JP2024505739A - 組換えヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ｉｄｓ）によるムコ多糖症ｉｉの治療 - Google Patents
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Abstract
ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象の中枢神経系（ＣＮＳ）の脳脊髄液に、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生した組換えヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を送達する組成物及び方法を記載している。【選択図】なし
Description
関連出願の相互参照
本願は、２０２１年２月１０日出願の米国仮出願第６３／１４８，０９３号、２０２１年４月２７日出願の米国仮出願第６３／１８０，３６１号、２０２１年６月１５日出願の米国仮出願第６３／２１０，６１０号、２０２１年９月９日出願の米国仮出願第６３／２４２，２５０号、及び２０２１年１０月１８日出願の米国仮出願第６３／２５６，８０５号の利益を主張し、当該出願のそれぞれの全内容を、参照により、本明細書で援用する。
本願は、２０２１年２月１０日出願の米国仮出願第６３／１４８，０９３号、２０２１年４月２７日出願の米国仮出願第６３／１８０，３６１号、２０２１年６月１５日出願の米国仮出願第６３／２１０，６１０号、２０２１年９月９日出願の米国仮出願第６３／２４２，２５０号、及び２０２１年１０月１８日出願の米国仮出願第６３／２５６，８０５号の利益を主張し、当該出願のそれぞれの全内容を、参照により、本明細書で援用する。
電子的に提出した配列表の援用
本願は、本出願と一緒に提出した、２０２２年１月２７日に作成した、１７２，３９１バイトのサイズを有する「Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿１２６５６－１４６－２２８．ＴＸＴ」の名称を付したテキストファイルの配列表を、参照により、援用する。
本願は、本出願と一緒に提出した、２０２２年１月２７日に作成した、１７２，３９１バイトのサイズを有する「Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿１２６５６－１４６－２２８．ＴＸＴ」の名称を付したテキストファイルの配列表を、参照により、援用する。
１．前書き
ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象の中枢神経系（ＣＮＳ）の脳脊髄液（ＣＳＦ）に、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生した組換えヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を送達する組成物及び方法を記載する。
ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象の中枢神経系（ＣＮＳ）の脳脊髄液（ＣＳＦ）に、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生した組換えヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を送達する組成物及び方法を記載する。
２．発明の背景
ハンター症候群／ＭＰＳ ＩＩは、出生男児１０万人あたり０．５～１．３人に認められる稀少なＸ連鎖劣性遺伝性疾患である。進行性であり、かつ深刻なこの疾患は、ヘパラン硫酸、及びデルマタン硫酸のリソソーム異化作用に必要な酵素であり、また、リソソーム貯蔵酵素であるイズロン酸－２－スルファターゼの欠損を招くＩＤＳ遺伝子の遺伝子変異に起因している。Ｉ２Ｓが皆無である、またはほとんど無い場合には、このタンパク質は、通常のリソソームエキソヒドロラーゼ機能を果たすことができず、ＭＰＳ ＩＩ患者の組織や臓器にＧＡＧ（グリコサミノグリカン）と称する、これらの普遍的な多糖類が、ＭＰＳ ＩＩ患者の組織及び臓器に蓄積し、その結果、特徴的な貯蔵病変と、多様な疾患後遺症をもたらす。この患者集団での罹患率及び死亡率は高く、重度の表現型（神経認知の悪化を特徴とする）の患者での平均寿命は１１．７歳であり、軽度または弱度の表現型の患者での平均寿命は２１．７歳である、と報告されている。（Ｙｏｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９８２，Ａ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｔｕｄｙ ｏｆ Ｈｕｎｔｅｒ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ．２ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｍｉｌｄ ａｎｄ ｓｅｖｅｒｅ ｆｏｒｍｓ．Ｊ．Ｍｅｄｉｃａｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １９：４０８－４１１）。患者の大多数（３分の２）が、この疾患の重症型であると報告されている。（Ｗｒａｉｔｈ ＪＥ，ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｅｎｚｙｍｅ ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｈｏ ｈａｖｅ ｍｕｃｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｏｓｉｓ Ｉ ａｎｄ ａｒｅ ｙｏｕｎｇｅｒ ｔｈａｎ ５ ｙｅａｒｓ：Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ａ ｍｕｌｔｉｎａｔｉｏｎａｌ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ ａｌｐｈａ－Ｌ－Ｉｄｕｒｏｎｉｄａｓｅ （Ｌａｒｏｎｉｄａｓｅ）．Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ １２０（１）：Ｅ３７－Ｅ４６）。この疾患は、主に男児が罹患するが、罹患した女性は、遺伝子の双方の対立遺伝子での非ランダムＸ不活性化、及び／または変異に起因すると報告されている。（Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｍｕｃｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｏｓｉｓ ＩＩ （Ｈｕｎｔｅｒ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）。Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ １２１：ｅ３７７）。
ハンター症候群／ＭＰＳ ＩＩは、出生男児１０万人あたり０．５～１．３人に認められる稀少なＸ連鎖劣性遺伝性疾患である。進行性であり、かつ深刻なこの疾患は、ヘパラン硫酸、及びデルマタン硫酸のリソソーム異化作用に必要な酵素であり、また、リソソーム貯蔵酵素であるイズロン酸－２－スルファターゼの欠損を招くＩＤＳ遺伝子の遺伝子変異に起因している。Ｉ２Ｓが皆無である、またはほとんど無い場合には、このタンパク質は、通常のリソソームエキソヒドロラーゼ機能を果たすことができず、ＭＰＳ ＩＩ患者の組織や臓器にＧＡＧ（グリコサミノグリカン）と称する、これらの普遍的な多糖類が、ＭＰＳ ＩＩ患者の組織及び臓器に蓄積し、その結果、特徴的な貯蔵病変と、多様な疾患後遺症をもたらす。この患者集団での罹患率及び死亡率は高く、重度の表現型（神経認知の悪化を特徴とする）の患者での平均寿命は１１．７歳であり、軽度または弱度の表現型の患者での平均寿命は２１．７歳である、と報告されている。（Ｙｏｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９８２，Ａ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｔｕｄｙ ｏｆ Ｈｕｎｔｅｒ’ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ．２ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｍｉｌｄ ａｎｄ ｓｅｖｅｒｅ ｆｏｒｍｓ．Ｊ．Ｍｅｄｉｃａｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １９：４０８－４１１）。患者の大多数（３分の２）が、この疾患の重症型であると報告されている。（Ｗｒａｉｔｈ ＪＥ，ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｅｎｚｙｍｅ ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｈｏ ｈａｖｅ ｍｕｃｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｏｓｉｓ Ｉ ａｎｄ ａｒｅ ｙｏｕｎｇｅｒ ｔｈａｎ ５ ｙｅａｒｓ：Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ａ ｍｕｌｔｉｎａｔｉｏｎａｌ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ ａｌｐｈａ－Ｌ－Ｉｄｕｒｏｎｉｄａｓｅ （Ｌａｒｏｎｉｄａｓｅ）．Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ １２０（１）：Ｅ３７－Ｅ４６）。この疾患は、主に男児が罹患するが、罹患した女性は、遺伝子の双方の対立遺伝子での非ランダムＸ不活性化、及び／または変異に起因すると報告されている。（Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｍｕｃｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｏｓｉｓ ＩＩ （Ｈｕｎｔｅｒ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）。Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ １２１：ｅ３７７）。
ＭＰＳ ＩＩの患者は、出生時には正常に見えるが、疾患の徴候及び症状は、一般的には、重症型では１８ヶ月齢～４歳の間に、軽症型では４～８歳の間に出現する。罹患したすべての患者に共通する徴候及び症状として、低身長、顔表面の粗雑化、巨頭症、巨大舌、難聴、肝腫大及び脾腫、多発異骨症、関節性拘縮、脊柱管狭窄、及び手根管症候群がある。上気道及び耳の感染症は、大抵の患者で認められることが多く、また、進行性の気道閉塞が一般的に認められており、睡眠時無呼吸を招いて、死に至ることがよくある。心臓病が、この集団での主な死因であり、左右の心室肥大と心不全を招く弁膜機能障害を特徴としている。一般的な死亡原因は、閉塞性気道疾患または心不全である。
重症型の疾患では、初期発達の重要な段階には達し得るが、発達遅延が１８～２４ヶ月齢で容易に認められる。一部の患者は、１歳時の聴力スクリーニング検査に合格することができず、また、他の発達段階、例えば、補助なしに座る能力、歩行する能力、発話に遅れが認められる。発達の進行は、３歳～５歳の間に停滞し始め、約６．５歳から退行が始まると報告されている。トイレの練習を行ったＭＰＳ ＩＩの子供の約５０％の内、すべてではないにしても、大多数の子供が、疾患が進行するにつれて、トイレを使うことができなくなってしまう。（Ｗｒａｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，２００７（上記）、Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，２００８（上記））。
著しい神経疾患を有する患者は、多動性、頑固さ、及び攻撃性などの重度の行動障害を示し、この障害は、２歳から始まり、神経変性が、この行動を弱める８～９歳まで続く。（Ｍｕｅｎｚｅｒ，ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｍｕｃｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｏｓｉｓ Ｉ：Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ａｎｄ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ，Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ １２３（１）：１９－２９）。
１０歳に達する重症患者の半数以上で発作が報告されており、死亡時までに、ＣＮＳ疾患を有するほとんどの患者は、重度の精神障害を有しており、また、常に世話をする必要がある。（Ｗｒａｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，２００７（上記）、Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，２００８（上記））。重症でない疾患を有する患者は、知的機能は正常であるが、ＭＲＩ画像は、ＭＰＳ ＩＩの全患者について、白質病変、脳室肥大、及び脳萎縮などの脳全体での異常を明らかにする。（Ｍｕｅｎｚｅｒ，ｅｔ ａｌ．，２００９（上記））。
ＨＴ１０８０（線維肉腫）細胞が産生する組換えイデュルスルファーゼを使用する酵素補充療法（ＥＲＴ）（Ｅｌａｐｒａｓｅ（登録商標）、Ｓｈｉｒｅ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ）は、ハンター症候群の治療用に承認を受けた唯一の製品であり、これは、毎週注入して投与される。（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（イデュルスルファーゼ）注射薬［添付文書］，Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ：Ｓｈｉｒｅ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｔｈｅｒａｐｉｅｓ，Ｉｎｃ；２０１３，ｈｔｔｐ：／／ｐｉ．ｓｈｉｒｅｃｏｎｔｅｎｔ．ｃｏｍ／ＰＩ／ＰＤＦｓ／Ｅｌａｐｒａｓｅ＿ＵＳＡ＿ＥＮＧ．ｐｄｆから入手可能である）。静脈内（ＩＶ）ＥＲＴ（組換えイデュルスルファーゼ）を毎週行う治療では、ＭＰＳ ＩＩの全身症状の改善は認められたが、患者とその介護者らは、一生そのような毎週のＥＲＴ注入をしながら生活をするということは負担でしかなく、それにより、患者の生活の質に影響が及んでいる。
現在実施されているＥＲＴは、血液脳関門を通過せず、したがって、重症型の疾患、すなわち、ＣＮＳ／神経認知及び行動に影響が及ぶＭＰＳ ＩＩを有する患者に対処できない。この問題に対処するために設計された最近の臨床試験では、脊椎に埋め込んだ、くも膜下腔内薬物送達装置（下肋骨を切開してアクセスポートを移植して、Ｌ４／Ｌ５のレベルでカテーテルを挿入する）を使用して、くも膜下腔内投与用製剤されたイデュルスルファーゼ（Ｅｌａｐｒａｓｅ）を、小児患者に、月１回投与した。また、患者には、週１回、イデュルスルファーゼを同時に静脈内に注射した。Ｍｕｅｎｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｉｎ Ｍｅｄ １８：７３－８１，ｅｓｐ．ｐ．７４を参照されたい。要約は、ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｕｂｍｅｄ／２５８３４９４８？ｄｏｐｔ＝Ａｂｓｔｒａｃｔから入手可能である。装置の誤動作があり、治療を受けた１２名の患者のうちの６名（５０％）で装置の一部変更、外科的全変更、または除外があった。特記すべきは、１４件のＳＡＥ（重度の有害事象）のうちの１２件は、装置関連（装置挿入に起因する合併症、装置の移動／接続の問題、装置の破損／誤動作／故障、インプラント部位感染、処置痛、及び創傷離開）によるものであった。（Ｍｕｅｎｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１６，ｐ．７５（第２段及び図１））。装置破損、及び脊柱管からのカテーテル移動は、この小児集団での活動レベルの大きさに起因して悪化した。（Ｍｕｅｎｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１６ ａｔ ｐ．７８ Ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ）。
３． 発明の概要
本発明は、ハンター症候群の診断を受けた患者を含むが、これに限定されないムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象の中枢神経系（ＣＮＳ）の脳脊髄液（ＣＳＦ）、及び全身分布のための肝臓の細胞に向けて、神経細胞またはグリア細胞を含むがこれらに限定されないヒト細胞が産生した組換えヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ｒｈＩＤＳ）を送達することを含む。
本発明は、ハンター症候群の診断を受けた患者を含むが、これに限定されないムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象の中枢神経系（ＣＮＳ）の脳脊髄液（ＣＳＦ）、及び全身分布のための肝臓の細胞に向けて、神経細胞またはグリア細胞を含むがこれらに限定されないヒト細胞が産生した組換えヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ｒｈＩＤＳ）を送達することを含む。
好ましい実施形態では、治療は、遺伝子治療を介して達成する－例えば、ヒトＩＤＳ（ｈＩＤＳ）、またはｈＩＤＳの誘導体をコードするウイルスベクター、またはその他のＤＮＡ発現コンストラクトを、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けた患者（ヒト対象）のＣＳＦに投与し、その結果、（ａ）継続的に導入遺伝子産物をＣＮＳに供給する形質導入した神経細胞、及び（ｂ）導入遺伝子産物を全身的に供給する形質導入肝細胞の永続的なデポーを作り出すことで達成する。神経細胞／グリア細胞デポーからＣＳＦに分泌されたｒｈＩＤＳ、及び肝臓デポーから全身的に分泌するｒｈＩＤＳは、それぞれ、その他のＣＮＳ及び肝細胞に取り込まれてしまい、レシピエント細胞での酵素欠損を「横断修正」する。さらに、予期せぬことに、ＣＳＦに対するウイルスベクターの投与が、ベクターの全身送達をもたらし、及びＣＮＳにある形質導入した神経細胞及びグリア細胞のデポーが、組換え酵素をＣＮＳ及び全身の両方に送達することができ、全身治療、例えば、毎週、酵素を静脈内注射する必要性を緩和または解消し得ることが判明した。
代替の実施形態では、ｈＩＤＳを、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞の細胞培養物（例えば、バイオリアクター）において生産して、酵素補充療法（「ＥＲＴ」）として、例えば、ＣＳＦに、ＣＮＳに直接に、及び／または全身に酵素を注入することにより、投与することができる。しかしながら、酵素は血液脳関門を通過できないので、酵素の全身送達ではＣＮＳの治療をもたらさず、本発明の遺伝子治療手法とは異なり、ＣＮＳへの酵素の直接の送達は、大きな負担を強いるだけでなく、感染のリスクを招く反復注射が必要となるので、遺伝子治療手法は、ＥＲＴを上回るいくつかの利点を提供する。
導入遺伝子がコードするｈＩＤＳは、限定するものではないが、配列番号１のアミノ酸配列を有するヒトＩＤＳ（ｈＩＤＳ）（図１に示す）、及びアミノ酸の置換、欠失、または付加を有する、例えば、限定するものではないが、図２に示すＩＤＳのオーソログに対応する非保存的残基から選択するアミノ酸置換などのｈＩＤＳの誘導体を含むことができる。ただし、そのような変異は、酵素活性に必要な位置８４（Ｃ８４）のシステイン残基の置換を含まない（Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ ３２６：２４３－２４７）、または、例えば、図３に示すように、または、各々を、参照により、その全内容を本明細書で援用する、Ｓｕｋｅｇａｗａ－Ｈａｙａｓａｋａ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｊ Ｉｎｈｅｒｔ Ｍｅｔａｂ Ｄｉｓ ２９：７５５－７６１（「弱度」変異体Ｒ４８Ｐ、Ａ８５Ｔ、Ｗ３３７Ｒ、及び切断型変異体Ｑ５３１Ｘ、及び、「重度」変異体Ｐ８６Ｌ、Ｓ３３３Ｌ、Ｓ３４９Ｉ、Ｒ４６８Ｑ、Ｒ４６８Ｌを報告している）、Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９８，ＢＢＡ １４０６：２１４－２１８（「弱度」変異体Ｐ４８０Ｌ、及びＰ４８０Ｑ、及び「重度」変異体Ｐ８６Ｌを報告している）、及び、Ｂｏｎｕｃｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，２００１，ＢＢＡ １５３７：２３３－２３８で報告されているような、重度、重度－中等度、中等度、または弱度ＭＰＳ ＩＩ表現型において同定されている変異を含まないことを条件とする。
例えば、ｈＩＤＳの特定位置でのアミノ酸置換は、図２に配置させて示したＩＤＳオーソログでの当該位置に認められる対応する非保存的アミノ酸残基から選択することができる。ただし、図３に示したような、または、その各々を、参照により、その全内容を本明細書で援用する、Ｓｕｋｅｇａｗａ－Ｈａｙａｓａｋａ ｅｔ ａｌ．，２００６（上記）、Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９８（上記）、及び、Ｂｏｎｕｃｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，２００１（上記）で報告されているような、いかなる有害な変異も含まないことを条件とする。結果として得られる導入遺伝子産物は、細胞培養または試験動物で、インビトロでの従来のアッセイを使用して試験し、変異がＩＤＳ機能を損なわないことを保証することができる。選択される好ましいアミノ酸置換、欠失、または付加は、細胞培養または動物モデルでのＭＰＳ ＩＩのためのインビトロでの従来のアッセイで試験して、ＩＤＳの酵素活性、安定性、または半減期を維持する、または増加させるものであるべきである。例えば、導入遺伝子産物の酵素活性は、基質として、例えば、４－メチルウンベリフェリル α－Ｌ－イドピラノシズロン酸 ２－硫酸塩、または４－メチルウンベリフェリル硫酸塩を用いる従来の酵素アッセイを使用して評価することができる（使用可能な例示的なＩＤＳ酵素アッセイについては、例えば、各々の全内容を、参照により、本明細書で援用する、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．４８（１８）：１３５０－１３５３、Ｄｅａｎ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．５２（４）：６４３－６４９を参照されたい）。導入遺伝子産物がＭＰＳ ＩＩ表現型を修正する能力を、細胞培養で評価することができ、例えば、培養しているＭＰＳ ＩＩ細胞に、ｈＩＤＳまたは誘導体をコードするウイルスベクターまたはその他のＤＮＡ発現コンストラクトを形質導入すること、培養しているＭＰＳ ＩＩ細胞に、導入遺伝子産物または誘導体を加えること、または、ＭＰＳ ＩＩ細胞を、ｒｈＩＤＳまたは誘導体を発現及び分泌するように遺伝子操作したヒト神経宿主細胞／ヒトグリア宿主細胞と共培養し、ＭＰＳ ＩＩ培養細胞の欠陥の修正を例えば、培養しているＭＰＳ ＩＩ細胞でのＩＤＳ酵素活性、及び／またはＧＡＧ貯蔵量の低下を検出することにより決定すること（例えば、全内容を、参照により、本明細書で援用するＳｔｒｏｎｃｅｋ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ ３９（４）：３４３－３５０を参照されたい）により、評価することができる。好ましい実施形態では、ＧＡＧ貯蔵の減少は、ヘパラン硫酸（ＨＳ）貯蔵の減少である。別の実施形態では、ＧＡＧ貯蔵の減少は、デルマタン硫酸（ＤＳ）貯蔵の減少である。別の実施形態では、ＧＡＧ貯蔵の減少は、ＨＳ貯蔵及びＤＳ貯蔵の両方の減少である。
ＭＰＳ ＩＩのための動物モデルは、本明細書に記載する治療薬を評価するために使用することができることが記載されている。例えば、ＭＰＳ ＩＩのノックアウトマウスモデル（ＩＤＳノックアウト）が、ＩＤＳ遺伝子のエクソン４及び５を、ネオマイシン耐性遺伝子で置換して開発された。（Ｇａｒｃｉａ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｊ Ｉｎｈｅｒｉｔ Ｍｅｔａｂ Ｄｉｓ ３０：９２４－３４）。このＩＤＳノックアウトマウスは、骨格異常、肝脾腫大症、尿及び組織ＧＡＧの上昇、及び脳貯蔵病変などのＭＰＳ ＩＩの数多くの特徴を示しており（Ｍｕｅｎｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ａｃｔａ Ｐａｅｄｉａｔｒ Ｓｕｐｐｌ ９１：９８－９９）、ＥＲＴの臨床試験を支援するためにＭＰＳ ＩＩでの酵素補充療法の効果を評価するために使用された。したがって、このマウスモデルは、ＭＰＳ ＩＩの治療法として、神経細胞またはグリア細胞が産生するｒＩＤＳを送達する遺伝子療法の効果を研究するための適切なモデルである（例えば、参照により、全内容を本明細書で援用する、Ｐｏｌｉｔｏ ａｎｄ Ｃｏｓｍａ，２００９，Ａｍ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．８５（２）：２９６－３０１を参照されたい）。
好ましくは、ヒト神経細胞／ヒトグリア細胞が産生するｈＩＤＳ導入遺伝子は、神経細胞及び／またはグリア細胞において機能する発現制御エレメント、例えば、ＣＢ７プロモーター（ニワトリβ－アクチンプロモーター、及びＣＭＶエンハンサー）で制御されるべきであり、ベクターによって駆動する導入遺伝子の発現を増強するその他の発現制御エレメント（例えば、ニワトリβ－アクチンイントロン、及びウサギβ－グロビンポリＡシグナル）を含むことができる。ｈＩＤＳ導入遺伝子のためのｃＤＮＡコンストラクトには、形質導入したＣＮＳ細胞による適切な翻訳中プロセシング及び翻訳後プロセシング（グリコシル化及びタンパク質硫酸化）を保証するシグナルペプチドのためのコード配列を含めるべきである。ＣＮＳ細胞で使用するそのようなシグナルペプチドとして、限定されないが、以下が挙げられ得る。
オリゴデンドロサイト－ミエリン糖タンパク質（ｈＯＭＧ）シグナルペプチド：
ＭＥＹＱＩＬＫＭＳＬＣＬＦＩＬＬＦＬＴＰＧＩＬＣ（配列番号２）
Ｅ１Ａ刺激遺伝子の細胞リプレッサー２（ｈＣＲＥＧ２）シグナルペプチド：
ＭＳＶＲＲＧＲＲＰＡＲＰＧＴＲＬＳＷＬＬＣＣＳＡＬＬＳＰＡＡＧ（配列番号３）
Ｖ－セット及び膜貫通ドメイン含有２Ｂ（ｈＶＳＴＭ２Ｂ）シグナルペプチド：
ＭＥＱＲＮＲＬＧＡＬＧＹＬＰＰＬＬＬＨＡＬＬＬＦＶＡＤＡ（配列番号４）
プロトカドヘリンアルファ－１（ｈＰＣＡＤＨＡ１）シグナルペプチド：
ＭＶＦＳＲＲＧＧＬＧＡＲＤＬＬＬＷＬＬＬＬＡＡＷＥＶＧＳＧ（配列番号５）
ＦＡＭ１９Ａ１（ＴＡＦＡ１）シグナルペプチド：
ＭＡＭＶＳＡＭＳＷＶＬＹＬＷＩＳＡＣＡ（配列番号６）
インターロイキン－２シグナルペプチド：
ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＩＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１４）
シグナルペプチドは、本明細書では、リーダー配列またはリーダーペプチドとも称することができる。
オリゴデンドロサイト－ミエリン糖タンパク質（ｈＯＭＧ）シグナルペプチド：
ＭＥＹＱＩＬＫＭＳＬＣＬＦＩＬＬＦＬＴＰＧＩＬＣ（配列番号２）
Ｅ１Ａ刺激遺伝子の細胞リプレッサー２（ｈＣＲＥＧ２）シグナルペプチド：
ＭＳＶＲＲＧＲＲＰＡＲＰＧＴＲＬＳＷＬＬＣＣＳＡＬＬＳＰＡＡＧ（配列番号３）
Ｖ－セット及び膜貫通ドメイン含有２Ｂ（ｈＶＳＴＭ２Ｂ）シグナルペプチド：
ＭＥＱＲＮＲＬＧＡＬＧＹＬＰＰＬＬＬＨＡＬＬＬＦＶＡＤＡ（配列番号４）
プロトカドヘリンアルファ－１（ｈＰＣＡＤＨＡ１）シグナルペプチド：
ＭＶＦＳＲＲＧＧＬＧＡＲＤＬＬＬＷＬＬＬＬＡＡＷＥＶＧＳＧ（配列番号５）
ＦＡＭ１９Ａ１（ＴＡＦＡ１）シグナルペプチド：
ＭＡＭＶＳＡＭＳＷＶＬＹＬＷＩＳＡＣＡ（配列番号６）
インターロイキン－２シグナルペプチド：
ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＩＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１４）
シグナルペプチドは、本明細書では、リーダー配列またはリーダーペプチドとも称することができる。
導入遺伝子を送達するために使用される組換えベクターは、神経細胞及び／またはグリア細胞など、これらに限定されない、ＣＮＳでの細胞への向性を有すべきである。そのようなベクターは、非複製組換えアデノ随伴ウイルスベクター（「ｒＡＡＶ」）を含むことができ、特に、ＡＡＶ９またはＡＡＶｒｈ１０キャプシドを有するウイルスベクターが好ましい。限定するものではないが、全内容を、参照により、本明細書で援用する米国特許第７，９０６，１１１号においてＷｉｌｓｏｎが記載した、特に好ましくは、ＡＡＶ／ｈｕ．３１及びＡＡＶ／ｈｕ．３２を有するＡＡＶバリアントキャプシド、ならびに、各々の全内容を、参照により、本明細書で援用する米国特許第８，６２８，９６６号、米国特許第８，９２７，５１４号、及びＳｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ ２２：１６２５－１６３４においてＣｈａｔｔｅｒｊｅｅが記載したＡＡＶバリアントキャプシドを使用することができる。しかしながら、レンチウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、または「ネイキッドＤＮＡ」コンストラクトと称する非ウイルス性発現ベクターを含むがこれらに限定されない、その他のウイルスベクターを使用することができる。
ある実施形態では、コンストラクト１を、導入遺伝子を送達するために使用することができる。コンストラクト１は、ヒトイズロン酸－２－スルファターゼ発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス血清型９キャプシドであり、発現は、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、ニワトリベータアクチンプロモーター（ＣＢ７）のハイブリッドにより誘導され、当該ＩＤＳ発現カセットは、逆方向末端反復（ＩＴＲ）に隣接しており、当該導入遺伝子は、ニワトリベータアクチンイントロンと、ウサギベータ－グロビンポリアデニル化（ポリＡ）シグナルを含む。好ましい実施形態では、ＩＴＲは、ＡＡＶ２ ＩＴＲである。ある実施形態では、コンストラクト１は、配列番号４５のヌクレオチド配列を含む核酸を含む。
ＣＳＦへの投与に好適な医薬組成物は、生理的に適合性の水性緩衝剤、界面活性剤、及び任意の賦形剤を含む製剤緩衝液でのｒｈＩＤＳベクターの懸濁液を含む。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、くも膜下腔内投与に好適である。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、大槽内投与（大槽内への注入）に好適である。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、Ｃ１－２穿刺を介した、くも膜下腔内への注入に好適である。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、脳室内投与に好適である。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、腰椎穿刺を介する投与に好適である。一部の実施形態では、本開示のｒＡＡＶを含む医薬組成物は、約８．７７ｇ／Ｌの濃度の塩化ナトリウム、約０．２４４ｇ／Ｌの濃度の塩化マグネシウム六水和物、約０．２２４ｇ／Ｌの濃度の塩化カリウム、約０．２０６ｇ／Ｌの濃度の塩化カルシウム二水和物、約０．７９３ｇ／Ｌの濃度のデキストロース無水物、約０．００１％（体積／体積）の濃度のポロクサマー１８８、約０．０２７８ｇ／Ｌの濃度のリン酸一ナトリウム一水和物、及び、約０．１１４ｇ／Ｌの濃度の無水リン酸二ナトリウムを含む。
組換えベクターの治療有効用量は、くも膜下腔内投与を介して（すなわち、くも膜下腔内へ注入して、組換えベクターがＣＳＦを通じて拡散して、ＣＮＳの細胞に形質導入するようにする）、ＣＳＦに投与すべきである。一部の実施形態では、組換えベクターは、約８．７７ｇ／Ｌの濃度の塩化ナトリウム、約０．２４４ｇ／Ｌの濃度の塩化マグネシウム六水和物、約０．２２４ｇ／Ｌの濃度の塩化カリウム、約０．２０６ｇ／Ｌの濃度の塩化カルシウム二水和物、約０．７９３ｇ／Ｌの濃度のデキストロース無水物、約０．００１％（体積／体積）の濃度のポロクサマー１８８、約０．０２７８ｇ／Ｌの濃度のリン酸一ナトリウム一水和物、及び、約０．１１４ｇ／Ｌの濃度の無水リン酸二ナトリウムを含む溶液に投与される。これは、いくつかの方法、例えば、頭蓋内（大槽または脳室内）注入、または腰椎槽への注入によって達成することができる。例えば、（大槽内への）大槽内（ＩＣ）注入は、ＣＴガイド後頭下穿刺で行うことができる、または、患者に実行し得る場合は、Ｃ１－２穿刺を介してくも膜下腔内への注入を実施することができる、または、腰椎穿刺（一般的には、ＣＳＦの試料を収集するために実施する診断手順）を、ＣＳＦにアクセスするために使用することができる。あるいは、脳室内（ＩＣＶ）投与（血液脳関門を透過しない抗感染剤または抗がん剤の導入に使用する、より侵襲的な技術）を使用して、組換えベクターを直接に脳室内に滴下することができる。あるいは、鼻腔内投与を使用して、ＣＮＳに組換えベクターを送達し得る。
ＣＳＦ濃度は、後頭部または腰椎穿刺から得られるＣＳＦ流体でのｒｈＩＤＳの濃度を直接に測定することでモニタリングする、または患者の血清において検出したｒｈＩＤＳの濃度から外挿によって推定することができる。
ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与される、また、脳質量は、ヒト対象の脳の脳磁気共鳴画像（ＭＲＩ）で決定される。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり１．３×１０１０ＧＣの用量で投与される。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり１．９×１０１０ＧＣの用量で投与される。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり９．６×１０１０ＧＣの用量で投与される。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターの用量は、１．３×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量である（例えば、脳質量は、ＭＲＩによって決定し、及び、ゲノム数はポリＡ ＰＣＲアッセイで決定する）。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターの用量は、１．９×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量である（例えば、脳質量は、ＭＲＩによって決定し、及び、ゲノム数は導入遺伝子特異的ＰＣＲアッセイで決定する）。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターの用量は、６．５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量である（例えば、脳質量は、ＭＲＩによって決定し、及び、ゲノム数はポリＡ ＰＣＲアッセイで決定する）。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターの用量は、９．６×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量である（例えば、脳質量は、ＭＲＩによって決定し、及び、ゲノム数は導入遺伝子特異的ＰＣＲアッセイで決定する）。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターの用量は、２．０×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量である（例えば、脳質量は、ＭＲＩによって決定し、及び、ゲノム数はポリＡ ＰＣＲアッセイで決定する）。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターの用量は、２．９×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量である（例えば、脳質量は、ＭＲＩによって決定し、及び、ゲノム数は導入遺伝子特異的ＰＣＲアッセイで決定する）。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、ＭＲＩで決定した６．５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の用量で投与する。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、ＭＲＩで決定した２．０×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量の用量で投与する。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、約２．９×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量脳質量の（例えば、ＭＲＩで決定した）用量で投与する。一部の実施形態では、導入遺伝子特異的アッセイまたはＰｏｌｙＡ特異的アッセイを使用して、対象に対して投与する組換えヌクレオチド発現ベクターの用量を計算する。ある特定の実施形態では、ヒト対象の脳質量は、ヒト対象の脳体積ｃｍ３に、１．０４６ｇ／ｃｍ３の係数を乗じることにより、ヒト対象の脳体積から変換され、ヒト対象の脳体積は、ヒト対象の脳ＭＲＩから得られる。
背景として、ヒトＩＤＳは、図１に記載する８つの潜在的なＮ－グリコシル化部位（Ｎ３１、Ｎ１１５、Ｎ１４４、Ｎ２４６、Ｎ２８０、Ｎ３２５、Ｎ５１３、及びＮ５３７）を含む５５０個のアミノ酸のポリペプチドとして翻訳され、プロセシングの間に切断される２５個のアミノ酸のシグナル配列を含む。最初の７６ｋＤａ細胞内前駆体が、そのオリゴ糖鎖がゴルジ体装置内で修飾を受けた後に、リン酸化を受けた９０ｋＤａ前駆体に変換される。この前駆体は、グリコシル化修飾、及びタンパク質分解的切断によって、様々な細胞内中間体を経て、主要な５５ｋＤａ形態へと処理される。まとめると、２５アミノ酸シグナル配列を除去した後に、タンパク質分解プロセシングは、Ｎ３１の下流でＮ末端タンパク質分解切断を行って、８個のアミノ酸（残基２６～３３）のプロペプチドを除去し、Ｎ５１３の上流でＣ末端タンパク質分解切断を行って、１８ｋＤａのポリペプチドを放出して、６２ｋＤａの中間体を生成し、これが、５５ｋＤａの成熟形態へと変換される。さらなるタンパク質分解的切断は、リソソーム区画に位置する４５ｋＤａの成熟形態を生成する。（Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ ２３０：３６２－３６７（「Ｍｉｌｌａｔ １９９７」）から抜粋した図面については図４を参照されたい；Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．１９９７，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．３２６：２４３－２４７ （「Ｍｉｌｌａｔ １９９７ａ」）、及び、Ｆｒｏｉｓｓａｒｔ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．３０９：４２５－４３０を参照されたい。これらの各々を、参照により、その全内容を本明細書で援用する）。
酵素活性に必要なＣ８４のホルミルグリシン修飾（図１の太字で示す）は、おそらくは初期の翻訳後事象または共翻訳事象として、小胞体で、ほぼ確かに起こる。（Ｓｃｈｍｉｄｔ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｃｅｌｌ ８２：２７１－２７８を引用しているＭｉｌｌａｔ １９９７ａを参照されたい）。ゴルジ体で翻訳後プロセシングが継続され、複合シアル酸含有グリカンを取り入れ、リソソーム区画への送達のための酵素に結合するマンノース－６－リン酸残基の取得を含む。（参照により、その全内容を本明細書で援用する簡潔な考察については、Ｃｌａｒｋｅ，２００８，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ ９：３１１－３１７を参照されたい）。ＩＤＳの安定性に必須の単一のグリコシル化部位は無いが、Ｎ２８０位でのグリコシル化は、マンノース－６－リン酸（Ｍ６Ｐ）受容体を介した細胞の内在化、及びリソソーム標的にとって重要である。（Ｃｈｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ Ｊ ３１：３０９－３１５ ｐ．３１０の第１段）。正常な生理学的状態では、ＩＤＳは非常に低レベルで産生され、酵素は、あったとしても、細胞からほとんど分泌されることはない。（Ｃｌａｒｋｅ，２００８（上記））。
本発明は、部分的には、以下の原理に基づく。
（ｉ）ＣＮＳの神経細胞及びグリア細胞は、ＣＮＳでの堅牢なプロセスである、グリコシル化、及びマンノース－６－リン酸化、及びチロシン－Ｏ－硫酸化を含む分泌タンパク質の翻訳後プロセシングのための細胞機構を有する分泌細胞である。例えば、ヒト脳マンノース－６－リン酸グリコプロテオームについて記載をしており、脳が、他の組織で認められるよりもはるかに多くの個々のアイソフォームを有するより多くのタンパク質と、マンノース－６－リン酸化タンパク質を含むことを注記した、Ｓｌｅａｔ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ５：１５２０－１５３２、及びＳｌｅａｔ １９９６，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７１：１９１９１－９８、及び、神経細胞が分泌するチロシン硫酸化糖タンパク質の産生について報告しているＫａｎａｎ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｅｘｐ．Ｅｙｅ Ｒｅｓ．８９：５５９－５６７、及びＫａｎａｎ＆Ａｌ－Ｕｂａｉｄｉ，２０１５，Ｅｘｐ．Ｅｙｅ Ｒｅｓ．１３３：１２６－１３１を参照されたい。ヒトＣＮＳ細胞がもたらす翻訳後修飾について、それぞれの全内容を、参照により援用する。
（ｉｉ）ヒトの脳は、天然型／ネイティブＩＤＳの複数のアイソフォームを生成する。特に、ヒト脳マンノース－６－リン酸化糖タンパク質のＮ末端配列決定で、ｈＩＤＳの成熟した４２ｋＤａ鎖のＮ末端配列が、次のように、脳内で位置３４または３６から変化することが明らかになった：Ｔ３４ＤＡＬＮＶＬＬＩ及びＡ３６ＬＮＶＬＬＩＩＶ。（Ｓｌｅａｔ，２００５，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ５：１５２０－１５３２，Ｔａｂｌｅ Ｓ２）。８つのＮ結合型グリコシル化部位のうちの２つ、すなわち、Ｎ２８０及びＮ１１６は、ヒト脳から得たＩＤＳにおいてマンノース－６－リン酸化されていることが判明した。（Ｓｌｅａｔ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｍｏｌ ＆ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｅｏｍｉｃｓ ５．４：６８６－７０１，Ｔａｂｌｅ Ｖで報告している）。
（ｉｉｉ）ｈＩＤＳのプロセシングの間に、神経細胞及びグリア細胞が、７６ｋＤａ及び９０ｋＤａの２つのポリペプチドを分泌するが、９０ｋＤａのポリペプチドだけが、マンノース－６－リン酸化を受けており、このものは、分泌した形態の酵素が、横断修正を達成する上で必要である。（Ｍｉｌｌａｔ，１９９７、形質導入したリンパ芽球様細胞に関する図１の結果、及びＦｒｏｉｓｓａｒｔ １９９５、形質導入した線維芽細胞に関する同様の結果を示す図４－培養培地では、９０ｋＤａ形態だけがリン酸化する）。興味深いことに、神経細胞及びグリア細胞が産生する組換えＩＤＳは、腎臓などのその他の細胞が産生する組換えＩＤＳよりも、レシピエントＣＮＳ細胞の方が貪欲にエンドサイトーシスし得ることを実証している。Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２（Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ １５８８（３）：２０３－９）は、４５ｋＤａ成熟活性型に対する前駆体を適切にプロセシングした非形質導入の神経細胞及びグリア細胞のレシピエント集団による、形質導入した神経細胞及びグリア細胞培養物の馴化培地由来の組換えＩＤＳのＭ６Ｐ受容体媒介エンドサイトーシスを実証した。神経細胞及びグリア細胞株が産生する組換えＩＤＳの取り込み（７４％のエンドサイトーシス）は、腎臓細胞株が産生する酵素の取り込み（５．６％のエンドサイトーシス）をはるかに上回っていた。いずれの事例でも、取り込みはＭ６Ｐによって阻害されており、このことは、組換えＩＤＳの取り込みが、Ｍ６Ｐ受容体が媒介していることを示す。（Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２，表２及び４を参照されたい、また、ｐｐ．２０５－２０６での結果に関連する説明を、以下の表１にまとめる）。
（ｉｖ）本明細書に記載する遺伝子治療手法は、酵素的に活性であるポリアクリルアミドゲル電気泳動（使用するアッセイによる）で測定して約９０ｋＤａのｈＩＤＳ糖タンパク質前駆体の連続分泌をもたらすであろう。まず、ＩＤＳ活性に必要なＣ８４のホルミルグリシン修飾に関与する酵素であるＦＧｌｙ生成酵素（ＦＧＥ、別名、ＳＵＭＦ１）は、ヒト脳の大脳皮質で発現する（ＳＵＭＦ１の遺伝子発現データは、例えば、ＧｅｎｅＣａｒｄｓのｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｅｃａｒｄｓ．ｏｒｇでアクセス可能である）。次に、インサイチュで形質導入した神経細胞及びグリア細胞が産生して分泌したグリコシル化／リン酸化ｒＩＤＳは、ＣＮＳでの形質導入されていない神経細胞及びグリア細胞に取り込まれ、そして、的確にプロセシングを受けるであろう。いかなる理論の拘束をも受けるものではないが、遺伝子治療によってインサイチュで産生されて分泌されたｒｈＩＤＳ前駆体は、ＣＮＳに投与した場合、ＥＲＴに使用する従来の組換え酵素よりも、ＣＮＳでのレシピエント細胞の方が貪欲にエンドサイトーシスし得る。例えば、Ｅｌａｐｒａｓｅ（登録商標）（線維肉腫細胞株であるＨＴ１０８０で作成）は、精製タンパク質であり、約７６ｋＤａの分子量を有すると報告がされており、神経細胞及びグリア細胞が分泌する高度にリン酸化を受けたと考えられる９０ｋＤａ種のものではない。８つのＮ結合型グリコシル化部位は、Ｅｌａｐｒａｓｅ（登録商標）で完全に占有されており、そして、２つのビスマンノース－６－リン酸末端グリカン、ならびに、高度にシアル酸付加したグリカン複合体を含むことが報告されているが、酵素活性の絶対要件であるＣ８４からＦＧｌｙへの翻訳後修飾は、約５０％にすぎない。（Ｃｌａｒｋｅ，２００８，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ ９：３１１－３１７；Ｅｌａｐｒａｓｅ（登録商標） Ｆｕｌｌ Ｐｒｅｓｃｒｉｂｉｎｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ＥＭＡ ｆｉｌｉｎｇ）。別の組換え産物であるＨｕｎｔｅｒａｓｅ（登録商標）は、ＣＨＯ細胞で作成される。Ｅｌａｐｒａｓｅ（登録商標）よりもＦＧｌｙの多さと活性の高さが報告されているが、マンノース－６－リン酸化と、取り込みには差異は無かった。（Ｃｈｕｎｇ，２０１４，Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ Ｊ ３１：３０９－３１５）。
（ｖ）インビボでの細胞外でのＩＤＳの有効性は、Ｍ６Ｐと、その活性部位ホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）、すなわち、ホルミルグリシン生成酵素による翻訳後修飾によってＣ８４から変換された、ＦＧｌｙとを介した取り込み（細胞、及びリソソームの内在化）に依存している。上記表１に示したように、脳細胞（神経細胞及びグリア細胞）は、形質導入した神経細胞及びグリア細胞が分泌するＩＤＳ前駆体培地とインキュベーションすると、遺伝子操作した腎臓細胞が分泌するＩＤＳ前駆体培地とインキュベーションした場合よりも高い酵素活性を示す。結果として生じる活性の５倍もの高まりは、ＩＤＳの効率的な取り込みに依るところが大きい（Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２、表２及び４を参照されたい）。ＣＨＯ細胞またはＨＴ－１０８０細胞が生成するＩＤＳの市販品でのＦＧｌｙ含量は、約５０％～７０％であり、これが、酵素活性を決定する。しかしながら、神経細胞及びグリア細胞は、ＩＤＳ取り込みが改善されるので、この活性を改善し得る。
（ｖｉ）ＩＤＳなどのリソソームタンパク質の細胞性及び細胞内輸送／取り込みは、Ｍ６Ｐを介する。Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２、及びＳｌｅａｔ，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ，２００５で報告されているように、脳細胞由来のＩＤＳは、Ｍ６Ｐをより高含有量で含み得る（ヒトの脳が、その他の組織よりも多くの（定量的及び定性的意味で）Ｍａｎ６－Ｐ糖タンパク質を含むことを示す）。ＩＤＳ前駆体のＭ６Ｐ含有量を測定することは、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２で行われているように可能である。阻害性Ｍ６Ｐ（例えば、５ｍＭ）の存在下では、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２の遺伝子操作した腎臓細胞などの非神経細胞または非グリア細胞が生成するＩＤＳ前駆体の取り込みは、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２に示したように、コントロール細胞のそれに近いレベルにまで低下すると予測される。阻害性Ｍ６Ｐの存在下では、神経細胞やグリア細胞などの脳細胞が生成したＩＤＳ前駆体の取り込みは、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２で示されたように、高レベルでとどまるものと予測され、その取り込みはコントロール細胞よりも４倍多く、また、阻害性Ｍ６Ｐが無いままに遺伝子操作した腎臓細胞が生成したＩＤＳ前駆体のＩＤＳ活性（または、取り込み）のレベルに匹敵する。このアッセイにより、脳細胞が生成したＩＤＳ前駆体でのＭ６Ｐ含量を予測する方法、及び、特に、異なるタイプの細胞が生成するＩＤＳ前駆体でのＭ６Ｐ含量を比較することができる。本明細書に記載する遺伝子治療手法は、結果として、このようなアッセイにおいて、阻害性Ｍ６Ｐの存在下で、高レベルで神経細胞及びグリア細胞に取り込まれ得るｈＩＤＳ前駆体を継続的に分泌する。
（ｖｉｉ）ＩＤＳ前駆体のＭ６Ｐ含量及び取り込みは、９０ｋＤａ及び７６ｋＤａのゲルバンド（例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルバンド）で実証し得る。この９０ｋＤａは、高度にグリコシル化／リン酸化しており、また、Ｍ６Ｐを含むと報告されているが、７６ｋＤａではそうではない。遺伝子操作した腎臓細胞から生成したＩＤＳ前駆体のゲルバンド（Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２、図１）と同様に、７６ｋＤａ～９５ｋＤａの範囲、及び８０～８５ｋＤａの平均分子量を有する非常に広範なゲルバンドは、脳細胞から生成したＩＤＳ前駆体のゲルバンドと対比され得る。Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２では、ＩＤＳ前駆体の免疫沈降が失敗に終わったので、ゲルバンドを得ることができない。本明細書に記載する遺伝子治療手法は、遺伝子操作された腎臓細胞から生成されるＩＤＳ前駆体ゲルバンドとは異なるｈＩＤＳ前駆体の継続的な分泌をもたらすであろう。
（ｖｉｉｉ）市販のＩＤＳ前駆体のＭ６Ｐ含量は、２～２．５ｍｏｌ／ｍｏｌであり、その大部分はジ－リン酸化グリカンの形態で存在する。平均的には、すべてのＩＤＳ前駆体がリン酸化しているが、グリカンの正規分布は、複数のリン酸化部位を仮定して、２つ、１つ、及び０個のジ－リン酸化Ｍ６Ｐグリカンを有する一部のＩＤＳ前駆体を有する。取り込み速度は、複数回のリン酸化では大幅に高くなるであろう。
（ｉｘ）ＣＮＳのヒト細胞によるｈＩＤＳのグリコシル化により、安定性、半減期を向上させ、かつ導入遺伝子産物の望ましくない凝集を減らすことができるグリカンが付加される。重要なことに、本発明のｈＩＤＳに付加されるグリカンは２，６－シアル酸を含み、Ｎｅｕ５Ａｃ（「ＮＡＮＡ」）を組み込むが、そのヒドロキシル化誘導体であるＮｅｕＧｃ（Ｎ－グリコリルノイラミン酸、すなわち「ＮＧＮＡ」または「Ｎｅｕ５Ｇｃ」）を組み込まない。そのようなグリカンは、ＣＨＯ細胞で作成されるＨｕｎｔｅｒａｓｅ（登録商標）などの組換えＩＤＳ産物には存在しない。これはすなわち、ＣＨＯ細胞が、この翻訳後修飾を行う上で必要とする２，６－シアリルトランスフェラーゼを有さず、バイセクティングＧｌｃＮＡｃも産生しないが、Ｎｅｕ５Ａｃ（ＮＡＮＡ）の代わりにヒトにとって一般的でない（かつ潜在的に免疫原性の）シアル酸としてＮｅｕ５Ｇｃ（ＮＧＮＡ）を付加していることによる。例えば、Ｄｕｍｏｎｔ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ ３６（６）：１１１０－１１２２（Ｅａｒｌｙ Ｏｎｌｉｎｅ ｐｐ．１－１３、ｐ．５）、及びＨａｇｕｅ ｅｔ ａｌ．，１９９８ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒ １９：２６１２－２６３０（「ＣＨＯ細胞株は、α２，６－シアリルトランスフェラーゼの欠如のため、グリコシル化に関して『表現形上制限される』と考えられている」）を参照されたい。さらに、ＣＨＯ細胞は大部分の個体に存在する抗α－Ｇａｌ抗体と反応して、高濃度でアナフィラキシーを誘発し得る免疫原性グリカンである、α－Ｇａｌ抗原も生産し得る。例えば、Ｂｏｓｑｕｅｓ，２０１０，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ ２８：１１５３－１１５６を参照されたい。本発明のｈＩＤＳのヒトグリコシル化パターンは、導入遺伝子産物の免疫原性を低下させ、かつ効力を向上させるであろう。
（ｘ）導入遺伝子産物の免疫原性は、患者の免疫状態、注入したタンパク質薬物の構造及び特徴、投与経路、ならびに治療の持続時間を含む様々な因子によって誘導され得る。プロセス関連不純物、例えば、宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）、宿主細胞ＤＮＡ、及び化学的残留物、ならびに産物関連不純物、例えば、タンパク質分解物及び構造特性、例えば、グリコシル化、酸化、及び凝集（肉眼不可視粒子）が免疫反応を増強するアジュバントとしての機能を果たすことで免疫原性を増加させる場合がある。プロセス関連及び産物関連不純物の量は、製造プロセス、すなわち商業生産するＩＤＳ産物に影響を及ぼし得る細胞培養、精製、製剤、保存、及び取扱いの影響を受け得る。遺伝子治療では、タンパク質はインビボで生産され、その結果、プロセス関連不純物は存在せず、タンパク質産物は組換え技術によって生産するタンパク質と関連した生産物関連不純物／分解物、例えば、タンパク質凝集物及びタンパク質酸化物を含む可能性は低い。凝集は、例えば、タンパク質生産及び貯蔵と関連付けられ、高いタンパク質濃度、製造装置及び容器との表面相互作用、ならびにある特定の緩衝液システムを用いた精製プロセスに起因する。しかし、導入遺伝子をインビボで発現させる場合、凝集を促進するこれらの条件は存在しない。また、酸化、例えば、メチオニン、トリプトファン、及びヒスチジンの酸化は、タンパク質生産及び貯蔵と関連付けられ、例えば、ストレス負荷した細胞培養条件、金属及び空気との接触、ならびに緩衝液及び賦形剤での不純物によって引き起こす。インビボで発現するタンパク質は、ストレス負荷条件下で酸化し得るが、ヒトは多くの生物と同様に、抗酸化防御システムを備えており、それにより酸化ストレスが低下するだけでなく、酸化を修復、及び／または逆行させもする。したがって、インビボで生産されるタンパク質が、酸化形態にある可能性は低い。凝集及び酸化は両方とも、効力、ＰＫ（クリアランス）に影響を及ぼし得、免疫原となる懸念を増大させ得る。本明細書に記載する遺伝子治療手法は、商業生産した産物と比較して免疫原性の低下したｈＩＤＳ前駆体の継続的分泌をもたらすであろう。
（ｘｉ）Ｎ結合型グリコシル化部位に加えて、ｈＩＤＳは、チロシン（「Ｙ」）硫酸化部位（ＰＳＳＥＫＹ１６５ＥＮＴＫＴＣＲＧＰＤ）を含む。（例えば、Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０：２１３８－２１６４、特に、ｐ．２１５４を参照されたい、この文献は、タンパク質チロシン硫酸化に供するチロシン残基を取り囲むアミノ酸の分析に関して、その全内容を、参照により援用する。「規則」は、以下のようにまとめることができる：Ｙの＋５～－５位以内にあるＥまたはＤを有するＹ残基、及びＹの位置－１が中性である、または酸性荷電アミノ酸である。しかし、塩基性アミノ酸、例えば、硫酸化を破棄するＲ、Ｋ、またはＨではない）。いかなる理論にも拘束されるものではないが、ｈＩＤＳでのこの部位の硫酸化は、酵素の安定性、及び基質に対する結合親和性を改善し得る。ヒトＣＮＳ細胞でのロバストな翻訳後プロセスであるｈＩＤＳのチロシン硫酸化は、導入遺伝子産物のプロセシング及び活性を改善するであろう。リソソームタンパク質のチロシン硫酸化の重要性は解明されていないが、他のタンパク質では、タンパク質間相互作用（抗体と受容体）の親和性を高め、タンパク質分解プロセシング（ペプチドホルモン）を促進することが示されている。（Ｍｏｏｒｅ，２００３，Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：２４２４３－４６；及び、Ｂｕｎｄｅｇａａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｔｈｅ ＥＭＢＯ Ｊ １４：３０７３－７９を参照されたい）。チロシン硫酸化（ＩＤＳプロセシングの最終ステップになり得る）に関与するチロシルタンパク質スルホトランスフェラーゼ（ＴＰＳＴ１）は、脳内で（ｍＲＮＡに基づいて）さらに高レベルで発現している（ＴＰＳＴ１の遺伝子発現データは、例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｇｘａ／ｈｏｍｅでアクセス可能である、ＥＭＢＬ－ＥＢＩ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｔｌａｓに認められ得る）。このような翻訳後修飾は、よくても、ＣＨＯ細胞産物において十分に表されていない。ヒトＣＮＳ細胞とは異なり、ＣＨＯ細胞は、分泌細胞ではなく、また、翻訳後チロシン硫酸化の能力も限られている。（例えば、Ｍｉｋｋｅｌｓｅｎ ＆ Ｅｚｂａｎ，１９９１，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３０：１５３３－１５３７，特に、ｐ．１５３７のｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎを参照されたい）。
（ｉ）ＣＮＳの神経細胞及びグリア細胞は、ＣＮＳでの堅牢なプロセスである、グリコシル化、及びマンノース－６－リン酸化、及びチロシン－Ｏ－硫酸化を含む分泌タンパク質の翻訳後プロセシングのための細胞機構を有する分泌細胞である。例えば、ヒト脳マンノース－６－リン酸グリコプロテオームについて記載をしており、脳が、他の組織で認められるよりもはるかに多くの個々のアイソフォームを有するより多くのタンパク質と、マンノース－６－リン酸化タンパク質を含むことを注記した、Ｓｌｅａｔ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ５：１５２０－１５３２、及びＳｌｅａｔ １９９６，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７１：１９１９１－９８、及び、神経細胞が分泌するチロシン硫酸化糖タンパク質の産生について報告しているＫａｎａｎ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｅｘｐ．Ｅｙｅ Ｒｅｓ．８９：５５９－５６７、及びＫａｎａｎ＆Ａｌ－Ｕｂａｉｄｉ，２０１５，Ｅｘｐ．Ｅｙｅ Ｒｅｓ．１３３：１２６－１３１を参照されたい。ヒトＣＮＳ細胞がもたらす翻訳後修飾について、それぞれの全内容を、参照により援用する。
（ｉｉ）ヒトの脳は、天然型／ネイティブＩＤＳの複数のアイソフォームを生成する。特に、ヒト脳マンノース－６－リン酸化糖タンパク質のＮ末端配列決定で、ｈＩＤＳの成熟した４２ｋＤａ鎖のＮ末端配列が、次のように、脳内で位置３４または３６から変化することが明らかになった：Ｔ３４ＤＡＬＮＶＬＬＩ及びＡ３６ＬＮＶＬＬＩＩＶ。（Ｓｌｅａｔ，２００５，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ５：１５２０－１５３２，Ｔａｂｌｅ Ｓ２）。８つのＮ結合型グリコシル化部位のうちの２つ、すなわち、Ｎ２８０及びＮ１１６は、ヒト脳から得たＩＤＳにおいてマンノース－６－リン酸化されていることが判明した。（Ｓｌｅａｔ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｍｏｌ ＆ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｅｏｍｉｃｓ ５．４：６８６－７０１，Ｔａｂｌｅ Ｖで報告している）。
（ｉｉｉ）ｈＩＤＳのプロセシングの間に、神経細胞及びグリア細胞が、７６ｋＤａ及び９０ｋＤａの２つのポリペプチドを分泌するが、９０ｋＤａのポリペプチドだけが、マンノース－６－リン酸化を受けており、このものは、分泌した形態の酵素が、横断修正を達成する上で必要である。（Ｍｉｌｌａｔ，１９９７、形質導入したリンパ芽球様細胞に関する図１の結果、及びＦｒｏｉｓｓａｒｔ １９９５、形質導入した線維芽細胞に関する同様の結果を示す図４－培養培地では、９０ｋＤａ形態だけがリン酸化する）。興味深いことに、神経細胞及びグリア細胞が産生する組換えＩＤＳは、腎臓などのその他の細胞が産生する組換えＩＤＳよりも、レシピエントＣＮＳ細胞の方が貪欲にエンドサイトーシスし得ることを実証している。Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２（Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ １５８８（３）：２０３－９）は、４５ｋＤａ成熟活性型に対する前駆体を適切にプロセシングした非形質導入の神経細胞及びグリア細胞のレシピエント集団による、形質導入した神経細胞及びグリア細胞培養物の馴化培地由来の組換えＩＤＳのＭ６Ｐ受容体媒介エンドサイトーシスを実証した。神経細胞及びグリア細胞株が産生する組換えＩＤＳの取り込み（７４％のエンドサイトーシス）は、腎臓細胞株が産生する酵素の取り込み（５．６％のエンドサイトーシス）をはるかに上回っていた。いずれの事例でも、取り込みはＭ６Ｐによって阻害されており、このことは、組換えＩＤＳの取り込みが、Ｍ６Ｐ受容体が媒介していることを示す。（Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２，表２及び４を参照されたい、また、ｐｐ．２０５－２０６での結果に関連する説明を、以下の表１にまとめる）。
（ｖ）インビボでの細胞外でのＩＤＳの有効性は、Ｍ６Ｐと、その活性部位ホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）、すなわち、ホルミルグリシン生成酵素による翻訳後修飾によってＣ８４から変換された、ＦＧｌｙとを介した取り込み（細胞、及びリソソームの内在化）に依存している。上記表１に示したように、脳細胞（神経細胞及びグリア細胞）は、形質導入した神経細胞及びグリア細胞が分泌するＩＤＳ前駆体培地とインキュベーションすると、遺伝子操作した腎臓細胞が分泌するＩＤＳ前駆体培地とインキュベーションした場合よりも高い酵素活性を示す。結果として生じる活性の５倍もの高まりは、ＩＤＳの効率的な取り込みに依るところが大きい（Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２、表２及び４を参照されたい）。ＣＨＯ細胞またはＨＴ－１０８０細胞が生成するＩＤＳの市販品でのＦＧｌｙ含量は、約５０％～７０％であり、これが、酵素活性を決定する。しかしながら、神経細胞及びグリア細胞は、ＩＤＳ取り込みが改善されるので、この活性を改善し得る。
（ｖｉ）ＩＤＳなどのリソソームタンパク質の細胞性及び細胞内輸送／取り込みは、Ｍ６Ｐを介する。Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２、及びＳｌｅａｔ，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ，２００５で報告されているように、脳細胞由来のＩＤＳは、Ｍ６Ｐをより高含有量で含み得る（ヒトの脳が、その他の組織よりも多くの（定量的及び定性的意味で）Ｍａｎ６－Ｐ糖タンパク質を含むことを示す）。ＩＤＳ前駆体のＭ６Ｐ含有量を測定することは、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２で行われているように可能である。阻害性Ｍ６Ｐ（例えば、５ｍＭ）の存在下では、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２の遺伝子操作した腎臓細胞などの非神経細胞または非グリア細胞が生成するＩＤＳ前駆体の取り込みは、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２に示したように、コントロール細胞のそれに近いレベルにまで低下すると予測される。阻害性Ｍ６Ｐの存在下では、神経細胞やグリア細胞などの脳細胞が生成したＩＤＳ前駆体の取り込みは、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２で示されたように、高レベルでとどまるものと予測され、その取り込みはコントロール細胞よりも４倍多く、また、阻害性Ｍ６Ｐが無いままに遺伝子操作した腎臓細胞が生成したＩＤＳ前駆体のＩＤＳ活性（または、取り込み）のレベルに匹敵する。このアッセイにより、脳細胞が生成したＩＤＳ前駆体でのＭ６Ｐ含量を予測する方法、及び、特に、異なるタイプの細胞が生成するＩＤＳ前駆体でのＭ６Ｐ含量を比較することができる。本明細書に記載する遺伝子治療手法は、結果として、このようなアッセイにおいて、阻害性Ｍ６Ｐの存在下で、高レベルで神経細胞及びグリア細胞に取り込まれ得るｈＩＤＳ前駆体を継続的に分泌する。
（ｖｉｉ）ＩＤＳ前駆体のＭ６Ｐ含量及び取り込みは、９０ｋＤａ及び７６ｋＤａのゲルバンド（例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルバンド）で実証し得る。この９０ｋＤａは、高度にグリコシル化／リン酸化しており、また、Ｍ６Ｐを含むと報告されているが、７６ｋＤａではそうではない。遺伝子操作した腎臓細胞から生成したＩＤＳ前駆体のゲルバンド（Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２、図１）と同様に、７６ｋＤａ～９５ｋＤａの範囲、及び８０～８５ｋＤａの平均分子量を有する非常に広範なゲルバンドは、脳細胞から生成したＩＤＳ前駆体のゲルバンドと対比され得る。Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２では、ＩＤＳ前駆体の免疫沈降が失敗に終わったので、ゲルバンドを得ることができない。本明細書に記載する遺伝子治療手法は、遺伝子操作された腎臓細胞から生成されるＩＤＳ前駆体ゲルバンドとは異なるｈＩＤＳ前駆体の継続的な分泌をもたらすであろう。
（ｖｉｉｉ）市販のＩＤＳ前駆体のＭ６Ｐ含量は、２～２．５ｍｏｌ／ｍｏｌであり、その大部分はジ－リン酸化グリカンの形態で存在する。平均的には、すべてのＩＤＳ前駆体がリン酸化しているが、グリカンの正規分布は、複数のリン酸化部位を仮定して、２つ、１つ、及び０個のジ－リン酸化Ｍ６Ｐグリカンを有する一部のＩＤＳ前駆体を有する。取り込み速度は、複数回のリン酸化では大幅に高くなるであろう。
（ｉｘ）ＣＮＳのヒト細胞によるｈＩＤＳのグリコシル化により、安定性、半減期を向上させ、かつ導入遺伝子産物の望ましくない凝集を減らすことができるグリカンが付加される。重要なことに、本発明のｈＩＤＳに付加されるグリカンは２，６－シアル酸を含み、Ｎｅｕ５Ａｃ（「ＮＡＮＡ」）を組み込むが、そのヒドロキシル化誘導体であるＮｅｕＧｃ（Ｎ－グリコリルノイラミン酸、すなわち「ＮＧＮＡ」または「Ｎｅｕ５Ｇｃ」）を組み込まない。そのようなグリカンは、ＣＨＯ細胞で作成されるＨｕｎｔｅｒａｓｅ（登録商標）などの組換えＩＤＳ産物には存在しない。これはすなわち、ＣＨＯ細胞が、この翻訳後修飾を行う上で必要とする２，６－シアリルトランスフェラーゼを有さず、バイセクティングＧｌｃＮＡｃも産生しないが、Ｎｅｕ５Ａｃ（ＮＡＮＡ）の代わりにヒトにとって一般的でない（かつ潜在的に免疫原性の）シアル酸としてＮｅｕ５Ｇｃ（ＮＧＮＡ）を付加していることによる。例えば、Ｄｕｍｏｎｔ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ ３６（６）：１１１０－１１２２（Ｅａｒｌｙ Ｏｎｌｉｎｅ ｐｐ．１－１３、ｐ．５）、及びＨａｇｕｅ ｅｔ ａｌ．，１９９８ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒ １９：２６１２－２６３０（「ＣＨＯ細胞株は、α２，６－シアリルトランスフェラーゼの欠如のため、グリコシル化に関して『表現形上制限される』と考えられている」）を参照されたい。さらに、ＣＨＯ細胞は大部分の個体に存在する抗α－Ｇａｌ抗体と反応して、高濃度でアナフィラキシーを誘発し得る免疫原性グリカンである、α－Ｇａｌ抗原も生産し得る。例えば、Ｂｏｓｑｕｅｓ，２０１０，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ ２８：１１５３－１１５６を参照されたい。本発明のｈＩＤＳのヒトグリコシル化パターンは、導入遺伝子産物の免疫原性を低下させ、かつ効力を向上させるであろう。
（ｘ）導入遺伝子産物の免疫原性は、患者の免疫状態、注入したタンパク質薬物の構造及び特徴、投与経路、ならびに治療の持続時間を含む様々な因子によって誘導され得る。プロセス関連不純物、例えば、宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）、宿主細胞ＤＮＡ、及び化学的残留物、ならびに産物関連不純物、例えば、タンパク質分解物及び構造特性、例えば、グリコシル化、酸化、及び凝集（肉眼不可視粒子）が免疫反応を増強するアジュバントとしての機能を果たすことで免疫原性を増加させる場合がある。プロセス関連及び産物関連不純物の量は、製造プロセス、すなわち商業生産するＩＤＳ産物に影響を及ぼし得る細胞培養、精製、製剤、保存、及び取扱いの影響を受け得る。遺伝子治療では、タンパク質はインビボで生産され、その結果、プロセス関連不純物は存在せず、タンパク質産物は組換え技術によって生産するタンパク質と関連した生産物関連不純物／分解物、例えば、タンパク質凝集物及びタンパク質酸化物を含む可能性は低い。凝集は、例えば、タンパク質生産及び貯蔵と関連付けられ、高いタンパク質濃度、製造装置及び容器との表面相互作用、ならびにある特定の緩衝液システムを用いた精製プロセスに起因する。しかし、導入遺伝子をインビボで発現させる場合、凝集を促進するこれらの条件は存在しない。また、酸化、例えば、メチオニン、トリプトファン、及びヒスチジンの酸化は、タンパク質生産及び貯蔵と関連付けられ、例えば、ストレス負荷した細胞培養条件、金属及び空気との接触、ならびに緩衝液及び賦形剤での不純物によって引き起こす。インビボで発現するタンパク質は、ストレス負荷条件下で酸化し得るが、ヒトは多くの生物と同様に、抗酸化防御システムを備えており、それにより酸化ストレスが低下するだけでなく、酸化を修復、及び／または逆行させもする。したがって、インビボで生産されるタンパク質が、酸化形態にある可能性は低い。凝集及び酸化は両方とも、効力、ＰＫ（クリアランス）に影響を及ぼし得、免疫原となる懸念を増大させ得る。本明細書に記載する遺伝子治療手法は、商業生産した産物と比較して免疫原性の低下したｈＩＤＳ前駆体の継続的分泌をもたらすであろう。
（ｘｉ）Ｎ結合型グリコシル化部位に加えて、ｈＩＤＳは、チロシン（「Ｙ」）硫酸化部位（ＰＳＳＥＫＹ１６５ＥＮＴＫＴＣＲＧＰＤ）を含む。（例えば、Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０：２１３８－２１６４、特に、ｐ．２１５４を参照されたい、この文献は、タンパク質チロシン硫酸化に供するチロシン残基を取り囲むアミノ酸の分析に関して、その全内容を、参照により援用する。「規則」は、以下のようにまとめることができる：Ｙの＋５～－５位以内にあるＥまたはＤを有するＹ残基、及びＹの位置－１が中性である、または酸性荷電アミノ酸である。しかし、塩基性アミノ酸、例えば、硫酸化を破棄するＲ、Ｋ、またはＨではない）。いかなる理論にも拘束されるものではないが、ｈＩＤＳでのこの部位の硫酸化は、酵素の安定性、及び基質に対する結合親和性を改善し得る。ヒトＣＮＳ細胞でのロバストな翻訳後プロセスであるｈＩＤＳのチロシン硫酸化は、導入遺伝子産物のプロセシング及び活性を改善するであろう。リソソームタンパク質のチロシン硫酸化の重要性は解明されていないが、他のタンパク質では、タンパク質間相互作用（抗体と受容体）の親和性を高め、タンパク質分解プロセシング（ペプチドホルモン）を促進することが示されている。（Ｍｏｏｒｅ，２００３，Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：２４２４３－４６；及び、Ｂｕｎｄｅｇａａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｔｈｅ ＥＭＢＯ Ｊ １４：３０７３－７９を参照されたい）。チロシン硫酸化（ＩＤＳプロセシングの最終ステップになり得る）に関与するチロシルタンパク質スルホトランスフェラーゼ（ＴＰＳＴ１）は、脳内で（ｍＲＮＡに基づいて）さらに高レベルで発現している（ＴＰＳＴ１の遺伝子発現データは、例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｇｘａ／ｈｏｍｅでアクセス可能である、ＥＭＢＬ－ＥＢＩ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｔｌａｓに認められ得る）。このような翻訳後修飾は、よくても、ＣＨＯ細胞産物において十分に表されていない。ヒトＣＮＳ細胞とは異なり、ＣＨＯ細胞は、分泌細胞ではなく、また、翻訳後チロシン硫酸化の能力も限られている。（例えば、Ｍｉｋｋｅｌｓｅｎ ＆ Ｅｚｂａｎ，１９９１，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３０：１５３３－１５３７，特に、ｐ．１５３７のｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎを参照されたい）。
上記した理由のために、ヒト神経細胞及び／またはヒトグリア細胞によるｒｈＩＤＳの生産は、例えば、ＭＰＳ ＩＩ疾患（ハンターを含むが、これらに限定されない）と診断されている患者（ヒト対象）のＣＳＦにｒｈＩＤＳをコードするウイルスベクターまたは他のＤＮＡ発現コンストラクトを投与して、形質導入したＣＮＳ細胞が分泌する完全ヒトグリコシル化、マンノース－６－リン酸化、硫酸化導入遺伝子産物を継続的に供給する、ＣＮＳでの永続的なデポーを作成することによる、遺伝子治療によって達成するＭＰＳ ＩＩの治療のための「バイオベター」分子をもたらすであろう。デポーからＣＳＦ中に分泌されるｈＩＤＳ導入遺伝子産物は、ＣＮＳでの細胞によりエンドサイトーシスされ、ＭＰＳ ＩＩレシピエント細胞での酵素欠陥を「横断修正」する。
遺伝子治療またはタンパク質治療手法において生産されるすべてのｒｈＩＤＳ分子が完全にグリコシル化され、リン酸化され、及び硫酸化されることは、必須ではない。むしろ、生産される糖タンパク質の集団は、有効性を示すのに十分なグリコシル化（２，６－シアル酸付加及びマンノース－６－リン酸化を含む）及び硫酸化を受けるべきである。本発明の遺伝子治療処置の目的は、疾患の進行を遅延させ、または停止させることである。有効性は、認知機能（例えば、神経認知機能の低下の防止または減少）；ＣＳＦ及び／または血清の疾患バイオマーカー（例えば、ＧＡＧ）の低下；及び／または、ＣＳＦ及び／または血清のＩＤＳ酵素活性の増加を測定することでモニタリングすることができる。炎症の徴候及びその他の安全事象をモニタリングすることもできる。
遺伝子治療に対する代替治療または追加治療として、ｒｈＩＤＳ糖タンパク質は、組換えＤＮＡ技術によってヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生することができ、また、糖タンパク質は、ＥＲＴのために、全身的に、及び／またはＣＳＦに、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けた患者に投与することができる）。そのような組換え糖タンパク質生産のために使用することができるヒト細胞株として、ＨＴ－２２、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＨＣＮ－１Ａ、ＨＣＮ－２、ＮＴ２、ＳＨ－ＳＹ５ｙ、ｈＮＳＣ１１、またはＲｅＮｃｅｌｌ ＶＭがあるが、これらに限定されない（例えば、全内容を、参照により、本明細書で援用する、ｒＨｕＧｌｙＩＤＳ糖タンパク質の組換え生産のために使用することができるヒト細胞株の総説に関するＤｕｍｏｎｔ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ ３６（６）：１１１０－１１２２の「Ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ：ｈｉｓｔｏｒｙ，ｓｔａｔｕｓ，ａｎｄ ｆｕｔｕｒｅ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ」を参照されたい）。完全なグリコシル化、特に、シアル化、及びチロシン硫酸化を保証するために、生産に使用する細胞株を、チロシン－Ｏ－硫酸化を担うα－２，６－シアリルトランスフェラーゼ（または、α－２，３－及びα－２，６－シアリルトランスフェラーゼの両方）、及び／またはＴＰＳＴ－１及びＴＰＳＴ－２酵素を共発現するように宿主細胞を遺伝子操作して強化することができる。
ｒｈＩＤＳの送達が、免疫反応を最小化するであろう一方で、ＣＮＳ関連遺伝子治療に関する最も明白な潜在的毒性源は、遺伝的にＩＤＳを欠損しており、したがって、タンパク質及び／または導入遺伝子を送達するために用いるベクターを寛容しない可能性のあるヒト対象において、発現したｒｈＩＤＳタンパク質に対する免疫を生じることである。
したがって、好ましい実施形態では、患者を免疫抑制治療で共治療することは、特に、ＩＤＳのレベルがゼロに近い重度の疾患を有する患者を治療する場合には適切である。タクロリムスまたはラパマイシン（シロリムス）とミコフェノール酸との組み合わせ、または組織移植手順において使用される他の免疫抑制レジメンが関係する免疫抑制治療を利用することができる。そのような免疫抑制治療は、遺伝子治療の過程で投与され得、ある特定の実施形態では、免疫抑制治療による前処置が好ましい場合がある。免疫抑制治療は、主治医の判断に基づいて、遺伝子治療処置の後も継続することができ、その後、免疫寛容が誘発した場合に、例えば、１８０日後に中止され得る。
他の利用可能な治療の送達を伴う、ＣＳＦに対するｒｈＩＤＳの送達との組み合わせが、本発明の方法に含まれる。さらなる治療を、遺伝子治療処置の前に、それと同時に、またはその後に実施することができる。本発明の遺伝子治療と併用することができ得るＭＰＳ ＩＩのために利用可能な治療として、Ｅｌａｐｒａｓｅ（登録商標）を全身的に、またはＣＳＦに対して投与する酵素補充療法、及び／または、ＨＳＣＴ療法があるが、これらに限定されない。
一態様では、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けたヒト対象の治療方法を提供し、当該方法は、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生した治療有効量のグリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体を、ヒト対象のＣＳＦに送達することを含み、当該グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体は、ヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを投与することにより送達され、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与され、脳質量は、ヒト対象の脳の脳ＭＲＩで決定される。
別の態様では、本明細書ではＭＰＳ ＩＩの診断を受けたヒト対象の治療方法を提供し、当該方法は、（ａ）ヒト対象のＣＳＦに対して、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生したグリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体の治療有効量を送達すること、（ｂ）ヒト対象のＣＳＦ中のヘパラン硫酸のレベルを測定すること、及び（ｃ）ヒト対象のＣＳＦ中のヘパラン硫酸のレベルを、参照集団でのヘパラン硫酸のレベルと比較することを、この順序で含み、グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体はヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターの投与によって送達され、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与され、脳質量は、ヒト対象の脳の脳磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）で決定される。ある特定の実施形態では、参照集団は、（ａ）少なくとも１、２、３、４、５、１０、２５、５０、７５、１００、２００、２５０、３００、４００、５００、または１０００名のＭＰＳ ＩＩではない健常者からなり、好ましくは、当該ヒト対象と同様の年齢、体重、及び／または同じ性別の健常者からなる。
別の態様では、本明細書ではＭＰＳ ＩＩの診断を受けたヒト対象の治療方法を提供し、当該方法は、（ａ）ヒト対象のＣＳＦ中のヘパラン硫酸のレベルの第１の測定を行うこと、（ｂ）ヒト対象のＣＳＦに対して、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生されたグリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体の治療有効量を送達すること、及び（ｃ）一定期間の後に、ヘパラン硫酸のレベルの第２の測定を行うことを、この順序で含み、グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体は、ヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターの投与によって送達され、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与され、脳質量は、ヒト対象の脳の脳磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）で決定される。ある特定の実施形態では、期間は、約１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、４週間、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、１１ヶ月、または１年である。
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、ヒト対象のＣＮＳでの細胞のリソソームに送達される。
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、ヒト対象の脳質量は、ヒト対象の脳体積に１．０４６ｇ／ｃｍ３の係数を乗じることにより、ヒト対象の脳体積ｃｍ３から変換され、ヒト対象の脳体積は、ヒト対象の脳ＭＲＩにより決定される。
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣ、またはＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの用量で投与される。本明細書に記載した治療方法のある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約２．０×１０１１ＧＣの用量で投与される。本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、ＭＲＩで決定した、約１．９×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の用量で投与する。本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、ＭＲＩで決定した、約９．６×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の用量で投与する。本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、約２．０×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量の用量で投与する（例えば、脳質量は、ＭＲＩで決定し、及び、ゲノム数は、ポリＡ特異的ＰＣＲアッセイで決定する）。本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、ＭＲＩで決定した、約２．９×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量の用量で投与する。本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、約２．９×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量の用量で投与する（例えば、脳質量は、ＭＲＩで決定し、及び、ゲノム数は、導入遺伝子特異的ＰＣＲアッセイで決定する）。本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、約１．３×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の用量で投与する（例えば、脳質量は、ＭＲＩで決定し、及び、ゲノム数は、ポリＡ特異的ＰＣＲアッセイで決定する）。本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、約１．９×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の用量で投与する（例えば、脳質量は、ＭＲＩで決定し、及び、ゲノム数は、導入遺伝子特異的ＰＣＲアッセイで決定する）。本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、約６．５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の用量で投与する（例えば、脳質量は、ＭＲＩで決定し、及び、ゲノム数は、ポリＡ特異的ＰＣＲアッセイで決定する）。本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、約９．６×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の用量で投与する（例えば、脳質量は、ＭＲＩで決定し、及び、ゲノム数は、導入遺伝子特異的ＰＣＲアッセイで決定する）。
本明細書に記載する治療方法の様々な実施形態では、ヒト対象は、５歳以上かつ１８歳未満である。特定の実施形態では、ヒト対象は、５歳、６歳、７歳、８歳、９歳、１０歳、１１歳、１２歳、１３歳、１４歳、１５歳、１６歳、１７歳、または１８歳である。特定の実施形態では、ヒト対象は、約５歳、６歳、７歳、８歳、９歳、１０歳、１１歳、１２歳、１３歳、１４歳、１５歳、１６歳、１７歳、または１８歳である。特定の実施形態では、ヒト対象は、５～６歳、６～７歳、７～８歳、８～９歳、９～１０歳、１０～１１歳、１１～１２歳、１２～１３歳、１３～１４歳、１４～１５歳、１５～１６歳、１６～１７歳、１７～１８歳、または１８～１９歳である。特定の実施形態では、ヒト対象は、約５～６歳、６～７歳、７～８歳、８～９歳、９～１０歳、１０～１１歳、１１～１２歳、１２～１３歳、１３～１４歳、１４～１５歳、１５～１６歳、１６～１７歳、１７～１８歳、または１８～１９歳である。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの用量で投与される。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、表７に記載した用量で投与される。
本明細書に記載する治療方法の様々な実施形態では、ヒト対象は、４ヶ月齢以上かつ５歳未満である。特定の実施形態では、ヒト対象は、４、５、６、７、８、９、１０、または１１ヶ月齢である。特定の実施形態では、ヒト対象は、約４、５、６、７、８、９、１０、または１１ヶ月齢である。特定の実施形態では、ヒト対象は、４～５、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０、１０～１１、または１１～１２ヶ月齢である。特定の実施形態では、ヒト対象は、約４～５、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０、１０～１１、または１１～１２ヶ月齢である。特定の実施形態では、ヒト対象は、１歳、２歳、３歳、４歳、または５歳である。特定の実施形態では、ヒト対象は、約１歳、２歳、３歳、４歳、または５歳である。特定の実施形態では、ヒト対象は、１～２歳、２～３歳、３～４歳、４～５歳、または５～６歳である。特定の実施形態では、ヒト対象は、約１～２歳、２～３歳、３～４歳、４～５歳、または５～６歳である。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣの用量で投与される。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの用量で投与される。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約１．９×１０１０ＧＣの用量で投与される。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、ＭＲＩで決定した、約９．６×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の用量で投与する。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、ＭＲＩで決定した、約２．０×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量の用量で投与する。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、ＭＲＩで決定した、約２．９×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量の用量で投与する。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、ＭＲＩで決定した、約２．０×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量の用量で投与する（例えば、脳質量は、ＭＲＩで決定し、及び、ゲノム数は、ポリＡ特異的ＰＣＲアッセイで決定する）。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、ＭＲＩで決定した、約２．９×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量の用量で投与する（例えば、脳質量は、ＭＲＩで決定し、及び、ゲノム数は、導入遺伝子特異的ＰＣＲアッセイで決定する）。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、ＭＲＩで決定した、約１．３×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の用量で投与する（例えば、脳質量は、ＭＲＩで決定し、及び、ゲノム数は、ポリＡ特異的ＰＣＲアッセイで決定する）。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、ＭＲＩで決定した、約１．９×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の用量で投与する（例えば、脳質量は、ＭＲＩで決定し、及び、ゲノム数は、導入遺伝子特異的ＰＣＲアッセイで決定する）。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、ＭＲＩで決定した、約６．５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の用量で投与する（例えば、脳質量は、ＭＲＩで決定し、及び、ゲノム数は、ポリＡ特異的ＰＣＲアッセイで決定する）。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、ＭＲＩで決定した、約９．６×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の用量で投与する（例えば、脳質量は、ＭＲＩで決定し、及び、ゲノム数は、導入遺伝子特異的ＰＣＲアッセイで決定する）。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、表５に従って用量１または用量２から選択される用量で投与される。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、表６に記載した用量で投与される。
本明細書に記載する治療方法の一部の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、大槽内（ＩＣ）投与を介して投与される。本明細書に記載する方法の他の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、脳室内（ＩＣＶ）投与を介して投与される。
本明細書に記載する方法のある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ヒト対象の脳脊髄液の総体積の１０％を超えない体積で投与される。
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体は、検出可能なレベルで分泌される。
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞は、ヒトＩＤＳ前駆体をコードする内因性遺伝子に少なくとも１つの変異を有する。
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞は、組換えアデノ随伴ウイルスベクター（ｒＡＡＶ）で形質導入される。
好ましい態様では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＡＡＶ９またはＡＡＶｒｈ１０ベクターである。
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体は、ＣＢ７プロモーターの制御下で発現される。
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体は、ヒトＩＤＳ前駆体をコードするｃＤＮＡから発現される。
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体は、ポリアクリルアミドゲル電気泳動で測定して約９０ｋＤａのものである。
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体は、ホルミルグリシンを含有する。
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体は、（ａ）α２，６－シアル化を受けている、（ｂ）検出可能なＮｅｕＧｃを含まない、（ｃ）検出可能なα－Ｇａｌ抗原を含まない、（ｄ）チロシン硫酸化を含む、及び／または（ｅ）マンノース－６－リン酸化を受けている。
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む。
本明細書で提供するある特定の実施形態では、当該方法は、ヒトＩＤＳ前駆体治療の前に、または同時に免疫抑制療法をヒト対象に対して実施し、任意に、その後も免疫抑制療法を継続する、ことをさらに含む。
一部の実施形態では、免疫抑制療法は、１つ以上のコルチコステロイド、シロリムス、及び／またはタクロリムスを投与することを含む。特定の実施形態では、１つ以上のコルチコステロイドは、メチルプレドニゾロン、及び／またはプレドニゾンである。
一部の実施形態では、当該方法は、免疫抑制療法の前に、または同時に、１つ以上の抗生物質をヒト対象に対して投与することをさらに含む。特定の実施形態では、１つ以上の抗生物質は、トリメトプリム、スルファメトキサゾール、ペンタミジン、ダプソン、及び／またはアトバコンである。
一部の実施形態では、当該方法は、免疫抑制療法の前に、または同時に、１つ以上の抗真菌療法をヒト対象に対して実施することをさらに含む。
一部の実施形態では、当該方法は、組換えヌクレオチド発現ベクターを投与した後に、次のバイオマーカーの１つ以上を測定するステップをさらに含む：（ａ）ＣＳＦ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）のレベル、（ｂ）ＣＳＦ中のイズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）のレベル、（ｃ）血漿中のＧＡＧのレベル；（ｄ）血漿中のＩ２Ｓのレベル、（ｅ）白血球Ｉ２Ｓ酵素活性のレベル、及び（ｆ）尿中のＧＡＧのレベル。特定の実施形態では、ＣＳＦ内のＧＡＧは、ＣＳＦ内のヘパリン硫酸を含む。別の特定の実施形態では、ＣＳＦ内のＧＡＧは、ＣＳＦ内のヘパリン硫酸である。別の特定の実施形態では、血漿内のＧＡＧは、血漿内のヘパリン硫酸を含む。別の特定の実施形態では、血漿内のＧＡＧは、血漿内のヘパリン硫酸である。別の特定の実施形態では、尿内のＧＡＧは、尿内のヘパリン硫酸を含む。別の特定の実施形態では、尿内のＧＡＧは、尿内のヘパリン硫酸である。特定の実施形態では、測定するステップは、ＣＳＦ中のヘパリン硫酸のレベルを測定することを含む。別の特定の実施形態では、測定するステップは、白血球Ｉ２Ｓ酵素活性のレベルを測定することを含む。
別の態様では、本明細書では、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けたヒト対象を治療する方法を提供しており、（ａ）ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶの治療有効量をヒト対象に対して投与することであって、ヒト対象は、ＥＲＴでの治療を受けた、またはＥＲＴでの治療を受けている、投与すること；及び、（ｂ）ヒト対象由来の生物学的試料の少なくとも１つのバイオマーカーのレベルが基準よりも低い場合、ヒト対象でのＥＲＴ治療を中止することを含み、ここで、生物学的試料は、投与後にヒト対象から得たものであり、かつ、少なくとも１つのバイオマーカーは、Ｄ２Ｓ６、ＨＳ、及び／または総ＧＡＧ（例えば、尿中で測定したもの）を含む。一部の実施形態では、少なくとも１つのバイオマーカーは、ＥＲＴを中止する前の基準よりも、約または少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％低い。一部の実施形態では、ＥＲＴは組換えイデュルスルファーゼである。一部の実施形態では、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けた対象は、肝脾腫大症を有する。
別の態様では、本明細書では、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けたヒト対象を治療する方法を提供しており、（ａ）ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶの治療有効量を、ヒト対象に対して投与することであって、ヒト対象は、ＥＲＴでの治療を受けた、またはＥＲＴでの治療を受けている、投与すること；及び（ｂ）ヒト対象由来の生物学的試料の少なくとも１つのバイオマーカーのレベルが基準よりも高い場合に、ヒト対象でのＥＲＴ治療を中止することを含み、ここで、生物学的試料は、投与前にヒト対象から得たものであり、かつ、少なくとも１つのバイオマーカーは、抗ＩＤＳ抗体である。一部の実施形態では、少なくとも１つのバイオマーカーは、ＥＲＴを中止する前の基準よりも約または少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１５０％、２５０％、５００％、７５０％、または１０００％よりも高い。一部の実施形態では、ＥＲＴは組換えイデュルスルファーゼである。一部の実施形態では、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けた対象は、肝脾腫大症を有する。
一部の実施形態では、基準は、ヒト対象に対してｒＡＡＶを投与する前にヒト対象から得た生物学的試料での少なくとも１つのバイオマーカーのレベルである。一部の実施形態では、基準は、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けたが、ＥＲＴを受けていない対象から得た生物学的試料での少なくとも１つのバイオマーカーのレベルである。一部の実施形態では、基準は、所定の値である。一部の実施形態では、ＥＲＴ治療は、ｒＡＡＶをヒト対象に投与して５２週間後に中止する。一部の実施形態では、生物学的試料は、ＣＳＦ、尿、血漿、または血清である。
別の態様では、本明細書では、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けたヒト対象を治療する方法を提供しており、（ａ）ヒト対象でのＥＲＴ治療を中止することであって、ヒト対象はＥＲＴでの治療を受けた、またはＥＲＴで治療している、中止すること、及び（ｂ）ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶの治療有効量をヒト対象に投与することを含み、ここで、投与は、ヒト対象でのＥＲＴ治療を中止した後に行う。一部の実施形態では、ＥＲＴ治療は、ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶを、ヒト対象に対して投与する約または少なくとも約１年、６ヶ月、５ヶ月、４ヶ月、３ヶ月、２ヶ月、１ヶ月、３週間、２週間、１週間、１０日、５日、または１日前に中止する。一部の実施形態では、少なくとも１つのバイオマーカーのレベルが、ヒト対象由来の生物学的試料で検出されない場合は、ＥＲＴ治療を中止する。一部の実施形態では、少なくとも１つのバイオマーカーは、抗ＡＡＶ抗体である。一部の実施形態では、抗ＡＡＶ抗体は、抗ＡＡＶ９抗体である。一部の実施形態では、生物学的試料は、血清である。一部の実施形態では、ヒト対象は肝脾腫大症を有する。一部の実施形態では、ＥＲＴは、組換えイデュルスルファーゼによる酵素補充療法である。
