JP2024019597A - 抗体薬物のコンジュゲーション、精製、及び製剤のための方法 - Google Patents
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Abstract
【課題】抗体薬物のコンジュゲーション、精製、及び製剤のための方法の提供。【解決手段】抗体薬物コンジュゲート(ADC)の生成、精製及び製剤の方法が本明細書で提供される。本方法は、連続コンジュゲーションプロセス、シングルパス・タンジェンシャルフローろ過、向流ダイアフィルトレーション、及び/またはインラインプロセス自動化技術を使用する。本方法は、処理時間及びコストを減少させ、かつ生成物の均一性を向上させる。【選択図】なし
Description
本発明の技術分野は、概して、連続コンジュゲーションプロセス、シングルパス・タンジェンシャルフローろ過、向流ダイアフィルトレーション、及び/またはインラインプロセス自動化技術を用いた抗体薬物コンジュゲート(ADC)の生成、精製及び製剤の方法に関する。
抗体薬物コンジュゲート(ADC)のコンジュゲーションに関連する製造上のボトルネックは、不純物の除去及びADCの安定なバッファーへの交換である。これは、現在は結合及び溶出カラムクロマトグラフィーまたはタンジェンシャルフローろ過(TFF)によるバルクの(従来の)ダイアフィルトレーションを用いて達成される。バルクのダイアフィルトレーションは、TFFシステムをバッファーA(すなわち、コンジュゲートが最初に存在するバッファー)でプライミングすることを必要とする。次いで(バッファーA中の)ADCを、プライミング量と混合する保持液容器に添加する。保持液容器の供給ポンプは、コンジュゲートを保持液からTFF膜上へ送り込み、そこで、コンジュゲートは保持される(かつ、保持液へ戻る)か、または廃棄物へと廃棄されるかのいずれかである。別のポンプ(ダイアフィルトレーションポンプ)は、容器から、別個の容器内に含まれるバッファーB(すなわち、ADCが交換されるバッファー)へと、容器から保持液容器内への供給ラインを用いて供給することになる。両方のポンプが起動し、保持液容器内のコンジュゲートがTFF膜を通過し始める。バッファーは廃棄流を通じて除去されるため、保持液の容量はバッファーBを(等量で)保持液容器に添加することによって維持される。その結果、コンジュゲートは徐々にバッファーBに交換される。この精製方法は、ADCをTFF膜上で複数サイクル再循環させる必要があることから費用がかかり、ラージスケール製造には最適ではない。再循環によって、高処理量及び多くの処理時間ならびに潜在的な高剪断領域へのADCの曝露の増加が生じる。バルク処理によるADCの製造は、精製し、製剤したコンジュゲートのバッチを生成するのに約4~5日を必要とし、多くの場合低収率である。したがって、改良されたADCのコンジュゲーションプロセスが必要とされている。
Pall Life Sciencesから入手可能なものなどのシングルパス・タンジェンシャルフローろ過(SPTFF)システムは、バイオプロセスプラットフォームにおいて、多くの場合抗体などの生体分子の量を減少させるための手段または生物分子を濃縮するための手段として使用される。しかしながら、本発明者らは驚くべきことに、SPTFFを抗体薬物コンジュゲーション反応に連結させて抗体薬物コンジュゲート(ADC)の濃縮を促進できるだけではなく、非コンジュゲート生成物をコンジュゲート反応から除去し、精製したADCを製剤バッファーに交換でき、それにより完全に連続したADCの生成及び処理方法が可能となることを見出した。本発明者らはまた、同様の目的のために、向流ダイアフィルトレーションも抗体薬物コンジュゲーション反応に使用できることも見出した。
いくつかの実施形態では、抗体薬物コンジュゲート(ADC)組成物を生成するための連続的方法は、(i)抗体またはその抗原結合断片を薬物とコンジュゲートさせてADCを形成すること、(ii)非コンジュゲート薬物を除去すること、及び(iii)ADCを安定なバッファーに交換することを含み、(i)~(iii)が連続的に実施され、非コンジュゲート薬物を除去し及び/またはADCを安定なバッファーに交換するために、シングルパス・タンジェンシャルフローろ過(SPTFF)が使用される。
いくつかの実施形態では、SPTFFは、非コンジュゲート薬物を除去してADCを安定なバッファーに交換するために使用される。いくつかの実施形態では、フロースルーカラムクロマトグラフィーが非コンジュゲート薬物を除去するために使用され、SPTFFがADCを安定なバッファーに交換するために使用される。
いくつかの実施形態では、抗体薬物コンジュゲート(ADC)組成物を生成するための連続的方法は、(i)抗体またはその抗原結合断片を薬物とコンジュゲートさせてADCを形成すること、(ii)非コンジュゲート薬物を除去すること、及び(iii)ADCを安定なバッファーに交換することを含み、(i)~(iii)が連続的に実施され、非コンジュゲート薬物を除去し及び/またはADCを安定なバッファーに交換するために向流ダイアフィルトレーションが使用される。
いくつかの実施形態では、向流ダイアフィルトレーションは、非コンジュゲート薬物を除去してADCを安定なバッファーに交換するために使用される。いくつかの実施形態では、フロースルーカラムクロマトグラフィーが非コンジュゲート薬物を除去するために使用され、向流ダイアフィルトレーションがADCを安定なバッファーに交換するために使用される。
いくつかの実施形態では、方法はさらに、抗体またはその抗原結合断片の前処理を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片の前処理は(i)~(iii)と共に連続的に実施される。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片の前処理はSPTFFを使用して実施される。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片の前処理は向流ダイアフィルトレーションを使用して実施される。いくつかの実施形態では、1つのSPTFF段階または向流ダイアフィルトレーション段階のみが前処理に使用される。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片の前処理は、(i)~(iii)の前にバルクで実施される。
いくつかの実施形態では、方法はさらに、コンジュゲーションのための薬物の前処理を含む。
いくつかの実施形態では、抗体薬物コンジュゲート(ADC)組成物を生成するための連続的方法は、(i)抗体またはその抗原結合断片を前処理すること、(ii)抗体またはその抗原結合断片を薬物とコンジュゲートさせてADCを形成すること、(iii)非コンジュゲート薬物を除去すること、及び(iv)ADCを安定なバッファーに交換することを含み、(i)~(iv)が連続的に実施され、非コンジュゲート薬物を除去し及び/またはADCを安定なバッファーに交換するために、シングルパス・タンジェンシャルフローろ過(SPTFF)が使用される。
いくつかの実施形態では、抗体薬物コンジュゲート(ADC)組成物を生成するための連続的方法は、(i)抗体またはその抗原結合断片を前処理すること、(ii)抗体またはその抗原結合断片を薬物とコンジュゲートさせてADCを形成すること、(iii)非コンジュゲート薬物を除去すること、及び(iv)ADCを安定なバッファーに交換することを含み、(i)~(iv)が連続的に実施され、非コンジュゲート薬物を除去し及び/またはADCを安定なバッファーに交換するために、向流ダイアフィルトレーションが使用される。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片の前処理は、抗体またはその抗原結合断片をコンジュゲーションのためのバッファーに交換することを含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片の前処理は、抗体もしくはその抗原結合断片を還元させること及び/または抗体もしくはその抗原結合断片を酸化させることを含む。いくつかの実施形態では、還元させること及び/または酸化させることはSPTFFまたは向流ダイアフィルトレーションを使用せずに達成される。いくつかの実施形態では、還元させること及び/または酸化させることは1つのSPTFF段階または向流ダイアフィルトレーション段階のみを使用して達成される。いくつかの実施形態では、還元させること及び/または酸化させることは2つ以上のSPTFF段階または向流ダイアフィルトレーション段階を使用して達成される。
いくつかの実施形態では、連続コンジュゲーションプロセスで抗体薬物コンジュゲート(ADC)を生成するための方法は、コンジュゲーション反応の進行中及び少なくとも1つのコンジュゲーション反応生成物(ADC)の形成後、1つ以上のコンジュゲーション反応の反応物質をコンジュゲーション反応に添加することを含む。いくつかの実施形態では、コンジュゲーション反応の反応物質は抗体またはその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、コンジュゲーション反応の反応物質はリンカーに結合した薬物を含む。いくつかの実施形態では、コンジュゲーション反応の反応物質はリンカーを含む。いくつかの実施形態では、コンジュゲーション反応の反応物質はリンカーに結合した抗体またはその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、コンジュゲーション反応の反応物質は薬物を含む。
いくつかの実施形態では、コンジュゲーション反応はフローリアクタ内で生じる。
いくつかの実施形態では、方法はさらに、抗体またはその抗原結合断片の前処理を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片の前処理はコンジュゲーション反応と共に連続的に実施される。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片の前処理はSPTFFを使用して実施される。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片の前処理は向流ダイアフィルトレーションを使用して実施される。いくつかの実施形態では、1つのSPTFF段階または向流ダイアフィルトレーション段階のみが前処理に使用される。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片の前処理は、コンジュゲーション反応の前にバルクで実施される。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片の前処理は、抗体またはその抗原結合断片をコンジュゲーションのためのバッファーに交換することを含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片の前処理は、抗体もしくはその抗原結合断片を還元させること及び/または抗体もしくはその抗原結合断片を酸化させることを含む。
いくつかの実施形態では、ADCはシングルパス・タンジェンシャルフローろ過を使用して濃縮される。いくつかの実施形態では、ADCはシングルパス・タンジェンシャルフローろ過を使用して精製される。いくつかの実施形態では、ADCはシングルパス・タンジェンシャルフローろ過を使用して製剤バッファーへ移される。
いくつかの実施形態では、ADCは向流ダイアフィルトレーションを使用して濃縮される。いくつかの実施形態では、ADCは向流ダイアフィルトレーションを使用して精製される。いくつかの実施形態では、ADCは向流ダイアフィルトレーションを使用して製剤バッファーへ移される。
いくつかの実施形態では、ADCはフロースルークロマトグラフィーを使用して濃縮され、精製され、及び/または製剤バッファーへ移される。
いくつかの実施形態では、抗体薬物コンジュゲート(ADC)を濃縮するための方法は、シングルパス・タンジェンシャルフローろ過を使用することを含む。いくつかの実施形態では、抗体薬物コンジュゲート(ADC)を精製するための方法は、シングルパス・タンジェンシャルフローろ過を使用することを含む。いくつかの実施形態では、抗体薬物コンジュゲート(ADC)を製剤バッファーへ移すための方法は、シングルパス・タンジェンシャルフローろ過を使用することを含む。いくつかの実施形態では、抗体薬物コンジュゲート(ADC)を濃縮するための方法は、向流ダイアフィルトレーションを使用することを含む。いくつかの実施形態では、抗体薬物コンジュゲート(ADC)を精製するための方法は、向流ダイアフィルトレーションを使用することを含む。いくつかの実施形態では、抗体薬物コンジュゲート(ADC)を製剤バッファーへ移すための方法は、向流ダイアフィルトレーションを使用することを含む。いくつかの実施形態では、ADCはバッチコンジュゲーションプロセスで生成される。いくつかの実施形態では、ADCは連続コンジュゲーションプロセスで生成される。
いくつかの実施形態では、シングルパス・タンジェンシャルフローろ過は限外ろ過膜を使用する。いくつかの実施形態では、シングルパス・タンジェンシャルフローろ過はダイアフィルトレーション膜を使用する。
いくつかの実施形態では、方法はADC生成の均一性を向上させる。いくつかの実施形態では、方法はADC生成のための時間を減少させる。
いくつかの実施形態では、シングルパス・タンジェンシャルフローろ過はADC生成の均一性を向上させる。いくつかの実施形態では、シングルパス・タンジェンシャルフローろ過はADCの濃縮、精製または移動のための時間を減少させる。いくつかの実施形態では、シングルパス・タンジェンシャルフローろ過は使用するバッファーの量を減少させる。
いくつかの実施形態では、向流ダイアフィルトレーションはADC生成の均一性を向上させる。いくつかの実施形態では、向流ダイアフィルトレーションはADCの濃縮、精製または移動のための時間を減少させる。いくつかの実施形態では、向流ダイアフィルトレーションは使用するバッファーの量を減少させる。
いくつかの実施形態では、方法はさらに分析対象のインラインモニタリングを含む。
いくつかの実施形態では、抗体薬物コンジュゲート(ADC)を生成するための方法は、インラインモニタリングを使用してADCコンジュゲーション反応への成分の添加を測定することを含む。
いくつかの実施形態では、インラインモニタリングはADCコンジュゲーション反応に添加する成分の濃度を測定する。
いくつかの実施形態では、インラインモニタリングはADCコンジュゲーション反応に添加する成分の流量を測定する。いくつかの実施形態では、成分は、抗体もしくはその抗原結合断片、薬物、リンカー、リンカーに結合した薬物、リンカーに結合した抗体もしくはその抗原結合断片及び/またはコンジュゲーションバッファーである。
いくつかの実施形態では、方法はさらに、in-situ反応への成分の添加を測定するためにインラインモニタリングすることを含む。いくつかの実施形態では、成分は薬物、リンカー、及び/またはin-situ反応バッファーである。
いくつかの実施形態では、抗体薬物コンジュゲート(ADC)を生成するための方法は、(i)ADCコンジュゲーション反応へのコンジュゲーションバッファーの添加を停止する時点、(ii)ADCコンジュゲーション反応内のコンジュゲーションバッファーの再循環を停止する時点、及び/または(iii)ADCコンジュゲーション反応からのコンジュゲーションバッファーのすすぎ落としを開始する時点を決定するための分析対象のインラインモニタリングを含む。いくつかの実施形態では、分析対象は非コンジュゲート薬物またはリンカーに結合した非コンジュゲート薬物である。
いくつかの実施形態では、ADCコンジュゲーションプロセスの後に抗体薬物コンジュゲート(ADC)を精製するための方法は、分析対象のインラインモニタリングを含む。いくつかの実施形態では、精製はろ過を含む。いくつかの実施形態では、ろ過は限外ろ過またはダイアフィルトレーションである。いくつかの実施形態では、ろ過はタンジェンシャルフローろ過である。いくつかの実施形態では、タンジェンシャルフローろ過は、シングルパス・タンジェンシャルフローろ過である。いくつかの実施形態では、ろ過は向流ダイアフィルトレーションである。
いくつかの実施形態では、分析対象は保持液中に存在する。いくつかの実施形態では、分析対象は非コンジュゲート薬物またはリンカーに結合した非コンジュゲート薬物の濃度である。いくつかの実施形態では、分析対象は、ADCまたは抗体もしくはその抗原結合断片の濃度である。いくつかの実施形態では、分析対象はコンジュゲーション反応バッファーまたはろ過バッファーの成分の濃度である。
いくつかの実施形態では、分析対象はpHである。
いくつかの実施形態では、分析対象は透過液中に存在する。いくつかの実施形態では、分析対象は、ADCまたは抗体もしくはその抗原結合断片の濃度である。いくつかの実施形態では、分析対象は非コンジュゲート薬物またはリンカーに結合した非コンジュゲート薬物の濃度である。
いくつかの実施形態では、精製はクロマトグラフィーを含み、分析対象はクロマトグラフィーカラムの終端で測定される。いくつかの実施形態では、分析対象はADCまたは抗体もしくはその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、分析対象は非コンジュゲート薬物、リンカーに結合した非コンジュゲート薬物、コンジュゲーション反応バッファーの成分、またはクロマトグラフィーバッファーの成分である。
いくつかの実施形態では、コンジュゲーション反応はバッチコンジュゲーション反応である。いくつかの実施形態では、コンジュゲーション反応は連続コンジュゲーション反応である。
いくつかの実施形態では、インラインモニタリングは、可変経路長技術、フローセル装置、UVセンサ、ラマン分光法、またはフーリエ変換赤外分光法(FITR)を使用して実施される。
いくつかの実施形態では、分析対象のインラインモニタリングはFlowVPEを使用して実施される。
いくつかの実施形態では、インラインモニタリングはADCの収率を向上させる。いくつかの実施形態では、インラインモニタリングはADCの回収率を向上させる。いくつかの実施形態では、インラインモニタリングはADC生成のための時間を減少させる。いくつかの実施形態では、インラインモニタリングは使用するバッファーの量を減少させる。
いくつかの実施形態では、抗体薬物コンジュゲート(ADC)を生成するための方法は、ADCコンジュゲーション反応へのコンジュゲーション反応成分の添加を停止する時点を決定するための、分析対象のインラインモニタリングを含む。いくつかの実施形態では、成分は、抗体もしくはその抗原結合断片、薬物、リンカー、リンカーに結合した薬物、及び/またはコンジュゲーション反応バッファーである。
いくつかの実施形態では、ADCは抗体を含む。いくつかの実施形態では、ADCは抗体の抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、ADCは、CD37、CD33、FOLR1、CD123、CD19、cMET、ADAM9、またはHER2に特異的に結合する抗体または抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、huMovl9、Z4681A、またはG4732AのVH CDR1、VH
CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2、及びVL CDR3を含む。いくつかの実施形態では、CDRは、Kabat定義のCDR、Chothia定義のCDR、またはAbM定義のCDRである。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号1~6、それぞれ配列番号7~12、それぞれ配列番号13~18、それぞれ配列番号19~24、それぞれ配列番号25~30、またはそれぞれ配列番号31~36の配列を含むVH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2、及びVL CDR3の配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号37及び38、それぞれ配列番号37及び39、それぞれ配列番号40及び41、それぞれ配列番号42及び43、それぞれ配列番号44及び45、それぞれ配列番号46及び47、またはそれぞれ配列番号48及び49の配列を含むVH及びVL配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号50及び51、それぞれ配列番号50及び52、それぞれ配列番号53及び54、またはそれぞれ配列番号55及び56の配列を含む重鎖配列及び軽鎖配列を含む。
CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2、及びVL CDR3を含む。いくつかの実施形態では、CDRは、Kabat定義のCDR、Chothia定義のCDR、またはAbM定義のCDRである。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号1~6、それぞれ配列番号7~12、それぞれ配列番号13~18、それぞれ配列番号19~24、それぞれ配列番号25~30、またはそれぞれ配列番号31~36の配列を含むVH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2、及びVL CDR3の配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号37及び38、それぞれ配列番号37及び39、それぞれ配列番号40及び41、それぞれ配列番号42及び43、それぞれ配列番号44及び45、それぞれ配列番号46及び47、またはそれぞれ配列番号48及び49の配列を含むVH及びVL配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号50及び51、それぞれ配列番号50及び52、それぞれ配列番号53及び54、またはそれぞれ配列番号55及び56の配列を含む重鎖配列及び軽鎖配列を含む。
いくつかの実施形態では、ADCは、SMCC、sSPDB、及びペプチドリンカーからなる群から選択されるリンカーを含む。いくつかの実施形態では、ADCはメイタンシノイドまたはインドリノ-ベンゾジアゼピンを含む。いくつかの実施形態では、メイタンシノイドはDM1またはDM4である。いくつかの実施形態では、インドリノ-ベンゾジアゼピンはDGN462またはDGN549である。
いくつかの実施形態では、ADCは、IMGN529、IMGN779、IMGN853、IMGN632またはKadcylaである。
いくつかの実施形態では、IMGN853を生成するための方法は、(i)IMGN853を形成するために、huMovl9抗体及びスルホ-SPDBに結合したDM4を連続コンジュゲーションプロセス中で混合することであって、任意でインラインモニタリングを使用してコンジュゲーション反応に添加したhuMovl9抗体の濃度を測定する、混合すること、(ii)任意でシングルパス・タンジェンシャルフローろ過を使用してIMGN853を濃縮することであって、任意でインラインモニタリングを使用して保持液中の非コンジュゲート薬物の濃度を測定する、濃縮すること、(iii)シングルパス・タンジェンシャルフローろ過を使用してIMGN853を精製することであって、任意でインラインモニタリングを使用して保持液中の非コンジュゲート薬物の濃度を測定する、精製すること、ならびに(iv)シングルパス・タンジェンシャルフローろ過を使用してIMGN853を製剤バッファーに交換することであって、任意でインラインモニタリングを使用して保持液中の不純物の濃度を測定する、交換することを含む。
いくつかの実施形態では、IMGN853を生成するための方法は、(i)IMGN853を形成するために、huMovl9抗体及びスルホ-SPDBに結合したDM4を連続コンジュゲーションプロセス中で混合することであって、任意でインラインモニタリングを使用してコンジュゲーション反応に添加したhuMovl9抗体の濃度を測定する、混合すること、(ii)任意でシングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用してIMGN853を濃縮することであって、任意でインラインモニタリングを使用して保持液中の非コンジュゲート薬物の濃度を測定する、濃縮すること、(iii)シングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用してIMGN853を精製することであって、任意でインラインモニタリングを使用して保持液中の非コンジュゲート薬物の濃度を測定する、精製すること、ならびに(iv)シングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用してIMGN853を製剤バッファーに交換することであって、任意でインラインモニタリングを使用して保持液中の不純物の濃度を測定する、交換することを含む。
