JP2024506931A - Ｄｒ５結合性ポリペプチドの製剤 - Google Patents

Abstract

ＤＲ５結合性ポリペプチドの製剤を本明細書で提供する。ＤＲ５結合性ポリペプチドの使用も提供する。

Description

［関連出願の相互参照］
本願は、２０２１年２月１９日付で出願された米国仮出願第６３／１５１，１３１号の優先権の利益を主張し、その全体があらゆる目的で引用することにより本明細書の一部をなす。

本発明は、ＤＲ５結合性タンパク質の製剤及び製剤を使用する方法に関する。そのような方法としては、癌を治療する方法が挙げられるが、これに限定されない。

ＤＲ５は、ＴＮＦ受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲＳＦ）のメンバーであり、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）に結合するＴＮＦ受容体スーパーファミリーの細胞表面受容体である。ＴＲＡＩＬは、健康な細胞集団から不要な細胞、感染細胞及び悪性細胞を選択的に除去することにより、哺乳動物の発生及び宿主防御において重要な役割を果たすように進化した。ＴＲＡＩＬは、ＴＮＦ受容体ファミリーのメンバーであるＤＲ４又はＤＲ５に結合することで、カスパーゼ依存性アポトーシスにより細胞死を誘導する。ＤＲ５は、ＴＲＡＩＬ経路で観察される腫瘍偏向活性を促進する腫瘍細胞上の主要な受容体のようである。ＤＲ５は、天然のリガンドＴＲＡＩＬによって活性化され、３つのＤＲ５受容体を近接させることで、細胞内カスパーゼ－８を活性化し、カスパーゼ－９及びカスパーゼ－３等の他の細胞死誘導カスパーゼの活性化を開始する。このため、この細胞死経路の開始には、効率的な細胞死のためのＤＲ５受容体のクラスター化が必要とされる。

直接的な細胞死を媒介するＤＲ５シグナル伝達をアゴナイズすることが可能な多価ＤＲ５結合性ポリペプチドの安定した液体医薬製剤及び凍結乾燥医薬製剤、並びに癌の治療のための医薬製剤の使用が本明細書で提供される。

実施の形態１． ＤＲ５結合性ポリペプチドを含む医薬製剤であって、該製剤が２０ｍｇ／ｍＬ～７０ｍｇ／ｍＬのＤＲ５結合性ポリペプチド、５ｍＭ～２０ｍＭのヒスチジン、７％～１０％（ｗ／ｖ）のスクロース及び０．１％～０．８％のポロキサマーＰ１８８を含み、ｐＨ５．３～６．７であり、ＤＲ５結合性ポリペプチドが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む少なくとも１つのＶＨＨドメインを含む、医薬製剤。
実施の形態２． ３０ｍｇ／ｍＬ～６０ｍｇ／ｍＬのＤＲ５結合性ポリペプチドを含む、実施の形態１の医薬製剤。
実施の形態３． ５０ｍｇ／ｍＬのＤＲ５結合性ポリペプチドを含む、実施の形態１の医薬製剤。
実施の形態４． ７ｍＭ～１５ｍＭのヒスチジンを含む、実施の形態１～３のいずれか１つの医薬製剤。
実施の形態５． １０ｍＭのヒスチジンを含む、実施の形態１～３のいずれか１つの医薬製剤。
実施の形態６． ヒスチジンがヒスチジンＨＣｌである、実施の形態１～５のいずれか１つの医薬製剤。
実施の形態７． ８％～９％のスクロースを含む、実施の形態１～６のいずれか１つの医薬製剤。
実施の形態８． ８％のスクロース又は９％のスクロースを含む、実施の形態１～７のいずれか１つの医薬製剤。
実施の形態９． ０．２％～０．４％のポロキサマーＰ１８８を含む、実施の形態１～８のいずれか１つの医薬製剤。
実施の形態１０． ０．２％のポロキサマーＰ１８８を含む、実施の形態１～９のいずれか１つの医薬製剤。
実施の形態１１． １ｍＭ～１０ｍＭ、２ｍＭ～８ｍＭ、３ｍＭ～７ｍＭ又は４ｍＭ～６ｍＭのメチオニンを含む、実施の形態１～１０のいずれか１つの医薬製剤。
実施の形態１２． ５ｍＭのメチオニンを含む、実施の形態１～１１のいずれか１つの医薬製剤。
実施の形態１３． 製剤のｐＨが５．４～６．６、５．５～６．５、５．６～６．４、５．７～６．３又は５．８～６．２である、実施の形態１～１２のいずれか１つの医薬製剤。
実施の形態１４． 製剤のｐＨが約６である、実施の形態１～１３のいずれか１つの医薬製剤。
実施の形態１５． 製剤が５０ｍｇ／ｍＬのＤＲ５結合性ポリペプチド、１０ｍＭのヒスチジンＨＣｌ、８％のスクロース及び０．２％のポロキサマーＰ１８８を含み、製剤のｐＨが約６である、実施の形態１～１４のいずれか１つの医薬製剤。
実施の形態１６． 製剤が本質的に５０ｍｇ／ｍＬのＤＲ５結合性ポリペプチド、１０ｍＭのヒスチジンＨＣｌ、８％のスクロース、０．２％のポロキサマーＰ１８８及び水からなり、製剤のｐＨが約６である、実施の形態１５の医薬製剤。
実施の形態１７． ＤＲ５結合性ポリペプチドが、配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＨＨドメインを含む、実施の形態１～１６のいずれか１つの医薬製剤。
実施の形態１８． ＤＲ５結合性ポリペプチドがＦｃ領域を含む、実施の形態１～１７のいずれか１つの医薬製剤。
実施の形態１９． Ｆｃ領域が配列番号６のアミノ酸配列を含む、実施の形態１８の医薬製剤。
実施の形態２０． ＤＲ５結合性ポリペプチドがＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ－リンカー－Ｆｃの構造を有する、実施の形態１～１９のいずれか１つの医薬製剤。
実施の形態２１． ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨが配列番号５のアミノ酸配列を含む、実施の形態２０の医薬製剤。
実施の形態２２． ＤＲ５結合性ポリペプチドが配列番号７のアミノ酸配列を含む、実施の形態１～２１のいずれか１つの医薬製剤。
実施の形態２３． ＤＲ５結合性ポリペプチドが配列番号７のアミノ酸配列からなる、実施の形態１～２１のいずれか１つの医薬製剤。
実施の形態２４． ＤＲ５結合性ポリペプチドを含む凍結乾燥製剤であって、ＤＲ５結合性ポリペプチドが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む少なくとも１つのＶＨＨドメインを含み、該凍結乾燥製剤を水中で再構成して水性製剤を形成すると、該水性製剤が２０ｍｇ／ｍＬ～７０ｍｇ／ｍＬのＤＲ５結合性ポリペプチド、５ｍＭ～２０ｍＭのヒスチジン、７％～１０％のスクロース及び０．１％～０．５％のポロキサマーＰ１８８を含み、ｐＨ５．３～６．７である、凍結乾燥製剤。
実施の形態２５． 製剤を水中で再構成して水性製剤を形成すると、該水性製剤が３０ｍｇ／ｍＬ～６０ｍｇ／ｍＬのＤＲ５結合性ポリペプチドを含む、実施の形態２４の凍結乾燥製剤。
実施の形態２６． 製剤を水中で再構成して水性製剤を形成すると、該水性製剤が５０ｍｇ／ｍＬのＤＲ５結合性ポリペプチドを含む、実施の形態２４の凍結乾燥製剤。
実施の形態２７． 製剤を水中で再構成して水性製剤を形成すると、該水性製剤が７ｍＭ～１５ｍＭのヒスチジンを含む、実施の形態２４～２６のいずれか１つの凍結乾燥製剤。
実施の形態２８． 製剤を水中で再構成して水性製剤を形成すると、該水性製剤が１０ｍＭのヒスチジンを含む、実施の形態２４～２６のいずれか１つの凍結乾燥製剤。
実施の形態２９． ヒスチジンがヒスチジンＨＣｌである、実施の形態２４～２８のいずれか１つの凍結乾燥製剤。
実施の形態３０． 凍結乾燥製剤を水中で再構成して水性製剤を形成すると、該水性製剤が８％～９％のスクロースを含む、実施の形態２４～２９のいずれか１つの凍結乾燥製剤。
実施の形態３１． 製剤を水中で再構成して水性製剤を形成すると、該水性製剤が８％のスクロース又は９％のスクロースを含む、実施の形態２４～３０のいずれか１つの凍結乾燥製剤。
実施の形態３２． 製剤を水中で再構成して水性製剤を形成すると、該水性製剤が０．２％～０．４％のポロキサマーＰ１８８を含む、実施の形態２４～３１のいずれか１つの凍結乾燥製剤。
実施の形態３３． 製剤を水中で再構成して水性製剤を形成すると、該水性製剤が０．２％のポロキサマーＰ１８８を含む、実施の形態２４～３２のいずれか１つの凍結乾燥製剤。
実施の形態３４． 製剤を水中で再構成して水性製剤を形成すると、該水性製剤が１ｍＭ～１０ｍＭ、２ｍＭ～８ｍＭ、３ｍＭ～７ｍＭ又は４ｍＭ～６ｍＭのメチオニンを含む、実施の形態２４～３３のいずれか１つの凍結乾燥製剤。
実施の形態３５． 製剤を水中で再構成して水性製剤を形成すると、該水性製剤が５ｍＭのメチオニンを含む、実施の形態２４～３３のいずれか１つの凍結乾燥製剤。
実施の形態３６． 製剤を水中で再構成して水性製剤を形成すると、該水性製剤のｐＨが５．４～６．６、５．５～６．５、５．６～６．４、５．７～６．３又は５．８～６．２である、実施の形態２４～３５のいずれか１つの凍結乾燥製剤。
実施の形態３７． 製剤を水中で再構成して水性製剤を形成すると、該水性製剤のｐＨが約６である、実施の形態２４～３５のいずれか１つの凍結乾燥製剤。
実施の形態３８． 製剤を水中で再構成して水性製剤を形成すると、該水性製剤が５０ｍｇ／ｍＬのＤＲ５結合性ポリペプチド、１０ｍＭのヒスチジンＨＣｌ、８％のスクロース及び０．２％のポロキサマーＰ１８８を含み、ｐＨ約６である、実施の形態２４～３７のいずれか１つの凍結乾燥製剤。
実施の形態３９． 製剤を水中で再構成して水性製剤を形成すると、該水性製剤が本質的に５０ｍｇ／ｍＬのＤＲ５結合性ポリペプチド、１０ｍＭのヒスチジンＨＣｌ、８％のスクロース、０．２％のポロキサマーＰ１８８及び水からなり、製剤のｐＨが約６である、実施の形態２８の凍結乾燥製剤。
実施の形態４０． ＤＲ５結合性ポリペプチドが、配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＨＨドメインを含む、実施の形態２４～３９のいずれか１つの凍結乾燥製剤。
実施の形態４１． ＤＲ５結合性ポリペプチドがＦｃ領域を含む、実施の形態２４～４０のいずれか１つの凍結乾燥製剤。
実施の形態４２． Ｆｃ領域が配列番号６のアミノ酸配列を含む、実施の形態４１の凍結乾燥製剤。
実施の形態４３． ＤＲ５結合性ポリペプチドがＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ－リンカー－Ｆｃの構造を有する、実施の形態２４～４２のいずれか１つの凍結乾燥製剤。
実施の形態４４． ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨが配列番号５のアミノ酸配列を含む、実施の形態４３の凍結乾燥製剤。
実施の形態４５． ＤＲ５結合性ポリペプチドが配列番号７のアミノ酸配列を含む、実施の形態２４～４４のいずれか１つの凍結乾燥製剤。
実施の形態４６． ＤＲ５結合性ポリペプチドが配列番号７のアミノ酸配列からなる、実施の形態２４～４４のいずれか１つの凍結乾燥製剤。
実施の形態４７． 実施の形態１～２３のいずれか１つの医薬製剤を凍結乾燥することによって形成される凍結乾燥製剤。
実施の形態４８． ２℃～８℃で最大３ヶ月、最大６ヶ月、最大９ヶ月、最大１２ヶ月又は１２ヶ月超にわたって保存した後に、凍結乾燥製剤が、目に見える不純物を全く含まないオフホワイト色の均一で見事なケーキである、実施の形態２４～４７のいずれか１つの凍結乾燥製剤。
実施の形態４９． ２℃～８℃で最大３ヶ月、最大６ヶ月、最大９ヶ月、最大１２ヶ月又は１２ヶ月超にわたって保存した後に、製剤を水中で再構成して水性製剤を形成すると、該水性製剤が実質的に目に見える粒子を含まない、実施の形態２４～４８のいずれか１つの凍結乾燥製剤。
実施の形態５０． ２℃～８℃で最大３ヶ月、最大６ヶ月、最大９ヶ月、最大１２ヶ月又は１２ヶ月超にわたって保存した後に、製剤を水中で再構成して水性製剤を形成すると、サイズ排除クロマトグラフィーによって測定して、水性製剤中に存在するＤＲ５結合性ポリペプチドの３％未満又は２％未満が凝集している、実施の形態２４～４９のいずれか１つの凍結乾燥製剤。
実施の形態５１． サイズ排除クロマトグラフィーによって測定して、水性製剤中に存在するＤＲ５結合性ポリペプチドの１％未満又は０．５％未満が分解されている、実施の形態５０の凍結乾燥製剤。
実施の形態５２． 実施の形態２４～５１のいずれか１つの凍結乾燥製剤を再構成することによって形成される医薬製剤。
実施の形態５３． 癌を有する被験体に実施の形態１～２３及び５２のいずれか１つの医薬製剤を投与することを含む、癌を治療する方法。
実施の形態５４． 癌が軟骨肉腫、中皮腫、ユーイング肉腫、大腸癌又は膵臓腺癌である、実施の形態５３の方法。

本明細書に示される実施形態は、ＤＲ５結合性ポリペプチドの製剤、及び例えば、癌を治療する様々な方法におけるそれらの使用に関する。

定義及び様々な実施形態
本明細書に使用されるセクションの見出しは編成のみを目的とし、記載される主題を限定すると解釈されるものではない。

特許出願、特許公報、及びＧｅｎｂａｎｋアクセッション番号を含む本明細書で引用される全ての参考文献は、各個別の参考文献が、引用することによりその全体が本明細書の一部をなすと具体的かつ個別に示されているかのように、引用することにより本明細書の一部をなす。

