JP2024063118A - 獣医学使用のためのインターロイキン３１モノクローナル抗体 - Google Patents

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Abstract

【課題】ネコ、イヌ、またはウマのＩＬ－３１媒介性障害の治療に有用な獣医学的組成物の形態をとることができる抗体を提供する。【解決手段】哺乳類ＩＬ－３１タンパク質とその共受容体との相互作用に関与する哺乳類ＩＬ－３１タンパク質上の領域に特異的に結合するモノクローナル抗体であって、以下：当該抗体の当該領域との結合が、特定の配列（ネコ＿ＩＬ３１＿野生型）によって表されるネコＩＬ－３１配列のアミノ酸残基約１２４から１３５の間の領域、特定の配列（イヌ＿ＩＬ３１）によって表されるイヌＩＬ－３１配列のアミノ酸残基約１２４から１３５の間の領域、及び特定の配列（ウマ＿ＩＬ３１）によって表されるウマＩＬ－３１のアミノ酸残基約１１８から１２９の間の領域から選択される１５Ｈ０５エピトープ結合領域の変異によって影響を受ける、モノクローナル抗体、またはその抗原結合部分が提供される。【選択図】図２６

Description

本発明は、組換え型モノクローナル抗体の分野、ならびに診断手順を含めた臨床的及び科学的手順における組換え型モノクローナル抗体の使用に関する。また、本発明は、ネコ、イヌ、またはウマのような哺乳類のＩＬ－３１障害の治療に有用な獣医学的組成物の形態をとる単離抗ＩＬ３１抗体も提供する。
アトピー性皮膚炎は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ特別委員会によって「特有の臨床的特徴を伴った、遺伝的素因のある炎症性及び掻痒性のアレルギー性皮膚疾患」と定義されている（Ｏｌｉｖｒｙ，ｅｔ ａｌ．Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ２００１；８１：１４３－１４６）。また、当該特別委員会は、イヌの疾患はアレルゲン特異的ＩｇＥに関連していることも認識している（Ｏｌｉｖｒｙ，ｅｔ
ａｌ．２００１（前掲）；Ｍａｒｓｅｌｌａ ＆ Ｏｌｉｖｒｙ Ｃｌｉｎｉｃｓ ｉｎ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ ２００３；２１：１２２－１３３）。重度の掻痒は、続発性脱毛症及び紅斑と共に、ペットの飼い主にとって最も目につき心配な症状である。
アレルギー性皮膚炎に関与する潜在的要因は多数あり、十分には理解されていない。食品の成分がアトピー性皮膚炎の誘因となる（Ｐｉｃｃｏ，ｅｔ ａｌ．Ｖｅｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２００８；１９：１５０－１５５）場合もあれば、ノミ、チリダニ、ブタクサ、植物抽出物などのような環境アレルゲンが誘因となる場合もある。遺伝的因子も重要な役割を担う。品種の偏向は確認されていないが、何らかの遺伝様式がアトピー性皮膚炎の素因を高めると考えられている（Ｓｏｕｓａ ＆ Ｍａｒｓｅｌｌａ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ２００１；８１：１５３－１５７；Ｓｃｈｗａｒｔｚｍａｎ，ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９７１；９：５４９－５６９）。
アトピー性皮膚炎の有病率は、全イヌ集団の１０％と推定されている（Ｍａｒｓｅｌｌａ ＆ Ｏｌｉｖｒｙ ２００３（前掲）；Ｓｃｏｔｔ，ｅｔ ａｌ．Ｃａｎａｄｉａｎ
Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｊｏｕｒｎａｌ ２００２；４３：６０１－６０３；Ｈｉｌｌｉｅｒ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ２００１；８１：１４７－１５１）。全世界で約４５０万頭のイヌが、この慢性的で生涯にわたる状態に罹患している。発生率は増加しているように思われる。イヌの品種及び性別の偏向が疑われているが、地理的地域に応じて大きく変動する可能性がある（Ｈｉｌｌｉｅｒ，２００１（前掲）；Ｐｉｃｃｏ，ｅｔ ａｌ．２００８（前掲））。
ネコアレルギー性皮膚炎は、健康なネコでは反応を誘導しない物質に対する免疫系の異常な応答によって引き起こされると考えられている、炎症性及び掻痒性の皮膚状態である。ネコアレルギー性皮膚炎の最も一貫した特徴は、慢性再発性の掻痒である。ネコのアレルギー性皮膚炎の一般的な臨床症状としては、自己誘発性脱毛、粟粒性皮膚炎、好酸性肉芽腫複合病変（プラーク、肉芽腫、及び無痛潰瘍を含む）、ならびに表皮剥離、びらん、及び／または潰瘍を特徴とする頭頚部に集中した掻痒が挙げられる。品種及び性別の偏向は実証されていないが、若齢のネコが疾患にかかりやすいように思われる（Ｈｏｂｉ ｅｔ ａｌ．Ｖｅｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ ２０１１ ２２：４０６－４１３；Ｒａｖｅｎｓ
ｅｔ ａｌ．Ｖｅｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ ２０１４；２５：９５－１０２；Ｂｕｃｋｅｌｙ Ｉｎ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ２０１７；３９：２４２－２５４）。
アレルギー性皮膚炎と診断されたネコに対する現状の治療は、臨床徴候の重症度、期間、及び飼い主の選好に依存し、アレルゲン特異的免疫療法、ならびにグルココルチコイド及びシクロスポリンのような鎮痒薬が含まれる（Ｂｕｃｋｌｅｙ（前掲））。免疫療法治療は一部の患者に有効であるが、頻繁な注射を要し、６～９か月間臨床的改善が見られない場合がある（Ｂｕｃｋｌｅｙ（前掲））。グルココルチコイドやシクロスポリンのような免疫抑制薬は概して有効であるが、長期間使用すると、しばしば望ましくない有害作用が生じる。
ウマアトピー性皮膚炎は、掻痒の潜在的原因として認識されている。ウマアトピー性皮膚炎における環境アレルゲンの役割については、より十分に理解されつつある。当該疾患は、関与するアレルゲン（複数可）に応じて季節性の場合も非季節性の場合もある。年齢、品種、性別の偏向はあまり報告されていない。Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，Ｄａｖｉｓ（ＳＶＭ－ＵＣＤ）の予備研究では、発症年齢の中央値は６．５歳、サラブレッドが最も一般的な品種でウマの２５％を占め、オス（通常は去勢馬）の有病率はメスのほぼ２倍であった。ただし、これらのデータはわずか２４頭のウマからのものであり、全体としての病院集団との比較はまだ行われていない。しばしば顔、遠位四肢、または体幹に向けられる掻痒は、ウマアトピー性皮膚炎における最も一般的な臨床徴候である。脱毛症、紅斑、蕁麻疹、丘疹はいずれも存在し得る。蕁麻疹病変は非常に重症であるが、掻痒性ではない。ウマの蕁麻疹様アトピー性皮膚炎には家族性素因の可能性がある。ウマは続発性膿皮症を有することがあり、これは、過剰な鱗屑、小さな表皮小環、または痂皮を伴う丘疹（「粟粒性皮膚炎」）が特徴である。アトピー性皮膚炎の診断は、臨床徴候及び他の診断、特に昆虫（Ｃｕｌｉｃｏｉｄｅｓ）過敏症の除外に基づく（Ｗｈｉｔｅ Ｃｌｉｎ Ｔｅｃｈ Ｅｑｕｉｎｅ Ｐｒａｃｔ ２００５；４：３１１－３１３；Ｆａｄｏｋ Ｖｅｔ Ｃｌｉｎ Ｅｑｕｉｎｅ ２０１３；２９ ５４１－５５０）。現在、ウマアトピー性皮膚炎の管理は、アレルギー応答により誘発される炎症及び掻痒を抑制することによって対症的に行われると共に、特定の原因に対処することによって（すなわち、原因となるアレルゲンを同定すること及びアレルゲン特異的ワクチンを製剤化することによって）も行われる。対症的アプローチは、典型的には、患者を快適にし自己外傷を最小限に抑えるため、短期的に必要とされる。このアプローチは、抗ヒスタミン剤、必須脂肪酸、ペントキシフィリン、及びグルココルチコイドを含めた局所療法と全身療法との組合せに依存する。環境アレルギーコントロールに対する一次的アプローチは、過敏性反応を誘発するアレルゲンの同定を伴う。アレルゲン特異的免疫療法がアトピー性ウマに有用であり得ることは、皮膚科医によって一般的に認められている。ただし、原則として、ほとんどのウマが改善を示すのは、免疫療法の最初の６か月の後に過ぎない（Ｍａｒｓｅｌｌａ Ｖｅｔ
Ｃｌｉｎ Ｅｑｕｉｎｅ ２０１３；２９：５５１－５５７）。また、ウマにおける免疫抑制薬の長期使用は、望ましくない有害作用をもたらす恐れがある。
２型ヘルパーＴ細胞が産生するサイトカインであるインターロイキン３１（ＩＬ－３１）は、ヒト、マウス、及びイヌの掻痒を誘導することが示されている（Ｂｉｅｂｅｒ Ｎ
Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２００８；３５８：１４８３－１４９４；Ｄｉｌｌｏｎ ｅｔ
ａｌ．Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００４；５：７５２－６０；Ｂａｍｍｅｒｔ ｅｔ
ａｌ．に対する米国特許第８，７９０，６５１号；Ｇｏｎｚａｌｅｚ ｅｔ ａｌ．Ｖｅｔ Ｄｅｒｍａｔｌ．２０１３；２４（１）：４８－５３）。ＩＬ－３１は、ＩＬ－３１受容体Ａ（ＩＬ－３１ＲＡ）及びオンコスタチンＭ受容体（ＯＳＭＲ）から構成された共受容体に結合する（Ｄｉｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．２００４（前掲）及びＢｉｌｓｂｏｒｏｕｇｈ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００６ １１７（２）：４１８－２５）。受容体活性化により、ＪＡＫ受容体（複数可）を介しＳＴＡＴがリン酸化される。共受容体の発現は、マクロファージ、ケラチノサイト、及び背根
神経節で示されている。
最近、ＩＬ－３１が皮膚炎、掻痒性皮膚病変、アレルギー、及び気道過敏症に関与していることが分かった。Ｚｏｅｔｉｓ Ｉｎｃ．（Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，ＮＪ）が製造したイヌ抗ＩＬ－３１モノクローナル抗体であるＣｙｔｏｐｏｉｎｔ（登録商標）は、アトピー性皮膚炎を有するイヌの掻痒及び皮膚病変を低減することが示されている（Ｇｏｎｚａｌｅｚ ｅｔ ａｌ．２０１３（前掲）；Ｍｉｃｈｅｌｓ ｅｔ ａｌ．Ｖｅｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２０１６；Ｄｅｃ；２７（６）：４７８－ｅ１２９）。獣医学哺乳類におけるＩＬ－３１媒介性障害を防止及び治療するためのさらなる抗ＩＬ３１抗体を提供することが望ましいと考えられる。ネコ及びウマにおけるアトピー性及びアレルギー性皮膚炎の安全で有効な代替治療に対する現状のアンメットニーズを考慮すると、アトピー性皮膚炎を有するネコ及びウマの掻痒及び皮膚病変を低減するためのネコ及びウマの抗ＩＬ－３１抗体を提供することが特に望ましいと考えられる。
１つの実施形態において、本発明は、哺乳類ＩＬ－３１タンパク質とその共受容体との相互作用に関与する哺乳類ＩＬ－３１タンパク質上の領域に特異的に結合するモノクロナール抗体であって、当該抗体の当該領域との結合が、以下：ａ）配列番号１５７（ネコ＿ＩＬ３１＿野生型）によって表されるネコＩＬ－３１配列のアミノ酸残基約１２４から１３５の間の領域、ｂ）配列番号１５５（イヌ＿ＩＬ３１）によって表されるイヌＩＬ－３１配列のアミノ酸残基約１２４から１３５の間の領域、及びｃ）配列番号１６５（ウマ＿ＩＬ３１）によって表されるウマＩＬ－３１のアミノ酸残基約１１８から１２９の間の領域のうちの少なくとも１つから選択される１５Ｈ０５エピトープ結合領域の変異によって影響を受ける、モノクローナル抗体、またはその抗原結合部分を提供する。
１つの実施形態において、１５Ｈ０５エピトープ結合領域内の上記変異は、以下：（ａ）配列番号１５７の１２６位及び１２８位がアラニンに変化した変異型、（ｂ）配列番号１５５の１２６位及び１２８位がアラニンに変化した変異型、ならびに（ｃ）配列番号１６５の１２０位及び１２２位がアラニンに変化した変異型のうちの少なくとも１つから選択される。
１つの実施形態において、本発明に従うモノクローナル抗体は、１５Ｈ０５エピトープ領域に結合する。すなわち、１つの実施形態において、本発明は、哺乳類ＩＬ－３１タンパク質とその共受容体との相互作用に関与する哺乳類ＩＬ－３１タンパク質上の領域に特異的に結合するモノクロナル抗体であって、結合領域が、以下：ａ）配列番号１５７（ネコ＿ＩＬ３１＿野生型）によって表されるネコＩＬ－３１配列のアミノ酸残基約１２４から１３５の間の領域、ｂ）配列番号１５５（イヌ＿ＩＬ３１）によって表されるイヌＩＬ－３１配列のアミノ酸残基約１２４から１３５の間の領域、及びｃ）配列番号１６５（ウマ＿ＩＬ３１）によって表されるウマＩＬ－３１のアミノ酸残基約１１８から１２９の間の領域のうちの少なくとも１つから選択される１５Ｈ０５エピトープ結合領域である、モノクローナル抗体、またはその抗原結合部分を提供する。
１つの実施形態において、抗体またはその抗原結合部分が特異的に結合する哺乳類ＩＬ－３１はネコＩＬ－３１であり、このとき、抗体は、配列番号１５７（ネコ＿ＩＬ３１＿野生型）によって表されるネコＩＬ－３１配列のアミノ酸残基約１２５から１３４の間の領域に結合する。いくつかの実施形態において、ネコＩＬ－３１上のこの領域に結合する抗体は、以下：４２位のリジンからアスパラギンへの置換、４３位のバリンからイソロイシンへの置換、４６位のロイシンからバリンへの置換、４９位のリジンからアスパラギンへの置換、及びこれらの組合せから選択されるフレームワーク２（ＦＷ２）変化を含むＶＬ鎖を含み、このとき、これらの位置は配列番号１２７（ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１）
のナンバリングに準拠している。
１つの実施形態において、抗体またはその抗原結合部分が特異的に結合する哺乳類ＩＬ－３１はイヌＩＬ－３１であり、このとき、抗体は、配列番号１５５（イヌ＿ＩＬ３１）によって表されるイヌＩＬ－３１配列のアミノ酸残基約１２５から１３４の間の領域に結合する。
別の実施形態において、抗体またはその抗原結合部分が特異的に結合する哺乳類ＩＬ－３１はウマＩＬ－３１であり、このとき、抗体は、配列番号１６５（ウマ＿ＩＬ３１）によって表されるウマＩＬ－３１のアミノ酸残基約１１７から１２８の間の領域に結合する。
１つの実施形態において、モノクローナル抗体またはその抗原結合部分は、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列の組合せ：
１）抗体１５Ｈ０５：可変重鎖（ＶＨ）－ＣＤＲ１がＳＹＴＩＨ（配列番号１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＮＩＮＰＴＳＧＹＴＥＮＮＱＲＦＫＤ（配列番号２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＷＧＦＫＹＤＧＥＷＳＦＤＶ（配列番号３）、可変軽鎖（ＶＬ）－ＣＤＲ１がＲＡＳＱＧＩＳＩＷＬＳ（配列番号４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＡＳＮＬＨＩ（配列番号５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＬＱＳＱＴＹＰＬＴ（配列番号６）、または
２）ＶＨまたはＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３のうちの少なくとも１つにおける１つ以上のアミノ酸残基の付加、欠失、及び／または置換によって親抗体１５Ｈ０５と相違する、１）のバリアント
を含む。
１つの実施形態において、抗体１５Ｈ０５／１５０５のバリアントは、ＣＤＲ内の以下の位置：重鎖ＣＤＲ １、２、及び３におけるそれぞれ配列番号１の残基４（Ｉ）、配列番号２の残基１～３（ＮＩＮ）、５～７（ＴＳＧ）、９～１１（ＴＥＮ）、及び１３（Ｑ）、配列番号３の残基４（Ｋ）、６（Ｄ）、及び１３（Ｖ）と、ＣＤＲＬ １、２、及び３におけるそれぞれ配列番号４の残基３～７（ＳＱＧＩＳ）、配列番号５の残基３（Ｓ）及び５（Ｌ）、ならびに配列番号６の残基４（Ｑ）、５（Ｔ）、及び９（Ｔ）のうちの１つ以上の置換を含む。１つの実施形態において、これらの置換のうちの１つ以上は保存的アミノ酸置換である。
１つの実施形態において、上記のモノクローナル抗体１５Ｈ０５は、以下：
ａ）ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２：
ＥＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＰＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＩＷＬＳＷＹＱＱＫＰＧＮＩＰＫＶＬＩＮＫＡＳＮＬＨＩＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＡＡＴＹＹＣＬＱＳＱＴＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１３５）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１：ＱＶＬＬＶＱＳＧＡＥＶＲＴＰＧＡＳＶＫＩＦＣＫＡＳＧＹＳＦＴＳＹＴＩＨＷＬＲＱＡＰＡＱＧＬＥＷＭＧＮＩＮＰＴＳＧＹＴＥＮＮＱＲＦＫＤＲＬＴＬＴＡＤＴＳＴＮＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＡＤＴＡＭＹＹＣＡＲＷＧＦＫＹＤＧＥＷＳＦＤＶＷＧＡＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号１２１）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含む。
また、本発明は、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列の組合せ：
１）抗体ＺＩＬ１：可変重鎖（ＶＨ）－ＣＤＲ１がＳＹＧＭＳ（配列番号１３）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＨＩＮＳＧＧＳＳＴＹＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号１４）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＶＹＴＴＬＡＡＦＷＴＤＮＦＤＹ（配列番号１５）、可変軽鎖（ＶＬ）－ＣＤＲ１がＳＧＳＴＮＮＩＧＩＬＡＡＴ（配列番号１６）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＳＤＧＮＲＰＳ（配列番号１
７）、及びＶＬ－ＣＤＲ３がＱＳＦＤＴＴＬＤＡＹＶ（配列番号１８）、
２）抗体ＺＩＬ８：ＶＨ－ＣＤＲ１がＤＹＡＭＳ（配列番号１９）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＧＩＤＳＶＧＳＧＴＳＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号２０）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＦＰＧＳＦＥＨ（配列番号２１）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＴＧＳＳＳＮＩＧＳＧＹＶＧ（配列番号２２）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＹＮＳＤＲＰＳ（配列番号２３）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＳＶＹＤＲＴＦＮＡＶ（配列番号２４）、
３）抗体ＺＩＬ９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＤＭＴ（配列番号２５）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＤＶＮＳＧＧＴＧＴＡＹＡＶＡＶＫＧ（配列番号２６）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＬＧＶＲＤＧＬＳＶ（配列番号２７）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＮＥＹＹＴＱ（配列番号２８）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＲＤＴＥＲＰＳ（配列番号２９）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＤＴＧＴＬＶ（配列番号３０）、
４）抗体ＺＩＬ１１：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＶＭＮ（配列番号３１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号３２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＳＭＶＧＰＦＤＹ（配列番号３３）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＳＮＹＹＡＱ（配列番号３４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号３５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶ（配列番号３６）、
５）抗体ＺＩＬ６９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＡＭＫ（配列番号３７）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＴＩＮＮＤＧＴＲＴＧＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号３８）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＮＡＥＳＧＣＴＧＤＨＣＰＰＹ（配列番号３９）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＮＫＹＹＡＱ（配列番号４０）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号４１）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＥＴＮＶ（配列番号４２）、
６）抗体ＺＩＬ９４：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＦＭＳ（配列番号４３）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＬＩＳＳＤＧＳＧＴＹＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号４４）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＦＷＲＡＦＮＤ（配列番号４５）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＧＬＮＳＧＳＶＳＴＳＮＹＰＧ（配列番号４６）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＤＴＧＳＲＰＳ（配列番号４７）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＳＬＹＴＤＳＤＩＬＶ（配列番号４８）、
７）抗体ＺＩＬ１５４：ＶＨ－ＣＤＲ１がＤＲＧＭＳ（配列番号４９）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＹＩＲＹＤＧＳＲＴＤＹＡＤＡＶＥＧ（配列番号５０）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＷＤＧＳＳＦＤＹ（配列番号５１）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＡＳＱＳＬＬＨＳＤＧＮＴＹＬＤ（配列番号５２）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＶＳＮＲＤＰ（配列番号５３）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＭＱＡＩＨＦＰＬＴ（配列番号５４）、
８）抗体ＺＩＬ１５９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＶＭＴ（配列番号５５）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＧＩＮＳＥＧＳＲＴＡＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号５６）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＤＩＶＡＴＧＴＳＹ（配列番号５７）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＴＬＮＲＦＹＴＱ（配列番号５８）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号５９）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＫＳＡＶＳＩＤＶＧＶ（配列番号６０）、
９）抗体ＺＩＬ１７１：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＶＭＮ（配列番号６１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号６２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＳＭＶＧＰＦＤＹ（配列番号６３）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＫＳＬＳＹＹＹＡＱ（配列番号６４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号６５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶ（配列番号６６）、
１０）抗体０４Ｈ０７：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＷＭＮ（配列番号２００）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＭＩＤＰＳＤＳＥＩＨＹＮＱＶＦＫＤ（配列番号２０１）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＱＤＩＶＴＴＶＤＹ（配列番号２０２）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＳＳＱＳＬＬＹＳＩＮＱＫＮＨＬＡ（配列番号２０３）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号２０４）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＱＱＧＹＴＹＰＦＴ（配列番号２０５）、
１１）抗体０６Ａ０９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＷＭＮ（配列番号２０６）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＭＩＤＰＳＤＳＥＴＨＹＮＱＩＦＲＤ（配列番号２０７）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＱＤＩＶＴＴＶＤＹ（配列番号２０８）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＳＳＱＳＬＬＹＳＩＮＱＫＮＦＬＡ（配列番号２０９）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号２１０）、ＶＬ－Ｃ
ＤＲ３がＱＱＨＹＧＹＰＦＴ（配列番号２１１）、または
１２）ＶＨまたはＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３のうちの少なくとも１つにおける１つ以上のアミノ酸残基の付加、欠失、及び／または置換によってそれぞれの親抗体ＺＩＬ１、ＺＩＬ８、ＺＩＬ９、ＺＩＬ１１、ＺＩＬ６９、ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、ＺＩＬ１５９、ＺＩＬ１７１、０４Ｈ０７、もしくは０６Ａ０９と相違する、１）～１１）のバリアント
を含むモノクローナル抗体またはその抗原結合部分も含む。
本発明のいくつかの実施形態において、
１）抗体ＺＩＬ１は、以下：
ａ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１＿ＶＬ：
ＱＳＶＬＴＱＰＴＳＶＳＧＳＬＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＴＮＮＩＧＩＬＡＡＴＷＹＱＱＬＰＧＫＡＰＫＶＬＶＹＳＤＧＮＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＮＳＡＴＬＴＩＴＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＦＤＴＴＬＤＡＹＶＦＧＳＧＴＱＬＴＶＬ（配列番号７７）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１＿ＶＨ：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＱＷＶＡＨＩＮＳＧＧＳＳＴＹＹＡＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＥＶＹＴＴＬＡＡＦＷＴＤＮＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７５）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、
２）抗体ＺＩＬ８は、以下：
ａ）ＣＡＮ－ＺＩＬ８＿ＶＬ：
ＱＳＶＬＴＱＰＡＳＶＳＧＳＬＧＱＫＶＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＳＧＹＶＧＷＹＱＱＬＰＧＴＧＰＲＴＬＩＹＹＮＳＤＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＲＳＧＴＴＡＴＬＴＩＳＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＳＶＹＤＲＴＦＮＡＶＦＧＧＧＴ（配列番号８１）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＣＡＮ－ＺＩＬ８＿ＶＨ：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＡＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＤＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＲＧＬＱＷＶＡＧＩＤＳＶＧＳＧＴＳＹＡＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＡＫＮＴＬＹＬＱＭＦＮＬＲＡＥＤＴＡＩＹＹＣＡＳＧＦＰＧＳＦＥＨＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７９）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含む、または
以下：
ｃ）ＺＴＳ＿５８６４＿ＶＬ：ＱＳＶＬＴＱＰＳＳＶＳＧＴＬＧＱＲＩＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＳＧＹＶＧＷＹＱＱＶＰＧＭＧＰＫＴＶＩＹＹＮＳＤＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＳＳＧＴＬＴＩＴＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＳＶＹＤＲＴＦＮＡＶＦＧＧＧＴＨＬＴＶＬＧＱＰＫＳＡＰＰＲＳＨＳＳＲＰＩＳＹＡＶＦＣＬ（配列番号２３０）を含む可変軽鎖、及び
ｄ）ＺＴＳ＿５８６４＿ＶＨ：ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＴＣＶＡＳＧＦＴＦＳＤＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＱＷＶＡＧＩＤＳＶＧＳＧＴＳＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＴＹＹＣＡＳＧＦＰＧＳＦＥＨＷＧＱＧＡＬＶＴＶＳＳ（配列番号２２８）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含む、または
以下：
ｅ）ＺＴＳ＿５８６５＿ＶＬ：
ＳＶＬＴＱＰＳＳＶＳＧＴＬＧＱＲＩＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＳＧＹＶＧＷＹＱＱＶＰＧＭＧＰＫＴＶＩＹＹＮＳＤＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＳＳＧＴＬＴＩＴＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＳＶＹＤＲＴＦＮＡＶＦＧＧＧＴＨＬＴＶＬＧＱＰＫＳＡＰＰＲＳＨＳＳＲＰＩＳＹＡＶＦＣＬ（配列番号２３４）を含む可変軽鎖、及び
ｆ）ＺＴＳ＿５８６５＿ＶＨ：
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＴＣＶＡＳＧＦＴＦＳＤＹＡＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＱＷＶＡＧＩＤＳＶＧＳＧＴＳＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＳＧＬＫＴＥＤＴＡＴＹＹＣＡＳＧＦＰＧＳＦＥＨＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２３２）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、
３）抗体ＺＩＬ９は、以下：
ａ）ＣＡＮ－ＺＩＬ９＿ＶＬ：ＳＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＬＧＱＴＡＴＩＳＣＳＧＥＳＬＮＥＹＹＴＱＷＦＱＱＫＡＧＱＡＰＶＬＶＩＹＲＤＴＥＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＳＳＧＮＴＨＴＬＴＩＳＧＡＲＡＥＤＥＡＤＹＹＣＥＳＡＶＤＴＧＴＬＶＦＧＧＧＴＨＬＡＶＬ（配列番号８５）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＣＡＮ－ＺＩＬ９＿ＶＨ：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＰＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＳＹＤＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＱＷＶＡＤＶＮＳＧＧＴＧＴＡＹＡＶＡＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＫＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＬＧＶＲＤＧＬＳＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８３）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、
４）抗体ＺＩＬ１１は、以下：
ａ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１１＿ＶＬ：ＳＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＬＧＱＴＡＴＩＳＣＳＧＥＳＬＳＮＹＹＡＱＷＦＱＱＫＡＧＱＡＰＶＬＶＩＹＫＤＴＥＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＳＳＧＮＴＨＴＬＴＩＳＧＡＲＡＥＤＥＡＤＹＹＣＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶＦＧＧＧＴ（配列番号８９）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１１＿ＶＨ：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＡＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＲＴＹＶＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＱＷＶＡＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧＲＦＴＶＳＲＤＮＡＱＮＳＬＦＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＶＶＳＭＶＧＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８７）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、
５）抗体ＺＩＬ６９は、以下：
ａ）ＣＡＮ－ＺＩＬ６９＿ＶＬ：ＳＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＬＧＱＴＡＴＩＳＣＳＧＥＳＬＮＫＹＹＡＱＷＦＱＱＫＡＧＱＡＰＶＬＶＩＹＫＤＴＥＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＳＡＧＮＴＨＴＬＴＩＳＧＡＲＡＥＤＥＡＤＹＹＣＥＳＡＶＳＳＥＴＮＶＦＧＳＧＴＱＬＴＶＬ（配列番号９３）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＣＡＮ－ＺＩＬ６９＿ＶＨ：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＡＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＫＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＱＷＶＡＴＩＮＮＤＧＴＲＴＧＹＡＤＡＶＲＧＲＦＴＩＳＫＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＤＳＬＲＡＤＤＴＡＶＹＹＣＴＫＧＮＡＥＳＧＣＴＧＤＨＣＰＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号９１）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、
６）抗体ＺＩＬ９４は、以下：
ａ）ＣＡＮ－ＺＩＬ９４＿ＶＬ：ＱＴＶＶＩＱＥＰＳＬＳＶＳＰＧＧＴＶＴＬＴＣＧＬＮＳＧＳＶＳＴＳＮＹＰＧＷＹＱＱＴＲＧＲＴＰＲＴＩＩＹＤＴＧＳＲＰＳＧＶＰＮＲＦＳＧＳＩＳＧＮＫＡＡＬＴＩＴＧＡＱＰＥＤＥＡＤＹＹＣＳＬＹＴＤＳＤＩＬＶＦＧＧＧＴＨＬＴＶＬ（配列番号９７）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＣＡＮ－ＺＩＬ９４＿ＶＨ：ＥＶＱＬＶＤＳＧＧＤＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＴＹＦＭＳＷＶＲＱＡＰＧＲＧＬＱＷＶＡＬＩＳＳＤＧＳＧＴＹＹＡＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＩＦＷＲＡＦＮＤＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号９５）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、
７）抗体ＺＩＬ１５４は、以下：
ａ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１５４＿ＶＬ：ＤＩＶＶＴＱＴＰＬＳＬＳＶＳＰＧＥＴＡＳＦＳＣＫＡＳＱＳＬＬＨＳＤＧＮＴＹＬＤＷＦＲＱＫＰＧＱＳＰＱＲＬＩＹＫＶＳＮＲＤＰＧＶＰ
ＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＲＩＳＧＶＥＡＤＤＡＧＬＹＹＣＭＱＡＩＨＦＰＬＴＦＧＡＧＴＫＶＥＬＫ（配列番号１０１）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１５４＿ＶＨ：ＥＶＨＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＷＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＤＲＧＭＳＷＶＲＱＳＰＧＫＧＬＱＷＶＡＹＩＲＹＤＧＳＲＴＤＹＡＤＡＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＷＤＧＳＳＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号９９）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、
８）抗体ＺＩＬ１５９は、以下：
ａ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１５９＿ＶＬ：ＳＮＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＬＧＱＴＡＴＩＳＣＳＧＥＴＬＮＲＦＹＴＱＷＦＱＱＫＡＧＱＡＰＶＬＶＩＹＫＤＴＥＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＳＳＧＮＩＨＴＬＴＩＳＧＡＲＡＥＤＥＡＡＹＹＣＫＳＡＶＳＩＤＶＧＶＦＧＧＧＴＨＬＴＶＦ（配列番号１０５）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１５９＿ＶＨ：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＡＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＳＹＶＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＱＷＶＡＧＩＮＳＥＧＳＲＴＡＹＡＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＩＤＳＬＲＡＥＤＴＡＩＹＹＣＡＴＧＤＩＶＡＴＧＴＳＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１０３）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、
９）抗体ＺＩＬ１７１は、以下：
ａ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１７１＿ＶＬ：ＳＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＬＧＱＴＡＴＩＳＣＳＧＫＳＬＳＹＹＹＡＱＷＦＱＱＫＡＧＱＡＰＶＬＶＩＹＫＤＴＥＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＳＳＧＮＴＨＴＬＴＩＳＧＡＲＡＥＤＥＡＤＹＹＣＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶＦＧＧＧＴＨＬＴＶＬ（配列番号１０９）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１７１＿ＶＨ：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＡＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＲＴＹＶＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＱＷＶＡＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧＲＦＴＶＳＲＤＮＡＱＮＳＬＦＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＩＹＦＣＶＶＳＭＶＧＰＦＤＹＷＧＨＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１０７）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、
１０）抗体０４Ｈ０７は、以下：
ａ）Ｍｕ＿０４Ｈ０７＿ＶＬ：
ＤＩＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＩＮＱＫＮＨＬＡＷＦＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＡＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＴＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＧＹＴＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号２１４）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）Ｍｕ＿０４Ｈ０７＿ＶＨ：
ＱＶＱＬＱＱＰＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＮＷＡＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＭＩＤＰＳＤＳＥＩＨＹＮＱＶＦＫＤＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＱＤＩＶＴＴＶＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号２１２）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、
１１）抗体０６Ａ０９は、以下：
ａ）Ｍｕ＿０６Ａ０９＿ＶＬ：ＤＩＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＩＮＱＫＮＦＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＳＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＨＹＧＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号２１８）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）Ｍｕ＿０６Ａ０９＿ＶＨ：
ＱＶＱＬＱＱＰＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＹＧＹＴＦＴＳＹＷＭＮＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＭＩＤＰＳＤＳＥＴＨＹＮＱＩＦＲＤＫＡＴＬＴＩＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＱＤＩＶＴＴＶＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号２１６）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含む。
１つの実施形態において、本発明に従うモノクローナル抗体またはその抗原結合部分は、哺乳類のＩＬ－３１媒介性掻痒状態またはアレルギー状態を低減、阻害、または中和する。１つの実施形態において、このような哺乳類は、イヌ、ネコ、またはウマから選択される。
いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体はキメラ型である。さらなる実施形態において、抗体は、イヌ化、ネコ化、ウマ化、完全イヌ、完全ネコ、または完全ウマ抗体である。
また、本発明は、上記の少なくとも１つの抗体またはその抗原結合部分の治療有効量を含む、獣医学的組成物も提供する。
また、対象のＩＬ－３１媒介性障害を治療する方法であって、上記の少なくとも１つの抗体またはその抗原結合部分の治療有効量を対象に投与することを含む、方法も提供される。
１つの実施形態において、ＩＬ－３１媒介性障害は、掻痒状態またはアレルギー状態である。いくつかの実施形態において、掻痒状態またはアレルギー状態は、アトピー性皮膚炎、湿疹、乾癬、強皮症、及び掻痒から選択される掻痒状態である。他の実施形態において、掻痒状態またはアレルギー状態は、アレルギー性皮膚炎、夏季湿疹、蕁麻疹、ヒーブ、炎症性気道疾患、再発性気道閉塞、気道過敏症、慢性閉塞性肺疾患、及び自己免疫に起因する炎症プロセスから選択されるアレルギー状態である。
他の実施形態において、ＩＬ－３１媒介性障害は腫瘍進行である。いくつかの実施形態において、ＩＬ－３１媒介性障害は好酸球性疾患またはマスト細胞腫である。
さらに、上記の抗体またはその抗原結合部分を哺乳類に投与することによって、哺乳類のＩＬ－３１活性を阻害する方法が提供される。
また、ＩＬ－３１媒介性障害を有する哺乳類の治療で使用するための、上記の抗体またはその抗原結合部分も提供される。
さらに、ＩＬ－３１媒介性障害を有する哺乳類を治療するための、上記の抗体またはその抗原結合部分の使用が提供される。
また、ＩＬ－３１を検出する方法であって、ＩＬ－３１を含む試料を、上記の抗体またはその抗原結合部分の存在下でインキュベートすることと、試料中でＩＬ－３１に結合している抗体を検出することとを含む、方法も提供される。１つの実施形態において、当該方法はさらに、試料中のＩＬ－３１を定量化することを含む。
また、本発明は、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列の組合せ：
１）抗体１５Ｈ０５：可変重鎖（ＶＨ）－ＣＤＲ１がＳＹＴＩＨ（配列番号１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＮＩＮＰＴＳＧＹＴＥＮＮＱＲＦＫＤ（配列番号２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＷＧＦＫＹＤＧＥＷＳＦＤＶ（配列番号３）、可変軽鎖（ＶＬ）－ＣＤＲ１がＲＡＳＱＧＩＳＩＷＬＳ（配列番号４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＡＳＮＬＨＩ（配列番号５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＬＱＳＱＴＹＰＬＴ（配列番号６）、
２）抗体ＺＩＬ１：可変重鎖（ＶＨ）－ＣＤＲ１がＳＹＧＭＳ（配列番号１３）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＨＩＮＳＧＧＳＳＴＹＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号１４）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＶＹＴＴＬＡＡＦＷＴＤＮＦＤＹ（配列番号１５）、可変軽鎖（ＶＬ）－ＣＤＲ１がＳＧＳ
ＴＮＮＩＧＩＬＡＡＴ（配列番号１６）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＳＤＧＮＲＰＳ（配列番号１７）、及びＶＬ－ＣＤＲ３がＱＳＦＤＴＴＬＤＡＹＶ（配列番号１８）、
３）抗体ＺＩＬ８：ＶＨ－ＣＤＲ１がＤＹＡＭＳ（配列番号１９）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＧＩＤＳＶＧＳＧＴＳＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号２０）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＦＰＧＳＦＥＨ（配列番号２１）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＴＧＳＳＳＮＩＧＳＧＹＶＧ（配列番号２２）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＹＮＳＤＲＰＳ（配列番号２３）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＳＶＹＤＲＴＦＮＡＶ（配列番号２４）、
４）抗体ＺＩＬ９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＤＭＴ（配列番号２５）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＤＶＮＳＧＧＴＧＴＡＹＡＶＡＶＫＧ（配列番号２６）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＬＧＶＲＤＧＬＳＶ（配列番号２７）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＮＥＹＹＴＱ（配列番号２８）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＲＤＴＥＲＰＳ（配列番号２９）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＤＴＧＴＬＶ（配列番号３０）、
５）抗体ＺＩＬ１１：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＶＭＮ（配列番号３１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号３２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＳＭＶＧＰＦＤＹ（配列番号３３）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＳＮＹＹＡＱ（配列番号３４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号３５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶ（配列番号３６）、
６）抗体ＺＩＬ６９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＡＭＫ（配列番号３７）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＴＩＮＮＤＧＴＲＴＧＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号３８）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＮＡＥＳＧＣＴＧＤＨＣＰＰＹ（配列番号３９）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＮＫＹＹＡＱ（配列番号４０）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号４１）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＥＴＮＶ（配列番号４２）、
７）抗体ＺＩＬ９４：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＦＭＳ（配列番号４３）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＬＩＳＳＤＧＳＧＴＹＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号４４）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＦＷＲＡＦＮＤ（配列番号４５）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＧＬＮＳＧＳＶＳＴＳＮＹＰＧ（配列番号４６）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＤＴＧＳＲＰＳ（配列番号４７）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＳＬＹＴＤＳＤＩＬＶ（配列番号４８）、
８）抗体ＺＩＬ１５４：ＶＨ－ＣＤＲ１がＤＲＧＭＳ（配列番号４９）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＹＩＲＹＤＧＳＲＴＤＹＡＤＡＶＥＧ（配列番号５０）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＷＤＧＳＳＦＤＹ（配列番号５１）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＡＳＱＳＬＬＨＳＤＧＮＴＹＬＤ（配列番号５２）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＶＳＮＲＤＰ（配列番号５３）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＭＱＡＩＨＦＰＬＴ（配列番号５４）、
９）抗体ＺＩＬ１５９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＶＭＴ（配列番号５５）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＧＩＮＳＥＧＳＲＴＡＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号５６）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＤＩＶＡＴＧＴＳＹ（配列番号５７）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＴＬＮＲＦＹＴＱ（配列番号５８）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号５９）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＫＳＡＶＳＩＤＶＧＶ（配列番号６０）、
１０）抗体ＺＩＬ１７１：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＶＭＮ（配列番号６１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号６２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＳＭＶＧＰＦＤＹ（配列番号６３）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＫＳＬＳＹＹＹＡＱ（配列番号６４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号６５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶ（配列番号６６）、
１１）抗体０４Ｈ０７：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＷＭＮ（配列番号２００）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＭＩＤＰＳＤＳＥＩＨＹＮＱＶＦＫＤ（配列番号２０１）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＱＤＩＶＴＴＶＤＹ（配列番号２０２）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＳＳＱＳＬＬＹＳＩＮＱＫＮＨＬＡ（配列番号２０３）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号２０４）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＱＱＧＹＴＹＰＦＴ（配列番号２０５）、
１２）抗体０６Ａ０９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＷＭＮ（配列番号２０６）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＭＩＤＰＳＤＳＥＴＨＹＮＱＩＦＲＤ（配列番号２０７）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＱＤＩＶＴＴＶＤＹ（配列番号２０８）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＳＳＱＳＬＬＹＳＩＮＱＫＮＦＬ
Ａ（配列番号２０９）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号２１０）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＱＱＨＹＧＹＰＦＴ（配列番号２１１）、または
１３）ＶＨまたはＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３のうちの少なくとも１つにおける１つ以上のアミノ酸残基の付加、欠失、及び／または置換によってそれぞれの親抗体１５Ｈ０５、ＺＩＬ１、ＺＩＬ８、ＺＩＬ９、ＺＩＬ１１、ＺＩＬ６９、ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、ＺＩＬ１５９、ＺＩＬ１７１、０４Ｈ０７、もしくは０６Ａ０９と相違する、１）～１２）のバリアント
のうちの少なくとも１つを含むモノクローナル抗体またはその抗原結合部分を産生する、宿主細胞も提供する。
また、抗体を産生する方法であって、上記の宿主細胞を、抗体の産生をもたらす条件下で培養することと、宿主細胞または宿主細胞の培地から抗体を単離することとを含む、方法も提供される。
本発明に従う単離核酸について、以下に説明する。このような核酸は、上記の可変重鎖または可変軽鎖のＣＤＲ配列をコードする核酸配列を含むことができる。代替的に、本発明に従う単離核酸は、可変重鎖及び可変軽鎖のＣＤＲ両方をコードする核酸配列を含むことができる。
１つの実施形態において、本発明は、以下の可変重鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列の組合せ：
１）１５Ｈ０５：可変重鎖（ＶＨ）－ＣＤＲ１がＳＹＴＩＨ（配列番号１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＮＩＮＰＴＳＧＹＴＥＮＮＱＲＦＫＤ（配列番号２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＷＧＦＫＹＤＧＥＷＳＦＤＶ（配列番号３）、
２）ＺＩＬ１：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＧＭＳ（配列番号１３）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＨＩＮＳＧＧＳＳＴＹＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号１４）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＶＹＴＴＬＡＡＦＷＴＤＮＦＤＹ（配列番号１５）、
３）ＺＩＬ８：ＶＨ－ＣＤＲ１がＤＹＡＭＳ（配列番号１９）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＧＩＤＳＶＧＳＧＴＳＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号２０）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＦＰＧＳＦＥＨ（配列番号２１）、
４）ＺＩＬ９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＤＭＴ（配列番号２５）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＤＶＮＳＧＧＴＧＴＡＹＡＶＡＶＫＧ（配列番号２６）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＬＧＶＲＤＧＬＳＶ（配列番号２７）、
５）ＺＩＬ１１：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＶＭＮ（配列番号３１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号３２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＳＭＶＧＰＦＤＹ（配列番号３３）、
６）ＺＩＬ６９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＡＭＫ（配列番号３７）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＴＩＮＮＤＧＴＲＴＧＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号３８）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＮＡＥＳＧＣＴＧＤＨＣＰＰＹ（配列番号３９）、
７）ＺＩＬ９４：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＦＭＳ（配列番号４３）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＬＩＳＳＤＧＳＧＴＹＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号４４）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＦＷＲＡＦＮＤ（配列番号４５）、
８）ＺＩＬ１５４：ＶＨ－ＣＤＲ１がＤＲＧＭＳ（配列番号４９）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＹＩＲＹＤＧＳＲＴＤＹＡＤＡＶＥＧ（配列番号５０）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＷＤＧＳＳＦＤＹ（配列番号５１）、
９）ＺＩＬ１５９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＶＭＴ（配列番号５５）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＧＩＮＳＥＧＳＲＴＡＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号５６）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＤＩＶＡＴＧＴＳＹ（配列番号５７）、