いくつかの実施形態では、IMGN779を生成するための方法は、(i)IMGN779を形成するために、Z4681A抗体及びスルホ-SPDBに結合したDGN462を連続コンジュゲーションプロセス中で混合することであって、任意でインラインモニタリングを使用してコンジュゲーション反応に添加したZ4681A抗体の濃度を測定する、混合すること、(ii)任意でシングルパス・タンジェンシャルフローろ過を使用してIMGN779を濃縮することであって、任意でインラインモニタリングを使用して保持液中の非コンジュゲート薬物の濃度を測定する、濃縮すること、(iii)シングルパス・タンジェンシャルフローろ過を使用してIMGN779を精製することであって、任意でインラインモニタリングを使用して保持液中の非コンジュゲート薬物の濃度を測定する、精製すること、ならびに(iv)シングルパス・タンジェンシャルフローろ過を使用してIMGN779を製剤バッファーに交換することであって、任意でインラインモニタリングを使用して保持液中の不純物の濃度を測定する、交換することを含む。
いくつかの実施形態では、IMGN779を生成するための方法は、(i)IMGN779を形成するために、Z4681A抗体及びスルホ-SPDBに結合したDGN462を連続コンジュゲーションプロセス中で混合することであって、任意でインラインモニタリングを使用してコンジュゲーション反応に添加したZ4681A抗体の濃度を測定する、混合すること、(ii)任意でシングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用してIMGN779を濃縮することであって、任意でインラインモニタリングを使用して保持液中の非コンジュゲート薬物の濃度を測定する、濃縮すること、(iii)シングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用してIMGN779を精製することであって、任意でインラインモニタリングを使用して保持液中の非コンジュゲート薬物の濃度を測定する、精製すること、ならびに(iv)シングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用してIMGN779を製剤バッファーに交換することであって、任意でインラインモニタリングを使用して保持液中の不純物の濃度を測定する、交換することを含む。
いくつかの実施形態では、IMGN632を生成するための方法は、(i)IMGN632を形成するために、G4732A抗体及びスルホン化DNG549Cを連続コンジュゲーションプロセス中で混合すること、(ii)任意でシングルパス・タンジェンシャルフローろ過を使用してIMGN632を濃縮することであって、任意でインラインモニタリングを使用して保持液中の非コンジュゲート薬物の濃度を測定する、濃縮すること、(iii)シングルパス・タンジェンシャルフローろ過を使用してIMGN632を精製することであって、任意でインラインモニタリングを使用して保持液中の非コンジュゲート薬物の濃度を測定する、精製すること、ならびに(iv)シングルパス・タンジェンシャルフローろ過を使用してIMGN632を製剤バッファーに交換することであって、任意でインラインモニタリングを使用して保持液中の不純物の濃度を測定する、交換することを含む。いくつかの実施形態では、G4732A抗体は、コンジュゲーションプロセスの前に1つのSPTFF段階のみにおいて還元及び酸化される。
いくつかの実施形態では、IMGN632を生成するための方法は、(i)IMGN632を形成するために、G4732A抗体及びスルホン化DNG549Cを連続コンジュゲーションプロセス中で混合すること、(ii)任意でシングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用してIMGN632を濃縮することであって、任意でインラインモニタリングを使用して保持液中の非コンジュゲート薬物の濃度を測定する、濃縮すること、(iii)シングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用してIMGN632を精製することであって、任意でインラインモニタリングを使用して保持液中の非コンジュゲート薬物の濃度を測定する、精製すること、ならびに(iv)シングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用してIMGN632を製剤バッファーに交換することであって、任意でインラインモニタリングを使用して保持液中の不純物の濃度を測定する、交換することを含む。いくつかの実施形態では、G4732A抗体は、コンジュゲーションプロセスの前に1つのSPTFF段階または向流ダイアフィルトレーション段階のみにおいて還元及び酸化される。
いくつかの実施形態では、方法は、コンジュゲーションプロセスの第1の温度を少なくとも5℃高温に上昇させることを含み、高温を20分間以下維持する。
いくつかの実施形態では、ADCを生成するための方法は、コンジュゲーションプロセスの第1の温度を少なくとも5℃高温に上昇させることを含み、高温を20分間以下維持する。
いくつかの実施形態では、高温は55℃以下である。いくつかの実施形態では、第1の温度を少なくとも10℃、少なくとも15℃、少なくとも20℃、または少なくとも30℃上昇させる。
いくつかの実施形態では、高温は35℃~55℃であるか、または40℃~50℃である。
いくつかの実施形態では、第1の温度を高温まで上昇させることは、2分よりも長くかからないか、または1分よりも長くかからない。
いくつかの実施形態では、方法はさらに、高温を任意で第1の温度まで低下させることを含む。いくつかの実施形態では、高温を任意で第1の温度まで低下させることは、2分よりも長くかからないか、または1分よりも長くかからない。
いくつかの実施形態では、第1の温度を高温に上昇させ、次いで高温を低下させる段階を、少なくとも2回または少なくとも3回繰り返す。いくつかの実施形態では、第1の温度を高温に上昇させ、次いで高温を低下させる段階を、2~20回または5~10回繰り返す。
いくつかの実施形態では、方法は、コンジュゲーションプロセスの第1の温度を少なくとも5℃低温に低下させることを含み、低温を20分間以下維持する。
いくつかの実施形態では、ADCを生成するための方法は、コンジュゲーションプロセスの第1の温度を少なくとも5℃低温に低下させることを含み、低温を20分間以下維持する。いくつかの実施形態では、第1の温度を30℃以下低下させる。いくつかの実施形態では、温度を少なくとも10℃、少なくとも15℃、または少なくとも20℃低下させる。
いくつかの実施形態では、第1の温度を低温まで低下させることは、2分よりも長くかからないか、または1分よりも長くかからない。
いくつかの実施形態では、方法はさらに、低温を任意で第1の温度まで上昇させることを含む。いくつかの実施形態では、低温を任意で第1の温度まで上昇させることは、2分よりも長くかからないか、または1分よりも長くかからない。
いくつかの実施形態では、第1の温度を低温に低下させ、次いで低温を上昇させる段階を、少なくとも2回または少なくとも3回繰り返す。いくつかの実施形態では、第1の温度を低温に低下させ、次いで低温を上昇させる段階を、2~20回または5~10回繰り返す。
いくつかの実施形態では、高温または低温を15分間以下維持する。いくつかの実施形態では、高温または低温を30秒~15分間維持する。いくつかの実施形態では、高温または低温を15分~20分間維持する。いくつかの実施形態では、高温または低温を10分~15分間維持する。いくつかの実施形態では、高温または低温を5分~10分間維持する。いくつかの実施形態では、高温または低温を1分~5分間維持する。
いくつかの実施形態では、方法は、コンジュゲーションプロセスの第1のpHを少なくとも0.5変化させたpHに変化させることを含み、変化させたpHを20分間以下維持する。
いくつかの実施形態では、ADCを生成するための方法は、コンジュゲーションプロセスの第1のpHを少なくとも0.5変化させたpHに変化させることを含み、変化させたpHを20分間以下維持する。
いくつかの実施形態では、第1のpHを少なくとも1上昇させ、任意で、変化させたpHは9を超えない。いくつかの実施形態では、第1のpHを少なくとも2または少なくとも3上昇させる。
いくつかの実施形態では、第1のpHは少なくとも1低下し、任意で、変化させたpHは4を下回らない。いくつかの実施形態では、第1のpHを少なくとも2または少なくとも3低下させる。
いくつかの実施形態では、方法はさらに、変化させたpHを任意で第1のpHへ変化させることを含む。いくつかの実施形態では、第1のpHを変化させたpHに変化させ、次いで変化させたpHを変化させる段階を、少なくとも2回または少なくとも3回繰り返す。いくつかの実施形態では、第1のpHを変化させたpHに変化させ、次いで変化させたpHを変化させる段階を、2~20回または5~10回繰り返す。
いくつかの実施形態では、変化させたpHを15分間以下維持する。いくつかの実施形態では、変化させたpHを30秒~15分間維持する。いくつかの実施形態では、変化させたpHを15分~20分間維持する。いくつかの実施形態では、変化させたpHを10分~15分間維持する。いくつかの実施形態では、変化させたpHを5分~10分間維持する。いくつかの実施形態では、変化させたpHを1分~5分間維持する。
本明細書にて提供される方法に従って生成されるADCもまた、本明細書で提供される。
I.定義
本明細書で使用する場合、用語「抗体薬物コンジュゲート」(ADC)及び「イムノコンジュゲート」は細胞結合物質(例えば、抗体またはその抗原結合断片)に結合した化合物またはその誘導体を指し、一般式:D-L-Aによって定義され、ここで、D=細胞毒性薬物、L=リンカー、及びA=抗体または抗体断片である。ADCは、逆の順番の一般式:A-L-Dによっても定義され得る。ADCは抗体またはその抗原結合断片あたり複数の薬物及びリンカー、例えば、(D-L)4-AまたはA-(L-D)2を含み得る。用語「抗体薬物コンジュゲート」及び「イムノコンジュゲート」は、本明細書において互換的に使用される。
本明細書で使用する場合、用語「抗体薬物コンジュゲート」(ADC)及び「イムノコンジュゲート」は細胞結合物質(例えば、抗体またはその抗原結合断片)に結合した化合物またはその誘導体を指し、一般式:D-L-Aによって定義され、ここで、D=細胞毒性薬物、L=リンカー、及びA=抗体または抗体断片である。ADCは、逆の順番の一般式:A-L-Dによっても定義され得る。ADCは抗体またはその抗原結合断片あたり複数の薬物及びリンカー、例えば、(D-L)4-AまたはA-(L-D)2を含み得る。用語「抗体薬物コンジュゲート」及び「イムノコンジュゲート」は、本明細書において互換的に使用される。
「リンカー」は、薬物を細胞結合物質(例えば、抗体またはその抗原結合断片)に安定な共有結合の様式で結合させることができるあらゆる化学的部分である。リンカーは、化合物または抗体が活性を維持する条件下で、酸誘発性切断、光誘発性切断、ペプチダーゼ誘発性切断、エステラーゼ誘発性切断、及びジスルフィド結合切断に対して感受性であるかまたは実質的に耐性であり得る。好適なリンカーは当該技術分野で周知であり、例えば、ジスルフィド基、チオエーテル基、及びペプチドリンカーが含まれる。
用語「抗体」は、免疫グロブリン分子の可変領域内の少なくとも1つの抗原認識部位を介して、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、または前述のものの組み合わせなどの標的を認識し、かつそれに特異的に結合する免疫グロブリン分子を意味する。本明細書で使用する場合、用語「抗体」は、抗体が所望の生物活性を示す限り、インタクトなポリクローナル抗体、インタクトなモノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体を含む融合タンパク質、及び他の任意の改変免疫グロブリン分子を包含する。抗体は、それぞれアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、及びミューと呼ばれるそれらの重鎖定常ドメインの識別に基づいて、免疫グロブリンの5つの主要なクラス:IgA、IgD、IgE、IgG、及びIgM、またはそれらのサブクラス(アイソタイプ)(例えばIgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及びIgA2)のうちのいずれかの抗体であり得る。免疫グロブリンの異なるクラスは、異なりかつ周知であるサブユニット構造及び三次元的配置を有する。抗体は裸であり得、または、毒素、放射性同位体などの他の分子とコンジュゲートされ得る。
用語「抗体断片」は、インタクトな抗体の一部を指す。「抗原結合断片」は、抗原に結合するインタクトな抗体の一部を指す。抗原結合断片は、インタクトな抗体の抗原決定可変領域を含み得る。抗体断片の例としては、Fab、Fab’、F(ab’)2、及びFv断片、線状抗体、ならびに単鎖抗体が挙げられるがこれらに限定されない。抗体断片は裸であり得、または、毒素、放射性同位体などの他の分子とコンジュゲートされ得る。
本明細書で使用する場合、用語「可変領域」または「可変ドメイン」は互換的に使用され、当該技術分野において一般的である。可変領域は一般に抗体の一部、通常、軽鎖または重鎖の一部、典型的には成熟重鎖のアミノ末端付近の110~120アミノ酸または110~125アミノ酸及び成熟軽鎖の約90~115アミノ酸を指し、これらは抗体間の配列において広く異なっており、その特定の抗原に対する特定の抗体の結合及び特異性において使用される。配列の可変性は相補性決定領域(CDR)と呼ばれる領域に集中しており、一方、可変ドメイン内のより高度に保存された領域は、フレームワーク領域(FR)と呼ばれる。いかなる特定の機構または理論にも拘束されることを望むものではないが、軽鎖及び重鎖のCDRは、抗体の抗原に対する相互作用及び特異性の主要因であると考えられる。特定の実施形態では、可変領域はヒト可変領域である。特定の実施形態では、可変領域はげっ歯類またはマウスのCDR及びヒトのフレームワーク領域(FR)を含む。特定の実施形態では、可変領域は霊長類(例えば、非ヒト霊長類)の可変領域である。特定の実施形態では、可変領域はげっ歯類またはマウスのCDR及び霊長類(例えば、非ヒト霊長類)のフレームワーク領域(FR)を含む。
用語「VL」及び「VLドメイン」は互換的に使用され、抗体の軽鎖可変領域を指す。
用語「VH」及び「VHドメイン」は互換的に使用され、抗体の重鎖可変領域を指す。
「Kabat付番」及び類似の用語は当該技術分野において認識されており、抗体またはその抗原結合断片の重鎖及び軽鎖の可変領域におけるアミノ酸残基の付番システムを指す。特定の態様では、CDRはKabat付番システムに従って決定され得る(例えば、Kabat EA & Wu TT(1971)Ann NY Acad Sci 190:382-391及びKabat EA et al.,(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,Fifth Edition,U.S.Department of Health and Human Services,NIH Publication No.91-3242を参照のこと)。Kabat付番システムを使用すると、抗体の重鎖分子内のCDRは一般にアミノ酸位置31~35に存在しており、35(Kabat付番スキームでは35A及び35Bと称される)(CDR1)、アミノ酸位置50~65(CDR2)、及びアミノ酸位置95~102(CDR3)に続く1つまたは2つの追加のアミノ酸を任意で含み得る。Kabat付番システムを使用すると、抗体の軽鎖分子内のCDRは一般に、アミノ酸位置24~34(CDR1)、アミノ酸位置50~56(CDR2)、及びアミノ酸位置89~97(CDR3)に存在している。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体のCDRはKabat付番スキームに従って決定される。
Chothiaは代わりに、構造ループの位置を指す(Chothia and Lesk,J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。Chothia CDR-H1ループの末端は、Kabat付番の慣例を使用して付番した場合、ループの長さに応じてH32とH34の間で変化する(これは、Kabat付番スキームがH35A及びH35Bで挿入を配置するためであり、35Aと35Bのいずれも存在しない場合はループは32で終了し、35Aのみが存在する場合はループは33で終了し、35Aと35Bの双方が存在する場合はループは34で終了する)。AbM超可変領域はKabat CDRとChothia構造ループとの間の折衷を表し、Oxford MolecularのAbM抗体モデリングソフトウェアによって使用されている。
本明細書で使用する場合、用語「定常領域」または「定常ドメイン」は互換的であり、当該技術分野において共通の意味を有する。定常領域は、抗体の抗原との結合に直接関与しないが、Fc受容体との相互作用などの様々なエフェクター機能を示し得る抗体の部分、例えば、軽鎖及び/または重鎖のカルボキシル末端部分である。免疫グロブリン分子の定常領域は、通常、免疫グロブリン可変ドメインと比較して、より保存されたアミノ酸配列を有する。特定の態様では、抗体または抗原結合断片は、抗体依存性細胞介在性細胞傷害(ADCC)に十分な定常領域またはそれらの部分を含む。
本明細書で使用する場合、用語「重鎖」は、抗体に関して使用するとき、IgGのサブクラス、例えばIgG1、IgG2、IgG3、及びIgG4を含むIgA、IgD、IgE、IgG、及びIgMクラスの抗体をそれぞれ生じる定常ドメインのアミノ酸配列に基づいてあらゆる異なる型、例えば、アルファ(α)、デルタ(δ)、イプシロン(ε)、ガンマ(γ)、及びミュー(μ)を指し得る。重鎖のアミノ酸配列は、当該技術分野において周知である。特定の実施形態では、重鎖はヒト重鎖である。
本明細書で使用する場合、用語「軽鎖」は、抗体に関して使用するとき、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいてあらゆる異なる型、例えば、カッパ(κ)またはラムダ(λ)を指し得る。軽鎖のアミノ酸配列は、当該技術分野において周知である。特定の実施形態では、軽鎖はヒト軽鎖である。
本明細書で使用する場合、用語「コンジュゲーションプロセス」は、コンジュゲーション反応の反応物質(例えば、細胞結合物質、薬物、及びリンカー;細胞結合物質及びリンカーに結合した薬物;またはリンカーと薬物に結合した細胞結合物質)を、反応物質を反応させADCを形成させることができる条件下で混合するプロセスを指す。
本明細書で使用する場合、用語「バッチコンジュゲーションプロセス」は、コンジュゲーション反応の反応物質をバルクで共に混合し、コンジュゲーション反応が生じてコンジュゲーション反応生成物(ADC)が形成され、次いで、コンジュゲーション反応生成物(ADC)をバルクで取り出すコンジュゲーションプロセスを指す。
本明細書で使用する場合、用語「連続コンジュゲーションプロセス」は、コンジュゲーション反応の進行中及び少なくとも1つのコンジュゲーション反応生成物(ADC)の形成後、1つ以上のコンジュゲーション反応の反応物質をコンジュゲーション反応に添加し続けるコンジュゲーションプロセスを指す。コンジュゲーション反応生成物(ADC)は、コンジュゲーション反応の進行に伴いコンジュゲーション反応から取り出し続けることができる。
本明細書で使用する場合、用語「in-situ反応」は、薬物とリンカーを混合してリンカーに結合した薬物を形成するプロセスを指す。次いで、リンカーに結合した薬物を細胞結合物質(例えば、抗体)とのコンジュゲーション反応に使用して、ADCを形成することができる。
本明細書で使用する場合、用語「フローリアクタ」は、連続反応化学作用に用いられるあらゆる反応容器を指し、典型的には管状である。フローリアクタはステンレス鋼、ガラス、ポリマーなどで製造することができる。
本明細書で使用する場合、用語「インラインモニタリング」は分析対象をリアルタイムで、例えば、コンジュゲーション反応、濃縮プロセス、精製プロセス、またはバッファー交換プロセスが生じている間にモニタリングすることを指す。
本明細書で使用する場合、用語「フィルタ」は、流体中の種を分離できる選択的障壁を指す。分離は、流体の1つ以上の種をフィルタを通して選択的に通過させ(透過させ)、その一方で、1つ以上の他の種の通過を遅延させることにより達成される。
本明細書で使用する場合、用語「供給流」は、フィルタまたは膜中の成分を分離するためにフィルタまたは膜に供給されている流体を指す。
本明細書で使用する場合、用語「保持液」は、フィルタを通過しない供給流の一部を指す。
本明細書で使用する場合、用語「透過液」は、フィルタを通過する供給流の一部を指す。
本明細書で使用する場合、用語「タンジェンシャルフローろ過」(TFF)は、供給流が膜表面に対して平行に通過する膜ベースのろ過プロセスを指す。供給流の一部は膜を通過し(透過液)、一方で、残り(保持液)は再循環して供給リザーバへと戻る。TFFは、クロスフローろ過とも称される。TFFを実施するためのシステムは周知であり、例えば、Pellicon型システム(Millipore,Billerica,MA)、Sartocon Cassetteシステム(Sartorius AG,Edgewood,NY)、及びCentrasette型システム(Pall Corporation,East Hills,NY)が挙げられる。
本明細書で使用する場合、用語「シングルパス・タンジェンシャルフローろ過」(SPTFF)は、供給流がろ過膜上を1回のみ通過するタンジェンシャルフローろ過プロセスを指す。SPTFFを実施するためのシステムは周知であり、例えばCadance型システム(Pall Corporation,Westborough,MA)が挙げられる。SPTFFを実施するためのシステム及び方法は、例えば、米国特許第7,384,549号、米国特許第7,510,654号、米国特許第7,682,511号、米国特許第7,967,987号、米国特許第8,157,999号、及び米国特許第8,231,787号に開示されており、これらの各々はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書で使用する場合、用語「連続ダイアフィルトレーション」は、供給流を希釈剤と混合し、透過液及び保持液を除去しながら供給流を膜全体へ送り込むことにより、連続方式で溶質の選択的分離が達成されるダイアフィルトレーションプロセスを指す。ろ過プロセスの進行に伴い、生成物は容器中には形成されず、代わりにろ過の過程中、系から連続的に回収される。「向流ダイアフィルトレーション」は、プロセス流(例えば、透過液または保持液)をダイアフィルトレーション段階にて再循環させる連続ダイアフィルトレーションプロセスを指す。
用語「インラインモニタリング」は、分析対象をリアルタイムで、例えば、生成プロセスまたは精製プロセス中にモニタリングすることを指す。インラインモニタリングは、リアルタイムのフィードバックを提供しないインプロセスの試料採取またはオフラインの分析とは区別される。
用語「インラインプロセス自動化技術」は、プロセス中に分析対象をモニタリングするために使用されるあらゆるインライン測定装置を指す。
本明細書で使用する場合、用語「分析対象」は広義の用語であり、分析することができる流体中の物質または化学成分を指すが、これらに限定されない。分析対象には、天然由来の物質、人工の物質、代謝物及び/または反応生成物が含まれ得る。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法における測定のための分析対象は、抗体もしくはその抗原結合断片、薬物、リンカー、抗体もしくはその抗原結合断片に結合したリンカー、薬物に結合したリンカー、抗体薬物コンジュゲート(ADC)、薬物抗体比(DAR)、及び/または不純物である。
本明細書で使用する場合、用語「反応バッファー」は、反応が生じ得るバッファーを指す。したがって、本明細書で使用する場合、用語「コンジュゲーション反応バッファー」または「コンジュゲーションバッファー」は、コンジュゲーション反応(連続コンジュゲーション反応またはバッチコンジュゲーション反応)が生じ得るバッファーを指す。同様に、本明細書で使用する場合、用語「in-situ反応バッファー」または「in-situバッファー」は、in-situ反応が生じ得るバッファーを指す。
