JP2024505207A

JP2024505207A - プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）細胞外小胞調製物

Info

Publication number: JP2024505207A
Application number: JP2023544547A
Authority: JP
Inventors: アルグエタ，シャノン; カートライト，アダム; ドルマン，デレック; ガングリー，タンモイ; イタノ，アンドレア; マッケンナ，コリン; ラフナサン，ディヴィヤ; ワング，ビル
Original assignee: エヴェロバイオサイエンシズ，インコーポレーテッド
Priority date: 2021-01-26
Filing date: 2022-01-25
Publication date: 2024-02-05
Also published as: TW202237816A; KR20230137968A; EP4284400A1; WO2022164806A1

Abstract

治療薬として有用であり得るプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細胞外小胞（ＥＶ）、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細胞外小胞（ＥＶ）の溶液及び乾燥形態（及びその治療用組成物）並びにその使用方法が本明細書に提供される。【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年１月２６日出願の米国仮特許出願第６３／１４１，６９３号明細書；２０２１年４月１６日出願の米国仮特許出願第６３／１７５，８５５号明細書；２０２１年６月４日出願の米国仮特許出願第６３／１９６，９８４号明細書；及び２０２１年１２月１４日出願の米国仮特許出願第６３／２８９，３４８号明細書の利益を主張するものであり、それぞれの全内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌から得られる細胞外小胞（ＥＶ）などのＥＶを含む治療用組成物は、治療効果を有し、疾患及び／又は健康障害の処置及び／又は予防に有用である。本明細書に記載されるように、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶは、バイオマスとして調製することができる（例えば、単離されたＥＶをＰＢＳなどの緩衝液に再懸濁することができる）。本明細書に記載されるように、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶは、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物として調製することができる。

いくつかの実施形態では、約６％未満の水分含有量を有する乾燥形態は、下流処理によりよく適する。いくつかの実施形態では、約６％未満の水分含有量を有する乾燥形態は、改善された安定性を有する。いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む溶液は、増量剤を含有する賦形剤も含み、任意選択的に凍結乾燥保護剤などの１つ以上の追加の成分を含む。いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む溶液は、凍結乾燥保護剤を含有する賦形剤も含み、任意選択的に増量剤などの１つ以上の追加の成分を含む。いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む乾燥形態は、増量剤を含有する賦形剤も含み、任意選択的に凍結乾燥保護剤などの１つ以上の追加の成分を含む。いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む乾燥形態は、凍結乾燥保護剤を含有する賦形剤も含み、任意選択的に増量剤などの１つ以上の追加の成分を含む。

特定の態様では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）の用量（例えば、治療有効用量）を対象に投与する（例えば、経口投与する）ことを含む、対象（例えば、ヒト対象）の免疫障害を処置する方法が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、免疫障害は、自己免疫疾患、炎症性疾患又はアレルギーを含む。いくつかの実施形態では、免疫障害は、炎症性疾患を含む。

特定の態様では、対象（例えば、ヒト対象）の免疫障害を処置するための薬剤の調製のための、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）の用量（例えば、治療有効用量）の使用が本明細書に提供される。

特定の態様では、対象（例えば、ヒト対象）の免疫障害の処置における使用のための、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）の用量（例えば、治療有効用量）が本明細書に提供される。

特定の態様では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）の用量（例えば、治療有効用量）を対象に投与する（例えば、経口投与する）ことを含む、対象（例えば、ヒト対象）の炎症性疾患を処置する方法が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、炎症性疾患は、Ｔｈ１媒介型炎症性疾患を含む。いくつかの実施形態では、炎症性疾患は、Ｔｈ２媒介型炎症性疾患（喘息又はアトピー性皮膚炎など）を含む。いくつかの実施形態では、炎症性疾患は、Ｔｈ１７媒介型炎症性疾患（乾癬など）を含む。

特定の態様では、対象（例えば、ヒト対象）の炎症性疾患を処置するための薬剤の調製のための、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）の用量（例えば、治療有効用量）の使用が本明細書に提供される。

特定の態様では、対象（例えば、ヒト対象）の炎症性疾患の処置における使用のための、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）の用量（例えば、治療有効用量）が本明細書に提供される。

特定の態様では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）の用量（例えば、治療有効用量）を対象に投与する（例えば、経口投与する）ことを含む、対象（例えば、ヒト対象）のＴＬＲ２を活性化する方法が本明細書に提供される。

特定の態様では、対象（例えば、ヒト対象）のＴＬＲ２を活性化するための薬剤の調製のための、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）の用量（例えば、治療有効用量）の使用が本明細書に提供される。

特定の態様では、対象（例えば、ヒト対象）のＴＬＲ２の活性化における使用のための、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）の用量（例えば、治療有効用量）が本明細書に提供される。

特定の態様では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）の用量（例えば、治療有効用量）を対象に投与する（例えば、経口投与する）ことを含む、対象（例えば、ヒト対象）のインターロイキン－１０受容体（ＩＬ－１０Ｒ）を刺激する方法が本明細書に提供される。

特定の態様では、対象（例えば、ヒト対象）のインターロイキン－１０受容体（ＩＬ－１０Ｒ）を刺激するための薬剤の調製のための、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）の用量（例えば、治療有効用量）の使用が本明細書に提供される。

特定の態様では、対象（例えば、ヒト対象）のインターロイキン－１０受容体（ＩＬ－１０Ｒ）の刺激における使用のための、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）の用量（例えば、治療有効用量）が本明細書に提供される。

特定の態様では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）の用量（例えば、治療有効用量）を対象に投与する（例えば、経口投与する）ことを含む、対象（例えば、ヒト対象）の抗炎症性サイトカイン反応を活性化する方法が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、抗炎症性サイトカイン反応は、インターロイキン－１０（ＩＬ－１０）産生を含む。いくつかの実施形態では、抗炎症性サイトカイン反応は、ＩＬ－２７産生を含む。いくつかの実施形態では、抗炎症性サイトカイン反応は、ＩＬ－１０及びＩＬ－２７の産生を含む。

特定の態様では、対象（例えば、ヒト対象）の抗炎症性サイトカイン反応を活性化するための薬剤の調製のための、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）の用量（例えば、治療有効用量）の使用が本明細書に提供される。

特定の態様では、対象（例えば、ヒト対象）の抗炎症性サイトカイン反応の活性化における使用のための、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）の用量（例えば、治療有効用量）が本明細書に提供される。

特定の態様では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）の用量（例えば、治療有効用量）を対象に投与する（例えば、経口投与する）ことを含む、対象（例えば、ヒト対象）の（例えば、そのＰＢＭＣにおける）抗炎症性サイトカイン分泌を増加させる方法が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、抗炎症性サイトカインは、ＩＬ－１０である。いくつかの実施形態では、抗炎症性サイトカインは、ＩＬ－２７である。いくつかの実施形態では、抗炎症性サイトカインは、ＩＬ－１０及びＩＬ－２７である。

特定の態様では、対象（例えば、ヒト対象）の抗炎症性サイトカイン分泌を増加させるための薬剤の調製のための、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）の用量（例えば、治療有効用量）の使用が本明細書に提供される。

特定の態様では、対象（例えば、ヒト対象）の抗炎症性サイトカイン分泌の増加における使用のための、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）の用量（例えば、治療有効用量）が本明細書に提供される。

特定の態様では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）の用量（例えば、治療有効用量）を対象に投与する（例えば、経口投与する）ことを含む、対象（例えば、ヒト対象）のＴＬＲ１／２及び／又はＴＬＲ２／６ヘテロ二量体を活性化する方法が本明細書に提供される。

特定の態様では、対象（例えば、ヒト対象）のＴＬＲ１／２及び／又はＴＬＲ２／６ヘテロ二量体の活性化における使用のための、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）の用量（例えば、治療有効用量）が本明細書に提供される。

特定の態様では、対象（例えば、ヒト対象）のＴＬＲ１／２及び／又はＴＬＲ２／６ヘテロ二量体を活性化するための薬剤の調製のための、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）の用量（例えば、治療有効用量）の使用が本明細書に提供される。

いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株は、例えば、本明細書に記載されるように、例えばインビトロアッセイにおいてＴＬＲ１／２及び／又はＴＬＲ２／６ヘテロ二量体を活性化する。

特定の態様では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）の用量（例えば、治療有効用量）を対象に投与する（例えば、経口投与する）ことを含む、対象（例えば、ヒト対象）において炎症性が低くなるようにＴ細胞に指示する方法が本明細書に提供される。

特定の態様では、対象（例えば、ヒト対象）において炎症性が低くなるようにＴ細胞に指示することにおける使用のための、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）の用量（例えば、治療有効用量）が本明細書に提供される。

特定の態様では、対象（例えば、ヒト対象）において炎症性が低くなるようにＴ細胞に指示するための薬剤の調製のための、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）の用量（例えば、治療有効用量）の使用が本明細書に提供される。

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、腸間膜リンパ節に誘導される。

いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）が経口投与され（例えば、小腸に移動し）、樹状細胞が小腸でプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）と相互作用し、樹状細胞が腸間膜リンパ節に移動し、腸間膜リンパ節を通って輸送するＴ細胞が樹状細胞に遭遇する。

特定の態様では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）の用量（例えば、治療有効用量）を対象に投与する（例えば、経口投与する）ことを含む、対象（例えば、ヒト対象）の腸間膜リンパ節に輸送するＴ細胞に影響を与える方法が本明細書に提供される。

特定の態様では、対象（例えば、ヒト対象）の腸間膜リンパ節に輸送するＴ細胞に影響を与えることにおける使用のための、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）の用量（例えば、治療有効用量）が本明細書に提供される。

特定の態様では、対象（例えば、ヒト対象）の腸間膜リンパ節に輸送するＴ細胞に影響を与えるための薬剤の調製のための、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）の用量（例えば、治療有効用量）の使用が本明細書に提供される。

特定の態様では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）の用量（例えば、治療有効用量）を対象に投与する（例えば、経口投与する）ことを含む、対象（例えば、ヒト対象）において炎症消散ＣＤ４＋Ｔ細胞を生成する方法が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される実施例で実証されるように、細胞外小胞は、炎症を消散させることができるＣＤ４＋Ｔ細胞の集団を生成する。

特定の態様では、対象（例えば、ヒト対象）における炎症消散ＣＤ４＋Ｔ細胞の生成における使用のための、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）の用量（例えば、治療有効用量）が本明細書に提供される。

特定の態様では、対象（例えば、ヒト対象）において炎症消散ＣＤ４＋Ｔ細胞を生成するための薬剤の調製における使用のための、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）の用量（例えば、治療有効用量）の使用が本明細書に提供される。

特定の態様では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）の用量（例えば、治療有効用量）の用量（例えば、治療有効用量）を対象に投与する（例えば、経口投与する）ことを含む、対象（例えば、ヒト対象）の炎症を消散させる方法が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される実施例で実証されるように、炎症の不存在下で投与された細胞外小胞は、免疫反応を阻害せず、代わりに進行中の炎症反応を解消する。いくつかの実施形態では、本明細書の実施例に記載されるように、抗原非依存性機構は、抗原特異的炎症を軽減することができる。

特定の態様では、対象（例えば、ヒト対象）の炎症の消散における使用のための、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）の用量（例えば、治療有効用量）が本明細書に提供される。

特定の態様では、対象（例えば、ヒト対象）の炎症を消散させるための薬剤の調製のための、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）の用量（例えば、治療有効用量）の使用が本明細書に提供される。

いくつかの実施形態では、対象（例えば、ヒト対象）は、Ｔｈ１媒介型炎症を有する。

いくつかの実施形態では、対象（例えば、ヒト対象）は、Ｔｈ２媒介型炎症を有する。

いくつかの実施形態では、対象（例えば、ヒト対象）は、Ｔｈ１７媒介型炎症を有する。

本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）の用量（例えば、治療有効用量）は、抗ＴＮＦアルファ抗体と組み合わせて投与される。本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）の用量（例えば、治療有効用量）は、ＴＮＦアルファアンタゴニスト（例えば、ＴＮＦアルファアンタゴニスト又はＴＮＦアルファ受容体アンタゴニスト）、例えばアダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標）；ＴＡ－６５０）、セルトリズマブペゴル（Ｃｉｍｚｉａ（登録商標）；ＣＤＰ８７０）、ゴリムマブ（Ｓｉｍｐｏｍ（登録商標）；ＣＮＴＯ１４８）、アナキンラ（Ｋｉｎｅｒｅｔ（登録商標））、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）；ＭａｂＴｈｅｒａ（登録商標））、アバタセプト（Ｏｒｅｎｃｉａ（登録商標））、トシリズマブ（ＲｏＡｃｔｅｍｒａ／Ａｃｔｅｍｒａ（登録商標））と組み合わせて投与される。

いくつかの実施形態では、細胞外小胞は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）Ｂ株（ＮＲＲＬ受託番号Ｂ５０３２９）のヌクレオチド配列（例えば、ゲノム配列、１６Ｓ配列、ＣＲＩＳＰＲ配列）に対して少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性（例えば、少なくとも９９．５％の配列同一性、少なくとも９９．６％の配列同一性、少なくとも９９．７％の配列同一性、少なくとも９９．８％の配列同一性、少なくとも９９．９％の配列同一性）を含むプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来である。いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）Ｂ株（ＮＲＲＬ受託番号Ｂ５０３２９）である。

いくつかの実施形態では、対象（例えば、ヒト対象）は、免疫障害を有する。いくつかの実施形態では、免疫障害は、関節硬化症、関節炎、静脈炎、血管炎及びリンパ管炎、胆管炎、胆嚢炎、腸炎、小腸結腸炎、胃炎、胃腸炎、炎症性腸疾患、回腸炎、直腸炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、過敏性腸症候群、顕微鏡的大腸炎、リンパ球性－形質細胞性腸炎、セリアック病、コラーゲン大腸炎、リンパ球性大腸炎、好酸球性腸炎、不確定大腸炎、偽膜性大腸炎（壊死性大腸炎）、虚血性炎症性腸疾患、ベーチェット病、サルコイドーシス、強皮症、ＩＢＤ関連異形成、異形成関連の腫瘤又は病変、原発性硬化性胆管炎、子宮頸管炎、絨毛羊膜炎、子宮内膜炎、精巣上体炎、臍炎、卵巣炎、精巣炎、卵管炎、卵管卵巣膿瘍、尿道炎、腟炎、外陰炎、外陰部痛、急性播種性全身性脱毛症、ベーチェット病、シャーガス病、慢性疲労症候群、自律神経障害、脳脊髄炎、強直性脊椎炎、再生不良性貧血、化膿性汗腺炎、自己免疫性肝炎、自己免疫性卵巣炎、セリアック病、１型糖尿病、巨細胞性動脈炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本病、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、川崎病、紅斑性狼瘡、顕微鏡的大腸炎、顕微鏡的多発動脈炎、混合性結合組織病、マックル・ウェルズ症候群、多発性硬化症、重症筋無力症、眼球クローヌス・ミオクローヌス症候群、視神経炎、オード甲状腺炎（Ｏｒｄ’ｓｔｈｙｒｏｉｄｉｔｉｓ）、天疱瘡、結節性多発動脈炎、多発性筋痛、関節リウマチ、ライター症候群、シェーグレン症候群、側頭動脈炎、ウェゲナー肉芽腫症、温式自己免疫性溶血性貧血、間質性膀胱炎、ライム病、モルフェア、乾癬、サルコイドーシス、強皮症、接触過敏症、接触性皮膚炎（ツタウルシに起因するものを含む）、じんま疹、皮膚アレルギー、呼吸アレルギー（枯草熱、アレルギー性鼻炎、チリダニアレルギー）、虫垂炎、皮膚炎、皮膚筋炎、心内膜炎、結合織炎、歯肉炎、舌炎、化膿性汗腺炎、虹彩炎、喉頭炎、乳腺炎、心筋炎、腎炎、耳炎、膵炎、耳下腺炎、心膜炎、腹膜炎、咽頭炎、胸膜炎、間質性肺炎、前立腺炎、腎盂腎炎、口内炎、移植片拒絶、急性膵炎、慢性膵炎、急性呼吸促迫症候群、セザール症候群、先天性副腎過形成、非化膿性甲状腺炎、癌と関連する高カルシウム血症、天疱瘡、水疱性ヘルペス状皮膚炎、重度の多形性紅斑、剥離性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、季節性の又は通年性のアレルギー性鼻炎、気管支喘息、接触性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、薬物過敏症反応、アレルギー性結膜炎、角膜炎、眼部帯状疱疹、虹彩炎及び虹彩毛様体炎、脈絡網膜炎、視神経炎、症候性サルコイドーシス、電撃性の又は播種性の肺結核化学療法、成人の特発性血小板減少性紫斑病、成人の続発性血小板減少症、後天性の（自己免疫）溶血性貧血、成人の白血病及びリンパ腫、子供の急性白血病、限局性腸炎、自己免疫血管炎、慢性閉塞性肺疾患又は敗血症である。

いくつかの実施形態では、対象（例えば、ヒト対象）は、乾癬を有する。

いくつかの実施形態では、対象（例えば、ヒト対象）は、アトピー性皮膚炎を有する。

いくつかの実施形態では、対象（例えば、ヒト対象）は、Ｔｈ１媒介型炎症性疾患を有する。

いくつかの実施形態では、対象（例えば、ヒト対象）は、Ｔｈ２媒介型炎症性疾患を有する。

いくつかの実施形態では、対象（例えば、ヒト対象）は、Ｔｈ１７媒介型炎症性疾患を有する。

いくつかの実施形態では、ＥＶは、経口投与される。

特定の態様では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）は、炎症のＤＴＨモデルで炎症を軽減する。

特定の態様では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）は、インビトロ培養ＨＥＫ２９３レポーター細胞株アッセイでＴＬＲ２を刺激する。

特定の態様では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）は、インビトロ培養Ｕ９３７細胞（例えば、ＰＭＡ処理で分化したもの）からのＩＬ－１０分泌を刺激する。

特定の態様では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）は、インビトロ培養ヒトＰＢＭＣからのＩＬ－１０分泌を刺激する。

特定の態様では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）は、インビトロ培養ヒトＰＢＭＣからのＩＬ－２７分泌を刺激する。

特定の態様では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）は、インビトロ培養ヒトＰＢＭＣからのＩＬ－１０、ＩＬ－２７、ＩＬ－６、ＩＰ－１０及び／又はＴＮＦａ分泌を誘導する。

特定の態様では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）は、インビトロ培養ヒトマクロファージからのＩＬ－１０、ＩＬ－２７、ＩＬ－６、ＩＰ－１０及び／又はＴＮＦａ分泌を誘導する。

特定の態様では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）は、インビトロ培養ヒト樹状細胞からのＩＬ－１０、ＩＬ－２７、ＩＬ－６、ＩＰ－１０及び／又はＴＮＦａ分泌を誘導する。特定の態様では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）は、インビトロ培養ヒト樹状細胞からのＩＬ－１０、ＩＬ－６及び／又はＴＮＦａ分泌を誘導する。

特定の態様では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）は、インビトロ培養Ｕ９３７細胞からのＩＬ－１０、ＩＬ－２７、ＩＬ－６、ＩＰ－１０及びＴＮＦａ分泌を誘導する。

いくつかの実施形態では、用量は、任意選択的に腸溶性コーティングを含む、１つ以上のカプセル（例えば、腸溶性コーティングされたカプセル）の形態である。いくつかの実施形態では、用量は、任意選択的に腸溶性コーティングを含む、１つ以上の錠剤（例えば、腸溶性コーティングされた錠剤）の形態である。いくつかの実施形態では、用量は、１つ以上の小型錠剤の形態である。いくつかの実施形態では、小型錠剤は、腸溶性コーティングされた小型錠剤である。いくつかの実施形態では、用量は、１つ以上の腸溶性コーティングされた小型錠剤を含む、腸溶性コーティングされていないカプセルの形態である。

本明細書に開示されるように、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細胞外小胞（ＥＶ）は、治療効果を有し、疾患及び／又は健康障害の処置及び／又は予防に有用である。プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶを含有するバイオマス、溶液及び乾燥形態の治療用組成物を調製することができる。

増量剤及び／又は凍結乾燥保護剤は、凍結乾燥及び噴霧乾燥などの乾燥のための細胞外小胞（ＥＶ）を調製する場合に使用される。いくつかの実施形態では、スクロース、マンニトール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ６０００などのＰＥＧ）、シクロデキストリン、マルトデキストリン及びデキストラン（デキストラン４０ｋなど）を含むが、これらに限定されない増量剤は、乾燥後の乾燥形態（粉末及び／又は凍結乾燥物など）の取り扱いをより容易にする。いくつかの実施形態では、増量剤は、乾燥形態の特性を改善する。いくつかの実施形態では、トレハロース、スクロース及びラクトースを含むが、これらに限定されない凍結乾燥保護剤は、凍結乾燥又は噴霧乾燥などの乾燥中にＥＶを保護する。いくつかの実施形態では、賦形剤は、乾燥サイクル時間を短縮するように機能する。いくつかの実施形態では、賦形剤は、ＥＶの治療効果を維持するように機能する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む乾燥形態を提供し、ここで、乾燥形態は、約６％未満の水分含有量（例えば、カールフィッシャー法によって決定される）を有する。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される乾燥形態は、約５％未満の水分含有量（例えば、カールフィッシャー法によって決定される）を有する。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される乾燥形態は、約４％未満の水分含有量（例えば、カールフィッシャー法によって決定される）を有する。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される乾燥形態は、約１％～約４％の水分含有量（例えば、カールフィッシャー法によって決定される）を有する。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される乾燥形態は、約２％～約４％の水分含有量（例えば、カールフィッシャー法によって決定される）を有する。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される乾燥形態は、約２％～約３％の水分含有量（例えば、カールフィッシャー法によって決定される）を有する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む凍結乾燥物を提供し、ここで、凍結乾燥物は、約６％未満の水分含有量（例えば、カールフィッシャー法によって決定される）を有する。

いくつかの実施形態では、凍結乾燥物は、約５％未満の水分含有量（例えば、カールフィッシャー法によって決定される）を有する。

いくつかの実施形態では、凍結乾燥物は、約４％未満の水分含有量（例えば、カールフィッシャー法によって決定される）を有する。

いくつかの実施形態では、凍結乾燥物は、約１％～約４％の水分含有量（例えば、カールフィッシャー法によって決定される）を有する。

いくつかの実施形態では、凍結乾燥物は、約２％～約４％の水分含有量（例えば、カールフィッシャー法によって決定される）を有する。

いくつかの実施形態では、凍結乾燥物は、約２％～約３％の水分含有量（例えば、カールフィッシャー法によって決定される）を有する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む粉末を提供し、ここで、粉末は、約６％未満の水分含有量（例えば、カールフィッシャー法によって決定される）を有する。

いくつかの実施形態では、粉末は、約５％未満の水分含有量（例えば、カールフィッシャー法によって決定される）を有する。

いくつかの実施形態では、粉末は、約４％未満の水分含有量（例えば、カールフィッシャー法によって決定される）を有する。

いくつかの実施形態では、粉末は、約１％～約４％の水分含有量（例えば、カールフィッシャー法によって決定される）を有する。

いくつかの実施形態では、粉末は、約２％～約４％の水分含有量（例えば、カールフィッシャー法によって決定される）を有する。

いくつかの実施形態では、粉末は、約２％～約３％の水分含有量（例えば、カールフィッシャー法によって決定される）を有する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、賦形剤とを含む乾燥形態を提供し、ここで、賦形剤は、乾燥形態の総質量の約９５％～約９９％を構成する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、賦形剤とを含む乾燥形態を提供し、ここで、ＥＶは、乾燥形態の総質量の約２％～約６％を占め得る。

本明細書で提供される乾燥形態のいくつかの実施形態では、乾燥形態は粉末を含む。いくつかの実施形態では、粉末は凍結乾燥粉末を含む。いくつかの実施形態では、粉末は噴霧乾燥粉末を含む。

本明細書で提供される乾燥形態のいくつかの実施形態では、乾燥形態は凍結乾燥物を含む。いくつかの実施形態では、凍結乾燥物は凍結乾燥粉末を含む。いくつかの実施形態では、凍結乾燥物は凍結乾燥ケーキを含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶを含む治療用組成物を提供し、ここで、本組成物は、薬学的に許容される賦形剤を更に含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、増量剤を含む賦形剤とを含む溶液を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、増量剤を含む賦形剤とから本質的になる溶液を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、増量剤及び凍結乾燥保護剤を含む賦形剤とを含む溶液を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、増量剤及び凍結乾燥保護剤を含む賦形剤とから本質的になる溶液を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、凍結乾燥保護剤を含む賦形剤とを含む溶液を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、凍結乾燥保護剤を含む賦形剤とから本質的になる溶液を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、溶液を含む治療用組成物を提供し、ここで、本組成物は、薬学的に許容される賦形剤を更に含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される賦形剤は、流動化剤、潤滑剤及び／又は希釈剤を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、増量剤を含む賦形剤とを含む乾燥形態を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、増量剤を含む賦形剤とから本質的になる乾燥形態を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、増量剤及び凍結乾燥保護剤を含む賦形剤とを含む乾燥形態を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、増量剤及び凍結乾燥保護剤を含む賦形剤とから本質的になる乾燥形態を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、凍結乾燥保護剤を含む賦形剤とを含む乾燥形態を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、凍結乾燥保護剤を含む賦形剤とから本質的になる乾燥形態を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、乾燥形態を含む治療用組成物を提供し、ここで、本組成物は、薬学的に許容される賦形剤を更に含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される賦形剤は、流動化剤、潤滑剤及び／又は希釈剤を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、増量剤を含む賦形剤とを含む粉末を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、増量剤を含む賦形剤とから本質的になる粉末を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、増量剤及び凍結乾燥保護剤を含む賦形剤とを含む粉末を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、増量剤及び凍結乾燥保護剤を含む賦形剤とから本質的になる粉末を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、凍結乾燥保護剤を含む賦形剤とを含む粉末を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、凍結乾燥保護剤を含む賦形剤とから本質的になる粉末を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、粉末を含む治療用組成物を提供し、ここで、本組成物は、薬学的に許容される賦形剤を更に含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される賦形剤は、流動化剤、潤滑剤及び／又は希釈剤を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、増量剤を含む賦形剤とを含む噴霧乾燥粉末を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、増量剤を含む賦形剤とから本質的になる噴霧乾燥粉末を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、増量剤及び凍結乾燥保護剤を含む賦形剤とを含む噴霧乾燥粉末を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、増量剤及び凍結乾燥保護剤を含む賦形剤とから本質的になる噴霧乾燥粉末を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、凍結乾燥保護剤を含む賦形剤とを含む噴霧乾燥粉末を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、凍結乾燥保護剤を含む賦形剤とから本質的になる噴霧乾燥粉末を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、噴霧乾燥粉末を含む治療用組成物を提供し、ここで、本組成物は、薬学的に許容される賦形剤を更に含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される賦形剤は、流動化剤、潤滑剤及び／又は希釈剤を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、増量剤を含む賦形剤とを含む凍結乾燥物を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、増量剤を含む賦形剤とから本質的になる凍結乾燥物を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、増量剤及び凍結乾燥保護剤を含む賦形剤とを含む凍結乾燥物を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、増量剤及び凍結乾燥保護剤を含む賦形剤とから本質的になる凍結乾燥物を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、凍結乾燥保護剤を含む賦形剤とを含む凍結乾燥物を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、凍結乾燥保護剤を含む賦形剤とから本質的になる凍結乾燥物を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、凍結乾燥物を含む治療用組成物を提供し、ここで、本組成物は、薬学的に許容される賦形剤を更に含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される賦形剤は、流動化剤、潤滑剤及び／又は希釈剤を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、増量剤を含む賦形剤とを含む凍結乾燥粉末を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、増量剤を含む賦形剤とから本質的になる凍結乾燥粉末を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、増量剤及び凍結乾燥保護剤を含む賦形剤とを含む凍結乾燥粉末を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、増量剤及び凍結乾燥保護剤を含む賦形剤とから本質的になる凍結乾燥粉末を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、凍結乾燥保護剤を含む賦形剤とを含む凍結乾燥粉末を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、凍結乾燥保護剤を含む賦形剤とから本質的になる凍結乾燥粉末を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、凍結乾燥粉末を含む治療用組成物を提供し、ここで、本組成物は、薬学的に許容される賦形剤を更に含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される賦形剤は、流動化剤、潤滑剤及び／又は希釈剤を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、増量剤を含む賦形剤とを含む凍結乾燥ケーキを提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、増量剤を含む賦形剤とから本質的になる凍結乾燥ケーキを提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、増量剤及び凍結乾燥保護剤を含む賦形剤とを含む凍結乾燥ケーキを提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、増量剤及び凍結乾燥保護剤を含む賦形剤とから本質的になる凍結乾燥ケーキを提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、凍結乾燥保護剤を含む賦形剤とを含む凍結乾燥ケーキを提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、凍結乾燥保護剤を含む賦形剤とから本質的になる凍結乾燥ケーキを提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、増量剤を含む賦形剤とを含む治療用組成物を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、増量剤を含む賦形剤とから本質的になる治療用組成物を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、増量剤及び凍結乾燥保護剤を含む賦形剤とを含む治療用組成物を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、増量剤及び凍結乾燥保護剤を含む賦形剤とから本質的になる治療用組成物を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、凍結乾燥保護剤を含む賦形剤とを含む治療用組成物を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、凍結乾燥保護剤を含む賦形剤とから本質的になる治療用組成物を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、１つ以上の賦形剤を含むストックの賦形剤とを含む溶液を提供し、ここで、ストックは、表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰに提供される配合を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、１つ以上の賦形剤を含むストックの賦形剤とから本質的になる溶液を提供し、ここで、ストックは、表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰに提供される配合を含む。

いくつかの態様では、本開示は、そのような溶液を含む治療用組成物を提供し、ここで、本組成物は、薬学的に許容される賦形剤を更に含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される賦形剤は、流動化剤、潤滑剤及び／又は希釈剤を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、１つ以上の賦形剤を含むストックの賦形剤とを含む乾燥形態を提供し、ここで、ストックは、表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰに提供される配合を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、１つ以上の賦形剤を含むストックの賦形剤とから本質的になる乾燥形態を提供し、ここで、ストックは、表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰに提供される配合を含む。

いくつかの態様では、本開示は、そのような乾燥形態を含む治療用組成物を提供し、ここで、本組成物は、薬学的に許容される賦形剤を更に含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される賦形剤は、流動化剤、潤滑剤及び／又は希釈剤を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、１つ以上の賦形剤を含むストックの賦形剤とを含む粉末を提供し、ここで、ストックは、表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰに提供される配合を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、１つ以上の賦形剤を含むストックの賦形剤とから本質的になる粉末を提供し、ここで、ストックは、表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰに提供される配合を含む。

いくつかの態様では、本開示は、そのような粉末を含む治療用組成物を提供し、ここで、本組成物は、薬学的に許容される賦形剤を更に含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される賦形剤は、流動化剤、潤滑剤及び／又は希釈剤を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、１つ以上の賦形剤を含むストックの賦形剤とを含む噴霧乾燥粉末を提供し、ここで、ストックは、表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰに提供される配合を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、１つ以上の賦形剤を含むストックの賦形剤とから本質的になる噴霧乾燥粉末を提供し、ここで、ストックは、表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰに提供される配合を含む。

いくつかの態様では、本開示は、そのような噴霧乾燥粉末を含む治療用組成物を提供し、ここで、本組成物は、薬学的に許容される賦形剤を更に含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される賦形剤は、流動化剤、潤滑剤及び／又は希釈剤を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、１つ以上の賦形剤を含むストックの賦形剤とを含む凍結乾燥物を提供し、ここで、ストックは、表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰに提供される配合を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、１つ以上の賦形剤を含むストックの賦形剤とから本質的になる凍結乾燥物を提供し、ここで、ストックは、表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰに提供される配合を含む。

いくつかの態様では、本開示は、そのような凍結乾燥物を含む治療用組成物を提供し、ここで、本組成物は、薬学的に許容される賦形剤を更に含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される賦形剤は、流動化剤、潤滑剤及び／又は希釈剤を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、１つ以上の賦形剤を含むストックの賦形剤とを含む凍結乾燥粉末を提供し、ここで、ストックは、表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰに提供される配合を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、１つ以上の賦形剤を含むストックの賦形剤とから本質的になる凍結乾燥粉末を提供し、ここで、ストックは、表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰに提供される配合を含む。

いくつかの態様では、本開示は、そのような凍結乾燥粉末を含む治療用組成物を提供し、ここで、本組成物は、薬学的に許容される賦形剤を更に含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される賦形剤は、流動化剤、潤滑剤及び／又は希釈剤を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、１つ以上の賦形剤を含むストックの賦形剤とを含む凍結乾燥ケーキを提供し、ここで、ストックは、表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰに提供される配合を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、１つ以上の賦形剤を含むストックの賦形剤とから本質的になる凍結乾燥ケーキを提供し、ここで、ストックは、表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰに提供される配合を含む。

いくつかの態様では、本開示は、そのような凍結乾燥ケーキを含む治療用組成物を提供し、ここで、本組成物は、薬学的に許容される賦形剤を更に含む。いくつかの実施形態では、薬学的に許容される賦形剤は、流動化剤、潤滑剤及び／又は希釈剤を含む。

いくつかの態様では、本開示は、対象（例えば、ヒト）（例えば、処置を必要とする対象）を処置する方法を提供し、本方法は、
本明細書に記載のプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ又は溶液、乾燥形態若しくは治療用組成物を対象に投与すること
を含む。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ又は溶液、乾燥形態若しくは治療用組成物は、対象（例えば、ヒト）（例えば、処置を必要とする対象）の処置における使用のためのものである。

いくつかの態様では、本開示は、対象（例えば、ヒト）（例えば、処置を必要とする対象）を処置するための薬剤の調製のための、本明細書で提供されるプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ又は溶液、乾燥形態若しくは治療用組成物の使用を提供する。

本明細書で提供される方法、溶液、乾燥形態、治療用組成物又は使用のいくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ又は溶液、乾燥形態若しくは治療用組成物は、経口投与される（例えば、経口投与のためのものである）。

本明細書で提供される方法、溶液、乾燥形態、治療用組成物又は使用のいくつかの実施形態では、対象は、免疫疾患の処置（及び／又は予防）を必要としている。

本明細書で提供される方法、溶液、乾燥形態、治療用組成物又は使用のいくつかの実施形態では、対象は、自己免疫疾患の処置（及び／又は予防）を必要としている。

本明細書で提供される方法、溶液、乾燥形態、治療用組成物又は使用のいくつかの実施形態では、対象は、炎症性疾患の処置（及び／又は予防）を必要としている。

本明細書で提供される方法、溶液、乾燥形態、治療用組成物又は使用のいくつかの実施形態では、対象は、代謝疾患の処置（及び／又は予防）を必要としている。

本明細書で提供される方法、溶液、乾燥形態、治療用組成物又は使用のいくつかの実施形態では、対象は、ディスバイオシスの処置（及び／又は予防）を必要としている。

本明細書で提供される方法、溶液、乾燥形態、治療用組成物又は使用のいくつかの実施形態では、溶液、乾燥形態又は治療用組成物は、追加の治療薬と組み合わせて投与される。

本明細書で提供される方法、溶液、乾燥形態、治療用組成物又は使用のいくつかの実施形態では、乾燥形態は粉末である。いくつかの実施形態では、粉末は凍結乾燥粉末である。いくつかの実施形態では、粉末は噴霧乾燥粉末である。

本明細書で提供される方法、溶液、乾燥形態、治療用組成物又は使用のいくつかの実施形態では、乾燥形態は凍結乾燥物である。いくつかの実施形態では、凍結乾燥物は凍結乾燥粉末である。いくつかの実施形態では、凍結乾燥物は凍結乾燥ケーキである。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む溶液を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、増量剤を含む（又は本質的に増量剤からなる）賦形剤と組み合わせ、それによって溶液を調製すること
を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む溶液を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、増量剤及び凍結乾燥保護剤を含む（又は本質的に増量剤からなる）賦形剤と組み合わせ、それによって溶液を調製すること
を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む溶液を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、凍結乾燥保護剤を含む（又は本質的に増量剤からなる）賦形剤と組み合わせ、それによって溶液を調製すること
を含む。

いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載の方法によって調製された溶液を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む乾燥形態を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、増量剤を含む（又は本質的に増量剤からなる）賦形剤と組み合わせて、溶液を調製すること；及び
溶液を乾燥させ、それによって乾燥形態を調製すること
を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む乾燥形態を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、増量剤を含む（又は本質的に増量剤からなる）賦形剤と組み合わせて、溶液を調製すること；
溶液を乾燥させて、ケーキを調製すること、及び
ケーキを粉砕し（例えば、すり潰し）、それによって乾燥形態を調製すること
を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む乾燥形態を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、増量剤及び凍結乾燥保護剤を含む（又は本質的に増量剤からなる）賦形剤と組み合わせて、溶液を調製すること；並びに
溶液を乾燥させ、それによって乾燥形態を調製すること
を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む乾燥形態を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、増量剤及び凍結乾燥保護剤を含む（又は本質的に増量剤からなる）賦形剤と組み合わせて、溶液を調製すること；
溶液を乾燥させて、ケーキを調製すること、及び
ケーキを粉砕し（例えば、すり潰し）、それによって乾燥形態を調製すること
を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む乾燥形態を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、凍結乾燥保護剤を含む（又は本質的に増量剤からなる）賦形剤と組み合わせて、溶液を調製すること；及び
溶液を乾燥させ、それによって乾燥形態を調製すること
を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む乾燥形態を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、凍結乾燥保護剤を含む（又は本質的に増量剤からなる）賦形剤と組み合わせて、溶液を調製すること；
溶液を乾燥させて、ケーキを調製すること、及び
ケーキを粉砕し（例えば、すり潰し）、それによって乾燥形態を調製すること
を含む。

本明細書で提供される乾燥形態を調製する方法のいくつかの実施形態では、乾燥は凍結乾燥を含む。

本明細書で提供される乾燥形態を調製する方法のいくつかの実施形態では、乾燥は噴霧乾燥を含む。

本明細書で提供される乾燥形態を調製する方法のいくつかの実施形態では、本方法は、乾燥形態を追加の成分と組み合わせることを更に含む。いくつかの実施形態では、追加の成分は、賦形剤、例えば流動化剤、潤滑剤及び／又は希釈剤を含む。

いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載の方法によって調製された乾燥形態を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む粉末を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、増量剤を含む（又は本質的に増量剤からなる）賦形剤と組み合わせて、溶液を調製すること；及び
溶液を乾燥させ、それによって粉末を調製すること
を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む粉末を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、増量剤を含む（又は本質的に増量剤からなる）賦形剤と組み合わせて、溶液を調製すること；
溶液を乾燥させて、ケーキを調製すること、及び
ケーキを粉砕し（例えば、すり潰し）、それによって粉末を調製すること
を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む粉末を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、増量剤及び凍結乾燥保護剤を含む（又は本質的に増量剤からなる）賦形剤と組み合わせて、溶液を調製すること；並びに
溶液を乾燥させ、それによって粉末を調製すること
を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む粉末を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、増量剤及び凍結乾燥保護剤を含む（又は本質的に増量剤からなる）賦形剤と組み合わせて、溶液を調製すること；
溶液を乾燥させて、ケーキを調製すること、及び
ケーキを粉砕し（例えば、すり潰し）、それによって粉末を調製すること
を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む粉末を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、凍結乾燥保護剤を含む（又は本質的に増量剤からなる）賦形剤と組み合わせて、溶液を調製すること；及び
溶液を乾燥させ、それによって粉末を調製すること
を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む粉末を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、凍結乾燥保護剤を含む（又は本質的に増量剤からなる）賦形剤と組み合わせて、溶液を調製すること；
溶液を乾燥させて、ケーキを調製すること、及び
ケーキを粉砕し（例えば、すり潰し）、それによって粉末を調製すること
を含む。

本明細書で提供される粉末を調製する方法のいくつかの実施形態では、乾燥は凍結乾燥を含む。

本明細書で提供される粉末を調製する方法のいくつかの実施形態では、乾燥は噴霧乾燥を含む。

本明細書で提供される粉末を調製する方法のいくつかの実施形態では、本方法は、粉末を追加の成分と組み合わせることを更に含む。いくつかの実施形態では、追加の成分は、賦形剤、例えば流動化剤、潤滑剤及び／又は希釈剤を含む。

いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載の方法によって調製された粉末を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む噴霧乾燥粉末を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、増量剤を含む（又は本質的に増量剤からなる）賦形剤と組み合わせて、溶液を調製すること；及び
溶液を噴霧乾燥させ、それによって噴霧乾燥粉末を調製すること
を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む噴霧乾燥粉末を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、増量剤及び凍結乾燥保護剤を含む（又は本質的に増量剤からなる）賦形剤と組み合わせて、溶液を調製すること；並びに
溶液を噴霧乾燥させ、それによって噴霧乾燥粉末を調製すること
を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む噴霧乾燥粉末を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、凍結乾燥保護剤を含む（又は本質的に増量剤からなる）賦形剤と組み合わせて、溶液を調製すること；及び
溶液を噴霧乾燥させ、それによって噴霧乾燥粉末を調製すること
を含む。

本明細書で提供される噴霧乾燥粉末を調製する方法のいくつかの実施形態では、本方法は、噴霧乾燥粉末を追加の成分と組み合わせることを更に含む。いくつかの実施形態では、追加の成分は、賦形剤、例えば流動化剤、潤滑剤及び／又は希釈剤を含む。

いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載の方法によって調製された噴霧乾燥粉末を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む凍結乾燥物を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、増量剤を含む（又は本質的に増量剤からなる）賦形剤と組み合わせて、溶液を調製すること；及び
溶液を凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅｄｒｙ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅ））させて、それによって凍結乾燥物を調製すること
を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む凍結乾燥物を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、増量剤を含む（又は本質的に増量剤からなる）賦形剤と組み合わせて、溶液を調製すること；
溶液を凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅｄｒｙ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅ））させて、ケーキを調製すること、及び
ケーキを粉砕し（例えば、すり潰し）、それによって凍結乾燥物を調製すること
を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む凍結乾燥物を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、増量剤及び凍結乾燥保護剤を含む（又は本質的に増量剤からなる）賦形剤と組み合わせて、溶液を調製すること；並びに
溶液を凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅｄｒｙ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅ））させて、それによって凍結乾燥物を調製すること
を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む凍結乾燥物を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、増量剤及び凍結乾燥保護剤を含む（又は本質的に増量剤からなる）賦形剤と組み合わせて、溶液を調製すること；
溶液を凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅｄｒｙ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅ））させて、ケーキを調製すること、及び
ケーキを粉砕し（例えば、すり潰し）、それによって凍結乾燥物を調製すること
を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む凍結乾燥物を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、凍結乾燥保護剤を含む（又は本質的に増量剤からなる）賦形剤と組み合わせて、溶液を調製すること；及び
溶液を凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅｄｒｙ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅ））させて、それによって凍結乾燥物を調製すること
を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む凍結乾燥物を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、凍結乾燥保護剤を含む（又は本質的に増量剤からなる）賦形剤と組み合わせて、溶液を調製すること；
溶液を凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅｄｒｙ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅ））させて、ケーキを調製すること、及び
ケーキを粉砕し（例えば、すり潰し）、それによって凍結乾燥物を調製すること
を含む。

本明細書で提供される凍結乾燥物を調製する方法のいくつかの実施形態では、本方法は、凍結乾燥物を追加の成分と組み合わせることを更に含む。いくつかの実施形態では、追加の成分は、賦形剤、例えば流動化剤、潤滑剤及び／又は希釈剤を含む。

いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載の方法によって調製された凍結乾燥物を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む凍結乾燥粉末を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、増量剤を含む（又は本質的に増量剤からなる）賦形剤と組み合わせて、溶液を調製すること；及び
溶液を凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅｄｒｙ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅ））させて、それによって噴霧乾燥粉末を調製すること
を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む凍結乾燥粉末を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、増量剤を含む（又は本質的に増量剤からなる）賦形剤と組み合わせて、溶液を調製すること；
溶液を凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅｄｒｙ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅ））させて、ケーキを調製すること、及び
ケーキを粉砕し（例えば、すり潰し）、それによって凍結乾燥粉末を調製すること
を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む凍結乾燥粉末を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、増量剤及び凍結乾燥保護剤を含む（又は本質的に増量剤からなる）賦形剤と組み合わせて、溶液を調製すること；並びに
溶液を凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅｄｒｙ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅ））させて、それによって噴霧乾燥粉末を調製すること
を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む凍結乾燥粉末を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、増量剤及び凍結乾燥保護剤を含む（又は本質的に増量剤からなる）賦形剤と組み合わせて、溶液を調製すること；
溶液を凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅｄｒｙ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅ））させて、ケーキを調製すること、及び
ケーキを粉砕し（例えば、すり潰し）、それによって凍結乾燥粉末を調製すること
を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む凍結乾燥粉末を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、凍結乾燥保護剤を含む（又は本質的に増量剤からなる）賦形剤と組み合わせて、溶液を調製すること；及び
溶液を凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅｄｒｙ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅ））させて、それによって噴霧乾燥粉末を調製すること
を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む凍結乾燥粉末を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、凍結乾燥保護剤を含む（又は本質的に増量剤からなる）賦形剤と組み合わせて、溶液を調製すること；
溶液を凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅｄｒｙ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅ））させて、ケーキを調製すること、及び
ケーキを粉砕し（例えば、すり潰し）、それによって凍結乾燥粉末を調製すること
を含む。

