JP2024508739A - コロナウイルス科の感染の予防的または治療的な処置における使用のためのインフルエンザウイルス欠陥干渉粒子 - Google Patents
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Abstract
本発明は第１の態様において、コロナウイルス科の感染の予防的または治療的な処置におけるインフルエンザウイルス欠陥干渉粒子の使用に関する。特に、インフルエンザＡの欠陥干渉粒子は、ＳＡＲＳコロナウイルス感染、特にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の処置において有益な効果を有することが認知されてきた。さらに本発明は、コロナウイルス科の感染、特にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の処置における使用のための医薬組成物に関する。さらなる態様では、ＤＩＰの投与に基づくコロナウイルス科の予防的または治療的な処置のための方法が開示される。
Description
本発明は第１の態様において、コロナウイルス科の感染の予防的または治療的な処置におけるインフルエンザウイルス欠陥干渉粒子の使用に関する。特に、インフルエンザＡウイルスの欠陥干渉粒子は、ＳＡＲＳコロナウイルス感染、特にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の処置において有益な効果を有することが認知されてきた。さらに本発明は、コロナウイルス科の感染、特にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の予防および処置における使用のための医薬組成物、ならびに治療用医薬品を形成するためまたは曝露前および／または曝露後の処置による前記ウイルス感染に対する処置または保護における使用のためのインフルエンザＡウイルスの欠陥干渉粒子を含む組成物またはキットに関する。さらなる態様では、ＤＩＰの投与に基づくコロナウイルス科の予防的または治療的な処置のための方法が開示される。
インフルエンザＡウイルス（ＩＡＶ）の欠陥干渉粒子（ＤＩＰ）は通常、８個のゲノムウイルスＲＮＡ（ｖＲＮＡ）の１つに大きな内部欠失を含む。これはウイルスの複製の欠陥をもたらし、完全に感染性の標準的なウイルス（ＳＴＶ）との重複感染によって補完され得る。さらに、変異を有するＤＩＰ、例えばＤＩＰ ＯＰ７が記載されている。ＫＵＰＫＥ，Ｓ．Ｙ．ら、２０１９．Ｊ Ｖｉｒｏｌ；９３（４）：ｅ０１７８６－１８、ｄｏｉ：１０．１１２８／ＪＶＩ．０１７８６－１８を参照されたい。さらに、ＤＩＰは、複製干渉としても知られている重複感染シナリオで、相同ＳＴＶ複製および拡散に特異的に干渉する。
ＩＡＶ ＤＩＰは以前、インフルエンザに対する抗ウイルス処置のために（例えばＺＨＡＯ，Ｈ．ら、２０１８．Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ、９、２３５８頁）、しかし他の呼吸器系ウイルス疾患の汎用の特異的処置（例えばＤＩＭＭＯＣＫ，Ｎ．Ｊ．およびＥＡＳＴＯＮ，Ａ．Ｊ．２０１４．Ｊ Ｖｉｒｏｌ、８８、５２１７～２７頁）のためにも提案された。ＩＡＶ ＤＩＰはそのゲノムに典型的には大きな内部欠失またはその代わりに最近発見された点変異を有しており（Ｋｕｐｋｅら、２０１９、上記参照）、それらが、ＩＡＶ
ＤＩＰをウイルス複製における欠陥がある状態にする（例えばＡＬＮＡＪＩ，Ｆ．Ｇ．およびＢＲＯＯＫＥ，Ｃ．Ｂ．２０２０ ＰＬＯＳ Ｐａｔｈｏｇ、１６、ｅ１００８４３６）。
ＤＩＰをウイルス複製における欠陥がある状態にする（例えばＡＬＮＡＪＩ，Ｆ．Ｇ．およびＢＲＯＯＫＥ，Ｃ．Ｂ．２０２０ ＰＬＯＳ Ｐａｔｈｏｇ、１６、ｅ１００８４３６）。
さらに、これらは重複感染シナリオで相同ウイルス複製および拡散を特異的に抑制および干渉する。結果として、ＩＡＶ ＤＩＰのマウスへの投与はＩＡＶの致死用量に対する完全な保護をもたらした（例えばＤＩＭＭＯＣＫ，Ｎ．Ｊ．、２０１２ ＰＬｏＳ Ｏｎｅ、７、ｅ４９３９４、ＨＥＩＮ，Ｍ．Ｄ．ら、２０２１、Ａｐｐｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、Ｊａｎ；１０５（１）：１２９～１４６頁）。フェレットのモデルにおいて、ＩＡＶ ＤＩＰの重複処置は、臨床的インフルエンザ疾患の重症度の低減をもたらした（例えばＤＩＭＭＯＣＫ，Ｎ．Ｊ．ら、２０１２、ＰＬｏＳ Ｏｎｅ、７、ｅ４９３９４）。魅力的なことに、マウスは、他の機構、例えば先天性免疫を刺激するＩＡＶ ＤＩＰの能力によって媒介されて、無関係なインフルエンザＢウイルスおよびパラミクソウイルス科ファミリーのニューモウイルスであるマウス肺炎ウイルスによる致死的感染に対しても保護された。
最近同定された、コロナウイルス疾患２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）を惹起する重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）は、公衆衛生、経済、および社会に思い負荷をもたらしている。現在までに、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に関連して２００万例を超える死亡が報告されている（ＷＨＯ、ｃｏｖｉｄ１９．ｗｈｏ．ｉｎｔ）。２０２０年には、（新規な）ワクチンの開発、その生産、ならびに臨床試験における安全性および免疫原性の研究についての前例のない競争があった。２０２０年の終わりには既に、最初の個人が承認済みワクチンによって処置された。ワクチン接種は典型的にはウイルス感染に対する最良の保護を提供するが、ＣＯＶＩＤ－１９ワクチンの生産能力およびワクチン接種のために必要なインフラは未だに限定的である。
さらに、種々のワクチン候補の有効性を疑問とするような変異が生じた。代替の処置オプションは抗ウイルス薬の使用である。しかし、レムデシビルは（臨床使用で）限定的な有効性しか示さず（例えばＷＡＮＧ，Ｙ．ら、２０２０．Ｌａｎｃｅｔ、３９５、１５６９～１５７８頁、Ｗａｎｇら２０２０）、目的変更した他の薬物候補（例えばヒドロキシクロロキンおよびロピナビル－リトナビル）は有効性の欠如を示した。さらに、モノクローナル抗体のカクテル（例えばバムラニビマブ（ＣＨＥＮ，Ｐ．ら、２０２０、Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ））ならびにコルチコステロイド（即ちデキサメタゾン（ＴｏｍａｚｉｎｉおよびＯＭＡＺＩＮＩら、２０２０、ＪＡＭＡ、３２４、１３０７～１３１６頁））が臨床で使用され、抗ウイルス効果を示している。利用可能な抗ウイルス介入オプションの共通性は疾患の改善であるが、防止ではない。したがって、ＣＯＶＩＤ－１９等のＣＯＶＩＤを含むコロナウイルス科による感染のための新たな処置手段に対する緊急のニーズがある。