本明細書で使用する場合、用語「製剤バッファー」は、有効成分の生物活性を有効にし、かつ製剤を投与する対象に対して許容できない毒性を有する付加的な成分を含まないバッファーを指す。
本明細書で使用する場合、用語「インドリノベンゾジアゼピン」(IGN)は、インドリノベンゾジアゼピンコア構造を有する化合物を指す。インドリノベンゾジアゼピンは、置換または非置換であり得る。インドリノベンゾジアゼピンは、リンカーによって結合した2つのインドリノベンゾジアゼピンコアを有する化合物も含む。インドリノベンゾジアゼピンコアの一部としてのイミン官能基(-C=N-)は還元され得る。特定の実施形態では、インドリノベンゾジアゼピン化合物は
で表されるコア構造を含み、任意に置換することができる。
で表されるコア構造を含み、任意に置換することができる。
いくつかの実施形態では、インドリノベンゾジアゼピン化合物は
で表されるコア構造を含み、さらに置換することができる。
で表されるコア構造を含み、さらに置換することができる。
本明細書で使用する場合、用語「ピロロベンゾジアゼピン」(PBD)は、ピロロベンゾジアゼピンコア構造を有する化合物を指す。ピロロベンゾジアゼピンは、置換または非置換であり得る。ピロロベンゾジアゼピンは、リンカーによって結合した2つのピロロベンゾジアゼピンコアを有する化合物も含む。インドリノベンゾジアゼピンコアの一部としてのイミン官能基(-C=N-)は還元され得る。特定の実施形態では、ピロロベンゾジアゼピン化合物は
で表されるコア構造を含み、任意に置換することができる。特定の実施形態では、ピロロベンゾジアゼピン化合物は
で表されるコア構造を含み、任意に置換することができる。
で表されるコア構造を含み、任意に置換することができる。特定の実施形態では、ピロロベンゾジアゼピン化合物は
で表されるコア構造を含み、任意に置換することができる。
本開示及び特許請求の範囲において使用する場合、単数形「a」、「an」、及び「the」には、文脈により別途明確に指示されない限り、複数形も含まれる。
本明細書において、「含む(comprising)」という言葉で実施形態が記載される場合はいつでも、「からなる(consisting of)」及び/または「から本質的になる(consisting essentially of)」という用語で記載される別の類似の実施形態もまた、提供されることが理解される。
本明細書における「A及び/またはB」などの表現において使用される用語「及び/または」は、「A及びB」、「AまたはB」、「A」、及び「B」のいずれも含むことが意図される。同様に、「A、B、及び/またはC」などの表現において使用される用語「及び/または」は、以下の実施形態:A、B、及びC;A、B、またはC;AまたはC;AまたはB;BまたはC;A及びC;A及びB;B及びC;A(単独);B(単独);及びC(単独)の各々を包含することが意図される。
II.連続コンジュゲーション、シングルパス・タンジェンシャルフローろ過、及び向流ダイアフィルトレーション
抗体薬物コンジュゲート(ADC)を形成及び/または処理するための連続的方法が、本明細書で提供される。バッチ形成及びバッチ処理では、成分をプロセスに添加し、プロセスを一定時間進行させ、次いでプロセスの生成物をバルクで取り出す。対照的に、本明細書で提供される連続的方法では、成分を進行中のプロセスに添加し続け、生成物はプロセス終了時のバルクによる代わりに、プロセス全体を通して取り出され得る。例えば、連続コンジュゲーションプロセスでは、反応の進行中及び少なくとも1つのコンジュゲーション反応生成物(ADC)の形成後、1つ以上のコンジュゲーション反応の反応物質をコンジュゲーション反応に添加し続ける。同様に、下流の連続濃縮プロセス、精製プロセス、及び/またはバッファー交換プロセスでは、これらのプロセスの進行に伴い、ADC、バッファー、及び/または他の成分を濃縮プロセス、精製プロセス、及び/またはバッファー交換プロセスに連続的に添加して、濃縮し、精製し、及びバッファー交換したADCを、これらの進行中のプロセスから連続的に取り出すことができる。したがって、ADCのコンジュゲーションからADCの製剤までのADCプロセス全体は、連続的であり得る(例えば、図1(下部)を参照のこと)。
抗体薬物コンジュゲート(ADC)を形成及び/または処理するための連続的方法が、本明細書で提供される。バッチ形成及びバッチ処理では、成分をプロセスに添加し、プロセスを一定時間進行させ、次いでプロセスの生成物をバルクで取り出す。対照的に、本明細書で提供される連続的方法では、成分を進行中のプロセスに添加し続け、生成物はプロセス終了時のバルクによる代わりに、プロセス全体を通して取り出され得る。例えば、連続コンジュゲーションプロセスでは、反応の進行中及び少なくとも1つのコンジュゲーション反応生成物(ADC)の形成後、1つ以上のコンジュゲーション反応の反応物質をコンジュゲーション反応に添加し続ける。同様に、下流の連続濃縮プロセス、精製プロセス、及び/またはバッファー交換プロセスでは、これらのプロセスの進行に伴い、ADC、バッファー、及び/または他の成分を濃縮プロセス、精製プロセス、及び/またはバッファー交換プロセスに連続的に添加して、濃縮し、精製し、及びバッファー交換したADCを、これらの進行中のプロセスから連続的に取り出すことができる。したがって、ADCのコンジュゲーションからADCの製剤までのADCプロセス全体は、連続的であり得る(例えば、図1(下部)を参照のこと)。
本発明者らは、コンジュゲーションプロセスがフローリアクタを用いて連続的に実施され得ることを実証した。フローリアクタによって、コンジュゲーション反応の進行中及び少なくとも1つのコンジュゲーション反応生成物(ADC)の形成後、1つ以上のコンジュゲーション反応の反応物質をコンジュゲーション反応に連続的に添加することができる。コンジュゲーションプロセスにおいてフローリアクタを使用することによって、コンジュゲーション反応の制御及びコンジュゲーションプロセスの汎用性(例えば、急速な温度変化/より厳格な温度制御、拡散により媒介されるためより均一である混合、及び容器または一組の(suite)の制限による制約がないこと)ならびにADCコンジュゲーションプロセスの改善された拡張性(すなわち、従来のバッチ処理のスケールアップリスクが当てはまらず、空時収率が最適化される(例えば、現行のプロセスを長時間実行することにより擬似的なスケールアップ(生成量の増加)を実施すること))が可能になる。
本発明者らは、さらに、連続ADC処理は、非コンジュゲート薬物をADCから良好に分離できるシングルパス・タンジェンシャルフローろ過(SPTFF)を用いて達成することができることを実証した。バルクの(従来の)ダイアフィルトレーションは、タンジェンシャルフローろ過(TFF)システムを第1のバッファーA(生成物が最初に存在するバッファー)でプライミングすることを含む。次いで、生成物を、プライミング量と混合する保持液容器に添加する。保持液容器用の供給ポンプは、生成物を保持液からTFF膜上へ送り込み、そこで、コンジュゲートは保持される(かつ、保持液へ戻る)か、または廃棄物へと廃棄されるかのいずれかである。別のポンプ(ダイアフィルトレーションポンプ)は、容器から、別個の容器内に含まれるバッファーB(生成物が交換されるバッファー)へと、容器から保持液容器への供給ラインを用いて供給することになる。両方のポンプが起動し、保持液容器内の生成物がTFF膜を通過し始める。バッファーは廃棄流を通じて除去されるため、保持液の容量はバッファーBを(等量で)保持液容器に添加することによって維持される。その結果、生成物は徐々にバッファーBに交換される。
SPTFFは、最初にバッファーAに存在する生成物のバッファーBへの交換という関連する概念を使用する。しかしながら、生成物は膜上を常に1回しか通過しないため、完全なバッファー交換を達成するためのバッファーBの適切な容量のすべてが達成されなければならない。これを行うために、SPTFFは積層したステージ上にバッファーBを添加することができる。したがって、生成物は膜を1回のみ通過する。すなわち、バッファーAに入り、バッファーB中のモジュールを出る。
同様に、連続ADC処理は向流ダイアフィルトレーションを用いて実現することができる。
したがって、本明細書にて提供される連続ADC処理法(例えば、SPTFF及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用すること)は、バッチADC処理と比較して、処理時間を減少させ、収率を改善し、及び/または生成物の均一性を向上させることができる。本明細書にて提供される連続ADC処理法(例えば、SPTFF及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用すること)は、バッチコンジュゲーションプロセスで用いられる保持段階を省略することもできる。本明細書にて提供される連続ADC処理法(例えば、SPTFF及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用すること)により、より小さな装置の使用も可能になる。SPTFFはまた、剪断力によって潜在的に生じ得る酸化に対し感受性である抗体が、SPTFFにより適し得るため好都合である。
ADC処理は、ADCのコンジュゲーション(形成)、ADCの濃縮、ADCの精製、及び/またはADCの製剤を含み得る。ADCのコンジュゲーションから製剤までのプロセス全体を連続的にする(例えば、図1に示すように)ことが特に有用であるが、連続処理段階をバッチ処理段階と組み合わせる(例えば、図2及び図3に示すように)ことも可能である。さらに、上流の処理段階(例えば、抗体、リンカー及び/または薬物の調製)を連続的にして、ADCのコンジュゲーションへと連続的に供給することが可能である。
したがって、本明細書にて提供されるいくつかの方法では、抗体薬物コンジュゲート(ADC)を形成するコンジュゲーションプロセスは連続的である。連続コンジュゲーションプロセスでは、コンジュゲーション反応の進行中及び少なくとも1つのコンジュゲーション反応生成物(ADC)の形成後、1つ以上のコンジュゲーション反応の反応物質をコンジュゲーション反応に添加し続ける。構築したADCを系から取り出す間に、コンジュゲーション反応の反応物質を系に入れることができる。例えば、本明細書にて提供されるいくつかの連続コンジュゲーションプロセスでは、細胞結合物質(例えば、抗体またはその抗原結合断片)、リンカーに結合した薬物、及びコンジュゲーション反応バッファーを、コンジュゲーション反応の進行中及び少なくとも1つのADCの形成後、コンジュゲーション反応に連続的に添加する。本明細書にて提供されるいくつかの連続コンジュゲーションプロセスでは、リンカーに結合した細胞結合物質(例えば、抗体またはその抗原結合断片)、薬物、及びコンジュゲーション反応バッファーを、コンジュゲーション反応の進行中及び少なくとも1つのADCの形成後、コンジュゲーション反応に連続的に添加する。本明細書にて提供されるいくつかの連続コンジュゲーションプロセスでは、細胞結合物質(例えば、抗体またはその抗原結合断片)、薬物、リンカー、及びコンジュゲーション反応バッファーを、コンジュゲーション反応の進行中及び少なくとも1つのADCの形成後、コンジュゲーション反応に連続的に添加する。連続的に添加する反応物質は、単一の供給流中に共に添加することができ、または収集容器に別々に供給するか、もしくは反応容器に直接供給することができる。
本明細書にて提供されるいくつかの連続コンジュゲーションプロセスでは、細胞結合物質(例えば、抗体またはその抗原結合断片)、リンカーに結合した細胞結合物質、薬物、リンカーに結合した薬物、リンカー、またはコンジュゲーション反応バッファーのうち1つのみを、コンジュゲーション反応の進行中及び少なくとも1つのADCの形成後、コンジュゲーション反応に連続的に添加する。本明細書にて提供されるいくつかの連続コンジュゲーションプロセスでは、細胞結合物質(例えば、抗体またはその抗原結合断片)、リンカーに結合した細胞結合物質、薬物、リンカーに結合した薬物、リンカー及びコンジュゲーション反応バッファーからなる群から選択される2つの反応物質を、コンジュゲーション反応の進行中及び少なくとも1つのADCの形成後、コンジュゲーション反応に連続的に添加する。
SPTFFの使用によって、コンジュゲーション反応からの成分の連続的な添加及び/または除去が可能となる。したがって、SPTFFは、ADCコンジュゲーションのための反応物質の調製及び構築したADCの処理のために使用することができる。SPTFFは、特定のADCのための処理段階(例えば、生成、濃縮、精製、及び/または製剤)のすべて(もしくは一部)が同時に起こり得るように、連続ADC処理を可能にすることができる。向流ダイアフィルトレーションもまた、ADCコンジュゲーションのための反応物質の調製及び構築したADCの処理のために使用することができる。
本明細書にて提供される方法に従って、SPTFFは、ADCを濃縮するために、ADCを精製するために、及び/またはADCを製剤するために(例えば、ADCを製剤バッファーに交換することによって)使用することができる。SPTFFは、ADCを第1のバッファーから第2のバッファーへ移すために使用することができる。向流ダイアフィルトレーションもまた、ADCを濃縮するために、ADCを精製するために、及び/またはADCを製剤するために(例えば、ADCを製剤バッファーに交換することによって)使用することができ、向流ダイアフィルトレーションはまた、ADCを第1のバッファーから第2のバッファーへ移すために使用することもできる。
本明細書にて提供されるいくつかの方法では、SPTFFはADCの生成、精製、及び製剤の全体にわたり使用され、ADC生成から製剤までのプロセス全体を連続的にする。本明細書にて提供されるいくつかの方法では、向流ダイアフィルトレーションはADCの生成、精製、及び製剤の全体にわたり使用され、ADC生成から製剤までのプロセス全体を連続的にする。したがって、例示的な図4及び図10に示すプロセス全体は、連続的であり得る。
本明細書にて提供されるいくつかの方法では、SPTFFは、例示的な図4及び図10に示すプロセスのいくつかの部分が連続的であり、その一方で他の部分はバッチで実施されるように、従来のTFFと組み合わせて使用される。例えば、抗体またはその抗原結合断片を、コンジュゲーションの前に、従来の(バッチの)TFF(例えば、図4のTFF1を参照のこと)を使用してバッファー交換することができ、次いで、SPTFFが下流のプロセス(例えば、図4のTFF2ステージI及びIIを参照のこと)に使用される連続プロセスへと供給する。このような方法において、向流ダイアフィルトレーションをSPTFFの代わりに、またはSPTFFと組み合わせて使用することができる。
図4及び図10において、点線で示した各枠は、バッチ方式または連続方式のいずれかで行うことができるプロセスの個々の部分を表す。例えば、図4の左上の枠に示す、コンジュゲーションのために抗体をバッファーに入れるプロセスは、SPTFFを使用して連続方式で実施することができ、または従来のTFFを使用してバッチ方式で実施することもできる。コンジュゲーションのために抗体をバッファーに入れるプロセスをバッチ方式で実施するかまたは連続方式で実施するかどうかに関わらず、コンジュゲーション反応の下流の枠に示すADCの濃縮及び精製プロセスは、SPTFFを使用して連続方式で実施することができ、または従来のTFFを使用してバッチ方式で実施することもできる。同様に、コンジュゲーションのために抗体をバッファーに入れるプロセスをバッチプロセスで実施するかまたは連続プロセスで実施するかどうかに関わらず、かつADCをバッチプロセスで濃縮及び精製するかまたは連続プロセスで濃縮及び精製するかどうかに関わらず、連続方式でSPTFFを使用してまたはバッチ方式で従来のTFFを使用してADCを製剤することができる。このような方法において、向流ダイアフィルトレーションをSPTFFの代わりに、またはSPTFFと組み合わせて使用することができる。
いくつかの実施形態では、ADCプロセスの少なくとも2つの段階がSPTFFを使用して実施される。例えば、いくつかの実施形態では、SPTFFが抗体またはその抗原結合断片をコンジュゲーションバッファーに移すために使用され、かつADCの形成後、ADCを濃縮及び精製するために使用されるが、一方で、SPTFFまたはTFFのいずれかがADCを製剤バッファーに交換するために使用される。いくつかの実施形態では、SPTFFが抗体またはその抗原結合断片をコンジュゲーションバッファーに移すために使用され、かつ精製したADCを製剤バッファーに交換するために使用されるが、一方で、SPTFFまたはTFFのいずれかがADCの形成後、ADCを濃縮及び精製するために使用される。いくつかの実施形態では、SPTFFがADCを濃縮及び精製するために使用され、かつ濃縮し精製したADCを製剤バッファーに交換するために使用されるが、一方で、SPTFFまたはTFFのいずれかが抗体またはその抗原結合断片をコンジュゲーションバッファーに移すために使用される。
SPTFFは、例えば、ADCを濃縮する方法において限外ろ過膜を使用することができる。SPTFFは、例えば、ADCを精製する方法及び/またはADCをバッファー(例えば、製剤バッファー)に移す方法においてダイアフィルトレーション膜を使用することができる。
いくつかの実施形態では、ADCプロセスの少なくとも2つの段階がSPTFF及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用して実施される。例えば、いくつかの実施形態では、SPTFF及び/または向流ダイアフィルトレーションが抗体またはその抗原結合断片をコンジュゲーションバッファーに移すために使用され、かつADCの形成後、ADCを濃縮及び精製するために使用されるが、一方で、SPTFF、向流ダイアフィルトレーション及び/またはTFFがADCを製剤バッファーに交換するために使用される。いくつかの実施形態では、SPTFF及び/または向流ダイアフィルトレーションが抗体またはその抗原結合断片をコンジュゲーションバッファーに移すために使用され、かつ精製したADCを製剤バッファーに交換するために使用されるが、一方で、SPTFF、向流ダイアフィルトレーション及び/またはTFFがADCの形成後、ADCを濃縮及び精製するために使用される。いくつかの実施形態では、SPTFF及び/または向流ダイアフィルトレーションがADCを濃縮及び精製するために使用され、かつ濃縮し精製したADCを製剤バッファーに交換するために使用されるが、一方で、SPTFF、向流ダイアフィルトレーション及び/またはTFFが抗体またはその抗原結合断片をコンジュゲーションバッファーに移すために使用される。
カラムクロマトグラフィーもまた、本明細書にて提供される連続ADC処理法(例えば、SPTFF及び/または向流ダイアフィルトレーションの組み合わせ)において、フロースルーモードで使用できる。例えば、コンジュゲーション反応物(例えば、連続コンジュゲーション反応物)をフロースルーカラムクロマトグラフィーへ供給し、コンジュゲーション反応物から非コンジュゲート薬物を除去することができる(図4のILDF段階のTFF2ステージの役割と類似している)。次いで、フロースルーカラムクロマトグラフィーを介して精製したADCを、製剤バッファーへのバッファー交換のためのSPTFFプロセスに供給することができる(例えば、図5のILDF段階のTFF2、ステージII)。フロースルーカラムクロマトグラフィーを介して精製したADCを、製剤バッファーへのバッファー交換のための向流ダイアフィルトレーションプロセスにも供給することができる。
場合によっては、本明細書にて提供される連続フローコンジュゲーションプロセスの反応パラメータは、急速に変化させることができるか、または「パルス」できる。例えば、連続フローコンジュゲーションにおいて、例えば、水浴、密封したリアクタ、ヒーター、熱電供給源を使用することによって、及び/または反応が流れて通過するコイル及び/またはチューブの一部分を絶縁することによって、温度を急激に変化させることができる。さらに、連続フローコンジュゲーションにおいて、例えば、酸または塩基を添加することによってpHを急速に変化させることができる。したがって、特定の場合には、コンジュゲーション反応はパルスされたパラメータを使用して実施される。パルスされたパラメータの使用により、例えば、生成物品質を損なうことなく反応時間を減少させ(すなわち、反応速度を増加させ)、急速な温度の低下により反応を一時的に抑制または停止させ、他の摂動(例えば、他の化学反応物質の添加)の導入前に溶液中でコンジュゲートを安定させることができるが、これに対して同一のパラメータに対するより長い曝露は劇的に生成物品質または生成物安定性を低下させる場合がある。
特定の場合には、コンジュゲーション反応を特定の時間増分で特定の回数、変化させた(例えば、上昇させたまたは低下させた)温度に曝露させる。例えば、一例では、温度を少なくとも2℃、少なくとも3℃、少なくとも4℃、または少なくとも5℃上昇させる。それに応じて、温度を少なくとも5℃、10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、または35℃上昇または低下させることができる。例えば、温度を5℃、10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、または35℃上昇または低下させることができる。温度はまた、約5℃~約10℃、約10℃~約15℃、約15℃~約20℃、約20℃~約25℃、約25℃~約30℃、または約30℃~約35℃上昇または低下させることができる。したがって、例えば、温度を(例えば、約20℃から)25℃、30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、または55℃の高温まで上昇させることができる。温度はまた、(例えば、約25℃から)30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、または55℃の高温まで上昇させることができる。特定の場合には、温度は55℃を超えない。特定の場合には、温度を(例えば、約20℃から)約35℃~約55℃の範囲の高温まで、または約40℃~約50℃の範囲の高温まで上昇させる。特定の場合には、温度を(例えば、約20℃から)約60℃~約70℃まで、約80℃まで、約90℃まで、または約100℃までの高温まで、(例えば、10秒などの短い時間増分の間)上昇させる。特定の場合には、温度を(例えば、約20℃から)60℃~70℃の範囲、70℃~80℃の範囲、80℃~90℃の範囲、または90℃~100℃の範囲の高温まで、(例えば、10秒などの短い時間増分の間)上昇させる。特定の場合には、温度を高温または低温に上昇または低下させるために要する時間は2分以下である。特定の場合には、温度を高温または低温に上昇または低下させるために要する時間は1分以下である。
特定の場合には、コンジュゲーション反応を特定の時間増分で特定の回数、変化させた(例えば、上昇させたまたは低下させた)pHに曝露させる。例えば、一例では、pHを、約1、約2、約3、約4、または約5上昇または低下させる。一例では、pHを約1~約2、約2~約3、約3~約4、または約4~約5上昇させる。したがって、例えば、pHを(例えば、約4から)約5、約6、約7、約8、または約9まで上昇させることができる。pHはまた、(例えば、約5から)約6、約7、約8、または約9まで上昇させることができる。pHはまた、(例えば、約9から)約8、約7、約6、約5、または約4に低下させることができる。
特定の場合には、パルス(例えば、変化させた温度及び/またはpHへの曝露)は約30秒、約1分、約2分、約3分、約4分、約5分、約6分、約7分、約8分、約9分、約10分、約15分、約30分、約1時間、約1.5時間、または約2時間生じる。パルス(例えば、変化させた温度への曝露及び/または)はまた、例えば、約30秒~約1分間、約1分間~約2分間、約2分間~約3分間、約3分間~約4分間、約4分間~約5分間、約6分間~約7分間、約7分間~約8分間、約8分間~約9分間、または約9分間~約10分間生じ得る。パルス(例えば、変化させた温度への曝露及び/または)はまた、例えば、約1分間~10分間、約1分間~15分間、約1分間~30分間、約1分間~1時間、約1分間~約1.5時間、または約1分間~約2時間生じ得る。パルス(例えば、変化させた温度への曝露及び/または)はまた、例えば、約1分間~5分間、または約5分間~10分間、約10分間~約15分間、約15分間~約30分間、約30分間~約1時間、約1時間~約1.5時間、または約1.5時間~約2時間生じ得る。特定の場合には、パルス(例えば、変化させた温度及び/またはpHへの曝露)は、2時間、1時間、30分、20分、または15分を超えない。