本明細書に記載又は参照される技術及び手順は、一般に十分に理解されており、通常、例えば、Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3rd. edition (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.、CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY (F. M. Ausubel, et al. eds., (2003))、METHODS IN ENZYMOLOGY (Academic Press, Inc.)のシリーズ、PCR 2: A PRACTICAL APPROACH (M. J. MacPherson, B. D. Hames and G. R. Taylor eds. (1995))、Harlow and Lane, eds. (1988) ANTIBODIES, A LABORATORY MANUAL、及びANIMAL CELL CULTURE (R. I. Freshney, ed. (1987))、Oligonucleotide Synthesis (M. J. Gait, ed., 1984)、Methods in Molecular Biology, Humana Press、Cell Biology: A Laboratory Notebook (J. E. Cellis, ed., 1998) Academic Press、Animal Cell Culture (R. I. Freshney, ed., 1987)、Introduction to Cell and Tissue Culture (J. P. Mather and P. E. Roberts, 1998) Plenum Press、Cell and Tissue Culture Laboratory Procedures (A. Doyle, J. B. Griffiths, and D. G. Newell eds., 1993-8) J. Wiley and Sons、Handbook of Experimental Immunology (D. M. Weir and C. C. Blackwell, eds.）、Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J. M. Miller and M. P. Calos, eds., 1987)、PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al., eds., 1994）、Current Protocols in Immunology (J. E. Coligan et al., eds., 1991)、Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999)、Immunobiology (C. A. Janeway and P. Travers, 1997)、Antibodies (P. Finch, 1997)、Antibodies: A Practical Approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989)、Monoclonal Antibodies: A Practical Approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000)、Using Antibodies: A Laboratory Manual (E. Harlow and D. Lane, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999)、The Antibodies (M. Zanetti and J. D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995)、及びCancer: Principles and Practice of Oncology (V. T. DeVita et al., eds., J.B. Lippincott Company, 1993)並びにそれらの最新版に記載される広く利用されている方法論等の当業者による慣例的な方法論を用いて使用される。

別段の規定がない限り、本開示に関連して使用される科学用語及び技術用語は、当業者によって一般に理解される意味を有するものとする。さらに、文脈により別段の要求がない限り、又は明白に特段の指示がない限り、単数名辞は複数を含み、複数名辞は単数を含むものとする。様々な出典又は参考文献の間での定義の矛盾については、本明細書に示される定義が優先される。

一般に、免疫グロブリン重鎖における残基の番号付けは、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)でのようなＥＵインデックスの番号付けである。「KabatでのようなＥＵインデックス」は、ヒトＩｇＧ１ ＥＵ抗体の残基番号付けを指す。

本明細書に記載される本発明の実施形態は、実施形態「からなる（consisting）」もの及び／又は実施形態「から本質的になる（consisting essentially of）」ものを含むと理解される。本明細書において使用される場合、単数形（"a", "an", and "the"）は、特段の指示がない限り複数の参照を含む。本明細書での「又は」という用語の使用は、選択肢が互いに排他的であることを意味すると解釈されない。

本出願において、「又は」の使用は、明白に特段の指定がない限り又は当業者によって理解されない限り、「及び／又は」を意味する。多項従属請求項の文脈では、「又は」の使用は、２項以上の先の独立請求項又は従属請求項を引用する。

「参照サンプル」、「参照細胞」、又は「参照組織」という語句は、少なくとも１つの未知の特徴を有するサンプルとの比較として使用され得る少なくとも１つの既知の特徴を有するサンプルを示す。幾つかの実施形態において、参照サンプルは、陽性又は陰性の指標として使用され得る。参照サンプルを使用することで、未知の特徴を有するサンプル中に存在するタンパク質及び／又はｍＲＮＡのレベルに対して、例えば、健康な組織中に存在するタンパク質及び／又はｍＲＮＡのレベルを確立することができる。幾つかの実施形態において、参照サンプルは、同じ被験体に由来するが、試験される部分とは異なる被験体の部分に由来するサンプルである。幾つかの実施形態において、参照サンプルは、癌を取り囲む又は癌に隣接する組織領域に由来するサンプルである。幾つかの実施形態において、参照サンプルは、試験される被験体に由来するものではなく、対象の障害（例えば、特定の癌又はＤＲ５関連障害）を有する又は有しないことが既知の被験体に由来するサンプルである。幾つかの実施形態において、参照サンプルは、同じ被験体に由来するものであるが、被験体が癌を発症する前の時点でのサンプルである。幾つかの実施形態において、参照サンプルは、同じ被験体又は異なる被験体からの良性癌サンプルに由来するサンプルである。比較のために陰性参照サンプルが使用される場合に、陰性参照サンプルにおける対象の分子の発現レベル又は量は、当業者が本開示を考慮して、該分子が存在しない及び／又は低いレベルの該分子が存在することを認識するレベルを示す。比較のために陽性参照サンプルが使用される場合に、陽性参照サンプルにおける対象の分子の発現レベル又は量は、当業者が本開示を考慮して、或るレベルの該分子が存在することを認識するレベルを示す。

治療剤の投与から恩恵を受ける又は治療剤の投与に応答するという文脈において本明細書において使用される「便益」、「臨床的便益」、「応答性」、及び「治療的応答性」という用語は、様々なエンドポイント、例えば、減速及び完全な停止を含む疾患進行の或る程度の阻害、疾患エピソード及び／又は症状の数の減少、病変サイズの縮小、隣接する末梢器官及び／又は末梢組織内への疾患細胞浸潤の阻害（すなわち、減少、減速、又は完全な停止）、病気蔓延の阻害（すなわち、減少、減速、又は完全な停止）、障害に関連する１つ以上の症状の或る程度の軽減、治療後の無病提示、例えば無増悪生存期間の長さの増加、全生存期間の延長、より高い奏効率、及び／又は治療後の所与の時点での死亡率の低下を評価することによって推し量ることができる。「非応答性」又は「応答しない」被験体又は癌は、「応答する」という上記の条件を満たさないものである。

「核酸分子」、「核酸」、及び「ポリヌクレオチド」という用語は、区別なく使用され、ヌクレオチドのポリマーを指し得る。そのようなヌクレオチドのポリマーは、天然及び／又は非天然のヌクレオチドを含み、限定されるものではないが、ＤＮＡ、ＲＮＡ、及びＰＮＡを含み得る。「核酸配列」は、核酸分子又はポリヌクレオチドに含まれるヌクレオチドの線状配列を指す。

「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指すために区別なく使用され、最小の長さに限定されない。そのようなアミノ酸残基のポリマーは、天然又は非天然のアミノ酸残基を含み、限定されるものではないが、ペプチド、オリゴペプチド、アミノ酸残基の二量体、三量体、及び多量体を含み得る。この定義には、完全長タンパク質及びその断片の両方が含まれる。これらの用語はまた、ポリペプチドの発現後修飾、例えば、グリコシル化、シアル化、アセチル化、リン酸化等を含む。さらに、本開示の目的で、「ポリペプチド」は、タンパク質が所望の活性を維持する限り、天然配列に対する欠失、付加、及び置換等の修飾（一般に性質について保存的）を含むタンパク質を指す。これらの修飾は、部位特異的突然変異誘発によるような意図的なものであってもよく、又はタンパク質を産生する宿主の突然変異若しくはＰＣＲ増幅によるエラーによるような偶発的なものであってもよい。

本明細書において使用される場合、「ＤＲ５」、「細胞死受容体５」及び「ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ」という用語は、細胞内でのＤＲ５前駆体のプロセシングから生ずるあらゆる天然の成熟ＤＲ５を指す。この用語は、特段の指示がない限り、霊長類（例えば、ヒト及びカニクイザル又はアカゲザル）及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）等の哺乳動物を含むあらゆる脊椎動物起源からのＤＲ５を含む。この用語はまた、スプライス変異体又はアレル変異体等のＤＲ５の天然に存在する変異体を含む。非限定的な例示的な前駆体ヒトＤＲ５アミノ酸配列は、例えば、ＮＣＢＩアクセッション番号ＮＰ＿００３８３３．４に示されている。配列番号８を参照されたい。非限定的な例示的な前駆体ヒトＤＲ５アミノ酸配列は、例えば配列番号９に示されている。

抗原又はエピトープに「特異的に結合する」という用語は、当該技術分野で十分に理解されている用語であり、そのような特異的な結合を決定する方法も当該技術分野で既知である。別の細胞又は物質と反応又は会合するよりも特定の細胞又は物質とより頻繁に、より迅速に、より長い持続時間及び／又はより高い親和性で反応又は会合する場合に、分子は「特異的な結合」又は「優先的な結合」を示すと言及される。シングルドメイン抗体（ｓｄＡｂ）又はＶＨＨ含有ポリペプチドは、他の物質に結合するよりも高い親和性、アビディティーで、より容易に、及び／又はより長い持続時間で結合する場合に、標的に「特異的に結合」又は「優先的に結合」する。例えば、ＤＲ５エピトープに特異的に又は優先的に結合するｓｄＡｂ又はＶＨＨ含有ポリペプチドは、他のＤＲ５エピトープ又は非ＤＲ５エピトープに結合するよりも高い親和性、アビディティーで、より容易に、及び／又はより長い持続時間でこのエピトープと結合するｓｄＡｂ又はＶＨＨ含有ポリペプチドである。また、この定義を解釈することにより、例えば、第１の標的に特異的又は優先的に結合するｓｄＡｂ又はＶＨＨ含有ポリペプチドが、第２の標的に特異的又は優先的に結合し得る又は結合し得ないことも理解される。したがって、「特異的な結合」又は「優先的な結合」は、排他的な結合を（含み得るものの）必ずしも必要としない。一般に、必ずしもそうとは限らないが、結合への言及は優先的な結合を意味する。「特異性」は、結合性タンパク質が抗原に選択的に結合する能力を指す。

「阻害」又は「阻害する」という用語は、任意の表現型特徴の減少若しくは停止、又はその特徴の発生率、程度、若しくは可能性の減少若しくは停止を指す。「低減する」又は「阻害する」とは、参照と比較して、活性、機能、及び／又は量を減少させる、低減する、又は停止することである。幾つかの実施形態において、「低減する」又は「阻害する」とは、１０％以上の全体的な減少を引き起こす能力を意味する。幾つかの実施形態において、「低減する」又は「阻害する」とは、５０％以上の全体的な減少を引き起こす能力を意味する。幾つかの実施形態において、「低減する」又は「阻害する」とは、７５％、８５％、９０％、９５％以上の全体的な減少を引き起こす能力を意味する。幾つかの実施形態において、上記の量は、或る期間にわたって、同じ期間にわたる対照に対して阻害又は減少される。

本明細書において使用される場合、「エピトープ」という用語は、抗原結合分子（例えば、ｓｄＡｂ又はＶＨＨ含有ポリペプチド）が結合する標的分子（例えば、タンパク質、核酸、炭水化物、又は脂質等の抗原）上の部位を指す。エピトープは、しばしば、アミノ酸、ポリペプチド、又は糖側鎖等の分子の化学的に活性な表面編成物を含み、特定の三次元構造的特徴及び特定の電荷特徴を有する。エピトープは、標的分子の連続残基及び／又は並置された非連続残基（例えば、アミノ酸、ヌクレオチド、糖、脂質部分）の両方から形成され得る。連続残基（例えば、アミノ酸、ヌクレオチド、糖、脂質部分）から形成されるエピトープは、通常、変性溶剤への曝露で保持されるが、三次フォールディングにより形成されるエピトープは、通常、変性溶剤による処理で失われる。エピトープは、限定されるものではないが、少なくとも３個、少なくとも５個、又は８個～１０個の残基（例えば、アミノ酸又はヌクレオチド）を含み得る。幾つかの実施形態において、エピトープは、２０残基（例えば、アミノ酸又はヌクレオチド）未満、１５残基未満、又は１２残基未満の長さである。２つの抗体は、それらが抗原に対して競合的結合を示す場合に、抗原内の同じエピトープに結合し得る。幾つかの実施形態において、エピトープは、抗原結合分子上のＣＤＲ残基との或る特定の最小距離によって特定され得る。幾つかの実施形態において、エピトープは、上記距離によって特定され得て、抗原結合分子の残基と抗原残基との間の結合（例えば、水素結合）に関与するそれらの残基に更に限定され得る。エピトープは、様々なスキャンによっても同様に特定され得る。例えば、アラニンスキャン又はアルギニンスキャンは、抗原結合分子が相互作用し得る１つ以上の残基を示すことができる。明示的に示されない限り、エピトープとしての残基のセットは、特定の抗原結合分子に対するエピトープの一部であることから他の残基を除外するものではない。むしろ、そのようなセットの存在は、最小のエピトープの列（又は種類のセット）を示す。したがって、幾つかの実施形態において、エピトープとして特定された残基のセットは、抗原上のエピトープについての残基の排他的リストではなく、抗原に関連する最小のエピトープを示す。

「非線状エピトープ」又は「立体構造エピトープ」は、エピトープに特異的な抗原結合分子が結合する抗原性タンパク質内の非連続的なポリペプチド、アミノ酸及び／又は糖を含む。幾つかの実施形態において、少なくとも１つの残基がエピトープの他の示された残基と非連続的であるが、１つ以上の残基が他の残基と連続的である場合もある。

「線状エピトープ」は、エピトープに特異的な抗原結合分子が結合する抗原性タンパク質内の連続的なポリペプチド、アミノ酸及び／又は糖を含む。幾つかの実施形態において、線状エピトープ内の残基の全てが、抗原結合分子によって直接的に結合される（又は結合に関与する）必要があるわけではないことに留意されたい。幾つかの実施形態において、線状エピトープは、事実上線状エピトープの配列からなるペプチドによる免疫化に由来し得る、又はタンパク質の残部から相対的に分離されたタンパク質の構造区間に由来し得る（こうして、抗原結合分子は、少なくとも主として、まさにその配列区間と相互作用し得る）。

「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、限定されるものではないが、慣例的な抗体（典型的には、少なくとも１つの重鎖及び少なくとも１つの軽鎖を含む）、シングルドメイン抗体（少なくとも１つのＶＨＨドメイン及びＦｃ領域を含むｓｄＡｂ）、ＶＨＨ含有ポリペプチド（少なくとも１つＶＨＨドメインを含むポリペプチド）、及び所望の抗原結合活性を示す限り上述のいずれかのフラグメントを含む抗体様抗原結合ドメインを含む様々なポリペプチドを包含する。幾つかの実施形態において、抗体は二量体化ドメインを含む。そのような二量体化ドメインには、限定されるものではないが、重鎖定常ドメイン（ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３を含み、ＣＨ１は典型的には、軽鎖定常ドメインＣＬと対をなす一方で、ヒンジは二量体化を媒介する）及びＦｃ領域（ヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３を含み、ヒンジは二量体化を媒介する）が含まれる。

抗体という用語には、限定されるものではないが、キメラ抗体、ヒト化抗体、及びラクダ（ラマを含む）、サメ、マウス、ヒト、カニクイザル等の様々な種の抗体も含まれる。

本明細書において使用される場合、「抗原結合ドメイン」という用語は、抗原に結合するのに十分な抗体の部分を指す。幾つかの実施形態において、慣例的な抗体の抗原結合ドメインは、３つの重鎖ＣＤＲ及び３つの軽鎖ＣＤＲを含む。したがって、幾つかの実施形態において、抗原結合ドメインは、ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３と、抗原への結合を維持するのに必要とされるＦＲ１及び／又はＦＲ４の任意の部分とを含む重鎖可変領域、並びにＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３と、抗原への結合を維持するのに必要とされるＦＲ１及び／又はＦＲ４の任意の部分とを含む軽鎖可変領域を含む。幾つかの実施形態において、ｓｄＡｂ又はＶＨＨ含有ポリペプチドの抗原結合ドメインは、ＶＨＨドメインの３つのＣＤＲを含む。したがって、幾つかの実施形態において、ｓｄＡｂ又はＶＨＨ含有ポリペプチドの抗原結合ドメインは、ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３と、抗原への結合を維持するのに必要とされるＦＲ１及び／又はＦＲ４の任意の部分とを含むＶＨＨドメインを含む。

