JP2024514424A

JP2024514424A - Ｍｕｓｋとｂｍｐ受容体との間の結合相互作用の特性評価

Info

Publication number: JP2024514424A
Application number: JP2023557054A
Authority: JP
Inventors: ファロン，ジャスティン，アール．; ジェイム，ディエゴ; ギャド，マーク
Original assignee: ブラウンユニバーシティ
Priority date: 2021-03-18
Filing date: 2022-03-18
Publication date: 2024-04-02
Also published as: US20240175869A1; EP4308232A1; WO2022198072A1

Abstract

神経発生または筋再生を増加させ、神経変性または筋再生に関連する疾患、障害または病態を予防または治療するための方法および組成物が本明細書に提供される。

Description

本開示は、中枢神経系の神経変性障害を治療するための神経系の障害のための薬物、例えば、向知性薬、認知力改善薬、アルツハイマー病または他の形態の認知症を治療するための薬物に一般に関する。本開示は、ＭｕＳＫとＢＭＰまたはＢＭＰ受容体Ｉとの間の特定の相互作用の調節に関する。

連邦政府による資金提供を受けた研究開発に関する記載
本発明は、国立衛生研究所によって授与された助成金番号Ｒ２１ＮＳ１１２７４３の下で政府の支援を受けて行われた。政府は、本発明に対して一定の権利を有する。

骨形成タンパク質（ＢＭＰ）は、人体のあらゆる部分で重要な機能を有することがよく知られている。Ｗａｎｇｅｔａｌ．（２０１４）。ＢＭＰシグナル伝達は、神経幹細胞および筋幹細胞の活性化、神経可塑性、骨成長、サルコペニア、ならびに腫瘍形成を含む様々な細胞事象を調節する。一部のＢＭＰ機能には、骨および軟骨の形成、血管発生、恒常性、癌の形質転換、ならびに腸上皮形成が含まれる。ＢＭＰシグナルが組織特異的にどのように調節されるかという疑問が依然として存在する。シグナル伝達には、約２０種類のＢＭＰが利用可能である。これらの２０個のＢＭＰは、同じ３つの１型ＢＭＰ受容体を介してシグナル伝達すると考えられている。Ｙａｄｉｎ，Ｋｎａｕｓ，＆Ｍｕｌｌｅｒ（２０１６）。これらのシグナルおよび機能が組織特異的にどのように調節されるかは、依然として特性評価されていない。

ＢＭＰシグナル伝達は多くの状況で使用され、標的化の特異性を困難にするため、ＢＭＰシグナル伝達は治療的に利用することが困難であった。ＢＭＰ２は、骨成長の治療促進剤として、ＧｅｎｅｔｉｃｓＩｎｓｔｉｔｕｔｅによって開発された。例えば、Ｂｕｒｋｕｓｅｔａｌ．，Ｊ．ＳｐｉｎａｌＤｉｓｏｒｄ．Ｔｅｃｈ．，１５，３３７（２００２）を参照されたい。ＢＭＰ２の使用は、腫瘍進行の刺激などの望ましくない副作用のために制限された。例えば、Ｊａｍｅｓｅｔａｌ．，ＴｉｓｓｕｅＥｎｇ．ＰａｒｔＢ，Ｒｅｖ．２２，２８４（２０１６）を参照されたい。

ＭｕＳＫは受容体チロシンキナーゼである。ＭｕＳＫの外部ドメインは、３つのＩｇ様ドメインと、ＣＲＤ／Ｆｒｉｚｚｌｅｄドメインとを含むのに対して、細胞内ドメインは、チロシンキナーゼドメインを含有する。Ｈｕｂｂａｒｄ＆Ｇｎａｎａｓａｍｂａｎｄａｎ（２０１３）を参照されたい。ＭｕＳＫは、骨格筋および他の哺乳動物組織内に発現される。Ｇａｒｃｉａ－Ｏｓｔａｅｔａｌ．（２００６）。ＭｕＳＫは、神経筋接合部の形成に極めて重要な役割を果たす。ＭｕＳＫがマウスに存在しない場合、これらのマウスは神経筋接合部を形成することができない。それらは出生時に死亡する。Ｈｕｂｂａｒｄ＆Ｇｎａｎａｓａｍｂａｎｄａｎ（２０１３）を参照されたい。

ＭｕＳＫは、ＢＭＰ共受容体であり、ＢＭＰＩｇ３ドメインでＢＭＰに結合する。ＢＭＰシグナル伝達の重要なサブセットは、「ＭｕＳＫ－ＢＭＰ経路」によって媒介される。Ｙｉｌｍａｚｅｔａｌ．（２０１６）；Ｆｉｓｈ＆Ｆａｌｌｏｎ（２０２０）を参照されたい。ＭｕＳＫは、ＢＭＰに結合するだけでなく、１型ＢＭＰ受容体（ＢＭＰＲ１ＡおよびＢＭＰＲ１Ｂ）にも結合する。ＭｕＳＫは組織および細胞のサブセットにのみ発現されるため、ＭｕＳＫ－ＢＭＰ経路は、一般的なＢＭＰシグナル伝達よりも本質的にはるかに選択的である。ＭｕＳＫは、ＢＭＰならびにＩ型ＢＭＰ受容体ＢＭＰＲ１ａ、ＢＭＲ１ｂおよびＡｃｖｒ１ｂ（それぞれＡＬＫ３、６および４としても知られている）に結合する。ＡＬＫは未分化リンパ腫キナーゼである。高親和性ＢＭＰ４結合に必要なＭｕＳＫＩｇ３ドメインを操作すると、成体海馬神経発生および筋再生が促進される。国際公開第２０２０／２１４９８７号を参照されたい。

しかし、生物医学分野では、あらゆるＭｕＳＫ相互作用および結合パートナーのさらに良好な理解が依然として必要とされている。ＢＭＰ経路を標的とする（例えば、調節する）薬物の開発の成功は、ＭｕＳＫ相互作用および結合パートナー、ならびに生物学的事象にそれらが果たす役割の理解の向上によって促進されるであろう。

国際公開第２０２０／２１４９８７号

Ｗａｎｇｅｔａｌ．（２０１４）Ｙａｄｉｎ，Ｋｎａｕｓ，＆Ｍｕｌｌｅｒ（２０１６）Ｂｕｒｋｕｓｅｔａｌ．，Ｊ．ＳｐｉｎａｌＤｉｓｏｒｄ．Ｔｅｃｈ．，１５，３３７（２００２）Ｊａｍｅｓｅｔａｌ．，ＴｉｓｓｕｅＥｎｇ．ＰａｒｔＢ，Ｒｅｖ．２２，２８４（２０１６）Ｈｕｂｂａｒｄ＆Ｇｎａｎａｓａｍｂａｎｄａｎ（２０１３）Ｇａｒｃｉａ－Ｏｓｔａｅｔａｌ．（２００６）Ｙｉｌｍａｚｅｔａｌ．（２０１６）Ｆｉｓｈ＆Ｆａｌｌｏｎ（２０２０）

［発明が解決しようとする課題］
本発明は、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）経路の選択的操作のための組成物および方法を提供する。本発明は、ＢＭＰ受容体（ＡＬＫ）が筋特異的キナーゼ（ＭｕＳＫ）のＩｇ２ドメインに結合するという観察結果に基づく。本明細書は、ＢＭＰ受容体とＢＭＰ共受容体である筋特異的キナーゼ（ＭｕＳＫ）との間の相互作用を同定し、特性評価する。

一態様では、本発明は、ＢＭＰ受容体（ＡＬＫ）がＭｕＳＫのＩｇ２ドメインに結合するという観察結果に対するいくつかの要素を提供する。

本発明者らは、ＭｕＳＫに結合するＢＭＰ受容体を同定した。本発明者らは、ＢＭＰＲ１に結合するのに必要なＭｕＳＫドメインをマッピングした。ＭｕＳＫ－ＢＭＰＲ１結合は、ＢＭＰシグナル伝達のための重要な調節機構であり得る。

本発明者らは、ＢＭＰ受容体（ＡＬＫ）への結合に必要なＭｕＳＫドメインをマッピングした。本発明者らは、ＭｕＳＫ外部ドメインおよび単離されたドメインの様々なＨｉｓタグ付き欠失構築物を設計し、生成した。本発明者らは、固相結合アッセイを使用して、異なるＭｕＳＫ構築物へのＢＭＰＲ１ＡおよびＢＭＰＲ１ｂの結合を定量し、各構築物の結合曲線を作成した。

ＢＭＰＲ１ａはＡＬＫ３としても知られており、ＢＭＰＲ１ｂはＡＬＫ６としても知られている。ＢＭＰＲ１ａおよびＢＭＰＲ１ｂは、ＭｕＳＫに結合するＢＭＰ受容体であるが、結合ドメインはこれまで分かっていなかった。本発明者らは、ＭｕＳＫ－ＢＭＰＲ１結合に必要な単一ドメイン（Ｉｇ２）を同定した。このドメインは、ＢＭＰＲ１に結合するために必要かつ十分である。したがって、このＭｕＳＫＩｇ２ドメインは、ＢＭＰ受容体に結合するために必要かつ十分である。本発明者らは、ＭｕＳＫの欠失構築物を設計し、発現させた。次いで、ＥＬＩＳＡ様固相結合アッセイを使用して、これらの欠失構築物とＡＬＫ６との間の結合をアッセイした。ΔＩｇ２ＭｕＳＫは、結合をほとんどまたは全く示さなかった。この結果は、ＡＬＫ６へのＭｕＳＫ結合に対するＩｇ２ドメインの必要性を示す。

本発明者らは、そのような結合がヒト細胞のどこで起こるかを突き止めた。本発明者らは、様々なｐＨ条件下でのＢＭＰ受容体へのＭｕＳＫの結合をアッセイした。本発明者らは、様々なｐＨ条件下でＢＭＰ受容体へのＭｕＳＫの結合をアッセイすることによって、ＢＭＰＲ１へのＭｕＳＫ結合がｐＨ依存性であることを示した。ＭｕＳＫ－ＢＭＰＲ１相互作用のこの特性評価は、アルツハイマー病のためのＭｕＳＫ－ＢＭＰ経路を標的とする治療開発プログラムを支援するのに有用である。

本発明者らは、ＭｕＳＫのこれまでに認識されていないスプライシング変異体を同定した。本発明者らはまた、２つの「小さな」３０ｂｐエクソン（５ａおよび５ｂ）の選択的スプライシングが、ＢＭＰ受容体結合のレベル、および異なるＢＭＰ受容体に対するＭｕＳＫの選択性の両方を調節し得ることを示した。これらの小さなエクソンによってコードされる、Ｉｇ２領域のタンパク質は、ＭｕＳＫに結合する。小さなエクソンを操作することにより、ＢＭＰシグナル伝達の治療的調節の選択性を高めることができる。

［課題を解］
いくつかの実施形態では、本開示は、ＭｕＳＫＩｇ２ドメインの調節に基づいて、アルツハイマー病、筋特異的キナーゼ重症筋無力症（ＭｕＳＫ－ＭＧ）および他の神経障害を治療する方法を提供する。

いくつかの実施形態では、本開示は、筋障害（例えば、心筋梗塞、心筋症）、または筋消耗を特徴とする遺伝性疾患を治療する方法を提供する。いくつかの実施形態では、治療される対象は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）、肺炎、もしくはＣＯＶＩＤ１９などのコロナウイルス感染を含むウイルス感染を含む特定の感染を含む、肺損傷に関連する疾患もしくは障害のリスクがあり得るか、またはそれに罹患している可能性がある。

本発明の技術によって治療され得る例示的な筋障害には、限定するものではないが、ベッカー型筋ジストロフィー、先天性筋ジストロフィー、遠位型筋ジストロフィー、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、エメリー・ドレフュス型筋ジストロフィー、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー、肢帯型筋ジストロフィー、筋緊張性筋ジストロフィーおよび眼咽頭型筋ジストロフィーが含まれる。

いくつかの実施形態では、筋成長の増強は、筋萎縮または筋消耗に関連する疾患または障害の治療に使用される。筋萎縮または筋消耗は、神経筋障害などの記載される様々な疾患および病態、または長期の不活動、床上安静、入院、加齢、栄養不良、癌悪液質、慢性炎症性疾患などによって直接的もしくは間接的に引き起こされる様々な疾患および病態で観察され得る。慢性炎症性疾患の例には、関節リウマチ、慢性心不全および慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）が挙げられる。

いくつかの実施形態では、本発明の方法はまた、対象が手術、外傷または長期の固定（例えば、床上安静またはギプス固定から）後に筋再生および筋成長の増強を必要とする場合に使用され得る。筋幹細胞活性は年齢とともに低下することから、本発明の方法はまた、他の点では健康な患者のサルコペニアを予防することができるかまたは逆転させることができ、生活の質および自立性の顕著な改善をもたらし得る。

いくつかの実施形態では、本開示は、５ａおよび５ｂＭｕＳＫエクソンの選択的スプライシングの調節に基づいて、アルツハイマー病、ＭｕＳＫ－ＭＧおよび他の神経障害または筋障害を治療する方法を提供する。

いくつかの実施形態では、本開示は、ＭｕＳＫＩｇ２ドメインへの自己抗体の結合に基づく、ＭｕＳＫ－ＭＧの診断を提供する。

いくつかの実施形態では、本開示は、ＭｕＳＫエクソン５ａおよび５ｂへの自己抗体の結合に基づく、ＭｕＳＫ－ＭＧの診断を提供する。

いくつかの実施形態では、本開示は、ＭｕＳＫＩｇ２ドメインの調節に基づいて、サルコペニア、悪液質および他の筋障害を治療する方法を提供する。

いくつかの実施形態では、本開示は、ＭｕＳＫエクソン５ａおよび５ｂの調節に基づいて、サルコペニア、悪液質および他の筋障害を治療する方法を提供する。

いくつかの実施形態では、本開示は、神経変性、認知障害または筋障害の１つ以上の特徴に罹患している対象を治療する方法であって、（ａ）機能的Ｉｇ２ドメインを欠くＭｕＳＫポリペプチドのレベルもしくは活性を増加させる工程、または（ｂ）ＢＭＰ受容体（ＡＬＫ）－ＭｕＳＫポリペプチド複合体のレベルもしくは活性を低下させる工程であって、ＭｕＳＫが、機能的Ｉｇ２ドメインを含む工程を含む方法を提供する。

いくつかの実施形態では、本開示は、神経発生、筋再生および筋成長を増加させる方法であって、（ａ）機能的Ｉｇ２ドメインを欠くＭｕＳＫポリペプチドのレベルもしくは活性を増加させる工程、または（ｂ）ＢＭＰ－ＭｕＳＫポリペプチド複合体のレベルもしくは活性を低下させる工程であって、ＭｕＳＫが、機能的Ｉｇ２ドメインを含む工程を含む方法を提供する。

いくつかの実施形態では、方法は、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤（ｍｏｄｕｌａｔｏｒａｇｅｎｔ）を含むかまたは送達する医薬組成物を投与する工程をさらに含む。

いくつかの実施形態では、方法は、ＭｕＳＫ転写物の改変されたスプライシングを増加させる医薬組成物を投与することをさらに含み、改変は、ＭｕＳＫＩｇ２ドメイン内の１つ以上のエクソンをスキップすることを含み、スキップされたエクソンは、ＭｕＳＫＩｇ２ドメインのエクソン５ａであるか、またはスキップされたエクソンは、ＭｕＳＫＩｇ２ドメインのエクソン５ｂであるか、またはスキップされたエクソンは、ＭｕＳＫＩｇ２ドメインのエクソン５ａおよび５ｂである。ＭｕＳＫ５ａおよび５ｂエクソンは、治療用抗体およびアンチセンスオリゴヌクレオチドの両方による調節に適している。別の実施形態では、調節は、エクソンスキッピングを誘導するためのアンチセンスオリゴヌクレオチドの投与によるものである。

いくつかの実施形態では、本開示は、エクソン５ａおよび５ｂの一方または両方のスキップが増加するように、ＭｕＳＫ一次転写物の集団を含む系を、そのような一次転写物に結合するオリゴヌクレオチドと接触させることによって、ＭｕＳＫエクソンスキッピングを誘導する方法を提供する。

いくつかの実施形態では、本開示は、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤を特性評価する方法であって、（ａ）ＭｕＳＫ－Ｉｇ２－ＢＭＰ受容体（ＡＬＫ）複合体形成を減少させる能力を評価する工程、（ｂ）一次ＭｕＳＫ転写物のスプライシングパターンを改変する能力を評価する工程、（ｃ）転写物の発現を阻害する能力を評価する工程、（ｄ）Ｉｇ２ドメインをコードする配列を欠くＭｕＳＫ転写物の発現を増加させる能力を評価する工程、（ｅ）機能的Ｉｇ２を欠くＭｕＳＫポリペプチドのレベルを増加させる能力を評価する工程、および（ｆ）集団内の細胞の特性に影響を及ぼす能力を評価する工程のうちの１つ以上を含む方法を提供する。

いくつかの実施形態では、本開示は、そのゲノム内にＭｕＳＫをコードする配列を含む遺伝子改変マウスを提供し、ＭｕＳＫをコードする配列は、エクソン５ａからエクソン５ｂ（５’から３’の順序で）までの領域内のヌクレオチドを含まず、遺伝子改変マウスは、全長ＭｕＳＫ転写物を発現することができず、全長ＭｕＳＫタンパク質を産生することもできない。

説明のために、本発明のいくつかの実施形態を以下に記載される図面に示す。図面内の同様の符号は、全体を通して同様の要素を示す。本発明は、示された正確な配置、寸法および機器に限定されない。

細胞内のＢＭＰ結合のプロセスを示す概略図である。ＭｕＳＫの全長外部ドメインおよび内部ドメインを示す概略図である。ＭｕＳＫの外部ドメインは、３つのＩｇ様ドメインとシステインリッチＣＲＤ／Ｆｒｉｚｚｌｅｄドメインとを含むのに対して、細胞内ドメインは、チロシンキナーゼドメインを含有する。本発明者らが生成した欠失構築物を示す概略図である。全長構築物、ΔＩｇ１構築物、ΔＩｇ２構築物およびΔＩｇ１Ｉｇ２構築物の存在を確認する電気泳動ゲルである。Ｉｇ１構築物、Ｉｇ２構築物、Ｉｇ１－Ｉｇ２構築物およびΔＣＲＤ／Ｆｚ構築物を確認する電気泳動ゲルである。ＣＲＤ／Ｆｚ構築物、Δ５ａ５ａ’構築物およびＬ８３Ｒ構築物の存在および予測されるサイズを確認する電気泳動ゲルである。ＭｕＳＫを固定し、ＡＬＫ６とインキュベートした固相結合アッセイからのデータを示す折れ線グラフである。結合に必要なＩｇ２ドメインを用いて、Ｉｇ１－Ｉｇ２構築物がＡＬＫ６への高親和性結合を有すること、ならびにＭｕＳＫをＡＬＫ６に結合させるためにＩｇ１ドメインおよびＩｇ２ドメインの両方が必要であることを示す折れ線グラフである。単離されたＩｇ２ドメインおよびＩｇ１ドメインを使用して、Ｉｇ２ドメインがＡＬＫ６に結合するのに十分であることを示す折れ線グラフである。ＭｕＳＫがＡＬＫ６に強力にかつ高い親和性で結合することを示す折れ線グラフである。ΔＩｇ１曲線とΔＩｇ２曲線との比較は、Ｉｇ１ドメインがＡＬＫ６へのＭｕＳＫ結合に不要であることを示した。Ｉｇ１ドメインおよびＩｇ２ドメインのみが存在し、精製のためにＨｉｓタグ付けされた、Ｉｇ１－Ｉｇ２のみの構築物ＭｕＳＫ外部ドメインを示す概略図である。固相結合アッセイを使用して、弱酸性条件下でＭｕＳＫがＡＬＫ６に顕著に結合することを示す折れ線グラフである。ｐＨ６でのＭｕＳＫとＡＬＫ６との間の相互作用は、この条件ではｐＨ７．０と比較して非常に好ましい。Ｉｇ１ドメインが欠失している場合、ＭｕＳＫはｐＨ依存性を示さないことを示し、ｐＨ６およびｐＨ７でＭｕＳＫがＡＬＫ６に別様に結合する理由がＩｇ１ドメインであることを示唆する折れ線グラフである。細胞表面（ｐＨ７．４）およびエンドソーム区画（ｐＨ６．０）でのＭｕＳＫ－ＡＬＫ６結合の概略モデルである。第１の左上パネルは、二量体としてのＭｕＳＫと、ＢＭＰにカノニカルに結合するＢＭＰ受容体とを示す。次いで、細胞内の事象が、クラスリン媒介エンドサイトーシスを誘発する（右上パネル）。細胞がクラスリン媒介エンドサイトーシスを開始するためには、ＰＩＰ２およびアダプタータンパク質の蓄積が必要である。クラスリン媒介エンドサイトーシスは、エンドソームの形成をもたらす（右下パネル）。エンドソームは、細胞の細胞外環境と比較して弱酸性のｐＨを有する。ＢＭＰ受容体１型は、これらの条件でのＭｕＳＫの結合を促進する（左下パネル）。ｐＨが低下すると、ＢＭＰがＢＭＰ受容体から解離するとともに、ＢＭＰ受容体に結合する。ＭｕＳＫにおける新規の小さなエクソン（５ａおよび５ｂ）の検出を示し、したがって、選択的にスプライシングされたエクソン５ａおよび５ｂを含有するＭｕＳＫ領域内の選択的スプライシングを実証する電気泳動ゲルである。プライマー（フォワード、エクソン５；リバースエクソン８）を使用した筋肉（中央）およびサテライト細胞（右）ｃＤＮＡのＰＣＲ。３つの形態が検出されることに留意されたい（５ａのみ；５ａ＋５ｂ；小さなエクソンなし）。選択的にスプライシングされたエクソン５ａおよび５ｂを含有する、ＭｕＳＫのアミノ酸配列を提供する。マウスヒラメ筋由来のエクソン５ａおよび５ｂの選択的スプライシングパターンを示す。

産業上の利用可能性
２０超のＢＭＰは、７つのＢＭＰ受容体のみを介してシグナル伝達する。ＢＭＰの機能は明確である。では、ＢＭＰとＢＭＰ受容体との同じ組合せから、どうしてこれほど多くの異なる機能が導き出され得るのであろうか。このような疑問は、ＢＭＰシグナル伝達経路のあらゆる共受容体および調節因子を同定することを研究者にとって興味深いものにする。

ＭｕＳＫ。ＭｕＳＫは、３つのＩｇおよび１つのＣＲＤ／Ｆｚドメインならびに細胞内チロシンドメイン（ＴＫ；図１）から細胞外に構成される受容体チロシンキナーゼである。ＭｕＳＫの最もよく理解されている機能は、Ｉｇ１ドメインへのアグリン－ＬＲＰ４の結合がＭｕＳＫＴＫ活性およびシナプス分化を誘発する神経筋接合部（ＮＭＪ）にある（Ｋｉｍｅｔａｌ．，２００８；Ｚｈａｎｇｅｔａｌ．，２００８ａ）。

ＭｕＳＫ－ＢＭＰ経路。脳は、生涯を通じてニューロンおよびグリア細胞を生成する神経幹細胞（ＮＳＣ）を有する。Ｍｏｒｅｎｏ－Ｊｉｍｅｎｅｚｅｔａｌ．（２０１９）；Ｓｔｅｉｎｅｒｅｔａｌ．（２０１９）。ＢＭＰは、少なくとも２つの重要なＮＳＣ決定点、すなわち、（１）増殖する幹細胞が細胞周期を出て、新鮮な幹細胞を供給することができる予備プールを補充するために戻る静止状態、および（２）成熟子孫への分化を調節する。Ｍｉｒａｅｔａｌ．（２０１０）。本開示は、ＮＳＣ内のＢＭＰ経路を操作することが、成体脳内で神経発生を調節するための魅力的な標的であることを企図する。

ＭｕＳＫはまた、ＢＭＰならびにその受容体ＡＬＫ３、４および６に結合し、ＢＭＰシグナル伝達をアップレギュレートし、筋原性細胞内で転写応答の組成を形作るＢＭＰ共受容体である。Ｙｉｌｍａｚｅｔａｌ．，Ｓｃｉ．Ｓｉｇｎａｌ．，９，ｒａ８７（２０１６）を参照されたい。このＢＭＰシグナル伝達経路は、ＭｕＳＫＴＫ活性を調節することも、必要とすることも、アグリン－ＬＲＰ４によって活性化されることもない。ＭｕＳＫＩｇ３ドメインは、高親和性ＢＭＰ結合に必要であるが、アグリン－ＬＲＰ４ＴＫ活性化にとっては重要ではない。Ｉｇ３ドメインは、脳内を含め、内因的に選択的にスプライシングされる。Ｇａｒｃｉａ－Ｏｓｔａｅｔａｌ．（２００６）；Ｈｅｓｓｅｒｅｔａｌ．（１９９９）。ＢＭＰシグナル伝達は、神経幹細胞（ＮＳＣ）の静止状態を誘導し、新生ニューロンの統合を阻害することができる。本発明者らは、ＭｕＳＫ－ＢＭＰシグナル伝達を減少させることによってＢＭＰ駆動を抑制すると、神経発生が増加し得ることを見出した。

Ｙｉｌｍａｚｅｔａｌ．，Ｓｃｉ．Ｓｉｇｎａｌ．，９，ｒａ８７（２０１６）は、ＭｕＳＫの「Ｉｇ３」ドメインがＢＭＰの高親和性結合に必要であることを開示している。内因的に発現されるＭｕＳＫの主な種は全長である。このＩｇ３ドメインは、内因的に選択的にスプライシングされ、Δｇ３ＭｕＳＫと呼ばれるアイソフォームを生成することができる。このスプライシングは、ＭｕＳＫプレｍＲＮＡからのエクソン６および７の協調的除去を伴う。ＭｕＳＫ選択的スプライシングの調節は、アルツハイマー病では神経発生を増加させるための戦略である。国際公開第２０２０／２１４９８７号（ブラウン大学）を参照されたい。ＭｕＳＫは、筋肉内で発現され、筋再生中にアップレギュレートされる。データは、ＭｕＳＫが筋形成時にＢＭＰシグナル伝達に関与することを示唆している。ＭｕＳＫは、ＢＭＰ２、ＢＭＰ４およびＢＭＰ７ならびにＩ型ＢＭＰ受容体ＡＬＫ３およびＡＬＫ６に結合するＢＭＰ共受容体として作用することができる。例えば、参照により本明細書に組み込まれるＹｉｌｍａｚｅｔａｌ．，Ｓｃｉ．Ｓｉｇｎａｌ．，９，ｒａ８７（２０１６）を参照されたい。ＭｕＳＫのＩｇ３ドメインは、ＢＭＰへの高親和性結合に必要である。ＭｕＳＫは、ＳＭＡＤ１／５／８のＢＭＰ４依存的リン酸化によって測定されるようにＢＭＰシグナル伝達をアップレギュレートする。ＭｕＳＫ－ＢＭＰシグナル伝達は、筋芽細胞および筋管内でＢＭＰ誘導性トランスクリプトームの大きさおよび組成を形作り、この役割はＭｕＳＫチロシンキナーゼ活性とは無関係である。ＭｕＳＫは、不死化した筋原性細胞内で、ＢＭＰシグナル伝達を増強し、筋原性因子、例えば、筋原性因子５（Ｍｙｆ５）を調節するＢＭＰ共受容体である。

活性化されたサテライト細胞はＭｕＳＫタンパク質を発現し、ＭｕＳＫ－ＢＭＰシグナル伝達の破壊は、インビボで筋肉を再生する際にサテライト細胞増殖を変化させる。含まれるデータは、サテライト細胞および筋再生におけるＭｕＳＫ－ＢＭＰ経路の役割に関する情報を提供する。これらのデータは、ＭｕＳＫ－ＢＭＰ経路が重要な役割を果たすことを示唆しており、本開示は、少なくともＭｕＳＫ発現はＢＭＰ系の発現よりもはるかに制限されているため、ＭｕＳＫ－ＢＭＰ経路を標的とすることはＢＭＰワイドな活性を標的とすることよりも選択的であるという洞察を提供する。提供されるデータはまた、ＭｕＳＫ－ＢＭＰ経路を標的とすることは筋成長を増強することを教示している。いくつかの実施形態では、筋成長は、例えば、損傷を受けていない組織内で起こる。

ＭｕＳＫ外部ドメインは細胞の表面に露出しているため、細胞外で作用する治療用抗体または他の作用物質による調節に適している。

ＭｕＳＫＩｇ２ドメインおよび２つの小さなエクソンは、アルツハイマー病、脳卒中、ＰＴＳＤおよび治療抵抗性うつ病などの障害を治療するためのＭｕＳＫ－ＢＭＰ経路を調節するための標的として浮上している。

ＭｕＳＫＩｇ２ドメインはまた、ＭｕＳＫ依存性重症筋無力症を媒介する自己抗体の標的であり得る。重症筋無力症（ＭＧ）は、骨格筋の衰弱を特徴とする慢性自己免疫性神経筋疾患である。ＪａｙａｍＴｒｏｕｔｈｅｔａｌ．（２０１２）。臨床研究では、重症筋無力症患者がＭｕＳＫに対する抗体を時折有し得ることが示されている。Ｇｕｐｔｉｌｌ，Ｓａｎｄｅｒｓ，＆ＥｖｏｌｉＡ（２０１１）。これらの抗ＭｕＳＫ抗体は、アセチルコリン受容体に対する抗体が存在しない多くの患者に存在する。Ｇｕｐｔｉｌｌ，Ｓａｎｄｅｒｓ，＆ＥｖｏｌｉＡ（２０１１）。ＭｕＳＫ依存性重症筋無力症（ＭｕＳＫ－ＭＧ）は、アグリン－ＬＲＰ４シグナル伝達を阻害する、ＭｕＳＫＩｇ１ドメインに対する自己抗体によって引き起こされ得る。本開示は、これらの患者に存在する自己抗体が、ＭｕＳＫＩｇ２ドメインに対するものであり、ＭｕＳＫ－ＢＭＰシグナル伝達を阻害し得、したがって、これらの患者に観察される筋萎縮の原因となり得ることを教示する。本開示によって提供される所見は、診断および治療の両方に対して潜在的価値を有する。例えば、そのような自己抗体とＭｕＳＫＩｇ２との間の相互作用を破壊することは、有効な治療戦略であり得る。またはおよびＭｕＳＫＩｇ２に結合する自己抗体の検出は、重症筋無力症の診断に有用であり得る。

定義
便宜上、本明細書、実施例、および添付の特許請求の範囲で使用されるいくつかの用語および語句の意味を以下に列挙する。特に指示しない限り、または文脈から黙示されない限り、これらの用語および語句は以下の意味を有するものとする。これらの定義は、特定の実施形態を説明するのに役立つが、特許請求される発明を限定することを意図するものではない。別途定義しない限り、あらゆる技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者が通常理解するものと同一の意味を有する。本明細書で提供される定義の意味と生物医学分野における用語の使用との間に明らかな不一致が生じた場合、本明細書で提供される用語の意味が優先するものとする。

約とは、値を参照して使用される場合、参照される値に関連して類似する値を指す。一般に、生物医学分野の当業者であれば、その文脈において約によって包含される分散度を理解する。

投与とは、組成物であるか、または組成物に含まれるか、またはそうでなければ組成物によって送達される作用物質、例えば、アゴナイジング剤（ａｇｏｎｉｚｉｎｇａｇｅｎｔ）の送達を達成するための、対象または系への医薬組成物の投与を指す。生物医学分野の当業者であれば、対象、例えば、ヒトへの投与に使用され得る様々な経路を知っている。投与は、眼、経口、頬側、真皮への局所、皮内、皮間（ｉｎｔｅｒｄｅｒｍａｌ）、経皮などのうちの１つ以上であり得るかまたはそれを含み得る皮膚、経腸、動脈内、皮内、胃内、髄内、筋肉内、鼻腔内、腹腔内、髄腔内、静脈内、脳室内、特定の器官内、例えば、肝臓内、粘膜内、経鼻、経口、直腸内、皮下、舌下、局所、例えば、気管内滴下による気管、膣、硝子体などであり得る。作用物質、例えば、アゴナイジング剤は、中枢神経系（ＣＮＳ）に送達され、例えば、脳室内投与を介して送達される。投与は、単回用量のみを伴い得る。投与は、定数の用量の適用を伴い得る。投与は、間欠的な投与、例えば、時間的または周期的に区切られた複数の用量、例えば、共通の期間の投与によって区切られた個々の用量を伴い得る。投与は、連続投与、例えば、少なくとも選択された期間にわたる灌流を伴い得る。

作用物質とは、ポリペプチド、核酸、糖、脂質、小分子、金属またはそれらの組合せもしくは複合体を含む任意の化学クラスの化合物または実体を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。生物医学分野の当業者であれば、作用物質という用語が、細胞もしくは生物、もしくはその画分、抽出物もしくは成分であるか、またはそれを含む実体を指すことを知っている。該用語は、天然に見出されるか、または天然から得られるため、天然産物を指し得る。該用語は、人の手の作用によって設計、操作もしくは生成されるか、または天然では見られないという点で、人工の１つ以上の実体を指し得る。作用物質は、単離された形態または純粋な形態で使用され得る。作用物質は、粗形態で使用され得る。潜在的な作用物質は、その中の活性剤を同定または特性評価するためにスクリーニングされ得る収集物またはライブラリーとして提供され得る。作用物質という用語は、高分子であるかまたは高分子を含む化合物または実体を指し得る。該用語は、１つ以上の高分子部分を含む化合物または実体を指し得る。作用物質という用語は、高分子ではないか、または任意の高分子もしくは１つ以上の特定の高分子部分を実質的に含まない化合物または実体を指し得る。該用語は、任意の高分子部分を欠くかまたは実質的に含まない化合物または実体を指し得る。

アゴニストとは、その存在、レベル、程度、種類または形態が別の作用物質、すなわち、アゴナイズされた作用物質（ａｇｏｎｉｚｅｄａｇｅｎｔ）または標的剤の活性レベルの増加と相関する作用物質（すなわち、アゴナイジング剤）、状態または事象を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。アゴニストは、小分子、ポリペプチド、核酸、炭水化物、脂質、金属、もしくは活性化活性を示す任意の他の実体を含む任意の化学クラスの作用物質であり得るか、またはそれを含み得る。アゴニストは、直接的であり得る（この場合、アゴニストは、その標的に直接影響を及ぼす）。アゴニストは、間接的であり得る（この場合、アゴニストは、その標的に結合すること以外によって、例えば、標的の調節因子と相互作用することによって、標的のレベルまたは活性が変化するように、その影響を及ぼす。アゴニストは、標的のレベル、形態または活性が変化するように、標的、例えば、タンパク質または核酸に結合するタンパク質、例えば、抗体または核酸、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドである結合剤である。変化したレベル、形態または活性は、標的核酸配列から発現される変化したタンパク質の増加したレベルである。生物医学分野の当業者であれば、アゴナイジング剤が結合標的に結合することができ、結合標的を潜在的にアゴナイズする（ａｇｏｎｉｚｅ）ことができ、その結合がさらなるアゴナイズされた標的のレベルまたは活性の増加を引き起こすことを知っている。核酸標的に結合するアゴナイジング剤は、その標的のレベルまたは活性を変化させることができる。アゴナイジング剤は、例えば、その修飾、スプライシング、５’キャップ形成もしくは３’末端形成、輸送または翻訳などを増加させることによって、その核酸標的の活性をアゴナイズすることができ、その結果、所望の産物、例えば、ｍＲＮＡのレベルが増加するか、またはそのような核酸標的によってコードされるポリペプチドなどの下流標的をアゴナイズすることができる。アゴナイジング剤は、一次転写物に結合し、そのスプライシングパターンを変化させて、特定のスプライシングされた形態、例えば、成熟ｍＲＮＡのレベルもしくは活性を増加させ、それにより、産物、例えば、そのような特定のスプライシングされた形態であるか、もしくはそのような特定のスプライシングされた形態によってコードされるポリペプチドのレベルの増加が達成され得るオリゴヌクレオチドであり得るか、またはそれを含み得る。

アゴニスト療法とは、所望の治療効果を達成するために目的の特定の標的をアゴナイズするアゴニストの投与を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。アゴニスト療法は、単回用量のアゴニストを投与することを伴う。アゴニスト療法は、数回の用量のアゴニストを投与することを伴う。アゴニスト療法は、治療効果を達成することが知られているかまたは予測される投与レジメンに従ってアゴニストを投与することを伴うが、これは、そのような結果が、指定された程度の統計的信頼性まで、例えば、関連する集団への投与によって確立されたためである。アゴニスト療法は、本明細書に記載のアゴナイジング剤の送達を伴う。アゴナイジング剤は、標的のレベル、形態もしくは活性が変化するように、標的、例えば、タンパク質もしくは核酸に結合するタンパク質、例えば、抗体もしくは核酸、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドである結合剤であり得るか、またはそれを含み得る。アゴナイジング剤は結合標的に結合することができ、結合標的を潜在的にアゴナイズすることができ、その結合は、さらなるアゴナイズされた標的のレベルまたは活性の増加を引き起こす。核酸標的に結合するアゴナイジング剤は、その標的のレベルまたは活性を変化させることができる。アゴナイジング剤は、例えば、その修飾、スプライシング、５’キャップ形成もしくは３’末端形成、輸送または翻訳などを増加させることによって、その核酸標的の活性をアゴナイズすることができ、その結果、所望の産物、例えば、ｍＲＮＡのレベルがもたらされるか、またはそのような核酸標的によってコードされるポリペプチドなどの下流標的をアゴナイズすることができる。アゴナイジング剤は、一次転写物に結合し、そのスプライシングパターンを変化させて、特定のスプライシングされた形態、例えば、成熟ｍＲＮＡのレベルもしくは活性をもたらし、それにより、産物、例えば、そのような特定のスプライシングされた形態であるか、もしくはそのような特定のスプライシングされた形態によってコードされるポリペプチドのレベルの増加が達成され得るオリゴヌクレオチドであり得るか、またはそれを含み得る。

アンタゴニストとは、その存在、レベル、程度、種類または形態が別の作用物質（すなわち、阻害された作用物質、または標的）のレベルまたは活性の低下と相関する作用物質（すなわち、拮抗剤）、状態または事象を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。アンタゴニストは、小分子、ポリペプチド、核酸、炭水化物、脂質、金属、もしくは関連する阻害活性を示す任意の他の実体を含む任意の化学クラスの作用物質であり得るか、またはそれを含み得る。アンタゴニストは、直接的であり得る（この場合、アンタゴニストは、その標的に直接影響を及ぼす。アンタゴニストは、間接的であり得る（この場合、アンタゴニストは、その標的に結合すること以外によって、例えば、標的の調節因子と相互作用することによって、標的のレベルまたは活性が変化するように、その影響を及ぼす。アンタゴニストは、標的のレベル、形態または活性が変化するように、標的、例えば、タンパク質または核酸に結合するタンパク質、例えば、抗体または核酸、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドである結合剤である。変化したレベル、形態または活性は、標的核酸配列から発現される変化したタンパク質の低下したレベルである。生物医学分野の当業者であれば、拮抗剤が結合標的に結合することができ、潜在的に拮抗することができ、その結合がさらなる拮抗された標的のレベルまたは活性の低下を引き起こすことを知っている。核酸標的に結合する拮抗剤は、その標的のレベルまたは活性を変化させることができる。拮抗剤は、例えば、その修飾、スプライシング、５’キャップ形成もしくは３’末端形成、輸送または翻訳などを減少させることによって、その核酸標的の活性に拮抗することができ、その結果、望ましくない産物、例えば、ｍＲＮＡのレベルが抑制されるか、またはそのような核酸標的によってコードされるポリペプチドなどの下流標的に拮抗することができる。拮抗剤は、一次転写物に結合し、そのスプライシングパターンを変化させて、特定のスプライシングされた形態、例えば、成熟ｍＲＮＡのレベルもしくは活性を抑制し、それにより、産物、例えば、そのような特定のスプライシングされた形態であるか、もしくはそのような特定のスプライシングされた形態によってコードされるポリペプチドのレベルの低下が達成され得るオリゴヌクレオチドであり得るか、またはそれを含み得る。

抗体剤とは、特定の抗原に特異的に結合する、例えば、目的のタンパク質、例えば、ＭｕＳＫタンパク質のエピトープであり得るかまたはそれを含み得る作用物質を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。該用語は、特異的結合を付与するのに十分な免疫グロブリン構造要素を含む任意のポリペプチドまたはポリペプチド複合体を包含する。例示的な抗体剤には、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体が含まれる。抗体剤は、マウス抗体、ウサギ抗体、霊長類抗体またはヒト抗体に特徴的な１つ以上の定常領域配列を含むことができる。抗体剤は、生物医学分野で知られているように、ヒト化された、霊長類化された（ｐｒｉｍａｔｉｚｅｄ）、キメラであるなどの１つ以上の配列要素を含むことができる。抗体剤という用語は、代替的な提示では、抗体の構造的特徴および機能的特徴を利用するための生物医学分野で公知のまたは生物医学分野によって開発された構築物または形式のうちの１つ以上を指し得る。本発明の下で使用される抗体剤は、限定するものではないが、インタクトなＩｇＡ抗体、ＩｇＧ抗体、ＩｇＥ抗体またはＩｇＭ抗体；二重特異性抗体または多重特異性抗体、例えば、Ｚｙｂｏｄｉｅｓ（登録商標）など；抗体断片、例えば、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ’断片、Ｆｄ断片および単離されたＣＤＲまたはそのセット；一本鎖Ｆｖ；ポリペプチド－Ｆｃ融合物；単一ドメイン抗体、例えば、ＩｇＮＡＲなどのサメ単一ドメイン抗体またはその断片；ラクダ抗体；マスクされた抗体、例えば、Ｐｒｏｂｏｄｉｅｓ（登録商標）；ＳｍａｌｌＭｏｄｕｌａｒＩｍｍｕｎｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（ＳＭＩＰｓ（商標））；一本鎖またはタンデムダイアボディ（ＴａｎｄＡｂ（登録商標））；ＶＨＨ；Ａｎｔｉｃａｌｉｎｓ（登録商標）；Ｎａｎｏｂｏｄｉｅｓ（登録商標）ミニボディ；ＢｉＴＥ（登録商標）；アンキリンリピートタンパク質またはＤＡＲＰＩＮｓ（登録商標）；Ａｖｉｍｅｒｓ（登録商標）；ＤＡＲＴｓ；ＴＣＲ様抗体；、Ａｄｎｅｃｔｉｎｓ（登録商標）；Ａｆｆｉｌｉｎｓ（登録商標）；Ｔｒａｎｓ－ｂｏｄｉｅｓ（登録商標）；Ａｆｆｉｂｏｄｉｅｓ（登録商標）；ＴｒｉｍｅｒＸ（登録商標）；ＭｉｃｒｏＰｒｏｔｅｉｎｓ；Ｆｙｎｏｍｅｒｓ（登録商標）、Ｃｅｎｔｙｒｉｎｓ（登録商標）；ならびにＫＡＬＢＩＴＯＲ（登録商標）から選択される形式である。抗体は、共有結合修飾、例えば、天然に産生された場合に有するであろう、グリカンの結合を欠き得る。抗体は、共有結合修飾、例えば、グリカン、ペイロード、例えば、検出可能部分、治療用部分、触媒部分など、または他のペンダント基、例えば、ポリエチレングリコールなどの結合を含有することができる。抗体剤は、そのアミノ酸配列が相補性決定領域（ＣＤＲ）として生物医学分野の当業者によって認識される１つ以上の構造要素を含むポリペプチドであり得るか、またはそれを含み得る。抗体剤は、そのアミノ酸配列が参照抗体に見られるものと実質的に同一の少なくとも１つのＣＤＲ、例えば、少なくとも１つの重鎖ＣＤＲもしくは少なくとも１つの軽鎖ＣＤＲを含むポリペプチドであり得るか、またはそれを含み得る。含まれるＣＤＲは、参照ＣＤＲと比較して配列が同一であるか、または１～５個のアミノ酸置換を含有するため、参照ＣＤＲと実質的に同一であり得る。含まれるＣＤＲは、参照ＣＤＲと少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を示すため、参照ＣＤＲと実質的に同一であり得る。含まれるＣＤＲは、参照ＣＤＲと少なくとも９６％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または少なくとも１００％の配列同一性を示すため、参照ＣＤＲと実質的に同一であり得る。含まれるＣＤＲは、含まれるＣＤＲ内の少なくとも１つのアミノ酸が、参照ＣＤＲと比較して欠失されているか、付加されているか、または置換されているが、含まれるＣＤＲが、参照ＣＤＲのアミノ酸配列と他の点では同一であるアミノ酸配列を有するという点で、参照ＣＤＲと実質的に同一であり得る。含まれるＣＤＲは、含まれるＣＤＲ内の１～５個のアミノ酸が、参照ＣＤＲと比較して欠失されているか、付加されているか、または置換されているが、含まれるＣＤＲが、参照ＣＤＲと他の点では同一であるアミノ酸配列を有するという点で、参照ＣＤＲと実質的に同一であり得る。含まれるＣＤＲは、含まれるＣＤＲ内の少なくとも１つのアミノ酸が、参照ＣＤＲと比較して置換されているが、含まれるＣＤＲが、参照ＣＤＲのアミノ酸配列と他の点では同一であるアミノ酸配列を有するという点で、参照ＣＤＲと実質的に同一であり得る。含まれるＣＤＲは、含まれるＣＤＲ内の１～５個のアミノ酸が、参照ＣＤＲと比較して欠失されているか、付加されているか、または置換されているが、含まれるＣＤＲが、参照ＣＤＲと他の点では同一であるアミノ酸配列を有するという点で、参照ＣＤＲと実質的に同一であり得る。抗体剤は、そのアミノ酸配列が免疫グロブリン可変ドメインとして生物医学分野の当業者によって認識される構造要素を含むポリペプチドであるか、またはそれを含む。抗体剤は、免疫グロブリン結合ドメインと相同またはほぼ相同な結合ドメインを有するポリペプチドタンパク質である。