特定の場合には、パルス(例えば、変化させた温度及び/またはpHへの曝露)は1回生じる。特定の場合には、パルス(例えば、変化させた温度への曝露及び/または)は、2回、3回、4回、5回、6回、7回、8回、9回、または10回繰り返される。特定の場合には、パルス(例えば、変化させた温度への曝露及び/または)は1回~5回生じる。特定の場合には、パルス(例えば、変化させた温度への曝露及び/または)は2~20回または5~10回生じる。
連続ADC処理(例えば、SPTFF及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用すること)は、インラインモニタリングプロセスと共に、またはインラインモニタリングプロセスなしで使用することができる(後述する)。
III.インラインプロセス自動化技術(インラインPAT)
抗体薬物コンジュゲート(ADC)を形成及び処理するために使用されるインラインプロセス自動化技術が、本明細書にて提供される。このような技術は直接測定を提供して、オフラインアッセイを不要にし、オペレーターによる材料の取扱いを減少させることができる。インラインモニタリングをADC(タンパク質)濃度及び遊離薬物の除去のモニタリングに使用することができる。これは、プロセス(例えば、精製プロセス)に使用される比容積またはダイアフィルトレーション容量(diavolume)数に基づく代わりに、インラインの測定値より得られたデータに基づくADCの最終濃度を標的とすることを可能にする。PATの実施により、制御及び検出感度を向上させることが可能となり(例えば、定常運転中の変化を使用して、生成物品質に影響を及ぼす前に問題を検知することができる)、多数のPATモジュール(例えば、FlowVPE、UVセンサ、pHメーター、導電率計、圧力センサ、または流量計)を使用することにより、個々の単位操作全体にわたり堅牢なプロセス性能を保証することができる。
抗体薬物コンジュゲート(ADC)を形成及び処理するために使用されるインラインプロセス自動化技術が、本明細書にて提供される。このような技術は直接測定を提供して、オフラインアッセイを不要にし、オペレーターによる材料の取扱いを減少させることができる。インラインモニタリングをADC(タンパク質)濃度及び遊離薬物の除去のモニタリングに使用することができる。これは、プロセス(例えば、精製プロセス)に使用される比容積またはダイアフィルトレーション容量(diavolume)数に基づく代わりに、インラインの測定値より得られたデータに基づくADCの最終濃度を標的とすることを可能にする。PATの実施により、制御及び検出感度を向上させることが可能となり(例えば、定常運転中の変化を使用して、生成物品質に影響を及ぼす前に問題を検知することができる)、多数のPATモジュール(例えば、FlowVPE、UVセンサ、pHメーター、導電率計、圧力センサ、または流量計)を使用することにより、個々の単位操作全体にわたり堅牢なプロセス性能を保証することができる。
インラインモニタリングを、例を挙げると、例えばin-situ反応及び/またはADCコンジュゲーション反応(例えば、連続コンジュゲーション反応またはバッチコンジュゲーション反応)における任意のポンプからの供給流中の流量をモニタリングするために使用することができる。インラインモニタリングを、例えば、in-situ反応及び/またはADCコンジュゲーション反応(例えば、連続コンジュゲーション反応またはバッチコンジュゲーション反応)に添加する成分の濃度をモニタリングするために使用することができる。このようなモニタリングは、反応の化学量論に対する適切な制御を確実にすることができる。インラインモニタリングは、例えば、抗体もしくはその抗原結合断片、薬物、リンカー、リンカーに結合した薬物、リンカーに結合した抗体もしくはその抗原結合断片及び/またはコンジュゲーションバッファーの流量または濃度をモニタリングすることができる。インラインモニタリングは、コンジュゲーション反応バッファー内への抗体またはその抗原結合断片の濃度の流量をモニタリングすることができる。
インラインモニタリングはまた、例えば、コンジュゲーションバッファーの添加を停止することによって、コンジュゲーションバッファーの循環を停止することによって、及び/またはコンジュゲーションバッファーのすすぎ落としまたは除去を開始することによって、コンジュゲーション反応を停止する時点を決定するためなどにも使用できる。本明細書にて提供されるいくつかの実施形態では、非コンジュゲート薬物またはリンカーに結合した非コンジュゲート薬物のインラインモニタリングを使用することができる。非コンジュゲート薬物またはリンカーに結合した非コンジュゲート薬物の測定値を、コンジュゲーション反応において達成される抗体あたりの薬物の平均数(DAR)を推測するために使用することができる。したがって、コンジュゲーション反応を、標的のDARに達したときに停止することができる。
インラインモニタリングはまた、ADCの濃縮及び/または精製をモニタリングするために使用することができる。例えば、インラインモニタリングは、例示的な図4に示すILC及び/またはTFF2 ILDFプロセスの前後または例示的な図10に示すILCまたはTFF3 ILDFプロセスの前後に使用することができる。濃縮及び/または精製は、ろ過(例えば、限外ろ過、ダイアフィルトレーション)を使用することができる。ろ過は、シングルパス・タンジェンシャルフローろ過(SPTFF)を含むタンジェンシャルフローろ過であり得る。ろ過は、向流ダイアフィルトレーションであり得る。ろ過をモニタリングするために使用する場合、インラインモニタリングは、保持液または透過液のいずれかに存在する分析対象を測定するために使用することができる。したがって、例えば、保持液中の非コンジュゲート薬物またはリンカーに結合した非コンジュゲート薬物のインラインモニタリングは、ADCの精製の程度を評価するために使用することができる。非コンジュゲート薬物またはリンカーに結合した非コンジュゲート薬物のレベルは、コンジュゲーション反応の直後の保持液中においては高いが、精製後の保持液中では低い場合がある(例えば、図12を参照のこと)。保持液または透過液におけるADCのインラインモニタリングは、濃縮及び/または精製プロセス中のADCの損失を評価するために使用することができる(例えば、図12を参照のこと)。
精製は、クロマトグラフィー(例えば、フロースルーカラムクロマトグラフィー)を使用することもできる。クロマトグラフィーカラムの終端でのインラインモニタリングは、例えば、ADCレベルを測定することができ、カラムが過負荷であるとき、またはADCのブレイクスルーがあるときを特定するために使用することができる。
インラインモニタリングはまた、pHを測定するためにも使用することができ、例えば、バッファー交換の完全性を判定するために使用することができる(例えば、図12を参照のこと)。
例示的なインラインモニタリング技術としては、例えば、フーリエ変換赤外(FTIR)フローセル、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)、または超高速液体クロマトグラフィー(UPLC)の使用が挙げられる。
インラインモニタリング技術は、例えば、FlowVPEまたはUVセンサを使用することができる。いくつかの実施形態では、FlowVPEを使用してインラインモニタリングを実施する。FlowVPEは連続モニタリングのためにフローセルを使用する。
タンジェンシャルフローろ過(例えば、シングルパス・タンジェンシャルフローろ過(SPTFF))の有効性は、FlowVPE、UVセンサ、pHメーター、導電率計、圧力センサ、流量計などを用いてインラインでモニタリングすることができる。向流ダイアフィルトレーションの有効性もまた、FlowVPE、UVセンサ、pHメーター、導電率計、圧力センサ、流量計などを用いてインラインでモニタリングすることができる。
インラインモニタリングプロセスは、例えばシングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用する連続コンジュゲーションプロセス(上述)と組み合わせて、またはバッチコンジュゲーションプロセス(これらは当該技術分野で既知である)と組み合わせて使用することができる。
IV.抗体薬物コンジュゲート(ADC)
本明細書にて提供される場合、抗体薬物コンジュゲート(ADC)は細胞結合物質、リンカー、及び薬物を含み得る。
本明細書にて提供される場合、抗体薬物コンジュゲート(ADC)は細胞結合物質、リンカー、及び薬物を含み得る。
細胞結合物質は、抗体またはその抗原結合断片、例えば、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片であり得る。細胞結合物質(例えば、抗体またはその抗原結合断片)は、ヒト化することができる。細胞結合物質(例えば、抗体またはその抗原結合断片)は、ヒトであり得る。
細胞結合物質(例えば、抗体またはその抗原結合断片)は、ヒトCD37、CD33、FOLR1、CD123、CD19、cMET、ADAM9、またはHER2に特異的に結合し得る。
細胞結合物質(例えば、抗体またはその抗原結合断片)は、表1に提供される抗体の6つのCDRを含み得る。
表1:抗体の相補性決定領域配列
細胞結合物質(例えば、抗体またはその抗原結合断片)は、表2に提供される抗体の可変重鎖及び/または可変軽鎖を含み得る。いくつかの実施形態では、細胞結合物質(例えば、抗体またはその抗原結合断片)は、表2に提供される抗体の可変重鎖及び可変軽鎖のCDR(例えば、Kabat定義、AbM定義、またはChothia定義CDR)を含む。
表2:抗体の可変重鎖配列及び可変軽鎖配列
細胞結合物質(例えば、抗体またはその抗原結合断片)は、表3に提供される抗体の重鎖及び/または軽鎖を含み得る。
表3:抗体の重鎖配列及び軽鎖配列
特定の実施形態では、抗FOLR1抗体は、10801 University Boulevard,Manassas,VA 20110に所在するAmerican Type Culture Collection(ATCC)に、ブダペスト条約の下で2010年4月7日に寄託され、ATCC寄託番号がPTA-10772及びPTA-10773または10774であるプラスミドによってコードされる。
細胞結合物質(例えば、抗体またはその抗原結合断片)は、CD37-3、huMovl9、Z4681A、G4732A、huB4、huCMET-27、huADAM9、またはHerceptin(トラスツズマブ)であり得る。
薬物は細胞毒性物質であり得る。細胞毒性物質は、細胞の死をもたらす、または細胞死を誘導する、または何らかの方法で細胞生存能を低下させるあらゆる化合物であり得、例えば、メイタンシノイド、メイタンシノイド類似体、ベンゾジアゼピン(例えば、インドリノ-ベンゾジアゼピン(IGN)またはピロロベンゾジアゼピン(PBD))、タキソイド、CC-1065及びCC-1065類似体、デュオカルマイシン及びデュオカルマイシン類似体、エンジイン(例えば、カリケアマイシン)、ドラスタチン及びドラスタチン類似体(アウリスタチンを含む)、トメイマイシン誘導体、レプトマイシン誘導体、メトトレキサート、シスプラチン、カルボプラチン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メルファラン、マイトマイシンC、クロラムブシルならびにモルホリノドキソルビシンが含まれる。一実施形態では、メイタンシノイドはDM1であり得る。別の実施形態では、メイタンシノイドはDM4であり得る。一実施形態では、インドリノ-ベンゾジアゼピンはDGN462であり得る。別の実施形態では、インドリノ-ベンゾジアゼピンはDGN549であり得る。他の実施形態では、ピロロベンゾジアゼピンは、タリリン、テシリン、SJG136、またはSGD1882であり得る。
好適な連結基は当該技術分野において周知であり、例えば、ジスルフィド基、チオエーテル基、酸不安定基、感光性基、ペプチダーゼ不安定基及びエステラーゼ不安定基が含まれる。リンカー分子としては、例えば、N-スクシンイミジル3-(2-ピリジルジチオ)プロピオナート(SPDP)(例えば、Carlsson et al.,Biochem.J.,173:723-737(1978)を参照のこと)、N-スクシンイミジル4-(2-ピリジルジチオ)ブタノアート(SPDB)(例えば、米国特許第4,563,304号を参照のこと)、N-スクシンイミジル4-(2-ピリジルジチオ)2-スルホブタノアート(スルホ-SPDB)(例えば、米国出願公開第20090274713号を参照のこと)、N-スクシンイミジル4-(2-ピリジルジチオ)ペンタノアート(SPP)(例えば、CAS登録番号341498-08-6を参照のこと)、2-イミノチオランまたはアセチルコハク酸無水物が挙げられる。リンカーは、SMCC、sSPDB、またはペプチドリンカーであり得る。
ADCは抗体あたり複数の薬物を含有し得る。抗体あたりの薬物数は多くの場合、薬物抗体比(DAR)と称される。一態様では、細胞結合物質に結合できる薬物分子の数は、平均すると約2~約8であり得る。したがって、例として、本明細書で提供されるプロセスは、約3~約4のDARを標的とすることができる。
いくつかの実施形態では、ADCは「IMGN853」である。本明細書で使用する場合、「IMGN853」はhuMovl9抗体、スルホSPDBリンカー、及びDM4メイタンシノイドを含有するADCを指す。huMovl9(M9346A)は、American Type Culture Collection(ATCC)にPTA-10772として寄託されたプラスミドによってコードされる重鎖のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む重鎖、及び(ii)ATCCにPTA-10774として寄託されたプラスミドによってコードされる軽鎖のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む軽鎖を含有する。IMGN853はWO2011/106528に記載されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、ADCは「IMGN779」である。本明細書で使用するとき、「IMGN779」は、Z4681A抗体、スルホSPDBリンカー、及びインドリノ-ベンゾジアゼピンDGN462を含有するADCを指す。
いくつかの実施形態では、ADCは「IMGN632」である。本明細書で使用する場合、「IMGN632」は図11に示すADC組成物を指す。ADC組成物は、スルホン化変種のhuCD123-6Gv4.7(「G4723A」)抗体あたり平均1.5~2.1のDGN549-C細胞毒性物質を含むADCを含む(図11、上部パネル)。ADC組成物は、非スルホン化ADC(図11の下部パネルに示すモノイミン構造)も含み得る。
ADAM9に結合する例示的なADCは、PCT/US2017/067823(WO2018119196として公開されている)に開示されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。ADAM9に結合する例示的なADCはまた、2018年6月28日に出願された米国出願第62/691,342号に開示されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。cMETに結合する例示的なADCは、PCT/US2018/012168(WO2018129029として公開されている)に開示されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。CD19に結合する例示的なADCは、WO2012156455に開示されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
V.実施例
実施例1:IMGN853のコンジュゲーションのための連続コンジュゲーションプロセス
抗体薬物コンジュゲート(ADC)のラージスケール製造の処理時間を減少させ収率を向上させるために、連続コンジュゲーションプロセスが開発された。連続コンジュゲーションでは、処理段階は同時に起こる。精製段階及びバッファー交換段階中のコンジュゲートの再循環、ならびにバッチコンジュゲーション中に用いられた中間保持段階を、連続コンジュゲーションを使用して省略した。このようにしてプロセスを4~5日間連続して実施し、TFF精製段階を通過した後にコンジュゲートを直接製剤した。加えて、インラインプロセス解析工学(PAT)システムを使用することでコンジュゲートの直接測定が可能となり、そのため、オフラインアッセイ及びオペレーターによる材料の取扱いが不要となった。さらに、処理時間が削減されたので大量のコンジュゲートを生成するための大型装置への要求は不要となり、大量の生成物を生成するために、より小さな装置及びより短い処理時間で十分であった。加えて、最終的に生成したコンジュゲートの所与の量に関して、連続処理を使用して生成した場合、生成物品質プロファイルはより均一であった。対照的に、バルクコンジュゲーションにおける複数のバッチの必要性は、生成物品質におけるバッチ間変動の増加の可能性をもたらす。
実施例1:IMGN853のコンジュゲーションのための連続コンジュゲーションプロセス
抗体薬物コンジュゲート(ADC)のラージスケール製造の処理時間を減少させ収率を向上させるために、連続コンジュゲーションプロセスが開発された。連続コンジュゲーションでは、処理段階は同時に起こる。精製段階及びバッファー交換段階中のコンジュゲートの再循環、ならびにバッチコンジュゲーション中に用いられた中間保持段階を、連続コンジュゲーションを使用して省略した。このようにしてプロセスを4~5日間連続して実施し、TFF精製段階を通過した後にコンジュゲートを直接製剤した。加えて、インラインプロセス解析工学(PAT)システムを使用することでコンジュゲートの直接測定が可能となり、そのため、オフラインアッセイ及びオペレーターによる材料の取扱いが不要となった。さらに、処理時間が削減されたので大量のコンジュゲートを生成するための大型装置への要求は不要となり、大量の生成物を生成するために、より小さな装置及びより短い処理時間で十分であった。加えて、最終的に生成したコンジュゲートの所与の量に関して、連続処理を使用して生成した場合、生成物品質プロファイルはより均一であった。対照的に、バルクコンジュゲーションにおける複数のバッチの必要性は、生成物品質におけるバッチ間変動の増加の可能性をもたらす。
ADC「IMGN853」のコンジュゲーションのための連続コンジュゲーションプロセスは、図4に示されるフローチャートに詳述されている。IMGN853は、スルホ-SPDBリンカーを介してDM4メイタンシノイド薬物にコンジュゲートした抗FOLR1抗体(「huMovl9」)を含有する。IMGN853はWO2011/106528に記載されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
実施例1A:フローケミストリー試験
従来のIMGN853のコンジュゲーションは、70%N,N-ジメチルアセトアミド(DMA)中のメイタンシノイド薬物DM4とN-スクシンイミジル4-(2-ピリジルジチオ)-2-スルホブタノアート(sSPDB)リンカーとの間のin-situ反応を含む。適切な量のDM4及びsSPDB原液を、in-situ反応容器に添加する。追加のDMA(溶媒)をin-situ容器に添加して、70体積%のDMAを標的とする。in-situ反応容器に添加する最後の反応物質は、反応バッファーである。反応バッファーを添加後、in-situ反応を開始させ、60~120分間混合する。次いで、in-situ成分を、反応バッファー中にダイアフィルトレーションしたM9346A(huMovl9)抗体を含有するコンジュゲーション容器に添加する。すべての成分を混合し、コンジュゲーション反応を一晩穏やかに混合しながら進行させ、標的薬物抗体比(DAR)が3.4である所望のコンジュゲートを生成する。
従来のIMGN853のコンジュゲーションは、70%N,N-ジメチルアセトアミド(DMA)中のメイタンシノイド薬物DM4とN-スクシンイミジル4-(2-ピリジルジチオ)-2-スルホブタノアート(sSPDB)リンカーとの間のin-situ反応を含む。適切な量のDM4及びsSPDB原液を、in-situ反応容器に添加する。追加のDMA(溶媒)をin-situ容器に添加して、70体積%のDMAを標的とする。in-situ反応容器に添加する最後の反応物質は、反応バッファーである。反応バッファーを添加後、in-situ反応を開始させ、60~120分間混合する。次いで、in-situ成分を、反応バッファー中にダイアフィルトレーションしたM9346A(huMovl9)抗体を含有するコンジュゲーション容器に添加する。すべての成分を混合し、コンジュゲーション反応を一晩穏やかに混合しながら進行させ、標的薬物抗体比(DAR)が3.4である所望のコンジュゲートを生成する。
この試験では、IMGN853の連続コンジュゲーションを実施した。連続コンジュゲーション反応は、1つの顕著な例外を除いて、同一の化学量論的なIMGN853のすべてのパラメータを使用した。コンジュゲーション反応の反応バッファーのpHを、7.6から8.7に上昇させた。in-situ反応バッファーのpHは変化させず、7.6のままとした。コンジュゲーション反応の反応速度を増加させるため、pHの上昇を開始した。コンジュゲーション反応の標的を18時間とする代わりに、より高いpHのバッファーでは、約4時間でコンジュゲートが生成され、より速い読み出し及びより柔軟な実験プロトコルが可能となった。
連続コンジュゲーション実験については、反応物質を連続的に添加するためにシリンジポンプを使用した。その構成を図5に示す。3つのシリンジポンプを使用した。第1のシリンジポンプは、DMAに溶解したin-situ成分の添加を制御した。これらは、DM4(ペイロード)、sSPDB(リンカー)、及びDMA(追加の溶媒)を含んでいた。これらの3つの成分を化学量論比で組み合わせ、次いで2.5mLのHamilton
Gastightシリンジに吸引した。第2のシリンジポンプはin-situ反応バッファーの添加を計量した。5mLのプラスチックBDシリンジを使用した。1/16’’PEEKチューブを連続コンジュゲーション試験に使用した。in-situ反応バッファー及びDMA成分の供給ラインをインラインスタティックミキサーに供給して、2つの反応物質の適切な混合を確実にした。これら2つの供給流は一体になり、同一のチューブ材料のスタティックミキサーから単一の1本のチューブを通って出て行った。in-situバッファー及びDMA成分の流量は、それぞれ952.9nL/分及び2.2233μL/分であった。90分間のin-situ反応を標的とするには、2つの入口流の流量及び使用されるチューブの断面積に基づいて、18.6センチメートルのPEEKチューブが必要であった。in-situ反応が生じるこの長さのPEEKチューブを、第2のインラインスタティックミキサーに供給した。第2のスタティックミキサーへの他の入口は、第3のシリンジポンプからのものであった。第3のシリンジは、抗体及びコンジュゲーション反応バッファー(pH8.7)の添加を制御した。抗体及びコンジュゲーション反応バッファーを合わせて、30mLのプラスチックBDシリンジに吸引した。同一のPEEKチューブを用いて、抗体及びコンジュゲーション反応バッファーを24.615μL/分の流量で供給した。in-situスタティックミキサーと同様に、第2のスタティックミキサーは、コンジュゲーション反応成分が十分に混合され単一の流出流に集約されることを確実にした。コンジュゲーション反応物質は長さ4.3メートルの同一の1本のPEEKチューブ内のスタティックミキサーから出て行き、標的の4時間のコンジュゲーション反応持続時間を達成した。
Gastightシリンジに吸引した。第2のシリンジポンプはin-situ反応バッファーの添加を計量した。5mLのプラスチックBDシリンジを使用した。1/16’’PEEKチューブを連続コンジュゲーション試験に使用した。in-situ反応バッファー及びDMA成分の供給ラインをインラインスタティックミキサーに供給して、2つの反応物質の適切な混合を確実にした。これら2つの供給流は一体になり、同一のチューブ材料のスタティックミキサーから単一の1本のチューブを通って出て行った。in-situバッファー及びDMA成分の流量は、それぞれ952.9nL/分及び2.2233μL/分であった。90分間のin-situ反応を標的とするには、2つの入口流の流量及び使用されるチューブの断面積に基づいて、18.6センチメートルのPEEKチューブが必要であった。in-situ反応が生じるこの長さのPEEKチューブを、第2のインラインスタティックミキサーに供給した。第2のスタティックミキサーへの他の入口は、第3のシリンジポンプからのものであった。第3のシリンジは、抗体及びコンジュゲーション反応バッファー(pH8.7)の添加を制御した。抗体及びコンジュゲーション反応バッファーを合わせて、30mLのプラスチックBDシリンジに吸引した。同一のPEEKチューブを用いて、抗体及びコンジュゲーション反応バッファーを24.615μL/分の流量で供給した。in-situスタティックミキサーと同様に、第2のスタティックミキサーは、コンジュゲーション反応成分が十分に混合され単一の流出流に集約されることを確実にした。コンジュゲーション反応物質は長さ4.3メートルの同一の1本のPEEKチューブ内のスタティックミキサーから出て行き、標的の4時間のコンジュゲーション反応持続時間を達成した。