当技術において、インフルエンザＡウイルス欠陥干渉粒子（ＩＡＶ ＤＩＰ）はインフルエンザ疾患の抗ウイルス処置に好適であることが記載されている。インターフェロンによる処置それ自体は当技術で記載されている。例えばＣＯＶＩＤ－１９患者のインターフェロンによる処置が検討されているが、まだ承認されていない。即ち、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の複製は一般に、外部から加えられたインターフェロンによる阻害を受けやすいことも記載されている。インビトロのインターフェロン（Ｉ型、ＩＩ型、およびＩＩＩ型）は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の複製に関して強力な抗ウイルス活性を呈した。しかし、ウイルス処理におけるＩ型は疾患のステージに応じてＣＯＶＩＤ－１９において大きな役割を果たしているようであり、ＩＩＩ型インターフェロンもＣＯＶＩＤ－１９の病因に寄与し得る。インターフェロンによる処置はＤＩＰによる処置とは実質的に異なっている。即ち、インターフェロンは高用量で全身的に投与され、したがって、インターフェロンによる処置は特に高用量での投与が必要な場合に多くの有害作用を有している。種々の有害な生理学的作用が当技術で記載されており、例えば組換えＩＦＮを使用する療法は費用集約的であり、Ｓｌｅｉｊｆｅｒ，Ｓ．ら、Ｐｈａｒｍ．Ｗｏｒｌｄ Ｓｃｉ．２００５、２７、４２３～４３１頁に概説されたサイトカインに対する自己抗体の形成等の望ましくない副作用のリスクを生じている。
本発明は、コロナウイルス科の感染、特にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染の予防および処置のためのインフルエンザウイルス欠陥干渉粒子に関する。本発明者らは驚くべきことに、これらのインフルエンザウイルス欠陥干渉粒子（ＩＶＤＩＰ）による処置がヒト細胞培養モデルにおけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の複製の無効化に関して有益な効果を有しており、それにより、コロナ感染、特にＣＯＶＩＤ－１９の有効な抗ウイルス処置が可能であることを認知した。ＩＡＶ ＤＩＰは、標的細胞中でより生理的なＩＦＮ応答を刺激する。さらに、高度に有効な用量でのＤＩＰのマウスへの鼻内投与は明らかな毒性効果をもたらさなかった一方、組換えで産生したＩＦＮは極めて高価である。細胞培養系のプロセスによって産生したＩＡＶ ＤＩＰのコストは患者あたり５～２０ユーロ（細胞培養由来のワクチンと同等）と推定される。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染はインターフェロン（ＩＦＮ）応答の調節および阻害をもたらすことが示されているが、一方、複製はインビトロおよび臨床試験において外部から加えられたＩＦＮによる阻害を受けやすい（例えばＣＨＥＮ，Ｄ．Ｙ．ら、２０２０．ｂｉｏＲｘｉｖ、ｄｏｉ：ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ．１０．１１０１／２０２０．１０．２７．３５８２５９、ＭＯＮＫら、２０２０、Ｌａｎｃｅｔ Ｒｅｓｐｉｒ Ｍｅｄ、９：１９６～２０６頁、Ｍｏｎｋら、２０２０）。本発明者らは、ＩＡＶ ＤＩＰがＩ型ＩＦＮ応答、したがって標的細胞における抗ウイルス状態を刺激する能力によってＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の複製も抑制することができるか否かを検討した。ＩＡＶ ＤＩＰの産生のためのラボスケールの撹拌タンクバイオリアクターでの細胞培養系の製造ワークフローが既に開発されている（Ｈｅｉｎら、２０２０、上記参照）。具体的には、２つの有望な候補ＤＩＰ、即ちプロトタイプのよく特徴解析された従来のＩＡＶ ＤＩＰである「ＤＩ２４４」（ＤＩＭＭＯＣＫ，Ｎ．Ｊ．およびＥＡＳＴＯＮ，Ａ．Ｊ．２０１４．Ｊ Ｖｉｒｏｌ、８８、５２１７～２７頁）および新たに発見された「ＯＰ７」（Ｋｕｐｋｅら、２０１９、上記参照）が産生された。製造されたＤＩＰはマウスへの投与に際して明らかな毒性効果を示さず、強力な抗ウイルス活性を示した。さらに、それらの投与は、ＩＡＶの致死的なチャレンジからのマウスの救済をもたらした（Ｈｅｉｎら、２０２０、上記参照）。さらに、ＤＩ２４４については（ＯＰ７についてではないが）、本発明者らは、純粋にクローナルなＤＩＰの産生のための遺伝子改変された細胞系に基づく新規なシステムを用いて（ＢＤＥＩＲ，Ｎ．ら、２０１９、ＰＬｏＳ Ｏｎｅ、１４、ｅ０２１２７５７ Ｂｄｅｉｒら、２０１９）、感染性ヘルパーウイルスを不活化するためのＵＶ照射の必要性を無効化した。
ここで、それぞれＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２とＤＩ２４４またはＯＰ７とのインビトロ重複感染実験のために、Ｃａｌｕ－３細胞（ヒト肺がん細胞系）を用いた。いずれのＤＩＰも、ＩＦＮ－βまたはレムデシビルによる処置と比較して同様に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の複製を完全にシャットダウンすることができた。さらに、ＩＡＶ ＤＩＰの阻害効果は、その先天性免疫を誘起する能力に起因することが示される。おそらく、ＩＡＶの複製および拡散に干渉する他の機構も役割を果たしている。即ち、ＩＡＶ ＤＩＰは早期のＣＯＶＩＤ－１９の処置等のＣＯＶＩＤ－１９のための有効な抗ウイルス剤である。さらに、様々なＩＡＶサブタイプに対するのみでなく、他のＩＦＮ感受性呼吸器系ウイルスに対する可能性のある汎用抗ウイルス剤としてのＩＡＶ ＤＩＰの使用が実証された。
即ち第１の態様では、本発明はコロナウイルス科の感染の予防的または治療的な処置における使用のためのインフルエンザウイルス欠陥干渉粒子（ＤＩＰ）に関する。
上述のように、インフルエンザウイルスＤＩＰ（ＩＶＤＩＰ）の有益な効果は、異なるウイルスのファミリー、即ちコロナウイルス科のウイルスファミリーに対して示されている。
特に本発明は、コロナウイルス科の感染の予防的または治療的な処置におけるインフルエンザＡウイルスＤＩＰの使用に関する。
第１の態様では、本発明は、個体におけるコロナウイルス科の感染の予防的または治療的な処置における使用のためのインフルエンザウイルス欠陥干渉粒子（ＤＩＰ）に関する。
インフルエンザウイルスＤＩＰ（ＩＶＤＩＰ）は、ヒト肺上皮細胞を用いた細胞培養実験で実証されたように、個体におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染等のコロナウイルス科の感染の低減において有益な効果を実証している。即ち、驚くべきことに、異なるウイルスファミリーのＤＩＰを用いて、無関係な種およびファミリー、ここではＣＯＶＩＤ－１９疾患の病原体としてのＳＡＲＳ－ＣｏＶおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２等のサルベコウイルス属を含むコロナウイルス科ファミリーのウイルス感染を予防的および治療的に処置することができる。
本明細書で用いる場合、用語「粒子」は、他に指示しない限り、ウイルス様粒子、ウイルスベクター、およびウイルス粒子を含む。粒子は、それぞれのウイルスの少なくとも一部をコードする核酸分子を含む。
用語「ウイルスベクター」は、組換えウイルス粒子を意味する。
用語「ウイルス粒子」は、弱毒化または不活化しなければ感染性である全ウイルスを意味する。
本明細書で用いる場合、用語「ウイルス様粒子」（ＶＬＰ）は、脂質およびエンベロープのタンパク質またはカプシドのタンパク質を含む粒子を意味し、さらに、さらなる遺伝物質を含んでもよい。即ち、これは少なくとも１つの核酸分子、即ち本明細書に記載した少なくとも１つの核酸分子を含んでもよい。ＶＬＰは非感染性粒子である。ＶＬＰは記載したＤＩＰを含み、ＤＩウイルスとも称される。