抗体とは、抗原に結合することができる免疫グロブリンドメインを含有する、例えば、目的のタンパク質、例えば、ＭｕＳＫタンパク質のエピトープであり得るかまたはそれを含み得る免疫グロブリンまたはその誘導体を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。抗体は、任意の種、例えば、ヒト、齧歯類、ウサギ、ヤギ、ニワトリなどのものであり得る。抗体は、ヒトクラス：ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥ、またはＩｇＧ１、ＩｇＧ２などのそのサブクラスのいずれかを含む、任意の免疫グロブリンクラスのメンバーであり得る。抗体は、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ（一本鎖可変）、もしくは抗原結合部位を保持する他の断片などの断片、または組換え生産された断片を含む、組換え生産されたｓｃＦｖ断片であり得る。例えば、Ａｌｌｅｎ（２００２）およびその中の参考文献を参照されたい。抗体は、一価、二価または多価であり得る。抗体は、齧歯類起源の可変ドメインがヒト起源の定常ドメインに融合され、したがって、齧歯類抗体の特異性を保持するキメラ抗体またはヒト化抗体であり得る。ヒト起源のドメインは、最初にヒトにおいて合成されるという意味で、ヒトに直接由来する必要はない。代わりに、ヒトドメインは、そのゲノムがヒト免疫グロブリン遺伝子を組み込んでいる齧歯類において生成され得る。例えば、Ｖａｕｇｈａｎｅｔａｌ．（１９９８）を参照されたい。抗体は、部分的または完全にヒト化され得る。抗体は、ポリクローナルまたはモノクローナルであり得るが、本発明では、モノクローナル抗体が一般に好ましい。実質的に任意の目的の分子に特異的に結合する抗体を産生する方法は、生物医学分野で公知である。モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体は、抗体を産生する動物の血液もしくは腹水から、例えば、分子もしくはその抗原性断片への自然曝露、もしくは分子もしくはその抗原性断片による免疫化の後に精製され得るか、細胞培養もしくはトランスジェニック生物に対する組換え技術を使用して産生され得るか、または化学合成によって作製され得る。抗体は、例えば、標的抗原に結合することによってアンタゴニストとして作用し、抗原のレベルまたは活性を低下させることができる。抗体は、例えば、標的抗原に結合することによってアゴニストとして作用し、抗原のレベルの増加または活性の増加をもたらすことができる。

アンチセンスとは、そのヌクレオチド配列が、コード鎖核酸に見られる配列の一部または全部に相補的である核酸を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。典型的には、コード鎖核酸は、その配列が、ポリペプチドの一部または全部をコードするオープンリーディングフレーム、または残基の他のストレッチの一部または全部を含むものである。アンチセンスという用語は、コード鎖に（すなわち、そのようなコード鎖内の標的配列に特異的に結合するオリゴヌクレオチドを特に指し得る。コード鎖は、コード配列および非コード配列の両方を含むことができ、例えば、一例を挙げると、イントロン配列およびエクソン配列の両方を含む一次転写物などの転写物であり得る。生物医学分野の当業者であれば、本開示を読むと、その配列の一部または全部がその標的鎖の非コード部分に相補的である場合、オリゴヌクレオチドをアンチセンスオリゴヌクレオチドと考えることができるか、またはアンチセンスオリゴヌクレオチドと呼ぶことができることを知っている。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的センス鎖内のコード配列に結合する。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的コード鎖内の非コード配列に結合する。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的コード鎖内のコード配列および非コード配列の両方に結合する。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、コード鎖、例えば、転写物内のその標的配列に結合すると、転写後プロセシング、例えば、そのようなコード鎖の修飾、スプライシング、５’キャップ形成もしくは３’末端形成、５’キャップ形成もしくは３’末端形成、輸送または翻訳のうちの１つ以上を変化させることを特徴とする。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、その標的コード鎖のスプライシングを変化させることができ、アンチセンスコード鎖複合体は、例えば、ＲＮアーゼＨによって分解されるか、または分解され得る。

およそ（Ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ）または約（ａｂｏｕｔ）は、数字に言及して使用される場合、いずれかの方向で５％、１０％、１５％または２０％の範囲内に入る数字を含む（特に指示しない限り、または文脈から明らかでない限り、その数字よりも大きいまたは小さい。

結合剤とは、本明細書に記載される目的の標的に結合する任意の実体を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。目的の結合剤は、特定の相互作用の状況では、その標的を他の潜在的な結合パートナーと区別するため、その標的と特異的に結合することができる。結合剤は、任意の化学クラスの実体、例えば、高分子、非高分子、小分子、ポリペプチド、炭水化物、脂質、核酸などであり得るか、またはそれを含み得る。結合剤は、単一の化学的実体である。結合剤は、非共有結合相互作用による条件下で互いに会合した２つ以上の別個の化学的実体の複合体である。生物医学分野の当業者であれば、結合剤が、一般的結合部分、例えば、ビオチン／アビジン／ストレプトアビジンまたはクラス特異的抗体のうちの１つと、特異的結合部分、例えば、一般的結合部分のパートナーに結合した特定の分子標的を有する抗体またはアプタマーとを含み得ることを知っている。そのような手法は、異なる特異的結合部分と同じ一般的結合部分パートナーとの結合を介したいくつかの結合剤のモジュール式組立体を可能にすることができる。結合剤は、例えば、抗体もしくは抗体断片を含むポリペプチドであるか、またはそれを含む。結合剤は、小分子であるか、または小分子を含む。結合剤は、核酸、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドであるか、またはそれを含む。結合剤はアプタマーである。結合剤は高分子である。結合剤は高分子ではない。結合剤は、高分子部分を欠くため、非高分子性である。結合剤は、炭水化物であるか、または炭水化物を含む。結合剤は、レクチンであるか、またはレクチンを含む。結合剤は、ペプチド模倣物であるか、またはペプチド模倣物を含む。結合剤は、スキャフォールドタンパク質であるか、またはスキャフォールドタンパク質を含む。結合剤は、ミメオトープ（ｍｉｍｅｏｔｏｐｅ）であるか、またはミメオトープを含む。結合剤は、ステープルペプチドであり得るか、またはステープルペプチドを含み得る。結合剤は、ＤＮＡもしくはＲＮＡなどの核酸、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドであり得るか、またはそれを含み得る。

ＢＭＰ受容体は、生物医学分野の当業者に知られている。ＢＭＰ受容体（ＢＭＰＲ）は、１０～１２個のシステイン残基を有する短い細胞外ドメインと、単一の膜貫通ドメインと、細胞内セリン／トレオニンキナーゼドメインとから構成されるセリン／トレオニンキナーゼ受容体である。Ｂｒａｇｄｏｎｅｔａｌ．（２０１１）ＢＭＰ受容体は、２つのタイプ、すなわち、ＢＭＰ受容体１型（ＢＭＰＲ１）およびＢＭＰ受容体２型（ＢＭＰＲ２）を有する。Ｓａｎｃｈｅｚ－Ｄｕｆｆｈｕｅｓｅｔａｌ．（２０２０）を参照されたい。ＢＭＰ受容体の数は限られている。研究者らは、５つのＢＭＰＩ型受容体（ＢＲＩ）、すなわち、ＡＬＫ１（Ａｃｖｒｌ１）、ＡＬＫ２（ＡｃｔＲＩ）、ＡＬＫ３（ＢＲＩａ）、ＡＬＫ４（ＡｃｔＲＩｂ）およびＡＬＫ６（ＢＲＩｂ）と、３つのＩＩ型受容体、すなわち、ＢＲＩＩ、ＡｃｔＲＩＩａおよびＡｃｔＲＩＩｂとを同定した。Ｂｒａｇｄｏｎｅｔａｌ．（２０１１）を参照されたい。ＢＭＰは、ＢＭＰ受容体１型と２型との組合せに結合する。ＢＭＰは、カノニカルなシグナル伝達経路と非カノニカルなシグナル伝達経路とを有する。カノニカルな経路では、ＢＭＰは、ＢＭＰ受容体と相互作用して、Ｉ型およびＩＩ型の２つの二量体から構成されるヘテロ四量体複合体を形成することによってシグナル伝達を開始する。Ｗａｎｇｅｔａｌ．（２０１４）を参照されたい）。この複合体が形成された後、ＩＩ型受容体は、ＧＳドメイン内のＩ型受容体をリン酸化する。Ｉ型受容体がリン酸化された後、Ｉ型受容体は、Ｒ－ＳＭＡＤとして知られる下流のＳＭＡＤ分子をリン酸化することができる。ＢＭＰシグナル伝達に関連付けられたＲ－ＳＭＡＤは、Ｓｍａｄ１、Ｓｍａｄ５およびＳｍａｄ８である。Ｗａｎｇｅｔａｌ．（２０１４）。次いで、これらのＳｍａｄはＳｍａｄ４に結合し、複合体全体が核内に転位置する。Ｗａｎｇｅｔａｌ．（２０１４）。Ｓｍａｄ複合体は、遺伝子調節を活性化または不活性化することができる転写因子として作用するＷａｎｇｅｔａｌ．（２０１４）。図１は、ＢＭＰ結合のプロセスを示す。

骨形成タンパク質（ＢＭＰ）は、人体を含む、哺乳動物の体内の必須分子として、生物医学分野の当業者に知られている。ＢＭＰは、タンパク質の形質転換増殖因子β（ＴＧＦ－β）スーパーファミリーに属する一群のシグナル伝達分子である。Ｂｒａｇｄｏｎｅｔａｌ．（２０１１）を参照されたい。２０を超えるＢＭＰが発見され、これにより、ＢＭＰＳが形質転換増殖因子β（ＴＧＦ－β）スーパーファミリーのタンパク質となった。Ｂｒａｇｄｏｎｅｔａｌ．（２０１１）を参照されたい。ＢＭＰは、骨発生を補助する分子として最初に同定されたが、ＢＭＰは、身体の多くの発生機能に何らかの役割を果たすことが後に示された。Ｗａｎｇｅｔａｌ．（２０１４）を参照されたい。

特徴的な配列要素とは、高分子、例えば、その高分子の特徴的な部分であるポリペプチドまたは核酸に見られる配列要素を指すために、生物医学分野の当業者によって使用される。特徴的な配列要素の存在は、高分子の特定の活性または特性の存在またはレベルと相関する。特徴的な配列要素の有無により、特定の高分子はそのような高分子の特定のファミリーもしくは群のメンバーとして、またはそのような高分子の特定のファミリーもしくは群のメンバーではないとして定義される。特徴的な配列要素は、少なくとも２つのモノマー、例えば、アミノ酸またはヌクレオチドを典型的に含む。特徴的な配列要素は、隣接して結合したモノマーを含む。特徴的な配列要素は、その長さが、配列要素を共有する高分子にわたって変化し得る１つ以上のスペーサー領域によって離隔された連続モノマーの少なくとも第１および第２のストレッチを含む。

相補的とは、特定の塩基、ヌクレオシド、ヌクレオチドまたは核酸間の正確な対形成能を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。アデニン（Ａ）とウリジン（Ｕ）とは相補的であり、アデニン（Ａ）とチミジン（Ｔ）とは相補的であり、グアニン（Ｇ）とシトシン（Ｃ）とは相補的であり、生物医学分野ではワトソン・クリック塩基対形成と呼ばれる。鎖が逆並列配向でアライメントされる場合、第１の核酸配列の特定の位置のヌクレオチドが第２の核酸配列の反対側に位置するヌクレオチドに相補的であれば、ヌクレオチド（ｎｔ）は相補的な塩基対を形成し、核酸はその位置で相補的である。第２の核酸に対する第１の核酸の相補性パーセントは、評価ウィンドウにわたって最大相補性についてそれらを逆並列配向でアライメントし、ウィンドウ内で相補的な塩基対を形成する両鎖のｎｔの総数を決定し、ウィンドウ内のヌクレオチドの総数で割り、１００を乗じることによって評価され得る。ＡＡＡＡＡＡＡＡとＴＴＴＧＴＴＡＴとは、１６ヌクレオチドのうち１２ヌクレオチドが相補的な塩基対にあるため、７５％相補的である。特定の相補性％を達成するために必要な相補的なｎｔの数を計算する場合、分数を最も近い整数に丸める。非相補的なヌクレオチドによって占められる位置はミスマッチを構成し、すなわち、その位置は非相補的な塩基対によって占められる。評価ウィンドウは、二重部分または対象部分について本明細書に記載される長さを有し得る。相補的な配列は、同じ長さであれば両ヌクレオチド配列の全長にわたって、または異なる長さであれば短い方の配列の全長にわたって、第１のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドと第２のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドとの塩基対形成を含む。そのような配列は、互いに関して完全に相補的である（１００％の相補性を有する）。評価ウィンドウにわたって少なくとも７０％相補的である核酸は、そのウィンドウにわたって実質的に相補的であると考えられる。相補的な核酸は、評価ウィンドウにわたって少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％相補的であり得る。本明細書に記載される第２の配列に関して第１の配列が実質的に相補的と呼ばれる場合、２つの配列は完全に相補的であり得るか、またはそれらはハイブリダイゼーション時に１つ以上の不一致塩基、例えば、ハイブリダイゼーション時に最大約５％、最大約１０％、最大約１５％、最大約２０％もしくは最大約２５％の不一致塩基、例えば、最大３０塩基対の二重鎖に対するハイブリダイゼーション時に１、２、３、４、５もしくは６個の不一致塩基を含み得るが、それらの意図する用途に最も関連する条件下でハイブリダイズする能力を保持する。２つのオリゴヌクレオチドがハイブリダイゼーション時に１つ以上の一本鎖オーバーハングを形成する場合、そのようなオーバーハングは、相補性パーセントの決定に関してミスマッチ、または不対のヌクレオチドと見なされない。２１ヌクレオチド長の一方のオリゴヌクレオチドと２３ヌクレオチド長の他方のオリゴヌクレオチドとを含むｄｓＲＮＡの二本鎖であって、長い方のオリゴヌクレオチドが、短い方のオリゴヌクレオチドに完全に相補的な、２１ヌクレオチドの配列と、２ヌクレオチドオーバーハングとを含む二本鎖は、完全に相補的であると呼ばれ得る。相補的な配列は、ハイブリダイズする能力に関する要件が満たされる限り、１つ以上の非ワトソン・クリック塩基対、または非天然ヌクレオチドおよび他の修飾ヌクレオチドから形成された塩基対を含み得る。そのような非ワトソン・クリック塩基対には、Ｇ：ＵＷｏｂｂｌｅ塩基対形成またはＨｏｏｇｓｔｅｅｎ塩基対形成が含まれる。生物医学分野の当業者であれば、グアニン、シトシン、アデニンおよびウラシルが、ｗｏｂｂｌｅルールに従って、そのような塩基を有するヌクレオチドを含むポリヌクレオチドの塩基対形成特性を実質的に変化させることなく、他の塩基によって置換され得ることを知っている。例えば、Ｍｕｒｐｈｙ＆Ｒａｍａｋｒｉｓｈｎａｎ（２００４）を参照されたい。イノシンをその塩基として含むヌクレオチドは、アデニン、シトシンまたはウラシルを含有するヌクレオチドと塩基対形成することができる。ウラシル、グアニンまたはアデニンを含有するヌクレオチドは、本明細書に記載の阻害性ＲＮＡのヌクレオチド配列では、例えば、イノシンを含有するヌクレオチドによって置換され得る。相補的、完全に相補的、および実質的に相補的という用語は、任意の２つの核酸間の塩基マッチング、例えば、二本鎖核酸またはその一部のセンス鎖とアンチセンス鎖との間の塩基マッチングに関して使用され得る。生物医学分野の当業者であれば、ハイブリダイズという用語が、２つの核酸配列間の相互作用を指し、２つの核酸配列は、同じ核酸分子の一部であり得るか、または相補的部分を含むもしくは相補的部分からなる異なる核酸分子の一部であり得るかもしくはそれを含み得るため、目的の特定の条件下で安定な二重鎖構造、すなわち、分子内二重鎖または分子間二重鎖が形成されることを知っている。

併用療法とは、対象が２つ以上の治療レジメン、例えば、２つ以上の治療剤に同時に曝露される状況を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。２つ以上のレジメンは、同時に投与され得る。そのようなレジメンは連続的に投与され得、例えば、第１のレジメンの全用量が、第２のレジメンの任意の用量の投与前に投与される。そのような作用物質は、重複した投与レジメンで投与される。併用療法の投与は、他の作用物質またはモダリティを併用で投与されている対象への１つ以上の作用物質またはモダリティの投与を伴い得る。明確にするために、併用療法は、個々の作用物質が単一の組成物で一緒に、または必然的に同時に投与されることを必要としないが、２つ以上の作用物質またはその活性部分は、組合せ組成物で一緒に、または組合せ化合物であっても一緒に、例えば、単一の化学的複合体または共有結合性実体の一部として投与され得る。

同等とは、観察された差または類似性に基づいて結論が合理的に引き出され得ることを生物医学分野の当業者が知るように、互いに同一ではない可能性があるが、それらの間の比較を可能にするのに十分に類似している２つ以上の作用物質、実体、状況、条件のセットなどを指すために生物医学分野の当業者によって使用される。条件、状況、個体または集団の同等のセットは、複数の実質的に同一の特徴と、１つまたは少数の変化する特徴とを特徴とする。生物医学分野の当業者であれば、２つ以上のそのような作用物質、実体、状況、条件のセットなどが同等であると考えられるために、任意の所与の状況ではどのような同一性が必要であるかを状況に応じて知っている。生物医学分野の当業者であれば、状況、個体または集団のセットが、状況、個体もしくは集団の異なるセットの下で、または状況、個体もしくは集団の異なるセットで観察される得られた結果または現象の差が、変化したそれらの特徴の変化によって引き起こされるか、または変化したそれらの特徴の変化を示すという合理的な結論を保証するのに十分な数および種類の実質的に同一の特徴を特徴とする場合、状況、個体または集団のセットが互いに同等であることを知っている。

「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、非排他的な方法で要素、構成要素または工程を指し、参照された要素、構成要素または工程が存在し得るか、使用され得るか、または他の要素、構成要素もしくは工程と組み合わせられ得ることを示す。ａ、ａｎおよびｔｈｅという単数形の用語は、文脈上別段の指示がない限り、複数の指示対象を含む。同様に、またはという包括的な用語は、文脈上別段の指示がない限り、およびという用語を包含すべきである。ｅ．ｇ．という略語は、非限定的な例を意味し、例えば（ｆｏｒｅｘａｍｐｌｅ）という用語と同義である。

ドメインとは、実体の部分または一部を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。ドメインは、ドメインがその親実体の残部から物理的に分離されている場合に、特定の構造的特徴または機能的特徴を実質的にまたは完全に保持するように、実体の特定の構造的特徴または機能的特徴に関連付けられる。ドメインは、その（親）実体から分離され、異なる（レシピエント）実体と結合した場合に、親実体ではそれを特徴付けた１つ以上の構造的特徴もしくは機能的特徴をレシピエント実体に実質的に保持もしくは付与する実体の一部であり得るか、またはそれを含み得る。ドメインは、分子、例えば、小分子、炭水化物、脂質、核酸またはポリペプチドの部分または一部である。ドメインは、ポリペプチドの部分、例えば、ＭｕＳＫタンパク質のＩｇ２ドメインである。ドメインは、特定の構造要素、例えば、特定のアミノ酸配列もしくは配列モチーフ、アルファ－ヘリックス特性、ベータ－シート特性、コイルドコイル特性、ランダムコイル特性など、または特定の機能的特徴、例えば、結合活性、酵素活性、折り畳み活性、シグナル伝達活性などを特徴とし得る。

投与レジメンとは、対象に個別に投与され、期間によって典型的に区切られる一連の単位用量（典型的には複数）を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。所与の治療剤は、１つ以上の用量を伴い得る推奨される投与レジメンを有する。投与レジメンは、それぞれが他の用量から時間的に区切られた複数の用量を含む。個々の用量は、同じ長さの期間によって互いから区切られる。投与レジメンは、複数の用量と、個々の用量を区切る少なくとも２つの異なる期間とを含む。投与レジメン内の全用量は、同じ単位用量量である。投与レジメン内の異なる用量は、異なる量である。投与レジメンは、第１の用量量の第１の用量、続いて、第１の用量量とは異なる第２の用量量の１つ以上の追加用量を含む。投与レジメンは、第１の用量量の第１の用量、続いて、第１の用量量と同じ第２の用量量の１つ以上の追加用量を含む。投与レジメンは、関連する集団にわたって投与された場合、所望のまたは有益な結果と相関し、すなわち、治療的投与レジメンである。

操作された（ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ）とは、人の手によって操作された（ｍａｎｉｐｕｌａｔｅｄ）態様を指す。抗体、抗体試薬、その抗原結合部分、ＣＡＲまたは二重特異性抗体は、抗体、抗体試薬、その抗原結合部分、ＣＡＲまたは二重特異性抗体の配列が、自然界に存在する抗体の配列とは異なるように人の手によって操作された（ｍａｎｉｐｕｌａｔｅｄ）場合に操作された（ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ）と考えられる。生物医学分野では、操作された（ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ）ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの子孫およびコピーは、実際の操作（ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ）が以前の実体に対して行われたとしても、典型的には依然として操作された（ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ）と呼ばれる。

核酸配列の発現とは、これらの事象、すなわち、（１）例えば、転写による、ＤＮＡ配列からのＲＮＡ鋳型の産生、（２）例えば、スプライシング、編集、５’キャップ形成もしくは３’末端形成によるＲＮＡ転写物のプロセシング、（３）例えば、核から細胞質へのＲＮＡ転写物の輸送、または（４）ポリペプチドもしくはタンパク質へのＲＮＡの翻訳、もしくは（４）ポリペプチドもしくはタンパク質の翻訳後修飾のうちの１つ以上を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。

材料または実体の断片とは、全体の別個の部分を含むが、全体に見られる１つ以上の部分を欠く構造を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。断片は、このような別個の部分からなる。断片は、全体に見られる特徴的な構造要素もしくは部分からなるか、またはそれを含む。高分子断片は、高分子全体に見られるモノマー単位、すなわち、残基を含むか、またはそれからなる。高分子断片は、高分子全体に見られるモノマー単位、すなわち、残基の少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約２５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％もしくはそれ以上を含むか、またはそれからなる。材料全体または実体全体は、断片の親と呼ばれ得る。

遺伝子とは、産物、例えば、ＲＮＡ産物またはポリペプチド産物をコードする、染色体内のＤＮＡ配列を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。遺伝子は、コード配列（すなわち、特定の産物をコードする配列を含む。遺伝子は、非コード配列を含む。遺伝子は、コード配列、すなわち、エクソン配列および非コード配列、すなわち、イントロン配列の両方を含み得る。遺伝子は、遺伝子発現、例えば、細胞型特異的発現、誘導性発現などの１つ以上の態様を制御し得るかまたはそれらに影響を及ぼし得る１つ以上の調節エレメントを含み得る。

遺伝子産物または発現産物とは、遺伝子から転写されたＲＮＡ（プレプロセシングまたはポストプロセシング、または遺伝子から転写されたＲＮＡによってコードされたポリペプチド（前修飾または後修飾）を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。遺伝子産物は、ＲＮＡ転写物の特定のプロセシングされた形態、例えば、特定の編集された形態、特定のスプライス形態、特定のキャップされた形態などであり得るか、またはそれを含み得る。

相同性とは、高分子分子間、例えば、核酸分子間、例えば、ＤＮＡ分子間もしくはＲＮＡ分子間またはポリペプチド分子間の全体的な関連性を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。高分子分子は、それらの配列が少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％同一である場合、互いに相同であると考えられる。高分子分子は、それらの配列が少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％類似している場合、互いに相同であると考えられる。

同一性とは、高分子分子間、例えば、核酸分子間、例えば、ＤＮＡ分子間もしくはＲＮＡ分子間またはポリペプチド分子間の全体的な関連性を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。高分子分子は、それらの配列が少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％同一である場合、互いに実質的に同一であると考えられる。２つの核酸配列またはポリペプチド配列の同一性パーセントの計算は、最適な比較目的のために２つの配列をアライメントすることによって行うことができ、例えば、最適なアライメントのために第１および第２の配列の一方または両方にギャップを導入することができ、比較のために非同一配列を無視することができる。比較のためにアライメントされた配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または実質的に１００％であり得る。次いで、対応する位置のヌクレオチドを比較する。第１の配列内の位置が、第２の配列内の対応する位置と同じ残基、例えば、ヌクレオチドまたはアミノ酸によって占められている場合、分子はその位置で同一である。２つの配列間の同一性パーセントは、ギャップの数および各ギャップの長さを考慮して、配列によって共有される同一位置の数の関数であり、これは、２つの配列の最適なアライメントのために導入される必要がある。２つの配列間の配列の比較および同一性パーセントの決定は、数学的アルゴリズムを用いて達成することができる。２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれたＭｅｙｅｒｓおよびＭｉｌｌｅｒのアルゴリズム（１９８９）を使用して決定することができる。核酸配列の比較は、ＰＡＭ１２０重量残基表、１２のギャップ長ペナルティ、および４のギャップペナルティを使用するＡＬＩＧＮプログラムを用いて行うことができる。２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰｍａｔｒｉｘを使用するＧＣＧソフトウェアパッケージのＧＡＰプログラムを使用して決定することができる。

改善、増加、阻害、低減またはその文法的等価物とは、ベースラインまたは他の参照測定と比較した値を示すことを指すために生物医学分野の当業者によって使用される。適切な参照測定は、例えば、特定の作用物質もしくは治療の前もしくは後に存在しない他の点では同等の条件下で、もしくは適切な参照作用物質、例えば、陽性対照作用物質もしくは陰性対照作用物質の存在下で、特定の系、例えば、単一の個体、単一の細胞、もしくは細胞集団に対する測定であり得るか、またはそれを含み得る。適切な参照測定は、作用物質もしくは治療の存在下で、特定の様式で応答することが知られているかもしくは予測される同等の系に対する測定であり得るか、またはそれを含み得る。生物医学分野の当業者であれば、改善、増加、低減などが統計的に有意な変化を典型的に指すことを知っている。生物医学分野の当業者であれば、どの程度の変化が関連し得るかを状況から知っている。変化は、倍率変化、すなわち、変化した値が１．１、１．２、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０、４０、５０倍またはそれ以上、例えば、５００、１０００倍（関連する基準に対して、１の間および１よりも上のあらゆる整数および小数点、例えば、１．５、１．６、１．７、１．８倍などの差を含むであるような変化であり得る。変化はパーセンテージ変化であり得る。したがって、変化した値は、関連する基準に対して、間のあらゆる整数および小数点を含む、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または１００％の増加または減少である。

ヌクレオチド間結合（ｉｎｔｅｒｎｕｃｌｅｏｔｉｄｉｃｌｉｎｋａｇｅ）とは、オリゴヌクレオチドのヌクレオチド単位間のリン含有結合を指すために生物医学分野の当業者によって使用され、糖間結合（ｉｎｔｅｒ－ｓｕｇａｒｌｉｎｋａｇｅ）およびリン原子架橋と交換可能である。ヌクレオチド間結合は、天然に存在するＤＮＡ分子およびＲＮＡ分子に見られるようなホスホジエステル結合である。ヌクレオチド間結合は、修飾されたヌクレオチド間結合であり、ホスホジエステル結合の各酸素原子は、有機部分または無機部分によって独立して置換されていてもよい。そのような有機部分または無機部分は、限定するものではないが、＝Ｓ、＝Ｓｅ、＝ＮＲ’、－ＳＲ’、－ＳｅＲ’、－Ｎ（Ｒ’）２、Ｂ（Ｒ’）３、－Ｓ－、－Ｓｅ－、および－Ｎ（Ｒ’）－から選択され、各Ｒ’は、独立して定義および記載される。ヌクレオチド間結合は、ホスホトリエステル結合、ホスホロチオエートジエステル結合または修飾ホスホロチオエートトリエステル結合である。生物医学分野の当業者であれば、ヌクレオチド間結合が、結合内の酸部分または塩基部分の存在に起因して、所与のｐＨでアニオンまたはカチオンとして存在し得ることを知っている。ヌクレオチド間結合はキラル結合であり得る。

結合したとは、２つ以上の部分に関して使用される場合、結合が形成される条件下、および新しい分子構造が使用される条件下、例えば、生理学的条件下で部分が会合したままであるように、十分に安定な分子構造を形成するために部分が互いに物理的に会合または接続されていることを意味するために、生物医学分野の当業者によって使用される。結合は共有結合であり得る。結合は非共有結合性であり得る。部分は、直接的または間接的に結合し得る。２つの部分が直接結合している場合、それらは互いに共有結合しているか、または２つの部分間の分子間力がそれらの会合を維持するように十分に近接している。２つの部分が間接的に結合している場合、それらは、２つの部分間の会合を維持する第３の部分に共有結合または非共有結合のいずれかでそれぞれ結合している。２つの部分がリンカーまたは結合部分（ｌｉｎｋｉｎｇｍｏｉｅｔｙ）もしくは結合部分（ｌｉｎｋｉｎｇｐｏｒｔｉｏｎ）によって結合されていると呼ばれる場合、２つの結合部分間の結合は間接的であり、典型的には、結合部分の各々がリンカーに共有結合している。リンカーは、合理的な期間内に、（条件に応じて保護され得る）部分の安定性と一致する条件下で、合理的な収率をもたらすのに十分な量で、結合される２つの部分と反応する任意の好適な部分であり得る。

長期投与とは、治療剤または治療薬を少なくとも１２週間の期間にわたって投与することを意味する。これは、治療剤または治療薬が少なくとも１２週間にわたって（ｏｖｅｒａｐｅｒｉｏｄｏｆａｔｌｅａｓｔ１２ｗｅｅｋｓ）または少なくとも週間の期間にわたって（ｆｏｒａｐｅｒｉｏｄｏｆａｔｌｅａｓｔ１２ｗｅｅｋｓ）有効であるように投与されることを含み、例えば、持続放出組成物または長時間作用型治療剤もしくは長時間作用型治療薬が使用される場合、投与自体が１２週間にわたって行われることを必ずしも意味しない。したがって、対象は、少なくとも１２週間の期間にわたって治療される。多くの場合、長期投与は、少なくとも４ヶ月、少なくとも５ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも７ヶ月、少なくとも８ヶ月、少なくとも９ヶ月もしくはそれ以上、または少なくとも１年、少なくとも２年、少なくとも３年、少なくとも５年、少なくとも７年もしくは少なくとも１０年もしくはそれ以上にわたる。

調節物質剤とは、その存在、レベル、程度、種類または形態が別の作用物質、すなわち、調節された作用物質または標的剤のレベルまたは活性の増加、低下または他の変化と相関する作用物質、状態または事象を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。調節物質剤は、小分子、ポリペプチド、核酸、炭水化物、脂質、金属、もしくは関連する活性化活性を示す任意の他の実体を含む任意の化学クラスの作用物質であり得るか、またはそれを含み得る。調節物質剤は、直接的であり得る（この場合、調節物質剤は、その標的に直接影響を及ぼす）。調節物質剤は、間接的であり得る（この場合、調節物質剤は、その標的に結合すること以外によって、例えば、標的の調節因子と相互作用することによって、標的のレベルまたは活性が変化するように、その影響を及ぼす。調節物質は、標的のレベル、形態または活性が変化するように、標的、例えば、タンパク質または核酸に結合するタンパク質、例えば、抗体または核酸、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドである結合剤である。レベル、形態または活性の変化とは、標的核酸配列から発現される変化したｍＲＮＡ、タンパク質のレベルの増加または低下である。生物医学分野の当業者であれば、調節物質剤が結合標的に結合することができ、結合標的を潜在的に調節することができ、その結合がさらなる調節された標的のレベルまたは活性の増加または低下を引き起こすことを知っている。核酸標的に結合する調節物質剤は、その標的のレベルまたは活性を変化させることができる。調節物質剤は、例えば、その修飾、スプライシング、５’キャップ形成もしくは３’末端形成、輸送または翻訳などを変化させることによって、その核酸標的の活性を調節することができ、その結果、所望の産物、例えば、ｍＲＮＡのレベルが増加もしくは低下するか、またはそのような核酸標的によってコードされるポリペプチドなどの下流標的を調節することができる。調節物質剤は、一次転写物に結合し、そのスプライシングパターンを変化させて、特定のスプライシングされた形態、例えば、成熟ｍＲＮＡのレベルもしくは活性を増加もしくは低下させるか、もしくは変化させ、それにより、産物、例えば、そのような特定のスプライシングされた形態であるか、もしくはそのような特定のスプライシングされた形態によってコードされるポリペプチドのレベルの増加もしくは低下が達成され得るオリゴヌクレオチドであり得るか、またはそれを含み得る。

調節物質療法とは、所望の治療効果を達成するために目的の特定の標的を調節する調節物質剤の投与を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。調節物質療法は、単回用量の調節物質を投与することを伴う。調節物質療法は、複数回用量の調節物質を投与することを伴う。調節物質療法は、治療効果を達成することが知られているかまたは予測される投与レジメンに従って調節物質を投与することを伴うが、これは、そのような結果が、指定された程度の統計的信頼性まで、例えば、関連する集団への投与によって確立されたためである。調節物質療法は、本明細書に記載の調節物質剤の送達を伴う。調節物質剤は、標的のレベル、形態もしくは活性が変化するように、標的、例えば、タンパク質もしくは核酸に結合するタンパク質、例えば、抗体もしくは核酸、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドである結合剤であり得るか、またはそれを含み得る。調節物質剤は結合標的に結合することができ、結合標的を潜在的に調節することができ、その結合は、さらなる調節物質標的のレベルまたは活性の増加または低下を引き起こす。核酸標的に結合する調節物質剤は、その標的のレベルまたは活性を変化させることができる。調節物質剤は、例えば、その修飾、スプライシング、５’キャップ形成もしくは３’末端形成、輸送または翻訳などを増加または低下させることによって、その核酸標的の活性を調節することができ、その結果、何らかのレベルの所望の産物、例えば、ｍＲＮＡが生成されるか、またはそのような核酸標的によってコードされるポリペプチドなどの下流標的を調節することができる。調節物質剤は、一次転写物に結合し、そのスプライシングパターンを変化させて、特定のスプライシングされた形態、例えば、成熟ｍＲＮＡのレベルもしくは活性をもたらし、それにより、産物、例えば、そのような特定のスプライシングされた形態であるか、もしくはそのような特定のスプライシングされた形態によってコードされるポリペプチドのレベルの増加もしくは低下が達成され得るオリゴヌクレオチドであり得るか、またはそれを含み得る。

部分とは、特定の構造または活性を有する定義された化学基または実体を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。

ＭｕＳＫは、３つのＩｇおよび１つのＣＲＤ／Ｆｚドメインならびに細胞内チロシンドメイン（ＴＫ）から細胞外に構成される受容体チロシンキナーゼとして生物医学分野の当業者に知られている。ＭｕＳＫの最もよく理解されている機能は、Ｉｇ１ドメインへのアグリン－ＬＲＰ４の結合がＭｕＳＫＴＫ活性およびシナプス分化を誘発する神経筋接合部（ＮＭＪ）にある（Ｋｉｍｅｔａｌ．，２００８；Ｚｈａｎｇｅｔａｌ．，２００８ａ）。ＭｕＳＫはまた、ＢＭＰならびにその受容体ＡＬＫ３および６に結合し、ＢＭＰシグナル伝達をアップレギュレートし、筋原性細胞内で転写応答の組成を形作るＢＭＰ共受容体である。Ｙｉｌｍａｚｅｔａｌ．（２０１６）を参照されたい。このＢＭＰシグナル伝達経路は、ＭｕＳＫＴＫ活性を調節することも、必要とすることも、アグリン－ＬＲＰ４によって活性化されることもない。ＭｕＳＫＩｇ３ドメインは、高親和性ＢＭＰ結合に必要であるが、アグリン－ＬＲＰ４ＴＫ活性化にとっては重要ではない。Ｉｇ３ドメインは、脳内を含め、内因的に選択的にスプライシングされる。Ｇａｒｃｉａ－Ｏｓｔａｅｔａｌ．，２００６；Ｈｅｓｓｅｒｅｔａｌ．，１９９９を参照されたい。ＢＭＰシグナル伝達はＮＳＣの静止状態を誘導し、新生ニューロンの統合を阻害することができるため、ＭｕＳＫ－ＢＭＰシグナル伝達を減少させることによってＢＭＰ駆動を抑制することにより、神経発生を増加させることができる。

ＭｕＳＫ－ＢＭＰ経路は、生物医学分野の当業者に知られている。脳は、生涯を通じてニューロンおよびグリア細胞を生成する神経幹細胞（ＮＳＣ）を有する。Ｍｏｒｅｎｏ－Ｊｉｍｅｎｅｚｅｔａｌ．（２０１９）；Ｓｔｅｉｎｅｒｅｔａｌ．（２０１９）。ＢＭＰは、少なくとも２つの重要な神経幹細胞決定点、すなわち、（１）増殖する幹細胞が細胞周期を出て、新鮮な幹細胞を供給することができる予備プールを補充するために戻る静止状態、および（２）成熟子孫への分化を調節する。Ｍｉｒａｅｔａｌ．（２０１０）を参照されたい。神経幹細胞内のＢＭＰ経路を操作することは、成体脳内で神経発生を調節するための魅力的な標的である。

ナノ粒子とは、１０００ナノメートル（ｎｍ）未満の直径を有する粒子を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。ナノ粒子は、米国科学財団によって定義されるように、３００ｎｍ未満の直径を有する。ナノ粒子は、米国国立衛生研究所によって定義されるように、１００ｎｍ未満の直径を有する。ナノ粒子は、例えば、管腔を画定するために空間または区画を取り囲み、密閉する両親媒性実体から典型的に構成されるミセル膜によってバルク溶液から分離された密閉区画を含むため、ミセルである。ミセル膜は、少なくとも１つの高分子、例えば、生体適合性高分子または生分解性高分子を含む。

核酸とは、その最も広い意味で、オリゴヌクレオチド鎖に組み込まれるかまたは組み込まれ得る任意の化合物または物質を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。核酸は、ホスホジエステル結合を介してオリゴヌクレオチド鎖に組み込まれるかまたは組み込まれ得る化合物または物質である。核酸とは、個々の核酸残基、例えば、ヌクレオチドまたはヌクレオシドを指し得る。核酸とは、個々の核酸残基を含むオリゴヌクレオチド鎖を指し得る。核酸は、ＲＮＡであるか、またはＲＮＡを含む。核酸は、ＤＮＡであるか、またはＤＮＡを含む。核酸は、１つ以上の天然の核酸残基であるか、１つ以上の天然の核酸残基を含むか、または１つ以上の天然の核酸残基からなる。核酸は、１つ以上の核酸類似体であるか、１つ以上の核酸類似体を含むか、または１つ以上の核酸類似体からなる。核酸類似体は、ホスホジエステル骨格を利用しないため、核酸とは異なる。核酸は、生物医学分野で公知であり、骨格にホスホジエステル結合の代わりにペプチド結合を有し、本発明の範囲内であると考えられる１つ以上のペプチド核酸であるか、それを含むか、またはそれからなる。核酸は、ホスホジエステル結合ではなく、１つ以上のホスホロチオエート結合または５’－Ｎ－ホスホラミダイト結合を有することができる。核酸は、１つ以上の天然ヌクレオシド、例えば、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウリジン、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、デオキシグアノシンおよびデオキシシチジンであるか、それを含むか、またはそれからなる。核酸は、１つ以上のヌクレオシド類似体、例えば、２－アミノアデノシン、２－チオチミジン、イノシン、ピロロ－ピリミジン、３メチルアデノシン、５－メチルシチジン、Ｃ５プロピニル－シチジン、Ｃ５プロピニル－ウリジン、２アミノアデノシン、Ｃ５－ブロモウリジン、Ｃ５－フルオロウリジン、Ｃ５－ヨードウリジン、Ｃ５－プロピニル－ウリジン、Ｃ５プロピニル－シチジン、Ｃ５－メチルシチジン、２－アミノアデノシン、７－デアザアデノシン、７デアザグアノシン、８－オキソアデノシン、８－オキソグアノシン、（６）－メチルグアニン、２－チオシチジン、メチル化塩基、介在塩基（ｉｎｔｅｒｃａｌａｔｅｄｂａｓｅ）およびそれらの組合せであるか、それを含むか、またはそれからなる。核酸は、天然核酸内のそれと比較して、１つ以上の修飾糖、例えば、２’－フルオロリボース、リボース、２’デオキシリボース、アラビノースおよびヘキソースを含む。核酸は、ＲＮＡまたはタンパク質などの機能的遺伝子産物をコードするヌクレオチド配列を有する。核酸は、１つ以上のイントロンを含む。核酸は、天然源からの単離、（インビボまたはインビトロでの）相補的鋳型に基づく重合による酵素的合成、組換え細胞または組換え系での再生、および化学合成のうちの１つ以上によって調製される。核酸は、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９５、少なくとも１００、少なくとも１１０、少なくとも１２０、少なくとも１３０、少なくとも１４０、少なくとも１５０、少なくとも１６０、少なくとも１７０、少なくとも１８０、少なくとも１９０、少なくとも２０、少なくとも２２５、少なくとも２５０、少なくとも２７５、少なくとも３００、少なくとも３２５、少なくとも３５０、少なくとも３７５、少なくとも４００、少なくとも４２５、少なくとも４５０、少なくとも４７５、少なくとも５００、少なくとも６００、少なくとも７００、少なくとも８００、少なくとも９００、少なくとも１０００、少なくとも１５００、少なくとも２０００、少なくとも２５００、少なくとも３０００、少なくとも３５００、少なくとも４０００、少なくとも４５００、少なくとも５０００またはそれ以上の残基長である。核酸は、部分的または全体的に一本鎖である。核酸は、部分的または全体的に二本鎖である。核酸は、ポリペプチドをコードする少なくとも１つの要素を含むヌクレオチド配列を有することができるか、またはポリペプチドをコードする配列の相補体である。核酸は、酵素活性を有する。

