JP2024504341A - 癌を治療するためのインターフェロンベースの方法及び組合せ医薬 - Google Patents

Abstract

本発明は、生物医学の分野に関する。本明細書に開示されているのは、癌を治療するためのインターフェロンベースの方法及び組合せ医薬である。特に、本発明は、癌を治療するためのインターフェロンベースの方法であって、対象にｉ）インターフェロンベースの治療剤を間欠的に投与すること、及びｉｉ）追加の抗癌剤、好ましくは、ゲムシタビンを投与することを含み、前記追加の抗癌剤が、インターフェロンベースの治療剤の前記間欠的投与の最初の投与の後に投与される、方法に関する。本発明はまた、前記方法において使用するための組合せ医薬に関する。【選択図】 なし

Description

本発明は、生物医学の分野に関する。本明細書に開示されているのは、癌を治療するためのインターフェロンベースの方法及び組合せ医薬である。特に、本発明は、対象にｉ）インターフェロンベースの治療剤を間欠的に投与すること、及びｉｉ）追加の抗癌剤、好ましくは、ゲムシタビンを投与することを含み、前記追加の抗癌剤が、インターフェロンベースの治療剤の前記間欠的投与の最初の投与の後に投与される、癌を治療するためのインターフェロンベースの方法に関する。本発明はまた、前記方法において使用するための組合せ医薬に関する。

インターフェロン（ＩＦＮ）は、複数の機能を有する活性タンパク質であり、単球及びリンパ球から産生されるサイトカインである。広範囲抗ウイルス活性、細胞の増殖、分化への影響、及び免疫機能の調節等、種々の生物活性を有しており、インターフェロンは、現在、最も重要な抗ウイルス感染症及び抗腫瘍の生物学的製剤である。

現在、インターフェロンはＩ型、ＩＩ型、及びＩＩＩ型インターフェロンに分類される。タイプＩインターフェロンは、ＩＦＮ－α、及びＩＦＮ－β等を含む。ＩＦＮ－αインターフェロンは、主に単球－マクロファージによって生成される。さらに、Ｂ細胞及び線維芽細胞もＩＦＮ－αインターフェロンを合成し得る。ＩＦＮ－βインターフェロンは、主に繊維芽細胞によって生成される。ＩＦＮ－αインターフェロン及びＩＦＮ－βインターフェロンは共に、例えば単球－マクロファージ、多形核白血球、Ｂ細胞、Ｔ細胞、血小板、上皮細胞、内皮細胞、及び腫瘍細胞に広く分布する同じ受容体に結合する。ＩＦＮαには２３を超えるサブタイプがあることが知られている。ＩＦＮβには１つのサブタイプしかない。ＩＩ型インターフェロン、又はγインターフェロンは、主に活性化Ｔ細胞（Ｔｈ０、Ｔｈ１細胞、殆ど全てのＣＤ８＋Ｔ細胞を含む）及びＮＫ細胞によって生成され、いわゆるリンパカインに属する。ＩＦＮ－γは、細胞外マトリクスに結合した形で存在している場合もあり、バイスタンダー効果によって細胞の増殖を制御し得る。ＩＦＮ－γは、成熟した赤血球を除く殆ど全ての細胞の表面に分布し得る。ＩＦＮ－γには１つのサブタイプしかない。ＩＩＩ型インターフェロンは、主にインターフェロンλを指す。

インターフェロン、インターフェロン変異体、及びインターフェロン誘導体は、種々の治療に広く使用することが承認されている。ヒトの臨床治療について承認されているインターフェロン及び変異体としては、インターフェロンα２ａ、インターフェロンα２ｂ、インターフェロンα１ｂ、化合物インターフェロン（インファーゲン（Ｉｎｆｅｒｇｅｎ））、及びインターフェロン変異体（例えばノバフェロン（Ｎｏｖａｆｅｒｏｎ））、インターフェロンβ、及びインターフェロンγ（１ｂ）等が挙げられる。インターフェロン誘導体としては、ペグインターフェロンα２ａ、ペグインターフェロンα２ｂ、及び統合型インターフェロン等が挙げられる。

また、近年、ＴＬＲ、ＲＬＲ、及びＳＴＩＮＧ等のシグナル経路の発見及び解明に伴い、上述のシグナル経路に作用してインターフェロンを生成する一連のアゴニストが発見及び解明され、その使用も今後のインターフェロンベースの治療の新たな方向性となっている。現在のところ、この種のアゴニストは、ＨＢＶ及び関連する腫瘍の治療に用いられている。

Ｉ型ＩＦＮは、癌の臨床治療のためにＦＤＡが承認した最初の免疫療法薬剤のバッチである。ＩＦＮは、血液系腫瘍に最も優れた治癒効果を示し、次いでリンパ系腫瘍にも効果があるが、悪性黒色腫、卵巣腫瘍、結直腸癌等の固形腫瘍については治癒効果が２０％以下と最悪の結果となる。また、インターフェロンと化学療法、放射線療法、免疫療法との併用適用は、現在のところインターフェロンを用いた一般的な抗腫瘍療法である。例えば、肝臓癌及び結直腸癌の治療に対するインターフェロンと５－フルオロウラシルとの併用適用、肺癌を治療するためのインターフェロンとシスプラチン、カルボプラチン等との併用適用がある。これらの研究は一定の成果を上げているが、全体的な効果はそれほど満足できるものではなく、予後は不良である。また、インターフェロンは一般的に臨床現場では大量に連続適用によって投与され、これにより、薬剤関連毒性、及び患者のコンプライアンス又は耐性が低いなどの問題が必然的に引き起こされる。

要約すると、インターフェロンの適用、又はインターフェロンと抗癌剤若しくは放射線療法及び他の治療方法との併用適用については、臨床応用がある程度進んでいるが、一般的には、そのような方法は、望ましくない効果をもたらし、予後が不良であり、毒性の副作用が大きい。

したがって、当技術分野では、インターフェロンベースの治療法を改善し、より優れた治療効果を達成することが依然として望ましい。

一態様において、本発明は、対象における癌を治療するための方法であって、対象に
ｉ）複数の連続的な治療コースの間、インターフェロンベースの治療剤を間欠的に投与すること；及び
ｉｉ）追加の抗癌剤を投与すること
を含む方法を提供し、
ここで、追加の抗癌剤は、複数の連続的な治療コースにおけるインターフェロンベースの治療薬の最初の投与の後に投与される。

いくつかの実施形態において、対象は、複数の連続的な治療コースにおけるインターフェロンベースの治療剤の最初の投与の前の少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも１２ヶ月、又はそれより長い期間の内に追加の抗癌剤を投与されていない。

いくつかの実施形態において、連続的な治療コースにおいて、インターフェロンベースの治療剤は、対象におけるネオプテリンの濃度が、実質的にコース全体の間、前記治療コースにおける最初の投与前のネオプテリン濃度よりも高くなるように、例えば、最初の投与前のネオプテリン濃度の約１１０％、約１２０％、約１３０％、約１４０％、約１５０％、約２００％、約２５０％又はそれより高くなるように、投与される。

いくつかの実施形態において、連続的な治療コースの期間は、インターフェロンベースの治療剤の最初の投与から最後の投与までの期間に、インターフェロンベースの治療剤のｉｎ ｖｉｖｏ半減期の約５倍を加えた期間である。

いくつかの実施形態において、複数の連続的な治療コースのそれぞれの期間は、約１週間～約２４週間、好ましくは約１週間～約１２週間、さらに好ましくは約１週間～約８週間、及びなおさらに好ましくは約２週間～約６週間である。

いくつかの実施形態において、複数の連続的な治療コースのそれぞれの期間は、約１週間～約１２週間であり、連続的な治療コース間の間隔は、約１週間～約１２週間である。

いくつかの実施形態において、連続的な治療コース間の間隔は、約１週間～約２４週間、好ましくは約１週間～約１２週間、さらに好ましくは約１週間～約８週間、及びなおさらに好ましくは約２週間～約６週間である。

いくつかの実施形態において、連続的な治療コースのそれぞれの期間は、約１週間～約８週間であり、治療コース間の間隔は、約１週間～約８週間である。

いくつかの実施形態において、連続的な治療コースのそれぞれの期間は、約２週間～約６週間であり、治療コース間の間隔は、約２週間～約６週間である。

いくつかの実施形態において、インターフェロンベースの治療剤は、２～２５の、又はそれより多い連続的な治療コースで投与される。

いくつかの実施形態において、複数の連続的な治療コースの期間は実質的に同じである。

いくつかの実施形態において、連続的な治療コース間の間隔は実質的に同じである。

いくつかの実施形態において、追加の抗癌剤は、インターフェロンベースの治療剤の最初の投与の後に投与され、追加の抗癌剤の投与とインターフェロンベースの治療剤の最初の投与との間隔は、インターフェロンベースの治療剤のｉｎ ｖｉｖｏ半減期の１０倍を超えない。

いくつかの実施形態において、追加の抗癌剤は、連続的な治療コースの各々の間に投与され、追加の抗癌剤は、各々の連続的な治療コースの間、インターフェロンベースの治療剤の後に投与される。

いくつかの実施形態において、追加の抗癌剤は、連続的な治療コースの各々の後に投与され、追加の抗癌剤は、各々の連続的な治療コースの間には投与されない。

いくつかの実施形態において、インターフェロンベースの治療剤は、インターフェロン又はその変異体若しくは誘導体を含むか、又はインターフェロン又はその変異体若しくは誘導体をコードする核酸分子を含むか、又は内在性インターフェロンの生成を促進する物質を含む。

いくつかの実施形態において、インターフェロンは、インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ又はインターフェロンλ、好ましくはインターフェロンα等の、Ｉ型、ＩＩ型又はＩＩＩ型インターフェロンである。

いくつかの実施形態において、インターフェロンベースの治療剤は、インターフェロンα２ａ、インターフェロンα２ｂ、インターフェロンα１ｂ、インターフェロンλ、又はその変異体若しくは誘導体を含む。

いくつかの実施形態において、インターフェロン又はその変異体若しくは誘導体は、ＰＥＧ化されている。

いくつかの実施形態において、インターフェロンベースの治療剤は、Ｐ１１０１、Ｐｅｇｂｅｒｏｎ、Ｐｅｇａｓｙｓ、Ｐｅｇｉｎｔｒｏｎ、Ｉｎｆｅｒｇｅｎ、Ｎｏｖａｆｅｒｏｎ、ＩＮＴＲＯＮＡ、Ｒｏｆｅｒｏｎ－Ａ、Ｈａｐｇｅｎ、ＰＥＧＩＮＦＥＲ及びＰｅｇｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ λからなる群から選択される。

いくつかの実施形態において、インターフェロンベースの治療剤は、ＴＬＲ、ＲＬＲ、及びＳＴＩＮＧシグナル伝達経路のアゴニストを含む。

いくつかの実施形態において、インターフェロンベースの治療剤は、ＧＳ－９６２０、ＧＳ－９６８８、ＲＯ７０２０５３１、ＲＯ６８６４０１８、ＴＱ－Ａ３３３４、ＪＮＪ－４９６４、ＳＢ９２００、ＭＩＷ８１５、ＤＭＸＡＡ、ＭＫ－１４５４、及びｄｉＡＢＺＩからなる群から選択される。

いくつかの実施形態において、癌は、白血病（急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病、多毛性白血病（ｐｏｌｙｃａｐｉｌｌａｒｙ ｌｅｕｋｅｍｉａ）等）、肝臓癌、肺癌、結直腸癌、皮膚癌、胃癌、乳癌、前立腺癌、非ホジキンリンパ腫、メラノーマ、多発性骨髄腫、喉頭乳頭腫、濾胞性リンパ腫、ＡＩＤＳ関連のカポジ肉腫、及び腎細胞癌、好ましくは肝臓癌、肺癌、乳癌、結直腸癌、又はメラノーマから選択される。

いくつかの実施形態において、抗癌剤は、
ｉ）化学療法剤、例えば、アルキル化剤、アルキル化剤：ニムスチン、カルムスチン、ロムスチン、シクロホスファミド、イホスファミド、グリシホスホラミド、セムスチン；代謝拮抗剤：デオキシフルオグアノシン、ドキシフルグアニジン、５－フルオロウラシル、メルカプトプリン、チオグアニン、シタラビン、フルグアノシン、テガフール、ゲムシタビン、カルモフール、ヒドロキシウレア、メトトレキサート、ＵＦＴ、アンシタビン、カペシタビン；抗腫瘍性抗生物質：アクチノマイシンＤ、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、マイトマイシン、ペロマイシン、ピンヤンマイシン、ピラルビシン；化学療法の抗腫瘍性動物及び植物成分：イリノテカン、ハリントニン、ヒドロキシカンプトテシン、ビノレルビン、パクリタキセル、アルブミンパクリタキセル、タキソテール、トポテカン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビンデシン、ビンブラスチン、テニポシド、エトポシド、エレメン；抗腫瘍剤ホルモン：アタメスタン、アナストロゾール、アミノグルテチミド、レトロゾール、フォルメスタン、メタステロン、タモキシフェン；種々の化学療法剤：アスパラギナーゼ、カルボプラチン、シスプラチン、ダカルバジン、オキサリプラチン、ロキサジン、エロキサチン、ミトキサントロン、プロカルバジン；又は
ｉｉ）ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ４の阻害剤等の免疫チェックポイント阻害剤、例えば：ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブから選択される抗体；又は
ｉｉｉ）低分子標的薬、例えば、イマチニブ、ゲフィチニブ、ボルテゾミブ、エルロチニブ、ソラフェニブ、レナリドミド、スニチニブ、ダサチニブ、ニロチニブ、ラパチニブ、パゾパニブ、エベロリムス、バンデタニブ、クリゾチニブ、ベロフィニブ、ルキソリチニブ、アキシチニブ、ビスモデギブ、カルフィルゾミブ、レゴラフェニブ、ボスチニブ、トファシチニブ、カルボチニブ、パナチニブ、ポマリドマイド、トラメチニブ、ダブラフェニブ、アファチニブ、イコチニブ、イブルチニブ、セリチニブ、イデラリス、アパチニブ、パブチリブ、レバチニブ、アキシチニブ、イコチニブ、アパチニブ、ソニデギブ、コビメチニブ、オシメルチニブ、アレクチニブ、イキサゾミブ；又は
ｉｖ）リツキサン、ハーセプチン等の腫瘍関連抗原特異的抗体であり、
好ましくは、抗癌剤は、オキサリプラチン、エピルビシン、パクリタキセル及びゲムシタビンから選択され、より好ましくはゲムシタビンである。

一態様において、本発明は、インターフェロンベースの治療剤及び抗癌剤を含む、対象における癌を治療する上で使用するための組合せ医薬を提供する。

いくつかの実施形態において、インターフェロンベースの治療剤は、インターフェロン又はその変異体若しくは誘導体を含むか、インターフェロン又はその変異体若しくは誘導体をコードする核酸分子を含むか、又は内在性インターフェロンの生成を促進する物質を含む。

いくつかの実施形態において、インターフェロンは、インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ又はインターフェロンλ、好ましくはインターフェロンα等のＩ型、ＩＩ型又はＩＩＩ型インターフェロンである。

いくつかの実施形態において、インターフェロンベースの治療剤は、インターフェロンα２ａ、インターフェロンα２ｂ、インターフェロンα１ｂ、インターフェロンλ、又はその変異体若しくは誘導体を含む。

いくつかの実施形態において、インターフェロン又はその変異体若しくは誘導体はＰＥＧ化されている。

いくつかの実施形態において、インターフェロンベースの治療剤は、Ｐ１１０１、ペグベロン（Ｐｅｇｂｅｒｏｎ）、ペガシス（Ｐｅｇａｓｙｓ）、ペギントロン（Ｐｅｇｉｎｔｒｏｎ）、インファーゲン（Ｉｎｆｅｒｇｅｎ）、ノバフェロン（Ｎｏｖａｆｅｒｏｎ）、イントロンＡ（ＩＮＴＲＯＮＡ）、ロフェロン（Ｒｏｆｅｒｏｎ）－Ａ、ハプゲン（Ｈａｐｇｅｎ）、ペギンファー（ＰＥＧＩＮＦＥＲ）及びペグインターフェロンλからなる群から選択される。

いくつかの実施形態において、インターフェロンベースの治療剤は、ＴＬＲ、ＲＬＲ、及びＳＴＩＮＧシグナル経路のアゴニストを含む。

いくつかの実施形態において、インターフェロンベースの治療剤は、ＧＳ－９６２０、ＧＳ－９６８８、ＲＯ７０２０５３１、ＲＯ６８６４０１８、ＴＱ－Ａ３３３４、ＪＮＪ－４９６４、ＳＢ９２００、ＭＩＷ８１５、ＤＭＸＡＡ、ＭＫ－１４５４、及びｄｉＡＢＺＩからなる群から選択される。