１０）ＺＩＬ１７１：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＶＭＮ（配列番号６１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号６２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＳＭＶＧＰＦ
ＤＹ（配列番号６３）、
１１）０４Ｈ０７：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＷＭＮ（配列番号２００）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＭＩＤＰＳＤＳＥＩＨＹＮＱＶＦＫＤ（配列番号２０１）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＱＤＩＶＴＴＶＤＹ（配列番号２０２）、
１２）０６Ａ０９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＷＭＮ（配列番号２０６）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＭＩＤＰＳＤＳＥＴＨＹＮＱＩＦＲＤ（配列番号２０７）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＱＤＩＶＴＴＶＤＹ（配列番号２０８）、または
１３）ＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３のうちの少なくとも１つにおける１つ以上のアミノ酸残基の付加、欠失、及び／または置換によってそれぞれの親抗体１５Ｈ０５、ＺＩＬ１、ＺＩＬ８、ＺＩＬ９、ＺＩＬ１１、ＺＩＬ６９、ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、ＺＩＬ１５９、ＺＩＬ１７１、０４Ｈ０７、もしくは０６Ａ０９のＣＤＲと相違する、１）～１２）のバリアント
のうちの少なくとも１つをコードする核酸配列を含む、単離核酸を提供する。
１つの実施形態において、上記の単離核酸はさらに、以下の可変軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列の組合せ：
１）１５Ｈ０５：可変軽鎖（ＶＬ）－ＣＤＲ１がＲＡＳＱＧＩＳＩＷＬＳ（配列番号４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＡＳＮＬＨＩ（配列番号５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＬＱＳＱＴＹＰＬＴ（配列番号６）、
２）ＺＩＬ１：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＳＴＮＮＩＧＩＬＡＡＴ（配列番号１６）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＳＤＧＮＲＰＳ（配列番号１７）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＱＳＦＤＴＴＬＤＡＹＶ（配列番号１８）、
３）ＺＩＬ８：ＶＬ－ＣＤＲ１がＴＧＳＳＳＮＩＧＳＧＹＶＧ（配列番号２２）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＹＮＳＤＲＰＳ（配列番号２３）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＳＶＹＤＲＴＦＮＡＶ（配列番号２４）、
４）ＺＩＬ９：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＮＥＹＹＴＱ（配列番号２８）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＲＤＴＥＲＰＳ（配列番号２９）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＤＴＧＴＬＶ（配列番号３０）、
５）ＺＩＬ１１：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＳＮＹＹＡＱ（配列番号３４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号３５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶ（配列番号３６）、
６）ＺＩＬ６９：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＮＫＹＹＡＱ（配列番号４０）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号４１）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＥＴＮＶ（配列番号４２）、
７）ＺＩＬ９４：ＶＬ－ＣＤＲ１がＧＬＮＳＧＳＶＳＴＳＮＹＰＧ（配列番号４６）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＤＴＧＳＲＰＳ（配列番号４７）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＳＬＹＴＤＳＤＩＬＶ（配列番号４８）、
８）ＺＩＬ１５４：ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＡＳＱＳＬＬＨＳＤＧＮＴＹＬＤ（配列番号５２）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＶＳＮＲＤＰ（配列番号５３）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＭＱＡＩＨＦＰＬＴ（配列番号５４）、
９）ＺＩＬ１５９：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＴＬＮＲＦＹＴＱ（配列番号５８）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号５９）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＫＳＡＶＳＩＤＶＧＶ（配列番号６０）、
１０）ＺＩＬ１７１：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＫＳＬＳＹＹＹＡＱ（配列番号６４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号６５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶ（配列番号６６）、
１１）０４Ｈ０７：ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＳＳＱＳＬＬＹＳＩＮＱＫＮＨＬＡ（配列番号２０３）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号２０４）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＱＱＧＹＴＹＰＦＴ（配列番号２０５）、
１２）０６Ａ０９：ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＳＳＱＳＬＬＹＳＩＮＱＫＮＦＬＡ（配列番号２
０９）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号２１０）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＱＱＨＹＧＹＰＦＴ（配列番号２１１）、または
１３）ＶＨまたはＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３のうちの少なくとも１つにおける１つ以上のアミノ酸残基の付加、欠失、及び／または置換によってそれぞれの親抗体１５Ｈ０５、ＺＩＬ１、ＺＩＬ８、ＺＩＬ９、ＺＩＬ１１、ＺＩＬ６９、ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、ＺＩＬ１５９、ＺＩＬ１７１、０４Ｈ０７、もしくは０６Ａ０９のＣＤＲと相違する、１）～１２）のバリアント
のうちの少なくとも１つをコードする核酸配列を含むことができる。
１つの実施形態において、本発明は、以下の可変軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列の組合せ：
１）１５Ｈ０５：可変軽鎖（ＶＬ）－ＣＤＲ１がＲＡＳＱＧＩＳＩＷＬＳ（配列番号４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＡＳＮＬＨＩ（配列番号５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＬＱＳＱＴＹＰＬＴ（配列番号６）、
２）ＺＩＬ１：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＳＴＮＮＩＧＩＬＡＡＴ（配列番号１６）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＳＤＧＮＲＰＳ（配列番号１７）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＱＳＦＤＴＴＬＤＡＹＶ（配列番号１８）、
３）ＺＩＬ８：ＶＬ－ＣＤＲ１がＴＧＳＳＳＮＩＧＳＧＹＶＧ（配列番号２２）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＹＮＳＤＲＰＳ（配列番号２３）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＳＶＹＤＲＴＦＮＡＶ（配列番号２４）、
４）ＺＩＬ９：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＮＥＹＹＴＱ（配列番号２８）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＲＤＴＥＲＰＳ（配列番号２９）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＤＴＧＴＬＶ（配列番号３０）、
５）ＺＩＬ１１：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＳＮＹＹＡＱ（配列番号３４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号３５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶ（配列番号３６）、
６）ＺＩＬ６９：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＮＫＹＹＡＱ（配列番号４０）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号４１）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＥＴＮＶ（配列番号４２）、
７）ＺＩＬ９４：ＶＬ－ＣＤＲ１がＧＬＮＳＧＳＶＳＴＳＮＹＰＧ（配列番号４６）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＤＴＧＳＲＰＳ（配列番号４７）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＳＬＹＴＤＳＤＩＬＶ（配列番号４８）、
８）ＺＩＬ１５４：ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＡＳＱＳＬＬＨＳＤＧＮＴＹＬＤ（配列番号５２）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＶＳＮＲＤＰ（配列番号５３）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＭＱＡＩＨＦＰＬＴ（配列番号５４）、
９）ＺＩＬ１５９：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＴＬＮＲＦＹＴＱ（配列番号５８）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号５９）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＫＳＡＶＳＩＤＶＧＶ（配列番号６０）、
１０）ＺＩＬ１７１：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＫＳＬＳＹＹＹＡＱ（配列番号６４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号６５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶ（配列番号６６）、
１１）０４Ｈ０７：ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＳＳＱＳＬＬＹＳＩＮＱＫＮＨＬＡ（配列番号２０３）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号２０４）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＱＱＧＹＴＹＰＦＴ（配列番号２０５）、
１２）０６Ａ０９：ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＳＳＱＳＬＬＹＳＩＮＱＫＮＦＬＡ（配列番号２０９）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号２１０）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＱＱＨＹＧＹＰＦＴ（配列番号２１１）、または
１３）ＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３のうちの少なくとも１つにおける１つ以上のアミノ酸残基の付加、欠失、及び／または置換によってそれぞれの親抗体１５Ｈ０５、ＺＩＬ１、ＺＩＬ８、ＺＩＬ９、ＺＩＬ１１、ＺＩＬ６９、ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１
５４、ＺＩＬ１５９、ＺＩＬ１７１、０４Ｈ０７、もしくは０６Ａ０９のＣＤＲと相違する、１）～１２）のバリアント
のうちの少なくとも１つをコードする核酸配列を含む、単離核酸を提供する。
本発明はさらに、上記の核酸のうちの少なくとも１つを含むベクターを提供する。
また、本発明は、ネコ抗体の一貫性及び／または品質を改善する方法であって、ネコＩｇＧカッパ軽鎖をコードするヌクレオチド配列とネコＩｇＧ重鎖をコードするヌクレオチド配列とを宿主細胞内で発現させてネコ抗体を産生することを含み、ネコＩｇＧカッパ軽鎖をコードするヌクレオチド配列が、他の場合では野生型ネコＩｇＧ軽鎖定常領域内に存在するＣ末端側ＱＲＥ配列をコードする配列が修飾及び／または欠失しているカッパ軽鎖定常ヌクレオチド配列を含む、方法も提供する。このような修飾には、例えば、ｃ末端に対する１つ以上のアミノ酸の欠失、置換、または付加が生じるようなヌクレオチド配列に対する修飾が含まれ得る。
１つの実施形態において、ネコ抗体の一貫性及び／または品質を改善する方法は、以下：
ａ）ネコ抗体の野生型ネコＩｇＧカッパ軽鎖定常領域をコードするヌクレオチド配列を提供することであって、該野生型ネコカッパ軽鎖定常領域がＱＲＥのＣ末端側アミノ酸配列を含む、提供することと、
ｂ）ａ）におけるヌクレオチド配列内のＣ末端側ＱＲＥをコードする配列を除去及び／または修飾して、修正されたカッパ軽鎖定常ヌクレオチド配列を形成することと、
ｃ）ｂ）からの修正されたカッパ軽鎖定常ヌクレオチド配列を、ネコＩｇＧカッパ軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列と組み合わせて、完全なネコＩｇＧカッパ軽鎖をコードするヌクレオチド配列を形成することと、
ｄ）ｃ）からの完全なネコＩｇＧカッパ軽鎖をコードするヌクレオチド配列と、ネコＩｇＧ重鎖をコードするヌクレオチド配列とを宿主細胞内で発現させて、他の場合では野生型ネコＩｇＧカッパ軽鎖定常領域内に存在するＣ末端側ＱＲＥ配列が修飾及び／または欠失しているネコ抗体を産生することと、を含む。
１つの実施形態において、ネコ抗体の一貫性及び／または品質を改善することは、遊離ＩｇＧカッパ軽鎖のレベルを低減し、それによってインタクトネコＩｇＧ抗体単量体のパーセンテージを増加させることを含む。
１つの実施形態において、ネコＩｇＧカッパ軽鎖をコードするヌクレオチド配列と、ネコＩｇＧ重鎖をコードするヌクレオチド配列とが、宿主細胞の形質転換に使用される同じベクター上で保有される。別の実施形態において、ネコＩｇＧカッパ軽鎖をコードするヌクレオチド配列と、ネコＩｇＧ重鎖をコードするヌクレオチド配列とが、宿主細胞の形質転換に使用される別々のベクター上で保有される。
ネコ抗体の一貫性及び／または品質を改善する方法の１つの実施形態において、ネコ抗体は、サイトカイン及び／または成長
因子媒介性障害に関与する標的に特異的に結合する。特定の１つの実施形態において、ネコ抗体は、ネコＩＬ－３１またはネコＮＧＦに特異的に結合する。
１つの実施形態において、ネコ抗体は、配列：ＲＳＤＡＱＰＳＶＦＬＦＱＰＳＬＤＥＬＨＴＧＳＡＳＩＶＣＩＬＮＤＦＹＰＫＥＶＮＶＫＷＫＶＤＧＶＶＱＮＫＧＩＱＥＳＴＴＥＱＮＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＭＳＳＴＥＹＱＳＨＥＫＦＳＣＥＶＴＨＫＳＬＡＳＴＬＶＫＳＦＱＲＳＥＣ（配列番号１８６）またはそのバリアントを有するカッパ軽鎖定常領域を含む。このようなバリアントとしては、例えば、配列番号１８６のｃ末端に対する１
つ以上のアミノ酸残基（複数可）の付加または修飾が挙げられる。
本発明はさらに、イヌ抗体の一貫性及び／または品質を改善する方法であって、イヌＩｇＧカッパ軽鎖をコードするヌクレオチド配列と、イヌＩｇＧ重鎖をコードするヌクレオチド配列とを宿主細胞内で発現させて、イヌ抗体を産生することを含み、イヌＩｇＧカッパ軽鎖をコードするヌクレオチド配列が、他の場合では野生型イヌＩｇＧ軽鎖（イヌＬＣカッパｗｔ、配列番号１９４）定常領域内に存在するＣ末端側ＱＲＶＤ配列をコードする配列が修飾及び／または欠失しているカッパ軽鎖定常ヌクレオチド配列を含む、方法を提供する。このような修飾には、例えば、ｃ末端に対する１つ以上のアミノ酸の欠失、置換、または付加が生じるようなヌクレオチド配列に対する修飾が含まれ得る。
１つの実施形態において、イヌ抗体の一貫性及び／または品質を改善する方法は、以下：
ａ）イヌ抗体の野生型イヌＩｇＧカッパ軽鎖定常領域をコードするヌクレオチド配列を提供することであって、野生型イヌカッパ軽鎖定常領域がＱＲＶＤのＣ末端側アミノ酸配列を含む、提供することと、
ｂ）ａ）におけるヌクレオチド配列内のＣ末端側ＱＲＶＤをコードする配列を除去及び／または修飾して、修正されたカッパ軽鎖定常ヌクレオチド配列を形成することと、
ｃ）ｂ）からの修正されたカッパ軽鎖定常ヌクレオチド配列を、イヌＩｇＧカッパ軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列と組み合わせて、完全なイヌＩｇＧカッパ軽鎖をコードするヌクレオチド配列を形成することと、
ｄ）ｃ）からの前記完全なイヌＩｇＧカッパ軽鎖をコードするヌクレオチド配列と、イヌＩｇＧ重鎖をコードするヌクレオチド配列とを宿主細胞内で発現させて、他の場合では野生型イヌＩｇＧカッパ軽鎖定常領域内に存在するＣ末端側ＱＲＶＤ配列が修飾及び／または欠失しているイヌ抗体を産生することと、を含む。
１つの実施形態において、イヌ抗体の一貫性及び／または品質を改善することは、遊離ＩｇＧカッパ軽鎖のレベルを低減し、それによってインタクトイヌＩｇＧ抗体単量体のパーセンテージを増加させることを含む。
１つの実施形態において、イヌＩｇＧカッパ軽鎖をコードするヌクレオチド配列と、イヌＩｇＧ重鎖をコードするヌクレオチド配列とが、宿主細胞の形質転換に使用される同じベクター上で保有される。別の実施形態において、イヌＩｇＧカッパ軽鎖をコードするヌクレオチド配列と、イヌＩｇＧ重鎖をコードするヌクレオチド配列とが、宿主細胞の形質転換に使用される別々のベクター上で保有される。
イヌ抗体の一貫性及び／または品質を改善する方法の１つの実施形態において、イヌ抗体は、サイトカイン及び／または成長因子媒介性障害に関与する標的に特異的に結合する。特定の１つの実施形態において、イヌ抗体は、イヌＩＬ－３１に特異的に結合する。
イヌ抗体の一貫性及び／または品質を改善する方法の１つの実施形態において、イヌ抗体は、配列：ＲＮＤＡＱＰＡＶＹＬＦＱＰＳＰＤＱＬＨＴＧＳＡＳＶＶＣＬＬＮＳＦＹＰＫＤＩＮＶＫＷＫＶＤＧＶＩＱＤＴＧＩＱＥＳＶＴＥＱＤＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＭＳＳＴＥＹＬＳＨＥＬＹＳＣＥＩＴＨＫＳＬＰＳＴＬＩＫＳＦＱＲＳＥＣ（配列番号１７９）またはそのバリアントを有するカッパ軽鎖定常領域を含む。このようなバリアントとしては、例えば、配列番号１７９のｃ末端に対する１つ以上のアミノ酸残基（複数可）の付加または修飾が挙げられる。
本明細書に記載されている修正されたカッパ軽鎖定常領域は、限定されるものではないが、本発明の明細書及び特許請求の範囲に記載されているイヌまたはネコの抗体のいずれ
かを含めた、任意の数のネコ及びイヌの抗体と共に使用することができる。また、ＩＬ－３１以外の標的を有するイヌまたはネコの抗体も、本明細書で開示されている修正されたカッパ軽鎖定常領域と好適に組み合わされるように想定されている。本発明は、このような修正されたカッパ軽鎖定常領域を含む任意のネコまたはイヌの抗体を含み、そのためこのような抗体は、本発明の明細書及び特許請求の範囲における開示に基づいて一貫性及び／または品質が改善されていることが合理的に予想される。
異なる種由来のＩＬ－３１間でアミノ酸配列が保存されていることを示すアラインメントである。詳細には、配列番号１５５（イヌＩＬ－３１）、配列番号１５７（ネコＩＬ－３１）、配列番号１６５（イヌＩＬ－３１）、及び配列番号１８１（ヒトＩＬ－３１）間の比較を示している。イヌ、ネコ、ウマ、及びヒトのＩＬ－３１間におけるアミノ酸配列同一性パーセントも示されている。 Ｂｉａｃｏｒｅシステム（Ｂｉａｃｏｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ），Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を用いて、マウス起源由来のＣＤＲを有する候補Ａｂがイヌ及びネコのＩＬ－３１に結合する親和性を詳述している。 イヌ及びネコの細胞アッセイで測定された、マウス起源由来のＣＤＲを有する候補抗体の効力（ＩＣ５０（μｇ／ｍｌ））を示す表である。詳細には、候補抗体について、イヌＤＨ－８２またはネコＦＣＷＦ４マクロファージ様細胞内でのＩＬ－３１媒介性ＳＴＡＴリン酸化を阻害する能力を評価した。
は、間接ＥＬＩＳＡ及びＢｉａｃｏｒｅ両方の方法を用いて、イヌ起源のＣＤＲを有する候補モノクローナル抗体の様々なタンパク質との結合において得られた結果を示している。間接ＥＬＩＳＡについては、野生型ネコＩＬ－３１への結合と、モノクローナル抗体１５Ｈ０５エピトープ領域内に変異を有するネコＩＬ－３１ １５Ｈ０５変異型への結合（ＥＬＩＳＡ ＯＤ）とを評価した。結合を確認するため、イヌ、ネコ、ウマ、ヒト、ネコ１５Ｈ０５変異型、及びネコ１１Ｅ１２変異型のＩＬ－３１タンパク質を表面として使用し、単一試験濃度の抗体を使用してｂｉａｃｏｒｅ分析を実施した。ネコＩＬ－３１ １１Ｅ１２変異型は、モノクローナル抗体１１Ｅ１２エピトープ領域内に変異を有した。 Ａは、マウス抗体１１Ｅ１２ ＶＬ配列（配列番号７３）のアラインメントを示しており、過去に開示されたＣａｎ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ＿ｃＵｎ＿１（配列番号１８２）及びＣＡＮ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ＿ｃＵｎ＿ＦＷ２（配列番号１８４）と称されるイヌ化１１Ｅ１２配列を、ＦＥＬ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ１（配列番号１１３）及びＦＥＬ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ１＿ＦＷ２（配列番号１１７）という名称のネコ化バージョンと比較している。Ａのアラインメントの下に記されているドットはＦｅｌ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ１の関連する変化の位置を示しており、この変化はこの抗体のＩＬ－３１タンパク質に対する親和性を回復するために必要であった。Ｂは、本明細書でＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ（配列番号６９）と称されるマウス抗体１５Ｈ０５ ＶＬ配列と、本明細書でＦＥｌ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１（配列番号１２７）及びＦＥｌ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ＿ＦＷ２（配列番号１３５）と称されるネコ化１５Ｈ０５ ＶＬ配列とのアラインメントを示している。Ｂのアラインメントの下にあるドットは、ネコ化１５Ｈ０５ ＶＬ（Ｆｅｌ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１）に必要な変化を示しており、この変化は、この抗体のマウス及びキメラ形態と比較したときのイヌ及びネコのＩＬ－３１に対する親和性を回復するだけでなく改善するために必要であった。 Ａは、変異型１５Ｈ０５（配列番号１６３）及び１１Ｅ１２（配列番号１６１）との野生型ネコＩＬ－３１（配列番号１５７）のアラインメントを示しており、アラニン置換が生じる位置は強調表示されている。ＢはネコＩＬ－３１ホモロジーモデルを示しており、抗体１１Ｅ１２（部位１）及び１５Ｈ０５（部位２）の結合に関与する２つのアミノ酸の位置が強調表示されている。Ｃは、モノクローナル抗体１１Ｅ１２及び１５Ｈ０５と、野生型ネコＩＬ－３１、ならびに変異型ＩＬ－３１タンパク質１５Ｈ０５（配列番号１６３）及び１１Ｅ１２（配列番号１６１）との結合において得られた結果を示すグラフであり、野生型及びこれらの変異型はコーティング抗原として使用されている。 Ｂｉａｃｏｒｅを用いたｍＡｂ １５Ｈ０５及び１１Ｅ１２の競合結合評価を示すグラフである。Ａは、マウス１５Ｈ０５及び１１Ｅ１２抗体のイヌＩＬ－３１との競合結合データを示している。Ｂは、抗体１５Ｈ０５及び１１Ｅ１２のネコＩＬ－３１表面上での競合結合データを示している。 ＯＳＭＲ及びＩＬ－３１Ｒａの個々の受容体サブユニットと、野生型ネコＩＬ－３１、ならびに変異型ＩＬ－３１タンパク質１５Ｈ０５（配列番号１６３）及び１１Ｅ１２（配列番号１６１）との結合において得られた結果を示すグラフであり、野生型及びこれらの変異型はコーティング抗原として使用されている。 ネコＩＬ－３１誘導性掻痒モデルにおけるマウス：ネコ１１Ｅ１２キメラ型、マウス：ネコ１５Ｈ０５キメラ型、及びネコ化１１Ｅ１２（ネコ１１Ｅ１２ １．１）の予備的有効性を示すグラフである。 ネコ掻痒チャレンジモデルにおける、ＺＴＳ－３６１と称されるネコ化１５Ｈ０５抗ＩＬ－３１抗体の有効性のｉｎ ｖｉｖｏ評価を示すグラフである。Ａは、Ｔ０１のビヒクルプラセボ群及びＴ０２の抗体ＺＴＳ－３６１群における－７日目から２８日目まで（ゼロ日目をＴ０２群への抗体投与日とする）のベースラインチャレンジ前掻痒行動を示している。Ｂは抗体ＺＴＳ－３６１の有効性を示しており、ＩＬ－３１チャレンジ後、ビヒクルプラセボコントロールと比較したときの掻痒の有意な低減が７日目（ｐ＜．０００１）、２１日目（ｐ＜０．００２７）、及び２８日目（ｐ＜０．０２３８）に実証されている。 Ａは、正常な実験用イヌと比較して、アトピー性及びアレルギー性皮膚炎を有するイヌのうちのクライアント所有動物のＩＬ－３１の血漿レベルを示すグラフである。Ｂは、米国内のいくつかの異なる地理的地域からの、アレルギー性皮膚炎（ＡＤ）の推定診断を受けたネコの血清ＩＬ－３１レベルを定量する最近の研究の結果を示すグラフである。Ｃは、１．７５μｇ／ｋｇのイヌＩＬ－３１を皮下投与した後のイヌにおけるイヌＩＬ－３１の薬物動態プロファイルを示すグラフである。 ＺＴＳ－３６１であるレーン１を比較する４～１２％の非還元ＳＤＳ ＰＡＧＥを示しており、ＺＴＳ－３６１の重鎖は（配列番号１２１；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１）とネコＩｇＧ重鎖定常領域（配列番号１７３；ネコ＿ＨＣ＿アレルＡ＿１）との組合せである。ＺＴＳ－３６１において、軽鎖は、（配列番号１３５；ＦＥＬ－１５Ｈ０５－ＶＬ１＿ＦＷ２）とネコＩｇＧカッパ軽鎖定常領域（配列番号１７５；ネコ＿ＬＣ＿カッパ＿Ｇ＿マイナス）との組合せである。レーン２はマウス１５Ｈ０５であり、その重鎖は（配列番号６７；ＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ）とマウスＩｇＧ重鎖定常領域（配列番号１８８；マウス＿ＨＣ＿ＩｇＧ１）との組合せである。マウス１５Ｈ０５において、軽鎖は、（配列番号６９；Ｆ ＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ）とマウスＩｇＧ軽鎖定常領域（配列番号１９０；マウス＿ＬＣ＿カッパ）との組合せである。インタクトとは、２つの重鎖及び２つの軽鎖が鎖間ジスルフィド結合によって一緒に保持されている、約１５０ｋＤａの予想分子量のＩｇＧを意味する。ＨＨＬとは「重・重・軽」を意味し、１つの軽鎖が欠落した予想分子量約１２５ｋＤａのＩｇＧのことである。ＨＨとは「重・重」を意味し、両方の軽鎖が欠落した予想分子量約１００ｋＤａのＩｇＧのことである。ＨＬとは「重・軽」を意味し、１つの重鎖及び１つの軽鎖を有する予想分子量約７５ｋＤａのＩｇＧのことである。Ｌとは「軽」を意味し、１つの軽鎖を有する予想分子量約２５ｋＤａのＩｇＧのことであり、本明細書では遊離軽鎖とも称される。 Ａは、ＺＴＳ－３６１またはマウス１５Ｈ０５（各々は上記で説明されている）を発現する安定した細胞系からのＩｇＧを比較する非還元キャピラリーゲル電気泳動（ＮＲ－ＣＧＥ）の結果を示している。単量体及び亜種のパーセントは、Ｂに電気泳動図として示されているＮＲ－ＣＧＥを用いた実験出力から計算される。時間補正面積（ＴＣＡ）は、装置出力からの個々のピーク面積を移動時間で割ったものとして定義される。総ＴＣＡは、０．３％以上の全てのピークに対するＴＣＡの合計として定義される。単量体インタクトＩｇＧパーセント（単量体％）及び個々のフラグメントのパーセント（ＨＨＬ％及びＬ％）は、総ＴＣＡのパーセントとしてこれらの個々のＴＣＡに基づいて計算される。フラグメント％は、インタクトＩｇＧよりも低分子量で移動する全てのピーク面積の合計である。 Ａは、個々の安定したＺＴＳ－３６１のＣＨＯクローンからのＩｇＧを比較する４～１２％の非還元ＳＤＳ ＰＡＧＥを示している（上記及び実施例セクションのセクション１．９で説明されている）。レーン１及び８は、比較用のＩｇＧ参照標準物質である。単量体パーセントは、ＢｉｏＲａｄ ＶｅｒｓａＤｏｃソフトウェアを用いて約１５０ｋＤａの予想分子量に移動する各バンドの濃度測定分析から計算される。フラグメント％は、分子量がより低い個々のバンドの合計である。Ｂは、ＺＴＳ－３６１の個々の安定したＣＨＯクローンからのＩｇＧを比較する非還元キャピラリーゲル電気泳動（ＮＲ－ＣＧＥ）の結果を示している。時間補正面積（ＴＣＡ）は、装置出力からの個々のピーク面積を移動時間で割ったものとして定義される。総ＴＣＡは、０．３％以上の全てのピークに対するＴＣＡの合計として定義される。単量体インタクトＩｇＧパーセント（単量体％）及びフラグメントパーセント（フラグメント％）は、総ＴＣＡのパーセントとしてこれらの個々のＴＣＡに基づいて計算される。フラグメント％は、インタクトＩｇＧよりも低分子量で移動する全てのピーク面積の合計である。 示された種のＩｇカッパ軽鎖定常タンパク質のｃ末端上にあるアミノ酸を示している。イヌＬＣカッパｗｔの場合、示されたＣ末端側アミノ酸残基は配列番号１９４の１０３～１０９位であり、示されたヌクレオチド残基番号は配列番号１９５の残基番号３０７～３３０である。ネコＬＣカッパＧマイナス（Ｇ－）の場合、示されたＣ末端側アミノ酸残基は配列番号１７５の１０５～１１０位であり、示されたヌクレオチド残基番号は配列番号１７６の残基番号３１３～３３０である。ブタＬＣカッパの場合、示されたＣ末端側アミノ酸残基は配列番号１９６の１０４～１０８位であり、示されたヌクレオチド残基番号は配列番号１９７の残基番号３１０～３２７である。ミンクＬＣカッパの場合、示されたＣ末端側アミノ酸残基は配列番号１９８の１０５～１０８位であり、示されたヌクレオチド残基番号は配列番号１９９の残基番号３１３～３２７である。ヒトＬＣカッパの場合、示されたＣ末端側アミノ酸残基は配列番号１９２の１０２～１０６位であり、示されたヌクレオチド残基番号は配列番号１９３の残基番号３０４～３２１である。マウスＬＣカッパの場合、示されたＣ末端側アミノ酸残基は配列番号１９０の１０２～１０６位であり、示されたヌクレオチド残基番号は配列番号１９１の残基番号３０４～３２１である。灰色の四角形は、インタクト抗体に必要なＩｇＧ重鎖定常領域との鎖間ジスルフィド結合を形成するｃ末端側システインの位置を囲んでいる。灰色の三角形は、示された種からのＩｇＧによるカッパ軽鎖利用率のパーセンテージ増加を強調表示しており、利用率に関しては、イヌ、ネコ、及びブタは（Ａｒｕｎ ｅｔ ａｌ．１９９６ Ｚｅｎｔｒａｌｂｌ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｍｅｄ． Ｎｏｖ；４３（９）：５７３－６）、ミンクは（Ｂｏｖｋｕｎ ｅｔ ａｌ．１９９３ Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ａｕｇ；２３（８）：１９２９－３４）、マウスは（Ｗｏｌｏｓｃｈａｋ ｅｔ ａｌ．１９８７ Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｊｕｌ；２４（７）：７５１－７）、ヒトは（Ｂａｒａｎｄｕｎ ｅｔ ａｌ．１９７６ Ｂｌｏｏｄ． Ｊａｎ；４７（１）：７９－８９）に従っている。薄灰色で示されたヌクレオチドは、その位置における単一のヌクレオチド変化が終止コドンをもたらすコドンが強調表示されたものである。 Ａは、ネコＩｇＧの図的表現であり、予想される鎖内及び鎖間ジスルフィド結合の相対的位置が強調表示されている。示されているアミノ酸残基ＣＹＳ１５は、ネコＨＣアレルＡ ｗｔ（配列番号１７１）及びネコＨＣアレルＡ １（配列番号１７３）の１５位であり、示されているヌクレオチド残基番号は、それぞれネコＨＣアレルＡ ｗｔ（配列番号１７２）の４３～４５及びネコＨＣアレルＡ １（配列番号１７４）の４３～４５である。示されているアミノ酸残基ＣＹＳ１０７は、ネコＬＣカッパＧマイナス（配列番号１７５）の１０７位であり、示されているヌクレオチド残基番号は、ネコＬＣカッパＧマイナス（配列番号１７６）の３１９～３２１である。ＢはＺＴＳ－３６１のホモロジーモデルであり、上記で説明されているＣＹＳ１５及びＣＹＳ１０７の位置が強調表示されている。Ｃは、Ｂの囲まれた領域の拡大図であり、ネコの重鎖及び軽鎖の鎖間対形成を担う２つのシステインの位置がここでも強調表示されている。示されているワイヤーフレーム面のシェルは、ネコＬＣカッパＧ－について図１５に記載されたＣＹＳ１０７のすぐ後のカッパ軽鎖定常残基ＱＲＥにおける静電気的寄与を計算したものである。 Ａは、抗体ＺＴＳ－３６１及びＺＴＳ－１５０５を産生する安定したＣＨＯ細胞系を作成するために使用される重鎖及び軽鎖に対応する配列番号を記載している（上記及び／または実施例セクションのセクション１．９で説明されている）。強調表示されているのは、ネコＬＣカッパＧマイナスＱＲＥマイナス（配列番号１８６）（これに対応するヌクレオチド配列はネコＬＣカッパＧマイナスＱＲＥマイナス（配列番号１８７）である）である。Ｂは、ＺＴＳ－１５０５の個々の安定したＣＨＯクローンからのＩｇＧを比較する非還元キャピラリーゲル電気泳動（ＮＲ－ＣＧＥ）の結果を示している。時間補正面積（ＴＣＡ）は、装置出力からの個々のピーク面積を移動時間で割ったものとして定義される。総ＴＣＡは、０．３％以上の全てのピークに対するＴＣＡの合計として定義される。単量体インタクトＩｇＧパーセント（単量体％）及びフラグメントパーセント（フラグメント％）は、総ＴＣＡのパーセントとして個々のＴＣＡに基づいて計算することができる。フラグメント％は、インタクトＩｇＧよりも低分子量で移動する全てのピーク面積の合計である。Ｃは、抗体ＺＴＳ－３６１を産生する単一の安定したＣＨＯクローンと、ＺＴＳ－１５０５を産生する単一の安定したＣＨＯクローンとの比較を示している。２つの安定したクローンの比較は、Ａ～Ｇとラベリングした８つの独立した培養条件で行った。１４日間の培養後の各培養物の生存率パーセントが示されている。力価は、それぞれの培養条件下で各々の安定したクローンによって培養の１４日後に産生された抗体の量を示す。様々な培養条件を用いて成長させた各々のクローンからのＮＲ－ＣＧＥから計算された単量体パーセントが示される。 Ａは、ＣｌｕｓｔａｌｌＷソフトウェアを用いて計算され、これらの抗ネコＮＧＦ抗体の可変領域を抗ＩＬ－３１と比較する同一性パーセントを示している。Ｂ及びＣは、抗ネコＩＬ－３１及びＮＧＦ抗体における、それぞれ可変重鎖のアラインメント及び可変軽鎖のアラインメントを示しており、ＣＤＲが枠で囲まれている。 カッパ定常領域Ｃ末端の修飾がありまたはなしの抗ネコＩＬ－３１及び抗ネコＮＧＦ抗体を比較するＮＲ ＣＧＥからの結果を示している。 ネコＩＬ－３１のウマＩＬ－３１に対するＣｌｕｓｔａｌｌＷ配列アラインメントを示している。 ＣｌｕｓｔａｌｌＷを用いてマウス抗体１５Ｈ０５と比較している抗体０４Ｈ０７及び０６Ａ０９の可変重鎖（図２１Ａ）及び軽鎖（図２１Ｂ）のアラインメントを示している。比較のため、６つのＣＤＲの各々の位置が枠で囲まれている。 抗ＩＬ３１抗体ＺＴＳ－１５０５の平均プロファイルを示すＢｉａｃｏｒｅセンサーグラムであり、アラニン置換ＣＤＲ変異型をスクリーニングするために＋／－３標準偏差を使用して応答の閾値を定義している。 抗体ＺＴＳ－１５０５の重鎖ＣＤＲのアラニン置換変異誘発の結果を示しており、野生型抗体に対する結合及びＩＬ－３１媒介性ｐＳＴＡＴシグナル伝達阻害を比較している。 抗体ＺＴＳ－１５０５の軽鎖ＣＤＲのアラニン置換変異誘発の結果を示しており、野生型抗体に対する結合及びＩＬ－３１媒介性ｐＳＴＡＴシグナル伝達阻害を比較している。 Ａ及びＢは、本明細書でＺＴＳ－５８６４及びＺＴＳ－５８６５と称される２つのネコ化抗体の結合親和性及び細胞効力をそれぞれ示している。 ネコ掻痒チャレンジモデルにおける、ネコ化ＺＴＳ－５８６４抗ＩＬ－３１抗体の有効性のｉｎ ｖｉｖｏ評価の結果を示すグラフである。
図１２、１３、及び１４に記載されている抗体は、図１７Ｃからの培養条件Ａと同等の培養条件で成長させた。
配列の簡単な説明
配列番号１は、本明細書でＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ＿ＣＤＲ１と称される可変重鎖ＣＤＲ１である。
配列番号２は、本明細書でＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ＿ＣＤＲ２と称される可変重鎖ＣＤＲ２である。
配列番号３は、本明細書でＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ＿ＣＤＲ３と称される可変重鎖ＣＤＲ３である。
配列番号４は、本明細書でＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ＿ＣＤＲ１と称される可変軽鎖ＣＤＲ１である。
配列番号５は、本明細書でＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ＿ＣＤＲ２と称される可変軽鎖ＣＤＲ２である。
配列番号６は、本明細書でＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ＿ＣＤＲ３と称される可変軽鎖ＣＤＲ３である。
配列番号７は、本明細書で１１Ｅ１２－ＶＨ－ＣＤＲ１と称される可変重鎖ＣＤＲ１である。
配列番号８は、本明細書で１１Ｅ１２－ＶＨ－ＣＤＲ２と称される可変重鎖ＣＤＲ２である。
配列番号９は、本明細書で１１Ｅ１２－ＶＨ－ＣＤＲ３と称される可変重鎖ＣＤＲ３である。
配列番号１０は、本明細書で１１Ｅ１２－ＶＬ－ＣＤＲ１と称される可変軽鎖ＣＤＲ１である。
配列番号１１は、本明細書で１１Ｅ１２－ＶＬ－ＣＤＲ２と称される可変軽鎖ＣＤＲ２である。
配列番号１２は、本明細書で１１Ｅ１２－ＶＬ－ＣＤＲ３と称される可変軽鎖ＣＤＲ３である。
配列番号１３は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ１＿ＶＨ＿ＣＤＲ１と称される可変重鎖ＣＤＲ１である。
配列番号１４は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ１＿ＶＨ＿ＣＤＲ２と称される可変重鎖ＣＤＲ２である。
配列番号１５は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ１＿ＶＨ＿ＣＤＲ３と称される可変重鎖ＣＤＲ３である。
配列番号１６は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ１＿ＶＬ＿ＣＤＲ１と称される可変軽鎖ＣＤＲ１である。
配列番号１７は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ１＿ＶＬ＿ＣＤＲ２と称される可変軽鎖ＣＤＲ２である。
配列番号１８は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ１＿ＶＬ＿ＣＤＲ３と称される可変軽鎖ＣＤＲ３である。
配列番号１９は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ８＿ＶＨ＿ＣＤＲ１と称される可変重鎖ＣＤＲ１である。
配列番号２０は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ８＿ＶＨ＿ＣＤＲ２と称される可変重鎖ＣＤＲ２である。
配列番号２１は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ８＿ＶＨ＿ＣＤＲ３と称される可変重鎖ＣＤＲ３である。
配列番号２２は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ８＿ＶＬ＿ＣＤＲ１と称される可変軽鎖ＣＤＲ１である。
配列番号２３は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ８＿ＶＬ＿ＣＤＲ２と称される可変軽鎖ＣＤＲ２である。
配列番号２４は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ８＿ＶＬ＿ＣＤＲ３と称される可変軽鎖ＣＤＲ３である。
配列番号２５は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ９＿ＶＨ＿ＣＤＲ１と称される可変重鎖ＣＤＲ１である。
配列番号２６は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ９＿ＶＨ＿ＣＤＲ２と称される可変重鎖ＣＤＲ２である。
配列番号２７は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ９＿ＶＨ＿ＣＤＲ３と称される可変重鎖ＣＤＲ３である。
配列番号２８は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ９＿ＶＬ＿ＣＤＲ１と称される可変軽鎖ＣＤＲ１である。
配列番号２９は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ９＿ＶＬ＿ＣＤＲ２と称される可変軽鎖ＣＤＲ２である。
配列番号３０は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ９＿ＶＬ＿ＣＤＲ３と称される可変軽鎖ＣＤＲ３である。
配列番号３１は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ１１＿ＶＨ＿ＣＤＲ１と称される可変重鎖ＣＤＲ１である。
配列番号３２は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ１１＿ＶＨ＿ＣＤＲ２と称される可変重鎖ＣＤＲ２である。
配列番号３３は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ１１＿ＶＨ＿ＣＤＲ３と称される可変重鎖ＣＤＲ３である。
配列番号３４は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ１１＿ＶＬ＿ＣＤＲ１と称される可変軽鎖ＣＤＲ１である。
配列番号３５は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ１１＿ＶＬ＿ＣＤＲ２と称される可変軽鎖ＣＤＲ２である。
配列番号３６は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ１１＿ＶＬ＿ＣＤＲ３と称される可変軽鎖ＣＤＲ３である。
配列番号３７は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ６９＿ＶＨ＿ＣＤＲ１と称される可変重鎖ＣＤＲ１である。
配列番号３８は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ６９＿ＶＨ＿ＣＤＲ２と称される可変重鎖ＣＤＲ２である。
配列番号３９は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ６９＿ＶＨ＿ＣＤＲ３と称される可変重鎖ＣＤＲ３である。
配列番号４０は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ６９＿ＶＬ＿ＣＤＲ１と称される可変軽鎖ＣＤＲ１である。
配列番号４１は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ６９＿ＶＬ＿ＣＤＲ２と称される可変軽鎖ＣＤＲ２である。
配列番号４２は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ６９＿ＶＬ＿ＣＤＲ３と称される可変軽鎖ＣＤＲ３である。
配列番号４３は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ９４＿ＶＨ＿ＣＤＲ１と称される可変重鎖ＣＤＲ１である。
配列番号４４は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ９４＿ＶＨ＿ＣＤＲ２と称される可変重鎖ＣＤＲ２である。
配列番号４５は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ９４＿ＶＨ＿ＣＤＲ３と称される可変重鎖ＣＤＲ３である。
配列番号４６は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ９４＿ＶＬ＿ＣＤＲ１と称される可変軽鎖ＣＤＲ１である。
配列番号４７は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ９４＿ＶＬ＿ＣＤＲ２と称される可変軽鎖ＣＤＲ２である。
配列番号４８は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ９４＿ＶＬ＿ＣＤＲ３と称される可変軽鎖ＣＤＲ３である。
配列番号４９は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ１５４＿ＶＨ＿ＣＤＲ１と称される可変重
鎖ＣＤＲ１である。
配列番号５０は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ１５４＿ＶＨ＿ＣＤＲ２と称される可変重鎖ＣＤＲ２である。
配列番号５１は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ１５４＿ＶＨ＿ＣＤＲ３と称される可変重鎖ＣＤＲ３である。
配列番号５２は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ１５４＿ＶＬ＿ＣＤＲ１と称される可変軽鎖ＣＤＲ１である。
配列番号５３は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ１５４＿ＶＬ＿ＣＤＲ２と称される可変軽鎖ＣＤＲ２である。
配列番号５４は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ１５４＿ＶＬ＿ＣＤＲ３と称される可変軽鎖ＣＤＲ３である。
配列番号５５は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ１５９＿ＶＨ＿ＣＤＲ１と称される可変重鎖ＣＤＲ１である。
配列番号５６は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ１５９＿ＶＨ＿ＣＤＲ２と称される可変重鎖ＣＤＲ２である。
配列番号５７は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ１５９＿ＶＨ＿ＣＤＲ３と称される可変重鎖ＣＤＲ３である。
配列番号５８は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ１５９＿ＶＬ＿ＣＤＲ１と称される可変軽鎖ＣＤＲ１である。
配列番号５９は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ１５９＿ＶＬ＿ＣＤＲ２と称される可変軽鎖ＣＤＲ２である。
配列番号６０は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ１５９＿ＶＬ＿ＣＤＲ３と称される可変軽鎖ＣＤＲ３である。
配列番号６１は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ１７１＿ＶＨ＿ＣＤＲ１と称される可変重鎖ＣＤＲ１である。
配列番号６２は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ１７１＿ＶＨ＿ＣＤＲ２と称される可変重鎖ＣＤＲ２である。
配列番号６３は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ１７１＿ＶＨ＿ＣＤＲ３と称される可変重鎖ＣＤＲ３である。
配列番号６４は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ１７１＿ＶＬ＿ＣＤＲ１と称される可変軽鎖ＣＤＲ１である。
配列番号６５は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ１７１＿ＶＬ＿ＣＤＲ２と称される可変軽鎖ＣＤＲ２である。
配列番号６６は、本明細書でＣＡＮ＿ＺＩＬ１７１＿ＶＬ＿ＣＤＲ３と称される可変軽鎖ＣＤＲ３である。
配列番号６７は、本明細書でＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＨと称される可変重鎖である。
配列番号６８は、本明細書でＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＨと称される可変重鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号６９は、本明細書でＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＬと称される可変軽鎖である。
配列番号７０は、本明細書でＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＬと称される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号７１は、本明細書でＭＵ－１１Ｅ１２－ＶＨと称される可変重鎖である。
配列番号７２は、本明細書でＭＵ－１１Ｅ１２－ＶＨと称される可変重鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号７３は、本明細書でＭＵ－１１Ｅ１２－ＶＬと称される可変軽鎖である。
配列番号７４は、本明細書でＭＵ－１１Ｅ１２－ＶＬと称される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号７５は、本明細書でＣＡＮ－ＺＩＬ１＿ＶＨと称される可変重鎖である。
配列番号７６は、本明細書でＣＡＮ－ＺＩＬ１＿ＶＨと称される可変重鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号７７は、本明細書でＣＡＮ－ＺＩＬ１＿ＶＬと称される可変軽鎖である。
配列番号７８は、本明細書でＣＡＮ－ＺＩＬ１＿ＶＬと称される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号７９は、本明細書でＣＡＮ－ＺＩＬ８＿ＶＨと称される可変重鎖である。
配列番号８０は、本明細書でＣＡＮ－ＺＩＬ８＿ＶＨと称される可変重鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号８１は、本明細書でＣＡＮ－ＺＩＬ８＿ＶＬと称される可変軽鎖である。
配列番号８２は、本明細書でＣＡＮ－ＺＩＬ８＿ＶＬと称される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号８３は、本明細書でＣＡＮ－ＺＩＬ９＿ＶＨと称される可変重鎖である。
配列番号８４は、本明細書でＣＡＮ－ＺＩＬ９＿ＶＨと称される可変重鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号８５は、本明細書でＣＡＮ－ＺＩＬ９＿ＶＬと称される可変軽鎖である。
配列番号８６は、本明細書でＣＡＮ－ＺＩＬ９＿ＶＬと称される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号８７は、本明細書でＣＡＮ－ＺＩＬ１１＿ＶＨと称される可変重鎖である。
配列番号８８は、本明細書でＣＡＮ－ＺＩＬ１１＿ＶＨと称される可変重鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号８９は、本明細書でＣＡＮ－ＺＩＬ１１＿ＶＬと称される可変軽鎖である。
配列番号９０は、本明細書でＣＡＮ－ＺＩＬ１１＿ＶＬと称される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号９１は、本明細書でＣＡＮ－ＺＩＬ６９＿ＶＨと称される可変重鎖である。
配列番号９２は、本明細書でＣＡＮ－ＺＩＬ６９＿ＶＨと称される可変重鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号９３は、本明細書でＣＡＮ－ＺＩＬ６９＿ＶＬと称される可変軽鎖である。
配列番号９４は、本明細書でＣＡＮ－ＺＩＬ６９＿ＶＬと称される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号９５は、本明細書でＣＡＮ－ＺＩＬ９４＿ＶＨと称される可変重鎖である。
配列番号９６は、本明細書でＣＡＮ－ＺＩＬ９４＿ＶＨと称される可変重鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号９７は、本明細書でＣＡＮ－ＺＩＬ９４＿ＶＬと称される可変軽鎖である。
配列番号９８は、本明細書でＣＡＮ－ＺＩＬ９４＿ＶＬと称される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号９９は、本明細書でＣＡＮ－ＺＩＬ１５４＿ＶＨと称される可変重鎖である。
配列番号１００は、本明細書でＣＡＮ－ＺＩＬ１５４＿ＶＨと称される可変重鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１０１は、本明細書でＣＡＮ－ＺＩＬ１５４＿ＶＬと称される可変軽鎖である。
配列番号１０２は、本明細書でＣＡＮ－ＺＩＬ１５４＿ＶＬと称される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１０３は、本明細書でＣＡＮ－ＺＩＬ１５９＿ＶＨと称される可変重鎖である。
配列番号１０４は、本明細書でＣＡＮ－ＺＩＬ１５９＿ＶＨと称される可変重鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１０５は、本明細書でＣＡＮ－ＺＩＬ１５９＿ＶＬと称される可変軽鎖である。
配列番号１０６は、本明細書でＣＡＮ－ＺＩＬ１５９＿ＶＬと称される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１０７は、本明細書でＣＡＮ－ＺＩＬ１７１＿ＶＨと称される可変重鎖である。
配列番号１０８は、本明細書でＣＡＮ－ＺＩＬ１７１＿ＶＨと称される可変重鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１０９は、本明細書でＣＡＮ－ＺＩＬ１７１＿ＶＬと称される可変軽鎖である。
配列番号１１０は、本明細書でＣＡＮ－ＺＩＬ１７１＿ＶＬと称される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１１１は、本明細書でＦＥＬ＿１１Ｅ１２＿ＶＨ１と称される可変重鎖である。
配列番号１１２は、本明細書でＦＥＬ＿１１Ｅ１２＿ＶＨ１と称される可変重鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１１３は、本明細書でＦＥＬ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ１と称される可変軽鎖である。
配列番号１１４は、本明細書でＦＥＬ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ１と称される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１１５は、本明細書でＦＥＬ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ２と称される可変軽鎖である。
配列番号１１６は、本明細書でＦＥＬ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ２と称される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１１７は、本明細書でＦＥＬ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ１＿ＦＷ２と称される可変軽鎖である。
配列番号１１８は、本明細書でＦＥＬ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ１＿ＦＷ２と称される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１１９は、本明細書でＦＥＬ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ１＿Ｋ４６Ｑと称される可変軽鎖である。
配列番号１２０は、本明細書でＦＥＬ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ１＿Ｋ４６Ｑと称される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１２１は、本明細書でＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１と称される可変重鎖である。
配列番号１２２は、本明細書でＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１と称される可変重鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１２３は、本明細書でＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ２と称される可変重鎖である。
配列番号１２４は、本明細書でＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ２と称される可変重鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１２５は、本明細書でＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ３と称される可変重鎖である。
配列番号１２６は、本明細書でＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ３と称される可変重鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１２７は、本明細書でＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１と称される可変軽鎖である。
配列番号１２８は、本明細書でＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１と称される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１２９は、本明細書でＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ２と称される可変軽鎖である。
配列番号１３０は、本明細書でＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ２と称される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１３１は、本明細書でＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ３と称される可変軽鎖である。
配列番号１３２は、本明細書でＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ３と称される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１３３は、本明細書でＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ１と称される可変軽鎖である。
配列番号１３４は、本明細書でＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ１と称される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１３５は、本明細書でＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２と称される可変軽鎖である。
配列番号１３６は、本明細書でＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２と称される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１３７は、本明細書でＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ３と称される可変軽鎖である。
配列番号１３８は、本明細書でＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ３と称される可変軽
鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１３９は、本明細書でＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ１＿ＦＷ２と称される可変軽鎖である。
配列番号１４０は、本明細書でＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ１＿ＦＷ２と称される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１４１は、本明細書でＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ１＿ＦＷ３と称される可変軽鎖である。
配列番号１４２は、本明細書でＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ１＿ＦＷ３と称される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１４３は、本明細書でＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿ＦＷ３と称される可変軽鎖である。
配列番号１４４は、本明細書でＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿ＦＷ３と称される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１４５は、本明細書でＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｋ４２Ｎと称される可変軽鎖である。
配列番号１４６は、本明細書でＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｋ４２Ｎと称される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１４７は、本明細書でＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｖ４３Ｉと称される可変軽鎖である。
配列番号１４８は、本明細書でＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｖ４３Ｉと称される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１４９は、本明細書でＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｌ４６Ｖと称される可変軽鎖である。
配列番号１５０は、本明細書でＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｌ４６Ｖと称される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１５１は、本明細書でＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｙ４９Ｎと称される可変軽鎖である。