本明細書で提供される凍結乾燥粉末を調製する方法のいくつかの実施形態では、本方法は、凍結乾燥粉末を追加の成分と組み合わせることを更に含む。いくつかの実施形態では、追加の成分は、賦形剤、例えば流動化剤、潤滑剤及び／又は希釈剤を含む。

いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載の方法によって調製された凍結乾燥粉末を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む凍結乾燥ケーキを調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、増量剤を含む（又は本質的に増量剤からなる）賦形剤と組み合わせて、溶液を調製すること；及び
溶液を凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅｄｒｙ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅ））させて、それによって噴霧乾燥ケーキを調製すること
を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む凍結乾燥ケーキを調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、増量剤及び凍結乾燥保護剤を含む（又は本質的に増量剤からなる）賦形剤と組み合わせて、溶液を調製すること；並びに
溶液を凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅｄｒｙ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅ））させて、それによって噴霧乾燥ケーキを調製すること
を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む凍結乾燥ケーキを調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、凍結乾燥保護剤を含む（又は本質的に増量剤からなる）賦形剤と組み合わせて、溶液を調製すること；及び
溶液を凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅｄｒｙ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅ））させて、それによって噴霧乾燥ケーキを調製すること
を含む。

いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載の方法によって調製された凍結乾燥ケーキを提供する。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む溶液を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、１つ以上の賦形剤を含むストックと組み合わせることであって、ストックが表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰに提供される配合を含み、それによって溶液を調製すること
を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む乾燥形態を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、１つ以上の賦形剤を含むストックと組み合わせることであって、ストックが表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰに提供される配合を含み、それによって溶液を調製すること；及び
溶液を乾燥させ、それによって乾燥形態を調製すること
を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む乾燥形態を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、１つ以上の賦形剤を含むストックと組み合わせることであって、ストックが表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰに提供される配合を含み、それによって溶液を調製すること；
溶液を乾燥させて、ケーキを調製すること、及び
ケーキを粉砕し（例えば、すり潰し）、それによって乾燥形態を調製すること
を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む粉末を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、１つ以上の賦形剤を含むストックと組み合わせることであって、ストックが表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰに提供される配合を含み、それによって溶液を調製すること；及び
溶液を乾燥させ、それによって粉末を調製すること
を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む粉末を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、１つ以上の賦形剤を含むストックと組み合わせることであって、ストックが表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰに提供される配合を含み、それによって溶液を調製すること；
溶液を乾燥させて、ケーキを調製すること、及び
ケーキを粉砕し（例えば、すり潰し）、それによって粉末を調製すること
を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む噴霧乾燥粉末を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、１つ以上の賦形剤を含むストックと組み合わせることであって、ストックが表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰに提供される配合を含み、それによって溶液を調製すること；及び
溶液を噴霧乾燥させ、それによって噴霧乾燥粉末を調製すること
を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む凍結乾燥物を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、１つ以上の賦形剤を含むストックと組み合わせることであって、ストックが表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰに提供される配合を含み、それによって溶液を調製すること；及び
溶液を凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅｄｒｙ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅ））させて、それによって凍結乾燥物を調製すること
を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む凍結乾燥物を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、１つ以上の賦形剤を含むストックと組み合わせることであって、ストックが表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰに提供される配合を含み、それによって溶液を調製すること；
溶液を凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅｄｒｙ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅ））させて、ケーキを調製すること、及び
ケーキを粉砕し（例えば、すり潰し）、それによって凍結乾燥物を調製すること
を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む凍結乾燥粉末を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、１つ以上の賦形剤を含むストックと組み合わせることであって、ストックが表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰに提供される配合を含み、それによって溶液を調製すること；及び
溶液を凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅｄｒｙ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅ））させて、それによって噴霧乾燥粉末を調製すること
を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む凍結乾燥粉末を調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、１つ以上の賦形剤を含むストックと組み合わせることであって、ストックが表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰに提供される配合を含み、それによって溶液を調製すること；
溶液を凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅｄｒｙ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅ））させて、ケーキを調製すること、及び
ケーキを粉砕し（例えば、すり潰し）、それによって凍結乾燥粉末を調製すること
を含む。

いくつかの態様では、本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む凍結乾燥ケーキを調製する方法を提供し、本方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、１つ以上の賦形剤を含むストックと組み合わせることであって、ストックが表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰに提供される配合を含み、それによって溶液を調製すること；及び
溶液を凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅｄｒｙ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅ））させて、それによって噴霧乾燥ケーキを調製すること
を含む。

凍結乾燥工程を含む方法のいくつかの実施形態では、凍結乾燥は、一次乾燥及び二次乾燥を含む。いくつかの実施形態では、一次乾燥は、約－３５℃～約－２０℃の間の温度で実施される。例えば、一次乾燥は、約－２０℃、約－２５℃、約－３０℃又は約－３５℃の温度で実施される。いくつかの実施形態では、二次乾燥は、約＋２０℃～約＋３０℃の温度で実施される。例えば、二次乾燥は、＋２５℃程度の温度で実施される。

本明細書で提供される溶液、乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、増量剤は、マンニトール、スクロース、マルトデキストリン、デキストラン、フィコール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ６０００などのＰＥＧ）、シクロデキストリン又はＰＶＰ－Ｋ３０を含む。

本明細書で提供される溶液、乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、増量剤はマンニトールを含む。

本明細書で提供される溶液、乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、賦形剤は追加の成分を含む。

本明細書で提供される溶液、乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、追加の成分は、トレハロース、マンニトール、スクロース、ソルビトール、デキストラン、ポロキサマー１８８、マルトデキストリン、ＰＶＰ－Ｋ３０、フィコール、クエン酸、アルギニン及び／又はヒドロキシプロピルＢ－シクロデキストリンを含む。

本明細書で提供される溶液、乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、賦形剤は、マンニトール及びトレハロースを含む。

本明細書で提供される溶液、乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、賦形剤は、本質的にマンニトール及びトレハロースからなる。

本明細書で提供される溶液、乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、賦形剤は、マンニトール、トレハロース及びソルビトールを含む。

本明細書で提供される溶液、乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、賦形剤は、本質的にマンニトール、トレハロース及びソルビトールからなる。

本明細書で提供される溶液、乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、賦形剤は、トレハロースを含む。

本明細書で提供される溶液、乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、賦形剤は、本質的にトレハロースからなる。

本明細書で提供される溶液、乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、賦形剤は、１つ以上の賦形剤を含むストックからのものであり、ここで、ストックは、表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰに提供される配合を含む。

本明細書で提供される溶液、乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、乾燥形態は粉末である。いくつかの実施形態では、粉末は凍結乾燥粉末である。いくつかの実施形態では、粉末は噴霧乾燥粉末である。

本明細書で提供される溶液、乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、乾燥形態は凍結乾燥物である。いくつかの実施形態では、凍結乾燥物は凍結乾燥粉末である。いくつかの実施形態では、凍結乾燥物は凍結乾燥ケーキである。

本明細書で提供される溶液、乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、賦形剤溶液は、マンニトール及びトレハロースを含み、ここで、マンニトールとトレハロースは等量では存在しない（例えば、マンニトールとトレハロースは、例えば重量ベース又は重量パーセントベースで、不等量で存在する）。いくつかの実施形態では、賦形剤溶液は、例えば重量ベース又は重量パーセントベースで、トレハロースよりも多くのマンニトールを含む。いくつかの実施形態では、賦形剤溶液は、例えば重量ベース又は重量パーセントベースで、トレハロースより少なくとも２倍多いマンニトールを含む。いくつかの実施形態では、賦形剤溶液は、例えば重量ベース又は重量パーセントベースで、トレハロースより少なくとも３倍多いマンニトールを含む。いくつかの実施形態では、溶液又は乾燥形態の賦形剤は、マンニトール及びトレハロースを含み、ここで、マンニトールとトレハロースは等量では存在しない（例えば、マンニトールとトレハロースは、例えば重量ベース又は重量パーセントベースで、不等量で存在する）。いくつかの実施形態では、溶液又は乾燥形態の賦形剤は、例えば重量ベース又は重量パーセントベースで、トレハロースよりも多くのマンニトールを含む。いくつかの実施形態では、溶液又は乾燥形態の賦形剤は、例えば重量ベース又は重量パーセントベースで、トレハロースより少なくとも２倍多いマンニトールを含む。いくつかの実施形態では、溶液又は乾燥形態の賦形剤は、例えば重量ベース又は重量パーセントベースで、トレハロースより少なくとも３倍多いマンニトールを含む。

本明細書で提供される溶液、乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、賦形剤溶液は、本質的にマンニトール及びトレハロースからなる。いくつかの実施形態では、賦形剤溶液は、本質的にマンニトール及びトレハロースからなり、ここで、マンニトールとトレハロースは等量では存在しない（例えば、マンニトールとトレハロースは、例えば重量ベース又は重量パーセントベースで、不等量で存在する）。いくつかの実施形態では、賦形剤溶液は本質的にマンニトール及びトレハロースからなり、ここで、賦形剤は、例えば重量ベース又は重量パーセントベースで、トレハロースよりも多くのマンニトールを含有する。いくつかの実施形態では、賦形剤溶液は本質的にマンニトール及びトレハロースからなり、ここで、賦形剤溶液は、例えば重量ベース又は重量パーセントベースで、トレハロースより少なくとも２倍多いマンニトールを含有する。いくつかの実施形態では、賦形剤溶液は本質的にマンニトール及びトレハロースからなり、ここで、賦形剤溶液は、例えば重量ベース又は重量パーセントベースで、トレハロースより少なくとも３倍多いマンニトールを含有する。いくつかの実施形態では、溶液又は乾燥形態の賦形剤は、本質的にマンニトール及びトレハロースからなり、ここで、溶液又は乾燥形態の賦形剤は、例えば重量ベース又は重量パーセントベースで、トレハロースよりも多くのマンニトールを含有する。いくつかの実施形態では、溶液又は乾燥形態の賦形剤は、本質的にマンニトール及びトレハロースからなり、ここで、溶液又は乾燥形態の賦形剤は、例えば重量ベース又は重量パーセントベースで、トレハロースより少なくとも２倍多いマンニトールを含有する。いくつかの実施形態では、溶液又は乾燥形態の賦形剤は、本質的にマンニトール及びトレハロースからなり、ここで、溶液又は乾燥形態の賦形剤は、例えば重量ベース又は重量パーセントベースで、トレハロースより少なくとも３倍多いマンニトールを含有する。

本明細書で提供される溶液、乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、賦形剤溶液は、マンニトール及びトレハロースを含むか又は本質的にそれらからなり、ここで、マンニトールもトレハロースも５ｍｇ／ｍｌ～１５ｍｇ／ｍｌの量では存在しない。いくつかの実施形態では、賦形剤溶液は、マンニトール及びトレハロースを含むか又は本質的にそれらからなり、マンニトールは５ｍｇ／ｍｌ～１５ｍｇ／ｍｌの量では存在しない。いくつかの実施形態では、賦形剤溶液は、マンニトール及びトレハロースを含むか又は本質的にそれらからなり、トレハロースは５ｍｇ／ｍｌ～１５ｍｇ／ｍｌの量では存在しない。

本明細書で提供される溶液、乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、賦形剤溶液は、マンニトール及びトレハロースを含むか又は本質的にそれらからなり、ここで、マンニトールもトレハロースも９ｍｇ／ｍｌの量では存在しない。いくつかの実施形態では、賦形剤溶液は、マンニトール及びトレハロースを含むか又は本質的にそれらからなり、マンニトールは９ｍｇ／ｍｌの量では存在しない。いくつかの実施形態では、賦形剤溶液は、マンニトール及びトレハロースを含むか又は本質的にそれらからなり、トレハロースは９ｍｇ／ｍｌの量では存在しない。

本明細書で提供される溶液、乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、賦形剤は、マンニトール及びトレハロースを含むか又は本質的にそれらからなり、メチオニンを含まない。

本明細書で提供される乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、乾燥形態又は治療用組成物は、マンニトール及びトレハロースを含むか又は本質的にそれらからなり、マンニトールとトレハロースは、乾燥形態又は治療用組成物中に等量では存在しない（例えば、マンニトールとトレハロースは、例えば重量ベース又は重量パーセントベースで、不等量で存在する）。

本明細書で提供される溶液、乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、溶液又は乾燥形態の少なくとも約１０％（重量）が賦形剤ストックである。

本明細書で提供される溶液、乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、溶液又は乾燥形態の約１０％～約８０％（重量）が賦形剤ストックである。

本明細書で提供される溶液、乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、溶液又は乾燥形態の約２０％～約７０％（重量）が賦形剤ストックである。

本明細書で提供される溶液、乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、溶液又は乾燥形態の約３０％～約６０％（重量）が賦形剤ストックである。

本明細書で提供される乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶは、乾燥形態の重量で全固形分の少なくとも約１％を構成する。

本明細書で提供される乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶは、乾燥形態の重量で全固形分の約１％～約９９％を構成する。

本明細書で提供される乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶは、乾燥形態の重量で全固形分の約５％～約９０％を構成する。本明細書で提供される乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶは、乾燥形態の重量で全固形分の約１％～約６０％を構成する。本明細書で提供される乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶは、粉末又はケーキの重量で全固形分の約１％～約２０％を構成する。本明細書で提供される乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶは、乾燥形態の重量で全固形分の約２％～約１０％を構成する。本明細書で提供される乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶは、乾燥形態の重量で全固形分の約２％～約６％を構成する。本明細書で提供される乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、乾燥形態は、約６％未満の水分含有量を含む（例えば、カールフィッシャー滴定によって決定される）。

本明細書で提供される乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、乾燥形態は、約５％未満の水分含有量を含む（例えば、カールフィッシャー滴定によって決定される）。

本明細書で提供される乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、乾燥形態は、約０．５％～約５％の水分含有量を含む（例えば、カールフィッシャー滴定によって決定される）。

本明細書で提供される乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、乾燥形態は、約１％～約５％の水分含有量を含む（例えば、カールフィッシャー滴定によって決定される）。

本明細書で提供される乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、乾燥形態は、約１％～約４％の水分含有量を含む（例えば、カールフィッシャー滴定によって決定される）。

本明細書で提供される乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、乾燥形態は、約２％～約５％の水分含有量を含む（例えば、カールフィッシャー滴定によって決定される）。

本明細書で提供される乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、乾燥形態は、約２％～約４％の水分含有量を含む（例えば、カールフィッシャー滴定によって決定される）。

本明細書で提供される乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、乾燥形態は、乾燥形態１ｍｇ当たり少なくとも１ｅ１０個の粒子を含む（例えば、ＮＴＡなど、１ｍｇ当たりの粒子によって決定される）。

本明細書で提供される乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、乾燥形態は、乾燥形態１ｍｇ当たり約３ｅ１０～約６．５ｅ１０個の粒子を含む（例えば、ＮＴＡなど、１ｍｇ当たりの粒子によって決定される）。

本明細書で提供される乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、乾燥形態は、乾燥形態１ｍｇ当たり約３ｅ１０～約８ｅ１０個の粒子を含む（例えば、ＮＴＡなど、１ｍｇ当たりの粒子によって決定される）。

本明細書で提供される乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、乾燥形態は、乾燥形態１ｍｇ当たり約６ｅ１０～約８ｅ１０個の粒子を含む（例えば、ＮＴＡなど、１ｍｇ当たりの粒子によって決定される）。

本明細書で提供される乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、乾燥形態は、乾燥形態１ｍｇ当たり約６．７ｅ８～約２．５５ｅ１０個の粒子を含む（例えば、ＮＴＡなど、１ｍｇ当たりの粒子によって決定される）。

本明細書で提供される乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、乾燥形態は、乾燥形態１ｍｇ当たり約６．７ｅ８～約２．８９ｅ１０個の粒子を含む。

いくつかの実施形態では、粒子数は、乾燥形態について、ＮＴＡによって決定される。いくつかの実施形態では、粒子数は、乾燥形態について、ＮＴＡによってＺｅｔａｖｉｅｗカメラを使用して決定される。

いくつかの実施形態では、粒子数は、水中に再懸濁された乾燥形態について、ＮＴＡによってＺｅｔａｖｉｅｗカメラを使用して決定される。

本明細書で提供される乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、粒子は、乾燥形態からの再懸濁（例えば、脱イオン水中での再懸濁）後、約１００ｎｍ～約３００ｎｍの流体力学直径（Ｚ平均、Ｚ_ａｖｅ）を有する（例えば、動的光散乱によって決定される）。

本明細書で提供される乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、粒子は、乾燥形態からの再懸濁（例えば、脱イオン水中での再懸濁）後、約１３０ｎｍ～約２５０ｎｍの流体力学直径（Ｚ平均、Ｚ_ａｖｅ）を有する（例えば、動的光散乱によって決定される）。

本明細書で提供される乾燥形態又は治療用組成物のいくつかの実施形態では、粒子は、乾燥形態からの再懸濁（例えば、脱イオン水中での再懸濁）後、約２００ｎｍの流体力学直径（Ｚ平均、Ｚ_ａｖｅ）を有する（例えば、動的光散乱によって決定される）。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される溶液、乾燥形態又は治療用組成物は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）由来のＥＶに加えて、１つ以上の細菌株由来のＥＶを含有し得る。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される溶液、乾燥形態又は治療用組成物は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）由来のＥＶに加えて、１つの細菌株由来のＥＶを含有し得る。ＥＶの供給源として使用される細菌株は、細菌の特性（例えば、増殖特性、収量、アッセイ又は対象における免疫反応を調節する能力）に基づいて選択され得る。

いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む本明細書で提供される溶液、乾燥形態若しくは治療用組成物は、例えば対象（例えば、ヒト）における、疾患及び／又は健康障害の処置又は予防に使用することができる。

いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む、本明細書に提供される乾燥形態（又はその治療用組成物）は、錠剤、小型錠剤、カプセル又は粉末などの固形用量形態；又はこれらの形態の組み合わせ（例えば、カプセル中に含まれる小型錠剤）として調製することができる。固形用量形態は、コーティング（例えば、腸溶性コーティング）を含み得る。

特定の実施形態では、治療用組成物は固形用量形態を含む。いくつかの実施形態では、治療用組成物は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶの凍結乾燥粉末及び賦形剤のブレンド（例えば、本明細書で提供されるプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶのカプセル化凍結乾燥粉末及び賦形剤）を含む。いくつかの実施形態では、治療用組成物は、カプセル中にプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶの凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ－ｄｒｉｅｄ）（例えば、凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ））粉末を含む。いくつかの実施形態では、カプセルは、ゼラチン又はヒドロキシプロピルメチルセルロースＨＰＭＣを含む。いくつかの実施形態では、カプセルは腸溶性コーティングされている。いくつかの実施形態では、賦形剤は、マンニトール、ステアリン酸マグネシウム及びコロイド状二酸化ケイ素の１つ以上を含む。いくつかの実施形態では、賦形剤は、マンニトール、ステアリン酸マグネシウム及びコロイド状二酸化ケイ素を含む。いくつかの実施形態では、治療用組成物は、錠剤又は小型錠剤中にプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶの凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ－ｄｒｉｅｄ）（例えば、凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ））粉末を含む。いくつかの実施形態では、錠剤又は小型錠剤は、腸溶性コーティングされている。いくつかの実施形態では、賦形剤は、ケイ化微結晶セルロース、クロスポビドン、ステアリン酸マグネシウム及びコロイド状二酸化ケイ素の１つ以上を含む。いくつかの実施形態では、賦形剤は、ケイ化微結晶セルロース、クロスポビドン、ステアリン酸マグネシウム及びコロイド状二酸化ケイ素を含む。

いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む、本明細書に提供される乾燥形態（又はその治療用組成物）は、再構成することができる。いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む、本明細書に提供される溶液（又はその治療用組成物）は、懸濁液として、例えば、懸濁液に希釈して又は未希釈の形態で使用することができる。

いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む溶液及び／又は乾燥形態を含む治療用組成物は、本明細書で提供されるように調製することができる。乾燥形態を含む治療用組成物は、錠剤、小型錠剤、カプセル又は粉末などの固形用量形態に製剤化することができ；又は懸濁液中で再構成することができる。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ又は溶液、乾燥形態若しくは治療用組成物は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のガンマ線照射されたＥＶを含み得る。プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のガンマ線照射されたＥＶは、治療用組成物中に配合することができる。プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のガンマ線照射されたＥＶは、錠剤、小型錠剤、カプセル又は粉末などの固形用量形態に製剤化することができ；又は懸濁液中で再構成することができる。

いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む本明細書で提供される溶液、乾燥形態若しくは治療用組成物は、経口投与することができる。

いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む本明細書で提供される溶液、乾燥形態若しくは治療用組成物は、鼻腔内投与することができる。

いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む本明細書で提供される溶液、乾燥形態若しくは治療用組成物は、吸入によって投与することができる。

いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む本明細書で提供される溶液、乾燥形態若しくは治療用組成物は、静脈内投与することができる。

いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む本明細書で提供される溶液、乾燥形態若しくは治療用組成物は、注射によって投与することができる。

特定の態様では、疾患又は健康障害（例えば、有害な健康障害）（例えば、免疫疾患（例えば、自己免疫疾患、炎症性疾患、アレルギー）、ディスバイオシス又は代謝疾患）の処置及び／又は予防に有用なプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態を含む治療用組成物、並びにそのようなプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態及び治療用組成物を作製及び／又は同定する方法、並びにそのようなプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態を使用する方法、並びに（単独での又は治療薬と組み合わせた、例えば免疫疾患（例えば、自己免疫疾患、炎症性疾患、アレルギー）、ディスバイオシス又は代謝疾患の処置のための）その治療用組成物が本明細書に提供される。

いくつかの実施形態では、治療用組成物は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶと、全細菌、例えば、生細菌、死滅細菌、弱毒化細菌などのＥＶが得られたプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌との両方を含み得る。いくつかの実施形態では、治療用組成物は、溶液及び／又は乾燥形態の細菌由来の含有量の約８５％超、約９０％超又は約９５％超（又は約９９％超が、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶから構成されるように、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを、それらが得られた細菌の不存在下で含む。プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶは、例えば本明細書に記載の方法によって単離された、単離ＥＶであり得る。

いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ又は溶液、乾燥形態若しくは治療用組成物は、単離されたプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ（例えば、１つ以上の細菌株由来（例えば、その治療有効量）を含む。例えば、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態の含有量（例えば、賦形剤を除外しない含有量）の少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％又は少なくとも９９％は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌（例えば、目的の細菌）から単離されたＥＶである。

いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ又は溶液、乾燥形態若しくは治療用組成物は、単離されたプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ（例えば、１つの細菌株（例えば、目的の細菌）由来（例えば、その治療有効量）を含む。例えば、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態の含有量（例えば、賦形剤を除外しない含有量）の少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％又は少なくとも９９％は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌（例えば、目的の細菌、例えば、本明細書に開示される細菌）の単離されたＥＶである。

いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ又は溶液、乾燥形態若しくは治療用組成物は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む。

いくつかの実施形態では、溶液、乾燥形態又は治療用組成物は、２つ以上の細菌株に由来するＥＶ（例えば、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶに加え、ある株に由来するＥＶ）を含む。

いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶは凍結乾燥される。

いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶはガンマ線照射される。

いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶはＵＶ照射される。

いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶは、熱失活されている（例えば、５０℃で２時間又は９０℃で２時間）。

いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶは酸処理される。

いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶは、酸素散布されている（例えば、０．１ｖｖｍで２時間）。

いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶは、プレボテラ属（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）Ｂ５０３２９株（ＮＲＲＬ受託番号Ｂ５０３２９）のヌクレオチド配列に対して少なくとも９０％（又は少なくとも９７％）のゲノム、１６Ｓ及び／又はＣＲＩＳＰＲ配列同一性を含む株由来である。いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶは、プレボテラ属（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）Ｂ５０３２９株（ＮＲＲＬ受託番号Ｂ５０３２９）のヌクレオチド配列に対して少なくとも９９％のゲノム、１６Ｓ及び／又はＣＲＩＳＰＲ配列同一性を含む株由来である。いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌は、プレボテラ属（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）Ｂ５０３２９株（ＮＲＲＬ受託番号Ｂ５０３２９）由来である。

特定の態様では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶは、毒性及び有害の軽減（例えば、リポ多糖（ＬＰＳ）の除去又は欠失による）、経口送達の強化（例えば、耐酸性、粘膜付着及び／若しくは浸透並びに／又は胆汁酸に対する耐性、抗細菌性ペプチド及び／若しくは抗体中和に対する耐性の改善による）、所望の細胞タイプ（例えば、Ｍ細胞、杯細胞、腸細胞、樹状細胞、マクロファージ）の標的化、全身又は適切なニッチ（例えば、腸間膜リンパ節、パイエル板、粘膜固有層、リンパ節及び／又は血液）における生体利用可能性の改善、免疫調節効果及び／又は治療効果の強化（例えば、単独で又は別の治療薬と組み合わせて）、免疫活性化の強化及び／又は製造特性（例えば、増殖特性、収量、より良い安定性、改善された凍結解凍耐性、より短い生成時間）など、特定の望ましい特性に基づいて選択された細菌から得られる。

特定の態様では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶは、特定の望ましい特性を強化するように改変された、操作された細菌に由来する。いくつかの実施形態では、操作された細菌は、そこから産生されるＥＶが、毒性及び有害の軽減（例えば、リポ多糖（ＬＰＳ）の除去又は欠失による）、経口送達の強化（例えば、耐酸性、粘膜付着及び／若しくは浸透並びに／又は胆汁酸に対する耐性、抗菌性ペプチド及び／若しくは抗体中和に対する耐性の改善による）、所望の細胞タイプ（例えば、Ｍ細胞、杯細胞、腸細胞、樹状細胞、マクロファージ）の標的化、全身又は適切なニッチ（例えば、腸間膜リンパ節、パイエル板、粘膜固有層、リンパ節及び／又は血液）における生体利用可能性の改善、免疫調節効果及び／又は治療効果の強化（例えば、単独で又は別の治療薬と組み合わせて）、免疫活性化の強化及び／又は製造特性の改善（例えば、増殖特性、収量、より良い安定性、改善された凍結解凍耐性、より短い生成時間）を有するように改変される。いくつかの実施形態では、そのようなＥＶを作製する方法が本明細書に提供される。

特定の態様では、疾患又は健康障害（例えば、免疫疾患（例えば、自己免疫疾患、炎症性疾患、アレルギー）、ディスバイオシス又は代謝疾患）の処置及び／又は予防に有用なプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態（又はその治療用組成物）、並びにそのような溶液及び／又は乾燥形態（又はその治療用組成物）を作製及び／又は同定する方法、並びに（例えば、免疫疾患（例えば、自己免疫疾患、炎症性疾患、アレルギー）、ディスバイオシス又は代謝疾患の処置のための）そのような溶液及び／又は乾燥形態を、単独で又は１つ以上の別の治療薬と組み合わせて使用する方法が本明細書に提供される。

プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態を含有する治療用組成物は、ＥＶが得られたプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）全細菌を含有する治療用組成物と同等以上の効力を提供することができる。例えば、同じ用量のＥＶ（例えば、粒子数又はタンパク質含有量に基づく）で、溶液及び／又は乾燥形態を含有する治療用組成物は、ＥＶが得られたものと同じプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株の全細菌を含有する治療用組成物と同等又はそれ以上の効力を提供することができる。このようなＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態を含有する治療用組成物は、より高用量の投与を可能にし、ＥＶが得られたものと同じプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株の全細菌を含有する治療用組成物で観察されたものと同等以上の（例えば、より効果的な）反応を引き出すことができる。

更なる例として、同じ用量（例えば、粒子数又はタンパク質含有量に基づく）で、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態を含有する治療用組成物は、ＥＶが得られたものと同じ細菌株のプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）全細菌を含有する治療用組成物と比較して、より少ない微生物由来物質（粒子数又はタンパク質含有量に基づく）を含むことができ、そのような治療用組成物を投与される対象に同等以上の治療効果を提供する。

更なる例として、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶは、例えば、ＮＴＡによって測定して、例えば、約１×１０^７～約１×１０^１５粒子の用量で投与することができる。いくつかの実施形態では、ＥＶの用量は約１×１０^５～約７×１０^１３粒子（例えば、ここで、粒子数は、ＮＴＡ（ナノ粒子追跡分析）によって決定される）である。いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶの用量は約１×１０^１０～約７×１０^１３粒子（例えば、ここで、粒子数は、ＮＴＡ（ナノ粒子追跡分析）によって決定される）である。ＮＴＡはＺｅｔａｖｉｅｗによって実施できる。

別の例として、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶは、例えば、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイによって測定して、例えば、約５ｍｇ～約９００ｍｇの総タンパク質の用量で投与することができる。別の例として、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶは、例えば、ＢＣＡアッセイによって測定して、例えば、約５ｍｇ～約９００ｍｇの総タンパク質の用量で投与することができる。

特定の実施形態では、本明細書に記載の治療用組成物若しくはプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態を対象に投与することを含む、免疫障害（例えば、自己免疫疾患、炎症性疾患、アレルギー）を有する対象を処置する方法が本明細書に提供される。特定の実施形態では、本明細書に記載の治療用組成物若しくはプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態を対象に投与することを含む、代謝疾患を有する対象を処置する方法が本明細書に提供される。特定の実施形態では、本明細書に記載の治療用組成物若しくはプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態を対象に投与することを含む、ディスバイオシスを有する対象を処置する方法が本明細書に提供される。特定の実施形態では、本明細書に記載の治療用組成物若しくはプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態を対象に投与することを含む、神経疾患を有する対象を処置する方法が本明細書に提供される。

いくつかの実施形態では、本方法は、対象に抗生物質を投与することを更に含む。いくつかの実施形態では、本方法は、免疫抑制剤及び／又は抗炎症剤の投与を更に含む。いくつかの実施形態では、治療用組成物又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液、乾燥形態及び／又は凍結乾燥物は、１つ以上の他の免疫効果調節剤と組み合わせた使用のためのものであり得る。いくつかの実施形態では、本方法は、代謝疾患治療薬の投与を更に含む。

特定の態様では、疾患（例えば、免疫疾患（例えば、自己免疫疾患、炎症性疾患、アレルギー）、ディスバイオシス又は代謝疾患）又は健康障害の処置及び／又は予防における使用のための、単独の又は１つ以上の他の（例えば、追加の）治療薬と組み合わせた、治療用組成物又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態が本明細書に提供される。

特定の実施形態では、対象（例えば、ヒト）の免疫疾患（例えば、自己免疫疾患、炎症性疾患、アレルギー）の処置及び／又は予防における使用のための治療用組成物又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態が本明細書に提供される。治療用組成物又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態は、単独で又は免疫障害の処置のための１つ以上の他の治療薬と組み合わせて使用することができる。特定の実施形態では、対象（例えば、ヒト）のディスバイオシスの処置及び／又は予防における使用のための治療用組成物又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態が本明細書に提供される。治療用組成物又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態は、単独で又はディスバイオシスの処置のための治療薬と組み合わせて使用することができる。特定の実施形態では、対象（例えば、ヒト）の代謝疾患の処置及び／又は予防における使用のための治療用組成物又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態が本明細書に提供される。治療用組成物又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態は、単独で又は代謝疾患の処置のための治療薬と組み合わせて使用することができる。特定の実施形態では、対象（例えば、ヒト）のディスバイオシスの処置及び／又は予防における使用のための治療用組成物又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態が本明細書に提供される。治療用組成物又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態は、単独で又はディスバイオシスの処置のための治療薬と組み合わせて使用することができる。特定の実施形態では、対象（例えば、ヒト）の神経疾患の処置及び／又は予防における使用のための治療用組成物又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態が本明細書に提供される。治療用組成物又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態は、単独で又は神経障害の処置のための１つ以上の他の治療薬と組み合わせて使用することができる。

いくつかの実施形態では、治療用組成物又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態は、抗生物質と組み合わせた使用のためのものであり得る。いくつかの実施形態では、治療用組成物又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態は、別の治療用細菌及び／又は１つ以上の他の細菌株（例えば、治療用細菌）から得られるＥＶと組み合わせた使用のためのものであり得る。いくつかの実施形態では、治療用組成物又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態は、１つ以上の免疫抑制剤及び／又は抗炎症剤と組み合わせた使用のためのものであり得る。いくつかの実施形態では、治療用組成物又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態は、１つ以上の他の代謝疾患治療薬と組み合わせた使用のためのものであり得る。

特定の態様では、疾患（例えば、免疫疾患（例えば、自己免疫疾患、炎症性疾患、アレルギー）、ディスバイオシス又は代謝疾患）を処置及び／又は予防するための薬剤の調製のための治療用組成物又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態の、単独での又は別の治療薬と組み合わせた使用が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、使用は、別の治療用細菌及び／又は１つ以上の他の細菌株（例えば、治療用細菌）から得られるＥＶと組み合わせたものである。

特定の実施形態では、（対象（例えば、ヒト）の免疫疾患（例えば、自己免疫疾患、炎症性疾患、アレルギー）を処置及び／又は予防するための薬剤の調製のための）治療用組成物又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態の使用が本明細書に提供される。治療用組成物又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態は、単独での又は免疫障害のための別の治療薬と組み合わせた使用のためのものであり得る。特定の実施形態では、対象（例えば、ヒト）のディスバイオシスを処置及び／又は予防するための薬剤の調製のための治療用組成物又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態の使用が本明細書に提供される。治療用組成物又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態は、単独での又はディスバイオシスのための別の治療薬と組み合わせた使用のためのものであり得る。特定の実施形態では、対象（例えば、ヒト）の代謝疾患を処置及び／又は予防するための薬剤の調製のための治療用組成物又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態の使用が本明細書に提供される。治療用組成物又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態は、単独での又は代謝疾患のための別の治療薬と組み合わせた使用のためのものであり得る。特定の実施形態では、対象（例えば、ヒト）のディスバイオシスを処置及び／又は予防するための薬剤の調製のための治療用組成物又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態の使用が本明細書に提供される。治療用組成物又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態は、単独での又はディスバイオシスのための別の治療薬と組み合わせた使用のためのものであり得る。特定の実施形態では、対象（例えば、ヒト）の神経疾患を処置及び／又は予防するための薬剤の調製のための治療用組成物又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態の使用が本明細書に提供される。治療用組成物又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態は、単独での又は神経障害のための別の治療薬と組み合わせた使用のためのものであり得る。

いくつかの実施形態では、治療用組成物又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態は、抗生物質と組み合わせた使用のためのものであり得る。いくつかの実施形態では、治療用組成物又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態は、別の治療用細菌及び／又は１つ以上の他の細菌株（例えば、治療用細菌）から得られるＥＶと組み合わせた使用のためのものであり得る。いくつかの実施形態では、治療用組成物又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態は、１つ以上の他の免疫抑制剤及び／又は抗炎症剤と組み合わせた使用のためのものであり得る。いくつかの実施形態では、治療用組成物又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は溶液及び／又は乾燥形態は、１つ以上の他の代謝疾患治療薬と組み合わせた使用のためのものであり得る。

治療用組成物又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む溶液及び／又は乾燥形態（例えば、本明細書に記載されるもの）は、治療有効量のプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶを対象、例えばヒトに提供することができる。

治療用組成物又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む溶液及び／又は乾燥形態（例えば、本明細書に記載されるもの）は、非天然量（ｎｏｎ－ｎａｔｕｒａｌａｍｏｕｎｔ）の治療有効成分（例えば、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ中に存在する）を対象、例えばヒトに提供することができる。

治療用組成物又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む溶液及び／又は乾燥形態（例えば、本明細書に記載されるもの）は、非天然量（ｕｎｎａｔｕｒａｌｑｕａｎｔｉｔｙ）の治療有効成分（例えば、ＥＶ中に存在する）を対象、例えばヒトに提供することができる。

治療用組成物又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む溶液及び／又は乾燥形態（例えば、本明細書に記載されるもの）は、例えば、疾患又は健康障害を処置又は予防するために、対象、例えばヒトに１つ以上の変化をもたらすことができる。

治療用組成物又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む溶液及び／又は乾燥形態（例えば、本明細書に記載されるもの）は、例えば、疾患又は健康障害を処置又は予防するために、対象、例えばヒトに影響を与えるなど、大きい有用性への可能性を有する。

特定の態様では、１つ以上の賦形剤を含むストックが本明細書に提供され、ここで、ストックは、増量剤を含み、ここで、ストックは、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）（例えば、その液体調製物）と組み合わせた使用のためのものである。

特定の態様では、１つ以上の賦形剤を含むストックが本明細書に提供され、ここで、ストックは、増量剤及び凍結乾燥保護剤を含み、ここで、ストックは、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）（例えば、その液体調製物）と組み合わせた使用のためのものである。

特定の態様では、１つ以上の賦形剤を含むストックが本明細書に提供され、ここで、ストックは、凍結乾燥保護剤を含み、ここで、ストックは、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）（例えば、その液体調製物）と組み合わせた使用のためのものである。

いくつかの実施形態では、増量剤は、マンニトール、スクロース、マルトデキストリン、デキストラン、フィコール又はＰＶＰ－Ｋ３０を含む。

いくつかの実施形態では、増量剤は、マンニトールを含む。

いくつかの実施形態では、賦形剤溶液は追加の成分を含む。

いくつかの実施形態では、追加の成分は、トレハロース、マンニトール、スクロース、ソルビトール、デキストラン、ポロキサマー１８８、マルトデキストリン、ＰＶＰ－Ｋ３０、フィコール、クエン酸、アルギニン及び／又はヒドロキシプロピルＢ－シクロデキストリンを含む。

いくつかの実施形態では、賦形剤溶液はマンニトール及びトレハロースを含む。

いくつかの実施形態では、賦形剤溶液は本質的にマンニトール及びトレハロースからなる。

いくつかの実施形態では、賦形剤溶液はマンニトール、トレハロース及びソルビトールを含む。

いくつかの実施形態では、賦形剤溶液は本質的にマンニトール、トレハロース及びソルビトールからなる。

いくつかの実施形態では、賦形剤溶液はトレハロースを含む。

いくつかの実施形態では、賦形剤溶液は本質的にトレハロースからなる。

いくつかの実施形態では、賦形剤溶液は、マンニトール及びトレハロースを含み、ここで、マンニトールとトレハロースは等量では存在しない（例えば、マンニトールとトレハロースは、例えば重量ベース又は重量パーセントベースで、不等量で存在する）。いくつかの実施形態では、賦形剤溶液は、例えば重量ベース又は重量パーセントベースで、トレハロースよりも多くのマンニトールを含む。いくつかの実施形態では、賦形剤溶液は、例えば重量ベース又は重量パーセントベースで、トレハロースより少なくとも２倍多いマンニトールを含む。いくつかの実施形態では、賦形剤溶液は、例えば重量ベース又は重量パーセントベースで、トレハロースより少なくとも３倍多いマンニトールを含む。いくつかの実施形態では、溶液又は乾燥形態の賦形剤は、マンニトール及びトレハロースを含み、ここで、マンニトールとトレハロースは等量では存在しない（例えば、マンニトールとトレハロースは、例えば重量ベース又は重量パーセントベースで、不等量で存在する）。いくつかの実施形態では、溶液又は乾燥形態の賦形剤は、例えば重量ベース又は重量パーセントベースで、トレハロースよりも多くのマンニトールを含む。いくつかの実施形態では、溶液又は乾燥形態の賦形剤は、例えば重量ベース又は重量パーセントベースで、トレハロースより少なくとも２倍多いマンニトールを含む。いくつかの実施形態では、溶液又は乾燥形態の賦形剤は、例えば重量ベース又は重量パーセントベースで、トレハロースより少なくとも３倍多いマンニトールを含む。

いくつかの実施形態では、賦形剤溶液は本質的にマンニトール及びトレハロースからなる。いくつかの実施形態では、賦形剤溶液は、本質的にマンニトール及びトレハロースからなり、ここで、マンニトールとトレハロースは等量では存在しない（例えば、マンニトールとトレハロースは、例えば重量ベース又は重量パーセントベースで、不等量で存在する）。いくつかの実施形態では、賦形剤溶液は本質的にマンニトール及びトレハロースからなり、ここで、賦形剤溶液は、例えば重量ベース又は重量パーセントベースで、トレハロースよりも多くのマンニトールを含有する。いくつかの実施形態では、賦形剤溶液は本質的にマンニトール及びトレハロースからなり、ここで、賦形剤溶液は、例えば重量ベース又は重量パーセントベースで、トレハロースより少なくとも２倍多いマンニトールを含有する。いくつかの実施形態では、賦形剤溶液は本質的にマンニトール及びトレハロースからなり、ここで、賦形剤溶液は、例えば重量ベース又は重量パーセントベースで、トレハロースより少なくとも３倍多いマンニトールを含有する。いくつかの実施形態では、溶液又は乾燥形態の賦形剤は、本質的にマンニトール及びトレハロースからなり、ここで、溶液又は乾燥形態の賦形剤は、例えば重量ベース又は重量パーセントベースで、トレハロースよりも多くのマンニトールを含有する。いくつかの実施形態では、溶液又は乾燥形態の賦形剤は、本質的にマンニトール及びトレハロースからなり、ここで、溶液又は乾燥形態の賦形剤は、例えば重量ベース又は重量パーセントベースで、トレハロースより少なくとも２倍多いマンニトールを含有する。いくつかの実施形態では、溶液又は乾燥形態の賦形剤は、本質的にマンニトール及びトレハロースからなり、ここで、溶液又は乾燥形態の賦形剤は、例えば重量ベース又は重量パーセントベースで、トレハロースより少なくとも３倍多いマンニトールを含有する。

いくつかの実施形態では、賦形剤溶液は、マンニトール及びトレハロースを含むか又は本質的にそれらからなり、マンニトールもトレハロースも５ｍｇ／ｍｌ～１５ｍｇ／ｍｌの量では存在しない。いくつかの実施形態では、賦形剤溶液は、マンニトール及びトレハロースを含むか又は本質的にそれらからなり、マンニトールは５ｍｇ／ｍｌ～１５ｍｇ／ｍｌの量では存在しない。いくつかの実施形態では、賦形剤溶液は、マンニトール及びトレハロースを含むか又は本質的にそれらからなり、トレハロースは５ｍｇ／ｍｌ～１５ｍｇ／ｍｌの量では存在しない。

いくつかの実施形態では、賦形剤溶液は、マンニトール及びトレハロースを含むか又は本質的にそれらからなり、マンニトールもトレハロースも９ｍｇ／ｍｌの量では存在しない。いくつかの実施形態では、賦形剤溶液は、マンニトール及びトレハロースを含むか又は本質的にそれらからなり、マンニトールは９ｍｇ／ｍｌの量では存在しない。いくつかの実施形態では、賦形剤溶液は、マンニトール及びトレハロースを含むか又は本質的にそれらからなり、トレハロースは９ｍｇ／ｍｌの量では存在しない。

いくつかの実施形態では、賦形剤溶液は、マンニトール及びトレハロースを含むか又は本質的にそれらからなり、メチオニンを含まない。

特定の態様では、１つ以上の賦形剤を含むストックが本明細書に提供され、ここで、ストックは、表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰに提供される配合を含む。

特定の態様では、１つ以上の賦形剤を含むストックが本明細書に提供され、ここで、ストックは、表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰに提供される配合を含み、ここで、ストックは、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）（例えば、その液体調製物）と組み合わせた使用のためのものである。

本明細書に記載の溶液及び乾燥形態及び方法のいくつかの実施形態では、液体調製物は、例えば本明細書に記載されるような、細菌細胞培養上清などの細胞培養上清を含む。本明細書に記載の溶液及び乾燥形態及び方法のいくつかの実施形態では、液体調製物は、例えば本明細書に記載されるような、濃縮された保持液などの保持液を含む。