いくつかの実施形態において、抗癌剤は、
ｉ）化学療法剤、例えば、アルキル化剤、アルキル化剤：ニムスチン、カルムスチン、ロムスチン、シクロホスファミド、イホスファミド、グリシホスホラミド、セムスチン；代謝拮抗剤：デオキシフルオグアノシン、ドキシフルグアニジン、５－フルオロウラシル、メルカプトプリン、チオグアニン、シタラビン、フルグアノシン、テガフール、ゲムシタビン、カルモフール、ヒドロキシウレア、メトトレキサート、ＵＦＴ、アンシタビン、カペシタビン；抗腫瘍性抗生物質：アクチノマイシンＤ、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、マイトマイシン、ペロマイシン、ピンヤンマイシン、ピラルビシン；化学療法の抗腫瘍性動物及び植物成分：イリノテカン、ハリントニン、ヒドロキシカンプトテシン、ビノレルビン、パクリタキセル、アルブミンパクリタキセル、タキソテール、トポテカン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビンデシン、ビンブラスチン、テニポシド、エトポシド、エレメン；抗腫瘍剤ホルモン：アタメスタン、アナストロゾール、アミノグルテチミド、レトロゾール、フォルメスタン、メタステロン、タモキシフェン；種々の化学療法剤：アスパラギナーゼ、カルボプラチン、シスプラチン、ダカルバジン、オキサリプラチン、ロキサジン、エロキサチン、ミトキサントロン、プロカルバジン；又は
ｉｉ）ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ４の阻害剤等の免疫チェックポイント阻害剤、例えば：ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブから選択される抗体；又は
ｉｉｉ）低分子標的薬、例えば、イマチニブ、ゲフィチニブ、ボルテゾミブ、エルロチニブ、ソラフェニブ、レナリドミド、スニチニブ、ダサチニブ、ニロチニブ、ラパチニブ、パゾパニブ、エベロリムス、バンデタニブ、クリゾチニブ、ベロフィニブ、ルキソリチニブ、アキシチニブ、ビスモデギブ、カルフィルゾミブ、レゴラフェニブ、ボスチニブ、トファシチニブ、カルボチニブ、パナチニブ、ポマリドマイド、トラメチニブ、ダブラフェニブ、アファチニブ、イコチニブ、イブルチニブ、セリチニブ、イデラリス、アパチニブ、パブチリブ、レバチニブ、アキシチニブ、イコチニブ、アパチニブ、ソニデギブ、コビメチニブ、オシメルチニブ、アレクチニブ、イキサゾミブ；又は
ｉｖ）リツキサン、ハーセプチン等の腫瘍関連抗原特異的抗体であり、
好ましくは、抗癌剤は、オキサリプラチン、エピルビシン、パクリタキセル及びゲムシタビンから選択され、より好ましくはゲムシタビンである。

いくつかの実施形態において、組合せ医薬は本発明の方法によって対象における癌の治療に使用するためのものである。

ｍＩＦＮ－α４発酵上清のＳＰセファロースファーストフロー（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ）の溶出プロファイルを示す。 ＳＰセファロースファーストフロー精製標的ｍＩＦＮ－α４の非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ（１４％分離ゲル、銀染色）電気泳動の結果を示す。 グリコシルを除去したｍＩＦＮ－α４のＱ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ精製溶出プロファイルを示す。 グリコシルを除去したｍＩＦＮ－α４のＱセファロースファーストフロー精製原液の非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ（１４％分離ゲル、銀染色）電気泳動の結果を示す。 ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４のＳＰセファロースファーストフロー精製溶出プロファイルを示す。 ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４原液の非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ（銀染色）電気泳動の結果を示す。 １μｇ／マウスのＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４をＢＡＬＢ／ｃマウスに単回皮下注射したときの血漿濃度時間曲線を示す。 マウスの移植肝癌Ｈ_２２の治療におけるＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の連続投与及び間欠的投与の有効性に関する比較実験の生存曲線を示す。 マウスにおける移植肝臓癌Ｈ２２の治療におけるＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続的投与、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与、及びゲムシタビンと併用したＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与の有効性の比較：生存曲線（Ａ）及び死亡曲線（Ｂ）を示す。 マウスにおける移植肺癌ＬＬＣの治療におけるＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続的投与、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与、及びゲムシタビンと併用したＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与の有効性の比較：死亡曲線を示す。Ａ：腫瘍接種から４５日目まで；Ｂ：腫瘍接種から６４日目まで。 マウスにおける移植結直腸癌ＣＴ２６の治療におけるＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続的投与、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与、及びゲムシタビンと併用したＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与の有効性の比較：生存曲線（Ａ）及び死亡曲線（Ｂ）を示す。 マウスにおける移植メラノーマＢ１６の治療におけるＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続的投与、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与、及びゲムシタビンと併用したＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与の有効性の比較：生存曲線を示す。 マウスにおける移植乳癌４Ｔ１の治療におけるＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続的投与、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与、及びゲムシタビンと併用したＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与の有効性の比較：死亡曲線を示す。 マウスの移植肝癌Ｈ２２の治療における抗癌剤エピルビシンの投与と組み合わせたインターフェロンの間欠的投与の生存曲線を示す。 マウスの移植肝癌Ｈ２２の治療における抗癌剤オキサリプラチンの投与と組み合わせたインターフェロンの間欠的投与の生存曲線を示す。 マウスの移植肝癌Ｈ２２の治療における抗癌剤パクリタキセルの投与と組み合わせたインターフェロンの間欠的投与の生存曲線を示す。 マウスにおける移植肝臓癌Ｈ２２の治療についての異なる投与順序のインターフェロン及びゲムシタビンの比較試験の腫瘍発生率曲線。 マウスにおける移植肝臓癌Ｈ２２の治療についての異なる投与順序のインターフェロン及びゲムシタビンの比較試験の生存曲線。

本発明者らは、インターフェロンを一定の治療コースで連続的に投与する場合と比較して、複数の治療コースでインターフェロンを間欠的に投与することにより、有意に優れた治療効果を達成し得ること、有意に優れた治療効果を達成し得ることを予想外に見出した。

理論に限定されるものではないが、インターフェロンを長期間連続的して投与すると、回復が困難な免疫細胞の消費が引き起こされ得ると考えられている。インターフェロンの有効性は、免疫系に依存している。そのため、インターフェロンベースの療法は、免疫細胞が未だ十分にある治療初期には、高い腫瘍抑制等の良好な治療効果を達成し得る。しかし、治療後期には、インターフェロンの長期投与によって引き起こされる免疫細胞の欠乏により、治療効果が大幅に低下し、インターフェロンの投与を継続しても改善されないことがある。この問題は、インターフェロンを間欠的に投与することで回避し得る。例えば、一定の治療効果を達成するためにインターフェロンを一定期間投与した後、部分的な免疫抑制及び免疫細胞が疲弊する前に、インターフェロンの投与を一定期間停止し、免疫細胞ができるだけ速く回復することを可能にし、その後、インターフェロンの投与を再開した場合、良好な治療効果をなお達成し得る。インターフェロンの間欠的投与に基づいて、追加の抗癌剤の投与は、治療有効性をさらに改善し得る。さらに、本出願人は、インターフェロンと抗癌剤の投与順序も治療効果に有意に影響することを予想外に見出した。

したがって、一態様において、本発明は、対象における癌を治療する方法であって、対象に
ｉ）インターフェロンベースの治療剤を少なくとも１つの連続的な治療コースで投与すること；及び
ｉｉ）追加の抗癌剤を投与すること
を含み、
追加の抗癌剤が、少なくとも１つの連続的な治療コースにおけるインターフェロンベースの治療剤の最初の投与の後に投与される
方法を提供する。

いくつかの実施形態において、本方法は、対象に
ｉ）複数の連続的な治療コースの間、インターフェロンベースの治療薬を間欠的に投与すること；及び
ｉｉ）追加の抗癌剤を投与すること
を含み、
追加の抗癌剤が、複数の連続的な治療コースにおけるインターフェロンベースの治療薬の最初の投与の後に投与される。

いくつかの実施形態において、対象は、複数の連続的な治療コースにおけるインターフェロンベースの治療剤の最初の投与の前の少なくとも１週間以内に追加の抗癌剤を投与されていない。いくつかの実施形態において、対象は、インターフェロンベースの治療剤の最初の投与の前の少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも１２ヶ月、又はそれより長い期間の内に、追加の抗癌剤を投与されていない。

「インターフェロン」は、ヒトインターフェロン、例えば、インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ又はインターフェロンλ、好ましくはインターフェロンα等のＩ型、ＩＩ型又はＩＩＩ型インターフェロンであってもよい。

本明細書で使用する「インターフェロンベースの治療剤」は、天然のインターフェロンの効果の少なくとも一部を生成することができる治療剤を指す。

例えば、「インターフェロンベースの治療剤」は、自然に単離されたインターフェロン、又は組換え生成されたインターフェロン、例えばＩ型インターフェロン、好ましくはインターフェロンαを含み得る。好適なインターフェロンαとしては、インターフェロンα２ａ、インターフェロンα２ｂ又はインターフェロンα１ｂが挙げられるが、これらに限定されない。

また、「インターフェロンベースの治療剤」は、インファーゲン（組換え統合型インターフェロン）等のインターフェロン変異体を含み得る。

また、「インターフェロンベースの治療剤」は、インターフェロン誘導体、例えば、ＰＥＧ化インターフェロン又はその変異体、アルブミン化インターフェロン又はその変異体、及び他のタンパク質及び有機修飾されたインターフェロン及びその変異体等を含み得る。ＰＥＧ化修飾インターフェロン又はその変異体の例としては、ペグインターフェロンα２ａ（例えば、ペガシス、４０Ｋｄ二分枝ＵＰＥＧ－ＮＨＳ修飾）、ペグインターフェロンα２ｂ（例えば、ペギントロン（Ｐｅｇｉｎｔｒｏｎ）、１２Ｋｄ直鎖ＰＥＧ－ＳＣ修飾）、ペグインターフェロンα２ｂ（例えば、ペグベロン、Ｙ型４０Ｋｄ ＰＥＧ修飾）、培養インターフェロンα－２（例えば、ペギンファー（ＰＥＧＩＮＦＥＲ））、ペグインターフェロンλ、及びＰ１１０１等が挙げられる。

いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」は、ＰＥＧ化インターフェロン又はその変異体等の長時間作用型インターフェロンを含む。いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」は、短時間作用型インターフェロンを含む。

いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」は、複数の種類のインターフェロン又はその変異体若しくは誘導体を含む。

「インターフェロンベースの治療剤」という用語は、販売が承認されているインターフェロン又はその変異体若しくは誘導体を含む種々の治療剤を網羅する。いくつかの実施形態では、「インターフェロンベースの治療剤」は、ペグベロン（Ｙ型４０Ｋｄ ＰＥＧ修飾、ペグインターフェロンα２ｂ、アモイトプ（Ａｍｏｙｔｏｐ））である。いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」は、ペガシス（ペグインターフェロンα２ａ、Ｒｏｃｈｅ）である。いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」はペギントロン（ペグインターフェロンα２ｂ注射薬、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ－Ｐｌｏｕｇｈ）である。いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」はインファーゲン（組換え統合型インターフェロン、Ａｍｇｅｎ、ＵＳＡ）である。いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」は、Ｉｎｔｒｏｎ Ａ（組換えヒトインターフェロンα２ｂ、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ－Ｐｌｏｕｇｈ）である。いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」は、Ｒｏｆｅｒｏｎ－Ａ（インターフェロンα２ａ、Ｒｏｃｈｅ）である。いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」は、ハプゲン（Ｈａｐｇｅｎ）（組換えヒトインターフェロンα１ｂ、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｓａｎｙｕａｎ Ｊｉｙｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ＣＯ．，Ｌｔｄ）である。いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」は、ＰＥＧＩＮＦＥＲ（ＰＥＧ化－統合型インターフェロンα－２注射薬、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｋａｗｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）である。いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」は、ペグインターフェロンλ（Ｎａｎｏｇｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｂｉｏｔｅｃｈｂｏｌｏｇｙ）である。

いくつかの好ましい実施形態において、インターフェロンベースの治療剤は、インターフェロンα２ｂを含む。いくつかの好ましい実施形態において、インターフェロンベースの治療剤は、ポリエチレングリコール修飾インターフェロンα２ｂを含む。いくつかの好ましい実施形態において、インターフェロンベースの治療剤はペグベロンである。

いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」は、インターフェロン又はその変異体若しくは誘導体を含み、ここで、インターフェロン又はその変異体若しくは誘導体は、配列番号１～５のいずれか１つのアミノ酸配列を含むか、又は、インターフェロン又はその変異体若しくは誘導体は、配列番号１～５のいずれか１つに対して、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」は、インターフェロン又はその変異体若しくは誘導体をコードする核酸分子、例えば、組換え核酸発現ベクターも含む。適切な発現ベクター、特に治療用途に適した発現ベクターは、当技術分野の当業者によって容易に決定することができる。

「インターフェロンベースの治療剤」には、また、内在性インターフェロンの生成を促進することができる物質、例えば、ＴＬＲ、ＲＬＲ、及びＳＴＩＮＧシグナル経路のアゴニスト等が含まれていてもよい。内在性インターフェロンの生成を促進することができる物質の例としては、ＧＳ－９６２０、ＧＳ－９６８８、ＲＯ７０２０５３１、ＲＯ６８６４０１８、ＴＱ－Ａ３３３４、ＪＮＪ－４９６４、ＳＢ９２００、ＭＩＷ８１５、ＤＭＸＡＡ、ＭＫ－１４５４、ｄｉＡＢＺＩ等が挙げられるが、これらに限定されない^{［１］－［３４］}。

本明細書において使用する用語「連続的な治療コース」は、治療コース中に治療剤を投与することにより、患者体内の（外因性又は内在性）インターフェロンのインビボ有効濃度（例えば、有効血中濃度）を連続的に維持すること、又は患者体内のインターフェロンの主要薬力学マーカーであるネオプテリン（ＮＰＴ）のインビボ濃度（例えば、血中濃度）を、治療剤を投与していない時の濃度（初期濃度又はベースライン濃度）よりも連続的に高く維持することが可能になることを意味する。インターフェロンの主要薬力学的マーカーであるネオプテリンとインターフェロンの投与との間には良好な相関関係があるため、ネオプテリンのインビボ濃度（血中濃度等）の変化を「連続的な治療コース」の指標として使用することが特に好ましい。例えば、「連続的な治療コース」は、インターフェロンベースの治療剤を１回又は複数回投与することにより、実質的に治療コース全体の間、対象のネオプテリン濃度を最初の投与前のネオプテリン濃度（ベースライン濃度）よりも高く、例えば、最初の投与前のネオプテリン濃度の約１１０％、約１２０％、約１３０％、約１４０％、約１５０％、約２００％、約２５０％又はそれより高く保つことができる治療コースと定義することができる。ネオプテリンのインビボ濃度は、当技術分野で知られている方法によって決定し得る。

連続的な治療コースでは、インターフェロンベースの治療剤の投与スキームは、一般的には、インビボにおける半減期等、選択された治療剤の特性によって決定される。例えば、連続的治療コースにおいて、長時間作用型インターフェロン（インビボの半減期が概ね３０～１２０時間）は、１週間に１回程度、２週間に１回程度で投与しても、又は１ヶ月に１回程度若しくは投与量を増やす場合にはさらに長期間にわたって投与してもよく、短時間作用型インターフェロン（インビボの半減期が概ね２～５時間）は、１日１回、２日に１回、又は１週間に３回投与しても、又は投与量を増やす（例えば９～３６ＭＩＵ以上）の場合は１週間に１回投与しても、又は投与量を低下させる場合は１日に複数回投与してもよい。連続的な治療コースにおいて、インターフェロンベースの治療剤の投与回数は、上記の「連続的な治療コース」の定義を満たす限り、特に限定されるものではない。当技術分野の当業者であれば、インターフェロンベースの治療剤の、ネオプテリン等の薬力学的マーカーのインビボ濃度（血中濃度等）に基づいて連続的な治療コースを決定することができる。

いくつかの実施形態において、「連続的な治療コース」で、「インターフェロンベースの治療剤」をその従来の投与スキームで投与してもよい。例えば、インファーゲン（組換え統合型インターフェロン）、インターフェロンα２ｂ（イントロンＡ等）、インターフェロンα２ａ（ロフェロン－Ａ等）、インターフェロンα１ｂ（ハプゲン等）は、３～１８ＭＩＵの用量範囲で、１日１回、又は２日に１回、又は１週間に３回、投与してもよい。ペグインターフェロンα２ａ（例えば、ペガシス）、ペグインターフェロンα２ｂ（例えば、ペギントロン又はペグベロン）、ＰＥＧ化統合型インターフェロンα－２（例えば、ペギンファー）又はペグインターフェロンλは、４５～２７０μｇの投与量範囲で週に１回投与し得る。Ｐ１１０１は、約４００μｇを２週間に１回投与してもよい。アルブミン化インターフェロンα２ｂは、約９００～約１８００μｇを２週間に１回、又は約１２００μｇを４週間に１回投与してもよい。