もちろん、ウイルス様粒子は他の核酸分子を含んでもよい。例えば、インフルエンザウイルスの場合には、ウイルス様粒子またはウイルスベクターは、ＲＮＡの形態、例えばウイルスＲＮＡおよびＰＢ２、ＰＢ１、ＰＡ、およびＮＰ等のウイルスタンパク質（ＲＮＡの分解に対する保護を可能にする）を含むウイルスリボヌクレオプロテイン（ｖＲＮＰ）複合体の形態の遺伝材料の様々なセグメントを含む一方、ウイルスカプシドまたはウイルスエンベロープは、インフルエンザＡまたはインフルエンザＢおよびインフルエンザＣを含む他のウイルスに由来するタンパク質からなっている。
ウイルス欠陥干渉粒子は、非感染性であって、典型的にはそのゲノムが完全なゲノムを有するウイルスに感染した細胞内に存在する場合のみに複製するという特徴がある。ＤＩＰは、感染性ウイルスの複製および拡散を阻害する能力を有する。典型的には、ＤＩＰは、ウイルスゲノムの欠失をもたらす変異または欠陥のあるウイルス複製をもたらす点変異を有し、最終的には子孫ビリオンを産生しない。しかし、これらはＳＴＶの複製および細胞培養内での拡散を抑制し、それにより、非感染性のＤＩＰは放出されるが、感染性のＳＴＶの放出は極めて少ないか、放出されない。
本発明によれば、ウイルス様粒子またはウイルスベクターを含むウイルスＤＩＰがインフルエンザウイルス、特にインフルエンザＡウイルスから誘導される。本発明の一実施形態では、ウイルスベクターまたはウイルス粒子等のＤＩＰは、欠失または点変異を含む核酸配列、特に任意選択でインフルエンザＡウイルスの他のセグメント１～６および８とともにセグメント７として配列番号３のＲＮＡ分子である核酸配列を含むインフルエンザＡウイルス（ＩＶＡＤＩＰ）である。あるいは、これらは、任意選択でインフルエンザＡウイルスの他のセグメント２～８とともにセグメント１として配列番号１または２の核酸配列を含む。
本発明の一実施形態では、欠陥干渉インフルエンザＡウイルスは、
ｉ）インフルエンザＡウイルスのセグメント１の核酸配列が
ａ．配列番号１もしくは配列番号２から選択される配列；または
ｂ．配列番号１もしくは配列番号２と少なくとも９９％の同一性を有する核酸配列
を含むか、あるいは
ｉｉ）核酸配列が、配列番号４の野生型配列と比較して以下の置換基：Ｃ３Ｔ、Ｇ４Ａ、Ｇ８Ａ、Ａ１００Ｇ、Ｇ１１３Ａ、Ｇ１３０Ａ、Ｇ２４０Ａ、Ａ２４１Ｇ、Ｃ３３４Ｔ、Ｃ３５３Ｔ、Ｃ３６１Ｔ、Ｃ３７０Ａ、Ｔ３７１Ｇ、Ｔ３８５Ｃ、Ａ４０１Ｔ、Ｇ４３４Ａ、Ｃ４４２Ｔ、Ａ４４３Ｇ、Ｃ４５３Ｔ、Ａ４５４Ｇ、Ａ５２４Ｇ、Ｔ６４３Ｇ、Ｇ６４５Ｔ、Ａ６４８Ｇ、Ａ６６７Ｇ、Ｇ６７０Ａ、Ａ７１６Ｇ、Ｃ７９３Ｔ、Ｇ８０１Ｔ、Ａ８０５Ｇ、Ｇ８７４Ｔ、Ａ８８７Ｔ、Ｃ８８８Ｔ、Ｇ８９４Ａ、Ｇ９４３Ａ、Ａ１８Ｇ、およびＣ５３５Ｔを含む配列番号３、または配列番号３の配列と９９％より大きな同一性を有し、上記３７種の置換基がそのまま存在している核酸配列を含む、ウイルスである。
ｉ）インフルエンザＡウイルスのセグメント１の核酸配列が
ａ．配列番号１もしくは配列番号２から選択される配列；または
ｂ．配列番号１もしくは配列番号２と少なくとも９９％の同一性を有する核酸配列
を含むか、あるいは
ｉｉ）核酸配列が、配列番号４の野生型配列と比較して以下の置換基：Ｃ３Ｔ、Ｇ４Ａ、Ｇ８Ａ、Ａ１００Ｇ、Ｇ１１３Ａ、Ｇ１３０Ａ、Ｇ２４０Ａ、Ａ２４１Ｇ、Ｃ３３４Ｔ、Ｃ３５３Ｔ、Ｃ３６１Ｔ、Ｃ３７０Ａ、Ｔ３７１Ｇ、Ｔ３８５Ｃ、Ａ４０１Ｔ、Ｇ４３４Ａ、Ｃ４４２Ｔ、Ａ４４３Ｇ、Ｃ４５３Ｔ、Ａ４５４Ｇ、Ａ５２４Ｇ、Ｔ６４３Ｇ、Ｇ６４５Ｔ、Ａ６４８Ｇ、Ａ６６７Ｇ、Ｇ６７０Ａ、Ａ７１６Ｇ、Ｃ７９３Ｔ、Ｇ８０１Ｔ、Ａ８０５Ｇ、Ｇ８７４Ｔ、Ａ８８７Ｔ、Ｃ８８８Ｔ、Ｇ８９４Ａ、Ｇ９４３Ａ、Ａ１８Ｇ、およびＣ５３５Ｔを含む配列番号３、または配列番号３の配列と９９％より大きな同一性を有し、上記３７種の置換基がそのまま存在している核酸配列を含む、ウイルスである。
本発明の一実施形態では、本明細書に記載した個体の処置における使用のためのインフルエンザＡウイルス欠陥干渉粒子は、核酸配列が配列番号３または配列番号３の配列と９９％より大きな同一性を有する核酸配列を含むＩＡＶ ＤＩＰである。
本発明の一実施形態では、核酸配列は配列番号３を有する核酸配列である。
本発明の一実施形態では、核酸分子はＲＮＡの形態であり、特に単離された核酸分子は、インフルエンザＡウイルスのゲノムセグメント７から誘導される保護的干渉ＲＮＡ（ｐｉＲＮＡ）を表す。上記の配列番号４は、ＮＣＢＩ参照配列ＮＣ＿００２０１６．１．の配列を意味する。
ヌクレオチド配列は、配列番号３の配列内で９９％より大きな同一性を有するヌクレオチド配列であってよい。例えば、核酸分子は配列番号３の配列内で９９％より大きな同一性を有するヌクレオチド配列を含み、配列番号３に存在する３７種の置換基はそのまま存在している。ヌクレオチド配列は、配列番号３と９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、または９９．９％より大きな同一性を有してよい。さらに、ヌクレオチド配列は、配列番号１または２と９９％、９９．５％、９９．６％、９９．７％、９９．８％、または９９．９％より大きな同一性を有してよい。
一実施形態では、本発明は個体におけるオルソコロナウイルス科、特にベータコロナウイルス科の感染の予防的または治療的な処置における使用のためのインフルエンザウイルス欠陥干渉粒子に関する。
さらに、本発明は、サルベコウイルス、特に重症急性呼吸器症候群関連のコロナウイルスまたは中東呼吸器症候群関連のコロナウイルスを含むメルベコウイルスによる感染の防止または処置における使用のためのインフルエンザウイルス欠陥干渉粒子に関する。
特に、本発明は、本明細書に記載したＤＩＰ、特にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に対する予防的または治療的な個体の処置における使用のためのＩＡＶＤＩＰの使用を記載している。
さらなる態様では、本発明は、サルベコウイルス、特に重症急性呼吸器症候群関連のコロナウイルスまたは中東呼吸器症候群関連のコロナウイルスを含むメルベコウイルスによる感染等の本明細書に記載したコロナウイルス科の感染、特にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に対する個体の予防的または治療的な処置における使用のための本明細書に記載したＤＩＰを含む医薬組成物に関する。
医薬組成物は、治療用として、特に早期治療用として特に有用である。特に、本発明による医薬組成物は、本明細書に記載したウイルスへの曝露前または曝露後のウイルス感染の処置における使用のためである。
本発明による医薬組成物は、動物またはヒトである個体への投与のために適合されている。一実施形態では、動物はネコ、オオコウモリ、フェレット、イヌ、またはミンクから選択される。別の実施形態では、個体はヒトである。
例えば、医薬組成物は、鼻内投与等の粘膜経路または経口での投与に適合されている。投与は、ネブライザー、液滴スプレイ等を含む既知の手段を用いる呼吸管への投与でよい。あるいは、投与は静脈内投与、筋肉内投与、または皮下投与によって行なってよい。
医薬組成物は好適な希釈剤、担体、または流出物をさらに含んでよい。当業者であれば相応に、好適な希釈剤、流出物、または担体についてよく知っている。
