JP2023553216A - 遺伝子操作細胞療法のための標的化サイトカイン構築物 - Google Patents

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モイニハン，ケリー
チェン，ウェイ
ベセッテ，ポール
キンバーリン，クリストファー
マシューソン，ネイサン
アンディー イェウン，イェック
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アシャ バイオセラピューティクス，インク．
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Abstract

本明細書では、疾病、例えば、増殖性疾患、例えば、がんの治療に使用するための、標的化サイトカイン構築物と、標的化サイトカイン構築物を遺伝子操作細胞療法と組み合わせて投与することによる遺伝子操作細胞療法の方法と、が提供される。【選択図】図１

Description

相互参照
本出願は、２０２０年１２月９日に出願された米国仮特許出願第６３／１２３，２８１号の利益を主張するものであり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
一実施形態は、遺伝子操作された細胞に対する標的化サイトカイン構築物であって、（ｉ）遺伝子操作された細胞に外因的に導入されたキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）若しくはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）のドメイン、（ｉｉ）遺伝子操作された細胞の表面に選択的に発現されたタグ分子、（ｉｉｉ）遺伝子操作された細胞に外因的に導入されたＣＡＲの一部であるポリペプチドタグ、（ｉｖ）遺伝子操作された細胞に外因的に導入されたＴＣＲの一部であるポリペプチドタグ、又は（ｖｉ）（ｉ）～（ｖ）の任意の組み合わせのうちの少なくとも１つを標的とする細胞結合ドメインと、サイトカインタンパク質又はその機能的断片若しくはバリアントと、を含む、標的化サイトカイン構築物を提供する。
いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物は、遺伝子操作されていない細胞の活性化と比較して、１０倍以上の効力で、遺伝子操作された細胞を選択的に活性化する。いくつかの実施形態では、効力は、ｐＳＴＡＴ５活性化アッセイ又はｐＳＴＡＴ３活性化アッセイによって測定される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲのドメインは、ｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、遺伝子操作されていない細胞は、その表面に、ＣＡＲ、ＴＣＲ、又はタグ分子を発現しない。いくつかの実施形態では、細胞結合ドメインは、抗体又はその抗原結合断片を含む。いくつかの実施形態では、抗体又はその抗原結合断片は、二価又は一価である。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１、若しくはその機能的断片、若しくはそのバリアント、又はこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－２ポリペプチド、又はその機能的断片、又はそのバリアントである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を有する野生型ＩＬ－２ポリペプチドの結合親和性と比較して、配列番号２のアミノ酸配列を有するＩＬ－２Ｒαポリペプチドに対して少なくとも約５０％低下した結合親和性を示す。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を有する野生型ＩＬ－２ポリペプチドの結合親和性と比較して、配列番号３のアミノ酸配列を有するＩＬ－２Ｒβポリペプチドに対して少なくとも約５０％低下した結合親和性、及び／又は配列番号４のアミノ酸配列を有するＩＬ－２Ｒγポリペプチドに対して少なくとも約５０％低下した結合親和性を示す。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号１に対して１つ以上のアミノ酸置換を有する配列番号１の配列を含み、１つ以上の置換（複数可）は、Ｑ１１、Ｈ１６、Ｌ１８、Ｌ１９、Ｄ２０、Ｑ２２、Ｒ３８、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｙ４５、Ｅ６２、Ｐ６５、Ｅ６８、Ｖ６９、Ｌ７２、Ｄ８４、Ｓ８７、Ｎ８８、Ｖ９１、Ｉ９２、Ｔ１２３、Ｑ１２６、Ｓ１２７、Ｉ１２９、及びＳ１３０からなる群から選択される、配列番号１の位置における置換を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の置換（複数可）は、配列番号１に対してＦ４２Ａアミノ酸置換又はＦ４２Ｋアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の置換（複数可）は、配列番号１に対して、Ｒ３８Ａ、Ｒ３８Ｄ、Ｒ３８Ｅ、Ｅ６２Ｑ、Ｅ６８Ａ、Ｅ６８Ｑ、Ｅ６８Ｋ、又はＥ６８Ｒアミノ酸置換を更に含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の置換（複数可）は、配列番号１に対して、Ｈ１６Ｅ、Ｈ１６Ｄ、Ｄ２０Ｎ、Ｍ２３Ａ、Ｍ２３Ｒ、Ｍ２３Ｋ、Ｓ８７Ｋ、Ｓ８７Ａ、Ｄ８４Ｌ、Ｄ８４Ｎ、Ｄ８４Ｖ、Ｄ８４Ｈ、Ｄ８４Ｙ、Ｄ８４Ｒ、Ｄ８４Ｋ、Ｎ８８Ａ、Ｎ８８Ｇ、Ｎ８８Ｓ、Ｎ８８Ｔ、Ｎ８８Ｒ、Ｎ８８Ｉ、Ｎ８８Ｄ、Ｖ９１Ａ、Ｖ９１Ｔ、Ｖ９１Ｅ、Ｉ９２Ａ、Ｅ９５Ｓ、Ｅ９５Ａ、Ｅ９５Ｒ、Ｔ１２３Ａ、Ｔ１２３Ｅ、Ｔ１２３Ｋ、Ｔ１２３Ｑ、Ｑ１２６Ａ、Ｑ１２６Ｓ、Ｑ１２６Ｔ、Ｑ１２６Ｅ、Ｓ１２７Ａ、Ｓ１２７Ｅ、Ｓ１２７Ｋ、又はＳ１２７Ｑアミノ酸置換を更に含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の置換（複数可）は、配列番号１と比較してアミノ酸変異Ｃ１２５Ａを更に含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ポリペプチドは、以下のセットのアミノ酸置換（配列番号１の配列に対する）：Ｒ３８Ｅ及びＦ４２Ａ；Ｒ３８Ｄ及びＦ４２Ａ；Ｆ４２Ａ及びＥ６２Ｑ；Ｒ３８Ａ及びＦ４２Ｋ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ｓ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ｇ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ｄ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＶ９１Ｅ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｈ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｋ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｒ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ｅ及びＦ４２Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ｅ及びＦ４２Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＮ８８Ｓ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＮ８８Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＮ８８Ｇ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＮ８８Ｄ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＶ９１Ｅ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｈ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｋ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｒ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ｄ及びＦ４２Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ｄ及びＦ４２Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＮ８８Ｓ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＮ８８Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＮ８８Ｇ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＮ８８Ｄ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＶ９１Ｅ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＤ８４Ｈ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＤ８４Ｋ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＤ８４Ｒ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ａ、及びＦ４２Ｋ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ａ、及びＦ４２Ｋ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＱ１２６Ｓ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＮ８８Ｓ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＮ８８Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＮ８８Ｇ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＮ８８Ｄ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＶ９１Ｅ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｈ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｋ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｒ；Ｈ１６Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＥ６２Ｑ；Ｈ１６Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＥ６２Ｑ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｃ１２５Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｃ１２５Ａ、及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｄ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｄ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｄ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｃ１２５Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＥ６２Ｑ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＥ６２Ｑ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｃ１２５Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；並びにＦ４２Ａ、Ｃ１２５Ａ及びＱ１２６Ｓのうちの１つを有する、配列番号１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号１１～９０からなる群から選択される配列と少なくとも約８５％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号４３、４８、５２、４９、及び１５６からなる群から選択される配列と少なくとも約７５％同一である配列を含む。
いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－７ポリペプチド、又はその機能的断片、又はそのバリアントである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－７ポリペプチドは、配列番号９１のアミノ酸配列を含む野生型ＩＬ－７ポリペプチドの、ＩＬ－７Ｒａポリペプチドへの結合親和性と比較して、配列番号９４のアミノ酸配列を含むＩＬ－７Ｒａポリペプチドに対して少なくとも約５０％低下した結合親和性を示す。いくつかの実施形態では、ＩＬ－７ポリペプチドは、配列番号９１のアミノ酸配列を含む野生型ＩＬ－７ポリペプチドの、ＩＬ－２Ｒａポリペプチドへの結合親和性と比較して、配列番号４のアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒｇポリペプチドに対して少なくとも約５０％低下した結合親和性を示す。いくつかの実施形態では、ＩＬ－７ポリペプチドは、配列番号９１に対して１つ以上の置換を有する配列番号９１の配列を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の置換は、位置Ｋ１０、Ｑ１１、Ｓ１４、Ｖ１５、Ｖ１８、Ｑ２２、Ｌ３５、Ｎ３６、Ｄ７４、Ｌ７７、Ｌ８０、Ｋ８１、Ｅ８４、Ｉ８８、Ｒ１３３、Ｑ１３６、Ｅ１３７、Ｔ１４０、Ｎ１４３、及びＫ１４４から選択される位置にある。いくつかの実施形態では、位置Ｋ８１の置換は、Ｋ８１Ａであり、位置Ｔ１４０の置換は、Ｋ１４０Ａである。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－１０ポリペプチド、又はその機能的断片、又はそのバリアントである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号９５のアミノ酸配列を含む野生型ＩＬ－１０ポリペプチドの、ＩＬ－１０ＲＡポリペプチドへの結合親和性と比較して、配列番号９６のアミノ酸配列を含むＩＬ－１０ＲＡポリペプチドに対して少なくとも約５０％低下した結合親和性を示す。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号９５のアミノ酸配列を含む野生型ＩＬ－１０ポリペプチドの、ＩＬ－１０ＲＢポリペプチドへの結合親和性と比較して、配列番号９７のアミノ酸配列を含むＩＬ－１０ＲＢポリペプチドに対して少なくとも約５０％増加した結合親和性を示す。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号９５に対して１つ以上の置換を有する配列番号９５の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号９９～１１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－２１ポリペプチド、又はその機能的断片、又はそのバリアントである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２１ポリペプチドは、配列番号９２のアミノ酸配列を含む野生型ＩＬ－２１ポリペプチドの、ＩＬ－２１Ｒポリペプチドへの結合親和性と比較して、配列番号９３のアミノ酸配列を含むＩＬ－２１Ｒポリペプチドに対して少なくとも約５０％低下した結合親和性を示す。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２１ポリペプチドは、配列番号９２のアミノ酸配列を含む野生型ＩＬ－２１ポリペプチドの、ＩＬ－２Ｒｇポリペプチドへの結合親和性と比較して、配列番号４のアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒｇポリペプチドに対して少なくとも約５０％低下した結合親和性を示す。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２１ポリペプチドは、配列番号１１５に対して１つ以上の置換を有する配列番号１１５の配列を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の位置における置換は、位置Ｒ５、Ｉ８、Ｒ９、Ｒ１１、Ｑ１２、Ｉ１４、Ｄ１５、Ｄ１８、Ｑ１９、Ｙ２３、Ｒ６５、Ｓ７０、Ｋ７２、Ｋ７３、Ｋ７５、Ｒ７６、Ｋ７７、Ｓ８０、Ｑ１１６、及びＫ１１７から選択され、位置の番号付けは、配列番号１１５のアミノ酸配列に従った番号である。
いくつかの実施形態では、遺伝子操作された細胞は、Ｔ細胞受容体を発現するＴ細胞（ＴＣＲ－Ｔ細胞）、γδＴ細胞、多能性幹細胞由来のＴ細胞又は人工多能性幹細胞由来のＴ細胞、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、多能性幹細胞由来のＮＫ細胞又は人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）由来のＮＫ細胞、キメラ抗原受容体を発現するように遺伝子操作されたＴ細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）、ＣＤ８陽性Ｔ細胞、ＣＤ４陽性Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球、ＣＡＲ－ＮＫ細胞、γδＴ細胞、骨髄細胞、造血系細胞、造血幹細胞及び前駆細胞（ＨＳＣ）、造血多分化能前駆細胞（ＭＰＰ）、プレＴ細胞前駆細胞、Ｔ細胞前駆細胞、ＮＫ細胞前駆細胞のうちの少なくとも１つを含む。いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物は、遺伝子操作された細胞を含む療法と組み合わせて対象に投与するのに好適である。いくつかの実施形態では、遺伝子操作された細胞は、対象にとって自家である。いくつかの実施形態では、遺伝子操作された細胞は、対象にとって同種異系細胞である。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。いくつかの実施形態では、対象は、がんを患っている。いくつかの実施形態では、がんは、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）（非Ｔ細胞ＡＬＬを含む）、急性骨髄性白血病、Ｂ細胞性前リンパ球性白血病、Ｂ細胞性急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍、バーキットリンパ腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄白血病、慢性若しくは急性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、ヘアリー細胞白血病、ホジキン病、悪性リンパ増殖性疾患、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、意義不明の単クローン性γグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、多発性骨髄腫、骨髄異形成及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、形質細胞増殖性疾患（無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫若しくは無痛性性骨髄腫を含む）を含む）、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞腫瘍、形質細胞腫（形質細胞疾患、孤立性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、髄外性形質細胞腫、及び多発性形質細胞腫を含む）、ＰＯＥＭＳ症候群（Ｃｒｏｗ－Ｆｕｋａｓｅ症候群、高槻病、及びＰＥＰ症候群としても知られている）、縦隔原発Ｂ細胞性大細胞型リンパ腫（ＰＭＢＣ）、小細胞若しくは大細胞濾胞性リンパ腫、脾臓辺縁帯リンパ腫（ＳＭＺＬ）、全身性アミロイド軽鎖アミロイド―シス、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ）、Ｔ細胞リンパ腫、形質転換濾胞性リンパ腫若しくはワルデンストロームマクログロブリン血症、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、形質転換濾胞性リンパ腫（ＴＦＬ）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣＬ）、多発性骨髄腫、ヘアリー細胞リンパ腫／白血病、肺がん、小細胞肺がん、非小細胞肺（ＮＳＣＬ）がん、細気管支肺胞細胞肺がん、扁平上皮がん、肺腺がん、肺扁平上皮がん、腹膜がん、頭頸部がん、骨がん、膵臓がん、皮膚がん、頭頸部のがん、皮膚若しくは眼球内黒色腫、甲状腺がん、子宮がん、消化器がん、卵巣がん、直腸がん、肛門部のがん、胃がん、胃がん、結腸がん、乳がん、子宮内膜がん、子宮がん、卵管のがん腫、子宮頸部のがん腫、膣のがん腫、外陰がん、ホジキン病、食道がん、小腸がん、内分泌系がん、甲状腺がん、副甲状腺がん、副腎がん、軟部組織の肉腫、尿道がん、陰茎がん、前立腺がん、膀胱がん、腎臓若しくは尿管がん、腎細胞がん、腎盂のがん腫、中皮腫、膀胱がん、肝臓がん、幹細胞腫、肝細胞がん、子宮頸がん、唾液腺がん、胆道がん、中枢神経系（ＣＮＳ）の腫瘍、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、多形神経膠芽腫、星状細胞腫、シュワン細胞腫、上衣腫、髄芽腫、髄膜腫、扁平上皮がん、下垂体腺腫及びユーイング肉腫であり、上記がんのいずれかの難治性バージョン、又は上記がんのうちの１つ以上の組み合わせを含む。
一実施形態は、本開示による標的化サイトカイン構築物と、薬学的に許容される賦形剤、担体、若しくは希釈剤のうちの少なくとも１つ、又はこれらの任意の組み合わせと、を含む、医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、遺伝子操作された細胞の集団を更に含む。一実施形態は、本開示による標的化サイトカイン構築物を含む医薬組成物と、標的化サイトカイン構築物を対象に投与するために明記された説明書と、を含む、細胞療法キットを提供する。いくつかの実施形態では、細胞療法キットは、遺伝子操作された細胞の集団を含む医薬組成物と、遺伝子操作された細胞の集団を対象に投与するために明記された説明書と、を更に含む。いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物を含む医薬組成物及び遺伝子操作された細胞の集団を含む医薬組成物は、連続投与用又は同時投与用である。
一実施形態は、対象における疾患を治療する方法を提供し、本方法は、（ａ）遺伝子操作された細胞と、（ｂ）（ｉ）遺伝子操作された細胞に外因的に導入された受容体又はドメインに結合する細胞結合ドメイン、及び（ｉｉ）サイトカインタンパク質又はその機能的断片若しくはバリアントを含む標的化サイトカイン構築物と、を含む最適治療計画を対象に施すことを含む。
いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物は、遺伝子操作されていない細胞の活性化と比較して、１０倍以上の効力で、遺伝子操作された細胞の集団を選択的に活性化する。いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物を投与すると、遺伝子操作されていない細胞の集団の活性化と比較して、遺伝子操作された細胞の活性化の増加をもたらす。いくつかの実施形態では、活性化は、ｐＳＴＡＴ５活性化アッセイ又はｐＳＴＡＴ３活性化アッセイによって測定される。いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物を投与すると、遺伝子操作されていない細胞の集団の拡大及び／又は増殖と比較して、遺伝子操作された細胞の集団の拡大及び／又は増殖の増加をもたらす。いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物を投与すると、遺伝子操作された細胞の集団のインビボ持続性は、遺伝子操作されていない細胞の集団のインビボ持続性と比較して、増加がもたらされる。いくつかの実施形態では、遺伝子操作されていない細胞は、ＣＡＲ、ＴＣＲ、又はタグ分子を発現しない。いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物を投与すると、遺伝子操作された細胞の集団の活性化、拡大、及び／又は増殖は、標的化サイトカイン構築物なしで投与されたときの、遺伝子操作された細胞の集団の活性化、拡大、及び／又は増殖と比較して、増加がもたらされる。いくつかの実施形態では、拡大及び／又は増殖は、インビボ又はインビトロで行われる。いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物を投与すると、遺伝子操作された細胞の集団のインビボ持続性は、標的化サイトカイン構築物なしで投与されたときの、遺伝子操作された細胞の集団のインビボ持続性と比較して、増加がもたらされる。いくつかの実施形態では、遺伝子操作された細胞の集団のインビボ持続性は、約１５日、約３０日～約１年の期間を含む。いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物を投与すると、遺伝子操作された細胞の集団の枯渇の速度及び／又は程度は、標的化サイトカイン構築物なしで投与されたときの、遺伝子操作された細胞の集団の枯渇の速度及び／又は程度と比較して、低下する。いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物を投与すると、遺伝子操作された細胞の選択的増強がもたらされ、非標的化サイトカイン又はその機能的断片若しくはバリアントとともに投与されたときの、遺伝子操作された細胞の集団の特異的富化と比較して、遺伝子操作された細胞の集団の特異的富化を増強することが可能になる。いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物を投与すると、対象から単離された生体サンプル中のＴｒｅｇ細胞の数を、非標的化サイトカイン又はその機能的断片若しくはバリアントを投与された対象から単離された生体サンプル中のＴｒｅｇ細胞の数と比較して、増加させない。いくつかの実施形態では、生体サンプルは、腫瘍生検又は末梢血液のうちの少なくとも１つである。いくつかの実施形態では、対象には、プレコンディショニングレジメンが事前に投与されている。いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物を投与することにより、プレコンディショニングレジメンの重大度又は期間のうちの少なくとも１つの低減が可能になる。いくつかの実施形態では、プレコンディショニングレジメンは、遺伝子操作された細胞の集団が拡大できるように、内因性リンパ球集団を減少させるために使用される。いくつかの実施形態では、プレコンディショニングレジメンは、リンパ球枯渇剤を投与することを含む。いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物を投与すると、遺伝子操作された細胞の生着に必要なリンパ球枯渇の程度が低下する。いくつかの実施形態では、プレコンディショニングレジメンは、化学療法剤を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、化学療法剤は、フルダラビン及びシクロホスファミドのうちの少なくとも１つである。いくつかの実施形態では、プレコンディショニングレジメンは、放射線治療を含む。いくつかの実施形態では、プレコンディショニングレジメンは、枯渇性抗体を投与することを含む。いくつかの実施形態では、枯渇性抗体は、アレムツズマブである。いくつかの実施形態では、対象には、プレコンディショニングレジメンが投与されない。
一実施形態は、遺伝子操作細胞療法を投与する前にプレコンディショニングレジメンを投与する必要性を排除するか、又はその重大度を最小限に抑える方法を提供し、本方法は、（ａ）遺伝子操作された細胞と、（ｂ）（ｉ）遺伝子操作された細胞に外因的に導入された受容体又はドメインに結合する細胞結合ドメイン、及び（ｉｉ）サイトカインタンパク質又はその機能的断片若しくはバリアントを含む、標的化サイトカイン構築物と、を含む最適治療計画を対象に施すことを含む。
いくつかの実施形態では、対象には、プレコンディショニングレジメンが投与されていない。いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物は、遺伝子操作されていない細胞の活性化と比較して、１０倍以上の効力で、遺伝子操作された細胞を選択的に活性化する。いくつかの実施形態では、活性化は、ｐＳＴＡＴ５活性化アッセイ又はｐＳＴＡＴ３活性化アッセイによって測定される。いくつかの実施形態では、遺伝子操作されていない細胞は、細胞に外因的に導入された受容体又はドメインを含まない。いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物は、遺伝子操作された細胞の投与後、約２日、３日、６日、１２日、１５日、３０日、６０日、若しくは９０日以上の期間内、又は約２日、３日、６日、１２日、１５日、３０日、６０日、若しくは９０日以上の期間内に投与される。いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物は、遺伝子操作された細胞を投与するのと同時に投与される。いくつかの実施形態では、最適治療計画における遺伝子操作された細胞の有効用量は、遺伝子操作された細胞を投与することを含むが、標的化サイトカイン構築物を投与することを含まない参照最適治療計画の有効用量より低い。
いくつかの実施形態では、最適治療計画における遺伝子操作された細胞の有効用量は、参照最適治療計画における遺伝子操作された細胞の有効薬量より少なくとも約１．５倍～約１０００倍低い。
一実施形態は、対象における遺伝子操作細胞療法の有効性を高める方法を提供し、本方法は、（ａ）遺伝子操作された細胞と、（ｂ）（ｉ）遺伝子操作された細胞に外因的に導入された受容体又はドメインに結合する細胞結合ドメイン、及び（ｉｉ）サイトカインタンパク質又はその機能的断片若しくはバリアントを含む、標的化サイトカイン構築物と、を含む最適治療計画を対象に施すことを含み、それにより、対象における遺伝子操作細胞療法の有効性を高める。
いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物は、遺伝子操作されていない細胞の活性化と比較して、１０倍以上の効力で、遺伝子操作された細胞を選択的に活性化する。いくつかの実施形態では、遺伝子操作されていない細胞は、細胞に外因的に導入された受容体又はドメインを含まない。いくつかの実施形態では、効力は、ｐＳＴＡＴ５活性化アッセイによって測定される。
一実施形態は、Ｂ細胞形成不全の消失を起こした対象を治療する方法を提供し、本方法は、（ｉ）遺伝子操作された細胞に外因的に導入された受容体又はドメインに結合する細胞結合ドメインと、（ｉｉ）サイトカインタンパク質又はその機能的断片若しくはバリアントと、を含む標的化サイトカイン構築物を対象に投与することを含む。
一実施形態は、（ａ）遺伝子操作された細胞と、（ｂ）（ｉ）遺伝子操作された細胞に外因的に導入された受容体又はドメインに結合する細胞結合ドメイン、及び（ｉｉ）サイトカインタンパク質又はその機能的断片若しくはバリアントを含む標的化サイトカイン構築物と、を含む最適治療計画を対象に行うことを含む、疾患又は疾病を治療する方法を提供し、標的化サイトカイン構築物を投与することにより、遺伝子操作された細胞を投与することを含むが、標的化サイトカイン構築物を含まない参照最適治療計画における遺伝子操作された細胞の有効用量に対して、最適治療計画における遺伝子操作された細胞の有効用量を低減することが可能となる。
いくつかの実施形態では、最適治療計画における遺伝子操作された細胞の有効用量は、参照最適治療計画における遺伝子操作された細胞の有効薬量より少なくとも約１．５倍～約１０００倍低い。いくつかの実施形態では、遺伝子操作された細胞は、組成物中で提供され、組成物は、ポイントオブケアで生成され、細胞の集団を培養することなく患者に投与される。一実施形態は、対象において遺伝子操作された細胞を標的化する方法を提供し、本方法は、細胞結合ドメイン及び修飾サイトカイン又はその機能的断片若しくはバリアントを含む標的化サイトカイン構築物を対象に投与することを含み、遺伝子操作された細胞は、（ｉ）修飾サイトカイン又はその機能的断片若しくはバリアントに対する受容体、及び（ｉｉ）細胞結合ドメインに対する標的抗原を発現する。一実施形態は、対象において遺伝子操作された細胞の集団を富化する方法を提供し、本方法は、細胞結合ドメイン及び修飾サイトカイン又はその機能的断片若しくはバリアントを含む標的化サイトカイン構築物を対象に投与することを含み、遺伝子操作された細胞は、（ｉ）修飾サイトカイン又はその機能的断片若しくはバリアントに対する受容体、及び（ｉｉ）細胞結合ドメインに対する標的抗原を発現する。
いくつかの実施形態では、遺伝子操作された細胞は、対象においてインビボで生成される。いくつかの実施形態では、対象は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体タンパク質（ＴＣＲ）を発現する核酸を含む、核酸担体を事前に投与されている。いくつかの実施形態では、核酸担体は、直鎖状ポリヌクレオチド、イオン性化合物又は両親媒性化合物と会合したポリヌクレオチド、プラスミド、及びウイルスのうちの少なくとも１つである。いくつかの実施形態では、核酸担体は、ナノ担体である。いくつかの実施形態では、核酸担体は、ウイルスベクターであり、ウイルスベクターは、センダイウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、又はレンチウイルスベクターのうちの少なくとも１つである。いくつかの実施形態では、核酸は、ＤＮＡ又はＲＮＡである。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、メッセンジャーＲＮＡ（mＲＮＡ）である。いくつかの実施形態では、核酸担体は、免疫細胞を標的化するための標的化部分を更に含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、骨髄細胞、Ｔ細胞、又はＮＫ細胞を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、Ｔリンパ球を含む。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞又はＮＫ細胞は、対象においてインビボで遺伝子操作された細胞を生成するために、ベクター又は核酸担体によって誘導される。いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物を投与すると、インビボで生成された遺伝子操作された細胞の集団の活性化、拡大、及び／又は増殖は、対象が標的化サイトカイン構築物を投与されないときの、インビボで生成された遺伝子操作された細胞の集団の活性化、拡大、及び／又は増殖と比較して、増加がもたらされる。
いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物を投与すると、インビボで生成された遺伝子操作された細胞の集団の持続性は、対象が標的化サイトカイン構築物を投与されないときの、インビボで生成された遺伝子操作された細胞の集団の持続性と比較して、増加がもたらされる。いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物を投与すると、インビボで生成された遺伝子操作された細胞の集団の枯渇の速度及び／又は程度は、標的化サイトカイン構築物なしで投与されたときの、インビボで生成された遺伝子操作された細胞の集団の枯渇の速度及び／又は程度と比較して、低下する。いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物を投与すると、インビボで生成された遺伝子操作された細胞の選択的増強がもたらされ、非標的化サイトカイン又はその機能的断片若しくはバリアントとともに投与されたときの、遺伝子操作された細胞の集団の特異的富化と比較して、インビボで生成された遺伝子操作された細胞の集団の特異的富化を増強することが可能になる。いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物を投与すると、対象から単離された生体サンプル中のＴｒｅｇ細胞の数を、非標的化サイトカイン又はその機能的断片若しくはバリアントを投与された対象から単離された生体サンプル中のＴｒｅｇ細胞の数と比較して、増加させない。いくつかの実施形態では、生体サンプルは、腫瘍生検又は末梢血液のうちの少なくとも１つである。いくつかの実施形態では、遺伝子操作された細胞の集団の持続性は、少なくとも約３０日～約１年の期間を含む。
一実施形態は、遺伝子操作された細胞の集団を富化する方法を提供し、本方法は、遺伝子操作された細胞の集団を、細胞結合ドメイン及び修飾サイトカイン又はその機能的断片若しくはバリアントを含む標的化サイトカイン構築物と接触させることを含み、遺伝子操作された細胞は、（ｉ）修飾サイトカイン又はその機能的断片若しくはバリアントに対する受容体、及び（ｉｉ）細胞結合ドメインに対する標的抗原を発現する。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１、若しくはその機能的断片、若しくはそのバリアント、又はこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、サイトカインは、（ｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒβポリペプチドに結合する、かつ／又はこれを活性化するＩＬ－２Ｒβγアゴニストポリペプチド、及び（ｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒγポリペプチドに結合する、かつ／又はこれを活性化するＩＬ－２Ｒβγポリペプチドアゴニストポリペプチドのうちの少なくとも１つである。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－２ポリペプチド、又はその機能的断片、又はそのバリアントである。いくつかの実施形態では、請求項１１４に記載の方法において、当該ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含む野生型ＩＬ－２ポリペプチドの、ＩＬ－２Ｒαポリペプチドへの結合親和性と比較して、配列番号２のアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒαポリペプチドに対して少なくとも約５０％低下した結合親和性を示す。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含む野生型ＩＬ－２ポリペプチドの、ＩＬ－２Ｒβポリペプチドへの結合親和性と比較して、配列番号３のアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒβポリペプチドに対して少なくとも約５０％低下した結合親和性、及び／又は配列番号４のアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒγポリペプチドに対して少なくとも約５０％低下した結合親和性を示す。いくつかの実施形態では、サイトカインは、配列番号９１のアミノ酸配列を含む野生型ＩＬ－７ポリペプチドの、ＩＬ－７Ｒａポリペプチドへの結合親和性と比較して、配列番号９４のアミノ酸配列を含むＩＬ－７Ｒａポリペプチドに対して少なくとも約５０％低下した結合親和性を示すＩＬ－７ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－７ポリペプチドは、配列番号９１のアミノ酸配列を含む野生型ＩＬ－７ポリペプチドの、ＩＬ－２Ｒｇポリペプチドへの結合親和性と比較して、配列番号４のアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒｇポリペプチドに対して５０％以上低下した結合親和性を示す。いくつかの実施形態では、サイトカインは、配列番号９５のアミノ酸配列を含む野生型ＩＬ－１０ポリペプチドの、ＩＬ－１０ＲＡポリペプチドへの結合親和性と比較して、配列番号９６のアミノ酸配列を含むＩＬ－１０ＲＡポリペプチドに対して少なくとも約５０％低下した結合親和性を示すＩＬ－１０ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号９５のアミノ酸配列を含む野生型ＩＬ－１０ポリペプチドの、ＩＬ－１０ＲＢポリペプチドへの結合親和性と比較して、配列番号９７のアミノ酸配列を含むＩＬ－１０ＲＢポリペプチドに対して少なくとも約５０％増加した結合親和性を示す。いくつかの実施形態では、サイトカインは、配列番号９２のアミノ酸配列を含む野生型ＩＬ－２１ポリペプチドの、ＩＬ－２１Ｒポリペプチドへの結合親和性と比較して、配列番号９３のアミノ酸配列を含むＩＬ－２１Ｒポリペプチドに対して５０％以上低下した結合親和性を示すＩＬ－２１ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２１ポリペプチドは、配列番号９２のアミノ酸配列を含む野生型ＩＬ－２１ポリペプチドの、ＩＬ－２Ｒｇポリペプチドへの結合親和性と比較して、配列番号４のアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒｇポリペプチドに対して少なくとも約５０％低下した結合親和性を示す。いくつかの実施形態では、サイトカインは、配列番号１に対して１つ以上のアミノ酸置換を有する配列番号１の配列を含むＩＬ－２ポリペプチドであり、１つ以上の置換（複数可）は、Ｑ１１、Ｈ１６、Ｌ１８、Ｌ１９、Ｄ２０、Ｑ２２、Ｒ３８、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｙ４５、Ｅ６２、Ｐ６５、Ｅ６８、Ｖ６９、Ｌ７２、Ｄ８４、Ｓ８７、Ｎ８８、Ｖ９１、Ｉ９２、Ｔ１２３、Ｑ１２６、Ｓ１２７、Ｉ１２９、及びＳ１３０からなる群から選択される、配列番号１の位置における置換（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の置換（複数可）は、配列番号１に対してＦ４２Ａアミノ酸置換又はＦ４２Ｋアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の置換（複数可）は、配列番号１に対して、Ｒ３８Ａ、Ｒ３８Ｄ、Ｒ３８Ｅ、Ｅ６２Ｑ、Ｅ６８Ａ、Ｅ６８Ｑ、Ｅ６８Ｋ、又はＥ６８Ｒアミノ酸置換を更に含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の置換（複数可）は、配列番号１に対して、Ｈ１６Ｅ、Ｈ１６Ｄ、Ｄ２０Ｎ、Ｍ２３Ａ、Ｍ２３Ｒ、Ｍ２３Ｋ、Ｓ８７Ｋ、Ｓ８７Ａ、Ｄ８４Ｌ、Ｄ８４Ｎ、Ｄ８４Ｖ、Ｄ８４Ｈ、Ｄ８４Ｙ、Ｄ８４Ｒ、Ｄ８４Ｋ、Ｎ８８Ａ、Ｎ８８Ｇ、Ｎ８８Ｓ、Ｎ８８Ｔ、Ｎ８８Ｒ、Ｎ８８Ｉ、Ｎ８８Ｄ、Ｖ９１Ａ、Ｖ９１Ｔ、Ｖ９１Ｅ、Ｉ９２Ａ、Ｅ９５Ｓ、Ｅ９５Ａ、Ｅ９５Ｒ、Ｔ１２３Ａ、Ｔ１２３Ｅ、Ｔ１２３Ｋ、Ｔ１２３Ｑ、Ｑ１２６Ａ、Ｑ１２６Ｓ、Ｑ１２６Ｔ、Ｑ１２６Ｅ、Ｓ１２７Ａ、Ｓ１２７Ｅ、Ｓ１２７Ｋ、又はＳ１２７Ｑアミノ酸置換を更に含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の置換（複数可）は、配列番号１と比較してアミノ酸変異Ｃ１２５Ａを更に含む。いくつかの実施形態では、サイトカインは、配列番号１１～９０からなる群から選択される配列と少なくとも約８５％同一であるアミノ酸配列を含むＩＬ－２ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、サイトカインは、配列番号４３、４８、５２、４９、及び１５６からなる群から選択される配列と少なくとも約８５％同一であるアミノ酸配列を含むＩＬ－２ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、サイトカインは、以下のセットのアミノ酸変異（配列番号１の配列に対する）：Ｒ３８Ｅ及びＦ４２Ａ；Ｒ３８Ｄ及びＦ４２Ａ；Ｆ４２Ａ及びＥ６２Ｑ；Ｒ３８Ａ及びＦ４２Ｋ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ｓ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ｇ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ｄ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＶ９１Ｅ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｈ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｋ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｒ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ｅ及びＦ４２Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ｅ及びＦ４２Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＮ８８Ｓ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＮ８８Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＮ８８Ｇ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＮ８８Ｄ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＶ９１Ｅ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｈ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｋ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｒ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ｄ及びＦ４２Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ｄ及びＦ４２Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＮ８８Ｓ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＮ８８Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＮ８８Ｇ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＮ８８Ｄ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＶ９１Ｅ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＤ８４Ｈ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＤ８４Ｋ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＤ８４Ｒ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ａ、及びＦ４２Ｋ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ａ、及びＦ４２Ｋ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＱ１２６Ｓ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＮ８８Ｓ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＮ８８Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＮ８８Ｇ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＮ８８Ｄ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＶ９１Ｅ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｈ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｋ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｒ；Ｈ１６Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＥ６２Ｑ；Ｈ１６Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＥ６２Ｑ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｃ１２５Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｃ１２５Ａ、及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｄ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｄ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｄ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｃ１２５Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＥ６２Ｑ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＥ６２Ｑ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｃ１２５Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；並びにＦ４２Ａ、Ｃ１２５Ａ及びＱ１２６Ｓのうちの１つを有する、配列番号１のアミノ酸配列を含む、ＩＬ－２ポリペプチドである。
いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－７ポリペプチド、又はその機能的断片、又はそのバリアントである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－７ポリペプチドは、配列番号９１に対して１つ以上の置換を有する、配列番号９１の配列を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の位置における置換は、位置Ｋ１０、Ｑ１１、Ｓ１４、Ｖ１５、Ｖ１８、Ｑ２２、Ｌ３５、Ｎ３６、Ｄ７４、Ｌ７７、Ｌ８０、Ｋ８１、Ｅ８４、Ｉ８８、Ｒ１３３、Ｑ１３６、Ｅ１３７、Ｔ１４０、Ｎ１４３、及びＫ１４４から選択される。いくつかの実施形態では、位置Ｋ８１の置換は、Ｋ８１Ａであり、位置Ｔ１４０の置換は、Ｋ１４０Ａである。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－１０ポリペプチド、又はその機能的断片、又はそのバリアントである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号９５に対して１つ以上の置換を有する、配列番号９５の配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号９９～１１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－２１ポリペプチド、又はその機能的断片、又はそのバリアントである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２１ポリペプチドは、配列番号１１５に対して１つ以上の置換を有する配列番号１１５の配列を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の位置における置換は、位置Ｒ５、Ｉ８、Ｒ９、Ｒ１１、Ｑ１２、Ｉ１４、Ｄ１５、Ｄ１８、Ｑ１９、Ｙ２３、Ｒ６５、Ｓ７０、Ｋ７２、Ｋ７３、Ｋ７５、Ｒ７６、Ｋ７７、Ｓ８０、Ｑ１１６、及びＫ１１７から選択され、位置の番号付けは、配列番号１１５のアミノ酸配列に従った番号である。