複数の連続的なコースの各１つの期間は、治療剤が一定の治療効果を達成することを可能にするが、免疫細胞の過剰な消費は避けるべきである。治療コースにおける免疫細胞の消費は、通常、治療指標の変化によって特定される。例えば、関連する治療指標が治療剤の有効性の悪化を示す場合、免疫細胞の過剰な消費を示している可能性がある。

いくつかの実施形態において、複数の連続的な治療コースのそれぞれの期間は、少なくとも約１週間である。

いくつかの実施形態では、複数の連続的な治療コースのそれぞれの期間は、最大で約２４週間である。

いくつかの実施形態において、複数の連続的な治療コースのそれぞれの期間は、約１週間～約２４週間であり、例えば、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間、約１３週間、約１４週間、約１５週間、約１６週間、約１７週間、約１８週間、約１９週間、約２０週間、約２１週間、約２２週間、約２３週間、又は約２４週間である。

いくつかの好ましい実施形態において、複数の連続的な治療コースのそれぞれの期間は、約１週間～約１２週間である。いくつかのさらに好ましい実施形態において、複数の連続的な治療コースのそれぞれの期間は、約１週間～約８週間である。いくつかのさらに好ましい実施形態において、複数の連続的な治療コースのそれぞれの期間は、約２週間～約６週間である。いくつかのさらに好ましい実施形態において、複数の連続的な治療コースのそれぞれの期間は、約２週間である。

いくつかの実施形態において、それぞれの連続的な治療コースの終点（すなわち、連続的な治療コース間の間隔の開始点）は、連続的な治療コースにおけるインターフェロンベースの治療剤の最後の投与の時点、プラス治療剤のインビボ半減期の約５倍であってもよい。すなわち、連続的な治療コースの期間は、治療コースにおける最初の投与から最後の投与までの期間に、治療剤のｉｎ ｖｉｖｏ半減期の約５倍を加えた期間である。半減期の５倍後では、治療剤は実質的な治療効果をもはや生じないようになると考えられている。

本発明の方法では、複数の連続的な治療コース間の間隔は、免疫細胞の再生サイクルに依存し得る。間隔の期間は、治療によって減少した患者の免疫細胞が、治療を効果的に実施できるレベルまで回復するのを可能にすべきである。一般的に、免疫細胞が増殖するには約１～２週間かかると考えられている。したがって、複数の連続的な治療コースの最短の間隔は、約１週間とし得る。

いくつかの実施形態において、複数の連続的な治療コース間の間隔は、少なくとも約１週間の間隔である。

いくつかの実施形態において、複数の連続的な治療コース間の間隔は最大で約２４週間である。

いくつかの実施形態において、複数の連続的な治療コース間の間隔は、約１週間から約２４週間であり、例えば、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間、約１３週間、約１４週間、約１５週間、約１６週間、約１７週間、約１８週間、約１９週間、約２０週間、約２１週間、約２２週間、約２３週間、又は約２４週間である。

いくつかの好ましい実施形態において、複数の連続的な治療コース間の間隔は、約１週間～約１２週間である。いくつかのより好ましい実施形態において、複数の連続的な治療コース間の間隔は、約１週間～約８週間である。さらにいくつかの好ましい実施形態において、複数の連続的な治療コース間の間隔は、約２週間～約６週間である。

いくつかの実施形態において、連続的な治療コースのそれぞれの期間は、約１週間から約２４週間であり、治療コース間の間隔は、約１週間から約２４週間である。

いくつかの実施形態において、連続的な治療コースのそれぞれの期間は約１週間～約１２週間であり、治療コース間の間隔は約１週間～約１２週間である。

いくつかの実施形態において、連続的な治療コースのそれぞれの期間は、約１週間～約８週間であり、治療コース間の間隔は、約１週間～約８週間である。

いくつかの実施形態において、連続的な治療コースのそれぞれの期間は約２週間～約６週間であり、治療コース間の間隔は約２週間～約６週間である。

いくつかの実施形態において、連続的な治療コースのそれぞれの期間は約２週間であり、治療コース間の間隔は約２週間である。

いくつかの実施形態において、「インターフェロンベースの治療剤」は、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５の、又はそれより多い連続的な治療コースで投与される。

いくつかの実施形態において、複数の連続的な治療コースの期間は実質的に同じである。

いくつかの実施形態において、治療コースの時間間隔は実質的に同じである。

いくつかの具体的な実施形態において、インターフェロンベースの治療剤はペグベロンであり、連続的な治療コースのそれぞれの期間は約５週間～約２４週間であり、連続的な治療コース間の間隔は約２週間～８週間である。

本明細書において、癌としては、白血病（急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病、多毛性白血病等）、肝臓癌、肺癌、結直腸癌、皮膚癌、胃癌、乳癌、前立腺癌、非ホジキンリンパ腫、メラノーマ、多発性骨髄腫、喉頭乳頭腫、濾胞性リンパ腫、ＡＩＤＳ関連カポジ肉腫、及び腎細胞癌等が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、疾患は骨髄増殖性腫瘍（ＭＰＮ）である。いくつかの好ましい実施形態において、疾患は、肝臓癌、肺癌、乳癌、結直腸癌又はメラノーマである。

本明細書において、追加の抗癌剤は、化学療法剤であり得、例えば、アルキル化剤：ニムスチン、カルムスチン、ロムスチン、シクロホスファミド、イホスファミド、グリシホスホラミド、セムスチン；例えば、化学療法的な代謝拮抗剤：デオキシフルオグアノシン、ドキシフルグアニジン、５－フルオロウラシル、メルカプトプリン、チオグアニン、シタラビン、フルグアノシン、テガフール、ゲムシタビン、カルモフール、ヒドロキシウレア、メトトレキサート、ＵＦＴ、アンシタビン、カペシタビン；例えば、化学療法的な抗腫瘍抗生物質：アクチノマイシンＤ、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、マイトマイシン、ペロマイシン、ピンヤンマイシン、ピラルビシン；例えば化学療法的な抗腫瘍性動物及び植物成分：イリノテカン、ハリントニン、ヒドロキシカンプトテシン、ビノレルビン、パクリタキセル、アルブミンパクリタキセル、タキソテール、トポテカン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビンデシン、ビンブラスチン、テニポシド、エトポシド、エレメン；例えば、抗腫瘍剤のホルモン：アタメスタン、アナストロゾール、アミノグルテチミド、レトロゾール、フォルメスタン、メタステロン、タモキシフェン；種々の化学療法剤等：アスパラギナーゼ、カルボプラチン、シスプラチン、ダカルバジン、オキサリプラチン、ロキサジン、エロキサチン、ミトキサントロン、又はプロカルバジンが挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態において、追加の抗癌剤は小分子標的薬剤であり、イマチニブ、ゲフィチニブ、ボルテゾミブ、エルロチニブ、ソラフェニブ、レナリドミド、スニチニブ、ダサチニブ、ニロチニブ、ラパチニブ、パゾパニブ、エベロリムス、バンデタニブ、クリゾチニブ、ベロフィニブ、ルキソリチニブ、アキシチニブ、ビスモデギブ、カーフィルゾミブ、レゴラフェニブ、ボスチニブ、トファシチニブ、カルボチニブ、パナチニブ、ポマリドマイド、トラメチニブ、ダブラフェニブ、アファチニブ、イコチニブ、イブルチニブ。セリチニブ、イデラリス、アパチニブ、パブチリブ、レバチニブ、アキシチニブ、イコチニブ、アパチニブ、ソニデギブ、コビメチニブ、オシメルチニブ、アレクチニブ、イキサゾミブを含むがこれらに限定されない。

また、追加の抗癌剤はリツキサン、ハーセプチン等の腫瘍関連抗原特異的抗体であってもよい。

また、追加の抗癌剤は、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＴＬＡ４等の阻害剤等の免疫チェックポイント阻害剤であってもよく、例えば、特異的抗体等であってもよい。免疫チェックポイント阻害剤の例としては、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、及びアベルマブ等が挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの特定の実施形態において、化学療法剤はオキサリプラチンである。いくつかの特定の実施形態において、化学療法剤は、エピルビシンである。いくつかの特定の実施形態において、化学療法剤はパクリタキセルである。

いくつかの好ましい実施形態において、化学療法剤は、ゲムシタビン、カペシタビン、及びアンシタビン等の抗代謝性化学療法剤である。いくつかの最も好ましい実施形態において、化学療法剤はゲムシタビンである。

いくつかの実施形態において、追加の抗癌剤は、複数の連続的なコースのインターフェロンベースの治療剤の最初の投与（すなわち、最初の連続的なコースにおける最初の投与）の後に投与される。例えば、追加の抗癌剤の投与とインターフェロンベースの治療剤の最初の投与との間隔は、インターフェロンベースの治療剤のｉｎ ｖｉｖｏ半減期の約１～約１０倍の期間である。いくつかの実施形態において、抗癌剤は、その従来の方式で投与することができる。

いくつかの実施形態において、追加の抗癌剤の投与は、インターフェロンベースの治療剤の最初の連続的なコースの間に開始され、例えば、その後、従来の方式で投与され得る。

いくつかの実施形態において、追加の抗癌剤は、各々のインターフェロンベースの治療剤の投与後に投与される。例えば、追加の抗癌剤の投与とインターフェロンベースの治療剤の投与との間隔は、インターフェロンベースの治療剤のｉｎ ｖｉｖｏ半減期の約１～約１０倍の期間である。

いくつかの実施形態において、追加の抗癌剤は、各々の連続的な治療コースの間に投与され、各々の連続的な治療コースの間、前記追加の抗癌剤は、少なくとも前記治療コースにおけるインターフェロンベースの治療剤の最初の投与の後に投与される。

いくつかの実施形態において、前記追加の抗癌剤は、各々のインターフェロンベースの治療剤の連続的なコースの後に投与される。例えば、インターフェロンベースの治療剤が３つの連続的なコースで投与される場合、前記追加の治療剤は、最初の連続的なコースの後に投与され、第２の連続的なコースの後に投与され、第３の連続的なコースの後に投与される。いくつかの実施形態において、追加の抗癌剤は、インターフェロンベースの治療剤のいずれの連続的なコース中にも投与されない。

いくつかの実施形態において、追加の治療剤はゲムシタビンであり、ゲムシタビンの投与スキームは、４週間毎に３回：１週間に１回を３週間の後、１週間停止：３週間毎に２回：１週間に１回を２週間の後、１週間停止：又は２週間毎に１回であってもよい。例示的なゲムシタビンの投与量は、表面積１ｍ^２あたり１０００ｍｇである。

いくつかの実施形態において、本発明の方法は、腫瘍の退縮若しくは腫瘍体積の減少、又は対象の生存期間の延長をもたらす。特に、本発明の方法は：癌細胞数の減少、腫瘍体積の低下、末梢器官への癌細胞の浸潤の阻害（すなわち、遅延又は停止）、腫瘍転移の阻害（すなわち、遅延又は停止）、腫瘍成長の阻害、及び／又は癌に関連する１つ又は複数の症候の緩和をもたらす。

一態様において、本発明は、本発明の方法による対象の癌の治療に使用するための、インターフェロンベースの治療剤を含む、医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態において、医薬組成物はまた、追加の薬剤を含む。インターフェロンベースの治療剤及び抗癌剤は、上記で定義した通りである。

一態様において、本発明は、本発明の方法によって対象の癌を治療するための医薬組成物の調製における、インターフェロンベースの治療剤の使用を提供する。いくつかの実施形態では、医薬組成物はまた、追加の抗癌剤を含む。インターフェロンベースの治療剤及び抗癌剤は、上記で定義した通りである。

一態様において、本発明は、対象の癌を治療するための医薬組成物の調製における、追加の抗癌剤と組み合わせたインターフェロンベースの治療剤の使用を提供する。インターフェロンベースの治療剤及び抗癌剤は、上記で定義した通りである。インターフェロンベースの治療剤及び／又は追加の抗癌剤は、本発明の方法に従って投与し得る。

一態様において、本発明は、追加の抗癌剤の有効性を高めるための医薬組成物の調製におけるインターフェロンベースの治療剤の使用を提供する。インターフェロンベースの治療剤及び抗癌剤は、上記で定義した通りである。インターフェロンベースの治療剤及び／又は追加の抗癌剤は、本発明の方法に従って投与し得る。

一態様において、本発明は、本発明の方法によって対象における癌の治療に使用するための、インターフェロンベースの治療剤及び追加の抗癌剤を含む、組合せ医薬を提供する。インターフェロンベースの治療剤及び／又は追加の抗癌剤は、本発明の方法に従って投与し得る。

一態様において、本発明は、インターフェロンベースの治療剤、追加の抗癌剤及び使用説明書を含むキットを提供し、使用説明書は、インターフェロンベースの治療剤及び追加の抗癌剤を対象における癌を治療するために、本発明の方法に従って使用してもよい又は本発明の方法に従って投与してもよいとの説明を提供する。インターフェロンベースの治療剤及び追加の抗癌剤は、上記で定義した通りである。

以下の実施例は、本発明をよりよく説明するために提示するに過ぎず、本発明をいかなる形でも限定することを意図するものではない。

実施例１．組換えマウスインターフェロンα４（ｍＩＦＮ－α４）の調製
インターフェロンは、癌治療にも広く用いられているが、その効果を改善する必要がある。そこで、インターフェロンの連続的投与によって、実際に部分的な免疫抑制及び免疫細胞の疲弊が起こり、その後の治療効果が悪くなるかどうかを検討するために、マウスにおいてインターフェロンの間欠的投与と連続的投与の効果を比較した。

抗腫瘍効果に関する多くの研究は、ヌードマウス（正常な胸腺がない）を宿主として行われていた。ヌードマウスの免疫状態は正常なマウスに比べて弱いため、正常な状態での免疫反応を反映させることは困難である。正常マウスに基づいた抗腫瘍モデルでは、インターフェロンの免疫系への作用が部分的に実現されてもよく、これは、インターフェロンを投与する抗腫瘍療法の効果が反映されていると考えられる。機能実現の観点からは、インターフェロンがその抗ウイルス及び抗腫瘍効果を十分に発揮するためには、宿主の免疫系に依存する必要がある。インターフェロンには強い種特異性があるため、実施例で正常なマウスを研究対象として使用した場合、マウスのインターフェロン又はその誘導体を使用することで、その生理作用及び実施効果をよりよく反映させることができる。本発明のマウスを用いた研究モデルでは、インターフェロン治療薬剤及びその誘導体の代表として、ＰＥＧ化組換えマウスインターフェロンα４（ＰＥＧ－ｍＩＦＮα４）を用いた。

ｍＩＦＮ－α４のアミノ酸配列（ＧｅｎＢａｎｋ ＮＰ＿０３４６３４）に従い、ピキア・パストリスの好ましいコドンに合わせてｍＩＦＮ－α４のｃＤＮＡ配列を最適化して設計し、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．に委託してｃＤＮＡを合成した。ｍＩＦＮ－α４をコードするｃＤＮＡをｐＰＩＣ９Ｋプラスミドに組み換え、ＴＯＰ１０コンピテントセルに形質転換し、ＬＢ固体培地上にプレーティングし、３７℃で一晩培養した。単一のクローンを選んでＬＢ液体培地に接種し、次いでこれを３７℃で一晩培養した。プラスミドを抽出し、ＸｈｏＩ及びＮｏｔＩで二重消化を行った。陽性クローンは、核酸電気泳動で同定し、さらに核酸配列決定で確認した。陽性クローンのプラスミドをＳａｌＩで消化して線状化し、ピキア・パストリスＧＳ１１５に電気形質導入し、ＲＤプレートにプレーティングし、２８～３０℃で３日間培養した。陽性の形質転換体を選んでＹＰＤ液体培地に接種し、２８－３０℃で一晩培養し、ＯＤ６００ｎｍの最終濃度が約１になるようにＢＭＭＹ培地に移し、２８－３０℃で約２４時間インキュベートした。メタノールを最終濃度が約１％になるまで添加し、さらに２８～３０℃で約２４時間培養した。培養液を遠心分離して上清を回収し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動によりｍＩＦＮ－α４の発現を検出した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動の結果によって、より高い発現及び安定した発現を有する操作株を選択し、その後、発酵槽で発酵させた。