一実施形態では、本発明による医薬組成物は、本明細書に記載したコロナウイルス科による感染、特にＳＡＲＳ－ＣｏＶ２による感染に罹患しているか、感染するリスクにある個体におけるウイルスに対する免疫応答の送達、例えば先天性免疫の刺激における使用のためである。
さらなる実施形態では、本発明は、例えば曝露前および曝露後の処置のための、特に本明細書で定義したウイルス感染、特にＳＡＲＳ－ＣｏＶ２に対する処置または保護における使用のための医薬品の形態等の医薬組成物の形態の、本明細書で定義したインフルエンザウイルス欠陥干渉粒子を含む組成物またはキットに関する。
さらに、本発明による使用のためのインフルエンザウイルス欠陥干渉粒子が記載され、前記ウイルス粒子は感染後に、
ｉ）ウイルス粒子の全数の低減、
ｉｉ）産生される感染性ウイルスの割合の大幅な低減、
ｉｉｉ）Ｉ型ＩＦＮの発現によって表される先天性免疫応答のより強い誘起が観察可能
のうち少なくとも１つを示す。
ｉ）ウイルス粒子の全数の低減、
ｉｉ）産生される感染性ウイルスの割合の大幅な低減、
ｉｉｉ）Ｉ型ＩＦＮの発現によって表される先天性免疫応答のより強い誘起が観察可能
のうち少なくとも１つを示す。
最後に、本発明は、本明細書に記載した有効量のＤＩＰ、特にＤＩ２４４およびＯＰ７を含むＩＡＶＤＩＰを投与するステップを含む、個体におけるコロナウイルス科のウイルス感染を治療的または予防的に処置する方法に関する。特に、本発明による方法は、オルソコロナウイルス科、特にベータコロナウイルス科の処置に関する。
例えば、本発明による方法は、サルベコウイルス、特に重症急性呼吸器症候群関連のコロナウイルスまたは中東呼吸器症候群関連のコロナウイルスを含むメルベコウイルスによる感染を防止または処置することを可能にする。好ましくは、処置はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に対するものである。
典型的には、投与は、本明細書に記載した既知の手段による呼吸管への投与を含むＤＩＰの粘膜または筋肉内の投与である。
さらに、本発明は、例えばＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ等の問題のウイルスへの曝露前または曝露後のＳＡＲＳ－ＣｏＶ２感染を含む上述のコロナウイルス科の感染に対する個体の治療的または予防的な処置の方法をさらに提供する。
例えば、個体はコロナウイルス科に感染していてよく、または感染していると疑われていてよい。実際に感染しているか、感染が疑われる場合には、本発明によるＤＩＰはできるだけ早く、個体が感染したか、または感染したと疑われてから７２時間以内、２４時間以内等に投与してよい。同様に、本発明によるＤＩＰを個体に投与することができる。別の実施形態では、個体が本明細書に記載したウイルスに近く曝露される場合には、予防手段として問題のウイルスへの起こり得る曝露の１～２週前に処置を行なってもよい。
インターフェロンの全身投与とは対照的に、本発明によるＤＩＰ、特に特異的ＤＩＰであるＤＩ２２４およびＯＰ７の局所投与は、ＣＯＶＩＤ－１９感染の早期の予防処置を可能にする。さらに、一般に鼻内投与または粘膜投与、特に吸入器またはスプレイを用いる呼吸管への投与は、特定的で非全身的な処置を可能にし、したがって有害効果を避けることができる。
材料および方法
細胞およびウイルス
Ｖｅｒｏ－６（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８６）細胞は、１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ、Ｂｉｏｗｅｓｔ、Ｓ１８１０－６５００）、１００ＩＵ／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン、１×ＧｌｕｔａＭａｘ（Ｇｉｂｃｏ）および１×ピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）を添加したＤＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ、４．５ｇ／Ｌのグルコース、ピルビン酸塩なし）中で維持した。Ｃａｌｕ－３（ＡＴＣＣ ＨＴＢ－５５）は、１０％ ＦＣＳ（Ｂｉｏｗｅｓｔ、Ｓ１８１０－６５００）、１００ＩＵ／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン、１×ＧｌｕｔａＭａｘ（Ｇｉｂｃｏ）および１×ピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）を添加したＭＥＭ（Ｓｉｇｍａ）中で培養した。Ｃａｃｏ－２（ＡＴＣＣ ＨＴＢ－３７）は、２０％ ＦＣＳ（Ｂｉｏｗｅｓｔ、Ｓ１８１０－６５００）、１００ＩＵ／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン、１×ＧｌｕｔａＭａｘ（Ｇｉｂｃｏ）および１×非必須アミノ酸溶液（Ｇｉｂｃｏ）を添加したＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）中で増殖させた。全ての細胞は、５％ＣＯ２雰囲気中、３７℃で維持しまたは感染させた。
細胞およびウイルス
Ｖｅｒｏ－６（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８６）細胞は、１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ、Ｂｉｏｗｅｓｔ、Ｓ１８１０－６５００）、１００ＩＵ／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン、１×ＧｌｕｔａＭａｘ（Ｇｉｂｃｏ）および１×ピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）を添加したＤＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ、４．５ｇ／Ｌのグルコース、ピルビン酸塩なし）中で維持した。Ｃａｌｕ－３（ＡＴＣＣ ＨＴＢ－５５）は、１０％ ＦＣＳ（Ｂｉｏｗｅｓｔ、Ｓ１８１０－６５００）、１００ＩＵ／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン、１×ＧｌｕｔａＭａｘ（Ｇｉｂｃｏ）および１×ピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）を添加したＭＥＭ（Ｓｉｇｍａ）中で培養した。Ｃａｃｏ－２（ＡＴＣＣ ＨＴＢ－３７）は、２０％ ＦＣＳ（Ｂｉｏｗｅｓｔ、Ｓ１８１０－６５００）、１００ＩＵ／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン、１×ＧｌｕｔａＭａｘ（Ｇｉｂｃｏ）および１×非必須アミノ酸溶液（Ｇｉｂｃｏ）を添加したＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）中で増殖させた。全ての細胞は、５％ＣＯ２雰囲気中、３７℃で維持しまたは感染させた。