プロドラッグとは、生物に投与された際に体内で代謝されて、目的の活性な、例えば、治療剤または診断剤を送達する実体を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。典型的には、そのような代謝は、活性剤が形成されるように少なくとも１つのプロドラッグ部分の除去を伴う。生物医学分野の当業者には様々な形態のプロドラッグが知られている。本明細書に記載される他の化合物と同様に、プロドラッグは、様々な形態、例えば、結晶形態、塩形態などのいずれかで提供され得る。プロドラッグは、その薬学的に許容される塩として提供される。

作動可能に連結されているとは、記載された成分が意図された様式で機能することを可能にする関係にある並置を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。機能要素に作動可能に連結された制御要素は、制御要素と適合する条件下で機能要素の発現または活性が達成されるように関連付けられる。作動可能に連結された制御要素、例えば、プロモーター、エンハンサーなどは、目的のコード要素と連続している、例えば、共有結合している。制御要素は、目的のコード機能要素とともにトランスまたはシスで作用する。

または、は、文脈が該用語の選言的意味を明確に示さない限り、該用語の包括的意味を有するものとする
患者とは、提供される組成物、例えば、ＡＳＯなどのアゴナイジング剤が、例えば、実験目的、診断目的、予防目的、美容目的もしくは治療目的で投与されるかまたは投与され得る任意の生物を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。典型的な患者には、動物、例えば、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類またはヒトなどの哺乳動物が含まれる。患者はヒトである。患者は、１つ以上の障害もしくは病態に罹患しているか、またはそれらに罹患しやすい。患者は、障害または病態の１つ以上の症状を示す。患者は、１つ以上の障害または病態と診断された。障害または病態は、アルツハイマー病（ＡＤ）、または神経変性を特徴とする他の疾患である。患者は、疾患、障害もしくは病態を診断もしくは治療するために特定の治療を受けているか、または受けたことがある。

医薬組成物とは、１つ以上の薬学的に許容される担体とともに製剤化された活性剤、例えば、アゴナイジング剤を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。活性剤は、関連する集団に投与された場合に所定の治療効果を達成する統計学的に有意な確率を示す治療レジメンでの投与に適切な単位用量量で存在する。医薬組成物は、経口投与に適合したもの、水薬、水性または非水性の溶液または懸濁液、錠剤、例えば、頬側、舌下および全身吸収を標的とするもの、ボーラス、粉末、顆粒、舌に塗布するためのペーストを含む固体形態または液体形態で投与するために特別に製剤化され得る。例えば、滅菌溶液もしくは滅菌懸濁液としての皮下、筋肉内、静脈内、腹腔内、髄腔内、静脈内、脳室内もしくは硬膜外注射、もしくは持続放出製剤；皮膚、肺もしくは口腔に適用されるクリーム、軟膏もしくは制御放出パッチもしくはスプレーとしての局所適用；例えば、ペッサリー、クリームもしくはフォームとして膣内もしくは直腸内に；舌下に；眼に；経皮的に；または経鼻的に、肺、および他の粘膜表面に、による非経口投与。

薬学的に許容されるとは、妥当な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応または他の問題もしくは合併症を伴わずヒトおよび動物の組織との接触に適しており、合理的な利益／リスク比に見合った化合物、材料、組成物または剤形を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。

薬学的に許容される担体とは、１つの器官、または身体の一部から別の器官、または身体の一部への化合物の運搬または輸送に関与する、液体または固体の充填剤、希釈剤、賦形剤または溶媒カプセル化材料などの薬学的に許容される材料、組成物またはビヒクルを意味するために生物医学分野の当業者によって使用される。各担体は、製剤の他の成分と適合性であり、患者に有害ではないという意味で許容されなければならない。薬学的に許容される担体には、糖、例えば、ラクトース、グルコースおよびスクロース；デンプン、例えば、トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプン；セルロースおよびその誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロース；トラガカント粉末；麦芽；ゼラチン；タルク；賦形剤、例えば、カカオバターおよび坐剤ワックス；油、例えば、落花生油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油および大豆油；グリコール、例えば、プロピレングリコール；ポリオール、例えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコール；エステル、例えば、オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル；寒天；緩衝剤、例えば、水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム；アルギン酸；パイロジェンフリー水；等張食塩水；リンガー液；エチルアルコール；ｐＨ緩衝液；ポリエステル、ポリカーボネートまたはポリ無水物；ならびに医薬製剤に使用される他の非毒性適合性物質が含まれる。

薬学的に許容される塩とは、薬学的状況で使用するのに適したそのような化合物の塩、すなわち、妥当な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応などを伴わずヒトおよび下等動物の組織との接触に適しており、合理的な利益／リスク比に見合った塩を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。薬学的に許容される塩は、生物医学分野で周知である。Ｂｅｒｇｅｅｔａｌ．（１９７７）は、薬学的に許容される塩を詳細に記載している。薬学的に許容される塩には、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸および過塩素酸などの無機酸と、もしくは酢酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸もしくはマロン酸などの有機酸と、または生物医学分野で使用される他の方法、例えば、イオン交換を使用することによって形成される、アミノ基の塩である非毒性の酸付加塩が含まれる。薬学的に許容される塩には、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、樟脳スルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、グルコン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヨウ化水素酸塩、２－ヒドロキシ－エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩（ｐｅｃｔｉｎａｔｅ）、過硫酸塩、３－フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などが含まれる。提供される化合物は、１つ以上の酸性基、例えば、オリゴヌクレオチドを含み、薬学的に許容される塩は、アルカリ金属、アルカリ土類金属またはアンモニウム、例えば、Ｎ（Ｒ）３のアンモニウム塩であり、式中、各Ｒは、独立して定義され、本開示の塩に記載される。代表的なアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩には、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどが含まれる。薬学的に許容される塩はナトリウム塩である。薬学的に許容される塩はカリウム塩である。薬学的に許容される塩は、カルシウム塩である。薬学的に許容される塩には、適切な場合、非毒性アンモニウム、第四級アンモニウム、ならびにハロゲン化物、水酸化物、カルボキシレート、スルフェート、ホスフェート、ニトレート、１～６個の炭素原子を有するアルキル、スルホネートおよびアリールスルホネートなどの対イオンを使用して形成されるアミンカチオンが含まれる。提供される化合物は、複数の酸基を含む。オリゴヌクレオチドは、例えば、天然のホスフェート結合、または修飾されたヌクレオチド間結合では、２つ以上の酸性基を含むことができる。そのような化合物の薬学的に許容される塩または一般に塩は、同じであっても異なっていてもよい２つ以上のカチオンを含む。薬学的に許容される塩（または一般に塩）では、例えば、酸性基内に約１１以下、約１０以下、約９以下、約８以下、約７以下、約６以下、約５以下、約４以下、約３以下または約２以下；約７以下；約６以下；約５以下；約４以下；約３以下のｐＫａを有する水溶液では、あらゆるイオン化可能な水素がカチオンによって置換されている。各ヌクレオチド間結合、例えば、ホスフェート基は、その塩形態で、例えば、ナトリウム塩の場合、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＮａ）－Ｏ－）で独立して存在する。薬学的に許容される塩は、オリゴヌクレオチドのナトリウム塩である。薬学的に許容される塩は、オリゴヌクレオチドのナトリウム塩であり、ここで、各酸性ホスフェート基および修飾ホスフェート基は、塩形態（いずれもナトリウム塩）として存在する。

本明細書でタンパク質という用語と区別なく使用されるポリペプチドとは、少なくとも３つのアミノ酸残基の高分子を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。ポリペプチドは、１つ以上またはあらゆる天然アミノ酸を含む。ポリペプチドは、１つ以上またはあらゆる非天然アミノ酸を含む。ポリペプチドは、１つ以上またはあらゆるＤ－アミノ酸を含む。ポリペプチドは、１つ以上またはあらゆるＬ－アミノ酸を含む。ポリペプチドは、ポリペプチドのＮ末端、ポリペプチドのＣ末端またはそれらの任意の組合せに、例えば、１つ以上のアミノ酸側鎖を修飾するかまたは１つ以上のアミノ酸側鎖に結合した１つ以上のペンダント基または他の修飾を含む。ポリペプチドは、アセチル化、アミド化、アミノエチル化、ビオチン化、カルバミル化、カルボニル化、シトルリン化、脱アミド化、脱イミノ化、エリミニル化（ｅｌｉｍｉｎｙｌａｔｉｏｎ）、グリコシル化、脂質化（ｌｉｐｉｄａｔｉｏｎ）、メチル化、ペグ化、リン酸化、ＳＵＭＯ化またはそれらの組合せなどの１つ以上の修飾を含む。ポリペプチドは、１つ以上の分子内ジスルフィド結合または分子間ジスルフィド結合に関与することができる。ポリペプチドは、環状であり得るか、または環状部分を含み得る。ポリペプチドは、環状でないか、または環状部分を含まない。ポリペプチドは直鎖である。ポリペプチドは、ステープルポリペプチドを含むことができる。ポリペプチドは、例えば、抗体では、１つ以上の他のポリペプチドとの非共有結合または共有結合による非共有結合複合体形成に関与する。ポリペプチドは、天然に存在するアミノ酸配列を有する。ポリペプチドは、天然には存在しないアミノ酸配列を有する。ポリペプチドは、人の手の作用によって設計または産生されるため、操作されたアミノ酸配列を有する。ポリペプチドという用語は、参照ポリペプチド、活性または構造の名称に付加され得、関連する活性または構造を共有するポリペプチドを指し得、したがって、同じクラスまたはポリペプチドのファミリーのメンバーと考えられ得る。そのような各クラスについて、本明細書は、そのアミノ酸配列もしくは機能が公知であるクラス内の例示的なポリペプチドを提供するか、または生物医学分野の当業者であれば、そのアミノ酸配列もしくは機能が公知であるクラス内の例示的なポリペプチドを知っている。そのような例示的なポリペプチドは、ポリペプチドのクラスまたはファミリーに関する参照ポリペプチドである。ポリペプチドのクラスまたはファミリーのメンバーは、クラスの参照ポリペプチドまたはクラス内のあらゆるポリペプチドと、場合により同等のレベルで、または指定された範囲内で、顕著な配列相同性もしくは配列同一性を示すか、共通の配列モチーフ、例えば、特徴的な配列要素を共有するか、または共通の活性を共有する。メンバーポリペプチドは、少なくとも約３０～４０％である、参照ポリペプチドとの全体的な配列相同性または配列同一性を示し、多くの場合、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％もしくはそれ以上を超えるか、または少なくとも１つの領域、例えば、多くの場合、９０％もしくはさらには９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％を超える高い配列同一性を示す特徴的な配列要素を含むことができる保存された領域を含む。そのような保存された領域は、少なくとも３～４つ、多くの場合、最大２０またはそれ以上のアミノ酸を通常包含する。保存された領域は、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５またはそれ以上の連続したアミノ酸の少なくとも１つのストレッチを包含する。有用なポリペプチドは、親ポリペプチドの断片を含むことができる。有用なポリペプチドは、複数の断片を含むことができ、その各々は、目的のポリペプチドに見られるものとは異なる、互いに対する空間配置で同じ親ポリペプチドに見られ、例えば、親では直接結合されている断片は、目的のポリペプチドでは空間的に分離されていてもよいか、もしくは逆もまた同様であり得るか、または断片は、親とは異なる順序で目的のポリペプチドに存在していてもよく、したがって、目的のポリペプチドはその親ポリペプチドの誘導体である。

疾患、障害または病態の発生に関連して使用される場合、予防する（ｐｒｅｖｅｎｔ）または予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）とは、疾患、障害もしくは病態を発症するリスクを低下させること、または疾患、障害もしくは病態の１つ以上の特徴もしくは症状の発症を遅延させることを指すために生物医学分野の当業者によって使用される。疾患、障害または病態の発症が所定の期間にわたって遅延した場合、予防は完全であると考えることができる。

組換えとは、組換え手段によって設計、操作、調製、発現、作成、製造または単離されたポリペプチド、例えば、宿主細胞にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを使用して発現されたポリペプチド；組換えコンビナトリアルヒトポリペプチドライブラリーから単離されたポリペプチド；トランスジェニックであるか、もしくはポリペプチドもしくはその１つ以上の成分、部分、要素もしくはドメインをコードするもしくはその発現を導く単数もしくは複数の遺伝子もしくは遺伝子成分を発現するように他の方法で操作された動物、例えば、マウス、ウサギ、ヒツジ、魚などから単離されたポリペプチド；または選択された核酸配列要素を互いにスプライシングもしくはライゲーションすること、選択された配列要素を化学的に合成すること、もしくはポリペプチドもしくはその１つ以上の成分、部分、要素もしくはドメインの発現をコードするかもしくは導く核酸を他の方法で生成することを伴う任意の他の手段によって調製、発現、作成もしくは単離されたポリペプチドを指すために生物医学分野の当業者によって使用される。そのような選択された配列要素のうちの１つ以上は、天然に見出される。そのような選択された配列要素のうちの１つ以上は、インシリコで設計される。１つ以上のそのような選択された配列要素は、例えば、公知の配列要素のインビボまたはインビトロでの変異誘発から、例えば、目的の起源生物、例えば、ヒト、マウスなどの生殖系列における天然または合成の供給物から生じる。

小分子とは、低分子量の有機化合物または無機化合物を意味するために生物医学分野の当業者によって使用される。小分子は、約５キロダルトン（ｋＤａ）未満のサイズである。小分子は、約４ｋＤａ未満、３ｋＤａ未満、約２ｋＤａ未満または約１ｋＤａ未満である。小分子は、約８００ダルトン（Ｄａ）未満、約６００Ｄａ未満、約５００Ｄａ未満、約４００Ｄａ未満、約３００Ｄａ未満、約２００Ｄａ未満または約１００Ｄａ未満である。小分子は、約２０００ｇ／ｍｏｌ未満、約１５００ｇ／ｍｏｌ未満、約１０００ｇ／ｍｏｌ未満、約８００ｇ／ｍｏｌ未満または約５００ｇ／ｍｏｌ未満である。小分子は高分子ではない。小分子は、高分子部分を含まない。小分子は、タンパク質もしくはポリペプチドではないか、またはタンパク質もしくはポリペプチドを含まず、例えば、オリゴペプチドまたはペプチドではない。小分子は、ポリヌクレオチドではないか、またはポリヌクレオチドを含まず、例えば、オリゴヌクレオチドではない。小分子は、多糖ではないか、または多糖を含まない。小分子は、糖タンパク質、プロテオグリカン、糖脂質などではない。小分子は脂質ではない。小分子は、調節剤であり、例えば、阻害剤または活性化剤である。小分子は生物学的に活性である。小分子は、検出可能であり、例えば、少なくとも１つの検出可能部分を含む。小分子は治療剤である。生物医学分野の当業者であれば、本明細書に記載される小分子化合物が、結晶形態、塩形態、保護形態、プロドラッグ形態、エステル形態、異性体形態、例えば、光学異性体または構造異性体、同位体形態などの様々な形態のいずれかで提供または使用され得ることを知っている。生物医学分野の当業者であれば、いくつかの小分子化合物が、１つ以上の立体異性体形態で存在し得る構造を有することを知っている。そのような小分子は、個々のエナンチオマー、ジアステレオマーもしくは幾何異性体の形態で本開示の下で使用され得るか、または立体異性体の混合物の形態であり得る。そのような小分子は、ラセミ混合物形態で本開示の下で使用され得る。生物医学分野の当業者であれば、いくつかの小分子化合物が、１つ以上の互変異性形態で存在し得る構造を有することを知っている。そのような小分子は、本開示の下で、個々の互変異性体の形態で、または互変異性形態間で相互変換する形態で使用され得る。生物医学分野の当業者であれば、いくつかの小分子化合物が、同位体置換を可能にする構造を有することを知っている。そのような小分子は、１つ以上の同位体的に修飾された形態またはそれらの混合物で本開示に従って使用され得る。特定の小分子化合物への言及は、その化合物の特定の形態に関連し得る。特定の小分子化合物は、化合物に応じて、塩形態、例えば、酸付加塩形態または塩基付加塩形態で提供または使用され得る。塩形態は、薬学的に許容される塩形態であり得る。小分子化合物が存在するかまたは天然に見出される場合、その化合物は、それが存在するかまたは天然に見出される形態とは異なる形態で本明細書の下で提供または使用され得る。生物医学分野の当業者であれば、場合により、目的の参照調製物、例えば、生物源または環境源などの目的の供給源からの一次試料中に存在する化合物または形態の化合物量の別の形態を含む、調製物の別の成分に関する絶対量または相対量とは異なる、化合物の絶対量もしくは相対量またはその特定の形態の絶対量もしくは相対量を含有する特定の小分子化合物を調製することは、参照調製物または参照供給源に存在する化合物とは異なることを知っている。小分子化合物の単一の立体異性体の調製は、化合物のラセミ混合物とは異なる形態の化合物と考えることができる。小分子化合物の特定の塩は、化合物の別の塩形態とは異なる形態と考えることができる。二重結合の一方の配座異性体（（Ｚ）または（Ｅ））を含有する化合物の形態のみを含有する調製物は、二重結合の他方の配座異性体（（Ｅ）または（Ｚ））を含有する化合物の形態とは異なる形態の化合物と考えることができる。１つ以上の原子が参照調製物中に存在するものとは異なる同位体である調製物は、異なる形態などと考えることができる。

特異的結合とは、結合が生じる環境に存在し得る結合パートナーを識別する能力を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。他の潜在的な標的が存在する場合に１つの特定の標的と相互作用する結合剤は、標的、例えば、それが相互作用する目的の標的タンパク質／遺伝子上の標的アミノ酸配列または標的核酸配列に特異的に結合すると言われる。特異的結合は、結合剤とそのパートナーとの間の会合を検出または決定することによって評価される。特異的結合は、結合剤－パートナー複合体の解離を検出または決定することによって評価される。特異的結合は、そのパートナーと別の実体との間で代替的な相互作用を競合する結合剤の能力を検出または決定することによって評価される。特異的結合は、様々な濃度にわたってそのような検出または決定を行うことによって評価される。

特異性とは、特定のリガンドがその結合パートナーを他の潜在的な結合パートナーと区別する能力の尺度を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。

対象とは、生物、典型的には哺乳動物、例えば、出生前のヒト形態も含むヒトを指すために生物医学分野の当業者によって使用される。対象は、関連する疾患、障害または病態、例えば、アルツハイマー病（ＡＤ）、または神経変性を特徴とする他の疾患に罹患している。対象は、疾患、障害または病態に罹患しやすい。対象は、疾患、障害または病態の１つ以上の症状または特徴を示す。対象は、疾患、障害または病態の症状または特徴を示す必要はない。対象は、疾患、障害もしくは病態に対する易罹患性、または疾患、障害もしくは病態のリスクに特徴的な１つ以上の特徴を有する人であり得る。対象は患者であり得る。

実質的にとは、目的の特徴または特性の全体的またはほぼ全体的な規模または程度を示す定性的状態を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。生物学分野の当業者であれば、生物学的現象および化学的現象が、完了するか、または完全まで進むか、または絶対的な結果を達成もしくは回避することはほとんどないことを知っている。したがって、実質的にという用語は、本明細書では、多くの生物学的現象および化学的現象に固有の完全性の潜在的な欠如を捕捉するために使用される。

実質的な同一性とは、アミノ酸配列または核酸配列間の比較を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。２つの配列は、対応する位置に同一の残基を含有する場合、生物医学では実質的に同一であると一般に考えられる。当技術分野で周知のように、アミノ酸配列または核酸配列は、ヌクレオチド配列についてはＢＬＡＳＴＮ、ならびにアミノ酸配列についてはＢＬＡＳＴＰ、ｇａｐｐｅｄＢＬＡＳＴおよびＰＳＩ－ＢＬＡＳＴなどの市販のコンピュータプログラムで利用可能なものを含む様々なアルゴリズムのいずれかを使用して比較され得る。例示的なそのようなプログラムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌｅｔａｌ．，Ｂａｓｉｃｌｏｃａｌａｌｉｇｎｍｅｎｔｓｅａｒｃｈｔｏｏｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５（３）：４０３－４１０，１９９０；Ａｌｔｓｃｈｕｌｅｔａｌ．，ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ；Ａｌｔｓｃｈｕｌｅｔａｌ．，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．２５：３３８９－３４０２，１９９７；Ｂａｘｅｖａｎｉｓｅｔａｌ．，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ：ＡＰｒａｃｔｉｃａｌＧｕｉｄｅｔｏｔｈｅＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＧｅｎｅｓａｎｄＰｒｏｔｅｉｎｓ，Ｗｉｌｅｙ，１９９８；およびＭｉｓｅｎｅｒ，ｅｔａｌ．（ｅｄｓ．），ＢｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓＭｅｔｈｏｄｓａｎｄＰｒｏｔｏｃｏｌｓ（ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１３２），ＨｕｍａｎａＰｒｅｓｓ，１９９９に記載されている。同一の配列を同定することに加えて、これらのプログラムは、同一性を示す。対応する残基の少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％またはそれ以上が残基の関連するストレッチにわたって同一である場合、２つの配列は実質的に同一であると考えられる。関連するストレッチは完全な配列である。関連するストレッチは、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９５、少なくとも１００、少なくとも１２５、少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２２５、少なくとも２５０、少なくとも２７５、少なくとも３００、少なくとも３２５、少なくとも３５０、少なくとも３７５、少なくとも４００、少なくとも４２５、少なくとも４５０、少なくとも４７５、少なくとも５００またはそれ以上の残基である。

に罹患しているとは、疾患、障害または病態、例えば、アルツハイマー病（ＡＤ）、または神経変性を特徴とする他の疾患を有する個体が、疾患、障害もしくは病態の１つ以上の症状と診断されたかまたはそれを示すことを指すために生物医学分野の当業者によって使用される。

に罹患しやすいとは、疾患、障害または病態、例えば、アルツハイマー病（ＡＤ）、または神経変性を特徴とする他の疾患に罹患しやすい個体が、一般の人々よりもその疾患、障害または病態を発症するリスクが高い個体であるであることを指すために生物医学分野の当業者によって使用される。疾患、障害または病態に罹患しやすい個体は、その疾患、障害または病態と診断されていない可能性がある。疾患、障害または病態に罹患しやすい個体は、その疾患、障害または病態の症状を示し得る。疾患、障害または病態に罹患しやすい個体は、その疾患、障害または病態の症状を示さない可能性がある。疾患、障害または病態に罹患しやすい個体は、その疾患、障害または病態を発症するであろう。疾患、障害または病態に罹患しやすい個体は、その疾患、障害または病態を発症しないであろう。

症状が低減されるとは、特定の疾患、障害または病態、例えば、アルツハイマー病（ＡＤ）、または神経変性を特徴とする他の疾患の１つ以上の症状の大きさ、例えば、強度、重症度など、または頻度が低減される場合を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。明確にするために、特定の症状の発症の遅延は、その症状の頻度を低減する１つの形態と考えられる。

標的遺伝子とは、例えば、スプライス活性を改変することによって、例えば、エクソンスキッピングを誘導することによって発現が調節される遺伝子を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。標的部分または標的領域という用語は、標的遺伝子のヌクレオチド配列の連続部分を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。標的部分または標的領域は、標的遺伝子配列内の１つ以上のエクソンである。標的部分は、約８～３６ヌクレオチド長、例えば、約１０～２０または約１５～３０ヌクレオチド長であり得る。標的部分の長さは、前述の範囲内の特定の値または部分範囲を有することができる。標的部分は、約１５～２９、約１５～２８、約１５２７、約１５～２６、約１５～２５、約１５～２４、約１５～２３、約１５～２２、約１５～２１、約１５～２０、約１５～１９、約１５～１８、約１５～１７、約１８～３０、約１８～２９、約１８２８、約１８～２７、約１８～２６、約１８～２５、約１８～２４、約１８～２３、約１８～２２、約１８～２１、約１８～２０、約１９～３０、約１９～２９、約１９～２８、約１９～２７、約１９２６、約１９～２５、約１９～２４、約１９～２３、約１９～２２、約１９～２１、約１９～２０、約２０～３０、約２０～２９、約２０～２８、約２０～２７、約２０～２６、約２０～２５、約２０２４、約２０～２３、約２０～２２、約２０～２１、約２１～３０、約２１～２９、約２１～２８、約２１～２７、約２１～２６、約２１～２５、約２１～２４、約２１～２３または約２１～２２ヌクレオチド長であり得る。

治療剤とは、対象に投与された場合に治療効果を有するかまたは所望の生物学的効果もしくは薬理学的効果を誘発する任意の作用物質を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。治療剤は、疾患、障害もしくは病態の１つ以上の症状もしくは特徴、例えば、アルツハイマー病（ＡＤ）もしくは神経変性を特徴とする他の疾患の１つ以上の症状もしくは特徴を緩和し得るか、改善し得るか、軽減し得るか、阻害し得るか、予防し得るか、その発症を遅延させ得るか、その重症度を低下させ得るか、またはその発生率を低下させ得る任意の物質である。

治療有効量とは、治療的投与レジメンの一部として投与された場合に所望の生物学的応答を誘発する物質、例えば、治療剤、組成物または製剤の量を意味するために生物医学分野の当業者によって使用される。物質の治療有効量は、疾患、障害もしくは病態に罹患しているかまたは罹患しやすい対象に投与された場合に、その疾患、障害もしくは病態を治療するか、診断するか、予防するか、またはその発症を遅延させるのに十分な量である。当業者であれば、物質の有効量が、所望の生物学的エンドポイント、送達される物質、標的細胞または標的組織などのような要因に応じて変化し得ることを知っている。疾患、障害または病態を治療するための製剤中の化合物の有効量は、その疾患、障害もしくは病態の１つ以上の症状もしくは特徴、例えば、アルツハイマー病（ＡＤ）、もしくは神経変性を特徴とする別の疾患の１つ以上の症状もしくは特徴を緩和するか、改善するか、軽減するか、阻害するか、予防するか、その発症を遅延させるか、その重症度を低下させるか、またはその発生率を低下させる量である。治療有効量は、単回用量で投与される。治療有効量を送達するためには、数回の単位用量が必要である。

治療するとは、治療を提供すること、すなわち、対象の任意の医学的管理または外科的管理を提供することを指すために生物医学分野の当業者によって使用される。治療は、疾患、障害もしくは病態の進行を逆転させるか、緩和するか、阻害するか、疾患、障害もしくは病態を予防するか、もしくは疾患、障害もしくは病態の可能性を低下させるために、または疾患、障害もしくは病態の１つ以上の症状もしくは徴候の進行を逆転させるか、緩和するか、阻害するか、もしくは予防するか、もしくは疾患、障害もしくは病態の１つ以上の症状もしくは徴候を予防するか、もしくは疾患、障害もしくは病態の１つ以上の症状もしくは徴候の可能性を低下させるために提供され得る。治療することは、例えば、病態を逆転させるか、緩和するか、病態の重症度を低下させるか、もしくは病態の進行を阻害するか、もしくは予防するため、または病態の１つ以上の症状もしくは徴候を逆転させるか、緩和するか、病態の１つ以上の症状もしくは徴候の重症度を低下させるか、もしくは病態の１つ以上の症状もしくは徴候を阻害するために、アルツハイマー病（ＡＤ）、または神経変性を特徴とする別の他の疾患を示す１つ以上の症状または徴候の発症後に作用物質を対象に投与することを含むことができる。本開示の組成物は、アルツハイマー病（ＡＤ）、もしくは神経変性を特徴とする別の他の疾患を発症しているか、または一般集団のメンバーと比較してそのような障害を発症するリスクが高い対象に投与され得る。本開示の組成物は、予防的に、すなわち、病態の何らかの症状または徴候の発現前に投与され得る。対象は、典型的には、病態を発症するリスクがある。

生体分子、例えば、核酸、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）、タンパク質または小分子に関連して使用される変異体とは、参照分子との顕著な構造的同一性を示すが、例えば、参照実体と比較して１つ以上の化学部分の存在もしくは非存在下またはレベルで参照分子と構造的に異なる分子を指す。変異体はまた、その参照分子と機能的に異なる。特定の分子が参照分子の変異体であると適切に考えられるかどうかは、参照分子との構造的同一性のその程度に基づく。任意の生物学的参照分子または化学的参照分子は、特徴的な構造要素を有する。変異体は、１つ以上のそのような特徴的な構造要素を共有するが、少なくとも１つの態様では参照分子と異なる別個の分子である。ほんの数例を挙げると、ポリペプチドは、線形空間もしくは三次元空間では互いに対して指定された位置を有するか、または特定の構造モチーフもしくは生物学的機能に寄与する複数のアミノ酸から構成される特徴的な配列要素を有することができる。核酸は、線形空間または三次元空間では互いに対して指定された位置を有する複数のヌクレオチド残基から構成される特徴的な配列要素を有することができる。変異体ポリペプチドまたは変異体核酸は、アミノ酸配列もしくはヌクレオチド配列の１つ以上の差、またはポリペプチドもしくは核酸の共有結合成分である、例えば、ポリペプチド骨格もしくは核酸骨格に結合している化学部分、例えば、炭水化物、脂質、ホスフェート基の１つ以上の差のために、参照ポリペプチドまたは参照核酸と異なり得る。変異体ポリペプチドまたは変異体核酸は、参照ポリペプチドまたは参照核酸との全体的な配列同一性を少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％または少なくとも９９％示す。変異体ポリペプチドまたは変異体核酸は、少なくとも１つの特徴的な配列要素を参照ポリペプチドまたは参照核酸と共有しない。参照ポリペプチドまたは参照核酸は、１つ以上の生物学的活性を有する。変異体ポリペプチドまたは変異体核酸は、参照ポリペプチドまたは参照核酸の生物学的活性のうちの１つ以上を共有する。変異体ポリペプチドまたは変異体核酸は、参照ポリペプチドまたは参照核酸の生物学的活性のうちの１つ以上を欠く。変異体ポリペプチドまたは変異体核酸は、参照ポリペプチドまたは参照核酸と比較して、低下したレベルの１つ以上の生物学的活性を示す。目的のポリペプチドまたは核酸は、それが参照のものと同一のアミノ酸配列またはヌクレオチド配列を有するが、特定の位置にいくつかの配列変化を有する場合、参照ポリペプチドまたは参照核酸の変異体と考えられる。典型的には、参照と比較して、変異体内の残基の約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約９％未満、約８％未満、約７％未満、約６％未満、約５％未満、約４％未満、約３％未満または約２％未満が置換、挿入または欠失される。変異体ポリペプチドまたは変異体核酸は、参照と比較して、約１０個、約９個、約８個、約７個、約６個、約５個、約４個、約３個、約２個または約１個の置換残基を含む。多くの場合、変異体ポリペプチドまたは変異体核酸は、参照と比較して、少数、例えば、約５個未満、約４個未満、約３個未満、約２個未満または約１個未満の置換、挿入または欠失された機能的残基（すなわち、特定の生物学的活性に関与する残基を含む。変異体ポリペプチドまたは変異体核酸は、参照と比較して、約５以下、約４以下、約３以下、約２以下または約１以下の付加または欠失を含み、付加または欠失を含まない。変異体ポリペプチドまたは変異体核酸は、参照と比較して、約２５未満、約２０未満、約１９未満、約１８未満、約１７未満、約１６未満、約１５未満、約１４未満、約１３未満、約１０未満、約９未満、約８未満、約７未満、約６未満、一般に約５未満、約４未満、約３未満または約２未満の付加または欠失を含む。参照ポリペプチドまたは参照核酸は、天然に見出される。参照ポリペプチドまたは参照核酸は、ヒトポリペプチドまたはヒト核酸である。

ベクターとは、それが結合された別の核酸を輸送することができる核酸分子を指すために生物医学分野の当業者によって使用される。ベクターの１つのタイプはプラスミドであり、プラスミドとは、追加のＤＮＡセグメントをライゲーションすることができる環状二本鎖ＤＮＡループを指す。別のタイプのベクターは、追加のＤＮＡセグメントをウイルスゲノムにライゲーションすることができるウイルスベクターである。いくつかのベクター、例えば、細菌複製起点を有する細菌ベクター、およびエピソーム哺乳動物ベクターは、それらが導入される宿主細胞内で自律的に複製する。他のベクター、例えば、非エピソーム哺乳動物ベクターは、宿主細胞への導入時に宿主細胞のゲノムに組み込まれ得、宿主ゲノムとともに複製される。特定のベクターは、それらが作動可能に連結されている遺伝子の発現を導くことができる。そのようなベクターは、発現ベクターとして生物医学分野で公知である。組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、ならびに組織培養および形質転換、例えば、エレクトロポレーション、リポフェクションには、標準的な技術を使用することができる。酵素反応および精製技術は、製造業者の仕様に従って、または生物医学分野で一般的に達成されるように行われ得る。前述の技術および手順は、生物医学分野で周知の従来の方法に従って、本明細書を通して引用および説明された様々な一般的およびさらに具体的な参考文献に記載されているように一般に行われ得る。例えば、ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ（２０１２）を参照されたい。

本明細書で別段定義されない限り、本出願とともに使用される科学用語および技術用語は、生物医学分野の当業者によって一般に理解される意味を有するものとする。本発明は、本明細書に記載される特定の方法、プロトコルおよび試薬などに限定されず、したがって、変化し得る。

本明細書に記載される開示は、ヒトをクローニングするためのプロセス、ヒトの生殖系列の遺伝的同一性を改変するためのプロセス、ヒト胚を工業的目的もしくは商業的目的のために使用すること、またはヒトもしくは動物に対して実質的な医学的利益を何らもたらさずに苦しませる可能性がある、動物の遺伝的同一性を改変するためのプロセス、さらにはそのようなプロセスから生じる動物にも関係しない。

ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤。

いくつかの実施形態では、本開示は、ＭｕＳＫＩｇ２ドメインによって媒介される生物学的事象を調節するための技術を提供する。例えば、いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載されるように、ＭｕＳＫＩｇ２ドメインと結合パートナー（例えば、ＢＭＰ受容体または自己抗体）との間の１つ以上の結合相互作用を破壊するための、またはそうでなければ妨げるための技術を提供する。

いくつかの実施形態では、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、例えば、そのようなドメインが変異しているか、除去されているか、またはそうでなければ不活性化されているため（例えば、遮断、改変などによって）、有効なＩｇ２ドメインを欠く１つ以上のＭｕＳＫポリペプチド（例えば、ΔＩｇ２－ＭｕＳＫ）のレベルまたは活性を増加させる。代替的または追加的に、いくつかの実施形態では、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、機能的Ｉｇ２ドメインをＭｕＳＫから遮断するか、不活性化するか、変異させるか、もしくは除去するか、またはそのような遮断、不活性化、変異もしくは除去を達成するか、支援するか、もしくはそれに寄与する。したがって、いくつかの実施形態では、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、ΔＩｇ２－ＭｕＳＫアゴナイジング剤と考えられ得る。

いくつかの実施形態では、本開示は、例えば、そのような作用物質自体を提供すること、またはそれらを同定、特性評価、製造もしくは使用するための方法もしくは試薬、もしくはそれらを含むもしくは送達する組成物を提供することを含む、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤に関する技術を提供する。

いくつかの実施形態では、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、ＭｕＳＫポリペプチドと（例えば、全長ＭｕＳＫと、またはΔＩｇ２－ＭｕＳＫと）直接相互作用し得る。いくつかの実施形態では、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、ＭｕＳＫポリペプチドと直接相互作用しなくてもよく、むしろ他の何らかの相互作用を介して（例えば、ＭｕＳＫの前駆体または調節因子または下流生成物により）、ΔＩｇ２－ＭｕＳＫのレベルまたは活性に影響を及ぼす。

原則として、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、任意の化学クラスのもの（例えば、小分子、ポリペプチド［例えば、抗体］、核酸など）であり得る。

いくつかの実施形態では、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、ＭｕＳＫＩｇ２ドメインタンパク質発現、ＭｕＳＫＩｇ２ドメイン遺伝子発現、またはＢＭＰＲのうちの１つ以上を介したＢＭＰシグナル伝達のＭｕＳＫＩｇ２活性化をダウンレギュレートする作用物質である。いかなる特定の理論にも拘束されることを望むものではないが、本開示は、そのようなＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤がそれによって神経発生を誘導し得るか、または筋萎縮を減少させ得るか、もしくは筋成長（例えば、筋形成）を刺激し得ることを提案する。

いくつかの実施形態では、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、ＭｕＳＫ ΔＩｇ２の発現を増加させるアゴナイジング剤である。

本明細書でさらに詳細に記載されるいくつかの特定の実施形態では、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、小分子であり得るか、または小分子を含み得る。

本明細書でさらに詳細に記載されるいくつかの特定の実施形態では、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、ＭｕＳＫポリペプチドに結合する抗体（例えば、ＭｕＳＫＩｇ２を遮断する抗体、または機能的Ｉｇ２を含む１つ以上のＭｕＳＫポリペプチド形態を捕捉する抗体）であり得るか、またはそれを含み得る。代替的または追加的に、いくつかの特定の実施形態では、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、ＭｕＳＫＩｇ２と抗体（例えば、自己抗体）との間の相互作用を破壊する（例えば、妨げる、競合するなど）作用物質であり得るか、またはそれを含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、ＭｕＳＫＩｇ２ドメインであり得るか、またはＭｕＳＫＩｇ２ドメインを含み得るが、１つ以上の他のＭｕＳＫエレメントを欠いている（例えば、いくつかの実施形態では、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、ＭｕＳＫＩｇ２ドメインもしくはその自己抗体結合部分であるかまたはそれを含む可溶性ペプチドであり得るか、またはそれを含み得る。

本明細書でさらに詳細に記載されるいくつかの特定の実施形態では、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、核酸剤であり得るか、または核酸剤を含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、機能的Ｉｇ２ドメインを欠くＭｕＳＫ形態（例えば、ΔＩｇ２－ＭｕＳＫ）をコードする核酸（例えば、遺伝子治療ベクター、またはｍＲＮＡなどのＲＮＡ治療薬）であり得るか、またはそれを含み得る。代替的または追加的に、いくつかの実施形態では、核酸ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、オリゴヌクレオチド、例えば、ＭｕＳＫＩｇ２標的エクソンスキッピングオリゴヌクレオチド、ＭｕＳＫＩｇ２標的ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９ｇＲＮＡ（例えば、Ｉｇ２を改変または除去する）、ＭｕＳＫＩｇ２標的ｓｉＲＮＡ（例えば、ＭｕＳＫＩｇ２をコードする転写物からのＭｕＳＫＩｇ２の産生／発現を阻害する）、もしくはＭｕＳＫＩｇ２標的ｓｈＲＮＡであり得るか、またはそれを含み得る。

小分子。

いくつかの実施形態では、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、小分子化合物であり得るか、または小分子化合物を含み得る。

いくつかの実施形態では、小分子ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、ＭｕＳＫスプライシングを標的とする治療剤を標的とする。例えば、いくつかの実施形態では、そのような小分子化合物は、ΔＩ２－ＭｕＳＫをコードするメッセージを生成するスプライシング事象を増強するか、または他のＭｕＳＫスプライス変異体をコードするメッセージを生成するスプライシング事象を阻害する。いくつかの実施形態では、小分子ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、ＢＭＰシグナル伝達経路を変化させる。いくつかの実施形態では、小分子ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、ＢＭＰ受容体を標的とすることによってＢＭＰシグナル伝達経路を変化させ、これにより、神経発生がさらに誘導されるか、または筋萎縮が減少し得るかもしくは筋成長（例えば、筋形成）が刺激され得る。

いくつかの実施形態では、小分子ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、Ｉ型ＢＭＰ受容体、ＡＬＫ３（ＡＬＫは未分化リンパ腫キナーゼである）およびＡＬＫ６ならびにＩ型アクチビン受容体ＡＬＫ４のうちの１つ以上を標的とする。いくつかの実施形態では、小分子ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤はＡＬＫ阻害剤である。いくつかの実施形態では、小分子ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、クリゾチニブ、セリチニブ、アレクチニブ、ブリグチニブ、ロルラチニブからなる群より選択されるＡＬＫ阻害剤である。

いくつかの実施形態では、小分子ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、ＭｕＳＫ／ＢＭＰ複合体のレベルまたは活性が低下するように、ＭｕＳＫＩｇ２ドメインまたはＢＭＰを標的とする。いくつかのそのような実施形態では、小分子ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、そのような複合体の形成を阻害するか、またはそのような複合体を破壊する。いくつかの実施形態では、そのようなＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、ＭｕＳＫＩｇ２への結合についてＢＭＰ受容体と競合するか、またはＢＭＰ受容体への結合についてＭｕＳＫＩｇ２と競合する。

抗体剤。

いくつかの実施形態では、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は抗体剤である。

いくつかの実施形態では、そのような抗体剤は、ＭｕＳＫポリペプチドに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＭｕＳＫを標的とする抗体剤は、ＭｕＳＫポリペプチドのＩｇ２ドメインに特異的に結合する。

いくつかの実施形態では、ＭｕＳＫタンパク質のＩｇ２ドメインを標的とする抗体は、ＭｕＳＫのＩｇ１ドメインまたはＩｇ３ドメインと比較してＩｇ２ドメインに特異的に結合し得る。

いくつかの実施形態では、抗体ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、ＭｕＳＫ／ＢＭＰ受容体複合体のレベルまたは活性が低下するように、ＭｕＳＫＩｇ２ドメインまたはＢＭＰ受容体を標的とする。いくつかのそのような実施形態では、抗体ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、そのような複合体の形成を阻害するか、またはそのような複合体を破壊する。いくつかの実施形態では、そのような抗体ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、ＭｕＳＫＩｇ２への結合についてＢＭＰ受容体と競合するか、またはＢＭＰ受容体への結合についてＭｕＳＫＩｇ２と競合する。

いくつかの実施形態では、抗ＭＵＳＫ抗体剤は、細胞（例えば、神経性細胞型を有する細胞）によって内在化される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体またはその抗原結合断片は、免疫グロブリン、重鎖抗体、軽鎖抗体、もしくは抗体様特性を有する他のタンパク質骨格、ならびにＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ジスルフィド結合Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ断片、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、マキシボディ（ｍａｘｉｂｏｄｙ）、ｔａｎｄａｂ、ＢｉＴｅ、およびそれらの任意の組合せを含む、当技術分野で公知の他の免疫学的結合部分であり得るか、またはそれを含み得る。いくつかの実施形態では、抗ＭＵＳＫ抗体またはその抗原結合断片は、例えば、ＭｕＳＫのＩｇ２ドメインを標的とする。いくつかの実施形態では、そのような抗体またはその抗原結合断片は、ＭｕＳＫＩｇ２ドメインへのＢＭＰ受容体の結合を阻害または実質的に防止し得る。

抗体は、４つのポリペプチド鎖、例えば、２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖の免疫グロブリン分子であり得る。重鎖は、重鎖可変ドメインおよび重鎖定常ドメインを含むことができる。重鎖定常ドメインは、ＣＨ１領域、ヒンジ領域、ＣＨ２領域、ＣＨ３領域および時にはＣＨ４領域を含むことができる。軽鎖は、軽鎖可変ドメインおよび軽鎖定常ドメインを含むことができる。軽鎖定常ドメインはＣＬを含むことができる。重鎖の重鎖可変ドメインと軽鎖の軽鎖可変ドメインとは、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるさらに保存された領域が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる可変領域に典型的にさらに細分され得る。そのような重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインは、以下の順序、すなわち、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４（これらのうちの１つ以上は本明細書に記載されるように操作され得る）でアミノ末端からカルボキシル末端に配置された３つのＣＤＲと４つのフレームワーク領域とをそれぞれ含むことができる。