いくつかの実施形態では、遺伝子操作された細胞は、Ｔ細胞受容体を発現するＴ細胞（ＴＣＲ－Ｔ細胞）、γδＴ細胞、多能性幹細胞由来のＴ細胞又は人工多能性幹細胞由来のＴ細胞、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、多能性幹細胞由来のＮＫ細胞又は人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）由来のＮＫ細胞、キメラ抗原受容体を発現するように遺伝子操作されたＴ細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）、ＣＤ８陽性Ｔ細胞、ＣＤ４陽性Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球、ＣＡＲ－ＮＫ細胞、γδＴ細胞、骨髄細胞、造血系細胞、造血幹細胞及び前駆細胞（ＨＳＣ）、造血多分化能前駆細胞（ＭＰＰ）、プレＴ細胞前駆細胞、Ｔ細胞前駆細胞、ＮＫ細胞前駆細胞のうちの少なくとも１つを含む。
いくつかの実施形態では、遺伝子操作された細胞は、対象にとって自家である。いくつかの実施形態では、遺伝子操作された細胞は、対象にとって同種異系である。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトである。いくつかの実施形態では、対象は、がんを患っている。いくつかの実施形態では、がんは、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）（非Ｔ細胞ＡＬＬを含む）、急性骨髄性白血病、Ｂ細胞性前リンパ球性白血病、Ｂ細胞性急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍、バーキットリンパ腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄白血病、慢性若しくは急性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、ヘアリー細胞白血病、ホジキン病、悪性リンパ増殖性疾患、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、意義不明の単クローン性γグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、多発性骨髄腫、骨髄異形成及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、形質細胞増殖性疾患（無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫若しくは無痛性性骨髄腫を含む）を含む）、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞腫瘍、形質細胞腫（形質細胞疾患、孤立性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、髄外性形質細胞腫、及び多発性形質細胞腫を含む）、ＰＯＥＭＳ症候群（Ｃｒｏｗ－Ｆｕｋａｓｅ症候群、高槻病、及びＰＥＰ症候群としても知られている）、縦隔原発Ｂ細胞性大細胞型リンパ腫（ＰＭＢＣ）、小細胞若しくは大細胞濾胞性リンパ腫、脾臓辺縁帯リンパ腫（ＳＭＺＬ）、全身性アミロイド軽鎖アミロイド―シス、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ）、Ｔ細胞リンパ腫、形質転換濾胞性リンパ腫若しくはワルデンストロームマクログロブリン血症、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、形質転換濾胞性リンパ腫（ＴＦＬ）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣＬ）、多発性骨髄腫、ヘアリー細胞リンパ腫／白血病、肺がん、小細胞肺がん、非小細胞肺（ＮＳＣＬ）がん、細気管支肺胞細胞肺がん、扁平上皮がん、肺腺がん、肺扁平上皮がん、腹膜がん、頭頸部がん、骨がん、膵臓がん、皮膚がん、頭頸部のがん、皮膚若しくは眼球内黒色腫、甲状腺がん、子宮がん、消化器がん、卵巣がん、直腸がん、肛門部のがん、胃がん、胃がん、結腸がん、乳がん、子宮内膜がん、子宮がん、卵管のがん腫、子宮頸部のがん腫、膣のがん腫、外陰がん、ホジキン病、食道がん、小腸がん、内分泌系がん、甲状腺がん、副甲状腺がん、副腎がん、軟部組織の肉腫、尿道がん、陰茎がん、前立腺がん、膀胱がん、腎臓若しくは尿管がん、腎細胞がん、腎盂のがん腫、中皮腫、膀胱がん、肝臓がん、幹細胞腫、肝細胞がん、子宮頸がん、唾液腺がん、胆道がん、中枢神経系（ＣＮＳ）の腫瘍、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、多形神経膠芽腫、星状細胞腫、シュワン細胞腫、上衣腫、髄芽腫、髄膜腫、扁平上皮がん、下垂体腺腫及びユーイング肉腫であり、上記がんのいずれかの難治性バージョン、又は上記がんのうちの１つ以上の組み合わせを含む。
一実施形態は、遺伝子操作された細胞との併用療法に使用するための標的化サイトカイン構築物を提供し、融合タンパク質は、（ｉ）細胞結合ドメイン、及び（ｉｉ）サイトカインタンパク質若しくはその機能的断片若しくはバリアントを含み、細胞結合ドメインは、
（ａ）遺伝子操作された細胞の表面に外因的に発現された受容体若しくはドメインに特異的な抗体若しくはその抗原結合断片を含み、
（ｂ）遺伝子操作された細胞上で発現された抗原結合タンパク質のドメインに特異的な抗体若しくはその抗原結合断片を含み、
（ｃ）タグに特異的であり、タグは、遺伝子操作された細胞によって共発現されるか、若しくは遺伝子操作された細胞によって発現される受容体の一部であり、
（ｄ）遺伝子操作された細胞によって標的化された抗原に由来するドメインであるか、又は
（ｅ）（ａ）～（ｄ）の任意の組み合わせを含む。
いくつかの実施形態では、遺伝子操作された細胞によって発現される受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１、若しくはその機能的断片、若しくはそのバリアント、又はこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－２ポリペプチド、又はその機能的断片、又はそのバリアントである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号１に対して１つ以上のアミノ酸置換を有する配列番号１の配列を含み、１つ以上の置換（複数可）は、Ｑ１１、Ｈ１６、Ｌ１８、Ｌ１９、Ｄ２０、Ｑ２２、Ｒ３８、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｙ４５、Ｅ６２、Ｐ６５、Ｅ６８、Ｖ６９、Ｌ７２、Ｄ８４、Ｓ８７、Ｎ８８、Ｖ９１、Ｉ９２、Ｔ１２３、Ｑ１２６、Ｓ１２７、Ｉ１２９、及びＳ１３０からなる群から選択される、配列番号１の位置における置換（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の置換（複数可）は、配列番号１に対してＦ４２Ａアミノ酸置換又はＦ４２Ｋアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の置換（複数可）は、配列番号１に対して、Ｒ３８Ａ、Ｒ３８Ｄ、Ｒ３８Ｅ、Ｅ６２Ｑ、Ｅ６８Ａ、Ｅ６８Ｑ、Ｅ６８Ｋ、又はＥ６８Ｒアミノ酸置換を更に含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の置換（複数可）は、配列番号１に対して、Ｈ１６Ｅ、Ｈ１６Ｄ、Ｄ２０Ｎ、Ｍ２３Ａ、Ｍ２３Ｒ、Ｍ２３Ｋ、Ｓ８７Ｋ、Ｓ８７Ａ、Ｄ８４Ｌ、Ｄ８４Ｎ、Ｄ８４Ｖ、Ｄ８４Ｈ、Ｄ８４Ｙ、Ｄ８４Ｒ、Ｄ８４Ｋ、Ｎ８８Ａ、Ｎ８８Ｇ、Ｎ８８Ｓ、Ｎ８８Ｔ、Ｎ８８Ｒ、Ｎ８８Ｉ、Ｎ８８Ｄ、Ｖ９１Ａ、Ｖ９１Ｔ、Ｖ９１Ｅ、Ｉ９２Ａ、Ｅ９５Ｓ、Ｅ９５Ａ、Ｅ９５Ｒ、Ｔ１２３Ａ、Ｔ１２３Ｅ、Ｔ１２３Ｋ、Ｔ１２３Ｑ、Ｑ１２６Ａ、Ｑ１２６Ｓ、Ｑ１２６Ｔ、Ｑ１２６Ｅ、Ｓ１２７Ａ、Ｓ１２７Ｅ、Ｓ１２７Ｋ、又はＳ１２７Ｑアミノ酸置換を更に含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の置換（複数可）は、配列番号１と比較してアミノ酸変異Ｃ１２５Ａを更に含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号１１～９０からなる群から選択される配列と少なくとも約８５％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、以下のセットのアミノ酸変異（配列番号１の配列に対する）：Ｒ３８ＥとＦ４２Ａ；Ｒ３８Ｄ及びＦ４２Ａ；Ｆ４２Ａ及びＥ６２Ｑ；Ｒ３８Ａ及びＦ４２Ｋ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ｓ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ｇ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ｄ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＶ９１Ｅ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｈ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｋ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｒ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ｅ及びＦ４２Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ｅ及びＦ４２Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＮ８８Ｓ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＮ８８Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＮ８８Ｇ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＮ８８Ｄ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＶ９１Ｅ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｈ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｋ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｒ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ｄ及びＦ４２Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ｄ及びＦ４２Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＮ８８Ｓ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＮ８８Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＮ８８Ｇ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＮ８８Ｄ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＶ９１Ｅ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＤ８４Ｈ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＤ８４Ｋ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＤ８４Ｒ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ａ、及びＦ４２Ｋ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ａ、及びＦ４２Ｋ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＱ１２６Ｓ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＮ８８Ｓ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＮ８８Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＮ８８Ｇ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＮ８８Ｄ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＶ９１Ｅ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｈ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｋ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｒ；Ｈ１６Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＥ６２Ｑ；Ｈ１６Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＥ６２Ｑ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｃ１２５Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｃ１２５Ａ、及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｄ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｄ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｄ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｃ１２５Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＥ６２Ｑ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＥ６２Ｑ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｃ１２５Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；並びにＦ４２Ａ、Ｃ１２５Ａ及びＱ１２６Ｓのうちの１つを有する配列番号１のアミノ酸配列。いくつかの実施形態では、サイトカインは、配列番号９１に対して１つ以上の置換を有する、配列番号９１の配列を含むＩＬ－７ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、１つ以上の位置における置換は、位置Ｋ１０、Ｑ１１、Ｓ１４、Ｖ１５、Ｖ１８、Ｑ２２、Ｌ３５、Ｎ３６、Ｄ７４、Ｌ７７、Ｌ８０、Ｋ８１、Ｅ８４、Ｉ８８、Ｒ１３３、Ｑ１３６、Ｅ１３７、Ｔ１４０、Ｎ１４３、及びＫ１４４から選択される。いくつかの実施形態では、位置Ｋ８１及びＴ１４０における置換は、Ｋ８１Ａ及びＴ１４０Ａである。いくつかの実施形態では、サイトカインは、配列番号９５に対して１つ以上の置換を有する、配列番号９５の配列を含むＩＬ－１０ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号９９～１１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－２１ポリペプチド、又はその機能的断片、又はそのバリアントである。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２１ポリペプチドは、配列番号１１５に対して１つ以上の置換を有する配列番号１１５の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２１ポリペプチドは、配列番号１１５の配列、又は位置Ｒ５、Ｉ８、Ｒ９、Ｒ１１、Ｑ１２、Ｉ１４、Ｄ１５、Ｄ１８、Ｑ１９、Ｙ２３、Ｒ６５、Ｓ７０、Ｋ７２、Ｋ７３、Ｋ７５、Ｒ７６、Ｋ７７、Ｓ８０、Ｑ１１６、及びＫ１１７からなる群から選択される１つ以上の位置におけるアミノ酸置換を含む配列を含み、位置の番号付けは、配列番号１１５のアミノ酸配列に従った番号である。いくつかの実施形態では、遺伝子操作された細胞によって共発現されるタグは、ＥＧＦＲｔタグである。いくつかの実施形態では、遺伝子操作された細胞によって標的化された抗原は、腫瘍関連抗原からのネオエピトープ、ＴＳＨＲ、ＣＤ１９、ＣＤ１２３、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ１７１、ＣＳ－１、ＣＬＬ－１、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖｌｌｌ、ＧＤ２、ＧＤ３、ＢＣＭＡ、Ｔｎ Ａｇ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＦＬＴ３、ＦＡＰ、ＴＡＧ７２、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、メソセリン、ＩＬ－１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ＬｅｗｉｓＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ－β、ＳＳＥＡ－４、ＣＤ２０、葉酸受容体α、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ（Ｐｒｏｓｔａｓｅ）、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、エフリンＢ２、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐ１００、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、ＥｐｈＡ２、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体β、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、ＧｌｏｂｏＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１ Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴ１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ＭＡＧＥ－Ａ１、レグマイン、ＨＰＶ Ｅ６、Ｅ７、ＭＡＧＥ Ａ１、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、精子タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ ２、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、プロスタイン（ｐｒｏｓｔｅｉｎ）、サバイビン及びテロメラーゼ、ＰＣＴＡ－１／ガレクチン８、メランＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点（ｓａｒｃｏｍａ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ ｂｒｅａｋｐｏｉｎｔ）、ＭＬ－ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１ Ｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ－１、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、ＬＡＩＲ１、ＦＣＡＲ、ＬＩＬＲＡ２、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＢＳＴ２、ＥＭＲ２、ＬＹ７５、ＧＰＣ３、ＦＣＲＬ５、又はＩＧＬＬ１からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、遺伝子操作された細胞は、αβＴ細胞受容体を発現するＴ細胞、γδＴ細胞、ＮＫ Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、多能性幹細胞由来のＴ細胞又は人工多能性幹細胞由来のＴ細胞、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、多能性幹細胞由来のＮＫ細胞又は人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）由来のＮＫ細胞、キメラ抗原受容体を発現するように遺伝子操作されたＴ細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）、Ｔ細胞受容体を発現するように遺伝子操作されたＴ細胞（ＴＣＲ－Ｔ細胞）、ＣＤ８陽性Ｔ細胞、ＣＤ４陽性Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球、キメラ抗原受容体を発現するように遺伝子操作されたＮＫ細胞（ＣＡＲ－ＮＫ細胞）、キメラ抗原受容体を発現するように遺伝子操作されたＮＫ Ｔ細胞（ＣＡＲ－ＮＫ Ｔ細胞）、骨髄細胞、造血系細胞、造血幹細胞及び前駆細胞（ＨＳＣ）、造血多分化能前駆細胞（ＭＰＰ）、プレＴ細胞前駆細胞、Ｔ細胞前駆細胞、ＮＫ細胞前駆細胞のうちの少なくとも１つを含む。
一実施形態は、がんを治療する方法を提供し、本方法は、遺伝子操作された細胞との併用療法において、請求項１４７～１６８のいずれか一項に記載の標的化サイトカイン構築物を投与することを含む。いくつかの実施形態では、追加の治療剤を投与することを更に含む。いくつかの実施形態では、がんは、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）（非Ｔ細胞ＡＬＬを含む）、急性骨髄性白血病、Ｂ細胞性前リンパ球性白血病、Ｂ細胞性急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍、バーキットリンパ腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄白血病、慢性若しくは急性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、ヘアリー細胞白血病、ホジキン病、悪性リンパ増殖性疾患、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、意義不明の単クローン性γグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、多発性骨髄腫、骨髄異形成及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、形質細胞増殖性疾患（無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫若しくは無痛性性骨髄腫を含む）を含む）、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞腫瘍、形質細胞腫（形質細胞疾患、孤立性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、髄外性形質細胞腫、及び多発性形質細胞腫を含む）、ＰＯＥＭＳ症候群（Ｃｒｏｗ－Ｆｕｋａｓｅ症候群、高槻病、及びＰＥＰ症候群としても知られている）、縦隔原発Ｂ細胞性大細胞型リンパ腫（ＰＭＢＣ）、小細胞若しくは大細胞濾胞性リンパ腫、脾臓辺縁帯リンパ腫（ＳＭＺＬ）、全身性アミロイド軽鎖アミロイド―シス、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ）、Ｔ細胞リンパ腫、形質転換濾胞性リンパ腫若しくはワルデンストロームマクログロブリン血症、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、形質転換濾胞性リンパ腫（ＴＦＬ）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣＬ）、多発性骨髄腫、ヘアリー細胞リンパ腫／白血病、肺がん、小細胞肺がん、非小細胞肺（ＮＳＣＬ）がん、細気管支肺胞細胞肺がん、扁平上皮がん、肺腺がん、肺扁平上皮がん、腹膜がん、頭頸部がん、骨がん、膵臓がん、皮膚がん、頭頸部のがん、皮膚若しくは眼球内黒色腫、甲状腺がん、子宮がん、消化器がん、卵巣がん、直腸がん、肛門部のがん、胃がん、胃がん、結腸がん、乳がん、子宮内膜がん、子宮がん、卵管のがん腫、子宮頸部のがん腫、膣のがん腫、外陰がん、ホジキン病、食道がん、小腸がん、内分泌系がん、甲状腺がん、副甲状腺がん、副腎がん、軟部組織の肉腫、尿道がん、陰茎がん、前立腺がん、膀胱がん、腎臓若しくは尿管がん、腎細胞がん、腎盂のがん腫、中皮腫、膀胱がん、肝臓がん、幹細胞腫、肝細胞がん、子宮頸がん、唾液腺がん、胆道がん、中枢神経系（ＣＮＳ）の腫瘍、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、多形神経膠芽腫、星状細胞腫、シュワン細胞腫、上衣腫、髄芽腫、髄膜腫、扁平上皮がん、下垂体腺腫及びユーイング肉腫であり、上記がんのいずれかの難治性バージョン、又は上記がんのうちの１つ以上の組み合わせを含む。
一実施形態は、本開示による標的化サイトカイン構築物と、薬学的に許容される賦形剤、担体、若しくは希釈剤のうちの少なくとも１つ、又はこれらの任意の組み合わせと、を含む、医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、遺伝子操作された細胞の集団を更に含む。一実施形態は、本開示による、標的化サイトカイン構築物を含む医薬組成物と、標的化サイトカイン構築物を対象に投与するために明記された説明書と、を有する、細胞療法キットを提供する。いくつかの実施形態では、細胞療法キットは、遺伝子操作された細胞の集団を含む医薬組成物と、遺伝子操作された細胞の集団を対象に投与するために明記された説明書と、を更に含む。いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物を含む医薬組成物及び遺伝子操作された細胞の集団を含む医薬組成物は、連続投与用又は同時投与用である。
参照による組み込み
本明細書で言及される全ての刊行物、特許、及び特許出願は、あたかも各個々の刊行物、特許、又は特許出願が参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示されているのと同じ範囲で、参照により本明細書に組み込まれる。
本開示の新規な特徴は、添付の特許請求の範囲に詳細に記載される。本開示の特徴及び利点のより良好な理解は、本開示の原理が利用される例示的な実施形態を記載する以下の詳細な説明及び添付の図面を参照することによって得られるであろう。
遺伝子操作された細胞（例えば、ＣＡＲ形質導入Ｔ細胞）上で選択的に発現された標的抗原（ドメイン又は受容体）を認識する細胞結合ドメインを有する、（例えば、ムテインサイトカインなどの野生型サイトカインタンパク質、又はその断片若しくはバリアントが、いくつかの例では、変異体ＩＬ－２（変異体ＩＬ２、又はムテインＩＬ－２、又はムテインＩＬ２とも称する）である）サイトカインポリペプチドを含む標的化サイトカイン構築物、又は非標的化サイトカインポリペプチドが、標的抗原を発現する遺伝子操作された細胞若しくは標的抗原を発現しない他の細胞を刺激するためにどのように働くかについての一般的なメカニズムを示す図である。 抗ＣＡＲ抗体である細胞結合ドメインを含む例示的な標的化サイトカイン構築物の優先活性を実証するアッセイの結果、具体的には、１人のドナーから生成された遺伝子操作された細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）を、示された構築物：ＩＬ－２Ｒβγ結合ポリペプチドＩＬ２ｍ１に融合した非ＣＡＲ結合抗体（対照ＩＬ２ｍ１）、ＩＬ－２Ｒβγ結合ポリペプチドＩＬ２ｍ１に融合したＣＡＲ結合抗体（抗ＣＡＲ ＩＬ２ｍ１）、又は対照として非標的化サイトカイン（ＩＬ－２）を用いて培養した、リン酸化ＳＴＡＴ５アッセイの結果を示す図である。示された濃度におけるＣＡＲ＋ Ｔ細胞又はＣＡＲ－ Ｔ細胞のいずれかについて、ｐＳＴＡＴ５発現細胞の割合を示した。 抗ＣＡＲ抗体である細胞結合ドメインを含む例示的な標的化サイトカイン構築物の優先活性を実証するアッセイの結果、具体的には、１人のドナーから生成された遺伝子操作された細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）を、示された構築物：ＩＬ－２Ｒβγ結合ポリペプチドＩＬ２ｍ１に融合した非ＣＡＲ結合抗体（対照ＩＬ２ｍ１）、ＩＬ－２Ｒβγ結合ポリペプチドＩＬ２ｍ１に融合したＣＡＲ結合抗体（抗ＣＡＲ ＩＬ２ｍ１）、又は対照として非標的化サイトカイン（ＩＬ－２）を用いて培養した、リン酸化ＳＴＡＴ５アッセイの結果を示す図である。示された濃度におけるＣＡＲ＋ Ｔ細胞又はＣＡＲ－ Ｔ細胞のいずれかについて、ｐＳＴＡＴ５発現細胞の割合を示した。 抗ＣＡＲ抗体である細胞結合ドメインを含む例示的な標的化サイトカイン構築物の優先活性を実証するアッセイの結果、具体的には、１人のドナーから生成された遺伝子操作された細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）を、示された構築物：ＩＬ－２Ｒβγ結合ポリペプチドＩＬ２ｍ１に融合した非ＣＡＲ結合抗体（対照ＩＬ２ｍ１）、ＩＬ－２Ｒβγ結合ポリペプチドＩＬ２ｍ１に融合したＣＡＲ結合抗体（抗ＣＡＲ ＩＬ２ｍ１）、又は対照として非標的化サイトカイン（ＩＬ－２）を用いて培養した、リン酸化ＳＴＡＴ５アッセイの結果を示す図である。示された濃度におけるＣＡＲ＋ Ｔ細胞又はＣＡＲ－ Ｔ細胞のいずれかについて、ｐＳＴＡＴ５発現細胞の割合を示した。 抗ＣＡＲ抗体である細胞結合ドメインを含む例示的な標的化サイトカイン構築物の優先活性を実証するアッセイの結果、具体的には、図２とは別のドナーから生成された遺伝子操作された細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）を、示された構築物：ＩＬ－２Ｒβγ結合ポリペプチドＩＬ２ｍ２に融合した非ＣＡＲ結合抗体（対照ＩＬ２ｍ２）、ＩＬ－２Ｒβγ結合ポリペプチドＩＬ２ｍ２に融合したＣＡＲ結合抗体（抗ＣＡＲ ＩＬ２ｍ２）、又は対照として非標的化サイトカイン（ＩＬ－２）を用いて培養した、リン酸化ＳＴＡＴ５アッセイの結果を示す図である。示された濃度におけるＣＡＲ＋ Ｔ細胞又はＣＡＲ－ Ｔ細胞のいずれかについて、ｐＳＴＡＴ５発現細胞の割合を示した。 抗ＣＡＲ抗体である細胞結合ドメインを含む例示的な標的化サイトカイン構築物の優先活性を実証するアッセイの結果、具体的には、図２とは別のドナーから生成された遺伝子操作された細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）を、示された構築物：ＩＬ－２Ｒβγ結合ポリペプチドＩＬ２ｍ２に融合した非ＣＡＲ結合抗体（対照ＩＬ２ｍ２）、ＩＬ－２Ｒβγ結合ポリペプチドＩＬ２ｍ２に融合したＣＡＲ結合抗体（抗ＣＡＲ ＩＬ２ｍ２）、又は対照として非標的化サイトカイン（ＩＬ－２）を用いて培養した、リン酸化ＳＴＡＴ５アッセイの結果を示す図である。示された濃度におけるＣＡＲ＋ Ｔ細胞又はＣＡＲ－ Ｔ細胞のいずれかについて、ｐＳＴＡＴ５発現細胞の割合を示した。 抗ＣＡＲ抗体である細胞結合ドメインを含む例示的な標的化サイトカイン構築物の優先活性を実証するアッセイの結果、具体的には、図２とは別のドナーから生成された遺伝子操作された細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）を、示された構築物：ＩＬ－２Ｒβγ結合ポリペプチドＩＬ２ｍ２に融合した非ＣＡＲ結合抗体（対照ＩＬ２ｍ２）、ＩＬ－２Ｒβγ結合ポリペプチドＩＬ２ｍ２に融合したＣＡＲ結合抗体（抗ＣＡＲ ＩＬ２ｍ２）、又は対照として非標的化サイトカイン（ＩＬ－２）を用いて培養した、リン酸化ＳＴＡＴ５アッセイの結果を示す図である。示された濃度におけるＣＡＲ＋ Ｔ細胞又はＣＡＲ－ Ｔ細胞のいずれかについて、ｐＳＴＡＴ５発現細胞の割合を示した。 非標的化サイトカイン（ＩＬ－２）、又は抗ＣＡＲ抗体である細胞結合ドメイン及びＩＬ－２Ｒβγ結合ポリペプチド（ＩＬ２ｍ１又はＩＬ２ｍ２）を含む標的化サイトカイン構築物のいずれかを用いた長期培養で達成された、培養物中のＣＡＲ＋ Ｔ細胞の発現頻度（左パネル）及び数（右パネル）を示す図である。抗ＣＡＲ ＩＬ２ｍ１、抗ＣＡＲ ＩＬ２ｍ２、対照ＩＬ－２、又はサイトカインを含まない細胞結合ドメインである抗ＣＡＲ抗体を、０．１ｎＭの濃度で最長１０日間培養した。ＣＡＲ＋ Ｔ細胞の数及び発現頻度は、示された時点でフローサイトメトリーによって測定された。 非標的化サイトカイン（ＩＬ－２）、又は抗ＣＡＲ抗体である細胞結合ドメイン及びＩＬ－２Ｒβγ結合ポリペプチド（ＩＬ２ｍ１又はＩＬ２ｍ２）を含む標的化サイトカイン構築物のいずれかを用いた長期培養で達成された、培養物中のＣＡＲ＋ Ｔ細胞の発現頻度（左パネル）及び数（右パネル）を示す図である。抗ＣＡＲ ＩＬ２ｍ１、抗ＣＡＲ ＩＬ２ｍ２、対照ＩＬ－２、又はサイトカインを含まない細胞結合ドメインである抗ＣＡＲ抗体を、０．１ｎＭの濃度で最長１０日間培養した。ＣＡＲ＋ Ｔ細胞の数及び発現頻度は、示された時点でフローサイトメトリーによって測定された。 本開示による、ＣＡＲ形質導入遺伝子操作されたＴ細胞を標的化するＣＡＲ標的化サイトカイン構築物の例示的な設計を示す図である。 本開示による、ＴＣＲ形質導入遺伝子操作されたＴ細胞を標的化するＴＣＲ標的化サイトカイン構築物の例示的な設計を示す図である。 成熟ＩＬ－２（図６Ａ、配列番号１）、ＩＬ－２Ｒα（図６Ｂ、配列番号２、ＩＬ－２Ｒβ（図６Ｃ、配列番号３）、及びＩＬ－２Ｒγ（図６Ｄ、配列番号４）ポリペプチドのアミノ酸配列を示す図である。 成熟ＩＬ－２（図６Ａ、配列番号１）、ＩＬ－２Ｒα（図６Ｂ、配列番号２、ＩＬ－２Ｒβ（図６Ｃ、配列番号３）、及びＩＬ－２Ｒγ（図６Ｄ、配列番号４）ポリペプチドのアミノ酸配列を示す図である。 成熟ＩＬ－２（図６Ａ、配列番号１）、ＩＬ－２Ｒα（図６Ｂ、配列番号２、ＩＬ－２Ｒβ（図６Ｃ、配列番号３）、及びＩＬ－２Ｒγ（図６Ｄ、配列番号４）ポリペプチドのアミノ酸配列を示す図である。 成熟ＩＬ－２（図６Ａ、配列番号１）、ＩＬ－２Ｒα（図６Ｂ、配列番号２、ＩＬ－２Ｒβ（図６Ｃ、配列番号３）、及びＩＬ－２Ｒγ（図６Ｄ、配列番号４）ポリペプチドのアミノ酸配列を示す図である。 野生型成熟ＩＬ－２ポリペプチド（配列番号１）のアミノ酸配列を示す図である。「Ｘ」は、本開示の変異体ＩＬ－２ポリペプチドを生成するために、野生型ＩＬ－２ポリペプチドの配列において別のアミノ酸に置換されたアミノ酸を示す。 それぞれ、本開示による３つの異なる例示的なＣＡＲ標的化サイトカイン構築物の概略図である。図８Ａは、重鎖のうちの１つのＣ末端に融合された変異体ＩＬ－２ポリペプチドを有する二価抗体を示す図である。図８Ｂは、可変領域を欠く重鎖のＣ末端に融合された変異体ＩＬ－２ポリペプチドを有する一価抗体を示す図である。図８Ｃは、可変領域を欠く重鎖のＮ末端に融合された変異体ＩＬ－２ポリペプチドを有する一価抗体を示す図である。 それぞれ、本開示による３つの異なる例示的なＣＡＲ標的化サイトカイン構築物の概略図である。図８Ａは、重鎖のうちの１つのＣ末端に融合された変異体ＩＬ－２ポリペプチドを有する二価抗体を示す図である。図８Ｂは、可変領域を欠く重鎖のＣ末端に融合された変異体ＩＬ－２ポリペプチドを有する一価抗体を示す図である。図８Ｃは、可変領域を欠く重鎖のＮ末端に融合された変異体ＩＬ－２ポリペプチドを有する一価抗体を示す図である。 それぞれ、本開示による３つの異なる例示的なＣＡＲ標的化サイトカイン構築物の概略図である。図８Ａは、重鎖のうちの１つのＣ末端に融合された変異体ＩＬ－２ポリペプチドを有する二価抗体を示す図である。図８Ｂは、可変領域を欠く重鎖のＣ末端に融合された変異体ＩＬ－２ポリペプチドを有する一価抗体を示す図である。図８Ｃは、可変領域を欠く重鎖のＮ末端に融合された変異体ＩＬ－２ポリペプチドを有する一価抗体を示す図である。 成熟ＩＬ－１０（図９Ａ、配列番号９５）、ＩＬ－１０ＲＡ（図９Ｂ、配列番号９６）、ＩＬ－１０ＲＢ（図９Ｃ、配列番号９７）、及び成熟単量体ＩＬ－１０（図９Ｄ、配列番号９８）のポリペプチドのアミノ酸配列を示す図である。 成熟ＩＬ－１０（図９Ａ、配列番号９５）、ＩＬ－１０ＲＡ（図９Ｂ、配列番号９６）、ＩＬ－１０ＲＢ（図９Ｃ、配列番号９７）、及び成熟単量体ＩＬ－１０（図９Ｄ、配列番号９８）のポリペプチドのアミノ酸配列を示す図である。 成熟ＩＬ－１０（図９Ａ、配列番号９５）、ＩＬ－１０ＲＡ（図９Ｂ、配列番号９６）、ＩＬ－１０ＲＢ（図９Ｃ、配列番号９７）、及び成熟単量体ＩＬ－１０（図９Ｄ、配列番号９８）のポリペプチドのアミノ酸配列を示す図である。 成熟ＩＬ－１０（図９Ａ、配列番号９５）、ＩＬ－１０ＲＡ（図９Ｂ、配列番号９６）、ＩＬ－１０ＲＢ（図９Ｃ、配列番号９７）、及び成熟単量体ＩＬ－１０（図９Ｄ、配列番号９８）のポリペプチドのアミノ酸配列を示す図である。 野生型成熟ＩＬ－１０ポリペプチド（図１０Ａ、配列番号９５）及び成熟単量体ＩＬ－１０（図１０Ｂ、配列番号９８）のアミノ酸配列を示す図である。「Ｘ」は、本開示の変異体ＩＬ－１０ポリペプチドを生成するために、野生型ＩＬ－１０ポリペプチドの配列において別のアミノ酸に置換されたアミノ酸を示す。 野生型成熟ＩＬ－１０ポリペプチド（図１０Ａ、配列番号９５）及び成熟単量体ＩＬ－１０（図１０Ｂ、配列番号９８）のアミノ酸配列を示す図である。「Ｘ」は、本開示の変異体ＩＬ－１０ポリペプチドを生成するために、野生型ＩＬ－１０ポリペプチドの配列において別のアミノ酸に置換されたアミノ酸を示す。 野生型成熟ＩＬ－１０ポリペプチド（図１１Ａ、配列番号９５）及び成熟単量体ＩＬ－１０（図１１Ｂ、配列番号９８）のアミノ酸配列を示す図である。白色のボックスは、ＩＬ－１０ＲＡに対するＩＬ－１０の親和性を低下させるために置換された残基を示し、灰色に塗ったボックスは、ＩＬ－１０ＲＢに対するＩＬ－１０の親和性を修飾するために置換された残基を示す。各位置の野生型残基の代わりに置換されたアミノ酸が示されている。 野生型成熟ＩＬ－１０ポリペプチド（図１１Ａ、配列番号９５）及び成熟単量体ＩＬ－１０（図１１Ｂ、配列番号９８）のアミノ酸配列を示す図である。白色のボックスは、ＩＬ－１０ＲＡに対するＩＬ－１０の親和性を低下させるために置換された残基を示し、灰色に塗ったボックスは、ＩＬ－１０ＲＢに対するＩＬ－１０の親和性を修飾するために置換された残基を示す。各位置の野生型残基の代わりに置換されたアミノ酸が示されている。 野生型成熟ＩＬ－１０ポリペプチド（図１１Ａ、配列番号９５）及び成熟単量体ＩＬ－１０（図１１Ｂ、配列番号９８）のアミノ酸配列を示す図である。白色のボックスは、ＩＬ－１０ＲＡに対するＩＬ－１０の親和性を低下させるために置換された残基を示し、灰色に塗ったボックスは、ＩＬ－１０ＲＢに対するＩＬ－１０の親和性を修飾するために置換された残基を示す。各位置の野生型残基の代わりに置換されたアミノ酸が示されている。 野生型成熟ＩＬ－１０ポリペプチド（図１１Ａ、配列番号９５）及び成熟単量体ＩＬ－１０（図１１Ｂ、配列番号９８）のアミノ酸配列を示す図である。白色のボックスは、ＩＬ－１０ＲＡに対するＩＬ－１０の親和性を低下させるために置換された残基を示し、灰色に塗ったボックスは、ＩＬ－１０ＲＢに対するＩＬ－１０の親和性を修飾するために置換された残基を示す。各位置の野生型残基の代わりに置換されたアミノ酸が示されている。 （ＣＡＲ Ｔ細胞によって発現されるｓｃＦｖを標的化する）抗ｓｃＦｖ抗体である細胞結合ドメイン、及びＩＬ－２ムテイン（ｍ１（図１２Ｂ）、ｍ２（図１２Ｃ）、ｍ３（図１２Ｄ）、ｍ４（図１２Ｅ）の、ｍ５（図１２Ｆ））を含むいくつかの例示的な標的化サイトカイン構築物の優先活性を実証するアッセイの結果、具体的には、１人のドナーから生成された遺伝子操作された細胞（ＣＡＲ非発現Ｔ細胞（ＣＡＲ－）との混合物中のＣＡＲ－Ｔ細胞（ＣＡＲ＋））を、示された構築物を用いて培養した、リン酸化ＳＴＡＴ５アッセイの結果を示す図である。示された濃度におけるＣＡＲ＋ Ｔ細胞又はＣＡＲ－ Ｔ細胞のいずれかについて、ｐＳＴＡＴ５発現細胞の割合を示した。図１２Ａは、このアッセイで試験された構築物の図である。 （ＣＡＲ Ｔ細胞によって発現されるｓｃＦｖを標的化する）抗ｓｃＦｖ抗体である細胞結合ドメイン、及びＩＬ－２ムテイン（ｍ１（図１２Ｂ）、ｍ２（図１２Ｃ）、ｍ３（図１２Ｄ）、ｍ４（図１２Ｅ）の、ｍ５（図１２Ｆ））を含むいくつかの例示的な標的化サイトカイン構築物の優先活性を実証するアッセイの結果、具体的には、１人のドナーから生成された遺伝子操作された細胞（ＣＡＲ非発現Ｔ細胞（ＣＡＲ－）との混合物中のＣＡＲ－Ｔ細胞（ＣＡＲ＋））を、示された構築物を用いて培養した、リン酸化ＳＴＡＴ５アッセイの結果を示す図である。示された濃度におけるＣＡＲ＋ Ｔ細胞又はＣＡＲ－ Ｔ細胞のいずれかについて、ｐＳＴＡＴ５発現細胞の割合を示した。図１２Ａは、このアッセイで試験された構築物の図である。 （ＣＡＲ Ｔ細胞によって発現されるｓｃＦｖを標的化する）抗ｓｃＦｖ抗体である細胞結合ドメイン、及びＩＬ－２ムテイン（ｍ１（図１２Ｂ）、ｍ２（図１２Ｃ）、ｍ３（図１２Ｄ）、ｍ４（図１２Ｅ）の、ｍ５（図１２Ｆ））を含むいくつかの例示的な標的化サイトカイン構築物の優先活性を実証するアッセイの結果、具体的には、１人のドナーから生成された遺伝子操作された細胞（ＣＡＲ非発現Ｔ細胞（ＣＡＲ－）との混合物中のＣＡＲ－Ｔ細胞（ＣＡＲ＋））を、示された構築物を用いて培養した、リン酸化ＳＴＡＴ５アッセイの結果を示す図である。示された濃度におけるＣＡＲ＋ Ｔ細胞又はＣＡＲ－ Ｔ細胞のいずれかについて、ｐＳＴＡＴ５発現細胞の割合を示した。図１２Ａは、このアッセイで試験された構築物の図である。 （ＣＡＲ Ｔ細胞によって発現されるｓｃＦｖを標的化する）抗ｓｃＦｖ抗体である細胞結合ドメイン、及びＩＬ－２ムテイン（ｍ１（図１２Ｂ）、ｍ２（図１２Ｃ）、ｍ３（図１２Ｄ）、ｍ４（図１２Ｅ）の、ｍ５（図１２Ｆ））を含むいくつかの例示的な標的化サイトカイン構築物の優先活性を実証するアッセイの結果、具体的には、１人のドナーから生成された遺伝子操作された細胞（ＣＡＲ非発現Ｔ細胞（ＣＡＲ－）との混合物中のＣＡＲ－Ｔ細胞（ＣＡＲ＋））を、示された構築物を用いて培養した、リン酸化ＳＴＡＴ５アッセイの結果を示す図である。示された濃度におけるＣＡＲ＋ Ｔ細胞又はＣＡＲ－ Ｔ細胞のいずれかについて、ｐＳＴＡＴ５発現細胞の割合を示した。図１２Ａは、このアッセイで試験された構築物の図である。 （ＣＡＲ Ｔ細胞によって発現されるｓｃＦｖを標的化する）抗ｓｃＦｖ抗体である細胞結合ドメイン、及びＩＬ－２ムテイン（ｍ１（図１２Ｂ）、ｍ２（図１２Ｃ）、ｍ３（図１２Ｄ）、ｍ４（図１２Ｅ）の、ｍ５（図１２Ｆ））を含むいくつかの例示的な標的化サイトカイン構築物の優先活性を実証するアッセイの結果、具体的には、１人のドナーから生成された遺伝子操作された細胞（ＣＡＲ非発現Ｔ細胞（ＣＡＲ－）との混合物中のＣＡＲ－Ｔ細胞（ＣＡＲ＋））を、示された構築物を用いて培養した、リン酸化ＳＴＡＴ５アッセイの結果を示す図である。示された濃度におけるＣＡＲ＋ Ｔ細胞又はＣＡＲ－ Ｔ細胞のいずれかについて、ｐＳＴＡＴ５発現細胞の割合を示した。図１２Ａは、このアッセイで試験された構築物の図である。 （ＣＡＲ Ｔ細胞によって発現されるｓｃＦｖを標的化する）抗ｓｃＦｖ抗体である細胞結合ドメイン、及びＩＬ－２ムテイン（ｍ１（図１２Ｂ）、ｍ２（図１２Ｃ）、ｍ３（図１２Ｄ）、ｍ４（図１２Ｅ）の、ｍ５（図１２Ｆ））を含むいくつかの例示的な標的化サイトカイン構築物の優先活性を実証するアッセイの結果、具体的には、１人のドナーから生成された遺伝子操作された細胞（ＣＡＲ非発現Ｔ細胞（ＣＡＲ－）との混合物中のＣＡＲ－Ｔ細胞（ＣＡＲ＋））を、示された構築物を用いて培養した、リン酸化ＳＴＡＴ５アッセイの結果を示す図である。示された濃度におけるＣＡＲ＋ Ｔ細胞又はＣＡＲ－ Ｔ細胞のいずれかについて、ｐＳＴＡＴ５発現細胞の割合を示した。図１２Ａは、このアッセイで試験された構築物の図である。 （ＣＡＲ－Ｔ細胞によって選択的に発現されるタグ分子を標的化する）抗タグ分子である細胞結合ドメイン、及びＩＬ－２ムテイン（ｍ１（図１３Ｂ）、ｍ２（図１３Ｃ）、ｍ３（図１３Ｄ）、ｍ４（図１３Ｅ）、ｍ５（図１３Ｆ））を含むいくつかの例示的な標的化サイトカイン構築物の優先活性を実証するアッセイの結果、具体的には、１人のドナーから生成された遺伝子操作された細胞（ＣＡＲ非発現Ｔ細胞（ＣＡＲ－）との混合物中のＣＡＲ－Ｔ細胞（ＣＡＲ＋））を、示された構築物を用いて培養した、リン酸化ＳＴＡＴ５アッセイの結果を示す図である。示された濃度におけるＣＡＲ＋ Ｔ細胞又はＣＡＲ－ Ｔ細胞のいずれかについて、ｐＳＴＡＴ５発現細胞の割合を示した。図１３Ａは、このアッセイで試験された構築物の図である。 （ＣＡＲ－Ｔ細胞によって選択的に発現されるタグ分子を標的化する）抗タグ分子である細胞結合ドメイン、及びＩＬ－２ムテイン（ｍ１（図１３Ｂ）、ｍ２（図１３Ｃ）、ｍ３（図１３Ｄ）、ｍ４（図１３Ｅ）、ｍ５（図１３Ｆ））を含むいくつかの例示的な標的化サイトカイン構築物の優先活性を実証するアッセイの結果、具体的には、１人のドナーから生成された遺伝子操作された細胞（ＣＡＲ非発現Ｔ細胞（ＣＡＲ－）との混合物中のＣＡＲ－Ｔ細胞（ＣＡＲ＋））を、示された構築物を用いて培養した、リン酸化ＳＴＡＴ５アッセイの結果を示す図である。示された濃度におけるＣＡＲ＋ Ｔ細胞又はＣＡＲ－ Ｔ細胞のいずれかについて、ｐＳＴＡＴ５発現細胞の割合を示した。図１３Ａは、このアッセイで試験された構築物の図である。 （ＣＡＲ－Ｔ細胞によって選択的に発現されるタグ分子を標的化する）抗タグ分子である細胞結合ドメイン、及びＩＬ－２ムテイン（ｍ１（図１３Ｂ）、ｍ２（図１３Ｃ）、ｍ３（図１３Ｄ）、ｍ４（図１３Ｅ）、ｍ５（図１３Ｆ））を含むいくつかの例示的な標的化サイトカイン構築物の優先活性を実証するアッセイの結果、具体的には、１人のドナーから生成された遺伝子操作された細胞（ＣＡＲ非発現Ｔ細胞（ＣＡＲ－）との混合物中のＣＡＲ－Ｔ細胞（ＣＡＲ＋））を、示された構築物を用いて培養した、リン酸化ＳＴＡＴ５アッセイの結果を示す図である。示された濃度におけるＣＡＲ＋ Ｔ細胞又はＣＡＲ－ Ｔ細胞のいずれかについて、ｐＳＴＡＴ５発現細胞の割合を示した。図１３Ａは、このアッセイで試験された構築物の図である。 （ＣＡＲ－Ｔ細胞によって選択的に発現されるタグ分子を標的化する）抗タグ分子である細胞結合ドメイン、及びＩＬ－２ムテイン（ｍ１（図１３Ｂ）、ｍ２（図１３Ｃ）、ｍ３（図１３Ｄ）、ｍ４（図１３Ｅ）、ｍ５（図１３Ｆ））を含むいくつかの例示的な標的化サイトカイン構築物の優先活性を実証するアッセイの結果、具体的には、１人のドナーから生成された遺伝子操作された細胞（ＣＡＲ非発現Ｔ細胞（ＣＡＲ－）との混合物中のＣＡＲ－Ｔ細胞（ＣＡＲ＋））を、示された構築物を用いて培養した、リン酸化ＳＴＡＴ５アッセイの結果を示す図である。示された濃度におけるＣＡＲ＋ Ｔ細胞又はＣＡＲ－ Ｔ細胞のいずれかについて、ｐＳＴＡＴ５発現細胞の割合を示した。図１３Ａは、このアッセイで試験された構築物の図である。 （ＣＡＲ－Ｔ細胞によって選択的に発現されるタグ分子を標的化する）抗タグ分子である細胞結合ドメイン、及びＩＬ－２ムテイン（ｍ１（図１３Ｂ）、ｍ２（図１３Ｃ）、ｍ３（図１３Ｄ）、ｍ４（図１３Ｅ）、ｍ５（図１３Ｆ））を含むいくつかの例示的な標的化サイトカイン構築物の優先活性を実証するアッセイの結果、具体的には、１人のドナーから生成された遺伝子操作された細胞（ＣＡＲ非発現Ｔ細胞（ＣＡＲ－）との混合物中のＣＡＲ－Ｔ細胞（ＣＡＲ＋））を、示された構築物を用いて培養した、リン酸化ＳＴＡＴ５アッセイの結果を示す図である。示された濃度におけるＣＡＲ＋ Ｔ細胞又はＣＡＲ－ Ｔ細胞のいずれかについて、ｐＳＴＡＴ５発現細胞の割合を示した。図１３Ａは、このアッセイで試験された構築物の図である。 （ＣＡＲ－Ｔ細胞によって選択的に発現されるタグ分子を標的化する）抗タグ分子である細胞結合ドメイン、及びＩＬ－２ムテイン（ｍ１（図１３Ｂ）、ｍ２（図１３Ｃ）、ｍ３（図１３Ｄ）、ｍ４（図１３Ｅ）、ｍ５（図１３Ｆ））を含むいくつかの例示的な標的化サイトカイン構築物の優先活性を実証するアッセイの結果、具体的には、１人のドナーから生成された遺伝子操作された細胞（ＣＡＲ非発現Ｔ細胞（ＣＡＲ－）との混合物中のＣＡＲ－Ｔ細胞（ＣＡＲ＋））を、示された構築物を用いて培養した、リン酸化ＳＴＡＴ５アッセイの結果を示す図である。示された濃度におけるＣＡＲ＋ Ｔ細胞又はＣＡＲ－ Ｔ細胞のいずれかについて、ｐＳＴＡＴ５発現細胞の割合を示した。図１３Ａは、このアッセイで試験された構築物の図である。 （ＣＡＲ－Ｔ細胞によって発現されるタグを標的化する）抗タグ抗体である細胞結合ドメイン、及びＩＬ－２ムテイン（ｍ１（図１４Ｂ）、ｍ２（図１４Ｃ）、ｍ３（図１４Ｄ）、ｍ４（図１４Ｅ）、ｍ５（図１４Ｆ））を含むいくつかの例示的な標的化サイトカイン構築物の優先活性を実証するアッセイの結果、具体的には、１人のドナーから生成された遺伝子操作された細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）を、示された構築物を用いて培養した、リン酸化ＳＴＡＴ５アッセイの結果を示す図である。示された濃度におけるＣＡＲ＋ Ｔ細胞又はＣＡＲ－ Ｔ細胞のいずれかについて、ｐＳＴＡＴ５発現細胞の割合を示した。図１４Ａは、このアッセイで試験された構築物の図である。 （ＣＡＲ－Ｔ細胞によって発現されるタグを標的化する）抗タグ抗体である細胞結合ドメイン、及びＩＬ－２ムテイン（ｍ１（図１４Ｂ）、ｍ２（図１４Ｃ）、ｍ３（図１４Ｄ）、ｍ４（図１４Ｅ）、ｍ５（図１４Ｆ））を含むいくつかの例示的な標的化サイトカイン構築物の優先活性を実証するアッセイの結果、具体的には、１人のドナーから生成された遺伝子操作された細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）を、示された構築物を用いて培養した、リン酸化ＳＴＡＴ５アッセイの結果を示す図である。示された濃度におけるＣＡＲ＋ Ｔ細胞又はＣＡＲ－ Ｔ細胞のいずれかについて、ｐＳＴＡＴ５発現細胞の割合を示した。図１４Ａは、このアッセイで試験された構築物の図である。 （ＣＡＲ－Ｔ細胞によって発現されるタグを標的化する）抗タグ抗体である細胞結合ドメイン、及びＩＬ－２ムテイン（ｍ１（図１４Ｂ）、ｍ２（図１４Ｃ）、ｍ３（図１４Ｄ）、ｍ４（図１４Ｅ）、ｍ５（図１４Ｆ））を含むいくつかの例示的な標的化サイトカイン構築物の優先活性を実証するアッセイの結果、具体的には、１人のドナーから生成された遺伝子操作された細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）を、示された構築物を用いて培養した、リン酸化ＳＴＡＴ５アッセイの結果を示す図である。示された濃度におけるＣＡＲ＋ Ｔ細胞又はＣＡＲ－ Ｔ細胞のいずれかについて、ｐＳＴＡＴ５発現細胞の割合を示した。図１４Ａは、このアッセイで試験された構築物の図である。 （ＣＡＲ－Ｔ細胞によって発現されるタグを標的化する）抗タグ抗体である細胞結合ドメイン、及びＩＬ－２ムテイン（ｍ１（図１４Ｂ）、ｍ２（図１４Ｃ）、ｍ３（図１４Ｄ）、ｍ４（図１４Ｅ）、ｍ５（図１４Ｆ））を含むいくつかの例示的な標的化サイトカイン構築物の優先活性を実証するアッセイの結果、具体的には、１人のドナーから生成された遺伝子操作された細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）を、示された構築物を用いて培養した、リン酸化ＳＴＡＴ５アッセイの結果を示す図である。示された濃度におけるＣＡＲ＋ Ｔ細胞又はＣＡＲ－ Ｔ細胞のいずれかについて、ｐＳＴＡＴ５発現細胞の割合を示した。図１４Ａは、このアッセイで試験された構築物の図である。 （ＣＡＲ－Ｔ細胞によって発現されるタグを標的化する）抗タグ抗体である細胞結合ドメイン、及びＩＬ－２ムテイン（ｍ１（図１４Ｂ）、ｍ２（図１４Ｃ）、ｍ３（図１４Ｄ）、ｍ４（図１４Ｅ）、ｍ５（図１４Ｆ））を含むいくつかの例示的な標的化サイトカイン構築物の優先活性を実証するアッセイの結果、具体的には、１人のドナーから生成された遺伝子操作された細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）を、示された構築物を用いて培養した、リン酸化ＳＴＡＴ５アッセイの結果を示す図である。示された濃度におけるＣＡＲ＋ Ｔ細胞又はＣＡＲ－ Ｔ細胞のいずれかについて、ｐＳＴＡＴ５発現細胞の割合を示した。図１４Ａは、このアッセイで試験された構築物の図である。 （ＣＡＲ－Ｔ細胞によって発現されるタグを標的化する）抗タグ抗体である細胞結合ドメイン、及びＩＬ－２ムテイン（ｍ１（図１４Ｂ）、ｍ２（図１４Ｃ）、ｍ３（図１４Ｄ）、ｍ４（図１４Ｅ）、ｍ５（図１４Ｆ））を含むいくつかの例示的な標的化サイトカイン構築物の優先活性を実証するアッセイの結果、具体的には、１人のドナーから生成された遺伝子操作された細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）を、示された構築物を用いて培養した、リン酸化ＳＴＡＴ５アッセイの結果を示す図である。示された濃度におけるＣＡＲ＋ Ｔ細胞又はＣＡＲ－ Ｔ細胞のいずれかについて、ｐＳＴＡＴ５発現細胞の割合を示した。図１４Ａは、このアッセイで試験された構築物の図である。 （ＴＣＲ形質導入Ｔ細胞によって発現されるタグを標的化する）抗タグ抗体である細胞結合ドメインを含む例示的な標的化サイトカイン構築物の優先結合を実証するアッセイの結果を示す図である。図１５Ａは、ＩＬ－２ムテインを有する、図１５Ｂで使用した抗タグ抗体を含む標的化サイトカイン構築物の図である。 （ＴＣＲ形質導入Ｔ細胞によって発現されるタグを標的化する）抗タグ抗体である細胞結合ドメインを含む例示的な標的化サイトカイン構築物の優先結合を実証するアッセイの結果を示す図である。図１５Ａは、ＩＬ－２ムテインを有する、図１５Ｂで使用した抗タグ抗体を含む標的化サイトカイン構築物の図である。