発酵槽は３０Ｌであった。発酵培養及びメタノール誘導については「Ｐｉｃｈｉａ Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ」を参照し、誘導時間は約３０ｈであった。発酵上清を遠心分離で回収し、５ｋＤの中空糸膜チューブで３～５回限外濾過して濃縮し、緩衝液系を２０ｍＭリン酸緩衝液－２０ｍＭアルギニン塩酸塩－５０ｍＭ塩化ナトリウム緩衝溶液（ｐＨ６．５）に置き換えた。続いて、ＳＰ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗクロマトグラフィーカラム（ＧＥヘルスケア、カラム床Φ３８ｍｍ×１６０ｍｍ）に装填した後、２０ｍＭリン酸緩衝液－２０ｍＭアルギニン塩酸塩（ｐＨ６．５）（溶液Ａ）を用いて、カラムの約３容量を洗浄した。溶液Ａ及び２０ｍＭリン酸緩衝液－２０ｍＭアルギニン塩酸塩－１Ｍ塩化ナトリウム溶液（ｐＨ６．５）（溶液Ｂ）を使用して、勾配溶出を行った。ｍＩＦＮ－α４標的サンプルを回収し、非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ用サンプル（分離ゲル濃度１４％、銀染色）を採取した。溶出プロファイルを図１に、電気泳動の結果を図２に示す。

ｍＩＦＮ－α４ ＳＰ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ精製サンプルを５Ｋ限外濾過膜パッケージを用いた限外濾過によって濃縮し、２０ｍＭリン酸緩衝液－５０ｍＭアルギニン塩酸塩－１０ｍＭメチオニン－２０ｍＭ塩化ナトリウム（ｐＨ７．０）に置換した後、その濃度を約１．０ｍｇ／ｍｌに調整した。ｍＩＦＮ－α４タンパク質と酵素の質量比が約２０：１になるようにグリコシダーゼを添加し、２５℃で約２０時間消化を行い、グリコシル基を除去した。消化したサンプルを５ｍＭホウ酸緩衝液－１０ｍＭアルギニン塩酸塩（ｐＨ９．０）で約６倍に希釈し、Ｑ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗクロマトグラフィーカラム（ＧＥヘルスケア、カラム床Φ５０ｍｍ×１５４ｍｍ）に装填した。２０ｍＭホウ酸緩衝液－２０ｍＭアルギニン塩酸塩－１０ｍＭメチオニン（ｐＨ９．０）（溶液Ｃ）を用いて、カラムの約３容量を洗浄した。溶液Ｃ及び２０ｍＭホウ酸緩衝液－２０ｍＭアルギニン塩酸塩－１０ｍＭフォルマザンチオニン－０．３Ｍ塩化ナトリウム（ｐＨ９．０）（溶液Ｄ）を用いて勾配溶出を行った。目的の脱グリコシル化ｍＩＦＮ－α４サンプルを回収し、１０％酢酸でｐＨを約ｐＨ５．０に調整した。５Ｋ限外濾過膜を用いて限外濾過により濃縮し、緩衝液を５ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液－５０ｍＭアルギニン塩酸塩－１００ｍＭ塩化ナトリウム（ｐＨ５．０）に置換した。得られたサンプルは、脱グリコシル化ｍＩＦＮ－α４のストック溶液であった。サンプルは検査に出すために採取して送られ、残りのサンプルは後で使用するために－７０℃で凍結した。溶出プロファイルを図３に示し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動の結果を図４に示す。

脱グリコシル化ｍＩＦＮ－α４ストック溶液の細菌性エンドトキシン含有量は、リムルス試薬法により６０ＥＵ／ｍｇ未満と決定した。特異的活性は、市販のｍＩＦＮ－α４（Ｒ＆Ｄ、カタログ番号１２１１５－１）を標準として使用し、マウス線維芽細胞／脳心筋炎ウイルス（Ｌ９２９／ＥＭＣＶ）サイトパス阻害法を用いて５．４×１０^８Ｕ／ｍｇと決定した。

実施例２．ＰＥＧ化組換えマウスインターフェロン（ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４）の調製
この脱グリコシル化ｍＩＦＮ－α４ストック溶液を、５ｋＤ限外濾過膜パッケージを用いた５ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液－５０ｍＭ塩化ナトリウム（ｐＨ５．０）の緩衝液による限外濾過によって置換した。約３３３ｍｌのサンプル（脱グリコシル化ｍＩＦＮα４含量約５００ｍｇ）を採取し、約２２ｍｌの０．８Ｍホウ酸／水酸化ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．４）を添加し、よく撹拌した。タンパク質と４０ｋＤのＹ型ポリエチレングリコールスクシンイミドエステル（ＹＰＥＧ－ＮＨＳ）の質量比が約１：８になるようにＹＰＥＧ－ＮＨＳを添加した後、これを素早く撹拌し、室温で１０分間反応させた。その後、約２０ｍｌの０．２Ｍメチオニンを添加して反応を停止させ、１０％酢酸でｐＨを５．０に調整した。その後、５５０ｍｌの純水を添加した後、さらに６００ｍｌの２０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液－２０ｍＭアルギニン塩酸塩－１０ｍＭメチオニン（ｐＨ５．１）（溶液Ｅ）を添加し、よく混合した。その後、ＳＰ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗクロマトグラフィーカラム（ＧＥヘルスケア、カラム床Φ５０ｍｍ×１９４ｍｍ）に装填し、溶液Ｅを用いてカラムの約５容量の洗浄を行った。その後、溶液Ｅ及び２０ｍＭ酢酸／酢酸ナトリウム緩衝液－２０ｍＭアルギニン塩酸塩－１０ｍＭメチオニン－６００ｍＭ塩化ナトリウム（ｐＨ５．１）（溶液Ｆ）を用いて勾配溶出を行い、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４標的サンプルを回収した。５ｋＤ限外濾過膜パッケージを用いた限外濾過により緩衝液を２０ｍＭリン酸緩衝液－１２３ｍＭ塩化ナトリウム（ｐＨ６．５）に置換した後、適当に濃縮し、０．５％のＴｗｅｅｎ８０をＴｗｅｅｎ８０の最終濃度が約０．００５％になるように添加した。得られたサンプルは、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４ストック溶液（ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４）であった。サンプルを採取してから検査に出し、残ったサンプルは後で使用するために凍結して－７０℃で保存した。溶出プロファイルを図５に示し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ電気泳動の結果を図６に示す。

ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４ストック溶液の細菌性エンドトキシン含有量は、リムルス試薬法により１５ＥＵ／ｍｇ未満と決定した。特異的活性は、市販のｍＩＦＮ－α４（Ｒ＆Ｄ、カタログ番号１２１１５－１）を標準として使用し、マウス線維芽細胞／脳筋心筋炎ウイルス（Ｌ９２９／ＥＭＣＶ）のサイトパス阻害法を用いて、６．１×１０^６Ｕ／ｍｇと決定した。

実施例３．健康なＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の皮下注射の薬物動態学的研究
本実施例では、ＢＡＬＢ／ｃマウスは、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の血中濃度を二重抗体サンドイッチＥＬＩＳＡにより検出した。Ｍｏｕｓｅ ＩＦＮ ａｌｐｈａ Ｐｌａｔｉｎｕｍ ＥＬＩＳＡキット（カタログ番号ＢＭＳ６０２７／ ＢＭＳ６０２７ＴＥＮ，Ｔｈｅｒｍｏ）の試験キットを使用したが、内在性ｍＩＦＮ－αの測定結果への干渉を避けるため、レポーター抗体を抗ＰＥＧ抗体３．３ビオチン（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ａｃａｄｅｍｉａ Ｓｉｎｉｃａ（ＩＢＭＳ），Ｔａｉｗａｎ）に変更した。

６～８週齢、ＳＰＦグレードのＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｎ＝６０、雌雄半々）に、１μｇ／マウスのＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を首後部の皮下に単回皮下注射した。注射前（０時間）と、注射後の１５時間、２４時間、３６時間、４８時間、７２時間、９６時間、１２０時間、１６８時間、２１６時間、２６４時間、３１２時間に血漿サンプルを回収し、血中濃度を決定した。薬物動態パラメータの算出にはＰｈｏｅｎｉｘ ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ ６．４ソフトウェアを使用した。

血中濃度決定の結果を表１に、血中濃度－投与時間曲線を図７に、及び薬物動態パラメータの結果を表２に示す。１μｇ／マウスのＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４をＢＡＬＢ／ｃマウスの首後部に単回皮下注射し、血漿濃度ピーク時間（Ｔ_ｍａｘ）は２４時間、ピーク濃度時間（Ｔ_ｍａｘ）は２６８ｎｇ／ｍｌ、排出半減期（Ｔ_１／２）は２８．３時間であった。

実施例４．マウスに移植された肝臓癌Ｈ_２２に対するＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の間欠的投与の治療効果の比較試験
本実施例では、ＢＡＬＢ／ｃマウスはＢｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入し、マウス肝臓癌Ｈ_２２細胞株はＣｈｉｎａ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＣＣＴＣＣ）から購入した。

６～８週齢、１８～２２ｇのＳＰＦグレードのＢＡＬＢ／ｃマウスに、Ｈ_２２細胞（０．５×１０^６細胞／ｍＬ、０．２ｍｌ／マウス）を右前肢腋窩に皮下接種した。腫瘍接種の日に無作為にグループ分けを行った。実験群は、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続投与群（Ｎ＝１５、雄７匹、雌８匹）、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与群（Ｎ＝１５、雄７匹、雌８匹）、通常の生理食塩水対照群（Ｎ＝１０、雌５匹、雄５匹）等を含んでいた。

ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４は、動物１匹あたり１マイクログラムの投与量で、首後部に皮下注射により投与した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与群は、４８時間に１回、３回投与した後、１４４時間休止し、これを４回繰り返した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続的投与群は、４８時間に１回、２１回の連続投与を行った。通常の生理食塩水対照群には、同体積の通常の生理食塩水を投与した。

全ての群で生存率分析を行い、群間の差を比較した。統計解析にはＳＡＳ９．４及びｏｆｆｉｃｅ２０１０ソフトウェアを使用し、統計検定は全て両側検定とした。

生存曲線を図８に示し、統計的比較結果を表３に示す。腫瘍接種後４０日目、通常の生理食塩水対照群の生存期間の中央値は１９．５日であり、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続的投与群では３８日であった。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与群の生存率は９３．３％であったが、生存期間の中央値はまだ算出できない。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続的投与群と間欠的投与群の生存曲線は、通常の生理食塩水対照群と比較して有意に異なっていた。また、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続的投与群と間欠的投与群の差も有意であった（Ｐ＝０．００３５）。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の間欠的投与群の生存期間は、連続的投与群よりも有意に長かった。マウスに移植された肝臓癌Ｈ_２２の治療において、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の間欠的投与は連続的投与に比べて有意に優れた治癒効果を示す。

実施例５．マウスの肝臓癌Ｈ_２２を治療するためのゲムシタビンと併用したインターフェロンの間欠的投与
本発明者らは、ゲムシタビンと併用したＰＥＧ化組換えマウスインターフェロンα（ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４）をマウス肝癌Ｈ２２に間欠的投与することによる抗腫瘍効果を検討し、インターフェロンとゲムシタビンの併用投与の有効性を探った。本発明者らは驚くべきことに、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を間欠的投与し、同時にゲムシタビンを投与することにより、ゲムシタビンを単独で投与する場合又はＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を単独で間欠的投与する場合と比較して、Ｈ２２腫瘍の治療において有意に良好な結果が得られる可能性があることを見出した。

本実施例において、マウスにおけるＨ２２移植肝臓癌に対するＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与（４８時間毎に１回投与、３回連続投与の後、１４４時間休薬；８回）、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続的投与（４８時間に１回、４２回連続投与）、ゲムシタビンと併用したＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４（ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４：４８時間毎に１回投与、３回連続投与の後、２４０時間休薬、６回；ゲムシタビン：１週間に１回）の有効性の比較試験を行った。

本実施例において、ＢＡＬＢ／ｃマウスはＢｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入し、Ｈ２２マウス肝臓癌細胞株はＣｈｉｎａ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＣＣＴＣＣ）から購入した。

６～８週齢、１８～２２ｇのＳＰＦグレードのＢＡＬＢ／ｃマウスに、肝臓細胞癌Ｈ２２腫瘍細胞（１×１０^６細胞／ｍＬ、０．２ｍｌ／マウス）を右前肢腋窩に皮下接種した。腫瘍を接種した日に、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続的投与群（Ｎ＝２４、雌１２匹、雄１２匹）、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与群（Ｎ＝２４、雌１２匹、雄１２匹）、通常の生理食塩水対照群（Ｎ＝２４、雌１２匹、雄１２匹）、ゲムシタビン単独群（Ｎ＝２４、雌１２匹、雄１２匹）、及びＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群（Ｎ＝２４、雌１２匹、雄１２匹）に無作為に分けた。

ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４は首後部に１ｕｇ／マウスで皮下注射した。ゲムシタビンは６０ｍｇ／ｋｇで腹腔内注射した。投与はグループ分けよりも後の日に開始した。

ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与群については、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４は４８時間毎に１回、３回連続投与の後、１４４時間休薬で８回投与した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続的投与群については、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４は４８時間毎に１回投与した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の間欠的投与とゲムシタビンとの併用群については、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４は４８時間毎に１回、３回連続投与の後、２４０時間休薬で６回投与し、ゲムシタビンは１週間に１回投与した。ゲムシタビン単独群については、ゲムシタビンは１週間に１回投与した。生理食塩水対照群については、同体積の生理食塩水を投与した。

生存率分析を全ての群について行い、群間の差を比較した。統計解析には、ＳＡＳ９．４、ｏｆｆｉｃｅ２０１０ソフトウェアを使用し、統計検定は全て両側検定とした。

生存曲線を図９に示し、統計的比較結果を表４に示す。腫瘍接種後１０８日目、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続的投与群の生存期間の中央値は３７．０日であり、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与群では６４．０日であり、共に通常の生理食塩水対照群の１７．５日を上回っていた。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続的投与群と間欠的投与群の生存曲線の間には有意な差があり（Ｐ＝０．０２４５）、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与群の生存期間は、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続的投与群よりも有意に長かった。マウスにおける移植肝臓癌Ｈ２２の治療において、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与は連続的投与に比べて有意に改善された効果を示した。

ゲムシタビン単独群の生存期間の中央値は５８．５日であり、ゲムシタビンとＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与の併用群において観察期間（腫瘍接種１０８日間）の終了時に観察される生存率は７５．０％であった。２群の生存曲線は有意に異なっていた（Ｐ＜０．００１）。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与とゲムシタビンとの併用群の生存期間は、ゲムシタビン単独群よりも有意に長かった。

ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与群の生存期間の中央値は６４．０日であり、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与とゲムシタビンとの併用群において観察期間（腫瘍接種１０８日間）の終了時に観察される生存率は７５．０％であった。２群の生存曲線は有意に異なっていた（Ｐ＜０．００１）。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与とゲムシタビンとの併用群の生存期間は、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与群よりも有意に長かった。

結果より、マウスにおけるＨ２２移植肝臓癌の治療について、ＰＥＧ化マウスインターフェロンαの間欠的投与はＰＥＧ化マウスインターフェロンαの連続的投与よりも優れていること、ゲムシタビンと併用したＰＥＧ化マウスインターフェロンαの間欠的投与の抗癌活性は、ゲムシタビン単独及びＰＥＧ化マウスインターフェロンα単独より有意に優れていることが示された。

実施例６．マウスの肺癌を治療するためのゲムシタビンと併用したインターフェロンの間欠的投与
本発明者らは、マウス肺癌ＬＬＣに対するゲムシタビンと併用したＰＥＧ化組換えマウスインターフェロンα（ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４）の間欠的投与の抗腫瘍効果を調べ、インターフェロンとゲムシタビンの併用投与の有効性を探った。本発明者らは、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を間欠的投与し、同時にゲムシタビンを投与することによって、ゲムシタビンを単独で投与した場合又はＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を単独で間欠的投与した場合に比べて、肺癌ＬＬＣの治療においても有意に良好な結果が得られる可能性があることを見出した。

本実施例において、マウスにおける移植肝臓癌ＬＬＣに対するＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与（４８時間毎に１回投与、４回連続投与の後、１９２時間休薬；５回）、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続的投与（４８時間に１回、３２回連続投与）、ゲムシタビンと併用したＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４（ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４：４８時間毎に１回投与、４回連続投与の後、３６０時間休薬、４回；ゲムシタビン：１週間に１回）の有効性の比較試験を行った。

本実施例において、Ｃ５７ＢＬ／６Ｎマウスは、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入し、マウス肺癌ＬＬＣ細胞株はＢｅｉｊｉｎｇ Ｕｎｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｃｅｎｔｅｒ、中国から購入した。

６～８週齢、１８～２２ｇのＳＰＦグレードのＢＡＬＢ／ｃマウスに、肺癌ＬＬＣ細胞（１×１０^６細胞／ｍＬ、０．２ｍｌ／マウス）を右前肢腋窩に皮下接種した。腫瘍を接種した日に、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与群（Ｎ＝２６、雌１３匹、雄１３匹）、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与群（Ｎ＝２６、雌１３匹、雄１３匹）、通常の生理食塩水対照群（Ｎ＝２６、雌１３匹、雄１３匹）、ゲムシタビン単独群（Ｎ＝２６、雌１３匹、雄１３匹）、及びＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群（Ｎ＝２６、雌１３匹、雄１３匹）に無作為に分けた。

ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４は首後部に１ｕｇ／マウスで皮下注射した。投与はグループ分けよりも後の日に開始した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与群については、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４は、４８時間毎に１回、４回連続投与の後、１９２時間休薬で８回投与した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続的投与群については、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４は４８時間毎に１回投与した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与とゲムシタビンとの併用群については、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４は４８時間毎に１回、４回連続投与の後、３６０時間休薬で４回投与し、ゲムシタビンは１週間に１回投与した。ゲムシタビン単独群については、ゲムシタビンは１週間に１回投与した。生理食塩水対照群については、同体積の生理食塩水を投与した。ゲムシタビンは６０ｍｇ／ｋｇで腹腔内注射した。

死亡率の差を比較するために、ＳＡＳ９．４ソフトウェアを使用し、統計検定は全て両側検定とした。

死亡率を図１０に示し、統計的比較結果を表５に示す。腫瘍接種後４５日目、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続的投与群の死亡率は１００％であり、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与群では３４．６％であり、差は有意だった（Ｐ＜０．００１）。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与群の死亡率は、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続的投与群よりも有意に低かった。マウスにおける移植肺癌ＬＬＣについて、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与は、連続的投与よりも有意に改善された効果を示した。

腫瘍接種後６４日目、ゲムシタビン単独群の死亡率は８０．８％であり、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の間欠的投与のゲムシタビンとの併用群は５３．８％であり、差は有意だった（Ｐ＝０．０３８５）。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の間欠的投与とゲムシタビンとの併用群の死亡率は、ゲムシタビン単独群よりも有意に低かった。

腫瘍接種後６４日目、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の間欠的投与単独群の死亡率は８４．６％であり、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の間欠的投与とゲムシタビンとの併用群では５３．８％であり、差は有意だった（Ｐ＝０．０１６２）。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の間欠的投与のゲムシタビンとの併用群の死亡率は、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与単独群よりも有意に低かった。

結果から、マウスにおける移植肺癌ＬＬＣの治療には、ＰＥＧ化マウスインターフェロンαの間欠的投与がＰＥＧ化マウスインターフェロンαの連続的投与よりも優れていること、ゲムシタビンと併用したＰＥＧ化マウスインターフェロンαの間欠的投与併用時の抗癌活性は、ゲムシタビン単独及びＰＥＧ化マウスインターフェロンα単独よりも有意に優れていることが示された。

実施例７．マウスの結直腸癌ＣＴ２６を治療するためのゲムシタビンと併用したインターフェロンの間欠的投与
本発明者らは、マウスの結直腸癌ＣＴ２６に対して、ゲムシタビンと併用したＰＥＧ化組換えマウスインターフェロンα（ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４）の間欠的投与の抗腫瘍効果を調べ、インターフェロンとゲムシタビンの併用投与の有効性を探った。本発明者らは驚くべきことに、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を間欠的投与し、同時にゲムシタビンを投与することによって、ゲムシタビンを単独で投与した場合又はＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を単独で間欠的投与した場合に比べて、結直腸癌ＣＴ２６の治療においても有意に良好な結果が得られる可能性があることを見出した。

本実施例において、マウスにおける移植結直腸癌ＣＴ２６に対するＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与（４８時間毎に１回投与、３回連続投与の後、１４４時間休薬；１１回）、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続的投与（４８時間に１回、５５回連続投与）、ゲムシタビンと併用したＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４（ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４：４８時間毎に１回投与、３回連続投与の後、２４０時間休薬、８回；ゲムシタビン：１週間に１回）の有効性の比較試験を行った。

本実施例において、ＢＡＬＢ／ｃマウスは、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入し、ＣＴ２６マウス結直腸癌細胞株はＣｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ、Ｓｈａｎｇｈａｉ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓから購入した。抗癌剤はゲムシタビン（Ｊｉａｎｇｓｕ ＨＡＯＳＥＮ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）である。

６～８週齢、１８～２２ｇのＳＰＦグレードのＢＡＬＢ／ｃマウスに、結直腸癌ＣＴ２６腫瘍細胞（１×１０^６細胞／ｍＬ、０．２ｍｌ／マウス）を右前肢腋窩に皮下接種した。腫瘍を接種した日に、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与群（Ｎ＝２４、雌１２匹、雄１２匹）、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与群（Ｎ＝２４、雌１２匹、雄１２匹）、通常の生理食塩水対照群（Ｎ＝２４、雌１２匹、雄１２匹）、ゲムシタビン単独群（Ｎ＝２４、雌１２匹、雄１２匹）、及びＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群（Ｎ＝２４、雌１２匹、雄１２匹）に無作為に分けた。

ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４は首後部に１ｕｇ／マウスで皮下注射した。ゲムシタビンは６０ｍｇ／ｋｇで腹腔内注射した。投与はグループ分けよりも後の日に開始した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与群については、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４は、４８時間毎に１回、３回連続投与の後、１４４時間の休薬で１１回投与した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続的投与群については、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４は４８時間毎に１回投与した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群については、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４は、４８時間毎に１回、３回連続投与の後、２４０時間の休薬で８回投与し、ゲムシタビンは１週間に１回投与した。ゲムシタビン単独群については、ゲムシタビンは１週間に１回投与した。生理食塩水対照群については、同体積の生理食塩水を投与した。

生存率分析を全ての群について行い、群間の差を比較した。統計解析には、ＳＡＳ９．４、ｏｆｆｉｃｅ２０１０ソフトウェアを使用し、統計検定は全て両側検定とした。

生存曲線を図１１に示し、統計的比較結果を表６に示す。腫瘍接種後１１０日目、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続的投与群の生存期間の中央値は５３．５日であり、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与群では８９．０日であり、これはいずれも通常の生理食塩水対照群の４９．５日よりも長かった。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続的投与群と間欠的投与群の生存曲線には有意な差があり（Ｐ＝０．０１５０）、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与群の生存期間はＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続的投与群に比べ有意に長かった。マウスの移植結直腸癌ＣＴ２６の治療については、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与は連続的投与に比べ有意に改善された効果を示した。

ゲムシタビン単独群の生存期間の中央値は８９．０日であり、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与とゲムシタビンとの併用群の観察期間（腫瘍接種後１１０日）終了時の生存率は７５．０％であった。２群間の生存曲線は有意に異なっていた（Ｐ＝０．０１０２）。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与とゲムシタビンとの併用群の生存期間は、ゲムシタビン単独群に比べ有意に長かった。

ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与群の生存期間中央値は８９．０日であり、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与とゲムシタビンとの併用群の観察期間（腫瘍接種後１１０日）終了時の生存率は７５．０％であった。２群間の生存曲線は有意に異なっていた（Ｐ＝０．００４８）。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与とゲムシタビンとの併用群の生存期間は、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与群より有意に長かった。

結果より、マウスにおける移植結直腸癌ＣＴ２６の治療について、ＰＥＧ化マウスインターフェロンαの間欠的投与がＰＥＧ化マウスインターフェロンαの連続的投与より優れていること、ゲムシタビンと併用したＰＥＧ化マウスインターフェロンαの間欠的投与は、ゲムシタビン単独及びＰＥＧ化マウスインターフェロンα単独より抗癌活性が有意に優れていることが示された。

実施例８．マウスのメラノーマを治療するためのゲムシタビンと併用したインターフェロンの間欠的投与
本発明者らは、マウスのメラノーマＢ１６に対するゲムシタビンと併用したＰＥＧ化組換えマウスインターフェロンα（ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４）の間欠的投与の抗腫瘍効果を調べ、インターフェロンとゲムシタビンの併用投与の有効性を探った。本発明者らはＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を間欠的投与し、ゲムシタビンを投与することによって、ゲムシタビンを単独で投与した場合又はＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を単独で間欠的投与した場合と比較して、マウスのメラノーマＢ１６の治療において有意に良好な結果が得られる可能性があることを見出した。

本実施例において、マウスにおける移植メラノーマＢ１６に対するＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与（４８時間毎に１回投与、３回連続投与の後、２４０時間休薬；４回）、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続的投与（４８時間に１回、２４回連続投与）、ゲムシタビンと併用したＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４（ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４：４８時間毎に１回投与、３回連続投与の後、２４０時間休薬、４回；ゲムシタビン：１週間に１回）の有効性の比較試験を行った。

６～８週齢、１８～２２ｇのＳＰＦグレードのＣ５７ＢＬ／６Ｎマウスに、Ｂ１６細胞（１×１０^５細胞／ｍＬ、０．２ｍｌ／マウス）を右前肢腋窩に皮下接種した。腫瘍を接種した日に、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続的投与群（Ｎ＝２８、雌１４匹、雄１４匹）、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与群（Ｎ＝２８、雌１４匹、雄１４匹）、通常の生理食塩水対照群（Ｎ＝２８、雌１４匹、雄１４匹）、ゲムシタビン単独群（Ｎ＝２８、雌１４匹、雄１４匹）、及びＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群（Ｎ＝２８、雌１４匹、雄１４匹）に無作為に分けた。

ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４は首後部に１ｕｇ／マウスで皮下注射した。投与はグループ分けよりも後の日に開始した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与群については、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４は４８時間毎に１回、３回の連続投与の後、２４０時間休薬で、４回投与した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続的投与群については、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４は４８時間毎に１回投与した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４のゲムシタビンとの併用群については、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４は、４８時間毎に１回、３回の連続投与の後、２４０時間休薬で４回投与し、ゲムシタビンは１週間に１回投与した。ゲムシタビン単独群については、ゲムシタビンは１週間に１回投与した。生理食塩水対照群については、同体積の生理食塩水を投与した。ゲムシタビンは６０ｍｇ／ｋｇで腹腔内投与した。

死亡率の差を比較するために、ＳＡＳ９．４ソフトウェアを使用し、統計検定は全て両側検定とした。

死亡率を図１２に、統計的比較結果を表７に示す。

腫瘍接種後４６日目、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続的投与群の死亡率は１００％、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与群では３９．３％であり、差は有意であった（Ｐ＜０．００１）。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与群の死亡率は、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続的投与群の死亡率より有意に低かった。マウスの移植メラノーマＢ１６の治療については、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与は連続的投与より有意に改善された効果を示した。

腫瘍接種後４８日目、ゲムシタビン単独群の死亡率は８９．３％、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与とゲムシタビンとの併用群では２１．４％であり、差は有意であった（Ｐ＜０．０００１）。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与とゲムシタビンとの併用群の死亡率は、ゲムシタビン単独群より有意に低かった。

腫瘍接種後４８日目、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与単独群の死亡率は４６．４％でライ、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与とゲムシタビンとの併用群は２１．４％であり、差は有意であった（Ｐ＝０．０４８２）。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与とゲムシタビンとの併用群の死亡率は、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与単独群より有意に低かった。

結果より、マウスにおける移植メラノーマＢ１６の治療には、ＰＥＧ化マウスインターフェロンαの間欠的投与がＰＥＧ化マウスインターフェロンαの連続的投与より優れていること、ゲムシタビンと併用したＰＥＧ化マウスインターフェロンαの間欠的投与の抗癌活性は、ゲムシタビン単独及びＰＥＧ化マウスインターフェロンα単独より有意に優れていることが示された。

実施例９．マウスの乳癌を治療するためのゲムシタビンと併用したインターフェロンの間欠的投与
本発明者らは、ゲムシタビンと併用したＰＥＧ化組換えマウスインターフェロンα（ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４）をマウス乳癌４Ｔ１に間欠的投与することによる抗腫瘍効果を検討し、インターフェロンとゲムシタビンの併用投与の有効性を探った。本発明者らは、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を間欠的投与し、ゲムシタビンを投与することにより、ゲムシタビンを単独で投与する場合又はＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を単独で間欠的投与する場合と比較して、マウス乳癌４Ｔ１の治療において有意に良好な結果が得られる可能性があることを見出した。

本実施例において、マウスにおける移植乳癌４Ｔ１に対するＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与（４８時間毎に１回投与、３回連続投与の後、１４４時間休薬；５回）、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続的投与（４８時間に１回、２５回連続投与）、ゲムシタビンと併用したＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４（ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４：４８時間毎に１回投与、３回連続投与の後、２４０時間休薬、４回；ゲムシタビン：１週間に１回）の有効性の比較試験を行った。

本実施例において、ＢＡＬＢ／ｃマウスは、Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入し、４Ｔ１マウス乳癌細胞株はＣｈｉｎａ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＣＣＴＣＣ）から購入した。

６～８週齢、１８～２２ｇのＳＰＦグレードのＢＡＬＢ／ｃマウスに、４Ｔ１細胞（１×１０^６細胞／ｍＬ、０．２ｍｌ／マウス）を右前肢腋窩に皮下接種した。腫瘍を接種した日に、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続的投与群（Ｎ＝２４、雌１２匹、雄１２匹）、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与群（Ｎ＝２４、雌１２匹、雄１２匹）、通常の生理食塩水対照群（Ｎ＝２４、雌１２匹、雄１２匹）、ゲムシタビン単独群（Ｎ＝２４、雌１２匹、雄１２匹）、及びＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群（Ｎ＝２４、雌１２匹、雄１２匹）に無作為に分けた。

ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４は首後部に１ｕｇ／マウスで皮下注射した。投与はグループ分けの後の日に開始した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与群については、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４は、４８時間毎に１回、３回の連続投与の後、１４４時間休薬で５回投与した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続的投与群については、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４は４８時間毎に１回投与した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群については、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４は、４８時間毎に１回、３回の連続投与の後、２４０時間休薬で４回投与し、ゲムシタビンは１週間に１回投与した。ゲムシタビン単独群については、ゲムシタビンは１週間に１回投与した。生理食塩水対照群については、同体積の生理食塩水を投与した。ゲムシタビンは６０ｍｇ／ｋｇで腹腔内注射した。

死亡率の差を比較するために、ＳＡＳ９．４ソフトウェアを使用し、統計検定は全て両側検定とした。

死亡率を図１３に示し、統計的比較結果を表８に示す。

腫瘍接種後５３日目、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続的投与群の死亡率は８７．５％であり、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与群では５８．３％であり、差は有意であり（Ｐ＝０．０２３０）、いずれも生理食塩水対照群（１００％）より低かった。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与群の死亡率は、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４連続的投与群の死亡率より有意に低かった。マウスの移植乳癌４Ｔ１の治療については、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の間欠的投与は連続的投与より有意に改善された効果を示した。

腫瘍移植後５３日目、ゲムシタビン単独群の死亡率は８７．５％であり、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与とゲムシタビンとの併用群は４．２％であり、差は有意であった（Ｐ＜０．０００１）。ゲムシタビンとＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与の併用群の死亡率は、ゲムシタビン単独群より有意に低かった。

腫瘍接種後５３日目、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与単独群の死亡率は５８．３％であり、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与とゲムシタビンとの併用群では４．２％であり、差は有意であった（Ｐ＜０．０００１）。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与とゲムシタビンとの併用群の死亡率は、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４間欠的投与単独群より有意に低かった。

結果より、マウスにおける移植乳癌４Ｔ１の治療には、ＰＥＧ化マウスインターフェロンαの間欠的投与がＰＥＧ化マウスインターフェロンαの連続的投与より優れていること、ゲムシタビンと併用したＰＥＧ化マウスインターフェロンαの間欠的投与の抗癌活性は、ゲムシタビン単独及びＰＥＧ化マウスインターフェロンα単独より有意に優れていることが示された。

実施例１０．インターフェロンと抗癌剤エピルビシンの間欠的投与によるマウスの移植肝臓癌Ｈ_２２の治療に関する研究
本実施例で使用する抗癌剤は、化学療法剤の中でも抗腫瘍性抗生物質であるエピルビシンであり、マウスに移植された肝臓癌Ｈ_２２の治療において、抗癌剤エピルビシンと併用したインターフェロンの間欠的投与の効果を調べた。

本実施例では、ＢＡＬＢ／ｃマウスはＢｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入し、マウス肝癌Ｈ２２細胞株はＣｈｉｎａ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＣＣＴＣＣ）から購入した。エピルビシンの製造者はＢｅｉｊｉｎｇ Ｕｎｉｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｆａｃｔｏｒｙであった。

６～８週齢、１８～２２ｇのＳＰＦグレードのＢＡＬＢ／ｃマウスに、肝臓癌Ｈ_２２腫瘍細胞（１×１０^６細胞／ｍＬ、０．２ｍｌ／マウス）を右前肢腋窩に皮下接種した。腫瘍接種の３日後、無作為に群分けし、各群２８匹（雌雄半々）で、通常の生理食塩水対照群、エピルビシン単独の群、及びＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とエピルビシンの併用群が含まれていた。

群分けの翌日から週１回で投与を開始した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を首後部に皮下注射し、エピルビシンを腹腔内に、毎回３．５ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。通常の生理食塩水の対照群には、同体積の通常の生理食塩水を投与した。