本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、賦形剤は賦形剤溶液中に存在する（例えば、賦形剤溶液中に提供される）。賦形剤溶液の例には、表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰに提供される１つ以上の賦形剤を含むストックが含まれる。例えば、本明細書で提供される乾燥形態は、乾燥などによって水分が除去された後の賦形剤溶液（ストックなど）からの賦形剤を含有する。例えば、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、表Ａの配合７ａのストック（賦形剤マンニトール及びトレハロースを含む）と組み合わせて、溶液を調製する。溶液を乾燥させて乾燥形態を調製する。乾燥形態は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶ、マンニトール及びトレハロースを含む。本明細書で使用される場合、「ストック」は、１つ以上の賦形剤を含むが、有効成分（細胞外小胞など）を含まない溶液を指す。いくつかの実施形態では、ストックは、ＥＶを含む調製物（液体調製物など）に１つ以上の賦形剤を導入するために使用される。いくつかの実施形態では、ストックは、既知量の１つ以上の賦形剤を含む濃縮溶液である。いくつかの実施形態では、ストックを、ＥＶを含む調製物（液体調製物など）と組み合わせて、本明細書で提供される溶液又は乾燥形態を調製する。

炎症の遅延型過敏症（ＤＴＨ）モデルにおいて、経口投与されたプレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ＥＶが抗炎症効果のために複数の経路を要することを示すグラフである。炎症は、耳の厚さの変化（ｍｍ）として評価される。ＴＬＲ２に対する抗体（抗ＴＬＲ２）又はＩＬ－１０受容体（ＩＬ－１０Ｒ）に対する抗体（抗ＩＬ－１０Ｒ）（図１Ａ）及びＣＤ６２及びＬＰＡＭ－１に対する抗体（抗ＣＤ６２／ＬＰＡＭ－１）（図１Ｂ）の、プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ＥＶでの炎症を軽減する能力を評価した。デキサメタゾンは、炎症軽減の陽性対照として使用した。図１Ａの続きである。ＨＥＫ２９３レポーター細胞アッセイにおいてプレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ＥＶが強力なヒトＴＬＲ２アゴニスト活性を有することを示すグラフである。様々な濃度のプレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ＥＶでのＴＬＲ１／２／６、ＴＬＲ１／２又はＴＬＲ２／６の活性化を、正規化された反応（ＯＤ６３０ｎｍ）として決定した。プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ＥＶに反応してＵ９３７細胞からのＩＬ－１０放出を誘導するために、ＴＬＲ１／２シグナル伝達が必要であることを示すグラフである。Ｕ９３７細胞からのＩＬ－１０サイトカイン放出（ｐｇ／ｍｌ）を引き起こすプレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ＥＶの能力に対する、ＴＬＲ２に対する抗体（抗ＴＬＲ２）、ＴＬＲ１に対する抗体（抗ＴＬＲ－１）及びＴＬＲ６に対する抗体（抗ＴＬＲ６）の効果を測定した。プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ＥＶがヒトＰＢＭＣからのＩＬ－１０（図４Ａ）及びＩＬ－２７（図４Ｂ）の濃度依存性産生を誘導することを示すグラフである。ＩＬ－１０及びＩＬ－２７のレベルは、プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ＥＶの様々な濃度でｐｇ／ｍｌとして測定された。炎症の遅延型過敏症（ＤＴＨ）モデルにおける、配合７ａで調製された、経口投与されたプレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ＥＶ粉末の効果を示すグラフである。炎症は、耳の厚さの変化（ｍｍ）として評価される。炎症の遅延型過敏症（ＤＴＨ）モデルにおける、経口投与されたプレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ｓｍＥＶ（ＥＶ）及び腹腔内投与された抗ＴＮＦａ抗体の効果を示すグラフである。炎症は、耳の厚さの変化（ｍｍ）として評価される。ＫＬＨ－ＣＦＡによる免疫前又は後の、ビヒクル（ＰＢＳ）、デキサメタゾン若しくはプレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ｓｍＥＶ（ＥＶ）又は別の細菌株（他の株ＥＶ）からのｓｍＥＶ（ＥＶ）を投与した後のＫＬＨ耳チャレンジから２４時間後の耳の厚さの変化を示すグラフである。ＩＦＡ－ＰＢＳ又はＣＦＡ－ＰＢＳのいずれかで免疫し、ビヒクル（ＰＢＳ）、デキサメタゾン又はプレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ｓｍＥＶ（ＥＶ）を投与し、次いでＫＬＨで免疫した後のＫＬＨ－ＣＦＡ耳チャレンジから２４時間後の耳の厚さの変化を示すグラフである。ビヒクル又はプレボテラｓｍＥＶ（ＥＶ）又は別の細菌株由来のｓｍＥＶ（ＥＶ）（他株ＥＶ）を投与されたＫＬＨ－ＣＦＡ免疫ドナーマウスからのＣＤ４＋Ｔ細胞の移植後の、レシピエントマウスにおけるＫＬＨ耳チャレンジの２４時間後の耳の厚さの変化を示すグラフである。ビヒクル又はプレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ｓｍＥＶ（ＥＶ）を投与されたアイソタイプ対照又は抗ＴＬＲ２処置ＫＬＨ－ＣＦＡ免疫マウスからのＣＤ４＋Ｔ細胞を、ＫＬＨ－ＣＦＡで免疫したレシピエントマウスに移植した後の、レシピエントマウスにおけるＫＬＨ耳チャレンジの２４時間後の耳の厚さの変化を示すグラフである。ビヒクル又はプレボテラｓｍＥＶ（ＥＶ）又は別の細菌株由来のｓｍＥＶ（ＥＶ）（他株ＥＶ）を投与されたＫＬＨ－ＣＦＡ免疫ドナーマウスからのＣＤ８＋Ｔ細胞の移植後の、レシピエントマウスにおけるＫＬＨ耳チャレンジの２４時間後の耳の厚さの変化を示すグラフである。

本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ、並びにプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含有する溶液、乾燥形態及び治療用組成物、並びにそれらを調製及び使用する方法を提供する。

小腸軸は、小腸を体の残りの部分と結ぶ解剖学的及び機能的接続の網状組織である。腸管腔内の外部シグナルを感知し、それらを全身的な免疫効果に変換する。本発明者らは過去に、経口微生物薬剤候補が、腸への定着又はマイクロバイオームの調節を伴わずに宿主細胞に直接作用することにより、炎症の前臨床モデルにおいて抗炎症活性を誘導することを示した。本発明者らは今回、これらの観察結果を、前臨床モデルで強力な抗炎症活性を有するプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶに拡張した。ＥＶは、親細胞のおよそ１／１０００の体積を有する非複製細菌膜小胞である。プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶは、経口送達され、分布が腸内に限定され、小腸内の自然免疫及び適応免疫を調節することによって作用して、全身性の炎症反応を軽減する。

本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含有する溶液及び乾燥形態並びにそれらを調製及び使用する方法を提供する。本開示は、溶液及び／又は乾燥形態を含有する治療用組成物も提供する。いくつかの実施形態では、ＥＶは、培養物中の細菌細胞によって分泌される（例えば、産生される）。このような分泌された細胞外小胞は、分泌された微生物細胞外小胞（ｓｍＥＶ）と呼ばれ得る。いくつかの実施形態では、ＥＶは、例えば、超音波処理などの細菌膜を破壊する方法によって細菌細胞を処理することによって調製される（例えば、人工的に調製される）。このように人工的に調製されたものは、処理された微生物細胞外小胞（ｐｍＥＶ）と呼ばれ得る。

本明細書で使用される場合、細胞外小胞（ＥＶ）（例えば、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来）を含有する「乾燥形態」は、ＥＶを含有する溶液を乾燥することによって得られる生成物を指す。いくつかの実施形態では、乾燥は、例えば、凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅｄｒｙｉｎｇ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ））又は噴霧乾燥によって実施される。いくつかの実施形態では、乾燥形態は粉末である。本明細書で使用される場合、粉末は、乾燥形態の一種を指し、凍結乾燥粉末及び噴霧乾燥などの方法により得られる噴霧乾燥粉末を含む。

凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅｄｒｙｉｎｇ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ））を実施する場合、得られる乾燥形態は凍結乾燥物である。いくつかの実施形態では、乾燥形態は凍結乾燥物である。例えば、いくつかの実施形態では、凍結乾燥物は凍結乾燥粉末又は凍結乾燥ケーキである。いくつかの実施形態では、凍結乾燥ケーキを粉砕して、凍結乾燥粉末を生成する。

いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含有する溶液及び乾燥形態は、増量剤及び／又は凍結乾燥保護剤などの１つ以上の賦形剤も含む。

いくつかの実施形態では、凍結乾燥のための細胞外小胞（ＥＶ）を調製する場合、増量剤及び凍結乾燥保護剤が使用される。いくつかの実施形態では、スクロース、マンニトール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ６０００などのＰＥＧ）、シクロデキストリン、マルトデキストリン及びデキストラン（デキストラン４０ｋなど）を含むが、これらに限定されない増量剤を、ＥＶの液体調製物（例えば、細菌培養物からＥＶを単離することによって得られる）に（例えば、それを含有するストックとして）添加して、凍結乾燥物などの乾燥形態に調製し、乾燥後の取り扱いをより容易にする（及び任意選択的に、例えば治療用組成物へと更に製剤化する）。いくつかの実施形態では、トレハロース、スクロース及びラクトースを含むが、これらに限定されない凍結乾燥保護剤を、ＥＶの液体調製物（例えば、細菌培養物からＥＶを単離することによって得られる）に（例えば、それを含有するストックとして）添加して、凍結乾燥又は噴霧乾燥中にＥＶを保護する。いくつかの実施形態では、増量剤及び／又は凍結乾燥保護剤は、溶液を生成し、且つ／又はその後の（例えば、溶液の）乾燥時に乾燥形態を生成するために、ＥＶ（例えば、精製及び／又は濃縮されたＥＶ）に添加される賦形剤ストックから含まれる。いくつかの実施形態では、凍結乾燥物などの乾燥形態は、重量で約５％～約１００％のＥＶ固形分を含む。いくつかの実施形態では、乾燥（凍結乾燥などによる）前、ＥＶ及び賦形剤を含む全固形分は、約２重量％～約２０重量％である。

本明細書に記載されるように、いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶを含有する凍結乾燥物において、賦形剤は、粉末又はケーキの総質量の約９５％～約９９％を占める。

本明細書に記載されるように、いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶを含有する凍結乾燥物において、ＥＶは、凍結乾燥物の総質量の約２％～約６％（例えば、約２％～約５％、約２％～約３％又は約３％～約５％）を占める。

いくつかの実施形態では、賦形剤は、ＥＶ有効性を維持し、且つ／又は乾燥（例えば、凍結乾燥）サイクル時間を短縮するように機能する。いくつかの実施形態では、凍結乾燥保護剤は、凍結乾燥プロセス中にＥＶ（例えば、そのタンパク質成分）を保護する。いくつかの実施形態では、増量剤は、例えば、更なる下流処理（粉砕、ブレンド及び／又は治療用組成物の調製など）のために、凍結乾燥物の特性を改善する。

凍結乾燥サイクルの長さは、コストを考慮する上で重要である。増量剤及び／又は凍結乾燥保護剤などの臨界温度調節剤は、乾燥時間を大幅に短縮できる。いくつかの実施形態では、１つ以上の賦形剤（例えば、増量剤及び／又は凍結乾燥保護剤を含有する）を含有する賦形剤ストックを濃縮されたＥＶ（例えば、その液体調製物）に添加して、全固形分を約２％～約２０％とする。いくつかの実施形態では、ＥＶは、体積濃縮係数（ＶＣＦ）の５～１００倍に濃縮される。本明細書で提供される例は、全固形分約１０％、実際の溶解固形分約６％～約８％の範囲を目標としている。いくつかの実施形態では、１つ以上の賦形剤（例えば、増量剤及び／又は凍結乾燥保護剤を含有する）を含有する賦形剤ストック（例えば、表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰの１つに提供される配合の賦形剤を含むストック）は、脱イオン水中のストック溶液として調製され、使用前に０．２ｍｍフィルターで滅菌濾過される。いくつかの実施形態では、ストック溶液は、例えば、重量に基づいて最大８０％まで濃縮されたＥＶに添加される。いくつかの実施形態では、添加するパーセンテージは、凍結乾燥前に所望の全固形分含有量を達成するための、ＥＶの推定固形分寄与に賦形剤ストックの溶解固形分を加えたものに基づく。

プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶを凍結乾燥（例えば、増量剤を含む賦形剤を用いて（例えば、本明細書に記載される通り））した後、いくつかの実施形態では、得られた凍結乾燥物（例えば、凍結乾燥ケーキ）は均一な外観を有し、白色～オフホワイトである。いくつかの実施形態では、凍結乾燥後に得られる凍結乾燥物（例えば、凍結乾燥ケーキ）は、白色～オフホワイトの、細かく滑らかな顆粒状の粉末である（例えば、凍結乾燥ケーキを粉砕した（例えば、すり潰した）後）。いくつかの実施形態では、動的光散乱（ＤＬＳ）を使用して、凍結乾燥物（例えば、凍結乾燥粉末）を脱イオン水中又はＰＢＳ（例えば、０．１ＸＰＢＳ）などの緩衝液中に再懸濁した後に存在する粒子の流体力学直径（Ｚ平均、Ｚ_ａｖｅ）を得る。いくつかの実施形態では、Ｚ_ａｖｅは、安定剤の有効性を定量するために使用される。例えば、理想的なＺ_ａｖｅ粒子サイズが２００ｎｍである場合、したがって、この粒子サイズに最も近い最低のＺ_ａｖｅを有する再懸濁されたＥＶは、十分に安定化されているとみなされる。いくつかの実施形態では、粒子サイズは、例えば１３０ｎｍ～３００ｎｍの範囲である。いくつかの実施形態では、動的光散乱（ＤＬＳ）を使用して、凍結乾燥物（例えば、凍結乾燥粉末）を脱イオン水中又はＰＢＳ（例えば、０．１ＸＰＢＳ）などの緩衝液中に再懸濁した後に存在する粒子の最も支配的なＤＬＳ積分ピークの平均サイズを得る。特に、粒子の平均サイズは、Ｚ平均で測定した場合でも、最も支配的なＤＬＳ積分ピークの平均サイズで測定した場合でも、凍結乾燥前のＥＶの平均サイズと必ずしも同一ではない。例えば、いくつかの実施形態では、凍結乾燥後（例えば、凍結乾燥物を脱イオン水中又はＰＢＳ（例えば、０．１ＸＰＢＳ）などの緩衝液中に再懸濁した後）の粒子の平均サイズは、凍結乾燥前の平均ＥＶサイズ又は細菌培養物からＥＶを単離又は調製した後の平均サイズ（例えば、細菌培養物からのＥＶの勾配精製後の平均サイズ）よりも、大きい又は小さい。凍結乾燥物（ＥＶを含有する溶液を凍結乾燥した後）中の粒子は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶを含有し、細胞残骸、ＬＰＳ及び／又はタンパク質などの培養培地由来の他の成分も含み得る。

本明細書で提供される賦形剤及び／又は条件を用いた凍結乾燥後に得られる凍結乾燥物は、多孔質のスポンジ形状を有しない。いくつかの実施形態では、粉砕後、本明細書で提供される賦形剤及び／又は条件を用いた凍結乾燥後に得られる凍結乾燥物は、白色からオフホワイトの、細かく滑らかな顆粒状の凍結乾燥物粉末である。

本明細書に記載されるように、本明細書に提供される賦形剤の使用により、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶを含む溶液をより高い温度及びより短い乾燥時間で凍結乾燥することも可能になる。例えば、本明細書で提供される賦形剤及び方法により、ＥＶを４０００分未満で凍結乾燥することができ、例えば、約２８００～約３２００分で凍結乾燥することができる。別の例として、いくつかの実施形態では、凍結工程は、１０～１５時間（６００～９００分）とは対照的に、２２５分未満で実施される。別の例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される賦形剤及び方法を使用して、一次乾燥は、例えば－５０℃とは対照的に、約－３５℃～約－２０℃の温度、例えば、約－２０℃、約－２５℃、約－３０℃又は約－３５℃で実施される。別の例として、いくつかの実施形態では、本明細書に提供される賦形剤及び方法を使用して、一次乾燥は、例えば５０～６０時間（３０００～３６００分）とは対照的に、約４２時間以下（例えば、２５００分以下）実施される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される賦形剤及び方法を使用して、総乾燥時間は、例えば、約７２時間以下、例えば、約４８～約７２時間、例えば、約４８時間未満である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される賦形剤及び方法を使用して、一次乾燥は、約６５時間以下（例えば、約６０時間以下）にわたって実施される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される賦形剤及び方法を使用して、二次乾燥は、約１２時間以下（例えば、約１０～約１２時間、約５～約１０時間、約１０時間以下又は約５時間以下）にわたって実施される。別の例として、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される賦形剤及び方法を使用して、二次乾燥は、例えば－２０℃とは対照的に、約＋２０℃～約＋３０℃の間の温度、例えば室温、例えば約＋２５℃で実施される。いくつかの実施形態では、より短い乾燥時間及び／又はより高い乾燥温度の使用により、ＥＶの凍結乾燥プロセスがより商業的に実現可能になる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶを含有する凍結乾燥物（例えば、本明細書に記載の賦形剤及び／又は方法を使用して調製される）は、凍結乾燥の完了時、約１０％未満（例えば、約９％未満、約８％未満、約７％未満、約６％未満、約５％未満又は約４％未満、例えば、約１％～約４％、約１．５％～約４％、約２％～約４％、約２％～約３％）の水分含有量（例えば、カールフィッシャー法によって決定される）を有するように調製される。いくつかの実施形態では、約６％未満の水分含有量を有するように凍結乾燥物を調製することにより、凍結乾燥物は、下流処理、例えば、治療用組成物における使用により適する。いくつかの実施形態では、約６％未満の水分含有量を有するように凍結乾燥物を調製することにより、凍結乾燥物は、安定性（例えば保存時）が改善される。

本明細書に提供される例に記載されるように、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶを含有する凍結乾燥物の水分含有量（カールフィッシャーによって決定）は、約１．８％～約３．８％の水分含有量を有していた。賦形剤の成分は、所望の水分含有量を得るために選択することができる。乾燥条件は、所望の水分含有量を得るために選択することができる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶを含有する凍結乾燥物（例えば、本明細書に記載の賦形剤及び／又は方法を使用して調製される）は、凍結乾燥物１ｍｇ当たり約３．２５ｅ１０～約７．７７ｅ１０個の粒子数を有するように調製される。いくつかの実施形態では、粒子数は、水中に再懸濁された凍結乾燥物について、例えばＮＴＡによってＺｅｔａｖｉｅｗカメラを使用して決定される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶを含有する凍結乾燥物（例えば、本明細書に記載の賦形剤及び／又は方法を使用して調製される）は、凍結乾燥物１ｍｇ当たり約３．２５ｅ１０～約６．４５ｅ１０個の粒子数を有するように調製される。いくつかの実施形態では、粒子数は、水中に再懸濁された凍結乾燥物について、例えばＮＴＡによってＺｅｔａｖｉｅｗカメラを使用して決定される。賦形剤の成分は、所望の粒子数を得るために選択することができる。乾燥条件は、望ましい粒子数を得るために選択することができる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される凍結乾燥物（例えば、凍結乾燥粉末）中の粒子（例えば、本明細書に記載される賦形剤及び／又は方法を使用して調製される）は、約１３７．４ｎｍ～約２２６．１ｎｍの流体力学直径（Ｚ平均、Ｚ_ａｖｅ）を有するように調製される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される凍結乾燥物（例えば、凍結乾燥粉末）中の粒子（例えば、本明細書に記載される賦形剤及び／又は方法を使用して調製される）は、約１３７．４ｎｍ～約２１２．８ｎｍの流体力学直径（Ｚ平均、Ｚ_ａｖｅ）を有するように調製される。いくつかの実施形態では、動的光散乱（ＤＬＳ）を使用して、凍結乾燥物を脱イオン水中又はＰＢＳ（例えば、０．１ＸＰＢＳ）などの緩衝液中に再懸濁した後に存在する粒子の流体力学直径（Ｚ平均、Ｚ_ａｖｅ）を得る。賦形剤の成分は、所望のＺ_ａｖｅを得るために選択することができる。乾燥条件は、所望のＺ_ａｖｅを得るために選択することができる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＥＶを含有する噴霧乾燥粉末（例えば、本明細書に記載の賦形剤及び／又は方法を使用して調製される）は、噴霧乾燥の完了時、約１０％未満（例えば、約９％未満、約８％未満、約７％未満、約６％未満、約５％未満又は約４％未満、例えば、約１％～約４％、約１．５％～約４％、約２％～約３％）の水分含有量（例えば、カールフィッシャー法によって決定される）を有するように調製される。いくつかの実施形態では、約６％未満の水分含有量を有するように噴霧乾燥粉末を調製することにより、噴霧乾燥粉末は、下流処理、例えば、治療用組成物における使用により適する。いくつかの実施形態では、約６％未満の水分含有量を有するように噴霧乾燥粉末を調製することにより、噴霧乾燥粉末は、安定性（例えば、保存時）が向上する。

本明細書に提供される例に記載されるように、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶを含有する噴霧乾燥粉末の水分含有量（カールフィッシャーによって決定）は、約２．５４％～約８．３８％の水分含有量を有していた。賦形剤の成分は、所望の水分含有量を得るために選択することができる。乾燥条件は、所望の水分含有量を得るために選択することができる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＥＶを含有する噴霧乾燥粉末（例えば、本明細書に記載の賦形剤及び／又は方法を使用して調製される）は、噴霧乾燥粉末１ｍｇ当たり約６．７ｅ８～約２．５５ｅ１０個の粒子数を有するように調製される。いくつかの実施形態では、粒子数は、例えば、Ｚｅｔａｖｉｅｗカメラを使用してＮＴＡによって決定される。

本明細書に提供される実施例に記載されるように、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶを含有する噴霧乾燥粉末は、噴霧乾燥粉末１ｍｇ当たり約８．０５ｅ９～約２．ｅ１０個の粒子数を有していた。賦形剤の成分は、所望の粒子数を得るために選択することができる。乾燥条件は、望ましい粒子数を得るために選択することができる。

定義
特に記載のない限り又は文脈から明らかでない限り、本明細書で使用される場合、「又は」という用語は包括的であると理解される。特に記載のない限り又は文脈から明らかでない限り、本明細書で使用される「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」及び「その」という用語は、単数又は複数であると理解される。

「アジュバント」又は「アジュバント療法」は、患者又は対象（例えばヒト）の免疫学的又は生理学的反応に影響を及ぼす薬剤を広く指す。例えば、アジュバントは、時間と共に抗原の存在を増加させる又は腫瘍のような目的の領域における抗原の存在を増加させ、抗原提示細胞抗原の吸収を助け、マクロファージ及びリンパ球を活性化し、且つサイトカインの産生を支援する可能性がある。免疫応答を変えることにより、アジュバントは、より少ない用量の免疫相互作用剤が特定の用量の免疫相互作用剤の有効性又は安全性を高めることができる可能性がある。例えば、アジュバントは、Ｔ細胞の疲弊を防止し、従って特定の免疫相互作用剤の有効性又は安全性を高める可能性がある。

「投与」は、対象への組成物（例えば、治療用組成物）の投与経路を広く指す。投与経路の例には、経口投与、直腸投与、局所投与、吸入（鼻）又は注射が含まれる。注射による投与には、静脈内（ＩＶ）投与、筋肉内（ＩＭ）投与及び皮下（ＳＣ）投与が含まれる。本明細書に記載の治療用組成物は、限定されるものではないが、経口、非経口、腸内、静脈内、腹腔内、局所、経皮（例えば、任意の標準的なパッチを使用）、皮内、眼内、経鼻（鼻腔内）、局所、非経口、例えばエアロゾル、吸入、皮下、筋肉内、口腔、舌下、（経）直腸、膣内、動脈内及び髄腔内、経粘膜（例えば、舌下、舌、（経）頬、（経）尿道、膣（例えば、経膣及び膣周囲）、埋め込み、膀胱内、肺内、十二指腸内、胃内及び気管支内を含む任意の効果的な経路によって任意の形態で投与することができる。好ましい実施形態では、本明細書に記載の治療用組成物は、経口、直腸、局所、膀胱内、排出リンパ節内又はその近傍への注射により、静脈内、吸入若しくはエアロゾルにより又は皮下投与される。別の好ましい実施形態では、本明細書に記載の治療用組成物は、経口又は皮下投与される。

本明細書で使用する場合、「抗体」という用語は、インタクト抗体及びその抗原結合断片の両方を指し得る。インタクト抗体は、ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質である。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶ_Ｈと略記）及び重鎖定常領域を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶ_Ｌと略記）及び軽鎖定常領域を含む。Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域に更に細分化することができる。各Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲで構成され、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって次の順序で配置されている：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖及び軽鎖の可変領域は抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。「抗体」という用語には、例えば、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、単鎖抗体及び抗原結合抗体断片が含まれる。

本明細書で使用される抗体の「抗原結合断片」及び「抗原結合部分」という用語は、抗原に結合する能力を保持した抗体の１つ以上の断片を指す。抗体の「抗原結合断片」という用語に含まれる結合断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、Ｆｄ、ダイアボディ、単鎖抗体、ＮＡＮＯＢＯＤＩＥＳ（登録商標）、単離ＣＤＲＨ３及びインタクト抗体の可変領域の少なくとも一部を保持した他の抗体断片が挙げられる。これらの抗体断片は、従来の組換え技術及び／又は酵素技術を用いて得ることができ、インタクト抗体と同じ要領で抗原結合についてスクリーニングすることができる。

「炭水化物」は糖又は糖のポリマーを指す。「糖」、「多糖」、「炭水化物」及び「オリゴ糖」という用語は互換的に使用され得る。ほとんどの炭水化物は、多くのヒドロキシル基（通常は分子の各炭素原子上に１個）を有するアルデヒド又はケトンである。炭水化物は、一般に、分子式Ｃ_ｎＨ_２ｎＯ_ｎを有する。炭水化物は、単糖、二糖、三糖、オリゴ糖又は多糖であり得る。最も基本的な炭水化物は、単糖であり、例えばグルコース、スクロース、ガラクトース、マンノース、リボース、アラビノース、キシロース及びフルクトースである。二糖は、２個の連結された単糖である。例示的な二糖としては、スクロース、マルトース、セロビオース及びラクトースが挙げられる。典型的には、オリゴ糖は３～６個の単糖単位（例えば、ラフィノース、スタキオース）を含み、多糖は６個以上の単糖単位を含む。例示的な多糖として、デンプン、グリコーゲン及びセルロースが挙げられる。炭水化物は、改変された糖単位を含み得、例えばヒドロキシル基が除去されている２’－デオキシリボース、ヒドロキシル基がフッ素に置き換えられている２’－フルオロリボース又はグルコースの窒素含有形態であるＮ－アセチルグルコサミン（例えば、２’－フルオロリボース、デオキシリボース及びヘキソース）を含み得る。炭水化物は多くの異なる形態で存在し得、例えば配座異性体、環式形態、非環式形態、立体異性体、互変異性体、アノマー及び異性体で存在し得る。

「細胞増加」は、環境中における細胞の流入又は細胞の拡大を広く指し、この細胞は、組成物の投与前にはこの環境中に実質的に存在せず、且つこの組成物自体に存在しない。この環境を増加する細胞として、免疫細胞、間質細胞、細菌細胞及び真菌細胞が挙げられる。

「クレード」は、系統樹における統計的に妥当なノードの下流であるＯＴＵ又は系統樹のメンバーを指す。クレードは、明確な単系統進化単位であり且つある程度の配列類似性を共有する、系統樹における一連の末端葉を含む。

「組み合わせ」は、ある供給株からのＥＶと、別の薬剤、例えば別のＥＶ（例えば、別の株由来）、細菌（例えば、ＥＶが得られたものと同じ又は異なる株）又は別の治療薬との組み合わせを指し得る。この組み合わせは、同じ材料又は製品内又は物理的に接続された製品内での物理的共存及びＥＶと他の薬剤の一時的な共投与又は共局在化であり得る。

本明細書で使用される場合、「本質的に～からなる」（又は「本質的に～からなっている」）という用語は、列挙された要素及び／又は工程並びに特許請求される発明の基本的及び新規な特徴に実質的に影響を与えない要素及び／又は工程に限定されることを意味する。

「ディスバイオシス」は、宿主の腸内マイクロバイオームの生態学的なネットワーク（「マイクロバイオーム」）の正常な多様性及び／又は機能が破壊されている、腸又は他の身体領域（例えば、粘膜表面若しくは皮膚表面を含む）の微生物叢又はマイクロバイオーム（又は任意の他のマイクロバイオームニッチ）の状態を指す。ディスバイオシスの状態は、病的状態を引き起こす可能性があるか、又は特定の条件下にのみか若しくは長期にわたり存在する場合にのみ、不健康な可能性がある。ディスバイオシスは、環境因子、感染因子、宿主の遺伝子型、宿主の食事及び／又はストレスを含む様々な因子に起因し得る。ディスバイオシスは、下記を引き起こす可能性がある：１つ以上の細菌のタイプ（例えば嫌気性）、種及び／若しくは株の有病率の変化（例えば上昇又は低下）；宿主のマイクロバイオーム集団構成の多様性の変化（例えば増加又は減少）、１つ以上の有益な効果の減少若しくは喪失をもたらす共生生物の１つ以上の集団の変化（例えば増加又は減少）；病原体（例えば病原菌）の１つ以上の集団の過剰増殖；並びに／又は特定の条件が存在する場合にのみ疾患を引き起こす共生生物の存在及び／若しくは過剰増殖。

「減少する」又は「枯渇する」という用語は、状況に応じて、処置前の状態と比較したときに処置後、差が少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１／１００、１／１０００、１／１０，０００、１／１００，０００、１／１，０００，０００又は検出不能であるような変化を意味する。減少し得る特性としては、免疫細胞、細菌細胞、間質細胞、骨髄由来抑制細胞、線維芽細胞、代謝産物の数；サイトカインのレベル；又は別の物理的パラメータ（例えば、（例えばＤＴＨ動物モデルにおける）耳の厚さ又は（例えば動物腫瘍モデルにおける）腫瘍サイズ）が挙げられる。

「有効用量」という用語は、患者への毒性が最小な、特定の患者、組成物及び投与様式に対して所望の治療反応を達成するのに有効な追加の治療用組成物の量である。

本明細書で使用する場合、「操作された細菌」とは、人間の介入により自然状態から遺伝的に変更されている任意細菌と、任意のそのような細菌の子孫とのことである。操作された細菌は、例えば、標的とされた遺伝子改変の産物、ランダム変異誘発スクリーニングの産物及び定向進化の産物を含む。

「エピトープ」という用語は、抗体又はＴ細胞受容体に特異的に結合することができるタンパク質決定基を意味する。エピトープは通常、アミノ酸又は糖側鎖などの化学的に活性な表面分子群で構成されている。特定のエピトープは、抗体が結合できる特定のアミノ酸配列によって定義することができる。

「細胞外小胞」（ＥＶ）は、ｓｍＥＶなど、細菌に由来する自然に生成された小胞であ得る。ＥＶは、細菌脂質及び／又は細菌タンパク質及び／又は細菌核酸及び／又は細菌炭水化物部分で構成され、培養上清から単離される。これらの小胞の自然な生成は、細菌細胞が培養されている環境の操作によって（例えば、培地又は温度の変化によって）、人工的に増強（例えば、増加）又は減少させることができる。更に、ＥＶ組成物は、細菌成分又は異物を減少、増加、追加又は除去して、有効性、免疫刺激、安定性、免疫刺激能力、安定性、臓器標的化（例えば、リンパ節）、吸収（例えば、胃腸）及び／又は収量を変更する（例えば、それによって有効性を変える）ように改変することができる。本明細書で使用される場合、「精製されたＥＶ組成物」又は「ＥＶ組成物」という用語は、原材料中に見出される少なくとも１つの付随する物質から分離されている（例えば、少なくとも１つの他の微生物成分から分離されている）ＥＶの調製物又はこの調製物を生成するために使用される任意のプロセスにおいてＥＶに付随する任意の物質から分離されているＥＶの調製物を指す。この用語は、特定の成分について有意に富化されている組成物も指し得る。細胞外小胞は、哺乳動物細胞から得ることができ、古細菌、真菌、微細藻類、原生動物、寄生虫などの微生物から得ることもできる。これらの供給源のいずれかからの細胞外小胞は、本明細書に記載されるように、溶液及び／又は乾燥形態に調製することができる。細胞外小胞は、ｐｍＥＶなど、細菌から調製される、例えば細菌細胞を（例えば、リゾチーム及び／又はリソスタフィンにより）化学的に破壊すること及び／又は（例えば、機械的な力により）物理的に破壊することと、遠心分離及び／若しくは超遠心分離又は他の方法によって細菌膜成分を細胞内成分から分離することとによって得られる人工的に生成された小胞であり得、本明細書に記載されるように溶液及び／又は乾燥形態に調製することもできる。

用語「遺伝子」は、生物学的機能に関連する核酸を指すために広く使用される。用語「遺伝子」は、特定のゲノム配列及びそのゲノム配列によってコードされるｃＤＮＡ又はｍＲＮＡに適用される。

２つの核酸分子の核酸配列間の「同一性」は、「ＦＡＳＴＡ」プログラムなどの既知のコンピューターアルゴリズムを使用し、例えばＰｅａｒｓｏｎｅｔａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：２４４４におけるようなデフォルトパラメーターを使用して、同一性のパーセンテージとして決定することができる（他のプログラムとしては、ＧＣＧプログラムパッケージ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｔａｌ．，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ１２（Ｉ）：３８７（１９８４））、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、ＦＡＳＴＡＡｔｓｃｈｕｌ、Ｓ．Ｆ．，ｅｔａｌ．，ＪＭｏｌｅｃＢｉｏｌ２１５：４０３（１９９０）；ＧｕｉｄｅｔｏＨｕｇｅＣｏｍｐｕｔｅｒｓ，ＭｒｔｉｎＪ．Ｂｉｓｈｏｐ，ｅｄ．，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，ＳａｎＤｉｅｇｏ，１９９４及びＣａｒｉｌｌｏｅｔａｌ．（１９８８）ＳＩＡＭＪＡｐｐｌｉｅｄＭａｔｈ４８：１０７３が挙げられる）。例えば、アメリカ国立生物工学情報センター（ＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒｆｏｒＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）のデータベースのＢＬＡＳＴ機能を用いて同一性を決定することができる。他の市販の又は公的に入手可能なプログラムとしては、ＤＮＡＳｔａｒ「ＭｅｇＡｌｉｇｎ」プログラム（Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．）及びＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＷｉｓｃｏｎｓｉｎＧｅｎｅｔｉｃｓＣｏｍｐｕｔｅｒＧｒｏｕｐ（ＵＷＧ）「Ｇａｐ」プログラム（ＭａｄｉｓｏｎＷｉｓ．））が挙げられる。

本明細書で使用する場合、「免疫障害」という用語は、免疫系の活性により引き起こされる任意の疾患、障害又は疾患症状（自己免疫疾患、炎症性疾患及びアレルギーを含む）を指す。免疫障害としては下記が挙げられるが、これらに限定されない：自己免疫疾患（例えば、乾癬、アトピー性皮膚炎、ループス、強皮症、溶血性貧血、血管炎、１型糖尿病、グレーブス病、関節リウマチ、多発性硬化症、グッドパスチャー症候群、悪性貧血及び／又はミオパチー）、炎症性疾患（例えば、尋常性ざ瘡、喘息、小児脂肪便症、慢性前立腺炎、糸球体腎炎、炎症性腸疾患、骨盤内炎症性疾患、再灌流傷害、関節リウマチ、サルコイドーシス、移植片拒絶、血管炎及び／又は間質性膀胱炎）並びに／又はアレルギー（例えば、食物アレルギー、薬物アレルギー及び／又は環境アレルギー）。

「免疫療法」とは、対象の免疫系を使用して疾患（例えば、免疫疾患、炎症性疾患、代謝疾患、癌）を処置する処置のことであり、この免疫療法として、例えばチェックポイント阻害剤、癌ワクチン、サイトカイン、細胞療法、ＣＡＲ－Ｔ細胞及び樹状細胞療法が挙げられる。

「増加する」という用語は、状況に応じて、治療前の状態と比較したときに治療後、差が少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、２倍、４倍、１０倍、１００倍、１０^３倍、１０^４倍、１０^５倍、１０^６倍及び／又は１０^７倍超であるような変化を意味する。増加し得る特性として、免疫細胞、細菌細胞、間質細胞、骨髄由来抑制細胞、線維芽細胞、代謝産物の数；サイトカインのレベル；又は別の物理的パラメータ（例えば、（例えばＤＴＨ動物モデルにおける）耳の厚さ又は腫瘍サイズ（例えば、動物腫瘍モデルにおける）が挙げられる。

「自然免疫アゴニスト」又は「免疫アジュバント」とは、自然免疫受容体（Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）、ＮＯＤ受容体、ＲＬＲ、Ｃ型レクチン受容体、ＳＴＩＮＧ－ｃＧＡＳ経路成分、インフラマソーム複合体を含む）を特異的に標的とする小分子、タンパク質又は他の作用物質である。例えば、ＬＰＳは、細菌由来であるか又は合成されたＴＬＲ－４アゴニストであり、アルミニウムを免疫刺激アジュバントとして使用し得る。免疫アジュバントは、より広範なアジュバント又はアジュバント療法の特定のクラスである。ＳＴＩＮＧアゴニストの例として、２’３’－ｃＧＡＭＰ、３’３’－ｃＧＡＭＰ、ｃ－ジ－ＡＭＰ、ｃ－ジ－ＧＭＰ、２’２’－ｃＧＡＭＰ及び２’３’－ｃＧＡＭ（ＰＳ）２（Ｒｐ／Ｓｐ）（２’３’－ｃＧＡＭＰのビス－ホスホロチオエート類似体のＲｐ，Ｓｐ－異性体）が挙げられるが、これらに限定されない。ＴＬＲアゴニストの例としては、ＴＬＲｌ、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、ＴＬＲ１０及びＴＬＲ１１が挙げられるが、これらに限定されない。ＮＯＤアゴニストの例としては、Ｎ－アセチルムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミン（ムラミルジペプチド（ＭＤＰ））、γ－Ｄ－グルタミル－メソ－ジアミノピメリン酸（ｉＥ－ＤＡＰ）及びデスムラミルペプチド（ＤＭＰ）が挙げられるが、これらに限定されない。

「内部転写スペーサー」又は「ＩＴＳ」は、特定の真菌において真核生物種の同定に使用されることが多い一般的な前駆体転写産物上の構造リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）の間に位置する非機能的ＲＮＡの一部である。リボソームのコアを形成する真菌のｒＲＮＡは、シグナル遺伝子として転写され、８Ｓ領域、５．８Ｓ領域及び２８Ｓ領域からなり、８Ｓ領域及び５．８Ｓ領域並びに５．８Ｓ領域及び２８Ｓ領域のそれぞれの間にＩＴＳ４及び５が存在する。１８Ｓ領域及び５．８Ｓ領域並びに５．８Ｓ領域及び２８Ｓ領域間のこれら２つのシストロン間セグメントは、スプライシングにより除去され、既に説明されているようにバーコーディング目的で種間に有意な変動を含む（ＳｃｈｏｃｈｅｔａｌＮｕｃｌｅａｒｒｉｂｏｓｏｍａｌｉｎｔｅｒｎａｌｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄｓｐａｃｅｒ（ＩＴＳ）ｒｅｇｉｏｎａｓａｕｎｉｖｅｒｓａｌＤＮＡｂａｒｃｏｄｅｍａｒｋｅｒｆｏｒＦｕｎｇｉ．ＰＮＡＳ１０９：６２４１－６２４６．２０１２）。系統発生の再構築には１８ＳｒＤＮＡが伝統的に使用されているが、ＩＴＳはこの機能を果たし得、なぜならば、ＩＴＳは、一般的に高度に保存されているが、ほとんどの真菌の属及び種を区別するのに十分なヌクレオチド多様性を保有する超可変領域を含むからである。

「単離された」又は「濃縮された」という用語は、（１）（天然又は実験的設定にかかわらず）最初に産生されたときに結合していた成分の少なくとも一部から分離された、且つ／又は（２）人間の手によって生産、調製、精製、且つ／若しくは製造された、微生物、ＥＶ（細菌ＥＶなど）又は他の実体若しくは物質を含む。単離された細菌又はＥＶは、最初に結合していた他の成分の少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％又はそれを超えるものから分離することができる。いくつかの実施形態では、単離された細菌又はＥＶは、約８０％超、約８５％超、約９０％超、約９１％超、約９２％超、約９３％超、約９４％超、約９５％超、約９６％超、約９７％超、約９８％超、約９９％超又は約９９％超純度であり、例えば、他の成分を実質的に含まない。

本明細書で使用する場合、「脂質」は、脂肪、油、トリグリセリド、コレステロール、リン脂質、遊離脂肪酸を含む任意の形態の脂肪酸を含む。脂肪、油及び脂肪酸は、飽和であり得るか、不飽和（シス又はトランス）であり得るか、又は部分的に不飽和（シス又はトランス）であり得る。

「代謝産物」は、本明細書で使用される場合、あらゆる細胞の若しくは細菌の代謝反応において基質として使用されるあらゆる分子化合物、組成物、分子、イオン、補助因子、触媒若しくは栄養素を指すか、又はあらゆる細胞の若しくは細菌の代謝反応から生成物として得られる化合物、組成物、分子、イオン、補助因子、触媒又は栄養素を指す。

「マイクロバイオーム」は、対象又は患者の身体部位上に存在するか又は身体部位中に存在する微生物を広く指す。マイクロバイオームの微生物には、細菌、ウイルス、真核微生物及び／又はウイルスが含まれ得る。マイクロバイオームの個々の微生物は、代謝的に活性であるか、休眠しているか、潜伏しているか、胞子として存在するか、プランクトン様に若しくは生体膜中に存在するか、又は持続可能な態様若しくは一過性の態様でマイクロバイオームに存在し得る。マイクロバイオームは、共生的若しくは健康な状態のマイクロバイオーム又は病的状態若しくはディスバイオシスのマイクロバイオームであり得る。マイクロバイオームは、対象又は患者にとって天然であり得るか、又はマイクロバイオームの成分は、健康状態又は治療状態（例えば、抗生物質による治療、異なる微生物への曝露）の変化のために調節されるか、導入されるか若しくは枯渇し得る。いくつかの態様では、マイクロバイオームは粘膜表面に存在する。いくつかの態様では、マイクロバイオームは腸内マイクロバイオームである。

組織又はサンプルの「マイクロバイオームプロファイル」又は「マイクロバイオームシグネチャ」は、マイクロバイオームの細菌構造の少なくとも部分的な特徴を指す。いくつかの実施形態では、マイクロバイオームプロファイルは、マイクロバイオーム中に少なくとも２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種、１０種、１５種、２０種、２５種、３０種、３５種、４０種、４５種、５０種、５５種、６０種、６５種、７０種、７５種、８０種、８５種、９０種、９５種、１００種又はそれを超える細菌株が存在するか又は存在しないかを示す。

細菌に関する「改変された」は、野生型から変化を受けている細菌を広く指す。細菌改変は、細菌の操作から生じ得る。細菌改変の例としては、遺伝子改変、遺伝子発現改変、表現型改変、製剤化改変、化学的改変及び用量又は濃度が挙げられる。改善された特性の例は本明細書全体を通して説明されており、例えば弱毒化、栄養素要求性、ホーミング又は抗原性が挙げられる。表現型改変としては、例えば、病原性を増加させるか又は減少させるように細菌の表現型を改変する培地中での細菌増殖が挙げられる可能性がある。