別の態様では、本明細書では、ヒト対象でのＭＰＳ ＩＩ治療の有効性を決定する、または有効性をモニタリングする方法を提供しており、ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶの治療有効量を、ヒト対象に対して投与することを含み、また、基準と比較したヒト対象由来の生物学的試料でのＤ２Ｓ６のレベルの低下は、ヒト対象でのＭＰＳ ＩＩ治療の有効性を示し、また、生物学的試料は、投与ステップの約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０日後、または１、２、３、４、５、６、７、８、１０、１６、２０、２４、３０、３５、４０、４５、４８、５０、５２、５６、１０４週間後、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２ヶ月後、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０年後にヒト対象から得た。一部の実施形態では、ヒト対象は、ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶを、ヒト対象に対して投与する前にＥＲＴを使用した治療を受けた。一部の実施形態では、ヒト対象は、ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶを、ヒト対象に対して投与した後にＥＲＴ治療を受けた。一部の実施形態では、ＥＲＴは、組換えイデュルスルファーゼを使用した酵素補充療法である。一部の実施形態では、生物学的試料は、ＣＳＦである。一部の実施形態では、患者は、小児患者である。
一部の実施形態では、治療の有効性は、基準（例えば、投与ステップ前の同じ患者でのＤ２Ｓ６レベル）と比較して、約または少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％のＤ２Ｓ６のレベルの減少によって実証する。一部の実施形態では、ＭＰＳ ＩＩ治療の有効性は、基準と比較して、Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ， ３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ）の少なくとも１つのサブテストにおける改善である。一部の実施形態では、少なくとも１つのサブテストとは、年齢同等性スコア、認知発達指数（ＤＱ）、表現言語ＤＱ、受容言語ＤＱ、粗大運動ＤＱ、及び／または微細運動ＤＱである。一部の実施形態では、改善は、約または少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１５、１７、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、または１００超のＤＱの改善である。一部の実施形態では、年齢同等性スコアは、約または少なくとも約１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１８ヶ月、２４ヶ月、または２４ヶ月超増加する。一部の実施形態では、基準は、投与する前に得たＢＳＩＤ－ＩＩＩの少なくとも１つのサブテストのスコアである。一部の実施形態では、基準は、ヒト対象と同じ年齢のＭＰＳ ＩＩを有するヒト対象から得たＢＳＩＤ－ＩＩＩの少なくとも１つのサブテストの平均スコアである。一部の実施形態では、基準は、投与前にヒト対象から得た生物学的試料でのＤ２Ｓ６のレベルである。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶを、ヒト対象に対してくも膜下腔内投与する。一部の実施形態では、ｒＡＡＶは、（ａ）約８．７７ｇ／Ｌの濃度の塩化ナトリウム、（ｂ）約０．２４４ｇ／Ｌの濃度の塩化マグネシウム、（ｃ）約０．２２４ｇ／Ｌの濃度の塩化カリウム、（ｄ）約０．２０６ｇ／Ｌの濃度の塩化カルシウム、（ｅ）約０．７９３ｇ／Ｌの濃度のデキストロース、（ｆ）約０．００１％（体積／体積）の濃度のポロクサマー１８８、（ｇ）約０．０２７８ｇ／Ｌの濃度のリン酸一ナトリウム一水和物、及び、（ｈ）約０．１１４ｇ／Ｌの濃度の無水リン酸二ナトリウムを含む溶液を使用して、ヒト対象に投与する。
本明細書で提供する１つの態様は、対象での神経障害性ＭＰＳ ＩＩの有無を同定または診断する方法であり、この方法は、（ａ）対象由来の生物学的試料での１つ以上のヘパラン硫酸二糖のレベルを決定する、（ｂ）１つ以上のヘパラン硫酸二糖のレベルが、基準レベルと比較して上昇しておれば、対象は、神経障害性ＭＰＳ ＩＩを有すると同定または診断する、及び（ｃ）ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶの治療有効量を、神経障害性ＭＰＳ ＩＩを有すると同定または診断した対象に対して投与する、ことを含む。一部の実施形態では、１つ以上のヘパラン硫酸二糖は、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、Ｄ２Ｓ６の１つ以上、またはそれらの組み合わせを含む。一部の実施形態では、１つ以上のヘパラン硫酸二糖は、Ｄ２Ｓ６である。
本明細書で提供する１つの態様は、対象での神経障害性ＭＰＳ ＩＩの有無を同定または診断する方法であり、対象由来の生物学的試料でのＤ２Ｓ６のレベルが、基準レベルと比較して上昇しておれば、対象は、神経障害性ＭＰＳ ＩＩを有すると同定または診断し、ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶの治療有効量を、神経障害性ＭＰＳを有すると同定または診断した対象に対して投与する。
一部の実施形態では、生物学的試料は、脳脊髄液である。一部の実施形態では、対象は、発症前である、または可視または検出可能なＭＰＳ ＩＩ症状を有していない。一部の実施形態では、対象は、ＭＰＳ ＩＩを有する。一部の実施形態では、基準レベルは、１名以上の健常者及び／または１名以上の非神経障害対象由来の生物学的試料での少なくとも１つ以上のヘパラン硫酸二糖のレベルである。一部の実施形態では、基準レベルは、１名以上の健常者及び／または１名以上の非神経障害対象由来の生物学的試料でのＤ２Ｓ６のレベルである。一部の実施形態では、１名以上の健常者及び／または１名以上の非神経障害対象由来の生物学的試料は、ＣＳＦ試料である。一部の実施形態では、基準レベルは、所定のレベルである。一部の実施形態では、Ｄ２Ｓ６のレベルは、対象由来の生物学的試料での約または少なくとも約１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、または４０％超の総ヘパラン硫酸二糖（ＨＳ）である。一部の実施形態では、対象由来の生物学的試料での総ヘパラン硫酸二糖（ＨＳ）のＤ２Ｓ６のレベルは、約または少なくとも約２０％である。一部の実施形態では、対象由来の生物学的試料での１つ以上のヘパラン硫酸二糖のレベルまたはＤ２Ｓ６のレベルは、約または少なくとも約５０ｎｇ／ｍＬ、約７５ｎｇ／ｍＬ、８０ｎｇ／ｍＬ、８５ｎｇ／ｍＬ、９０ｎｇ／ｍＬ、９５ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ、１０５ｎｇ／ｍＬ、１１０ｎｇ／ｍＬ、１１５ｎｇ／ｍＬ、１２０ｎｇ／ｍＬ、１２５ｎｇ／ｍＬ、１３０ｎｇ／ｍＬ、１３５ｎｇ／ｍＬ、１４０ｎｇ／ｍＬ、１４５ｎｇ／ｍＬ、１５０ｎｇ／ｍＬ、１５５ｎｇ／ｍＬ、１６０ｎｇ／ｍＬ、１６５ｎｇ／ｍＬ、１７０ｎｇ／ｍＬ、１７５ｎｇ／ｍＬ、１８０ｎｇ／ｍＬ、１８５ｎｇ／ｍＬ、１９０ｎｇ／ｍＬ、１９５ｎｇ／ｍＬ、２００ｎｇ／ｍＬ、２１０ｎｇ／ｍＬ、２２０ｎｇ／ｍＬ、２３０ｎｇ／ｍＬ、２４０ｎｇ／ｍＬ、２５０ｎｇ／ｍＬ、２６０ｎｇ／ｍＬ、２７０ｎｇ／ｍＬ、２８０ｎｇ／ｍＬ、２９０ｎｇ／ｍＬ、３００ｎｇ／ｍＬ、３１０ｎｇ／ｍＬ、３２０ｎｇ／ｍＬ、３３０ｎｇ／ｍＬ、３４０ｎｇ／ｍＬ、３５０ｎｇ／ｍＬ、３６０ｎｇ／ｍＬ、３７０ｎｇ／ｍＬ、３８０ｎｇ／ｍＬ、３９０ｎｇ／ｍＬ、４００ｎｇ／ｍＬ、または４００ｎｇ／ｍＬ超である。一部の実施形態では、対象由来の生物学的試料での１つ以上のヘパラン硫酸二糖のレベルまたはＤ２Ｓ６のレベルは、約または少なくとも約１００ｎｇ／ｍＬ、約１１０ｎｇ／ｍＬ、１２０ｎｇ／／ｍＬ、１３０ｎｇ／ｍＬ、１４０ｎｇ／ｍＬ、１５０ｎｇ／ｍＬ、１６０ｎｇ／ｍＬ、１７０ｎｇ／ｍＬ、１８０ｎｇ／ｍＬ、１９０ｎｇ／ｍＬ、２００ｎｇ／ｍＬ、または２００ｎｇ／ｍＬ超である。一部の実施形態では、対象由来の生物学的試料での１つ以上のヘパラン硫酸二糖のレベルまたはＤ２Ｓ６レベルは、基準レベルと比較して、約または少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬ、約２０ｎｇ／ｍＬ、３０ｎｇ／ｍＬ、４０ｎｇ／ｍＬ、５０ｎｇ／ｍＬ、６０ｎｇ／ｍＬ、７０ｎｇ／ｍＬ、８０ｎｇ／ｍＬ、９０ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ、１５０ｎｇ／ｍＬ、１６０ｎｇ／ｍＬ、１７０ｎｇ／ｍＬ、１８０ｎｇ／ｍＬ、１９０ｎｇ／ｍＬ、２００ｎｇ／ｍＬ、２１０ｎｇ／ｍＬ、２２０ｎｇ／ｍＬ、２３０ｎｇ／ｍＬ、２４０ｎｇ／ｍＬ、２５０ｎｇ／ｍＬ、２６０ｎｇ／ｍＬ、２７０ｎｇ／ｍＬ、２８０ｎｇ／ｍＬ、２９０ｎｇ／ｍＬ、３００ｎｇ／ｍＬ、３１０ｎｇ／ｍＬ、３２０ｎｇ／ｍＬ、３３０ｎｇ／ｍＬ、３４０ｎｇ／ｍＬ、３５０ｎｇ／ｍＬ、３６０ｎｇ／ｍＬ、３７０ｎｇ／ｍＬ、３８０ｎｇ／ｍＬ、３９０ｎｇ／ｍＬ、４００ｎｇ／ｍＬ、４１０ｎｇ／ｍＬ、４２０ｎｇ／ｍＬ、４３０ｎｇ／ｍＬ、４４０ｎｇ／ｍＬ、４５０ｎｇ／ｍＬ、４６０ｎｇ／ｍＬ、４７０ｎｇ／ｍＬ、４８０ｎｇ／ｍＬ、４９０ｎｇ／ｍＬ、５００ｎｇ／ｍＬ、または５００ｎｇ／ｍＬ超の上昇がある。
本明細書で提供する一態様は、ヒト対象におけるＭＰＳ Ｉ治療の有効性またはモニタリング効果を決定する方法であって、ヒトＩＤＵＡをコードするｒＡＡＶの治療有効量をヒト対象に投与することを含み、基準と比較して、ヒト対象由来の生物学的試料でのＩ０Ｓ６のレベルが低下していることは、ヒト対象でのＭＰＳ Ｉ治療の有効性を示し、また、生物学的試料は、投与後のヒト対象から得た。
一部の態様では、生物学的試料は血漿である。一部の態様では、ヒト対象を、投与前にＥＲＴで治療した、及び／または投与後にＥＲＴ治療を行った。一部の態様では、ＥＲＴは、組換えイデュルスルファーゼによる酵素補充療法である。一部の態様では、Ｉ０Ｓ６のレベルの低下は、基準と比較して、約または少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％の減少である。一部の態様では、基準は、投与前にヒト対象から得た生物学的試料でのＩ０Ｓ６のレベルである。一部の態様では、基準は、所定の値である。一部の態様では、基準は、ＭＰＳ Ｉの診断を受けた別のヒト対象、またはＭＰＳ Ｉの診断を受けたヒト対象の集団から得た生物学的試料でのＩ０Ｓ６のレベルである。一部の態様では、ＭＰＳ Ｉ治療の有効性は、基準と比較して、Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ， ３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ）の少なくとも１つのサブテストにおける改善である。一部の態様では、少なくとも１つのサブテストとは、年齢同等性スコア、認知発達指数（ＤＱ）、表現言語ＤＱ、受容言語ＤＱ、粗大運動ＤＱ、及び／または微細運動ＤＱである。一部の態様では、基準は、投与前にヒト対象から得たＢＳＩＤ－ＩＩＩの少なくとも１つのサブテストのスコアである。一部の態様では、基準は、ヒト対象と同じ年齢のＭＰＳ Ｉを有するヒト対象から得たＢＳＩＤ－ＩＩＩの少なくとも１つのサブテストの平均スコアである。
一部の態様では、ｒＡＡＶは、（ａ）約８．７７ｇ／Ｌの濃度の塩化ナトリウム、（ｂ）約０．２４４ｇ／Ｌの濃度の塩化マグネシウム、（ｃ）約０．２２４ｇ／Ｌの濃度の塩化カリウム、（ｄ）約０．２０６ｇ／Ｌの濃度の塩化カルシウム、（ｅ）約０．７９３ｇ／Ｌの濃度のデキストロース、（ｆ）約０．００１％（体積／体積）の濃度のポロクサマー１８８、（ｇ）約０．０２７８ｇ／Ｌの濃度のリン酸一ナトリウム一水和物、及び、（ｈ）約０．１１４ｇ／Ｌの濃度の無水リン酸二ナトリウムを含む溶液を使用して、ヒト対象に投与する。
３．１ 例示実施形態
３．１．１．セット１
１．ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象の治療方法であって、前記ヒト対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）に、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生したグリコシル化組換えヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）前駆体の治療有効量を送達することを含み、前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体を、ヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを投与して送達し、前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、前記ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与し、及び前記脳質量を、前記ヒト対象の脳の脳磁気共鳴画像（ＭＲＩ）で決定する、前記方法。
２．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、検出可能なレベルで分泌される、パラグラフ１に記載の方法。
３．前記ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が、ヒトＩＤＳ前駆体をコードする内因性遺伝子に少なくとも１つの変異を有する、パラグラフ１または２に記載の方法。
４．前記ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞に、組換えアデノ随伴ウイルスベクター（ｒＡＡＶ）で形質導入する、パラグラフ１～３のいずれか１つに記載の方法。
５．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、ＣＢ７プロモーターの制御下で発現する、パラグラフ１～４のいずれか１つに記載の方法。
６．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、ヒトＩＤＳ前駆体をコードするｃＤＮＡから発現する、パラグラフ１～５のいずれか１つに記載の方法。
７．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、ポリアクリルアミドゲル電気泳動で測定して約９０ｋＤａのものである、パラグラフ１～６のいずれか１つに記載の方法。
８．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、ホルミルグリシンを含有する、パラグラフ１～７のいずれか１つに記載の方法。
９．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、（ａ）α２，６－シアル化を受けている、（ｂ）検出可能なＮｅｕＧｃを含まない、（ｃ）検出可能なα－Ｇａｌ抗原を含まない、（ｄ）チロシン－硫酸化を含む、及び／または、（ｅ）マンノース－６－リン酸化を受けている、パラグラフ１～８のいずれか１つに記載の方法。
１０．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、配列番号１のアミノ酸配列を含む、パラグラフ１～９のいずれか１つに記載の方法。
１１．前記組換えヌクレオチド発現ベクターが、ＡＡＶ９またはＡＡＶｒｈ１０ベクターである、パラグラフ１～１０のいずれか１つに記載の方法。
１２．前記ヒト対象の脳質量を、前記ヒト対象の脳体積ｃｍ３に、１．０４６ｇ／ｃｍ３の係数を乗じて、前記ヒト対象の脳体積から変換し、前記ヒト対象の脳体積を、前記ヒト対象の脳ＭＲＩから得る、パラグラフ１～１１のいずれか１つに記載の方法。
１３．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣ、またはＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの用量で投与する、パラグラフ１～１２のいずれか１つに記載の方法。
１４．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、大槽内（ＩＣ）投与を介して投与する、パラグラフ１～１３のいずれか１つに記載の方法。
１５．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、脳室内（ＩＣＶ）投与を介して投与するパラグラフ１～１３のいずれか１つに記載の方法。
１６．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、前記ヒト対象の脳脊髄液の総体積の１０％を超えない体積で投与する、パラグラフ１～１５のいずれか１つに記載の方法。
１７．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体を、前記ヒト対象のＣＮＳの細胞内のリソソームに対して送達する、パラグラフ１～１６のいずれか１つに記載の方法。
１８．前記ヒトＩＤＳ前駆体治療を行う前に、または同時に、前記ヒト対象に対して免疫抑制療法を実施すること、及び、その後に、任意に、免疫抑制療法を継続することをさらに含む、パラグラフ１～１７のいずれか１つに記載の方法。
１９．前記免疫抑制療法が、１つ以上のコルチコステロイド、シロリムス、及び／またはタクロリムスを投与することを含む、パラグラフ１８に記載の方法。
２０．１つ以上の前記コルチコステロイドが、メチルプレドニゾロン、及び／またはプレドニゾンである、パラグラフ１９に記載の方法。
２１．免疫抑制療法を行う前に、または同時に、１つ以上の抗生物質を、ヒト対象に対して投与することをさらに含む、パラグラフ１８～２０のいずれか１つに記載の方法。
２２．前記１つ以上の抗生物質が、トリメトプリム、スルファメトキサゾール、ペンタミジン、ダプソン、及び／またはアトバコンである、パラグラフ２１に記載の方法。
２３．免疫抑制療法を行う前に、または同時に、１つ以上の抗真菌療法を、ヒト対象に対して実施することをさらに含む、パラグラフ１８～２２のいずれか１つに記載の方法。
２４．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを投与した後に、次のバイオマーカーのうちの１つ以上を測定するステップをさらに含む、パラグラフ１～２３のいずれか１つに記載の方法：（ａ）ＣＳＦ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）のレベル、（ｂ）ＣＳＦ中のイズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）のレベル、（ｃ）血漿中のＧＡＧのレベル、（ｄ）血漿中のＩ２Ｓのレベル、（ｅ）白血球Ｉ２Ｓ酵素活性のレベル、及び（ｆ）尿中のＧＡＧのレベル。
２５．前記ＣＳＦ中のＧＡＧが、ＣＳＦ中のヘパリン硫酸を含む、パラグラフ２４に記載の方法。
２６．前記ＣＳＦ中のＧＡＧが、ＣＳＦ中のヘパリン硫酸である、パラグラフ２４に記載の方法。
２７．前記血漿中のＧＡＧが、血漿中のヘパリン硫酸を含む、パラグラフ２４～２６のいずれか１つに記載の方法。
２８．前記血漿中のＧＡＧが、血漿中のヘパリン硫酸である、パラグラフ２４～２６のいずれか１つに記載の方法。
２９．前記尿中のＧＡＧが、尿中のヘパリン硫酸を含む、パラグラフ２４～２８のいずれか１つに記載の方法。
３０．前記尿中のＧＡＧが、尿中のヘパリン硫酸である、パラグラフ２４～２８のいずれか１つに記載の方法。
３１．前記測定のステップが、ＣＳＦ中のヘパリン硫酸のレベルを測定することを含む、パラグラフ２４～３０のいずれか１つに記載の方法。
３２．前記測定のステップが、白血球Ｉ２Ｓ酵素活性のレベルを測定することを含む、パラグラフ２４～３１のいずれか１つに記載の方法。
３．１．２．セット２
１．ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象の治療方法であって、前記ヒト対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）に、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生したグリコシル化組換えヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）前駆体の治療有効量を送達することを含み、前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体を、ヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを投与して送達し、前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、前記ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与し、前記脳質量を、前記ヒト対象の脳の脳磁気共鳴画像（ＭＲＩ）で決定する、前記方法。
２．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、検出可能なレベルで分泌される、パラグラフ１に記載の方法。
３．前記ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が、ヒトＩＤＳ前駆体をコードする内因性遺伝子に少なくとも１つの変異を有する、パラグラフ１または２に記載の方法。
４．前記ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞に、組換えアデノ随伴ウイルスベクター（ｒＡＡＶ）で形質導入する、パラグラフ１～３のいずれか１つに記載の方法。
５．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、ＣＢ７プロモーターの制御下で発現する、パラグラフ１～４のいずれか１つに記載の方法。
６．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体を、ヒトＩＤＳ前駆体をコードするｃＤＮＡから発現する、パラグラフ１～５のいずれか１つに記載の方法。
７．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、ポリアクリルアミドゲル電気泳動で測定して約９０ｋＤａのものである、パラグラフ１～６のいずれか１つに記載の方法。
８．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、ホルミルグリシンを含有する、パラグラフ１～７のいずれか１つに記載の方法。
９．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、（ａ）α２，６－シアル化を受けている、（ｂ）検出可能なＮｅｕＧｃを含まない、（ｃ）検出可能なα－Ｇａｌ抗原を含まない、（ｄ）チロシン－硫酸化を含む、及び／または、（ｅ）マンノース－６－リン酸化を受けている、パラグラフ１～８のいずれか１つに記載の方法。
１０．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、配列番号１のアミノ酸配列を含む、パラグラフ１～９のいずれか１つに記載の方法。
１１．前記組換えヌクレオチド発現ベクターが、ＡＡＶ９またはＡＡＶｒｈ１０ベクターである、パラグラフ１～１０のいずれか１つに記載の方法。
１２．前記ヒト対象の脳質量を、前記ヒト対象の脳体積ｃｍ３に、１．０４６ｇ／ｃｍ３の係数を乗じて、前記ヒト対象の脳体積から変換し、前記ヒト対象の脳体積を、前記ヒト対象の脳ＭＲＩから得る、パラグラフ１～１１のいずれか１つに記載の方法。
１３．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣ、またはＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの用量で投与する、パラグラフ１～１２のいずれか１つに記載の方法。
１４．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約２．０×１０１１ＧＣ、または脳質量１ｇあたり約２．９×１０１１ＧＣの用量で投与する、パラグラフ１～１２のいずれか１つに記載の方法。
１５．前記ヒト対象が、５歳以上、かつ１８歳未満である、パラグラフ１～１２のいずれか１つに記載の方法。
１６．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの用量で投与する、パラグラフ１５に記載の方法。
１７．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、以下の表に記載の用量で投与する、パラグラフ１５に記載の方法。
１８．前記ヒト対象が、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満である、パラグラフ１～１２のいずれか１つに記載の方法。
１９．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、以下の表に従って、用量１または用量２から選択される用量で投与する、パラグラフ１８に記載の方法。
２０．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、以下の表に記載の用量で投与する、パラグラフ１８に記載の方法。
２１．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、大槽内（ＩＣ）投与を介して投与する、パラグラフ１～２０のいずれか１つに記載の方法。
２２．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、脳室内（ＩＣＶ）投与を介して投与するパラグラフ１～２０のいずれか１つに記載の方法。
２３．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、前記ヒト対象の脳脊髄液の総体積の１０％を超えない体積で投与する、パラグラフ１～２２のいずれか１つに記載の方法。
２４．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体を、前記ヒト対象のＣＮＳの細胞内のリソソームに対して送達する、パラグラフ１～２３のいずれか１つに記載の方法。
２５．前記ヒトＩＤＳ前駆体治療を行う前に、または同時に、前記ヒト対象に対して免疫抑制療法を実施し、及び、その後に、任意に、免疫抑制療法を継続することをさらに含む、パラグラフ１～２４のいずれか１つに記載の方法。
２６．前記免疫抑制療法が、１つ以上のコルチコステロイド、シロリムス、及び／またはタクロリムスを投与することを含む、パラグラフ２５に記載の方法。
２７．１つ以上の前記コルチコステロイドが、メチルプレドニゾロン、及び／またはプレドニゾンである、パラグラフ２６に記載の方法。
２８．免疫抑制療法を行う前に、または同時に、１つ以上の抗生物質を、ヒト対象に対して投与することをさらに含む、パラグラフ２５～２７のいずれか１つに記載の方法。
２９．１つ以上の前記抗生物質が、トリメトプリム、スルファメトキサゾール、ペンタミジン、ダプソン、及び／またはアトバコンである、パラグラフ２８に記載の方法。
３０．免疫抑制療法を行う前に、または同時に、１つ以上の抗真菌療法を、ヒト対象に対して実施することをさらに含む、パラグラフ２５～２９のいずれか１つに記載の方法。
３１．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを投与した後に、次のバイオマーカーのうちの１つ以上を測定するステップをさらに含む、パラグラフ１～３０のいずれか１つに記載の方法：（ａ）ＣＳＦ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）のレベル、（ｂ）ＣＳＦ中のイズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）のレベル、（ｃ）血漿中のＧＡＧのレベル、（ｄ）血漿中のＩ２Ｓのレベル、（ｅ）白血球Ｉ２Ｓ酵素活性のレベル、及び（ｆ）尿中のＧＡＧのレベル。
３２．前記ＣＳＦ中のＧＡＧが、ＣＳＦ中のヘパリン硫酸を含む、パラグラフ３１に記載の方法。
３３．前記ＣＳＦ中のＧＡＧが、ＣＳＦ中のヘパリン硫酸である、パラグラフ３１に記載の方法。
３４．前記血漿中のＧＡＧが、血漿中のヘパリン硫酸を含む、パラグラフ３１～３３のいずれか１つに記載の方法。
３５．前記血漿中のＧＡＧが、血漿中のヘパリン硫酸である、パラグラフ３１～３３のいずれか１つに記載の方法。
３６．前記尿中のＧＡＧが、尿中のヘパリン硫酸を含む、パラグラフ３１～３５のいずれか１つに記載の方法。
３７．前記尿中のＧＡＧが、尿中のヘパリン硫酸である、パラグラフ３１～３５のいずれか１つに記載の方法。
３８．前記測定のステップが、ＣＳＦ中のヘパリン硫酸のレベルを測定することを含む、パラグラフ３１～３７のいずれか１つに記載の方法。
３９．前記測定のステップが、白血球Ｉ２Ｓ酵素活性のレベルを測定することを含む、パラグラフ３１～３８のいずれか１つに記載の方法。
３．１．３．セット３
１．ヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ｈＩＤＳ）をコードする組換えアデノ随伴ウイルスベクター（ｒＡＡＶ）を、治療を必要とするヒト対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）に対して投与することを含む、ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けた前記ヒト対象での肝脾腫大症を治療する方法。
２．ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶの単回用量を、治療を必要とするヒト対象のＣＳＦに対して投与することを含み、ＣＮＳ以外にはＭＰＳ ＩＩに関するさらなる治療は行わない、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けた前記ヒト対象での肝脾腫大症及び中枢神経系（ＣＮＳ）症状を治療する方法。
３．前記ＣＮＳ症状が、Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ， ３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ）によって測定する認知能力である、パラグラフ２に記載の方法。
４．前記ＣＮＳ症状が、ＢＳＩＤ ＩＩＩの言語ドメインで測定する言語である、パラグラフ２に記載の方法。
５．前記ＣＮＳ症状がＢＳＩＤ－ＩＩＩの運動ドメインで決定する運動機能である、パラグラフ２に記載の方法。
６．ｒＡＡＶの単回用量を、ヒト対象のＣＳＦに投与することを含む、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けた前記ヒト対象の肝臓及び／または脾臓に対して、ｈＩＤＳをコードする前記ｒＡＡＶを送達する方法。
７．前記方法は、前記ｒＡＡＶの投与前の肝臓の大きさと比較して、前記肝臓の大きさを、約１０％、約２０％、または約３０％減少させる、パラグラフ１～６のいずれか１つに記載の方法。
８．前記方法は、前記ｒＡＡＶの投与前の脾臓の大きさと比較して、前記脾臓の大きさを、約１０％、約２０％、または約３０％減少させる、パラグラフ１～７のいずれか１つに記載の方法。
９．（ｉ）ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶの治療有効量を、ヒト対象のＣＳＦに投与する、及び（ｉｉ）前記対象のＣＳＦでのヘパリン硫酸（ＨＳ）Ｄ２Ｓ６のレベルを測定することを含む、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けた前記ヒト対象を治療する方法。
１０．ＨＳ Ｄ２Ｓ６の減少は、ヒト対象における神経認知パラメーターの改善と相関する、パラグラフ９に記載の方法。
１１．さらなる治療の必要性の要否を判定するステップをさらに含む、パラグラフ９または１０に記載の方法。
１２．さらなる治療を行うステップをさらに含む、パラグラフ１１に記載の方法。
１３．さらなる前記治療が、ステップ（ｉ）のものと同じｒＡＡＶの２回目の投与である、パラグラフ１２に記載の方法。
１４．さらなる前記治療が、ステップ（ｉ）のものと同じｒＡＡＶの２回目の投与を高用量で行う、パラグラフ１２に記載の方法。
１５．さらなる前記治療が、組換えイデュルスルファーゼを利用する酵素補充療法であるパラグラフ１２に記載の方法。
１６．前記方法は、前記ｒＡＡＶを投与する前の前記対象のＣＳＦでのＨＳ Ｄ２Ｓ６のレベルと比較して、前記対象のＣＳＦでのＨＳ Ｄ２Ｓ６のレベルを、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％超の減少をもたらす、パラグラフ１～１５のいずれか１つに記載の方法。
１７．ＨＳ Ｄ２Ｓ６のレベルを、前記ｒＡＡＶを投与して、約２ヶ月、約４ヶ月、約６ヶ月、約８ヶ月、約１０ヶ月、約１２ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約３年、約４年、または約５年後に決定する、パラグラフ１６に記載の方法。
１８．ＨＳ Ｄ２Ｓ６のレベルの低下が、前記ｒＡＡＶを投与してから、少なくとも６ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１２ヶ月間、少なくとも１５ヶ月間、少なくとも１８ヶ月間、少なくとも２１ヶ月間、または少なくとも２４ヶ月間持続する、パラグラフ１６または１７に記載の方法。
１９．前記ｒＡＡＶが、ＭＲＩで決定した、約１．３×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量、約６．５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量、または２×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量の用量で投与する、パラグラフ１～１８のいずれか１つに記載の方法。
２０．前記ヒト対象が、５歳以上、かつ１８歳未満である、パラグラフ１～１９のいずれか１つに記載の方法。
２１．前記ヒト対象が、４ヶ月以上、かつ５歳未満である、パラグラフ１～１９のいずれか１つに記載の方法。
２２．前記ヒト対象が、前記ｒＡＡＶの投与時に酵素補充療法（ＥＲＴ）を受けている、パラグラフ１～２１のいずれか１つに記載の方法。
２３．前記ヒト対象は、ＥＲＴに応答しない、パラグラフ２２に記載の方法。
２４．前記ＥＲＴが、組換えイデュルスルファーゼである、パラグラフ２２または２３に記載の方法。
２５．前記ＥＲＴは、前記ｒＡＡＶを投与して、約６ヶ月、約９０ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２１ヶ月、または約２４ヶ月後に中止する、パラグラフ２２～２４のいずれか１つに記載の方法。
２６．前記ｒＡＡＶを、大槽内（ＩＣ）投与を介して投与する、パラグラフ１～２５のいずれか１つに記載の方法。
２７．前記ｒＡＡＶを、脳室内（ＩＣＶ）投与を介して投与する、パラグラフ１～２５のいずれか１つに記載の方法。
２８．前記ｒＡＡＶを、前記ヒト対象の脳脊髄液の全体積の１０％を超えない体積で投与する、パラグラフ１～２７のいずれか１つに記載の方法。
２９．前記ｒＡＡＶが、組換えアデノ随伴ウイルス血清型９であるパラグラフ１～２８のいずれか１つに記載の方法。
３０．前記ｒＡＡＶが、ヒトＩＤＳ発現カセットを含有しており、発現が、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーとニワトリベータアクチンプロモーター（ＣＢ７）とのハイブリッドによって駆動する、パラグラフ２９に記載の方法。
３１．前記ヒトＩＤＳ発現カセットが、（ｉ）逆方向末端反復（ＩＴＲ）に隣接するＩＤＳ導入遺伝子、（ｉｉ）ニワトリベータアクチンイントロン、及び（ｉｉｉ）ウサギベータ－グロビンポリアデニル化（ポリＡ）シグナルを含む、パラグラフ３０に記載の方法。
３２．前記ＩＴＲが、ＡＡＶ２ ＩＴＲである、パラグラフ３１に記載の方法。
３３．前記ヒトＩＤＳ発現カセットが、配列番号４５のヌクレオチド配列を含む核酸を含む、パラグラフ３０～３２のいずれか１つに記載の方法。
３４．前記ｒＡＡＶの投与前または投与時に、前記ヒト対象に対して免疫抑制療法を投与することをさらに含み、任意に、その後も免疫抑制療法を継続する、パラグラフ１～３３のいずれか１つに記載の方法。
３５．前記免疫抑制療法は、コルチコステロイド、シロリムス、及び／またはタクロリムスの１つ以上を投与することを含む、パラグラフ３４に記載の方法。
３６．前記１つ以上のコルチコステロイドが、メチルプレドニゾロン及び／またはプレドニゾンである、パラグラフ３５に記載の方法。
３７．前記ｒＡＡＶより先に、または同時に、前記ヒト対象に対して１つ以上の抗生物質を投与することをさらに含む、パラグラフ１～３６のいずれか１つに記載の方法。
３８．前記１つ以上の抗生物質が、トリメトプリム、スルファメトキサゾール、ペンタミジン、ダプソン、及び／またはアトバコンである、パラグラフ３７に記載の方法。
３９．ｒＡＡＶより先に、または同時に、前記ヒト対象に対して１つ以上の抗真菌療法を行うことをさらに含む、パラグラフ１～３８のいずれか１つに記載の方法。
４０．ＭＰＳ ＩＩの診断を受けたヒト対象を治療する方法であって：
（ａ）前記ヒト対象に対して、ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶの治療有効量を投与することであって、前記ヒト対象は、ＥＲＴでの治療を受けた、またはＥＲＴの治療を行っている、前記投与すること；及び
（ｂ）前記ヒト対象由来の生物学的試料での少なくとも１つのバイオマーカーのレベルが基準よりも低い場合、前記ヒト対象でのＥＲＴ治療を中止することであって、前記生物学的試料は、投与後に前記ヒト対象から得たものであり、前記少なくとも１つのバイオマーカーが、Ｄ２Ｓ６、ＨＳ、及び／または総ＧＡＧを含む、前記中止すること、を含む、前記方法。
４１．ＭＰＳ ＩＩの診断を受けたヒト対象を治療する方法であって：
（ａ）前記ヒト対象に対して、ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶの治療有効量を投与することであって、前記ヒト対象は、ＥＲＴでの治療を受けた、またはＥＲＴの治療を行っている、前記投与すること；及び
（ｂ）前記ヒト対象由来の生物学的試料での少なくとも１つのバイオマーカーのレベルが基準よりも高い場合、前記ヒト対象でのＥＲＴ治療を中止することであって、前記生物学的試料は、投与前に前記ヒト対象から得たものであり、前記少なくとも１つのバイオマーカーが、抗ＩＤＳ抗体である、前記中止すること、を含む、前記方法。
４２．前記少なくとも１つのバイオマーカーは、Ｄ２Ｓ６である、パラグラフ４０に記載の方法。
４３．前記少なくとも１つのバイオマーカーは、ＥＲＴを中止する前の基準よりも、約または少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％低い、パラグラフ４０または４２のいずれか１つに記載の方法。
４４．前記少なくとも１つのバイオマーカーが、ＥＲＴを中止する前の基準よりも、約または少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％高い、パラグラフ４１に記載の方法。
４５．前記基準が、所定値である、パラグラフ４０～４４のいずれか１つに記載の方法。
４６．前記基準は、前記ヒト対象に対して前記ｒＡＡＶを投与する前に前記ヒト対象から得た生物学的試料での前記少なくとも１つのバイオマーカーのレベルである、パラグラフ４０～４４のいずれか１つに記載の方法。
４７．前記基準は、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けたが、ＥＲＴを受けていない対象から得た生物学的試料での少なくとも１つのバイオマーカーのレベルである、パラグラフ４０～４４のいずれか１つに記載の方法。
４８．前記ｒＡＡＶを、前記ヒト対象に対して投与した日と同じ日に前記ＥＲＴ治療を中止する、パラグラフ４０～４７のいずれか１つに記載の方法。
４９．前記ｒＡＡＶを、前記ヒト対象に対して投与して５２週間後に前記ＥＲＴ治療を中止する、パラグラフ４０または４２～４７のいずれか１つに記載の方法。
５０．前記生物学的試料がＣＳＦ、尿、血漿、または血清である、パラグラフ４０～４９のいずれか１つに記載の方法。
５１．ＭＰＳ ＩＩの診断を受けたヒト対象を治療する方法であって：
（ａ）前記ヒト対象でのＥＲＴ治療を中止することであって、前記ヒト対象は、ＥＲＴでの治療を受けた、またはＥＲＴの治療を行っている、前記中止すること；及び
（ｂ）ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶの治療有効量をヒト対象に対して投与することであって、前記投与は、前記ヒト対象でのＥＲＴ治療が中止した後に行う、前記投与すること、を含む、前記方法。
５２．前記ＥＲＴ治療は、前記投与の約または少なくとも約１年、６ヶ月、５ヶ月、４ヶ月、３ヶ月、２ヶ月、１ヶ月、３週間、２週間、１週間、１０日、５日、または１日前に中止する、パラグラフ５１に記載の方法。
５３．少なくとも１つのバイオマーカーのレベルは、中止する前に、前記ヒト対象由来の生物学的試料では検出されない、パラグラフ５１～５２のいずれか１つに記載の方法。
５４．前記少なくとも１つのバイオマーカーが、抗ＡＡＶ抗体である、パラグラフ５３に記載の方法。
５５．前記抗ＡＡＶ抗体が、抗ＡＡＶ９抗体である、パラグラフ５４に記載の方法。
５６．前記生物学的試料が、血清であるパラグラフ５１～５５のいずれか１つに記載の方法。
５７．ヒト対象におけるＭＰＳ ＩＩ治療の有効性を決定するか、またはモニタリングする方法であって、ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶの治療有効量を、前記ヒト対象に対して投与することを含み、基準と比較した前記ヒト対象由来の生物学的試料でのＤ２Ｓ６のレベルの低下は、前記ヒト対象における前記ＭＰＳ ＩＩ治療の有効性を示し、前記生物学的試料は、投与後の前記ヒト対象から得た、前記方法。
５８．前記ヒト対象が、肝脾腫大症を有する、パラグラフ４０～５７のいずれか１つに記載の方法。
５９．前記ヒト対象が、投与前にＥＲＴでの治療を受けた、及び／または投与後にＥＲＴ治療を受けた、パラグラフ５８に記載の方法。
６０．前記ＥＲＴが、組換えイデュルスルファーゼを用いた酵素補充療法である、パラグラフ４０～５９のいずれか１つに記載の方法。
６１．前記生物学的試料が、ＣＳＦである、パラグラフ５７～６０のいずれか１つに記載の方法。
６２．Ｄ２Ｓ６のレベルの低下は、前記基準と比較して、約または少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％の減少である、パラグラフ５７～６１のいずれか１つに記載の方法。
６３．ＭＰＳ ＩＩ治療の前記有効性は、基準と比較した、Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ， ３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ）の少なくとも１つのサブテストの改善である、パラグラフ５７～６２のいずれか１つに記載の方法。
６４．前記少なくとも１つのサブテストが、年齢同等性スコア、認知発達指数（ＤＱ）、表現言語ＤＱ、受容言語ＤＱ、粗大運動ＤＱ、及び／または微細運動ＤＱである、パラグラフ６３に記載の方法。
６５．前記改善が、約または少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１５、１７、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、または１００を超えるＤＱの改善である、パラグラフ６３または６４に記載の方法。
６６．前記年齢同等性スコアが、約または少なくとも約１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１８ヶ月、２４ヶ月、または２４ヶ月を超えて増加する、パラグラフ６４に記載の方法。
６７．前記基準は、投与前に前記ヒト対象から得た前記ＢＳＩＤ－ＩＩＩの少なくとも１つのサブテストのスコアである、パラグラフ６３～６６のいずれか１つに記載の方法。
６８．前記基準は、前記ヒト対象と同年齢のＭＰＳ ＩＩを有するヒト対象から得た前記ＢＳＩＤ－ＩＩＩの少なくとも１つのサブテストの平均スコアである、パラグラフ６３～６６のいずれか１つに記載の方法。
６９．前記基準が、投与前に前記ヒト対象から得た生物学的試料でのＤ２Ｓ６のレベルである、パラグラフ５７～６８のいずれか１つに記載の方法。
７０．前記生物学的試料は、投与して約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０日後、または１、２、３、４、５、６、７、８、１０、１６、２０、２４、３０、３５、４０、４５、４８、５０、５２、５６、１０４週間後、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２ヶ月後、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０年後に前記ヒト対象から得た、パラグラフ５７～６９のいずれか１つに記載の方法。
７１．前記ヒト対象が、小児対象である、パラグラフ５１～７０のいずれか１つに記載の方法。
７２．ＭＰＳ ＩＩ治療の前記有効性は、投与前の前記ヒト対象でのＤ２Ｓ６のレベルと比較して、約または少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％のＤ２Ｓ６のレベルの低下で実証する、パラグラフ５７～７１のいずれか１つに記載の方法。
７３．前記ｒＡＡＶを、前記ヒト対象に対して、くも膜下腔内に投与する、パラグラフ１～７２のいずれか１つに記載の方法。
７４．前記ｒＡＡＶを：
（ａ）約８．７７ｇ／Ｌの濃度の塩化ナトリウム、
（ｂ）約０．２４４ｇ／Ｌの濃度の塩化マグネシウム、
（ｃ）約０．２２４ｇ／Ｌの濃度の塩化カリウム、
（ｄ）約０．２０６ｇ／Ｌの濃度の塩化カルシウム、
（ｅ）約０．７９３ｇ／Ｌの濃度のデキストロース、
（ｆ）約０．００１％（体積／体積）の濃度のポロクサマー１８８、
（ｇ）約０．０２７８ｇ／Ｌの濃度のリン酸一ナトリウム一水和物、及び
（ｈ）約０．１１４ｇ／Ｌの濃度の無水リン酸二ナトリウム、を含む溶液で前記ヒト対象に対して投与する、パラグラフ１～７３のいずれか１つに記載の方法。
７５．対象が神経障害性ＭＰＳ ＩＩを有すると同定または診断する方法であって：
（ａ）前記対象由来の生物学的試料での１つ以上のヘパラン硫酸二糖のレベルを決定する；
（ｂ）１つ以上のヘパラン硫酸二糖の前記レベルが、基準レベルと比較して高い場合、前記対象は神経障害性ＭＰＳ ＩＩを有すると同定または診断する；及び
（ｃ）ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶの治療有効量を、神経障害性ＭＰＳ ＩＩを有すると同定または診断した前記対象に投与する、ことを含む、前記方法。
７６．前記１つ以上のヘパラン硫酸二糖が、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、Ｄ２Ｓ６の１つ以上、またはこれらの組み合わせを含む、パラグラフ７５に記載の方法。
７７．前記１つ以上のヘパラン硫酸二糖が、Ｄ２Ｓ６である、パラグラフ７６に記載の方法。
７８．対象が神経障害性ＭＰＳ ＩＩを有すると同定または診断する方法であって：
基準レベルと比較して、対象由来の生物学的試料でのＤ２Ｓ６のレベルが高い場合、前記対象は神経障害性ＭＰＳ ＩＩを有すると同定または診断し、ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶの治療有効量を、神経障害性ＭＰＳ ＩＩを有すると同定または診断された前記対象に投与する、前記方法。
７９．前記生物学的試料が、脳脊髄液である、パラグラフ７５～７８のいずれか１つに記載の方法。
８０．前記対象が、発症前である、または可視または検出可能なＭＰＳ ＩＩ症状を有していない、パラグラフ７５～７９のいずれか１つに記載の方法。
８１．前記対象が、ＭＰＳ ＩＩを有する、パラグラフ７５～８０のいずれか１つに記載の方法。
８２．前記基準レベルが、１名以上の健常者及び／または１名以上の非神経障害性対象由来の生物学的試料での前記少なくとも１つ以上のヘパラン硫酸二糖のレベルである、パラグラフ７５～７７及び７９～８１のいずれか１つに記載の方法。
８３．前記基準レベルが、１名以上の健常者及び／または１名以上の非神経障害性対象由来の生物学的試料でのＤ２Ｓ６のレベルである、パラグラフ７７～８１のいずれか１つに記載の方法。
８４．１名以上の健常者及び／または１名以上の非神経障害性対象由来の前記生物学的試料がＣＳＦ試料である、パラグラフ８２または８３に記載の方法。
８５．前記基準レベルが、所定のレベルである、パラグラフ７５～８４のいずれか１つに記載の方法。
８６．Ｄ２Ｓ６のレベルは、前記対象由来の前記生物学的試料での総ヘパラン硫酸二糖（ＨＳ）の約または少なくとも約１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、または４０％超である、パラグラフ７７～８５のいずれか１つに記載の方法。
８７．Ｄ２Ｓ６のレベルが、前記対象由来の前記生物学的試料での総ヘパラン硫酸二糖（ＨＳ）の約または少なくとも約２０％である、パラグラフ８６に記載の方法。
８８．前記対象由来の前記生物学的試料での前記１つ以上のヘパラン硫酸二糖のレベルまたはＤ２Ｓ６のレベルが、約または少なくとも約５０ｎｇ／ｍＬ、７５ｎｇ／ｍＬ、８０ｎｇ／ｍＬ、８５ｎｇ／ｍＬ、９０ｎｇ／ｍＬ、９５ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ、１０５ｎｇ／ｍＬ、１１０ｎｇ／ｍＬ、１１５ｎｇ／ｍＬ、１２０ｎｇ／ｍＬ、１２５ｎｇ／ｍＬ、１３０ｎｇ／ｍＬ、１３５ｎｇ／ｍＬ、１４０ｎｇ／ｍＬ、１４５ｎｇ／ｍＬ、１５０ｎｇ／ｍＬ、１５５ｎｇ／ｍＬ、１６０ｎｇ／ｍＬ、１６５ｎｇ／ｍＬ、１７０ｎｇ／ｍＬ、１７５ｎｇ／ｍＬ、１８０ｎｇ／ｍＬ、１８５ｎｇ／ｍＬ、１９０ｎｇ／ｍＬ、１９５ｎｇ／ｍＬ、２００ｎｇ／ｍＬ、２１０ｎｇ／ｍＬ、２２０ｎｇ／ｍＬ、２３０ｎｇ／ｍＬ、２４０ｎｇ／ｍＬ、２５０ｎｇ／ｍＬ、２６０ｎｇ／ｍＬ、２７０ｎｇ／ｍＬ、２８０ｎｇ／ｍＬ、２９０ｎｇ／ｍＬ、３００ｎｇ／ｍＬ、３１０ｎｇ／ｍＬ、３２０ｎｇ／ｍＬ、３３０ｎｇ／ｍＬ、３４０ｎｇ／ｍＬ、３５０ｎｇ／ｍＬ、３６０ｎｇ／ｍＬ、３７０ｎｇ／ｍＬ、３８０ｎｇ／ｍＬ、３９０ｎｇ／ｍＬ、４００ｎｇ／ｍＬ、または、４００ｎｇ／ｍＬ超である、パラグラフ７５～８７のいずれか１つに記載の方法。
８９．前記対象由来の前記生物学的試料での前記１つ以上のヘパラン硫酸二糖のレベルまたはＤ２Ｓ６のレベルが、約または少なくとも約１００ｎｇ／ｍＬ、１１０ｎｇ／ｍＬ、１２０ｎｇ／ｍＬ、１３０ｎｇ／ｍＬ、１４０ｎｇ／ｍＬ、１５０ｎｇ／ｍＬ、１６０ｎｇ／ｍＬ、１７０ｎｇ／ｍＬ、１８０ｎｇ／ｍＬ、１９０ｎｇ／ｍＬ、２００ｎｇ／ｍＬ、２００ｎｇ／ｍＬ、または２００ｎｇ／ｍＬ超である、パラグラフ７５～８８のいずれか１つに記載の方法。
９０．前記対象由来の前記生物学的試料での前記１つ以上のヘパラン硫酸二糖のレベルまたはＤ２Ｓ６のレベルが、前記基準レベルと比較して、約または少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬ、２０ｎｇ／ｍＬ、３０ｎｇ／ｍＬ、４０ｎｇ／ｍＬ、５０ｎｇ／ｍＬ、６０ｎｇ／ｍＬ、７０ｎｇ／ｍＬ、８０ｎｇ／ｍＬ、９０ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ、１５０ｎｇ／ｍＬ、１６０ｎｇ／ｍＬ、１７０ｎｇ／ｍＬ、１８０ｎｇ／ｍＬ、１９０ｎｇ／ｍＬ、２００ｎｇ／ｍＬ、２１０ｎｇ／ｍＬ、２２０ｎｇ／ｍＬ、２３０ｎｇ／ｍＬ、２４０ｎｇ／ｍＬ、２５０ｎｇ／ｍＬ、２６０ｎｇ／ｍＬ、２７０ｎｇ／ｍＬ、２８０ｎｇ／ｍＬ、２９０ｎｇ／ｍＬ、３００ｎｇ／ｍＬ、３１０ｎｇ／ｍＬ、３２０ｎｇ／ｍＬ、３３０ｎｇ／ｍＬ、３４０ｎｇ／ｍＬ、３５０ｎｇ／ｍＬ、３６０ｎｇ／ｍＬ、３７０ｎｇ／ｍＬ、３８０ｎｇ／ｍＬ、３９０ｎｇ／ｍＬ、４００ｎｇ／ｍＬ、４１０ｎｇ／ｍＬ、４２０ｎｇ／ｍＬ、４３０ｎｇ／ｍＬ、４４０ｎｇ／ｍＬ、４５０ｎｇ／ｍＬ、４６０ｎｇ／ｍＬ、４７０ｎｇ／ｍＬ、４８０ｎｇ／ｍＬ、４９０ｎｇ／ｍＬ、５００ｎｇ／ｍＬ、または５００ｎｇ／ｍＬ超の上昇を示す、パラグラフ７５～８９のいずれか１つに記載の方法。
９１．ヒト対象でのＭＰＳ Ｉ治療の有効性を決定する、または有効性をモニタリングする方法であって、ヒトＩＤＵＡをコードするｒＡＡＶの治療有効量を、前記ヒト対象に投与することを含み、基準と比較した前記ヒト対象由来の生物学的試料でのＩ０Ｓ６のレベルの低下は、前記ヒト対象での前記ＭＰＳ Ｉ治療の有効性を示しており、前記生物学的試料は、投与した後の前記ヒト対象から得た、前記方法。
９２．前記生物学的試料が、血漿である、パラグラフ９１に記載の方法。
９３．前記ヒト対象が、投与前にＥＲＴでの治療を受けた、及び／または投与後にＥＲＴの治療を受けた、パラグラフ９０または９１に記載の方法。
９４．前記ＥＲＴが、組換えイデュルスルファーゼを使用する酵素補充療法である、パラグラフ９１～９３のいずれか１つに記載の方法。
９５．前記Ｉ０Ｓ６のレベルの低下は、前記基準と比較して、約または少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％の減少である、パラグラフ９１～９４のいずれか１つに記載の方法。
９６．前記基準は、投与前に前記ヒト対象から得た生物学的試料でのＩ０Ｓ６のレベルである、パラグラフ９１～９５のいずれか１つに記載の方法。
９７．前記基準は、所定の値である、パラグラフ９１～９５のいずれか１つに記載の方法。
９８．前記基準は、ＭＰＳ Ｉの診断を受けた別のヒト対象、またはＭＰＳ Ｉの診断を受けたヒト対象の集団から得た生物学的試料でのＩ０Ｓ６のレベルである、パラグラフ９１～９５のいずれか１つに記載の方法。
９９．ＭＰＳ Ｉ治療の前記有効性は、基準と比較した、Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ， ３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ）の少なくとも１つのサブテストの改善である、パラグラフ９１～９８のいずれか１つに記載の方法。
１００．前記少なくとも１つのサブテストが、年齢同等性スコア、認知発達指数（ＤＱ）、表現言語ＤＱ、受容言語ＤＱ、粗大運動ＤＱ、及び／または微細運動ＤＱである、パラグラフ９９に記載の方法。
１０１．前記基準は、投与前に前記ヒト対象から得た前記ＢＳＩＤ－ＩＩＩの少なくとも１つのブテストのスコアである、パラグラフ９９または１００に記載の方法。
１０２．前記基準は、前記ヒト対象と同じ年齢のＭＰＳ Ｉを有するヒト対象から得た前記ＢＳＩＤ－ＩＩＩの少なくとも１つのサブテストの平均スコアである、パラグラフ９９～１０１のいずれか１つに記載の方法。
１０３．前記ｒＡＡＶを：
（ａ）約８．７７ｇ／Ｌの濃度の塩化ナトリウム、
（ｂ）約０．２４４ｇ／Ｌの濃度の塩化マグネシウム、
（ｃ）約０．２２４ｇ／Ｌの濃度の塩化カリウム、
（ｄ）約０．２０６ｇ／Ｌの濃度の塩化カルシウム、
（ｅ）約０．７９３ｇ／Ｌの濃度のデキストロース、
（ｆ）約０．００１％（体積／体積）の濃度のポロクサマー１８８、
（ｇ）約０．０２７８ｇ／Ｌの濃度のリン酸一ナトリウム一水和物、及び
（ｈ）約０．１１４ｇ／Ｌの濃度の無水リン酸二ナトリウム、を含む溶液で前記ヒト対象に対して投与する、パラグラフ９１～１０２のいずれか１つに記載の方法。
３．１ 例示実施形態
３．１．１．セット１
１．ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象の治療方法であって、前記ヒト対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）に、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生したグリコシル化組換えヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）前駆体の治療有効量を送達することを含み、前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体を、ヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを投与して送達し、前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、前記ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与し、及び前記脳質量を、前記ヒト対象の脳の脳磁気共鳴画像（ＭＲＩ）で決定する、前記方法。
２．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、検出可能なレベルで分泌される、パラグラフ１に記載の方法。
３．前記ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が、ヒトＩＤＳ前駆体をコードする内因性遺伝子に少なくとも１つの変異を有する、パラグラフ１または２に記載の方法。
４．前記ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞に、組換えアデノ随伴ウイルスベクター（ｒＡＡＶ）で形質導入する、パラグラフ１～３のいずれか１つに記載の方法。
５．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、ＣＢ７プロモーターの制御下で発現する、パラグラフ１～４のいずれか１つに記載の方法。
６．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、ヒトＩＤＳ前駆体をコードするｃＤＮＡから発現する、パラグラフ１～５のいずれか１つに記載の方法。
７．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、ポリアクリルアミドゲル電気泳動で測定して約９０ｋＤａのものである、パラグラフ１～６のいずれか１つに記載の方法。
８．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、ホルミルグリシンを含有する、パラグラフ１～７のいずれか１つに記載の方法。
９．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、（ａ）α２，６－シアル化を受けている、（ｂ）検出可能なＮｅｕＧｃを含まない、（ｃ）検出可能なα－Ｇａｌ抗原を含まない、（ｄ）チロシン－硫酸化を含む、及び／または、（ｅ）マンノース－６－リン酸化を受けている、パラグラフ１～８のいずれか１つに記載の方法。
１０．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、配列番号１のアミノ酸配列を含む、パラグラフ１～９のいずれか１つに記載の方法。
１１．前記組換えヌクレオチド発現ベクターが、ＡＡＶ９またはＡＡＶｒｈ１０ベクターである、パラグラフ１～１０のいずれか１つに記載の方法。
１２．前記ヒト対象の脳質量を、前記ヒト対象の脳体積ｃｍ３に、１．０４６ｇ／ｃｍ３の係数を乗じて、前記ヒト対象の脳体積から変換し、前記ヒト対象の脳体積を、前記ヒト対象の脳ＭＲＩから得る、パラグラフ１～１１のいずれか１つに記載の方法。
１３．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣ、またはＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの用量で投与する、パラグラフ１～１２のいずれか１つに記載の方法。
１４．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、大槽内（ＩＣ）投与を介して投与する、パラグラフ１～１３のいずれか１つに記載の方法。
１５．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、脳室内（ＩＣＶ）投与を介して投与するパラグラフ１～１３のいずれか１つに記載の方法。
１６．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、前記ヒト対象の脳脊髄液の総体積の１０％を超えない体積で投与する、パラグラフ１～１５のいずれか１つに記載の方法。
１７．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体を、前記ヒト対象のＣＮＳの細胞内のリソソームに対して送達する、パラグラフ１～１６のいずれか１つに記載の方法。
１８．前記ヒトＩＤＳ前駆体治療を行う前に、または同時に、前記ヒト対象に対して免疫抑制療法を実施すること、及び、その後に、任意に、免疫抑制療法を継続することをさらに含む、パラグラフ１～１７のいずれか１つに記載の方法。
１９．前記免疫抑制療法が、１つ以上のコルチコステロイド、シロリムス、及び／またはタクロリムスを投与することを含む、パラグラフ１８に記載の方法。
２０．１つ以上の前記コルチコステロイドが、メチルプレドニゾロン、及び／またはプレドニゾンである、パラグラフ１９に記載の方法。
２１．免疫抑制療法を行う前に、または同時に、１つ以上の抗生物質を、ヒト対象に対して投与することをさらに含む、パラグラフ１８～２０のいずれか１つに記載の方法。
２２．前記１つ以上の抗生物質が、トリメトプリム、スルファメトキサゾール、ペンタミジン、ダプソン、及び／またはアトバコンである、パラグラフ２１に記載の方法。
２３．免疫抑制療法を行う前に、または同時に、１つ以上の抗真菌療法を、ヒト対象に対して実施することをさらに含む、パラグラフ１８～２２のいずれか１つに記載の方法。
２４．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを投与した後に、次のバイオマーカーのうちの１つ以上を測定するステップをさらに含む、パラグラフ１～２３のいずれか１つに記載の方法：（ａ）ＣＳＦ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）のレベル、（ｂ）ＣＳＦ中のイズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）のレベル、（ｃ）血漿中のＧＡＧのレベル、（ｄ）血漿中のＩ２Ｓのレベル、（ｅ）白血球Ｉ２Ｓ酵素活性のレベル、及び（ｆ）尿中のＧＡＧのレベル。
２５．前記ＣＳＦ中のＧＡＧが、ＣＳＦ中のヘパリン硫酸を含む、パラグラフ２４に記載の方法。
２６．前記ＣＳＦ中のＧＡＧが、ＣＳＦ中のヘパリン硫酸である、パラグラフ２４に記載の方法。
２７．前記血漿中のＧＡＧが、血漿中のヘパリン硫酸を含む、パラグラフ２４～２６のいずれか１つに記載の方法。
２８．前記血漿中のＧＡＧが、血漿中のヘパリン硫酸である、パラグラフ２４～２６のいずれか１つに記載の方法。
２９．前記尿中のＧＡＧが、尿中のヘパリン硫酸を含む、パラグラフ２４～２８のいずれか１つに記載の方法。
３０．前記尿中のＧＡＧが、尿中のヘパリン硫酸である、パラグラフ２４～２８のいずれか１つに記載の方法。
３１．前記測定のステップが、ＣＳＦ中のヘパリン硫酸のレベルを測定することを含む、パラグラフ２４～３０のいずれか１つに記載の方法。
３２．前記測定のステップが、白血球Ｉ２Ｓ酵素活性のレベルを測定することを含む、パラグラフ２４～３１のいずれか１つに記載の方法。
３．１．２．セット２
１．ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象の治療方法であって、前記ヒト対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）に、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生したグリコシル化組換えヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）前駆体の治療有効量を送達することを含み、前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体を、ヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを投与して送達し、前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、前記ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与し、前記脳質量を、前記ヒト対象の脳の脳磁気共鳴画像（ＭＲＩ）で決定する、前記方法。
２．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、検出可能なレベルで分泌される、パラグラフ１に記載の方法。
３．前記ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が、ヒトＩＤＳ前駆体をコードする内因性遺伝子に少なくとも１つの変異を有する、パラグラフ１または２に記載の方法。
４．前記ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞に、組換えアデノ随伴ウイルスベクター（ｒＡＡＶ）で形質導入する、パラグラフ１～３のいずれか１つに記載の方法。
５．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、ＣＢ７プロモーターの制御下で発現する、パラグラフ１～４のいずれか１つに記載の方法。
６．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体を、ヒトＩＤＳ前駆体をコードするｃＤＮＡから発現する、パラグラフ１～５のいずれか１つに記載の方法。
７．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、ポリアクリルアミドゲル電気泳動で測定して約９０ｋＤａのものである、パラグラフ１～６のいずれか１つに記載の方法。
８．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、ホルミルグリシンを含有する、パラグラフ１～７のいずれか１つに記載の方法。
９．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、（ａ）α２，６－シアル化を受けている、（ｂ）検出可能なＮｅｕＧｃを含まない、（ｃ）検出可能なα－Ｇａｌ抗原を含まない、（ｄ）チロシン－硫酸化を含む、及び／または、（ｅ）マンノース－６－リン酸化を受けている、パラグラフ１～８のいずれか１つに記載の方法。
１０．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、配列番号１のアミノ酸配列を含む、パラグラフ１～９のいずれか１つに記載の方法。
１１．前記組換えヌクレオチド発現ベクターが、ＡＡＶ９またはＡＡＶｒｈ１０ベクターである、パラグラフ１～１０のいずれか１つに記載の方法。
１２．前記ヒト対象の脳質量を、前記ヒト対象の脳体積ｃｍ３に、１．０４６ｇ／ｃｍ３の係数を乗じて、前記ヒト対象の脳体積から変換し、前記ヒト対象の脳体積を、前記ヒト対象の脳ＭＲＩから得る、パラグラフ１～１１のいずれか１つに記載の方法。
１３．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣ、またはＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの用量で投与する、パラグラフ１～１２のいずれか１つに記載の方法。
１４．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約２．０×１０１１ＧＣ、または脳質量１ｇあたり約２．９×１０１１ＧＣの用量で投与する、パラグラフ１～１２のいずれか１つに記載の方法。
１５．前記ヒト対象が、５歳以上、かつ１８歳未満である、パラグラフ１～１２のいずれか１つに記載の方法。
１６．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの用量で投与する、パラグラフ１５に記載の方法。
１７．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、以下の表に記載の用量で投与する、パラグラフ１５に記載の方法。
１９．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、以下の表に従って、用量１または用量２から選択される用量で投与する、パラグラフ１８に記載の方法。
２２．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、脳室内（ＩＣＶ）投与を介して投与するパラグラフ１～２０のいずれか１つに記載の方法。
２３．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを、前記ヒト対象の脳脊髄液の総体積の１０％を超えない体積で投与する、パラグラフ１～２２のいずれか１つに記載の方法。
２４．前記グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体を、前記ヒト対象のＣＮＳの細胞内のリソソームに対して送達する、パラグラフ１～２３のいずれか１つに記載の方法。
２５．前記ヒトＩＤＳ前駆体治療を行う前に、または同時に、前記ヒト対象に対して免疫抑制療法を実施し、及び、その後に、任意に、免疫抑制療法を継続することをさらに含む、パラグラフ１～２４のいずれか１つに記載の方法。
２６．前記免疫抑制療法が、１つ以上のコルチコステロイド、シロリムス、及び／またはタクロリムスを投与することを含む、パラグラフ２５に記載の方法。
２７．１つ以上の前記コルチコステロイドが、メチルプレドニゾロン、及び／またはプレドニゾンである、パラグラフ２６に記載の方法。
２８．免疫抑制療法を行う前に、または同時に、１つ以上の抗生物質を、ヒト対象に対して投与することをさらに含む、パラグラフ２５～２７のいずれか１つに記載の方法。
２９．１つ以上の前記抗生物質が、トリメトプリム、スルファメトキサゾール、ペンタミジン、ダプソン、及び／またはアトバコンである、パラグラフ２８に記載の方法。
３０．免疫抑制療法を行う前に、または同時に、１つ以上の抗真菌療法を、ヒト対象に対して実施することをさらに含む、パラグラフ２５～２９のいずれか１つに記載の方法。
３１．前記組換えヌクレオチド発現ベクターを投与した後に、次のバイオマーカーのうちの１つ以上を測定するステップをさらに含む、パラグラフ１～３０のいずれか１つに記載の方法：（ａ）ＣＳＦ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）のレベル、（ｂ）ＣＳＦ中のイズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）のレベル、（ｃ）血漿中のＧＡＧのレベル、（ｄ）血漿中のＩ２Ｓのレベル、（ｅ）白血球Ｉ２Ｓ酵素活性のレベル、及び（ｆ）尿中のＧＡＧのレベル。
３２．前記ＣＳＦ中のＧＡＧが、ＣＳＦ中のヘパリン硫酸を含む、パラグラフ３１に記載の方法。
３３．前記ＣＳＦ中のＧＡＧが、ＣＳＦ中のヘパリン硫酸である、パラグラフ３１に記載の方法。
３４．前記血漿中のＧＡＧが、血漿中のヘパリン硫酸を含む、パラグラフ３１～３３のいずれか１つに記載の方法。
３５．前記血漿中のＧＡＧが、血漿中のヘパリン硫酸である、パラグラフ３１～３３のいずれか１つに記載の方法。
３６．前記尿中のＧＡＧが、尿中のヘパリン硫酸を含む、パラグラフ３１～３５のいずれか１つに記載の方法。
３７．前記尿中のＧＡＧが、尿中のヘパリン硫酸である、パラグラフ３１～３５のいずれか１つに記載の方法。
３８．前記測定のステップが、ＣＳＦ中のヘパリン硫酸のレベルを測定することを含む、パラグラフ３１～３７のいずれか１つに記載の方法。
３９．前記測定のステップが、白血球Ｉ２Ｓ酵素活性のレベルを測定することを含む、パラグラフ３１～３８のいずれか１つに記載の方法。
３．１．３．セット３
１．ヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ｈＩＤＳ）をコードする組換えアデノ随伴ウイルスベクター（ｒＡＡＶ）を、治療を必要とするヒト対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）に対して投与することを含む、ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けた前記ヒト対象での肝脾腫大症を治療する方法。
２．ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶの単回用量を、治療を必要とするヒト対象のＣＳＦに対して投与することを含み、ＣＮＳ以外にはＭＰＳ ＩＩに関するさらなる治療は行わない、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けた前記ヒト対象での肝脾腫大症及び中枢神経系（ＣＮＳ）症状を治療する方法。
３．前記ＣＮＳ症状が、Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ， ３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ）によって測定する認知能力である、パラグラフ２に記載の方法。
４．前記ＣＮＳ症状が、ＢＳＩＤ ＩＩＩの言語ドメインで測定する言語である、パラグラフ２に記載の方法。
５．前記ＣＮＳ症状がＢＳＩＤ－ＩＩＩの運動ドメインで決定する運動機能である、パラグラフ２に記載の方法。
６．ｒＡＡＶの単回用量を、ヒト対象のＣＳＦに投与することを含む、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けた前記ヒト対象の肝臓及び／または脾臓に対して、ｈＩＤＳをコードする前記ｒＡＡＶを送達する方法。
７．前記方法は、前記ｒＡＡＶの投与前の肝臓の大きさと比較して、前記肝臓の大きさを、約１０％、約２０％、または約３０％減少させる、パラグラフ１～６のいずれか１つに記載の方法。
８．前記方法は、前記ｒＡＡＶの投与前の脾臓の大きさと比較して、前記脾臓の大きさを、約１０％、約２０％、または約３０％減少させる、パラグラフ１～７のいずれか１つに記載の方法。
９．（ｉ）ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶの治療有効量を、ヒト対象のＣＳＦに投与する、及び（ｉｉ）前記対象のＣＳＦでのヘパリン硫酸（ＨＳ）Ｄ２Ｓ６のレベルを測定することを含む、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けた前記ヒト対象を治療する方法。
１０．ＨＳ Ｄ２Ｓ６の減少は、ヒト対象における神経認知パラメーターの改善と相関する、パラグラフ９に記載の方法。
１１．さらなる治療の必要性の要否を判定するステップをさらに含む、パラグラフ９または１０に記載の方法。
１２．さらなる治療を行うステップをさらに含む、パラグラフ１１に記載の方法。
１３．さらなる前記治療が、ステップ（ｉ）のものと同じｒＡＡＶの２回目の投与である、パラグラフ１２に記載の方法。
１４．さらなる前記治療が、ステップ（ｉ）のものと同じｒＡＡＶの２回目の投与を高用量で行う、パラグラフ１２に記載の方法。
１５．さらなる前記治療が、組換えイデュルスルファーゼを利用する酵素補充療法であるパラグラフ１２に記載の方法。
１６．前記方法は、前記ｒＡＡＶを投与する前の前記対象のＣＳＦでのＨＳ Ｄ２Ｓ６のレベルと比較して、前記対象のＣＳＦでのＨＳ Ｄ２Ｓ６のレベルを、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％超の減少をもたらす、パラグラフ１～１５のいずれか１つに記載の方法。
１７．ＨＳ Ｄ２Ｓ６のレベルを、前記ｒＡＡＶを投与して、約２ヶ月、約４ヶ月、約６ヶ月、約８ヶ月、約１０ヶ月、約１２ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約３年、約４年、または約５年後に決定する、パラグラフ１６に記載の方法。
１８．ＨＳ Ｄ２Ｓ６のレベルの低下が、前記ｒＡＡＶを投与してから、少なくとも６ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１２ヶ月間、少なくとも１５ヶ月間、少なくとも１８ヶ月間、少なくとも２１ヶ月間、または少なくとも２４ヶ月間持続する、パラグラフ１６または１７に記載の方法。
１９．前記ｒＡＡＶが、ＭＲＩで決定した、約１．３×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量、約６．５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量、または２×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量の用量で投与する、パラグラフ１～１８のいずれか１つに記載の方法。
２０．前記ヒト対象が、５歳以上、かつ１８歳未満である、パラグラフ１～１９のいずれか１つに記載の方法。
２１．前記ヒト対象が、４ヶ月以上、かつ５歳未満である、パラグラフ１～１９のいずれか１つに記載の方法。
２２．前記ヒト対象が、前記ｒＡＡＶの投与時に酵素補充療法（ＥＲＴ）を受けている、パラグラフ１～２１のいずれか１つに記載の方法。
２３．前記ヒト対象は、ＥＲＴに応答しない、パラグラフ２２に記載の方法。
２４．前記ＥＲＴが、組換えイデュルスルファーゼである、パラグラフ２２または２３に記載の方法。
２５．前記ＥＲＴは、前記ｒＡＡＶを投与して、約６ヶ月、約９０ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２１ヶ月、または約２４ヶ月後に中止する、パラグラフ２２～２４のいずれか１つに記載の方法。
２６．前記ｒＡＡＶを、大槽内（ＩＣ）投与を介して投与する、パラグラフ１～２５のいずれか１つに記載の方法。
２７．前記ｒＡＡＶを、脳室内（ＩＣＶ）投与を介して投与する、パラグラフ１～２５のいずれか１つに記載の方法。
２８．前記ｒＡＡＶを、前記ヒト対象の脳脊髄液の全体積の１０％を超えない体積で投与する、パラグラフ１～２７のいずれか１つに記載の方法。
２９．前記ｒＡＡＶが、組換えアデノ随伴ウイルス血清型９であるパラグラフ１～２８のいずれか１つに記載の方法。
３０．前記ｒＡＡＶが、ヒトＩＤＳ発現カセットを含有しており、発現が、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーとニワトリベータアクチンプロモーター（ＣＢ７）とのハイブリッドによって駆動する、パラグラフ２９に記載の方法。
３１．前記ヒトＩＤＳ発現カセットが、（ｉ）逆方向末端反復（ＩＴＲ）に隣接するＩＤＳ導入遺伝子、（ｉｉ）ニワトリベータアクチンイントロン、及び（ｉｉｉ）ウサギベータ－グロビンポリアデニル化（ポリＡ）シグナルを含む、パラグラフ３０に記載の方法。
３２．前記ＩＴＲが、ＡＡＶ２ ＩＴＲである、パラグラフ３１に記載の方法。
３３．前記ヒトＩＤＳ発現カセットが、配列番号４５のヌクレオチド配列を含む核酸を含む、パラグラフ３０～３２のいずれか１つに記載の方法。
３４．前記ｒＡＡＶの投与前または投与時に、前記ヒト対象に対して免疫抑制療法を投与することをさらに含み、任意に、その後も免疫抑制療法を継続する、パラグラフ１～３３のいずれか１つに記載の方法。
３５．前記免疫抑制療法は、コルチコステロイド、シロリムス、及び／またはタクロリムスの１つ以上を投与することを含む、パラグラフ３４に記載の方法。
３６．前記１つ以上のコルチコステロイドが、メチルプレドニゾロン及び／またはプレドニゾンである、パラグラフ３５に記載の方法。
３７．前記ｒＡＡＶより先に、または同時に、前記ヒト対象に対して１つ以上の抗生物質を投与することをさらに含む、パラグラフ１～３６のいずれか１つに記載の方法。
３８．前記１つ以上の抗生物質が、トリメトプリム、スルファメトキサゾール、ペンタミジン、ダプソン、及び／またはアトバコンである、パラグラフ３７に記載の方法。
３９．ｒＡＡＶより先に、または同時に、前記ヒト対象に対して１つ以上の抗真菌療法を行うことをさらに含む、パラグラフ１～３８のいずれか１つに記載の方法。
４０．ＭＰＳ ＩＩの診断を受けたヒト対象を治療する方法であって：
（ａ）前記ヒト対象に対して、ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶの治療有効量を投与することであって、前記ヒト対象は、ＥＲＴでの治療を受けた、またはＥＲＴの治療を行っている、前記投与すること；及び
（ｂ）前記ヒト対象由来の生物学的試料での少なくとも１つのバイオマーカーのレベルが基準よりも低い場合、前記ヒト対象でのＥＲＴ治療を中止することであって、前記生物学的試料は、投与後に前記ヒト対象から得たものであり、前記少なくとも１つのバイオマーカーが、Ｄ２Ｓ６、ＨＳ、及び／または総ＧＡＧを含む、前記中止すること、を含む、前記方法。
４１．ＭＰＳ ＩＩの診断を受けたヒト対象を治療する方法であって：
（ａ）前記ヒト対象に対して、ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶの治療有効量を投与することであって、前記ヒト対象は、ＥＲＴでの治療を受けた、またはＥＲＴの治療を行っている、前記投与すること；及び
（ｂ）前記ヒト対象由来の生物学的試料での少なくとも１つのバイオマーカーのレベルが基準よりも高い場合、前記ヒト対象でのＥＲＴ治療を中止することであって、前記生物学的試料は、投与前に前記ヒト対象から得たものであり、前記少なくとも１つのバイオマーカーが、抗ＩＤＳ抗体である、前記中止すること、を含む、前記方法。
４２．前記少なくとも１つのバイオマーカーは、Ｄ２Ｓ６である、パラグラフ４０に記載の方法。
４３．前記少なくとも１つのバイオマーカーは、ＥＲＴを中止する前の基準よりも、約または少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％低い、パラグラフ４０または４２のいずれか１つに記載の方法。
４４．前記少なくとも１つのバイオマーカーが、ＥＲＴを中止する前の基準よりも、約または少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％高い、パラグラフ４１に記載の方法。
４５．前記基準が、所定値である、パラグラフ４０～４４のいずれか１つに記載の方法。
４６．前記基準は、前記ヒト対象に対して前記ｒＡＡＶを投与する前に前記ヒト対象から得た生物学的試料での前記少なくとも１つのバイオマーカーのレベルである、パラグラフ４０～４４のいずれか１つに記載の方法。
４７．前記基準は、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けたが、ＥＲＴを受けていない対象から得た生物学的試料での少なくとも１つのバイオマーカーのレベルである、パラグラフ４０～４４のいずれか１つに記載の方法。
４８．前記ｒＡＡＶを、前記ヒト対象に対して投与した日と同じ日に前記ＥＲＴ治療を中止する、パラグラフ４０～４７のいずれか１つに記載の方法。
４９．前記ｒＡＡＶを、前記ヒト対象に対して投与して５２週間後に前記ＥＲＴ治療を中止する、パラグラフ４０または４２～４７のいずれか１つに記載の方法。
５０．前記生物学的試料がＣＳＦ、尿、血漿、または血清である、パラグラフ４０～４９のいずれか１つに記載の方法。
５１．ＭＰＳ ＩＩの診断を受けたヒト対象を治療する方法であって：
（ａ）前記ヒト対象でのＥＲＴ治療を中止することであって、前記ヒト対象は、ＥＲＴでの治療を受けた、またはＥＲＴの治療を行っている、前記中止すること；及び
（ｂ）ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶの治療有効量をヒト対象に対して投与することであって、前記投与は、前記ヒト対象でのＥＲＴ治療が中止した後に行う、前記投与すること、を含む、前記方法。
５２．前記ＥＲＴ治療は、前記投与の約または少なくとも約１年、６ヶ月、５ヶ月、４ヶ月、３ヶ月、２ヶ月、１ヶ月、３週間、２週間、１週間、１０日、５日、または１日前に中止する、パラグラフ５１に記載の方法。
５３．少なくとも１つのバイオマーカーのレベルは、中止する前に、前記ヒト対象由来の生物学的試料では検出されない、パラグラフ５１～５２のいずれか１つに記載の方法。
５４．前記少なくとも１つのバイオマーカーが、抗ＡＡＶ抗体である、パラグラフ５３に記載の方法。
５５．前記抗ＡＡＶ抗体が、抗ＡＡＶ９抗体である、パラグラフ５４に記載の方法。
５６．前記生物学的試料が、血清であるパラグラフ５１～５５のいずれか１つに記載の方法。
５７．ヒト対象におけるＭＰＳ ＩＩ治療の有効性を決定するか、またはモニタリングする方法であって、ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶの治療有効量を、前記ヒト対象に対して投与することを含み、基準と比較した前記ヒト対象由来の生物学的試料でのＤ２Ｓ６のレベルの低下は、前記ヒト対象における前記ＭＰＳ ＩＩ治療の有効性を示し、前記生物学的試料は、投与後の前記ヒト対象から得た、前記方法。
５８．前記ヒト対象が、肝脾腫大症を有する、パラグラフ４０～５７のいずれか１つに記載の方法。
５９．前記ヒト対象が、投与前にＥＲＴでの治療を受けた、及び／または投与後にＥＲＴ治療を受けた、パラグラフ５８に記載の方法。
６０．前記ＥＲＴが、組換えイデュルスルファーゼを用いた酵素補充療法である、パラグラフ４０～５９のいずれか１つに記載の方法。
６１．前記生物学的試料が、ＣＳＦである、パラグラフ５７～６０のいずれか１つに記載の方法。
６２．Ｄ２Ｓ６のレベルの低下は、前記基準と比較して、約または少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％の減少である、パラグラフ５７～６１のいずれか１つに記載の方法。
６３．ＭＰＳ ＩＩ治療の前記有効性は、基準と比較した、Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ， ３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ）の少なくとも１つのサブテストの改善である、パラグラフ５７～６２のいずれか１つに記載の方法。
６４．前記少なくとも１つのサブテストが、年齢同等性スコア、認知発達指数（ＤＱ）、表現言語ＤＱ、受容言語ＤＱ、粗大運動ＤＱ、及び／または微細運動ＤＱである、パラグラフ６３に記載の方法。
６５．前記改善が、約または少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１５、１７、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、または１００を超えるＤＱの改善である、パラグラフ６３または６４に記載の方法。
６６．前記年齢同等性スコアが、約または少なくとも約１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１８ヶ月、２４ヶ月、または２４ヶ月を超えて増加する、パラグラフ６４に記載の方法。
６７．前記基準は、投与前に前記ヒト対象から得た前記ＢＳＩＤ－ＩＩＩの少なくとも１つのサブテストのスコアである、パラグラフ６３～６６のいずれか１つに記載の方法。
６８．前記基準は、前記ヒト対象と同年齢のＭＰＳ ＩＩを有するヒト対象から得た前記ＢＳＩＤ－ＩＩＩの少なくとも１つのサブテストの平均スコアである、パラグラフ６３～６６のいずれか１つに記載の方法。
６９．前記基準が、投与前に前記ヒト対象から得た生物学的試料でのＤ２Ｓ６のレベルである、パラグラフ５７～６８のいずれか１つに記載の方法。
７０．前記生物学的試料は、投与して約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０日後、または１、２、３、４、５、６、７、８、１０、１６、２０、２４、３０、３５、４０、４５、４８、５０、５２、５６、１０４週間後、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２ヶ月後、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０年後に前記ヒト対象から得た、パラグラフ５７～６９のいずれか１つに記載の方法。
７１．前記ヒト対象が、小児対象である、パラグラフ５１～７０のいずれか１つに記載の方法。
７２．ＭＰＳ ＩＩ治療の前記有効性は、投与前の前記ヒト対象でのＤ２Ｓ６のレベルと比較して、約または少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％のＤ２Ｓ６のレベルの低下で実証する、パラグラフ５７～７１のいずれか１つに記載の方法。
７３．前記ｒＡＡＶを、前記ヒト対象に対して、くも膜下腔内に投与する、パラグラフ１～７２のいずれか１つに記載の方法。
７４．前記ｒＡＡＶを：
（ａ）約８．７７ｇ／Ｌの濃度の塩化ナトリウム、
（ｂ）約０．２４４ｇ／Ｌの濃度の塩化マグネシウム、
（ｃ）約０．２２４ｇ／Ｌの濃度の塩化カリウム、
（ｄ）約０．２０６ｇ／Ｌの濃度の塩化カルシウム、
（ｅ）約０．７９３ｇ／Ｌの濃度のデキストロース、
（ｆ）約０．００１％（体積／体積）の濃度のポロクサマー１８８、
（ｇ）約０．０２７８ｇ／Ｌの濃度のリン酸一ナトリウム一水和物、及び
（ｈ）約０．１１４ｇ／Ｌの濃度の無水リン酸二ナトリウム、を含む溶液で前記ヒト対象に対して投与する、パラグラフ１～７３のいずれか１つに記載の方法。
７５．対象が神経障害性ＭＰＳ ＩＩを有すると同定または診断する方法であって：
（ａ）前記対象由来の生物学的試料での１つ以上のヘパラン硫酸二糖のレベルを決定する；
（ｂ）１つ以上のヘパラン硫酸二糖の前記レベルが、基準レベルと比較して高い場合、前記対象は神経障害性ＭＰＳ ＩＩを有すると同定または診断する；及び
（ｃ）ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶの治療有効量を、神経障害性ＭＰＳ ＩＩを有すると同定または診断した前記対象に投与する、ことを含む、前記方法。
７６．前記１つ以上のヘパラン硫酸二糖が、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、Ｄ２Ｓ６の１つ以上、またはこれらの組み合わせを含む、パラグラフ７５に記載の方法。
７７．前記１つ以上のヘパラン硫酸二糖が、Ｄ２Ｓ６である、パラグラフ７６に記載の方法。
７８．対象が神経障害性ＭＰＳ ＩＩを有すると同定または診断する方法であって：
基準レベルと比較して、対象由来の生物学的試料でのＤ２Ｓ６のレベルが高い場合、前記対象は神経障害性ＭＰＳ ＩＩを有すると同定または診断し、ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶの治療有効量を、神経障害性ＭＰＳ ＩＩを有すると同定または診断された前記対象に投与する、前記方法。
７９．前記生物学的試料が、脳脊髄液である、パラグラフ７５～７８のいずれか１つに記載の方法。
８０．前記対象が、発症前である、または可視または検出可能なＭＰＳ ＩＩ症状を有していない、パラグラフ７５～７９のいずれか１つに記載の方法。
８１．前記対象が、ＭＰＳ ＩＩを有する、パラグラフ７５～８０のいずれか１つに記載の方法。
８２．前記基準レベルが、１名以上の健常者及び／または１名以上の非神経障害性対象由来の生物学的試料での前記少なくとも１つ以上のヘパラン硫酸二糖のレベルである、パラグラフ７５～７７及び７９～８１のいずれか１つに記載の方法。
８３．前記基準レベルが、１名以上の健常者及び／または１名以上の非神経障害性対象由来の生物学的試料でのＤ２Ｓ６のレベルである、パラグラフ７７～８１のいずれか１つに記載の方法。
８４．１名以上の健常者及び／または１名以上の非神経障害性対象由来の前記生物学的試料がＣＳＦ試料である、パラグラフ８２または８３に記載の方法。
８５．前記基準レベルが、所定のレベルである、パラグラフ７５～８４のいずれか１つに記載の方法。
８６．Ｄ２Ｓ６のレベルは、前記対象由来の前記生物学的試料での総ヘパラン硫酸二糖（ＨＳ）の約または少なくとも約１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、または４０％超である、パラグラフ７７～８５のいずれか１つに記載の方法。
８７．Ｄ２Ｓ６のレベルが、前記対象由来の前記生物学的試料での総ヘパラン硫酸二糖（ＨＳ）の約または少なくとも約２０％である、パラグラフ８６に記載の方法。
８８．前記対象由来の前記生物学的試料での前記１つ以上のヘパラン硫酸二糖のレベルまたはＤ２Ｓ６のレベルが、約または少なくとも約５０ｎｇ／ｍＬ、７５ｎｇ／ｍＬ、８０ｎｇ／ｍＬ、８５ｎｇ／ｍＬ、９０ｎｇ／ｍＬ、９５ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ、１０５ｎｇ／ｍＬ、１１０ｎｇ／ｍＬ、１１５ｎｇ／ｍＬ、１２０ｎｇ／ｍＬ、１２５ｎｇ／ｍＬ、１３０ｎｇ／ｍＬ、１３５ｎｇ／ｍＬ、１４０ｎｇ／ｍＬ、１４５ｎｇ／ｍＬ、１５０ｎｇ／ｍＬ、１５５ｎｇ／ｍＬ、１６０ｎｇ／ｍＬ、１６５ｎｇ／ｍＬ、１７０ｎｇ／ｍＬ、１７５ｎｇ／ｍＬ、１８０ｎｇ／ｍＬ、１８５ｎｇ／ｍＬ、１９０ｎｇ／ｍＬ、１９５ｎｇ／ｍＬ、２００ｎｇ／ｍＬ、２１０ｎｇ／ｍＬ、２２０ｎｇ／ｍＬ、２３０ｎｇ／ｍＬ、２４０ｎｇ／ｍＬ、２５０ｎｇ／ｍＬ、２６０ｎｇ／ｍＬ、２７０ｎｇ／ｍＬ、２８０ｎｇ／ｍＬ、２９０ｎｇ／ｍＬ、３００ｎｇ／ｍＬ、３１０ｎｇ／ｍＬ、３２０ｎｇ／ｍＬ、３３０ｎｇ／ｍＬ、３４０ｎｇ／ｍＬ、３５０ｎｇ／ｍＬ、３６０ｎｇ／ｍＬ、３７０ｎｇ／ｍＬ、３８０ｎｇ／ｍＬ、３９０ｎｇ／ｍＬ、４００ｎｇ／ｍＬ、または、４００ｎｇ／ｍＬ超である、パラグラフ７５～８７のいずれか１つに記載の方法。
８９．前記対象由来の前記生物学的試料での前記１つ以上のヘパラン硫酸二糖のレベルまたはＤ２Ｓ６のレベルが、約または少なくとも約１００ｎｇ／ｍＬ、１１０ｎｇ／ｍＬ、１２０ｎｇ／ｍＬ、１３０ｎｇ／ｍＬ、１４０ｎｇ／ｍＬ、１５０ｎｇ／ｍＬ、１６０ｎｇ／ｍＬ、１７０ｎｇ／ｍＬ、１８０ｎｇ／ｍＬ、１９０ｎｇ／ｍＬ、２００ｎｇ／ｍＬ、２００ｎｇ／ｍＬ、または２００ｎｇ／ｍＬ超である、パラグラフ７５～８８のいずれか１つに記載の方法。
９０．前記対象由来の前記生物学的試料での前記１つ以上のヘパラン硫酸二糖のレベルまたはＤ２Ｓ６のレベルが、前記基準レベルと比較して、約または少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬ、２０ｎｇ／ｍＬ、３０ｎｇ／ｍＬ、４０ｎｇ／ｍＬ、５０ｎｇ／ｍＬ、６０ｎｇ／ｍＬ、７０ｎｇ／ｍＬ、８０ｎｇ／ｍＬ、９０ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ、１５０ｎｇ／ｍＬ、１６０ｎｇ／ｍＬ、１７０ｎｇ／ｍＬ、１８０ｎｇ／ｍＬ、１９０ｎｇ／ｍＬ、２００ｎｇ／ｍＬ、２１０ｎｇ／ｍＬ、２２０ｎｇ／ｍＬ、２３０ｎｇ／ｍＬ、２４０ｎｇ／ｍＬ、２５０ｎｇ／ｍＬ、２６０ｎｇ／ｍＬ、２７０ｎｇ／ｍＬ、２８０ｎｇ／ｍＬ、２９０ｎｇ／ｍＬ、３００ｎｇ／ｍＬ、３１０ｎｇ／ｍＬ、３２０ｎｇ／ｍＬ、３３０ｎｇ／ｍＬ、３４０ｎｇ／ｍＬ、３５０ｎｇ／ｍＬ、３６０ｎｇ／ｍＬ、３７０ｎｇ／ｍＬ、３８０ｎｇ／ｍＬ、３９０ｎｇ／ｍＬ、４００ｎｇ／ｍＬ、４１０ｎｇ／ｍＬ、４２０ｎｇ／ｍＬ、４３０ｎｇ／ｍＬ、４４０ｎｇ／ｍＬ、４５０ｎｇ／ｍＬ、４６０ｎｇ／ｍＬ、４７０ｎｇ／ｍＬ、４８０ｎｇ／ｍＬ、４９０ｎｇ／ｍＬ、５００ｎｇ／ｍＬ、または５００ｎｇ／ｍＬ超の上昇を示す、パラグラフ７５～８９のいずれか１つに記載の方法。
９１．ヒト対象でのＭＰＳ Ｉ治療の有効性を決定する、または有効性をモニタリングする方法であって、ヒトＩＤＵＡをコードするｒＡＡＶの治療有効量を、前記ヒト対象に投与することを含み、基準と比較した前記ヒト対象由来の生物学的試料でのＩ０Ｓ６のレベルの低下は、前記ヒト対象での前記ＭＰＳ Ｉ治療の有効性を示しており、前記生物学的試料は、投与した後の前記ヒト対象から得た、前記方法。
９２．前記生物学的試料が、血漿である、パラグラフ９１に記載の方法。
９３．前記ヒト対象が、投与前にＥＲＴでの治療を受けた、及び／または投与後にＥＲＴの治療を受けた、パラグラフ９０または９１に記載の方法。
９４．前記ＥＲＴが、組換えイデュルスルファーゼを使用する酵素補充療法である、パラグラフ９１～９３のいずれか１つに記載の方法。
９５．前記Ｉ０Ｓ６のレベルの低下は、前記基準と比較して、約または少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％の減少である、パラグラフ９１～９４のいずれか１つに記載の方法。
９６．前記基準は、投与前に前記ヒト対象から得た生物学的試料でのＩ０Ｓ６のレベルである、パラグラフ９１～９５のいずれか１つに記載の方法。
９７．前記基準は、所定の値である、パラグラフ９１～９５のいずれか１つに記載の方法。
９８．前記基準は、ＭＰＳ Ｉの診断を受けた別のヒト対象、またはＭＰＳ Ｉの診断を受けたヒト対象の集団から得た生物学的試料でのＩ０Ｓ６のレベルである、パラグラフ９１～９５のいずれか１つに記載の方法。
９９．ＭＰＳ Ｉ治療の前記有効性は、基準と比較した、Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ， ３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ）の少なくとも１つのサブテストの改善である、パラグラフ９１～９８のいずれか１つに記載の方法。
１００．前記少なくとも１つのサブテストが、年齢同等性スコア、認知発達指数（ＤＱ）、表現言語ＤＱ、受容言語ＤＱ、粗大運動ＤＱ、及び／または微細運動ＤＱである、パラグラフ９９に記載の方法。
１０１．前記基準は、投与前に前記ヒト対象から得た前記ＢＳＩＤ－ＩＩＩの少なくとも１つのブテストのスコアである、パラグラフ９９または１００に記載の方法。
１０２．前記基準は、前記ヒト対象と同じ年齢のＭＰＳ Ｉを有するヒト対象から得た前記ＢＳＩＤ－ＩＩＩの少なくとも１つのサブテストの平均スコアである、パラグラフ９９～１０１のいずれか１つに記載の方法。
１０３．前記ｒＡＡＶを：
（ａ）約８．７７ｇ／Ｌの濃度の塩化ナトリウム、
（ｂ）約０．２４４ｇ／Ｌの濃度の塩化マグネシウム、
（ｃ）約０．２２４ｇ／Ｌの濃度の塩化カリウム、
（ｄ）約０．２０６ｇ／Ｌの濃度の塩化カルシウム、
（ｅ）約０．７９３ｇ／Ｌの濃度のデキストロース、
（ｆ）約０．００１％（体積／体積）の濃度のポロクサマー１８８、
（ｇ）約０．０２７８ｇ／Ｌの濃度のリン酸一ナトリウム一水和物、及び
（ｈ）約０．１１４ｇ／Ｌの濃度の無水リン酸二ナトリウム、を含む溶液で前記ヒト対象に対して投与する、パラグラフ９１～１０２のいずれか１つに記載の方法。
４．図面の簡単な説明
ヒトＩＤＳのアミノ酸配列である。Ｃ８４の翻訳後ホルミルグリシン修飾（図１に太字で示す）は、酵素活性に必要である。８つのＮ結合型グリコシル化部位（Ｎ３１、Ｎ１１５、Ｎ１４４、Ｎ２４６、Ｎ２８０、Ｎ３２５、Ｎ５１３、及びＮ５３７）は、太字であり、枠で囲む。１つのチロシン－Ｏ－硫酸化部位（Ｙ）を太字で表しており、そして、全硫酸化部位配列（ＰＳＳＥＫＹ１６５ＥＮＴＫＴＣＲＧＰＤ）を枠で囲む。Ｎ末端の成熟４２ｋＤａ及び成熟１４ｋＤａポリペプチドを、横方向矢印で示す。脳内では、Ｎ末端の成熟４２ｋＤａ形態は、図１に示すように、次のように、３４位または３６位から始まる：Ｔ３４ＤＡＬＮＶＬＬＩ、及びＡ３６ＬＮＶＬＬＩＩＶ。（Ｓｌｅａｔ，２００５，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ５：１５２０－１５３２，Ｔａｂｌｅ Ｓ２を参照されたい）。８つのＮ－結合型グリコシル化部位の２つ、すなわち、Ｎ２８０及びＮ１１６は、ヒト脳から得たＩＤＳにおいてマンノース－６－リン酸化を受ける。（Ｓｌｅａｔ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｍｏｌ ＆ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｅｏｍｉｃｓ ５．４：６８６－７０１，Ｔａｂｌｅ Ｖで報告される）。
５． 発明の詳細な説明
本発明は、ハンター症候群の診断を受けた患者であるが、これに限定されないムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象の中枢神経系（ＣＮＳ）の脳脊髄液（ＣＳＦ）に向けて、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生する組換えヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ｒｈＩＤＳ）を送達することを含む。本明細書に記載する発明に従って使用することができる組成物及び方法に関して、全内容を、参照により、本明細書で援用する２０１７年４月１４日に出願された国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０２７７７０号（２０１７年１０月１９日にＷＯ／２０１７／１８１１１３として公開された）も参照されたい。
本発明は、ハンター症候群の診断を受けた患者であるが、これに限定されないムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象の中枢神経系（ＣＮＳ）の脳脊髄液（ＣＳＦ）に向けて、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生する組換えヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ｒｈＩＤＳ）を送達することを含む。本明細書に記載する発明に従って使用することができる組成物及び方法に関して、全内容を、参照により、本明細書で援用する２０１７年４月１４日に出願された国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０２７７７０号（２０１７年１０月１９日にＷＯ／２０１７／１８１１１３として公開された）も参照されたい。
好ましい実施形態では、治療は、遺伝子治療を介して行う、例えば、ヒトＩＤＳ（ｈＩＤＳ）、またはｈＩＤＳの誘導体をコードするウイルスベクターまたはその他のＤＮＡ発現コンストラクトを、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けた患者（ヒト対象）のＣＳＦに投与して、形質導入した神経細胞、及び／またはグリア細胞の永続的なデポーを作り出すことで、継続的に導入遺伝子産物をＣＮＳに供給する。神経細胞／グリア細胞デポーからＣＳＦに分泌されるｒｈＩＤＳは、ＣＮＳでの細胞に取り込まれて、レシピエント細胞での酵素欠損を「横断修正」する。さらに、予期せぬことに、ＣＮＳでの形質導入した神経細胞及びグリア細胞のデポーが、組換え酵素を、ＣＮＳ及び全身の両方に送達することを可能とし、全身治療、例えば、酵素の毎週の静脈内注射の必要性を緩和または解消し得ることが判明した。また、本明細書では、ヒトＩＤＵＡをコードするウイルスベクター、またはその他のＤＮＡ発現コンストラクトを対象に対して投与することによって、ＭＰＳ Ｉを治療することも提供する（例えば、ｈＩＤＵＡ発現カセットを含む血清型９キャプシドの非複製組換えＡＡＶ；コンストラクト２；ＰＣＴ／ＵＳ２０２１／０１４１２９；ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０１５９１０；及び、ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０４２２０５を参照されたい、これらの各々は、参照により、全内容を本明細書に組み込む）。
代替の実施形態では、ｈＩＤＳを、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞の細胞培養物（例えば、バイオリアクター）において生産することができ、酵素補充療法（「ＥＲＴ」）として、例えば、酵素を注射して、ＣＳＦに、ＣＮＳに直接に、及び／または全身に投与することができる。しかしながら、酵素は血液脳関門を通過できず、酵素の全身送達ではＣＮＳの治療をもたらさず、本発明の遺伝子治療手法とは異なり、ＣＮＳへの酵素の直接の送達には、大きな負担を強いるだけでなく、感染のリスクを招く反復注射が必要となるので、遺伝子治療手法は、ＥＲＴを上回るいくつかの利点を提供する。
導入遺伝子がコードするｈＩＤＳは、限定されないが、配列番号１のアミノ酸配列を有するヒトＩＤＳ（ｈＩＤＳ）（図１に示す）、及びアミノ酸の置換、欠失、または付加を有する、例えば、限定をされないが、図２に示すＩＤＳのオーソログに対応する非保存的残基から選択されるアミノ酸置換などを有するｈＩＤＳの誘導体を含むことができるが、ただし、そのような変異は、酵素活性に必要な位置８４（Ｃ８４）のシステイン残基の置換を含まないことを条件とし（Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ ３２６：２４３－２４７）、または、例えば、図３に示すように、または、各々を、参照により全内容を本明細書で援用する、Ｓｕｋｅｇａｗａ－Ｈａｙａｓａｋａ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｊ Ｉｎｈｅｒｔ Ｍｅｔａｂ Ｄｉｓ ２９：７５５－７６１（「弱度」変異体Ｒ４８Ｐ、Ａ８５Ｔ、Ｗ３３７Ｒ、及び切断型変異体Ｑ５３１Ｘ、及び、「重度」変異体Ｐ８６Ｌ、Ｓ３３３Ｌ、Ｓ３４９Ｉ、Ｒ４６８Ｑ、Ｒ４６８Ｌを報告している）、Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９８，ＢＢＡ １４０６：２１４－２１８（「弱度」変異体Ｐ４８０Ｌ、及びＰ４８０Ｑ；及び「重度」変異体Ｐ８６Ｌを報告している）、及び、Ｂｏｎｕｃｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，２００１，ＢＢＡ １５３７：２３３－２３８で報告されているような、重度、重度－中等度、中等度、または弱度ＭＰＳ ＩＩ表現型において特定された変異を含まないことを条件とする。