いくつかの実施形態では、抗体剤（例えば、抗ＭＵＳＫ抗体）は、本明細書に記載の様々な重鎖および軽鎖を含むことができる。いくつかの実施形態では、抗体は、２つの重鎖および軽鎖を含むことができる。様々な実施形態では、本開示は、本明細書に開示される少なくとも１つの重鎖もしくは軽鎖、本明細書に開示される少なくとも１つの重鎖フレームワークドメインもしくは軽鎖フレームワークドメイン、本明細書に開示される少なくとも１つの重鎖ＣＤＲドメインもしくは軽鎖ＣＤＲドメイン、または本明細書に開示される任意の重鎖定常ドメインもしくは軽鎖定常ドメインを含む抗体を包含する。

いくつかの実施形態では、抗体剤は、モノクローナル抗体であるか、またはモノクローナル抗体を含む。典型的には、モノクローナル抗体は、実質的に均質な抗体の集団から得られ、すなわち、その集団を含む個々の抗体は、少量存在する可能性のある天然の変異を除いて実質的に同一である。したがって、本明細書で使用されるモノクローナルという修飾語句は、個別の抗体の混合物ではないという抗体の特徴を示す。いくつかの実施形態では、特定のエピトープに対するモノクローナル抗体は、単一の細胞株（例えば、Ｂ細胞株）に由来する。

いくつかの実施形態では、抗体剤（例えば、抗ＭｕＳＫ抗体）は、ポリクローナル抗体であり得るか、またはポリクローナル抗体を含み得る。モノクローナル抗体とは対照的に、ポリクローナル抗体は、異種抗体の集団を典型的に表し、すなわち、特定の集団内の抗体は、構造的変動、例えば、特定の抗原（例えば、ＭｕＳＫのＩｇ２ドメイン、またはＩｇ２ドメイン内の領域）に対する異なるエピトープに対する親和性を含む。ポリクローナル抗体を産生するいくつかの方法が当技術分野で公知であり、それには、動物への関連する抗原の複数回の皮下注射または腹腔内注射の使用が含まれ、場合により、１つ以上のアジュバントの同時投与が含まれる。

オリゴヌクレオチド。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、オリゴヌクレオチドであるか、またはオリゴヌクレオチドを含む。

合成オリゴヌクレオチドは、多種多様な用途に有用な分子ツールを提供する。例えば、オリゴヌクレオチドは、治療用途、診断用途、研究用途および新しいナノ材料用途に有用である。天然に存在する核酸（例えば、非修飾ＤＮＡまたは非修飾ＲＮＡ）の使用は、例えば、エンドヌクレアーゼおよびエキソヌクレアーゼに対する感受性によって制限される。これらの欠点を回避するために、様々な合成対応物が開発された。これらには、これらの分子を分解されにくくし、オリゴヌクレオチドの他の特性を改善する化学修飾、例えば、塩基修飾、糖修飾、骨格修飾などを含有する合成オリゴヌクレオチドが含まれる。化学修飾はまた、例えば、毒性の増加などの特定の望ましくない作用をもたらし得る。

本開示は、オリゴヌクレオチドの構造要素、例えば、塩基配列、化学修飾（例えば、糖、塩基またはヌクレオチド間結合およびそのパターンの修飾）または立体化学（例えば、骨格キラル中心（キラルなヌクレオチド間結合）またはそのパターンの立体化学）が、特性、例えば、安定性、スプライシングを変化させる能力などに大きな影響を及ぼし得るという認識を包含する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド特性は、化学修飾（塩基、糖またはヌクレオチド間結合の修飾）または立体化学（骨格キラル中心のパターン）を最適化することによって調整され得る。

いくつかの実施形態では、本開示は、制御された構造要素、例えば、制御された化学修飾を有するオリゴヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド組成物が、限定するものではないが、本明細書に記載されるものを含む予想外の特性を提供することを実証する。いくつかの実施形態では、化学修飾（例えば、塩基修飾、糖修飾、ヌクレオチド間結合修飾など）を有するオリゴヌクレオチドを含む提供される組成物は、特性の改善、例えば、スプライシングを変化させる能力の改善、またはタンパク質結合プロファイルの改善、または送達の改善などを有する。特に、いくつかの実施形態では、本開示は、転写物のスプライシングを変化させるための組成物および方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、転写物のスプライシングを改善するための組成物および方法を提供する。いくつかの実施形態では、提供される組成物および方法による変化した転写物スプライシングには、所望の生物学的機能もしくは改善された生物学的機能を有する産物の産生、または例えば、望ましくない生物学的機能が抑制もしくは除去され得るようにスプライシング産物を改変することによる望ましくない産物のノックダウンが含まれる。

いくつかの実施形態では、スプライシング産物はｍＲＮＡである。いくつかの実施形態では、変化は、１つ以上のエクソンをスキップすることを含む。いくつかの実施形態では、転写物のスプライシングは、エクソンスキッピングが、エクソンスキッピングの非存在と比較して改善された有益な活性を有するｍＲＮＡおよびタンパク質のレベルを増加させるという点で改善される。

いくつかの実施形態では、転写物のスプライシングは、エクソンスキッピングが、エクソンスキッピングの非存在と比較して望ましくない活性を有するｍＲＮＡおよびタンパク質のレベルを低下させるという点で改善される。いくつかの実施形態では、標的は、１つ以上のエクソンをスキップすることによって未成熟終止コドンまたはフレームシフト変異を引き起こすエクソンスキッピングによってノックダウンされる。

いくつかの実施形態では、本開示のオリゴヌクレオチドは、１つ以上の天然核酸塩基、または天然核酸塩基に由来する１つ以上の修飾核酸塩基を含む。例には、限定するものではないが、アシル保護基によって保護されたそれぞれのアミノ基を有するウラシル、チミン、アデニン、シトシンおよびグアニン、２－フルオロウラシル、２－フルオロシトシン、５－ブロモウラシル、５－ヨードウラシル、２，６－ジアミノプリン、アザシトシン、ピリミジン類似体、例えば、シュードイソシトシンおよびシュードウラシル、ならびに他の修飾核酸塩基、例えば、８－置換プリン、キサンチンまたはヒポキサンチン（後者の２つは天然分解産物である）が挙げられる。

修飾核酸塩基には、フェニル環などの１つ以上のアリール環が付加された、拡大サイズの核酸塩基も含まれる。

いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、置換されていてもよい、以下の構造のいずれか１つである：

いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は非置換である。いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は置換されている。いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、例えば、蛍光部分、ビオチン部分もしくはアビジン部分、または他のタンパク質もしくはペプチドに接続されたヘテロ原子、アルキル基または結合部分を含有するように置換されている。いくつかの実施形態では、修飾核酸塩基は、最も古典的な意味では核酸塩基ではないが、核酸塩基と同様に機能するユニバーサル塩基である。そのようなユニバーサル塩基の１つの代表的な例は、３－ニトロピロールである。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドは、修飾核酸塩基、または修飾糖に共有結合した核酸塩基を組み込んだヌクレオシドを含む。修飾核酸塩基を組み込んだヌクレオシドのいくつかの例には、４－アセチルシチジン；５－（カルボキシヒドロキシルメチル）ウリジン；２’－Ｏ－メチルシチジン；５－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオウリジン；５－カルボキシメチルアミノメチルウリジン；ジヒドロウリジン；２’－Ｏ－メチルシュードウリジン；β，Ｄ－ガラクトシルケオシン（ｂｅｔａ，Ｄ－ｇａｌａｃｔｏｓｙｌｑｕｅｏｓｉｎｅ）；２’－Ｏ－メチルグアノシン；Ｎ^６－イソペンテニルアデノシン；１－メチルアデノシン；１－メチルシュードウリジン；１－メチルグアノシン；ｌ－メチルイノシン；２，２－ジメチルグアノシン；２－メチルアデノシン；２－メチルグアノシン；Ｎ^７－メチルグアノシン；３－メチル－シチジン；５－メチルシチジン；５－ヒドロキシメチルシチジン；５－メチルシトシン、５－ホルミルシトシン；５－カルボキシルシトシン；Ｎ^６－メチルアデノシン；７－メチルグアノシン；５－メチルアミノエチルウリジン；５－メトキシアミノメチル－２－チオウリジン；β，Ｄ－マンノシルケオシン（ｂｅｔａ，Ｄ－ｍａｎｎｏｓｙｌｑｕｅｏｓｉｎｅ）；５－メトキシカルボニルメチルウリジン；５－メトキシウリジン；２－メチルチオ－Ｎ^６－イソペンテニルアデノシン；Ｎ－（（９－β，Ｄ－リボフラノシル－２－メチルチオプリン－６－イル）カルバモイル）トレオニン；Ｎ－（（９－β，Ｄ－リボフラノシルプリン－６－イル）－Ｎ－メチルカルバモイル）トレオニン；ウリジン－５－オキシ酢酸メチルエステル；ウリジン－５－オキシ酢酸（ｖ）；シュードウリジン；ケオシン（ｑｕｅｏｓｉｎｅ）；２－チオシチジン；５－メチル－２－チオウリジン；２－チオウリジン；４－チオウリジン；５－メチルウリジン；２’－Ｏ－メチル－５－メチルウリジン；および２’－Ｏ－メチルウリジンが挙げられる。

いくつかの実施形態では、ヌクレオシドは、６’位に（Ｒ）－キラリティーまたは（Ｓ）－キラリティーのいずれかを有し、米国特許第７，３９９，８４５号明細書に記載されている類似体を含む６’修飾二環式ヌクレオシド類似体を含む。他の実施形態では、ヌクレオシドは、５’位に（Ｒ）－キラリティーまたは（Ｓ）－キラリティーのいずれかを有し、米国特許公開第２００７０２８７８３１号明細書に記載されている類似体を含む５’修飾二環式ヌクレオシド類似体を含む。いくつかの実施形態では、核酸塩基または修飾核酸塩基は、５－ブロモウラシル、５－ヨードウラシル、または２，６－ジアミノプリンである。いくつかの実施形態では、核酸塩基または修飾核酸塩基は、蛍光部分による置換によって修飾されている。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドは、ヌクレオチド内のホスフェート基または結合リンが糖または修飾糖の様々な位置に結合している１つ以上の修飾ヌクレオチドを含む。非限定的な例として、ホスフェート基または結合リンは、糖または修飾糖の２’、３’、４’または５’ヒドロキシル部分に結合することができる。この文脈では、本明細書に記載される修飾核酸塩基を組み込んだヌクレオチドも企図される。

他の修飾糖もオリゴヌクレオチド分子内に組み込むことができる。いくつかの実施形態では、修飾糖は、－Ｆ；－ＣＦ_３、－ＣＮ、－Ｎ_３、－ＮＯ、－ＮＯ_２、－ＯＲ’、－ＳＲ’、もしくは－Ｎ（Ｒ’）_２（式中、各Ｒ’は、独立して、上に定義され、本明細書に記載される通りである）；－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_１０アルキル）、－Ｓ－（Ｃ_１～Ｃ_１０アルキル）、－ＮＨ－（Ｃ_１～Ｃ_１０アルキル）、もしくは－Ｎ（Ｃ_１～Ｃ_１０アルキル）_２；－Ｏ－（Ｃ_２～Ｃ_１０アルケニル）、－Ｓ－（Ｃ_２～Ｃ_１０アルケニル）、－ＮＨ－（Ｃ_２～Ｃ_１０アルケニル）、もしくは－Ｎ（Ｃ_２～Ｃ_１０アルケニル）_２；－Ｏ－（Ｃ_２～Ｃ_１０アルキニル）、－Ｓ－（Ｃ_２～Ｃ_１０アルキニル）、－ＮＨ－（Ｃ_２～Ｃ_１０アルキニル）、もしくは－Ｎ（Ｃ_２～Ｃ_１０アルキニル）_２；または－Ｏ－－（Ｃ_１～Ｃ_１０アルキレン）－Ｏ－－（Ｃ_１～Ｃ_１０アルキル）、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_１０アルキレン）－ＮＨ－（Ｃ_１～Ｃ_１０アルキル）、もしくは－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_１０アルキレン）－ＮＨ（Ｃ_１～Ｃ_１０アルキル）_２、－ＮＨ－（Ｃ_１～Ｃ_１０アルキレン）－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_１０アルキル）、もしくは－Ｎ（Ｃ_１～Ｃ_１０アルキル）－（Ｃ_１～Ｃ_１０アルキレン）－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_１０アルキル）（式中、アルキル、アルキレン、アルケニルおよびアルキニルは、置換されていても非置換であってもよい）のうちの１つを含む１つ以上の置換基を２’位に含有する。置換基の例には、限定するものではないが、－Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＯＣＨ_３、および－Ｏ（ＣＨ_２）_ｎＮＨ_２（式中、ｎは１～約１０である）、ＭＯＥ、ＤＭＡＯＥ、ＤＭＡＥＯＥが挙げられる。

いくつかの実施形態では、リボースの２’－ＯＨは、－Ｈ、－Ｆ；－ＣＦ_３、－ＣＮ、－Ｎ_３、－ＮＯ、－ＮＯ_２、－ＯＲ’、－ＳＲ’、もしくは－Ｎ（Ｒ’）_２（式中、各Ｒ’は、独立して、上に定義され、本明細書に記載される通りである）；－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_１０アルキル）、－Ｓ－（Ｃ_１～Ｃ_１０アルキル）、－ＮＨ－（Ｃ_１～Ｃ_１０アルキル）、もしくは－Ｎ（Ｃ_１～Ｃ_１０アルキル）_２；－Ｏ－（Ｃ_２～Ｃ_１０アルケニル）、－Ｓ－（Ｃ_２～Ｃ_１０アルケニル）、－ＮＨ－（Ｃ_２～Ｃ_１０アルケニル）、もしくは－Ｎ（Ｃ_２～Ｃ_１０アルケニル）_２；－Ｏ－（Ｃ_２～Ｃ_１０アルキニル）、－Ｓ－（Ｃ_２～Ｃ_１０アルキニル）、－ＮＨ－（Ｃ_２～Ｃ_１０アルキニル）、もしくは－Ｎ（Ｃ_２～Ｃ_１０アルキニル）_２；または－Ｏ－－（Ｃ_１～Ｃ_１０アルキレン）－Ｏ－－（Ｃ_１～Ｃ_１０アルキル）、－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_１０アルキレン）－ＮＨ－（Ｃ_１～Ｃ_１０アルキル）、もしくは－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_１０アルキレン）－ＮＨ（Ｃ_１～Ｃ_１０アルキル）_２、－ＮＨ－（Ｃ_１～Ｃ_１０アルキレン）－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_１０アルキル）、もしくは－Ｎ（Ｃ_１～Ｃ_１０アルキル）－（Ｃ_１～Ｃ_１０アルキレン）－Ｏ－（Ｃ_１～Ｃ_１０アルキル）（式中、アルキル、アルキレン、アルケニルおよびアルキニルは、置換されていても非置換であってもよい）のうちの１つを含む置換基によって置換されている。いくつかの実施形態では、２’－ＯＨは、－Ｈ（デオキシリボース）によって置換されている。いくつかの実施形態では、２’－ＯＨは、－Ｆによって置換されている。いくつかの実施形態では、２’－ＯＨは、－ＯＲ’によって置換されている。いくつかの実施形態では、２’－ＯＨは、－ＯＭｅによって置換されている。いくつかの実施形態では、２’－ＯＨは、－ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＭｅ（ＭＯＥ）によって置換されている。

修飾糖には、ロックド核酸（ＬＮＡ）も含まれる。いくつかの実施形態では、ロックド核酸は、以下に示す構造を有する。以下の構造のロックド核酸が示され、ここで、Ｂａは、本明細書に記載の核酸塩基または修飾核酸塩基を表し、Ｒ^２ｓは－ＯＣＨ_２Ｃ４’－である。

いくつかの実施形態では、本発明は、式Ｉの構造を独立して有する１つ以上の修飾されたヌクレオチド間結合を含むオリゴヌクレオチドを提供する：

式中、
Ｐ＊は、不斉リン原子であり、ＲｐまたはＳｐのいずれかであり、
Ｗは、Ｏ、ＳまたはＳｅであり、
Ｘ、ＹおよびＺの各々は、独立して、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｎ（－Ｌ－Ｒ^１）－、またはＬであり、
Ｌは、共有結合、または置換されていてもよい直鎖もしくは分岐Ｃ_１～Ｃ_１０アルキレンであり、ここで、Ｌの１つ以上のメチレン単位は、置換されていてもよいＣ_１～Ｃ_６アルキレン、Ｃ_１～Ｃ_６アルケニレン、

、－Ｃ（Ｒ’）_２－、－Ｃｙ－、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓ－Ｓ－、－Ｎ（Ｒ’）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（ＮＲ’）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）_２－、－Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）_２－、－ＳＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｓ－、－ＯＣ（Ｏ）－、または－Ｃ（Ｏ）Ｏ－によって任意にかつ独立して置換されており、
Ｒ^１は、ハロゲン、Ｒ、または置換されていてもよいＣ_１～Ｃ_５０脂肪族であり、ここで、１つ以上のメチレン単位は、置換されていてもよいＣ_１～Ｃ_６アルキレン、Ｃ_１～Ｃ_６アルケニレン、

、－Ｃ（Ｒ’）_２－、－Ｃｙ－、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｓ－Ｓ－、－Ｎ（Ｒ’）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｓ）－、－Ｃ（ＮＲ’）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）_２－、－Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）_２－、－ＳＣ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｓ－、－ＯＣ（Ｏ）－、または－Ｃ（Ｏ）Ｏ－によって任意にかつ独立して置換されており、
各Ｒ’は、独立して、－Ｒ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ、－ＣＯ_２Ｒ、もしくは－ＳＯ_２Ｒであるか、または
同じ窒素上の２つのＲ’は、それらの介在原子と一緒になって、置換されていてもよい複素環もしくはヘテロアリール環を形成するか、または
同じ炭素上の２つのＲ’は、それらの介在原子と一緒になって、置換されていてもよいアリール環、炭素環、複素環もしくはヘテロアリール環を形成し、
－Ｃｙ－は、フェニレン、カルボシクリレン、アリーレン、ヘテロアリーレンまたはヘテロシクリレンから選択される置換されていてもよい二価の環であり、
各Ｒは、独立して、水素、またはＣ_１～Ｃ_６脂肪族、フェニル、カルボシクリル、アリール、ヘテロアリールもしくはヘテロシクリルから選択される置換されていてもよい基であり、
各

は、ヌクレオシドへの接続を独立して表す。

いくつかの実施形態では、式Ｉの構造を有するヌクレオチド間結合は、以下である。

とりわけ、本開示は、本開示に記載されるように、様々な核酸塩基およびそのパターン、糖およびそのパターン、ヌクレオチド間結合およびそのパターン、または追加の化学部分およびそのパターンを含み得る様々な設計のオリゴヌクレオチドを提供する。いくつかの実施形態では、提供されるオリゴヌクレオチドは、ＭｕＳＫＩｇ２ドメインタンパク質発現、ＭｕＳＫＩｇ２ドメイン遺伝子発現、またはＢＭＰ受容体を介したＢＭＰシグナル伝達レベルのＭｕＳＫＩｇ２活性化をダウンレギュレートし、それによって、成体海馬神経発生（ＡＨＮ）を増加させ、ＡＤにおける認知を改善するか、または筋再生および筋成長を達成する（例えば、誘導する、増強するなど）ことができる。いくつかの実施形態では、提供されるオリゴヌクレオチドは、対象または患者の細胞内のＭｕＳＫＩｇ２ドメイン、またはその産物のうちの１つ以上の発現、レベルまたは活性の低下を導くことができる。いくつかの実施形態では、細胞は、ＭｕＳＫＩｇ２ドメインによってコードされるタンパク質を正常に発現または産生する。いくつかの実施形態では、提供されるオリゴヌクレオチドは、ＭｕＳＫＩｇ２ドメイン遺伝子またはＭｕＳＫＩｇ２ドメイン遺伝子産物の発現、レベルまたは活性の低下を導くことができ、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドの塩基配列からなるか、それを含むか、またはその一部（例えば、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０またはそれ以上の連続した塩基の範囲）を含む塩基配列を有し、ここで、各Ｔは、Ｕによって独立して置換され得、逆もまた同様であり得、オリゴヌクレオチドは、塩基、糖またはヌクレオチド間結合の少なくとも１つの天然に存在しない修飾を含む。

本明細書に記載されるように、高度に豊富な全長ＭｕＳＫは、ＢＭＰ受容体（ＡＬＫ）結合Ｉｇ２ドメインを有し、ＢＭＰシグナル伝達を増強し、したがって、神経発生および筋再生／成長（例えば、筋形成）を抑制する。対照的に、ΔＩｇ２－ＭｕＳＫは、ＢＭＰ受容体（ＡＬＫ）を介したＢＭＰシグナル伝達が低下し、ＡＨＮを促進し、認知を改善する。いくつかの実施形態では、本開示は、ＭｕＳＫをＡＨＮ拘束性全長ＭｕＳＫからＡＨＮ許容性ΔＩｇ２－ＭｕＳＫスプライス形態に切り替えるエクソンスキッピングＡＳＯを提供する。

いくつかの実施形態では、１つ以上のスキップされたエクソンは、エクソン５ａおよび５ｂまたはＭｕＳＫ遺伝子から選択される。いくつかの実施形態では、ＭｕＳＫのエクソン５ａはスキップされる。いくつかの実施形態では、ＭｕＳＫのエクソン５ｂはスキップされる。いくつかの実施形態では、ＭｕＳＫのエクソン５ａおよび５ｂの両方がスキップされる。

様々な実施形態では、活性化合物は、ＭｕＳＫ遺伝子内の１つ以上のエクソンのスキップを導くオリゴヌクレオチドである。様々な実施形態では、活性化合物は、ＭｕＳＫ遺伝子内の複数のエクソンのスキップを導くオリゴヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、活性化合物は、ＭｕＳＫ遺伝子内のエクソン５ａ、エクソン５ｂまたはその両方のスキップを導くオリゴヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、活性化合物は、ＭｕＳＫ遺伝子内のエクソン５ａのスキップを導くオリゴヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、活性化合物は、ＭｕＳＫ遺伝子内のエクソン５ｂのスキップを導くオリゴヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、活性化合物は、ＭｕＳＫ遺伝子内のエクソン５ａおよび５ｂのスキップを導くオリゴヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、複数のオリゴヌクレオチドが一緒に使用され得る。いくつかのそのような実施形態では、２つ以上の異なるエクソンスキッピングオリゴヌクレオチド（例えば、エクソン５ａのスキップを導く少なくとも１つ、およびエクソン５ｂのスキップを導く１つ）が組み合わせて使用され得る。代替的または追加的に、いくつかの実施形態では、少なくとも１つのエクソンスキッピングオリゴヌクレオチドが、例えば、機能的Ｉｇ２ドメインまたはその一部を含むＭｕＳＫ転写物を標的とし得る少なくとも１つの分解オリゴヌクレオチド（例えば、ＲＮアーゼＨ分解のための転写物を標的とする）と組み合わせて使用され得る。

いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、塩形態で提供または利用される。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、それらの塩形態として存在する負に荷電したヌクレオチド間結合（例えば、ホスホロチオエートヌクレオチド間結合、天然のホスフェート結合など）を含む塩として提供される。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、薬学的に許容される塩として提供される。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、金属塩として提供される。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ナトリウム塩として提供される。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、金属塩、例えば、ナトリウム塩として提供され、ここで、それぞれ負に荷電したヌクレオチド間結合は、独立して、塩形態（例えば、ナトリウム塩では、ホスホロチオエートヌクレオチド間結合については－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＳＮａ）－Ｏ－、天然のホスフェート結合については－Ｏ－Ｐ（Ｏ）（ＯＮａ）－Ｏ－など）である。

モデル系
とりわけ、本開示は、本明細書に記載されるように有用なモデル系を提供する。例えば、いくつかの実施形態では、１つ以上のＭｕＳＫＭＲアゴナイジング剤をスクリーニング、検証、特性評価、評価または同定するために使用され得る提供されるモデル系。

いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるモデル系は、人工的に操作された細胞株であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、操作された細胞株は、不死化ＭｕＳＫ－／－筋原性細胞株である。

いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるモデル系は、本明細書に記載の操作されたマウスであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、提供されるマウスは、ΔＩｇ２－ＭｕＳＫマウスであるか、またはΔＩｇ２－ＭｕＳＫマウスを含む。

いくつかの実施形態では、提供されるモデル系（例えば、細胞株またはマウス）は、例えば、小分子剤、抗体剤、オリゴヌクレオチド剤など、およびそれらの組合せを含む、本明細書に記載の作用物質をスクリーニング、検証、特性評価、評価または同定するために使用される。いくつかの実施形態では、そのような作用物質の活性は、適切な参照（例えば、陽性対照または陰性対照）と比較される。いくつかの実施形態では、適切な参照は、任意の作用物質の非存在、もしくはモデル系における公知の活性もしくは性能の作用物質の存在であり得るか、またはそれを含み得る。いくつかの実施形態では、適切な参照は履歴参照であり得る。いくつかの実施形態では、適切な参照は、現時点の参照または同時の参照であり得る。

いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるモデル系ＭｕＳＫとＢＭＰ受容体との共結晶構造。いくつかの実施形態では、共結晶構造は、コンピュータベースのシミュレーションを通じて小分子ＭｕＳＫＭＲアゴナイジング剤の設計を導くために使用され得る。いくつかの実施形態では、共結晶構造は、小分子ＭｕＳＫＭＲアゴナイジング剤のハイスループットスクリーニングを導くために使用され得る。いくつかの実施形態では、小分子ＭｕＳＫＭＲアゴナイジング剤は、ＭｕＳＫを標的とする。いくつかの実施形態では、小分子ＭｕＳＫＭＲアゴナイジング剤は、Ｉ型ＢＭＰ受容体、ＡＬＫ３（ＡＬＫは未分化リンパ腫キナーゼである）およびＡＬＫ６、ならびにＩ型アクチビン受容体ＡＬＫ４、例えば、ＡＬＫ阻害剤（例えば、クリゾチニブ、セリチニブ、アレクチニブ、ブリグチニブ、ロルラチニブ）のうちの１つ以上を標的とする。

ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤の特性評価。

ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、１つ以上のそれらの物理的／化学的特性または生物学的活性について同定、評価または特性評価され得る。生物医学分野の当業者であれば、そのような同定、評価または特性評価に使用され得る特定のアッセイを含む様々な手法を知っている。

小分子ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、例えば、ＭｕＳＫＩｇ２またはＢＭＰ受容体に直接結合することによって、ＭｕＳＫＩｇ２とＢＭＰ受容体との間の相互作用を妨げ得る。そのような作用物質は、例えば、ＭｕＳＫＩｇ２もしくはＢＭＰ受容体に対するそれらの標的に対するそれらの親和性、特異性、もしくはそれらとの相互作用の１つ以上の動力学的特徴もしくは熱力学的特徴を評価する直接結合アッセイによって、または例えば、ＭｕＳＫＩｇ２およびＢＭＰ受容体の過度に予め形成された複合体を破壊する、もしくは複合体形成を減少させるそれらの能力を評価する競合結合アッセイによって特性評価され得る。そのような結合アッセイは、望ましくは、いくつかの濃度で行われる。そのような結合アッセイはまた、全長ＭｕＳＫを用いて、またはＭｕＳＫＩｇ２であるかもしくはＭｕＳＫＩｇ２を含む何らかの他のポリペプチドもしくは作用物質を用いて行われ得る。

ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤、例えば、ＭｕＳＫのＩｇ２ドメインに結合する抗体または小分子は、ＭｕＳＫを発現する細胞と接触すると、Ｉｇ２ドメインの結合についてＢＭＰ受容体と競合する。そのような抗体剤は、特定の細胞型、例えば、神経性細胞型で発現されるＭｕＳＫのエピトープに特異的に結合する。そのような抗体剤は、例えば、解離定数によって測定される場合）、ＭｕＳＫタンパク質、例えば、ＭｕＳＫタンパク質のＩｇ２ドメインに対する結合親和性が、少なくとも約１０^－４Ｍ、少なくとも約１０^－５Ｍ、少なくとも約１０^－６Ｍ、少なくとも約１０^－７Ｍ、少なくとも約１０^－８Ｍ、少なくとも約１０^－９Ｍまたはそれ以下であり得る。生物医学分野の当業者であれば、例えば、解離定数によって測定される場合）、結合親和性が、２つの分子間の水素結合、静電相互作用、疎水性およびファンデルワールス力などの非共有結合性分子間相互作用による影響を受け得ることを知っている。リガンドとその標的分子との間の結合親和性は、他の分子による影響を受け得る。生物医学分野の当業者であれば、例えば、限定するものではないが、ＥＬＩＳＡ、ゲルシフトアッセイ、プルダウンアッセイ、平衡透析、分析的超遠心分離、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、バイオレイヤー干渉法、グレーティング結合干渉法および分光法アッセイを含む、本開示の下で結合親和性または解離定数を測定するための様々な技術に精通しているであろう。

競合アッセイは、ＭｕＳＫのＩｇ２ドメインへの結合について本明細書に記載の抗ＭｕＳＫ抗体剤と競合する抗体を同定することができる。そのような競合抗体は、本明細書に記載の抗ＭｕＳＫ抗体によって結合される、ＭｕＳＫのＩｇ２ドメイン内の同じエピトープに結合する。例示的なエピトープマッピング方法は公知である。例えば、Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｐｉｔｏｐｅｍａｐｐｉｎｇｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，６６（１９９６）を参照されたい。

生物学的活性を有するその抗ＭｕＳＫ抗体剤を同定するためのアッセイが提供され得る。ＭｕＳＫに対する中和活性を有するその抗ＭｕＳＫ抗体剤を同定するためのアッセイが提供され得る。インビボまたはインビトロでそのような生物学的活性を有する抗体剤も提供され得る。本開示の抗体は、そのような生物学的活性についてアッセイされ得る。

抗ＭｕＳＫ抗体剤の生物学的活性とは、例えば、Ｉｇ２ドメイン内などの特定のＭｕＳＫエピトープに対する結合親和性、ＢＭＰへのＭｕＳＫ結合の中和または阻害、インビボでのＭｕＳＫ活性、例えば、ＩＣ_５０の中和または阻害、薬物動態、および例えば、ＭＵＳＫタンパク質の非ヒトホモログもしくは非ヒトオルソログとの、または他のタンパク質もしくは組織との交差反応性を指し得る。生物医学分野で認識されている抗原結合剤の他の生物学的特性または生物学的特徴には、例えば、結合活性、選択性、溶解性、フォールディング、免疫毒性、発現および製剤が含まれ得る。これらの特性または特徴は、限定するものではないが、ＥＬＩＳＡ、競合ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴分析（ＢＩＡＣＯＲＥ（商標））、または速度論的排除アッセイ（ＫＩＮＥＸＡ（商標））、インビトロまたはインビボ中和アッセイ、受容体リガンド結合アッセイ、サイトカインまたは増殖因子の産生または分泌アッセイ、ならびにシグナル伝達および免疫組織化学アッセイを含む標準的な技術を使用して観察、測定または評価され得る。

本明細書に記載のＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、例えば、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤、例えば、アゴナイジングオリゴヌクレオチドが、ＭｕＳＫを発現する細胞と接触すると、ＭｕＳＫ ΔＩｇ２ｍＲＮＡまたはＭｕＳＫ ΔＩｇ２タンパク質のレベルまたは活性を増加させることを特徴とする。

ＭｕＳＫＩｇ２調節物質オリゴヌクレオチドは、細胞内のＭｕＳＫプレｍＲＮＡのスプライシング活性を変化させる能力を特徴とする。例えば、細胞をＭｕＳＫＩｇ２調節物質オリゴヌクレオチドによってトランスフェクトすることができ、一定期間のインキュベーション後に、例えば、エクソン５ａおよび５ｂがスキップされた場合のＭｕＳＫＲＮＡ転写物のプロセシングされた形態の代替的な形態の発現をＲＴ－ＰＣＲによって測定することができる。例えば、培養細胞におけるＭｕＳＫエクソンスキッピングの効率１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９５％を超える。

ＭｕＳＫＩｇ２調節物質オリゴヌクレオチドは、ＭｕＳＫ ΔＩｇ２ｍＲＮＡを増加させることができる。ＭｕＳＫＩｇ２調節物質オリゴヌクレオチドは、ＭｕＳＫプレｍＲＮＡのスプライシングを変化させることができる。ＭｕＳＫＩｇ２調節物質オリゴヌクレオチドは、エクソン５ａまたはエクソン５ｂのスキップまたは包含を促進することができる。

ＭｕＳＫ ΔＩｇ２の発現の調節は、細胞；組織；または動物の器官を含有し得る、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質オリゴヌクレオチドを用いて治療された対象の体液に対して測定され得る。体液、例えば、痰、血清またはＣＳＦ、組織、例えば、生検または器官などの分析用試料を得る方法、および分析を可能にするための試料の調製方法は、生物医学分野の当業者に周知である。対象に対する治療の効果は、本出願に記載の１つ以上の組成物と接触させた動物から採取された１つ以上の生体液、組織または器官内の標的遺伝子発現に関連するバイオマーカーを測定することによって評価され得る。

ＭｕＳＫ ΔＩｇ２ｍＲＮＡの増加とは、ＭｕＳＫ ΔＩｇ２ｍＲＮＡの細胞内レベルが、参照レベル、例えば、対照（例えば、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質オリゴヌクレオチドを投与されていない対象）におけるＭｕＳＫ ΔＩｇ２ｍＲＮＡのレベルよりも高いことを意味する。細胞内ＭｕＳＫ ΔＩｇ２ｍＲＮＡの増加は、産生されたＭｕＳＫ ΔＩｇ２タンパク質またはＭｕＳＫ ΔＩｇ２ｍＲＮＡのレベルの増加として測定され得る。ＭｕＳＫ ΔＩｇ２ｍＲＮＡの増加は、例えば、本明細書に記載の方法によって、またはアッセイ技術、例えば、対象、もしくは対象から得られた試料に対して、ＲＮＡ溶液ハイブリダイゼーション、ヌクレアーゼ保護、ノーザンハイブリダイゼーション、逆転写、マイクロアレイによる遺伝子発現モニタリング、抗体結合、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、核酸配列決定、ウェスタンブロッティング、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、他のイムノアッセイ、蛍光活性化細胞分析（ＦＡＣＳ）、もしくはＭｕＳＫ ΔＩｇ２ｍＲＮＡもしくはＭｕＳＫ ΔＩｇ２タンパク質を検出することができる任意の他の技術もしくは技術の組合せによって決定され得る。

ＭｕＳＫＩｇ２調節物質オリゴヌクレオチド治療を受けている対象から得られた試料中のＭｕＳＫ ΔＩｇ２ｍＲＮＡのレベルと、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質オリゴヌクレオチドを用いて治療されていない対象のＭｕＳＫ ΔＩｇ２ｍＲＮＡのレベルとを比較することによって、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質オリゴヌクレオチド治療がＭｕＳＫ ΔＩｇ２ｍＲＮＡを増加させる程度を決定することができる。ＭｕＳＫ ΔＩｇ２ｍＲＮＡの参照レベルは、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質オリゴヌクレオチド治療を受ける前に同じ対象から得られる。ＭｕＳＫ ΔＩｇ２ｍＲＮＡの参照レベルは、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質オリゴヌクレオチド治療を受けていない対象の集団によって決定される範囲である。全長ＭｕＳＫｍＲＮＡのレベルは、ＭｕＳＫ ΔＩｇ２ｍＲＮＡのレベルと比較される。例えば、参照比の１倍、１．５～５倍、５～１０倍、１０～５０倍、５０～１００倍、約１．１倍、約１．２倍、約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、約１０倍、約１５倍、約２０倍、約３０倍、約４０倍、約５０倍、約６０倍、約７０倍、約８０倍、約９０倍、約１００倍を超える、ＭｕＳＫ ΔＩｇ２ｍＲＮＡと、全長ＭｕＳＫｍＲＮＡ、例えば、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質オリゴヌクレオチド治療を受けている対象におけるエクソン５ａおよび５ｂを有しないＭｕＳＫｍＲＮＡとの比。

ＭｕＳＫ ΔＩｇ２ｍＲＮＡの増加したレベルは、例えば、参照値の１倍、１．５～５倍、５～１０倍、１０～５０倍、５０～１００倍、約１．１倍、約１．２倍、約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、約１０倍、約１５倍、約２０倍、約３０倍、約４０倍、約５０倍、約６０倍、約７０倍、約８０倍、約９０倍、約１００倍を超える。

対象におけるＭｕＳＫ ΔＩｇ２ｍＲＮＡの増加は、参照レベルと比較したＭｕＳＫ ΔＩｇ２タンパク質の増加によって示され得る。ＭｕＳＫ ΔＩｇ２タンパク質の参照レベルは、治療前に、例えば、アルツハイマー病、もしくは神経変性を特徴とする疾患を有するかまたは有するリスクがある対象から得られたＭｕＳＫ ΔＩｇ２タンパク質レベルである。体液、器官または組織を本明細書に記載の１つ以上の組成物の有効量と接触させる方法も企図される。体液、器官または組織を、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質オリゴヌクレオチドを含む１つ以上の組成物と接触させて、体液、器官または組織の細胞内のＭｕＳＫ ΔＩｇ２の発現、およびＭｕＳＫ発現の調節をもたらすことができる。有効量は、対象に投与されるかまたは細胞に接触させられるＭｕＳＫＩｇ２調節物質オリゴヌクレオチドの機能的ＭｕＳＫ ΔＩｇ２タンパク質発現に対する効果をモニタリングすることによって決定され得る。

ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、例えば、神経幹細胞または神経前駆細胞（ＮＰＣ）を含む細胞の集団に投与されると、活性化状態の細胞の数、例えば、活性な増殖を増加させる。集団内の細胞は、それらが活性化状態にあるかどうかについて、例えば、ＥｄＵ＋サイクリング細胞（ｃｙｃｌｉｎｇｃｅｌｌ）を総細胞数と比較するＥｄＵアッセイを含む、生物医学分野で公知の方法によって評価され得る。ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、神経幹細胞を含む細胞の集団に投与されると、集団内の静止状態の神経幹細胞の数を減少させるか、または活性化神経幹細胞の数を増加させる。

ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、神経幹細胞または神経前駆細胞を含む細胞の集団に投与されると、初期ニューロン、例えば、Ｄｅｘに関連する遺伝子を発現する細胞の数を増加させるか、または成熟ニューロン、例えば、Ｍａｐ２、星状膠細胞、例えば、ＧＦＡＰおよびＳ１００ｂ、もしくは乏突起膠細胞、例えば、ＣＮＰアーゼおよびＯ４に関連する遺伝子を発現する細胞の数を減少させる。ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、神経幹細胞または神経前駆細胞を含む細胞の集団に投与されると、細胞の集団内の初期ニューロン、例えば、Ｄｅｘに関連する遺伝子の発現のレベルを増加させるか、または成熟ニューロン、例えば、Ｍａｐ２、星状膠細胞、例えば、ＧＦＡＰおよびＳ１００ｂ、もしくは乏突起膠細胞、例えば、ＣＮＰアーゼおよびＯ４に関連する遺伝子の発現のレベルを低下させる。

細胞の集団は、例えば、胚性幹細胞または多能性幹細胞などの幹細胞から、神経幹細胞であるように誘導された神経幹細胞を含む。

細胞の集団は、健康な対象から得られる。細胞の集団は、神経変性または筋障害を特徴とする疾患に罹患している対象から得られる。

ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、対象由来の細胞の集団と接触させると、対象の神経発生または筋再生もしくは筋成長を増加させる。ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、例えば、対象への注射によって、インビボで細胞の集団と接触させられる。ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、対象から細胞の集団を得ることによってエクスビボで細胞の集団と接触させられ、処理された細胞が対象に再導入されると、神経発生または筋再生もしくは筋成長が増加する。

ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、対象に投与されると、神経発生を増加させるか、認知を改善するか、または筋再生もしくは筋成長を達成する。これらの生物学的効果を評価する方法の例は、本明細書に詳述されている。

アゴナイジング抗体の産生
抗体および抗原結合断片は、生物医学分野で公知の任意の技術によって調製または精製され得、これにより、安定な抗体または抗体断片のその後の形成が可能になる。

本開示の抗ＭｕＳＫ抗体剤をコードする核酸は、従来の手順によって容易に単離および配列決定され得る。

本開示の発現抗体は、宿主細胞から単離された後、均一に精製され得る。本開示の抗体の単離または精製は、タンパク質を単離および精製するための従来の方法によって行われ得る。例えば、理論に拘束されることを望むものではないが、本開示のＭｕＳＫ抗体剤は、限定するものではないが、タンパク質を含む周知の方法によって組換え細胞培養物から回収および精製され得る。精製、プロテインＧ精製、硫酸アンモニウム沈殿またはエタノール沈殿、酸抽出、アニオン交換クロマトグラフィーまたはカチオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィー。高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）も精製に使用することができる。本開示の抗体は、濾過、超濾過、塩析、透析などをさらに組み合わせることによって単離または精製され得る。

本開示の精製抗ＭｕＳＫ剤は、ＥＬＩＳＡ、ＥＬＩＳＰＯＴ、フローサイトメトリー、免疫細胞学、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）分析、ＳＡＰＩＤＹＮＥＫＩＮＥＸＡ（商標）速度論的排除アッセイ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥおよびウェスタンブロットによって、またはＨＰＬＣ分析によって、および本明細書に開示されるいくつかの他の機能的アッセイによって特性評価され得る。

アゴナイジングオリゴヌクレオチドの産生
アゴナイジング剤、例えば、本明細書に記載のアゴナイジングオリゴヌクレオチドは、生物医学分野で公知の標準的な方法によって、例えば、自動合成機の使用によって合成され得る。化学合成、例えば、ホスホラミダイト法を使用した固相合成）後、アゴナイジングオリゴヌクレオチド分子を脱保護し、ｄｓ分子にアニーリングし、例えば、ゲル電気泳動またはＨＰＬＣによって精製することができる。アゴナイジングオリゴヌクレオチドの調製のためのプロトコルは、生物医学分野で公知である。

細胞内に導入された発現構築物からのＲＮＡの転写によって、アゴナイジングオリゴヌクレオチドを細胞内で形成することもできる。例えば、Ｙｕｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，９９，６０４７－６０５２（２００２）を参照されたい。アゴナイジングオリゴヌクレオチド分子のインビボ産生のための発現構築物は、例えば、プロモーターエレメントおよび転写終結シグナルを含む、アンチセンスコード配列の適切な転写に必要なエレメントに作動可能に連結された１つ以上のアンチセンスコード配列を含み得る。そのような発現構築物に好ましいプロモーターには、ポリメラーゼＩＩＩＨＩ－ＲＮＡプロモーター（例えば、Ｂｒｕｍｍｅｌｋａｍｐｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２００２；２９６：５５０－５５３を参照）およびＵ６ポリメラーゼ－ＩＩＩプロモーター（例えば、Ｓｕｉｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ２００２；Ｐａｕｌｅｔａｌ．，ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２０，５０５－５０８（２００２）；およびＹｕｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，９９，６０４７－６０５２を参照）（２００２）が含まれる。アゴナイジングオリゴヌクレオチド発現構築物は、発現構築物のクローニングを容易にする１つ以上のベクター配列をさらに含むことができる。使用され得る標準的なベクターには、例えば、ｐＳｉｌｅｎｃｅｒ２．０－Ｕ６ベクター（ＡｍｂｉｏｎＩｎｃ．，Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ，ＵＳＡ）が含まれる。

