JP2024506758A - 改変された幹細胞組成物およびその使用方法 - Google Patents

Abstract

幹細胞移植における改変幹細胞とその使用法を提供する。

Description

関連出願
本出願は、２０２１年２月９日出願の米国仮特許出願第６３／１４７，６２７号および２０２１年１０月１８日出願の米国仮特許出願第６３／２５７，０１２号に基づく優先権の利益を主張するものであり、これらは引用によりその内容全体を本明細書に包含させる。

配列表
本出願はＥＦＳ－Ｗｅｂを通じて電子的に提出され、電子的に提出されたテキスト形式の配列表を含む。テキストファイルには、２０２２年２月８日に作成されたJATH_001_01WO_ST25.txtという表題の配列表が含まれており、サイズは８２キロバイトである。このテキストファイルに含まれる配列表は、本明細書の一部であり、引用することによりその内容全体を本明細書に包含させる。

発明の分野
本発明は、改変された造血幹細胞、例えば構成的に活性な改変されたＣＤ１１７を含む造血幹細胞、および造血幹細胞移植のためのそれらの使用に関する。

背景
造血細胞移植（ＨＣＴ）は一般に、骨髄、末梢血、臍帯血から得られた自家または同種ドナーの造血幹細胞（ＨＳＣ）または造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）を、骨髄または免疫系に損傷または欠陥のある対象に静脈内点滴することを含む。造血幹細胞移植は、白血病などの癌および先天性免疫不全症など、多くの疾患の治療の一部として行われ得る。

ＨＣＴは通常、ドナーのＨＳＣが生着するために、内因性ＨＳＣの骨髄ニッチを除去するための準備または条件付け(preparative or conditioning)レジメンを伴う。現在の条件付けレジメンには、ＤＮＡに損傷を与える放射線療法および／または化学療法が含まれることがあり、これらの治療にはＨＣＴの使用を制限する毒性作用がある。最近、ＨＳＣを標的とし、枯渇させる非遺伝毒性アプローチが開発され、これは、ＨＳＣおよび前駆細胞（ＨＳＰＣ）の表面に発現される受容体チロシンキナーゼであるヒトＣＤ１１７（ｃ－Ｋｉｔ）と結合する抗体を用いるものである。抗ｃ－Ｋｉｔ抗体による処置は、インビボでヒト造血を抑制し、ヒト細胞を異種移植したマウスでヒトＨＳＣを枯渇させ、ヒト以外の霊長動物の造血幹細胞を安全に枯渇させることが示されている(Agarwal, R. et al., Blood (2019) 134 (Supplement_1):800。

それにもかかわらず、毒性が減少し、移植されたＨＳＣおよび／またはＨＳＰＣの生着が増加する条件付き方法を含む、ＨＣＴのための改善された組成物および方法が当技術分野で必要とされている。本発明はこのニーズに応えるものである。

発明の概要
本発明は、とりわけ、新規の改変されたＣＤ１１７ポリペプチド、関連組成物および造血幹細胞移植におけるその使用法を提供する。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドは、幹細胞因子（ＳＣＦ）結合の不存在下でＨＳＣおよび／またはＨＳＰＣにおけるシグナル伝達が可能である。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドは、細胞、例えばＨＳＣおよび／またはＨＳＰＣにおいて発現または存在するとき、構成的シグナル伝達および／またはＣＤ１１７介在キナーゼ活性を提供する。従って、特定の態様において、ＨＳＣおよび／またはＨＳＰＣにおいて発現または存在するとき、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドは、ＣＤ１１７へのＳＣＦ結合を阻止する抗体によって結合されたとき、ＣＤ１１７シグナル伝達を可能にする。

一面において、本明細書は、野生型ＣＤ１１７ポリペプチドと比較して１以上のアミノ酸修飾、例えば、１以上のアミノ酸置換、挿入または欠失を含む改変型ＣＤ１１７ポリペプチドを提供する。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドは、１以上のアミノ酸置換、例えば、野生型ヒトＣＤ１１７に存在する以下のアミノ酸の１以上、例えば、Ｄ８１６Ｖ置換および／またはＮ５０５Ｉ置換のような、Ｎ５０５またはＤ８１６を含む。特定の態様において、１以上のアミノ酸修飾は、野生型ＣＤ１１７ポリペプチドの細胞外ドメイン、膜貫通領域または細胞内ドメインの表面露出アミノ酸残基または領域、例えば、膜近傍領域またはキナーゼドメインに位置する。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドは、野生型ＣＤ１１７ポリペプチド、またはその機能的フラグメントに対して、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列相同性を有する。特定の態様において、野生型ＣＤ１１７ポリペプチドは、野生型ヒトＣＤ１１７ポリペプチドであり、要すれば、以下のアミノ酸配列のうちの１つを有する：
ＭＲＧＡＲＧＡＷＤＦＬＣＶＬＬＬＬＬＲＶＱＴＧＳＳＱＰＳＶＳＰＧＥＰＳＰＰＳＩＨＰＧＫＳＤＬＩＶＲＶＧＤＥＩＲＬＬＣＴＤＰＧＦＶＫＷＴＦＥＩＬＤＥＴＮＥＮＫＱＮＥＷＩＴＥＫＡＥＡＴＮＴＧＫＹＴＣＴＮＫＨＧＬＳＮＳＩＹＶＦＶＲＤＰＡＫＬＦＬＶＤＲＳＬＹＧＫＥＤＮＤＴＬＶＲＣＰＬＴＤＰＥＶＴＮＹＳＬＫＧＣＱＧＫＰＬＰＫＤＬＲＦＩＰＤＰＫＡＧＩＭＩＫＳＶＫＲＡＹＨＲＬＣＬＨＣＳＶＤＱＥＧＫＳＶＬＳＥＫＦＩＬＫＶＲＰＡＦＫＡＶＰＶＶＳＶＳＫＡＳＹＬＬＲＥＧＥＥＦＴＶＴＣＴＩＫＤＶＳＳＳＶＹＳＴＷＫＲＥＮＳＱＴＫＬＱＥＫＹＮＳＷＨＨＧＤＦＮＹＥＲＱＡＴＬＴＩＳＳＡＲＶＮＤＳＧＶＦＭＣＹＡＮＮＴＦＧＳＡＮＶＴＴＴＬＥＶＶＤＫＧＦＩＮＩＦＰＭＩＮＴＴＶＦＶＮＤＧＥＮＶＤＬＩＶＥＹＥＡＦＰＫＰＥＨＱＱＷＩＹＭＮＲＴＦＴＤＫＷＥＤＹＰＫＳＥＮＥＳＮＩＲＹＶＳＥＬＨＬＴＲＬＫＧＴＥＧＧＴＹＴＦＬＶＳＮＳＤＶＮＡＡＩＡＦＮＶＹＶＮＴＫＰＥＩＬＴＹＤＲＬＶＮＧＭＬＱＣＶＡＡＧＦＰＥＰＴＩＤＷＹＦＣＰＧＴＥＱＲＣＳＡＳＶＬＰＶＤＶＱＴＬＮＳＳＧＰＰＦＧＫＬＶＶＱＳＳＩＤＳＳＡＦＫＨＮＧＴＶＥＣＫＡＹＮＤＶＧＫＴＳＡＹＦＮＦＡＦＫＧＮＮＫＥＱＩＨＰＨＴＬＦＴＰＬＬＩＧＦＶＩＶＡＧＭＭＣＩＩＶＭＩＬＴＹＫＹＬＱＫＰＭＹＥＶＱＷＫＶＶＥＥＩＮＧＮＮＹＶＹＩＤＰＴＱＬＰＹＤＨＫＷＥＦＰＲＮＲＬＳＦＧＫＴＬＧＡＧＡＦＧＫＶＶＥＡＴＡＹＧＬＩＫＳＤＡＡＭＴＶＡＶＫＭＬＫＰＳＡＨＬＴＥＲＥＡＬＭＳＥＬＫＶＬＳＹＬＧＮＨＭＮＩＶＮＬＬＧＡＣＴＩＧＧＰＴＬＶＩＴＥＹＣＣＹＧＤＬＬＮＦＬＲＲＫＲＤＳＦＩＣＳＫＱＥＤＨＡＥＡＡＬＹＫＮＬＬＨＳＫＥＳＳＣＳＤＳＴＮＥＹＭＤＭＫＰＧＶＳＹＶＶＰＴＫＡＤＫＲＲＳＶＲＩＧＳＹＩＥＲＤＶＴＰＡＩＭＥＤＤＥＬＡＬＤＬＥＤＬＬＳＦＳＹＱＶＡＫＧＭＡＦＬＡＳＫＮＣＩＨＲＤＬＡＡＲＮＩＬＬＴＨＧＲＩＴＫＩＣＤＦＧＬＡＲＤＩＫＮＤＳＮＹＶＶＫＧＮＡＲＬＰＶＫＷＭＡＰＥＳＩＦＮＣＶＹＴＦＥＳＤＶＷＳＹＧＩＦＬＷＥＬＦＳＬＧＳＳＰＹＰＧＭＰＶＤＳＫＦＹＫＭＩＫＥＧＦＲＭＬＳＰＥＨＡＰＡＥＭＹＤＩＭＫＴＣＷＤＡＤＰＬＫＲＰＴＦＫＱＩＶＱＬＩＥＫＱＩＳＥＳＴＮＨＩＹＳＮＬＡＮＣＳＰＮＲＱＫＰＶＶＤＨＳＶＲＩＮＳＶＧＳＴＡＳＳＳＱＰＬＬＶＨＤＤＶ（配列番号１）；または、
ＭＲＧＡＲＧＡＷＤＦＬＣＶＬＬＬＬＬＲＶＱＴＧＳＳＱＰＳＶＳＰＧＥＰＳＰＰＳＩＨＰＧＫＳＤＬＩＶＲＶＧＤＥＩＲＬＬＣＴＤＰＧＦＶＫＷＴＦＥＩＬＤＥＴＮＥＮＫＱＮＥＷＩＴＥＫＡＥＡＴＮＴＧＫＹＴＣＴＮＫＨＧＬＳＮＳＩＹＶＦＶＲＤＰＡＫＬＦＬＶＤＲＳＬＹＧＫＥＤＮＤＴＬＶＲＣＰＬＴＤＰＥＶＴＮＹＳＬＫＧＣＱＧＫＰＬＰＫＤＬＲＦＩＰＤＰＫＡＧＩＭＩＫＳＶＫＲＡＹＨＲＬＣＬＨＣＳＶＤＱＥＧＫＳＶＬＳＥＫＦＩＬＫＶＲＰＡＦＫＡＶＰＶＶＳＶＳＫＡＳＹＬＬＲＥＧＥＥＦＴＶＴＣＴＩＫＤＶＳＳＳＶＹＳＴＷＫＲＥＮＳＱＴＫＬＱＥＫＹＮＳＷＨＨＧＤＦＮＹＥＲＱＡＴＬＴＩＳＳＡＲＶＮＤＳＧＶＦＭＣＹＡＮＮＴＦＧＳＡＮＶＴＴＴＬＥＶＶＤＫＧＦＩＮＩＦＰＭＩＮＴＴＶＦＶＮＤＧＥＮＶＤＬＩＶＥＹＥＡＦＰＫＰＥＨＱＱＷＩＹＭＮＲＴＦＴＤＫＷＥＤＹＰＫＳＥＮＥＳＮＩＲＹＶＳＥＬＨＬＴＲＬＫＧＴＥＧＧＴＹＴＦＬＶＳＮＳＤＶＮＡＡＩＡＦＮＶＹＶＮＴＫＰＥＩＬＴＹＤＲＬＶＮＧＭＬＱＣＶＡＡＧＦＰＥＰＴＩＤＷＹＦＣＰＧＴＥＱＲＣＳＡＳＶＬＰＶＤＶＱＴＬＮＳＳＧＰＰＦＧＫＬＶＶＱＳＳＩＤＳＳＡＦＫＨＮＧＴＶＥＣＫＡＹＮＤＶＧＫＴＳＡＹＦＮＦＡＦＫＥＱＩＨＰＨＴＬＦＴＰＬＬＩＧＦＶＩＶＡＧＭＭＣＩＩＶＭＩＬＴＹＫＹＬＱＫＰＭＹＥＶＱＷＫＶＶＥＥＩＮＧＮＮＹＶＹＩＤＰＴＱＬＰＹＤＨＫＷＥＦＰＲＮＲＬＳＦＧＫＴＬＧＡＧＡＦＧＫＶＶＥＡＴＡＹＧＬＩＫＳＤＡＡＭＴＶＡＶＫＭＬＫＰＳＡＨＬＴＥＲＥＡＬＭＳＥＬＫＶＬＳＹＬＧＮＨＭＮＩＶＮＬＬＧＡＣＴＩＧＧＰＴＬＶＩＴＥＹＣＣＹＧＤＬＬＮＦＬＲＲＫＲＤＳＦＩＣＳＫＱＥＤＨＡＥＡＡＬＹＫＮＬＬＨＳＫＥＳＳＣＳＤＳＴＮＥＹＭＤＭＫＰＧＶＳＹＶＶＰＴＫＡＤＫＲＲＳＶＲＩＧＳＹＩＥＲＤＶＴＰＡＩＭＥＤＤＥＬＡＬＤＬＥＤＬＬＳＦＳＹＱＶＡＫＧＭＡＦＬＡＳＫＮＣＩＨＲＤＬＡＡＲＮＩＬＬＴＨＧＲＩＴＫＩＣＤＦＧＬＡＲＤＩＫＮＤＳＮＹＶＶＫＧＮＡＲＬＰＶＫＷＭＡＰＥＳＩＦＮＣＶＹＴＦＥＳＤＶＷＳＹＧＩＦＬＷＥＬＦＳＬＧＳＳＰＹＰＧＭＰＶＤＳＫＦＹＫＭＩＫＥＧＦＲＭＬＳＰＥＨＡＰＡＥＭＹＤＩＭＫＴＣＷＤＡＤＰＬＫＲＰＴＦＫＱＩＶＱＬＩＥＫＱＩＳＥＳＴＮＨＩＹＳＮＬＡＮＣＳＰＮＲＱＫＰＶＶＤＨＳＶＲＩＮＳＶＧＳＴＡＳＳＳＱＰＬＬＶＨＤＤＶ（配列番号２）。

特定の態様において、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドは、野生型ＣＤ１１７ポリペプチドと比較して、キナーゼ活性を実質的に保持し、いくつかの態様において、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドは、野生型ＣＤ１１７ポリペプチドと比較して、キナーゼ活性を実質的に増加させる。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドは、ＳＣＦ結合の存在下での野生型ＣＤ１１７ポリペプチドのキナーゼ活性と比較して、ＳＣＦ結合の不存在下でのキナーゼ活性、要すれば構成的キナーゼ活性を実質的に保持するか、または増加させる。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドは、野生型ＣＤ１１７ポリペプチドと比較して、要すればＳＣＦ結合に応答して、キナーゼ活性を実質的に保持し得る。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドは、野生型ＣＤ１１７ポリペプチドと比較して、要すればＳＣＦ結合に応答して、キナーゼ活性を増加させ得る。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドは、野生型ＣＤ１１７ポリペプチドを発現する細胞、例えばＨＳＣおよび／またはＨＳＰＣにおいて、ＳＣＦ結合に応答して、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の構成的キナーゼ活性を、要すればＳＣＦ結合の不存在下で有し得る。

特定の態様において、１以上のアミノ酸修飾は、野生型ＣＤ１１７ポリペプチドと比較して、細胞、例えばＨＳＣおよび／またはＨＳＰＣにおいて発現される改変型ＣＤ１１７ポリペプチドによるｃ－Ｋｉｔシグナル伝達または細胞増殖（要すれば、必ずしもＳＣＦ結合に応答する必要はないが）を実質的に阻害または低下させない。

特定の態様において、１以上のアミノ酸修飾は、野生型ＣＤ１１７ポリペプチドと比較して、細胞、例えばＨＳＣおよび／またはＨＳＰＣにおいて発現される改変型ＣＤ１１７ポリペプチドへの抗ｃ－Ｋｉｔ抗体の結合を実質的に阻害または低下させない。特定の態様において、抗ｃ－Ｋｉｔ抗体は、野生型ＣＤ１１７および／または改変型ＣＤ１１７ポリペプチドへのＳＣＦの結合を破壊または阻止する。特定の態様では、抗ｃ－Ｋｉｔ抗体は、ＪＳＰ１９１、ＡＢ８５、ＣＤＸ－０１５９またはＦＳＩ－１７４のいずれか１つに存在する６つのＣＤＲを含む。特定の態様では、抗ｃ－Ｋｉｔ抗体は、ＪＳＰ１９１、ＡＢ８５、ＣＤＸ－０１５９またはＦＳＩ－１７４のいずれか１つである。

特定の態様において、１以上のアミノ酸修飾は、野生型ＣＤ１１７ポリペプチドと比較して、細胞内で発現される改変型ＣＤ１１７ポリペプチドへの幹細胞因子（ＳＣＦ）の結合を実質的に阻害または減少させない。

関連する態様において、本発明は、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドをコードする核酸を提供する。特定の態様では、核酸はＲＮＡ、ＤＮＡまたはそれらの組合せを含む。一態様において、核酸は修飾ｍＲＮＡを含む。特定の態様では、核酸は１以上の脂質と結合しており、要すれば、核酸は脂質核酸粒子、脂質ナノ粒子、またはリポソーム内に存在する。

さらなる関連する態様において、本発明は、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドをコードする核酸を含むベクターを提供する。特定の態様において、ベクターは発現ベクター、例えばＡＡＶベクターまたはレンチウイルスベクターである。特定の態様では、ベクターは造血幹細胞を形質導入することができる。関連する態様において、本発明は、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドをコードする核酸を含むベクターを含む宿主細胞を提供する。特定の態様では、宿主細胞は細菌細胞または哺乳動物細胞である。

別の関連する態様において、本発明は、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドおよび／または改変型ＣＤ１１７ポリペプチドをコードする核酸を含む改変された細胞を提供する。特定の態様では、細胞は改変型ＣＤ１１７ポリペプチドおよび野生型ＣＤ１１７ポリペプチドの両方を発現する。特定の態様では、細胞はベクターで形質導入された。特定の態様では、細胞は幹細胞である。特定の態様では、細胞は造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）または造血幹細胞（ＨＳＣ）である。特定の態様では、細胞はＣＤ３４＋であり、いくつかの態様では、細胞はＣＤ３４＋／ＣＤ９０＋、ＣＤ３４＋／ＣＤ３８－、ＣＤ３４＋／ＣＤ３８－／ＣＤ９０＋、またはＣＤ３４＋／ＣＤ１３３＋である。ある態様では、細胞はヒト細胞である。ある態様では、細胞は哺乳動物ドナーから得られた。特定の態様では、哺乳動物ドナーは造血幹細胞移植を必要とする対象であり（自家ドナー）、他の態様では、哺乳動物ドナーは造血幹細胞移植を必要とする対象ではない（同種ドナー）。特定の態様において、細胞は改変型ＣＤ１１７ポリペプチドを発現し、要すれば、改変された細胞は改変型ＣＤ１１７ポリペプチドを一過性に発現する。特定の態様では、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドは細胞表面または細胞膜に発現し、特定の態様では、細胞は抗ＣＤ１１７抗体の存在下および／またはＳＣＦの不存在下で増殖可能である。特定の態様において、抗ＣＤ１１７抗体は、野生型ＣＤ１１７のみを発現する細胞の増殖および／または生存を阻害できるが、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドを発現する細胞の増殖および／または生存を実質的に阻害しない。いくつかの態様において、抗ＣＤ１１７抗体は、野生型ＣＤ１１７のみを発現する細胞のアポトーシスまたは細胞死を誘導するが、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドを発現する細胞のアポトーシスまたは細胞死を実質的に誘導しない。特定の態様では、抗ＣＤ１１７抗体との接触または抗ＣＤ１１７抗体の存在は、野生型ＣＤ１１７ポリペプチドのみを発現する細胞と比較して、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドを発現する細胞において５０％未満、４０％未満、３０％未満、２０％未満、または１０％未満の細胞死をもたらす。いくつかの態様において、抗ＣＤ１１７抗体は、ＪＳＰ１９１、ＣＤＸ－０１５９、ＡＢ８５、およびＦＳＩ－１７４からなる群より選択される。

さらなる関連する態様において、本発明は、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドをコードする核酸を含む改変された細胞、例えばＨＳＣ、および薬学的に許容される賦形剤、担体または希釈剤を含む医薬組成物を提供する。いくつかの態様において、医薬組成物は、抗ＣＤ１１７抗体をさらに含む。特定の態様において、医薬組成物は、１以上の抗ＣＤ４７抗体、抗ＣＤ４０Ｌ抗体、抗ＣＤ１２２抗体、抗ＣＤ４抗体、および／または抗ＣＤ８抗体をさらに含む。