ＩＡＶ ＤＩＰであるＤＩ２４４およびＯＰ７は、５００ｍＬラボスケールの撹拌タンクバイオリアクターを用いる細胞培養系のプロセスで産生し、続いて以前記載されたように（Ｈｅｉｎら、２０２０）、立体排除クロマトグラフィー（Ｍａｒｉｃｈａｌ－Ｇａｌｌａｒｄｏら、２０１７）によって精製および濃縮した。ＤＩ２４４およびＯＰ７についてそれぞれ、３．３および３．６７ログの赤血球凝集（ＨＡ）単位／１００μＬの産生力価ならびに５．６×１０８および１．１２×１０１１ＤＩ ｖＲＮＡ／ｍＬが達成された。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の分離株ｈＣｏＶ－１９／Ｃｒｏａｔｉａ／ＺＧ－２９７－２０／２０２０を用いた。感染性ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を用いる全ての実験は、Ｈｅｌｍｈｏｌｔｚ Ｃｅｎｔｒｅ ｆｏｒ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）のＢＳＬ－３施設で実施した。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２シードウイルスはＣａｃｏ－２細胞で産生し、ウイルス粒子はＶｉｖａｓｐｉｎ２０カラム（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ Ｓｔｅｄｉｍ，Ｂｉｏｔｅｃｈ）で遠心分離によって富化した。収集したウイルスは－８０℃で保存した。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の力価はプラークアッセイによって定量した。
プラークアッセイ
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の定量は、プラークアッセイによって実施した。試料を１０倍ステップで段階希釈し、Ｖｅｒｏ－６細胞のコンフルエントな単層に（９６ウェルプレート上で）１時間感染させるために用いた。次いで接種材料を除去して、１．５％のメチルセルロースを含む細胞培養培地（ＳＩＧＭＡ、＃Ｃ９４８１－５００）に細胞を重層した。３ｄｐｉで細胞を６％のホルムアルデヒドによって固定し、クリスタルバイオレットで染色した。Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ ＩｎｃｕＣｙｔｅ Ｓ３（４倍対物、全ウェルスキャン）を用いてウェルをイメージングし、プラークカウントを決定した。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の定量は、プラークアッセイによって実施した。試料を１０倍ステップで段階希釈し、Ｖｅｒｏ－６細胞のコンフルエントな単層に（９６ウェルプレート上で）１時間感染させるために用いた。次いで接種材料を除去して、１．５％のメチルセルロースを含む細胞培養培地（ＳＩＧＭＡ、＃Ｃ９４８１－５００）に細胞を重層した。３ｄｐｉで細胞を６％のホルムアルデヒドによって固定し、クリスタルバイオレットで染色した。Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ ＩｎｃｕＣｙｔｅ Ｓ３（４倍対物、全ウェルスキャン）を用いてウェルをイメージングし、プラークカウントを決定した。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染および抗ウイルス処理
９６ウェルプレート中のコンフルエントなＣａｌｕ－３細胞（約６×１０４細胞／ウェル）にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（２０００ＰＦＵ／ウェル）を感染させた。１または２４ｈｐｉで、細胞培養体積１００μＬに対して指示された割合（％ｖ／ｖ）で活性または不活性のＩＡＶ ＤＩＰ（ＤＩ２２４またはＯＰ７）を添加した。指示された場合には常に、０．８μＭのルキソリチニブ（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ、Ｃａｔ．＃Ｃａｙ１１６０９－１）をこれらのウェルにさらに添加した。あるいは、レムデシビルまたはＩＦＮ－β－１Ａを（ＩＡＶ ＤＩＰの代わりに）指示された濃度で、１ｈｐｉで添加した。３ｄｐｉで上清を収集した。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の力価の定量は、プラークアッセイを用いて実施した。
９６ウェルプレート中のコンフルエントなＣａｌｕ－３細胞（約６×１０４細胞／ウェル）にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（２０００ＰＦＵ／ウェル）を感染させた。１または２４ｈｐｉで、細胞培養体積１００μＬに対して指示された割合（％ｖ／ｖ）で活性または不活性のＩＡＶ ＤＩＰ（ＤＩ２２４またはＯＰ７）を添加した。指示された場合には常に、０．８μＭのルキソリチニブ（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ、Ｃａｔ．＃Ｃａｙ１１６０９－１）をこれらのウェルにさらに添加した。あるいは、レムデシビルまたはＩＦＮ－β－１Ａを（ＩＡＶ ＤＩＰの代わりに）指示された濃度で、１ｈｐｉで添加した。３ｄｐｉで上清を収集した。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の力価の定量は、プラークアッセイを用いて実施した。
免疫蛍光染色
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染細胞は、ＰＢＳ中、６％のホルムアルデヒドによって室温、１時間で固定し、続いてＰＢＳで洗浄した。細胞はＰＢＳ中、０．１％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００によって室温、１０分で透徹化し、ＰＢＳで洗浄し、ＰＢＳ中２％のＢＳＡで１時間、ブロックした。抗体標識はマウス抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質（Ａｂｃａｌｉｓ、クローンＡＢ６８－Ａ０９、＃ＡＢＫ６８－Ａ０９－Ｍ）および二次抗体抗マウスＡｌｅｘａ４８８（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、＃４４０８）を用いて実施し、それぞれのステップに続いて０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０を含むＰＢＳで３回洗浄した。最後に、細胞にＶｅｃｔａｓｈｉｅｌｄマウンティング培地（Ｂｉｏｚｏｌ、＃ＶＥＣ－Ｈ－１０００）を重層した。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染細胞は、ＰＢＳ中、６％のホルムアルデヒドによって室温、１時間で固定し、続いてＰＢＳで洗浄した。細胞はＰＢＳ中、０．１％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００によって室温、１０分で透徹化し、ＰＢＳで洗浄し、ＰＢＳ中２％のＢＳＡで１時間、ブロックした。抗体標識はマウス抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質（Ａｂｃａｌｉｓ、クローンＡＢ６８－Ａ０９、＃ＡＢＫ６８－Ａ０９－Ｍ）および二次抗体抗マウスＡｌｅｘａ４８８（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、＃４４０８）を用いて実施し、それぞれのステップに続いて０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０を含むＰＢＳで３回洗浄した。最後に、細胞にＶｅｃｔａｓｈｉｅｌｄマウンティング培地（Ｂｉｏｚｏｌ、＃ＶＥＣ－Ｈ－１０００）を重層した。