例えば、ｈＩＤＳの特定位置でのアミノ酸置換は、図２に配置して示したＩＤＳオーソログでの当該位置に認められる対応する非保存的アミノ酸残基から選択することができるが、ただし、図３に示すような、または、各々を、参照により、その全内容を本明細書で援用する、Ｓｕｋｅｇａｗａ－Ｈａｙａｓａｋａ ｅｔ ａｌ．，２００６，ｓｕｐｒａ；Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９８（上記）、及び、Ｂｏｎｕｃｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，２００１，ｓｕｐｒａで報告されているようなあらゆる有害な変異を含まないことを条件とする。結果として得られる導入遺伝子産物は、インビトロで細胞培養または試験動物で、従来のアッセイを使用して試験して、変異がＩＤＳ機能を損なわないことを保証することができる。選択される好ましいアミノ酸置換、欠失、または付加は、細胞培養または動物モデルでのＭＰＳ ＩＩのためのインビトロでの従来のアッセイで試験して、ＩＤＳの酵素活性、安定性、または半減期を維持する、または増加させるものであるべきである。例えば、導入遺伝子産物の酵素活性は、基質として、例えば、４－メチルウンベリフェリル α－Ｌ－イドピラノシズロン酸 ２－硫酸塩、または４－メチルウンベリフェリル硫酸塩を用いる従来の酵素アッセイを使用して評価することができる（使用可能な例示的なＩＤＳ酵素アッセイについては、例えば、各々の全内容を、参照により、本明細書で援用する、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．４８（１８）：１３５０－１３５３，Ｄｅａｎ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．５２（４）：６４３－６４９を参照されたい）。導入遺伝子産物がＭＰＳ ＩＩ表現型を修正する能力を、細胞培養で評価することができる。例えば、培養しているＭＰＳ ＩＩ細胞に、ｈＩＤＳまたは誘導体をコードするウイルスベクターまたはその他のＤＮＡ発現コンストラクトを形質導入する、培養しているＭＰＳ ＩＩ細胞に、導入遺伝子産物または誘導体を加える、または、ＭＰＳ ＩＩ細胞を、ｒｈＩＤＳまたは誘導体を発現及び分泌するように遺伝子操作されたヒト神経宿主細胞／ヒトグリア宿主細胞と共培養して、ＭＰＳ ＩＩ培養細胞の欠陥の修正を決定する、例えば、培養しているＭＰＳ ＩＩ細胞でのＩＤＳ酵素活性及び／またはＧＡＧ貯蔵量の低下を検出することによる。（例えば、その全内容を、参照により、本明細書で援用するＳｔｒｏｎｃｅｋ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ ３９（４）：３４３－３５０を参照されたい）。
本明細書に記載する治療薬を評価するために使用することができる、ＭＰＳ ＩＩのための動物モデルが記載されている。例えば、ＭＰＳ ＩＩのノックアウトマウスモデル（ＩＤＳノックアウト）は、ＩＤＳ遺伝子のエクソン４及び５を、ネオマイシン耐性遺伝子で置換して遺伝子操作された。（Ｇａｒｃｉａ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｊ Ｉｎｈｅｒｉｔ Ｍｅｔａｂ Ｄｉｓ ３０：９２４－３４）。このＩＤＳノックアウトマウスは、骨格異常、肝脾腫大症、尿及び組織ＧＡＧの上昇、及び脳貯蔵病変などのＭＰＳ ＩＩの数多くの特徴を示し（Ｍｕｅｎｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ａｃｔａ Ｐａｅｄｉａｔｒ Ｓｕｐｐｌ ９１：９８－９９）、そして、ＥＲＴの臨床試験を支援するためにＭＰＳ ＩＩでの酵素補充療法の効果を評価するために使用された。したがって、このマウスモデルは、ＭＰＳ ＩＩの治療法として、神経細胞またはグリア細胞が産生するｒＩＤＳを送達する遺伝子療法の効果を研究するための適切なモデルである（例えば、参照により、その全内容を本明細書で援用する、Ｐｏｌｉｔｏ ａｎｄ Ｃｏｓｍａ，２００９，Ａｍ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．８５（２）：２９６－３０１を参照されたい）。
好ましくは、ヒト神経細胞／ヒトグリア細胞が産生するｈＩＤＳ導入遺伝子は、神経細胞及び／またはグリア細胞において機能する発現制御エレメント、例えば、ＣＢ７プロモーター（ニワトリβ－アクチンプロモーター及びＣＭＶエンハンサー）によって制御するべきであり、ベクターによって駆動する導入遺伝子の発現を増強するその他の発現制御エレメント（例えば、ニワトリβ－アクチンイントロン及びウサギβ－グロビンポリＡシグナル）を含むことができる。ｈＩＤＳ導入遺伝子のためのｃＤＮＡコンストラクトには、形質導入したＣＮＳ細胞による適切な翻訳中プロセシング及び翻訳後プロセシング（グリコシル化及びタンパク質硫酸化）を保証するシグナルペプチドのためのコード配列を含めるべきである。ＣＮＳ細胞で使用するそのようなシグナルペプチドとして、以下が挙げられるが、それらに限定されない。
オリゴデンドロサイト－ミエリン糖タンパク質（ｈＯＭＧ）シグナルペプチド：
ＭＥＹＱＩＬＫＭＳＬＣＬＦＩＬＬＦＬＴＰＧＩＬＣ（配列番号２）
Ｅ１Ａ刺激遺伝子の細胞リプレッサー２（ｈＣＲＥＧ２）シグナルペプチド：
ＭＳＶＲＲＧＲＲＰＡＲＰＧＴＲＬＳＷＬＬＣＣＳＡＬＬＳＰＡＡＧ（配列番号３）
Ｖ－セット及び膜貫通ドメイン含有２Ｂ（ｈＶＳＴＭ２Ｂ）シグナルペプチド：
ＭＥＱＲＮＲＬＧＡＬＧＹＬＰＰＬＬＬＨＡＬＬＬＦＶＡＤＡ（配列番号４）
プロトカドヘリンアルファ－１（ｈＰＣＡＤＨＡ１）シグナルペプチド：
ＭＶＦＳＲＲＧＧＬＧＡＲＤＬＬＬＷＬＬＬＬＡＡＷＥＶＧＳＧ（配列番号５）
ＦＡＭ１９Ａ１（ＴＡＦＡ１）シグナルペプチド：
ＭＡＭＶＳＡＭＳＷＶＬＹＬＷＩＳＡＣＡ（配列番号６）
インターロイキン－２シグナルペプチド：
ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＩＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１４）。
シグナルペプチドは、本明細書では、リーダー配列またはリーダーペプチドとも称され得る。
オリゴデンドロサイト－ミエリン糖タンパク質（ｈＯＭＧ）シグナルペプチド：
ＭＥＹＱＩＬＫＭＳＬＣＬＦＩＬＬＦＬＴＰＧＩＬＣ（配列番号２）
Ｅ１Ａ刺激遺伝子の細胞リプレッサー２（ｈＣＲＥＧ２）シグナルペプチド：
ＭＳＶＲＲＧＲＲＰＡＲＰＧＴＲＬＳＷＬＬＣＣＳＡＬＬＳＰＡＡＧ（配列番号３）
Ｖ－セット及び膜貫通ドメイン含有２Ｂ（ｈＶＳＴＭ２Ｂ）シグナルペプチド：
ＭＥＱＲＮＲＬＧＡＬＧＹＬＰＰＬＬＬＨＡＬＬＬＦＶＡＤＡ（配列番号４）
プロトカドヘリンアルファ－１（ｈＰＣＡＤＨＡ１）シグナルペプチド：
ＭＶＦＳＲＲＧＧＬＧＡＲＤＬＬＬＷＬＬＬＬＡＡＷＥＶＧＳＧ（配列番号５）
ＦＡＭ１９Ａ１（ＴＡＦＡ１）シグナルペプチド：
ＭＡＭＶＳＡＭＳＷＶＬＹＬＷＩＳＡＣＡ（配列番号６）
インターロイキン－２シグナルペプチド：
ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＩＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号１４）。
シグナルペプチドは、本明細書では、リーダー配列またはリーダーペプチドとも称され得る。
導入遺伝子を送達するために使用される組換えベクターは、神経細胞及び／またはグリア細胞などであるが、これらに限定されない、ＣＮＳでの細胞への向性を有すべきである。そのようなベクターは、非複製組換えアデノ随伴ウイルスベクター（「ｒＡＡＶ」）を含むことができ、特に、ＡＡＶ９またはＡＡＶｒｈ１０キャプシドを有するウイルスベクターが好ましい。限定されないが、全内容を、参照により、本明細書で援用する米国特許第７，９０６，１１１号においてＷｉｌｓｏｎが記載した、特に好ましくはＡＡＶ／ｈｕ．３１及びＡＡＶ／ｈｕ．３２を有する、ＡＡＶバリアントキャプシド、ならびにその各々の全内容を、参照により、本明細書で援用する米国特許第８，６２８，９６６号、米国特許第８，９２７，５１４号、及びＳｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ ２２：１６２５－１６３４においてＣｈａｔｔｅｒｊｅｅが記載したＡＡＶバリアントキャプシドを使用することができる。しかしながら、「ネイキッドＤＮＡ」コンストラクトと称するレンチウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、または非ウイルス性発現ベクターを含むがこれらに限定されない、他のウイルスベクターを使用することができる。
ＣＳＦへの投与に好適な医薬組成物は、生理的に適合性の水性緩衝剤、界面活性剤、及び任意の賦形剤を含む製剤緩衝液でのｒｈＩＤＳベクターの懸濁液を含む。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、くも膜下腔内投与に好適である。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、大槽内投与（大槽内への注入）に好適である。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、Ｃ１－２穿刺を介した、くも膜下腔内への注入に好適である。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、脳室内投与に好適である。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、腰椎穿刺を介する投与に好適である。一部の実施形態では、本開示のｒＡＡＶを含む医薬組成物は、約８．７７ｇ／Ｌの濃度の塩化ナトリウム、約０．２４４ｇ／Ｌの濃度の塩化マグネシウム六水和物、約０．２２４ｇ／Ｌの濃度の塩化カリウム、約０．２０６ｇ／Ｌの濃度の塩化カルシウム二水和物、約０．７９３ｇ／Ｌの濃度のデキストロース無水物、約０．００１％（体積／体積）の濃度のポロクサマー１８８、約０．０２７８ｇ／Ｌの濃度のリン酸一ナトリウム一水和物、及び、約０．１１４ｇ／Ｌの濃度の無水リン酸二ナトリウムを含む。
組換えベクターの治療有効用量は、くも膜下腔内投与を介して（すなわち、くも膜下腔内へ注入して、組換えベクターがＣＳＦを通じて拡散して、ＣＮＳの細胞に形質導入するようにする）、ＣＳＦに投与すべきである。一部の実施形態では、組換えベクターは、約８．７７ｇ／Ｌの濃度の塩化ナトリウム、約０．２４４ｇ／Ｌの濃度の塩化マグネシウム六水和物、約０．２２４ｇ／Ｌの濃度の塩化カリウム、約０．２０６ｇ／Ｌの濃度の塩化カルシウム二水和物、約０．７９３ｇ／Ｌの濃度のデキストロース無水物、約０．００１％（体積／体積）の濃度のポロクサマー１８８、約０．０２７８ｇ／Ｌの濃度のリン酸一ナトリウム一水和物、及び、約０．１１４ｇ／Ｌの濃度の無水リン酸二ナトリウムを含む溶液で投与する。このことは、いくつかの方法、例えば、頭蓋内（大槽または脳室内）注入、または腰椎槽への注入によって達成することができる。例えば、（大槽内への）大槽内（ＩＣ）注入は、ＣＴガイド後頭下穿刺で行うことができ、または、患者に実行可能であれば、Ｃ１－２穿刺を介してくも膜下腔内への注入を実施することができ、または、腰椎穿刺（一般的には、ＣＳＦの試料を収集するために実施する診断手順）を、ＣＳＦにアクセスするために使用することができる。あるいは、脳室内（ＩＣＶ）投与（血液脳関門を透過しない抗感染剤または抗がん剤の導入に使用する、より侵襲的な技術）を使用して、組換えベクターを直接に脳室内に滴下することができる。あるいは、鼻腔内投与を使用して、ＣＮＳに組換えベクターを送達し得る。
小児の成長過程の早期に起こる比較的急速な脳成長のために、ＩＣに投与されるＡＡＶ９．ｈＩＤＳの総用量は、異なる年齢層において推定した脳質量に応じて変わる、例えば、以下の表２を参照されたい。治験対象の年齢での脳質量については、例えば、ＡＳ Ｄｅｋａｂａｎ，Ａｎｎ Ｎｅｕｒｏｌ，１９７８ Ｏｃｔ；４（４）：３４５－５６を参照されたい。
ＣＳＦ濃度は、後頭部または腰椎穿刺から得られたＣＳＦ流体でのｒｈＩＤＳの濃度を直接に測定することでモニタリングする、または患者の血清において検出したｒｈＩＤＳの濃度から外挿によって推定することができる。
背景として、ヒトＩＤＳは、図１に記載した８つの潜在的なＮ－グリコシル化部位（Ｎ３１、Ｎ１１５、Ｎ１４４、Ｎ２４６、Ｎ２８０、Ｎ３２５、Ｎ５１３、及びＮ５３７）を含む５５０個のアミノ酸のポリペプチドとして翻訳され、プロセシングの間に切断される２５個のアミノ酸のシグナル配列を含む。最初の７６ｋＤａ細胞内前駆体は、そのオリゴ糖鎖がゴルジ体装置内で修飾を受けた後に、リン酸化を受けた９０ｋＤａ前駆体に変換される。この前駆体は、グリコシル化修飾、及びタンパク質分解的切断によって、様々な細胞内中間体を経て、主要な５５ｋＤａ形態へと処理される。まとめると、２５アミノ酸シグナル配列を除去した後に、タンパク質分解プロセシングは、Ｎ３１の下流でＮ末端タンパク質分解切断を行って、８個のアミノ酸（残基２６～３３）のプロペプチドを除去し、Ｎ５１３の上流でＣ末端タンパク質分解切断を行って、１８ｋＤａのポリペプチドを放出して、６２ｋＤａの中間体を生成し、これが、５５ｋＤａの成熟形態へと変換される。さらなるタンパク質分解的切断は、リソソーム区画に位置する４５ｋＤａの成熟形態を生成する。（Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ ２３０：３６２－３６７（「Ｍｉｌｌａｔ １９９７」）から抜粋した図面について、図４を参照されたい、Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．１９９７，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．３２６：２４３－２４７ （「Ｍｉｌｌａｔ １９９７ａ」）、及び、Ｆｒｏｉｓｓａｒｔ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．３０９：４２５－４３０を参照されたい。これらの各々を、参照により、その全内容を本明細書で援用する）。
酵素活性に必要なＣ８４のホルミルグリシン修飾（図１の太字で示す）は、おそらくは初期の翻訳後に起こる、または共翻訳事象として起こる、小胞体では、ほぼ確実に起こる。（Ｓｃｈｍｉｄｔ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｃｅｌｌ ８２：２７１－２７８を引用しているＭｉｌｌａｔ １９９７ａを参照されたい）。ゴルジ体で翻訳後プロセシングが継続し、複合シアル酸含有グリカンを取り入れる、リソソーム区画への送達のための酵素に結合するマンノース－６－リン酸残基を得る。（参照により、簡潔な考察については、全内容を本明細書で援用するＣｌａｒｋｅ，２００８，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ ９：３１１－３１７を参照されたい）。ＩＤＳの安定性に必須の単一のグリコシル化部位は無いが、Ｎ２８０位でのグリコシル化は、マンノース－６－リン酸（Ｍ６Ｐ）受容体を介した細胞の内在化、及びリソソーム標的にとって重要である。（Ｃｈｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ Ｊ ３１：３０９－３１５ ｐ．３１０の第１段）。正常な生理学的状態では、ＩＤＳは非常に低レベルで産生される、酵素は、あったとしても、細胞からほとんど分泌されることはない。（Ｃｌａｒｋｅ，２００８（上記））。
本発明は、部分的には、以下の原理に基づく。
（ｉ）ＣＮＳの神経細胞及びグリア細胞は、ＣＮＳでの堅牢なプロセスである、グリコシル化、及びマンノース－６－リン酸化、及びチロシン－Ｏ－硫酸化を含む分泌タンパク質の翻訳後プロセシングのための細胞機構を有する分泌細胞である。例えば、ヒト脳マンノース－６－リン酸グリコプロテオームについて記載をしており、脳が、その他の組織で認められるよりもはるかに多くの個々のアイソフォームを有するより多くのタンパク質と、マンノース－６－リン酸化タンパク質を含むことを注記した、Ｓｌｅａｔ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ５：１５２０－１５３２、及びＳｌｅａｔ １９９６，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７１：１９１９１－９８；及び、神経細胞が分泌するチロシン硫酸化糖タンパク質の産生を報告しているＫａｎａｎ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｅｘｐ．Ｅｙｅ Ｒｅｓ．８９：５５９－５６７、及びＫａｎａｎ＆Ａｌ－Ｕｂａｉｄｉ，２０１５，Ｅｘｐ．Ｅｙｅ Ｒｅｓ．１３３：１２６－１３１を参照されたい。ヒトＣＮＳ細胞がもたらす翻訳後修飾については、それぞれの全内容を、参照により援用する。
（ｉｉ）ヒトの脳は、天然型／ネイティブＩＤＳの複数のアイソフォームを生成する。特に、ヒト脳マンノース－６－リン酸化糖タンパク質のＮ末端配列決定で、ｈＩＤＳの成熟した４２ｋＤａ鎖のＮ末端配列が、次のように、脳内で位置３４または３６から変化することを明らかにした：Ｔ３４ＤＡＬＮＶＬＬＩ；及び、Ａ３６ＬＮＶＬＬＩＩＶ。（Ｓｌｅａｔ，２００５，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ５：１５２０－１５３２，Ｔａｂｌｅ Ｓ２）。８つのＮ結合型グリコシル化部位のうちの２つ、すなわち、Ｎ２８０及びＮ１１６は、ヒト脳から得たＩＤＳにおいてマンノース－６－リン酸化されていることが判明した。（Ｓｌｅａｔ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｍｏｌ ＆ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｅｏｍｉｃｓ ５．４：６８６－７０１，Ｔａｂｌｅ Ｖで報告している）。
（ｉｉｉ）ｈＩＤＳのプロセシングの間に、神経細胞及びグリア細胞が、７６ｋＤａ及び９０ｋＤａの２つのポリペプチドを分泌するが、９０ｋＤａのポリペプチドだけが、マンノース－６－リン酸化を受けており、このものは、分泌した形態の酵素が、クロスコレクションを達成する上で必要である。（Ｍｉｌｌａｔ，１９９７、形質導入したリンパ芽球様細胞に関する図１の結果、及びＦｒｏｉｓｓａｒｔ １９９５、形質導入した線維芽細胞に関する同様の結果を示す図４－培養培地では、９０ｋＤａ形態だけがリン酸化する）。興味深いことに、神経細胞及びグリア細胞が産生する組換えＩＤＳは、腎臓などのその他の細胞が産生する組換えＩＤＳよりも、レシピエントＣＮＳ細胞の方が貪欲にエンドサイトーシスし得ることを実証している。Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２（Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ １５８８（３）：２０３－９）は、４５ｋＤａ成熟活性型に対する前駆体を適切に処理した非形質導入の神経細胞及びグリア細胞のレシピエント集団による、形質導入した神経細胞及びグリア細胞培養物の馴化培地由来の組換えＩＤＳのＭ６Ｐ受容体媒介エンドサイトーシスを実証した。神経細胞及びグリア細胞株が産生する組換えＩＤＳの取り込み（７４％のエンドサイトーシス）は、腎臓細胞株が産生する酵素の取り込み（５．６％のエンドサイトーシス）をはるかに上回っていた。いずれの事例でも、取り込みはＭ６Ｐによって阻害されており、このことは、組換えＩＤＳの取り込みが、Ｍ６Ｐ受容体が媒介していることを示す。（Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２，表２及び４を参照されたい、また、ｐｐ．２０５－２０６での結果に関連する説明を、以下の表３にまとめる）。
（ｉｖ）本明細書に記載する遺伝子治療手法は、酵素的に活性であるポリアクリルアミドゲル電気泳動（使用するアッセイによる）で測定して約９０ｋＤａのｈＩＤＳ糖タンパク質前駆体の連続分泌をもたらすであろう。まず、ＩＤＳ活性に必要なＣ８４のホルミルグリシン修飾に関与する酵素であるＦＧｌｙ生成酵素（ＦＧＥ、別名、ＳＵＭＦ１）は、ヒト脳の大脳皮質で発現する（ＳＵＭＦ１の遺伝子発現データは、例えば、ＧｅｎｅＣａｒｄｓのｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｅｃａｒｄｓ．ｏｒｇでアクセス可能である）。次に、インサイチュで形質導入した神経細胞及びグリア細胞が産生して分泌したグリコシル化／リン酸化ｒＩＤＳは、ＣＮＳでの形質導入されていない神経細胞及びグリア細胞に取り込まれ、そして、的確にプロセシングされるであろう。いかなる理論の拘束も受けるものではないが、遺伝子治療によってインサイチュで産生して分泌したｒｈＩＤＳ前駆体は、ＣＮＳに投与した場合、ＥＲＴに使用する従来の組換え酵素よりも、ＣＮＳでのレシピエント細胞の方が貪欲にエンドサイトーシスし得る。例えば、Ｅｌａｐｒａｓｅ（登録商標）（線維肉腫細胞株であるＨＴ１０８０で作成）は、精製タンパク質であり、約７６ｋＤａの分子量を有すると報告がされており、神経細胞及びグリア細胞が分泌する高度にリン酸化したと考えられる９０ｋＤａ種のものではない。８つのＮ結合型グリコシル化部位は、Ｅｌａｐｒａｓｅ（登録商標）で完全に占有されており、そして、２つのビスマンノース－６－リン酸末端グリカン、ならびに、高度にシアル化したグリカン複合体を含むことが報告されているが、酵素活性の絶対要件であるＣ８４からＦＧｌｙへの翻訳後修飾は、約５０％にすぎない。（Ｃｌａｒｋｅ，２００８，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ ９：３１１－３１７；Ｅｌａｐｒａｓｅ（登録商標） Ｆｕｌｌ Ｐｒｅｓｃｒｉｂｉｎｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ＥＭＡ ｆｉｌｉｎｇ）。別の組換え産物であるＨｕｎｔｅｒａｓｅ（登録商標）は、ＣＨＯ細胞で作成される。Ｅｌａｐｒａｓｅ（登録商標）よりもＦＧｌｙの多さと活性の高さが報告されているが、マンノース－６－リン酸化と、取り込みについての差異は無かった。（Ｃｈｕｎｇ，２０１４，Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ Ｊ ３１：３０９－３１５）。
（ｖ）インビボでの細胞外でのＩＤＳの有効性は、Ｍ６Ｐと、その活性部位ホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）、すなわち、ホルミルグリシン生成酵素による翻訳後修飾によってＣ８４から変換された、ＦＧｌｙとを介した取り込み（細胞、及びリソソームの内在化）に依存している。上記した表３に示したように、脳細胞（神経細胞及びグリア細胞）は、形質導入した神経細胞及びグリア細胞が分泌するＩＤＳ前駆体培地とインキュベーションすると、遺伝子操作した腎臓細胞が分泌するＩＤＳ前駆体培地とインキュベーションした場合よりも高い酵素活性を示す。結果として生じる活性の５倍もの高まりは、ＩＤＳの効率的な取り込みに依るところが大きい（Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２、表２及び４を参照されたい）。ＣＨＯ細胞またはＨＴ－１０８０細胞が生成するＩＤＳの市販品でのＦＧｌｙ含量は、約５０％～７０％であり、このものが、酵素活性を決定する。しかしながら、神経細胞及びグリア細胞は、ＩＤＳ取り込みが改善しているので、この活性を高め得る。
（ｖｉ）ＩＤＳなどのリソソームタンパク質の細胞性及び細胞内輸送／取り込みは、Ｍ６Ｐを介する。Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２、及びＳｌｅａｔ，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ，２００５で報告されているように、脳細胞由来のＩＤＳは、Ｍ６Ｐを高含有量で含み得る（ヒトの脳が、その他の組織よりも多くの（定量的及び定性的意味で）Ｍａｎ６－Ｐ糖タンパク質を含むことを示す）。ＩＤＳ前駆体のＭ６Ｐ含有量を測定することは、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２で行われているように可能である。阻害性Ｍ６Ｐ（例えば、５ｍＭ）の存在下では、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２の遺伝子操作した腎臓細胞などの非神経細胞または非グリア細胞が生成するＩＤＳ前駆体の取り込みは、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２に示したように、コントロール細胞のそれに近いレベルにまで低下すると予測される。阻害性Ｍ６Ｐの存在下では、神経細胞やグリア細胞などの脳細胞が生成したＩＤＳ前駆体の取り込みは、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２で示されたように、高レベルでとどまるものと予測されており、その取り込みはコントロール細胞よりも４倍多く、また、阻害性Ｍ６Ｐが無いままに遺伝子操作した腎臓細胞が生成したＩＤＳ前駆体のＩＤＳ活性（または、取り込み）のレベルに匹敵する。このアッセイにより、脳細胞が生成したＩＤＳ前駆体でのＭ６Ｐ含量を予測する方法、及び、特に、異なるタイプの細胞が生成するＩＤＳ前駆体でのＭ６Ｐ含量を比較することができる。本明細書に記載する遺伝子治療手法は、結果として、このようなアッセイにおいて、阻害性Ｍ６Ｐの存在下で、高レベルで神経細胞及びグリア細胞に取り込まれ得るｈＩＤＳ前駆体を継続的に分泌する。
（ｖｉｉ）ＩＤＳ前駆体のＭ６Ｐ含量及び取り込みは、９０ｋＤａ及び７６ｋＤａのゲルバンド（例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルバンド）で実証し得る。この９０ｋＤａは、高度にグリコシル化／リン酸化を受けており、また、Ｍ６Ｐを含むと報告されているが、７６ｋＤａではそうではない。遺伝子操作した腎臓細胞から生成したＩＤＳ前駆体のゲルバンド（Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２、図１）と同様に、７６ｋＤａ～９５ｋＤａの範囲、及び８０～８５ｋＤａの平均分子量を有する非常に広範なゲルバンドは、脳細胞から生成したＩＤＳ前駆体のゲルバンドと対比され得る。Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２では、ＩＤＳ前駆体の免疫沈降が失敗に終わったので、ゲルバンドを得ることができない。本明細書に記載する遺伝子治療手法は、遺伝子操作された腎臓細胞から生成されるＩＤＳ前駆体ゲルバンドとは異なるｈＩＤＳ前駆体の継続的を分泌をもたらすであろう。
（ｖｉｉｉ）市販のＩＤＳ前駆体のＭ６Ｐ含量は、２～２．５ｍｏｌ／ｍｏｌであり、その大部分はジ－リン酸化グリカンの形態で存在する。平均的には、すべてのＩＤＳ前駆体がリン酸化しているが、グリカンの正規分布は、複数のリン酸化部位を仮定して、２つ、１つ、及び０個のジ－リン酸化Ｍ６Ｐグリカンを有する一部のＩＤＳ前駆体を有する。取り込み速度は、複数回のリン酸化で大幅に高くなるであろう。
（ｉｘ）ＣＮＳのヒト細胞によるｈＩＤＳのグリコシル化により、安定性、半減期を高め、かつ導入遺伝子産物の望ましくない凝集を減らすことができるグリカンが付加される。重要なことに、本発明のｈＩＤＳに付加されるグリカンは、２，６－シアル酸を含み、Ｎｅｕ５Ａｃ（「ＮＡＮＡ」）を組み込んでいるが、そのヒドロキシル化誘導体であるＮｅｕＧｃ（Ｎ－グリコリルノイラミン酸、すなわち「ＮＧＮＡ」または「Ｎｅｕ５Ｇｃ」）は組み込まない。そのようなグリカンは、ＣＨＯ細胞で作成されるＨｕｎｔｅｒａｓｅ（登録商標）などの組換えＩＤＳ産物には存在しない。これはすなわち、ＣＨＯ細胞が、この翻訳後修飾を行う上で必要とする２，６－シアリルトランスフェラーゼを有しておらず；また、ＣＨＯ細胞が、二等分したＧｌｃＮＡｃも産生せず、Ｎｅｕ５Ａｃ（ＮＡＮＡ）の代わりに、ヒトにとって一般的でない（かつ、潜在的に免疫原性の）シアル酸としてＮｅｕ５Ｇｃ（ＮＧＮＡ）を付加していることによる。例えば、Ｄｕｍｏｎｔ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ ３６（６）：１１１０－１１２２（Ｅａｒｌｙ Ｏｎｌｉｎｅ ｐｐ．１－１３，ｐ．５）、及びＨａｇｕｅ ｅｔ ａｌ．，１９９８ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒ １９：２６１２－２６３０（“「ＣＨＯ細胞株は、α２，６－シアリルトランスフェラーゼの欠如のため、グリコシル化に関して『表現形上制限される』と考えられている」”）を参照されたい。さらに、ＣＨＯ細胞は大部分の個体に存在する抗α－Ｇａｌ抗体と反応して、高濃度でアナフィラキシーを誘発することができる免疫原性グリカンである、α－Ｇａｌ抗原も産生することができる。例えば、Ｂｏｓｑｕｅｓ，２０１０，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ ２８：１１５３－１１５６を参照されたい。本発明のｒｈＩＤＳのヒトグリコシル化パターンは、導入遺伝子産物の免疫原性を低下させ、かつ有効性を向上させるであろう。
（ｘ）導入遺伝子産物の免疫原性は、患者の免疫状態、注入したタンパク質薬物の構造及び特徴、投与経路、ならびに治療の持続時間を含む様々な因子によって誘導され得る。プロセス関連不純物、例えば、宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）、宿主細胞ＤＮＡ、及び化学的残渣、ならびに産物関連不純物、例えば、タンパク質分解物及び構造特徴物、例えば、グリコシル化、酸化、及び凝集（目視不可粒子）が、免疫反応を増強するアジュバントとしての機能を果たすことで免疫原性も高め得る。プロセス関連不純物、及び産物関連不純物の量は、製造プロセス、すなわち細胞培養、精製、製剤、保存、及び取扱いによる影響を受ける、また、それらは、商業生産するＩＤＳ産物に影響を及ぼす。遺伝子治療では、タンパク質はインビボで生産する、その結果、プロセス関連不純物は存在せず、また、タンパク質産物は、組換え技術で生産するタンパク質と関連した生産物関連不純物／分解物、例えば、タンパク質凝集物及びタンパク質酸化物を含む可能性は低い。凝集は、例えば、タンパク質生産及び貯蔵と関連があり、高いタンパク質濃度、製造装置及び容器との表面相互作用、ならびにある特定の緩衝剤系を使用した精製プロセスに起因する。しかし、導入遺伝子をインビボで発現させる場合、凝集を促すこれらの条件は存在しない。また、酸化、例えば、メチオニン、トリプトファン、及びヒスチジンの酸化は、タンパク質生産及び貯蔵と関連があり、例えば、ストレスを負荷した細胞培養条件、金属及び空気との接触、ならびに緩衝剤及び賦形剤での不純物に起因して発生する。インビボで発現するタンパク質は、ストレスを負荷した条件下でも酸化し得るが、ヒトは多くの生物と同様に、抗酸化防御システムを備えており、それにより、酸化ストレスが低下するだけでなく、酸化を修復、及び／または逆行させる。したがって、インビボで生産されるタンパク質が、酸化形態にある可能性は低い。凝集及び酸化は両方とも、効力、薬物動態（クリアランス）に影響を及ぼし得る、また、免疫原となる懸念を増大させる。本明細書に記載する遺伝子治療手法は、商業生産した産物と比較して免疫原性の低下したｈＩＤＳ前駆体の継続的分泌をもたらすであろう。
（ｘｉ）Ｎ結合型グリコシル化部位に加えて、ｈＩＤＳは、チロシン（「Ｙ」）硫酸化部位（ＰＳＳＥＫＹ１６５ＥＮＴＫＴＣＲＧＰＤ）を含む。（例えば、Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０：２１３８－２１６４、特に、ｐ．２１５４、この文献は、タンパク質チロシン硫酸化に供するチロシン残基を取り囲むアミノ酸の分析に関して、その全内容を、参照により援用する。「規則」は、以下のようにまとめることができる：Ｙの＋５～－５位以内にあるＥまたはＤを有するＹ残基、及びＹの位置－１が中性である、または酸性荷電アミノ酸である。しかし、塩基性アミノ酸、例えば、硫酸化を破棄するＲ、Ｋ、またはＨではない）。いかなる理論にも拘束されるものではないが、ｈＩＤＳでのこの部位の硫酸化は、酵素の安定性、及び基質に対する結合親和性を改善し得る。ヒトＣＮＳ細胞での堅牢な翻訳後プロセスであるｈＩＤＳのチロシン硫酸化は、導入遺伝子産物のプロセシング及び活性を改善するであろう。リソソームタンパク質のチロシン硫酸化の重要性は解明されていないが、その他のタンパク質では、タンパク質間相互作用（抗体と受容体）の親和性を高め、そして、タンパク質分解プロセシング（ペプチドホルモン）を促すことを示している。（Ｍｏｏｒｅ，２００３，Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：２４２４３－４６；及び、Ｂｕｎｄｅｇａａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｔｈｅ ＥＭＢＯ Ｊ １４：３０７３－７９を参照されたい）。チロシン硫酸化（ＩＤＳプロセシングの最終ステップとして起こり得る）に関与するチロシルタンパク質スルホトランスフェラーゼ（ＴＰＳＴ１）は、脳内で（ｍＲＮＡに基づいて）さらに高レベルで発現している（ＴＰＳＴ１の遺伝子発現データは、例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｇｘａ／ｈｏｍｅでアクセス可能である、ＥＭＢＬ－ＥＢＩ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｔｌａｓに認められ得る）。このような翻訳後修飾は、よくても、ＣＨＯ細胞産物において過小評価される。ヒトＣＮＳ細胞とは異なり、ＣＨＯ細胞は、分泌細胞ではなく、また、翻訳後チロシン硫酸化の能力も限られている。（例えば、Ｍｉｋｋｅｌｓｅｎ ＆ Ｅｚｂａｎ，１９９１，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３０：１５３３－１５３７，特に、ｐ．１５３７のｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎを参照されたい）。
（ｉ）ＣＮＳの神経細胞及びグリア細胞は、ＣＮＳでの堅牢なプロセスである、グリコシル化、及びマンノース－６－リン酸化、及びチロシン－Ｏ－硫酸化を含む分泌タンパク質の翻訳後プロセシングのための細胞機構を有する分泌細胞である。例えば、ヒト脳マンノース－６－リン酸グリコプロテオームについて記載をしており、脳が、その他の組織で認められるよりもはるかに多くの個々のアイソフォームを有するより多くのタンパク質と、マンノース－６－リン酸化タンパク質を含むことを注記した、Ｓｌｅａｔ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ５：１５２０－１５３２、及びＳｌｅａｔ １９９６，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７１：１９１９１－９８；及び、神経細胞が分泌するチロシン硫酸化糖タンパク質の産生を報告しているＫａｎａｎ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｅｘｐ．Ｅｙｅ Ｒｅｓ．８９：５５９－５６７、及びＫａｎａｎ＆Ａｌ－Ｕｂａｉｄｉ，２０１５，Ｅｘｐ．Ｅｙｅ Ｒｅｓ．１３３：１２６－１３１を参照されたい。ヒトＣＮＳ細胞がもたらす翻訳後修飾については、それぞれの全内容を、参照により援用する。
（ｉｉ）ヒトの脳は、天然型／ネイティブＩＤＳの複数のアイソフォームを生成する。特に、ヒト脳マンノース－６－リン酸化糖タンパク質のＮ末端配列決定で、ｈＩＤＳの成熟した４２ｋＤａ鎖のＮ末端配列が、次のように、脳内で位置３４または３６から変化することを明らかにした：Ｔ３４ＤＡＬＮＶＬＬＩ；及び、Ａ３６ＬＮＶＬＬＩＩＶ。（Ｓｌｅａｔ，２００５，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ５：１５２０－１５３２，Ｔａｂｌｅ Ｓ２）。８つのＮ結合型グリコシル化部位のうちの２つ、すなわち、Ｎ２８０及びＮ１１６は、ヒト脳から得たＩＤＳにおいてマンノース－６－リン酸化されていることが判明した。（Ｓｌｅａｔ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｍｏｌ ＆ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｅｏｍｉｃｓ ５．４：６８６－７０１，Ｔａｂｌｅ Ｖで報告している）。
（ｉｉｉ）ｈＩＤＳのプロセシングの間に、神経細胞及びグリア細胞が、７６ｋＤａ及び９０ｋＤａの２つのポリペプチドを分泌するが、９０ｋＤａのポリペプチドだけが、マンノース－６－リン酸化を受けており、このものは、分泌した形態の酵素が、クロスコレクションを達成する上で必要である。（Ｍｉｌｌａｔ，１９９７、形質導入したリンパ芽球様細胞に関する図１の結果、及びＦｒｏｉｓｓａｒｔ １９９５、形質導入した線維芽細胞に関する同様の結果を示す図４－培養培地では、９０ｋＤａ形態だけがリン酸化する）。興味深いことに、神経細胞及びグリア細胞が産生する組換えＩＤＳは、腎臓などのその他の細胞が産生する組換えＩＤＳよりも、レシピエントＣＮＳ細胞の方が貪欲にエンドサイトーシスし得ることを実証している。Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２（Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ １５８８（３）：２０３－９）は、４５ｋＤａ成熟活性型に対する前駆体を適切に処理した非形質導入の神経細胞及びグリア細胞のレシピエント集団による、形質導入した神経細胞及びグリア細胞培養物の馴化培地由来の組換えＩＤＳのＭ６Ｐ受容体媒介エンドサイトーシスを実証した。神経細胞及びグリア細胞株が産生する組換えＩＤＳの取り込み（７４％のエンドサイトーシス）は、腎臓細胞株が産生する酵素の取り込み（５．６％のエンドサイトーシス）をはるかに上回っていた。いずれの事例でも、取り込みはＭ６Ｐによって阻害されており、このことは、組換えＩＤＳの取り込みが、Ｍ６Ｐ受容体が媒介していることを示す。（Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２，表２及び４を参照されたい、また、ｐｐ．２０５－２０６での結果に関連する説明を、以下の表３にまとめる）。
（ｖ）インビボでの細胞外でのＩＤＳの有効性は、Ｍ６Ｐと、その活性部位ホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）、すなわち、ホルミルグリシン生成酵素による翻訳後修飾によってＣ８４から変換された、ＦＧｌｙとを介した取り込み（細胞、及びリソソームの内在化）に依存している。上記した表３に示したように、脳細胞（神経細胞及びグリア細胞）は、形質導入した神経細胞及びグリア細胞が分泌するＩＤＳ前駆体培地とインキュベーションすると、遺伝子操作した腎臓細胞が分泌するＩＤＳ前駆体培地とインキュベーションした場合よりも高い酵素活性を示す。結果として生じる活性の５倍もの高まりは、ＩＤＳの効率的な取り込みに依るところが大きい（Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２、表２及び４を参照されたい）。ＣＨＯ細胞またはＨＴ－１０８０細胞が生成するＩＤＳの市販品でのＦＧｌｙ含量は、約５０％～７０％であり、このものが、酵素活性を決定する。しかしながら、神経細胞及びグリア細胞は、ＩＤＳ取り込みが改善しているので、この活性を高め得る。
（ｖｉ）ＩＤＳなどのリソソームタンパク質の細胞性及び細胞内輸送／取り込みは、Ｍ６Ｐを介する。Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２、及びＳｌｅａｔ，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ，２００５で報告されているように、脳細胞由来のＩＤＳは、Ｍ６Ｐを高含有量で含み得る（ヒトの脳が、その他の組織よりも多くの（定量的及び定性的意味で）Ｍａｎ６－Ｐ糖タンパク質を含むことを示す）。ＩＤＳ前駆体のＭ６Ｐ含有量を測定することは、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２で行われているように可能である。阻害性Ｍ６Ｐ（例えば、５ｍＭ）の存在下では、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２の遺伝子操作した腎臓細胞などの非神経細胞または非グリア細胞が生成するＩＤＳ前駆体の取り込みは、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２に示したように、コントロール細胞のそれに近いレベルにまで低下すると予測される。阻害性Ｍ６Ｐの存在下では、神経細胞やグリア細胞などの脳細胞が生成したＩＤＳ前駆体の取り込みは、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２で示されたように、高レベルでとどまるものと予測されており、その取り込みはコントロール細胞よりも４倍多く、また、阻害性Ｍ６Ｐが無いままに遺伝子操作した腎臓細胞が生成したＩＤＳ前駆体のＩＤＳ活性（または、取り込み）のレベルに匹敵する。このアッセイにより、脳細胞が生成したＩＤＳ前駆体でのＭ６Ｐ含量を予測する方法、及び、特に、異なるタイプの細胞が生成するＩＤＳ前駆体でのＭ６Ｐ含量を比較することができる。本明細書に記載する遺伝子治療手法は、結果として、このようなアッセイにおいて、阻害性Ｍ６Ｐの存在下で、高レベルで神経細胞及びグリア細胞に取り込まれ得るｈＩＤＳ前駆体を継続的に分泌する。
（ｖｉｉ）ＩＤＳ前駆体のＭ６Ｐ含量及び取り込みは、９０ｋＤａ及び７６ｋＤａのゲルバンド（例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルバンド）で実証し得る。この９０ｋＤａは、高度にグリコシル化／リン酸化を受けており、また、Ｍ６Ｐを含むと報告されているが、７６ｋＤａではそうではない。遺伝子操作した腎臓細胞から生成したＩＤＳ前駆体のゲルバンド（Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２、図１）と同様に、７６ｋＤａ～９５ｋＤａの範囲、及び８０～８５ｋＤａの平均分子量を有する非常に広範なゲルバンドは、脳細胞から生成したＩＤＳ前駆体のゲルバンドと対比され得る。Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２では、ＩＤＳ前駆体の免疫沈降が失敗に終わったので、ゲルバンドを得ることができない。本明細書に記載する遺伝子治療手法は、遺伝子操作された腎臓細胞から生成されるＩＤＳ前駆体ゲルバンドとは異なるｈＩＤＳ前駆体の継続的を分泌をもたらすであろう。
（ｖｉｉｉ）市販のＩＤＳ前駆体のＭ６Ｐ含量は、２～２．５ｍｏｌ／ｍｏｌであり、その大部分はジ－リン酸化グリカンの形態で存在する。平均的には、すべてのＩＤＳ前駆体がリン酸化しているが、グリカンの正規分布は、複数のリン酸化部位を仮定して、２つ、１つ、及び０個のジ－リン酸化Ｍ６Ｐグリカンを有する一部のＩＤＳ前駆体を有する。取り込み速度は、複数回のリン酸化で大幅に高くなるであろう。
（ｉｘ）ＣＮＳのヒト細胞によるｈＩＤＳのグリコシル化により、安定性、半減期を高め、かつ導入遺伝子産物の望ましくない凝集を減らすことができるグリカンが付加される。重要なことに、本発明のｈＩＤＳに付加されるグリカンは、２，６－シアル酸を含み、Ｎｅｕ５Ａｃ（「ＮＡＮＡ」）を組み込んでいるが、そのヒドロキシル化誘導体であるＮｅｕＧｃ（Ｎ－グリコリルノイラミン酸、すなわち「ＮＧＮＡ」または「Ｎｅｕ５Ｇｃ」）は組み込まない。そのようなグリカンは、ＣＨＯ細胞で作成されるＨｕｎｔｅｒａｓｅ（登録商標）などの組換えＩＤＳ産物には存在しない。これはすなわち、ＣＨＯ細胞が、この翻訳後修飾を行う上で必要とする２，６－シアリルトランスフェラーゼを有しておらず；また、ＣＨＯ細胞が、二等分したＧｌｃＮＡｃも産生せず、Ｎｅｕ５Ａｃ（ＮＡＮＡ）の代わりに、ヒトにとって一般的でない（かつ、潜在的に免疫原性の）シアル酸としてＮｅｕ５Ｇｃ（ＮＧＮＡ）を付加していることによる。例えば、Ｄｕｍｏｎｔ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ ３６（６）：１１１０－１１２２（Ｅａｒｌｙ Ｏｎｌｉｎｅ ｐｐ．１－１３，ｐ．５）、及びＨａｇｕｅ ｅｔ ａｌ．，１９９８ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒ １９：２６１２－２６３０（“「ＣＨＯ細胞株は、α２，６－シアリルトランスフェラーゼの欠如のため、グリコシル化に関して『表現形上制限される』と考えられている」”）を参照されたい。さらに、ＣＨＯ細胞は大部分の個体に存在する抗α－Ｇａｌ抗体と反応して、高濃度でアナフィラキシーを誘発することができる免疫原性グリカンである、α－Ｇａｌ抗原も産生することができる。例えば、Ｂｏｓｑｕｅｓ，２０１０，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ ２８：１１５３－１１５６を参照されたい。本発明のｒｈＩＤＳのヒトグリコシル化パターンは、導入遺伝子産物の免疫原性を低下させ、かつ有効性を向上させるであろう。
（ｘ）導入遺伝子産物の免疫原性は、患者の免疫状態、注入したタンパク質薬物の構造及び特徴、投与経路、ならびに治療の持続時間を含む様々な因子によって誘導され得る。プロセス関連不純物、例えば、宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）、宿主細胞ＤＮＡ、及び化学的残渣、ならびに産物関連不純物、例えば、タンパク質分解物及び構造特徴物、例えば、グリコシル化、酸化、及び凝集（目視不可粒子）が、免疫反応を増強するアジュバントとしての機能を果たすことで免疫原性も高め得る。プロセス関連不純物、及び産物関連不純物の量は、製造プロセス、すなわち細胞培養、精製、製剤、保存、及び取扱いによる影響を受ける、また、それらは、商業生産するＩＤＳ産物に影響を及ぼす。遺伝子治療では、タンパク質はインビボで生産する、その結果、プロセス関連不純物は存在せず、また、タンパク質産物は、組換え技術で生産するタンパク質と関連した生産物関連不純物／分解物、例えば、タンパク質凝集物及びタンパク質酸化物を含む可能性は低い。凝集は、例えば、タンパク質生産及び貯蔵と関連があり、高いタンパク質濃度、製造装置及び容器との表面相互作用、ならびにある特定の緩衝剤系を使用した精製プロセスに起因する。しかし、導入遺伝子をインビボで発現させる場合、凝集を促すこれらの条件は存在しない。また、酸化、例えば、メチオニン、トリプトファン、及びヒスチジンの酸化は、タンパク質生産及び貯蔵と関連があり、例えば、ストレスを負荷した細胞培養条件、金属及び空気との接触、ならびに緩衝剤及び賦形剤での不純物に起因して発生する。インビボで発現するタンパク質は、ストレスを負荷した条件下でも酸化し得るが、ヒトは多くの生物と同様に、抗酸化防御システムを備えており、それにより、酸化ストレスが低下するだけでなく、酸化を修復、及び／または逆行させる。したがって、インビボで生産されるタンパク質が、酸化形態にある可能性は低い。凝集及び酸化は両方とも、効力、薬物動態（クリアランス）に影響を及ぼし得る、また、免疫原となる懸念を増大させる。本明細書に記載する遺伝子治療手法は、商業生産した産物と比較して免疫原性の低下したｈＩＤＳ前駆体の継続的分泌をもたらすであろう。
（ｘｉ）Ｎ結合型グリコシル化部位に加えて、ｈＩＤＳは、チロシン（「Ｙ」）硫酸化部位（ＰＳＳＥＫＹ１６５ＥＮＴＫＴＣＲＧＰＤ）を含む。（例えば、Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０：２１３８－２１６４、特に、ｐ．２１５４、この文献は、タンパク質チロシン硫酸化に供するチロシン残基を取り囲むアミノ酸の分析に関して、その全内容を、参照により援用する。「規則」は、以下のようにまとめることができる：Ｙの＋５～－５位以内にあるＥまたはＤを有するＹ残基、及びＹの位置－１が中性である、または酸性荷電アミノ酸である。しかし、塩基性アミノ酸、例えば、硫酸化を破棄するＲ、Ｋ、またはＨではない）。いかなる理論にも拘束されるものではないが、ｈＩＤＳでのこの部位の硫酸化は、酵素の安定性、及び基質に対する結合親和性を改善し得る。ヒトＣＮＳ細胞での堅牢な翻訳後プロセスであるｈＩＤＳのチロシン硫酸化は、導入遺伝子産物のプロセシング及び活性を改善するであろう。リソソームタンパク質のチロシン硫酸化の重要性は解明されていないが、その他のタンパク質では、タンパク質間相互作用（抗体と受容体）の親和性を高め、そして、タンパク質分解プロセシング（ペプチドホルモン）を促すことを示している。（Ｍｏｏｒｅ，２００３，Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：２４２４３－４６；及び、Ｂｕｎｄｅｇａａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｔｈｅ ＥＭＢＯ Ｊ １４：３０７３－７９を参照されたい）。チロシン硫酸化（ＩＤＳプロセシングの最終ステップとして起こり得る）に関与するチロシルタンパク質スルホトランスフェラーゼ（ＴＰＳＴ１）は、脳内で（ｍＲＮＡに基づいて）さらに高レベルで発現している（ＴＰＳＴ１の遺伝子発現データは、例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｇｘａ／ｈｏｍｅでアクセス可能である、ＥＭＢＬ－ＥＢＩ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｔｌａｓに認められ得る）。このような翻訳後修飾は、よくても、ＣＨＯ細胞産物において過小評価される。ヒトＣＮＳ細胞とは異なり、ＣＨＯ細胞は、分泌細胞ではなく、また、翻訳後チロシン硫酸化の能力も限られている。（例えば、Ｍｉｋｋｅｌｓｅｎ ＆ Ｅｚｂａｎ，１９９１，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３０：１５３３－１５３７，特に、ｐ．１５３７のｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎを参照されたい）。
上記した理由のために、ヒト神経細胞及び／またはグリア細胞によるｒｈＩＤＳの産生は、例えば、ＭＰＳ ＩＩ疾患（ハンターなどがあるが、これに限定はされない）の診断を受けた患者（ヒト対象）のＣＳＦに、ｒｈＩＤＳをコードするウイルスベクターまたはその他のＤＮＡ発現コンストラクトを投与して、形質導入したＣＮＳ細胞が分泌する完全ヒトグリコシル化、マンノース－６－リン酸化、硫酸化導入遺伝子産物を継続的に供給する、ＣＮＳでの永続的なデポーを作成することによる、遺伝子治療を達成するＭＰＳ ＩＩの治療のための「バイオベター」分子をもたらすであろう。デポーからＣＳＦに分泌されるｈＩＤＳ導入遺伝子産物は、ＣＮＳでの細胞によってエンドサイトーシスされ、ＭＰＳ ＩＩレシピエント細胞での酵素欠陥を「横断修正」する。
遺伝子治療またはタンパク質治療手法において生産されるすべてのｒｈＩＤＳ分子が完全にグリコシル化する、リン酸化する、及び硫酸化することは、必須ではない。むしろ、生産される糖タンパク質の集団は、有効性を示すのに十分なグリコシル化（２，６－シアル化、及びマンノース－６－リン酸化を含む）及び硫酸化を受けるべきである。本発明の遺伝子治療処置の目的は、疾患の進行を遅延させ、または停止させることである。有効性は、認知機能（例えば、神経認知機能の低下の防止または抑制）；ＣＳＦ及び／または血清での疾患のバイオマーカー（例えば、ＧＡＧ）の低下；及び／または、ＣＳＦ及び／または血清でのＩＤＳ酵素活性の増加を測定することでモニタリングすることができる。炎症の徴候、及びその他の安全事象をモニタリングすることもできる。
遺伝子治療に対する代替治療または追加治療として、ｒｈＩＤＳ糖タンパク質は、組換えＤＮＡ技術によってヒト細胞神経細胞またはグリア細胞が生産することができ、また、糖タンパク質は、ＥＲＴのために、全身的に、及び／またはＣＳＦに、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けた患者に投与することができる）。そのような組換え糖タンパク質生産のために使用することができるヒト細胞株として、ＨＴ－２２、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＨＣＮ－１Ａ、ＨＣＮ－２、ＮＴ２、ＳＨ－ＳＹ５ｙ、ｈＮＳＣ１１、またはＲｅＮｃｅｌｌ ＶＭがあるが、これらに限定されない（例えば、全内容を、参照により、本明細書で援用する、ｒＨｕＧｌｙＩＤＳ糖タンパク質の組換え生産のために使用することができるヒト細胞株の総説に関するＤｕｍｏｎｔ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ ３６（６）：１１１０－１１２２の「Ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ：ｈｉｓｔｏｒｙ，ｓｔａｔｕｓ，ａｎｄ ｆｕｔｕｒｅ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ」を参照されたい）。完全なグリコシル化、特に、シアル化、及びチロシン硫酸化を保証するために、生産に使用する細胞株を、チロシン－Ｏ－硫酸化を担うα－２，６－シアリルトランスフェラーゼ（または、α－２，３－及びα－２，６－シアリルトランスフェラーゼの両方）、及び／またはＴＰＳＴ－１及びＴＰＳＴ－２酵素を共発現するように宿主細胞を遺伝子操作することで強化することができる。
ｒｈＩＤＳの送達が、免疫反応を最小化するであろう一方で、ＣＮＳ関連遺伝子治療に関する最も明白な潜在的毒性源は、遺伝的にＩＤＳを欠損しており、したがって、タンパク質及び／または導入遺伝子を送達するために用いるベクターを寛容しない可能性のあるヒト対象において、発現したｒｈＩＤＳタンパク質に対する免疫を生じることである。
したがって、好ましい実施形態では、患者を免疫抑制治療で共治療することは、特に、ＩＤＳのレベルがゼロに近い重度の疾患を有する患者を治療する場合には適切である。タクロリムスまたはラパマイシン（シロリムス）とミコフェノール酸との組み合わせ、または組織移植手順において使用される他の免疫抑制レジメンが関係する免疫抑制治療を利用することができる。そのような免疫抑制治療は、遺伝子治療の過程で投与され得、ある特定の実施形態では、免疫抑制治療による前処置が好ましい場合がある。免疫抑制治療は、主治医の判断に基づいて、遺伝子治療処置の後も継続することができ、その後、免疫寛容が誘発した場合、例えば、１８０日後に中止され得る。
他の利用可能な治療の送達を伴う、ＣＳＦに対するｒｈＩＤＳの送達との組み合わせが、本発明の方法に含まれる。さらなる治療を、遺伝子治療処置の前に、それと同時に、またはその後に実施することができる。本発明の遺伝子治療と併用することができ得るＭＰＳ ＩＩのために利用可能な治療として、Ｅｌａｐｒａｓｅ（登録商標）を全身的に、またはＣＳＦに対して投与する酵素補充療法、及び／または、ＨＳＣＴ療法があるが、これらに限定されない。
特定の態様では、本明細書に記載する方法は、ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象の治療方法であり、当該ヒト対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）に、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生する組換えヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）前駆体の治療有効量を送達することを含む。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載する方法は、ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象の治療方法であり、当該ヒト対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）に、組換えヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）前駆体の治療有効量を送達することを含み、当該前駆体は、ポリアクリルアミドゲル電気泳動で測定して約９０ｋＤａ（例えば、８５ｋＤａ、８６ｋＤａ、８７ｋＤａ、８８ｋＤａ、８９ｋＤａ、９０ｋＤａ、９１ｋＤａ、９２ｋＤａ、９３ｋＤａ、９４ｋＤａ、または９５ｋＤａ）のものであり、Ｃ８４にホルミルグリシン残基を有し（図１）、α２，６－シアル化を受けており、検出可能なＮｅｕＧｃを含まず、マンノース－６－リン酸化を受けている。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載する方法は、ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象の治療方法であり、当該ヒト対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）に、組換えヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）糖タンパク質前駆体の治療有効量を送達することを含み、当該前駆体は、ポリアクリルアミドゲル電気泳動で測定して約９０ｋＤａ（例えば、８５ｋＤａ、８６ｋＤａ、８７ｋＤａ、８８ｋＤａ、８９ｋＤａ、９０ｋＤａ、９１ｋＤａ、９２ｋＤａ、９３ｋＤａ、９４ｋＤａ、または９５ｋＤａ）のものであり、Ｃ８４にホルミルグリシン残基を有し（図１）、α２，６－シアル化を受けており、検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌを含まず、マンノース－６－リン酸化を受けている。
ある特定の実施形態では、ヒトＩＤＳ前駆体は、当該ＩＤＳ前駆体をＣＳＦに分泌するように遺伝子操作された中枢神経系の細胞のデポーからＣＳＦに送達する。ある特定の実施形態では、デポーを、当該対象の脳内で形成する。ある特定の実施形態では、ヒト対象は、ＩＤＳ活性を欠損している。ある特定の実施形態では、ヒトＩＤＳは、配列番号１のアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載する方法は、ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象の治療方法であり、当該ヒト対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）に、ヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）をコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを投与することを含み、当該発現ベクターは、培養物での初代ヒト神経細胞を形質導入するために使用する場合、ポリアクリルアミドゲル電気泳動で測定して約９０ｋＤａ（例えば、８５ｋＤａ、８６ｋＤａ、８７ｋＤａ、８８ｋＤａ、８９ｋＤａ、９０ｋＤａ、９１ｋＤａ、９２ｋＤａ、９３ｋＤａ、９４ｋＤａ、または９５ｋＤａ）のものであり、Ｃ８４にホルミルグリシン残基を有し（図１）、α２，６－シアル化を受けており、マンノース－６－リン酸化を受けている。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載する方法は、ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象の治療方法であり、当該ヒト対象の脳の脊髄液に向けて、ヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターの治療有効量を投与することを含み、それにより、α２，６－シアル化を受けている、そして、マンノース－６－リン酸化を受けている組換えヒトＩＤＳ糖タンパク質前駆体を分泌するデポーを当該対象の中枢神経系に形成する。
ある特定の実施形態では、α２，６－シアル化した当該組換えヒトＩＤＳ糖タンパク質前駆体の分泌を、細胞培養で、ヒト神経細胞株に当該組換えヌクレオチド発現ベクターを形質導入して確認する。ある特定の実施形態では、マンノース－６－リン酸化した前記組換えヒトＩＤＳ糖タンパク質前駆体の分泌を、細胞培養で、ヒト神経細胞株に当該組換えヌクレオチド発現ベクターを形質導入して確認する。ある特定の実施形態では、マンノース－６－リン酸の存在下及び非存在下で分泌を確認する。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載する方法は、ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象の治療方法であり、当該ヒト対象の脳の脊髄液に、ヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターの治療有効量を投与することを含み、それにより、α２，６－シアル化グリカンを含有するグリコシル化ＩＤＳ前駆体を分泌するデポーを形成し、当該組換えベクターは、培養で、ヒト神経細胞の形質導入のために使用すると、当該細胞培養で、α２，６－シアル化グリカンを含む当該グリコシル化ＩＤＳ前駆体の分泌をもたらす。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載する方法は、ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象を治療する方法であり、当該ヒト対象の脳の脳脊髄液に、ヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターの治療有効量を投与することを含み、それにより、マンノース－６－リン酸を含むグリコシル化ＩＤＳ前駆体を分泌するデポーを形成し、当該組換えベクターは、培養で、ヒト神経細胞の形質導入のために使用すると、当該細胞培養で、マンノース－６－リン酸化した当該グリコシル化ＩＤＳ前駆体の分泌をもたらす。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載する方法は、ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象を治療する方法であり、当該ヒト対象の脳の脳脊髄液に、ヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターの治療有効量を投与することを含み、それにより、ホルミルグリシンを含むグリコシル化ＩＤＳ前駆体を分泌するデポーを形成し、当該組換えベクターは、培養で、ヒト神経細胞の形質導入のために使用すると、当該細胞培養で、ホルミルグリシンを含有する当該グリコシル化ＩＤＳ前駆体の分泌をもたらす。
ある特定の実施形態では、ヒトＩＤＳは、配列番号１のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＩＤＳ導入遺伝子は、リーダーペプチドをコードする。ある特定の実施形態では、発現ベクターは、複製欠損ＡＡＶベクターである。ある特定の実施形態では、発現ベクターは、くも膜下腔内（例えば、大槽内、患者に対して実施可能であればＣ１－２穿刺、または腰椎穿刺）、脳室内、または鼻腔内投与によって、当該対象のＣＳＦに送達する。ある特定の実施形態では、ヒト対象は、ＩＤＳ活性が欠損している。一部の実施形態では、発現ベクターは、約８．７７ｇ／Ｌの濃度の塩化ナトリウム、約０．２４４ｇ／Ｌの濃度である塩化マグネシウム六水和物、約０．２２４ｇ／Ｌの濃度の塩化カリウム、約０．２０６ｇ／Ｌの濃度の塩化カルシウム二水和物、約０．７９３ｇ／Ｌの濃度のデキストロース無水物、約０．００１％（体積／体積）の濃度のポロクサマー１８８、約０．０２７８ｇ／Ｌの濃度のリン酸一ナトリウム一水和物、及び、約０．１１４ｇ／Ｌの濃度の無水リン酸二ナトリウムを含む溶液をくも膜腔下内投与して対象のＣＳＦに送達する。
好ましい実施形態では、グリコシル化ＩＤＳは、検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌを含まない。本明細書で使用する「検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ」という表現は、当該技術分野で公知の標準的なアッセイ方法によって検出可能なＮｅｕＧｃ及び／またはα－Ｇａｌ部分のことを意味する。例えば、ＮｅｕＧｃは、ＮｅｕＧｃを検出する方法に関して、参照により、本明細書で援用する、Ｈａｒａ ｅｔ ａｌ．，１９８９，“Ｈｉｇｈｌｙ Ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎ－Ａｃｅｔｙｌ－ａｎｄ Ｎ－Ｇｌｙｃｏｌｙｌｎｅｕｒａｍｉｎｉｃ Ａｃｉｄｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｕｍ ａｎｄ Ｕｒｉｎｅ ａｎｄ Ｒａｔ Ｓｅｒｕｍ ｂｙ Ｒｅｖｅｒｓｅｄ－Ｐｈａｓｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｗｉｔｈ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ．” Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．，Ｂ：Ｂｉｏｍｅｄ．３７７：１１１－１１９に従ってＨＰＬＣで検出し得る。あるいは、ＮｅｕＧｃは、質量分析で検出し得る。α－Ｇａｌは、ＥＬＩＳＡを使用して検出し得、例えば、Ｇａｌｉｌｉ ｅｔ ａｌ．，１９９８，“Ａ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｍｅａｓｕｒｉｎｇ ａｌｐｈａ－Ｇａｌ ｅｐｉｔｏｐｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｎ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ａ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉ－Ｇａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ．” Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．６５（８）：１１２９－３２を参照されたい、または、質量分析を使用して検出し得、例えば、Ａｙｏｕｂ ｅｔ ａｌ．，２０１３，“Ｃｏｒｒｅｃｔ ｐｒｉｍａｒｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ａｎｄ ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ ｇｌｙｃｏ－ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ ｏｆ ｃｅｔｕｘｉｍａｂ ｂｙ ａ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔａｃｔ，ｍｉｄｄｌｅ－ｕｐ，ｍｉｄｄｌｅ－ｄｏｗｎ ａｎｄ ｂｏｔｔｏｍ－ｕｐ ＥＳＩ ａｎｄ ＭＡＬＤＩ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．” Ｌａｎｄｅｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ．５（５）：６９９－７１０を参照されたい。また、Ｐｌａｔｔｓ－Ｍｉｌｌｓ ｅｔ ａｌ．，２０１５，“Ａｎａｐｈｙｌａｘｉｓ ｔｏ ｔｈｅ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｓｉｄｅ－Ｃｈａｉｎ Ａｌｐｈａ－ｇａｌ” Ｉｍｍｕｎｏｌ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｎｏｒｔｈ Ａｍ．３５（２）：２４７－２６０で引用している文献も参照されたい。
一態様では、本明細書では、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けたヒト対象の治療方法を提供し、ヒトの神経細胞またはグリア細胞が産生する治療有効量のグリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体を、ヒト対象のＣＳＦに送達することを含み、当該グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体を、ヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを投与して誘導し、組換えヌクレオチド発現ベクターを、ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与し、ヒト対象の脳の脳ＭＲＩで脳質量を決定する。
別の態様では、本明細書では、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けたヒト対象の治療方法を提供し、ヒト対象の脳質量を、ヒト対象の脳ＭＲＩで決定して、続いて、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生するグリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体の治療有効量をヒト対象のＣＳＦに送達することを含み、当該グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体を、ヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを投与して送達し、当該組換えヌクレオチド発現ベクターを、ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与する。
別の態様では、本明細書では、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けたヒト対象の治療方法を提供して、（ａ）ヒト対象の脳ＭＲＩからヒト対象の脳質量を決定すること、（ｂ）ヒト対象の脳質量に基づいて用量を計算すること、及び（ｃ）続いて、ヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターの当該用量を、当該対象のＣＳＦに投与することを含む。
別の態様では、本明細書では、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けたヒト対象の治療方法を提供し、（ａ）ヒト対象のＣＳＦに対して、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生するグリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体の治療有効量を送達すること（ｂ）ヒト対象のＣＳＦ中のヘパラン硫酸のレベルを測定すること、及び（ｃ）ヒト対象のＣＳＦ中のヘパラン硫酸のレベルを、参照集団でのヘパラン硫酸のレベルと比較することを、この順序で含み、当該グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体を、ヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターの投与によって誘導し、組換えヌクレオチド発現ベクターを、ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与し、ヒト対象の脳の脳磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）で脳質量を決定する。ある特定の実施形態では、参照集団は、（ａ）少なくとも１、２、３、４、５、１０、２５、５０、７５、１００、２００、２５０、３００、４００、５００、または１０００名のＭＰＳ ＩＩでない健常者からなり、好ましくは、ヒト対象と同様の年齢、体重、及び／または同じ性別の健常者からなる。
別の態様では、本明細書では、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けたヒト対象の治療方法を提供し、（ａ）ヒト対象のＣＳＦ中のヘパラン硫酸のレベルに関する第１の測定を行うこと、（ｂ）ヒト対象のＣＳＦに対して、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞が産生するグリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体の治療有効量を送達すること、及び（ｃ）一定期間の後に、ヘパラン硫酸のレベルに関する第２の測定を行うことを、この順序で含み、当該グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体を、ヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターの投与によって誘導すし、当該組換えヌクレオチド発現ベクターを、ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与し、ヒト対象の脳の脳磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）で脳質量を決定する。ある特定の実施形態では、当該期間は、約１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、４週間、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、１１ヶ月、または１年である。
好ましい実施形態では、グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体を、ヒト対象のＣＮＳでの細胞が取り込む。好ましい実施形態では、グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体を、ヒト対象のＣＮＳでの細胞のリソソームに送達する。
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、ヒト対象の脳体積に、１．０４６ｇ／ｃｍ３の係数を乗じて、ヒト対象の脳体積ｃｍ３からヒト対象の脳質量に変換し、ヒト対象の脳体積を、ヒト対象の脳ＭＲＩから得る。
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣ、またはＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの用量で投与する。本明細書に記載した治療方法の一部の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、約１．３×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量（例えば、脳質量は、ＭＲＩによって決定し、及び、ゲノム数はポリＡ特異的ＰＣＲアッセイで決定する）の用量で投与する。本明細書に記載した治療方法の一部の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、約１．９×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量（例えば、脳質量は、ＭＲＩによって決定し、及び、ゲノム数は導入遺伝子特異的ＰＣＲアッセイで決定する）の用量で投与する。本明細書に記載した治療方法のある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、約６．５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量（例えば、脳質量は、ＭＲＩによって決定し、及び、ゲノム数はポリＡ特異的ＰＣＲアッセイで決定する）の用量で投与する。本明細書に記載した治療方法のある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、約９．６×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量（例えば、脳質量は、ＭＲＩによって決定し、及び、ゲノム数は導入遺伝子特異的ＰＣＲアッセイで決定する）の用量で投与する。本明細書に記載した治療方法のある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、約２．０×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量（例えば、脳質量は、ＭＲＩによって決定し、及び、ゲノム数はポリＡ特異的ＰＣＲアッセイで決定する）の用量で投与する。本明細書に記載した治療方法のある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、約２．９×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量（例えば、脳質量は、ＭＲＩによって決定し、及び、ゲノム数は導入遺伝子特異的ＰＣＲアッセイで決定する）の用量で投与する。
本明細書に記載する治療方法の様々な実施形態では、ヒト対象は、５歳以上、かつ１８歳未満である。特定の実施形態では、ヒト対象は、５歳、６歳、７歳、８歳、９歳、１０歳、１１歳、１２歳、１３歳、１４歳、１５歳、１６歳、１７歳、または１８歳である。特定の実施形態では、ヒト対象は、約５歳、６歳、７歳、８歳、９歳、１０歳、１１歳、１２歳、１３歳、１４歳、１５歳、１６歳、１７歳、または１８歳である。特定の実施形態では、ヒト対象は、５～６歳、６～７歳、７～８歳、８～９歳、９～１０歳、１０～１１歳、１１～１２歳、１２～１３歳、１３～１４歳、１４～１５歳、１５～１６歳、１６～１７歳、１７～１８歳、または１８～１９歳である。特定の実施形態では、ヒト対象は、約５～６歳、６～７歳、７～８歳、８～９歳、９～１０歳、１０～１１歳、１１～１２歳、１２～１３歳、１３～１４歳、１４～１５歳、１５～１６歳、１６～１７歳、１７～１８歳、または１８～１９歳である。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの用量で投与する。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、表７に記載した用量で投与する。
本明細書に記載する治療方法の様々な実施形態では、ヒト対象は、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満である。特定の実施形態では、ヒト対象は、４、５、６、７、８、９、１０、または１１ヶ月齢である。特定の実施形態では、ヒト対象は、約４、５、６、７、８、９、１０、または１１ヶ月齢である。特定の実施形態では、ヒト対象は、４～５、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０、１０～１１、または１１～１２ヶ月齢である。特定の実施形態では、ヒト対象は、約４～５、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０、１０～１１、または１１～１２ヶ月齢である。特定の実施形態では、ヒト対象は、１歳、２歳、３歳、４歳、または５歳である。特定の実施形態では、ヒト対象は、約１歳、２歳、３歳、４歳、または５歳である。特定の実施形態では、ヒト対象は、１～２歳、２～３歳、３～４歳、４～５歳、または５～６歳である。特定の実施形態では、ヒト対象は、約１～２歳、２～３歳、３～４歳、４～５歳、または５～６歳である。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣの用量で投与する。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの用量で投与する。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約２．０×１０１１ＧＣの用量で投与する。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約２．９×１０１１ＧＣの用量で投与する。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約１．９×１０１０ＧＣの用量で投与する。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＭＲＩで決定した脳質量１ｇあたり約９．６×１０１０ＧＣの用量で投与する。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、脳質量１ｇあたり約２．０×１０１１ＧＣ（例えば、脳質量は、ＭＲＩによって決定し、及び、ゲノム数はポリＡ特異的ＰＣＲアッセイで決定する）の用量で投与する。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、脳質量１ｇあたり約２．９×１０１１ＧＣ（例えば、脳質量は、ＭＲＩによって決定し、及び、ゲノム数は導入遺伝子特異的ＰＣＲアッセイで決定する）の用量で投与する。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣ（例えば、脳質量は、ＭＲＩによって決定し、及び、ゲノム数はポリＡ特異的ＰＣＲアッセイで決定する）の用量で投与する。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、脳質量１ｇあたり約１．９×１０１０ＧＣ（例えば、脳質量は、ＭＲＩによって決定し、及び、ゲノム数は導入遺伝子特異的ＰＣＲアッセイで決定する）の用量で投与する。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣ（例えば、脳質量は、ＭＲＩによって決定し、及び、ゲノム数はポリＡ特異的ＰＣＲアッセイで決定する）の用量で投与する。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、脳質量１ｇあたり約９．６×１０１０ＧＣ（例えば、脳質量は、ＭＲＩによって決定し、及び、ゲノム数は導入遺伝子特異的ＰＣＲアッセイで決定する）の用量で投与する。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、表５に従って用量１または用量２から選択する用量で投与する。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、表６に記載した用量で投与する。
本明細書に記載する治療方法の一部の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、大槽内（ＩＣ）投与を介して投与する。本明細書に記載する方法の他の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、脳室内（ＩＣＶ）投与を介して投与する。
本明細書に記載する方法のある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、ヒト対象の脳脊髄液の総体積の１０％を超えない体積で投与する。
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、検出可能なレベルで分泌される。
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞は、ヒトＩＤＳ前駆体をコードする内因性遺伝子に少なくとも１つの変異を有する。
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞を、組換えアデノ随伴ウイルスベクター（ｒＡＡＶ）で形質導入する。
好ましい態様では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＡＡＶ９またはＡＡＶｒｈ１０ベクターである。
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体を、ＣＢ７プロモーターの制御下で発現する。
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体が、ヒトＩＤＳ前駆体をコードするｃＤＮＡから発現する。
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体は、ポリアクリルアミドゲル電気泳動で測定して約９０ｋＤａのものである。
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体は、ホルミルグリシンを含有する。
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体は、（ａ）α２，６－シアル化を受けている、（ｂ）検出可能なＮｅｕＧｃを含まない、（ｃ）検出可能なα－Ｇａｌ抗原を含まない、（ｄ）チロシン硫酸化を含む、及び／または（ｅ）マンノース－６－リン酸化を受けている。
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、グリコシル化組換えヒトＩＤＳ前駆体は、配列番号１のアミノ酸配列を含む。
本明細書で提供するある特定の実施形態では、当該方法は、ヒトＩＤＳ前駆体治療の前に、または同時に免疫抑制療法をヒト対象に対して実施し、任意に、その後も免疫抑制療法を継続する、ことをさらに含む。
一部の実施形態では、免疫抑制療法は、１つ以上のコルチコステロイド、シロリムス、及び／またはタクロリムスを投与することを含む。特定の実施形態では、１つ以上のコルチコステロイドは、メチルプレドニゾロン、及び／またはプレドニゾンである。
特定の実施形態では、免疫抑制療法は、プレドニゾンを、約０．１０ｍｇ／ｋｇ、０．１１ｍｇ／ｋｇ、０．１２ｍｇ／ｋｇ、０．１３ｍｇ／ｋｇ、０．１４ｍｇ／ｋｇ、０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．１６ｍｇ／ｋｇ、０．１７ｍｇ／ｋｇ、０．１８ｍｇ／ｋｇ、０．１９ｍｇ／ｋｇ、０．２０ｍｇ／ｋｇ、０．２１ｍｇ／ｋｇ、０．２２ｍｇ／ｋｇ、０．２３ｍｇ／ｋｇ、０．２４ｍｇ／ｋｇ、０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．２６ｍｇ／ｋｇ、０．２７ｍｇ／ｋｇ、０．２８ｍｇ／ｋｇ、０．２９ｍｇ／ｋｇ、０．３０ｍｇ／ｋｇ、０．３１ｍｇ／ｋｇ、０．３２ｍｇ／ｋｇ、０．３３ｍｇ／ｋｇ、０．３４ｍｇ／ｋｇ、０．３５ｍｇ／ｋｇ、０．３６ｍｇ／ｋｇ、０．３７ｍｇ／ｋｇ、０．３８ｍｇ／ｋｇ、０．３９ｍｇ／ｋｇ、０．４０ｍｇ／ｋｇ、０．４１ｍｇ／ｋｇ、０．４２ｍｇ／ｋｇ、０．４３ｍｇ／ｋｇ、０．４４ｍｇ／ｋｇ、０．４５ｍｇ／ｋｇ、０．４６ｍｇ／ｋｇ、０．４７ｍｇ／ｋｇ、０．４８ｍｇ／ｋｇ、０．４９ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、または１ｍｇ／ｋｇの用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、プレドニゾンを、約０．１０ｍｇ／ｋｇ～約０．２０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、プレドニゾンを、約０．２０ｍｇ／ｋｇ～約０．３０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、プレドニゾンを、約０．３０ｍｇ／ｋｇ～約０．４０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、プレドニゾンを、約０．４０ｍｇ／ｋｇ～約０．５０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、プレドニゾンを、約０．５０ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、これらの用量は、毎日投与する。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、プレドニゾンを、０．５ｍｇ／ｋｇ／日の用量で投与することを含む。別の特定の実施形態では、免疫抑制療法は、プレドニゾンを、０．５ｍｇ／ｋｇ／日の用量で投与することを含み、漸減及び中止する。
ある特定の実施形態では、免疫抑制療法は、メチルプレドニゾロンを、約０．５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．８ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、５．５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、６．５ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、８．５ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、９．５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１１ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇ、１３ｍｇ／ｋｇ、１４ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、１６ｍｇ／ｋｇ、１７ｍｇ／ｋｇ、１８ｍｇ／ｋｇ、１９ｍｇ／ｋｇ、または２０ｍｇ／ｋｇの用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、メチルプレドニゾロンを、約０．５０ｍｇ／ｋｇ～約１．０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、メチルプレドニゾロンを、約１．０ｍｇ／ｋｇ～約２．０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、メチルプレドニゾロンを、約２．０ｍｇ／ｋｇ～約３．０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、メチルプレドニゾロンを、約３．０ｍｇ／ｋｇ～約５．０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、メチルプレドニゾロンを、約５．０ｍｇ／ｋｇ～約１０．０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、メチルプレドニゾロンを、約１０．０ｍｇ／ｋｇ～約１５．０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、メチルプレドニゾロンを、約１５．０ｍｇ／ｋｇ～約２０．０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、メチルプレドニゾロンを１度投与する。特定の実施形態では、メチルプレドニゾロンを、静脈内投与する。特定の実施形態では、メチルプレドニゾロンを、最大で５００ｍｇ投与する。特定の実施形態では、メチルプレドニゾロンを、少なくとも３０分間にわたって投与する。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、メチルプレドニゾロンを、１０ｍｇ／ｋｇ ＩＶの用量で、少なくとも３０分間にわたって、最大で５００ｍｇを投与することを含む。
ある特定の実施形態では、免疫抑制療法は、１～３ｎｇ／ｍＬの標的血中レベルを維持する用量でシロリムスを投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、シロリムスを、約０．２５ｍｇ／ｍ２／日、０．３ｍｇ／ｍ２／日、０．４ｍｇ／ｍ２／日、０．５ｍｇ／ｍ２／日、０．６ｍｇ／ｍ２／日、０．７ｍｇ／ｍ２／日、０．８ｍｇ／ｍ２／日、０．９ｍｇ／ｍ２／日、１ｍｇ／ｍ２／日、１．２５ｍｇ／ｍ２／日、１．５ｍｇ／ｍ２／日、１．７５ｍｇ／ｍ２／日、２ｍｇ／ｍ２／日、２．２５ｍｇ／ｍ２／日、２．５ｍｇ／ｍ２／日、２．７５ｍｇ／ｍ２／日、３ｍｇ／ｍ２／日、３．２５ｍｇ／ｍ２／日、３．５ｍｇ／ｍ２／日、３．７５ｍｇ／ｍ２／日、４ｍｇ／ｍ２／日、４．２５ｍｇ／ｍ２／日、４．５ｍｇ／ｍ２／日、４．７５ｍｇ／ｍ２／日、または５ｍｇ／ｍ２／日の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、シロリムスを、０．２５ｍｇ／ｍ２／日～約０．５ｍｇ／ｍ２／日の範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、シロリムスを、約０．５０ｍｇ／ｍ２／日～約１．０ｍｇ／ｍ２／日の範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、シロリムスを、約１．０ｍｇ／ｍ２／日～約１．５ｍｇ／ｍ２／日の範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、シロリムスを、約１．５ｍｇ／ｍ２／日～約２ｍｇ／ｍ２／日の範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、シロリムスを、約２ｍｇ／ｍ２／日～約５ｍｇ／ｍ２／日の範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、用量を、ＢＩＤ投与用に分割する。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、シロリムスを、約１ｍｇ／ｍ２／日の用量で、４時間ごとに投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、シロリムスを、ＢＩＤ投与用に分割した約０．５ｍｇ／ｍ２／日の用量で投与することを含む。
特定の実施形態では、免疫抑制療法は、タクロリムスを、２～４ｎｇ／ｍＬの標的血中レベルを維持する用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、タクロリムスを、約０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０２ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．０４ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０６ｍｇ／ｋｇ、０．０７ｍｇ／ｋｇ、０．０８ｍｇ／ｋｇ、０．０９ｍｇ／ｋｇ、または０．１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、タクロリムスを、０．０１ｍｇ／ｋｇ～０．０２ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、タクロリムスを、０．０２ｍｇ／ｋｇ～０．０３ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、タクロリムスを、０．０３ｍｇ／ｋｇ～０．０５ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、タクロリムスを、０．０５ｍｇ／ｋｇ～０．０７ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、タクロリムスを、０．０７ｍｇ／ｋｇ～０．１０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与することを含む。特定の実施形態では、当該用量を、１日２回投与する。特定の実施形態では、免疫抑制療法は、タクロリムスを、約０．０５ｍｇ／ｋｇの用量で、１日２回投与することを含む。
一部の実施形態では、当該方法は、免疫抑制療法の前に、または同時に、１つ以上の抗生物質を、ヒト対象に投与することをさらに含む。特定の実施形態では、１つ以上の抗生物質は、トリメトプリム、スルファメトキサゾール、ペンタミジン、ダプソン、及び／またはアトバコンである。別の特定の実施形態では、１つ以上の抗生物質は、トリメトプリム、及び／またはスルファメトキサゾールである。別の特定の実施形態では、１つ以上の抗生物質は、ペンタミジン、ダプソン、及び／またはアトバコンである。特定の実施形態では、１つ以上の抗生物質を、約１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与する。特定の実施形態では、１つ以上の抗生物質を、約１ｍｇ／ｋｇ～２ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与する。特定の実施形態では、１つ以上の抗生物質を、約２ｍｇ／ｋｇ～３ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与する。特定の実施形態では、１つ以上の抗生物質を、約３ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与する。特定の実施形態では、１つ以上の抗生物質を、約５ｍｇ／ｋｇ～７ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与する。特定の実施形態では、１つ以上の抗生物質を、約７ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与する。特定の実施形態では、１つ以上の抗生物質を、週に約３回の用量で投与する。ある特定の実施形態では、１つ以上の抗生物質を、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ肺炎を予防するために投与する。
一部の実施形態では、当該方法は、免疫抑制療法の前に、または同時に、１つ以上の抗真菌療法をヒト対象に実施することをさらに含む。ある特定の実施形態では、１つ以上の抗真菌療法は、絶対好中球数が５００ｍｍ３未満であれば開始する。
一部の実施形態では、当該方法は、組換えヌクレオチド発現ベクターを投与した後に、次のバイオマーカーの１つ以上を測定するステップをさらに含む：（ａ）ＣＳＦ中のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）のレベル、（ｂ）ＣＳＦ中のイズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）のレベル；（ｃ）血漿中のＧＡＧのレベル、（ｄ）血漿中のＩ２Ｓのレベル、（ｅ）白血球Ｉ２Ｓ酵素活性のレベル、及び（ｆ）尿中のＧＡＧのレベル。特定の実施形態では、ＣＳＦ中のＧＡＧは、ＣＳＦ中のヘパリン硫酸を含む。別の特定の実施形態では、ＣＳＦ中のＧＡＧは、ＣＳＦ中のヘパリン硫酸である。別の特定の実施形態では、血漿中のＧＡＧは、血漿中のヘパリン硫酸を含む。別の特定の実施形態では、血漿中のＧＡＧは、血漿中のヘパリン硫酸である。別の特定の実施形態では、尿中のＧＡＧは、尿中のヘパリン硫酸を含む。別の特定の実施形態では、尿中のＧＡＧは、尿中のヘパリン硫酸である。特定の実施形態では、測定するステップは、ＣＳＦ中のヘパリン硫酸のレベルを測定すること含む。別の特定の実施形態では、測定するステップは、白血球Ｉ２Ｓ酵素活性のレベルを測定することを含む。
本明細書に記載する治療方法の特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、液体組成物である。本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、凍結組成物である。本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターは、凍結乾燥組成物、または再構成凍結乾燥組成物である。本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、本明細書で提供する組換えヌクレオチド発現ベクターは、ＩＣまたはＩＣＶ投与のための様々な剤形で製剤し得る。本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、本明細書に提供する組換えヌクレオチド発現ベクターは、単位投与量製剤または複数投与量製剤で提供し得る。本明細書で使用する単位投与量製剤とは、ヒト及び動物対象への投与に適した物理的に別個の単位のことを指しており、当該技術分野で公知の包装方法で個別に包装する。それぞれの単位投与量製剤は、必要な医薬担体または賦形剤と共同して所望の治療効果を奏する上で十分な所定量の当該組換えヌクレオチド発現ベクター、及び／またはその他の成分（複数可）を含む。単位投与量製剤の例として、アンプル、バイアル、予め充填したシリンジ、またはカートリッジがある。
本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、単位投与量を、その一部またはその倍数の用量で投与し得る。本明細書に記載する治療方法のある特定の実施形態では、複数単位投与量とは、単一の容器に同一の単位投与量が複数入れてあり、当該単位投与量に分けて投与する。複数単位投与量の例として、バイアル、予め充填したシリンジ、またはカートリッジがある。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、８．５×１０１２ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、９．８×１０１２ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、１．１×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、１．３×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、１．５×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、１．７×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、４．２×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、４．９×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、５．５×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、６．３×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、７．３×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、８．５×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、９．０×１０１３ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、１．０×１０１４ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、１．１×１０１４ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、１．２×１０１４ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、１．３×１０１４ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、１．４×１０１４ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、１．５×１０１４ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、１．６×１０１４ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、１．７×１０１４ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、１．８×１０１４ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、１．９×１０１４ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、２．０×１０１４ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、２．１×１０１４ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、２．２×１０１４ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、２．３×１０１４ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、２．４×１０１４ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、２．５×１０１４ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、２．６×１０１４ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、１．３×１０１０ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、１．９×１０１０ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、６．５×１０１０ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、９．６×１０１０ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、２．０×１０１１ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。ある特定の実施形態では、予め充填したシリンジは、２．９×１０１１ＧＣの組換えヌクレオチド発現ベクターを含む。