特定の定義
本明細書及び特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」には、文脈上明らかに別段の指示がない限り、複数の参照が含まれる。例えば、「キメラ膜貫通受容体ポリペプチド」という用語には、複数のキメラ膜貫通受容体ポリペプチドが含まれる。
「約」又は「およそ」という用語は、当業者が決定する特定の値の許容誤差範囲内を意味し、これは、値がどのように測定又は決定されるか、すなわち、計測システムの限界に部分的に依存する。例えば、「約」は、当技術分野の慣例に従って、１以内の標準偏差又は１を超える標準偏差を意味し得る。あるいは、「約」は、所与の値の最大２０％、最大１０％、最大５％、又は最大１％の範囲を意味し得る。あるいは、特に生物学的システム又は生物学的プロセスに関して、この用語は、値の一桁内、好ましくは５倍以内、より好ましくは２倍以内を意味し得る。本出願及び特許請求の範囲に特定の値が記載されている場合、特に明記しない限り、特定の値について許容誤差範囲内を意味する「約」という用語を想定すべきである。
本明細書で使用される場合、「細胞」は、一般に生物細胞を指す。細胞は、生物の基本的な構造単位、機能単位、及び／又は生物学的単位であり得る。細胞は、１つ以上の細胞を持つ任意の生物に由来し得る。いくつかの非限定的な例としては、原核細胞、真核細胞、細菌細胞、古細菌細胞、単細胞真核生物の細胞、原生動物細胞、植物由来の細胞（例えば、植物作物、果物、野菜、穀類、ダイズ、コーン、トウモロコシ、コムギ、種子、トマト、コメ、キャッサバ、サトウキビ、カボチャ、干し草、ジャガイモ、綿花、タイマ、タバコ、顕花植物、球果植物、裸子植物、シダ、ヒカゲノカズラ類、ツノゴケ類、苔類、蘚類）、藻類細胞（例えば、Ｂｏｔｒｙｏｃｏｃｃｕｓ ｂｒａｕｎｉｉ、Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎａｓ ｒｅｉｎｈａｒｄｔｉｉ、Ｎａｎｎｏｃｈｌｏｒｏｐｓｉｓ ｇａｄｉｔａｎａ、Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ ｐｙｒｅｎｏｉｄｏｓａ、Ｓａｒｇａｓｓｕｍ ｐａｔｅｎｓ Ｃ．Ａｇａｒｄｈなど）、海藻（例えば、コンブ）、真菌細胞（例えば、酵母細胞、キノコ由来の細胞）、動物細胞、無脊椎動物（例えば、ミバエ、刺胞動物、刺皮動物、線形動物など）由来の細胞、脊椎動物（例えば、魚、両生類、爬虫類、鳥、哺乳動物）由来の細胞、哺乳動物（例えば、ブタ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、げっ歯類、ラット、マウス、非ヒト霊長類、ヒトなど）由来の細胞などが挙げられる。場合によっては、細胞が天然生物に由来しないこともある（例えば、細胞は、合成的に作ることができ、人工細胞と呼ばれることがある）。
本明細書で使用される場合、「抗原」という用語は、選択的結合剤によって結合することができる分子又はその断片を指す。一例として、抗原は、受容体などの選択的結合剤によって結合することができるリガンドであり得る。別の例として、抗原は、免疫タンパク質（例えば、抗体）などの選択的結合剤によって結合することができる抗原分子であり得る。また、抗原は、その抗原に結合することができる抗体を産生するために動物において使用可能な分子又はその断片を指し得る。
「サイトカイン」は、始原細胞／初代細胞と標的細胞／エフェクター細胞との間のクロストークを媒介できる免疫調節ポリペプチドの一種である。サイトカインは、標的免疫細胞上の「サイトカイン受容体」に結合してシグナル伝達を活性化するために関連する可溶性形態又は細胞表面として機能することができる。本明細書で使用される場合、「サイトカイン受容体」は、細胞外細胞表面上のサイトカインに結合すると細胞内シグナル伝達を活性化する細胞表面上のポリペプチドである。サイトカインには、ケモカイン、インターフェロン、インターロイキン、リンホカイン、及び腫瘍壊死因子が含まれ得るが、これらに限定されない。サイトカインは、免疫細胞、内皮細胞、線維芽細胞、間質細胞を含む広範囲の細胞によって産生される。所与のサイトカインは、複数の細胞型によって産生されてもよい。サイトカインは、多面発現性であり、受容体が複数の免疫細胞サブセットで発現されるため、１つのサイトカインが複数の細胞のシグナル伝達経路を活性化することができる。しかしながら、細胞型に応じて、サイトカインのシグナル伝達現象は、活性化、増殖、生存、アポトーシス、エフェクター機能、及び他の免疫調節タンパク質の分泌など、異なる下流の細胞現象を引き起こす可能性がある。いくつかの実施形態では、所与のサイトカインは、変異体サイトカインポリペプチド（本明細書では、ムテインサイトカイン、例えば、ムテインＩＬ－２、ムテインＩＬ－７とも称する）など、野生型サイトカインポリペプチド、その断片、又はそのバリアントである。
本明細書で使用される場合、「抗原結合ドメイン」とは、抗原決定基に特異的に結合する分子を指す。標的化部分又は抗原結合ドメインは、タンパク質、炭水化物、脂質、又は他の化学化合物であり得る。これには、抗体、抗体断片（Ｃｈａｍｅｓ ｅｔ ａｌ，２００９；Ｃｈａｎ ＆ Ｃａｒｔｅｒ，２０１０；Ｌｅａｖｙ，２０１０；Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ＆ Ｈｕｄｓｏｎ，２００５）、足場抗原結合タンパク質（Ｇｅｂａｕｅｒ ａｎｄ Ｓｋｅｒｒａ，２００９；Ｓｔｕｍｐｐ ｅｔ ａｌ，２００８）、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、ミニボディ（Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏ ｅｔ ａｌ，１９９４）、重鎖抗体の可変ドメイン（ナノボディ、ＶＨＨ）、新しい抗原受容体の可変ドメイン（ＶＮＡＲ）、炭水化物結合ドメイン（ＣＢＤ）（Ｂｌａｋｅ ｅｔ ａｌ，２００６）、コラーゲン結合ドメイン（Ｋｎｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ，２０００）、レクチン結合タンパク質（テトラネクチン）、コラーゲン結合タンパク質、アドネクチン／フィブロネクチン（Ｌｉｐｏｖｓｅｋ，２０１１）、血清トランスフェリン（トランスボディ）、エビボディ、プロテインＡのＺドメイン（Ａｆｆｉｂｏｄｙ）などのプロテインＡ由来分子、（Ｎｙｇｒｅｎ ｅｔ ａｌ，２００８）、Ａドメイン（Ａｖｉｍｅｒ／Ｍａｘｉｂｏｄｙ）、アルファボディ（国際公開第２０１０／０６６７４０）、Ａｖｉｍｅｒ／Ｍａｘｉｂｏｄｙ、設計されたアンキリン－リピートドメイン（ＤＡＲＰｉｎｓ）（Ｓｔｕｍｐｐ ｅｔ ａｌ，２００８）、アンチカリン（Ｓｋｅｒｒａ ｅｔ ａｌ，２００８）、ヒトガンマ－クリスタリン又はユビキチン（Ａｆｆｉｌｉｎ分子）、ヒトプロテアーゼ阻害剤のクーニッツ型ドメイン、ノッティン（Ｋｏｌｍａｒ ｅｔ ａｌ，２００８）、半減期を延長するための融合を伴う又は伴わない直鎖状又は拘束ペプチド、例えば（Ｆｃ融合－ペプチボディ）（Ｒｅｎｔｅｒｏ Ｒｅｂｏｌｌｏ ＆ Ｈｅｉｎｉｓ，２０１３；欧州特許第１１４４４５４（Ｂ２）号；Ｓｈｉｍａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ，２０１２；米国特許第７２０５２７５（Ｂ２）号）、拘束二環式ペプチド（米国特許出願公開第２０１８／０２００３７８（Ａ１）号）、アプタマー、遺伝子操作されたＣＨ２ドメイン（ナノ抗体、Ｄｉｍｉｔｒｏｖ，２００９））、及び遺伝子操作されたＣＨ３ドメイン「Ｆｃａｂ」ドメイン（Ｗｏｚｎｉａｋ－Ｋｎｏｐｐ ｅｔ ａｌ，２０１０）を挙げることができるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、免疫グロブリン様機能を有するタンパク質性結合分子を指す。抗体という用語には、抗体（例えば、モノクローナル抗体及びポリクローナル抗体）、並びにその誘導体、バリアント、及び断片が含まれる。抗体には、異なるクラスの免疫グロブリン（Ｉｇ）（すなわち、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＥ）並びにサブクラス（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２など）が挙げられるが、これらに限定されない。これらの誘導体、バリアント、又は断片とは、対応する抗体の結合特異性（例えば、完全及び／又は部分的）を保持する機能的誘導体又は断片を指す。抗原結合断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、可変断片（Ｆｖ）、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ミニボディ、ダイアボディ、及び単一ドメイン抗体（「ｓｄＡｂ」又は「ナノボディ」又は「ラクダ類」）が含まれる。抗体という用語には、最適化された、遺伝子操作された、又は化学的に共役された抗体及び抗体の抗原結合断片が含まれる。最適化された抗体の例には、親和性成熟抗体が挙げられる。遺伝子操作された抗体の例には、Ｆｃ最適化抗体（例えば、断片結晶化可能領域において最適化された抗体）及び多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）が挙げられる。
本明細書で使用される場合、「Ｆｃ受容体」又は「ＦｃＲ」という用語とは、一般に、抗体のＦｃ領域に結合することができる受容体、又はその任意の誘導体、バリアント若しくは断片を指す。特定の実施形態では、ＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（γ受容体、ＦｃγＲ）に結合するものであり、アレルバリアント及びこれら受容体の選択的スプライスによる形態を含む、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、及びＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）サブクラスの受容体を含む。ＦｃγＲＩＩ受容体には、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「阻害受容体」）が含まれ、これらは主にその細胞質ドメインが異なる同様のアミノ酸配列を有する。「ＦｃＲ」という用語には、母体ＩｇＧの胎児への移入の役割を担う新生児受容体ＦｃＲｎもまた含まれる。
本明細書で使用される場合、「エフェクター機能」とは、抗体アイソタイプによって変化する、抗体Ｆｃ領域とＦｃ受容体又はリガンドとの相互作用から生じる生化学的事象を意味する。エフェクター機能には、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞性食作用（ＡＤＣＰ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、サイトカイン分泌、抗原提示細胞による免疫複合性抗原取り込み、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御、及びＢ細胞活性化が挙げられるが、これらに限定されない。「抗体依存性細胞性細胞傷害」又は「ＡＤＣＣ」とは、ＦｃＲを発現する非特異的細胞傷害性細胞（ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及びマクロファージなど）が標的細胞上の結合抗体を認識し、その後、標的細胞の溶解を引き起す細胞性反応を指す。ＡＤＣＣは、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合と相関しており、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合の増加は、ＡＤＣＣ活性の増加につながる。対象の分子のＡＤＣＣ活性を評価するには、米国特許第５，５００，３６２号又は同第５，８２１，３３７号に記載されているようなインビトロＡＤＣＣアッセイを実施してもよい。本明細書で使用される場合、「ＡＤＣＰ」又は抗体依存性細胞性食作用は、ＦｃγＲを発現する非特異的細胞傷害性細胞が標的細胞上の結合抗体を認識し、その後、標的細胞の食作用を引き起こす細胞性反応を意味する。
「Ｆｃヌル」及び「Ｆｃヌルバリアント」は、互換的に使用され、エフェクター機能が減少又は消失した修飾Ｆｃを記述するために本明細書で使用される。このようなＦｃヌル又はＦｃヌルバリアントは、ＦｃγＲｓ及び／又は補体受容体に対して減少又は消失している。好ましくは、このようなＦｃヌル又はＦｃヌルバリアントは、エフェクター機能を消失している。修飾の例示的な方法としては、化学変成、アミノ酸残基の置換、挿入、及び欠失などが挙げられるが、これらに限定されない。結果として得られるバリアントのエフェクター機能を低下させるために、位置ｉ）ＩｇＧ１：Ｃ２２０、Ｃ２２６、Ｃ２２９、Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｇ２３７、Ｐ２３８、Ｓ２３９、Ｄ２６５、Ｓ２６７、Ｎ２９７、Ｌ３２８、Ｐ３３１、Ｋ３２２、Ａ３２７、及びＰ３２９、ｉｉ）ＩｇＧ２：Ｖ２３４、Ｇ２３７、Ｄ２６５、Ｈ２６８、Ｎ２９７、Ｖ３０９、Ａ３３０、Ａ３３１、Ｋ３２２、並びにｉｉｉ）ＩｇＧ４：Ｌ２３５、Ｇ２３７、Ｄ２６５、及びＥ３１８に１つ以上の修飾が導入されたＦｃ分子上の例示的なアミノ酸位置である（ＥＵ番号付け方式に基づく番号付け）。エフェクター機能が低下した例示的なＦｃ分子としては、以下の置換、ｉ）ＩｇＧ１：Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ｑ、Ｃ２２０Ｓ／Ｃ２２６Ｓ／Ｃ２２９Ｓ／Ｐ２３８Ｓ、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、Ｃ２２６Ｓ／Ｃ２２９Ｓ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ａ３３１Ｓ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９Ｇ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ／Ａ３２７Ｇ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ／Ａ３２７Ｇ及びＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７削除、ｉｉ）ＩｇＧ２：Ａ３３０Ｓ／Ａ３３１Ｓ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｄ２６５Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ａ３３１Ｓ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｄ２６５Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ａ３３１Ｓ、及びＨ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ａ３３１Ｓ、ｉｉｉ）ＩｇＧ４：Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｅ３１８Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｄ２６５Ａ、及びＬ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｄ２６５Ａ／Ｅ３１８Ａのうちの１つ以上を有するＦｃ分子が挙げられる。
本明細書で使用される場合、「エピトープ」とは、パラトープとして知られる抗体分子の可変領域に特異的に結合可能な決定基を指す。エピトープとは、アミノ酸又は糖側鎖などの分子のグループであり、通常、特定の構造特性並びに特定の電荷特性を有している。単一の抗原が２つ以上のエピトープを有してもよい。エピトープは、結合に直接関与するアミノ酸残基と、抗原結合ペプチドによって効果的に阻害されるアミノ酸残基などの、結合に直接関与しない他のアミノ酸残基（言い換えれば、アミノ酸残基が抗原結合ペプチドのフットプリント内にある）と、を含み得る。エピトープは、立体配座的又は直鎖状のいずれかであり得る。エピトープには、通常、少なくとも３個、より一般的には少なくとも５個又は８～１０個のアミノ酸が含まれる。同じエピトープを認識する抗体は、ある抗体が標的抗原への別の抗体の結合を阻害する能力を示す簡便なイムノアッセイ、例えば、「ビニング」で確認することができる。
本明細書で使用される場合、「リンカー」とは、２つのポリペプチド鎖を接続する分子を指す。リンカーは、ポリペプチドリンカー又は合成化学リンカーであり得る（例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，９（３），２９９－３０５，１９９６に開示されているものを参照）。ポリペプチドリンカーの長さ及び配列は、特に限定されておらず、当業者であれば目的に応じて選択することができる。ポリペプチドリンカーは、１つ以上のアミノ酸を含む。好ましくは、ポリペプチドリンカーは、少なくとも５個のアミノ酸の長さ、好ましくは５～１００個のアミノ酸、より好ましくは１０～５０個のアミノ酸の長さを有するペプチドである。一実施形態では、当該ペプチドリンカーは、Ｇ、Ｓ、ＧＳ、ＳＧ、ＳＧＧ、ＧＧＳ、及びＧＳＧ（Ｇ＝グリシン及びＳ＝セリン）である。別の実施形態では、当該ペプチドリンカーは、（ＧＧＧＳ）ｘＧｎ（配列番号５）又は（ＧＧＧＧＳ）ｘＧｎ（配列番号６）又は（ＧＧＧＧＧＳ）ｘＧｎ（配列番号７）であり、ｘ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２、及びｎ=０、１、２、又は３である。好ましくは、当該リンカーは、（ＧＧＧＧＳ）ｘＧｎであり、ｘ＝２、３、又は４、及びｎ＝０（配列番号８）であり、より好ましくは、当該リンカーは、（ＧＧＧＧＳ）ｘＧｎであり、ｘ＝３、及びｎ＝０（配列番号９）である。合成化学リンカーには、ペプチドを架橋するために日常的に使用される架橋剤、例えば、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）、スベリン酸ジスクシンイミジル（ＤＳＳ）、スベリン酸ビス（スクシンイミジル）（ＢＳ３）、ジチオビス（プロピオン酸スクシンイミジル）（ＤＳＰ）、ジチオビス（プロピオン酸スクシンイミジル）（ＤＴＳＳＰ）、エチレングリコールビス（コハク酸スクシンイミジル）（ＥＧＳ）、エチレングリコールビス（コハク酸スルホスクシンイミジル）（スルホ－ＥＧＳ）、酒石酸ジスクシンイミジル（ＤＳＴ）、酒石酸ジスルホスクシンイミジル（スルホ－ＤＳＴ）、ビス［２－（スクシンイミドキシカルボニルオキシ）エチル］スルホン（ＢＳＯＣＯＥＳ）、及びビス［２－（スクシンイミドキシカルボニルオキシ）エチル］スルホン（スルホ－ＢＳＯＣＯＥＳ）が挙げられる。
本明細書で使用される場合、「ヌクレオチド」という用語は、一般に、塩基－糖－リン酸の組み合わせを指す。ヌクレオチドは、合成ヌクレオチドを含むことができる。ヌクレオチドは、合成ヌクレオチド類似体を含むことができる。ヌクレオチドは、核酸配列の単量体単位（例えば、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）及びリボ核酸（ＲＮＡ））であり得る。ヌクレオチドという用語には、リボヌクレオシド三リン酸 アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）、ウリジン三リン酸（ＵＴＰ）、シトシン三リン酸（ＣＴＰ）、グアノシン三リン酸（ＧＴＰ）、及びｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＩＴＰ、ｄＵＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＴＴＰ、又はこれらの誘導体などのデオキシリボヌクレオシド三リン酸が含まれ得る。このような誘導体には、例えば、［αＳ］ｄＡＴＰ、７－デアザ－ｄＧＴＰ、及び７－デアザ－ｄＡＴＰ、並びにこれらを含む核酸分子にヌクレアーゼ耐性を与えるヌクレオチド誘導体が含まれ得る。本明細書で使用される場合、ヌクレオチドという用語は、いくつかの例では、ジデオキシリボヌクレオシド三リン酸（ｄｄＮＴＰ）及びその誘導体を指す。ジデオキシリボヌクレオシド三リン酸の例示としては、ｄｄＡＴＰ、ｄｄＣＴＰ、ｄｄＧＴＰ、ｄｄＩＴＰ、及びｄｄＴＴＰを挙げることができるが、これらに限定されない。ヌクレオチドは、非標識であり得るか、又は周知の技法によって検出可能に標識され得る。また、量子ドットによる標識も行うことができる。検出可能な標識としては、例えば、放射性同位体、蛍光標識、化学発光標識、生物発光標識、及び酵素標識を挙げることができる。ヌクレオチドの蛍光標識としては、フルオレセイン、５－カルボキシフルオレセイン（ＦＡＭ）、２’７’－ジメトキシ－４’５－ジクロロ－６－カルボキシフルオレセイン（ＪＯＥ）、ローダミン、６－カルボキシローダミン（Ｒ６Ｇ）、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチル－６－カルボキシローダミン（ＴＡＭＲＡ）、６－カルボキシ－Ｘ－ローダミン（ＲＯＸ）、４－（４’ジメチルアミノフェニルアゾ）安息香酸（ＤＡＢＣＹＬ）、カスケードブルー、オレゴングリーン、テキサスレッド、シアニン、及び５－（２’－アミノエチル）アミノナフタレン－１－スルホン酸（ＥＤＡＮＳ）を挙げることができるが、これらに限定されない。蛍光標識ヌクレオチドの具体例としては、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，Ｃａｌｉｆ．）から入手可能な［Ｒ６Ｇ］ｄＵＴＰ、［ＴＡＭＲＡ］ｄＵＴＰ、［Ｒ１１０］ｄＣＴＰ、［Ｒ６Ｇ］ｄＣＴＰ、［ＴＡＭＲＡ］ｄＣＴＰ、［ＪＯＥ］ｄｄＡＴＰ、［Ｒ６Ｇ］ｄｄＡＴＰ、［ＦＡＭ］ｄｄＣＴＰ、［Ｒ１１０］ｄｄＣＴＰ、［ＴＡＭＲＡ］ｄｄＧＴＰ、［ＲＯＸ］ｄｄＴＴＰ、［ｄＲ６Ｇ］ｄｄＡＴＰ、［ｄＲ１１０］ｄｄＣＴＰ、［ｄＴＡＭＲＡ］ｄｄＧＴＰ、及び［ｄＲＯＸ］ｄｄＴＴＰ、Ａｍｅｒｓｈａｍ（Ａｒｌｉｎｇｔｏｎ Ｈｅｉｇｈｔｓ，Ｉｌｌ．）から入手可能なＦｌｕｏｒｏＬｉｎｋ ＤｅｏｘｙＮｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ、ＦｌｕｏｒｏＬｉｎｋ Ｃｙ３－ｄＣＴＰ、ＦｌｕｏｒｏＬｉｎｋ Ｃｙ５－ｄＣＴＰ、ＦｌｕｏｒｏＬｉｎｋ Ｆｌｕｏｒ Ｘ－ｄＣＴＰ、ＦｌｕｏｒｏＬｉｎｋ Ｃｙ３－ｄＵＴＰ、及びＦｌｕｏｒｏＬｉｎｋ Ｃｙ５－ｄＵＴＰ、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，Ｉｎｄ．）から入手可能なフルオレセイン－１５－ｄＡＴＰ、フルオレセイン－１２－ｄＵＴＰ、テトラメチル－ローダミン－６－ｄＵＴＰ、ＩＲ７７０－９－ｄＡＴＰ、フルオレセイン－１２－ｄｄＵＴＰ、フルオレセイン－１２－ＵＴＰ、及びフルオレセイン－１５－２’－ｄＡＴＰ、並びにＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ（Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｒｅｇ．）から入手可能な染色体標識ヌクレオチド、ＢＯＤＩＰＹ－ＦＬ－１４－ＵＴＰ、ＢＯＤＩＰＹ－ＦＬ－４－ＵＴＰ、ＢＯＤＩＰＹ－ＴＭＲ－１４－ＵＴＰ、ＢＯＤＩＰＹ－ＴＭＲ－１４－ｄＵＴＰ、ＢＯＤＩＰＹ－ＴＲ－１４－ＵＴＰ、ＢＯＤＩＰＹ－ＴＲ－１４－ｄＵＴＰ、カスケードブルー－７－ＵＴＰ、カスケードブルー－７－ｄＵＴＰ、フルオレセイン－１２－ＵＴＰ、フルオレセイン－１２－ｄＵＴＰ、オレゴングリーン４８８－５－ｄＵＴＰ、ローダミングリーン－５－ＵＴＰ、ローダミングリーン－５－ｄＵＴＰ、テトラメチルローダミン－６－ＵＴＰ、テトラメチルローダミン－６－ｄＵＴＰ、テキサスレッド－５－ＵＴＰ、テキサスレッド－５－ｄＵＴＰ、及びテキサスレッド－１２－ｄＵＴＰを挙げることができる。また、ヌクレオチドは、化学修飾によって標識又はマークすることもできる。化学修飾された単一ヌクレオチドは、ビオチン－ｄＮＴＰであり得る。ビオチン化ｄＮＴＰのいくつかの非限定的な例としては、ビオチン－ｄＡＴＰ（例えば、ビオ－Ｎ６－ｄｄＡＴＰ、ビオチン－１４－ｄＡＴＰ）、ビオチン－ｄＣＴＰ（例えば、ビオチン－１１－ｄＣＴＰ、ビオチン－１４－ｄＣＴＰ）、及びビオチン－ｄＵＴＰ（例えば、ビオチン－１１－ｄＵＴＰ、ビオチン－１６－ｄＵＴＰ、ビオチン－２０－ｄＵＴＰ）を挙げることができる。
「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」、及び「核酸」という用語は、デオキシリボヌクレオチド若しくはリボヌクレオチド、又はその類似体のいずれかである、一本鎖形態、二本鎖形態、又は多重鎖形態のいずれかの、任意の長さのヌクレオチドのポリマー形態を指すために互換的に使用される。ポリヌクレオチドは、細胞にとって外因的であってもよいか、又は内因的であってもよい。ポリヌクレオチドは、無細胞環境でも存在することができる。ポリヌクレオチドは、遺伝子又はその断片であり得る。ポリヌクレオチドは、ＤＮＡであり得る。ポリヌクレオチドは、ＲＮＡであり得る。ポリヌクレオチドは、任意の三次元構造を有することができ、既知又は未知の任意の機能を実施することができる。ポリヌクレオチドは、１つ以上の類似体（例えば、改変された骨格、糖、又は核酸塩基）を含むことができる。ヌクレオチド構造に修飾が存在する場合、ポリマーの構築前又は構築後に修飾を加えることができる。類似体のいくつかの非限定的な例としては、５－ブロモウラシル、ペプチド核酸、ゼノ核酸、モルホリノ、ロックド核酸、グリコール核酸、トレオース核酸、ジデオキシヌクレオチド、コルジセピン、７－デアザ－ＧＴＰ、フルオロフォア（例えば、糖に連結したローダミン又はフルオレセイン）、チオール含有ヌクレオチド、ビオチン連結ヌクレオチド、蛍光塩基類似体、ＣｐＧアイランド、メチル－７－グアノシン、メチル化ヌクレオチド、イノシン、チウリジン、シュードウルジン、ジヒドロウリジン、キューオシン、及びワイオシンを挙げることができる。ポリヌクレオチドの非限定的な例としては、遺伝子又は遺伝子断片のコード領域又は非コード領域、連鎖解析から定義される複数の遺伝子座（遺伝子座）、エキソン、イントロン、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、転移ＲＮＡ（tＲＮＡ）、リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、短干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、リボザイム、ｃＤＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分岐ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクター、任意の配列の単離ＤＮＡ、任意の配列の単離ＲＮＡ、無細胞ＤＮＡ（ｃｆＤＮＡ）及び無細胞ＲＮＡ（ｃｆＲＮＡ）を含む無細胞ポリヌクレオチド、核酸プローブ、及びプライマーが挙げられる。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分によって中断され得る。
本明細書で使用される場合、「遺伝子」という用語は、核酸（例えば、ゲノムＤＮＡ及びｃＤＮＡなどのＤＮＡ）及びＲＮＡ転写物のコード化に関与する、その対応するヌクレオチド配列を指す。ゲノムＤＮＡに関して本明細書で使用される用語は、介在する非コード領域及び制御領域を含み、５’末端及び３’末端を含むことができる。いくつかの使用では、この用語は、５’及び３’の非翻訳領域（５’－ＵＴＲ及び３’－ＵＴＲ）、エキソン、及びイントロンを含む転写配列を含む。いくつかの遺伝子では、転写領域にはポリペプチドをコードする「オープンリーディングフレーム」が含まれる。この用語のいくつかの使用では、「遺伝子」は、ポリペプチドをコードするために必要なコード配列（例えば、「オープンリーディングフレーム」又は「コード領域」）のみを含む。場合によっては、遺伝子は、ポリペプチド、例えば、リボソームＲＮＡ遺伝子（ｒＲＮＡ）及び転移ＲＮＡ（ｔＲＮＡ）遺伝子をコードしないこともある。場合によっては、「遺伝子」という用語には、転写配列だけでなく、更に、上流側及び下流側の制御領域、エンハンサー、及びプロモーターを含む非転写領域も含まれる。遺伝子とは、場合によっては、「内在性遺伝子」、又は生物のゲノム内の本来の位置にある天然遺伝子を指す。遺伝子とは、場合によっては、「外来遺伝子」又は非天然遺伝子を指す。非天然遺伝子とは、場合によっては、宿主生物には通常見出されないが、遺伝子移入によって宿主生物に導入された遺伝子を指す。非天然遺伝子とは、場合によっては、生物のゲノム内の本来の位置にない遺伝子を指す。また、非天然遺伝子とは、場合によっては、変異、挿入、及び／又は欠失を含む、天然に存在する核酸又はポリペプチド配列（例えば、非天然配列）を指す。
発現又は活性に関して「制御する」という用語は、本明細書で使用される場合、発現又は活性のレベルを変化させることを指す。制御は、転写レベル及び／又は翻訳レベルで発生する可能性がある。
「ペプチド」、「ポリペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、本明細書では互換的に使用され、ペプチド結合（複数可）によって結合された少なくとも２つのアミノ酸残基のポリマーを指す。この用語は、ポリマーの特定の長さを意味するものではなく、ペプチドが組換え技術、化学合成、若しくは酵素合成を使用して産生されるか、又は天然に存在するかを暗示又は区別することを意図するものでもない。この用語は、天然に存在するアミノ酸ポリマー、及び少なくとも１つの修飾アミノ酸を含むアミノ酸ポリマーに適用される。場合によっては、ポリマーが非アミノ酸によって中断され得る。この用語には、全長タンパク質を含む任意の長さのアミノ酸鎖、並びに二次構造及び／又は三次構造（例えば、ドメイン）を有するタンパク質又は有さないタンパク質が含まれる。この用語はまた、例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、酸化、及び標識成分との結合などの任意の他の操作によって修飾されたアミノ酸ポリマーを含む。本明細書で使用される場合、「アミノ酸」及び「複数のアミノ酸」という用語は、一般に、修飾アミノ酸及びアミノ酸類似体を含むがこれらに限定されない、天然アミノ酸及び非天然アミノ酸を指す。修飾アミノ酸は、アミノ酸上に天然には存在しない基又は化学部分を含むように化学的に修飾された天然アミノ酸及び非天然アミノ酸を含むことができる。アミノ酸類似体とは、アミノ酸誘導体を指すことができる。「アミノ酸」という用語には、Ｄ－アミノ酸とＬ－アミノ酸との両方が含まれる。
「誘導体」、「バリアント」、及び「断片」という用語は、ポリペプチドに関して本明細書で使用されるとき、例えば、アミノ酸配列、構造（例えば、二次及び／若しくは三次）、活性（例えば、酵素活性）、並びに／又は機能のいずれかによって、野生型ポリペプチドに関連するポリペプチドを指す。ポリペプチドの誘導体、バリアント、及び断片は、野生型ポリペプチドと比較して、１つ以上のアミノ酸変動（例えば、変異、挿入、及び欠失）、切断、修飾、又はこれらの組み合わせを含むことができる。
本明細書で使用される場合、「残基」という用語は、タンパク質内の位置及びそれに関連するアミノ酸同一性を意味する。例えば、Ｌｅｕ ２３４（Ｌｅｕ２３４又はＬ２３４とも称する）は、ヒト抗体ＩｇＧ１の位置２３４の残基である。
本明細書で使用される場合、「野生型」という用語は、アレル変異を含む、自然界に見出されるアミノ酸配列又はヌクレオチド配列を意味する。野生型タンパク質は、意図的に修飾されていないアミノ酸配列又はヌクレオチド配列を有する。
「置換」又は「変異」という用語は、ポリペプチドの野生型配列中に天然に存在するアミノ酸が、当該ポリペプチドの同じ位置において天然に存在しない別のアミノ酸に置換される、ポリペプチド骨格に対する変化を指す。場合によっては、受容体に対するポリペプチドの親和性を修飾するために変異又は複数の変異が導入され、それにより、その活性が野生型同族ポリペプチドの親和性及び活性とは異なるように変化する。また、変異は、ポリペプチドの生物物理学的特性を改善することができる。アミノ酸変異は、当技術分野で周知の遺伝的方法又は化学的方法を使用して生成することができる。遺伝的方法には、部位特異的変異誘発、ＰＣＲ、遺伝子合成などが含まれ得る。化学修飾などの遺伝子工学以外の方法によってアミノ酸の側鎖基を変化させる方法もまた有用であり得ることが企図される。
「親和性」又は「結合親和性」という用語は、分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合相手（例えば、抗原）との間の非共有結合性相互作用の総計の強さを指す。特に示さない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」とは、結合対のメンバー（例えば、抗体と抗原との）間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。親和性は、一般に、解離定数（ＫＤ）で表すことができ、これは、解離速度定数と会合速度定数（それぞれｋｏｆｆ及びｋｏｎ）との比である。したがって、速度定数の比が同じままである限り、等価な親和性は、異なる速度定数を含んでもよい。親和性は、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ）、ＢｉｏＬａｙｅｒ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｍｅｔｒｙ（ＢＬＩ）技術（例えば、Ｏｃｔｅｔ）、及び他の従来の結合アッセイ（Ｈｅｅｌｅｙ，Ｅｎｄｏｃｒ Ｒｅｓ ２８，２１７－２２９（２００２））などの当技術分野で知られている一般的な方法によって測定することができる。
本明細書で使用される場合、「結合」又は「特異的結合」という用語は、それぞれ、ポリペプチド又は標的抗原の受容体と選択的に相互作用するためのポリペプチド又は抗原結合ドメインの能力を指すことができ、この特異的相互作用は、非標的相互作用、又は所望しない相互作用、又は非特異的相互作用とは区別することができる。特異的結合の例としては、ＩＬ－２サイトカインの特異的受容体（例えば、ＩＬ－２Ｒα、ＩＬ－２Ｒβ、及びＩＬ－２Ｒγ）に結合するＩＬ－２サイトカイン、並びに特異的抗原（例えば、ＣＤ８又はＰＤ－１）に結合する抗原結合ドメインを挙げることができるが、これらに限定されない。
「対象」、「個体」、及び「患者」という用語は、本明細書では互換的に使用され、脊椎動物、好ましくはヒトなどの哺乳動物を指す。哺乳動物には、ネズミ、サル、ヒト、家畜、競技用動物、及びペットが挙げられるが、これらに限定されない。インビボで得られた、又はインビトロで培養された生物学的実体の組織、細胞、及びそれらの子孫もまた含まれる。
本明細書で使用される場合、「治療」及び「治療すること」という用語は、治療的有効性及び／又は予防的有効性を含むが、これらに限定されない、有益な又は所望の結果を得るための手法を指す。例えば、治療は、本明細書に開示されるシステム又は細胞集団を投与することを含むことができる。治療的有効性とは、治療中の１つ以上の疾病、疾患、又は症状における任意の治療上関連する改善又は効果を意味する。予防的有効性を得るために、組成物は、特定の疾病、疾患、又は症状を発症するリスクがある対象に、又はたとえ疾病、疾患、又は症状がまだ現れていなかったとしても、疾病の生理的症状のうちの１つ以上を報告している対象に、投与することができる。
「有効量」又は「治療上有効量」又は「有効用量」又は「有効薬量」という用語は、組成物、例えば、リンパ球（例えば、Ｔリンパ球及び／又はＮＫ細胞）などの免疫細胞を含む組成物の量を指し、組成物は、これを必要とする対象への投与時に所望の活性をもたらすのに十分な、本開示の標的化サイトカイン構築物と組み合わせることができる。本開示の文脈内で、「治療上有効な」という用語は、本開示の方法によって治療される障害の発現を遅らせ、進行を阻止し、少なくとも１つの症状を軽減又は緩和するのに十分な組成物の量を指す。
概要
概要として、本開示は、遺伝子操作された細胞（例えば、遺伝子操作細胞療法のための遺伝子操作された細胞の集団）、及び標的化サイトカイン構築物を使用することにより、疾病又は疾患、例えば、増殖性疾患、例えば、がんの治療のための方法、組成物、キット、システム、レジメンに関する。いくつかの実施形態では、本明細書では、疾病、例えば、増殖性疾患、例えば、がんに対する遺伝子操作された細胞の治療有効性を向上させることができる併用法、例えば、遺伝子操作された細胞と標的化サイトカイン構築物との両方の投与が提供される。いくつかの態様では、本明細書に記載の遺伝子操作された細胞の集団を標的化サイトカイン構築物と接触させることによって、遺伝子操作された細胞の治療有効性を向上させるためのインビトロ方法が提供される。
いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物は、以下の効果：遺伝子操作された細胞において、このような遺伝子操作された細胞の増殖を増強すること、遺伝子操作された細胞によるサイトカイン分泌を変化させること、遺伝子操作された細胞の生存及び増殖における外因性サイトカインへの依存を軽減すること、このような遺伝子操作された細胞の細胞傷害性を増強すること、このような遺伝子操作された細胞の生存率を高めること、このような遺伝子操作された細胞のアポトーシスを遮断すること、このような遺伝子操作された細胞の老化を遅延させること、このような遺伝子操作された細胞の枯渇を防止若しくは遅延させること、対象に投与されたときに、このような遺伝子操作された細胞のインビボでの持続性を増強すること、対象に投与されたときに、遺伝子操作された細胞のインビボでの有効性を増強すること、罹患した器官若しくは組織（例えば、腫瘍）への遺伝子操作された細胞の浸透を増強すること、又はこれらの任意の組み合わせ、のうちの１つ以上を誘発する。
いくつかの実施形態では、本開示は、遺伝子操作された細胞のインビボ持続性及び治療有効性を向上させるための方法及び組成物を提供する。いくつかの実施形態では、遺伝子操作された細胞の集団及び標的化サイトカイン構築物を含む最適治療計画を施すことにより、遺伝子操作された細胞の集団を単独で投与した場合と比較して、遺伝子操作された細胞の集団のインビボ持続性が少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、又は１００％向上する。いくつかの実施形態では、遺伝子操作された細胞の集団及び標的化サイトカイン構築物を含む最適治療計画を施すことにより、遺伝子操作された細胞の集団を非標的化サイトカイン又はその機能的断片若しくはバリアントと組み合わせて投与した場合と比較して、遺伝子操作された細胞の集団のインビボ持続性が少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、又は１００％向上する。いくつかの実施形態では、遺伝子操作された細胞の集団及び標的化サイトカイン構築物を含む最適治療計画を施すことにより、遺伝子操作された細胞の集団を、サイトカインタンパク質に融合されていない細胞結合ドメインと組み合わせて投与した場合と比較して、遺伝子操作された細胞のインビボ持続性が少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、又は１００％向上する。いくつかの実施形態では、本開示の標的化サイトカイン構築物は、遺伝子操作された細胞の集団が標的化サイトカイン構築物と接触したときに、遺伝子操作された細胞の集団のインビトロ持続性が、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、又は１００％向上する。
いくつかの実施形態では、本開示は、遺伝子操作された細胞のインビボ持続性及び治療有効性を向上させるための方法及び組成物を提供する。いくつかの実施形態では、遺伝子操作された細胞の集団及び標的化サイトカイン構築物を含む最適治療計画を施すことにより、遺伝子操作された細胞の集団を単独で投与した場合と比較して、遺伝子操作された細胞の集団のインビボ持続性が少なくとも約２倍向上する。いくつかの実施形態では、遺伝子操作された細胞の集団及び標的化サイトカイン構築物を含む最適治療計画を施すことにより、遺伝子操作された細胞の集団を非標的化サイトカイン又はその機能的断片若しくはバリアントと組み合わせて投与した場合と比較して、遺伝子操作された細胞の集団のインビボ持続性が少なくとも２倍向上する。いくつかの実施形態では、遺伝子操作された細胞の集団及び標的化サイトカイン構築物を含む最適治療計画を施すことにより、遺伝子操作された細胞の集団を、サイトカインタンパク質に融合されていない細胞結合ドメインと組み合わせて投与した場合と比較して、遺伝子操作された細胞のインビボ持続性が少なくとも２倍向上する。
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載の遺伝子操作された細胞の集団及び標的化サイトカイン構築物を投与することを含む、遺伝子操作細胞療法における遺伝子操作された細胞の有効薬量を低減する方法に関する。いくつかの実施形態では、遺伝子操作された細胞の集団及び標的化サイトカイン構築物を含む組成物は、遺伝子操作された細胞の集団を含むが、標的化サイトカイン構築物を含まない参照組成物中の量と比較して、より少ない量の遺伝子操作された細胞を含み、これら両方の組成物は、同様の有効性を示す。
いくつかの実施形態では、遺伝子操作された細胞の集団及び標的化サイトカイン構築物を含む組成物は、遺伝子操作された細胞の集団及び非標的化サイトカイン又はその機能的断片若しくはバリアントを含む参照組成物中の量と比較して、より少ない量の遺伝子操作された細胞を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子操作された細胞の集団及び標的化サイトカイン構築物を含む組成物は、遺伝子操作された細胞の集団及び細胞結合ドメインを含むが、サイトカインタンパク質を含まない参照組成物中の量と比較して、より少ない量の遺伝子操作された細胞を含む。いくつかの実施形態では、上述の有効用量又は量は、参照組成物中の有効用量又は量に対して、組成物中で、約２倍、約４倍、約８倍、約１６倍、約３２倍、約５０倍、約６４倍、約７０倍、約７５倍、約８０倍、約９０倍、約９１倍、約９２倍、約９３倍、約９４倍、約９５倍、約９６倍、約９７倍、約９８倍、約９９倍、又は約１０００倍などの、約１．５倍～約１０００倍低い。
研究によると、ＣＡＲ Ｔ細胞の消失は、拡大を妨げるＴ細胞固有の問題、又はＴ細胞外部からの免疫拒絶のいずれかに関連していることが示されている。ＣＡＲ Ｔ細胞の誘導による寛解後に再発を経験した患者は、非常に早期にＣＡＲ Ｔ細胞が消失するか、又はＢ細胞形成不全の消失（絶対Ｂ細胞数は、通常、５０～１００／μＬを超えるフローによって測定される）を起こしており、これらの消失は、一般に、再発（例えば、ＣＤ１９＋ Ｂ細胞の再発）に関連している。例えば、Ｎｉｅ ｅｔ ａｌ．「Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇ ＣＤ１９－ｐｏｓｉｔｉｖｅ ＡＬＬ ｒｅｌａｐｓｅ ａｆｔｅｒ ａｎｔｉ－ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ ｃｅｌｌ ｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ」，Ｂｉｏｍａｒｋｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｖｏｌｕｍｅ ８，Ａｒｔｉｃｌｅ ｎｕｍｂｅｒ：１８（２０２０）を参照のこと。遺伝子操作された細胞による治療（例えば、ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞療法などのＣＡＲ－Ｔ細胞療法）後に再発した患者において、本開示の標的化サイトカイン構築物の投与は、救済療法として機能する可能性がある。したがって、本開示のいくつかの実施形態では、遺伝子操作細胞療法に続いて、Ｂ細胞形成不全の消失を経験した患者に、標的化サイトカイン構築物を投与することによる治療の方法が提供される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作された細胞の集団及び標的化サイトカイン構築物を対象に投与することを含む最適治療計画が提供され、本方法は、（ａ）対象へのリンパ球枯渇剤の事前の投与を回避すること、又は（ｂ）遺伝子操作された細胞の拡大、生着に必要な事前のリンパ球枯渇の程度を低減すること、のうちの少なくとも１つを可能にする。リンパ球枯渇剤の非限定的な例としては、フルダラビン、シクロホスファミドなどの化学療法剤、及びアレムツズマブなどの枯渇性抗体が挙げられる。
いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物は、対象においてインビボで生成された遺伝子操作された標的化細胞に投与される。このようなインビボで生成された、遺伝子操作された細胞に対する様々な改善、例えば、持続性の増加、枯渇の速度及び／又は程度の低下、拡大及び／又は増殖の増加、Ｔｒｅｇ細胞数の増加なし、遺伝子操作された細胞の選択的増強及び特異的富化は、標的化サイトカイン構築物を投与することによって実現することができる。インビボで遺伝子操作された細胞（例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞又はＴＣＲ－Ｔ細胞）を生成するための例示的な技術には、ＣＡＲ遺伝子又はＴＣＲ遺伝子を含む核酸担体を対象に投与することが含まれる。いくつかの実施形態では、核酸担体は、非ウイルスベクター、プラスミド、直鎖状ポリヌクレオチド、イオン性化合物又は両親媒性化合物と会合したポリヌクレオチド、プラスミド、又はウイルス（ウイルスベクターなど）である。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、センダイウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、又はレンチウイルスベクターのうちの少なくとも１つである。核酸担体は、場合によっては、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、Ｔリンパ球、骨髄細胞）に特異的な標的化部分を含む。核酸担体によって標的化される免疫細胞は、いくつかの実施形態では、本開示の標的化サイトカイン構築物によって標的化されるインビボで遺伝子操作された細胞を生成するように誘導される。
併用療法
一態様では、本開示は、（１）遺伝子操作された細胞、例えば、ＣＡＲ発現細胞、例えば、Ｔ細胞、その集団、及び（２）標的化サイトカイン構築物を含む最適治療計画を対象に行うことを含む、疾病又は障害、例えば、がん又は増殖性疾患を治療するための併用療法、例えば、治療方法及び治療計画を提供する。別の態様では、本開示は、本明細書に記載の遺伝子操作された細胞の集団を標的化サイトカイン構築物と接触させることによって、遺伝子操作された細胞集団のインビトロ活性化及び／又は拡大を向上させる方法を提供し、いくつかの実施形態では、疾病又は障害、例えば、がん又は増殖性疾患を治療するために、遺伝子操作された細胞の集団を投与することを含む、遺伝子操作細胞療法を更に提供する。上述のような投与は、本開示の標的化サイトカイン構築物と組み合わせることができる。
いくつかの実施形態では、遺伝子操作された細胞は、疾病又は障害、例えば、がん又は増殖性疾患に関連する抗原を特異的に認識かつ／又は標的化する。いくつかの実施形態では、遺伝子操作された細胞は、標的化サイトカイン構築物のサイトカインによって認識されるドメイン又は受容体を発現する。また、遺伝子操作された細胞の集団を含む組成物及び／又は標的化サイトカイン構築物を含む組成物を含む、キットなどの組み合わせ及び製品、並びにがんも含む疾病、疾患、及び障害を治療するためのこのような組成物及び組み合わせの使用も提供される。このような方法には、遺伝子操作された細胞（例えば、ＣＡＲ発現Ｔ細胞）を含む療法の投与（例えば、投与の開始）前、投与と同時、投与中、投与の過程中（投与の過程中に一度に、かつ／又は定期的にを含む）、かつ／又は投与後の標的化サイトカイン構築物の投与を含むことができる。いくつかの実施形態では、この投与は、標的化サイトカイン構築物及び／又は遺伝子操作された細胞の集団の連続投与又は間欠投与を含むことができる（遺伝子操作された細胞の集団を投与することは、本明細書では遺伝子操作細胞療法とも称する）。
投与量及び治療計画
いくつかの実施形態では、本開示は、遺伝子操作された細胞の集団を含む第１の医薬組成物、及び標的化サイトカイン構築物を含む第２の医薬組成物を含む、最適治療計画を提供する。いくつかの実施形態では、第２の医薬組成物は、遺伝子操作された細胞の集団の治療効果を増強するのに十分な量の標的化サイトカイン構築物を含む。
いくつかの実施形態では、遺伝子操作された細胞の集団を含む第１の組成物及び標的化サイトカイン構築物を含む第２の医薬組成物が、同時に又は連続的に対象に投与される。いくつかの実施形態では、対象は、最初に、遺伝子操作された細胞の集団を含む療法の投与を受ける、例えば、最初に、遺伝子操作された細胞の集団を含む療法を終了し、次いで、標的化サイトカイン構築物の投与を受ける。
いくつかの実施形態では、遺伝子操作された細胞の集団及び標的化サイトカイン構築物を含む療法は、所定の治療計画に従って、例えば、同時に、間欠的に、又は連続的に対象に投与される。いくつかの実施形態では、対象は、所定の投与計画に従って、例えば、連続する数週間にわたって、１週間に１、２、３、４、５、６、若しくは７回、又は、所与の期間、例えば、１週間、１か月、若しくは１年間にわたって、１、２、３、４、５、６、又は７日ごとに１回、遺伝子操作された細胞の集団を含む療法の投与を受ける。いくつかの実施形態では、対象はまた、遺伝子操作された細胞の集団を含む療法と同じ投与計画に従って、又は場合によっては、遺伝子操作された細胞の集団を含む療法の投与計画と重複する投与計画に従って、標的化サイトカイン構築物の投与を受ける。例えば、対象は、遺伝子操作された細胞の集団を含む療法、例えば、Ｔ細胞注入と、標的化サイトカイン構築物との両方を、同時に、例えば、両方とも静脈内注入を介して受けることができる。他の場合では、対象は、遺伝子操作された細胞の集団を含む療法、例えば、Ｔ細胞注入と、標的化サイトカイン構築物との両方を、同日に受けることができる。場合によっては、２つの投与計画が重複するとき、対象は、ある日に、遺伝子操作された細胞の集団を含む療法を受け、そして次の日に、又は２、３、４、５、６、７日後、若しくはそれを超えた後で、かつ遺伝子操作された細胞の集団を含む療法の次の投与を受ける前に、標的化サイトカイン構築物を受けることができる。あるいは、場合によっては、対象は、標的化サイトカイン構築物と比較して、遺伝子操作された細胞の集団を含む療法をより多くの回数投与することができ、又はその逆も可能である。
いくつかの実施形態では、遺伝子操作された細胞の集団を含む療法は、標的化サイトカイン構築物の投与と同時に、又は標的化サイトカイン構築物の投与を始めた後若しくは開始した後に投与される。いくつかの実施形態では、遺伝子操作された細胞の集団を含む療法は、標的化サイトカイン構築物の投与を始めた後又は開始した後に、０～３０日間、０～１５日間、０～６日間、０～９６時間、０～２４時間、０～１２時間、０～６時間、又は０～２時間、２時間～３０日間、２時間～１５日間、２時間～６日間、２時間～９６時間、２時間～２４時間、２時間～１２時間、２時間～６時間、６時間～９０日間、６時間～３０日間、６時間～１５日間、６時間～６日間、６時間～９６時間、６時間～２４時間、６時間～１２時間、１２時間～９０日間、１２時間～３０日間、１２時間～１５日間、１２時間～６日間、１２時間～９６時間、１２時間～２４時間、２４時間～９０日間、２４時間～３０日間、２４時間～１５日間、２４時間～６日間、２４時間～９６時間、９６時間～９０日間、９６時間～３０日間、９６時間～１５日間、９６時間～６日間、６日間～９０日間、６日間～３０日間、６日間～１５日間、１５日間～９０日間、１５日間～３０日間、又は３０日間～９０日間などの、０～９０日間投与される。いくつかの実施形態では、遺伝子操作された細胞の集団を含む療法は、標的化サイトカイン構築物の投与を始めた後又は開始した後に、少なくとも又は約少なくとも又は約１時間、２時間、６時間、１２時間、２４時間、２日間、３日間、６日間、１２日間、１５日間、３０日間、６０日間、若しくは９０日間投与される。