配列番号１５２は、本明細書でＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｙ４９Ｎと称される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１５３は、本明細書でＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｋ４２Ｎ＿Ｖ４３Ｉと称される可変軽鎖である。
配列番号１５４は、本明細書でＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｋ４２Ｎ＿Ｖ４３Ｉと称される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１５５は、本明細書でイヌ＿ＩＬ３１と称されるイヌＩＬ－３１タンパク質のアミノ酸配列である。
配列番号１５６は、本明細書でイヌ＿ＩＬ３１と称されるイヌＩＬ－３１タンパク質をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１５７は、Ｃ末端側Ｈｉｓタグを有する野生型ネコＩＬ－３１タンパク質に相当する、本明細書でネコ＿ＩＬ３１＿野生型と称されるアミノ酸配列である。
配列番号１５８は、本明細書でネコ＿ＩＬ３１＿野生型と称されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１５９は、Ｎ末端側Ｈｉｓタグを有するネコＩＬ－３１タンパク質に相当する、本明細書でネコ＿ＩＬ＿３１＿Ｅ＿ｃｏｌｉと称されるアミノ酸配列である。
配列番号１６０は、本明細書でネコ＿ＩＬ＿３１＿Ｅ＿ｃｏｌｉと称されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１６１は、Ｃ末端側Ｈｉｓタグを有する変異型ネコＩＬ－３１ １１Ｅ１２タンパク質に相当する、本明細書でネコ＿ＩＬ３１＿１１Ｅ１２＿変異型と称されるアミノ酸配列である。
配列番号１６２は、本明細書でネコ＿ＩＬ３１＿１１Ｅ１２＿変異型と称されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１６３は、Ｃ末端側Ｈｉｓタグを有する変異型ネコＩＬ－３１ １５Ｈ０５タンパク質に相当する、本明細書でネコ＿ＩＬ３１＿１５Ｈ０５＿変異型と称されるアミノ酸配列である。
配列番号１６４は、本明細書でネコ＿ＩＬ３１＿１５Ｈ０５＿変異体と称されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１６５は、本明細書でウマ＿ＩＬ３１と称されるウマＩＬ－３１タンパク質のアミノ酸である。
配列番号１６６は、本明細書でウマ＿ＩＬ３１と称されるウマＩＬ－３１タンパク質をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１６７は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃと融合したネコＯＳＭＲの細胞外ドメインに相当する、本明細書でネコ＿ＯＳＭＲ＿ｈＩｇＧ１＿Ｆｃと称されるアミノ酸配列である。
配列番号１６８は、本明細書でネコ＿ＯＳＭＲ＿ｈＩｇＧ１＿Ｆｃと称されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１６９は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃと融合したネコＩＬ－３１Ｒａに相当する、本明細書でネコ＿ＩＬ３１Ｒａ＿ＨＩｇＧ１＿Ｆｃ＿Ｘ１＿Ｆｎ３と称されるアミノ酸配列である。
配列番号１７０は、本明細書でネコ＿ＩＬ３１Ｒａ＿ＨＩｇＧ１＿Ｆｃ＿Ｘ１＿Ｆｎ３と称されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１７１は、本明細書でネコ＿ＨＣ＿アレルＡ＿ｗｔと称されるネコ重鎖である。
配列番号１７２は、本明細書でネコ＿ＨＣ＿アレルＡ＿ｗｔと称されるネコ重鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１７３は、本明細書でネコ＿ＨＣ＿アレルＡ＿１と称されるネコ重鎖であり、これは、抗体エフェクター機能を除去するために、配列番号１７１の野生型配列の１２０、１２１、及び１２３位のそれぞれＭ、Ｌ、及びＧをアラニン（Ａ）で置き換えるように操作されたものである。
配列番号１７４は、本明細書でネコ＿ＨＣ＿アレルＡ＿１と称されるネコ重鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１７５は、本明細書でネコ＿ＬＣ＿カッパ＿Ｇ＿マイナスと称されるネコカッパ軽鎖であり、これは、野生型ネコカッパ軽鎖内のこの位置に通常存在するＮがＱに変更されるように、１０３位のグリコシル化ノックアウト（Ｇ－）を伴って操作されたものである。
配列番号１７６は、本明細書でネコ＿ＬＣ＿カッパ＿Ｇ＿マイナスと称されるネコカッパ軽鎖のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１７７は、本明細書でイヌ＿ＨＣ＿６５＿１と称されるイヌ重鎖である。
配列番号１７８は、本明細書でイヌ＿ＨＣ＿６５＿１と称されるイヌ重鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１７９は、本明細書でイヌ＿ＬＣ＿カッパと称されるイヌカッパ軽鎖である。
配列番号１８０は、本明細書でイヌ＿ＬＣ＿カッパと称されるイヌカッパ軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１８１は、ヒトＩＬ－３１のアミノ酸配列である。
配列番号１８２は、本明細書でＣａｎ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ＿ｃＵｎ＿１と称される可変軽鎖ｍＡｂ配列である。
配列番号１８３は、本明細書でＣａｎ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ＿ｃＵｎ＿１と称される可変軽鎖ｍＡｂ配列をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１８４は、本明細書でＣａｎ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ＿ｃＵｎ＿ＦＷ２と称される可変軽鎖ｍＡｂ配列である。
配列番号１８５は、本明細書でＣａｎ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ＿ｃＵｎ＿ＦＷ２と称される可変軽鎖ｍＡｂ配列をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１８６は、本明細書でネコ＿ＬＣ＿カッパ＿Ｇ＿マイナス＿ＱＲＥ＿マイナスと称されるネコカッパ軽鎖であり、これは、ｉ）野生型ネコカッパ軽鎖内のこの位置に通常存在するＮがＱに変更されるようにするための、１０３位のグリコシル化ノックアウト
（Ｇ－）と、ｉｉ）野生型に対するＣ末端ＱＲＥの欠失とを伴って操作されたものである。
配列番号１８７は、本明細書でネコ＿ＬＣ＿カッパ＿Ｇ＿マイナス＿ＱＲＥ＿マイナスと称されるネコカッパ軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１８８は、本明細書でマウス＿ＨＣ＿ＩｇＧ１と称されるマウス重鎖である。
配列番号１８９は、本明細書でマウス＿ＨＣ＿ＩｇＧ１と称されるマウス重鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１９０は、本明細書でマウス＿ＬＣ＿カッパと称されるマウスカッパ軽鎖である。
配列番号１９１は、本明細書でマウス＿ＬＣ＿カッパと称されるマウスカッパ軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１９２は、本明細書でヒト＿ＬＣ＿カッパと称されるヒトカッパ軽鎖である。
配列番号１９３は、本明細書でヒト＿ＬＣ＿カッパと称されるヒトカッパ軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１９４は、本明細書でイヌ＿ＬＣ＿カッパ＿ｗｔと称される野生型イヌカッパ軽鎖である。
配列番号１９５は、本明細書でイヌ＿ＬＣ＿カッパ＿ｗｔと称される野生型イヌカッパ軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１９６は、本明細書でブタ＿ＬＣ＿カッパと称されるブタカッパ軽鎖である。
配列番号１９７は、本明細書でブタ＿ＬＣ＿カッパと称されるブタカッパ軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号１９８は、本明細書でミンク＿ＬＣ＿カッパと称されるミンクカッパ軽鎖である。
配列番号１９９は、本明細書でミンク＿ＬＣ＿カッパと称されるミンクカッパ軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号２００は、本明細書でＭｕ＿０４Ｈ０７＿ＶＨ＿ＣＤＲ１と称される可変重鎖ＣＤＲ１である。
配列番号２０１は、本明細書でＭｕ＿０４Ｈ０７＿ＶＨ＿ＣＤＲ２と称される可変重鎖ＣＤＲ２である。
配列番号２０２は、本明細書でＭｕ＿０４Ｈ０７＿ＶＨ＿ＣＤＲ３と称される可変重鎖ＣＤＲ３である。
配列番号２０３は、本明細書でＭｕ＿０４Ｈ０７＿ＶＬ＿ＣＤＲ１と称される可変軽鎖ＣＤＲ１である。
配列番号２０４は、本明細書でＭｕ＿０４Ｈ０７＿ＶＬ＿ＣＤＲ２と称される可変軽鎖ＣＤＲ２である。
配列番号２０５は、本明細書でＭｕ＿０４Ｈ０７＿ＶＬ＿ＣＤＲ３と称される可変軽鎖ＣＤＲ３である。
配列番号２０６は、本明細書でＭｕ＿０６Ａ０９＿ＶＨ＿ＣＤＲ１と称される可変重鎖ＣＤＲ１である。
配列番号２０７は、本明細書でＭｕ＿０６Ａ０９＿ＶＨ＿ＣＤＲ２と称される可変重鎖ＣＤＲ２である。
配列番号２０８は、本明細書でＭｕ＿０６Ａ０９＿ＶＨ＿ＣＤＲ３と称される可変重鎖ＣＤＲ３である。
配列番号２０９は、本明細書でＭｕ＿０６Ａ０９＿ＶＬ＿ＣＤＲ１と称される可変軽鎖ＣＤＲ１である。
配列番号２１０は、本明細書でＭｕ＿０６Ａ０９＿ＶＬ＿ＣＤＲ２と称される可変軽鎖ＣＤＲ２である。
配列番号２１１は、本明細書でＭｕ＿０６Ａ０９＿ＶＬ＿ＣＤＲ３と称される可変軽鎖ＣＤＲ３である。
配列番号２１２は、本明細書でＭｕ＿０４Ｈ０７＿ＶＨと称される可変重鎖である。
配列番号２１３は、本明細書でＭｕ＿０４Ｈ０７＿ＶＨと称される可変重鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号２１４は、本明細書でＭｕ＿０４Ｈ０７＿ＶＬと称される可変軽鎖である。
配列番号２１５は、本明細書でＭｕ＿０４Ｈ０７＿ＶＬと称される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号２１６は、本明細書でＭｕ＿０６Ａ０９＿ＶＨと称される可変重鎖である。
配列番号２１７は、本明細書でＭｕ＿０６Ａ０９＿ＶＨと称される可変重鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号２１８は、本明細書でＭｕ＿０６Ａ０９＿ＶＬと称される可変軽鎖である。
配列番号２１９は、本明細書でＭｕ＿０６Ａ０９＿ＶＬと称される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号２２０は、本明細書でＺＴＳ＿７６８＿ＶＨと称される可変重鎖である。
配列番号２２１は、本明細書でＺＴＳ＿７６８＿ＶＨと称される可変重鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号２２２は、本明細書でＺＴＳ＿７６８＿ＶＬと称される可変軽鎖である。
配列番号２２３は、本明細書でＺＴＳ＿７６８＿ＶＬと称される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号２２４は、本明細書でＺＴＳ＿９４３＿ＶＨと称される可変重鎖である。
配列番号２２５は、本明細書でＺＴＳ＿９４３＿ＶＨと称される可変重鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号２２６は、本明細書でＺＴＳ＿９４３＿ＶＬと称される可変軽鎖である。
配列番号２２７は、本明細書でＺＴＳ＿９４３＿ＶＬと称される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号２２８は、本明細書でＺＴＳ＿５８６４＿ＶＨと称される可変重鎖である。
配列番号２２９は、本明細書でＺＴＳ＿５８６４＿ＶＨと称される可変重鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号２３０は、本明細書でＺＴＳ＿５８６４＿ＶＬと称される可変軽鎖である。
配列番号２３１は、本明細書でＺＴＳ＿５８６４＿ＶＬと称される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号２３２は、本明細書でＺＴＳ＿５８６５＿ＶＨと称される可変重鎖である。
配列番号２３３は、本明細書でＺＴＳ＿５８６５＿ＶＨと称される可変重鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号２３４は、本明細書でＺＴＳ＿５８６５＿ＶＬと称される可変軽鎖である。
配列番号２３５は、本明細書でＺＴＳ＿５８６５＿ＶＬと称される可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
配列番号２３６は、本明細書でネコ＿ＬＣ＿ラムダと称されるネコカッパ軽鎖のアミノ酸配列である。
配列番号２３７は、本明細書でネコ＿ＬＣ＿ラムダと称されるネコカッパ軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。
定義
本発明を詳細に説明する前に、本発明の文脈で使用されるいくつかの用語について定義する。これらの用語に加えて、必要に応じて他の用語についても本明細書の別の箇所で定義する。本明細書で別段の明示的な定義がない限り、本明細書で使用される技術用語は、当技術分野で認識されている意味を有する。
本明細書及び特許請求の範囲で使用する場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈による別段の明確な定めがない限り、複数の指示対象を含む。例えば、「（１つの）抗体」と言及するときには、複数のこのような抗体が含まれる。
本明細書で使用する場合、「含む」という用語は、組成物及び方法が挙げられた要素を含むが、他の要素を排除しないことを意味するように意図されている。
本明細書で使用する場合、エピトープとは、抗体のＣＤＲによって認識される抗原決定基を意味する。言い換えれば、エピトープとは、抗体によって認識され、結合されることが可能な任意の分子のその部分を意味する。別段の明記がない限り、「エピトープ」という用語は、本明細書で使用する場合、抗ＩＬ－３１剤が反応するＩＬ－３１の領域を意味する。
「抗原」とは、抗体によって結合されることが可能な分子または分子の部分であり、これはさらに、抗体によって認識され、結合されることが可能である（対応する抗体の結合領域は、パラトープと称されることがある）。概して、エピトープは、分子（例えば、アミノ酸または糖側鎖）の化学活性表面グルーピングからなり、特定の３次元構造特性及び特定の荷電特性を有する。エピトープは、免疫系によって認識されるタンパク質上の抗原決定基である。エピトープを認識する免疫系の構成要素は、抗体、Ｔ細胞、及びＢ細胞である。Ｔ細胞エピトープは抗原提示細胞（ＡＰＣ）の表面に表示され、典型的には８～１１アミノ酸長（ＭＨＣクラスＩ）または１５アミノ酸長以上（ＭＨＣクラスＩＩ）である。Ｔ細胞の活性化には、表示されたＭＨＣ－ペプチド複合体を認識することが不可欠である。これらの機構により、細菌やウイルスのような「非自己」タンパク質に対し自己タンパク質を適切に認識することが可能になる。必ずしも隣接していない独立したアミノ酸残基は、ＡＰＣ結合溝との相互作用や、その後のＴ細胞受容体による認識に寄与する（Ｊａｎｅｗａｙ，Ｔｒａｖｅｒｓ，Ｗａｌｐｏｒｔ，Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ：Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｅ Ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｄｉｓｅａｓｅ．５ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｇａｒｌａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ；２００１）。可溶性抗体及び細胞表面関連Ｂ細胞受容体によって認識されるエピトープは、長さ及び連続性の程度が非常に様々である（Ｓｉｖａｌｉｎｇａｍ ａｎｄ Ｓｈｅｐｈｅｒｄ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１２；５１（３－４）：３０４－３０９）。線状エピトープまたは連続したタンパク質配列内に見出されるエピトープでさえも、抗体パラトープまたはＢ細胞受容体とのキーとなる接触点に相当する非連続的アミノ酸を有することが多い。抗体及びＢ細胞によって認識されるエピトープは、３次元空間でタンパク質上に共通の接触領域を構成するアミノ酸と共に立体構造をとる場合があり、タンパク質の３次及び４次構造の特徴に依存する。このような残基は、１次アミノ酸配列の空間的に異なる領域内でみられることが多い。
本明細書で使用する場合、「ミモトープ」とは、抗原のエピトープを模倣する線状または拘束性のペプチドである。ミモトープは、Ｔ細胞エフェクター応答を誘発可能な１次アミノ酸配列、及び／または動物における獲得免疫応答を成熟させるＢ細胞と結合するのに必要な３次元構造を有することができる。所与のエピトープ抗原に対する抗体は、そのエピトープを模倣するミモトープを認識する。
抗体結合の文脈における「特異的に」という用語は、抗体と特定の抗原、すなわちポリペプチド、またはエピトープとの高いアビディティー及び／または高い親和性の結合を意味する。多くの実施形態において、特異的抗原は、抗体産生細胞を単離する動物宿主の免疫化に使用される抗原（または抗原のフラグメントもしくは細画分）である。ある抗原に対する抗体の特異的な結合は、他の抗原に対する同じ抗体の結合よりも強力である。あるポリペプチドに特異的に結合する抗体は、他のポリペプチドに対し、弱いながらも検出可能なレベル（例えば、目的ポリペプチドに対し示される結合の１０％以下）で結合可能な場合がある。このような弱い結合、すなわちバックグラウンド結合は、例えば、適切な対照を使用することにより、対象ポリペプチドに対する抗体の特異的結合と容易に識別する
ことができる。概して、特異的抗体は、抗原に対し、１０－７Ｍ以下、例えば１０－８Ｍ以下（例えば、１０－９Ｍ以下、１０－１０以下、１０－１１以下、１０－１２以下、または１０－１３以下など）のＫＤの結合親和性で結合する。
本明細書で使用する場合、「抗体」という用語は、２つの軽鎖及び２つの重鎖を有するインタクト免疫グロブリンを意味する。したがって、単一の単離抗体またはフラグメントは、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、合成抗体、組換え型抗体、キメラ型抗体、ヘテロキメラ型抗体、イヌ化抗体、ネコ化抗体、完全イヌ抗体、完全ネコ抗体、または完全ウマ抗体とすることができる。「抗体」という用語は、好ましくは、モノクローナル抗体及びそのフラグメント、ならびにＩＬ－３１タンパク質及びそのフラグメントに結合することができるこれらの免疫結合等価物を意味する。抗体という用語は、均質な分子、または複数の異なる分子実体から構成された血清産物のような混合物の両方を意味するように使用される。
「ネイティブ抗体」及び「ネイティブ免疫グロブリン」とは、通常は、約１５０，０００ダルトンのヘテロ４量体糖タンパク質であり、２つの同一の軽（Ｌ）鎖と２つの同一の重（Ｈ）鎖とから構成されている。各軽鎖は、１つのジスルフィド共有結合によって重鎖に結合しているが、ジスルフィド結合の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖によって変動する。また、各々の重鎖及び軽鎖は、一定の間隔が置かれた鎖間ジスルフィド架橋も有する。各重鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＨ）を有し、それに続いて複数の定常ドメインを有する。各軽鎖は、一端（ＶＬ）に可変ドメイン、他端に定常ドメインを有し、この軽鎖の定常ドメインは重鎖の第１の定常ドメインと共に整列し、軽鎖の可変ドメインは重鎖の可変ドメインと共に整列している。特定のアミノ酸残基は、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間の界面を形成すると考えられている。
「抗体フラグメント」という用語は、インタクト抗体構造に満たないものを意味し、限定されるものではないが、単離された単一の抗体鎖、Ｆｖコンストラクト、Ｆａｂコンストラクト、Ｆｃコンストラクト、軽鎖可変または相補性決定領域（ＣＤＲ）の配列などが含まれる。
「可変」領域という用語は、フレームワーク及びＣＤＲ（超可変領域の別名でも知られている）を含み、当該用語は、可変ドメインのある特定の部分が、抗体間で配列が大きく相違し、かつ各特定の抗体のその特定の抗原に対する結合及び特異性で使用されるという事実を意味する。ただし、可変性は、抗体の可変ドメイン全体にわたり均等に分布しているわけではない。可変性は、軽鎖及び重鎖両方の可変ドメイン内の超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに集中している。より高度に保存された可変ドメインの部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。ネイティブな重鎖及び軽鎖の可変ドメインは各々、大部分がβシート構成を採用する複数のＦＲ領域を含み、これらは３つの超可変領域によって接続され、これにより、βシート構造に接続し、場合によってはβシート構造の一部を形成するループが形成される。各鎖における超可変領域は、ＦＲによって、他方の鎖の超可変領域と近接して保持されており、抗体の抗原結合部位の形成に寄与している（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）、６４７－６６９ページを参照）。定常ドメインは、抗体を抗原に結合させることに直接は関係しないが、抗体を抗体依存性細胞毒性に関与させるなどの様々なエフェクター機能を示す。
本明細書で使用される場合、「超可変領域」という用語は、抗原結合を担う抗体のアミノ酸残基を意味する。超可変領域は、「相補性決定領域」すなわち「ＣＤＲ」（Ｋａｂａ
ｔ，ｅｔ ａｌ．（１９９１）（上記））からのアミノ酸残基及び／または「超可変ループ」からのアミノ酸残基（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）を含む。「フレームワーク」すなわち「ＦＲ」残基は、本明細書で定義される超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。
抗体のパパイン消化により、「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれる２つの同一の抗原結合フラグメントが産生される。各Ｆａｂは単一の抗原結合部位と残部の「Ｆｃ」フラグメントとを有し、Ｆｃという名称には容易に結晶化する能力が反映されている。ペプシン処理はＦ（ａｂ’）２フラグメントをもたらす。このフラグメントは、２つの抗原結合部位を有し、依然として抗原を架橋可能である。
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識及び抗原結合部位を含む最小の抗体フラグメントである。この領域は、１つの重鎖及び１つの軽鎖可変ドメインが緊密に非共有結合的に会合した２量体からなる。この構成において、各可変ドメインの３つの超可変領域が相互作用してＶＨ－ＶＬ２量体の表面上に抗原結合部位を画定する。まとめると、６つの超可変領域は、抗体に抗原結合特異性を付与する。ただし、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つの超可変領域のみを含むＦｖの半分）であっても、全結合部位よりは親和性が低いものの、抗原を認識し、抗原に結合する能力を有する。
また、Ｆａｂフラグメントは、軽鎖の定常ドメイン及び重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）も含む。Ｆａｂ’フラグメントは、抗体ヒンジ領域からの１つ以上のシステイン（複数可）を含めたいくつかの残基が重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシル末端に付加されている点で、Ｆａｂフラグメントと相違する。Ｆａｂ’－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を有するＦａｂ’に対する本明細書における呼称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体フラグメントは、元々は、間にヒンジシステインを有するＦａｂ’フラグメントの対として産生されたものである。抗体フラグメントにおけるその他の化学的結合も知られている。
任意の脊椎動物種由来の抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２つの明確に異なるタイプの一方に割り当てることができる。
免疫グロブリンは、その重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、異なるクラスに割り当てることができる。現在、免疫グロブリンには５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが存在し、これらのいくつかはさらに、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、及びＩｇＡ２（マウス及びヒトの呼称による定義）に分類することができる。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、及びミューと呼ばれる。種々のクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造及び３次元構成は、複数の種において周知されている。これらの定常ドメインに関連する個別のアイソタイプ及び機能的活性の普及は種特異的であり、実験により定義されなければならない。
本明細書で定義される「モノクローナル抗体」とは、単一の細胞クローン（具体的には、ハイブリドーマ細胞のような単一の細胞クローン）によって産生される抗体であり、したがって単一の純粋で均質なタイプの抗体である。同じクローンから産生される全てのモノクローナル抗体は同一であり、同じ抗原特異性を有する。「モノクローナル」という用語は、単一の細胞クローン、単一の細胞、及び当該細胞の子孫に関係する。
本明細書で定義される「完全イヌ抗体」とは、細胞クローン（典型的にはＣＨＯ細胞系
）によって産生されるモノクローナル抗体であり、したがって単一の純粋で均質なタイプの抗体である。イヌなどの免疫化哺乳類の単一のＢ細胞から同定された抗体は、その可変ドメイン配列の同定後に組換え型ＩｇＧタンパク質として作成される。このような可変ドメインをイヌ定常ドメイン（重鎖及び軽鎖カッパまたはラムダ定常）に移植すると、組換え型完全イヌ抗体が生成される。同じクローンから産生される全ての完全イヌモノクローナル抗体は同一であり、同じ抗原特異性を有する。「モノクローナル」という用語は、単一の細胞クローン、単一の細胞、及び当該細胞の子孫に関係する。
本明細書で定義される「完全ネコ抗体」とは、細胞クローン（典型的にはＣＨＯ細胞系）によって産生されるモノクローナル抗体であり、したがって単一の純粋で均質なタイプの抗体である。イヌなどの免疫化哺乳類の単一のＢ細胞から同定された抗体は、その可変ドメイン配列の同定後に組換え型ＩｇＧタンパク質として作成される。このような可変ドメインをネコ定常ドメイン（重鎖及び軽鎖カッパまたはラムダ定常）に移植すると、組換え型完全ネコ抗体が生成される。同じクローンから産生される全ての完全ネコモノクローナル抗体は同一であり、同じ抗原特異性を有する。「モノクローナル」という用語は、単一の細胞クローン、単一の細胞、及び当該細胞の子孫に関係する。
本明細書で定義される「完全ウマ抗体」とは、細胞クローン（典型的にはＣＨＯ細胞系）によって産生されるモノクローナル抗体であり、したがって単一の純粋で均質なタイプの抗体である。イヌなどの免疫化哺乳類の単一のＢ細胞から同定された抗体は、その可変ドメイン配列の同定後に組換え型ＩｇＧタンパク質として作成される。このような可変ドメインをウマ定常ドメイン（重鎖及び軽鎖カッパまたはラムダ定常）に移植すると、組換え型完全ウマ抗体が生成される。同じクローンから産生される全ての完全ウマモノクローナル抗体は同一であり、同じ抗原特異性を有する。「モノクローナル」という用語は、単一の細胞クローン、単一の細胞、及び当該細胞の子孫に関係する。
本明細書におけるモノクローナル抗体には、具体的には、重鎖及び／または軽鎖の部分が、特定の種に由来する抗体内の対応する配列と同一または相同である一方で、鎖（複数可）の残部は別の種に由来する抗体内の対応する配列と同一または相同である「キメラ型」抗体（免疫グロブリン）を含み、加えて、所望の生物学的活性を示す限りでは、このような抗体のフラグメントも含む。典型的には、キメラ型抗体とは、その軽鎖及び重鎖遺伝子が、典型的には遺伝子工学により、異なる種に属する抗体可変領域及び定常領域遺伝子から構築された抗体である。例えば、マウスモノクローナル抗体からの遺伝子の可変セグメントは、イヌ定常セグメントに連結させることができる。キメラ型マウス：イヌＩｇＧの１つの実施形態において、抗原結合部位はマウスに由来し、ＦＣ部分はイヌのものである。
非イヌ（例えば、マウス）抗体の「イヌ化」形態は、非イヌ免疫グロブリン由来の最小配列を含む遺伝子操作抗体である。イヌ化抗体とは、レシピエントの超可変領域残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウスのような非イヌ種（ドナー抗体）からの超可変領域残基で置き換えられたイヌ免疫グロブリン配列（レシピエント抗体）である。いくつかの場合において、イヌ免疫グロブリン配列のフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非イヌ残基で置き換えられる。さらに、イヌ化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見られない残基を含むことができる。このような修飾は、抗体性能をさらに改良するために行われる。概して、イヌ化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、超可変領域の全てまたは実質的に全てが非イヌ免疫グロブリン配列の超可変領域に対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てがイヌ免疫グロブリン配列のＦＲである。また、イヌ化抗体は、任意選択で、完全なまたは少なくとも一部分の免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的には、完全なまたは少なくとも一部分のイヌ免疫グロブリン配列も含む。マウスＩｇＧの種分化またはイヌ化の１つの実施形態にお
いて、マウスＣＤＲがイヌフレームワークに移植される。
非ネコ（例えば、マウス）抗体の「ネコ化」形態は、非ネコ免疫グロブリンに由来する最小配列を含む遺伝子操作抗体である。ネコ化抗体とは、レシピエントの超可変領域残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウスのような非ネコ種（ドナー抗体）からの超可変領域残基で置き換えられたネコ免疫グロブリン配列（レシピエント抗体）である。いくつかの場合において、ネコ免疫グロブリン配列のフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ネコ残基で置き換えられる。さらに、ネコ化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見られない残基を含むことができる。このような修飾は、抗体性能をさらに改良するために行われる。概して、ネコ化抗体は、超可変領域の全てまたは実質的に全てが非ネコ免疫グロブリン配列の超可変領域に対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てがネコ免疫グロブリン配列のＦＲである少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含む。また、ネコ化抗体は、任意選択で、完全なまたは少なくとも一部分の免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的には、完全なまたは少なくとも一部分のネコ免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）も含む。
非ウマ（例えば、マウス）抗体の「ウマ化」形態は、非ウマ免疫グロブリンに由来する最小配列を含む遺伝子操作抗体である。ウマ化抗体とは、レシピエントの超可変領域残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウスのような非ウマ種（ドナー抗体）からの超可変領域残基で置き換えられたウマ免疫グロブリン配列（レシピエント抗体）である。いくつかの場合において、ウマ免疫グロブリン配列のフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ウマ残基で置き換えられる。さらに、ウマ化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見られない残基を含むことができる。このような修飾は、抗体性能をさらに改良するために行われる。概して、ウマ化抗体は、超可変領域の全てまたは実質的に全てが非ウマ免疫グロブリン配列の超可変領域に対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てがウマ免疫グロブリン配列のＦＲである少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含む。また、ウマ化抗体は、任意選択で、完全なまたは少なくとも一部分の免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的には、完全なまたは少なくとも一部分のウマ免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）も含む。
「完全イヌ」抗体とは、非イヌ免疫グロブリンに由来する配列を含まない遺伝子操作抗体である。完全イヌ抗体とは、超可変領域残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有する天然イヌ抗体イヌ（ドナー抗体）に由来するイヌ免疫グロブリン配列（レシピエント抗体）である。いくつかの場合において、イヌ免疫グロブリン配列のフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非イヌ残基で置き換えられる。さらに、完全イヌ抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見られない残基を含むことができ、例えば、限定されるものではないが、親和性を修飾するためのＣＤＲの変化がこれに含まれる。このような修飾は、抗体性能をさらに改良するために行われる。概して、完全イヌ抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、超可変領域の全てまたは実質的に全てがイヌ免疫グロブリン配列の超可変領域に対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てがイヌ免疫グロブリン配列のＦＲである。また、完全イヌ抗体は、任意選択で、完全なまたは少なくとも一部分の免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的には、完全なまたは少なくとも一部分のイヌ免疫グロブリン配列も含む。
「完全ネコ」抗体とは、非ネコ免疫グロブリンに由来する配列を含まない遺伝子操作抗体である。完全ネコ抗体とは、超可変領域残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有する天然ネコ抗体イヌ（ドナー抗体）に由来するネコ免疫グロブリン配列（レシピエント抗体）である。いくつかの場合において、ネコ免疫グロブリン配列のフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ネコ残基で置き換えられる。さらに、完全ネコ抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見られない残基を含むことができ、例えば、限定される
ものではないが、親和性を修飾するためのＣＤＲの変化がこれに含まれる。このような修飾は、抗体性能をさらに改良するために行われる。概して、完全ネコ抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、超可変領域の全てまたは実質的に全てがネコ免疫グロブリン配列の超可変領域に対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てがネコ免疫グロブリン配列のＦＲである。また、完全ネコ抗体は、任意選択で、完全なまたは少なくとも一部分の免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的には、完全なまたは少なくとも一部分のネコ免疫グロブリン配列も含む。
「完全ウマ」抗体とは、非ウマ免疫グロブリンに由来する配列を含まない遺伝子操作抗体である。完全ウマ抗体とは、超可変領域残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有する天然ウマ抗体イヌ（ドナー抗体）に由来するウマ免疫グロブリン配列（レシピエント抗体）である。いくつかの場合において、ウマ免疫グロブリン配列のフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ウマ残基で置き換えられる。さらに、完全ウマ抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見られない残基を含むことができ、例えば、限定されるものではないが、親和性を修飾するためのＣＤＲの変化がこれに含まれる。このような修飾は、抗体性能をさらに改良するために行われる。概して、完全ウマ抗体は、超可変領域の全てまたは実質的に全てウマ免疫グロブリン配列の超可変領域に対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てがウマ免疫グロブリン配列のＦＲである少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含む。また、完全ウマ抗体は、任意選択で、完全なまたは少なくとも一部分の免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的には、完全なまたは少なくとも一部分のウマ免疫グロブリン配列も含む。
本明細書で定義する「ヘテロキメラ型」という用語は、抗体鎖の一方（重鎖または軽鎖）がイヌ化、ネコ化、またはウマ化され、他方はキメラ型である抗体を意味する。１つの実施形態において、ネコ化可変重鎖（全てのＣＤＲがマウスであり全てのＦＲがネコである）は、キメラ型可変軽鎖（全てのＣＤＲがマウスであり全てのＦＲがマウスである）と対形成する。この実施形態では、可変重鎖及び可変軽鎖の両方をネコ定常領域と融合する。
本明細書において「バリアント」抗ＩＬ－３１抗体とは、親抗体配列における１つ以上のアミノ酸残基（複数可）の付加、欠失、及び／または置換によって「親」抗ＩＬ－３１抗体アミノ酸配列とアミノ酸配列が相違し、親抗ＩＬ－３１抗体における少なくとも１つの所望の活性を保持する分子を意味する。所望の活性としては、抗原に特異的に結合する能力、動物のＩＬ－３１活性を低減、阻害、または中和する能力、及び細胞ベースアッセイにおけるＩＬ－３１媒介性ｐＳＴＡＴシグナル伝達の阻害能力を挙げることができる。１つの実施形態において、バリアントは、親抗体の１つ以上の超可変及び／またはフレームワーク領域（複数可）に１つ以上のアミノ酸置換（複数可）を含む。例えば、バリアントは、親抗体の１つ以上の超可変及び／またはフレームワーク領域に少なくとも１つ、例えば、約１～約１０、好ましくは約２～約５の置換を含むことができる。通常、バリアントは、親抗体の重鎖または軽鎖可変ドメイン配列に対し少なくとも５０％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも６５％、より好ましくは少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。この配列に対する同一性または相同性は、本明細書では、配列を整列し必要に応じてギャップを導入して最大のパーセント配列同一性を達成した後に親抗体残基と同一である候補配列のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。抗体配列へのＮ末端側、Ｃ末端側、または内部の伸長、欠失、または挿入はいずれも、配列の同一性または相同性に影響を及ぼすとはみなさないものとする。バリアントは、ＩＬ－３１に結合する能力を保持し、好ましくは、親抗体の活性よりも優れた所望の活性を有する。例えば、バリアントは、より強力な結合親和性を有する場合も、動物のＩＬ－３１活性を低減、阻害、もしくは中
和する能力が強化される場合も、及び／または細胞ベースアッセイにおけるＩＬ－３１媒介性ｐＳＴＡＴシグナル伝達の阻害能力が強化される場合もある。
「バリアント」核酸とは、本明細書では、「親」核酸と配列が相違する分子を意味する。ポリヌクレオチド配列の相違は、１つ以上のヌクレオチドの欠失、置換、または付加のような変異による変化から生じ得る。これらの変化の各々は、所与の配列内で、単独または組合せで１回以上生じ得る。
本明細書における「親」抗体とは、バリアントの調製に使用されるアミノ酸配列によってコードされる抗体である。１つの実施形態において、親抗体は、イヌフレームワーク領域を有し、存在する場合はイヌ抗体定常領域（複数可）を有する。例えば、親抗体は、イヌ化抗体またはイヌ抗体とすることができる。別の例として、親抗体は、ネコ化抗体またはネコ抗体とすることができる。また別の例として、親抗体は、ウマ化抗体またはウマ抗体とすることができる。さらに別の例において、親抗体は、マウスモノクローナル抗体である。
本明細書及び特許請求の範囲の全体にわたって使用される「抗原結合領域」、「抗原結合部分」などの用語は、抗原と相互作用し、抗原に対するその特異性及び親和性を抗体に付与するアミノ酸残基を含む、抗体分子の部分を意味する。抗体結合領域は、抗原結合残基の適切な立体構造を維持するために必要な「フレームワーク」アミノ酸残基を含む。代替的に、本発明に従う抗体の抗原結合部分は、本明細書では、例えば、ＩＬ－３１特異的ペプチドもしくはポリペプチド、または抗ＩＬ－３１ペプチドもしくはポリペプチドと称されることがある。
「単離された」という用語は、物質（例えば、抗体または核酸）がその自然環境の構成要素から分離及び／または回収されていることを意味する。当該物質の自然環境における混入構成要素は、当該物質の診断上または治療上の使用を妨げ得る物質であり、このような構成要素としては、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質溶質または非タンパク質溶質を挙げることができる。核酸に関しては、単離核酸は、染色体内で通常会合している５’から３’への配列から分離されたものを含むことができる。好ましい実施形態において、当該物質は、物質の９５重量％超まで、最も好ましくは９９重量％超まで精製される。単離物質は、物質の自然環境における少なくとも１つの構成要素が存在しないことから、組換え型細胞内のｉｎ ｓｉｔｕの物質を含む。ただし、通常、単離物質は少なくとも１つの精製ステップによって調製される。
「標識」という語は、本明細書で使用する場合、抗体または核酸と直接的または間接的に結合体化される検出可能な化合物または組成物を意味する。標識そのものは、それ自体が検出可能であってもよく（例えば、放射性同位体標識もしくは蛍光標識）、または酵素標識の場合は、検出可能な基質化合物もしくは組成物の化学改変を触媒してもよい。
「核酸」、「ポリヌクレオチド」、「核酸分子」などの用語は本明細書では互換的に使用され得、ＤＮＡ及びＲＮＡにおける一連のヌクレオチド塩基（「ヌクレオチド」とも呼ばれる）を意味する。核酸は、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、及び／またはこれらの類似体を含むことができる。「核酸」という用語は、例えば、１本鎖及び２本鎖の分子を含む。核酸は、例えば、遺伝子または遺伝子フラグメント、エクソン、イントロン、ＤＮＡ分子（例えば、ｃＤＮＡ）、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ）、組換え型核酸、プラスミド、ならびにその他のベクター、プライマー、及びプローブであり得る。５’から３’（センス）及び３’から５’（アンチセンス）両方のポリヌクレオチドが含まれる。
「対象」または「患者」とは、本発明の分子によって影響を受ける可能性がある治療を必要とする動物を意味する。本発明に従って治療することができる動物には脊椎動物が含まれ、イヌ、ネコ、及びウマ動物のような哺乳類が特に好ましい例である。
「治療的有効量」（または「有効量」）とは、対象または患者に投与したときに有益なまたは所望の結果をもたらすのに十分な活性成分（例えば、本発明に従う薬剤）の量を意味する。有効量は、１回以上の投与、適用、または薬用量で投与することができる。本発明に従う組成物の治療有効量は、当業者によって容易に定量することができる。本発明の文脈において、「治療有効量」とは、症状の臨床的改善を含めた、掻痒状態またはアレルギー状態の治療に関連する１つ以上のパラメーターの客観的に測定された変化をもたらす量である。当然ながら、治療有効量は、治療を行う特定の対象及び状態、対象の体重及び年齢、疾患状態の重症度、選択される特定の化合物、従うべき投薬レジメン、投与のタイミング、投与方法などに応じて変動し、これらは全て当業者が容易に定量することができる。
本明細書で使用する場合、「治療的」という用語は、疾患または障害の治療の全範囲を包含する。本発明の「治療」剤は、リスクがあると同定され得る動物を標的化するように設計された手順（薬理遺伝学）を組み込むものを含めて、予防もしくは防止する方式で、または本質的に改善もしくは治癒する方式で、作用することができ、あるいは治療を行う疾患または障害の少なくとも１つの症状の進行の速度または程度を遅くするように作用することができる。
「治療」、「治療する」などは、治療処置及び予防的もしくは防止的措置のいずれも意味する。治療を必要とする動物には、既に障害を有する動物に加えて障害が防止されるべき動物が含まれる。疾患もしくは障害の「治療」またはこれらを「治療する」という用語は、疾患もしくは障害に対し防止もしくは保護すること（すなわち、臨床症状を発生させないこと）、疾患もしくは障害を阻害すること（すなわち、臨床症状の発生を阻止もしくは抑制すること）、及び／または疾患もしくは障害を緩和すること（すなわち、臨床症状を軽減すること）を含む。最終的な誘導事象（１つまたは複数）は未知または潜在的であり得るため、理解されるであろうが、疾患または障害の「防止」及び「抑制」を区別するのは必ずしも可能ではない。したがって、「予防」という用語は、「防止」及び「抑制」の両方を包含する一種の「治療」を構成するように理解されたい。したがって、「治療」という用語は「予防」を含む。
「アレルギー状態」という用語は、本明細書では、免疫システムと身体に対する異物との間の相互作用によって引き起こされる疾患または障害として定義される。この外来物質は「アレルゲン」と称される。一般的なアレルゲンとしては、空中アレルゲン、例えば、花粉、粉塵、カビ、チリダニタンパク質、虫刺されから注入された唾液などが挙げられる。アレルギー状態の例としては、限定されるものではないが、以下：アレルギー性皮膚炎、夏季湿疹、蕁麻疹、ヒーブ、炎症性気道疾患、再発性気道閉塞、気道過敏症、慢性閉塞性肺疾患、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）のような自己免疫に起因する炎症プロセスが挙げられる。
「掻痒状態」という用語は、本明細書では、皮膚をこするまたは引っ掻いて緩和を得たくなる衝動をもたらす強いかゆみ感覚を特徴とする疾患または障害として定義される。掻痒状態の例としては、限定されるものではないが、以下：アトピー性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、湿疹、乾癬、強皮症、及び掻痒が挙げられる。
本明細書で使用する場合、「細胞」、「細胞系」、及び「細胞培養物」という用語は互換的に使用され得る。これらの用語の全てはその子孫も含み、子孫はあらゆる後続の世代
である。全ての子孫は、故意のまたは偶発的な変異により、同一でない場合があることを理解されたい。異種核酸配列を発現させる文脈において、「宿主細胞」とは、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏのいずれにあるかにかかわらず、原核細胞または真核細胞（例えば、細菌細胞、酵母細胞、哺乳類細胞、及び昆虫細胞）を意味する。例えば、宿主細胞は、トランジェニック動物内にあってもよい。宿主細胞は、ベクターのレシピエントとして使用することができ、ベクターを複製可能な及び／またはベクターにコードされる異種核酸を発現可能な任意の形質転換可能な生物を含むことができる。
「組成物」とは、活性薬剤と別の化合物または組成物との組合せを意味するように意図され、別の化合物または組成物は不活性（例えば、標識）であっても活性（例えば、アジュバント）であってもよい。
本明細書で定義されるように、本発明での使用に適した医薬的に許容される担体は、当業者に周知されている。このような担体としては、限定されるものではないが、水、食塩水、緩衝食塩水、リン酸緩衝液、アルコール溶液／水溶液、乳濁液、または懸濁液が挙げられる。その他の従来的に用いられている希釈剤、アジュバント、及び賦形剤は、従来的な技法に従って添加することができる。このような担体としては、エタノール、ポリオール、及びこれらの好適な混合物、植物油、ならびに注射用有機エステルを挙げることができる。緩衝液及びｐＨ調整剤も用いることができる。緩衝液としては、限定されるものではないが、有機酸または塩基から調製される塩が挙げられる。代表的な緩衝液としては、限定されるものではないが、有機酸塩、例えば、クエン酸の塩（例えば、シトレート）、アスコルビン酸、グルコン酸、ヒスチジン－ＨＣｌ、炭酸、酒石酸、コハク酸、酢酸、もしくはフタル酸の塩、トリス、トリメタンミン塩酸塩（ｔｒｉｍｅｔｈａｎｍｉｎｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、またはリン酸緩衝液が挙げられる。非経口用担体としては、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロース、トレハロース、スクロース、及び塩化ナトリウム、乳酸リンゲルまたは固定油を挙げることができる。静注用担体としては、液体及び栄養補充液、電解質補充液、例えば、リンゲルデキストロースに基づくものなどを挙げることができる。防腐剤及びその他の添加物、例えば、抗微生物剤、抗酸化剤、キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）、不活性ガスなども医薬担体中に提供され得る。本発明は、担体の選択によって限定されるものではない。これらの医薬的に許容される組成物を適切なｐＨ等張性、安定性、及びその他の従来的な特性を有する上記の構成要素から調製することは、当業者の技能範囲内である。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ
ｅｄ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，ｐｕｂｌ．，２０００及びＴｈｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，４．ｓｕｐ．ｔｈ ｅｄｉｔ．，ｅｄｓ．Ｒ．Ｃ．Ｒｏｗｅ ｅｔ ａｌ，ＡＰｈＡ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，２００３などのテキストを参照。
「保存的アミノ酸置換」という用語は、所与のアミノ酸残基の任意のアミノ酸置換を示すものであり、置換残基は所与の残基と非常に化学的に類似するため、ポリペプチド機能（例えば、酵素活性）が実質的に低下しない。保存的アミノ酸置換は、当技術分野で一般に知られており、その例は、例えば、米国特許第６，７９０，６３９号、第６，７７４，１０７号、第６，１９４，１６７号、または第５，３５０，５７６号で説明されている。好ましい実施形態において、保存的アミノ酸置換は、以下の６つの群のうちの１つの中で生じるいずれか１つである。
１．低分子脂肪族で実質的に非極性の残基：Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、及びＴｈｒ
２．高分子脂肪族で非極性の残基：Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、及びＶａｌ；Ｍｅｔ
３．極性で負に帯電した残基及びそのアミド：Ａｓｐ及びＧｌｕ
４．極性で負に帯電した残基のアミド：Ａｓｎ及びＧｌｎ；Ｈｉｓ
５．極性で正に帯電した残基：Ａｒｇ及びＬｙｓ；Ｈｉｓ
６．高分子芳香族残基：Ｔｒｐ及びＴｙｒ；Ｐｈｅ
好ましい実施形態において、保存的アミノ酸置換は、ネイティブ残基（保存的置換）対としてリストされる以下のうちのいずれか１つである：Ａｌａ（Ｓｅｒ）；Ａｒｇ（Ｌｙｓ）；Ａｓｎ（Ｇｌｎ；Ｈｉｓ）；Ａｓｐ（Ｇｌｕ）；Ｇｌｎ（Ａｓｎ）；Ｇｌｕ（Ａｓｐ）；Ｇｌｙ（Ｐｒｏ）；Ｈｉｓ（Ａｓｎ；Ｇｌｎ）；Ｉｌｅ（Ｌｅｕ；Ｖａｌ）；Ｌｅｕ（Ｉｌｅ；Ｖａｌ）；Ｌｙｓ（Ａｒｇ；Ｇｌｎ；Ｇｌｕ）；Ｍｅｔ（Ｌｅｕ；Ｉｌｅ）；Ｐｈｅ（Ｍｅｔ；Ｌｅｕ；Ｔｙｒ）；Ｓｅｒ（Ｔｈｒ）；Ｔｈｒ（Ｓｅｒ）；Ｔｒｐ（Ｔｙｒ）；Ｔｙｒ（Ｔｒｐ；Ｐｈｅ）；及びＶａｌ（Ｉｌｅ；Ｌｅｕ）。
ポリペプチドが保存的アミノ酸置換（複数可）を含むことができるのと同様に、ポリペプチドのポリヌクレオチドも保存的コドン置換（複数可）を含むことができる。コドン置換は、発現したときに上記のように保存的アミノ酸置換をもたらす場合には、保存的であるとみなされる。また、アミノ酸置換を生じない縮重コドン置換も、本発明に従うポリヌクレオチドでは有用である。したがって、例えば、本発明の実施形態で有用な選択されたポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、それを用いて形質転換を行う発現宿主細胞によって示されるコドン使用頻度に近づけるために、または別の方法でその発現を改善するために、縮重コドン置換によって変異させてもよい。
本発明は、本明細書で説明されている特定の方法論、プロトコル、及び試薬などに限定されず、そのため変動する可能性があることを理解されたい。本明細書で使用する用語は、特定の実施形態を説明するためのものに過ぎず、本発明の範囲を限定するようには意図されていない。本発明の範囲は特許請求の範囲によってのみ定義される。
別段の定義がない限り、本明細書で説明されている抗体に関連して使用される科学用語及び技術用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有するものとする。さらに、文脈による別段の要求がない限り、単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形を含むものとする。概して、本明細書で説明されている細胞及び組織培養、分子生物学、ならびにタンパク質及びオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチド化学及びハイブリダイゼーションに関連して利用されている命名法及びこれらの技法は、当技術分野で周知され、一般的に使用されているものである。組換え型ＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、ならびに組織培養及び形質移入（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション）については、標準的な技法が使用される。
酵素反応及び精製の技法は、製造業者の仕様に従って、または当技術分野で一般的に遂行されているように、または本明細書で説明されているように実施される。上記の技法及び手順は、概して、当技術分野で周知されている従来的な方法に従って、また本明細書全体で引用され論じられている様々な全般的及びより具体的な参考文献に記載されているように、実施される。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＣＬＯＮＩＮＧ：ＬＡＢ． ＭＡＮＵＡＬ（３ｒｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂ． Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，２００１）及びＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ／Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ），１９９３を参照。本明細書で説明されている分析化学、合成有機化学、ならびに医薬品化学及び製薬化学に関連して利用されている名称、ならびにこれらの実験手順及び技法は、当技術分野で周知され一般的に使用されているものである。化学合成、化学分析、医薬の調製、製剤化、及び送達、ならびに患者の治療で標準的な技法が使用される。
作業実施例または別途指示されている場合以外では、本明細書で使用される成分または反応条件の量を表現する全ての数字は、全ての場合において「約」という用語で修飾されるものとして理解されたい。
特定された全ての特許及びその他の刊行物は、例えば、本発明と関連して使用され得るこのような刊行物で説明されている方法論を説明及び開示する目的において、参照により本明細書に明示的に援用される。これらの刊行物は、単に本出願の出願日以前に開示されたために提供するものである。
本発明は、組換え型モノクローナル抗体及びペプチド、ならびに診断手順を含めた臨床的及び科学的手順におけるこれらの使用を提供する。
分子生物学及び組換え技術の方法が出現したことにより、組換え手段によって抗体及び抗体様分子を産生し、それによって、抗体のポリペプチド構造に見られる特定のアミノ酸配列をコードする遺伝子配列を生成することが可能である。このような抗体は、当該抗体のポリペプチド鎖をコードする遺伝子配列をクローンし、または当該ポリペプチド鎖を直接合成し、合成した鎖を組み立てて特定のエピトープ及び抗原決定基に対する親和性を備えた活性４量体（Ｈ２Ｌ２）構造を形成することによって産生することができる。これにより、異なる種及び供給源から中和抗体に特徴的な配列を有する抗体を容易に産生することが可能になった。
抗体の供給源、または抗体がどのように組換え構築されているか、または抗体がどのように合成されているか、ｉｎ ｖｉｔｒｏかｉｎ ｖｉｖｏか、トランスジェニック動物の使用、実験サイズもしくは商業サイズの大規模細胞培養、トランスジェニック植物の使用、または任意のプロセス段階で生物を用いない直接的化学合成によるものかにかかわらず、全ての抗体は、同様の全体的３次元構造を有する。この構造は、しばしばＨ２Ｌ２として定められ、抗体が一般的に２つのアミノ酸軽鎖（Ｌ）と２つのアミノ酸重鎖（Ｈ）とを含むという事実を意味する。両方の鎖は、構造的に相補的な抗原標的と相互作用可能な領域を有する。標的と相互作用する領域は、「可変」または「Ｖ」領域と称され、抗原特異性が異なる抗体からのアミノ酸配列の違いによって特徴付けられる。Ｈ鎖またはＬ鎖の可変領域は、抗原標的に対し特異的に結合可能なアミノ酸配列を含む。
上記のように、本明細書及び特許請求の範囲の全体にわたって使用される「抗原結合領域」、「抗原結合部分」などの用語は、抗原と相互作用し、抗原に対するその特異性及び親和性を抗体に付与するアミノ酸残基を含む、抗体分子の部分を意味する。抗体結合領域は、抗原結合残基の適切な立体構造を維持するために必要な「フレームワーク」アミノ酸残基を含む。本発明に従う抗体の抗原結合部分は、本明細書では、例えば、ＩＬ－３１特異的ペプチドもしくはポリペプチド、または抗ＩＬ－３１ペプチドもしくはポリペプチドと称されることがある。
抗原結合領域を提供するＨ鎖またはＬ鎖の可変領域内には、特異性の異なる抗体間で極度に変動することから「超可変」と呼ばれるより小さな配列がある。このような超可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」領域とも称される。これらのＣＤＲ領域は、特定の抗原決定基構造に対する抗体の基本的な特異性の根拠となる。
ＣＤＲは、可変領域内の非連続的なアミノ酸の連なりに相当するが、種に関係なく、可変重鎖及び軽鎖領域内におけるこれらの不可欠なアミノ酸配列の位置は、可変鎖のアミノ酸配列内で同様の位置を有することが分かっている。全ての抗体の可変重鎖及び軽鎖は各々３つのＣＤＲ領域を有し、各々が他のＣＤＲ領域と隣接していない。
全ての哺乳類種において、抗体ペプチドは定常（すなわち、高度に保存された）領域及び可変領域を含み、可変領域内にはＣＤＲといわゆる「フレームワーク領域」とがあり、フレームワーク領域は、重鎖または軽鎖の可変領域内のＣＤＲ以外のアミノ酸配列から構成される。
抗体のＣＤＲ領域に認識される抗原決定基に関しては、「エピトープ」とも称される。言い換えれば、エピトープとは、抗体が認識可能であり、かつ抗体が結合可能である任意の分子のその部分を意味する（対応する抗体結合領域は、パラトープと称されることがある）。
「抗原」とは、抗体が結合可能であり、さらに、その抗原のエピトープに結合可能な抗体を産生するように動物を誘導可能である分子または分子の部分である。抗原は、１つまたは複数のエピトープを有することができる。上記で言及した特異的反応は、抗体が、高度に選択的な方法で、対応する抗体に反応し、他の抗原によって誘発され得る他の多数の抗体には反応しないことを示すように意図されている。
本発明の抗体は、インタクト免疫グロブリン分子と、その部分、フラグメント、ペプチド、及び誘導体（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｓｅ、ＣＤＲ領域、パラトープ、または抗原もしくはエピトープに結合可能な抗体の任意の部分（例えば、ポリペプチド）もしくはペプチド配列）とを含むように意図されている。抗体は、分子と特異的に反応してその分子を抗体に結合させることが可能である場合、分子に「結合可能」であるとされる。
また、本発明の抗体は、任意の既知の技法（例えば、限定されるものではないが、酵素切断、ペプチド合成、または組換え技法）によって提供されるキメラ型抗体、ヘテロキメラ型抗体、イヌ化抗体、ネコ化抗体、またはウマ化抗体、ならびにこれらのフラグメント、部分、領域、ペプチド、または誘導体も含む。本発明のこのような抗体は、イヌＩＬ－３１またはネコＩＬ－３１のうちの少なくとも１つに特異的に結合可能である。抗体のフラグメントまたは部分は、インタクト抗体のＦｃフラグメントが欠如し、血液循環からより迅速に除去される可能性があり、インタクト抗体よりも低い非特異的組織結合を有する可能性がある。抗体フラグメントの例は、当技術分野で周知された方法を用いて、例えば、（Ｆａｂフラグメントを産生するための）パパインまたは（Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを産生するための）ペプシンのような酵素によるタンパク質分解切断によって、インタクト抗体から産生することができる。例えば、Ｗａｈｌ ｅｔ ａｌ．，２４ Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．３１６－２５（１９８３）を参照。抗体の部分は、上記の方法のいずれかによって作製することも、組換え型分子の部分を発現させることによって作製することもできる。例えば、組換え型抗体のＣＤＲ領域（複数可）を単離し、適切な発現ベクター内でサブクローンすることができる。例えば、米国特許第６，６８０，０５３号を参照。
本明細書及び特許請求の範囲の全体にわたって使用される「抗原結合領域」、「抗原結合部分」などの用語は、抗原と相互作用し、抗原に対するその特異性及び親和性を抗体に付与するアミノ酸残基を含む、抗体分子の部分を意味する。抗体結合領域は、抗原結合残基の適切な立体構造を維持するために必要な「フレームワーク」アミノ酸残基を含む。代替的に、本発明に従う抗体の抗原結合部分は、本明細書では、例えば、ＩＬ－３１特異的ペプチドもしくはポリペプチド、または抗ＩＬ－３１ペプチドもしくはポリペプチドと称されることがある。
クローン１５Ｈ０５、ＺＩＬ１、ＺＩＬ８、ＺＩＬ９、ＺＩＬ１１、ＺＩＬ６９、ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、ＺＩＬ１５９、ＺＩＬ１７１、０４Ｈ０７、及び０６Ａ０９のヌ
クレオチド及びアミノ酸配列
いくつかの実施形態において、本発明は、イヌＩＬ－３１、ネコＩＬ－３１、またはウマＩＬ－３１のうちの少なくとも１つに特異的に結合する新規のモノクローナル抗体を提供する。１つの実施形態において、本発明のモノクローナル抗体は、イヌＩＬ－３１、ネコＩＬ－３１、またはウマＩＬ－３１に結合し、ＩＬ－３１受容体Ａ（ＩＬ－３１Ｒａ）及びオンコスタチンＭ特異的受容体（ＯｓｍＲまたはＩＬ－３１Ｒｂ）を含む共受容体へのその結合及び活性化を防止する。本発明のモノクローナル抗体は、本明細書では「１５Ｈ０５」、「ＺＩＬ１」、「ＺＩＬ８」、「ＺＩＬ９」、「ＺＩＬ１１」、「ＺＩＬ６９」、「ＺＩＬ９４」、「ＺＩＬ１５４」、「ＺＩＬ１５９」、「ＺＩＬ１７１」、０４Ｈ０７、及び０６Ａ０９として同定され、これはそのクローンに割り当てられた番号を意味する。また、本明細書では、「１５Ｈ０５」、「ＺＩＬ１」、「ＺＩＬ８」、「ＺＩＬ９」、「ＺＩＬ１１」、「ＺＩＬ６９」、「ＺＩＬ９４」、「ＺＩＬ１５４」、「ＺＩＬ１５９」、「ＺＩＬ１７１」、「０４Ｈ０７」、及び「０６Ａ０９」は、それぞれ１５Ｈ０５、ＺＩＬ１、ＺＩＬ８、ＺＩＬ９、ＺＩＬ１１、ＺＩＬ６９、ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、ＺＩＬ１５９、ＺＩＬ１７１、０４Ｈ０７、及び０６Ａ０９抗体に結合する能力を有することから１５Ｈ０５、ＺＩＬ１、ＺＩＬ８、ＺＩＬ９、ＺＩＬ１１、ＺＩＬ６９、ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、ＺＩＬ１５９、ＺＩＬ１７１、０４Ｈ０７、及び０６Ａ０９として同定されるＩＬ－３１エピトープと特異的に結合するモノクローナル抗体の部分、ＣＤＲ、またはパラトープも意味する。本明細書で説明されている１５Ｈ０５、ＺＩＬ１、ＺＩＬ８、ＺＩＬ９、ＺＩＬ１１、ＺＩＬ６９、ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、ＺＩＬ１５９、ＺＩＬ１７１、０４Ｈ０７、及び０６Ａ０９のいくつかの組換え型、キメラ型、ヘテロキメラ型、イヌ化、ネコ化、ウマ化、完全イヌ、完全ネコ、及び／または完全ウマ形態は、同じ名称で称される場合がある。いくつかの実施形態において、１５Ｈ０５は、少なくとも同じＣＤＲを共有することから、本明細書では代替的に１５０５と称される場合がある。