特定の態様において、本発明は、薬学的に許容される賦形剤、担体または希釈剤、ならびに改変された造血幹細胞（ＨＳＣ）または造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）を含む医薬組成物を提供し、ここで、改変されたＨＳＣまたはＨＳＰＣは、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドを含み、要すれば、前記改変型ＣＤ１１７ポリペプチドは構成的ｃ－Ｋｉｔシグナル伝達および／またはキナーゼ活性を有し、要すれば、野生型ＣＤ１１７のみを発現するＨＳＰＣの増殖および／または生存を阻害できる抗ｃ－Ｋｉｔモノクローナル抗体と接触させたときに、前記改変された細胞が増殖および／または生存できる。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７のｃ－Ｋｉｔシグナル伝達および／またはキナーゼ活性は、抗ｃ－Ｋｉｔモノクローナル抗体によって実質的に阻害されない。特定の態様において、抗ｃ－Ｋｉｔモノクローナル抗体は、ＳＣＦのＣＤ１１７への結合を阻害する。特定の態様において、抗ｃ－Ｋｉｔモノクローナル抗体は、ＪＳＰ１９１、ＡＢ８５、ＣＤＸ－０１５９またはＦＳＩ－１７４のいずれか１つに存在する６つのＣＤＲのうちの１以上を含む。特定の態様において、抗ｃ－Ｋｉｔモノクローナル抗体は、ＪＳＰ１９１、ＡＢ８５、ＣＤＸ－０１５９またはＦＳＩ－１７４のいずれか１つである。特定の態様では、抗ｃ－Ｋｉｔ抗体はＪＳＰ１９１である。特定の態様では、抗ｃ－Ｋｉｔ抗体はＦＳＩ－１７４である。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７は、野生型ＣＤ１１７ポリペプチドと比較して、１以上のアミノ酸修飾を含む。特定の態様において、１以上のアミノ酸修飾は、１以上のアミノ酸置換、挿入または欠失を含む。特定の態様において、１以上のアミノ酸修飾は、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドの細胞外ドメインの表面露出アミノ酸残基内、膜スパニングドメイン内、または細胞内ドメイン内に存在する。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドは、野生型ヒトＣＤ１１７に存在する以下のアミノ酸の１以上の置換または欠失を含む:Ｎ５０５またはＤ８１６。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドは、野生型ヒトＣＤ１１７と比較して、Ｄ８１６Ｖ置換および／またはＮ５０５Ｉ置換を含む。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドは、野生型ＣＤ１１７ポリペプチドに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列相同性を有する。特定の態様において、野生型ＣＤ１１７ポリペプチドは、野生型ヒトＣＤ１１７ポリペプチドであり、要すれば、以下のアミノ酸配列のうちの１つを有する：
ＭＲＧＡＲＧＡＷＤＦＬＣＶＬＬＬＬＬＲＶＱＴＧＳＳＱＰＳＶＳＰＧＥＰＳＰＰＳＩＨＰＧＫＳＤＬＩＶＲＶＧＤＥＩＲＬＬＣＴＤＰＧＦＶＫＷＴＦＥＩＬＤＥＴＮＥＮＫＱＮＥＷＩＴＥＫＡＥＡＴＮＴＧＫＹＴＣＴＮＫＨＧＬＳＮＳＩＹＶＦＶＲＤＰＡＫＬＦＬＶＤＲＳＬＹＧＫＥＤＮＤＴＬＶＲＣＰＬＴＤＰＥＶＴＮＹＳＬＫＧＣＱＧＫＰＬＰＫＤＬＲＦＩＰＤＰＫＡＧＩＭＩＫＳＶＫＲＡＹＨＲＬＣＬＨＣＳＶＤＱＥＧＫＳＶＬＳＥＫＦＩＬＫＶＲＰＡＦＫＡＶＰＶＶＳＶＳＫＡＳＹＬＬＲＥＧＥＥＦＴＶＴＣＴＩＫＤＶＳＳＳＶＹＳＴＷＫＲＥＮＳＱＴＫＬＱＥＫＹＮＳＷＨＨＧＤＦＮＹＥＲＱＡＴＬＴＩＳＳＡＲＶＮＤＳＧＶＦＭＣＹＡＮＮＴＦＧＳＡＮＶＴＴＴＬＥＶＶＤＫＧＦＩＮＩＦＰＭＩＮＴＴＶＦＶＮＤＧＥＮＶＤＬＩＶＥＹＥＡＦＰＫＰＥＨＱＱＷＩＹＭＮＲＴＦＴＤＫＷＥＤＹＰＫＳＥＮＥＳＮＩＲＹＶＳＥＬＨＬＴＲＬＫＧＴＥＧＧＴＹＴＦＬＶＳＮＳＤＶＮＡＡＩＡＦＮＶＹＶＮＴＫＰＥＩＬＴＹＤＲＬＶＮＧＭＬＱＣＶＡＡＧＦＰＥＰＴＩＤＷＹＦＣＰＧＴＥＱＲＣＳＡＳＶＬＰＶＤＶＱＴＬＮＳＳＧＰＰＦＧＫＬＶＶＱＳＳＩＤＳＳＡＦＫＨＮＧＴＶＥＣＫＡＹＮＤＶＧＫＴＳＡＹＦＮＦＡＦＫＧＮＮＫＥＱＩＨＰＨＴＬＦＴＰＬＬＩＧＦＶＩＶＡＧＭＭＣＩＩＶＭＩＬＴＹＫＹＬＱＫＰＭＹＥＶＱＷＫＶＶＥＥＩＮＧＮＮＹＶＹＩＤＰＴＱＬＰＹＤＨＫＷＥＦＰＲＮＲＬＳＦＧＫＴＬＧＡＧＡＦＧＫＶＶＥＡＴＡＹＧＬＩＫＳＤＡＡＭＴＶＡＶＫＭＬＫＰＳＡＨＬＴＥＲＥＡＬＭＳＥＬＫＶＬＳＹＬＧＮＨＭＮＩＶＮＬＬＧＡＣＴＩＧＧＰＴＬＶＩＴＥＹＣＣＹＧＤＬＬＮＦＬＲＲＫＲＤＳＦＩＣＳＫＱＥＤＨＡＥＡＡＬＹＫＮＬＬＨＳＫＥＳＳＣＳＤＳＴＮＥＹＭＤＭＫＰＧＶＳＹＶＶＰＴＫＡＤＫＲＲＳＶＲＩＧＳＹＩＥＲＤＶＴＰＡＩＭＥＤＤＥＬＡＬＤＬＥＤＬＬＳＦＳＹＱＶＡＫＧＭＡＦＬＡＳＫＮＣＩＨＲＤＬＡＡＲＮＩＬＬＴＨＧＲＩＴＫＩＣＤＦＧＬＡＲＤＩＫＮＤＳＮＹＶＶＫＧＮＡＲＬＰＶＫＷＭＡＰＥＳＩＦＮＣＶＹＴＦＥＳＤＶＷＳＹＧＩＦＬＷＥＬＦＳＬＧＳＳＰＹＰＧＭＰＶＤＳＫＦＹＫＭＩＫＥＧＦＲＭＬＳＰＥＨＡＰＡＥＭＹＤＩＭＫＴＣＷＤＡＤＰＬＫＲＰＴＦＫＱＩＶＱＬＩＥＫＱＩＳＥＳＴＮＨＩＹＳＮＬＡＮＣＳＰＮＲＱＫＰＶＶＤＨＳＶＲＩＮＳＶＧＳＴＡＳＳＳＱＰＬＬＶＨＤＤＶ（配列番号１）；または
ＭＲＧＡＲＧＡＷＤＦＬＣＶＬＬＬＬＬＲＶＱＴＧＳＳＱＰＳＶＳＰＧＥＰＳＰＰＳＩＨＰＧＫＳＤＬＩＶＲＶＧＤＥＩＲＬＬＣＴＤＰＧＦＶＫＷＴＦＥＩＬＤＥＴＮＥＮＫＱＮＥＷＩＴＥＫＡＥＡＴＮＴＧＫＹＴＣＴＮＫＨＧＬＳＮＳＩＹＶＦＶＲＤＰＡＫＬＦＬＶＤＲＳＬＹＧＫＥＤＮＤＴＬＶＲＣＰＬＴＤＰＥＶＴＮＹＳＬＫＧＣＱＧＫＰＬＰＫＤＬＲＦＩＰＤＰＫＡＧＩＭＩＫＳＶＫＲＡＹＨＲＬＣＬＨＣＳＶＤＱＥＧＫＳＶＬＳＥＫＦＩＬＫＶＲＰＡＦＫＡＶＰＶＶＳＶＳＫＡＳＹＬＬＲＥＧＥＥＦＴＶＴＣＴＩＫＤＶＳＳＳＶＹＳＴＷＫＲＥＮＳＱＴＫＬＱＥＫＹＮＳＷＨＨＧＤＦＮＹＥＲＱＡＴＬＴＩＳＳＡＲＶＮＤＳＧＶＦＭＣＹＡＮＮＴＦＧＳＡＮＶＴＴＴＬＥＶＶＤＫＧＦＩＮＩＦＰＭＩＮＴＴＶＦＶＮＤＧＥＮＶＤＬＩＶＥＹＥＡＦＰＫＰＥＨＱＱＷＩＹＭＮＲＴＦＴＤＫＷＥＤＹＰＫＳＥＮＥＳＮＩＲＹＶＳＥＬＨＬＴＲＬＫＧＴＥＧＧＴＹＴＦＬＶＳＮＳＤＶＮＡＡＩＡＦＮＶＹＶＮＴＫＰＥＩＬＴＹＤＲＬＶＮＧＭＬＱＣＶＡＡＧＦＰＥＰＴＩＤＷＹＦＣＰＧＴＥＱＲＣＳＡＳＶＬＰＶＤＶＱＴＬＮＳＳＧＰＰＦＧＫＬＶＶＱＳＳＩＤＳＳＡＦＫＨＮＧＴＶＥＣＫＡＹＮＤＶＧＫＴＳＡＹＦＮＦＡＦＫＥＱＩＨＰＨＴＬＦＴＰＬＬＩＧＦＶＩＶＡＧＭＭＣＩＩＶＭＩＬＴＹＫＹＬＱＫＰＭＹＥＶＱＷＫＶＶＥＥＩＮＧＮＮＹＶＹＩＤＰＴＱＬＰＹＤＨＫＷＥＦＰＲＮＲＬＳＦＧＫＴＬＧＡＧＡＦＧＫＶＶＥＡＴＡＹＧＬＩＫＳＤＡＡＭＴＶＡＶＫＭＬＫＰＳＡＨＬＴＥＲＥＡＬＭＳＥＬＫＶＬＳＹＬＧＮＨＭＮＩＶＮＬＬＧＡＣＴＩＧＧＰＴＬＶＩＴＥＹＣＣＹＧＤＬＬＮＦＬＲＲＫＲＤＳＦＩＣＳＫＱＥＤＨＡＥＡＡＬＹＫＮＬＬＨＳＫＥＳＳＣＳＤＳＴＮＥＹＭＤＭＫＰＧＶＳＹＶＶＰＴＫＡＤＫＲＲＳＶＲＩＧＳＹＩＥＲＤＶＴＰＡＩＭＥＤＤＥＬＡＬＤＬＥＤＬＬＳＦＳＹＱＶＡＫＧＭＡＦＬＡＳＫＮＣＩＨＲＤＬＡＡＲＮＩＬＬＴＨＧＲＩＴＫＩＣＤＦＧＬＡＲＤＩＫＮＤＳＮＹＶＶＫＧＮＡＲＬＰＶＫＷＭＡＰＥＳＩＦＮＣＶＹＴＦＥＳＤＶＷＳＹＧＩＦＬＷＥＬＦＳＬＧＳＳＰＹＰＧＭＰＶＤＳＫＦＹＫＭＩＫＥＧＦＲＭＬＳＰＥＨＡＰＡＥＭＹＤＩＭＫＴＣＷＤＡＤＰＬＫＲＰＴＦＫＱＩＶＱＬＩＥＫＱＩＳＥＳＴＮＨＩＹＳＮＬＡＮＣＳＰＮＲＱＫＰＶＶＤＨＳＶＲＩＮＳＶＧＳＴＡＳＳＳＱＰＬＬＶＨＤＤＶ（配列番号２）。

特定の態様において、改変された細胞は、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドおよび野生型ＣＤ１１７ポリペプチドの両方を発現する。特定の態様において、改変された細胞は、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドを一過性に発現する。特定の態様において、ＨＳＣまたはＨＳＰＣはＣＤ３４＋であり、要すればＨＳＰＣはＣＤ３４＋／ＣＤ９０＋、ＣＤ３４＋／ＣＤ３８－、またはＣＤ３４＋／ＣＤ３８－／ＣＤ９０＋、またはＣＤ３４＋ＣＤ１３３＋である。特定の態様では、細胞はヒト細胞である。特定の態様では、細胞は哺乳動物ドナーから得られた。特定の態様において、哺乳動物ドナーは、造血細胞移植（ＨＣＴ）を必要とする対象である。特定の態様では、哺乳動物ドナーは健康なドナーである。特定の態様では、哺乳動物ドナーから得られた細胞はエクスビボで改変された。特定の態様において、医薬組成物は、抗ＣＤ１１７抗体、抗ＣＤ４７抗体、抗ＣＤ４０Ｌ抗体、抗ＣＤ１２２抗体、抗ＣＤ４抗体、および／または抗ＣＤ８抗体をさらに含む。

関連する面において、本発明は、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドをコードする核酸またはベクターを細胞に導入することを含む、細胞、例えばＨＳＣを改変する方法を含み、要すれば、前記細胞は一過性に改変されていてよく、要すれば、この方法は、哺乳動物対象への造血細胞移植（ＨＣＴ）のための修飾細胞を調製するための方法であり得る。特定の態様において、核酸またはベクターは、トランスフェクション、導入、感染、エレクトロポレーション、またはナノポア技術によって細胞に導入される。

別の面において、本発明は、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドおよび／または改変型ＣＤ１１７ポリペプチドをコードする核酸を含む、修飾細胞、例えばＨＳＣを含む医薬組成物を対象に投与することを含む、それを必要とする哺乳動物対象を処置する方法を含む。いくつかの態様において、本方法は、改変された細胞の生着を促進もしくは増加させるか、または内因性の野生型ＨＳＣを枯渇させるための条件付けレジメンを対象に投与することをさらに含み、前記条件付けレジメンは、医薬組成物の投与前または投与と同時に投与される。いくつかの態様では、条件付けレジメンは抗ＣＤ１１７抗体、要すればＪＳＰ１９１を含むか、またはこれらからなる。ある態様において、条件付けレジメンは、化学療法（要すればヌクレオシド類縁体および／またはアルキル化剤）、モノクローナル抗体療法、および放射線療法（要すれば全身への放射線療法）のうち１以上を含む。特定の態様では、条件付けレジメンは、対象が改変型ＣＤ１１７ポリペプチドを含まない造血幹細胞を投与される場合よりもマイルドである。いくつかの態様において、対象は、医薬組成物の投与前または投与と同時に、改変された細胞の生着を促進または増加させるための条件付けレジメンを投与されないか、または条件付けレジメンは抗ＣＤ１１７抗体のみを含む。特定の態様において、本方法は、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドを含まない造血幹細胞を条件付けレジメンと組み合わせて対象に投与する方法と比較して、毒性、罹患率、または移植片対宿主病の減少、例えば、毒性、罹患率、および／または移植片対宿主病の少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％の減少をもたらす。

特定の態様において、本方法は、癌、心臓疾患、神経疾患、自己免疫疾患、免疫不全、代謝疾患、および遺伝疾患からなる群より選択される疾患または障害を処置するために用いられる。特定の態様において、癌は、固形組織癌または血液癌、例えば、白血病、リンパ腫、または急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）などの骨髄異形成症候群である。特定の態様において、免疫不全症は重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）である。特定の態様では、遺伝子疾患は鎌状赤血球症またはファンコニー貧血である。いくつかの態様において、本方法は、疾患または障害の処置のために対象に別の治療剤を投与することをさらに含む。

図１は、野生型ＢａＦ３細胞（ＢａＦ３）、または野生型ＣＤ１１７（ｃ－Ｋｉｔ）もしくはＣＤ１１７－Ｄ８１６Ｖ変異体を発現するＢａＦ３細胞の、指示濃度の幹細胞因子（ＳＣＦ）存在下、抗ＣＤ１１７抗体ＪＳＰ１９１の存在下または不存在下でのＯＤ５９５を示すグラフである。これらの結果は、ＣＤ１１７－Ｄ８１６Ｖ変異体が、ＳＣＦの不存在下かつ抗ＣＤ１１７抗体ＪＳＰ１９１の存在下でも、細胞に増殖優位性を与えることを示している。ＳＣＦ（５ｎｇ／ｍｌ）の場合、グラフの線は上から下へ：Ｄ８１６ Ｖ；Ｄ８１６ Ｖ＋ＪＳＰ１９１；ｃ－Ｋｉｔ；ＢａＦ３；およびｃ－Ｋｉｔ＋ＪＳＰ１９１。 図２は、Atilla, Erden et al. “A Review of Myeloablative vs Reduced Intensity/Non-Myeloablative Regimens in Allogeneic Hematopoietic Stem Cell Transplantations ” Balkan Medical Journal, Vol. 34, 1 (2017):1-9. doi:10.4274/balkanmedj.2017.0055. から転載した、様々な骨髄移植、強度減少型骨髄移植、非骨髄移植の条件付けレジメンを示した表である。

発明の詳細な説明
造血幹細胞移植（ＨＣＴ）は、健康な造血幹細胞（ＨＳＣ）および／または造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）が異常な造血幹細胞に取って代わるという原則に基づいており、多くの疾患に対する根治療法となり得る。しかしながら、ＨＣＴは、この手法の現在の実施に伴う毒性のために、広く用いられていない。ＨＣＴの有害な影響には、移植前の化学療法および／または放射線療法（これはレシピエントがドナーまたは自家遺伝子修正（gene-corrected)細胞を受容する準備をするために必要である）および同種造血移植片内に含まれるドナーリンパ球によって引き起こされる移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）による実質的な組織傷害および死亡率さえ含まれる。化学療法および／または放射線療法、および同種移植片へのドナーリンパ球の移入によって引き起こされる合併症が知られているにもかかわらず、これらの方法がＨＣＴに取り入れられているのは、ドナーＨＳＣの生着が促進されるためである。さらに、ドナーＨＳＣが生着しなかったり、および／またはＨＣＴ法後に持続しなかったりするために、ＨＣＴが失敗することもある。

ある種のＨＣＴ法には、ＨＳＣおよび／またはＨＳＰＣを患者に移植する前に、幹細胞因子（ＳＣＦ）が患者の内因性ＨＳＣの表面上のｃ－Ｋｉｔに結合するのを阻害する抗ｃ－Ｋｉｔ抗体による処置によって、ＨＣＴの前に患者を条件付けすることが含まれる。しかしながら、これには通常、抗ｃ－Ｋｉｔ抗体投与後約１週間以上の有意な洗浄期間が必要であるため、移植されたＨＳＣおよび／またはＨＳＰＣを枯渇させ得る抗ｃ－Ｋｉｔ抗体はほとんど残っていない。

本発明は、ドナーまたは自家遺伝子修正ＨＳＣおよび／またはＨＳＰＣがレシピエントにおいて生着および／または持続する能力を増強し、それによってＨＣＴ処置の成功の可能性を高め、ＨＣＴに関連する毒性を軽減する組成物および方法を提供する。特に、本発明は、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドへのＳＣＦ結合を阻害する抗ｃ－Ｋｉｔ抗体（例えば、ＪＳＰ１９１）の存在下でも、構成的活性を有するかまたは活性（例えば、ｃ－Ｋｉｔキナーゼ活性）を保持する改変型ＣＤ１１７ポリペプチドを含む移植用の改変されたＨＳＣおよび／またはＨＳＰＣを提供する。特定の態様において、改変されたＨＳＣおよび／またはＨＳＰＣは、ＳＣＦに結合していないときでも活性（例えば、ｃ－Ｋｉｔキナーゼ活性）を有する。特定の態様において、改変されたＨＳＣおよび／またはＨＰＳＣは、抗ｃ－Ｋｉｔ抗体、例えば、内因性ＨＳＣおよび／またはＨＳＰＣを枯渇させるための条件付けレジメンに用いられる抗ｃ－Ｋｉｔ抗体によって実質的に枯渇されない。従って、改変された細胞は、枯渇を受けることなく、抗ｃ－Ｋｉｔ抗体の存在下で対象に移植でき、従って、ＨＣＴのために患者を条件付けする改善された方法を提供し、潜在的に洗浄期間の短縮および／または他の利点を有し得る。本明細書に記載のＨＣＴ法は、集中的な化学療法、放射線療法、および／またはＨＳＣの生着を促進するために用いられるドナーのリンパ球または他の細胞の必要性を減少させ、それによってＨＣＴの毒性を減少させる。本明細書に記載の組成物および方法は、血液幹細胞移植が適応となるすべての疾患の処置に用いられ得る。

ＳＣＦおよび／または抗ｃ－Ｋｉｔ抗体と改変型ＣＤ１１７ポリペプチドとの結合は、当技術分野で公知の様々な方法によって決定できる。例えば、改変型ＣＤ１１７を発現する一過性トランスフェクトＨＥＫ２９３Ｔ細胞を用いて結合を決定できる。トランスフェクション後、細胞をＳＣＦ抗体および／または抗ｃ－Ｋｉｔ抗体と共にインキュベートする。結合したＭＡｂは、Alexa Fluor 488標識二次抗体を用いて検出し、フローサイトメトリーにより細胞蛍光を測定できる。結合したＳＣＦは、ＳＣＦと結合する蛍光標識抗体およびフローサイトメトリーを用いて決定できる。

特定の態様において、本発明は、ＣＤ３４＋細胞またはＣＤ３４＋細胞のサブセットを含むがこれらに限定されないＨＳＣおよび／またはＨＳＰＣに、ＲＮＡベースの方法および／またはＤＮＡベースの方法によって、ＣＤ１１７バリアントおよび変異体（改変型ＣＤ１１７）を、ＨＳＣおよび／またはＨＳＰＣがレシピエントに首尾よく移植され得るように、エクスビボで導入するための組成物および方法を提供する。改変型ＣＤ１１７は、改変されたＨＳＣおよび／またはＨＳＰＣにおいて一過性に発現され得る。例えば、改変型ＣＤ１１７をコードする核酸を、移植前のＨＳＣおよび／またはＨＳＰＣに一過性に導入し、そこで改変型ＣＤ１１７を発現させることができる。従って、改変型ＣＤ１１７は内因性の野生型ＣＤ１１７に加えて発現する可能性がある。これらの改変されたＨＳＣの移植は、抗体（抗ＣＤ１１７抗体など）による処置を含む条件付き療法の後に、あるいは条件付き療法と併用して行うことができる。これらのＨＳＣは単独で、あるいは他の細胞と組み合わせて移植される。