医薬組成物。

本開示は、本明細書に記載のアゴナイジング剤を含むかまたは送達する医薬組成物を提供する。本開示はまた、本明細書に記載のアゴナイジング剤に曝露された細胞集団であるかまたはそれを含む医薬組成物を提供する。

例えば、提供される医薬組成物は、投与されると、ＭｕＳＫポリペプチド、例えば、ＭｕＳＫ ΔＩｇ２ポリペプチド、もしくはＢＭＰとの相互作用のために機能するＩｇ２ドメインを欠く、Ｉｇ２が破壊された別のＭｕＳＫ変異体ポリペプチドのレベルもしくは活性の増加を達成する抗体剤もしくは核酸剤などのＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤を含むことができるか、または送達することができる。提供される医薬組成物は、神経性細胞の数もしくは活性が集団内で増加するように、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤に曝露された細胞の集団を含むことができるか、または送達することができる。

医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤と組み合わせた活性剤、例えば、本明細書に記載のアゴナイジング剤、もしくはその前駆体であり得るか、またはそれを含み得る。生物医学分野の当業者であれば、特定の医薬組成物の成分が医薬組成物の投与経路による影響を受け得ることを知っている。

本開示の組成物は、全身投与および局所（ｔｏｐｉｃａｌ）投与または局所（ｌｏｃａｌｉｚｅｄ）投与を含む様々な投与様式のために製剤化され得る。技術および製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ（２０ｔｈｅｄ．２０００）に一般に見出され得る。

本発明の組成物は、いくつかの経口剤形、非経口剤形および局所剤形で調製および投与され得る。本発明の組成物は、注射によって、例えば、静脈内、筋肉内、皮内、皮下、十二指腸内または腹腔内に投与され得る。本明細書に記載の組成物は、吸入によって、例えば、鼻腔内に投与され得る。本発明の組成物は、経皮投与され得る。本発明の組成物を投与するために、いくつかの投与経路、例えば、筋肉内、経口、経皮を使用することができる。

本明細書に記載の医薬組成物は、静脈内注射、髄腔内投与、経口投与、頬側投与、吸入、経鼻投与、局所投与、眼投与または耳投与から選択される経路による送達のために製剤化され得る。医薬組成物は、髄腔内投与による送達のために製剤化され得る。医薬組成物は、静脈内投与による送達のために製剤化され得る。医薬組成物は、経口投与による送達のために製剤化され得る。

オリゴヌクレオチドおよび組成物は、中枢神経系に送達され得る。オリゴヌクレオチドおよび組成物は、脳脊髄液に送達される。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドおよび組成物は、脳実質に投与される。オリゴヌクレオチドおよび組成物は、髄腔内投与または脳室内投与によって動物／対象に送達され得る。本明細書に記載されるオリゴヌクレオチドおよび組成物の中枢神経系内への広範囲な分布は、実質内投与、髄腔内投与または脳室内投与によって達成され得る。

非経口投与は、注射、例えば、シリンジ、ポンプなどによるものであり得る。注射はボーラス注射であり得る。注射は、線条体、尾状体、皮質、海馬および小脳などの組織に直接投与され得る。

ボーラス注射などによって医薬品を特異的に局在化させる方法は、有効濃度中央値（ＥＣ_５０）を２０、２５、３０、３５、４０、４５または５０分の１に低下させることができる。本明細書にさらに記載されるアンチセンス化合物中の医薬品。標的組織は脳組織であり得る。標的組織は海馬組織であり得る。ＥＣ_５０の低下は、それを必要とする患者に対して薬理学的結果を達成するために必要な用量を減少させるため、望ましい可能性がある。

アンチセンスオリゴヌクレオチドは、注射または注入によって、１ヶ月に１回、２ヶ月に１回、９０日に１回、３ヶ月に１回、６ヶ月に１回、年に２回、または年に１回送達され得る。

これらの医薬組成物はまた、薬学的に使用され得る調製物への活性化合物の加工を容易にする賦形剤および助剤を含む好適な薬学的に許容される担体を含有することができる。経口投与のために製剤化される調製物は、錠剤、糖衣錠、カプセルまたは溶液であり得る。

経口使用のための医薬調製物は、活性化合物を固体賦形剤と組み合わせ、得られた混合物を場合により粉砕し、所望であれば好適な助剤を加えた後に顆粒の混合物を加工して錠剤または糖衣錠コアを得ることによって得られ得る。好適な賦形剤は、充填剤、例えば、ラクトース、スクロース、マンニトールもしくはソルビトールを含む糖；セルロース調製物、例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、バレイショデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル－セルロース、カルボキシメチル－セルロースナトリウム（ＣＭＣ）またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ：ポビドン）である。架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはその塩、例えば、アルギン酸ナトリウムなどの崩壊剤を加えることができる。

糖衣錠コアには、好適なコーティングが施される。アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、または二酸化チタン、ラッカー溶液、および好適な有機溶媒または溶媒混合物を場合により含有することができる濃縮糖溶液を使用することができる。識別のために、または活性化合物用量の様々な組合せを特徴付けるために、染料または顔料を錠剤または糖衣錠コーティングに加えることができる。

経口的に使用され得る医薬調製物には、ゼラチン製の押込み式カプセル、およびゼラチン製の軟質密閉カプセル、ならびにグリセロールまたはソルビトールなどの可塑剤が含まれる。押込み式カプセルは、ラクトースなどの充填剤、デンプンなどの結合剤、またはタルクもしくはステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤、および場合により安定剤と混合して活性成分を含有することができる。軟質カプセルでは、活性化合物は、脂肪油、流動パラフィンまたは液体ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの好適な液体に溶解または懸濁され得る。安定剤を加えることができる。

医薬組成物は、錠剤、丸剤、カプセル、液体、吸入剤、点鼻薬溶液、坐剤、懸濁液、ゲル、コロイド、分散液、懸濁液、溶液、エマルジョン、軟膏、ローション、点眼剤または点耳剤であり得る。

治療される特定の病態に応じて、本開示の医薬組成物は、液体剤形または固体剤形に製剤化され得、全身投与または局所投与され得る。医薬組成物は、例えば、生物医学分野の当業者に知られているように、時間調節されたまたは持続的な低放出形態で送達され得る。製剤化および投与のための技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ（２０ｔｈｅｄ．２０００）に見出され得る。好適な経路には、経口投与、吸入スプレーによる頬側投与、舌下投与、直腸投与、経皮投与、経膣投与、経粘膜投与、経鼻投与もしくは腸投与；筋肉内注射、皮下注射、髄内注射、および髄腔内注射、直接脳室内注射、静脈内注射、関節内注射、胸骨内注射、滑膜内注射、肝臓内注射、病巣内注射、頭蓋内注射、腹腔内注射、鼻腔内注射もしくは眼内注射、または他の送達様式を含む非経口送達が含まれ得る。

注射では、本開示の医薬組成物は、水溶液、例えば、ハンクス液、リンガー液または生理食塩水緩衝液などの生理学的に適合性の緩衝液中で製剤化および希釈され得る。そのような経粘膜投与では、浸透されるバリアに適切な浸透剤が製剤に使用される。そのような浸透剤は、生物医学分野で周知である。

本開示の実施のために開示される本明細書の組成物を全身投与に適した投与量に製剤化するための薬学的に許容される不活性担体の使用は、本開示の範囲内である。担体の適切な選択、および好適な製造実施により、溶液として製剤化された本開示の組成物は、静脈内注射などによって非経口的に投与され得る。

本明細書に記載の組成物は、生物医学分野で利用可能な薬学的に許容される担体を使用して、経口投与に適した投与量に製剤化され得る。そのような担体は、対象、例えば、治療される患者による経口摂取のための錠剤、丸剤、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液などとして本開示の化合物を製剤化することを可能にする。

経鼻送達または吸入送達では、１つ以上の可溶化物質、希釈物質または分散物質、例えば、生理食塩水、保存剤、例えば、ベンジルアルコール、吸収促進剤およびフルオロカーボンを使用することができる。

提供される組成物は、活性剤の前駆体を含むことができるか、または送達することができ、前駆体は、投与されると活性治療剤になるかまたは活性治療剤を放出する。例えば、前駆体は、小分子アゴナイジング剤のプロドラッグ、もしくはタンパク質アゴナイジング剤をコードする核酸などであり得るか、またはそれを含み得る。

提供される医薬組成物は、薬学的に許容される塩形態で、例えば、ナトリウム塩、アンモニウム塩などとして提供され得る、治療有効量、例えば、確立されたプロトコルに従って投与された場合に有効な量）の提供されるオリゴヌクレオチドを含むことができるか、または送達することができる。そのような提供される医薬組成物は、関連するオリゴヌクレオチドと、薬学的に許容される希釈剤、薬学的に許容される賦形剤および薬学的に許容される担体から選択される少なくとも１つの薬学的に許容される不活性成分とを含む。提供されるオリゴヌクレオチドの塩形態は、例えば、オリゴヌクレオチド内の負に荷電した酸性基、例えば、ホスフェート、ホスホロチオエートなどの数まで、２つ以上のカチオンを含む。

薬学的に許容される塩は、生物医学分野の当業者に一般に周知であり、例えば、限定するものではないが、酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ベシル酸塩、安息香酸塩、重炭酸塩、重酒石酸塩、臭化物、エデト酸カルシウム、カルンシレート（ｃａｒｎｓｙｌａｔｅ）、炭酸塩、クエン酸塩、エデト酸塩、エジシル酸塩、エストレート、エシレート、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニレート（ｇｌｙｃｏｌｌｙｌａｒｓａｎｉｌａｔｅ）、ヘキシルレゾルシン酸塩、ヒドラバミン、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、ヨウ化物、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、ムチン酸塩、ナプシル酸塩、硝酸塩、パモ酸塩（エンボン酸塩）、パントテン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ポリガラクツロ酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩またはテオクル酸塩を含むことができる。他の薬学的に許容される塩は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ（２０ｔｈｅｄ．２０００）に見出され得る。好ましい薬学的に許容される塩には、例えば、酢酸塩、安息香酸塩、臭化物、炭酸塩、クエン酸塩、グルコン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、マレイン酸塩、メシル酸塩、ナプシル酸塩、パモ酸塩（エンボン酸塩）、リン酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩または酒石酸塩が含まれる。

生物医学分野の当業者に知られているように、オリゴヌクレオチドは、例えば、医薬用途のためのいくつかの塩として製剤化され得る。塩は、金属カチオン塩またはアンモニウム塩である。塩は、オリゴヌクレオチドの金属カチオン塩である。塩は、オリゴヌクレオチドのアンモニウム塩である。代表的なアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩には、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどが含まれる。塩は、オリゴヌクレオチドのナトリウム塩である。薬学的に許容される塩には、適切な場合、非毒性アンモニウム、第四級アンモニウム、および提供されるオリゴヌクレオチド内に存在し得る水酸化物、カルボキシレート、スルフェート、ホスフェート、ニトレート、スルホネート、ホスホロチオエートなどの対イオンによって形成されるアミンカチオンが含まれる。生物医学分野の当業者に認識されるように、オリゴヌクレオチドの塩は、オリゴヌクレオチド内に複数のアニオンが存在し得ることから、複数のカチオン、例えば、ナトリウムイオンを含有し得る。

提供されるオリゴヌクレオチドおよびその組成物は、広い投与量範囲にわたって有効であり得る。例えば、成人の治療では、約０．０１～約１０００ｍｇ、約０．５～約１００ｍｇ、約１～約５０ｍｇ／日、および約５～約１００ｍｇ／日の投与量が、使用され得る投与量の例である。正確な投与量は、投与経路、化合物が投与される形態、治療される対象、治療される対象の体重、ならびに主治医の選好および経験に依存する。

本開示は、例えば、他の治療剤または医療手技との併用療法のための技術、例えば、組成物、方法などを提供する。提供されるオリゴヌクレオチドまたは組成物は、１つ以上の他の治療剤とともに使用され得る。提供される組成物は、提供されるオリゴヌクレオチドと、１つ以上の他の治療剤とを含む。１つ以上の他の治療剤は、組成物中の提供されるオリゴヌクレオチドと比較した場合、１つ以上の異なる標的、または標的に対する１つ以上の異なる機構を有することができる。治療剤はオリゴヌクレオチドである。治療剤は小分子薬物である。治療剤はタンパク質である。治療剤は抗体である。いくつかの治療剤を本開示に従って使用することができる。提供されるオリゴヌクレオチドまたはその組成物は、１つ以上の他の治療剤もしくは医療手技の前、それと同時に、またはその後に投与される。提供されるオリゴヌクレオチドまたはその組成物は、１つ以上の他の治療剤または医療手技と同時に投与される。提供されるオリゴヌクレオチドまたはその組成物は、１つ以上の他の治療剤または医療手技の前に投与される。提供されるオリゴヌクレオチドまたはその組成物は、１つ以上の他の治療剤または医療手技の後に投与される。提供される組成物は、１つ以上の他の治療剤を含む。

医薬組成物の生成。

本開示の組成物から医薬組成物を調製するために、薬学的に許容される担体は、固体または液体のいずれかであり得る。固体形態の調製物には、粉末、錠剤、丸剤、カプセル、カシェ剤、坐剤および分散性顆粒が含まれる。固体担体は、希釈剤、香味剤、結合剤、保存剤、錠剤崩壊剤またはカプセル化材料としても作用することができる１つ以上の物質であり得る。

粉末では、担体は、微粉化された活性成分との混合物中の微粉化された固体である。錠剤では、活性成分は、必要な結合特性を有する担体と好適な割合で混合され、所望の形状およびサイズに圧縮される。

粉末および錠剤は、５％～７０％の治療剤を含有することができる。好適な担体は、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点ワックス、カカオバターなどである。調製という用語は、他の担体を含むまたは含まない活性成分が担体によって取り囲まれており、したがって、それと会合しているカプセルを提供する担体としてのカプセル化材料を含む活性治療剤の製剤を含む。同様に、カシェ剤およびロゼンジが含まれる。錠剤、粉末、カプセル、丸剤、カシェ剤およびロゼンジは、経口投与に適した固体剤形として使用され得る。

坐剤を調製するために、低融点ワックス、例えば、脂肪酸グリセリドまたはカカオバターの混合物を最初に溶融し、活性成分を撹拌することによって均質に分散させる。次いで、溶融した均質な混合物を好都合な大きさの型に注ぎ、冷却し、固化させる。

液体形態の調製物には、溶液、懸濁液およびエマルジョン、例えば、水、または水／プロピレングリコール溶液が含まれる。非経口注射のために、液体調製物をポリエチレングリコール水溶液中の溶液中で製剤化することができる。

非経口適用が必要とされるかまたは所望される場合、本発明の組成物のための特に好適な混合物は、油性溶液または水溶液中の注射可能な滅菌溶液、ならびに坐剤を含む懸濁液、エマルジョンまたはインプラントである。特に、非経口投与用の担体には、デキストロース水溶液、生理食塩水、純水、エタノール、グリセロール、プロピレングリコール、落花生油、ゴマ油、ポリオキシエチレンブロック高分子などが含まれる。アンプルは、好都合な単位投与量である。本発明の組成物はまた、リポソームに組み込まれ得るか、または経皮ポンプもしくはパッチを介して投与され得る。本発明に使用するのに適した医薬混合物には、例えば、ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ２３^ｒｄｅｄ．（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，２０２０）に記載されているものが含まれる。

経口使用に適した水溶液は、活性成分を水に溶解し、所望であれば好適な着色剤、香料、安定剤および増粘剤を加えることによって調製され得る。経口使用に適した水性懸濁液は、天然ゴムまたは合成ゴム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムおよび他の周知の懸濁化剤などの粘性材料を用いて、微粉化された活性成分を水に分散させることによって作製され得る。

使用直前に経口投与用の液体形態の調製物に変換されることを意図した固体形態の調製物も含まれる。そのような液体形態には、溶液、懸濁液およびエマルジョンが含まれる。これらの調製物は、活性成分の他に、着色剤、香料、安定剤、緩衝剤、人工甘味料および天然甘味料、分散剤、増粘剤、可溶化剤などを含有することができる。

医薬調製物は、単位剤形であり得る。そのような形態では、調製物は、適切な量の活性成分を含有する単位用量に細分される。単位剤形は、包装された調製物であり得、包装物は、個別の量の調製物、例えば、包装された錠剤、カプセル、およびバイアルまたはアンプル内の粉末を含有する。単位剤形は、カプセル、錠剤、カシェ剤もしくはロゼンジ自体であり得るか、または適切な数の包装形態のこれらのいずれかであり得る。

単位用量調製物中の活性成分の量は、特定の用途、および活性成分の効力に従って変化し得るか、または調整され得る。組成物は、所望であれば、他の適合性治療剤も含有することができる。

投与
当業者であれば、いくつかの実施形態では、対象、特にヒトに投与される投与量が、例えば、使用される特定の治療薬または製剤、投与方法、投与レジメン、治療される特定の対象の１つ以上の特徴などに応じて変化し得ることを理解するであろう。いくつかの実施形態では、当分野の臨床医は、特定の医学的状態を治療または予防するために、ヒトまたは他の対象に投与される治療薬の治療有効量を決定する。治療的に有効であるために必要とされる治療薬の正確な量は、当業者の範囲内である、多くの対象特異的な考慮事項に加えて、多数の要因、例えば、治療薬の比活性、および投与経路に依存する。

いくつかの実施形態では、投与は、眼、経口、頬側、皮膚（例えば、真皮への局所、皮内、皮間、経皮などのうちの１つ以上であり得るかまたはそれを含み得る）、経腸、動脈内、皮内、胃内、髄内、筋肉内、鼻腔内、腹腔内、髄腔内、静脈内、脳室内、特定の器官内（例えば、肝臓内）、粘膜内、経鼻、経口、直腸内、皮下、舌下、局所、気管（例えば、気管内滴下による）、膣、硝子体などであり得る。

当業者であれば、本開示を読むと、いくつかの実施形態では、筋肉へのＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤の送達を達成することが望ましい場合があることを理解するであろう。代替的または追加的に、いくつかの実施形態では、ＣＮＳ（例えば、脳、例えば、海馬または脳室下領域）または肺へのＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤の送達を達成することが望ましい場合がある。

いくつかの実施形態では、作用物質（例えば、アゴナイジング剤）は、全身送達、または筋肉への局所送達（例えば、筋肉内注射を介して）を介して送達される。

いくつかの実施形態では、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、核酸ペイロードの形態でＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤を効果的に送達するためにウイルスベクターを使用して投与される。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、特定の細胞型（例えば、筋芽細胞、筋細胞、筋管、サテライト細胞および筋線維）を標的とする。様々な筋細胞型を標的とするために、ＡＡＶ１ベクター、ＡＡＶ６ベクターおよびＡＡＶ９ベクターが使用された（例えば、Ａｒｎｅｔｔｅｔａｌ．，ＭｏｌＴｈｅｒＭｅｔｈｏｄｓＣｌｉｎＤｅｖ．１．ｐｉｉ：１４０３８，２０１４、およびＲｉａｚｅｔａｌ．，ＳｋｅｌｅｔａｌＭｕｓｃｌｅ５（３７）２０１５を参照されたい）。

当業者であれば、本開示を読むと、いくつかの実施形態では、ＣＮＳへのＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤の送達、およびいくつかの実施形態では脳へのＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤の送達を達成することが望ましい場合があることを理解するであろう。当業者であれば、本開示を読むと、いくつかの実施形態では、筋肉へのＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤の送達を達成することが望ましい場合があることを理解するであろう。

いくつかの実施形態では、全身投与は、ＣＮＳ（例えば、脳、例えば、海馬または脳室下帯）または筋肉への送達を達成する。いくつかの実施形態では、作用物質（例えば、アゴナイジング剤）は、脳室内投与によって中枢神経系（ＣＮＳ）または筋肉に送達される。

さらに、特定のウイルスベクターは、ニューロンを選択的に標的とし、遺伝子的なペイロードを脳に効果的に送達することが知られている。例えば、海馬内の神経性細胞に核酸ペイロード（例えば、遺伝子治療、コードされたＲＮＡなど）を効果的に送達するために、ＡＡＶ２／１ベクターが確立された。例えば、Ｈａｍｍｏｎｄｅｔａｌ．，ＰＬｏＳＯｎｅ，１２，ｅ０１８８８３０（２０１７）；Ｇｕｇｇｅｎｈｕｂｅｒｅｔａｌ．，ＰＬｏＳＯｎｅ，５，ｅ１５７０７，（２０１０）；Ｌａｗｌｏｒｅｔａｌ．，Ｍｏｌ．Ｎｅｕｒｏｄｅｇ．２：１１（２００７）を参照されたい。同様に、脳室下帯細胞内の特定の細胞を標的とし、核酸ペイロードを効果的に送達するために、特定のＡＡＶベクター（例えば、ＡＡＶ２／１ベクターまたはＡＡＶ４ベクター）が確立された。例えば、Ｌｉｕｅｔａｌ．，ＧｅｎｅＴｈｅｒａｐ．１２，１５０３（２００５）；Ｂｏｃｋｓｔａｅｌｅｔａｌ．，Ｈｕｍ．ＧｅｎｅＴｈｅｒａｐ．２３，２１６（２０１２）を参照されたい。

神経変性に関連する疾患、障害もしくは病態に罹患しているかまたは罹患しやすい対象では、ＣＮＳ、例えば脳（例えば、海馬または脳室下領域）への送達を達成する投与が望ましい場合がある。

いくつかの実施形態では、効果的な送達は、本明細書に記載の組成物の全身投与によって達成され得る。代替的または追加的に、いくつかの実施形態では、効果的な送達は、ＣＮＳ、脳または筋肉への局所投与によって、例えば、髄腔内送達または腔内（例えば、脳室内）送達によって、達成され得る。

ＣＮＳ、脳または筋肉への局所投与のための技術が開発され、例えば、様々なタンパク質治療薬（例えば、Ｃａｌｉａｓｅｔａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．＆Ｔｈｅｒａｐ．１４４：１２２，２０１４を参照）、小分子（例えば、ＤｏｄｏｕＰｈａｒｍ２８９：５０１，２０１２を参照）、細胞組成物（例えば、Ｅｆｔｅｋｈａｒｚａｄｅｈｅｔａｌ．，ＩｒａｎＪＢａｓｉｃＭｅｄＳｃｉ１８：５２０，２０１５を参照）、および核酸治療薬（例えば、Ｏｔｓｕｋａｅｔａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｔｒａｕｍａ２８：１０６３，２０１１を参照；オナセムノゲンアベパルボベク－ｘｉｏｉ［商標名Ｚｏｌｇｅｎｓｍａ（商標）の下に販売されている］およびヌシネルセン［商標名Ｓｐｉｎｒａｚａ（商標）の下に販売されている］の処方情報も参照）に有効であることが実証された。

当業者であれば、髄腔内送達が、細胞、タンパク質および核酸の治療薬を含む、海馬への送達を達成するのに特に効果的であり得ることを認識するであろう。

全身投与技術（例えば、経口、非経口、粘膜などを含む）は、多種多様な作用物質について十分に確立されている。ＣＮＳ送達、筋肉送達または脳送達を達成する全身投与は、いくつかの実施形態では、血液脳関門（ＢＢＢ）を通過する能力に依存し得る。

特定の活性剤または送達系は、ＢＢＢを通過することが知られている。近年の技術は、その点に関して特に困難であると従来考えられていたオリゴヌクレオチドなどの作用物質のＣＮＳ送達または脳送達さえも達成することが示された。一例を挙げると、参照により本明細書に組み込まれるＭｉｎｅｔａｌ．，ＡｎｇｅｗＣｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，（２０２０）は、ＢＢＢを越えてオリゴヌクレオチドを輸送するグルコース被覆高分子ナノ担体を記載している。

オリゴヌクレオチド治療薬へのある特定の化学物質の組込みは、ＢＢＢを越えるそれらの移動を容易にすることができる。例えば、参照により本明細書に組み込まれる）Ｋｈｏｒｋｏｖａｅｔａｌ．，ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈ３５：２４９，２０１７は、２’－修飾ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド．．．が、それらの長い半減期を考慮すると、ＣＮＳ障害に特に適応可能であり得、脳内の効果が単回注射後６ヶ月まで持続することを記載している。別のタイプの糖部分修飾、ロックド核酸（ＬＮＡ）では、２’酸素と４’炭素とを接続する架橋が導入される。この修飾は、ＬＮＡ－ＤＮＡハイブリッドおよびＬＮＡ－ＲＮＡハイブリッドの溶融温度を実質的に上昇させ、ひいては、バイオアベイラビリティーの増大と、製造コストの低減とを伴うさらに短いＯＤＮベースの化合物の作成を可能にする。立体構造的に制約されたオリゴヌクレオチド類似体である、近年提案されたトリシクロ－ＤＮＡは、糖のＣ（５’）とＣ（３’）との間に３個の追加のＣ原子を有する（図２）。この修飾は、安定性、疎水性およびＲＮＡ親和性を増加させ、組織取込みおよびＢＢＢ透過性を改善する。

特発性肺線維症（ＩＰＦ）、急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）、肺炎、およびウイルス感染による肺合併症などの疾患もしくは障害に罹患しているかまたは罹患しやすい対象では、肺への送達を達成する投与が望ましい場合がある。

オリゴヌクレオチド
いくつかの実施形態では、標的部位への送達を増強するためにＡＳＯが開発される。当技術分野で記載されているように、オリゴロード（ｏｌｉｇｏｌｏａｄ）は、標的部位へのさらに安全な送達を増強するために、脂質粒子、リポソーム、ナノ粒子、およびさらに近年では糖Ｎ－アセチルガラクトサミンなどの担体またはリガンドに共有結合される。Ｖｅｒｍａ，Ａｎｎ．ＩｎｄｉａｎＡｃａｄ．Ｎｅｕｒｏｌ．２０１８２１（１）：３－８を参照されたい。

標的部位、例えば、筋肉へのＡＳＯの細胞送達の効率を改善するために、特定の技術が開発された。例えば、アミノグリコシド（ＡＧ）は、インビトロおよびインビボの両方でアンチセンスホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー（ＰＭＯ）の送達を改善することが示されている。Ｗａｎｇ，ｅｔａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓ，２０１９；１６：６６３－６７４を参照されたい。共有結合を介して、または非共有結合性ナノ粒子複合体の形成を介してオリゴヌクレオチドに直接結合することができる短い細胞透過性ペプチド（ＣＰＰ）は、細胞取込みを促進することができる。ＭｃＣｌｏｒｅｙｅｔａｌ．；Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅｓ，６（２），５１（２０１８）を参照されたい。また、ＡＳＯ脂肪酸コンジュゲートは、筋肉内のアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）の機能的取込みを増強することが報告されている。Ｐｒａｋａｓｈｅｔａｌ．；ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ，４７，２０１９，６０２９－６０４４を参照されたい。

当業者であれば、第三世代ホスホロジアミデートモルホリノＡＳＯである、デュシェンヌ型筋ジストロフィー（ＤＭＤ）の承認された治療法であるエテプリルセン（ＥｘｏｎＤｙｓ５１）に精通しているであろう。

商標名Ｅｘｏｎｄｙｓ５１（商標）の下に販売されているエテプリルセン（ＳａｒｅｐｔａＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）は、エクソン５１をプレｍＲＮＡにスプライシングし、適したフレームシフト変異を有する患者の１３％にリーディングフレームを回復させる（Ｃｒｕｄｅｌｅｅｔａｌ．ＨｕｍａｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＧｅｎｅｔｉｃｓ，Ｖｏｌｕｍｅ２８，ＩｓｓｕｅＲ１，ｐｐ．Ｒ１０２－Ｒ１０７，２０１９を参照）。

エテプリルセンは、３５～６０分間にわたって静脈内注入によって投与される。特に、その推奨投与量は、毎週３０ｍｇ／ｋｇ体重である。単回投与バイアルでは、医薬組成物は、１００ｍｇ／２ｍＬまたは５００ｍｇ／ｍＬ（５０ｍｇ／ｍＬ）溶液として製剤化される。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチド治療薬は、静脈内投与され得る。いくつかのそのような実施形態では、そのようなオリゴヌクレオチド治療薬は、エテプリルセン［商標名Ｅｘｏｎｄｙｓ５１（商標）の下に販売されている］に使用されるレジメンと合理的に同等のレジメンに従って投与され得る。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるさらに低用量のアゴナイジングオリゴヌクレオチドは、１２ｍｇである。いくつかの実施形態では、１用量当たり合計５ｍｇ～６０ｍｇのアゴナイジングオリゴヌクレオチドが、対象に投与される。いくつかの実施形態では、１用量当たり合計１２ｍｇ～４８ｍｇのアゴナイジングオリゴヌクレオチドが、対象に投与される。いくつかの態様では、１用量当たり合計１２ｍｇ～３６ｍｇのアゴナイジングオリゴヌクレオチドが、対象に投与される。いくつかの態様では、１用量当たり合計１２ｍｇのアゴナイジングオリゴヌクレオチドが、対象に投与される。

当業者であれば、生存運動ニューロン－２（ｓｕｒｖｉｖａｌｍｏｔｏｒｎｅｕｒｏｎ－２）（ＳＭＮ２）特異的遺伝子転写物を標的とし、小児患者および成人患者の脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の治療に適応されるアンチセンスオリゴヌクレオチド治療薬であるヌシネルセン［商標名Ｓｐｉｎｒａｚａ（商標）の下に販売されている］に精通しているであろう。Ｓｐｉｎｒａｚａは、髄腔内投与される。特に、その推奨投与量は、４つの負荷用量を伴うレジメンに従って、１投与当たり単回投与バイアルでは１２ｍｇ／５ｍＬ（２．４ｍｇ／ｍＬ）である。４つの負荷用量のうちの最初の３つは１４日間隔で投与され、４つの負荷用量の４番目は３回目の投与の３０日後に投与され、その後、４ヶ月ごとに１回維持用量が投与される。血小板算定、凝固臨床検査および定量的スポット尿タンパク質検査をベースライン時および各投与の前に行うことが推奨される。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチド治療薬は、髄腔内投与され得る。いくつかのそのような実施形態では、そのようなオリゴヌクレオチド治療薬は、ヌシネルセン［商標名Ｓｐｉｎｒａｚａ（商標）の下に販売されている］に使用されるレジメンと合理的に同等のレジメンに従って投与され得る。

細胞療法
本明細書に記載されるＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤が筋再生（例えば、ＳＣ、ＭＰＣもしくは筋芽細胞であるか、またはそれらを含む細胞集団に由来する）を促進する能力に照らして、当業者であれば、本開示を読むと、とりわけ、本開示が細胞集団内に存在するニューロン、ＳＣ、ＭＰＣまたは筋芽細胞のレベルを増強するための技術を提供することを理解するであろう。すなわち、元の細胞集団を本明細書に記載されるＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤と接触させることにより、元の集団内のレベルと比較して神経発生または筋再生もしくは筋成長のレベルが増加した、結果として得られる集団を生成することができる。本明細書に記載されるそのようなＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤の投与は、そのような増加を達成することができる。

いくつかの実施形態では、元の細胞集団は、ニューロン、ＳＣ、ＭＰＣもしくは筋芽細胞であり得るか、またはそれを含み得る。いくつかの実施形態では、元の細胞集団は、胚性幹細胞もしくは多能性幹細胞であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、胚性幹細胞または多能性幹細胞は、神経細胞もしくは筋原性前駆細胞であるか、または例えば、当技術分野で公知の技術（例えば、Ｍｉｙａｇｏｅ－Ｓｕｚｕｋｉｅｔａｌ．．，ＳｔｅｍＣｅｌｌｓＩｎｔ．７８２４６１４２０１７）を使用して神経細胞もしくは筋原性前駆細胞に分化した。

いくつかの実施形態では、上記のように、そのような投与は、関連する元の細胞集団にインビボで曝露される（すなわち、接触する）ように、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤を（例えば、ヒト、特に成人、例えば、そのようなヒトの筋組織に）送達する。

いくつかの実施形態では、本開示による投与は、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤を、例えば、神経幹細胞（ＮＣＳ）、ＳＣ、ＭＰＣもしくは筋芽細胞であり得るかまたはそれを含み得る細胞の集団（例えば、細胞の元の集団）とエクスビボで接触させる。例えば、いくつかの実施形態では、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、対象由来の細胞の集団にエクスビボ（例えば、インビトロ）で投与される。いくつかの実施形態では、対象から得られた細胞の集団。

いくつかの実施形態では、エクスビボで特に使用されるＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤は、小分子、および抗体、もしくは核酸剤、もしくはそれらの組合せであり得るか、またはそれを含み得る。いくつかの特定のそのような実施形態では、核酸（例えば、１つ以上の遺伝子治療［例えば、核酸ベクターまたは転写物］、オリゴヌクレオチドまたはｇＲＮＡ）であるかまたはそれを含む１つ以上の作用物質は、細胞へのエクスビボ投与またはインビトロ投与に特に有用であり得る。細胞集団のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ改変は確立された成長しつつある分野であり、当業者であれば、例えば、ＭｕＳＫＩｇ２ドメイン配列を改変または破壊するための本開示によるそのような戦略の適用性を理解するであろう。代替的または追加的に、機能的Ｉｇ２ドメインを欠くＭｕＳＫ形態をコードする核酸（またはその発現産物が機能的Ｉｇ２ドメインを欠くＭｕＳＫ形態をコードする核酸）は、エクスビボまたはインビトロで細胞に導入され得る。さらに代替的または追加的に、機能的Ｉｇ２を欠く形態を促進するようにＭｕＳＫ転写物のエクソンスキッピングを導く、または機能的Ｉｇ２を含む形態の直接分解を導く（または翻訳を遮断する）オリゴヌクレオチドが利用され得る。

いくつかの実施形態では、細胞の集団は、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤と接触させられ、同時にまたは続いて刺激または拡大増殖される。代替的または追加的に、細胞の集団は、初期ニューロン、例えば、Ｄｅｘ、または成熟ニューロン、例えば、Ｍａｐ２、星状膠細胞、例えば、ＧＦＡＰおよびＳ１００ｂ、または乏突起膠細胞、例えば、ＣＮＰアーゼおよびＯ４を有する特徴を示す細胞について濃縮または選択される。

いくつかの実施形態では、細胞の元の集団をＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤とエクスビボで接触させることによって達成される、細胞の得られた集団は、次いで、対象に投与される。いくつかの実施形態では、細胞の得られた集団は、筋障害、神経筋機能不全、神経変性障害、心臓障害（例えば、心筋梗塞、心筋症）、もしくは筋消耗を特徴とする遺伝性疾患などの疾患もしくは障害に罹患しているかまたは罹患しやすい対象に投与される。いくつかの実施形態では、細胞の得られた集団は、細胞の元の集団が得られた対象に投与される。いくつかの実施形態では、細胞の得られた集団は、細胞の元の集団が得られた対象とは異なる対象に投与される。いくつかのそのような実施形態では、元の集団は健康な対象から得られ、得られた集団は、筋障害、神経筋機能不全、神経変性障害、心臓障害（例えば、心筋梗塞、心筋症）、もしくは筋消耗を特徴とする遺伝性疾患などの疾患もしくは障害に罹患しているかまたは罹患しやすい対象に投与される。

いくつかの実施形態では、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤と接触させた細胞の集団を投与することにより、対象の筋障害、神経筋機能不全、神経変性障害、心臓障害（例えば、心筋梗塞、心筋症）、または筋消耗を特徴とする遺伝性疾患などの疾患または障害が効果的に治療される。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の刺激または拡大増殖されたＮＳＣ、ＳＣ、ＭＰＣまたは筋芽細胞の集団は、細胞治療薬に製剤化され得る。いくつかの実施形態では、細胞治療薬は、薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤を含む。本明細書に記載の薬学的に許容される担体、例えば、ビヒクル、アジュバント、賦形剤および希釈剤は、周知であり、当業者にとって容易に入手可能である。好ましくは、薬学的に許容される担体は、活性剤、例えば、細胞治療薬に対して化学的に不活性であり、使用条件下で有害な副作用または毒性を誘発しない。

いくつかの実施形態では、細胞治療薬は、任意の好適な経路、例えば、静脈内投与経路、腫瘍内投与経路、動脈内投与経路、筋肉内投与経路、腹腔内投与経路、髄腔内投与経路、硬膜外投与経路または皮下投与経路などによる投与のために製剤化され得る。好ましくは、細胞治療薬は、非経口投与経路のために製剤化される。いくつかの実施形態では、細胞治療薬は、注入によって対象に投与される。

いくつかの実施形態では、非経口投与に適した細胞治療薬は、例えば、組成物を意図するレシピエントの血液と等張にする、抗酸化剤、緩衝液、静菌薬および溶質を含有することができる水性または非水性の等張性滅菌注射液であり得る。水性または非水性の滅菌懸濁液は、１つ以上の懸濁化剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤および保存剤を含有することができる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単一の治療用細胞は、拡大増殖し、治療上の利益を提供することができる。いくつかの実施形態では、１０^２個以上、例えば、１０^３個以上、１０^４個以上、１０^５個以上または１０^８個以上の治療用細胞が細胞治療薬として投与される。代替的または追加的に、本明細書に記載される、１０^１２個以下、例えば、１０^１１個以下、１０^９個以下、１０^７個以下または１０^５個以下の治療用細胞が細胞治療薬として対象に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される、１０^２～１０^５個、１０^４～１０^７個、１０^３～１０^９個、または１０^５～１０^１０個の治療用細胞が細胞治療薬として投与される。

本明細書に記載される細胞治療薬の用量は、必要に応じて、１回で、または好適な期間にわたって投与される一連の分割用量（ｓｕｂｄｏｓｅ）で、例えば、連日、週２回、週１回、隔週、月２回、隔月、年２回もしくは年１回のベースで対象に投与され得る。有効量の細胞治療薬を含む投与量単位は、１日１回用量で投与されてもよいか、または総１日投与量は、必要に応じて、１日に投与される２、３、４もしくはそれ以上の分割用量で投与されてもよい。いくつかの実施形態では、細胞治療薬は、別の療法と組み合わせて投与される。

併用療法
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＭｕＳＫＩｇ２調節物質療法は、別の療法と組み合わせて、すなわち、対象が両療法に同時に曝露されるように投与される。

本明細書に記載されるＭｕＳＫＩｇ２調節物質療法の投与量、および組み合わせて投与される別の療法の投与量、ならびに投与スケジュールは、限定するものではないが、治療される疾患（例えば、筋障害、神経筋機能不全、神経変性障害、心臓障害、または筋消耗を特徴とする遺伝性疾患）、対象の全般的な健康状態、および投与する医師の裁量を含む様々なパラメータに依存し得る。

ＭｕＳＫＩｇ２調節物質療法は、それを必要とする対象に、他の療法の投与の前に（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間または１２週間前）、それと同時に、またはそれに続いて（例えば、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、８週間または１２週間後）投与され得る。様々な実施形態では、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質療法と他の療法とは、１分間隔、１０分間隔、３０分間隔、１時間未満間隔、１時間間隔、１時間～２時間間隔、２時間～３時間間隔、３時間～４時間間隔、４時間～５時間間隔、５時間～６時間間隔、６時間～７時間間隔、７時間～８時間間隔、８時間～９時間間隔、９時間～１０時間間隔、１０時間～１１時間間隔、１１時間～１２時間間隔、２４時間以下または４８時間以下間隔で投与される。一実施形態では、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質療法と他の療法とは、３時間以内に投与される。別の実施形態では、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質療法と他の療法とは、１分～２４時間間隔で投与される。

ＭｕＳＫＩｇ２調節物質療法と他の療法との相乗的な組合せは、これらの作用物質の一方もしくは両方のさらに低い投与量の使用、または筋障害、神経筋機能不全、神経変性障害、心臓障害、もしくは筋消耗を特徴とする遺伝性疾患に罹患している対象への療法のさらに低い頻度の投与を可能にし得る。相乗効果は、これらの作用物質の効果の改善、またはいずれかの作用物質単独の使用に関連する有害副作用もしくは望ましくない副作用の減少をもたらし得る。

いくつかの実施形態では、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質療法は、関連する疾患、障害または病態（例えば、筋障害、神経筋機能不全、神経変性障害、心臓障害、または筋消耗を特徴とする遺伝性疾患）に対する標準治療処置と組み合わせて投与される。

ＤＭＤの療法には、デフラザコート（Ｅｍｆｌａｚａ；ＰＴＣＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）エテプリルセン（Ｅｘｏｎｄｙｓ５１；ＳａｒｅｐｔａＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、アタルレン（Ｔｒａｎｓｌａｒｎａ；ＰＴＣＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、およびプレドニゾンなどの糖質コルチコイドが含まれる。いくつかの実施形態では、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質療法は、ＤＭＤのための１つ以上の療法と組み合わせて投与される。

ＡＬＳの承認された療法には、Ｒａｄｉｃａｖａ、Ｒｉｌｕｔｅｋ、ＴｉｇｌｕｔｉｋおよびＮｕｅｄｅｘｔａが含まれる。いくつかの実施形態では、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質療法は、ＡＬＳのための１つ以上の療法と組み合わせて投与される。

心筋症の承認された療法には、限定するものではないが、アンジオテンシンＩＩ変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）およびスピロノラクトンが含まれる。いくつかの実施形態では、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質療法は、心筋症のための１つ以上の療法と組み合わせて投与される。

いくつかの実施形態では、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質療法は、関連する疾患、障害もしくは病態の症状もしくは特徴を緩和する１つ以上の療法、またはそのための療法と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、ＭｕＳＫＩｇ２調節物質療法は、症状または特徴を緩和する１つ以上の他の療法と組み合わせて投与され、その結果、上記他の療法に関連する副作用が緩和される。いくつかの実施形態では、療法に関連する副作用は、筋痙攣および筋攣縮、便秘、疲労、過剰な唾液および痰、疼痛、うつ、睡眠問題、ならびに笑うまたは叫ぶという制御されない激発のうちの１つ以上を特徴とする。

筋障害、神経筋機能不全、神経変性障害、心臓障害、もしくは筋消耗を特徴とする遺伝性疾患の治療もしくは予防に有用であることが知られている、または使用されている、使用される、もしくは現在使用されている任意の療法は、本明細書に記載の本発明によるＭｕＳＫＩｇ２調節物質療法と組み合わせて使用され得る。

プラスミドおよびタンパク質産生。

全長ＭｕＳＫと１つ以上のＭｕＳＫドメイン（例えば、Ｉｇ１、Ｉｇ２またはＩｇ３）の欠失を含む構築物とを含む、本開示のＭｕＳＫ構築物を調製するために、上記構築物の包装、および宿主細胞内の上記構築物の発現のためにプラスミドを使用することができる。

例示的な実施形態では、Ｈｉｓタグ付き全長外部ドメインＭｕＳＫ組換えタンパク質を生成するために、６×ＨｉｓタグｐＣＥＰ－Ｐｕ哺乳動物発現ベクタープラスミドにクローニングされた全長外部ドメインＭｕＳＫが、以前の研究で使用されている。Ｙｉｌｍａｚｅｔａｌ．（２０１６）。ΔＩｇ１、ΔＩｇ２、ΔＩｇ１／２、Δ５ａ／５ｂ、Ｉｇ１／２ＭｕＳＫ外部ドメイン欠失構築物が、ＮｈｅＩ５’およびＮｏｔＩ３’制限酵素認識部位を用いて合成され、ｐＵＣ５７細菌発現ベクター（Ｇｅｎｅｗｉｚ）にクローニングされた。ＭｕＳＫ外部ドメイン欠失構築物が、ｐＣＥＰ－Ｐｕ哺乳動物発現ベクターにクローニングされ、配列確認のためにＳａｎｇｅｒ配列決定された。全長外部ドメインＭｕＳＫｐＣＥＰ－Ｐｕプラスミドから、ＰＣＲクローニングによって、単離されたＩｇ１ドメイン、およびＩｇ２の単離されたドメインが生成された。