１つの実施形態において、本発明は、哺乳類ＩＬ－３１タンパク質とその共受容体との相互作用に関与する哺乳類ＩＬ－３１タンパク質上の領域に特異的に結合するモノクロナル抗体であって、当該抗体の当該領域との結合が、以下：ａ）配列番号１５７（ネコ＿ＩＬ３１＿野生型）によって表されるネコＩＬ－３１配列のアミノ酸残基約１２４から１３５の間の領域、ｂ）配列番号１５５（イヌ＿ＩＬ３１）によって表されるイヌＩＬ－３１配列のアミノ酸残基約１２４から１３５の間の領域、及びｃ）配列番号１６５（ウマ＿ＩＬ３１）によって表されるウマＩＬ－３１のアミノ酸残基約１１８から１２９の間の領域のうちの少なくとも１つから選択される１５Ｈ０５エピトープ結合領域の変異によって影響を受ける、モノクローナル抗体、またはその抗原結合部分を提供する。１つの実施形態において、１５Ｈ０５エピトープ結合領域内の変異は、以下：（ａ）配列番号１５７の１２６位及び１２８位がアラニンに変化した変異型、（ｂ）配列番号１５５の１２６位及び１２８位がアラニンに変化した変異型、ならびに（ｃ）配列番号１６５の１２０位及び１２２位がアラニンに変化した変異型のうちの少なくとも１つから選択される。
特定の１つの実施形態において、本発明による抗体は、上記の１５Ｈ０５エピトープ結合領域に結合する。すなわち、１つの実施形態において、本発明は、哺乳類ＩＬ－３１タンパク質とその共受容体との相互作用に関与する哺乳類ＩＬ－３１タンパク質上の領域に特異的に結合するモノクロナル抗体であって、結合領域が、以下：ａ）配列番号１５７（ネコ＿ＩＬ３１＿野生型）によって表されるネコＩＬ－３１配列のアミノ酸残基約１２４から１３５の間の領域、ｂ）配列番号１５５（イヌ＿ＩＬ３１）によって表されるイヌＩＬ－３１配列のアミノ酸残基約１２４から１３５の間の領域、及びｃ）配列番号１６５（ウマ＿ＩＬ３１）によって表されるウマＩＬ－３１のアミノ酸残基約１１８から１２９の間の領域のうちの少なくとも１つから選択される、モノクローナル抗体、またはその抗原結合部分を提供する。
１つの実施形態において、抗体またはその抗原結合部分が特異的に結合する哺乳類ＩＬ－３１はネコＩＬ－３１であり、このとき、抗体は、配列番号１５７（ネコ＿ＩＬ３１＿野生型）によって表されるネコＩＬ－３１配列のアミノ酸残基約１２５から１３４の間の領域に結合する。いくつかの実施形態において、ネコＩＬ３１に結合する抗体は、以下：４２位のリジンからアスパラギンへの置換、４３位のバリンからイソロイシンへの置換、４６位のロイシンからバリンへの置換、４９位のリジンからアスパラギンへの置換、及びこれらの組合せから選択されるフレームワーク２（ＦＷ２）変化を含むＶＬ鎖を含み、このとき、これらの位置は配列番号１２７（ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１）のナンバリングに準拠している。
１つの実施形態において、モノクローナル抗体またはその抗原結合部分は、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列の組合せ：
１）抗体１５Ｈ０５：可変重鎖（ＶＨ）－ＣＤＲ１がＳＹＴＩＨ（配列番号１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＮＩＮＰＴＳＧＹＴＥＮＮＱＲＦＫＤ（配列番号２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＷＧＦＫＹＤＧＥＷＳＦＤＶ（配列番号３）、可変軽鎖（ＶＬ）－ＣＤＲ１がＲＡＳＱＧＩＳＩＷＬＳ（配列番号４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＡＳＮＬＨＩ（配列番号５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＬＱＳＱＴＹＰＬＴ（配列番号６）、または
２）ＶＨまたはＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３のうちの少なくとも１つにおける１つ以上のアミノ酸残基の付加、欠失、及び／または置換によって親抗体１５Ｈ０５と相違する、１）のバリアント
を含む。
１つの実施形態において、上記の抗体１５Ｈ０５は、以下の可変重鎖及び／または可変軽鎖：
ａ）ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２：ＥＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＰＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＩＷＬＳＷＹＱＱＫＰＧＮＩＰＫＶＬＩＮＫＡＳＮＬＨＩＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＡＡＴＹＹＣＬＱＳＱＴＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１３５）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１：ＱＶＬＬＶＱＳＧＡＥＶＲＴＰＧＡＳＶＫＩＦＣＫＡＳＧＹＳＦＴＳＹＴＩＨＷＬＲＱＡＰＡＱＧＬＥＷＭＧＮＩＮＰＴＳＧＹＴＥＮＮＱＲＦＫＤＲＬＴＬＴＡＤＴＳＴＮＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＡＤＴＡＭＹＹＣＡＲＷＧＦＫＹＤＧＥＷＳＦＤＶＷＧＡＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号１２１）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含む。
別の実施形態において、モノクローナル抗体またはその抗原結合部分は、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列の組合せ：
１）抗体ＺＩＬ１：可変重鎖（ＶＨ）－ＣＤＲ１がＳＹＧＭＳ（配列番号１３）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＨＩＮＳＧＧＳＳＴＹＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号１４）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＶＹＴＴＬＡＡＦＷＴＤＮＦＤＹ（配列番号１５）、可変軽鎖（ＶＬ）－ＣＤＲ１がＳＧＳＴＮＮＩＧＩＬＡＡＴ（配列番号１６）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＳＤＧＮＲＰＳ（配列番号１７）、及びＶＬ－ＣＤＲ３がＱＳＦＤＴＴＬＤＡＹＶ（配列番号１８）、
２）抗体ＺＩＬ８：ＶＨ－ＣＤＲ１がＤＹＡＭＳ（配列番号１９）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＧＩＤＳＶＧＳＧＴＳＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号２０）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＦＰＧＳＦＥＨ（配列番号２１）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＴＧＳＳＳＮＩＧＳＧＹＶＧ（配列番号２２）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＹＮＳＤＲＰＳ（配列番号２３）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＳＶＹＤＲＴＦＮＡＶ（配列番号２４）、
３）抗体ＺＩＬ９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＤＭＴ（配列番号２５）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＤＶＮＳＧＧＴＧＴＡＹＡＶＡＶＫＧ（配列番号２６）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＬＧＶＲＤＧＬＳＶ（配列番号２７）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＮＥＹＹＴＱ（配列番号２８）、Ｖ
Ｌ－ＣＤＲ２がＲＤＴＥＲＰＳ（配列番号２９）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＤＴＧＴＬＶ（配列番号３０）、
４）抗体ＺＩＬ１１：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＶＭＮ（配列番号３１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号３２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＳＭＶＧＰＦＤＹ（配列番号３３）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＳＮＹＹＡＱ（配列番号３４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号３５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶ（配列番号３６）、
５）抗体ＺＩＬ６９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＡＭＫ（配列番号３７）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＴＩＮＮＤＧＴＲＴＧＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号３８）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＮＡＥＳＧＣＴＧＤＨＣＰＰＹ（配列番号３９）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＮＫＹＹＡＱ（配列番号４０）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号４１）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＥＴＮＶ（配列番号４２）、
６）抗体ＺＩＬ９４：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＦＭＳ（配列番号４３）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＬＩＳＳＤＧＳＧＴＹＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号４４）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＦＷＲＡＦＮＤ（配列番号４５）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＧＬＮＳＧＳＶＳＴＳＮＹＰＧ（配列番号４６）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＤＴＧＳＲＰＳ（配列番号４７）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＳＬＹＴＤＳＤＩＬＶ（配列番号４８）、
７）抗体ＺＩＬ１５４：ＶＨ－ＣＤＲ１がＤＲＧＭＳ（配列番号４９）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＹＩＲＹＤＧＳＲＴＤＹＡＤＡＶＥＧ（配列番号５０）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＷＤＧＳＳＦＤＹ（配列番号５１）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＡＳＱＳＬＬＨＳＤＧＮＴＹＬＤ（配列番号５２）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＶＳＮＲＤＰ（配列番号５３）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＭＱＡＩＨＦＰＬＴ（配列番号５４）、
８）抗体ＺＩＬ１５９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＶＭＴ（配列番号５５）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＧＩＮＳＥＧＳＲＴＡＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号５６）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＤＩＶＡＴＧＴＳＹ（配列番号５７）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＴＬＮＲＦＹＴＱ（配列番号５８）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号５９）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＫＳＡＶＳＩＤＶＧＶ（配列番号６０）、
９）抗体ＺＩＬ１７１：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＶＭＮ（配列番号６１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号６２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＳＭＶＧＰＦＤＹ（配列番号６３）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＫＳＬＳＹＹＹＡＱ（配列番号６４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号６５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶ（配列番号６６）、
１０）抗体０４Ｈ０７：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＷＭＮ（配列番号２００）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＭＩＤＰＳＤＳＥＩＨＹＮＱＶＦＫＤ（配列番号２０１）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＱＤＩＶＴＴＶＤＹ（配列番号２０２）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＳＳＱＳＬＬＹＳＩＮＱＫＮＨＬＡ（配列番号２０３）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号２０４）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＱＱＧＹＴＹＰＦＴ（配列番号２０５）、
１１）抗体０６Ａ０９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＷＭＮ（配列番号２０６）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＭＩＤＰＳＤＳＥＴＨＹＮＱＩＦＲＤ（配列番号２０７）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＱＤＩＶＴＴＶＤＹ（配列番号２０８）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＳＳＱＳＬＬＹＳＩＮＱＫＮＦＬＡ（配列番号２０９）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号２１０）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＱＱＨＹＧＹＰＦＴ（配列番号２１１）、または
１２）ＶＨまたはＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３のうちの少なくとも１つにおける１つ以上のアミノ酸残基の付加、欠失、及び／または置換によってそれぞれの親抗体ＺＩＬ１、ＺＩＬ８、ＺＩＬ９、ＺＩＬ１１、ＺＩＬ６９、ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、ＺＩＬ１５９、ＺＩＬ１７１、０４Ｈ０７、もしくは０６Ａ０９と相違する、１）～１１）のバリアント を含む。
本発明のいくつかの実施形態において、
１）抗体ＺＩＬ１は、以下：
ａ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１＿ＶＬ：
ＱＳＶＬＴＱＰＴＳＶＳＧＳＬＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＴＮＮＩＧＩＬＡＡＴＷＹＱＱＬＰＧＫＡＰＫＶＬＶＹＳＤＧＮＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＮＳＡＴＬＴＩＴＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＦＤＴＴＬＤＡＹＶＦＧＳＧＴＱＬＴＶＬ（配列番号７７）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１＿ＶＨ：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＱＷＶＡＨＩＮＳＧＧＳＳＴＹＹＡＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＥＶＹＴＴＬＡＡＦＷＴＤＮＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７５）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、
２）抗体ＺＩＬ８は、以下：
ａ）ＣＡＮ－ＺＩＬ８＿ＶＬ：
ＱＳＶＬＴＱＰＡＳＶＳＧＳＬＧＱＫＶＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＳＧＹＶＧＷＹＱＱＬＰＧＴＧＰＲＴＬＩＹＹＮＳＤＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＲＳＧＴＴＡＴＬＴＩＳＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＳＶＹＤＲＴＦＮＡＶＦＧＧＧＴ（配列番号８１）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＣＡＮ－ＺＩＬ８＿ＶＨ：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＡＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＤＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＲＧＬＱＷＶＡＧＩＤＳＶＧＳＧＴＳＹＡＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＡＫＮＴＬＹＬＱＭＦＮＬＲＡＥＤＴＡＩＹＹＣＡＳＧＦＰＧＳＦＥＨＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７９）のうちの少なくとも１つを含み、または抗体ＺＩＬ８は、以下：
ｃ）ＺＴＳ＿５８６４＿ＶＬ：ＱＳＶＬＴＱＰＳＳＶＳＧＴＬＧＱＲＩＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＳＧＹＶＧＷＹＱＱＶＰＧＭＧＰＫＴＶＩＹＹＮＳＤＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＳＳＧＴＬＴＩＴＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＳＶＹＤＲＴＦＮＡＶＦＧＧＧＴＨＬＴＶＬＧＱＰＫＳＡＰＰＲＳＨＳＳＲＰＩＳＹＡＶＦＣＬ（配列番号２３０）を含む可変軽鎖、及び
ｄ）ＺＴＳ＿５８６４＿ＶＨ：ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＴＣＶＡＳＧＦＴＦＳＤＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＱＷＶＡＧＩＤＳＶＧＳＧＴＳＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＴＹＹＣＡＳＧＦＰＧＳＦＥＨＷＧＱＧＡＬＶＴＶＳＳ（配列番号２２８）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、または
抗体ＺＩＬ８は、以下：
ｅ）ＺＴＳ＿５８６５＿ＶＬ：
ＳＶＬＴＱＰＳＳＶＳＧＴＬＧＱＲＩＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＳＧＹＶＧＷＹＱＱＶＰＧＭＧＰＫＴＶＩＹＹＮＳＤＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＳＳＧＴＬＴＩＴＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＳＶＹＤＲＴＦＮＡＶＦＧＧＧＴＨＬＴＶＬＧＱＰＫＳＡＰＰＲＳＨＳＳＲＰＩＳＹＡＶＦＣＬ（配列番号２３４）を含む可変軽鎖、及び
ｆ）ＺＴＳ＿５８６５＿ＶＨ：
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＴＣＶＡＳＧＦＴＦＳＤＹＡＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＱＷＶＡＧＩＤＳＶＧＳＧＴＳＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＳＧＬＫＴＥＤＴＡＴＹＹＣＡＳＧＦＰＧＳＦＥＨＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２３２）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、
３）抗体ＺＩＬ９は、以下：
ａ）ＣＡＮ－ＺＩＬ９＿ＶＬ：ＳＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＬＧＱＴＡＴＩＳＣＳＧＥＳＬＮＥＹＹＴＱＷＦＱＱＫＡＧＱＡＰＶＬＶＩＹＲＤＴＥＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＳＳＧＮＴＨＴＬＴＩＳＧＡＲＡＥＤＥＡＤＹＹＣＥＳＡＶＤＴＧＴＬＶＦＧＧＧＴＨＬＡＶＬ（配列番号８５）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＣＡＮ－ＺＩＬ９＿ＶＨ：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＰＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＳＹＤＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＱＷＶＡＤＶＮＳＧＧＴＧＴＡＹＡＶＡＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＫＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＬＧＶＲＤＧＬＳＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８３）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、
４）抗体ＺＩＬ１１は、以下：
ａ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１１＿ＶＬ：ＳＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＬＧＱＴＡＴＩＳＣＳＧＥＳＬＳＮＹＹＡＱＷＦＱＱＫＡＧＱＡＰＶＬＶＩＹＫＤＴＥＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＳＳＧＮＴＨＴＬＴＩＳＧＡＲＡＥＤＥＡＤＹＹＣＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶＦＧＧＧＴ（配列番号８９）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１１＿ＶＨ：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＡＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＲＴＹＶＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＱＷＶＡＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧＲＦＴＶＳＲＤＮＡＱＮＳＬＦＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＶＶＳＭＶＧＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８７）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、
５）抗体ＺＩＬ６９は、以下：
ａ）ＣＡＮ－ＺＩＬ６９＿ＶＬ：ＳＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＬＧＱＴＡＴＩＳＣＳＧＥＳＬＮＫＹＹＡＱＷＦＱＱＫＡＧＱＡＰＶＬＶＩＹＫＤＴＥＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＳＡＧＮＴＨＴＬＴＩＳＧＡＲＡＥＤＥＡＤＹＹＣＥＳＡＶＳＳＥＴＮＶＦＧＳＧＴＱＬＴＶＬ（配列番号９３）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＣＡＮ－ＺＩＬ６９＿ＶＨ：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＡＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＫＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＱＷＶＡＴＩＮＮＤＧＴＲＴＧＹＡＤＡＶＲＧＲＦＴＩＳＫＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＤＳＬＲＡＤＤＴＡＶＹＹＣＴＫＧＮＡＥＳＧＣＴＧＤＨＣＰＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号９１）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、
６）抗体ＺＩＬ９４は、以下：
ａ）ＣＡＮ－ＺＩＬ９４＿ＶＬ：ＱＴＶＶＩＱＥＰＳＬＳＶＳＰＧＧＴＶＴＬＴＣＧＬＮＳＧＳＶＳＴＳＮＹＰＧＷＹＱＱＴＲＧＲＴＰＲＴＩＩＹＤＴＧＳＲＰＳＧＶＰＮＲＦＳＧＳＩＳＧＮＫＡＡＬＴＩＴＧＡＱＰＥＤＥＡＤＹＹＣＳＬＹＴＤＳＤＩＬＶＦＧＧＧＴＨＬＴＶＬ（配列番号９７）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＣＡＮ－ＺＩＬ９４＿ＶＨ：ＥＶＱＬＶＤＳＧＧＤＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＴＹＦＭＳＷＶＲＱＡＰＧＲＧＬＱＷＶＡＬＩＳＳＤＧＳＧＴＹＹＡＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＩＦＷＲＡＦＮＤＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号９５）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、
７）抗体ＺＩＬ１５４は、以下：
ａ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１５４＿ＶＬ：ＤＩＶＶＴＱＴＰＬＳＬＳＶＳＰＧＥＴＡＳＦＳＣＫＡＳＱＳＬＬＨＳＤＧＮＴＹＬＤＷＦＲＱＫＰＧＱＳＰＱＲＬＩＹＫＶＳＮＲＤＰＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＲＩＳＧＶＥＡＤＤＡＧＬＹＹＣＭＱＡＩＨＦＰＬＴＦＧＡＧＴＫＶＥＬＫ（配列番号１０１）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１５４＿ＶＨ：ＥＶＨＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＷＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＤＲＧＭＳＷＶＲＱＳＰＧＫＧＬＱＷＶＡＹＩＲＹＤＧＳＲＴＤＹＡＤＡＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＷＤＧＳＳＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号９９）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、
８）抗体ＺＩＬ１５９は、以下：
ａ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１５９＿ＶＬ：ＳＮＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＬＧＱＴＡＴＩＳＣＳＧＥＴＬＮＲＦＹＴＱＷＦＱＱＫＡＧＱＡＰＶＬＶＩＹＫＤＴＥＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＳＳＧＮＩＨＴＬＴＩＳＧＡＲＡＥＤＥＡＡＹＹＣＫＳＡＶＳＩＤＶＧＶＦＧＧＧＴＨＬＴＶＦ（配列番号１０５）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１５９＿ＶＨ：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＡＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＳＹＶＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＱＷＶＡＧＩＮＳＥＧＳＲＴＡＹＡＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＩＤＳＬＲＡＥＤＴＡＩＹＹＣＡＴＧＤＩＶＡＴＧＴＳＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１０３）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、
９）抗体ＺＩＬ１７１は、以下：
ａ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１７１＿ＶＬ：ＳＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＬＧＱＴＡＴＩＳＣＳＧＫＳＬＳＹＹＹＡＱＷＦＱＱＫＡＧＱＡＰＶＬＶＩＹＫＤＴＥＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＳＳＧＮＴＨＴＬＴＩＳＧＡＲＡＥＤＥＡＤＹＹＣＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶＦＧＧＧＴＨＬＴＶＬ（配列番号１０９）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１７１＿ＶＨ：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＡＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＲＴＹＶＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＱＷＶＡＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧＲＦＴＶＳＲＤＮＡＱＮＳＬＦＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＩＹＦＣＶＶＳＭＶＧＰＦＤＹＷＧＨＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１０７）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、
１０）抗体０４Ｈ０７は、以下：
ａ）Ｍｕ＿０４Ｈ０７＿ＶＬ：
ＤＩＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＩＮＱＫＮＨＬＡＷＦＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＡＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＴＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＧＹＴＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号２１４）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）Ｍｕ＿０４Ｈ０７＿ＶＨ：
ＱＶＱＬＱＱＰＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＮＷＡＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＭＩＤＰＳＤＳＥＩＨＹＮＱＶＦＫＤＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＱＤＩＶＴＴＶＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号２１２）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、
１１）抗体０６Ａ０９は、以下：
ａ）Ｍｕ＿０６Ａ０９＿ＶＬ：ＤＩＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＩＮＱＫＮＦＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＳＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＨＹＧＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号２１８）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）Ｍｕ＿０６Ａ０９＿ＶＨ：
ＱＶＱＬＱＱＰＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＹＧＹＴＦＴＳＹＷＭＮＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＭＩＤＰＳＤＳＥＴＨＹＮＱＩＦＲＤＫＡＴＬＴＩＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＱＤＩＶＴＴＶＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号２１６）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含む。
他の実施形態において、本発明は、上記の抗体を産生する宿主細胞を提供する。
また、本発明は、本発明の範囲内において、本発明の抗ＩＬ－３１抗体の軽鎖及び重鎖の可変領域をコードするヌクレオチド配列も含む。また、本発明の範囲内には、１５Ｈ０５、ＺＩＬ１、ＺＩＬ８、ＺＩＬ９、ＺＩＬ１１、ＺＩＬ６９、ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、ＺＩＬ１５９、ＺＩＬ１７１、０４Ｈ０７、０６Ａ０９、またはこれらのＩＬ－３１特異的ポリペプチドもしくはペプチドのアミノ酸配列をコードする任意のヌクレオチド配列も含まれる。
いくつかの実施形態において、本発明は、以下の可変重鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列の組合せ：
１）１５Ｈ０５：可変重鎖（ＶＨ）－ＣＤＲ１がＳＹＴＩＨ（配列番号１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＮＩＮＰＴＳＧＹＴＥＮＮＱＲＦＫＤ（配列番号２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＷＧＦＫＹＤＧＥＷＳＦＤＶ（配列番号３）、
２）ＺＩＬ１：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＧＭＳ（配列番号１３）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＨＩＮＳＧＧＳＳＴＹＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号１４）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＶＹＴＴＬＡＡＦＷＴＤＮＦＤＹ（配列番号１５）、
３）ＺＩＬ８：ＶＨ－ＣＤＲ１がＤＹＡＭＳ（配列番号１９）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＧＩＤＳＶＧＳＧＴＳＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号２０）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＦＰＧＳＦＥＨ（配列番号２１）、
４）ＺＩＬ９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＤＭＴ（配列番号２５）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＤＶＮＳＧＧＴＧＴＡＹＡＶＡＶＫＧ（配列番号２６）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＬＧＶＲＤＧＬＳＶ（配列番号２７）、
５）ＺＩＬ１１：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＶＭＮ（配列番号３１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号３２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＳＭＶＧＰＦＤＹ（配列番号３３）、
６）ＺＩＬ６９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＡＭＫ（配列番号３７）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＴＩＮＮＤＧＴＲＴＧＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号３８）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＮＡＥＳＧＣＴＧＤＨＣＰＰＹ（配列番号３９）、
７）ＺＩＬ９４：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＦＭＳ（配列番号４３）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＬＩＳＳＤＧＳＧＴＹＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号４４）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＦＷＲＡＦＮＤ（配列番号４５）、
８）ＺＩＬ１５４：ＶＨ－ＣＤＲ１がＤＲＧＭＳ（配列番号４９）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＹＩＲＹＤＧＳＲＴＤＹＡＤＡＶＥＧ（配列番号５０）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＷＤＧＳＳＦＤＹ（配列番号５１）、
９）ＺＩＬ１５９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＶＭＴ（配列番号５５）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＧＩＮＳＥＧＳＲＴＡＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号５６）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＤＩＶＡＴＧＴＳＹ（配列番号５７）、
１０）ＺＩＬ１７１：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＶＭＮ（配列番号６１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号６２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＳＭＶＧＰＦＤＹ（配列番号６３）、
１１）０４Ｈ０７：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＷＭＮ（配列番号２００）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＭＩＤＰＳＤＳＥＩＨＹＮＱＶＦＫＤ（配列番号２０１）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＱＤＩＶＴＴＶＤＹ（配列番号２０２）、
１２）０６Ａ０９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＷＭＮ（配列番号２０６）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＭＩＤＰＳＤＳＥＴＨＹＮＱＩＦＲＤ（配列番号２０７）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＱＤＩＶＴＴＶＤＹ（配列番号２０８）、または
１３）ＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３のうちの少なくとも１つにおける１つ以上のアミノ酸残基の付加、欠失、及び／または置換によってそれぞれの親抗体１５Ｈ０５、ＺＩＬ１、ＺＩＬ８、ＺＩＬ９、ＺＩＬ１１、ＺＩＬ６９、ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、ＺＩＬ１５９、ＺＩＬ１７１、０４Ｈ０７、もしくは０６Ａ０９のＣＤＲと相違する、１）～１２）のバリアント
のうちの少なくとも１つをコードする核酸配列を含む、単離核酸を提供する。
１つの実施形態において、上記の単離核酸はさらに、以下の可変軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列の組合せ：
１）１５Ｈ０５：可変軽鎖（ＶＬ）－ＣＤＲ１がＲＡＳＱＧＩＳＩＷＬＳ（配列番号４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＡＳＮＬＨＩ（配列番号５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＬＱＳＱＴＹＰＬＴ（配列番号６）、
２）ＺＩＬ１：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＳＴＮＮＩＧＩＬＡＡＴ（配列番号１６）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＳＤＧＮＲＰＳ（配列番号１７）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＱＳＦＤＴＴＬＤＡＹＶ
（配列番号１８）、
３）ＺＩＬ８：ＶＬ－ＣＤＲ１がＴＧＳＳＳＮＩＧＳＧＹＶＧ（配列番号２２）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＹＮＳＤＲＰＳ（配列番号２３）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＳＶＹＤＲＴＦＮＡＶ（配列番号２４）、
４）ＺＩＬ９：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＮＥＹＹＴＱ（配列番号２８）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＲＤＴＥＲＰＳ（配列番号２９）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＤＴＧＴＬＶ（配列番号３０）、
５）ＺＩＬ１１：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＳＮＹＹＡＱ（配列番号３４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号３５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶ（配列番号３６）、
６）ＺＩＬ６９：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＮＫＹＹＡＱ（配列番号４０）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号４１）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＥＴＮＶ（配列番号４２）、
７）ＺＩＬ９４：ＶＬ－ＣＤＲ１がＧＬＮＳＧＳＶＳＴＳＮＹＰＧ（配列番号４６）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＤＴＧＳＲＰＳ（配列番号４７）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＳＬＹＴＤＳＤＩＬＶ（配列番号４８）、
８）ＺＩＬ１５４：ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＡＳＱＳＬＬＨＳＤＧＮＴＹＬＤ（配列番号５２）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＶＳＮＲＤＰ（配列番号５３）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＭＱＡＩＨＦＰＬＴ（配列番号５４）、
９）ＺＩＬ１５９：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＴＬＮＲＦＹＴＱ（配列番号５８）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号５９）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＫＳＡＶＳＩＤＶＧＶ（配列番号６０）、
１０）ＺＩＬ１７１：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＫＳＬＳＹＹＹＡＱ（配列番号６４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号６５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶ（配列番号６６）、
１１）０４Ｈ０７：ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＳＳＱＳＬＬＹＳＩＮＱＫＮＨＬＡ（配列番号２０３）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号２０４）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＱＱＧＹＴＹＰＦＴ（配列番号２０５）、
１２）０６Ａ０９：ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＳＳＱＳＬＬＹＳＩＮＱＫＮＦＬＡ（配列番号２０９）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号２１０）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＱＱＨＹＧＹＰＦＴ（配列番号２１１）、または
１３）ＶＨまたはＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３のうちの少なくとも１つにおける１つ以上のアミノ酸残基の付加、欠失、及び／または置換によってそれぞれの親抗体１５Ｈ０５、ＺＩＬ１、ＺＩＬ８、ＺＩＬ９、ＺＩＬ１１、ＺＩＬ６９、ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、ＺＩＬ１５９、ＺＩＬ１７１、０４Ｈ０７、もしくは０６Ａ０９のＣＤＲと相違する、１）～１２）のバリアント
のうちの少なくとも１つをコードする核酸配列を含むことができる。
１つの実施形態において、本発明は、以下の可変軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列の組合せ：
１）１５Ｈ０５：可変軽鎖（ＶＬ）－ＣＤＲ１がＲＡＳＱＧＩＳＩＷＬＳ（配列番号４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＡＳＮＬＨＩ（配列番号５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＬＱＳＱＴＹＰＬＴ（配列番号６）、
２）ＺＩＬ１：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＳＴＮＮＩＧＩＬＡＡＴ（配列番号１６）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＳＤＧＮＲＰＳ（配列番号１７）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＱＳＦＤＴＴＬＤＡＹＶ（配列番号１８）、
３）ＺＩＬ８：ＶＬ－ＣＤＲ１がＴＧＳＳＳＮＩＧＳＧＹＶＧ（配列番号２２）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＹＮＳＤＲＰＳ（配列番号２３）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＳＶＹＤＲＴＦＮＡＶ（配列番号２４）、
４）ＺＩＬ９：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＮＥＹＹＴＱ（配列番号２８）、ＶＬ－ＣＤ
Ｒ２がＲＤＴＥＲＰＳ（配列番号２９）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＤＴＧＴＬＶ（配列番号３０）、
５）ＺＩＬ１１：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＳＮＹＹＡＱ（配列番号３４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号３５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶ（配列番号３６）、
６）ＺＩＬ６９：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＮＫＹＹＡＱ（配列番号４０）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号４１）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＥＴＮＶ（配列番号４２）、
７）ＺＩＬ９４：ＶＬ－ＣＤＲ１がＧＬＮＳＧＳＶＳＴＳＮＹＰＧ（配列番号４６）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＤＴＧＳＲＰＳ（配列番号４７）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＳＬＹＴＤＳＤＩＬＶ（配列番号４８）、
８）ＺＩＬ１５４：ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＡＳＱＳＬＬＨＳＤＧＮＴＹＬＤ（配列番号５２）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＶＳＮＲＤＰ（配列番号５３）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＭＱＡＩＨＦＰＬＴ（配列番号５４）、
９）ＺＩＬ１５９：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＴＬＮＲＦＹＴＱ（配列番号５８）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号５９）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＫＳＡＶＳＩＤＶＧＶ（配列番号６０）、
１０）ＺＩＬ１７１：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＫＳＬＳＹＹＹＡＱ（配列番号６４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号６５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶ（配列番号６６）、
１１）０４Ｈ０７：ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＳＳＱＳＬＬＹＳＩＮＱＫＮＨＬＡ（配列番号２０３）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号２０４）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＱＱＧＹＴＹＰＦＴ（配列番号２０５）、
１２）０６Ａ０９：ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＳＳＱＳＬＬＹＳＩＮＱＫＮＦＬＡ（配列番号２０９）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号２１０）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＱＱＨＹＧＹＰＦＴ（配列番号２１１）、または
１３）ＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３のうちの少なくとも１つにおける１つ以上のアミノ酸残基の付加、欠失、及び／または置換によってそれぞれの親抗体１５Ｈ０５、ＺＩＬ１、ＺＩＬ８、ＺＩＬ９、ＺＩＬ１１、ＺＩＬ６９、ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、ＺＩＬ１５９、ＺＩＬ１７１、０４Ｈ０７、もしくは０６Ａ０９のＣＤＲと相違する、１）～１２）のバリアント
のうちの少なくとも１つをコードする核酸配列を含む、単離核酸を提供する。
本発明はさらに、上記の核酸のうちの少なくとも１つを含むベクターを提供する。
以下でさらに詳細に説明するように、上記の可変重鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列の組合せのうちの少なくとも１つをコードする核酸配列は、上記の可変軽鎖のＣＤＲ配列の組合せのうちの少なくとも１つをコードする核酸配列と共に、同じベクターに含まれてもよい。代替的に、上記の可変軽鎖のＣＤＲ配列の組合せのうちの少なくとも１つをコードする核酸配列及び上記の可変重鎖のＣＤＲ配列の組合せのうちの少なくとも１つをコードする核酸配列は各々、別々のベクターに含まれてもよい。
遺伝暗号は縮重しているため、特定のアミノ酸をコードするのに２つ以上のコドンを使用することができる。遺伝暗号を用いて、各々がそのアミノ酸をコード可能と考えられる１つ以上の異なるヌクレオチド配列を同定することができる。特定のオリゴヌクレオチドが実際に実際のＸＸＸコード配列を構成する可能性は、抗ＩＬ－３１抗体またはそのＩＬ－３１特異的部分を発現する真核細胞または原核細胞における異常な塩基対の関係と、特定のコドンが実際に（特定のアミノ酸をコードするのに）使用される頻度とを考慮することによって推定することができる。このような「コドン使用頻度ルール」は、Ｌａｔｈｅ，ｅｔ ａｌ．，１８３ Ｊ．Ｍｏｌｅｃ． Ｂｉｏｌ．１－１２（１９８５）によって
開示されている。Ｌａｔｈｅの「コドン使用頻度ルール」を用いて、抗ＩＬ－３１配列をコード可能な理論上「最も可能性の高い」ヌクレオチド配列を含む単一のヌクレオチド配列またはヌクレオチド配列のセットを同定することができる。また、本発明で使用するための抗体コード領域は、本明細書に記載の抗体及びペプチドのバリアント（アゴニスト）をもたらす標準的な分子生物学的手法を用いて既存の抗体遺伝子を改変することによって提供され得ることも意図されている。このようなバリアントとしては、限定されるものではないが、抗ＩＬ－３１抗体またはＩＬ－３１特異的ポリペプチドもしくはペプチド（抗体のＣＤＲ領域を含む）のアミノ酸配列の欠失、付加、及び置換が挙げられる。例えば、抗体のＣＤＲ領域内またはその他の領域内の抗原結合に不可欠ではないことが分かっている残基を置換することができる。特定の残基が抗原結合に不可欠でないかどうかを評価するのに使用される実験のタイプの例は、以下の実施例セクションのセクション１．２１で説明されている。１つの実施形態において、置換のうちの１つ以上は保存的アミノ酸置換であり、これについては本明細書でさらに詳細に説明する。ただし、本発明に従う抗体バリアント（ＣＤＲバリアントを含む）は、保存的アミノ酸置換に限定されない。
例えば、置換における１つのクラスが保存的アミノ酸置換である。このような置換は、抗ＩＬ－３１抗体ペプチド内の所与のアミノ酸を、同様の特性を有する別のアミノ酸で置換するものである。典型的に保存的置換として見られるものとしては、脂肪族アミノ酸Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、及びＩｌｅの間での一方から別のものへの置換、ヒドロキシル残基Ｓｅｒ及びＴｈｒの交換、酸性残基Ａｓｐ及びＧｌｕの交換、アミド残基Ａｓｎ及びＧｌｎ間の置換、塩基性残基Ｌｙｓ及びＡｒｇの交換、芳香族残基Ｐｈｅ、Ｔｙｒなどの間での置換がある。どのアミノ酸変化が表現型的にサイレントであり得るかについての指針は、Ｂｏｗｉｅ ｅｔ ａｌ．，２４７ Ｓｃｉｅｎｃｅ １３０６－１０（１９９０）に見出される。
バリアントまたはアゴニストの抗ＩＬ－３１抗体またはＩＬ－３１特異的ポリペプチドもしくはペプチドは、完全に機能する場合もあれば、１つ以上の活性において機能が欠如する場合もある。完全に機能するバリアントは、典型的には、保存的バリエーションのみを含むか、または不可欠でない残基もしくは不可欠でない領域のバリエーションを含む。また、機能するバリアントは、機能に変化をもたらさないかまたは重要でない変化をもたらす類似のアミノ酸の置換を含む場合もある。代替的に、このような置換は、機能にある程度の正または負の影響を及ぼす場合がある。機能しないバリアントは、典型的には、１つ以上の非保存的なアミノ酸の置換、欠失、挿入、逆位、もしくは切断、または不可欠な残基もしくは不可欠な領域の置換、挿入、逆位、もしくは欠失を含む。
機能に必須となるアミノ酸は、部位特異的変異誘発またはアラニンスキャニング変異誘発のような当技術分野で公知の方法によって同定することができる。Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ｅｔ ａｌ．，２４４ Ｓｃｉｅｎｃｅ １０８１－８５（１９８９）。後者の手順では、分子内の全ての残基に単一のアラニン変異が導入される。得られた変異分子に対し、次に、エピトープ結合またはｉｎ ｖｉｔｒｏ ＡＤＣＣ活性のような生物学的活性を試験する。リガンド－受容体結合に不可欠な部位は、結晶学、核磁気共鳴、または光親和性標識のような構造分析によって決定することもできる。Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，２２４ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．８９９－９０４（１９９２）；ｄｅ Ｖｏｓ ｅｔ ａｌ．，２５５ Ｓｃｉｅｎｃｅ ３０６－１２（１９９２）。
さらに、ポリペプチドは、しばしば２０種の「天然」アミノ酸以外のアミノ酸を含む。さらに、末端側アミノ酸を含めた多くのアミノ酸は、プロセッシング及びその他の翻訳後修飾のような自然のプロセスによって、または当技術分野で周知されている化学修飾技術によって修飾することができる。既知の修飾としては、限定されるものではないが、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ－リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共
有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスホチジルイノシトールの共有結合、架橋、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有架橋の形成、シスチンの形成、ピログルタミン酸の形成、ホルミル化、ガンマカルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解プロセッシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、タンパク質に対するアミノ酸のトランスファーＲＮＡ媒介性付加（例えば、アルギニル化）、及びユビキチン化が挙げられる。
このような修飾は当技術分野で周知されており、科学文献で非常に詳細に説明されている。いくつかの特に一般的な修飾、例えば、グリコシル化、脂質結合、硫酸化、グルタミン酸残基のガンマ－カルボキシル化、ヒドロキシル化、及びＡＤＰリボシル化は、最も基本的なテキスト、例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ－－Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ（２ｎｄ ｅｄ．，Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．，ＮＹ，１９９３）で説明されている。この主題については、Ｗｏｌｄ，Ｐｏｓｔｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｖａｌｅｎｔ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ，１－１２（Ｊｏｈｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，１９８３）、Ｓｅｉｆｔｅｒ ｅｔ ａｌ．１８２ Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．６２６－４６（１９９０）、及びＲａｔｔａｎ ｅｔ ａｌ． ６６３ Ａｎｎ．ＮＹ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．４８－６２（１９９２）などによる多くの詳細な概説が利用可能である。
したがって、本発明のＩＬ－３１特異的抗体、ポリペプチド、及びペプチドは、置換されたアミノ酸残基が遺伝暗号によってコードされていない誘導体または類似体も包含する。
同様に、アミノ酸配列の付加及び置換、ならびに今説明したバリエーション及び修飾は、ＩＬ－３１抗原及び／またはそのエピトープまたはペプチドのアミノ酸配列にも等しく適用可能であり得、したがって、これらも本発明に包含される。上記のように、本発明に従うモノクローナル抗体をコードする遺伝子は、ＩＬ－３１の認識において特に有効である。
抗体誘導体
抗体誘導体は、本発明の範囲内に含まれる。抗体の「誘導体」は、通常はタンパク質の一部ではない追加的な化学的部分を含む。タンパク質の共有結合修飾は、本発明の範囲内に含まれる。このような修飾は、抗体の標的アミノ酸残基を、選択された側鎖または末端側残基と反応可能な有機誘導体化剤と反応させることにより、分子に導入することができる。例えば、当技術分野で周知されている二官能性剤による誘導体化は、抗体またはフラグメントを水不溶性支持マトリックスまたは他の巨大分子担体と架橋させるのに有用である。
誘導体には、標識されている放射性標識モノクローナル抗体も含まれる。例えば、放射性ヨウ素（１２５Ｉ、１３１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、インジウム（１１１Ｉｎ）、トリチウム（３Ｈ）など；モノクローナル抗体とビオチンまたはアビジン、酵素、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ベータ－Ｄ－ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、グルコアミラーゼ、カルボン酸アンヒドラーゼ、アセチルコリンエステラーゼ、リゾチーム、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、またはグルコース６－リン酸デヒドロゲナーゼとの結合体；さらに、モノクローナル抗体と生物発光剤（例えば、ルシフェラーゼ）、化学発光剤（例えば、アクリジンエステル）、または蛍光剤（例えば、フィコビリンタンパク質）との結合体。
本発明の別の誘導体二官能性抗体は、２つの異なる抗原基を認識する２つの別々の抗体の一部を組み合わせることにより生成される、二重特異性抗体である。これは、架橋または組換え技法によって達成することができる。加えて、抗体またはその一部に成分を加えて、（例えば、血流からのクリアランスまでの時間を長くすることによって）ｉｎ ｖｉｖｏでの半減期を増加させることができる。このような技法としては、例えば、ＰＥＧ成分の付加（ＰＥＧ化とも呼ばれる）が挙げられ、当技術分野で周知されている。米国特許出願公開第２００３００３１６７１号を参照。
抗体の組換え発現
いくつかの実施形態において、主題モノクローナル抗体をコードする核酸は、宿主細胞に直接導入され、細胞は、コードされる抗体の発現を誘発するのに十分な条件下でインキュベートされる。細胞は、主題核酸を導入された後、抗体の発現を可能にするため、典型的には、通常３７℃で、場合により選択下で、約１～２４時間の期間インキュベートされる。１つの実施形態において、抗体は、細胞が成長している培地の上清に分泌される。