本明細書で使用する用語「約」は、所定の値または範囲の±１０％以内にあることを意味する。ある特定の実施形態では、用語「約」は、所与の値または範囲の±１％以内であることを意味し、また、この数値は、ヒト対象の脳質量に応じた用量であり、また、脳質量は、ヒト対象の脳の脳ＭＲＩで決定する。ある特定の実施形態では、用語「約」は、所与の値または範囲の±２％以内であることを意味し、また、この数値は、対象の脳の脳ＭＲＩで決定する用量である、そして、脳質量は、ヒト対象の脳の脳ＭＲＩで決定する。ある特定の実施形態では、用語「約」は、所与の値または範囲の±５％以内であることを意味し、また、この数値は、ヒト対象の脳質量に応じた用量であり、また、脳質量は、ヒト対象の脳の脳ＭＲＩで決定する。ある特定の実施形態では、用語「約」は、所与の値または範囲の±７％以内であることを意味し、また、この数値は、ヒト対象の脳質量に応じた用量であり、また、脳質量は、ヒト対象の脳の脳ＭＲＩで決定する。ある特定の実施形態では、用語「約」は、所与の値または範囲の±１０％以内であることを意味し、また、この数値は、ヒト対象の脳質量に応じた用量であり、また、脳質量は、ヒト対象の脳の脳ＭＲＩで決定する。しかしながら、本明細書では、用語「約」が、その用語に接続している正確な数値の詳細を示すことも理解されたい。例えば、「約１０」は、数字の「１０」に関する詳細を的確に提供する。
５．１ プロセシング、Ｎ－グリコシル化、及びチロシン硫酸化
５．１．１．プロセシング
ヒトＩＤＳは、プロセシングの間に切断される２５個のアミノ酸のシグナル配列を含む。最初の７６ｋＤａ細胞内ＩＤＳ前駆体は、そのオリゴ糖鎖がゴルジ体装置内で修飾を受けた後に、リン酸化を受けた９０ｋＤａ ＩＤＳ前駆体に変換される。この前駆体は、グリコシル化修飾、及びタンパク質分解的切断によって、様々な細胞内中間体を経て、主要な５５ｋＤａ形態へとプロセシングされる。まとめると、２５アミノ酸シグナル配列を除去した後に、タンパク質分解プロセシングは、Ｎ３１の下流でＮ末端タンパク質分解切断を行って、８個のアミノ酸（残基２６～３３）のプロペプチドを除去し、Ｎ５１３の上流でＣ末端タンパク質分解切断を行って、１８ｋＤａのポリペプチドを放出して、６２ｋＤａの中間体を生成し、これが、５５ｋＤａの成熟形態へと変換される。さらなるタンパク質分解的切断は、リソソーム区画に位置する４５ｋＤａの成熟形態を生成する。（Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ ２３０：３６２－３６７（「Ｍｉｌｌａｔ １９９７」）から抜粋した図面については図４を参照されたい；Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．１９９７，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．３２６：２４３－２４７ （「Ｍｉｌｌａｔ １９９７ａ」）；及び、Ｆｒｏｉｓｓａｒｔ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．３０９：４２５－４３０を参照されたい。これらの各々を、参照により、その全内容を本明細書で援用する）。
５．１．１．プロセシング
ヒトＩＤＳは、プロセシングの間に切断される２５個のアミノ酸のシグナル配列を含む。最初の７６ｋＤａ細胞内ＩＤＳ前駆体は、そのオリゴ糖鎖がゴルジ体装置内で修飾を受けた後に、リン酸化を受けた９０ｋＤａ ＩＤＳ前駆体に変換される。この前駆体は、グリコシル化修飾、及びタンパク質分解的切断によって、様々な細胞内中間体を経て、主要な５５ｋＤａ形態へとプロセシングされる。まとめると、２５アミノ酸シグナル配列を除去した後に、タンパク質分解プロセシングは、Ｎ３１の下流でＮ末端タンパク質分解切断を行って、８個のアミノ酸（残基２６～３３）のプロペプチドを除去し、Ｎ５１３の上流でＣ末端タンパク質分解切断を行って、１８ｋＤａのポリペプチドを放出して、６２ｋＤａの中間体を生成し、これが、５５ｋＤａの成熟形態へと変換される。さらなるタンパク質分解的切断は、リソソーム区画に位置する４５ｋＤａの成熟形態を生成する。（Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ ２３０：３６２－３６７（「Ｍｉｌｌａｔ １９９７」）から抜粋した図面については図４を参照されたい；Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．１９９７，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．３２６：２４３－２４７ （「Ｍｉｌｌａｔ １９９７ａ」）；及び、Ｆｒｏｉｓｓａｒｔ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．３０９：４２５－４３０を参照されたい。これらの各々を、参照により、その全内容を本明細書で援用する）。
酵素活性に必要なＣ８４のホルミルグリシン修飾（図１の太字で示す）は、おそらくは初期の翻訳後事象、または共翻訳事象として、小胞体では、ほぼ確かに起こる。（Ｓｃｈｍｉｄｔ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｃｅｌｌ ８２：２７１－２７８を引用しているＭｉｌｌａｔ １９９７ａを参照されたい）。ゴルジ体で翻訳後プロセシングが継続され、複合シアル酸含有グリカンを取り入れ、リソソーム区画への送達のための酵素に結合するマンノース－６－リン酸残基の取得を含む。（参照により、その全内容を本明細書で援用する簡潔な考察については、Ｃｌａｒｋｅ，２００８，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ ９：３１１－３１７を参照されたい）。
特定の実施形態では、本明細書に記載する方法に従って使用するＨｕＧｌｙＩＤＳは、神経細胞またはグリア細胞において、インビボまたはインビトロで発現する場合、９０ｋＤａ（例えば、８５ｋＤａ、８６ｋＤａ、８７ｋＤａ、８８ｋＤａ、８９ｋＤａ、９０ｋＤａ、９１ｋＤａ、９２ｋＤａ、９３ｋＤａ、９４ｋＤａ、または９５ｋＤａ）の酵素のマンノース－６－リン酸化形態とすることができる。神経細胞及びグリア細胞から産生したＩＤＳは、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２及びＳｌｅａｔ，Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ，２００５が報告しているように、Ｍ６Ｐをより高含量で含み得る（このことは、ヒトの脳が、他の組織よりも（定量的及び定性的の双方の意味で）Ｍ６Ｐ糖タンパク質を多く含むことを示す）。ＩＤＳ前駆体のＭ６Ｐ含有量を測定することは、Ｄａｎｉｅｌｅ ２００２で行われているようにして行うことができる。
したがって、ある特定の実施形態では、本明細書に記載する方法に従って使用するＨｕＧｌｙＩＤＳは、神経細胞またはグリア細胞で発現する場合、インビボまたはインビトロで、非神経細胞またはグリア細胞において発現するＩＤＳよりも高レベルでマンノース－６－リン酸化を受ける。特に、本明細書に記載する方法に従って使用するＨｕＧｌｙＩＤＳは、神経細胞またはグリア細胞で発現する場合、インビボまたはインビトロで、ＨＴ１０８０またはＣＨＯ細胞で発現するＩＤＳよりも高レベルでマンノース－６－リン酸化を受ける。ある特定の実施形態では、発現したＩＤＳのマンノース－６－リン酸化レベルは、Ｍ６Ｐ（例えば、５ｍＭ Ｍ６Ｐ）の存在下でのヒト神経細胞によるＩＤＳの取り込みによって測定する。ある特定の実施形態では、インビボまたはインビトロで神経細胞またはグリア細胞で発現させると、本明細書に記載する方法に従って使用するＨｕＧｌｙＩＤＳ分子の１０％～２０％、２０％～３０％、３０％～４０％、４０％～５０％、５０％～６０％、６０％～７０％、７０％～８０％、８０％～９０％、または９０％～１００％は、マンノース－６－リン酸化を受ける。
したがって、ある特定の実施形態では、本明細書に記載する方法に従って使用するＨｕＧｌｙＩＤＳは、神経細胞またはグリア細胞で発現する場合、インビボまたはインビトロで、非神経細胞またはグリア細胞において発現するＩＤＳよりも高レベルでマンノース－６－リン酸化を受ける。特に、本明細書に記載する方法に従って使用するＨｕＧｌｙＩＤＳは、神経細胞またはグリア細胞で発現する場合、インビボまたはインビトロで、ＨＴ１０８０またはＣＨＯ細胞で発現するＩＤＳよりも高レベルでマンノース－６－リン酸化を受ける。ある特定の実施形態では、発現したＩＤＳのマンノース－６－リン酸化レベルは、Ｍ６Ｐ（例えば、５ｍＭ Ｍ６Ｐ）の存在下でのヒト神経細胞によるＩＤＳの取り込みによって測定する。ある特定の実施形態では、インビボまたはインビトロで神経細胞またはグリア細胞で発現させると、本明細書に記載する方法に従って使用するＨｕＧｌｙＩＤＳ分子の１０％～２０％、２０％～３０％、３０％～４０％、４０％～５０％、５０％～６０％、６０％～７０％、７０％～８０％、８０％～９０％、または９０％～１００％は、マンノース－６－リン酸化を受ける。
５．１．２ Ｎ－グリコシル化
ＣＮＳでの神経細胞及びグリア細胞は、グリコシル化及びチロシン－Ｏ－硫酸化など、分泌タンパク質の翻訳後プロセシングのための細胞機構を有する分泌細胞である。ｈＩＤＳは、図１に示す８つのアスパラギン（「Ｎ」）グリコシル化部位を有する（Ｎ３１ＳＴ、Ｎ１１５ＦＳ、Ｎ１４４ＨＴ、Ｎ２４６ＩＴ、Ｎ２８０ＩＳ、Ｎ３２５ＳＴ、Ｎ５１３ＦＳ、Ｎ５３７ＤＳ）。８つのＮ結合型グリコシル化部位の２つ、すなわち、Ｎ２８０及びＮ１１６は、ヒト脳から得たＩＤＳにおいてマンノース－６－リン酸化を受ける。（Ｓｌｅａｔ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｍｏｌ ＆ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｅｏｍｉｃｓ ５．４：６８６－７０１，Ｔａｂｌｅ Ｖで報告している）。ＩＤＳの安定性に必須の単一のグリコシル化部位は無いが、Ｎ２８０位でのグリコシル化は、マンノース－６－リン酸（Ｍ６Ｐ）受容体を介した細胞の内在化、及びリソソーム標的にとって重要である。（Ｃｈｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ Ｊ ３１：３０９－３１５ ｐ．３１０の第１段）。正常な生理学的状態では、ＩＤＳは非常に低レベルで産生され、酵素、合ったとしても、細胞からほとんど分泌されることはない。（Ｃｌａｒｋｅ，２００８（上記））。
ＣＮＳでの神経細胞及びグリア細胞は、グリコシル化及びチロシン－Ｏ－硫酸化など、分泌タンパク質の翻訳後プロセシングのための細胞機構を有する分泌細胞である。ｈＩＤＳは、図１に示す８つのアスパラギン（「Ｎ」）グリコシル化部位を有する（Ｎ３１ＳＴ、Ｎ１１５ＦＳ、Ｎ１４４ＨＴ、Ｎ２４６ＩＴ、Ｎ２８０ＩＳ、Ｎ３２５ＳＴ、Ｎ５１３ＦＳ、Ｎ５３７ＤＳ）。８つのＮ結合型グリコシル化部位の２つ、すなわち、Ｎ２８０及びＮ１１６は、ヒト脳から得たＩＤＳにおいてマンノース－６－リン酸化を受ける。（Ｓｌｅａｔ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｍｏｌ ＆ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｅｏｍｉｃｓ ５．４：６８６－７０１，Ｔａｂｌｅ Ｖで報告している）。ＩＤＳの安定性に必須の単一のグリコシル化部位は無いが、Ｎ２８０位でのグリコシル化は、マンノース－６－リン酸（Ｍ６Ｐ）受容体を介した細胞の内在化、及びリソソーム標的にとって重要である。（Ｃｈｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ Ｊ ３１：３０９－３１５ ｐ．３１０の第１段）。正常な生理学的状態では、ＩＤＳは非常に低レベルで産生され、酵素、合ったとしても、細胞からほとんど分泌されることはない。（Ｃｌａｒｋｅ，２００８（上記））。
遺伝子治療またはタンパク質治療手法において生産するすべての分子が完全にグリコシル化され、硫酸化することは、必須ではない。むしろ、生産した糖タンパク質の集団には、有効性を示す上で十分なグリコシル化及び硫酸化を与えるであろう。
特定の実施形態では、本明細書に記載する方法に従って使用するＨｕＧｌｙＩＤＳは、神経細胞またはグリア細胞においてインビボまたはインビトロで発現させた場合、そのＮ－グリコシル化部位の１００％でグリコシル化し得る。しかしながら、当業者であれば、グリコシル化のメリットが達成するためには、必ずしもすべてのＨｕＧｌｙＩＤＳのＮ－グリコシル化部位がＮ－グリコシル化する必要はないことを認識する。むしろ、グリコシル化のメリットは、Ｎ－グリコシル化部位の一定の割合のみがグリコシル化する場合、及び／または発現したＩＤＳ分子の一定の割合のみがグリコシル化する場合に実現し得る。したがって、ある特定の実施形態では、本明細書に記載する方法に従って使用するＨｕＧｌｙＩＤＳは、神経細胞またはグリア細胞においてインビボまたはインビトロで発現させた場合、その利用可能なＮ－グリコシル化部位の１０％～２０％、２０％～３０％、３０％～４０％、４０％～５０％、５０％～６０％、６０％～７０％、７０％～８０％、８０％～９０％、または９０％～１００％でグリコシル化する。ある特定の実施形態では、神経細胞またはグリア細胞においてインビボまたはインビトロで発現させた場合、本明細書に記載する方法に従って使用するＨｕＧｌｙＩＤＳ分子の１０％～２０％、２０％～３０％、３０％～４０％、４０％～５０％、５０％～６０％、６０％～７０％、７０％～８０％、８０％～９０％、または９０％～１００％が、それらの利用可能なＮ－グリコシル化部位の少なくとも１つでグリコシル化する。
特定の実施形態では、ＨｕＧｌｙＩＤＳを神経細胞またはグリア細胞においてインビボまたはインビトロで発現させた場合、本明細書に記載する方法に従って使用するＨｕＧｌｙＩＤＳに存在するＮ－グリコシル化部位の少なくとも１０％、２０％ ３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％が、Ｎ－グリコシル化部位に存在するＡｓｎ残基（または、その他の関連した残基）でグリコシル化する。すなわち、結果として生じるＨｕＧｌｙＩＤＳのＮ－グリコシル化部位の少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９％が、グリコシル化する。
別の特定の実施形態では、ＨｕＧｌｙＩＤＳを神経細胞またはグリア細胞においてインビボまたはインビトロで発現させた場合、本明細書に記載する方法に従って使用するＨｕＧｌｙＩＤＳ分子に存在するＮ－グリコシル化部位の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％が、Ｎ－グリコシル化部位に存在するＡｓｎ残基（または、その他の関連した残基）に結合する同一の結合したグリカンによってグリコシル化する。すなわち、結果として生じるＨｕＧｌｙＩＤＳのＮ－グリコシル化部位の少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％が、同一の結合したグリカンを有する。
重要なことに、本明細書に記載する方法に従って使用するＩＤＳタンパク質が神経細胞またはグリア細胞において発現する場合、原核生物宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）または真核生物宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）でのインビトロ生産の必要性が回避される。その代わりに、本明細書に記載する治療方法（例えば、ＩＤＳを発現させるための神経細胞またはグリア細胞の使用）の結果、ＩＤＳタンパク質のＮ－グリコシル化部位は、有利なことに、ヒトの治療に適切で、及び有益なグリカンで修飾され、特に、治療の標的箇所で修飾される。ＣＨＯ細胞またはＥ．ｃｏｌｉをタンパク質生産に利用する場合、そのような利点は得られない。なぜなら、例えば、ＣＨＯ細胞は、（１）２，６シアリルトランスフェラーゼを発現せず、したがって、Ｎ－グリコシル化の間、２，６シアル酸を付加することができず、（２）シアル酸としてＮｅｕ５Ａｃの代わりにＮｅｕ５Ｇｃを付加し得るからであり、Ｅ．ｃｏｌｉは、天然にはＮ－グリコシル化に必要な構成要素を含まないからである。さらに、このような利点は、神経細胞またはグリア細胞ではないヒト細胞を、タンパク質産生のために利用しても達成し得ない。したがって、一実施形態では、神経細胞またはグリア細胞において発現して、本明細書に記載する治療方法で使用するＨｕＧｌｙＩＤＳをもたらすＩＤＳタンパク質は、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞においてタンパク質がＮ－グリコシル化する様式でグリコシル化を受けるが、ＣＨＯ細胞においてタンパク質がグリコシル化する様式ではグリコシル化しない。別の実施形態では、神経細胞またはグリア細胞で発現して本明細書に記載する治療方法で使用するＨｕＧｌｙＩＤＳをもたらすＩＤＳタンパク質は、神経細胞またはグリア細胞においてタンパク質がＮ－グリコシル化する様式でグリコシル化を受けるが、そのようなグリコシル化は、原核生物宿主細胞、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉを使用した場合は自然には達成できない。一実施形態では、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞で発現して、本明細書に記載する治療方法で使用するＨｕＧｌｙＩＤＳをもたらすＩＤＳタンパク質は、タンパク質がヒト神経細胞またはヒトグリア細胞においてＮ－グリコシル化する様式でグリコシル化を受けるが、神経細胞またはグリア細胞ではないヒト細胞においてタンパク質がグリコシル化を受ける様式ではグリコシル化されない。
タンパク質のグリコシル化パターンを決定するためのアッセイは、当該技術分野において公知である。例えば、ヒドラジン分解は、グリカンを分析するために使用することができる。まず、多糖を、ヒドラジンとインキュベーションして、会合するタンパク質から放出させる（Ｌｕｄｇｅｒ Ｌｉｂｅｒａｔｅ Ｈｙｄｒａｚｉｎｏｌｙｓｉｓ Ｇｌｙｃａｎ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｋｉｔ，Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫを使用することができる）。求核剤であるヒドラジンは、多糖とキャリアタンパク質との間のグリコシド結合を攻撃して、結合したグリカンを放出させる。Ｎ－アセチル基が、この処理の間に失われ、再度のＮ－アセチル化によって再構成しなくてはならない。遊離グリカンは、炭素カラム上で精製され、続いて、蛍光色素分子である２－アミノベンズアミドを使用して還元末端を標識することができる。標識多糖は、Ｒｏｙｌｅ ｅｔ ａｌ，Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ ２００２，３０４（１）：７０－９０のＨＰＬＣプロトコールに従って、ＧｌｙｃｏＳｅｐ－Ｎカラム（ＧＬ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）上で分離することができる。結果として生じる蛍光クロマトグラムは、多糖の長さ、及び繰り返し単位の数を示す。構造情報は、個々のピークを収集する、続いて、ＭＳ／ＭＳ分析を実施して集めることができる。それにより、繰り返し単位の単糖の組成及び配列を確認することができ、さらに多糖の組成の均一性を特定することができる。低分子量の特定のピークは、ＭＡＬＤＩ－ＭＳ／ＭＳによって分析でき、その結果を使用してグリカン配列を確認することができる。それぞれのピークは、ある特定の数の繰り返し単位、及びそのフラグメントからなるポリマーに対応する。このように、クロマトグラムを使用すれば、ポリマー長の分布の測定が可能となる。溶出時間は、ポリマー長の指標である一方で、蛍光強度は、それぞれのポリマーのためのモル存在量と相関する。
タンパク質と関連するグリカンパターンの均一性は、グリカン長、及びグリコシル化部位全体に存在するグリカンの数と関係しているので、この均一性は、当該技術分野で公知の方法、例えば、グリカン長と流体力学半径を測定する方法を使用して評価することができる。サイズ排除ＨＰＬＣは、流体力学半径の測定を可能にする。タンパク質でのグリコシル化部位の数が多いほど、グリコシル化部位がより少ないキャリアと比較して、流体力学半径のばらつきがより大きくなる。しかしながら、単一のグリカン鎖を分析する場合、それらは、長さがより高度に制御されるために、より均一になり得る。グリカン長は、ヒドラジン分解、ＳＤＳ ＰＡＧＥ、及びキャピラリーゲル電気泳動によって測定することができる。加えて、均一であることは、ある特定のグリコシル化部位の使用パターンがより広い／より狭い範囲に変化することも意味し得る。これらの因子は、糖ペプチドＬＣ－ＭＳ／ＭＳで測定することができる。
Ｎ－グリコシル化は、本明細書に記載する方法で使用するＨｕＧｌｙＩＤＳに多くのメリットを与える。そのようなメリットは、Ｅ．ｃｏｌｉでのタンパク質生産では得られない。それはすなわち、Ｅ．ｃｏｌｉは、Ｎ－グリコシル化に必要とする構成要素を天然には有しないためである。さらに、一部のメリットは、例えば、ＣＨＯ細胞でのタンパク質生産では得られない。それは、ＣＨＯ細胞が、特定のグリカン（例えば、２，６シアル酸）の付加に必要な構成要素を欠いており、ヒトにとって一般的でないグリカン、例えば、Ｎｅｕ５Ｇｃ、及び大部分の個体において免疫原性であり、高濃度ではアナフィラキシーを誘発し得るα－Ｇａｌ抗原を付加し得るからである。さらに、一部のメリットは、神経細胞またはグリア細胞ではないヒト細胞でのタンパク質産生では得られない。したがって、ヒト神経細胞またはヒトグリア細胞でのＩＤＳの発現は、有益なグリカンを含むＨｕＧｌｙＩＤＳを生産するが、このものと、ＣＨＯ細胞、またはＥ．ｃｏｌｉ、または神経細胞またはグリア細胞ではないヒト細胞が産生したタンパク質との関連性はない。
５．１．３ チロシン硫酸化
Ｎ－結合型グリコシル化部位に加えて、ｈＩＤＳは、チロシン（「Ｙ」）硫酸化部位（ＰＳＳＥＫＹ１６５ＥＮＴＫＴＣＲＧＰＤ）を含有する。（例えば、全内容を、参照により、本明細書で援用する、タンパク質チロシン硫酸化を受けるチロシン残基を取り囲むアミノ酸の解析に関するＹａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０：２１３８－２１６４、特に、ｐ．２１５４を参照されたい。「規則」は、以下のようにまとめることができる：Ｙの＋５～－５位以内にあるＥまたはＤを有するＹ残基、及びＹの位置－１が中性である、または酸性荷電アミノ酸である－しかし、塩基性アミノ酸、例えば、硫酸化を止めるＲ、Ｋ、またはＨではない）。
Ｎ－結合型グリコシル化部位に加えて、ｈＩＤＳは、チロシン（「Ｙ」）硫酸化部位（ＰＳＳＥＫＹ１６５ＥＮＴＫＴＣＲＧＰＤ）を含有する。（例えば、全内容を、参照により、本明細書で援用する、タンパク質チロシン硫酸化を受けるチロシン残基を取り囲むアミノ酸の解析に関するＹａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０：２１３８－２１６４、特に、ｐ．２１５４を参照されたい。「規則」は、以下のようにまとめることができる：Ｙの＋５～－５位以内にあるＥまたはＤを有するＹ残基、及びＹの位置－１が中性である、または酸性荷電アミノ酸である－しかし、塩基性アミノ酸、例えば、硫酸化を止めるＲ、Ｋ、またはＨではない）。
重要なことに、チロシン硫酸化タンパク質は、チロシン硫酸化に求められる酵素を天然には有しないＥ．ｃｏｌｉでは生産することができない。さらに、ＣＨＯ細胞は、チロシン硫酸化について欠陥がある。この細胞は、分泌細胞ではなく、翻訳後のチロシン硫酸化のための能力が限られている。例えば、Ｍｉｋｋｅｌｓｅｎ ＆ Ｅｚｂａｎ，１９９１，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３０：１５３３－１５３７を参照されたい。有利なことに、本明細書で提供する方法は、分泌型であり、かつチロシン硫酸化のための能力を備える神経細胞またはグリア細胞でのＩＤＳ、例えば、ＨｕＧｌｙＩＤＳの発現を必要とする。チロシン硫酸化を検出するためのアッセイは、当該技術分野において公知である。例えば、Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０：２１３８－２１６４を参照されたい。
ヒトＣＮＳ細胞での堅実な翻訳後プロセスであるｈＩＤＳのチロシン硫酸化は、導入遺伝子産物のプロセシング及び活性を向上させる。リソソームタンパク質のチロシン硫酸化の意義は、明らかにされていないが、他のタンパク質では、タンパク質－タンパク質相互作用（抗体及び受容体）の親和性が高まり、タンパク質分解性プロセシング（ペプチドホルモン）を促すことが示されている。（Ｍｏｏｒｅ，２００３，Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：２４２４３－４６、及びＢｕｎｄｅｇａａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｔｈｅ ＥＭＢＯ Ｊ １４：３０７３－７９を参照されたい）。チロシン硫酸化（ＩＤＳプロセシングの最終ステップとして起こり得る）を担うチロシンタンパク質スルホトランスフェラーゼ（ＴＰＳＴ１）は、明らかに、脳において高レベルで（ｍＲＮＡに基づいて）発現する（ＴＰＳＴ１のための遺伝子発現データは、例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｇｘａ／ｈｏｍｅでアクセス可能なＥＭＢＬ－ＥＢＩ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｔｌａｓに認め得る）。
５．２ コンストラクト及び製剤
イズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）、例えば、ヒトＩＤＳ（ｈＩＤＳ）をコードするウイルスベクターまたはその他のＤＮＡ発現コンストラクトが、本明細書で提供する方法での使用のために提供される。グリコシル化（ＨｕＧｌｙ）ａ－Ｌ－イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）、例えば、ヒトＩＤＵＡ（ｈＩＤＵＡ）をコードするウイルスベクター、またはその他のＤＮＡ発現コンストラクトが、本明細書で提供する方法での使用のために提供される。本明細書で提供するウイルスベクター、及び他のＤＮＡ発現コンストラクトは、脳脊髄液（ＣＳＦ）に、導入遺伝子を送達するための任意の好適な方法を含む。導入遺伝子の送達の手段には、ウイルスベクター、リポソーム、その他の脂質を含む複合体、その他の高分子複合体、合成修飾ｍＲＮＡ、非修飾ｍＲＮＡ、小分子、非生物活性分子（例えば、金粒子）、重合分子（例えば、デンドリマー）、ネイキッドＤＮＡ、プラスミド、ファージ、トランスポゾン、コスミド、またはエピソームがある。一部の実施形態では、ベクターは、標的ベクター、例えば、神経細胞を標的とするベクターである。
イズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）、例えば、ヒトＩＤＳ（ｈＩＤＳ）をコードするウイルスベクターまたはその他のＤＮＡ発現コンストラクトが、本明細書で提供する方法での使用のために提供される。グリコシル化（ＨｕＧｌｙ）ａ－Ｌ－イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）、例えば、ヒトＩＤＵＡ（ｈＩＤＵＡ）をコードするウイルスベクター、またはその他のＤＮＡ発現コンストラクトが、本明細書で提供する方法での使用のために提供される。本明細書で提供するウイルスベクター、及び他のＤＮＡ発現コンストラクトは、脳脊髄液（ＣＳＦ）に、導入遺伝子を送達するための任意の好適な方法を含む。導入遺伝子の送達の手段には、ウイルスベクター、リポソーム、その他の脂質を含む複合体、その他の高分子複合体、合成修飾ｍＲＮＡ、非修飾ｍＲＮＡ、小分子、非生物活性分子（例えば、金粒子）、重合分子（例えば、デンドリマー）、ネイキッドＤＮＡ、プラスミド、ファージ、トランスポゾン、コスミド、またはエピソームがある。一部の実施形態では、ベクターは、標的ベクター、例えば、神経細胞を標的とするベクターである。
一部の態様では、本開示は、使用のための核酸を提供をし、当該核酸は、ＩＤＳ、例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター、ＭＭＴプロモーター、ＥＦ－１アルファプロモーター、ＵＢ６プロモーター、ニワトリベータ－アクチンプロモーター、ＣＡＧプロモーター、ＲＰＥ６５プロモーター、及びオプシンプロモーターからなる群から選択されるプロモーターと機能的に連結されているｈＩＤＳをコードする。
ある特定の実施形態では、本明細書では、１つ以上の核酸（例えば、ポリヌクレオチド）を含む組換えベクターを提供する。核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはＤＮＡとＲＮＡとの組み合わせを含み得る。ある特定の実施形態では、ＤＮＡは、プロモーター配列、関心対象の遺伝子配列（導入遺伝子、例えば、ＩＤＳ）、非翻訳領域、及び終止配列からなる群から選択される１つ以上の配列を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、関心対象の遺伝子と機能的に連結したプロモーターを含む。
ある特定の実施形態では、本明細書に開示する核酸（例えば、ポリヌクレオチド）及び核酸配列は、例えば、当業者に公知のあらゆるコドン－最適化技術を介して、コドン最適化することができる（例えば、Ｑｕａｘ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ ５９：１４９－１６１を参照されたい）。
別の態様では、本開示は、ヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを含む製剤を提供し、当該製剤は、ヒト脳の脳脊髄液への投与に適しており、それにより、デポーが、ヒト中枢神経系で形成され、当該デポーは、ポリアクリルアミドゲル電気泳動で測定して約９０ｋＤａ（例えば、８５ｋＤａ、８６ｋＤａ、８７ｋＤａ、８８ｋＤａ、８９ｋＤａ、９０ｋＤａ、９１ｋＤａ、９２ｋＤａ、９３ｋＤａ、９４ｋＤａ、または９５ｋＤａ）であり、ホルミルグリシンを含む、α２，６－シアル化を受けた、検出可能なＮｅｕＧｃを含まない、α－Ｇａｌ抗原を含まない、及び／またはマンノース－６－リン酸化を受けた、組換えヒトＩＤＳ糖タンパク質前駆体を分泌する。例えば、製剤は、ヒト脳の脳脊髄液への投与に適した緩衝液（例えば、特定のｐＨを有する緩衝液、または特定の成分を含有する緩衝液）を含有し得、それにより、ポリアクリルアミドゲル電気泳動で測定して約９０ｋＤａ（例えば、８５ｋＤａ、８６ｋＤａ、８７ｋＤａ、８８ｋＤａ、８９ｋＤａ、９０ｋＤａ、９１ｋＤａ、９２ｋＤａ、９３ｋＤａ、９４ｋＤａ、または９５ｋＤａ）であり、ホルミルグリシンを含む、α２，６－シアル化を受けた、検出可能なＮｅｕＧｃを含まない、α－Ｇａｌ抗原を含まない、及び／またはマンノース－６－リン酸化を受けた、組換えヒトＩＤＳ糖タンパク質前駆体を分泌するデポーを、ヒト中枢神経系で形成する。特定の実施形態では、緩衝液は、生理学的に適合する水性緩衝液、界面活性剤、及び任意の賦形剤を含む。
別の態様では、本開示は、ヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクター、及び医薬として許容可能な担体を含むキットを提供し、当該組換えヌクレオチド発現ベクターは、ヒト脳の脳脊髄液（ＣＳＦ）への投与に適しており、それにより、デポーが、ヒト中枢神経系で形成され、当該デポーは、ポリアクリルアミドゲル電気泳動で測定して約９０ｋＤａ（例えば、８５ｋＤａ、８６ｋＤａ、８７ｋＤａ、８８ｋＤａ、８９ｋＤａ、９０ｋＤａ、９１ｋＤａ、９２ｋＤａ、９３ｋＤａ、９４ｋＤａ、または９５ｋＤａ）であり、ホルミルグリシンを含む、α２，６－シアル化を受けた、検出可能なＮｅｕＧｃを含まない、α－Ｇａｌ抗原を含まない、及び／またはマンノース－６－リン酸化を受けた、組換えヒトＩＤＳ糖タンパク質前駆体を分泌する。別の態様では、本開示は、ヒトＩＤＳをコードする組換えヌクレオチド発現ベクターを含む製剤を含むキットを提供し、当該製剤は、ヒト脳のＣＳＦへの投与に適しており、それにより、デポーが、ヒト中枢神経系で形成され、当該デポーは、ポリアクリルアミドゲル電気泳動で測定して約９０ｋＤａ（例えば、８５ｋＤａ、８６ｋＤａ、８７ｋＤａ、８８ｋＤａ、８９ｋＤａ、９０ｋＤａ、９１ｋＤａ、９２ｋＤａ、９３ｋＤａ、９４ｋＤａ、または９５ｋＤａ）であり、ホルミルグリシンを含む、α２，６－シアル化を受けた、検出可能なＮｅｕＧｃを含まない、α－Ｇａｌ抗原を含まない、及び／またはマンノース－６－リン酸化を受けた、組換えヒトＩＤＳ糖タンパク質前駆体を分泌する。本明細書に記載するキットは、１つ以上の容器中に組換えヌクレオチド発現ベクター、または製剤を含む。そのような１つ以上の容器には、医薬品または生物学的製剤の製造、使用、または販売を規制する政府機関が定めた形式の通知が任意に伴い、この通知は、当該機関が、ヒトへの投与に関して、製造、使用、または販売を承認していることを反映している。
本明細書が包含する製剤及びキットは、本開示で提供するヒト患者の治療方法に従って使用することができる。
５．２．１．ｍＲＮＡ
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、関心対象の遺伝子（例えば、導入遺伝子、例えば、ＩＤＳ）をコードする修飾ｍＲＮＡである。ＣＳＦへの導入遺伝子の送達のための修飾及び非修飾ｍＲＮＡの合成は、例えば、全内容を参照により本明細書で援用するＨｏｃｑｕｅｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２７（７）：４７８－４９６で教示している。ある特定の実施形態では、ＩＤＳ、例えば、ｈＩＤＳをコードする修飾ｍＲＮＡについて本明細書に記載する。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、関心対象の遺伝子（例えば、導入遺伝子、例えば、ＩＤＳ）をコードする修飾ｍＲＮＡである。ＣＳＦへの導入遺伝子の送達のための修飾及び非修飾ｍＲＮＡの合成は、例えば、全内容を参照により本明細書で援用するＨｏｃｑｕｅｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２７（７）：４７８－４９６で教示している。ある特定の実施形態では、ＩＤＳ、例えば、ｈＩＤＳをコードする修飾ｍＲＮＡについて本明細書に記載する。
５．２．２．ウイルスベクター
ウイルスベクターには、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ、例えば、ＡＡＶ９）、レンチウイルス、ヘルパー依存的アデノウイルス、単純ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、センダイウイルス（ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ ｖｉｒｕｓ ｏｆ Ｊａｐａｎ）（ＨＶＪ）、アルファウイルス、ワクシニアウイルス、及びレトロウイルスベクターがある。レトロウイルスベクターには、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）及びヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）をベースとしたベクターがある。アルファウイルスベクターには、セムリキ森林ウイルス（ＳＦＶ）及びシンドビスウイルス（ＳＩＮ）がある。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、組換えウイルスベクターである。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、ヒトにおいて複製欠損型となるように改変されている。ある特定の実施形態では、ウイルスベクターは、ハイブリッドベクター、例えば、「ヘルプレス」アデノウイルスベクターに配置されるＡＡＶベクターである。ある特定の実施形態では、第１のウイルスからのウイルスキャプシド、及び第２のウイルスからのウイルスエンベロープタンパク質を含むウイルスベクターを、本明細書で提供する。特定の実施形態では、第２のウイルスは、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）である。より特定の実施形態では、エンベロープタンパク質は、ＶＳＶ－Ｇタンパク質である。
ウイルスベクターには、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ、例えば、ＡＡＶ９）、レンチウイルス、ヘルパー依存的アデノウイルス、単純ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、センダイウイルス（ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ ｖｉｒｕｓ ｏｆ Ｊａｐａｎ）（ＨＶＪ）、アルファウイルス、ワクシニアウイルス、及びレトロウイルスベクターがある。レトロウイルスベクターには、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）及びヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）をベースとしたベクターがある。アルファウイルスベクターには、セムリキ森林ウイルス（ＳＦＶ）及びシンドビスウイルス（ＳＩＮ）がある。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、組換えウイルスベクターである。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、ヒトにおいて複製欠損型となるように改変されている。ある特定の実施形態では、ウイルスベクターは、ハイブリッドベクター、例えば、「ヘルプレス」アデノウイルスベクターに配置されるＡＡＶベクターである。ある特定の実施形態では、第１のウイルスからのウイルスキャプシド、及び第２のウイルスからのウイルスエンベロープタンパク質を含むウイルスベクターを、本明細書で提供する。特定の実施形態では、第２のウイルスは、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）である。より特定の実施形態では、エンベロープタンパク質は、ＶＳＶ－Ｇタンパク質である。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、ＨＩＶをベースとしたウイルスベクターである。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するＨＩＶをベースとしたベクターは少なくとも２つのポリヌクレオチドを含み、ｇａｇ及びｐｏｌ遺伝子はＨＩＶゲノム由来であり、ｅｎｖ遺伝子は、別のウイルス由来である。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、単純ヘルペスウイルスをベースとしたウイルスベクターである。ある特定の実施形態では、本明細書で提供する単純ヘルペスウイルスをベースとしたベクターは、１つ以上の前初期（ＩＥ）遺伝子を含まず、そのために細胞傷害性がなくなるように改変されている。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、ＭＬＶをベースとしたウイルスベクターである。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するＭＬＶをベースとしたベクターは、ウイルス遺伝子の代わりに最大で８ｋｂの異種ＤＮＡを含む。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、レンチウイルスをベースとしたウイルスベクターである。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するレンチウイルスベクターは、ヒトレンチウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するレンチウイルスベクターは、非ヒトレンチウイルスに由来する。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するレンチウイルスベクターは、レンチウイルスキャプシドにパッケージングされる。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するレンチウイルスベクターは、以下のエレメントうちの１つ以上を含む：長い末端反復配列、プライマー結合部位、ポリプリントラクト、ａｔｔ部位、及びキャプシド化部位。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、アルファウイルスをベースとしたウイルスベクターである。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するアルファウイルスベクターは、組換え、複製欠損アルファウイルスである。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するアルファウイルスベクターのアルファウイルスレプリコンは、それらのビリオン表面に機能的な異種リガンドを提示することで、特定の細胞種が標的とされる。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、ＡＡＶをベースとしたウイルスベクターである。好ましい実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、ＡＡＶ９またはＡＡＶｒｈ１０をベースとしたウイルスベクターである。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するＡＡＶ９またはＡＡＶｒｈ１０をベースとしたウイルスベクターは、ＣＮＳ細胞への向性を保持する。複数のＡＡＶ血清型が特定されている。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するＡＡＶをベースとしたベクターは、ＡＡＶの１つ以上の血清型に由来する成分を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するＡＡＶをベースとしたベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶ１０、またはＡＡＶ１１のうちの１つ以上に由来する成分を含む。好ましい実施形態では、本明細書で提供するＡＡＶをベースとしたベクターは、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶ１０、またはＡＡＶ１１血清型の１つ以上に由来する成分を含む。ＡＡＶ９をベースとしたウイルスベクターが、本明細書に記載する方法で使用される。ＡＡＶをベースとしたウイルスベクターの核酸配列ならびに組換えＡＡＶ及びＡＡＶキャプシドの作製方法は、例えば、各々の全内容を、参照により、本明細書で援用する、米国特許第７，２８２，１９９ Ｂ２号、米国特許第７，７９０，４４９ Ｂ２号、米国特許第８，３１８，４８０ Ｂ２号、米国特許第８，９６２，３３２ Ｂ２号、及び国際特許出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１４／０７６４６６号で教示している。ある態様では、導入遺伝子（例えば、ＩＤＳ）をコードするＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ９またはＡＡＶｒｈ１０）をベースとしたウイルスベクターを、本明細書で提供する。特定の実施形態では、ＩＤＳをコードするＡＡＶ９をベースとしたウイルスベクターを、本明細書で提供する。なおも特定の実施形態では、ｈＩＤＳをコードするＡＡＶ９をベースとしたウイルスベクターを、本明細書で提供する。
特定の実施形態では、（ｉ）調節エレメントの制御下にあり、ＩＴＲと隣接している導入遺伝子を含む発現カセット、及び（ｉｉ）ＡＡＶ９キャプシドタンパク質のアミノ酸配列を有する、またはＡＡＶ９キャプシドタンパク質（配列番号２６）のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９．９％が同一であり、同時にＡＡＶ９キャプシドの生物学的機能を保持するウイルスキャプシドを含む人工ゲノムを含むＡＡＶ９ベクターを提供する。ある特定の実施形態では、コードされたＡＡＶ９キャプシドは、配列番号２６の配列に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０個のアミノ酸置換を有し、ＡＡＶ９キャプシドの生物学的機能を保持する。図６は、ＳＵＢＳと表示した列での比較に基づいて配置した配列の特定の位置で置換し得る潜在的アミノ酸を有する異なるＡＡＶ血清型のキャプシドタンパク質のアミノ酸配列の比較アラインメントを提供する。したがって、特定の実施形態では、ＡＡＶ９ベクターは、ネイティブＡＡＶ９配列での当該位置に存在しない図６のＳＵＢＳ列において特定される１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０個のアミノ酸置換を有するＡＡＶ９キャプシドバリアントを含む。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載する方法で使用するＡＡＶは、全内容を、参照により、本明細書で援用するＺｉｎｎ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ．１２（６）：１０５６－１０６８に記載の、Ａｎｃ８０またはＡｎｃ８０Ｌ６５である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載する方法で使用するＡＡＶは、各々の全内容を、参照により、本明細書で援用する米国特許第９，１９３，９５６号、第９４５８５１７号、及び第９，５８７，２８２号、ならびに米国特許出願公開第２０１６／０３７６３２３号に記載の、以下のアミノ酸挿入のうちの１つを含む：ＬＧＥＴＴＲＰまたはＬＡＬＧＥＴＴＲＰ。ある特定の実施形態では、本明細書に記載する方法で使用するＡＡＶは、各々の全内容を、参照により、本明細書で援用する米国特許第９，１９３，９５６号、第９，４５８，５１７号、及び第９，５８７，２８２号、ならびに米国特許出願公開第２０１６／０３７６３２３号に記載の、ＡＡＶ．７ｍ８である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載する方法で使用するＡＡＶは、米国特許第９，５８５，９７１号で開示される任意のＡＡＶ、例えば、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂである。ある特定の実施形態では、本明細書に記載する方法で使用するＡＡＶは、各々の全内容を、参照により、本明細書で援用する以下の特許及び特許出願のいずれかで開示するＡＡＶである：米国特許第７，９０６，１１１号、第８，５２４，４４６号、第８，９９９，６７８号、第８，６２８，９６６号、第８，９２７，５１４号、第８，７３４，８０９号、米国第９，２８４，３５７号、第９，４０９，９５３号、第９，１６９，２９９号、第９，１９３，９５６号、第９４５８５１７号、及び第９，５８７，２８２号、米国特許出願公開第２０１５／０３７４８０３号、第２０１５／０１２６５８８号、第２０１７／００６７９０８号、第２０１３／０２２４８３６号、第２０１６／０２１５０２４号、第２０１７／００５１２５７号、及び国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０３４７９９、ＰＣＴ／ＥＰ２０１５／０５３３３５。
ある特定の実施形態では、一本鎖ＡＡＶ（ｓｓＡＡＶ）は、上記した通りにして使用することができる。ある特定の実施形態では、自己相補的ベクター、例えば、ｓｃＡＡＶを使用することができる（例えば、各々の全内容を、参照により、本明細書で援用するＷｕ，２００７，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，１８（２）：１７１－８２，ＭｃＣａｒｔｙ ｅｔ ａｌ，２００１，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｖｏｌ ８，Ｎｕｍｂｅｒ １６（１２４８～１２５４ページ）、及び米国特許第６，５９６，５３５号、第７，１２５，７１７号、及び第７，４５６，６８３号を参照されたい）。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載する方法で使用するウイルスベクターは、アデノウイルスをベースとしたウイルスベクターである。組換えアデノウイルスベクターは、ＩＤＳの導入に使用し得る。組換えアデノウイルスは、Ｅ１欠失を有する、Ｅ３欠失を有していてもいなくてもよく、かついずれかの欠失した領域に発現カセットが挿入された第一世代のベクターであり得る。組換えアデノウイルスは、Ｅ２及びＥ４領域の完全または部分的欠失を含む第二世代のベクターであり得る。ヘルパー依存型アデノウイルスは、アデノウイルス逆方向末端反復及びパッケージングシグナル（ｐｈｉ）だけを保持する。導入遺伝子は、パッケージングシグナル及び３’ＩＴＲの間に挿入され、人工ゲノムのサイズをおよそ３６ｋｂの野生型サイズに近く維持するスタッファー配列の有無は問わない。アデノウイルスベクターの生産のための例示的なプロトコールは、全内容を、参照により、本明細書で援用するＡｌｂａ ｅｔ ａｌ．，２００５，“Ｇｕｔｌｅｓｓ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ：ｌａｓｔ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ ｆｏｒ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ，”Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １２：Ｓ１８－Ｓ２７に見出すことができる。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載する方法で使用するウイルスベクターは、レンチウイルスをベースとしたウイルスベクターである。組換えレンチウイルスベクターを、ＩＤＳの導入に使用することができる。４つのプラスミドが、コンストラクトを作成するために使用される：Ｇａｇ／ｐｏｌ配列を含むプラスミド、Ｒｅｖ配列を含むプラスミド、エンベロープタンパク質を含むプラスミド（すなわち、ＶＳＶ－Ｇ）、ならびにパッケージングエレメント、及びＩＤＳ遺伝子を有するＣｉｓプラスミド。
レンチウイルスベクター産生のために、４つのプラスミドが、細胞（すなわち、ＨＥＫ２９３をベースとした細胞）と共トランスフェクションされ、それにより特に、ポリエチレンイミンまたはリン酸カルシウムをトランスフェクション薬剤として使用し得る。続いて、レンチウイルスは上清で採取される（レンチウイルスは、細胞から出芽させて活性を保つ必要があるので、細胞の回収を行う必要はない／すべきではない）。上清を濾過し（０．４５μｍ）、続いて、塩化マグネシウム及びベンゾナーゼを加える。さらに下流のプロセスは、非常に様々であり、ＴＦＦ及びカラムクロマトグラフィーの使用が最もＧＭＰに適合するプロセスである。他のプロセスでは、カラムクロマトグラフィーを使用する／使用しない超遠心分離を使用する。レンチウイルスベクターの作製のための例示的なプロトコールは、両方とも全内容を、参照により、本明細書で援用する、Ｌｅｓｃｈ ｅｔ ａｌ．，２０１１，“Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒ ｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｉｎ ２９３Ｔ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ｂａｃｕｌｏｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒｓ，”Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １８：５３１－５３８、及びＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，２０１２，“Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＣＧＭＰ－Ｇｒａｄｅ Ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ Ｖｅｃｔｏｒｓ，”Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｉｎｔ．１０（２）：３２－４３に見出すことができる。
特定の実施形態では、本明細書に記載する方法で使用するベクターはＩＤＳ（例えば、ｈＩＤＳ）をコードするベクターであり、ＣＮＳの細胞または適切な細胞（例えば、インビボまたはインビトロで神経細胞）に形質導入した際に、ＩＤＳのグリコシル化バリアントを形質導入した細胞が発現する。ある特定の実施形態では、本明細書に記載する方法で使用するベクターはＩＤＳ（例えば、ｈＩＤＳ）をコードするベクターであり、ＣＮＳの細胞または関連した細胞（例えば、インビボまたはインビトロの神経細胞）に形質導入した際に、ＩＤＳの硫酸化バリアントを細胞が発現する。
５．２．３．遺伝子発現のプロモーター及び修飾因子
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、遺伝子送達または遺伝子発現（例えば、「発現制御エレメント」）を調節する構成要素を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、遺伝子発現を調節する構成要素を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、細胞との結合または細胞への標的化に影響を及ぼす構成要素を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、取り込みの後に、細胞内でのポリヌクレオチド（例えば、導入遺伝子）の局在化に影響を及ぼす構成要素を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、例えば、ポリヌクレオチドを取り込んだ細胞を検出する、または選択するための検出可能なマーカーまたは選択可能なマーカーとして使用することができる構成要素を含む。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、遺伝子送達または遺伝子発現（例えば、「発現制御エレメント」）を調節する構成要素を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、遺伝子発現を調節する構成要素を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、細胞との結合または細胞への標的化に影響を及ぼす構成要素を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、取り込みの後に、細胞内でのポリヌクレオチド（例えば、導入遺伝子）の局在化に影響を及ぼす構成要素を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、例えば、ポリヌクレオチドを取り込んだ細胞を検出する、または選択するための検出可能なマーカーまたは選択可能なマーカーとして使用することができる構成要素を含む。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、１つ以上のプロモーターを含む。ある特定の実施形態では、プロモーターは、構成的プロモーターである。代替の実施形態では、プロモーターは、誘導性プロモーターである。ネイティブのＩＤＳ遺伝子は、大部分のハウスキーピング遺伝子と同様に、主にＧＣリッチプロモーターを使用する。好ましい実施形態では、ｈＩＤＳの持続的な発現を提供する強力な構成的プロモーターを使用する。そのようなプロモーターには、「Ｃ」－サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）初期エンハンサーエレメント、「Ａ」－ニワトリベータアクチン遺伝子のプロモーターならびに第一エクソン及びイントロン、ならびに「Ｇ」－ウサギベータ－グロビン遺伝子のスプライスアクセプターを含む「ＣＡＧ」合成プロモーターがある（Ｍｉｙａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｇｅｎｅ ７９：２６９－２７７、及びＮｉｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ １０８：１９３－１９９を参照されたい）。
ある特定の実施形態では、プロモーターはＣＢ７プロモーターである（全内容を、参照により、本明細書で援用するＤｉｎｃｕｌｅｓｃｕ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｈｕｍ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ １６：６４９－６６３を参照されたい）。一部の実施形態では、ＣＢ７プロモーターは、ベクターによって駆動する導入遺伝子の発現を増強するその他の発現制御エレメントを含む。ある特定の実施形態では、その他の発現制御エレメントには、ニワトリβ－アクチンイントロン及び／またはウサギβ－グロビンｐｏｌＡシグナルがある。ある特定の実施形態では、プロモーターは、ＴＡＴＡボックスを含む。ある特定の実施形態では、プロモーターは、１つ以上のエレメントを含む。ある特定の実施形態では、１つ以上のプロモーターエレメントは、互いに対して逆向きにしても、位置を変えてもよい。ある特定の実施形態では、プロモーターのエレメントは、協働的に機能するように配置される。ある特定の実施形態では、プロモーターのエレメントは、独立して機能するように配置される。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、ヒトＣＭＶ前初期遺伝子プロモーター、ＳＶ４０初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳ）長鎖末端反復配列、及びラットインスリンプロモーターからなる群から選択される１つ以上のプロモーターを含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、ＡＡＶ、ＭＬＶ、ＭＭＴＶ、ＳＶ４０、ＲＳＶ、ＨＩＶ－１、及びＨＩＶ－２ ＬＴＲからなる群から選択される１つ以上の長鎖末端反復配列（ＬＴＲ）プロモーターを含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、１つ以上の組織特異的プロモーター（例えば、神経細胞特異的プロモーター）を含む。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、プロモーター以外の１つ以上の調節エレメントを含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、エンハンサーを含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、リプレッサーを含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、イントロンまたはキメライントロンを含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、ポリアデニル化配列を含む。
５．２．４．シグナルペプチド
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、タンパク質送達を調節する構成要素を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、１つ以上のシグナルペプチドを含む。ある特定の実施形態では、シグナルペプチドは、導入遺伝子産物（例えば、ＩＤＳ）の細胞内での適切なパッケージング（例えば、グリコシル化）を可能にする。ある特定の実施形態では、シグナルペプチドは、導入遺伝子産物（例えば、ＩＤＳ）が細胞内で適切に局在化することを可能にする。ある特定の実施形態では、シグナルペプチドは、導入遺伝子産物（例えば、ＩＤＳ）を細胞から分泌することを可能にする。ベクターに関連して使用するシグナルペプチドの事例、及び本明細書で提供する導入遺伝子は、表４に見出すことができる。シグナルペプチドは、本明細書において、リーダー配列またはリーダーペプチドとも称し得る。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、タンパク質送達を調節する構成要素を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、１つ以上のシグナルペプチドを含む。ある特定の実施形態では、シグナルペプチドは、導入遺伝子産物（例えば、ＩＤＳ）の細胞内での適切なパッケージング（例えば、グリコシル化）を可能にする。ある特定の実施形態では、シグナルペプチドは、導入遺伝子産物（例えば、ＩＤＳ）が細胞内で適切に局在化することを可能にする。ある特定の実施形態では、シグナルペプチドは、導入遺伝子産物（例えば、ＩＤＳ）を細胞から分泌することを可能にする。ベクターに関連して使用するシグナルペプチドの事例、及び本明細書で提供する導入遺伝子は、表４に見出すことができる。シグナルペプチドは、本明細書において、リーダー配列またはリーダーペプチドとも称し得る。
５．２．５．非翻訳領域
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、１つ以上の非翻訳領域（ＵＴＲ）（例えば、３’及び／または５’ＵＴＲ）を含む。ある特定の実施形態では、ＵＴＲは、所望のレベルのタンパク質発現に関して最適化される。ある特定の実施形態では、ＵＴＲは、導入遺伝子のｍＲＮＡ半減期に関して最適化される。ある特定の実施形態では、ＵＴＲは、導入遺伝子のｍＲＮＡの安定性に関して最適化される。ある特定の実施形態では、ＵＴＲは、導入遺伝子のｍＲＮＡの二次構造に関して最適化される。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、１つ以上の非翻訳領域（ＵＴＲ）（例えば、３’及び／または５’ＵＴＲ）を含む。ある特定の実施形態では、ＵＴＲは、所望のレベルのタンパク質発現に関して最適化される。ある特定の実施形態では、ＵＴＲは、導入遺伝子のｍＲＮＡ半減期に関して最適化される。ある特定の実施形態では、ＵＴＲは、導入遺伝子のｍＲＮＡの安定性に関して最適化される。ある特定の実施形態では、ＵＴＲは、導入遺伝子のｍＲＮＡの二次構造に関して最適化される。
５．２．６．逆方向末端反復
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、１つ以上の逆方向末端反復（ＩＴＲ）配列を含む。ＩＴＲ配列は、ウイルスベクターのビリオンに組換え遺伝子発現カセットをパッケージングするために使用することができる。ある特定の実施形態では、ＩＴＲは、ＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ９）に由来するものである（その各々の全内容を、参照により、本明細書で援用する、例えば、Ｙａｎ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７９（１）：３６４－３７９、米国特許第７，２８２，１９９ Ｂ２号、米国特許第７，７９０，４４９ Ｂ２号、米国特許第８，３１８，４８０ Ｂ２号、米国特許第８，９６２，３３２ Ｂ２号、及び国際特許出願番号ＰＣＴ／ＥＰ２０１４／０７６４６６を参照されたい）。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、１つ以上の逆方向末端反復（ＩＴＲ）配列を含む。ＩＴＲ配列は、ウイルスベクターのビリオンに組換え遺伝子発現カセットをパッケージングするために使用することができる。ある特定の実施形態では、ＩＴＲは、ＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ９）に由来するものである（その各々の全内容を、参照により、本明細書で援用する、例えば、Ｙａｎ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７９（１）：３６４－３７９、米国特許第７，２８２，１９９ Ｂ２号、米国特許第７，７９０，４４９ Ｂ２号、米国特許第８，３１８，４８０ Ｂ２号、米国特許第８，９６２，３３２ Ｂ２号、及び国際特許出願番号ＰＣＴ／ＥＰ２０１４／０７６４６６を参照されたい）。
５．２．７．導入遺伝子
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、ＩＤＳ導入遺伝子をコードする。特定の実施形態では、ＩＤＳは、神経細胞での発現のために、好適な発現制御エレメントによって制御される。ある特定の実施形態では、ＩＤＳ（例えば、ｈＩＤＳ）導入遺伝子は、配列番号１のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＩＤＳ（例えば、ｈＩＤＳ）導入遺伝子は、配列番号１に記載の配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％が同一であるアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、ＩＤＳ導入遺伝子をコードする。特定の実施形態では、ＩＤＳは、神経細胞での発現のために、好適な発現制御エレメントによって制御される。ある特定の実施形態では、ＩＤＳ（例えば、ｈＩＤＳ）導入遺伝子は、配列番号１のアミノ酸配列を含む。ある特定の実施形態では、ＩＤＳ（例えば、ｈＩＤＳ）導入遺伝子は、配列番号１に記載の配列と、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％が同一であるアミノ酸配列を含む。
導入遺伝子がコードするＨｕＧｌｙＩＤＳは、限定されないが、配列番号１のアミノ酸配列を有するヒトＩＤＳ（ｈＩＤＳ）（図１に示す）、ならびにアミノ酸の置換、欠失、または付加を有するｈＩＤＳの誘導体、例えば、限定されないが、図２に示すＩＤＳのオーソログにおいて対応する非保存的残基から選択するアミノ酸置換を含む当該誘導体を含むことができるが、ただし、そのような変異は、酵素活性に必要な位置８４（Ｃ８４）のシステイン残基の置換を含まない（Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ ３２６：２４３－２４７）、または、例えば、図３に示したもの、または、各々を、参照により、本明細書で援用する、Ｓｕｋｅｇａｗａ－Ｈａｙａｓａｋａ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｊ Ｉｎｈｅｒｔ Ｍｅｔａｂ Ｄｉｓ ２９：７５５－７６１（「弱度」変異体Ｒ４８Ｐ、Ａ８５Ｔ、Ｗ３３７Ｒ、及び切断型変異体Ｑ５３１Ｘ、及び、「重度」変異体Ｐ８６Ｌ、Ｓ３３３Ｌ、Ｓ３４９Ｉ、Ｒ４６８Ｑ、Ｒ４６８Ｌを報告している）、Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９８，ＢＢＡ １４０６：２１４－２１８（「弱度」変異体Ｐ４８０Ｌ及びＰ４８０Ｑ；及び、「重度」変異体Ｐ８６Ｌを報告している）；及び、Ｂｏｎｕｃｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，２００１，ＢＢＡ １５３７：２３３－２３８で報告されたような、重度、重度～中等度、中等度、または弱度ＭＰＳ ＩＩ表現型において特定された変異を含まないことを条件とする。
例えば、ｈＩＤＳの特定位置でのアミノ酸置換は、図２でアラインメントしたＩＤＳオーソログでの当該位置に認める対応する非保存的アミノ酸残基から選択することができるが、ただし、そのような置換は、図３に示したもの、または、各々を、参照により、本明細書で援用する、Ｓｕｋｅｇａｗａ－Ｈａｙａｓａｋａ ｅｔ ａｌ．，２００６（上記）、Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９８，（上記）、または、Ｂｏｎｕｃｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，２００１（上記）で報告されたような有害な変異のいずれも含まないことを条件とする。結果として得られる導入遺伝子産物は、インビトロでの細胞培養、または試験動物で、変異がＩＤＳ機能を損なわないことを保証するための従来のアッセイを使用して試験することができる。選択される好ましいアミノ酸置換、欠失、または付加は、インビトロでの細胞培養、または動物モデルでのＭＰＳ ＩＩのための従来のアッセイによって試験するＩＤＳの酵素活性、安定性、または半減期を維持する、または増加させるべきである。例えば、導入遺伝子産物の酵素活性は、基質として４－メチルウンベリフェリル α－Ｌ－イドピラノシズロン酸 ２－硫酸塩、または４－メチルウンベリフェリル硫酸塩を用いる従来の酵素アッセイを使用して評価することができる（使用できる例示的なＩＤＳ酵素アッセイについては、例えば、各々の全内容を、参照により、本明細書で援用する、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．４８（１８）：１３５０－１３５３、Ｄｅａｎ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．５２（４）：６４３－６４９を参照されたい）。導入遺伝子産物がＭＰＳ ＩＩ表現型を修正する能力は、細胞培養において評価することができる。例えば、培養において、ＭＰＳ ＩＩ細胞に、ｈＩＤＳまたは誘導体をコードするウイルスベクター、またはその他のＤＮＡ発現コンストラクトを形質導入すること、培養において、ＭＰＳ ＩＩ細胞に、当該導入遺伝子または誘導体を加えること、または、ＭＰＳ ＩＩ細胞を、ｒｈＩＤＳまたは誘導体を発現及び分泌するように遺伝子操作されたヒト神経宿主細胞／ヒトグリア宿主細胞と共培養することにより、及び、ＭＰＳ ＩＩ細胞培養での欠陥の修正を、例えば、培養でのＭＰＳ ＩＩ細胞のＩＤＳ酵素活性、及び／またはＧＡＧ貯蔵量の低下を検出して決定することにより、評価することができる（例えば、全内容を、参照により、本明細書で援用するＳｔｒｏｎｃｅｋ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ ３９（４）：３４３－３５０を参照されたい）。
一部の実施形態では、本開示の組換えＡＡＶの用量は、ＰＣＲアッセイを使用して決定する。一部の実施形態では、ＰＣＲアッセイは、ポリＡ ＰＣＲアッセイである。一部の実施形態では、ＰＣＲアッセイは、導入遺伝子特異的ＰＣＲアッセイである。一部の実施形態では、１つのアッセイで決定する用量は、別のアッセイで決定した用量とは異なる（例えば、多いまたは少ない）。例えば、導入遺伝子特異的ＰＣＲアッセイを使用して決定した用量は、ポリＡ特異的ＰＣＲアッセイを使用して決定した用量よりも多い（例えば、約５０％多い）。一部の実施形態では、導入遺伝子特異的ＰＣＲアッセイで決定した用量は、ポリＡ特異的ＰＣＲアッセイで決定した用量よりも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、または約７５％超多い。一部の実施形態では、ゲノムコピー数をポリＡ特異的ＰＣＲアッセイを使用して決定した２．０×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量の用量は、ゲノムコピーの数を導入遺伝子特異的ＰＣＲアッセイを使用して決定して得た２．９×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量の用量と同等である。一部の実施形態では、対象に投与した総用量は、対象の推定脳質量を占め、これは磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）スクリーニングを使用して決定することができる。
５．２．８．コンストラクト
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、次のエレメントを、次の順序で含む：ａ）第１のＩＴＲ配列、ｂ）第１のリンカー配列、ｃ）プロモーター配列、ｄ）第２のリンカー配列、ｅ）イントロン配列、ｆ）第３のリンカー配列、ｇ）導入遺伝子（例えば、ＩＤＳ）をコードする配列、ｈ）第４のリンカー配列、ｉ）ポリＡ配列、ｊ）第５のリンカー配列、及びｋ）第２のＩＴＲ配列。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、次のエレメントを、次の順序で含む：ａ）第１のＩＴＲ配列、ｂ）第１のリンカー配列、ｃ）プロモーター配列、ｄ）第２のリンカー配列、ｅ）イントロン配列、ｆ）第３のリンカー配列、ｇ）導入遺伝子（例えば、ＩＤＳ）をコードする配列、ｈ）第４のリンカー配列、ｉ）ポリＡ配列、ｊ）第５のリンカー配列、及びｋ）第２のＩＴＲ配列。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、次のエレメントを、次の順序で含む：ａ）プロモーター配列、及びｂ）導入遺伝子（例えば、ＩＤＳ）をコードする配列。ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、次のエレメントを次の順序で含む：ａ）プロモーター配列、及びｂ）導入遺伝子（例えば、ＩＤＳ）をコードする配列。ここで、導入遺伝子はシグナルペプチドを含む。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、次のエレメントを、次の順序で含む：ａ）第１のＩＴＲ配列、ｂ）第１のリンカー配列、ｃ）プロモーター配列、ｄ）第２のリンカー配列、ｅ）イントロン配列、ｆ）第３のリンカー配列、ｇ）第１のＵＴＲ配列、ｈ）導入遺伝子（例えば、ＩＤＳ）をコードする配列、ｉ）第２のＵＴＲ配列、ｊ）第４のリンカー配列、ｋ）ポリＡ配列、ｌ）第５のリンカー配列、及びｍ）第２のＩＴＲ配列。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、次のエレメントを、次の順序で含む：ａ）第１のＩＴＲ配列、ｂ）第１のリンカー配列、ｃ）プロモーター配列、ｄ）第２のリンカー配列、ｅ）イントロン配列、ｆ）第３のリンカー配列、ｇ）第１のＵＴＲ配列、ｈ）導入遺伝子（例えば、ＩＤＳ）をコードする配列、ｉ）第２のＵＴＲ配列、ｊ）第４のリンカー配列、ｋ）ポリＡ配列、ｌ）第５のリンカー配列、及びｍ）第２のＩＴＲ配列。ここで、導入遺伝子は、シグナルペプチドを含み、導入遺伝子はｈＩＤＳをコードする。
特定の実施形態では、本明細書に記載するウイルスベクターは、図５に例示したエレメントを例示した順序で含む。
５．２．９．ベクターの製造及び試験
本明細書で提供するウイルスベクターは、宿主細胞を使用して製造することができる。本明細書で提供するウイルスベクターは、哺乳動物の宿主細胞、例えば、Ａ５４９、ＷＥＨＩ、１０Ｔ１／２、ＢＨＫ、ＭＤＣＫ、ＣＯＳ１、ＣＯＳ７、ＢＳＣ １、ＢＳＣ ４０、ＢＭＴ １０、ＶＥＲＯ、Ｗ１３８、ＨｅＬａ、２９３、Ｓａｏｓ、Ｃ２Ｃ１２、Ｌ、ＨＴ１０８０、ＨｅｐＧ２、初代線維芽細胞、肝細胞、及び筋芽細胞を使用して製造することができる。本明細書で提供するウイルスベクターは、ヒト、サル、マウス、ラット、ウサギ、またはハムスター由来の宿主細胞を使用して製造することができる。
本明細書で提供するウイルスベクターは、宿主細胞を使用して製造することができる。本明細書で提供するウイルスベクターは、哺乳動物の宿主細胞、例えば、Ａ５４９、ＷＥＨＩ、１０Ｔ１／２、ＢＨＫ、ＭＤＣＫ、ＣＯＳ１、ＣＯＳ７、ＢＳＣ １、ＢＳＣ ４０、ＢＭＴ １０、ＶＥＲＯ、Ｗ１３８、ＨｅＬａ、２９３、Ｓａｏｓ、Ｃ２Ｃ１２、Ｌ、ＨＴ１０８０、ＨｅｐＧ２、初代線維芽細胞、肝細胞、及び筋芽細胞を使用して製造することができる。本明細書で提供するウイルスベクターは、ヒト、サル、マウス、ラット、ウサギ、またはハムスター由来の宿主細胞を使用して製造することができる。
宿主細胞は、導入遺伝子及び関連するエレメント（すなわち、ベクターゲノム）、及びウイルスを宿主細胞で生産する手段、例えば、複製及びキャプシド遺伝子（例えば、ＡＡＶのｒｅｐ及びｃａｐ遺伝子）をコードする配列を使用して安定的に形質転換される。ＡＡＶ８キャプシドを有する組換えＡＡＶベクターを生産する方法については、その全内容を、参照により、本明細書で援用する米国特許第７，２８２，１９９ Ｂ２号の詳細な説明の第ＩＶ節を参照されたい。上記ベクターのゲノムコピー力価は、例えば、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）分析によって決定することができる。ビリオンは、例えば、ＣｓＣｌ２沈降によって回収することができる。
インビトロアッセイ、例えば、細胞培養アッセイを、本明細書に記載するベクターからの導入遺伝子発現を測定するために使用することができ、したがって、例えば、ベクターの効力を示すことができる。例えば、ＨＴ－２２、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＨＣＮ－１Ａ、ＨＣＮ－２、ＮＴ２、ＳＨ－ＳＹ５ｙ、ｈＮＳＣ１１、またはＲｅＮｃｅｌｌ ＶＭ細胞株、または神経細胞またはグリア細胞、または神経細胞またはグリア細胞の前駆細胞に由来するその他の細胞株を、導入遺伝子発現を評価するために使用することができる。発現すると、ＨｕＧｌｙＩＤＳと関連したグリコシル化及びチロシン硫酸化のパターンの決定など、発現産物（すなわち、ＨｕＧｌｙＩＤＳ）の特性を決定することができる。
５．２．１０．組成物
本明細書に記載する導入遺伝子をコードするベクター及び好適な担体を含む組成物を記載する。好適な（例えば、ＣＳＦ、及び、例えば、神経細胞への投与のための）担体は、当業者により容易に選択されるであろう。
本明細書に記載する導入遺伝子をコードするベクター及び好適な担体を含む組成物を記載する。好適な（例えば、ＣＳＦ、及び、例えば、神経細胞への投与のための）担体は、当業者により容易に選択されるであろう。
５．３ 遺伝子治療
ＭＰＳ ＩＩを有するヒト対象への治療有効量の導入遺伝子コンストラクトの投与のための方法を記載する。より詳細には、ＭＰＳ ＩＩを有する患者に、治療有効量の導入遺伝子コンストラクトを投与するための方法、特に、ＣＳＦに投与するための方法を記載する。特定の実施形態では、そのような治療有効量の導入遺伝子コンストラクトのＣＳＦへの投与方法を、ハンター症候群を有する患者を治療するために使用することができる。
ＭＰＳ ＩＩを有するヒト対象への治療有効量の導入遺伝子コンストラクトの投与のための方法を記載する。より詳細には、ＭＰＳ ＩＩを有する患者に、治療有効量の導入遺伝子コンストラクトを投与するための方法、特に、ＣＳＦに投与するための方法を記載する。特定の実施形態では、そのような治療有効量の導入遺伝子コンストラクトのＣＳＦへの投与方法を、ハンター症候群を有する患者を治療するために使用することができる。
５．３．１．標的患者集団
ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効用量を、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けた患者に投与する。特定の実施形態では、患者は、軽度のＭＰＳ ＩＩの診断を受けている。特定の実施形態では、患者は、重度のＭＰＳ ＩＩの診断を受けている。特定の実施形態では、患者は、ハンター症候群の診断を受けている。特定の実施形態では、患者は、神経障害性ＭＰＳ ＩＩの診断を受けている。一部の実施形態では、患者は、肝脾腫大症と診断されており、肝脾腫大症に関連する症状を有しており、肝脾腫大症を有する疑いがあり、及び／または肝脾腫大症に罹患する素因を有する。肝脾腫大症に関連する症状の例として、限定するものではないが、褐色尿、粘土色便、腹部の肥大または浮腫、発熱、掻痒感、眼及び皮膚の黄疸または黄変、吐き気、疼痛（例えば、Ｉ 胃の右上部）、疲労、及び／または嘔吐がある。一部の実施形態では、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けた患者は肝脾腫大症を有する。一部の実施形態では、患者は、ＭＰＳ ＩＩに関連する肝脾腫大症に罹患している。一部の実施形態では、患者は、ＥＲＴで治療している、または治療したことがある。
ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効用量を、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けた患者に投与する。特定の実施形態では、患者は、軽度のＭＰＳ ＩＩの診断を受けている。特定の実施形態では、患者は、重度のＭＰＳ ＩＩの診断を受けている。特定の実施形態では、患者は、ハンター症候群の診断を受けている。特定の実施形態では、患者は、神経障害性ＭＰＳ ＩＩの診断を受けている。一部の実施形態では、患者は、肝脾腫大症と診断されており、肝脾腫大症に関連する症状を有しており、肝脾腫大症を有する疑いがあり、及び／または肝脾腫大症に罹患する素因を有する。肝脾腫大症に関連する症状の例として、限定するものではないが、褐色尿、粘土色便、腹部の肥大または浮腫、発熱、掻痒感、眼及び皮膚の黄疸または黄変、吐き気、疼痛（例えば、Ｉ 胃の右上部）、疲労、及び／または嘔吐がある。一部の実施形態では、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けた患者は肝脾腫大症を有する。一部の実施形態では、患者は、ＭＰＳ ＩＩに関連する肝脾腫大症に罹患している。一部の実施形態では、患者は、ＥＲＴで治療している、または治療したことがある。
ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効用量を、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けた患者、すなわち、ＩＤＳ、例えば、ｈＩＤＳを使用する治療に応答を示すことが認められた患者に投与する。
ある特定の態様では、組換えベクターの治療有効量を、小児患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、３歳未満の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、２～４歳の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満の患者に投与する。特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、重度のＭＰＳ ＩＩを有している、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、５歳以上、かつ１８歳未満の患者に投与する。特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、神経障害性ＭＰＳ ＩＩを有している、５歳以上、かつ１８歳未満の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、１８ヶ月齢以上、かつ８歳以下の患者に投与する。特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、小児男性患者である、１８ヶ月齢以上、かつ８歳以下の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、３～８歳の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、８～１６歳の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、５～１８歳の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、１０歳以下の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、重度のＭＰＳ ＩＩを有する、１０歳以下の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、１８歳以下の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、５歳以上の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、１０歳超の患者に投与する。
特定の態様では、組換えベクターの治療有効量を、４、５、６、７、８、９、１０、または１１ヶ月齢の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、約４、５、６、７、８、９、１０、または１１ヶ月齢の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、４～５、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０、１０～１１、または１１～１２ヶ月齢の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、約４～５、５～６、６～７、７～８、８～９、９～１０、１０～１１、または１１～１２ヶ月齢の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、１、２、３、４、または５歳の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、約１歳、２歳、３歳、４歳、または５歳の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、１～２歳、２～３歳、３～４歳、４～５歳、または５～６歳の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、約１～２歳、２～３歳、３～４歳、４～５歳、または５～６歳の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、５～６歳、６～７歳、７～８歳、８～９歳、９～１０歳、１０～１１歳、１１～１２歳、１２～１３歳、１３～１４歳、１４～１５歳、１５～１６歳、１６～１７歳、１７～１８歳、または１８～１９歳の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効量を、約５～６歳、６～７歳、７～８歳、８～９歳、９～１０歳、１０～１１歳、１１～１２歳、１２～１３歳、１３～１４歳、１４～１５歳、１５～１６歳、１６～１７歳、１７～１８歳、または１８～１９歳の患者に投与する。
特定の態様では、組換えベクターの治療有効用量を、思春期の患者に投与する。ある特定の実施形態では、組換えベクターの治療有効用量を、成人患者に投与する。一部の実施形態では、組換えベクターの治療有効用量を、男性患者に投与する。その他の実施形態では、組換えベクターの治療有効用量を、女性患者に投与する。
ある特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターを、ＭＰＳ ＩＩと診断され、遺伝子治療処置の前にＣＳＦに注入したＩＤＳ、例えば、ｈＩＤＳによる治療に反応することを確認した患者に投与する。
５．３．２．投与量及び投与様式
ある特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターを、くも膜下腔内投与（すなわち、くも膜下腔内に注入して、組換えベクターがＣＳＦを通じて拡散して、ＣＮＳの細胞に形質導入するようにする）を介して、ＣＳＦに投与する。これは、いくつかの方法で、例えば、頭蓋内（大槽内または脳室内）注入、または腰椎槽への注入によって達成することができる。ある特定の実施形態では、くも膜下腔内投与は、大槽内（ＩＣ）（例えば、大槽内への）注入により実施する。ある特定の実施形態では、大槽内注入は、ＣＴガイド後頭下穿刺で行う。ある特定の実施形態では、くも膜下腔内注入は、腰椎穿刺で行う。ある特定の実施形態では、患者に対して実行できるのであれば、くも膜下腔内への注入はＣ１－２穿刺で行う。あるいは、脳室内（ＩＣＶ）投与（血液脳関門を透過しない抗感染症薬または抗癌薬を導入するために使用する、より侵襲的な技術）、例えば、画像支援型ＩＣＶ注入を使用して、組換えベクターを、脳室内に直接に注入することができる。特定の実施形態では、組換えベクターを、単一の画像支援型ＩＣＶ注入を介して投与する。さらなる特定の実施形態では、組換えベクターを、投与カテーテルを直ちに除去しながら、単一の画像支援型ＩＣＶ注入を介して投与する。ある特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターを、鼻腔内投与を介してＣＮＳに投与する。ある特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターを、脳実質内注入によりＣＮＳに投与する。ある特定の実施形態では、脳実質内注入は、線条体を標的とする。ある特定の実施形態では、脳実質内注入は、白質を標的とする。ある特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターは、当該技術分野で公知の任意の手段、例えば、全内容を、参照により、本明細書で援用するＨｏｃｑｕｅｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２７（７）：４７８－４９６において開示される任意の手段で、ＣＳＦに投与する。
ある特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターを、くも膜下腔内投与（すなわち、くも膜下腔内に注入して、組換えベクターがＣＳＦを通じて拡散して、ＣＮＳの細胞に形質導入するようにする）を介して、ＣＳＦに投与する。これは、いくつかの方法で、例えば、頭蓋内（大槽内または脳室内）注入、または腰椎槽への注入によって達成することができる。ある特定の実施形態では、くも膜下腔内投与は、大槽内（ＩＣ）（例えば、大槽内への）注入により実施する。ある特定の実施形態では、大槽内注入は、ＣＴガイド後頭下穿刺で行う。ある特定の実施形態では、くも膜下腔内注入は、腰椎穿刺で行う。ある特定の実施形態では、患者に対して実行できるのであれば、くも膜下腔内への注入はＣ１－２穿刺で行う。あるいは、脳室内（ＩＣＶ）投与（血液脳関門を透過しない抗感染症薬または抗癌薬を導入するために使用する、より侵襲的な技術）、例えば、画像支援型ＩＣＶ注入を使用して、組換えベクターを、脳室内に直接に注入することができる。特定の実施形態では、組換えベクターを、単一の画像支援型ＩＣＶ注入を介して投与する。さらなる特定の実施形態では、組換えベクターを、投与カテーテルを直ちに除去しながら、単一の画像支援型ＩＣＶ注入を介して投与する。ある特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターを、鼻腔内投与を介してＣＮＳに投与する。ある特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターを、脳実質内注入によりＣＮＳに投与する。ある特定の実施形態では、脳実質内注入は、線条体を標的とする。ある特定の実施形態では、脳実質内注入は、白質を標的とする。ある特定の実施形態では、治療有効用量の組換えベクターは、当該技術分野で公知の任意の手段、例えば、全内容を、参照により、本明細書で援用するＨｏｃｑｕｅｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２７（７）：４７８－４９６において開示される任意の手段で、ＣＳＦに投与する。
好ましい実施形態では、くも膜下腔内投与（ＩＣ及びＩＣＶ投与など）のために、治療有効用量の組換えベクターを、全ＣＳＦ量の１０％を超えない注入量でＣＳＦに投与し、その全ＣＳＦ量は、乳児では約５０ｍｌであり、成人では約１５０ｍｌである。くも膜下腔内注入に好適な担体、例えば、Ｅｌｌｉｏｔｔ’ｓ Ｂ溶液または修正Ｅｌｌｉｏｔｔ’ｓ Ｂ溶液を、組換えベクターのためのビヒクルとして使用すべきである。Ｅｌｌｉｏｔ’ｓ Ｂ溶液（一般名：塩化ナトリウム、重炭酸ナトリウム、無水デキストロース、硫酸マグネシウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、及びリン酸ナトリウム）は、静菌保存剤を含んでいない無菌で、かつ非発熱性の等張溶液であり、化学療法薬のくも膜下腔内投与のための希釈剤として使用する。修正Ｅｌｌｉｏｔｓ Ｂ溶液は、８．７７ｇ／Ｌの塩化ナトリウム、０．２４４ｇ／Ｌの塩化マグネシウム、０．０２７８ｇ／Ｌのリン酸一ナトリウム一水和物、０．１１４ｇ／Ｌの無水リン酸二ナトリウム、０．２２４ｇ／Ｌの塩化カリウム、０．２０６ｇ／Ｌの塩化カルシウム、０．７９３ｇ／Ｌのデキストロース、０．００１％のポロクサマー１８８、ｐＨ ７．２６を含む。一部の実施形態では、本開示のＡＡＶまたは当該ＡＡＶを含む組成物は、くも膜下腔内投与のための修正Ｅｌｌｉｏｔ’ｓ Ｂ溶液に含めて提供する。
ある実施形態では、ヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ＩＤＳ）を発現する非複製組換えＡＡＶ９ベクターを、治療のために使用する。ある特定の実施形態では、ＩＤＳ発現カセットは、逆方向末端反復（ＩＴＲ）に隣接しており、そして、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーとニワトリベータアクチンプロモーター（ＣＢ７）とのハイブリッドが発現を駆動する。ある特定の実施形態では、導入遺伝子は、ニワトリベータアクチンイントロンと、ウサギベータ－グロビンポリアデニル化（ポリＡ）シグナルを含む。
ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを、ヒト対象の脳質量に応じた用量で投与する。好ましい実施形態では、脳質量は、対象の脳の脳磁気共鳴画像（ＭＲＩ）で決定する。ある特定の実施形態では、ヒト対象の脳体積ｃｍ３に、１．０４６ｇ／ｃｍ３の係数を乗じて、ヒト対象の脳体積からヒト対象の脳質量に変換し、ヒト対象の脳体積は、ヒト対象の脳ＭＲＩから得る。一部の実施形態では、用量は、脳質量の重量あたりのゲノムコピーの数である。一部の実施形態では、ある用量（例えば、組換えヌクレオチド発現ベクターの用量）におけるゲノムコピーの数は、ポリＡ特異的ＰＣＲアッセイで決定する。一部の実施形態では、ある用量（例えば、組換えヌクレオチド発現ベクターの用量）におけるゲノムコピー数は、導入遺伝子特異的ＰＣＲアッセイで決定する。一部の実施形態では、脳質量の重量は、ＭＲＩで決定する。
ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶ９．ｈＩＤＳは、約５～２０ｍｌの体積において、１．４×１０１３ＧＣ（脳質量１ｇあたり１．１×１０１０ＧＣ）～７．０×１０１３ＧＣ（脳質量１ｇあたり５．６×１０１０ＧＣ）の範囲の単回固定用量を、ＩＣ（後頭下注射で）投与する。患者がＡＡＶに対する中和抗体を有している場合には、高い範囲の用量を使用し得る。一部の実施形態では、ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶの単回用量を、対象の中枢神経系（例えば、脳脊髄液）に対して投与すると、驚くべきことに、治療効果がＣＮＳ以外で認められる。例えば、臓器の大きさの変化は、本開示のｒＡＡＶを対象のＣＮＳに投与した後に、ＣＮＳ以外（例えば、脾臓または肝臓）で認められる。一部の実施形態では、バイオマーカーレベル（例えば、Ｄ２Ｓ６、ＨＳ、総ＧＡＧ、及び／または抗ＩＤＳ抗体）の変化は、脳脊髄液で開示したｒＡＡＶを投与した後にＣＮＳ以外で（例えば、肝臓、脾臓、尿、血漿、または血液において検出されるバイオマーカーレベルの変化が）検出される。一部の実施形態では、ＭＰＳ ＩＩに対する追加の療法は、対象のＣＮＳ以外には投与しない。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満である場合は）脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣ～脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの範囲の単回固定用量として、くも膜下腔内に投与し得る。特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満である場合は）脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣの単回固定用量として、くも膜下腔内に投与し得る。特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満である場合は）脳質量１ｇあたり約１．９×１０１０ＧＣの単回固定用量として、くも膜下腔内に投与し得る。別の特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満である場合は）脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの単回固定用量として、くも膜下腔内に投与し得る。特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満である場合は）脳質量１ｇあたり約９．６×１０１０ＧＣの単回固定用量として、くも膜下腔内に投与し得る。特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満である場合は）脳質量１ｇあたり約２．０×１０１１ＧＣの単回固定用量として、くも膜下腔内に投与し得る。特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満である場合は）脳質量１ｇあたり約２．９×１０１１ＧＣの単回固定用量として、くも膜下腔内に投与し得る。別のある特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満である場合は）以下の表５に記載した用量１または用量２の単回固定用量として、くも膜下腔内に投与し得る。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満である場合に）脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣ～脳質量１ｇあたり約２．０×１０１１ＧＣの範囲の単回固定用量として、くも膜下腔内に投与し得る。特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満である場合に）脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣ～脳質量１ｇあたり約２．９×１０１１ＧＣの範囲の単回固定用量として、くも膜下腔内に投与し得る。特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満である場合は）脳質量１ｇあたり約２．０×１０１１ＧＣの単回固定用量として、くも膜下腔内に投与し得る。特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満である場合は）脳質量１ｇあたり約２．９×１０１１ＧＣの単回固定用量として、くも膜下腔内に投与し得る。別の特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満である場合に）以下の表６に記載した用量３の単回固定用量として、くも膜下腔内に投与し得る。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満である場合に）脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣ脳質量～約６．５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量の範囲の単回固定用量として、ＩＣ投与で投与し得る。特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満である場合に）脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣ脳質量の単回固定用量として、ＩＣ投与で投与し得る。特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満である場合に）脳質量１ｇあたり約１．９×１０１０ＧＣ脳質量の単回固定用量として、ＩＣ投与で投与し得る。別の特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満である場合に）脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣ脳質量の単回固定用量として、ＩＣ投与で投与し得る。特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満である場合に）脳質量１ｇあたり約９．６×１０１０ＧＣ脳質量の単回固定用量として、ＩＣ投与で投与し得る。別の特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満である場合に）以下の表５に記載した用量１または用量２の単回固定用量として、ＩＣ投与で投与し得る。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満である場合に）脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣ～脳質量１ｇあたり約２．０×１０１１ＧＣの範囲の単回固定用量として、ＩＣ投与で投与し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満である場合に）脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣ～脳質量１ｇあたり約２．９×１０１１ＧＣの範囲の単回固定用量として、ＩＣ投与で投与し得る。特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満である場合に）脳質量１ｇあたり約２．０×１０１１ＧＣの単回固定用量として、ＩＣ投与で投与し得る。特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満である場合に）脳質量１ｇあたり約２．９×１０１１ＧＣの単回固定用量として、ＩＣ投与で投与し得る。別の特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満である場合に）以下の表６に記載した用量３の単回固定用量として、ＩＣ投与で投与し得る。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満である場合に）脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣ～脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの範囲の単回固定用量として、ＩＣＶ投与で投与し得る。特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満である場合に）脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣの単回固定用量として、ＩＣＶ投与で投与し得る。特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満である場合に）脳質量１ｇあたり約１．９×１０１０ＧＣの単回固定用量として、ＩＣＶ投与で投与し得る。別の特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満である場合に）脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの単回固定用量として、ＩＣＶ投与で投与し得る。特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満である場合に）脳質量１ｇあたり約９．６×１０１０ＧＣの単回固定用量として、ＩＣＶ投与で投与し得る。別の特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満である場合は）以下の表５に記載した用量１または用量２の単回固定用量として、ＩＣＶ投与で投与し得る。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満である場合に）脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣ～脳質量１ｇあたり約２．０×１０１１ＧＣの範囲の単回固定用量として、ＩＣＶ投与で投与し得る。ある特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満である場合に）脳質量１ｇあたり約１．３×１０１０ＧＣ～脳質量１ｇあたり約２．９×１０１１ＧＣの範囲の単回固定用量として、ＩＣＶ投与で投与し得る。特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満である場合に）脳質量１ｇあたり約２．０×１０１１ＧＣの単回固定用量として、ＩＣＶ投与で投与し得る。特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満である場合に）脳質量１ｇあたり約２．９×１０１１ＧＣの単回固定用量として、ＩＣＶ投与で投与し得る。別の特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満である場合に）以下の表６に記載した用量３の単回固定用量として、ＩＣＶ投与で投与し得る。