「操作的分類単位」及び「ＯＴＵ及び」は、系統樹における末端の葉を指し、核酸配列、例えば全ゲノム又は特定の遺伝子配列この核酸配列と種のレベルで配列同一性を共有する全ての配列によって定義される。いくつかの実施形態では、特定の遺伝子配列は、１６Ｓ配列又は１６Ｓ配列の一部であり得る。他の実施形態では、２つの実体の全ゲノムが配列決定され、比較される。別の実施形態では、多遺伝子座配列タグ（ＭＬＳＴ）、特定の遺伝子又は遺伝子のセットなどの選択領域を遺伝的に比較することができる。１６Ｓの場合、１６Ｓ全体又は１６Ｓの一部の可変領域で９７％以上の平均ヌクレオチド同一性を共有するＯＴＵは、同じＯＴＵと見なされる。例えば、ＣｌａｅｓｓｏｎＭＪ，ＷａｎｇＱ，Ｏ’ＳｕｌｌｉｖａｎＯ，Ｇｒｅｅｎｅ－ＤｉｎｉｚＲ，ＣｏｌｅＪＲ，ＲｏｓｓＲＰ，ａｎｄＯ’ＴｏｏｌｅＰＷ．２０１０．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｔｗｏｎｅｘｔ－ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓｆｏｒｒｅｓｏｌｖｉｎｇｈｉｇｈｌｙｃｏｍｐｌｅｘｍｉｃｒｏｂｉｏｔａｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｕｓｉｎｇｔａｎｄｅｍｖａｒｉａｂｌｅ１６ＳｒＲＮＡｇｅｎｅｒｅｇｉｏｎｓ．ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ３８：ｅ２００．ＫｏｎｓｔａｎｔｉｎｉｄｉｓＫＴ，ＲａｍｅｔｔｅＡ，ａｎｄＴｉｅｄｊｅＪＭ．２００６．Ｔｈｅｂａｃｔｅｒｉａｌｓｐｅｃｉｅｓｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎｉｎｔｈｅｇｅｎｏｍｉｃｅｒａ．ＰｈｉｌｏｓＴｒａｎｓＲＳｏｃＬｏｎｄＢＢｉｏｌＳｃｉ３６１：１９２９－１９４０を参照されたい。完全なゲノムの場合、ＭＬＳＴ、１６Ｓ以外の特定の遺伝子又は９５％以上の平均ヌクレオチド同一性を共有する遺伝子セットＯＴＵは同じＯＴＵと見なす。例えば、ＡｃｈｔｍａｎＭ，ａｎｄＷａｇｎｅｒＭ．２００８．Ｍｉｃｒｏｂｉａｌｄｉｖｅｒｓｉｔｙａｎｄｔｈｅｇｅｎｅｔｉｃｎａｔｕｒｅｏｆｍｉｃｒｏｂｉａｌｓｐｅｃｉｅｓ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６：４３１－４４０．ＫｏｎｓｔａｎｔｉｎｉｄｉｓＫＴ，ＲａｍｅｔｔｅＡ，ａｎｄＴｉｅｄｊｅＪＭ．２００６．Ｔｈｅｂａｃｔｅｒｉａｌｓｐｅｃｉｅｓｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎｉｎｔｈｅｇｅｎｏｍｉｃｅｒａ．ＰｈｉｌｏｓＴｒａｎｓＲＳｏｃＬｏｎｄＢＢｉｏｌＳｃｉ３６１：１９２９－１９４０を参照されたい。ＯＴＵは、多くの場合、生物間の配列を比較することで定義される。一般に、９５％未満の配列同一性を有する配列は、同じＯＴＵの部分を形成するとは見なされない。ＯＴＵは、ヌクレオチドマーカー又は遺伝子、特に高度に保存された遺伝子（例えば、「ハウスキーピング」遺伝子）の任意の組み合わせ又はそれらの組み合わせによっても特徴付けることができる。本明細書では、例えば、属、種及び系統分岐群に分類学的に割り当てられた操作的分類単位（ＯＴＵ）が提供される。

本明細書で使用される場合、遺伝子が細菌で「過剰発現」されるとは、同じ条件下で同じ種の野生型細菌によって発現されるよりも、少なくともいくつかの条件下で操作された細菌でより高いレベルで発現される場合である。同様に、遺伝子が細菌で「過少発現」されるとは、同じ条件下で同じ種の野生型細菌によって発現されるよりも、少なくともいくつかの条件下で操作された細菌でより低いレベルで発現される場合である。

「ポリヌクレオチド」及び「核酸」という用語は互換的に使用される。それらは、デオキシリボヌクレオチド若しくはリボヌクレオチド又はその類似体のいずれかの任意の長さのヌクレオチドのポリマー形態を指す。ポリヌクレオチドは、任意の三次元構造を有し得、あらゆる機能を果たし得る。以下は、ポリヌクレオチドの非限定的な例である：遺伝子又は遺伝子断片のコード領域又は非コード領域、連鎖解析から定義される遺伝子座、エクソン、イントロン、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、サイレンシングＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ、リボソームＲＮＡ、リボザイム、ｃＤＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分岐ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、任意の配列の単離ＤＮＡ、任意の配列の単離ＲＮＡ、核酸プローブ及びプライマー。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチド及びヌクレオチド類似体などの修飾ヌクレオチドを含み得る。存在する場合、ヌクレオチド構造に対する修飾は、ポリマーのアセンブリ前又は後に付与され得る。ポリヌクレオチドは、標識成分との結合などにより更に修飾され得る。本明細書で提供される全ての核酸配列において、Ｕヌクレオチドは、Ｔヌクレオチドと交換可能である。

本明細書で使用される場合、物質は、他の成分を実質的に含まない場合に「純粋」である。「精製する」、「精製すること」及び「精製された」という用語は、（例えば、自然界で又は実験的な設定で）最初に産生されたか若しくは生成されたかのいずれかの場合に付随したか、又は最初の産生後の任意の時間にわたり付随した成分の少なくとも一部から分離されているＥＶ（細菌由来のＥＶなど）調製物又は他の物質を指す。ＥＶ調製物又は組成物は、産生時又は産生後、例えば１つ以上の他の細菌成分から単離されている場合に精製されたと見なされ得、精製された微生物又は細菌集団は、他の物質を最大約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％又は約９０％超含み得、それでもなお「精製された」と見なされる。いくつかの実施形態では、精製されたＥＶは、約８０％超、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％又は約９９％超純粋である。ＥＶ組成物（又は調製物）は、例えば、残存生息環境産物から精製されている。

本明細書で使用される場合、「精製されたＥＶ組成物」又は「ＥＶ組成物」という用語は、原材料中に見出される少なくとも１つの付随する物質から分離されている（例えば、少なくとも１つの他の細菌成分から分離されている）、細菌由来のＥＶを含む調製物又はこの調製物を生成するために使用される任意のプロセスにおいてＥＶに付随する任意の物質から分離されている、細菌由来のＥＶを含む調製物を指す。この用語は、有意に富化されているか又は濃縮されている組成物も指す。いくつかの実施形態では、ＥＶは、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、１００倍、１０００倍、１０，０００倍又は１０，０００倍超濃縮されている。

「残存生息環境産物」は、対象内の又は対象上の微生物叢の生息環境に由来する物質を指す。例えば、微生物の発酵培養物は、汚染物質、例えば他の微生物株又は形態（例えば、細菌、ウイルス、マイコプラズマ及び／又は真菌）を含み得る。例えば、微生物は、胃腸管内の糞便中、皮膚自体上、唾液中、気道の粘膜中又は尿生殖路の分泌物（即ち微生物群衆に関連する生物学的物質）中に生息する。残存生息環境産物を実質的に含まないということは、細菌組成物が、培養物若しくはヒト若しくは動物対象上又は内の微生物環境と関連する生物学的物質をもはや含んでおらず、且つ微生物群衆と関連するあらゆる混入性生物学的物質を１００％含まず、９９％含まず、９８％含まず、９７％含まず、９６％含まず、又は９５％含まないことを意味する。残存生息環境産物は、非生物的物質（未消化の食物を含む）を含み得るか、又は不要な微生物を含み得る。残存生息環境産物を実質的に含まないということは、微生物組成物が混入物又はヒト又は動物に由来する検出可能な細胞を含まず、且つ微生物細胞のみが検出可能であることも意味し得る。一実施形態では、残存生息環境産物を実施的に含まないということは、微生物組成物が検出可能なウイルス（細菌ウイルス（例えばファージ）を含む）混入物、真菌混入物、マイコプラズマ混入物を含まないことも意味し得る。別の実施形態では、残存生息環境産物を実施的に含まないということは、微生物細胞と比較して、微生物組成物中の生細胞の１×１０^－２％、１×１０^－３％、１×１０^－４％、１×１０^－５％、１×１０^－６％、１×１０^－７％、１×１０^－８％未満がヒト又は動物であることを意味する。この純度を達成するための複数の方法が存在しており、これらのいずれも限定するものではない。そのため、一連の単一コロニーからの反復（例えば、限定されないが２回）画線が単一コロニー形態のみを示しているまで固体培地上で単一コロニーを画線する複数の工程により所望の構成物を単離することにより、混入を減少させ得る。代わりに、単一の所望される細胞に対する、複数回の１０倍連続希釈等の複数回の連続希釈（例えば１０^－８又は１０^－９の希釈）により、混入の減少を達成し得る。これは、複数の単離コロニーが類似の細胞形状及びグラム染色挙動を有することを示すことにより、更に裏付けられ得る。十分な純度を確認する他の方法として、遺伝子解析（例えば、ＰＣＲ、ＤＮＡ配列決定）、血清学的分析及び抗原分析、酵素学的分析及び代謝分析並びに混入物から所望の構成物を区別する試薬によるフローサイトメトリーなどの計測手段を使用する方法が挙げられる。

本明細書で使用される場合、「特異的結合」は、抗体が所定の抗原に結合する能力又はポリペプチドがその所定の結合パートナーに結合する能力を指す。典型的には、抗体又はポリペプチドは、約１０^－７Ｍ以下のＫ_Ｄに対応する親和性でその所定の抗原又は結合パートナーに特異的に結合し、非特異的及び無関係な抗原／結合パートナー（例えば、ＢＳＡ、カゼイン）に結合する親和性に対して少なくとも１０倍未満、少なくとも１００倍未満又は少なくとも１０００倍未満である親和性（Ｋ_Ｄで表される）で所定の抗原／結合パートナーに結合する。代わりに、特異的結合は、１つの成分がタンパク質、脂質又は炭水化物又はそれらの組み合わせであり、且つタンパク質、脂質、炭水化物又はそれらの組み合わせである第２の成分と特異的に結合する２成分系により広く当てはまる。

「株」は、同じ細菌種の密接に関連したメンバーから区別され得るような遺伝的特徴を有する細菌種のメンバーを指す。遺伝的特徴は、少なくとも１つの遺伝子の全部又は一部の欠損、少なくとも１つの調節領域（例えば、プロモーター、ターミネーター、リボスイッチ、リボソーム結合部位）の全部又は一部の欠損、少なくとも１つの天然プラスミドの不在（「キュアリング」）、少なくとも１つの組換え遺伝子の存在、少なくとも１つの変異遺伝子の存在、少なくとも１つの外来遺伝子（別の種に由来する遺伝子）の存在、少なくとも１つの変異調節領域（例えば、プロモーター、ターミネーター、リボスイッチ、リボソーム結合部位）の存在、少なくとも１つの非天然プラスミドの存在、少なくとも１つの抗生物質耐性カセットの存在又はこれらの組み合わせであり得る。異なる株間の遺伝的特徴は、ＰＣＲ増幅、続いて任意選択的に目的のゲノム領域又は全ゲノムのＤＮＡ配列決定を行うことにより、同定され得る。１つの株が（同じ種の別の株と比較して）抗生物質耐性を獲得したり失ったり、又は生合成能力を獲得したり失ったりした場合（栄養要求性株など）、抗生物質又は栄養素／代謝産物をそれぞれ用いて選択又は対抗選択することにより、株を識別し得る。

「対象」又は「患者」という用語は、任意の動物を指す。「それを必要とする」として記載される対象又は患者は、疾患の治療（又は予防）を必要とする者を指す。哺乳類（即ち哺乳動物）には、ヒト、実験動物（例えば、霊長類、ラット、マウス）、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ブタ）及びペット（例えば、イヌ、ネコ、げっ歯類）が含まれる。対象はヒトであり得る。対象は、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタ、ロバ、ヤギ、ラクダ、マウス、ラット、モルモット、ヒツジ、ラマ、サル、ゴリラ又はチンパンジーを含むが、これらに限定されない非ヒト哺乳動物であり得る。対象は、健康であり得、任意の発達段階で疾患又は障害に罹患していてもよい。

本明細書で使用される場合、「治療薬」という用語は、治療用途のための薬剤を指す。いくつかの実施形態では、治療薬は、疾患及び／又は状態を処置及び／又は予防するために使用することができるＥＶを含む組成物（「ＥＶ組成物」）である。いくつかの実施形態では、治療薬は医薬品である。いくつかの実施形態では、医薬品、医療食品、食品又は栄養補助食品は、治療薬を含む。いくつかの実施形態では、治療薬は溶液中であり、他の実施形態では、乾燥形態である。乾燥形態の実施形態は、例えば、凍結乾燥又は噴霧乾燥によって生成され得る。いくつかの実施形態では、治療薬の乾燥形態は凍結乾燥ケーキ又は粉末である。いくつかの実施形態では、治療薬の乾燥形態は噴霧乾燥粉末である。

本明細書で使用される場合、「治療用組成物」又は「医薬組成物」という用語は、治療有効量の治療薬を含む組成物（例えば、本明細書に記載のＥＶ組成物）を指す。いくつかの実施形態では、治療用組成物は、医薬品、医療食品、食品又は栄養補助食品である（又はその中に存在する）。

本明細書で使用される場合、対象の疾患を「処置する」又は疾患を有するか若しくは有すると疑われる対象を「処置する」という用語は、この疾患の少なくとも１つの症状が軽減されるか又は悪化することが防止されるように、この対象に薬学的処置を施すこと、例えば１つ以上の薬剤を投与することを指す。そのため、一実施形態では、「処置する」は、とりわけ、進行の遅延、寛解の促進、寛解の誘発、寛解の増強、回復の加速、代替治療薬の有効性の増加若しくは代替治療薬への耐性の低下又はこれらの組み合わせを指す。本明細書で使用される場合、対象の疾患を「予防する」という用語は、疾患の少なくとも１つの症状の発症が遅延されるか又は予防されるように、薬学的処置を対象に施すこと（例えば、１つ以上の薬剤の投与）を指す。

細菌
特定の態様では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細胞外小胞（ＥＶ）、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細胞外小胞（ＥＶ）を含む溶液及び／又は乾燥形態並びに治療用組成物が本明細書で提供される。特定の態様では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌から得られるＥＶを含む溶液及び／又は乾燥形態及び治療用組成物が本明細書に提供される。

いくつかの実施形態では、ＥＶが得られるプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌は凍結乾燥される。

いくつかの実施形態では、ＥＶが得られるプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌はガンマ線照射される（例えば、１７．５又は２５ｋＧｙ）。

いくつかの実施形態では、ＥＶが得られるプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌はＵＶ照射される。

いくつかの実施形態では、ＥＶが得られるプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌は、熱失活されている（例えば、５０℃で２時間又は９０℃で２時間）。

いくつかの実施形態では、ＥＶが得られるプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌は酸処理される。

いくつかの実施形態では、ＥＶが得られるプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌は酸素散布される（例えば、０．１ｖｖｍで２時間）。

いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶは噴霧乾燥される。

いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶはガンマ線照射される（例えば、１７．５又は２５ｋＧｙ）。

増殖期は、細菌及び／又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌により産生されるＥＶの量又は特性に影響を及ぼす可能性がある。例えば、本明細書で提供されるＥＶの調製方法では、ＥＶを、対数増殖期の開始時、対数期の途中及び／又は定常増殖期に達した時点で例えば培養物から単離することができる。

いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶは、１つの細菌株、例えば、本明細書で提供される株に由来する。

いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶは、１つの細菌株（例えば、本明細書で提供される株）に由来するか又は２つ以上の株に由来する。

いくつかの実施形態では、ＥＶは、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌、例えば、プレボテラ属（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）Ｂ５０３２９株（ＮＲＲＬ受託番号Ｂ５０３２９）のヌクレオチド配列に対して少なくとも９０％又は少なくとも９９％のゲノム、１６Ｓ及び／又はＣＲＩＳＰＲ配列同一性を含む株由来である。いくつかの実施形態では、ＥＶは、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）、例えばプレボテラ属（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）Ｂ５０３２９株（ＮＲＲＬ受託番号Ｂ５０３２９）由来である。

いくつかの実施形態では、ＥＶが得られるプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌は、毒性若しくは他の有害作用を低減するように、（例えば、耐酸性、粘膜付着及び／若しくは浸透並びに／又は胆汁酸、消化酵素に対する耐性、抗菌性ペプチド及び／若しくは抗体中和に対する耐性の改善により）ＥＶの送達（例えば、経口送達）を増強するように、所望の細胞タイプ（例えば、Ｍ細胞、杯細胞、腸細胞、樹状細胞、マクロファージ）を標的とするように、ＥＶ（例えば、単独又は別の治療薬との組み合わせのいずれかで）のそれらの免疫調節効果及び／若しくは治療効果を増強するように、且つ／又は（例えば、多糖、線毛（ｐｉｌｉ）、線毛（ｆｉｍｂｒｉａｅ）、アドヘシンの産生の改変を通して）ＥＶによる免疫の活性化若しくは抑制を増強するように改変（例えば、操作）されている。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される操作された細菌は、ＥＶの製造を改善する（例えば、より高い酸素耐性、安定性、改善された凍結解凍耐性、より短い生成時間）ように改変されている。例えば、いくつかの実施形態では、記載される操作された細菌として、１つ以上の遺伝的変化を保有する細菌が挙げられ、そのような変化は、細菌染色体若しくは内因性プラスミド及び／又は１つ以上の外来性プラスミドで含まれる１つ以上のヌクレオチドの挿入、欠失、転座若しくは置換又はこれらの任意の組み合わせであり、この遺伝的変化により、１つ以上の遺伝子の過剰発現及び／又は過小発現が引き起こされ得る。操作された細菌を、当技術分野で公知の任意の技術（限定されないが、部位特異的変異誘発、トランスポゾン突然変異誘発、ノックアウト、ノックイン、ポリメラーゼ連鎖反応変異誘発、化学的変異誘発、紫外線変異誘発、形質転換（化学的又はエレクトロポレーションによる）、ファージ形質導入、定向進化又はこれらの任意の組み合わせを含む）を使用して生成し得る。

改変ＥＶ
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）は、治療用部分を含み、それに連結され、且つ／又はそれに結合されるように改変されている。いくつかの実施形態では、磁性部分及び／又は常磁性部分は、細菌に含まれ、且つ／又は細菌に直接連結されている。いくつかの実施形態では、この磁性部分及び／又は常磁性部分は、ＥＶに結合するＥＶ結合部分に連結され、且つ／又はこのＥＶ結合部分の一部である。いくつかの実施形態では、ＥＶ結合部分は、ＰＧＲＰ等の完全長ペプチドグリカン認識タンパク質又はその断片である。いくつかの実施形態では、ＥＶ結合部分は、（例えば、細菌抗原に対する結合特異性を有することにより）ＥＶに対する結合特異性を有する。いくつかの実施形態では、ＥＶ結合部分は、抗体又はその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、ＥＶ結合部分は、Ｔ細胞受容体又はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶは、磁性部分及び／又は常磁性部分（例えば磁気ビーズ）を含み、それに連結され、且つ／又はそれに結合されるように操作されている。

細菌の細胞外小胞（ＥＶ）の生成
分泌されたＥＶ。特定の態様では、ＥＶ（本明細書に記載の細菌からの分泌ＥＶ（ｓｍＥＶ）など）は、当技術分野で公知の任意の方法を使用して調製される。

いくつかの実施形態では、ｓｍＥＶをｓｍＥＶ精製工程なしで調製する。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載される細菌を、ｓｍＥＶをインタクトのままにする方法を使用して死滅させ、得られたｓｍＥＶを含む細菌成分を、本明細書に記載される方法及び組成物で使用する。いくつかの実施形態では、この細菌を、抗生物質を使用して（例えば、本明細書に記載されている抗生物質を使用して）死滅させる。いくつかの実施形態では、この細菌を、ＵＶ照射を使用して死滅させる。いくつかの実施形態では、細菌を、加熱により死滅させる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるｓｍＥＶを、１つ以上の他の細菌成分から精製する。細菌からｓｍＥＶを精製するための方法は、当技術分野で公知である。いくつかの実施形態では、Ｓ．ＢｉｎＰａｒｋ，ｅｔａｌ．ＰＬｏＳＯＮＥ．６（３）：Ｅ１７６２９（２０１１）又はＧ．Ｎｏｒｈｅｉｍ，ｅｔａｌ．ＰＬｏＳＯＮＥ．１０（９）：ｅ０１３４３５３（２０１５）又はＪｅｐｐｅｓｅｎ，ｅｔａｌ．Ｃｅｌｌ１７７：４２８（２０１９）（その各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）で記載される方法を使用して細菌培養物から調製する。いくつかの実施形態では、細菌を高い光学密度まで培養し、次いで（例えば、１０，０００×ｇにおいて４℃で３０分間、１５，５００×ｇにおいて４℃で１５分間）細菌を遠心分離してペレット化する。いくつかの実施形態では、次いで、培養上清をフィルター（例えば、０．２２μｍフィルター）に通して、インタクトの細菌細胞を排除する。いくつかの実施形態では、次いで、上清をタンジェント流濾過にかけ、その間に上清を濃縮し、１００ｋＤａ未満の種を除去し、培地を部分的にＰＢＳと交換する。いくつかの実施形態では、濾過した上清を遠心分離して細菌のｓｍＥＶをペレット化する（例えば、１００，０００～１５０，０００×ｇにおいて４℃で１～３時間、２００，０００×ｇにおいて４℃で１～３時間）。いくつかの実施形態では、得られたｓｍＥＶペレットを（例えば、ＰＢＳに）再懸濁し、再懸濁したｓｍＥＶをＯｐｔｉｐｒｅｐ（ヨージキサノール）勾配又は勾配（例えば、３０～６０％の不連続勾配、０～４５％の不連続勾配）に適用し、続いて遠心分離（例えば、２００，０００×ｇにおいて４℃で４～２０時間）することにより、ｓｍＥＶを更に精製する。ｓｍＥＶバンドを収集し、ＰＢＳで希釈し、遠心分離してｓｍＥＶをペレット化する（例えば、１５０，０００×ｇにおいて４℃で３時間、２００，０００×ｇにおいて４℃で１時間）。精製されたｓｍＥＶは、使用するまで、例えば－８０℃又は－２０℃で貯蔵することができる。いくつかの実施形態では、ｓｍＥＶは、ＤＮａｓｅ及び／又はプロテイナーゼＫで処理することにより更に精製される。

例えば、いくつかの実施形態では、細菌培養物を、１１，０００×ｇにおいて４℃で２０～４０分間遠心分離し、細菌をペレット化することができる。培養上清を０．２２μｍフィルターに通し、インタクトな細菌細胞を排除し得る。次いで、濾過された上清は、硫酸アンモニウム沈殿、超遠心分離又は濾過を含み得るが、これらに限定されない方法を使用して濃縮され得る。例えば、硫酸アンモニウム沈殿の場合、４℃で撹拌しながら、濾過した上清に、１．５～３Ｍの硫酸アンモニウムをゆっくりと添加することができる。沈殿物を４℃で８～４８時間インキュベートし、次いで１１，０００×ｇにおいて４℃で２０～４０分間遠心分離することができる。得られたペレットには、細菌のｓｍＥＶ及び他の残骸が含まれる。超遠心分離を使用して、濾過した上清を１００，０００～２００，０００×ｇにおいて４℃で１～１６時間遠心分離することができる。この遠心分離のペレットには、細胞のｓｍＥＶ及び大きいタンパク質複合体などの他の残骸が含まれる。いくつかの実施形態では、ＡｍｉｃｏｎＵｌｔｒａスピンフィルターの使用又はタンジェント流濾過などの濾過技術を使用して、分子量が５０又は１００ｋＤａを超える種を保持するように上清を濾過することができる。

代わりに、増殖中の細菌培養から継続的に又は増殖中の選択された時点で、例えばバイオリアクターを交互タンジェント流（ＡＴＦ）システム（例えば、ＲｅｐｌｉｇｅｎのＸＣｅｌｌＡＴＦ）に接続することによってｓｍＥＶを入手することができる。ＡＴＦシステムは、バイオリアクター内にインタクトな細胞（＞０．２２μｍ）を保持し、より小さい成分（例えば、ｓｍＥＶ、遊離タンパク質）がフィルターを通過して収集できるようにする。例えば、システムは、＜０．２２μｍの濾液が１００ｋＤａの２番目のフィルターを通過するように構成でき、これにより、０．２２μｍ～１００ｋＤａのｓｍＥＶなどの種を収集し、１００ｋＤａ未満の種をポンプでバイオリアクター内に戻すことができる。代わりに、システムは、培養物の増殖中にバイオリアクター内の培地を補充及び／又は改変できるように構成することができる。この方法によって収集されたｓｍＥＶは、濾過された上清について上記したように、超遠心分離又は濾過によって更に精製及び／又は濃縮され得る。

本明細書で提供される方法によって得られるｓｍＥＶは、限定されるものではないが、スクロース勾配又はＯｐｔｉｐｒｅｐ勾配の使用を含み得る方法を用いて、サイズ排除カラムクロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー及び勾配超遠心分離によって更に精製することができる。簡単に述べると、スクロース勾配法を用いて、硫酸アンモニウム沈殿又は超遠心分離が使用されて濾過された上清が濃縮されたら、ペレットを６０％スクロース、３０ｍＭＴｒｉｓ、ｐＨ８．０に再懸濁される。濾過を使用して濾過した上清を濃縮する場合、濃縮液が、ＡｍｉｃｏｎＵｌｔｒａカラムを用いて、６０％スクロース、３０ｍＭＴｒｉｓ、ｐＨ８．０に緩衝液交換される。サンプルは、３５～６０％の不連続スクロース勾配に適用され、４℃で３～２４時間、２００，０００×ｇで遠心分離される。簡単に述べると、Ｏｐｔｉｐｒｅｐ勾配法を用いて、硫酸アンモニウム沈殿又は超遠心分離の使用により、濾過された上清が濃縮されたら、ペレットがＰＢＳ中に再懸濁され、３つの体積の６０％Ｏｐｔｉｐｒｅｐがサンプルに添加される。いくつかの実施形態では、濾過を用いて濾過された上清が濃縮されたら、濃縮物が、６０％Ｏｐｔｉｐｒｅｐを用いて３５％Ｏｐｔｉｐｒｅｐの最終濃度まで希釈される。サンプルは、０～４５％の不連続Ｏｐｔｉｐｒｅｐ勾配に適用され、４℃で３～２４時間、例えば４℃で４～２４時間、２００，０００×ｇで遠心分離される。

いくつかの実施形態では、ｓｍＥＶ調製物の無菌性及び単離を確認するために、ｓｍＥＶは、試験される細菌の日常的な培養に使用される寒天培地に連続希釈され、日常的な条件を用いてインキュベートされる。非無菌調製物は、インタクトな細胞を排除するために０．２２μｍフィルターに通される。純度を更に高めるために、単離されたｓｍＥＶを、ＤＮａｓｅ又はプロテイナーゼＫで処理することができる。

いくつかの実施形態では、インビボでの注射に使用されるｓｍＥＶの調製について、精製されたｓｍＥＶは前述のように処理される（Ｇ．Ｎｏｒｈｅｉｍ，ｅｔａｌ．ＰＬｏＳＯＮＥ．１０（９）：ｅ０１３４３５３（２０１５））。簡単に述べると、スクロース勾配遠心分離後、ｓｍＥＶを含むバンドは、３％スクロースを含む溶液又は当業者に公知のインビボでの注射に好適な他の溶液中に５０μｇ／ｍＬの最終濃度まで再懸濁される。この溶液は、アジュバント、例えば０～０．５％（ｗ／ｖ）の濃度の水酸化アルミニウムも含み得る。いくつかの実施形態では、インビボでの注射に使用されるｓｍＥＶの調製のために、ＰＢＳ中のｓｍＥＶは＜０．２２μｍまで滅菌濾過される。

特定の実施形態では、サンプルを更なるテストと相溶性を持たせるために（例えば、ＴＥＭイメージング又はインビトロアッセイ前にスクロースを除去するために）、濾過（例えば、ＡｍｉｃｏｎＵｌｔｒａカラム）、透析又は超遠心分離（２００，０００×ｇ、≧３時間、４℃）及び再懸濁を使用して、サンプルをＰＢＳ又は３０ｍＭのＴｒｉｓ、ｐＨ８．０中にバッファー交換する。

いくつかの実施形態では、ｓｍＥＶ調製物の無菌性は、ｓｍＥＶの生成に使用される細菌の標準培養に使用される寒天培地上にｓｍＥＶの一部を播種し、標準条件を用いてインキュベートすることによって確認することができる。

いくつかの実施形態では、選択されたｓｍＥＶは、クロマトグラフィー及びｓｍＥＶ上の結合表面部分によって単離及び富化される。他の実施形態では、選択されたｓｍＥＶは、親和性試薬、化学染料、組換えタンパク質を使用する方法又は当業者に公知の他の方法による蛍光細胞選別によって単離及び／又は富化される。

いくつかの実施形態では、ｓｍＥＶは、例えば、Ｊｅｐｐｅｓｅｎ，ｅｔａｌ．Ｃｅｌｌ１７７：４２８（２０１９）で記載されているように、分析される。

いくつかの実施形態では、ｓｍＥＶは凍結乾燥されている。

いくつかの実施形態では、ｓｍＥＶは噴霧乾燥されている。

いくつかの実施形態では、ｓｍＥＶは、（例えば１７．５又は２５ｋＧｙで）ガンマ線照射されている。

いくつかの実施形態では、ｓｍＥＶはＵＶ照射されている。

いくつかの実施形態では、ｓｍＥＶは熱失活されている（例えば、５０℃で２時間又は９０℃で２時間）。

いくつかの実施形態では、ｓｍＥＶは酸処理されている。

いくつかの実施形態では、ｓｍＥＶは酸素散布されている（例えば、０．１ｖｖｍで２時間）。

増殖期は、細菌及び／又は細菌により産生されるｓｍＥＶの量又は特性に影響を及ぼす可能性がある。例えば、本明細書で提供されるｓｍＥＶの調製方法では、ｓｍＥＶを、対数増殖期の開始時、対数期の途中及び／又は定常増殖期に達した時点で例えば培養物から単離することができる。

増殖環境（培養条件など）は、細菌によって産生されるｓｍＥＶの量に影響を与える可能性がある。例えば、表４で提供されているように、ｓｍＥＶの収量はｓｍＥＶインデューサによって増加させることができる。

本明細書で提供されるｓｍＥＶを調製する方法では、方法は、任意選択的に、細菌培養物からｓｍＥＶを単離する前に、細菌培養物をｓｍＥＶインデューサに曝露することを含み得る。細菌培養物を、対数増殖期の開始時、対数期の途中及び／又は定常増殖期に達した時点でｓｍＥＶインデューサに曝露することができる。

処理されたＥＶ。特定の態様では、ＥＶ（本明細書に記載の処理されたＥＶ（ｐｍＥＶ）など）は、当技術分野で公知の任意の方法を使用して調製される（例えば、人工的に調製される）。

いくつかの実施形態では、ｐｍＥＶをｐｍＥＶ精製工程なしで調製する。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるｐｍＥＶを放出する細菌を、細菌のｐｍＥＶをインタクトのままにする方法を使用して死滅させ、得られたｐｍＥＶを含む細菌成分を、本明細書に記載される方法及び組成物で使用する。いくつかの実施形態では、細菌は、抗生物質を使用して（例えば、本明細書に記載される抗生物質を使用して）死滅させる。いくつかの実施形態では、細菌は、ＵＶ照射を使用して死滅させる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるｐｍＥＶを、１つ以上の他の細菌成分から精製する。細菌（及び任意選択的に他の細菌成分）からｐｍＥＶを精製する方法は、当技術分野で公知である。いくつかの実施形態では、ｐｍＥＶを、Ｔｈｅｉｎ，ｅｔａｌ．（Ｊ．ＰｒｏｔｅｏｍｅＲｅｓ．９（１２）：６１３５－６１４７（２０１０））又はＳａｎｄｒｉｎｉ，ｅｔａｌ．（Ｂｉｏ－ｐｒｏｔｏｃｏｌ４（２１）：ｅ１２８７（２０１４））（その各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）で記載される方法を使用して細菌培養物から調製する。いくつかの実施形態では、細菌を高い光学密度まで培養し、次いで（例えば、室温又は４℃において１０，０００～１５，０００×ｇで１０～１５分間）遠心分離して細菌をペレット化する。いくつかの実施形態では、上清を廃棄し、細胞ペレットを－８０℃で凍結させる。いくつかの実施形態では、細胞ペレットを氷上で解凍し、１ｍｇ／ｍＬＤＮアーゼＩが補充された１００ｍＭＴｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ７．５に再懸濁させる。いくつかの実施形態では、細胞を、製造業者により推奨される条件下でＥｍｕｌｓｉｆｌｅｘＣ－３（Ａｖｅｓｔｉｎ，Ｉｎｃ．）を使用して溶解させる。いくつかの実施形態では、残屑及び未溶解の細胞を、４℃において１０，０００×ｇでの１５分間の遠心分離によりペレット化する。いくつかの実施形態では、次いで、上清を、４℃において１２０，０００×ｇで１時間遠心分離する。いくつかの実施形態では、ペレットを、１００ｍＭの氷冷炭酸ナトリウム、ｐＨ１１に再懸濁させ、４℃で１時間撹拌しつつインキュベートし、次いで、４℃において１２０，０００×ｇで１時間遠心分離する。いくつかの実施形態では、ペレットを、１００ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ７．５に再懸濁させ、４℃において１２０，０００×ｇで２０分間再度遠心分離し、次いで、０．１ＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ７．５又はＰＢＳに再懸濁させる。いくつかの実施形態では、サンプルを、－２０℃で保存する。

特定の態様では、Ｓａｎｄｒｉｎｉｅｔａｌ，２０１４から適合された方法によりｐｍＥＶを得る。いくつかの実施形態では、細菌培養物を、室温又は４℃において１０，０００～１５，５００×ｇで１０～１５分間遠心分離する。いくつかの実施形態では、細胞ペレットを－８０℃で凍結させ、上清を廃棄する。いくつかの実施形態では、細胞ペレットを氷上で解凍し、０．１ｍｇ／ｍＬのリゾチームが補充された１０ｍＭＴｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ８．０、１ｍＭＥＤＴＡに再懸濁させる。いくつかの実施形態では、サンプルを、室温又は３７℃で３０分間混合しつつインキュベートする。いくつかの実施形態では、サンプルを－８０℃で再度凍結させ、氷上で再び解凍する。いくつかの実施形態では、ＤＮアーゼＩを、１．６ｍｇ／ｍＬの最終濃度まで添加し、ＭｇＣｌ２を、１００ｍＭの最終濃度まで添加する。いくつかの実施形態では、サンプルを、３０秒オン及び３０秒オフの７サイクルでＱＳｏｎｉｃａＱ５００超音波処理器を使用して超音波処理する。いくつかの実施形態では、残屑及び未溶解の細胞を、４℃において１０，０００×ｇでの１５分間の遠心分離によりペレット化する。いくつかの実施形態では、次いで、上清を、４℃において１１０，０００×ｇで１５分間遠心分離する。いくつかの実施形態では、ペレットを、１０ｍＭＴｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ８．０、２％のＴｒｉｔｏｎ－Ｘ１００に再懸濁させ、室温で混合しつつ３０～６０分間インキュベートする。いくつかの実施形態では、サンプルを、４℃において１１０，０００×ｇで１５分間遠心分離する。いくつかの実施形態では、ペレットを、ＰＢＳに再懸濁させて－２０℃で保存する。

特定の態様では、本明細書に記載される単離された細菌のｐｍＥＶを形成する（例えば調製する）方法は、（ａ）細菌培養物を遠心分離し、それにより第１のペレット及び第１の上清を形成する工程であって、第１のペレットは、細胞を含む、工程と、（ｂ）第１の上清を廃棄する工程と、（ｃ）第１のペレットを溶液に再懸濁させる工程と、（ｄ）細胞を溶解させる工程と、（ｅ）溶解した細胞を遠心分離し、それにより第２のペレット及び第２の上清を形成する工程と、（ｆ）第２のペレットを廃棄し、第２の上清を遠心分離し、それにより第３のペレット及び第３の上清を形成する工程と、（ｇ）第３の上清を廃棄し、第３のペレットを第２の溶液に再懸濁させ、それにより単離された細菌のｐｍＥＶを形成する工程とを含む。

いくつかの実施形態では、方法は、（ｈ）工程（ｇ）の溶液を遠心分離し、それにより第４のペレット及び第４の上清を形成する工程と、（ｉ）第４の上清を廃棄し、第４のペレットを第３の溶液に再懸濁させる工程とを更に含む。いくつかの実施形態では、方法は、（ｊ）工程（ｉ）の溶液を遠心分離し、それにより第５のペレット及び第５の上清を形成する工程と、（ｋ）第５の上清を廃棄し、第５のペレットを第４の溶液に再懸濁させる工程とを更に含む。

いくつかの実施形態では、工程（ａ）の遠心分離を、１０，０００×ｇで行う。いくつかの実施形態では、工程（ａ）の遠心分離は、１０～１５分間実施する。いくつかの実施形態では、工程（ａ）の遠心分離は、４℃又は室温で実施する。いくつかの実施形態では、工程（ｂ）は、－８０℃で第１のペレットを凍結させることを更に含む。いくつかの実施形態では、工程（ｃ）での溶液は、１ｍｇ／ｍｌのＤＮアーゼＩが補充された１００ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ７．５である。いくつかの実施形態では、工程（ｃ）での溶液は、０．１ｍｇ／ｍｌのリゾチームが補充された１０ｍＭＴｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ８．０、１ｍＭＥＤＴＡである。いくつかの実施形態では、工程（ｃ）は、３７℃又は室温で３０分間インキュベートすることを更に含む。いくつかの実施形態では、工程（ｃ）は、－８０℃で第１のペレットを凍結させることを更に含む。いくつかの実施形態では、工程（ｃ）は、１．６ｍｇ／ｍｌの最終濃度までＤＮアーゼＩを添加することを更に含む。いくつかの実施形態では、工程（ｃ）は、１００ｍＭの最終濃度までＭｇＣｌ_２を添加することを更に含む。いくつかの実施形態では、細胞を、均質化により工程（ｄ）で溶解させる。いくつかの実施形態では、細胞を、ｅｍｕｌｓｉｆｌｅｘＣ３により工程（ｄ）で溶解させる。いくつかの実施形態では、細胞を、超音波処理により工程（ｄ）で溶解させる。いくつかの実施形態では、細胞を７サイクルで超音波処理し、各サイクルは、３０秒間の超音波処理及び超音波処理なしの３０秒間を含む。いくつかの実施形態では、工程（ｅ）の遠心分離を、１０，０００×ｇで実施する。いくつかの実施形態では、工程（ｅ）の遠心分離を、１５分間実施する。いくつかの実施形態では、工程（ｅ）の遠心分離を、４℃又は室温で実施する。

いくつかの実施形態では、工程（ｆ）の遠心分離を、１２０，０００×ｇで実施する。いくつかの実施形態では、工程（ｆ）の遠心分離を、１１０，０００×ｇで実施する。いくつかの実施形態では、工程（ｆ）の遠心分離を、１時間実施する。いくつかの実施形態では、工程（ｆ）の遠心分離を、１５分間実施する。いくつかの実施形態では、工程（ｆ）の遠心分離を、４℃又は室温で実施する。いくつかの実施形態では、工程（ｇ）での第２の溶液は、１００ｍＭの炭酸ナトリウム、ｐＨ１１である。いくつかの実施形態では、工程（ｇ）での第２の溶液は、１０ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌｐＨ８．０、２％のトリトンＸ－１００である。いくつかの実施形態では、工程（ｇ）は、４℃で溶液を１時間インキュベートすることを更に含む。いくつかの実施形態では、工程（ｇ）は、室温で溶液を３０～６０分間インキュベートすることを更に含む。いくつかの実施形態では、工程（ｈ）の遠心分離を、１２０，０００×ｇで実施する。いくつかの実施形態では、工程（ｈ）の遠心分離を、１１０，０００×ｇで実施する。いくつかの実施形態では、工程（ｈ）の遠心分離を、１時間実施する。いくつかの実施形態では、工程（ｈ）の遠心分離を、１５分間実施する。いくつかの実施形態では、工程（ｈ）の遠心分離を、４℃又は室温で実施する。いくつかの実施形態では、工程（ｉ）での第３の溶液は、１００ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ７．５である。いくつかの実施形態では、工程（ｉ）での第３の溶液は、ＰＢＳである。いくつかの実施形態では、工程（ｊ）の遠心分離を、１２０，０００×ｇで実施する。いくつかの実施形態では、工程（ｊ）の遠心分離を、２０分間実施する。いくつかの実施形態では、工程（ｊ）の遠心分離を、４℃又は室温で実施する。いくつかの実施形態では、工程（ｋ）での第４の溶液は、１００ｍＭのＴｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ７．５又はＰＢＳである。

本明細書で提供される方法によって得られるｐｍＥＶは、限定されるものではないが、スクロース勾配又はＯｐｔｉｐｒｅｐ勾配の使用を含み得る方法を用いて、サイズ排除カラムクロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー及び勾配超遠心分離によって更に精製することができる。簡単に述べると、スクロース勾配法を用いて、硫酸アンモニウム沈殿又は超遠心分離が使用されて濾過された上清が濃縮されたら、ペレットを６０％スクロース、３０ｍＭＴｒｉｓ、ｐＨ８．０に再懸濁される。濾過を使用して濾過した上清を濃縮する場合、濃縮液が、ＡｍｉｃｏｎＵｌｔｒａカラムを用いて、６０％スクロース、３０ｍＭＴｒｉｓ、ｐＨ８．０に緩衝液交換される。サンプルは、３５～６０％の不連続スクロース勾配に適用され、４℃で３～２４時間、２００，０００×ｇで遠心分離される。簡単に述べると、Ｏｐｔｉｐｒｅｐ勾配法を用いて、硫酸アンモニウム沈殿又は超遠心分離の使用により、濾過された上清が濃縮されたら、ペレットがＰＢＳ中、３５％Ｏｐｔｉｐｒｅｐに再懸濁される。いくつかの実施形態では、濾過を用いて濾過された上清が濃縮されたら、濃縮物が、６０％Ｏｐｔｉｐｒｅｐを用いて３５％Ｏｐｔｉｐｒｅｐの最終濃度まで希釈される。サンプルは、３５～６０％の不連続スクロース勾配に適用され４℃において２００，０００×ｇで３～２４時間遠心分離される。

いくつかの実施形態では、ｐｍＥＶ調製物の無菌性及び単離を確認するために、ｐｍＥＶは、試験される細菌の日常的な培養に使用される寒天培地に連続希釈され、日常的な条件を用いてインキュベートされる。非無菌調製物は、インタクトな細胞を排除するために０．２２μｍフィルターに通される。純度を更に高めるために、単離されたｐｍＥＶを、ＤＮａｓｅ又はプロテイナーゼＫで処理することができる。

いくつかの実施形態では、ｐｍＥＶ調製物の無菌性は、ｐｍＥＶの生成に使用される細菌の標準培養に使用される寒天培地上にｐｍＥＶの一部を播種し、標準条件を用いてインキュベートすることによって確認することができる。

いくつかの実施形態では、選択されたｐｍＥＶは、クロマトグラフィー及びｐｍＥＶ上の結合表面部分によって単離及び濃縮される。他の実施形態では、選択されたｐｍＥＶは、親和性試薬、化学染料、組換えタンパク質を使用する方法又は当業者に公知の他の方法による蛍光細胞選別によって単離及び／又は濃縮される。

いくつかの実施形態では、ｐｍＥＶは、例えば、Ｊｅｐｐｅｓｅｎｅｔａｌ．Ｃｅｌｌ１７７：４２８（２０１９）で記載されているように、分析される。

いくつかの実施形態では、ｐｍＥＶは凍結乾燥されている。

いくつかの実施形態では、ｐｍＥＶは噴霧乾燥されている。

いくつかの実施形態では、ｐｍＥＶは、（例えば１７．５又は２５ｋＧｙで）ガンマ線照射されている。

いくつかの実施形態では、ｐｍＥＶはＵＶ照射されている。

いくつかの実施形態では、ｐｍＥＶは熱失活されている（例えば、５０℃で２時間又は９０℃で２時間）。

いくつかの実施形態では、ｐｍＥＶは酸処理されている。

いくつかの実施形態では、ｐｍＥＶは酸素散布されている（例えば、０．１ｖｖｍで２時間）。

増殖期は、細菌の量又は特性に影響を及ぼす可能性がある。本明細書で提供されるｐｍＥＶの調製方法では、ｐｍＥＶを、対数増殖期の開始時、対数期の途中及び／又は定常増殖期に達した時点で例えば培養物から単離することができる。

溶液及び乾燥形態
本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ（例えば、本明細書に記載のプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又はＥＶの組み合わせ）を含む溶液（例えば、液体混合物）を提供する。例えば、いくつかの実施形態では、溶液は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶと、増量剤を含む賦形剤とを含む。別の例として、いくつかの実施形態では、溶液は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶと、増量剤及び凍結乾燥保護剤を含む賦形剤とを含む。別の例として、いくつかの実施形態では、溶液は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶと、凍結乾燥保護剤を含む賦形剤とを含む。