全ての群で生存曲線分析を行い、生存期間の中央値を比較した。統計解析には、ＳＡＳ ９．４及びｏｆｆｉｃｅ２０１０ソフトウェアを使用した。統計検定は全て両側検定とした。

生存曲線を図１４に示し、生存時間の中央値を表９に示す。生理食塩水群の生存期間の中央値は１３．５日、エピルビシン群の生存期間の中央値は１５日、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とエピルビシンの併用群の観察期間中の生存率は５７．１％であった。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とエピルビシンの併用群の生存曲線は、通常の生理食塩水群と比較して有意に異なっていた（Ｐ＜０．０００１）。エピルビシンと併用してＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を間欠的投与することによって、エピルビシン単独投与に比べて、腫瘍保有マウスの生存期間が有意に延長し得ることが示された（Ｐ＜０．０００１）。

本実施例は、マウスに移植された肝臓癌Ｈ_２２の治療において、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４をエピルビシンと併用して間欠的投与することで、エピルビシン単独投与に比べて有意に優れた効果が得られたことを示唆している。

実施例１１．抗癌剤オキサリプラチンと併用したインターフェロンの間欠的投与によるマウスの移植肝臓癌Ｈ_２２の治療に関する研究
本実施例で使用する抗癌剤は化学療法剤オキサリプラチンであり、マウスに移植された肝臓癌Ｈ_２２の治療において、抗癌剤オキサリプラチンと併用したインターフェロンの間欠的投与の効果を調べた。

本実施例では、ＢＡＬＢ／ｃマウスはＢｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入し、Ｈ_２２マウス肝癌細胞株はＣｈｉｎａ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＣＣＴＣＣ）から購入した。オキサリプラチンの製造者は、Ｑｉｌｕ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ（Ｈａｉｎａｎ）Ｃｏであった。

６～８週齢、１８～２２ｇのＳＰＦグレードのＢＡＬＢ／ｃマウスに、肝臓癌Ｈ_２２腫瘍細胞（１×１０^６細胞／ｍＬ、０．２ｍｌ／マウス）を右前肢腋窩に皮下接種した。腫瘍接種の３日後、無作為に群分けし、各群２８匹（雌雄半々）で、通常の生理食塩水対照群、オキサリプラチン単独の群、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とオキサリプラチンの併用群が含まれていた。

群分けの翌日から週１回で投与を開始した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４は首後部に皮下注射し、オキサリプラチンは腹腔内に注射し、毎回１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。通常の生理食塩水対照群には、同体積の通常の生理食塩水を投与した。

全ての群で生存曲線分析を行い、生存期間の中央値を比較した。統計解析には、ＳＡＳ ９．４及びｏｆｆｉｃｅ２０１０ソフトウェアを使用した。統計検定は全て両側検定とした。

生存曲線を図１５に示し、生存期間の中央値を表１０に示す。通常の生理食塩水群の生存期間の中央値は１１日、オキサリプラチン群の生存期間の中央値は１２．５日、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とオキサリプラチンの併用群の生存期間の中央値は３１日であった。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とオキサリプラチン併用群の生存曲線は、通常の生理食塩水群と比較して有意に異なり（Ｐ＝０．０００１）、オキサリプラチン単独群と比較しても有意に異なっていた（Ｐ＝０．００１４）。オキサリプラチンと併用したＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を間欠的に投与することで、腫瘍保有マウスの生存期間を有意に延長し得る。

本実施例は、マウスに移植された肝臓癌Ｈ_２２の治療において、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４をオキサリプラチンと併用して間欠的投与することによって、オキサリプラチン単独に比べて有意に優れた効果が得られたことを示している。

実施例１２．インターフェロンと抗癌剤パクリタキセルの間欠的投与によるマウスの移植肝臓癌Ｈ_２２の治療に関する研究
本実施例で使用する抗癌剤は化学療法剤パクリタキセルであり、マウスに移植された肝臓癌Ｈ_２２の治療における、抗癌剤パクリタキセルと併用したインターフェロンの間欠的投与の効果を調べた。

本実施例では、ＢＡＬＢ／ｃマウスはＢｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から購入し、Ｈ_２２マウス肝臓癌細胞株はＣｈｉｎａ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＣＣＴＣＣ）から購入した。パクリタキセルの製造者は、Ｑｉｌｕ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ（Ｈａｉｎａｎ）Ｃｏ．，Ｌｔｄ．であった。

６～８週齢、１８～２２ｇのＳＰＦグレードのＢＡＬＢ／ｃマウスに、肝臓癌Ｈ_２２腫瘍細胞（１×１０^６細胞／ｍＬ、０．２ｍｌ／マウス）を右前肢腋窩に皮下接種した。腫瘍接種から３日後、無作為に群分けし、各群２８匹（雌雄半々）で、通常の生理食塩水対照群、パクリタキセル単独の群、及びＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とパクリタキセルの併用群が含まれていた。

投与は群分けの翌日から週１回で開始した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４は毎回１ｍｇ／マウスの用量を首後部に皮下注射し、オキサリプラチンは毎回１０ｍｇ／ｋｇの用量を腹腔内に注射した。

全ての群で生存曲線分析を行い、生存期間の中央値を比較した。統計解析には、ＳＡＳ ９．４及びｏｆｆｉｃｅ２０１０ソフトウェアを使用した。統計検定は全て両側検定とした。

生存曲線を図１６に示し、生存時間の中央値を表１１に示す。通常の生理食塩水群の生存期間の中央値は１５日であり、パクリタキセル群の生存期間の中央値は１７日であった。観察期間中、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とパクリタキセルの併用群の生存率は８２．１％であった。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とパクリタキセルの併用群の生存曲線は、通常の生理食塩水群と有意に異なり（Ｐ＝０．０００１）、またパクリタキセル単独の群とも有意に異なった（Ｐ＜０．０００１）。パクリタキセルと併用したＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の間欠的投与により、腫瘍保有マウスの生存期間を有意に延長し得る。

本実施例は、マウスに移植された肝臓癌Ｈ_２２の治療において、パクリタキセルと併用したＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の間欠的投与の効果が、パクリタキセル単独の効果よりも有意に優れていたことを示している。

本発明の上記結果は、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４をゲムシタビン、パクリタキセル、オキサリプラチン、エピルビシン等の化学療法剤と併用して間欠的投与することで、化学療法剤を単独で投与するよりも格段に優れた癌治療効果を得ることができることを示唆している。

上記結果により、インターフェロンを長期間連続的に投与すると、免疫抑制及び免疫細胞の欠乏が引き起こされ、回復が困難になることが示唆されている。インターフェロンの有効性は、免疫系に依存する。そのため、インターフェロンベースの治療は、免疫細胞が未だ十分である治療初期段階には、高い腫瘍抑制等の良好な治療効果を達成し得る。しかし、治療の後期段階になると、インターフェロンの長期投与による免疫細胞の欠乏又は免疫抑制により、治療効果が大幅に低下し、インターフェロンを投与し続けても高い有効性が維持できない場合がある。この問題は、インターフェロンを間欠的投与することによって回避することができる。例えば、一定の効果を得るためにインターフェロンを一定期間投与した後、部分的な免疫抑制及び免疫細胞の疲弊が起こる前に、インターフェロンの投与を一定期間中断して、免疫細胞をできるだけ速く回復させるようにし、その後、インターフェロンを再投与することで、やはりより優れた治療効果を達成し得る。また、インターフェロン治療剤を他の薬剤と合理的に併用して間欠的投与することにより、より優れた治療効果を達成し得る。

実施例１３．インターフェロンとゲムシタビンの併用（ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を週１回投与、及びゲムシタビンを週１回、１９週間投与）又はインターフェロンとゲムシタビンの異なる併用方法によるマウス移植肝臓癌Ｈ_２２の治療に関する試験
本実施例では、ＢＡＬＢ／ｃマウスはＢｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＣＯ．，Ｌｔｄから購入し、マウス肝臓癌Ｈ２２細胞株はＣｈｉｎａ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＣＣＴＣＣ）から購入した。

６～８週齢、１８～２２ｇのＳＰＦグレードのＢＡＬＢ／ｃマウスに、Ｈ２２細胞（１×１０^６／ｍＬ、０．２ｍｌ／マウス）を右前肢の脇下に皮下接種した。腫瘍接種３日後、無作為に以下の実験群に分けた：ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４単独群（Ｎ＝２７、雌１４匹、雄１３匹）、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群（同時投与；Ｎ＝２７、雌１４匹、雄１３匹）、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群（ゲムシタビンはＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の７２時間後に投与）（Ｎ＝２７、雌１４匹、及び雄１３匹）、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群（ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４はゲムシタビンの７２時間後に投与）（Ｎ＝２７、雌１４匹、及び雄１２匹）並びに通常の生理食塩水対照群（Ｎ＝２７、雌１４匹、及び雄１３匹）。

ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４はマウス１匹あたり１μｇの用量を頸部背面に皮下注射により投与した。投与は群分けの翌日から開始した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４単独群では、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を週１回投与した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用（同時投与）群では、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４及びゲムシタビンを同日に週１回投与した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用（ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４はゲムシタビンの７２時間後に投与）群では、ゲムシタビンはＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の３日前に週１回投与した。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用（ゲムシタビンはＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の７２時間後に投与）群では、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４を最初に投与し、ゲムシタビンを３日後に週１回投与した。通常の生理食塩水対照群では、同体積の生理食塩水を投与した。ゲムシタビンは６０ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内に注射した。

群間の腫瘍発生率の差を比較するためにＳＡＳ９．４ソフトウェアを使用し、統計学的検定は全て両側検定とした。

各群の腫瘍発生率は、腫瘍発生陽性と判定される６２．５ｍｍ＾以上の腫瘍体積に基づいて算出した。腫瘍発生率の変化を図１７に示す。腫瘍接種後１５１日目までの腫瘍発生率は、通常の生理食塩液対照群では１００．０％、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群（同時投与）では６３．０％、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群（ゲムシタビンはＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の７２時間後に投与）では２９．６％、及びＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群（ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４はゲムシタビンの７２時間後に投与）では８０．８％であった。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群の腫瘍発生率は、通常の生理食塩水対照群及びＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４単独群よりも低かった。腫瘍発生陰性と判定されたマウスは解剖により確認され、腋窩に固形腫瘍は認められなかった。統計学的比較結果を表１２に示す。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群（ゲムシタビンは７２時間後に投与）の腫瘍発生率は、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群（同時投与）（Ｐ＝０．０１４０）及びＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群（ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４は７２時間後に投与）（Ｐ＝０．０００２）よりも低かった。

生存曲線を図１８に示す。腫瘍接種後１５１日目までの、通常の生理食塩水対照群の生存期間の中央値は１９．０日、ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４単独群の生存期間中央値は３８．０日、及びＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群（同時投与）の生存期間中央値は１２２．０日であり；ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群（ゲムシタビンはＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の７２時間後に投与）の生存率は６６．７％であり；ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群（ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４はゲムシタビンの７２時間後に投与）の生存期間中央値は９４．０日であった。統計学的比較結果を表１３に示す。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４治療群の生存期間は通常の生理食塩水対照群の生存期間より長く；ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群の生存期間はＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４単独群の生存期間より長く、生存曲線は統計学的に異なっていた（Ｐ＜０．０００１）。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群（ゲムシタビンはＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４の７２時間後に投与）の生存期間は他の併用群よりも長く、その生存曲線はＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群（同時投与）及びＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用群（ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４はゲムシタビンの７２時間後に投与）と統計学的に有意に異なっていた（Ｐ値はそれぞれ０．０２４１及び０．００１０であった）。

その結果、マウスにおける移植肝臓癌Ｈ２２の治療について、ＰＥＧ化マウスインターフェロンαとゲムシタビンの異なる組合せが抗癌活性を有することが示された。ＰＥＧ化マウスインターフェロンαとゲムシタビンとの併用群では、ＰＥＧ化マウスインターフェロンαとゲムシタビンの投与順序の違いにより、抗癌活性が異なっていた。ＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４投与後にゲムシタビンが投与されるＰＥＧ－ｍＩＦＮ－α４とゲムシタビンとの併用療法は、他の併用よりも有意に優れていた。

配列及び説明
＞ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１は、インターフェノンα２ａのアミノ酸配列である（例えばロフェロン－Ａ又はペガシス）
CDLPQTHSLGSRRTLMLLAQMRKISLFSCLKDRHDFGFPQEEFGNQFQKAETIPVLHEMIQQIFNLFSTKDSSAAWDETLLDKFYTELYQQLNDLEACVIQGVGVTEPLMKEDSILAVRKYFQRITLYLKEKKYSPCAWEVVRAEIMRSFSLSTNLQESLRSKE
＞ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２は、インターフェノンα２ｂのアミノ酸配列である（例えばイントロンＡ又はペギントロン又はペグベロン）
CDLPQTHSLGSRRTLMLLAQMRRISLFSCLKDRHDFGFPQEEFGNQFQKAETIPVLHEMIQQIFNLFSTKDSSAAWDETLLDKFYTELYQQLNDLEACVIQGVGVTETPLMKEDSILAVRKYFQRITLYLKEKKYSPCAWEVVRAEIMRSFSLSTNLQESLRSKE。
＞ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３は、組換え統合インターフェロンのアミノ酸配列である（例えばインファーゲン）
MCDLPQTHSLGNRRALILLAQMRRISPFSCLKDRHDFGFPQEEFDGNQFQKAQAISVLHEMIQQTFNLFSTKDSSAAWDESLLEKFYTELYQQLNDLEACVIQEVGVEETPLMNVDSILAVKKYFQRITLYLTEKKYSPCAWEVVRAEIMRSFSLSTNLQERLRRKE。
＞ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４は、統合インターフェロンα－２のアミノ酸配列である（例えばペギンファー）。
GSGGGCDLPQTHSLGNRRALILLAQMRRISPFSCLKDRHDFGFPQEEFDGNQFQKAQAISVLHEMIQQTFNLFSTKDSSAAWDESLLEKFYTELYQQLNDLEACVIQEVGVEETPLMNVDSILAVRKYFQRITLYLTEKKYSPCAWEVVRAEIMRSFSLSTNLQERLRRKD
＞ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５は、インターフェロンλのアミノ酸配列である。
MGPVPTSKPTTTGKGCHIGRFKSLSPQELASFKKARDALEESLKLKNWSCSSPVFPGNWDLRLLQVRERPVALEAELALTLKVLEAAAGPALEDVLDQPLHTLHHILSQLQACIQPQPTAGPRPRGRLHHWLHRLQEAPKKESAGCLEASVTFNLFRLLTRDLKYVADGNLCLRTSTHPEST
＞ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６は、マウスインターフェロンα４のアミノ酸配列である。
CDLPHTYNLGNKRALTVLEEMRRLPPLSCLKDRKDFGFPLEKVDNQQIQKAQAILVLRDLTQQILNLFTSKDLSATWNATLLDSFCNDLHQQLNDLKACVMQEPPLTQEDSLLAVRTYFHRITVYLRKKKHSLCAWEVIRAEVWRALSSSTNLLARLSEEKE