本明細書において使用される場合、「ＶＨＨ」又は「ＶＨＨドメイン」又は「ＶＨＨ抗原結合ドメイン」という用語は、ラクダ抗体又はサメ抗体等のシングルドメイン抗体の抗原結合部分を指す。幾つかの実施形態において、ＶＨＨは、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４と表される３つのＣＤＲと４つのフレームワーク領域とを含む。幾つかの実施形態において、ＶＨＨは、ＶＨＨが実質的に抗原結合及び特異性を維持する限り、部分的なＦＲ１及び／又はＦＲ４のみを含むように又はそれらのフレームワーク領域の一方若しくは両方を欠くように、Ｎ末端又はＣ末端で切断されていてもよい。

「シングルドメイン抗体」及び「ｓｄＡｂ」という用語は、軽鎖及びＦｃ領域を有しないＶＨＨドメイン等の少なくとも１つの単量体ドメインを含む抗体を指すために、本明細書において区別なく使用される。幾つかの実施形態において、ｓｄＡｂは、それぞれのポリペプチドが少なくとも１つのＶＨＨドメイン及びＦｃ領域を含む２つのポリペプチドの二量体である。本明細書において使用される場合、「シングルドメイン抗体」及び「ｓｄＡｂ」という用語は、多重ＶＨＨドメインを含むポリペプチド、例えば、構造ＶＨＨ_１－ＶＨＨ_２－Ｆｃ又はＶＨＨ_１－ＶＨＨ_２－ＶＨＨ_３－Ｆｃを有し、ここで、ＶＨＨ_１、ＶＨＨ_２、及びＶＨＨ_３が同一又は異なる場合があるポリペプチドを包含する。

「ＶＨＨ含有ポリペプチド」という用語は、少なくとも１つのＶＨＨドメインを含むポリペプチドを指す。幾つかの実施形態において、ＶＨＨポリペプチドは、２つ、３つ、又は４つ以上のＶＨＨドメインを含み、ここで、各ＶＨＨドメインは、同じ又は異なっていてもよい。幾つかの実施形態において、ＶＨＨ含有ポリペプチドは、Ｆｃ領域を含む。幾つかのそのような実施形態において、ＶＨＨ含有ポリペプチドは、ｓｄＡｂと称され得る。さらに、幾つかのそのような実施形態において、ＶＨＨポリペプチドは、二量体を形成し得る。ｓｄＡｂとも称されるＶＨＨ含有ポリペプチドの非限定的な構造には、ＶＨＨ_１－Ｆｃ、ＶＨＨ_１－ＶＨＨ_２－Ｆｃ、及びＶＨＨ_１－ＶＨＨ_２－ＶＨＨ_３－Ｆｃが含まれ、ここで、ＶＨＨ_１、ＶＨＨ_２、及びＶＨＨ_３は、同じ又は異なっていてもよい。そのような構造の幾つかの実施形態において、或るＶＨＨは、リンカーによって別のＶＨＨに連結され得る、又は或るＶＨＨは、リンカーによってＦｃに連結され得る。幾つかのそのような実施形態において、リンカーは、１個～２０個のアミノ酸、好ましくは、主にグリシン及び任意にセリンから構成される１個～２０個のアミノ酸を含む。幾つかの実施形態において、ＶＨＨ含有ポリペプチドがＦｃを含む場合に、それは二量体を形成する。したがって、構造ＶＨＨ_１－ＶＨＨ_２－Ｆｃは、それが二量体を形成する場合に、四価であるとみなされる（すなわち、二量体は４つのＶＨＨドメインを有する）。同様に、構造ＶＨＨ_１－ＶＨＨ_２－ＶＨＨ_３－Ｆｃは、それが二量体を形成する場合に、六価であるとみなされる（すなわち、二量体は６つのＶＨＨドメインを有する）。

「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均一な抗体集団の抗体（ｓｄＡｂ又はＶＨＨ含有ポリペプチドを含む）を指す。すなわち、集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る天然に生じる可能性のある突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は非常に特異的であり、単一の抗原部位に対するものである。さらに、典型的には、異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対する抗体である。したがって、モノクローナル抗体のサンプルは、抗原上の同じエピトープに結合することができる。「モノクローナル」という修飾成句は、抗体の実質的に均一な集団から得られる抗体の性質を示し、何らかの特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈されるべきではない。例えば、モノクローナル抗体は、Kohler and Milstein, 1975, Nature 256:495により最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製され得る、又は米国特許第４，８１６，５６７号に記載されるような組換えＤＮＡ法によって作製され得る。モノクローナル抗体はまた、例えば、McCafferty et al., 1990, Nature 348:552-554に記載される技術を使用して作製されたファージライブラリーから単離され得る。

「ＣＤＲ」という用語は、少なくとも１つの当業者に対する特定様式によって定義される相補性決定領域を示す。幾つかの実施形態において、ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けスキーム、Ｋａｂａｔ番号付けスキーム、ＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａとの組合せ、ＡｂＭ定義、及び／又は接触定義（contact definition）のいずれかに従って定義され得る。ＶＨＨは、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と表される３つのＣＤＲを含む。

本明細書において使用される場合、「重鎖定常領域」という用語は、少なくとも３つの重鎖定常ドメイン、すなわち、Ｃ_Ｈ１、ヒンジ、Ｃ_Ｈ２、及びＣ_Ｈ３を含む領域を指す。当然ながら、ドメイン内の機能を変えない欠失及び改変は、特段の指定がない限り、「重鎖定常領域」という用語の範囲内に含まれる。非限定的な例示的な重鎖定常領域には、γ、δ、及びαが含まれる。非限定的な例示的な重鎖定常領域には、ε及びμも含まれる。それぞれの重鎖定常領域は、１つの抗体アイソタイプに対応する。例えば、γ定常領域を含む抗体はＩｇＧ抗体であり、δ定常領域を含む抗体はＩｇＤ抗体であり、α定常領域を含む抗体はＩｇＡ抗体である。さらに、μ定常領域を含む抗体はＩｇＭ抗体であり、ε定常領域を含む抗体はＩｇＥ抗体である。或る特定のアイソタイプは、更にサブクラスに細分化され得る。例えば、ＩｇＧ抗体には、限定されるものではないが、ＩｇＧ１抗体（γ_１定常領域を含む）、ＩｇＧ２抗体（γ_２定常領域を含む）、ＩｇＧ３抗体（γ_３定常領域を含む）、及びＩｇＧ４抗体（γ_４定常領域を含む）が含まれ、ＩｇＡ抗体には、限定されるものではないが、ＩｇＡ１抗体（α_１定常領域を含む）及びＩｇＡ２抗体（α_２定常領域を含む）が含まれ、ＩｇＭ抗体には、限定されるものではないが、ＩｇＭ１及びＩｇＭ２が含まれる。

本明細書において使用される場合、「Ｆｃ領域」は、ＣＨ２及びＣＨ３を含む重鎖定常領域の一部を指す。幾つかの実施形態において、Ｆｃ領域は、ヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３を含む。様々な実施形態において、Ｆｃ領域がヒンジを含む場合に、ヒンジは、２つのＦｃ含有ポリペプチド間の二量体化を媒介する。Ｆｃ領域は、本明細書で論じられる任意の抗体重鎖定常領域アイソタイプのものであり得る。幾つかの実施形態において、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４である。

本明細書において使用される場合、「アクセプターヒトフレームワーク」は、本明細書で論じられるように、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークに由来する重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークに由来するアクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含むことができる、又はアミノ酸配列の変化を含み得る。幾つかの実施形態において、アミノ酸の変化の数は、ＶＨＨ等の単一の抗原結合ドメイン内の全てのヒトフレームワークにわたって１０個未満、又は９個未満、又は８個未満、又は７個未満、又は６個未満、又は５個未満、又は４個未満、又は３個未満である。

「親和性」は、分子（例えば、抗体、例えばｓｄＡｂ又はＶＨＨ含有ポリペプチド）の単一の結合部位及びその結合相手（例えば、抗原）の間の非共有結合的相互作用の合計の強さを指す。分子Ｘのその相手Ｙに対する親和性又は見かけの親和性は、一般に、それぞれ解離定数（Ｋ_Ｄ）又はＫ_{Ｄ（見かけ）}によって表すことができる。親和性は、本明細書に記載されている方法を含む、当該技術分野で既知の通常の方法（例えば、ＥＬＩＳＡ Ｋ_Ｄ、ＫｉｎＥｘＡ、フローサイトメトリー、及び／又は表面プラズモン共鳴デバイス等）によって測定され得る。このような方法には、限定されるものではないが、ＢＩＡｃｏｒｅ（商標）、Ｏｃｔｅｔ（商標）、又はフローサイトメトリーを要する方法が含まれる。

本明細書において使用される場合、「Ｋ_Ｄ」という用語は、抗原結合分子／抗原相互作用の平衡解離定数を指す。本明細書で「Ｋ_Ｄ」という用語が使用される場合に、それには、Ｋ_Ｄ及びＫ_{Ｄ（見かけ）}が含まれる。

幾つかの実施形態において、抗原結合分子のＫ_Ｄは、フローサイトメトリーによって、抗原発現細胞系統を使用し、各抗体濃度で測定された平均蛍光を非線形１サイト結合方程式（graphpadのＰｒｉｓｍ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）にフィッティングして測定される。幾つかのそのような実施形態において、Ｋ_ＤはＫ_{Ｄ（見かけ）}である。

「生物学的活性」という用語は、分子の任意の１つ以上の生物学的特性（ｉｎ ｖｉｖｏで見られるように天然に存在するか、又は組換え手段によって提供される若しくは可能となるかどうか）を指す。生物学的特性としては、リガンドとの結合、細胞増殖の誘導又は増加、及びサイトカインの発現の誘導又は増加が挙げられるが、これらに限定されない。

「アゴニスト」抗体又は「活性化」抗体は、標的抗原の生物学的活性を増加及び／又は活性化する抗体である。幾つかの実施形態において、アゴニスト抗体は、抗原に結合し、その生物学的活性を少なくとも約２０％、４０％、６０％、８０％、８５％以上増加させる。

「アンタゴニスト」抗体、「ブロッキング」抗体、又は「中和」抗体は、標的抗原の生物学的活性を阻害、低下及び／又は不活性化する抗体である。幾つかの実施形態において、中和抗体は、抗原に結合し、その生物学的活性を少なくとも約２０％、４０％、６０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％以上低下させる。

「親和性成熟」ｓｄＡｂ又はＶＨＨ含有ポリペプチドは、ｓｄＡｂ又はＶＨＨ含有ポリペプチドの抗原に対する親和性に改善をもたらす改変を有しない親ｓｄＡｂ又はＶＨＨ含有ポリペプチドと比較して１つ以上のＣＤＲに１つ以上のそのような改変を有するｓｄＡｂ又はＶＨＨ含有ポリペプチドを指す。

本明細書において使用される場合、「ヒト化ＶＨＨ」は、１つ以上のフレームワーク領域が実質的にヒトフレームワーク領域で置き換えられたＶＨＨを指す。幾つかの場合には、ヒト免疫グロブリンの或る特定のフレームワーク領域（ＦＲ）残基が、対応する非ヒト残基によって置き換えられる。さらに、ヒト化ＶＨＨは、当初のＶＨＨにもヒトフレームワーク配列にも見られないが、ｓｄＡｂ又はＶＨＨ含有ポリペプチドの性能をさらに改良及び最適化するために含まれる残基を含み得る。幾つかの実施形態において、ヒト化ｓｄＡｂ又はＶＨＨ含有ポリペプチドは、ヒトＦｃ領域を含む。理解されるように、ヒト化配列は、その一次配列によって特定され得て、必ずしも抗体が作製された過程を示すわけではない。

「エフェクターポジティブ（effector-positive）Ｆｃ領域」は、天然配列のＦｃ領域の「エフェクター機能」を有する。例示的な「エフェクター機能」には、Ｆｃ受容体結合、Ｃｌｑ結合及び補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方調節、並びにＢ細胞活性化等が含まれる。このようなエフェクター機能は、一般に、Ｆｃ領域を結合ドメイン（例えば、抗体可変ドメイン）と組み合わせることを要し、様々なアッセイを使用して評価することができる。

「天然配列のＦｃ領域」は、天然に見られるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。天然配列のヒトＦｃ領域には、天然配列のヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域（非Ａアロタイプ及びＡアロタイプ）、天然配列のヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域、天然配列のヒトＩｇＧ３ Ｆｃ領域、及び天然配列のヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域、並びにそれらの天然に存在する変異体が含まれる。

「変異型Ｆｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾により天然配列のＦｃ領域のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、「変異型Ｆｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾により天然配列のＦｃ領域のアミノ酸配列とは異なるが、天然配列のＦｃ領域の少なくとも１つのエフェクター機能を保持するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、変異型Ｆｃ領域は、天然配列のＦｃ領域又は親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して、天然配列のＦｃ領域又は親ポリペプチドのＦｃ領域において、少なくとも１個のアミノ酸置換、例えば、約１個～約１０個のアミノ酸置換、好ましくは、約１個～約５個のアミノ酸置換を有する。幾つかの実施形態において、本明細書の変異型Ｆｃ領域は、天然配列のＦｃ領域及び／又は親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約８０％の配列同一性、それらと少なくとも約９０％の配列同一性、それらと少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、又は少なくとも約９９％の配列同一性を有する。

「Ｆｃ受容体」又は「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を記載している。幾つかの実施形態において、ＦｃγＲは、天然のヒトＦｃＲである。幾つかの実施形態において、ＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（ガンマ受容体）に結合するものであり、ＦｃγＲＩサブクラス、ＦｃγＲＩＩサブクラス、及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体であって、これらの受容体のアレル変異体及び選択的にスプライシングされた形態を含む受容体を含む。ＦｃγＲＩＩ受容体には、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「阻害受容体」）が含まれ、これらは同様のアミノ酸配列を有するが、主にその細胞質ドメインが異なる。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。阻害受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含む（例えば、Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997)を参照されたい）。ＦｃＲは、例えば、Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991)、Capel et al., Immunomethods 4:25-34 (1994)、及びde Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126:330-41 (1995)でレビューされている。将来特定されるものを含む他のＦｃＲは、本明細書において「ＦｃＲ」という用語によって包含される。例えば、「Ｆｃ受容体」又は「ＦｃＲ」という用語はまた、胎児性受容体ＦｃＲｎを含み、これは、母体のＩｇＧの胎児への移動（Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976)及びKim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)）及び免疫グロブリンの恒常性の調節の役割を担う。ＦｃＲｎへの結合を測定する方法は既知である（例えば、Ghetie and Ward, Immunol. Today 18(12):592-598 (1997)、Ghetie et al., Nature Biotechnology, 15(7):637-640 (1997)、Hinton et al., J. Biol. Chem. 279(8):6213-6216 (2004)、国際公開第２００４／９２２１９号（Hintonら）を参照されたい）。