いくつかの実施形態では、遺伝子操作された細胞の集団を含む療法は、標的化サイトカイン構築物の投与と同時に、又は標的化サイトカイン構築物の投与を始める前若しくは開始する前に投与される。いくつかの実施形態では、遺伝子操作された細胞の集団を含む療法は、標的化サイトカイン構築物の投与を始める前又は開始する前に、０～３０日間、０～１５日間、０～６日間、０～９６時間、０～２４時間、０～１２時間、０～６時間、又は０～２時間、２時間～３０日間、２時間～１５日間、２時間～６日間、２時間～９６時間、２時間～２４時間、２時間～１２時間、２時間～６時間、６時間～９０日間、６時間～３０日間、６時間～１５日間、６時間～６日間、６時間～９６時間、６時間～２４時間、６時間～１２時間、１２時間～９０日間、１２時間～３０日間、１２時間～１５日間、１２時間～６日間、１２時間～９６時間、１２時間～２４時間、２４時間～９０日間、２４時間～３０日間、２４時間～１５日間、２４時間～６日間、２４時間～９６時間、９６時間～９０日間、９６時間～３０日間、９６時間～１５日間、９６時間～６日間、６日間～９０日間、６日間～３０日間、６日間～１５日間、１５日間～９０日間、１５日間～３０日間、又は３０日間～９０日間などの、０～９０日間投与される。いくつかの実施形態では、遺伝子操作された細胞の集団を含む療法は、標的化サイトカイン構築物の投与を始める前又は開始する前に、少なくとも又は約少なくとも又は約１時間、２時間、６時間、１２時間、２４時間、２日間、３日間、６日間、１２日間、１５日間、３０日間、６０日間、若しくは９０日間投与される。
いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物及び遺伝子操作された細胞の集団の最初の投与に続いて、インビボで遺伝子操作された細胞を維持するために、標的化サイトカイン構築物の次の用量が対象に投与される。いくつかの実施形態では、その後の投与は、最初の投与後、１週間ごとに１回、２週間ごとに１回、３週間ごとに１回、又は毎月である。
いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物の薬量及びタイミングは、遺伝子操作された細胞の集団を含む療法を行った後の対象からのサンプルにおいて、遺伝子操作された細胞の集団を含む療法の実行に関連する１つ以上の治療効果の測定に基づいて調整される。場合によっては、遺伝子操作された細胞の集団を含む組成物及び標的化サイトカイン構築物を含む組成物の投与計画は、対象の主治医が決定する。医師の決定は、対象の病歴及び対象の他の医学的検査結果、例えば、腫瘍の病理学的検査結果を含むが、これらに限定されない、いくつかの要因に基づくことができる。標的化サイトカイン構築物の具体的な用量は、選択されたサイトカインと細胞結合ドメインとの特定の組み合わせ、従うべき投与計画、対象の健康状態、投与される組織、及び物理的送達システムに応じて変化する。いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物は、治療サイクルにわたって１週間当たり平均で、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１５０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、又は１０００ｍｇの範囲内で対象に投与される。例えば、標的化サイトカイン構築物は、１週間当たり、約３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、又は５５ｍｇの範囲内で対象に投与される。いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物は、１週間当たり、約４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、又は５５ｍｇの範囲内で対象に投与される。
いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物は、治療サイクルにわたって１日当たり平均で、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、又は１０ｍｇを超える量で対象に投与される。例えば、標的化サイトカイン構築物は、治療サイクルにわたって１日当たり平均で、約６～１０ｍｇ、約６．５～９．５ｍｇ、約６．５～８．５ｍｇ、約６．５～８ｍｇ、又は約７～９ｍｇの量で対象に投与される。
いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物は、１日当たり約０．０１ｍｇ／ｋｇ、約０．０２ｍｇ／ｋｇ、約０．０３ｍｇ／ｋｇ、約０．０４ｍｇ／ｋｇ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ、約０．０６ｍｇ／ｋｇ、約０．０７ｍｇ／ｋｇ、約０．０８ｍｇ／ｋｇ、約０．０９ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．４ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１１ｍｇ／ｋｇ、約１２ｍｇ／ｋｇ、約１３ｍｇ／ｋｇ、約１４ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約１６ｍｇ／ｋｇ、約１７ｍｇ／ｋｇ、約１８ｍｇ／ｋｇ、約１９ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、若しくは約５０ｍｇ／ｋｇ、これら未満、又はこれらを超える量など、１日当たり約０．０１ｍｇ／ｋｇ～５０ｍｇ／ｋｇの範囲内で対象に投与される。いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物は、１週間当たり約０．１ｍｇ／ｋｇ、約０．２ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．８ｍｇ／ｋｇ、約０．９ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約１００ｍｇ／ｋｇ、約１５０ｍｇ／ｋｇ、約２００ｍｇ／ｋｇ、約２５０ｍｇ／ｋｇ、約３００ｍｇ／ｋｇ、約３５０ｍｇ／ｋｇ、若しくは約４００ｍｇ／ｋｇ、これら未満、又はこれらを超える量など、１週間当たり約０．１ｍｇ／ｋｇ～４００ｍｇ／ｋｇの範囲内で対象に投与される。いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物は、毎週又は隔週で約１ｍｇ／ｋｇの用量で対象に投与される。
いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物は、１か月当たり約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約２０ｍｇ／ｋｇ、約２５ｍｇ／ｋｇ、約３０ｍｇ／ｋｇ、約３５ｍｇ／ｋｇ、約４０ｍｇ／ｋｇ、約４５ｍｇ／ｋｇ、約５０ｍｇ／ｋｇ、約１００ｍｇ／ｋｇ、約１５０ｍｇ／ｋｇ、約２００ｍｇ／ｋｇ、約２５０ｍｇ／ｋｇ、約３００ｍｇ／ｋｇ、約３５０ｍｇ／ｋｇ、約４００ｍｇ／ｋｇ、約４５０ｍｇ／ｋｇ、約５００ｍｇ／ｋｇ、約５５０ｍｇ／ｋｇ、約６００ｍｇ／ｋｇ、約６５０ｍｇ／ｋｇ、約７００ｍｇ／ｋｇ、約７５０ｍｇ／ｋｇ、約８００ｍｇ／ｋｇ、約８５０ｍｇ／ｋｇ、約９００ｍｇ／ｋｇ、約９５０ｍｇ／ｋｇ、若しくは約１０００ｍｇ／ｋｇ、これら未満、又はこれらを超える量など、１か月当たり約０．４ｍｇ／ｋｇ～１５００ｍｇ／ｋｇの範囲内で対象に投与される。いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物は、１週間当たり約１ｍｇ／ｍ２、約５ｍｇ／ｍ２、約１０ｍｇ／ｍ２、約１５ｍｇ／ｍ２、約２０ｍｇ／ｍ２、約２５ｍｇ／ｍ２、約３０ｍｇ／ｍ２、約３５ｍｇ／ｍ２、約４０ｍｇ／ｍ２、約４５ｍｇ／ｍ２、約５０ｍｇ／ｍ２、約５５ｍｇ／ｍ２、約６０ｍｇ／ｍ２、約６５ｍｇ／ｍ２、約７０ｍｇ／ｍ２、約７５ｍｇ／ｍ２、約１００ｍｇ／ｍ２、約１２５ｍｇ／ｍ２、約１５０ｍｇ／ｍ２、約１７５ｍｇ／ｍ２、若しくは約２００ｍｇ／ｍ２、これら未満、又はこれらを超える量など、１週間当たり約０．１ｍｇ／ｍ２～２００ｍｇ／ｍ２の範囲内で対象に投与される。標的用量は、単回投与で投与され得る。あるいは、標的用量は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０以上、又はこれらを超える用量で投与され得る。例えば、１週間当たり約１ｍｇ／ｋｇの用量は、その週にわたって、毎週約１ｍｇ／ｋｇの用量で毎週送達されてもよく、約２ｍｇ／ｋｇで２週間ごとに投与されてもよいかか、又は約４ｍｇ／ｋｇで４週間ごとに投与されてもよい。投与スケジュールは、本明細書に記載の任意の投与スケジュールを含む、本明細書に記載の任意のレジメンに従って繰り返され得る。いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物は、約１ｍｇ／ｍ２、約５ｍｇ／ｍ２、約１０ｍｇ／ｍ２、約１５ｍｇ／ｍ２、約２０ｍｇ／ｍ２、約２５ｍｇ／ｍ２、約３０ｍｇ／ｍ２、約３５ｍｇ／ｍ２、約４０ｍｇ／ｍ２、約４５ｍｇ／ｍ２、約５０ｍｇ／ｍ２、約５５ｍｇ／ｍ２、約６０ｍｇ／ｍ２、約６５ｍｇ／ｍ２、約７０ｍｇ／ｍ２、約７５ｍｇ／ｍ２、約１００ｍｇ／ｍ２、約１３０ｍｇ／ｍ２、約１３５ｍｇ／ｍ２、約１５５ｍｇ／ｍ２、約１７５ｍｇ／ｍ２、約２００ｍｇ／ｍ２、約２２５ｍｇ／ｍ２、約２５０ｍｇ／ｍ２、約３００ｍｇ／ｍ２、約３５０ｍｇ／ｍ２、約４００ｍｇ／ｍ２、約４２０ｍｇ／ｍ２、約４５０ｍｇ／ｍ２、若しくは約５００ｍｇ／ｍ２、これら未満、又はこれらを超える量など、約０．１ｍｇ／ｍ２～５００ｍｇ／ｍ２の範囲で対象に投与される。
いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物の用量は、約、少なくとも約、又は最大で約０．１、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、５２５、５５０、５７５、６００、６２５、６５０、６７５、７００、７２５、７５０、７７５、８００、８２５、８５０、８７５、９００、９２５、９５０、９７５、１０００ｍｇ若しくはｍｇ／ｋｇ、又はこれらの中で導出可能な任意の範囲である。ｍｇ／ｋｇの薬量は、対象の総体重１ｋｇ当たりの標的化サイトカイン構築物のｍｇ量を指すことが企図される。複数回の用量が患者に与えられるとき、用量は量が変化してもよいか、又は同じであってもよいことが企図される。
治療効果
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、対象に投与される遺伝子操作された細胞の集団のインビトロでの拡大及び／若しくは増殖（遺伝子操作細胞療法）、又は遺伝子操作された細胞の集団のインビトロ増殖の速度の調節を可能にする。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の治療方法は、標的化サイトカイン構築物の非存在下で対象に投与された遺伝子操作された細胞に対して、インビボで、投与された遺伝子操作された細胞の拡大及び／又は増殖を増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の治療方法は、標的化サイトカイン構築物の非存在下で対象に投与された遺伝子操作された細胞に対して、インビボで、投与された遺伝子操作された細胞の拡大及び／又は増殖を少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、又は１００倍増加させる。いくつかの実施形態では、本開示の標的化サイトカイン構築物は、本明細書に記載の標的化サイトカイン構築物と接触していない遺伝子操作された細胞に対して、インビトロで、遺伝子操作された細胞の拡大及び／又は増殖を少なくとも約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、又は１００倍増加させる。場合によっては、遺伝子操作された細胞の集団のインビボでの拡大及び／又は増殖の増加は、遺伝子操作された細胞の集団を標的化サイトカイン構築物と組み合わせて投与するときに、遺伝子操作された細胞を、（ａ）サイトカインを有さない細胞結合ドメイン、（ｂ）細胞結合ドメインを有さない非標的化サイトカイン又はその機能的断片若しくはバリアントのうちの少なくとも１つと組み合わせて投与することに対して、少なくとも約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、又は１００倍である。同様に、場合によっては、遺伝子操作された細胞の集団を、標的化サイトカイン構築物と接触させたときのインビトロでの拡大及び／又は増殖の増加は、遺伝子操作された細胞の集団を、（ａ）サイトカインを有さない細胞結合ドメイン、（ｂ）細胞結合ドメインを有さない非標的化サイトカイン又はその機能的断片若しくはバリアントのうちの少なくとも１つと組み合わせて投与することに対して、少なくとも約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、又は１００倍である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、遺伝子操作された細胞の集団を単独で、又は細胞結合ドメインを有さない非標的化サイトカイン若しくはその機能的断片若しくはバリアントと組み合わせて投与することに対して、対象に投与される遺伝子操作された細胞の集団の特異的富化を増強することを可能にする。いくつかの実施形態では、遺伝子操作された細胞は、サイトカインタンパク質の受容体を発現し、本明細書に記載の方法は、ＣＡＲの受容体を発現しない細胞の増殖とは対照的に、遺伝子操作された細胞（例えば、ＣＡＲを発現する細胞）の選択的な増殖をもたらす。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、遺伝子操作された細胞の集団を単独で、又は細胞結合ドメインを有さない非標的化サイトカイン若しくはその機能的断片若しくはバリアントと組み合わせて投与したときのＴｒｅｇ細胞の増加とは対照的に、遺伝子操作された細胞の集団を標的化サイトカイン構築物と組み合わせて投与した後、Ｔｒｅｇ細胞の増加をもたらさない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、遺伝子操作された細胞の集団を単独で、又は細胞結合ドメインを有さない非標的化サイトカイン若しくはその機能的断片若しくはバリアントと組み合わせて、又はサイトカインを有さない細胞結合ドメインと組み合わせて投与することに対して、対象に投与される遺伝子操作された細胞の集団の枯渇の速度及び／又は程度を減少させる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、標的化サイトカイン構築物を有さない遺伝子操作された細胞の集団を投与することに対して、又はサイトカインを有さない細胞結合ドメインとともに投与されるときに対して、対象に投与される遺伝子操作された細胞の集団のインビボ持続性を増加させる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、標的化サイトカイン構築物と接触しないとき又はサイトカインを有さない細胞結合ドメインと接触したときの、遺伝子操作された細胞の集団のインビトロ持続性に対して、本明細書に記載の標的化サイトカイン構築物と接触したときの、遺伝子操作された細胞の集団のインビトロ持続性を増加させる。いくつかの実施形態では、インビボ持続性又はインビトロ持続性の増加は、上述の比較対照薬よりも、少なくとも約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、又は１００倍大きい。いくつかの例では、標的化サイトカイン構築物と組み合わせて対象に投与されたときの、遺伝子操作された細胞の集団のインビボ持続性は、約４５日、約６０日、約９０日、約１２０日、約６か月、約７か月、約８か月、約９か月、約１０か月、約１１か月、約１２か月、約１８か月以上など、少なくとも約３０日～約１年以上である。
本明細書で提供される方法、組成物、組み合わせ、キット、及び療法は、いくつかの態様において、遺伝子操作された細胞の効果的な生着に必要なプレコンディショニングレジメン（例えば、リンパ球枯渇療法）の重大度の低減を可能にすることができる。したがって、一例では、遺伝子操作された細胞の集団を投与（例えば、注入）する前に、対象はリンパ球枯渇される。他の例では、リンパ球枯渇は必要なく、遺伝子操作された細胞の集団が対象に迅速に注入される。
いくつかの実施形態では、本方法は、遺伝子操作細胞療法の開始前に、リンパ球枯渇剤などのプレコンディショニング剤、又はシクロホスファミド、フルダラビン、若しくはこれらの組み合わせなどの化学療法剤、又は枯渇性抗体であるアレムツズマブなどの抗体を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法、組成物、組み合わせ、キット、及びレジメンは、遺伝子操作細胞療法を投与する前に、標的化サイトカイン構築物と組み合わせて、プレコンディショニング剤／レジメン（例えば、リンパ球枯渇剤／レジメン）を対象に投与する必要性を排除することができる。
プレコンディショニング剤を投与される対象において、この対象は、細胞療法の開始の少なくとも３、４、５、６、又は７日前などの、少なくとも２日前にプレコンディショニング剤を投与されてもよい。いくつかの実施形態では、対象には、細胞療法の開始の６、５、４、３、又は２日前までなどの、７日前までにプレコンディショニング剤が投与される。
いくつかの実施形態では、対象は、例えば、対象の体重１ｋｇ当たり、約２０ｍｇ／ｋｇ未満、約４０ｍｇ／ｋｇ未満、又は約８０ｍｇ／ｋｇ未満などの、１００ｍｇ／ｋｇ未満の用量のシクロホスファミドでプレコンディショニングされる。したがって、プレコンディショニング剤は、遺伝子操作細胞療法が、単独で、又は（ａ）サイトカインを有さない細胞結合ドメイン、若しくは（ｂ）細胞結合ドメインを有さない非標的化サイトカイン若しくはその機能的断片若しくはバリアントのうちの少なくとも１つと組み合わせて投与されるときに対して、遺伝子操作細胞療法が、標的化サイトカイン構築物と組み合わせて投与されるときよりも低い薬量で投与される。いくつかの態様では、対象は、プレコンディショニングされるか、又はシクロホスファミドなどのプレコンディショニング剤を、単回投与、又は毎日、隔日、若しくは３日ごとなどの複数回投与で投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドなどのプレコンディショニング剤は、対象の体表面積当たり、約４００ｍｇ／ｍ２未満、約３００ｍｇ／ｍ２未満、約２５０ｍｇ／ｍ２未満、約２００ｍｇ／ｍ２未満、又は約１００ｍｇ／ｍ２未満などの、約５００ｍｇ／ｍ２未満の用量で対象に投与される。
例示的なリンパ球枯渇療法を以下の表に示す。



































本明細書で提供される方法、組成物、組み合わせ、キット、及び療法は、がんなどの増殖性疾患を治療することができる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される併用療法は、がんなどの増殖性疾患の治療において有利な治療効果を有する。
本明細書で提供される方法、組成物、組み合わせ、キット、及び使用のいくつかの実施形態では、提供される併用療法は、以下で説明されるように、療法又は治療に関連するパラメータのいずれか１つ以上に関連する特徴などの、１つ以上の治療結果をもたらす。
いくつかの実施形態では、療法又は治療結果に関連するパラメータには、腫瘍負荷又は疾患負荷を含むスクリーニング工程及び／又は治療結果の評価及び／又は治療結果のモニタリングに関して評価することができるパラメータが挙げられる。Ｔ細胞療法（例えば、ＣＡＲ発現Ｔ細胞）などの、本明細書に記載の遺伝子操作された細胞及び／又は標的化サイトカイン構築物を含む療法の投与は、対象における疾病又は疾患の拡大又は負担を低減又は予防することができる。例えば、疾病又は疾患が腫瘍である場合、本方法は、一般に、腫瘍のサイズ、大きさ、転移、骨髄内の芽球の割合、又は分子的に検出可能ながんを低減し、かつ／又は予後若しくは生存若しくは腫瘍負荷に関連する他の症状を改善することができる。
いくつかの実施形態では、提供される併用療法は、遺伝子操作細胞療法（例えば、ＣＡＲ発現Ｔ細胞）が、標的化サイトカイン構築物の投与なしに与えられる代替方法と比較して、治療対象における腫瘍負荷の減少をもたらす。併用療法を受けている全ての対象において実際に腫瘍負荷が減少する必要はないが、併用療法で治療された対象のうちの少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％以上が腫瘍負荷の低減を示すなど、このような併用療法で治療された大多数の対象が腫瘍負荷の低減を示す臨床データなどに基づいて、治療された対象において平均して腫瘍負荷が低減した。
疾病負荷は、対象における、又は腫瘍の器官若しくは組織、又は例えば、転移を示す別の場所など、対象の器官、組織、若しくは体液における疾病の細胞の総数を含むことができる。例えば、特定の血液悪性腫瘍に関連して、血液、リンパ液、又は骨髄中の腫瘍細胞が検出かつ／又は定量化され得る。疾病負荷は、いくつかの実施形態では、腫瘍の質量、転移の数若しくは程度、及び／又は骨髄中に存在する芽球細胞の割合を含むことができる。
いくつかの実施形態では、対象は、骨髄腫、リンパ腫、又は白血病を患っている。いくつかの実施形態では、対象は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、又は骨髄腫、例えば、多発性骨髄腫（ＭＭ）を患っている。いくつかの実施形態では、対象は、ＭＭ又はＤＢＣＢＬを患っている。いくつかの実施形態では、対象は、固形腫瘍を患っている。
多発性骨髄腫の場合、疾病負荷の程度を評価するための例示的なパラメータには、クローン形質細胞の数（例えば、骨髄生検で＞１０％、又は他の組織からの生検で任意の量、形質細胞腫）などのパラメータ、血清又は尿のいずれかにおけるモノクローナルタンパク質（パラタンパク質）の存在、形質細胞障害に関連すると感じられる末端器官損傷の証拠（例えば、高カルシウム血症（補正カルシウム＞２．７５ｍｍｏｌ／１）、骨髄腫に起因する腎不全、貧血（ヘモグロビン＜１０ｇ／ｄＬ）、及び／又は骨病変（渙散性病変又は圧迫骨折を伴う骨粗鬆症））を含む。びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫の場合、疾病負荷の程度を評価するための例示的なパラメータには、細胞形態（例えば、中心芽細胞、免疫芽細胞、及び未分化細胞）、遺伝子発現、ｍｉＲＮＡ発現、及びタンパク質発現（例えば、ＢＣＬ２、ＢＣＬ６、ＭＵＭ１、ＬＭ０２、ＭＹＣ、及びｐ２１の発現）などのパラメータが含まれる。白血病の場合、疾病負荷の程度は、血液又は骨髄中の残存白血病の評価によって決定することができる。いくつかの実施形態では、例えば、光学顕微鏡によって検出されたときに、骨髄中に５％以上の芽球が存在する場合、対象は、形態的な疾病を示す。いくつかの実施形態では、骨髄中に５％未満の芽球が存在する場合、対象は、完全寛解又は臨床寛解を示す。いくつかの実施形態では、白血病の場合、対象は、完全寛解を示す場合があるが、（光学顕微鏡技術によって）形態学的に検出不可能な残存白血病細胞が少量存在する。対象が骨髄中に５％未満の芽球を示し、かつ分子的に検出可能ながんを示す場合、対象は、微小残存病変（ＭＲＤ）を示していると言われる。いくつかの実施形態では、分子的に検出可能ながんは、少数の細胞の高感度な検出を可能にする様々な分子技術のいずれかを使用して評価することができる。いくつかの態様では、このような技術には、染色体転座によって産生される固有のＩｇ／Ｔ細胞受容体遺伝子再構成又は融合転写物を決定することができるＰＣＲアッセイが含まれる。いくつかの実施形態では、フローサイトメトリーを使用して、白血病特異的免疫表現型に基づいてがん細胞を同定することができる。いくつかの実施形態では、がんの分子検出では、１００，０００個の正常細胞中わずか１個の白血病細胞を検出することができる。いくつかの実施形態では、対象は、ＰＣＲ又はフローサイトメトリーなどにより、１００，０００個の細胞中少なくとも１個以上の白血病細胞が検出される場合に、分子的に検出可能なＭＲＤを示す。いくつかの実施形態では、対象の疾病負荷は、分子的に検出不可能であるか、又は対象は、微小残存病変（ＭＲＤ）を示し、その結果、場合によっては、ＰＣＲ又はフローサイトメトリー技術を使用して対象において白血病細胞を検出することができない。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される併用療法は、併用療法の投与直前の時点での疾病負荷と比較して、疾病負荷を減少させる。いくつかの態様では、併用療法の投与は、疾病負荷の増加を防止し、これは、疾病負荷に変化がないことによって証明され得る。いくつかの実施形態では、本方法は、対象が、標的化サイトカイン構築物を投与しない場合に、遺伝子操作細胞療法を単独で受ける療法などの、代替療法を使用する同等の方法で観察される低減と比較して、疾病又は疾患の負担、例えば、腫瘍細胞の数、腫瘍のサイズ、患者の生存期間、又は無症状生存期間を、より大きな程度に、かつ／又はより長い期間低減する。いくつかの実施形態では、疾病負荷は、薬剤の各々を単独で投与する、例えば、遺伝子操作細胞療法を受けていない対象に標的化サイトカイン構築物を投与するか、又は標的化サイトカイン構築物を受けていない対象に遺伝子操作細胞療法を投与することによってもたらされる低減と比較して、遺伝子操作細胞療法及び標的化サイトカイン構築物の投与の併用療法後に、より大きな程度に、又はより長い期間にわたって低減される。
いくつかの実施形態では、対象における疾病又は疾患の負荷は、検出されるか、評価されるか、又は測定される。疾病負荷は、いくつかの態様では、対象内の、又は対象の器官、組織、若しくは血液若しくは血清などの体液中の疾病細胞又は疾病関連細胞、例えば、腫瘍細胞の総数を検出することによって検出することができる。いくつかの実施形態では、疾病負荷、例えば、腫瘍負荷は、固形腫瘍の質量及び／又は転移の数若しくは程度を測定することによって評価される。いくつかの態様では、対象の生存期間、特定の期間内の生存期間、生存の程度、無症状生存期間若しくは症状のない生存期間の存在若しくは持続、又は無再発生存期間が評価される。いくつかの実施形態では、疾病又は疾患の任意の症状が評価される。いくつかの実施形態では、疾病負荷又は疾患負荷の尺度が特定される。いくつかの実施形態では、決定のための例示的なパラメータには、疾病又は疾患、例えば、腫瘍の改善又は向上を示す特定の臨床転帰が含まれる。このようなパラメータには、完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）、又は安定疾病（ＳＤ）（例えば、固形癌効果判定基準（ＲＥＣＩＳＴ）のガイドラインを参照のこと）、客観的奏効率（ＯＲＲ）、無増悪生存期間（ＰＦＳ）、及び全生存期間（ＯＳ）を含む疾病制御の持続期間が挙げられる。パラメータの特定の閾値を設定して、本明細書で提供される併用療法の方法の有効性を判定することができる。
いくつかの態様では、疾病負荷は、遺伝子操作細胞療法の投与前、遺伝子操作細胞療法の投与後であるが標的化サイトカイン構築物の投与前、又は標的化サイトカイン構築物の投与後であるが遺伝子操作細胞療法の投与前、及び／又は遺伝子操作細胞療法と標的化サイトカイン構築物との両方の投与後に測定又は検出される。併用療法の１つ以上の工程の複数回投与に関連して、いくつかの実施形態における疾病負荷は、これらの工程のいずれかの投与前又は投与後、投与の用量及び／若しくはサイクルの前又は後に、又はこれらの工程のいずれかの投与の間、投与の用量及び／若しくはサイクルの間の時点で測定され得る。
いくつかの実施形態では、負荷は、提供される方法によって、標的化サイトカイン構築物及び遺伝子操作細胞療法の投与直前と比較して、少なくとも約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、又は１００パーセント減少する。いくつかの実施形態では、疾病負荷、腫瘍サイズ、腫瘍体積、腫瘍質量、及び／又は腫瘍量若しくは大きさは、遺伝子操作細胞療法及び／又は標的化サイトカイン構築物の投与直前と比較して、遺伝子操作細胞療法及び標的化サイトカイン構築物の投与後に、少なくとも又は約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０％以上低減される。
いくつかの実施形態では、本方法による疾病負荷の低減は、併用療法の投与後、例えば、併用療法の開始後、１か月、２か月、３か月で、又は３か月を超えて評価されるときに、形態的完全寛解の誘導を含む。いくつかの態様では、例えば、マルチパラメータのフローサイトメトリーによって測定されるときに、微小残存病変のアッセイが、陰性であるか、又は微小残存病変のレベルが、約０．３％未満、約０．２％未満、約０．１％未満、若しくは約０．０５％未満である。
いくつかの実施形態では、対象の無症状生存率又は全生存率は、他の方法と比較して、本方法によって改善される。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される併用療法の方法後６か月において、本方法によって治療された対象の無症状生存率又は確率は、約４０％超、約５０％超、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約９０％超、又は約９５％超である。いくつかの態様では、全生存率は、約４０％超、約５０％超、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約９０％超、又は約９５％超である。いくつかの実施形態では、本方法で治療された対象は、少なくとも６か月間、又は少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０年間までの、無症状生存期間、無再発生存期間、又は生存期間を示す。いくつかの実施形態では、腫瘍増殖停止時間は、６か月間以上若しくは約６か月間、又は少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０年間の腫瘍増殖停止時間など、改善される。
いくつかの実施形態では、本方法による治療後の再発の確率は、他の方法と比較して低減される。例えば、いくつかの実施形態では、併用療法の方法後６か月の再発の確率は、約８０％未満、約７０％未満、約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、又は約１０％未満である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子操作された細胞は、ポイントオブケアの場所において修飾される（例えば、本開示の標的化サイトカイン構築物と接触する）。場合によっては、ポイントオブケアの場所は、治療が必要な対象の近くの病院又は施設（例えば、医療施設）にある。対象は、アフェレーシスを受け、得られた末梢血単核球（ＰＢＭＣ）は、例えば、エルトリエーションによって富化することができる。一例では、エルトリエーションプロセスは、ヒト血清アルブミンを含む緩衝液を使用して実施される。遺伝子操作された細胞、例えば、ＣＡＲ＋ Ｔ細胞、ＴＣＲ形質導入Ｔ細胞は、本明細書に記載の選択方法によって単離することができる。一例では、遺伝子操作された細胞の選択方法には、遺伝子操作された細胞（例えば、ＣＡＲ＋ Ｔ細胞）上のＣＤ３及びＣＤ８などのマーカーに特異的なビーズが挙げられる。ある事例では、ビーズは、常磁性ビーズであり得る。採取され、かつ修飾された細胞は、修飾前に任意の適切な凍結保存溶液中で凍結保存することができる。細胞は、最大で注入の２４時間前、３６時間前、４８時間前、７２時間前、又は９６時間前まで解凍することができる。解凍細胞は、修飾前に、細胞培養緩衝液、例えば、ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を補充した細胞培養緩衝液（例えば、ＲＰＭＩ）に入れるか、又はＩＬ－２及びＩＬ－２１を含む緩衝液に入れることができる。別の態様では、採取した細胞は、凍結保存を必要とせずに直ちに修飾することができる。
場合によっては、採取した細胞は、キメラ受容体、１つ以上の細胞タグ（複数可）を遺伝子操作／導入すること、及び／又は本開示の標的化サイトカイン構築物と接触させ、次いで、対象に迅速に注入することによって修飾される。場合によっては、細胞の供給源には、同種異系供給源と自家供給源との両方を挙げることができる。ある事例では、細胞は、Ｔ細胞又はＮＫ細胞であり得る。ある事例では、キメラ受容体は、ＣＡＲ又はＴＣＲであり得る。場合によっては、細胞は、配列番号１１～９０からなる群から選択される配列、又は配列番号１１～９０からなる群から選択される配列と少なくとも約７５％～約９９％同一である配列を含む、機能的断片又はバリアントのサイトカインタンパク質を含む標的化サイトカイン構築物と接触させることによって修飾される。
特定の場合では、遺伝子操作された細胞は、切断型上皮成長因子、ＥＧＦＲｔなどの、ＣＡＲ分子又はＴＣＲ分子とは別個の細胞タグを細胞表面に発現させることによって修飾される。いくつかの例では、細胞タグは、本明細書に記載の切断型上皮成長因子受容体タグなどの細胞タグを含む修飾され遺伝子操作された細胞の条件付きインビボアブレーションのために、例えば、セツキシマブを介して活性化される。いくつかの実施形態では、細胞は、以下の配列：ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬを有するｍｙｃタグなどのポリペプチドタグ配列を含むキメラ抗原受容体若しくはＴ細胞受容体、又はそれらの一部を発現させることによって修飾される。本開示の標的化サイトカイン構築物は、いくつかの例では、細胞によって発現されるか、又は細胞によって発現されるＣＡＲ若しくはＴＣＲ分子の一部として発現される、上述のようなタグに特異的な細胞結合ドメイン（抗体又はその抗原結合断片など）を含む。例としては、遺伝子操作された細胞上で発現されるＥＧＦＲｔタグに結合するために使用することができる抗ＥＧＦＲ抗体、又は遺伝子操作された細胞上のＣＡＲ又はＴＣＲ分子の一部として発現されるｍｙｃタグに結合するために使用することができる抗ｍｙｃ抗体が挙げられる。
いくつかの実施形態では、採取した細胞は、エレクトロポレーションを通じて標的化サイトカイン構築物によって修飾される。一例では、エレクトロポレーションは、ＬｏｎｚａのＮｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ（商標）エレクトロポレータなどのエレクトロポレータを用いて実施される。他の実施形態では、上記の構築物を含むベクターは、非ウイルスベクター又はウイルスベクターである。ある事例では、非ウイルスベクターには、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙトランスポゾン－トランスポザーゼシステムが含まれる。一例では、細胞は、特異的配列を使用してエレクトロポレーションされる。例えば、細胞は、１つのトランスポゾン、続いてトランスポザーゼをコードするＤＮＡ、続いて第２のトランスポゾンを用いてエレクトロポレーションすることができる。別の例では、免疫エフェクター細胞は、全てのトランスポゾン及びトランスポザーゼを同時に用いてエレクトロポレーションすることができる。別の例では、細胞は、トランスポザーゼ、続いて一度に両方のトランスポゾン又は１つのトランスポゾンを用いてエレクトロポレーションすることができる。連続的なエレクトロポレーションを行っている間、細胞は、次のエレクトロポレーション工程の前に一定期間静置してもよい。
場合によっては、修飾された細胞は、増殖及び活性化の工程を受けない。場合によっては、修飾された細胞は、インキュベーション工程又は培養工程（例えば、エクスビボ増殖）を受けない。他の例では、修飾された免疫エフェクター細胞は、注入前に、細胞培養緩衝液、例えば、ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を補充した細胞培養緩衝液（例えば、ＲＰＭＩ）に置くか、又は静置する。注入前に、修飾された細胞を採取し、洗浄し、対象への注入に備えて生理食塩水緩衝液中で製剤化することができる。
標的化サイトカイン構築物
本開示は、いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物であって、（ｉ）遺伝子操作された細胞に外因的に導入されたキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）若しくはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）のドメイン、（ｉｉ）遺伝子操作された細胞の表面に選択的に発現されたタグ分子、（ｉｉｉ）遺伝子操作された細胞に外因的に導入されたＣＡＲの一部であるポリペプチドタグ、（ｉｖ）ＴＣＲの一部であるポリペプチドタグ、又は（ｖｉ）（ｉ）～（ｖ）の任意の組み合わせのうちの少なくとも１つを標的とする細胞結合ドメインと、サイトカインタンパク質又はその機能的断片若しくはバリアントと、を含む、標的化サイトカイン構築物を提供する。
一実施形態は、遺伝子操作された細胞との併用療法で使用するための標的化サイトカイン構築物を提供し、融合タンパク質は、（ｉ）細胞結合ドメイン、及び（ｉｉ）サイトカインタンパク質若しくはその機能的断片若しくはバリアントを含み、細胞結合ドメインは、（ａ）遺伝子操作された細胞（例えば、ＣＡＲ又はＴＣＲ）上で発現される抗原受容体のドメインに特異的な抗体又はその抗原結合断片を含み、（ｃ）タグに特異的であり、タグは、遺伝子操作された細胞によって共発現される（「別々に発現される」）表面分子であるか、若しくは遺伝子操作された細胞によって発現される抗原受容体（例えば、ＣＡＲ若しくはＴＣＲ）の一部（「ＣＡＲの一部」若しくは「ＴＣＲの一部」）であり、（ｄ）遺伝子操作された細胞によって標的化された抗原に由来するドメインであるか、又は（ｅ）（ａ）～（ｄ）の任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、遺伝子操作された細胞によって発現される受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。
いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物は、２つの部分を含み、ｉ）第１の部分は、抗体重鎖ＶＨ－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３単量体と、抗体軽鎖ＶＬ－ＣＬを含むポリペプチドと、変異体サイトカインポリペプチドと、を含むポリペプチドであり、ＶＨは、可変重鎖であり、ＣＨ２－ＣＨ３は、Ｆｃドメインであり、ＶＬは、可変軽鎖であり、ＣＬは、定常軽鎖であり、変異体サイトカインのＮ末端は、リンカーを介してＦｃドメインのＣ末端に融合されており、ｉｉ）第２の部分は、抗体重鎖ＶＨ－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３単量体と、抗体軽鎖ＶＬ－ＣＬと、を含むポリペプチドであり、第１の部分及び第２の部分は両方とも、遺伝子操作されていない細胞よりも遺伝子操作された細胞上で選択的に発現されるドメインに結合する。
いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物は、２つの部分を含み、ｉ）第１の部分は、抗体ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３単量体と、変異体サイトカインポリペプチドと、を含むポリペプチドであり、ＣＨ２－ＣＨ３は、Ｆｃドメインであり、変異体サイトカインポリペプチドのＮ末端は、リンカーを介してＦｃドメインのＣ末端に融合されており、ｉｉ）第２の部分は、抗体重鎖ＶＨ－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３単量体と、抗体軽鎖ＶＬ－ＣＬと、を含むポリペプチドであり、第２の部分は、遺伝子操作されていない細胞よりも遺伝子操作された細胞上で選択的に発現されるドメインに結合する。
いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物は、２つの部分を含み、ｉ）第１の部分は、抗体ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３単量体と、変異体サイトカインポリペプチドと、を含むポリペプチドであり、ＣＨ２－ＣＨ３は、Ｆｃドメインであり、変異体サイトカインポリペプチドのＣ末端は、リンカーを介してＦｃドメインのＮ末端に融合されており、ｉｉ）第２の部分は、抗体重鎖ＶＨ－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３単量体と、抗体軽鎖ＶＬ－ＣＬと、を含むポリペプチドであり、第２の部分は、遺伝子操作されていない細胞よりも遺伝子操作された細胞上で選択的に発現されるドメインに結合する。
本開示は、いくつかの実施形態では、（ｉ）細胞結合ドメイン、及び（ｉｉ）サイトカインタンパク質又はその機能的断片若しくはバリアントを含む標的化サイトカイン構築物を提供し、細胞結合ドメインは、（ａ）遺伝子操作された細胞の表面に外因的に発現される受容体若しくはドメインに特異的な抗体若しくはその抗原結合断片を含み、（ｂ）遺伝子操作された細胞上で発現された抗原結合タンパク質のドメインに特異的な抗体若しくはその抗原結合断片を含み、（ｃ）遺伝子操作された細胞によって共発現されるタグ、若しくは受容体上のタグ（例えば、キメラ抗原受容体－ＣＡＲ、若しくは遺伝子操作された細胞によって発現されるＴ細胞受容体（ＴＣＲ）に特異的であり、（ｄ）遺伝子操作された細胞によって標的化された抗原に由来するドメインであるか、又は（ｅ）（ａ）～（ｄ）の任意の組み合わせを含む。
細胞結合ドメインは、いくつかの例では、遺伝子操作された細胞の表面に外因的に発現される受容体又はドメインに特異的な、抗体又はその抗原結合断片である。いくつかの実施形態では、細胞結合ドメインは、遺伝子操作された細胞に特異的な抗イディオタイプ抗体を含む。いくつかの実施形態では、細胞結合ドメインは、遺伝子操作された細胞上で発現される抗原結合タンパク質のドメイン、例えば、細胞結合ドメインがＶＨ－ＶＬ界面、ＶＨ、ＶＬ、又はｓｃＦｖのリンカーに特異的である、遺伝子操作された細胞上で発現されるｓｃＦｖのドメインに特異的である。いくつかの実施形態では、細胞結合ドメインは、ＥＧＦＲｔタグなどの、遺伝子操作された細胞によって共発現されるタグに特異的である。いくつかの実施形態では、細胞結合ドメインは、遺伝子操作された細胞によって発現されるＣＡＲ構築物上のタグに特異的である。一例を図５Ａに示す。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ構築物上のこのようなタグは、以下の構造、ｓｃＦｖ－タグ－膜貫通ドメイン－追加ドメイン（ＣＤ３ζシグナル伝達ドメイン、共刺激ドメイン（例えば、ＣＤ２８ドメイン、４１－ＢＢドメイン）など）の一部である。
いくつかの実施形態では、細胞結合ドメインは、遺伝子操作された細胞によって標的化された抗原に由来するドメインを含み、この非限定的な例としては、腫瘍関連抗原からのネオエピトープ、ＴＳＨＲ、ＣＤ１９、ＣＤ１２３、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ１７１、ＣＳ－１、ＣＬＬ－１、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖｌｌｌ、ＧＤ２、ＧＤ３、ＢＣＭＡ、Ｔｎ Ａｇ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＦＬＴ３、ＦＡＰ、ＴＡＧ７２、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、メソセリン、ＩＬ－１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ＬｅｗｉｓＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ－β、ＳＳＥＡ－４、ＣＤ２０、葉酸受容体α、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、エフリンＢ２、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐ１００、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、ＥｐｈＡ２、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体β、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、ＧｌｏｂｏＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１ Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴ１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ＭＡＧＥ－Ａ１、レグマイン、ＨＰＶ Ｅ６、Ｅ７、ＭＡＧＥ Ａ１、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、精子タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ ２、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、プロスタイン、サバイビン及びテロメラーゼ、ＰＣＴＡ－１／ガレクチン８、メランＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点、ＭＬ－ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１ Ｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ－１、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、ＬＡＩＲ１、ＦＣＡＲ、ＬＩＬＲＡ２、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＢＳＴ２、ＥＭＲ２、ＬＹ７５、ＧＰＣ３、ＦＣＲＬ５、又はＩＧＬＬ１が挙げられる。
サイトカインの非限定的な例としては、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１、若しくはその機能的断片、若しくはそのバリアント、又はこれらの任意の組み合わせが挙げられる。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－２ポリペプチド、その断片又はバリアントである。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－７ポリペプチド、その断片又はバリアントである。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－１０ポリペプチド、その断片又はバリアントである。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－２１ポリペプチド、その断片又はバリアントである。元のサイトカインペプチド、例えば、野生型ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１５、又はＩＬ－２１に対する複数の修飾を組み合わせて、親和性の低下又は生物物理学的特性の改善など、所望の活性修飾を達成してもよい。非限定的な例として、コンセンサスＮ結合グリコシル化のためのアミノ酸配列をポリペプチドに組み込んで、グリコシル化を可能にしてもよい。別の非限定的な例としては、リシンをポリペプチドに組み込んでペグ化を可能にし得ることである。いくつかの実施形態では、変異又は複数の変異をポリペプチドに導入して、その受容体に対する親和性を低下させることにより、その活性を修飾する。
インターロイキン－２（ＩＬ－２）
いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ポリペプチドは、本明細書に記載の変異体ＩＬ－２ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、変異体サイトカイン（例えば、ＩＬ－２ポリペプチド）が本明細書において提供され、その変異体サイトカインは、その受容体、例えば、ＩＬ－２Ｒα（例えば、配列番号２又は図６Ｂに示すようなアミノ酸配列を含む）に対して５０％未満の結合親和性を示す。
本明細書で互換的に使用される「インターロイキン－２」又は「ＩＬ－２」は、別段の指示がない限り、任意の天然ＩＬ－２を指すことができる。「ＩＬ－２」は、未処理のＩＬ－２（前駆体ＩＬ－２など）、及び細胞内での処理から生じるＩＬ－２の形態であり得る「成熟ＩＬ－２」を含むことができる。ヒト「成熟ＩＬ－２」の配列は、配列番号１として提供される。未処理のヒトＩＬ－２の１つの例示的な形態は、成熟ＩＬ－２に結合した追加のＮ末端アミノ酸シグナルペプチドから構成され得る。「ＩＬ－２」には、ＩＬ－２の天然に存在するバリアント、例えば、アレルバリアント又はスプライスバリアント又はバリアントも含まれ得るが、これらに限定されない。例示的なヒトＩＬ－２のアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ Ｐ６０５６８（ＩＬ２_ＨＵＭＡＮ）に記載されている。「変異体ＩＬ－２ポリペプチド」は、その受容体に対する親和性の低下など、その受容体に対する親和性が変化し得るＩＬ－２ポリペプチドを指すことができ、このような親和性の減少は、変異体の生物活性の低下をもたらすことになる。親和性及びそれによる活性の低下などの、親和性の変化は、少数のアミノ酸変異又はアミノ酸置換を導入することによって得ることができる。また、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ペプチド骨格に他の修飾を有することもでき、ポリペプチドのアミノ酸欠失、並べ替え、環化、ジスルフィド結合、若しくは翻訳後修飾（例えば、グリコシル化若しくは改変炭水化物）、ポリペプチドへの化学的修飾若しくは酵素的修飾（例えば、ポリペプチド骨格へのＰＥＧの結合）、ペプチドタグ若しくは標識の付加、又はＩＬ－２Ｒβγに対する親和性の低下など、所望の特性を有する最終構築物を生成するための、タンパク質若しくはタンパク質ドメインへの融合が挙げられるが、これらに限定されない。また、所望の活性には、野生型ＩＬ－２ポリペプチドと比較して改善された生物物理学的特性も含まれ得る。複数の修飾を組み合わせて、親和性の低下若しくは増加、又は生物物理学的特性の改善など、所望の活性修飾を達成してもよい。非限定的な例として、コンセンサスＮ結合グリコシル化のためのアミノ酸配列をポリペプチドに組み込んで、グリコシル化を可能にしてもよい。別の非限定的な例としては、リシンをポリペプチドに組み込んでペグ化を可能にし得ることである。場合によっては、変異又は複数の変異をポリペプチドに導入して、その活性を修飾する。
いくつかの実施形態では、野生型ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１）の配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドもまた、（例えば、配列番号３のアミノ酸配列を含む）ＩＬ－２Ｒβに対して５０％未満の結合親和性を示す。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、（例えば、配列番号１のアミノ酸配列を含む）野生型ＩＬ－２ポリペプチドと比較して、ＩＬ－２Ｒαに対して５０％未満の結合親和性を示し、（例えば、配列番号３のアミノ酸配列又は図６Ｃに示すアミノ酸配列を含む）ＩＬ－２Ｒβに対して５０％未満の結合親和性を示す。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、（例えば、配列番号１のアミノ酸配列を含む）野生型ＩＬ－２ポリペプチドと比較して、ＩＬ－２Ｒαに対して５０％未満の結合親和性を示し、（例えば、配列番号４のアミノ酸配列又は図６Ｄに示すアミノ酸配列を含む）ＩＬ－２Ｒγに対して５０％未満の結合親和性を示す。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、野生型ＩＬ－２ポリペプチドと比較して、ＩＬ－２Ｒαに対して５０％未満の結合親和性を示し、ＩＬ－２Ｒβに対して５０％未満の結合親和性を示し、ＩＬ－２Ｒγに対して５０％未満の結合親和性を示す。野生型ポリペプチドと開示された変異体ポリペプチドとの、ＩＬ－２Ｒα及びＩＬ－２Ｒβに対する結合親和性の違いは、例えば、当業者にはよく知られているタンパク質間相互作用の親和性を測定する標準的な表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイで測定することができる。野生型ポリペプチドと開示された変異体ポリペプチドとの、ＩＬ－２Ｒγに対する結合親和性の違いは、ＩＬ－２Ｒγに対する野生型ＩＬ－２ポリペプチドの親和性が非常に低いため、ＳＰＲアッセイでは信頼性をもって測定することができない。その代わりに、ＩＬ－２Ｒγに対するそれらの親和性の低下は、ｐＳＴＡＴ５を測定し、ＩＬ－２Ｒγの親和性を低下させる置換を有するＩＬ－２ポリペプチド及びその置換を有さないＩＬ－２ポリペプチドの、ＩＬ－２Ｒ発現細胞に対する活性を比較するインビトロアッセイを実施することによって推測することができる。