参考文献：
［１］ Ｇｉｓｓｌｉｎｇｅｒ Ｈ， ｅｔ． ａｌ． Ｒｏｐｅｇｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｌｆａ－２ｂ， ａ ｎｏｖｅｌ ＩＦＮα－２ｂ， ｉｎｄｕｃｅｓ ｈｉｇｈ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｒａｔｅｓ ｗｉｔｈ ｌｏｗ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｐｏｌｙｃｙｔｈｅｍｉａ ｖｅｒａ． Ｂｌｏｏｄ． ２０１５ Ｏｃｔ ８；１２６（１５）：１７６２－９． ｄｏｉ： １０．１１８２／ｂｌｏｏｄ－２０１５－０４－６３７２８０． Ｅｐｕｂ ２０１５ Ａｕｇ １０．
［２］ Ｇａｎｅ ＥＪ， ｅｔ． ａｌ． Ｔｈｅ ｏｒａｌ ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－７ ａｇｏｎｉｓｔ ＧＳ－９６２０ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ． Ｊ Ｈｅｐａｔｏｌ． ２０１５ Ａｕｇ；６３（２）：３２０－８．
ｄｏｉ： １０．１０１６／ｊ．ｊｈｅｐ．２０１５．０２．０３７． Ｅｐｕｂ ２０１５ Ｆｅｂ ２７．
［３］ Ｊａｎｓｓｅｎ ＨＬＡ， ｅｔ． ａｌ． Ｓａｆｅｔｙ， ｅｆｆｉｃａｃｙ ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓ ｏｆ ｖｅｓａｔｏｌｉｍｏｄ （ＧＳ－９６２０） ｉｎ ｖｉｒａｌｌｙ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ． Ｊ Ｈｅｐａｔｏｌ． ２０１８ Ｍａｒ；６８（３）：４３１－４４０． ｄｏｉ： １０．１０１６／ｊ．ｊｈｅｐ．２０１７．１０．０２７． Ｅｐｕｂ ２０１７ Ｄｅｃ １１．
［４］ Ａｇａｒｗａｌ Ｋ， ｅｔ． ａｌ． Ｓａｆｅｔｙ ａｎｄ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ｖｅｓａｔｏｌｉｍｏｄ （ＧＳ－９６２０） ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｗｈｏ ａｒｅ ｎｏｔ ｃｕｒｒｅｎｔｌｙ ｏｎ ａｎｔｉｖｉｒａｌ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒａｌ Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ ［２０１８ Ａｕｇ， ２５（１１）：１３３１－１３４０．
［５］ Ｌｏｐａｔｉｎ Ｕ， ｅｔ． ａｌ． Ｓａｆｅｔｙ， ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓ ｏｆ ＧＳ－９６２０， ａｎ ｏｒａｌ Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ７ ａｇｏｎｉｓｔ． Ａｎｔｉｖｉｒ Ｔｈｅｒ． ２０１３；１８（３）：４０９－１８． ｄｏｉ： １０．３８５１／ＩＭＰ２５４８． Ｅｐｕｂ ２０１３ Ｆｅｂ １５．
［６］ Ｅｄｗａｒｄ Ｊ． Ｇａｎｅ， ｅｔ． ａｌ． ＴＬＲ７ ａｇｏｎｉｓｔ ＲＯ７０２０５３１ ｔｒｉｇｇｅｒｓ ｉｍｍｕｎｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｆｔｅｒ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｄｏｓｅｓ ｉｎ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｐａｔｉｅｎｔｓ Ｒｅｐｏｒｔｅｄ ｂｙ Ｊｕｌｅｓ Ｌｅｖｉｎ． ＡＡＳＬＤ ２０１８ Ｎｏｖ ９－１３ ＳＦ
［７］ Ｅｂｒａｈｉｍ Ｍ， ｅｔ． ａｌ． Ａｒｅ ＲＩＧ－１ ａｎｄ ＭＤＡ５ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｃｈｒｏｎｉｃ ＨＢＶ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ？ Ｖｉｒａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２０１５ Ｎｏｖ；２８（９）：５０４－８． ｄｏｉ： １０．１０８９／ｖｉｍ．２０１５．００５６． Ｅｐｕｂ ２０１５ Ｏｃｔ ２０．
［８］ Ｍａ Ｚ， ｅｔ． ａｌ． Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｔｏ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｂｙ ｉｎｉｔｉａｔｉｎｇ ａｎｔｉｖｉｒａｌ ｉｎｎａｔｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ａｎｄ ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｄａｐｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ． Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２０１５ Ｍａｙ；１２（３）：２７３－８２． ｄｏｉ： １０．１０３８／ｃｍｉ．２０１４．１１２． Ｅｐｕｂ ２０１４ Ｎｏｖ ２４．
［９］ Ｊｏｎｅｓ Ｍ， ｅｔ． ａｌ． ＳＢ ９２００， ａ ｎｏｖｅｌ ａｇｏｎｉｓｔ ｏｆ ｉｎｎａｔｅ ｉｍｍｕｎｉｔｙ， ｓｈｏｗｓ ｐｏｔｅｎｔ ａｎｔｉｖｉｒａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｇａｉｎｓｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ＨＣＶ ｖａｒｉａｎｔｓ． Ｊ Ｍｅｄ Ｖｉｒｏｌ． ２０１７ Ｓｅｐ；８９（９）：１６２０－１６２８． ｄｏｉ： １０．１００２／ｊｍｖ．２４８０９． Ｅｐｕｂ ２０１７ Ｍａｙ ２３．
［１０］ Ｘｕ ＣＬ， ｅｔ． ａｌ． Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ４ ｏｎ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ＰＢＭＣｓ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ ａｇｇｒａｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＨＢＶ－ｒｅｌａｔｅｄ ａｃｕｔｅ－ｏｎ－ｃｈｒｏｎｉｃ ｌｉｖｅｒ ｆａｉｌｕｒｅ． Ｊ Ｈｕａｚｈｏｎｇ Ｕｎｉｖ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇ Ｍｅｄ Ｓｃｉ． ２０１５ Ｄｅｃ；３５（６）：９１０－９１５． ｄｏｉ： １０．１００７／ｓ１１５９６－０１５－１５２７－ｘ． Ｅｐｕｂ ２０１５ Ｄｅｃ １６．
［１１］ Ｋａｔｏ Ｈ， ｅｔ． ａｌ． ＲＩＧ－Ｉ－Ｌｉｋｅ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ａｎｄ Ｔｙｐｅ Ｉ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｏｐａｔｈｉｅｓ． Ｊ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ． ２０１７ Ｍａｙ；３７（５）：２０７－２１３． ｄｏｉ： １０．１０８９／ｊｉｒ．２０１６．００９５．
［１２］ Ｌｉ Ｌ， ｅｔ． ａｌ． Ａｎｔｉ－ＨＢＶ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ７ ａｇｏｎｉｓｔ ＧＳ－９６２０ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｉｎｔｒａｈｅｐａｔｉｃ ａｇｇｒｅｇａｔｅｓ ｏｆ Ｔ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｂ ｃｅｌｌｓ． Ｊ Ｈｅｐａｔｏｌ． ２０１８ Ｍａｙ；６８（５）：９１２－９２１． ｄｏｉ： １０．１０１６／ｊ．ｊｈｅｐ．２０１７．１２．００８． Ｅｐｕｂ ２０１７ Ｄｅｃ １４．
［１３］ Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ， ｅｔ． ａｌ． ＬＢＡ１５Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ－ｉｎ－ｈｕｍａｎ （ＦＩＨ） ｓｔｕｄｙ ｏｆ ＭＫ－１４５４， ａｎ ａｇｏｎｉｓｔ ｏｆ ｓｔｉｍｕｌａｔｏｒ ｏｆ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｇｅｎｅｓ （ＳＴＩＮＧ）， ａｓ ｍｏｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｒ ｉｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ （ｐｅｍｂｒｏ） ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｄｖａｎｃｅｄ ｓｏｌｉｄ ｔｕｍｏｒｓ ｏｒ ｌｙｍｐｈｏｍａｓ． Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ．２０１８ ＯＣＴ．２９（８）：７１２－７１２．Ｍｅｅｔｉｎｇ Ａｂｓｔｒａｃｔ．
［１４］ Ｃｅｍｅｒｓｋｉ， Ｓａｓｏ， ｅｔ． ａｌ． Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｎｏｖｅｌ ＳＴＩＮＧ ａｇｏｎｉｓｔ， ＭＫ－１４５４． ＪＯＵＲＮＡＬ ＦＯＲ ＩＭＭＵＮＯＴＨＥＲＡＰＹ ＯＦ ＣＡＮＣＥＲ． ２０１７ ＮＯＶ．５（２）：１６．Ｍｅｅｔｉｎｇ Ａｂｓｔｒａｃｔ．
［１５］ Ｒａｍａｎｊｕｌｕ ＪＭ， ｅｔ． ａｌ． Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ａｍｉｄｏｂｅｎｚｉｍｉｄａｚｏｌｅ ＳＴＩＮＧ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｇｏｎｉｓｔｓ ｗｉｔｈ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ． Ｎａｔｕｒｅ． ２０１８ Ｄｅｃ；５６４（７７３６）：４３９－４４３． ｄｏｉ： １０．１０３８／ｓ４１５８６－０１８－０７０５－ｙ． Ｅｐｕｂ ２０１８ Ｎｏｖ ７．
［１６］ Ｓａｆｅｔｙ ａｎｄ Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ＭＩＷ８１５ （ＡＤＵ－Ｓ１００） ＋／－ Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ Ｗｉｔｈ Ａｄｖａｎｃｅｄ／Ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ Ｓｏｌｉｄ Ｔｕｍｏｒｓ ｏｒ Ｌｙｍｐｈｏｍａｓ．
ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ａｄｕｒｏ．ｃｏｍ／ｆｉｌｅ．ｃｆｍ／１３／ｄｏｃｓ／ＳＩＴＣ１８＿ＭＩＷ８１５Ｘ２１０１＿ＳＩＴＣ％２０Ｐｏｓｔｅｒ（ｅ＿ｖｅｒｓｉｏｎ）＿０８Ｎｏｖ２０１８．ｐｄｆ
［１７］Ｌａｒａ ＰＮ Ｊｒ， ｅｔ． ａｌ． Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ｐｈａｓｅ ＩＩＩ ｐｌａｃｅｂｏ－ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｔｒｉａｌ ｏｆ ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ ａｎｄ ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ ｗｉｔｈ ｏｒ ｗｉｔｈｏｕｔ ｔｈｅ ｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｒｕｐｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ ｖａｄｉｍｅｚａｎ （ＡＳＡ４０４） ｉｎ ａｄｖａｎｃｅｄ ｎｏｎ－ｓｍａｌｌ－ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ． ２０１１ Ａｕｇ １；２９（２２）：２９６５－７１． ｄｏｉ： １０．１２００／ＪＣＯ．２０１１．３５．０６６０． Ｅｐｕｂ ２０１１ Ｊｕｎ ２７．
［１８］ Ｙｕｅｎ， Ｍ． Ｆ， ｅｔ． ａｌ． Ｄｏｓｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ａｎｄ ｓａｆｅｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｄａｉｌｙ， ｏｒａｌ ＲＩＧ－Ｉ ａｇｏｎｉｓｔ Ｉｎａｒｉｇｉｖｉｒ （ＳＢ ９２００） ｉｎ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｎａｉｖｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ： ｒｅｓｕｌｔｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ２５ｍｇ ａｎｄ ５０ｍｇ ｃｏｈｏｒｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ＡＣＨＩＥＶＥ ｔｒｉａｌ． ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＨＥＰＡＴＯＬＯＧＹ． ２０１８ ＡＰＲ．６８（１）： Ｓ５０９－Ｓ５１０．ＤＯＩ： １０．１０１６／Ｓ０１６８－８２７８（１８）３１２６７－４
［１９］ Ｍａ Ｚ， ｅｔ． ａｌ． Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ Ｖｉｒｕｓ ａｎｄ Ｔｏｌｌ－Ｌｉｋｅ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ： Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｓｔａｔｕｓ ａｎｄ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ ｆｏｒ Ｃｈｒｏｎｉｃ Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ． Ｖａｃｃｉｎｅｓ （Ｂａｓｅｌ）． ２０１８ Ｊａｎ １６；６（１）． ｐｉｉ： Ｅ６． ｄｏｉ： １０．３３９０／ｖａｃｃｉｎｅｓ６０１０００６．
［２０］ Ｗａｌｓｈ， Ｒ．， ｅｔ． ａｌ． Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＳＢ９２００ （Ｉｎａｒｉｇｉｖｉｒ） ｔｈｅｒａｐｙ ｏｎ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ．ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＨＥＰＡＴＯＬＯＧＹ． ２０１８ ＡＰＲ．６８（１）： Ｓ８９－Ｓ８９． ＤＯＩ： １０．１０１６／Ｓ０１６８－８２７８（１８）３０３９６－９
［２１］ Ｎｉｕ Ｃ， ｅｔ． ａｌ． Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ７ ａｇｏｎｉｓｔ ＧＳ－９６２０ ｉｎｄｕｃｅｓ ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＨＢＶ ｖｉａ ａ ｔｙｐｅ Ｉ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ． Ｊ Ｈｅｐａｔｏｌ． ２０１８ Ｍａｙ；６８（５）：９２２－９３１． ｄｏｉ： １０．１０１６／ｊ．ｊｈｅｐ．２０１７．１２．００７． Ｅｐｕｂ ２０１７ Ｄｅｃ １３．
［２２］ Ｙｕｅｎ， ＭＦ， ｅｔ． ａｌ． Ａｓｃｅｎｄｉｎｇ ｄｏｓｅ ｃｏｈｏｒｔ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｉｎａｒｉｇｉｖｉｒ － Ａ ｎｏｖｅｌ ＲＩＧ Ｉ ａｇｏｎｉｓｔ ｉｎ ｃｈｒｏｎｉｃ ＨＢＶ ｐａｔｉｅｎｔｓ： Ｆｉｎａｌ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ＡＣＨＩＥＶＥ ｔｒｉａｌ． ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＨＥＰＡＴＯＬＯＧＹ． ２０１９ ＡＰＲ．７０（１）： Ｅ４７－Ｅ４８．ＤＯＩ： １０．１０１６／Ｓ０６１８－８２７８（１９）３００８４－２
［２３］ Ｂｏｕｒｑｕｉｎ Ｃ， ｅｔ． ａｌ． Ｈａｒｎｅｓｓｉｎｇ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ ｔｏ ｆｉｇｈｔ ｃａｎｃｅｒ ｗｉｔｈ Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｄ ＲＩＧ－Ｉ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｇｏｎｉｓｔｓ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｓ． ２０１９ Ｍａｒ ２． ｐｉｉ： Ｓ１０４３－６６１８（１８）３２０６６－８． ｄｏｉ： １０．１０１６／ｊ．ｐｈｒｓ．２０１９．０３．００１．
［２４］ Ｚｅｎｇ Ｙ， ｅｔ． ａｌ． Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ， ｌｏｎｇ ｎｏｎ－ｃｏｄｉｎｇ ＲＮＡ ＮＥＡＴ１， ａｎｄ ＲＩＧ－Ｉ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｒｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＨＢｅＡｇ－ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｅ ｐｈａｓｅ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｌａｂ Ａｎａｌ． ２０１９ Ｊｕｎ；３３（５）：ｅ２２８８６． ｄｏｉ： １０．１００２／ｊｃｌａ．２２８８６． Ｅｐｕｂ ２０１９ Ｍａｒ ２９．
［２５］ Ｗａｎｇ Ｊｉａｗｅｎ， ｅｔ ａｌ． Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ａｇｏｎｉｓｔｓ． Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２０１８， Ｖｏｌ． ４９， Ｎｏ． ４， ２８９－２９２．
［２６］ Ｔａｏ Ｚｅｙｕ， ｅｔ ａｌ． Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ｄｒｕｇｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ． Ｆｏｒｅｉｇｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ Ｖｏｌｕｍｅ， Ｊｕｌｙ ２０１８， Ｖｏｌ． ３９， Ｎｏ． ４： ３０８－３１９．
［２７］ Ｘｕ Ｑｕｎ， ｅｔ ａｌ． Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｓ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ． Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｙ， ２０１６， ４０（１）： ４２－５５．
［２８］ Ｌｉｕ Ｑｉｕｍｉｎｇ， ｅｔ ａｌ． Ｎｅｗ Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ａｎｔｉ－ＨＢＶ Ｄｒｕｇ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ． Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２０１６， Ｖｏｌ． ３２， Ｉｓｓｕｅ ５： ６５０－６５８．
［２９］ Ｍｕ Ｎａ， ｅｔ ａｌ． Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｐａｔｔｅｒｎ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ＴＬＲ３， ＲＩＧ－Ｉ ａｎｄ ＭＤＡ５ ｉｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ． Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ． ２０１６－０５：７１５－７１９．
［３０］ Ｈｅｉｎｚ Ｇｉｓｓｌｉｎｇｅｒ， ｅｔ． ａｌ． Ｒｏｐｅｇｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｌｆａ－２ｂ， ａ ｎｏｖｅｌ ＩＦＮα－２ｂ， ｉｎｄｕｃｅｓ ｈｉｇｈ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｒａｔｅｓ ｗｉｔｈ ｌｏｗ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｐｏｌｙｃｙｔｈｅｍｉａ ｖｅｒａ．Ｂｌｏｏｄ． ２０１５ Ｏｃｔ ８； １２６（１５）： １７６２－１７６９．Ｐｒｅｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｏｎｌｉｎｅ ２０１５ Ａｕｇ １０．
［３１］ Ｍｏｎｋａｒｓｈ ＳＰ， ｅｔ． ａｌ． Ｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ ｉｓｏｍｅｒｓ ｏｆ ｍｏｎｏｐｅｇｙｌａｔｅｄ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｌｐｈａ－２ａ： ｉｓｏｌａｔｉｏｎ， ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ， ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ． Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ． １９９７ Ｍａｙ １；２４７（２）：４３４－４０．
［３２］ Ｇｒａｃｅ Ｍ， ｅｔ． ａｌ． Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｅｇｙｌａｔｅｄ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＩＦＮ－ａｌｐｈａ２ｂ． Ｊ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ． ２００１ Ｄｅｃ；２１（１２）：１１０３－１５．
［３３］ Ｆｏｓｅｒ Ｓ， ｅｔ． ａｌ． Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ， ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ， ａｎｄ ａｎｔｉｖｉｒａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ ｉｓｏｍｅｒｓ ｏｆ ｍｏｎｏｐｅｇｙｌａｔｅｄ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｌｐｈａ－２ａ （ＰＥＧＡＳＹＳ）． Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒ Ｐｕｒｉｆ． ２００３ Ｊｕｌ；３０（１）：７８－８７．
［３４］ Ｎａｎｏｇｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｂｉｏｔｅｃｈｂｏｌｏｇｙ．ＰＥＧ－ＩＮＴＥＲＦＥＲＯＮ ＬＡＭＢＤＡ １ ＣＯＮＪＵＧＡＴＥＳ．ＷＯ２０１３／０２８２３３ Ａ１． ２８．０２．２０１３．
［３５］ Ｎａｎｏｇｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｂｉｏｔｅｃｈｂｏｌｏｇｙ．ＰＥＧ－ＩＮＴＥＲＦＥＲＯＮ ＬＡＭＢＤＡ １ ＣＯＮＪＵＧＡＴＥＳ．ＵＳ ８４５４９４７ Ｂ１．Ｊｕｎ．４．２０１３．
ｈｔｔｐｓ：／／ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ．ｅｓｐａｃｅｎｅｔ．ｃｏｍ／ｓｅａｒｃｈＲｅｓｕｌｔｓ？ｓｕｂｍｉｔｔｅｄ＝ｔｒｕｅ＆ｌｏｃａｌｅ＝ｅｎ＿ＥＰ＆ＤＢ＝ＥＰＯＤＯＣ＆ＳＴ＝ａｄｖａｎｃｅｄ＆ＴＩ＝＆ＡＢ＝ｐｅｇ－ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ＋ｌａｍｂｄａ＆ＰＮ＝＆ＡＰ＝＆ＰＲ＝＆ＰＤ＝＆ＰＡ＝＆ＩＮ＝＆ＣＰＣ＝＆ＩＣ＝
［３６］ Ｗａｎｇ Ｊｕｎｚｈｉ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｄｒｕｇ ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ． ２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ． Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｒｅｓｓ， ２００７： ５４０．
［３７］ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｌｐｈａ－４ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ［Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ］．ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｐｒｏｔｅｉｎ／ＮＰ＿０３４６３４．
［３８］ Ｐｉｃｈｉａ Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ， Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ．ｃｏｍ／ｄｏｃｕｍｅｎｔ－ｃｏｎｎｅｃｔ／ｄｏｃｕｍｅｎｔ－ｃｏｎｎｅｃｔ．ｈｔｍｌ？ｕｒｌ＝ｈｔｔｐｓ％ ３Ａ％２Ｆ％２Ｆａｓｓｅｔｓ．ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ．ｃｏｍ％２ＦＴＦＳ－Ａｓｓｅｔｓ％２ＦＬＳＧ％２Ｆｍａｎｕａｌｓ％２ Ｆｐｉｃｈｉａｆｅｒｍ＿ｐｒｏｔ．ｐｄｆ＆ｔｉｔｌｅ＝ＵＧｌｊａＧｌｈＩＥＺｌｃｍ１ｌｂｎＲｈｄＧｌｖｂｉＢＨｄＷｌｋＺＷｘｐｂｍＶｚ．