従来、モノクローナル抗体は、マウスハイブリドーマ系のネイティブ分子として産生された。その技術に加えて、本発明は、モノクローナル抗体の組換え型ＤＮＡ発現を提供する。これによって、イヌ化、ネコ化、ウマ化、完全イヌ、完全ネコ、及び完全ウマ抗体、ならびに選択した宿主種における抗体誘導体及び融合タンパク質のスペクトルの産生が可能になる。
本発明の少なくとも１つの抗ＩＬ－３１抗体、部分、またはポリペプチドをコードする核酸配列は、ライゲーション用の平滑末端またはねじれ末端、制限酵素消化を含めた従来の技法に従って、ベクターＤＮＡを用いて組み換えて、適切な末端、必要に応じた付着末端の充填、望ましくない連結を回避するためのアルカリホスファターゼ処置、及び適切なリガーゼを用いたライゲーションを提供することができる。このような操作のための技法は、例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓ ｅｔ ａｌ．，ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＣＬＯＮＩＮＧ，ＬＡＢ． ＭＡＮＵＡＬ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂ． Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，１９８２及び１９８９）によって開示されており、またＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．１９９３（上記）を使用して、モノクローナル抗体分子またはその抗原結合領域をコードする核酸配列を構築することができる。
ＤＮＡのような核酸分子は、転写及び翻訳の制御情報を含むヌクレオチド配列を含み、かつこのような配列が、あるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と「作用可能に結合」している場合、そのポリペプチドを「発現可能」であるものとされる。作用可能な結合とは、調節ＤＮＡ配列と、発現が求められるＤＮＡ配列とが、回収可能な量の抗ＩＬ－３１ペプチドまたは抗体部分としての遺伝子発現を可能にするような方法で接続している結合である。遺伝子発現に必要な制御領域の詳細な性質は、類似技術分野で周知されているように生物によって異なり得る。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，２００１（前掲）、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，１９９３（前掲）を参照。
したがって、本発明は、原核細胞または真核細胞のいずれかにおける抗ＩＬ－３１抗体またはＩＬ－３１特異的ポリペプチドもしくはペプチドの発現を包含する。好適な宿主としては、ｉｎ ｖｉｖｏもしくはｉｎ ｓｉｔｕいずれかの細菌、酵母、昆虫、菌類、鳥類、及び哺乳類細胞を含めた細菌もしくは真核生物の宿主、または哺乳類、昆虫、鳥類、もしくは酵母を起源とする宿主細胞が挙げられる。哺乳類の細胞または組織は、ヒト、霊長類、ハムスター、ウサギ、げっ歯類、ウシ、ブタ、ヒツジ、ウマ、ヤギ、イヌ、またはネコ起源とすることができるが、他の任意の哺乳類細胞が使用されてもよい。
１つの実施形態において、導入されたヌクレオチド配列は、レシピエント宿主内で自律
複製可能なプラスミドまたはウイルスベクターに組み込まれる。この目的のために、多種多様なベクターのいずれかを使用することができる。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，１９９３（前掲）を参照。特定のプラスミドまたはウイルスベクターを選択する上で重要な因子としては、ベクターを含まないレシピエント細胞から、ベクターを含むレシピエント細胞を容易に認識及び選択することができること、特定の宿主に所望されるベクターのコピー数、ならびに異なる種の宿主細胞間でベクターを「シャッフル」できることが望ましいかどうかが挙げられる。
当技術分野で知られている原核生物ベクターの例としては、プラスミド、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ内での複製が可能なプラスミド（例えば、ｐＢＲ３２２、ＣｏｌＥ１、ｐＳＣ１０１、ｐＡＣＹＣ １８４、ｐｉ．ＶＸ）が挙げられる。このようなプラスミドは、例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓ ｅｔ ａｌ．，１９８９（前掲）、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ，１９９３（前掲）によって開示されている。Ｂａｃｉｌｌｕｓプラスミドとしては、ｐＣ１９４、ｐＣ２２１、ｐＴ１２７などが挙げられる。このようなプラスミドは、Ｇｒｙｃｚａｎ（ＴＨＥ ＭＯＬＥＣ． ＢＩＯ． ＯＦ ＴＨＥ ＢＡＣＩＬＬＩ ３０７－３２９（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ，１９８２））によって開示されている。好適なＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属プラスミドとしては、ｐＩＪ１０１（Ｋｅｎｄａｌｌ
ｅｔ ａｌ．，１６９ Ｊ． Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ． ４１７７－８３（１９８７））、及びｐｈｉ．Ｃ３１のようなＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属バクテリオファージ（Ｃｈａｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（ＳＩＸＴＨ ＩＮＴ’Ｌ ＳＹＭＰＯＳＩＵＭ ＯＮ ＡＣＴＩＮＯＭＹＣＥＴＡＬＥＳ ＢＩＯ．４５－５４（Ａｋａｄｅｍｉａｉ Ｋａｉｄｏ，Ｂｕｄａｐｅｓｔ，Ｈｕｎｇａｒｙ １９８６））が挙げられる。Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属プラスミドは、Ｊｏｈｎ ｅｔ ａｌ．，８ Ｒｅｖ． Ｉｎｆｅｃｔ． Ｄｉｓ．６９３－７０４（１９８６）、Ｉｚａｋｉ，３３ Ｊｐｎ． Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．７２９－４２（１９７８）、及びＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，１９９３（前掲）で概説されている。
代替的に、抗ＩＬ－３１抗体またはペプチドをコードするｃＤＮＡの発現に有用な遺伝子発現エレメントとしては、限定されるものではないが、（ａ）ウイルス転写プロモーター及びそのエンハンサーエレメント、例えば、ＳＶ４０初期プロモーター（Ｏｋａｙａｍａ ｅｔ ａｌ．，３ Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ．２８０（１９８３））、ラウス肉腫ウイルスＬＴＲ（Ｇｏｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，７９ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ ６７７７（１９８２））、及びモロニーマウス白血病ウイルスＬＴＲ（Ｇｒｏｓｓｃｈｅｄｌ ｅｔ ａｌ．，４１ Ｃｅｌｌ ８８５（１９８５））、（ｂ）スプライス領域及びポリアデニル化部位、例えば、ＳＶ４０後期領域（Ｏｋａｙａｒｅａ ｅｔ ａｌ．，ＭＣＢ，３：２８０（１９８３）、ならびに（ｃ）ポリアデニル化部位、例えば、ＳＶ４０内の部位（Ｏｋａｙａｍａ ｅｔ ａｌ．，１９８３（前掲））が挙げられる。
免疫グロブリンｃＤＮＡ遺伝子は、Ｗｅｉｄｌｅ ｅｔ ａｌ．，５１（１）Ｇｅｎｅ
２１－２９（１９８７）によって説明されているように、発現エレメントとして、ＳＶ４０初期プロモーター及びそのエンハンサー、マウス免疫グロブリンＨ鎖プロモーターエンハンサー、ＳＶ４０後期領域ｍＲＮＡスプライシング、ウサギＳ－グロビン介在配列、免疫グロブリン及びウサギＳ－グロビンポリアデニル化部位、ならびにＳＶ４０ポリアデニル化エレメントを用いて発現させることができる。
ｃＤＮＡの一部、ゲノムＤＮＡの一部から構成された免疫グロブリン遺伝子（Ｗｈｉｔｔｌｅ ｅｔ ａｌ．，１ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎ．４９９－５０５（１９８７））については、転写プロモーターはヒトサイトメガロウイルスとすることができ、プロモーターエンハンサーは、サイトメガロウイルス及びマウス／ヒト免疫グロブリンとするこ
とができ、ｍＲＮＡスプライシング及びポリアデニル化領域は、ネイティブ染色体免疫グロブリン配列とすることができる。
１つの実施形態において、げっ歯類細胞内のｃＤＮＡ遺伝子の発現については、転写プロモーターはウイルスＬＴＲ配列であり、転写プロモーターエンハンサーは、マウス免疫グロブリン重鎖エンハンサー及びウイルスＬＴＲエンハンサーのいずれかまたは両方であり、スプライス領域は、３１ｂｐ超のイントロンを含み、ポリアデニル化領域及び転写終結領域は、合成されている免疫グロブリン鎖に対応するネイティブ染色体配列に由来する。他の実施形態において、他のタンパク質をコードするｃＤＮＡ配列は、哺乳類細胞内でのタンパク質の発現を達成するために上記の発現エレメントと組み合わせる。
各々の融合遺伝子は、発現ベクター内で組み立てるか、または発現ベクターに挿入することができる。次に、キメラ型免疫グロブリン鎖遺伝子産物を発現可能なレシピエント細胞を、抗ＩＬ－３１ペプチドまたはキメラ型Ｈもしくはキメラ型Ｌ鎖をコードする遺伝子で単独で形質移入するか、またはキメラ型Ｈ及びキメラ型Ｌ鎖遺伝子で同時形質移入する。形質移入したレシピエント細胞は、組み込まれた遺伝子の発現を許容する条件下で培養し、発現した免疫グロブリン鎖またはインタクト抗体もしくはフラグメントを培養物から回収する。
１つの実施形態において、抗ＩＬ－３１ペプチドもしくはキメラ型Ｈ鎖及びＬ鎖をコードする融合遺伝子、またはこれらの部分を別々の発現ベクター内で組み立て、次にこれらのベクターをレシピエント細胞の同時形質移入に使用する。代替的に、キメラ型Ｈ鎖及びＬ鎖をコードする融合遺伝子を同じ発現ベクター上で組み立ててもよい。
発現ベクターの形質移入及びキメラ型抗体の産生については、レシピエント細胞系は骨髄腫細胞であってもよい。骨髄腫細胞は、形質移入した免疫グロブリン遺伝子によってコードされる免疫グロブリンを合成し、組み立て、分泌することができ、その免疫グロブリンのグリコシル化の機構を有する。骨髄腫細胞は、培養物中またはマウスの腹腔内で成長させることができ、腹腔内の場合、分泌された免疫グロブリンは腹水から得ることができる。その他の好適なレシピエント細胞としては、リンパ球様細胞、例えば、ヒトもしくは非ヒト起源のＢリンパ球、ヒトもしくは非ヒト起源のハイブリドーマ細胞、または種間ヘテロハイブリドーマ細胞が挙げられる。
本発明のキメラ型、イヌ化、ネコ化、ウマ化、完全イヌ、完全ネコ、または完全ウマの抗ＩＬ－３１抗体コンストラクトまたはＩＬ－３１特異的ポリペプチドもしくはペプチド（例えば、本明細書で説明されている抗体の抗原結合部分）は、形質転換、形質移入、結合体化、プロトプラスト融合、リン酸カルシウム沈殿法のような生化学的手段、ジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）デキストランのようなポリカチオンを用いた適用、ならびにエレクトロポレーション、直接マイクロインジェクション、及び微粒子銃のような機械的手段を含めた、様々な好適な手段のいずれかによって、適切な宿主細胞に導入することができる。Ｊｏｈｎｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，２４０ Ｓｃｉｅｎｃｅ １５３８－１５４１（１９８８）。
酵母は、免疫グロブリンのＨ鎖及びＬ鎖の産生において、細菌を上回る相当な利点をもたらし得る。酵母は、グリコシル化を含めた翻訳後ペプチド修飾を行う。現在、複数の組換え型ＤＮＡ戦略が存在し、これらの戦略は、酵母内での所望タンパク質の産生に使用することができる強力なプロモーター配列及び高コピー数のプラスミドを利用している。酵母は、クローン化哺乳類遺伝子産物のリーダー配列を認識し、リーダー配列を有するペプチド（すなわち、プレペプチド）を分泌する。Ｈｉｔｚｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１１ｔｈ
Ｉｎｔ’ｌ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ ｏｎ Ｙｅａｓｔ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ＆ Ｍｏ
ｌｅｃ． Ｂｉｏｌ．（Ｍｏｎｔｐｅｌｉｅｒ，Ｆｒａｎｃｅ，１９８２）。
酵母遺伝子発現システムは、抗ＩＬ－３１ペプチド、抗体、ならびに組み立てられたマウス及びキメラ型、ヘテロキメラ型、イヌ化、ネコ化、ウマ化、完全イヌ、完全ネコ、または完全ウマ抗体、これらのフラグメント及び領域の産生、分泌、及び安定性のレベルを通例的に評価することができる。酵母がグルコースに富む培地中で成長するときに大量に産生される解糖酵素をコードする活発に発現した遺伝子からのプロモーター及び終結エレメントを組み込む、任意の一連の酵母遺伝子発現システムを利用することができる。また、既知の解糖遺伝子も非常に効率的な転写調節シグナルを提供することができる。例えば、ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）遺伝子のプロモーター及び終結シグナルを利用することができる。酵母内でのクローン化免疫グロブリンｃＤＮＡの発現に最適な発現プラスミドを評価するために、複数のアプローチがとられ得る。Ｖｏｌ． ＩＩ ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ，４５－６６（Ｇｌｏｖｅｒ，ｅｄ．，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫ １９８５）を参照。
また、細菌株も、本発明によって説明される抗体分子またはペプチドの産生のための宿主として利用することができる。このような細菌宿主と共に、宿主細胞に適合性の種に由来するレプリコン及び調節配列を含むプラスミドベクターが使用される。このベクターは、複製部位に加えて、形質転換細胞の表現型選択を提供可能な特異的遺伝子を保有する。細菌内のクローン化免疫グロブリンｃＤＮＡによってコードされたマウス、キメラ型、ヘテロキメラ型、イヌ化、ネコ化、ウマ化、完全イヌ、完全ネコ、もしくは完全ウマ抗体、フラグメント及び領域、または抗体鎖を産生するための発現プラスミドを評価するために、複数のアプローチがとられ得る（Ｇｌｏｖｅｒ，１９８５（前掲）；Ａｕｓｕｂｅｌ，１９９３（前掲）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，２００１（前掲）；Ｃｏｌｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ，ＮＹ（１９９４－２００１）；Ｃｏｌｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ，ＮＹ（１９９７－２００１）を参照）。
宿主哺乳類細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ またはｉｎ ｖｉｖｏで成長させることができる。哺乳類細胞は免疫グロブリンタンパク質分子に対し、リーダーペプチドの除去、Ｈ鎖及びＬ鎖のフォールディング及び組み立て、抗体分子のグリコシル化、ならびに機能的抗体タンパク質の分泌を含めた翻訳後修飾をもたらす。
抗体タンパク質を産生するための宿主として有用であり得る哺乳類細胞としては、上記のリンパ系起源の細胞に加えて、線維芽細胞起源の細胞、例えば、ベロ細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ ８１）またはＣＨＯ－Ｋ１細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ ６１）が挙げられる。
哺乳類細胞内でクローン化抗ＩＬ－３１ペプチドＨ鎖及びＬ鎖遺伝子を発現させるには多くのベクターシステムが利用可能である（Ｇｌｏｖｅｒ，１９８５（前掲）を参照）。種々のアプローチに従って、完全なＨ２Ｌ２抗体を得ることができる。同じ細胞内でＨ鎖及びＬ鎖を同時発現させて、Ｈ鎖及びＬ鎖の細胞内会合及び結合を達成し、完全な４量体Ｈ２Ｌ２抗体及び／または抗ＩＬ－３１ペプチドにすることが可能である。同時発現は、同じ宿主内で同じまたは異なるプラスミドを使用することによって生じ得る。Ｈ鎖及びＬ鎖両方の遺伝子及び／または抗ＩＬ－３１ペプチドを同じプラスミドに入れ、次にこのプラスミドを細胞に形質移入して、両方の鎖を発現する細胞を直接選択することができる。代替的に、まず細胞に１つの鎖、例えばＬ鎖をコードするプラスミドを形質移入し、次に得られた細胞系に、第２の選択マーカーを含むＨ鎖プラスミドを形質移入することができる。いずれかの経路によって抗ＩＬ－３１ペプチド及び／またはＨ２Ｌ２分子を産生する
細胞系に対し、追加的な選択マーカーと共にペプチド、Ｈ、Ｌ、またはＨ及びＬ鎖の追加的なコピーをコードするプラスミドを形質移入して、性質の強化（例えば、組み立てられたＨ２Ｌ２抗体分子の生産量向上または形質移入細胞系の安定性強化）を伴った細胞系を生成することができる。
組換え型抗体を長期にわたり高収率で産生するために、安定した発現を使用することができる。例えば、抗体分子を安定して発現させる細胞系を操作することができる。ウイルスの複製起点を含む発現ベクターを使用する代わりに、免疫グロブリン発現カセット及び選択マーカーを用いて宿主細胞を形質転換してもよい。外来ＤＮＡの導入後、操作した細胞は、濃縮培地で１～２日間成長させることができ、次に選択培地に切り替える。組換え型プラスミド内の選択マーカーは、選択に対する耐性を付与し、細胞が安定的にプラスミドを染色体に統合し、成長して増殖巣を形成し、これがクローン化し拡大して細胞系になることを可能にする。このような操作細胞系は、抗体分子と直接的または間接的に相互作用する化合物／構成要素のスクリーニング及び評価をする上で特に有用であり得る。
本発明の抗体が産生されたら、この抗体を、当技術分野で知られている免疫グロブリン分子を精製する任意の方法により、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、親和性、特にプロテインＡの後の特異的抗原に対する親和性、及びサイジングカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、溶解度の差によって、またはタンパク質精製における他の任意の標準的技法によって精製することができる。多くの実施形態において、抗体は細胞から培養培地に分泌され、培養培地から採取される。
医薬用途
本発明の抗ＩＬ－３１抗体またはＩＬ－３１特異的ポリペプチドもしくはペプチドは、イヌ、ネコ、及びウマのような伴侶動物の、例えば掻痒状態またはアレルギー状態の治療で使用することができる。１つの実施形態において、このようなポリペプチドまたはペプチドは、本明細書で説明される抗ＩＬ－３１抗体の抗原結合部分を含む。より具体的には、本発明はさらに、医薬的に許容される担体または希釈剤と、有効成分としての本発明に従う抗体またはポリペプチドまたはペプチドを含む医薬組成物を提供する。抗体は、本発明に従うキメラ型、ヘテロキメラ型、イヌ化、ネコ化、ウマ化、完全イヌ、完全ネコ、または完全ウマ抗体とすることができる。また、インタクト免疫グロブリンまたはその結合フラグメント（例えば、Ｆａｂ）も想定されている。本発明の抗体及びその医薬組成物は、非経口投与、例えば、皮下、筋肉内、または静脈内投与に有用である。
抗ＩＬ－３１抗体及び／またはＩＬ－３１特異的ポリペプチド及び／または本発明のＩＬ－３１特異的ペプチドは、個別の治療剤として、または他の治療剤と組み合わせて、投与することができる。これらは単独で投与することができるが、概して、選択された投与経路及び標準的なやり方に基づいて選択した医薬担体と共に投与される。
本明細書で開示されている抗体の投与は、非経口注射（例えば、腹腔内、皮下、または筋肉内注射）、経口投与、または気道表面への抗体の局所投与（通常、医薬製剤にて運搬される）を含めた任意の適切な手段によって行うことができる。気道表面への局所投与は、鼻腔内投与によって（例えば、ドロッパー、スワブ、または吸入器の使用によって）行うことができる。また、気道表面への抗体の局所投与は、吸入投与によって、例えば、抗体を含んだ吸込可能な医薬製剤粒子（固体及び液体両方の粒子を含む）をエアロゾル懸濁液として作成し、次いで対象に吸込可能な粒子を吸入させることによって行ってもよい。吸込可能な医薬製剤粒子を投与するための方法及び装置は周知されており、任意の従来的技法を用いることができる。経口投与は、例えば、経口摂取可能な液体または固体製剤の形態をとることができる。
いくつかの望ましい実施形態において、抗体は非経口注射によって投与される。非経口投与の場合、抗ＩＬ－３１抗体またはポリペプチドまたはペプチドは、医薬的に許容される非経口ビヒクルと共に、溶液、懸濁液、乳濁液、または凍結乾燥粉末として製剤化することができる。例えば、ビヒクルは、水性担体のような許容される担体に溶解した抗体またはそのカクテルの溶液とすることができ、このようなビヒクルは、水、食塩水、リンゲル液、ブドウ糖液、トレハロースもしくはスクロースの溶液、または５％血清アルブミン、０．４％食塩水、０．３％グリシンなどである。また、リポソーム及び非水性ビヒクル（例えば、不揮発性油）も使用することができる。このような溶液は無菌であり、概して粒子状物質を含まない。このような組成物は、従来の周知されている滅菌技法によって滅菌することができる。組成物は、生理的条件に近づけるために必要に応じて医薬的に許容される補助物質、例えば、ｐＨ調整剤及び緩衝剤、毒性（ｔｏｘｉｃｉｔｙ）調整剤など、例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウムなどを含むことができる。このような製剤中の抗体の濃度は、例えば、約０．５重量％未満、通常は約１重量％以上から１５重量％または２０重量％にのぼるまで幅広く変動し得、選択された特定の投与様式に応じて、主に液体体積、粘度などに基づき選択される。ビヒクルまたは凍結乾燥粉末は、等張性を維持する添加物（例えば、塩化ナトリウム、マンニトール）及び化学的安定性を維持する添加物（例えば、緩衝液及び防腐剤）を維持する添加物を含むことができる。製剤は、一般的に使用されている技法によって滅菌される。
非経口投与可能な組成物を調製するための実際の方法は、当業者に公知または明らかであり、例えば、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡ． ＳＣＩ．（１５ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８０）でより詳細に説明されている。
本発明の抗体は、保存のために凍結乾燥し、使用前に好適な担体で再構成することができる。この技法は、従来的な免疫グロブリンに対し有効であることが示されている。任意の好適な凍結乾燥及び再構成技法を用いることができる。凍結乾燥及び再構成によって様々な程度の抗体活性損失に至る可能性があり、補うために使用レベルを調整しなければならない場合があることは、当業者に理解されよう。
本発明の抗体またはそのカクテルを含む組成物は、既存の疾患の再発防止及び／または治療処置のために投与することができる。好適な医薬担体については、当技術分野の標準的参考文献であるＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳの最新版で説明されている。
治療用途において、組成物は、既に疾患を患っている患者に対し、疾患及びその合併症を治癒するか、または少なくとも部分的に抑止もしくは軽減するのに十分な量を投与することができる。これを達成するのに十分な量は、「治療有効用量」または「治療有効量」として定義される。この使用に有効な量は、疾患の重症度及び対象自身の免疫系の全般的状態に依存するが、概して、体重１ｋｇ当たり抗体約０．１ｍｇ～体重１ｋｇ当たり抗体約１５ｍｇ、好ましくは体重１ｋｇ当たり抗体約０．３ｍｇ体重～体重１ｋｇ当たり抗体約１２ｍｇの範囲である。１つの実施形態において、治療有効量は、最大１２ｍｇ／ｋｇ体重の用量で少なくとも１ヵ月の有効期間をもたらす。外来物質の最小化と、本発明のイヌ様、ネコ様、及びウマ様抗体によって達成される「外来物質」拒絶の可能性低下とを考慮すれば、これらの抗体の相当程度の過剰量を投与することは可能であると考えられる。
投与する薬用量は、当然ながら、特定の薬剤の薬力学特性、その投与様式及び投与経路、レシピエントの年齢、健康状態、及び体重、症状の性質及び程度、併用治療の種類、治療の頻度、ならびに所望の効果などの既知の因子に応じて変動する。
非限定的な例として、イヌ、ネコ、またはウマのＩＬ－３１関連病態の治療は、上記の薬用量範囲内における本発明の抗ＩＬ－３１抗体の隔週または毎月の薬用量として提供することができる。
イヌ、ネコ、またはウマの治療的使用のための例示的抗体は、本発明に従う強力なｉｎ
ｖｉｖｏ抗ＩＬ－３１活性を有する高親和性（高アビディティーでもあり得る）抗体、ならびにそのフラグメント、領域、及び誘導体である。抗体のフラグメント及び領域は、本明細書では代替的に、抗ＩＬ－３１抗体の抗原結合部分を含む本発明のポリペプチドまたはペプチドと呼ばれる場合がある。
組成物の単回または複数回投与は、治療する獣医師が選択する用量レベル及びパターンを用いて実施することができる。いずれにしても、医薬製剤は、対象を有効に治療するのに十分な量の本発明抗体（１つまたは複数）を提供すべきである。
診断用途
また、本発明は、掻痒状態及び／またはアレルギー状態であることが知られているかまたはそれを有する疑いのある伴侶動物のＩＬ－３１を検出するための診断方法で使用するための、上記の抗ＩＬ－３１抗体、ポリペプチド、及び／またはペプチドも提供する。
本発明の抗ＩＬ－３１抗体、ポリペプチド、及び／またはペプチドは、試料中のＩＬ－３１または抗ＩＬ－３１抗体を検出または定量化するイムノアッセイに有用である。ＩＬ－３１のイムノアッセイは、典型的には、選択的にＩＬ－３１に結合可能である本発明の検出可能に標識された高親和性（または高アビディティー）の抗ＩＬ－３１抗体、ポリペプチド、またはペプチドの存在下で臨床試料または生体試料をインキュベートすることと、試料中で結合している標識されたポリペプチド、ペプチド、または抗体を検出することとを含む。様々な臨床アッセイ手順が当技術分野で周知されている。例えば、ＩＭＭＵＮＯＡＳＳＡＹＳ ＦＯＲ ＴＨＥ ８０’Ｓ（Ｖｏｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｕｎｉｖ． Ｐａｒｋ，１９８１）を参照。このような試料には、動物対象から収集され、以下に説明するＥＬＩＳＡ分析に供される組織生検、血液、血清、糞便試料、または液体が含まれる。
いくつかの実施形態において、抗原の抗体との結合は、固体支持体を使用せずに検出される。例えば、抗原の抗体との結合は、液体形式で検出することができる。
他の実施形態において、抗ＩＬ－３１抗体、ポリペプチド、またはペプチドは、例えば、ニトロセルロースに固定するか、または細胞、細胞粒子、もしくは可溶性タンパク質を固定化可能な別の固体支持体に固定することができる。次いで支持体を好適な緩衝液で洗浄してから、検出可能に標識されたＩＬ－３１特異的なポリペプチド、ペプチド、または抗体で処置することができる。次いで固相支持体を緩衝液でもう一度洗浄して、結合していないポリペプチド、ペプチド、または抗体を除去することができる。次いで、固体支持体上の結合した標識の量を、既知の方法ステップによって検出することができる。
「固相支持体」または「担体」とは、ポリペプチド、ペプチド、抗原、または抗体を結合可能な任意の支持体を意味する。周知されている支持体または担体としては、ガラス、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリビニリデンフルオリド（ＰＶＤＦ）、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、天然及び変性セルロース類（例えば、ニトロセルロース）、ポリアクリルアミド、アガロース、ならびに磁鉄鉱が挙げられる。担体の性質は、本発明の目的においてある程度可溶性であるか、または不溶性であり得る。支持体物質は、結合分子がＩＬ－３１または抗ＩＬ－３１抗体に結合可能である限り、考えられ
るほぼ全ての構造的構成を有することができる。したがって、支持体の構成は、ビーズのように球形であっても、試験管の内側面または棒の外側面のように円柱状であってもよい。代替的に、表面は、シート、培養皿、試験片などのように平坦であってもよい。例えば、支持体は、ポリスチレンビーズを含んでもよい。当業者は、抗体、ポリペプチド、ペプチド、もしくは抗原を結合するための多くの他の好適な担体を知っており、または日常的な実験によって好適な担体を確認することができる。
周知されている方法ステップは、所与のロットの抗ＩＬ－３１ポリペプチド、ペプチド、及び／または抗体の結合活性を決定することができる。当業者は、日常的な実験によって、効果的かつ最適なアッセイ条件を決定することができる。
ＩＬ－３１特異的なポリペプチド、ペプチド、及び／または抗体の検出可能な標識は、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）または酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）で使用するための酵素に結合することにより、遂行することができる。結合した酵素は、露出した基質と反応して、例えば、分光光度的、蛍光光度的、または視覚的な手段により、検出され得る化学成分を生成する。本発明のＩＬ－３１特異的抗体の検出可能な標識に使用することができる酵素としては、限定されるものではないが、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ブドウ球菌ヌクレアーゼ、デルタ－５－ステロイドイソメラーゼ、酵母アルコールデヒドロゲナーゼ、アルファ－グリセロリン酸デヒドロゲナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、ベータ－ガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース－６－リン酸デヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼ、及びアセチルコリンエステラーゼが挙げられる。
ＩＬ－３１特異的抗体を放射能標識することにより、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）を使用してＩＬ－３１を検出することが可能である。Ｗｏｒｋ ｅｔ ａｌ．，ＬＡＢ．
ＴＥＣＨＮＩＱＵＥＳ ＆ ＢＩＯＣＨＥＭ．１Ｎ ＭＯＬＥＣ． Ｂｉｏ． （Ｎｏ．Ｈｏｌｌａｎｄ Ｐｕｂ．Ｃｏ．，ＮＹ，１９７８）を参照。放射性同位体は、ガンマカウンターもしくはシンチレーションカウンターを使用するなどの手段により、またはオートラジオグラフィーにより、検出することができる。本発明の目的において特に有用な同位体としては、３Ｈ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ、及び１２５Ｉが挙げられる。
ＩＬ－３１特異的抗体を蛍光化合物で標識することも可能である。蛍光標識抗体を適切な波長の光に曝露すると、その存在を蛍光によって検出することができる。最も一般的に使用される蛍光標識化合物に含まれるものとして、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ－フタルアルデヒド、フルオレスカミンがある。
また、ＩＬ－３１特異的抗体は、蛍光発光金属、例えば、１２５Ｅｕまたはランタニド系列の他の金属を用いても、検出可能に標識することができる。これらの金属は、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）またはエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）のような金属キレート基を用いて、ＩＬ－３１特異的抗体に結合させることができる。
また、ＩＬ－３１特異的抗体は、化学発光化合物との結合によっても検出可能に標識することができる。この場合、化学発光で標識された抗体の存在は、化学反応の途中で生じる発光の存在を検出することによって決定される。有用な化学発光標識化合物の例は、ルミノール、イソルミノール、セロマティック（ｔｈｅｒｏｍａｔｉｃ）アクリジニウムエステル、イミダゾール、アクリジニウム塩、及びシュウ酸エステルである。
同様に、生物発光化合物を使用して、本発明のＩＬ－３１特異的な抗体、部分、フラグメント、ポリペプチド、または誘導体を標識することができる。生物発光は、生体系で見られる化学発光の一種であり、触媒タンパク質が化学発光反応の効率を高めている。生物発光タンパク質の存在は、発光の存在を検出することによって決定される。標識の目的において重要な生物発光化合物は、ルシフェリン、ルシフェラーゼ、及びエクオリンである。
ＩＬ－３１特異的な抗体、部分、フラグメント、ポリペプチド、または誘導体の検出は、例えば、検出可能な標識が放射性ガンマエミッターである場合はシンチレーションカウンターにより、または、例えば、標識が蛍光物質の場合は蛍光系により、遂行することができる。酵素標識の場合には、検出は、酵素の基質を用いる比色法によって遂行することができる。また、検出は、同様に調製された標準物質に対し、基質の酵素反応の程度の視覚的比較によっても遂行することができる。
本発明の目的において、上記のアッセイによって検出されるＩＬ－３１は、生体試料中に存在する可能性がある。ＩＬ－３１を含む任意の試料を使用することができる。例えば、試料は、生体液であり、例えば、血液、血清、リンパ液、尿、糞便、炎症滲出液、脳脊髄液、羊水、組織抽出物またはホモジネートなどである。本発明は、これらの試料のみを使用するアッセイに限定されるものではないが、当業者は、本明細書に照らして、他の試料の使用が可能になる好適な条件を決定することが可能である。
ｉｎ ｓｉｔｕ検出は、動物対象から組織学的標本を取り出し、このような標本に本発明の標識抗体の組合せを提供することにより、遂行することができる。抗体（またはその部分）は、標識抗体（または部分）を生体試料に適用するか、または上に重ねることによって提供することができる。このような手順を使用することにより、ＩＬ－３１の存在だけでなく、検査組織中のＩＬ－３１の分布も決定することが可能である。当業者は、本発明を使用すれば、このようなｉｎ ｓｉｔｕ検出を達成するために任意の多種多様な組織学的方法（例えば、染色手順）を変更することができることを容易に理解するであろう。
本発明の抗体、フラグメント、または誘導体は、「２部位」または「サンドイッチ」アッセイとしても知られるイムノメトリックアッセイでの利用に適合させることができる。典型的なイムノメトリックアッセイでは、ある量の非標識抗体（または抗体のフラグメント）は、試験を行う液体中で不溶性の固体支持体と結合させ、検出可能に標識された可溶性の抗体を加えて、固相抗体、抗原、及び標識抗体の間で形成された三元複合体の検出及び／または定量化を可能にする。
抗体は、試料中のＩＬ－３１を定量的または定性的に検出するため、またはＩＬ－３１を発現する細胞の存在を検出するために使用することができる。これは、蛍光顕微鏡、フローサイトメトリー、または蛍光定量的検出を伴う蛍光標識抗体（下記参照）を用いた免疫蛍光技法により、遂行することができる。診断目的においては、抗体は標識されていても標識されていなくてもよい。非標識抗体は、抗体に反応する他の標識抗体（二次抗体）（例えば、イヌまたはネコ免疫グロブリン定常領域に対し特異的な抗体）と組み合わせて使用することができる。代替的に、抗体を直接標識することもできる。多種多様な標識、例えば、放射性核種、蛍光物質、酵素、酵素基質、酵素補因子、酵素阻害剤、リガンド（詳細にはハプテン）などを用いることができる。これまでに論じたアッセイのような多数のタイプのイムノアッセイが利用可能であり、当業者に周知されている。
１つの実施形態において、ＩＬ－３１を検出するための診断方法は、ラテラルフローイムノアッセイ試験である。これは、イムノクロマトグラフィックアッセイ、ラピッドイムノマイグレーション（Ｒａｐｉｄ ＩｍｍｕｎｏＭｉｇｒａｔｉｏｎ）（ＲＩＭ（登録商
標））またはストリップテストとしても知られている。ラテラルフローイムノアッセイは、本質的には、テストストリップ形式に合わせるための単一の軸に沿って動作するように適合させたイムノアッセイである。この技術の複数のバリエーションが開発されて商用製品となっているが、これらは全て同じ基本原理に従って動作する。典型的なテストストリップは、以下の構成要素：（１）試料パッド（試験試料を適用する吸収パッド）、（２）結合体または試薬パッド（これは、着色粒子（通常はコロイド金粒子、またはラテックスミクロスフェア）と結合体化した標的アナライトに特異的な抗体を含む）と、（３）反応メンブレン（典型的には、疎水性のニトロセルロースまたは酢酸セルロースのメンブレンであり、その上に抗標的アナライト抗体が捕捉ゾーンまたは試験ラインとしてメンブレンを横断するライン内に固定化されている（結合体抗体に特異的な抗体を含む対照ゾーンが存在してもよい））と、（４）吸取りまたは廃棄物リザーバー（毛細管作用によって反応メンブレンを横断して試料を引き出し収集するように設計されたさらなる吸収パッド）とからなる。ストリップの構成要素は通常、不活性のバッキング材に固定されており、シンプルなディップスティック形式で提供されるか、または捕捉ゾーン及び対照ゾーンを示す試料ポート及び反応ウィンドウを備えたプラスチックケース入りで提供される。
微生物学的試験で使用されるラテラルフローイムノアッセイには、２つの主要なタイプ：二重抗体サンドイッチアッセイ及び競合アッセイが存在する。二重抗体サンドイッチ形式では、試料は試料パッドから結合体パッドを通って移動し、存在する標的アナライトは結合体に結合する。次に、試料は捕捉ゾーンに到達するまでメンブレンを横断して移動を継続し、捕捉ゾーンに到達したところで標的／結合体複合体は固定化された抗体に結合し、メンブレン上のラインが可視化される。次に、試料は対照ゾーンに到達するまでストリップに沿ってさらに移動し、対照ゾーンに到達したところで過剰な結合体が結合し、メンブレン上の第２のラインが可視化される。この対照ラインは、試料が意図通りにメンブレンを横断して移動したことを示す。メンブレン上に２つの明確なラインがあれば、結果は陽性である。対照ゾーンに１つのラインがあれば、結果は陰性である。競合アッセイは、結合体パッドが標的アナライトまたはその類似体に既に結合した抗体を含んでいるという点で、二重抗体サンドイッチ形式とは相違する。そのため、標的アナライトが試料中に存在する場合、標的アナライトは結合体に結合せず、非標識のまま保たれる。試料がメンブレンに沿って移動し捕捉ゾーンに到達すると、過剰な非標識アナライトは固定化された抗体に結合し、結合体の捕捉を遮断するため、ラインは可視化されない。次に、結合していない結合体が対照ゾーンの抗体に結合し、対照ラインが可視化される。メンブレン上に１つの対照ラインがあれば、結果は陽性である。捕捉ゾーン及び対照ゾーンに２つのラインが見えれば、結果は陰性である。ただし、過剰な非標識標的アナライトが存在しない場合は捕捉ゾーンに薄いラインが生成されることがあり、これは決定的ではない結果を示す。ラテラルフロー技術には複数のバリエーションが存在する。メンブレン上の捕捉ゾーンは、標的アナライトに応じて、抗体ではなく固定化された抗原または酵素を含んでもよい。また、複数の捕捉ゾーンを適用して多重化試験を作成することも可能である。例えば、同じ試料中のＥＨＥＣ志賀毒素ＳＴ１及びＳＴ２の両方を別々に検出することができる市販のテストストリップが開発された。
重要なことに、本発明の抗体は、イヌ、ネコ、またはウマの掻痒状態またはアレルギー状態の診断に有用であり得る。より具体的には、本発明の抗体は、伴侶動物におけるＩＬ－３１の過剰発現を同定することができる。したがって、本発明の抗体は、重要な免疫組織化学ツールを提供することができる。１つの実施形態において、ＩＬ－３１ミモトープ（ペプチド）を使用して、アッセイで検出するために標識された本発明の抗体を捕捉するというアッセイ設計がここでは考えられる。この捕捉された抗体は、結合したミモトープに対し、宿主種のネイティブ循環ＩＬ－３１の親和性よりも低い親和性を有すると考えられる。この実施形態において、宿主種に由来する液のインキュベートは、固体表面に繋留した標識抗体：ミモトープ複合体と共にインキュベートされる。宿主種に由来する試験液
中にＩＬ－３１が存在すれば抗体に対する親和性がより高いため、標識抗体は固体表面から遊離し、洗浄ステップ中に除去され得る。したがって、試験液中のＩＬ－３１レベルは、ミモトープ結合表面に現れるシグナルの欠如と相関する可能性がある。このようなアッセイは、診断試験としての使用のための研究または臨床設定でＩＬ－３１を測定するのに有用であると考えられている。
本発明の抗体は抗体アレイ上で使用することができ、これは遺伝子発現プロファイルを測定する上で非常に好適である。
キット
主題方法を実施するためのキットも本発明の範囲内に含まれる。キットは少なくとも、本発明の抗体、本発明の抗体をコードする核酸、または本発明の抗体を含む細胞のうちの１つ以上を含む。１つの実施形態において、本発明の抗体は、通常、容器に入った凍結乾燥形態で提供することができる。標識または毒素と結合体化してもよく結合体化していなくてもよい抗体が、典型的には、緩衝液（例えば、トリス、リン酸、炭酸など）、安定化剤、殺生物剤、不活性タンパク質（例えば、血清アルブミン）などと共にキットに含まれる。概して、これらの材料は、活性抗体の量に基づいて５ｗｔ％未満で存在し、通常は、再び抗体濃度に基づいて少なくとも約０．００１ｗｔ％の総量で存在する。多くの場合、活性成分を希釈するために不活性の増量剤または賦形剤を含むことが望ましく、このとき賦形剤は、組成物全体の約１ｗｔ％～９９ｗｔ％で存在することができる。一次抗体に結合可能な二次抗体がアッセイで用いられる場合、これは通常別々のバイアルに存在する。二次抗体は、典型的には、標識と結合体化し上記の抗体製剤と類似の方法で製剤化される。また、キットは概して使用説明書一式も含む。
１つの実施形態において、本発明に従うキットは、試料中のイヌ、ネコ、またはウマのＩＬ－３１タンパク質を検出するのに有用なテストストリップキット（ラテラルフローイムノアッセイキット）である。このようなテストストリップは、典型的には、試験試料を適用する試料パッドと、イヌ、ネコ、またはウマＩＬ－３１に特異的であり着色粒子（通常はコロイド金粒子）と結合体化している抗体を含む、結合体または試薬パッドと、反応メンブレンであって、その上に抗ＩＬ－３１抗体が捕捉ゾーンまたは試験ラインとしてメンブレンを横断するライン内に固定化されている、反応メンブレン（結合体抗体に特異的な抗体を含む対照ゾーンが存在してもよい）と、毛細管作用によって反応メンブレンを横断して試料を引き出し収集するように設計されたさらなる吸収パッドとを含む。概して、テストストリップキットは使用説明書も含む。
ネコ抗体またはイヌ抗体の一貫性及び／または品質を改善する方法
このような方法は、上記の発明の概要セクションと、本出願の実施例及び図とで説明されている。
本発明者らの驚くべき発見は、ネイティブ生殖系列が末端側軽鎖システイン以外に追加的な残基をコードする動物種からのカッパ軽鎖定常領域のｃ末端を除去または修飾することが、このような種の均質な組換え型抗体の産生に有益であると共に、安定した細胞系から産生される抗体の量にも有益である（例えば、収率が改善される）ということである。本明細書で説明される結果は、ネコ（及びイヌ）のカッパ軽鎖における末端側システイン以外の追加的なアミノ酸残基が重鎖との効率的な対形成に有害であり、抗体の誤対形成及び産生不良につながることを支持している。
１つの実施形態において、本発明は、ネコ抗体の一貫性及び／または品質を改善する方法を提供する。この方法は、ネコＩｇＧカッパ軽鎖をコードするヌクレオチド配列とネコＩｇＧ重鎖をコードするヌクレオチド配列とを宿主細胞内で発現させてネコ抗体を産生す
ることを含み、ネコＩｇＧカッパ軽鎖をコードするヌクレオチド配列は、他の場合では野生型ネコＩｇＧ軽鎖定常領域内に存在するＣ末端側ＱＲＥ配列をコードする配列が修飾及び／または欠失しているカッパ軽鎖定常ヌクレオチド配列を含む。図１５に示されるネコＩｇカッパ軽鎖定常ドメインのＣ末端側アミノ酸残基に関連し、１つの実施形態において、本発明は、配列番号１７５のネコ軽鎖カッパ配列のＣＹＳ１０７の直後にあるｃ末端側「ＱＲＥ」の除去をもたらす。この修飾によって単量体の組換え型ネコＩｇＧの産生が改善されることが分かった。ただし、本発明はこの点に限定されるものではない。例えば、ネイティブＱＲＥの代わりに１０７位のシステインのｃ末端に３つの追加的なアミノ酸を連続して付加しても、この３つのアミノ酸の静電荷の影響が最小限である場合は許容され得る。
本発明はさらに、イヌ抗体の一貫性及び／または品質を改善する方法を提供する。この方法は、イヌＩｇＧカッパ軽鎖をコードするヌクレオチド配列とイヌＩｇＧ重鎖をコードするヌクレオチド配列とを宿主細胞内で発現させてイヌ抗体を産生することを含み、イヌＩｇＧカッパ軽鎖をコードするヌクレオチド配列は、他の場合では野生型イヌＩｇＧ軽鎖定常領域内に存在するＣ末端側ＱＲＶＤ配列をコードする配列が修飾及び／または欠失しているカッパ軽鎖定常ヌクレオチド配列を含む。図１５に示されるイヌＩｇカッパ軽鎖定常ドメインのＣ末端側アミノ酸残基に関連し、１つの実施形態において、本発明は、配列番号１９４のイヌ軽鎖カッパ配列のＣＹＳ１０５の直後にあるｃ末端側「ＱＲＶＤ」の除去をもたらす。ただし、本発明はこの点に限定されるものではない。例えば、ネイティブＱＲＶＤの代わりに１０５位のシステインのｃ末端に３つの追加的なアミノ酸を連続して付加しても、この３つのアミノ酸の静電荷の影響が最小限である場合は許容され得る。
本明細書の結果は、上記の方法が、完全に別個の標的を認識する構造的に異なる抗体にも適用されることを明らかに実証しているため、このような修飾が、限定されるものではないが、抗ＩＬ－３１及び抗ＮＧＦ抗体を含めた幅広い属のネコ抗体、加えてカッパ軽鎖定常領域上に追加的なＣ末端側アミノ酸を有するその他の哺乳類抗体にも適用できる可能性がある。いかなる１つの理論にも束縛されることを望まないが、この軽鎖修飾は、安定したＣＨＯ細胞系からの誘導産生中に免疫グロブリン鎖をより高い忠実度で対形成して、より多量の単量体ＩｇＧと、場合によってはより高い全体的抗体収率とをもたらすように思われる。これらの属性はいずれも、商用グレードの抗体治療薬を製造する観点から非常に望ましい。
１つの実施形態において、本明細書で開示するいずれの抗ＩＬ－３１抗体も、本明細書で開示するカッパ軽鎖定常領域の欠失及び／または修飾を含むことができる。例えば、１つの実施形態において、本発明に従うネコ抗体は、カッパ軽鎖定常領域のｃ末端側に通常存在する「ＱＲＥ」が除去され、任意選択で、静電荷の影響が最小限である最大３つの追加的なアミノ酸で置き換えられているカッパ軽鎖定常領域を含む。特定の実施形態において、本発明に従うネコ抗体は、配列：ＲＳＤＡＱＰＳＶＦＬＦＱＰＳＬＤＥＬＨＴＧＳＡＳＩＶＣＩＬＮＤＦＹＰＫＥＶＮＶＫＷＫＶＤＧＶＶＱＮＫＧＩＱＥＳＴＴＥＱＮＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＭＳＳＴＥＹＱＳＨＥＫＦＳＣＥＶＴＨＫＳＬＡＳＴＬＶＫＳＦＱＲＳＥＣ（配列番号１８６）またはそのバリアントを有するネコカッパ軽鎖を含む。
次に、本発明を以下の非限定的な実施例によってさらに説明する。以下の実施例セクション及び図面において、名称に「１１Ｅ１２」を含む抗体について示される任意のデータは、本発明の抗体との比較を目的としている。
１．１．チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞からのイヌインターロイキン３１（ｃＩＬ－３１）の産生
インターロイキン３１タンパク質は、相同種間でアミノ酸配列の保存が異なる（図１）が、Ｉ型サイトカインファミリーの他のメンバーと共通の構造アーキテクチャーを有すると考えられている（Ｂｏｕｌａｙ ｅｔ ａｌ．２００３，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ． Ａｕｇ；１９（２）：１５９－６３２００３；Ｄｉｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．２００４ Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｊｕｌ；５（７）：７５２－６０）。このアップダウンバンドルトポロジーは、これらのサイトカインが共有する受容体認識の様式に重要である（Ｄｉｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．（前掲），Ｃｏｒｎｅｌｉｓｓｅｎ ｅｔ ａｌ．２０１２ Ｅｕｒ Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．Ｊｕｎ－Ｊｕｌ；９１（６－７）：５５２－６６）。異なる種間でＩＬ－３１タンパク質配列同一性が変動するため、ある種に対し産生した抗体が、他の異なるエピトープ性質及び局所的アミノ酸組成を仮定した他の種と交差反応するか予測することは不可能である。結果的に、この課題については複数の種及び発現系に相当するＩＬ－３１タンパク質の複数形態が検討された。イヌＩＬ－３１タンパク質（ｃＩＬ－３１）を産生して、抗体ヒットの親和性及び効力を試験するための免疫原及び試薬として使用した。ＣＨＲＯＭＯＳ ＡＣＥ（人工染色体発現）（Ｃｈｒｏｍｏｓ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｕｒｎａｂｙ，Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｃｏｌｕｍｂｉａ）を用いてシステムＣＨＯ細胞内で組換え型ｃＩＬ－３１を作成し、（配列番号１５５；イヌ＿ＩＬ３１）の配列（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１５６；イヌ＿ＩＬ３１）である）を有する分泌イヌＩＬ－３１タンパク質を生成した。条件培地は４００ｍｌの細胞培養物（ＣＨＯ細胞系）から取得し、１０体積のＱＡ緩衝液（２０ｍＭトリスｐＨ ８．０、２０ｍＭ ＮａＣｌ）ｎに対し４．５時間透析した。透析した培地を０．２μｍで濾過し、ＱＡ緩衝液で予め平衡化したＳＯＵＲＣＥ（商標）Ｑカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）に１ｍｌ／分で装填した。マルチステップ直線勾配を用いてタンパク質を溶出した。ｃＩＬ－３１の大部分はフロースルー（ＦＴ）画分に残存し、少量のｃＩＬ－３１が勾配の初期に溶出した。タンパク質の同定は、ウェスタンイムノブロッティング及びトリプシン消化物の質量分析（ＭＳ）によって予め確認した。ＦＴ画分中のタンパク質を４～５倍濃縮し、４℃のリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）に対し終夜透析した。ＰＢＳへの透析後にタンパク質の安定性を調べた。４℃で数日おいた後、沈殿は観察されず、タンパク質分解も観察されなかった。Ｎ－グリコシダーゼＦを用いた脱グリコシル化実験の結果、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上で約１５ｋＤａのシングルバンドまでタンパク質が凝縮された。タンパク質濃度は、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を標準物質として用いたビシンコニン酸アッセイ（ＢＣＡアッセイ）を使用して決定した（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）。タンパク質溶液をアリコートに分割し、スナップ凍結し（液体Ｎ２）、－８０℃で保存した。
１．２．ＣＨＯ細胞からの野生型及び変異型ネコインターロイキン３１（ｆＩＬ－３１）の一過性発現
適切なエピトープ結合特性を備えた抗体の同定を補助するため、哺乳類発現系で野生型及び変異型ネコＩＬ－３１タンパク質を発現させて、親和性及び細胞ベースのアッセイで産生、精製、及び評価を行った。ＩＬ－３１上の抗体１１Ｅ１２の結合部位については過去に説明されている（Ｂａｍｍｅｒｔ，ｅｔ ａｌ．に対する米国特許第８，７９０，６５１号）。抗体１５Ｈ０５が認識するＩＬ－３１上の新規結合部位のキャラクタリゼーションについては、本明細書で説明されている。野生型の名称は全長ネコＩＬ－３１タンパク質であり、ネイティブアミノ酸残基に変化はない。変異型タンパク質は対応する抗体名（１１Ｅ１２及び１５Ｈ０５）により命名されており、（改変された場合に）各それぞれの抗体との結合に影響を及ぼすＩＬ－３１タンパク質のアミノ酸の変異を意味する。ネコＩＬ－３１ １５Ｈ０５タンパク質に必要な適切な変異の同定については、セクション１．１０で説明されている。目的は、ＩＬ－３１エピトープのアミノ酸を変更し、各それぞれの抗体に対する結合表現型の喪失を観察することであった。次に、スクリーニング中に比較を行って、新しい候補抗体が野生型タンパク質に結合し変異型に結合しないかを確認
することができる。次に、新たな抗体ヒットを、抗体１１Ｅ１２または１５Ｈ０５と同じまたは類似のエピトープとの結合に応じてビニングすることができる。
発現コンストラクトを、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞内での発現用にコドン最適化し合成した。合成した遺伝子を一過性発現用にｐＤ２５２９（ＡＴＵＭベクター）内でクローンした。野生型ネコＩＬ－３１タンパク質は（配列番号１５７；ネコ＿ＩＬ３１＿野生型）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１５８；ネコ＿ＩＬ３１＿野生型）である）によって表される。変異型ネコＩＬ－３１ １１Ｅ１２タンパク質は（配列番号１６１；ネコ＿ＩＬ３１＿１１Ｅ１２＿変異型）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１６２；ネコ＿ＩＬ３１＿１１Ｅ１２＿変異型）である）によって表される。変異型ネコＩＬ－３１ １５Ｈ０５タンパク質は（配列番号１６３；ネコ＿ＩＬ３１＿１５Ｈ０５＿変異型）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１６４；ネコ＿ＩＬ３１＿１５Ｈ０５＿変異型）である）によって表される。製造業者による一過性ＣＨＯ発現用の最大力価プロトコルに従うことにより、ＥｘｐｉＣＨＯ－Ｓ（商標）細胞（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）内で組換え型ネコＩＬ－３１タンパク質を発現させた。形質移入から１２日後、細胞を遠心分離及び濾過して、条件培地中の分泌タンパク質を捕捉した。各コンストラクト（野生型及び変異型）に対し、１２０ｍＬの条件培地（ＣＨＯ細胞培養物から０．２μｍで濾過）を、ＮａＣｌ、５ｍＭイミダゾール、及びｐＨ７．４を加えることにより３０ｍＳ／ｃｍに調整した。各培地試料を、５ｍＭイミダゾール、２０ｍＭリン酸ナトリウム、３００ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．４で平衡化した５ｍＬのＨｉｓＰｕｒコバルト樹脂（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）と合わせた。各試料及び樹脂を４℃で終夜混合した。ＢｉｏＲａｄエコノカラム（Ｅｃｏｎｃｏｌｕｍｎ）（Ｂｉｏ－Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）を介して注ぐことにより、樹脂を収集（及び結合していない画分から分離）した。樹脂を５×５ｍＬの緩衝液（上記と同じ）で洗浄し、次いで同じ緩衝液中の５×５ｍＬの５００ｍＭイミダゾールで溶出した。画分をＳＤＳ－ＰＡＧＥによって評価した。濃度は、標準的な方法を用いてＢＣＡタンパク質アッセイによって測定した。
１．３．Ｅ．ｃｏｌｉからのネコインターロイキン３１（ｆＩＬ－３１）の産生
アッセイ試薬として、及びネコの掻痒応答を誘導するｉｎ ｖｉｖｏチャレンジ研究に使用するため、Ｅ．ｃｏｌｉ発現宿主内で組換えネコＩＬ－３１タンパク質を生成した。Ｅ．ｃｏｌｉ内での最適な発現用にネコＩＬ－３１に相当する遺伝子を合成した。検出及び精製用にＮ末端側６－Ｈｉｓタグを含む全長ネコＩＬ－３１遺伝子を有する発現コンストラクトを作成した。このネコＩＬ－３１タンパク質は（配列番号１５９；ネコ＿ＩＬ－３１＿Ｅ＿ｃｏｌｉ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１６０；ネコ＿ＩＬ－３１＿Ｅ＿ｃｏｌｉ）である）によって表される。配列確認済みプラスミドを使用してＥ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１ ＤＥ３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ．，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を形質転換し、次にタンパク質を発現させた。
Ｅ．ｃｏｌｉからの細胞ペースト（２６２．３ｇ）を以下のようにして溶解した：細胞ペーストを５００ｍＬの５０ｍＭトリスｐＨ８に再懸濁させ、ステンレスメッシュフィルターで濾過して粒子を除去し、次にマイクロフルイダイザーに１３００ｐｓｉで２回通過させることによって溶解した。ライセート（約１２００ｍＬの体積）を４つのボトルに分割し、１０℃で２０分間、１２，０００ｇで遠心分離した。上清をデカントし廃棄した。各ペレットを、３００ｍＬの５ｍＭ ＥＤＴＡ、０．５％トリトンＸ－１００、ｐＨ９．０に懸濁させることにより洗浄し、次いで１０℃で５０分間、１２，０００ｇで遠心分離した。上清をデカントし廃棄した。洗浄したペレットは、フォールディング及び単離を行うまで－２０℃で保存した。
単離の前に、ペレットの１つを水で洗浄して残留洗剤を除去し、次いで４℃で２０分間、１０，０００ｇで遠心分離した。再び上清をデカントした。最後に、洗浄したペレットを６０ｍＬの５０ｍＭリン酸ナトリウム、３００ｍＭ ＮａＣｌ、６Ｍグアニジン－ＨＣｌ、５ｍＭイミダゾール、ｐＨ７．４に溶解した。ペレットを室温でおよそ２５分間混合した後、再び４℃で２０分間、１０，０００ｇで遠心分離した。このときは上清をデカントし、これをさらなる処理のために保管した。ペレット（水に再懸濁させ元の体積にしたもの）をＳＤＳ－ＰＡＧＥ専用に確保した。粗製ＩＭＡＣ（固定化金属親和性クロマトグラフィー）を実施して、フォールディングの前に純度を高めた。この場合において、１５ｍＬのＮｉ－ＮＴＡ Ｓｕｐｅｒｆｌｏｗ（Ｑｉａｇｅｎ Ｉｎｃ，Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ，ＭＤ（カタログ番号３０４５０、同じ緩衝液中で予め平衡化したもの））を清澄化した上清に添加し、室温でおよそ９０分間混合した。結合していない画分をデカントし、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ用に確保した。ＩＭＡＣ樹脂を５ｍＭイミダゾール、５０ｍＭリン酸ナトリウム、３００ｍＭ ＮａＣｌ、６Ｍグアニジン－ＨＣｌ、ｐＨ７．４（溶解バッファーと同じもの）で洗浄した。樹脂を２００ｍＭイミダゾール、５０ｍＭリン酸ナトリウム、３００ｍＭ ＮａＣｌ、６Ｍグアニジン－ＨＣｌ、ｐＨ７．４で溶出した（最初は７．５ｍＬ、次いで１５ｍＬの倍数で行い、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイによりタンパク質溶出をモニターした）。タンパク質を含む溶出画分（Ｂｒａｄｆｏｒｄに従う）をさらなる処理用にプールした（１２５ｍＬ）。
ＩＬ－３１タンパク質を以下のようにしてフォールディングした。ジチオトレイトールを添加することによりＩＬ－３１を最終的に１０ｍＭまで還元し、室温で２時間混合した。次いで希釈した試料を、２５００ｍＬ（２０倍体積）のＰＢＳ＋１Ｍ ＮａＣｌに滴下して迅速に撹拌しながら希釈した。この時点では、尿素の理論的濃度は約０．４Ｍであったと考えられる。残りの尿素は、３回交換したＰＢＳ（各４Ｌ）に対する透析により、４℃で終夜にわたりゆっくり除去した。透析後、試料を０．２μｍで濾過して、任意のフォールディングしていない／沈殿したタンパク質を除去した。
第２ラウンドのＩＭＡＣにより、今回は直線勾配溶出を用いて、試料をさらに精製した。１５ｍＬのＮｉ－ＮＴＡ Ｓｕｐｅｒｆｌｏｗ樹脂を試料に添加し、４℃で終夜（懸濁撹拌棒で）撹拌することにより、バッチ式で結合した。再度、結合していない画分をデカントし、これを確保した。Ｎｉ－ＮＴＡ Ｓｕｐｅｒｆｌｏｗ樹脂をＸＫ１６カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｒｌｂｏｒｏｕｇｈ，ＭＡ）に充填し、ＡＫＴＡブランドのクロマトグラフィーシステム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｒｌｂｏｒｏｕｇｈ，ＭＡ）に接続した。次いでカラムを５０ｍＭトリス、３００ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ８．２で洗浄し、０～５００ｍＭイミダゾールの１５０ｍＬ直線勾配により、各々を洗浄緩衝液中で溶出した。画分をＳＤＳ－ＰＡＧＥによって分析した。十分な純度のＩＬ－３１を有する画分をプールし、４℃で終夜にわたり、３回交換したＰＢＳ（各２Ｌ）に対する透析によって緩衝液を再度交換した。最後に、フォールディング及び精製した試料を透析から収集し、滅菌濾過し、濃度を測定し、分取し、ドライアイス／イソプロパノール浴中でスナップ凍結し、－８０℃で保存した。
１．４．表面プラズモン共鳴を用いて抗ＩＬ－３１抗体のＩＬ－３１に対する親和性を決定する方法
候補ｍＡｂがイヌ及びネコのＩＬ－３１に結合する親和性を、Ｂｉａｃｏｒｅシステム（Ｂｉｏｃｏｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ），Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）の表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を用いて決定した。抗体を表面に固定化する際に生じ得る異なる表面調製に関連する親和性の差を回避するため、ＩＬ－３１を表面に直接結合体化させる戦略が採用された。固定化は、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）／１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミ
ド（ＥＤＣ）化学を用いて５μｇ／ｍＬのＩＬ－３１をアミンカップリングすることによって得た。チップをエタノールアミンでクエンチし、固定化されたＩＬ－３１に結合した全ての候補ｍＡｂとの親和性を評価した。すべての曲線を１：１モデルに適合させた。１×１０－１１Ｍ（１Ｅ－１１Ｍ）未満の親和性定数（ＫＤ）を装置による検出の定量下限未満とする。親和性測定の結果を本明細書に記載する。
１．５．イヌ及びネコのマクロファージ細胞のイヌ及びネコＩＬ－３１誘導性ｐＳＴＡＴ３シグナル伝達の阻害によって評価される抗ＩＬ－３１抗体の効力を定量する方法
阻害活性を有する候補を同定するため、イヌまたはネコいずれかの細胞ベースアッセイで、抗体のＩＬ－３１媒介性ＳＴＡＴ３リン酸化に影響を及ぼす能力を評価した。イヌＤＨ－８２（ＡＴＣＣ（登録商標）ＣＲＬ－１０３８９（商標））またはネコＦＣＷＦ４マクロファージ様細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－２７８７）でＳＴＡＴ３リン酸化を定量したＤＨ８２及びＦＣＷＦ４細胞を、それぞれ１０ｎｇ／ｍＬのイヌインターフェロンガンマ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）で２４時間、または１２５ｎｇ／ｍＬのネコインターフェロンガンマ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）で９６時間プライミングして、受容体発現を増加させた。いずれの細胞タイプも、ＩＬ－３１及びｍＡｂ処置の前の２時間、血清飢餓状態にした。２つの独立した方法を用いて、全ての候補ｍＡｂについて、１μｇ／ｍＬイヌまたは０．２μｇ／ｍＬネコにおけるＩＬ－３１誘導性ＳＴＡＴ３リン酸化の阻害能力を評価した。またアッセイは、イヌ及びネコのサイトカインの交差反応性と、抗体における両方の種のシグナル伝達の阻害能力の交差機能性とを実証するためにも行った。複合体形成を確実に行うため、細胞を刺激する前にｍＡｂ及びＩＬ－３１サイトカインの１時間の共インキュベートを完了させた。ＩＬ－３１細胞刺激を５分間行った。ＳＴＡＴ３リン酸化は、ＡｌｐｈａＬＩＳＡ ＳｕｒｅＦｉｒｅ ＵＬＴＲＡ（商標）技術（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）を用いて測定した。抗体の濃度及び純度が不明の場合は、ハイブリドーマ上清を１ｍｇ／ｍｌのイヌＩＬ－３１または０．２ｍｇ／ｍｌのネコＩＬ－３１と共に１時間共インキュベートした後、ハイブリドーマ上清のＳＴＡＴ３リン酸化阻害能力を定性的に測定した。これらのアッセイにおける個々のモノクローナル抗体のＩＬ－３１媒介性ＳＴＡＴ３リン酸化阻害能力によって定義されるモノクローナル抗体の効力は、抗体選択をさらに進める上でのキーとなる選択基準とみなされた。効力という用語は、これらのアッセイから計算されたＩＣ５０値を意味し、ＩＬ－３１によって誘導されるシグナル伝達が最大値の半分まで減少する抗体の濃度である。本明細書で説明されている効力の増加は、ＩＣ５０値の低下と相関する。
１．６．イヌ及びネコのインターロイキン３１を認識するマウス及びイヌのモノクローナル抗体の同定
抗体を同定する目的で、マウス及びイヌを組換え型イヌＩＬ－３１（配列番号１５５）で免疫化した。酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を用いて免疫動物の血清抗体価を定量した。イヌまたはネコのＩＬ－３１（５０ｎｇ／ウェル）をポリスチレンマイクロプレートに固定化し、捕捉抗原として使用した。免疫動物からの血清を０．０５％ ｔｗｅｅｎ－２０（ＰＢＳＴ）を含むリン酸緩衝食塩水で希釈した。抗ＩＬ－３１抗体の存在を、適切なＨＲＰ標識二次抗体で検出した。発色基質（ＳｕｒｅＢｌｕｅ Ｒｅｓｅｒｖｅ ＴＭＢ １－Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ Ｍｉｃｒｏｗｅｌｌ Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（ＫＰＬ，Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ））を添加し、室温（ＲＴ）で１０分間インキュベートした後、１００μＬの０．１Ｎ ＨＣｌを添加して反応を停止した。各ウェルの吸光度を４５０ｎｍの光学密度（ＯＤ）で定量した。ＥＬＩＳＡを用いて、イヌ及びネコのＩＬ－３１への結合能力によって抗体を選択した。場合によっては、ネコＩＬ－３１タンパク質の変異型形態を捕捉抗原として用いたＥＬＩＳＡを使用して、選択時にさらなるキャラクタリゼーションを実施した。ＩｇＧの可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）に相当するＲＮＡ転写物の配列分析のために、所望の結合及