本明細書において使用される場合、「実質的に同様」又は「実質的に同じ」という用語は、当業者が２つ以上の値の間の差を、上記値によって測定される生物学的特徴の文脈内で生物学的意義及び／又は統計学的有意性が殆どない又は全くないとみなすような、２つ以上の数値の間の十分に高度な類似性を示す。幾つかの実施形態において、２つ以上の実質的に同様の値は、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、又は５０％のいずれか１つの概数以下だけ異なる。

ポリペプチド「変異体」とは、配列をアラインメントし、必要に応じてギャップを導入して最大パーセントの配列同一性を達成した後に、配列同一性の部分として保存的置換を一切考慮せずに、天然配列のポリペプチドと少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性を有する生物学的に活性なポリペプチドを意味する。そのような変異体には、例えば、ポリペプチドのＮ末端又はＣ末端で１つ以上のアミノ酸残基が付加又は欠失されているポリペプチドが含まれる。幾つかの実施形態において、変異体は、少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性を有する。幾つかの実施形態において、変異体は、少なくとも約９０％のアミノ酸配列同一性を有する。幾つかの実施形態において、変異体は、天然配列のポリペプチドと少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性を有する。

本明細書において使用される場合、ペプチド配列、ポリペプチド配列、又は抗体配列に関する「パーセント（％）のアミノ酸配列同一性」及び「相同性」は、配列をアラインメントし、必要に応じてギャップを導入して最大パーセントの配列同一性を達成した後に、配列同一性の部分として保存的置換を一切考慮せずに、特定のペプチド配列又はポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。パーセントのアミノ酸配列同一性を決定するためのアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、又はＭＥＧＡＬＩＧＮ（商標）（DNASTAR）ソフトウェア等の公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して、当該技術分野の技能の範囲内である様々な方法で達成され得る。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメーターを決定することができる。

アミノ酸置換には、限定されるものではないが、ポリペプチド中の或るアミノ酸を別のアミノ酸により置き換えることが含まれ得る。例示的な置換を表１に示す。アミノ酸置換を対象の抗体に導入し、産物を所望の活性、例えば、抗原結合の保持／改善、免疫原性の減少、又はＡＤＣＣ若しくはＣＤＣの改善についてスクリーニングすることができる。

共通の側鎖特性に従ってアミノ酸をグループ分けすることができる：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、
（５）鎖の配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。

非保存的置換は、これらのクラスの１つのメンバーを別のクラスに交換することを伴う。

「ベクター」という用語は、宿主細胞内で増殖され得る、クローニングされた単数又は複数のポリヌクレオチドを含むように操作することができるポリヌクレオチドを記載するために使用される。ベクターは、以下のエレメントのうちの１つ以上を含み得る：複製起点、対象のポリペプチドの発現を調節する１つ以上の調節配列（例えば、プロモーター及び／又はエンハンサー等）、及び／又は１つ以上の選択可能なマーカー遺伝子（例えば、抗生物質耐性遺伝子及び比色アッセイで使用することができる遺伝子、例えば、β－ガラクトシダーゼ等）。「発現ベクター」という用語は、宿主細胞において対象のポリペプチドを発現するために使用されるベクターを指す。

「宿主細胞」は、ベクター又は単離されたポリヌクレオチドのレシピエントであり得る又はレシピエントであった細胞を指す。宿主細胞は、原核細胞又は真核細胞であり得る。例示的な真核細胞には、霊長類動物細胞又は非霊長類動物細胞等の哺乳動物細胞、酵母等の真菌細胞、植物細胞、及び昆虫細胞が含まれる。非限定的な例示的な哺乳動物細胞には、限定されるものではないが、ＮＳＯ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（商標）細胞（Crucell）、並びに２９３細胞及びＣＨＯ細胞、並びにそれらの派生物、例えば２９３－６Ｅ細胞、ＣＨＯ－ＤＧ４４細胞、ＣＨＯ－Ｋ１細胞、ＣＨＯ－Ｓ細胞、及びＣＨＯ－ＤＳ細胞が含まれる。宿主細胞には、単一の宿主細胞の子孫が含まれるが、自然突然変異、偶発突然変異、又は意図的突然変異のため、子孫は必ずしも当初の親細胞と完全に同一（形態又はゲノムＤＮＡ相補において）であるとは限らない。宿主細胞には、本明細書で提供されるポリヌクレオチド（複数の場合もある）によりｉｎ ｖｉｖｏでトランスフェクトされた細胞が含まれる。

本明細書において使用される場合、「単離された」という用語は、典型的に天然に一緒に見出される又は一緒に産生される成分の少なくとも幾つかから分離された分子を指す。例えば、ポリペプチドは、それを産生した細胞の成分の少なくとも一部から分離される場合に、「単離された」と称される。ポリペプチドが発現後に細胞によって分泌される場合に、ポリペプチドを含む上清を、それを産生した細胞から物理的に分離することは、ポリペプチドを「単離する」とみなされる。同様に、ポリヌクレオチドは、それが典型的に天然に見られるより大きなポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡポリヌクレオチドの場合に、ゲノムＤＮＡ又はミトコンドリアＤＮＡ等）の一部ではない場合に、又は例えば、ＲＮＡポリヌクレオチドの場合に、それを産生した細胞の成分の少なくとも一部から分離される場合に、「単離された」と称される。したがって、宿主細胞内のベクターに含まれるＤＮＡポリヌクレオチドは、「単離された」と称され得る。

「個体」及び「被験体」という用語は、動物、例えば哺乳動物を指すために本明細書において区別なく使用される。幾つかの実施形態において、限定されるものではないが、ヒト、齧歯類、サル、ネコ、イヌ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、実験用哺乳動物、哺乳動物家畜、競技用哺乳動物（mammalian sport animals）、及び哺乳動物ペットを含む哺乳動物を治療する方法が提供される。幾つかの例では、「個体」又は「被験体」は、疾患又は障害の治療を必要とする個体又は被験体を指す。幾つかの実施形態において、治療を受ける被験体は、被験体が治療に関連する障害を有する又は障害を患う十分なリスクがあると特定されたことを表す患者であり得る。

本明細書において使用される場合、「疾患」又は「障害」は、治療が必要とされる及び／又は所望される状態を指す。

「腫瘍細胞」、「癌細胞」、「癌」、「腫瘍」、及び／又は「新生物」という用語は、特段の指定がない限り、本明細書において区別なく使用され、身体器官及び系の正常な機能を妨げる制御不能な増殖及び／又は異常な細胞生存の増加及び／又はアポトーシスの阻害を示す細胞（又は複数の細胞）を指す。この定義には、良性及び悪性の癌、ポリープ、過形成、及び潜伏腫瘍又は微小転移が含まれる。

「癌」及び「腫瘍」という用語は、固形癌及び血液癌／リンパ腺癌を包含するとともに、悪性腫瘍、前悪性腫瘍、及び良性腫瘍、例えば異形成も包含する。例示的な癌には、限定されるものではないが、基底細胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脳癌及び中枢神経系癌、乳癌、腹膜癌、子宮頸癌、絨毛癌、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、結腸直腸癌（大腸癌）、結合組織癌、消化器系癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、頭頸部癌、胃部癌（gastric cancer）（胃腸癌を含む）、膠芽腫、肝癌、肝細胞癌、上皮内新生物、腎臓癌又は腎癌、喉頭癌、白血病、肝臓癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、及び肺扁平上皮癌）、黒色腫、骨髄腫、神経芽細胞腫、口腔癌（唇、舌、口、及び咽頭）、卵巣癌、膵臓癌（例えば、膵臓腺癌）、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸癌、呼吸器系癌、中皮腫、唾液腺癌、肉腫、皮膚癌、扁平上皮癌、胃癌（stomach cancer）、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌又は子宮内膜癌、泌尿器系癌、外陰癌、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫を含むリンパ腫、並びにＢ細胞リンパ腫（低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、小リンパ球（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非分割細胞ＮＨＬ、巨大病変ＮＨＬを含む、マントル細胞リンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、及びワルデンストレームマクログロブリン血症）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、有毛細胞白血病、慢性骨髄芽球性白血病、並びにその他の癌腫及び肉腫、並びに移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）、並びに母斑症、浮腫（脳腫瘍に関連する浮腫等）及びメイグス症候群に関連する異常血管増殖が含まれる。

幾つかの実施形態において、「増加」又は「減少」は、それぞれ、統計学的に有意な増加又は減少を指す。当業者に明らかであるように、「調節」はまた、試験作用物質が存在することを除き同じ条件と比較した、標的又は抗原のそのリガンド、結合相手、ホモ多量体形若しくはヘテロ多量体形へと会合する相手又は基質の１つ以上に対する親和性、アビディティー、特異性及び／又は選択性の変化（増加又は減少のいずれかであり得る）を引き起こすこと、標的又は抗原が存在する培地又は環境における１つ以上の条件（ｐＨ、イオン強度、補因子の存在等）に対する標的又は抗原の感受性の変化（増加又は減少のいずれかであり得る）を引き起こすこと、及び／又は細胞増殖若しくはサイトカイン産生を含み得る。これは、関与する標的に応じて、それ自体が既知の又は本明細書に記載される任意の適切な方法で及び／又は任意の適切なアッセイを使用して決定され得る。

本明細書において使用される場合、「治療」は、有益な又は所望の臨床結果を得るための手法である。本明細書において使用される場合、「治療」は、ヒトを含む哺乳動物における疾患用の療法薬の任意の投与又は適用を対象とする。本開示の目的では、有益な又は所望の臨床結果には、限定されるものではないが、１つ以上の症状の緩和、疾患の程度の減少、疾患の進展（例えば、転移、例えば肺又はリンパ節への転移）の未然防止又は遅延、疾患の再発の未然防止又は遅延、疾患の進行の遅延又は減速、疾患状態の改善、疾患又は疾患の進行の阻害、疾患又はその進行の阻害又は減速、その発達の停止、及び寛解（部分的でも全体的でも）のいずれか１つ以上が含まれる。「治療」には、増殖性疾患の病理学的結果の軽減も含まれる。本明細書において提供される方法は、治療のこれらの側面のいずれか１つ以上を企図している。上記に従って、治療という用語は、障害の全ての側面を１００パーセント除去する必要はない。

「改善する」とは、治療剤を投与しない場合と比べて、１つ以上の症状が軽減又は向上することを意味する。「改善」には、症状の持続期間が短縮又は減少することも含まれる。

「抗癌剤」という用語は、本明細書において、その最も広い意味で、１つ以上の癌の治療に使用される作用物質を指すために使用される。そのような作用物質の例示的なクラスには、限定されるものではないが、化学療法剤、抗癌生物製剤（サイトカイン、受容体細胞外ドメイン－Ｆｃ融合物、及び抗体等）、放射線療法薬、ＣＡＲ－Ｔ療法薬、治療用オリゴヌクレオチド（アンチセンスオリゴヌクレオチド及びｓｉＲＮＡ等）、及び腫瘍溶解性ウイルスが含まれる。

「生体サンプル」という用語は、生きている生き物又はかつて生きていた生き物からの或る量の物質を意味する。そのような物質には、限定されるものではないが、血液（例えば、全血）、血漿、血清、尿、羊水、滑液、内皮細胞、白血球、単球、他の細胞、器官、組織、骨髄、リンパ節、及び脾臓が含まれる。

「対照」又は「参照」という用語は、分析物を含まないことが既知の組成物（「陰性対照」）又は分析物を含むことが既知の組成物（「陽性対照」）を指す。陽性対照は、既知の濃度の分析物を含み得る。

本明細書において使用される場合、「疾患の発症を遅延させる」とは、疾患（癌等）の発症を遅らせる、妨げる、減速させる、遅滞させる、安定化させる、抑制する、及び／又は引き延ばすことを意味する。この遅延は、疾患の病歴及び／又は治療される個体に応じて、様々な長さの時間となり得る。当業者に明らかであるように、十分な又は大幅な遅延は、事実上、個体が疾患を発症しないという点で未然防止を包含し得る。例えば、転移の発生等の末期癌を遅延させることができる。

本明細書において使用される場合、「未然防止」は、疾患の素因を有し得るが、まだ疾患と診断されていない被験体における疾患の発生又は再発に対する予防をもたらすことを含む。特段の指示がない限り、「低減する」、「阻害する」、又は「未然防止する、防ぐ」という用語は、全期間にわたる完全な未然防止を示すのではなく又は必要とするのではなく、測定される期間だけにわたる未然防止を示す又は必要とする。

物質／分子、アゴニスト又はアンタゴニストの「治療有効量」は、個体の疾患状態、年齢、性別、及び体重、並びに物質／分子、アゴニスト又はアンタゴニストが個体において所望の応答を誘発する能力等の要因によって変動し得る。治療有効量はまた、治療的に有益な作用が物質／分子、アゴニスト又はアンタゴニストの任意の有毒作用又は有害作用を上回る量である。治療有効量は、１回以上の投与で送達され得る。治療有効量は、必要な投与量で必要な時間にわたって、所望の治療的結果及び／又は予防的結果を達成するのに有効な量を指す。

「医薬製剤」及び「医薬組成物」という用語は、区別なく使用され、有効成分（複数の場合もある）の生物学的活性が有効になることを可能にするような形態であり、製剤を投与する被験体に対して許容不可能なほど有毒な追加の成分を含まない調製物を指す。そのような製剤は滅菌され得る。

「薬学的に許容可能な担体」は、被験体に投与するための「医薬組成物」を一緒に含む治療剤とともに使用される当該技術分野において慣用の非毒性の固体、半固体又は液体の充填剤、希釈剤、カプセル化材料、製剤補助剤、又は担体を指す。薬学的に許容可能な担体は、使用される投与量及び濃度でレシピエントに対して無毒であり、製剤の他の成分と適合性がある。薬学的に許容可能な担体は、使用される製剤にとって適切である。

１つ以上の更なる治療剤と「組み合わせて」の投与には、同時（併用）投与及び任意の順序での連続投与が含まれる。

「同時に」という用語は、本明細書において、２つ以上の治療剤の投与であって、投与の少なくとも一部が時間的に重複する、又は１つの治療剤の投与が他の治療剤の投与に対して短い期間に含まれる、又は両方の治療剤の治療効果が少なくとも或る期間にわたり重複する、投与を指すために使用される。

「連続的に」という用語は、本明細書において、２つ以上の治療剤の投与であって、時間的に重複しない、又は治療剤の治療効果が重複しない、投与を指すために使用される。

本明細書において使用される場合、「～と組み合わせて」は、或る治療法の施与に別の治療法を加えることを指す。したがって、「～と組み合わせて」は、或る治療法を、個体に他の治療法を施す前、その間、又はその後に施すことを指す。

「添付文書」という用語は、治療製品の市販パッケージに通例含まれる使用説明書であって、そのような治療製品の使用に関する指示、使用法、投与量、投与、併用療法、禁忌及び／又は警告に関する情報を含む、使用説明書を指すために使用される。