例えば、いくつかの実施形態では、増量剤は、マンニトール、スクロース、マルトデキストリン、デキストラン、フィコール又はＰＶＰ－Ｋ３０を含む。いくつかの実施形態では、賦形剤は、任意選択的に、トレハロース、マンニトール、スクロース、ソルビトール、マルトデキストリン、デキストラン、ポロキサマー１８８、マルトデキストリン、ＰＶＰ－Ｋ３０、フィコール、クエン酸塩、アルギニン及び／又はヒドロキシプロピル－Ｂ－シクロデキストリンなどの追加の成分を含む。例えば、いくつかの実施形態では、溶液は、ＥＶの液体調製物と、増量剤を含む賦形剤、例えば表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰの１つに提供される配合のストックからの賦形剤とを含有する。例えば、いくつかの実施形態では、溶液は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶを含有する液体調製物（例えば、細菌培養物（上清など）又は保持液からプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶを単離することによって得られる）と、増量剤を含む賦形剤とを含み、例えば、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶを含有する液体調製物を、増量剤を含む賦形剤ストック、例えば、表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰの１つに提供される配合の賦形剤ストックと組み合わせて、溶液を調製する。

プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細胞外小胞（ＥＶ）を含有する「乾燥形態」は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶを含有する溶液を乾燥させることによって得られる生成物を指す。いくつかの実施形態では、乾燥は、凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅｄｒｙｉｎｇ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ））又は噴霧乾燥によって実施される。いくつかの実施形態では、乾燥形態は粉末である。本明細書で使用される場合、粉末は、乾燥形態の一種を指し、凍結乾燥粉末を含むが、噴霧乾燥などの方法により得られる噴霧乾燥粉末などの粉末を含む。

凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅｄｒｙｉｎｇ）（凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ））を実施する場合、得られる生成物は凍結乾燥物である。いくつかの実施形態では、乾燥形態は凍結乾燥物である。本明細書で使用される場合、凍結乾燥物は、乾燥形態の一種を指し、凍結乾燥粉末及び凍結乾燥ケーキを含む。いくつかの実施形態では、凍結乾燥ケーキを粉砕して（例えば、すり潰して）、凍結乾燥粉末を生成する。粉砕は、固体の機械的なサイズの縮小を指す。すり潰しは、粉砕の一種で、例えば、乾燥形態に対して実施できる。例えば、Ｓｅｉｂｅｒｔｅｔａｌ．，“ＭＩＬＬＩＮＧＯＰＥＲＡＴＩＯＮＳＩＮＴＨＥＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＩＮＤＵＳＴＲＹ”ｉｎＣｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｉｎｔｈｅＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＩｎｄｕｓｔｒｙ：Ｒ＆ＤｔｏＭａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ，ＥｄｉｔｅｄｂｙＤａｖｉｄＪ．ａｍＥｎｄｅ（２０１１）を参照されたい。

本開示は、いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ（例えば、本明細書に記載のプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又はＥＶの組み合わせ）と、賦形剤とを含む、凍結乾燥物などの乾燥形態も提供する。例えば、乾燥形態は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶと、増量剤を含む賦形剤とを含み得る。別の例として、乾燥形態は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶと、増量剤及び凍結乾燥保護剤を含む賦形剤とを含み得る。別の例として、乾燥形態は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶと、凍結乾燥保護剤を含む賦形剤とを含み得る。例えば、本明細書に記載されるように、いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶを、増量剤及び／又は凍結乾燥保護剤を含む賦形剤と組み合わせて、例えば、溶液を調製する。いくつかの実施形態では、溶液は乾燥される。得られた乾燥形態（例えば、凍結乾燥物）は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶと、賦形剤の成分、例えば増量剤及び／又は凍結乾燥保護剤（例えば、乾燥形態）とを含有する。

本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び賦形剤の乾燥形態も提供する。いくつかの実施形態では、乾燥形態は、例えば、凍結乾燥ケーキ又は凍結乾燥粉末などの凍結乾燥物である。いくつかの実施形態では、乾燥形態は、例えば噴霧乾燥粉末又は凍結乾燥粉末などの粉末である。例えば、いくつかの実施形態では、増量剤は、マンニトール、スクロース、マルトデキストリン、デキストラン、フィコール又はＰＶＰ－Ｋ３０を含む。いくつかの実施形態では、賦形剤は、トレハロース、マンニトール、スクロース、ソルビトール、デキストラン、ポロキサマー１８８、マルトデキストリン、ＰＶＰ－Ｋ３０、フィコール、クエン酸塩、アルギニン及び／又はヒドロキシプロピル－Ｂ－シクロデキストリンなどの追加の成分を含む。例えば、いくつかの実施形態では、乾燥形態は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶと、賦形剤、例えば増量剤を含む賦形剤、例えば、表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰの１つに提供される配合のストックからの賦形剤とを含有する。いくつかの実施形態では、乾燥形態は、約６％未満（又は約５％未満）の水分含有量を有する（例えば、カールフィッシャー滴定によって決定される）。いくつかの実施形態では、乾燥形態は、約１０％～約８０％（重量）の賦形剤、例えば、増量剤を含む賦形剤を有する。いくつかの実施形態では、乾燥形態は、約１０％～約８０％（重量）の賦形剤、例えば、表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰの１つに提供される配合のストックからの賦形剤を有する。いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶは、乾燥形態の重量で全固形分の約１％～約９９％を構成する。いくつかの実施形態では、乾燥形態は、乾燥形態１ｍｇ当たり少なくとも約１ｅ１０粒子のプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）を有する（例えば、ＮＴＡなど、１ｍｇ当たりの粒子によって決定される）。いくつかの実施形態では、乾燥形態の粒子は、乾燥形態からの再懸濁（例えば、脱イオン水中での再懸濁）後、約１３０ｎｍ～約３００ｎｍの流体力学直径（Ｚ平均、Ｚ_ａｖｅ）を有する（例えば、動的光散乱によって決定される）。

いくつかの実施形態では、溶液及び／又は乾燥形態は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）全細菌（例えば、生細菌、死滅細菌及び／又は弱毒化細菌）を実質的に又は全く含まない、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶを含む。いくつかの実施形態では、溶液及び／又は乾燥形態は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及びプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）全細菌（例えば、生細菌、死滅細菌及び／又は弱毒化細菌）を両方含む。いくつかの実施形態では、溶液及び／又は乾燥形態は、ガンマ線照射されたプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶを含む。いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶは、ＥＶが単離された（例えば、調製された）後にガンマ線照射される。

いくつかの実施形態では、細菌由来のプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及び／又は細菌サンプル中に存在する細菌の数を定量するために、電子顕微鏡法（例えば、超薄凍結切片のＥＭ）を使用して、ＥＶ及び／又は細菌を視覚化し、それらの相対数を数える。代わりに、ナノ粒子追跡分析（ＮＴＡ）、Ｃｏｕｌｔｅｒ計数若しくは動的光散乱（ＤＬＳ）又はこれらの技術の組み合わせを使用する。ＮＴＡ及びＣｏｕｌｔｅｒ計数器は粒子を計数し、そのサイズを示す。ＤＬＳは粒子の粒度分布を示すが、濃度は示さない。細菌の直径は、多くの場合、１～２μｍ（ミクロン）である。全範囲は０．２～２０μｍである。Ｃｏｕｌｔｅｒ計数とＮＴＡの結果を組み合わせると、所与のサンプル中の細菌及び／又は細菌由来のＥＶの数を明らかにすることができる。Ｃｏｕｌｔｅｒ計数により、直径が０．７～１０μｍの粒子の数が明らかになる。ほとんどの細菌及び／又はＥＶサンプルの場合、Ｃｏｕｌｔｅｒ計数のみでサンプル内の細菌及び／又はＥＶの数を明らかにできる。ＮＴＡの場合、Ｎａｎｏｓｉｇｈｔ機器は、ＭａｌｖｅｒｎＰａｎａｎｌｙｔｉｃａｌから入手することができる。例えば、ＮＳ３００は、１０～２０００ｎｍのサイズ範囲の懸濁液中の粒子を視覚化及び測定できる。ＮＴＡでは、例えば、直径５０～１０００ｎｍの粒子の数を数えることができる。ＤＬＳは、およそ１ｎｍ～３μｍの範囲内の様々な直径の粒子の分布を明らかにする。

いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶは、当技術分野で公知の分析方法によって特徴付けられる（Ｊｅｐｐｅｓｅｎ，ｅｔａｌ．Ｃｅｌｌ１７７：４２８（２０１９））。

いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶは、粒子数に基づいて定量される。例えば、ＥＶ調製物の粒子数は、ＮＴＡを使用して測定できる。例えば、ＥＶ調製物の粒子数は、ＺｅｔａｖｉｅｗによってＮＴＡを使用して測定できる。

いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）は、タンパク質、脂質又は炭水化物の量に基づいて定量される。例えば、いくつかの実施形態では、ＥＶ調製物の総タンパク質含有量は、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイ又はＢＣＡを使用して測定される。

いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶは、元の細菌の１つ以上の他の細菌成分から単離される。いくつかの実施形態では、溶液及び／又は乾燥形態は、他の細菌成分を更に含む。

特定の実施形態では、元の細菌から得られたプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ液体調製物は、亜集団の物理的特性（例えば、サイズ、密度、タンパク質含有量及び／又は結合親和性）に基づいて亜集団に分画され得る。次いで、１つ以上のＥＶ亜集団を（例えば、液体調製物として）、本発明の溶液、粉末及び／又は凍結乾燥物に組み込むことができる。

特定の態様では、疾患（例えば、免疫疾患（例えば、自己免疫疾患、炎症性疾患、アレルギー）、ディスバイオシス又は代謝疾患）の処置及び／又は予防に有用な細菌由来のプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶを含む溶液及び／又は乾燥形態（及びその治療用組成物）、並びにそのようなＥＶを作製及び／又は同定する方法、並びに（単独での又は治療薬と組み合わせた、例えば、免疫疾患（例えば、自己免疫疾患、炎症性疾患、アレルギー）、ディスバイオシス又は代謝疾患の処置のための）そのような溶液及び／又は乾燥形態（及びその治療用組成物）を使用する方法が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、治療用組成物は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ及びプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）全細菌（例えば、生細菌、死滅細菌及び／又は弱毒化細菌）を両方含む。いくつかの実施形態では、溶液及び／又は乾燥形態は、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上）の分類群（例えば、綱、目、科、属、種又は株）の細菌に由来するＥＶを含む。いくつかの実施形態では、溶液及び／又は乾燥形態は、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上）の細菌株又は種の細菌に由来するＥＶを含む。いくつかの実施形態では、治療用組成物は、細菌の不存在下（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％又は少なくとも約９９％細菌を含まない）プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶを含む。いくつかの実施形態では、治療用組成物は、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上）の分類群（例えば、綱、目、科、属、種又は株）の細菌に由来するＥＶを含む。いくつかの実施形態では、治療用組成物は、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上）の細菌株又は種の細菌に由来するＥＶを含む。

いくつかの実施形態では、溶液及び／又は乾燥形態は、健康食品若しくは飲料、乳児用食品若しくは飲料、妊婦、スポーツ選手、高齢者若しくは他の特定の集団のための食品若しくは飲料、機能性食品、飲料、特定保健用食品若しくは飲料、栄養補助食品、プロバイオティクス、患者のための食品若しくは飲料又は動物の飼料などの食品（例えば、食品又は飲料）に添加されるか又は組み込まれる。飲食品の具体例としては、ジュース、清涼飲料、茶飲料、飲料調製物、ゼリー飲料及び機能性飲料などの様々な飲料；ビールなどのアルコール飲料；米飯食品、麺、パン及びパスタなどの炭水化物含有食品；魚肉ハム、ソーセージ、魚介類の練り製品などの練り製品；カレー、あんかけ食品、スープなどのレトルト食品；牛乳、乳飲料、アイスクリーム、チーズ及びヨーグルトなどの乳製品；味噌、ヨーグルト、発酵飲料及び漬物などの発酵食品；豆製品；ビスケット、クッキー等を含む様々な菓子製品、キャンディー、チューインガム、グミ及びゼリー、クリームキャラメル、氷菓を含む冷菓；即席スープ、即席豆乳スープなどの即席食品；電子レンジ対応食品；等が挙げられる。更に、粉末、顆粒、錠剤、カプセル、液体、ペースト、ゼリーの形態に調製された健康食品及び飲料も含まれる。

いくつかの実施形態では、溶液及び／又は乾燥形態は、ヒトを含む動物のための食品又は栄養補助食品に添加される。ヒト以外の動物としては特に限定されず、組成物は、様々な家畜、家禽、ペット、実験動物等に使用することができる。動物の具体例としては、ブタ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ニワトリ、アヒル、ダチョウ、シチメンチョウ、イヌ、ネコ、ウサギ、ハムスター、マウス、ラット、サルなどが挙げられるが、これらに限定されない。

治療用組成物
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される溶液及び／又は乾燥形態は、治療用組成物に製剤化される。

特定の実施形態では、本明細書に記載の溶液及び／又は乾燥形態を含む治療用組成物が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、治療用組成物は、本明細書で提供される溶液及び／又は乾燥形態と、薬学的に許容される担体とを含む。いくつかの実施形態では、治療用組成物は、流動化剤、潤滑剤及び／又は希釈剤などの薬学的に許容される賦形剤を含む。

特定の態様では、疾患（例えば、免疫疾患（例えば、自己免疫疾患、炎症性疾患、アレルギー）、ディスバイオシス又は代謝疾患）の処置及び／又は予防に有用な細菌由来のプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶを含む治療用組成物、並びにそのようなＥＶを作製及び／又は同定する方法、並びに（単独での又は治療薬と組み合わせた、例えば、免疫疾患（例えば、自己免疫疾患、炎症性疾患、アレルギー）、ディスバイオシス又は代謝疾患の処置のための）そのような治療用組成物を使用する方法が本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、治療用組成物は、ＥＶ及び全細菌（例えば、生細菌、死滅細菌、弱毒化細菌）を両方含む。いくつかの実施形態では、治療用組成物は、細菌の不存在下（例えば、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％又は少なくとも約９９％細菌を含まない）ＥＶを含む。いくつかの実施形態では、治療用組成物は、分類群に由来する細菌の１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上）に由来するＥＶ及び／又は細菌を含む。いくつかの実施形態では、治療用組成物は、１つ以上の細菌株からのＥＶ及び／又は細菌を含む。いくつかの実施形態では、治療用組成物は、分類群に由来する細菌の１つに由来するＥＶ及び／又は細菌を含む。いくつかの実施形態では、治療用組成物は、細菌株又は細菌種の１つに由来するＥＶ及び／又は細菌を含む。

特定の態様では、対象（例えば、ヒト対象）への投与のための治療用組成物が提供される。いくつかの実施形態では、治療用組成物は、単回投与単位又は複数回投与形式であり得る最終製品を製造するために、追加の活性物質及び／又は不活性物質と組み合わされている。いくつかの実施形態では、治療用組成物は、免疫アジュバント（例えば、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＴＬＲアゴニスト、ＮＯＤアゴニスト）などのアジュバントと組み合わされている。

いくつかの実施形態では、治療用組成物は、少なくとも１つの炭水化物を含む。

いくつかの実施形態では、治療用組成物は、少なくとも１つの脂質を含む。いくつかの実施形態では、脂質は、ラウリン酸（１２：０）、ミリスチン酸（１４：０）、パルミチン酸（１６：０）、パルミトレイン酸（１６：１）、マルガリン酸（１７：０）、ヘプタデセン酸（１７：１）、ステアリン酸（１８：０）、オレイン酸（１８：１）、リノール酸（１８：２）、リノレン酸（１８：３）、オクタデカテトラエン酸（１８：４）、アラキジン酸（２０：０）、エイコセン酸（２０：１）、エイコサジエン酸（２０：２）、エイコサテトラエン酸（２０：４）、エイコサペンタエン酸（２０：５）（ＥＰＡ）、ドコサン酸（２２：０）、ドコセン酸（２２：１）、ドコサペンタエン酸（２２：５）、ドコサヘキサエン酸（２２：６）（ＤＨＡ）及びテトラコサン酸（２４：０）から選択される少なくとも１つの脂肪酸を含む。

いくつかの実施形態では、治療用組成物は、少なくとも１つの補助ミネラル又はミネラル源を含む。ミネラルの例として、塩化物、ナトリウム、カルシウム、鉄、クロム、銅、ヨウ素、亜鉛、マグネシウム、マンガン、モリブデン、リン、カリウム及びセレンが挙げられるが、これらに限定されない。上述したミネラルのいずれかの好適な形態として、可溶性のミネラル塩、わずかに可能性のミネラル塩、不溶性のミネラル塩、キレート化ミネラル、ミネラル複合体、非反応性ミネラル（例えばカルボニルミネラル）及び還元ミネラル並びにこれらの組み合わせが挙げられる。

いくつかの実施形態では、治療用組成物は、少なくとも１つの補助ビタミンを含む。少なくとも１つのビタミンは、脂溶性又は水溶性のビタミンであり得る。好適なビタミンとして、ビタミンＣ、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＢ１２、ビタミンＫ、リボフラビン、ナイアシン、ビタミンＤ、ビタミンＢ６、葉酸、ピリドキシン、チアミン、パントテン酸及びビオチンが挙げられるが、これらに限定されない。上述のいずれかの好適な形態は、ビタミンの塩、ビタミンの誘導体、ビタミンと同一の又は類似の活性を有する化合物及びビタミンの代謝物である。

いくつかの実施形態では、治療用組成物は、賦形剤を含む。好適な賦形剤の非限定的な例としては、緩衝剤、保存料、安定剤、結合剤、圧縮剤、潤滑剤、分散増強剤、崩壊剤、香味剤、甘味料及び着色剤が挙げられる。

いくつかの実施形態では、賦形剤は緩衝剤である。適切な緩衝剤の非限定的な例としては、クエン酸ナトリウム、炭酸マグネシウム、重炭酸マグネシウム、炭酸カルシウム及び重炭酸カルシウムが挙げられる。

いくつかの実施形態では、賦形剤は保存剤を含む。適切な保存剤の非限定的な例としては、アルファトコフェロール及びアスコルビン酸塩などの抗酸化剤並びにパラベン、クロロブタノール及びフェノールなどの抗菌剤が挙げられる。

いくつかの実施形態では、治療用組成物は、賦形剤として結合剤を含む。適切な結合剤の非限定的な例としては、デンプン、アルファ化デンプン、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、セルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、ポリアクリルアミド、ポリビニルオキソアゾリドン、ポリビニルアルコール、Ｃ_１２～Ｃ_１８脂肪酸アルコール、ポリエチレングリコール、ポリオール、糖類、オリゴ糖及びそれらの組み合わせが挙げられる。

いくつかの実施形態では、治療用組成物は、賦形剤として潤滑剤を含む。適切な潤滑剤の非限定的な例としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、硬化植物油、ステロテックス（ｓｔｅｒｏｔｅｘ）、ポリオキシエチレンモノステアレート、タルク、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウム及び軽鉱油が挙げられる。

いくつかの実施形態では、治療用組成物は、賦形剤として分散促進剤を含む。適切な分散剤の非限定的な例としては、高ＨＬＢ乳化界面活性剤として、デンプン、アルギン酸、ポリビニルピロリドン、グアーガム、カオリン、ベントナイト、精製木材セルロース、デンプングリコール酸ナトリウム、イソアモルファスケイ酸塩及び微結晶セルロースが挙げられる。

いくつかの実施形態では、治療用組成物は、賦形剤として崩壊剤を含む。いくつかの実施形態では、崩壊剤は非発泡性崩壊剤である。適切な非発泡性崩壊剤の非限定的な例としては、コーンスターチ、ジャガイモデンプン、それらのアルファ化デンプン及び変性デンプンなどのデンプン、甘味料、ベントナイトなどの粘土、微結晶セルロース、アルギン酸塩、デンプングリコール酸ナトリウム、寒天、グアー、ローカストビーン、カラヤ、ペクチン及びトラガカントなどのガムが挙げられる。いくつかの実施形態では、崩壊剤は発泡性崩壊剤である。適切な発泡性崩壊剤の非限定的な例としては、クエン酸と組み合わせた重炭酸ナトリウム及び酒石酸と組み合わせた重炭酸ナトリウムが挙げられる。

いくつかの実施形態では、治療用組成物は、健康食品若しくは飲料、乳児用食品若しくは飲料、妊婦、スポーツ選手、高齢者若しくは他の特定の集団のための食品若しくは飲料、機能性食品、飲料、特定保健用食品若しくは飲料、栄養補助食品、患者のための食品若しくは飲料又は動物の飼料などの食品（例えば、食品又は飲料）である。飲食品の具体例としては、ジュース、清涼飲料、茶飲料、飲料調製物、ゼリー飲料及び機能性飲料などの様々な飲料；ビールなどのアルコール飲料；米飯食品、麺、パン及びパスタなどの炭水化物含有食品；魚肉ハム、ソーセージ、魚介類の練り製品などの練り製品；カレー、あんかけ食品及び中華スープなどのレトルト食品；スープ；牛乳、乳飲料、アイスクリーム、チーズ及びヨーグルトなどの乳製品；味噌、ヨーグルト、発酵飲料及び漬物などの発酵食品；豆製品；ビスケット、クッキー等を含む様々な菓子製品、キャンディー、チューインガム、グミ及びゼリー、クリームキャラメル、氷菓を含む冷菓；即席スープ、即席豆乳スープなどの即席食品；電子レンジ対応食品；等が挙げられる。更に、粉末、顆粒、錠剤、カプセル、液体、ペースト、ゼリーの形態に調製された健康食品及び飲料も含まれる。

いくつかの実施形態では、治療用組成物は、ヒトを含む動物のための食品である。ヒト以外の動物としては特に限定されず、組成物は、様々な家畜、家禽、ペット、実験動物等に使用することができる。動物の具体例としては、ブタ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ニワトリ、カモ、ダチョウ、アヒル、シチメンチョウ、イヌ、ネコ、ウサギ、ハムスター、マウス、ラット、サルなどが挙げられるが、これらに限定されない。

用量形態
いくつかの実施形態では、乾燥形態を含む治療用組成物は、例えば、経口投与のための固形剤形（「固形用量形態」とも呼ばれる）として製剤化される。いくつかの実施形態では、固形剤形は、乾燥形態に加えて、１つ以上の賦形剤、例えば、薬学的に許容される賦形剤を含む。固形剤形の乾燥形態は、単離されたプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶを含有する。任意選択的に、固形剤形中のプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶはガンマ線照射される。いくつかの実施形態では、固形剤形は、錠剤、小型錠剤、カプセル若しくは粉末；又はこれらの形態の組み合わせ（例えば、カプセル中に含まれる小型錠剤）を含む。

本明細書に記載の固形剤形は、例えば、カプセルであり得る。本明細書に記載される固形剤形は、例えば、錠剤又は小型錠剤であり得る。更に、複数の小型錠剤をカプセル中に入れる（例えば、中に充填する）ことができる。

特定の実施形態では、固形剤形は、カプセルを含む。いくつかの実施形態では、カプセルは、００号、０号、１号、２号、３号、４号又は５号のカプセルである。いくつかの実施形態では、カプセルは、０号のカプセルである。本明細書で使用される場合、カプセルのサイズは、腸溶性コーティングを施す前の錠剤のサイズを指す。いくつかの実施形態では、カプセルは充填した後（及びカプセルを腸溶性コーティングする前）にバンディングされる。いくつかの実施形態では、カプセルは、ＨＰＭＣ系バンディング溶液でバンディングされる。

いくつかの実施形態では、固形剤形は錠剤（＞４ｍｍ）（例えば、５ｍｍ～１７ｍｍ）を含む。例えば、錠剤は５ｍｍ、６ｍｍ、７ｍｍ、８ｍｍ、９ｍｍ、１０ｍｍ、１１ｍｍ、１２ｍｍ、１３ｍｍ、１４ｍｍ、１５ｍｍ、１６ｍｍ、１７ｍｍ又は１８ｍｍの錠剤である。サイズは、当技術分野で公知であるように、錠剤の直径を指す。本明細書で使用される場合、錠剤のサイズは、腸溶性コーティングを施す前の錠剤のサイズを指す。

いくつかの実施形態では、固形剤形は小型錠剤を含む。小型錠剤は、１ｍｍ～４ｍｍのサイズ範囲であり得る。例えば、小型錠剤は、１ｍｍの小型錠剤、１．５ｍｍの小型錠剤、２ｍｍの小型錠剤、３ｍｍの小型錠剤又は４ｍｍの小型錠剤であり得る。サイズは、当技術分野で公知であるように、小型錠剤の直径を指す。本明細書で使用される場合、小型錠剤のサイズは、腸溶性コーティングを施す前の小型錠剤のサイズを指す。

小型錠剤はカプセル中に存在し得る。カプセルは、００号、０号、１号、２号、３号、４号又は５号のカプセルであり得る。小型錠剤を収容するカプセルは、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）又はゼラチンを含み得る。小型錠剤はカプセル内部に存在し得る：カプセル内部の小型錠剤の数は、カプセルのサイズと小型錠剤のサイズによって異なる。例として、０号のカプセルは、３ｍｍの小型錠剤である小型錠剤を３１～３５個（平均、３３個）を収容することができる。いくつかの実施形態では、カプセルは充填した後にバンディングされる。いくつかの実施形態では、カプセルは、ＨＰＭＣ系バンディング溶液でバンディングされる。

溶液及び／又は粉末（例えば、ＥＶ及び増量剤を含む）を含む治療用組成物は、例えば、経口投与又は注射のための懸濁液として製剤化することができる（例えば、粉末は再構成することができ；溶液は希釈することができる）。注射による投与には、静脈内（ＩＶ）投与、筋肉内（ＩＭ）投与及び皮下（ＳＣ）投与が含まれる。懸濁液の場合、ＥＶは、緩衝液、例えば薬学的に許容される緩衝液、例えば生理食塩水又はＰＢＳ中に存在することができる。懸濁液は、１つ以上の賦形剤、例えば、薬学的に許容される賦形剤を含み得る。懸濁液は、例えばスクロース又はグルコースを含み得る。溶液又は粉末（例えば、ＥＶ及び増量剤を含む）中のＥＶは、単離されたＥＶであり得る。任意選択的に、懸濁液内のＥＶにガンマ線照射することもできる。

コーティング：
本明細書に記載される固形剤形（例えば、カプセル、錠剤又は小型錠剤）は、例えば、１層の腸溶性コーティング又は例えば、内側腸溶性コーティング及び外側腸溶性コーティングの２層の腸溶性コーティングで、腸溶性コーティングされ得る。内側腸溶性コーティング及び外側腸溶性コーティングは同一ではない（例えば、内側腸溶性コーティング及び外側腸溶性コーティングは、同一の成分を同一の量で含有しない）。腸溶性コーティングは、例えば小腸内での、治療薬（プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶ、その乾燥形態及び／又は固形剤形など）の放出を可能にする。

小腸内での治療薬の放出は、治療薬が、これらの特定の位置に位置する細胞（例えば、上皮細胞及び／又は免疫細胞）をターゲティングし、その細胞に作用することを可能にし、これにより、消化管内の局部効果を引き起こすことができ、且つ／又は全身効果（例えば、胃腸管外での効果）を引き起こし得る。

ＥＵＤＲＡＧＩＴは、様々な範囲のポリメタクリレート系コポリマーのブランド名である。これには、メタクリル酸及びメタクリル／アクリル酸エステル又はそれらの誘導体に基づくアニオン性、カチオン性及び中性のコポリマーが含まれる。

腸溶性コーティング（例えば、１つの腸溶性コーティング又は内側腸溶性コーティング及び／若しくは外側腸溶性コーティング）で使用することができる他の物質の例としては、セルロースアセテートフタレート（ＣＡＰ）、セルロースアセテートトリメリテート（ＣＡＴ）、ポリ（ビニルアセテートフタレート）（ＰＶＡＰ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート（ＨＰＭＣＰ）、脂肪酸、ワックス、シェラック（アロイリット酸のエステル）、プラスチック、植物繊維、Ｚｅｉｎ、Ａｑｕａ－Ｚｅｉｎ（登録商標）（アルコールを含有しない水性ゼイン製剤）、アミロースデンプン、デンプン誘導体、デキストリン、メチルアクリレート－メタクリル酸コポリマー、セルロースアセテートサクシネート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート（ヒプロメロースアセテートサクシネート）、メチルメタクリレート－メタクリル酸コポリマー及び／又はアルギン酸ナトリウムが挙げられる。

腸溶性コーティング（例えば、１つの腸溶性コーティング又は内部腸溶性コーティング及び／若しくは外部腸溶性コーティング）は、メタクリル酸エチルアクリレート（ＭＡＥ）コポリマー（１：１）を含む。

１つの内部腸溶性コーティングは、メタクリル酸エチルアクリレート（ＭＡＥ）コポリマー（１：１）（ＫｏｌｌｉｃｏａｔＭＡＥ１００Ｐなど）を含み得る。

１つの腸溶性コーティングは、Ｅｕｄｒａｇｉｔコポリマー、例えばＥｕｄｒａｇｉｔＬ（例えば、ＥｕｄｒａｇｉｔＬ１００－５５；ＥｕｄｒａｇｉｔＬ３０Ｄ－５５）、ＥｕｄｒａｇｉｔＳ、ＥｕｄｒａｇｉｔＲＬ、ＥｕｄｒａｇｉｔＲＳ、ＥｕｄｒａｇｉｔＥ又はＥｕｄｒａｇｉｔＦＳ（例えば、ＥｕｄｒａｇｉｔＦＳ３０Ｄ）を含み得る。

腸溶性コーティング（例えば、１つの腸溶性コーティング又は内側腸溶性コーティング及び／若しくは外側腸溶性コーティング）に使用することができる物質の他の例としては、例えば、米国特許第６３１２７２８号明細書；同第６６２３７５９号明細書；同第４７７５５３６号明細書；同第５０４７２５８号明細書；同第５２９２５２２号明細書；同第６５５５１２４号明細書；同第６６３８５３４号明細書；米国特許出願公開第２００６／０２１０６３１号明細書；同第２００８／２００４８２号明細書；同第２００５／０２７１７７８号明細書；同第２００４／００２８７３７号明細書；国際公開第２００５／０４４２４０号パンフレットに記載されているものが挙げられる。

メタクリル酸コポリマー、フタル酸ポリビニルアセテート、コハク酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース及びフタル酸セルロースを含む、本明細書で提供される固形剤形と共に使用できるｐＨ依存性腸溶性ポリマーを提供する、例えば米国特許第９２３３０７４号明細書も参照されたく、好適なメタクリル酸コポリマーとしては、ポリ（メタクリル酸、メタクリル酸メチル）１：１は、例えば、ＥｕｄｒａｇｉｔＬ１００の商品名で販売されており；ポリ（メタクリル酸、アクリル酸エチル）１：１は、例えば、ＥｕｄｒａｇｉｔＬ１００－５５の商品名で販売されており；部分的に中和されたポリ（メタクリル酸、アクリル酸エチル）１：１は、例えば、ＫｏｌｌｉｃｏａｔＭＡＥ－１００Ｐの商品名で販売されており；ポリ（メタクリル酸、メタクリル酸メチル）１：２は、例えば、ＥｕｄｒａｇｉｔＳ１００の商品名で販売されている。

固形用量形態（例えば、カプセル）は、単層コーティング、例えばＨＰＭＣ（ヒドロキシルプロピルメチルセルロース）又はゼラチンなどの非腸溶性コーティングを含み得る。

溶液及び乾燥形態の製造方法
本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶと増量剤を含む賦形剤との溶液を調製する方法も提供する。例えば、いくつかの実施形態では、増量剤は、マンニトール、スクロース、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ６０００などのＰＥＧ）、シクロデキストリン、マルトデキストリン、デキストラン、フィコール又はＰＶＰ－Ｋ３０を含む。いくつかの実施形態では、賦形剤は凍結乾燥保護剤を含む。いくつかの実施形態では、賦形剤は、任意選択的に、トレハロース、マンニトール、スクロース、ソルビトール、デキストラン、ポロキサマー１８８、マルトデキストリン、ＰＶＰ－Ｋ３０、フィコール、クエン酸塩、アルギニン及び／又はヒドロキシプロピル－Ｂ－シクロデキストリンなどの追加の成分を含む。例えば、いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶの液体調製物と、増量剤を含む賦形剤とを組み合わせて、溶液を調製する。例えば、いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶの液体調製物（例えば、細菌培養物（上清又は保持液など）からＥＶを単離することによって得られる）と、増量剤を含む賦形剤、例えば、表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰの１つに提供される配合の賦形剤ストックとを組み合わせて、溶液を調製する。例えば、いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶを含有する液体調製物（例えば、細菌培養物（上清又は保持液など）からＥＶを単離することによって得られる）と、増量剤を含む賦形剤とを組み合わせて、例えば、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶを含有する液体調製物（例えば、細菌培養物（上清又は保持液など）又は保持液からＥＶを単離することによって得られる）を、例えばマンニトールなどの増量剤を含む賦形剤又は表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ若しくはＰの１つに提供される配合の賦形剤ストックの賦形剤と組み合わせて、溶液を調製する。

本開示は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶの乾燥形態を調製する方法も提供する。例えば、いくつかの実施形態では、本方法は、凍結乾燥粉末及び／又は凍結乾燥ケーキなどの凍結乾燥物を調製するために使用される。例えば、いくつかの実施形態では、本方法は、凍結乾燥粉末及び／又は噴霧乾燥粉末などの粉末を調製するために使用される。いくつかの実施形態では、賦形剤は増量剤を含む。例えば、いくつかの実施形態では、増量剤は、マンニトール、スクロース、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ６０００などのＰＥＧ）、シクロデキストリン、マルトデキストリン、デキストラン、フィコール又はＰＶＰ－Ｋ３０を含む。いくつかの実施形態では、賦形剤は凍結乾燥保護剤を含む。いくつかの実施形態では、賦形剤は、任意選択的に、トレハロース、マンニトール、スクロース、ソルビトール、デキストラン、ポロキサマー１８８、マルトデキストリン、ＰＶＰ－Ｋ３０、フィコール、クエン酸塩、アルギニン及び／又はヒドロキシプロピル－Ｂ－シクロデキストリンなどの追加の成分を含む。例えば、いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶを含有する液体調製物（例えば、細菌培養物（上清又は保持液など）からＥＶを単離することによって得られる）を、マンニトール又は表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰの１つに提供される配合の賦形剤ストックの賦形剤など、増量剤を含む賦形剤と組み合わせ、乾燥（例えば、凍結乾燥又は噴霧乾燥）させて、それによって乾燥形態を調製する。いくつかの実施形態では、乾燥形態は、約６％未満、約５％未満、約４％未満、約０．５％～約５％、約１％～約５％、約１％～約４％、約１．５％～約４％、約２％～約４％又は約２％～約３％の水分含有量を有する（例えば、カールフィッシャー滴定によって決定される）。いくつかの実施形態では、乾燥形態は、約１０％～約８０％（重量）の賦形剤、例えば、増量剤を含む賦形剤を有する。いくつかの実施形態では、乾燥形態は、約１０％～約８０％（重量）の賦形剤、例えば、表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰの１つに提供される配合のストックからの賦形剤を有する。いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶは、乾燥形態の重量で全固形分の約１％～約９９％を構成する。いくつかの実施形態では、乾燥形態は、乾燥形態１ｍｇ当たり少なくとも約１ｅ１０粒子のプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）を有する（例えば、ＮＴＡなど、１ｍｇ当たりの粒子によって決定される）。いくつかの実施形態では、乾燥形態中の粒子は、乾燥形態からの再懸濁（例えば、脱イオン水中での再懸濁）後、約１３０ｎｍ～約３００ｎｍの流体力学直径（Ｚ平均、Ｚ_ａｖｅ）を有する（例えば、動的光散乱によって決定される）。

いくつかの実施形態では、乾燥形態は凍結乾燥物である。いくつかの実施形態では、凍結乾燥物は凍結乾燥粉末又は凍結乾燥ケーキである。いくつかの実施形態では、乾燥形態は粉末である。いくつかの実施形態では、粉末は凍結乾燥粉末又は噴霧乾燥粉末である。

いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む溶液を調製する方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、増量剤を含む賦形剤と組み合わせ、それによって溶液を調製すること
を含む。

いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む溶液を調製する方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、増量剤及び凍結乾燥保護剤を含む賦形剤と組み合わせ、それによって溶液を調製すること
を含む。

いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む溶液を調製する方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、凍結乾燥保護剤を含む賦形剤と組み合わせ、それによって溶液を調製すること
を含む。

いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の細胞外小胞（ＥＶ）を含む溶液を調製する方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む液体調製物を、１つ以上の賦形剤を含むストックと組み合わせることであって、ストックが表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰに提供される配合を含み、それによって溶液を調製すること
を含む。

いくつかの実施形態では、乾燥は凍結乾燥を含む。

いくつかの実施形態では、乾燥は噴霧乾燥を含む。

いくつかの実施形態では、本方法は、乾燥形態を追加の成分と組み合わせることを更に含む。いくつかの実施形態では、追加の成分は、賦形剤、例えば流動化剤、潤滑剤及び／又は希釈剤を含む。

いくつかの実施形態では、乾燥は凍結乾燥を含む。

いくつかの実施形態では、乾燥は噴霧乾燥を含む。

いくつかの実施形態では、本方法は、粉末を追加の成分と組み合わせることを更に含む。いくつかの実施形態では、追加の成分は、賦形剤、例えば流動化剤、潤滑剤及び／又は希釈剤を含む。

いくつかの実施形態では、本方法は、噴霧乾燥粉末を追加の成分と組み合わせることを更に含む。いくつかの実施形態では、追加の成分は、賦形剤、例えば流動化剤、潤滑剤及び／又は希釈剤を含む。

いくつかの実施形態では、本方法は、凍結乾燥物を追加の成分と組み合わせることを更に含む。いくつかの実施形態では、追加の成分は、賦形剤、例えば流動化剤、潤滑剤及び／又は希釈剤を含む。

いくつかの実施形態では、本方法は、凍結乾燥粉末を追加の成分と組み合わせることを更に含む。いくつかの実施形態では、追加の成分は、賦形剤、例えば流動化剤、潤滑剤及び／又は希釈剤を含む。

いくつかの実施形態では、乾燥は凍結乾燥を含む。

いくつかの実施形態では、乾燥は噴霧乾燥を含む。

いくつかの実施形態では、乾燥は凍結乾燥を含む。

いくつかの実施形態では、乾燥は噴霧乾燥を含む。

治療用組成物の調製方法
本開示は、治療用組成物を調製する方法も提供する。いくつかの実施形態では、本方法は、本明細書に記載の溶液又は乾燥形態を、流動化剤、潤滑剤及び／又は希釈剤などの薬学的に許容される賦形剤と組み合わせ、それによって治療用組成物を調製することを含む。

本開示は、本明細書に記載の乾燥形態を含有する固形剤形などの治療用組成物を調製する方法も提供する。いくつかの実施形態では、固形剤形はカプセル、錠剤又は小型錠剤である。

本開示は、乾燥形態を含む固形剤形（例えば、経口投与用）（例えば、医薬用途用）を作製する方法も提供する。いくつかの実施形態では、乾燥形態は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細胞外小胞（ＥＶ）と、増量剤を含む賦形剤とを含む。いくつかの実施形態では、乾燥形態は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細胞外小胞（ＥＶ）と、凍結乾燥保護剤を含む賦形剤とを含む。いくつかの実施形態では、乾燥形態は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細胞外小胞（ＥＶ）と、増量剤及び凍結乾燥保護剤を含む賦形剤とを含む。いくつかの実施形態では、乾燥形態は１つ以上の追加の成分も含む。いくつかの実施形態では、乾燥形態は、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤と組み合わされる。いくつかの実施形態では、固形剤形は、例えば本明細書に記載のコーティングで、腸溶性コーティングされる。

いくつかの態様では、固形剤形を作製する方法は、
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細胞外小胞（ＥＶ）を含む乾燥形態をカプセルに充填し、それによってカプセルを調製し、それによって固形剤形を調製すること；
任意選択的に、カプセルに充填する前に、乾燥形態を薬学的に許容される賦形剤と組み合わせること；及び／又は
任意選択的に、カプセルを充填した後、カプセルをバンディングすること（例えば、任意選択的に、カプセルを充填した後、カプセルをバンディングすること）
を含む。

いくつかの態様では、固形剤形を作製する方法は、
本明細書に記載のプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細胞外小胞（ＥＶ）を含む乾燥形態を小型錠剤に圧縮し、それによって小型錠剤を調製し、それによって固形剤形を調製すること；
任意選択的に、圧縮する前に、乾燥形態を薬学的に許容される賦形剤と組み合わせること；
任意選択的に、複数の腸溶性コーティングされた小型錠剤をカプセルに充填すること
を含む。

いくつかの態様では、固形剤形を作製する方法は、
本明細書に記載のプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細胞外小胞（ＥＶ）を含む乾燥形態を錠剤に圧縮し、それによって錠剤を調製し、それによって固形剤形を調製すること；
任意選択的に、圧縮する前に、乾燥形態を薬学的に許容される賦形剤と組み合わせること
を含む。

特定の実施形態では、本方法は、粉末と１つ以上（例えば、１つ、２つ又は３つ）の賦形剤を組み合わせて固形剤形などの治療用組成物にする前に、粉末に湿式造粒を実施することを含む。いくつかの実施形態では、湿式造粒は、（ｉ）粉末を造粒液（例えば、水、エタノール又はイソプロパノールを、単独で又は組み合わせて）と混合することを含む。いくつかの実施形態では、湿式造粒は、粉末を水と混合することを含む。いくつかの実施形態では、湿式造粒は、（ｉｉ）混合された粉末及び造粒液を乾燥させること（例えば、流動層乾燥機で乾燥させること）を含む。いくつかの実施形態では、湿式造粒は、（ｉｉｉ）乾燥粉末及び造粒液を粉砕する（例えば、すり潰す）ことを含む。次いで、粉砕された（例えば、すり潰された）粉末及び造粒液を１つ以上（例えば、１つ、２つ又は３つ）の賦形剤と組み合わせて、固形剤形などの治療用組成物を調製する。いくつかの実施形態では、粉末は凍結乾燥粉末である。いくつかの実施形態では、粉末は噴霧乾燥粉末である。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の乾燥形態を液体（例えば、緩衝液、ジュース又は水）中で再構成して、治療用組成物を調製する。

いくつかの実施形態では、溶液を液体（例えば、緩衝液、ジュース又は水）中に再懸濁（例えば、希釈）して、治療用組成物を調製する。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の乾燥形態を含む治療用組成物は、液体（例えば、緩衝液、ジュース又は水）中で再構成して、懸濁液を調製する。

いくつかの実施形態では、溶液を含む治療用組成物を液体（例えば、緩衝液、ジュース又は水）中に再懸濁（例えば、希釈）して、懸濁液を調製する。

ガンマ線照射：
粉末（例えば、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶの粉末）に１７．５ｋＧｙの放射線単位で周囲温度においてガンマ線を照射する。

凍結バイオマス（例えば、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶ）は、ドライアイスの存在下、２５ｋＧｙの放射線単位でガンマ線照射できる。

追加の治療薬
特定の態様では、本明細書で提供される方法は、単独又は追加の治療薬との組み合わせのいずれかでの、本明細書に記載される治療用組成物の対象への投与を含む。いくつかの実施形態では、追加の治療薬は、免疫抑制剤、抗炎症剤及び／又はステロイドである。

いくつかの実施形態では、追加の治療薬を投与する前（例えば、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３若しくは２４時間前又は少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９若しくは３０日前）に、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む治療用組成物を対象に投与する。いくつかの実施形態では、追加の治療薬を投与した後（例えば、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３若しくは２４時間後又は少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９若しくは３０日後）に、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む治療用組成物を対象に投与する。いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む治療用組成物及び追加の治療薬を、同時又はほぼ同時に対象に投与する（例えば、互いに１時間以内に投与する）。

いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む治療用組成物を対象に投与する前（例えば、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３若しくは２４時間前又は少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９若しくは３０日前）に、抗生物質を対象に投与する。いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む治療用組成物を対象に投与した後（例えば、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３若しくは２４時間前又は少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９若しくは３０日後）に、抗生物質を対象に投与する。いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む治療用組成物及び抗生物質を、同時又はほぼ同時に対象に投与する（例えば、互いに１時間以内に投与する）。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、１つ以上の追加の治療薬との組み合わせでの、本明細書に記載される治療用組成物の投与を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、２つの治療薬の投与を含む。

いくつかの実施形態では、治療薬は抗生物質である。「抗生物質」は、細菌感染を阻害又は予防できる化合物を広く指す。抗生物質は、特定の感染症への使用、作用機序、生体利用可能性又は標的微生物のスペクトル（例えば、グラム陰性菌とグラム陽性菌、好気性菌と嫌気性菌など）を含め、様々に分類することができ、これらは、宿主の特定の領域（「ニッチ」）で特定の細菌を殺すために使用することができる（Ｌｅｅｋｈａ，ｅｔａｌ２０１１．ＧｅｎｅｒａｌＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓｏｆＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌＴｈｅｒａｐｙ．ＭａｙｏＣｌｉｎＰｒｏｃ．８６（２）：１５６－１６７）。特定の実施形態では、抗生物質を使用して、特定のニッチの細菌を選択的に標的とすることができる。いくつかの実施形態では、抗生物質は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む治療用組成物の後に投与される。いくつかの実施形態では、抗生物質は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む治療用組成物の前に投与される。