び阻害特性を備えた抗体を産生する細胞を選択した。
マウス抗体の場合、単一応答性ＣＦ－１マウスからのドナー脾細胞を融合に使用し、ＥＬＩＳＡにより、ハイブリドーマ上清においてイヌまたはネコのＩＬ－３１タンパク質のいずれかに結合する抗体をスクリーニングした。これにより、両方の種のＩＬ－３１に対しナノモル以下の親和性を有する単一のマウス抗体Ｍｕ－１５Ｈ０５が同定された（図２Ａ）。マウス抗ＩＬ－３１ １５Ｈ０５をさらにサブクローニングして均質な抗体を産生するハイブリドーマを生成し、可変重鎖及び軽鎖をシークエンシングした。抗体１５Ｈ０５について決定したマウス抗ＩＬ－３１可変配列は以下の通りであり、１５Ｈ０５可変重鎖（配列番号６７；ＭＵ－１５Ｈ０５－ＶＨ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号６８；ＭＵ－１５Ｈ０５－ＶＨ）である）、及び１５Ｈ０５可変軽鎖（配列番号６９；ＭＵ－１５Ｈ０５－ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列（配列番号７０；ＭＵ－１５Ｈ０５－ＶＬ）である）である。
マウス抗体１５Ｈ０５に加えて、さらに、過去にＢａｍｍｅｒｔ，ｅｔ ａｌ．に対する米国特許第８，７９０，６５１号で説明されているさマウス由来抗体１１Ｅ１２について検討した。本明細書では、抗体１１Ｅ１２がイヌ及びネコ両方のＩＬ－３１タンパク質に高親和性で結合する能力を示すデータを記載する。１１Ｅ１２はネコＩＬ－３１に結合することができるため、この抗体はネコ化とネコにおける治療使用の潜在可能性とにおいて好適な候補となった。抗体１１Ｅ１２について以前に決定したマウス抗ＩＬ－３１可変配列は以下の通りであり、１１Ｅ１２可変重鎖（配列番号７１；ＭＵ－１１Ｅ１２－ＶＨ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号７２；ＭＵ－１１Ｅ１２－ＶＨ）である）、及び１１Ｅ１２可変軽鎖（配列番号７３；ＭＵ－１１Ｅ１２－ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号７４；ＭＵ－１１Ｅ１２－ＶＬ）である）である。
ワクチン接種後に抗ＩＬ－３１力価が上昇したイヌを、所望の表現型を備えた抗体を産生するＢ細胞集団の分析用に選択した。Ｂ細胞は、さらなる分析のためにＰＢＭＣ、骨髄、脾臓、またはリンパ節から誘導した。単一のＢ細胞を個々のウェルに分離し、ＵＳ２０１２／０００９６７１ Ａ１、ＵＳ２０１６／０２５２４９５ Ａ１、ＵＳ９，１８８，５９３、ＷＯ２０１５／１７６１６２ Ａ９、及びＷＯ２０１６／１２３６９２ Ａ１で説明されている方法を用いて、イヌＩＬ－３１（ＡｂＣｅｌｌｅｒａ，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，ＢＣ）の野生型、１１Ｅ１２変異型、及び１５Ｈ０５変異型形態に結合可能な分泌ＩｇＧが存在するかアッセイした。
このスクリーニング戦略は、ＩＬ－３１タンパク質の共受容体複合体を介した結合及びシグナル伝達に不可欠となるＩＬ－３１タンパク質の既知の領域に基づくものである。スクリーニング用のこれらの変異型タンパク質の選択については、本出願のセクション１．２で説明されている。ＩｇＧの可変重鎖及び軽鎖ドメインのシークエンシングは、個々の候補Ｂ細胞からのＲＴ－ＰＣＲ反応後に行った。これらのスクリーニングによって９つのイヌ抗体が同定され、これらをさらなる評価用に選択した。これらのイヌ抗ＩＬ－３１可変配列は、以下の通りであり、ＺＩＬ１可変重鎖（配列番号７５；ＣＡＮ－ＺＩＬ１＿ＶＨ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号７６；ＣＡＮ－ＺＩＬ１＿ＶＨ）である）、ＺＩＬ１可変軽鎖（配列番号７７；ＣＡＮ－ＺＩＬ１＿ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号７８；ＣＡＮ－ＺＩＬ１＿ＶＬ）である）；ＺＩＬ８可変重鎖（配列番号７９；ＣＡＮ－ＺＩＬ８＿ＶＨ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号８０；ＣＡＮ－ＺＩＬ８＿ＶＨ）である）、ＺＩＬ８可変軽鎖（配列番号８１；ＣＡＮ－ＺＩＬ８＿ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号８２；ＣＡＮ－ＺＩＬ８＿ＶＬ）である）；ＺＩＬ９可変重鎖（配列番号８３；ＣＡＮ－ＺＩＬ９＿ＶＨ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号８４；ＣＡＮ－ＺＩＬ９＿ＶＨ）である）、ＺＩＬ９可変軽鎖（配列番号８５；ＣＡＮ－ＺＩＬ９＿ＶＬ）（これに対応する
ヌクレオチド配列は（配列番号８６；ＣＡＮ－ＺＩＬ９＿ＶＬ）である）；ＺＩＬ１１可変重鎖（配列番号８７；ＣＡＮ－ＺＩＬ１１＿ＶＨ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号８８；ＣＡＮ－ＺＩＬ１１＿ＶＨ）である）、ＺＩＬ１１可変軽鎖（配列番号８９；ＣＡＮ－ＺＩＬ１１＿ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号９０；ＣＡＮ－ＺＩＬ１１＿ＶＬ）である）；ＺＩＬ６９可変重鎖（配列番号９１；ＣＡＮ－ＺＩＬ６９＿ＶＨ）（これに対応するはヌクレオチド配列（配列番号９２；ＣＡＮ－ＺＩＬ６９＿ＶＨ）である）、ＺＩＬ６９可変軽鎖（配列番号９３；ＣＡＮ－ＺＩＬ６９＿ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号９４；ＣＡＮ－ＺＩＬ６９＿ＶＬ）である）；ＺＩＬ９４可変重鎖（配列番号９５；ＣＡＮ－ＺＩＬ９４＿ＶＨ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号９６；ＣＡＮ－ＺＩＬ９４＿ＶＨ）である）、ＺＩＬ９４可変軽鎖（配列番号９７；ＣＡＮ－ＺＩＬ９４＿ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号９８；ＣＡＮ－ＺＩＬ９４＿ＶＬ）である）；ＺＩＬ１５４可変重鎖（配列番号９９；ＣＡＮ－ＺＩＬ１５４＿ＶＨ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１００；ＣＡＮ－ＺＩＬ１５４＿ＶＨ）である）、ＺＩＬ１５４可変軽鎖（配列番号１０１；ＣＡＮ－ＺＩＬ１５４＿ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１０２；ＣＡＮ－ＺＩＬ１５４＿ＶＬ）である）；ＺＩＬ１５９可変重鎖（配列番号１０３；ＣＡＮ－ＺＩＬ１５９＿ＶＨ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１０４；ＣＡＮ－ＺＩＬ１５９＿ＶＨ）である）、ＺＩＬ１５９可変軽鎖（配列番号１０５；ＣＡＮ－ＺＩＬ１５９＿ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１０６；ＣＡＮ－ＺＩＬ１５９＿ＶＬ）である）；ＺＩＬ１７１可変重鎖（配列番号１０７；ＣＡＮ－ＺＩＬ１７１＿ＶＨ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１０８；ＣＡＮ－ＺＩＬ１７１＿ＶＨ）である）、ＺＩＬ１７１可変軽鎖（配列番号１０９；ＣＡＮ－ＺＩＬ１７１＿ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１１０；ＣＡＮ－ＺＩＬ１７１＿ＶＬ）である）である。
さらなるキャラクタリゼーション用に選択した上記の９つのモノクローナル抗体は、本明細書の他の箇所、図面、または特許請求の範囲でＺＩＬ１、ＺＩＬ８、ＺＩＬ８、ＺＩＬ１１、ＺＩＬ６９、ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、ＺＩＬ１５９、及びＺＩＬ１７１と称されることがある。
１．７．組換え型のキメラ型抗体及び完全イヌ抗体の構築
抗体可変ドメインは、抗原結合を担当する。完全可変ドメインをそれぞれの定常領域に移植した場合、抗体のＩＬ－３１免疫原への結合能力はほとんどまたは全く影響を受けないことが予想される。重鎖及び軽鎖可変領域の正しい配列が同定されたことを同時に確認し、均質な材料を生成するため、発現ベクターを、哺乳類発現系で組換え型のキメラ型抗体または完全イヌ抗体を生成するように設計した。ここで説明するキメラ型抗体は、ネコまたはイヌのＩｇＧ分子のそれぞれの重鎖及び軽鎖の定常領域に移植された宿主種抗体からの可変配列（ＣＤＲ及びフレームワークの両方）からなる（例えば、マウス可変配列：イヌ定常領域はマウス：イヌキメラ型と称される）。ここで説明する完全イヌ抗体は、イヌＩｇＧ分子のそれぞれの重鎖及び軽鎖の定常領域に移植された宿主種抗体（イヌ）からの可変配列（ＣＤＲとフレームワークの両方）からなる。選択した抗体の可変重鎖（ＶＨ）配列及び可変軽鎖（ＶＬ）配列のために合成ＤＮＡ配列を構築した。これらの配列は、ユニークな制限エンドヌクレアーゼ部位と、Ｋｏｚａｋコンセンサス配列と、哺乳類細胞系からの組換え型抗体の発現及び分泌を促進するためのＮ末端側分泌リーダーとを含む。
マウス：ネコキメラ型については、各それぞれの可変領域を、ネコＩｇＧ重鎖定常領域（配列番号１７３；ネコ＿ＨＣ＿アレルＡ＿１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１７４；ネコ＿ＨＣ＿アレルＡ＿１）である）、または軽鎖定常領域（配列番号１７５；ネコ＿ＬＣ＿カッパ＿Ｇ＿マイナス）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１７６；ネコ＿ＬＣ＿カッパ＿Ｇ＿マイナス）である）のいずれかを含む哺乳類発
現プラスミド内でクローンした。マウス：イヌキメラ型抗体または完全イヌ抗体については、各々のマウスまたはイヌの可変領域を、イヌＩｇＧ重鎖定常領域（配列番号１７７：イヌ＿ＨＣ＿６５＿１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１７８；イヌ＿ＨＣ＿６５＿１）である）または軽鎖定常領域（配列番号１７９；イヌ＿ＬＣ＿カッパ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１８０；イヌ＿ＬＣ＿カッパ）である）のいずれかを含む哺乳類発現プラスミド内でクローンした。標準的な方法を用いて、ＣＭＶプロモーターの制御下で各々の重鎖及び軽鎖をコードするプラスミドをＨＥＫ２９３細胞に同時形質移入した。発現から６日後、タンパク質精製の標準的方法に従ってＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕｒｅプロテインＡ樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を用いて、５０ｍｌの一過的に形質移入したＨＥＫ２９３ＦＳ細胞上清からキメラ型ｍＡｂを精製した。溶出画分をプールし、１０，０００名目ＭＷカットオフＮａｎｏｓｅｐ Ｏｍｅｇａ遠心デバイス（Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐ．，Ｐｏｒｔ Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＮＹ）を用いて約５００μｌまでのウシュク氏、１×ＰＢＳ、ｐＨ７．２中４℃で終夜透析し、さらなる使用のために４℃で保存した。以下、選択組換え型抗体の親和性及び細胞ベース効力について説明する。
図２は、ｂｉａｃｏｒｅを用いてマウス起源由来のＣＤＲを有する抗体の親和性を詳述している。図２ａは、マウス抗ＩＬ－３１抗体１１Ｅ１２及び１５Ｈ０５の親和性、ならびにネコ及びイヌ両方のＩＬ－３１表面に対するネコ及びイヌのキメラ型形態の対応する親和性を示している。これらの観察結果から、両方のマウス抗体の正しい配列が確認され、そしてキメラ型への変換により、マウス親抗体と比較して同等またはそれ以上の親和性を備えた抗体が得られることが示される。ただし、マウス：ネコ１５Ｈ０５キメラ型は例外で、キメラ型形態に変換した結果、両方のＩＬ－３１種に対するいくらかの親和性が喪失した。
抗体１１Ｅ１２及び１５Ｈ０５の完全マウス及びキメラ型形態についても、セクション１．５で説明されているイヌ及びネコの細胞アッセイにおける活性を試験した。図３は、これらのアッセイの結果を示している。マウス抗体１１Ｅ１２及び１５Ｈ０５について、シグナル伝達を刺激するためにイヌ及びネコ両方のＩＬ－３１を用いてイヌ及びネコの細胞タイプに対する活性を試験した。両方のマウス抗体の効力は、ネコサイトカインを用いたイヌ及びネコ両方の細胞に対し同等であったが、ネコＦＣＷＦ４細胞におけるネコＩＬ－３１に対する１５Ｈ０５は例外で、ＩＣ５０のわずかな増加を示している。マウス１５Ｈ０５はネコ及びイヌ両方の細胞でイヌＩＬ－３１シグナル伝達を遮断可能であり、イヌアッセイでの効力がわずかに高かった。これらの結果は、これらの抗体が認識するそれぞれのエピトープが、イヌ及びネコ両方のＩＬ－３１に存在することと、これらの抗体の結合が、両方の種からの関連細胞系における受容体媒介性細胞シグナル伝達を中和可能であることとを示している。
図３は、両方の細胞アッセイでの選択キメラの効力についても記載している。ネコ効力アッセイにおいて、ネコ抗体からネコ及びイヌのキメラ型への変換がネコＩＬ－３１に対する効力に及ぼす影響は最小限であった（ＩＣ５０範囲１．１５～３．４５μｇ／ｍｌ）。これらのキメラ型をイヌＤＨ８２細胞系でネコＩＬ－３１シグナル伝達に対し試験したときにも同様の結果が観察され、１５Ｈ０５マウス：イヌキメラ型においてわずかな効力の増加（ＩＣ５０＝０．７１μｇ／ｍｌ）が観察された。概して、イヌ及びネコ両方の細胞タイプにおいてイヌＩＬ－３１に対するＩＣ５０値が増加した。マウス：ネコ１５Ｈ０５キメラ型は、このアッセイ形式ではマウス：イヌ形態と比較してわずかに効力が弱かった（ＩＣ５０ １２．４９μｇ／ｍｌに対し２８．６１μｇ／ｍｌ）。マウス抗体での観察結果と整合して、イヌ及びネコのキメラ型形態への変換による効力の変化は最小限であった。
上記の免疫化したイヌの単一のＢ細胞から同定した抗体を、これらの可変ドメイン配列を同定した後に組換え型ＩｇＧタンパク質として構築した。これらの可変ドメインをイヌ重鎖Ｆｃ（６５＿１アイソタイプ）に移植した結果、組換え型の完全イヌ抗体が生成された。関心対象となったのは、野生型ネコＩＬ－３１に結合する追加的なイヌ抗体を同定し、どのイヌ抗体のネコＩＬ－３１ １５Ｈ０５変異型との結合が減少するかを同定することであった（すなわち、１５Ｈ０５エピトープを対象とする）。この代替供給源（イヌｖｓマウス）から得られたこれらの抗体は、１５Ｈ０５エピトープを認識し、そのため選択対象となる異なる物理的特性を備えた抗体の多様性を高める追加的なパラトープ（ＩＬ－３１タンパク質を認識する抗体の部分、ＣＤＲを含む）を提供する。
図４は、ＥＬＩＳＡ及びＢｉａｃｏｒｅ両方の方法を用いて、これらの組換え型イヌ抗体の様々なタンパク質との結合において得られた結果を示している。間接ＥＬＩＳＡ法では、野生型及びネコＩＬ－３１ １５Ｈ０５変異型タンパク質に対する抗体結合を評価した。９つのイヌモノクローナル抗体（ＺＩＬ１、ＺＩＬ８、ＺＩＬ８、ＺＩＬ１１、ＺＩＬ６９、ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、ＺＩＬ１５９、及びＺＩＬ１７１）全てが野生型ネコＩＬ－３１に結合可能であり、結合はｍＡｂ １５Ｈ０５エピトープ領域の変異による影響を受けており、これらの同定に使用した最初のスクリーニング中に決定した結合表現型が正しいことが確認された。一方、１１Ｅ１２抗体は野生型ネコＩＬ－３１に結合し、その結合は、図４のデータで裏付けられているように１５Ｈ０５エピトープ領域の変異による影響を受けなかった。結合を確認するため、イヌ、ネコ、ウマ、ヒト、ネコ１５Ｈ０５変異型、及びネコ１１Ｅ１２変異型のＩＬ－３１タンパク質を表面として用い、そして抗体の単一試験濃度を用いてｂｉａｃｏｒｅ分析を実施した。ＥＬＩＳＡでの観察結果と同様に、全ての試験抗体は野生型ネコＩＬ－３１に結合した。このセクションで先に説明したデータと一致して、マウス抗体１１Ｅ１２及び１５Ｈ０５の両方がイヌ及びネコのＩＬ－３１表面に結合した。３つの追加的な抗体、ＺＩＬ６９（部分的イヌ結合）、ＺＩＬ９４、及びＺＩＬ１５９が、この二重結合特性を有することが示された。この９つの完全イヌ抗体の群からは、ＺＩＬ１及びＺＩＬ９のみがウマＩＬ－３１と交差反応した。注目すべきことに、抗体１５Ｈ０５は、本明細書でアッセイした全ての抗体の中でイヌ、ネコ、及びウマのＩＬ－３１に結合した唯一の抗体であり、３種にまたがるいくらかのレベルのエピトープ保存を示している。これに対し、本明細書で説明されている抗体でヒトＩＬ－３１に結合したものはない。追加的なｂｉａｃｏｒｅ表面を使用して、諸抗体において野生型ネコＩＬ－３１ならびに１５Ｈ０５エピトープの変異（１５Ｈ０５変異型）または１１Ｅ１２エピトープの変異（１１Ｅ１２変異型）を伴った２つのタンパク質との結合に差があることを示すＥＬＩＳＡの観察結果を検証した。予想された通り、対照マウス抗体１１Ｅ１２は、１５Ｈ０５ ＩＬ－３１変異型には結合したが、エピトープの変異により、１１Ｅ１２ ＩＬ－３１変異型には結合しなかった。同様に、マウス１５Ｈ０５は、１５Ｈ０５変異型には結合しなかったが、１１Ｅ１２ ＩＬ－３１変異型との結合は保持しており、これら２つの抗体が認識する別々の結合エピトープをさらに区別した。ＥＬＩＳＡの結果と一致して、（部分的に影響を受けた）ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、及びＺＩＬ１７１を除き、全ての完全イヌ抗体は１５Ｈ０５変異による影響を受けた。結果の相違は、２つのアッセイの方法論の違いに起因するものと考えられる。加えて、３つの抗体の結合は、１１Ｅ１２変異型による影響も受けることが示された（ＺＩＬ１（部分的な効果）、ＺＩＬ８、及びＺＩＬ１５９）。これらの結果は、これらの抗体が認識するエピトープが、ＩＬ－３１タンパク質の両方の領域の変化によって影響を受けることを示すものである。まとめると、これらの結果は、抗体１５Ｈ０５が認識するネコＩＬ－３１タンパク質上の領域との結合を共有するイヌＢ細胞由来の９つの抗体のキャラクタリゼーションを支持するものである。
１．８．マウス１１Ｅ１２及び１５Ｈ０５抗体のネコ化ならびに結合親和性の最適化
抗薬物抗体（ＡＤＡ）の生成は、モノクローナル抗体を含めた任意の生物治療用タンパ
ク質の有効性の喪失と関連する可能性がある。網羅的な文献評価により、モノクローナル抗体の種分化はｍＡｂが免疫原性になる傾向を低減し得ることが示されているが、免疫原性の完全ヒトｍＡｂ及び非免疫原性のキメラｍＡｂの例も見出され得る。本明細書で提供する抗ＩＬ－３１モノクローナル抗体のＡＤＡ形成に関連するリスクを軽減する一助とするため、ネコ化戦略が採用された。このネコ化戦略は、ＣＤＲ移植に最も適切なネコ生殖系列抗体配列を同定することに基づく。可変重鎖及び軽鎖両方において全ての利用可能なネコ生殖系列配列を詳細に分析した後に、マウスｍＡｂに対する相同性に基づいて生殖系列候補を選択し、マウスｍＡｂ前駆細胞からのＣＤＲを使用してネイティブネコＣＤＲを置き換えた。目的は、ネコ抗体フレームワークを用いて高い親和性及び細胞ベース活性を保持して、ｉｎ ｖｉｖｏでの免疫原性の潜在可能性を最小限に抑えることであった。ネコ化ｍＡｂを発現させ、細胞ベースアッセイでネコ化ｍＡｂのネコＩＬ－３１に対する親和性と効力とをキャラクタリゼーションした。ネコ化抗体がＩＬ－３１への結合能力を喪失した場合、系統的な精査を行って、１）機能喪失の原因となる鎖と、２）機能喪失の原因となるフレームワークと、３）機能喪失の原因となるアミノ酸（複数可）とを同定した。
ｍＡｂ １１Ｅ１２及び１５Ｈ０５のネコ化可変重鎖及び軽鎖に相当する合成ヌクレオチドコンストラクトを作製した。各々の可変鎖をそれぞれのネコ重鎖またはカッパ定常領域を含むプラスミド内でサブクローンした後、抗体を発現させるため、プラスミドをＨＥＫ２９３細胞に同時形質移入した。抗体１１Ｅ１２のネコ化における最初の試みは、ＶＬフレームワーク（配列番号１１３；ＦＥＬ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１１４；ＦＥＬ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ１）である）及び（配列番号１１５；ＦＥＬ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ２）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１１６；ＦＥＬ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ２）である）と別個に対形成した単一のネコＶＨフレームワーク（配列番号１１１；ＦＥＬ＿１１Ｅ１２＿ＶＨ１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１１２；ＦＥＬ＿１１Ｅ１２＿ＶＨ１）である）の利用に焦点を絞って、それぞれネコ１１Ｅ１２ １．１及びネコ１１Ｅ１２ １．２を形成することであった。この種分化の試みにより、マウス形態の抗体と比較すると、ネコ及びイヌ両方のＩＬ－３１タンパク質に対するネコ１１Ｅ１２ １．１の親和性が喪失し、ネコ１１Ｅ１２ １．２ ｍＡｂの結合は完全に喪失した（図２ｂ）。これらの種分化抗体の効力を、ネコＩＬ－３１サイトカインを用いたイヌＤＨ８２及びネコＦＣＷＦ４細胞アッセイで試験した。ネコ化１１Ｅ１２ １．１のネコＩＬ－３１に対する効力は、ネコＦＣＷＦアッセイにおいて、マウスバージョンの抗体と比較するとおよそ２倍減少した。ネコ化１１Ｅ１２ １．２における親和性喪失と一致して、この抗体における細胞効力の完全な喪失が観察された（図３）。ｍＡｂ １１Ｅ１２オーソログのイヌ化中における過去の経験に基づき、同様の戦略をとってネコ化に対する親和性喪失の回復を試みた（Ｂａｍｍｅｒｔ，
ｅｔ ａｌ．に対する米国特許第８，７９０，６５１号）。ネコ１１Ｅ１２ ＶＬ１のネコ化フレームワーク２（ＦＷ２）領域を（配列番号７３；Ｍｕ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号７４；Ｍｕ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ）である）からのマウスＦＷ２で置き換えて、ネコ１１Ｅ１２ ＶＬ１ ＦＷ２を生成した。加えて、ネコＶＬの４６位における単一置換（Ｋ４６Ｑ）を実施して、（配列番号１１９；ＦＥＬ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ１＿Ｋ４６Ｑ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１２０；ＦＥＬ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ１＿Ｋ４６Ｑ）である）を生成した。上記のＶＬとＦｅｌ＿１１Ｅ１２＿ＶＨ１との対形成により、それぞれネコ１１Ｅ１２ １．１ ＦＷ２及びネコ１１Ｅ１２ １．１ Ｋ４６Ｑが得られた。ＦＷ２の変更によってネコＩＬ－３１タンパク質に対するネコ１１Ｅ１２ １．１ ＦＷ２の親和性が回復し、その結果、マウス及びキメラ型形態と同等のＫＤが得られた（図２Ａ及び２Ｂ）。ただし、これらの変更により、イヌＩＬ－３１タンパク質に対するネコ１１Ｅ１２ １．１ ＦＷ２の親和性に有害な影響がもたらされた。このことは、抗体１１Ｅ１２におけるネコ及びイヌのサイトカイン上のこのエピトープへの結合能力の性質に明確な違いがあることを示している。ネ
コ１１Ｅ１２ １．１ Ｋ４６Ｑの単一アミノ酸置換は、この抗体の親和性に影響を及ぼすことができなかった。抗体１１Ｅ１２ １．１ ＦＷ２のネコＩＬ－３１タンパク質に対する親和性が増加したことにより、イヌＤＨ８２アッセイでネコサイトカインに対する効力が増加した（図３）。
マウス抗体１５Ｈ０５に対するネコ化の試みは、合計９つのネコ化ｍＡｂにおける３つのネコＶＨフレームワークと３つのネコＶＬフレームワークとの組合せに焦点を絞った。ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１（配列番号１２１；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１２２；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１）である）を、（配列番号１２７；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１２８；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１）である）、（配列番号１２９；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ２）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１３０；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ２）である）、及び（配列番号１３１；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ３）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１３２；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ３）である）と組み合わせ、これらを使用してそれぞれネコ１５Ｈ０５ １．１、ネコ１５Ｈ０５ １．２、及びネコ１５Ｈ０５ １．３を作成した。ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ２（配列番号１２３；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ２）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１２４；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ２）である）を、（配列番号１２７；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１２８；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１）である）、（配列番号１２９；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ２）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１３０；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ２）である）、及び（配列番号１３１；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ３）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１３２；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ３）である）と組み合わせ、これらを使用してそれぞれネコ１５Ｈ０５ ２．１、ネコ１５Ｈ０５ ２．２、及びネコ１５Ｈ０５ ２．３を作成した。ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ３（配列番号１２５；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ３）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１２６；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ３）である）を、（配列番号１２７；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１２８；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１）である）、（配列番号１２９；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ２）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１３０；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ２）である）、及び（配列番号１３１；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ３）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１３２；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ３）である）と組み合わせ、これらを使用してそれぞれネコ１５Ｈ０５ ３．１、ネコ１５Ｈ０５ ３．２、及びネコ１５Ｈ０５ ３．３を作成した。抗体１１Ｅ１２における観察結果と同様に、抗体１５Ｈ０５のネコ化の最初の試みにより、マウス１５Ｈ０５と比較するとネコＩＬ－３１タンパク質に対する親和性が喪失し、１５Ｈ０５マウスネコキメラ型と比較すると中立的影響がもたらされた（図２Ａ及び２Ｃ）。ネコ化抗体１１Ｅ１２のイヌＩＬ－３１との結合における観察結果と同様に、ネコ１５Ｈ０５のある特定のＶＨフレームワークとＶＬフレームワークとの組合せは、イヌＩＬ－３１に対する親和性に中立的～肯定的な影響を及ぼした（図２Ｃ：ネコ１５Ｈ０５ １．１、２．２、及び３．２を参照）。
ネコ化抗体１５Ｈ０５の親和性を回復する試みにおいて、各ネコ化１５Ｈ０５ ＶＨをマウス１５Ｈ０５ ＶＬと対形成してヘテロキメラ型抗体を生成した。ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１（配列番号１２１；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１２２；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１）である）をＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ（配列番号６９；ＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号７０；ＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ）である）と組み合わせてネコ１５Ｈ０５ ＶＨ１マウスＶＬを生成した。ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ２（配列番号１２３；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ２）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１２４；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ２）である）をＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ（配列番号６９；ＭＵ＿１５Ｈ
０５＿ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号７０；ＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ）である）と組み合わせてネコ１５Ｈ０５ ＶＨ２マウスＶＬを生成した。ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ３（配列番号１２５；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ３）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１２６；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ３）である）をＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ（配列番号６９；ＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号７０；ＭＵ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ）である）と組み合わせてネコ１５Ｈ０５ ＶＨ３マウスＶＬを生成した。これらのネコ化ＶＨマウスＶＬヘテロキメラ型について、イヌ及びネコのＩＬ－３１に対する親和性を分析した。ネコ化１５Ｈ０５ ＶＨ１及びＶＨ３をマウス１５Ｈ０５ ＶＬと対形成することにより、ネコＩＬ－３１に対する親和性がマウス及びキメラ形態と同等以上に回復した。この親和性改善傾向は、イヌＩＬ－３１タンパク質に対しても観察された（図２Ａ及び２Ｃ）。
親和性喪失の原因となる１５Ｈ０５フレームワークの位置をさらに精査するため、１５Ｈ０５の単一ネコ化ＶＨ（ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１）を使用して、マウス１５Ｈ０５
ＶＬからの個々のフレームワーク置換と対形成した。ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１（配列番号１２２；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１２３；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１）である）を、ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ１（配列番号１３３；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１３４；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ１）である）、ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２（配列番号１３５；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１３６；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２）である）、及びＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ３（配列番号１３７；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ３）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１３８；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ３）である）と別個に組み合わせて、それぞれネコ１５Ｈ０５ １．１ ＦＷ１、ネコ１５Ｈ０５ １．１ ＦＷ２、及びネコ１５Ｈ０５ １．１ ＦＷ３を作成した。ネコ１５Ｈ０５ １．１に対するマウス１５Ｈ０５
ＦＷ１の置換は、ネコ及びイヌ両方のＩＬ－３１に対する親和性に有害であったが、ネコ１５Ｈ０５ １．１に対しマウスＦＷ２またはＦＷ３を置換した場合は、イヌ及びネコのＩＬ－３１に対する秀逸な親和性が達成され、両方の種においてＦＷ２がより優れていた（図２Ｃ）。追加的な対によるフレームワーク置換を実施して、このアプローチによる親和性調節の程度を定量した。ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１（配列番号１２１；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１２２；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１）である）を、ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ１＿２（配列番号１３９；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ１＿ＦＷ２）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１４０；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ１＿ＦＷ２）である）、ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿３（配列番号１４３；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿ＦＷ３）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１４４；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿ＦＷ３）である）、及びＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ１＿３（配列番号１４１；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ１＿ＦＷ３）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１４２；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ１＿ＦＷ３）である）と別個に組み合わせて、それぞれネコ１５Ｈ０５ １．１ ＦＷ１＿２、ネコ１５Ｈ０５ １．１ ＦＷ２＿３、及びネコ１５Ｈ０５ １．１ ＦＷ１＿３を得た。興味深いことに、マウスＦＷ１単独の置換は親和性に有害であったが、ＦＷ１とＦＷ２またはＦＷ３との組合せは、ネコ及びイヌ両方のＩＬ－３１に良好な親和性をもたらした（図２Ｃ）。
最後に、ネコフレームワークの復帰変異の数を最小限に抑える試みを、最も有望なネコ化ＶＨ及びＶＬ配列の組合せから行った。このために、ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１（配列番号１２１；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１２２；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１）である）を、ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１
＿ＦＷ２＿Ｋ４２Ｎ（配列番号１４５；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｋ４２Ｎ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１４６；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｋ４２Ｎ）である）、ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｖ４３Ｉ（配列番号１４７；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｖ４３Ｉ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１４８；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｖ４３Ｉ）である）、ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｌ４６Ｖ（配列番号１４９；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｌ４６Ｖ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１５０；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｌ４６Ｖ）である）、ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｙ４９Ｎ（配列番号１５１；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｙ４９Ｎ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１５２；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｙ４９Ｎ）である）、及びＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｋ４２Ｎ＿Ｖ４３Ｉ（配列番号１５３；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｋ４２Ｎ＿Ｖ４３Ｉ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１５４；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２＿Ｋ４２Ｎ＿Ｖ４３Ｉ）である）と別個に組み合わせて、それぞれネコ１５Ｈ０５ １．１ Ｋ４２Ｎ、ネコ１５Ｈ０５ １．１ Ｖ４３Ｉ、ネコ１５Ｈ０５ １．１ Ｌ４６Ｖ、ネコ１５Ｈ０５ １．１ Ｙ４９Ｎ、及びネコ１５Ｈ０５ １．１ Ｋ４２Ｎ＿Ｖ４３Ｉを作成した。ネコ化１５Ｈ０５ ＶＬ１に対しマウスＦＷ２フレームワーク全体を置換したところ、イヌ及びネコのＩＬ－３１に対する秀逸な親和性を備えた抗体が得られた（図２Ｃ、ネコ１５Ｈ０５ １．１ ＦＷ２）が、ＦＷ２アミノ酸残基の個別の復帰変異は中立的または有害な影響を及ぼした。このことから、ＩＬ－３１エピトープにＣＤＲを配置するための最適な３次構造を維持するには、４つ全ての置換が必要であることが示される。ネコ化１５Ｈ０５ １．１ ＦＷ２がネコ及びイヌのＩＬ－３１に対する親和性を増加させたことにより、この抗体をさらなる課題向けに選択する。
図５Ａはマウス抗体１１Ｅ１２ ＶＬ配列のアラインメントを示し、先に言及したイヌ化１１Ｅ１２配列をネコ化バージョンと比較している。アラインメントの下に記されているドットはＦｅｌ＿１１Ｅ１２＿ＶＬ１の関連する変化の位置を示しており、この変化はこの抗体のＩＬ－３１タンパク質に対する親和性を回復するために必要であった。同様に、図５Ｂは、ネコ化１５Ｈ０５ ＶＬ（Ｆｅｌ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１）に必要な変化を示しており、この変化は、この抗体のマウス及びキメラ形態と比較したときのイヌ及びネコのＩＬ－３１に対する親和性を回復するだけでなく改善するために必要であった。
１．９．グルタミンシンターゼ（ＧＳ）プラスミドからネコ化抗ＩＬ－３１抗体を発現させる細胞系の生成
ネコ化１５Ｈ０５ １．１ ＦＷ２を、さらなるキャラクタリゼーション用の抗体を均質に供給する安定した細胞系を生成するための候補として選択した。細胞系産生のためのネコ化重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子を、それぞれＧＳプラスミドｐＥＥ ６．４及びｐＥＥ １２．４（Ｌｏｎｚａ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）内でクローンした。得られたプラスミドを製造業者のプロトコルに従って消化させ、共にライゲーションして単一の哺乳類発現プラスミドを形成した。ＺＴＳ－９２７において、重鎖は、（配列番号１２１；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１２２；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１）である）とネコＩｇＧ重鎖定常領域（配列番号１７１；ネコ＿ＨＣ＿アレルＡ＿ｗｔ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１７２；ネコ＿ＨＣ＿アレルＡ＿ｗｔ）である）との組合せである。ＺＴＳ－９２７において、軽鎖は、（配列番号１３５；ＦＥＬ－１５Ｈ０５－ＶＬ１＿ＦＷ２）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１３６；ＦＥＬ－１５Ｈ０５－ＶＬ１＿ＦＷ２）である）とネコＩｇＧ軽鎖定常領域（配列番号１７５；ネコ＿ＬＣ＿カッパ＿Ｇ＿マイナス）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１７６；ネコ＿ＬＣ＿カッパ＿Ｇ＿マイナス）である）との組合せである。ＺＴＳ－３６１において、重鎖は、（配列番号１２１；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１２
２；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１）である）とネコＩｇＧ重鎖定常領域（配列番号１７３；ネコ＿ＨＣ＿アレルＡ＿１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１７４；ネコ＿ＨＣ＿アレルＡ＿１）である）との組合せである。ＺＴＳ－３６１において、軽鎖は、（配列番号１３５；ＦＥＬ－１５Ｈ０５－ＶＬ１＿ＦＷ２）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１３６；ＦＥＬ－１５Ｈ０５－ＶＬ１＿ＦＷ２）である）とネコＩｇＧ軽鎖定常領域（配列番号１７５；ネコ＿ＬＣ＿カッパ＿Ｇ＿マイナス）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１７６；ネコ＿ＬＣ＿カッパ＿Ｇ＿マイナス）である）との組合せである。ＺＴＳ－１５０５において、重鎖は、（配列番号１２１；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１２２；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１）である）とネコＩｇＧ重鎖定常領域（配列番号１７３；ネコ＿ＨＣ＿アレルＡ＿１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１７４；ネコ＿ＨＣ＿アレルＡ＿１）である）との組合せである。ＺＴＳ－１５０５において、軽鎖は、（配列番号１３５；ＦＥＬ－１５Ｈ０５－ＶＬ１＿ＦＷ２）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１３６；ＦＥＬ－１５Ｈ０５－ＶＬ１＿ＦＷ２）である）とネコＩｇＧ軽鎖定常領域（配列番号１８６；ネコ＿ＬＣ＿カッパ＿Ｇ＿マイナス＿ＱＲＥ＿マイナス）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１８７；ネコ＿ＬＣ＿カッパ＿Ｇ＿マイナス＿ＱＲＥ＿マイナス）である）との組合せである。ＺＴＳ－１５０５の親和性及び効力のデータについては、本実施例セクションのセクション１．１８で後述する。
抗体の一過性産生を実証するため、各プラスミドをＨＥＫ２９３細胞の形質移入に使用し、発現を様々なサイズの培養物で行った。標準的なタンパク質精製法に従い、プロテインＡ親和性クロマトグラフィーを用いて条件ＨＥＫ培地からタンパク質を単離した。培地をクロマトグラフィー樹脂に装填し、ｐＨシフトによって溶出した。溶出したタンパク質は、使用前にｐＨ調整、透析、滅菌濾過を行った。次に、ＺＴＳ－３６１をネコ掻痒モデルの評価に使用してｉｎ ｖｉｖｏ有効性を評価した。
単一のＧＳプラスミドから産生した抗体、ＺＴＳ－９２７及びＺＴＳ－３６１の親和性及び効力を試験した。図２Ｄは、ｂｉａｃｏｒｅを用いたこれらの抗体の親和性評価の結果を示している。ネコＩＬ－３１に対するＺＴＳ－９２７及びＺＴＳ－３６１の親和性は、マウス及びキメラ型形態の前駆細胞マウスｍＡｂ １５Ｈ０５の親和性との整合性が高い。イヌ及びネコ両方の細胞アッセイを用いて、イヌ及びネコのＩＬ－３１に対するこれら２つの抗体の効力を定量した（図３）。以前の観察結果と整合して、両方の細胞タイプに対しイヌ形態のＩＬ－３１を使用した場合、ＩＣ５０値は比例して高くなった。ネコＩＬ－３１に対するＺＴＳ－９２７及びＺＴＳ－３６１のＩＣ５０値は、キメラ型及びマウス形態の抗体に由来する値との整合性も高く、このことから単一のＧＳプラスミドから産生した最終ネコ化バージョンのｍＡｂ １５Ｈ０５が細胞系開発に好適であることが示された。
候補抗体を産生する安定した細胞株を生成するため、ＧＳプラスミドを線状化してから、プラスミド骨格内の単一部位を切断する制限酵素ＰｖｕＩを形質移入した。エレクトロポレーションを介してＧＳ－ＣＨＯＫ１ＳＶ（クローン１４４Ｅ１２）細胞に線状化プラスミドＤＮＡを形質移入した。形質移入後、安定したプールを生成するため、細胞を４８ウェルプレート（４８ＷＰ）で平板培養した。４８ＷＰでプールが少なくとも５０％コンフルエントになったら、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ及びプロテインＡバイオセンサー（Ｐａｌｌ ＦｏｒｔｅＢｉｏ，Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ）を用いて１００μｌ上清のＩｇＧ発現を分析した。最良の発現クローンを６ウェルプレート（６ＷＰ）にスケールアップし、次いで１２５ｍＬ振とうフラスコ（ＳＦ）にスケールアップした。細胞が１２５ｍＬフラスコの懸濁培養に適応したら、各細胞系プールの２つのバイアルをＬＮ保管用にバンクした。細胞系の製造はクローン性でなければならないため、９６ウェル培養プレートでの限界希釈により上位３つの高発現プールをサブクローンした。クローン性を証明し、第
２ラウンドの限界希釈を回避するため、単一細胞及びその後の成長の画像を取り込むＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｃｌｏｎｅ－Ｓｅｌｅｃｔ Ｉｍａｇｅｒ（ＣＳＩ）（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ ＬＬＣ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を用いて９６ウェルプレートをイメージングした。クローンは、９６ＷＰにおける好結果のＣＳＩ画像、成長、及び産生に基づき選択した。
細胞培養の成長及び生産性を評価するため、上位発現プールを１２５ｍＬ ＳＦ中１４日間の流加バッチでさらに評価した。細胞を、プラットフォーム培地ならびにＬｉｆｅ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓのＣＤ ＣＨＯに４つのアミノ酸を加えたもの、独自フィードＣＤＦ ｖ６．２、及び１０％グルコースからなるフィードに播種した。１４日間の流加バッチ後にプールを遠心分離し、０．２０μｍポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）メンブレンを介し上清を濾過することによってＣＤ ＣＨＯで産生されたｍＡＢを単離し、それから精製を行った。
典型的な精製は、２リットルの条件培地（ＣＨＯ細胞培養からのもの、０．２μｍ濾過済み）をＭａｂＳｅｌｅｃｔ（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号１７－５１９９－０２）の２３５ｍＬカラムに装填することからなった。カラムは、予めＰＢＳで平衡化した。試料は＞２．５分の滞留時間で装填した。装填後、カラムをＰＢＳで再度洗浄し、次いで２５ｍＭ酢酸ナトリウム（ほぼ中性のｐＨ）で洗浄した。カラムを２５ｍＭ酢酸、ｐＨ３．６で溶出し、次いで２５０ｍＭ酢酸、２５０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ約２．２でストリッピングした。溶出及びストリップのステップ中に画分（５０ｍＬ）を収集した。Ａ２８０におけるＵＶ吸光度を終始モニターした。ピーク画分をプールし、２０ｍＭ酢酸ナトリウムを添加することでｐＨを約５．５に調整し、３回交換した緩衝液に対し透析した。透析液を収集し、滅菌濾過し、４℃で保存した。
１．１０．抗体１５Ｈ０５が認識するＩＬ－３１のエピトープの同定
抗体が認識するＩＬ－３１のエピトープについて知ることは、抗体がサイトカインのＩＬ－３１Ｒａ：ＯＳＭＲ共受容体への結合を中和するメカニズムを理解する上で不可欠である。加えて、エピトープを知ることで、（限定されるものではないが）抗体結合親和性の最適化が可能になり、また、分析用捕捉試薬として、及び関連する焦点を絞った免疫応答を誘発するサブユニットワクチンとして非常に有用であり得るペプチドエピトープミメティック（ミモトープ）の設計が可能になる。ＣＬＩＰＳ（Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｌｉｎｋａｇｅ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｏｎｔｏ Ｓｃａｆｆｏｌｄｓ）技術（Ｔｉｍｍｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｍｏｌ Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．２００７；２０（５）：２８３－２９９）を用いたマルチステッププロセスを使用して、ｍＡｂ １５Ｈ０５（Ｐｅｐｓｃａｎ，Ｌｅｌｙｓｔａｄ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）のパラトープに結合可能なペプチドを同定及び最適化した。イヌ及びネコのＩＬ－３１タンパク質に対するｍＡｂ １５Ｈ０５の親和性が高い（図２、ＭＵ－１５Ｈ０５）ことから、いずれのＩＬ－３１種の一次配列もこの試みに関連すると考えられた。イヌＩＬ－３１タンパク質に相当するペプチドマイクロアレイライブラリーを作成し、間接ＥＬＩＳＡを用いたｍＡｂ １５Ｈ０５に結合可能なペプチドの同定に使用した。一次アミノ酸配列がＩＬ－３１上のｍＡｂ １５Ｈ０５の結合領域に相当するペプチドを同定した後に、焦点を絞った完全置換分析を実施して、ＩＬ－３１の一セグメントに相当するペプチドを使用し、このｍＡｂ １５Ｈ０５結合領域の１２個のアミノ酸の各々を各位置において１９個の他の可能なアミノ酸残基で置き換えた。この分析は、ｍＡｂ １５Ｈ０５結合に関与するＩＬ－３１上のキーとなるアミノ酸残基を同定するために必須であり、また抗体結合の強化につながるイヌ一次配列上の置換位置についても実証した。
抗体１１Ｅ１２が認識するイヌＩＬ－３１タンパク質上のアミノ酸については過去に説明されている（Ｂａｍｍｅｒｔ ，ｅｔ ａｌ．に対する米国特許第８，７９０，６５１
号）。この文献では、アラニンに変換したときにｍＡｂ １１Ｅ１２の結合に影響を及ぼすイヌＩＬ－３１タンパク質上の位置を示すイヌＩＬ－３１タンパク質の変異分析について説明された。上記のｍＡｂ １５Ｈ０５について説明した完全置換分析及び１１Ｅ１２の結合エピトープについての過去の知見に基づき、各抗体が認識するエピトープ上の２つのキーとなる残基をアラニンに置換することにより、ネコＩＬ－３１タンパク質の変異型形態を作成した（上記のセクション１．２で説明した変異型）。各エピトープの変異は、変異の部位を認識する抗体に従って命名した（ネイティブｗｔタンパク質配列に対し変異型１１Ｅ１２及び１５Ｈ０５）。
図６Ａは、変異型１５Ｈ０５（配列番号１６３）及び１１Ｅ１２（配列番号１６１）との野生型ネコＩＬ－３１（配列番号１５７）のアラインメントを示しており、アラニン置換が生じる位置は強調表示されている。ＩＬ－３１はサイトカインのＩＬ－６ファミリーに属し、４つのヘリックスバンドルがアップダウンアーキテクチャーを有する（ＣＡＴＨ
ｄａｔａｂａｓｅ，Ｄａｗｓｏｎ ｅｔ ａｌ．２０１７ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０１７ Ｊａｎ ４；４５（Ｄａｔａｂａｓｅ ｉｓｓｕｅ）：Ｄ２８９－Ｄ２９５）。ホモロジーモデルは、ヒトＩＬ－６構造１Ｐ９Ｍ（Ｂｏｕｌａｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．２００３ Ｓｃｉｅｎｃｅ． Ｊｕｎ ２７；３００（５６２８）：２１０１－４）に基づき、ＭＯＥソフトウェア（Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ，Ｍｏｎｔｒｅａｌ，ＱＣ，Ｃａｎａｄａ）を用いて生成した。図６ＢはネコＩＬ－３１ホモロジーモデルを示しており、抗体１１Ｅ１２（部位１）及び１５Ｈ０５（部位２）の結合に関与するアミノ酸の位置が強調表示されている。各抗体の結合部位は、ＩＬ－３１タンパク質上の別々の位置にあるように思われる。
ｍＡｂｓ １１Ｅ１２及び１５Ｈ０５におけるこれらのネコＩＬ－３１変異型形態への結合能力による影響を定量するため、イムノアッセイプレートに直接コーティングされた変異型を用いて間接ＥＬＩＳＡを実行した。図６ＣはこのＥＬＩＳＡの結果を示しており、ｍＡｂ １１Ｅ１２及び１５Ｈ０５がこのアッセイ形式において野生型ネコＩＬ－３１に結合可能であることを実証している。変異型１１Ｅ１２が捕捉タンパク質として使用される場合、ｍＡｂ １１Ｅ１２の結合は非常に弱まり、ｍＡｂ １５Ｈ０５の結合は部分的に弱まる。イヌＩＬ－３１の１１Ｅ１２エピトープに対する過去の分析（Ｂａｍｍｅｒｔ ｅｔ ａｌ．に対する米国特許第８，７９０，６５１号に記載）では、４つのアミノ酸残基がアラニンに変異するとｍＡｂの結合に影響を及ぼすことが示されたため、この場合、２つの残基の変異では、このＥＬＩＳＡ形式を用いてｍＡｂ １１Ｅ１２の高親和性結合を完全に除去するのに十分でない可能性がある。ｍＡｂ １５Ｈ０５の１１Ｅ１２変異型との結合がわずかに弱まるのは、１５Ｈ０５結合部位に影響を及ぼす２つの前面のヘリックスが移動することによる変異の翻訳効果によるものと考えられる。ｍＡｂ １５Ｈ０５の結合に影響を及ぼすように設計された変異（変異型１５Ｈ０５）は、ＥＬＩＳＡにより、ｍＡｂ １５０５のこのＩＬ－３１変異型への結合能力が完全に喪失していることを示している。１１Ｅ１２変異型とは異なり、ｍＡｂ １５Ｈ０５（変異型１５Ｈ０５）が認識するランダムコイルの変化はｍＡｂ １１Ｅ１２の結合に影響を及ぼさなかったが、これは２つのエピトープ間の相違をさらに支持するものである（図６Ｃ）。
１．１１．ｂｉａｃｏｒｅを用いたｍＡｂ １５Ｈ０５及び１１Ｅ１２の競合結合評価
ｍＡｂｓ １５Ｈ０５及び１１Ｅ１２が結合するＩＬ－３１エピトープをさらにキャラクタリゼーションするため、ｂｉａｃｏｒｅを用いて遮断実験を行い、ＩＬ－３１タンパク質を含む表面を生成してから抗体を順次加えた。図７は、１１Ｅ１２または１５Ｈ０５の捕捉後における各抗体のＩＬ－３１との相対的結合を示している。ＨＢＳ－ＥＰ（アッセイ緩衝液）と表示された列は、競合なしに単独でＩＬ－３１表面に結合する各抗体から得られた最大信号を示す。図７Ａは、マウス１５Ｈ０５及び１１Ｅ１２抗体のイヌＩＬ－３１との競合結合データを示している。これらの結果は明らかに、抗体１５Ｈ０５及び１
１Ｅ１２が互いの存在下でイヌＩＬ－３１に結合可能であることを示しており、これにより、これらの抗体がタンパク質上の異なるエピトープを認識したことが示される。図７Ａに関連するセンサーグラムは、この新たに形成されたｂｉａｃｏｒｅ表面上でいずれの抗体の解離速度も非常に遅く、そのため、同じ抗体を加えても結合部位の追加的な占有が生じ得ないことを示している（データは示されず）。
図７Ｂは、抗体１５Ｈ０５及び１１Ｅ１２のネコＩＬ－３１表面上の競合結合データを示しており、ここでもまた、認識するエピトープに重複がないことが示される。同じ抗体の存在下で追加的な抗体が結合するのは、使用される表面の質が低いことによりオフ速度が増加する結果である。オフ率の増加が見られ、図２の新たに形成されたネコＩＬ－３１表面からのＫＤ値と比較することができる。
これらの結果はさらに、抗体ＭＵ－１１Ｅ１２と比較したときに、抗体ＭＵ－１５Ｈ０５に含まれるＣＤＲが異なるエピトープを認識することを示すセクション１．１０のエピトープマッピングデータを支持するものである。抗体１５Ｈ０５が認識するエピトープは、（Ｂａｍｍｅｒｔ， ｅｔ ａｌ．に対する米国特許第８，７９０，６５１号）で説明されている抗体１１Ｅ１２とは異なるものであり、複数の種においてこのサイトカイン活性を中和するためのＩＬ－３１タンパク質上の新規標的である。これらの知見は、ネコＩＬ－３１ホモロジーモデル（図６Ｂ）で説明されている結合部位の異なる空間関係を強調し、また、サイトカインのこの面が、ＩＬ－３１Ｒａ：ＯＳＭＲ受容体複合体との相互作用に不可欠であるという仮説を支持するものである。
１．１２．可溶性ネコＩＬ－３１共受容体（ＩＬ－３１ＲＡ及びＯＳＭＲ）の合成ならびにキャラクタリゼーション
ＩＬ３１Ｒａ及びＯＳＭＲサブユニットからなるヒトＩＬ－３１ヘテロマー受容体共複合体は、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路のＩＬ３１媒介性細胞間活性化に必要であり、アトピー性皮膚疾患に関与していることが示された（Ｄｉｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．２００４ Ｎａｔ
Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｊｕｌ；５（７）：７５２－６０；Ｄｒｅｕｗ ｅｔ ａｌ．２００４ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７９：３６１１２－３６１２０；及びＤｉｖｅｕ ｅｔ ａｌ．２００４ Ｅｕｒ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｎｅｔｗ．１５：２９１－３０２）。ヒトＩＬ－３１ Ｒａサブユニットはその後、ＩＬ－３１が細胞表面受容体と接触しているときに生じる最初の結合事象として説明され、この事象は、ＯＳＭＲの動員及びその後の高親和性共受容体複合体の形成にとって必須条件である（Ｌｅ Ｓａｕｘ ｅｔ ａｌ．２０１０ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．Ｊａｎ ２９；２８５（５）：３４７０－７）。本明細書では、ネコＩＬ－３１タンパク質がＯＳＭＲ及びＩＬ－３１ Ｒａの両方に独立的に結合可能であるという根拠について説明する。この観察結果は新規であり、ＩＬ－３１タンパク質がどのようにＩＬ－３１Ｒａ：ＯＳＭＲ共受容体と相互作用するかについての理解に対し、また、ＩＬ－３１が個々のサブユニットと独立的に相互作用する際のＩＬ－３１の生物学的役割に対し、重要な意義を有する。
ＩＬ－３１がその共受容体にどのように結合するか理解できるようにするため、及び同定された抗体の阻害特性をキャラクタリゼーションするため、２つの受容体形態を合成した。個々のＩＬ－３１受容体サブユニットＩＬ－３１Ｒａ（配列番号１６９；ネコ＿ＩＬ３１Ｒａ＿ＨＩｇＧ１＿Ｆｃ＿Ｘ１＿Ｆｎ３）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１７０；ネコ＿ＩＬ３１Ｒａ＿ＨＩｇＧ１＿Ｆｃ＿Ｘ１＿Ｆｎ３）である）及びＯＳＭＲ－（配列番号１６７；ネコ＿ＯＳＭＲ＿ｈＩｇＧ１＿Ｆｃ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１６８；ネコ＿ＯＳＭＲ＿ｈＩｇＧ１＿Ｆｃ）である）を、いずれもヒトＩｇＧ１ Ｆｃ融合物として構築した。ヒト相同体との相同性により、サイトカイン結合、フィブロネクチンＩＩＩ、及びＩｇ様ドメインが同定された。個々の受容体サブユニットを評価するため、ＯＳＭＲ及びＩＬ－３１Ｒａの細胞外ドメイン（及び予想
されるＮ末端近位のフィブロネクチンＩＩＩドメイン）を、いずれもネイティブシグナルペプチドを用いてヒトＩｇＧ１ Ｆｃ融合物として生成した。全ての合成カセットをｐｃＤＮＡ３．１内でクローニングし、ＥｘｐｉＣＨＯ系で発現させ、上記で説明されているように精製した。
これらの受容体形態の野生型及び変異型ＩＬ－３１タンパク質への結合能力を分析するため、４Ｃの炭酸／重炭酸緩衝液（ｓｉｇｍａ Ｃ３０４１－１００ＣＡＰ）中で終夜ｉｍｍｕｌｏｎ ２ＨＢプレート（１μｇ／ｍｌ）に１００ｕｌの各それぞれのタンパク質をコーティングすることにより、間接ＥＬＩＳＡを実行した。次いで、室温で１時間、ＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳＴ中５％ ＮＦＤＭブロッキング緩衝液でブロックし、それから複数の濃度の各受容体コンストラクトを室温で１時間結合した。ＰＢＳＴで洗浄した後、室温で１時間、マウス抗ヒトＩｇＧ１（Ｌｉｆｅｔｅｃｈ Ａ１０６８４、１：５００希釈）を用いて、結合した受容体（Ｆｃ融合物）の存在を同定した。ウェルを再びＰＢＳＴで洗浄し、ＫＰＬ ｓｕｒｅｂｌｕｅ ３，３’，５，５’－テトラ－メチルベンジジン（ＴＭＢ）マイクロウェル基質で発色させた。図８は、野生型及び変異型形態のネコＩＬ－３１タンパク質を捕捉物質として用いた、この間接ＥＬＩＳＡの結果を示している。これらのデータは、野生型ネコＩＬ－３１がＩＬ－３１Ｒａ及びＯＳＭＲ受容体サブユニットに独立的に結合することができることを実証している。これらの観察結果は、ＩＬ－３１タンパク質が最初にＩＬ－３１Ｒａサブユニットに結合し、さらにその部位にＯＳＭＲを動員することを示した過去の報告とは対照的である。ＩＬ－３１の生物学的役割はまだ判定の途上にあるため、受容体結合の動態や、アトピー性皮膚炎などの疾患でその役割が弱まることに対する潜在的な結果を理解することは、非常に重要である。このため、これらの観察結果は、ＩＬ－３１のＩＬ－３１Ｒａ及びＯＳＭＲに対する認識能力を妨害可能なエピトープに結合する抗体をキャラクタリゼーションする際に、さらなる検討を行った。
セクション１．２では、抗体１１Ｅ１２及び１５Ｈ０５について、これらの結合部位内のキーとなるアミノ酸がアラニンに変換された変異型（それぞれ変異型１１Ｅ１２及び１５Ｈ０５）との結合が弱まることを説明している。そのため、これらの変異が個々のＩＬ－３１Ｒａ及びＯＳＭＲ受容体サブユニットへの結合能力に及ぼす影響について理解することが大きな関心対象となった。図８は、１１Ｅ１２または１５Ｈ０５いずれかの結合部位の変異がＩＬ－３１Ｒａ及びＯＳＭＲの結合能力を完全に破壊することを示しており、このことから、いずれの抗体も、ＩＬ－３１と両方の受容体サブユニットとの相互作用に必要なエピトープに結合することが示される。結合の欠如は、変異から生じるＩＬ－３１の確認の変化に起因する可能性もあるが、これらの変異型が依然として抗体に結合可能であることから、これは該当しないことが示唆される。このキーとなる知見は、サイトカインがその共受容体を通じてシグナル伝達するのを中和し、さらにこのプロセス中にサイトカインといずれかの受容体との細胞会合を遮断するＩＬ－３１上のエピトープを認識する、抗体１１Ｅ１２及び１５Ｈ０５（ならびに誘導体）両方の能力を支持するものである。これらのデータは、ＩＬ－３１を循環から除去し細胞表面または可溶性受容体形態に結合できなくすることが可能な抗体が同定されたことを支持するものである。
１．１３．ネコＩＬ－３１掻痒チャレンジモデルにおけるキメラ型抗体のｉｎ ｖｉｖｏ評価
抗体のその標的を効果的に中和する能力は、適切な親和性を備えた標的タンパク質上の関連するエピトープへの結合と、ｉｎ ｖｉｖｏ効力への外挿が可能な細胞ベースアッセイでの効力とを調べることにより、ｉｎ ｖｉｔｒｏで評価することができる。上記は、マウス前駆細胞ｍＡｂ １１Ｅ１２及び１５Ｈ０５から生成された２系列の抗体をキャラクタリゼーションするために取られたステップである。セクション１．７では、ネコ及びイヌのＩＬ－３１に対し元のマウスモノクローナル抗体と同等の親和性が得られたｍＡｂ