「製造品」は、少なくとも１つの試薬、例えば、疾患若しくは障害（例えば、癌）の治療用の医薬、又は本明細書に記載されるバイオマーカーを特異的に検出するプローブを含む任意の製造物（例えば、パッケージ又は容器）又はキットである。幾つかの実施形態において、製造物又はキットは、本明細書に記載される方法を実施するユニットとして宣伝、配送、又は販売される。

「標識」及び「検出可能な標識」という用語は、例えば、抗体又は抗原に結合されて、特異的結合ペアのメンバー間の反応（例えば、結合）を検出可能にする部分を意味する。特異的結合ペアの標識されたメンバーは、「検出可能に標識された」と称される。したがって、「標識された結合性タンパク質」という用語は、結合性タンパク質の特定をもたらす標識が組み込まれたタンパク質を指す。幾つかの実施形態において、標識は、視覚的に又は機器的手段により検出可能なシグナルを生成し得る検出可能なマーカー、例えば、放射性標識されたアミノ酸の組み込み又はマーキングされたアビジン（例えば、蛍光マーカー又は光学的方法若しくは比色法により検出され得る酵素活性を含むストレプトアビジン）によって検出され得るビオチニル部のポリペプチドへの結合である。ポリペプチドの標識の例には、限定されるものではないが、放射性同位体又は放射性核種（例えば、^３Ｈ、^１４Ｃ、^３５Ｓ、^９０Ｙ、^９９Ｔｃ、^１１１Ｉｎ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１７７Ｌｕ、^１６６Ｈｏ、又は^１５３Ｓｍ）、色素原、蛍光標識（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニド蛍光体）、酵素標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）、化学発光マーカー、ビオチニル基、二次レポーターによって認識される予め決められたポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパーペア配列、二次抗体のための結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）、及びガドリニウムキレート等の磁性剤が含まれる。イムノアッセイに通常使用される標識の代表的な例には、光を発する部分、例えば、アクリジニウム化合物、及び蛍光を発する部分、例えば、フルオレセインが含まれる。この点について、その部分自体は検出可能に標識されていない場合もあるが、更に別の部分と反応すると検出可能になり得る。

例示的なＤＲ５結合性ポリペプチド
本明細書において、ＤＲ５結合性ポリペプチドの製剤が提供される。様々な実施形態において、ＤＲ５結合性ポリペプチドは、配列番号１の配列を含むＣＤＲ１と、配列番号２の配列を含むＣＤＲ２と、配列番号３の配列を含むＣＤＲ３とを含む少なくとも１つのＶＨＨドメインを含む。幾つかの実施形態において、少なくとも１つのＶＨＨドメインはヒト化されている。幾つかの実施形態において、ＤＲ５結合性ポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸配列を含む少なくとも１つのＶＨＨドメインを含む。

幾つかの実施形態において、ＤＲ５結合性ポリペプチドは、ＤＲ５に結合する少なくとも１つのＶＨＨドメインと、Ｆｃ領域とを含む。幾つかの実施形態において、本明細書において提供されるＤＲ５結合性ポリペプチドは、ＤＲ５に結合する２つのＶＨＨドメインと、Ｆｃ領域とを含む。幾つかの実施形態において、Ｆｃ領域は、生理学的条件でＤＲ５結合性ポリペプチドの二量体化を媒介し、こうして二量体が形成されることにより、ＤＲ５結合部位の数が２倍となる。例えば、ＤＲ５に結合する２つのＶＨＨドメインと、Ｆｃ領域とを含むＤＲ５結合性ポリペプチドは、単量体としては二価であるが、生理学的条件では、Ｆｃ領域が二量体化を媒介することができ、こうしてＤＲ５結合性ポリペプチドは、そのような条件下で四価の二量体として存在する。

幾つかの実施形態において、ＤＲ５結合性ポリペプチドは、ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ－リンカー－Ｆｃの構造を含む。幾つかの実施形態において、ＤＲ５結合性ポリペプチドのＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ部分は、配列番号５のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、Ｆｃはヒンジを含む。幾つかのそのような実施形態において、Ｆｃは配列番号６のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、ＤＲ５結合性ポリペプチドは、２つのＶＨＨドメインとＦｃ領域とを含む配列番号７のアミノ酸配列を含む。

幾つかの実施形態において、ＤＲ５に結合するＶＨＨドメインはヒト化され得る。ヒト化抗体（ｓｄＡｂ又はＶＨＨ含有ポリペプチド等）は、治療分子として有用である。それというのも、ヒト化抗体は、抗体療法薬に対する免疫応答をもたらして療法薬の有効性を低下させ得る非ヒト抗体に対するヒト免疫応答を低減又は排除するからである。一般に、ヒト化抗体は、ＣＤＲ（又はその一部）が非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（又はその一部）がヒト抗体配列に由来する１つ以上の可変ドメインを含む。ヒト化抗体はまた、任意に、ヒト定常領域の少なくとも一部を含む。幾つかの実施形態において、ヒト化抗体における幾つかのＦＲ残基は、例えば、抗体の特異性又は親和性を回復又は改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＣＤＲ残基の元となる抗体）からの対応する残基で置換される。

ヒト化抗体及びその作製方法は、例えば、Almagro and Fransson, (2008) Front. Biosci. 13: 1619-1633においてレビューされており、例えば、Riechmann et al., (1988) Nature 332:323-329、Queen et al., (1989) Proc. Natl Acad. Sci. USA 86: 10029-10033、米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号、及び同第７，０８７，４０９号、Kashmiri et al., (2005) Methods 36:25-34、Padlan, (1991) Mol. Immunol. 28:489-498（「リサーフェイシング（resurfacing）」を記載している）、Dall'Acqua et al., (2005) Methods 36:43-60（「ＦＲシャッフリング（FR shuffling）」を記載している）、並びにOsbourn et al., (2005) Methods 36:61-68及びKlimka et al., (2000) Br. J. Cancer, 83:252-260（ＦＲシャッフリングに対する「ガイド選択（guided selection）」アプローチを記載している）で更に記載されている。

ヒト化に使用され得るヒトフレームワーク領域には、限定されるものではないが、「ベストフィット（best-fit）」法を使用して選択されたフレームワーク領域（例えば、Sims et al. (1993) J. Immunol. 151 :2296を参照されたい）、重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Carter et al. (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285、及びPresta et al. (1993) J. Immunol, 151:2623を参照されたい）、ヒト成熟（体細胞突然変異した）フレームワーク領域又はヒト生殖細胞系フレームワーク領域（例えば、Almagro and Fransson, (2008) Front. Biosci. 13:1619-1633を参照されたい）、及びＦＲライブラリーのスクリーニングから得られるフレームワーク領域（例えば、Baca et al., (1997) J. Biol. Chem. 272: 10678-10684、及びRosok et al., (1996) J. Biol. Chem. 271 :22611-22618を参照されたい）が含まれる。典型的には、ＶＨＨのＦＲ領域をヒトＦＲ領域と置き換えることで、ヒト化ＶＨＨが作製される。幾つかの実施形態において、ヒトＦＲの或る特定のＦＲ残基を置き換えることで、ヒト化ＶＨＨの１つ以上の特性が改善される。そのような置き換えられた残基を有するＶＨＨドメインも、本明細書において更に「ヒト化」と称される。

様々な実施形態において、ＤＲ５結合性ポリペプチドに含まれるＦｃ領域は、ヒトＦｃ領域である、又はヒトＦｃ領域に由来する。

幾つかの実施形態において、ＤＲ５結合性ポリペプチドに含まれるＦｃ領域は、ヒトＦｃ領域に由来し、ＩｇＧ１ Ｅ２３３、Ｌ２３４、及びＬ２３５に対応する３つのアミノ酸欠失を下部ヒンジに含み、本明細書で「Ｆｃ ｘＥＬＬ」と称される。Ｆｃ ｘＥＬＬポリペプチドはＦｃγＲと結合しないため、「エフェクターサイレント」又は「エフェクターヌル」と称されるが、幾つかの実施形態において、ｘＥＬＬ Ｆｃ領域はＦｃＲｎに結合するため、半減期の延長及びＦｃＲｎ媒介性リサイクリング（FcRn mediated recycling）と関連したトランスサイトーシスを伴う。幾つかの実施形態において、Ｆｃ領域はヒトＩｇＧ１ ｘＥＬＬ Ｆｃ領域である。

ポリペプチドの発現及び産生
ＤＲ５結合性ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子が提供される。幾つかの実施形態において、核酸分子はまた、ＤＲ５結合性ポリペプチドの分泌を指示するリーダー配列もコードすることができ、そのリーダー配列は、典型的には、これが分泌されたポリペプチド中に存在しないように切断される。リーダー配列は、天然の重鎖（又はＶＨＨ）リーダー配列であり得る、又は別の異種リーダー配列であり得る。

核酸分子は、当該技術分野で慣用の組換えＤＮＡ技術を使用して構築され得る。幾つかの実施形態において、核酸分子は、選択された宿主細胞における発現に適した発現ベクターである。

本明細書に記載されるＤＲ５結合性ポリペプチドをコードする核酸を含むベクターが提供される。そのようなベクターには、限定されるものではないが、ＤＮＡベクター、ファージベクター、ウイルスベクター、レトロウイルスベクター等が含まれる。幾つかの実施形態において、ＣＨＯ細胞若しくはＣＨＯ由来細胞等の所望の細胞型、又はＮＳＯ細胞におけるポリペプチドの発現のために最適化されたベクターが選択される。例示的なそのようなベクターは、例えば、Running Deer et al., Biotechnol. Prog. 20:880-889 (2004)に記載されている。

幾つかの実施形態において、ＤＲ５結合性ポリペプチドは、細菌細胞等の原核細胞において、又は真菌細胞（酵母等）、植物細胞、昆虫細胞、及び哺乳類細胞等の真核細胞において発現され得る。そのような発現は、例えば、当該技術分野で既知の手順に従って実施され得る。ポリペプチドの発現に使用され得る例示的な真核細胞には、限定されるものではないが、ＣＯＳ７細胞を含むＣＯＳ細胞、２９３－６Ｅ細胞を含む２９３細胞、ＣＨＯ－Ｓ、ＤＧ４４、Ｌｅｃ１３ ＣＨＯ細胞及びＦＵＴ８ ＣＨＯ細胞を含むＣＨＯ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（商標）細胞（Crucell）、並びにＮＳＯ細胞が含まれる。幾つかの実施形態において、ＤＲ５結合性ポリペプチドは、酵母において発現され得る。例えば、米国特許出願公開第２００６／０２７００４５号を参照されたい。幾つかの実施形態において、特定の真核宿主細胞は、ポリペプチドに対して所望の翻訳後修飾を行うその能力に基づいて選択される。例えば、幾つかの実施形態において、ＣＨＯ細胞は、２９３細胞で産生される同じポリペプチドよりも高レベルのシアリル化を有するポリペプチドを産生する。

所望の宿主細胞への１つ以上の核酸（ベクター等）の導入は、限定されるものではないが、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介トランスフェクション、カチオン性脂質媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション、形質導入、感染等を含むあらゆる方法によって達成され得る。非限定的な例示的な方法は、例えばSambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 3^rd ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press (2001)に記載されている。核酸は、任意の適切な方法に従って、所望の宿主細胞に一過的又は安定的にトランスフェクトされ得る。

本明細書に記載される核酸又はベクターのいずれかを含む宿主細胞も提供される。幾つかの実施形態において、本明細書に記載されるＤＲ５結合性ポリペプチドを発現する宿主細胞が提供される。宿主細胞で発現されたＤＲ５結合性ポリペプチドは、任意の適切な方法によって精製され得る。そのような方法には、限定されるものではないが、親和性マトリックス又は疎水性相互作用クロマトグラフィーの使用が含まれる。適切なアフィニティーリガンドには、ＲＯＲ１ ＥＣＤ及びＦｃ領域に結合する作用物質が含まれる。例えば、プロテインＡ、プロテインＧ、プロテインＡ／Ｇ、又は抗体アフィニティーカラムを使用して、Ｆｃ領域に結合することで、Ｆｃ領域を含むＤＲ５結合性ポリペプチドを精製することができる。疎水性相互作用クロマトグラフィー、例えば、ブチルカラム又はフェニルカラムもまた、抗体等の幾つかのポリペプチドを精製するのに適切であり得る。イオン交換クロマトグラフィー（例えば、陰イオン交換クロマトグラフィー及び／又は陽イオン交換クロマトグラフィー）もまた、抗体等の幾つかのポリペプチドを精製するのに適切であり得る。混合モードクロマトグラフィー（例えば、逆相／陰イオン交換、逆相／陽イオン交換、親水性相互作用／陰イオン交換、親水性相互作用／陽イオン交換等）も、抗体等の幾つかのポリペプチドを精製するのに適切であり得る。ポリペプチドを精製する多くの方法が当該技術分野で知られている。

幾つかの実施形態において、ＤＲ５結合性ポリペプチドは、無細胞系において産生される。非限定的な例示的な無細胞系は、例えば、Sitaraman et al., Methods Mol. Biol. 498: 229-44 (2009)、Spirin, Trends Biotechnol. 22: 538-45 (2004)、Endo et al., Biotechnol. Adv. 21: 695-713 (2003)に記載されている。

幾つかの実施形態において、上記の方法によって作製されたＤＲ５結合性ポリペプチドが提供される。幾つかの実施形態において、ＤＲ５結合性ポリペプチドは、宿主細胞において作製される。幾つかの実施形態において、ＤＲ５結合性ポリペプチドは、無細胞系において作製される。幾つかの実施形態において、ＤＲ５結合性ポリペプチドは精製される。幾つかの実施形態において、ＤＲ５結合性ポリペプチドを含む細胞培養培地が提供される。

幾つかの実施形態において、上記の方法によって作製された抗体を含む組成物が提供される。幾つかの実施形態において、該組成物は、宿主細胞において作製されたＤＲ５結合性ポリペプチドを含む。幾つかの実施形態において、該組成物は、無細胞系において作製されたＤＲ５結合性ポリペプチドを含む。幾つかの実施形態において、該組成物は、精製されたＤＲ５結合性ポリペプチドを含む。

ＤＲ５結合性ポリペプチドの医薬製剤
幾つかの実施形態において、ＤＲ５結合性ポリペプチドの医薬製剤は、水性液体製剤である。他の実施形態において、製剤は凍結乾燥されている。いずれの場合も、製剤はＤＲ５結合性ポリペプチドを含む。幾つかの実施形態において、ＤＲ５結合性ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む少なくとも１つのＶＨＨドメインを含む。幾つかの実施形態において、少なくとも１つのＶＨＨドメインはヒト化されている。幾つかの実施形態において、ＤＲ５結合性ポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸配列を含む少なくとも１つのＶＨＨドメインを含む。幾つかの実施形態において、ＤＲ５結合性ポリペプチドは、ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ－リンカー－Ｆｃの構造を含む。幾つかの実施形態において、ＤＲ５結合性ポリペプチドのＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ部分は、配列番号５のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、Ｆｃはヒンジを含む。幾つかのそのような実施形態において、Ｆｃは配列番号６のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、ＤＲ５結合性ポリペプチドは、２つのＶＨＨドメインとＦｃ領域とを含む配列番号７のアミノ酸配列を含む。