試験は、いずれの流出の開始前に3つのシリンジすべてを充填することによって実施した。まず、in-situ反応バッファー(シリンジ2)及びDMA成分(シリンジ1)のポンプを同時に起動した。約90分後、ポンプ3(抗体及びコンジュゲーション反応バッファー)を起動した。最初の2つのポンプの起動から約5時間、コンジュゲートは長さ4.3メートルの1本のPEEKチューブから溶出した。試料の分析を、末端部から直接収集することにより実施した(すなわち、十分に混合されたコンジュゲートのプールからプール試料を収集した)。(いずれのポンプからの)in-situの供給流及びコンジュゲーションの供給流の流量を測定するために、さらに、流量計を使用することができる。流量計は、反応の化学量論に対する適切な制御を確実にするためのプロセス解析工学(PAT)機構として機能する。
第1のIMGN853の連続コンジュゲーション試験の結果を表4に示す。
表4:第1のIMGN853の連続コンジュゲーション試験の結果
試験により、連続コンジュゲーションの生成物品質は、並列で実施した対照(バッチ)の生成物品質と同等であることが示された。生成物品質は、「初期」の時点でのより低い薬物抗体比(DAR)から明らかなように、定常状態へ達するのに多少の時間がかかった。これは、30分の試料もまたわずかに低いDARであった第2の試験において一致した。第2の試験において3時間までに、生成物品質は、(並列バッチの対照と比較して)標的DARで定常状態に達した。DARに加えて、生成物品質はモノマーレベル及び遊離薬物レベルに関しても同等であった。総合すると、これらの結果は連続コンジュゲーションプロセスが良好に実施され、生成物品質に関して並列バッチの対照と同等であることを示す。
第2の試験の結果を表5に示す。
表5:第2のIMGN853の連続コンジュゲーション試験の結果
この試験では上記の試験と同じパラメータを使用したが、プロセスを40時間連続して実施し、100mgの装置の設定を使用してプロセスをより長く実施することにより、10倍多い生成物を生成できることを示した。結果は、コンジュゲートが溶出した30分~3時間の間にコンジュゲートが定常状態に達し、SEC及び遊離薬物分析によって並列バッチの対照と同等であることを示した。3時間での生成物品質は40時間で溶出したコンジュゲートとほぼ同一であり、供給反応物質が反応チューブに供給される限り、連続プロセスが一貫して実施されることを示した。
製造設定において、各個別の反応物質のためのポンプを使用して原液を分離させておくことができる。DM4、sSPDB、またはDMAを単一の供給流に集約する代わりに、各原液を別々に収集容器に供給するか、またはin-situ反応に直接供給することができる。同じことが抗体及びコンジュゲーション反応バッファーにも適用できる。抗体の原液は指定のポンプを使用して供給することができ、一方で、別個のポンプは、他のコンジュゲーション反応成分へのコンジュゲーション反応バッファーの適切な体積比での添加を制御する。
他のPAT機構を使用して、反応の進行につれてin-situ反応またはコンジュゲーション反応のいずれかをモニタリングすることができる。フーリエ変換赤外(FTIR)フローセルをインラインで使用して、in-situ反応またはコンジュゲーション反応の性能をモニタリングすることができる。さらに、複数のFTIRフローセルまたは類似のPATツールを、in-situ反応チューブ及びコンジュゲーション反応チューブに沿った中間位置に配置して、反応が生じたときにその反応をモニタリングすることができる。所望のコンジュゲートの形成を、反応の開始から終了まで始終測定することができる。次いで、PATシグナルの著しい変化のいずれも、in-situ反応またはコンジュゲーション反応(開始、中間または終了)のいずれかにおいてエラーが生じた場所を特定するために使用することができる。コンジュゲートに対しては、代替的PAT機構は、UVセンサ付属またはUVセンサなしの迅速高速液体クロマトグラフィー(HPLC)ベースの機器(超高速液体クロマトグラフィー(UPLC))であり得る。HPLCベースの分析はDARを測定するために使用することができ、一方で、インラインに配置されたUVセンサはコンジュゲーション反応における抗体濃度をモニタリングすることができる。
実施例1B:シングルパス・タンジェンシャルフローろ過試験
従来のタンジェンシャルフローろ過(TFF)は、IMGN853原薬のプロセス中に2回使用される。まず、コンジュゲーション反応(TFF1)の前に、配合した抗体をコンジュゲーション反応バッファーにバッファー交換するためにTFFを実施する。コンジュゲーション反応後、TFFは、粗反応の混合機から残留不純物を除去し、コンジュゲーション反応バッファーから基礎製剤バッファー(TFF2)にコンジュゲートをバッファー交換するために使用される。これらの従来のTFF段階の両方をシングルパスTFF(SPTFF)法に置き換えるために、連続プロセスが開発された。連続SPTFFは、Pall Life Sciencesによるインライン濃縮(ILC)及びインラインダイアフィルトレーション(ILDF)技術を利用した。
従来のタンジェンシャルフローろ過(TFF)は、IMGN853原薬のプロセス中に2回使用される。まず、コンジュゲーション反応(TFF1)の前に、配合した抗体をコンジュゲーション反応バッファーにバッファー交換するためにTFFを実施する。コンジュゲーション反応後、TFFは、粗反応の混合機から残留不純物を除去し、コンジュゲーション反応バッファーから基礎製剤バッファー(TFF2)にコンジュゲートをバッファー交換するために使用される。これらの従来のTFF段階の両方をシングルパスTFF(SPTFF)法に置き換えるために、連続プロセスが開発された。連続SPTFFは、Pall Life Sciencesによるインライン濃縮(ILC)及びインラインダイアフィルトレーション(ILDF)技術を利用した。
TFF1については、従来の処理の間、抗体を30mg/mLで8ダイアフィルトレーション容量に対してダイアフィルトレーションした。従来のTFF1処理の間、流入する抗体を60mg/mLで配合してダイアフィルトレーションの前に希釈した。連続処理の間、60mg/mLで配合した抗体をT-コネクタに供給し、ここに別のポンプがコンジュゲーション反応バッファーを添加して、抗体を30mg/mLの標的濃度まで希釈した。T-コネクタの後、30mg/mLの抗体の単一供給流をILDFモジュールに供給した。ILDFのダイアフィルトレーションのバッファーポンプは、バッファー交換が1回の通過で達成されるように、ILDFモジュールへのコンジュゲーション反応バッファーの添加を制御した。ILDFを出た抗体は、コンジュゲーション反応バッファー中で30mg/mLであった。
この単位操作をモニタリングしかつ制御するために、PAT制御を様々な場所で実施することができる。FlowVPEまたはUVセンサを、配合した抗体供給流(60mg/mL)、希釈した抗体供給流(30mg/mL)、及び/またはコンジュゲーション反応バッファー中のバッファー交換した抗体上に配置することができる。FlowVPEまたはUVセンサを使用して、異なる供給流中の抗体の濃度を測定することができる。加えて、ILDF中のバッファー交換が30mg/mLで起こることを確実にするために、すべての供給流上の流量計を使用して任意の成分の流量をモニタリング及び調整することができる。さらに、ILDF後に伝導性プローブまたはpHプローブを使用して、コンジュゲーション反応バッファーへの抗体のバッファー交換の完了を確実にすることができる。
コンジュゲーション後、従来のTFF2は一般に全て単一の単位操作において生じる3つの段階で実施される。まず、コンジュゲーション後の粗反応混合物を、限外ろ過により(コンジュゲーション反応後の15mg/mLから)30mg/mLに濃縮する。次いで、TFF2のステージIと称されるものの中で、コンジュゲートをコンジュゲーション反応バッファーに対して4ダイアフィルトレーション容量でダイアフィルトレーションする。ステージIの間に、残留不純物を粗反応混合物から除去する。ステージIの直後に、コンジュゲートを8ダイアフィルトレーション容量の基礎製剤バッファーに対してダイアフィルトレーションすることによりステージIIを実施する。ステージIIは厳密にバッファー交換段階として設計されているが、残留不純物の付加的な除去にも寄与する。
SPTFFを利用する連続プロセスについて、3つの別々の段階を評価した。まず、濃縮用のILCモジュールを使用した。ILCはコンジュゲーション反応チューブの後に続いた。1回の通過で、15mg/mLでILCに入るコンジュゲートを30mg/mLに濃縮し、除去された容量は廃棄物へと迂回させた。IMGN853に使用され、この例に記載された濃度係数は2であるが、ダイアフィルトレーションの前にコンジュゲートを濃縮するという同一の結果を得るために、他の濃度係数を代わりに使用することができる。
ILC後、30mg/mLのコンジュゲートの供給流を、ステージIの模倣を意図した第1のILDF(ILDF1)に供給した。ILDF1へのダイアフィルトレーションバッファーの供給はコンジュゲーション反応バッファーであり、1回の通過で所望のダイアフィルトレーション容量数を達成するために適切な容量で添加した。IMGN853については、ステージIは従来の4ダイアフィルトレーション容量で達成した。概念実証試験にて、ダイアフィルトレーションバッファー供給ポンプの流量を調整することによって、ダイアフィルトレーション容量数の関数として残留不純物の除去を評価した。
ILDF1後、コンジュゲートは30mg/mLのままであったが、存在する不純物の濃度は極めて低かった。ILDF1からの出口流を、ダイアフィルトレーションバッファーが基礎製剤バッファーであるILDF2に供給した。コンジュゲートはコンジュゲーション反応バッファー(pH7.6~8.7)中に30mg/mLでILDFに入り、pH5.0のバッファー中に30mg/mLでILDF2を出た。
最初の概念実証試験は、0.11m2の膜面積を有するT01モジュールを用いたPall Life SciencesのILDFモジュールを使用して実施した。コンジュゲートの供給に関して、モジュールを1~4mL/分の間の流量で評価した。ダイアフィルトレーションバッファーの供給速度は、ダイアフィルトレーション容量数が変化するように変化させた。ILDFを用いて、1~13のダイアフィルトレーション容量間の処理を評価した。すべての試験について、コンジュゲート材料を従来のバッチ処理を用いて生成し、アリコート中で凍結した。遊離のメイタンシノイド種を凍結前に定量化し、解凍前に(処理前に)再度定量化した。粗反応混合物をILCに供給した。保持液流の流量を流量計を用いて測定し、モジュール全体で達した濃度係数を算出した。IMGN853のプロセス及びすべての試験を、標的濃度係数2を用いて実施した。
IMGN853のコンジュゲーション反応からの残留不純物のクリアランスを評価するため、ILDFを用いた第1の試験を実施した。バルクコンジュゲーションを実施して、標的の反応条件を使用する試験用の材料を生成した。コンジュゲーション後の粗反応混合物をろ過し、アリコートにして、使用前に凍結した。解凍後、粗反応混合物を、濃度係数2を標的としたシングルパスILCモジュールを用いて濃縮した。粗反応混合物は15mg/mLであり、ILC後のコンジュゲートの標的保持液濃度は30mg/mLであった。次いで、ILC後のコンジュゲートをコンジュゲーション反応バッファーを用いて10mg/mLに希釈して、低開始濃度でILDFモジュールを試験した。ILDFの前の30mg/mLから10mg/mLへの希釈は、コンジュゲート供給物中の遊離薬物不純物の量を効果的に減少させた。このことは、ILCの前後の4つの主要な不純物種についての遊離薬物不純物レベルを示す図6において明らかである。コンジュゲーション後の粗反応混合物は、高い不純物レベルを有する。ILC上で濃縮し、次いで10mg/mLに希釈した後、不純物の濃度は開始濃度の約1/3に低下した。
ステージIにおいて、10mg/mLのコンジュゲートを、7ダイアフィルトレーション容量の処理を標的として4mL/分でT01 ILDFモジュールに供給した。ステージIのダイアフィルトレーションバッファーは、コンジュゲーション反応バッファー(15mMリン酸カリウム、2mM EDTA、pH8.7)であった。試料を保持液ラインから採取してタンパク質濃度を分析し、コンジュゲートが系から溶出した時点を決定した。濃度が定常状態に到達した後、試料を保持液ラインから収集し、RP-HPLCで分析して遊離薬物不純物レベルを定量化し、ILDF上のクリアランスを算出した。図6は、ILDF1段階より採取した3つの試料(初期、後期、及びプール試料)についての結果を示す。初期試料は、ILDF上で定常状態に達した直後に採取した。3つの試料すべてにおける不純物レベルは、規格限界を十分下回った。ILDF上の遊離薬物レベルの減少は著しく、プロセス性能の観点から許容可能であった。
TFF2のステージIを模倣するためのコンジュゲーション反応バッファーに対するILDFの最初の通過の後、次いで、得られたプールされたコンジュゲートを再びモジュールに通過させてステージIIを模倣した。ステージIIの前にモジュールをフラッシュし、次いで、基礎製剤バッファー(10mM酢酸、9%スクロース、pH5.0)に対するダイアフィルトレーションの準備をした。コンジュゲートを4mL/分で供給し、ダイアフィルトレーションバッファー供給流量をILDF全体で13ダイアフィルトレーション容量を標的とするように設定した。この数値は、従来のTFF処理の8ダイアフィルトレーション容量と適合するように選択した。
ILDF1と同様に、試料を保持液ラインから収集して分析し、抗体の濃度を測定した。タンパク質濃度が検出されたとき、生成物を回収して試料を保持液ラインから定期的に採取した。系が定常状態に到達した後、試料を保持液ラインから収集し、RP-HPLCで分析して残留不純物レベルを定量化し、ILDF2上のクリアランスを算出した。生成物がILDF上を通過して回収された後、プールされた材料をろ過し、次いでSEC及びRP-HPLCで分析した。従来のTFF2処理の間のステージIIのバッファー交換を模したILDF2からのすべての試料の結果を図6に示す。遊離薬物レベルはすべて1%未満であり、これは精製原薬(DS)の最終規格より十分低い。これらの結果は、SPTFFによるIMGN853コンジュゲートの連続精製が実施可能であり、かつSEC及びRP-HPLCにより測定される許容可能な生成物品質を備えた精製コンジュゲートを生成することができることを立証している。
次の試験は、15mg/mLの供給濃度で残留不純物を除去するILDFのクリアランス能力を調査した。この濃度は、第1の試験が10mg/mLで十分なクリアランスを示した後に選択した。この試験の間、コンジュゲートにはILCによる処理を施さなかった。バルクコンジュゲーションからの粗コンジュゲート反応混合物を解凍し、ILDFへ直接供給した。T01 ILDFモジュールを使用し、供給流量は4mL/分であった。コンジュゲーション反応バッファーをダイアフィルトレーションバッファーに使用し、供給流量は1ダイアフィルトレーション容量を初期標的とするように設定した。濃度を測定することにより保持液中でコンジュゲートを検出したとき、試料を保持液ラインから収集し、RP-HPLCで分析して遊離薬物レベルを定量化した。結果を図7に示す。コンジュゲーション後の粗反応混合物は、以前のコンジュゲートと一致する高い開始レベルを有していた。1ダイアフィルトレーション容量の処理に相当する1回の通過後、全遊離薬物レベルは、供給物中の約26%から保持液中の7%へと低下した。
次いで、ダイアフィルトレーションの供給流量を、従来のTFF処理の標的の4ダイアフィルトレーション容量と同等である、7ダイアフィルトレーション容量を標的とするように増加させた。系が定常状態に達した後、遊離薬物レベルを保持液中で測定した。図4に示されているように、これらの処理条件下での1回の通過後、遊離薬物レベルは顕著に低下した。最終の全遊離薬物レベルは1%を下回り、これは最終生成物品質の許容範囲内であった。これらの結果はILDFが15mg/mLの供給コンジュゲート濃度で良好に機能し、7ダイアフィルトレーション容量で処理した場合、規格限界を下回るレベルまで不純物を除去することを示す。
比較のために、バッチのTFF2精製プロセスによる遊離薬物不純物のクリアランス値を図8に示す。4ダイアフィルトレーション容量の従来のTFF2バッチ処理後(無地バー)、全遊離薬物の不純物レベルは3.4%であった。従来の4ダイアフィルトレーション容量に相当する7ダイアフィルトレーション容量のSPTFF処理後(ストライプバー)、全遊離薬物レベルは0.7%であった。これら2つの試験の間の1つの重要な違いは、精製中のコンジュゲートの濃度であった。連続処理試験については、ILDFモジュールへのコンジュゲートの供給は15mg/mLであった。従来のバッチTFF処理は30mg/mLで実施した。
ILDFは圧力または生成物品質の懸念なく15mg/mLで十分に機能したため、後続の試験において、ILDFからの収率を最適化するために供給物のコンジュゲート濃度を増加させた。標的の供給コンジュゲート濃度は30mg/mLであった。まず、粗反応混合物を濃度係数2を標的としたILCに通過させた。コンジュゲートを15mg/mLでILCに入れ、30mg/mLの標的まで濃縮させた。30mg/mLで得られたコンジュゲートをILDFに供給する前に回収した。ILDF用のダイアフィルトレーションバッファーはコンジュゲーション反応バッファーであり、供給流量は7ダイアフィルトレーション容量を標的とするように設定した。T01 ILDFモジュール上の30mg/mLのコンジュゲートの供給流量は4mL/分であった。保持液流中にタンパク質が検出された後、コンジュゲートを回収して試料を収集した。この系を定常状態に到達させてから、試料をRP-HPLCにより分析して遊離薬物レベルを定量化しILDF上のクリアランスを算出した。結果を図9に示す。ILDF後の遊離薬物レベルを、ILC前に採取した試料(15mg/mLの粗反応混合物)及びILC後に採取した試料(30mg/mL)と比較した。ILC後の遊離薬物レベルはわずかに上昇し、これはコンジュゲートのわずかな過濃縮に起因していた。ILC後のコンジュゲートは31mg/mLと測定され、濃度係数2.1が使用されたことを示した。得られた遊離薬物レベルはわずかに高かったが、ILDFを正確に評価するために、ILDFへ供給する前に適切な量のコンジュゲーション反応バッファーをプールした材料に添加することによって、コンジュゲートを30mg/mLに希釈した。
4mL/分でILDFから収集しRP-HPLCによって分析した試料は、ILDF前/ILC後の試料からの遊離薬物種のクリアランスを示した。しかしながら、保持液中のコンジュゲートの濃度は約20mg/mLと測定された。コンジュゲート濃度の低下は、カセット内の膜上の生成物の凝集及び蓄積に起因すると仮定した。あらゆる目詰まりを軽減させ系内の圧力を減少させるために、流量を3mL/分に減少させた。それに応じて、7ダイアフィルトレーション容量が処理の標的となるように、ダイアフィルトレーションバッファー供給ポンプの流量も減少させた。ILDFの入口流量を減少させた後、試料を保持液から収集し、濃度及び遊離薬物レベルについて分析した。試料の濃度は22.5mg/mLと測定され、遊離薬物レベルは4mL/分にて測定した試料と同等であった。総合すると、これは7ダイアフィルトレーション容量の処理はコンジュゲートの精製に十分であるが、最大で23mg/mLの保持液中のコンジュゲート濃度が観察されたことを示す。
実施例2:IMGN632のコンジュゲーションのための連続コンジュゲーションプロセス
ADC IMGN632のコンジュゲーションのための連続コンジュゲーションプロセスは、図10に示されるフローチャートに詳述されている。IMGN632は、細胞毒性ペイロードDGN549-Cに結合した抗CD123抗体(「G4732A」)を含有する。IMGN632を図11に示す。
ADC IMGN632のコンジュゲーションのための連続コンジュゲーションプロセスは、図10に示されるフローチャートに詳述されている。IMGN632は、細胞毒性ペイロードDGN549-Cに結合した抗CD123抗体(「G4732A」)を含有する。IMGN632を図11に示す。
実施例2A:フローケミストリー試験
反応の構成は図5に示す構成と同様である。第1のシリンジは、DMAに溶解したDNAアルキル化IGNペイロード「DGN549C」を含有する。第2のシリンジは、亜硫酸水素塩原液及びpH3.3の50mMコハク酸塩を適切な体積比で含有する。これら双方の供給流をスタティックインラインミキサー中で混合し、スルホン化反応を開始する。DGN549Cは、混合流中で1mMの最終濃度を標的とする。得られた混合物は、亜硫酸水素塩のDGNに対する比が1.4モル過剰であるpH3.3の50mMコハク酸塩及び50%DMAである。2本の供給流は単一流でスタティックインラインミキサーを出る。チューブの長さは、3時間をチューブ内の反応物質の滞留時間の標的とするように体積流量に基づいて決定する。スルホン化反応の温度は25℃であり、チューブを温度制御した水浴中に浸漬させることによりその温度を維持する。第3のシリンジ(図5の抗体+バッファーシリンジ)は、5%コハク酸でpH6.0に調整した再酸化した抗CD123抗体(「G4723」)を含有する。適量のDMA及び50mMのリン酸カリウムを、再酸化した抗体混合物に添加する。均一な混合物をシングルシリンジに吸い上げて、インラインでスルホン化反応物と合わせる。
反応の構成は図5に示す構成と同様である。第1のシリンジは、DMAに溶解したDNAアルキル化IGNペイロード「DGN549C」を含有する。第2のシリンジは、亜硫酸水素塩原液及びpH3.3の50mMコハク酸塩を適切な体積比で含有する。これら双方の供給流をスタティックインラインミキサー中で混合し、スルホン化反応を開始する。DGN549Cは、混合流中で1mMの最終濃度を標的とする。得られた混合物は、亜硫酸水素塩のDGNに対する比が1.4モル過剰であるpH3.3の50mMコハク酸塩及び50%DMAである。2本の供給流は単一流でスタティックインラインミキサーを出る。チューブの長さは、3時間をチューブ内の反応物質の滞留時間の標的とするように体積流量に基づいて決定する。スルホン化反応の温度は25℃であり、チューブを温度制御した水浴中に浸漬させることによりその温度を維持する。第3のシリンジ(図5の抗体+バッファーシリンジ)は、5%コハク酸でpH6.0に調整した再酸化した抗CD123抗体(「G4723」)を含有する。適量のDMA及び50mMのリン酸カリウムを、再酸化した抗体混合物に添加する。均一な混合物をシングルシリンジに吸い上げて、インラインでスルホン化反応物と合わせる。
スルホン化供給流は、pH調整した再酸化した抗体と混合される場所である第2のスタティックミキサーに入る。第2のスタティックミキサーを出る最終コンジュゲーションの流れが抗体濃度2.0mg/mL、DMA 15%、及びDGNの抗体に対するモル比3.5の所望の反応条件を達成するように、体積流量を調整する。コンジュゲートのチューブコイルの長さは、20時間のコンジュゲーション反応持続時間を滞留時間の標的とするように選択する。スルホン化のチューブと同様に、コンジュゲーションのチューブを25℃に設定した温度制御した水浴中に浸漬させる。
実施例2B:シングルパス・タンジェンシャルフローろ過試験
pH4.2にpH調整した粗コンジュゲート混合物を、保持液が約8mg/mLとなるように、濃度係数4を標的として2mg/mLの濃度でILCに供給する。8mg/mLの得られたコンジュゲート材料をILDF SPTFFモジュールに供給する。第1のILDFのダイアフィルトレーションバッファーは10%(v/v)のDMAを含む10mMコハク酸塩、pH4.2の50μM亜硫酸水素塩である。ILDFの流量を、従来のバッチ処理中に使用される4ダイアフィルトレーション容量と適合する7ダイアフィルトレーション容量を標的とするように調整する。