Ｉｇ１のＰＣＲプライマー：フォワードＧＡＴＣＴＴＣＴＴＴＣＴＣＣＴＴＴＧＣＣＴＧＧＣ（配列番号１）；リバースＴＡＡＧＣＡＧＣＧＧＣＣＧＣＣＡＴＣＴＴＣＡＣＴＴＧＣＡＧＧＧＣＡＣＣ（配列番号２）、およびＩｇ２のＰＣＲプライマー：フォワードＣＣＴＣＡＧＣＴＡＧＣＡＣＣＴＡＡＡＡＴＡＡＣＴＣＧＴＣＣＴＣＣＣ（配列番号３）；リバースＡＡＴＴＡＧＣＧＧＣＣＧＣＣＴＴＣＡＣＣＡＧＴＴＴＧＧＡＧＴＡＡＧＣ（配列番号４）。

単離されたＩｇ１ＰＣＲおよびＩｇ２ＰＣＲが、ｐＣＥＰ－Ｐｕ発現ベクターにクローニングされ、確認のためにＳａｎｇｅｒ配列決定された。ＭｕＳＫ外部ドメインヒスタグ付きタンパク質の産生では、ヒト胎児由来腎臓２９３（ＨＥＫ２９３）ＰＥＡＫｒａｐｉｄ細胞（ＡＴＣＣＣＲＬ－２８２８）が、ＰｒｏｍｅｇａＦｕｇｅｎｅＨＤ（登録商標）を使用してＭｕＳＫ外部ドメインプラスミドによってトランスフェクトされ、ピューロマイシン処理によって選択された。外部ドメインＭｕＳＫ－ｈｉｓ組換えタンパク質が培地に分泌され、馴化培地が２週間にわたって２～３日ごとに収集された。馴化培地から、ニッケルアフィニティークロマトグラフィーを使用して、ＭｕＳＫ－ｈｉｓ組換えタンパク質が精製された。精製されたタンパク質の純度が、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって評価され、計算された０．１％の吸光係数によりＥＬＩＳＡおよびＮａｎｏＤｒｏｐを使用して定量された。

ＭｕＳＫＰＣＲおよび配列決定。

インビボで発現されるＭｕＳＫエクソンを増幅するために、野生型ヒラメマウス筋由来のＲＮＡが単離され、逆転写された。

エクソン５～８の領域を増幅するプライマーが設計された：
フォワード：ＡＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＴＧＧＡＡＧＴＧＧ（配列番号７）
リバース：ＧＣＣＴＴＧＧＣＴＧＴＣＴＴＴＣＴＧＴＧ（配列番号８）
ＤｒｅａｍＴａｑＧｒｅｅｎＰＣＲマスターミックス（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を使用してＰＣＲが行われ、ＤＮＡのゲル抽出のためのＰＣＲバンドを十分に分離し、分離されたＤＮＡバンドの交差汚染を防止するために、産物がアガロースゲル電気泳動に供された。各バンドのＤＮＡ配列を同定するために、抽出されたＤＮＡがＳａｎｇｅｒ配列決定された。

ＲＮＡ配列決定およびバイオインフォマティクス。

ＲＮＡ非鎖ライブラリー調製および配列決定のためのＲＮｅａｓｙＦｉｂｒｏｕｓＴｉｓｓｕｅミニキット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、野生型およびΔＩｇ３－ＭｕＳＫマウスヒラメ筋由来のＲＮＡが抽出された（Ｇｅｎｅｗｉｚ）。試料当たり約５０００万リードの深さで試料が配列決定された。リードは、Ｔｒｉｍｍｏｍａｔｉｃを使用してアダプター配列の品質について評価され、トリミングされ、次いで、ＧＳＮＡＰを用いて参照ゲノムとアライメントされる。リードカウント行列は、ｈｔｓｅｑ－ｃｏｕｎｔを使用して生成される。Ａｎｄｒｅｗｓ，ＦａｓｔＱＣ（２０１８）；Ｂｏｌｇｅｒ，Ｌｏｈｓｅ，＆Ｕｓａｄｅｌ（２０１４）；Ｗｕ＆Ｎａｃｕ（２０１０）；Ａｎｄｅｒｓ，Ｐｙｌ，＆Ｈｕｂｅｒ（２０１５）を参照されたい。リードカウント行列は、探索的データ分析、示差的遺伝子発現および経路ＧＯ分析のための統合されたＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄＰａｔｈｗａｙ（ｉＤＥＰ）分析ツールにアップロードされる。Ｇｅ，Ｓｏｎ，＆Ｙａｏ（２０１８）。リードカウント行列は、ＬｅａｆＣｕｔｔｅｒを実行して既知および未知の選択的スプライシング事象を同定および測定するために使用される。Ｌｉｅｔａｌ．（２０１８）を参照されたい。

配列表
ＭｕＳＫＩｇ１のＰＣＲプライマー：フォワード
ＧＡＴＣＴＴＣＴＴＴＣＴＣＣＴＴＴＧＣＣＴＧＧＣ（配列番号１）
ＭｕＳＫＩｇ１のＰＣＲプライマー：リバース
ＴＡＡＧＣＡＧＣＧＧＣＣＧＣＣＡＴＣＴＴＣＡＣＴＴＧＣＡＧＧＧＣＡＣＣ（配列番号２）
ＭｕＳＫＩｇ２のＰＣＲプライマー：フォワード
ＣＣＴＣＡＧＣＴＡＧＣＡＣＣＴＡＡＡＡＴＡＡＣＴＣＧＴＣＣＴＣＣＣ（配列番号３）
ＭｕＳＫＩｇ２のＰＣＲプライマー：リバース
ＡＡＴＴＡＧＣＧＧＣＣＧＣＣＴＴＣＡＣＣＡＧＴＴＴＧＧＡＧＴＡＡＧＣ（配列番号４）
ＭｕＳＫヒトＩｇ３ドメイン：
ＡＲＩＬＲＡＰＥＳＨＮＶＴＦＧＳＦＶＴＬＨＣＴＡＴＧＩＰＶＰＴＩＴＷＩＥＮＧＮＡＶＳＳＧＳＩＱＥＳＶＫＤＲＶＩＤＳＲＬＱＬＦＩＴＫＰＧＬＹＴＣＩＡＴＮＫＨＧＥＫＦＳＴＡＫＡＡＡＴＩＳ（配列番号５）
ＭｕＳＫマウスＩｇ３ドメイン
ＡＲＩＬＲＡＰＥＳＨＮＶＴＦＧＳＦＶＴＬＲＣＴＡＩＧＩＰＶＰＴＩＳＷＩＥＮＧＮＡＶＳＳＧＳＩＱＥＳＶＫＤＲＶＩＤＳＲＬＱＬＦＩＴＫＰＧＬＹＴＣＩＡＴＮＫＨＧＥＫＦＳＴＡＫＡＡＡＴＶＳ（配列番号６）
ＭｕＳＫｃＤＮＡを増幅するために使用されるプライマー：フォワード。

ＡＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＴＧＧＡＡＧＴＧＧ（配列番号７）
ＭｕＳＫｃＤＮＡを増幅するために使用されるプライマー：リバース。

ＧＣＣＴＴＧＧＣＴＧＴＣＴＴＴＣＴＧＴＧ（配列番号８）
以下の実施例は、本発明を例示するために提供され、本発明の範囲を限定するものではない。

実施例１
この実施例は、ＢＭＰおよびその受容体との様々なＭｕＳＫドメインの結合特性を試験および特性評価するために生成された、全長（ＦＬ）、Ｉｇ１欠失を有するＭｕＳＫ（ΔＩｇ１）、Ｉｇ２欠失を有するＭｕＳＫ（ΔＩｇ２）、ならびにＩｇ１およびＩｇ２の両方の欠失を有するＭｕＳＫ（ΔＩｇ１Ｉｇ２）を含む構築物を提供する。

材料および方法
抗体および材料。ＡＬＫ２、ＡＬＫ３、ＡＬＫ４、ＡＬＫ５およびＡＬＫ６をＲ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ，ＵＳＡ）から入手した。ヤギ抗ヒトＩｇＧＦｃ二次抗体、ＨＲＰ（カタログ番号Ａ１８８１７）をＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ）から入手した。Ｈｉｓタグ付きＭｕＳＫ外部ドメインを含有する発現ベクターは、Ｄｒ．ＭａｒｋｕｓＲｕｅｇｇから寄贈された。基質３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）（カタログ番号Ｔ０４４０－１００ＭＬ）をＳｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）から入手した。

タンパク質構築物の産生。第１の工程は、ＭｕＳＫタンパク質の欠失構築物を生成することであった。ＭｕＳＫがＢＭＰ受容体に結合するドメインをマッピングするために、本発明者らは、特定のドメインを欠く、ＭｕＳＫの欠失構築物を生成した。本発明者らは、これらの欠失構築物を使用して、ＢＭＰ受容体に結合するＭｕＳＫのドメインを決定した。

ＭｕＳＫの全長をＧＥＮＥＷＩＺ（ＳｏｕｔｈＰｌａｉｎｆｉｅｌｄ，ＮＪ，ＵＳＡ）に送付したところ、該企業は、その配列を含有するプラスミドを製造し、それを本発明者らに返送した。ＧＥＮＥＷＩＺは、ｐＵＣ５７プラスミド内のＭｕＳＫ配列を本発明者らに提供する。ｐＵＣ５７プラスミドは、クローニングベクターに一般的に使用されるプラスミドである。

ＳｕｂｃｌｏｎｉｎｇＥｆｆｉｃｉｅｎｃｙ（商標）ＤＨ５α ＣｏｍｐｅｔｅｎｔＣｅｌｌｓを使用して、ＧＥＮＥＷＩＺから取得したＤＮＡを形質転換した。次いで、細菌を寒天プレート上に広げた。翌日、コロニーを採取し、ブロスを入れたチューブに加えた。このプロセスを通して、アンピシリンを選択の形態として使用している。寒天プレートから採取したコロニーをＬＢ培地中に一晩静置した。

翌日、ＱＩＡＧＥＮ（Ｖｅｎｌｏ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）製のＱＩＡｐｒｅｐＳｐｉｎＭｉｎｉｐｒｅｐＫｉｔを使用してｍｉｎｉｐｒｅｐを行った。＞８０００ｒｐｍ（６８００×ｇ）で３分間、室温（１５～２５℃）で遠心分離することによって、１～５ｍｌの細菌一晩培養物をペレット化する。ペレット化した細菌細胞を２５０μＬの緩衝液Ｐ１に再懸濁し、微量遠心管に移す。２５０μＬの緩衝液Ｐ２を加え、溶液が透明になるまでチューブを４～６回反転させることによって完全に混合する。溶解反応を５分を超えて進行させない。ＬｙｓｅＢｌｕｅ試薬を使用する場合、溶液は青色になる。３５０μＬの緩衝液Ｎ３を加え、チューブを４～６回反転させることによって直ちに完全に混合する。ＬｙｓｅＢｌｕｅ試薬を使用する場合、溶液は無色になる。卓上微量遠心機で１３，０００ｒｐｍ（約１７，９００×ｇ）で１０分間遠心分離する。デカントまたはピペッティングによって、工程５から得られた上清をＱＩＡｐｒｅｐスピンカラムに適用する。３０～６０秒間遠心分離し、フロースルーを廃棄するか、またはマニホールドに真空を適用して溶液をＱＩＡｐｒｅｐスピンカラムを通して引き出し、真空源をオフにする。推奨：０．５ｍｌの緩衝液ＰＢを加えることによってＱＩＡｐｒｅｐスピンカラムを洗浄する。３０～６０秒間遠心分離し、フロースルーを廃棄するか、またはマニホールドに真空を適用して溶液をＱＩＡｐｒｅｐスピンカラムを通して引き出し、真空源をオフにする。（この工程は、ｅｎｄＡ＋株、または高いヌクレアーゼ活性もしくは炭水化物含有量を有する他の細菌株を使用する場合にのみ必要とされる。）０．７５ｍｌの緩衝液ＰＥを加えることによってＱＩＡｐｒｅｐスピンカラムを洗浄する。３０～６０秒間遠心分離し、フロースルーを廃棄するか、またはマニホールドに真空を適用して溶液をＱＩＡｐｒｅｐスピンカラムを通して引き出し、真空源をオフにする。ＱＩＡｐｒｅｐスピンカラムを収集チューブに移す。１分間遠心分離して、残留洗浄緩衝液を除去する。ＱＩＡｐｒｅｐカラムを清浄な１．５ｍｌ微量遠心管に入れる。ＤＮＡを溶出するために、５０μＬの緩衝液ＥＢ（１０ｍＭＴｒｉｓ・Ｃｌ、ｐＨ８．５）または水をＱＩＡｐｒｅｐスピンカラムの中心に加え、１分間放置し、１分間遠心分離する。詳細については、ＱＩＡｐｒｅｐＭｉｎｉｐｒｅｐＨａｎｄｂｏｏｋ、（２００６年１２月）を参照されたい。

次いで、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ製のＮａｎｏＤｒｏｐ２０００／２０００ｃを使用して、このｍｉｎｉｐｒｅｐから得られたこのＤＮＡの濃度を測定した。

これまでに得られたＤＮＡは、ｐＵＣ５７ベクター内にＭｕＳＫ挿入物を有する。次の工程は、ＭｕＳＫ挿入物をｐＣＥＰ４哺乳動物発現ベクターに移動させることであった。アンピシリンは原核生物選択形態である。真核生物選択のためにピューロマイシンを使用する。ＯｒｉＰは、細胞がプラスミドを取り込むことを可能にする。ＥＢＮＡ－１は、ウイルスＤＮＡ複製の活性化を可能にする。ＢＭ４０は、細胞がタンパク質を培地に分泌することを可能にする分泌ペプチドである。

ｐＣＥＰ４発現ベクターへのＭｕＳＫ挿入物のサブクローニングを完了するために、制限酵素により、ＭｕＳＫ挿入物をｐＵＣ５７ベクターから切断した。制限酵素を加えた後、ＤＮＡをアガロースゲル上で泳動させて、ベクターの残りからＭｕＳＫ挿入物を分離した。ゲルからＭｕＳＫ、挿入物を抽出するために、本発明者らは、ＱＩＡｑｕｉｃｋ抽出キットを使用した。ゲルからＭｕＳＫ、挿入物を抽出するために、本発明者らは、ＱＩＡｑｕｉｃｋ（登録商標）ＧｅｌＥｘｔｒａｃｔｉｏｎＫｉｔ（カタログ番号２８７０４、２８７０６、２８５０６および２８１１５）を使用した。清浄な鋭利なメスを用いて、アガロースゲルからＤＮＡ断片を切り出す。ゲル切片を無色チューブ内で秤量する。３つの体積の緩衝液ＱＧを１つの体積のゲル（１００ｍｇゲル約１００μＬ）に加える。スピンカラム１本当たりのゲルの最大量は４００ｍｇである。＞２％アガロースゲルの場合、６体積の緩衝液ＱＧを加える。５０℃で１０分間（またはゲル切片が完全に溶解するまで）インキュベートする。ゲルの溶解を助けるために、チューブを２～３分ごとにボルテックスする。ゲル切片が完全に溶解した後、混合物の色が黄色である（溶解アガロースを含まない緩衝液ＱＧと同様に）ことを確認する。混合物の色がオレンジ色または紫色である場合、１０μＬの３Ｍ酢酸ナトリウム、ｐＨ５．０を加え、混合する。混合物は黄色に変わる。１ゲル体積のイソプロパノールを試料に加え、混合する。ＱＩＡｑｕｉｃｋスピンカラムを用意された２ｍｌ収集チューブ、または真空マニホールドに入れる。ＤＮＡを結合させるために、試料をＱＩＡｑｕｉｃｋカラムに適用し、１分間遠心分離するか、または全試料がカラムを通過するまでマニホールドに真空を適用する。フロースルーを廃棄し、ＱＩＡｑｕｉｃｋカラムを同じチューブに戻す。＞８００μＬの試料体積では、ローディングし、回転させ／再び真空を適用する。続いて、ＤＮＡを配列決定、インビトロ転写またはマイクロインジェクションに使用する場合、５００μＬの緩衝液ＱＧをＱＩＡｑｕｉｃｋカラムに加え、１分間遠心分離するか、または真空を適用する。フロースルーを廃棄し、ＱＩＡｑｕｉｃｋカラムを同じチューブに戻す。洗浄するために、７５０μＬの緩衝液ＰＥをＱＩＡｑｕｉｃｋカラムに加え、１分間遠心分離するか、または真空を適用する。フロースルーを廃棄し、ＱＩＡｑｕｉｃｋカラムを同じチューブに戻す。注記：ＤＮＡを塩の影響を受けやすい用途（例えば、配列決定、平滑末端ライゲーション）に使用する場合、緩衝液ＰＥを加えた２～５分後にカラムを放置する。用意された２ｍｌ収集チューブ内のＱＩＡｑｕｉｃｋカラムを１分間遠心分離して、残留洗浄緩衝液を除去する。ＱＩＡｑｕｉｃｋカラムを清浄な１．５ｍｌ微量遠心管に入れる。ＤＮＡを溶出するために、５０μＬの緩衝液ＥＢ（１０ｍＭＴｒｉｓ・Ｃｌ、ｐＨ８．５）または水をＱＩＡｑｕｉｃｋメンブレンの中心に加え、カラムを１分間遠心分離する。ＤＮＡ濃度を増加させるために、３０μＬの緩衝液ＥＢをＱＩＡｑｕｉｃｋメンブレンの中心に加え、カラムを１分間放置し、次いで、１分間遠心分離する。緩衝液ＥＢをＱＩＡｑｕｉｃｋメンブレンに加えた後、インキュベーション時間を最大４分まで増加させると、精製ＤＮＡの収率を増加させることができる。精製ＤＮＡをゲル上で分析する場合、５体積の精製ＤＮＡに１体積のＬｏａｄｉｎｇＤｙｅを加える。ゲルをローディングする前に、上下にピペッティングすることによって溶液を混合する。

ＤＮＡをゲルから抽出した後、ライゲーション酵素を使用して、ＭｕＳＫ挿入物をｐＣＥＰ４ベクターにライゲーションする。サブクローニング後、ＤＨ５α ＣｏｍｐｅｔｅｎｔＣｅｌｌｓを使用してベクターを形質転換した。細胞をＬＢ寒天プレート上に画線接種する。次いで、この新たに形成されたベクターに対して同じプロセスを繰り返す。ｍｉｎｉｐｒｅｐも同様に行い、再びＤＮＡ濃度を測定する。生成された全ＭｕＳＫ欠失構築物は、ＧＥＮＥＷＩＺによって組織外で配列決定された。

トランスフェクションおよび培地回収。ＨＥＫ２９３細胞をＴ７５フラスコに７０％コンフルエンシーで播種した。２４時間後、ＦｕＧＥＮＥ（登録商標）ＨＤを使用してＤＮＡを増殖培地にトランスフェクトした。ＦｕＧＥＮＥ（登録商標）ＨＤは、Ｐｒｏｍｅｇａ（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ，ＵＳＡ）から入手した。トランスフェクションの２４時間後、増殖培地を高用量抗生物質選択培地に交換した。これらの培地交換の４８時間後、上清を回収し、細胞を低用量抗生物質選択培地に入れた。

培地を回収するために、滅菌コニカルチューブ内で培地を遠心して細胞をペレット化した。次いで、上清を新しい滅菌チューブに移した。上清を液体窒素を用いて凍結し、次いで、タンパク質を精製する時間になるまで－８０℃で保存した。

タンパク質精製。精製に使用した試薬は、ＮａｌｇｅｎｅＲａｐｉｄ－ＦｌｏｗｆｉｌｔｅｒＵｎｉｔ０．４５ｕｍＳＦＣＡ滅菌フィルター（Ｆｉｓｈｅｒ、カタログ番号１５６－００４５）、ＡｍｉｃｏｎＵｌｔｒａ－１５ＣｅｎｔｒｉｆｕｇａｌＦｉｌｔｅｒＤｅｖｉｃｅｓ（Ｆｉｓｈｅｒ、カタログ番号ＵＦＣ９０１０２４）、ＡｍｉｃｏｎＰｒｏＡｆｆｉｎｉｔｙＣｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎＫｉｔ－Ｎｉ－ＮＴＡ（Ｆｉｓｈｅｒ、カタログ番号ＡＣＫ５０１０ＮＴ）およびＧｉｂｃｏＤｉｓｔｉｌｌｅｄＷａｔｅｒ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号１５２３０１６２）であった。

回収した培地をロッカー上、４℃で一晩解凍した。次に、ＮａｌｇｅｎｅＲａｐｉｄ－ＦｌｏｗｆｉｌｔｅｒＵｎｉｔ０．４５ｕｍＳＦＣＡ滅菌フィルターを使用して増殖培地を濾過した。次いで、ＡｍｉｃｏｎＵｌｔｒａ－１５ＣｅｎｔｒｉｆｕｇａｌＦｉｌｔｅｒＤｅｖｉｃｅｓを使用して、増殖培地を濃縮した。次いで、濃縮された回収した培地を滅菌チューブに移し、それらを精製する時間になるまで氷上で保存した。

ニッケルカラムアフィニティー精製を使用して、ＭｕＳＫタンパク質を精製した。使用前に、透析を行って緩衝液を交換し、精製されたタンパク質からイミダゾールを除去した。最終保存緩衝液は、リン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ７．４である。

Ｈｉｓタグ付き組換えタンパク質のＡｍｉｃｏｎ（登録商標）ＰｒｏＡｆｆｉｎｉｔｙＣｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎＫｉｔ－Ｎｉ－ＮＴＡ（カタログ番号ＡＣＲ５０００ＮＴ、ＡＣＫ５００３ＮＴ、ＡＣＫ５０１０ＮＴ、ＡＣＫ５０３０ＮＴ、ＡＣＫ５０５０ＮＴ、ＡＣＫ５１００ＮＴ）金属キレート化アフィニティー精製のためのプロトコルは、ＥＭＤＭｉｌｌｉｐｏｒｅによって提供されたものであった。

ビーズ調製。均一な懸濁を確実にするために、Ｎｉ－ＮＴＡ樹脂を装置に加える前に十分にボルテックスする。収集チューブキャップを取り外し、交換装置キャップを開く。２００μＬの樹脂スラリーを交換装置の基部に加える。交換キャップを閉じる。装置ごとに５００μＬまでの充填樹脂（１０００μＬのスラリー体積）を加えてもよい。樹脂転写のために大孔径チップ（カタログ番号０２－７０７－１３４、ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用することが推奨される。保存緩衝液を除去するために、揺動バケットローター内で１０００ｇ×１分間で遠心分離する。５００μＬの１Ｘ結合緩衝液を加える。１０００ｇ×１分で遠心分離する。

タンパク質結合。５００μＬの試料を交換装置に加える。最大９ｍＬの試料を加えることができる。ローディングされる体積は、標的タンパク質の発現レベルと、樹脂の結合容量とによって決定される。穏やかに撹拌しながら室温で６０分間インキュベートする。低い設定のプレートシェーカーを用いた上方撹拌が推奨される。特に少ない体積による、または長時間にわたるエンドオーバーエンド混合は、フィーダーチューブの側面にかなりのビーズ損失を引き起こす可能性がある。揺動バケットローター内、１０００ｇ×１分で装置を遠心分離する。５０ｍＬ収集チューブからの試料フロースルーの回収は任意である。最大のタンパク質捕捉を確実にするために、遠心分離の前に全樹脂を溶液に収集する。１．５ｍＬの洗浄緩衝液を加える。１０００ｇ×１分で遠心分離する。５０ｍＬ収集チューブからの洗浄画分の回収は任意である。交換装置の容量が大きいため、試料純度を高めるために洗浄の体積を増加させることができる。複数の洗浄工程は必要とされない。

試料溶出。溶出緩衝液を加え、清浄な５０ｍｌ収集チューブに直接遠心分離（１０００ｇ×２分間）することによって、試料を濃縮せずに溶出することができる。ＡＵ－０．５装置の限られた体積処理能力を考慮すると、＞１．５ｍｌの溶出体積が必要な場合、このプロトコルが推奨される。

固相結合アッセイ。ＭｕＳＫとＡＬＫとの間の結合をアッセイするために、本発明者らは、ＥＬＩＳＡ様固相結合アッセイを使用した。固相結合アッセイに使用したプレートは、Ｓｉｇｍａ製の９６ウェルプレート（カタログ番号Ｍ９４１０－１ＣＳ）からのものであった。プロセスの第１の工程は、ＭｕＳＫ構築物を９６ウェルプレートに固定することであった。５０ｕｌのＭｕＳＫを１６ｕｇ／ｍｌの濃度で９６ウェルプレートに三連で加えた。プレートを覆い、４℃で一晩インキュベートした。翌日、（所望のｐＨの）ＰＢＳを使用してプレートを洗浄した。次いで、ウェルをＢｌｏｃｋ（１％ＢＳＡ）中に１時間静置した。ブロッキング後、ＰＢＳＴ（０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０およびＰＢＳ溶液）を使用して全洗浄工程を行った。

Ｂｌｏｃｋを加えた後、ＡＬＫの系列希釈液を加えた。全アッセイについて、加えたＡＬＫ濃度は、３．１２５、６．２５、１２．５、２５、５０および１００ｎＭであった。ＡＬＫ、ヤギ抗ヒトＩｇＧＦｃ二次抗体の存在を検出するために、ＨＲＰを１：２５０の濃度として使用した。次いで、ＴＭＢを加えてＨＲＰの存在を検出した。反応時間を記録し、反応が十分に高いシグナルを生成した際に、硫酸を使用して反応をクエンチした。

これらのウェルから生成されたシグナルを定量するために、プレートリーダーを使用して４５０ｎｍでシグナルを測定した。次いで、吸光度をバックグラウンド減算し、Ｐｒｉｓｍ８ソフトウェアを使用して曲線上にプロットした。各データ点は、３回の反復の平均を表した。

ＳＤＳ－ＰＡＧＥおよびＰＮＧａｓｅＦ。ＳＤＳ－ＰＡＧＥは、電気泳動によってタンパク質を分離する方法である。Ｋａｕｌｉｃｈｅｔａｌ．（２０２０）。ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウムは、ポリアクリルアミドゲルを使用して試料を分離する前にタンパク質を変性させるために使用される。Ｋａｕｌｉｃｈｅｔａｌ．（２０２０）。ＳＤＳは、電気泳動を使用してゲルを泳動させる際に重要な負電荷を試料に提供する。ＳＤＳ－ＰＡＧＥにより、試料の純度が確認される。試料をＰＮＧａｓｅＦを用いて処理して、試料のグリコシル化を評価した。ＰＮＧａｓｅＦは、Ｎ結合型オリゴ糖を遊離する酵素である。

生成したＭｕＳＫ構築物の純度を評価するために、構築物をＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル上で泳動させた。１ｕｇのタンパク質をゲルの各ウェルに加えた。ＢｉｏＲａｄ（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）製のＭｉｎｉ－ＰＲＯＴＥＡＮ（登録商標）ＴＧＸ（商標）ＰｒｅｃａｓｔＧｅｌをこれらのゲルアッセイに使用した。ゲルを染色するために、ＡｃｑｕａＳｔａｉｎＰｒｏｔｅｉｎＧｅｌＳｔａｉｎ（Ｂｕｌｌｄｏｇ－Ｂｉｏ，Ｐｏｒｔｓｍｏｕｔｈ，ＮＨ，ＵＳＡ）を使用して、ゲルを一晩染色した。

タンパク質構築物が適切にグリコシル化されたことを示すために、ＰＮＧａｓｅＦをタンパク質とインキュベートし、その後、ＰＮＧａｓｅＦを用いて処理しなかった構築物とともにゲル上で並べて泳動させた。ＰＮＧａｓｅＦを用いて試料を処理するために使用したプロトコルは、ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄＢｉｏｌａｂｓＩｐｓｗｉｃｈ，ＭＡ，ＵＳＡ）によって提供されたものである。典型的な反応条件は以下の通りである：
変性反応条件：１～２０μｇの糖タンパク質と、１μＬの糖タンパク質変性緩衝液（１０Ｘ）と、ＨＯ（必要な場合）とを合わせて、１０μＬの総反応体積を作製する。糖タンパク質を１００℃で１０分間にわたる加熱反応によって変性させる。変性糖タンパク質を氷上で冷却し、１０秒間遠心分離する。２μＬのＧｌｙｃｏＢｕｆｆｅｒ２（１０Ｘ）と、２μＬの１０％ＮＰ－４０と、６μＬのＨＯとを加えることによって総反応体積を２０μＬにする。ＰＮＧａｓｅＦはＳＤＳによって阻害されるため、ＮＰ－４０を変性条件下で反応混合物に加える。ＮＰ－４０を変性プロトコルに含めることができないと、酵素活性が喪失する。１μＬのＰＮＧａｓｅＦを加え、穏やかに混合する。反応物を３７℃で１時間インキュベートする。任意の方法によって分析する。注記：脱グリコシル化の程度を評価する最も簡単な方法は、ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル上の移動度シフトによるものである。

非変性反応条件：天然糖タンパク質を脱グリコシル化する場合、糖タンパク質のアリコートを変性プロトコルに供して、完全に脱グリコシル化されたタンパク質の陽性対照を提供することが推奨される。次いで、非変性反応を変性反応と比較して、反応完了の程度を決定することができる。１～２０μｇの糖タンパク質、２μＬのＧｌｙｃｏＢｕｆｆｅｒ２（１０×）と、ＨＯ（必要な場合）とを合わせて、２０μＬの総反応体積を作製する。２～５μＬのＰＮＧａｓｅＦを加え、穏やかに混合する。反応物を３７℃で４～２４時間インキュベートする。

天然糖タンパク質を脱グリコシル化するためには、さらに長いインキュベーション時間とさらに多くの酵素とが必要とされ得る。任意の方法によって分析する。脱グリコシル化の程度を評価する最も簡単な方法は、ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル上の移動度シフトによるものである。

結果
ＭｕＳＫ構築物のＳＤＳ－ＰＡＧＥ。

図４から、各構築物について構築物が生成されたことが確認される。全長構築物は、いくつかのグリコシル化部位を有するため、スメアを示した。全長構築物は７５ｋＤａマーカー付近の質量を有したが、ＰＮＧａｓｅＦを用いて処理した全長は、未処理のものよりもわずかに低い分子量を有した。処理したレーン内の３０ｋＤａマーカーに沿ったバンドは、処理に使用したＰＮＧａｓｅＦ酵素を示す。図４のΔＩｇ１構築物は、いくつかのグリコシル化部位を有するため、スメアを示した。ΔＩｇ１構築物はＦＬよりもほぼ軽い質量を有したが、ＰＮＧａｓｅＦを用いて処理したΔＩｇ１は、未処理のものよりもわずかに低い分子量を有した。処理したレーン内の３０ｋＤａマーカーに沿ったバンドは、処理に使用したＰＮＧａｓｅＦ酵素を示す。

図４のΔＩｇ２構築物は、いくつかのグリコシル化部位を有するため、スメアを示した。ΔＩｇ２構築物は、ΔＩｇ１の質量と同様であるが、ＦＬの質量よりも軽い質量を有した。ＰＮＧａｓｅＦを用いて処理したΔＩｇ２は、未処理のものよりもわずかに低い分子量を有した。処理したレーン内の３０ｋＤａマーカーに沿ったバンドは、処理に使用したＰＮＧａｓｅＦ酵素を示す。図４のΔＩｇ１－Ｉｇ２構築物は、いくつかのグリコシル化部位を有するため、スメアを示した。ΔＩｇ１構築物はＦＬよりもほぼ軽い質量を有したが、ＰＮＧａｓｅＦを用いて処理したΔＩｇ１は、未処理のものよりもわずかに低い分子量を有した。処理したレーン内の３０ｋＤａマーカーに沿ったバンドは、処理に使用したＰＮＧａｓｅＦ酵素を示す。

図５では、Ｉｇ１、Ｉｇ２、Ｉｇ１－Ｉｇ２およびΔＣＲＤ／Ｆｚの結果を示し、予測された構築物が生成されたことが確認される。Ｉｇ１バンドは、約１５ｋＤａを形成した。ＰＮＧａｓｅＦを用いて処理したＩｇ１バンドは、未処理のものと同じマーカーに現れ、これにより、Ｉｇ１ドメインがグリコシル化部位を有しないことが示された。処理したレーン内の３０ｋＤａマーカーに沿ったバンドは、処理に使用したＰＮＧａｓｅＦ酵素を示す。図５では、Ｉｇ２バンドは、１５ｋＤａをわずかに超える質量を有する。ＰＮＧａｓｅＦを用いて処理したＩｇ２バンドは、未処理のものと同じマーカーに現れ、これにより、Ｉｇ２ドメインがグリコシル化部位を有しないことが示された。処理したレーン内の３０ｋＤａマーカーに沿ったバンドは、処理に使用したＰＮＧａｓｅＦ酵素を示す。

図５では、Ｉｇ１－Ｉｇ２バンドは、約３０ｋＤａの分子量を有するように思われる。Ｉｇ１－Ｉｇ２バンドはスメアを示さず、質量はＰＮＧａｓｅＦを用いた処理後に影響を受けない。結果は、Ｉｇ１ドメインおよびＩｇ２ドメインが、グリコシル化されず、グリコシル化部位を有しないことを示した。処理したレーン内の３０ｋＤａマーカーに沿った単独のバンドは、処理に使用したＰＮＧａｓｅＦ酵素を示す。図５では、７０ｋＤａマーク付近にΔＣＲＤ／Ｆｚの不鮮明なバンドが現れている。図５では、ΔＣＲＤ／Ｆｚがグリコシル化であるため、バンドがスメアとして現れている。これは、ＰＮＧａｓｅＦを用いて処理した試料の質量が未処理のものよりも小さいという事実によってさらに確認される。処理したレーン内の３０ｋＤａマーカーに沿った単独のバンドは、処理に使用したＰＮＧａｓｅＦ酵素を示す。

図６は、ＣＲＤ／Ｆｚ構築物、Δ５ａ５ａ’構築物およびＬ８３Ｒ構築物の結果を示す。図６のＣＲＤ／Ｆｚバンドは不鮮明であり、これはいくらかのグリコシル化を示す。ＰＮＧａｓｅＦ酵素は、処理した試料中のＣＲＤ／Ｆｚバンドと重複する。５ａ５ａ’は、選択的にスプライシングされたエクソンである。バンドのサイズは、この試料と全長試料との間に大きな差がないことを示している。処理した試料のサイズが小さいほど、試料がグリコシル化部位を有することを示す。図６の不鮮明なバンドを参照されたい。図６はまた、Ｌ８３Ｒ構築物を示す。ＭｕＳＫＬ８３Ｒは、８３位のロイシンがＭｕＳＫ二量体化に必要であることが示されたため、重要である。Ｓｔｉｅｇｌｅｒ，Ｂｕｒｄｅｎ，＆Ｈｕｂｂａｒｄ（２００６）。目的は、ロイシンをアルギニンに変異させることによって、ＭｕＳＫが二量体化するのを防ぐことであった。図６は、ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル上で泳動されたＭｕＳＫＬ８３Ｒを示す。ＭｕＳＫはグリコシル化されているため、バンドは不鮮明である。処理したレーン内の３０ｋＤａマーカーに沿った唯一のバンドは、処理に使用したＰＮＧａｓｅＦ酵素を示す。

実施例２
Ｉｇ２ドメインは、ＭｕＳＫ－ＢＭＰ受容体結合のために必要かつ十分である
本発明者らは、ＥＬＩＳＡ様固相結合アッセイとＭｕＳＫ欠失構築物とを使用して、ＢＭＰ受容体（ＡＬＫ）に結合する、ＭｕＳＫのドメインをマッピングした。Ｙｉｌｍａｚｅｔａｌ．（２０１６）は、ＭｕＳＫがＡＬＫ６に結合することを以前に示したが、どのＭｕＳＫドメインがＡＬＫ６に結合するかを決定しなかった。

図７は、ＭｕＳＫを固定し、ＡＬＫ６とインキュベートした固相結合アッセイからのデータを示す。ＡＬＫ濃度をｘ軸に示し、吸光度をｙ軸に示す。吸光度が高いほど、結合は良好である。図７は、Ｉｇ２ドメインが欠損している場合、ＭｕＳＫの全長外部ドメイン（ＦＬＥＣＤ）と比較して、ＭｕＳＫはほとんどまたは全く結合を示さないことを示す。１００ｎＭのＡＬＫ６濃度では、ＦＬＥＣＤは吸光度１を有し、ΔＩｇ２ＭｕＳＫ構築物は吸光度０．１５を有した。Ｉｇ２ドメインの存在下では、ＭｕＳＫは６．６倍増加した。この増加は顕著である。図７は、Ｉｇ２ドメインがＡＬＫ６へのＭｕＳＫ結合に必要であることを示す。ΔＩｇ２曲線に関する結合に対して高い親和性がないことを示すことから、曲線の形状に留意することが重要である。

次の工程は、結合に必要なＩｇ２ドメインを用いて、ＭｕＳＫ外部ドメインのＩｇ１－Ｉｇ２Ｉｇ１Ｉｇ２領域への結合を単離することであった。図８は、Ｉｇ１－Ｉｇ２構築物およびΔＩｇ１－Ｉｇ２構築物からの結合アッセイデータを示す。図８は、Ｉｇ１－Ｉｇ２構築物がＡＬＫ６に対する高親和性結合を有することを示す。Ｉｇ１－Ｉｇ２曲線は、１００ｎＭの濃度で吸光度３に達する。一方、ΔＩｇ１－Ｉｇ２構築物では、ＭｕＳＫはほとんどまたは全く結合を示さない。これは、Ｉｇ１－Ｉｇ２曲線と比較するとさらに明らかである。Ｉｇ１－Ｉｇ２曲線の最大半値は６．２５ｎＭ濃度にあり、これは、Ｉｇ１－Ｉｇ２構築物が高親和性結合を有することを示す。図１３Ｉｇ１ドメインおよびＩｇ２ドメインの両方が、ＭｕＳＫをＡＬＫ６に結合させるために必要であること。

Ｉｇ２ドメインがＡＬＫ６に結合するのに十分であることを示すために、本発明者らは、図９では、単離されたＩｇ２ドメインおよびＩｇ１ドメインを使用した。図９は、Ｉｇ２曲線が１．８の吸光度曲線と、６．２５ｎＭの最大半値濃度とを有することを示す。このアッセイでは全長ＭｕＳＫは飽和せず、約０．５ｎＭの最大半値を有したのみであった。単離されたＩｇ１ドメイン曲線は、結合をほとんどまたは全く示さなかった。これらの結果は、Ｉｇ２ドメインが高親和性特性を有する結合曲線を示したことから、Ｉｇ２ドメインが結合に十分であることを示している。図８および図９は、Ｉｇ２ドメインが、ＡＬＫ６へのＭｕＳＫの結合に必要かつ十分であることを示す。結合アッセイに関する最大半値および飽和レベルを提供する表１もまた参照されたい。全長データは、Ｙｉｌｍａｚｅｔａｌ．（２０１６）から得た。１００ｎＭで測定した飽和パーセンテージ。

実施例３
Ｉｇ１ドメインはＭｕＳＫ結合に必要ではない。

Ｉｇ１ドメインは、ＭｕＳＫがアグリン－ＬＲＰ４に結合するドメインとして重要である。Ｓｔｉｅｇｌｅｒ，Ｂｕｒｄｅｎ，＆Ｈｕｂｂａｒｄ（２００６）。また、結晶構造は、ＭｕＳＫがＩｇ１ドメインを介して二量体化することを示す。したがって、ＢＭＰへのＭｕＳＫ結合相互作用にＩｇ１ドメインが果たし得る役割を実証することが重要であった。ＭｕＳＫ ΔＩｇ１構築物を固相結合アッセイに固定した。図１０は、ＭｕＳＫがＡＬＫ６に強力にかつ高い親和性で結合することを示す。ΔＩｇ１曲線は、１２．５ｎＭの濃度での最大半値を示す。同じ図１０のΔＩｇ２曲線と比較すると、この結果は、Ｉｇ１ドメインがＡＬＫ６へのＭｕＳＫ結合に不要であることを示す。図１０は、ＡＬＫ６へのＭｕＳＫ結合がＩｇ２ドメイン位置で起こることを示す。固相結合アッセイは、異なる構築物間の定量的結合差を提供しないが、ＭｕＳＫ ΔＩｇ１構築物は、アッセイされたいずれの構築物と比較しても最も高い吸光度を有した。いくつかのアッセイにわたって、１００ｎＭＡＬＫ６の吸光度は常に３を超えていた。ΔＩｇ１は、常に高親和性曲線を生成し、図１０に見られる。

実施例４
ＭｕＳＫ－ＡＬＫ結合はｐＨ依存性である
ＢＭＰ共受容体は、ｐＨ依存的にＢＭＰおよびＢＭＰ受容体に結合することが示された。Ｙａｄｉｎ，Ｋｎａｕｓ，＆Ｍｕｌｌｅｒ（２０１６）。ＭｕＳＫはＢＭＰ共受容体である。本発明者らは、ＭｕＳＫがＢＭＰ受容体に結合することを本明細書に示した。本発明者らは、ＭｕＳＫがｐＨ依存的にＢＭＰ受容体に結合するかどうかをさらに調査した。

構造に関する概説論文は、ＢＭＰ受容体およびＢＭＰが、それらの結合パートナーにｐＨ依存的に結合することができることを示している。Ｙａｄｉｎ，Ｋｎａｕｓ，＆Ｍｕｌｌｅｒ（２０１６）を参照されたい。反発性ガイダンス分子（ＲＧＭ）は、弱酸性のｐＨでＢＭＰに良好に結合するタンパク質である。Ｈｅａｌｅｙｅｔａｌ．（２０１５）を参照されたい。ＲＧＭは、ｐＨ７．４と比較してｐＨ５．５でＢＭＰ２に良好に結合する。Ｈｅａｌｅｙｅｔａｌ．（２０１５）。

ＢＭＰ受容体へのＭｕＳＫ結合に対するｐＨの影響をアッセイするために、Ｉｇ１－Ｉｇ２のみの構築物を使用した。図１１に示すように、Ｉｇ１ドメインおよびＩｇ２ドメインのみが存在する、Ｉｇ１－Ｉｇ２のみの構築物ＭｕＳＫ外部ドメイン。図１１は、精製のためにＨｉｓタグ付けされたこのＩｇ１－Ｉｇ２ドメインの概略図を示す。固相結合アッセイを使用して、本発明者らは、ｐＨがＡＬＫ６へのＭｕＳＫ結合に影響を及ぼすかどうかをアッセイした（図１２）。図１２は、ＭｕＳＫが弱酸性条件下でＡＬＫ６に顕著に結合することを示す。ｐＨ６では、最大半値は６．２５ｎＭであったが、ｐＨ７．４では、最大半値は２５ｎＭであった。吸光度の差は顕著であり、ｐＨ６．０の試料は吸光度３に達したが、ｐＨ７．４の試料は吸光度０．７５に辛うじて達した。この差は、ＭｕＳＫが弱酸性条件でＡＬＫ６に結合することを選好することを示している。図１２はまた、ｐＨ６．０で、ＭｕＳＫが高親和性曲線を示しており、曲線の最初の部分が急速に上昇し、次いで、曲線の残りが吸光度３付近でプラトーになっていることを示す。この高親和性曲線は、ｐＨ６でのＭｕＳＫとＡＬＫ６との間の相互作用が、この条件ではｐＨ７．０と比較して非常に好ましいことを示している。

図１３は、Ｉｇ１ドメインを欠失させた場合、ＭｕＳＫはｐＨ依存性を示さないことを示す。図１３は、ΔＩｇ１ＭｕＳＫが、ｐＨが６．０であっても７．４であっても、ＡＬＫ６に対して高い親和性で結合することを示す。これは、Ｉｇ１ドメインが、ＭｕＳＫがｐＨ６およびｐＨ７でＡＬＫ６に別様に結合する理由であることを示唆している。図１３では、両曲線が、ほぼ４の最大吸光度に達している。両曲線の最大半値は約６．５ｎＭである。図は、吸光度の曲線の最初の部分が急速に上昇する高親和性曲線を示している。