幾つかの実施形態において、本明細書における水性製剤又は本明細書に記載される凍結乾燥製剤の再構成物中のＤＲ５結合性ポリペプチドの濃度は、例えば２０ｍｇ／ｍＬ～７０ｍｇ／ｍＬ、例えば３０ｍｇ／ｍＬ～６０ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ～６０ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ～５０ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ～４０ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ～７０ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ～５０ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ～４０ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ～７０ｍｇ／ｍＬ又は５０ｍｇ／ｍＬ～６０ｍｇ／ｍＬである。幾つかの実施形態において、製剤は２０ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、６０ｍｇ／ｍＬ又は７０ｍｇ／ｍＬのＤＲ５結合性ポリペプチドを含む。幾つかの実施形態において、製剤は５０ｍｇ／ｍＬのＤＲ５結合性ポリペプチドを含む。

幾つかの実施形態において、製剤のｐＨは５．３～６．７、例えば５．４～６．６、５．５～６．５、５．６～６．４、５．６～６．５、５．７～６．５、５．８～６．５、５．９～６．５、６～６．５、５．５～６．４、５．５～６．３、５．５～６．２、５．５～６．１、５．５～６、５．８～６．２、５．８～６、５．９～６、５．９～６．１、６～６．１又は６～６．２である。幾つかの実施形態において、製剤のｐＨは約５．５、約５．６、約５．７、約５．８、約５．９、約６、約６．１、約６．２、約６．３、約６．４又は約６．５である。幾つかの実施形態において、製剤のｐＨは約６である。幾つかの実施形態において、製剤のｐＨは５．５～６．５である。

幾つかの実施形態において、製剤はヒスチジンを含み、その濃度は、例えば５ｍＭ～２０ｍＭのヒスチジン、例えば５ｍＭ～１５ｍＭ、７ｍＭ～１５ｍＭ、５ｍＭ～１２ｍＭ、７ｍＭ～１２ｍＭであり得る。幾つかの実施形態において、製剤は５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、１１ｍＭ、１２ｍＭ、１３ｍＭ、１４ｍＭ、１５ｍＭ、１６ｍＭ、１７ｍＭ、１８ｍＭ、１９ｍＭ又は２０ｍＭのヒスチジンを含む。幾つかの実施形態において、製剤は１０ｍＭのヒスチジンを含む。幾つかの実施形態において、ヒスチジンはヒスチジンＨＣｌである。

幾つかの実施形態において、製剤はスクロースを含み、その濃度は、例えば７％～１０％（ｗ／ｖ）、例えば７％～９％、８％～１０％、８％～９％、７％、８％、９％又は１０％（ｗ／ｖ）であり得る。幾つかの実施形態において、製剤は８％のスクロースを含む。幾つかの実施形態において、製剤は９％のスクロースを含む。

幾つかの実施形態において、製剤はポロキサマー１８８（Ｐ１８８）を含み、その濃度は、例えば０．１％～０．８％、例えば０．１％～０．５％、例えば０．２％～０．４％、０．２％～０．５％、０．３％～０．５％、０．３％～０．４％、０．１％～０．２％、０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％又は０．８％であり得る。幾つかの実施形態において、製剤は０．２％のポロキサマーＰ１８８を含む。

非限定的な例示的な製剤は、５０ｍｇ／ｍＬのＤＲ５結合性ポリペプチド、１０ｍＭのヒスチジンＨＣｌ、８％のスクロース及び０．２％のポロキサマーＰ１８８を含み、製剤のｐＨは約６である。幾つかの実施形態において、ＤＲ５結合性ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む少なくとも１つのＶＨＨドメインを含む。幾つかの実施形態において、少なくとも１つのＶＨＨドメインはヒト化されている。幾つかの実施形態において、ＤＲ５結合性ポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸配列を含む少なくとも１つのＶＨＨドメインを含む。幾つかの実施形態において、ＤＲ５結合性ポリペプチドは、ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ－リンカー－Ｆｃの構造を含む。幾つかの実施形態において、ＤＲ５結合性ポリペプチドのＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ部分は、配列番号５のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、Ｆｃはヒンジを含む。幾つかのそのような実施形態において、Ｆｃは配列番号６のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、ＤＲ５結合性ポリペプチドは、２つのＶＨＨドメインとＦｃ領域とを含む配列番号７のアミノ酸配列を含む。

幾つかの実施形態において、ＤＲ５結合性ポリペプチドの医薬製剤は、凍結乾燥形態で提供される。タンパク質含有薬物製品を凍結乾燥する方法は、当該技術分野で既知である。幾つかの実施形態において、本明細書で提供される凍結乾燥製剤は、２℃～８℃で保存した場合に、少なくとも若しくは最大３ヶ月、少なくとも若しくは最大６ヶ月、少なくとも若しくは最大９ヶ月、少なくとも若しくは最大１２ヶ月、又は１２ヶ月超にわたって安定している。幾つかのそのような実施形態において、凍結乾燥製剤は、保存中にそのケーキ特性を保持する。幾つかの実施形態において、凍結乾燥製剤は、目に見える不純物を全く含まないオフホワイト色の均一で見事なケーキである。

幾つかの実施形態において、保存後の凍結乾燥製剤の再構成時に、再構成された水性製剤は、目に見える粒子を実質的に含まない。幾つかの実施形態において、水性製剤中に存在するＤＲ５結合性ポリペプチドの３％未満若しくは２％未満が凝集し、及び／又は水性製剤中に存在するＤＲ５結合性ポリペプチドの１％未満若しくは０．５％未満が分解されている。凝集及び／又は分解されたＤＲ５結合性ポリペプチドの存在は、例えばサイズ排除クロマトグラフィーを用いて測定することができる。

本明細書に開示されるＤＲ５結合性ポリペプチドの医薬製剤は、単位剤形で与えることができるか、又は２単位用量以上を供給するのに適した形態で保存することができる。医薬製剤は、その意図される投与経路に適合する必要がある。凍結乾燥製剤は通例、投与又は使用前に溶液中で再構成されるが、水性製剤は例えば、最初に希釈されることなく直接投与されることを意味する「即時使用可能」であってもよく、又は使用前に生理食塩水若しくは別の溶液で希釈してもよい。

医薬製剤は、滅菌されているのが好ましい。減菌は任意の好適な方法、例えば滅菌濾過膜を通した濾過によって達成することができる。組成物が凍結乾燥される場合、濾過滅菌は、凍結乾燥及び再構成の前又は後に行うことができる。様々な実施形態において、凍結乾燥製剤が提供され、これは再構成されて、本明細書で提供される液体医薬製剤を形成し得る。

ＤＲ５結合性ポリペプチド製剤を用いて疾患を治療する例示的な方法
幾つかの実施形態において、ＤＲ５結合性ポリペプチドを含む医薬製剤を投与することを含む、個体における疾患を治療する方法が提供される。幾つかの実施形態において、個体における癌を治療する方法が提供される。

幾つかの実施形態において、方法は、本明細書で提供されるＤＲ５結合性ポリペプチドを含む医薬製剤を有効量、個体に投与することを含む。そのような治療方法は、ヒト又は動物における治療方法であり得る。幾つかの実施形態において、ヒトを治療する方法が提供される。本明細書で提供されるＤＲ５結合性ポリペプチドで治療され得る非限定的な例示的な癌としては、基底細胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脳癌及び中枢神経系癌、乳癌、腹膜癌、子宮頸癌、絨毛癌、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、結腸直腸癌（大腸癌）、結合組織癌、消化器系癌、子宮内膜癌、食道癌、眼癌、頭頸部癌、胃部癌、胃腸癌、膠芽腫、肝癌、肝細胞癌、上皮内新生物、腎臓癌又は腎癌、喉頭癌、肝臓癌、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、黒色腫、骨髄腫、神経芽細胞腫、口腔癌、卵巣癌、膵臓腺癌等の膵臓癌、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸癌、呼吸器系癌、中皮腫、唾液腺癌、肉腫、皮膚癌、扁平上皮癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、子宮癌又は子宮内膜癌、泌尿器系癌及び外陰癌、リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、低悪性度／濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、小リンパ球（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非分割細胞ＮＨＬ、巨大病変ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、有毛細胞白血病、並びに慢性骨髄芽球性白血病が挙げられる。

医薬製剤は、必要に応じて被験体に投与され得る。投与の頻度の決定は、治療される病態、治療される被験体の年齢、治療される病態の重症度、治療される被験体の全般的健康状態等の考慮に基づいて、主治医等の当業者によって行われ得る。幾つかの実施形態において、有効用量のＤＲ５結合性ポリペプチドが被験体に１回以上投与される。幾つかの実施形態において、有効用量のＤＲ５結合性ポリペプチドが、被験体に毎日、週に２回、毎週、２週間ごとに、月に１回等で投与される。有効用量のＤＲ５結合性ポリペプチドが被験体に少なくとも１回投与される。幾つかの実施形態において、有効用量のＤＲ５結合性ポリペプチドが、少なくとも１ヶ月、少なくとも６ヶ月、又は少なくとも１年間にわたる複数回を含む複数回で投与され得る。

幾つかの実施形態において、医薬製剤は、癌を治療（癌の予防を含む）するのに有効な量で投与される。治療有効量は、典型的には、治療される被験体の体重、その被験体の身体的状態若しくは健康状態、治療される病態の広範さ、又は治療される被験体の年齢に依存する。一般に、抗体は、用量あたり約０．０５ｍｇ／ｋｇ（体重）～約１００ｍｇ／ｋｇ（体重）の範囲の量で投与され得る。幾つかの実施形態において、抗体は、用量あたり約１０μｇ／ｋｇ（体重）～約１００ｍｇ／ｋｇ（体重）の範囲の量で投与され得る。幾つかの実施形態において、抗体は、用量あたり約５０μｇ／ｋｇ（体重）～約５ｍｇ／ｋｇ（体重）の範囲の量で投与され得る。幾つかの実施形態において、抗体は、用量あたり約１００μｇ／ｋｇ（体重）～約１０ｍｇ／ｋｇ（体重）の範囲の量で投与され得る。幾つかの実施形態において、抗体は、用量あたり約１００μｇ／ｋｇ（体重）～約２０ｍｇ／ｋｇ（体重）の範囲の量で投与され得る。幾つかの実施形態において、抗体は、用量あたり約０．５ｍｇ／ｋｇ（体重）～約２０ｍｇ／ｋｇ（体重）の範囲の量で投与され得る。幾つかの実施形態において、抗体は、用量あたり約０．５ｍｇ／ｋｇ（体重）～約１０ｍｇ／ｋｇ（体重）の範囲の量で投与され得る。幾つかの実施形態において、抗体は、用量あたり約０．０５ｍｇ／ｋｇ（体重）～約２０ｍｇ／ｋｇ（体重）の範囲の量で投与され得る。幾つかの実施形態において、抗体は、用量あたり約０．０５ｍｇ／ｋｇ（体重）～約１０ｍｇ／ｋｇ（体重）の範囲の量で投与され得る。幾つかの実施形態において、抗体は、約５ｍｇ／ｋｇ（体重）以下、例えば、４ｍｇ／ｋｇ未満、３ｍｇ／ｋｇ未満、２ｍｇ／ｋｇ未満、又は１ｍｇ／ｋｇ未満の範囲の抗体の量で投与され得る。

幾つかの実施形態において、ＤＲ５結合性ポリペプチドは限定されるものではないが、筋肉内、静脈内、動脈内、非経口、腹腔内、又は皮下を含む様々な経路によってｉｎ ｖｉｖｏで投与され得る。意図される用途に応じて、適切な製剤及び投与経路を選択することができる。

併用療法
ＤＲ５結合性ポリペプチドは、単独で又は他の抗癌剤等の他の治療方式と組み合わせて投与され得る。ＤＲ５結合性ポリペプチドは、他の治療方式の前、実質的にそれと同時に、又はその後に供給され得る（すなわち、同時に又は順次に）。幾つかの実施形態において、本明細書に記載される治療方法は、放射線療法、化学療法、ワクチン接種、標的腫瘍療法、ＣＡＲ－Ｔ療法、腫瘍溶解性ウイルス療法、癌免疫療法、サイトカイン療法、外科的切除、クロマチン修飾、切除、冷却療法、腫瘍標的に対するアンチセンス剤、腫瘍標的に対するｓｉＲＮＡ剤、腫瘍標的に対するマイクロＲＮＡ剤若しくは抗癌剤／抗腫瘍剤、又は抗体、サイトカイン若しくは受容体細胞外ドメイン－Ｆｃ融合物等の生物製剤を施すことを更に含み得る。

幾つかの実施形態において、本明細書で提供されるＤＲ５結合性ポリペプチドは、第２の治療剤、例えば、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法薬と同時に与えられる。ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１療法薬の例には、ニボルマブ（BMS）、ピディリズマブ（CureTech、ＣＴ－０１１）、ペンブロリズマブ（Merck）、デュルバルマブ（Medimmune/AstraZeneca）、アテゾリズマブ（Genentech/Roche）、アベルマブ（Pfizer）、ＡＭＰ－２２４（Amplimmune）、ＢＭＳ－９３６５５９、ＡＭＰ－５１４（Amplimmune）、ＭＤＸ－１１０５（Merck）、ＴＳＲ－０４２（Tesaro/AnaptysBio、ＡＮＢ－０１１）、ＳＴＩ－Ａ１０１０（Sorrento Therapeutics）、ＳＴＩ－Ａ１１１０（Sorrento Therapeutics）、及びプログラム死－１（ＰＤ－１）又はプログラム死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）に対する他の作用物質が含まれる。

幾つかの実施形態において、本明細書で提供されるＤＲ５結合性ポリペプチドは、免疫刺激剤、例えば腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲＳＦ）のメンバー又はＢ７ファミリーのメンバーのアゴニストと同時に与えられる。免疫刺激性ＴＮＦＲＳＦメンバーの非限定的な例としては、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、４１ＢＢ、ＣＤ２７及びＨＶＥＭが挙げられる。Ｂ７ファミリーメンバーの非限定的な例としては、ＣＤ２８及びＩＣＯＳが挙げられる。このため、幾つかの実施形態において、本明細書で提供されるＣＤ８結合性ポリペプチドは、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、４１ＢＢ、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＣＤ２８及び／又はＩＣＯＳのアゴニスト、例えばアゴニスト抗体と同時に与えられる。

幾つかの実施形態において、本明細書で提供されるＤＲ５結合性ポリペプチドは、ＣＡＲ－Ｔ（キメラ抗原受容体Ｔ細胞）療法薬、腫瘍溶解性ウイルス療法薬、サイトカイン療法薬、及び／又はＶＩＳＴＡ、ｇｐＮＭＢ、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＨＨＬＡ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＧＩＴ等の他のチェックポイント分子を標的とする作用物質と同時に与えられる。

キット
本明細書で提供される製剤のいずれか及び適切な包装を含む製造品及びキットも提供される。幾つかの実施形態において、本発明は、（ｉ）ＤＲ５結合性ポリペプチドを含む製剤と、（ｉｉ）該キットを使用して製剤を個体に投与するための使用説明書とを含むキットを含む。