pH4.2にpH調整した粗コンジュゲート混合物を、保持液が約8mg/mLとなるように、濃度係数4を標的として2mg/mLの濃度でILCに供給する。8mg/mLの得られたコンジュゲート材料をILDF SPTFFモジュールに供給する。第1のILDFのダイアフィルトレーションバッファーは10%(v/v)のDMAを含む10mMコハク酸塩、pH4.2の50μM亜硫酸水素塩である。ILDFの流量を、従来のバッチ処理中に使用される4ダイアフィルトレーション容量と適合する7ダイアフィルトレーション容量を標的とするように調整する。
第1のILDFの後、ダイアフィルトレーションバッファーが10mMコハク酸塩、pH4.2の50μM亜硫酸水素塩である第2のILDFモジュールに、材料を同一の濃度で供給する。ダイアフィルトレーションバッファー供給の流量及び生成物供給の流量を、従来のバッチTFF処理中に標的とした10ダイアフィルトレーション容量と同様のバッファー交換を達成するために、標的ダイアフィルトレーション容量数が15となるように設定する。
実施例3:パルス処理はIMGN853のコンジュゲーションを改善する
本発明者らは、連続フローコンジュゲーションがパラメータ(例えば、温度またはpH)のパルス変化を可能にすることを発見した。パルスは、反応物質が少量でコイル及びチューブを通過する際に反応が生じる連続フローコンジュゲーションプロセスで可能である。例えば、コイルまたはチューブの短い部分を急速に加熱して(例えば、絶縁によって)または冷却して短い温度の変位、すなわち「パルス」を生成することができる(例えば、図12を参照のこと)。
本発明者らは、連続フローコンジュゲーションがパラメータ(例えば、温度またはpH)のパルス変化を可能にすることを発見した。パルスは、反応物質が少量でコイル及びチューブを通過する際に反応が生じる連続フローコンジュゲーションプロセスで可能である。例えば、コイルまたはチューブの短い部分を急速に加熱して(例えば、絶縁によって)または冷却して短い温度の変位、すなわち「パルス」を生成することができる(例えば、図12を参照のこと)。
発明者らはさらに、反応パラメータにおけるパルス変化は、例えば、変化させたパラメータへのより長い曝露がプロセスに損害を与えるか、または生成物品質に悪影響を及ぼす場合に好都合であることを発見した。例えば、コンジュゲーション反応の温度を長時間にわたり上昇させることは凝集の増加をもたらし得る。対照的に、本明細書に示すように、短い時間のパルスのみにおいてコンジュゲーション反応の温度を上昇させることで、凝集形成の大幅な増加を伴わずに反応速度を増加させることができる。
IMGN853のコンジュゲーションをバイアル中で温度パルスを用いて実施した。このコンジュゲーションには、コンジュゲーション反応成分を含むバイアルを20℃で約30分間載置すること、次いでより高温の水浴中に特定のパルス時間バイアルを載置することでパルスすること、及びその後バイアルを20℃に戻すことが含まれた。次のパルスが生じるまでバイアルを20℃に戻し、プロセスを特定のパルス数繰り返した。4パルスを40℃でそれぞれ7分間、4パルスを42.5℃でそれぞれ7分間、5パルスを50℃でそれぞれ1分間、及び5パルスを60℃でそれぞれ1分間の、4つの異なるパルス条件を評価した。対照反応は、一定の20℃の温度で実施した。
反応完了の程度(%)を用いて反応速度を決定した。定常の20℃の温度では、IMGN853のコンジュゲーション反応が完了に達するのに約8時間を要する。(図14、左パネルを参照のこと)。試験したすべてのパルス条件は反応時間を減少させた(すなわち、より短時間で100%完了に達した)。(図14、左パネルを参照のこと)。60℃で1パルスあたり1分間のパルス(5回)は、高分子量(HMW;凝集体)種の発生を劇的に増加させた。(図14、右パネルを参照のこと)。対照的に、試験した他のすべてのパルス条件はHWM(凝集体)種の発生にほとんど影響を与えなかった。
このデータは、連続フローコンジュゲーションによって可能となる反応条件が、生成物品質を損なうことなく反応速度及び生産性を改善できることを立証する。
実施例4:コンジュゲーションのための抗体の1段階調製
実施例2では、IMGN632の原薬プロセスは、コンジュゲーションのためのG4723A抗体を調製するための2つの段階、すなわち還元及び再酸化を含む(図10、左上の枠)。G4723A抗体の還元は天然のシステイン間の鎖間ジスルフィドを還元し、C442改変システイン残基上のキャッピング基を除去する。この段階は、25モル当量のTCEPのG4723A抗体への添加を含む。還元反応後、還元された抗体混合物をバッファー交換して任意の残留TCEPを除去し、再酸化反応のための抗体を調製する。再酸化段階は、還元されたG4723A抗体に8モル当量のDHAAを添加して、抗体の鎖間ジスルフィドを再形成することを含む。この反応は、C442改変システイン残基を、マレイミド官能基を介してペイロードとコンジュゲートできる遊離チオールの状態とする。
実施例2では、IMGN632の原薬プロセスは、コンジュゲーションのためのG4723A抗体を調製するための2つの段階、すなわち還元及び再酸化を含む(図10、左上の枠)。G4723A抗体の還元は天然のシステイン間の鎖間ジスルフィドを還元し、C442改変システイン残基上のキャッピング基を除去する。この段階は、25モル当量のTCEPのG4723A抗体への添加を含む。還元反応後、還元された抗体混合物をバッファー交換して任意の残留TCEPを除去し、再酸化反応のための抗体を調製する。再酸化段階は、還元されたG4723A抗体に8モル当量のDHAAを添加して、抗体の鎖間ジスルフィドを再形成することを含む。この反応は、C442改変システイン残基を、マレイミド官能基を介してペイロードとコンジュゲートできる遊離チオールの状態とする。
連続方式においてこれらの反応を実施することの実現可能性を立証するため、マイクロスケールのフローリアクタを使用してスモールスケール試験を実施した。
実施例4A:還元反応
配合したG4723A抗体がフローリアクタ中で還元され、並列バッチの反応と同様の均一な生成物品質を有する抗体をもたらすことができることを立証するために、還元反応を実施した。
配合したG4723A抗体がフローリアクタ中で還元され、並列バッチの反応と同様の均一な生成物品質を有する抗体をもたらすことができることを立証するために、還元反応を実施した。
G4723A抗体をベースとした150mgの縮小スケールを実施して、フローリアクタ中の連続還元を立証した。51.1mg/mLで配合したG4723A抗体を1本の供給流として使用した。抗体溶液をシリンジに吸引した。pH7.5の50mMリン酸カリウム中に100mMで調製したTCEP-HCl原液を、連続反応のための第2の供給流として追加のpH7.5の50mMリン酸カリウムと合わせた。これは、それらが別々である場合、低流量であり、かつTCEP-HCl原液対pH7.5の供給流である50mMリン酸カリウムの体積比が低いために実施した。還元反応のためには、配合したG4723A抗体を5mg/mLに希釈するため、pH7.5バッファーである追加の50mMリン酸カリウムが必要である。
Harvard Apparatusのシリンジポンプ及び1/16PEEKチューブを用いて反応を設定した。2本の供給流の体積比を、混合後の最終反応の化学量論が標的反応条件、すなわち抗体に対し25モル当量のTCEP-HCl、5mg/mLの抗体となるように選択した。2本の供給流を組み合わせた体積流量を使用して、反応持続時間、すなわちフローリアクタ中の滞留時間が16時間となるために必要なPEEKチューブの長さを算出した。この実験については、並列バッチの対照反応及び連続反応の双方を周囲温度にて実施した。
並列バッチの対照の還元反応は、20mgのG4723A抗体のスケールで設定した。すべての反応パラメータを一致させた。16時間の反応持続時間後、対照反応物及び連続反応物を試料採取して、分析のために標識した。連続還元反応物はフローリアクタの出口から試料採取した。バルク対照のバッチ反応物を分析のため試料採取した。
還元反応の特性決定のため、抗体上の遊離チオールと反応しUV分光測定法により検出できるAlexa-MAL 488フルオロフォアで試料を標識した。試料をAlexa-MAL 488と反応させ、SE-HPLCで分析してAlexa-抗体比を算出した。連続反応及び並列の対照反応の結果を表6に示す。
表6:バッチ対連続還元反応
表6に示すデータは、G4723A抗体が従来のバッチ処理及び連続処理によって還元されたことを示す。還元前の配合したG4723A抗体については、Alexa標識は観察されなかった。還元反応中に鎖間ジスルフィドが還元され遊離チオールを形成後に、Alexa-MAL488は遊離チオールと反応してコンジュゲートすることができる。抗体の改変システイン及び天然システインの完全な還元は、10個の標識を生じる。
約7~8個のAlexa-MAL488標識が両方の試料中に検出され、G4723A抗体が還元されたことを示した。これらの結果は、還元反応後に8個のAlexa-MAL 488標識が確認された、以前のより小さなスケールの開発研究に一致する。理論的標的である10個の標識との差異は、スモールスケールにて生じる反応容器中の空気により駆動される多少の再酸化が、遊離チオールにジスルフィドの再形成を生じさせ、Alexa-MAL488とのコンジュゲーションのための利用可能な抗体上の遊離チオール数を減少させることに起因すると考えられる。
後続の試験をより大きなスケールで、約3時間のより短い還元時間を標的にして繰り返した。同様に、これらの試験から生成された抗体をAlexa-MAL488で標識し、SE-HPLCで特性決定して反応効率を比較した。2本の供給流の体積流量を増加させることによって3時間の還元反応時間を標的とした、後続の試験による生成物品質データを表7に示す。
表7:連続還元反応の生成物品質評価
バッチの対照反応及び連続反応の還元反応の程度を比較するAlexa:抗体比に加えて、2つの反応生成物のモノマー値及びHMW値を測定した。表7のデータは、より大きな体積流量を用いたより大きなスケールでは、連続還元反応はバッチの対照と同等であることを示す。さらに、連続反応によって生成された抗体のモノマーは、わずかに増加している。
これらの結果は、還元反応がフローケミストリーを用いて連続方式で問題なく実施され得ることを立証する。
実施例4B:再酸化反応
連続方式において還元されたG4723A抗体が再酸化され得ることを立証するために、再酸化反応を実施した。
連続方式において還元されたG4723A抗体が再酸化され得ることを立証するために、再酸化反応を実施した。
反応及びフローリアクタ装置のスケールのため、再酸化試験への供給に使用する還元された抗体をNAP精製した。IMGN632の製造中、任意の残留TCEP-HClを反応溶液から除去するために、還元された抗体をTFF精製する。TCEP-HClの除去後、コンジュゲーションのために2個の改変C442システイン残基を遊離させている間に、DHAAを反応プールに添加して抗体の鎖間ジスルフィドを再形成する。
再酸化試験については、再酸化反応条件のためにフローリアクタ装置の設置が必要となることから、まず、G4723A抗体をバッチ反応を用いて還元させた。還元反応を、5mg/mLの抗体濃度で抗体に対して25モル当量の同一のTCEP-HClを用いて37℃で1時間実施して、抗体を完全に還元させた。還元反応後、反応物の試料をAlexaで標識して抗体の還元を確認した。
次いで、DHAAの添加前に、還元された抗体をNAP精製して溶液から残留TCEP-HClを除去した。再酸化反応の設定が適切な化学量論比を標的とすることを確実にするために、NAP精製した材料の濃度を測定した。連続再酸化試料を用いて並列バッチの対照反応物を対照として設定できるように、NAP精製した還元された抗体を分割した。
連続再酸化反応については3本の供給流を使用した。1本目はNAP精製した還元された抗体であった。2本目は、DMA中の100mMのDHAA原液を、最終5%(v/v)の反応の標的を標的とするために必要な別のDMAと合わせたものであった。3本目は、NAP精製し還元された抗体を反応のために標的の2.5mg/mL抗体濃度まで希釈する、50mMリン酸カリウムのpH7.5バッファーであった。これら3本の供給流の体積比を、NAP精製し還元された抗体の濃度に基づいて決定した。組み合わされた供給流が混合後に最終的な標的の再酸化反応条件を与えるように、この比を調整した。体積流量は、6時間の反応持続時間を標的とするために必要な1/16PEEKチューブの量を算出するためにも用いた。並列の再酸化反応及び連続再酸化反応の双方を周囲温度で設定した。
50mgの再酸化反応を連続反応及び対照反応のために設定した。3本の供給流の体積流量に基づいて、6時間を標的にするためには合計19.9フィートの1/16PEEKチューブが必要であった。連続再酸化反応では、反応開始の6.5時間後に開始し断続的にフローリアクタの出口より試料採取した。フローリアクタ内の潜在的な背圧に基づいて、反応が定常状態に達することを確実にするために、さらなる時間を与えた。フローリアクタの出口からまたはバッチ再酸化反応のバルクから採取した試料をすべて、Alexa-MAL 488フルオロフォアで標識してSE-HPLCで特性決定した。再酸化反応物を経時的に試料採取して、定常状態が達成されることを確実にした。さらに、シリンジ内に含まれ、連続再酸化反応の供給流のうちの1本として供給され還元された抗体もまた、試験終了後に標識した。試験の持続時間にわたりシリンジ内に位置していた間、還元された抗体が再酸化していないことを確実にするために、この試料を試験した。周囲条件によって潜在的に引き起こされる還元された抗体におけるあらゆる変化を理解するために、この試料を還元後の試料と比較した。この連続再酸化試験の結果を表8に示す。
表8:連続再酸化反応の生成物品質
これらのデータは、連続処理を使用して再酸化反応を問題なく実施できることを示す。フローリアクタ内で実施した再酸化反応は、約2.4個のAlexa-MAL488標識を有する良好な再酸化を示した。バッチの対照反応によるデータは、約2.2個のAlexa-MAL488標識と同等であった。再酸化前の還元された抗体は、DHAAの添加がジスルフィドの再形成を生じさせたことを示す約8個の標識を有していた。Alexa-MAL488とコンジュゲートした残存標識は、コンジュゲーションに使用され得る改変システイン残基である。さらに、表8に示すデータは、還元された抗体が周囲条件下で極めてわずかな再酸化を受けることを示す。還元された抗体は、8.15個の標識で開始し、再酸化試験の持続時間後は7.36個へとわずかに減少した。このデータは、再酸化はDHAAとの反応によって駆動され、反応容器またはバッファー中に存在する空気により駆動されていないことを示す。
総合すると、これらの結果は再酸化反応がフローリアクタ中で連続処理を使用して問題なく達成され得ることを示す。
発明の概要及び要約の項ではなく、発明を実施するための形態の項が、特許請求の範囲を解釈するために使用されることを意図していることを理解されたい。発明の概要及び要約の項は、すべてではないが1つ以上の本発明者(複数可)によって意図されるような本発明の例示的な実施形態を記載でき、したがって、本発明及び添付の特許請求の範囲をいかなる形でも限定することを意図するものではない。
本発明は、特定の機能の実施態様及びそれらの関係を示す機能的構成要素を用いて上述されている。これらの機能的構成要素の境界は、説明の便宜上、本明細書において任意に定義されている。特定の機能及びそれらの関係が適切に実施される限り、代替の境界を定義することができる。
特定の実施形態の前述の説明は、本発明の一般的な性質を十分に明らかにするので、他者は、本技術分野の範囲内の知識を適用することによって、過度の実験を行うことなく、本発明の一般概念から逸脱することなく、そのような特定の実施形態を様々な用途に容易に改変及び/または適応させることができる。したがって、そのような適応及び改変は、本明細書で提示される教示及び指導に基づいて、開示される実施形態の等価物の意味及び範囲内にあることが意図される。本明細書の術語または専門用語は説明の目的のためのものであり、限定の目的のためのものではなく、したがって、本明細書の専門用語または術語は、教示及び指導に照らして当業者によって解釈されるべきであることを理解されたい。
本発明の広さ及び範囲は、上述の例示的な実施形態のいずれによっても限定されるべきではなく、以下の特許請求の範囲及びそれらの等価物に従ってのみ定義されるべきである。
本出願の特許請求の範囲は、親出願または他の関連出願の特許請求の範囲とは異なる。したがって、出願人は、親出願または本出願に関連するあらゆる前の出願においてなされた特許請求の範囲のいかなる放棄を撤回する。したがって、審査官は、いかなるそのような以前の放棄及びそれを回避するためになされた引用文献を再考する必要があり得ることを勧告される。さらに、審査官はまた、本出願においてなされたいかなる放棄も、親出願に読み込まれるべきではなく、または親出願に反して読まれるべきではないことに留意されたい。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
(項目1)
抗体薬物コンジュゲート(ADC)組成物を生成するための連続的方法であって、
(i)抗体またはその抗原結合断片を薬物とコンジュゲートさせてADCを形成すること、
(ii)非コンジュゲート薬物を除去すること、及び
(iii)前記ADCを安定なバッファーに交換すること
を含み、
(i)~(iii)が連続的に実施され、
前記非コンジュゲート薬物を除去し及び/または前記ADCを前記安定なバッファーに交換するために、シングルパス・タンジェンシャルフローろ過(SPTFF)及び/または向流ダイアフィルトレーションが使用される、
前記方法。
(項目2)
前記非コンジュゲート薬物を除去して前記ADCを前記安定なバッファーに交換するために、SPTFF及び/または向流ダイアフィルトレーションが使用される、項目1に記載の方法。
(項目3)
フロースルーカラムクロマトグラフィーが前記非コンジュゲート薬物を除去するために使用され、SPTFF及び/または向流ダイアフィルトレーションが前記ADCを前記安定なバッファーに交換するために使用される、項目1に記載の方法。
(項目4)
前記抗体またはその抗原結合断片の前処理をさらに含む、項目1~3のいずれか1項に記載の方法。
(項目5)
前記抗体またはその抗原結合断片の前記前処理が(i)~(iii)と共に連続的に実施される、項目4に記載の方法。
(項目6)
前記抗体またはその抗原結合断片の前記前処理が、SPTFF及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用して実施され、任意で1つのSPTFF段階または向流ダイアフィルトレーション段階のみが前記前処理に使用される、項目4または5に記載の方法。
(項目7)
前記抗体またはその抗原結合断片の前記前処理が(i)~(iii)の前にバルクで実施される、項目4に記載の方法。
(項目8)
前記方法が、コンジュゲーションのための前記薬物の前処理をさらに含む、項目1~7のいずれか1項に記載の方法。
(項目9)
抗体薬物コンジュゲート(ADC)組成物を生成するための連続的方法であって、
(i)抗体またはその抗原結合断片を前処理すること、
(ii)前記抗体またはその抗原結合断片を薬物とコンジュゲートさせてADCを形成すること、
(iii)非コンジュゲート薬物を除去すること、及び
(iv)前記ADCを安定なバッファーに交換すること
を含み、
(i)~(iv)が連続的に実施され、
前記非コンジュゲート薬物を除去し及び/または前記ADCを前記安定なバッファーに交換するために、シングルパス・タンジェンシャルフローろ過(SPTFF)及び/または向流ダイアフィルトレーションが使用される、
前記方法。
(項目10)
前記抗体またはその抗原結合断片の前記前処理が、前記抗体またはその抗原結合断片をコンジュゲーションのためのバッファーに交換することを含む、項目4~9のいずれか1項に記載の方法。
(項目11)
前記抗体またはその抗原結合断片の前記前処理が、
前記抗体もしくはその抗原結合断片を還元させること及び/または
前記抗体もしくはその抗原結合断片を酸化させることを含み、任意で、
(a)前記還元させること及び/または前記酸化させることが、SPTFFもしくは向流ダイアフィルトレーションを使用せずに達成されるか、または
(b)前記還元させること及び/または前記酸化させることが、1つのSPTFF段階もしくは向流ダイアフィルトレーション段階のみを使用して達成される、
項目4~10のいずれか1項に記載の方法。
(項目12)
連続コンジュゲーションプロセスで抗体薬物コンジュゲート(ADC)を生成するための方法であって、
コンジュゲーション反応の進行中及び少なくとも1つのコンジュゲーション反応生成物(ADC)の形成後、1つ以上のコンジュゲーション反応の反応物質を前記コンジュゲーション反応に添加することを含む、前記方法。
(項目13)
前記コンジュゲーション反応の反応物質が抗体またはその抗原結合断片を含む、項目12に記載の方法。
(項目14)
前記コンジュゲーション反応の反応物質がリンカーに結合した薬物を含む、項目12または13に記載の方法。
(項目15)
前記コンジュゲーション反応の反応物質がリンカーを含む、項目12または13に記載の方法。
(項目16)
前記コンジュゲーション反応の反応物質がリンカーに結合した抗体またはその抗原結合断片を含む、項目12に記載の方法。
(項目17)
前記コンジュゲーション反応の反応物質が薬物を含む、項目12、13、15または16に記載の方法。
(項目18)
前記コンジュゲーション反応がフローリアクタ内で生じる、項目12~17のいずれか1項に記載の方法。
(項目19)
抗体またはその抗原結合断片の前処理をさらに含む、項目12~18のいずれか1項に記載の方法。
(項目20)
前記抗体またはその抗原結合断片の前記前処理が、コンジュゲーション反応と共に連続的に実施される、項目19に記載の方法。
(項目21)
前記抗体またはその抗原結合断片の前記前処理が、SPTFF及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用して実施され、任意で1つのSPTFF段階または向流ダイアフィルトレーション段階のみが前記前処理に使用される、項目19または20に記載の方法。
(項目22)
前記抗体またはその抗原結合断片の前記前処理が、コンジュゲーション反応の前にバルクで実施される、項目19に記載の方法。
(項目23)
前記抗体またはその抗原結合断片の前記前処理が、前記抗体またはその抗原結合断片をコンジュゲーションのためのバッファーに交換することを含む、項目19~22のいずれか1項に記載の方法。
(項目24)
前記抗体またはその抗原結合断片の前記前処理が、前記抗体もしくはその抗原結合断片を還元させること及び/または前記抗体もしくはその抗原結合断片を酸化させることを含む、項目19~23のいずれか1項に記載の方法。
(項目25)
前記ADCがシングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用して濃縮される、項目5~10のいずれか1項に記載の方法。
(項目26)
前記ADCがシングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用して精製される、項目5~11のいずれか1項に記載の方法。
(項目27)
前記ADCがシングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用して製剤バッファーへ移される、項目5~12のいずれか1項に記載の方法。
(項目28)
前記ADCがフロースルークロマトグラフィーを使用して濃縮され、精製され、及び/または製剤バッファーへ移される、項目12~27のいずれか1項に記載の方法。
(項目29)
シングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用することを含む、抗体薬物コンジュゲート(ADC)を濃縮するための方法。
(項目30)
シングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用することを含む、抗体薬物コンジュゲート(ADC)を精製するための方法。
(項目31)
シングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用することを含む、抗体薬物コンジュゲート(ADC)を製剤バッファーへ移すための方法。
(項目32)
前記ADCがバッチコンジュゲーションプロセスで生成される、項目29~31のいずれか1項に記載の方法。
(項目33)
前記ADCが連続コンジュゲーションプロセスで生成される、項目29~31のいずれか1項に記載の方法。
(項目34)