結果
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の複製はインビトロでのＩＡＶ ＤＩＰ処理によって無効化される。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の複製に関するＩＡＶ ＤＩＰの潜在的抗ウイルス有効性を試験するため、インビトロ重複感染実験を行なった。このため、９６ウェルプレートで培養したコンフルエントなＣａｌｕ－３細胞（約６０，０００細胞）に、２，０００プラーク形成単位（ＰＦＵ）のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を感染させた。１時間後、ＤＩ２４４およびＯＰ７についてそれぞれ５．６×１０６および１．１２×１０９個の欠陥干渉（ＤＩ）ウイルスＲＮＡ（ｖＲＮＡ）に相当する細胞培養系製造（Ｈｅｉｎら、２０２０）（Ｈｅｉｎら、提示）由来の１０％（ｖ／ｖ、培養体積１００μＬについて）のＤＩ２４４またはＯＰ７の高濃縮ＤＩＰを添加した。感染後３日目（ｄｐｉ）に、細胞表面のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の発現について細胞を染色した。まさに、スパイクタンパク質の発現は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のみを感染させた細胞と比較して、ＤＩ２４４またはＯＰ７で共処理した細胞について顕著に低減しており、ＤＩＰの重複感染によるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の複製の抑制が示された。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の複製はインビトロでのＩＡＶ ＤＩＰ処理によって無効化される。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の複製に関するＩＡＶ ＤＩＰの潜在的抗ウイルス有効性を試験するため、インビトロ重複感染実験を行なった。このため、９６ウェルプレートで培養したコンフルエントなＣａｌｕ－３細胞（約６０，０００細胞）に、２，０００プラーク形成単位（ＰＦＵ）のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を感染させた。１時間後、ＤＩ２４４およびＯＰ７についてそれぞれ５．６×１０６および１．１２×１０９個の欠陥干渉（ＤＩ）ウイルスＲＮＡ（ｖＲＮＡ）に相当する細胞培養系製造（Ｈｅｉｎら、２０２０）（Ｈｅｉｎら、提示）由来の１０％（ｖ／ｖ、培養体積１００μＬについて）のＤＩ２４４またはＯＰ７の高濃縮ＤＩＰを添加した。感染後３日目（ｄｐｉ）に、細胞表面のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の発現について細胞を染色した。まさに、スパイクタンパク質の発現は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のみを感染させた細胞と比較して、ＤＩ２４４またはＯＰ７で共処理した細胞について顕著に低減しており、ＤＩＰの重複感染によるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の複製の抑制が示された。
次に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染した細胞の処理について様々な濃度範囲のＤＩＰを試験した（図１Ａ）。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の複製の読み出しとして、Ｖｅｒｏ細胞（アフリカミドリザル腎上皮細胞）を用い、３ｄｐｉで上清のプラーク力価を決定した。陰性のプラーク力価によって実証されたように、欠陥のある複製不能なＩＡＶ ＤＩＰのみによる感染は子孫ビリオンの放出をもたらさなかったことに留意されたい。驚くべきことに、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の複製はＩＡＶ ＤＩＰの重複感染によって大幅に低減した。特に、両方のＤＩＰについて試験した２つの最大濃度において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のプラーク力価はもはや検出不能となった（検出限界（ＬＯＤ）＝３３ＰＦＵ／ｍＬ）。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の複製の抑制は、ＤＩＰの希釈度の増大とともに低下した。しかし注目すべきことに、１０００倍希釈でのＤＩＰによる処理でも、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の複製の顕著な阻害がもたらされた。比較のため、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染細胞のＩＦＮ－βまたはレムデシビルによる処理を試験した。両方の薬剤も、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のプラーク力価をＬＯＤ未満の特定の濃度まで低下させることができた。しかし阻害効果は希釈度の増大とともに顕著に速く低下し、これはレムデシビルで最も明白に観察された。
図１Ｂは、不活化ＤＩＰによって惹起されるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の阻害を図示する。これらのＤＩＰは、（ＩＡＶの複製に対して）干渉有効性がインビトロでもはや観察されなくなるまで既にＵＶ照射によって処理されており（Ｈｅｉｎら、２０２０）、原因となる干渉物質、即ちＤＩ ｖＲＮＡの完全な不活化を示している。対照的に、不活化ＤＩＰによるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の複製の阻害はそれでも検出可能であった（図１Ｂ）。より具体的には、プラーク力価の残留抑制がまだ観察された。これは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の複製の抑制をもたらした可能性がある不活性なウイルス粒子による先天性免疫の非特異的刺激によって説明され得る。それにも関わらず、活性ＤＩＰによって惹起される阻害がより強いので、これはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の複製への干渉をもたらすＩＡＶ ＤＩＰの特異的活性を示している。最後に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の２４時間後の活性ＤＩＰの投与でさえ、顕著な抗ウイルス効果をもたらしたことが注目される（図１Ｃ）。
結論として、両方のＤＩＰによる処理は、ＩＦＮ－βおよびレムデシビルによる処理と同様に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の複製を完全に無効化した。しかし、ＩＡＶ ＤＩＰの抗ウイルス効果は希釈度の増大とともにより顕著に持続した。