特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、５歳以上、かつ１８歳未満である場合は）脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの単回固定用量として、くも膜下腔内に投与し得る。別の特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、５歳以上、かつ１８歳未満である場合は）以下の表７に記載する、及び表７に従った単回固定用量として、くも膜下腔内に投与し得る。
特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、５歳以上、かつ１８歳未満である場合に）脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの単回固定用量として、ＩＣ投与で投与し得る。別の特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、５歳以上、かつ１８歳未満である場合に）以下の表７に記載した、及び表７に従った単回固定用量として、ＩＣ投与で投与し得る。
特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、５歳以上、かつ１８歳未満である場合は）脳質量１ｇあたり約６．５×１０１０ＧＣの単回固定用量として、ＩＣＶ投与で投与し得る。別の特定の実施形態では、本明細書に記載する組換えベクターは、（例えば、ヒト患者が、５歳以上、かつ１８歳未満である場合に）以下の表７に記載した、及び表７に従った単回固定用量として、ＩＣＶ投与で投与し得る。
５．４ 併用療法
ＣＳＦへのＨｕＧｌｙＩＤＳの投与、及びこれに伴う他の利用可能な治療の実施との組み合わせを、本発明の方法は包含する。さらなる治療は、遺伝子治療処置の前に、それと同時に、またはその後に行い得る。本発明の遺伝子治療と併用することができるＭＰＳ ＩＩのための利用可能な治療として、限定を意図するものではないが、全身的に、またはＣＳＦに投与されるイデュルスルファーゼを使用する酵素補充療法（ＥＲＴ）、及び／または、ＨＳＣＴ療法がある。別の実施形態では、ＥＲＴは、組換えＤＮＡ技術によってヒト神経細胞／ヒトグリア細胞株が産生したｒＨｕＧｌｙＩＤＳ糖タンパク質を使用して投与することができる。そのような組換え糖タンパク質生産のために使用することができるヒト神経細胞／ヒトグリア細胞株は、限定されないが、数例を挙げれば、ＨＴ－２２、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＨＣＮ－１Ａ、ＨＣＮ－２、ＮＴ２、ＳＨ－ＳＹ５ｙ、ｈＮＳＣ１１、またはＲｅＮｃｅｌｌ ＶＭがある。完全なグリコシル化、特に、シアル化、及びチロシン硫酸化を保証するために、生産に使用する細胞株を、チロシン－Ｏ－硫酸化を担うα－２，６－シアリルトランスフェラーゼ（または、α－２，３－及びα－２，６－シアリルトランスフェラーゼの両方）、及び／またはＴＰＳＴ－１及びＴＰＳＴ－２酵素を共発現するように宿主細胞を遺伝子操作することで、強化することができる。
ＣＳＦへのＨｕＧｌｙＩＤＳの投与、及びこれに伴う他の利用可能な治療の実施との組み合わせを、本発明の方法は包含する。さらなる治療は、遺伝子治療処置の前に、それと同時に、またはその後に行い得る。本発明の遺伝子治療と併用することができるＭＰＳ ＩＩのための利用可能な治療として、限定を意図するものではないが、全身的に、またはＣＳＦに投与されるイデュルスルファーゼを使用する酵素補充療法（ＥＲＴ）、及び／または、ＨＳＣＴ療法がある。別の実施形態では、ＥＲＴは、組換えＤＮＡ技術によってヒト神経細胞／ヒトグリア細胞株が産生したｒＨｕＧｌｙＩＤＳ糖タンパク質を使用して投与することができる。そのような組換え糖タンパク質生産のために使用することができるヒト神経細胞／ヒトグリア細胞株は、限定されないが、数例を挙げれば、ＨＴ－２２、ＳＫ－Ｎ－ＭＣ、ＨＣＮ－１Ａ、ＨＣＮ－２、ＮＴ２、ＳＨ－ＳＹ５ｙ、ｈＮＳＣ１１、またはＲｅＮｃｅｌｌ ＶＭがある。完全なグリコシル化、特に、シアル化、及びチロシン硫酸化を保証するために、生産に使用する細胞株を、チロシン－Ｏ－硫酸化を担うα－２，６－シアリルトランスフェラーゼ（または、α－２，３－及びα－２，６－シアリルトランスフェラーゼの両方）、及び／またはＴＰＳＴ－１及びＴＰＳＴ－２酵素を共発現するように宿主細胞を遺伝子操作することで、強化することができる。
５．５ バイオマーカー／試料採取／有効性のモニタリング
有効性は、認知機能（例えば、神経認知機能の低下の防止または低減）、ＣＳＦ及び／または血清での疾患バイオマーカー（例えば、ヘパラン硫酸、及びデルマタン硫酸などのＧＡＧ）の低下、及び／または、ＣＳＦ及び／または血清でのＩＤＳ酵素活性の増加を測定してモニタリングすることができる。炎症の徴候及びその他の安全事象をモニタリングし得る。
有効性は、認知機能（例えば、神経認知機能の低下の防止または低減）、ＣＳＦ及び／または血清での疾患バイオマーカー（例えば、ヘパラン硫酸、及びデルマタン硫酸などのＧＡＧ）の低下、及び／または、ＣＳＦ及び／または血清でのＩＤＳ酵素活性の増加を測定してモニタリングすることができる。炎症の徴候及びその他の安全事象をモニタリングし得る。
一態様では、本明細書では、ＥＲＴ治療を行っている対象、またはＥＲＴ治療を受けた対象が、本開示の遺伝子治療（例えば、ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶ）を行った後にＥＲＴ治療を中止できるか否かを決定することによって有効性をモニタリングする方法を提供する。例えば、本明細書では、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けた対象（例えば、ＥＲＴ治療の中止に応じそうな対象）を治療及び／または同定する方法を提供しており、（ａ）治療有効量の本開示の遺伝子療法（例えば、ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶ）を対象に対して行い、対象は、ＥＲＴの治療を受けた、またはＥＲＴの治療を行っている、（ｂ）対象がＥＲＴ治療の中止に応じそうであると同定することであって、ｉ．対象から生物学的試料を取得する、または取得していること、ｉｉ．当該生物学的試料での少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを決定すること；及び、ｉｉｉ．生物学的試料でのバイオマーカーのレベルが、基準（例えば、少なくとも１つのバイオマーカーの基準レベル）と異なる（例えば、高いまたは低い）場合に、対象はＥＲＴ治療の中止に応じそうであると同定する、及び、（ｃ）対象に関するＥＲＴ治療を中止する、ことを含む。一部の実施形態では、バイオマーカーは、Ｄ２Ｓ６、ＨＳ、総ＧＡＧ、及び／または抗ＩＤＳ抗体である。一部の実施形態では、ＥＲＴは、組換えイデュルスルファーゼである。一部の実施形態では、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けた対象は、肝脾腫大症を有する。
別の態様では、本明細書では、ＭＰＳ ＩＩを有するヒト対象を選択的に治療する方法を提供しており、ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶの治療有効量を対象に投与することを含み、対象は、ＥＲＴの治療を受けた、またはＥＲＴの治療を行っており、（ａ）対象から生物学的試料を取得する、及び（ｂ）生物学的試料での少なくとも１つのバイオマーカーのレベルを決定することを含む方法であって、少なくとも１つのバイオマーカーのレベルが、基準と異なる（例えば、高いまたは低い）場合には、その対象はＥＲＴ治療の中止に応じそうであると決定する方法に従って、対象はＥＲＴ治療の中止に応じそうであると決定されている。一部の実施形態では、バイオマーカーは、Ｄ２Ｓ６、ＨＳ、総ＧＡＧ、及び／または抗ＩＤＳ抗体である。一部の実施形態では、ＥＲＴは、組換えイデュルスルファーゼである。一部の実施形態では、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けた対象は、肝脾腫大症を有する。
別の態様では、対象が神経障害性または非神経障害性のＭＰＳ ＩＩまたはＭＰＳ Ｉを有すると同定または診断する方法を本明細書で提供する。一部の実施形態では、方法は、対象由来の生物学的試料での１つ以上の二糖（例えば、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、Ｄ２Ｓ６）のレベルを決定することを含む。一部の実施形態では、方法は、対象由来の生物学的試料での未分解のグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）のレベルを決定することを含む。一部の実施形態では、１つ以上の二糖（例えば、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、及び／またはＤ２Ｓ６）のレベルが、基準レベルと比較して上昇している場合に、対象は神経障害性ＭＰＳ ＩＩまたはＭＰＳ Ｉを有するものとして同定または診断する。一部の実施形態では、対象は、ＧＡＧヘパラン硫酸（ＨＳ）のレベルが、基準レベルと比較して（例えば、脳において）上昇している場合、神経障害性ＭＰＳ ＩＩまたはＭＰＳ Ｉを有するものとして同定または診断する。一部の実施形態では、ヘパリン硫酸（ｔ－ＨＳ）の総量は、（例えば、生物分析質量分析法に基づいて決定する）酵素消化の後の脳脊髄液（ＣＳＦ）での４つの二糖（Ｄ２Ｓ６、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６）の合計である。一部の実施形態では、例えば、対象（例えば、発症前対象）でのＣＳＦにおけるＤ２Ｓ６のレベルの上昇は、神経障害性ＭＰＳ ＩＩまたはＭＰＳ Ｉを示す。一部の実施形態では、Ｄ２Ｓ６のレベルは、イズロン酸－２－スルファターゼ酵素活性を示し、治療モニタリングに使用することができる。一部の実施形態では、１つ以上の二糖は、１つ以上のＤ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、Ｄ２Ｓ６の１つ以上、またはそれらの組み合わせを含む。別の態様では、対象が神経障害性または非神経障害性のＭＰＳ ＩＩまたはＭＰＳ Ｉを有すると同定または診断する方法を本明細書で提供し、ここで、対象は、対象由来の生物学的試料での１つ以上の二糖（例えば、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、及び／またはＤ２Ｓ６）のレベルが、基準レベルと比較して上昇している場合、神経障害性ＭＰＳ ＩＩを有すると同定または診断する。一部の実施形態では、対象は、発症前である、または可視可能または検出可能なＭＰＳ ＩＩまたはＭＰＳ Ｉ症状を有していない。一部の実施形態では、対象は、ＭＰＳ ＩまたはＭＰＳ ＩＩを有する、またはその診断を受けている。一部の実施形態では、基準レベルは、１名以上の健常者及び／または１名以上の非神経障害対象に由来する生物学的試料での１つ以上の二糖（例えば、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、及び／またはＤ２Ｓ６）のレベルである。一部の実施形態では、基準レベルは、１名以上の健常者及び／または１名以上の非神経障害対象に由来する生物学的試料（例えば、ＣＳＦ試料）でのＤ２Ｓ６のレベルである。一部の実施形態では、基準レベルは、所定のレベルである。一部の実施形態では、１つ以上の二糖（例えば、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、Ｄ２Ｓ６）のレベルは、対象（例えば、ＭＰＳ ＩまたはＭＰＳ ＩＩを有する対象）に由来する生物学的試料での総ヘパラン硫酸二糖（ＨＳ）の約または少なくとも約１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、または４０％超である。一部の実施形態では、１つ以上の二糖（例えば、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、及び／またはＤ２Ｓ６）のレベルは、対象（例えば、ＭＰＳ ＩまたはＭＰＳ ＩＩを有する対象）に由来する生物学的試料での総ヘパラン硫酸二糖（ＨＳ）の約または少なくとも約２０％である。一部の実施形態では、対象（例えば、ＭＰＳ ＩまたはＭＰＳ ＩＩを有する対象）由来の生物学的試料での１つ以上の二糖（例えば、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、及び／またはＤ２Ｓ６）のレベルは、基準（例えば、健常者）由来の生物学的試料での１つ以上の二糖（例えば、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、及び／またはＤ２Ｓ６）のレベルよりも、約または少なくとも約５％、１０％、１１５、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９０％、または９０％超高い。一部の実施形態では、総ヘパリン硫酸（例えば、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、及び／またはＤ２Ｓ６）のレベルは、約または少なくとも約２５０ｎｇ／ｍＬ、２７５ｎｇ／ｍＬ、３００ｎｇ／ｍＬ、３２５ｎｇ／ｍＬ、３５０ｎｇ／ｍＬ、３７５ｎｇ／ｍＬ、４００ｎｇ／ｍＬ、４２５ｎｇ／ｍＬ、４５０ｎｇ／ｍＬ、４７５ｎｇ／ｍＬ、５００ｎｇ／ｍＬ、５２５ｎｇ／ｍＬ、５５０ｎｇ／ｍＬ、５７５ｎｇ／ｍＬ、６００ｎｇ／ｍＬ、６２５ｎｇ／ｍＬ、６５０ｎｇ／ｍＬ、６７５ｎｇ／ｍＬ、７００ｎｇ／ｍＬ、７２５ｎｇ／ｍＬ、７５０ｎｇ／ｍＬ、７７５ｎｇ／ｍＬ、８００ｎｇ／ｍＬ、８２５ｎｇ／ｍＬ、８５０ｎｇ／ｍＬ、８７５ｎｇ／ｍＬ、９００ｎｇ／ｍＬ、９２５ｎｇ／ｍＬ、９５０ｎｇ／ｍＬ、９７５ｎｇ／ｍＬ、１０００ｎｇ／ｍＬ、または１０００ｎｇ／ｍＬ超である。一部の実施形態では、総ヘパリン硫酸（例えば、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、及び／またはＤ２Ｓ６）のレベルは、約または少なくとも約５００ｎｇ／ｍＬである。一部の実施形態では、総ヘパリン硫酸（例えば、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、及び／またはＤ２Ｓ６）のレベルは、約または少なくとも約６００ｎｇ／ｍＬである。一部の実施形態では、総ヘパリン硫酸（例えば、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、及び／またはＤ２Ｓ６）のレベルは、約または少なくとも約７００ｎｇ／ｍＬである。一部の実施形態では、総ヘパリン硫酸（例えば、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、及び／またはＤ２Ｓ６）のレベルは、約または少なくとも約８００ｎｇ／ｍＬである。一部の実施形態では、総ヘパリン硫酸（例えば、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、及び／またはＤ２Ｓ６）のレベルは、約５００ｎｇ／ｍＬ～約１０００ｎｇ／ｍＬ、約３００ｎｇ／ｍＬ～約１０００ｎｇ／ｍＬ、約４００ｎｇ／ｍＬ～約１０００ｎｇ／ｍＬ、約５５０ｎｇ／ｍＬ～約１０００ｎｇ／ｍＬ 約６００ｎｇ／ｍＬ～約１０００ｎｇ／ｍＬ、約７００ｎｇ／ｍＬ～約１０００ｎｇ／ｍＬ ５００ｎｇ／ｍＬ～約９００ｎｇ／ｍＬ、約３００ｎｇ／ｍＬ～約９００ｎｇ／ｍＬ、約４００ｎｇ／ｍＬ～約９００ｎｇ／ｍＬ、約５５０ｎｇ／ｍＬ～約９００ｎｇ／ｍＬ 約６００ｎｇ／ｍＬ～約９００ｎｇ／ｍＬ、または約７００ｎｇ／ｍＬ～約９００ｎｇ／ｍＬにある。一部の実施形態では、少なくとも１つの硫酸ヘパリン（例えば、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、及び／またはＤ２Ｓ６）のレベルは、約または少なくとも約５０ｎｇ／ｍＬ、７５ｎｇ／ｍＬ、８０ｎｇ／ｍＬ、８５ｎｇ／ｍＬ、９０ｎｇ／ｍＬ、９５ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ、１０５ｎｇ／ｍＬ、１１０ｎｇ／ｍＬ、１１５ｎｇ／ｍＬ、１２０ｎｇ／ｍＬ、１２５ｎｇ／ｍＬ、１３０ｎｇ／ｍＬ、１３５ｎｇ／ｍＬ、１４０ｎｇ／ｍＬ、１４５ｎｇ／ｍＬ、１５０ｎｇ／ｍＬ、１５５ｎｇ／ｍＬ、１６０ｎｇ／ｍＬ、１６５ｎｇ／ｍＬ、１７０ｎｇ／ｍＬ、１７５ｎｇ／ｍＬ、１８０ｎｇ／ｍＬ、１８５ｎｇ／ｍＬ、１９０ｎｇ／ｍＬ、１９５ｎｇ／ｍＬ、２００ｎｇ／ｍＬ、２１０ｎｇ／ｍＬ、２２０ｎｇ／ｍＬ、２３０ｎｇ／ｍＬ、２４０ｎｇ／ｍＬ、２５０ｎｇ／ｍＬ、２６０ｎｇ／ｍＬ、２７０ｎｇ／ｍＬ、２８０ｎｇ／ｍＬ、２９０ｎｇ／ｍＬ、３００ｎｇ／ｍＬ、３１０ｎｇ／ｍＬ、３２０ｎｇ／ｍＬ、３３０ｎｇ／ｍＬ、３４０ｎｇ／ｍＬ、３５０ｎｇ／ｍＬ、３６０ｎｇ／ｍＬ、３７０ｎｇ／ｍＬ、３８０ｎｇ／ｍＬ、３９０ｎｇ／ｍＬ、４００ｎｇ／ｍＬ、または４００ｎｇ／ｍＬ超とする。一部の実施形態では、少なくとも１つのヘパリン硫酸（例えば、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、及び／またはＤ２Ｓ６）のレベルは、約または少なくとも約５０ｎｇ／ｍＬ、６０ｎｇ／ｍＬ、７０ｎｇ／ｍＬ、８０ｎｇ／ｍＬ、９０ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ、１１０ｎｇ／ｍＬ、１２０ｎｇ／ｍＬ、１３０ｎｇ／ｍＬ、１４０ｎｇ／ｍＬ、１５０ｎｇ／ｍＬ、１６０ｎｇ／ｍＬ、１７０ｎｇ／ｍＬ、１８０ｎｇ／ｍＬ、１９０ｎｇ／ｍＬ、２００ｎｇ／ｍＬ、２００ｎｇ／ｍＬ超である。一部の実施形態では、少なくとも１つのヘパリン硫酸（例えば、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、及び／またはＤ２Ｓ６）のレベルは、約または少なくとも約８０ｎｇ／ｍＬである（例えば、Ｄ０Ｓ０またはＤ０Ａ６の場合）。一部の実施形態では、少なくとも１つのヘパリン硫酸（例えば、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、及び／またはＤ２Ｓ６）のレベルは、約または少なくとも約１００ｎｇ／ｍＬである（例えば、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、またはＤ２Ｓ６の場合）。一部の実施形態では、少なくとも１つのヘパリン硫酸（例えば、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、及び／またはＤ２Ｓ６）のレベルは、約または少なくとも約９０ｎｇ／ｍＬである（例えば、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、またはＤ２Ｓ６の場合）。一部の実施形態では、少なくとも１つの硫酸ヘパリン（例えば、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、及び／またはＤ２Ｓ６）のレベルは、約または少なくとも約１１０ｎｇ／ｍＬである（例えば、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、またはＤ２Ｓ６の場合）。一部の実施形態では、少なくとも１つの硫酸ヘパリン（例えば、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、及び／またはＤ２Ｓ６）のレベルは、約または少なくとも約１２０ｎｇ／ｍＬである（例えば、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、またはＤ２Ｓ６の場合）。一部の実施形態では、少なくとも１つの硫酸ヘパリン（例えば、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、及び／またはＤ２Ｓ６）のレベルは、約または少なくとも約１６０ｎｇ／ｍＬである（例えば、Ｄ２Ｓ６、またはＤ０Ａ６の場合）。一部の実施形態では、少なくとも１つの硫酸ヘパリン（例えば、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、及び／またはＤ２Ｓ６）のレベルは、約または少なくとも約２５０ｎｇ／ｍＬである（例えば、Ｄ２Ｓ６、またはＤ０Ａ０の場合）。一部の実施形態では、少なくとも１つの硫酸ヘパリン（例えば、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、及び／またはＤ２Ｓ６）のレベルは、約または少なくとも約３００ｎｇ／ｍＬである（例えば、Ｄ２Ｓ６、またはＤ０Ａ０の場合）。一部の実施形態では、少なくとも１つの硫酸ヘパリン（例えば、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、及び／またはＤ２Ｓ６）のレベルは、約または少なくとも約３５０ｎｇ／ｍＬである（例えば、Ｄ２Ｓ６、またはＤ０Ａ０の場合）。一部の実施形態では、少なくとも１つの硫酸ヘパリン（例えば、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、及び／またはＤ２Ｓ６）のレベルは、約または少なくとも約１５０ｎｇ／ｍＬである（例えば、Ｄ２Ｓ６の場合）。一部の実施形態では、少なくとも１つの硫酸ヘパリン（例えば、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、及び／またはＤ２Ｓ６）のレベルは、約または少なくとも約１７０ｎｇ／ｍＬである（例えば、Ｄ２Ｓ６の場合）。一部の実施形態では、少なくとも１つの硫酸ヘパリン（例えば、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、及び／またはＤ２Ｓ６）のレベルは、約または少なくとも約１８０ｎｇ／ｍＬである（例えば、Ｄ２Ｓ６の場合）。一部の実施形態では、少なくとも１つの硫酸ヘパリン（例えば、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、及び／またはＤ２Ｓ６）のレベルは、約または少なくとも約２００ｎｇ／ｍＬである（例えば、Ｄ２Ｓ６の場合）。一部の実施形態では、対象由来の生物学的試料での１つ以上のヘパラン硫酸二糖（例えば、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、及び／またはＤ２Ｓ６）のレベル、またはＤ２Ｓ６のレベルは、基準レベル（例えば、１つ以上のヘパラン硫酸二糖（例えば、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、及び／またはＤ２Ｓ６）のレベル）、または１名以上の健常者、及び／または１名以上の非神経障害対象に由来する生物学的試料でのＤ２Ｓ６のレベル、または事前に決定した値）と比較して、約または少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬ、２０ｎｇ／ｍＬ、３０ｎｇ／ｍＬ、４０ｎｇ／ｍＬ、５０ｎｇ／ｍＬ、６０ｎｇ／ｍＬ、７０ｎｇ／ｍＬ、８０ｎｇ／ｍＬ
、９０ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ、１５０ｎｇ／ｍＬ、１６０ｎｇ／ｍＬ、１７０ｎｇ／ｍＬ、１８０ｎｇ／ｍＬ、１９０ｎｇ／ｍＬ、２００ｎｇ／ｍＬ、２１０ｎｇ／ｍＬ、２２０ｎｇ／ｍＬ、２３０ｎｇ／ｍＬ、２４０ｎｇ／ｍＬ、２５０ｎｇ／ｍＬ、２６０ｎｇ／ｍＬ、２７０ｎｇ／ｍＬ、２８０ｎｇ／ｍＬ、２９０ｎｇ／ｍＬ、３００ｎｇ／ｍＬ、３１０ｎｇ／ｍＬ、３２０ｎｇ／ｍＬ、３３０ｎｇ／ｍＬ、３４０ｎｇ／ｍＬ、３５０ｎｇ／ｍＬ、３６０ｎｇ／ｍＬ、３７０ｎｇ／ｍＬ、３８０ｎｇ／ｍＬ、３９０ｎｇ／ｍＬ、４００ｎｇ／ｍＬ、４１０ｎｇ／ｍＬ、４２０ｎｇ／ｍＬ、４３０ｎｇ／ｍＬ、４４０ｎｇ／ｍＬ、４５０ｎｇ／ｍＬ、４６０ｎｇ／ｍＬ、４７０ｎｇ／ｍＬ、４８０ｎｇ／ｍＬ、４９０ｎｇ／ｍＬ、５００ｎｇ／ｍＬ、または５００ｎｇ／ｍＬ超高い。一部の実施形態では、対象由来の生物学的試料でのヘパラン硫酸二糖（複数可）（例えば、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、及び／またはＤ２Ｓ６）の総レベルは、基準レベル（例えば１名以上の健常者及び／または１人以上の非神経障害対象由来の生物学的試料でのヘパラン硫酸二糖（例えば、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、及びＤ２Ｓ６）の合計レベル、または事前に決定した値）と比較して、約または少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬ、２０ｎｇ／ｍＬ、３０ｎｇ／ｍＬ、４０ｎｇ／ｍＬ、５０ｎｇ／ｍＬ、６０ｎｇ／ｍＬ、７０ｎｇ／ｍＬ、８０ｎｇ／ｍＬ、９０ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ、１５０ｎｇ／ｍＬ、１６０ｎｇ／ｍＬ、１７０ｎｇ／ｍＬ、１８０ｎｇ／ｍＬ、１９０ｎｇ／ｍＬ、２００ｎｇ／ｍＬ、２１０ｎｇ／ｍＬ、２２０ｎｇ／ｍＬ、２３０ｎｇ／ｍＬ、２４０ｎｇ／ｍＬ、２５０ｎｇ／ｍＬ、２６０ｎｇ／ｍＬ、２７０ｎｇ／ｍＬ、２８０ｎｇ／ｍＬ、２９０ｎｇ／ｍＬ、３００ｎｇ／ｍＬ、３１０ｎｇ／ｍＬ、３２０ｎｇ／ｍＬ、３３０ｎｇ／ｍＬ、３４０ｎｇ／ｍＬ、３５０ｎｇ／ｍＬ、３６０ｎｇ／ｍＬ、３７０ｎｇ／ｍＬ、３８０ｎｇ／ｍＬ、３９０ｎｇ／ｍＬ、４００ｎｇ／ｍＬ、４１０ｎｇ／ｍＬ、４２０ｎｇ／ｍＬ、４３０ｎｇ／ｍＬ、４４０ｎｇ／ｍＬ、４５０ｎｇ／ｍＬ、４６０ｎｇ／ｍＬ、４７０ｎｇ／ｍＬ、４８０ｎｇ／ｍＬ、４９０ｎｇ／ｍＬ、５００ｎｇ／ｍＬ、５１０ｎｇ／ｍＬ、５２０ｎｇ／ｍＬ、５３０ｎｇ／ｍＬ、５４０ｎｇ／ｍＬ、５５０ｎｇ／ｍＬ、５６０ｎｇ／ｍＬ、５７０ｎｇ／ｍＬ、５８０ｎｇ／ｍＬ、５９０ｎｇ／ｍＬ、６００ｎｇ／ｍＬ、６１０ｎｇ／ｍＬ、６２０ｎｇ／ｍＬ、６３０ｎｇ／ｍＬ、６４０ｎｇ／ｍＬ、６５０ｎｇ／ｍＬ、６６０ｎｇ／ｍＬ、６７０ｎｇ／ｍＬ、６８０ｎｇ／ｍＬ、６９０ｎｇ／ｍＬ、７００ｎｇ／ｍＬ、７１０ｎｇ／ｍＬ、７２０ｎｇ／ｍＬ、７３０ｎｇ／ｍＬ、７４０ｎｇ／ｍＬ、７５０ｎｇ／ｍＬ、７６０ｎｇ／ｍＬ、７７０ｎｇ／ｍＬ、７８０ｎｇ／ｍＬ、７９０ｎｇ／ｍＬ、８００ｎｇ／ｍＬ、８５０ｎｇ／ｍＬ、９００ｎｇ／ｍＬ、９５０ｎｇ／ｍＬ、１０００ｎｇ／ｍＬ、または１０００ｎｇ／ｍＬ超高い。
、９０ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ、１５０ｎｇ／ｍＬ、１６０ｎｇ／ｍＬ、１７０ｎｇ／ｍＬ、１８０ｎｇ／ｍＬ、１９０ｎｇ／ｍＬ、２００ｎｇ／ｍＬ、２１０ｎｇ／ｍＬ、２２０ｎｇ／ｍＬ、２３０ｎｇ／ｍＬ、２４０ｎｇ／ｍＬ、２５０ｎｇ／ｍＬ、２６０ｎｇ／ｍＬ、２７０ｎｇ／ｍＬ、２８０ｎｇ／ｍＬ、２９０ｎｇ／ｍＬ、３００ｎｇ／ｍＬ、３１０ｎｇ／ｍＬ、３２０ｎｇ／ｍＬ、３３０ｎｇ／ｍＬ、３４０ｎｇ／ｍＬ、３５０ｎｇ／ｍＬ、３６０ｎｇ／ｍＬ、３７０ｎｇ／ｍＬ、３８０ｎｇ／ｍＬ、３９０ｎｇ／ｍＬ、４００ｎｇ／ｍＬ、４１０ｎｇ／ｍＬ、４２０ｎｇ／ｍＬ、４３０ｎｇ／ｍＬ、４４０ｎｇ／ｍＬ、４５０ｎｇ／ｍＬ、４６０ｎｇ／ｍＬ、４７０ｎｇ／ｍＬ、４８０ｎｇ／ｍＬ、４９０ｎｇ／ｍＬ、５００ｎｇ／ｍＬ、または５００ｎｇ／ｍＬ超高い。一部の実施形態では、対象由来の生物学的試料でのヘパラン硫酸二糖（複数可）（例えば、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、及び／またはＤ２Ｓ６）の総レベルは、基準レベル（例えば１名以上の健常者及び／または１人以上の非神経障害対象由来の生物学的試料でのヘパラン硫酸二糖（例えば、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、及びＤ２Ｓ６）の合計レベル、または事前に決定した値）と比較して、約または少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬ、２０ｎｇ／ｍＬ、３０ｎｇ／ｍＬ、４０ｎｇ／ｍＬ、５０ｎｇ／ｍＬ、６０ｎｇ／ｍＬ、７０ｎｇ／ｍＬ、８０ｎｇ／ｍＬ、９０ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ、１５０ｎｇ／ｍＬ、１６０ｎｇ／ｍＬ、１７０ｎｇ／ｍＬ、１８０ｎｇ／ｍＬ、１９０ｎｇ／ｍＬ、２００ｎｇ／ｍＬ、２１０ｎｇ／ｍＬ、２２０ｎｇ／ｍＬ、２３０ｎｇ／ｍＬ、２４０ｎｇ／ｍＬ、２５０ｎｇ／ｍＬ、２６０ｎｇ／ｍＬ、２７０ｎｇ／ｍＬ、２８０ｎｇ／ｍＬ、２９０ｎｇ／ｍＬ、３００ｎｇ／ｍＬ、３１０ｎｇ／ｍＬ、３２０ｎｇ／ｍＬ、３３０ｎｇ／ｍＬ、３４０ｎｇ／ｍＬ、３５０ｎｇ／ｍＬ、３６０ｎｇ／ｍＬ、３７０ｎｇ／ｍＬ、３８０ｎｇ／ｍＬ、３９０ｎｇ／ｍＬ、４００ｎｇ／ｍＬ、４１０ｎｇ／ｍＬ、４２０ｎｇ／ｍＬ、４３０ｎｇ／ｍＬ、４４０ｎｇ／ｍＬ、４５０ｎｇ／ｍＬ、４６０ｎｇ／ｍＬ、４７０ｎｇ／ｍＬ、４８０ｎｇ／ｍＬ、４９０ｎｇ／ｍＬ、５００ｎｇ／ｍＬ、５１０ｎｇ／ｍＬ、５２０ｎｇ／ｍＬ、５３０ｎｇ／ｍＬ、５４０ｎｇ／ｍＬ、５５０ｎｇ／ｍＬ、５６０ｎｇ／ｍＬ、５７０ｎｇ／ｍＬ、５８０ｎｇ／ｍＬ、５９０ｎｇ／ｍＬ、６００ｎｇ／ｍＬ、６１０ｎｇ／ｍＬ、６２０ｎｇ／ｍＬ、６３０ｎｇ／ｍＬ、６４０ｎｇ／ｍＬ、６５０ｎｇ／ｍＬ、６６０ｎｇ／ｍＬ、６７０ｎｇ／ｍＬ、６８０ｎｇ／ｍＬ、６９０ｎｇ／ｍＬ、７００ｎｇ／ｍＬ、７１０ｎｇ／ｍＬ、７２０ｎｇ／ｍＬ、７３０ｎｇ／ｍＬ、７４０ｎｇ／ｍＬ、７５０ｎｇ／ｍＬ、７６０ｎｇ／ｍＬ、７７０ｎｇ／ｍＬ、７８０ｎｇ／ｍＬ、７９０ｎｇ／ｍＬ、８００ｎｇ／ｍＬ、８５０ｎｇ／ｍＬ、９００ｎｇ／ｍＬ、９５０ｎｇ／ｍＬ、１０００ｎｇ／ｍＬ、または１０００ｎｇ／ｍＬ超高い。
一部の実施形態では、対象は、対象由来の生物学的試料でのＩ０Ｓ６のレベルに基づいて、本開示の治療（例えば、ＭＰＳ Ｉの治療のためのｈＩＤＵＡをコードするｒＡＡＶ９；コンストラクト２）に応答性であるものと決定する。一部の実施形態では、基準と比較して上昇した対象（例えば、ＭＰＳ Ｉを有する対象）由来の生物学的試料でのＩ０Ｓ６のレベルは、対象が、本開示の治療（またはＭＰＳ Ｉに関するｈＩＤＵＡをコードするｒＡＡＶ９による治療）に応答性であることを示す。一部の実施形態では、基準は、健常者、または健常者の集団に由来する生物学的試料でのＩ０Ｓ６のレベルである。一部の実施形態では、基準は、ＭＰＳ Ｉを有する対象またはＭＰＳ Ｉを有する対象の集団に由来する生物学的試料でのＩ０Ｓ６のレベルである。一部の実施形態では、基準は、ＭＰＳ Ｉを有さない、またはＭＰＳ Ｉと診断されていない対象、またはＭＰＳ Ｉと診断されていない対象の集団に由来する生物学的試料でのＩ０Ｓ６のレベルである。一部の実施形態では、基準は、同じ対象に由来するが、異なる時点で得た（例えば、早い時点で得た）生物学的試料でのＩＳ０６のレベルである。一部の実施形態では、基準は、所定の値である。
５．５．１．疾患マーカー
ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを使用する治療の有効性を、患者の疾患バイオマーカーのレベルを測定してモニタリングする。ある特定の実施形態では、疾患バイオマーカーのレベルを、患者のＣＳＦにおいて測定する。ある特定の実施形態では、疾患バイオマーカーのレベルを、患者の血清において測定する。ある特定の実施形態では、疾患バイオマーカーのレベルを、患者の血漿において測定する。ある特定の実施形態では、疾患バイオマーカーのレベルを、患者の尿において測定する。ある特定の実施形態では、疾患バイオマーカーは、ＧＡＧである。一部の実施形態では、疾患バイオマーカーは、Ｉ０Ｓ６である。好ましい実施形態では、疾患バイオマーカーは、ヘパラン硫酸である。ある特定の実施形態では、疾患バイオマーカーは、Ｄ２Ｓ６である。Ｉ２Ｓ酵素は、リソソームにおいてＨＳから硫酸塩を切断し、及び、Ｉ２Ｓの非存在は、完全に硫酸化したＤ２Ｓ６の長鎖を蓄積させる。一部の実施形態では、Ｄ２Ｓ６の定量的測定は、Ｉ２Ｓ酵素活性レベルを反映しており、及び、ＨＳ及びＤ２Ｓ６のレベルの上昇は、ＭＰＳ ＩＩの神経障害性表現型と密接に相関している。一部の実施形態では、Ｄ２Ｓ６のレベルは、神経認知発達と逆相関している。一部の実施形態では、疾患バイオマーカーは、抗ＡＡＶ抗体（例えば、抗ＡＡＶ９抗体）である。ある特定の実施形態では、疾患バイオマーカーは、デルマタン硫酸である。ある特定の実施形態では、疾患バイオマーカーは、ＩＤＳ酵素活性である。ある特定の実施形態では、疾患バイオマーカーは、炎症である。ある特定の実施形態では、疾患バイオマーカーは、安全事象である。
ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを使用する治療の有効性を、患者の疾患バイオマーカーのレベルを測定してモニタリングする。ある特定の実施形態では、疾患バイオマーカーのレベルを、患者のＣＳＦにおいて測定する。ある特定の実施形態では、疾患バイオマーカーのレベルを、患者の血清において測定する。ある特定の実施形態では、疾患バイオマーカーのレベルを、患者の血漿において測定する。ある特定の実施形態では、疾患バイオマーカーのレベルを、患者の尿において測定する。ある特定の実施形態では、疾患バイオマーカーは、ＧＡＧである。一部の実施形態では、疾患バイオマーカーは、Ｉ０Ｓ６である。好ましい実施形態では、疾患バイオマーカーは、ヘパラン硫酸である。ある特定の実施形態では、疾患バイオマーカーは、Ｄ２Ｓ６である。Ｉ２Ｓ酵素は、リソソームにおいてＨＳから硫酸塩を切断し、及び、Ｉ２Ｓの非存在は、完全に硫酸化したＤ２Ｓ６の長鎖を蓄積させる。一部の実施形態では、Ｄ２Ｓ６の定量的測定は、Ｉ２Ｓ酵素活性レベルを反映しており、及び、ＨＳ及びＤ２Ｓ６のレベルの上昇は、ＭＰＳ ＩＩの神経障害性表現型と密接に相関している。一部の実施形態では、Ｄ２Ｓ６のレベルは、神経認知発達と逆相関している。一部の実施形態では、疾患バイオマーカーは、抗ＡＡＶ抗体（例えば、抗ＡＡＶ９抗体）である。ある特定の実施形態では、疾患バイオマーカーは、デルマタン硫酸である。ある特定の実施形態では、疾患バイオマーカーは、ＩＤＳ酵素活性である。ある特定の実施形態では、疾患バイオマーカーは、炎症である。ある特定の実施形態では、疾患バイオマーカーは、安全事象である。
ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを使用する治療の有効性を、患者由来の試料での次のバイオマーカーのうちの１つ以上を測定してモニタリングする：（ａ）ＣＳＦ中のＧＡＧのレベル、（ｂ）ＣＳＦ中のＩ２Ｓのレベル、（ｃ）血漿中のＧＡＧのレベル、（ｄ）血漿中のＩ２Ｓのレベル、（ｅ）白血球Ｉ２Ｓ酵素活性のレベル、（ｆ）尿中のＧＡＧのレベル、（ｇ）ＣＳＦ中のヘパラン硫酸のレベル、及び（ｈ）ＣＳＦ中のデルマタン硫酸のレベル。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを使用する治療の有効性は、ＣＳＦ、尿、及び／または血漿でのＩ２Ｓ及び／またはＧＡＧを測定してモニタリングする。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを使用する治療の有効性は、ＣＳＦ、血漿、及び／または尿でのヘパラン硫酸を測定してモニタリングする。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを使用する治療の有効性は、非還元性ヘパラン硫酸を測定してモニタリングする。一部の実施形態では、ＣＳＦで測定したヘパラン硫酸は、治療の有効性を決定するための主要評価項目である。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを使用する治療の有効性は、ＣＳＦでのＤ２Ｓ６を測定してモニタリングする。一部の実施形態では、Ｄ２Ｓ６は、Ｄ２Ｓ６を検出するために使用するあらゆる検出可能／利用可能なアッセイまたは生物学的試料（例えば、ＣＳＦ、尿、及び／または血漿）を使用して測定する。ある特定の実施形態では、組換えヌクレオチド発現ベクターを使用する治療の有効性は、尿中総ＧＡＧ、尿中ＨＳ、及び／または血漿Ｉ２Ｓ酵素活性を測定してモニタリングする。一部の実施形態では、尿中ＧＡＧは、全身効果を示す、及び／またはＥＲＴ治療とは無関係である。一部の実施形態では、本開示の治療の有効性は、対象由来の試料でのＩ２Ｓタンパク質濃度のレベルに基づいて決定する（例えば、Ｉ２Ｓタンパク質濃度のレベルの増加は、有効性を示す）。一部の実施形態では、ヘパラン硫酸（ＨＳ）、及びＤ２Ｓ６（グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）は、ベースライン時、及び／または本開示の組換えベクターを投与した後に脳脊髄液（ＣＳＦ）で測定する。一部の実施形態では、対象におけるＭＰＳ ＩＩ治療の有効性の決定、またはモニタリングは、対象に対して本開示のｒＡＡＶを投与して（例えば、それから、基準と比較して）約、少なくとも約、または最大限でも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０日後、または１、２、３、４、５、６、７、８、１０、１６、２０、２４、３０、３５、４０、４５、４８、５０、５２、５６、１０４週間後、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２ヶ月後、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０年後に得た対象由来の生物学的試料での少なくとも１つのバイオマーカー（例えば、Ｄ２Ｓ６）のレベルを検出して決定する。一部の実施形態では、対象におけるＭＰＳ Ｉ治療の有効性の決定、またはモニタリングは、対象に対して本開示のｒＡＡＶを投与して（例えば、それから、基準と比較して）約、少なくとも約、または最大限でも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０日後、または１、２、３、４、５、６、７、８、１０、１６、２０、２４、３０、３５、４０、４５、４８、５０、５２、５６、１０４週間後、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２ヶ月後、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０年後に得た対象由来の生物学的試料での少なくとも１つのバイオマーカー（例えば、Ｉ０Ｓ６）のレベルを検出して決定する。
一部の実施形態では、ＨＳ及び／またはＤ２Ｓ６のレベルは、基準と比較して（例えば、本開示の組換えベクターを投与する前の対象でのＨＳ及び／またはＤ２Ｓ６のレベル、またはベースライン、または所定の値と比較して）、本開示の組換えベクターを投与した後の対象において減少する。一部の実施形態では、ＨＳのレベルは、本開示の組換えベクターを投与した後、例えば、ＥＲＴを中止する前の基準と比較して（例えば、本開示の組換えベクターを投与する前の対象でのＨＳのレベルと比較して）、約または少なくとも約３％、５％、７％、８％、９％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２２％、２５％、２７％、３０％、３２％、３５％、３７％、４０％、４２％、４５％、４７％、５０％、５２％、５５％、５７％、６０％、６２％、６５％、６７％、７０％、７２％、７５％、７７％、８０％、８８％、８５％、８７％、９０％、９２％、９５％、９７％、１００％、または１００％超減少する。一部の実施形態では、Ｄ２Ｓ６のレベルは、本開示の組換えベクターを投与した後、例えば、ＥＲＴを中止する前の基準と比較して（例えば、本開示の組換えベクターを投与する前の対象でのＤ２Ｓ６のレベルと比較して）、約または少なくとも約３％、５％、７％、８％、９％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２２％、２５％、２７％、３０％、３２％、３５％、３７％、４０％、４２％、４５％、４７％、５０％、５２％、５５％、５７％、６０％、６２％、６５％、６７％、７０％、７２％、７５％、７７％、８０％、８８％、８５％、８７％、９０％、９２％、９５％、９７％、１００％、または１００％超減少する。一部の実施形態では、Ｉ０Ｓ６のレベルは、対象において、基準と比較して（例えば、本開示の組換えベクターを投与する前の対象でのＩ０Ｓ６のレベルと比較して、またはベースライン、または所定の値と比較して）減少する。一部の実施形態では、Ｉ０Ｓ６のレベルは、本開示の組換えベクターを投与した後、例えば、ＥＲＴを中止する前の基準と比較して（例えば、本開示の組換えベクターを投与する前の対象でのＩ０Ｓ６のレベルと比較して）、約または少なくとも約３％、５％、７％、８％、９％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２２％、２５％、２７％、３０％、３２％、３５％、３７％、４０％、４２％、４５％、４７％、５０％、５２％、５５％、５７％、６０％、６２％、６５％、６７％、７０％、７２％、７５％、７７％、８０％、８８％、８５％、８７％、９０％、９２％、９５％、９７％、１００％、または１００％超減少する。一部の実施形態では、バイオマーカー（例えば、ＨＳ、Ｄ２Ｓ６、Ｉ０Ｓ６、総ＧＡＧ、及び／またはＩ２Ｓ酵素）は、本開示の組換えベクターを投与する前、本開示の組換えベクターの投与日と同じ日、本開示の組換えベクターを投与して１日後、及び／または本開示の組換えベクターを投与して約１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、１３週間、１４週間、１５週間、１６週間、１７週間、１８週間、１９週間、２０週間、２２週間、２４週間、２６週間、３０週間、３５週間、４０週間、４２週間、４４週間、４６週間、４８週間、５０週間、５２週間、５４週間、５６週間、６０週間、６５週間、７０週間、７５週間、８０週間、８５週間、９０週間、９５週間、１００週間、１０４週間、１年、２年、または２年超の後に測定を行う。一部の実施形態では、バイオマーカー（例えば、ＨＳ、Ｄ２Ｓ６、Ｉ０Ｓ６、総ＧＡＧ、及び／またはＩ２Ｓ酵素）は、本開示の組換えベクターを投与する前、本開示の組換えベクターの投与日と同じ日、本開示の組換えベクターを投与して８週間、１６週間、２４週間、３２週間、４０週間、４８週間、５６週間、７２週間、１０４週間、１年、２年、または２年超の後に測定を行う。一部の実施形態では、ＨＳ及び／またはＤ２Ｓ６は、ＣＳＦで、ｎｇ／ｍｌで測定する。一部の実施形態では、バイオマーカー（例えば、ＨＳ、Ｉ０Ｓ６、及び／またはＤ２Ｓ６）は、本開示の組換えベクターを投与した後に、基準と比較して（例えば、ベースラインの量、または本開示の組換えベクターで治療する前の量と比較して）、約または少なくとも約５ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌ、１５ｎｇ／ｍｌ、２０ｎｇ／ｍｌ、２５ｎｇ／ｍｌ、３０ｎｇ／ｍｌ、３５ｍｇ／ｍｌ、４０ｍｇ／ｍｌ、４５ｎｇ／ｍｌ、５０ｎｇ／ｍｌ、５５ｎｇ／ｍｌ、６０ｎｇ／ｍｌ、６５ｎｇ／ｍｌ、７０ｎｇ／ｍｌ、７５ｎｇ／ｍｌ、８０ｎｇ／ｍｌ、９０ｎｇ／ｍｌ、９５ｎｇ／ｍｌ、１００ｎｇ／ｍｌ、１１０ｎｇ／ｍｌ、１２０ｎｇ／ｍｌ、１３０ｎｇ／ｍｌ、１４０ｎｇ／ｍｌ、１５０ｎｇ／ｍｌ、１６０ｎｇ／ｍｌ、１７０ｎｇ／ｍｌ、１８０ｎｇ／ｍｌ、１９０ｎｇ／ｍｌ、２００ｎｇ／ｍｌ、２２０ｎｇ／ｍｌ、２５０ｎｇ／ｍｌ、２７０ｎｇ／ｍｌ、３００ｎｇ／ｍｌ、または３００ｎｇ／ｍｌ超減少する。一部の実施形態では、総ＧＡＧ（例えば、尿中）は、ｇ／ｍｏｌ、ＣＫで測定する。一部の実施形態では、バイオマーカー（例えば、総ＧＡＧ）は、本開示の組換えベクターを投与した後に、基準と比較して（例えば、ベースラインの量、または本開示の組換えベクターで治療する前の量と比較して）、約または少なくとも約５ｇ／ｍｏｌ、１０ｇ／ｍｏｌ、１５ｇ／ｍｏｌ、２０ｇ／ｍｏｌ、２５ｇ／ｍｏｌ、３０ｇ／ｍｏｌ、３５ｍｇ／ｍｌ、４０ｍｇ／ｍｌ、４５ｇ／ｍｏｌ、５０ｇ／ｍｏｌ、５５ｇ／ｍｏｌ、６０ｇ／ｍｏｌ、６５ｇ／ｍｏｌ、７０ｇ／ｍｏｌ、７５ｇ／ｍｏｌ、８０ｇ／ｍｏｌ、８５ｇ／ｍｏｌ、９０ｇ／ｍｏｌ、９５ｇ／ｍｏｌ、１００ｇ／ｍｏｌ、１１０ｇ／ｍｏｌ、１２０ｇ／ｍｏｌ、１３０ｇ／ｍｏｌ、１４０ｇ／ｍｏｌ、１５０ｇ／ｍｏｌ、１６０ｇ／ｍｏｌ、１７０ｇ／ｍｏｌ、２００ｇ／ｍｏｌ、または２００ｇ／ｍｏｌ超減少する。一部の実施形態では、バイオマーカー（例えば、ＨＳ、Ｄ２Ｓ６、Ｉ０Ｓ６、及び／または総ＧＡＧ）及び／または肝脾腫大症は、本開示の組換えベクターを投与した後に、例えば、ＥＲＴを中止する前の基準と比較して、（例えば、ベースラインの量、または本開示の組換えベクターで治療する前の量と比較して）、約３％、５％、７％、８％、９％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２２％、２５％、２７％、３０％、３２％、３５％、３７％、４０％、４２％、４５％、４７％、５０％、５２％、５５％、５７％、６０％、６２％、６５％、６７％、７０％、７２％、７５％、７７％、８０％、８８％、８５％、８７％、９０％、９２％、９５％、９７％、１００％、または１００％超減少する、及び／または緩和する。一部の実施形態では、対象でのバイオマーカーの増減の判定は、対象においてＥＲＴを中止する前に決定する。一部の実施形態では、バイオマーカー（例えば、ＨＳ、Ｉ０Ｓ６、Ｄ２Ｓ６、及び／または総ＧＡＧ）、及び／または肝脾腫大症は、本開示の組換えベクターを投与した後に、基準と比較して（例えば、本開示の組換えベクターの投与前の対象でのバイオマーカーのレベルと比較して、または以前に得た対象由来の生物学的試料からのバイオマーカーレベルと比較して、またはベースラインと比較して、または健常者でのバイオマーカーのレベルと比較して）、約、およそ以下の期間後、少なくとも約、または最長で約２日、５日、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、１３週間、１４週間、１５週間、１６週間、１７週間、１８週間、１９週間、２０週間、２２週間、２４週間、２６週間、３０週間、３５週間、４０週間、４２週間、４４週間、４６週間、４８週間、５０週間、５２週間、５４週間、５６週間、６０週間、６５週間、７０週間、７５週間、８０週間、８５週間、９０週間、９５週間、１００週間、１０４週間、１０４週間超、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１５ヶ月、１８ヶ月、２１ヶ月、２４ヶ月、３０ヶ月、３６ヶ月、４０ヶ月、４８ヶ月、５０ヶ月、５５ヶ月、６０ヶ月、６５ヶ月、７０ヶ月、７５ヶ月、８０ヶ月、８５ヶ月、９０ヶ月、９５ヶ月、１００ヶ月、１年、１．５年、２年、２．５年、３年、３．５年、４年、４．５年、５年、５．５年、６年、６．５年、７年、７．５年、８年、８．５年、９年、９．５年、１０年、または１０年超の間は減少する、及び／または緩和する。例えば、一部の実施形態では、バイオマーカー（例えば、ＨＳ、Ｄ２Ｓ６、Ｉ０Ｓ６、及び／または総ＧＡＧ）及び／または肝脾腫大症は、（例えば、ベースラインからのバイオマーカーもしくは肝脾腫大症のレベルまたは本開示の組換えベクターを使用する治療前のバイオマーカーもしくは肝脾腫大症のレベルと比較して、または、より早い時点で対象から得たバイオマーカーまたは肝脾腫大症のレベルと比較して）本開示の組換えベクターを投与した後に、約、少なくとも約、または最長で約２週間、４週間、６週間、８週間、１６週間、２４週間、４８週間、５６週間、１０４週間、２年、または２年超にわたって、約５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、または５０％超の減少及び／または緩和を示す。一部の実施形態では、バイオマーカー（例えば、ＨＳ、Ｄ２Ｓ６、Ｉ０Ｓ６、及び／または総ＧＡＧ）の減少、肝脾腫大症の緩和、及び／またはバイオマーカー（例えば、Ｉ２Ｓ）の増加は、本開示の組換えベクターを投与した後は、約または少なくとも約２日、５日、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、１３週間、１４週間、１５週間、１６週間、１７週間、１８週間、１９週間、２０週間、２２週間、２４週間、２６週間、３０週間、３５週間、４０週間、４２週間、４４週間、４６週間、４８週間、５０週間、５２週間、５４週間、５６週間、６０週間、６５週間、７０週間、７５週間、８０週間、８５週間、９０週間、９５週間、１００週間、１０４週間、１０４週間超、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１５ヶ月、１８ヶ月、２１ヶ月、２４ヶ月、３０ヶ月、３６ヶ月、４０ヶ月、４８ヶ月、５０ヶ月、５５ヶ月、６０ヶ月、６５ヶ月、７０ヶ月、７５ヶ月、８０ヶ月、８５ヶ月、９０ヶ月、９５ヶ月、１００ヶ月、１年、１．５年、２年、２．５年、３年、３．５年、４年、４．５年、５年、５．５年、６年、６．５年、７年、７．５年、８年、８．５年、９年、９．５年、１０年、または１０年超は持続する。
一部の実施形態では、バイオマーカー（例えば、Ｉ２Ｓ酵素）のレベルは、本開示の組換えベクターを投与した後に、基準（例えば、本開示の組換えベクターの投与前の対象でのバイオマーカーのレベル）と比較して、約または少なくとも約３％、５％、７％、８％、９％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２２％、２５％、２７％、３０％、３２％、３５％、３７％、４０％、４２％、４５％、４７％、５０％、５２％、５５％、５７％、６０％、６２％、６５％、６７％、７０％、７２％、７５％、７７％、８０％、８８％、８５％、８７％、９０％、９２％、９５％、９７％、１００％、または１００％超増加する。一部の実施形態では、バイオマーカー（例えば、Ｉ２Ｓ酵素）は、本開示の組換えベクターを投与した後に、基準と比較して（例えば、本開示の組換えベクターの投与する前の対象でのバイオマーカーのレベルと比較して）、約、以下の期間後、少なくとも約、または最長で約２日、５日、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、１３週間、１４週間、１５週間、１６週間、１７週間、１８週間、１９週間、２０週間、２２週間、２４週間、２６週間、３０週間、３５週間、４０週間、４２週間、４４週間、４６週間、４８週間、５０週間、５２週間、５４週間、５６週間、６０週間、６５週間、７０週間、７５週間、８０週間、８５週間、９０週間、９５週間、１００週間、１０４週間、１０４週間超、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１５ヶ月、１８ヶ月、２１ヶ月、２４ヶ月、３０ヶ月、３６ヶ月、４０ヶ月、４８ヶ月、５０ヶ月、５５ヶ月、６０ヶ月、６５ヶ月、７０ヶ月、７５ヶ月、８０ヶ月、８５ヶ月、９０ヶ月、９５ヶ月、１００ヶ月、１年、１．５年、２年、２．５年、３年、３．５年、４年、４．５年、５年、５．５年、６年、６．５年、７年、７．５年、８年、８．５年、９年、９．５年、１０年、または１０年超増加する。一部の実施形態では、バイオマーカー（例えば、Ｉ２Ｓ酵素）は、本開示の組換えベクターを投与した後に（例えば、ベースラインからの量、または本開示の組換えベクターで治療する前の量と比較して）、約、少なくとも約、または最長で約２週間、４週間、６週間、８週間、１６週間、２４週間、４８週間、５６週間、１０４週間、２年、または２年超にわたって、約または少なくとも約５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％または５０％超増加する。一部の実施形態では、バイオマーカー（例えば、Ｉ２Ｓ酵素）は、本開示の組換えベクターを投与した後に、（例えば、ベースラインからの量、または本開示の組換えベクターを使用する治療前の量と比較して）約または少なくとも約５００ｐｇ／ｍｌ、１０００ｐｇ／ｍｌ、１５００ｐｇ／ｍｌ、１００００ｐｇ／ｍｌ、１５０００ｍｇ／ｍｌ、２００００ｍｇ／ｍｌ、２５０００ｐｇ／ｍｌ、３００００ｐｇ／ｍｌ、３５０００ｐｇ／ｍｌ、４００００ｐｇ／ｍｌ、４５０００ｐｇ／ｍｌ、５００００ｐｇ／ｍｌ、または５００００ｐｇ／ｍｌ超増加する。
一部の実施形態では、ＣＳＦ中のヘパラン硫酸（ＨＳ）グリコサミノグリカン（ＣＡＧ）を、生物分析ＬＣ／ＭＳを使用して測定する。一部の実施形態では、ＣＮＳ中のヘパラン硫酸非還元末端、及び総ヘパラン硫酸を、生物分析ＬＣ／ＭＳを使用して測定する。一部の実施形態では、血漿中のヘパラン硫酸非還元末端、及び総ヘパラン硫酸を、生物分析ＬＣ／ＭＳを使用して測定する。一部の実施形態では、尿中のＨＳ ＣＡＧを、生物分析ＬＣ／ＭＳを使用して測定する。一部の実施形態では、尿での総ＣＡＧ濃度を、比色アッセイを使用して測定する。一部の実施形態では、使用可能なアッセイに関するより詳細な説明を、本開示のセクション６で提供する。
一部の実施形態では、本開示の組換えベクターを対象に投与した後に、バイオマーカー（例えば、Ｄ２Ｓ６、Ｉ０Ｓ６、ＨＳ、ＧＡＧ（例えば、尿中の総ＧＡＧ））が増加及び／または肝脾腫大症が増悪し、及び／またはバイオマーカー（例えば、Ｉ２Ｓ）が減少した場合に、別の用量の（例えば、従前の用量と同用量、それよりも低用量、または高用量）の本開示の組換えベクターを対象に投与する。一部の実施形態では、本開示の組換えベクターを対象に対して投与した後に、バイオマーカー（例えば、Ｄ２Ｓ６、ＨＳ、ＧＡＧ（例えば、尿中の総ＧＡＧ））が増加し、及び／または肝脾腫大症が増悪し、及び／またはバイオマーカー（例えば、Ｉ２Ｓ）が増えた場合に、別の療法または治療（例えば、ＭＰＳ ＩＩの治療のために使用する療法または治療、罹患している対象の症状を治療するために使用する療法または治療、肝脾腫大症のための療法または治療、及び／またはＭＰＳ ＩＩに由来する症状を治療または予防するために使用する療法または治療）を対象に対して行う。一部の実施形態では、本開示の組換えベクターを対象に対して投与した後に、バイオマーカー（例えば、Ｉ０Ｓ６）が増加し、及び／または肝脾腫大症が増悪し、及び／またはバイオマーカー（例えば、Ｉ２Ｓ）が減少した場合に、別の療法または治療（例えば、ＭＰＳ Ｉの治療のために使用する療法または治療、罹患している対象の症状を治療するために使用する療法または治療、肝脾腫大症のための療法または治療、及び／またはＭＰＳ Ｉに由来する症状を治療または予防するために使用する療法または治療）を対象に対して行う。例えば、基準と比較して、約または少なくとも約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、または１００％超、バイオマーカー（例えば、Ｄ２Ｓ６、Ｉ０Ｓ６、ＨＳ、ＧＡＧ（例えば、尿中の総ＧＡＧ））が増加し、及び／または肝脾腫大症が増悪した場合、及び／またはバイオマーカー（例えば、Ｉ２Ｓ）が減少した場合、本開示の組換えベクターの別の用量（例えば、従前の用量と同用量、それよりも低用量、または高用量）を対象に対して投与を行い、及び／または別の療法または治療（例えば、ＥＲＴ治療）を、対象に対して行う。一部の実施形態では、基準は、対照である。一部の実施形態では、基準は、従前の生物学的試料、または対象の画像（例えば、超音波）から得たバイオマーカーレベル、及び／または肝脾腫大症である。一部の実施形態では、基準は、ベースライン時（例えば、本開示の組換えベクターを対象に投与する前）における対象のバイオマーカーレベル及び／または肝脾腫大症である。一部の実施形態では、基準は、健常者またはＭＰＳ ＩＩでない、または診断を受けていない対象でのバイオマーカーレベル及び／または肝脾腫大症である。一部の実施形態では、基準は、ＥＲＴを受けたことがない、またはＥＲＴを受けておらず、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けた対象から得た生物学的試料での少なくとも１つのバイオマーカーレベル及び／または肝脾腫大症である。一部の実施形態では、基準は、ＭＰＳ ＩＩを有する対象または対象の集団におけるバイオマーカーレベル及び／または肝脾腫大症である。一部の実施形態では、本開示の組換えベクターの投与の後に、バイオマーカー（例えば、Ｄ２Ｓ６、Ｉ０Ｓ６、ＨＳ、ＧＡＧ（例えば、尿中の総ＧＡＧ））の増加、及び／または肝脾腫大症の増悪、及び／またはバイオマーカー（例えば、Ｉ２Ｓ）の減少が、約、少なくとも約、または最長で約１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、１３週間、１４週間、１５週間、１６週間、１７週間、１８週間、１９週間、２０週間、２２週間、２４週間、２６週間、３０週間、３５週間、４０週間、４１週間、４２週間、４３週間、４４週間、４５週間、４６週間、４７週間、４８週間、４９週間、５０週間、５１週間、５２週間、５３週間、５４週間、５５週間、５６週間、５７週間、５８週間、５９週間、６０週間、６５週間、７０週間、７５週間、８０週間、８５週間、９０週間、９５週間、１００週間、１０４週間、１０４週間超、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１５ヶ月、１８ヶ月、２１ヶ月、２４ヶ月、３０ヶ月、３６ヶ月、４０ヶ月、４８ヶ月、５０ヶ月、５５ヶ月、６０ヶ月、６５ヶ月、７０ヶ月、７５ヶ月、８０ヶ月、８５ヶ月、９０ヶ月、９５ヶ月、１００ヶ月、１年、１．５年、２年、２．５年、３年、３．５年、４年、４．５年、５年、５．５年、６年、６．５年、７年、７．５年、８年、８．５年、９年、９．５年、１０年、または１０年超の期間にわたって認められる場合、本開示の組換えベクターの別の用量（例えば、従前の用量と比較して同用量、それよりも低用量、または高用量）を対象に投与し、及び／または別の療法または治療を対象に投与する。
一部の実施形態では、対象は、本開示の組換えベクターの投与前に、及び／またはそれと継続的に、酵素補充療法（ＥＲＴ）を受けている、または受けた。一部の実施形態では、対象でのＥＲＴ治療は、本開示の組換えベクターの投与前に中止する。一部の実施形態では、対象でのＥＲＴ治療は、本開示の組換えベクターを投与して約５２週間後に中止する。一部の実施形態では、対象でのＥＲＴ治療は、本開示の組換えベクターを投与して約５６週間後に中止する。一部の実施形態では、対象でのＥＲＴ治療は、本開示の組換えベクターを対象に投与して約５２週間、同週間前、または同週間後（例えば、本開示の組換えベクターを対象に投与して、約１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、４週間、６週間、８週間、１０週間、１２週間、１４週間、１６週間、１８週間、２０週間、２２週間、２４週間、２６週間、２８週間、３０週間、３２週間、３４週間、３６週間、３８週間、４０週間、４２週間、４４週間、４６週間、４８週間、５０週間、５２週間、５４週間、５６週間、５８週間、６０週間、６５週間、７０週間、７５週間、８０週間、８５週間、９０週間、９５週間、１００週間、または１００週間超後、これら期間前、またはこれら期間後）に中止する。一部の実施形態では、バイオマーカーレベル及び／または肝脾腫大症の決定を使用して、本開示の組換えベクターを対象に投与した後に、患者は、酵素補充療法（ＥＲＴ）治療の中止について決定をすることができる。一部の実施形態では、（例えば、ベースラインと比較した）本開示の組換えベクターを対象に投与した後のバイオマーカー（例えば、Ｉ２Ｓ）の高まりは、対象が、ＥＲＴによる治療を中止できることを示す。一部の実施形態では、本開示の組換えベクターを対象に投与した後の期間でのバイオマーカー（例えば、Ｉ２Ｓ）の高まりは、対象が、ＥＲＴによる治療を中止できることを示す。一部の実施形態では、対象が抗ＡＡＶ抗体に対してネガティブである場合（例えば、対象由来の生物学的試料が抗ＡＡＶ９抗体の検出可能なレベルを示さない場合）、本開示の組換えベクターを対象に投与する前にＥＲＴ治療を中止する。一部の実施形態では、ＥＲＴ治療は、本開示の組換えベクターが対象に投与する約または少なくとも約１年、１０ヶ月、８ヶ月、６ヶ月、５ヶ月、４ヶ月、３ヶ月、２ヶ月、１ヶ月、３週間、２週間、１週間、１０日、５日、４日、３日、２日、または１日前までに中止する。一部の実施形態では、（例えば、ベースラインと比較した）本開示の組換えベクターを対象に投与した後のバイオマーカー（例えば、Ｄ２Ｓ６、ＨＳ、ＧＡＧ（例えば、尿中の総ＧＡＧ））の減少及び／または肝脾腫大症の緩和は、ＥＲＴによる対象の治療を中止できることを示す。一部の実施形態では、本開示の組換えベクターを対象に投与した後のバイオマーカー（例えば、Ｄ２Ｓ６、Ｉ０Ｓ６、ＨＳ、ＧＡＧ（例えば、尿中の総ＧＡＧ））の減少及び／または一定期間にわたる肝脾腫大症の緩和は、ＥＲＴによる対象の治療を中止できることを示す。一部の実施形態では、本開示の組換えベクターを投与した後の、約、少なくとも約、または最長で約１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、１３週間、１４週間、１５週間、１６週間、１７週間、１８週間、１９週間、２０週間、２２週間、２４週間、２６週間、３０週間、３５週間、４０週間、４１週間、４２週間、４３週間、４４週間、４５週間、４６週間、４７週間、４８週間、４９週間、５０週間、５１週間、５２週間、５３週間、５４週間、５５週間、５６週間、５７週間、５８週間、５９週間、６０週間、６５週間、７０週間、７５週間、８０週間、８５週間、９０週間、９５週間、１００週間、１０４週間、１０４週間超、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１５ヶ月、１８ヶ月、２１ヶ月、２４ヶ月、３０ヶ月、３６ヶ月、４０ヶ月、４８ヶ月、５０ヶ月、５５ヶ月、６０ヶ月、６５ヶ月、７０ヶ月、７５ヶ月、８０ヶ月、８５ヶ月、９０ヶ月、９５ヶ月、１００ヶ月、１年、１．５年、２年、２．５年、３年、３．５年、４年、４．５年、５年、５．５年、６年、６．５年、７年、７．５年、８年、８．５年、９年、９．５年、１０年、または１０年超にわたる期間のバイオマーカー（例えば、Ｄ２Ｓ６、Ｉ０Ｓ６、ＨＳ、ＧＡＧ（例えば、尿中の総ＧＡＧ））の減少及び／または肝脾腫大症の緩和、及び／またはバイオマーカー（例えば、Ｉ２Ｓ）の増加は、ＥＲＴによる対象の治療を中止または中断できることを示す。一部の実施形態では、バイオマーカーレベル（例えば、Ｄ２Ｓ６、Ｉ０Ｓ６、ＨＳ、ＧＡＧ（例えば、尿中の総ＧＡＧ））の減少、及び／または肝脾腫大症の緩和、及び／またはバイオマーカー（例えば、Ｉ２Ｓ）の増加が、基準レベルと比較して、約または少なくとも約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、または１００％超である場合、ＥＲＴ治療を中断または中止する。一部の実施形態では、基準レベル（例えば、本開示の組換えベクターが投与した後）と比較して、約または少なくとも約１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、５５倍、６０倍、６５倍、７０倍、７５倍、８０倍、８５倍、９０倍、９５倍、１００倍、または１００倍超までバイオマーカーレベル（例えば、Ｄ２Ｓ６、Ｉ０Ｓ６、ＨＳ、ＧＡＧ（例えば、尿中の総ＧＡＧ））が減少した場合、及び／または肝脾腫大症が緩和した場合、及び／またはバイオマーカー（例えば、Ｉ２Ｓ）が増加した場合、ＥＲＴ治療を、中断または中止する。一部の実施形態では、ＥＲＴを、無期限に中止する。一部の実施形態では、ＥＲＴは、約、少なくとも約、または最長で約１日、５日、７日、１０日、２週間、３週間、４週間、５週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、１３週間、１４週間、１５週間、１６週間、１７週間、１８週間、１９週間、２０週間、２２週間、２４週間、２６週間、３０週間、３５週間、４０週間、４１週間、４２週間、４３週間、４４週間、４５週間、４６週間、４７週間、４８週間、４９週間、５０週間、５１週間、５２週間、５３週間、５４週間、５５週間、５６週間、５７週間、５８週間、５９週間、６０週間、６５週間、７０週間、７５週間、８０週間、８５週間、９０週間、９５週間、１００週間、１０４週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１５ヶ月、１８ヶ月、２１ヶ月、２４ヶ月、３０ヶ月、３６ヶ月、４０ヶ月、４８ヶ月、５０ヶ月、５５ヶ月、６０ヶ月、６５ヶ月、７０ヶ月、７５ヶ月、８０ヶ月、８５ヶ月、９０ヶ月、９５ヶ月、１００ヶ月、１年、１．５年、２年、２．５年、３年、３．５年、４年、４．５年、５年、５．５年、６年、６．５年、７年、７．５年、８年、８．５年、９年、９．５年、１０年、または１０年超の間、中止または中断する。一部の実施形態では、ＥＲＴは、本開示の組換えベクターを投与して後、約または少なくとも約５２週間で中断する。
一部の実施形態では、バイオマーカー（例えば、Ｉ２Ｓ、Ｉ０Ｓ６、Ｄ２Ｓ６、ＨＳ、ＧＡＧ（例えば、尿中の総ＧＡＧ））及び／または肝脾腫大症について、ＥＲＴ治療が中止した後にモニタリングする。例えば、一部の実施形態では、ＥＲＴ治療を中断または中止した後、及び／または本開示の組換えベクターを対象に投与した後に、バイオマーカー（例えば、Ｉ２Ｓ、Ｉ０Ｓ６、Ｄ２Ｓ６、ＨＳ、ＧＡＧ（例えば、尿中の総ＧＡＧ））及び／または肝脾腫大症（例えば、肝臓または脾臓のサイズ）について、約、少なくとも約、または毎２日、５日、７日、１０日、２週間、３週間、４週間、５週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、１３週間、１４週間、１５週間、１６週間、１７週間、１８週間、１９週間、２０週間、２２週間、２４週間、２６週間、３０週間、３５週間、４０週間、４１週間、４２週間、４３週間、４４週間、４５週間、４６週間、４７週間、４８週間、４９週間、５０週間、５１週間、５２週間、５３週間、５４週間、５５週間、５６週間、５７週間、５８週間、５９週間、６０週間、６５週間、７０週間、７５週間、８０週間、８５週間、９０週間、９５週間、１００週間、１０４週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１５ヶ月、１８ヶ月、２１ヶ月、２４ヶ月、３０ヶ月、３６ヶ月、４０ヶ月、４８ヶ月、５０ヶ月、５５ヶ月、６０ヶ月、６５ヶ月、７０ヶ月、７５ヶ月、８０ヶ月、８５ヶ月、９０ヶ月、９５ヶ月、１００ヶ月、１年、１．５年、２年、２．５年、３年、３．５年、４年、４．５年、５年、５．５年、６年、６．６年、７年、７．５年、８年、８．５年、９年、９．５年、１０年、または１０年超で測定をする。
一部の実施形態では、ＥＲＴ治療を中断または中止した後に、バイオマーカー（例えば、Ｄ２Ｓ６、Ｉ０Ｓ６、ＨＳ、ＧＡＧ（例えば、尿中の総ＧＡＧ））が増加し、及び／または肝脾腫大症が増悪し、及び／またはバイオマーカー（例えば、Ｉ２Ｓ）が減少すると、対象に対してＥＲＴ治療を再開する。例えば、（例えば、本開示の組換えベクターを対象に投与した後に）基準と比較して、バイオマーカー（例えば、Ｄ２Ｓ６、Ｉ０Ｓ６、ＨＳ、ＧＡＧ（例えば、尿中の総ＧＡＧ））の増加、及び／または肝脾腫大症の増悪、及び／またはバイオマーカー（例えば、Ｉ２Ｓ）の減少が、約または少なくとも約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、または１００％超であれば、バイオマーカー（例えば、Ｄ２Ｓ６、Ｉ０Ｓ６、ＨＳ、ＧＡＧ（例えば、尿中の総ＧＡＧ）を減少または制御してから、及び／または肝脾腫大症を緩和または制御する、及び／またはバイオマーカー（例えば、Ｉ２Ｓ）を増加または制御するまでの期間、対象に対してＥＲＴの治療を再開する。一部の実施形態では、基準は、対照である。一部の実施形態では、基準は、従前の生物学的試料、または対象から得た画像（例えば、超音波）由来のバイオマーカーレベル及び／または肝脾腫大症である。一部の実施形態では、基準は、ベースライン（例えば、本開示の組換えベクターを対象に投与する前）における対象由来のバイオマーカーレベル及び／または肝脾腫大症である。一部の実施形態では、基準は、健常者またはＭＰＳ ＩＩでない、または診断を受けていない対象におけるバイオマーカーレベル及び／または肝脾腫大症である。一部の実施形態では、基準は、ＭＰＳ ＩＩを有する対象または対象の集団におけるバイオマーカーレベル及び／または肝脾腫大症である。一部の実施形態では、基準は、健常者またはＭＰＳ Ｉでない、または診断を受けていない対象におけるバイオマーカーレベル及び／または肝脾腫大症である。一部の実施形態では、基準は、ＭＰＳ Ｉを有する対象または対象の集団におけるバイオマーカーレベル及び／または肝脾腫大症である。一部の実施形態では、基準は、ＥＲＴ治療を受けている、または受けた対象または対象の集団におけるバイオマーカーレベル及び／または肝脾腫大症である。
一部の実施形態では、ＥＲＴ治療は、本開示の組換えベクターを投与した後に中止する。例えば、ＥＲＴ治療を受け、抗ＩＤＳ抗体レベル（例えば、ＥＲＴ治療の結果としての抗ＩＤＳ抗体レベル）を有する対象に対して本開示の組換えベクターを投与した後に、ＥＲＴ治療を中断する。一部の実施形態では、抗ＩＤＳ抗体レベルを有する対象は、本開示の組換えベクターの対象への投与ができ次第または投与直後にＥＲＴ治療を止めた。一部の実施形態では、抗ＩＤＳ抗体レベルは、対象由来の生物学的試料（例えば、血清試料）で決定する。一部の実施形態では、抗ＩＤＳ抗体レベルは、本開示の組換えベクターを対象に投与する前に対象から得た生物学的試料で決定する。一部の実施形態では、抗ＩＤＳ抗体レベルは、本開示の組換えベクターを対象に投与する前及び／または後にモニタリングする。一部の実施形態では、抗ＩＤＳ抗体レベルが基準レベルより高い場合、ＥＲＴ治療を、中断または中止する。一部の実施形態では、基準レベルは、所定のレベルである。一部の実施形態では、基準レベルは、対象から得た従前の生物学的試料での抗ＩＤＳ抗体レベルである。一部の実施形態では、基準レベルは、ベースライン（例えば、本開示の組換えベクターを対象に投与する前）での対象由来の抗ＩＤＳ抗体レベルである。一部の実施形態では、基準レベルは、健常者またはＭＰＳ ＩＩを有していない、または診断されていない対象での抗ＩＤＳ抗体レベルである。一部の実施形態では、基準レベルは、ＭＰＳ ＩＩを有する対象または対象の集団における抗ＩＤＳ抗体レベルである。一部の実施形態では、基準レベルは、ＥＲＴ治療を受けている、または受けた対象または対象の集団における抗ＩＤＳ抗体レベルである。一部の実施形態では、抗ＩＤＳ抗体レベルが、基準レベルと比較して、約または少なくとも約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１５０％、２５０％、５００％、７５０％、１０００％、または１０００％超大きくなるまたはそれだけ増加すると、ＥＲＴ治療を中止する。一部の実施形態では、抗ＩＤＳ抗体レベルが、基準レベルと比較して、約または少なくとも約１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、５５倍、６０倍、６５倍、７０倍、７５倍、８０倍、８５倍、９０倍、９５倍、１００倍、１５０倍、２５０倍、５００倍、７５０倍、１０００倍、または１０００倍超大きくなると、ＥＲＴ治療を中断または中止する。一部の実施形態では、ＥＲＴ治療を対象に行った後に、ＥＲＴ治療を中断または中止した後に、本開示の組換えベクターを対象に投与する前に、及び／または本開示の組換えベクターを投与した後に、抗ＩＤＳ抗体レベルを、約、少なくとも約、または毎１日、５日、７日、１０日、２週間、３週間、４週間、５週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、１３週間、１４週間、１５週間、１６週間、１７週間、１８週間、１９週間、２０週間、２２週間、２４週間、２６週間、３０週間、３５週間、４０週間、４１週間、４２週間、４３週間、４４週間、４５週間、４６週間、４７週間、４８週間、４９週間、５０週間、５１週間、５２週間、５３週間、５４週間、５５週間、５６週間、５７週間、５８週間、５９週間、６０週間、６５週間、７０週間、７５週間、８０週間、８５週間、９０週間、９５週間、１００週間、１０４週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１５ヶ月、１８ヶ月、２１ヶ月、２４ヶ月、３０ヶ月、３６ヶ月、４０ヶ月、４８ヶ月、５０ヶ月、５５ヶ月、６０ヶ月、６５ヶ月、７０ヶ月、７５ヶ月、８０ヶ月、８５ヶ月、９０ヶ月、９５ヶ月、１００ヶ月、１年、１．５年、２年、２．５年、３年、３．５年、４年、４．５年、５年、５．５年、６年、６．５年、７年、７．５年、８年、８．５年、９年、９．５年、１０年、または１０年超で測定する。
一部の実施形態では、（例えば、ｈＩＤＵＡをコードするｒＡＡＶ９を用いた）治療の有効性または治療の有効性のモニタリングは、Ｉ０Ｓ６のレベルに基づく。一部の実施形態では、Ｉ０Ｓ６のレベルは、対象由来の生物学的試料から決定する。一部の実施形態では、生物学的試料は血漿である。一部の実施形態では、基準と比較して、本開示の組換えベクター（例えば、ｈＩＤＵＡをコードするｒＡＡＶ９）で治療した後のＩ０Ｓ６のレベルが低下していることが、治療の有効性を示す。一部の実施形態では、基準は、本開示の組換えＡＡＶの投与前に得た対象に由来する生物学的試料でのＩ０Ｓ６のレベルである。一部の実施形態では、基準は、所定の値である。一部の実施形態では、基準は、ＭＰＳ Ｉを有する別の対象、またはＭＰＳ Ｉを有する対象の集団に由来する生物学的試料でのＩ０Ｓ６のレベルである。一部の実施形態では、Ｉ０Ｓ６のレベルは、ｒＡＡＶの投与前と比較して、本開示の組換えＡＡＶを投与した後に減少する。一部の実施形態では、対象は、ｒＡＡＶを投与する前に先にＥＲＴの治療を受けている、及び／または、ｒＡＡＶを投与した後にＥＲＴ治療を受けた。一部の実施形態では、Ｉ０Ｓ６のレベルの低下は、基準と比較して、約または少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％の減少である。一部の実施形態では、ＭＰＳ Ｉ治療の有効性は、基準と比較した、Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ， ３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ）の少なくとも１つのサブテストの改善である。一部の実施形態では、少なくとも１つのサブテストは、年齢同等性スコア、認知発達指数（ＤＱ）、表現言語ＤＱ、受容言語ＤＱ、粗大運動ＤＱ、及び／または微細運動ＤＱである。一部の実施形態では、ＭＰＳ Ｉ治療の有効性は、ＷＡＳＩ及び／またはＶＡＢＳスコアの改善である。一部の実施形態では、ｈＩＤＵＡをコードするｒＡＡＶ９は、（ａ）約８．７７ｇ／Ｌの濃度の塩化ナトリウム、（ｂ）約０．２４４ｇ／Ｌの濃度の塩化マグネシウム、（ｃ）約０．２２４ｇ／Ｌの濃度の塩化カリウム、（ｄ）約０．２０６ｇ／Ｌの濃度の塩化カルシウム、（ｅ）約０．７９３ｇ／Ｌの濃度のデキストロース、（ｆ）約０．００１％（体積／体積）の濃度のポロクサマー１８８、（ｇ）約０．０２７８ｇ／Ｌの濃度のリン酸一ナトリウム一水和物、及び、（ｈ）約０．１１４ｇ／Ｌの濃度の無水リン酸二ナトリウムを含む溶液を使用して、ヒト対象に投与する。
５．５．２ 肝脾腫大症
一部の実施形態では、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けた対象は、肝脾腫大症を有する、または肝脾腫大症に関連する症状を経験している。一部の実施形態では、肝脾腫大症は、身体診察で診断する。例えば、医師または医療従事者は、臓器肥大の徴候の有無に関して腹部の周囲を観察することができる。一部の実施形態では、医師または医療従事者は、肝臓及び／または脾臓の感度または肥大に関して、対象の腹部領域の感触を確かめる、または触診を行う。一部の実施形態では、肝脾腫大症を検出するための診断試験を行う。例えば、肝脾腫大症は、血液検査（例えば、肝機能検査、血球計算、及び／または凝固因子の検査）を使用して検出することができる。一部の実施形態では、肝脾腫大症は、コンピューター断層撮影（ＣＴ）スキャン、または超音波などの画像スキャンを使用して検出する。一部の実施形態では、肝脾腫大症は生検を介して検出する。
一部の実施形態では、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けた対象は、肝脾腫大症を有する、または肝脾腫大症に関連する症状を経験している。一部の実施形態では、肝脾腫大症は、身体診察で診断する。例えば、医師または医療従事者は、臓器肥大の徴候の有無に関して腹部の周囲を観察することができる。一部の実施形態では、医師または医療従事者は、肝臓及び／または脾臓の感度または肥大に関して、対象の腹部領域の感触を確かめる、または触診を行う。一部の実施形態では、肝脾腫大症を検出するための診断試験を行う。例えば、肝脾腫大症は、血液検査（例えば、肝機能検査、血球計算、及び／または凝固因子の検査）を使用して検出することができる。一部の実施形態では、肝脾腫大症は、コンピューター断層撮影（ＣＴ）スキャン、または超音波などの画像スキャンを使用して検出する。一部の実施形態では、肝脾腫大症は生検を介して検出する。
一部の実施形態では、肝脾腫大症は、本開示の組換えベクターを使用する治療の前、最中、及び／または後に測定する。一部の実施形態では、肝脾腫大症は、本開示の組換えベクターを使用する治療の前、最中、及び／または後の異なる時点で測定する。一部の実施形態では、肝脾腫大症の緩和は、治療が有効であることを示す。一部の実施形態では、肝脾腫大症を評価またはモニタリングして、用量の増加、用量の減量などの用量、及び／または投与頻度を決定するために使用する。
一部の実施形態では、肝脾腫大症は、対象が、本開示の療法または治療による治療を開始する前、及び／または本開示の療法または治療による治療を開始した後に決定する。一部の実施形態では、肝脾腫大症は、服薬の間（例えば、第１の用量の前（すなわち、本開示の組換えベクターを使用する治療の開始前）と、本開示の組換えベクターの初回投与を対象に行った後との間、用量０と用量２との間、用量０と用量３との間、用量１と用量２との間、用量１と用量３との間、及び／または用量２と用量３との間）に決定する。一部の実施形態では、肝脾腫大症は、投与して、または治療開始して（例えば、本開示の組換えベクターを対象に投与して、及び／またはＥＲＴ治療して）１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１週間、２週間、３週間、４週間、６週間、８週間、１０週間、１２週間、１４週間、１６週間、１８週間、２０週間、２２週間、２４週間、２６週間、２８週間、３０週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１５ヶ月、１８ヶ月、２１ヶ月、２４ヶ月、３０ヶ月、３６ヶ月、４０ヶ月、４８ヶ月、５０ヶ月、５５ヶ月、６０ヶ月、６５ヶ月、７０ヶ月、７５ヶ月、８０ヶ月、８５ヶ月、９０ヶ月、９５ヶ月、１００ヶ月、１ヶ月、１年、１．５年、２年、２．５年、３年、３．５年、４年、４．５年、５年、５．５年、６年、６．５年、７年、７．５年、８年、８．５年、９年、９．５年、１０年、１０年超後に決定する。
一部の実施形態では、肝脾腫大症（例えば、脾臓の肝臓の大きさ）は、本開示の組換えベクターを対象に投与した後に、約または少なくとも約３％、５％、７％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、１００％、２００％、または２００％超減少する。一部の実施形態では、肝脾腫大症は、本開示の組換えベクターを対象に投与した後に、約または少なくとも約１．５倍、２倍、２．５倍、３倍、５倍、７倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、３５倍、４０倍、４５倍、５０倍、５５倍、６０倍、６５倍、７０倍、７５倍、８０倍、８５倍、９０倍、９５倍、９７倍、１００倍、２００倍、または２００倍超減少する。一部の実施形態では、肝脾腫大症の緩和は、肝臓及び／または脾臓の寸法の減少に対応している。一部の実施形態では、肝脾腫大症の緩和は、肝臓及び／または脾臓の質量または直径の減少に対応している。一部の実施形態では、肝脾腫大症の緩和は、肝臓及び／または脾臓の大きさの減少に対応している。一部の実施形態では、肝脾腫大症は本開示の組換えベクターを減少させる は対象に投与する、及び／または服薬の間に投与する。一部の実施形態では、本開示の組換えベクターを、対象に投与及び／または服薬した後（例えば、第１の用量、第２の用量、第３の用量、第４の用量、第５の用量、または数度の用量を与えた後）に肝脾腫大症が緩和する。一部の実施形態では、肝脾腫大症は、本開示の組換えベクターを対象に投与して、約、以下の期間後、少なくとも約、または最長で約１日、３日、５日、７日、１週間、２週間、３週間、４週間、６週間、８週間、１０週間、１２週間、１４週間、１６週間、１８週間、２０週間、２２週間、２４週間、２６週間、２８週間、３０週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１５ヶ月、１８ヶ月、２１ヶ月、２４ヶ月、３０ヶ月、３６ヶ月、４０ヶ月、４８ヶ月、５０ヶ月、５５ヶ月、６０ヶ月、６５ヶ月、７０ヶ月、７５ヶ月、８０ヶ月、８５ヶ月、９０ヶ月、９５ヶ月、１００ヶ月、１年、１．５年、２年、２．５年、３年、３．５年、４年、４．５年、５年、５．５年、６年、６．５年、７年、７．５年、８年、８．５年、９年、９．５年、１０年、または１０年超緩和する。一部の実施形態では、肝脾腫大症の緩和は、本開示の組換えベクターを対象に投与して、少なくとも約または約１日、３日、５日、７日、１週間、２週間、３週間、４週間、６週間、８週間、１０週間、１２週間、１４週間、１６週間、１８週間、２０週間、２２週間、２４週間、２６週間、２８週間、３０週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１５ヶ月、１８ヶ月、２１ヶ月、２４ヶ月、３０ヶ月、３６ヶ月、４０ヶ月、４８ヶ月、５０ヶ月、５５ヶ月、６０ヶ月、６５ヶ月、７０ヶ月、７５ヶ月、８０ヶ月、８５ヶ月、９０ヶ月、９５ヶ月、１００ヶ月、１年、１．５年、２年、２．５年、３年、３．５年、４年、４．５年、５年、５．５年、６年、６．５年、７年、７．５年、８年、８．５年、９年、９．５年、１０年、または１０年超持続する。一部の実施形態では、肝脾腫大症の緩和は、肝脾腫大症またはＭＰＳ ＩＩの治療のための別の治療を受けている対象の肝脾腫大症の緩和と比較して、本開示の治療を受けている対象の方が大きい。一部の実施形態では、肝脾腫大症またはＭＰＳ ＩＩの治療に使用する別の治療を受けている比較可能な肝脾腫大症を有する比較可能な対象での肝脾腫大症の緩和と比較して、本開示の組換えベクターの治療を受けた対象での肝脾腫大症の緩和の方が大きい。一部の実施形態では、肝脾腫大症の緩和は、（例えば、肝脾腫大症またはＭＰＳ ＩＩの治療に使用する別の治療を受けている対象の場合の肝脾腫大症の緩和と比較して）約または少なくとも約３％、５％、７％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、１００％、２００％、または２００％超大きい。
５．５．３．神経認知及び神経変性機能の試験
ある特定の実施形態では、組換えベクターによる治療の有効性を、患者の認知機能のレベルを測定してモニタリングする。認知機能は、当業者に公知の任意の方法で測定することができる。ある特定の実施形態では、認知機能は、検証された手段を用いて知能指数（ＩＱ）を測定する。特定の実施形態では、ＩＱは、Ｗｅｃｈｓｌｅｒ Ａｂｂｒｅｖｉａｔｅｄ Ｓｃａｌｅ ｏｆ Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｃｅ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（ＷＡＳＩ－ＩＩ）で測定する。一部の実施形態では、神経認知は、Ｂａｙｌｅｙ’ｓ Ｉｎｆａｎｔｉｌｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｓｃａｌｅで測定する知能指数（ＩＱ）を測定して決定する。一部の実施形態では、発達指数（ＤＱ）は、Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ（ＢＳＩＤ－ＩＩＩ）を使用して測定する。一部の実施形態では、Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎを使用して、本開示の乳児、幼児、または患者における運動、認知、言語、社会的感情、及び／または適応行動発達を測定する。一部の実施形態では、本開示の方法によるＭＰＳ ＩＩの治療（例えば、ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶを対象に対する投与）の有効性は、ＢＳＩＤ－ＩＩＩの少なくとも１つのサブテストを分析して決定する。一部の実施形態では、本開示の方法によるＭＰＳ Ｉの治療（例えば、ｈＩＤＵＡをコードするｒＡＡＶを対象に対する投与による）の有効性は、ＢＳＩＤ－ＩＩＩの少なくとも１つのサブテストを分析して決定する。一部の実施形態では、本開示の方法によるＭＰＳ ＩＩまたはＭＰＳ Ｉの治療（例えば、ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶ、またはｈＩＤＵＡをコードするＡＡＶを対象に対する投与による）の有効性は、年齢同等性スコア、認知発達指数（ＤＱ）、表現言語ＤＱ、受容言語ＤＱ、粗大運動ＤＱ、及び／または微細運動ＤＱを分析して決定する。一部の実施形態では、ＭＰＳ ＩＩまたはＭＰＳ Ｉ治療の有効性は、基準と比較した、Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ， ３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ）の少なくとも１つのサブテストでの改善である。一部の実施形態では、少なくとも１つのサブテストは、年齢同等性スコア、認知発達指数（ＤＱ）、表現言語ＤＱ、受容言語ＤＱ、粗大運動ＤＱ、及び／または微細運動ＤＱである。一部の実施形態では、改善は、約または少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１５、１７、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、または１００を超えるＤＱの改善である。一部の実施形態では、年齢同等性スコアは、基準と比較して、約または少なくとも約１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１８ヶ月、２４ヶ月、または２４ヶ月超の増加を示す。一部の実施形態では、基準は、本開示のｒＡＡＶの投与前に得たＢＳＩＤ－ＩＩＩの少なくとも１つのサブテストのスコアである。一部の実施形態では、基準は、本開示のｒＡＡＶを受けるヒト対象と同じ年齢のＭＰＳ ＩＩを有するヒト対象から得たＢＳＩＤ－ＩＩＩの少なくとも１つのサブテストの平均スコアである。一部の実施形態では、基準は、本開示のｒＡＡＶを受けているヒト対象と同じ年齢のＭＰＳ Ｉを有するヒト対象から得たＢＳＩＤ－ＩＩＩの少なくとも１つのサブテストの平均スコアである。一部の実施形態では、本開示のバイオマーカーのレベルは、ＭＰＳ ＩＩ治療の有効性を示す。例えば、一部の実施形態では、対象由来の生物学的試料でのＤ２Ｓ６のレベルは、ＭＰＳ ＩＩ治療の有効性に反比例する。一部の実施形態では、生物学的試料でのＤ２Ｓ６レベルの低下は、ＢＳＩＤ－ＩＩＩの少なくとも１つのサブテストでの改善と相関する。一部の実施形態では、生物学的試料でのＩ０Ｓ６レベルの低下は、ＢＳＩＤ－ＩＩＩの少なくとも１つのサブテストでの改善と相関する。一部の実施形態では、ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶを投与した後の対象から得た生物学的試料でのＤ２Ｓ６レベルの低下は（例えば、基準、または、ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶの投与前のＤ２Ｓ６のレベルと比較して）、ＭＰＳ ＩＩを有する対象の年齢同等性スコアの改善と相関する（または、それを示す）。一部の実施形態では、ｈＩＤＵＡをコードするｒＡＡＶを投与した後の対象から得た生物学的試料でのＩ０Ｓ６レベルの低下は（例えば、基準、または、ｈＩＤＵＡをコードするｒＡＡＶの投与前のＩ０Ｓ６のレベルと比較して）、ＭＰＳ Ｉを有する対象の年齢同等性スコアの改善と相関する（または、それを示す）。一部の実施形態では、ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶを投与した後の対象から得た生物学的試料でのＤ２Ｓ６レベルの低下は（例えば、基準、または、ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶを投与する前のＤ２Ｓ６のレベルと比較して）、ＭＰＳ ＩＩを有する対象の認知発達指数（ＤＱ）、表現言語ＤＱ、受容言語ＤＱ、粗大運動ＤＱ、及び／または微細運動ＤＱの改善と相関する（または、それを示す）。一部の実施形態では、ｈＩＤＵＡをコードするｒＡＡＶを投与した対象から得た生物学的試料でのＩ０Ｓ６レベルの低下（例えば、基準、または ｈＩＤＵＡをコードするｒＡＡＶを投与する前のＩ０Ｓ６のレベルと比較して）は、ＭＰＳ Ｉを有する対象の認知発達指数（ＤＱ）、表現言語ＤＱ、受容言語ＤＱ、粗大運動ＤＱ、及び／または微細運動ＤＱの改善と相関する（または、それを示す）。ある特定の実施形態では、認知機能は、検証された手段を用いて記憶力を測定する。特定の実施形態では、記憶力は、ホプキンス言語学習試験（ＨＶＬＴ）で測定する。ある特定の実施形態では、認知機能は、検証された手段を用いて注意力を測定する。特定の実施形態では、注意力は、注意変数試験（ＴＯＶＡ）で測定する。ある特定の実施形態では、認知機能は、検証された手段を用いて、ＩＱ、記憶力、及び注意力のうちの１つ以上を測定する。
ある特定の実施形態では、組換えベクターによる治療の有効性を、患者の認知機能のレベルを測定してモニタリングする。認知機能は、当業者に公知の任意の方法で測定することができる。ある特定の実施形態では、認知機能は、検証された手段を用いて知能指数（ＩＱ）を測定する。特定の実施形態では、ＩＱは、Ｗｅｃｈｓｌｅｒ Ａｂｂｒｅｖｉａｔｅｄ Ｓｃａｌｅ ｏｆ Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｃｅ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（ＷＡＳＩ－ＩＩ）で測定する。一部の実施形態では、神経認知は、Ｂａｙｌｅｙ’ｓ Ｉｎｆａｎｔｉｌｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｓｃａｌｅで測定する知能指数（ＩＱ）を測定して決定する。一部の実施形態では、発達指数（ＤＱ）は、Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ（ＢＳＩＤ－ＩＩＩ）を使用して測定する。一部の実施形態では、Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎを使用して、本開示の乳児、幼児、または患者における運動、認知、言語、社会的感情、及び／または適応行動発達を測定する。一部の実施形態では、本開示の方法によるＭＰＳ ＩＩの治療（例えば、ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶを対象に対する投与）の有効性は、ＢＳＩＤ－ＩＩＩの少なくとも１つのサブテストを分析して決定する。一部の実施形態では、本開示の方法によるＭＰＳ Ｉの治療（例えば、ｈＩＤＵＡをコードするｒＡＡＶを対象に対する投与による）の有効性は、ＢＳＩＤ－ＩＩＩの少なくとも１つのサブテストを分析して決定する。一部の実施形態では、本開示の方法によるＭＰＳ ＩＩまたはＭＰＳ Ｉの治療（例えば、ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶ、またはｈＩＤＵＡをコードするＡＡＶを対象に対する投与による）の有効性は、年齢同等性スコア、認知発達指数（ＤＱ）、表現言語ＤＱ、受容言語ＤＱ、粗大運動ＤＱ、及び／または微細運動ＤＱを分析して決定する。一部の実施形態では、ＭＰＳ ＩＩまたはＭＰＳ Ｉ治療の有効性は、基準と比較した、Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ， ３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ）の少なくとも１つのサブテストでの改善である。一部の実施形態では、少なくとも１つのサブテストは、年齢同等性スコア、認知発達指数（ＤＱ）、表現言語ＤＱ、受容言語ＤＱ、粗大運動ＤＱ、及び／または微細運動ＤＱである。一部の実施形態では、改善は、約または少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１５、１７、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、または１００を超えるＤＱの改善である。一部の実施形態では、年齢同等性スコアは、基準と比較して、約または少なくとも約１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１８ヶ月、２４ヶ月、または２４ヶ月超の増加を示す。一部の実施形態では、基準は、本開示のｒＡＡＶの投与前に得たＢＳＩＤ－ＩＩＩの少なくとも１つのサブテストのスコアである。一部の実施形態では、基準は、本開示のｒＡＡＶを受けるヒト対象と同じ年齢のＭＰＳ ＩＩを有するヒト対象から得たＢＳＩＤ－ＩＩＩの少なくとも１つのサブテストの平均スコアである。一部の実施形態では、基準は、本開示のｒＡＡＶを受けているヒト対象と同じ年齢のＭＰＳ Ｉを有するヒト対象から得たＢＳＩＤ－ＩＩＩの少なくとも１つのサブテストの平均スコアである。一部の実施形態では、本開示のバイオマーカーのレベルは、ＭＰＳ ＩＩ治療の有効性を示す。例えば、一部の実施形態では、対象由来の生物学的試料でのＤ２Ｓ６のレベルは、ＭＰＳ ＩＩ治療の有効性に反比例する。一部の実施形態では、生物学的試料でのＤ２Ｓ６レベルの低下は、ＢＳＩＤ－ＩＩＩの少なくとも１つのサブテストでの改善と相関する。一部の実施形態では、生物学的試料でのＩ０Ｓ６レベルの低下は、ＢＳＩＤ－ＩＩＩの少なくとも１つのサブテストでの改善と相関する。一部の実施形態では、ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶを投与した後の対象から得た生物学的試料でのＤ２Ｓ６レベルの低下は（例えば、基準、または、ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶの投与前のＤ２Ｓ６のレベルと比較して）、ＭＰＳ ＩＩを有する対象の年齢同等性スコアの改善と相関する（または、それを示す）。一部の実施形態では、ｈＩＤＵＡをコードするｒＡＡＶを投与した後の対象から得た生物学的試料でのＩ０Ｓ６レベルの低下は（例えば、基準、または、ｈＩＤＵＡをコードするｒＡＡＶの投与前のＩ０Ｓ６のレベルと比較して）、ＭＰＳ Ｉを有する対象の年齢同等性スコアの改善と相関する（または、それを示す）。一部の実施形態では、ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶを投与した後の対象から得た生物学的試料でのＤ２Ｓ６レベルの低下は（例えば、基準、または、ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶを投与する前のＤ２Ｓ６のレベルと比較して）、ＭＰＳ ＩＩを有する対象の認知発達指数（ＤＱ）、表現言語ＤＱ、受容言語ＤＱ、粗大運動ＤＱ、及び／または微細運動ＤＱの改善と相関する（または、それを示す）。一部の実施形態では、ｈＩＤＵＡをコードするｒＡＡＶを投与した対象から得た生物学的試料でのＩ０Ｓ６レベルの低下（例えば、基準、または ｈＩＤＵＡをコードするｒＡＡＶを投与する前のＩ０Ｓ６のレベルと比較して）は、ＭＰＳ Ｉを有する対象の認知発達指数（ＤＱ）、表現言語ＤＱ、受容言語ＤＱ、粗大運動ＤＱ、及び／または微細運動ＤＱの改善と相関する（または、それを示す）。ある特定の実施形態では、認知機能は、検証された手段を用いて記憶力を測定する。特定の実施形態では、記憶力は、ホプキンス言語学習試験（ＨＶＬＴ）で測定する。ある特定の実施形態では、認知機能は、検証された手段を用いて注意力を測定する。特定の実施形態では、注意力は、注意変数試験（ＴＯＶＡ）で測定する。ある特定の実施形態では、認知機能は、検証された手段を用いて、ＩＱ、記憶力、及び注意力のうちの１つ以上を測定する。
一部の実施形態では、バイオマーカーレベル（例えば、Ｄ２Ｓ６、Ｉ０Ｓ６、ＨＳ、ＧＡＧ（例えば、尿中の総ＧＡＧ））の減少、及び／または肝脾腫大症の緩和、及び／またはバイオマーカー（例えば、Ｉ２Ｓ）レベルの増加は、改善した、または未変化の神経認知評価（例えば、ＤＱ、ＩＱ、表現的コミュニケーション、粗大運動、受容的コミュニケーション、及び／または微細運動技能）を示す。一部の実施形態では、基準と比較して、約または少なくとも約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、または１００％超のバイオマーカーレベル（例えば、Ｄ２Ｓ６、Ｉ０Ｓ６、ＨＳ、ＧＡＧ（例えば、尿中の総ＧＡＧ））の減少、及び／または肝脾腫大症の緩和、及び／またはバイオマーカーレベル（例えば、Ｉ２Ｓ）の増加は、（例えば、約または少なくとも約１点、２点、３点、４点、５点、６点、７点、８点、９点、１０点、１５点、２０点、２５点、３０点 ３５点、４０点、４５点、５０点、または５０点超）の増加、変化なし、または、神経認知評価（例えば、ＤＱ、表現的コミュニケーション、粗大運動、受容的コミュニケーション、及び／または微細動能力など）の約３０ポイント以下、約２５ポイント以下、約２０ポイント以下、約１５ポイント以下、約１０ポイント以下、または約５ポイント以下の低下と相関する。一部の実施形態では、基準と比較して、（例えば、本開示の組換えベクターを対象に投与した後の）約または少なくとも約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、または１００％超のバイオマーカーレベル（例えば、Ｄ２Ｓ６、Ｉ０Ｓ６、ＨＳ、ＧＡＧ（例えば、尿中の総ＧＡＧ））の減少、及び／または肝脾腫大症の緩和、及び／またはバイオマーカーレベル（例えば、Ｉ２Ｓ）の増加は、増加（例えば、約または少なくとも約１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１３ヶ月、１４ヶ月、１５ヶ月、１６ヶ月、１７ヶ月、１８ヶ月、１９ヶ月、２０ヶ月、２５ヶ月、３０ヶ月 ３５ヶ月、４０ヶ月、４５ヶ月、５０ヶ月、または５０ヶ月超）、変化なし、または、年齢同等性が、約３０ヶ月以内、約２５ヶ月以内、約２０ヶ月以内、約１８ヶ月以内、約１５ヶ月以内、約１４ヶ月以内、約１３ヶ月以内、約１２ヶ月以内、約１１ヶ月以内、約１０ヶ月以内、約９ヶ月以内、約８ヶ月以内、約７ヶ月以内、約６ヶ月以内、約５ヶ月以内、約４ヶ月以内、約３ヶ月以内、約２ヶ月以内、または約１ヶ月以内に減少することと相関する。
神経認知評価機器を使用して、認知年齢同等性（ＡＥｑ）または認知発達指数（ＤＱ）などの指標を決定することができる。一部の実施形態では、対象の認知年齢同等性（ＡＥｑ）は、本開示の組換えベクターで治療した後のベースラインレベルと比較して、変化しない、または増加する。対象のベースラインレベルに対する増加は、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１５ヶ月 １８ヶ月、２０ヶ月、２年、２．５年、３年以上である。一部の実施形態では、治療を開始または進行した時点での対象の実年齢は、約３ヶ月、６ヶ月、９ヶ月、１２ヶ月、１８ヶ月、２４ヶ月、３０ヶ月、３６ヶ月、４２ヶ月、４８ヶ月、６０ヶ月、７２ヶ月、８４ヶ月、９６ヶ月、１０８ヶ月、１２０ヶ月、５．５年、６年、６．５年、７年、７．５年、８年、８．５年、９年、９．５年、１０年、１０．５年、１１年、１１．５年、１２年、１２．５年、１３年、１４年、１５年、１６年、１７年、または１７年以下である、またはそれより上である。一部の実施形態では、本開示の組換えベクターを使用する治療開始前の認知年齢同等性（ＡＥｑ）は、ベースラインレベルよりも、約、少なくとも約、または最長で約１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、月、８ヶ月、ヶ月、１０ヶ月、１２ヶ月、または１２ヶ月超短い。一部の実施形態では、本開示の組換えベクターを使用する治療開始後の認知年齢同等性（ＡＥｑ）は、ベースラインレベルよりも、約、多くとも１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、ヶ月、１０ヶ月、１２ヶ月、または１２ヶ月超短い。
一部の実施形態では、神経発達機能（例えば、ＡＥｑまたはＤＱ）は、表現的コミュニケーション、粗大運動、受容的コミュニケーション、及び／または微細運動技能に基づいて決定する。一部の実施形態では、表現的コミュニケーション、粗大運動、受容的コミュニケーション、及び／または微細運動能力のいずれか１つは、ＡＥｑ及び／またはＤＱを示す。一部の実施形態では、対象の神経発達機能（例えば、ＡＥｑ、認知発達指数（ＤＱ）、ＩＱ、表現的コミュニケーション、粗大運動、受容的コミュニケーション、及び／または微細運動能力）は、組換えベクターを対象に投与してから、約、少なくとも約、または毎１日、５日、７日、１０日、２週間、３週間、４週間、５週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、１３週間、１４週間、１５週間、１６週間、１７週間、１８週間、１９週間、２０週間、２２週間、２４週間、２６週間、３０週間、３５週間、４０週間、４１週間、４２週間、４３週間、４４週間、４５週間、４６週間、４７週間、４８週間、４９週間、５０週間、５１週間、５２週間、５３週間、５４週間、５５週間、５６週間、５７週間、５８週間、５９週間、６０週間、６５週間、７０週間、７５週間、８０週間、８５週間、９０週間、９５週間、１００週間、１０４週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１５ヶ月、１８ヶ月、２１ヶ月、２４ヶ月、３０ヶ月、３６ヶ月、４０ヶ月、４８ヶ月、５０ヶ月、５５ヶ月、６０ヶ月、６５ヶ月、７０ヶ月、７５ヶ月、８０ヶ月、８５ヶ月、９０ヶ月、９５ヶ月、１００ヶ月、１年、１．５年、２年、２．５年、３年、３．５年、４年、４．５年、５年、５．５年、６年、６．５年、７年、７．５年、８年、８．５年、９年、９．５年、１０年、または１０年超で測定を行う。