１１Ｅ１２及び１５Ｈ０５のマウス：ネコキメラ型形態の生成について説明している（図２Ａ）。また、１１Ｅ１２及び１５Ｈ０５のマウス：ネコキメラ型形態は、イヌ及びネコのマクロファージ細胞におけるネコＩＬ－３１誘導性ｐＳＴＡＴ３シグナル伝達の阻害を示す同等のＩＣ５０値も得た（図３）。セクション１．８のネコ化プロセス中に、マウスｍＡｂ １１Ｅ１２はネコ化バージョン（ネコ１１Ｅ１２ １．１）に変換され、続いてイヌ及びネコのＩＬ－３１に対する親和性を喪失し（図３）、イヌ及びネコの細胞内でのネコＩＬ－３１シグナル伝達に対する効力を喪失した（図３）。セクション１．８で説明したネコ化１１Ｅ１２及び１５Ｈ０５抗体を最適化する前に、関心対象となったのは、ネコ曝露モデルにおいてこれらの予備的なネコ化及びキメラ型形態のネコＩＬ－３１掻痒活性を中和する能力について理解することであった。関心対象となったのは、これらの異なる抗体が掻痒の中和に及ぼす薬力学的効果、そして有効性に影響を及ぼし得る親和性、細胞効力、またはエピトープ認識との任意の相関を理解することであった。掻痒チャレンジモデルにおいてｉｎ ｖｉｖｏ有効性と相関する一連の細胞効力を先に進めることで、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイを用いてさらなる必要な最適化を予測できると考えられた。
マウス：ネコ１１Ｅ１２キメラ型、マウス：ネコ１５Ｈ０５キメラ型、及びネコ化１１Ｅ１２（ネコ１１Ｅ１２ １．１）の予備的有効性を試験するため、ネコＩＬ－３１誘導性掻痒モデルを開発した。０．５μｇ／ｋｇのネコＩＬ－３１（配列番号１５９；ネコ＿ＩＬ－３１＿Ｅ＿ｃｏｌｉ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１６０；ネコ＿ＩＬ－３１＿Ｅ＿ｃｏｌｉ）である）の静脈内投与後、ネコは、（限定されるものではないが）舐める、噛む、引っ掻く、及び頭または身体を揺らす行動を含めた一過性の掻痒行動を表現する。ケージに身体を擦り付けることは掻痒活動とみなさなかった。掻痒の観察は、ＩＬ－３１タンパク質の投与前の３０分間及び投与後の１時間、訓練を受けた研究者によって行われる。この研究において、ネコＩＬ－３１によるベースラインチャレンジは、抗体を投与する１ヵ月前まで実施した。ゼロ日目に、０．５ｍｇ／ｋｇ抗体用量を０．５μｇ／ｋｇのネコＩＬ－３１と室温で６０分間合わせた後、この予め結合した複合体を各動物に注射した。対照には「ｍＡｂなし」対照を含めた。ｍＡｂの用量は、サイトカインに対する総モル過剰の抗体に相当する。掻痒活動は、０、７、及び２１日目に説明通りにモニターした。図９の結果は、プラセボ対照と比較したときに、０、７、及び２１日目のマウス：ネコ１５Ｈ０５キメラ型の掻痒スコアが有意に改善した（ｐ＜０．０５）ことを示している。マウス：ネコ１１Ｅ１２キメラ型は、ゼロ日目に初期的な有効性の傾向を示したが、ビヒクルプラセボと比較したときに、いかなる時点においても掻痒の有意な低減は達成されなかった。ネコ１１Ｅ１２ １．１はゼロ日目に掻痒を低減せず、ビヒクルプラセボと比較したときに有効性の傾向を示さなかったため、７日目及び２１日目のＩＬ－３１チャレンジは実施しなかった。
まとめると、これらの結果は、ＩＬ－３１によって誘導されるネコの掻痒行動を防止することにおける１１Ｅ１２ １．１の有効性欠如により、これらの抗体の活性間で明確な線引きがされたことを示すものである。おそらくは、ネコ１１Ｅ１２ １．１の親和性及び効力が喪失した結果、ｉｎ ｖｉｖｏでの有効性欠如が生じたと考えられる。マウス：ネコ１１Ｅ１２キメラ型及びマウス：ネコ１５Ｈ０５キメラ型の有効性の結果を比較すると、区別はより微妙となる。両ｍＡｂのキメラ型形態のＫＤ値はそれらのマウス前駆細胞と同等であり、ネコ及びイヌ両方のＩＬ－３１に対するマウス：ネコ１１Ｅ１２の親和性がわずかに優れている（図２Ａ）。ただし、ネコＦＣＷＦ４細胞内のネコＩＬ－３１誘導性ｐＳＴＡＴ３シグナル伝達に対するマウス：ネコ１５Ｈ０５キメラ型のＩＣ５０はマウス：ネコ１１Ｅ１２キメラ型のおよそ２倍高い（図３）ため、この親和性の増加は、直接的に効力の増加に変換されるわけではない。これらのデータは、抗体１５Ｈ０５ ＣＤＲがネコＩＬ－３１を認識する方法が、サイトカインのその共受容体を介したシグナル伝達能力を中和することにおいて優れており、そのためネコの掻痒の遮断においてもより有効となることを示唆している。これらの細胞アッセイで観察されたＩＣ５０の差により、ｉ
ｎ ｖｉｖｏでの効力を予測し、一連の抗体内及び一連の抗体間のエピトープ認識の微妙な差を識別するための有望な手段がもたらされる。
１．１４．ネコ掻痒チャレンジモデルにおけるネコ化１５Ｈ０５抗ＩＬ－３１抗体の有効性のｉｎ ｖｉｖｏ評価
上記のマウス：ネコ１５Ｈ０５キメラ型を用いた肯定的な有効性の結果に基づき、ネコ化１５Ｈ０５の親和性及び効力を増加させるためのさらなる作業を行った（上記のセクション１．８で説明）。ネコ１５Ｈ０５ １．１抗体内のネコ可変軽鎖フレームワークを系統的に置換することにより、マウス１５Ｈ０５と比較してネコ及びイヌ両方のＩＬ－３１に対する親和性が増加したネコ１５Ｈ０５ １．１ ＦＷ２の同定につながる（図２）。ネコ１５Ｈ０５ １．１ ＦＷ２の重鎖及び軽鎖を単一のプラスミド内で組み合わせることにより、ＨＥＫ及びＣＨＯ発現系からの産生後にＺＴＳ－９２７及びＺＴＳ－３６１抗体が形成される。単一のプラスミドからの発現から生じた両抗体の親和性及び効力は、それぞれ図２及び３にも記載されている。
ＩＬ－３１誘導性ｉｎ ｖｉｖｏネコモデルにおいて、完全ネコ化抗ネコＩＬ－３１ ｍＡｂ ＺＴＳ－３６１の有効性を、掻痒行動に対する当該抗体の中和能力について評価した。図１０Ａは、Ｔ０１のビヒクルプラセボ群及びＴ０２の抗体ＺＴＳ－３６１群における－７日目から２８日目まで（ゼロ日目をＴ０２群への抗体投与日とする）のベースラインチャレンジ前掻痒行動を示している。このグラフに示されているように、ＩＬ－３１チャレンジ前のＴ０１群及びＴ０２群の両方でスコア化した掻痒行動の分散はほとんど変化せず、掻痒事象の回数は３０分の観察期間内に０～１０で観察された。この研究は、ネコＩＬ－３１と合わせて予め結合した複合体を生成せずに４ｍｇ／ｋｇのＺＴＳ－３６１をゼロ日目のネコに皮下投与した点において、上記のセクション１．１３で説明した予備的ネコチャレンジモデルとは異なった。抗体が循環するＩＬ－３１に結合しこれを中和するには十分な曝露を必要とする初回ＩＬ－３１チャレンジ前の７日間に抗体ＺＴＳ－３６１が血液循環するため、この研究はより厳密な有効性評価となる。
この研究では、７、２１、２８日目にＩＬ－３１タンパク質０．５μｇ／ｋｇの静脈内チャレンジ後の１時間、掻痒行動を評価した。図１０Ｂは抗体ＺＴＳ－３６１の有効性を示しており、ＩＬ－３１チャレンジ後、ビヒクルプラセボコントロールと比較して掻痒の有意な低減が７日目（ｐ＜．０００１）、２１日目（ｐ＜０．００２７）、及び２８日目（ｐ＜０．０２３８）に実証されている。このチャレンジモデルからのデータは、マウス：ネコ１５Ｈ０５キメラ型の有効性を実証する過去の観察結果を支持し、また、１５Ｈ０５ ＣＤＲが認識するネコＩＬ－３１上のエピトープにおける細胞ベースの効力及び関連性を支持するものである。これらのデータはさらに、抗体ＺＴＳ－３６１のネコＩＬ－３１によって誘導される掻痒に対する中和能力を支持し、この抗体がネコにおけるアトピー性皮膚炎を含めたＩＬ－３１媒介性疾患の治療薬として機能し得ることを示唆している。
クライアント所有の動物におけるＩＬ－３１の血漿レベルを調べた最近のデータでは、正常な実験用ビーグル犬と比較して、アトピー性及びアレルギー性皮膚炎を有するイヌの間で循環中のサイトカイン量が増加していることが示されている（図１１Ａ）。最近の研究は、米国内のいくつかの異なる地理的地域からのアレルギー性皮膚炎（ＡＤ）の推定診断を受けたネコの血清中ＩＬ－３１レベルを定量するために実施した。図１１Ｂはこの評価からの結果を示しており、アトピー性及びアレルギー性皮膚炎を有するイヌと同様に、この推定診断によって調査したネコ７３例の平均循環ＩＬ－３１レベルは８７９９ｆｇ／ｍｌであり、これに対し同齢の対照ネコ１７例は２０５ｆｇ／ｍｌであったことが示されている。過去のモデル開発研究におけるイヌＩＬ－３１のレベルを理解するため、イヌＩＬ－３１の薬物動態プロファイルを、１．７５μｇ／ｋｇ皮下投与した後のイヌで分析した。 図１１Ｃはピーク血漿レベルを示しており、最初の１時間以内に最大の約３０ｎｇ
／ｍｌに達し、３時間時に約４００ｐｇ／ｍｌの維持レベルを示している。これらの知見に基づけば、このネコモデルで使用した０．５μｇ／ｋｇのネコＩＬ－３１を静脈内投与すると、イヌ及びネコの自然発生的疾患状態で観察される循環量よりもはるかに過剰な循環量になると考えるのが妥当である。
１．１５．リードネコ化抗ＩＬ－３１抗体の進歩のために使用する分析方法
細胞系開発のプロセスでは、抗体治療薬を一貫した方法で製造できることを保証するために様々な分析方法が採用されている。（限定されるものではないが）生成物の同一性、純度、及び効力を保証する分析方法に細心の注意を払うことは、リードモノクローナル抗体の一貫した生産や、標的動物種の効力及び安全性アウトカムとの強い相関にとって不可欠である。抗体は、鎖間ジスルフィド結合を介し保持された２つのヘテロ二量体単位のホモ二量体であるため、対形成プロセスのいかなる中断もタンパク質薬品の不均一性につながり得る。抗体の解離のモニターに十分適合した２つの分析方法は、非還元（ＮＲ）ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）及び非還元（ＮＲ）キャピラリーゲル電気泳動（ＣＧＥ）である。
ＮＲ ＳＤＳ－ＰＡＧＥは、試験試料中の個々のタンパク質種の質量を定量するための簡便な定性的方法を提供する。ＳＤＳはタンパク質と疎水的に会合し、タンパク質に正味の負電荷を均一に付与することで、質量に基づいた個々の構成要素の分離を可能にする。ポリアクリルアミドゲル上での電気泳動分離後、タンパク質は、検出を可能にするためにクーマシーブルーのような色素で染色する。染色の非線形性は個々のタンパク質バンドの絶対的定量化を妨げるが、濃度測定分析が可能なソフトウェア（ＶｅｒｓａＤｏｃ，Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を用いて推定することができる。キャピラリーゲル電気泳動（ＣＧＥとして一般的に知られている）は、タンパク質を再びＳＤＳにかけて均一な負電荷をもたらし、非共有結合タンパク質複合体を解離させる。電場の存在下で、ＳＤＳコーティングされたタンパク質は陽極に向かって移動し、２２０ｎｍの固定波長の紫外光吸収を用いて検出される。分離は、交換可能なＳＤＳ－ポリマーゲルシービングマトリックスで満たされたキャピラリー内の試料中の構成要素のサイズに基づく。非還元ＣＧＥでは、アルキル化剤ヨードアセトアミド（ＩＡＭ）を添加して試料調製中のジスルフィド結合シャッフリングを最小限に抑える。インタクトＩｇＧは任意の断片化された種から分離し、純度の定量化が可能になる。ＣＧＥ分析用のソフトウェア（例えば、Ｅｍｐｏｗｅｒまたは３２ Ｋａｒａｔ）は、移動時間によって個々のピーク面積として定義される時間補正面積（ＴＣＡ）を利用する。総ＴＣＡは、０．３％以上の全てのピークに対するＴＣＡの合計として定義される。したがって、単量体インタクトＩｇＧ及び亜種のパーセントは、総ＴＣＡのパーセントとして個々のＴＣＡに基づいて計算することができる。
ネコ掻痒モデル（セクション１．１４）のために説明されたＺＴＳ－３６１の有望なｉｎ ｖｉｖｏ有効性データを考慮して、これらの説明された分析方法を用いて様々なロットの抗体のさらなるキャラクタリゼーションを決定した。このプロセス中、ネコ化抗ＩＬ－３１（ＺＴＳ－３６１）抗体を発現する安定したプールでは、ＳＤＳ－ＰＡＧＥのクーマシー染色によって可視化された低分子量種（遊離軽鎖を含む）のレベルが、マウス前駆細胞ハイブリドーマ１５Ｈ０５と比較して高いことが明らかになった（図１２）。本明細書では、インタクト、またはインタクト単量体とは、２つの重鎖及び２つの軽鎖が鎖間ジスルフィド結合によって一緒に保持されている、約１５０ｋＤａの予想分子量のＩｇＧを意味する。ＨＨＬとは、本明細書では「重・重・軽」を意味し、１つの軽鎖が欠落した予想分子量約１２５ｋＤａのＩｇＧのことである。ＨＨとは、本明細書では「重・重」を意味し、両方の軽鎖が欠落した予想分子量約１００ｋＤａのＩｇＧのことである。ＨＬとは、本明細書では「重・軽」を意味し、１つの重鎖及び１つの軽鎖を有する予想分子量約７５ｋＤａのＩｇＧのことである。Ｌとは、本明細書では「軽」を意味し、１つの軽鎖を有する予想分子量約２５ｋＤａのＩｇＧのことであり、本明細書では遊離軽鎖とも称される
。この同じ材料に対するＮＲ ＣＧＥを用いた定量的評価により、ＺＴＳ－３６１ではインタクト単量体ＩｇＧが、マウス前駆細胞１５Ｈ０５（９４．７％）と比較すると顕著に少ない（８３％）ことが明らかになった（図１３ａ）。図１３Ｂは、ＮＲ ＣＧＥによる試料の分解後の電気泳動図を示している。異なる保持時間におけるこれらのピークからのデータを使用して、試料１（ＺＴＳ－３６１）及び試料２（マウス１５Ｈ０５）の合計のＴＣＡパーセントを定量化した。メジャーインタクトＩｇＧピークよりも分子量が小さいマイナーピークの合計を使用して、図１３Ａに示されているフラグメントパーセントを計算する（フラグメント％）。ＺＴＳ－３６１を産生する安定したＣＨＯプールでは、最終抗体産物の１７％がネコ化ＩｇＧのフラグメント化形態として得られ、これに対しマウスハイブリドーマ１５Ｈ０５ではわずか５．３％であった。
この現象の理解を進めるため、ＺＴＳ－３６１クローンプールから単一クローンＣＨＯ細胞分離株を誘導して、インタクトＩｇＧ単量体のパーセンテージが個々のクローン間で変動するか調べた。図１４Ａは、ＺＴＳ－３６１を安定的に発現する８つの個々のクローンの培養物に由来する精製抗体を用いたクーマシー染色ＮＲ ＳＤＳ－ＰＡＧＥを示している。比較のため、１及び８と表示されたレーンは、インタクトＩｇＧ単量体のパーセンテージが高い（約９７％）ことが知られている参照標準抗体を示している。バンド強度の定性的濃度定量が図の右側に示されている。インタクト単量体パーセントのクローンのばらつきは８０．２％～８６％の範囲で、平均は約８２％である。同様に、フラグメントパーセントの定量化は、個々のクローンにおいて１４．０％～１９．５％の範囲であり、平均は１７．５％であった。図１４Ｂは、ＮＲ－ＣＧＥを用いたこれらの個々のクローンの定量的評価を示している。この方法を使用するとより少ないばらつきが観察され、試験した８つのクローンにおいて、インタクト単量体の平均パーセントは８６．３％、より低分子量の種のパーセンテージは１３．７％であった。個々のクローン間のＺＴＳ－３６１のインタクトＩｇＧ単量体のパーセンテージにおいて高レベルの一貫性が観察されたが、関心対象となったのは、インタクトＩｇＧ単量体の全体的レベルがマウスバージョンの抗体で観察されたレベルよりも低い理由を理解することであった。抗体（限定されるものではないが、一過性発現系（例えば、ＨＥＫ及びＣＨＯ細胞）から産生されたネコ化抗体を含む）が高レベルの単量体形態パーセント（約８８％～約９２％）でＩｇＧを産生した（データは示されず）点に注目することは重要である。これに対応して、これらの一過性培養物から産生される抗体の量は、安定したＣＨＯ系から産生される量よりも顕著に少なくなる。いかなる１つの理論にも束縛されることは望まないが、ネコ化種及びその他の種で見られるフラグメント化抗体種の発生は、宿主細胞が例外的に大量の抗体を産生し、培養条件及び／または抗体の分子組成における固有の制約が観察される条件下で、観察される可能性がある。
１．１６．哺乳類の複数種からのＩｇＧカッパ軽鎖定常ドメインの一次アミノ酸配列に対する検討
ネコ化抗体ＺＴＳ－３６１の潜在的制約の分析は、一次抗体配列の検討から開始した。ＺＴＳ－３６１は、可変領域（配列番号１２１；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１２２；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１）である）とネコＩｇＧ重鎖定常領域（配列番号１７３；ネコ＿ＨＣ＿アレルＡ＿１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１７４；ネコ＿ＨＣ＿アレルＡ＿１）である）との組合せを含む重鎖と、可変領域（配列番号１３５；ＦＥＬ－１５Ｈ０５－ＶＬ１＿ＦＷ２）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１３６；ＦＥＬ－１５Ｈ０５－ＶＬ１＿ＦＷ２）である）とネコＩｇＧ軽鎖定常領域（配列番号１７５；ネコ＿ＬＣ＿カッパ＿Ｇ＿マイナス）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１７６；ネコ＿ＬＣ＿カッパ＿Ｇ＿マイナス）である）との組合せを含む軽鎖とから構成される。天然のネコ抗体重鎖定常領域の機能的特性については、過去にＳｔｒｉｅｔｚｅｌ ｅｔ ａｌ．（２０１４ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ
ｏｇｙ Ａｐｒｉｌ １５；１５８（３－４）：２１４－２２３）によって説明されている。ここでは、重鎖定常領域（配列番号１７１；ネコ＿ＨＣ＿アレルＡ＿１）を用いたネコ化抗体ＺＴＳ－３６１のクローン及び発現について説明する。配列番号：１７１のネコＨＣアレルＡ １は、Ｓｔｒｉｅｔｚｅｌ ｅｔ ａｌ．２０１４（前掲）のネコＩｇＧ１ａに対応し、機能的にはヒトＩｇＧ１と同等であるように思われる。この重鎖定常領域のこれらの機能的属性及びアラインメントを多様な種のセットからの他の定常領域と比較しても、インタクトＩｇＧ単量体の形成を非効率的にするいかなる明らかな関心領域も明らかにならなかった（データは示されず）。
ＺＴＳ－３６１（配列番号１７５；ネコ＿ＬＣ＿カッパ＿Ｇ＿マイナス）で使用されるカッパ定常鎖に対する同様の分析からは、少なくともネコ及びイヌの配列で観察されたカッパ定常軽鎖の多様性における独特の態様が明らかになる。異なる種は、異なる頻度でその免疫グロブリンレパートリー内のカッパ軽鎖を利用する。図１５は、示された種からのいくつかのカッパ軽鎖定常領域における代表的なｃ末端側アミノ酸及び対応するヌクレオチドを示している。示された種からのＩｇＧによるカッパ軽鎖利用率のパーセンテージについては、イヌ、ネコ、及びブタは（Ａｒｕｎ ｅｔ ａｌ．１９９６ Ｚｅｎｔｒａｌｂｌ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｍｅｄ． Ｎｏｖ；４３（９）：５７３－６）、ミンクは（Ｂｏｖｋｕｎ ｅｔ ａｌ．１９９３ Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ａｕｇ；２３（８）：１９２９－３４）、マウスは（Ｗｏｌｏｓｃｈａｋ ｅｔ ａｌ．１９８７ Ｍｏｌ
Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｊｕｌ；２４（７）：７５１－７）、ヒトは（Ｂａｒａｎｄｕｎ ｅｔ ａｌ．１９７６ Ｂｌｏｏｄ． Ｊａｎ；４７（１）：７９－８９）に従っている。モノクローナル抗体の通例的な生成は、マウスを用いて行われる。図１５に示すように、マウスは、ラムダ軽鎖と比較して時間の約９５％のカッパ軽鎖を利用する。これに対し、イヌ及びネコは主に、免疫グロブリンレパートリー内のラムダ軽鎖を使用する（それぞれ９％及び８％）。比較すると、２種の非ヒト哺乳類（ブタ及びミンク）ならびにヒト哺乳類は、バランスの取れた利用率のカッパ及びラムダ軽鎖使用を示す（それぞれ５０％、４６％、及び約５０％）。この図面では、最もｃ末端側のシステインの位置にアノテーションが付けられており、異なる種全体においてアラインメントされている。このシステインは、重鎖定常領域との鎖間共有結合ジスルフィド結合の形成に関与するため、インタクトＩｇＧ構造を形成するために生成される四元複合体の形成に不可欠である。いかなる１つの理論にも束縛されることは望まないが、少なくともイヌ及びネコの軽鎖が末端側システインの後に複数のアミノ酸を含む点に注目することは大きな関心対象となる。これらの追加的なアミノ酸残基は、極性（グルタミン）及び電荷（アルギニン、アスパラギン酸、及びグルタミン酸）の両方を有する。これらの残基は、典型的には、これらが水素結合相互作用に関与する環境で見られ、このような相互作用には、限定されるものではないが、外部の水性環境との相互作用が含まれる。末端側システイン以外のこれらの追加的な残基の性質及び位置は、ＩｇＧヘテロ二量体の形成に必要な鎖間ジスルフィド結合の形成を妨げる可能性がある。２種の哺乳類（ブタ及びミンク）は、ｃ末端側システイン以外の追加的な残基の数が少なく、カッパ及びラムダ軽鎖をほぼ同等の比率（それぞれ５０％及び４６％）で使用する。配列番号１７５のアミノ酸１０７位におけるシステイン直後のカッパ軽鎖定常領域のｃ末端にあるアミノ酸のバリエーション及び欠失を伴うＺＴＳ－３６１組換え型形態の生成は、ＨＥＫ細胞からの一過性発現を用いて作成し、ＮＲ－ＣＧＥによって単量体ＩｇＧのパーセントを試験した（データは示されず）。前述のように、対のない軽鎖やより低分子量のＩｇＧ複合体の産生は、抗体が安定したクローン細胞から過剰産生されている条件下において、より明らかである。ただし、ＮＲ－ＣＧＥは、細胞（例えば、ＨＥＫ及びＣＨＯ）の一過性形質移入によって産生された培養物からインタクト単量体ＩｇＧとより低分子量の不純物との量の差を検出可能である。これにより、一過性培養物から産生される単量体ＩｇＧのパーセントを定性的に評価することができる。このような一過性培養物からのＮＲ－ＣＧＥの定性的使用により、単量体ＩｇＧのパーセントの存在に関してＺＴＳ－３６１のカッパ定常鎖のｃ末端に対する複数の修飾及び欠失をアッセイ
することが可能になった（データは示されず）。いかなる１つの理論にも束縛されることは望まないが、ネコカッパ定常鎖のｃ末端からの残基ＱＲＥの欠失は、単量体組換え型ネコＩｇＧの産生に最も最適と思われる。ｃ末端に対するその他の付加は許容されると思われる。概して、ネコＬＣカッパＧマイナス（配列番号１７５）の１０７位におけるシステイン以外に付加された１つまたは２つの追加的なアミノ酸は、一過性産生ＩｇＧからの単量体パーセントの定性的評価を用いれば、許容されると思われる。これらの同じ定性的アッセイを用いれば、ネイティブＱＲＥアミノ酸残基の代わりに１０７位のシステインのｃ末端に隣接して３つの追加的なアミノ酸を連続して付加しても、この３つのアミノ酸の静電荷の影響が最小限である場合は許容され得ると思われる。本明細書では、ネコＬＣカッパＧマイナス（配列番号１７５）の１０７位におけるシステインの後の追加的なアミノ酸の数及び化学的特徴が、カッパ軽鎖定常領域と対応するＩｇ重鎖定常量との間の鎖間ジスルフィド結合の効率的な形成に影響を及ぼすことが注目される。この領域に対する修飾及び／または欠失が安定した組換え型細胞系から均一なインタクトＩｇＧを産生する有利な効果を有する可能性が考えられる。
ヒト及びマウスのカッパ軽鎖ｃ末端側アミノ酸は末端側システインであるため、重鎖定常領域とのジスルフィド結合の形成中に外部環境との相互作用に利用できる追加的なアミノ酸残基はない。そのため、本明細書では、少なくともネコ及びイヌのカッパ軽鎖定常領域におけるこれらの追加的なｃ末端側残基が、自然界では通常観察されないと考えられるが、実験室設定でのこれらの種分化形態の過剰産生に非常に関連すると考えられるこのジスルフィド結合の形成に対する制約をもたらすものと仮定する。このような制約には、安定した細胞系から組換え型抗体を産生するときに先に説明したＨＨＬ、ＨＨ、ＨＬ、及びＬ種の存在をもたらす、カッパ軽鎖のｃ末端と重鎖定常鎖との間のジスルフィド結合の形成の欠如が含まれ得る。これらのより低分子量の種は均一な薬品を生産する上で望ましくないものであり、これらの存在は、品質及び安全性の観点から問題となり得る。
この観察結果に付け加えたのが、この領域内のアミノ酸残基をコードするコドンであり、図１５の各アミノ酸文字の下に示している。哺乳類には、リボソーム内でポリペプチド翻訳の終結をシグナル伝達する３つの終止コドン（ＴＡＡ、ＴＧＡ、及びＴＡＧ）が存在する。いかなる１つの理論にも束縛されることは望まないが、ｃ末端側システイン及びその後のアミノ酸をコードするコドンの大半が終止コドン（図１５、コドンのうち薄灰色の文字）から１ヌクレオチド離れていることが観察された。本明細書では、様々なヌクレオチド位置の体細胞変異が、ＩｇＧカッパ抗体の効率的な発現及び正しい鎖の対形成を可能にする最適な免疫グロブリンカッパ定常鎖長及びアミノ酸組成の選択につながった可能性があると仮定する。末端側システインに隣接してｃ末端に存在し得る適切なアミノ酸の許容度を評価する際には、微妙な差異を看過することはできない。本明細書では、ブタ軽鎖への残基ＥＡの付加またはミンク軽鎖へのＱの付加が、鎖間ジスルフィドの形成及びインタクトＩｇＧ分子の発現にほとんどまたは全く有害な影響を及ぼさないと考えられる観察結果に注目する。これらの種はカッパ及びラムダ軽鎖の同等の使用率を示しており、これらの付加の許容性については許容される領域内で説明される。限定されるものではないが、イヌ及びネコのｃ末端側カッパ軽鎖残基に関しては、ｃ末端側システインからの距離と、アルギニン（ならびにアスパラギン酸及びグルタミン酸）残基の荷電性の性質とが、ネコ及びイヌの抗体における、それぞれの重鎖との効率的かつ正確な共有結合ジスルフィド結合の形成能力に顕著な影響を及ぼすと考えられる。
１．１７．ネコ重鎖及びカッパ軽鎖の鎖界面における四次構造の観察
図１６Ａは、ＺＴＳ－３６１と同等の重鎖及び軽鎖を有するネコＩｇＧの予想される構造を図的に表現したものである（支持的な分析データは示されず）。鎖内及び鎖間ジスルフィド結合の位置は、単純化のため、構造における１つのアームのみの重鎖システイン（ＣＹＳ１５）及び軽鎖システイン（ＣＹＳ１０７）が強調表示されている。示されている
アミノ酸残基ＣＹＳ１５は、ネコＨＣアレルＡ ｗｔ（配列番号１７１）及びネコＨＣアレルＡ １（配列番号１７３）の１５位であり、示されているヌクレオチド残基番号は、それぞれネコＨＣアレルＡ ｗｔ（配列番号１７２）の４３～４５及びネコＨＣアレルＡ
１（配列番号１７４）の４３～４５である。示されているアミノ酸残基ＣＹＳ１０７は、ネコＬＣカッパＧマイナス（配列番号１７５）及びネコＬＣカッパＧマイナスＱＲＥマイナス（配列番号１８６）の１０７位であり、示されているヌクレオチド残基番号は、ネコＬＣカッパＧマイナス（配列番号１７６）の３１９～３２１及びネコＬＣカッパＧマイナスＱＲＥマイナス（配列番号１８７）の３１９～３２１である。前述のように、ネコＺＴＳ－３６１の組成はヒトＩｇＧ１と機能的に同等であるが、ジスルフィド結合パターンの性質は、ヒトＩｇＧ２に対する類似性の方が高い（データは示されず）。図１６Ｂは、ＭＯＥソフトウェア（Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ，Ｍｏｎｔｒｅａｌ，ＱＣ，Ｃａｎａｄａ）を用いてＺＴＳ－３６１の２つのＦ（ａｂ’）２アームを表すホモロジーモデルを示しており、明快さのためＣＹＳ１５及びＣＹＳ１０７のおよその位置が強調表示されている。図１６Ｃは、ＣＹＳ１０７のすぐ後のカッパ軽鎖定常残基ＱＲＥがもたらす追加的な静電荷の局所環境への寄与を示している。これらの３つのアミノ酸からの電荷は、この図面ではワイヤーフレーム面のシェルとして表現されている。ホモロジーモデルは、アルファヘリックス及び秩序づけられたベータシートのような秩序づけられた二次構造構成要素で見られる構造よりも精度の低いランダムコイル構造から構成された領域を表現する。ただし、重鎖のＣＹＳ１５については、これはそれほど考慮の必要はない。というのも、ＩｇＧ定常ドメインのこの領域は、豊富な構造データや、保存的なＩｇＧ構造を有するこの領域の秩序づけられた性質によって十分に定義されているからである。同様に、軽鎖のＣＹＳ１０７も多数の抗体構造で解明されており、重鎖のＣＹＳ１５に対するその近接性は理解することができる。当該モデルにおける末端側軽鎖システイン以外の残基の付加は、隣接する残基の幾何学的配置と局所エネルギー最小値の計算に基づいてのみ定義することができる。このＺＴＳ－３６１のネコカッパ軽鎖の表現は、実験デザインの仮説を生成するための作業モデルをもたらすことにおける最善の努力に相当する。まとめると、これらの結果は、ネコ（及びおそらくはその他の種）のカッパ軽鎖における末端側システイン以外の追加的なアミノ酸残基が重鎖との効率的な対形成に有害であり、抗体の誤対形成及び産生不良につながり得ることを示唆するものである。
１．１８．カッパ定常領域Ｃ末端が修飾されたネコ化抗ＩＬ－３１抗体ＺＴＳ－１５０５の生成
ＺＴＳ－３６１を用いた均一な抗体調製物を一貫的に産生することにおける潜在的制約を考慮すると、単量の産生パーセントの欠如に対する解決策を見出すことが必要であると考えられた。限定されるものではないが、この試みに向けられたのはＺＴＳ－１５０５の生成であり、重鎖は、可変領域（配列番号１２１；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１２２；ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１）である）とネコＩｇＧ重鎖定常領域（配列番号１７３；ネコ＿ＨＣ＿アレルＡ＿１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１７４；ネコ＿ＨＣ＿アレルＡ＿１）である）との組合せである。ＺＴＳ－１５０５において、軽鎖は、可変領域（配列番号１３５；ＦＥＬ－１５Ｈ０５－ＶＬ１＿ＦＷ２）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１３６；ＦＥＬ－１５Ｈ０５－ＶＬ１＿ＦＷ２）である）とネコＩｇＧ軽鎖定常領域（配列番号１８６；ネコ＿ＬＣ＿カッパ＿Ｇ＿マイナス＿ＱＲＥ＿マイナス）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１８７；ネコ＿ＬＣ＿カッパ＿Ｇ＿マイナス＿ＱＲＥ＿マイナス）である）との組合せである。ＺＴＳ－１５０５は、軽鎖カッパ定常領域の最もｃ末端から３つの追加的な残基ＱＲＥが除去されていることを除いてＺＴＳ－３６１と同一であり、この除去は、カッパ軽鎖との非効率的な対形成から生じるより低分子量の種を伴って抗体を産生するという望ましくない影響を回避する試みによるものである。これらの残基の除去が単量体ＩｇＧを産生するプロセスに有益であると想定されている。ただし、カッパ軽鎖に対する他の変更も行っており、一過性発現の予備実験データ（データは示されず
）に基づけば、このような変更によって中立の効果が生じ、あるいは有益な効果ですら生じると思われるため、本発明は、必ずしもこのカッパ軽鎖における１つの修飾に限定されるものではない。
図１７Ａは、抗体ＺＴＳ－３６１及びＺＴＳ－１５０５に使用される可変及び定常配列を記載しており、ＺＴＳ－１５０５に使用される異なる軽鎖が強調表示されている。ＺＴＳ－１５０５を発現する安定したＣＨＯ細胞系の作成については、本出願のセクション１．９で説明されている。抗体の質の評価は大きな関心対象となるため、安定したＣＨＯ形質移入からの個々のクローンの単量体抗体産生能力を調べた。図１７Ｂは、ＮＲ－ＣＧＥを用いたこれらの個々のクローンの定性的評価の結果を示している。２３個の個々の安定したＣＨＯクローンを評価したところ、単量体パーセントに高いレベルの一貫性が観察され、単量体は平均９０．３％で産生された。これは、ＺＴＳ－３６１の個々のクローン分離株で産生された単量体の平均パーセント（図１４Ｂ）からの４％の増加に相当し、安定したプール（図１３Ａ）においては７．３％の増加が観察された。図１７Ｃは、異なる培養条件下における抗体ＺＴＳ－３６１及びＺＴＳ－１５０５を発現する個々の安定したＣＨＯ細胞系の直接的な比較を示している。注目すべきことに、図１２、１３、及び１４に記載された抗体は、図１７Ｃの培養条件Ａと同等の培養条件で培養されており、これらの条件については本出願のセクション１．９で説明されている。両方の細胞系を１４日間成長させ、生存率パーセント、力価（抗体の収率（ｇ／Ｌ））、及びＮＲ－ＣＧＥによる単量体パーセントを定量した。生存率パーセントは、両方の細胞系を用いて試験した全ての条件において一貫していた。ＮＲ－ＣＧＥによる単量体パーセントは、ＺＴＳ－１５０５をＺＴＳ－３６１と比較して一貫した４～５％の単量体パーセントの改善を示しており、このことからも、追加的なＱＲＥ残基が欠如したＺＴＳ－１５０５のカッパ軽鎖定常領域が、ネコ重鎖定常領域とカッパ軽鎖との間の鎖会合に肯定的な効果をもたらしたことが再び示される。さらに際立っていたのは、ＺＴＳ－１５０５抗体の産生量がＺＴＳ－３６１と比較して改善したことである。ＺＴＳ－１５０５は、野生型カッパ軽鎖定常領域を有するＺＴＳ－３６１と比較して、安定したＣＨＯ細胞からの抗体産生量が平均で３．５倍改善した。
カッパ軽鎖定常領域の修飾がＺＴＳ－１５０５の親和性及び効力に影響を及ぼさないことを保証するため、ｂｉａｃｏｒｅと、イヌ及びネコ細胞のＩＬ－３１媒介性ｐＳＴＡＴシグナル伝達の阻害とを用いて、比較分析を実施した。下記の表１では、複数種のＩＬ－３１タンパク質を表面捕捉物として用いたｂｉａｃｏｒｅ分析の結果が記載されている。これらの結果は、軽鎖カッパ定常領域の修飾を有するＺＴＳ－１５０５において、野生型ネコカッパ定常領域Ｃ末端を有するＺＴＳ－３６１と比較して、イヌ、ネコ、及びウマのＩＬ－３１タンパク質に対するほぼ同一の親和性が観察されたことを示している。また、本明細書では、ＺＴＳ－１５０５において、本出願のセクション１．２で説明されているネコ１５Ｈ０５及びネコ１１Ｅ１２の変異型との予想される結合表現型についても説明されている。カッパ定常鎖のｃ末端修飾は、ＺＴＳ－１５０５がネコ１５Ｈ０５変異型タンパク質に結合せず、ネコ１１Ｅ１２変異型への結合を保持し、ＺＴＳ－３６１と同等であったことによって実証されるように、エピトープに対する選択性を変更しなかった。
下記の表２では、ＺＴＳ－１５０５をＺＴＳ－３６１を比較した細胞効力データを示している。ＺＴＳ－１５０５の軽鎖カッパ定常領域の修飾は、同等のＩＣ５０値で示されるように、イヌＤＨ８２細胞及びネコＦＣＷＦ－４細胞上でそれぞれイヌ及びネコのＩＬ－３１によって誘導される細胞ｐＳＴＡＴシグナル伝達に対するこの抗体の阻害能力に影響を及ぼさなかった。
まとめると、これらの結果は、ネイティブ生殖系列がこれらの追加的な残基をコードする種からのカッパ軽鎖のｃ末端を除去または修飾することが、このような種の均質な組換え型抗体の産生に有益であると共に、安定した細胞系から産生される抗体の量にも有益である（例えば、収率が改善される）ことを示唆するものである。さらに、このような修飾は、産生される抗体の質及び量を増強する一方で、ＩＬ－３１標的タンパク質に対する抗体の親和性及び効力に負の影響は及ぼさない。本明細書では、これらの因子が、複数の種における治療使用のための組換え型抗体の産生に有益であり得ることに注目している。
１．１９．抗ＩＬ－３１ ｍＡｂ １５０５を用いたＮＲ ＣＧＥ結果の確認、及び抗ＮＧＦ抗体におけるカッパ定常領域Ｃ末端修飾の有用性に対するさらなる実証
関心対象となったのは、単量ＩｇＧパーセントの産生増加が、タンパク質標的がＩＬ－３１に類似しない異なる抗体にも適用可能かを判定することである。これを遂行するため、ネコベータ神経成長因子（ＮＧＦ）を認識するネコ抗体（ＺＴＳ－７６８及びＺＴＳ－９４３）を用いて、追加の安定したＣＨＯ細胞系プールセットを生成した。抗体ＺＴＳ－７６８重鎖の配列は、（配列番号２２０；ＺＴＳ＿７６８＿ＶＨ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号２２１；ＺＴＳ＿７６８＿ＶＨ）である）とネコＩｇＧ重鎖定常領域（配列番号１７１；ネコ＿ＨＣ＿アレルＡ＿ｗｔ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１７２；ネコ＿ＨＣ＿アレルＡ＿ｗｔ）である）との組合せである。抗体ＺＴＳ－９４３重鎖の配列は、（配列番号２２４；ＺＴＳ＿９４３＿ＶＨ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号２２５；ＺＴＳ＿９４３＿ＶＨ）である）とネコＩ
ｇＧ重鎖定常領域（配列番号１７１；ネコ＿ＨＣ＿アレルＡ＿ｗｔ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１７２；ネコ＿ＨＣ＿アレルＡ＿ｗｔ）である）との組合せである。ＺＴＳ－７６８において、軽鎖可変領域は（配列番号２２２；ＺＴＳ＿７６８＿ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号２２３；ＺＴＳ＿７６８＿ＶＬ）である）である。ＺＴＳ－７６８において、この軽鎖可変領域は、ネコＩｇＧ軽鎖定常領域（配列番号１７５；ネコ＿ＬＣ＿カッパ＿Ｇ＿マイナス）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１７６；ネコ＿ＬＣ＿カッパ＿Ｇ＿マイナス）である）と組み合わされる。ＺＴＳ－９４３において、軽鎖可変領域は、（配列番号２２６；ＺＴＳ＿９４３＿ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号２２７；ＺＴＳ＿９４３＿ＶＬ）である）であり、ネコＩｇＧ軽鎖定常領域（配列番号１８６；ネコ＿ＬＣ＿カッパ＿Ｇ＿マイナス＿ＱＲＥ＿マイナス）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１８７；ネコ＿ＬＣ＿カッパ＿Ｇ＿マイナス＿ＱＲＥ＿マイナス）である）と組み合わされる。抗ＩＬ－３１抗体と直接比較するため、抗ＮＧＦ抗体と同一の培養及び精製条件を用いて、ＺＴＳ－３６１及びＺＴＳ－１５０５の安定したプールも生成した。
上記で説明した４つの抗体の産生及び精製の後に、ＮＲ ＣＧＥを使用して単量体インタクトＩｇＧ及び亜種のパーセントを定量した。同一の方法を用いて生成及び精製したこれらの抗体を比較することにより、別個のタンパク質標的を認識する構造的に異なる抗体間でカッパ定常領域Ｃ末端の修飾を組み込むことの有用性を評価することができた。図１８Ａは、これらの抗ネコＮＧＦ抗体の可変領域を抗ＩＬ－３１と比較する同一性パーセントを示しており、これはＣｌｕｓｔａｌｌＷソフトウェアを用いて計算した。図１８Ｂ及び１８Ｃは、抗ネコＩＬ－３１及びＮＧＦ抗体における、それぞれ可変重鎖のアラインメント及び可変軽鎖のアラインメントを示しており、ＣＤＲが枠で囲まれている。抗ＩＬ－３１抗体及び抗ＮＧＦ抗体が互いに異なるのは明らかであり、全体的な同一性が欠如しており、とりわけＣＤＲとして強調表示されている抗原結合領域内が異なっている。
図１９は、カッパ定常領域Ｃ末端の修飾がありまたはなしの抗ネコＩＬ－３１及び抗ネコＮＧＦ抗体を比較するＮＲ ＣＧＥからの結果を示している。以前の知見と整合して、野生型カッパ軽鎖を含む抗ＩＬ－３１抗体（ＺＴＳ－３６１）は、８０．７４％の単量体ＩｇＧを得、ＨＨＬ亜種が８．７１％と優勢であることが観察された。３つのＣ末端側残基を除去してＺＴＳ－１５０５を生成した後に、再び単量体パーセントの明らかな改善が観察された（８９．１７％の単量体及び５．９％のＨＨＬ）。野生型カッパ軽鎖（ＺＴＳ－７６８）を含む抗ネコＮＧＦ ｍＡｂからの精製ＩｇＧをＮＲ ＣＧＥで分析した結果、抗ＩＬ－３１ ＺＴＳ－３６１に対し同様の量の単量体及び亜種（８０．８１％の単量体及び１２．３３％のＨＨＬ）が単離された。注目すべきことに、抗ネコＮＧＦ抗体からＣ末端残基を除去した後にも同じパターンが観察され、８８．５９％の単量体がもたらされ、優勢な亜種は５．９８％のＨＨＬであった。
これらの結果は、カッパ軽鎖のＣ末端に野生型アミノ酸残基（ＱＲＥ）を含むネコＩｇＧタンパク質と、これらの残基が除去されたＩｇＧとの間に構造的な区別が存在することを示唆するものである。本明細書で説明されている実験結果は、このカッパ軽鎖修飾を使用することにより、亜種不純物の量が低減して単量体ネコＩｇＧが産生されることを支持している。これに付け加えて、本明細書の結果は、この方法が、完全に別個の標的を認識する構造的に異なる抗体にも適用されることを明らかに実証しているため、この修飾が、幅広い属のネコ抗体に加えて、カッパ軽鎖定常領域上にさらなるＣ末端側アミノ酸を有するその他の哺乳類抗体にも適用できる可能性がある。いかなる１つの理論にも束縛されることを望まないが、この軽鎖修飾は、安定したＣＨＯ細胞系からの誘導産生中に免疫グロブリン鎖をより高い忠実度で対形成して、より多量の単量体ＩｇＧと、場合によってはより高い全体的抗体収率とをもたらすように思われる。これらの属性はいずれも、商用グレードの抗体治療薬を製造する観点から非常に望ましい。
１．２０．ネコＩＬ－３１に結合するｍＡｂ １５Ｈ０５との比較において、ウマＩＬ－３１タンパク質上の同等の領域に結合する抗ウマＩＬ－３１抗体の同定
本明細書で説明されているマウス１５Ｈ０５系統からの抗体を用いたネコ掻痒モデルにおける有望なｉｎ ｖｉｖｏ有効性を考慮すれば、ＩＬ－３１タンパク質のウマオルソログ上の類似領域に結合する新規抗体基質の同定が所望された。この目標に向け、ウマＩＬ－３１に結合する抗体を同定する目的で、マウスを組換え型ウマＩＬ－３１（配列番号１６５）で免疫化した。
先に説明したように、ＥＬＩＳＡを用いて免疫動物の血清抗体価を定量した。単一応答性マウスからのドナー脾細胞を融合に使用し、ＥＬＩＳＡにより、ハイブリドーマ上清においてウマＩＬ－３１タンパク質に結合する抗体をスクリーニングした。これにより、ネコＩＬ－３１上の抗体１５Ｈ０５の結合部位と同等の、ウマＩＬ－３１タンパク質上の領域に結合する２つのマウス抗体が同定された。本出願のセクション１．１０では、図６ＢでネコＩＬ－３１のホモロジーモデル上のおよその結合部位を図示しながら抗体１５Ｈ０５の結合部位のキャラクタリゼーションについて説明している。図２０は、ＣｌｕｓｔａｌｌＷソフトウェアを使用したネコＩＬ－３１野生型（配列番号１５７）とウマＩＬ－３１（配列番号１６５）とのアラインメントを示している。アラインメントの上の矢印は、セクション１．１０で、部位２（図６Ｂ）においてネコＩＬ－３１に対する抗体１５Ｈ０５の結合領域内に含まれていると説明されている残基Ｐ１２６及びＤ１２８を示している。ウマＩＬ－３１タンパク質におけるこの結合部位を共有する２つの抗ウマＩＬ－３１抗体は、０４Ｈ０７及び０６Ａ０９である。
抗ウマＩＬ－３１ ０４Ｈ０７及び０６Ａ０９をさらにサブクローニングして、均一な抗体を産生するハイブリドーマを生成し、可変重鎖及び軽鎖をシークエンシングした。抗体０４Ｈ０７に対し決定したマウス抗ＩＬ－３１可変配列は、以下の通りであり、０４Ｈ０７可変重鎖（配列番号２１２；Ｍｕ＿０４Ｈ０７＿ＶＨ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号２１３；Ｍｕ＿０４Ｈ０７＿ＶＨ）である）、０４Ｈ０７可変軽鎖（配列番号２１４；Ｍｕ＿０４Ｈ０７＿ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号２１５；Ｍｕ＿０４Ｈ０７＿ＶＬ）である）、０６Ａ０９可変重鎖（配列番号２１６；Ｍｕ＿０６Ａ０９＿ＶＨ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号２１７；Ｍｕ＿０６Ａ０９＿ＶＨ）である）、０６Ａ０９可変軽鎖（配列番号２１８；Ｍｕ＿０６Ａ０９＿ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号２１９；Ｍｕ＿０６Ａ０９＿ＶＬ）である）である。図２１は、ＣｌｕｓｔａｌｌＷを用いてマウス抗体１５Ｈ０５と比較している０４Ｈ０７及び０６Ａ０９の可変重鎖（図２１Ａ）及び軽鎖（図２１Ｂ）のアラインメントを示している。比較のため、６つのＣＤＲの各々の位置が枠で囲まれている。抗ウマＩＬ－３１抗体０４Ｈ０７及び０６Ａ０９は互いの類似性が高く、共通のクローン系統から出現した可能性がある。抗ネコＩＬ－３１抗体１５Ｈ０５は、抗ウマＩＬ－３１ ０４Ｈ０７及び０６Ａ０９と比較して、ＣＤＲのアミノ酸配列ならびにＣＤＲＨ３及びＣＤＲＬ１の長さが明確に異なる。関心対象となるのは、ウマタンパク質と比較すると、抗体１５Ｈ０５のネコＩＬ－３１への結合部位が保存されていることである（図２０矢印）。これらの結果は、構造的に異なるＣＤＲが２つのＩＬ－３１オーソログ上の共通のエピトープ領域を認識可能であることをさらに例示するものである。
１．２１．抗ＩＬ－３１抗体ＺＴＳ－１５０５上のＣＤＲのアラニンスキャニング
抗原認識を担う抗体の領域はパラトープに相当する。パラトープは、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域両方の相補性決定領域（ＣＤＲ）内のアミノ酸の組合せによって作成される。抗体と抗原との間の結合は、多くの場合、抗原の側鎖または炭水化物成分を伴ったＣＤＲ残基の側鎖によって媒介される。抗体認識に関与する不可欠な側鎖を定義する助けとするため、重鎖及び軽鎖両方の各ＣＤＲ残基に対しアラニンスキャニング変異誘発を実施し
た。次いで、これらの変異型に対し、ｂｉａｃｏｒｅを用いてネコＩＬ－３１への結合能力を個別に試験し、ＦＣＷＦ－４細胞ベースアッセイでＩＬ－３１媒介性シグナル伝達の阻害を評価した。
アラニンスキャニング変異型ｍＡｂの親ｍＡｂに対する相対的親和性を決定するため、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００を用いて１００ｎＭにおけるネコＩＬ－３１コーティングチップに対する結合プロファイルを決定した。親ｍＡｂの４つの複製物の平均応答単位＋／－３標準偏差を使用して、抗体結合のオン速度及びオフ速度両方を含む応答単位の閾値を定義するためのパラメーターを生成した（図２２）。次いで、この閾値内に収まる各変異型のデータポイントのパーセンテージを使用して、「類似性スコア％」を定義した（図２３）。ＺＴＳ－１５０５内の各重鎖及び軽鎖のＣＤＲ位置におけるアラニン置換から得られた類似性スコアが、それぞれ図２３及び２４に示されている。
細胞ベースのアッセイでＺＴＳ－１５０５変異型抗体の相対的活性を定量するため、各抗体に対し、１５ｕｇ／ｍＬにおけるＦｃｗｆ－４細胞内でのネコＩＬ－３１媒介性ＳＴＡＴ３リン酸化を阻害する能力を評価した。ＳＴＡＴリン酸化の相対的阻害は、親に対する各変異型のｓｔａｔリン酸化阻害％を評価することによって決定した。重鎖及び軽鎖についてのＺＴＳ－１５０５の各ＣＤＲ位置のアラニン置換からの結果は、それぞれ図２３及び２４で「親に対する阻害パーセント」として示されている。個々のアラニン置換が結合親和性及び細胞ベース活性に及ぼす影響を評価することにより、各ＣＤＲアミノ酸残基の側鎖に対し、抗原認識におけるその役割を個別に評価することができる。アラニンに変更し、かつ活性を保持することができるＣＤＲ残基は、おそらくは、様々なアミノ酸置換を受けやすく、抗原認識に不可欠ではない残基に相当する。これらのデータに基づけば、少なくとも、配列番号１の残基４（Ｉ）、配列番号２の残基１～３（ＮＩＮ）、５～７（ＴＳＧ）、９～１１（ＴＥＮ）、及び１３（Ｑ）、配列番号３の残基４（Ｋ）、６（Ｄ）、及び１３（Ｖ）は、それぞれ重鎖ＣＤＲ １、２、及び３において抗原結合に不可欠ではない残基である。結合に不可欠ではない軽鎖ＣＤＲ残基としては、ＣＤＲＬ １、２、及び３からの、それぞれ配列番号４の残基３～７（ＳＱＧＩＳ）、配列番号５の残基３（Ｓ）及び５（Ｌ）、ならびに配列番号６の残基４（Ｑ）、５（Ｔ）、及び９（Ｔ）が挙げられる。
１．２２．ＺＩＬ８抗体の２つのネコ化バージョンにおける結合親和性及び細胞効力
この実施例の上記のセクション１．６では、ＺＩＬ８と称される、ネコＩＬ－３１を認識するイヌ抗体の同定について説明している。最初のスクリーニングにより、この抗体はネコＩＬ－３１タンパク質に結合可能であることが明らかになったが、その結合は１５Ｈ０５変異の影響を受ける。そのため、関心対象となったのは、ネコの治療薬として使用するための当該抗体のネコ化形態を追求することである。この目標に向け、本出願のセクション１．８で先に説明したようにネコ化戦略がとられた。ＺＩＬ８ ＣＤＲを適切なネコフレームワークに移植することにより、抗体ＺＴＳ－５８６４及びＺＴＳ－５８６５が得られた。抗体ＺＴＳ－５８６４重鎖の配列は、（配列番号２２８；ＺＴＳ＿５８６４＿ＶＨ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号２２９；ＺＴＳ＿５８６４＿ＶＨ）である）とネコＩｇＧ重鎖定常領域（配列番号１７３；ネコ＿ＨＣ＿アレルＡ＿１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１７４；ネコ＿ＨＣ＿アレルＡ＿１）である）との組合せである。ＺＴＳ－５８６４において、軽鎖可変領域は（配列番号２３０；ＺＴＳ＿５８６４＿ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号２３１；ＺＴＳ＿５８６４＿ＶＬ）である）である。ＺＴＳ－５８６４において、この軽鎖可変領域は、ネコＩｇＧ軽鎖定常領域（配列番号２３６；ネコ＿ＬＣ＿ラムダ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号２３７；ネコ＿ＬＣ＿ラムダ）である）と組み合わされる。抗体ＺＴＳ－５８６５重鎖の配列は、（配列番号２３２；ＺＴＳ＿５８６５＿ＶＨ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号２３３；ＺＴＳ＿５８６５＿ＶＨ）である）と
ネコＩｇＧ重鎖定常領域（配列番号１７３；ネコ＿ＨＣ＿アレルＡ＿１）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号１７４；ネコ＿ＨＣ＿アレルＡ＿１）である）との組合せである。ＺＴＳ－５８６５において、軽鎖可変領域は（配列番号２３４；ＺＴＳ＿５８６５＿ＶＬ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号２３５；ＺＴＳ＿５８６５＿ＶＬ）である）である。ＺＴＳ－５８６５において、この軽鎖可変領域は、ネコＩｇＧ軽鎖定常領域（配列番号２３６；ネコ＿ＬＣ＿ラムダ）（これに対応するヌクレオチド配列は（配列番号２３７；ネコ＿ＬＣ＿ラムダ）である）と組み合わされる。
図２５Ａ及び２５Ｂは、２つのネコ化抗体ＺＴＳ－５８６４及びＺＴＳ－５８６５におけるこの親和性及び細胞効力を示している。両抗体はネコＩＬ－３１に対する親和性が高く、ＺＴＳ－５８６４はＺＴＳ－５８６４と比較しておよそ４倍親和性（ＫＤ（Ｍ））が増加している。ネコＩＬ－３１を用いてＦＣＦＷ４細胞内のｐＳＴＡＴ３シグナル伝達を刺激して細胞効力を評価した。本出願で先に説明したように、各抗体のＩＣ５０値を計算した。ＺＴＳ－５８６４は、ＺＴＳ－５８６５とＩＣ５０値を比較するとおよそ３倍強力である。両抗体が、本明細書で先に説明した１５Ｈ０５系統からの抗体（図３）の範囲内のＩＣ５０で強力であるとみなされることは注目に値する。ネコＦＣＦＷ４細胞からのｐＳＴＡＴ３シグナル伝達を用いたこれらの効力の関連性は、先に、ネコ掻痒モデルにおけるキメラ型及びネコ化抗体を用いた肯定的なｉｎ ｖｉｖｏ有効性の結果によって認定されている（図９及び図１０）。
１．２３．ネコ掻痒チャレンジモデルにおけるネコ化ＺＴＳ－５８６４抗ＩＬ－３１抗体の有効性のｉｎ ｖｉｖｏ評価
この実施例セクションのセクション１．１４で先に説明したように、ＺＴＳ－５８６４のｉｎ ｖｉｖｏ有効性を誘導性掻痒のネコＩＬ－３１モデルで評価した。図２６は、この研究の結果を示している。投与前（－７日目）は、Ｔ０１及びＴ０２群の動物が投与前にＩＬ－３１チャレンジに対し同等の掻痒反応を有することを示している。５６日にわたる研究の過程で、Ｔ０１の掻痒応答にはほとんど変化が観察されなかった。これに対し、ＺＴＳ－５８６４（３．０ｍｇ／ｍｇ）をゼロ日目に皮下投与したところ、５６日目までの研究の全過程を通じＩＬ－３１チャレンジの掻痒効果が減弱した（図２６、Ｔ０２）。５６日目におけるＴ０２の平均掻痒スコアの継続的な減少は、抗体がこの時点を超えても有効性を維持する可能性があることを示している。これらの結果は、本出願における抗ネコＩＬ－３１抗体の選択に使用したロバストな基準を強調するものである。これらの結果はさらに、ネコにおけるＩＬ－３１媒介性障害の治療のための治療薬としてのこれらの種分化抗体の位置付けを支持するものである。
非限定的に、本発明は以下の態様を含む。
[態様１]
哺乳類ＩＬ－３１タンパク質とその共受容体との相互作用に関与する前記哺乳類ＩＬ－３１タンパク質上の領域に特異的に結合するモノクローナル抗体またはその抗原結合部分であって、前記抗体の前記領域との前記結合が、以下：
ａ）配列番号１５７によって表されるネコＩＬ－３１配列（ネコ＿ＩＬ３１＿野生型）のアミノ酸残基約１２４から１３５の間の領域、
ｂ）配列番号１５５（イヌ＿ＩＬ３１）によって表されるイヌＩＬ－３１配列のアミノ酸残基約１２４から１３５の間の領域、及び
ｃ）配列番号１６５（ウマ＿ＩＬ３１）によって表されるウマＩＬ－３１配列のアミノ酸残基約１１８から１２９の間の領域
からなる群より選択される１５Ｈ０５エピトープ結合領域の変異によって影響を受ける、前記モノクローナル抗体、またはその抗原結合部分。
[態様２]
前記１５Ｈ０５エピトープ結合領域の前記変異が、以下：
（ａ）配列番号１５７の１２６位及び１２８位がアラニンに変化した変異型、
（ｂ）配列番号１５５の１２６位及び１２８位がアラニンに変化した変異型、及び
（ｃ）配列番号１６５の１２０位及び１２２位がアラニンに変化した変異型
からなる群より選択される、態様１に記載のモノクローナル抗体。
[態様３]
前記抗体が前記１５Ｈ０５エピトープ領域に結合する、態様１または２に記載のモノクローナル抗体。
[態様４]
前記哺乳類ＩＬ－３１がネコＩＬ－３１であり、前記抗体が、配列番号１５７（ネコ＿ＩＬ３１＿野生型）によって表されるネコＩＬ－３１配列のアミノ酸残基約１２５から１３４の間の領域に結合する、態様１～３のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体。
[態様５]
前記哺乳類ＩＬ－３１がイヌＩＬ－３１であり、前記抗体が、配列番号１５５（イヌ＿ＩＬ３１）によって表されるイヌＩＬ－３１配列のアミノ酸残基約１２５から１３４の間の領域に結合する、態様１～３のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体。
[態様６]
前記哺乳類ＩＬ－３１がウマＩＬ－３１であり、前記抗体が、配列番号１６５（ウマ＿ＩＬ３１）によって表されるウマＩＬ－３１のアミノ酸残基約１１７から１２８の間の領域に結合する、態様１～３のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体。
[態様７]
前記抗体が、ネコＩＬ３１に結合し、かつ４２位のリジンからアスパラギンへの置換、４３位のバリンからイソロイシンへの置換、４６位のロイシンからバリンへの置換、４９位のリジンからアスパラギンへの置換、及びこれらの組合せからなる群より選択されるフレームワーク２（ＦＷ２）変化を含むＶＬ鎖を含み、前記位置が配列番号１２７（ＦＥＬＩ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１）のナンバリングに準拠している、態様４に記載のモノクローナル抗体。
[態様８]
前記抗体またはその抗原結合部分が、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列の組合せ：１）抗体１５Ｈ０５：可変重鎖（ＶＨ）－ＣＤＲ１がＳＹＴＩＨ（配列番号１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＮＩＮＰＴＳＧＹＴＥＮＮＱＲＦＫＤ（配列番号２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＷＧＦＫＹＤＧＥＷＳＦＤＶ（配列番号３）、可変軽鎖（ＶＬ）－ＣＤＲ１がＲＡＳＱＧＩＳＩＷＬＳ（配列番号４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＡＳＮＬＨＩ（配列番号５）、及びＶＬ－ＣＤＲ３がＬＱＳＱＴＹＰＬＴ（配列番号６）、または
２）ＶＨまたはＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、またはＣＤＲ３のうちの少なくとも１つにおける１つ以上のアミノ酸残基の付加、欠失、及び／または置換によって前記親抗体１５Ｈ
０５と相違する、１）のバリアント
を含む、態様１～７のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体。
[態様９]
前記抗体またはその抗原結合部分が、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列の以下の組合せ：
１）抗体ＺＩＬ１：可変重鎖（ＶＨ）－ＣＤＲ１がＳＹＧＭＳ（配列番号１３）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＨＩＮＳＧＧＳＳＴＹＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号１４）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＶＹＴＴＬＡＡＦＷＴＤＮＦＤＹ（配列番号１５）、可変軽鎖（ＶＬ）－ＣＤＲ１がＳＧＳＴＮＮＩＧＩＬＡＡＴ（配列番号１６）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＳＤＧＮＲＰＳ（配列番号１７）、及びＶＬ－ＣＤＲ３がＱＳＦＤＴＴＬＤＡＹＶ（配列番号１８）、
２）抗体ＺＩＬ８：ＶＨ－ＣＤＲ１がＤＹＡＭＳ（配列番号１９）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＧＩＤＳＶＧＳＧＴＳＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号２０）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＦＰＧＳＦＥＨ（配列番号２１）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＴＧＳＳＳＮＩＧＳＧＹＶＧ（配列番号２２）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＹＮＳＤＲＰＳ（配列番号２３）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＳＶＹＤＲＴＦＮＡＶ（配列番号２４）、
３）抗体ＺＩＬ９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＤＭＴ（配列番号２５）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＤＶＮＳＧＧＴＧＴＡＹＡＶＡＶＫＧ（配列番号２６）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＬＧＶＲＤＧＬＳＶ（配列番号２７）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＮＥＹＹＴＱ（配列番号２８）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＲＤＴＥＲＰＳ（配列番号２９）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＤＴＧＴＬＶ（配列番号３０）、
４）抗体ＺＩＬ１１：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＶＭＮ（配列番号３１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号３２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＳＭＶＧＰＦＤＹ（配列番号３３）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＳＮＹＹＡＱ（配列番号３４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号３５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶ（配列番号３６）、
５）抗体ＺＩＬ６９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＡＭＫ（配列番号３７）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＴＩＮＮＤＧＴＲＴＧＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号３８）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＮＡＥＳＧＣＴＧＤＨＣＰＰＹ（配列番号３９）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＮＫＹＹＡＱ（配列番号４０）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号４１）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＥＴＮＶ（配列番号４２）、
６）抗体ＺＩＬ９４：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＦＭＳ（配列番号４３）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＬＩＳＳＤＧＳＧＴＹＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号４４）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＦＷＲＡＦＮＤ（配列番号４５）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＧＬＮＳＧＳＶＳＴＳＮＹＰＧ（配列番号４６）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＤＴＧＳＲＰＳ（配列番号４７）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＳＬＹＴＤＳＤＩＬＶ（配列番号４８）、
７）抗体ＺＩＬ１５４：ＶＨ－ＣＤＲ１がＤＲＧＭＳ（配列番号４９）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＹＩＲＹＤＧＳＲＴＤＹＡＤＡＶＥＧ（配列番号５０）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＷＤＧＳＳＦＤＹ（配列番号５１）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＡＳＱＳＬＬＨＳＤＧＮＴＹＬＤ（配列番号５２）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＶＳＮＲＤＰ（配列番号５３）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＭＱＡＩＨＦＰＬＴ（配列番号５４）、
８）抗体ＺＩＬ１５９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＶＭＴ（配列番号５５）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＧＩＮＳＥＧＳＲＴＡＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号５６）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＤＩＶＡＴＧＴＳＹ（配列番号５７）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＴＬＮＲＦＹＴＱ（配列番号５８）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号５９）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＫＳＡＶＳＩＤＶＧＶ（配列番号６０）、
９）抗体ＺＩＬ１７１：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＶＭＮ（配列番号６１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号６２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＳＭＶＧＰＦＤＹ（配列番号６３）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＫＳＬＳＹＹＹＡＱ（配列番号６４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号６５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶ（配列番号６６）、
１０）抗体０４Ｈ０７：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＷＭＮ（配列番号２００）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＭＩＤＰＳＤＳＥＩＨＹＮＱＶＦＫＤ（配列番号２０１）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＱＤＩＶＴＴＶＤＹ（配列番号２０２）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＳＳＱＳＬＬＹＳＩＮＱＫＮＨＬＡ（配列番号２０３）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号２０４）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＱＱＧＹＴＹＰＦＴ（配列番号２０５）、
１１）抗体０６Ａ０９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＷＭＮ（配列番号２０６）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＭＩＤＰＳＤＳＥＴＨＹＮＱＩＦＲＤ（配列番号２０７）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＱＤＩＶＴＴＶＤＹ（配列番号２０８）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＳＳＱＳＬＬＹＳＩＮＱＫＮＦＬＡ（配列番号２０９）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号２１０）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＱＱＨＹＧＹＰＦＴ（配列番号２１１）、または
１２）ＶＨまたはＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３のうちの少なくとも１つにおける１つ以上のアミノ酸残基の付加、欠失、及び／または置換によってそれぞれの親抗体ＺＩＬ１、ＺＩＬ８、ＺＩＬ９、ＺＩＬ１１、ＺＩＬ６９、ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、ＺＩＬ１５９、ＺＩＬ１７１、０４Ｈ０７、もしくは０６Ａ０９と相違する、１）～１１）のバリアント