先天性免疫の刺激によって惹起されるＩＡＶ ＤＩＰによるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の複製の阻害
次に、ＤＩＰによるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の複製の阻害がＩＦＮ系を刺激するその能力によって惹起されるという仮説を検討するため、重複感染実験にルキソリチニブを用いた。この小分子薬物は、ＩＦＮ系の重要なエフェクターであるヤーヌスキナーゼ（ＪＡＫ）の効率的な阻害剤である。ＪＡＫは典型的には転写のシグナルトランスデューサーおよびアクチベーター（ＳＴＡＴ）を動員し、究極的にはＩＦＮ刺激遺伝子（ＩＳＧ、ウイルス複製を制限するエフェクター）の上方制御をもたらす。
次に、ＤＩＰによるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の複製の阻害がＩＦＮ系を刺激するその能力によって惹起されるという仮説を検討するため、重複感染実験にルキソリチニブを用いた。この小分子薬物は、ＩＦＮ系の重要なエフェクターであるヤーヌスキナーゼ（ＪＡＫ）の効率的な阻害剤である。ＪＡＫは典型的には転写のシグナルトランスデューサーおよびアクチベーター（ＳＴＡＴ）を動員し、究極的にはＩＦＮ刺激遺伝子（ＩＳＧ、ウイルス複製を制限するエフェクター）の上方制御をもたらす。
図２は、ルキソリチニブによる処理におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２とＩＡＶ ＤＩＰの重複感染の結果を示す。ＤＩＰの重複感染（両方のＤＩＰを２０％および２％の濃度で使用）はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のプラーク力価をアッセイのＬＯＤ（３３ＰＦＵ）付近に低下させた一方、ルキソリチニブによるさらなる処理によって、ＩＡＶ ＤＩＰによって惹起されたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の複製の抑制は完全に無効化された。具体的には、ウイルス力価は、ＤＩＰを含まない（ルキソリチニブも含まない）対照のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染と比較して有意差がなかった。結論として、これらの結果は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の複製の干渉におけるＩＡＶ ＤＩＰによる先天性免疫応答の誘起の主な役割を示唆している。
考察
ＣＯＶＩＤ－１９については新たな抗ウイルス処置のオプションが必要である。本明細書で、細胞培養由来で製造されたＩＡＶ ＤＩＰがＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の複製の強力な阻害剤であることが示される。さらに、インビトロ実験によって、ＩＡＶ ＤＩＰによるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の複製の抑制が、先天性免疫を刺激するそれらの能力に帰せられることが示唆される。
ＣＯＶＩＤ－１９については新たな抗ウイルス処置のオプションが必要である。本明細書で、細胞培養由来で製造されたＩＡＶ ＤＩＰがＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の複製の強力な阻害剤であることが示される。さらに、インビトロ実験によって、ＩＡＶ ＤＩＰによるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の複製の抑制が、先天性免疫を刺激するそれらの能力に帰せられることが示唆される。
ＣＯＶＩＤ－１９についての承認済みの抗ウイルス処置オプションは、極めて限定的な有効性しか示していない。例えば、ポリメラーゼ阻害剤であるレムデシビルによる処置は、臨床試験で死亡率の全体の低下をもたらさなかった（Ｂｅｉｇｅｌら、２０２０、Ｐａｎら、２０２０）。しかし、酸素補給を受けた患者については、約１２～約４％の生存率の改善が観察された（Ｂｅｉｇｅｌら、２０２０）。さらに、ＣＯＶＩＤ－１９の患者の回復に必要な期間が５日短縮された（Ｂｅｉｇｅｌら、２０２０）。別の戦略は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質の受容体結合ドメインを標的とし、それにより、宿主細胞の進入受容体であるアンギオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）との係合を阻害するモノクローナル抗体の使用を含む。ウイルス逃避バリアントの出現を防止するために抗体カクテルを使用することが提案された。臨床試験において、そのような抗体カクテル（即ちバムラニビマブによる外来患者の処置がウイルス負荷の減少を加速し、入院を必要とする患者の割合を６．３％から１．６％に低減させた（Ｃｈｅｎら、２０２０ｂ）。コルチコステロイドであるデキサメタゾンの臨床使用により、極めて重いＣＯＶＩＤ－１９患者において全体として低い死亡率がもたらされる（例えばＨｏｒｂｙら、２０２０）。しかしこれは警告を有している。それは、死亡率の低下は酸素（機械的換気を含む）を必要とする患者で観察されたが、酸素を必要としない患者で死亡率の増加が観察されたからである。
現在のところ、ＩＦＮによるＣＯＶＩＤ－１９の患者の処置はまだ承認されていない。一般に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染はＩＦＮ応答を調節し、阻害する（例えばＣｈｅｎら、２０２０ａ）。さらに、宿主細胞の進入受容体であるＡＣＥ２がまさにＩＳＧであることが最近示され、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２がＩＦＮによって駆動されるＡＣＥ２の上方制御を利用して感染を増進させる可能性が推測された。しかし、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の複製は外部から加えられたＩＦＮによる阻害を受けやすいことも示された。例えば、全てのＩＦＮ（Ｉ型、ＩＩ型、およびＩＩＩ型）はインビトロでＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の複製に対する強力な抗ウイルス活性を呈し、ＩＦＮの抗ウイルス活性はＡＣＥ２の誘起に由来するいずれのプロウイルス効果をも相殺し得ることを示唆している。これと一致して、プラセボ対照第２相臨床試験において、霧化された吸入ＩＦＮベータ－１ａの投与は、疾患の改善のより高い機会およびＣＯＶＩＤ－１９からのより速い回復をもたらした（Ｍｏｎｋら、２０２０）。