一部の実施形態では、本開示の組換えベクターを使用して治療すると、（例えば、バイオマーカーレベル（例えば、Ｄ２Ｓ６、Ｉ０Ｓ６、ＨＳ、ＧＡＧ（例えば、尿中の総ＧＡＧ））の低下、及び／または肝脾腫大症の緩和、及び／またはバイオマーカー（例えば、Ｉ２Ｓ）レベルの増加に起因して）、患者の神経認知発達指数（ＤＱ）、ＡＥｑ、ＩＱ、表現的コミュニケーション、粗大運動、受容的コミュニケーション、及び／または微細運動能力の改善が生じ、これは、例えば、Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔを使用して評価する。一部の実施形態では、本開示の組換えベクターを使用して治療すると、（例えば、バイオマーカーレベル（例えば、Ｄ２Ｓ６、Ｉ０Ｓ６、ＨＳ、ＧＡＧ（例えば、尿中の総ＧＡＧ））の低下、及び／または肝脾腫大症の緩和、及び／またはバイオマーカー（例えば、Ｉ２Ｓ）レベルの増加に起因して）、患者の神経認知発達指数（ＤＱ）、ＡＥｑ、ＩＱ、表現的コミュニケーション、粗大運動、受容的コミュニケーション、及び／または微細運動能力に変化は生じず、これは、例えば、Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔを使用して評価する。一部の実施形態では、本開示の組換えベクターで処理した後に、対象の認知発達指数（ＤＱ）、ＡＥｑ、ＩＱ、表現的コミュニケーション、粗大運動、受容的コミュニケーション、及び／または微細運動能力が改善する、変化しない、または３０ポイント以下減少する、２５ポイント以下減少する、２０ポイント以下減少する、１５ポイント以下減少する、１０ポイント以下減少する、または５ポイント以下減少する。一部の実施形態では、本開示の組換えベクターを使用する治療は、本開示の組換えベクターを対象に投与した後に、年齢同等性（ＡＥｑ）の、（例えば、約または少なくとも約１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１３ヶ月、１４ヶ月、１５ヶ月、１６ヶ月、１７ヶ月、１８ヶ月、１９ヶ月、２０ヶ月、２５ヶ月、３０ヶ月、３５ヶ月、４０ヶ月、４５ヶ月、５０ヶ月、または５０ヶ月超）の増加、無変化、または、約３０ヶ月以内、約２５ヶ月以内、約２０ヶ月以内、約１８ヶ月以内、約１５ヶ月以内、約１４ヶ月以内、約１３ヶ月以内、約１２ヶ月以内、約１１ヶ月以内、約１０ヶ月以内、約９ヶ月以内、約８ヶ月以内、約７ヶ月以内、約６ヶ月以内、約５ヶ月以内、約４ヶ月以内、約３ヶ月以下、約２ヶ月以内、または約１ヶ月以内の減少を生じる。一部の実施形態では、対象の認知発達指数（ＤＱ）、ＡＥｑ、ＩＱ、表現的コミュニケーション、粗大運動、受容的コミュニケーション、及び／または微細運動能力は、本開示の組換えベクターで治療した後（例えば、バイオマーカーレベル（例えば、Ｄ２Ｓ６、Ｉ０Ｓ６、ＨＳ、ＧＡＧ（例、尿中の総ＧＡＧ）の低下、及び／または肝脾腫大症の緩和、及び／またはバイオマーカーレベル（例えば、Ｉ２Ｓ）の増加に起因して）、治療開始前の対象のＤＱ、ＡＥｑ、ＩＱ、表現的コミュニケーション、粗大運動、受容的コミュニケーション、及び／または微細運動能力と比較して、約または少なくとも約１ポイント、２ポイント、３ポイント、４ポイント、５ポイント、６ポイント、７ポイント、８ポイント、９ポイント、１０ポイント、１５ポイント、２０ポイント、２５ポイント、３０ポイント ３５ポイント、４０ポイント、４５ポイント、５０ポイント、または５０ポイント超増加する。一部の実施形態では、対象の認知発達指数（ＤＱ）、ＡＥｑ、ＩＱ、表現的コミュニケーション、粗大運動、受容的コミュニケーション、及び／または微細運動能力は、本開示の組換えベクターを使用する治療を終えて（例えば、本開示のｒＡＡＶの初回用量を対象に投与した後、本開示のｒＡＡＶの数回用量を対象に投与した後、本開示のｒＡＡＶの最終用量を対象に投与した後、本開示のｒＡＡＶによる治療を開始した後、及び／または本開示のｒＡＡＶによる治療が終了した後）、約または少なくとも約１日、５日、７日、１０日、１４日、２１日、２８日、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１５ヶ月、１８ヶ月、２１ヶ月、２４ヶ月、３０ヶ月、３６ヶ月、４０ヶ月、４８ヶ月、５０ヶ月、５５ヶ月、６０ヶ月、６５ヶ月、７０ヶ月、７５ヶ月、８０ヶ月、８５ヶ月、９０ヶ月、９５ヶ月、１００ヶ月、１年、１．５年、２年、２．５年、３年、３．５年、４年、４．５年、５年、５．５年、６年、６．５年、７年、７．５年、８年、８．５年、９年、９．５年、１０年、または１０年超、変化しないままである、または約または少なくとも約１ポイント、２ポイント、３ポイント、４ポイント、５ポイント、６ポイント、７ポイント、８ポイント、９ポイント、１０ポイント、１５ポイント、２０ポイント、２５ポイント、３０ポイント ３５ポイント、４０ポイント、４５ポイント、５０ポイント、または約５０ポイント超改善する。
一部の実施形態では、組換えベクターを使用する治療の有効性は、不適応行動、トイレトレーニングに関する課題、及び／または睡眠障害スケールの変化を分析してモニタリングする。不適応行動とトイレトレーニングの課題は、神経変性に関連している。本明細書で使用する不適応行動とは、日常機能を妨げる望ましくない行動の尺度である（Ｓｐａｒｒｏｗ Ｓ， Ｃｉｃｈｅｔｔｉ Ｄ， Ｂａｌｌａ Ｄ （２００５）Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ： ２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ． Ｐｅａｒｓｏｎ， Ｂｌｏｏｍｉｎｇｔｏｎ， ＩＮ）。一部の実施形態では、睡眠障害は、対象のいびきパターンに基づいて決定する。一部の実施形態では、睡眠障害は、睡眠の間の呼吸困難のレベルに基づいて決定する。一部の実施形態では、不適応行動指数の減少は、本開示の組換えベクターを使用する治療の有効性を示す。一部の実施形態では、排泄スキル（例えば、腸または膀胱の制御）の改善は、本開示の組換えベクターを使用する治療の有効性を示す。一部の実施形態では、睡眠パターンの改善（例えば、いびきの頻度の減少または呼吸の改善）は、本開示の組換えベクターを使用する治療の有効性を示す。
５．５．４．身体的変化
ある特定の実施形態では、組換えベクターによる治療の有効性は、患者のリソソーム蓄積症に関連する身体的な特徴を測定してモニタリングする。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、保存損傷である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、低身長である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、顔表面の粗雑化である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、閉塞性睡眠無呼吸である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、聴覚障害である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、視覚障害である。特定の実施形態では、視覚障害は、角膜混濁に起因する。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、水頭症である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、脊髄圧迫症である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、肝脾腫である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、骨及び関節の変形である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、心臓弁膜疾患である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、再発性上気道感染症である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、手根管症候群である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、巨舌症（舌の肥大）である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、声帯肥大、及び／または変声である。そのような身体的な特徴は、当業者に公知のあらゆる方法によって測定することができる。
ある特定の実施形態では、組換えベクターによる治療の有効性は、患者のリソソーム蓄積症に関連する身体的な特徴を測定してモニタリングする。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、保存損傷である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、低身長である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、顔表面の粗雑化である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、閉塞性睡眠無呼吸である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、聴覚障害である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、視覚障害である。特定の実施形態では、視覚障害は、角膜混濁に起因する。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、水頭症である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、脊髄圧迫症である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、肝脾腫である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、骨及び関節の変形である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、心臓弁膜疾患である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、再発性上気道感染症である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、手根管症候群である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、巨舌症（舌の肥大）である。ある特定の実施形態では、身体的な特徴は、声帯肥大、及び／または変声である。そのような身体的な特徴は、当業者に公知のあらゆる方法によって測定することができる。
６．実施例
６．１ 実施例１：ｈＩＤＳ ｃＤＮＡ
ｈＩＤＳ（配列番号１）を含む導入遺伝子を含むｈＩＤＳ ｃＤＮＡをベースとしたベクターを構築する。導入遺伝子は、表４に記載した群から選択されるシグナルペプチドを含む核酸を含む。任意に、ベクターは、さらにプロモーターを含む。
６．１ 実施例１：ｈＩＤＳ ｃＤＮＡ
ｈＩＤＳ（配列番号１）を含む導入遺伝子を含むｈＩＤＳ ｃＤＮＡをベースとしたベクターを構築する。導入遺伝子は、表４に記載した群から選択されるシグナルペプチドを含む核酸を含む。任意に、ベクターは、さらにプロモーターを含む。
６．２実施例２：置換ｈＩＤＳ ｃＤＮＡ
ｈＩＤＳ ｃＤＮＡをベースとしたベクターを、配列番号１のｈＩＤＳ配列と比較して、アミノ酸置換、欠失、または付加を有するｈＩＤＳを含むベクターを構築する。ｈＩＤＳは、例えば、限定されないが、図２に示すＩＤＳのオーソログでの対応する非保存的残基から選択されるアミノ酸置換を含み、そのような変異は、酵素活性に必要な位置８４（Ｃ８４）のシステイン残基の置換を含まず（Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ ３２６：２４３－２４７）、例えば、図３に示したもの、または、各々を、参照により、本明細書で援用する、Ｓｕｋｅｇａｗａ－Ｈａｙａｓａｋａ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｊ Ｉｎｈｅｒｔ Ｍｅｔａｂ Ｄｉｓ ２９：７５５－７６１（「弱度」変異体Ｒ４８Ｐ、Ａ８５Ｔ、Ｗ３３７Ｒ、及び切断型変異体Ｑ５３１Ｘ、及び、「重度」変異体Ｐ８６Ｌ、Ｓ３３３Ｌ、Ｓ３４９Ｉ、Ｒ４６８Ｑ、Ｒ４６８Ｌを報告している）、Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９８，ＢＢＡ １４０６：２１４－２１８（「弱度」変異体Ｐ４８０Ｌ及びＰ４８０Ｑ；及び、「重度」変異体Ｐ８６Ｌを報告している）、及び、Ｂｏｎｕｃｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，２００１，ＢＢＡ １５３７：２３３－２３８で報告されたような、重度、重度～中等度、中等度、または弱度ＭＰＳ ＩＩ表現型において同定された変異を含まないことを条件とする。また、導入遺伝子は、表４に記載した群から選択されるシグナルペプチドを含む核酸を含む。任意に、ベクターは、プロモーターをさらに含む。
ｈＩＤＳ ｃＤＮＡをベースとしたベクターを、配列番号１のｈＩＤＳ配列と比較して、アミノ酸置換、欠失、または付加を有するｈＩＤＳを含むベクターを構築する。ｈＩＤＳは、例えば、限定されないが、図２に示すＩＤＳのオーソログでの対応する非保存的残基から選択されるアミノ酸置換を含み、そのような変異は、酵素活性に必要な位置８４（Ｃ８４）のシステイン残基の置換を含まず（Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ ３２６：２４３－２４７）、例えば、図３に示したもの、または、各々を、参照により、本明細書で援用する、Ｓｕｋｅｇａｗａ－Ｈａｙａｓａｋａ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｊ Ｉｎｈｅｒｔ Ｍｅｔａｂ Ｄｉｓ ２９：７５５－７６１（「弱度」変異体Ｒ４８Ｐ、Ａ８５Ｔ、Ｗ３３７Ｒ、及び切断型変異体Ｑ５３１Ｘ、及び、「重度」変異体Ｐ８６Ｌ、Ｓ３３３Ｌ、Ｓ３４９Ｉ、Ｒ４６８Ｑ、Ｒ４６８Ｌを報告している）、Ｍｉｌｌａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９８，ＢＢＡ １４０６：２１４－２１８（「弱度」変異体Ｐ４８０Ｌ及びＰ４８０Ｑ；及び、「重度」変異体Ｐ８６Ｌを報告している）、及び、Ｂｏｎｕｃｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，２００１，ＢＢＡ １５３７：２３３－２３８で報告されたような、重度、重度～中等度、中等度、または弱度ＭＰＳ ＩＩ表現型において同定された変異を含まないことを条件とする。また、導入遺伝子は、表４に記載した群から選択されるシグナルペプチドを含む核酸を含む。任意に、ベクターは、プロモーターをさらに含む。
６．３ 実施例３：ｈＩＤＳまたは置換ｈＩＤＳを有する動物モデルでのＭＰＳ ＩＩの治療
導入遺伝子として発現させる場合、ｈＩＤＳ ｃＤＮＡをベースとしたベクターは、ＭＰＳ ＩＩの治療に有用であると考えられる。ＭＰＳ ＩＩのための動物モデル、例えば、Ｇａｒｃｉａ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｊ Ｉｎｈｅｒｉｔ Ｍｅｔａｂ Ｄｉｓ ３０：９２４－３４、またはＭｕｅｎｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ａｃｔａ Ｐａｅｄｉａｔｒ Ｓｕｐｐｌ ９１：９８－９９に記載されたマウスモデルに対して、くも膜下腔内に、ｈＩＤＳをコードする組換えベクターを、動物のＣＳＦに治療有効濃度の導入遺伝子産物を送達及び維持する上で十分な用量で投与する。治療の後に、動物を、特定の動物モデルの疾患と一致した症状の改善について評価する。
導入遺伝子として発現させる場合、ｈＩＤＳ ｃＤＮＡをベースとしたベクターは、ＭＰＳ ＩＩの治療に有用であると考えられる。ＭＰＳ ＩＩのための動物モデル、例えば、Ｇａｒｃｉａ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｊ Ｉｎｈｅｒｉｔ Ｍｅｔａｂ Ｄｉｓ ３０：９２４－３４、またはＭｕｅｎｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ａｃｔａ Ｐａｅｄｉａｔｒ Ｓｕｐｐｌ ９１：９８－９９に記載されたマウスモデルに対して、くも膜下腔内に、ｈＩＤＳをコードする組換えベクターを、動物のＣＳＦに治療有効濃度の導入遺伝子産物を送達及び維持する上で十分な用量で投与する。治療の後に、動物を、特定の動物モデルの疾患と一致した症状の改善について評価する。
６．４ 実施例４：ｈＩＤＳまたは置換ｈＩＤＳによるＭＰＳ ＩＩの治療
導入遺伝子として発現させる場合、ｈＩＤＳ ｃＤＮＡをベースとしたベクターは、ＭＰＳ ＩＩの治療に有用であると考えられる。ＭＰＳ ＩＩを呈する対象に対して、くも膜下腔内に、ｈＩＤＳをコードするｃＤＮＡをベースとしたベクター（例えば、コンストラクト１（以下を参照されたい）などを、ＣＳＦに治療有効濃度の導入遺伝子産物を送達及び維持する上で十分な用量で投与する。治療の後に、対象を、ＭＰＳ ＩＩの症状の改善について評価する。
導入遺伝子として発現させる場合、ｈＩＤＳ ｃＤＮＡをベースとしたベクターは、ＭＰＳ ＩＩの治療に有用であると考えられる。ＭＰＳ ＩＩを呈する対象に対して、くも膜下腔内に、ｈＩＤＳをコードするｃＤＮＡをベースとしたベクター（例えば、コンストラクト１（以下を参照されたい）などを、ＣＳＦに治療有効濃度の導入遺伝子産物を送達及び維持する上で十分な用量で投与する。治療の後に、対象を、ＭＰＳ ＩＩの症状の改善について評価する。
６．５ 実施例５：ＭＰＳ ＩＩ（ハンター症候群）の小児対象でのコンストラクト１の安全性、忍容性、及び薬力学を評価するための第Ｉ／ＩＩ相多施設非盲検試験
６．５．１．概要
治験薬、用量、及び投与経路
６．５．１．概要
治験薬、用量、及び投与経路
コンストラクト１：ＡＡＶ９．ＣＢ７．ｈＩＤＳ（ヒトイズロン酸－２－スルファターゼ発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス血清型９キャプシド）。図５を参照されたい。
治験薬を、単回大槽内（ＩＣ）用量として送達する。
３つの用量レベル、すなわち脳質量１ｇあたり１．３×１０１０ゲノムコピー（ＧＣ）（用量１）、及び脳質量１ｇあたり６．５×１０１０ＧＣ（用量２）、脳質量１ｇあたり２．０×１０１１ＧＣ（用量３）、または脳質量１ｇあたり２．９×１０１１ＧＣ（用量３拡大コホート（ＥＣ））。用量３コホートは、２．０×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量（ポリＡ特異的ＰＣＲアッセイで決定したゲノムコピーの数）、または２．９×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量（導入遺伝子特異的ＰＣＲアッセイによって決定したゲノムコピーの数）を含む。投与総用量は、治験対象の年齢に基づいて推定した脳サイズを考慮に含める。投与する治験薬の総体積は、５ｍＬを超えない。
目的
主要目的：
重度のＭＰＳ ＩＩを有する小児対象者に対して単回ＩＣ投与をして２４週間にわたるコンストラクト１の安全性及び忍容性を評価する。
副次目的：
コンストラクト１の長期安全性及び忍容性を評価する。
脳脊髄液（ＣＳＦ）、血漿、尿でのバイオマーカーに対するコンストラクト１の効果を評価する。
認知機能、行動機能、適応機能の神経発達パラメーターに対するコンストラクト１の効果を評価する。
ＣＳＦ、血漿、及び尿でのベクターの切断を評価する。
探索目的：
●コンストラクト１の免疫原性を評価する
●ＣＮＳの物理的変化に対するコンストラクト１の影響を調べる
●疾患の全身症状に対するコンストラクト１の効果を調べる
●聴覚能力に対するコンストラクト１の効果を調べる
●ＩＶ ＥＲＴ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））を一時的に中止した対象の血漿及び尿でのバイオマーカーに対するコンストラクト１の効果を調べる
●生活の質（ＱＯＬ）と睡眠測定に対するコンストラクト１の効果を調べる。
●コンストラクト１の免疫原性を評価する
●ＣＮＳの物理的変化に対するコンストラクト１の影響を調べる
●疾患の全身症状に対するコンストラクト１の効果を調べる
●聴覚能力に対するコンストラクト１の効果を調べる
●ＩＶ ＥＲＴ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））を一時的に中止した対象の血漿及び尿でのバイオマーカーに対するコンストラクト１の効果を調べる
●生活の質（ＱＯＬ）と睡眠測定に対するコンストラクト１の効果を調べる。
治験デザインと方法
これは、コンストラクト１の第Ｉ／ＩＩ相、ファーストインヒューマン、多施設、非盲検、単一アーム用量漸増試験である。コントロール群は含まない。重度のＭＰＳ ＩＩの約６名の小児対象者を、２つの用量コホート、すなわち脳質量１ｇあたり１．３×１０１０ＧＣ（用量１）、または脳質量１ｇあたり６．５×１０１０ＧＣ（用量２）に登録することができ、当該コホートは、コンストラクト１の単回用量の投与をＩＣ注射で受ける。治療を行って最初の２４週間（一次試験期間）は、安全性が主要な注目点となる。主要治験期間が終了した後に、対象者に対して、コンストラクト１の治療を受けた後、合計で１０４週間目まで、評価（安全性及び有効性）を継続する。当該治験が終わると、対象者には、長期追跡調査への参加を促す。
最初の３名の適格対象者が、用量１コホート（１．３×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）に登録される。第１の対象者にコンストラクト１を投与した後に、安全性に関する８週間の観察期間を設ける。Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｓａｆｅｔｙ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＳＣ）が、この対象者に関して最初の８週間で得た安全性データ（８週目の受診の間に得たデータを含む）を検討し、安全性の懸念が無ければ、第２の対象者を登録し得る。同じプロセスを使用して、第３の対象者を登録する。安全性検討トリガー（ＳＲＴ）事象が認められなければ、第３の対象者の第８週目の受診時までに得た用量１コホートに関して利用可能なすべての安全性データを、Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｄａｔａ Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＤＭＣ）が評価する。第２の用量（６．５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）へ移行する決定が出れば、続く２名の対象者が、最後に投与した対象者に関して最初の８週間で得たすべての安全性データ（８週目の受診時に得たデータを含む）を検討した後に決めた後続の各対象者に関する用量を使用して、当初の用量コホートと同じ投与スキームに従う。ＩＳＣは、第２の対象者の２週目までの受診、及び２週目での受診で得た当該対象者のすべての安全性データを検討し、この評価の直後に、第３の対象者への投与に進むことが安全であると判断し得る。用量２コホートについて入手可能なすべての安全性データを、用量２コホートでの第３の対象者の８週目での受診後にＩＤＭＣが評価する。
潜在的な対象者を、投与の３５日前までにスクリーニングして、治験への適格性を決定する。適格基準を満たす対象者は、－２日目～１日目の朝（施設の基準による）の間に入院し、ベースライン評価を投与前に行う。対象者は、１日目に、コンストラクト１の単一ＩＣ用量の投与を受け、観察のために、投薬後の約３０～３６時間は病院に留まる。主要治験期間（すなわち、第２４週目まで）以降の評価は、第４週目まで毎週、及び、第８週、第１２週、第１６週、第２０週、及び第２４週目に実施する。主要治験期間の後に、第２８週、第３２週、第４０週、第４８週、第５２週、第５６週、第６４週、第７８週、及び第１０４週目に受診する。第１２週、第４０週、第６４週目の受診は、在宅保健師が行い得る。第２０週と第２８週の評価は、電話で聞き取りをして、ＡＥと併用療法の評価だけを行う。
すべての対象者は、動物で実施した非臨床安全性／毒物学治験での潜在的免疫原性の知見に基づいて、まず、本治験では免疫抑制（ＩＳ）を受け、コルチコステロイド（１日目にメチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇを１回静脈内［ＩＶ］に前投与する、２日目に経口プレドニゾンを０．５ｍｇ／ｋｇ／日から開始する、段階的に漸減させて、第１２週目までに中止する）、タクロリムス（２日目～第２４週目まで１日２回［ＢＩＤ］１ｍｇを経口的に［ＰＯ］、目標血中レベルを４～８ｎｇ／ｍＬとする、そして、第２４週～第３２週にかけての８週間にわたり漸減する）、及びシロリムス（－２日目に４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量の負荷用量、続いて、－１日目以降はシロリムス０．５ｍｇ／ｍ２／日をＢＩＤに分けて、第４８週目まで目標血中レベルを４～８ｎｇ／ｍｌとして投与する）を含む。神経学的評価及びタクロリムス／シロリムス血中レベルをモニタリングする。シロリムス及びタクロリムスの用量を、目標範囲内の血中レベルを維持するように調節する。
４８週間後のＩＳ療法は予定していない。臨床的に関連する免疫応答を調節するために４８週以後もＩＳが必要であれば、臨床的必要性に応じて、メディカルモニター及びスポンサーと確認しながら、治験責任医師（ＰＩ）が適切な免疫抑制レジメンを決定する。
有効性評価は、神経認知機能、聴覚能力、脳ＭＲＩ、肝臓及び脾臓の大きさ、及びＣＳＦ、血漿、そして尿での薬力学（ＰＤ）バイオマーカーのレベルの測定を含む。治験に参加している間、対象者の標準治療の一部として実施した神経認知評価尺度または適応評価尺度も、施設と協議した後に、治験スポンサーの決定にしたがって収集し得る。
評価項目
主要評価項目：
● 第２４週目までの安全性：ＡＥ及び重度の有害事象（ＳＡＥ）
● 第２４週目までの安全性：ＡＥ及び重度の有害事象（ＳＡＥ）
副次評価項目：
●第１０４週目までの安全性：ＡＥ報告、検査室評価、バイタルサイン、ＥＣＧ、身体診察、及び神経学的評価
●ＣＳＦ（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、血漿（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、及び尿（ＧＡＧ）でのバイオマーカー
●認知、行動、及び適応機能の神経発達パラメーター：
■Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ） （Ｂａｙｌｅｙ，２００５，Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ）またはＫａｕｆｍａｎ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｂａｔｔｅｒｙ ｆｏｒ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＫＡＢＣ－ＩＩ） （Ｋａｕｆｍａｎ，２００４，Ｋａｕｆｍａｎ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｂａｔｔｅｒｙ ｆｏｒ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ，２ｎｄ Ｅｄ．）
■Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ Ｆｏｒｍ （ＶＡＢＳ－ＩＩ） （Ｓｐａｒｒｏｗ ｅｔ ａｋ，２００５，Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄ．
●コンストラクト１デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）に対する定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によるＣＳＦ、血漿、尿中のベクター濃度
●第１０４週目までの安全性：ＡＥ報告、検査室評価、バイタルサイン、ＥＣＧ、身体診察、及び神経学的評価
●ＣＳＦ（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、血漿（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、及び尿（ＧＡＧ）でのバイオマーカー
●認知、行動、及び適応機能の神経発達パラメーター：
■Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ） （Ｂａｙｌｅｙ，２００５，Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ）またはＫａｕｆｍａｎ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｂａｔｔｅｒｙ ｆｏｒ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＫＡＢＣ－ＩＩ） （Ｋａｕｆｍａｎ，２００４，Ｋａｕｆｍａｎ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｂａｔｔｅｒｙ ｆｏｒ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ，２ｎｄ Ｅｄ．）
■Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ Ｆｏｒｍ （ＶＡＢＳ－ＩＩ） （Ｓｐａｒｒｏｗ ｅｔ ａｋ，２００５，Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄ．
●コンストラクト１デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）に対する定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によるＣＳＦ、血漿、尿中のベクター濃度
探索評価項目：
●免疫原性測定
○ＡＡＶ９に対する中和抗体価、及びＣＳＦと血清でのＩ２Ｓに対する結合抗体価
○酵素結合イムノスポット（ＥＬＩＳＰＯＴ）アッセイ：ＡＡＶ９及びＩ２Ｓに対するＴ 細胞応答
○フローサイトメトリー：ＡＡＶ及びＩ２Ｓ特異的制御性Ｔ細胞
●脳の磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）で評価したＣＮＳ構造異常
●腹部のＭＲＩ及び超音波で評価した肝臓及び脾臓のサイズ
●聴覚脳幹応答（ＡＢＲ）検査で測定した聴覚能力の変化
●ＩＶ ＥＲＴ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））を一時的に中止した対象者での血漿及び尿中ＧＡＧ
●ＰｅｄｓＱＬ（バージョン４）
●睡眠尺度の全体的印象
●免疫原性測定
○ＡＡＶ９に対する中和抗体価、及びＣＳＦと血清でのＩ２Ｓに対する結合抗体価
○酵素結合イムノスポット（ＥＬＩＳＰＯＴ）アッセイ：ＡＡＶ９及びＩ２Ｓに対するＴ 細胞応答
○フローサイトメトリー：ＡＡＶ及びＩ２Ｓ特異的制御性Ｔ細胞
●脳の磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）で評価したＣＮＳ構造異常
●腹部のＭＲＩ及び超音波で評価した肝臓及び脾臓のサイズ
●聴覚脳幹応答（ＡＢＲ）検査で測定した聴覚能力の変化
●ＩＶ ＥＲＴ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））を一時的に中止した対象者での血漿及び尿中ＧＡＧ
●ＰｅｄｓＱＬ（バージョン４）
●睡眠尺度の全体的印象
本治験の全期間を、投与後の１０４週間であり得、安全性の主要評価時点は、２４週間目である。スクリーニングには、最長で３５日を要し得る。
診断、及び採用と除外の基準
本治験に参加する資格を得るにあたって、対象者は、以下の全採用基準に該当しなくてはならない。
１．対象者の法的保護者（複数可）は、治験の趣旨説明を受けた後、かつ治験関連の手続きを行う前に、インフォームドコンセント用紙に署名をして提供する意思があり、かつ、そうすることが可能である。
２．男性である
３．以下のいずれか１つの基準に該当していること：
ａ．文書によるＭＰＳ ＩＩの診断があり、かつ、４ヶ月齢以上、５歳未満であり、かつ、神経認知検査スコアが５５超、７７以下（ＢＳＩＤ－ＩＩＩまたはＫＡＢＣ－ＩＩ）である、または
ｂ．文書によるＭＰＳ ＩＩの診断があり、かつ、４ヶ月齢以上、５歳未満であり、かつ、神経認知検査（ＢＳＩＤ－ＩＩＩまたはＫＡＢＣ－ＩＩ）で１以上の標準偏差の低下がある、及び、試験スコアが５５超である、または
ｃ．対象者と同じＩＤＳ変異を有する重度のＭＰＳ ＩＩの診断を受けた血縁者がおり、かつ、遺伝学者の意見で、重度のＭＰＳ ＩＩの形態を受け継いでいる
４．補助器具の有無に関係なく、必須のプロトコール試験を完了する上で十分な聴覚的及び視覚的能力を有し、該当する場合には、試験日に進んで補助器具を利用する。
１．対象者の法的保護者（複数可）は、治験の趣旨説明を受けた後、かつ治験関連の手続きを行う前に、インフォームドコンセント用紙に署名をして提供する意思があり、かつ、そうすることが可能である。
２．男性である
３．以下のいずれか１つの基準に該当していること：
ａ．文書によるＭＰＳ ＩＩの診断があり、かつ、４ヶ月齢以上、５歳未満であり、かつ、神経認知検査スコアが５５超、７７以下（ＢＳＩＤ－ＩＩＩまたはＫＡＢＣ－ＩＩ）である、または
ｂ．文書によるＭＰＳ ＩＩの診断があり、かつ、４ヶ月齢以上、５歳未満であり、かつ、神経認知検査（ＢＳＩＤ－ＩＩＩまたはＫＡＢＣ－ＩＩ）で１以上の標準偏差の低下がある、及び、試験スコアが５５超である、または
ｃ．対象者と同じＩＤＳ変異を有する重度のＭＰＳ ＩＩの診断を受けた血縁者がおり、かつ、遺伝学者の意見で、重度のＭＰＳ ＩＩの形態を受け継いでいる
４．補助器具の有無に関係なく、必須のプロトコール試験を完了する上で十分な聴覚的及び視覚的能力を有し、該当する場合には、試験日に進んで補助器具を利用する。
以下の除外基準のいずれかに該当する対象者は、治験に参加する資格が無い：
１．ＩＣ注射に対して次のいずれかの禁忌を示す：
ａ．治験（１施設につき１）に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームがベースラインＭＲＩ検査の検討を行って、ＩＣ注射に対して禁忌を認める
ｂ．この治験に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームが、入手可能な情報に基づいて、ＩＣ注射に対して禁忌である頭部／頸部の手術歴を認める。
ｃ．コンピューター断層撮影（ＣＴ）、造影剤、または全身麻酔に対して禁忌を認める
ｄ．ＭＲＩまたはガドリニウムに対して禁忌を認める
ｅ．推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）が、３０ｍＬ未満／分／１．７３ｍ２である
２．プレドニゾン、タクロリムス、またはシロリムスを使用する治療に対して禁忌であるいずれかの病態を有する
３．ＭＰＳ ＩＩまたは神経精神病態の診断に起因しない神経認知障害があり、ＰＩの意見では、研究結果の解釈に混乱を招き得る
４．腰椎穿刺に対して禁忌を示す
５．心室シャントを有する
６．造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）を受けている
７．ＡＡＶをベースとした遺伝子治療薬を使用する治療を受けたことがある
８．くも膜下腔（ＩＴ）投与を介して、イデュルスルファーゼ［ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標）］の投与を受けている
９．イデュルスルファーゼ［ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標）］ＩＶの投与を受けて、ＩＶイデュルスルファーゼ［ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標）］投与に関連すると考えられるアナフィラキシーなど、重度な過敏反応を経験した
１０．インフォームドコンセント用紙（ＩＣＦ）に署名する前に、第一日目の３０日以内または５半減期以内のうち、いずれか長い期間内に治験薬の投与を受けた
１１．スクリーニングの少なくとも３ヶ月前に完全な寛解に至っていないリンパ腫の既往歴、または、皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの既往歴を有する
１２．血小板数が、１００，０００／マイクロリットル（μＬ）未満である
１３．アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、またはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）が、３×ＵＬＮ超である、または総ビリルビンが１．５×ＵＬＮ超である。ただし、対象者がギルバート症候群の病歴を有する、及び総ビリルビン３５％未満が抱合型ビリルビンである分画ビリルビンを有することが分かっている場合は、この限りではない
１４．最大限の医学的治療にもかかわらず、制御不良高血圧症（収縮期血圧［ＢＰ］＞１８０ｍｍＨｇ、拡張期ＢＰ＞１００ｍｍＨｇ）である
１５．ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、またはＢ型肝炎またはＣ型肝炎ウイルス感染の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原またはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎またはＨＩＶ抗体のスクリーニング試験が陽性である
１６．臨床施設従業員または治験の実施に関与する他のいずれかの個人の一等親以内の家族、または、臨床施設従業員または治験の実施に関与するその他のあらゆる個人
１７．ＰＩの見解では、対象者の安全性を損ねかねない臨床的に有意なＥＣＧ異常を有している
１８．ＰＩの見解では、対象者の安全性を損ねかねない、または治験への参加の成功を妨げかねない、または、治験結果の解釈を歪めかねない、重大な、または不安定な医学的または心理的状態を有している
１９．ＰＩの見解では、対象者を過度のリスクに曝しかねない制御不能な発作を有する
免疫抑制療法に関連する除外基準：
２０．タクロリムス、シロリムス、またはプレドニゾロンに対して過敏反応の既往歴を有する
２１．原発性免疫不全（例えば、共通可変免疫不全症候群）、脾臓摘出術、または感染症に罹患しやすいあらゆる基礎疾患の既往歴のある患者
２２．帯状疱疹（ＶＺＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、またはエプスタイン－バールウイルス（ＥＢＶ）に感染しており、スクリーニング前の少なくとも１２週間に完全に解消していない
２３．入院または親世代抗感染症薬による治療を必要とするいずれの感染症も、２回目の受診の少なくとも８週間前に消散していない
２４．２回目の受診前の１０日以内に経口抗感染症薬（抗ウイルス薬を含む）を必要とするいずれかの活動性の感染症に罹患した
２５．スクリーニングの間の活動性の結核（ＴＢ）またはＱｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ－ＴＢ Ｇｏｌｄ試験での陽性結果
２６．ＩＣＦに署名をする前の８週間以内に何らかの生ワクチンを受けている
２７．ＩＣＦに署名をする前の８週間以内に大手術を受けた、または、治験期間中に大手術の計画がある
２８．登録して６ヶ月以内にアデノイド摘出術または扁桃摘出術の必要性が考えられる
２９．好中球数の絶対数が１．３×１０３未満／μＬである
３０．ＰＩが免疫抑制療法に適さないと考える病態または正常でない検査所見がある
１．ＩＣ注射に対して次のいずれかの禁忌を示す：
ａ．治験（１施設につき１）に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームがベースラインＭＲＩ検査の検討を行って、ＩＣ注射に対して禁忌を認める
ｂ．この治験に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームが、入手可能な情報に基づいて、ＩＣ注射に対して禁忌である頭部／頸部の手術歴を認める。
ｃ．コンピューター断層撮影（ＣＴ）、造影剤、または全身麻酔に対して禁忌を認める
ｄ．ＭＲＩまたはガドリニウムに対して禁忌を認める
ｅ．推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）が、３０ｍＬ未満／分／１．７３ｍ２である
２．プレドニゾン、タクロリムス、またはシロリムスを使用する治療に対して禁忌であるいずれかの病態を有する
３．ＭＰＳ ＩＩまたは神経精神病態の診断に起因しない神経認知障害があり、ＰＩの意見では、研究結果の解釈に混乱を招き得る
４．腰椎穿刺に対して禁忌を示す
５．心室シャントを有する
６．造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）を受けている
７．ＡＡＶをベースとした遺伝子治療薬を使用する治療を受けたことがある
８．くも膜下腔（ＩＴ）投与を介して、イデュルスルファーゼ［ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標）］の投与を受けている
９．イデュルスルファーゼ［ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標）］ＩＶの投与を受けて、ＩＶイデュルスルファーゼ［ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標）］投与に関連すると考えられるアナフィラキシーなど、重度な過敏反応を経験した
１０．インフォームドコンセント用紙（ＩＣＦ）に署名する前に、第一日目の３０日以内または５半減期以内のうち、いずれか長い期間内に治験薬の投与を受けた
１１．スクリーニングの少なくとも３ヶ月前に完全な寛解に至っていないリンパ腫の既往歴、または、皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの既往歴を有する
１２．血小板数が、１００，０００／マイクロリットル（μＬ）未満である
１３．アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、またはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）が、３×ＵＬＮ超である、または総ビリルビンが１．５×ＵＬＮ超である。ただし、対象者がギルバート症候群の病歴を有する、及び総ビリルビン３５％未満が抱合型ビリルビンである分画ビリルビンを有することが分かっている場合は、この限りではない
１４．最大限の医学的治療にもかかわらず、制御不良高血圧症（収縮期血圧［ＢＰ］＞１８０ｍｍＨｇ、拡張期ＢＰ＞１００ｍｍＨｇ）である
１５．ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、またはＢ型肝炎またはＣ型肝炎ウイルス感染の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原またはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎またはＨＩＶ抗体のスクリーニング試験が陽性である
１６．臨床施設従業員または治験の実施に関与する他のいずれかの個人の一等親以内の家族、または、臨床施設従業員または治験の実施に関与するその他のあらゆる個人
１７．ＰＩの見解では、対象者の安全性を損ねかねない臨床的に有意なＥＣＧ異常を有している
１８．ＰＩの見解では、対象者の安全性を損ねかねない、または治験への参加の成功を妨げかねない、または、治験結果の解釈を歪めかねない、重大な、または不安定な医学的または心理的状態を有している
１９．ＰＩの見解では、対象者を過度のリスクに曝しかねない制御不能な発作を有する
免疫抑制療法に関連する除外基準：
２０．タクロリムス、シロリムス、またはプレドニゾロンに対して過敏反応の既往歴を有する
２１．原発性免疫不全（例えば、共通可変免疫不全症候群）、脾臓摘出術、または感染症に罹患しやすいあらゆる基礎疾患の既往歴のある患者
２２．帯状疱疹（ＶＺＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、またはエプスタイン－バールウイルス（ＥＢＶ）に感染しており、スクリーニング前の少なくとも１２週間に完全に解消していない
２３．入院または親世代抗感染症薬による治療を必要とするいずれの感染症も、２回目の受診の少なくとも８週間前に消散していない
２４．２回目の受診前の１０日以内に経口抗感染症薬（抗ウイルス薬を含む）を必要とするいずれかの活動性の感染症に罹患した
２５．スクリーニングの間の活動性の結核（ＴＢ）またはＱｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ－ＴＢ Ｇｏｌｄ試験での陽性結果
２６．ＩＣＦに署名をする前の８週間以内に何らかの生ワクチンを受けている
２７．ＩＣＦに署名をする前の８週間以内に大手術を受けた、または、治験期間中に大手術の計画がある
２８．登録して６ヶ月以内にアデノイド摘出術または扁桃摘出術の必要性が考えられる
２９．好中球数の絶対数が１．３×１０３未満／μＬである
３０．ＰＩが免疫抑制療法に適さないと考える病態または正常でない検査所見がある
統計的手法
すべてのデータを、対象者データ表に記載する。カテゴリ変数を、頻度とパーセンテージを使用してまとめ、連続変数を、記述統計（ｎ、平均、標準偏差、中央値、最小値、及び最大値）を使用してまとめる。必要に応じて、グラフ表示を使用する。安全性及びＰＤ評価項目を、用量群で報告し、また、２つの用量群の組み合わせも報告し得る。
サンプルサイズと検出力の計算：サンプルの大きさを決定するための正式な計算は行わなかった。
６．５．２．略語と用語
６．５．２．略語と用語
６．５．３．治験計画
評価項目
評価項目
主要評価項目：
●第２４週目までの安全性：ＡＥ及びＳＡＥ
●第２４週目までの安全性：ＡＥ及びＳＡＥ
副次評価項目：
●第１０４週目までの安全性：ＡＥ報告、検査室評価、バイタルサイン、心電図（ＥＣＧ）、身体診察、及び神経学的評価
●ＣＳＦ（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、血漿（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、及び尿（ＧＡＧ）中のバイオマーカー
●認知、行動、及び適応機能の神経発達パラメーター：
■Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ） （Ｂａｙｌｅｙ，２００５，Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ）またはＫａｕｆｍａｎ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｂａｔｔｅｒｙ ｆｏｒ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＫＡＢＣ－ＩＩ） （Ｋａｕｆｍａｎ，２００４，Ｋａｕｆｍａｎ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｂａｔｔｅｒｙ ｆｏｒ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ，２ｎｄ Ｅｄ．）
■Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ Ｆｏｒｍ （ＶＡＢＳ－ＩＩ） （Ｓｐａｒｒｏｗ ｅｔ ａｌ，２００５，Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄ．
●定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）による、コンストラクト１ ＤＮＡに対するＣＳＦ、血漿、尿でのベクター濃度
●第１０４週目までの安全性：ＡＥ報告、検査室評価、バイタルサイン、心電図（ＥＣＧ）、身体診察、及び神経学的評価
●ＣＳＦ（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、血漿（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、及び尿（ＧＡＧ）中のバイオマーカー
●認知、行動、及び適応機能の神経発達パラメーター：
■Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ） （Ｂａｙｌｅｙ，２００５，Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ）またはＫａｕｆｍａｎ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｂａｔｔｅｒｙ ｆｏｒ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＫＡＢＣ－ＩＩ） （Ｋａｕｆｍａｎ，２００４，Ｋａｕｆｍａｎ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｂａｔｔｅｒｙ ｆｏｒ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ，２ｎｄ Ｅｄ．）
■Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ Ｆｏｒｍ （ＶＡＢＳ－ＩＩ） （Ｓｐａｒｒｏｗ ｅｔ ａｌ，２００５，Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄ．
●定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）による、コンストラクト１ ＤＮＡに対するＣＳＦ、血漿、尿でのベクター濃度
探索評価項目：
●免疫原性測定
○ＡＡＶ９に対する中和抗体価、及びＣＳＦと血清でのＩ２Ｓに対する結合抗体価
○酵素結合イムノスポット（ＥＬＩＳＰＯＴ）アッセイ：ＡＡＶ９及びＩ２Ｓに対するＴ 細胞応答
○フローサイトメトリー：ＡＡＶ及びＩ２Ｓ特異的制御性Ｔ細胞
●脳のＭＲＩで評価したＣＮＳ構造異常
●腹部のＭＲＩで評価した肝臓及び脾臓のサイズ
●聴覚脳幹応答（ＡＢＲ）検査で測定した聴覚能力の変化
●ＩＶ ＥＲＴ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））を一時的に中止した対象者での血漿及び尿中ＧＡＧ
●ＰｅｄｓＱＬ（バージョン４）
●睡眠尺度の全体的印象
●免疫原性測定
○ＡＡＶ９に対する中和抗体価、及びＣＳＦと血清でのＩ２Ｓに対する結合抗体価
○酵素結合イムノスポット（ＥＬＩＳＰＯＴ）アッセイ：ＡＡＶ９及びＩ２Ｓに対するＴ 細胞応答
○フローサイトメトリー：ＡＡＶ及びＩ２Ｓ特異的制御性Ｔ細胞
●脳のＭＲＩで評価したＣＮＳ構造異常
●腹部のＭＲＩで評価した肝臓及び脾臓のサイズ
●聴覚脳幹応答（ＡＢＲ）検査で測定した聴覚能力の変化
●ＩＶ ＥＲＴ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））を一時的に中止した対象者での血漿及び尿中ＧＡＧ
●ＰｅｄｓＱＬ（バージョン４）
●睡眠尺度の全体的印象
治験デザイン
これは、コンストラクト１の第Ｉ／ＩＩ相、ファーストインヒューマン、多施設、非盲検、単一アーム用量漸増試験である。重度のＭＰＳ ＩＩの約６名の小児対象者を、２つの用量コホート、すなわち脳質量１ｇあたり１．３×１０１０ＧＣ（用量１）、または脳質量１ｇあたり６．５×１０１０ＧＣ（用量２）に登録することができ、当該コホートは、コンストラクト１の単回用量の投与をＩＣ注射で受ける。治療を行って最初の２４週間（一次試験期間）は、安全性が主要な注目点となる。主要治験期間が終了した後に、対象者に対して、コンストラクト１の治療を受けた後、合計で１０４週間目まで、評価（安全性及び有効性）を継続する。当該治験が終わると、対象者には、長期追跡調査への参加を促す。
潜在的な対象者を、投与の３５日前までにスクリーニングして、治験への適格性を決定する。適格基準を満たす対象者は、－２日目～１日目の朝（施設の基準による）の間に入院する、そして、ベースライン評価を投与前に行う。対象者は、１日目に、コンストラクト１の単一ＩＣ用量の投与を受ける、そして、観察のために、投与後の約３０～３６時間は病院に留まる。主要治験期間（すなわち、第２４週目まで）以降の評価は、第４週目まで毎週、及び、第８週、第１２週、第１６週、第２０週、及び第２４週目に実施する。主要治験期間の後に、第２８週、第３２週、第４０週、第４８週、第５２週、第５６週、第６４週、第７８週、及び第１０４週目に受診する。第１２週、第４０週、第６４週目の受診は、在宅保健師が行い得る。第２０週と第２８週の評価は、電話で聞き取りをして、ＡＥと併用療法の評価だけを行う。
すべての対象者は、動物で実施した非臨床安全性での知見に基づいて、まず、本治験ではＩＳを受ける。ＩＳには、コルチコステロイド（１日目にメチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇを１回ＩＶに前投与する、２日目に経口プレドニゾンを０．５ｍｇ／ｋｇ／日から開始する、段階的に漸減させて、第１２週目までに中止する）、タクロリムス（２日目～第２４週目まで１日２回［ＢＩＤ］１ｍｇを経口的に［ＰＯ］、目標血中レベルを４～８ｎｇ／ｍＬとする、そして、第２４週～第３２週にかけての８週間にわたり漸減する）、及びシロリムス（－２日目に４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量の負荷用量、続いて、－１日目以降はシロリムス０．５ｍｇ／ｍ２／日を１日に２回に分けて、第４８週目まで目標血中レベルを４～８ｎｇ／ｍｌとして投与する）を含む。神経学的評価及びタクロリムス／シロリムス血中レベルをモニタリングする。シロリムス及びタクロリムスの用量を、目標範囲内の血中レベルを維持するように調節する。
４８週間後のＩＳ療法は予定していない。臨床的に関連する免疫応答を調節するために４８週以後もＩＳが必要であれば、臨床的必要性に応じて、メディカルモニター及びスポンサーと確認しながら、治験責任医師（ＰＩ）が適切な免疫抑制レジメンを決定する。
コンストラクト１の安全性及び忍容性は、ＡＥ及び重大な有害事象（ＳＡＥ）、化学分析、血液学分析、尿検査、ＣＳＦ炎症のマーカー、免疫原性、ベクターの切断（ベクター濃度）、バイタルサイン、心電図（ＥＣＧ）、及び神経学的評価などの身体診察を介してモニタリングする。
有効性評価は、神経認知及び適応機能、聴覚能力、脳ＭＲＩ、肝臓及び脾臓の大きさ、及びＣＳＦ、血漿、そして尿でのＰＤバイオマーカーのレベルの測定を含む。
６．５．４．対象者集団と選択
治験集団の選択
治験集団の選択
約６名の４ヶ月齢以上、５歳未満の小児対象者で、ＭＰＳ ＩＩに起因する神経認知障害が確定している者、または重度のＭＰＳ ＩＩの遺伝型からなる遺伝子型及び家族歴を有する者を治験薬（ＩＰ）で治療する。
採用基準
本治験に参加する資格を得るにあたって、対象者は、以下の全採用基準に該当しなくてはならない：
１．対象者の法的保護者（複数可）は、治験の趣旨説明を受けた後、かつ治験関連の手続きを行う前に、インフォームドコンセント用紙に署名をして提供する意思があり、かつ、そうすることが可能である。
２．男性である
３．以下のいずれか１つの基準を満足していること：
ａ．ＭＰＳ ＩＩの診断が確定している、かつ、４ヶ月齢以上、５歳未満であり、かつ、神経認知検査スコアが、５５超、７７以下（ＢＳＩＤ－ＩＩＩまたはＫＡＢＣ－ＩＩ）である、または
ｂ．ＭＰＳ ＩＩの診断が確定している、かつ、４ヶ月齢以上５歳未満であり、かつ、神経認知検査（ＢＳＩＤ－ＩＩＩまたはＫＡＢＣ－ＩＩ）で１以上の標準偏差の低下がある、及び、試験スコアが５５超である、または
ｃ．対象者と同じＩＤＳ変異を有する重度のＭＰＳ ＩＩの診断を受けた血縁者がいる、かつ、遺伝学者の意見で、重度のＭＰＳ ＩＩの形態を受け継いでいる
４．補助器具の有無に関係なく、必須のプロトコール試験を完了する上で十分な聴覚的及び視覚的能力を有し、該当する場合には、試験日に進んで補助器具を利用する。
１．対象者の法的保護者（複数可）は、治験の趣旨説明を受けた後、かつ治験関連の手続きを行う前に、インフォームドコンセント用紙に署名をして提供する意思があり、かつ、そうすることが可能である。
２．男性である
３．以下のいずれか１つの基準を満足していること：
ａ．ＭＰＳ ＩＩの診断が確定している、かつ、４ヶ月齢以上、５歳未満であり、かつ、神経認知検査スコアが、５５超、７７以下（ＢＳＩＤ－ＩＩＩまたはＫＡＢＣ－ＩＩ）である、または
ｂ．ＭＰＳ ＩＩの診断が確定している、かつ、４ヶ月齢以上５歳未満であり、かつ、神経認知検査（ＢＳＩＤ－ＩＩＩまたはＫＡＢＣ－ＩＩ）で１以上の標準偏差の低下がある、及び、試験スコアが５５超である、または
ｃ．対象者と同じＩＤＳ変異を有する重度のＭＰＳ ＩＩの診断を受けた血縁者がいる、かつ、遺伝学者の意見で、重度のＭＰＳ ＩＩの形態を受け継いでいる
４．補助器具の有無に関係なく、必須のプロトコール試験を完了する上で十分な聴覚的及び視覚的能力を有し、該当する場合には、試験日に進んで補助器具を利用する。
除外基準
以下の除外基準のいずれかに該当する対象者は、治験に参加する資格が無い：
１．ＩＣ注射に対して次のいずれかの禁忌を示す：
ａ．治験（１施設につき１）に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームがベースラインＭＲＩ検査の検討を行って、ＩＣ注射に対して禁忌を認める
ｂ．この治験に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームが、入手可能な情報に基づいて、ＩＣ注射に対して禁忌である頭部／頸部の手術歴を認める。
ｃ．コンピューター断層撮影（ＣＴ）、造影剤、または全身麻酔に対して禁忌を認める
ｄ．ＭＲＩまたはガドリニウムに対して禁忌を認める
ｅ．推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）が、３０ｍＬ未満／分／１．７３ｍ２である
２．プレドニゾン、タクロリムス、またはシロリムスを使用する治療に対して禁忌であるいずれかの病態を有する
３．ＭＰＳ ＩＩまたは神経精神病態の診断に起因しない神経認知障害があり、ＰＩの意見では、研究結果の解釈に混乱を招き得る
４．腰椎穿刺に対して禁忌を示す
５．心室シャントを有する
６．造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）を受けている
７．ＡＡＶをベースとした遺伝子治療薬を使用する治療を受けたことがある
８．くも膜下腔（ＩＴ）投与を介して、イデュルスルファーゼの投与を受けている
９．ＩＶイデュルスルファーゼ［ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標）］の投与を受けて、ＩＶイデュルスルファーゼ［ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標）］投与に関連すると考えられるアナフィラキシーなど、重度な過敏反応を経験した
１０．インフォームドコンセント用紙（ＩＣＦ）に署名する前に、第一日目の３０日以内または５半減期以内のうち、いずれか長い期間内に治験薬の投与を受けた
１１．スクリーニングの少なくとも３ヶ月前に完全な寛解に至っていないリンパ腫の既往歴、または、皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの既往歴を有する
１２．血小板数が、＜１００，０００／マイクロリットル（μＬ）である
１３．アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、またはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）が、３×ＵＬＮ超である、または総ビリルビンが１．５×ＵＬＮ超である、ただし、対象者がギルバート症候群の病歴を有する、及び総ビリルビン３５％未満が抱合型ビリルビンである分画ビリルビンを有することが分かっている場合は、この限りではない
１４．最大限の医学的治療にもかかわらず、制御不良高血圧症（収縮期血圧［ＢＰ］＞１８０ｍｍＨｇ、拡張期ＢＰ＞１００ｍｍＨｇ）である
１５．ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、またはＢ型肝炎またはＣ型肝炎ウイルス感染の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原またはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎またはＨＩＶ抗体のスクリーニング試験が陽性である
１６．臨床施設従業員または治験の実施に関与するその他のいずれかの個人の一等親以内の家族、または、臨床施設従業員または治験の実施に関与するその他のあらゆる個人
１７．ＰＩの見解では、対象者の安全性を損ねかねない臨床的に有意なＥＣＧ異常を有している
１８．ＰＩの見解では、対象者の安全性を損ねかねない、または治験への参加の成功を妨げかねない、または、治験結果の解釈を歪めかねない、重大な、または不安定な医学的または心理的状態を有している
１９．ＰＩの見解では、対象者を過度のリスクに曝しかねない制御不能な発作を有する
免疫抑制療法に関連する除外基準：
２０．タクロリムス、シロリムス、またはプレドニゾロンに対して過敏反応の既往歴を有する
２１．原発性免疫不全（例えば、共通可変免疫不全症候群）、脾臓摘出術、または感染症に罹患しやすいあらゆる基礎疾患の既往歴のある患者
２２．帯状疱疹（ＶＺＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、またはエプスタイン－バール・ウイルス（ＥＢＶ）に感染しており、スクリーニング前の少なくとも１２週間に完全に解消されていない
２３．入院または親世代抗感染症薬による治療を必要とするいずれの感染症も、２回目の受診の少なくとも８週間前に消散していない
２４．２回目の受診前の１０日以内に経口抗感染症薬（抗ウイルス薬を含む）を必要とするいずれかの活動性の感染症に罹患した
２５．スクリーニングの間の活動性の結核（ＴＢ）またはＱｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ－ＴＢ Ｇｏｌｄ試験での陽性結果
２６．ＩＣＦに署名をする前の８週間以内に何らかの生ワクチンを受けている
２７．ＩＣＦに署名をする前の８週間以内に大手術を受けた、または、治験期間中に大手術の計画がある
２８．登録して６ヶ月以内にアデノイド摘出術または扁桃摘出術の必要性が考えられる
２９．好中球数の絶対数が１．３×１０３未満／μＬである
３０．ＰＩが免疫抑制療法に適さないと考える病態または正常でない検査所見がある
１．ＩＣ注射に対して次のいずれかの禁忌を示す：
ａ．治験（１施設につき１）に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームがベースラインＭＲＩ検査の検討を行って、ＩＣ注射に対して禁忌を認める
ｂ．この治験に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームが、入手可能な情報に基づいて、ＩＣ注射に対して禁忌である頭部／頸部の手術歴を認める。
ｃ．コンピューター断層撮影（ＣＴ）、造影剤、または全身麻酔に対して禁忌を認める
ｄ．ＭＲＩまたはガドリニウムに対して禁忌を認める
ｅ．推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）が、３０ｍＬ未満／分／１．７３ｍ２である
２．プレドニゾン、タクロリムス、またはシロリムスを使用する治療に対して禁忌であるいずれかの病態を有する
３．ＭＰＳ ＩＩまたは神経精神病態の診断に起因しない神経認知障害があり、ＰＩの意見では、研究結果の解釈に混乱を招き得る
４．腰椎穿刺に対して禁忌を示す
５．心室シャントを有する
６．造血幹細胞移植（ＨＳＣＴ）を受けている
７．ＡＡＶをベースとした遺伝子治療薬を使用する治療を受けたことがある
８．くも膜下腔（ＩＴ）投与を介して、イデュルスルファーゼの投与を受けている
９．ＩＶイデュルスルファーゼ［ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標）］の投与を受けて、ＩＶイデュルスルファーゼ［ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標）］投与に関連すると考えられるアナフィラキシーなど、重度な過敏反応を経験した
１０．インフォームドコンセント用紙（ＩＣＦ）に署名する前に、第一日目の３０日以内または５半減期以内のうち、いずれか長い期間内に治験薬の投与を受けた
１１．スクリーニングの少なくとも３ヶ月前に完全な寛解に至っていないリンパ腫の既往歴、または、皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの既往歴を有する
１２．血小板数が、＜１００，０００／マイクロリットル（μＬ）である
１３．アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、またはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）が、３×ＵＬＮ超である、または総ビリルビンが１．５×ＵＬＮ超である、ただし、対象者がギルバート症候群の病歴を有する、及び総ビリルビン３５％未満が抱合型ビリルビンである分画ビリルビンを有することが分かっている場合は、この限りではない
１４．最大限の医学的治療にもかかわらず、制御不良高血圧症（収縮期血圧［ＢＰ］＞１８０ｍｍＨｇ、拡張期ＢＰ＞１００ｍｍＨｇ）である
１５．ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、またはＢ型肝炎またはＣ型肝炎ウイルス感染の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原またはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎またはＨＩＶ抗体のスクリーニング試験が陽性である
１６．臨床施設従業員または治験の実施に関与するその他のいずれかの個人の一等親以内の家族、または、臨床施設従業員または治験の実施に関与するその他のあらゆる個人
１７．ＰＩの見解では、対象者の安全性を損ねかねない臨床的に有意なＥＣＧ異常を有している
１８．ＰＩの見解では、対象者の安全性を損ねかねない、または治験への参加の成功を妨げかねない、または、治験結果の解釈を歪めかねない、重大な、または不安定な医学的または心理的状態を有している
１９．ＰＩの見解では、対象者を過度のリスクに曝しかねない制御不能な発作を有する
免疫抑制療法に関連する除外基準：
２０．タクロリムス、シロリムス、またはプレドニゾロンに対して過敏反応の既往歴を有する
２１．原発性免疫不全（例えば、共通可変免疫不全症候群）、脾臓摘出術、または感染症に罹患しやすいあらゆる基礎疾患の既往歴のある患者
２２．帯状疱疹（ＶＺＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、またはエプスタイン－バール・ウイルス（ＥＢＶ）に感染しており、スクリーニング前の少なくとも１２週間に完全に解消されていない
２３．入院または親世代抗感染症薬による治療を必要とするいずれの感染症も、２回目の受診の少なくとも８週間前に消散していない
２４．２回目の受診前の１０日以内に経口抗感染症薬（抗ウイルス薬を含む）を必要とするいずれかの活動性の感染症に罹患した
２５．スクリーニングの間の活動性の結核（ＴＢ）またはＱｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ－ＴＢ Ｇｏｌｄ試験での陽性結果
２６．ＩＣＦに署名をする前の８週間以内に何らかの生ワクチンを受けている
２７．ＩＣＦに署名をする前の８週間以内に大手術を受けた、または、治験期間中に大手術の計画がある
２８．登録して６ヶ月以内にアデノイド摘出術または扁桃摘出術の必要性が考えられる
２９．好中球数の絶対数が１．３×１０３未満／μＬである
３０．ＰＩが免疫抑制療法に適さないと考える病態または正常でない検査所見がある
６．５．５．治療
実施する治療
実施する治療
治験薬（ＩＰ）、コンストラクト１（図５を参照されたい）を、単一用量ＩＣ投与として投与する。２つの用量レベル：脳質量１ｇあたり１．３×１０１０ＧＣ（用量１）、または脳質量１ｇあたり６．５×１０１０ＧＣ（用量２）。投与する総用量（総ＧＣ）は、年齢による脳の大きさの違いを考慮して調整する。投与する治験薬の総体積は、５ｍＬを超えない。
この治験の間は、参照療法は実施しない。以下に説明するように、ＩＳ療法は、ＩＰに加えて行う。
治験薬
コンストラクト１は、ｈＩＤＳ発現カセットを含む血清型９キャプシドの非複製組換えＡＡＶである。
コンストラクト１は、くも膜下腔（ＩＴ）に投与した後の中枢神経系（ＣＮＳ）においてヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ｈＩＤＳ）産物の効率的な発現を許容する非複製組換えＡＡＶ９ベクターである。このベクターゲノムは、ＡＡＶ２逆方向末端反復（ＩＴＲ）に隣接するｈＩＤＳ発現カセットを含む。カセットからの発現は、ＣＢ７プロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）即時早期エンハンサーとニワトリβ－アクチンプロモーターとの間のハイブリッドが駆動する。このプロモーターからの転写は、ニワトリβ－アクチンイントロン（ＣＩ）の存在によって高まる。発現カセットのポリアデニル化シグナルは、ウサギβ－グロビン（ＲＢＧ）遺伝子に由来する。コンストラクト１の概略を、図５に示す。
最終的なＩＰを、ＡＡＶベクター活性成分（ＡＡＶ９．ＣＢ７．ｈＩＤＳ）の凍結溶液を入れた０．００１％のＰｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８を含む改変Ｅｌｌｉｏｔ’ｓ Ｂ（登録商標）溶液として供給し、２ｍＬをＣＲＹＳＴＡＬ ＺＥＮＩＴＨ（登録商標）（ＣＺ）バイアルに充填し、ラテックス不含のゴム栓と、アルミニウムフリップオフシールとで密封する。一部の実施形態では、ＡＡＶベクター活性成分（ＡＡＶ９．ＣＢ７．ｈＩＤＳ）は、８．７７ｇ／Ｌの塩化ナトリウム、０．２４４ｇ／Ｌの塩化マグネシウム、０．０２７８ ｇ／Ｌのリン酸一ナトリウム一水和物、０．１１４ｇ／Ｌの無水リン酸二ナトリウム、０．２２４ｇ／Ｌの塩化カリウム、０．２０６ｇ／Ｌの塩化カルシウム、０．７９３ｇ／Ｌのデキストロース、０．００１％のポロクサマー１８８、ｐＨ ７．２６を含む溶液で供給する。バイアルは、－６０℃以下で貯蔵すべきである。それぞれのＩＰロットの濃度（ＧＣ／ｍＬ）を分析証明書（ＣｏＡ）で報告する。治験薬の濃度に基づいた詳細な投与指示は、管理マニュアルに記載している。
免疫抑制療法
コルチコステロイド
●ベクター投与（１日目、前投与）の朝に、患者に対して、少なくとも３０分間にわたって、メチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇ（最大５００ｍｇ）をＩＶで与える。メチルプレドニゾロンは、ＩＰの腰椎穿刺及びＩＣ注入の前に投与すべきである。アセトアミノフェン及び抗ヒスタミン剤の前投与は、治験責任医師の裁量で任意に行う。
●第１２週目までにプレドニゾンを中止することを目標として、２日目に経口プレドニゾンを開始する。プレドニゾンの用量は、以下の通りである：
○２日目～第２週の終わりまで：０．５ｍｇ／ｋｇ／日
○第３週及び４週：０．３５ｍｇ／ｋｇ／日
○第５週～８週：０．２ｍｇ／ｋｇ／日
○第９週～１２週：０．１ｍｇ／ｋｇ
○プレドニゾンは、第１２週の後に中止する。プレドニゾンの正確な用量は、一段階増やした臨床上実用的な用量に調整することができる。
●ベクター投与（１日目、前投与）の朝に、患者に対して、少なくとも３０分間にわたって、メチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇ（最大５００ｍｇ）をＩＶで与える。メチルプレドニゾロンは、ＩＰの腰椎穿刺及びＩＣ注入の前に投与すべきである。アセトアミノフェン及び抗ヒスタミン剤の前投与は、治験責任医師の裁量で任意に行う。
●第１２週目までにプレドニゾンを中止することを目標として、２日目に経口プレドニゾンを開始する。プレドニゾンの用量は、以下の通りである：
○２日目～第２週の終わりまで：０．５ｍｇ／ｋｇ／日
○第３週及び４週：０．３５ｍｇ／ｋｇ／日
○第５週～８週：０．２ｍｇ／ｋｇ／日
○第９週～１２週：０．１ｍｇ／ｋｇ
○プレドニゾンは、第１２週の後に中止する。プレドニゾンの正確な用量は、一段階増やした臨床上実用的な用量に調整することができる。
シロリムス
●ベクター投与の２日前（－２日目）：４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量のシロリムスの負荷用量を投与する。
●－１日目以降：０．５ｍｇ／ｍ２／日のシロリムスを１日２回に分割して投与する、目標血中レベルを４～８ｎｇ／ｍｌとする。
●シロリムスを、第４８週目の受診後に中止する。
●ベクター投与の２日前（－２日目）：４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量のシロリムスの負荷用量を投与する。
●－１日目以降：０．５ｍｇ／ｍ２／日のシロリムスを１日２回に分割して投与する、目標血中レベルを４～８ｎｇ／ｍｌとする。
●シロリムスを、第４８週目の受診後に中止する。
タクロリムス
●２日目（ＩＰ投与の翌日）に、タクロリムスを１日２回、１ｍｇの用量で開始する、２４週間にわたり４～８ｎｇ／ｍＬの血中レベルを達成するように調整する。
●タクロリムスは第２４週目の受診から８週にわたって漸減する。第２４週に、用量をおよそ５０％まで減少させる。第２８週に、用量をおよそ５０％までさらに減少させる。タクロリムスは、第３２週に中止する。
●タクロリムス及びシロリムスの血中レベルをモニタリングする。投薬調整は、本開示で説明を行っている。
●２日目（ＩＰ投与の翌日）に、タクロリムスを１日２回、１ｍｇの用量で開始する、２４週間にわたり４～８ｎｇ／ｍＬの血中レベルを達成するように調整する。
●タクロリムスは第２４週目の受診から８週にわたって漸減する。第２４週に、用量をおよそ５０％まで減少させる。第２８週に、用量をおよそ５０％までさらに減少させる。タクロリムスは、第３２週に中止する。
●タクロリムス及びシロリムスの血中レベルをモニタリングする。投薬調整は、本開示で説明を行っている。
治療に供する対象者を割り当てる方法
適格な対象者を登録し、ＩＤＭＣによる安全性データの検討を経てから、用量コホートに順次に割り当てる。最初の３名は、脳質量１ｇあたり１．３×１０１０ＧＣの用量コホート、次の３名は、脳質量１ｇあたり６．５×１０１０ＧＣの用量コホートに割り当てる。
投薬に関する考慮事項
治験薬
本開示では、個々の対象者の間での安全性データの検討、及びそれぞれのコホートが任意の用量レベルで投与を受けた後の安全性データの検討など、対象者に対して順次に投与する計画についての説明を開示している（例えば、（０２３７）～（０２６５）；（０１７５）～（０１８６））。
免疫抑制療法
プレドニゾンの投与は ０．５ｍｇ／ｋｇ／日から開始して、第１２週目の受診まで漸減する。
タクロリムスの用量調節は、最初の２４週間の間、４～８ｎｇ／ｍｌの全血中トラフ濃度を維持するようにする。２４週目で、用量は約５０％減らす。２８週目で、用量を、さらに約５０％減らす。タクロリムスは、３２週目に中止する。シロリムスの用量調節は、４～８ｎｇ／ｍｌの全血中トラフ濃度を維持するようにする。大部分の対象者において、用量調整は、式：新規用量＝現在の用量×（目標濃度／現在の濃度）に基づくことができる。対象者は、濃度モニタリングによってさらなる用量調整が行われるまで、少なくとも７～１４日間は、新たな維持用量を継続すべきである。
以下の投薬及び処置は、禁止する：
●スクリーニングから６ヶ月以内のＩＴ ＥＲＴは許可しない。
●ＩＣＦに署名する前の３０日以内または５半減期以内のいずれか長い期間内、または治験の間（第１０４週目まで）のあらゆる時点での治験薬。
●シロリムス及び／またはタクロリムスを服用している間の生ワクチンは避ける
●シロリムス及び／またはタクロリムス投与中は、ＣＹＰ３Ａ４及び／またはＰ－糖タンパク質（ＰｇＰ）の強力な阻害剤（ケトコナゾール、ボリコナゾール、イトラコナゾール、ポサコナゾール、エリスロマイシン、テリスロマイシン、またはクラリスロマイシンなど）、またはＣＹＰ３Ａ４及び／またはＰｇｐの強力な誘導物質（リファンピンまたはリファブチンなど）は避ける
●グレープフルーツジュースは、ＣＹＰ３Ａ酵素を阻害し、その結果、タクロリムス及びシロリムスの全血トラフ濃度が高まる。対象者は、タクロリムス及び／またはシロリムスと一緒にグレープフルーツの摂食、または、グレープフルーツジュースを飲むことは避ける。
●スクリーニングから６ヶ月以内のＩＴ ＥＲＴは許可しない。
●ＩＣＦに署名する前の３０日以内または５半減期以内のいずれか長い期間内、または治験の間（第１０４週目まで）のあらゆる時点での治験薬。
●シロリムス及び／またはタクロリムスを服用している間の生ワクチンは避ける
●シロリムス及び／またはタクロリムス投与中は、ＣＹＰ３Ａ４及び／またはＰ－糖タンパク質（ＰｇＰ）の強力な阻害剤（ケトコナゾール、ボリコナゾール、イトラコナゾール、ポサコナゾール、エリスロマイシン、テリスロマイシン、またはクラリスロマイシンなど）、またはＣＹＰ３Ａ４及び／またはＰｇｐの強力な誘導物質（リファンピンまたはリファブチンなど）は避ける
●グレープフルーツジュースは、ＣＹＰ３Ａ酵素を阻害し、その結果、タクロリムス及びシロリムスの全血トラフ濃度が高まる。対象者は、タクロリムス及び／またはシロリムスと一緒にグレープフルーツの摂食、または、グレープフルーツジュースを飲むことは避ける。
許可する投薬及び処置
対象者が、ＩＶ ＥＲＴの安定したレジメン、ならびに、あらゆる対症療法（例えば、理学療法）を続けることを許可する。地域の病院の標準治療に従って、対象者が、ＭＲＩを行う間の閉所恐怖症を予防する薬を服用すること、そして、腰椎穿刺、ＭＲＩ、及び神経伝導研究（ＡＢＲ、または感覚誘発電位）のために全身麻酔を受けることを許可する。
対象者の安全及び健康の上で必要であると考えられる（例えば、高血圧症の）場合には、地域の標準治療に従って、治験責任医師の裁量で、上記した以外の投薬を行い得る、そして、ＣＲＦの適切なセクションに記録し得る。
６．６ 実施例６：ＭＰＳ ＩＩ（ハンター症候群）の小児対象者でのコンストラクト１の安全性、忍容性、及び薬力学を評価するための第Ｉ／ＩＩ相多施設非盲検試験
上記したように、コンストラクト１は、ＡＡＶ９．ＣＢ７．ｈＩＤＳ（ヒトイズロン酸－２－スルファターゼ発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス血清型９キャプシド）である。図５、及び実施例５を参照されたい。
上記したように、コンストラクト１は、ＡＡＶ９．ＣＢ７．ｈＩＤＳ（ヒトイズロン酸－２－スルファターゼ発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス血清型９キャプシド）である。図５、及び実施例５を参照されたい。
コンストラクト１を、単回大槽内（ＩＣ）または単回脳室内（ＩＣ）用量として送達する。
２つの用量レベル、すなわち脳質量１ｇあたり１．３×１０１０ゲノムコピー（ＧＣ）（用量１）、及び脳質量１ｇあたり６．５×１０１０ＧＣ（用量２）を評価する。投与する総用量は、対象者のスクリーニング磁気共鳴画像（ＭＲＩ）に基づいて推定した治験対象者の脳サイズを考慮に含める。投与する治験薬の総体積は、ＣＳＦの総体積（乳幼児の脳では約５０ｍＬ、そして、成人の脳では約１５０ｍＬと推定する）の１０％を超えない。
６．６．１．目標：
主要目的：
●重度のＭＰＳ ＩＩを有する小児対象者に対して単回ＩＣ、またはＩＣが禁忌である場合にはＩＣＶを投与して２４週間にわたるコンストラクト１の安全性及び忍容性を評価する。
主要目的：
●重度のＭＰＳ ＩＩを有する小児対象者に対して単回ＩＣ、またはＩＣが禁忌である場合にはＩＣＶを投与して２４週間にわたるコンストラクト１の安全性及び忍容性を評価する。
副次目的：
●コンストラクト１の長期安全性及び忍容性を評価する。
●脳脊髄液（ＣＳＦ）、血漿、尿でのバイオマーカーに対するコンストラクト１の効果を評価する。
●認知機能、行動機能、適応機能の神経発達パラメーターに対するコンストラクト１の効果を評価する。
●ＣＳＦ、血漿、及び尿中のベクターの切断を評価する。
●コンストラクト１の長期安全性及び忍容性を評価する。
●脳脊髄液（ＣＳＦ）、血漿、尿でのバイオマーカーに対するコンストラクト１の効果を評価する。
●認知機能、行動機能、適応機能の神経発達パラメーターに対するコンストラクト１の効果を評価する。
●ＣＳＦ、血漿、及び尿中のベクターの切断を評価する。
探索目的：
●コンストラクト１の免疫原性を評価する
●ＣＮＳイメージングに対するコンストラクト１の効果を調べる
●疾患の全身症状に対するコンストラクト１の効果を調べる
●聴覚能力に対するコンストラクト１の効果を調べる
●静脈内（ＩＶ）ＥＲＴ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））を一時的に中止した対象者の血漿及び尿中のバイオマーカーに対するコンストラクト１の効果を調べる
●生活の質（ＱＯＬ）と睡眠測定に対するコンストラクト１の効果を調べる
●睡眠測定に対するコンストラクト１の効果を調べる。
●転帰に関して臨床医が報告したコンストラクト１の効果を調べる
●転帰に関して介護士が報告したコンストラクト１の効果を調べる
●コンストラクト１の免疫原性を評価する
●ＣＮＳイメージングに対するコンストラクト１の効果を調べる
●疾患の全身症状に対するコンストラクト１の効果を調べる
●聴覚能力に対するコンストラクト１の効果を調べる
●静脈内（ＩＶ）ＥＲＴ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））を一時的に中止した対象者の血漿及び尿中のバイオマーカーに対するコンストラクト１の効果を調べる
●生活の質（ＱＯＬ）と睡眠測定に対するコンストラクト１の効果を調べる
●睡眠測定に対するコンストラクト１の効果を調べる。
●転帰に関して臨床医が報告したコンストラクト１の効果を調べる
●転帰に関して介護士が報告したコンストラクト１の効果を調べる
６．６．２．治験デザインと方法
これは、コンストラクト１の第Ｉ／ＩＩ相、ファーストインヒューマン、多施設、非盲検、単一アーム用量漸増試験である。コントロール群は含まない。重度のＭＰＳ ＩＩの約６名の小児対象者を、２つの用量コホート、すなわち脳質量１ｇあたり１．３×１０１０ＧＣ（用量１）、または脳質量１ｇあたり６．５×１０１０ＧＣ（用量２）に登録することができ、当該コホートは、コンストラクト１の単回用量の投与をＩＣまたはＩＣＶ注射で受ける。治療を行って最初の２４週間（主要試験期間）は、安全性が主要な注目点となる。主要治験期間が終了した後に、対象者に対して、コンストラクト１の治療を受けた後、合計で１０４週間目まで、評価（安全性及び有効性）を継続する。当該治験が終わると、対象者には、長期追跡調査への参加を促す。
これは、コンストラクト１の第Ｉ／ＩＩ相、ファーストインヒューマン、多施設、非盲検、単一アーム用量漸増試験である。コントロール群は含まない。重度のＭＰＳ ＩＩの約６名の小児対象者を、２つの用量コホート、すなわち脳質量１ｇあたり１．３×１０１０ＧＣ（用量１）、または脳質量１ｇあたり６．５×１０１０ＧＣ（用量２）に登録することができ、当該コホートは、コンストラクト１の単回用量の投与をＩＣまたはＩＣＶ注射で受ける。治療を行って最初の２４週間（主要試験期間）は、安全性が主要な注目点となる。主要治験期間が終了した後に、対象者に対して、コンストラクト１の治療を受けた後、合計で１０４週間目まで、評価（安全性及び有効性）を継続する。当該治験が終わると、対象者には、長期追跡調査への参加を促す。
最初の３名の適格対象者は、用量１コホート（１．３×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）に登録される。第１の対象者にコンストラクト１を投与した後に、安全性に関する８週間の観察期間を設ける。Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｓａｆｅｔｙ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＳＣ）が、この対象者に関して最初の８週間で得た安全性データ（８週目の受診の間に得たデータを含む）を検討し、安全性の懸念が無ければ、第２の対象者を登録し得る。同じプロセスを使用して、第３の対象者を登録する。次の対象者のインフォームドコンセントとスクリーニングを、前の対象者の観察期間中に進め得る。
安全性検討トリガー（ＳＲＴ）事象が認められなければ、第３の対象者の第８週目の受診時までに得た用量１コホートに関して利用可能なすべての安全性データを、Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｄａｔａ Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＤＭＣ）が評価する。第２の用量（６．５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）へ移行する決定が出れば、続く２名の対象者が、最後に投与した対象者に関して最初の８週間で得たすべての安全性データ（８週目の受診時に得たデータを含む）を検討した後に決めた後続の各対象者に関する用量を使用して、当初の用量コホートと同じ投与スキームに従う。ＩＳＣは、第２の対象者の２週目までの受診、及び２週目での受診で得た当該対象者のすべての安全性データを検討し、この評価の直後に、第３の対象者への投与に進むことが安全であると判断し得る。用量２コホートについて入手可能なすべての安全性データを、用量２コホートでの第３の対象者に関する８週目での受診後に、ＩＤＭＣが評価する。ＩＤＭＣの承認が得られると、治験薬が利用可能となり、そして、スポンサーも承認しており、ＩＳＣまたはＩＤＭＣのいずれかに従って登録の停止が認められる安全事象が無い限りは、さらなる対象者を、用量２の拡大コホートで投与し得る。拡大コホートでのそれぞれの対象者には、少なくとも２週間の間隔で交互に投与する。
あらゆる所与のＩＤＭＣ会合において、用量コホートの終了時に計画しているものである、または、ＳＲＴが要請したものであるかに関係なく、ＩＤＭＣは、試験の中止、現在の用量のさらなる対象者に対する投与、次の用量コホートへの進行、または低用量での進行を勧告し得る。最後の用量２コホート対象者から８週間のデータが利用可能になり、用量２コホート対象者において何らのＳＲＴ事象も認められない場合、治験への登録は完了したとみなす。拡大コホートへの登録は、上記に定めた通りに継続し得る。拡大コホートに登録した最後の対象者が第２週目の受診を完了すると、前回の対象者の第２週目の受診からのデータを含めて、拡大コホートのすべての安全性データをＩＤＭＣが評価する。
いずれかの事象が、停止規則の基準に該当する場合、ＲＥＧＥＮＸＢＩＯ、及び外部ＩＤＭＣが、すべての安全性データを詳細に検討するまで、新規対象者に対する投与は停止する。
潜在的な対象者を、投与の３５日前までにスクリーニングして、治験への適格性を決定する。インフォームドコンセント用紙（ＩＣＦ）に署名した後にスクリーニング評価するが、この機会以外では、治験責任医師が決定し、かつメディカルモニターが承認した場合には許可し得る。スクリーニング機会以外で実施する評価は、メディカルモニターの判断で繰り返して行う。対象者は、当初に登録を済ましていなければ、治験のために１度の再スクリーニングを行い得る；対象者の再スクリーニングには、スポンサーの承認が必要である。再スクリーニングは、対象者の初期スクリーニングを行い得なかった時点から少なくとも３ヶ月が経過した後にすることができる。
適格基準を満たす対象者は、－２日目～１日目の朝（施設の基準による）の間に入院し、ベースライン評価を投与前に行う。対象者は、１日目に、コンストラクト１の単一ＩＣまたはＩＣＶ用量の投与を受け、観察のために、投薬後の約１～２日間は入院する。治験責任医師が２泊以上の入院延長は不要と判断した後に対象者は退院する。主要治験期間（すなわち、第２４週目まで）以降の評価は、第４週目まで毎週、及び、第８週、第１２週、第１６週、第２０週、及び第２４週目に実施する。主要治験期間の後に、第２８週、第３２週、第４０週、第４８週、第５２週、第５６週、第６４週、第７８週、及び第１０４週目に受診する。第６４週目の受診は、ＩＶ ＥＲＴを中止した対象者に対してのみ実施する。第２０週と第２８週の評価は、電話で聞き取りをして、有害事象（ＡＥ）と併用療法の評価だけを行う。
すべての対象者は、まず、本試験では免疫抑制（ＩＳ）を受けて、導入遺伝子を発現する組織に対するあらゆる免疫媒介反応のリスクを最小化し、かつ有効性の低下を招き得るＩＤＳに対する抗体の形成または増加に関連するあらゆるリスクを最小限に抑える。ＩＳレジメンは、コルチコステロイド（１日目にメチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇを１回ＩＶに前投与する、２日目に経口プレドニゾンを０．５ｍｇ／ｋｇ／日から開始する、段階的に漸減させて、第１２週目までに中止する）、タクロリムス（２日目～第２４週目まで１日２回［ＢＩＤ］０．０５ｍｇを経口的に［ＰＯ］、目標血中レベルを２～４ｎｇ／ｍＬとする、そして、第２４週～第３２週にかけての８週間にわたり漸減する）、及びシロリムス（－２日目に４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量の負荷用量、続いて、－１日目以降はシロリムス０．５ｍｇ／ｍ２／日をＢＩＤに分けて、第４８週目まで目標血中レベルを１～３ｎｇ／ｍｌとして投与する）を含む。神経学的評価及びタクロリムス／シロリムス血中レベルをモニタリングする。シロリムス及びタクロリムスの用量を、目標範囲内の血中レベルを維持するように調節する。
４８週間後のＩＳ療法は予定していない。臨床的に関連する免疫応答を調節するために４８週以後もＩＳが必要であれば、臨床的必要性に応じて、メディカルモニター及びスポンサーと確認しながら、治験責任医師（ＰＩ）が適切な免疫抑制レジメンを決定する。
非臨床的安全性／毒物学治験で認められた後根神経節及び関連する軸索障害の組織病理学的所見、及びＩＣ投与手順による潜在的な安全性リスクを考慮して、焦点を絞った神経学的評価、及び体性感覚誘発電位（ＳＳＥＰ）試験などの綿密な神経学的モニタリングを使用する。
動物データは、ＩＣ及びＩＣＶでのコンストラクト１の投与が全身的利益を提供し得ることを示唆しているので、ＩＶイデュルスルファーゼ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））を服用している対象者には、第５２週目の受診後に、ＥＲＴを中止する選択肢を提供し得る。ＥＲＴを中止する決定は、ＰＩの臨床的判断に委ねられており、治験スポンサーと合意した通りに行われる。ＥＲＴを停止する決定に有用な追加情報は、第５２週目の受診までに得た血漿Ｉ２Ｓ及び血漿及び尿中ＧＡＧのトラフ測定（ＥＲＴ投薬に基づいたもの）、ならびに超音波による肝臓及び脾臓サイズの測定結果である。第５２週、第５６週、第６０週、第６４週、及び第７８週目での受診には、ＥＲＴの中止を選択した対象者の血漿Ｉ２Ｓ、それに、対象者の血漿及び尿中ＧＡＧレベルのさらなるモニタリングが含まれる。ＩＶ ＥＲＴを中止した対象者は、６４週目に追加の腹部超音波検査を受けて、肝臓及び脾臓サイズの測定を行う。ＩＶ ＥＲＴは、以下の基準のいずれかに該当した場合に再開する：第５２週目の受診時に測定した尿中ＧＡＧレベルよりも２倍にまで尿中ＧＡＧが高まっている、または第５２週目での肝臓径の数値よりも＞２０％も大きくなっている、またはＩＶ ＥＲＴの再開を許可するにあたって、内部安全委員会及び／またはＩＤＭＣが考慮したその他の安全パラメーターに変更があったとき。しかしながら、ＰＩが必要と判断した場合にはいつでも、対象者に対してＥＲＴを再開し得る。
コンストラクト１の安全性及び忍容性は、ＡＥ及び重大な有害事象（ＳＡＥ）、化学分析、血液学分析、尿検査、ＣＳＦ炎症のマーカー、免疫原性、ベクターの切断（ベクター濃度）、バイタルサイン、心電図（ＥＣＧ）、ＳＳＥＰ検査、及び神経学的評価などの身体診察の評価を介してモニタリングする。循環ウイルスゲノム（ＥＢＶ及びＣＭＶ）を検出するための連続ＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）も、対象者がＩＳを受けている間に行う。
有効性評価は、薬力学（ＰＤ）バイオマーカー（ＣＳＦ及び血漿中のＧＡＧ及びＩ２Ｓ、白血球Ｉ２Ｓ酵素活性、及び尿でのＧＡＧ）のレベルの測定、ならびに神経認知機能、聴覚能力、脳ＭＲＩ、肝臓及び脾臓の大きさ、及び心エコー図による心臓評価を含む。治験に参加する一方で、対象者の標準治療の一部として実施した神経認知評価または適応評価も、施設と協議した後に、治験スポンサーの決定にしたがって収集し得る。
６．６．３．評価項目
主要評価項目：
● 第２４週目までの安全性：ＡＥ及びＳＡＥ
主要評価項目：
● 第２４週目までの安全性：ＡＥ及びＳＡＥ
副次評価項目：
●第１０４週目までの安全性：ＡＥ報告、検査室評価、バイタルサイン、ＥＣＧ、身体診察、及び神経学的評価
●ＣＳＦ（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、血漿（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、及び尿（ＧＡＧ）でのバイオマーカー
●認知、行動、及び適応機能の神経発達パラメーター：
○Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ） （Ｂａｙｌｅｙ，２００５，Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ）またはＫａｕｆｍａｎ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｂａｔｔｅｒｙ ｆｏｒ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＫＡＢＣ－ＩＩ） （Ｋａｕｆｍａｎ，２００４，Ｋａｕｆｍａｎ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｂａｔｔｅｒｙ ｆｏｒ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ，２ｎｄ Ｅｄ．）
○Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｘｐａｎｄｅｄ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ Ｆｏｒｍ （ＶＡＢＳ－ＩＩ） （Ｓｐａｒｒｏｗ ｅｔ ａｋ，２００５，Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄ．
●定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）による、コンストラクト１デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）に対するＣＳＦ、血漿、尿でのベクター濃度副次的評価項目：
●第１０４週目までの安全性：ＡＥ報告、検査室評価、バイタルサイン、ＥＣＧ、身体診察、及び神経学的評価
●ＣＳＦ（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、血漿（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、及び尿（ＧＡＧ）でのバイオマーカー
●認知、行動、及び適応機能の神経発達パラメーター：
○Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ） （Ｂａｙｌｅｙ，２００５，Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ）またはＫａｕｆｍａｎ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｂａｔｔｅｒｙ ｆｏｒ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＫＡＢＣ－ＩＩ） （Ｋａｕｆｍａｎ，２００４，Ｋａｕｆｍａｎ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｂａｔｔｅｒｙ ｆｏｒ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ，２ｎｄ Ｅｄ．）
○Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｘｐａｎｄｅｄ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ Ｆｏｒｍ （ＶＡＢＳ－ＩＩ） （Ｓｐａｒｒｏｗ ｅｔ ａｋ，２００５，Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄ．
●定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）による、コンストラクト１デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）に対するＣＳＦ、血漿、尿でのベクター濃度副次的評価項目：
探索評価項目：
●免疫原性測定
○ＡＡＶ９に対する中和抗体価、及びＣＳＦと血清でのＩ２Ｓに対する結合抗体価
○酵素結合イムノスポット（ＥＬＩＳＰＯＴ）アッセイ：ＡＡＶ９及びＩ２Ｓに対するＴ 細胞応答
○フローサイトメトリー：ＡＡＶ及びＩ２Ｓ特異的制御性Ｔ細胞
●脳のＭＲＩで評価したＣＮＳ構造異常
●腹部のＭＲＩで評価した肝臓及び脾臓のサイズ
●心エコー図による、弁膜症及び左室心筋重量係数に関する心臓評価
●聴覚脳幹応答（ＡＢＲ）検査、または行動聴力及び耳音響放射試験で測定した聴覚能力の変化
●ＩＶ ＥＲＴ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））を一時的に中止した対象者での血漿及び尿中ＧＡＧ
●ＰｅｄｓＱＬ
●睡眠評価（Ｆｅｒｒｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｓｌｅｅｐ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；１０（４）：４５７－４６３）
●疾患の臨床評価
●疾患の介護者評価
●日常生活の活動度（Ｔａｎｊｕａｋｉｏ ｅｔ ａｌ．２０１５，Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ Ｍｅｔａｂ，１１４（２）：１６１－１６９；Ｋａｔｏ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｂｒａｉｎ Ｄｅｖ，２９（５）：２９８－３０５）
●病気の負担
●免疫原性測定
○ＡＡＶ９に対する中和抗体価、及びＣＳＦと血清でのＩ２Ｓに対する結合抗体価
○酵素結合イムノスポット（ＥＬＩＳＰＯＴ）アッセイ：ＡＡＶ９及びＩ２Ｓに対するＴ 細胞応答
○フローサイトメトリー：ＡＡＶ及びＩ２Ｓ特異的制御性Ｔ細胞
●脳のＭＲＩで評価したＣＮＳ構造異常
●腹部のＭＲＩで評価した肝臓及び脾臓のサイズ
●心エコー図による、弁膜症及び左室心筋重量係数に関する心臓評価
●聴覚脳幹応答（ＡＢＲ）検査、または行動聴力及び耳音響放射試験で測定した聴覚能力の変化
●ＩＶ ＥＲＴ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））を一時的に中止した対象者での血漿及び尿中ＧＡＧ
●ＰｅｄｓＱＬ
●睡眠評価（Ｆｅｒｒｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｓｌｅｅｐ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；１０（４）：４５７－４６３）
●疾患の臨床評価
●疾患の介護者評価
●日常生活の活動度（Ｔａｎｊｕａｋｉｏ ｅｔ ａｌ．２０１５，Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ Ｍｅｔａｂ，１１４（２）：１６１－１６９；Ｋａｔｏ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｂｒａｉｎ Ｄｅｖ，２９（５）：２９８－３０５）
●病気の負担
６．６．４．計画した対象者の数と実施期間
最大で１２名の対象者を登録する。
●用量１コホートの対象者３名
●用量２コホートの対象者３名
●用量２拡大コホートで最大６名の対象者
●ＩＤＭＣは、対象者の追加を勧め得る。
最大で１２名の対象者を登録する。
●用量１コホートの対象者３名
●用量２コホートの対象者３名
●用量２拡大コホートで最大６名の対象者
●ＩＤＭＣは、対象者の追加を勧め得る。
本治験の総期間は、投与後の１０４週間であり、一次安全性評価は２４週間目で行う。スクリーニングには、最長で３５日を要し得る。
６．６．５．診断、及び採用と除外の基準
罹患している血縁者に関する以下の情報は、利用可能であれば、血縁者のインフォームドコンセントを得た後に収集する。
●人口統計（年齢、性別）
●医学的及び外科的病歴（例えば、心臓病、手根管症候群、股関節形成不全、または亜脱臼など）
●重度のＭＰＳ ＩＩの診断時の年齢、及び診断に至るまでの経緯
●遺伝子型決定の結果
●認知、発話及び言語、微細運動及び粗大運動などの神経発達検査の結果（利用可能であり、かつ重度のＭＰＳ ＩＩの診断は神経発達検査で行った）
●脳ＭＲＩの結果
●ＥＲＴまたはＨＳＣＴなどのＭＰＳ ＩＩの治療
●現在服用している薬
罹患している血縁者に関する以下の情報は、利用可能であれば、血縁者のインフォームドコンセントを得た後に収集する。
●人口統計（年齢、性別）
●医学的及び外科的病歴（例えば、心臓病、手根管症候群、股関節形成不全、または亜脱臼など）
●重度のＭＰＳ ＩＩの診断時の年齢、及び診断に至るまでの経緯
●遺伝子型決定の結果
●認知、発話及び言語、微細運動及び粗大運動などの神経発達検査の結果（利用可能であり、かつ重度のＭＰＳ ＩＩの診断は神経発達検査で行った）
●脳ＭＲＩの結果
●ＥＲＴまたはＨＳＣＴなどのＭＰＳ ＩＩの治療
●現在服用している薬
対象者は、当初に登録を済ましていなければ、治験のために１度の再スクリーニングを行い得る。対象者の再スクリーニングには、スポンサーの承認が必要である。再スクリーニングは、対象者の初期スクリーニングを行い得なかった時点から少なくとも３ヶ月が経過した後にすることができる。再スクリーニングを受けた参加者は、新たなＩＣＦに署名する必要がある。ＭＲＩを除いた全スクリーニング手順を繰り返して、神経放射線科医／神経外科医が再試験について決定をする。
本治験に参加する資格を得るにあたって、対象者は、以下の全採用基準に該当しなくてはならない：
●１．対象者の法的保護者（複数可）は、治験の趣旨説明を受けた後、かつ治験関連の手続きを行う前に、インフォームドコンセント用紙に署名をして提供する意思があり、かつ、そうすることが可能である。
●２．４ヶ月齢以上、５歳未満の男児である
●３．以下のいずれかの基準に該当していること：
○ａ．文書に記録されているＭＰＳ ＩＩの診断があり、かつ、神経認知検査スコアが、７７以下（ＢＳＩＤ－ＩＩＩまたはＫＡＢＣ－ＩＩ）である、または
○ｂ．文書に記録されているＭＰＳ ＩＩの診断があり、かつ３～３６ヶ月の間隔で受けた神経認知検査（ＢＳＩＤ－ＩＩＩまたはＫＡＢＣ－ＩＩ）で、１以上の標準偏差の低下を示している、または
○ｃ．対象者と同じＩＤＳ変異を有する重度のＭＰＳ ＩＩの診断を受けた血縁者がおり、かつ、遺伝学者の意見で、重度のＭＰＳ ＩＩの形態を受け継いでいる、または
○ｄ．遺伝学者の意見では、神経障害性表現型（例えば、完全な欠失、または大きな欠失（例えば、１以上のエクソンに及ぶもの）、または組換え）を招くことが知られているＩＤＳの変異（複数可）が文書に記録されており、かつ、臨床医の意見では、重症型のＭＰＳ ＩＩである
●４．補助器具の有無に関係なく、必須のプロトコール試験を完了する上で十分な聴覚的及び視覚的能力を有する、該当する場合には、試験日に進んで補助器具を利用する。
●１．対象者の法的保護者（複数可）は、治験の趣旨説明を受けた後、かつ治験関連の手続きを行う前に、インフォームドコンセント用紙に署名をして提供する意思があり、かつ、そうすることが可能である。
●２．４ヶ月齢以上、５歳未満の男児である
●３．以下のいずれかの基準に該当していること：
○ａ．文書に記録されているＭＰＳ ＩＩの診断があり、かつ、神経認知検査スコアが、７７以下（ＢＳＩＤ－ＩＩＩまたはＫＡＢＣ－ＩＩ）である、または
○ｂ．文書に記録されているＭＰＳ ＩＩの診断があり、かつ３～３６ヶ月の間隔で受けた神経認知検査（ＢＳＩＤ－ＩＩＩまたはＫＡＢＣ－ＩＩ）で、１以上の標準偏差の低下を示している、または
○ｃ．対象者と同じＩＤＳ変異を有する重度のＭＰＳ ＩＩの診断を受けた血縁者がおり、かつ、遺伝学者の意見で、重度のＭＰＳ ＩＩの形態を受け継いでいる、または
○ｄ．遺伝学者の意見では、神経障害性表現型（例えば、完全な欠失、または大きな欠失（例えば、１以上のエクソンに及ぶもの）、または組換え）を招くことが知られているＩＤＳの変異（複数可）が文書に記録されており、かつ、臨床医の意見では、重症型のＭＰＳ ＩＩである
●４．補助器具の有無に関係なく、必須のプロトコール試験を完了する上で十分な聴覚的及び視覚的能力を有する、該当する場合には、試験日に進んで補助器具を利用する。
以下の除外基準のいずれかに該当する対象者は、治験に参加する資格が無い：
●１．ＩＣまたはＩＣＶ注射に対して次のいずれかの禁忌を示す：
○ａ．治験（１名の神経放射線科医または神経外科医／施設）に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームがベースラインＭＲＩ検査の検討を行って、ＩＣまたはＩＣＶ注射に対して禁忌を認める
○ｂ．この治験に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームが、入手可能な情報に基づいて、ＩＣ注射に対して禁忌である頭部／頸部の手術歴を認める。