いくつかの実施形態では、サイトカインは、（ｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒβポリペプチドに結合する、かつ／又はこれを活性化するＩＬ－２Ｒβγアゴニストポリペプチド、及び（ｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒγポリペプチドに結合する、かつ／又はこれを活性化するＩＬ－２Ｒβγポリペプチドアゴニストポリペプチドのうちの少なくとも１つである。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－２Ｒβポリペプチドは、ＭＡＡＰＡＬＳＷＲＬＰＬＬＩＬＬＬＰＬＡＴＳＷＡＳＡＡＶＮＧＴＳＱＦＴＣＦＹＮＳＲＡＮＩＳＣＶＷＳＱＤＧＡＬＱＤＴＳＣＱＶＨＡＷＰＤＲＲＲＷＮＱＴＣＥＬＬＰＶＳＱＡＳＷＡＣＮＬＩＬＧＡＰＤＳＱＫＬＴＴＶＤＩＶＴＬＲＶＬＣＲＥＧＶＲＷＲＶＭＡＩＱＤＦＫＰＦＥＮＬＲＬＭＡＰＩＳＬＱＶＶＨＶＥＴＨＲＣＮＩＳＷＥＩＳＱＡＳＨＹＦＥＲＨＬＥＦＥＡＲＴＬＳＰＧＨＴＷＥＥＡＰＬＬＴＬＫＱＫＱＥＷＩＣＬＥＴＬＴＰＤＴＱＹＥＦＱＶＲＶＫＰＬＱＧＥＦＴＴＷＳＰＷＳＱＰＬＡＦＲＴＫＰＡＡＬＧＫＤＴＩＰＷＬＧＨＬＬＶＧＬＳＧＡＦＧＦＩＩＬＶＹＬＬＩＮＣＲＮＴＧＰＷＬＫＫＶＬＫＣＮＴＰＤＰＳＫＦＦＳＱＬＳＳＥＨＧＧＤＶＱＫＷＬＳＳＰＦＰＳＳＳＦＳＰＧＧＬＡＰＥＩＳＰＬＥＶＬＥＲＤＫＶＴＱＬＬＬＱＱＤＫＶＰＥＰＡＳＬＳＳＮＨＳＬＴＳＣＦＴＮＱＧＹＦＦＦＨＬＰＤＡＬＥＩＥＡＣＱＶＹＦＴＹＤＰＹＳＥＥＤＰＤＥＧＶＡＧＡＰＴＧＳＳＰＱＰＬＱＰＬＳＧＥＤＤＡＹＣＴＦＰＳＲＤＤＬＬＬＦＳＰＳＬＬＧＧＰＳＰＰＳＴＡＰＧＧＳＧＡＧＥＥＲＭＰＰＳＬＱＥＲＶＰＲＤＷＤＰＱＰＬＧＰＰＴＰＧＶＰＤＬＶＤＦＱＰＰＰＥＬＶＬＲＥＡＧＥＥＶＰＤＡＧＰＲＥＧＶＳＦＰＷＳＲＰＰＧＱＧＥＦＲＡＬＮＡＲＬＰＬＮＴＤＡＹＬＳＬＱＥＬＱＧＱＤＰＴＨＬＶ（配列番号３）の配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－２Ｒαポリペプチドは、ＭＤＳＹＬＬＭＷＧＬＬＴＦＩＭＶＰＧＣＱＡＥＬＣＤＤＤＰＰＥＩＰＨＡＴＦＫＡＭＡＹＫＥＧＴＭＬＮＣＥＣＫＲＧＦＲＲＩＫＳＧＳＬＹＭＬＣＴＧＮＳＳＨＳＳＷＤＮＱＣＱＣＴＳＳＡＴＲＮＴＴＫＱＶＴＰＱＰＥＥＱＫＥＲＫＴＴＥＭＱＳＰＭＱＰＶＤＱＡＳＬＰＧＨＣＲＥＰＰＰＷＥＮＥＡＴＥＲＩＹＨＦＶＶＧＱＭＶＹＹＱＣＶＱＧＹＲＡＬＨＲＧＰＡＥＳＶＣＫＭＴＨＧＫＴＲＷＴＱＰＱＬＩＣＴＧＥＭＥＴＳＱＦＰＧＥＥＫＰＱＡＳＰＥＧＲＰＥＳＥＴＳＣＬＶＴＴＴＤＦＱＩＱＴＥＭＡＡＴＭＥＴＳＩＦＴＴＥＹＱＶＡＶＡＧＣＶＦＬＬＩＳＶＬＬＬＳＧＬＴＷＱＲＲＱＲＫＳＲＲＴＩ（配列番号２）の配列を含む
いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－２ポリペプチド、又はその機能的断片、又はそのバリアントである。いくつかの実施形態では、サイトカインは、配列番号１のアミノ酸配列を含む野生型ＩＬ－２ポリペプチドの、ＩＬ－２Ｒαポリペプチドへの結合親和性と比較して、配列番号２のアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒαポリペプチドに対して５０％以上低下した結合親和性を示す変異体ＩＬ－２ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、サイトカインは、配列番号１のアミノ酸配列を含む野生型ＩＬ－２ポリペプチドの、ＩＬ－２Ｒβポリペプチドへの結合親和性と比較して、配列番号３のアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒβポリペプチドに対して５０％以上低下した結合親和性を示す変異体ＩＬ－２ポリペプチドである。
いくつかの実施形態では、サイトカインは、配列番号１のアミノ酸配列を含む野生型ＩＬ－２ポリペプチドの、配列番号４のアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒγポリペプチドへの結合親和性と比較して、配列番号４のアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒαポリペプチドに対して５０％以上低下した結合親和性、及びＩＬ－２Ｒγポリペプチドに対して５０％以上低下した結合親和性を示す変異体ＩＬ－２ポリペプチドである。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－２Ｒγポリペプチドは、ＭＬＫＰＳＬＰＦＴＳＬＬＦＬＱＬＰＬＬＧＶＧＬＮＴＴＩＬＴＰＮＧＮＥＤＴＴＡＤＦＦＬＴＴＭＰＴＤＳＬＳＶＳＴＬＰＬＰＥＶＱＣＦＶＦＮＶＥＹＭＮＣＴＷＮＳＳＳＥＰＱＰＴＮＬＴＬＨＹＷＹＫＮＳＤＮＤＫＶＱＫＣＳＨＹＬＦＳＥＥＩＴＳＧＣＱＬＱＫＫＥＩＨＬＹＱＴＦＶＶＱＬＱＤＰＲＥＰＲＲＱＡＴＱＭＬＫＬＱＮＬＶＩＰＷＡＰＥＮＬＴＬＨＫＬＳＥＳＱＬＥＬＮＷＮＮＲＦＬＮＨＣＬＥＨＬＶＱＹＲＴＤＷＤＨＳＷＴＥＱＳＶＤＹＲＨＫＦＳＬＰＳＶＤＧＱＫＲＹＴＦＲＶＲＳＲＦＮＰＬＣＧＳＡＱＨＷＳＥＷＳＨＰＩＨＷＧＳＮＴＳＫＥＮＰＦＬＦＡＬＥＡＶＶＩＳＶＧＳＭＧＬＩＩＳＬＬＣＶＹＦＷＬＥＲＴＭＰＲＩＰＴＬＫＮＬＥＤＬＶＴＥＹＨＧＮＦＳＡＷＳＧＶＳＫＧＬＡＥＳＬＱＰＤＹＳＥＲＬＣＬＶＳＥＩＰＰＫＧＧＡＬＧＥＧＰＧＡＳＰＣＮＱＨＳＰＹＷＡＰＰＣＹＴＬＫＰＥＴ（配列番号４）の配列を含む。
本開示の変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、いくつかの例では、配列番号１のアミノ酸配列を有する野生型成熟ＩＬ－２ポリペプチドに対して、１つ以上、２つ以上、又は３つ以上の親和性を低下させるアミノ酸置換を有しており、１つ以上、２つ以上、又は３つ以上の置換残基は、Ｑ１１、Ｈ１６、Ｌ１８、Ｌ１９、Ｄ２０、Ｑ２２、Ｒ３８、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｙ４５、Ｅ６２、Ｐ６５、Ｅ６８、Ｖ６９、Ｌ７２、Ｄ８４、Ｓ８７、Ｎ８８、Ｖ９１、Ｉ９２、Ｔ１２３、Ｑ１２６、Ｓ１２７、Ｉ１２９、及びＳ１３０の群から選択される。野生型成熟ＩＬ－２ポリペプチドの配列において可能性のあるアミノ酸置換の位置。ＩＬ－２Ｒαに対する親和性の減少は、野生型成熟ＩＬ－２ポリペプチドの配列における残基：Ｒ３８、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｙ４５、Ｅ６２、Ｐ６５、Ｅ６８、Ｖ６９、及びＬ７２のうちの１つ以上を置換することによって得てもよい。ＩＬ－２Ｒβに対する親和性の減少は、以下の残基：Ｅ１５、Ｈ１６、Ｌ１９、Ｄ２０、Ｄ８４、Ｓ８７、Ｎ８８、Ｖ９１、及びＩ９２のうちの１つ以上を置換することによって得てもよい。ＩＬ－２Ｒγに対する親和性の減少は、野生型成熟ＩＬ－２ポリペプチドの配列における残基：Ｑ１１、Ｌ１８、Ｑ２２、Ｔ１２３、Ｑ１２６、Ｓ１２７、Ｉ１２９、及びＳ１３０のうちの１つ以上を置換することによって得てもよい。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、図６Ａに示すように、野生型成熟ＩＬ－２アミノ酸配列、例えば、配列番号１に対して、Ｆ４２Ａ又はＦ４２Ｋアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、野生型成熟ＩＬ－２アミノ酸配列に対して、Ｆ４２Ａ又はＦ４２Ｋアミノ酸置換、及びＲ３８Ａ、Ｒ３８Ｄ、Ｒ３８Ｅ、Ｅ６２Ｑ、Ｅ６８Ａ、Ｅ６８Ｑ、Ｅ６８Ｋ、又はＥ６８Ｒアミノ酸置換を含む。例えば、いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、Ｆ４２Ａ；Ｒ３８Ａ及びＦ４２Ａ；Ｒ３８Ｄ及びＦ４２Ａ；Ｒ３８Ｅ及びＦ４２Ａ；Ｆ４２Ａ及びＥ６２Ｑ；Ｆ４２Ａ及びＥ６８Ａ；Ｆ４２Ａ及びＥ６８Ｑ；Ｆ４２Ａ及びＥ６８Ｋ；Ｆ４２Ａ及びＥ６８Ｒ；又はＲ３８Ａ及びＦ４２Ｋアミノ酸置換（複数可）を、例えば、配列番号１に示すような野生型成熟ＩＬ－２アミノ酸配列に対して含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、野生型ＩＬ－２アミノ酸配列に対してＲ３８Ｅ及びＦ４２Ａアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、野生型ＩＬ－２アミノ酸配列に対してＲ３８Ｄ及びＦ４２Ａアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、野生型ＩＬ－２アミノ酸配列に対してＦ４２Ａ及びＥ６２Ｑアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、野生型ＩＬ－２アミノ酸配列に対してＲ３８Ａ及びＦ４２Ｋアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、野生型ＩＬ－２アミノ酸配列に対してＲ３８Ｄ及びＦ４２Ａアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、野生型ＩＬ－２アミノ酸配列に対してＲ３８Ａ及びＦ４２Ｋアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、野生型ＩＬ－２アミノ酸配列に対してＦ４２Ａ及びＥ６２Ｑアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、野生型ＩＬ－２アミノ酸配列に対して、Ｈ１６Ｅ、Ｈ１６Ｄ、Ｄ２０Ｎ、Ｍ２３Ａ、Ｍ２３Ｒ、Ｍ２３Ｋ、Ｄ８４Ｌ、Ｄ８４Ｎ、Ｄ８４Ｖ、Ｄ８４Ｈ、Ｄ８４Ｙ、Ｄ８４Ｒ、Ｄ８４Ｋ、Ｓ８７Ｋ、Ｓ８７Ａ、Ｎ８８Ａ、Ｎ８８Ｄ、Ｎ８８Ｇ、Ｎ８８Ｓ、Ｎ８８Ｔ、Ｎ８８Ｒ、Ｎ８８Ｉ、Ｖ９１Ａ、Ｖ９１Ｔ、Ｖ９１Ｅ、Ｉ９２Ａ、Ｅ９５Ｓ、Ｅ９５Ａ、Ｅ９５Ｒ、Ｔ１２３Ａ、Ｔ１２３Ｅ、Ｔ１２３Ｋ、Ｔ１２３Ｑ、Ｑ１２６Ａ、Ｑ１２６Ｓ、Ｑ１２６Ｔ、Ｑ１２６Ｅ、Ｓ１２７Ａ、Ｓ１２７Ｅ、Ｓ１２７Ｋ、又はＳ１２７Ｑアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、Ｆ４２Ａ；Ｒ３８Ａ及びＦ４２Ａ；Ｒ３８Ｄ及びＦ４２Ａ；Ｒ３８Ｅ及びＦ４２Ａ；Ｆ４２Ａ及びＥ６２Ｑ；Ｆ４２Ａ及びＥ６８Ａ；Ｆ４２Ａ及びＥ６８Ｑ；Ｆ４２Ａ及びＥ６８Ｋ；Ｆ４２Ａ及びＥ６８Ｒ；又はＲ３８Ａ及びＦ４２Ｋアミノ酸置換（複数可）を、例えば、配列番号１に示すような、野生型成熟ＩＬ－２アミノ酸配列に対して含み、また、Ｈ１６Ｅ、Ｈ１６Ｄ、Ｄ２０Ｎ、Ｍ２３Ａ、Ｍ２３Ｒ、Ｍ２３Ｋ、Ｄ８４Ｌ、Ｄ８４Ｎ、Ｄ８４Ｖ、Ｄ８４Ｈ、Ｄ８４Ｙ、Ｄ８４Ｒ、Ｄ８４Ｋ、Ｓ８７Ｋ、Ｓ８７Ａ、Ｎ８８Ａ、Ｎ８８Ｄ、Ｎ８８Ｇ、Ｎ８８Ｓ、Ｎ８８Ｔ、Ｎ８８Ｒ、Ｎ８８Ｉ、Ｖ９１Ａ、Ｖ９１Ｔ、Ｖ９１Ｅ、Ｉ９２Ａ、Ｅ９５Ｓ、Ｅ９５Ａ、Ｅ９５Ｒ、Ｔ１２３Ａ、Ｔ１２３Ｅ、Ｔ１２３Ｋ、Ｔ１２３Ｑ、Ｑ１２６Ａ、Ｑ１２６Ｓ、Ｑ１２６Ｔ、Ｑ１２６Ｅ、Ｓ１２７Ａ、Ｓ１２７Ｅ、Ｓ１２７Ｋ、又はＳ１２７Ｑアミノ酸置換を、野生型成熟ＩＬ－２アミノ酸配列に対して含む。例えば、いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、野生型ＩＬ－２アミノ酸配列に対して、Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＨ１６Ｅアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、野生型ＩＬ－２アミノ酸配列に対して、Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＨ１６Ｄアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、野生型ＩＬ－２アミノ酸配列に対して、Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｋアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、野生型ＩＬ－２アミノ酸配列に対して、Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｒアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、野生型ＩＬ－２アミノ酸配列に対して、Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ｓアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、野生型ＩＬ－２アミノ酸配列に対して、Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ａアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、野生型ＩＬ－２アミノ酸配列に対して、Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ｇアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、野生型ＩＬ－２アミノ酸配列に対して、Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ｒアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、野生型ＩＬ－２アミノ酸配列に対して、Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ｔアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、野生型ＩＬ－２アミノ酸配列に対して、Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ｄアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、野生型ＩＬ－２アミノ酸配列に対して、Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＶ９１Ｅアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、野生型ＩＬ－２アミノ酸配列に対して、Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＱ１２６Ｓアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、（配列番号１の配列に対して）Ｒ３８Ｅ及びＦ４２Ａ、Ｒ３８Ｄ及びＦ４２Ａ；Ｆ４２Ａ及びＥ６２Ｑ；Ｒ３８Ａ及びＦ４２Ｋ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ｓ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ｇ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ｒ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ｔ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ｄ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＶ９１Ｅ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｈ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｋ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｒ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ｅ及びＦ４２Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ｅ及びＦ４２Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＮ８８Ｓ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＮ８８Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＮ８８Ｇ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＮ８８Ｒ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＮ８８Ｔ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＮ８８Ｄ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＶ９１Ｅ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｈ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｋ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｒ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ｄ及びＦ４２Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ｄ及びＦ４２Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＮ８８Ｓ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＮ８８Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＮ８８Ｇ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＮ８８Ｒ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＮ８８Ｔ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＮ８８Ｄ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＶ９１Ｅ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＤ８４Ｈ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＤ８４Ｋ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＤ８４Ｒ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ａ、及びＦ４２Ｋ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ａ、及びＦ４２Ｋ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＱ１２６Ｓ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＮ８８Ｓ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＮ８８Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＮ８８Ｇ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＮ８８Ｒ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＮ８８Ｔ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＮ８８Ｄ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＶ９１Ｅ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｈ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｋ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｒ；Ｈ１６Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＥ６２Ｑ；Ｈ１６Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＥ６２Ｑ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｒ４２Ａ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｔ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｃ１２５Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｔ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｃ１２５Ａ、及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｎ８８Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｎ８８Ｔ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｄ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｄ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｄ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｃ１２５Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｎ８８Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｎ８８Ｔ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＥ６２Ｑ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＥ６２Ｑ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｃ１２５Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｔ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；並びにＦ４２Ａ、Ｃ１２５Ａ及びＱ１２６Ｓのうちの１つを有する、配列番号１のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号１に対して１、２、３、４、又は５つのアミノ酸置換を有する配列番号１の配列を含み、これら１、２、３、４、又は５つの置換（複数可）は、Ｑ１１、Ｈ１６、Ｌ１８、Ｌ１９、Ｄ２０、Ｑ２２、Ｒ３８、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｙ４５、Ｅ６２、Ｐ６５、Ｅ６８、Ｖ６９、Ｌ７２、Ｄ８４、Ｓ８７、Ｎ８８、Ｖ９１、Ｉ９２、Ｔ１２３、Ｑ１２６、Ｓ１２７、Ｉ１２９、及びＳ１３０からなる群から選択される、配列番号
１の位置における置換（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ポリペプチドは、（配列番号１の配列に対して）Ｒ３８Ｅ及び４２Ａ；Ｒ３８Ｄ及びＦ４２Ａ；Ｆ４２Ａ及びＥ６２Ｑ；Ｒ３８Ａ及びＦ４２Ｋ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ｓ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ｇ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ｒ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ｔ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ｄ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＶ９１Ｅ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｈ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｋ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｒ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ｅ及びＦ４２Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ｅ及びＦ４２Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＮ８８Ｓ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＮ８８Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＮ８８Ｇ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＮ８８Ｒ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＮ８８Ｔ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＮ８８Ｄ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＶ９１Ｅ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｈ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｋ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｒ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ｄ及びＦ４２Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ｄ及びＦ４２Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＮ８８Ｓ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＮ８８Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＮ８８Ｇ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＮ８８Ｒ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＮ８８Ｔ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＮ８８Ｄ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＶ９１Ｅ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＤ８４Ｈ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＤ８４Ｋ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＤ８４Ｒ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ａ、及びＦ４２Ｋ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ａ、及びＦ４２Ｋ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＱ１２６Ｓ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＮ８８Ｓ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＮ８８Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＮ８８Ｇ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＮ８８Ｒ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＮ８８Ｔ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＮ８８Ｄ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＶ９１Ｅ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｈ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｋ；並びにＦ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｒアミノ酸置換のセットのうちの１つを有する、配列番号１の配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ポリペプチドは、位置Ｃ１２５において配列番号１に対して更なるアミノ酸置換を有する、配列番号１の配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ポリペプチドは、（配列番号１の配列に対して）Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｒ４２Ａ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｔ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｃ１２５Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｔ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｃ１２５Ａ、及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｎ８８Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｎ８８Ｔ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｄ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｄ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｄ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｃ１２５Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｎ８８Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｎ８８Ｔ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＥ６２Ｑ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＥ６２Ｑ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｃ１２５Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｔ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；並びにＦ４２Ａ、Ｃ１２５Ａ及びＱ１２６Ｓのうちの１つを有する、配列番号１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＥＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＤＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＱＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＡＭＬＴＫＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＥＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＳＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＥＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＡＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＥＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＥＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＥＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＨＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＤＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＥＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＥＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＥＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＥＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＳＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＤＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＳＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号２２）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＤＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＡＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号２３）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＤＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＥＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号２４）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＤＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＨＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号２５）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＤＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＤＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号２６）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＥＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＤＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号２７）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＤＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＳＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号２８）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＡＭＬＴＫＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＳＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号２９）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＡＭＬＴＫＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＡＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＡＭＬＴＫＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＥＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＡＭＬＴＫＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＨＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＤＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＡＭＬＴＫＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号３３）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＥＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＡＭＬＴＫＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号３４）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＡＭＬＴＫＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＳＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号３５）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＱＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＳＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号３６）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＱＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＡＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号３７）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＱＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＥＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号３８）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＱＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＨＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号３９）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＤＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＱＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号４０）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＥＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＱＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＱＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＳＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号４２）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＥＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号４３）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＤＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号４４）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＱＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号４５）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＡＭＬＴＫＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号４６）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＥＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＳＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号４７）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＥＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＡＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号４８）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＥＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＥＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号４９）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＥＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＨＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号５０）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＤＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＥＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号５１）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＥＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＥＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号５２）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＥＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＳＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号５３）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＤＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＳＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号５４）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＤＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＡＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号５５）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＤＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＥＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号５６）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＤＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＨＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号５７）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＤＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＤＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号５８）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＥＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＤＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号５９）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＤＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＳＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号６０）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＡＭＬＴＫＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＳＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号６１）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＡＭＬＴＫＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＡＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号６２）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＡＭＬＴＫＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＥＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号６３）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＡＭＬＴＫＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＨＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＤＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＡＭＬＴＫＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＥＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＡＭＬＴＫＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号６６）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＡＭＬＴＫＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＳＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号６７）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＱＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＳＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号６８）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＱＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＡＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号６９）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＱＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＥＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号７０）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＱＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＨＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号７１）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＤＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＱＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号７２）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＥＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＱＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号７３）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＱＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＳＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号７４）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＳＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号７５）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＡＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号７６）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＥＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号７７）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＨＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号７８）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＤＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号７９）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＥＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号８０）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＳＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号８１）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＥＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＧＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号８２）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＤＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＧＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号８３）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＡＭＬＴＫＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＧＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号８４）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＱＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＧＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号８５）のアミノ酸配列を含む