いくつかの態様では、抗生物質は、それらの殺菌特性又は静菌特性に基づいて選択することができる。殺菌性抗生物質には、細胞壁（例えば、β－ラクタム）、細胞膜（例えば、ダプトマイシン）又は細菌ＤＮＡ（例えば、フルオロキノロン）を破壊する作用機序が含まれる。静菌剤は、細菌の複製を阻害し、スルホンアミド、テトラサイクリン及びマクロライドを含み、タンパク質合成を阻害することによって作用する。更に、一部の薬物は特定の生物では殺菌性であり、他の薬物では静菌性であり得るが、標的生物を知ることで、当業者は適切な特性を有する抗生物質を選択することができる。特定の治療条件では、静菌性抗生物質は殺菌性抗生物質の活性を阻害する。従って、特定の実施形態では、殺菌性抗生物質と静菌性抗生物質とは、組み合わされない。

抗生物質としては、限定されるものではないが、アミノグリコシド、アンサマイシン、カルバセフェム、カルバペネム、セファロスポリン、グリコペプチド、リンコサミド、リポペプチド、マクロライド、モノバクタム、ニトロフラン、オキサゾリドノン（ｏｘａｚｏｌｉｄｏｎｏｎｅ）、ペニシリン、ポリペプチド抗生物質、キノロン、フルオロキノロン、スルホンアミド、テトラサイクリン及び抗マイコバクテリア化合物並びにそれらの組み合わせが挙げられる。

アミノグリコシドとしては、限定されるものではないが、アミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、トブラマイシン、パロモマイシン及びスペクチノマイシンが挙げられる。アミノグリコシドは、例えば、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、シュードモナス・エルギノーザ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）及びフランシセラ・トゥラレンシス（Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ）などのグラム陰性細菌に対して且つ特定の好気性菌に対して有効であるが、偏性／通性嫌気性菌に対してあまり有効ではない。アミノグリコシドは、細菌の３０Ｓ又は５０Ｓリボソームサブユニットに結合し、それによって細菌のタンパク質合成を阻害すると考えられている。

アンサマイシンとしては、限定されるものではないが、ゲルダナマイシン、ハービマイシン、リファマイシン及びストレプトバリシンが挙げられる。ゲルダナマイシン及びハービマイシンは、熱ショックタンパク質９０の機能を阻害又は変更すると考えられている。

カルバセフェムとしては、限定されるものではないが、ロラカルベフが挙げられる。カルバセフェムは、細菌の細胞壁合成を阻害すると考えられている。

カルバペネムとしては、限定されるものではないが、エルタペネム、ドリペネム、イミペネム／シラスタチン及びメロペネムが挙げられる。カルバペネムは、広域抗生物質としてのグラム陽性菌とグラム陰性菌の両方に対して殺菌性がある。カルバペネムは、細菌の細胞壁合成を阻害すると考えられている。

セファロスポリンとしては、限定されるものではないが、セファドロキシル、セファゾリン、セファロチン（Ｃｅｆａｌｏｔｉｎ）、セファロチン（Ｃｅｆａｌｏｔｈｉｎ）、セファレキシン、セファクロル、セファマンドール、セフォキシチン、セフプロジル、セフロキシム、セフィキシム、セフジニル、セフジトレン、セフォペラゾン、セフォタキシム、セフポドキシム、セフタジジム、セフチブテン、セフチゾキシム、セフトリアキソン、セフェピム、セフタロリンフォサミル及びセフトビプロールが挙げられる。選択されたセファロスポリンは、例えば、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）を含むグラム陰性菌及びグラム陽性菌対して有効であり、特定のセファロスポリンは、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ）（ＭＲＳＡ）に対して有効である。セファロスポリンは、細菌細胞壁のペプチドグリカン層の合成を妨害することにより、細菌細胞壁合成を阻害すると考えられている。

糖ペプチドには、限定されるものではないが、テイコプラニン、バンコマイシン及びテラバンシンが含まれる。糖ペプチドは、例えば、ＭＲＳＡ及びクロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）を含む好気性及び嫌気性のグラム陽性菌に対して有効である。糖ペプチドは、細菌細胞壁のペプチドグリカン層の合成を妨害することによって細菌細胞壁の合成を阻害すると考えられている。

リンコサミドとしては、限定されるものではないが、クリンダマイシン及びリンコマイシンが挙げられる。リンコサミドは、例えば、嫌気性菌並びにスタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）及びストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）に対して有効である。リンコサミドは、細菌の５０Ｓリボソームサブユニットに結合し、それによって細菌のタンパク質合成を阻害すると考えられている。

リポペプチドとしては、限定されるものではないが、ダプトマイシンが挙げられる。リポペプチドは、例えば、グラム陽性菌に対して有効である。リポペプチドは、細菌膜に結合し、急速な脱分極を引き起こすと考えられている。

マクロライドとしては、限定されるものではないが、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、ジリスロマイシン、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、トロレアンドマイシン、テリスロマイシン及びスピラマイシンが挙げられる。マクロライドは、例えば、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）及びマイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ）に対して有効である。マクロライドは、細菌又は５０Ｓリボソームサブユニットに結合し、それによって細菌のタンパク質合成を阻害すると考えられている。

モノバクタムとしては、限定されるものではないが、アズトレオナムが挙げられる。モノバクタムは、例えば、グラム陰性菌に対して有効である。モノバクタムは、細菌細胞壁のペプチドグリカン層の合成を妨害することによって細菌細胞壁の合成を阻害すると考えられている。

ニトロフランとしては、限定されるものではないが、フラゾリドン及びニトロフラントインが挙げられる。

オキサゾリドノンとしては、限定されるものではないが、リネゾリド、ポシゾリド、ラデゾリド及びトレゾリドが挙げられる。オキサゾリドノンは、タンパク質合成阻害剤であると考えられている。

ペニシリンとしては、限定されるものではないが、アモキシシリン、アンピシリン、アズロシリン、カルベニシリン、クロキサシリン、ジクロキサシリン、フルクロキサシリン、メズロシリン、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、ピペラシリン、テモシリン及びチカルシリンが挙げられる。ペニシリンは、例えば、グラム陽性菌、通性嫌気性菌、例えばストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ボレリア及びトレポネーマに対して有効である。ペニシリンは、細菌細胞壁のペプチドグリカン層の合成を妨害することによって細菌細胞壁の合成を阻害すると考えられている。

ペニシリンの組み合わせとしては、限定されるものではないが、アモキシシリン／クラブラン酸塩、アンピシリン／スルバクタム、ピペラシリン／タゾバクタム及びチカルシリン／クラブラン酸塩が挙げられる。

ポリペプチド抗生物質としては、限定されるものではないが、バシトラシン、コリスチン及びポリミキシンＢ及びＥが挙げられる。ポリペプチド抗生物質は、例えば、グラム陰性菌に対して有効である。特定のポリペプチド抗生物質は、細菌細胞壁のペプチドグリカン層の合成に関与するイソプレニルピロリン酸を阻害すると考えられているが、細菌の対イオンを置き換えることによって細菌の外膜を不安定にするものもある。

キノロン及びフルオロキノロンとしては、限定されるものではないが、シプロフロキサシン、エノキサシン、ガチフロキサシン、ゲミフロキサシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、モキシフロキサシン、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、オフロキサシン、トロバフロキサシン、グレパフロキサシン、スパルフロキサシン及びテマフロキサシンが挙げられる。キノロン／フルオロキノロンは、例えば、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）及びナイセリア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）に対して有効である。キノロン／フルオロキノロンは、細菌のＤＮＡジャイレース又はトポイソメラーゼＩＶを阻害し、それによってＤＮＡの複製及び転写を阻害すると考えられている。

スルホンアミドとしては、限定されるものではないが、マフェニド、スルファセタミド、スルファジアジン、スルファジアジン銀、スルファジメトキシン、スルファメチゾール、スルファメトキサゾール、スルファニルイミド、スルファサラジン、スルフイソキサゾール、トリメトプリム－スルファメトキサゾール（コトリモキサゾール）及びスルホンアミドクリソイジンが挙げられる。スルホンアミドは、ジヒドロプテロイン酸合成酵素の競合的阻害によって葉酸合成を阻害し、それによって核酸合成を阻害すると考えられている。

テトラサイクリンとしては、限定されるものではないが、デメクロサイクリン、ドキシサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン及びテトラサイクリンが挙げられる。テトラサイクリンは、例えば、グラム陰性菌に対して有効である。テトラサイクリンは、細菌の３０Ｓリボソームサブユニットに結合し、それによって細菌のタンパク質合成を阻害すると考えられている。

抗マイコバクテリア化合物としては、限定されるものではないが、クロファジミン、ダプソン、カプレオマイシン、サイクロセリン、エタンブトール、エチオナミド、イソニアジド、ピラジナミド、リファンピシン、リファブチン、リファペンチン及びストレプトマイシンが挙げられる。

好適な抗生物質としては、アルスフェナミン、クロラムフェニコール、フォスフォマイシン、フシジン酸、メトロニダゾール、ムピロシン、プラテンシマイシン、キヌプリスチン／ダルフォプリスチン、チゲサイクリン、チニダゾール、トリメトプリム・アモキシシリン／クラブラン酸塩、アンピシリン／スルバクタム、アンホマイシンリストセチン、アジスロマイシン、バシトラシン、ブフォリンＩＩ、カルボマイシン、セクロピンＰ１、クラリスロマイシン、エリスロマイシン、フラゾリドン、フシジン酸、フシジン酸ナトリウム、グラミシジン、イミペネム、インドリシジン、ジョサマイシン、マガイナンＩＩ、メトロニダゾール、ニトロイミダゾール、ミカマイシン、ムタシンＢ－Ｎｙ２６６、ムタシンＢ－ＪＨｌ１４０、ムタシンＪ－Ｔ８、ナイシン、ナイシンＡ、ノボビオシン、オレアンドマイシン、オストレオグリシン、ピペラシリン／タゾバクタム、プリスチナマイシン、ラモプラニン、ラナレキシン、ロイテリン、リファキシミン、ロザマイシン、ロサラマイシン、スペクチノマイシン、スピラマイシン、スタフィロマイシン、ストレプトグラミン、ストレプトグラミンＡ、シネルギスチン、タウロリジン、テイコプラニン、テリスロマイシン、チカルシリン／クラブラン酸、トリアセチルオレアンドマイシン、タイロシン、チロシジン、チロトリシン、バンコマイシン、ベママイシン（ｖｅｍａｍｙｃｉｎ）及びバージニアマイシンも挙げられる。

いくつかの実施形態では、追加の治療薬は、免疫抑制剤、ＤＭＡＲＤ、疼痛制御剤、ステロイド、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）又はサイトカイン拮抗薬及びこれらの組み合わせである。代表的な薬剤として下記が挙げられるが、これらに限定されない：シクロスポリン、レチノイド、副腎皮質ステロイド、プロピオン酸誘導体、酢酸誘導体、エノール酸誘導体、フェナム酸誘導体、Ｃｏｘ－２阻害剤、ルミラコキシブ、イブプロフェン、サリチル酸コリンマグネシウム、フェノプロフェン、サルサラート、ジフニサル（ｄｉｆｕｎｉｓａｌ）、トルメチン、ケトプロフェン、フルルビプロフェン、オキサプロジン、インドメタシン、スリンダク、エトドラク、ケトロラック、ナブメトン、ナプロキセン、バルデコキシブ、エトリコキシブ、ＭＫ０９６６；ロフェコキシブ、アセトミノフェン、セレコキシブ、ジクロフェナク、トラマドール、ピロキシカム、メロキシカム、テノキシカム、ドロキシカム、ロルノキシカム、イソキシカム、メフェナム酸、メクロフェナム酸、フルフェナム酸、トルフェナム酸、バルデコキシブ、パレコキシブ、エトドラク、インドメタシン、アスピリン、イブプロフェン、フィロコキシブ、メトトレキサート（ＭＴＸ）、抗マラリア剤（例えば、ヒドロキシクロロキン及びクロロキン）、スルファサラジン、レフルノミド、アザチオプリン、シクロスポリン、金塩、ミノサイクリン、シクロホスファミド、Ｄ－ペニシラミン、ミノサイクリン、オーラノフィン、タクロリムス、ミオクリシン、クロラムブシル、ＴＮＦα拮抗薬（例えば、ＴＮＦα拮抗薬又はＴＮＦα受容体拮抗薬）、例えばアダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ（登録商標））、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標）；ＴＡ－６５０）、セルトリズマブペゴル（Ｃｉｍｚｉａ（登録商標）；ＣＤＰ８７０）、ゴリムマブ（Ｓｉｍｐｏｍ（登録商標）；ＣＮＴＯ１４８）、アナキンラ（Ｋｉｎｅｒｅｔ（登録商標））、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）；ＭａｂＴｈｅｒａ（登録商標））、アバタセプト（Ｏｒｅｎｃｉａ（登録商標））、トシリズマブ（ＲｏＡｃｔｅｍｒａ／Ａｃｔｅｍｒａ（登録商標））、インテグリン拮抗薬（ＴＹＳＡＢＲＩ（登録商標）（ナタリズマブ））、ＩＬ－１拮抗薬（ＡＣＺ８８５（イラリス））、アナキンラ（Ｋｉｎｅｒｅｔ（登録商標）））、ＣＤ４拮抗薬、ＩＬ－２３拮抗薬、ＩＬ－２０拮抗薬、ＩＬ－６拮抗薬、ＢＬｙＳ拮抗薬（例えば、アタシセプト、Ｂｅｎｌｙｓｔａ（登録商標）／ＬｙｍｐｈｏＳｔａｔ－Ｂ（登録商標）（ベリムマブ））、ｐ３８阻害剤、ＣＤ２０拮抗薬（オクレリズマブ、オファツムマブ（Ａｒｚｅｒｒａ（登録商標）））、インターフェロンγ拮抗薬（フォントリズマブ）、プレドニゾロン、プレドニゾン、デキサメタゾン、コルチゾール、コルチゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、ベタメタゾン、トリアムシノロン、ベクロメタゾン、フルドロコルチゾン、デオキシコルチコステロン、アルドステロン、ドキシサイクリン、バンコマイシン、ピオグリタゾン、ＳＢＩ－０８７、ＳＣＩＯ－４６９、Ｃｕｒａ－１００、オンコキシン＋ビウシド（Ｏｎｃｏｘｉｎ＋Ｖｉｕｓｉｄ）、ＴｗＨＦ、メトキサレン、ビタミンＤ－エルゴカルシフェロール、ミルナシプラン、パクリタキセル、ロージングタゾン、タクロリムス（Ｐｒｏｇｒａｆ（登録商標））、ＲＡＤＯＯｌ、ラパミューン、ラパマイシン、フォスタマチニブ、フェンタニル、ＸＯＭＡ０５２、フォスタマチニブ二ナトリウム、ロシグリタゾン、クルクミン（Ｌｏｎｇｖｉｄａ（商標））、ロスバスタチン、マラビロク、ラミピニル（ｒａｍｉｐｎｌ）、ミルナシプラン、コビプロストン、ソマトロピン、ｔｇＡＡＣ９４遺伝子治療用ベクター、ＭＫ０３５９、ＧＷ８５６５５３、エソメプラゾール、エベロリムス、トラスツズマブ、ＪＡＫｌ阻害剤及びＪＡＫ２阻害剤、パンＪＡＫ阻害剤、例えば四環系ピリドン６（Ｐ６）、３２５、ＰＦ－９５６９８０、デノスマブ、ＩＬ－６拮抗薬、ＣＤ２０拮抗薬、ＣＴＬＡ４拮抗薬、ＩＬ－８拮抗薬、ＩＬ－２１拮抗薬、ＩＬ－２２拮抗薬、インテグリン拮抗薬（Ｔｙｓａｒｂｒｉ（登録商標）（ナタリズマブ））、ＶＧＥＦ拮抗薬、ＣＸＣＬ拮抗薬、ＭＭＰ拮抗薬、ディフェンシン拮抗薬、ＩＬ－１拮抗薬（例えばＩＬ－１β拮抗薬）並びにＩＬ－２３拮抗薬（例えば、レセプターデコイ、拮抗性抗体等）。

いくつかの実施形態では、追加の治療薬は、免疫抑制剤である。免疫抑制剤の例として下記が挙げられるが、これらに限定されない：副腎皮質ステロイド、メサラジン、メサラミン、スルファサラジン、スルファサラジン誘導体、免疫抑制薬、シクロスポリンＡ、メルカプトプリン、アザチオプリン、プレドニゾン、メトトレキサート、抗ヒスタミン薬、グルココルチコイド、エピネフリン、テオフィリン、クロモグリク酸ナトリウム、抗ロイコトリエン、鼻炎のための抗コリン薬、ＴＬＲ拮抗薬、インフラマソーム阻害剤、抗コリン性うっ血除去薬、肥満細胞安定化薬、モノクローナル抗ＩｇＥ抗体、ワクチン（例えば、アレルゲンの量の徐々に増加するワクチン接種に使用されるワクチン）、サイトカイン阻害剤、例えば抗ＩＬ－６抗体、ＴＮＦ阻害剤、例えばインフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴル、ゴリムマブ又はエタネルセプト及びこれらの組み合わせ。

投与
特定の態様では、本明細書に記載の治療用組成物（例えば、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来の治療用組成物ＥＶ）を対象に送達する方法が本明細書に提供される。本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、治療用組成物を追加の治療薬の投与と共に投与する。いくつかの実施形態では、治療用組成物は、追加の治療薬と共製剤化されたプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む。いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む治療用組成物は、追加の治療薬と共投与される。いくつかの実施形態では、追加の治療薬を、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む治療用組成物の投与前（例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０若しくは５５分前、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２若しくは２３時間前又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３若しくは１４日前）に対象に投与する。いくつかの実施形態では、追加の治療薬を、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む治療用組成物の投与後（例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０若しくは５５分後、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２若しくは２３時間後又は約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３若しくは１４日後）に対象に投与する。いくつかの実施形態では、同じ送達様式を使用して、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む治療用組成物及び追加の治療薬の両方を送達する。いくつかの実施形態では、異なる送達様式を使用して、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶ及び追加の治療薬を含む治療用組成物を投与する。例えば、いくつかの実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む治療用組成物は経口投与され、追加の治療薬は注射（例えば、静脈内及び／又は筋肉内注射）により投与される。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の治療用組成物は、１日１回投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の治療用組成物は、１日２回投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の治療用組成物は、１日用量のために製剤化される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の治療用組成物は、１日２回の用量で製剤化され、ここで、各用量は１日用量の半分である。

投与レジメンは、様々な方法及び量のいずれかであり得、且つ既知の臨床学的因子に従って当業者によって決定され得る。医学分野で既知であるように、任意の一患者のための投与量は多くの因子に依存し得、例えば対象の種、サイズ、体表面積、年齢、性別、免疫能力及び全体的な健康、投与する特定の微生物、投与の持続期間及び経路、例えば疾患の種類及び段階並びに他の化合物（例えば、同時又はほぼ同時に投与する薬剤）に依存し得る。上記の因子に加えて、そのようなレベルは、当業者によって決定され得るように、微生物の感染力及び微生物の性質の影響を受け得る。本方法では、微生物の適切な最小投与量レベルは、微生物が生存し、増殖し、且つ複製するのに十分なレベルであり得る。本明細書に記載のプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶを含む治療用組成物の用量は、剤形、投与経路、標的疾患の程度又は段階及び同類のものに従って適切に設定又は調整され得る。例えば、薬剤の一般的な有効用量は、０．０１ｍｇ／体重ｋｇ／日～１０００ｍｇ／体重ｋｇ／日、０．１ｍｇ／体重ｋｇ／日～１０００ｍｇ／体重ｋｇ／日、０．５ｍｇ／体重ｋｇ／日～５００ｍｇ／体重ｋｇ／日、１ｍｇ／体重ｋｇ／日～１００ｍｇ／体重ｋｇ／日又は５ｍｇ／体重ｋｇ／日～５０ｍｇ／体重ｋｇ／日の範囲であり得る。この有効用量は、０．０１、０．０５、０．１、０．５、１、２、３、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、５００若しくは１０００ｍｇ／体重ｋｇ／日又はより多くであり得るが、この用量はこれらに限定されない。

いくつかの実施形態では、対象に投与する用量は、疾患（例えば、免疫疾患（例えば、自己免疫疾患、炎症性疾患、アレルギー）、ディスバイオシス又は代謝性疾患）を予防するのに、疾患の発症を遅延させるか、又は疾患の進行を遅らせるか若しくは停止させるか、又は疾患の１つ以上の症状を緩和するのに十分である。投与量は、用いる特定の薬剤（例えば、治療薬）の強度並びに対象の年齢、種、病態及び体重を含む様々な因子に依存することを当業者は理解するであろう。用量のサイズは、投与の経路、タイミング及び頻度並びに特定の治療薬の投与に伴う可能性があるあらゆる有害な副作用及び所望される生理学的効果の存在、性質及び程度によっても決定されるであろう。

好適な用量及び投与レジメンを、当業者に既知の従来の範囲発見技術によって決定し得る。一般に、治療は、化合物の適切な用量未満である、より少ない投与量で開始する。その後、投与量は、この状況下で最適な効果に達するまで少しずつ増加させる。有効な投与量及び治療プロトコルを、例えば実験動物での低用量から始めて、次いで効果をモニタリングしつつ投与量を増加させ、更に投与量レジメンを体系的に変えることにより、日常的で従来の手段によって決定し得る。一般には、実験動物を使用して体重１キログラム当たりの生物活性剤の最大耐量（「ＭＴＤ」）を決定する。当業者は、ヒトを含む他の種において、毒性を回避しつつ有効性のために用量を定期的に推定する。

上記に従い、治療用途において、本発明に従って使用される治療薬の用量は、選択された用量に影響を与える他の要因の中で、活性剤、レシピエント患者の年齢、体重及び臨床状態並びに治療を行う臨床医又は開業医の経験及び判断に依存して変化する。別の例として、用量は、対象が治療されている疾患の進行の遅延を引き起こすのに十分であるべきであり、好ましくは対象が治療されている疾患の１つ以上の症状を改善するのに十分であるべきである。

個別の投与は、２回以上の投与（２回、３回、４回、５回又は６回の投与を含む）のいずれかの数を含み得る。当業者は、本明細書で提供される治療方法をモニタリングするための当技術分野で既知の方法及び他のモニタリング方法に従って、１回以上の追加の投与を実施するための投与の数又はこの投与の実施の望ましさを容易に決定し得る。従って、本明細書で提供される方法は、治療用組成物の１回以上の投与を対象にもたらす方法を含み、投与回数は、対象をモニタリングし、このモニタリングの結果に基づいて、１回以上の追加の投与をもたらすかどうかを決定することにより、決定し得る。１回以上の追加の投与をもたらすかどうかの決定は、様々なモニタリング結果に基づき得る。

投与間の間隔は、様々な期間のいずれかであり得る。この投与間の間隔は、投与回数、対象が免疫反応を開始するための期間に関して説明されているように、モニタリング工程を含む様々な因子のいずれかの関数であり得る。一例では、この期間は対象が免疫反応を開始するための期間の関数であり得、例えば、この期間は、対象が免疫反応を開始するための期間超であり得、例えば約１週間超、約１０日超、約２週間超又は約１ヶ月超であり得、別の例では、この期間は対象が免疫反応を開始するための期間未満であり得、例えば約１週間未満、約１０日未満、約２週間未満又は約１カ月未満であり得る。

いくつかの実施形態では、本明細書で記載される治療用組成物と組み合わせた追加の治療薬の送達により、有害作用が低減され、且つ／又は追加の治療薬の有効性が改善される。

本明細書で記載される追加の治療薬の有効用量は、患者への毒性が最小な、特定の患者、組成物及び投与様式に対して所望の治療反応を達成するのに有効な追加の治療薬の量である。有効投与量レベルは、本明細書で説明されている方法を使用して特定され得、且つ様々な薬物動態学的因子（投与される特定の組成物の活性、投与経路、投与期間、用いられる特定の化合物の排泄速度、治療の持続期間、用いられる特定の組成物と組み合わせて使用される他の薬剤、化合物及び／又は物質、治療される患者の年齢、性別、体重、状態、全体的な健康及び過去の病歴並びに医療分野で公知の類似の因子を含む）に依存するであろう。一般に、追加の治療薬の有効用量は、治療効果を生じるのに有効な最低用量である追加の治療薬の量であろう。そのような有効用量は一般に、上記で説明されている因子に依存するであろう。

追加の治療薬の毒性は、治療中又は後に対象が経験する有害作用のレベルである。追加の治療の毒性と関連する有害事象として、下記が挙げられる、これらに限定されない：腹痛、胃酸過多、呑酸、アレルギー反応、脱毛、アナフィラキシー、貧血症、不安、食欲不振、関節痛、無力症、運動失調、高窒素血症、平衡の欠如、骨痛、出血、血餅、低血圧、高血圧、呼吸困難、気管支炎、挫傷、低白血球数、低赤血球数、低血小板数、心毒性、膀胱炎、出血性膀胱炎、不整脈、心臓弁膜症、心筋症、冠動脈疾患、白内障、中枢神経毒性、認知障害、錯乱、結膜炎、便秘、咳嗽、筋痙攣、膀胱炎、深部静脈血栓症、脱水、うつ病、下痢、眩暈、口渇、乾燥皮膚、消化不良、呼吸困難、浮腫、電解質異常、食道炎、疲労、生殖能力の欠如、発熱、鼓腸、潮紅、胃逆流、胃食道逆流症、生殖器痛、顆粒球減少症、女性化乳房、緑内障、脱毛、手足症候群、頭痛、難聴、心不全、心臓の動悸、胸やけ、血腫、出血性膀胱炎、肝毒性、高アミラーゼ血症、高カルシウム血症、高クロール血症、高血糖、高カリウム血症、高リパーゼ血症、高マグネシウム血症、高ナトリウム血症、高リン酸血症、色素増加症、高トリグリセリド血症、高尿酸血症、低アルブミン血症、低カルシウム血症、低クロール血症、低血糖症、低カリウム血症、低マグネシウム血症、低ナトリウム血症、低リン酸血症、勃起不全、感染、注射部位反応、不眠症、鉄欠乏症、そう痒、関節痛、腎不全、白血球減少症、肝機能障害、記憶喪失、閉経、口の痛み、粘膜炎、筋痛、筋肉痛、骨髄抑制、心筋炎、好中球減少性発熱、吐き気、腎毒性、好中球減少症、鼻血、しびれ、聴器毒性、疼痛、手掌足底感覚異常症、汎血球減少症、心膜炎、末梢神経障害、咽頭炎、羞明、光線過敏症、肺炎、間質性肺炎、タンパク尿症、肺塞栓症、肺線維症、肺毒性、発疹、速い心臓の鼓動、直腸出血、不穏状態、鼻炎、発作、息切れ、副鼻腔炎、血小板減少症、耳鳴、尿路感染、腟出血、腟乾燥、回転性めまい、水貯留、脱力、体重減少、体重増加及び口腔乾燥症。一般に、治療を通して達成される患者への利益が、治療に起因して患者が経験する有害事象を上回る場合、毒性は、許容される。

免疫障害
いくつかの実施形態では、本明細書で記載される方法及び治療用組成物は、病理学的免疫反応に関連する疾患又は障害（例えば、自己免疫疾患、アレルギー反応及び／又は炎症性疾患）の治療又は予防に関する。いくつかの実施形態では、この疾患又は障害は、炎症性腸疾患（例えば、クローン病又は潰瘍性大腸炎）である。いくつかの実施形態では、疾患又は障害は乾癬である。いくつかの実施形態では、疾患又は障害はアトピー性皮膚炎である。

本明細書で記載される方法を使用して、それを必要とするあらゆる対象を治療するこができる。本明細書で使用する場合、「それを必要とする対象」は、病理学的免疫反応に関連する疾患又は障害（例えば、炎症性腸疾患）を有するあらゆる対象及びそのような疾患又は障害を獲得する可能性が高いあらゆる対象を含む。

本明細書で記載される治療用組成物は、例えば、自己免疫疾患、例えば慢性炎症性腸疾患、全身性エリテマトーデス、乾癬、マックル・ウェルズ症候群、関節リウマチ、多発性硬化症若しくは橋本病；アレルギー性疾患、例えば食物アレルギー、花粉症若しくは喘息；感染性疾患、例えばクロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）による感染；炎症性疾患、例えばＴＮＦ媒介型炎症性疾患（例えば、胃腸管の炎症性疾患、例えば嚢炎、心臓血管の炎症状態、例えばアテローム性動脈硬化症若しくは炎症性肺疾患、例えば慢性閉塞性肺疾患）；組織拒絶が生じる可能性がある臓器移植若しくは他の状況での拒絶を抑制するための治療用（例えば、医薬）組成物；免疫機能を改善するためのサプリメント、食物若しくは飲料；又は免疫細胞の増殖若しくは機能を抑制するための試薬を予防するか又は治療する（有害作用を部分的に又は完全に低減する）ための医薬組成物として使用することができる。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、炎症の治療に有用である。特定の実施形態では、下記で論じられるように、身体のあらゆる組織及び臓器の炎症としては、筋骨格の炎症、血管の炎症、神経の炎症、消化器系の炎症、眼の炎症、生殖器系の炎症及び他の炎症が挙げられる。いくつかの実施形態では、炎症はＴｈ１媒介型炎症を含む。いくつかの実施形態では、炎症はＴｈ２媒介型炎症（喘息又はアトピー性皮膚炎によるものなど）を含む。いくつかの実施形態では、炎症はＴｈ１７媒介型炎症（乾癬によるものなど）を含む。

筋骨格系の免疫障害としては、骨格関節（手、手首、肘、肩、顎、脊椎、首、臀部、膝、足首及び足の関節を含む）に影響を及ぼす病態並びに腱等の骨格に筋肉を結びつける組織に影響を及ぼす病態が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書で記載される方法及び組成物で治療され得るそのような免疫障害の例としては、下記が挙げられるが、これらに限定されない：関節炎（例えば、骨関節炎、関節リウマチ、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、急性及び慢性の感染性関節炎、痛風及び偽痛風と関連する関節炎並びに若年性特発性関節炎を含む）、腱炎、滑膜炎、腱鞘炎、滑液包炎、結合織炎（線維筋痛症）、上顆炎、筋炎並びに骨炎（例えば、パジェット病、恥骨骨炎及び嚢胞性線維性骨炎を含む）。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、乾癬の処置に有用である。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法は、アトピー性皮膚炎の処置に有用である。

眼の免疫障害は、まぶたを含む眼のあらゆる構造に影響を及ぼす免疫障害を指す。本明細書で記載される方法及び組成物で治療され得る眼の免疫障害の例としては、眼瞼炎、眼瞼皮膚弛緩症、結膜炎、涙腺炎、角膜炎、乾性角結膜炎（ドライアイ）、強膜炎、睫毛乱生及びぶどう膜炎が挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書に記載される方法及び組成物で治療され得る神経系の免疫障害の例としては、脳炎、ギラン・バレー症候群、髄膜炎、神経性筋強直症、ナルコレプシー、多発性硬化症、脊髄炎及び統合失調症が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書に記載される方法及び組成物で治療され得る血管系又はリンパ系の炎症の例としては、関節硬化症、関節炎、静脈炎、血管炎及びリンパ管炎が挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書に記載される方法及び治療用組成物で治療され得る消化器系の免疫障害の例としては、胆管炎、胆嚢炎、腸炎、小腸結腸炎、胃炎、胃腸炎、炎症性腸疾患、回腸炎及び直腸炎が挙げられるが、これらに限定されない。炎症性腸疾患としては、例えば、関連疾患の群の特定の当技術分野で認められた形態が挙げられる。炎症性腸疾患のいくつかの主要な形態が知られており、この障害の最も一般的なものはクローン病（局所性腸疾患、例えば不活性な形態及び活性な形態）及び潰瘍性大腸炎（例えば、不活性な形態及び活性な形態）である。加えて、この炎症性腸疾患には、過敏性腸症候群、顕微鏡的大腸炎、リンパ球性－形質細胞性腸炎、セリアック病、コラーゲン大腸炎、リンパ球性大腸炎及び好酸球性腸炎が含まれる。ＩＢＤの他のあまり一般的ではない形態としては、不確定大腸炎、偽膜性大腸炎（壊死性大腸炎）、虚血性炎症性腸疾患、ベーチェット病、サルコイドーシス、強皮症、ＩＢＤ関連異形成、異形成関連の腫瘤又は病変及び原発性硬化性胆管炎が挙げられる。

本明細書に記載される方法及び治療用組成物で治療され得る生殖器系の免疫障害の例として、子宮頸管炎、絨毛羊膜炎、子宮内膜炎、精巣上体炎、臍炎、卵巣炎、精巣炎、卵管炎、卵管卵巣膿瘍、尿道炎、腟炎、外陰炎及び外陰部痛が挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書に記載される方法及び治療用組成物を使用して、炎症性成分を有する自己免疫病態を治療し得る。そのような病態としては、下記が挙げられるが、これらに限定されない：急性播種性全身性脱毛症、ベーチェット病、シャーガス病、慢性疲労症候群、自律神経障害、脳脊髄炎、強直性脊椎炎、再生不良性貧血、化膿性汗腺炎、自己免疫性肝炎、自己免疫性卵巣炎、セリアック病、クローン病、１型糖尿病、巨細胞性動脈炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本病、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、川崎病、紅斑性狼瘡、顕微鏡的大腸炎、顕微鏡的多発動脈炎、混合性結合組織病、マックル・ウェルズ症候群、多発性硬化症、重症筋無力症、眼球クローヌス・ミオクローヌス症候群、視神経炎、オード甲状腺炎、天疱瘡、結節性多発動脈炎、多発性筋痛、関節リウマチ、ライター症候群、シェーグレン症候群、側頭動脈炎、ウェゲナー肉芽腫症、温式自己免疫性溶血性貧血、間質性膀胱炎、ライム病、モルフェア、乾癬、サルコイドーシス、強皮症、潰瘍性大腸炎及び白斑。

本明細書に記載される方法及び治療用組成物を使用して、炎症性成分を有するＴ細胞媒介型過敏性疾患を治療し得る。そのような病態としては、接触過敏症、接触性皮膚炎（ツタウルシに起因するものを含む）、じんま疹、皮膚アレルギー、呼吸アレルギー（枯草熱、アレルギー性鼻炎、チリダニアレルギー）及びグルテン過敏性腸症（セリアック病）が挙げられるが、これらに限定されない。

本方法及び治療用組成物で治療され得る他の免疫障害としては、例えば下記が挙げられる；虫垂炎、皮膚炎、皮膚筋炎、心内膜炎、結合織炎、歯肉炎、舌炎、肝炎、化膿性汗腺炎、虹彩炎、喉頭炎、乳腺炎、心筋炎、腎炎、耳炎、膵炎、耳下腺炎、心膜炎、腹膜炎、咽頭炎、胸膜炎、間質性肺炎、前立腺炎、腎盂腎炎及び口内炎、移植片拒絶（例えば、腎臓、肝臓、心臓、肺、膵臓（例えば膵島細胞）、骨髄、角膜、小腸、皮膚同種移植片（ｓｋｉｎａｌｌｏｇｒａｆｔ）、皮膚同種移植片（ｓｋｉｎｈｏｍｏｇｒａｆｔ）及び心臓弁異種移植片等の臓器、血清病及び移植片対宿主病を含む）、急性膵炎、慢性膵炎、急性呼吸促迫症候群、セザール症候群、先天性副腎過形成、非化膿性甲状腺炎、癌と関連する高カルシウム血症、天疱瘡、水疱性ヘルペス状皮膚炎、重度の多形性紅斑、剥離性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、季節性の又は通年性のアレルギー性鼻炎、気管支喘息、接触性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、薬物過敏症反応、アレルギー性結膜炎、角膜炎、眼部帯状疱疹、虹彩炎及び虹彩毛様体炎、脈絡網膜炎、視神経炎、症候性サルコイドーシス、電撃性の又は播種性の肺結核化学療法、成人の特発性血小板減少性紫斑病、成人の続発性血小板減少症、後天性の（自己免疫）溶血性貧血、成人の白血病及びリンパ腫、子供の急性白血病、限局性腸炎、自己免疫血管炎、多発性硬化症、慢性閉塞性肺疾患、固形臓器移植拒絶、敗血症。好ましい治療としては、移植拒絶、関節リウマチ、乾癬性関節炎、多発性硬化症、１型糖尿病、喘息、炎症性大腸疾患、全身性紅斑性狼瘡、乾癬、慢性障害肺疾患及び感染状態を伴う炎症（例えば敗血症）の治療が挙げられる。

代謝性障害
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法及び治療用組成物は、代謝性疾患又は障害、例えばＩＩ型糖尿病、耐糖能異常、インスリン抵抗性、肥満症、高血糖症、高インスリン血症、脂肪肝、非アルコール性脂肪性肝炎、高コレステロール血症、高血圧症、高リポタンパク血症、高脂血症、高トリグリセリド血症、ケトアシドーシス、高血糖症、血栓性障害、脂質異常症、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）又は関連疾患などの治療又は予防に関する。いくつかの実施形態では、関連疾患は、心臓血管疾患、アテローム性動脈硬化症、腎疾患、腎症、糖尿病性神経障害、糖尿病性網膜症、性的機能不全、皮膚症、消化不良症又は浮腫である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法及び治療用組成物は、ＮＡＦＬＤ及びＮＡＳＨの治療に関する。

本明細書で記載される方法を使用して、それを必要とするあらゆる対象を治療するこができる。本明細書で使用される場合、「それを必要とする対象」は、代謝性疾患又は障害を有するあらゆる対象及びそのような疾患又は障害を獲得する可能性が高いあらゆる対象を含む。

本明細書に記載される治療用組成物は、例えば、代謝性疾患、例えばＩＩ型糖尿病、耐糖能異常、インスリン抵抗性、肥満症、高血糖症、高インスリン血症、脂肪肝、非アルコール性脂肪性肝炎、高コレステロール血症、高血圧症、高リポタンパク血症、高脂血症、高トリグリセリド血症、ケトアシドーシス、高血糖症、血栓性障害、脂質異常症、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ又は関連疾患などを予防又は治療する（有害作用を部分的に又は完全に低減する）ために使用することができる。いくつかの実施形態では、関連疾患は、心臓血管疾患、アテローム性動脈硬化症、腎疾患、腎症、糖尿病性神経障害、糖尿病性網膜症、性的機能不全、皮膚症、消化不良症又は浮腫である。

他の疾患及び障害
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法及び治療用組成物は肝疾患の処置に関する。そのような疾患として下記が挙げられるが、これらに限定されない：アラジール症候群、アルコール関連肝疾患、α－１抗トリプシン欠損症、自己免疫性肝炎、胆道閉鎖症、肝硬変、ガラクトース血症、ジルベール症候群、ヘモクロマトーシス、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、肝性脳症、妊娠性肝内胆汁うっ滞（ＩＣＰ）、ライソゾーム酸性リパーゼ欠損症（ＬＡＬ－Ｄ）、肝嚢胞、新生児黄疸、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、ライ症候群、Ｉ型糖原病及びウィルソン病。

本明細書に記載される方法及び治療用組成物を使用して、神経変性疾患及び神経性疾患を治療し得る。特定の実施形態では、この神経変性疾患及び神経性疾患は、パーキンソン病、アルツハイマー病、プリオン病、ハンチントン病、運動ニューロン疾患（ＭＮＤ）、脊髄小脳失調症、脊髄性筋萎縮症、ジストニア、特発性頭蓋内圧亢進症、てんかん、神経系疾患、中枢神経系疾患、運動障害、多発性硬化症、脳症、末梢神経障害又は術後認知機能障害である。

ディスバイオシス
腸内マイクロバイオーム（「腸内微生物叢」とも呼ばれる）は、微生物の活動並びに宿主の免疫細胞及び他の細胞への（局所及び／又は遠位での）影響を介して個体の健康に大きい影響を及ぼし得る（Ｗａｌｋｅｒ，Ｗ．Ａ．，Ｄｙｓｂｉｏｓｉｓ．ＴｈｅＭｉｃｒｏｂｉｏｔａｉｎＧａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌＰａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ．Ｃｈａｐｔｅｒ２５．２０１７；ＷｅｉｓｓａｎｄＴｈｉｅｒｒｙ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓａｎｄｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｄｙｓｂｉｏｓｉｓ．ＣｅｌｌｕｌａｒａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ．（２０１７）７４（１６）：２９５９－２９７７．ＺｕｒｉｃｈＯｐｅｎＲｅｐｏｓｉｔｏｒｙａｎｄＡｒｃｈｉｖｅ，ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１００７／ｓ０００１８－０１７－２５０９－ｘ））。

健康な宿主の腸内マイクロバイオームの恒常性は、「ユービオシス」又は「ノルモバイオシス」と称されることもあり、宿主のマイクロバイオームの組成及び／又はその多様性の有害な変化は、マイクロバイオームでの不健康な不均衡又は「ディスバイオシス」を引き起こす可能性がある（ＨｏｏｋｓａｎｄＯ’Ｍａｌｌｅｙ．Ｄｙｓｂｉｏｓｉｓａｎｄｉｔｓｄｉｓｃｏｎｔｅｎｔｓ．ＡｍｅｒｉｃａｎＳｏｃｉｅｔｙｆｏｒＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ．Ｏｃｔ２０１７．Ｖｏｌ．８．Ｉｓｓｕｅ５．ｍＢｉｏ８：ｅ０１４９２－１７．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１２８／ｍＢｉｏ．０１４９２－１７）。マイクロバイオームの恒常性が失われているか又は減少している場合、ディスバイオシス及び付随する局所的な又は遠位の宿主炎症又は免疫効果が起こる場合があり、病原体に対する感受性の増加、宿主の細菌代謝活性の変更、宿主の炎症促進活性の誘発及び／又は宿主の抗炎症活性の減少が生じる。そのような効果は、宿主免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、樹状細胞、肥満細胞、ＮＫ細胞、腸上皮リンパ球（ＩＥＣ）、マクロファージ及び食細胞）と、そのような細胞及び他の宿主細胞により放出されるサイトカイン及び他の物質との間の相互作用により部分的に媒介される。

ディスバイオシスは、消化管内で起こり得るか（「消化管ディスバイオシス」又は「腸ディスバイオシス」）又は消化管の管腔外で起こり得る（「遠位ディスバイオシス」）。消化管ディスバイオシスは、腸上皮バリアの完全性の低下、密着結合の完全性の低下及び腸透過性の増加を伴うことが多い。Ｃｉｔｉ，Ｓ．ＩｎｔｅｓｔｉｎａｌＢａｒｒｉｅｒｓｐｒｏｔｅｃｔａｇａｉｎｓｔｄｉｓｅａｓｅ，Ｓｃｉｅｎｃｅ３５９：１０９８－９９（２０１８）；Ｓｒｉｎｉｖａｓａｎｅｔａｌ．，ＴＥＥＲｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓｆｏｒインビトロｂａｒｒｉｅｒｍｏｄｅｌｓｙｓｔｅｍｓ．Ｊ．Ｌａｂ．Ａｕｔｏｍ．２０：１０７－１２６（２０１５）。消化管ディスバイオシスは、消化管の内外で生理的な及び免疫的な影響を及ぼす可能性がある。

ディスバイオシスの存在は、下記を含む多様な疾患及び病態と関連し得る：感染、癌、自己免疫障害（例えば、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ））又は炎症性障害（例えば、機能性消化管障害、例えば炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、潰瘍性大腸炎及びクローン病）、神経炎症性疾患（例えば、多発性硬化症）、移植障害（例えば、移植片対宿主病）、脂肪性肝疾患、Ｉ型糖尿病、関節リウマチ、シェーグレン症候群、セリアック病、嚢胞性線維症、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）並びに免疫機能不全と関連する他の疾患及び病態。Ｌｙｎｃｈｅｔａｌ．，ＴｈｅＨｕｍａｎＭｉｃｒｏｂｉｏｍｅｉｎＨｅａｌｔｈａｎｄＤｉｓｅａｓｅ，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３７５：２３６９－７９（２０１６），Ｃａｒｄｉｎｇｅｔａｌ．，Ｄｙｓｂｉｏｓｉｓｏｆｔｈｅｇｕｔｍｉｃｒｏｂｉｏｔａｉｎｄｉｓｅａｓｅ．Ｍｉｃｒｏｂ．Ｅｃｏｌ．ＨｅａｌｔｈＤｉｓ．（２０１５）；２６：１０：３４０２／ｍｅｈｄ．ｖ２６．２６１９；Ｌｅｖｙｅｔａｌ，ＤｙｓｂｉｏｓｉｓａｎｄｔｈｅＩｍｍｕｎｅＳｙｓｔｅｍ，ＮａｔｕｒｅＲｅｖｉｅｗｓＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１７：２１９（Ａｐｒｉｌ２０１７）。