本発明は、記載された特定の方法、製品、装置および要因に限定されるものではないことが理解されるべきである。また、本明細書で用いる用語は、特定の態様を説明するためだけのものであり、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される本発明の範囲を限定することを意図するものではないことも理解されるべきである。

本明細書および添付の特許請求の範囲で用いられる単数形“ａ”、“ａｎｄ”および“ｔｈｅ”は、文脈上明らかにそうでない場合を除き、複数形を含むことが特記される。したがって、例えば、“薬剤候補（a drug candidate）”という言及は、そのような候補の１つまたは混合物を意味し、“方法（the method）”という言及は、当業者に知られている同等のステップおよび方法等への言及を含む。

本明細書で特に定義しない限り、本明細書で用いる科学用語および技術用語は、当業者に一般的に理解される意味を有する。一般に、化学、分子生物学、細胞生物学および癌生物学、免疫学、微生物学、薬理学、ならびに本明細書に記載されるタンパク質および核酸化学に関連して用いられる命名法およびその技術は、当該技術分野において周知であり、一般的に使用されるものである。

値の範囲が規定されている場合、文脈上明らかにそうでない場合を除き、その範囲の上限値と下限値との間に、下限値の単位の１０分の１までの各中間値、およびその規定範囲内の他の規定値または中間値は、本発明に包含されると理解される。これらのより小さい範囲の上限および下限は、記載された範囲内の特に除外された制限を条件として、独立してより小さい範囲に含まれることも本発明に包含される。記載された範囲が限界値の一方または両方を含む場合、それらの含まれる限界値の一方または両方を除いた範囲も本発明に含まれる。

本明細書で用いる用語“抗体”は、特定の抗原と免疫学的に反応する免疫グロブリン分子への言及を含み、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の両方を包含する。この用語には、ヒト化抗体、キメラ抗体（例えば、ヒト化マウス抗体など）およびヘテロコンジュゲート抗体などの遺伝子操作型も含まれる。用語“抗体”には、抗原結合能を有するフラグメント（例えば、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆａｂ、ＦｖおよびｒＩｇＧ）を含む、抗体の抗原結合形態も含まれる。この用語は、組換え一本鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）も意味する。抗体という用語には、二価または二特異性分子、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディも含まれる。

“ヒト化抗体”とは、ヒト以外の免疫グロブリンに由来する配列を最小限で含む免疫グロブリン分子である。ヒト化抗体には、レシピエントの相補的決定領域（ＣＤＲ）の残基が、所望の特異性、親和性および能力（capacity）を有するマウス、ラットまたはウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲの残基で置換されたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）が含まれる。ある例において、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基は、対応する非ヒト残基で置換される。ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも挿入されたＣＤＲまたはフレームワーク配列にも存在しない残基を含んでいてもよい。一般的に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、通常２つの可変ドメインの実質的にすべてを含んでおり、ＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、フレームワーク（ＦＲ）領域のすべてまたは実質的にすべてがヒト免疫グロブリンのコンセンサス配列のものである。ヒト化抗体はまた、最適には、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、一般的にはヒト免疫グロブリンのものを含んでいる。

各ＶＬドメインおよびＶＨドメイン（およびその中のＣＤＲ）へのアミノ酸の割り当ては、ＣＤＲの従来の定義に従う。従来の定義としては、Ｋａｂａｔ定義(Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1987 and 1991)；Ｃｈｏｔｈｉａ定義（Chothia & Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917, 1987; Chothia et al., Nature 342:878-883, 1989）；ＣＤＲ－Ｈ１がＣｈｏｔｈｉａおよびＫａｂａｔのＣＤＲの合成である、Ｃｈｏｔｈｉａ Ｋａｂａｔ ＣＤＲの合成；Oxford Molecularの抗体モデリングソフトウェアで使用されているＡｂＭ定義；Martinらの接触定義（world wide web bioinfo.org.uk/abs）などが挙げられる。Ｋａｂａｔは、異なる重鎖間または異なる軽鎖間の対応する残基が同じ番号を割り当てられる、広く用いられている番号付け規則（Ｋａｂａｔ番号付け）を提供している。特記されない限り、抗体の可変領域内の位置の番号付けはＫａｂａｔ番号付けである。抗体がＣＤＲのある定義（例えば、Ｋａｂａｔ）によってＣＤＲを含むと言われる場合、その定義は抗体中に存在するＣＤＲ残基の最小数（すなわち、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ）を規定する。従来の別のＣＤＲの定義に含まれるが、指定された定義外の残基が存在することを排除するものではない。例えば、Ｋａｂａｔによって定義されたＣＤＲを含む抗体には、ＣＤＲがＫａｂａｔ ＣＤＲ残基を含み、他のＣＤＲ残基を含まない抗体、ＣＤＲ Ｈ１が複合Ｃｈｏｔｈｉａ－Ｋａｂａｔ ＣＤＲ Ｈ１であり、他のＣＤＲがＫａｂａｔ ＣＤＲ残基を含み、他の定義に基づくさらなるＣＤＲ残基を含まない抗体などが含まれる。

用語“ポリヌクレオチド”とは、デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチド、あるいはそれらの類縁体または混合物を含む、何れかの長さのヌクレオチドの重合体を意味する。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチド、ヌクレオチドまたはヌクレオシド類縁体などの修飾ヌクレオチドを含んでいてもよく、非ヌクレオチド成分によって中断されていてもよい。もしあれば、ポリマーの組み立て前または組み立て後に、ヌクレオチド構造に修飾を加えることができる。本明細書で用いる用語ポリヌクレオチドには、二本鎖分子、一本鎖分子、およびそれらの混合物が含まれるが、これらに限定されない。他に規定または要求されない限り、ポリヌクレオチドである本明細書に記載の本発明の何れかの態様は、二本鎖形態、および二本鎖形態を構成することが公知であるかまたは予測される２つの相補的な一本鎖形態のそれぞれとの両方を、ＲＮＡまたはＤＮＡとして、またはそれらの混合物として包含する。

本明細書で用いる用語“ポリペプチド”、“ペプチド”および“タンパク質”とは、何れかの長さのアミノ酸のポリマーを意味する。前記用語は、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、リン酸化、標識成分との複合体化などの、修飾されたアミノ酸ポリマーも包含する。

ポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、他のポリヌクレオチドまたはポリペプチドと一定の割合で“配列同一性”を有しており、これは、アラインメントしたとき、２つの配列を比較したときに、塩基またはアミノ酸の割合が同じであることを意味する。用語“配列同一性”とは、対照配列に対する目的のポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列の同一性のパーセンテージを意味し、対照配列に対する目的の配列の最適アラインメントにおける完全一致の数の１００倍を対照配列の全長（ギャップを含む）で割ったものとして計算される。ＤＮＡおよびＲＮＡの塩基配列を比較するとき、チミン（Ｔ）およびウラシル（Ｕ）は一致するものとしてカウントされる。

配列の類似性は、さまざまな方法で決定できる。配列同一性を決定するには、ＢＬＡＳＴを含む世界中のウェブで利用可能な方法およびコンピュータープログラム(ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)を用いて配列をアラインメントできる。特記されない限り、配列同一性はＢＬＡＳＴアルゴリズム（例えば、bl2seqなど）を用いてデフォルトのパラメーターで決定される。配列の最適アラインメントは、Maderia et al. Nucleic Acids Res. 47(W1):W636-W641 (2019)に記載の、www.ebi.ac.ukで利用可能なthe European Molecular Biology Open Software Suite (EMBOSS) needle programを用いて作製され得る。もう一つのアラインメントアルゴリズムは、Oxford Molecular Group, Inc.の完全子ものである米国ウィスコンシン州マディソンのGenetics Computing Group (GCG)パッケージで入手可能なＦＡＳＴＡである。アライメントのための他のテクニックは、Methods in Enzymology, vol. 266: Computer Methods for Macromolecular Sequence Analysis (1996), ed. Doolittle, Academic Press, Inc., a division of Harcourt Brace & Co., San Diego, Calif., USAに記載されている。特に興味深いのは、配列中のギャップを許容するアラインメントプログラムである。Smith-Watermanは、配列アラインメントのギャップを許容するアルゴリズムの一種である。（Meth. Mol. Biol. 70: 173-187 (1997)参照）。また、Needleman and Wunschアラインメント法を用いたＧＡＰプログラムも配列のアラインメントに利用できる。（J. Mol.Biol. 48: 443-453 (1970)参照）。

興味があるのは、SmithおよびWatermanの局所相同性アルゴリズム（Advances in Applied Mathematics 2: 482-489 (1981))を用いて配列同一性を決定するＢｅｓｔＦｉｔプログラムである。ギャップ生成ペナルティは一般的に１～５、通常は２～４、多くの態様では３となる。ギャップ延長ペナルティは一般的に約０．０１～０．２０の範囲であり、多くの場合０．１０となる。このプログラムには、比較するために入力された配列によって決まるデフォルトのパラメーターがある。好ましくは、配列同一性は、プログラムによって決定されたデフォルトパラメーターを用いて決定される。このプログラムは、米国ウィスコンシン州マディソン（Madison, Wis., USA）のGenetics Computing Group （ＧＣＧ）パッケージからも入手可能である。

もうひとつの興味あるプログラムはＦａｓｔＤＢアルゴリズムである。ＦａｓｔＤＢは、Current Methods in Sequence Comparison and Analysis, Macromolecule Sequencing and Synthesis, Selected Methods and Applications, pp.127-149, 1988, Alan R. Liss, Inc.に記載されている。配列同一性のパーセンテージは、以下のパラメーターに基づいてＦａｓｔＤＢによって計算される：ミスマッチペナルティ:１．００；ギャップペナルティ:１．００；ギャップサイズペナルティ:０．３３；および結合ペナルティ:３０．０。

本明細書で用いる“ベクター”とは、ポリヌクレオチドを含むか、ポリヌクレオチドと結合し、ポリヌクレオチドの細胞への送達を仲介するために用いられ得る高分子または高分子の結合体を意味する。例示的なベクターとしては、例えばプラスミド、ウイルスベクター、リポソーム、およびその他の遺伝子導入ビヒクルが挙げられる。

本明細書で用いる“発現ベクター”とは、本明細書で議論されるような、または当技術分野で公知のベクター、例えば、プラスミド、ミニサークル、ウイルスベクター、リポソームなどを包含し、目的の遺伝子産物をコードするポリヌクレオチドを含み、意図される標的細胞において遺伝子産物の発現をもたらすために使用される。発現ベクターはまた、標的における遺伝子産物の発現を促進するために、コード領域に作動可能に連結された調節エレメントを含んでいる。調節エレメント、例えばプロモーター、エンハンサー、ＵＴＲ、ｍｉＲＮＡ標的配列など、およびそれらが発現のために作動可能に連結されている遺伝子または遺伝子の組合せは、“発現カセット”と呼ばれる。このような調節要素の多くは公知であり、当技術分野で入手可能であるか、または当技術分野で入手可能な構成要素から容易に構成できる。

本明細書で用いる“プロモーター”とは、ＲＮＡポリメラーゼの結合を指示し、それによってＲＮＡ合成を促進するＤＮＡ配列、すなわち転写を指示するのに十分な最小限の配列を包含する。プロモーターおよびそれに対応するタンパク質またはポリペプチドの発現は、ユビキタス、つまり広範囲の細胞、組織および種で強く活性を示し得るか、または細胞型特異的、組織特異的もしくは種特異的であり得る。プロモーターは“構成的”、つまり常に活性であるか、または“誘導可能”、つまり生物学的または非生物学的因子の存在または不存在によって活性化または不活性化され得る。

“作動可能に連結された”（operatively linked or operably linked）”とは、遺伝子要素の並置を意味し、前記要素は、それらが期待される方法で作動することを可能にする関係にある。例えば、プロモーターがコード配列の転写の開始を助ける場合、プロモーターはコーディング領域に作動可能に連結される。この機能的関係が維持される限り、プロモーターとコーディング領域の間に介在残基があってもよい。

本明細書で用いる用語“天然”または“野生型”とは、野生型の細胞、組織、臓器または生物に存在するヌクレオチド配列、例えば遺伝子または遺伝子産物、例えばＲＮＡまたはポリペプチド、例えば野生型ヒト遺伝子またはタンパク質配列を意味する。本明細書で用いる用語“変異体”とは、対照ポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列（例えば、天然または野生型）の変異体、すなわち、対照ポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列と１００％未満の配列同一性を有するものを意味する。換言すれば、変異体は、対照ポリヌクレオチド配列、例えば、天然ポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列に対して、少なくとも１つのアミノ酸の相違（例えば、アミノ酸置換、アミノ酸挿入、アミノ酸欠失）を含む。例えば、変異体は、全長の天然ポリヌクレオチド配列に対して５０％以上、６０％以上、または７０％以上の配列同一性、例えば、全長の天然ポリヌクレオチド配列に対して７５％または８０％以上、例えば、８５％、９０％または９５％以上、例えば、９８％または９９％の同一性を有するポリヌクレオチドであり得る。別の例として、変異体は、全長の天然ポリペプチド配列に対して７０％以上の配列同一性、例えば、全長の天然ポリペプチド配列に対して７５％または８０％以上、例えば、８５％、９０％または９５％以上、例えば、９８％または９９％の同一性を有するポリペプチドであり得る。変異体はまた、対照配列、例えば、天然配列のフラグメントに対して７０％以上の配列同一性を共有する変異体フラグメント、例えば、天然配列に対して７５％または８０％以上、例えば、８５％、９０％または９５％以上、例えば、９８％または９９％の同一性を共有する変異体フラグメントを含み得る。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドは、本明細書に記載の改変および欠失、例えばＮ末端および／またはＣ末端欠失を含むが、なおＣＤ１１７活性、例えばキナーゼ活性を実質的に保持している。本明細書に記載の改変型ＣＤ１１７ポリペプチドの特定の態様では、改変型ＣＤ１１７は構成的キナーゼ活性を有する。

本明細書で用いる用語“幹細胞”とは、自己複製能および分化した子孫を生成する能力の両方を有する哺乳動物細胞を意味する（Morrison et al. (1997) Cell 88:287-298参照）。内在性幹細胞は、特定のエピトープに関連したマーカーの存在によって特徴づけられる。造血幹細胞（ＨＳＣ）は骨髄（ＢＭ）に存在する多能性細胞であり、成熟した血液細胞を生涯にわたって産生する役割を担っている。造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）には、ＨＳＣだけでなく、骨髄に存在し、かつ成熟した血液細胞に分化する能力を有する造血前駆細胞も含まれる。いくつかの態様において、ＨＳＣおよび／またはＨＳＰＣ生着細胞は新鮮なもの、凍結したもの、または事前に培養したものであってもよい。ＨＳＣおよび／またはＨＳＰＣは、胎児の肝臓、骨髄、臍帯血、末梢血、ドナー（同種）、患者自身（自家）、またはその他の従来の供給源から得ることができる。

本明細書で用いる用語“投与する”または“導入する”または“提供する”とは、細胞への、対象の細胞、組織および／または器官への、あるいは対象への、組成物の送達を意味する。かかる投与または導入は、インビボ、インビトロ、またはエクスビボで行われる。

本明細書で用いる用語“処置”、“処置する”などは、一般的に、所望の薬理学的および／または生理学的効果を得る手段を意味する。その効果は、疾患またはその症状を完全にまたは部分的に予防するという観点、例えば、対象において疾患またはその症状が発生する可能性を減少させるという観点では予防的であり得て、および／または疾患および／または疾患に起因する副作用の部分的または完全な治癒という観点では治療的であり得る。本明細書で用いる“処置”とは、哺乳動物における疾患の何れかの処置を対象とし、以下を含む：（ａ）疾患を阻害すること、すなわち、その発症を阻止すること；または（ｂ）疾患を緩和すること、すなわち、疾患の退縮をもたらすこと。治療薬は、疾患または損傷の発症前、発症中または発症後に投与できる。進行中の疾患の処置で、該処置によって患者の好ましくない臨床症状が安定したり軽減したりする場合は、特に関心が高い。このような処置は、患部組織の機能が完全に失われる前に行うことが望ましい。対象療法は、疾患の症状発現前または症状発現中に投与できる。

用語“個体”、“宿主”、“対象”および“患者”とは、本明細書中、互換的に用いられ、ヒトおよびヒト以外の霊長動物（猿およびヒトを含む）；哺乳動物であるスポーツ用動物（例えば、ウマ）；哺乳動物である家畜（例えば、ヒツジ、ヤギなど）；哺乳動物であるペット（犬、猫など）およびげっ歯動物（マウス、ラットなど）を含むがこれらに限定されない哺乳動物を意味する。

本明細書で用いる用語“実質的に”とは、顕著な量または程度を意味する。例えば、“実質的に”増加するとは、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、または少なくとも１０倍増加することを意味し、“実質的に”減少するとは、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％減少させることを意味する。

以下の説明では、本発明をより深く理解するために、数多くの具体的な詳細を述べる。しかしながら、当業者には、本発明はこれらの具体的な詳細の１以上がなくても実施できることが明らかであり得る。他の例では、本発明を不明瞭にしないために、当業者によく知られた周知の特徴および手段については記載していない。

一般的に、タンパク質合成、組換え細胞培養、タンパク質単離、および組換えＤＮＡ技術の当業者による常套法が、本発明において採用される。このような技術は文献で十分に説明されており、例えば、Maniatis, Fritsch & Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (1982); Sambrook, Russell and Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2001); Harlow, Lane and Harlow, Using Antibodies: A Laboratory Manual: Portable Protocol No. I, Cold Spring Harbor Laboratory (1998); and Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory; (1988)に記載されている。

ＣＤ１１７変異体ポリペプチドおよびポリヌクレオチド
ｃ－ｋｉｔまたは幹細胞因子受容体（ＳＣＦＲ）としても知られるＣＤ１１７は、成熟タンパク質として分子量１４５ｋＤａを有し、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）受容体およびマクロファージコロニー刺激因子１（ＣＳＦ－１）（ｃ－ｆｍｓ）受容体を含むＩＩＩ型受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）ファミリーのメンバーである。ＣＤ１１７は正常な造血細胞の発生に必須であり、肥満細胞、メラノサイト、生殖細胞の生存、増殖、分化に重要な役割を果たしている。胚肝臓の造血細胞では発生を通じて発現しており、骨髄系、赤血球系、巨核球系、ナチュラルキラー系、樹状突起系前駆細胞など、より分化の進んだ前駆細胞でも発現している。

ＣＤ１１７には、５つの免疫グロブリン様ドメインからなる約５１９アミノ酸の細胞外ドメイン、膜貫通セグメント、膜接合ドメイン、および約８０アミノ酸残基のインサートを含むプロテインキナーゼドメインが含まれる。細胞外ドメインの約１８４アミノ酸は表面に露出しており、Ｘ線結晶学的研究に基づいて同定されている。ＣＤ１１７の結晶構造は、例えば、Mol, et al., Accelerated Publications, Volume 278, ISSUE 34, P31461-31464, August 22, 2003; Ogg et al., RCSB Protein Data Bank, 6XV9, Crystal structure of the kinase domain of human c-KIT in complex with a type-II inhibitor, DOI: 10.2210/pdb6XV9/pdb; McAuley et al., RCSB Protein Data Bank Alkynyl Benzoxazines and Dihydroquinazolines as Cysteine Targeting Covalent Warheads and Their Application in Identification of Selective Irreversible Kinase Inhibitors, DOI: 10.1021/jacs.9b13391; Schimpl et al., RCSB Protein Data Bank 6GQM, Crystal structure of human c-KIT kinase domain in complex with a small molecule inhibitor, AZD3229, DOI: 10.1021/acs.jmedchem.8b00938;および、Lin et al., RCSB Protein Data Bank Identification of a Multitargeted Tyrosine Kinase Inhibitor for the Treatment of Gastrointestinal Stromal Tumors and Acute Myeloid Leukemia, DOI: 10.1021/acs.jmedchem.9b01229に提供されている。ＣＤ１１７のそのリガンド（幹細胞因子；ＳＣＦ）への結合は、受容体の二量体化、キナーゼドメインのトランス型自己リン酸化、リン酸化チロシン結合またはＳｒｃ相同性２（ＳＨ２）ドメインを介したシグナル伝達タンパク質の動員、およびそれに続くシグナル伝達を引き起こす。

一面において、本発明は、野生型ＣＤ１１７ポリペプチドと比較して１以上のアミノ酸修飾を含む改変型ＣＤ１１７ポリペプチドを提供する。特定の態様において、１以上のアミノ酸修飾は、１以上のアミノ酸置換、挿入、または欠失を含む。特定の態様において、１以上のアミノ酸修飾は、ＣＤ１１７ポリペプチドの細胞外ドメインに位置する。特定の態様において、１以上のアミノ酸修飾は、ＣＤ１１７ポリペプチドの細胞外ドメインの１以上の表面に露出したアミノ酸または領域に位置する。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７は、並置膜領域またはキナーゼドメイン内の１以上の修飾を含む。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドは、１以上の欠失、例えば、Ｎ末端またはＣ末端欠失を含み、要すれば、欠失は、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドの生物学的活性、例えば、シグナル伝達を実質的に損なわない。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドは、野生型ＣＤ１１７ポリペプチドに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列相同性を保持または有する。特定の態様において、１以上のアミノ酸修飾は、ヒトＣＤ１１７における以下のものから選択されるアミノ酸残基の１以上のアミノ酸置換または欠失を含む：Ｎ５０５またはＤ８１６。特定の態様において、１以上のアミノ酸修飾は、例えば、これらの残基の何れか１以上のアミノ酸置換を含む。特定の態様では、アミノ酸残基は、何れか他のアミノ酸によって、アラニンによって置換される。特定の態様では、アミノ酸置換は保存的アミノ酸置換である。本明細書で用いる用語“保存的置換”とは、１以上のアミノ酸が別の生物学的に類似の残基で置換されることを示す。