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＥＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＧＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号８６）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＤＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＧＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号８７）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＡＭＬＴＫＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＧＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号８８）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＱＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＧＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号８９）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＧＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号９０）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＥＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＫＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１３７）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＥＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＲＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１３８）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＤＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＫＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１３９）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＤＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＲＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１４０）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＡＭＬＴＫＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＫＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１４１）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＡＭＬＴＫＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＲＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１４２）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＱＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＫＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１４３）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＱＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＲＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１４４）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＥＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＫＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１４５）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＥＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＲＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１４６）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＤＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＫＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１４７）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＤＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＲＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１４８）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＡＭＬＴＫＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＫＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１４９）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＡＭＬＴＫＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＲＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１５０）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＱＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＫＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１５１）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＱＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＲＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１５２）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＫＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１５３）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＲＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１５４）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＥＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＤＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１５６）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＥＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＴＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１５７）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＥＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＲＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１５８）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＥＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＲＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１５９）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＥＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＴＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１６０）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＥＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＤＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１６１）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＤＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＲＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１６２）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＤＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＴＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１６３）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＤＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＤＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１６４）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＡＭＬＴＫＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＲＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１６５）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＡＭＬＴＫＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬ
ＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＴＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１６６）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＡＭＬＴＫＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＤＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１６７）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＱＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＲＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１６８）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＱＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＴＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１６９）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＱＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＤＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１７０）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＤＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＲＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１７４）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＤＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＴＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１７５）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＤＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＤＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１７６）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＡＭＬＴＫＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＲＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１７７）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＡＭＬＴＫＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＴＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１７８）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＡＭＬＴＫＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＤＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１７９）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＱＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＲＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１８０）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＱＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＴＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１８１）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＱＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＤＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１８２）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＲＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１８３）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＴＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１８４）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＡＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＤＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＡＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１８５）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、表７に列挙されるＩＬ－２ポリペプチドのアミノ酸配列を含む。


























いくつかの実施形態では、本開示の変異体ＩＬ－２ポリペプチドはまた、生物物理学的特性の向上などの追加の利点を提供する、変異及び欠失を含むが、これらに限定されない、他の修飾も含む。生物物理学的特性の向上には、熱安定性の向上、凝集傾向、酸可逆性、粘度、及び哺乳動物細胞又は細菌細胞又は酵母細胞における産生が含まれるが、これらに限定されない。例えば、残基Ｃ１２５は、セリン、アラニン、トレオニン、又はバリンなどの中性アミノ酸で置換されてもよく、Ｎ末端Ａ１残基は、欠失する可能性があり、これらは両方とも米国特許第４，５１８，５８４号に記載されている。変異体ＩＬ－２ポリペプチドはまた、米国特許第５，２０６，３４４号に記載されているように、Ｍ１０４Ａなどの残基Ｍ１０４の変異を含み得る。したがって、特定の実施形態では、本開示の変異体ＩＬ－２ポリペプチドは、アミノ酸置換Ｃ１２５Ａを含む。他の実施形態では、１、２、又は３つのＮ末端残基が欠失される。
インターロイキン－１０（ＩＬ－１０）
インターロイキン－１０（ＩＬ－１０）は、多くの免疫細胞サブセットを制御するサイトカインであり、これらのいくつかには、単球、マクロファージ、樹状細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ＮＫ細胞などが挙げられる。ＩＬ－１０は、ＩＬ－１０に特異的であり、主に免疫細胞上で発現するＩＬ－１０ＲＡと、他のサイトカインと共有され、より広範囲に発現されるＩＬ－１０ＲＢとの、２つのサブユニットからなるヘテロ二量体受容体（ＩＬ－１０受容体、ＩＬ－１０Ｒ）に結合する。ＩＬ－１０がその受容体に結合すると、受容体関連ヤヌスキナーゼ、ＪＡＫ１、及びチロシンキナーゼ、ＴＹＫ２のリン酸化が誘導され、リンパ球の多くの遺伝子の転写を制御するＳＴＡＴ３転写因子（ｐＳＴＡＴ３）のリン酸化が促進される。
本明細書で互換的に使用される「インターロイキン－１０」又は「ＩＬ－１０」という用語は、別段の指示がない限り、霊長類（例えば、ヒト）及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源由来の任意の天然ＩＬ－１０を指し得る。ＩＬ－１０は、ホモ二量体として存在し得る。「ＩＬ－１０」は、未処理のＩＬ－１０、及び細胞内での処理から生じるＩＬ－１０の形態である「成熟ＩＬ－１０」を含み得る。「成熟ＩＬ－１０」の配列を図９Ａに示す。未処理のヒトＩＬ－１０の１つの例示的な形態は、成熟ＩＬ－１０に結合した追加のＮ末端アミノ酸シグナルペプチドから構成される。「ＩＬ－１０」には、ＩＬ－１０の天然に存在するバリアント、例えば、アレルバリアント又はスプライスバリアント又はバリアントも含まれ得る。例示的なヒトＩＬ－１０のアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ Ｐ２２３０１（ＩＬ１０_ＨＵＭＡＮ）に記載されている。
本明細書で互換的に使用される「ＩＬ－１０ホモ二量体」又は「ＩＬ－１０二量体」は、ＩＬ－１０α鎖（ＩＬ－１０ＲＡ）の２分子及びＩＬ－１０Ｒβ鎖（ＩＬ－１０ＲＢ）の２分子からなる、細胞上の四量体ＩＬ－１０受容体（ＩＬ－１０Ｒ）複合体に結合する野生型ＩＬ－１０ポリペプチドの天然に対称なホモ二量体形態を指し得る。各ＩＬ－１０ポリペプチド鎖のαヘリックスは、一方の鎖の最初の４つのヘリックス（Ａ～Ｄ）が他方の鎖の最後の２つのヘリックス（Ｅ及びＦ）と会合するように絡み合い、これにより、二量体化時に各ドメインの構造的完全性が維持される（Ｗａｌｔｅｒ ＆ Ｎａｇａｂｈｕｓｈａｎ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．１９９５ Ｓｅｐ ２６；３４（３８）：１２１１８－２５）。「ＩＬ－１０モノマー」は、交換された二次構造要素を接続するループを伸長することによって生成できるＩＬ－１０のモノマー形態を指し得る。Ｊｏｓｅｐｈｓｏｎ ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９９５ Ｓｅｐ ２６；３４（３８）：１２１１８－２５に記載されているように、当該ループへの６個のアミノ酸の挿入は、二量体化を防止し、ＩＬ－１０単量体形成を誘導するのに十分であった。結果として得られたＩＬ－１０モノマーは、生物学的に活性であり、単一のＩＬ－１０ＲＡ分子に結合し、単一のＩＬ－１０ＲＢ分子をシグナル伝達複合体に動員してＩＬ－１０性細胞応答を誘発することができる。したがって、短いアミノ酸配列又は短いリンカーを、ループＤ（残基Ｃ１１４で終わる）とループＥ（残基Ｖ１２１で始まる）との間のＩＬ－１０ポリペプチド（例えば、本開示の野生型ＩＬ－１０又は任意の変異体ＩＬ－１０ポリペプチド）の配列に挿入すると、当該ＩＬ－１０ポリペプチドの「単量体異性体」を生成する。この追加されたアミノ酸配列又はリンカーは、Ｃ１１４、Ｅ１１５、Ｎ１１６、Ｋ１１７、Ｓ１１８、Ｋ１１９、又はＡ１２０の直後に挿入することができる。本明細書に記載されるように、ＩＬ－１０単量体ポリペプチドのアミノ酸番号付けは、リンカー配列／アミノ酸（複数可）が数えられないように、配列番号９５（すなわち、ＩＬ－１０二量体ポリペプチド）の番号に基づく。
「変異体ＩＬ－１０ポリペプチド」は、野生型ＩＬ－１０とは異なるアミノ酸配列を有するＩＬ－１０ポリペプチドを指し得る。例えば、変異体ＩＬ－１０ポリペプチドは、アミノ酸置換、欠失、及び挿入を有してもよい。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－１０ポリペプチドは、その受容体に対する親和性が低下しており、このような親和性の減少は、変異体の生物活性の低下をもたらす。親和性の低下とそれによる活性の低下は、少数のアミノ酸変異又はアミノ酸置換を導入することによって得ることができる。また、変異体ＩＬ－１０ポリペプチドは、ペプチド骨格に他の修飾を有することもでき、ポリペプチドのアミノ酸欠失、並べ替え、環化、ジスルフィド結合、若しくは翻訳後修飾（例えば、グリコシル化若しくは改変炭水化物）、ポリペプチドへの化学的修飾若しくは酵素的修飾（例えば、ポリペプチド骨格へのＰＥＧの結合）、ペプチドタグ若しくは標識の付加、又はＩＬ－１０Ｒに対する親和性の低下など、所望の特性を有する最終構築物を生成するための、タンパク質若しくはタンパク質ドメインへの融合が挙げられるが、これらに限定されない。また、所望の活性には、野生型ＩＬ－１０ポリペプチドと比較して向上した生物物理学的特性も含まれ得る。
いくつかの実施形態では、本開示は、変異体ＩＬ－１０ポリペプチド、及び変異体ＩＬ－１０ポリペプチドを含む標的化サイトカインに関する。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－１０ポリペプチドは、（例えば、配列番号９７の配列を含む）ＩＬ－１０ＲＢポリペプチドに対する結合親和性を増加させる、（例えば、配列番号９５に対する）１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－１０ポリペプチドは、（例えば、配列番号９６の配列を含む）ＩＬ－１０ＲＡポリペプチドに対する結合親和性を減少させる、（例えば、配列番号９５に対する）１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－１０ポリペプチドは、（例えば、配列番号９７の配列を含む）ＩＬ－１０ＲＢポリペプチドに対する結合親和性を増加させる、（例えば、配列番号９５に対する）１つ以上の変異を含み、（例えば、配列番号９６の配列を含む）ＩＬ－１０ＲＡポリペプチドに対する結合親和性を減少させる、（例えば、配列番号９５に対する）１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－１０ポリペプチドは、野生型成熟ＩＬ－１０（例えば、図９Ａに示す配列番号９５）、又は示した成熟単量体ＩＬ－１０（例えば、図９Ｄに示す配列番号９８）のいずれかのアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－１０ポリペプチドは、野生型成熟ＩＬ－１０（例えば、図９Ａに示す配列番号９５）、又は成熟単量体ＩＬ－１０（例えば、図９Ｄに示す配列番号９８）のいずれかのアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－１０ポリペプチドは、ｉ）図９Ｂに示す配列番号９６によって示されるようなアミノ酸配列を有するＩＬ－１０ＲＡポリペプチドに対して低下した結合親和性を示し、ｉｉ）図９Ａに示す配列番号９５によって示されるような野生型ＩＬ－１０ポリペプチド、又は図９Ｄに示す配列番号９８によって示され、図１０Ａ～図１１Ｂに示すように、Ｐ２０、Ｌ２３、Ｒ２４、Ｒ２７、Ｄ２８、Ｋ３４、Ｔ３５、Ｑ３８、Ｍ３９、Ｄ４１、Ｌ４３、Ｄ４４、Ｎ４５、Ｌ４６、Ｋ４９、Ｉ８７、Ｖ９１、Ｌ９４、Ｌ９８、Ｋ１３８、Ｓ１４１、Ｅ１４２、Ｄ１４４、Ｎ１４８、Ｅ１５１、及びＩ１５８の群から選択されるような成熟単量体ＩＬ－１０のアミノ酸配列に対して、１つ以上のアミノ酸置換を有する。いくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換は、Ｒ２４Ａ、Ｒ２７Ａ、Ｋ３４Ａ、Ｋ３４Ｄ、Ｋ３４Ｅ、Ｋ３４Ｓ、Ｋ３４Ｐ、Ｋ３４Ｇ、Ｋ３４Ｔ、Ｋ３４Ｈ、Ｋ３４Ｌ、Ｋ３４Ｎ、Ｋ３４Ｆ、Ｋ３４Ｒ、Ｋ３４Ｑ、Ｋ３４Ｖ、Ｋ３４Ｙ、Ｑ３８Ａ、Ｑ３８Ｄ、Ｑ３８Ｐ、Ｑ３８Ｇ、Ｑ３８Ｈ、Ｑ３８Ｉ、Ｑ３８Ｌ、Ｑ３８Ｒ、Ｑ３８Ｋ、Ｑ３８Ｎ、Ｑ３８Ｆ、Ｑ３８Ｔ、Ｑ３８Ｅ、Ｑ３８Ｓ、Ｑ３８Ｖ、Ｑ３８Ｙ、Ｄ４４Ａ、Ｄ４４Ｅ、Ｄ４４Ｓ、Ｄ４４Ｖ、Ｄ４４Ｇ、Ｄ４４Ｈ、Ｄ４４Ｉ、Ｄ４４Ｋ、Ｄ４４Ｐ、Ｄ４４Ｌ、Ｄ４４Ｎ、Ｄ４４Ｆ、Ｄ４４Ｔ、Ｄ４４Ｒ、Ｄ４４Ｑ、Ｉ８７Ａ、Ｋ１３８Ａ、Ｅ１４２Ａ、Ｅ１４２Ｇ、Ｅ１４２Ｎ、Ｅ１４２Ｌ、Ｅ１４２Ｆ、Ｅ１４２Ｉ、Ｅ１４２Ｖ、Ｅ１４２Ｋ、Ｅ１４２Ｒ、Ｅ１４２Ｐ、Ｅ１４２Ｑ、Ｅ１４２Ｔ、Ｅ１４２Ｓ、Ｅ１４２Ｙ、Ｄ１４４Ａ、Ｄ１４４Ｅ、Ｄ１４４Ｇ、Ｄ１４４Ｈ、Ｄ１４４Ｒ、Ｄ１４４Ｉ、Ｄ１４４Ｋ、Ｄ１４４Ｎ、Ｄ１４４Ｑ、Ｄ１４４Ｐ、Ｄ１４４Ｓ、Ｄ１４４Ｌ、Ｄ１４４Ｔ、Ｄ１４４Ｖ、Ｄ１４４Ｙ、Ｎ１４８Ｇ、Ｎ１４８Ｐ、Ｎ１４８Ｓ、Ｎ１４８Ｄ、Ｎ１４８Ｔ、Ｎ１４８Ｋ、Ｎ１４８Ｖ、Ｎ１４８Ｉ、Ｎ１４８Ｅ、Ｎ１４８Ｆ、Ｅ１５１Ａ、Ｅ１５１Ｇ、Ｅ１５１Ｈ、Ｅ１５１Ｉ、Ｅ１５１Ｎ、Ｅ１５１Ｆ、Ｅ１５１Ｌ、Ｅ１５１Ｖ、Ｅ１５１Ｒ、Ｅ１５１Ｋ、Ｅ１５１Ｐ、Ｅ１５１Ｑ、Ｅ１５１Ｓ、Ｅ１５１Ｔ、及びＥ１５１Ｙからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換は、Ｒ２４Ａ、Ｒ２７Ａ、Ｋ３４Ａ、Ｋ３４Ｄ、Ｋ３４Ｅ、Ｋ３４Ｓ、Ｋ３４Ｐ、Ｋ３４Ｇ、Ｋ３４Ｔ、Ｋ３４Ｈ、Ｋ３４Ｌ、Ｋ３４Ｎ、Ｋ３４Ｆ、Ｋ３４Ｖ、Ｋ３４Ｙ、Ｑ３８Ａ、Ｑ３８Ｄ、Ｑ３８Ｐ、Ｑ３８Ｇ、Ｑ３８Ｉ、Ｑ３８Ｌ、Ｑ３８Ｒ、Ｑ３８Ｋ、Ｑ３８Ｆ、Ｑ３８Ｔ、Ｑ３８Ｅ、Ｑ３８Ｓ、Ｑ３８Ｖ、Ｑ３８Ｙ、Ｉ８７Ａ、Ｋ１３８Ａ、Ｅ１４２Ａ、Ｅ１４２Ｇ、Ｅ１４２Ｎ、Ｅ１４２Ｌ、Ｅ１４２Ｆ、Ｅ１４２Ｉ、Ｅ１４２Ｖ、Ｅ１４２Ｋ、Ｅ１４２Ｒ、Ｅ１４２Ｐ、Ｅ１４２Ｑ、Ｅ１４２Ｔ、Ｅ１４２Ｓ、Ｅ１４２Ｙ、Ｄ１４４Ａ、Ｄ１４４Ｅ、Ｄ１４４Ｇ、Ｄ１４４Ｈ、Ｄ１４４Ｒ、Ｄ１４４Ｉ、Ｄ１４４Ｋ、Ｄ１４４Ｎ、Ｄ１４４Ｑ、Ｄ１４４Ｐ、Ｄ１４４Ｓ、Ｄ１４４Ｌ、Ｄ１４４Ｔ、Ｄ１４４Ｖ、Ｄ１４４Ｙ、Ｎ１４８Ｐ、Ｎ１４８Ｄ、Ｎ１４８Ｉ、Ｅ１５１Ａ、Ｅ１５１Ｇ、Ｅ１５１Ｈ、Ｅ１５１Ｉ、Ｅ１５１Ｎ、Ｅ１５１Ｆ、Ｅ１５１Ｌ、Ｅ１５１Ｖ、Ｅ１５１Ｒ、Ｅ１５１Ｋ、Ｅ１５１Ｐ、Ｅ１５１Ｑ、Ｅ１５１Ｓ、Ｅ１５１Ｔ、及びＥ１５１Ｙからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、本開示の変異体ＩＬ－１０ポリペプチドは、図９Ｂに示す配列番号９６に示されるようなアミノ酸配列を有するＩＬ－１０ＲＡポリペプチドに対して、５０％以上低下した結合親和性を示す。野生型ＩＬ－１０ポリペプチドと変異体ＩＬ－１０ポリペプチドとの、ＩＬ－１０ＲＡに対する結合親和性の違いは、当業者にはよく知られているタンパク質間相互作用の親和性を測定する標準的なＳＰＲアッセイで測定される。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－１０ポリペプチドは、野生型成熟ＩＬ－１０（例えば、図９Ａに示す配列番号９５）、又は成熟単量体ＩＬ－１０（例えば、図９Ｄに示す配列番号９８）のいずれかのアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－１０ポリペプチドは、ｉ）図９Ｃに示す配列番号９７によって示されるようなアミノ酸配列を有するＩＬ－１０ＲＢポリペプチドに対して増加した結合親和性を示し、ｉｉ）図９Ａに示す配列番号９５によって示され、Ｎ１８、Ｎ２１、Ｍ２２、Ｒ２４、Ｄ２５、Ｓ３１、Ｒ３２、Ｄ５５、Ｍ６８、Ｉ６９、Ｌ７３、Ｅ７４、Ｍ７７、Ｐ７８、Ｑ７９、Ｅ８１、Ｎ８２、Ｋ８８、Ａ８９、Ｈ９０、Ｎ９２、Ｓ９３、Ｇ９５、Ｅ９６、Ｎ９７、Ｋ９９、Ｔ１００、Ｌ１０１、Ｌ１０３、Ｒ１０４、Ｒ１０７、Ｒ１１０、及びＦ１１１（図１０Ａ～図１１Ｂ）の群から選択されるような野生型成熟ＩＬ－１０ポリペプチドのアミノ酸配列に対して、１つ以上のアミノ酸置換を有する。いくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換は、配列番号９５に従って番号付けされた、Ｎ１８、Ｄ２８、Ｎ９２、Ｋ９９、及びＬ１０３からなる群から選択される位置（複数可）にある。いくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換は、配列番号９５に従って番号付けされた、Ｎ１８Ｆ、Ｎ１８Ｌ、Ｎ１８Ｙ、Ｄ２８Ｑ、Ｄ２８Ｒ、Ｎ９２Ｆ、Ｎ９２Ｈ、Ｎ９２Ｉ、Ｎ９２Ｋ、Ｎ９２Ｌ、Ｎ９２Ｒ、Ｎ９２Ｓ、Ｎ９２Ｔ、Ｎ９２Ｖ、Ｎ９２Ｙ、Ｋ９９Ｎ、Ｌ１０３Ｎ、及びＬ１０３Ｑからなる群から選択される。更に他の実施形態では、変異体ＩＬ－１０ポリペプチドは、図９Ｃに示す配列番号９７に示されるようなアミノ酸配列を有するＩＬ－１０ＲＢポリペプチドに対して１５０％以上増加した結合親和性を示す。
野生型成熟ＩＬ－１０ポリペプチドの配列において可能性のあるアミノ酸置換の位置を図１０Ａ～図１０Ｂに示す。いくつかの実施形態では、図１１Ａ～図１１Ｂに示すように、野生型成熟ＩＬ－１０ポリペプチドの配列における指定アミノ酸は、アラニン又は別のアミノ酸に置換された。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－１０ポリペプチドはまた、生物物理学的特性の向上などの追加の利点を提供する、変異及び欠失を含むが、これらに限定されない、他の修飾も含む。生物物理学的特性の向上には、熱安定性の向上、凝集傾向、酸可逆性、粘度、及び哺乳動物細胞又は細菌細胞又は酵母細胞における産生が含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－１０ポリペプチドは、位置Ｒ１０７における配列番号１のアミノ酸配列に対するアミノ酸置換を更に含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号９５に従って番号付けされたＲ１０７Ａ変異を更に含む。
いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－１０ポリペプチドは、例えば、単量体としてのフォールディング及び発現を可能にするために、（例えば、図９Ｄに示すような）Ｎ１１６とＫ１１７との間にアミノ酸挿入又はペプチド挿入を含む単量体である。いくつかの実施形態では、挿入は、１～１５アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、挿入は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５アミノ酸長である。特定の実施形態では、挿入は、６アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、残基Ｃ１１４、Ｅ１１５、Ｎ１１６、Ｋ１１７、Ｓ１１８、Ｋ１１９、又はＡ１２０の直後に１～１５個のアミノ酸のアミノ酸挿入又はペプチド挿入を有する配列番号９５のアミノ酸配列を含み、番号付けは、配列番号９５に基づく。挿入の例としては、Ｇ、ＧＧ、ＧＧＧ、ＧＧＧＧ、ＧＧＧＳＧ、ＧＧＧＧＧ、ＧＧＧＧＧＧ、及びＧＧＧＳＧＧを挙げることができるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、配列番号９８のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、本開示の変異体単量体ＩＬ－１０ポリペプチドは、図１Ｂに示すアミノ酸配列を有するＩＬ－１０ＲＡポリペプチドに対する結合親和性が低下しており、Ｐ２０、Ｌ２３、Ｒ２４、Ｒ２７、Ｄ２８、Ｋ３４、Ｔ３５、Ｑ３８、Ｍ３９、Ｄ４１、Ｌ４３、Ｄ４４、Ｎ４５、Ｌ４６、Ｋ４９、Ｉ８７、Ｖ９１、Ｌ９４、Ｌ９８、Ｋ１３８、Ｓ１４１、Ｅ１４２、Ｄ１４４、Ｎ１４８、Ｅ１５１、及びＩ１５８の群から選択される（又はＲ２４、Ｒ２７、Ｋ３４、Ｑ３８、Ｄ４４、Ｉ８７、Ｋ１３８、Ｅ１４２、Ｄ１４４、Ｎ１４８、及びＥ１５１の群から選択される）アミノ酸置換を有し、アミノ酸番号付けは、６リンカー挿入のない野生型ＩＬ－１０ポリペプチド中の対応するアミノ酸を指す。いくつかの実施形態では、本開示の変異体単量体ＩＬ－１０ポリペプチドはまた、図１Ｃに示すアミノ酸配列を有するＩＬ－１０ＲＢポリペプチドに対する結合親和性が増加しており、Ｎ１８、Ｎ２１、Ｍ２２、Ｒ２４、Ｄ２５、Ｄ２８、Ｓ３１、Ｒ３２、Ｄ５５、Ｍ６８、Ｉ６９、Ｌ７３、Ｅ７４、Ｍ７７、Ｐ７８、Ｑ７９、Ｅ８１、Ｎ８２、Ｋ８８、Ａ８９、Ｈ９０、Ｎ９２、Ｓ９３、Ｇ９５、Ｅ９６、Ｎ９７、Ｋ９９、Ｔ１００、Ｌ１０１、Ｌ１０３、Ｒ１０４、Ｒ１０７、Ｒ１１０及びＦ１１１の群から選択される（又はＮ１８、Ｄ２８、Ｎ９２、Ｋ９９及びＬ１０３の群から選択される）アミノ酸置換を有する。
表３は、本開示のＩＬ－１０単量体ポリペプチドの例示的なアミノ酸挿入及び挿入位置を示す（挿入には下線を付す）。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、表３に列挙されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、表３に列挙されるように、かつ／又は表３に列挙される位置においてアミノ酸挿入を含む。いくつかの実施形態では、挿入は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、残基Ｃ１１４、Ｅ１１５、Ｎ１１６、Ｋ１１７、Ｓ１１８、Ｋ１１９、又はＡ１２０の直後に１～１５個のアミノ酸のアミノ酸挿入又はペプチド挿入を有する、本開示の変異体ＩＬ－１０単量体ポリペプチドのアミノ酸配列を含み、番号付けは、配列番号９５に基づく。挿入の例としては、Ｇ、ＧＧ、ＧＧＧ、ＧＧＧＧ、ＧＧＧＳＧ、ＧＧＧＧＧ、ＧＧＧＧＧＧ、及びＧＧＧＳＧＧを挙げることができるが、これらに限定されない。



























































いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－１０ポリペプチドは、表４に提供される配列番号９９～１１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

























ＩＬ－７ポリペプチドの例示的なアミノ酸配列を以下に提供し（配列番号９１）、位置Ｋ１０、Ｑ１１、Ｓ１４、Ｖ１５、Ｖ１８、Ｑ２２、Ｌ３５、Ｎ３６、Ｄ７４、Ｌ７７、Ｌ８０、Ｋ８１、Ｅ８４、Ｉ８８、Ｒ１３３、Ｑ１３６、Ｅ１３７、Ｔ１４０、Ｎ１４３、及びＫ１４４のうちの少なくとも１つは、変異する可能性がある（例えば、Ｋ８１Ａ及びＴ１４０Ａ）。ＤＣＤＩＥＧＫＤＧＫＱＹＥＳＶＬＭＶＳＩＤＱＬＬＤＳＭＫＥＩＧＳＮＣＬＮＮＥＦＮＦＦＫＲＨＩＣＤＡＮＫＥＧＭＦＬＦＲＡＡＲＫＬＲＱＦＬＫＭＮＳＴＧＤＦＤＬＨＬＬＫＶＳＥＧＴＴＩＬＬＮＣＴＧＱＶＫＧＲＫＰＡＡＬＧＥＡＱＰＴＫＳＬＥＥＮＫＳＬＫＥＱＫＫＬＮＤＬＣＦＬＫＲＬＬＱＥＩＫＴＣＷＮＫＩＬＭＧＴＫＥＨ（配列番号９１）。
例えば、例示的な変異体ＩＬ－７ペプチドは、アミノ酸置換Ｋ８１Ａ及びＴ１４０Ａを含む。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－７ペプチドは、ＤＣＤＩＥＧＫＤＧＫＱＹＥＳＶＬＭＶＳＩＤＱＬＬＤＳＭＫＥＩＧＳＮＣＬＮＮＥＦＮＦＦＫＲＨＩＣＤＡＮＫＥＧＭＦＬＦＲＡＡＲＫＬＲＱＦＬＫＭＮＳＴＧＤＦＤＬＨＬＬＡＶＳＥＧＴＴＩＬＬＮＣＴＧＱＶＫＧＲＫＰＡＡＬＧＥＡＱＰＴＫＳＬＥＥＮＫＳＬＫＥＱＫＫＬＮＤＬＣＦＬＫＲＬＬＱＥＩＫＡＣＷＮＫＩＬＭＧＴＫＥＨ（配列番号１１３）の配列を含む。
いくつかの実施形態では、サイトカインは、配列番号９１のアミノ酸配列を含む野生型ＩＬ－７ポリペプチドの、ＩＬ－７Ｒαポリペプチドへの結合親和性と比較して、配列番号９４のアミノ酸配列を含むＩＬ－７Ｒαポリペプチドに対して５０％以上低下した結合親和性を示す変異体ＩＬ－７ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、変異体ＩＬ－７ポリペプチドは、配列番号９１のアミノ酸配列を含む野生型ＩＬ－７ポリペプチドの、ＩＬ－７Ｒγポリペプチドへの結合親和性と比較して、配列番号４のアミノ酸配列を含むＩＬ－７Ｒγポリペプチドに対して５０％以上低下した結合親和性を示す。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－７Ｒαポリペプチドは、ＭＴＩＬＧＴＴＦＧＭＶＦＳＬＬＱＶＶＳＧＥＳＧＹＡＱＮＧＤＬＥＤＡＥＬＤＤＹＳＦＳＣＹＳＱＬＥＶＮＧＳＱＨＳＬＴＣＡＦＥＤＰＤＶＮＩＴＮＬＥＦＥＩＣＧＡＬＶＥＶＫＣＬＮＦＲＫＬＱＥＩＹＦＩＥＴＫＫＦＬＬＩＧＫＳＮＩＣＶＫＶＧＥＫＳＬＴＣＫＫＩＤＬＴＴＩＶＫＰＥＡＰＦＤＬＳＶＶＹＲＥＧＡＮＤＦＶＶＴＦＮＴＳＨＬＱＫＫＹＶＫＶＬＭＨＤＶＡＹＲＱＥＫＤＥＮＫＷＴＨＶＮＬＳＳＴＫＬＴＬＬＱＲＫＬＱＰＡＡＭＹＥＩＫＶＲＳＩＰＤＨＹＦＫＧＦＷＳＥＷＳＰＳＹＹＦＲＴＰＥＩＮＮＳＳＧＥＭＤＰＩＬＬＴＩＳＩＬＳＦＦＳＶＡＬＬＶＩＬＡＣＶＬＷＫＫＲＩＫＰＩＶＷＰＳＬＰＤＨＫＫＴＬＥＨＬＣＫＫＰＲＫＮＬＮＶＳＦＮＰＥＳＦＬＤＣＱＩＨＲＶＤＤＩＱＡＲＤＥＶＥＧＦＬＱＤＴＦＰＱＱＬＥＥＳＥＫＱＲＬＧＧＤＶＱＳＰＮＣＰＳＥＤＶＶＩＴＰＥＳＦＧＲＤＳＳＬＴＣＬＡＧＮＶＳＡＣＤＡＰＩＬＳＳＳＲＳＬＤＣＲＥＳＧＫＮＧＰＨＶＹＱＤＬＬＬＳＬＧＴＴＮＳＴＬＰＰＰＦＳＬＱＳＧＩＬＴＬＮＰＶＡＱＧＱＰＩＬＴＳＬＧＳＮＱＥＥＡＹＶＴＭＳＳＦＹＱＮＱ（配列番号９４）の配列を含む。
インターロイキン－２１（ＩＬ－２１）
いくつかの実施形態では、サイトカインは、配列番号９２又は配列番号１１５のアミノ酸配列を含む野生型ＩＬ－２１ポリペプチドの、ＩＬ－２１Ｒポリペプチドへの結合親和性と比較して、配列番号９３のアミノ酸配列を含むＩＬ－２１Ｒγポリペプチドに対して５０％以上低下した結合親和性を示す変異体ＩＬ－２１ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、配列番号９２又は配列番号１１５のアミノ酸配列を含む野生型ＩＬ－２１ポリペプチドの、ＩＬ－２１Ｒγポリペプチドへの結合親和性と比較して、変異体ＩＬ－２１ポリペプチドは、配列番号９３のアミノ酸配列を含むＩＬ－２１Ｒγポリペプチドに対して５０％以上低下した結合親和性を示す。
本明細書で互換的に使用される「インターロイキン－２１」又は「ＩＬ－２１」は、別段の指示がない限り、任意の天然ＩＬ－２１を指し得る。「ＩＬ－２１」は、未処理のＩＬ－２１（前駆体ＩＬ－２１など）、及び細胞内での処理から生じるＩＬ－２１の形態であり得る「成熟ＩＬ－２１」を含み得る。ヒト「成熟ＩＬ－２１」の配列は、配列番号９２又は配列番号１１５として提供される。「ＩＬ－２１」には、ＩＬ－２１の天然に存在するバリアント、例えば、アレルバリアント又はスプライスバリアント又はバリアントも含まれ得るが、これらに限定されない。例示的なヒトＩＬ－２１のアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ Ｑ９ＨＢＥ４（ＩＬ２１_ＨＵＭＡＮ）に記載されている。「変異体ＩＬ－２ポリペプチド」は、その受容体に対する親和性の低下など、その受容体に対する親和性が変化し得るＩＬ－２ポリペプチドを指すことができ、このような親和性の減少は、変異体の生物活性の低下をもたらすことになる。親和性及びそれによる活性の低下などの、親和性の変化は、少数のアミノ酸変異又はアミノ酸置換を導入することによって得ることができる。また、変異体ＩＬ－２１ポリペプチドは、ペプチド骨格に他の修飾を有することもでき、ポリペプチドのアミノ酸欠失、並べ替え、環化、ジスルフィド結合、若しくは翻訳後修飾（例えば、グリコシル化若しくは改変炭水化物）、ポリペプチドへの化学的修飾若しくは酵素的修飾（例えば、ポリペプチド骨格へのＰＥＧの結合）、ペプチドタグ若しくは標識の付加、又はＩＬ－２１Ｒに対する親和性の低下など、所望の特性を有する最終構築物を生成するための、タンパク質若しくはタンパク質ドメインへの融合が挙げられるが、これらに限定されない。また、所望の活性には、野生型ＩＬ－２１ポリペプチドと比較して改善された生物物理学的特性も含まれ得る。複数の修飾を組み合わせて、親和性の低下若しくは増加、又は生物物理学的特性の改善など、所望の活性修飾を達成してもよい。非限定的な例として、コンセンサスＮ結合グリコシル化のためのアミノ酸配列をポリペプチドに組み込んで、グリコシル化を可能にしてもよい。別の非限定的な例としては、リシンをポリペプチドに組み込んでペグ化を可能にし得ることである。場合によっては、変異又は複数の変異をポリペプチドに導入して、その活性を修飾する。
ＩＬ－２１は、４ヘリックスバンドル構造を有し、単量体として存在している。ヒトでは、ＩＬ－２１の２つのアイソフォームが知られており、これらの各々が前駆体分子に由来している。第１のＩＬ－２１アイソフォームは、１６２個のアミノ酸（ａａ）を含み、そのうちの最初の２９個がシグナルペプチドを構成しており、第２のＩＬ－２１アイソフォームは、１５３個のａａを含み、そのうちの最初の２９個が第１のアイソフォームと同様にシグナルペプチドを構成している。
ＩＬ－２１は、ＩＬ－２１受容体（ＩＬ－２１Ｒ）及び共通γ鎖（γｃ）から構成されるヘテロ二量体ＩＬ－２１受容体複合体に結合する。ＩＬ－２１受容体複合体は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、及びＮＫ細胞の表面に発現する。ＩＬ－２１受容体複合体は、これらのサイトカイン受容体複合体の各々がγｃを含むという点で、ＩＬ－２受容体複合体と構造が似ている。
ＩＬ－２１がＩＬ－２１受容体複合体に結合するとき、ＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナル伝達経路が活性化されて、標的遺伝子が活性化される。ＩＬ－２１誘導シグナル伝達は、治療上望ましい場合があるが、ＩＬ－２１の幅広い発現プロファイルを考慮し、ＩＬ－２１にはＣＤ８＋ Ｔ細胞応答を増強するだけでなく、抗原提示及びＴ細胞のプライミングを抑制する能力もあるという事実により、シグナル伝達のタイミング及び位置を慎重に検討する必要がある。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－２１は、ＨＫＳＳＳＱＧＱＤＲＨＭＩＲＭＲＱＬＩＤＩＶＤＱＬＫＮＹＶＮＤＬＶＰＥＦＬＰＡＰＥＤＶＥＴＮＣＥＷＳＡＦＳＣＦＱＫＡＱＬＫＳＡＮＴＧＮＮＥＲＩＩＮＶＳＩＫＫＬＫＲＫＰＰＳＴＮＡＧＲＲＱＫＨＲＬＴＣＰＳＣＤＳＹＥＫＫＰＰＫＥＦＬＥＲＦＫＳＬＬＱＫＭＩＨＱＨＬＳＳＲＴＨＧＳＥＤＳ（配列番号９２）の配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－２１は、ＱＧＱＤＲＨＭＩＲＭＲＱＬＩＤＩＶＤＱＬＫＮＹＶＮＤＬＶＰＥＦＬＰＡＰＥＤＶＥＴＮＣＥＷＳＡＦＳＣＦＱＫＡＱＬＫＳＡＮＴＧＮＮＥＲＩＩＮＶＳＩＫＫＬＫＲＫＰＰＳＴＮＡＧＲＲＱＫＨＲＬＴＣＰＳＣＤＳＹＥＫＫＰＰＫＥＦＬＥＲＦＫＳＬＬＱＫＭＩＨＱＨＬＳＳＲＴＨＧＳＥＤＳ（配列番号１１５）の配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－２１Ｒポリペプチドは、ＭＰＲＧＷＡＡＰＬＬＬＬＬＬＱＧＧＷＧＣＰＤＬＶＣＹＴＤＹＬＱＴＶＩＣＩＬＥＭＷＮＬＨＰＳＴＬＴＬＴＷＱＤＱＹＥＥＬＫＤＥＡＴＳＣＳＬＨＲＳＡＨＮＡＴＨＡＴＹＴＣＨＭＤＶＦＨＦＭＡＤＤＩＦＳＶＮＩＴＤＱＳＧＮＹＳＱＥＣＧＳＦＬＬＡＥＳＩＫＰＡＰＰＦＮＶＴＶＴＦＳＧＱＹＮＩＳＷＲＳＤＹＥＤＰＡＦＹＭＬＫＧＫＬＱＹＥＬＱＹＲＮＲＧＤＰＷＡＶＳＰＲＲＫＬＩＳＶＤＳＲＳＶＳＬＬＰＬＥＦＲＫＤＳＳＹＥＬＱＶＲＡＧＰＭＰＧＳＳＹＱＧＴＷＳＥＷＳＤＰＶＩＦＱＴＱＳＥＥＬＫＥＧＷＮＰＨＬＬＬＬＬＬＬＶＩＶＦＩＰＡＦＷＳＬＫＴＨＰＬＷＲＬＷＫＫＩＷＡＶＰＳＰＥＲＦＦＭＰＬＹＫＧＣＳＧＤＦＫＫＷＶＧＡＰＦＴＧＳＳＬＥＬＧＰＷＳＰＥＶＰＳＴＬＥＶＹＳＣＨＰＰＲＳＰＡＫＲＬＱＬＴＥＬＱＥＰＡＥＬＶＥＳＤＧＶＰＫＰＳＦＷＰＴＡＱＮＳＧＧＳＡＹＳＥＥＲＤＲＰＹＧＬＶＳＩＤＴＶＴＶＬＤＡＥＧＰＣＴＷＰＣＳＣＥＤＤＧＹＰＡＬＤＬＤＡＧＬＥＰＳＰＧＬＥＤＰＬＬＤＡＧＴＴＶＬＳＣＧＣＶＳＡＧＳＰＧＬＧＧＰＬＧＳＬＬＤＲＬＫＰＰＬＡＤＧＥＤＷＡＧＧＬＰＷＧＧＲＳＰＧＧＶＳＥＳＥＡＧＳＰＬＡＧＬＤＭＤＴＦＤＳＧＦＶＧＳＤＣＳＳＰＶＥＣＤＦＴＳＰＧＤＥＧＰＰＲＳＹＬＲＱＷＶＶＩＰＰＰＬＳＳＰＧＰＱＡＳ（配列番号９３）の配列を含む。
本開示は、いくつかの実施形態では、本明細書において配列番号９２又は配列番号１１５として提供される野生型ＩＬ－２１アミノ酸配列に対して少なくとも１つのアミノ酸置換を含む、ＩＬ－２１ポリペプチド又はその機能的断片若しくはバリアントを提供する。配列番号９２又は配列番号１１５に対して少なくとも１つのアミノ酸置換を含むこのようなＩＬ－２１ポリペプチドはまた、本明細書ではＩＬ－２１ムテインとも称する。例示的な態様では、本明細書に記載のＩＬ－２１ポリペプチド又はその機能的断片若しくはバリアントは、少なくとも１つでＸ個以下のアミノ酸置換を含み、Ｘは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４以上である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＩＬ－２１ポリペプチド又はその機能的断片若しくはバリアントは、配列番号１１５と比較して少なくとも３５個のアミノ酸置換を含む。例示的な実施形態では、本明細書に記載のＩＬ－２１ポリペプチド又はその機能的断片若しくはバリアントは、ヒトＩＬ－２１のアミノ酸配列（例えば、配列番号１１５）と、１０個のアミノ酸、１５個のアミノ酸、２０個のアミノ酸、又は２５個のアミノ酸だけ異なるアミノ酸配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書に記載のＩＬ－２１ポリペプチド又はその機能的断片若しくはバリアントは、ヒトＩＬ－２１のアミノ酸配列（例えば、配列番号１１５）と、７個以下のアミノ酸又は５個以下のアミノ酸だけ異なるアミノ酸配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書に記載のＩＬ－２１ポリペプチド又はその機能的断片若しくはバリアントは、ヒトＩＬ－２１のアミノ酸配列（例えば、配列番号１１５）と、３、４、５、又は６個のアミノ酸だけ異なるアミノ酸配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書に記載のＩＬ－２１ポリペプチド又はその機能的断片若しくはバリアントは、ヒトＩＬ－２１のアミノ酸配列（例えば、配列番号１１５）と、３～６個のアミノ酸又は１～５個のアミノ酸だけ異なるアミノ酸配列を含む。例示的な実施形態では、本明細書に記載のＩＬ－２１ポリペプチド又はその機能的断片若しくはバリアントは、ヒトＩＬ－２１のアミノ酸配列（例えば、配列番号１１５）と、１個又は２個のアミノ酸だけ異なるアミノ酸配列を含む。
ＩＬ－２１Ｒ結合の低下
いくつかの実施形態では、ＩＬ－２１ポリペプチド又はその機能的断片若しくはバリアントは、ＩＬ－２１Ｒに対するその結合親和性を低下させる少なくとも１つの変異を含む。このような変異は、いくつかの実施形態では、Ｒ５、Ｉ８、Ｒ９、Ｒ１１、Ｑ１２、Ｉ１４、Ｄ１５、Ｄ１８、Ｑ１９、Ｙ２３、Ｒ６５、Ｓ７０、Ｋ７２、Ｋ７３、Ｋ７５、Ｒ７６、Ｋ７７、Ｓ８０、Ｑ１１６、及びＫ１１７からなる群から選択される１つ以上の位置にあり、位置の番号付けは、配列番号１１５のアミノ酸配列に従った番号である。