前記シングルパス・タンジェンシャルフローろ過が限外ろ過膜を使用する、項目25、29、32及び33のいずれか1項に記載の方法。
(項目35)
前記シングルパス・タンジェンシャルフローろ過がダイアフィルトレーション膜を使用する、項目26、27、30及び31~33のいずれか1項に記載の方法。
(項目36)
前記方法が前記ADC生成の均一性を向上させる、項目1~35のいずれか1項に記載の方法。
(項目37)
前記方法がADC生成のための時間を減少させる、項目1~36のいずれか1項に記
載の方法。
(項目38)
前記シングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または前記向流ダイアフィルトレーションが、前記ADC生成の均一性を向上させる、項目1~11、21、23~27、及び29~37のいずれか1項に記載の方法。
(項目39)
前記シングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または前記向流ダイアフィルトレーションが、ADCの濃縮、精製または移動のための時間を減少させる、項目1~11、21、23~27、及び29~38のいずれか1項に記載の方法。
(項目40)
前記シングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または前記向流ダイアフィルトレーションが、使用するバッファーの量を減少させる、項目1~11、21、23~27、及び29~39のいずれか1項に記載の方法。
(項目41)
前記方法が分析対象のインラインモニタリングをさらに含む、項目1~40のいずれか1項に記載の方法。
(項目42)
インラインモニタリングを使用してADCコンジュゲーション反応への成分の添加を測定する、抗体薬物コンジュゲート(ADC)を生成するための方法。
(項目43)
前記インラインモニタリングが前記ADCコンジュゲーション反応に添加する成分の濃度を測定する、項目41または42に記載の方法。
(項目44)
前記インラインモニタリングが前記ADCコンジュゲーション反応に添加する成分の流量を測定する、項目41~43のいずれか1項に記載の方法。
(項目45)
前記成分が、抗体もしくはその抗原結合断片、薬物、リンカー、リンカーに結合した薬物、リンカーに結合した抗体もしくはその抗原結合断片及び/またはコンジュゲーションバッファーである、項目42~44のいずれか1項に記載の方法。
(項目46)
前記方法が、in-situ反応への成分の添加を測定するためにインラインモニタリングすることをさらに含む、項目42~44のいずれか1項に記載の方法。
(項目47)
前記成分が薬物、リンカー、及び/またはin-situ反応バッファーである、項目46に記載の方法。
(項目48)
抗体薬物コンジュゲート(ADC)を生成するための方法であって、
分析対象のインラインモニタリングを使用して、
(i)ADCコンジュゲーション反応へのコンジュゲーションバッファーの添加を停止する時点、
(ii)ADCコンジュゲーション反応内のコンジュゲーションバッファーの再循環を停止する時点、及び/または
(iii)ADCコンジュゲーション反応からのコンジュゲーションバッファーのすすぎ落としを開始する時点を決定する、
前記方法。
(項目49)
前記分析対象が非コンジュゲート薬物またはリンカーに結合した非コンジュゲート薬物である、項目48に記載の方法。
(項目50)
ADCコンジュゲーションプロセスの後に抗体薬物コンジュゲート(ADC)を精製するための方法であって、分析対象のインラインモニタリングを含む、前記方法。
(項目51)
前記精製がろ過を含む、項目50に記載の方法。
(項目52)
前記ろ過が限外ろ過またはダイアフィルトレーションであり、任意で、前記ダイアフィルトレーションが向流ダイアフィルトレーションである、項目51に記載の方法。
(項目53)
前記ろ過がタンジェンシャルフローろ過を含む、項目51に記載の方法。
(項目54)
前記タンジェンシャルフローろ過がシングルパス・タンジェンシャルフローろ過である、項目53に記載の方法。
(項目55)
前記分析対象が保持液中に存在する、項目42~54のいずれか1項に記載の方法。
(項目56)
前記分析対象が非コンジュゲート薬物またはリンカーに結合した非コンジュゲート薬物の濃度である、項目55に記載の方法。
(項目57)
前記分析対象がADCまたは抗体もしくはその抗原結合断片の濃度である、項目55または56に記載の方法。
(項目58)
前記分析対象がコンジュゲーション反応バッファーまたはろ過バッファーの成分の濃度である、項目55~57のいずれか1項に記載の方法。
(項目59)
前記分析対象がpHである、項目55~57のいずれか1項に記載の方法。
(項目60)
前記分析対象が透過液中に存在する、項目50~59のいずれか1項に記載の方法。
(項目61)
前記分析対象がADCまたは抗体もしくはその抗原結合断片の濃度である、項目60に記載の方法。
(項目62)
前記分析対象が非コンジュゲート薬物またはリンカーに結合した非コンジュゲート薬物の濃度である、項目60または61に記載の方法。
(項目63)
前記精製がクロマトグラフィーを含み、前記分析対象がクロマトグラフィーカラムの終端で測定される、項目50~62のいずれか1項に記載の方法。
(項目64)
前記分析対象がADCまたは抗体もしくはその抗原結合断片である、項目63に記載の方法。
(項目65)
前記分析対象が非コンジュゲート薬物、リンカーに結合した非コンジュゲート薬物、コンジュゲーション反応バッファーの成分、またはクロマトグラフィーバッファーの成分である、項目63または65に記載の方法。
(項目66)
前記コンジュゲーション反応がバッチコンジュゲーション反応である、項目42~65のいずれか1項に記載の方法。
(項目67)
前記コンジュゲーション反応が連続コンジュゲーション反応である、項目42~65のいずれか1項に記載の方法。
(項目68)
前記インラインモニタリングが、可変経路長技術、フローセル装置、UVセンサ、ラマン分光法、またはフーリエ変換赤外分光法(FITR)を使用して実施される、項目42~67のいずれか1項に記載の方法。
(項目69)
前記分析対象の前記インラインモニタリングがFlowVPE(登録商標)を使用して実施される、項目42~67のいずれか1項に記載の方法。
(項目70)
前記インラインモニタリングがADCの収率を向上させる、項目42~69のいずれか1項に記載の方法。
(項目71)
前記インラインモニタリングがADCの回収率を向上させる、項目42~70のいずれか1項に記載の方法。
(項目72)
前記インラインモニタリングがADC生成のための時間を減少させる、項目42~71のいずれか1項に記載の方法。
(項目73)
前記インラインモニタリングが使用するバッファーの量を減少させる、項目42~72のいずれか1項に記載の方法。
(項目74)
抗体薬物コンジュゲート(ADC)を生成するための方法であって、
分析対象のインラインモニタリングを使用して、ADCコンジュゲーション反応へのコンジュゲーション反応成分の添加を停止する時点を決定する、
前記方法。
(項目75)
前記成分が、抗体もしくはその抗原結合断片、薬物、リンカー、リンカーに結合した薬物、及び/またはコンジュゲーション反応バッファーである、項目74に記載の方法。
(項目76)
前記ADCが抗体を含む、項目1~75のいずれか1項に記載の方法。
(項目77)
前記ADCが抗体の抗原結合断片を含む、項目1~75のいずれか1項に記載の方法。
(項目78)
前記ADCが、CD37、CD33、FOLR1、CD123、CD19、cMET、ADAM9、またはHER2に特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片を含む、項目1~77のいずれか1項に記載の方法。
(項目79)
前記抗体またはその抗原結合断片が、huMovl9、Z4681A、またはG4732AのVH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2、及びVL CDR3を含む、項目78に記載の方法。
(項目80)
前記CDRが、Kabat定義のCDR、Chothia定義のCDR、またはAbM定義のCDRである、項目79に記載の方法。
(項目81)
項目78に記載の方法であって、前記抗体またはその抗原結合断片が、それぞれ配列番号1~6、それぞれ配列番号7~12、それぞれ配列番号13~18、それぞれ配列番号19~24、それぞれ配列番号25~30、またはそれぞれ配列番号31~36の配列を含むVH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2、及びVL CDR3の配列を含む、前記方法。
(項目82)
項目78に記載の方法であって、前記抗体またはその抗原結合断片が、それぞれ配列番号37及び38、それぞれ配列番号37及び39、それぞれ配列番号40及び41、そ
れぞれ配列番号42及び43、それぞれ配列番号44及び45、それぞれ配列番号46及び47、またはそれぞれ配列番号48及び49の配列を含むVH及びVL配列を含む、前記方法。
(項目83)
前記抗体が、それぞれ配列番号50及び51、それぞれ配列番号50及び52、それぞれ配列番号53及び54、またはそれぞれ配列番号55及び56の配列を含む重鎖配列及び軽鎖配列を含む、項目78に記載の方法。
(項目84)
前記ADCが、SMCC、sSPDB、及びペプチドリンカーからなる群から選択されるリンカーを含む、項目1~83のいずれか1項に記載の方法。
(項目85)
前記ADCがメイタンシノイドまたはインドリノ-ベンゾジアゼピンを含む、項目1~84のいずれか1項に記載の方法。
(項目86)
前記メイタンシノイドがDM1またはDM4である、項目85に記載の方法。
(項目87)
前記インドリノ-ベンゾジアゼピンがDGN462またはDGN549である、項目85に記載の方法。
(項目88)
前記ADCが、IMGN529、IMGN779、IMGN853、IMGN632またはKadcylaである、項目1~87のいずれか1項に記載の方法。
(項目89)
IMGN853を生成するための方法であって、
(i)IMGN853を形成するために、huMovl9抗体及びスルホ-SPDBに結合したDM4を連続コンジュゲーションプロセス中で混合することであって、任意でインラインモニタリングを使用してコンジュゲーション反応に添加したhuMovl9抗体の濃度を測定する、前記混合すること、
(ii)任意でシングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用してIMGN853を濃縮することであって、任意でインラインモニタリングを使用して保持液中の非コンジュゲート薬物の濃度を測定する、前記濃縮すること、
(iii)シングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用してIMGN853を精製することであって、任意でインラインモニタリングを使用して保持液中の非コンジュゲート薬物の濃度を測定する、前記精製すること、ならびに
(iv)シングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用して前記IMGN853を製剤バッファーに交換することであって、任意でインラインモニタリングを使用して保持液中の不純物の濃度を測定する、前記交換すること
を含む、前記方法。
(項目90)
IMGN779を生成するための方法であって、
(i)IMGN779を形成するために、Z4681A抗体及びスルホ-SPDBに結合したDGN462を連続コンジュゲーションプロセス中で混合することであって、任意でインラインモニタリングを使用してコンジュゲーション反応に添加したZ4681A抗体の濃度を測定する、前記混合すること、
(ii)任意でシングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用してIMGN779を濃縮することであって、任意でインラインモニタリングを使用して保持液中の非コンジュゲート薬物の濃度を測定する、前記濃縮すること、
(iii)シングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用してIMGN779を精製することであって、任意でインラインモニタリングを使用して保持液中の非コンジュゲート薬物の濃度を測定する、前記精製すること、ならびに
(iv)シングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用して前記IMGN779を製剤バッファーに交換することであって、任意でインラインモニタリングを使用して保持液中の不純物の濃度を測定する、前記交換すること
を含む、前記方法。
(項目91)
IMGN632を生成するための方法であって、
(i)IMGN632を形成するために、G4732A抗体及びスルホン化DNG549Cを連続コンジュゲーションプロセス中で混合すること、
(ii)任意でシングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用してIMGN632を濃縮することであって、任意でインラインモニタリングを使用して保持液中の非コンジュゲート薬物の濃度を測定する、前記濃縮すること、
(iii)シングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用してIMGN632を精製することであって、任意でインラインモニタリングを使用して保持液中の非コンジュゲート薬物の濃度を測定する、前記精製すること、ならびに
(iv)シングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用して前記IMGN632を製剤バッファーに交換することであって、任意でインラインモニタリングを使用して保持液中の不純物の濃度を測定する、前記交換すること
を含み、
任意で前記G4732A抗体が、前記コンジュゲーションプロセスの前に1つのSPTFF段階または向流ダイアフィルトレーション段階のみにおいて還元及び酸化される、
前記方法。
(項目92)
項目1~28または34~91のいずれか1項に記載の方法であって、
コンジュゲーションプロセスの第1の温度を少なくとも5℃高温に上昇させることを含み、前記高温を20分間以下維持する、前記方法。
(項目93)
コンジュゲーションプロセスの第1の温度を少なくとも5℃高温に上昇させることを含み、前記高温を20分間以下維持する、ADCを生成するための方法。
(項目94)
前記高温が55℃以下である、項目92または93に記載の方法。
(項目95)
前記第1の温度を少なくとも10℃上昇させる、項目94に記載の方法。
(項目96)
前記第1の温度を少なくとも15℃上昇させる、項目94に記載の方法。
(項目97)
前記第1の温度を少なくとも20℃上昇させる、項目94に記載の方法。
(項目98)
前記第1の温度を少なくとも30℃上昇させる、項目94に記載の方法。
(項目99)
前記高温が35℃~55℃である、項目92~98のいずれか1項に記載の方法。
(項目100)
前記高温が40℃~50℃である、項目99に記載の方法。
(項目101)
前記第1の温度を前記高温まで上昇させることが2分よりも長くかからない、項目92~100のいずれか1項に記載の方法。
(項目102)
前記第1の温度を前記高温まで上昇させることが1分よりも長くかからない、項目101に記載の方法。
(項目103)
前記高温を任意で前記第1の温度まで低下させることをさらに含む、項目92~100のいずれか1項に記載の方法。
(項目104)
前記高温を任意で前記第1の温度まで低下させることが2分よりも長くかからない、項目103に記載の方法。
(項目105)
前記高温を任意で前記第1の温度まで低下させることが1分よりも長くかからない、項目104に記載の方法。
(項目106)
前記第1の温度を前記高温に上昇させ、次いで前記高温を低下させる段階を、少なくとも2回または少なくとも3回繰り返す、項目103~105のいずれか1項に記載の方法。
(項目107)
前記第1の温度を前記高温に上昇させ、次いで前記高温を低下させる段階を、2~20回または5~10回繰り返す、項目103~105のいずれか1項に記載の方法。
(項目108)
項目1~28または34~91のいずれか1項に記載の方法であって、
コンジュゲーションプロセスの第1の温度を少なくとも5℃低温に低下させることを含み、前記低温を20分間以下維持する、
前記方法。
(項目109)
コンジュゲーションプロセスの第1の温度を少なくとも5℃低温に低下させることを含み、前記低温を20分間以下維持する、ADCを生成するための方法。
(項目110)
前記第1の温度を30℃以下低下させる、項目108または109に記載の方法。
(項目111)
前記温度を少なくとも10℃低下させる、項目108~110のいずれか1項に記載の方法。
(項目112)
前記温度を少なくとも15℃低下させる、項目108~110のいずれか1項に記載の方法。
(項目113)
前記温度を少なくとも20℃低下させる、項目108~110のいずれか1項に記載の方法。
(項目114)
前記第1の温度を前記低温まで低下させることが2分よりも長くかからない、項目108~113のいずれか1項に記載の方法。
(項目115)
前記第1の温度を前記低温まで低下させることが1分よりも長くかからない、項目114に記載の方法。
(項目116)
前記低温を任意で前記第1の温度まで上昇させることをさらに含む、項目108~115のいずれか1項に記載の方法。
(項目117)
前記低温を任意で前記第1の温度まで上昇させることが2分よりも長くかからない、項目115に記載の方法。
(項目118)
前記低温を任意で前記第1の温度まで上昇させることが1分よりも長くかからない、項目116に記載の方法。
(項目119)
前記第1の温度を前記低温に低下させ、次いで前記低温を上昇させる段階を、少なくとも2回または少なくとも3回繰り返す、項目116~118のいずれか1項に記載の方法。
(項目120)
前記第1の温度を前記低温に低下させ、次いで前記低温を上昇させる段階を、2~20回または5~10回繰り返す、項目116~118のいずれか1項に記載の方法。
(項目121)
前記高温または前記低温を15分間以下維持する、項目92~120のいずれか1項に記載の方法。
(項目122)
前記高温または前記低温を30秒~15分間維持する、項目92~121のいずれか1項に記載の方法。
(項目123)
前記高温または前記低温を5分~10分間または10分~15分間維持する、項目122に記載の方法。
(項目124)
前記高温または前記低温を1分~5分間維持する、項目122に記載の方法。
(項目125)
項目1~28、または34~124のいずれか1項に記載の方法であって、
コンジュゲーションプロセスの第1のpHを少なくとも0.5変化させたpHに変化させることを含み、前記変化させたpHを20分間以下維持する、
前記方法。
(項目126)
コンジュゲーションプロセスの第1のpHを少なくとも0.5変化させたpHに変化させることを含み、前記変化させたpHを20分間以下維持する、ADCを生成するための方法。
(項目127)
前記第1のpHを少なくとも1上昇させ、任意で、前記変化させたpHが9を超えない、項目125または126に記載の方法。
(項目128)
前記第1のpHを少なくとも2上昇させる、項目127に記載の方法。
(項目129)
前記第1のpHを少なくとも3上昇させる、項目127に記載の方法。
(項目130)
前記第1のpHが少なくとも1低下し、任意で、前記変化させたpHが4を下回らない、項目125または126に記載の方法。
(項目131)
前記第1のpHを少なくとも2低下させる、項目130に記載の方法。
(項目132)
前記第1のpHを少なくとも3低下させる、項目131に記載の方法。
(項目133)
前記変化させたpHを任意で前記第1のpHへ変化させることをさらに含む、項目125~132のいずれか1項に記載の方法。
(項目134)
前記第1のpHを前記変化させたpHに変化させ、次いで前記変化させたpHを変化させる段階を、少なくとも2回または少なくとも3回繰り返す、項目133に記載の方法。
(項目135)
前記第1のpHを前記変化させたpHに変化させ、次いで前記変化させたpHを変化させる段階を、2~20回または5~10回繰り返す、項目133に記載の方法。
(項目136)
前記変化させたpHを15分間以下維持する、項目125~135のいずれか1項に記載の方法。
(項目137)
前記変化させたpHを30秒~15分間維持する、項目125~136のいずれか1項に記載の方法。
(項目138)
前記変化させたpHを5分~10分間または10分~15分間維持する、項目137に記載の方法。
(項目139)
前記変化させたpHを1分~5分間維持する、項目137に記載の方法。
(項目140)
項目1~139のいずれか1項に記載の方法に従って生成されるADC。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
(項目1)
抗体薬物コンジュゲート(ADC)組成物を生成するための連続的方法であって、
(i)抗体またはその抗原結合断片を薬物とコンジュゲートさせてADCを形成すること、
(ii)非コンジュゲート薬物を除去すること、及び
(iii)前記ADCを安定なバッファーに交換すること
を含み、
(i)~(iii)が連続的に実施され、
前記非コンジュゲート薬物を除去し及び/または前記ADCを前記安定なバッファーに交換するために、シングルパス・タンジェンシャルフローろ過(SPTFF)及び/または向流ダイアフィルトレーションが使用される、
前記方法。
(項目2)
前記非コンジュゲート薬物を除去して前記ADCを前記安定なバッファーに交換するために、SPTFF及び/または向流ダイアフィルトレーションが使用される、項目1に記載の方法。
(項目3)
フロースルーカラムクロマトグラフィーが前記非コンジュゲート薬物を除去するために使用され、SPTFF及び/または向流ダイアフィルトレーションが前記ADCを前記安定なバッファーに交換するために使用される、項目1に記載の方法。
(項目4)
前記抗体またはその抗原結合断片の前処理をさらに含む、項目1~3のいずれか1項に記載の方法。
(項目5)
前記抗体またはその抗原結合断片の前記前処理が(i)~(iii)と共に連続的に実施される、項目4に記載の方法。
(項目6)
前記抗体またはその抗原結合断片の前記前処理が、SPTFF及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用して実施され、任意で1つのSPTFF段階または向流ダイアフィルトレーション段階のみが前記前処理に使用される、項目4または5に記載の方法。
(項目7)
前記抗体またはその抗原結合断片の前記前処理が(i)~(iii)の前にバルクで実施される、項目4に記載の方法。
(項目8)
前記方法が、コンジュゲーションのための前記薬物の前処理をさらに含む、項目1~7のいずれか1項に記載の方法。
(項目9)
抗体薬物コンジュゲート(ADC)組成物を生成するための連続的方法であって、
(i)抗体またはその抗原結合断片を前処理すること、
(ii)前記抗体またはその抗原結合断片を薬物とコンジュゲートさせてADCを形成すること、
(iii)非コンジュゲート薬物を除去すること、及び
(iv)前記ADCを安定なバッファーに交換すること
を含み、
(i)~(iv)が連続的に実施され、
前記非コンジュゲート薬物を除去し及び/または前記ADCを前記安定なバッファーに交換するために、シングルパス・タンジェンシャルフローろ過(SPTFF)及び/または向流ダイアフィルトレーションが使用される、
前記方法。
(項目10)
前記抗体またはその抗原結合断片の前記前処理が、前記抗体またはその抗原結合断片をコンジュゲーションのためのバッファーに交換することを含む、項目4~9のいずれか1項に記載の方法。
(項目11)
前記抗体またはその抗原結合断片の前記前処理が、
前記抗体もしくはその抗原結合断片を還元させること及び/または
前記抗体もしくはその抗原結合断片を酸化させることを含み、任意で、
(a)前記還元させること及び/または前記酸化させることが、SPTFFもしくは向流ダイアフィルトレーションを使用せずに達成されるか、または
(b)前記還元させること及び/または前記酸化させることが、1つのSPTFF段階もしくは向流ダイアフィルトレーション段階のみを使用して達成される、
項目4~10のいずれか1項に記載の方法。
(項目12)
連続コンジュゲーションプロセスで抗体薬物コンジュゲート(ADC)を生成するための方法であって、
コンジュゲーション反応の進行中及び少なくとも1つのコンジュゲーション反応生成物(ADC)の形成後、1つ以上のコンジュゲーション反応の反応物質を前記コンジュゲーション反応に添加することを含む、前記方法。
(項目13)
前記コンジュゲーション反応の反応物質が抗体またはその抗原結合断片を含む、項目12に記載の方法。