以下のスキームでは、アミノ酸の保存的置換は、示された物理化学的特性によってグループ化されている。Ｉ：中性、親水性、ＩＩ：酸性、かつアミド、ＩＩＩ：塩基性、ＩＶ：疎水性、Ｖ：芳香族性、大きなアミノ酸。

以下のスキームでは、アミノ酸の保存的置換は、示された物理化学的特性によってグループ化されている。ＶＩ：中性または疎水性、ＶＩＩ：酸性、ＶＩＩＩ：塩基性、ＩＸ：極性、Ｘ：芳香族性。

特定の態様において、１以上のアミノ酸置換は、Ｄ８１６Ｖ置換および／またはＮ５０５Ｉ置換を含む。

ある態様において、変異体のベースとなる野生型ＣＤ１１７ポリペプチドは、ヒトＣＤ１１７ポリペプチドであるが、他の態様では他の哺乳動物ＣＤ１１７ポリペプチドである。ヒトおよび哺乳動物のＣＤ１１７ポリペプチドの配列は当技術分野で知られている。ｃ－ｋｉｔ遺伝子の選択的スプライシングにより、ヒトＣＤ１１７ポリペプチドは様々なアイソフォームとして発現しており、本明細書に従ってこれらのいずれを用いてもよい。これらのアイソフォームには２つのＧＮＮＫ＋アイソフォームおよびＧＮＮＫ－アイソフォーム（それぞれｃ－Ｋｉｔおよびｃ－ＫｉｔＡとも表記される）があり、これらは膜貫通ドメインに隣接する細胞外ドメインの５１０－ＧＮＮＫ－５１３（配列番号２５）という４つのアミノ酸の有無によって異なり、ほとんどの組織で共発現されるが、通常はＧＮＮＫ－アイソフォームが優勢である。アイソフォームはまた、キナーゼ間ドメインの７１５位のＳｅｒ残基の有無でも異なり得て、本明細書には、Ｓｅｒ１７５が存在するかまたは存在しない、以下に示すものを含むＣＤ１１７のアイソフォームも含まれる。これらのアイソフォームは、例えばＮ５０５ＩまたはＤ８１６Ｖ改変体、および例えば少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を含むそれらの変異体を含む、本明細書に記載の改変体のいずれかを含んでいてもよい。

特定の態様において、野生型ＣＤ１１７ポリペプチドは、ＧＮＮＫ＋またはＧＮＮＫ－アイソフォームであり、そして以下のアミノ酸配列（ＧＮＮＫテトラペプチド（配列番号２５）、およびＮ５０５残基およびＤ８１６残基は太字である；番号付けは、ＧＮＮＫ－アイソフォームに基づく）のうちの１つを含むか、またはそれらからなる：

特定の態様において、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドは、以下の配列のいずれかを含むか、またはこれらからなる：

またはそれらの変異体もしくはフラグメント、例えば、それらに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有するもの。特定の態様において、変異体は、改変型ＣＤ１１７に存在するＮ５０５ＩまたはＤ８１６Ｖアミノ酸置換を保持する。特定の態様において、ＣＤ１１７変異体は、改変型ＣＤ１１７に構成的活性を付与する異なるアミノ酸修飾を含む。特定の態様において、フラグメントは、ＣＤ１１７キナーゼ活性を実質的に保持し、例えば、ＣＤ１１７キナーゼ活性を少なくとも５０％保持する。

特定の態様において、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドは、野生型ＣＤ１１７ポリペプチドと比較して、キナーゼ活性を実質的に保持する。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドは、ＳＣＦが結合したとき、野生型ＣＤ１１７ポリペプチドのキナーゼ活性の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または１００％を有し、特定の態様において、改変型ＣＤ１１７は、ＳＣＦが結合していない場合でさえ、この活性を有する。いくつかの態様において、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドは、野生型ＣＤ１１７ポリペプチドと比較して、キナーゼ活性を増加させる。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドは、野生型ＣＤ１１７ポリペプチドのキナーゼ活性の少なくとも１５０％、少なくとも２００％、少なくとも３００％、少なくとも５００％、少なくとも７５０％、または少なくとも１０００％を有する。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７は、ＳＣＦ結合がないとき、または抗ｃ－Ｋｉｔ抗体の存在下においてさえも、構成的キナーゼ活性を有する。キナーゼ活性は、キナーゼ反応から生成されるＡＤＰを測定する発光キナーゼアッセイであるADP-Glo^(商標)キナーゼアッセイ（ＡＤＰはＡＴＰに変換され、ＡＴＰはUltra-Glo^(商標)ルシフェラーゼ(Promega Corporation, Madison, WIから入手可能)によって光に変換される）など、当技術分野で公知のアッセイを用いて決定できる。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドは、Ｇａｂ２、Ｓｈｃ、ＳＨＰ－２および／またはＣｂｌを構成的にリン酸化する。

特定の態様において、１以上のアミノ酸修飾は、細胞中で発現されたとき、野生型ＣＤ１１７ポリペプチドへの幹細胞因子（ＳＣＦ）の結合と比較して、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドへのＳＣＦの結合を実質的に阻害または減少させない。特定の態様において、
以上のアミノ酸修飾は、野生型ＣＤ１１７ポリペプチドと比較して、細胞内で発現される改変型ＣＤ１１７ポリペプチドへの幹細胞因子（ＳＣＦ）の結合を実質的に阻害または減少させない。

特定の態様において、改変型ＣＤ１１７は、例えば、ＳＣＦリガンドが結合していない状態で、構成的シグナル伝達活性またはキナーゼ活性を有する改変型ＣＤ１１７である。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７は、例えばＳＣＦが結合していない状態で、構成的な自己リン酸化活性を有する。このような改変型ＣＤ１１７は、例えば癌細胞において様々なものが同定されており、本明細書に記載の組成物および方法に従って、これらのいずれかを使用できる。活性化または機能獲得のＣＤ１１７修飾の例としては、Ｎ５０５Ｉ、Ｖ５５９Ｄ、Ｄ８１６Ｖ、Ｄ８１６Ｈ、Ｖ５６８Ｆ、Ｖ５７０Ｆ、またはＹ７０３Ｆ、位置５０５、５２２、８１６、５５７、５５８、５５９、５６８、５６９、５７０、７０３、８１６に対応するアミノ酸残基の修飾または変異、あるいはコドン５７９（Ａｓｐ）の欠失が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Akin and Metcalfe, Journal of Allergy and Clinical Immunology, Vol. 114, Issue 1, p13-19, July 1, 2004; Hirotakoji et al., Science 23, Jan 1998, Vol. 279, Issue 5350, pp. 577-580; Sanlorenzo et al., J Proteomics 2016 July 20, 144: 140-147、および前述のいずれかで引用された文献を参照のこと。これらは全て、引用によりその内容全体が本明細書に包含される。特定の態様において、アミノ酸修飾は膜貫通ドメインとチロシンキナーゼドメインの間の領域にある。ｃ－Ｋｉｔの構成的活性化を引き起こす変異は、肥満細胞症のいくつかの型において原因であることが示されており、いくつかのタイプの変異が骨髄増殖性疾患（ＭＰＤ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、副鼻腔リンパ腫および消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）に関連している。これらは、キナーゼ分子の制御に影響を与える“制御型”変異、および酵素部位を形成するアミノ酸配列を直接変化させる“酵素ポケット型”変異の２種の活性化変異と考えられる。いずれのタイプの変異も、Longley et al., Leukemia Research, Vol. 25, Issue 7, July 2001, pp. 571-576、およびそこで引用された文献（これらはすべて、引用によりその内容全体が本明細書に包含される）に開示されたもののいずれかを含む、本明細書の種々の態様に従って使用され得る。

特定の態様において、１以上のアミノ酸修飾は、野生型ＣＤ１１７ポリペプチドのみを発現する細胞におけるシグナル伝達と比較して、改変型ＣＤ１１７のみを発現する細胞が、要すればＳＣＦ結合に応答して、ｃ－Ｋｉｔシグナル伝達または増殖を実質的に阻害または減少させるという結果をもたらさない。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７は、対応する野生型ＣＤ１１７と比較して、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％のｃ－Ｋｉｔシグナル伝達および／または増殖を、要すればＳＣＦ結合に応答して保持する。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７は、対応する野生型ＣＤ１１７と比較して、ＳＣＦ結合の不存在下で、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％のｃ－Ｋｉｔシグナル伝達および／または増殖を保持する。

特定の態様において、１以上のアミノ酸修飾は、野生型ＣＤ１１７ポリペプチドと比較して、細胞内で発現された改変型ＣＤ１１７ポリペプチドへの抗ｃ－Ｋｉｔ抗体の結合を実質的に阻害または減少させない。

特定の態様では、抗ｃ－Ｋｉｔ抗体は、ＪＳＰ１９１、ＡＢ８５、ＣＤＸ－０１５９またはＦＳＩ－１７４のいずれか１つに存在する６つのＣＤＲを含む。特定の態様では、抗ｃ－Ｋｉｔ抗体は、ＪＳＰ１９１、ＡＢ８５、ＣＤＸ－０１５９またはＦＳＩ－１７４のいずれか１つである。

いくつかの態様では、抗ｃ－Ｋｉｔ抗体はＪＳＰ１９１であるか、またはＪＳＰ１９１に存在する６つのＣＤＲを含む。

いくつかの態様では、抗ｃ－Ｋｉｔ抗体はＡＢ８５であるか、またはＡＢ８５に存在する６つのＣＤＲを含む。

いくつかの態様において、抗ｃ－Ｋｉｔ抗体はＣＤＸ－０１５９であるか、またはＣＤＸ－０１５９に存在する６つのＣＤＲを含む。

いくつかの態様では、抗ｃ－Ｋｉｔ抗体はＦＳＩ－１７４であるか、ＦＳＩ－１７４に存在する６つのＣＤＲを含む。

本発明はまた、本明細書に記載の改変型ＣＤ１１７ポリペプチドをコードする核酸またはポリヌクレオチドを提供する。特定の態様において、核酸は、ＲＮＡ、ＤＮＡまたはそれらの組合せを含み、特定の態様において、核酸は、一本鎖領域および／または二本鎖領域、またはそれらの混合物を含む。特定の態様では、核酸は二本鎖ＤＮＡであり、特定の態様では、核酸は一本鎖ＲＮＡ、例えばメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）である。特定の態様において、核酸は修飾ｍＲＮＡを含む。特定の態様において、本明細書に記載のポリヌクレオチド、例えば改変ｍＲＮＡは、例えば宿主細胞におけるコードされたポリペプチドの発現を増強するようにコドン最適化される。

特定の態様において、ポリヌクレオチド変異体は、１以上の修飾ヌクレオチドまたはヌクレオシドを含む。１以上の修飾ヌクレオシドを含む修飾ｍＲＮＡは、非修飾ｍＲＮＡに比べて、安定性の向上、発現レベルの向上、免疫原性の低下などの利点を有すると記載されている。改変型ＣＤ１１７ポリペプチドをコードする核酸中に存在し得るｍＲＮＡに対する修飾の限定されない例は、例えば、ＰＣＴ特許公開公報ＷＯ２０１１／１３０６２４、ＷＯ２０１２／１３８４５３、ＷＯ２０１３０５２５２３、ＷＯ２０１３１５１６６６、ＷＯ２０１３／０７１０４７、ＷＯ２０１３／０７８１９９、ＷＯ２０１２０４５０７５、ＷＯ２０１４０８１５０７、ＷＯ２０１４０９３９２４、ＷＯ２０１４１６４２５３、米国特許第ＵＳ８，２７８，０３６号（シュードウリジンを含む修飾ｍＲＮＡを記載）、ＵＳ８，６９１，９６６号（シュードウリジンおよび／またはＮ１－メチルシュードウリジンを含む修飾ｍＲＮＡを記載）、ＵＳ８，８３５，１０８号（５－メチルシチジンを含む修飾ｍＲＮＡを記載）、ＵＳ８，７４８，０８９（シュードウリジンまたは１－メチルシュードウリジンを含む修飾ｍＲＮＡを記載）に記載されている。特定の態様では、修飾ｍＲＮＡは１以上のヌクレオシド修飾を含んでいる。特定の態様において、修飾ｍＲＮＡ配列は、未修飾のＡ、Ｇ、ＵまたはＣリボヌクレオシドと比較して、少なくとも１つの修飾を含む。例えば、ウリジンはシュードウリジン（Ψ）またはＮ１－メチル－シュードウリジン（ｍ１Ψ）のような類似のヌクレオシドに、シトシンは５－メチルシトシンに置き換えることができる。特定の態様において、少なくとも１つの修飾ヌクレオシドは、Ｎ１－メチル－シュードウリジンおよび／または５－メチルシチジンを含む。特定の態様において、修飾ｍＲＮＡ中の全てのウリジンは、シュードウリジン（Ψ）またはＮ１－メチル－シュードウリジン（ｍ１Ψ）などの類似のヌクレオシドで置換され、および／または修飾ｍＲＮＡ中の全てのシトシンは、５－メチルシトシンなどの類似のヌクレオシドで置換される。特定の態様において、修飾ｍＲＮＡは、５’末端キャップ配列の後に改変型ＣＤ１１７ポリペプチドをコードする配列が続き、その後にポリＡまたはポリＡ－Ｇ配列のような３’テーリング配列が続く。

特定の態様では、核酸、例えば修飾ｍＲＮＡは、細胞膜を横切っての送達を容易にし、その負電荷を遮蔽し、および／またはヌクレアーゼによる分解から保護するために、例えば１以上の脂質と結合している。特定の態様において、核酸は、脂質核酸粒子、脂質ナノ粒子、またはリポソームと結合しているか、またはその中に存在する。特定の態様において、脂質核酸粒子、脂質ナノ粒子、またはリポソームは、細胞による核酸の送達または取り込みを促進する。特定の態様において、ｍＲＮＡ、要すれば修飾ｍＲＮＡは、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）に共形成される。特定の態様において、ｍＲＮＡ－ＬＮＰ製剤は以下を含む：(１）ポリアニオン性ｍＲＮＡを被覆化するための、３級アミンまたは４級アミンを有するイオン性またはカチオン性脂質またはポリマー物質；（２）細胞膜の脂質に似た、双性イオン性脂質（例えば、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン［ＤＯＰＥ］など）；（３）ＬＮＰの脂質二重層を安定化させるコレステロール；および、（４）ナノ粒子に水和層を与え、コロイド安定性を改善し、タンパク質の吸収を抑えるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）－脂質。

特定の態様において、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドをコードする核酸はベクター中に存在する。特定の態様において、ベクターは、哺乳動物のＨＳＣまたは他の幹細胞に、例えば、ＨＳＣまたは幹細胞の核に、核酸を送達できる。特定の態様において、ベクターはエピソームベクター、例えばプラスミドである。特定の態様において、ベクターは、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドをコードする核酸配列に作動可能に連結されたプロモーター配列を含む発現ベクターである。特定の態様において、発現ベクターは、ＨＳＣまたは他の幹細胞においてコードされた改変型ＣＤ１１７ポリペプチドの発現を促進するプロモーター配列を含む。特定の態様において、発現ベクターは、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドをコードする配列の上流および下流にそれぞれ、５’および／または３’細胞ＵＴＲまたはウイルスＵＴＲまたはその誘導体を含む。

特定の態様において、ベクターはウイルスベクターであり、要すればＡＡＶベクター、サイトメガロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、またはレンチウイルスベクターであり得る。特定の態様では、ウイルスベクターおよびＨＳＣを培養液中で少なくとも約２４時間一緒に培養すると、ウイルスベクターはＨＳＣに感染する。

改変された造血幹細胞および医薬組成物
関連する面において、本発明は、本明細書に記載の改変型ＣＤ１１７ポリペプチドをコードする核酸を含む、改変細胞、例えばＨＳＣおよび／またはＨＳＰＣを提供する。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドは、１以上のアミノ酸置換、例えば、野生型ヒトＣＤ１１７に存在する以下のアミノ酸の１以上：Ｎ５０５またはＤ８１６での置換を含む。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドは、Ｄ８１６Ｖ置換および／またはＮ５０５Ｉ置換を含む。

特定の態様では、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドをコードする核酸は、改変された細胞中に一過性に存在し、細胞のゲノム内には存在しない。特定の態様では、改変された細胞は改変型ＣＤ１１７ポリペプチドを発現し、および／またはそれを含み、特定の態様では、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドは細胞表面に存在し、例えば細胞外ドメインは改変された細胞の外側に存在する。特定の態様では、改変された細胞は発現ベクター、要すればウイルスベクターで形質導入されるか、または感染される。特定の態様において、改変された細胞は、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドおよび野生型、内因性ＣＤ１１７ポリペプチドの両方を発現および／または含んでおり、特定の態様において、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドおよび野生型、内因性ＣＤ１１７ポリペプチドの両方は、細胞表面上に存在し、例えば、それらの細胞外ドメインは改変細胞の外側に存在する。特定の態様では、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドは細胞表面に存在し、例えば、その細胞外ドメインは修飾細胞の外側に存在する。特定の態様では、ＣＤ１１７はヒトＣＤ１１７またはその改変型である。

特定の態様において、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドおよび／またはコーディング核酸を含む改変された細胞は、例えば、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドを産生するために用いられ得るＨＥＫ２９３細胞などの宿主細胞である。対象組成物を調製する際には、例えば、哺乳動物細胞（例えば、２９３細胞）、昆虫細胞（例えば、ＳＦ９細胞）、微生物および酵母を含むがこれらに限定されない、何れかの宿主細胞が用いられ得る。

特定の態様では、改変された細胞は幹細胞または多能性細胞であり、特定の態様では、幹細胞は造血幹細胞（ＨＳＣ）またはＨＳＰＣである。いくつかの態様では、幹細胞は自己複製能および分化した子孫を生成する能力の両方を有する哺乳動物細胞である。特定の態様では、幹細胞はヒト細胞である。幹細胞は、非同期複製、あるいは対称複製を行う能力、つまり分裂後の２つの娘細胞が異なる表現型を有する能力、広範な自己複製能力、分裂休止状態で存在する能力、存在する全ての組織のクローン再生能力（例えば、造血幹細胞は全ての造血系を再構成する能力）を有する。

造血幹細胞（ＨＳＣ）は生涯を通じて維持される(自己複製)。造血前駆細胞は、明確に定義された階層の中であらゆる種類の成熟した血液細胞に分化する。造血幹細胞はまた、例えば多能性胚性幹細胞、人工多能性細胞などからインビトロで作製することもできる。例えば、造血前駆細胞の作製プロトコルを詳述したSugimuraらの、(2017)Nature 545:432-438(引用により本明細書に具体的に包含される）を参照のこと。

細胞は新鮮なものでも、凍結されたものでも、あるいは予め培養されたものでもよい。それらは胎児、新生児、成人などであってもよい。造血幹細胞およびＨＳＰＣは、胎児の肝臓、骨髄、血液、特にＧ－ＣＳＦまたはＧＭ－ＣＳＦで動員された末梢血、あるいはその他の常套の供給源から得ることができる。生着用の細胞は、要すれば他の細胞から分離されるが、幹細胞を造血系や他の系統の細胞から分離する方法は本発明にとって重要ではない。要すれば、幹細胞に関連するエピトープ特性を提示しつつ、分化細胞に関連するマーカーを含まない細胞を選択的に単離することによって、実質的に均質な幹細胞または前駆細胞の集団を得ることができる。

改変されたＨＳＣは、哺乳動物ドナーから得たＨＳＣを用いて作製できる。特定の態様において、ドナーは造血幹細胞移植を必要とする対象、例えば、ＨＣＴで処置可能な疾患または障害と診断された対象である。他の態様では、改変されたＨＳＣは健康なドナーから得たＨＳＣを用いて作製でき、例えば、改変されたＨＳＣは別の対象をＨＣＴで処置するために用いられる。したがって、改変されたＨＳＣは、ＨＣＴを必要とする対象に自家移植することも同種移植することもできる。

ドナーから幹細胞を採取する前に、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ；filgrastim [Neupogen])で骨髄をプライミングし、幹細胞数を増加させることができる。Ｇ－ＣＳＦまたはＧＭ－ＣＳＦのようなサイトカインによって骨髄から末梢血へ幹細胞を移動させることが、造血幹細胞移植のためのアフェレーシスによる末梢血前駆細胞の広範な採用につながった。動員に用いるＧ－ＣＳＦの用量は、約１０ｕｇ／ｋｇ／日である。しかしながら、前処置の多い自己ドナーでは、最大約４０ｕｇ／ｋｇ／日の投与が可能である。モゾビルは、造血幹細胞を末梢血に動員して採取するためにＧ－ＣＳＦと併用されることがある。

造血幹細胞（ＨＳＣ）マーカーの中でも、ＣＤ３４はＨＳＣに特異的に発現することでよく知られている。特定の態様において、改変された細胞はＣＤ３４＋細胞である。特定の態様において、改変された細胞は、細胞表面マーカー発現の以下のパターンまたは組み合わせのいずれか１つを有するＨＳＣのサブセットである：ＣＤ３４＋／ＣＤ９０＋、ＣＤ３４＋／ＣＤ３８－、またはＣＤ３４＋／ＣＤ３８－／ＣＤ９０＋。ＣＤ３４＋細胞および／またはＣＤ９０＋細胞は、ドナー造血細胞試料からの磁気ビーズセレクション、フローサイトメトリーなどを含む親和性法により選択できる。ＨＳＣ組成物は、集団中のＣＤ３４＋である細胞の割合によって定義されるように、少なくとも約５０％純度であってもよく、少なくとも約７５％純度であってもよく、少なくとも約８５％純度であってもよく、少なくとも約９５％純度であってもよく、あるいはそれ以上であってもよい。

特定の態様において、造血幹細胞および／またはＨＳＰＣは、骨髄、末梢血、または臍帯血から得られ、その後、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドをコードする核酸を細胞に導入することによって改変される。例えば、核酸はウイルスベクターによるトランスフェクションまたは感染、あるいはｍＲＮＡとの接触によって導入できる。