いくつかの実施形態では、位置Ｒ５の変異は、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ｙ、又はＦからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、位置Ｉ８の変異は、Ｑ、Ｈ、Ｅからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、位置Ｒ９の変異は、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ｙ、又はＦからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、位置Ｒ１１の変異は、Ｄ又はＥからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、位置Ｑ１２の変異は、Ｌ、Ｉ、又はＹからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、位置Ｉ１４の変異は、Ｄ又はＥからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、位置Ｄ１５の変異は、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｌ、Ｙ、又はＦからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、位置Ｄ１８の変異は、Ａ、Ｋ、又はＲからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、位置Ｑ１９の変異は、Ｌ、又はＹからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、位置Ｙ２３の変異は、Ｅのアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、位置Ｒ６５の変異は、Ｇ、Ｓ、Ｅ、Ｄ、又はＡからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、位置Ｓ７０の変異は、Ｈ、Ｙ、Ｌ、Ｖ、又はＦからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、位置Ｋ７２の変異は、Ｇ、Ｓ、Ｅ、Ｄ又はＡからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、位置Ｋ７３の変異は、Ａ、Ｙ、Ｌ、Ｆ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、Ｅ、又はＤからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、位置Ｋ７５の変異は、Ｇ、Ｓ、Ｅ、Ｄ又はＡからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、位置Ｒ７６の変異は、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ｙ、又はＦからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、位置Ｋ７７の変異は、Ｇ、Ｓ、Ｅ、Ｄ又はＡからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、位置Ｓ８０の変異は、Ｈ、Ａ、Ｇ、Ｅ、又はＤからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、位置Ｑ１１６の変異は、Ｙであるアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、位置Ｋ１１７の変異は、Ａ、Ｄ、又はＥからなる群から選択されるアミノ酸置換を含む。
本開示のＩＬ－２１ポリペプチド又はその機能的断片若しくはバリアントの例示的な配列は、ＱＧＱＤＸ１ＨＭＸ２Ｘ３ＭＸ４Ｘ５ＬＸ６Ｘ７ＩＶＸ８Ｘ９ＬＫＮＸ１０ＶＮＤＬＶＰＥＦＬＰＡＰＥＤＶＥＴＮＣＥＷＳＡＦＳＣＦＱＫＡＱＬＫＳＡＮＴＧＮＮＥＸ１１ＩＩＮＶＸ１２ＩＸ１３Ｘ１４ＬＸ１５Ｘ１６Ｘ１７ＰＰＸ１８ＴＮＡＧＲＲＱＫＨＲＬＴＣＰＳＣＤＳＹＥＫＫＰＰＫＥＦＬＥＲＦＫＳＬＬＸ１９Ｘ２０ＭＩＨＱＨＬＳＳＲＴＨＧＳＥＤＳ（配列番号１３６）のように提供される。いくつかの実施形態では、Ｘ１＝Ｒ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ｙ、又はＦである。いくつかの実施形態では、Ｘ２＝Ｉ、Ｑ、Ｈ、Ｅである。いくつかの実施形態では、Ｘ３＝Ｒ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ｙ、又はＦである。いくつかの実施形態では、Ｘ４＝Ｒ、Ｄ又はＥである。いくつかの実施形態では、Ｘ５＝Ｑ、Ｌ、Ｉ、又はＹである。いくつかの実施形態では、Ｘ６＝Ｉ、Ｄ又はＥである。いくつかの実施形態では、Ｘ７＝Ｄ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｌ、Ｙ、又はＦである。いくつかの実施形態では、Ｘ８＝Ｄ、Ａ、Ｋ、又はＲである。いくつかの実施形態では、Ｘ９＝Ｑ、Ｌ、又はＹである。いくつかの実施形態では、Ｘ１０＝Ｙ又はＥである。いくつかの実施形態では、Ｘ１１＝Ｒ、Ｇ、Ｓ、Ｅ、Ｄ、又はＡである。いくつかの実施形態では、Ｘ１２＝Ｓ、Ｈ、Ｙ、Ｌ、Ｖ、又はＦである。いくつかの実施形態では、Ｘ１３＝Ｋ、Ｇ、Ｓ、Ｅ、Ｄ、又はＡである。いくつかの実施形態では、Ｘ１４＝Ｋ、Ａ、Ｙ、Ｌ、Ｆ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、Ｅ、Ａ、又はＤである。いくつかの実施形態では、Ｘ１５＝Ｋ、Ｇ、Ｓ、Ｅ、Ｄ、又はＡである。いくつかの実施形態では、Ｘ１６＝Ｒ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ｙ、又はＦである。いくつかの実施形態では、Ｘ１７＝Ｋ、Ｇ、Ｓ、Ｅ、Ｄ、又はＡである。いくつかの実施形態では、Ｘ１８=Ｓ、Ｈ、Ａ、Ｇ、Ｅ、又はＤである。いくつかの実施形態では、Ｘ１９=Ｑ又はＹである。いくつかの実施形態では、Ｘ２０=Ｋ、Ａ、Ｄ、又はＥである。














































本開示の特定の態様は、がん又は慢性感染症を治療する方法に関する。いくつかの実施形態では、本方法は、患者に、有効量の標的化サイトカイン構築物、又は標的化サイトカイン構築物及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を投与することを含む。いくつかの実施形態では、当該治療を必要とする患者は、がんと診断されている。
いくつかの実施形態では、標的化サイトカイン構築物又は組成物は、遺伝子操作細胞療法（例えば、Ｔ細胞療法）、がんワクチン、化学療法剤、又は免疫チェックポイント阻害剤（ＩＣＩ）と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態では、化学療法剤とは、キナーゼ阻害剤、代謝拮抗剤、細胞毒素剤若しくは細胞増殖抑制剤、抗ホルモン剤、白金系化学療法剤、メチルトランスフェラーゼ阻害剤、抗体、又は抗がんペプチドである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＣＥＡＣＡＭ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ２７６、ＶＴＣＮ１、ＨＶＥＭ、ＫＩＲ、Ａ２ＡＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬＳ、アデノシン、ＴＧＦＲ、ＯＸ４０、ＣＤ１３７、ＣＤ４０、ＩＤＯ、ＣＳＦ１Ｒ、ＴＩＭ－３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ－３、ＴＩＧＩＴ、ＩＤＯ、ＭＩＣＡ／Ｂ、ＬＩＬＲＢ４、ＳＩＧＬＥＣ－１５、又はアルギナーゼを標的化し、ＰＤ－１の阻害剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体）、ＰＤ－Ｌ１の阻害剤（例えば、抗ＰＤ－Ｌ１抗体）、又はＣＴＬＡ－４の阻害剤（例えば、抗ＣＴＬＡ－４抗体）が挙げられるが、これらに限定されない。Ｔ細胞療法の例としては、ＣＤ４＋ Ｔ細胞ベースの療法又はＣＤ８＋ Ｔ細胞ベースの療法、養子Ｔ細胞療法、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ベースのＴ細胞療法、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）ベースの療法、自家Ｔ細胞療法、及び同種異系Ｔ細胞療法が挙げられるが、これらに限定されない。例示的ながんワクチンとしては、樹状細胞ワクチン、１つ以上のがん抗原をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含むワクチン、及び１つ以上のがん抗原ペプチドを含むワクチンが挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、本開示の標的化サイトカイン構築物は、例えば、標的化サイトカイン構築物及び１つ以上の薬学的に許容される担体を含む医薬組成物の一部である。本明細書に記載の医薬組成物及び製剤は、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で、所望の純度を有する活性成分（標的化サイトカイン構築物など）を１つ以上の任意の薬学的に許容される担体と混合することによって調製することができる（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））。薬学的に許容される担体は、一般に、使用される薬量及び濃度ではレシピエントに対して無毒であり、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸などの緩衝液、アスコルビン酸及びメチオニンなどの抗酸化剤、防腐剤、低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド、血清アルブミン、ゼラチン、若しくは免疫グロブリンなどのタンパク質、ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー、アミノ酸、グルコース、マンノース、若しくはデキストリンなどの、単糖類、二糖類、及び他の炭水化物、ＥＤＴＡなどのキレート剤、スクロース、マンニトール、トレハロース、若しくはソルビトールなどの糖類、ナトリウムなどの塩形成性対イオン、金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質複合体）、及び／又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本開示の標的化サイトカイン構築物は、凍結乾燥される。
遺伝子操作細胞療法
いくつかの実施形態では、本開示は、遺伝子操作細胞療法、例えば、遺伝子操作細胞療法を、それを必要とする対象に投与することに関する。遺伝子操作細胞療法は、細胞（例えば、Ｔ細胞）を対象に投与して、身体ががんなどの疾病と闘うのを助ける一種の免疫療法であり得る。がん治療では、通常、患者自身の血液又は腫瘍組織からＴ細胞が採取され、研究室で大量に増殖させられ、その後、免疫系ががんと闘うのを助けるために患者に戻される。場合により、対象のがん細胞を標的化して殺傷する能力を向上させた、遺伝子操作された細胞を生成するために、研究室においてＴ細胞を変化させる。遺伝子操作細胞療法の種類には、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ Ｔ細胞）療法、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）療法、及び腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）療法が挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の併用療法で使用するための、遺伝子操作細胞療法は、疾病又は疾患に関連する分子を認識かつ／又はこれに特異的に結合して、このような分子への結合時に、このような分子に対する免疫応答などの応答をもたらすように設計された組換え受容体を発現する遺伝子操作された細胞を投与することを含む。受容体には、キメラ受容体、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、及びトランスジェニックＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む他のトランスジェニック抗原受容体が含まれ得る。いくつかの実施形態では、疾病又は疾患に関連する分子を認識かつ／又はこれに特異的に結合する内因性Ｔ細胞受容体を有するＴ細胞は、Ｔ細胞療法のために単離される。
いくつかの実施形態では、細胞は、受容体、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）などの遺伝子操作された抗原受容体を含むか、又は含むように遺伝子操作される。また、このような細胞の集団、このような細胞を含む組成物、及び／又はＴ細胞若しくはＣＤ８＋細胞若しくはＣＤ４＋細胞などの特定の種類の細胞が富化又は選択されるなど、このような細胞が富化された組成物も提供される。また、細胞及び組成物を対象、例えば、患者に投与するための治療方法も提供される。いくつかの実施形態では、細胞は、遺伝子工学を介して導入された１つ以上の核酸を含み、それにより、このような核酸の組換え生成物又は遺伝子操作された生成物を発現する。いくつかの実施形態では、遺伝子移入は、例えば、サイトカイン又は活性化マーカーの発現によって測定されるような、増殖、生存、及び／又は活性化などの応答を誘導する刺激と細胞を組み合わせることなどによって、最初に細胞を刺激し、続いて、活性化された細胞を形質導入し、臨床応用に十分な数まで培養で拡大することによって達成される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の細胞療法で使用される細胞は、機能的非ＴＣＲ抗原受容体、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む抗原受容体などの、天然受容体又は組換え受容体などの受容体、及びトランスジェニックＴ細胞受容体（ＴＣＲ）などの他の抗原結合受容体を発現することができる。また、受容体の中には、他のキメラ受容体も含まれ得る。いくつかの実施形態では、細胞は、本明細書に記載の標的化サイトカイン構築物のサイトカインに特異的な受容体を発現することができる。
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
ＣＡＲを含む例示的な抗原受容体、例示的なＣＡＲ－Ｔ細胞、及びこのような受容体を遺伝子操作して細胞に導入する方法には、例えば、国際公開第２０００／１４２５７号、同第２０１３／１２６７２６号、同第２０１２／１２９５１４号、同第２０１４／０３１６８７号、同第２０１３／１６６３２１号、同第２０１３／０７１１５４号、同第２０１３／１２３０６１号、米国特許出願公開第２００２１３１９６０号、同第２０１３２８７７４８号、同第２０１３０１４９３３７号、米国特許第６，４５１，９９５号、同第７，４４６，１９０号、同第８，２５２，５９２号、同第８，３３９，６４５号、同第８，３９８，２８２号、同第７，４４６，１７９号、同第６，４１０，３１９号、同第７，０７０，９９５号、同第７，２６５，２０９号、同第７，３５４，７６２号、同第７，４４６，１９１号、同第８，３２４，３５３号、及び同第８，４７９，１１８号、並びに欧州特許第２５３７４１６号に記載されているもの、並びに／又はＳａｄｅｌａｉｎ ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ．，３（４）：３８８－３９８（２０１３）；Ｄａｖｉｌａ ｅｔ ａｌ，ＰＬｏＳ ＯＮＥ ８（４）：ｅ６１３３８（２０１３）；Ｔｕｒｔｌｅ ｅｔ ａｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，２４（５）：６３３－３９（２０１２）；Ｗｕ ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ，１８（２）：１６０－７５（２０１２）に記載されているものが挙げられる。いくつかの態様では、抗原受容体には、米国特許第７，４４６，１９０号に記載されているＣＡＲ、及び国際公開第２０１４０５５６６８（Ａ１）号に記載されているＣＡＲが挙げられる。ＣＡＲの例には、国際公開第２０１４０３１６８７号、米国特許第８，３３９，６４５号、同第７，４４６，１７９号、米国特許出願公開第２０１３／０１４９３３７号、米国特許第７，４４６，１９０号、同第８，３８９，２８２号、Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，１０，２６７－２７６（２０１３）；Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３５（９）：６８９－７０１（２０１２）；及びＢｒｅｎｔｊｅｎｓ ｅｔ ａｌ，Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ．５（１７７）（２０１３）などの前述の刊行物のいずれかに開示されているＣＡＲが挙げられる。また、国際公開第２０１４０３１６８７号、米国特許第８，３３９，６４５号、同第７，４４６，１７９号、米国特許出願公開第２０１３／０１４９３３７号、米国特許第７，４４６，１９０号、及び同第８，３８９，２８２号も参照のこと。ＣＡＲなどのキメラ受容体は、抗体分子の一部、一般には抗体の可変重（ＶＨ）鎖領域及び／又は可変軽（ＶＬ）鎖領域、例えば、ｓｃＦｖ抗体断片などの細胞外抗原結合ドメインを含むことができる。本明細書で提供される方法又は組成物で使用できるＣＡＲ又はＣＡＲ－Ｔ細胞の非限定的な例としては、チサゲンレクルユーセル、アキシカブタゲンシロルユーセル、リソカブタゲンマラルユーセル、及びＣＤ１９、ＣＤ２２、ＷＴ１、ＣＤ１７１（Ｌ１ＣＡＭ）、ＭＵＣ１６、ＲＯＲ１、又はＬｗｅｉｓ Ｙ（ＬeＹ）血液型抗原などの抗原を標的化するように遺伝子操作されたＣＡＲ－Ｔ細胞が挙げられる。
キメラ膜貫通受容体ポリペプチドの抗原結合ドメインは、抗原に結合できる任意のタンパク質又は分子を含むことができる。本明細書に開示されるキメラ膜貫通受容体ポリペプチドの抗原結合ドメインは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ミニボディ、ダイアボディ、及び重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、及びラクダ類由来のナノボディの可変ドメイン（ＶＨＨ）などの単一ドメイン抗体が挙げられるが、これらに限定されない、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、又はその機能的誘導体、バリアント、若しくは断片であってもよい。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖのうちの少なくとも１つを含む。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、抗体ミメティックを含む。抗体ミメティックとは、抗体に匹敵する親和性を用いて標的分子に結合できる分子を指し、単鎖結合分子、シトクロムｂ５６２ベースの結合分子、フィブロネクチン又はフィブロネクチン様タンパク質足場（例えば、アドネクチン）、リポカリン足場、カリックスアレーン足場、Ａドメイン、及びその他の足場を含む。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、膜貫通受容体、又はその任意の誘導体、バリアント、若しくは断片を含む。例えば、抗原結合ドメインは、膜貫通受容体の少なくとも１つのリガンド結合ドメインを含むことができる。
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、ヒト化抗体を含む。ヒト化抗体は、ＣＤＲ移植、ベニアリング又はリサーフェイシング、チェインシャッフリング、及び他の技法を含むがこれらに限定されない様々な技法を使用して作製することができる。軽鎖及び重鎖を含むヒト可変ドメインは、ヒト化抗体の免疫原性を低下させるために選択することができる。いくつかの実施形態では、キメラ膜貫通受容体ポリペプチドの抗原結合ドメインは、高い親和性で抗原に結合し、免疫原性の低下及び／又は最小化などの、他の好ましい生物学的特性を有するヒト化抗体の断片を含む。ヒト化抗体又は抗体断片は、対応する非ヒト化抗体と同様の抗原特異性を保持することができる。
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。ｓｃＦｖ分子は、ポリペプチドリンカーなどの可動性リンカーを使用して免疫グロブリンの重鎖（ＶＨ）領域と軽鎖（ＶＬ）領域とを一緒に連結することによって作製することができる。ｓｃＦｖは、様々な方法に従って調製することができる。
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、特定の標的抗原に結合するように遺伝子操作される。例えば、抗原結合ドメインは、遺伝子操作されたｓｃＦｖであり得る。ｓｃＦｖを含む抗原結合ドメインは、ファージディスプレイライブラリー、酵母ディスプレイライブラリー、細胞ベースのディスプレイライブラリー（例えば、哺乳動物細胞）、タンパク質－核酸融合物、リボソームディスプレイライブラリー、及び／又は大腸菌ペリプラスムディスプレイライブラリーなどのディスプレイライブラリーが挙げられるが、これらに限定されない、様々な方法を使用して遺伝子操作することができる。いくつかの実施形態では、遺伝子操作された抗原結合ドメインは、類似抗体又は遺伝子操作を受けていない抗体より高い親和性で抗原に結合し得る。
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、複数の抗原、例えば、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個の抗原に結合する。抗原結合ドメインは、ボツリヌス毒素の２つのサブタイプ（例えば、ボツリヌス神経毒素サブタイプＡ１及びサブタイプＡ２）など、２つの関連する抗原に結合することができる。抗原結合ドメインは、受容体チロシンキナーゼｅｒｂＢ－２（Ｎｅｕ、ＥＲＢＢ２、ＨＥＲ２とも称する）と血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）などの、２つの無関係なタンパク質に結合することができる。２つの抗原に結合可能な抗原結合ドメインは、抗体の異なるが重複する部位で２つの無関係なタンパク質標的に結合するように遺伝子操作された抗体を含むことができる。いくつかの実施形態では、複数の抗原に結合する抗原結合ドメインは、二重特異性抗体分子を含む。二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対する結合特異性を有する第１の免疫グロブリン可変ドメイン配列と、第２のエピトープに対する結合特異性を有する第２の免疫グロブリン可変ドメイン配列と、を有することができる。いくつかの実施形態では、第１のエピトープ及び第２のエピトープは、同じ抗原、例えば、同じタンパク質（又は多量体タンパク質のサブユニット）上にある。第１のエピトープ及び第２のエピトープは、重複し得る。いくつかの実施形態では、第１のエピトープ及び第２のエピトープは、重複しない。いくつかの実施形態では、第１のエピトープ及び第２のエピトープは、異なる抗原、例えば、異なるタンパク質（又は多量体タンパク質の異なるサブユニット）上にある。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対する結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列及び軽鎖可変ドメイン配列と、第２のエピトープに対する結合特異性を有する重鎖可変ドメイン配列及び軽鎖可変ドメイン配列と、を含む。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対する結合特異性を有する半抗体と、第２のエピトープに対する結合特異性を有する半抗体と、を含む。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体分子は、第１のエピトープに対する結合特異性を有する半抗体又はその断片と、第２のエピトープに対する結合特異性を有する半抗体又はその断片と、を含む。
いくつかの実施形態では、キメラ膜貫通受容体ポリペプチドの細胞外領域は、複数の抗原結合ドメイン、例えば、少なくとも２つの抗原結合ドメイン（例えば、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、又は１０個の抗原結合ドメイン）を含む。複数の抗原結合ドメインは、同じ抗原又は異なる抗原への結合を示すことができる。いくつかの実施形態では、細胞外領域は、少なくとも２つの抗原結合ドメイン、例えば、タンデムに連結された少なくとも２つのｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、２つのｓｃＦｖ断片がペプチドリンカーによって連結される。
いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）が結合できる抗原は、ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、この抗原は、炭水化物又は他の分子である。いくつかの実施形態では、抗原は、正常細胞又は非標的化細胞又は組織と比較して、疾病又は疾患の細胞、例えば、腫瘍細胞又は病原性細胞上で選択的に発現又は過剰発現される。他の実施形態では、抗原は、正常細胞上で発現される、かつ／又は遺伝子操作された細胞上で発現される。
いくつかの実施形態では、遺伝子操作された細胞上で発現される抗原結合ドメインは、腫瘍関連抗原からのネオエピトープ、ＴＳＨＲ、ＣＤ１９、ＣＤ１２３、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ１７１、ＣＳ－１、ＣＬＬ－１、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖｌｌｌ、ＧＤ２、ＧＤ３、ＢＣＭＡ、Ｔｎ Ａｇ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＦＬＴ３、ＦＡＰ、ＴＡＧ７２、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、メソセリン、ＩＬ－１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ＬｅｗｉｓＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ－β、ＳＳＥＡ－４、ＣＤ２０、葉酸受容体α、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、エフリンＢ２、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐ１００、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、ＥｐｈＡ２、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体β、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、ＧｌｏｂｏＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１ Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴ１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ＭＡＧＥ－Ａ１、レグマイン、ＨＰＶ Ｅ６、Ｅ７、ＭＡＧＥ Ａ１、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、精子タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ ２、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、プロスタイン、サバイビン及びテロメラーゼ、ＰＣＴＡ－１／ガレクチン８、メランＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点、ＭＬ－ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１ Ｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ－１、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、ＬＡＩＲ１、ＦＣＡＲ、ＬＩＬＲＡ２、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＢＳＴ２、ＥＭＲ２、ＬＹ７５、ＧＰＣ３、ＦＣＲＬ５、ＩＧＬＬ１、１－４０－β－アミロイド、４－１ＢＢ、５ＡＣ、５Ｔ４、アクチビン受容体様キナーゼ１、ＡＣＶＲ２Ｂ、腺がん抗原、ＡＧＳ－２２Ｍ６、αフェトプロテイン、アンジオポエチン２、アンジオポエチン３、炭疽毒素、ＡＯＣ３（ＶＡＰ－１）、Ｂ７－Ｈ３、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ（炭疽菌）、ＢＡＦＦ、βアミロイド、Ｂ－リンパ腫細胞、Ｃ２４２抗原、Ｃ５、ＣＡ－１２５、イヌＩＬ３１、炭酸脱水酵素９（ＣＡ－ＩＸ）、心筋ミオシン、ＣＣＬ１１（エオタキシン－１）、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＤ１１、ＣＤ１８、ＣＤ１２５、ＣＤ１４０ａ、ＣＤ１４７（ベイシジン）、ＣＤ１５、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４（ＣＤ４０Ｌ）、ＣＤ１９、ＣＤ２、ＣＤ２０、ＣＤ２００、ＣＤ２２、ＣＤ２２１、ＣＤ２３（ＩｇＥ受容体）、ＣＤ２５（ＩＬ－２受容体のα鎖）、ＣＤ２７、ＣＤ２７４、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ３ε、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４、ＣＤ４０、ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４１、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ５、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ６、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ８０、ＣＥＡ、ＣＥＡ関連抗原、ＣＦＤ、ｃｈ４Ｄ５、ＣＬＤＮ１８．２、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ、クランピング因子Ａ、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＳＦ２、ＣＴＬＡ－４、Ｃ－Ｘ－Ｃケモカイン受容体４型、サイトメガロウイルス、サイトメガロウイルス糖タンパク質Ｂ、ダビガトラン、ＤＬＬ４、ＤＰＰ４、ＤＲ５、大腸菌志賀毒素１型、大腸菌志賀毒素２型、ＥＧＦＬ７、ＥＧＦＲ、エンドトキシン、ＥｐＣＡＭ、エピシアリン、ＥＲＢＢ３、大腸菌、呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質、ＦＡＰ、フィブリンＩＩβ鎖、フィブロネクチンエクストラドメイン－Ｂ、葉酸加水分解酵素、葉酸受容体１、葉酸受容体α、Ｆｒｉｚｚｌｅｄ受容体、ガングリオシドＧＤ２、ＧＤ２、ＧＤ３ガングリオシド、グリピカン３、ＧＭＣＳＦ受容体α鎖、ＧＰＮＭＢ、増殖分化因子８、ＧＵＣＹ２Ｃ、ヘマグルチニン、Ｂ型肝炎表面抗原、Ｂ型肝炎ウイルス、ＨＥＲ１、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＨＥＲ３、ＨＧＦ、ＨＨＧＦＲ、ヒストン複合体、ＨＩＶ－１、ＨＬＡ－ＤＲ、ＨＮＧＦ、Ｈｓｐ９０、ヒト散乱因子受容体キナーゼ、ヒトＴＮＦ、ヒトβアミロイド、ＩＣＡＭ－１（ＣＤ５４）、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－γ、ＩｇＥ、ＩｇＥ Ｆｃ領域、ＩＧＦ－１受容体、ＩＧＦ－１、ＩＧＨＥ、ＩＬ １７Ａ、ＩＬ １７Ｆ、ＩＬ ２０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１７、ＩＬ－１β、ＩＬ－２２、ＩＬ－２３、ＩＬ－３１ＲＡ、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－６受容体、ＩＬ－９、ＩＬＧＦ２、インフルエンザＡ型血球凝集素、インフルエンザＡ型ウイルス血球凝集素、インスリン様増殖因子Ｉ受容体、インテグリンα４β７、インテグリンα４、インテグリンα５β１、インテグリンα７β７、インテグリンαＩＩｂβ３、インテグリンαｖβ３、インターフェロンα／β受容体、インターフェロンγ誘導タンパク質、ＩＴＧＡ２、ＩＴＧＢ２（ＣＤ１８）、ＫＩＲ２Ｄ、Ｌｅｗｉｓ－Ｙ抗原、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ）、ＬＩＮＧＯ－１、リポテイコ酸、ＬＯＸＬ２、Ｌ－セレクチン（ＣＤ６２Ｌ）、ＬＴＡ、ＭＣＰ－１、メソテリン、ＭＩＦ、ＭＳ４Ａ１、ＭＳＬＮ、ＭＵＣ１、ムチンＣａｎＡｇ、ミエリン関連糖タンパク質、ミオスタチン、ＮＣＡ－９０（顆粒球抗原）、神経アポトーシス調節プロテイナーゼ１、ＮＧＦ、Ｎ－グリコリルノイラミン酸、ＮＯＧＯ－Ａ、Ｎｏｔｃｈ受容体、ＮＲＰ１、アナウサギ、ＯＸ－４０、ｏｘＬＤＬ、ＰＣＳＫ９、ＰＤ－１、ＰＤＣＤ１、ＰＤＧＦ－Ｒα、リン酸ナトリウム共輸送体、ホスファチジルセリン、血小板由来増殖因子受容体β、前立腺がん細胞、緑膿菌、狂犬病ウイルス糖タンパク質、ＲＡＮＫＬ、ＲＳウイルス、ＲＨＤ、アカゲザル因子、ＲＯＮ、ＲＴＮ４、スクレロスチン、ＳＤＣ１、セレクチンＰ、ＳＬＡＭＦ７、ＳＯＳＴ、スフィンゴシン－１－リン酸、黄色ブドウ球菌、ＳＴＥＡＰ１、ＴＡＧ－７２、Ｔ－細胞受容体、ＴＥＭ１、テネイシンＣ、ＴＦＰＩ、ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２、ＴＧＦ－β、ＴＮＦ－α、ＴＲＡＩＬ－Ｒ１、ＴＲＡＩＬ－Ｒ２、腫瘍抗原ＣＴＡＡ１６．８８、ＭＵＣ１の腫瘍特異的グリコシル化、腫瘍関連カルシウムシグナルトランスデューサー２、ＴＷＥＡＫ受容体、ＴＹＲＰ１（糖タンパク質７５）、ＶＥＧＦＡ、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ビメンチン、及びＶＷＦからなる群から選択される抗原に結合する。
いくつかの実施形態では、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）が結合することできる抗原は、７０７－ＡＰ、ビオチン化分子、α－アクチニン－４、ａｂｌ－ｂｃｒ ａｌｂ－ｂ３（ｂ２ａ２）、ａｂｌ－ｂｃｒ ａｌｂ－ｂ４（ｂ３ａ２）、アディポフィリン、ＡＦＰ、ＡＩＭ－２、アネキシンＩＩ、ＡＲＴ－４、ＢＡＧＥ、β－カテニン、ｂｃｒ－ａｂｌ、ｂｃｒ－ａｂｌ ｐ１９０（ｅ１ａ２）、ｂｃｒ－ａｂｌ ｐ２１０（ｂ２ａ２）、ｂｃｒ－ａｂｌ ｐ２１０（ｂ３ａ２）、ＢＩＮＧ－４、ＣＡＧ－３、ＣＡＩＸ、ＣＡＭＥＬ、カスパーゼ－８、ＣＤ１７１、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤＣ２７、ＣＤＫ－４、ＣＥＡ、ＣＬＣＡ２、Ｃｙｐ－Ｂ、ＤＡＭ－１０、ＤＡＭ－６、ＤＥＫ－ＣＡＮ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＧＰ－２、ＥＧＰ－４０、ＥＬＦ２、Ｅｐ－ＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＥｐｈＡ３、ｅｒｂ－Ｂ２、ｅｒｂ－Ｂ３、ｅｒｂ－Ｂ４、ＥＳ－ＥＳＯ－１ａ、ＥＴＶ６／ＡＭＬ、ＦＢＰ、胎児性アセチルコリン受容体、ＦＧＦ－５、ＦＮ、Ｇ２５０、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＧＡＧＥ－３、ＧＡＧＥ－４、ＧＡＧＥ－５、ＧＡＧＥ－６、ＧＡＧＥ－７Ｂ、ＧＡＧＥ－８、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧｎＴ－Ｖ、Ｇｐ１００、ｇｐ７５、Ｈｅｒ－２、ＨＬＡ－Ａ*０２０１－Ｒ１７０Ｉ、ＨＭＷ－ＭＡＡ、ＨＳＰ７０－２ Ｍ、ＨＳＴ－２（ＦＧＦ６）、ＨＳＴ－２／ｎｅｕ、ｈＴＥＲＴ、ｉＣＥ、ＩＬ－１１Ｒα、ＩＬ－１３Ｒα２、ＫＤＲ、ＫＩＡＡ０２０５、Ｋ－ＲＡＳ、Ｌ１－細胞接着分子、ＬＡＧＥ－１、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、Ｌｅｗｉｓ Ｙ、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－１０、ＭＡＧＥ－１２、ＭＡＧＥ－２、ＭＡＧＥ－３、ＭＡＧＥ－４、ＭＡＧＥ－６、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＧＥ－Ｂ１、ＭＡＧＥ－Ｂ２、リンゴ酸酵素、マンマグロビン－Ａ、ＭＡＲＴ－１／メラン－Ａ、ＭＡＲＴ－２、ＭＣ１Ｒ、Ｍ－ＣＳＦ、メソセリン、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ２、ＭＵＭ－１、ＭＵＭ－２、ＭＵＭ－３、ミオシン、ＮＡ８８－Ａ、Ｎｅｏ－ＰＡＰ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＰＭ／ＡＬＫ、Ｎ－ＲＡＳ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＯＡ１、ＯＧＴ、がん胎児性抗原（ｈ５Ｔ４）、ＯＳ－９、Ｐポリペプチド、Ｐ１５、Ｐ５３、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＡ、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＰＴＰＲＫ、ＲＡＧＥ、ＲＯＲ１、ＲＵ１、ＲＵ２、ＳＡＲＴ－１、ＳＡＲＴ－２、ＳＡＲＴ－３、ＳＯＸ１０、ＳＳＸ－２、サバイビン、サバイビン－２Ｂ、ＳＹＴ／ＳＳＸ、ＴＡＧ－７２、ＴＥＬ／ＡＭＬ１、ＴＧＦａＲＩＩ、ＴＧＦｂＲＩＩ、ＴＰ１、ＴＲＡＧ－３、ＴＲＧ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、ＴＲＰ－２／ＩＮＴ２、ＴＲＰ－２－６ｂ、チロシナーゼ、ＶＥＧＦ－Ｒ２、ＷＴ１、α－葉酸受容体、及びκ－軽鎖からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、腫瘍関連抗原に結合する。
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、抗体、例えば、細胞表面タンパク質又はポリペプチドに結合する抗体に結合する。抗体によって結合される細胞表面のタンパク質又はポリペプチドは、ウイルス感染、細菌感染、及び／若しくは寄生虫感染、炎症性疾患及び／若しくは自己免疫疾患、又はがん及び／若しくは腫瘍などの新生物などの疾病に関連する抗原を含むことができる。いくつかの実施形態では、抗体は、腫瘍関連抗原（例えば、タンパク質又はポリペプチド）に結合する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるキメラ膜貫通受容体ポリペプチドの抗原結合ドメインは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｃ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ミニボディ、ダイアボディ、及び重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、及びラクダ類由来のナノボディの可変ドメイン（ＶＨＨ）などの単一ドメイン抗体が挙げられるが、これらに限定されない、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、又はその機能的誘導体、バリアント、若しくは断片に結合することができる。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｃ、Ｆｖ、及びｓｃＦｖのうちの少なくとも１つに結合することができる。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、抗体のＦｃドメインに結合する。
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、２０－（７４）－（７４）（ミラツズマブ、ベルツズマブ）、２０－２ｂ－２ｂ、３Ｆ８、７４－（２０）－（２０）（ミラツズマブ、ベルツズマブ）、８Ｈ９、Ａ３３、ＡＢ－１６Ｂ５、アバゴボマブ、アブシキシマブ、アビツズマブ、ＡＢＰ４９４（セツキシマブバイオシミラー）、アブリルマブ、ＡＢＴ－７００、ＡＢＴ－８０６、アクチマブ－Ａ（アクチニウムＡｃ－２２５リンツズマブ）、アクトクスマブ、アダリムマブ、ＡＤＣ－１０１３、ＡＤＣＴ－３０１、ＡＤＣＴ－４０２、アデカツムマブ、アデュカヌマブ、アフェリモマブ、ＡＦＭ１３、アフツズマブ、ＡＧＥＮ１８８４、ＡＧＳ１５Ｅ、ＡＧＳ－１６Ｃ３Ｆ、ＡＧＳ６７Ｅ、アラシズマブペゴル、ＡＬＤ５１８、アレムツズマブ、アリロクマブ、ペンテト酸アルツモマブ、アマツキシマブ、ＡＭＧ２２８、ＡＭＧ８２０、アナツモマブマフェナトックス、アネツマブラブタンシン、アニフロルマブ、アンルキンズマブ、ＡＰＮ３０１、ＡＰＮ３１１、アポリズマブ、ＡＰＸ００３／ＳＩＭ－ＢＤ０８０１（セバシズマブ）、ＡＰＸ００５Ｍ、アルシツモマブ、ＡＲＸ７８８、アスクリンバキュマブ、アセリズマブ、ＡＳＧ－１５ＭＥ、アテゾリズマブ、アチヌマブ、ＡＴＬ１０１、アトリズマブ（トシリズマブとも称する）、アトロリムマブ、アベルマブ、Ｂ－７０１、バピヌズマブ、バシリキシマブ、バビツキシマブ、ＢＡＹ１１２９９８０、ＢＡＹ１１８７９８２、ベクツモマブ、ベゲロマブ、ベリムマブ、ベンラリズマブ、ベルティリムマブ、ベシレソマブ、ベタルチン（１７７Ｌｕ－テトラキセタン－テツロマブ）、ベバシズマブ、ＢＥＶＺ９２（ベバシズマブバイオシミラー）、ベズロトクスマブ、ＢＧＢ－Ａ３１７、ＢＨＱ８８０、ＢＩ８３６８８０、ＢＩ－５０５、ビシロマブ、ビマグルマブ、ビメキズマブ、ビバツズマブメルタンシン、ＢＩＷ－８９６２、ブリナツモマブ、ブロソズマブ、ＢＭＳ－９３６５５９、ＢＭＳ－９８６０１２、ＢＭＳ－９８６０１６、ＢＭＳ－９８６１４８、ＢＭＳ－９８６１７８、ＢＮＣ１０１、ボコシズマブ、ブレンツキシマブベドチン、ブレバレックス、ブリアキヌマブ、ブロダルマブ、ブロルシズマブ、ブロンチクツズマブ、Ｃ２－２ｂ－２ｂ、カナキヌマブ、カンツズマブメルタンシン、カンツズマブラブタンシン、カプラシズマブ、カプロマブペンデチド、カルルマブ、カツマキソマブ、ＣＢＲ９６－ドキソルビシン免疫複合体、ＣＢＴ１２４（ベバシズマブ）、ＣＣ－９０００２、ＣＤＸ－０１４、ＣＤＸ－１４０１、セデリズマブ、セルトリズマブペゴル、セツキシマブ、ＣＧＥＮ－１５００１Ｔ、ＣＧＥＮ－１５０２２、ＣＧＥＮ－１５０２９、ＣＧＥＮ－１５０４９、ＣＧＥＮ－１５０５２、ＣＧＥＮ－１５０９２、Ｃｈ．１４．１８、シタツズマブボガトックス、シクスツムマブ、クラザキズマブ、クレノリキシマブ、クリバツズマブテトラキセタン、ＣＭ－２４、コドリツズマブ、コルツキシマブラブタンシン、コナツムマブ、コンシズマブ、コタラ（ヨウ素Ｉ－１３１デルロツキシマブビオチン）、ｃＲ６２６１、クレネズマブ、ＤＡ－３１１１（トラスツズマブバイオシミラー）、ダセツズマブ、ダクリズマブ、ダロツズマブ、ダピロリズマブペゴル、ダラツムマブ、ダラツムマブエンハンゼ（ダラツムマブ）、ダーロイキン、デクトレクマブ、デムシズマブ、デニンツズマブマホドチン、デノスマブ、デパツキシズマブ、デパツキシズマブマホドチン、デルロツキシマブビオチン、デツモマブ、ＤＩ－Ｂ４、ジヌツキシマブ、ディリダブマブ、ＤＫＮ－０１、ＤＭＯＴ４０３９Ａ、ドルリモマブアリトックス、ドロジツマブ、ＤＳ－１１２３、ＤＳ－８８９５、デュリゴツマブ、デュピルマブ、デュルバルマブ、デュシギツマブ、エクロメキシマブ、エクリズマブ、エドバコマブ、エドレコロマブ、エファリズマブ、エフングマブ、エルデルマブ、エルゲムツマブ、エロツズマブ、エルシリモマブ、エマクツズマブ、エミベツズマブ、エナバツズマブ、エンフォルツマブベドチン、エンリモマブペゴル、エノブリツズマブ、エノキズマブ、エノティクマブ、エンシツキシマブ、エピツモマブシツキセタン、エプラツズマブ、エルリズマブ、エルツマクソマブ、エタラシズマブ、エトロリズマブ、エビナクマブ、エボロクマブ、エクスビビルマブ、ファノレソマブ、ファラリモマブ、ファルレツズマブ、ファシヌマブ、ＦＢＴＡ０５、フェルビズマブ、フェザキヌマブ、ＦＦ－２１１０１、ＦＧＦＲ２抗体－薬物結合体、フィブロムン、フィクラツズマブ、フィギツムマブ、フィリブマブ、フランボツマブ、フレチクマブ、フォントリズマブ、フォルアルマブ、フォラビルマブ、ＦＰＡ１４４、フレソリムマブ、ＦＳ１０２、フルラヌマブ、フツキシマブ、ガリキシマブ、ガニツマブ、ガンテンネルマブ、ガビリモマブ、ゲムツズマブオゾガマイシン、ゲリリムズマブ、ゲボキズマブ、ギレンツキシマブ、グレンバツムマブベドチン、ＧＮＲ－００６、ＧＮＲ－０１１、ゴリムマブ、ゴミリキシマブ、ＧＳＫ２８４９３３０、ＧＳＫ２８５７９１６、ＧＳＫ３１７４９９８、ＧＳＫ３３５９６０９、グセルクマブ、Ｈｕ１４．１８Ｋ３２２Ａ ＭＡｂ、ｈｕ３Ｓ１９３、Ｈｕ８Ｆ４、ＨｕＬ２Ｇ７、ＨｕＭａｂ－５Ｂ１、イバリズマブ、イブリツモマブチウキセタン、イクルクマブ、イダルシズマブ、ＩＧＮ００２、ＩＧＮ５２３、イゴボマブ、ＩＭＡＢ３６２、ＩＭＡＢ３６２（クラウディキシマブ）、イマルマブ、ＩＭＣ－ＣＳ４、ＩＭＣ－Ｄ１１、イムシロマブ、イムガツズマブ、ＩＭＧＮ５２９、ＩＭＭＵ－１０２（イットリウムＹ－９０エプラツズマブテトラキセタン）、ＩＭＭＵ－１１４、ＩｍｍｕＴｕｎｅ ＭＰ７０１アンタゴニスト抗体、ＩＮＣＡＧＮ１８７６、インクラクマブ、ＩＮＣＳＨＲ１２１０、インダツキシマブラブタンシン、インデュサツマブベドチン、インフリキシマブ、イノリモマブ、イノツズマブオゾガマイシン、インテツムマブ、イパフリセプト、ＩＰＨ４１０２、イピリムマブ、イラツムマブ、イサツキシマブ、イスティラツマブ、イトリズマブ、イキセキズマブ、ＪＮＪ－５６０２２４７３、ＪＮＪ－６１６１０５８８、ケリキシマブ、ＫＴＮ３３７９、Ｌ１９ＩＬ２／Ｌ１９ＴＮＦ、ラベツズマブ、ラベツズマブゴビテカン、ＬＡＧ５２５、ランブロリズマブ、ランパリズマブ、Ｌ－ＤＯＳ４７、レブリキズマブ、レマレソマブ、レンチルマブ、レルデリムマブ、ロイコツキシマブ、レクサツムマブ、リビビルマブ、リファスツズマブベドチン、リゲリズマブ、リロトマブサテトラキセタン、リンツズマブ、リリルマブ、ＬＫＺ１４５、ロデルシズマブ、ロキベトマブ、ロルボツズマブメルタンシン、ルカツムマブ、ルリズマブペゴル、ルミリキシマブ、ルムレツズマブ、ＬＹ３１６４５３０、マパツムマブ、マルゲツキシマブ、マスリモマブ、マツズマブ、マブリリムマブ、ＭＢ３１１、ＭＣＳ－１１０、ＭＥＤＩ０５６２、ＭＥＤＩ－０６３９、ＭＥＤＩ０６８０、ＭＥＤＩ－３６１７、ＭＥＤＩ－５５１（イネビリズマブ）、ＭＥＤＩ－５６５、ＭＥＤＩ６４６９、メポリズマブ、メテリムマブ、ＭＧＢ４５３、ＭＧＤ００６／Ｓ８０８８０、ＭＧＤ００７、ＭＧＤ００９、ＭＧＤ０１１、ミラツズマブ、ミラツズマブ－ＳＮ－３８、ミンレツモマブ、ミルベツキシマブソラブタンシン、ミツモマブ、ＭＫ－４１６６、ＭＭ－１１１、ＭＭ－１５１、ＭＭ－３０２、モガムリズマブ、ＭＯＲ２０２、ＭＯＲ２０８、ＭＯＲＡｂ－０６６、モロリムマブ、モタビズマブ、モキセツモマブパスドトックス、ムロモナブ－ＣＤ３、ナコロマブタフェナトックス、ナミルマブ、ナプツモマブエスタフェナトックス、ナルナツマブ、ナタリズマブ、ネバクマブ、ネシツムマブ、ネモリズマブ、ネレリモマブ、ネスバクマブ、ニモツズマブ、ニボルマブ、ノフェツモマブメルペンタン、ＮＯＶ－１０、オビルトキアキシマブ、オビヌツズマブ、オカラツズマブ、オクレリズマブ、オデュリモマブ、オファツムマブ、オララツマブ、オロキズマブ、オマリズマブ、ＯＭＰ－１３１Ｒ１０、ＯＭＰ－３０５Ｂ８３、オナルツズマブ、オンツキシズマブ、オピシヌマブ、オポルツズマブモナトックス、オレゴボマブ、オルティクマブ、オテリキシズマブ、オトレルツズマブ、ＯＸ００２／ＭＥＮ１３０９、オキセルマブ、オザネズマブ、オゾラリズマブ、パギバキシマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、パンコマブ、パンコマブ－ＧＥＸ、パノバクマブ、パルサツズマブ、パスコリズマブ、パソツキシズマブ、パテクリズマブ、パトリツマブ、ＰＡＴ－ＳＣ１、ＰＡＴ－ＳＭ６、ペムブロリズマブ、ペムツモマブ、ペラキズマブ、ペルツズマブ、ペキセリズマブ、ＰＦ－０５０８２５６６（ウトミルマブ）、ＰＦ－０６６４７２６３、ＰＦ－０６６７１００８、ＰＦ－０６８０１５９１、ピジリズマブ、ピナツズマブベドチン、ピンツモマブ、プラクルマブ、ポラツズマブベドチン、ポネズマブ、プリリキシマブ、プリトキサキシマブ、プリツムマブ、ＰＲＯ １４０、プロキシニウム、ＰＳＭＡ ＡＤＣ、キリズマブ、ラコツモマブ、ラドレツマブ、ラフィビルマブ、ラルパンシズマブ、ラムシルマブ、ラニビズマブ、ラキシバクマブ、レファネズマブ、レガビルマブ、ＲＥＧＮ１４００、ＲＥＧＮ２８１０／ＳＡＲ４３９６８４、レスリズマブ、ＲＦＭ－２０３、ＲＧ７３５６、ＲＧ７３８６、ＲＧ７８０２、ＲＧ７８１３、ＲＧ７８４１、ＲＧ７８７６、ＲＧ７８８８、ＲＧ７９８６、リロツムマブ、リヌクマブ、リツキシマブ、ＲＭ－１９２９、ＲＯ７００９７８９、ロバツムマブ、ロレズマブ、ロモソズマブ、ロンタリズマブ、ロベリズマブ、ルプリズマブ、サシツズマブゴビテカン、サマリズマブ、ＳＡＲ４０８７０１、ＳＡＲ５６６６５８、サリルマブ、ＳＡＴ０１２、サツモマブペンデタイド、ＳＣＴ２００、ＳＣＴ４００、ＳＥＡ－ＣＤ４０、セクキヌマブ、セリバンツマブ、セトキサキシマブ、セビルマブ、ＳＧＮ－ＣＤ１９Ａ、ＳＧＮ－ＣＤ１９Ｂ、ＳＧＮ－ＣＤ３３Ａ、ＳＧＮ－ＣＤ７０Ａ、ＳＧＮ－ＬＩＶ１Ａ、シブロツズマブ、シファリムマブ、シルツキシマブ、シムツズマブ、シプリズマブ、シルクマブ、ソフィツズマブベドチン、ソラネズマブ、ソリトマブ、ソネプシズマブ、ソンツズマブ、スタムルマブ、スレソマブ、スビズマブ、ＳＹＤ９８５、ＳＹＭ００４（フツキシマブ及びモドツキシマブ）、Ｓｙｍ０１５、ＴＡＢ０８、タバルマブ、タカツズマブテトラキセタン、タドシズマブ、タリズマブ、タネズマブ、タニビルマブ、タプリツモマブパプトックス、タレックスツマブ、ＴＢ－４０３、テフィバズマブ、テロイキン、テリモマブアリトックス、テナツモマブ、テネリキシマブ、テプリズマブ、テプロツムマブ、テシドルマブ、テツロマブ、ＴＧ－１３０３、ＴＧＮ１４１２、トリウム－２２７－エプラツズマブコンジュゲート、チシリムマブ、チガツズマブ、チルドラキズマブ、チソツマブベドチン、ＴＮＸ－６５０、トシリズマブ、トラリズマブ、トサトクスマブ、トシツモマブ、トベツマブ、トラロキヌマブ、トラスツズマブ、トラスツズマブエムタンシン、ＴＲＢＳ０７、ＴＲＣ１０５、トレガリズマブ、トレメリムマブ、トレボグルマブ、ＴＲＰＨ０１１、ＴＲＸ５１８、ＴＳＲ－０４２、ＴＴＩ－２００．７、ツコツズマブセルモロイキン、ツビルマブ、Ｕ３－１５６５、Ｕ３－１７８４、ウブリツキシマブ、ウロクプルマブ、ウレルマブ、ウルトキサズマブ、ウステキヌマブ、バダスツキシマブタリリン、バンドルツズマブベドチン、バンチクツマブ、バヌシズマブ、バパリキシマブ、バルリルマブ、バテリズマブ、ＶＢ６－８４５、ベドリズマブ、ベルツズマブ、ベパリモマブ、ベセンクマブ、ビシリズマブ、ボロシキシマブ、ボルセツズマブマフォドチン、ボツムマブ、ＹＹＢ－１０１、ザルツムマブ、ザノリムマブ、ザツキシマブ、ジラリムマブ、及びゾリモマブアリトックスからなる群から選択される抗体に結合する。特定の実施形態では、抗原結合ドメインは、前述の抗体のＦｃドメインに結合する。
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、抗体ミメティックに結合する。抗体ミメティックは、本明細書の他の場所に記載されているように、抗体に匹敵する親和性で標的分子に結合することができる。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、本明細書の他の場所に記載されるヒト化抗体に結合することができる。いくつかの実施形態では、キメラ膜貫通受容体ポリペプチドの抗原結合ドメインは、ヒト化抗体の断片に結合することができる。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）に結合することができる。
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインはまた、好適な哺乳動物（例えば、ヒト、マウス、ラット、ヤギ、ヒツジ、又はサル）の免疫グロブリン（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、又はＩｇＥ）のＦｃ部分にも結合する。好適なＦｃ結合ドメインは、哺乳動物のＦｃ受容体又は特定の細菌タンパク質（例えば、タンパク質Ａ及びタンパク質Ｇ）などの天然に存在するタンパク質に由来し得る。加えて、Ｆｃ結合ドメインは、所望の親和性及び特異性で本明細書に記載のＩｇ分子のいずれかのＦｃ部分に結合するように特別に遺伝子操作された合成ポリペプチドであってもよい。例えば、このようなＦｃ結合ドメインは、免疫グロブリンのＦｃ部分に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片であり得る。例としては、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ドメイン抗体、及びナノボディが挙げられるが、これらに限定されない。あるいは、Ｆｃ結合ドメインは、クニッツドメイン、小モジュラー免疫薬（ＳＭＩＰ）、アドネクチン、アビマー、アフィボディ、ＤＡＲＰｉｎ、又はアンチカリンなどの、Ｆｃ部分に特異的に結合する合成ペプチドであってもよく、これは、Ｆｃへの結合活性についてペプチドライブラリーをスクリーニングすることによって同定され得る。