実施例５
ＭｕＳＫ外部ドメインの完全な構造は未だ存在しないが、ＭｕＳＫＩｇ１－Ｉｇ２単独の結晶構造が利用可能である。Ｓｔｉｅｇｌｅｒ，Ｂｕｒｄｅｎ，＆Ｈｕｂｂａｒｄ（２００６）を参照されたい。この構造は、Ｉｇ１ドメインとＩｇ２ドメインとが互いに相互作用することを示す。Ｓｔｉｅｇｌｅｒ，Ｂｕｒｄｅｎ，＆Ｈｕｂｂａｒｄ（２００６）。Ｉｇ１ドメインとＩｇ２ドメインとの間には３つの接触点がありＳｔｉｅｇｌｅｒ，Ｂｕｒｄｅｎ，＆Ｈｕｂｂａｒｄ（２００６）、そのうちの２つはファンデルワールス接触であり、そのうちの１つはアスパラギンとバリンとの間の水素結合である。Ｓｔｉｅｇｌｅｒ，Ｂｕｒｄｅｎ，＆Ｈｕｂｂａｒｄ（２００６）。これらのＩｇ２欠失構築物は、タンパク質の中央のドメインを除去する。図７におけるＡＬＫ６へのＭｕＳＫ結合の欠如は、Ｉｇ２ドメインの必要性、またはタンパク質全体がミスフォールドしたことに起因し得ることが理解される。

Ｉｇ２ドメインがＭｕＳＫとＡＬＫ６との間の相互作用にどのように重要であるかを決定するために、本発明者らは、単離されたＩｇ２ドメインを設計し、発現させた。図９は、単離されたＩｇ２ドメインがＢＭＰ受容体に結合していることを示す。図７および図９からのこの結果は、Ｉｇ２ドメインが、ＢＭＰ受容体へのＭｕＳＫ結合に必要かつ十分であることを示す。Ｉｇ１ドメインは、ＭｕＳＫのカノニカルな結合パートナーであるアグリン－ＬＲＰ４への結合に何らかの役割を果たす。Ｈｅｒｂｓｔ＆Ｂｕｒｄｅｎ（２０００）を参照されたい。Ｉｇ３ドメインはＢＭＰに結合する。Ｙｉｌｍａｚｅｔａｌ．（２０１６）を参照されたい。したがって、Ｉｇ２ドメインは、ＢＭＰ受容体に結合する。

ＢＭＰおよびＢＭＰ受容体は、ｐＨ依存的に結合する結合パートナーを有することが知られている。Ｈｅａｌｅｙｅｔａｌ．（２０１５）を参照されたい。ＭｕＳＫおよびＢＭＰ受容体がｐＨ依存的に結合することを示すために、本発明者らは、弱酸性のｐＨで結合アッセイを使用した。以前のアッセイはｐＨ７．４で行われていたが、ｐＨ依存性をアッセイするために、本発明者らは、ｐＨ６．０で結合親和性をアッセイした。図１２は、Ｉｇ１－Ｉｇ２構築物が、ｐＨ６．０では、ｐＨ７．４と比較してさらに低いｐＨではるかに良好に、さらに高い親和性で結合することを示す。ΔＩｇ１構築物をアッセイした場合、２つの異なるｐＨで結合親和性または吸光度に差はなかった。図１３を参照されたい。これらの結果は、ＭｕＳＫがｐＨ依存的にＢＭＰ受容体に結合することを示す。これらの結果はまた、Ｉｇ１の欠失がこの相互作用に対するｐＨ感受性を排除したことから、Ｉｇ１ドメインがこのｐＨ依存性に必要であることを示す。

タンパク質相互作用にｐＨ依存性がある場合、このｐＨ依存性を引き起こしている原因残基は通常ヒスチジンである。Ｃｕｉｅｔａｌ．（２０２０）を参照されたい。したがって、ＭｕＳＫがＢＭＰ受容体に結合するｐＨ依存性結合の発見時に、ＭｕＳＫ配列に存在するヒスチジン残基が存在するかどうかを確認することが重要であった。ＭｕＳＫＩｇ２ドメイン内にヒスチジン残基が見出された。さらに、本発明者らは、結晶構造から、ヒスチジンが露出しており、外側を向いていることを見ることができる。このヒスチジン残基は、２つの異なるｐＨの下でＭｕＳＫがどのように別様に応答するかを制御する点で何らかの役割を果たしている可能性がある。

この実施例では、アラニンへのヒスチジン残基を変異させ、変異した構築物の結合をアッセイして、これらの構築物におけるｐＨ感受性の欠如、または一緒に結合することの欠如を決定する。

ＡＬＫ６へのＭｕＳＫの結合は、弱酸性のｐＨで有利である。ＭｕＳＫは、Ｉｇ１ドメインが欠失している場合にＡＬＫ６に最もよく結合する（図１０）。ＭｕＳＫがＩｇ１ドメインを欠くＡＬＫ６に強力にかつ高い親和性で結合する理由を、いくつかの理由によって説明することができる。ＭｕＳＫがＩｇ２ドメインを介してＡＬＫ６に結合することを考慮すると、Ｉｇ１ドメインの欠失は、ＢＭＰ受容体が結合する際に受ける立体障害を排除している可能性がある。Ｉｇ１ドメインは、Ｉｇ２ドメインにある結合界面をわずかに遮断している可能性があり、したがって、ΔＩｇ１構築物は、他の構築物よりも顕著に良好に結合する。Ｉｇ１ドメインは、Ｉｇ１－Ｉｇ２ドメインの結晶構造に示されるように、ＭｕＳＫ二量体化に必要である。Ｓｔｉｅｇｌｅｒ，Ｂｕｒｄｅｎ，＆Ｈｕｂｂａｒｄ（２００６）を参照されたい。図１９を参照されたい。

実施例６
ＢＭＰシグナル伝達に関連してＭｕＳＫがＢＭＰ受容体にどのように結合するかに関するワーキングモデル。

細胞の表面では、ｐＨは７．４であり、ＢＭＰはＢＭＰ受容体に結合し、ＭｕＳＫはＩｇ１ドメインを使用して二量体化する。Ｓｔｉｅｇｌｅｒ，Ｂｕｒｄｅｎ，＆Ｈｕｂｂａｒｄ（２００６）；Ｙａｄｉｎ，Ｋｎａｕｓ，＆Ｍｕｌｌｅｒ（２０１６）；およびＬａｒｄｎｅｒ（２００１）を参照されたい。図１４の第１のパネルは、二量体としてのＭｕＳＫと、ＢＭＰにカノニカルに結合するＢＭＰ受容体とを示す。次いで、図１４の次のパネルに示される、細胞内の事象が、クラスリン媒介エンドサイトーシスを誘発する。細胞がクラスリン媒介エンドサイトーシスを開始するためには、ＰＩＰ２およびアダプタータンパク質の蓄積が必要である。Ｋａｋｓｏｎｅｎ＆Ｒｏｕｘ（２０１８）。クラスリン媒介エンドサイトーシスは、エンドソームの形成をもたらす。エンドソームは、細胞の細胞外環境と比較して弱酸性のｐＨを有することが知られている。Ｇｅｉｓｏｗ＆Ｅｖａｎｓ（１９８４）ＢＭＰ受容体１型は、これらの条件でのＭｕＳＫの結合を促進する。図１４では、ｐＨが低くなれば、ＢＭＰがＢＭＰ受容体からも解離し、ＢＭＰ受容体に結合するはずであるが、実験データは未だこれを示していない。ＢＭＰ受容体は、エンドソームに存在することが知られている。Ｈａｒｔｕｎｇｅｔａｌ．（２００６）。ＭｕＳＫ－ＢＭＰ経路およびＭｕＳＫ－ＢＭＰ受容体経路は、ＳＭＡＤタンパク質のリン酸化をもたらす可能性がある。したがって、エンドソームおよびＭｕＳＫ－ＢＭＰ経路は、細胞の増強されたＳＭＡＤ経路を作り出す。

本開示は、Ｉｇ２ドメインがＡＬＫ６に結合することを示す。ＭｕＳＫがＢＭＰ受容体に結合する、Ｉｇ２ドメインの残基を特定するために、ＮＭＲが計画されている。ｐＨ依存性は、Ｉｇ２ドメイン内のヒスチジンが相互作用に重要であることを示す。Ｉｇ２ドメインは約１５ｋＤａである。本発明者らは、大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）内で該タンパク質を発現させ、ＮＭＲを使用して、Ｉｇ２ドメインがＡＬＫ６に結合する際に撹乱される残基が何であるかをさらに詳細に同定することを計画している。ＭｕＳＫＥＣＤがＩｇ１ドメインが欠失している際に最もよく結合することを考慮し、さらに、Ｉｇ１がＩｇ２ドメインとの３つの接触点を有することを考慮すると、撹乱された残基はそれらの接触点である可能性がある。Ｓｔｉｅｇｌｅｒ，Ｂｕｒｄｅｎ，＆Ｈｕｂｂａｒｄ（２００６）を参照されたい。

ＭｕＳＫは、主にエンドソーム内でＢＭＰ受容体に結合する可能性が高い。本発明者らは、細胞内のクラスリン媒介エンドサイトーシスを破壊し、ＳＭＡＤ経路が結果として変化しているかどうかを観察することを計画している。本発明者らは、制吐薬／抗精神病薬プロクロルペラジンを使用しているが、これは、制吐薬／抗精神病薬プロクロルペラジンが膜タンパク質のインビボエンドサイトーシスを阻害することが示されたためである。Ｃｈｅｗｅｔａｌ．（２０２０）を参照されたい。エンドサイトーシスの阻害はＳＭＡＤ経路と細胞のリン酸化とに影響を及ぼすため、ＭｕＳＫおよびＢＭＰ受容体はエンドサイトーシスを介してシグナル伝達する。

ＭｕＳＫの二量体化または単量体化がＢＭＰ受容体への結合に果たす役割。図１０に示すように、ＭｕＳＫは、Ｉｇ１ドメインが欠失した際に、最良のＢＭＰ受容体に結合する。ＭｕＳＫがＩｇ１ドメインを介して二量体化することも結晶構造から明らかである。ＭｕＳＫは、ＢＭＰ受容体への結合を調節するために二量体化および単量体化する可能性が高い。本発明者らは、サイズ排除クロマトグラフィーを使用して、Ｉｇ１試料がモノマーであるかどうか、および他の試料が二量体であるかどうかを評価することを計画している。ＭｕＳＫがｐＨ６．０で二量体であるかどうかをアッセイするために、サイズ排除クロマトグラフィーを使用することができる。ＭｕＳＫは、ｐＨ７．４で二量体化することができ、ｐＨ６．０でモノマーであるため、ＭｕＳＫはそのｐＨで良好に結合する。

実施例７
ＲＮＡ分析
本発明者らは、この実施例のために、５ヶ月齢のＰａｘ７^{ＣｒｅＥＲＴ２}；ＴｄＴｏｍａｔｏ^{Ｆｌ／Ｆｌ}マウスを使用した。Ｐａｗｌｉｋｏｗｓｋｉｅｔａｌ．（２０１５）を参照されたい。５０μＬの１．２％ＢａＣｌ_２の注射を使用して、マウスの腹横（ＴＡ）筋を損傷させた。損傷の４日後、横腹筋を採取し、次いで、９０分間にわたって４０００Ｕ／ｍＬコラゲナーゼＩＩを使用して消化し、細かく刻み、続いて、一連の細胞濾過を行った。次いで、ＴｄＴｏｍａｔｏ発現、ならびにインテグリンα－７に対する抗体を陽性細胞選択マーカーとして、およびＣＤ４５、ＣＤ３１およびＬｙ－６ａＡ／Ｅに対する抗体を陰性細胞選択マーカーとして使用して、ＦＡＣＳ選別によってサテライト細胞（ＳＣ）を細胞懸濁液から単離した。ＱｉａｇｅｎＲＮｅａｓｙミニキットを使用して、サテライト細胞からＲＮＡを単離した。ＡｚｕｒａＱｕａｎｔｃＤＮＡ合成キットを使用して、ｃＤＮＡを生成した。以下のＰＣＲプライマーを使用して、ＭｕＳＫｃＤＮＡを増幅した：フォワード：ＡＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＴＧＧＡＡＧＴＧＧ（配列番号７）およびリバース：ＧＣＣＴＴＧＧＣＴＧＴＣＴＴＴＣＴＧＴＧ（配列番号８）。ＴＢＥ中３％アガロース、０．００４％ＥｔＢｒゲル上でＰＣＲ産物を泳動させた。

結果を図１５に示す。選択的にスプライシングされたエクソン５ａおよび５ｂを含有する、ＭｕＳＫのアミノ酸配列を図１６に提供する。図１７は、マウスヒラメ筋由来のエクソン５ａおよび５ｂの選択的スプライシングパターンを示す。

実施例８
ＭｕＳＫＩｇ２調節物質オリゴヌクレオチド
エクソンスキッピングＡＳＯの設計および合成。いかなる理論にも拘束されることを望むものではないが、本明細書に記載されるＭｕＳＫＭＲアゴナイジングオリゴヌクレオチドは、限定するものではないが、以下の一般的な指針に従って設計される（Ａａｒｔｓｍａ－Ｒｕｓｅｔａｌ．，ＨｕｍａｎａＰｒｅｓｓ，２０１２，１１７－１２９を参照）：
・エンドヌクレアーゼまたはエキソヌクレアーゼに対する耐性のために改変されたＲＮＡまたはＤＮＡ（例えば、２’ＭｏＥ、２’ＯＭｅ、ＰＭＯ、ホスホロチオエート）；
・標的配列に対する設計；
・典型的には、１５～２５ヌクレオチド、さらに最適には１７～２０ヌクレオチド；
・典型的には、４８℃を超える溶融温度で最も効果的；
・典型的には、立体障害／二量体化、標的にアクセスする利用可能性を防ぐために、４０％～６０％のＧＣ含有量で最も効果的；
・典型的には、最も効果的な標的化オープン／アクセス可能なプレｍＲＮＡ構造；
・典型的には、最も効果的な標的化スプライス調節部位またはエクソン定義部位（例えば、イントロンスプライスエンハンサー、イントロンスプライスサイレンサー（例えば、ＳＭＮ２エクソン７のＩＳＳに対して標的化されたＳｐｉｎｒａｚａ、エクソンスプライスエンハンサー、エクソンスプライスサイレンサー）；
・典型的には、２個以下のグアニン（Ｇ）ヌクレオチドまたはシトシン（Ｃ）ヌクレオチドを直接連続して含有する配列組成（例えば、ＣＣＣまたはＧＧＧ）で最も効果的。

ＡＳＯ化学。本発明者らは、糖骨格にホスホロチオエート結合も含む２’－Ｏ－２－メトキシエチル（２’ＭＯＥ）ＡＳＯを開発する。そのようなＡＳＯの設計および試験のための方法は、齧歯類および非ヒト霊長類を対象とした製造、薬物動態、生体内分布および毒性学を含めて、十分に確立されている（ＢｅｎｎｅｔｔａｎｄＳｗａｙｚｅ，２０１０；Ｃｈｉｒｉｂｏｇａｅｔａｌ．，２０１６；Ｈｕａｅｔａｌ．，２０１５；Ｍｅｒｃｕｒｉｅｔａｌ．，２０１８；Ｒｉｇｏｅｔａｌ．，２０１４）。リボースの２’位に付加されたＭＯＥ基は、１残基当たり約２℃だけＴｍを増加させるため、結合親和性を高めるほか、ヌクレアーゼ耐性も改善する。ホスホロチオエート修飾は、さらなるヌクレアーゼ耐性を付与するほか、血漿タンパク質に対する親和性も増加させ、組織に効率的に分布し、製剤を必要とする細胞に取り込まれるＡＳＯをもたらす。この化学はオフパテントであり、商業的利点を提供する。

ＡＳＯ設計。ＡＳＯは、商業施設によって合成され、ＢｏｌｄｅｎＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．によってスクリーニングのためにブラウン大学のＦａｌｌｏｎａｎｄＷｅｂｂラボに提供される。ＡＳＯを設計するための戦略は、重複するＡＳＯ（１～２ｂｐシフト／オリゴ）を有する５’および３’スプライス部位の両方に隣接するエクソン配列およびイントロン配列を走査することを含む。ＡＳＯの最適な長さは約１７量体であり、これにより、標的特異性と薬物曝露との間の良好なバランスがもたらされる。ＡＳＯは、潜在的なオフターゲット効果、ならびに組成バイアス（ＧＣ含有量）、および望ましくない二量体形成の傾向についてインシリコで事前にスクリーニングされる。

ＡＳＯは、ＭｕＳＫの両エクソン５ａおよび５ｂのスキップを誘導するように設計される。

最適なエクソンスキッピングＡＳＯのスクリーニングおよび選択。

本発明者らは、以下の異なるＭｕＳＫスプライス形態を特異的に定量するために、ＲＴ－ｑＰＣＲＴａｑＭａｎアッセイを設計する：１）全長（ＦＬ）ＭｕＳＫ；２）ΔＩｇ２－ＭｕＳＫをコードする所望の生成物であるΔエクソン^{５ａ－５ｂ}；ならびに３）潜在的な「不完全な」スキッピングのアイソフォームΔエクソン^５ａおよびΔエクソン^５ｂ。本発明者らは、従来のＲＴ－ＰＣＲを並行して行って、予期しない生成物を検出する。約０．１～１０ｎＭの範囲にわたるいくつかの濃度の候補ＡＳＯを細胞にトランスフェクトする。処理の１日後、ＲＮＡを抽出し、スプライシングをＲＴ－ｑＰＣＲによって測定して、エクソンスキッピング効率を評価する。本発明者らの目標は、エクソン５ａおよび５ｂの≧８０％の座標スプライシング（ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｓｐｌｉｃｉｎｇ）を誘導する少なくとも１つのＡＳＯを単離することである。

培養細胞内でＭｕＳＫ－ＢＭＰ受容体シグナル伝達を阻害する能力について、選択されたＡＳＯを試験する。

本発明者らは、ＭｕＳＫのΔＩｇ２ドメインがＭｕＳＫ－ＢＭＰ受容体結合に必要であることを観察した。ただし、インビボでのスキップは１００％未満の効率である可能性があるため（Ｒｉｇｏｅｔａｌ．，２０１４）、達成されたスキップのレベルと生理学的影響との間の関係を確立することが重要である。したがって、この目的では、本発明者らは、ＡＳＯ処理細胞内のＭｕＳＫ－ＢＭＰ受容体（ＡＬＫ）依存性シグナル伝達のレベルを測定する。

本発明者らは、ＭｕＳＫ－ＢＭＰ受容体依存性転写物のレベルを測定するために、ｑＲＴ－ＰＣＲを使用する。対照ＡＳＯのいずれかのエクソンスキッピングによって処理した細胞をＡＬＫにより２時間刺激する。次いで、転写物のレベルを測定し、ＢＭＰに対する応答をエクソンスキッピングの程度と相関させる。

データ。本開示は、いくつかの実施形態では、エクソン５ａおよび５ｂをスキップする効率が、単一のＡＳＯでは不十分であり得ることを認識する。いくつかの実施形態では、単独で、またはエクソン５ａ特異的ＡＳＯとともに使用するために、エクソン５ｂに対する１つ以上のＡＳＯを調製することが望ましい場合がある。

当業者であれば、本開示を読むと、いくつかの実施形態では、試験を再現すること（例えば、少なくとも３回）、または適切な統計的方法を用いてデータを分析すること（例えば、多重比較（例えば、ボンフェローニ）のための適切な補正を伴うｔ検定によって）が望ましい場合があることを理解するであろう。

本明細書に記載の研究は、神経筋の疾患および障害のためのＡＳＯ媒介療法の効率的な開発のための技術を提供し、筋再生を増強する。

参考文献一覧
生物医学分野の当業者であれば、本発明を作製および使用する際の指針として、これらの特許、特許出願および科学的参考文献を使用することができる。

特許文献。

米国特許第９，５７４，０１５号明細書（Ｂｕｒｄｅｎｅｔａｌ．）。この特許は、ＭｕＳＫポリペプチドの一部を投与することによって、すなわち、筋特異的受容体キナーゼ（ＭｕＳＫ）第１免疫グロブリン様ドメイン１（Ｉｇ１）を投与することによって、神経筋障害に罹患している対象を治療する方法、すなわち、筋特異的受容体キナーゼ重症筋無力症（ＭｕＳＫ－ＭＧ）に罹患している対象の運動機能を改善する方法を開示する。Ｂｕｒｄｅｎは、神経発生を増加させる方法であって、機能的ｌｇ３ドメインを欠くＭｕＳＫポリペプチドのレベルもしくは活性を増加させる工程もしくは特定の工程、またはＢＭＰ－ＭｕＳＫポリペプチド複合体のレベルもしくは活性を低下させる工程もしくは特定の工程であって、ＭｕＳＫが、機能的ｌｇ３ドメインを含む工程もしくは特定の工程を含む方法を開示していない。

国際公開第２０１２／１０９０７５号（ＰｌｅｘｘｉｋｏｎＩｎｃ．）。この特許公報は、キナーゼとキナーゼを選択的に調節する化合物とを使用してＭｕＳＫの活性を調節する工程、およびキナーゼ活性の調節による治療（段落［０００３］）、例えば、アルツハイマー病の神経変性疾患に適している、神経変性または認知障害の特徴を有する疾患適応症のための使用（段落［０００１］）を開示している。化合物には、式Ｉ（開示されている）、およびあらゆる下位一般式、特許請求の範囲に記載の化合物、ならびにタンパク質キナーゼの調節物質である、本明細書に記載の化合物が含まれる。記載される化合物によるキナーゼ活性の調節による治療に適した疾患適応症。この特許公報は、機能的ｌｇ３ドメインを欠くＭｕＳＫポリペプチドのレベルもしくは活性を増加させること、またはＢＭＰ－ＭｕＳＫポリペプチド複合体のレベルもしくは活性を低下させることであって、ＭｕＳＫが、機能的ｌｇ３ドメインを含むことを開示していない。この特許公報は、神経発生を増加させる、もしくは機能的ｌｇ３ドメインを欠くＭｕＳＫポリペプチドのレベルもしくは活性を増加させる、またはＢＭＰ－ＭｕＳＫポリペプチド複合体のレベルもしくは活性を低下させる方法であって、ＭｕＳＫが、機能的ｌｇ３ドメインを含む方法にこれを使用することを開示していない。

国際公開第２０２０／２１４９８７号（ブラウン大学）神経発生、は、神経発生を増加させ、神経変性に関連する疾患、障害または病態を予防または治療するための方法および組成物を開示している。

非特許文献。

Ａａｒｔｓｍａ－Ｒｕｓ，ＯｖｅｒｖｉｅｗｏｎＤＭＤｅｘｏｎｓｋｉｐｐｉｎｇ．ＭｅｔｈｏｄｓＭｏｌ．Ｂｉｏｌ．８６７，９７－１１６（２０１２）．
Ａｌｌｅｎｅｔａｌ．，Ｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｉｓｒｅｄｕｃｅｄｉｎｔｈｅｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓｉｎｓｃｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａ．Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ＆ＮｅｗＺｅａｌａｎｄＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｓｙｃｈｉａｔｒｙ，５０．５，４７３－４８０（２０１６）．
Ａｌｌｅｎ，Ｌｉｇａｎｄ－ｔａｒｇｅｔｅｄｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓｉｎａｎｔｉｃａｎｃｅｒｔｈｅｒａｐｙ．ＮａｔｕｒｅＲｅｖｉｅｗｓＣａｎｃｅｒ，２，７５０－７６５（２００２）．
Ａｌｌｉｓｏｎｅｔａｌ．，ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔＭＲＩ－ｂａｓｅｄｍｏｒｐｈｏｍｅｔｒｉｃｅｓｔｉｍａｔｅｓｆｏｒｄｅｆｉｎｉｎｇｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎａｃｒｏｓｓｔｈｅＡｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓｄｉｓｅａｓｅｃｏｎｔｉｎｕｕｍ．ＮｅｕｒｏｉｍａｇｅＣｌｉｎ．，２３，１０１８９５（２０１９）．
Ａｍｅｎｔａｅｔａｌ．，Ｂｉｇｌｙｃａｎｒｅｃｒｕｉｔｓｕｔｒｏｐｈｉｎｔｏｔｈｅｓａｒｃｏｌｅｍｍａａｎｄｃｏｕｎｔｅｒｓｄｙｓｔｒｏｐｈｉｃｐａｔｈｏｌｏｇｙｉｎｍｄｘｍｉｃｅ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１０８，７６２－７６７（２０１１）．
Ａｍｅｎｔａｅｔａｌ．，ＢｉｇｌｙｃａｎｉｓａｎｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒＭｕＳＫｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｆｏｒｓｙｎａｐｓｅｓｔａｂｉｌｉｔｙ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，３２，２３２４－２３３４（２０１２）．
Ａｎｄｅｒｓ，Ｐｙｌ，＆Ｈｕｂｅｒ，ＨＴＳｅｑ－ａＰｙｔｈｏｎｆｒａｍｅｗｏｒｋｔｏｗｏｒｋｗｉｔｈｈｉｇｈ－ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｄａｔａ．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，３１，１６６－１６９（２０１５）．
Ａｎｄｒｅｗｓ．ＦａｓｔＱＣ：ＡＱｕａｌｉｔｙＣｏｎｔｒｏｌＴｏｏｌｆｏｒＨｉｇｈＴｈｒｏｕｇｈｐｕｔＳｅｑｕｅｎｃｅＤａｔａ（２０１０）．
Ａｔｋｉｎｓｏｎｅｔａｌ．，ＮｏＥｖｉｄｅｎｃｅｆｏｒＲｅｃｅｎｔＳｅｌｅｃｔｉｏｎａｔＦＯＸＰ２ａｍｏｎｇＤｉｖｅｒｓｅＨｕｍａｎＰｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ．Ｃｅｌｌ，１７４，１４２４－１４３５．ｅ１５（２０１８）．
Ａｕｄｅｓｓｅ＆Ｗｅｂｂ，ＥｎｈａｎｃｉｎｇＬｙｓｏｓｏｍａｌＡｃｔｉｖａｔｉｏｎＲｅｓｔｏｒｅｓＮｅｕｒａｌＳｔｅｍＣｅｌｌＦｕｎｃｔｉｏｎＤｕｒｉｎｇＡｇｉｎｇ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，１２，１１７９０６９５１８７９５８７４（２０１８）．
Ｂａｒｒｏｓ－Ｌｏｓｃｅｒｔａｌｅｓｅｔａｌ．，Ｒｅｄｕｃｅｄｓｔｒｉａｔａｌｖｏｌｕｍｅｉｎｃｏｃａｉｎｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｎｅｕｒｏｉｍａｇｅ，５６．３，１０２１－１０２６（２０１１）．
Ｂｅｎｎｅｔｔ＆Ｓｗａｙｚｅ，ＲＮＡｔａｒｇｅｔｉｎｇｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ：ｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆａｎｔｉｓｅｎｓｅｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓａｓａｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｐｌａｔｆｏｒｍ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．，５０，２５９－２９３（２０１０）．
Ｂｅｎｎｅｔｔｅｔａｌ．，ＡｎｔｉｓｅｎｓｅＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅＴｈｅｒａｐｉｅｓｆｏｒＮｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅＤｉｓｅａｓｅｓ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．４２，３８５－４０６（２０１９）．
Ｂｅｒｇｅｅｔａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓａｌｔｓ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，６６（１），１－１９（１９７７）．
Ｂｌｕｒｔｏｎ－Ｊｏｎｅｓｅｔａｌ．，ＮｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｉｍｐｒｏｖｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎｖｉａＢＤＮＦｉｎａｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｍｏｄｅｌｏｆＡｌｚｈｅｉｍｅｒｄｉｓｅａｓｅ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，１０６，１３５９４－１３５９９（２００９）．
Ｂｏｌｄｒｉｎｉｅｔａｌ．，ＨｕｍａｎＨｉｐｐｏｃａｍｐａｌＮｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓＰｅｒｓｉｓｔｓｔｈｒｏｕｇｈｏｕｔＡｇｉｎｇ．ＣｅｌｌＳｔｅｍＣｅｌｌ，２２，５８９－５９９．ｅ５（２０１８）．
Ｂｏｌｇｅｒ，Ｌｏｈｓｅ，＆Ｕｓａｄｅｌ，Ｔｒｉｍｍｏｍａｔｉｃ：ａｆｌｅｘｉｂｌｅｔｒｉｍｍｅｒｆｏｒＩｌｌｕｍｉｎａｓｅｑｕｅｎｃｅｄａｔａ．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，３０，２１１４－２１２０（２０１４）．
Ｂｒａｇｄｏｎｅｔａｌ．，Ｂｏｎｅｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎｓ：ａｃｒｉｔｉｃａｌｒｅｖｉｅｗ．ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌ．，２３，６０９－６２０（２０１１）．
Ｂｕｒｄｅｎｅｔａｌ．，ＴｈｅｒｏｌｅｏｆＭｕＳＫｉｎｓｙｎａｐｓｅｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌａｒｄｉｓｅａｓｅ．ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂ．Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．Ｂｉｏｌ．，５，ａ００９１６７（２０１３）．Ｂｕｒｄｅｎは、神経変性または認知障害のうちの１つ以上の特徴に罹患している対象を治療する方法であって、機能的ｌｇ３ドメインを欠くＭｕＳＫポリペプチドのレベルもしくは活性を増加させる工程もしくは特定の工程、またはＢＭＰ－ＭｕＳＫポリペプチド複合体のレベルもしくは活性を低下させる工程もしくは特定の工程であって、ＭｕＳＫが、機能的ｌｇ３ドメインを含む工程もしくは特定の工程を含む方法を開示していない。