特定の態様において、本発明は、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドをコードする核酸を細胞に導入することを含む、ＨＳＣおよび／またはＨＳＰＣなどの幹細胞を含む細胞を改変する方法を提供する。特定の態様では、導入された核酸はウイルスベクター内に存在する。特定の態様では、核酸は脂質ナノ粒子、リポソームなどと結合しているか、その中に存在する。特定の態様において、核酸は改変された細胞中に一過性のみ存在し続けるか、または核酸は細胞中で改変型ＣＤ１１７ポリペプチドを一過性のみ発現する。特定の態様では、本方法は、哺乳動物対象のＨＣＴ処置用に改変された細胞を調製するために用いられる。特定の態様では、核酸またはベクターは、トランスフェクション、トランスダクション、感染、エレクトロポレーション、またはナノポア技術など、当技術分野で公知の様々な方法によって細胞内に導入され得る。特定の態様では、ｍＲＮＡ、例えば改変型ｍＲＮＡは、脂質核酸粒子（ＬＮＰ）またはナノ粒子を用いて細胞に導入される。したがって、細胞、例えば造血幹細胞および／またはＨＳＰＣＳは、当技術分野で利用可能な種々の方法に従って、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドをコードする核酸をＨＳＣおよび／またはＨＳＰＣに導入することにより改変され得る。

特定の態様において、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドを発現する改変された細胞は、内因性または野生型細胞表面ＣＤ１１７に結合し、野生型ＣＤ１１７のみを発現し、本明細書に記載の改変型ＣＤ１１７ポリペプチドを発現しない細胞の増殖を阻害または死滅させるモノクローナル抗体（ｍＡｂ）によって実質的に阻害、排除、枯渇、または死滅されない。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドを発現する改変された細胞の増殖は、修飾されていない、例えば野生型ＣＤ１１７のみを発現する同じ細胞型の増殖と比較して、５０％未満、４０％未満、３０％未満、２０％未満、または１０％未満阻害、排除、枯渇、または死滅される。

本明細書に記載の組成物および方法は、何れかの抗ｃ－Ｋｉｔ抗体、特にモノクローナル抗ヒトｃ－Ｋｉｔ抗体に適用できる。例示的な抗ｃ－Ｋｉｔ抗体としては、ＳＲ－１、ＪＳＰ１９１、８Ｄ７、Ｋ４５、１０４Ｄ２、ＣＫ６、ＹＢ５．Ｂ８、ＡＦ－２－１、ＡＦ１１、ＡＦ１２、ＡＦ１１２、ＡＦ－３、ＡＦ－１－１、ＮＦ、ＮＦ－２－１、ＮＦ１１、ＮＦ１２、ＮＦ１１２、ＮＦ－３、ＨＦ１１、ＨＦ１２、およびＨＦ１１２が挙げられるが、これらに限定されない。ヒトＣＤ１１７に特異的に結合する、本発明によって企図される多数の抗体は、当技術分野で公知であり、市販されており、ＳＲ１、２Ｂ８、ＡＣＫ２、ＹＢ５－Ｂ８、５７Ａ５、１０４Ｄ２などが含まれるが、これらに限定されない。特定の態様において、抗ＣＤ１１７抗体は、以下からなる群より選択される：ＪＳＰ１９１（Jasper Therapeutics; Redwood City, CA）；ＣＤＸ－０１５９（Celldex Therapeutics, Hampton, NJ)；ＭＧＴＡ－１１７（ＡＢ８５）（マゼンタ・セラピューティクス（マサチューセッツ州ケンブリッジ）；ＣＫ６（Magenta Therapeutics, Cambridge, MA）；ＡＢ２４９（Magenta Therapeutics, Cambridge, MA）；および、ＳＩ－１７４（Gilead, Foster City, CA）からなる群より選択される。本発明によって企図されるMagenta Therapeuticsからの抗体には、米国特許出願公開第２０１９０１５３１１４号、ＰＣＴ出願公開ＷＯ２０１９／０８４０６４号、ＷＯ２０２０／２１９７４８号、およびＷＯ２０２０／２１９７７０号に開示されるものが含まれるが、これらに限定されない。ＦＳＩ－１７４抗体は、ＰＣＴ出願公開第ＷＯ２０２０／１１２６８７号および米国特許出願公開第２０２００１６５３３７号に開示されている。本発明には、本明細書に記載の特許出願のいずれかに開示された抗ｃ－Ｋｉｔ抗体および／またはＣＤＲセットが含まれるが、これらに限定されるものではなく、これらはすべて引用によりその内容全体が包含される。

特定の態様では、抗ｃ－Ｋｉｔ抗体はＣＤ１１７の細胞外領域、すなわちアミノ酸２６－５２４に結合する。この領域の配列を以下に示す:
ＱＰＳＶＳＰＧＥＰＳＰＰＳＩＨＰＧＫＳＤＬＩＶＲＶＧＤＥＩＲＬＬＣＴＤＰＧＦＶＫＷＴＦＥＩＬＤＥＴＮＥＮＫＱＮＥＷＩＴＥＫＡＥＡＴＮＴＧＫＹＴＣＴＮＫＨＧＬＳＮＳＩＹＶＦＶＲＤＰＡＫＬＦＬＶＤＲＳＬＹＧＫＥＤＮＤＴＬＶＲＣＰＬＴＤＰＥＶＴＮＹＳＬＫＧＣＱＧＫＰＬＰＫＤＬＲＦＩＰＤＰＫＡＧＩＭＩＫＳＶＫＲＡＹＨＲＬＣＬＨＣＳＶＤＱＥＧＫＳＶＬＳＥＫＦＩＬＫＶＲＰＡＦＫＡＶＰＶＶＳＶＳＫＡＳＹＬＬＲＥＧＥＥＦＴＶＴＣＴＩＫＤＶＳＳＳＶＹＳＴＷＫＲＥＮＳＱＴＫＬＱＥＫＹＮＳＷＨＨＧＤＦＮＹＥＲＱＡＴＬＴＩＳＳＡＲＶＮＤＳＧＶＦＭＣＹＡＮＮＴＦＧＳＡＮＶＴＴＴＬＥＶＶＤＫＧＦＩＮＩＦＰＭＩＮＴＴＶＦＶＮＤＧＥＮＶＤＬＩＶＥＹＥＡＦＰＫＰＥＨＱＱＷＩＹＭＮＲＴＦＴＤＫＷＥＤＹＰＫＳＥＮＥＳＮＩＲＹＶＳＥＬＨＬＴＲＬＫＧＴＥＧＧＴＹＴＦＬＶＳＮＳＤＶＮＡＡＩＡＦＮＶＹＶＮＴＫＰＥＩＬＴＹＤＲＬＶＮＧＭＬＱＣＶＡＡＧＦＰＥＰＴＩＤＷＹＦＣＰＧＴＥＱＲＣＳＡＳＶＬＰＶＤＶＱＴＬＮＳＳＧＰＰＦＧＫＬＶＶＱＳＳＩＤＳＳＡＦＫＨＮＧＴＶＥＣＫＡＹＮＤＶＧＫＴＳＡＹＦＮＦＡＦＫＧＮＮＫＥＱＩＨＰＨＴＬＦＴＰ（配列番号７）。

特定の態様では、抗体はＳＲ１のヒト化型であり、これは米国特許第５，９１９，９１１号および第５，４８９，５１６号に開示されているマウス抗ｃ－Ｋｉｔ抗体である。ＪＳＰ１９１(以前はＡＭＧ１９１と呼ばれていた）と呼ばれるヒト化抗体は、米国特許第第８，４３６，１５０号、同第８，７９１，２４９号、同第７，９１５，３９１号、および米国特許出願公開第２０１１０２２３１６５号に記載されている。ＪＳＰ１９１は糖鎖除去された（aglycosylated）ＩｇＧ１ヒト化抗体である。ＪＳＰ１９１は、骨髄から造血幹細胞を除去するコンディショニング剤として臨床開発中のヒト化モノクローナル抗体である。ＪＳＰ１９１は、造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）の表面に発現する幹細胞因子（ＳＣＦ）の受容体であるヒトＣＤ１１７に特異的に結合する。ＪＳＰ１９１はＳＣＦがＣＤ１１７に結合するのを阻害し、重要な生存シグナルを破壊し、造血幹細胞の枯渇をもたらす。

ＪＳＰ１９１の重鎖および軽鎖の配列は、それぞれ米国特許第８，４３６，１５０号の配列番号４および米国特許第８，４３６，１５０号の配列番号２として開示されている。ＪＳＰ１９１の重鎖および軽鎖の配列は以下の通りである：
重鎖：
ＭＭＤＷＴＷＲＶＦＣＬＬＡＶＡＰＧＡＨＳＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＮＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＶＩＹＳＧＮＧＤＴＳＹＮＱＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＲＤＴＲＦＧＮＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＱＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号８）
軽鎖：
ＭＶＬＱＴＱＶＦＩＳＬＬＬＷＩＳＧＡＹＧＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＡＳＥＳＶＤＩＹＧＮＳＦＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＬＡＳＮＬＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＮＮＥＤＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号９）。

特定の態様において、ＪＳＰ１９１の可変重鎖ドメインは、以下の配列を含む：
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＮＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＶＩＹＳＧＮＧＤＴＳＹＮＱＫＦＫＧＲＶＴＩＴＡＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＲＤＴＲＦＧＮＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１０）。

特定の態様において、ＪＳＰ１９１の可変軽鎖ドメインは、以下の配列を含む：
ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣＲＡＳＥＳＶＤＩＹＧＮＳＦＭＨＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＬＡＳＮＬＥＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣＱＱＮＮＥＤＰＹＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１１）。

ＪＳＰ１９１に存在するＣＤＲは以下の通りである：ＶＨ ＣＤＲ１＝ＹＮＭＨ（配列番号２６）；ＶＨ ＣＤＲ２＝ＩＹＳＧＮＧＤＴＳＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号２７）；ＶＨ ＣＤＲ３＝ＥＲＤＴＲＦＧＮ（配列番号２８）；ＶＬ ＣＤＲ１＝ＲＡＳＥＳＶＤＩＹＧＮＳＦＭＨ（配列番号２９）；ＶＬ ＣＤＲ２＝ＬＡＳＮＬＥＳ（配列番号３０）；および、ＶＬ ＣＤＲ３＝ＱＱＮＮＥＤＰＹＴ（配列番号３１）。

ＣＤＸ－０１５９は、受容体型チロシンキナーゼＫＩＴに特異的に結合し、その活性を強力に阻害するヒト化モノクローナル抗体である。ＣＤＸ－０１５９は、ＳＣＦの結合およびＫＩＴの二量体化の両方を阻害することにより、ＫＩＴの活性化を阻害するように設計されている。ＣＤＸ－０１５９および他の抗ｃ－Ｋｉｔ抗体は、米国特許第１０，７８１，２６７号に記載されており、特定の態様において、本明細書に開示される抗ｃ－Ｋｉｔは、そこに開示される抗体のいずれかのＣＤＲを含む。特定の態様において、抗ｃ－Ｋｉｔ抗体は以下を含む：（ｉ）以下のアミノ酸配列：

（配列番号１２）を含む軽鎖可変領域（「ＶＬ」）であり、ここで、Ｘ_Ｋ１は芳香族または脂肪族ヒドロキシル側鎖を有するアミノ酸であり、Ｘ_Ｋ２は脂肪族または脂肪族ヒドロキシル側鎖を有するアミノ酸であり、Ｘ_Ｋ３は脂肪族ヒドロキシル側鎖を有するアミノ酸であり、Ｘ_Ｋ４は脂肪族ヒドロキシル側鎖を有するアミノ酸であるか、またはＰであり、Ｘ_Ｋ５は荷電側鎖または酸性側鎖を有するアミノ酸であり、そしてＸ_Ｋ６は芳香族側鎖を有するアミノ酸である；および、（ｉｉ）以下のアミノ酸配列

（配列番号１３）を含む重鎖可変領域（「ＶＨ」）であり、ここで、Ｘ_Ｈ１は脂肪族側鎖を有するアミノ酸であり、Ｘ_Ｈ２は脂肪族側鎖を有するアミノ酸であり、Ｘ_Ｈ３は極性側鎖または塩基性側鎖を有するアミノ酸であり、Ｘ_Ｈ４は脂肪族側鎖を有するアミノ酸であり、Ｘ_Ｈ５は脂肪族側鎖を有するアミノ酸であり、Ｘ_Ｈ６は酸性側鎖を有するアミノ酸であり、Ｘ_Ｈ７は酸性またはアミド誘導体側鎖を有するアミノ酸であり、Ｘ_Ｈ８は脂肪族ヒドロキシル側鎖を有するアミノ酸である。特定の面において、本明細書に記載されるのは、抗体(例えば、ヒト抗体またはヒト化抗体）であり、以下の抗原結合断片を含む：
（ｉ）以下のアミノ酸配列：

（配列番号１４）または

（配列番号１５）を含むＶＨドメインのＶＨ ＣＤＲ：
および、
（ｉｉ）以下のアミノ酸配列：

（配列番号１６）を含むＶＬドメインのＶＬ ＣＤＲ。

ＭＧＴＡ－１１７（ＡＢ８５）は、移植環境用に作製され、アマニチンと結合された、ＣＤ１１７標的化抗体であり、自家または同種幹細胞移植による免疫リセットを受ける患者を対象に開発されている。ＭＧＴＡ－１１７は造血幹細胞および前駆細胞を枯渇させるが、この抗体および本発明が意図する他の抗体は、米国出願第２０２００４０７４４０号および／またはＰＣＴ出願第ＷＯ２０１９０８４０６４号に記載されている。ＡＢ８５のＣＤ１７７への結合に関するエピトープ解析は、ＰＣＴ出願公開第ＷＯ２０２０２１９７７０号に記載されており、ＣＤ１１７内に以下の２つのエピトープが同定されている：
ＥＫＡＥＡＴＮＴＧＫＹＴＣＴＮＫＨＧＬＳＮＳＩＹＶＦＶＲＤＰＡ（アミノ酸６０～９０；(配列番号１７））、および
ＲＣＰＬＴＤＰＥＶＴＮＹＳＬＫＧＣＱＧＫＰ（アミノ酸１００～１３０；(配列番号１８）)。

ＡＢ８５の可変重鎖および可変軽鎖の配列は、それぞれＰＣＴ出願番号ＷＯ２０１９０８４０６４の配列番号１４３および配列番号１４４として開示されている。

ＡＢ８５の重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列は以下の通りである：

（配列番号１９）。

ＡＢ８５のＶＨ ＣＤＲアミノ酸配列は以下の通りである：
ＮＹＷＩＧ（ＶＨ ＣＤＲ１；配列番号３２）；ＩＩＮＰＲＤＳＤＴＲＹＲＰＳＦＱＧ（ＶＨ ＣＤＲ２；配列番号３３）；および、ＨＧＲＧＹＥＧＹＥＧＡＦＤＩ（ＶＨ ＣＤＲ３；配列番号３４）。

ＡＢ８５の軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列は以下の通りである：

（配列番号２０）。

ＡＢ８５のＶＬ ＣＤＲアミノ酸配列は以下の通りである：
ＲＳＳＱＧＩＲＳＤＬＧ（ＶＬＣＤＲ１；配列番号３５）；ＤＡＳＮＬＥＴ（ＶＬＣＤＲ２；配列番号３６）；および、ＱＱＡＮＧＦＰＬＴ（ＶＬＣＤＲ３；配列番号３７）。

ＦＳＩ－１７４は抗ｃＫＩＴ抗体であり、５Ｆ９との併用で無毒性移植条件付けレジメンとして、また標的化血液悪性腫瘍の治療薬として開発中である。ＦＳＩ－１７４の配列は、ＰＣＴ出願公開第２０２０／１１２６８７号、米国特許出願公開第２０２００１６５３３７号、および米国特許第１１，０４１，０２２号に開示されている。特定の態様において、抗ｃ－Ｋｉｔ抗体は、そこに開示されるＡＨ１、ＡＨ２、ＡＨ３、ＡＨ４またはＡＨ５の何れかに存在する３つのＣＤＲまたは可変重鎖領域、および／またはそこに開示されるＡＬ１またはＡＬ２の何れかに存在する３つのＣＤＲまたは可変重鎖領域を含む。

特定の態様において、ＦＳＩ－１７４および関連抗体に存在するＣＤＲは以下の通りである:ＶＨ ＣＤＲ１＝ＳＹＮＭＨ（配列番号３８）；ＶＨ ＣＤＲ２＝ＶＩＹＳＧＮＧＤＴＳＹ（Ａ／Ｎ）ＱＫＦ（Ｋ／Ｑ）Ｇ（配列番号３９）；ＶＨ ＣＤＲ３＝ＥＲＤＴＲＦＧＮ（配列番号４０）；ＶＬ ＣＤＲ１＝ＲＡＳ（Ｄ／Ｅ）ＳＶＤＩＹＧ（Ｎ／Ｑ）ＳＦＭＨ（配列番号４１）；ＶＬ ＣＤＲ２＝ＬＡＳＮＬＥＳ（配列番号４２）；およびＶＬ ＣＤＲ３＝ＱＱＮＮＥＤＰＹＴ（配列番号４３）。Ａ／Ｎなどは、アミノ酸位置が２つのアミノ酸のいずれか、この例ではＡまたはＮのいずれかであってもよいことを示す。特定の態様において、重鎖可変領域に存在するＣＤＲは、Ｋａｂａｔによって定義されるＣＤＲ Ｈ１、Ｈ２およびＨ３である:Ｈ１＝ＳＹＮＭＨ（配列番号３８）；Ｈ２＝ＶＩＹＳＧＮＧＤＴＳＹＡＱＫＦＫＧ（配列番号４４）；およびＨ３＝ＥＲＤＴＲＦＧＮ（配列番号３９）であり；そして軽鎖可変領域に存在するＣＤＲは、Ｋａｂａｔによって定義されるＣＤＲ Ｌ１、Ｌ２およびＬ３である:Ｌ１＝ＲＡＳＥＳＶＤＩＹＧＱＳＦＭＨ（配列番号４５）；Ｌ２＝ＬＡＳＮＬＥＳ（配列番号４２）；およびＬ３＝ＱＱＮＮＥＤＰＹＴ（配列番号４３）であり、それぞれ、１個、２個または３個のＣＤＲ残基置換が、重鎖位置６０におけるＮからＡ、重鎖位置６４におけるＫからＱ、および軽鎖位置３０におけるＮからＱから選択されるように存在することを除いて、Ｋａｂａｔによって定義されるＣＤＲであり、位置はＫａｂａｔに従って番号付けされる。特定の態様において、抗体は、以下に提供される重鎖可変領域配列（ＡＨ２、ＡＨ３、ＡＨ４）および／または軽鎖可変領域配列（ＡＬ２）のいずれか、またはその中の下線で示されるＣＤＲを含む：
ＡＨ２：

ＡＨ３：

ＡＨ４：

ＡＬ２：

特定の態様において、抗ＣＤ１１７抗体は、本明細書に記載の抗体の何れかの完全重鎖および／または完全軽鎖、または本明細書に記載の重鎖もしくは軽鎖、例えばＪＳＰ１９１重鎖もしくは軽鎖に対して少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の態様において、抗ＣＤ１１７抗体は、本明細書に記載の抗体のいずれかの重鎖および／または軽鎖の可変領域、または本明細書に記載の重鎖もしくは軽鎖の可変領域、例えばＪＳＰ１９１重鎖もしくは軽鎖可変領域と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の態様において、抗ＣＤ１１７抗体は、本明細書に記載の抗体の１以上のＣＤＲ、例えば、本明細書に記載の抗体、例えば、ＪＳＰ１９１抗体の２つ、３つ、４つ、５つまたは６つのＣＤＲを含む重鎖および／または軽鎖を含む。特定の態様において、抗ＣＤ１１７抗体は、本明細書に記載の１つ、２つ、または３つの重鎖ＣＤＲを含む重鎖またはその可変領域、例えばＪＳＰ１９１重鎖を含む。特定の態様において、抗ＣＤ１１７抗体は、本明細書に記載の１つ、２つ、または３つの軽鎖ＣＤＲを含む軽鎖またはその可変領域、例えばＪＳＰ１９１軽鎖を含む。

特定の態様において、抗体は、野生型ＣＤ１１７の領域、または本明細書に記載の改変型ＣＤ１１７ポリペプチドにおいて修飾される野生型ＣＤ１１７のエピトープに結合する。特定の態様では、抗体は、本明細書に記載の改変型ＣＤ１１７ポリペプチドに結合しないか、または親和性が低下した、例えば５０％未満、２５％未満、または１０％未満で本明細書に記載の改変型ＣＤ１１７ポリペプチドに結合する。野生型ＣＤ１１７または改変型ＣＤ１１７のような特定のポリペプチドに対する抗体の親和性は、例えば、抗体とその抗原との間の平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）を測定することによって決定されてもよく、これは、例えば、Hearty, Stephen, Paul Leonard, and Richard O’Kennedy. “Measuring antibody-antigen binding kinetics using surface plasmon resonance.” Antibody Engineering: Methods and Protocols, Second Edition (2012): 411-442に記載されているように、表面プラズモン共鳴によって、当技術分野における常套方法によって決定されてもよい。