を含む、態様１または２に記載のモノクローナル抗体。
[態様１０]
前記抗体が、哺乳類のＩＬ－３１媒介性掻痒状態またはアレルギー状態を低減、阻害、または中和する、態様１～９のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体。
[態様１１]
前記哺乳類が、イヌ、ネコ、及びウマからなる群より選択される、態様１０に記載のモノクローナル抗体。
[態様１２]
前記抗体がキメラ型である、態様１～１１のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体。
[態様１３]
前記抗体が、イヌ化、ネコ化、ウマ化、完全イヌ化、完全ネコ化、または完全ウマ化されている、態様１～１２のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体。
[態様１４]
以下からなる群：
ａ）ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＬ１＿ＦＷ２：
ＥＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＰＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＩＷＬＳＷＹＱＱＫＰＧＮＩＰＫＶＬＩＮＫＡＳＮＬＨＩＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＡＡＴＹＹＣＬＱＳＱＴＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１３５）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＦＥＬ＿１５Ｈ０５＿ＶＨ１：ＱＶＬＬＶＱＳＧＡＥＶＲＴＰＧＡＳＶＫＩＦＣＫＡＳＧＹＳＦＴＳＹＴＩＨＷＬＲＱＡＰＡＱＧＬＥＷＭＧＮＩＮＰＴＳＧＹＴＥＮＮＱＲＦＫＤＲＬＴＬＴＡＤＴＳＴＮＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＡＤＴＡＭＹＹＣＡＲＷＧＦＫＹＤＧＥＷＳＦＤＶＷＧＡＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号１２１）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含む、態様８に記載のモノクローナル抗体。
[態様１５]
１）抗体ＺＩＬ１が、以下からなる群：
ａ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１＿ＶＬ：
ＱＳＶＬＴＱＰＴＳＶＳＧＳＬＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＴＮＮＩＧＩＬＡＡＴＷＹＱＱＬＰＧＫＡＰＫＶＬＶＹＳＤＧＮＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＮＳＡＴＬＴＩＴＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＦＤＴＴＬＤＡＹＶＦＧＳＧＴＱＬＴＶＬ（配列番号７７）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１＿ＶＨ：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＱＷＶＡＨＩＮＳＧＧＳＳＴＹＹＡＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹ
ＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＶＥＶＹＴＴＬＡＡＦＷＴＤＮＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７５）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、
２）抗体ＺＩＬ８が、以下からなる群：
ａ）ＣＡＮ－ＺＩＬ８＿ＶＬ：
ＱＳＶＬＴＱＰＡＳＶＳＧＳＬＧＱＫＶＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＳＧＹＶＧＷＹＱＱＬＰＧＴＧＰＲＴＬＩＹＹＮＳＤＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＲＳＧＴＴＡＴＬＴＩＳＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＳＶＹＤＲＴＦＮＡＶＦＧＧＧＴ（配列番号８１）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＣＡＮ－ＺＩＬ８＿ＶＨ：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＡＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＤＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＲＧＬＱＷＶＡＧＩＤＳＶＧＳＧＴＳＹＡＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＡＫＮＴＬＹＬＱＭＦＮＬＲＡＥＤＴＡＩＹＹＣＡＳＧＦＰＧＳＦＥＨＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号７９）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含む、または
以下からなる群：
（ｃ）ＺＴＳ＿５８６４＿ＶＬ：ＱＳＶＬＴＱＰＳＳＶＳＧＴＬＧＱＲＩＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＳＧＹＶＧＷＹＱＱＶＰＧＭＧＰＫＴＶＩＹＹＮＳＤＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＳＳＧＴＬＴＩＴＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＳＶＹＤＲＴＦＮＡＶＦＧＧＧＴＨＬＴＶＬＧＱＰＫＳＡＰＰＲＳＨＳＳＲＰＩＳＹＡＶＦＣＬ（配列番号２３０）を含む可変軽鎖、及び
（ｄ）ＺＴＳ＿５８６４＿ＶＨ：ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＴＣＶＡＳＧＦＴＦＳＤＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＱＷＶＡＧＩＤＳＶＧＳＧＴＳＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＴＹＹＣＡＳＧＦＰＧＳＦＥＨＷＧＱＧＡＬＶＴＶＳＳ（配列番号２２８）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含む、または
以下からなる群：
（ｅ）ＺＴＳ＿５８６５＿ＶＬ：
ＳＶＬＴＱＰＳＳＶＳＧＴＬＧＱＲＩＴＩＳＣＴＧＳＳＳＮＩＧＳＧＹＶＧＷＹＱＱＶＰＧＭＧＰＫＴＶＩＹＹＮＳＤＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＳＳＧＴＬＴＩＴＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＳＶＹＤＲＴＦＮＡＶＦＧＧＧＴＨＬＴＶＬＧＱＰＫＳＡＰＰＲＳＨＳＳＲＰＩＳＹＡＶＦＣＬ（配列番号２３４）を含む可変軽鎖、及び
（ｆ）ＺＴＳ＿５８６５＿ＶＨ：
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＴＣＶＡＳＧＦＴＦＳＤＹＡＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＱＷＶＡＧＩＤＳＶＧＳＧＴＳＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＳＧＬＫＴＥＤＴＡＴＹＹＣＡＳＧＦＰＧＳＦＥＨＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２３２）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、
３）抗体ＺＩＬ９が、以下からなる群：
ａ）ＣＡＮ－ＺＩＬ９＿ＶＬ：ＳＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＬＧＱＴＡＴＩＳＣＳＧＥＳＬＮＥＹＹＴＱＷＦＱＱＫＡＧＱＡＰＶＬＶＩＹＲＤＴＥＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＳＳＧＮＴＨＴＬＴＩＳＧＡＲＡＥＤＥＡＤＹＹＣＥＳＡＶＤＴＧＴＬＶＦＧＧＧＴＨＬＡＶＬ（配列番号８５）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＣＡＮ－ＺＩＬ９＿ＶＨ：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＰＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＳＹＤＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＱＷＶＡＤＶＮＳＧＧＴＧＴＡＹＡＶＡＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＫＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＬＧＶＲＤＧＬＳＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８３）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、
４）抗体ＺＩＬ１１が、以下からなる群：
ａ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１１＿ＶＬ：ＳＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＬＧＱＴＡＴＩＳＣＳＧＥＳＬＳＮＹＹＡＱＷＦＱＱＫＡＧＱＡＰＶＬＶＩＹＫＤＴＥＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＳＳＧＮＴＨＴＬＴＩＳＧＡＲＡＥＤＥＡＤＹＹＣＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶＦＧＧＧＴ（配列番号８９）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１１＿ＶＨ：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＡＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＲＴＹＶＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＱＷＶＡＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧＲＦＴＶＳＲＤＮＡＱＮＳＬＦＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＦＣＶＶＳＭＶＧＰＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号８７）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、
５）抗体ＺＩＬ６９が、以下からなる群：
ａ）ＣＡＮ－ＺＩＬ６９＿ＶＬ：ＳＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＬＧＱＴＡＴＩＳＣＳＧＥＳＬＮＫＹＹＡＱＷＦＱＱＫＡＧＱＡＰＶＬＶＩＹＫＤＴＥＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＳＡＧＮＴＨＴＬＴＩＳＧＡＲＡＥＤＥＡＤＹＹＣＥＳＡＶＳＳＥＴＮＶＦＧＳＧＴＱＬＴＶＬ（配列番号９３）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＣＡＮ－ＺＩＬ６９＿ＶＨ：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＡＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＭＫＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＱＷＶＡＴＩＮＮＤＧＴＲＴＧＹＡＤＡＶＲＧＲＦＴＩＳＫＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＤＳＬＲＡＤＤＴＡＶＹＹＣＴＫＧＮＡＥＳＧＣＴＧＤＨＣＰＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号９１）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、
６）抗体ＺＩＬ９４が、以下からなる群：
ａ）ＣＡＮ－ＺＩＬ９４＿ＶＬ：ＱＴＶＶＩＱＥＰＳＬＳＶＳＰＧＧＴＶＴＬＴＣＧＬＮＳＧＳＶＳＴＳＮＹＰＧＷＹＱＱＴＲＧＲＴＰＲＴＩＩＹＤＴＧＳＲＰＳＧＶＰＮＲＦＳＧＳＩＳＧＮＫＡＡＬＴＩＴＧＡＱＰＥＤＥＡＤＹＹＣＳＬＹＴＤＳＤＩＬＶＦＧＧＧＴＨＬＴＶＬ（配列番号９７）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＣＡＮ－ＺＩＬ９４＿ＶＨ：ＥＶＱＬＶＤＳＧＧＤＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＴＹＦＭＳＷＶＲＱＡＰＧＲＧＬＱＷＶＡＬＩＳＳＤＧＳＧＴＹＹＡＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＭＹＹＣＡＩＦＷＲＡＦＮＤＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号９５）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、
７）抗体ＺＩＬ１５４が、以下からなる群：
ａ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１５４＿ＶＬ：ＤＩＶＶＴＱＴＰＬＳＬＳＶＳＰＧＥＴＡＳＦＳＣＫＡＳＱＳＬＬＨＳＤＧＮＴＹＬＤＷＦＲＱＫＰＧＱＳＰＱＲＬＩＹＫＶＳＮＲＤＰＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＲＩＳＧＶＥＡＤＤＡＧＬＹＹＣＭＱＡＩＨＦＰＬＴＦＧＡＧＴＫＶＥＬＫ（配列番号１０１）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１５４＿ＶＨ：ＥＶＨＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＷＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＤＲＧＭＳＷＶＲＱＳＰＧＫＧＬＱＷＶＡＹＩＲＹＤＧＳＲＴＤＹＡＤＡＶＥＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＷＤＧＳＳＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号９９）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、
８）抗体ＺＩＬ１５９が、以下からなる群：
ａ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１５９＿ＶＬ：ＳＮＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＬＧＱＴＡＴＩＳＣＳＧＥＴＬＮＲＦＹＴＱＷＦＱＱＫＡＧＱＡＰＶＬＶＩＹＫＤＴＥＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＳＳＧＮＩＨＴＬＴＩＳＧＡＲＡＥＤＥＡＡＹＹＣＫＳＡＶＳＩＤＶＧＶＦＧＧＧＴＨＬＴＶＦ（配列番号１０５）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１５９＿ＶＨ：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＡＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳＳＹＶＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＱＷＶＡＧＩＮＳＥＧＳＲＴＡＹＡＤＡＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＴＬＹＬＱＩＤＳＬＲＡＥＤＴＡＩＹＹＣＡＴＧＤＩＶＡＴＧＴＳＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１０３）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、
９）抗体ＺＩＬ１７１が、以下からなる群：
ａ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１７１＿ＶＬ：ＳＳＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＬＧＱＴＡＴＩＳＣＳＧＫＳＬＳＹＹＹＡＱＷＦＱＱＫＡＧＱＡＰＶＬＶＩＹＫＤＴＥＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＳＳＧＮＴＨＴＬＴＩＳＧＡＲＡＥＤＥＡＤＹＹＣＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶＦＧＧＧＴＨＬＴＶＬ（配列番号１０９）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）ＣＡＮ－ＺＩＬ１７１＿ＶＨ：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＫＰＡＧＳＬＲＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＲＴＹＶＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＱＷＶＡＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧＲＦＴＶＳＲＤＮＡＱＮＳＬＦＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＩＹＦＣＶＶＳＭＶＧＰＦＤＹＷＧＨＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１０７）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、
１０）抗体０４Ｈ０７が、以下からなる群：
ａ）Ｍｕ＿０４Ｈ０７＿ＶＬ：
ＤＩＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＩＮＱＫＮＨＬＡＷＦＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＡＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＴＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＧＹＴＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号２１４）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）Ｍｕ＿０４Ｈ０７＿ＶＨ：
ＱＶＱＬＱＱＰＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＮＷＡＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＭＩＤＰＳＤＳＥＩＨＹＮＱＶＦＫＤＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＱＤＩＶＴＴＶＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号２１２）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含み、
１１）抗体０６Ａ０９が、以下からなる群：
ａ）Ｍｕ＿０６Ａ０９＿ＶＬ：ＤＩＶＭＳＱＳＰＳＳＬＡＶＳＶＧＥＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＹＳＩＮＱＫＮＦＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＫＳＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＨＹＧＹＰＦＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号２１８）を含む可変軽鎖、及び
ｂ）Ｍｕ＿０６Ａ０９＿ＶＨ：
ＱＶＱＬＱＱＰＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＹＧＹＴＦＴＳＹＷＭＮＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＭＩＤＰＳＤＳＥＴＨＹＮＱＩＦＲＤＫＡＴＬＴＩＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＱＤＩＶＴＴＶＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳ（配列番号２１６）を含む可変重鎖
のうちの少なくとも１つを含む、態様９に記載のモノクローナル抗体。
[態様１６]
対象のＩＬ－３１媒介性障害を治療する方法であって、態様１～１５のいずれか１項に記載の抗体の治療有効量を前記対象に投与することを含む、前記方法。
[態様１７]
前記ＩＬ－３１媒介性障害が掻痒状態またはアレルギー状態である、態様１６に記載の方法。
[態様１８]
前記掻痒状態またはアレルギー状態が、アトピー性皮膚炎、湿疹、乾癬、強皮症、及び掻痒からなる群より選択される掻痒状態である、態様１７に記載の方法。
[態様１９]
前記掻痒状態またはアレルギー状態が、アレルギー性皮膚炎、夏季湿疹、蕁麻疹、ヒーブ、炎症性気道疾患、再発性気道閉塞、気道過敏症、慢性閉塞性肺疾患、及び自己免疫に起因する炎症プロセスからなる群より選択されるアレルギー状態である、態様１８に記載の方法。
[態様２０]
前記ＩＬ－３１媒介性障害が腫瘍進行である、態様１６に記載の方法。
[態様２１]
前記ＩＬ－３１媒介性障害が好酸球性疾患またはマスト細胞腫である、態様２０に記
載の方法。
[態様２２]
哺乳類のＩＬ－３１活性を阻害する方法であって、態様１～１５のいずれか１項に記載の抗体を前記哺乳類に投与することを含む、前記方法。
[態様２３]
態様１～１５のいずれか１項に記載の抗体の治療有効量を含む、獣医学的組成物。
[態様２４]
ＩＬ－３１媒介性障害を有する哺乳類の治療で使用するための、態様１～１５のいずれか１項に記載の抗体。
[態様２５]
ＩＬ－３１媒介性障害を有する哺乳類を治療するための、態様１～１５のいずれか１項に記載の抗体の使用。
[態様２６]
ＩＬ－３１を検出する方法であって、
（ａ）ＩＬ－３１を含む試料を、態様１～１５のいずれか１項に記載の抗体の存在下でインキュベートすることと、
（ｂ）前記試料中のＩＬ－３１に結合している前記抗体を検出することとを含む、前記方法。
[態様２７]
前記試料中の前記ＩＬ－３１を定量化することをさらに含む、態様２６に記載の方法。
[態様２８]
態様１～１５のいずれか１項に記載のモノクローナル抗体を産生する宿主細胞であって、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列の組合せ：
１）抗体１５Ｈ０５：可変重鎖（ＶＨ）－ＣＤＲ１がＳＹＴＩＨ（配列番号１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＮＩＮＰＴＳＧＹＴＥＮＮＱＲＦＫＤ（配列番号２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＷＧＦＫＹＤＧＥＷＳＦＤＶ（配列番号３）、可変軽鎖（ＶＬ）－ＣＤＲ１がＲＡＳＱＧＩＳＩＷＬＳ（配列番号４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＡＳＮＬＨＩ（配列番号５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＬＱＳＱＴＹＰＬＴ（配列番号６）、
２）抗体ＺＩＬ１：可変重鎖（ＶＨ）－ＣＤＲ１がＳＹＧＭＳ（配列番号１３）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＨＩＮＳＧＧＳＳＴＹＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号１４）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＶＹＴＴＬＡＡＦＷＴＤＮＦＤＹ（配列番号１５）、可変軽鎖（ＶＬ）－ＣＤＲ１がＳＧＳＴＮＮＩＧＩＬＡＡＴ（配列番号１６）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＳＤＧＮＲＰＳ（配列番号１７）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＱＳＦＤＴＴＬＤＡＹＶ（配列番号１８）、
３）抗体ＺＩＬ８：ＶＨ－ＣＤＲ１がＤＹＡＭＳ（配列番号１９）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＧＩＤＳＶＧＳＧＴＳＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号２０）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＦＰＧＳＦＥＨ（配列番号２１）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＴＧＳＳＳＮＩＧＳＧＹＶＧ（配列番号２２）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＹＮＳＤＲＰＳ（配列番号２３）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＳＶＹＤＲＴＦＮＡＶ（配列番号２４）、
４）抗体ＺＩＬ９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＤＭＴ（配列番号２５）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＤＶＮＳＧＧＴＧＴＡＹＡＶＡＶＫＧ（配列番号２６）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＬＧＶＲＤＧＬＳＶ（配列番号２７）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＮＥＹＹＴＱ（配列番号２８）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＲＤＴＥＲＰＳ（配列番号２９）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＤＴＧＴＬＶ（配列番号３０）、
５）抗体ＺＩＬ１１：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＶＭＮ（配列番号３１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号３２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＳＭＶＧＰＦＤＹ（配列番号３３）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＳＮＹＹＡＱ（配列番号３４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号３５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶ（配列番号３６）、
６）抗体ＺＩＬ６９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＡＭＫ（配列番号３７）、ＶＨ－ＣＤＲ２が
ＴＩＮＮＤＧＴＲＴＧＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号３８）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＮＡＥＳＧＣＴＧＤＨＣＰＰＹ（配列番号３９）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＮＫＹＹＡＱ（配列番号４０）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号４１）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＥＴＮＶ（配列番号４２）、
７）抗体ＺＩＬ９４：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＦＭＳ（配列番号４３）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＬＩＳＳＤＧＳＧＴＹＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号４４）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＦＷＲＡＦＮＤ（配列番号４５）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＧＬＮＳＧＳＶＳＴＳＮＹＰＧ（配列番号４６）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＤＴＧＳＲＰＳ（配列番号４７）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＳＬＹＴＤＳＤＩＬＶ（配列番号４８）、
８）抗体ＺＩＬ１５４：ＶＨ－ＣＤＲ１がＤＲＧＭＳ（配列番号４９）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＹＩＲＹＤＧＳＲＴＤＹＡＤＡＶＥＧ（配列番号５０）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＷＤＧＳＳＦＤＹ（配列番号５１）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＡＳＱＳＬＬＨＳＤＧＮＴＹＬＤ（配列番号５２）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＶＳＮＲＤＰ（配列番号５３）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＭＱＡＩＨＦＰＬＴ（配列番号５４）、
９）抗体ＺＩＬ１５９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＶＭＴ（配列番号５５）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＧＩＮＳＥＧＳＲＴＡＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号５６）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＤＩＶＡＴＧＴＳＹ（配列番号５７）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＴＬＮＲＦＹＴＱ（配列番号５８）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号５９）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＫＳＡＶＳＩＤＶＧＶ（配列番号６０）、
１０）抗体ＺＩＬ１７１：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＶＭＮ（配列番号６１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号６２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＳＭＶＧＰＦＤＹ（配列番号６３）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＫＳＬＳＹＹＹＡＱ（配列番号６４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号６５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶ（配列番号６６）、
１１）抗体０４Ｈ０７：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＷＭＮ（配列番号２００）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＭＩＤＰＳＤＳＥＩＨＹＮＱＶＦＫＤ（配列番号２０１）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＱＤＩＶＴＴＶＤＹ（配列番号２０２）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＳＳＱＳＬＬＹＳＩＮＱＫＮＨＬＡ（配列番号２０３）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号２０４）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＱＱＧＹＴＹＰＦＴ（配列番号２０５）、
１２）抗体０６Ａ０９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＷＭＮ（配列番号２０６）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＭＩＤＰＳＤＳＥＴＨＹＮＱＩＦＲＤ（配列番号２０７）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＱＤＩＶＴＴＶＤＹ（配列番号２０８）、ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＳＳＱＳＬＬＹＳＩＮＱＫＮＦＬＡ（配列番号２０９）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号２１０）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＱＱＨＹＧＹＰＦＴ（配列番号２１１）、または
１３）ＶＨまたはＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３のうちの少なくとも１つにおける１つ以上のアミノ酸残基の付加、欠失、及び／または置換によってそれぞれの親抗体１５Ｈ０５、ＺＩＬ１、ＺＩＬ８、ＺＩＬ９、ＺＩＬ１１、ＺＩＬ６９、ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、ＺＩＬ１５９、ＺＩＬ１７１、０４Ｈ０７、もしくは０６Ａ０９と相違する、１）～１２）のバリアント
のうちの少なくとも１つを含む、前記宿主細胞。
[態様２９]
以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列の組合せ：
１）１５Ｈ０５：可変重鎖（ＶＨ）－ＣＤＲ１がＳＹＴＩＨ（配列番号１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＮＩＮＰＴＳＧＹＴＥＮＮＱＲＦＫＤ（配列番号２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＷＧＦＫＹＤＧＥＷＳＦＤＶ（配列番号３）、
２）ＺＩＬ１：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＧＭＳ（配列番号１３）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＨＩＮＳＧＧＳＳＴＹＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号１４）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＶＹＴＴＬＡＡＦＷＴＤＮＦＤＹ（配列番号１５）、
３）ＺＩＬ８：ＶＨ－ＣＤＲ１がＤＹＡＭＳ（配列番号１９）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＧＩＤＳＶＧＳＧＴＳＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号２０）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＦＰＧＳＦＥＨ（
配列番号２１）、
４）ＺＩＬ９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＤＭＴ（配列番号２５）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＤＶＮＳＧＧＴＧＴＡＹＡＶＡＶＫＧ（配列番号２６）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＬＧＶＲＤＧＬＳＶ（配列番号２７）、
５）ＺＩＬ１１：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＶＭＮ（配列番号３１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号３２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＳＭＶＧＰＦＤＹ（配列番号３３）、
６）ＺＩＬ６９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＡＭＫ（配列番号３７）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＴＩＮＮＤＧＴＲＴＧＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号３８）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＮＡＥＳＧＣＴＧＤＨＣＰＰＹ（配列番号３９）、
７）ＺＩＬ９４：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＦＭＳ（配列番号４３）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＬＩＳＳＤＧＳＧＴＹＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号４４）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＦＷＲＡＦＮＤ（配列番号４５）
８）ＺＩＬ１５４：ＶＨ－ＣＤＲ１がＤＲＧＭＳ（配列番号４９）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＹＩＲＹＤＧＳＲＴＤＹＡＤＡＶＥＧ（配列番号５０）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＷＤＧＳＳＦＤＹ（配列番号５１）、
９）ＺＩＬ１５９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＶＭＴ（配列番号５５）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＧＩＮＳＥＧＳＲＴＡＹＡＤＡＶＫＧ（配列番号５６）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＧＤＩＶＡＴＧＴＳＹ（配列番号５７）、
１０）ＺＩＬ１７１：ＶＨ－ＣＤＲ１がＴＹＶＭＮ（配列番号６１）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＳＩＮＧＧＧＳＳＰＴＹＡＤＡＶＲＧ（配列番号６２）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＳＭＶＧＰＦＤＹ（配列番号６３）、
１１）０４Ｈ０７：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＷＭＮ（配列番号２００）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＭＩＤＰＳＤＳＥＩＨＹＮＱＶＦＫＤ（配列番号２０１）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＱＤＩＶＴＴＶＤＹ（配列番号２０２）、
１２）０６Ａ０９：ＶＨ－ＣＤＲ１がＳＹＷＭＮ（配列番号２０６）、ＶＨ－ＣＤＲ２がＭＩＤＰＳＤＳＥＴＨＹＮＱＩＦＲＤ（配列番号２０７）、ＶＨ－ＣＤＲ３がＱＤＩＶＴＴＶＤＹ（配列番号２０８）、または
１３）ＶＨのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３のうちの少なくとも１つにおける１つ以上のアミノ酸残基の付加、欠失、及び／または置換によってそれぞれの親抗体１５Ｈ０５、ＺＩＬ１、ＺＩＬ８、ＺＩＬ９、ＺＩＬ１１、ＺＩＬ６９、ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、ＺＩＬ１５９、ＺＩＬ１７１、０４Ｈ０７、もしくは０６Ａ０９の前記ＣＤＲと相違する、１）～１２）のバリアント
のうちの少なくとも１つをコードする核酸配列を含む、単離核酸。
[態様３０]
以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列の組合せ：
１）１５Ｈ０５：可変軽鎖（ＶＬ）－ＣＤＲ１がＲＡＳＱＧＩＳＩＷＬＳ（配列番号４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＡＳＮＬＨＩ（配列番号５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＬＱＳＱＴＹＰＬＴ（配列番号６）、
２）ＺＩＬ１：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＳＴＮＮＩＧＩＬＡＡＴ（配列番号１６）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＳＤＧＮＲＰＳ（配列番号１７）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＱＳＦＤＴＴＬＤＡＹＶ（配列番号１８）、
３）ＺＩＬ８：ＶＬ－ＣＤＲ１がＴＧＳＳＳＮＩＧＳＧＹＶＧ（配列番号２２）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＹＮＳＤＲＰＳ（配列番号２３）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＳＶＹＤＲＴＦＮＡＶ（配列番号２４）、
４）ＺＩＬ９：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＮＥＹＹＴＱ（配列番号２８）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＲＤＴＥＲＰＳ（配列番号２９）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＤＴＧＴＬＶ（配列番号３０）、
５）ＺＩＬ１１：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＳＮＹＹＡＱ（配列番号３４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号３５））、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶ（
配列番号３６）、
６）ＺＩＬ６９：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＮＫＹＹＡＱ（配列番号４０）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号４１）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＥＴＮＶ（配列番号４２）、
７）ＺＩＬ９４：ＶＬ－ＣＤＲ１がＧＬＮＳＧＳＶＳＴＳＮＹＰＧ（配列番号４６）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＤＴＧＳＲＰＳ（配列番号４７）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＳＬＹＴＤＳＤＩＬＶ（配列番号４８）、
８）ＺＩＬ１５４：ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＡＳＱＳＬＬＨＳＤＧＮＴＹＬＤ（配列番号５２）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＶＳＮＲＤＰ（配列番号５３）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＭＱＡＩＨＦＰＬＴ（配列番号５４）、
９）ＺＩＬ１５９：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＴＬＮＲＦＹＴＱ（配列番号５８）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号５９）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＫＳＡＶＳＩＤＶＧＶ（配列番号６０）、
１０）ＺＩＬ１７１：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＫＳＬＳＹＹＹＡＱ（配列番号６４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号６５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶ（配列番号６６）、
１１）０４Ｈ０７：ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＳＳＱＳＬＬＹＳＩＮＱＫＮＨＬＡ（配列番号２０３）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号２０４）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＱＱＧＹＴＹＰＦＴ（配列番号２０５）、
１２）０６Ａ０９：ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＳＳＱＳＬＬＹＳＩＮＱＫＮＦＬＡ（配列番号２０９）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号２１０）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＱＱＨＹＧＹＰＦＴ（配列番号２１１）、または
１３）ＶＨまたはＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３のうちの少なくとも１つにおける１つ以上のアミノ酸残基の付加、欠失、及び／または置換によってそれぞれの親抗体１５Ｈ０５、ＺＩＬ１、ＺＩＬ８、ＺＩＬ９、ＺＩＬ１１、ＺＩＬ６９、ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、ＺＩＬ１５９、ＺＩＬ１７１、０４Ｈ０７、もしくは０６Ａ０９の前記ＣＤＲと相違する、１）～１２）のバリアント
のうちの少なくとも１つをコードする核酸配列をさらに含む、態様２９に記載の単離核酸。
[態様３１]
以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列の組合せ：
１）１５Ｈ０５：可変軽鎖（ＶＬ）－ＣＤＲ１がＲＡＳＱＧＩＳＩＷＬＳ（配列番号４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＡＳＮＬＨＩ（配列番号５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＬＱＳＱＴＹＰＬＴ（配列番号６）、
２）ＺＩＬ１：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＳＴＮＮＩＧＩＬＡＡＴ（配列番号１６）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＳＤＧＮＲＰＳ（配列番号１７）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＱＳＦＤＴＴＬＤＡＹＶ（配列番号１８）、
３）ＺＩＬ８：ＶＬ－ＣＤＲ１がＴＧＳＳＳＮＩＧＳＧＹＶＧ（配列番号２２）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＹＮＳＤＲＰＳ（配列番号２３）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＳＶＹＤＲＴＦＮＡＶ（配列番号２４）、
４）ＺＩＬ９：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＮＥＹＹＴＱ（配列番号２８）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＲＤＴＥＲＰＳ（配列番号２９）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＤＴＧＴＬＶ（配列番号３０）、
５）ＺＩＬ１１：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＳＮＹＹＡＱ（配列番号３４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号３５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶ（配列番号３６）、
６）ＺＩＬ６９：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＳＬＮＫＹＹＡＱ（配列番号４０）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号４１）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＥＴＮＶ（配列番号４２）、
７）ＺＩＬ９４：ＶＬ－ＣＤＲ１がＧＬＮＳＧＳＶＳＴＳＮＹＰＧ（配列番号４６）、Ｖ
Ｌ－ＣＤＲ２がＤＴＧＳＲＰＳ（配列番号４７）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＳＬＹＴＤＳＤＩＬＶ（配列番号４８）、
８）ＺＩＬ１５４：ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＡＳＱＳＬＬＨＳＤＧＮＴＹＬＤ（配列番号５２）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＶＳＮＲＤＰ（配列番号５３）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＭＱＡＩＨＦＰＬＴ（配列番号５４）、
９）ＺＩＬ１５９：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＥＴＬＮＲＦＹＴＱ（配列番号５８）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号５９）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＫＳＡＶＳＩＤＶＧＶ（配列番号６０）、
１０）ＺＩＬ１７１：ＶＬ－ＣＤＲ１がＳＧＫＳＬＳＹＹＹＡＱ（配列番号６４）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＫＤＴＥＲＰＳ（配列番号６５）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＥＳＡＶＳＳＤＴＩＶ（配列番号６６）、
１１）０４Ｈ０７：ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＳＳＱＳＬＬＹＳＩＮＱＫＮＨＬＡ（配列番号２０３）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号２０４）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＱＱＧＹＴＹＰＦＴ（配列番号２０５）、
１２）０６Ａ０９：ＶＬ－ＣＤＲ１がＫＳＳＱＳＬＬＹＳＩＮＱＫＮＦＬＡ（配列番号２０９）、ＶＬ－ＣＤＲ２がＷＡＳＴＲＥＳ（配列番号２１０）、ＶＬ－ＣＤＲ３がＱＱＨＹＧＹＰＦＴ（配列番号２１１）、または
１３）ＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３のうちの少なくとも１つにおける１つ以上のアミノ酸残基の付加、欠失、及び／または置換によってそれぞれの親抗体１５Ｈ０５、ＺＩＬ１、ＺＩＬ８、ＺＩＬ９、ＺＩＬ１１、ＺＩＬ６９、ＺＩＬ９４、ＺＩＬ１５４、ＺＩＬ１５９、ＺＩＬ１７１、０４Ｈ０７、もしくは０６Ａ０９のＣＤＲと相違する、１）～１２）のバリアント
のうちの少なくとも１つをコードする核酸配列を含む、単離核酸。
[態様３２]
態様２９、態様３０、または態様３１に記載の核酸を含む、ベクター。
[態様３３]
抗体を産生する方法であって、態様２８に記載の宿主細胞を前記抗体の産生をもたらす条件下で培養することと、前記宿主細胞または前記宿主細胞の培地から前記抗体を単離することとを含む、前記方法。
[態様３４]
ネコ抗体の一貫性及び／または品質を改善する方法であって、
ネコＩｇＧカッパ軽鎖をコードするヌクレオチド配列とネコＩｇＧ重鎖をコードするヌクレオチド配列とを宿主細胞内で発現させてネコ抗体を産生することを含み、前記ネコＩｇＧカッパ軽鎖をコードする前記ヌクレオチド配列が、他の場合では野生型ネコＩｇＧ軽鎖定常領域内に存在するＣ末端側ＱＲＥ配列をコードする配列が修飾及び／または欠失しているカッパ軽鎖定常ヌクレオチド配列を含む、前記方法。
[態様３５]
前記方法が、
ａ）ネコ抗体の野生型ネコＩｇＧカッパ軽鎖定常領域をコードするヌクレオチド配列を提供することであって、前記野生型ネコカッパ軽鎖定常領域がＱＲＥのＣ末端側アミノ酸配列を含む、前記提供することと、
ｂ）ａ）における前記ヌクレオチド配列内の前記Ｃ末端側ＱＲＥをコードする配列を除去及び／または修飾して、修正されたカッパ軽鎖定常ヌクレオチド配列を形成することと、ｃ）ｂ）からの前記修正されたカッパ軽鎖定常ヌクレオチド配列を、ネコＩｇＧカッパ軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列と組み合わせて、完全なネコＩｇＧカッパ軽鎖をコードするヌクレオチド配列を形成することと、
ｄ）ｃ）からの前記完全なネコＩｇＧカッパ軽鎖をコードする前記ヌクレオチド配列と、ネコＩｇＧ重鎖をコードするヌクレオチド配列とを宿主細胞内で発現させて、他の場合では野生型ネコＩｇＧカッパ軽鎖定常領域内に存在する前記Ｃ末端側ＱＲＥ配列が修飾及び／または欠失しているネコ抗体を産生することとを含む、態様３４に記載の方法。
[態様３６]
前記ネコ抗体の一貫性及び／または品質を改善することが、遊離ＩｇＧカッパ軽鎖のレベルを低減し、それによってインタクトネコＩｇＧ抗体単量体のパーセンテージを増加させることを含む、態様３４または態様３５に記載の方法。
[態様３７]
前記ネコＩｇＧカッパ軽鎖をコードする前記ヌクレオチド配列と、前記ネコＩｇＧ重鎖をコードする前記ヌクレオチド配列とが、前記宿主細胞の形質転換に使用される同じベクター上で保有される、態様３４～３６のいずれか１項に記載の方法。
[態様３８]
前記ネコＩｇＧカッパ軽鎖をコードする前記ヌクレオチド配列と、前記ネコＩｇＧ重鎖をコードする前記ヌクレオチド配列とが、前記宿主細胞の形質転換に使用される別々のベクター上で保有される、態様３４～３６のいずれか１項に記載の方法。
[態様３９]
前記ネコ抗体が、サイトカイン及び／または成長因子媒介性障害に関与する標的に特異的に結合する、態様３４～３８のいずれか１項に記載の方法。
[態様４０]
前記ネコ抗体が、ネコＩＬ－３１またはネコＮＧＦに特異的に結合する、態様３９に記載の方法。
[態様４１]
前記ネコ抗体が、配列ＲＳＤＡＱＰＳＶＦＬＦＱＰＳＬＤＥＬＨＴＧＳＡＳＩＶＣＩＬＮＤＦＹＰＫＥＶＮＶＫＷＫＶＤＧＶＶＱＮＫＧＩＱＥＳＴＴＥＱＮＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＭＳＳＴＥＹＱＳＨＥＫＦＳＣＥＶＴＨＫＳＬＡＳＴＬＶＫＳＦＱＲＳＥＣ（配列番号１８６）またはそのバリアントを有するカッパ軽鎖定常領域を含む、態様３４～４０のいずれか１項に記載の方法。
[態様４２]
イヌ抗体の一貫性及び／または品質を改善する方法であって、
イヌＩｇＧカッパ軽鎖をコードするヌクレオチド配列とイヌＩｇＧ重鎖をコードするヌクレオチド配列とを宿主細胞内で発現させてイヌ抗体を産生することを含み、前記イヌＩｇＧカッパ軽鎖をコードする前記ヌクレオチド配列が、他の場合では野生型イヌＩｇＧ軽鎖定常領域内に存在するＣ末端側ＱＲＶＤ配列をコードする配列が修飾及び／または欠失しているカッパ軽鎖定常ヌクレオチド配列を含む、前記方法。
[態様４３]
前記方法が、
ａ）イヌ抗体の野生型イヌＩｇＧカッパ軽鎖定常領域をコードするヌクレオチド配列を提供することであって、前記野生型イヌカッパ軽鎖定常領域がＱＲＶＤのＣ末端側アミノ酸配列を含む、前記提供することと、
ｂ）ａ）における前記ヌクレオチド配列内の前記Ｃ末端側ＱＲＶＤをコードする配列を除去及び／または修飾して、修正されたカッパ軽鎖定常ヌクレオチド配列を形成することと、
ｃ）ｂ）からの前記修正されたカッパ軽鎖定常ヌクレオチド配列を、イヌＩｇＧカッパ軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列と組み合わせて、完全なイヌＩｇＧカッパ軽鎖をコードするヌクレオチド配列を形成することと、
ｄ）ｃ）からの前記完全なイヌＩｇＧカッパ軽鎖をコードする前記ヌクレオチド配列と、イヌＩｇＧ重鎖をコードするヌクレオチド配列とを宿主細胞内で発現させて、他の場合では野生型イヌＩｇＧカッパ軽鎖定常領域内に存在する前記Ｃ末端側ＱＲＶＤ配列が修飾及び／または欠失しているイヌ抗体を産生することとを含む、態様４２に記載の方法。
[態様４４]
前記イヌ抗体の一貫性及び／または品質を改善することが、遊離ＩｇＧカッパ軽鎖のレベルを低減し、それによってインタクトイヌＩｇＧ抗体単量体のパーセンテージを増加させることを含む、態様４２または態様４３に記載の方法。
[態様４５]
前記イヌＩｇＧカッパ軽鎖をコードする前記ヌクレオチド配列と、前記イヌＩｇＧ重鎖をコードする前記ヌクレオチド配列とが、前記宿主細胞の形質転換に使用される同じベクター上で保有される、態様４２～４４のいずれか１項に記載の方法。
[態様４６]
前記イヌＩｇＧカッパ軽鎖をコードする前記ヌクレオチド配列と、前記イヌＩｇＧ重鎖をコードする前記ヌクレオチド配列とが、前記宿主細胞の形質転換に使用される別々のベクター上で保有される、態様４２～４４のいずれか１項に記載の方法。
[態様４７]
前記イヌ抗体が、サイトカイン及び／または成長因子媒介性障害に関与する標的に特異的に結合する、態様４２～４６のいずれか１項に記載の方法。
[態様４８]
前記イヌ抗体が、イヌＩＬ－３１またはイヌＮＧＦに特異的に結合する、態様４７に記載の方法。
[態様４９]
前記イヌ抗体が、配列ＲＮＤＡＱＰＡＶＹＬＦＱＰＳＰＤＱＬＨＴＧＳＡＳＶＶＣＬＬＮＳＦＹＰＫＤＩＮＶＫＷＫＶＤＧＶＩＱＤＴＧＩＱＥＳＶＴＥＱＤＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＭＳＳＴＥＹＬＳＨＥＬＹＳＣＥＩＴＨＫＳＬＰＳＴＬＩＫＳＦＱＲＳＥＣ（配列番号１７９）またはそのバリアントを有するカッパ軽鎖定常領域を含む、態様４２～４８のいずれかに記載の方法。

Claims (16)

  1. ネコ抗体の一貫性及び／または品質を改善する方法であって、
    ネコＩｇＧカッパ軽鎖をコードするヌクレオチド配列とネコＩｇＧ重鎖をコードするヌクレオチド配列とを宿主細胞内で発現させてネコ抗体を産生することを含み、前記ネコＩｇＧカッパ軽鎖をコードする前記ヌクレオチド配列が、他の場合では野生型ネコＩｇＧ軽鎖定常領域内に存在するＣ末端側ＱＲＥ配列をコードする配列が修飾及び／または欠失しているカッパ軽鎖定常ヌクレオチド配列を含む、前記方法。
  2. 前記方法が、
    ａ）ネコ抗体の野生型ネコＩｇＧカッパ軽鎖定常領域をコードするヌクレオチド配列を提供することであって、前記野生型ネコカッパ軽鎖定常領域がＱＲＥのＣ末端側アミノ酸配列を含む、前記提供することと、
    ｂ）ａ）における前記ヌクレオチド配列内の前記Ｃ末端側ＱＲＥをコードする配列を除去及び／または修飾して、修正されたカッパ軽鎖定常ヌクレオチド配列を形成することと、ｃ）ｂ）からの前記修正されたカッパ軽鎖定常ヌクレオチド配列を、ネコＩｇＧカッパ軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列と組み合わせて、完全なネコＩｇＧカッパ軽鎖をコードするヌクレオチド配列を形成することと、
    ｄ）ｃ）からの前記完全なネコＩｇＧカッパ軽鎖をコードする前記ヌクレオチド配列と、ネコＩｇＧ重鎖をコードするヌクレオチド配列とを宿主細胞内で発現させて、他の場合では野生型ネコＩｇＧカッパ軽鎖定常領域内に存在する前記Ｃ末端側ＱＲＥ配列が修飾及び／または欠失しているネコ抗体を産生することとを含む、請求項１に記載の方法。
  3. 前記ネコ抗体の一貫性及び／または品質を改善することが、遊離ＩｇＧカッパ軽鎖のレベルを低減し、それによってインタクトネコＩｇＧ抗体単量体のパーセンテージを増加させることを含む、請求項１または請求項２に記載の方法。
  4. 前記ネコＩｇＧカッパ軽鎖をコードする前記ヌクレオチド配列と、前記ネコＩｇＧ重鎖をコードする前記ヌクレオチド配列とが、前記宿主細胞の形質転換に使用される同じベクター上で保有される、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。
  5. 前記ネコＩｇＧカッパ軽鎖をコードする前記ヌクレオチド配列と、前記ネコＩｇＧ重鎖をコードする前記ヌクレオチド配列とが、前記宿主細胞の形質転換に使用される別々のベクター上で保有される、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。
  6. 前記ネコ抗体が、サイトカイン及び／または成長因子媒介性障害に関与する標的に特異的に結合する、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。
  7. 前記ネコ抗体が、ネコＩＬ－３１またはネコＮＧＦに特異的に結合する、請求項６に記載の方法。
  8. 前記ネコ抗体が、配列ＲＳＤＡＱＰＳＶＦＬＦＱＰＳＬＤＥＬＨＴＧＳＡＳＩＶＣＩＬＮＤＦＹＰＫＥＶＮＶＫＷＫＶＤＧＶＶＱＮＫＧＩＱＥＳＴＴＥＱＮＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＭＳＳＴＥＹＱＳＨＥＫＦＳＣＥＶＴＨＫＳＬＡＳＴＬＶＫＳＦＱＲＳＥＣ（配列番号１８６）またはそのバリアントを有するカッパ軽鎖定常領域を含む、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。
  9. イヌ抗体の一貫性及び／または品質を改善する方法であって、
    イヌＩｇＧカッパ軽鎖をコードするヌクレオチド配列とイヌＩｇＧ重鎖をコードするヌクレオチド配列とを宿主細胞内で発現させてイヌ抗体を産生することを含み、前記イヌＩｇＧカッパ軽鎖をコードする前記ヌクレオチド配列が、他の場合では野生型イヌＩｇＧ軽鎖定常領域内に存在するＣ末端側ＱＲＶＤ配列をコードする配列が修飾及び／または欠失しているカッパ軽鎖定常ヌクレオチド配列を含む、前記方法。
  10. 前記方法が、
    ａ）イヌ抗体の野生型イヌＩｇＧカッパ軽鎖定常領域をコードするヌクレオチド配列を提供することであって、前記野生型イヌカッパ軽鎖定常領域がＱＲＶＤのＣ末端側アミノ酸配列を含む、前記提供することと、
    ｂ）ａ）における前記ヌクレオチド配列内の前記Ｃ末端側ＱＲＶＤをコードする配列を除去及び／または修飾して、修正されたカッパ軽鎖定常ヌクレオチド配列を形成することと、
    ｃ）ｂ）からの前記修正されたカッパ軽鎖定常ヌクレオチド配列を、イヌＩｇＧカッパ軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列と組み合わせて、完全なイヌＩｇＧカッパ軽鎖をコードするヌクレオチド配列を形成することと、
    ｄ）ｃ）からの前記完全なイヌＩｇＧカッパ軽鎖をコードする前記ヌクレオチド配列と、イヌＩｇＧ重鎖をコードするヌクレオチド配列とを宿主細胞内で発現させて、他の場合では野生型イヌＩｇＧカッパ軽鎖定常領域内に存在する前記Ｃ末端側ＱＲＶＤ配列が修飾及び／または欠失しているイヌ抗体を産生することとを含む、請求項９に記載の方法。
  11. 前記イヌ抗体の一貫性及び／または品質を改善することが、遊離ＩｇＧカッパ軽鎖のレベルを低減し、それによってインタクトイヌＩｇＧ抗体単量体のパーセンテージを増加させることを含む、請求項９または請求項１０に記載の方法。
  12. 前記イヌＩｇＧカッパ軽鎖をコードする前記ヌクレオチド配列と、前記イヌＩｇＧ重鎖をコードする前記ヌクレオチド配列とが、前記宿主細胞の形質転換に使用される同じベクター上で保有される、請求項９～１１のいずれか１項に記載の方法。
  13. 前記イヌＩｇＧカッパ軽鎖をコードする前記ヌクレオチド配列と、前記イヌＩｇＧ重鎖をコードする前記ヌクレオチド配列とが、前記宿主細胞の形質転換に使用される別々のベクター上で保有される、請求項９～１１のいずれか１項に記載の方法。
  14. 前記イヌ抗体が、サイトカイン及び／または成長因子媒介性障害に関与する標的に特異的に結合する、請求項９～１３のいずれか１項に記載の方法。
  15. 前記イヌ抗体が、イヌＩＬ－３１またはイヌＮＧＦに特異的に結合する、請求項１４に記載の方法。
  16. 前記イヌ抗体が、配列ＲＮＤＡＱＰＡＶＹＬＦＱＰＳＰＤＱＬＨＴＧＳＡＳＶＶＣＬＬＮＳＦＹＰＫＤＩＮＶＫＷＫＶＤＧＶＩＱＤＴＧＩＱＥＳＶＴＥＱＤＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＭＳＳＴＥＹＬＳＨＥＬＹＳＣＥＩＴＨＫＳＬＰＳＴＬＩＫＳＦＱＲＳＥＣ（配列番号１７９）またはそのバリアントを有するカッパ軽鎖定常領域を含む、請求項９～１５のいずれかに記載の方法。
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