Ｃａｍｉｃｉｏｌｉｅｔａｌ．，Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓｄｉｓｅａｓｅｉｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈＨｉｐｐｏｃａｍｐａｌＡｔｒｏｐｈｙ．Ｍｏｖ．Ｄｉｓｏｒｄ．，１８（７），７８４－７９０（２００３）．
Ｃｈａｎｅｔａｌ．，Ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌｖｏｌｕｍｅｉｎｖｕｌｎｅｒａｂｉｌｉｔｙａｎｄｒｅｓｉｌｉｅｎｃｅｔｏｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｆｆｅｃｔｉｖｅＤｉｓｏｒｄｅｒｓ，１８９，１９９－２０２（２０１６）．
Ｃｈｅｎｅｔａｌ．，Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔｏｆｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌｎｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓｂｙｌｉｔｈｉｕｍ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，７５．４，１７２９－１７３４（２０００）．
Ｃｈｅｎｅｔａｌ．，Ａｌｌｏｐｒｅｇｎａｎｏｌｏｎｅｐｒｏｍｏｔｅｓｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎａｎｄｒｅｄｕｃｅｓ β－ａｍｙｌｏｉｄｂｕｒｄｅｎｉｎａｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌｍｏｄｅｌｏｆＡｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓｄｉｓｅａｓｅ．ＰＬｏＳＯｎｅ，６，ｅ２４２９３（２０１１）．
Ｃｈｅｗｅｔａｌ．，ＥｎｄｏｃｙｔｏｓｉｓＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｉｎＨｕｍａｎｓｔｏＩｍｐｒｏｖｅＲｅｓｐｏｎｓｅｓｔｏＡＤＣＣ－ＭｅｄｉａｔｉｎｇＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｃｅｌｌ，１８０，８９５－９１４．ｅ２７（２０２０）．
Ｃｈｉｒｉｂｏｇａｅｔａｌ．，Ｒｅｓｕｌｔｓｆｒｏｍａｐｈａｓｅ１ｓｔｕｄｙｏｆｎｕｓｉｎｅｒｓｅｎ（ＩＳＩＳ－ＳＭＮ（Ｒｘ））ｉｎｃｈｉｌｄｒｅｎｗｉｔｈｓｐｉｎａｌｍｕｓｃｕｌａｒａｔｒｏｐｈｙ．Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，８６，８９０－８９７（２０１６）．
Ｃｈｏｉｅｔａｌ．，Ｅｆｆｅｃｔｏｆｅｘｅｒｃｉｓｅ－ｉｎｄｕｃｅｄｎｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓｏｎｃｏｇｎｉｔｉｖｅｆｕｎｃｔｉｏｎｄｅｆｉｃｉｔｉｎａｒａｔｍｏｄｅｌｏｆｖａｓｃｕｌａｒｄｅｍｅｎｔｉａ．ＭｏｌｅｃｕｌａｒＭｅｄｉｃｉｎｅＲｅｐｏｒｔｓ，１３Ａ，２９８１－２９９０（２０１６）．
Ｃｈｏｉｅｔａｌ．，ＣｏｍｂｉｎｅｄａｄｕｌｔｎｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓａｎｄＢＤＮＦｍｉｍｉｃｅｘｅｒｃｉｓｅｅｆｆｅｃｔｓｏｎｃｏｇｎｉｔｉｏｎｉｎａｎＡｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓｍｏｕｓｅｍｏｄｅｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，３６１（２０１８）．
Ｃｏｏｋｅｔａｌ．，Ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌｖｏｌｕｍｅｔｒｉｃａｎｄｍｏｒｐｈｏｍｅｔｒｉｃｓｔｕｄｉｅｓｉｎｆｒｏｎｔａｌａｎｄｔｅｍｐｏｒａｌｌｏｂｅｅｐｉｌｅｐｓｙ．Ｂｒａｉｎ，１１５．４，１００１－１０１５（１９９２）．
Ｃｒｅｗｓｅｔａｌ．，ＩｎｃｒｅａｓｅｄＢＭＰ６ｌｅｖｅｌｓｉｎｔｈｅｂｒａｉｎｓｏｆＡｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓｄｉｓｅａｓｅｐａｔｉｅｎｔｓａｎｄＡＰＰｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｍｉｃｅａｒｅａｃｃｏｍｐａｎｉｅｄｂｙｉｍｐａｉｒｅｄｎｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，３０，１２２５２－１２２６２（２０１０）．
Ｃｕｉｅｔａｌ．，ＭａｐｐｉｎｇｔｈｅｓｔｒｕｃｔｕｒａｌａｎｄｄｙｎａｍｉｃｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓｏｆｐＨ－ｓｅｎｓｉｔｉｖｅｈｅｐａｒｉｎｂｉｎｄｉｎｇｔｏｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｍａｃｒｏｐｈａｇｅｃｏｌｏｎｙｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５９，３５４１－３５５３（２０２０）．
Ｂｒａｎｄｈｏｒｓｔｅｔａｌ．，ＡＰｅｒｉｏｄｉｃＤｉｅｔｔｈａｔＭｉｍｉｃｓＦａｓｔｉｎｇＰｒｏｍｏｔｅｓＭｕｌｔｉ－ＳｙｓｔｅｍＲｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，ＥｎｈａｎｃｅｄＣｏｇｎｉｔｉｖｅＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，ａｎｄＨｅａｌｔｈｓｐａｎ．ＣｅｌｌＭｅｔａｂ．，２２，８６－９９（２０１５）．
Ｄａｓ，Ｄｅｂｊａｎｉｅｔａｌ．，Ｌｉｆｅｔｉｍｅｃｉｇａｒｅｔｔｅｓｍｏｋｉｎｇｉｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｓｔｒｉａｔａｌｖｏｌｕｍｅｍｅａｓｕｒｅｓ．Ａｄｄｉｃｔｉｏｎｂｉｏｌｏｇｙ，１７．４，８１７－８２５（２０１２）．
ＤｅＣｈｉａｒａｅｔａｌ．，ＴｈｅｒｅｃｅｐｔｏｒｔｙｒｏｓｉｎｅｋｉｎａｓｅＭｕＳＫｉｓｒｅｑｕｉｒｅｄｆｏｒｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌａｒｊｕｎｃｔｉｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｉｎｖｉｖｏ．Ｃｅｌｌ，８５，５０１－５１２（１９９６）．
Ｄｉｘ＆Ａｇｇｌｅｔｏｎ，Ｅｘｔｅｎｄｉｎｇｔｈｅｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｐｒｅｆｅｒｅｎｃｅｔｅｓｔｏｆｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ：ｅｖｉｄｅｎｃｅｏｆｏｂｊｅｃｔ－ｌｏｃａｔｉｏｎａｎｄｏｂｊｅｃｔ－ｃｏｎｔｅｘｔｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ．Ｂｅｈａｖ．ＢｒａｉｎＲｅｓ．，９９，１９１－２００（１９９９）．
Ｅｋｏｎｏｍｏｕｅｔａｌ．，Ｉｎｃｒｅａｓｅｄｎｅｕｒａｌｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｓｉｎｖａｓｃｕｌａｒｄｅｍｅｎｔｉａ．ＮｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙｏｆＡｇｉｎｇ，３２．１２，２１５２－２１６１（２０１１）．
Ｅｎｗｅｒｅｅｔａｌ．，Ａｇｉｎｇｒｅｓｕｌｔｓｉｎｒｅｄｕｃｅｄｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒｓｉｇｎａｌｉｎｇ，ｄｉｍｉｎｉｓｈｅｄｏｌｆａｃｔｏｒｙｎｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓ，ａｎｄｄｅｆｉｃｉｔｓｉｎｆｉｎｅｏｌｆａｃｔｏｒｙｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｏｎ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，２４，８３５４－８３６５（２００４）．
Ｅｒｉｋｓｓｏｎｅｔａｌ．，Ｎｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎｔｈｅａｄｕｌｔｈｕｍａｎｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ．ＮａｔｕｒｅＭｅｄ．，４，１３１３－１３１７（１９９８）．
Ｅｒｎｓｔｅｔａｌ．，（２０１４）．Ｎｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎｔｈｅｓｔｒｉａｔｕｍｏｆｔｈｅａｄｕｌｔｈｕｍａｎｂｒａｉｎ．Ｃｅｌｌ，１５６，１０７２－１０８３（２０１４）．
Ｅｒｓｃｈｅｅｔａｌ．，Ｍｅｔａ－ａｎａｌｙｓｉｓｏｆｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｂｒａｉｎａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｓｔｉｍｕｌａｎｔｄｒｕｇｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅａｎｄｎｅｕｒｏｉｍａｇｉｎｇｏｆａｄｄｉｃｔｉｏｎｖｕｌｎｅｒａｂｉｌｉｔｙａｎｄｒｅｓｉｌｉｅｎｃｅ．Ｃｕｒｒｅｎｔｏｐｉｎｉｏｎｉｎｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２３．４，６１５－６２４（２０１３）．
Ｆａｒｒａｒｅｔａｌ．，Ｅｍｅｒｇｉｎｇｔｈｅｒａｐｉｅｓａｎｄｃｈａｌｌｅｎｇｅｓｉｎｓｐｉｎａｌｍｕｓｃｕｌａｒａｔｒｏｐｈｙ．Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．，８１，３５５－３６８（２０１７）．
Ｆｉｃｈｔｎｅｒｅｔａｌ．，Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｐａｔｈｏｌｏｇｙｉｎｍｙａｓｔｈｅｎｉａｇｒａｖｉｓｄｉｓｅａｓｅｓｕｂｔｙｐｅｓｉｓｇｏｖｅｒｎｅｄｂｙｄｉｖｅｒｇｅｎｔｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ．Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１，７７６（２０２０）．
Ｆｉｓｈ＆Ｆａｌｌｏｎ，ＭｕｌｔｉｐｌｅＭｕＳＫｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｓａｎｄｔｈｅａｇｉｎｇｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌａｒｊｕｎｃｔｉｏｎ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．，７３１，１３５０１４（２０２０）．
Ｆｏｌａｎｄｅｔａｌ．，Ｉｎｃｒｅａｓｅｄｖｏｌｕｍｅｏｆｔｈｅａｍｙｇｄａｌａａｎｄｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓｉｎｂｉｐｏｌａｒｐａｔｉｅｎｔｓｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｌｉｔｈｉｕｍ．ＮｅｕｒｏＲｅｐｏｒｔ，１９．２，２２１（２００８）．
Ｇａｇｅ，Ａｄｕｌｔｎｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎｍａｍｍａｌｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，３６４，８２７－８２８（２０１９）．
Ｇａｒｃｉａ－Ｏｓｔａｅｔａｌ．，ＭｕＳＫｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎｔｈｅｂｒａｉｎｍｅｄｉａｔｅｓｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃｒｅｓｐｏｎｓｅｓ，ｓｙｎａｐｔｉｃｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ，ａｎｄｍｅｍｏｒｙｆｏｒｍａｔｉｏｎ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，Ｏｆｆ．Ｊ．Ｓｏｃ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，２６，７９１９－７９３２（２００６）．
Ｇｅ，Ｓｏｎ，＆Ｙａｏ，ｉＤＥＰ：ａｎｉｎｔｅｇｒａｔｅｄｗｅｂａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｆｏｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｐａｔｈｗａｙａｎａｌｙｓｉｓｏｆＲＮＡ－Ｓｅｑｄａｔａ．ＢＭＣＢｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，１９，５３４（２０１８）．
Ｇｅｉｓｏｗ＆Ｅｖａｎｓ，ｐＨｉｎｔｈｅｅｎｄｏｓｏｍｅ：Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓｄｕｒｉｎｇｐｉｎｏｃｙｔｏｓｉｓａｎｄｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｍｅｄｉａｔｅｄｅｎｄｏｃｙｔｏｓｉｓ．Ｅｘｐ．ＣｅｌｌＲｅｓ．，１５０，３６－４６（１９８４）．
Ｇｏｌｄｅｔａｌ．，Ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌｄａｍａｇｅａｎｄｍｅｍｏｒｙｉｍｐａｉｒｍｅｎｔｓａｓｐｏｓｓｉｂｌｅｅａｒｌｙｂｒａｉｎｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｏｆｔｙｐｅ２ｄｉａｂｅｔｅｓ．Ｄｉａｂｅｔｏｆｏｇｉａ，５０．４，７１１－７１９（２００７）．
Ｇｕｐｔｉｌｌ，Ｓａｎｄｅｒｓ＆Ｅｖｏｌｉ，Ａｎｔｉ－ＭｕＳＫａｎｔｉｂｏｄｙｍｙａｓｔｈｅｎｉａｇｒａｖｉｓ：Ｃｌｉｎｉｃａｌｆｉｎｄｉｎｇｓａｎｄｒｅｓｐｏｎｓｅｔｏｔｒｅａｔｍｅｎｔｉｎｔｗｏｌａｒｇｅｃｏｈｏｒｔｓ．ＭｕｓｃｌｅＮｅｒｖｅ，４４，３６－４０（２０１１）．
Ｈａｒｔｕｎｇｅｔａｌ．，ＤｉｆｆｅｒｅｎｔＲｏｕｔｅｓｏｆＢｏｎｅＭｏｒｐｈｏｇｅｎｉｃＰｒｏｔｅｉｎ（ＢＭＰ）ＲｅｃｅｐｔｏｒＥｎｄｏｃｙｔｏｓｉｓＩｎｆｌｕｅｎｃｅＢＭＰＳｉｇｎａｌｉｎｇ．Ｍｏｌ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．，２６，７７９１－７８０５（２００６）．
Ｈｅａｌｅｙｅｔａｌ．，Ｒｅｐｕｌｓｉｖｅｇｕｉｄａｎｃｅｍｏｌｅｃｕｌｅｉｓａｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｂｒｉｄｇｅｂｅｔｗｅｅｎｎｅｏｇｅｎｉｎａｎｄｂｏｎｅｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎ．ＮａｔｕｒｅＳｔｒｕｃｔ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２，４５８－４６５（２０１５）．
Ｈｅｒｂｓｔ＆Ｂｕｒｄｅｎ，ＴｈｅｊｕｘｔａｍｅｍｂｒａｎｅｒｅｇｉｏｎｏｆＭｕＳＫｈａｓａｃｒｉｔｉｃａｌｒｏｌｅｉｎａｇｒｉｎ－ｍｅｄｉａｔｅｄｓｉｇｎａｌｉｎｇ．ＥＭＢＯＪ１９：６７－７７（２０００）．
Ｈｅｓｓｅｒｅｔａｌ．，ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆａｎｏｖｅｌｓｐｌｉｃｅｖａｒｉａｎｔｏｆＭｕＳＫ．ＦＥＢＳＬｅｔｔ．，４４２，１３３－１３７（１９９９）．
Ｈｏｅｔａｌ．，Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｄｉａｂｅｔｅｓｏｎｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌｎｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓ：ｌｉｎｋｓｔｏｃｏｇｎｉｔｉｏｎａｎｄｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ＆ＢｉｏｂｅｈａｖｉｏｒａｌＲｅｖｉｅｗｓ，３７．８，１３４６－１３６２（２０１３）．
Ｈｏｎｇｅｔａｌ．，ＣＣＬ２ｉｎｄｕｃｅｓｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｎｅｕｒｏｎａｌｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｉｎＮｉｅｍａｎｎ－ＰｉｃｋｔｙｐｅＣｍｉｃｅ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ，１４－０３５２（２０１５）．
Ｈｕａｅｔａｌ．，Ｍｏｔｏｒｎｅｕｒｏｎｃｅｌｌ－ｎｏｎａｕｔｏｎｏｍｏｕｓｒｅｓｃｕｅｏｆｓｐｉｎａｌｍｕｓｃｕｌａｒａｔｒｏｐｈｙｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓｉｎｍｉｌｄａｎｄｓｅｖｅｒｅｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｍｏｕｓｅｍｏｄｅｌｓ．ＧｅｎｅｓＤｅｖ．２９，２８８－２９７（２０１５）．
Ｈｕｂｂａｒｄ＆Ｇｎａｎａｓａｍｂａｎｄａｎ，ＳｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆＭｕＳＫ，ａｒｅｃｅｐｔｏｒｔｙｒｏｓｉｎｅｋｉｎａｓｅｃｅｎｔｒａｌｔｏｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌａｒｊｕｎｃｔｉｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１８３４，２１６６－２１６９（２０１３）．
Ｉｍａｙｏｓｈｉｅｔａｌ．，Ｒｏｌｅｓｏｆｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｎｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎｔｈｅｓｔｒｕｃｔｕｒａｌａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｎｔｅｇｒｉｔｙｏｆｔｈｅａｄｕｌｔｆｏｒｅｂｒａｉｎ．Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１１，１１５３－１１６１（２００８）．
Ｊａｍｅｓｅｔａｌ．，Ａｒｅｖｉｅｗｏｆｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌｓｉｄｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｂｏｎｅｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎ－２．ＴｉｓｓｕｅＥｎｇ．ＰａｒｔＢＲｅｖ．，２２，２８４－２９７（２０１６）．
ＪａｙａｍＴｒｏｕｔｈｅｔａｌ．，Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｄｉｓｅａｓｅｓ，ｍｙａｓｔｈｅｎｉａｇｒａｖｉｓ：Ａｒｅｖｉｅｗ（２０１２）．
Ｋａｋｓｏｎｅｎ＆Ｒｏｕｘ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｃｌａｔｈｒｉｎ－ｍｅｄｉａｔｅｄｅｎｄｏｃｙｔｏｓｉｓ．ＮａｔｕｒｅＲｅｖ．Ｍｏｌ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．，１９，３１３－３２６（２０１８）．
Ｋａｌａｍａｋｉｓｅｔａｌ．，Ｑｕｉｅｓｃｅｎｃｅｍｏｄｕｌａｔｅｓｓｔｅｍｃｅｌｌｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅａｎｄｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅｃａｐａｃｉｔｙｉｎｔｈｅａｇｉｎｇｂｒａｉｎ．Ｃｅｌｌ１７６，１４０７－１４１９．ｅ１４（２０１９）．
Ｋａｎｔａｒｃｉｅｔａｌ．，ＨｉｐｐｏｃａｍｐａｌｖｏｌｕｍｅｓｐｒｅｄｉｃｔｒｉｓｋｏｆｄｅｍｅｎｔｉａｗｉｔｈＬｅｗｙｂｏｄｉｅｓｉｎｍｉｌｄｃｏｇｎｉｔｉｖｅｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ．Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，８７．２２，２３１７－２３２３（２０１６）．
Ｋａｔｈｎｅｒ－Ｓｃｈａｆｆｅｒｔｅｔａｌ．，Ｅａｒｌｙｓｔｒｏｋｅｉｎｄｕｃｅｓｌｏｎｇ－ｔｅｒｍｉｍｐａｉｒｍｅｎｔｏｆａｄｕｌｔｎｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓａｃｃｏｍｐａｎｉｅｄｂｙｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ－ｍｅｄｉａｔｅｄｃｏｇｎｉｔｉｖｅｄｅｃｌｉｎｅ．Ｃｅｌｌｓ，８（２０１９）．
Ｋａｕｌｉｃｈｅｔａｌ．，ＣｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔＳＤＳ－ＰＡＧＥｇｅｌｓｔａｉｎｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓｆｏｒｔｈｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｓｈｏｒｔｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅ－ｅｎｃｏｄｅｄｐｅｐｔｉｄｅｓ．Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ，２０，２００００８４（２０２０）．
Ｋｅｍｐｅｒｍａｎｎｅｔａｌ．，Ｈｕｍａｎａｄｕｌｔｎｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓ：ｅｖｉｄｅｎｃｅａｎｄｒｅｍａｉｎｉｎｇｑｕｅｓｔｉｏｎｓ．ＣｅｌｌＳｔｅｍＣｅｌｌ，２３，２５－３０（２０１８）．
Ｋｉｍｅｔａｌ．，ＬＲＰ４ｉｓａｒｅｃｅｐｔｏｒｆｏｒａｇｒｉｎａｎｄｆｏｒｍｓａｃｏｍｐｌｅｘｗｉｔｈＭｕＳＫ．Ｃｅｌｌ，１３５，３３４－３４２（２００８）．
Ｋｏｈ＆Ｐａｒｋ，Ｎｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎｓｔｒｏｋｅｒｅｃｏｖｅｒｙ．Ｔｒａｎｓｌ．ＳｔｒｏｋｅＲｅｓ．，８，３－１３（２０１７）．
Ｌａｒｄｎｅｒ，ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｐＨｏｎｉｍｍｕｎｅｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．，６９，５２２－５３０（２００１）．
Ｌｅｅｍａｎｅｔａｌ．，Ｌｙｓｏｓｏｍｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎｃｌｅａｒｓａｇｇｒｅｇａｔｅｓａｎｄｅｎｈａｎｃｅｓｑｕｉｅｓｃｅｎｔｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌａｃｔｉｖａｔｉｏｎｄｕｒｉｎｇａｇｉｎｇ．Ｓｃｉｅｎｃｅ３５９，１２７７－１２８３（２０１８）．
Ｌｉｅｔａｌ．Ａｎｎｏｔａｔｉｏｎ－ｆｒｅｅｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＲＮＡｓｐｌｉｃｉｎｇｕｓｉｎｇＬｅａｆＣｕｔｔｅｒ．ＮａｔｕｒｅＧｅｎｅｔ．，５０，１５１－１５８（２０１８）．
Ｌｉｅｔａｌ．，Ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌｓｕｂｆｉｅｌｄｖｏｌｕｍｅｔｒｙｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｓｕｂｃｏｒｔｉｃａｌｖａｓｃｕｌａｒｍｉｌｄｃｏｇｎｉｔｉｖｅｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ．ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＲｅｐｏｒｔｓ６：２０８７３（２０１６）．
Ｌｉｎｄｖａｌｌ＆Ｋｏｋａｉａ，Ｎｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓｆｏｌｌｏｗｉｎｇｓｔｒｏｋｅａｆｆｅｃｔｉｎｇｔｈｅａｄｕｌｔｂｒａｉｎ．ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓｉｎＢｉｏｌｏｇｙ，７（１１），ｐ．ａ０１９０３４（２０１５）．
Ｌｕｅｔａｌ．，Ｔａｒｇｅｔｉｎｇａｄｕｌｔｎｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓｆｏｒｐｏｓｔｓｔｒｏｋｅｔｈｅｒａｐｙ．ＳｔｅｍＣｅｌｌｓＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（２０１７）．
Ｌｕｃａｓｓｅｎｅｔａｌ．，Ａｄｕｌｔｎｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓ，ｈｕｍａｎａｆｔｅｒａｌｌ（ａｇａｉｎ）：Ｃｌａｓｓｉｃ，ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ，ａｎｄｆｕｔｕｒｅａｐｐｒｏａｃｈｅｓ．Ｂｅｈａｖ．ＢｒａｉｎＲｅｓ．１１２４５８（２０１９）．
Ｍａｋｅｔａｌ．，Ｍｕｌｔｉ－ｍｏｄａｌＭＲＩｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｆｖｏｌｕｍｅｔｒｉｃａｎｄｍｉｃｒｏｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｃｈａｎｇｅｓｉｎｔｈｅｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓａｎｄｉｔｓｓｕｂｆｉｅｌｄｓｉｎｍｉｌｄｃｏｇｎｉｔｉｖｅｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ，Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓｄｉｓｅａｓｅ，ａｎｄｄｅｍｅｎｔｉａｗｉｔｈＬｅｗｙｂｏｄｉｅｓ．ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＰｓｙｃｈｏｇｅｒｉａｔｒｉｃｓ，２９．４，５４５－５５５（２０１７）．
Ｍａｎｎｅｔａｌ．，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ－ｉｎｄｕｃｅｄｅｘｏｎｓｋｉｐｐｉｎｇａｎｄｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎｉｎｔｈｅｍｄｘｍｏｕｓｅ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，９８，４２－４７（２００１）．
ＭｃＣｌｏｒｅｙｅｔａｌ．，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ－ｉｎｄｕｃｅｄｅｘｏｎｓｋｉｐｐｉｎｇｒｅｓｔｏｒｅｓｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｖｉｔｒｏｉｎａｃａｎｉｎｅｍｏｄｅｌｏｆＤＭＤ．ＧｅｎｅＴｈｅｒ．，１３，１３７３－１３８１（２００６）．
Ｍｅｒｃａｄｏｅｔａｌ．，Ｂｉｇｌｙｃａｎｔａｒｇｅｔｓｄｙｓｔｒｏｂｒｅｖｉｎ，ｓｙｎｔｒｏｐｈｉｎａｎｄｎＮＯＳｔｏｔｈｅｍｕｓｃｌｅｃｅｌｌｍｅｍｂｒａｎｅ．ＦＡＳＥＢＪ．（２００６）．
Ｍｅｒｃｕｒｉｅｔａｌ．，Ｎｕｓｉｎｅｒｓｅｎｖｅｒｓｕｓｓｈａｍｃｏｎｔｒｏｌｉｎｌａｔｅｒ－ｏｎｓｅｔｓｐｉｎａｌｍｕｓｃｕｌａｒａｔｒｏｐｈｙ．Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３７８，６２５－６３５（２０１８）．
Ｍｅｙｅｒｓ＆ＭｉｌｌｅｒＯｐｔｉｍａｌａｌｉｇｎｍｅｎｔｓｉｎｌｉｎｅａｒｓｐａｃｅ．ＣＡＢＩＯＳ，４：１１－１７（１９８９）．
Ｍｉｒａｅｔａｌ．，ＳｉｇｎａｌｉｎｇｔｈｒｏｕｇｈＢＭＰＲ－ＩＡｒｅｇｕｌａｔｅｓｑｕｉｅｓｃｅｎｃｅａｎｄｌｏｎｇ－ｔｅｒｍａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｉｎｔｈｅａｄｕｌｔｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ．ＣｅｌｌＳｔｅｍＣｅｌｌ７，７８－８９（２０１０）．
Ｍｏｒｅｎｏ－Ｊｉｍｅｎｅｚｅｔａｌ．，ＡｄｕｌｔｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌｎｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓｉｓａｂｕｎｄａｎｔｉｎｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌｌｙｈｅａｌｔｈｙｓｕｂｊｅｃｔｓａｎｄｄｒｏｐｓｓｈａｒｐｌｙｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＡｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓｄｉｓｅａｓｅ．ＮａｔｕｒｅＭｅｄｉｃｉｎｅ（２０１９）．
Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｐｉｔｏｐｅｍａｐｐｉｎｇｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，６６（１９９６）．
Ｍｕｅｌｌｅｒ，ＲＧＭｃｏ－ｒｅｃｅｐｔｏｒｓａｄｄｃｏｍｐｌｅｘｉｔｙｔｏＢＭＰｓｉｇｎａｌｉｎｇ．ＮａｔｕｒｅＳｔｒｕｃｔ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２，４３９－４４０（２０１５）．
Ｍｕｌｌａｎｅ＆ＷｉｌｌｉａｍｓＡｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓｄｉｓｅａｓｅ（ＡＤ）ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ－１：ＲｅｐｅａｔｅｄｃｌｉｎｉｃａｌｆａｉｌｕｒｅｓｃｏｎｔｉｎｕｅｔｏｑｕｅｓｔｉｏｎｔｈｅａｍｙｌｏｉｄｈｙｐｏｔｈｅｓｉｓｏｆＡＤａｎｄｔｈｅｃｕｒｒｅｎｔｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇｏｆＡＤｃａｕｓａｌｉｔｙ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１５８，３５９－３７５（２０１８）．
Ｍｕｒｐｈｙ＆Ｒａｍａｋｒｉｓｈｎａｎ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆａｐｕｒｉｎｅ－ｐｕｒｉｎｅｗｏｂｂｌｅｂａｓｅｐａｉｒｉｎｔｈｅｄｅｃｏｄｉｎｇｃｅｎｔｅｒｏｆｔｈｅｒｉｂｏｓｏｍｅ．ＮａｔｕｒｅＳｔｒｕｃｔｕｒａｌａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，１１，１２５１－１２５２（２００４）．
Ｍｙａｓｔｈｅｎｉａｇｒａｖｉｓ｜ＧｅｎｅｔｉｃａｎｄＲａｒｅＤｉｓｅａｓｅｓＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎＣｅｎｔｅｒ（ＧＡＲＤ）－ａｎＮＣＡＴＳＰｒｏｇｒａｍ．
Ｎａｔｈａｎｅｔａｌ．，ＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎＣＳＦｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ，ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌｖｏｌｕｍｅａｎｄｃｏｇｎｉｔｉｖｅｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈａｍｎｅｓｔｉｃｍｉｌｄｃｏｇｎｉｔｉｖｅｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ（ＭＣＩ）．ＮｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙｏｆＡｇｉｎｇ，５３，１－１０（２０１７）．
Ｐａｗｌｉｋｏｗｓｋｉｅｔａｌ．ＳｋｅｌｅｔａｌＭｕｓｃｌｅ，Ｖｏｌｕｍｅ５，Ａｒｔｉｃｌｅｎｕｍｂｅｒ：４２（２０１５）
Ｐｉｔｃｈｅｒｅｔａｌ．，（２０１２）．ＲｅｄｕｃｅｄｓｔｒｉａｔａｌｖｏｌｕｍｅｓｉｎＰａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓｄｉｓｅａｓｅ：ａｍａｇｎｅｔｉｃｒｅｓｏｎａｎｃｅｉｍａｇｉｎｇｓｔｕｄｙ．Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ１．１１７．
Ｐｏｗｅｒｓｅｔａｌ．，ＥｘｅｒｃｉｓｅａｕｇｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｆｅｘｐｏｓｕｒｅｔｈｅｒａｐｙｆｏｒＰＴＳＤ：ｒａｔｉｏｎａｌｅａｎｄｐｉｌｏｔｅｆｆｉｃａｃｙｄａｔａ．ＣｏｇｎｉｔｉｖｅＢｅｈａｖｉｏｕｒＴｈｅｒａｐｙ，４４．４，３１４－３２７（２０１５）．
Ｒｅｎａｕｌｔｅｔａｌ．，（２００９）．ＦｏｘＯ３ｒｅｇｕｌａｔｅｓｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ．ＣｅｌｌＳｔｅｍＣｅｌｌ５，５２７－５３９．
Ｒｉｇｏｅｔａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙｏｆａｃｅｎｔｒａｌｎｅｒｖｏｕｓｓｙｓｔｅｍｄｅｌｉｖｅｒｅｄ２’－Ｏ－ｍｅｔｈｏｘｙｅｔｈｙｌ－ｍｏｄｉｆｉｅｄｓｕｒｖｉｖａｌｏｆｍｏｔｏｒｎｅｕｒｏｎｓｐｌｉｃｉｎｇｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｉｎｍｉｃｅａｎｄｎｏｎｈｕｍａｎｐｒｉｍａｔｅｓ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．３５０，４６－５５（２０１４）．
Ｒｕｂｉｎｅｔａｌ．，ＧｒｅａｔｅｒｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌｖｏｌｕｍｅｉｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈＰＴＳＤｔｒｅａｔｍｅｎｔｒｅｓｐｏｎｓｅ．ＰｓｙｃｈｉａｔｒｙＲｅｓｅａｒｃｈ：Ｎｅｕｒｏｉｍａｇｉｎｇ２５２：３６－３９（２０１６）．
Ｓａｎｃｈｅｚ－Ｄｕｆｆｈｕｅｓｅｔａｌ．，Ｂｏｎｅｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎｒｅｃｅｐｔｏｒｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｆｕｎｃｔｉｏｎａｎｄｔａｒｇｅｔｉｎｇｂｙｓｅｌｅｃｔｉｖｅｓｍａｌｌｍｏｌｅｃｕｌｅｋｉｎａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．Ｂｏｎｅ，１３８，１１５４７２（２０２０）．
Ｓａｓｓｏｎｅｅｔａｌ．，ＲｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅａｐｐｒｏａｃｈｅｓｉｎＨｕｎｔｉｎｇｔｏｎ’ｓｄｉｓｅａｓｅ：Ｆｒｏｍｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃｉｎｓｉｇｈｔｓｔｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｐｒｏｔｏｃｏｌｓ．ＦｒｏｎｔｉｅｒｓｉｎＮｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，１２，ｐ．８００（２０１８）．
Ｓｃｈｏｅｎｆｅｌｄｅｔａｌ．，ＮｅｗｎｅｕｒｏｎｓｒｅｓｔｏｒｅｓｔｒｕｃｔｕｒａｌａｎｄｂｅｈａｖｉｏｒａｌａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓｉｎａｒａｔｍｏｄｅｌｏｆＰＴＳＤ．Ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ（２０１９）．
Ｓｅｌｋｏｅ，Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｄｉｓｅａｓｅａｎｄａｄｕｃａｎｕｍａｂ：ａｄｊｕｓｔｉｎｇｏｕｒａｐｐｒｏａｃｈ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｌ．１５，３６５－３６６（２０１９）．
Ｓｏｒｒｅｌｌｓｅｔａｌ．，Ｈｕｍａｎｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌｎｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓｄｒｏｐｓｓｈａｒｐｌｙｉｎｃｈｉｌｄｒｅｎｔｏｕｎｄｅｔｅｃｔａｂｌｅｌｅｖｅｌｓｉｎａｄｕｌｔｓ．Ｎａｔｕｒｅ，５５５，３７７－３８１（２０１８）．
Ｓｐａｌｄｉｎｇｅｔａｌ．，Ｄｙｎａｍｉｃｓｏｆｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌｎｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎａｄｕｌｔｈｕｍａｎｓ．Ｃｅｌｌ１５３，１２１９－１２２７（２０１３）．
Ｓｔｅｉｎｅｒｅｔａｌ．，Ａｆｒｅｓｈｌｏｏｋａｔａｄｕｌｔｎｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓ．ＮａｔｕｒｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，２５，５４２－５４３（２０１９）．
Ｓｔｅｒｌｉｎｇｅｔａｌ．，ＳｔｒｉａｔａｌｓｈａｐｅｉｎＰａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓｄｉｓｅａｓｅ．ＮｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙｏｆＡｇｉｎｇ，３４．１１，２５１０－２５１６（２０１３）．
Ｓｔｉｅｇｌｅｒ，Ｂｕｒｄｅｎ，＆Ｈｕｂｂａｒｄ，Ｃｒｙｓｔａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｔｈｅａｇｒｉｎ－ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ－ｌｉｋｅｄｏｍａｉｎｓ１ａｎｄ２ｏｆｔｈｅｒｅｃｅｐｔｏｒｔｙｒｏｓｉｎｅｋｉｎａｓｅＭｕＳＫ．ＪＭｏｌＢｉｏｌ３６４：４２４－４３３（２００６）．
Ｔａｉｅｔａｌ．，Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅｐｒｏｃｅｓｓｅｓｉｎｔｅｍｐｏｒａｌｌｏｂｅｅｐｉｌｅｐｓｙｗｉｔｈｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌｓｃｌｅｒｏｓｉｓ：Ｃｌｉｎｉｃａｌ，ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｎｅｕｒｏｉｍａｇｉｎｇｅｖｉｄｅｎｃｅ．ＮｅｕｒｏｐａｔｈｏｌｏｇｙａｎｄＡｐｐｌｉｅｄＮｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，４４．１，７０－９０（２０１８）．
Ｔｅｒｒｅｒｏｓ－Ｒｏｎｃａｌｅｔａｌ．，Ａｃｔｉｖｉｔｙ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｒｅｃｏｎｎｅｃｔｉｏｎｏｆａｄｕｌｔ－ｂｏｒｎｄｅｎｔａｔｅｇｒａｎｕｌｅｃｅｌｌｓｉｎａｍｏｕｓｅｍｏｄｅｌｏｆｆｒｏｎｔｏｔｅｍｐｏｒａｌｄｅｍｅｎｔｉａ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，３９（２９），５７９４－５８１５（２０１９）．
Ｔｏｂｉｎｅｔａｌ．，ＨｕｍａｎｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌｎｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓｐｅｒｓｉｓｔｓｉｎａｇｅｄａｄｕｌｔｓａｎｄＡｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓｄｉｓｅａｓｅｐａｔｉｅｎｔｓ．ＣｅｌｌＳｔｅｍＣｅｌｌ，２４，９７４－９８２．ｅ３（２０１９）．
ｖａｎＥｒｐｅｔａｌ．，Ｓｕｂｃｏｒｔｉｃａｌｂｒａｉｎｖｏｌｕｍｅａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓｉｎ２０２８ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓｗｉｔｈｓｃｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａａｎｄ２５４０ｈｅａｌｔｈｙｃｏｎｔｒｏｌｓｖｉａｔｈｅＥＮＩＧＭＡｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ．ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｓｙｃｈｉａｔｒｙ，２１．４：５４７（２０１６）．
Ｖａｎｅｔａｌ．，Ｓｍａｌｌｅｒｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌｖｏｌｕｍｅａｓａｖｕｌｎｅｒａｂｉｌｉｔｙｆａｃｔｏｒｆｏｒｔｈｅｐｅｒｓｉｓｔｅｎｃｅｏｆｐｏｓｔ－ｔｒａｕｍａｔｉｃｓｔｒｅｓｓｄｉｓｏｒｄｅｒ．ＰｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ，４５．１３：２７３７－２７４６（２０１５）．
ｖａｎＰｒａａｇｅｔａｌ．，Ｅｘｅｒｃｉｓｅｅｎｈａｎｃｅｓｌｅａｒｎｉｎｇａｎｄｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌｎｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎａｇｅｄｍｉｃｅ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，２５，８６８０－８６８５（２００５）．
Ｖａｕｇｈａｎｅｔａｌ．，Ｈｕｍａｎａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｂｙｄｅｓｉｇｎ．ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１６，５３５－５３９（１９９８）．
Ｖｉｌｌｅｄａｅｔａｌ．，Ｔｈｅａｇｅｉｎｇｓｙｓｔｅｍｉｃｍｉｌｉｅｕｎｅｇａｔｉｖｅｌｙｒｅｇｕｌａｔｅｓｎｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓａｎｄｃｏｇｎｉｔｉｖｅｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ，４７７，９０－９４（２０１１）．
Ｖｉｌｌｅｄａｅｔａｌ．，Ｙｏｕｎｇｂｌｏｏｄｒｅｖｅｒｓｅｓａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄｉｍｐａｉｒｍｅｎｔｓｉｎｃｏｇｎｉｔｉｖｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｎｄｓｙｎａｐｔｉｃｐｌａｓｔｉｃｉｔｙｉｎｍｉｃｅ．ＮａｔｕｒｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，２０，６５９－６６３（２０１４）．
Ｗａｎｇｅｔａｌ．，ＢｏｎｅＭｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃＰｒｏｔｅｉｎ（ＢＭＰ）ｓｉｇｎａｌｉｎｇｉｎｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｈｕｍａｎｄｉｓｅａｓｅｓ．ＧｅｎｅｓＤｉｓ．１，８７－１０５（２０１４）．
Ｗａｔｔｙ＆Ｂｕｒｄｅｎ，ＭｕＳＫｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎｒｅｓｔｒａｉｎｓＭｕＳＫａｃｔｉｖａｔｉｏｎａｎｄａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７，５０４５７－５０４６２（２００２）．
Ｗｅｂｂｅｔａｌ．，ＦＯＸＯ３ｓｈａｒｅｓｃｏｍｍｏｎｔａｒｇｅｔｓｗｉｔｈＡＳＣＬ１ｇｅｎｏｍｅ－ｗｉｄｅａｎｄｉｎｈｉｂｉｔｓＡＳＣＬ１－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｎｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓ．ＣｅｌｌＲｅｐ．，４，４７７－４９１（２０１３）．
Ｗｈｉｔｗｏｒｔｈｅｔａｌ．，Ｄｉｒｅｃｔａｎｄｉｎｄｉｒｅｃｔｅｆｆｅｃｔｓｏｆｅｘｅｒｃｉｓｅｏｎｐｏｓｔｔｒａｕｍａｔｉｃｓｔｒｅｓｓｄｉｓｏｒｄｅｒｓｙｍｐｔｏｍｓ：Ａｌｏｎｇｉｔｕｄｉｎａｌｓｔｕｄｙ．ＧｅｎｅｒａｌＨｏｓｐｉｔａｌＰｓｙｃｈｉａｔｒｙ，４９，５６－６２（２０１７）．
Ｗｉｌｔｏｎｅｔａｌ．，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ－ｉｎｄｕｃｅｄｅｘｏｎｓｋｉｐｐｉｎｇａｃｒｏｓｓｔｈｅｈｕｍａｎｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎｇｅｎｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ．Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．，１５，１２８８－１２９６（２００７）．
Ｗｏｌｆｅｔａｌ．，Ｋｌｏｔｈｏｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｅｓｒｅｎａｌｃａｌｃｉｕｍｃｈａｎｎｅｌｔｒａｎｓｉｅｎｔｒｅｃｅｐｔｏｒｐｏｔｅｎｔｉａｌｖａｎｉｌｌｏｉｄ５（ＴＲＰＶ５）ｂｙｉｎｔｒａ－ａｎｄｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒＮ－ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８９，３５８４９－３５８５７（２０１４）．
Ｗｕ＆Ｎａｃｕ，ＦａｓｔａｎｄＳＮＰ－ｔｏｌｅｒａｎｔｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｃｏｍｐｌｅｘｖａｒｉａｎｔｓａｎｄｓｐｌｉｃｉｎｇｉｎｓｈｏｒｔｒｅａｄｓ．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，２６，８７３－８８１（２０１０）．
Ｗｙｓｓ－Ｃｏｒａｙ，Ａｇｅｉｎｇ，ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎａｎｄｂｒａｉｎｒｅｊｕｖｅｎａｔｉｏｎ．Ｎａｔｕｒｅ，５３９，１８０－１８６（２０１６）．
Ｙａｄｉｎ，Ｋｎａｕｓ，＆Ｍｕｌｌｅｒ，ＳｔｒｕｃｔｕｒａｌｉｎｓｉｇｈｔｓｉｎｔｏＢＭＰｒｅｃｅｐｔｏｒｓ：Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ，ａｃｔｉｖａｔｉｏｎａｎｄｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ．ＳｃｉｅｎｃｅＤｉｒｅｃｔ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ＆ＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒＲｅｖｉｅｗｓ，２７，１３－３４（Ｆｅｂｒｕａｒｙ２０１６）．
Ｙｉｌｍａｚｅｔａｌ．，ＭｕＳＫｉｓａＢＭＰｃｏ－ｒｅｃｅｐｔｏｒｔｈａｔｓｈａｐｅｓＢＭＰｒｅｓｐｏｎｓｅｓａｎｄｃａｌｃｉｕｍｓｉｇｎａｌｉｎｇｉｎｍｕｓｃｌｅｃｅｌｌｓ．ＳｃｉｅｎｃｅＳｉｇｎａｌｉｎｇ，Ｖｏｌ．９，Ｉｓｓｕｅ４４４，ｐｐ．ＲＡ８７，ｐｇ１－２（Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ６，２０１６）．ＭｕＳＫはＢＭＰ共受容体である。ＭｕＳＫは、Ｉｇ３ドメインでＢＭＰ４に結合する。ＭｕＳＫの「Ｉｇ３」ドメインは、ＢＭＰの高親和性結合に必要である。内因的に発現されるＭｕＳＫの主な種は全長である。このＩｇ３ドメインは、内因的に選択的にスプライシングされ、Δｇ３ＭｕＳＫと呼ばれるアイソフォームを生成することができる。このスプライシングは、ＭｕＳＫプレｍＲＮＡからのエクソン６および７の協調的除去を伴う。Ｙｉｌｍａｚｅｔａｌ．（２０１６）は、全長ＭｕＳＫまたはΔＩｇ３ＭｕＳＫ外部ドメインＦｃ融合物を固定した。次いで、これらのタンパク質構築物をＢＭＰ４とインキュベートした。Ｙｉｌｍａｚｅｔａｌ．（２０１６）は、ＭｕＳＫがＢＭＰに結合することを示しただけでなく、ＭｕＳＫがＢＭＰ受容体に結合することも示した。固定されたＭｕＳＫは、異なる濃度のＡＬＫ４、ＡＬＫ６、ＡＬＫ３、ＡＬＫ２、ＢＭＰＲＩ、ＡｃｔＲＩＩＢおよびＴＲＯＹと再度インキュベートされた。ＭｕＳＫは、ＡＬＫ４およびＡＬＫ６に最もよく結合する。Ｙｉｌｍａｚｅｔａｌ．（２０１６）．ＭｕＳＫｉｓａＢＭＰｃｏ－ｒｅｃｅｐｔｏｒｔｈａｔｓｈａｐｅｓＢＭＰｒｅｓｐｏｎｓｅｓａｎｄｃａｌｃｉｕｍｓｉｇｎａｌｉｎｇｉｎｍｕｓｃｌｅｃｅｌｌｓ．Ｓｃｉ．Ｓｉｇｎａｌ．９，ｒａ８７．Ｙｉｌｍａｚは、機能的ｌｇ３ドメインを欠くＭｕＳＫポリペプチド、またはＢＭＰ－ＭｕＳＫポリペプチド複合体のレベルもしくは活性を低下させることを開示しており、ここで、ＭｕＳＫは機能的ｌｇ３ドメインを含む（２頁、２段目、１段落目）。ＭｕＳＫ－ＢＭＰ４結合に果たすこのドメインの潜在的な役割をアッセイするために、本発明者らは、Ｉｇ３ドメイン（それぞれＦＬおよびＤｌｇ３）を含有するかまたは欠くＦｅ融合外部ドメインタンパク質をコードする構築物を生成し、様々な濃度にわたって可溶性ＢＭＰ４へのそれらの結合をアッセイした。ドメインを欠くＭｕＳＫは変異体である。該構築物は、Ｉｇ３ドメインを欠くＭｕＳＫを産生し、Ｉｇ３ドメインを欠くＭｕＳＫは、野生型と比較した場合、このポリペプチドのレベルおよび活性を増加させる）。Ｙｉｌｍａｚｅｔａｌ．（２０１６）は、神経変性または認知障害の１つ以上の特徴に罹患している対象を治療する方法にこれを使用することを開示していない。

Ｙｕｎｅｔａｌ．，Ｒｅ－ｅｖａｌｕａｔｉｎｇｔｈｅｌｉｎｋｂｅｔｗｅｅｎｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃｄｉｓｏｒｄｅｒｓａｎｄｄｙｓｒｅｇｕｌａｔｅｄａｄｕｌｔｎｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓ．ＮａｔｕｒｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，２２（１１），ｐ．１２３９（２０１６）．
Ｚｈａｎｇｅｔａｌ．，ＡｒｏｌｅｆｏｒａｄｕｌｔＴＬＸ－ｐｏｓｉｔｉｖｅｎｅｕｒａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｉｎｌｅａｒｎｉｎｇａｎｄｂｅｈａｖｉｏｕｒ．Ｎａｔｕｒｅ，４５１，１００４－１００７（２００８ｂ）．
Ｚｈａｎｇｅｔａｌ．，ＬＲＰ４ｓｅｒｖｅｓａｓａｃｏｒｅｃｅｐｔｏｒｏｆａｇｒｉｎ．Ｎｅｕｒｏｎ，６０，２８５－２９７（２００８ａ）．
Ｔｅｘｔｂｏｏｋｓａｎｄｔｅｃｈｎｉｃａｌｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ
ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（ＣＰＩ）（２００３）．ＪｏｈｎＥ．Ｃｏｌｉｇａｎ，ＡＤＡＭＫｒｕｉｓｂｅｅｋ，ＤａｖｉｄＨＭａｒｇｕｌｉｅｓ，ＥｔｈａｎＭＳｈｅｖａｃｈ，ＷａｒｒｅｎＳｔｒｏｂｅ，（ｅｄｓ．）ＪｏｈｎＷｉｌｅｙａｎｄＳｏｎｓ，Ｉｎｃ．（ＩＳＢＮ０４７１１４２７３５，９７８０４７１１４２７３７）．
ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ（ＣＰＭＢ），（２０１４）．ＦｒｅｄｅｒｉｃｋＭ．Ａｕｓｕｂｅｌ（ｅｄ．），ＪｏｈｎＷｉｌｅｙａｎｄＳｏｎｓ（ＩＳＢＮ０４７１５０３３８Ｘ，９７８０４７１５０３３８５）．
ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＰｒｏｔｅｉｎＳｃｉｅｎｃｅ（ＣＰＰＳ），（２００５）．ＪｏｈｎＥ．Ｃｏｌｉｇａｎ（ｅｄ．），ＪｏｈｎＷｉｌｅｙａｎｄＳｏｎｓ，Ｉｎｃ．
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００６）．ＷｅｒｎｅｒＬｕｔｔｍａｎｎ，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄｂｙＥｌｓｅｖｉｅｒ．
Ｊａｎｅｗａｙ’ｓＩｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，（２０１４）．ＫｅｎｎｅｔｈＭｕｒｐｈｙ，ＡｌｌａｎＭｏｗａｔ，ＣａｓｅｙＷｅａｖｅｒ（ｅｄｓ．），Ｔａｙｌｏｒ＆ＦｒａｎｃｉｓＬｉｍｉｔｅｄ，（ＩＳＢＮ０８１５３４５３０５，９７８０８１５３４５３０５）．
ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ：ＤＮＡ，（２０１３）．ＪｏｎＬｏｒｓｃｈ（ｅｄ．）Ｅｌｓｅｖｉｅｒ（ＩＳＢＮ０１２４１９９５４２）．
Ｌｅｗｉｎ’ｓＧｅｎｅｓＸＩ，（２０１４）．ｐｕｂｌｉｓｈｅｄｂｙＪｏｎｅｓ＆ＢａｒｔｌｅｔｔＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（ＩＳＢＮ－１４４９６５９０５５）．
ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：ａＣｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅＤｅｓｋＲｅｆｅｒｅｎｃｅ，（１９９５）．ＲｏｂｅｒｔＡ．Ｍｅｙｅｒｓ（ｅｄ．），ｐｕｂｌｉｓｈｅｄｂｙＶＣＨＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．（ＩＳＢＮ１－５６０８１－５６９－８）．
ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，４ｔｈｅｄ．，ＭｉｃｈａｅｌＲｉｃｈａｒｄＧｒｅｅｎａｎｄＪｏｓｅｐｈＳａｍｂｒｏｏｋ，（２０１２）．ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，ＵＳＡ（ＩＳＢＮ１９３６１１３４１４）．
ＴｈｅＥｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｅｌｌＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＲｏｂｅｒｔＳ．Ｐｏｒｔｅｒｅｔａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｕｂｌｉｓｈｅｄｂｙＢｌａｃｋｗｅｌｌＳｃｉｅｎｃｅＬｔｄ．，１９９９－２０１２（ＩＳＢＮ９７８３５２７６００９０８）．
ＴｈｅＭｅｒｃｋＭａｎｕａｌｏｆＤｉａｇｎｏｓｉｓａｎｄＴｈｅｒａｐｙ，１９^ｔｈｅｄｉｔｉｏｎ（ＭｅｒｃｋＳｈａｒｐ＆ＤｏｈｍｅＣｏｒｐ．，２０１８）．
ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ２３^ｒｄｅｄｉｔｉｏｎ（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，２０２０）．
［実施形態のリスト］
ＭｕｓｋとＢｍｐ受容体との間の結合相互作用を特性評価する具体的な組成物および方法を記載した。本発明の範囲は、特許請求の範囲によってのみ定義されるべきである。生物医学分野の当業者であれば、本開示の文脈および趣旨と一致する最も広い可能な方法ですべての請求項の用語を解釈するであろう。本明細書の詳細な説明は例示であり、限定的または網羅的ではない。本発明は、本明細書に記載の特定の方法、プロトコルおよび試薬に限定されず、実際には変化し得る。明細書または特許請求の範囲が、順序付けられた工程または機能を記載する場合、代替の実施形態は、それらの機能を異なる順序でまたは実質的に同時に実行し得る。生物医学分野の当業者が認識するように、本明細書に記載された本発明の概念から逸脱することなく、既に記載されたもの以外の他の同等物および改変が可能である。

本明細書を通して引用されたすべての特許および刊行物は、本明細書に記載された技術とともに使用される材料および方法を開示および説明するために参照により組み込まれる。特許および刊行物は、本明細書の出願日前の開示のためにのみ提供される。特許および刊行物の開示および公開日に関するすべての記述は、本発明者らの情報および確信からのものである。本発明者らは、これらの文献の内容または日付の正確性について何ら認めるものではない。本明細書で提供された日付と実際の公開日との間に不一致がある場合、実際の公開日が優先される。本発明者らは、先行発明または別の理由のためにそのような開示に先行し得る。以前の特許または刊行物の科学的教示または技術的教示と本明細書との間に不一致がある場合、本明細書およびこれらの特許請求の範囲の教示が優先される。

本明細書が値の範囲を提供する場合、その範囲の上限と下限との間の各介在値は、文脈上別段の指示がない限り、値の範囲内にある。

Claims

ＭｕＳＫＩｇ２ドメインの調節に基づいて、アルツハイマー病、ＭｕＳＫ－ＭＧおよび他の神経障害を治療する方法。
５ａおよび５ｂＭｕＳＫエクソンの選択的スプライシングの調節に基づいて、アルツハイマー病、ＭｕＳＫ－ＭＧおよび他の神経障害を治療する方法。
ＭｕＳＫＩｇ２ドメインへの自己抗体の結合に基づく、ＭｕＳＫ－ＭＧの診断
ＭｕＳＫエクソン５ａおよび５ｂへの自己抗体の結合に基づく、ＭｕＳＫ－ＭＧの診断。
ＭｕＳＫＩｇ２ドメインの調節に基づいて、サルコペニア、悪液質および他の筋障害を治療する方法。
ＭｕＳＫエクソン５ａおよび５ｂの調節に基づいて、サルコペニア、悪液質および他の筋障害を治療する方法。
神経変性または認知障害の１つ以上の特徴に罹患している対象を治療する方法であって、
（ａ）機能的Ｉｇ２ドメインを欠くＭｕＳＫポリペプチドのレベルもしくは活性を増加させる工程、または
（ｂ）ＢＭＰ受容体（ＡＬＫ）－ＭｕＳＫポリペプチド複合体のレベルもしくは活性を低下させる工程であって、前記ＭｕＳＫが、機能的Ｉｇ２ドメインを含む工程、
を含む、方法。
神経発生を増加させる方法であって、
（ａ）機能的Ｉｇ２ドメインを欠くＭｕＳＫポリペプチドのレベルもしくは活性を増加させる工程、または
（ｂ）ＢＭＰ－ＭｕＳＫポリペプチド複合体のレベルもしくは活性を低下させる工程であって、前記ＭｕＳＫが、機能的Ｉｇ２ドメインを含む工程、
を含む、方法。
ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤を含むかまたは送達する医薬組成物を投与する工程をさらに含む、請求項７または８に記載の方法。
ＭｕＳＫ転写物の改変されたスプライシングを増加させる医薬組成物を投与する工程をさらに含み、前記改変が、ＭｕＳＫＩｇ２ドメイン内の１つ以上のエクソンをスキップすることを含み、
スキップされたエクソンが、ＭｕＳＫＩｇ２ドメインのエクソン５ａであるか、
スキップされたエクソンが、ＭｕＳＫＩｇ２ドメインのエクソン５ｂであるか、または
スキップされたエクソンが、ＭｕＳＫＩｇ２ドメインのエクソン５ａおよび５ｂである、請求項７または８に記載の方法。
エクソン５ａおよび５ｂの一方または両方のスキップが増加するように、ＭｕＳＫ一次転写物の集団を含む系を、そのような一次転写物に結合するオリゴヌクレオチドと接触させることによって、ＭｕＳＫエクソンスキッピングを誘導する方法。
ＭｕＳＫＩｇ２調節物質剤を特性評価する方法であって、
（ａ）ＭｕＳＫのＩｇ２ドメインに結合する能力を評価する工程、
（ｂ）ＭｕＳＫ－Ｉｇ２－ＢＭＰ受容体（ＡＬＫ）複合体形成を減少させる能力を評価する工程、
（ｃ）一次ＭｕＳＫ転写物のスプライシングパターンを改変する能力を評価する工程、
（ｄ）転写物の発現を阻害する能力を評価する工程、
（ｅ）Ｉｇ２ドメインをコードする配列を欠くＭｕＳＫ転写物の発現を増加させる能力を評価する工程、
（ｆ）機能的Ｉｇ２を欠くＭｕＳＫポリペプチドのレベルを増加させる能力を評価する工程、および
（ｇ）集団内の細胞の特性に影響を及ぼす能力を評価する工程、
のうちの１つ以上を含む、方法。
そのゲノム内にＭｕＳＫをコードする配列を含む遺伝子改変マウスであって、ＭｕＳＫをコードする前記配列が、エクソン５ａからエクソン５ｂ（５’から３’の順序で）までのヌクレオチドの範囲を含まず、
全長ＭｕＳＫ転写物を発現することができず、全長ＭｕＳＫタンパク質を産生することもできない、遺伝子改変マウス。