特定の態様において、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドを発現する改変された細胞は、抗ＣＤ１１７抗体、例えば、細胞表面上のＣＤ１１７へのＳＣＦの結合を遮断または阻害する抗ＣＤ１１７抗体の存在下で増殖または生存できる。特定の態様において、抗ＣＤ１１７抗体、例えば、細胞表面上のＣＤ１１７へのＳＣＦの結合を遮断または阻害する抗ＣＤ１１７抗体の存在下での、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドを発現する改変された細胞の増殖および／または生存は、抗ＣＤ１１８抗体の不存在下での増殖および／または生存のレベルの少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、少なくとも５０％、または少なくとも４０％である。特定の態様において、抗ＣＤ１１７抗体は、本明細書に記載の改変型ＣＤ１１７ポリペプチドではなく、野生型ＣＤ１１７のみを発現する細胞の増殖を阻害するか、または細胞死もしくはアポトーシスを誘導できる。特定の態様では、抗ＣＤ１１７抗体は、以下からなる群より選択される:ＳＲ１、２Ｂ８、ＡＣＫ２、ＹＢ５－Ｂ８、５７Ａ５、１０４Ｄ２、ＪＳＰ１９１、ＣＤＸ－０１５９、ＭＧＴＡ－１１７（ＡＢ８５）、およびＦＳＩ－１７４。特定の態様では、抗体はＪＳＰ１９１である。従って、特定の態様において、本明細書に記載の改変型ＣＤ１１７ポリペプチドは、ＨＳＣおよび／またはＨＳＰＣ表面上で発現されると、細胞表面上の内因性野生型ＣＤ１１７へのＳＣＦの結合を阻害する抗ＣＤ１１７抗体の存在下で、ＳＣＦと実質的に結合できる。同様に、特定の態様において、本明細書に記載の改変型ＣＤ１１７ポリペプチドは、ＨＳＣ表面上に発現されたとき、ＳＣＦの不存在下および細胞表面上の内因性野生型ＣＤ１１７への結合を阻害する抗ＣＤ１１７抗体の存在下で、ＳＣＦによって結合されたときに細胞内シグナル伝達が可能である。特定の態様において、ＳＣＦ結合および／またはＳＣＦ介在シグナル伝達は、抗ＣＤ１１７抗体の存在下で実質的に減少しておらず、例えば、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドを発現する改変された細胞の結合および／またはシグナル伝達は、改変されていない、例えば、野生型ＣＤ１１７のみを発現する同じ細胞型で観察される結合および／またはシグナル伝達のレベルの少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％である。

ｃ－Ｋｉｔシグナル伝達、増殖または生存率は、当技術分野で標準的な方法を用いて測定できる。例えば、特定の態様では、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドを発現するように操作された細胞株（例えば、Ｂａ／Ｆ３細胞）を用いて、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドを含む細胞のｃ－Ｋｉｔシグナル伝達または増殖（例えば、ＳＣＦに対する応答）を決定する。細胞はＩＬ－３の存在下、幹細胞因子（ＳＣＦ）の有無にかかわらず、抗ＣＤ１１７抗体、例えばＪＳＰ１９１の存在下または不存在下で培養される。対照の親Ｂａ／Ｆ３細胞はＩＬ－３不存在下では増殖しない。さらに、親Ｂａ／Ｆ３細胞はＣＤ１１７を発現せず、ＳＣＦシグナルには反応しない。ＳＣＦ結合に対する増殖は、例えば抗ＣＤ１１７抗体の存在下および不存在下で、改変型ＣＤ１１７を過剰発現している細胞について測定できる。

本発明はまた、本明細書に記載の改変型ＣＤ１１７をコードするポリヌクレオチド配列をＨＳＣおよび／またはＨＳＰＣに導入することを含む、ＨＣＴのためのＨＳＣおよび／またはＨＳＰＣを調製する方法を提供する。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７をコードするポリヌクレオチド配列は、ｍＲＮＡまたは発現ベクター内に存在し、改変型ＣＤ１１７は、ＨＳＣおよび／またはＨＳＰＣに導入された後、一過性または構成的に発現される。ポリヌクレオチドおよび／またはベクターは、例えば、ポリヌクレオチドまたはベクターの発現または安定性を増加させるために、本明細書に記載のものまたは当技術分野で公知のものを含むヌクレオチド修飾を含んでいてもよい。

生着目的の場合、ＨＳＣおよび／またはＨＳＰＣを含む組成物を患者に投与する。このような方法は当技術分野でよく知られている。幹細胞は、必ずしも精製される必要はないが、要すれば精製される。フローサイトメトリー、アイソレックスシステム（Klein et al. (2001) Bone Marrow Transplant. 28(11):1023-9; Prince et al. (2002) Cytotherapy 4(2):137-45)；免疫磁気分離（Prince et al. (2002) Cytotherapy 4(2):147-55; Handgretinger et al. (2002) Bone Marrow Transplant. 29(9):731-6; Chou et al. (2005) Breast Cancer. 12(3):178-88)などがある。これらの文献はそれぞれ、特に造血幹細胞移植の手順、細胞組成、投与量に関して、引用により本明細書中に具体的に包含される。

本発明はまた、１以上の改変型ＣＤ１１７ポリペプチド、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドをコードする配列（例えば、改変型ｍＲＮＡ）を含む１以上のポリヌクレオチドもしくはベクター、または改変型ＣＤ１１７ポリペプチドをコードするおよび／もしくは改変型ＣＤ１１７を発現するポリヌクレオチドもしくはベクターを含む改変された細胞を、１以上の薬学的に許容される希釈剤、担体または賦形剤と組み合わせて含む医薬組成物を含む。

本発明は、本明細書に記載の改変型ＣＤ１１７ポリペプチド（または改変型ＣＤ１１７ポリペプチドをコードする核酸配列）を含む改変された細胞、および１以上の薬学的に許容される希釈剤、担体または賦形剤を含む医薬組成物を開示する。特定の態様では、細胞は異種細胞または処置対象から得た自己細胞である。特定の態様では、細胞は幹細胞、例えば造血幹細胞および／またはＨＳＰＣである。特定の態様において、医薬組成物は、１以上のさらなる活性剤をさらに含む。特定の態様において、１以上のさらなる活性剤は抗ＣＤ１１７抗体を含む。特定の態様では、抗ＣＤ１１７抗体は、以下からなる群より選択される：ＳＲ１、２Ｂ８、ＡＣＫ２、ＹＢ５－Ｂ８、５７Ａ５、１０４Ｄ２、ＪＳＰ１９１、ＣＤＸ－０１５９、ＭＧＴＡ－１１７（ＡＢ８５）、およびＦＳＩ－１７４からなる群より選択される。特定の態様では、抗体はＪＳＰ１９１である。特定の態様において、１以上のさらなる活性剤は、１以上の抗ＣＤ４７抗体、抗ＣＤ４０Ｌ抗体、抗ＣＤ１２２抗体、抗ＣＤ４抗体、および／または抗ＣＤ８抗体を含む。

本明細書に記載のポリヌクレオチド、ポリペプチドおよび細胞は、一般に安全で、毒性がなく、望ましい製剤を調製するのに有用な薬学的に許容される担体、希釈剤および試薬と組み合わせることができ、哺乳動物、例えばヒトまたは霊長動物の使用に許容される賦形剤を含む。特定の態様において、医薬組成物は、本明細書に記載の改変された細胞を含む溶液または懸濁液である。このような担体または希釈剤の例としては、水、生理食塩水、リンゲル液、ブドウ糖液、５％ヒト血清アルブミンなどが挙げられるが、これらに限定されない。補助的な活性化合物を配合することもできる。製剤に用いられる溶液または懸濁液には、注射用水、生理食塩水、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒のような無菌希釈剤；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンのような抗菌化合物；アスコルビン酸または重亜硫酸ナトリウムのような酸化防止剤；エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）のようなキレート化合物；酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩のような緩衝剤；凝集を防ぐためのＴｗｅｅｎ２０などの界面活性剤；および、塩化ナトリウムまたはブドウ糖などの強壮剤が含まれ得る。ｐＨは塩酸または水酸化ナトリウムなどの酸または塩基で調整できる。特定の態様において、医薬組成物は無菌である。静脈内投与に適した担体としては、生理的食塩水、静菌水、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）などがある。特定の態様では、それは製造および貯蔵の条件下で安定であり、細菌または真菌のような微生物の汚染作用に対して保存される。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液状ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの適切な混合物を含む溶媒または分散媒体であり得る。ある場合には、組成物は無菌であり、容易に注射できる程度に流動性がある。微生物の作用の防止は、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなど、さまざまな抗菌および抗真菌剤によって達成できる。特定の態様において、医薬組成物は、等張化剤、例えば、糖類、マンニトール、ソルビトールなどの多価アルコール、塩化ナトリウムを組成物中に含む。内用組成物の吸収を延長するには、吸収を遅らせる薬剤、例えばモノステアリン酸アルミニウムやゼラチンを組成物に含めることができる。

使用方法
さらなる面において、本発明は、本明細書に記載の改変型ＣＤ１１７ポリペプチドおよび／または改変型ＣＤ１１７ポリペプチドをコードする核酸を含む改変された細胞、例えばＨＳＣまたはＨＳＰＣを対象に投与することを含む、それを必要とする哺乳動物対象を処置する方法を提供する。特定の態様では、対象はＨＣＴまたは造血幹細胞移植を必要としている。移植は、同種異系幹細胞、不一致同種幹細胞、遺伝子操作された自家または同種細胞などが含まれるが、これらに限定されない、自家、同種異系または異種異系のいずれであってもよい。特定の態様において、改変されたＨＳＣまたはＨＳＰＣは、例えば、静脈内注入により、例えば、数分から数時間の期間にわたって中心静脈から対象に注入される。特定の態様において、改変されたＨＳＣまたはＨＳＰＣは、構成的に活性である、例えば構成的にキナーゼ活性を有する、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドを一過性に発現する。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７は、例えばＳＣＦが結合していない状態で、構成的な自己リン酸化活性を有する。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７を一過性に発現する修飾されたＨＳＣまたはＨＳＰＣは、例えばＪＳＰ１９１のような抗ｃ－Ｋｉｔ抗体による切断（ablation）に抵抗性である。従って、ＨＣＴを必要とする対象は、疾患のＨＳＰＣを除くために、ＨＣＴの前、ＨＣＴと共に、またはＨＣＴの後に、ＪＳＰ１９１のような抗ｃ－Ｋｉｔモノクローナル抗体を用いてコンディショニングを受けることができる。一方、移植された改変されたＨＳＣまたはＨＳＰＣは、抗体の存在下でも一過性の構成的ＣＤ１１７シグナル伝達を提供する改変型ＣＤ１１７を一過性に発現するため、移植後の対象では、如何なるモノクローナル抗体によっても切除されにくくなる。

ドナーがレシピエントと同種である場合、ドナーおよびレシピエントのＨＬＡ型が一致するかどうかを検査してもよいし、ハプロタイプ一致の細胞を使用してもよい。特定の態様において、ＨＬＡ－ハプロタイプ一致のドナーまたはＨＬＡ－同型ドナーから得られた細胞が用いられる。ＨＬＡ－ハプロタイプ一致のドナーは、ＣＤ３４またはＣＤ３４／ＣＤ９０選択によって操作できる。ＨＬＡの一致では、従来、マッチングに重要な遺伝子座はＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－ＢおよびＨＬＡ－ＤＲであった。ＨＬＡ－ＣおよびＨＬＡ－ＤＱもまた、ドナーの適正を判断する際に考慮されるようになった。完全に適合した同胞ドナー（sibling donor）は、一般的に理想的なドナーと考えられている。関係のないドナーの場合、ほとんどの移植では完全一致または１つの不一致が許容されると考えられているが、状況によってはそれ以上の不一致も許容される。好ましくは、血清学的および分子学的な一致である。ドナー細胞が臍帯血由来である場合、許容できるＨＬＡの不一致の程度ははるかに大きく、６つのＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－ＢおよびＨＬＡ－ＤＲＢ１抗原のうち３つまたは４つが一致すれば、移植には通常十分である。移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）が発症する可能性を低減または排除するために、様々な方法を用いて免疫不全ドナーＴ細胞を除去できる。

本明細書に記載のＨＣＴは、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドまたは改変型ＣＤ１１７ポリペプチドをコードする核酸を含む改変されたＨＳＣを用いる。本発明の方法は、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドまたは改変型ＣＤ１１７ポリペプチドをコードする核酸を含まないＨＳＣを対象に投与するＨＣＴと比較して、毒性の低減、罹患率の低減、または移植片対宿主病の低減をもたらすと考えられる。本発明の方法は、レシピエントへの移植後の幹細胞の生着も改善すると考えられる。

本明細書に記載の処置方法の特定の態様では、対象に条件付けレジメンを投与して、改変された細胞の生着を促進または増加させる。特定の態様では、条件付けレジメンは、対象の内因性の正常ＨＳＣまたは疾患ＨＳＣを枯渇させる。条件付けレジメンは、移植前に骨髄中の血液幹細胞の数を減らして、ドナーの血液幹細胞が移植されるためのスペースを確保し、かつ患者を治癒させるために行われ得る。一般的には、条件付けレジメンは、医薬組成物の投与前および／または投与と同時に投与される。特定の態様において、条件付けレジメンは抗ＣＤ１１７抗体の投与を含み、該抗ＣＤ１１７抗体は野生型ＣＤ１１７を発現する内因性ＨＳＣを枯渇させるが、抗ＣＤ１１７抗体は投与された改変されたＨＳＣを枯渇させない。特定の態様では、抗ＣＤ１１７抗体は、以下からなる群から選択される：ＳＲ１、２Ｂ８、ＡＣＫ２、ＹＢ５－Ｂ８、５７Ａ５、１０４Ｄ２、ＪＳＰ１９１、ＣＤＸ－０１５９、ＭＧＴＡ－１１７（ＡＢ８５）、およびＦＳＩ－１７４からなる群から選択される。特定の態様では、抗体はＪＳＰ１９１である。特定の態様では、条件付けレジメンは抗ＣＤ１１７抗体のみを含む。特定の態様では、対象は、例えば単回投与として、改変されたＨＳＣを投与する前に抗ＣＤ１１７抗体を投与される。

抗ｃ－Ｋｉｔ抗体の有効量とは、内因性の造血幹細胞を枯渇させる量である。有効量は、個体および特定の抗体によって異なるが、一般に、約１００μｇ／ｋｇ体重まで、約２５０μｇ／ｋｇまで、約５００μｇ／ｋｇまで、約７５０μｇ／ｋｇまで、約１ｍｇ／ｋｇまで、約１．２ｍｇ／ｋｇまで、約１．５ｍｇ／ｋｇまで、約３ｍｇ／ｋｇまで、約５ｍｇ／ｋｇまで、約１０ｍｇ／ｋｇまでである。いくつかの態様では、対象に抗ｃ－ｋｉｔ抗体、例えばＪＳＰ１９１を約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約２ｍｇ／ｋｇ投与し、要すれば対象に抗ｃ－ｋｉｔ抗体、例えばＪＳＰ１９１を約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇ投与する。いくつかの態様では、抗ｃ－Ｋｉｔ抗体は、対象の体重１ｋｇあたり約０．０１ｍｇ～約２ｍｇ、または対象の体重１ｋｇあたり約０．１ｍｇ～約１ｍｇの用量で対象に投与され得る。いくつかの態様では、抗ｃ－Ｋｉｔシグナル伝達抗体は、約０．６ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。

特定の態様において、条件付けレジメンは、抗ＣＤ１１７抗体と１以上のさらなる抗体との併用投与を含む。特定の態様において、１以上のさらなる抗体は、抗ＣＤ４７抗体、抗ＣＤ４０Ｌ抗体、抗ＣＤ１２２抗体、抗ＣＤ４抗体、および／または抗ＣＤ８抗体のうちの１以上を含む。

特定の態様において、条件付けレジメンは、抗ＣＤ１１７抗体の単独投与、または骨髄破壊的（ＭＡ）条件、強度低下条件（ＲＩＣ）、または他の非ＭＡ（ＮＭＡ）条件付けレジメンとの併用投与を含む。様々な条件付けレジメンの例を図２に示す。特定の態様では、条件付けレジメンは遺伝毒性条件付けレジメンであり、および/または化学療法（要すればヌクレオシド類縁体および／またはアルキル化剤）、モノクローナル抗体療法、および放射線（要すれば全身への放射線）のうちの１以上を含み得る。特定の態様では、対象は、本明細書に記載の改変型ＣＤ１１７および／または抗ＣＤ１１７抗体を含む改変された細胞、例えばＨＳＣを投与されるので、条件付けレジメンは、対象が改変型ＣＤ１１７ポリペプチドを含まない細胞、例えばＨＳＣを投与される場合よりも穏やかである。特定の態様において、条件付けレジメンが、化学療法（要すればヌクレオシド類縁体および／またはアルキル化剤）、他のモノクローナル抗体療法、および／または放射線と併用した抗ＣＤ１１７抗体の使用を含む場合、化学療法、他のモノクローナル抗体療法、および／または放射線の量は、ＪＳＰ１９１のような抗ＣＤ１１７抗体と併用しない場合に使用する量と比較して減少する。例えば、他の条件付き療法の量および／または期間のいずれか一方または両方を、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または約１００％減少させることができる。

しかしながら、他の態様において、対象は、医薬組成物の投与前または投与と同時に、骨髄破壊または遺伝毒性条件付けレジメンを投与されない。例えば、レシピエントは免疫不全であってもよく、移植は骨髄破壊的条件付けレジメン（conditioning）を行わない場合、すなわち放射線および／または化学療法薬を用いない場合に実施される。レシピエントは、細胞およびＨＬＡの一致に応じて選択された薬剤セットを併用投与することで条件付けされ得る。

対象に投与される幹細胞、例えば、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドおよび／または改変型ＣＤ１１７ポリペプチドをコードする核酸を含む改変されたＨＳＣの用量は、注入される細胞組成物の純度、および細胞の供給源によって変わり得る。特定の態様において、投与量は、自家移植および同種移植について、少なくともまたは約１～２ｘ１０^６ ＣＤ３４＋細胞／ｋｇ体重である。より高い用量としては、例えば、少なくともまたは約３ｘ１０^６、少なくともまたは約４ｘ１０^６、少なくともまたは約５ｘ１０^６、少なくともまたは約６ｘ１０^６を挙げることができる、少なくとも約７ｘ１０^６、少なくとも約８ｘ１０^６、少なくとも約９ｘ１０^６、少なくとも約１０^７以上のＣＤ３４＋細胞／ｋｇ体重を自家および同種移植に使用する。多くの場合、投与量は利用可能な細胞数によって制限され、本発明の方法は、必要なときまたは制限されたときに、より少ない細胞を送達することを包含する。通常、供給源にかかわらず、投与量は存在するＣＤ３４＋細胞の数によって計算される。未分画骨髄または動員末梢血の場合、ＣＤ３４＋細胞の割合が低くなることがある。

特定の態様において、改変されたＨＳＣ組成物で送達されるＣＤ３＋細胞の最大数は、レシピエント体重１ｋｇあたり約１０^７ ＣＤ３＋細胞以下、レシピエント体重１ｋｇあたり約１０^６ ＣＤ３＋細胞以下、レシピエント体重１ｋｇあたり約１０^５ ＣＤ３＋細胞以下、または約レシピエント体重１ｋｇあたり約１０^４ ＣＤ３＋細胞以下である。あるいは、細胞集団をＣＤ３４およびＣＤ９０の発現について選択してもよく、この細胞集団は高度に精製されていてもよく、例えば、少なくとも約８５％のＣＤ３４＋ ＣＤ９０＋細胞、少なくとも約９０％のＣＤ３４＋ ＣＤ９０＋細胞、少なくとも約９５％のＣＤ３４＋ ＣＤ９０＋細胞であってよく、および最大約９９％のＣＤ３４＋ ＣＤ９０＋細胞以上であってもよい。

特定の態様において、本発明は、本明細書に記載の改変型ＣＤ１１７ポリペプチド、例えば、構成的ｃ－Ｋｉｔシグナル伝達またはキナーゼ活性を有する改変型ＣＤ１１７を含む改変された細胞、例えば、ＨＳＣおよび／またはＨＳＰＣを対象に投与することを含む、それを必要とする哺乳動物対象を処置する方法を含む。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７は、例えばＳＣＦが結合していない状態で、構成的な自己リン酸化活性を有する。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドは、細胞中で一過性に、例えば、約１日間、約２日間、約３日間、約４日間、約５日間、または約１週間発現される。特定の態様において、対象はまた、移植後の改変された細胞の生着を促進または増加させるための条件付けレジメンを投与され、ここで、条件付けレジメンは、医薬組成物の投与前または投与と同時に投与される。特定の態様において、条件付けレジメンは、抗ｃ－Ｋｉｔ抗体、例えば、本明細書に記載のもの（例えば、ＪＳＰ１９１など）を対象に投与することを含む。いくつかの態様において、抗ｃ－Ｋｉｔ抗体は、対象への医薬組成物の投与前に対象に投与される。特定の態様では、抗ｃ－Ｋｉｔ抗体の投与後、改変された細胞（すなわち、ＨＣＴ）の投与前に“ウォッシュアウト”期間がある。この期間に、抗ｃ－Ｋｉｔ抗体（またはコンディショニングに用いられた他の薬剤）がクリアランスされる。アブレーション剤（ablative agent）のクリアランスに必要な期間は、経験的に決定することもできるし、薬剤の薬物動態に関する以前の経験に基づいて決定することもできる。歴史的には、クリアランスの時間は通常、アブレーション剤、例えば抗ｃ－Ｋｉｔ抗体のレベルがピークレベルから少なくとも約１０の１、通常は少なくとも約１００分の１、１０００分の１、１０，０００分の１、またはそれ以上減少するのに十分な時間であった。しかしながら、本明細書に記載の方法に従って対象に投与される改変された細胞は、コンディショニングに用いられるアブレーション（ablative）抗ｃ－Ｋｉｔ抗体によって結合されない改変型ＣＤ１１７ポリペプチドを含んでいるため、本発明の方法は洗浄ウォッシュアウト期間を必要としないか、または改変されていない細胞が移植されるときと比較してウォッシュアウト期間を短縮するだけで済む。特定の態様において、ウォッシュアウト期間は５日未満、４日未満、３日未満、２日未満、または１日未満である。特定の態様において、本方法は、抗ｃ－Ｋｉｔ抗体および医薬組成物または改変された細胞、例えば改変されたＨＳＣおよび／またはＨＳＰＣを、重複する期間中またはほぼ同時に投与することを含む。特定の態様において、本方法は、医薬組成物または改変された細胞、例えば、改変されたＨＳＣおよび／またはＨＳＰＣの投与後に、要すれば少なくとも１日、少なくとも２日、少なくとも３日、少なくとも４日、少なくとも５日、または少なくとも１週間の期間、抗ｃ－Ｋｉｔ抗体を対象に投与することを含む。これにより、改変されたＨＳＣおよび／またはＨＳＰＣの投与後も、内因性のＨＳＣおよび／またはＨＳＰＣをアブレーションし続け、より大きな生着が可能になると考えられる。