特定の実施形態では、本明細書に開示される例示的な治療用組成物は、ディスバイオシスの部位に存在する免疫活性を改変することにより、ディスバイオシス及びその影響を処置し得る。本明細書に記載されるとおり、そのような組成物は、対象レシピエントの炎症を軽減する抗炎症性サイトカインの分泌の増加及び／若しくは炎症促進性サイトカインの分泌の減少を引き起こす宿主免疫細胞への作用によるか又は代謝産物産生の変化により、ディスバイオシスを改変し得る。

ディスバイオシスに関連する障害の処置に有用な、本明細書に開示される例示的な治療用組成物は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶを含有する。そのような組成物は、消化管中において、レシピエントである宿主の免疫機能に影響を及ぼし得、且つ／又は対象の消化管外の遠位部位で全身性効果を及ぼし得る。

ディスバイオシスに関連する障害の処置に有用な、本明細書に開示される例示的な治療用組成物は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶの集団を含有する。そのような組成物は、消化管中において、レシピエントである宿主の免疫機能に影響を及ぼし得、且つ／又は対象の消化管外の遠位部位で全身性効果を及ぼし得る。

一実施形態では、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌に由来する単離されたＥＶの集団を含有する治療用組成物は、哺乳動物のディスバイオシス及びその影響の１つ以上を処置するのに有効な量でレシピエントに投与される（例えば、経口投与される）。ディスバイオシスは、消化管ディスバイオシス又は遠位ディスバイオシスであり得る。

別の実施形態では、本発明の治療用組成物は、消化管ディスバイオシス又はその宿主免疫細胞への影響の１つ以上を治療することができ、対象レシピエントの炎症を軽減する抗炎症性サイトカインの分泌の増加及び／又は炎症促進性サイトカインの分泌の減少を引き起こす。

別の実施形態では、治療用組成物は、腸上皮バリアの完全性を増加させることにより腸透過性を低下させるために、細胞及びサイトカインの調節によりレシピエントの免疫反応を改変することにより、消化管ディスバイオシス及びその影響の１つ以上を治療することができる。

別の実施形態では、治療用組成物は、宿主免疫細胞の改変によりディスバイオシスの部位でのレシピエントの免疫反応を改変することにより、遠位ディスバイオシス及びその影響の１つ以上を治療することができる。

他の例示的な治療用組成物は、ディスバイオシスを伴う障害の治療に有用であり、この組成物は、レシピエントにおける宿主免疫細胞の亜集団（例えば、Ｔ細胞、免疫リンパ球系細胞、樹状細胞、ＮＫ細胞及び他の免疫細胞の亜集団）又はその機能の相対的な割合を変更し得る１つ以上のタイプの細菌及び／又はＥＶを含む。

他の例示的な治療用組成物は、ディスバイオシスを伴う障害の治療に有用であり、この組成物は、レシピエント対象における免疫細胞の亜集団（例えば、Ｔ細胞亜集団、免疫リンパ球系細胞、ＮＫ細胞及び他の免疫細胞）又はその機能の相対的な割合を変更し得るプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶの集団を含む。

一実施形態では、本発明は、消化管ディスバイオシスの部位に存在するマイクロバイオーム集団を変更する治療用組成物を、その必要な対象に経口投与することにより、消化管ディスバイオシス及びその影響の１つ以上を処置する方法を提供する。治療用組成物は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶを含有し得る。

一実施形態では、本発明は、消化管外での対象の免疫反応を変更する治療用組成物を、その必要な対象に経口投与することにより、遠位ディスバイオシス及びその影響の１つ以上を処置する方法を提供する。治療用組成物は、免疫調節細菌又はプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶの集団由来の１つ以上のタイプのＥＶを含有し得る。

例示的な実施形態では、ディスバイオシスを伴う障害の治療に有用な治療用組成物は、宿主免疫細胞による１つ以上の抗炎症性サイトカインの分泌を刺激する。抗炎症性サイトカインとしては、ＩＬ－１０、ＩＬ－１３、ＩＬ－９、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＴＧＦβ及びこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。他の例示的な実施形態では、宿主免疫細胞による１つ以上の炎症促進性サイトカインの分泌を減少させる（例えば阻害する）、ディスバイオシスを伴う障害の治療に有用な治療用組成物である。炎症促進性サイトカインとしては、ＩＦＮγ、ＩＬ－１２ｐ７０、ＩＬ－１α、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＭＣＰ１、ＭＩＰ１α、ＭＩＰ１β、ＴＮＦα及びこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。他の例示的なサイトカインは、当技術分野で公知であり、且つ本明細書に記載されている。

別の態様では、本発明は、それを必要とする対象のディスバイオシスを伴う障害を治療するか又は予防する方法であって、ディスバイオシスを伴う障害が治療されるように、ディスバイオシスの部位でのマイクロバイオームを変更するのに十分な量でプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶを含むプロバイオティック食品又は医療食品の形態の医薬組成物を対象に投与する（例えば経口投与する）ことを含む方法を提供する。

別の実施形態では、プロバイオティック食品又は医療食品の形態の本発明の医薬組成物を使用して、ディスバイオシスを発症するリスクがある対象でのディスバイオシスの発症を予防し得るか又は遅延させ得る。

強化された細菌を製造する方法
特定の態様では、本明細書に記載されるプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶの産生のために操作された細菌を作製する方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、操作された細菌は、特定の所望の特性を増強するように改変されている。例えば、いくつかの実施形態では、操作された細菌は、（例えば、単独で又は別の治療薬との組み合わせで）ＥＶの免疫調節効果及び／若しくは治療効果を増強するように改変されており、毒性を減少するように改変されており、且つ／又は細菌及び／若しくはＥＶの製造を改善する（例えば、より高い酸素耐性、凍結融解耐性の改善、より短い生成時間）ように改変されている。操作された細菌を、当技術分野で公知の任意の技術（部位特異的変異誘発、トランスポゾン突然変異誘発、ノックアウト、ノックイン、ポリメラーゼ連鎖反応変異誘発、化学的変異誘発、紫外線変異誘発、形質転換（化学的又はエレクトロポレーションによる）、ファージ形質導入、定向進化、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９又はこれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない）を使用して製造し得る。

本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、細菌は定向進化により改変されている。いくつかの実施形態では、定向進化は、細菌の環境条件への曝露と、この環境条件下での生存及び／又は増殖が改善されている細菌の選択とを含む。いくつかの実施形態では、方法は、強化された細菌を同定するアッセイを使用する変異誘発細菌のスクリーニングを含む。いくつかの実施形態では、方法は、（例えば、化学的変異原及び／又はＵＶ放射線への曝露により）細菌を変異誘発させること又は細菌を治療薬（例えば抗生剤）に曝露すること、その後に続く所望の表現型を有する細菌を検出するためのアッセイ（例えば、インビボでのアッセイ、エクスビボでのアッセイ又はインビトロでのアッセイ）を更に含む。

実施例１：凍結乾燥物の調製
表Ａ～表Ｄに提供される配合を有する賦形剤ストックを溶液として調製した（示される量は、配合中の各成分のパーセンテージである）。賦形剤ストックの配合は、ポリマーありとポリマーなしの２つの主なカテゴリーに分類される。賦形剤ストック溶液を細胞外小胞の液体調製物と混合した。得られた溶液を凍結乾燥し、分析した。

この実施例では、試験で使用した細胞外小胞（ｓｍＥＶ）は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）の株（プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）Ｂ株）（ＮＲＲＬ受託番号Ｂ５０３２９）から単離された。

これらの混合物の凍結乾燥から収集したデータを表Ｅに提供する。測定された全てのサンプルの残留水分含有量は５％未満であった。いくつかのサンプルは、遅延型過敏症（ＤＴＨ）モデルでキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）特異的炎症を使用してインビボで更にテストした。ＫＬＨ－ＤＴＨでテストしたサンプルは有効性を示した。

細胞外小胞（ＥＶ）の凍結乾燥サイクル
凍結乾燥サイクルは、各賦形剤配合について最適化される。混合物の臨界温度と崩壊温度の差は、凍結乾燥中の棚温度がそれに応じて調整されることを意味する。最適化プロセスには、初期スクリーニング、一次乾燥最適化、二次乾燥最適化の３工程が含まれる。最終サイクルは、材料を残留水分５％未満に乾燥させるのに十分であることが確認されている。この例では、最適化のために選択された賦形剤配合は賦形剤配合７であった。

実施例２：経口送達された微生物細胞外小胞はマウスの抗炎症活性を誘導する
遅延型過敏症モデルでは耳の腫れ及び炎症の有意な軽減が観察され、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）Ｂ株（ＮＲＲＬ受託番号Ｂ５０３２９）の細胞外小胞（ＥＶ）が全身性炎症反応を調節することが示された。プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶの活性は、ＴＬＲ２シグナル伝達及び局所免疫細胞の存在の両方に依存する。インビトロの結果は、ＥＶによる免疫細胞におけるＴＬＲ２アゴニズム及び抗炎症性サイトカイン反応の誘導を示している。これらの発見は、経口送達された微生物細胞外小胞の抗炎症効果を実証する。プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶは、全身への曝露なしで、全身的薬理学の新規機序を介して、複数の経路にわたる炎症の広範な解消を誘導する。ＥＶは、腸内の宿主細胞を関与させて遠位の炎症を調節するのに特に効果的である。これらのデータは、経口ＥＶが新しい種類の免疫療法薬であることを示している。

実施例３：細菌からの細胞外小胞（ＥＶ）の精製及び調製
精製
細胞外小胞（ＥＶ）は、当業者に公知の方法を用いて細菌培養物から精製及び調製される（Ｓ．ＢｉｎＰａｒｋ，ｅｔａｌ．ＰＬｏＳＯＮＥ．６（３）：ｅ１７６２９（２０１１））。

例えば、細菌培養物を１０，０００～１５，５００×ｇ、４℃又は室温で１０～４０分間遠心分離して細菌をペレット化する。次いで、０．２２μｍ以下の物質を含み、インタクトな細菌細胞を除外するように、培養上清を濾過した（例えば、０．２２μｍ又は０．４５μｍフィルターを介して）。濾過された上清は、硫酸アンモニウム沈殿、超遠心分離又は濾過を含み得るが、これらに限定されない方法を使用して濃縮される。簡単に述べると、硫酸アンモニウム沈殿の場合、４℃で撹拌しながら、濾過した上清に、１．５～３Ｍの硫酸アンモニウムをゆっくりと添加する。沈殿物を４℃で８～４８時間インキュベートし、次いで１１，０００×ｇにおいて４℃で２０～４０分間遠心分離する。ペレットには、ｓｍＥＶ及び他の残骸が含まれる。簡単に述べると、超遠心分離を使用して、濾過した上清を１００，０００～２００，０００×ｇにおいて４℃で１～１６時間遠心分離する。この遠心分離のペレットには、ＥＶ及び他の残骸が含まれる。簡単に述べると、濾過技術を使用して、ＡｍｉｃｏｎＵｌｔｒａスピンフィルターを使用して又はタンジェント流濾過により、分子量が５０、１００、３００又は５００ｋＤａを超える種を保持するように上清を濾過する。

代わりに、製造業者の指示に従って、増殖中の細菌培養から継続的に又は増殖中の選択された時点で、バイオリアクターを交互タンジェント流（ＡＴＦ）システム（例えば、ＲｅｐｌｉｇｅｎのＸＣｅｌｌＡＴＦ）に接続することによってＥＶが入手される。ＡＴＦシステムは、バイオリアクター内にインタクトな細胞（＞０．２２μｍ）を保持し、より小さい成分（例えば、ＥＶ、遊離タンパク質）がフィルターを通過して収集できるようにする。例えば、システムは、＜０．２２μｍの濾液が１００ｋＤａの２番目のフィルターを通過するように構成でき、これにより、０．２２μｍ～１００ｋＤａのＥＶなどの種を収集し、１００ｋＤａ未満の種をポンプでバイオリアクター内に戻すことができる。代わりに、システムは、培養物の増殖中にバイオリアクター内の培地を補充及び／又は改変できるように構成することができる。この方法によって収集されたＥＶは、濾過された上清について上記したように、超遠心分離又は濾過によって更に精製及び／又は濃縮され得る。

上記の方法によって得られたＥＶは、限定されるものではないが、スクロース勾配又はＯｐｔｉｐｒｅｐ勾配の使用を含み得る方法を用いて、勾配超遠心分離によって更に精製され得る。簡単に述べると、スクロース勾配法を用いて、硫酸アンモニウム沈殿又は超遠心分離が使用されて濾過された上清が濃縮されたら、ペレットを６０％スクロース、３０ｍＭＴｒｉｓ、ｐＨ８．０に再懸濁される。濾過を使用して濾過した上清を濃縮する場合、濃縮液が、ＡｍｉｃｏｎＵｌｔｒａカラムを用いて、６０％スクロース、３０ｍＭＴｒｉｓ、ｐＨ８．０に緩衝液交換される。サンプルは、３５～６０％の不連続スクロース勾配に適用され、４℃で３～２４時間、２００，０００×ｇで遠心分離される。簡単に述べると、Ｏｐｔｉｐｒｅｐ勾配法を用いて、硫酸アンモニウム沈殿又は超遠心分離の使用により、濾過された上清が濃縮されたら、ペレットがＰＢＳ中、４５％Ｏｐｔｉｐｒｅｐに再懸濁される。濾過を用いて濾過された上清が濃縮されたら、濃縮物が、６０％Ｏｐｔｉｐｒｅｐを用いて４５％Ｏｐｔｉｐｒｅｐの最終濃度まで希釈される。サンプルは、０～４５％の不連続スクロース勾配に適用され、４℃で３～２４時間、２００，０００×ｇで遠心分離される。代わりに、高分離能の密度勾配分割を使用して、密度に基づいてＥＶを分離することもできる。

調製
ＥＶ調製物の無菌性及び単離を確認するために、ＥＶは、試験される細菌の日常的な培養に使用される寒天培地に連続希釈され、日常的な条件を用いてインキュベートされる。非無菌調製物は、インタクトな細胞を排除するために０．２２μｍフィルターに通される。純度を更に高めるために、単離されたＥＶを、ＤＮａｓｅ又はプロテイナーゼＫで処理することができる。

代わりに、インビボでの注射に使用されるＥＶの調製について、精製されたＥＶは前述のように処理される（Ｇ．Ｎｏｒｈｅｉｍ，ｅｔａｌ．ＰＬｏＳＯＮＥ．１０（９）：ｅ０１３４３５３（２０１５））。簡単に述べると、スクロース勾配遠心分離後、ＥＶを含むバンドは、３％スクロースを含む溶液又は当業者に公知のインビボでの注射に好適な他の溶液中に５０μｇ／ｍＬの最終濃度まで再懸濁される。この溶液は、アジュバント、例えば０～０．５％（ｗ／ｖ）の濃度の水酸化アルミニウムも含み得る。

サンプルを更なるテストと相溶性を持たせるために（例えば、ＴＥＭイメージング又はインビトロアッセイ前にスクロースを除去するために）、濾過（例えば、ＡｍｉｃｏｎＵｌｔｒａカラム）、透析又は超遠心分離（ＰＢＳで１５倍以上に希釈後、２００，０００×ｇ、１～３時間、４℃）及びＰＢＳへの再懸濁を使用して、サンプルをＰＢＳ又は３０ｍＭのＴｒｉｓ、ｐＨ８．０中にバッファー交換する。

これらの試験の全てについて、ＥＶは、投与前に加熱、照射及び／又は凍結乾燥され得る（本明細書に記載されるように）。

実施例４：ストレスによって細菌を操作して様々な量のＥＶを生成する及び／又はＥＶの内容を変動させる
ストレス、特にエンベロープストレスは、いくつかの細菌株によるＥＶの産生を増加させることが示されている（Ｉ．ＭａｃＤｏｎａｌｄ，Ｍ．Ｋｕｅｈｎ．ＪＢａｃｔｅｒｉｏｌ１９５（１３）：ｄｏｉ：１０／１１２８／ＪＢ．０２２６７－１２）。細菌によるＥＶの産生を変動させるために、様々な方法を使用して細菌にストレスが与えられる。

細菌は、単一のストレス因子又は複数のストレス因子の組み合わせに供され得る。異なる細菌に対する異なるストレッサーの効果は、ストレス条件を変動させ、ＩＣ５０値（細胞増殖を５０％阻害するのに必要な条件）を決定することによって経験的に決定される。ＥＶの精製、定量及び特性評価が行われる。ＥＶの産生は、（１）ナノ粒子追跡分析（ＮＴＡ）又は透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）によって細菌及びＥＶの複合なサンプルで；又は（２）ＮＴＡ、脂質定量又はタンパク質定量によるＥＶ精製後に定量される。ＥＶ含有量は、上記の方法による精製後に評価される。

抗生物質ストレス
細菌は、亜致死濃度の抗生物質を添加した標準的な増殖条件下で培養される。これは、０．１～１μｇ／ｍＬのクロラムフェニコール、０．１～０．３μｇ／ｍＬのゲンタマイシン又は同様の濃度の他の抗生物質（例えば、アンピシリン、ポリミキシンＢ）を含み得る。リゾチーム、ディフェンシン及びＲｅｇタンパク質などの宿主抗菌産物を抗生物質の代わりに使用し得る。バクテリオシン及びミクロシンを含む、細菌によって産生される抗菌ペプチドを使用し得る。

温度ストレス
細菌は標準的な増殖条件下で培養されるが、その増殖に典型的な温度よりも高い又は低い温度で培養される。代わりに、細菌を標準条件下で増殖させた後、それぞれ低温又は高温で短時間インキュベートすることにより、コールドショック又はヒートショックに供する。例えば、３７℃で増殖した細菌は、コールドショックの場合には４℃～１８℃、ヒートショックの場合には４２℃～５０℃で１時間培養する。

飢餓及び栄養制限
栄養ストレスを誘発するために、細菌は、１つ以上の栄養素が制限された条件下で培養される。細菌は、増殖中に栄養ストレスに供されるか、又は富栄養培地から貧栄養培地に移行され得る。制限される培地成分の例は、炭素、窒素、鉄及び硫黄である。培地の例は、唯一の炭素源として低グルコースを含有するＭ９最少培地（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）である。特にプレボテラ属の場合、低ヘミン条件で増殖した細胞はより多数のＥＶを生成することが見出されたため、培地中のヘミンの濃度を変更し、且つ／又は培地中に存在するポルフィリン又は他の鉄担体の種類を変更することにより、鉄の利用可能性が変化する（Ｓ．Ｓｔｕｂｂｓｅｔａｌ．ＬｅｔｔｅｒｓｉｎＡｐｐｌｉｅｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ．２９：３１－３６（１９９９）。培地成分は、ＥＤＴＡ及びデフェロキサミンなどのキレート剤の添加によっても操作される。

飽和
細菌を飽和まで増殖させ、飽和点を超えて様々な期間培養する。代わりに、馴化培地を使用して、指数増殖中の飽和環境を模倣する。馴化培地は、遠心分離及び濾過によって飽和培養物からインタクトな細胞を除去することによって調製され、馴化培地は、特定の成分を濃縮又は除去するために更に処理され得る。

塩ストレス
細菌は、ＮａＣｌ、胆汁酸塩又は他の塩を含有する培地中で培養又は短期間曝露される。

ＵＶストレス
ＵＶストレスは、ＵＶランプ下で細菌を培養するか、又はＳｔｒａｔａｌｉｎｋｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ）などの装置を使用して細菌をＵＶにさらすことによって達成される。ＵＶは、培養期間全体を通してショートバーストで又は増殖後の１回の所定期間にわたって照射され得る。

活性酸素ストレス
細菌は亜致死濃度の過酸化水素（２５０～１，０００μＭ）の存在下で培養され、活性酸素種の形態でストレスを誘発する。嫌気性細菌は、それらにとって有毒な酸素濃度で培養されるか又はそれにさらされる。

界面活性剤ストレス
細菌は、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）又はデオキシコール酸などの界面活性剤中で培養されるか又はそれに曝露される。

ｐＨストレス
細菌は、異なるｐＨの培地で培養されるか、又は限られた時間培地に曝露される。

実施例５：ＥＶ組成物及び内容のプロファイリング
ＥＶは、ＮａｎｏＳｉｇｈｔ特性評価、ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル電気泳動、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、液体クロマトグラフィー質量分析法及び質量分析法、動的光散乱法、脂質レベル、総タンパク質、脂質対タンパク質比率、核酸分析及び／又はゼータ電位を含むが、これらに限定されない、様々な方法のいずれか１つによって特性評価される。

ＥＶのＮａｎｏＳｉｇｈｔ特性評価
ナノ粒子追跡分析（ＮＴＡ）は、精製されたＥＶのサイズ分布を特徴付けるために使用される。精製ＥＶ調製物をＮａｎｏＳｉｇｈｔ装置（ＭａｌｖｅｒｎＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）にかけ、ＥＶのサイズ及び濃度を評価する。

ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル電気泳動
精製されたＥＶのタンパク質成分を同定するために、標準的な技術を使用して、サンプルをゲル、例えばＢｏｌｔＢｉｓ－ＴｒｉｓＰｌｕｓ４～１２％ゲル（Ｔｈｅｒｍｏ－ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）上で泳動する。サンプルを１ｘＳＤＳサンプルバッファー中で１０分間煮沸し、４℃に冷却し、１６，０００×ｇで１分間遠心分離する。次いで、サンプルをＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル上で泳動し、バンドを視覚化するためにいくつかの標準的な技術（例えば、銀染色、クマシーブルー、ＧｅｌＣｏｄｅＢｌｕｅ）の１つを使用して染色する。

ウェスタンブロット分析
精製されたＥＶの特定のタンパク質成分を同定及び定量するために、ＥＶタンパク質は上記のようにＳＤＳ－ＰＡＧＥによって分離され、ウェスタンブロット分析に供され（Ｃｖｊｅｔｋｏｖｉｃｅｔａｌ．，Ｓｃｉ．Ｒｅｐ．６，３６３３８（２０１６））、ＥＬＩＳＡによって定量される。

ＥＶプロテオミクス及び液体クロマトグラフィー質量分析（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）及び質量分析（ＭＳ）
ＥＶに存在するタンパク質は、質量分析技術によって同定及び定量される。ＥＶタンパク質は、Ｅｒｉｃｋｓｏｎｅｔａｌ，２０１７（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｅｌｌ，ＶＯＬＵＭＥ６５，ＩＳＳＵＥ２，Ｐ３６１－３７０，２０１７年１月１９日）に記載されるように、ジチオスレイトール溶液（ＤＴＴ）を使用したタンパク質の還元並びにＬｙｓＣ及びトリプシンなどの酵素を使用したタンパク質消化を含む標準的な技術を使用して、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳのために調製され得る。代わりに、ペプチドは、Ｌｉｕｅｔａｌ．２０１０（ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＢＡＣＴＥＲＩＯＬＯＧＹ，２０１０年６月，ｐ．２８５２－２８６０Ｖｏｌ．１９２，Ｎｏ．１１），ＫｉｅｓｅｌｂａｃｈａｎｄＯｓｃａｒｓｓｏｎ２０１７（ＤａｔａＢｒｉｅｆ．２０１７年２月；１０：４２６－４３１．），Ｖｉｌｄｈｅｄｅｅｔａｌ，２０１８（ＤｒｕｇＭｅｔａｂｏｌｉｓｍａｎｄＤｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ２０１８年２月８日）に記載されているように調製される。消化後、単一サンプル内のタンパク質同定のために、ペプチド調製物を直接、液体クロマトグラフィー及び質量分析装置にかける。サンプル間のタンパク質の相対定量では、異なるサンプルからのペプチド消化物は、ｉＴＲＡＱＲｅａｇｅｎｔ－８ｐｌｅｘＭｕｌｔｉｐｌｅｘＫｉｔ（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，ＦｏｓｔｅｒＣｉｔｙ，ＣＡ）又はＴＭＴ１０ｐｌｅｘ及び１１ｐｌｅｘＬａｂｅｌＲｅａｇｅｎｔｓ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ＳａｎＪｏｓｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して同重体タグで標識される。各ペプチド消化物は異なる同重体タグで標識され、標識された消化物は１つのサンプル混合物にまとめられる。結合したペプチド混合物は、同定及び定量の両方のためにＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって分析される。ＬＣ－ＭＳ／ＭＳデータを使用してデータベース検索を実施して、標識ペプチド及び対応するタンパク質を特定する。同重体標識の場合、付けられたタグの断片化により、各ＥＶに存在するペプチド及びタンパク質の相対定量を取得するために使用される低分子量レポーターイオンが生成される。

更に、代謝量は、質量分析法と組み合わせた液体クロマトグラフィー技術を使用して確認される。様々なサンプルのメタボローム含有量を決定するために様々な技術が存在し、溶媒抽出、クロマトグラフィー分離及び質量決定と組み合わせた様々なイオン化技術を含み、当業者に公知である（Ｒｏｂｅｒｔｓｅｔａｌ２０１２ＴａｒｇｅｔｅｄＭｅｔａｂｏｌｏｍｉｃｓ．ＣｕｒｒＰｒｏｔｏｃＭｏｌＢｉｏｌ．３０：１－２４；Ｄｅｔｔｍｅｒｅｔａｌ２００７，Ｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ－ｂａｓｅｄｍｅｔａｂｏｌｏｍｉｃｓ．ＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｍＲｅｖ．２６（１）：５１－７８）。非限定的な例として、ＬＣ－ＭＳシステムは、１１００シリーズポンプ（Ａｇｉｌｅｎｔ）及びＨＴＳＰＡＬオートサンプラー（ＬｅａｐＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）と組み合わせた４０００ＱＴＲＡＰ三連四重極質量分析計（ＡＢＳＣＩＥＸ）を含む。培地サンプル又は他の複合代謝混合物（約１０μＬ）は、安定同位体標識内部標準（バリン－ｄ８，Ｉｓｏｔｅｃ；及びフェニルアラニン－ｄ８，ＣａｍｂｒｉｄｇｅＩｓｏｔｏｐｅＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を含有する９体積部の７４．９：２４．９：０．２（ｖ／ｖ／ｖ）アセトニトリル／メタノール／ギ酸を使用して抽出される。標準は、目的の代謝産物に応じて調整又は改変され得る。サンプルを遠心分離し（１０分間、９，０００×ｇ、４℃）、上清（１０μＬ）をＨＩＬＩＣカラム（１５０×２．１ｍｍ、粒径３μｍ）に注入してＬＣＭＳに供する。カラムは、５％移動相［水中１０ｍＭギ酸アンモニウム、０．１％ギ酸］を２５０μＬ／分の速度で１分間流し、続いて４０％移動相［０．１％ギ酸を含むアセトニトリル］の溶液まで１０分間かけて直線勾配で溶出する。イオンスプレーの電圧は４．５ｋＶ、イオン源温度は４５０℃に設定する。

データは、質量スペクトルピーク統合のためにＡＢＳＣＩＥＸのＭｕｌｔｉｑｕａｎｔ１．２などの市販のソフトウェアを使用して分析される。目的のピークを手動で精選し、標準と比較して、ピークの同一性を確認する必要がある。適切な標準を用いた定量を実施して、細菌による前処置後の初期培地に存在する代謝産物の数を決定する。非標的メタボロミクス手法は、ピークの同定のために、限定されないが、ＮＩＳＴデータベースなどの代謝産物データベースを用いても使用され得る。

動的光散乱（ＤＬＳ）
異なるＥＶ調製物中の異なるサイズの粒子の分布を含むＤＬＳ測定は、ＤｙｎａＰｒｏＮａｎｏＳｔａｒ（ＷｙａｔｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）及びＺｅｔａｓｉｚｅｒＮａｎｏＺＳ（ＭａｌｖｅｒｎＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）などの機器を使用して行われる。

脂質レベル
脂質レベルは、Ａ．Ｊ．ＭｃＢｒｏｏｍｅｔａｌ．ＪＢａｃｔｅｒｉｏｌ１８８：５３８５－５３９２．及びＡ．Ｆｒｉａｓ，ｅｔａｌ．ＭｉｃｒｏｂＥｃｏｌ．５９：４７６－４８６（２０１０）に記載されているものと同様の方法で、ＦＭ４－６４（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して定量する。サンプルをＦＭ４－６４と共にインキュベートする（ＰＢＳ中３．３μｇ／ｍＬ、３７℃、暗所で１０分間）。５１５ｎｍで励起した後、ＳｐｅｃｔｒａｍａｘＭ５プレートリーダー（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｅｖｉｃｅｓ）を使用して６３５ｎｍでの発光を測定する。絶対濃度は、未知のサンプルを既知濃度の標準（パルミトイルオレオイルホスファチジルグリセロール（ＰＯＰＧ）小胞など）と比較することによって決定される。リピドミクスを使用して、ＥＶに存在する脂質を特定できる。

総タンパク質
タンパク質レベルは、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイ及びＢＣＡアッセイなどの標準的なアッセイによって定量される。Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイは、製造元のプロトコルに従って、ＱｕｉｃｋＳｔａｒｔＢｒａｄｆｏｒｄ１ｘＤｙｅＲｅａｇｅｎｔ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用して実行される。ＢＣＡアッセイは、ＰｉｅｒｃｅＢＣＡタンパク質アッセイキット（Ｔｈｅｒｍｏ－ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して実行される。絶対濃度は、既知濃度のＢＳＡから生成された標準曲線と比較することによって決定される。代わりに、タンパク質濃度は、Ｎａｎｏｄｒｏｐ分光光度計（Ｔｈｅｒｍｏ－ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で測定される、２８０ｎｍでのサンプル吸光度（Ａ２８０）を用いたＢｅｅｒ－Ｌａｍｂｅｒｔ方程式を使用して計算できる。更に、プロテオミクスを使用してサンプル中のタンパク質を同定し得る。

脂質：タンパク質比
脂質：タンパク質の比率は、脂質濃度をタンパク質濃度で割ることによって算出される。これらは、各調製物中の遊離タンパク質と比較した小胞の純度の尺度を提供する。

核酸分析
核酸はＥＶから抽出され、Ｑｕｂｉｔ蛍光光度計を使用して定量される。ＢｉｏＡｎａｌｙｚｅｒを使用してサイズ分布が評価され、材料が配列決定される。

ゼータ電位
異なる調製物のゼータ電位は、ＺｅｔａｓｉｚｅｒＺＳ（ＭａｌｖｅｒｎＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）などの機器を使用して測定される。

実施例６：製造条件
富化培地は、細菌を増殖させ、インビトロ及びインビボでの使用並びに最終的にはＥＶ調製のために調製するために使用される。例えば、培地は、糖、酵母エキス、植物ベースのペプトン、緩衝剤、塩、微量元素、界面活性剤、消泡剤及びビタミンを含有し得る。酵母エキス及びペプトンなどの複合成分の組成物は、未定義であるか又は部分的に定義され得る（アミノ酸、糖などのおよその濃度を含む）。微生物の代謝は、炭素及び窒素などの資源の利用可能性に依存し得る。様々な糖又は他の炭素源がテストされ得る。代わりに、参照により本明細書に組み込まれるＳａａｒｅｌａｅｔａｌ．，Ｊ．ＡｐｐｌｉｅｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ．２００５．９９：１３３０－１３３９に示されるように培地を調製し、選択した細菌を増殖させ得る。乳ベースの成分を使用せずに産生された、選択された細菌の凍結乾燥生存率、保存安定性並びに酸及び胆汁への曝露に対する、発酵時間、凍結保護剤及び細胞濃縮物の中和の影響。

大規模では、培地は滅菌される。滅菌は、超高温（ＵＨＴ）処理によって行われ得る。ＵＨＴ処理は、非常に高温で短時間実施される。ＵＨＴの範囲は、１３５～１８０℃であり得る。例えば、培地は、１３５℃で１０～３０秒間滅菌され得る。

接種物は、フラスコ又はより小さいバイオリアクターにおいて調製することができ、増殖がモニターされる。例えば、接種物のサイズは、バイオリアクターの総容量のおよそ０．５％～３％であり得る。材料の用途及び必要性に応じて、バイオリアクターの容量は、少なくとも２Ｌ、１０Ｌ、８０Ｌ、１００Ｌ、２５０Ｌ、１０００Ｌ、２５００Ｌ、５０００Ｌ、１０，０００Ｌであり得る。

接種前に、バイオリアクターは、所望のｐＨ、温度、酸素濃度の培地で準備される。培養培地の初期ｐＨは、プロセス設定値と異なり得る。ｐＨストレスは、細胞濃度が低いと有害な場合があり、初期ｐＨは、ｐＨ７．５とプロセス設定値との間であり得る。例えば、ｐＨは、４．５～８．０に設定され得る。発酵中、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム又は水酸化アンモニウムを使用してｐＨを制御できる。温度は、２５℃～４５℃、例えば３７℃に制御され得る。嫌気性条件は、培養ブロス中の酸素レベルを約８ｍｇ／Ｌから０ｍｇ／Ｌに下げることによって作成される。例えば、嫌気性条件を確立するために窒素又は混合ガス（Ｎ_２、ＣＯ_２及びＨ_２）を使用し得る。代わりに、ガスを使用せず、細胞が培地からの残りの酸素を消費することによって嫌気性条件が確立される。菌株及び接種物のサイズに応じて、バイオリアクター発酵時間は変化し得る。例えば、発酵時間は、およそ５時間～４８時間で変化し得る。

凍結状態から細菌を復活させるには、特別の配慮を要し得る。生産培地は解凍後に細胞にストレスを与え得る。解凍した材料から種系列を一貫して開始するには、特定の解凍培地を要し得る。種の体積を増やすか又は微生物の増殖状態を維持する目的で、種材料を新鮮培地に導入又は継代する動態は、細菌の現在の状態（例えば、指数増殖、定常増殖、ストレスなし、ストレスあり）によって影響を受け得る。

生産発酵槽への接種は、増殖動態及び細胞活性に影響を与え得る。安定した生産を成功させるには、バイオリアクターシステムの初期状態を最適化しなければならない。全培地に対する種培養物の割合（例えば、パーセンテージ）は、増殖速度に劇的な影響を与える。範囲は、発酵槽の作業体積の１～５％であり得る。培養培地の初期ｐＨは、プロセス設定値と異なり得る。ｐＨストレスは、細胞濃度が低いと有害な場合があり、初期ｐＨは、ｐＨ７．５とプロセス設定値との間であり得る。接種中の撹拌及びシステムへのガス流入は、プロセス設定値と異なり得る。両方の条件による物理的及び化学的ストレスは、細胞濃度が低いと有害な場合がある。

処理条件及び制御設定は、微生物の増殖及び細胞活性の動態に影響を与え得る。プロセス条件の変化により、膜組成、代謝産物の産生、増殖速度、細胞ストレスなどが変化し得る。増殖に最適な温度範囲は株によって変動し得る。範囲は２０～４０℃であり得る。細胞増殖及び下流活性のパフォーマンスに最適なｐＨは株によって変動し得る。範囲はｐＨ５～８であり得る。培地に溶解したガスは、細胞の代謝に使用され得る。プロセス全体を通して、Ｏ_２、ＣＯ_２及びＮ_２の濃度を調整することを要し得る。栄養素の利用可能性により、細胞の成長が変化し得る。過剰の栄養素が利用可能な場合、細菌は別の動態を有し得る。

発酵終了時及び回収中の細菌の状態は、細胞の生存及び活性に影響を与え得る。細菌は、分離及び下流処理に伴う物理的及び化学的ストレスに対してよりよく備えるために、回収の直前に前処理され得る。温度の変化（多くの場合に２０～５℃に低下）は、細胞の代謝を低下させ、増殖（及び／又は死滅）及び発酵槽から取り出したときの生理学的変化を遅らせ得る。遠心濃縮の有効性は培養物のｐＨに影響され得る。ｐＨを１～２ポイント上げると、濃縮の有効性を改善することができるが、細胞に有害である可能性もある。細菌は、培地中の塩及び／又は糖の濃度を高めることによって回収の直前にストレスを受け得る。この方法でストレスを受けた細胞は、下流での凍結及び凍結乾燥でよりよく生存し得る。

分離方法及び技術は、培養培地から細菌を効率的に分離する方法に影響を与え得る。固体は、遠心分離技術を使用して除去され得る。遠心濃縮の有効性は、培養物のｐＨ又は凝集剤の使用によって影響を受け得る。ｐＨを１～２ポイント上げると、濃縮の有効性が改善され得るが、細胞に有害である可能性もある。細菌は、培地中の塩及び／又は糖の濃度を高めることによって回収の直前にストレスを受け得る。この方法でストレスを受けた細胞は、下流での凍結及び凍結乾燥でよりよく生存し得る。更に、細菌は、濾過によって分離され得る。細胞が遠心分離を成功させるために過剰なｇ－分（ｇ－ｍｉｎｕｔｅｓ）を要する場合、精製には濾過が遠心分離技術よりも優れている。賦形剤は分離前に添加することができる。凍結保護又は凍結乾燥中の保護のために、賦形剤を追加することができる。賦形剤としては、限定されるものではないが、スクロース、トレハロース又はラクトースが挙げられ、これらは代替的に緩衝剤及び抗酸化剤と混合され得る。凍結乾燥前に、賦形剤と混合した細胞ペレットの液滴を液体窒素中に浸漬する。

回収は、連続遠心分離によって実施することができる。産物は、様々な賦形剤で所望の最終濃度に再懸濁され得る。凍結保護又は凍結乾燥中の保護のために、賦形剤を追加することができる。賦形剤としては、限定されるものではないが、スクロース、トレハロース又はラクトースが挙げられ、これらは、代替的に緩衝剤及び抗酸化剤と混合され得る。凍結乾燥前に、賦形剤と混合した細胞ペレットの液滴を液体窒素中に浸漬する。

生細菌、小胞又は他の細菌派生体を含む材料の凍結乾燥には、凍結、一次乾燥及び二次乾燥段階が含まれる。凍結乾燥は凍結から始まる。生成物は、凍結段階前に凍結乾燥保護剤又は安定剤と混合しても又はしなくてもよい。生成物は、凍結乾燥機に入れる前に又は凍結乾燥機の棚上の制御された条件下で冷凍され得る。次の段階である一次乾燥段階では、氷が昇華によって除去される。ここで、減圧が発生し、適切な量の熱が材料に供給される。氷は、生成物の温度を氷点下且つ材料の臨界温度（Ｔ_ｃ）未満に保ちながら昇華する。材料を載せる棚の温度及び容器の真空を操作して、望ましい生成物温度を達成できる。二次乾燥段階では、産物に結合した水分子が除去される。ここで、一般的に、温度を一次乾燥段階よりも高くして、水分子と生成物との間に形成された物理化学的相互作用を破壊する。凍結乾燥プロセスが完了した後、容器を窒素などの不活性ガスで充填し得る。産物は、ガラスバイアル又は他の同様の容器中、乾燥条件下で凍結乾燥機内に密封され、大気中の水及び汚染物質への曝露を防ぐことができる。

実施例７：ｓｍＥＶの調製
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ｓｍＥＶを以下のように調製した。

ｓｍＥＶ：ｓｍＥＶの下流処理は、バイオリアクターの回収直後に開始した。２０，０００×ｇでの遠心分離を使用して、ブロスから細胞を除去した。得られた上清を、０．２２μｍフィルターを使用して清澄化した。ＥＶを濃縮し、１００ｋＤａの分画分子量（ＭＷＣＯ）のフラットシートカセット限外濾過（ＵＦ）膜による接線流濾過（ＴＦＦ）を使用して洗浄した。透析濾過（ＤＦ）を使用して、５体積部のリン酸緩衝液（ＰＢＳ）を使用して小分子及び小タンパク質を洗い流した。ＴＦＦからの保持液を超遠心機で、２００，０００×ｇで１時間遠心沈降して、高速ペレット（ＨＳＰ）と呼ばれるＥＶが豊富に含まれるペレットを形成した。ペレットを最少量のＰＢＳで再懸濁し、ＯｐｔｉＰｒｅｐ（商標）密度勾配培地で勾配を調製し、２００，０００×ｇで１６時間、超遠心分離した。得られた画分のうち、２つの中間バンドにＥＶが含まれていた。画分を１５倍ＰＢＳで洗浄し、ＥＶを２００，０００×ｇで１時間遠心沈殿して、分画ＨＳＰ又はｆＨＳＰを生成した。続いて、これを最小限のＰＢＳに再懸濁し、プールし、ｍＬ当たりの粒子及びタンパク質含有量を分析した。所望の濃度を達成するために、粒子／ｍＬカウントから用量を調製した。ＭａｌｖｅｒｎＰａｎａｌｙｔｉｃａｌのＮａｎｏＳｉｇｈｔＮＳ３００を使用して、５３２ｎｍレーザーを用いた散乱モードでＥＶを特性評価した。

実施例８：ＥＶの単離及び計数
ＥＶ単離に使用される装置には、ＳＬＡ－３０００ローターを備えたＳｏｒｖａｌｌＲＣ－５Ｃ遠心機；Ｂｅｃｋｍａｎ－Ｃｏｕｌｔｅｒ４５Ｔｉローターを備えたＯｐｔｉｍａＸＥ－９０超遠心機；ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃのＳｏｒｖａｌｌｗＸ＋Ｕｌｔｒａシリーズ遠心機；及びＦｉｂｅｒｌｉｔｅＦ３７Ｌ－８ｘ１００ローターが含まれる。

細菌上清の収集及び濾過
細菌ではなくＥＶを回収するためには、細菌をペレット化し、上清から濾別しなければならない。

ペレット細菌培養物は、ＳＬＡ－３０００ローターを備えたＳｏｒｖａｌｌＲＣ－５Ｃ遠心機を使用し、培養物を最低７，０００ｒｐｍで最低１５分間遠心分離することによって生成される。次いで、上清を新しい滅菌容器にデカントする。

上清を０．２μｍフィルターで濾過する。濾過性の悪い上清（フィルターを通過する上清が３００ｍｌ未満）の場合、０．２μｍ真空フィルターの前に０．４５μｍカプセルフィルターが取り付けられる。濾過した上清を４℃で保存する。濾過した上清は、次いで、ＴＦＦを使用して濃縮できる。

超遠心分離を使用したＥＶの単離
濃縮された上清を超遠心機で遠心分離してＥＶをペレット化し、より小さい生体分子からＥＶを単離する。速度は２００，０００×ｇ、時間は１時間、温度は４℃である。ローターが停止したら、チューブを超遠心機から取り出し、上清を静かに注ぎ出す。更に上清を加え、チューブを再度遠心分離する。全ての濃縮された上清が遠心分離された後、生成されたペレットは「粗製」ＥＶペレットと呼ばれる。滅菌１ｘＰＢＳをペレットに加え、容器に入れる。容器を速度７０に設定したシェーカー上に４℃で一晩以上置く。ＥＶペレットを追加の滅菌１ｘＰＢＳに再懸濁する。再懸濁した粗製ＥＶサンプルを４℃又は－８０℃で保存する。

密度勾配を使用したＥＶの精製
ＥＶの精製には密度勾配が使用される。超遠心分離中、サンプル中の粒子は、その「浮遊」密度に基づいて段階的密度媒体内で移動し、分離する。このようにして、ＥＶは、サンプル中の糖、脂質又は他のタンパク質などの他の粒子から分離される。

ＥＶ精製には、４つの異なるパーセンテージの密度媒体（６０％Ｏｐｔｉｐｒｅｐ）、４５％層、３５％層、２５％及び１５％層が使用される。これにより、段階的な層が作成される。滅菌１×ＰＢＳからなる０％層を上部に加える。４５％勾配層には粗製ＥＶサンプルが含まれている必要がある。５ｍｌのサンプルを１５ｍｌのＯｐｔｉＰｒｅｐ（商標）に添加する。粗製ＥＶサンプルが５ｍｌ未満の場合、滅菌１ｘＰＢＳを使用して定量にする。

血清ピペットを使用して、４５％勾配混合物をピペットで上下させて混合する。次いで、ラベルを付した清潔な滅菌超遠心管にサンプルをピペットで移す。次に、１０ｍｌ血清ピペットを使用して、１３ｍｌの３５％勾配混合物をゆっくりと加える。次に、１３ｍｌの２５％勾配混合物を加え、続いて１３ｍｌの１５％混合物、最後に６ｍｌの滅菌１ｘＰＢＳを加える。超遠心管は滅菌１ｘＰＢＳで平衡にする。勾配混合物を慎重にローターに配置し、超遠心機を２００，０００×ｇ、４℃に設定する。勾配混合物を少なくとも１６時間遠心分離する。