○ｃ．コンピューター断層撮影、造影剤、または全身麻酔に対して禁忌を認める
○ｄ．ＭＲＩまたはガドリニウムに対して禁忌を認める
○ｅ．クレアチニンに基づいた推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）が３０ｍＬ未満／分／１．７３ｍ２である。検査所見から、クレアチニンが、アッセイ検証または検出の下限未満であると判断した場合には、下限カットオフ値を使用してｅＧＦＲを推定する。
○ｆ．治験責任医師、及び神経放射線科医／神経外科医のチームの意見では、以前に臨床的に有意な頭蓋内出血を経験しており、ＩＣ及びＩＣＶ注射に対して禁忌を認める
●２．プレドニゾン、タクロリムス、またはシロリムスを使用する治療に対して禁忌であるいずれかの病態を有する
●３．ＭＰＳ ＩＩまたは神経精神病態の診断に起因しない神経認知障害があり、ＰＩの意見では、研究結果の解釈に混乱を招き得る
●４．腰椎穿刺に対して禁忌を示す
●５．施設の神経放射線科医／神経外科医の意見、それに、メディカルモニターとの協議では、（大脳）心室シャントを有しており、対象者への投与と適切な投薬に影響を与え得る
●６．ＨＳＣＴを受けている
●７．ＡＡＶをベースとした遺伝子治療薬を使用する治療を受けたことがある
●８．ＩＣＦに署名する４ヶ月以内に、くも膜下腔（ＩＴ）投与を介して、イデュルスルファーゼ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））の投与を受けている
●９．イデュルスルファーゼ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））ＩＶの投与を受けて、ＩＶイデュルスルファーゼ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））投与に関連すると考えられるアナフィラキシーなど、重度な過敏反応を経験した。現在もＩＶでイデュルスルファーゼの投与を受けており、投与を中断している、または毎週異なる用量レジメンを使っている場合には、ＲＥＧＥＮＸＢＩＯメディカルモニターとの協議が必要である。
●１０．ＩＣＦの署名日である１日目から３０日以内または５半減期以内のいずれか長い期間内に治験薬の投与を受けた
●１１．スクリーニングの少なくとも１年前に完全な寛解に至っていないリンパ腫の既往歴、または、皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの既往歴を有する
●１２．血小板数が、１００，０００未満／マイクロリットル（μＬ）である
●１３．アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、またはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）が、３×ＵＬＮ超である、または総ビリルビンが１．５×ＵＬＮ超である。ただし、対象者がギルバート症候群の病歴を有している場合は、この限りではない。
●１４．医学的治療にもかかわらず、コントロール不良な高血圧症であり、これは、年齢、性別、身長の規範的基準に基づいて、１７歳以下の小児では、収縮期血圧または拡張期血圧が９９パーセンタイル＋５ｍｍＨｇ超と定義されている
●１５．ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、またはＢ型肝炎またはＣ型肝炎ウイルス感染の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原またはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎またはＨＩＶ抗体のスクリーニング試験が陽性である
●１６．臨床施設従業員または治験の実施に関与する他のいずれかの個人の一等親以内の家族、または、臨床施設従業員または治験の実施に関与する他のいずれかの個人
●１７．ＰＩの見解では、対象者の安全性を損ねかねない臨床的に有意なＥＣＧ異常を有している
●１８．ＰＩの見解では、対象者の安全性を損ねかねない、または治験への参加の成功を妨げかねない、または、治験結果の解釈を歪めかねない、重大な、または不安定な医学的または心理的状態を有している
●１９．ＰＩの見解では、対象者を過度のリスクに曝しかねない制御不能な発作を有する
●１．ＩＣまたはＩＣＶ注射に対して次のいずれかの禁忌を示す：
○ａ．治験（１名の神経放射線科医または神経外科医／施設）に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームがベースラインＭＲＩ検査の検討を行って、ＩＣまたはＩＣＶ注射に対して禁忌を認める
○ｂ．この治験に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームが、入手可能な情報に基づいて、ＩＣ注射に対して禁忌である頭部／頸部の手術歴を認める。
○ｃ．コンピューター断層撮影、造影剤、または全身麻酔に対して禁忌を認める
○ｄ．ＭＲＩまたはガドリニウムに対して禁忌を認める
○ｅ．クレアチニンに基づいた推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）が３０ｍＬ未満／分／１．７３ｍ２である。検査所見から、クレアチニンが、アッセイ検証または検出の下限未満であると判断した場合には、下限カットオフ値を使用してｅＧＦＲを推定する。
○ｆ．治験責任医師、及び神経放射線科医／神経外科医のチームの意見では、以前に臨床的に有意な頭蓋内出血を経験しており、ＩＣ及びＩＣＶ注射に対して禁忌を認める
●２．プレドニゾン、タクロリムス、またはシロリムスを使用する治療に対して禁忌であるいずれかの病態を有する
●３．ＭＰＳ ＩＩまたは神経精神病態の診断に起因しない神経認知障害があり、ＰＩの意見では、研究結果の解釈に混乱を招き得る
●４．腰椎穿刺に対して禁忌を示す
●５．施設の神経放射線科医／神経外科医の意見、それに、メディカルモニターとの協議では、（大脳）心室シャントを有しており、対象者への投与と適切な投薬に影響を与え得る
●６．ＨＳＣＴを受けている
●７．ＡＡＶをベースとした遺伝子治療薬を使用する治療を受けたことがある
●８．ＩＣＦに署名する４ヶ月以内に、くも膜下腔（ＩＴ）投与を介して、イデュルスルファーゼ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））の投与を受けている
●９．イデュルスルファーゼ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））ＩＶの投与を受けて、ＩＶイデュルスルファーゼ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））投与に関連すると考えられるアナフィラキシーなど、重度な過敏反応を経験した。現在もＩＶでイデュルスルファーゼの投与を受けており、投与を中断している、または毎週異なる用量レジメンを使っている場合には、ＲＥＧＥＮＸＢＩＯメディカルモニターとの協議が必要である。
●１０．ＩＣＦの署名日である１日目から３０日以内または５半減期以内のいずれか長い期間内に治験薬の投与を受けた
●１１．スクリーニングの少なくとも１年前に完全な寛解に至っていないリンパ腫の既往歴、または、皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの既往歴を有する
●１２．血小板数が、１００，０００未満／マイクロリットル（μＬ）である
●１３．アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、またはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）が、３×ＵＬＮ超である、または総ビリルビンが１．５×ＵＬＮ超である。ただし、対象者がギルバート症候群の病歴を有している場合は、この限りではない。
●１４．医学的治療にもかかわらず、コントロール不良な高血圧症であり、これは、年齢、性別、身長の規範的基準に基づいて、１７歳以下の小児では、収縮期血圧または拡張期血圧が９９パーセンタイル＋５ｍｍＨｇ超と定義されている
●１５．ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、またはＢ型肝炎またはＣ型肝炎ウイルス感染の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原またはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎またはＨＩＶ抗体のスクリーニング試験が陽性である
●１６．臨床施設従業員または治験の実施に関与する他のいずれかの個人の一等親以内の家族、または、臨床施設従業員または治験の実施に関与する他のいずれかの個人
●１７．ＰＩの見解では、対象者の安全性を損ねかねない臨床的に有意なＥＣＧ異常を有している
●１８．ＰＩの見解では、対象者の安全性を損ねかねない、または治験への参加の成功を妨げかねない、または、治験結果の解釈を歪めかねない、重大な、または不安定な医学的または心理的状態を有している
●１９．ＰＩの見解では、対象者を過度のリスクに曝しかねない制御不能な発作を有する
免疫抑制療法に関連する除外基準：
●２０．タクロリムス、シロリムス、またはプレドニゾロンに対して過敏反応の既往歴を有する
●２１．原発性免疫不全（例えば、共通可変免疫不全症候群）、脾臓摘出術、または感染症に罹患しやすいあらゆる基礎疾患の既往歴のある患者
●２２．帯状疱疹（ＶＺＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、またはエプスタイン－バール・ウイルス（ＥＢＶ）に感染しており、スクリーニング前の少なくとも１２週間に完全に解消されていない
●２３．入院または親世代抗感染症薬による治療を必要とするいずれかの感染症が、２回目の受診の少なくとも８週間前に消散していない
●２４．２回目の受診前の１０日以内に経口抗感染症薬（抗ウイルス薬を含む）を必要とするいずれかの活動性の感染症に罹患している
●２５．スクリーニングの間の活動性の結核（ＴＢ）またはＱｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ－ＴＢ Ｇｏｌｄ試験での陽性結果
●２６．－２日目以前の４週間以内に何らかの生ワクチンを受けている
●２７．ＩＣＦに署名をする前の８週間以内に大手術を受けた、または、治験期間中に大手術の計画がある
●２８．登録して６ヶ月以内にアデノイド摘出術または扁桃摘出術の必要性が考えられる。アデノイド摘出術または扁桃摘出術を予定する場合には、スクリーニング前に行う
●２９．好中球数の絶対数が１．０×１０３未満／μＬである
●３０．ＰＩが免疫抑制療法に適さないと考える病態または正常でない検査所見がある
●２０．タクロリムス、シロリムス、またはプレドニゾロンに対して過敏反応の既往歴を有する
●２１．原発性免疫不全（例えば、共通可変免疫不全症候群）、脾臓摘出術、または感染症に罹患しやすいあらゆる基礎疾患の既往歴のある患者
●２２．帯状疱疹（ＶＺＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、またはエプスタイン－バール・ウイルス（ＥＢＶ）に感染しており、スクリーニング前の少なくとも１２週間に完全に解消されていない
●２３．入院または親世代抗感染症薬による治療を必要とするいずれかの感染症が、２回目の受診の少なくとも８週間前に消散していない
●２４．２回目の受診前の１０日以内に経口抗感染症薬（抗ウイルス薬を含む）を必要とするいずれかの活動性の感染症に罹患している
●２５．スクリーニングの間の活動性の結核（ＴＢ）またはＱｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ－ＴＢ Ｇｏｌｄ試験での陽性結果
●２６．－２日目以前の４週間以内に何らかの生ワクチンを受けている
●２７．ＩＣＦに署名をする前の８週間以内に大手術を受けた、または、治験期間中に大手術の計画がある
●２８．登録して６ヶ月以内にアデノイド摘出術または扁桃摘出術の必要性が考えられる。アデノイド摘出術または扁桃摘出術を予定する場合には、スクリーニング前に行う
●２９．好中球数の絶対数が１．０×１０３未満／μＬである
●３０．ＰＩが免疫抑制療法に適さないと考える病態または正常でない検査所見がある
６．６．６．提案用量
コンストラクト１は、単一のＩＣ注入または単一のＩＣＶ注入で優先的に投与される、またはＩＣ投与が困難である、あるいは潜在的に安全でないことが証明されておれば、限定したＣＳＦ区画内の標的組織へのベクターの直接送達が許容される。頸部穿刺（Ｃ１－Ｃ２）は、脊髄造影法の造影剤投与のために使用する通常の臨床処置であるが、画像支援型後頭下穿刺は、主要な臨床的投与経路として提案されている。これは、非臨床研究で使用する投与経路を模倣しており、そして、ＭＰＳ ＩＩの患者では、Ｃ１－Ｃ２穿刺に関連するリスクを実質的に高めるＣ１－Ｃ２ ＩＴ空間での異常狭窄の発生率が高いので、意図した患者集団でのＣ１－Ｃ２穿刺よりも有利であると考えられる。この手順を行う前に、それぞれの対象者は、治験に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームが検討した領域の磁気共鳴画像（ＭＲＩ）を撮る。ＩＣ注入の実施が安全でないと考えられる場合には、対象者は、ＩＣＶ注入を考慮する。ＩＣＶ注入は、小児及び成人の個体での脳室腹腔短絡術シャント配置のために、そして、最近では、ＣＮＳ薬物投与のために一般的に使用する経路を使用している（Ｄｒａｋｅ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｃｈｉｌｄｓ Ｎｅｒｖ Ｓｙｓｔ １６（１０－１１）：８００－８０４；Ｃｏｈｅｎ－Ｐｆｅｆｆｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ６７：２３－２５；Ｓｌａｖｃ ｅｔ ａｌ．，２０１８，Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ １２４（２０１８）：１８４－１８８）。このプロトコールで提案する画像支援型単一ＩＣＶ注入は、定位脳生検術に匹敵するものであり、新たに出現した高精度ＭＲＩとコンピューター断層撮影（ＣＴ）技術を利用する通常の神経外科的介入にもなる。
コンストラクト１は、単一のＩＣ注入または単一のＩＣＶ注入で優先的に投与される、またはＩＣ投与が困難である、あるいは潜在的に安全でないことが証明されておれば、限定したＣＳＦ区画内の標的組織へのベクターの直接送達が許容される。頸部穿刺（Ｃ１－Ｃ２）は、脊髄造影法の造影剤投与のために使用する通常の臨床処置であるが、画像支援型後頭下穿刺は、主要な臨床的投与経路として提案されている。これは、非臨床研究で使用する投与経路を模倣しており、そして、ＭＰＳ ＩＩの患者では、Ｃ１－Ｃ２穿刺に関連するリスクを実質的に高めるＣ１－Ｃ２ ＩＴ空間での異常狭窄の発生率が高いので、意図した患者集団でのＣ１－Ｃ２穿刺よりも有利であると考えられる。この手順を行う前に、それぞれの対象者は、治験に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームが検討した領域の磁気共鳴画像（ＭＲＩ）を撮る。ＩＣ注入の実施が安全でないと考えられる場合には、対象者は、ＩＣＶ注入を考慮する。ＩＣＶ注入は、小児及び成人の個体での脳室腹腔短絡術シャント配置のために、そして、最近では、ＣＮＳ薬物投与のために一般的に使用する経路を使用している（Ｄｒａｋｅ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｃｈｉｌｄｓ Ｎｅｒｖ Ｓｙｓｔ １６（１０－１１）：８００－８０４；Ｃｏｈｅｎ－Ｐｆｅｆｆｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ６７：２３－２５；Ｓｌａｖｃ ｅｔ ａｌ．，２０１８，Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ １２４（２０１８）：１８４－１８８）。このプロトコールで提案する画像支援型単一ＩＣＶ注入は、定位脳生検術に匹敵するものであり、新たに出現した高精度ＭＲＩとコンピューター断層撮影（ＣＴ）技術を利用する通常の神経外科的介入にもなる。
ＭＰＳ ＩＩＩマウスに対してコンストラクト１を使用して行った薬理学的研究は、ＡＡＶ９ベクターをベースとした治験薬の生体内分布と導入遺伝子発現プロファイルが、ＩＣＶ及びＩＣ経路に匹敵することを示しており、ＩＣ投与が困難であること、または潜在的に安全でないことを証明されれば、投与の代替経路としてのＩＣＶの使用を支持する。ＩＣ及びＩＣＶ手順の詳細については、それぞれの管理マニュアルに概説されている。
投与する治験薬の総体積は、ＣＳＦの総体積（乳幼児の脳では約５０ｍＬ、そして、成人の脳では約１５０ｍＬと推定する）の１０％を超えない。
発達過程の子供で早期に起こる比較的に迅速な脳の成長が故に、コンストラクト１をＩＣまたはＩＣＶで投与する総投与量は、治験対象者のスクリーニングＭＲＩから得た推定脳質量に応じて変化する。対象者のＭＲＩから得た治験対象者の推定脳体積は、表５、セクション５．３．２に示すように、脳質量に変換され、投与する正確な用量を計算するために使用される。
６．６．７．免疫抑制療法
コルチコステロイド
●ベクター投与（１日目、前投与）の朝に、患者に対して、少なくとも３０分間にわたるメチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇ（最大５００ｍｇ）をＩＶで与える。メチルプレドニゾロンは、治験薬の腰椎穿刺及びＩＣまたはＩＣＶ注入の前に投与すべきである。アセトアミノフェン及び抗ヒスタミン剤の前投与は、治験責任医師の裁量で任意に行う。
●第１２週目までにプレドニゾンを中止することを目標として、２日目に経口プレドニゾンを開始する。プレドニゾンの用量は、以下の通りである：
○２日目～第２週の終わりまで：０．５ｍｇ／ｋｇ／日
○第３週及び４週：０．３５ｍｇ／ｋｇ／日
○第５週～８週：０．２ｍｇ／ｋｇ／日
○第９週～１２週：０．１ｍｇ／ｋｇ
○プレドニゾンは、第１２週の後に中止する。プレドニゾンの正確な用量は、一段階増やした臨床上実用的な用量に調整することができる。
コルチコステロイド
●ベクター投与（１日目、前投与）の朝に、患者に対して、少なくとも３０分間にわたるメチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇ（最大５００ｍｇ）をＩＶで与える。メチルプレドニゾロンは、治験薬の腰椎穿刺及びＩＣまたはＩＣＶ注入の前に投与すべきである。アセトアミノフェン及び抗ヒスタミン剤の前投与は、治験責任医師の裁量で任意に行う。
●第１２週目までにプレドニゾンを中止することを目標として、２日目に経口プレドニゾンを開始する。プレドニゾンの用量は、以下の通りである：
○２日目～第２週の終わりまで：０．５ｍｇ／ｋｇ／日
○第３週及び４週：０．３５ｍｇ／ｋｇ／日
○第５週～８週：０．２ｍｇ／ｋｇ／日
○第９週～１２週：０．１ｍｇ／ｋｇ
○プレドニゾンは、第１２週の後に中止する。プレドニゾンの正確な用量は、一段階増やした臨床上実用的な用量に調整することができる。
シロリムス
●ベクター投与の２日前（－２日目）：４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量のシロリムスの負荷用量を投与する。
●－１日目以降：０．５ｍｇ／ｍ２／日のシロリムスを１日２回に分割して投与する、目標血中レベルを１～３ｎｇ／ｍｌとする。
●シロリムスを、第４８週目の受診後に中止する。
●ベクター投与の２日前（－２日目）：４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量のシロリムスの負荷用量を投与する。
●－１日目以降：０．５ｍｇ／ｍ２／日のシロリムスを１日２回に分割して投与する、目標血中レベルを１～３ｎｇ／ｍｌとする。
●シロリムスを、第４８週目の受診後に中止する。
タクロリムス
●２日目（ＩＰ投与の翌日）に、タクロリムスを１日２回、０．０５ｍｇ／ｋｇの用量で開始する、２４週間にわたり２～４ｎｇ／ｍＬの血中レベルを達成するように調整する。
●タクロリムスは第２４週目の受診から８週にわたって漸減する。第２４週に、用量をおよそ５０％まで減少させる。第２８週に、用量をおよそ５０％までさらに減少させる。タクロリムスは、第３２週に中止する。
●タクロリムス及びシロリムスの血中レベルをモニタリングする。
●２日目（ＩＰ投与の翌日）に、タクロリムスを１日２回、０．０５ｍｇ／ｋｇの用量で開始する、２４週間にわたり２～４ｎｇ／ｍＬの血中レベルを達成するように調整する。
●タクロリムスは第２４週目の受診から８週にわたって漸減する。第２４週に、用量をおよそ５０％まで減少させる。第２８週に、用量をおよそ５０％までさらに減少させる。タクロリムスは、第３２週に中止する。
●タクロリムス及びシロリムスの血中レベルをモニタリングする。
用量調整
プレドニゾンの投与は ０．５ｍｇ／ｋｇ／日で開始する、そして、第１２週目の受診まで漸減する。
タクロリムスの用量調整は、最初の２４週間は、全血トラフ濃度を２～４ｎｇ／ｍＬ以内に維持する。第２４週目に、用量を約５０％にまで減らす。第２８週目には、用量を、さらに約５０％減らす。タクロリムスは、第３２週目に中止する。シロリムスの用量調整は、全血トラフ濃度を１～３ｎｇ／ｍＬ以内に維持するようにして行う。用量調整は、臨床薬剤師が行う。対象者は、濃度モニタリングで、さらなる用量調整を行う前に、少なくとも７～１４日間、新しい維持用量を継続するべきである。
トリメトプリム／スルファメトキサゾール（Ｂａｃｔｒｉｍ（商標）；ＢＡＣＴＲＩＭ（商標） ＵＳＰＩ，２０１３）を使用するＰｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ肺炎（ＰＣＰ）の予防は、週に３回の投与（投与スケジュールの例、月曜日、水曜日、金曜日）を、－２日目に５ｍｇ／ｋｇの用量で開始して、第４８週目まで継続する。トリメトプリム／スルファメトキサゾール（ＢＡＣＴＲＩＭ（商標） ＵＳＰＩ、２０１３）の使用に関連するリスクについては、処方情報を参照されたい。サルファアレルギーの患者については、代替薬として、ペンタミジン、ダプソン、アトバコンがある。
ＡＮＣが５００ｍｍ３未満であれば、抗真菌予防薬を始める。治療レジメンは、適切な超専門医と協議して、地域の施設の標準治療を勘案して決定する。
カルシニューリン阻害剤とラパムネとの併用は、カルシニューリン阻害剤誘発血栓性微小血管障害のリスクを高め得る。血栓性微小血管障害（ＴＭＡ）とは、血小板減少症、微小血管新生性溶血性貧血、及び様々な臓器系の関与を特徴とする障害の群である。
これは、重度の血小板減少症（＜３０×１０９／Ｌ）、血液塗抹標本上の破砕赤血球を特徴とする微小血管障害性溶血性貧血、網状赤血球数の増加（＞１２０×１０９／Ｌ）、乳酸デヒドロゲナーゼレベル（ＬＤＨ）の上昇、及び、皮膚及び粘膜出血、衰弱、及び呼吸困難の徴候を呈し得る。治療として、タクロリムスの中止と、血漿交換の開始がある。
連続試験の間にＣＭＶまたはＥＢＶウイルスゲノムの上昇を検出した場合に、ＩＳを低減する、または、抗ウイルス療法を開始するとの決定は、適切な超専門医と協議をして、地域の施設の標準治療を勘案して決定する。
６．６．８．禁止薬物と処置
以下の投薬及び処置は、禁止する：
●ＩＣＦに署名をして４ヶ月以内のＩＴ ＥＲＴは許可しない
●ＩＣＦに署名する前、３０日以内または５半減期以内のいずれか長い期間内、または治験の間（第１０４週目まで）のあらゆる時点での治験薬
●シロリムス及び／またはタクロリムスを服用している間の生ワクチンは避ける
●シロリムス及び／またはタクロリムス投与中は、ＣＹＰ３Ａ４及び／またはＰ－糖タンパク質（ＰｇＰ）の強力な阻害剤（ケトコナゾール、ボリコナゾール、イトラコナゾール、ポサコナゾール、エリスロマイシン、テリスロマイシン、またはクラリスロマイシンなど）、またはＣＹＰ３Ａ４及び／またはＰｇｐの強力な誘導物質（リファンピンまたはリファブチンなど）は避ける
●グレープフルーツジュースは、ＣＹＰ３Ａ酵素を阻害し、その結果、タクロリムス及びシロリムスの全血トラフ濃度が高まる。対象者は、タクロリムス及び／またはシロリムスと一緒にグレープフルーツの摂食、または、グレープフルーツジュースを飲むことは避ける。
以下の投薬及び処置は、禁止する：
●ＩＣＦに署名をして４ヶ月以内のＩＴ ＥＲＴは許可しない
●ＩＣＦに署名する前、３０日以内または５半減期以内のいずれか長い期間内、または治験の間（第１０４週目まで）のあらゆる時点での治験薬
●シロリムス及び／またはタクロリムスを服用している間の生ワクチンは避ける
●シロリムス及び／またはタクロリムス投与中は、ＣＹＰ３Ａ４及び／またはＰ－糖タンパク質（ＰｇＰ）の強力な阻害剤（ケトコナゾール、ボリコナゾール、イトラコナゾール、ポサコナゾール、エリスロマイシン、テリスロマイシン、またはクラリスロマイシンなど）、またはＣＹＰ３Ａ４及び／またはＰｇｐの強力な誘導物質（リファンピンまたはリファブチンなど）は避ける
●グレープフルーツジュースは、ＣＹＰ３Ａ酵素を阻害し、その結果、タクロリムス及びシロリムスの全血トラフ濃度が高まる。対象者は、タクロリムス及び／またはシロリムスと一緒にグレープフルーツの摂食、または、グレープフルーツジュースを飲むことは避ける。
６．６．９．許可する投薬及び処置
対象者は、ＩＶ ＥＲＴの安定したレジメン、ならびに、あらゆる対症療法（例えば、理学療法）を続けることを許可する。地域の病院の標準治療に従って、対象者は、ＭＲＩを行う間の閉所恐怖症を予防する薬を服用すること、そして、腰椎穿刺、ＭＲＩ、及び神経伝導研究（ＡＢＲ、またはＳＳＥＰ）のために全身麻酔を受けることが許可される。
対象者は、ＩＶ ＥＲＴの安定したレジメン、ならびに、あらゆる対症療法（例えば、理学療法）を続けることを許可する。地域の病院の標準治療に従って、対象者は、ＭＲＩを行う間の閉所恐怖症を予防する薬を服用すること、そして、腰椎穿刺、ＭＲＩ、及び神経伝導研究（ＡＢＲ、またはＳＳＥＰ）のために全身麻酔を受けることが許可される。
対象者の安全及び健康の上で必要であると考えられる（例えば、高血圧症の）場合には、地域の標準治療に従って、治験責任医師の裁量で、上記した以外の投薬を行い得る、そして、ＣＲＦの適切なセクションに記録し得る。
６．６．１０．有効性評価
バイオマーカー
●ＣＳＦ：ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ
●血漿：ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ。毎週のＩＶ ＥＲＴで治療した対象者については、ＥＲＴ注入して少なくとも９６時間後から次の注入の開始までと定義するトラフでの血漿バイオマーカーを採取する。
●白血球Ｉ２Ｓ酵素活性。毎週のＩＶ ＥＲＴで治療した対象者については、ＥＲＴ注入して少なくとも９６時間後から次の注入の開始までと定義するトラフでの全血を採取する。
●尿：ＧＡＧ。毎週のＩＶ ＥＲＴで治療した対象者については、ＥＲＴ注入して少なくとも９６時間後から次の注入の開始までと定義するトラフでの尿中ＧＡＧを採取する。
バイオマーカー
●ＣＳＦ：ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ
●血漿：ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ。毎週のＩＶ ＥＲＴで治療した対象者については、ＥＲＴ注入して少なくとも９６時間後から次の注入の開始までと定義するトラフでの血漿バイオマーカーを採取する。
●白血球Ｉ２Ｓ酵素活性。毎週のＩＶ ＥＲＴで治療した対象者については、ＥＲＴ注入して少なくとも９６時間後から次の注入の開始までと定義するトラフでの全血を採取する。
●尿：ＧＡＧ。毎週のＩＶ ＥＲＴで治療した対象者については、ＥＲＴ注入して少なくとも９６時間後から次の注入の開始までと定義するトラフでの尿中ＧＡＧを採取する。
認知、行動、及び適応機能の神経発達パラメーター：
●Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ）またはＫａｕｆｍａｎ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｂａｔｔｅｒｙ ｆｏｒ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＫＡＢＣ－ＩＩ）
●Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｘｐａｎｄｅｄ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ Ｆｏｒｍ （ＶＡＢＳ－ＩＩ）
●治験に参加している間、対象者の標準治療の一部として実施した神経認知評価または適応評価も、施設と協議した後に、治験スポンサーの決定にしたがって採取し得る。
●Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ）またはＫａｕｆｍａｎ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｂａｔｔｅｒｙ ｆｏｒ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＫＡＢＣ－ＩＩ）
●Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｘｐａｎｄｅｄ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ Ｆｏｒｍ （ＶＡＢＳ－ＩＩ）
●治験に参加している間、対象者の標準治療の一部として実施した神経認知評価または適応評価も、施設と協議した後に、治験スポンサーの決定にしたがって採取し得る。
画像評価
●脳のＭＲＩを、ある特定の受診時に行う。推定糸球体濾過速度（ｅＧＦＲ）は、ガドリニウムを使用するスクリーニングＭＲＩの前に文書記録しなくてはならない。治験責任医師は、ｅＧＦＲが、３０ｍＬ未満／分／１．７３ｍ２でああれば、スクリーニングＭＲＩを行う前に、メディカルモニターと相談しなくてはらない。
●腹部の超音波検査を、ある特定の受診時に行って、鎖骨中央線での頭尾方向の肝臓直径を確認し（Ｋｒａｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｊ Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ Ｍｅｄ ２２：１１５５－１１６１）、扁長楕円体式（０．５２×長さ×前後方向の寸法×幅）を使用して、脾臓の体積を計算する。
●２－Ｄ心エコーを、ある特定の受診時に行って、弁膜症及び左室心筋重量係数を評価する。
●聴覚能力の変化は、行動聴力試験及び耳音響放射試験で測定する。行動聴力の測定が無理な場合には、ＡＢＲ試験を行う。聴覚能力は、特定の受診時に評価する。治験責任医師が臨床的に必要と判断した場合には、第２４週目の受診時でのさらなる評価が許可される。
●ＰｅｄｓＱＬを使用したＱＯＬ評価
●睡眠評価
●疾患の臨床評価
●疾患の介護者評価
●ＡＤＬ
●病気の負担
●脳のＭＲＩを、ある特定の受診時に行う。推定糸球体濾過速度（ｅＧＦＲ）は、ガドリニウムを使用するスクリーニングＭＲＩの前に文書記録しなくてはならない。治験責任医師は、ｅＧＦＲが、３０ｍＬ未満／分／１．７３ｍ２でああれば、スクリーニングＭＲＩを行う前に、メディカルモニターと相談しなくてはらない。
●腹部の超音波検査を、ある特定の受診時に行って、鎖骨中央線での頭尾方向の肝臓直径を確認し（Ｋｒａｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｊ Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ Ｍｅｄ ２２：１１５５－１１６１）、扁長楕円体式（０．５２×長さ×前後方向の寸法×幅）を使用して、脾臓の体積を計算する。
●２－Ｄ心エコーを、ある特定の受診時に行って、弁膜症及び左室心筋重量係数を評価する。
●聴覚能力の変化は、行動聴力試験及び耳音響放射試験で測定する。行動聴力の測定が無理な場合には、ＡＢＲ試験を行う。聴覚能力は、特定の受診時に評価する。治験責任医師が臨床的に必要と判断した場合には、第２４週目の受診時でのさらなる評価が許可される。
●ＰｅｄｓＱＬを使用したＱＯＬ評価
●睡眠評価
●疾患の臨床評価
●疾患の介護者評価
●ＡＤＬ
●病気の負担
６．６．１１．臨床検査
以下のＣＳＦ安全性検査、及び抗体試験で評価する：
●ＣＳＦ炎症のマーカー：ＣＳＦ圧力、赤血球細胞数、差異が認められるＷＢＣ計数、総タンパク質、及びグルコース
●免疫応答モニタリング：ＡＡＶ９に対する中和抗体、及びＩ２Ｓに対する結合抗体
●ベクター濃度（ｑＰＣＲ）：コンストラクト１濃度
以下のＣＳＦ安全性検査、及び抗体試験で評価する：
●ＣＳＦ炎症のマーカー：ＣＳＦ圧力、赤血球細胞数、差異が認められるＷＢＣ計数、総タンパク質、及びグルコース
●免疫応答モニタリング：ＡＡＶ９に対する中和抗体、及びＩ２Ｓに対する結合抗体
●ベクター濃度（ｑＰＣＲ）：コンストラクト１濃度
以下の臨床検査所見を評価する：
●化学：グルコース、血中尿素窒素、クレアチニン、ナトリウム、カリウム、塩化物、二酸化炭素、カルシウム、マグネシウム、リン、総タンパク質、アルブミン、総ビリルビン、直接ビリルビン、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、ＡＬＴ、ＡＳＴ、ガンマグルタミルトランスフェラーゼ、及びクレアチンキナーゼ
●脂質パネル：総コレステロール、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）コレステロール、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）コレステロール、及びトリグリセリド
●血液学：差次ＣＢＣ、及び、血小板の計数、例えば、ヘマトクリット、ヘモグロビン、赤血球（ＲＢＣ）、ＷＢＣ、血小板、好中球、リンパ球、単球、好酸球、及び好塩基球の計数。
●凝固：プロトロンビン時間（ＰＴ）、及び部分トロンボプラスチン時間（ＰＴＴ）。
●尿検査：グルコース、ケトン、タンパク質、及び血液に関する尿試験紙検査（検査の妥当性を保証する場合には、顕微鏡評価を行う）
●免疫原性測定：ＡＡＶ９に対する中和抗体、及びＩ２Ｓに対する結合抗体；ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ：ＡＡＶ９及びＩ２Ｓに対するＴ細胞応答；ＡＡＶ及びＩ２Ｓ特異的制御性Ｔ細胞に対するフローサイトメトリー
●ベクター濃度（ｑＰＣＲ）：血清及び尿でのコンストラクト１の濃度
●血清学及びゲノム検出のためのウイルス検査：
○ＶＺＶ：Ａｂ力価（ベースライン）
○ＥＢＶ及びＣＭＶ：ウイルスゲノム（ベースライン及び連続的）ＰＣＲ検査
●Ｂ型肝炎表面抗原、Ｂ型肝炎コア抗体、抗Ｃ型肝炎、及びＨＩＶ：スクリーニング目的に限る
●Ｑｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ－Ｇｏｌｄ＿ＴＢ Ｐｌｕｓ：スクリーニング目的に限る
●血漿バイオマーカー
●尿バイオマーカー
●化学：グルコース、血中尿素窒素、クレアチニン、ナトリウム、カリウム、塩化物、二酸化炭素、カルシウム、マグネシウム、リン、総タンパク質、アルブミン、総ビリルビン、直接ビリルビン、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）、ＡＬＴ、ＡＳＴ、ガンマグルタミルトランスフェラーゼ、及びクレアチンキナーゼ
●脂質パネル：総コレステロール、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）コレステロール、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）コレステロール、及びトリグリセリド
●血液学：差次ＣＢＣ、及び、血小板の計数、例えば、ヘマトクリット、ヘモグロビン、赤血球（ＲＢＣ）、ＷＢＣ、血小板、好中球、リンパ球、単球、好酸球、及び好塩基球の計数。
●凝固：プロトロンビン時間（ＰＴ）、及び部分トロンボプラスチン時間（ＰＴＴ）。
●尿検査：グルコース、ケトン、タンパク質、及び血液に関する尿試験紙検査（検査の妥当性を保証する場合には、顕微鏡評価を行う）
●免疫原性測定：ＡＡＶ９に対する中和抗体、及びＩ２Ｓに対する結合抗体；ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ：ＡＡＶ９及びＩ２Ｓに対するＴ細胞応答；ＡＡＶ及びＩ２Ｓ特異的制御性Ｔ細胞に対するフローサイトメトリー
●ベクター濃度（ｑＰＣＲ）：血清及び尿でのコンストラクト１の濃度
●血清学及びゲノム検出のためのウイルス検査：
○ＶＺＶ：Ａｂ力価（ベースライン）
○ＥＢＶ及びＣＭＶ：ウイルスゲノム（ベースライン及び連続的）ＰＣＲ検査
●Ｂ型肝炎表面抗原、Ｂ型肝炎コア抗体、抗Ｃ型肝炎、及びＨＩＶ：スクリーニング目的に限る
●Ｑｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ－Ｇｏｌｄ＿ＴＢ Ｐｌｕｓ：スクリーニング目的に限る
●血漿バイオマーカー
●尿バイオマーカー
適切な臨床検討を確実にするために、検査結果が適時にＰＩに提供される。ＰＩは、すべての検査報告書の確認と署名を行う責任を負う。
６．６．１２．バイタルサイン及び心電図
バイタルサイン（収縮期／拡張期ＢＰ、脈拍数、体温、呼吸数）、頭囲、身長、体重、及びＥＣＧの評価は、受診時に取得／実施する。
バイタルサイン（収縮期／拡張期ＢＰ、脈拍数、体温、呼吸数）、頭囲、身長、体重、及びＥＣＧの評価は、受診時に取得／実施する。
６．６．１３．神経学的評価
神経学的評価は、次を含む：
●意識レベル
●脳神経検査
●運動機能
●感覚機能
●協調運動と歩行
神経学的評価は、次を含む：
●意識レベル
●脳神経検査
●運動機能
●感覚機能
●協調運動と歩行
ＳＳＥＰ試験も、選択した時点で実行する。ＳＳＥＰ試験のプロトコール要件の詳細については、ＳＳＥＰマニュアルを参照されたい。
６．７ 実施例７：ＭＰＳ ＩＩマウスモデル試験
ＭＰＳ ＩＩまたはハンター症候群は、イズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）の欠損に起因する、組織でのグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）の蓄積をもたらす。重度のＭＰＳ ＩＩは、組換えＩ２Ｓ酵素を使用する静脈内投与酵素補充療法で対応できない不可逆的な神経認知機能低下と行動症状をもたらす。コンストラクト１は、ヒトイズロン酸－２－スルファターゼ発現カセット（ＡＡＶ９．ＣＢ７．ｈＩＤＳ）を含む組換えアデノ随伴ウイルス血清型９キャプシド（ＡＡＶ９）である。ＭＰＳ ＩＩマウスモデルでは、脳脊髄液（ＣＳＦ）に投与したコンストラクト１は、用量依存的なＩ２Ｓ活性、ＧＡＧレベルの低下、中枢神経系での貯蔵病態の改善、及び神経行動機能の改善を実証した。ベクター分布、及びＧＡＧレベルの低下が末梢臓器で認められ、また肝臓のサイズ及び重量の正常化も認められた。
ＭＰＳ ＩＩまたはハンター症候群は、イズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）の欠損に起因する、組織でのグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）の蓄積をもたらす。重度のＭＰＳ ＩＩは、組換えＩ２Ｓ酵素を使用する静脈内投与酵素補充療法で対応できない不可逆的な神経認知機能低下と行動症状をもたらす。コンストラクト１は、ヒトイズロン酸－２－スルファターゼ発現カセット（ＡＡＶ９．ＣＢ７．ｈＩＤＳ）を含む組換えアデノ随伴ウイルス血清型９キャプシド（ＡＡＶ９）である。ＭＰＳ ＩＩマウスモデルでは、脳脊髄液（ＣＳＦ）に投与したコンストラクト１は、用量依存的なＩ２Ｓ活性、ＧＡＧレベルの低下、中枢神経系での貯蔵病態の改善、及び神経行動機能の改善を実証した。ベクター分布、及びＧＡＧレベルの低下が末梢臓器で認められ、また肝臓のサイズ及び重量の正常化も認められた。
６．８ 実施例８：第１／２相、ファーストインヒューマン、多施設、非盲検、用量漸増試験
ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）は、リソソーム酵素イズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）の欠損に起因する稀少なＸ連鎖劣勢疾患であり、ヘパリン硫酸（ＨＳ）などのグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）の蓄積をもたらし、最終的には、細胞、組織、及び臓器の機能障害をもたらす。この疾患の重症型では、初期発育の重要な段階には達し得るが、発達の遅延が、１８～２４ヶ月齢で明らかになる。ＭＰＳ ＩＩの患者は、全身酵素補充療法が利用可能であるにもかかわらず、認知発達障害などの中枢神経系（ＣＮＳ）での疾患の症状には対応できないなど、依然として大きな困難を抱えている。ＭＰＳ ＩＩの神経学的症状に対応する、そして、認知機能低下を予防または安定化させるための特定の治療は、依然として課題が残っている重要な医療ニーズである。ＭＰＳ ＩＩ患者でのＩ２Ｓ酵素活性の主要なバイオマーカーとして、その基質ＨＳがあり、これは、障害の神経認知症状と相関することが示されている。
ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）は、リソソーム酵素イズロン酸－２－スルファターゼ（Ｉ２Ｓ）の欠損に起因する稀少なＸ連鎖劣勢疾患であり、ヘパリン硫酸（ＨＳ）などのグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）の蓄積をもたらし、最終的には、細胞、組織、及び臓器の機能障害をもたらす。この疾患の重症型では、初期発育の重要な段階には達し得るが、発達の遅延が、１８～２４ヶ月齢で明らかになる。ＭＰＳ ＩＩの患者は、全身酵素補充療法が利用可能であるにもかかわらず、認知発達障害などの中枢神経系（ＣＮＳ）での疾患の症状には対応できないなど、依然として大きな困難を抱えている。ＭＰＳ ＩＩの神経学的症状に対応する、そして、認知機能低下を予防または安定化させるための特定の治療は、依然として課題が残っている重要な医療ニーズである。ＭＰＳ ＩＩ患者でのＩ２Ｓ酵素活性の主要なバイオマーカーとして、その基質ＨＳがあり、これは、障害の神経認知症状と相関することが示されている。
進行中の第１／２相、ファーストインヒューマン、多施設、非盲検、用量漸増試験では、コンストラクト１を、４ヶ月齢～５歳の重度ＭＰＳ ＩＩの参加者の大槽内に、単回大槽内注射をして、１度だけ注射をして投与した。コンストラクト１は、ＡＡＶ９ベクターを使用してＩ２Ｓ酵素をコードする遺伝子をＣＮＳに直接に送達するようにデザインしており、分泌したＩ２Ｓが血液脳関門を越えて恒久的に供給源を提供することで、ＣＮＳ全体の細胞の長期的なクロスコレクションを可能ならしめることを目的としている。
患者は、以下の採用基準のいずれかを満たしている必要がある：ａ）ＭＰＳ ＩＩの確定診断、及び神経認知試験スコアが７７以下であること（ＢａｙｌｅｙまたはＫａｕｆｍａｎ）；ｂ）ＭＰＳ ＩＩの確定診断、及び３～３６ヶ月の間隔をあけて実施した連続神経認知試験での標準偏差が１以上低下していること（ＢａｙｌｅｙまたはＫａｕｆｍａｎ）；ｃ）対象と同じＩＤＳ変異を有しており、かつ、遺伝学者が重度のＭＰＳ ＩＩを受け継いでいると意見している、重度のＭＰＳ ＩＩであると臨床的に診断を受けた血縁者；またはｄ）遺伝学者が、常に神経障害の表現型をもたらすことが知られていると意見しており、かつ、臨床医が、重症型のＭＰＳ ＩＩを有すると意見している、ＩＤＳの確定突然変異（複数可）。患者は、４ヶ月以上、５歳未満でなければならない。
除外基準は：大槽内注射、脳室内注射、または腰椎穿刺に対して禁忌である患者；免疫抑制療法に対して禁忌；ＭＰＳ ＩＩまたは神経精神状態の診断に起因しない神経認知障害；対象の適切な投薬に影響を与え得る（脳）心室シャントを有する患者；造血幹細胞移植を受けた対象；ＡＡＶをベースとした遺伝子治療製品で従前に治療を受けた対象；ＩＣＦに署名してから４ヶ月以内にくも膜下腔内（ＩＴ）投与を介してＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標）を投与した対象、またはＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標）に対して深刻な過敏反応を経験した対象；ＩＣＦに署名する前に、第一日目の３０日以内または５半減期以内のうち、いずれか長い期間内に治験薬の投与を受けた対象；対象がギルバート症候群の既往歴が無ければ、スクリーニングで、血小板数＜１００，０００／マイクロリットル（μＬ）、絶対好中球数＜１．３×１０３／μＬ、もしくはアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）またはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ） 正常値上限（ＵＬＮ）の３倍超、またはＵＬＮの１．５倍超の総ビリルビンを有する対象、である。
評価には、第１０４週目までの安全性及び忍容性；ＣＳＦ、血漿、及び尿バイオマーカー；免疫原性；神経発達尺度（Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、またはＫａｕｆｍａｎ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｂａｔｔｅｒｙ ｆｏｒ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ，及びＶｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ）；聴力測定；脳、肝臓、及び脾臓の画像化；臨床医及び患者が報告した転帰尺度が含められた。
合計８名の患者に対して、脳質量１グラムあたり１．３×１０１０ゲノムコピー（ＧＣ／ｇ）（コホート１）または脳質量１グラムあたり６．５×１０１０ゲノムコピー（ＧＣ／ｇ）（コホート２）のいずれかを投与した。患者の年齢は、５ヶ月齢から５９ヶ月齢の範囲である。表９に示したように、少なくとも３名の患者が、コホート１で、６４、７８、及び１０４週間の追跡期間の免疫抑制レジメン、及び、少なくとも１名の患者が、コホート２で５６週間の追跡期間の免疫抑制レジメンを完了した。患者では、３つのミスセンス、２つの遺伝子反転、及び１つのフレームシフトの変異が認められた。第１／２相試験のコホート１とコホート２では、８名の患者に、５ヶ月齢～５９月齢で大槽内投与し、３名の患者には、脳質量１グラムあたり１．３×１０１０ゲノムコピー（ＧＣ／ｇ）を投与し、及び４名の患者には、脳質量１グラムあたり６．５×１０１０ゲノムコピー（ＧＣ／ｇ）の用量を投与した。第１／２相試験のコホート３では、脳質量１グラムあたり２．０×１０１１ゲノムコピー（ＧＣ／ｇ）を投与した患者のコホート３も含む。一部の事例では、第１／２相試験のコホート３は、脳質量１グラムあたり２．９×１０１１ゲノムコピー（ＧＣ／ｇ）を投与した患者を含む別のコホートも含むことができる。脳質量１グラムあたり２．０×１０１１ゲノムコピー（ＧＣ／ｇ）の数を、ポリＡ特異的ＰＣＲアッセイに基づいて決定し、及び、脳質量の重量は、ＭＲＩによって決定した。２．９×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量の用量のゲノムコピー数は、導入遺伝子特異的ＰＣＲアッセイに基づいて決定し、及び、脳質量の重量は、ＭＲＩによって決定した。コンストラクト１の投与は、コホート１及びコホート２の６名のすべての患者で忍容性が良好であり、薬物関連の重篤な有害事象（ＳＡＥ）は報告されていない。プロトコールに従って、患者は４８週間の免疫抑制レジメンを行って、免疫抑制レジメンを完了した４名の患者（コホート１から３名とコホート２から１名）の免疫介在反応の可能性を最小限にする。
合計１３名の患者が、第１／２相試験に参加した（図２２）。従前の研究では、コンストラクト１をＩＣ投与した後に、非ヒト霊長類において広範なＣＮＳ及び全身性生体内分布が認められた（図２３）。コホート１の患者（３名の患者）には、脳質量１グラムあたり１．３×１０１０ゲノムコピー（ＧＣ／ｇ）のコンストラクト１を投与し、コホート２の患者（７名の患者）には、６．５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量のコンストラクト１を投与し、及び、コホート３の患者（３名の患者）には、２．９×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量のコンストラクト１を投与した（コホート３は、以前は、ポリＡ特異的ＰＣＲアッセイに基づいて得た、２．０×ｌ０１０ＧＣ／ｇ脳質量として報告されており、この数値は、導入遺伝子特異的ＰＣＲアッセイを使用して得た２．９×ｌ０１１ＧＣ／ｇ脳質量と同等である）。参加者の投与年齢は、５ヶ月齢～５９ヶ月齢の範囲であった。重篤なＭＰＳ ＩＩ治験参加者でのＩＤＳ変異には、ミスセンス、遺伝子反転、及びフレームシフトがあった。追跡は、コホート１の参加者では１０４週間、コホート２の参加者では８～１０４週間、及び、コホート３の参加者では８～３６週間かけて行った。
免疫抑制は、次の通り、すべての適格な参加者（ｎ＝８）に関して（例えば、５２週間後に）中止した：３名の参加者が、コホート１において免疫抑制レジメンを完了した；５名の参加者が、コホート２において免疫抑制レジメンを完了した（２名は実施中である）；及び、コホート３の３名の参加者は、免疫抑制レジメンを実施中である。ＥＲＴ（ＩＶ）の状態は次の通りでああった：コホート１では、１名が毎週、及び２名が中止であった：コホート２では、４名が毎週、１名が中止、及び、２名が未実施であった；及び、コホート３では、３名が毎週であった。結果は、治験に関連するＳＡＥが同定されていないことを示した。ＣＳＦ ＨＳレベルは、異なる時点で決定しており、及び、結果は、８週目及び２４週目に、コホート１～３において用量依存的な減少を示した（図２４Ａ～２４Ｂ）。さらに、３つのコホートすべての参加者の大多数は、利用可能な最後の時点でＣＳＦ ＨＳの低下を示した。ＨＳ Ｄ２Ｓ６二糖レベルを、異なる時点で決定し、及び、結果は、８週目及び２４週目に、コホート１～３において用量依存的な減少を示し、コホート３の参加者は正常レベルに近づいていた（図２５Ａ～２５Ｂ）。結果は、３つのコホートすべての参加者の大多数が、利用可能な最後の時点でＣＳＦ Ｄ２Ｓ６の低下を示したことを実証した。さらに、対象由来の試料は、コンストラクト１の投与後のコホート２及び３の参加者で測定可能なＣＳＦ Ｉ２Ｓタンパク質濃度を示した（範囲８３４～４８３０ｐｇ／ｍＬ）。
患者に投与して１０４週間の安全性、忍容性、及び有効性について評価した。評価は、ＣＳＦ、血漿、及び尿でのバイオマーカー；神経発達スケール（Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ － ＢＳＩＤ、Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ － ＶＡＢＳ）；聴力検査；脳、肝臓、及び脾臓の画像化；免疫応答アッセイ；及び、臨床医及び患者が報告した転帰尺度を含む。参加者は、ＢＳＩＤ－ＩＩＩ認知、表現言語及び受容言語を使用して評価を受けており、ならびに微細運動及び粗大運動サブテスト（例えば、図２６Ａ及び図２７Ａ（それぞれ、コホート１及びコホート２）は、ＢＳＩＤ－ＩＩＩ認知サブテストのためのデータを示しており、図２６Ｂ及び図２７Ｂ（それぞれ、コホート１及びコホート２）は、表現言語サブテストのためのデータを示しており、及び、図２６Ｃ及び図２７Ｃ（それぞれ、コホート１及びコホート２）は、微細運動サブテストに関するデータを示す）。コホート１では、ベースラインで認知機能が－２超の標準偏差（ＳＤ）である３名の参加者が、認知、表現言語、及び微細運動サブテストの最後の評価で２ＳＤ以内にとどまっており、別の参加者が、表現言語サブテストで、技能を習得したことが認められた。コホート２では、２名の参加者の認知（２～３ヶ月のＡＥｑ延長）、及び別の参加者の表現言語（５ヶ月のＡＥｑ延長）で最小限の機能習得を実証した。また、参加者は、Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ－ＩＩ （ＶＡＢＳ－ＩＩ）を使用して、不適応行動（日常の機能を妨げる望ましくない行動）、及び排泄スキルについても試験した。不適応行動とトイレトレーニングの課題は、神経変性に関連している。結果は、４名の参加者（ベースラインで＜－２ＳＤの認知機能を有する３名）で、不適応行動の減少を示し（図２８Ａ）、及び、４名の参加者（ベースラインで＜－２ＳＤの認知機能を有する２名）が排泄スキルの改善を示した（図２８Ｂ）。さらに、参加者は、睡眠呼吸サブテストを受け、１１名の参加者のうちの１０名（＜－２ＳＤの認知機能を有する５名）が、コンストラクト１を投与した後に、睡眠呼吸の改善を示したことが認められた。睡眠呼吸サブテストは、気道異常、呼吸メカニズム、及びＣＮＳの関与が原因である可能性のあるいびきや睡眠時の呼吸困難など、子供の睡眠障害を検出する。全身効果を分析するために、血漿Ｉ２Ｓタンパク質濃度と尿中総ＧＡＧを、異なる時点で決定した。血漿中Ｉ２Ｓタンパク質濃度の増加が、コンストラクト１を投与した後の参加者の大多数において実証された（図２９Ａ）。また、尿中ＧＡＧレベルは、ＥＲＴ処理とは別に、コンストラクト１の全身効果の証拠も示した（図２９Ｂ）。例えば、ＥＲＴ未処置参加者の場合、利用可能な最後の時点まで、２名の参加者の１名の尿中ＧＡＧで顕著な減少が示した；ＥＲＴの中止については、ＥＲＴ中止後の尿中総ＧＡＧは、ＥＲＴ中止前の尿中総ＧＡＧと比較的に一致していた；及び、ＥＲＴ継続のために、尿中総ＧＡＧは、利用可能な最後の時点で、すべての参加者において減少していた（図２９Ｂ）。
第１／２相試験の一次転帰は、２４週間の時間枠で、治療関連の有害事象及び重篤な有害事象を有する患者の数を決定するための安全対策を含む。
二次転帰は、１０４週間の時間枠で、治療関連の有害事象及び重篤な有害事象を有する患者の数を決定するための安全対策；ベースライン、２週目、４週目、８週目、２４週目、４８週目、５６週目、１０４週目に測定したグリコサミノグリカンレベル（ｎｇ／ｍＬ）のベースラインからの変化を決定するバイオマーカー測定；ベースライン、１週目、２週目、４週目、８週目、２４週目、３２週目、４８週目、５６週目、１０４週目に測定したイズロン酸－２－スルファターゼ活性のベースラインからの変化を決定するためのバイオマーカー測定；Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ， ３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ）またはＫａｕｆｍａｎ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｂａｔｔｅｒｙ ｆｏｒ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ， ２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＫＡＢＣ－ＩＩ）で測定した、認知、行動、及び適応機能の神経発達パラメーターのベースラインからの変化を含む。Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ （転帰＃７）での平均年齢同等性スコアに基づいて、子供は、ベースライン、４８週目、７８週目、１０４週目で、ＢＳＩＤ－ＩＩＩ（３６ヶ月未満または４２ヶ月以下のスコアで、ＫＡＢＣ－ＩＩを完了することができない場合）、またはＫＡＢＣ－ＩＩ（３６ヶ月以上のスコアの場合）のいずれかを使用して評価する；Ｍｕｌｌｅｎ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｅａｒｌｙ Ｌｅａｒｎｉｎｇ（ＭＳＥＬ）で、ベースライン、４８週目、７８週目、１０４週目に測定した認知、行動、適応機能の神経発達パラメーターのベースラインからの変化；及び、ベースライン、第４８週、第７８週、第１０４週に測定するＶｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ， ２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＶＡＢＳ－ＩＩ），Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ Ｆｏｒｍによって測定した認知、行動、適応機能の神経発達パラメーターのベースラインからの変化。
データ及び安全性の概要：コンストラクト１は、８名の患者に認められたような薬物関連の重篤な有害事象（ＳＡＥ）も無く十分に忍容される。投与した後の追跡の期間は４週間から２年の範囲である。４８週間の追跡に達した４名の患者全員が、研究プロトコールに従って免疫抑制レジメンを完了した。患者のうちの６名は、登録時に、毎週、静脈内酵素補充療法（ＥＲＴ）を受けていた；これらの患者のうちの２名は、その後、ＥＲＴを中止した。
ＣＮＳバイオマーカーデータ：ＭＰＳ ＩＩ患者では、大量のＨＳが、ＣＮＳに蓄積して、神経認知低下と密接に相関する。コホート１及びコホート２の患者由来のバイオマーカーデータは、コンストラクト１の１回の投与後のＣＮＳでのＩ２Ｓ酵素活性のシグナルを示した。ＨＳの成分であるヘパラン硫酸（ＨＳ）及びＤ２Ｓ６は、Ｉ２Ｓ酵素活性の重要なバイオマーカーであるグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）であり、ベースライン時、及びコンストラクト１を投与した後に脳脊髄液（ＣＳＦ）で測定した。Ｉ２Ｓ酵素は、リソソームのＨＳから硫酸塩を切断し、及び、Ｉ２Ｓの非存在が故に、完全に硫酸化したＤ２Ｓ６の長鎖がＨＳに蓄積する。そのため、Ｄ２Ｓ６の定量的測定は、Ｉ２Ｓ酵素活性レベルを反映している。Ｉ２Ｓ６及びＤ２Ｓ６は、図７に例示するように、ヘパリナーゼ消化の産物である。ＨＳ及びＤ２Ｓ６のレベルの上昇は、ＭＰＳ ＩＩの神経障害表現型と密接に相関している。コホート１及び２の最初の６名の患者のＨＳレベルは、コンストラクト１を投与してから２年後まで、ＣＳＦの一貫した減少を示し、ベースラインからの中央値は、８週目で３０．３％、及び、それぞれの患者に利用可能な最後の時点で３５．８％減少した（ｐ値は、ウィルコクソンの符号順位検定で得た０．０３である）（図８を参照されたい）。同様に、これらの患者は、コンストラクト１を投与して２年後までＤ２Ｓ６の一貫した減少を示し、ベースラインからの中央値は８週目で４４．２％、及び、それぞれの患者が利用可能な最後の時点で３９．２％減少した。加えて、ＣＳＦでのＩ２Ｓ酵素濃度は、投与前にすべての患者で検出できなかったが、コンストラクト１を投与した後のコホート２の患者（１１７０～１９４０ｐｇ／ｍＬの範囲）で測定可能であった（図８を参照されたい）。コホート１及びコホート２の患者でのＣＳＦ ＨＳ二糖Ｄ２Ｓ６の変化を決定した（図９を参照されたい）。８週目（Ｎ＝６）のベースラインからの変化の中央値は、４４．２％であり、ｐ値は０．０３であり、及び、ウィルコクソンの符号順位検定によって決定した最後に利用可能な時点（Ｎ＝６）でのベースラインからの変化の中央値は３９．２％であった（図９を参照されたい）。Ｄ２Ｓ６二糖は、重症患者、弱毒化患者、及び正常患者を明確に区別した；治験患者では、ＣＳＦ Ｄ２Ｓ６を弱毒化範囲に向けて一貫した減少を示した。
神経認知発達データ：コホート１及び２の患者は、コンストラクト１を投与して２年後まで継続した神経認知発達を示した。Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ１によると、コホート１及び２の５名の患者は、コンストラクト１を投与して以来、少なくとも６ヶ月の追跡を続け、それらの５名の患者のうちの３名は、正常範囲内で神経認知発達を示し続けた（図１０Ａ～１０Ｃを参照されたい）。さらに、ＤＱ及びＡＥｑを使用したコンストラクト１のファーストインヒューマン（ＦＩＨ）試験から得たデータ解釈は一貫していることが示されており（図１０Ｂ～１０Ｃ）、このことは、発達低下の発症前に治療を開始した患者の７５％が、６ヶ月超の追跡時点で正常の－２ＳＤ超の神経認知発達を示し続けていることを示しており、ベースライン時に認知的に低下した患者は比較的安定しており、表現及び受容言語技能を習得し続けたことを実証している。簡潔に説明すると、モックデータは、正常発達状態、正常から１ＳＤ（１標準偏差）未満及び１ＳＤ超の発達状態、及び正常から２ＳＤ（２標準偏差）未満及び２ＳＤ超の発達状態にある、４ヶ月齢～４２ヶ月齢の対象のＢＳＩＤ－ＩＩＩマニュアルの生の標準スコア、標準、及びＡＥｑスコアから生成する。生のスコア、ＡＥｑ、及びＤＱは、平均スケールスコアに対応するように導き出されており、平均から１及び２ＳＤである。スコアを、正規分布の範囲を近似させるために、二次回帰線または線形回帰線にあてはめた。次に、認知領域のＢＳＩＤ－ＩＩＩマニュアルのデータを使用して、あてはめた±１ＳＤ及び±２ＳＤ線をコンストラクト１の長手方向ＢＳＩＤ－ＩＩＩデータに適用して、経時的な変化を追跡し、治療効果を評価した。２名の患者が、ベースラインでの神経認知発達の顕著な遅延をもってして治験に参加した。コンストラクト１を投与した後に、これらの患者の１名は進行性の神経認知発達を示し、両方の患者は、Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓに基づいて表現力と受容力の言語技能を獲得し続けた。継続的な言語及び／または運動技能の獲得は、６ヶ月を超える追跡期間を設けたすべての患者において認められた（図１１Ａ～１１Ｄを参照されたい）。
全身バイオマーカーデータ及び臨床有効性：コホート１及び２の患者は、コンストラクト１を投与した後の血漿及び尿でのＩ２Ｓ酵素活性の証拠を実証した。６名の患者のうちの５名は、経時的に血漿でのＩ２Ｓ酵素濃度レベルの増加を示した（図１２を参照されたい）。コンストラクト１を投与した８名の患者のうち６名は、治験への登録時にＥＲＴを受けていた。これらの患者のうちの６名全員が、コンストラクト１を投与して２年後まで尿中の総ＧＡＧレベルの低下を示した（図１３を参照されたい）。特筆すべきことに、ＥＲＴ未処置であったコホート２の２名の患者は、コンストラクト１を投与した後の尿中総ＧＡＧレベルの急速な低下を示した（図１４を参照されたい）。ＥＲＴを受けたことのない１名の患者は、コンストラクト１を受けて２４週間後には、肝臓と脾臓の寸法の明確な減少を示した（表１０を基準されたい）。肝臓及び脾臓の寸法は、超音波を使用して測定することができる（図１５を参照されたい）。ＥＲＴ未処置の患者６での肝臓直径（１０％）及び脾臓体積（７７％）の減少は、コンストラクト１を投与して２４週間後に腹部超音波によって認められた（表１０を参照されたい）。
結論：コンストラクト１は、１回だけ大槽内に投与した後のＭＰＳ ＩＩ患者において良好に忍容される（８名の患者は、コンストラクト１に関連するＳＡＥを示さなかった）；プロトコールに従って４名の患者で免疫抑制を中止した；コンストラクト１による治療は、ＣＳＦでのＨＳの一貫した減少が２年後まで認められたので、ＭＰＳ ＩＩにおけるＩ２Ｓ酵素活性の重要なバイオマーカーであるヘパラン硫酸のＣＳＦレベルの一貫した持続的な低下をもたらした；ＣＳＦ Ｉ２Ｓ酵素濃度は、コホート２の全患者で測定可能であった；継続的な認知発達は、６ヶ月超の追跡を行う５名のうちの４名の患者で認められた：継続的な言語及び／または運動技能の習得は、６ヶ月超の追跡を受けた患者で認められた；認知及び／または言語技能の継続的な習得は、投与前に認知遅延のあった患者で認められた；血漿Ｉ２Ｓ酵素レベルは、６名のうちの５名の患者で増加していた；急速な尿中ＧＡＧの減少が、ＥＲＴ未処置患者で認められた；肝臓と脾臓の寸法の減少は、ＥＲＴ未処置患者で認められた；ＥＲＴを中止した２名の患者の尿中ＧＡＧのリバウンド欠如；及び、神経認知パラメーターの改善は、Ｄ２Ｓ６マーカーの低下と相関している。
６．９ 実施例９：ＭＰＳ ＩＩ（ハンター症候群）の５歳以上の小児でのコンストラクト１の安全性、忍容性、及び薬力学を評価するための第Ｉ／ＩＩ相多施設非盲検試験
６．９．１．概要
治験デザイン
６．９．１．概要
治験デザイン
これは、コンストラクト１の第Ｉ／ＩＩ相多施設、非盲検、シングルアーム治験である。コントロール群は含まない。重症（神経因性）ＭＰＳ ＩＩを有する約６名の子供（５歳以上～１８歳未満）は、脳質量１ｇあたり６．５×１０１０ＧＣの単回投与コホートに登録することができ、ＩＣまたはＩＣＶ注射で、コンストラクト１の単回投与を受ける。
主要目的：
●神経障害性ＭＰＳ ＩＩを有する年長児（５歳超）に対して、単回ＩＣ投与、またはＩＣ経路が禁忌である場合にはＩＣＶ投与をした後に、２４週間にわたるコンストラクト１の安全性及び忍容性を評価する。
●神経障害性ＭＰＳ ＩＩを有する年長児（５歳超）に対して、単回ＩＣ投与、またはＩＣ経路が禁忌である場合にはＩＣＶ投与をした後に、２４週間にわたるコンストラクト１の安全性及び忍容性を評価する。
副次目的：
●コンストラクト１の免疫原性を評価する
●ＣＮＳイメージングに対するコンストラクト１の評価する
●疾患の全身症状に対するコンストラクト１の効果を調査する
●ＩＶ ＥＲＴ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））を中止した参加者の血漿及び尿中のバイオマーカーに関するコンストラクト１の効果を調査する
●コンストラクト１が生活の質（ＱＯＬ）に及ぼす影響を調査する
●睡眠尺度に対するコンストラクト１の効果を調査する
●臨床医が報告した転帰に対するコンストラクト１の効果を調査する
●介護者が報告した転帰に対するコンストラクト１の効果を調査する
●日常の身体機能を捕捉するためにビデオ録画を使用する
●微細な運動機能に対するコンストラクト１の効果を調査する
●コンストラクト１の免疫原性を評価する
●ＣＮＳイメージングに対するコンストラクト１の評価する
●疾患の全身症状に対するコンストラクト１の効果を調査する
●ＩＶ ＥＲＴ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））を中止した参加者の血漿及び尿中のバイオマーカーに関するコンストラクト１の効果を調査する
●コンストラクト１が生活の質（ＱＯＬ）に及ぼす影響を調査する
●睡眠尺度に対するコンストラクト１の効果を調査する
●臨床医が報告した転帰に対するコンストラクト１の効果を調査する
●介護者が報告した転帰に対するコンストラクト１の効果を調査する
●日常の身体機能を捕捉するためにビデオ録画を使用する
●微細な運動機能に対するコンストラクト１の効果を調査する
診断、及び主な採用基準：
この治験に参加するにあたって、参加者は、５歳以上、１８歳未満の男性であり、
●神経認知機能低下を伴うＭＰＳ ＩＩの文書による診断を受けていること、または
●ＭＰＳ ＩＩの神経障害性形態を招くことが公知のＩＤＳでの変異（複数可）が文書記録されていること、または
●神経症性ＭＰＳ ＩＩを有する血縁者の変異と同一のＩＤＳでの変異（複数可）が文書記録されていること、を満たしていなくてはならない。
●神経認知機能低下を伴うＭＰＳ ＩＩの文書による診断を受けていること、または
●ＭＰＳ ＩＩの神経障害性形態を招くことが公知のＩＤＳでの変異（複数可）が文書記録されていること、または
●神経症性ＭＰＳ ＩＩを有する血縁者の変異と同一のＩＤＳでの変異（複数可）が文書記録されていること、を満たしていなくてはならない。
加えて、参加者は、ＩＣまたはＩＣＶ注射、及び免疫抑制を安全に受けることができなくてはならない。
治験薬、用量、及び投与経路
コンストラクト１：ＡＡＶ９．ＣＢ７．ｈＩＤＳ（ヒトイズロン酸－２－スルファターゼ発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス血清型９キャプシド）。図５を参照されたい。
治験薬を、単回ＩＣまたはＩＣＶ用量として送達する。
１つの用量レベル、すなわち脳質量１ｇあたり６．５×１０１０ＧＣを評価する。投与する総用量は、対象者のスクリーニングＭＲＩに基づいて推定した治験対象者の脳のサイズに依る。投与する治験薬の総体積は、推定ＣＳＦ体積の１０％を超えない。
６．９．２．安全性及び有効性の評価基準
主要評価項目：
● 第２４週目までの安全性：ＡＥ及びＳＡＥ
主要評価項目：
● 第２４週目までの安全性：ＡＥ及びＳＡＥ
副次評価項目：
●第１０４週目までの安全性：ＡＥ及びＳＡＥ
●ＣＳＦ（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、血漿（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、及び尿（ＧＡＧ）でのバイオマーカー
●認知、行動、及び適応機能の神経発達パラメーター：
●Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ） （Ｂａｙｌｅｙ，２００５，Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄ．）
●Ｍｕｌｌｅｎ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｅａｒｌｙ Ｌｅａｒｎｉｎｇ（ＭＳＥＬ）（Ｍｕｌｌｅｎ，Ｃｉｒｃｌｅ Ｐｉｎｅｓ，ＭＮ：Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｇｕｉｄａｎｃｅ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｉｎｃ．；１９９５）
●Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｘｐａｎｄｅｄ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ Ｆｏｒｍ （ＶＡＢＳ－ＩＩ） （Ｓｐａｒｒｏｗ ｅｔ ａｋ，２００５，Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄ．）
●第１０４週目までの安全性：ＡＥ及びＳＡＥ
●ＣＳＦ（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、血漿（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、及び尿（ＧＡＧ）でのバイオマーカー
●認知、行動、及び適応機能の神経発達パラメーター：
●Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ） （Ｂａｙｌｅｙ，２００５，Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄ．）
●Ｍｕｌｌｅｎ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｅａｒｌｙ Ｌｅａｒｎｉｎｇ（ＭＳＥＬ）（Ｍｕｌｌｅｎ，Ｃｉｒｃｌｅ Ｐｉｎｅｓ，ＭＮ：Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｇｕｉｄａｎｃｅ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｉｎｃ．；１９９５）
●Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｘｐａｎｄｅｄ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ Ｆｏｒｍ （ＶＡＢＳ－ＩＩ） （Ｓｐａｒｒｏｗ ｅｔ ａｋ，２００５，Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄ．）
探索評価項目：
●免疫原性測定
●ＡＡＶ９に対する中和抗体価、及びＣＳＦと血清でのＩ２Ｓに対する結合抗体価
－酵素結合イムノスポット（ＥＬＩＳＰＯＴ）アッセイ：ＡＡＶ９及びＩ２Ｓに対するＴ 細胞応答
●脳のＭＲＩで評価したＣＮＳ構造異常
●腹部の超音波で評価した肝臓及び脾臓のサイズ
●心エコー図による弁膜症及び左室心筋重量係数に関する心臓評価
●正中神経運動感覚性遠位伝導速度及び潜伏期間
●ＩＶ ＥＲＴ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））を中止した対象者での血漿及び尿中ＧＡＧ
●ＰｅｄｓＱＬ
●睡眠評価（Ｓｌｅｅｐ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｓｃａｌｅ ｆｏｒ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ－ＳＤＳＣ）（Ｆｅｒｒｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｓｌｅｅｐ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；１０（４）：４５７－４６３）
●臨床医が感じた全体的な重症度の印象、及び臨床医が感じた全体的な変化の印象
●介護者が感じた全体的な重症度の印象、及び介護者が感じた全体的な変化の印象
●日常生活の活動度（Ｔａｎｊｕａｋｉｏ ｅｔ ａｌ．２０１５，Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ Ｍｅｔａｂ，１１４（２）：１６１－１６９；Ｋａｔｏ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｂｒａｉｎ Ｄｅｖ，２９（５）：２９８－３０５）
●Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｉｓａｂｉｌｉｔｙ Ｉｎｖｅｎｔｏｒｙ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｔｅｓｔ （ＰＥＤＩ ＣＡＴ）
●９－Ｈｏｌｅ Ｐｅｇ Ｔｅｓｔ
●ビデオで捕捉した運動機能性
●免疫原性測定
●ＡＡＶ９に対する中和抗体価、及びＣＳＦと血清でのＩ２Ｓに対する結合抗体価
－酵素結合イムノスポット（ＥＬＩＳＰＯＴ）アッセイ：ＡＡＶ９及びＩ２Ｓに対するＴ 細胞応答
●脳のＭＲＩで評価したＣＮＳ構造異常
●腹部の超音波で評価した肝臓及び脾臓のサイズ
●心エコー図による弁膜症及び左室心筋重量係数に関する心臓評価
●正中神経運動感覚性遠位伝導速度及び潜伏期間
●ＩＶ ＥＲＴ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））を中止した対象者での血漿及び尿中ＧＡＧ
●ＰｅｄｓＱＬ
●睡眠評価（Ｓｌｅｅｐ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｓｃａｌｅ ｆｏｒ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ－ＳＤＳＣ）（Ｆｅｒｒｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｓｌｅｅｐ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；１０（４）：４５７－４６３）
●臨床医が感じた全体的な重症度の印象、及び臨床医が感じた全体的な変化の印象
●介護者が感じた全体的な重症度の印象、及び介護者が感じた全体的な変化の印象
●日常生活の活動度（Ｔａｎｊｕａｋｉｏ ｅｔ ａｌ．２０１５，Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ Ｍｅｔａｂ，１１４（２）：１６１－１６９；Ｋａｔｏ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｂｒａｉｎ Ｄｅｖ，２９（５）：２９８－３０５）
●Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｉｓａｂｉｌｉｔｙ Ｉｎｖｅｎｔｏｒｙ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｔｅｓｔ （ＰＥＤＩ ＣＡＴ）
●９－Ｈｏｌｅ Ｐｅｇ Ｔｅｓｔ
●ビデオで捕捉した運動機能性
統計的手法
すべてのデータを、記述統計を使用して分析する。カテゴリ変数を、頻度とパーセンテージを使用してまとめる。連続変数を、記述統計を、見落としのない観察数、平均、標準偏差、中央値、最小値、及び最大値を使用してまとめる。必要に応じて、グラフ表示を使用する。参加者データリストも表示する。
サンプルサイズと検出力の計算
正式な計算を行って、サンプルの大きさを決定することはしなかった。
６．９．３．略語と用語の定義の表
６．９．３．略語と用語の定義の表
６．９．４．全体的な治験デザイン
これは、コンストラクト１の第Ｉ／ＩＩ相多施設、非盲検、シングルアーム治験である。コントロール群は含まない。重症（神経因性）ＭＰＳ ＩＩを有する約６名の子供（５歳以上～１８歳未満）が、脳質量１ｇあたり６．５×１０１０ＧＣの単回投与コホートに登録することができ、ＩＣまたはＩＣＶ注射で、コンストラクト１の単回投与を受ける。治療を行って最初の２４週間（主要試験期間）は、安全性が主要な注目点となる。主要治験期間が終了した後に、参加者は、コンストラクト１の治療を受けた後、合計で１０４週間目まで、評価（安全性及び有効性）を継続して受ける（図１０Ａ）。当該治験が終わると、参加者には、長期追跡調査への参加を促す。
これは、コンストラクト１の第Ｉ／ＩＩ相多施設、非盲検、シングルアーム治験である。コントロール群は含まない。重症（神経因性）ＭＰＳ ＩＩを有する約６名の子供（５歳以上～１８歳未満）が、脳質量１ｇあたり６．５×１０１０ＧＣの単回投与コホートに登録することができ、ＩＣまたはＩＣＶ注射で、コンストラクト１の単回投与を受ける。治療を行って最初の２４週間（主要試験期間）は、安全性が主要な注目点となる。主要治験期間が終了した後に、参加者は、コンストラクト１の治療を受けた後、合計で１０４週間目まで、評価（安全性及び有効性）を継続して受ける（図１０Ａ）。当該治験が終わると、参加者には、長期追跡調査への参加を促す。
最初の２名の適格な参加者が、時間を置いて登録される。第１の参加者にコンストラクト１を投与した後に、安全性に関する８週間の観察期間を設ける。Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｓａｆｅｔｙ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＳＣ）は、ＩＳＣ規約に従って、この参加者に関して、試験の最初の８週間で得た安全性データ（８週目の受診の間に得たデータを含む）を検討する、そして、安全性の懸念が無ければ、第２の参加者に投与し得る。第２の対象者のインフォームドコンセントとスクリーニングを、第１の対象者の観察期間中に進め得る。
安全性検討トリガー（ＳＲＴ）事象が認められなければ、２名の参加者について、第２の参加者の第８週目の受診時までに得た利用可能なすべての安全性データを、Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｄａｔａ Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＤＭＣ）が評価する。続行が決定されると、次の４名の参加者を登録する。
利用可能なすべての安全性データを、６番目の参加者の８週目の受診後に、治験独自のＩＤＭＣ規約に規定した間隔でＩＤＭＣが評価する。
あらゆるＩＤＭＣ会合において、ＳＲＴによる計画または要請の有無に関係なく、ＩＤＭＣは、試験の中止、さらなる参加者への投与の遅延、または低用量での進行を薦め得る。６番目の参加者から８週間のデータが利用できるようになれば、試験への登録が完了する。
何らかの事象が、事前に指定した停止規則の基準に該当すると、ＲＥＧＥＮＸＢＩＯ、及び外部のＩＤＭＣが安全性データのすべての完全な検討を行うまで、新規の参加者に対する投与は停止される。
適格基準を満たす参加者は、－２日目～１日目の朝（施設の基準による）の間に入院し、ベースライン評価を投与前に行う。参加者は、１日目に、コンストラクト１の単一ＩＣまたはＩＣＶ用量の投与を受け、観察のために、投薬後に一晩病院に留まる。参加者は、退院の準備ができており、かつ、入院の延長は必要ないと治験責任医師が判断した後に退院する。一次治験期間（すなわち、第２４週目まで）以降の評価は、第１週、第２週、第３週、第４週、第１２週、及び第２４週目に実施する。第８週と第１６週の評価は、電話で聞き取りをして、有害事象（ＡＥ）と併用療法の評価だけを行う。一次治験期間の後に、第３８週、第５２週、第６４週、第７８週、及び第１０４週目に受診する。第３０週目の受診は、第２４週からＩＶ ＥＲＴを中止した参加者に対してのみ行う。
発達過程の子供で起こる脳の成長と、ＭＰＳ ＩＩにおいて起こり得る脳の成長の差異のために、コンストラクト１をＩＣまたはＩＣＶで投与する総投与量は、治験参加者のスクリーニングＭＲＩから得た推定脳質量に応じて変化する。参加者のＭＲＩから得た治験参加者の推定脳体積は、表１２示すように、脳質量に変換され、投与する正確な用量を計算するために使用される。
コンストラクト１は、コンストラクト１の治験薬概要書の情報に精通しており、かつ、臨床試験の実施経験のある選ばれた治験責任医師だけが、治験用途においてのみ使用することが意図される。コンストラクト１は、スポンサーが支援／承認した臨床試験に登録しており、かつ、同意書を提出したヒト参加者だけに投与し得る。
６．９．５．採用基準
本治験に参加する資格を得るにあたって、参加者は、以下の全採用基準に該当しなくてはならない：
１．参加者の法的保護者（複数可）は、治験の趣旨説明を受けた後であり、かつ治験関連の手続きを行う前に、インフォームドコンセント用紙に署名をして提供する意思があり、かつ、そうすることが可能である。
２．５歳以上、１８歳未満の男性である
３．以下のいずれかの基準に該当していること：
ａ．文書によるＭＰＳ ＩＩの診断があり、かつ、神経認知検査スコアが、基準平均（ＢＳＩＤ－ＩＩＩ：７７、及びＭＳＥＬ Ｖｉｓｕａｌ Ｒｅｃｅｐｔｉｏｎ：３５）から１ １／２以上の標準偏差の低下がある、または
ｂ．文書によるＭＰＳ ＩＩの診断があり、かつ、３～３６ヶ月の期間をあけて投与して行った一連の神経認知検査スコア（ＢＳＩＤ－ＩＩＩ Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ、またはＭＳＥＬ Ｖｉｓｕａｌ Ｒｅｃｅｐｔｉｏｎ）から１以上の標準偏差の低下がある、または
ｃ．参加者と同じＩＤＳ変異を有する神経障害性ＭＰＳ ＩＩの臨床的診断を受けた血縁者がおり、かつ、遺伝学者の意見で、神経障害性ＭＰＳ ＩＩを受け継いでいる、または
ｄ．文書記録されているＩＤＳでの変異（複数可）があり、遺伝学者がの意見で、それは神経障害性表現型に起因するものであり、かつ、臨床医の意見で、神経障害性ＭＰＳ ＩＩを有している。
本治験に参加する資格を得るにあたって、参加者は、以下の全採用基準に該当しなくてはならない：
１．参加者の法的保護者（複数可）は、治験の趣旨説明を受けた後であり、かつ治験関連の手続きを行う前に、インフォームドコンセント用紙に署名をして提供する意思があり、かつ、そうすることが可能である。
２．５歳以上、１８歳未満の男性である
３．以下のいずれかの基準に該当していること：
ａ．文書によるＭＰＳ ＩＩの診断があり、かつ、神経認知検査スコアが、基準平均（ＢＳＩＤ－ＩＩＩ：７７、及びＭＳＥＬ Ｖｉｓｕａｌ Ｒｅｃｅｐｔｉｏｎ：３５）から１ １／２以上の標準偏差の低下がある、または
ｂ．文書によるＭＰＳ ＩＩの診断があり、かつ、３～３６ヶ月の期間をあけて投与して行った一連の神経認知検査スコア（ＢＳＩＤ－ＩＩＩ Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ、またはＭＳＥＬ Ｖｉｓｕａｌ Ｒｅｃｅｐｔｉｏｎ）から１以上の標準偏差の低下がある、または
ｃ．参加者と同じＩＤＳ変異を有する神経障害性ＭＰＳ ＩＩの臨床的診断を受けた血縁者がおり、かつ、遺伝学者の意見で、神経障害性ＭＰＳ ＩＩを受け継いでいる、または
ｄ．文書記録されているＩＤＳでの変異（複数可）があり、遺伝学者がの意見で、それは神経障害性表現型に起因するものであり、かつ、臨床医の意見で、神経障害性ＭＰＳ ＩＩを有している。
６．９．６．除外基準
以下の除外基準のいずれかに該当する参加者は、治験に参加する資格が無い：
１．ＩＣ及びＩＣＶ注射に対して次のいずれかの禁忌を示す：
ａ．治験に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームがベースラインＭＲＩ検査の検討を行って、ＩＣ及びＩＣＶ注射に対して禁忌を認める
ｂ．この治験に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームが、入手可能な情報に基づいて、かつての頭部／頸部の手術歴が、ＩＣ及びＩＣＶ注射の双方に対して禁忌を認める。
ｃ．全身麻酔に対して禁忌を認める
ｄ．ＭＲＩまたはガドリニウムに対して禁忌を認める
ｅ．クレアチニンに基づいた推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）が３０ｍＬ未満／分／１．７３ｍ２である。クレアチニンが、アッセイ検証または検出の下限未満であると検査所見が示した場合、最低限カットオフ値を使用してｅＧＦＲを推定する。
ｆ．治験責任医師及び神経放射線科医／神経外科医のチームの意見では、以前に臨床的に有意な頭蓋内出血を経験しており、ＩＣ及びＩＣＶ注射に対して禁忌を認める。
ｇ．頭蓋内圧が上昇している（≧３０ｃｍ Ｈ２Ｏ）
２．プレドニゾン、タクロリムス、またはシロリムスを使用する治療に対して禁忌であるいずれかの病態を有する
３．ＭＰＳ ＩＩまたは神経精神病態の診断に起因しない神経認知障害があり、ＰＩの意見では、研究結果の解釈に混乱を招き得る
４．腰椎穿刺に対して禁忌を示す
５．施設の神経放射線科医／神経外科医の意見、それに、メディカルモニターとの協議では、（大脳）心室シャントを有しており、参加者への投与と適切な投薬に影響を与え得る
６．ＡＡＶをベースとした遺伝子治療薬を使用する治療を受けたことがある
７．ＩＣＦに署名した時点で、くも膜下腔内（ＩＴ）投与を介して、イデュルスルファーゼ［ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標）］の投与を受けている。参加者は、治験期間中のＩＴイデュルスルファーゼの中止に同意しなければならず、ＩＣＦに署名した直後から履行する。
８．イデュルスルファーゼ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））ＩＶを受けて、ＩＶイデュルスルファーゼ（［ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））投与に関連すると考えられるアナフィラキシーなど、重度な過敏反応を経験した
９．抗ＩＤＳ抗体が中和されているので、イデュルスルファーゼ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））ＩＶに対して応答を示さず、尿中ＧＡＧレベルの高まりが認められる。免疫調節を受けており、かつ、現在のところ、ＩＶイデュルスルファーゼ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））に反応しておれば、当該参加者は登録し得る
１０．ＩＣＦに署名する前の３０日以内または５半減期以内、いずれか長い期間内に治験薬の投与を受けた
１１．スクリーニングの少なくとも１年前に完全な寛解に至っていないリンパ腫の既往歴、または、皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの既往歴を有する
１２．血小板数が、１００，０００未満／マイクロリットル（μＬ）である
１３．アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、またはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）が、３×ＵＬＮ超である、または総ビリルビンが１．５×ＵＬＮ超である。ただし、参加者がギルバート症候群の病歴を有している場合は、この限りではない
１４．ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、またはＢ型肝炎またはＣ型肝炎ウイルス感染の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原またはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎またはＨＩＶ抗体のスクリーニング試験が陽性である
１５．臨床施設従業員または治験の実施に関与する他のいずれかの個人の一等親以内の家族、または、臨床施設従業員または治験の実施に関与する他のいずれかの個人
１６．ＰＩの見解では、参加者の安全性を損ねかねない臨床的に有意なＥＣＧ異常を有している
１７．ＰＩの見解では、参加者の安全性を損ねる、重大な、または不安定な医学的または心理的状態を有している
１８．ＰＩの見解では、参加者を過度のリスクに曝しかねない制御不能な発作を有する
１９．タクロリムス、シロリムス、またはプレドニゾロンに対して過敏反応の既往歴を有する
２０．原発性免疫不全（例えば、共通可変免疫不全症候群）、脾臓摘出術、または感染症に罹患しやすいあらゆる基礎疾患の既往歴がある
２１．帯状疱疹（ＶＺＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、またはエプスタイン－バール・ウイルス（ＥＢＶ）に感染しており、スクリーニング前の少なくとも１２週間に完全に解消されていない
２２．入院または親世代抗感染症薬による治療を必要とするいずれかの感染症が、２回目の受診の少なくとも８週間前に消散していない
２３．２回目の受診前の１０日以内に経口抗感染症薬（抗ウイルス薬を含む）を必要とするいずれかの活動性の感染症に罹患している
２４．スクリーニングの間の活動性の結核（ＴＢ）またはＱｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ－ＴＢ Ｇｏｌｄ試験での陽性結果
２５．－２日目以前の４週間以内に何らかの生ワクチンを受けている
２６．ＩＣＦに署名をする前の８週間以内に大手術を受けた、または、治験期間中に大手術の計画がある
２７．登録して６ヶ月以内にアデノイド摘出術または扁桃摘出術の必要性が考えられる。アデノイド摘出術または扁桃摘出術を予定する場合には、スクリーニング前に行う。
２８．好中球数の絶対数が、１．０×１０３未満／μＬである
２９．ＰＩが免疫抑制療法に適さないと考える病態または正常でない検査所見がある。
以下の除外基準のいずれかに該当する参加者は、治験に参加する資格が無い：
１．ＩＣ及びＩＣＶ注射に対して次のいずれかの禁忌を示す：
ａ．治験に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームがベースラインＭＲＩ検査の検討を行って、ＩＣ及びＩＣＶ注射に対して禁忌を認める
ｂ．この治験に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームが、入手可能な情報に基づいて、かつての頭部／頸部の手術歴が、ＩＣ及びＩＣＶ注射の双方に対して禁忌を認める。
ｃ．全身麻酔に対して禁忌を認める
ｄ．ＭＲＩまたはガドリニウムに対して禁忌を認める
ｅ．クレアチニンに基づいた推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）が３０ｍＬ未満／分／１．７３ｍ２である。クレアチニンが、アッセイ検証または検出の下限未満であると検査所見が示した場合、最低限カットオフ値を使用してｅＧＦＲを推定する。
ｆ．治験責任医師及び神経放射線科医／神経外科医のチームの意見では、以前に臨床的に有意な頭蓋内出血を経験しており、ＩＣ及びＩＣＶ注射に対して禁忌を認める。
ｇ．頭蓋内圧が上昇している（≧３０ｃｍ Ｈ２Ｏ）
２．プレドニゾン、タクロリムス、またはシロリムスを使用する治療に対して禁忌であるいずれかの病態を有する
３．ＭＰＳ ＩＩまたは神経精神病態の診断に起因しない神経認知障害があり、ＰＩの意見では、研究結果の解釈に混乱を招き得る
４．腰椎穿刺に対して禁忌を示す
５．施設の神経放射線科医／神経外科医の意見、それに、メディカルモニターとの協議では、（大脳）心室シャントを有しており、参加者への投与と適切な投薬に影響を与え得る
６．ＡＡＶをベースとした遺伝子治療薬を使用する治療を受けたことがある
７．ＩＣＦに署名した時点で、くも膜下腔内（ＩＴ）投与を介して、イデュルスルファーゼ［ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標）］の投与を受けている。参加者は、治験期間中のＩＴイデュルスルファーゼの中止に同意しなければならず、ＩＣＦに署名した直後から履行する。
８．イデュルスルファーゼ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））ＩＶを受けて、ＩＶイデュルスルファーゼ（［ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））投与に関連すると考えられるアナフィラキシーなど、重度な過敏反応を経験した
９．抗ＩＤＳ抗体が中和されているので、イデュルスルファーゼ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））ＩＶに対して応答を示さず、尿中ＧＡＧレベルの高まりが認められる。免疫調節を受けており、かつ、現在のところ、ＩＶイデュルスルファーゼ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））に反応しておれば、当該参加者は登録し得る
１０．ＩＣＦに署名する前の３０日以内または５半減期以内、いずれか長い期間内に治験薬の投与を受けた
１１．スクリーニングの少なくとも１年前に完全な寛解に至っていないリンパ腫の既往歴、または、皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの既往歴を有する
１２．血小板数が、１００，０００未満／マイクロリットル（μＬ）である
１３．アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、またはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）が、３×ＵＬＮ超である、または総ビリルビンが１．５×ＵＬＮ超である。ただし、参加者がギルバート症候群の病歴を有している場合は、この限りではない
１４．ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、またはＢ型肝炎またはＣ型肝炎ウイルス感染の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原またはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎またはＨＩＶ抗体のスクリーニング試験が陽性である
１５．臨床施設従業員または治験の実施に関与する他のいずれかの個人の一等親以内の家族、または、臨床施設従業員または治験の実施に関与する他のいずれかの個人
１６．ＰＩの見解では、参加者の安全性を損ねかねない臨床的に有意なＥＣＧ異常を有している
１７．ＰＩの見解では、参加者の安全性を損ねる、重大な、または不安定な医学的または心理的状態を有している
１８．ＰＩの見解では、参加者を過度のリスクに曝しかねない制御不能な発作を有する
１９．タクロリムス、シロリムス、またはプレドニゾロンに対して過敏反応の既往歴を有する
２０．原発性免疫不全（例えば、共通可変免疫不全症候群）、脾臓摘出術、または感染症に罹患しやすいあらゆる基礎疾患の既往歴がある
２１．帯状疱疹（ＶＺＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、またはエプスタイン－バール・ウイルス（ＥＢＶ）に感染しており、スクリーニング前の少なくとも１２週間に完全に解消されていない
２２．入院または親世代抗感染症薬による治療を必要とするいずれかの感染症が、２回目の受診の少なくとも８週間前に消散していない
２３．２回目の受診前の１０日以内に経口抗感染症薬（抗ウイルス薬を含む）を必要とするいずれかの活動性の感染症に罹患している
２４．スクリーニングの間の活動性の結核（ＴＢ）またはＱｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ－ＴＢ Ｇｏｌｄ試験での陽性結果
２５．－２日目以前の４週間以内に何らかの生ワクチンを受けている
２６．ＩＣＦに署名をする前の８週間以内に大手術を受けた、または、治験期間中に大手術の計画がある
２７．登録して６ヶ月以内にアデノイド摘出術または扁桃摘出術の必要性が考えられる。アデノイド摘出術または扁桃摘出術を予定する場合には、スクリーニング前に行う。
２８．好中球数の絶対数が、１．０×１０３未満／μＬである
２９．ＰＩが免疫抑制療法に適さないと考える病態または正常でない検査所見がある。
６．９．７．免疫抑制療法
コルチコステロイド
●ベクター投与（１日目、前投与）の朝に、患者に対して、少なくとも３０分間にわたって、メチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇ（最大５００ｍｇ）をＩＶで与える。メチルプレドニゾロンは、ＩＰの腰椎穿刺及びＩＣ注射の前に投与すべきである。アセトアミノフェン及び抗ヒスタミン剤の前投与は、治験責任医師の裁量で任意に行う。
●第１２週目までにプレドニゾンを中止することを目標として、２日目に経口プレドニゾンを開始する。プレドニゾンの用量は、以下の通りである：
－ ２日目～第２週の終わりまで：０．５ｍｇ／ｋｇ／日
－ 第３週及び４週：０．３５ｍｇ／ｋｇ／日
－ 第５週～８週：０．２ｍｇ／ｋｇ／日
－ 第９週～１２週：０．１ｍｇ／ｋｇ
－ プレドニゾンは、第１２週の後に中止する。プレドニゾンの正確な用量は、一段階増やした臨床上実用的な用量に調整することができる。
コルチコステロイド
●ベクター投与（１日目、前投与）の朝に、患者に対して、少なくとも３０分間にわたって、メチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇ（最大５００ｍｇ）をＩＶで与える。メチルプレドニゾロンは、ＩＰの腰椎穿刺及びＩＣ注射の前に投与すべきである。アセトアミノフェン及び抗ヒスタミン剤の前投与は、治験責任医師の裁量で任意に行う。
●第１２週目までにプレドニゾンを中止することを目標として、２日目に経口プレドニゾンを開始する。プレドニゾンの用量は、以下の通りである：
－ ２日目～第２週の終わりまで：０．５ｍｇ／ｋｇ／日
－ 第３週及び４週：０．３５ｍｇ／ｋｇ／日
－ 第５週～８週：０．２ｍｇ／ｋｇ／日
－ 第９週～１２週：０．１ｍｇ／ｋｇ
－ プレドニゾンは、第１２週の後に中止する。プレドニゾンの正確な用量は、一段階増やした臨床上実用的な用量に調整することができる。
シロリムス
●ベクター投与の２日前（－２日目）：４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量のシロリムスの負荷用量を投与する。
●－１日目以降：０．５ｍｇ／ｍ２／日のシロリムスを１日２回に分割して投与する、目標血中レベルを１～３ｎｇ／ｍｌとする。
●シロリムスを、第４８週目の受診後に中止する。
●ベクター投与の２日前（－２日目）：４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量のシロリムスの負荷用量を投与する。
●－１日目以降：０．５ｍｇ／ｍ２／日のシロリムスを１日２回に分割して投与する、目標血中レベルを１～３ｎｇ／ｍｌとする。
●シロリムスを、第４８週目の受診後に中止する。
タクロリムス
●２日目（ＩＰ投与の翌日）に、タクロリムスを１日２回、０．０５ｍｇ／ｋｇの用量で開始する、２４週間にわたり２～４ｎｇ／ｍＬの血中レベルを達成するように調整する。
●タクロリムスは第２４週目の受診から８週にわたって漸減する。第２４週目に、用量をおよそ５０％まで減少させる。第２８週目に、用量をおよそ５０％までさらに減少させる。タクロリムスは、第３２週目に中止する。
●タクロリムス及びシロリムスの血中レベルをモニタリングする。
●２日目（ＩＰ投与の翌日）に、タクロリムスを１日２回、０．０５ｍｇ／ｋｇの用量で開始する、２４週間にわたり２～４ｎｇ／ｍＬの血中レベルを達成するように調整する。
●タクロリムスは第２４週目の受診から８週にわたって漸減する。第２４週目に、用量をおよそ５０％まで減少させる。第２８週目に、用量をおよそ５０％までさらに減少させる。タクロリムスは、第３２週目に中止する。
●タクロリムス及びシロリムスの血中レベルをモニタリングする。
タクロリムスの用量調整は、最初の２４週間は、全血トラフ濃度を２～４ｎｇ／ｍＬ以内に維持する。第２４週目に、用量を約５０％にまで減らす。第２８週目には、用量を、さらに約５０％減らす。タクロリムスは、第３２週目に中止する。シロリムスの用量調整は、全血トラフ濃度を１～３ｎｇ／ｍＬ以内に維持するようにして行う。用量調整は、臨床薬剤師が行う。参加者は、濃度モニタリングで、さらなる用量調整を行う前に、少なくとも７～１４日間、新しい維持用量を継続するべきである。
免疫抑制剤薬物の説明責任、ＩＳ分注、シロリムス及びタクロリムス全血トラフ濃度は、通常の治験受診の間に治験責任医師の方で完了させる。
４８週間後のＩＳ療法は予定していない。臨床的に関連する免疫応答を調節するために４８週以後もＩＳが必要であれば、臨床的必要性に応じて、メディカルモニター及びスポンサーと確認しながら、ＰＩが適切な免疫抑制レジメンを決定する。
トリメトプリム／スルファメトキサゾール（Ｓｅｐｔｒａ（登録商標）；ＢＡＣＴＲＩＭ（商標） ＵＳＰＩ，２０１３）を使用するＰｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ肺炎（ＰＣＰ）の予防は、週に３回の投与（投与スケジュールの例；月曜日、水曜日、金曜日）を、－２日目に５ｍｇ／ｋｇの用量で開始して、第４８週目まで継続する。トリメトプリム／スルファメトキサゾール（ＢＡＣＴＲＩＭ（商標） ＵＳＰＩ、２０１３）の使用に関連するリスクについては、処方情報を参照されたい。サルファアレルギーの患者については、代替薬として、ペンタミジン、ダプソン、アトバコンがある。
ＡＮＣが５００ｍｍ３未満であれば、抗真菌予防薬を始める。治療レジメンは、適切な超専門医と協議して、地域の施設の標準治療を勘案して決定する。
カルシニューリン阻害剤とラパムネとの併用は、カルシニューリン阻害剤誘発血栓性微小血管障害のリスクを高め得る。血栓性微小血管障害（ＴＭＡ）とは、血小板減少症、微小血管新生性溶血性貧血、及び様々な臓器系の関与を特徴とする障害の群である。
これは、重度の血小板減少症（＜３０×１０９／Ｌ）、血液塗抹標本上の破砕赤血球を特徴とする微小血管障害性溶血性貧血、網状赤血球数の増加（＞１２０×１０９／Ｌ）、乳酸デヒドロゲナーゼレベル（ＬＤＨ）の上昇、及び、皮膚及び粘膜出血、衰弱、及び呼吸困難の徴候を呈し得る。治療として、タクロリムスの中止と、血漿交換の開始がある。
連続試験の間にＣＭＶまたはＥＢＶウイルスゲノムの上昇を検出した場合に、ＩＳを低減する、または、抗ウイルス療法を開始するとの決定は、適切な超専門医と協議をして、地域の施設の標準治療を勘案して決定する。
６．１０ 実施例１０：ＭＰＳ ＩＩ（ハンター症候群）の小児対象者でのコンストラクト１の安全性、忍容性、及び薬力学を評価するための第Ｉ／ＩＩ相多施設非盲検試験
６．１０．１．概要
治験デザイン
６．１０．１．概要
治験デザイン
これは、コンストラクト１の第Ｉ／ＩＩ相、ファーストインヒューマン、多施設、非盲検、シングルアーム用量漸増研究である。対照群は含めていない。重度のＭＰＳ ＩＩを有する約１２名または１８名の小児対象（または、最大１８名の小児対象）を、３つの用量コホート、１．３×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量（用量１）、６．５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量（用量２）、２．０×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量（用量３：ゲノムコピー数をポリＡアッセイに基づいて決定した）、または２．９×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量（用量３ ＥＣ：ゲノムコピー数を導入遺伝子特異的アッセイに基づいて決定した）に登録することができ、ＩＣまたはＩＣＶ注射によってコンストラクト１を単回用量で投与する。用量３拡大コホート（ＥＣ）では、２．９×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量（導入遺伝子特異的アッセイを使用して用量を決定した）を投与し、これは、ポリＡ特異的アッセイを使用して推定した用量３と等価である。一部の事例では、用量３及び用量３ ＥＣ双方の有効用量は同じである。治療を行って最初の２４週間（主要試験期間）は、安全性が主要な注目点となる。主要治験期間が終了した後に、対象者は、コンストラクト１の治療を受けた後、合計で１０４週間目まで、評価（安全性及び有効性）を継続する。当該治験が終わると、対象者には、長期追跡調査への参加を促す。
最初の３名の適格対象者が、用量１コホート（１．３×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）に登録される。第１の対象者にコンストラクト１を投与した後に、安全性に関する８週間の観察期間を設ける。Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｓａｆｅｔｙ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＳＣ）は、ＩＳＣ規約に従って、この対象者に関して最初の８週間で得た安全性データ（８週目の受診の間に得たデータを含む）を検討する、そして、安全性の懸念が無ければ、第２の対象者を登録し得る。同じプロセスを使用して、第３の対象者を登録する。次の対象者のインフォームドコンセントとスクリーニングを、前の対象者の観察期間中に進め得る。