一態様では、本方法は、
（ｉ）対象に抗ｃ－Ｋｉｔ抗体、例えばＪＳＰ－１９１を投与することにより、該対象の内因性造血幹細胞を選択的にアブレーションすること；
（ｉｉ）要すれば、抗ｃ－Ｋｉｔ抗体の投与後、一定期間待機すること；および
（ｉｉｉ）（ｉｉ）の後、改変された細胞、例えば改変されたＨＳＣおよび／または改変されたＨＳＰＣを含む医薬組成物を、多系統末梢血キメラを達成するのに有効な用量で対象に投与すること
を含む。
特定の態様において、工程（ｉｉ）の期間は５日未満、４日未満、３日未満、２日未満、または１日未満であるか、または０日である。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７は構成的ｃ－Ｋｉｔシグナル伝達活性またはキナーゼ活性を有する。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドは、細胞中で一過性に、例えば、約１日間、約２日間、約３日間、約４日間、約５日間、または約１週間発現される。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドは、野生型ヒトｃ－Ｋｉｔポリペプチドに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、Ｎ５０５またはＤ８１６と呼ばれる位置で、例えばＮ５０５ＩまたはＤ８１６Ｖのようなアミノ酸置換を含む。

特定の態様において、ＨＣＴを必要とする対象を処置する方法は、
（ｉ）対象に条件付けレジメンを投与する工程であって、前記条件付けレジメンは抗ＣＤ１１７モノクローナル抗体、例えばＪＳＰ１９１を含む、工程；および
（ｉｉ）対象に改変されたＨＳＣを投与する工程であって、前記改変されたＨＳＣが改変型ＣＤ１１７ポリペプチドを含み、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドが細胞表面に発現し、改変されたＨＳＣが、野生型ＣＤ１１７ポリペプチドのみを含む内因性造血幹細胞と同程度には条件付けレジメンによって枯渇しない、および／または改変されたＨＳＣが、内因性造血幹細胞と比較して増殖優位性を有する、工程
を含む。特定の態様では、改変型ＣＤ１１７は構成的ｃ－Ｋｉｔシグナル伝達活性またはキナーゼ活性を有する。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７は、例えばＳＣＦが結合していない状態で、構成的な自己リン酸化活性を有する。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドは、細胞中で一過性に、例えば、約１日間、約２日間、約３日間、約４日間、約５日間、または約１週間発現される。特定の態様では、条件付けレジメンはモノクローナル抗ｃ－Ｋｉｔ抗体、例えばＪＳＰ１９１を含む。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドは、野生型ヒトｃ－Ｋｉｔポリペプチドに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の同一性を有し、Ｎ５０５またはＤ８１６と呼ばれる位置におけるアミノ酸置換、例えばＮ５０５ＩまたはＤ８１６Ｖのようなアミノ酸置換を含む。“Ｎ５０５”または“Ｄ８１６”修飾の実際の位置は、ｃ－Ｋｉｔポリペプチドの特定のアイソタイプによって異なり得る。特定の態様において、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドは、配列番号３～６のいずれか１つに示される配列を有する。

いくつかの態様において、移植は、骨髄破壊療法条件付けレジメンを行わないで実施される。いくつかの態様では、レシピエントは免疫不全である。移植前の条件付けレジメンの投与は、アブレーションの望ましいレベルを達成するために必要に応じて繰り返される。ドナー幹細胞による移植後、レシピエントはドナー細胞に対するキメラまたは混合キメラであり得る。

本明細書に記載の方法は、幹細胞移植に適応可能な様々な適応症の処置に用いられ得る。特定の態様において、本明細書に記載のＨＣＴ法は、癌、心臓疾患、神経疾患、自己免疫疾患、免疫不全、代謝疾患、ヘモグロビン異常症、および遺伝疾患からなる群より選択される疾患または障害を処置するために使用される。特定の態様では、以下の疾患のいずれかを処置するために用いられる：多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、急性骨髄性白血病、神経芽細胞腫、胚細胞腫瘍、および自己免疫疾患、例えば、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、全身性硬化症、またはアミロイドーシス、例えば、自家ＨＣＴによるもの。特定の態様において、それらは以下の障害のいずれかを処置するために用いられる：急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄性白血病；慢性リンパ性白血病、骨髄増殖性障害、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、再生不良性貧血、純粋赤血球形成不全、発作性夜間ヘモグロビン尿症、ファンコニー貧血、サラセミア、重症サラセミア、鎌状赤血球貧血、複合免疫不全症、重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）、ウィスコット・アルドリッチ症候群、血球貪食性リンパ組織球症（ＨＬＨ）、先天性代謝異常症（例えば、ムコ多糖症、ゴーシェ病、メタクロマチック白質ジストロフィー、およびアドレノロイコジストロフィー）、表皮水疱症、重症先天性好中球減少症、シュワックマン・ダイヤモンド症候群、ダイヤモンド・ブラックファン貧血、白血球接着欠損症などを、例えば同種ＨＣＴによって処置できる。

特定の態様において、本発明の方法は、固形組織がん、または白血病、リンパ腫、骨髄異形成症候群などの血液がんを処置するために用いられる。特定の態様では、白血病は急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。

特定の態様では、リンパ腫は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である。

特定の態様では、本発明の方法は免疫不全の処置に用いられる。特定の態様では、免疫不全症は重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）である。特定の態様において、免疫不全症は、免疫グロブリンＧサブクラス欠損症、選択的免疫グロブリンＡ欠損症、胸腺低形成（ディ・ジョージ（DiGeorge）症候群、高免疫グロブリンＭ（ＨＩＧＭ）症候群、選択的ＩｇＭ欠損症、ウィスコット－アルドリッチ症候群、またはＸ連鎖性アガマグロブリン血症（ＸＬＡ）である。

特定の態様では、本発明の方法は遺伝性疾患の処置に用いられる。特定の態様では、遺伝子疾患は鎌状赤血球症またはファンコニー貧血である。処置の対象となる鎌状赤血球症には、これらに限定されない：ＨｂＳ病、ドレパン球性貧血、髄鞘球症、慢性溶血性貧血など。

本発明のＨＣＴ法のいずれかの特定の態様において、本方法はさらに、ＨＣＴ法によって処置される疾患または障害の治療のための治療剤を対象に投与することを含む。

実施例１
ＣＤ１１７変異体を発現する造血細胞の増殖は抗ＣＤ１１７抗体では阻害されない
変異型ＣＤ１１７の発現が、野生型ＣＤ１１７に対して変異型ＣＤ１１７を発現する造血細胞に増殖優位性を与えることを証明するために、野生型ヒトＣＤ１１７（ｃ－Ｋｉｔ）および変異ヒトＣＤ１１７－Ｄ８１６Ｖを発現するＢａ／Ｆ３細胞を、ＩＬ－３の不存在下、幹細胞因子（ＳＣＦ）の濃度を変化させ、抗ＣＤ１１７抗体ＪＳＰ１９１の存在下または不存在下で培養した。

対照の親Ｂa／Ｆ３細胞はＩＬ－３不存在下では増殖しなかった。さらに、親のＢａ／Ｆ３細胞はＣＤ１１７を発現せず、ＳＣＦシグナルには反応しなかった。従って、対照の親Ｂａ／Ｆ３細胞は、濃度の高いＳＣＦの存在下では増殖せず、ＪＳＰ１９１の添加による生存率または増殖への影響は見られなかった。

野生型ヒトＣＤ１１７（ｃ－Ｋｉｔ）を発現するＢａ／Ｆ３細胞株は、ＳＣＦに対して用量反応性の増殖を示したが、これは抗ＣＤ１１７抗体ＪＳＰ１９１の存在下で阻害された。

ＣＤ１１７－Ｄ８１６Ｖ変異体を発現するＢａ／Ｆ３細胞株は、ＳＣＦ不存在下でも増殖が可能であり、抗ＣＤ１１７抗体ＪＳＰ１９１の存在によっても増殖は阻害されなかった。

これらの研究は、構成的に活性な改変型ＣＤ１１７を含む細胞は、ＣＤ１１７へのＳＣＦ結合を阻害する抗ＣＤ１１７抗体の存在下でも増殖可能であり、従って、改変型ＣＤ１１７は、特に抗ＣＤ１１７抗体の存在下において、野生型細胞と比較して、改変された細胞に増殖優位性を与えることを示している。

上記の様々な態様を組み合わせて、さらなる態様を提供できる。

態様の面は、必要に応じて、様々な特許、特許出願、および刊行物の概念を採用するように変更して、さらなる態様を提供できる。

これらの変更およびその他の変更は、上記の詳細な説明に照らして態様に加えることができる。一般に、以下の特許請求の範囲において、用いられる用語は、特許請求の範囲を本明細書および特許請求の範囲に開示された特定の態様に限定するように解釈されるべきではなく、そのような特許請求の範囲が権利を有する等価物の全範囲とともに、すべての可能な態様を含むように解釈されるべきである。したがって、特許請求の範囲は本開示によって限定されるものではない。

米国特許、米国特許出願公開公報、米国特許出願、外国特許、外国特許出願、および本明細書中で言及され、および／または出願データシートに記載されている非特許文献はすべて、引用によりその内容全体を本明細書に包含させる。

Claims (80)