清潔なピペットを使用して目的の画分を取り出し、１５ｍｌコニカルチューブに加える。これらの「精製」ＥＶサンプルを４℃で保管する。

ＥＶから残留するＯｐｔｉＰｒｅｐ（商標）を洗浄及び除去するために、精製されたＥＶに１０倍量のＰＢＳが添加される。超遠心機を２００，０００×ｇ、４℃に設定する。１時間にわたって遠心分離及び回転させる。チューブを超遠心機から慎重に取り出し、上清をデカントする。精製されたＥＶは、全てのサンプルがペレット化されるまで洗浄される。１ｘＰＢＳを精製ペレットに加え、容器に入れる。容器を速度７０に設定したシェーカー上に４℃で一晩以上置く。「精製」ＥＶペレットを追加の滅菌１ｘＰＢＳに再懸濁する。再懸濁した精製ＥＶサンプルを４℃又は－８０℃で保存する。

実施例９：プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ｓｍＥＶの作用機序
一部の細菌は、親細菌と含有分子を共有する細胞外小胞（ｓｍＥＶ）を、体積の約１／１０００の粒子内に非複製形態で産生する。

抗炎症薬理学のためのＥＶのスクリーニングから選択されたプレボテラ科（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｃｅａｅ）の単一のグラム陰性菌株に由来するプレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ｓｍＥＶの経口投与調製物の前臨床薬理効果、作用機序及び生体内分布。経口送達されたプレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ｓｍＥＶは、Ｔｈ１及びＴｈ１７炎症のマウスモデルにおいて強力に炎症を軽減する、腸に限定された細菌性ＥＶである。

この実施例では、試験で使用したプレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）細胞外小胞（ｓｍＥＶ）は、プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）Ｂ株（ＮＲＲＬ受託番号Ｂ５０３２９）から単離された。

経口投与されるプレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ｓｍＥＶは、抗炎症効果のために複数の経路を要する。キーホールリンペットヘマグルチニン（ＫＬＨ）に対する遅延型過敏症（ＤＴＨ）反応を起こしているマウスに、５～８日目に２Ｅ１０粒子／用量のプレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ＥＶを強制経口投与した。試験中、示されているように、抗体の腹腔内注射によって様々な作用機序が調べられた。図１Ａ：グラフは、ＫＬＨタンパク質によるチャレンジ及びＴＬＲ２又はＩＬ－１０Ｒシグナル伝達の遮断から２４時間後の耳の厚さの変化を示す。図１Ｂ：グラフは、ＫＬＨタンパク質によるチャレンジ及びリンパ球腸ホーミングの阻害（抗ＣＤ６２及び抗ＬＰＡＭ－１抗体による）から２４時間後の耳の厚さの変化を示す。点は個々のマウスを示し、線は耳の厚さの中央値の変化を示す。データは２つの独立した試験の代表である。統計分析は、一元配置分散分析（対ビヒクル）又は両側不対ｔ検定（アイソタイプ対処理済）を使用して実施した。Ｎｓ＝有意でない、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。

プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ｓｍＥＶは消化管に限定される。ＩＲＤｙｅ８００又は色素のみの対照で共有結合的に標識されたプレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ＥＶの２Ｅ１０粒子をマウスに静脈内注射又は経口投与した。１０分間、１時間、６時間又は２４時間後、小動物イメージングシステム（ＬｉｃｏｒＰｅａｒｌ（登録商標））を使用して臓器（脾臓、肝臓、消化管、ＭＬＮ（腸間膜リンパ節）、腎臓、肺）における蛍光を測定した。データは示さず。結果は、経口投与されたプレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ＥＶが腸に限定されているようであることを示した。

プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ｓｍＥＶは、ＴＬＲ２の刺激後にＩＬ－１０の放出を誘導する。図２：プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ＥＶは、ＴＬＲ１／２及びＴＬＲ２／６ヘテロ二量体の両方を刺激し、ＴＬＲ１／２ヘテロ二量体に対してより高い効力を有する。ヒトＴＬＲ１、ＴＬＲ２及びＴＬＲ６の組み合わせを発現するＨＥＫ２９３－ＳＥＡＰレポーター細胞（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）を、示された濃度のプレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ＥＶと２４時間インキュベートした。上清を収集し、分泌型胎児性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）産生を分析して、ＴＬＲ２ヘテロ二量体の刺激を決定した。図３：プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ＥＶによって刺激された、Ｕ９３７細胞からのＩＬ－１０放出は、ＴＬＲ１又はＴＬＲ２の抗体媒介型遮断によって障害されるが、ＴＬＲ６では障害されない。ＰＭＡ分化ヒト単球Ｕ９３７細胞を、プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ＥＶ±２．５μｇ／ｍＬの抗ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ６又はアイソタイプ対照抗体と共に２４時間インキュベートした。上清を収集し、ＭＳＤによってＩＬ－１０反応について分析した。データは２つの独立した実験の代表である。

プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ｓｍＥＶは、ヒトＰＢＭＣ由来のＩＬ－１０及びＩＬ－２７の濃度依存的な産生を誘導する。ＰＢＭＣを６人のヒトドナーの全血から単離し、ウェルあたり１００，０００細胞でプレーティングし、一晩静置し、次いで異なる濃度のプレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ＥＶと共に２４時間インキュベートした。上清を収集し、ＩＬ－１０（図４Ａ）及びＩＬ－２７（図４Ｂ）濃度をＭＳＤによって決定した。データは２つの独立した実験の代表である。

結論：経口送達された微生物細胞外小胞は、自然炎症状態を確立している炎症を広範囲に消散させる。プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ＥＶの有効性は、腸リンパ組織へのリンパ球ホーミングに加え、ＴＬＲ２受容体及びＩＬ－１０受容体の両方の刺激に依存する。プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ＥＶは、ＩＬ－１０のＴＬＲ２依存性放出を誘導する。ＥＶは、経口投与され腸に制限される治療薬であり、動物モデルにおいて明らかな安全性又は忍容性の問題はなく、望ましい治療プロファイルとなる。

これらのデータは、新しい種類の免疫療法薬としてのＥＶの開発を裏付けるものである。それらは小腸軸を関与させるのに特に効果的であり、腸内の宿主細胞に局所的に作用して遠位免疫反応を活性化する。プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ＥＶは、異常なＴｈ１及びＴｈ１７免疫反応の両方を含む炎症性疾患について、前臨床開発中である。

実施例１０：プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ｓｍＥＶ凍結乾燥物：ＤＴＨの有効性
雌の５週齢Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、ＴａｃｏｎｉｃＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入し、ビバリウムで１週間順化させた。０日目に、皮下免疫により、ＫＬＨ及びＣＦＡ（１：１）のエマルジョンでマウスをプライミングした。マウスに、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ｓｍＥＶを毎日強制経口投与するか、又は６～８日目に１ｍｇ／ｋｇのデキサメタゾン（陽性対照）を腹腔内投与した。８日目の投与後、マウスをイソフルランで麻酔し、左耳をＦｏｗｌｅｒカリパスでベースライン測定値のために測定した後、左耳において生理食塩水（１０μｌ）中のＫＬＨでマウスを皮内チャレンジし、耳の厚さを２４時間時点で測定した。

この実施例では、試験で使用したプレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）細胞外小胞（ｓｍＥＶ）は、プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）Ｂ株（ＮＲＲＬ受託番号Ｂ５０３２９）から単離された。ｓｍＥＶを賦形剤配合７ａ中で凍結乾燥した。

２４時間時点の耳介測定結果を図５に示す。プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）から作製され、配合７ａの賦形剤中で凍結乾燥されたＥＶを、３日間の投与で、４用量（２Ｅ０９、２Ｅ０７、２Ｅ０５、２Ｅ０３）による用量範囲試験でテストした。プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ＥＶの全用量は、最低用量（２Ｅ０３）以外はビヒクルと比較して有効であり、用量反応傾向が見られた。陰性対照として、配合７ａのみを使用した（２ｅ１１ＥＶが製剤化された場合に存在する量と同等の用量の賦形剤成分を含む）。

実施例１１：乾燥のための追加のストック
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細菌由来のＥＶは、表Ｋに提供されるストックの１つを使用して、凍結乾燥又は噴霧乾燥などによって乾燥される。

表Ｌの乾燥条件が凍結乾燥に使用される。

実施例１２：プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ｓｍＥＶの噴霧乾燥粉末
この実施例では、試験で使用した細胞外小胞（ｓｍＥＶ）は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）Ｂ株から単離された。

ｓｍＥＶは以下のように噴霧乾燥した。

ＥＶ保持液を、表Ｐに提供される賦形剤の１つと混合した。

噴霧乾燥は１００℃又は１３０℃で実施した。表Ｑには温度も含まれている。

噴霧乾燥後、各粉末の水分含有量（ＭＣ）（カールフィッシャー滴定（ＫＦ）による）及び粒子（噴霧乾燥粉末１ｍｇあたりの粒子数（ｐ／ｍｇ））（Ｚｅｔａｖｉｅｗを使用したナノ粒子追跡分析（ＮＴＡ）による定量）を分析した。結果を表Ｑに示す。ＥＸＰ７Ａは配合７ａのストックである。

噴霧乾燥も、ＰＥＧ６０００－マンニトール－トレハロース（６０：２０：２０）からなるストックを使用して実施された。しかし、他の方法と比較して回収される乾燥生成物が少なく、それ以上の分析は行われなかった。

プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ｓｍＥＶを、配合７ａ（Ｆ７Ａ）のストック内、入口温度１３０℃で、２つの濃度：２５Ｘ及び５００Ｘで噴霧乾燥又は凍結乾燥した。

噴霧乾燥粉末１ｍｇ当たりの粒子数及びサイズの比較を表Ｒに示す。ＳＤ＝噴霧乾燥；Ｌ０．４７＝凍結乾燥；０．４７は使用されたストック比を指す：保持液１００ｇごとに４７ｇの賦形剤。

噴霧乾燥及び凍結乾燥されたＥＶの粒子充填及びサイズは、両方の乾燥方法で、同様であった。

実施例１３：プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ｓｍＥＶ及び抗ＴＮＦａ抗体：ＤＴＨの有効性
この実施例では、試験で使用した細胞外小胞（ｓｍＥＶ）は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）Ｂ株から単離された。

雌の５週齢Ｃ５７ＢＬ／６マウスは、ＴａｃｏｎｉｃＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入し、ビバリウムで１週間順化させた。０日目に、皮下免疫により、ＫＬＨ及びＣＦＡ（１：１）のエマルジョンでマウスをプライミングした。０日目、３日目及び６日目に、３ｍｇ／ｋｇの抗ＴＮＦアルファ（抗ＴＮＦａ）抗体（クローン：ＸＴ３．１１、ＢｉｏＸＣｅｌｌから購入）又は同等のアイソタイプ対照（ＩｇＧ１、ＢｉｏＸＣｅｌｌから購入）をマウスに腹腔内注射した。マウスに、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）細胞外小胞（ｓｍＥＶ）を毎日強制経口投与するか、又は５～８日目に１ｍｇ／ｋｇのデキサメタゾンを腹腔内投与した。８日目の投与後、マウスをイソフルランで麻酔し、左耳をＦｏｗｌｅｒカリパスでベースライン測定値のために測定した後、左耳において生理食塩水（１０μｌ）中のＫＬＨでマウスを皮内チャレンジした。耳の厚さの測定を２４時間後に行った。

２４時間時点の耳介測定結果を図６に示す。プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）から作製したｓｍＥＶ（用量あたり２Ｅ０９粒子）を、単独で又は３ｍｇ／ｋｇの抗ＴＮＦアルファ抗体又は同等のアイソタイプ対照（ＩｇＧ１）と組み合わせて、試験した。３ｍｇ／ｋｇの抗ＴＮＦアルファ抗体も、単独で又はビヒクル対照と共にテストした。プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ｓｍＥＶと抗ＴＮＦアルファの組み合わせは、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ｓｍＥＶ単独及び抗ＴＮＦアルファ抗体単独の両方よりも有効であった。

実施例１４：プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ｓｍＥＶの経口投与は非炎症条件下で免疫系を阻害しない
この実施例では、試験で使用した細胞外小胞（ｓｍＥＶ）は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）Ｂ株から単離された。

ＫＬＨＤＴＨ反応前又は後の経口投与：この研究では２つのマウスグループを使用した。免疫前にｓｍＥＶ又は対照を投与した「免疫前」マウス及び免疫後にｓｍＥＶ又は対照を投与した「免疫後」マウスである。－５日目から開始して、「免疫前」マウスにＰＢＳビヒクルＰＯ、デキサメタゾン（１ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ（腹腔内））又はプレボテラｓｍＥＶ若しくは別の細菌株由来のｓｍＥＶＰＯ（経口）を４日間毎日投与した。０日目に、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）で乳化させたＫＬＨを皮下注射することによって全てのマウスを免疫した。「免疫後」マウスに、免疫後５日目から開始して毎日、スクロースビヒクル、プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ｓｍＥＶ若しくは別の細菌株由来のｓｍＥＶＰＯ又はデキサメタゾン（１ｍｇ／ｋｇ、ＩＰ）を４日間投与した。８日目に、カリパスを使用してベースラインの耳の厚さを測定し、次いでマウスをＫＬＨの皮内耳注射によりチャレンジした。２４時間後、耳の厚さの変化を評価し、ベースラインの測定値と比較した。プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ｓｍＥＶ及び別の細菌株由来のｓｍＥＶを、２Ｅ９粒子／用量で使用した。他の細菌株ｓｍＥＶは、ＤＴＨモデルにおける炎症を軽減する能力に基づいて試験に選択された。

結果及び結論：結果を図７に示す。デキサメタゾンによる処置により、その後のＤＴＨ反応における炎症が軽減された。免疫前にプレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ｓｍＥＶ又は別の細菌株由来のｓｍＥＶを投与しても、皮内耳チャレンジによってその後誘発された炎症は軽減されなかった。免疫後にプレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ｓｍＥＶ又は別の細菌株からのｓｍＥＶを投与すると、チャレンジ後の耳の炎症が軽減された。これらのデータは、炎症の不存在下で投与されたｓｍＥＶは、免疫反応を阻害せず、代わりに進行中の炎症反応を解消することを示している。

実施例１５：炎症誘発時の抗原特異的反応は、その後のプレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ｓｍＥＶによるＫＬＨＤＴＨ反応における炎症の解消に必要でない
この実施例では、試験で使用した細胞外小胞（ｓｍＥＶ）は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）Ｂ株から単離された。

完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）（ＴＬＲアゴニスト及び加熱死菌結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）を含有）及び不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）（ＴＬＲアゴニストのみを含有する）は、それぞれＴｈ１及びＴｈ２免疫反応を駆動することが示されている。更に、ＩＦＡ－ＰＢＳ免疫は、抗原が存在しない炎症反応を誘導する。

炎症誘発後の投与は、その後のＫＬＨＤＴＨチャレンジにおける炎症消散を誘発するのに十分である。－９日目に、完全又は不完全フロイントアジュバント（それぞれＣＦＡ又はＩＦＡ）で乳化したＰＢＳを皮下注射して、「ＰＢＳ－ＩＦＡ」及び「ＰＢＳ－ＣＦＡ」マウスを免疫した。－５日目に、マウスにＰＢＳビヒクルＰＯ又はプレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ｓｍＥＶＰＯを４日間毎日経口投与した。０日目に、完全フロイントアジュバントで乳化させたＫＬＨでマウスを免疫したが、ＫＬＨ－ＣＦＡ免疫後にｓｍＥＶは投与しなかった。５日目に、カリパスを使用してベースラインの耳の厚さを測定し、次いでマウスをＫＬＨの皮内耳注射によりチャレンジした。２４時間後、耳の厚さの変化を評価し、ベースラインの測定値と比較した。プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ｓｍＥＶを、２Ｅ９粒子／用量で使用した。

結果及び結論：結果を図８に示す。ＫＬＨ感作前、ＣＦＡ又はＩＦＡを用いた炎症の誘発中にのみ投与されたｓｍＥＶは、耳チャレンジ後のＫＬＨＤＴＨ反応を阻害することができた。これらのデータは、ＤＴＨ（ＫＬＨ）で使用される関連抗原の不存在下での全身性炎症の誘発は、ＫＬＨＤＴＨの有効性にとって十分であり、したがって、抗原特異的炎症を軽減することができる抗原非依存性機構であることを示している。

実施例１６：プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ｓｍＥＶを投与されたＫＬＨ－ＣＦＡ免疫マウス由来のＣＤ４＋Ｔ細胞の養子移植は、レシピエントＫＬＨ－ＣＦＡ免疫マウスの免疫回復をもたらす
この実施例では、試験で使用した細胞外小胞（ｓｍＥＶ）は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）Ｂ株から単離された。

経口投与されたＫＬＨ－ＣＦＡ免疫マウスからＫＬＨ－ＤＴＨ免疫レシピエントマウスへのＣＤ４＋Ｔ細胞の養子細胞移植：０日目に、完全フロイントアジュバントで乳化させたＫＬＨを皮下注射することによって「ドナーマウス」を免疫した。５日目に、「レシピエントマウス」に完全フロイントアジュバントで乳化させたＫＬＨを皮下注射することによって免疫し、「ドナーマウス」にＰＢＳビヒクル又はプレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ｓｍＥＶ若しくは別の細菌株由来のｓｍＥＶＰＯを４日間毎日投与した。９日目に、上腕、腋窩、鼠径リンパ節及び脾臓をドナーマウスから採取し、磁気ビーズでのネガティブセレクションによってＣＤ４＋Ｔ細胞を富化した。次いで、富化された細胞を計数し、ＰＢＳ（３００×ｇ、１０分間、４℃）で洗浄し、５×１０^７細胞／ｍＬでＰＢＳに再懸濁した。富化後、５×１０^６個のＣＤ４＋Ｔ細胞をＩＰ注射によって「レシピエントマウス」に移植した。１２日目に、カリパスを使用してベースラインの耳の厚さを測定し、次いでレシピエントマウスをＫＬＨの皮内耳注射によりチャレンジした。２４時間後、耳の厚さの変化を評価し、ベースラインの測定値と比較した。プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ｓｍＥＶ及び別の細菌株由来のｓｍＥＶを、２Ｅ９粒子／用量で使用した。他の細菌株ｓｍＥＶは、ＤＴＨモデルにおける炎症を軽減する能力に基づいて試験に選択された。

結果及び結論：結果を図９に示す。プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）で処置したマウスから移植したＣＤ４＋Ｔ細胞及び別の細菌株からのｓｍＥＶは、ｓｍＥＶで処置されていないレシピエントマウスのＤＴＨ反応を阻害できたが、ＰＢＳビヒクルで処置したドナー由来のＣＤ４＋Ｔ細胞は、レシピエントマウスでは効果がなかった。これらのデータは、プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ｓｍＥＶ又は別の細菌株由来のｓｍＥＶの経口投与により、プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ｓｍＥＶ又は別の細菌株由来のｓｍＥＶの経口投与を受けていない炎症を起こしたマウスの炎症を解消できるＣＤ４＋Ｔ細胞の集団が生成されたことを示している。

実施例１７：プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ｓｍＥＶの経口投与中、ＴＬＲ２シグナル伝達は、レシピエントＫＬＨＤＴＨモデルにおける免疫回復を媒介するために養子移植できるＣＤ４＋Ｔ細胞の生成に不可欠である
この実施例では、試験で使用した細胞外小胞（ｓｍＥＶ）は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）Ｂ株から単離された。

小腸には、微生物の複数の成分を認識するトール様受容体（ＴＬＲ）が多量に含まれている。本発明者らは過去に、プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ｓｍＥＶの経口投与により、ＫＬＨＤＴＨモデルへの養子移植後の免疫回復を媒介するＣＤ４＋Ｔ細胞の集団を生成できることを示した。

抗ＴＬＲ２で処置された経口投与ＫＬＨ－ＣＦＡ免疫マウスからＫＬＨ－ＤＴＨ免疫レシピエントマウスへのＣＤ４＋Ｔ細胞の養子細胞移植：０日目に、完全フロイントアジュバントで乳化させたＫＬＨを皮下注射することによって「ドナーマウス」を免疫し、０日目、３日目及び６日目に抗ＴＬＲ２又はラットＩｇＧ２ａアイソタイプ対照抗体（２μｇ／マウス）ＩＰで処置した。５日目に、「レシピエントマウス」に完全フロイントアジュバントで乳化させたＫＬＨを皮下注射することによって免疫し、「ドナーマウス」にＰＢＳビヒクル又はプレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ｓｍＥＶＰＯを４日間毎日投与した。９日目に、上腕、腋窩、鼠径リンパ節及び脾臓をドナーマウスから採取し、磁気ビーズでのネガティブセレクションによってＣＤ４＋Ｔ細胞を富化した。次いで、富化された細胞を計数し、ＰＢＳ（３００×ｇ、１０分間、４℃）で洗浄し、５×１０^７細胞／ｍＬでＰＢＳに再懸濁した。富化後、５×１０^６個のＣＤ４＋Ｔ細胞をＩＰ注射によって「レシピエントマウス」に移植した。１２日目に、カリパスを使用してベースラインの耳の厚さを測定し、次いでレシピエントマウスをＫＬＨの皮内耳注射によりチャレンジした。２４時間後、耳の厚さの変化を評価し、ベースラインの測定値と比較した。プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ｓｍＥＶを、２Ｅ９粒子／用量で使用した。

結果及び結論：結果を図１０に示す。ＰＢＳビヒクル及び抗ＴＬＲ２遮断抗体で処置したマウスから単離されたＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＰＢＳ単独又はアイソタイプ対照抗体を含むＰＢＳで処置したマウスからのＣＤ４＋Ｔ細胞と比較して、ＫＬＨに対するＤＴＨ反応を阻害しなかった。以前に示されたように、プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ｓｍＥＶ及びアイソタイプ対照抗体で処置したマウスからのＣＤ４＋Ｔ細胞はこのモデルで有効であり、皮内ＫＬＨチャレンジ後の耳の炎症を阻害できた。しかし、抗ＴＬＲ２抗体の存在下でプレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ｓｍＥＶを投与したマウスから移植されたＣＤ４＋Ｔ細胞は、レシピエントマウスでは効果がなく、耳の腫れはＰＢＳで処理されたＣＤ４＋Ｔ細胞のものと同等であった。ドナーマウスにおけるこの受容体の抗体媒介遮断により、プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ＥＶ投与マウスから移植されたＣＤ４＋Ｔ細胞の有効性がなくなったため、これらのデータは、ＴＬＲ２シグナル伝達がプレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ＥＶ誘導性の免疫回復ＣＤ４＋Ｔ細胞の生成に必須であったことを実証している。

実施例１８：プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ｓｍＥＶを投与されたＫＬＨ－ＣＦＡ免疫マウス由来のＣＤ８＋Ｔ細胞の養子移植は、レシピエントＫＬＨ－ＣＦＡ免疫マウスの免疫回復をもたらさない
この実施例では、試験で使用した細胞外小胞（ｓｍＥＶ）は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）Ｂ株から単離された。

本発明者らは過去に、プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ＥＶ投与マウスからのＣＤ４＋Ｔ細胞の養子移植がＫＬＨ－ＤＴＨレシピエントの炎症を解消する能力があることを示した。

経口投与されたＫＬＨ－ＣＦＡ免疫マウスからＫＬＨ－ＤＴＨ免疫レシピエントマウスへのＣＤ８＋Ｔ細胞の養子細胞移植：０日目に、完全フロイントアジュバントで乳化させたＫＬＨを皮下注射することによって「ドナーマウス」を免疫した。５日目に、「レシピエントマウス」に完全フロイントアジュバントで乳化させたＫＬＨを皮下注射することによって免疫し、「ドナーマウス」にＰＢＳ又はプレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ｓｍＥＶ若しくは別の細菌株由来のｓｍＥＶＰＯを４日間ＱＤ投与した。９日目に、上腕、腋窩、鼠径リンパ節及び脾臓をドナーマウスから採取し、磁気ビーズでのネガティブセレクションによってＣＤ４＋Ｔ細胞を富化した。次いで、富化された細胞を計数し、ＰＢＳ（３００×ｇ、１０分間、４℃）で洗浄し、５×１０^７細胞／ｍＬでＰＢＳに再懸濁した。富化後、５×１０^６個のＣＤ８＋Ｔ細胞をＩＰ注射によって「レシピエントマウス」に移植した。１２日目に、カリパスを使用してベースラインの耳の厚さを測定し、次いでレシピエントマウスをＫＬＨの皮内耳注射によりチャレンジした。２４時間後、耳の厚さの変化を評価し、ベースラインの測定値と比較した。プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ｓｍＥＶ及び別の細菌株由来のｓｍＥＶを、２Ｅ９粒子／用量で使用した。他の細菌株ｓｍＥＶは、ＤＴＨモデルにおける炎症を軽減する能力に基づいて試験に選択された。

結果及び結論：結果を図１１に示す。ＣＤ４＋Ｔ細胞と異なり、ＫＬＨ－ＣＦＡ炎症を起こしたプレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ｓｍＥＶ及び別の細菌株由来のｓｍＥＶを投与されたドナーマウスからのＣＤ８＋Ｔ細胞の、ＫＬＨ－ＣＦＡ炎症を起こしたレシピエントマウスへの養子細胞移植は、レシピエントマウスにおいてＫＬＨＤＴＨモデルの免疫回復をもたらさなかった。これらのデータは、プレボテラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ）ｓｍＥＶ及び別の細菌株由来のｓｍＥＶを経口投与すると、免疫回復性ＣＤ４＋Ｔ細胞の集団を誘導するが、レシピエントマウスのＤＴＨ反応を阻害できるＣＤ８＋Ｔ細胞は誘導しないことを示唆している。

実施例１９：プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ｓｍＥＶを含む固形剤形の調製
表Ｓの製法の錠剤を調製した。

表Ｓのプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ｓｍＥＶは、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）Ｂ５０３２９株（ＮＲＲＬ受託番号Ｂ５０３２９）由来である。

原薬（粉末）は、賦形剤配合７ａを使用して凍結乾燥によって調製した。ＨＳＤＳ：高強度原薬。ＬＳＤＳ：低強度原薬。ＬＳＤＳは、凍結乾燥前にＨＳＤＳを（凍結乾燥賦形剤を使用して）１０倍に希釈することによって調製された。

医薬組成物錠剤を調製するために、ｓｍＥＶを含有する原薬（医薬品）に湿式造粒を実施した。原薬は、（ｉ）水と混合され、（ｉｉ）流動層乾燥機で乾燥され、（ｉｉｉ）粉砕され、（ｉｖ）次いで、表Ｓに提供される薬物製品賦形剤とブレンドされる。

錠剤は５．５ｍｍ×１５．８ｍｍであった。

実施例２０：プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ｓｍＥＶを含む固形剤形の調製
表Ｔの製法のカプセルを調製した。

表Ｔのプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ｓｍＥＶは、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）Ｂ５０３２９株（ＮＲＲＬ受託番号Ｂ５０３２９）由来である。

原薬（粉末）は、賦形剤配合７ａを使用して凍結乾燥によって調製した。ＨＳＤＳ：高強度原薬。ＬＳＤＳ：低強度原薬。ＬＳＤＳは、凍結乾燥前にＨＳＤＳを（凍結乾燥賦形剤を使用して）１０倍に希釈することによって調製された。ＨＳＤＳ：高強度原薬。ＬＳＤＳ：低強度原薬。

ＬＳＤＳは、凍結乾燥前にＨＳＤＳを（凍結乾燥賦形剤を使用して）１０倍に希釈することによって調製された。

医薬組成物カプセルを調製するために、ｓｍＥＶを含有する原薬（医薬品）に湿式造粒を実施した。原薬は、（ｉ）水と混合され、（ｉｉ）流動層乾燥機で乾燥され、（ｉｉｉ）粉砕され、（ｉｖ）次いで、表Ｔに提供される薬物製品賦形剤とブレンドされる。

カプセルは０号であった。

実施例２１：原薬のテスト
原薬（ＤＳ）の調製に使用されるプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）ｓｍＥＶは、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）Ｂ５０３２９株（ＮＲＲＬ受託番号Ｂ５０３２９）由来である。

原薬（粉末）は、賦形剤配合７ａ（８０％マンニトール；２０％トレハロース）を使用して凍結乾燥によって調製した。ＨＳＤＳ：高強度原薬。ＬＳＤＳ：低強度原薬。ＬＳＤＳは、凍結乾燥前にＨＳＤＳを（凍結乾燥賦形剤を使用して）１０倍に希釈することによって調製された。

ＨＳＤＳ及びＬＳＤＳは、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、マクロファージ及び樹状細胞で実施したインビトロアッセイで評価した。細胞は５人のドナーから入手した；５人のドナーを生物学的複製として実行し、データは平均反応として表した。段階希釈を実施した：ＨＳＤＳ及びＬＳＤＳの両方の１×１０^３、１×１０^４、１×１０^５、１×１０^６、１×１０^７、１×１０^８、１×１０^９及び１×１０^１０個の粒子を、ＰＢＭＣ、マクロファージ及び樹状細胞からのサイトカイン分泌に対する影響について評価した。同様の傾向が３つの細胞集団全てにわたって見られた。ＨＳＤＳ及びＬＳＤＳは、３つの細胞集団全てからＩＬ－１０、ＩＬ－２７、ＩＬ－６、ＩＰ－１０及びＴＮＦａを誘導することができた。樹状細胞は、両方のＤＳに反応して低レベルのＩＬ－２７及びＩＰ－１０を産生した。

ＨＳＤＳ及びＬＳＤＳは、Ｕ９３７で実施したインビトロアッセイで評価した。段階希釈を実施した：ＨＳＤＳ及びＬＳＤＳの両方の７．０６×１０^３、２．１２×１０^４、６．３５×１０^４、１．９１×１０^５、５．７２×１０^５、１．７１×１０^６、５．１４×１０^６、１．５４×１０^７、４．６３×１０^７、１．３９×１０^８、４．１７×１０^８及び１．２５×１０^９個の粒子を、Ｕ９３７細胞からのサイトカイン分泌に対する影響について評価した。ＨＳＤＳ及びＬＳＤＳは、Ｕ９３７細胞からＩＬ－１０、ＩＬ－２７、ＩＬ－６、ＩＰ－１０及びＴＮＦａを誘導することができた。

参照による組み込み
本明細で言及される全ての刊行物、特許出願は、個々の刊行物又は特許出願の各々が具体的に且つ個々に参照により組み込まれていると示されているかのように、それら全体が参照により本明細書に組み込まれる。競合する場合、本明細書中の定義を含む本出願が優先されることとなる。

均等物
当業者は、日常的実験のみを使用して、本明細書に記載された本発明の特定の実施形態に対する多くの均等物を認識又は確認することがきできるであろう。そのような均等物は、以下の特許請求の範囲に包含されるものとする。

Claims

対象のＴＬＲ２を活性化する方法であって、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は前記細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）の用量（例えば、治療有効用量）を前記対象に投与する（例えば、経口投与する）ことを含む方法。
対象の抗炎症性サイトカイン反応を活性化する方法であって、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）及び／又は前記細胞外小胞を含む組成物（例えば、溶液、乾燥形態及び／又は治療用組成物）の用量（例えば、治療有効用量）を前記対象に投与する（例えば、経口投与する）ことを含む方法。
前記細胞外小胞は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）Ｂ株（ＮＲＲＬ受託番号Ｂ５０３２９）のヌクレオチド配列（例えば、ゲノム配列、１６Ｓ配列、ＣＲＩＳＰＲ配列）に対して少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性（例えば、少なくとも９９．５％の配列同一性、少なくとも９９．６％の配列同一性、少なくとも９９．７％の配列同一性、少なくとも９９．８％の配列同一性、少なくとも９９．９％の配列同一性）を含むプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来である、請求項１又は２に記載の方法。
前記プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株は、前記プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）Ｂ株（ＮＲＲＬ受託番号Ｂ５０３２９）である、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
前記対象は、免疫障害を有する、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
前記免疫障害は、関節硬化症、関節炎、静脈炎、血管炎及びリンパ管炎、胆管炎、胆嚢炎、腸炎、小腸結腸炎、胃炎、胃腸炎、炎症性腸疾患、回腸炎、直腸炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、過敏性腸症候群、顕微鏡的大腸炎、リンパ球性－形質細胞性腸炎、セリアック病、コラーゲン大腸炎、リンパ球性大腸炎、好酸球性腸炎、不確定大腸炎、偽膜性大腸炎（壊死性大腸炎）、虚血性炎症性腸疾患、ベーチェット病、サルコイドーシス、強皮症、ＩＢＤ関連異形成、異形成関連の腫瘤又は病変、原発性硬化性胆管炎、子宮頸管炎、絨毛羊膜炎、子宮内膜炎、精巣上体炎、臍炎、卵巣炎、精巣炎、卵管炎、卵管卵巣膿瘍、尿道炎、腟炎、外陰炎、外陰部痛、急性播種性全身性脱毛症、ベーチェット病、シャーガス病、慢性疲労症候群、自律神経障害、脳脊髄炎、強直性脊椎炎、再生不良性貧血、化膿性汗腺炎、自己免疫性肝炎、自己免疫性卵巣炎、セリアック病、１型糖尿病、巨細胞性動脈炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本病、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、川崎病、紅斑性狼瘡、顕微鏡的大腸炎、顕微鏡的多発動脈炎、混合性結合組織病、マックル・ウェルズ症候群、多発性硬化症、重症筋無力症、眼球クローヌス・ミオクローヌス症候群、視神経炎、オード甲状腺炎、天疱瘡、結節性多発動脈炎、多発性筋痛、関節リウマチ、ライター症候群、シェーグレン症候群、側頭動脈炎、ウェゲナー肉芽腫症、温式自己免疫性溶血性貧血、間質性膀胱炎、ライム病、モルフェア、乾癬、サルコイドーシス、強皮症、接触過敏症、接触性皮膚炎（ツタウルシに起因するものを含む）、じんま疹、皮膚アレルギー、呼吸アレルギー（枯草熱、アレルギー性鼻炎、チリダニアレルギー）、虫垂炎、皮膚炎、皮膚筋炎、心内膜炎、結合織炎、歯肉炎、舌炎、化膿性汗腺炎、虹彩炎、喉頭炎、乳腺炎、心筋炎、腎炎、耳炎、膵炎、耳下腺炎、心膜炎、腹膜炎、咽頭炎、胸膜炎、間質性肺炎、前立腺炎、腎盂腎炎、口内炎、移植片拒絶、急性膵炎、慢性膵炎、急性呼吸促迫症候群、セザール症候群、先天性副腎過形成、非化膿性甲状腺炎、癌と関連する高カルシウム血症、天疱瘡、水疱性ヘルペス状皮膚炎、重度の多形性紅斑、剥離性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、季節性の又は通年性のアレルギー性鼻炎、気管支喘息、接触性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、薬物過敏症反応、アレルギー性結膜炎、角膜炎、眼部帯状疱疹、虹彩炎及び虹彩毛様体炎、脈絡網膜炎、視神経炎、症候性サルコイドーシス、電撃性の又は播種性の肺結核化学療法、成人の特発性血小板減少性紫斑病、成人の続発性血小板減少症、後天性の（自己免疫）溶血性貧血、成人の白血病及びリンパ腫、子供の急性白血病、限局性腸炎、自己免疫血管炎、慢性閉塞性肺疾患又は敗血症である、請求項５に記載の方法。
前記対象は、乾癬を有する、請求項６に記載の方法。
前記対象は、アトピー性皮膚炎を有する、請求項６に記載の方法。
前記対象は、Ｔｈ１媒介型炎症性疾患を有する、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
前記対象は、Ｔｈ２媒介型炎症性疾患を有する、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
前記対象は、Ｔｈ１７媒介型炎症性疾患を有する、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
前記ＥＶは、経口投与される、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。
前記用量は、任意選択的に腸溶性コーティングを含む、１つ以上のカプセル（例えば、腸溶性コーティングされたカプセル）の形態である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
前記用量は、任意選択的に腸溶性コーティングを含む、１つ以上の錠剤（例えば、腸溶性コーティングされた錠剤）の形態である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
前記用量は、１つ以上の小型錠剤の形態である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
前記小型錠剤は、腸溶性コーティングされた小型錠剤である、請求項１５に記載の方法。
前記用量は、腸溶性コーティングされた小型錠剤を含む、腸溶性コーティングされていないカプセルの形態である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
前記用量は、追加の治療薬と組み合わせて投与される、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、増量剤を含む賦形剤とを含む溶液。
請求項１９に記載の溶液を含む治療用組成物であって、薬学的に許容される賦形剤を更に含む治療用組成物。
前記薬学的に許容される賦形剤は、流動化剤、潤滑剤及び／又は希釈剤を含む、請求項２０に記載の治療用組成物。
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、増量剤を含む賦形剤とを含む乾燥形態。
請求項２２に記載の乾燥形態を含む治療用組成物であって、薬学的に許容される賦形剤を更に含む治療用組成物。
前記薬学的に許容される賦形剤は、流動化剤、潤滑剤及び／又は希釈剤を含む、請求項２３に記載の治療用組成物。
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、増量剤を含む賦形剤とを含む治療用組成物。
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、１つ以上の賦形剤を含むストックの賦形剤とを含む溶液であって、前記ストックは、表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰに提供される配合を含む、溶液。
請求項２６に記載の溶液を含む治療用組成物であって、薬学的に許容される賦形剤を更に含む治療用組成物。
前記薬学的に許容される賦形剤は、流動化剤、潤滑剤及び／又は希釈剤を含む、請求項２７に記載の治療用組成物。
プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来の細胞外小胞（ＥＶ）と、１つ以上の賦形剤を含むストックの賦形剤とを含む乾燥形態であって、前記ストックは、表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｋ又はＰに提供される配合を含む、乾燥形態。
請求項２９に記載の乾燥形態を含む治療用組成物であって、薬学的に許容される賦形剤を更に含む治療用組成物。
前記薬学的に許容される賦形剤は、流動化剤、潤滑剤及び／又は希釈剤を含む、請求項３０に記載の治療用組成物。
対象（例えば、処置を必要とする対象）を処置する方法であって、請求項１９～３１のいずれか一項に記載の溶液、乾燥形態又は治療用組成物（例えば、その治療有効量）を前記対象に投与することを含む方法。
対象（例えば、処置を必要とする対象）の処置における使用のためのものである、請求項１９～３１のいずれか一項に記載の溶液、粉末又は治療用組成物（例えば、その治療有効量）。
対象（例えば、ヒト）（例えば、処置を必要とする対象）を処置するための薬剤の調製のための、請求項１９～３１のいずれか一項に記載の溶液、乾燥形態又は治療用組成物（例えば、その治療有効量）の使用。
前記溶液／粉末／治療組成物は、経口投与される（例えば、経口投与のためのものである）、請求項３２～３４のいずれか一項に記載の方法／溶液／粉末／治療用組成物／使用。
前記対象は、免疫障害を有する、請求項３２～３５のいずれか一項に記載の方法／溶液／粉末／治療用組成物／使用。
前記免疫障害は、関節硬化症、関節炎、静脈炎、血管炎及びリンパ管炎、胆管炎、胆嚢炎、腸炎、小腸結腸炎、胃炎、胃腸炎、炎症性腸疾患、回腸炎、直腸炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、過敏性腸症候群、顕微鏡的大腸炎、リンパ球性－形質細胞性腸炎、セリアック病、コラーゲン大腸炎、リンパ球性大腸炎、好酸球性腸炎、不確定大腸炎、偽膜性大腸炎（壊死性大腸炎）、虚血性炎症性腸疾患、ベーチェット病、サルコイドーシス、強皮症、ＩＢＤ関連異形成、異形成関連の腫瘤又は病変、原発性硬化性胆管炎、子宮頸管炎、絨毛羊膜炎、子宮内膜炎、精巣上体炎、臍炎、卵巣炎、精巣炎、卵管炎、卵管卵巣膿瘍、尿道炎、腟炎、外陰炎、外陰部痛、急性播種性全身性脱毛症、ベーチェット病、シャーガス病、慢性疲労症候群、自律神経障害、脳脊髄炎、強直性脊椎炎、再生不良性貧血、化膿性汗腺炎、自己免疫性肝炎、自己免疫性卵巣炎、セリアック病、１型糖尿病、巨細胞性動脈炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本病、ヘノッホ・シェーンライン紫斑病、川崎病、紅斑性狼瘡、顕微鏡的大腸炎、顕微鏡的多発動脈炎、混合性結合組織病、マックル・ウェルズ症候群、多発性硬化症、重症筋無力症、眼球クローヌス・ミオクローヌス症候群、視神経炎、オード甲状腺炎、天疱瘡、結節性多発動脈炎、多発性筋痛、関節リウマチ、ライター症候群、シェーグレン症候群、側頭動脈炎、ウェゲナー肉芽腫症、温式自己免疫性溶血性貧血、間質性膀胱炎、ライム病、モルフェア、乾癬、サルコイドーシス、強皮症、接触過敏症、接触性皮膚炎（ツタウルシに起因するものを含む）、じんま疹、皮膚アレルギー、呼吸アレルギー（枯草熱、アレルギー性鼻炎、チリダニアレルギー）、虫垂炎、皮膚炎、皮膚筋炎、心内膜炎、結合織炎、歯肉炎、舌炎、化膿性汗腺炎、虹彩炎、喉頭炎、乳腺炎、心筋炎、腎炎、耳炎、膵炎、耳下腺炎、心膜炎、腹膜炎、咽頭炎、胸膜炎、間質性肺炎、前立腺炎、腎盂腎炎、口内炎、移植片拒絶、急性膵炎、慢性膵炎、急性呼吸促迫症候群、セザール症候群、先天性副腎過形成、非化膿性甲状腺炎、癌と関連する高カルシウム血症、天疱瘡、水疱性ヘルペス状皮膚炎、重度の多形性紅斑、剥離性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、季節性の又は通年性のアレルギー性鼻炎、気管支喘息、接触性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、薬物過敏症反応、アレルギー性結膜炎、角膜炎、眼部帯状疱疹、虹彩炎及び虹彩毛様体炎、脈絡網膜炎、視神経炎、症候性サルコイドーシス、電撃性の又は播種性の肺結核化学療法、成人の特発性血小板減少性紫斑病、成人の続発性血小板減少症、後天性の（自己免疫）溶血性貧血、成人の白血病及びリンパ腫、子供の急性白血病、限局性腸炎、自己免疫血管炎、慢性閉塞性肺疾患又は敗血症である、請求項３６に記載の方法／溶液／粉末／治療用組成物／使用。
前記対象は、乾癬を有する、請求項３２～３７のいずれか一項に記載の方法／溶液／粉末／治療用組成物／使用。
前記対象は、アトピー性皮膚炎を有する、請求項３２～３７のいずれか一項に記載の方法／溶液／粉末／治療用組成物／使用。
前記対象は、Ｔｈ１媒介型炎症性疾患を有する、請求項３２～３５のいずれか一項に記載の方法／溶液／粉末／治療用組成物／使用。
前記対象は、Ｔｈ２媒介型炎症性疾患を有する、請求項３２～３５のいずれか一項に記載の方法／溶液／粉末／治療用組成物／使用。
前記対象は、Ｔｈ１７媒介型炎症性疾患を有する、請求項３２～３５のいずれか一項に記載の方法／溶液／粉末／治療用組成物／使用。
前記溶液／粉末／治療用組成物は、追加の治療薬と組み合わせて投与される、請求項３２～４２のいずれか一項に記載の方法／溶液／乾燥形態／治療用組成物／使用。
前記細胞外小胞は、プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）Ｂ株（ＮＲＲＬ受託番号Ｂ５０３２９）のヌクレオチド配列（例えば、ゲノム配列、１６Ｓ配列、ＣＲＩＳＰＲ配列）に対して少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％の配列同一性（例えば、少なくとも９９．５％の配列同一性、少なくとも９９．６％の配列同一性、少なくとも９９．７％の配列同一性、少なくとも９９．８％の配列同一性、少なくとも９９．９％の配列同一性）を含むプレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株由来である、請求項１９～４３のいずれか一項に記載の方法／溶液／乾燥形態／治療用組成物／使用。
前記プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）株は、前記プレボテラ・ヒスチコラ（Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｈｉｓｔｉｃｏｌａ）Ｂ株（ＮＲＲＬ受託番号Ｂ５０３２９）である、請求項１９～４４のいずれか一項に記載の方法／溶液／乾燥形態／治療用組成物／使用。
前記対象は、ヒト又は非ヒト哺乳動物である、請求項１～１８又は３２～４４のいずれか一項に記載の方法。