安全性検討トリガー（ＳＲＴ）事象が認められなければ、第３の対象者の第８週目の受診時までに得た用量１コホートに関して利用可能なすべての安全性データを、Ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｄａｔａ Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＤＭＣ）が評価する。第２の用量（６．５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量）に移行する決定が出れば、続く２名の対象者が、当初の用量コホートと同じ投与スキームに従う。ＩＳＣは、用量２コホートでの第２の対象者の２週目までの受診、及び２週目での受診で得た当該対象者のすべての安全性データを検討し、この評価の直後に、第３の対象者への投与に進むことが安全であると判断し得る。用量２コホートについて入手可能なすべての安全性データを、用量２コホートでの３番目の対象者に関する８週目での受診後に、ＩＤＭＣが評価する。
ＩＤＭＣの承認が得られると、治験薬が利用可能となり、そして、スポンサーの承認を得ており、かつ、ＩＳＣまたはＩＤＭＣのいずれかに従って登録を妨げる安全事象がない限りは、最大で６名の対象者に対して用量２拡大コホートで投与し得る。
安全性検討トリガー（ＳＲＴ）事象が認められず、かつ、ＩＤＭＣが承認をしておれば、第３の用量コホート（２．０×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量）の登録を開始する。一部の事例では、さらなる用量３拡大コホート（ＥＣ）は、２．９×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量を受ける。ＩＳＣは、第１の対象者について、第８週目の受診に至るまでに、及び第８週目の受診で利用可能なすべての安全性データを検討する。安全性の懸念が無ければ、第２の対象者に投与をする。ＩＳＣは、用量３コホートでの第２の対象者の第２週目の受診までに得た全対象者の安全性データを検討する、そして、この評価の直後に、第３の対象者の投与に移行することが安全であるとの判断をし得る。
用量コホートの終了時に計画されているか、ＳＲＴが求めたかに関係なく、いずれの所与のＩＤＭＣミーティングにおいて、ＩＤＭＣは、試験を中止する、現在の用量でさらなる対象に投与する、次の用量コホートに進む、またはより低用量で進行することを推奨し得る。用量３コホートの３番目の対象から８週目のデータが利用可能になると、３番目の対象の８週目の診察までのすべての安全性データをＩＤＭＣが評価する。ＩＤＭＣの承認があれば、最大で３名のさらなる対象に対して、同様に時期をずらして用量３ＥＣを投与し得る：第１の対象が投与を受けた後のＩＳＣ評価を含む８週間の観察期間、２番目の対象に投与した後の２週間の観察期間、３番目の対象の８週目の診察のデータが利用可能になった後にＩＤＭＣは評価を行う。
停止規則（以下の表を参照されたい）の基準に該当するいずれかの事象が認められた場合、すべての安全性データの完全な検討が行われるまでは、いかなる新規対象に対しても投与を中断する。
適格基準を満たす対象は、１日目の朝から２日目まで（施設の慣行に従って）入院し、及び、ベースライン評価は投与前に実施する。対象は、１日目にコンストラクト１のＩＣまたはＩＣＶの単回投与を受け、及び投与してから一晩、及び約１～２日間、観察のために入院する。対象は、治験責任医師（ＰＩ）が、２泊を超える入院の延長は必要ないと判断すれば退院する。一次研究期間のその後の評価（すなわち、２４週目まで）を、４週目までは毎週、及び８、１２、１６、２０、及び２４週目に実行する。一次研究期間の後、２８、３２、４０、４８、５２、５６、６０、６４、７８、及び１０４週目に通院する。６４週目の通院は、ＩＶ ＥＲＴを中止した対象に対してのみ行われる。２０週目と２８週目の評価は、電話連絡による有害事象（ＡＥ）と併用療法の評価に限定する。
非ヒト霊長類（ＮＨＰ）での知見は、ＤＲＧでの炎症細胞の存在及び免疫抑制（ＩＳ）による軸索変性症の部分減弱が実証するように一部が免疫媒介した後根神経節神経症及び関連する軸索変性症の組織学的所見を示した。これらの理由から、すべての対象は、治験において、まず免疫抑制（ＩＳ）を受け、導入遺伝子を発現する組織に対するあらゆる免疫媒介反応のリスクを最小限にし、ならびに、有効性を低下し得るＩＤＳに対する抗体の形成または増加に関連するリスクを最小限にする。このＩＳレジメンは、コルチコステロイド（メチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇをＩＶで１日目に１回事前投与し、経口プレドニゾンを２日目に０．５ｍｇ／ｋｇ／日から開始して、徐々に漸減し、及び１２週目までに中止した）、タクロリムス（０．０５ｍｇ／ｋｇを、１日２回［ＢＩＤ］経口投与［ＰＯ］を２日目から２４週目まで、２～４ｎｇ／ｍＬの目標血中レベルにするために用量調整を行い、及び、２４～３２週目の８週間で漸減する）、及びシロリムス（２日目に、４時間ごとに、１ｍｇ／ｍ２の負荷用量を３回、及び１日目から、：シロリムス０．５ｍｇ／ｍ２／日をＢＩＤ投与で分割し、目標血中濃度は、４８週目までに１～３ｎｇ／ｍＬとする）を含む。神経学的評価、及びタクロリムス／シロリムスの血中濃度モニタリングは、表Ａに従って行う。シロリムス及びタクロリムスの用量は、血中濃度を目標範囲に維持するように調整する。
第４８週以降は、ＩＳ療法は計画しない。臨床的に関連する免疫応答を制御するために４８週目以降にＩＳが必要であれば、適切な免疫抑制レジメンは、臨床的必要性に応じて、医療モニター及びスポンサーと協議して、治験責任医師（ＰＩ）が決定をする。
非臨床安全性／毒物学研究で認められた後根神経節及び関連する軸索変性症における組織病理学的所見、ならびにＩＣ投与手順による潜在的な安全リスクを考えると、集中的な神経学的評価及び体性感覚誘発電位（ＳＳＥＰ）試験を含む綿密な神経学的モニタリングを、表Ａに示したように採用する。
コンストラクト１で処置して、動物実験が示唆するように、血漿中でＩＤＳ活性を示す場合には、ＩＶイデュルスルファーゼ（Ｅｌａｐｒａｓｅ（登録商標））を服用している対象には、第２４週目の診察後にＥＲＴを中止する選択肢を提供し得る。ＥＲＴを中止する決定は、ＰＩの臨床的判断によるものであり、治験スポンサーと合意した通りに行う。ＥＲＴを中断する決定に役立つ可能性のあるさらなる情報は、２４週目の診察までの血漿Ｉ２Ｓ及び血漿及び尿中ＧＡＧのトラフ測定（ＥＲＴ投与に基づいたもの）、及び超音波による肝臓及び脾臓サイズの測定である。５２、５６、６０、６４、及び７８週目の診察には、ＥＲＴを中止することを選択する対象に関して、当該対象の血漿Ｉ２Ｓ及び血漿及び尿中ＧＡＧレベルのさらなるモニタリングを含む。ＩＶ ＥＲＴを中止した対象については、肝臓と脾臓の大きさの測定を行うために、３２週目と６４週目にさらなる腹部超音波検査を行う。次の基準のいずれか：尿中ＧＡＧレベルが、２４週目の診察時に測定したレベルの２倍超である、または肝臓の直径が、２４週目での数値よりも２０％超である、または、内部安全委員会及び／またはＩＤＭＣが、ＩＶ ＥＲＴの再開の正当な理由とみなすその他の安全パラメーターの何らかの変化に該当した場合、ＩＶ ＥＲＴを再開した。しかしながら、対象は、ＰＩが必要と判断した場合は、いつでもＥＲＴを再開し得る。
コンストラクト１の安全性及び忍容性は、ＡＥ及び重篤な有害事象（ＳＡＥ）、化学、血液学、尿検査、ＣＳＦ炎症のマーカー、免疫原性、ベクターの切断（ベクター濃度）、バイタルサイン、心電図（ＥＣＧ）、ＳＳＥＰ試験、及び神経学的評価を含む身体診察の評価を通じてモニタリングする。循環ウイルスゲノム（ＥＢＶ及びＣＭＶ）検出のためのシリアルＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反応）は、対象が、表Ａのスケジュールに従ってＩＳを受けている間に実行する。
有効性評価は、薬力学的（ＰＤ）バイオマーカー（ＣＳＦ及び血漿でのＧＡＧ及びＩ２Ｓ、ならびに尿でのＧＡＧ）のレベルの測定、ならびに神経認知機能、聴覚能力、脳ＭＲＩ、肝臓及び脾臓の大きさ、ならびに心エコー図による心臓評価に関するものを含む。試験に参加している間、対象の標準治療の一部として実施した神経認知的または適応的評価も、施設と協議した後に、研究スポンサーが決定するように収集する場合もあり得る。
主要目的
重度のＭＰＳ ＩＩを有する小児対象者に対して単回ＩＣ投与、または、ＩＣが禁忌である場合にはＩＣＶをして２４週間にわたるコンストラクト１の安全性及び忍容性を評価する。ＡＥとＳＡＥは、２４週間にわたり決定する。
副次目的
●コンストラクト１の長期安全性及び忍容性を評価する。１０４週目までの安全性：ＡＥレポート、検査室評価、バイタルサイン、ＥＣＧ、身体診察、及び神経学的評価。
●ＣＳＦ（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ）、血漿（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ）、尿（ＧＡＧ）でのバイオマーカーでコンストラクト１の効果を評価する。
●認知機能、行動機能、適応機能の神経発達パラメーターでコンストラクト１の効果を評価する。
○Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（ＢＳＩＤ－ＩＩＩ）（Ｂａｙｌｅｙ，２００５）またはＫａｕｆｍａｎ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｂａｔｔｅｒｙ ｆｏｒ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（ＫＡＢＣ－ＩＩ）（Ｋａｕｆｍａｎ，２００４）
○ Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｘｐａｎｄｅｄ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ Ｆｏｒｍ（ＶＡＢＳ－ＩＩ）（Ｓｐａｒｒｏｗ ｅｔ ａｌ．，２００５）
●コンストラクト１の長期安全性及び忍容性を評価する。１０４週目までの安全性：ＡＥレポート、検査室評価、バイタルサイン、ＥＣＧ、身体診察、及び神経学的評価。
●ＣＳＦ（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ）、血漿（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ）、尿（ＧＡＧ）でのバイオマーカーでコンストラクト１の効果を評価する。
●認知機能、行動機能、適応機能の神経発達パラメーターでコンストラクト１の効果を評価する。
○Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（ＢＳＩＤ－ＩＩＩ）（Ｂａｙｌｅｙ，２００５）またはＫａｕｆｍａｎ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｂａｔｔｅｒｙ ｆｏｒ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（ＫＡＢＣ－ＩＩ）（Ｋａｕｆｍａｎ，２００４）
○ Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｘｐａｎｄｅｄ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ Ｆｏｒｍ（ＶＡＢＳ－ＩＩ）（Ｓｐａｒｒｏｗ ｅｔ ａｌ．，２００５）
ＣＳＦ、血漿、及び尿中のベクターの切断を評価する（例えば、コンストラクト１デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）に対する定量ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によるもの）。
探索目的
●コンストラクト１の免疫原性を評価する（例えば、ＣＳＦ及び血清でのＡＡＶ９及びＩ２Ｓに対する抗体価の決定；及び／または、酵素結合イムノスポット（ＥＬＩＳＰＯＴ）アッセイの使用：ＡＡＶ９及びＩ２Ｓに対するＴ細胞反応によるもの）
●ＣＮＳイメージングに対するコンストラクト１の効果を評価する。脳のＭＲＩで評価した中枢神経系の構造異常
●腹部の超音波検査で評価した肝臓と脾臓の大きさ
●心臓弁膜症と左室心筋重量係数に関する心エコー図による心臓評価
●疾患の全身症状に対するコンストラクト１の効果を調査する
●聴覚能力に対するコンストラクト１の効果を調査する。聴覚脳幹反応（ＡＢＲ）で測定を行い、可能であれば、行動聴力検査によって測定する聴覚能力の変化。ティンパノメトリーは、ＢＡＵＤとＡＢＲの両方の評価に付随する。
●ＩＶ ＥＲＴ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））を一時的に中止した対象者の血漿及び尿中のバイオマーカーでコンストラクト１の効果を調査する
●生活の質（ＱＯＬ）に及ぼすコンストラクト１の効果を調査する
●睡眠尺度に関するコンストラクト１の効果を調査する（Ｆｅｒｒｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．，２００９）
●臨床医が報告した転帰に関するコンストラクト１の効果を調査する
●介護者が報告した転帰に関するコンストラクト１の効果を調査する
●日常生活の行動（Ｔａｎｊｕａｋｉｏ Ｊ．， ２０１５；Ｋａｔｏ ｅｔ ａｌ．， ２００７）
●病気の負担
●コンストラクト１の免疫原性を評価する（例えば、ＣＳＦ及び血清でのＡＡＶ９及びＩ２Ｓに対する抗体価の決定；及び／または、酵素結合イムノスポット（ＥＬＩＳＰＯＴ）アッセイの使用：ＡＡＶ９及びＩ２Ｓに対するＴ細胞反応によるもの）
●ＣＮＳイメージングに対するコンストラクト１の効果を評価する。脳のＭＲＩで評価した中枢神経系の構造異常
●腹部の超音波検査で評価した肝臓と脾臓の大きさ
●心臓弁膜症と左室心筋重量係数に関する心エコー図による心臓評価
●疾患の全身症状に対するコンストラクト１の効果を調査する
●聴覚能力に対するコンストラクト１の効果を調査する。聴覚脳幹反応（ＡＢＲ）で測定を行い、可能であれば、行動聴力検査によって測定する聴覚能力の変化。ティンパノメトリーは、ＢＡＵＤとＡＢＲの両方の評価に付随する。
●ＩＶ ＥＲＴ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））を一時的に中止した対象者の血漿及び尿中のバイオマーカーでコンストラクト１の効果を調査する
●生活の質（ＱＯＬ）に及ぼすコンストラクト１の効果を調査する
●睡眠尺度に関するコンストラクト１の効果を調査する（Ｆｅｒｒｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．，２００９）
●臨床医が報告した転帰に関するコンストラクト１の効果を調査する
●介護者が報告した転帰に関するコンストラクト１の効果を調査する
●日常生活の行動（Ｔａｎｊｕａｋｉｏ Ｊ．， ２０１５；Ｋａｔｏ ｅｔ ａｌ．， ２００７）
●病気の負担
計画の対象数及び研究期間：
最大で１８名の対象を登録する。例えば、用量１コホートに３名の対象；用量２コホートの３名の対象と、用量２の拡大コホート３の最大で６名の対象；用量３コホートの３名の対象と用量３の拡大コホートの最大で３名の対象。投与した総用量（総ＧＣ）は、それぞれの対象のスクリーニングＭＲＩから推定する脳質量の差を考慮して調整する。コンストラクト１のベクター定量のための導入遺伝子特異的ＰＣＲアッセイは、同じ用量のポリＡ ＰＣＲアッセイとは異なる数のゲノムコピーをもたらす（表Ｂを参照されたい）。一部の事例では、導入遺伝子特異的ＰＣＲアッセイを実施して、生成物の濃度及び用量を定量する。同じコンストラクト１試料を試験する場合、導入遺伝子特異的ＰＣＲアッセイは、ポリＡ ＰＣＲアッセイから得た用量よりも約５０％高い値を示す。したがって、ゲノムコピー数を計算するためのポリＡ ＰＣＲアッセイを使用した２．０×１０１１ＧＣ／ｇの用量は、ゲノムコピー数を計算するための導入遺伝子特異的ＰＣＲアッセイを使用した２．９×１０１１ＧＣ／ｇの用量に相当する。投与した産物の総量は、ＣＳＦの総体積の１０％を超えない（乳児の脳では約５０ｍＬ、成人の脳では約１５０ｍＬと推定される）。ＩＤＭＣは、あらゆる用量コホートにさらなる対象を加えることを推奨し得る。一部の事例では、治験の合計期間は、投与してから１０４週間であり、一次安全性評価時点は２４週間である。スクリーニングには、最長で３５日を使用し得る。
診断、及び主要な採用基準：
本治験に参加する資格を得るにあたって、対象者は、以下の全採用基準に該当しなくてはならない：
１．対象者の法的保護者（複数可）は、治験の趣旨説明を受けた後であり、かつ治験関連の手続きを行う前に、インフォームドコンセント用紙に署名をして提供する意思があり、かつ、そうすることが可能である。
２．４ヶ月齢以上、５歳未満の男児である
３．以下のいずれかの基準に該当していること：
ａ）文書に記録されているＭＰＳ ＩＩの診断があり、かつ、神経認知検査スコアが、７７以下（ＢＳＩＤ－ＩＩＩまたはＫＡＢＣ－ＩＩ）である、または
ｂ）文書に記録されているＭＰＳ ＩＩの診断があり、かつ、３～３６ヶ月の期間をあけて投与して行った一連の神経認知検査（ＢＳＩＤ－ＩＩＩまたはＫＡＢＣ－ＩＩ）から１以上の標準偏差の低下がある、または
ｃ）対象者と同じＩＤＳ変異を有する重度のＭＰＳ ＩＩの臨床的診断を受けた血縁者がおり、かつ、遺伝学者がの意見で、重症型のＭＰＳ ＩＩを受け継いでいる、または
ｄ）文書に記録されているＩＤＳでの変異（複数可）があり、遺伝学者の意見で、それは神経障害性表現型［例えば、完全な欠失、または大規模な欠失（例えば、１以上のエクソンに及ぶもの）、または組換え］に起因するものである、または、臨床医の意見で、重症型のＭＰＳ ＩＩを有している。
４．補助器具の有無に関係なく、必須のプロトコール試験を完了する上で十分な聴覚的及び視覚的能力を有する、該当する場合には、試験日に進んで補助器具を利用する。
１．対象者の法的保護者（複数可）は、治験の趣旨説明を受けた後であり、かつ治験関連の手続きを行う前に、インフォームドコンセント用紙に署名をして提供する意思があり、かつ、そうすることが可能である。
２．４ヶ月齢以上、５歳未満の男児である
３．以下のいずれかの基準に該当していること：
ａ）文書に記録されているＭＰＳ ＩＩの診断があり、かつ、神経認知検査スコアが、７７以下（ＢＳＩＤ－ＩＩＩまたはＫＡＢＣ－ＩＩ）である、または
ｂ）文書に記録されているＭＰＳ ＩＩの診断があり、かつ、３～３６ヶ月の期間をあけて投与して行った一連の神経認知検査（ＢＳＩＤ－ＩＩＩまたはＫＡＢＣ－ＩＩ）から１以上の標準偏差の低下がある、または
ｃ）対象者と同じＩＤＳ変異を有する重度のＭＰＳ ＩＩの臨床的診断を受けた血縁者がおり、かつ、遺伝学者がの意見で、重症型のＭＰＳ ＩＩを受け継いでいる、または
ｄ）文書に記録されているＩＤＳでの変異（複数可）があり、遺伝学者の意見で、それは神経障害性表現型［例えば、完全な欠失、または大規模な欠失（例えば、１以上のエクソンに及ぶもの）、または組換え］に起因するものである、または、臨床医の意見で、重症型のＭＰＳ ＩＩを有している。
４．補助器具の有無に関係なく、必須のプロトコール試験を完了する上で十分な聴覚的及び視覚的能力を有する、該当する場合には、試験日に進んで補助器具を利用する。
診断、及び主要な除外基準：
以下の除外基準のいずれかに該当する対象者は、治験に参加する資格が無い：
１．ＩＣ及びＩＣＶ注射に対して次のいずれかの禁忌を示す：
ａ）治験に参加している神経放射線科医／神経外科医（施設あたり１名の神経放射線科医／神経外科医）のチームがベースラインＭＲＩ検査の検討を行って、ＩＣ及びＩＣＶ注射の双方に対して禁忌を認める
ｂ）この治験に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームが、入手可能な情報に基づいて、かつての頭部／頸部の手術歴が、ＩＣ及びＩＣＶ注射に対して禁忌を認める。
ｃ）コンピューター断層撮影、造影剤、または全身麻酔に対して禁忌を認める
ｄ）ＭＲＩまたはガドリニウムに対して禁忌を認める
ｅ）クレアチニンに基づいた推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）が３０ｍＬ未満／分／１．７３ｍ２である。クレアチニンが、アッセイ検証または検出の下限未満であると検査所見から判断した場合、最低限カットオフ値を使用してｅＧＦＲを推定する。
ｆ）治験責任医師及び神経放射線科医／神経外科医のチームの意見では、以前に臨床的に有意な頭蓋内出血を経験しており、ＩＣ及びＩＣＶ注射に対して禁忌を認める。
２．プレドニゾン、タクロリムス、またはシロリムスを使用する治療に対して禁忌であるいずれかの病態を有する
３．ＭＰＳ ＩＩまたは神経精神病態の診断に起因しない神経認知障害があり、ＰＩの意見では、研究結果の解釈に混乱を招き得る
４．腰椎穿刺に対して禁忌を示す
５．施設の神経放射線科医／神経外科医の意見、それに、メディカルモニターとの協議では、（大脳）心室シャントを有しており、対象者への投与と適切な投薬に影響を与え得る
６．ＨＳＣＴを受けている
７．ＡＡＶをベースとした遺伝子治療薬を使用する治療を受けたことがある
８．ＩＣＦに署名する４ヶ月以内に、イデュルスルファーゼ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））のくも膜下腔内（ＩＴ）投与を受けたことがある
９．イデュルスルファーゼ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））ＩＶを受けて、ＩＶイデュルスルファーゼ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））投与に関連すると考えられるアナフィラキシーなど、重度な過敏反応を経験した。現在もＩＶでイデュルスルファーゼの投与を受けており、投与を中断している、または毎週異なる用量レジメンを使っている場合には、ＲＥＧＥＮＸＢＩＯ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｍｏｎｉｔｏｒとの協議が必要である。
１０．ＩＣＦに署名する前の３０日以内または５半減期以内の、いずれか長い期間内に治験薬の投与を受けた
１１．スクリーニングの少なくとも１年前に完全な寛解に至っていないリンパ腫の既往歴、または、皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの既往歴を有する
１２．血小板数が、１００，０００未満／マイクロリットル（μＬ）である
１３．アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、またはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）が、３×ＵＬＮ超である、または総ビリルビンが１．５×ＵＬＮ超である。ただし、対象者がギルバート症候群の病歴を有している場合は、この限りではない
１４．医学的治療にもかかわらず、コントロール不良な高血圧症であり、これは、年齢、性別、身長の規範的基準に基づいて、１７歳以下の小児では、収縮期血圧または拡張期血圧が９９パーセンタイル＋５ｍｍＨｇ超と定義されている
１５．ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、またはＢ型肝炎またはＣ型肝炎ウイルス感染の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原またはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎またはＨＩＶ抗体のスクリーニング試験が陽性である
１６．臨床施設従業員または治験の実施に関与する他のいずれかの個人の一等親以内の家族、または、臨床施設従業員または治験の実施に関与する他のいずれかの個人
１７．ＰＩの見解では、対象者の安全性を損ねかねない臨床的に有意なＥＣＧ異常を有している
１８．ＰＩの見解では、対象者の安全性を損ねかねない、または治験への円滑な参加を妨げかねない、または、治験結果の解釈を歪めかねない、重大な、または不安定な医学的または心理的状態を有している
１９．ＰＩの見解では、対象者を過度のリスクに曝しかねない制御不能な発作を有する
１．ＩＣ及びＩＣＶ注射に対して次のいずれかの禁忌を示す：
ａ）治験に参加している神経放射線科医／神経外科医（施設あたり１名の神経放射線科医／神経外科医）のチームがベースラインＭＲＩ検査の検討を行って、ＩＣ及びＩＣＶ注射の双方に対して禁忌を認める
ｂ）この治験に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームが、入手可能な情報に基づいて、かつての頭部／頸部の手術歴が、ＩＣ及びＩＣＶ注射に対して禁忌を認める。
ｃ）コンピューター断層撮影、造影剤、または全身麻酔に対して禁忌を認める
ｄ）ＭＲＩまたはガドリニウムに対して禁忌を認める
ｅ）クレアチニンに基づいた推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）が３０ｍＬ未満／分／１．７３ｍ２である。クレアチニンが、アッセイ検証または検出の下限未満であると検査所見から判断した場合、最低限カットオフ値を使用してｅＧＦＲを推定する。
ｆ）治験責任医師及び神経放射線科医／神経外科医のチームの意見では、以前に臨床的に有意な頭蓋内出血を経験しており、ＩＣ及びＩＣＶ注射に対して禁忌を認める。
２．プレドニゾン、タクロリムス、またはシロリムスを使用する治療に対して禁忌であるいずれかの病態を有する
３．ＭＰＳ ＩＩまたは神経精神病態の診断に起因しない神経認知障害があり、ＰＩの意見では、研究結果の解釈に混乱を招き得る
４．腰椎穿刺に対して禁忌を示す
５．施設の神経放射線科医／神経外科医の意見、それに、メディカルモニターとの協議では、（大脳）心室シャントを有しており、対象者への投与と適切な投薬に影響を与え得る
６．ＨＳＣＴを受けている
７．ＡＡＶをベースとした遺伝子治療薬を使用する治療を受けたことがある
８．ＩＣＦに署名する４ヶ月以内に、イデュルスルファーゼ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））のくも膜下腔内（ＩＴ）投与を受けたことがある
９．イデュルスルファーゼ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））ＩＶを受けて、ＩＶイデュルスルファーゼ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））投与に関連すると考えられるアナフィラキシーなど、重度な過敏反応を経験した。現在もＩＶでイデュルスルファーゼの投与を受けており、投与を中断している、または毎週異なる用量レジメンを使っている場合には、ＲＥＧＥＮＸＢＩＯ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｍｏｎｉｔｏｒとの協議が必要である。
１０．ＩＣＦに署名する前の３０日以内または５半減期以内の、いずれか長い期間内に治験薬の投与を受けた
１１．スクリーニングの少なくとも１年前に完全な寛解に至っていないリンパ腫の既往歴、または、皮膚の扁平上皮細胞または基底細胞癌以外の別のがんの既往歴を有する
１２．血小板数が、１００，０００未満／マイクロリットル（μＬ）である
１３．アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、またはアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）が、３×ＵＬＮ超である、または総ビリルビンが１．５×ＵＬＮ超である。ただし、対象者がギルバート症候群の病歴を有している場合は、この限りではない
１４．医学的治療にもかかわらず、コントロール不良な高血圧症であり、これは、年齢、性別、身長の規範的基準に基づいて、１７歳以下の小児では、収縮期血圧または拡張期血圧が９９パーセンタイル＋５ｍｍＨｇ超と定義されている
１５．ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、またはＢ型肝炎またはＣ型肝炎ウイルス感染の既往歴、またはＢ型肝炎表面抗原またはＢ型肝炎コア抗体、またはＣ型肝炎またはＨＩＶ抗体のスクリーニング試験が陽性である
１６．臨床施設従業員または治験の実施に関与する他のいずれかの個人の一等親以内の家族、または、臨床施設従業員または治験の実施に関与する他のいずれかの個人
１７．ＰＩの見解では、対象者の安全性を損ねかねない臨床的に有意なＥＣＧ異常を有している
１８．ＰＩの見解では、対象者の安全性を損ねかねない、または治験への円滑な参加を妨げかねない、または、治験結果の解釈を歪めかねない、重大な、または不安定な医学的または心理的状態を有している
１９．ＰＩの見解では、対象者を過度のリスクに曝しかねない制御不能な発作を有する
免疫抑制療法に関連する除外基準：
２０．タクロリムス、シロリムス、またはプレドニゾロンに対して過敏反応の既往歴を有する
２１．原発性免疫不全（例えば、共通可変免疫不全症候群）、脾臓摘出術、または感染症に罹患しやすいあらゆる基礎疾患の既往歴のある患者
２２．帯状疱疹（ＶＺＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、またはエプスタイン－バール・ウイルス（ＥＢＶ）に感染しており、スクリーニング前の少なくとも１２週間に完全に解消されていない
２３．入院または親世代抗感染症薬による治療を必要とするいずれかの感染症が、２回目の受診の少なくとも８週間前に消散していない
２４．２回目の受診前の１０日以内に経口抗感染症薬（抗ウイルス薬を含む）を必要とするいずれかの活動性の感染症に罹患している
２５．スクリーニングの間の活動性の結核（ＴＢ）またはＱｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ－ＴＢ Ｇｏｌｄ試験での陽性結果
２６．２日目の４週間前から何らかの生ワクチンを受けている
２７．ＩＣＦに署名をする前の８週間以内に大手術を受けた、または、治験期間中に大手術の計画がある
２８．登録して６ヶ月以内にアデノイド摘出術または扁桃摘出術の必要性が考えられる。アデノイド摘出術または扁桃摘出術を予定する場合には、スクリーニング前に行う。
２９．好中球数の絶対数が、１．３×１０３未満／μＬである
３０．ＰＩが免疫抑制療法に適さないと考える病態または正常でない検査所見がある。
２０．タクロリムス、シロリムス、またはプレドニゾロンに対して過敏反応の既往歴を有する
２１．原発性免疫不全（例えば、共通可変免疫不全症候群）、脾臓摘出術、または感染症に罹患しやすいあらゆる基礎疾患の既往歴のある患者
２２．帯状疱疹（ＶＺＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、またはエプスタイン－バール・ウイルス（ＥＢＶ）に感染しており、スクリーニング前の少なくとも１２週間に完全に解消されていない
２３．入院または親世代抗感染症薬による治療を必要とするいずれかの感染症が、２回目の受診の少なくとも８週間前に消散していない
２４．２回目の受診前の１０日以内に経口抗感染症薬（抗ウイルス薬を含む）を必要とするいずれかの活動性の感染症に罹患している
２５．スクリーニングの間の活動性の結核（ＴＢ）またはＱｕａｎｔｉｆｅｒｏｎ－ＴＢ Ｇｏｌｄ試験での陽性結果
２６．２日目の４週間前から何らかの生ワクチンを受けている
２７．ＩＣＦに署名をする前の８週間以内に大手術を受けた、または、治験期間中に大手術の計画がある
２８．登録して６ヶ月以内にアデノイド摘出術または扁桃摘出術の必要性が考えられる。アデノイド摘出術または扁桃摘出術を予定する場合には、スクリーニング前に行う。
２９．好中球数の絶対数が、１．３×１０３未満／μＬである
３０．ＰＩが免疫抑制療法に適さないと考える病態または正常でない検査所見がある。
大きさ及び出力計算
コンストラクト１の安全性及び忍容性を評価し、及び、バイオマーカー及び臨床有効性項目に対するコンストラクト１の３つの用量レベル全体の効果を調査するために、それぞれの用量コホートにおいて３～９名の対象及び最大で１８名の対象を登録する。
治験薬
コンストラクト１：ＡＡＶ９．ＣＢ７．ｈＩＤＳ（ヒトイズロン酸－２－スルファターゼ発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス血清型９キャプシド）。図５を参照されたい。
投与量
コンストラクト１は、単一のＩＣ注入、または単一のＩＣＶ注入で優先的に投与される、またはＩＣ投与が困難である、または潜在的に安全でないことが証明されておれば、限定したＣＳＦ区画内の標的組織へのベクターの直接送達が許容される。頸部穿刺（Ｃ１－Ｃ２）は、脊髄造影法の造影剤投与のために使用する通常の臨床処置であるが、画像支援型後頭下穿刺は、主要な臨床的投与経路として提案されている。これは、非臨床研究で使用する投与経路を模倣しており、そして、ＭＰＳ ＩＩの患者では、Ｃ１－Ｃ２穿刺に関連するリスクを実質的に高めるＣ１－Ｃ２ ＩＴ空間での異常狭窄の発生率が高いので、意図した患者集団でのＣ１－Ｃ２穿刺よりも好都合であると考えられる。この手順を行う前に、それぞれの対象者は、治験に参加している神経放射線科医／神経外科医のチームが検討した領域の磁気共鳴画像（ＭＲＩ）を撮る。ＩＣ注入の実施が安全でないと考えられる場合には、対象者は、ＩＣＶ注入を考慮する。
コンストラクト１は、コンストラクト１の治験薬概要書の情報に精通しており、かつ、臨床試験の実施経験のある選ばれた治験責任医師だけが、治験用途においてのみ使用することが意図される。コンストラクト１は、スポンサーが支援／承認した臨床試験に登録しており、かつ、同意書を提出したヒト対象者だけに投与し得る。
６．１０．２．安全性及び有効性の評価基準
主要評価項目：
● 第２４週目までの安全性：ＡＥ及びＳＡＥ
主要評価項目：
● 第２４週目までの安全性：ＡＥ及びＳＡＥ
副次評価項目：
●第１０４週目までの安全性：ＡＥ及びＳＡＥ
●ＣＳＦ（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、血漿（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、及び尿（ＧＡＧ）でのバイオマーカー
●認知、行動、及び適応機能の神経発達パラメーター：
－ Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ） （Ｂａｙｌｅｙ，２００５，Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄ．）
－ Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｘｐａｎｄｅｄ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ Ｆｏｒｍ （ＶＡＢＳ－ＩＩ） （Ｓｐａｒｒｏｗ ｅｔ ａｋ，２００５，Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄ．）
●定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によるコンストラクト１ ＤＮＡに対するＣＳＦ、血清、尿でのベクター濃度
●第１０４週目までの安全性：ＡＥ及びＳＡＥ
●ＣＳＦ（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、血漿（ＧＡＧ、Ｉ２Ｓ活性）、及び尿（ＧＡＧ）でのバイオマーカー
●認知、行動、及び適応機能の神経発達パラメーター：
－ Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ） （Ｂａｙｌｅｙ，２００５，Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，３ｒｄ Ｅｄ．）
－ Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｘｐａｎｄｅｄ Ｉｎｔｅｒｖｉｅｗ Ｆｏｒｍ （ＶＡＢＳ－ＩＩ） （Ｓｐａｒｒｏｗ ｅｔ ａｋ，２００５，Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ，２ｎｄ Ｅｄ．）
●定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によるコンストラクト１ ＤＮＡに対するＣＳＦ、血清、尿でのベクター濃度
探索評価項目：
●免疫原性測定
●ＡＡＶ９に対する中和抗体価、及びＣＳＦと血清でのＩ２Ｓに対する結合抗体価
●酵素結合イムノスポット（ＥＬＩＳＰＯＴ）アッセイ：ＡＡＶ９及びＩ２Ｓに対するＴ 細胞応答
●フローサイトメトリー：ＡＡＶ９及びＩ２Ｓ特異的制御性Ｔ細胞
●脳のＭＲＩで評価したＣＮＳ構造異常
●腹部の超音波で評価した肝臓及び脾臓のサイズ
●心エコー図による弁膜症及び左室心筋重量係数に関する心臓評価
●聴覚脳幹応答（ＡＢＲ）検査、または行動聴力及び耳音響放射試験で測定した聴覚能力の変化
●ＩＶ ＥＲＴ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））を一時的に中止した対象者での血漿及び尿中ＧＡＧ
●ＰｅｄｓＱＬ
●睡眠評価（Ｆｅｒｒｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｓｌｅｅｐ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；１０（４）：４５７－４６３）
●疾患の臨床評価
●疾患の介護者評価
●日常生活の活動度（Ｔａｎｊｕａｋｉｏ ｅｔ ａｌ．２０１５，Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ Ｍｅｔａｂ，１１４（２）：１６１－１６９；Ｋａｔｏ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｂｒａｉｎ Ｄｅｖ，２９（５）：２９８－３０５）
●病気の負担
６．１０．３．略語と用語の定義の表
６．１０．４．免疫抑制療法
●免疫原性測定
●ＡＡＶ９に対する中和抗体価、及びＣＳＦと血清でのＩ２Ｓに対する結合抗体価
●酵素結合イムノスポット（ＥＬＩＳＰＯＴ）アッセイ：ＡＡＶ９及びＩ２Ｓに対するＴ 細胞応答
●フローサイトメトリー：ＡＡＶ９及びＩ２Ｓ特異的制御性Ｔ細胞
●脳のＭＲＩで評価したＣＮＳ構造異常
●腹部の超音波で評価した肝臓及び脾臓のサイズ
●心エコー図による弁膜症及び左室心筋重量係数に関する心臓評価
●聴覚脳幹応答（ＡＢＲ）検査、または行動聴力及び耳音響放射試験で測定した聴覚能力の変化
●ＩＶ ＥＲＴ（ＥＬＡＰＲＡＳＥ（登録商標））を一時的に中止した対象者での血漿及び尿中ＧＡＧ
●ＰｅｄｓＱＬ
●睡眠評価（Ｆｅｒｒｅｉｒａ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｓｌｅｅｐ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；１０（４）：４５７－４６３）
●疾患の臨床評価
●疾患の介護者評価
●日常生活の活動度（Ｔａｎｊｕａｋｉｏ ｅｔ ａｌ．２０１５，Ｍｏｌ Ｇｅｎｅｔ Ｍｅｔａｂ，１１４（２）：１６１－１６９；Ｋａｔｏ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｂｒａｉｎ Ｄｅｖ，２９（５）：２９８－３０５）
●病気の負担
６．１０．３．略語と用語の定義の表
コルチコステロイド
●ベクター投与（１日目、前投与）の朝に、患者に対して、少なくとも３０分間にわたって、メチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇ（最大５００ｍｇ）をＩＶで与える。メチルプレドニゾロンは、ＩＰの腰椎穿刺及びＩＣ注射の前に投与すべきである。アセトアミノフェン及び抗ヒスタミン剤の前投与は、治験責任医師の裁量で任意に行う。
●第１２週目までにプレドニゾンを中止することを目標として、２日目に経口プレドニゾンを開始する。プレドニゾンの用量は、以下の通りである：
－ ２日目～第２週の終わりまで：０．５ｍｇ／ｋｇ／日
－ 第３週及び４週：０．３５ｍｇ／ｋｇ／日
－ 第５週～８週：０．２ｍｇ／ｋｇ／日
－ 第９週～１２週：０．１ｍｇ／ｋｇ
－ プレドニゾンは、第１２週の後に中止する。プレドニゾンの正確な用量は、一段階増やした臨床上実用的な用量に調整することができる。
●注記：プレドニゾロンは、治験責任医師者の裁量で、１：１の変換率でプレドニゾンに置換し得る。
●ベクター投与（１日目、前投与）の朝に、患者に対して、少なくとも３０分間にわたって、メチルプレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇ（最大５００ｍｇ）をＩＶで与える。メチルプレドニゾロンは、ＩＰの腰椎穿刺及びＩＣ注射の前に投与すべきである。アセトアミノフェン及び抗ヒスタミン剤の前投与は、治験責任医師の裁量で任意に行う。
●第１２週目までにプレドニゾンを中止することを目標として、２日目に経口プレドニゾンを開始する。プレドニゾンの用量は、以下の通りである：
－ ２日目～第２週の終わりまで：０．５ｍｇ／ｋｇ／日
－ 第３週及び４週：０．３５ｍｇ／ｋｇ／日
－ 第５週～８週：０．２ｍｇ／ｋｇ／日
－ 第９週～１２週：０．１ｍｇ／ｋｇ
－ プレドニゾンは、第１２週の後に中止する。プレドニゾンの正確な用量は、一段階増やした臨床上実用的な用量に調整することができる。
●注記：プレドニゾロンは、治験責任医師者の裁量で、１：１の変換率でプレドニゾンに置換し得る。
シロリムス
●ベクター投与の２日前（－２日目）：４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量のシロリムスの負荷用量を投与する。
●－１日目以降：０．５ｍｇ／ｍ２／日のシロリムスを１日２回に分割して投与する、目標血中レベルを１～３ｎｇ／ｍｌとする。
●シロリムスを、第４８週目の受診後に中止する。
●ベクター投与の２日前（－２日目）：４時間ごとに１ｍｇ／ｍ２×３用量のシロリムスの負荷用量を投与する。
●－１日目以降：０．５ｍｇ／ｍ２／日のシロリムスを１日２回に分割して投与する、目標血中レベルを１～３ｎｇ／ｍｌとする。
●シロリムスを、第４８週目の受診後に中止する。
タクロリムス
●２日目（ＩＰ投与の翌日）に、タクロリムスを１日２回、０．０５ｍｇ／ｋｇの用量で開始する、２４週間にわたり２～４ｎｇ／ｍＬの血中レベルを達成するように調整する。
●タクロリムスは第２４週目の受診から８週にわたって漸減する。第２４週目に、用量をおよそ５０％まで減少させる。第２８週目に、用量をおよそ５０％までさらに減少させる。タクロリムスは、第３２週目に中止する。
●タクロリムス及びシロリムスの血中レベルをモニタリングする。
●２日目（ＩＰ投与の翌日）に、タクロリムスを１日２回、０．０５ｍｇ／ｋｇの用量で開始する、２４週間にわたり２～４ｎｇ／ｍＬの血中レベルを達成するように調整する。
●タクロリムスは第２４週目の受診から８週にわたって漸減する。第２４週目に、用量をおよそ５０％まで減少させる。第２８週目に、用量をおよそ５０％までさらに減少させる。タクロリムスは、第３２週目に中止する。
●タクロリムス及びシロリムスの血中レベルをモニタリングする。
プレドニゾンの投与は ０．５ｍｇ／ｋｇ／日で開始する、そして、第１２週目の受診まで漸減する。
タクロリムスの用量調整は、最初の２４週間は、全血トラフ濃度を２～４ｎｇ／ｍＬ以内に維持する。第２４週目に、用量を約５０％にまで減らす。第２８週目には、用量を、さらに約５０％減らす。タクロリムスは、第３２週目に中止する。シロリムスの用量調整は、全血トラフ濃度を１～３ｎｇ／ｍＬ以内に維持するようにして行う。用量調整は、臨床薬剤師が行う。対象者は、濃度モニタリングで、さらなる用量調整を行う前に、少なくとも７～１４日間、新しい維持用量を継続するべきである。
トリメトプリム／スルファメトキサゾール（Ｂａｃｔｒｉｍ（商標）；ＢＡＣＴＲＩＭ（商標） ＵＳＰＩ，２０１３）を使用するＰｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ肺炎（ＰＣＰ）の予防は、週に３回の投与（投与スケジュールの例；月曜日、水曜日、金曜日）を、－２日目に５ｍｇ／ｋｇの用量で開始して、第４８週目まで継続する。トリメトプリム／スルファメトキサゾール（ＢＡＣＴＲＩＭ（商標） ＵＳＰＩ、２０１３）の使用に関連するリスクについては、処方情報を参照されたい。サルファアレルギーの患者については、代替薬として、ペンタミジン、ダプソン、アトバコンがある。
ＡＮＣが５００ｍｍ３未満であれば、抗真菌予防薬を始める。治療レジメンは、適切な超専門医と協議して、地域の施設の標準治療を勘案して決定する。
カルシニューリン阻害剤とラパムネとの併用は、カルシニューリン阻害剤誘発血栓性微小血管障害のリスクを高め得る。血栓性微小血管障害（ＴＭＡ）とは、血小板減少症、微小血管新生性溶血性貧血、及び様々な臓器系の関与を特徴とする障害の群である。
これは、重度の血小板減少症（＜３０×１０９／Ｌ）、血液塗抹標本上の破砕赤血球を特徴とする微小血管障害性溶血性貧血、網状赤血球数の増加（＞１２０×１０９／Ｌ）、乳酸デヒドロゲナーゼレベル（ＬＤＨ）の上昇、及び、皮膚及び粘膜出血、衰弱、及び呼吸困難の徴候を呈し得る。治療として、タクロリムスの中止と、血漿交換の開始がある。
連続試験の間にＣＭＶまたはＥＢＶウイルスゲノムの上昇を検出した場合に、ＩＳを低減する、または、抗ウイルス療法を開始するとの決定は、適切な超専門医と協議をして、地域の施設の標準治療を勘案して決定する。
６．１１ 実施例１１：ＭＰＳ ＩＩマウスにおける薬理学的研究
最小有効用量研究（治験＃１）：この研究は、ＭＰＳ ＩＩのマウスモデルにおいて、注射後（ｐｉ）３ヶ月の観察期間を設けて、ＩＣＶ経路を介して単回用量を投与したコンストラクト１（ＡＡＶ９．ＣＢ７．ＣＩ．ｈＩＤＳ．ｒＢＧ）の最小有効用量（ＭＥＤ）を決定するようにデザインした。限定した安全性評価（導入遺伝子及び脳組織病理学に対する体液性免疫応答の評価）も含めた。
最小有効用量研究（治験＃１）：この研究は、ＭＰＳ ＩＩのマウスモデルにおいて、注射後（ｐｉ）３ヶ月の観察期間を設けて、ＩＣＶ経路を介して単回用量を投与したコンストラクト１（ＡＡＶ９．ＣＢ７．ＣＩ．ｈＩＤＳ．ｒＢＧ）の最小有効用量（ＭＥＤ）を決定するようにデザインした。限定した安全性評価（導入遺伝子及び脳組織病理学に対する体液性免疫応答の評価）も含めた。
コンストラクト１を、２～３ヶ月齢のＣ５７ＢＬ／６ ＩＤＳ γ／－（ＭＰＳ ＩＩ）マウス（雄１６匹／群）に、１．３×１０９、１．３×１０１０、または１．３×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量（研究報告に示された当初の方法からｄｄＰＣＲ力価に対する変換係数に基づいて算出した）の用量で、０日目に、ＩＣＶで投与した。２１日目に、処置した用量群のそれぞれから８匹のマウスを安楽死させ、及び、ＣＮＳ Ｉ２Ｓ活性、生体内分布、及び、抗ｈＩ２Ｓ免疫原性の評価のために剖検した。６０日目から８９日目の間に、野生型マウスと未処理のＭＰＳ ＩＩマウスを、一連の神経行動アッセイ（オープンフィールド、Ｙ迷路、文脈的恐怖条件付け、及び新規物体認識）で評価を行い、これらの評価項目に対する疾患状態の影響の特徴決定をした。これらの初期アッセイの結果に基づいて、残りの処置マウスを、長期記憶（文脈的恐怖条件付け、及び新規物体認識）を評価した２つのアッセイにおいて評価した。
コンストラクト１のＩＣＶ投与から約３ヶ月後に、残りのすべてのマウスを安楽死させ、及び剖検した。血清及びＣＳＦは、Ｉ２Ｓ活性ならびに抗Ｉ２Ｓ抗体に関する血清について評価した。肝臓及び心臓を、ＧＡＧ組織含量について評価した。脳全体のリソソーム貯蔵（一次ＧＡＧ貯蔵、及び二次ガングリオシド貯蔵の双方）は、ＬＩＭＰ２及びＧＭ３の免疫組織化学的染色によって評価した。組織ヘキソサミニダーゼレベルは、ＭＰＳ ＩＩマウス及びＭＰＳ ＩＩ患者において高いこと、及びリソソーム恒常性攪乱のバイオマーカーであることが示されている。したがって、組織ヘキソサミニダーゼ酵素活性は、コンストラクト１投与に続くリソソーム機能のバイオマーカーとして測定した。脳の病理組織を評価して、有効性と安全性の両方を調査した。
最大で１．３×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量（ｄｄＰＣＲ法への変換係数を使用する）のコンストラクト１を、Ｃ５７ＢＬ／６ ＩＤＳ γ／－（ＭＰＳ ＩＩ）マウスにＩＣＶ投与することは、忍容性が良好であり、臨床的徴候または死亡率が無く、及び、ＣＮＳならびに末梢組織、特に、肝臓へ分布しており、したがって、ＣＳＦから末梢血に注入したウイルス粒子の再分布の一部を実証した。
ベクターの存在に対応して、注射の２１日後、及びＣＳＦでは３ヶ月で、脳におけるＩ２Ｓ活性の用量依存的増加に基づいたＩＤＳ遺伝子発現の証拠が認められ、酵素活性は、最高用量（脳組織）で野生型レベルに近似しており、及び、中用量及び高用量（ＣＳＦ）では、野生型に匹敵している、または、それよりも強くなっている。注射の３ヶ月後のすべての用量でのＣＮＳがＬＩＭＰ２及びＧＭ３染色が減少していることが示すように、リソソームコンパートメントの用量依存的正常化があった。Ｈ＆Ｅ染色した脳スライスでは、グリア空胞形成の量と頻度の用量依存的な減少、及びＭＰＳ ＩＩ ＣＮＳ表現型の指標である両親媒性物質のニューロン蓄積も認められた。Ｈ＆Ｅ染色切片でのＣＮＳリソソーム含量の変化及び疾患関連形態の改善に対応して、長期記憶の一方の尺度（新規物体認識、ＮＯＲ）には改善が認められたが、他方の文脈的恐怖条件付け（ＣＦＣ）では改善が認められなかった。ＮＯＲの改善において明確な用量反応は明らかではなかった。
血清Ｉ２Ｓ活性の用量依存的増加も、注射の３ヶ月後に認められており、酵素活性は、中用量及び高用量で野生型と同等またはそれを超えていた。血清でのＩ２Ｓ活性の正常化を反映して、処置したＭＰＳ ＩＩマウスは、肝臓及び心臓でのヘキソサミニダーゼ活性及びＧＡＧ含量の用量依存的な減少を示した。肝ヘキソサミニダーゼ及びＧＡＧレベルは、肝臓での全用量レベル、及び心臓での中用量及び高用量で正常化した。高度に形質導入した肝臓（二倍体ゲノムあたり１～１０ＧＣ）は、血清へのＩ２Ｓの分泌のデポー臓器として機能しており、高用量で心臓に認められるＧＡＧの減少に寄与し得る。
コンストラクト１、及び注入手順は、十分に許容されていた。マウスに臨床的異常は認められず、予定した安楽死まで全体が生存していた。組織病理学での脳でのコンストラクト１関連の毒性の証拠はなかったが、ＩＣＶ投与手順自体に関連する変化が一部のマウスで認められた。導入遺伝子に対する体液性免疫応答は軽微であり、一部の中用量及び高用量動物だけで認められ、それらの動物の健康または脳組織病理学に影響を与えなかった。
結論として、コンストラクト１は、すべての用量レベルでＭＰＳ ＩＩマウスにおいて良好に忍容しており、及び、ＭＰＳ ＩＩのＣＮＳ及び末梢パラメーターの両方の改善に関連したＩ２Ｓレベル（酵素活性）の用量依存的増加をもたらした。投与した最低用量、１．３×１０９ＧＣ／ｇ脳質量（ｄｄＰＣＲ法への変換係数）は、この治験での最小有効用量であった。
非ヒト霊長類でのＧＬＰ毒性学及び生体内分布研究（コンストラクト１の２つの用量レベルの安全性；治験＃２）：この治験では、成体の雄アカゲザルに画像誘導して後頭部下穿刺投与した後の最長で９０日間のコンストラクト１の２つの用量レベルの安全性、生体内分布、及び薬理学を評価した。対照品（Ｅｌｌｉｏｔｔ’ｓ Ｂ（登録商標）＋０．００１％ Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８緩衝剤）を、グループ１の１匹のマカクに後頭部下穿刺を介して投与した。コンストラクト１を含む同じ緩衝剤を、グループ２～３に無作為化した６匹の雄のアカゲザルに後頭部下穿刺を介して投与した。グループ２（ｎ＝３）のマカクは、５．６×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量（合計５×１０１３ＧＣ）の高用量（ＨＤ）でコンストラクト１を与え、グループ３（ｎ＝３）のマカクは、１．９×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量（合計１．７×１０１３ＧＣ）の低用量（ＬＤ）でコンストラクト１を与えた。血液及び脳脊髄液（ＣＳＦ）は、ベースライン、７、１４、２１、３０、４５、６０及び９０日目に一般的な安全パネルの一部として回収した。導入遺伝子産物ｈＩ２Ｓ、及びＡＡＶ９キャプシド、及びｈＩ２Ｓ酵素活性に対する体液性応答、血清及びＣＳＦにおいて、同時点で分析した。導入遺伝子産物ｈＩ２Ｓ及びＡＡＶ９キャプシドに対するＴ細胞応答を、血液では、ベースライン、１４、３０、６０、及び９０日目に評価し、及び脾臓及び骨髄では、９０日目に評価した。ベクターゲノムは、総血液及びＣＳＦに関しては、ベースライン、７、１４、２１、３０、４５、６０、及び９０日目に定量し、及び、尿及び糞便（排泄物）に関しては、ベースライン、５、３０、及び９０日目に定量する、ベクターを投与して９０±３日後に生存期間の治験段階が完了した後に、マカクを、さらなる評価のために剖検し、組織を回収した。ベクターゲノムの組織学的評価と生体内分布は、中枢神経系（ＣＮＳ）、末梢神経系（ＰＮＳ）、及び末梢臓器の組織の包括的なリストで行った。
投与手順に関連する有害事象（ＡＥ）は無く、臨床的一般観察、体重変化、血清化学、または凝固パラメーターに関する治療関連の異常も無かった。治療に関連した全血球計算（ＣＢＣ）の一過性の変化、すなわち、リンパ球増加症、単球増加症、及び好塩基球増加症は、７日目頃と３０日目頃に認められた。増加は緩慢で、ベースラインの３倍未満であり、ＨＤ動物と比較してＬＤ動物では一般的に顕著ではなかった。用量依存的なＣＳＦ軽度リンパ球性多細胞症（μＬあたり２０細胞未満）は、２１日目から４５日目の間に２／３のＨＤ動物で、３０日目に１／３のＬＤ動物で認められた。１匹（ＲＡ２２０３、ＨＤ）を除くすべての動物は、９０日目までに数値が正常化した。
導入遺伝子発現ｈＩ２Ｓに対する用量依存的な体液性免疫応答は、３／３ＨＤ及び２／３ＬＤの血清、及び２／３ＨＤ及び１／３ＬＤ動物のＣＳＦに存在していた。コンストラクト１で処理した１匹の動物（ＬＤ）だけが、タンパク質ｈＩ２Ｓに対する末梢血Ｔ細胞免疫応答を生成した。
すべての処置動物は、血清では、７日目から用量依存的抗ＡＡＶ９中和抗体（ＮＡｂ）応答を生成した。抗ＡＡＶ９ ＮＡｂレベルは、ＣＳＦで低く、４５日目まで出現せず、１匹の動物の治験を通して陰性のままであった。血液、脾臓、または骨髄でのＡＡＶ９キャプシドに対して検出可能なＴ細胞応答を示した動物は無かった。
用量依存的な治療関連の組織学的所見は、主に後根神経節（ＤＲＧ）内（単核球浸潤を伴う軽微から軽度の神経変性）、及び脊髄の対応する背側白質路内（軽微から軽度の背側軸索変性症）内に認められた。発生率と重症度の両方が、高用量と比較して低用量で減少した。ＤＲＧの炎症細胞は、主にＣＤ３＋ Ｔ細胞であり、ＣＤ２０＋ Ｂ細胞がより少ない数で存在はするが一貫していない。これらの組織学的所見は、認められた臨床的異常と関連していなかった。
高レベルのＡＡＶベクターゲノムが、すべてのコンストラクト１処置動物の脳、脊髄、及びＤＲＧ全体にわたって検出されており、すべてのＣＮＳ及びＤＲＧ試料の平均は、ＬＤグループで８．３０×１０４ＧＣ／μｇ ＤＮＡ、及びＨＤグループで１．５１×１０５ＧＣ／μｇ ＤＮＡであった。重要なベクターの生体内分布は、末梢、特に、肝臓でも認められており、これは、ＣＮＳよりも約１０倍高いレベルである。形質導入が最も少ない臓器は、眼、腎臓、睾丸、肺、及び甲状腺であり、レベルは、約１０３ＧＣ／μｇ ＤＮＡであり、ＣＮＳで測定したものの１％に相当する。
ベクターは、すべての動物において３０日目～９０日目の間にＣＳＦから除去されたが、それは時間の経過とともに減少したものであり、最後の９０日目の時点では全血では低レベルで持続していた。最も早い時点である７日目では、ベクターＤＮＡは、ＣＳＦよりも血中に豊富に存在しており、くも膜下腔内コンパートメントから体循環への急速な移行を示した。ベクターの切断は、主に、胆道クリアランスによって発生しており、尿よりも糞便で検出したゲノムコピー値が高くなった。また、切断は、尿中（５日目まで）よりも、糞便（３０日～９０日目まで）の方で持続性があった。
Ｉ２Ｓ活性は、すべての動物において、血清及びＣＳＦのベースラインを急速に超えた。活性レベルは、１匹（ＬＤ）を除くすべての動物で、２１日目から６０日目の間に血清のベースラインレベルを下回っていた。抗ｈＩ２Ｓ抗体の発症と血清活性の低下との間には相関関係があった。ＣＳＦでは、体液性免疫応答は、さほど顕著ではなく、Ｉ２Ｓ活性は変動的ではあったが、１匹（ＨＤ）を除いてすべての動物で、ベースラインレベルを上回っていた。血清またはＣＳＦのいずれにも明確な用量反応は無かった。
用量依存的な軽微から軽度の背側軸索変性症の観察に基づいて、観察不能有害作用レベル（ＮＯＡＥＬ）は、ヒトＩ２Ｓを発現するベクターであるコンストラクト１をＩＴに注射したアカゲザルでは定義できなかった。
免疫抑制を伴うコンストラクト１の安全性（治験＃３）：組織病理学的所見をさらに調査するために、免疫抑制（ＩＳ）と同じ用量レベル（１．９×１０１１及び５．６×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量）で、さらに９０日間の探索的ＮＨＰ ＧＬＰ研究を実施した。ＩＳレジメンは、ラパマイシンとミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）で構成しており、注射して６０日後に後者を中止した。トラフ薬物レベルを測定して、有効な薬物レベルを維持するために、必要に応じて用量を調整した。
投与手順に関連するＡＥはなく、臨床一般観察、体重変化、臓器重量、ＣＢＣ、血清化学、または凝固パラメーターに関するコンストラクト１関連異常も無かった。ＩＳ手順は、一部の炎症パラメーターの増加を伴う腸徴候を引き起こしており、コンストラクト１の投与とは関係の無い貧血を引き起こした。ＬＤグループの１匹（ＲＡ２２３３）だけが、剖検日にリンパ球性ＣＳＦ髄液細胞増加症（２３細胞／μＬ）を有していた。
高レベルのＡＡＶベクターゲノムを、コンストラクト１で処置したすべての動物の脳、脊髄、及び後根神経節のあらゆる箇所で検出した。有意なベクターの生体内分布は、末梢、特に、ＨＤ動物のＣＮＳの約１０倍のレベルを有しており、ＬＤ動物のＣＮＳと同等のレベルを持つ肝臓でも認められた。形質導入が最も少ない臓器は、眼、腎臓、睾丸、甲状腺であった。
１匹の動物は、肝臓、眼、心臓、肺、精巣、及び甲状腺の形質導入を完全に阻害する既存のＡＡＶ９ ＮＡｂ（ベースライン力価１：４０）を有していたが（検出されないゲノムコピー）、ＣＮＳ及びＰＮＳベクターの生体内分布は影響を受けなかった。ＣＮＳ、ＰＮＳ、及び末梢臓器でのベクターゲノムコピーの存在に対応して、Ｉ２Ｓ活性は、血清では１匹を除くすべての動物、及びＣＳＦではすべての動物においてベースライン上で急速に増加しており、このことは、コンストラクト１が、くも膜下腔内処理動物のＣＳＦ及び血清の両方に存在する機能性Ｉ２Ｓ酵素を発現することを示す。
ｈＩ２Ｓに対する体液性免疫応答は、存在しない、または最小応答にまで低下した。ＩＳ動物では、ｈＩ２Ｓに対するＴ細胞応答は無く、ＬＤグループだけで、ＡＡＶ９に対する最小から中等度の応答を認めた。６０日目のＭＭＦの中止後、リバウンド免疫応答は認められなかった。
ベクター投与後の軽度のＡＡＶ９ ＮＡｂ応答があり、これは、ＨＤ動物よりもＬＤ動物においてより明白であった。ＩＳは、ＬＤ動物のＡＡＶ９ ＮＡｂ応答に明確な効果を及ぼさなかった（ＩＳ動物と非ＩＳ動物の両方で低い）が、ＨＤ動物のＡＡＶ９ ＮＡｂ応答を調節する上で効率的であるように思われた。ＩＳは、コンストラクト１で処置したＨＤ及びＬＤ動物の両方において、ＣＳＦ ＡＡＶ９ ＮＡｂ応答を完全に予防した。
治療関連の組織病理学的所見は、低用量グループ及び高用量グループの両方で認められた。これらの所見は、脊髄背側白質路及び坐骨神経の軽微から軽度の軸索変性症を含む、背側白質路に突出する三叉神経節及び後根神経への単核細胞浸潤を伴う軽微から軽度の神経細胞体変性で構成されていた。ＤＲＧの免疫組織化学により、両方のグループでＣＤ３＋細胞の浸潤が同定され、低用量でも、時折、ＣＤ２０＋細胞が認められた。これらの所見は、治験＃２で認められたものと一般的に質的に類似していたので、このＮＨＰ治験では、ＩＳによって妨げられることはなかった。しかしながら、組織病理学に関して２つの治験の間には一部の相違があった。治験＃２では、所見の発生率と重症度に関して、低用量グループと高用量グループとの間に明らかな用量反応があった。治験＃３では、用量反応は認められなかった。高用量での軸索変性症の重症度は、治験＃２と比較して、治験＃３では低いようではあるが、治験＃３の低用量ＩＳでは、それら所見のような減少はしなかった。病理組織学的所見は、高用量で治療した動物において、ＩＳプロトコールによって一部は改善した（しかし、予防はされなかった）可能性がある。コピー数の大きなベクターが存在するにもかかわらず、脳または脊髄内に炎症は認められず、おそらくは、高度に血管新生され、かつ、ＣＮＳとは違って保護血液脳関門を欠いている後根神経節の解剖学的特異性を反映している。
概念実証研究（治験＃４）：この概念実証研究の目的は、ＭＰＳ ＩＩマウスでのＩＤＳ欠損の矯正、及び神経学的欠損の予防でのＩＣＶ投与したコンストラクト１の有効性を評価することにあった。
８週齢のＭＰＳ ＩＩ雄マウス（Ｃ５７ＢＬ／６ ＩＤＳ －／０；ｎ＝１３）を、ケタミン／キシラジンで麻酔し、コンストラクト１を、５μＬで、２．１５×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量で右外側脳室に投与した。１５匹の未処理ＭＰＳ ＩＩマウスと、１５匹の野生型マウスを、比較対象として使った。さらに別の３匹の動物を、生体内分布のために別々に使用した。
研究データを集めるためのタイムラインを、図１６に示す。血漿Ｉ２Ｓ活性評価のための血液は、投与して２８週間、４週間ごとに回収した。６ヶ月齢、野生型、処置済、及び未処置のマウスを、齧歯類の対象がプラットフォームから逃げ出すように周囲に穴を設けた円形の迷路であるＢａｒｎｅｓ迷路での行動に関して評価した。この迷路は、海馬機能が関与していると考えられているマウスの空間学習と記憶を評価するために使用する。未処置のＭＰＳ ＩＩマウスは、６日間の試験をしても、プラットフォームからの脱出は、野生型の同腹仔よりも有意に遅い（脱出までの平均潜時は、７１秒対ＷＴ動物の３０秒；ｐ≦０．０５）。試験の終わり（マウスが４０週齢のとき）に、クレアチニンとグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）含量を評価するために尿を採取し、それから、マウスを安楽死させた。選択した組織を回収し、剖検で秤量し、脳、脊髄、心臓、肺、肝臓、脾臓、腎臓の組織ホモジネートを調製し、Ｉ２Ｓ活性とＧＡＧ含有量を評価した。同じ組織ホモジネートからＤＮＡを単離し、ｑＰＣＲによってベクターの生体内分布を評価した。
処置したマウスは、試験の５日目及び６日目にＢａｒｎｅｓ迷路に対応する能力が高まっており、処置した動物と野生型同腹仔との間の対応力に有意差はなかった（ｐ＞０．０５）。
ベクターは、注射が失敗した１匹の動物を除いて、処置したマウスのＣＮＳを通して良好に分布した。ゲノム当量あたり１～１０個のベクターコピーが、右海馬を除く脳のほとんどの領域で認められ、右海馬では４９個のベクターコピー／ゲノム当量を検出した。
また、ベクターは、心臓、肺、脾臓、及び腎臓では、平均して、わずかに低いレベル（ゲノム当量あたり１ベクターコピー未満）であるが、処置したマウスの末梢臓器にも行き渡った。例外は、肝臓であり、平均で６０ベクターコピー／ゲノム当量を含んでいた。
処置したマウスでのＣＮＳ組織Ｉ２Ｓ活性レベルは、嗅球（５８％）と脊髄（７％）を除くと、野生型レベルの脳の１２領域では、９～２８％であった。末梢組織のＩ２Ｓ活性レベルは、野生型マウス（それぞれ、心臓、肝臓、脾臓、及び腎臓）よりも、１１倍、２７０倍、５倍、３倍も高かった。肺のＩ２Ｓ活性レベルは、野生型マウスの３４％であった。処置マウスでの血漿Ｉ２Ｓ活性は、野生型マウスよりも１６０倍高かった。未処置のＭＰＳ ＩＩマウスは、検出可能な血漿Ｉ２Ｓ活性を有していなかった。
尿タンパク質に対して正規化した処置したＭＰＳ ＩＩマウスでの尿中ＧＡＧレベルは、野生型マウスの尿中ＧＡＧレベルに匹敵しており、未処置のＭＰＳ ＩＩマウスよりも有意に低かった。ＣＮＳ組織及び末梢臓器の切片でのＧＡＧ含量は、未処置のＭＰＳ ＩＩ対照と比較して、処置したＭＰＳ ＩＩマウスで有意に低く（平均１２．５３対３０．５８；ｐ＜０．０１）、野生型マウスと有意差はなかった（平均１２．５３対１０．１１；ｐ＞０．０５）。肝臓ＧＡＧ含量の減少は、未処置のＭＰＳ ＩＩマウスと比較した処置動物の肝臓重量の減少と相関していた。処置したＭＰＳ ＩＩマウスでの肝臓重量は、野生型マウスと同等であった。
結論として、２．１５×１０１１ＧＣ／ｇ脳の用量のコンストラクト１は、ＭＰＳ ＩＩマウスにおいて良好な忍容性をもたらし、ＣＮＳ及び末梢の両方でのベクターの分布、ＣＮＳ及び末梢臓器Ｉ２Ｓ活性の増加、ならびにＭＰＳ ＩＩのＣＮＳ機能、及び末梢パラメーターの両方の改善をもたらした。
コンストラクト１を有するＭＰＳ ＩＩマウスにおいて実施した薬理学的研究から、ＡＡＶ９ベクターをベースとした産物の生体内分布、及び導入遺伝子発現プロファイルは、ＩＣＶ及びＩＣ経路について同等であることが示されており、ＩＣ投与が困難または潜在的に安全でないことが判明した場合の代替投与経路としてのＩＣＶの使用を支持する（治験＃２、治験＃４）。ＦＤＡは、動物から人間への用量スケーリングは、ターゲットコンパートメントのボリュームに基づくものとすべきとしている。したがって、動物の用量に等価な算出したヒト当量は、年齢によるＣＮＳコンパートメントの相対的なサイズに基づいている（ほとんどの種の脳質量に関する正確なデータが利用できるため、脳質量を尺度として使用する）。
したがって、提案した初期用量レベルは、マウスの薬理学研究をヒトにあてはめた。ヒトで提案した開始用量、１．３×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量（用量１）は、ＭＰＳ ＩＩマウスモデルでの観察に基づいている（治験＃１）。図１７に示すように、開始用量は、治験＃１で評価した中間用量を表しており、マウスで認められたＭＥＤよりも１０倍高い。また、ＮＨＰで実施した安全性／毒物学研究で評価した最低用量よりも約１４倍低い（１．９×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量；治験＃２、治験＃３）。用量２は、６．５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量（すなわち、低用量の５倍）であり、ＮＨＰ毒性試験で評価した最低用量より３倍低い（すなわち、１．９×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量）。用量３及び用量３の拡大コホート（ＥＣ）は、２．０×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量（ポリＡアッセイ）または２．９×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量（導入遺伝子特異的アッセイ）であり、これは用量２から３倍増えており、ＮＨＰ研究で使用する最低用量に相当する。用量３ ＥＣ用の医薬品でのゲノムコピー（ＧＣ）の数を決定するために使用する分析アッセイを改変して、コンストラクト１導入遺伝子に対して特異的にした。同じロットを試験する場合、改変したアッセイは、従前の用量コホートで使用したアッセイ（例えば、ポリＡ ＰＣＲアッセイ、及び導入遺伝子特異的アッセイ）よりも１．４８倍も大きなＧＣ数を報告している。しかしながら、有効用量（対象が経験する用量）は変化しない。
いずれのＮＨＰにも治療関連の臨床的有害事象または所見は認められなかったが、用量依存的治療関連の組織学的所見は、脊髄の背側根神経節（ＤＲＧ）、及びそれらに対応する背側白質路内で生じた。発生率と重症度の両方が、５．６×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量の高用量と比較して、１．９×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量の用量にまで減少した。投与した産物の総量は、ＣＳＦの総体積の１０％を超えない（乳児の脳では約５０ｍＬ、成人の脳では約１５０ｍＬと推定される）。
６．１２ 実施例１２：ＭＰＳ Ｉ及びＭＰＳ ＩＩの神経障害型を区別するバイオマーカーの同定
本治験では、健常対照（ｎ＝３１；１ヶ月齢～８９歳までの年齢範囲）、ＭＰＳ Ｉ（神経障害性ｎ＝７、非神経障害性ｎ＝２；１歳～２８歳までの年齢範囲）、及びＭＰＳ ＩＩ（神経障害性ｎ＝１４、非神経障害性ｎ＝４；４歳～２９歳までの年齢範囲）患者から得た脳脊髄液（ＣＳＦ）試料を使用して、ヘパラン硫酸（ｔ－ＨＳ）及びＧＡＧヘパラン硫酸（ＨＳ）の総量を決定した。ＭＰＳ患者は、それぞれ、７０以下または７０未満のＩＱに基づいて、神経障害性または非神経障害性に分類した。また、総ＨＳは、４つの二糖の合計として算出した（図１８）。簡潔に説明すると、酵素消化後の脳脊髄液（ＣＳＦ）での４つの二糖（Ｄ２Ｓ６、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６）の合計として、ヘパラン硫酸（ｔ－ＨＳ）の総量を定量するための生物分析質量分析法を開発及び検証した。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳアッセイは、同位体標識二糖誘導体を内部標準として使用して、ヒト脳脊髄液（ＣＳＦ）でのＨＳ二糖Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、及びＤ２Ｓ６を測定した。ＨＳ多糖を、酵素（ヘパリナーゼＩ、ＩＩ、ＩＩＩ）によって二糖に消化して、ＬＣ－ＭＳで分析する前に誘導体化する。二糖の分離は、逆相ＨΜＬＣで達成され、二糖は、ＭＳ／ＭＳを使用して検出した。
本治験では、健常対照（ｎ＝３１；１ヶ月齢～８９歳までの年齢範囲）、ＭＰＳ Ｉ（神経障害性ｎ＝７、非神経障害性ｎ＝２；１歳～２８歳までの年齢範囲）、及びＭＰＳ ＩＩ（神経障害性ｎ＝１４、非神経障害性ｎ＝４；４歳～２９歳までの年齢範囲）患者から得た脳脊髄液（ＣＳＦ）試料を使用して、ヘパラン硫酸（ｔ－ＨＳ）及びＧＡＧヘパラン硫酸（ＨＳ）の総量を決定した。ＭＰＳ患者は、それぞれ、７０以下または７０未満のＩＱに基づいて、神経障害性または非神経障害性に分類した。また、総ＨＳは、４つの二糖の合計として算出した（図１８）。簡潔に説明すると、酵素消化後の脳脊髄液（ＣＳＦ）での４つの二糖（Ｄ２Ｓ６、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６）の合計として、ヘパラン硫酸（ｔ－ＨＳ）の総量を定量するための生物分析質量分析法を開発及び検証した。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳアッセイは、同位体標識二糖誘導体を内部標準として使用して、ヒト脳脊髄液（ＣＳＦ）でのＨＳ二糖Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、及びＤ２Ｓ６を測定した。ＨＳ多糖を、酵素（ヘパリナーゼＩ、ＩＩ、ＩＩＩ）によって二糖に消化して、ＬＣ－ＭＳで分析する前に誘導体化する。二糖の分離は、逆相ＨΜＬＣで達成され、二糖は、ＭＳ／ＭＳを使用して検出した。
結果は、ＨＳ組成物が、正常な対照と比較して、ＭＰＳ Ｉ及びＭＰＳ ＩＩでの二糖濃度が異なることを明らかにした（図１９Ａ～Ｃ）。加えて、Ｄ２Ｓ６濃度は、非神経障害性ＭＰＳ Ｉ及びＭＰＳ ＩＩ及び健常対照と比較して、神経障害において上昇していた（図２０）。なので、ＣＳＦ試料でのＤ２Ｓ６の濃度は、非神経障害性ＭＰＳ Ｉ及びＭＰＳ ＩＩの患者から神経障害を有する患者を分離した（図２０）。したがって、ＣＳＦ Ｄ２Ｓ６は、未発症患者において神経障害性及び非神経障害性ＭＰＳ ＩＩを区別するための診断バイオマーカーを提供することができる。加えて、Ｄ２Ｓ６は、ＭＰＳ ＩＩの欠損イズロン酸－２－スルファターゼ酵素の直接基質であり、及び、酵素活性の直接推定値を提供して、モニタリング療法での潜在的な有用性を提供する。この研究で得た、正常者、神経障害性ＭＰＳ Ｉ、非神経障害性ＭＰＳ Ｉ、神経障害性ＭＰＳ ＩＩ、及び非神経障害性ＭＰＳ ＩＩでのＨＳ二糖（例えば、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ａ６、Ｄ０Ｓ０、及びＤ２Ｓ６）の組成パーセントを、図２１に示す。図２１は、健常対象と比較して、ＭＰＳ Ｉ及びＭＰＳ ＩＩ ＣＳＦ試料で、４つの二糖（例えば、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ａ６、Ｄ０Ｓ０、及びＤ２Ｓ６）の増加が認められたことを示している。ＨＳ組成分析は、Ｄ２Ｓ６が、神経障害性ＭＰＳ Ｉ及びＭＰＳ ＩＩのそれぞれで、ＣＳＦ ＨＳの２１％及び２３．３％を構成していたが、健常対照では、ＣＳＦ ＨＳの１１．２％を構成するにすぎないことを示した。
６．１３ 実施例１３：コンストラクト２（ヒトＩＤＵＡ（ｈＩＤＵＡ）をコードするｒＡＡＶ９）を使用したＭＰＳ Ｉの第Ｉ／ＩＩ相試験
第Ｉ／ＩＩ相治験を行って、コホート１の参加者には、脳質量１グラムあたり１．０×１０１０ゲノムコピーの用量で、及びコホート２の参加者には、脳質量１グラムあたり５．０×１０１０ゲノムコピーの用量でコンストラクト２を与えた（図３０は、第Ｉ／ＩＩ相治験を表す）。コンストラクト２は、ｈＩＤＵＡ発現カセットを含む血清型９キャプシドの非複製組換えＡＡＶである（ＰＣＴ／ＵＳ２０２１／０１４１２９；ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０１５９１０；及びＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０４２２０５を参照されたい、これらの各々は、参照により、全内容を本明細書に組み込む）。主要評価項目は安全性であり、副次評価項目として：ＣＳＦバイオマーカー（硫酸ヘパリン）、神経発達評価（Ｂａｙｌｅｙ／ＷＡＳＩ）、介護者報告アウトカム（Ｖｉｎｅｌａｎｄ）、及び全身バイオマーカー（尿及び血漿）がある。投与したときの参加者の年齢（合計で６名の参加者）は、第１／２相試験で４ヶ月齢～１３歳の範囲であり、及び単一患者試験で２０ヶ月であった。第１／２相治験及び単一患者試験の参加者でのＩＤＵＡ変異には、ナンセンス／フレームシフト、ナンセンス／ヌルバリアントスプライス部位、及びミスセンスがあった。治験に関連するＳＡＥは観察されず、免疫抑制は２８週目以降に中止した。表１６は、第Ｉ／ＩＩ相治験、及び単一の参加者試験をまとめてある（図３１Ａ～３１Ｂ）。ＣＳＦヘパラン硫酸は、利用可能な最後の時点までに、すべての参加者で減少しており、測定可能なＣＳＦ ＩＤＵＡ酵素活性が、第１／２治験の４名の参加者のうちの３名の患者と、単一患者ＩＮＤ参加者で認められた。
第Ｉ／ＩＩ相治験を行って、コホート１の参加者には、脳質量１グラムあたり１．０×１０１０ゲノムコピーの用量で、及びコホート２の参加者には、脳質量１グラムあたり５．０×１０１０ゲノムコピーの用量でコンストラクト２を与えた（図３０は、第Ｉ／ＩＩ相治験を表す）。コンストラクト２は、ｈＩＤＵＡ発現カセットを含む血清型９キャプシドの非複製組換えＡＡＶである（ＰＣＴ／ＵＳ２０２１／０１４１２９；ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０１５９１０；及びＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０４２２０５を参照されたい、これらの各々は、参照により、全内容を本明細書に組み込む）。主要評価項目は安全性であり、副次評価項目として：ＣＳＦバイオマーカー（硫酸ヘパリン）、神経発達評価（Ｂａｙｌｅｙ／ＷＡＳＩ）、介護者報告アウトカム（Ｖｉｎｅｌａｎｄ）、及び全身バイオマーカー（尿及び血漿）がある。投与したときの参加者の年齢（合計で６名の参加者）は、第１／２相試験で４ヶ月齢～１３歳の範囲であり、及び単一患者試験で２０ヶ月であった。第１／２相治験及び単一患者試験の参加者でのＩＤＵＡ変異には、ナンセンス／フレームシフト、ナンセンス／ヌルバリアントスプライス部位、及びミスセンスがあった。治験に関連するＳＡＥは観察されず、免疫抑制は２８週目以降に中止した。表１６は、第Ｉ／ＩＩ相治験、及び単一の参加者試験をまとめてある（図３１Ａ～３１Ｂ）。ＣＳＦヘパラン硫酸は、利用可能な最後の時点までに、すべての参加者で減少しており、測定可能なＣＳＦ ＩＤＵＡ酵素活性が、第１／２治験の４名の参加者のうちの３名の患者と、単一患者ＩＮＤ参加者で認められた。
神経発達評価には、０～４２ヶ月の年代または発達年齢に関するＢａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ， Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ）；６歳超の年代または発達年齢に関するＷｅｃｈｓｌｅｒ Ａｂｂｒｅｖｉａｔｅｄ Ｓｃａｌｅ ｏｆ Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｃｅ （ＷＡＳＩ－ＩＩ）、及び、Ｖｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅ， Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＶＡＢＳ－ＩＩＩ）がある。コホート１及び２の参加者に関する認知、表現言語、及び微細運動テストの結果を、図３２Ａ～図３２Ｆに示す。すべての参加者は、最後の評価において、認知、表現言語、及び微細運動サブテストに関して、規範的平均の２ＳＤ以内の継続的技能を獲得していた（図３２Ａ～３２Ｆ）。単一患者研究の神経発達機能ＢＳＩＤ認知を、ＭＰＳ Ｉ自然成長と比較した。認知機能は、コンストラクト２を投与して２０ヶ月後の最後の評価において、規範的範囲の２ＳＤ内にとどまることが認められた（図３３）。４２ヶ月齢に近い参加者でのＢＳＩＤ認知は、利用可能な自然成長データよりも高い年齢同等性スコアを示した（図３３）。さらに、１３歳の第１／２相治験参加者は、コンストラクト２を投与して５２週間後で、ＷＡＳＩ合成数、及びＶＡＢＳの大部分の要素の改善を実証した（図３４）。また、全身効果は、参加者の血漿Ｉ０Ｓ６レベル（図３５Ａ～３５Ｂ）、及び尿総ＧＡＧ（図３６Ａ～３６Ｂ）を測定して決定した。Ｉ０Ｓ６は、ＭＰＳ Ｉ患者の血漿、尿、ＣＳＦで上昇することを示すグリコサミノグリカンの非還元末端（ＮＲＥ）二糖である。ベースライン時にＩ０Ｓ６が上昇した参加者は、コンストラクト２を投与した後にＩ０Ｓ６の減少を示しており、一般的に、コンストラクト２を投与した後の参加者では、Ｉ０Ｓ６レベルが低いことが認められた。尿中総ＧＡＧは、利用可能な最後の時点で、すべての参加者において３０ｇ／ｍｏｌ未満のままであった（図３６Ａ～３６Ｂ）。
均等物
均等物
本発明を、その特定の実施形態に関して詳細に記載しているが、本発明の範囲内に機能的に等価である変形があることが理解される。実際、本明細書に記載しており、説明をしている発明に加えて、本発明の様々な修正が、上記した明細書及び添付した図面から当業者には明らかとなるであろう。そのような修正は、添付した特許請求の範囲の範囲内にあることが意図される。当業者であれば、本明細書に記載する発明の特定の実施形態の数多くの均等物を認識する、または、日常的な実験を用いてこれを確認することが可能である。そのような等価物は、以下の特許請求の範囲に含まれることが意図される。
本明細書に記載するすべての刊行物、特許、及び特許出願は、それぞれの個別の刊行物、特許、または特許出願の全内容を、参照により、本明細書で援用することが、具体的かつ個別的に示されるのと同程度にまで、参照により、本明細書で援用する。
Claims (103)
- ヒトイズロン酸－２－スルファターゼ（ｈＩＤＳ）をコードする組換えアデノ随伴ウイルスベクター（ｒＡＡＶ）を、治療を必要とするヒト対象の脳脊髄液（ＣＳＦ）に対して投与することを含む、ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）の診断を受けたヒト対象での肝脾腫大症を治療する方法。
- ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶの単回用量を、治療を必要とするヒト対象のＣＳＦに対して投与することを含み、ＣＮＳ以外にはＭＰＳ ＩＩに関するさらなる治療は行わない、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けたヒト対象での肝脾腫大症及び中枢神経系（ＣＮＳ）症状を治療する方法。
- 前記ＣＮＳ症状が、Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ）によって測定する認知能力である、請求項２に記載の方法。
- 前記ＣＮＳ症状が、ＢＳＩＤ ＩＩＩの言語ドメインで測定する言語である、請求項２に記載の方法。
- 前記ＣＮＳ症状が、ＢＳＩＤ－ＩＩＩの運動ドメインで決定する運動機能である、請求項２に記載の方法。
- 前記ｒＡＡＶの単回用量を、ヒト対象のＣＳＦに投与することを含む、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けたヒト対象の肝臓及び／または脾臓に対して、ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶを送達する方法。
- 前記方法は、前記ｒＡＡＶの投与前の肝臓の大きさと比較して、前記肝臓の大きさを、約１０％、約２０％、または約３０％減少させる、請求項１～６のいずれか１項に記載の方法。
- 前記方法は、前記ｒＡＡＶの投与前の脾臓の大きさと比較して、前記脾臓の大きさを、約１０％、約２０％、または約３０％減少させる、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。
- （ｉ）ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶの治療有効量を、ヒト対象のＣＳＦに投与する、及び（ｉｉ）前記対象のＣＳＦでのヘパリン硫酸（ＨＳ）Ｄ２Ｓ６のレベルを測定することを含む、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けたヒト対象を治療する方法。
- ＨＳ Ｄ２Ｓ６の減少は、ヒト対象での神経認知パラメーターの改善と相関する、請求項９に記載の方法。
- さらなる治療の必要性の要否を判定するステップをさらに含む、請求項９または１０に記載の方法。
- さらなる治療を行うステップをさらに含む、請求項１１に記載の方法。
- さらなる前記治療が、ステップ（ｉ）のものと同じｒＡＡＶの２回目の投与である、請求項１２に記載の方法。
- さらなる前記治療が、ステップ（ｉ）のものと同じｒＡＡＶの２回目の投与を高用量で行う、請求項１２に記載の方法。
- さらなる前記治療が、組換えイデュルスルファーゼを利用する酵素補充療法である請求項１２に記載の方法。
- 前記方法は、ｒＡＡＶを投与する前の前記対象のＣＳＦでのＨＳ Ｄ２Ｓ６のレベルと比較して、前記対象のＣＳＦでのＨＳ Ｄ２Ｓ６のレベルを、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約９５％超の減少をもたらす、請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法。
- ＨＳ Ｄ２Ｓ６のレベルを、ｒＡＡＶを投与して、約２ヶ月、約４ヶ月、約６ヶ月、約８ヶ月、約１０ヶ月、約１２ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約３年、約４年、または約５年後に決定する、請求項１６に記載の方法。
- ＨＳ Ｄ２Ｓ６のレベルの低下が、ｒＡＡＶを投与してから、少なくとも６ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１２ヶ月間、少なくとも１５ヶ月間、少なくとも１８ヶ月間、少なくとも２１ヶ月間、または少なくとも２４ヶ月間持続する、請求項１６または１７に記載の方法。
- 前記ｒＡＡＶが、ＭＲＩで決定した、約１．３×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量、約６．５×１０１０ＧＣ／ｇ脳質量、または２×１０１１ＧＣ／ｇ脳質量の用量で投与する、請求項１～１８のいずれか１項に記載の方法。
- 前記ヒト対象が、５歳以上、かつ１８歳未満である、請求項１～１９のいずれか１項に記載の方法。
- 前記ヒト対象が、４ヶ月齢以上、かつ５歳未満である、請求項１～１９のいずれか１項に記載の方法。
- 前記ヒト対象が、前記ｒＡＡＶの投与時に酵素補充療法（ＥＲＴ）を受けている、請求項１～２１のいずれか１項に記載の方法。
- 前記ヒト対象は、ＥＲＴに応答しない、請求項２２に記載の方法。
- 前記ＥＲＴが、組換えイデュルスルファーゼである、請求項２２または２３に記載の方法。
- 前記ＥＲＴは、前記ｒＡＡＶを投与して、約６ヶ月、約９０ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２１ヶ月、または約２４ヶ月後に中止する、請求項２２～２４のいずれか１項に記載の方法。
- 前記ｒＡＡＶを、大槽内（ＩＣ）投与を介して投与する、請求項１～２５のいずれか１項に記載の方法。
- 前記ｒＡＡＶを、脳室内（ＩＣＶ）投与を介して投与する、請求項１～２５のいずれか１項に記載の方法。
- 前記ｒＡＡＶを、前記ヒト対象の脳脊髄液の全体積の１０％を超えない体積で投与する、請求項１～２７のいずれか１項に記載の方法。
- 前記ｒＡＡＶが、組換えアデノ随伴ウイルス血清型９である請求項１～２８のいずれか１項に記載の方法。
- 前記ｒＡＡＶが、ヒトＩＤＳ発現カセットを含有しており、発現が、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーとニワトリベータアクチンプロモーター（ＣＢ７）とのハイブリッドによって駆動する、請求項２９に記載の方法。
- 前記ヒトＩＤＳ発現カセットが、（ｉ）逆方向末端反復（ＩＴＲ）に隣接するＩＤＳ導入遺伝子、（ｉｉ）ニワトリベータアクチンイントロン、及び（ｉｉｉ）ウサギベータ－グロビンポリアデニル化（ポリＡ）シグナルを含む、請求項３０に記載の方法。
- 前記ＩＴＲが、ＡＡＶ２ ＩＴＲである、請求項３１に記載の方法。
- 前記ヒトＩＤＳ発現カセットが、配列番号４５のヌクレオチド配列を含む核酸を含む、請求項３０～３２のいずれか１項に記載の方法。
- ｒＡＡＶの投与前または投与時に、前記ヒト対象に対して免疫抑制療法を投与することをさらに含み、任意に、その後も免疫抑制療法を継続する、請求項１～３３のいずれか１項に記載の方法。
- 前記免疫抑制療法は、コルチコステロイド、シロリムス、及び／またはタクロリムスの１つ以上を投与することを含む、請求項３４に記載の方法。
- 前記１つ以上のコルチコステロイドが、メチルプレドニゾロン及び／またはプレドニゾンである、請求項３５に記載の方法。
- ｒＡＡＶより先に、または同時に、前記ヒト対象に対して１つ以上の抗生物質を投与することをさらに含む、請求項１～３６のいずれか１項に記載の方法。
- 前記１つ以上の抗生物質が、トリメトプリム、スルファメトキサゾール、ペンタミジン、ダプソン、及び／またはアトバコンである、請求項３７に記載の方法。
- ｒＡＡＶより先に、または同時に、前記ヒト対象に対して１つ以上の抗真菌療法を行うことをさらに含む、請求項１～３８のいずれか１項に記載の方法。
- ＭＰＳ ＩＩの診断を受けたヒト対象を治療する方法であって：
（ａ）前記ヒト対象に対して、ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶの治療有効量を投与することであって、前記ヒト対象は、ＥＲＴでの治療を受けた、またはＥＲＴの治療を行っている、前記投与すること；及び
（ｂ）前記ヒト対象由来の生物学的試料での少なくとも１つのバイオマーカーのレベルが基準よりも低い場合、前記ヒト対象でのＥＲＴ治療を中止することであって、前記生物学的試料を、投与後に前記ヒト対象から得て、前記少なくとも１つのバイオマーカーが、Ｄ２Ｓ６、ＨＳ、及び／または総ＧＡＧを含む、前記中止すること、を含む、前記方法。 - ＭＰＳ ＩＩの診断を受けたヒト対象を治療する方法であって：
（ａ）前記ヒト対象に対して、ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶの治療有効量を投与することであって、前記ヒト対象は、ＥＲＴでの治療を受けた、またはＥＲＴの治療を行っている、前記投与すること；及び
（ｂ）前記ヒト対象由来の生物学的試料での少なくとも１つのバイオマーカーのレベルが基準よりも高い場合、前記ヒト対象でのＥＲＴ治療を中止することであって、前記生物学的試料は、投与前に前記ヒト対象から得たものであり、前記少なくとも１つのバイオマーカーが、抗ＩＤＳ抗体である、前記中止すること、を含む、前記方法。 - 前記少なくとも１つのバイオマーカーは、Ｄ２Ｓ６である、請求項４０に記載の方法。
- 前記少なくとも１つのバイオマーカーは、ＥＲＴを中止する前の基準よりも、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％低い、請求項４０または４２のいずれか１項に記載の方法。
- 前記少なくとも１つのバイオマーカーが、ＥＲＴを中止する前の基準よりも、約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％高い、請求項４１に記載の方法。
- 前記基準が、所定値である、請求項４０～４４のいずれか１項に記載の方法。
- 前記基準は、前記ヒト対象に対して前記ｒＡＡＶを投与する前に前記ヒト対象から得た生物学的試料での前記少なくとも１つのバイオマーカーのレベルである、請求項４０～４４のいずれか１項に記載の方法。
- 前記基準は、ＭＰＳ ＩＩの診断を受けたが、ＥＲＴを受けていない対象から得た生物学的試料での少なくとも１つのバイオマーカーのレベルである、請求項４０～４４のいずれか１項に記載の方法。
- 前記ｒＡＡＶを、前記ヒト対象に対して投与した日と同じ日にＥＲＴ治療を中止する、請求項４０～４７のいずれか１項に記載の方法。
- 前記ｒＡＡＶを、前記ヒト対象に対して投与して４０週間後にＥＲＴ治療を中止する、請求項４０または４２～４７のいずれか１項に記載の方法。
- 前記生物学的試料が、ＣＳＦ、尿、血漿、または血清である、請求項４０～４９のいずれか１項に記載の方法。
- ＭＰＳ ＩＩの診断を受けたヒト対象を治療する方法であって：
（ａ）前記ヒト対象でのＥＲＴ治療を中止することであって、前記ヒト対象は、ＥＲＴでの治療を受けた、またはＥＲＴの治療を行っている、前記中止すること；及び
（ｂ）ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶの治療有効量をヒト対象に対して投与することであって、前記投与は、前記ヒト対象でのＥＲＴ治療が中止した後に行う、前記投与すること、を含む、前記方法。 - 前記ＥＲＴ治療は、前記投与の約または少なくとも約１年、６ヶ月、５ヶ月、４ヶ月、３ヶ月、２ヶ月、１ヶ月、３週間、２週間、１週間、１０日、５日、または１日前に中止する、請求項５１に記載の方法。
- 前記少なくとも１つのバイオマーカーのレベルは、中止する前に、前記ヒト対象由来の生物学的試料では検出されない、請求項５１～５２のいずれか１項に記載の方法。
- 前記少なくとも１つのバイオマーカーが、抗ＡＡＶ抗体である、請求項５３に記載の方法。
- 前記抗ＡＡＶ抗体が、抗ＡＡＶ９抗体である、請求項５４に記載の方法。
- 前記生物学的試料が、血清である請求項５１～５５のいずれか１項に記載の方法。
- ヒト対象でのＭＰＳ ＩＩ治療の有効性を決定する、またはモニタリングする方法であって、ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶの治療有効量を、前記ヒト対象に対して投与することを含み、基準と比較した前記ヒト対象由来の生物学的試料でのＤ２Ｓ６のレベルの低下は、ヒト対象でのＭＰＳ ＩＩ治療の有効性を示し、前記生物学的試料は、投与後の前記ヒト対象から得た、前記方法。
- 前記ヒト対象が、肝脾腫大症を有する、請求項４０～５７のいずれか１項に記載の方法。
- 前記ヒト対象が、投与前にＥＲＴでの治療を受けた、及び／または投与した後にＥＲＴ治療を受けた、請求項５８に記載の方法。
- 前記ＥＲＴが、組換えイデュルスルファーゼを用いた酵素補充療法である、請求項４０～５９のいずれか１項に記載の方法。
- 前記生物学的試料が、ＣＳＦである、請求項５７～６０のいずれか１項に記載の方法。
- Ｄ２Ｓ６のレベルの低下は、基準と比較して、約または少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％の減少である、請求項５７～６１のいずれか１項に記載の方法。
- ＭＰＳ ＩＩ治療の前記有効性は、基準と比較した、Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ）の少なくとも１つのサブテストの改善である、請求項５７～６２のいずれか１項に記載の方法。
- 前記少なくとも１つのサブテストが、年齢同等性スコア、認知発達指数（ＤＱ）、表現言語ＤＱ、受容言語ＤＱ、粗大運動ＤＱ、及び／または微細運動ＤＱである、請求項６３に記載の方法。
- 前記改善が、約または少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１５、１７、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、または１００を超えるＤＱの改善である、請求項６３または６４に記載の方法。
- 前記年齢同等性スコアが、約または少なくとも約１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、１８ヶ月、２４ヶ月、または２４ヶ月を超えて増加する、請求項６４に記載の方法。
- 前記基準は、投与前に前記ヒト対象から得た前記ＢＳＩＤ－ＩＩＩの少なくとも１つのサブテストのスコアである、請求項６３～６６のいずれか１項に記載の方法。
- 前記基準は、前記ヒト対象と同年齢のＭＰＳ ＩＩを有するヒト対象から得た前記ＢＳＩＤ－ＩＩＩの少なくとも１つのサブテストの平均スコアである、請求項６３～６６のいずれか１項に記載の方法。
- 前記基準が、投与前に前記ヒト対象から得た生物学的試料でのＤ２Ｓ６のレベルである、請求項５７～６８のいずれか１項に記載の方法。
- 前記生物学的試料は、投与して約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、３００、３１０、３２０、３３０、３４０、３５０、３６０、３７０、３８０、３９０、４００、４１０、４２０、４３０、４４０、４５０、４６０、４７０、４８０、４９０日後、または１、２、３、４、５、６、７、８、１０、１６、２０、２４、３０、３５、４０、４５、４８、５０、５２、５６、１０４週間後、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２ヶ月後、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０年後に前記ヒト対象から得た、請求項５７～６９のいずれか１項に記載の方法。
- 前記ヒト対象が、小児対象である、請求項５１～７０のいずれか１項に記載の方法。
- ＭＰＳ ＩＩ治療の前記有効性は、投与前の前記ヒト対象でのＤ２Ｓ６のレベルと比較して、約または少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％のＤ２Ｓ６のレベルの低下で実証する、請求項５７～７１のいずれか１項に記載の方法。
- 前記ｒＡＡＶを、前記ヒト対象に対して、くも膜下腔内に投与する、請求項１～７２のいずれか１項に記載の方法。
- 前記ｒＡＡＶを：
（ａ）約８．７７ｇ／Ｌの濃度の塩化ナトリウム、
（ｂ）約０．２４４ｇ／Ｌの濃度の塩化マグネシウム、
（ｃ）約０．２２４ｇ／Ｌの濃度の塩化カリウム、
（ｄ）約０．２０６ｇ／Ｌの濃度の塩化カルシウム、
（ｅ）約０．７９３ｇ／Ｌの濃度のデキストロース、
（ｆ）約０．００１％（体積／体積）の濃度のポロクサマー１８８、
（ｇ）約０．０２７８ｇ／Ｌの濃度のリン酸一ナトリウム一水和物、及び
（ｈ）約０．１１４ｇ／Ｌの濃度の無水リン酸二ナトリウム、を含む溶液で前記ヒト対象に対して投与する、請求項１～７３のいずれか１項に記載の方法。 - 対象が神経障害性ＭＰＳ ＩＩを有すると同定または診断する方法であって：
（ａ）前記対象由来の生物学的試料での１つ以上のヘパラン硫酸二糖のレベルを決定する；
（ｂ）１つ以上のヘパラン硫酸二糖の前記レベルが、基準レベルと比較して高い場合、前記対象が、神経障害性ＭＰＳ ＩＩを有すると同定または診断する；及び
（ｃ）ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶの治療有効量を、神経障害性ＭＰＳ ＩＩを有すると同定または診断した前記対象に投与する、ことを含む、前記方法。 - 前記１つ以上のヘパラン硫酸二糖が、Ｄ０Ａ０、Ｄ０Ｓ０、Ｄ０Ａ６、Ｄ２Ｓ６の１つ以上、またはこれらの組み合わせを含む、請求項７５に記載の方法。
- 前記１つ以上のヘパラン硫酸二糖が、Ｄ２Ｓ６である、請求項７６に記載の方法。
- 対象が神経障害性ＭＰＳ ＩＩを有すると同定または診断する方法であって：
基準レベルと比較して、対象由来の生物学的試料でのＤ２Ｓ６のレベルが高い場合、前記対象は、神経障害性ＭＰＳ ＩＩを有すると同定または診断し、ｈＩＤＳをコードするｒＡＡＶの治療有効量を、神経障害性ＭＰＳ ＩＩを有すると同定または診断された前記対象に投与する、前記方法。 - 前記生物学的試料が、脳脊髄液である、請求項７５～７８のいずれか１項に記載の方法。
- 前記対象が、発症前である、または可視または検出可能なＭＰＳ ＩＩ症状を有していない、請求項７５～７９のいずれか１項に記載の方法。
- 前記対象が、ＭＰＳ ＩＩを有する、請求項７５～８０のいずれか１項に記載の方法。
- 前記基準レベルが、１名以上の健常者及び／または１名以上の非神経障害性対象由来の生物学的試料での前記少なくとも１つ以上のヘパラン硫酸二糖のレベルである、請求項７５～７７及び７９～８１のいずれか１項に記載の方法。
- 前記基準レベルが、１名以上の健常者及び／または１名以上の非神経障害性対象由来の生物学的試料でのＤ２Ｓ６のレベルである、請求項７７～８１のいずれか１項に記載の方法。
- １名以上の健常者及び／または１名以上の非神経障害性対象由来の前記生物学的試料がＣＳＦ試料である、請求項８２または８３に記載の方法。
- 前記基準レベルが、所定のレベルである、請求項７５～８４のいずれか１項に記載の方法。
- Ｄ２Ｓ６のレベルは、前記対象由来の前記生物学的試料での総ヘパラン硫酸二糖（ＨＳ）の約または少なくとも約１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、または４０％超である、請求項７７～８５のいずれか１項に記載の方法。
- Ｄ２Ｓ６のレベルが、前記対象由来の前記生物学的試料での総ヘパラン硫酸二糖（ＨＳ）の約または少なくとも約２０％である、請求項８６に記載の方法。
- 前記対象由来の前記生物学的試料での前記１つ以上のヘパラン硫酸二糖のレベルまたはＤ２Ｓ６のレベルが、約または少なくとも約５０ｎｇ／ｍＬ、７５ｎｇ／ｍＬ、８０ｎｇ／ｍＬ、８５ｎｇ／ｍＬ、９０ｎｇ／ｍＬ、９５ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ、１０５ｎｇ／ｍＬ、１１０ｎｇ／ｍＬ、１１５ｎｇ／ｍＬ、１２０ｎｇ／ｍＬ、１２５ｎｇ／ｍＬ、１３０ｎｇ／ｍＬ、１３５ｎｇ／ｍＬ、１４０ｎｇ／ｍＬ、１４５ｎｇ／ｍＬ、１５０ｎｇ／ｍＬ、１５５ｎｇ／ｍＬ、１６０ｎｇ／ｍＬ、１６５ｎｇ／ｍＬ、１７０ｎｇ／ｍＬ、１７５ｎｇ／ｍＬ、１８０ｎｇ／ｍＬ、１８５ｎｇ／ｍＬ、１９０ｎｇ／ｍＬ、１９５ｎｇ／ｍＬ、２００ｎｇ／ｍＬ、２１０ｎｇ／ｍＬ、２２０ｎｇ／ｍＬ、２３０ｎｇ／ｍＬ、２４０ｎｇ／ｍＬ、２５０ｎｇ／ｍＬ、２６０ｎｇ／ｍＬ、２７０ｎｇ／ｍＬ、２８０ｎｇ／ｍＬ、２９０ｎｇ／ｍＬ、３００ｎｇ／ｍＬ、３１０ｎｇ／ｍＬ、３２０ｎｇ／ｍＬ、３３０ｎｇ／ｍＬ、３４０ｎｇ／ｍＬ、３５０ｎｇ／ｍＬ、３６０ｎｇ／ｍＬ、３７０ｎｇ／ｍＬ、３８０ｎｇ／ｍＬ、３９０ｎｇ／ｍＬ、４００ｎｇ／ｍＬ、または、４００ｎｇ／ｍＬ超である、請求項７５～８７のいずれか１項に記載の方法。
- 前記対象由来の前記生物学的試料での前記１つ以上のヘパラン硫酸二糖のレベルまたはＤ２Ｓ６のレベルが、約または少なくとも約１００ｎｇ／ｍＬ、１１０ｎｇ／ｍＬ、１２０ｎｇ／ｍＬ、１３０ｎｇ／ｍＬ、１４０ｎｇ／ｍＬ、１５０ｎｇ／ｍＬ、１６０ｎｇ／ｍＬ、１７０ｎｇ／ｍＬ、１８０ｎｇ／ｍＬ、１９０ｎｇ／ｍＬ、２００ｎｇ／ｍＬ、２００ｎｇ／ｍＬ、または２００ｎｇ／ｍＬ超である、請求項７５～８８のいずれか１項に記載の方法。
- 前記対象由来の前記生物学的試料での前記１つ以上のヘパラン硫酸二糖のレベルまたはＤ２Ｓ６のレベルが、前記基準レベルと比較して、約または少なくとも約１０ｎｇ／ｍＬ、２０ｎｇ／ｍＬ、３０ｎｇ／ｍＬ、４０ｎｇ／ｍＬ、５０ｎｇ／ｍＬ、６０ｎｇ／ｍＬ、７０ｎｇ／ｍＬ、８０ｎｇ／ｍＬ、９０ｎｇ／ｍＬ、１００ｎｇ／ｍＬ、１５０ｎｇ／ｍＬ、１６０ｎｇ／ｍＬ、１７０ｎｇ／ｍＬ、１８０ｎｇ／ｍＬ、１９０ｎｇ／ｍＬ、２００ｎｇ／ｍＬ、２１０ｎｇ／ｍＬ、２２０ｎｇ／ｍＬ、２３０ｎｇ／ｍＬ、２４０ｎｇ／ｍＬ、２５０ｎｇ／ｍＬ、２６０ｎｇ／ｍＬ、２７０ｎｇ／ｍＬ、２８０ｎｇ／ｍＬ、２９０ｎｇ／ｍＬ、３００ｎｇ／ｍＬ、３１０ｎｇ／ｍＬ、３２０ｎｇ／ｍＬ、３３０ｎｇ／ｍＬ、３４０ｎｇ／ｍＬ、３５０ｎｇ／ｍＬ、３６０ｎｇ／ｍＬ、３７０ｎｇ／ｍＬ、３８０ｎｇ／ｍＬ、３９０ｎｇ／ｍＬ、４００ｎｇ／ｍＬ、４１０ｎｇ／ｍＬ、４２０ｎｇ／ｍＬ、４３０ｎｇ／ｍＬ、４４０ｎｇ／ｍＬ、４５０ｎｇ／ｍＬ、４６０ｎｇ／ｍＬ、４７０ｎｇ／ｍＬ、４８０ｎｇ／ｍＬ、４９０ｎｇ／ｍＬ、５００ｎｇ／ｍＬ、または５００ｎｇ／ｍＬ超の上昇を示す、請求項７５～８９のいずれか１項に記載の方法。
- ヒト対象でのＭＰＳ Ｉ治療の有効性を決定する、または有効性をモニタリングする方法であって、ヒトＩＤＵＡをコードするｒＡＡＶの治療有効量を、前記ヒト対象に投与することを含み、基準と比較した前記ヒト対象由来の生物学的試料でのＩ０Ｓ６のレベルの低下は、前記ヒト対象での前記ＭＰＳ Ｉ治療の有効性を示しており、前記生物学的試料は、投与した後の前記ヒト対象から得た、前記方法。
- 前記生物学的試料が、血漿である、請求項９１に記載の方法。
- 前記ヒト対象が、投与前にＥＲＴでの治療を受けた、及び／または投与後にＥＲＴの治療を受けた、請求項９０または９１に記載の方法。
- 前記ＥＲＴが、組換えイデュルスルファーゼを使用する酵素補充療法である、請求項９１～９３のいずれか１項に記載の方法。
- 前記Ｉ０Ｓ６のレベルの低下は、前記基準と比較して、約または少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％の減少である、請求項９１～９４のいずれか１項に記載の方法。
- 前記基準は、投与前に前記ヒト対象から得た生物学的試料でのＩ０Ｓ６のレベルである、請求項９１～９５のいずれか１項に記載の方法。
- 前記基準は、所定の値である、請求項９１～９５のいずれか１項に記載の方法。
- 前記基準は、ＭＰＳ Ｉの診断を受けた別のヒト対象、またはＭＰＳ Ｉの診断を受けたヒト対象の集団から得た生物学的試料でのＩ０Ｓ６のレベルである、請求項９１～９５のいずれか１項に記載の方法。
- ＭＰＳ Ｉ治療の前記有効性は、基準と比較した、Ｂａｙｌｅｙ Ｓｃａｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｆａｎｔ ａｎｄ Ｔｏｄｄｌｅｒ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ （ＢＳＩＤ－ＩＩＩ）の少なくとも１つのサブテストの改善である、請求項９１～９８のいずれか１項に記載の方法。
- 前記少なくとも１つのサブテストが、年齢同等性スコア、認知発達指数（ＤＱ）、表現言語ＤＱ、受容言語ＤＱ、粗大運動ＤＱ、及び／または微細運動ＤＱである、請求項９９に記載の方法。
- 前記基準は、投与前に前記ヒト対象から得た前記ＢＳＩＤ－ＩＩＩの少なくとも１つのブテストのスコアである、請求項９９または１００に記載の方法。
- 前記基準は、前記ヒト対象と同じ年齢のＭＰＳ Ｉを有するヒト対象から得た前記ＢＳＩＤ－ＩＩＩの少なくとも１つのサブテストの平均スコアである、請求項９９～１０１のいずれか１項に記載の方法。
- 前記ｒＡＡＶを：
（ａ）約８．７７ｇ／Ｌの濃度の塩化ナトリウム、
（ｂ）約０．２４４ｇ／Ｌの濃度の塩化マグネシウム、
（ｃ）約０．２２４ｇ／Ｌの濃度の塩化カリウム、
（ｄ）約０．２０６ｇ／Ｌの濃度の塩化カルシウム、
（ｅ）約０．７９３ｇ／Ｌの濃度のデキストロース、
（ｆ）約０．００１％（体積／体積）の濃度のポロクサマー１８８、
（ｇ）約０．０２７８ｇ／Ｌの濃度のリン酸一ナトリウム一水和物、及び
（ｈ）約０．１１４ｇ／Ｌの濃度の無水リン酸二ナトリウム、を含む溶液で前記ヒト対象に対して投与する、請求項９１～１０２のいずれか１項に記載の方法。
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