本発明者らのインビトロ研究において、ＩＡＶ ＤＩＰはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の複製を完全に無効化した。しかし、ＵＶ照射した不活性のＤＩＰ材料も残存阻害効果を示した。それにも関わらず、活性ＤＩＰによる処理に際してのより強い抗ウイルス効果の観察は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の抑制に関するＩＡＶ ＤＩＰの特異的活性を暗示している。ＤＩＰはウイルス複製に欠陥があり、その感染は完全な感染サイクルをもたらすことができない。しかし、ウイルスのリボヌクレオプロテイン（ｖＲＮＰ）複合体にパッケージされた進入ゲノムｖＲＮＡは、それでもポリメラーゼ活性を示し、転写されてウイルスｍＲＮＡを産生することができる。特に、短いＤＩ ｖＲＮＡには（およびおそらく得られる短いＤＩ ｍＲＮＡにも）、レチノイン酸誘導性遺伝子Ｉ（ＲＩＧ－Ｉ）タンパク質が優先的に結合し、これが続いてＩＦＮ応答の活性化をもたらすことが示された。
本結果は、ＩＡＶ ＤＩＰが他の多くの異種ＩＦＮ感受性呼吸器系ウイルスに対して、特にＣＯＶＩＤ－１９の処置に対して保護するであろうという概念を支持するものである。
Claims (23)
- 個体におけるコロナウイルス科の感染の予防的または治療的な処置における使用のためのインフルエンザウイルス欠陥干渉粒子（ＤＩＰ）。
- インフルエンザＡウイルス欠陥干渉粒子である、請求項１に記載の使用のためのインフルエンザウイルス欠陥干渉粒子。
- オルソコロナウイルス亜科、特にベータコロナウイルス科の予防的または治療的な処置のための請求項１または２に記載の使用のためのインフルエンザウイルス欠陥干渉粒子。
- ｉ）サルベコウイルス、特に重症急性呼吸器症候群関連のコロナウイルスまたはｉｉ）中東呼吸器症候群関連のコロナウイルスを含むメルベコウイルスによる感染の防止または処置のための、請求項１から３のいずれか一項に記載の使用のためのインフルエンザウイルス欠陥干渉粒子。
- コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）感染に関連する重症急性呼吸器症候群の予防的または治療的な処置における、請求項１から４のいずれか一項に記載の使用のためのインフルエンザウイルス欠陥干渉粒子。
- 欠陥干渉インフルエンザＡウイルスが、
ｉ）インフルエンザＡウイルスのセグメント１の核酸配列が
ａ．配列番号１もしくは配列番号２から収集される配列；または
ｂ．配列番号１もしくは配列番号２と少なくとも９９％の同一性を有する核酸配列
を含むか、あるいは
ｉｉ）核酸配列が、配列番号４の野生型配列と比較して以下の置換：Ｃ３Ｔ、Ｇ４Ａ、Ｇ８Ａ、Ａ１００Ｇ、Ｇ１１３Ａ、Ｇ１３０Ａ、Ｇ２４０Ａ、Ａ２４１Ｇ、Ｃ３３４Ｔ、Ｃ３５３Ｔ、Ｃ３６１Ｔ、Ｃ３７０Ａ、Ｔ３７１Ｇ、Ｔ３８５Ｃ、Ａ４０１Ｔ、Ｇ４３４Ａ、Ｃ４４２Ｔ、Ａ４４３Ｇ、Ｃ４５３Ｔ、Ａ４５４Ｇ、Ａ５２４Ｇ、Ｔ６４３Ｇ、Ｇ６４５Ｔ、Ａ６４８Ｇ、Ａ６６７Ｇ、Ｇ６７０Ａ、Ａ７１６Ｇ、Ｃ７９３Ｔ、Ｇ８０１Ｔ、Ａ８０５Ｇ、Ｇ８７４Ｔ、Ａ８８７Ｔ、Ｃ８８８Ｔ、Ｇ８９４Ａ、Ｇ９４３Ａ、Ａ１８Ｇ、およびＣ５３５Ｔを含む配列番号３、または配列番号３の配列と９９％より大きな同一性を有する核酸配列を含む、ウイルスである、請求項２から５のいずれか一項に記載の使用のためのインフルエンザＡウイルス欠陥干渉粒子。 - 核酸配列が、配列番号３または配列番号３の配列と９９％より大きな同一性を有する核酸配列を含む、請求項６に記載の使用のためのインフルエンザＡウイルス欠陥干渉粒子。
- 請求項１から４のいずれか一項で定義した、個体におけるコロナウイルス科の感染の治療的または予防的な処置における使用のための、請求項１から７のいずれか一項に記載の使用のためのインフルエンザウイルス欠陥粒子を含む医薬組成物。
- 液滴スプレイまたはネブライザーによる呼吸管への投与等の粘膜投与のための医薬組成物である、請求項８に記載の医薬組成物。
- 鼻内投与のための、請求項８から９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 個体におけるウイルスに対する先天性免疫の刺激における使用のための、請求項８から１０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 特に請求項１から７のいずれか一項で定義したウイルス感染に対する処置または保護における使用のための、請求項１から７のいずれか一項で定義したインフルエンザウイルス欠陥干渉粒子を含む組成物もしくはキット、または請求項８から１１のいずれか一項で定義した医薬組成物。
- 前記ウイルス粒子が感染後に、
ｉ）ウイルス粒子の全数の低減、
ｉｉ）産生される感染性ウイルスの割合の大幅な低減、
ｉｉｉ）Ｉ型ＩＦＮの発現によって表される先天性免疫応答のより強い誘起が観察可能
のうち少なくとも１つを示す、請求項１から７のいずれか一項に記載の使用のためのインフルエンザウイルス欠陥干渉粒子。 - 処置される個体が動物またはヒトであり、特に動物がネコ、フェレット、イヌ、またはミンクから選択されることを特徴とする、請求項１から７のいずれか一項に記載の使用のためのインフルエンザウイルス欠陥干渉粒子。
- 請求項１から７のいずれか一項で定義した有効量のＤＩＰまたは前記ＤＩＰを含む医薬組成物を、治療的または予防的な処置を必要とする個体に投与するステップを含む、前記個体におけるコロナウイルス科のウイルス感染を治療的または予防的に処置する方法。
- 有効量のＤＩＰの投与が、粘膜投与、特に液滴スプレイまたはネブライザーによる呼吸管への粘膜投与である、請求項１５に記載のコロナウイルス科のウイルス感染を治療的または予防的に処置する方法。
- 有効量のＤＩＰの投与が鼻内投与によるものである、請求項１５に記載の個体におけるコロナウイルス科のウイルス感染を治療的または予防的に処置する方法。
- 有効量のインフルエンザＡウイルスのＤＩＰ、特に請求項６または７のいずれか一項で定義したインフルエンザＡウイルスのＤＩＰを投与するステップを含む、個体におけるコロナウイルス属のウイルス感染を治療的または予防的に処置する方法。
- 有効量のＩＡＶ ＤＩＰ、特にＤＩ２４４およびＯＰ７のＤＩＰを投与するステップを含む、請求項１５から１８のいずれか一項に記載のウイルス感染を治療的または予防的に処置する方法。
- ＤＩＰが、個体がコロナウイルス科に感染したか、または感染したと疑われた時点から１２時間以内、２４時間以内等に投与される、コロナウイルス科に感染したと疑われるか感染した個体を処置するための、請求項１５から１９のいずれか一項に記載の方法。
- 個体におけるコロナウイルス科のウイルス感染を予防的に処置する請求項１５から１９のいずれか一項に記載の方法であって、ＤＩＰの投与が、ウイルスへの起こり得る曝露の前１～２週以内に行なわれる、方法。
- ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２を含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ、サルベコウイルス、特に重症急性呼吸器症候群関連のコロナウイルスまたは中東呼吸器症候群関連のコロナウイルスを含むメルベコウイルスに対する個体の予防的または治療的な処置のための、請求項１５から２１のいずれか一項に記載の方法。
- 治療有効量のＤＩＰ ＤＩ２４４またはＤＩＰ ＯＰ７を投与するステップを含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ ２感染を治療的または予防的に処置するための、請求項１５から２２のいずれか一項に記載の方法。
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