(項目14)
前記コンジュゲーション反応の反応物質がリンカーに結合した薬物を含む、項目12または13に記載の方法。
(項目15)
前記コンジュゲーション反応の反応物質がリンカーを含む、項目12または13に記載の方法。
(項目16)
前記コンジュゲーション反応の反応物質がリンカーに結合した抗体またはその抗原結合断片を含む、項目12に記載の方法。
(項目17)
前記コンジュゲーション反応の反応物質が薬物を含む、項目12、13、15または16に記載の方法。
(項目18)
前記コンジュゲーション反応がフローリアクタ内で生じる、項目12~17のいずれか1項に記載の方法。
(項目19)
抗体またはその抗原結合断片の前処理をさらに含む、項目12~18のいずれか1項に記載の方法。
(項目20)
前記抗体またはその抗原結合断片の前記前処理が、コンジュゲーション反応と共に連続的に実施される、項目19に記載の方法。
(項目21)
前記抗体またはその抗原結合断片の前記前処理が、SPTFF及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用して実施され、任意で1つのSPTFF段階または向流ダイアフィルトレーション段階のみが前記前処理に使用される、項目19または20に記載の方法。
(項目22)
前記抗体またはその抗原結合断片の前記前処理が、コンジュゲーション反応の前にバルクで実施される、項目19に記載の方法。
(項目23)
前記抗体またはその抗原結合断片の前記前処理が、前記抗体またはその抗原結合断片をコンジュゲーションのためのバッファーに交換することを含む、項目19~22のいずれか1項に記載の方法。
(項目24)
前記抗体またはその抗原結合断片の前記前処理が、前記抗体もしくはその抗原結合断片を還元させること及び/または前記抗体もしくはその抗原結合断片を酸化させることを含む、項目19~23のいずれか1項に記載の方法。
(項目25)
前記ADCがシングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用して濃縮される、項目5~10のいずれか1項に記載の方法。
(項目26)
前記ADCがシングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用して精製される、項目5~11のいずれか1項に記載の方法。
(項目27)
前記ADCがシングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用して製剤バッファーへ移される、項目5~12のいずれか1項に記載の方法。
(項目28)
前記ADCがフロースルークロマトグラフィーを使用して濃縮され、精製され、及び/または製剤バッファーへ移される、項目12~27のいずれか1項に記載の方法。
(項目29)
シングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用することを含む、抗体薬物コンジュゲート(ADC)を濃縮するための方法。
(項目30)
シングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用することを含む、抗体薬物コンジュゲート(ADC)を精製するための方法。
(項目31)
シングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用することを含む、抗体薬物コンジュゲート(ADC)を製剤バッファーへ移すための方法。
(項目32)
前記ADCがバッチコンジュゲーションプロセスで生成される、項目29~31のいずれか1項に記載の方法。
(項目33)
前記ADCが連続コンジュゲーションプロセスで生成される、項目29~31のいずれか1項に記載の方法。
(項目34)
前記シングルパス・タンジェンシャルフローろ過が限外ろ過膜を使用する、項目25、29、32及び33のいずれか1項に記載の方法。
(項目35)
前記シングルパス・タンジェンシャルフローろ過がダイアフィルトレーション膜を使用する、項目26、27、30及び31~33のいずれか1項に記載の方法。
(項目36)
前記方法が前記ADC生成の均一性を向上させる、項目1~35のいずれか1項に記載の方法。
(項目37)
前記方法がADC生成のための時間を減少させる、項目1~36のいずれか1項に記
載の方法。
(項目38)
前記シングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または前記向流ダイアフィルトレーションが、前記ADC生成の均一性を向上させる、項目1~11、21、23~27、及び29~37のいずれか1項に記載の方法。
(項目39)
前記シングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または前記向流ダイアフィルトレーションが、ADCの濃縮、精製または移動のための時間を減少させる、項目1~11、21、23~27、及び29~38のいずれか1項に記載の方法。
(項目40)
前記シングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または前記向流ダイアフィルトレーションが、使用するバッファーの量を減少させる、項目1~11、21、23~27、及び29~39のいずれか1項に記載の方法。
(項目41)
前記方法が分析対象のインラインモニタリングをさらに含む、項目1~40のいずれか1項に記載の方法。
(項目42)
インラインモニタリングを使用してADCコンジュゲーション反応への成分の添加を測定する、抗体薬物コンジュゲート(ADC)を生成するための方法。
(項目43)
前記インラインモニタリングが前記ADCコンジュゲーション反応に添加する成分の濃度を測定する、項目41または42に記載の方法。
(項目44)
前記インラインモニタリングが前記ADCコンジュゲーション反応に添加する成分の流量を測定する、項目41~43のいずれか1項に記載の方法。
(項目45)
前記成分が、抗体もしくはその抗原結合断片、薬物、リンカー、リンカーに結合した薬物、リンカーに結合した抗体もしくはその抗原結合断片及び/またはコンジュゲーションバッファーである、項目42~44のいずれか1項に記載の方法。
(項目46)
前記方法が、in-situ反応への成分の添加を測定するためにインラインモニタリングすることをさらに含む、項目42~44のいずれか1項に記載の方法。
(項目47)
前記成分が薬物、リンカー、及び/またはin-situ反応バッファーである、項目46に記載の方法。
(項目48)
抗体薬物コンジュゲート(ADC)を生成するための方法であって、
分析対象のインラインモニタリングを使用して、
(i)ADCコンジュゲーション反応へのコンジュゲーションバッファーの添加を停止する時点、
(ii)ADCコンジュゲーション反応内のコンジュゲーションバッファーの再循環を停止する時点、及び/または
(iii)ADCコンジュゲーション反応からのコンジュゲーションバッファーのすすぎ落としを開始する時点を決定する、
前記方法。
(項目49)
前記分析対象が非コンジュゲート薬物またはリンカーに結合した非コンジュゲート薬物である、項目48に記載の方法。
(項目50)
ADCコンジュゲーションプロセスの後に抗体薬物コンジュゲート(ADC)を精製するための方法であって、分析対象のインラインモニタリングを含む、前記方法。
(項目51)
前記精製がろ過を含む、項目50に記載の方法。
(項目52)
前記ろ過が限外ろ過またはダイアフィルトレーションであり、任意で、前記ダイアフィルトレーションが向流ダイアフィルトレーションである、項目51に記載の方法。
(項目53)
前記ろ過がタンジェンシャルフローろ過を含む、項目51に記載の方法。
(項目54)
前記タンジェンシャルフローろ過がシングルパス・タンジェンシャルフローろ過である、項目53に記載の方法。
(項目55)
前記分析対象が保持液中に存在する、項目42~54のいずれか1項に記載の方法。
(項目56)
前記分析対象が非コンジュゲート薬物またはリンカーに結合した非コンジュゲート薬物の濃度である、項目55に記載の方法。
(項目57)
前記分析対象がADCまたは抗体もしくはその抗原結合断片の濃度である、項目55または56に記載の方法。
(項目58)
前記分析対象がコンジュゲーション反応バッファーまたはろ過バッファーの成分の濃度である、項目55~57のいずれか1項に記載の方法。
(項目59)
前記分析対象がpHである、項目55~57のいずれか1項に記載の方法。
(項目60)
前記分析対象が透過液中に存在する、項目50~59のいずれか1項に記載の方法。
(項目61)
前記分析対象がADCまたは抗体もしくはその抗原結合断片の濃度である、項目60に記載の方法。
(項目62)
前記分析対象が非コンジュゲート薬物またはリンカーに結合した非コンジュゲート薬物の濃度である、項目60または61に記載の方法。
(項目63)
前記精製がクロマトグラフィーを含み、前記分析対象がクロマトグラフィーカラムの終端で測定される、項目50~62のいずれか1項に記載の方法。
(項目64)
前記分析対象がADCまたは抗体もしくはその抗原結合断片である、項目63に記載の方法。
(項目65)
前記分析対象が非コンジュゲート薬物、リンカーに結合した非コンジュゲート薬物、コンジュゲーション反応バッファーの成分、またはクロマトグラフィーバッファーの成分である、項目63または65に記載の方法。
(項目66)
前記コンジュゲーション反応がバッチコンジュゲーション反応である、項目42~65のいずれか1項に記載の方法。
(項目67)
前記コンジュゲーション反応が連続コンジュゲーション反応である、項目42~65のいずれか1項に記載の方法。
(項目68)
前記インラインモニタリングが、可変経路長技術、フローセル装置、UVセンサ、ラマン分光法、またはフーリエ変換赤外分光法(FITR)を使用して実施される、項目42~67のいずれか1項に記載の方法。
(項目69)
前記分析対象の前記インラインモニタリングがFlowVPE(登録商標)を使用して実施される、項目42~67のいずれか1項に記載の方法。
(項目70)
前記インラインモニタリングがADCの収率を向上させる、項目42~69のいずれか1項に記載の方法。
(項目71)
前記インラインモニタリングがADCの回収率を向上させる、項目42~70のいずれか1項に記載の方法。
(項目72)
前記インラインモニタリングがADC生成のための時間を減少させる、項目42~71のいずれか1項に記載の方法。
(項目73)
前記インラインモニタリングが使用するバッファーの量を減少させる、項目42~72のいずれか1項に記載の方法。
(項目74)
抗体薬物コンジュゲート(ADC)を生成するための方法であって、
分析対象のインラインモニタリングを使用して、ADCコンジュゲーション反応へのコンジュゲーション反応成分の添加を停止する時点を決定する、
前記方法。
(項目75)
前記成分が、抗体もしくはその抗原結合断片、薬物、リンカー、リンカーに結合した薬物、及び/またはコンジュゲーション反応バッファーである、項目74に記載の方法。
(項目76)
前記ADCが抗体を含む、項目1~75のいずれか1項に記載の方法。
(項目77)
前記ADCが抗体の抗原結合断片を含む、項目1~75のいずれか1項に記載の方法。
(項目78)
前記ADCが、CD37、CD33、FOLR1、CD123、CD19、cMET、ADAM9、またはHER2に特異的に結合する抗体もしくは抗原結合断片を含む、項目1~77のいずれか1項に記載の方法。
(項目79)
前記抗体またはその抗原結合断片が、huMovl9、Z4681A、またはG4732AのVH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2、及びVL CDR3を含む、項目78に記載の方法。
(項目80)
前記CDRが、Kabat定義のCDR、Chothia定義のCDR、またはAbM定義のCDRである、項目79に記載の方法。
(項目81)
項目78に記載の方法であって、前記抗体またはその抗原結合断片が、それぞれ配列番号1~6、それぞれ配列番号7~12、それぞれ配列番号13~18、それぞれ配列番号19~24、それぞれ配列番号25~30、またはそれぞれ配列番号31~36の配列を含むVH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2、及びVL CDR3の配列を含む、前記方法。
(項目82)
項目78に記載の方法であって、前記抗体またはその抗原結合断片が、それぞれ配列番号37及び38、それぞれ配列番号37及び39、それぞれ配列番号40及び41、そ
れぞれ配列番号42及び43、それぞれ配列番号44及び45、それぞれ配列番号46及び47、またはそれぞれ配列番号48及び49の配列を含むVH及びVL配列を含む、前記方法。
(項目83)
前記抗体が、それぞれ配列番号50及び51、それぞれ配列番号50及び52、それぞれ配列番号53及び54、またはそれぞれ配列番号55及び56の配列を含む重鎖配列及び軽鎖配列を含む、項目78に記載の方法。
(項目84)
前記ADCが、SMCC、sSPDB、及びペプチドリンカーからなる群から選択されるリンカーを含む、項目1~83のいずれか1項に記載の方法。
(項目85)
前記ADCがメイタンシノイドまたはインドリノ-ベンゾジアゼピンを含む、項目1~84のいずれか1項に記載の方法。
(項目86)
前記メイタンシノイドがDM1またはDM4である、項目85に記載の方法。
(項目87)
前記インドリノ-ベンゾジアゼピンがDGN462またはDGN549である、項目85に記載の方法。
(項目88)
前記ADCが、IMGN529、IMGN779、IMGN853、IMGN632またはKadcylaである、項目1~87のいずれか1項に記載の方法。
(項目89)
IMGN853を生成するための方法であって、
(i)IMGN853を形成するために、huMovl9抗体及びスルホ-SPDBに結合したDM4を連続コンジュゲーションプロセス中で混合することであって、任意でインラインモニタリングを使用してコンジュゲーション反応に添加したhuMovl9抗体の濃度を測定する、前記混合すること、
(ii)任意でシングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用してIMGN853を濃縮することであって、任意でインラインモニタリングを使用して保持液中の非コンジュゲート薬物の濃度を測定する、前記濃縮すること、
(iii)シングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用してIMGN853を精製することであって、任意でインラインモニタリングを使用して保持液中の非コンジュゲート薬物の濃度を測定する、前記精製すること、ならびに
(iv)シングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用して前記IMGN853を製剤バッファーに交換することであって、任意でインラインモニタリングを使用して保持液中の不純物の濃度を測定する、前記交換すること
を含む、前記方法。
(項目90)
IMGN779を生成するための方法であって、
(i)IMGN779を形成するために、Z4681A抗体及びスルホ-SPDBに結合したDGN462を連続コンジュゲーションプロセス中で混合することであって、任意でインラインモニタリングを使用してコンジュゲーション反応に添加したZ4681A抗体の濃度を測定する、前記混合すること、
(ii)任意でシングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用してIMGN779を濃縮することであって、任意でインラインモニタリングを使用して保持液中の非コンジュゲート薬物の濃度を測定する、前記濃縮すること、
(iii)シングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用してIMGN779を精製することであって、任意でインラインモニタリングを使用して保持液中の非コンジュゲート薬物の濃度を測定する、前記精製すること、ならびに
(iv)シングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用して前記IMGN779を製剤バッファーに交換することであって、任意でインラインモニタリングを使用して保持液中の不純物の濃度を測定する、前記交換すること
を含む、前記方法。
(項目91)
IMGN632を生成するための方法であって、
(i)IMGN632を形成するために、G4732A抗体及びスルホン化DNG549Cを連続コンジュゲーションプロセス中で混合すること、
(ii)任意でシングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用してIMGN632を濃縮することであって、任意でインラインモニタリングを使用して保持液中の非コンジュゲート薬物の濃度を測定する、前記濃縮すること、
(iii)シングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用してIMGN632を精製することであって、任意でインラインモニタリングを使用して保持液中の非コンジュゲート薬物の濃度を測定する、前記精製すること、ならびに
(iv)シングルパス・タンジェンシャルフローろ過及び/または向流ダイアフィルトレーションを使用して前記IMGN632を製剤バッファーに交換することであって、任意でインラインモニタリングを使用して保持液中の不純物の濃度を測定する、前記交換すること
を含み、
任意で前記G4732A抗体が、前記コンジュゲーションプロセスの前に1つのSPTFF段階または向流ダイアフィルトレーション段階のみにおいて還元及び酸化される、
前記方法。
(項目92)
項目1~28または34~91のいずれか1項に記載の方法であって、
コンジュゲーションプロセスの第1の温度を少なくとも5℃高温に上昇させることを含み、前記高温を20分間以下維持する、前記方法。
(項目93)
コンジュゲーションプロセスの第1の温度を少なくとも5℃高温に上昇させることを含み、前記高温を20分間以下維持する、ADCを生成するための方法。
(項目94)
前記高温が55℃以下である、項目92または93に記載の方法。
(項目95)
前記第1の温度を少なくとも10℃上昇させる、項目94に記載の方法。
(項目96)
前記第1の温度を少なくとも15℃上昇させる、項目94に記載の方法。
(項目97)
前記第1の温度を少なくとも20℃上昇させる、項目94に記載の方法。
(項目98)
前記第1の温度を少なくとも30℃上昇させる、項目94に記載の方法。
(項目99)
前記高温が35℃~55℃である、項目92~98のいずれか1項に記載の方法。
(項目100)
前記高温が40℃~50℃である、項目99に記載の方法。
(項目101)
前記第1の温度を前記高温まで上昇させることが2分よりも長くかからない、項目92~100のいずれか1項に記載の方法。
(項目102)
前記第1の温度を前記高温まで上昇させることが1分よりも長くかからない、項目101に記載の方法。
(項目103)
前記高温を任意で前記第1の温度まで低下させることをさらに含む、項目92~100のいずれか1項に記載の方法。
(項目104)
前記高温を任意で前記第1の温度まで低下させることが2分よりも長くかからない、項目103に記載の方法。
(項目105)
前記高温を任意で前記第1の温度まで低下させることが1分よりも長くかからない、項目104に記載の方法。
(項目106)
前記第1の温度を前記高温に上昇させ、次いで前記高温を低下させる段階を、少なくとも2回または少なくとも3回繰り返す、項目103~105のいずれか1項に記載の方法。
(項目107)
前記第1の温度を前記高温に上昇させ、次いで前記高温を低下させる段階を、2~20回または5~10回繰り返す、項目103~105のいずれか1項に記載の方法。
(項目108)
項目1~28または34~91のいずれか1項に記載の方法であって、
コンジュゲーションプロセスの第1の温度を少なくとも5℃低温に低下させることを含み、前記低温を20分間以下維持する、
前記方法。
(項目109)
コンジュゲーションプロセスの第1の温度を少なくとも5℃低温に低下させることを含み、前記低温を20分間以下維持する、ADCを生成するための方法。
(項目110)
前記第1の温度を30℃以下低下させる、項目108または109に記載の方法。
(項目111)
前記温度を少なくとも10℃低下させる、項目108~110のいずれか1項に記載の方法。
(項目112)
前記温度を少なくとも15℃低下させる、項目108~110のいずれか1項に記載の方法。
(項目113)
前記温度を少なくとも20℃低下させる、項目108~110のいずれか1項に記載の方法。
(項目114)
前記第1の温度を前記低温まで低下させることが2分よりも長くかからない、項目108~113のいずれか1項に記載の方法。
(項目115)
前記第1の温度を前記低温まで低下させることが1分よりも長くかからない、項目114に記載の方法。
(項目116)
前記低温を任意で前記第1の温度まで上昇させることをさらに含む、項目108~115のいずれか1項に記載の方法。
(項目117)
前記低温を任意で前記第1の温度まで上昇させることが2分よりも長くかからない、項目115に記載の方法。
(項目118)
前記低温を任意で前記第1の温度まで上昇させることが1分よりも長くかからない、項目116に記載の方法。
(項目119)
前記第1の温度を前記低温に低下させ、次いで前記低温を上昇させる段階を、少なくとも2回または少なくとも3回繰り返す、項目116~118のいずれか1項に記載の方法。
(項目120)
前記第1の温度を前記低温に低下させ、次いで前記低温を上昇させる段階を、2~20回または5~10回繰り返す、項目116~118のいずれか1項に記載の方法。
(項目121)
前記高温または前記低温を15分間以下維持する、項目92~120のいずれか1項に記載の方法。
(項目122)
前記高温または前記低温を30秒~15分間維持する、項目92~121のいずれか1項に記載の方法。
(項目123)
前記高温または前記低温を5分~10分間または10分~15分間維持する、項目122に記載の方法。
(項目124)
前記高温または前記低温を1分~5分間維持する、項目122に記載の方法。
(項目125)
項目1~28、または34~124のいずれか1項に記載の方法であって、
コンジュゲーションプロセスの第1のpHを少なくとも0.5変化させたpHに変化させることを含み、前記変化させたpHを20分間以下維持する、
前記方法。
(項目126)
コンジュゲーションプロセスの第1のpHを少なくとも0.5変化させたpHに変化させることを含み、前記変化させたpHを20分間以下維持する、ADCを生成するための方法。
(項目127)
前記第1のpHを少なくとも1上昇させ、任意で、前記変化させたpHが9を超えない、項目125または126に記載の方法。
(項目128)
前記第1のpHを少なくとも2上昇させる、項目127に記載の方法。
(項目129)
前記第1のpHを少なくとも3上昇させる、項目127に記載の方法。
(項目130)
前記第1のpHが少なくとも1低下し、任意で、前記変化させたpHが4を下回らない、項目125または126に記載の方法。
(項目131)
前記第1のpHを少なくとも2低下させる、項目130に記載の方法。
(項目132)
前記第1のpHを少なくとも3低下させる、項目131に記載の方法。
(項目133)
前記変化させたpHを任意で前記第1のpHへ変化させることをさらに含む、項目125~132のいずれか1項に記載の方法。
(項目134)
前記第1のpHを前記変化させたpHに変化させ、次いで前記変化させたpHを変化させる段階を、少なくとも2回または少なくとも3回繰り返す、項目133に記載の方法。
(項目135)
前記第1のpHを前記変化させたpHに変化させ、次いで前記変化させたpHを変化させる段階を、2~20回または5~10回繰り返す、項目133に記載の方法。
(項目136)
前記変化させたpHを15分間以下維持する、項目125~135のいずれか1項に記載の方法。
(項目137)
前記変化させたpHを30秒~15分間維持する、項目125~136のいずれか1項に記載の方法。
(項目138)
前記変化させたpHを5分~10分間または10分~15分間維持する、項目137に記載の方法。
(項目139)
前記変化させたpHを1分~5分間維持する、項目137に記載の方法。
(項目140)
項目1~139のいずれか1項に記載の方法に従って生成されるADC。
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- 明細書に記載の発明。
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