本明細書に記載される組成物に適切な包装は、当該技術分野で知られており、例えば、バイアル（例えば、密封バイアル）、容器、アンプル、ボトル、広口瓶、フレキシブルな包装（例えば、密封マイラー又はプラスチックバッグ）等が含まれる。これらの製造品は、更に滅菌及び／又は密封され得る。本明細書に記載される組成物を含む単位剤形も提供される。これらの単位剤形は、単回又は多回単位剤形で適切な包装内で保存され得て、更に滅菌及び密封もされ得る。本発明のキットに提供される使用説明書は、典型的には、ラベル又は添付文書（例えば、キットに含まれる紙シート）に書かれた指示であるが、機械可読の指示（例えば、磁気記憶ディスク又は光学記憶ディスクに保持された指示）も許容可能である。抗体の使用に関する使用説明書は一般に、意図された治療又は工業的使用のための投与量、投与スケジュール、及び投与経路に関する情報を含む。キットは、個々の適切な治療を選択することの説明を更に含み得る。

容器は、単位用量、バルク包装（例えば、多回用量包装）又はサブユニット用量であり得る。例えば、１週間、２週間、３週間、４週間、６週間、８週間、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月以上のいずれかの概数の期間等の長期間にわたって個体に効果的な治療をもたらすのに十分な用量の本明細書に開示される分子を含むキットも提供され得る。キットはまた、多回単位用量の分子及び使用説明書を含むことができ、薬局、例えば、病院薬局及び調剤薬局での保存及び使用に十分な量で包装され得る。幾つかの実施形態において、キットは、再構成、再懸濁、又は再水和することで、一般的に抗体の安定な水溶液を形成することができる乾燥（例えば、凍結乾燥）組成物を含む。

以下で論じられる実施例は、本発明を純粋に例示することが意図され、決して本発明を限定するとみなされるべきではない。これらの実施例は、以下の実験が、実施された全て又は唯一の実験であることを表すとは意図されない。使用される数値（例えば、量、温度等）に関して正確さを保証するための努力がなされたが、幾らかの実験誤差及び偏差が考慮に入れられるべきである。特段の指示が無い限り、部は重量部であり、分子量は平均分子量であり、温度は摂氏温度であり、圧力は大気圧であるか又は近大気圧である。

実施例１：最初の凍結乾燥ＩＮＢＲＸ－１０９製剤の開発
ＩＮＢＲＸ－１０９の第１相製剤は、２０ｍｇ／ｍＬのＩＮＢＲＸ－１０９、２０ｍＭ酢酸ナトリウム、２６３ｍＭのスクロース及び０．２０％のポロキサマー１８８を含有し、ｐＨ５．０であった。製剤は、液体状態で保存した場合、５℃で６ヶ月後に目に見えるタンパク性粒子を発生することが見出された。したがって、粒子形成を防ぐために臨床製品を凍結した。したがって、次の臨床段階のための凍結乾燥製剤を開発した。

目に見える粒子を実質的に含まず、サイズ排除（ＳＥＣ）クロマトグラフィーにより、再構成後及び５℃で２年間の保存の間の両方で高分子量（ＨＭＷ）種の最小限の増加を示す凍結乾燥製剤を開発することが目的であった。

第１相製剤は２０ｍＭのアセテートを含有していたが、ヒスチジンがフリーズドライプロセスにより適合するため、ヒスチジンを含む凍結乾燥製剤を最初に開発し、試験した。最初の凍結乾燥製剤は、２０ｍＭヒスチジン緩衝液（ｐＨ６．０）を含んでいた。２０ｍｇ／ｍｌのＩＮＢＲＸ－１０９製剤は、０．２％のポロキサマーＰ１８８を含有し、４０ｍｇ／ｍｌのＩＮＢＲＸ－１０９製剤は、０．４％のポロキサマーＰ１８８を含有していた。スクロース、トレハロース、又はスクロース及びマンニトールの３つの異なる凍結乾燥保護剤を様々な％（ｗ／ｖ）濃度で試験した。製剤をガラスバイアルに２ｍｌ充填した。１回の凍結／融解サイクル後及び凍結乾燥後、並びに凍結乾燥製剤を４０℃又は５０℃で１ヶ月保存した後の可溶性凝集体の変化を、ＴＳＫ ｇｅｌ Ｇ３０００ＳＷｘｌカラム（３０ｃｍ×７．８ｍｍ、５μｍ）及びAgilentのＨＰＬＣを用いたＳＥＣ分析によって決定した。移動相は５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液、３００ｍＭ ＮａＣｌ（ｐＨ６．８）であった。流量は１．０ｍＬ／分であった。サンプルを１ｍｇ／ｍＬに希釈し、目に見える粒子がある場合は０．２２μｍ ＰＥＳ膜で滅菌濾過し、ＨＰＬＣカラムに１０μＬの容量で注入し、２８０ｎｍで検出した。結果を表１に示す。

表１に示されるように、スクロースは、この製剤において凍結乾燥保護剤としてトレハロースよりも優れており（１Ａ～３Ａ対４Ａ～６Ａ；１Ｂ～３Ｂ対４Ｂ～６Ｂの比較）、スクロースの濃度が高いほど、より安定していた（４Ａ対６Ａ；４Ｂ対６Ｂの比較）。

実施例２：更なる凍結乾燥ＩＮＢＲＸ－１０９製剤の開発
５０ｍｇ／ｍＬのＩＮＢＲＸ－１０９、１０ｍＭのヒスチジン（ｐＨ６）及び０．２％のポロキサマーＰ１８８を用いた一連の更なる製剤を試験した。この一連の製剤は全て、表２に示されるように５ｍＭのメチオニンとトレハロース又はスクロースのいずれかとを含んでいた。

凍結乾燥前に、表２の各製剤を目に見える粒子の外観について、またＳＥＣによってアッセイした。凍結乾燥後、時点０及び４０℃にて１週間の保存後の両方で、製剤をケーキの外観及び再構成時間についてアッセイし、再構成した製剤を目に見える粒子の外観について、またＳＥＣ及びＨＩＡＣによってアッセイした。外観試験については、ＹＢ－２ライトボックスを用いて白黒の背景に対して製剤を試験した。本研究に用いた凍結乾燥サイクルを表３に示す。

外観試験の結果を表４に示す。Ｓｏ＝僅かに乳白色；ＦＶＰ＝目に見える粒子なし。

全ての製剤の外観は、凍結乾燥の前後及び凍結乾燥状態で１ヶ月の保存後に僅かに乳白色であり、目に見える粒子を含まなかった。

表５に示されるように、Ｔ０での凍結乾燥製剤のＳＥＣ分析は、全ての製剤の凍結乾燥後に最小限の増加を示した。スクロース含有製剤では、４０℃で１週間の保存後にＨＭＷに変化は見られなかったが、１週間の時点でのトレハロース製剤（Ｆ１～Ｆ５）の分析中のＳＥＣカラムのパフォーマンスの低下が、これらのサンプルのＨＭＷの見かけの増加をもたらした可能性がある。０．２％～０．８％の濃度範囲でポロキサマーを含有する製剤は、保存後にＨＭＷの同様の変化を示した（Ｆ２対Ｆ６）。

相対的なケーキの外観を半定量化するために、「視覚的外観」スコアを開発した。ここで、スコア「０」は、非常に悪い外観（崩壊、亀裂、メルトバック等）を有するケーキであり、スコア「１０」は、好ましくない外観を有しない見事な固体ケーキ（亀裂、メルトバック、崩壊等を有しない固体ケーキ）である。表６は、時点０でのケーキの外観及び視覚的外観スコアを示す。

次いで、水で５０ｍｇ／ｍｌのＩＮＢＲＸ－１０９に再構成し、２５℃で最大３０時間保存した後の各製剤の外観を決定した。結果を表７に示す。ＰＯ＝観察された粒子；ＦＶＰ＝目に見える粒子なし；（＋）＝観察された粒子がより多い；（－）＝観察された粒子がより少ない。

トレハロース含有製剤（Ｆ１～Ｆ４）が、粒子を形成する可能性が高く、僅か４時間の保存（Ｆ１）、また全てのトレハロース含有製剤について２４時間の保存までに目に見える粒子の存在を示すことが見出された。Ｆ５及びＦ６（０．８％のポロキサマー）の両方が、Ｆ１（０．２％のポロキサマー）と同じく４時間後に目に見える粒子を示したことから、ポロキサマーの濃度が粒子形成までの時間を変化させないことも見出された。スクロース含有製剤は、粒子形成までの時間においてトレハロースよりも優れていた。製剤Ｆ７（２６０ｍＭのスクロース）は、Ｆ１（２６０ｍＭのトレハロース）の４時間に対して２４時間で粒子を形成し、Ｆ９（２００ｍＭのスクロース）は、１８時間の時点になるまで粒子を含まなかったＦ３（２００ｍＭのトレハロース）と比較して、３０時間で粒子を含まなかった。

実施例３：凍結乾燥前の製剤の安定性
製剤を凍結乾燥前に液体原薬としての短期保存中の物理的安定性（ＳＥＣによる凝集及び目に見える粒子の外観）について評定した。非イオン性界面活性剤としてポロキサマー又はポリソルベート８０のいずれかを用い、２０ｍＭヒスチジンＨＣｌ緩衝液（ｐＨ６．０）中で２５ｍｇ／ｍｌ又は５０ｍｇ／ｍｌのタンパク質の一連の新たな製剤を調製した。ポロキサマーとともに８％のスクロースを含む２０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）中の対照製剤も調製し、試験した。製剤を２５℃で最大３日間保存し、粒子形成について観察した。製剤を表８に示し、結果を表９に示す。ＦＶＰ＝目に見える粒子なし。

表９に示されるように、２５℃で保存した場合、これらの製剤は最大３日間粒子を含まず、スクロースとポロキサマー又はポリソルベート８０のいずれかとを用いたヒスチジン製剤が、アセテートを含む対照製剤と同程度に安定していたことが示される。２０ｍｇ／ｍｌ及び５０ｍｇ／ｍｌの製剤の両方が、これらの条件下で安定していた。

高分子量（ＨＭＷ）凝集体の変化を、２５℃で１日後及び３日後にＳＥＣによってもアッセイした。表１０に示されるように、ＨＭＷ凝集体形成は、液体状態にて２５℃で最大３日間保存した場合に、酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）を含有する製剤とヒスチジンＨＣｌ緩衝液（ｐＨ６．０）を含有する製剤とで同様であった。予想の通り、５０ｍｇ／ｍｌ製剤は、２０ｍｇ／ｍｌ製剤と比較して凝集率が高かった（太字；Ｆ１１、Ｆ１３、及びＦ１５）。ＬＭＷ＝低分子量種。

実施例４：様々な濃度のスクロース及びＩＮＢＲＸ－１０９
スクロースの濃度を最適化し、２５ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度を評価するために付加的な製剤を開発した。これらの製剤は、安定剤として作用し得るメチオニンも含んでいた。製剤を表１１に示す。

凍結乾燥前、凍結乾燥後の時点０（再構成後にアッセイ）、凍結乾燥製剤の４０℃で４週間の保存後（再構成後のアッセイ）、液体製剤の３回の凍結／融解サイクル後、及び液体製剤の２５℃で２週間又は４週間の保存後の外観について３つの製剤をアッセイした。結果を表１２に示す。ＳＯ－僅かに乳白色；ＦＶＰ＝目に見える粒子なし。

表１２に示されるように、凍結乾燥の前後、凍結乾燥状態にて４０℃で４週間の保存後、３回の凍結－融解サイクル後、並びに液体形態にて２５℃で２週間及び４週間の保存後に標準検査手順により観察した場合に、３つの全ての製剤が目に見える粒子を含まなかった。より細密な検査手順を用いて観察した場合（ＵＳＰ＜７９０＞）、９％のスクロースを含む製剤（Ｆ１７及びＦ１８）は、凍結乾燥後の時点０で約１０個の非常に小さな粒子を示し、３つ全ての製剤が、液体形態にて２５℃で４週間の最も長いストレス条件後の細密検査の際に、これらの小さな粒子を示した。

全ての凍結乾燥製剤の視覚的外観は、許容可能であり、白色ないしオフホワイト色の固体ケーキのように見え、物理的崩壊、収縮又は亀裂の所見はなかった。

凍結乾燥含水率、再構成時間、並びに凍結乾燥製剤として４０℃で４週間の保存後、液体製剤として２５℃で４週間の保存後、及び３回の凍結／融解サイクル後に保持された効力についても製剤を試験した。表１３に示されるように、３つ全ての製剤が許容範囲内であった。

製剤をＳＥＣにより、ＨＭＷ凝集体形成についてもアッセイした。ＨＭＷ凝集体形成によって測定したところ、凍結乾燥前、凍結乾燥後、及び凍結乾燥製剤として４０℃で４週間の保存後に３つ全ての製剤が安定していることが見出された。結果を表１４に示す。

表１５に示されるように、液体状態で、５０ｍｇ／ｍｌの製剤が２５℃で４週間後にＳＥＣによって測定されるＨＭＷ凝集の僅かな増加を示し、３回の凍結／融解サイクル後又は２５℃で４週間の保存後に変化は見られなかった。

次いで、凍結乾燥前、凍結乾燥後の時点０、及び凍結乾燥製剤の４０℃で４週間の保存後に、高精度流体粒子計数法（High Accuracy Fluid Particle Counting：ＨＩＡＣ）を用い、１ミリリットル当たりの目に見えない粒子の存在及び数について製剤をアッセイした。ＨＩＡＣ装置を用いて粒子を測定及び計数し、報告値は各サンプルの三連測定の平均とした。結果を表１６に示す。

３つ全ての製剤が、凍結乾燥後及び凍結乾燥状態にて４０℃で４週間の保存後に非常に少ない、１ミリリットル当たりの目に見えない粒子を示した（目に見えない粒子の許容限界は、１０μｍ以上の粒子については６０００粒子／容器（１０００粒子／ｍＬ）未満であり、２５μｍ以上のサイズについては６００粒子／容器（１００粒子／ｍＬ）未満である）。

表１７は、様々な条件下での液体製剤中の目に見えない粒子の数を示す。

目に見えない粒子も試験した条件下で液体製剤中にて許容限界内であり、製剤が良好な物理的安定性を示すことが実証された。

製剤中のタンパク質のサイズ分布（凝集体（ＨＭＷ）、非還元モノマー（メイン）、フラグメント（ＬＭＷ））を非還元ＣＥ－ＳＤＳ（ＳＤＳ変性剤を用いたキャピラリー電気泳動）によって測定した。表１８に示されるように、凍結乾燥後及び凍結乾燥製剤の４０℃で４週間の保存後にサイズ分布が本質的に変化しないことが見出され、タンパク質がこれらの製剤中で物理的に分解されないことが示された。