1. 薬学的に許容される賦形剤、担体または希釈剤、ならびに改変された造血幹細胞（ＨＳＣ）または造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）を含む医薬組成物であって、前記改変されたＨＳＣまたはＨＳＰＣが、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドを含み、要すれば、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドが、構成的ｃ－Ｋｉｔシグナル伝達および／またはキナーゼ活性を有し、および要すれば、野生型ＣＤ１１７のみを発現するＨＳＰＣの増殖および／または生存を阻害できる抗ｃ－Ｋｉｔモノクローナル抗体と接触させたときに、該改変された細胞が増殖および／または生存できる、医薬組成物。
2. 改変型ＣＤ１１７のｃ－Ｋｉｔシグナル伝達および／またはキナーゼ活性が、抗ｃ－Ｋｉｔモノクローナル抗体によって実質的に阻害されない、請求項１に記載の医薬組成物。
3. 抗ｃ－Ｋｉｔモノクローナル抗体が、ＳＣＦとＣＤ１１７との結合を阻害する、請求項２に記載の医薬組成物。
4. 抗ｃ－Ｋｉｔモノクローナル抗体が、ＪＳＰ１９１、ＡＢ８５、ＣＤＸ－０１５９またはＦＳＩ－１７４のいずれか１つに存在する６つのＣＤＲのうちの１つ以上を含む、請求項２に記載の医薬組成物。
5. 抗ｃ－Ｋｉｔモノクローナル抗体が、ＪＳＰ１９１、ＡＢ８５、ＣＤＸ－０１５９またはＦＳＩ－１７４のいずれか１つである、請求項２に記載の医薬組成物。
6. 抗ｃ－Ｋｉｔ抗体がＪＳＰ１９１である、請求項５に記載の医薬組成物。
7. 抗ｃ－Ｋｉｔ抗体がＦＳＩ－１７４である、請求項５に記載の医薬組成物。
8. 改変型ＣＤ１１７が、野生型ＣＤ１１７ポリペプチドと比較して１以上のアミノ酸修飾を含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
9. １以上のアミノ酸修飾が、１以上のアミノ酸置換、挿入または欠失を含む、請求項８に記載の医薬組成物。
10. アミノ酸修飾の１以上が、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドの細胞外ドメインの表面露出アミノ酸残基内、膜スパニングドメイン内、または細胞内ドメイン内に存在する、請求項８に記載の医薬組成物。
11. 改変型ＣＤ１１７ポリペプチドが、野生型ヒトＣＤ１１７に存在する以下のアミノ酸:Ｎ５０５またはＤ８１６の１以上の置換または欠失を含む、請求項８に記載の医薬組成物。
12. 改変型ＣＤ１１７ポリペプチドが、野生型ヒトＣＤ１１７と比較して、Ｄ８１６Ｖ置換および／またはＮ５０５Ｉ置換を含む、請求項１１に記載の医薬組成物。
13. 改変型ＣＤ１１７ポリペプチドが、野生型ＣＤ１１７ポリペプチドに対して、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列相同性を有する、請求項１から１２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
14. 野生型ＣＤ１１７ポリペプチドが野生型ヒトＣＤ１１７ポリペプチドであり、要すれば以下のアミノ酸配列のうちの１つを有する、請求項８から１３のいずれか一項に記載の医薬組成物：
    ＭＲＧＡＲＧＡＷＤＦＬＣＶＬＬＬＬＬＲＶＱＴＧＳＳＱＰＳＶＳＰＧＥＰＳＰＰＳＩＨＰＧＫＳＤＬＩＶＲＶＧＤＥＩＲＬＬＣＴＤＰＧＦＶＫＷＴＦＥＩＬＤＥＴＮＥＮＫＱＮＥＷＩＴＥＫＡＥＡＴＮＴＧＫＹＴＣＴＮＫＨＧＬＳＮＳＩＹＶＦＶＲＤＰＡＫＬＦＬＶＤＲＳＬＹＧＫＥＤＮＤＴＬＶＲＣＰＬＴＤＰＥＶＴＮＹＳＬＫＧＣＱＧＫＰＬＰＫＤＬＲＦＩＰＤＰＫＡＧＩＭＩＫＳＶＫＲＡＹＨＲＬＣＬＨＣＳＶＤＱＥＧＫＳＶＬＳＥＫＦＩＬＫＶＲＰＡＦＫＡＶＰＶＶＳＶＳＫＡＳＹＬＬＲＥＧＥＥＦＴＶＴＣＴＩＫＤＶＳＳＳＶＹＳＴＷＫＲＥＮＳＱＴＫＬＱＥＫＹＮＳＷＨＨＧＤＦＮＹＥＲＱＡＴＬＴＩＳＳＡＲＶＮＤＳＧＶＦＭＣＹＡＮＮＴＦＧＳＡＮＶＴＴＴＬＥＶＶＤＫＧＦＩＮＩＦＰＭＩＮＴＴＶＦＶＮＤＧＥＮＶＤＬＩＶＥＹＥＡＦＰＫＰＥＨＱＱＷＩＹＭＮＲＴＦＴＤＫＷＥＤＹＰＫＳＥＮＥＳＮＩＲＹＶＳＥＬＨＬＴＲＬＫＧＴＥＧＧＴＹＴＦＬＶＳＮＳＤＶＮＡＡＩＡＦＮＶＹＶＮＴＫＰＥＩＬＴＹＤＲＬＶＮＧＭＬＱＣＶＡＡＧＦＰＥＰＴＩＤＷＹＦＣＰＧＴＥＱＲＣＳＡＳＶＬＰＶＤＶＱＴＬＮＳＳＧＰＰＦＧＫＬＶＶＱＳＳＩＤＳＳＡＦＫＨＮＧＴＶＥＣＫＡＹＮＤＶＧＫＴＳＡＹＦＮＦＡＦＫＧＮＮＫＥＱＩＨＰＨＴＬＦＴＰＬＬＩＧＦＶＩＶＡＧＭＭＣＩＩＶＭＩＬＴＹＫＹＬＱＫＰＭＹＥＶＱＷＫＶＶＥＥＩＮＧＮＮＹＶＹＩＤＰＴＱＬＰＹＤＨＫＷＥＦＰＲＮＲＬＳＦＧＫＴＬＧＡＧＡＦＧＫＶＶＥＡＴＡＹＧＬＩＫＳＤＡＡＭＴＶＡＶＫＭＬＫＰＳＡＨＬＴＥＲＥＡＬＭＳＥＬＫＶＬＳＹＬＧＮＨＭＮＩＶＮＬＬＧＡＣＴＩＧＧＰＴＬＶＩＴＥＹＣＣＹＧＤＬＬＮＦＬＲＲＫＲＤＳＦＩＣＳＫＱＥＤＨＡＥＡＡＬＹＫＮＬＬＨＳＫＥＳＳＣＳＤＳＴＮＥＹＭＤＭＫＰＧＶＳＹＶＶＰＴＫＡＤＫＲＲＳＶＲＩＧＳＹＩＥＲＤＶＴＰＡＩＭＥＤＤＥＬＡＬＤＬＥＤＬＬＳＦＳＹＱＶＡＫＧＭＡＦＬＡＳＫＮＣＩＨＲＤＬＡＡＲＮＩＬＬＴＨＧＲＩＴＫＩＣＤＦＧＬＡＲＤＩＫＮＤＳＮＹＶＶＫＧＮＡＲＬＰＶＫＷＭＡＰＥＳＩＦＮＣＶＹＴＦＥＳＤＶＷＳＹＧＩＦＬＷＥＬＦＳＬＧＳＳＰＹＰＧＭＰＶＤＳＫＦＹＫＭＩＫＥＧＦＲＭＬＳＰＥＨＡＰＡＥＭＹＤＩＭＫＴＣＷＤＡＤＰＬＫＲＰＴＦＫＱＩＶＱＬＩＥＫＱＩＳＥＳＴＮＨＩＹＳＮＬＡＮＣＳＰＮＲＱＫＰＶＶＤＨＳＶＲＩＮＳＶＧＳＴＡＳＳＳＱＰＬＬＶＨＤＤＶ（配列番号１）；または、
    ＭＲＧＡＲＧＡＷＤＦＬＣＶＬＬＬＬＬＲＶＱＴＧＳＳＱＰＳＶＳＰＧＥＰＳＰＰＳＩＨＰＧＫＳＤＬＩＶＲＶＧＤＥＩＲＬＬＣＴＤＰＧＦＶＫＷＴＦＥＩＬＤＥＴＮＥＮＫＱＮＥＷＩＴＥＫＡＥＡＴＮＴＧＫＹＴＣＴＮＫＨＧＬＳＮＳＩＹＶＦＶＲＤＰＡＫＬＦＬＶＤＲＳＬＹＧＫＥＤＮＤＴＬＶＲＣＰＬＴＤＰＥＶＴＮＹＳＬＫＧＣＱＧＫＰＬＰＫＤＬＲＦＩＰＤＰＫＡＧＩＭＩＫＳＶＫＲＡＹＨＲＬＣＬＨＣＳＶＤＱＥＧＫＳＶＬＳＥＫＦＩＬＫＶＲＰＡＦＫＡＶＰＶＶＳＶＳＫＡＳＹＬＬＲＥＧＥＥＦＴＶＴＣＴＩＫＤＶＳＳＳＶＹＳＴＷＫＲＥＮＳＱＴＫＬＱＥＫＹＮＳＷＨＨＧＤＦＮＹＥＲＱＡＴＬＴＩＳＳＡＲＶＮＤＳＧＶＦＭＣＹＡＮＮＴＦＧＳＡＮＶＴＴＴＬＥＶＶＤＫＧＦＩＮＩＦＰＭＩＮＴＴＶＦＶＮＤＧＥＮＶＤＬＩＶＥＹＥＡＦＰＫＰＥＨＱＱＷＩＹＭＮＲＴＦＴＤＫＷＥＤＹＰＫＳＥＮＥＳＮＩＲＹＶＳＥＬＨＬＴＲＬＫＧＴＥＧＧＴＹＴＦＬＶＳＮＳＤＶＮＡＡＩＡＦＮＶＹＶＮＴＫＰＥＩＬＴＹＤＲＬＶＮＧＭＬＱＣＶＡＡＧＦＰＥＰＴＩＤＷＹＦＣＰＧＴＥＱＲＣＳＡＳＶＬＰＶＤＶＱＴＬＮＳＳＧＰＰＦＧＫＬＶＶＱＳＳＩＤＳＳＡＦＫＨＮＧＴＶＥＣＫＡＹＮＤＶＧＫＴＳＡＹＦＮＦＡＦＫＥＱＩＨＰＨＴＬＦＴＰＬＬＩＧＦＶＩＶＡＧＭＭＣＩＩＶＭＩＬＴＹＫＹＬＱＫＰＭＹＥＶＱＷＫＶＶＥＥＩＮＧＮＮＹＶＹＩＤＰＴＱＬＰＹＤＨＫＷＥＦＰＲＮＲＬＳＦＧＫＴＬＧＡＧＡＦＧＫＶＶＥＡＴＡＹＧＬＩＫＳＤＡＡＭＴＶＡＶＫＭＬＫＰＳＡＨＬＴＥＲＥＡＬＭＳＥＬＫＶＬＳＹＬＧＮＨＭＮＩＶＮＬＬＧＡＣＴＩＧＧＰＴＬＶＩＴＥＹＣＣＹＧＤＬＬＮＦＬＲＲＫＲＤＳＦＩＣＳＫＱＥＤＨＡＥＡＡＬＹＫＮＬＬＨＳＫＥＳＳＣＳＤＳＴＮＥＹＭＤＭＫＰＧＶＳＹＶＶＰＴＫＡＤＫＲＲＳＶＲＩＧＳＹＩＥＲＤＶＴＰＡＩＭＥＤＤＥＬＡＬＤＬＥＤＬＬＳＦＳＹＱＶＡＫＧＭＡＦＬＡＳＫＮＣＩＨＲＤＬＡＡＲＮＩＬＬＴＨＧＲＩＴＫＩＣＤＦＧＬＡＲＤＩＫＮＤＳＮＹＶＶＫＧＮＡＲＬＰＶＫＷＭＡＰＥＳＩＦＮＣＶＹＴＦＥＳＤＶＷＳＹＧＩＦＬＷＥＬＦＳＬＧＳＳＰＹＰＧＭＰＶＤＳＫＦＹＫＭＩＫＥＧＦＲＭＬＳＰＥＨＡＰＡＥＭＹＤＩＭＫＴＣＷＤＡＤＰＬＫＲＰＴＦＫＱＩＶＱＬＩＥＫＱＩＳＥＳＴＮＨＩＹＳＮＬＡＮＣＳＰＮＲＱＫＰＶＶＤＨＳＶＲＩＮＳＶＧＳＴＡＳＳＳＱＰＬＬＶＨＤＤＶ（配列番号２）。
15. 改変された細胞が、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドおよび野生型ＣＤ１１７ポリペプチドの両方を発現する、請求項１から１４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
16. 改変された細胞が改変型ＣＤ１１７ポリペプチドを一過性に発現する、請求項１から１５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
17. ＨＳＣまたはＨＳＰＣがＣＤ３４＋であり、要すればＨＳＰＣがＣＤ３４＋／ＣＤ９０＋、ＣＤ３４＋／ＣＤ３８－、またはＣＤ３４＋／ＣＤ３８－／ＣＤ９０＋、またはＣＤ３４＋ＣＤ１３３＋である、請求項１から１６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
18. 細胞がヒト細胞である、請求項１から１７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
19. 細胞が哺乳動物ドナーから得られたものである、請求項１から１８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
20. 哺乳動物ドナーが造血細胞移植（ＨＣＴ）を必要とする対象である、請求項１９に記載の医薬組成物。
21. 哺乳動物ドナーが健康なドナーである、請求項１９に記載の医薬組成物。
22. 哺乳動物ドナーから得られた細胞がエクスビボで改変されたものである、請求項１９から２１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
23. 抗ＣＤ１１７抗体をさらに含む、請求項１から２２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
24. １以上の抗ＣＤ４７抗体、抗ＣＤ４０Ｌ抗体、抗ＣＤ１２２抗体、抗ＣＤ４抗体、および／または抗ＣＤ８抗体をさらに含む、請求項１から２３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
25. 請求項１から２４のいずれか一項に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、それを必要とする哺乳動物対象を処置する方法。
26. 対象が、改変された細胞の生着を促進または増加させるための条件付けレジメンを投与され、条件付けレジメンが、医薬組成物の投与前または投与と同時に投与される、請求項２５に記載の方法。
27. 条件付けレジメンが、医薬組成物の投与後に投与される、請求項２６に記載の方法。
28. 条件付けレジメンが、対象が改変型ＣＤ１１７ポリペプチドを含まない造血幹細胞を投与される場合よりもマイルドである、請求項２６または２７に記載の方法。
29. 対象が、医薬組成物の投与前または投与と同時に、改変された細胞の生着を促進または増加させるための条件付けレジメンを投与されない、請求項２５に記載の方法。
30. 対象に、改変型ＣＤ１１７ポリペプチドを含まない造血幹細胞を条件付けレジメンと組み合わせて投与する方法と比較して、毒性、罹患率の減少、または移植片対宿主病の減少をもたらす、請求項２５から２９のいずれか一項に記載の方法。
31. 条件付けレジメンが、抗ＣＤ１１７モノクローナル抗体の投与、要すればＪＳＰ１９１の投与を含むか、またはその投与からなる、請求項２５から３０のいずれか一項に記載の方法。
32. 対象が、癌、心臓障害、神経障害、自己免疫疾患、免疫不全、代謝障害、および遺伝的障害からなる群より選択される疾患または障害のために処置される、請求項２５から３１のいずれか一項に記載の方法。
33. 癌が固形組織癌または血液癌である、請求項３２に記載の方法。
34. 血液癌が白血病、リンパ腫、または骨髄異形成症候群である、請求項３３に記載の方法。
35. 白血病が急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である、請求項３４に記載の方法。
36. 免疫不全症が重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）である、請求項３２に記載の方法。
37. 遺伝子疾患が鎌状赤血球症またはファンコニー貧血である、請求項３２に記載の方法。
38. 疾患または障害の処置のための治療薬を対象に投与することをさらに含む、請求項２５から３７のいずれか一項に記載の方法。
39. 野生型ＣＤ１１７ポリペプチドと比較して１以上のアミノ酸修飾を含む改変型ＣＤ１１７ポリペプチドであって、ここで、抗ｃ－Ｋｉｔモノクローナル抗体が、野生型ＣＤ１１７ポリペプチドと比較して、細胞内で発現された改変型ＣＤ１１７ポリペプチドによるｃ－Ｋｉｔシグナル伝達、要すればＳＣＦ結合への応答を実質的に阻害または低減しない、改変型ＣＤ１１７ポリペプチド。
40. 改変型ＣＤ１１７ポリペプチドが、野生型ＣＤ１１７ポリペプチドと比較して、要すればＳＣＦ結合に応答して、キナーゼ活性を実質的に保持する、請求項３９に記載の改変型ＣＤ１１７ポリペプチド。
41. 改変型ＣＤ１１７ポリペプチドが構成的ｃ－Ｋｉｔシグナル伝達活性および／またはキナーゼ活性を有する、請求項３９または４０に記載の改変型ＣＤ１１７ポリペプチド。
42. 改変型ＣＤ１１７ポリペプチドが、野生型ＣＤ１１７ポリペプチドと比較して、要すれ、ＳＣＦ結合に応答して、ｃ－Ｋｉｔシグナル伝達および／またはキナーゼ活性を実質的に増加させる、請求項３９から４１のいずれか一項に記載の改変型ＣＤ１１７ポリペプチド。
43. 抗ｃ－Ｋｉｔ抗体が、ＪＳＰ１９１、ＡＢ８５、ＣＤＸ－０１５９またはＦＳＩ－１７４のいずれか１つに存在する６つのＣＤＲのうちの１以上を含む、請求項３９から４２のいずれか一項に記載の改変型ＣＤ１１７ポリペプチド。
44. 抗ｃ－Ｋｉｔ抗体が、ＪＳＰ１９１、ＡＢ８５、ＣＤＸ－０１５９、またはＦＳＩ－１７４のいずれか１つである、請求項４３に記載の改変型ＣＤ１１７ポリペプチド。
45. 抗ｃ－Ｋｉｔ抗体が、ＪＳＰ１９１および／またはＦＳＩ－１７４に存在する１以上の、要すれば６つのＣＤＲを含む、請求項４３に記載の改変型ＣＤ１１７ポリペプチド。
46. 抗ｃ－Ｋｉｔ抗体がＪＳＰ１９１またはＦＳＩ－１７４である、請求項４５に記載の改変型ＣＤ１１７ポリペプチド。
47. １以上のアミノ酸改変が、１以上のアミノ酸置換、挿入、または欠失を含む、請求項３９から４６のいずれか一項に記載の改変型ＣＤ１１７ポリペプチド。
48. アミノ酸修飾の１以上が、細胞外ドメインの表面露出アミノ酸残基内、膜スパニングドメイン内、または野生型ＣＤ１１７ポリペプチドの細胞内ドメイン内に存在する、請求項４７に記載の改変型ＣＤ１１７ポリペプチド。
49. １以上のアミノ酸修飾が１以上のアミノ酸置換または欠失を含む、請求項４７または４８に記載の改変型ＣＤ１１７ポリペプチド。
50. １以上のアミノ酸修飾が１以上のアミノ酸置換を含む、請求項４９に記載の改変型ＣＤ１１７ポリペプチド。
51. １以上のアミノ酸置換または欠失が、野生型ヒトＣＤ１１７に存在する以下のアミノ酸:Ｎ５０５またはＤ８１６の１以上の置換または欠失を含む、請求項４７から５０のいずれか一項に記載の改変型ＣＤ１１７ポリペプチド。
52. １以上のアミノ酸置換が、Ｄ８１６Ｖ置換および／またはＮ５０５Ｉ置換を含む、請求項５０または５１に記載の改変型ＣＤ１１７ポリペプチド。
53. 改変型ＣＤ１１７ポリペプチドが野生型ＣＤ１１７ポリペプチドに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列相同性を有する、請求項３９から５２のいずれか一項に記載の改変型ＣＤ１１７ポリペプチド。
54. 野生型ＣＤ１１７ポリペプチドが野生型ヒトＣＤ１１７ポリペプチドであり、要すれば、以下のアミノ酸配列のいずれかを有する、請求項３９から５３のいずれか一項に記載の改変型ＣＤ１１７ポリペプチド：
    ＭＲＧＡＲＧＡＷＤＦＬＣＶＬＬＬＬＬＲＶＱＴＧＳＳＱＰＳＶＳＰＧＥＰＳＰＰＳＩＨＰＧＫＳＤＬＩＶＲＶＧＤＥＩＲＬＬＣＴＤＰＧＦＶＫＷＴＦＥＩＬＤＥＴＮＥＮＫＱＮＥＷＩＴＥＫＡＥＡＴＮＴＧＫＹＴＣＴＮＫＨＧＬＳＮＳＩＹＶＦＶＲＤＰＡＫＬＦＬＶＤＲＳＬＹＧＫＥＤＮＤＴＬＶＲＣＰＬＴＤＰＥＶＴＮＹＳＬＫＧＣＱＧＫＰＬＰＫＤＬＲＦＩＰＤＰＫＡＧＩＭＩＫＳＶＫＲＡＹＨＲＬＣＬＨＣＳＶＤＱＥＧＫＳＶＬＳＥＫＦＩＬＫＶＲＰＡＦＫＡＶＰＶＶＳＶＳＫＡＳＹＬＬＲＥＧＥＥＦＴＶＴＣＴＩＫＤＶＳＳＳＶＹＳＴＷＫＲＥＮＳＱＴＫＬＱＥＫＹＮＳＷＨＨＧＤＦＮＹＥＲＱＡＴＬＴＩＳＳＡＲＶＮＤＳＧＶＦＭＣＹＡＮＮＴＦＧＳＡＮＶＴＴＴＬＥＶＶＤＫＧＦＩＮＩＦＰＭＩＮＴＴＶＦＶＮＤＧＥＮＶＤＬＩＶＥＹＥＡＦＰＫＰＥＨＱＱＷＩＹＭＮＲＴＦＴＤＫＷＥＤＹＰＫＳＥＮＥＳＮＩＲＹＶＳＥＬＨＬＴＲＬＫＧＴＥＧＧＴＹＴＦＬＶＳＮＳＤＶＮＡＡＩＡＦＮＶＹＶＮＴＫＰＥＩＬＴＹＤＲＬＶＮＧＭＬＱＣＶＡＡＧＦＰＥＰＴＩＤＷＹＦＣＰＧＴＥＱＲＣＳＡＳＶＬＰＶＤＶＱＴＬＮＳＳＧＰＰＦＧＫＬＶＶＱＳＳＩＤＳＳＡＦＫＨＮＧＴＶＥＣＫＡＹＮＤＶＧＫＴＳＡＹＦＮＦＡＦＫＧＮＮＫＥＱＩＨＰＨＴＬＦＴＰＬＬＩＧＦＶＩＶＡＧＭＭＣＩＩＶＭＩＬＴＹＫＹＬＱＫＰＭＹＥＶＱＷＫＶＶＥＥＩＮＧＮＮＹＶＹＩＤＰＴＱＬＰＹＤＨＫＷＥＦＰＲＮＲＬＳＦＧＫＴＬＧＡＧＡＦＧＫＶＶＥＡＴＡＹＧＬＩＫＳＤＡＡＭＴＶＡＶＫＭＬＫＰＳＡＨＬＴＥＲＥＡＬＭＳＥＬＫＶＬＳＹＬＧＮＨＭＮＩＶＮＬＬＧＡＣＴＩＧＧＰＴＬＶＩＴＥＹＣＣＹＧＤＬＬＮＦＬＲＲＫＲＤＳＦＩＣＳＫＱＥＤＨＡＥＡＡＬＹＫＮＬＬＨＳＫＥＳＳＣＳＤＳＴＮＥＹＭＤＭＫＰＧＶＳＹＶＶＰＴＫＡＤＫＲＲＳＶＲＩＧＳＹＩＥＲＤＶＴＰＡＩＭＥＤＤＥＬＡＬＤＬＥＤＬＬＳＦＳＹＱＶＡＫＧＭＡＦＬＡＳＫＮＣＩＨＲＤＬＡＡＲＮＩＬＬＴＨＧＲＩＴＫＩＣＤＦＧＬＡＲＤＩＫＮＤＳＮＹＶＶＫＧＮＡＲＬＰＶＫＷＭＡＰＥＳＩＦＮＣＶＹＴＦＥＳＤＶＷＳＹＧＩＦＬＷＥＬＦＳＬＧＳＳＰＹＰＧＭＰＶＤＳＫＦＹＫＭＩＫＥＧＦＲＭＬＳＰＥＨＡＰＡＥＭＹＤＩＭＫＴＣＷＤＡＤＰＬＫＲＰＴＦＫＱＩＶＱＬＩＥＫＱＩＳＥＳＴＮＨＩＹＳＮＬＡＮＣＳＰＮＲＱＫＰＶＶＤＨＳＶＲＩＮＳＶＧＳＴＡＳＳＳＱＰＬＬＶＨＤＤＶ（配列番号１）；または、
    ＭＲＧＡＲＧＡＷＤＦＬＣＶＬＬＬＬＬＲＶＱＴＧＳＳＱＰＳＶＳＰＧＥＰＳＰＰＳＩＨＰＧＫＳＤＬＩＶＲＶＧＤＥＩＲＬＬＣＴＤＰＧＦＶＫＷＴＦＥＩＬＤＥＴＮＥＮＫＱＮＥＷＩＴＥＫＡＥＡＴＮＴＧＫＹＴＣＴＮＫＨＧＬＳＮＳＩＹＶＦＶＲＤＰＡＫＬＦＬＶＤＲＳＬＹＧＫＥＤＮＤＴＬＶＲＣＰＬＴＤＰＥＶＴＮＹＳＬＫＧＣＱＧＫＰＬＰＫＤＬＲＦＩＰＤＰＫＡＧＩＭＩＫＳＶＫＲＡＹＨＲＬＣＬＨＣＳＶＤＱＥＧＫＳＶＬＳＥＫＦＩＬＫＶＲＰＡＦＫＡＶＰＶＶＳＶＳＫＡＳＹＬＬＲＥＧＥＥＦＴＶＴＣＴＩＫＤＶＳＳＳＶＹＳＴＷＫＲＥＮＳＱＴＫＬＱＥＫＹＮＳＷＨＨＧＤＦＮＹＥＲＱＡＴＬＴＩＳＳＡＲＶＮＤＳＧＶＦＭＣＹＡＮＮＴＦＧＳＡＮＶＴＴＴＬＥＶＶＤＫＧＦＩＮＩＦＰＭＩＮＴＴＶＦＶＮＤＧＥＮＶＤＬＩＶＥＹＥＡＦＰＫＰＥＨＱＱＷＩＹＭＮＲＴＦＴＤＫＷＥＤＹＰＫＳＥＮＥＳＮＩＲＹＶＳＥＬＨＬＴＲＬＫＧＴＥＧＧＴＹＴＦＬＶＳＮＳＤＶＮＡＡＩＡＦＮＶＹＶＮＴＫＰＥＩＬＴＹＤＲＬＶＮＧＭＬＱＣＶＡＡＧＦＰＥＰＴＩＤＷＹＦＣＰＧＴＥＱＲＣＳＡＳＶＬＰＶＤＶＱＴＬＮＳＳＧＰＰＦＧＫＬＶＶＱＳＳＩＤＳＳＡＦＫＨＮＧＴＶＥＣＫＡＹＮＤＶＧＫＴＳＡＹＦＮＦＡＦＫＥＱＩＨＰＨＴＬＦＴＰＬＬＩＧＦＶＩＶＡＧＭＭＣＩＩＶＭＩＬＴＹＫＹＬＱＫＰＭＹＥＶＱＷＫＶＶＥＥＩＮＧＮＮＹＶＹＩＤＰＴＱＬＰＹＤＨＫＷＥＦＰＲＮＲＬＳＦＧＫＴＬＧＡＧＡＦＧＫＶＶＥＡＴＡＹＧＬＩＫＳＤＡＡＭＴＶＡＶＫＭＬＫＰＳＡＨＬＴＥＲＥＡＬＭＳＥＬＫＶＬＳＹＬＧＮＨＭＮＩＶＮＬＬＧＡＣＴＩＧＧＰＴＬＶＩＴＥＹＣＣＹＧＤＬＬＮＦＬＲＲＫＲＤＳＦＩＣＳＫＱＥＤＨＡＥＡＡＬＹＫＮＬＬＨＳＫＥＳＳＣＳＤＳＴＮＥＹＭＤＭＫＰＧＶＳＹＶＶＰＴＫＡＤＫＲＲＳＶＲＩＧＳＹＩＥＲＤＶＴＰＡＩＭＥＤＤＥＬＡＬＤＬＥＤＬＬＳＦＳＹＱＶＡＫＧＭＡＦＬＡＳＫＮＣＩＨＲＤＬＡＡＲＮＩＬＬＴＨＧＲＩＴＫＩＣＤＦＧＬＡＲＤＩＫＮＤＳＮＹＶＶＫＧＮＡＲＬＰＶＫＷＭＡＰＥＳＩＦＮＣＶＹＴＦＥＳＤＶＷＳＹＧＩＦＬＷＥＬＦＳＬＧＳＳＰＹＰＧＭＰＶＤＳＫＦＹＫＭＩＫＥＧＦＲＭＬＳＰＥＨＡＰＡＥＭＹＤＩＭＫＴＣＷＤＡＤＰＬＫＲＰＴＦＫＱＩＶＱＬＩＥＫＱＩＳＥＳＴＮＨＩＹＳＮＬＡＮＣＳＰＮＲＱＫＰＶＶＤＨＳＶＲＩＮＳＶＧＳＴＡＳＳＳＱＰＬＬＶＨＤＤＶ（配列番号２）。
55. 請求項３９から５４のいずれか一項に記載の改変型ＣＤ１１７ポリペプチドをコードする核酸。
56. 核酸がＲＮＡ、ＤＮＡまたはそれらの組合せを含む、請求項５５に記載の核酸。
57. 核酸が修飾ｍＲＮＡを含む、請求項５６に記載の核酸。
58. 核酸が１以上の脂質と結合しており、要すれば、核酸は脂質核酸粒子、脂質ナノ粒子、またはリポソーム内に存在する、請求項５５から５７のいずれか一項に記載の核酸。
59. 請求項５５から５８のいずれか一項に記載の核酸を含むベクター。
60. ベクターが発現ベクターである、請求項５９に記載のベクター。
61. ベクターがウイルスベクター、要すれば、ＡＡＶベクターまたはレンチウイルスベクターである、請求項５９または６０に記載のベクター。
62. ベクターが造血幹細胞を形質導入できる、請求項５９から６１のいずれか一項に記載のベクター。
63. 請求項３９から５４のいずれか一項に記載の改変型ＣＤ１１７ポリペプチドおよび／または請求項５５から５８のいずれか一項に記載の核酸を含む改変された細胞。
64. 細胞が改変型ＣＤ１１７ポリペプチドおよび野生型ＣＤ１１７ポリペプチドの両方を発現する、請求項６３に記載の改変された細胞。
65. 細胞が請求項５９から６２のいずれか一項に記載のベクターで形質導入された、請求項６３または６４に記載の改変された細胞。
66. 細胞が幹細胞または多能性細胞である、請求項６３から６５のいずれか一項に記載の改変された細胞。
67. 幹細胞が造血幹細胞（ＨＳＣ）または造血幹細胞および前駆細胞（ＨＳＰＣ）である、請求項６６に記載の改変された細胞。
68. 細胞がＣＤ３４＋であり、要すれば、細胞がＣＤ３４＋／ＣＤ９０＋、ＣＤ３４＋／ＣＤ３８－、またはＣＤ３４＋／ＣＤ３８－／ＣＤ９０＋、またはＣＤ３４＋ＣＤ１３３＋である、請求項６３から６７のいずれか一項に記載の改変された細胞。
69. 細胞がヒト細胞である、請求項６３から６８のいずれか一項に記載の改変された細胞。
70. 細胞が哺乳動物ドナーから得られたものである、請求項６３から６９のいずれか一項に記載の改変された細胞。
71. 哺乳動物ドナーが造血細胞移植（ＨＣＴ）を必要とする対象である、請求項７０に記載の改変された細胞。
72. 哺乳動物ドナーが健康なドナーである、請求項７０に記載の改変された細胞。
73. 哺乳動物ドナーから得られた細胞がエクスビボで改変されたものである、請求項７０から７２のいずれか一項に記載の改変された細胞。
74. 細胞が改変型ＣＤ１１７ポリペプチドを発現し、要すれば、改変された細胞が改変型ＣＤ１１７ポリペプチドを一過性に発現する、請求項６３から７３のいずれか一項に記載の改変された細胞。
75. 改変型ＣＤ１１７ポリペプチドが細胞表面または細胞膜に発現している、請求項７４に記載の改変された細胞。
76. 細胞が、抗ＣＤ１１７抗体の存在下で増殖および／または生存できる、請求項６３から７５のいずれか一項に記載の改変された細胞。
77. 抗ＣＤ１１７抗体が、野生型ＣＤ１１７のみを発現する細胞の増殖および／または生存を阻害できる、請求項７６に記載の改変された細胞。
78. 抗ＣＤ１１７抗体が、ＪＳＰ１９１、ＣＤＸ－０１５９、ＡＢ８５およびＦＳＩ－１７４からなる群より選択される、請求項７６または７７に記載の改変細胞。
79. 細胞を改変する方法であって、請求項５５から５８のいずれか一項に記載の核酸または請求項５９から６２のいずれか一項に記載のベクターを細胞に導入することを含み、要すれば、該細胞が一過性に改変され、要すれば、該方法が、哺乳動物対象への造血細胞移植（ＨＣＴ）のための改変された細胞を調製するためのものである、方法。
80. 核酸またはベクターが、トランスフェクション、導入、感染、エレクトロポレーション、またはナノポア技術によって細胞に導入される、請求項７９に記載の方法。