Claims (34)

1. 対象における癌を治療する方法であって、前記対象に
   ｉ）インターフェロンベースの治療剤を複数の連続的な治療コースで間欠的に投与するステップ；及び
   ｉｉ）追加の抗癌剤を投与するステップ
   を含み、
   前記追加の抗癌剤が、前記複数の連続的な治療コースにおけるインターフェロンベースの治療剤の最初の投与の後に投与される、方法。
2. 前記対象が、前記複数の連続的な治療コースにおけるインターフェロンベースの治療剤の最初の投与の前の少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも１２ヶ月、又はそれより長い期間の内に、追加の抗癌剤を投与されていない、請求項１に記載の方法。
3. 前記連続的な治療コースにおいて、前記インターフェロンベースの治療剤は、前記対象におけるネオプテリン濃度が、実質的にコース全体の間、前記治療コースにおける前記最初の投与前のネオプテリン濃度よりも高くなるように、例えば、前記最初の投与前のネオプテリン濃度の約１１０％、約１２０％、約１３０％、約１４０％、約１５０％、約２００％、約２５０％又はそれより高くなるように、投与される、請求項１又は２に記載の方法。
4. 前記連続的な治療コースの期間が、前記インターフェロンベースの治療剤の最初の投与から最後の投与までの期間に、前記インターフェロンベースの治療剤のｉｎ ｖｉｖｏ半減期の約５倍を加えた期間である、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
5. 前記複数の連続的な治療コースのそれぞれの期間が、約１週間～約２４週間、好ましくは約１週間～約１２週間、さらに好ましくは約１週間～約８週間、さらに好ましくは約２週間～約６週間である、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
6. 前記連続的な治療コースのそれぞれの期間が約１週間～約１２週間であり、前記連続的な治療コース間の間隔が約１週間～約１２週間である、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
7. 前記連続的な治療コース間の間隔が、約１週間～約２４週間、好ましくは約１週間～約１２週間、さらに好ましくは約１週間～約８週間、よりさらに好ましくは約２週間～約６週間である、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
8. 前記連続的な治療コースのそれぞれの期間が約１週間～約８週間であり、前記連続的な治療コース間の間隔が約１週間～約８週間である、請求項１～７のいずれか一項に記載の方法。
9. 前記連続的な治療コースのそれぞれの期間が約２週間～約６週間であり、前記連続的な治療コース間の間隔が約２週間～約６週間である、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
10. 前記インターフェロンベースの治療剤を２～２５以上の連続的な治療コースで投与する、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
11. 前記複数の連続的な治療コースの期間が実質的に同じである、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。
12. 前記連続的な治療コース間の間隔が実質的に同じである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。
13. 前記追加の抗癌剤が、前記インターフェロンベースの治療剤の前記最初の投与の後に投与され、前記追加の抗癌剤の投与と前記インターフェロンベースの治療剤の前記最初の投与との間隔が、前記インターフェロンベースの治療剤のｉｎ ｖｉｖｏ半減期の１０倍を超えない、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
14. 前記追加の抗癌剤が、各々の連続的な治療コースの間に投与され、前記追加の抗癌剤が、各々の連続的な治療コースの間、インターフェロンベースの治療剤の後に投与される、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。
15. 前記追加の抗癌剤が、各々の連続的な治療コースの後に投与され、前記追加の抗癌剤が、各々の連続的な治療コースの間には投与されない、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。
16. 前記インターフェロンベースの治療剤が、インターフェロン又はその変異体若しくは誘導体を含むか、又はインターフェロン又はその変異体若しくは誘導体をコードする核酸分子を含むか、又は内在性インターフェロンの生成を促進する物質を含む、請求項１～１５のいずれか一項に記載の方法。
17. 前記インターフェロンが、インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ又はインターフェロンλ、好ましくはインターフェロンα等のＩ型、ＩＩ型又はＩＩＩ型インターフェロンである、請求項１～１６のいずれか一項に記載の方法。
18. 前記インターフェロンベースの治療剤が、インターフェロンα２ａ、インターフェロンα２ｂ、インターフェロンα１ｂ、インターフェロンλ、又はその変異体若しくは誘導体を含む、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。
19. 前記インターフェロン又はその変異体若しくは誘導体がＰＥＧ化されている、請求項１～１８のいずれか一項に記載の方法。
20. 前記インターフェロンベースの治療剤が、Ｐ１１０１、Ｐｅｇｂｅｒｏｎ、Ｐｅｇａｓｙｓ、Ｐｅｇｉｎｔｒｏｎ、Ｉｎｆｅｒｇｅｎ、Ｎｏｖａｆｅｒｏｎ、ＩＮＴＲＯＮＡ、Ｒｏｆｅｒｏｎ－Ａ、Ｈａｐｇｅｎ、ＰＥＧＩＮＦＥＲ及びＰｅｇｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ λからなる群から選択される、請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法。
21. 前記インターフェロンベースの治療剤が、ＴＬＲ、ＲＬＲ、及びＳＴＩＮＧシグナル伝達経路のアゴニストを含む、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。
22. 前記インターフェロンベースの治療剤が、ＧＳ－９６２０、ＧＳ－９６８８、ＲＯ７０２０５３１、ＲＯ６８６４０１８、ＴＱ－Ａ３３３４、ＪＮＪ－４９６４、ＳＢ９２００、ＭＩＷ８１５、ＤＭＸＡＡ、ＭＫ－１４５４、及びｄｉＡＢＺＩからなる群から選択される、請求項２１に記載の方法。
23. 前記癌が、白血病（例えば急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病、多毛性白血病）、肝臓癌、肺癌、結直腸癌、皮膚癌、胃癌、乳癌、前立腺癌、非ホジキンリンパ腫、メラノーマ、多発性骨髄腫、喉頭乳頭腫、濾胞性リンパ腫、ＡＩＤＳ関連のカポジ肉腫、及び腎細胞癌、好ましくは肝臓癌、肺癌、乳癌、結直腸癌、又はメラノーマから選択される、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法。
24. 前記抗がん剤が、
    ｉ）化学療法剤、例えば、アルキル化剤、アルキル化剤：ニムスチン、カルムスチン、ロムスチン、シクロホスファミド、イホスファミド、グリシホスホラミド、セムスチン；代謝拮抗剤：デオキシフルオグアノシン、ドキシフルグアニジン、５－フルオロウラシル、メルカプトプリン、チオグアニン、シタラビン、フルグアノシン、テガフール、ゲムシタビン、カルモフール、ヒドロキシウレア、メトトレキサート、ＵＦＴ、アンシタビン、カペシタビン；抗腫瘍性抗生物質：アクチノマイシンＤ、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、マイトマイシン、ペロマイシン、ピンヤンマイシン、ピラルビシン；化学療法の抗腫瘍性動物及び植物成分：イリノテカン、ハリントニン、ヒドロキシカンプトテシン、ビノレルビン、パクリタキセル、アルブミンパクリタキセル、タキソテール、トポテカン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビンデシン、ビンブラスチン、テニポシド、エトポシド、エレメン；抗腫瘍剤ホルモン：アタメスタン、アナストロゾール、アミノグルテチミド、レトロゾール、フォルメスタン、メタステロン、タモキシフェン；種々の化学療法剤：アスパラギナーゼ、カルボプラチン、シスプラチン、ダカルバジン、オキサリプラチン、ロキサジン、エロキサチン、ミトキサントロン、若しくはプロカルバジン；又は
    ｉｉ）免疫チェックポイント阻害剤、例えばＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ４の阻害剤、例えばニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブから選択される抗体；又は
    ｉｉｉ）低分子標的薬、例えば、イマチニブ、ゲフィチニブ、ボルテゾミブ、エルロチニブ、ソラフェニブ、レナリドミド、スニチニブ、ダサチニブ、ニロチニブ、ラパチニブ、パゾパニブ、エベロリムス、バンデタニブ、クリゾチニブ、ベロフィニブ、ルキソリチニブ、アキシチニブ、ビスモデギブ、カルフィルゾミブ、レゴラフェニブ、ボスチニブ、トファシチニブ、カルボチニブ、パナチニブ、ポマリドマイド、トラメチニブ、ダブラフェニブ、アファチニブ、イコチニブ、イブルチニブ、セリチニブ、イデラリス、アパチニブ、パブチリブ、レバチニブ、アキシチニブ、イコチニブ、アパチニブ、ソニデギブ、コビメチニブ、オシメルチニブ、アレクチニブ、イキサゾミブ；又は
    ｉｖ）腫瘍関連抗原特異的抗体、例えばリツキサン、ハーセプチン、
    好ましくは、前記抗癌剤が、オキサリプラチン、エピルビシン、パクリタキセル及びゲムシタビンから選択され、より好ましくはゲムシタビンである、請求項１～２３のいずれか一項に記載の方法。
25. インターフェロンベースの治療剤及び抗癌剤を含む、対象における癌の治療に使用するための組合せ医薬。
26. 前記インターフェロンベースの治療剤が、インターフェロン又はその変異体若しくは誘導体を含むか、又はインターフェロン又はその変異体若しくは誘導体をコードする核酸分子を含むか、又は内在性インターフェロンの生成を促進する物質を含む、請求項２５に記載の組合せ医薬。
27. 前記インターフェロンが、インターフェロンα、インターフェロンβ、インターフェロンγ又はインターフェロンλ、好ましくはインターフェロンα等のＩ型、ＩＩ型又はＩＩＩ型インターフェロンである、請求項２５又は２６に記載の組合せ医薬。
28. 前記インターフェロンベースの治療剤が、インターフェロンα２ａ、インターフェロンα２ｂ、インターフェロンα１ｂ、インターフェロンλ、又はその変異体若しくは誘導体を含む、請求項２５～２７のいずれか一項に記載の組合せ医薬。
29. 前記インターフェロン又はその変異体若しくは誘導体がＰＥＧ化されている、請求項２５～２８のいずれか一項に記載の組合せ医薬。
30. 前記インターフェロンベースの治療剤が、Ｐ１１０１、Ｐｅｇｂｅｒｏｎ、Ｐｅｇａｓｙｓ、Ｐｅｇｉｎｔｒｏｎ、Ｉｎｆｅｒｇｅｎ、Ｎｏｖａｆｅｒｏｎ、ＩＮＴＲＯＮＡ、Ｒｏｆｅｒｏｎ－Ａ、Ｈａｐｇｅｎ、ＰＥＧＩＮＦＥＲ及びＰｅｇｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎλからなる群から選択される、請求項２５～２９のいずれか一項に記載の組合せ医薬。
31. 前記インターフェロンベースの治療剤が、ＴＬＲ、ＲＬＲ、及びＳＴＩＮＧシグナル伝達経路のアゴニストを含む、請求項２５～２７のいずれか一項に記載の組合せ医薬。
32. 前記インターフェロンベースの治療剤が、ＧＳ－９６２０、ＧＳ－９６８８、ＲＯ７０２０５３１、ＲＯ６８６４０１８、ＴＱ－Ａ３３３４、ＪＮＪ－４９６４、ＳＢ９２００、ＭＩＷ８１５、ＤＭＸＡＡ、ＭＫ－１４５４、及びｄｉＡＢＺＩからなる群から選択される、請求項３１に記載の組合せ医薬。
33. 前記抗癌剤が、
    ｉ）化学療法剤、例えば、アルキル化剤、アルキル化剤：ニムスチン、カルムスチン、ロムスチン、シクロホスファミド、イホスファミド、グリシホスホラミド、セムスチン；代謝拮抗剤：デオキシフルオグアノシン、ドキシフルグアニジン、５－フルオロウラシル、メルカプトプリン、チオグアニン、シタラビン、フルグアノシン、テガフール、ゲムシタビン、カルモフール、ヒドロキシウレア、メトトレキサート、ＵＦＴ、アンシタビン、カペシタビン；抗腫瘍性抗生物質：アクチノマイシンＤ、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、マイトマイシン、ペロマイシン、ピンヤンマイシン、ピラルビシン；化学療法用抗腫瘍性動物及び植物成分：イリノテカン、ハリントニン、ヒドロキシカンプトテシン、ビノレルビン、パクリタキセル、アルブミンパクリタキセル、タキソテール、トポテカン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビンデシン、ビンブラスチン、テニポシド、エトポシド、エレメン；抗腫瘍剤ホルモン：アタメスタン、アナストロゾール、アミノグルテチミド、レトロゾール、フォルメスタン、メタステロン、タモキシフェン；種々雑多な化学療法剤：アスパラギナーゼ、カルボプラチン、シスプラチン、ダカルバジン、オキサリプラチン、ロキサジン、エロキサチン、ミトキサントロン、若しくはプロカルバジン；又は
    ｉｉ）免疫チェックポイント阻害剤、例えばＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ４の阻害剤、例えばニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブから選択される抗体；又は
    ｉｉｉ）低分子標的薬、例えば、イマチニブ、ゲフィチニブ、ボルテゾミブ、エルロチニブ、ソラフェニブ、レナリドミド、スニチニブ、ダサチニブ、ニロチニブ、ラパチニブ、パゾパニブ、エベロリムス、バンデタニブ、クリゾチニブ、ベロフィニブ、ルキソリチニブ、アキシチニブ、ビスモデギブ、カルフィルゾミブ、レゴラフェニブ、ボスチニブ、トファシチニブ、カルボチニブ、パナチニブ、ポマリドマイド、トラメチニブ、ダブラフェニブ、アファチニブ、イコチニブ、イブルチニブ、セリチニブ、イデラリス、アパチニブ、パブチリブ、レバチニブ、アキシチニブ、イコチニブ、アパチニブ、ソニデギブ、コビメチニブ、オシメルチニブ、アレクチニブ、イキサゾミブ；又は
    ｉｖ）腫瘍関連抗原特異的抗体、例えばリツキサン、ハーセプチン、
    好ましくは、前記抗癌剤が、オキサリプラチン、エピルビシン、パクリタキセル及びゲムシタビンから選択され、より好ましくはゲムシタビンである、請求項２５～３２のいずれか一項に記載の組合せ医薬。
34. 前記組合せ医薬が、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法によって対象における癌の治療に使用するための、請求項２５～３３のいずれか一項に記載の組合せ医薬。