タンパク質はまた、表１９に示されるように、アッセイした条件下で殆ど物理的分解を受けず、液体状態にて３つの製剤中で安定していた。

製剤中のタンパク質の電荷プロファイル（％酸性種、％塩基性種、％モノマー）をキャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）によってアッセイした。酸性種は、メインピークよりも低いｐＩ（等電点）を有し、アスパラギン（Ａｓｎ）及び／又はグルタミン酸（Ｇｌｎ）の脱アミド化レベルが増加した分子を含む可能性がある。塩基性種は、メインピークに対して高いｐＩを有し、Ｃ末端リジンを有し、及び／又はアスパラギン酸（Ａｓｐ）残基でのスクシンイミド形成が増加した分子を含む可能性がある。表２０に示されるように、凍結乾燥後及び凍結乾燥製剤の４０℃で４週間の保存後に、電荷プロファイルは本質的に変化しなかった。これらの結果から、これらの条件下で製剤がタンパク質の化学修飾から保護されていることが示される。

製剤はまた、表２１に示されるように、試験した条件下で液体状態にてタンパク質の電荷プロファイルの顕著な変化を示さなかった。したがって、製剤は液体状態でタンパク質の化学修飾から保護され、製剤が薬物製品の凍結乾燥前の製造工程を可能にするのに十分に安定していることが示される。

試験結果に基づき、５０ｍｇ／ｍｌのＩＮＢＲＸ－１０９、１０ｍＭのヒスチジンＨＣｌ、８％のスクロース及び０．２％のポロキサマー１８８の最終製剤（ｐＨ６．０）を選択した。８％スクロースの製剤（Ｆ８）が、再構成後に９％スクロースの製剤（Ｆ７）と比較して長時間にわたって粒子を含まなかった最初の外観の結果に基づき、９％のスクロースよりも８％のスクロースを選択した。

ＩＮＢＲＸ－１０９の最終製剤のバッチを作製し、表２２に示すように様々な条件下で様々な特性について試験した。

最終製剤の製品品質属性から、この製剤が再構成後及び凍結乾燥薬物製品の保存後の両方で目に見える粒子の形成を防ぎ、ＩＮＢＲＸ－１０９の物理的及び化学的安定性並びに効力を維持することが示された。

実施例５：製剤中のＩＮＢＲＸ－１０９薬物製品の安定性
パイロット規模で製造したＩＮＢＲＸ－１０９凍結乾燥薬物製品の幾つかの温度で保存した後のバッチの安定性を評定した。凍結乾燥製品を滅菌水で再構成して、５０ｍｇ／ｍｌのＩＮＢＲＸ－１０９、１０ｍＭのヒスチジンＨＣｌ、８％のスクロース及び０．２％のポロキサマー１８８を含有する水性製剤（ｐＨ６．０）を形成した。

再構成した製品の分析試験の結果を表２３及び表２４に示す。凍結乾燥薬物製品中のＩＮＢＲＸ－１０９は、２℃～８℃の意図される保存条件で９ヶ月の保存後、また製品の分解を加速するために用いた温度である２５℃及び４０℃で長時間にわたって、その物理的特性、化学的特性（ＳＥＣによるサイズ分布、ＣＥ－ＳＤＳ、ｉＣＩＥＦによる電荷変異体プロファイル）及び生物学的特性（効力）を保持した。これらの保存条件下で、凍結乾燥薬物製品は、目に見える粒子を実質的に含まないままであった。表２３及び表２４において、「ＳＶＰ」は目に見えない粒子を意味し、「ＳＥＣ」はサイズ排除クロマトグラフィーを意味し、「ｃＩＥＦ」はキャピラリー等電点電気泳動を意味し、「ＣＥ－ＳＤＳ－ＮＲ」はキャピラリー電気泳動－ドデシル硫酸ナトリウム－非還元を意味し、「ＣＥ－ＳＤＳ－Ｒ」はキャピラリー電気泳動－ドデシル硫酸ナトリウム－還元を意味し、「＃／Ｃ」は粒子数／容器を意味し、「ＨＭＷ」は高分子量種を意味し、「メイン」はメインピークを意味し、「ＬＭＷ」は低分子量種を意味し、「ｍＯｓｍ」はミリオスモルを意味し、「ＰＦＶＰ」は、目に見える粒子を実質的に含まないことを意味し、「ＲＨ」は相対湿度を意味する。

再構成前の凍結乾燥製品の分析試験の結果を表２５に示す。このデータから、薬物製品の物理的外観、再構成時間及び含水率に極めて僅かな変化しか検出されなかったため、凍結乾燥薬物製品が長時間にわたり、また幾つかの温度にわたってその安定性を保持したことが示される。「ＲＨ」は相対湿度を意味し、「ＮＴ」は試験しないことを意味し、「再構成時間」は、目視で決定される、製品バイアルに希釈剤（注射用滅菌水）を添加してから凍結乾燥固体が完全に溶解するまでの時間（秒）である。

本開示は、本開示の趣旨又は本質的な特徴から逸脱することなく、他の特定の形態で具体化され得る。したがって、上述の実施形態は、全ての点で例示としてみなされるべきであって、本開示を限定するものとはみなされない。したがって、本開示の範囲は、上述の詳細な説明ではなく、添付の特許請求の範囲によって示されるため、特許請求の範囲の意味及び均等の範囲内にある全ての変更は、本明細書に含まれることが意図される。

Claims (54)

1. ＤＲ５結合性ポリペプチドを含む医薬製剤であって、該製剤が２０ｍｇ／ｍＬ～７０ｍｇ／ｍＬのＤＲ５結合性ポリペプチド、５ｍＭ～２０ｍＭのヒスチジン、７％～１０％（ｗ／ｖ）のスクロース及び０．１％～０．８％のポロキサマーＰ１８８を含み、ｐＨ５．３～６．７であり、前記ＤＲ５結合性ポリペプチドが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む少なくとも１つのＶＨＨドメインを含む、医薬製剤。
2. ３０ｍｇ／ｍＬ～６０ｍｇ／ｍＬのＤＲ５結合性ポリペプチドを含む、請求項１に記載の医薬製剤。
3. ５０ｍｇ／ｍＬのＤＲ５結合性ポリペプチドを含む、請求項１に記載の医薬製剤。
4. ７ｍＭ～１５ｍＭのヒスチジンを含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の医薬製剤。
5. １０ｍＭのヒスチジンを含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の医薬製剤。
6. 前記ヒスチジンがヒスチジンＨＣｌである、請求項１～５のいずれか一項に記載の医薬製剤。
7. ８％～９％のスクロースを含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の医薬製剤。
8. ８％のスクロース又は９％のスクロースを含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の医薬製剤。
9. ０．２％～０．４％のポロキサマーＰ１８８を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の医薬製剤。
10. ０．２％のポロキサマーＰ１８８を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の医薬製剤。
11. １ｍＭ～１０ｍＭ、２ｍＭ～８ｍＭ、３ｍＭ～７ｍＭ又は４ｍＭ～６ｍＭのメチオニンを含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載の医薬製剤。
12. ５ｍＭのメチオニンを含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の医薬製剤。
13. 前記製剤のｐＨが５．４～６．６、５．５～６．５、５．６～６．４、５．７～６．３又は５．８～６．２である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の医薬製剤。
14. 前記製剤のｐＨが約６である、請求項１～１３のいずれか一項に記載の医薬製剤。
15. 前記製剤が５０ｍｇ／ｍＬのＤＲ５結合性ポリペプチド、１０ｍＭのヒスチジンＨＣｌ、８％のスクロース及び０．２％のポロキサマーＰ１８８を含み、前記製剤のｐＨが約６である、請求項１～１４のいずれか一項に記載の医薬製剤。
16. 前記製剤が本質的に５０ｍｇ／ｍＬのＤＲ５結合性ポリペプチド、１０ｍＭのヒスチジンＨＣｌ、８％のスクロース、０．２％のポロキサマーＰ１８８及び水からなり、前記製剤のｐＨが約６である、請求項１５に記載の医薬製剤。
17. 前記ＤＲ５結合性ポリペプチドが、配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＨＨドメインを含む、請求項１～１６のいずれか一項に記載の医薬製剤。
18. 前記ＤＲ５結合性ポリペプチドがＦｃ領域を含む、請求項１～１７のいずれか一項に記載の医薬製剤。
19. 前記Ｆｃ領域が配列番号６のアミノ酸配列を含む、請求項１８に記載の医薬製剤。
20. 前記ＤＲ５結合性ポリペプチドがＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ－リンカー－Ｆｃの構造を有する、請求項１～１９のいずれか一項に記載の医薬製剤。
21. 前記ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨが配列番号５のアミノ酸配列を含む、請求項２０に記載の医薬製剤。
22. 前記ＤＲ５結合性ポリペプチドが配列番号７のアミノ酸配列を含む、請求項１～２１のいずれか一項に記載の医薬製剤。
23. 前記ＤＲ５結合性ポリペプチドが配列番号７のアミノ酸配列からなる、請求項１～２１のいずれか一項に記載の医薬製剤。
24. ＤＲ５結合性ポリペプチドを含む凍結乾燥製剤であって、前記ＤＲ５結合性ポリペプチドが、配列番号１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１と、配列番号２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２と、配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３とを含む少なくとも１つのＶＨＨドメインを含み、該凍結乾燥製剤を水中で再構成して水性製剤を形成すると、該水性製剤が２０ｍｇ／ｍＬ～７０ｍｇ／ｍＬのＤＲ５結合性ポリペプチド、５ｍＭ～２０ｍＭのヒスチジン、７％～１０％のスクロース及び０．１％～０．５％のポロキサマーＰ１８８を含み、ｐＨ５．３～６．７である、凍結乾燥製剤。
25. 前記製剤を水中で再構成して水性製剤を形成すると、該水性製剤が３０ｍｇ／ｍＬ～６０ｍｇ／ｍＬのＤＲ５結合性ポリペプチドを含む、請求項２４に記載の凍結乾燥製剤。
26. 前記製剤を水中で再構成して水性製剤を形成すると、該水性製剤が５０ｍｇ／ｍＬのＤＲ５結合性ポリペプチドを含む、請求項２４に記載の凍結乾燥製剤。
27. 前記製剤を水中で再構成して水性製剤を形成すると、該水性製剤が７ｍＭ～１５ｍＭのヒスチジンを含む、請求項２４～２６のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。
28. 前記製剤を水中で再構成して水性製剤を形成すると、該水性製剤が１０ｍＭのヒスチジンを含む、請求項２４～２６のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。
29. 前記ヒスチジンがヒスチジンＨＣｌである、請求項２４～２８のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。
30. 前記凍結乾燥製剤を水中で再構成して水性製剤を形成すると、該水性製剤が８％～９％のスクロースを含む、請求項２４～２９のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。
31. 前記製剤を水中で再構成して水性製剤を形成すると、該水性製剤が８％のスクロース又は９％のスクロースを含む、請求項２４～３０のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。
32. 前記製剤を水中で再構成して水性製剤を形成すると、該水性製剤が０．２％～０．４％のポロキサマーＰ１８８を含む、請求項２４～３１のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。
33. 前記製剤を水中で再構成して水性製剤を形成すると、該水性製剤が０．２％のポロキサマーＰ１８８を含む、請求項２４～３２のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。
34. 前記製剤を水中で再構成して水性製剤を形成すると、該水性製剤が１ｍＭ～１０ｍＭ、２ｍＭ～８ｍＭ、３ｍＭ～７ｍＭ又は４ｍＭ～６ｍＭのメチオニンを含む、請求項２４～３３のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。
35. 前記製剤を水中で再構成して水性製剤を形成すると、該水性製剤が５ｍＭのメチオニンを含む、請求項２４～３３のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。
36. 前記製剤を水中で再構成して水性製剤を形成すると、該水性製剤のｐＨが５．４～６．６、５．５～６．５、５．６～６．４、５．７～６．３又は５．８～６．２である、請求項２４～３５のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。
37. 前記製剤を水中で再構成して水性製剤を形成すると、該水性製剤のｐＨが約６である、請求項２４～３５のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。
38. 前記製剤を水中で再構成して水性製剤を形成すると、該水性製剤が５０ｍｇ／ｍＬのＤＲ５結合性ポリペプチド、１０ｍＭのヒスチジンＨＣｌ、８％のスクロース及び０．２％のポロキサマーＰ１８８を含み、ｐＨ約６である、請求項２４～３７のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。
39. 前記製剤を水中で再構成して水性製剤を形成すると、該水性製剤が本質的に５０ｍｇ／ｍＬのＤＲ５結合性ポリペプチド、１０ｍＭのヒスチジンＨＣｌ、８％のスクロース、０．２％のポロキサマーＰ１８８及び水からなり、前記製剤のｐＨが約６である、請求項２８に記載の凍結乾燥製剤。
40. 前記ＤＲ５結合性ポリペプチドが、配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＨＨドメインを含む、請求項２４～３９のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。
41. 前記ＤＲ５結合性ポリペプチドがＦｃ領域を含む、請求項２４～４０のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。
42. 前記Ｆｃ領域が配列番号６のアミノ酸配列を含む、請求項４１に記載の凍結乾燥製剤。
43. 前記ＤＲ５結合性ポリペプチドがＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨ－リンカー－Ｆｃの構造を有する、請求項２４～４２のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。
44. 前記ＶＨＨ－リンカー－ＶＨＨが配列番号５のアミノ酸配列を含む、請求項４３に記載の凍結乾燥製剤。
45. 前記ＤＲ５結合性ポリペプチドが配列番号７のアミノ酸配列を含む、請求項２４～４４のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。
46. 前記ＤＲ５結合性ポリペプチドが配列番号７のアミノ酸配列からなる、請求項２４～４４のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。
47. 請求項１～２３のいずれか一項に記載の医薬製剤を凍結乾燥することによって形成される凍結乾燥製剤。
48. ２℃～８℃で最大３ヶ月、最大６ヶ月、最大９ヶ月、最大１２ヶ月又は１２ヶ月超にわたって保存した後に、前記凍結乾燥製剤が、目に見える不純物を全く含まないオフホワイト色の均一で見事なケーキである、請求項２４～４７のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。
49. ２℃～８℃で最大３ヶ月、最大６ヶ月、最大９ヶ月、最大１２ヶ月又は１２ヶ月超にわたって保存した後に、前記製剤を水中で再構成して水性製剤を形成すると、該水性製剤が実質的に目に見える粒子を含まない、請求項２４～４８のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。
50. ２℃～８℃で最大３ヶ月、最大６ヶ月、最大９ヶ月、最大１２ヶ月又は１２ヶ月超にわたって保存した後に、前記製剤を水中で再構成して水性製剤を形成すると、サイズ排除クロマトグラフィーによって測定して、前記水性製剤中に存在する前記ＤＲ５結合性ポリペプチドの３％未満又は２％未満が凝集している、請求項２４～４９のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。
51. サイズ排除クロマトグラフィーによって測定して、前記水性製剤中に存在する前記ＤＲ５結合性ポリペプチドの１％未満又は０．５％未満が分解されている、請求項５０に記載の凍結乾燥製剤。
52. 請求項２４～５１のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤を再構成することによって形成される医薬製剤。
53. 癌を有する被験体に請求項１～２３及び５２のいずれか一項に記載の医薬製剤を投与することを含む、癌を治療する方法。
54. 前記癌が軟骨肉腫、中皮腫、大腸癌、ユーイング肉腫又は膵臓腺癌である、請求項５３に記載の方法。