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、哺乳動物のＦｃ受容体の細胞外リガンド結合ドメインを含むＦｃ結合ドメインを含む。Ｆｃ受容体は、一般に、多くの免疫細胞（Ｂ細胞、樹状細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好中球、マスト細胞、及び好酸球を含む）の表面に発現する細胞表面受容体であり、抗体のＦｃドメインに対して結合特異性を示す。場合によっては、抗体のＦｃ部分へのＦｃ受容体の結合により、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）効果が引き起こされ得る。本明細書に記載のキメラ膜貫通受容体ポリペプチドを構築するために使用されるＦｃ受容体は、野生型対応物と比較してＦｃドメインに対する親和性が変化している（例えば、増加又は減少している）場合があるバリアントなどの、天然に存在する多型バリアントであってもよい。あるいは、Ｆｃ受容体は、Ｉｇ分子のＦｃ部分に対する結合親和性を変化させる１つ以上の変異（例えば、最大１０個のアミノ酸残基置換）を有する野生型対応物の機能的バリアントであってもよい。いくつかの実施形態では、変異は、Ｆｃ受容体のグリコシル化パターン、したがって、Ｆｃドメインに対する結合親和性を変化させ得る。
Ｆｃ受容体は、結合することができる抗体のアイソタイプに基づいて分類することができる。例えば、Ｆｃ－γ受容体（ＦｃγＲ）は、一般に、ＩｇＧ抗体（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４）に結合する。Ｆｃ－α受容体（ＦｃαＲ）は、一般に、ＩｇＡ抗体に結合し、Ｆｃ－ε受容体（ＦｃεＲ）は、一般に、ＩｇＥ抗体に結合する。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｆｃγ受容体、又はその任意の誘導体、バリアント、若しくは断片を含む。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩａ、ＦｃγＲＩｂ、ＦｃγＲＩｃ、アロタイプＨ１３１及びＲ１３１を含むＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＢ－１及びＦｃγＲＩＩＢ－２を含むＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２）、アロタイプＶ１５８及びＦ１５８を含むＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）、アロタイプＦｃγＲＩＩＩｂ－ＮＡ１及びＦｃγＲＩＩＩｂ－ＮＡ２を含むＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）、それらの任意の誘導体、それらの任意のバリアント、並びにそれらの任意の断片から選択されるＦｃＲを含むＦｃ結合ドメインを含む。ＦｃγＲは、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、及びサルが挙げられるが、これらに限定されない、任意の生物由来であり得る。マウスＦｃγＲには、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、ＦｃδＲＩＩＩ（ＣＤ１６）、及びＦｃγＲＩＩＩ－２（ＣＤ１６－２）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｆｃε受容体、又はその任意の誘導体、バリアント、若しくは断片を含む。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、ＦｃεＲＩ、ＦｃεＲＩＩ（ＣＤ２３）、それらの任意の誘導体、それらの任意のバリアント、及びそれらの任意の断片から選択されるＦｃＲを含む。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、Ｆｃα受容体、又はその任意の誘導体、バリアント、若しくは断片を含む。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、ＦｃαＲＩ（ＣＤ８９）、Ｆｃα／μＲ、それらの任意の誘導体、それらの任意のバリアント、及びそれらの任意の断片から選択されるＦｃＲを含む。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、ＦｃＲｎ、それらの任意の誘導体、それらの任意のバリアント、及びそれらの任意の断片から選択されるＦｃＲを含む。キメラ膜貫通受容体ポリペプチドで使用するためのＦｃ受容体のリガンド結合ドメインの選択は、Ｆｃ結合ドメインの結合が所望される抗体のアイソタイプ及び結合相互作用の所望の親和性などの様々な要因に依存し得る。
主題の系のキメラ膜貫通受容体ポリペプチドの細胞内領域の免疫細胞シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達ドメインを含むことができる。一次シグナル伝達ドメインは、免疫細胞シグナル伝達に関与する任意のシグナル伝達ドメイン、又はその誘導体、バリアント、若しくは断片であり得る。例えば、シグナル伝達ドメインは、刺激性又は抑制性のいずれかでＴＣＲ複合体の一次活性化の制御に関与している。一次シグナル伝達ドメインは、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）、Ｆｃε受容体（ＦｃεＲ）、Ｆｃα受容体（ＦｃαＲ）、新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）、ＣＤ３、ＣＤ３ζ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２８、ＣＤ３２、ＣＤ４０Ｌ（ＣＤ１５４）、ＣＤ４５、ＣＤ６６ｄ、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳとしても知られている）、ＣＤ２４７ζ、ＣＤ２４７η、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＦＹＮ、ＬＡＴ、Ｌｃｋ、ＭＡＰＫ、ＭＨＣ複合体、ＮＦＡＴ、ＮＦ－κＢ、ＰＬＣ－γ、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ｄｇ、Ｃ３ｄ、及びＺａｐ７０のシグナル伝達ドメインを含むことができる。いくつかの実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ又はＩＴＡＭを含む。ＩＴＡＭを含む一次シグナル伝達ドメインは、６～８個のアミノ酸で区切られたアミノ酸配列ＹｘｘＬ／Ｉの２つの反復を含むことができ、各ｘは、独立して任意のアミノ酸であり、保存モチーフＹｘｘＬ／Ｉｘ（６－８）ＹｘｘＬ／Ｉを生成する。ＩＴＡＭを含む一次シグナル伝達ドメインは、例えば、抗原結合ドメインが抗原に結合されるときのリン酸化によって修飾することができる。リン酸化されたＩＴＡＭは、他のタンパク質、例えば、様々なシグナル伝達経路に関与するタンパク質のドッキングサイトとして機能することができる。いくつかの実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、天然のＩＴＡＭドメインと比較して活性が変化した（例えば、増加又は減少した）修飾されたＩＴＡＭドメイン、例えば、変異、切断、かつ／又は最適化されたＩＴＡＭドメインを含む。
いくつかの実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、ＦｃγＲシグナル伝達ドメイン（例えば、ＩＴＡＭ）を含む。ＦｃγＲシグナル伝達ドメインは、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）、及びＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）から選択することができる。いくつかの実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、ＦｃεＲシグナル伝達ドメイン（例えば、ＩＴＡＭ）を含む。ＦｃεＲシグナル伝達ドメインは、ＦｃεＲＩ及びＦｃεＲＩＩ（ＣＤ２３）から選択することができる。いくつかの実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、ＦｃαＲシグナル伝達ドメイン（例えば、ＩＴＡＭ）を含む。ＦｃαＲシグナル伝達ドメインは、ＦｃαＲＩ（ＣＤ８９）及びＦｃα／μＲから選択することができる。いくつかの実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζのＩＴＡＭを含む。
いくつかの実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフ又はＩＴＩＭを含む。ＩＴＩＭを含む一次シグナル伝達ドメインは、免疫系のいくつかの抑制性受容体の細胞質尾部に見られる保存されたアミノ酸の配列（Ｓ／Ｉ／Ｖ／ＬｘＹｘｘＩ／Ｖ／Ｌ）を含むことができる。ＩＴＩＭを含む一次シグナル伝達ドメインは、Ｓｒｃキナーゼファミリーのメンバー（例えばＬｃｋ）などの酵素によって修飾、例えば、リン酸化することができる。リン酸化の後、酵素を含む他のタンパク質がＩＴＩＭに動員され得る。これらの他のタンパク質には、ホスホチロシンホスファターゼＳＨＰ－１及びＳＨＰ－２などの酵素、ＳＨＩＰと称するイノシトールホスファターゼ、及び１つ以上のＳＨ２ドメインを有するタンパク質（例えば、ＺＡＰ７０）が挙げられるが、これらに限定されない。一次シグナル伝達ドメインは、ＢＴＬＡ、ＣＤ５、ＣＤ３１、ＣＤ６６ａ、ＣＤ７２、ＣＭＲＦ３５Ｈ、ＤＣＩＲ、ＥＰＯ－Ｒ、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２）、Ｆｃ受容体様タンパク質２（ＦＣＲＬ２）、Ｆｃ受容体受容体様タンパク質３（ＦＣＲＬ３）、Ｆｃ受容体様タンパク質４（ＦＣＲＬ４）、Ｆｃ受容体様タンパク質５（ＦＣＲＬ５）、Ｆｃ受容体様タンパク質６（ＦＣＲＬ６）、タンパク質Ｇ６ｂ（Ｇ６Ｂ）、インターロイキン４受容体（ＩＬ４Ｒ）、免疫グロブリンスーパーファミリー受容体転座関連１（ＩＲＴＡ１）、免疫グロブリンスーパーファミリー受容体転座関連２（ＩＲＴＡ２）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体２ＤＬ１（ＫＩＲ２ＤＬ１）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体２ＤＬ２（ＫＩＲ２ＤＬ２）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体２ＤＬ３（ＫＩＲ２ＤＬ３）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体２ＤＬ４（ＫＩＲ２ＤＬ４）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体２ＤＬ５（ＫＩＲ２ＤＬ５）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体３ＤＬ１（ＫＩＲ３ＤＬ１）、キラー細胞免疫グロブリン様受容体３ＤＬ２（ＫＩＲ３ＤＬ２）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢのメンバー１（ＬＩＲ１）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢのメンバー２（ＬＩＲ２）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢのメンバー３（ＬＩＲ３）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢのメンバー５（ＬＩＲ５）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーＢのメンバー８（ＬＩＲ８）、白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ－１）、マスト細胞機能関連抗原（ＭＡＦＡ）、ＮＫＧ２Ａ、細胞傷害誘発受容体２（ＮＫｐ４４）、ＮＴＢ－Ａ、プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）、ＰＩＬＲ、ＳＩＧＬＥＣＬ１、シアル酸結合Ｉｇ様レクチン２（ＳＩＧＬＥＣ２又はＣＤ２２）、シアル酸結合Ｉｇ様レクチン３（ＳＩＧＬＥＣ３又はＣＤ３３）、シアル酸結合Ｉｇ様レクチン５（ＳＩＧＬＥＣ５又はＣＤ１７０）、シアル酸結合Ｉｇ様レクチン６（ＳＩＧＬＥＣ６）、シアル酸結合Ｉｇ様レクチン７（ＳＩＧＬＥＣ７）、シアル酸結合Ｉｇ様レクチン１０（ＳＩＧＬＥＣ１０）、シアル酸結合Ｉｇ様レクチン１１（ＳＩＧＬＥＣ１１）、シアル酸結合Ｉｇ様レクチン４（ＳＩＧＬＥＣ４）、シアル酸結合Ｉｇ様レクチン８（ＳＩＧＬＥＣ８）、シアル酸結合Ｉｇ様レクチン９（ＳＩＧＬＥＣ９）、血小板及び内皮細胞接着分子１（ＰＥＣＡＭ－１）、シグナル制御タンパク質（ＳＩＲＰ ２）、及びシグナル伝達閾値制御膜貫通アダプタ１（ＳＩＴ）のシグナル伝達ドメイン（例えば、ＩＴＩＭ）を含むことができる。いくつかの実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、天然のＩＴＩＭドメインと比較して活性が変化した（例えば、増加又は減少した）修飾されたＩＴＩＭドメイン、例えば、変異、切断、かつ／又は最適化されたＩＴＩＭドメインを含む。
いくつかの実施形態では、免疫細胞シグナル伝達ドメインは、複数の一次シグナル伝達ドメインを含む。例えば、免疫細胞シグナル伝達ドメインは、少なくとも２つの一次シグナル伝達ドメイン、例えば、少なくとも２、３、４、５、７、８、９、又は１０個の一次シグナル伝達ドメインを含むことができる。いくつかの実施形態では、免疫細胞シグナル伝達ドメインは、少なくとも２つのＩＴＡＭドメイン（例えば、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、又は１０個のＩＴＡＭドメイン）を含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞シグナル伝達ドメインは、少なくとも２つのＩＴＩＭドメイン（例えば、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、又は１０個のＩＴＩＭドメイン）（例えば、少なくとも２つの一次シグナル伝達ドメイン）を含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭドメイン及びＩＴＩＭドメインの両方を含む。
キメラ膜貫通受容体ポリペプチドの細胞内領域の免疫細胞シグナル伝達ドメインは、共刺激ドメインを含むことができる。いくつかの実施形態では、例えば、共刺激分子からの共刺激ドメインは、例えば、免疫細胞の活性化及び／又は非活性化のためのＩＴＡＭドメイン及び／又はＩＴＩＭドメインからのシグナル伝達などの、免疫細胞シグナル伝達のための共刺激シグナルを提供することができる。いくつかの実施形態では、免疫細胞シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達ドメイン及び少なくとも１つの共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、共刺激ドメインは、免疫細胞における増殖シグナル及び／又は生存シグナルを制御するように機能する。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、ＭＨＣクラスＩタンパク質、ＭＨＣクラスＩＩタンパク質、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、又はＴｏｌｌリガンド受容体のシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、共刺激ドメインは、２Ｂ４／ＣＤ２４４／ＳＬＡＭＦ４、４－１ＢＢ／ＴＮＦＳＦ９／ＣＤ１３７、Ｂ７－１／ＣＤ８０、Ｂ７－２／ＣＤ８６、Ｂ７－Ｈ１／ＰＤ－Ｌ１、Ｂ７－Ｈ２、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ６、Ｂ７－Ｈ７、ＢＡＦＦ Ｒ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＢＡＦＦ／ＢＬｙＳ／ＴＮＦＳＦ１３Ｂ、ＢＬＡＭＥ／ＳＬＡＭＦ８、ＢＴＬＡ／ＣＤ２７２、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ１０３、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤ１５０、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２、ＣＤ２００、ＣＤ２２９／ＳＬＡＭＦ３、ＣＤ２７リガンド／ＴＮＦＳＦ７、ＣＤ２７／ＴＮＦＲＳＦ７、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ２Ｆ－１０／ＳＬＡＭＦ９、ＣＤ３０リガンド／ＴＮＦＳＦ８、ＣＤ３０／ＴＮＦＲＳＦ８、ＣＤ３００ａ／ＬＭＩＲ１、ＣＤ４、ＣＤ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ５、ＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５、ＣＤ４８／ＳＬＡＭＦ２、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９Ｄ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５３、ＣＤ５８／ＬＦＡ－３、ＣＤ６９、ＣＤ７、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ８２／Ｋａｉ－１、ＣＤ８４／ＳＬＡＭＦ５、ＣＤ９０／Ｔｈｙ１、ＣＤ９６、ＣＤＳ、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＡＣＣ／ＳＬＡＭＦ７、ＣＲＴＡＭ、ＣＴＬＡ－４、ＤＡＰ１２、デクチン－１／ＣＬＥＣ７Ａ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＤＰＰＩＶ／ＣＤ２６、ＤＲ３／ＴＮＦＲＳＦ２５、ＥｐｈＢ６、ＧＡＤＳ、Ｇｉ２４／ＶＩＳＴＡ／Ｂ７－Ｈ５、ＧＩＴＲリガンド／ＴＮＦＳＦ１８、ＧＩＴＲ／ＴＮＦＲＳＦ１８、ＨＬＡクラスＩ、ＨＬＡ－ＤＲ、ＨＶＥＭ／ＴＮＦＲＳＦ１４、ＩＡ４、ＩＣＡＭ－１、ＩＣＯＳ／ＣＤ２７８、イカロス、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、インテグリンα４／ＣＤ４９ｄ、インテグリンα４β１、インテグリンα４β７／ＬＰＡＭ－１、ＩＰＯ－３、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ６、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＸ、ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ７、ＫＩＲＤＳ２、ＬＡＧ－３、ＬＡＴ、ＬＩＧＨＴ／ＴＮＦＳＦ１４、ＬＴＢＲ、Ｌｙ１０８、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、リンホトキシン－α／ＴＮＦ－β、ＮＫＧ２Ｃ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＴＢ－Ａ／ＳＬＡＭＦ６、ＯＸ４０リガンド／ＴＮＦＳＦ４、ＯＸ４０／ＴＮＦＲＳＦ４、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＰＤ－１、ＰＤＣＤ６、ＰＤ－Ｌ２／Ｂ７－ＤＣ、ＰＳＧＬ１、ＲＥＬＴ／ＴＮＦＲＳＦ１９Ｌ、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１）、ＳＬＡＭ／ＣＤ１５０、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ）、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＰ－７６、ＴＡＣＩ／ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＴＣＬ１Ａ、ＴＣＬ１Ｂ、ＴＩＭ－１／ＫＩＭ－１／ＨＡＶＣＲ、ＴＩＭ－４、ＴＬ１Ａ／ＴＮＦＳＦ１５、ＴＮＦ ＲＩＩ／ＴＮＦＲＳＦ１Ｂ、ＴＮＦ－α、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＴＳＬＰ、ＴＳＬＰ Ｒ、ＶＬＡ１、及びＶＬＡ－６からなる群から選択される分子のシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞シグナル伝達ドメインは、複数の共刺激ドメイン、例えば、少なくとも２つ、例えば、少なくとも３、４、又は５つの共刺激ドメインを含む。
Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）
いくつかの実施形態では、遺伝子操作細胞療法において、腫瘍、ウイルス、又は自己免疫タンパク質の抗原などの、標的ポリペプチドのペプチドエピトープ又はＴ細胞エピトープを認識するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）又はその抗原結合部分を発現する、Ｔ細胞などの遺伝子操作された細胞が提供される。
いくつかの実施形態では、「Ｔ細胞受容体」又は「ＴＣＲ」は、可変α鎖及びβ鎖（それぞれＴＣＲα及びＴＣＲβとしても知られている）又は可変γ鎖及びδ鎖（それぞれＴＣＲγ及びＴＣＲδとしても知られている）を含む分子、又はその抗原結合部分であり、ＭＨＣ分子に結合したペプチドに特異的に結合可能である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、αβ形態である。αβ形態及びγδ形態で存在するＴＣＲは、構造的に類似している可能性があるが、それらを発現するＴ細胞は、異なる解剖学的位置又は機能を有することができる。ＴＣＲは、細胞の表面に、又は可溶性形態で見出され得る。
ＴＣＲは、Ｔ細胞（又はＴリンパ球）の表面に見出すことができ、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子に結合した抗原の認識の役割を担うことができる。
特に明記しない限り、「ＴＣＲ」という用語は、完全なＴＣＲ及びその抗原結合部分又は抗原結合断片を含むと理解される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、αβ形態又はγδ形態のＴＣＲを含む、無傷ＴＣＲ又は全長ＴＣＲである。いくつかの実施形態では、αβＴ細胞は、広範な腫瘍反応性γδＴ細胞受容体、例えば、γ９δ２ＴＣＲ形質導入αβＴ細胞をαβＴ細胞に移入することによってがん細胞に対して再指向される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、全長ＴＣＲより短いが、ＭＨＣ－ペプチド複合体に結合するなど、ＭＨＣ分子に結合された特異的ペプチドに結合する抗原結合部分である。場合によっては、ＴＣＲの抗原結合部分又は断片は、全長ＴＣＲ又は無傷ＴＣＲの構造ドメインの一部分のみを含むが、それでも完全なＴＣＲが結合するＭＨＣペプチド複合体などのペプチドエピトープに結合することができる。場合によっては、抗原結合部分は、特異的なＭＨＣ－ペプチド複合体に結合するための結合部位を形成するのに十分な、ＴＣＲの可変α鎖及び可変β鎖などの、ＴＣＲの可変ドメインを含む。ＴＣＲの可変鎖は、ペプチド、ＭＨＣ、及び／又はＭＨＣ－ペプチド複合体の認識に関与する相補性決定領域を含むことができる。
いくつかの実施形態では、ＴＣＲの可変ドメインは、抗原認識及び結合能力及び特異性に対して主要な一因となり得る超可変ループ又は相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲのＣＤＲ又はその組み合わせは、所与のＴＣＲ分子の抗原結合部位の全て又は実質的に全てを形成する。ＴＣＲ鎖の可変領域内の様々なＣＤＲは、フレームワーク領域（ＦＲ）によって分離することができ、フレームワーク領域（ＦＲ）は、ＣＤＲと比較してＴＣＲ分子間のばらつきが少ないことを示すことができる（例えば、Ｊｏｒｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８７：９１３８，１９９０；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．７：３７４５，１９８８を参照のこと、また、Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：５５，２００３）も参照のこと）。いくつかの実施形態では、ＣＤＲ３は、抗原結合若しくは特異性の役割を担う主要なＣＤＲであるか、又は抗原認識及び／若しくはペプチド－ＭＨＣ複合体の処理されたペプチド部分との相互作用に関して、所与のＴＣＲ可変領域上の３つのＣＤＲの中で最も重要である。場合によっては、α鎖のＣＤＲ１は、特定の抗原ペプチドのＮ末端部と相互作用することがある。状況によっては、β鎖のＣＤＲ１は、ペプチドのＣ末端部と相互作用することがある。状況によっては、ＣＤＲ２は、ＭＨＣ－ペプチド複合体のＭＨＣ部分との相互作用又はＭＨＣ－ペプチド複合体のＭＨＣ部分の認識に最も強く寄与するか、又はその役割を担う主要なＣＤＲである。いくつかの実施形態では、β鎖の可変領域は、更なる超可変領域（ＣＤＲ４又はＨＶＲ４）を含み、超可変領域は、抗原認識ではなく超抗原結合に関与することができる。
いくつかの実施形態では、ＴＣＲはまた、定常ドメイン、膜貫通ドメイン、及び／又は短い細胞質尾部も含む。場合によっては、ＴＣＲの各鎖は、１つのＮ末端免疫グロブリン可変ドメイン、１つの免疫グロブリン定常ドメイン、膜貫通領域、及びＣ末端の短い細胞質尾部を所有する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、シグナル伝達の媒介に関与するＣＤ３複合体の不変タンパク質と会合している。
いくつかの実施形態では、ＴＣＲ鎖は、１つ以上の定常ドメインを含む。例えば、所与のＴＣＲ鎖（例えば、α鎖又はβ鎖）の細胞外部分は、可変ドメイン（例えば、Ｖα又はＶβ、典型的にはＫａｂａｔらのＫａｂａｔの番号付け「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」，ＵＳ Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，１９９１，５ｔｈ ｅｄ．に基づくアミノ酸１～１１６個）、及び細胞膜に隣接する定常ドメイン（例えば、α鎖定常ドメイン若しくはＣα、典型的にはＫａｂａｔの番号付けに基づく鎖の位置１１７～２５９、又はβ鎖定常ドメイン若しくはＣβ、典型的にはＫａｂａｔに基づく鎖の位置１１７～２９５）などの、２つの免疫グロブリン様ドメインを含むことができる。例えば、場合によっては、２つの鎖によって形成されるＴＣＲの細胞外部分は、２つの膜近位定常ドメインと、２つの膜遠位可変ドメインと、を含み、これらの可変ドメインは、各々ＣＤＲを含む。ＴＣＲの定常ドメインには、システイン残基がジスルフィド結合を形成する短い接続配列を含むことができ、それにより、ＴＣＲの２つの鎖が連結される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、α鎖及びβ鎖の各々に追加のシステイン残基を有しているため、ＴＣＲは、定常ドメインに２つのジスルフィド結合を含む。
いくつかの実施形態では、ＴＣＲ鎖は、膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、正に帯電している。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ鎖は、細胞質尾部を含む。場合によっては、その構造により、ＴＣＲがＣＤ３及びそのサブユニットなどの他の分子と会合することが可能である。例えば、膜貫通領域を有する定常ドメインを含むＴＣＲは、タンパク質を細胞膜に固定し、ＣＤ３シグナル伝達装置又は複合体の不変サブユニットと会合することができる。ＣＤ３シグナル伝達サブユニット（例えば、ＣＤ３ｙ鎖、ＣＤ３５鎖、ＣＤ３ｓ鎖、及びＣＤ３ζ鎖）の細胞内尾部は、ＴＣＲ複合体のシグナル伝達能力に関与する１つ以上の免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ又はＩＴＡＭを含む。
いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、２つの鎖α及びβ（若しくは任意選択でγ及びδ）のヘテロ二量体であるか、又は単鎖ＴＣＲ構築物である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、ジスルフィド結合若しくは複数のジスルフィド結合などによって連結された２つの別個の鎖（α鎖及びβ鎖、又はγ鎖及びδ鎖）を含むヘテロ二量体である。
いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、実質的に全長のコード配列が容易に入手できるＶα、Ｖβ鎖の配列などの、既知のＴＣＲ配列から生成される。細胞源からＶ鎖配列を含む全長ＴＣＲ配列を取得する方法は、周知である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲをコードする核酸は、所与の細胞若しくは複数の細胞内の、又はこれらから単離されたＴＣＲをコードする核酸のポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）増幅、又は公的に入手可能なＴＣＲ ＤＮＡ配列の合成など、様々な供給源から得られる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞）、Ｔ細胞ハイブリドーマ、又は他の公的に入手可能な供給源などの細胞などの生物学的供給源から得られる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、インビボで単離された細胞から得られる。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、生検腫瘍サンプルから得られる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、胸腺で選択されたＴＣＲである。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、ネオエピトープ制限のＴＣＲである。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、培養されたＴ細胞ハイブリドーマ又はクローンである。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ又はその抗原結合部分は、ＴＣＲの配列の知識から合成的に生成される。
いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、標的ポリペプチド抗原又はその標的Ｔ細胞エピトープに対する候補ＴＣＲのライブラリーのスクリーニングから同定又は選択されたＴＣＲから生成される。ＴＣＲライブラリーは、ＰＢＭＣ、脾臓、又は他のリンパ器官に存在する細胞を含む、対象から単離されたＴ細胞からＶα及びＶβのレパートリーを増幅することによって生成することができる。場合によっては、Ｔ細胞は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）から増幅される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲライブラリーは、ＣＤ４＋細胞又はＣＤ８＋細胞から生成される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、正常で健康な対象のＴ細胞源、例えば、正常なＴＣＲライブラリーから増幅される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、疾病の対象のＴ細胞源、例えば、疾病のＴＣＲライブラリーから増幅される。いくつかの実施形態では、縮重プライマーは、ヒトから得られたＴ細胞などのサンプルにおけるＲＴ－ＰＣＲなどにより、Ｖα及びＶβの遺伝子レパートリーを増幅するために使用される。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖライブラリーは、増幅産物がクローン化されるか、又はリンカーによって分離されるように組み立てられるナイーブＶα及びＶβライブラリーから組み立てられる。対象及び細胞の供給源に応じて、ライブラリーは、ＨＬＡアレル特異的であり得る。あるいは、いくつかの実施形態では、ＴＣＲライブラリーは、親ＴＣＲ分子又は足場ＴＣＲ分子の変異誘発又は多様化によって生成される。いくつかの態様では、ＴＣＲは、例えば、α鎖又はβ鎖の変異誘発などによる指向性進化を受ける。場合によっては、ＴＣＲのＣＤＲ内の特定の残基が変更される。いくつかの実施形態では、選択されたＴＣＲは、親和性成熟によって修飾される。抗原特異的Ｔ細胞は、ペプチドに対するＣＴＬ活性を評価するためのスクリーニングなどによって選択することができる。いくつかの態様では、例えば、抗原特異的Ｔ細胞上に存在するＴＣＲは、結合活性、例えば、抗原に対する特定の親和性又は結合活性などによって選択することができる。
いくつかの実施形態では、ＴＣＲ又はその抗原結合部分は、修飾又は遺伝子操作されたものである。いくつかの実施形態では、指向性進化法は、特異的ＭＨＣ－ペプチド複合体に対するより高い親和性など、特性が変化したＴＣＲを生成するために使用される。いくつかの実施形態では、指向性進化は、酵母ディスプレイ（Ｈｏｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，（２００３）Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ，４，５５－６２；Ｈｏｌｌｅｒｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｐｒｏｃ Ｎａｔ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，９７，５３８７－９２）、ファージディスプレイ（Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２３，３４９－５４）、又はＴ細胞ディスプレイ（Ｃｈｅｒｖｉｎ ｅｔ ａｌ，（２００８）Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，３３９，１７５－８４）を含むが、これらに限定されないディスプレイ方法によって達成される。いくつかの実施形態では、ディスプレイ手法は、既知の親ＴＣＲ又は参照ＴＣＲを遺伝子操作又は修飾することを伴う。例えば、野生型ＴＣＲは、ＣＤＲの１つ以上の残基が変異している変異誘発型ＴＣＲを作製するためのテンプレートとして使用することができ、所望の標的抗原に対するより高い親和性など、所望の変化した特性を有する変異体が選択される。
いくつかの実施形態では、目的のＴＣＲを作製又は生成する際に使用する標的ポリペプチドのペプチドは、既知であるか、又は当業者によって容易に同定される。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ又は抗原結合部分の生成における使用に好適なペプチドは、目的の標的ポリペプチドにおけるＨＬＡ制限モチーフの存在に基づいて決定される。いくつかの実施形態では、ペプチドは、当業者に知られているコンピュータ予測モデルを使用して同定される。
いくつかの実施形態では、ＴＣＲ又はその抗原結合部分は、結合特性などの１つ以上の特性が変更された、組換え生成された天然タンパク質又はその変異体であり得る。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、ヒト、マウス、ラット、又は他の哺乳動物などの、様々な動物種のうちの１つに由来し得る。ＴＣＲは、細胞結合形態又は可溶形態であってもよい。いくつかの実施形態では、提供される方法の目的のために、ＴＣＲは、細胞結合形態で細胞の表面に発現される。
いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、全長ＴＣＲである。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、抗原結合タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、二量体ＴＣＲ（ｄＴＣＲ）である。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、単鎖ＴＣＲ（ｓｃ－ＴＣＲである）。いくつかの実施形態では、ｄＴＣＲ又はｓｃＴＣＲは、国際公開第０３／０２０７６３号、同第０４／０３３６８５号、又は同第２０１１／０４４１８６号に記載されている構造を有する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、膜貫通配列に対応する配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、細胞質配列に対応する配列を含む。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、ＣＤ３とＴＣＲ複合体を形成可能である。いくつかの実施形態では、ｄＴＣＲ又はｓｃＴＣＲを含むＴＣＲのいずれかを、Ｔ細胞の表面に活性ＴＣＲを生じるシグナル伝達ドメインに連結することができる。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、細胞の表面に発現される。
いくつかの実施形態では、ｄＴＣＲは、ＴＣＲα鎖可変領域配列に対応する配列が、ＴＣＲα鎖定常領域細胞外配列に対応する配列のＮ末端に融合されている第１のポリペプチドと、ＴＣＲβ鎖可変領域配列に対応する配列が、ＴＣＲβ鎖定常領域細胞外配列に対応する配列のＮ末端に融合されている第２のポリペプチドと、を含み、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドは、ジスルフィド結合によって連結されている。いくつかの実施形態では、この結合は、天然の二量体αβＴＣＲに存在する天然の鎖間ジスルフィド結合に相当し得る。いくつかの実施形態では、鎖間ジスルフィド結合は、天然のＴＣＲには存在しない。例えば、いくつかの実施形態では、１つ以上のシステインを、ｄＴＣＲポリペプチド対の定常領域細胞外配列に組み込むことができる。場合によっては、天然及び非天然両方のジスルフィド結合が望ましい場合がある。いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、膜に固定するための膜貫通配列を含む。
いくつかの実施形態では、ｄＴＣＲは、可変αドメイン、定常αドメイン、及び定常αドメインのＣ末端に結合した第１の二量体化モチーフを含むＴＣＲａ鎖と、可変βドメイン、定常βドメイン、及び定常βドメインのＣ末端に結合した第１の二量体化モチーフを含むＴＣＲβ鎖と、を含み、第１の二量体化モチーフ及び第２の二量体化モチーフは、容易に相互作用して、ＴＣＲα鎖とＴＣＲβ鎖とを連結する第１の二量体化モチーフ中のアミノ酸と第２の二量体化モチーフ中のアミノ酸との間に共有結合を形成する。
いくつかの実施形態では、ＴＣＲは、ｓｃＴＣＲである。ｓｃＴＣＲは、当業者に知られている方法を使用して生成することができる、例えば、Ｓｏｏ Ｈｏｏ，Ｗ．Ｆ．ｅｔ ａｈ，ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）８９，４７５９（１９９２）、Ｗｉｌｆｉｎｇ，Ｃ．及びＰｌｉｃｋｔｈｕｎ，Ａ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４２，６５５（１９９４）、Ｋｕｒｕｃｚ，Ｉ．ｅｔ ａｌ，ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）９０３８３０（１９９３）、国際公開第９６／１３５９３号、同第９６／１８１０５号、同第９９／６０１２０号、同第０９９／１８１２９号、同第０３／０２０７６３号、同第２０１１／０４４１８６号、及びＳｃｈｌｕｅｔｅｒ，Ｃ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２５６，８５９（１９９６）を参照。いくつかの実施形態では、ｓｃＴＣＲは、ＴＣＲ鎖の会合を促進するために導入された非天然ジスルフィド鎖間結合を含む（例えば、国際公開第０３／０２０７６３号を参照）。いくつかの実施形態では、ｓｃＴＣＲは、そのＣ末端に融合された異種由来（ｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓ）ロイシンジッパーが鎖会合を容易にする非ジスルフィド連結切断型ＴＣＲである（例えば、国際公開第９９／６０１２０号を参照のこと）。いくつかの実施形態では、ｓｃＴＣＲは、ペプチドリンカーを介してＴＣＲβ可変ドメインに共有連結したＴＣＲα可変ドメインを含む（例えば、国際公開第Ｗ０９９／１８１２９号を参照のこと）。
いくつかの実施形態では、ｓｃＴＣＲは、ＴＣＲα鎖可変領域に対応するアミノ酸配列によって構成される第１のセグメントと、ＴＣＲβ鎖定常ドメイン細胞外配列に対応するアミノ酸配列のＮ末端に融合したＴＣＲβ鎖可変領域配列に対応するアミノ酸配列によって構成される第２のセグメントと、第１のセグメントのＣ末端を第２のセグメントのＮ末端に連結するリンカー配列と、を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＴＣＲは、ａ鎖細胞外定常ドメイン配列のＮ末端に融合したα鎖可変領域配列によって構成される第１のセグメントと、β鎖細胞外定常及び膜貫通配列のＮ末端に融合したβ鎖可変領域配列によって構成される第２のセグメントと、任意選択的に、第１のセグメントのＣ末端を第２のセグメントのＮ末端に連結するリンカー配列と、を含む。
いくつかの実施形態では、ｓｃＴＣＲは、β鎖細胞外定常ドメイン配列のＮ末端に融合したＴＣＲβ鎖可変領域配列によって構成される第１のセグメントと、ａ鎖細胞外定常及び膜貫通配列のＮ末端に融合したａ鎖可変領域配列によって構成される第２のセグメントと、任意選択的に、第１のセグメントのＣ末端を第２のセグメントのＮ末端に連結するリンカー配列と、を含む。
いくつかの実施形態では、第１のＴＣＲセグメントと第２のＴＣＲセグメントとを連結するｓｃＴＣＲのリンカーは、ＴＣＲ結合特異性を保持しながら、単一のポリペプチド鎖を形成することができる任意のリンカーである。いくつかの実施形態では、リンカー配列は、例えば、式－Ｐ－ＡＡ－Ｐ－を有してもよく、Ｐはプロリンであり、ＡＡは、アミノ酸がグリシン及びセリンであるアミノ酸配列を表す。いくつかの実施形態では、第１のセグメント及び第２のセグメントは、これらの可変領域配列がこのような結合のために配向されるように対にされる。したがって、場合によっては、リンカーは、第１のセグメントのＣ末端と第２のセグメントのＮ末端との間の距離、又はその逆の距離にまたがるのに十分な長さを有するが、標的リガンドに対するｓｃＴＣＲの結合を阻害又は低下させほど長くはない。いくつかの実施形態では、リンカーは、１０～３０個のアミノ酸又は２６～４１個のアミノ酸残基、例えば、２９、３０、３１、又は３２個のアミノ酸など、約１０～４５個のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、式－ＰＧＧＧ－（ＳＧＧＧＧ）５－Ｐを有し、Ｐはプロリン、Ｇはグリシン、Ｓはセリンである。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列ＧＳＡＤＤＡＫＫＤＡＡＫＫＤＧＫＳを有する。いくつかの実施形態では、ｓｃＴＣＲは、ａ鎖の定常ドメインの免疫グロブリン領域の残基をβ鎖の定常ドメインの免疫グロブリン領域の残基に連結する共有結合性ジスルフィド結合を含む。いくつかの実施形態では、天然ＴＣＲには鎖間ジスルフィド結合が存在しない。例えば、いくつかの実施形態では、１つ以上のシステインを、ｓｃＴＣＲポリペプチドの第１のセグメント及び第２のセグメントの定常領域細胞外配列に組み込むことができる。場合によっては、天然及び非天然両方のジスルフィド結合が望ましい場合がある。導入された鎖間ジスルフィド結合を含むｄＴＣＲ又はｓｃＴＣＲのいくつかの実施形態では、天然ジスルフィド結合は存在しない。いくつかの実施形態では、天然鎖間ジスルフィド結合を形成する天然システインのうちの１つ以上は、セリン又はアラニンなどの別の残基に置換される。いくつかの実施形態では、導入されたジスルフィド結合は、第１のセグメント及び第２セグメント上の非システイン残基をシステインに変異させることによって形成される。ＴＣＲの非天然ジスルフィド結合の例は、公開された国際公開第２００６／０００８３０号に記載されている。
いくつかの実施形態では、ＴＣＲ又はその抗原結合断片は、標的抗原に対する平衡結合定数が、（約）１０－５～（約）１０－１２Ｍ、及びその中の全ての個々の値及び範囲を有する親和性を示す。いくつかの実施形態では、標的抗原は、ＭＨＣ－ペプチド複合体又はリガンドである。
いくつかの実施形態では、遺伝子操作細胞療法は、多標的化戦略（例えば、２つ以上の遺伝子操作された受容体の細胞、例えば、Ｔ細胞での発現、各々が異なる抗原の同じものを認識し、典型的には、各々が異なる細胞内シグナル伝達成分を含む）を含む。このような多標的化戦略は、例えば、ＷＯ第２０１４０５５６６８（Ａ１）号（活性化ＣＡＲと共刺激ＣＡＲとの組み合わせ、例えば、オフターゲットの、例えば、正常細胞上に個々に存在するが、治療される疾病又は疾患の細胞上にのみ一緒に存在する２つの異なる抗原を標的化することについて記載している）及びＦｅｄｏｒｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，５（２１５）（２０１３）（活性化ＣＡＲが正常細胞又は非疾病細胞及び治療される疾病又は疾患の細胞の両方で発現する１つの抗原に結合し、抑制性ＣＡＲが正常細胞又は治療することが望ましくない細胞のみで発現する別の抗原に結合するものなど、活性化ＣＡＲ及び抑制性ＣＡＲを発現する細胞について記載している）に記載されている。
例えば、いくつかの実施形態では、細胞、例えば、Ｔ細胞は、第１の遺伝子操作された抗原受容体（例えば、ＣＡＲ又はＴＣＲ）を発現する受容体を含み、これは、一般に、第１の受容体によって認識される抗原、例えば、第１の抗原への特異的結合時に、細胞に活性化シグナルを誘導することができる。いくつかの実施形態では、細胞は、第２の遺伝子操作された抗原受容体（例えば、ＣＡＲ又はＴＣＲ）、例えば、一般に、第２の受容体によって認識される第２の抗原への特異的結合時に、免疫細胞への共刺激シグナルを誘導することができるキメラ共刺激受容体を更に含む。いくつかの実施形態では、第１の抗原と第２の抗原とは、同じである。いくつかの実施形態では、第１の抗原と第２の抗原とは、異なる。
いくつかの実施形態では、第１の受容体単独のライゲーションも、第２の受容体単独のライゲーションも、強力な免疫応答を誘導しない。いくつかの態様では、１つの受容体のみが連結される場合、細胞は、抗原に対して寛容化若しくは無反応になるか、かつ／又は増殖若しくは因子の分泌若しくはエフェクター機能の実行が阻害されるか、若しくは誘導されなくなる。しかしながら、いくつかのこのような実施形態では、第１の抗原及び第２の抗原を発現する細胞に遭遇したときなど、複数の受容体が連結されたときに、例えば、１つ以上のサイトカインの分泌、増殖、持続性、及び／又は標的細胞の細胞傷害性殺傷などの免疫エフェクター機能の実行によって示されるように、完全な免疫活性化又は免疫刺激など、所望の応答が達成される。
いくつかの実施形態では、２つの受容体は、それぞれ、細胞への活性化シグナルと抑制性シグナルとを誘導し、その結果、受容体の１つによるその抗原への結合は、細胞を活性化するか、又は応答を誘導するが、第２の抑制性受容体によるその抗原への結合は、その応答を抑制又は減衰するシグナルを誘発する。例としては、活性化ＣＡＲと抑制性ＣＡＲ又はｉＣＡＲとの組み合わせがある。このような戦略は、例えば、活性化ＣＡＲが疾病又は疾患において発現するが、正常細胞でも発現する抗原に結合し、抑制性受容体が正常細胞では発現するが疾病又は疾患の細胞では発現しない別個の抗原に結合する場合に使用され得る。
いくつかの実施形態では、多標的化戦略は、特定の疾病若しくは疾患に関連する抗原が非疾病細胞上で発現される、かつ／又は遺伝子操作された細胞自体上で、一時的に（例えば、遺伝子工学に関連した刺激時）又は永続的のいずれかで発現される場合に使用される。このような場合では、２つの別個の個々に特異的な抗原受容体のライゲーションを必要とすることにより、特異性、選択性、及び／又は有効性が向上する場合がある。
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、抗原非制限サイトカイン開始性殺傷のためにリダイレクトされたＴ細胞（Ｔ ｃｅｌｌｓ ｒｅｄｉｒｅｃｔｅｄ ｆｏｒ ａｎｔｉｇｅｎ－ｕｎｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ ｃｙｔｏｋｉｎｅ－ｉｎｉｔｉａｔｅｄ ｋｉｌｌｉｎｇ、ＴＲＵＣＫ）になるように遺伝子操作され、これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉ Ｍ ｅｔ ａｌ．Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｌ Ｔｈｅｒ．２０１５；１５（８）：１１４５－５４に記載されているものなど、ＣＡＲ－Ｔ活性を増強するためのサイトカイン産生のための遺伝子、又は毒性を防止するための自殺遺伝子をコードする。
いくつかの実施形態では、複数の抗原、例えば、第１の抗原及び第２の抗原は、がん細胞などの標的化される細胞、組織、又は疾病若しくは疾患上で発現される。いくつかの態様では、細胞、組織、疾病、又は疾患は、多発性骨髄腫又は多発性骨髄腫細胞である。いくつかの実施形態では、複数の抗原のうちの１つ以上は、一般に、正常又は非疾病の細胞又は組織、及び／又は遺伝子操作された細胞自体など、細胞療法で標的化することが望ましくない細胞上でも発現される。このような実施形態では、細胞の応答を達成するために複数の受容体のライゲーションを必要とすることによって、特異性及び／又は有効性が達成される。
いくつかの実施形態では、例えば、本明細書に記載の方法を使用してがんを治療するための、遺伝子操作されたＴＣＲには、がん関連抗原に応答する免疫細胞活性化機能を有するＴＣＲが含まれる。非限定的な例としては、例えば、国際公開第２００３／０２０７６３号、同第２００４／０３３６８５号、同第２００４／０４４００４号、同第２００５／１１４２１５号、同第２００６／０００８３０号、同第２００８／０３８００２号、同第２００８／０３９８１８号、同第２００４／０７４３２２号、同第２００５／１１３５９５号、同第２００６／１２５９６２号、Ｓｔｒｏｍｍｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ．２０１４；２５７（１）：１４５－６４、Ｓｃｈｍｉｔｔ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．２０１３；１２２（３）：３４８－５６、Ｃｈａｐｕｌｓ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ．２０１３；５（１７４）：１７４ｒａ２７、Ｔｈａｘｔｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｈｕｍ Ｖａｃｃｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２０１４；１０（１１）：３３１３－２１（ＰＭＩＤ：２５４８３６４４）、Ｇｓｃｈｗｅｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ．２０１４；２５７（１）：２３７－４９（ＰＭＩＤ：２４３２９８０１）、Ｈｉｎｒｉｃｈｓ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ．２０１４；２５７（１）：５６－７１（ＰＭＩＤ：２４３２９７８９）、Ｚｏｅｔｅ ｅｔ ａｌ．Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１３；４：２６８（ＰＭＩＤ：２４０６２７３８）、Ｍａｒｒ ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１２；１６７（２）：２１６－２５（ＰＭＩＤ：２２２３５９９７）、Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．２０１２；６４（８）：７５６－６２（ＰＭＩＤ：２２１７８９０４）、Ｃｈｈａｂｒａ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｗｏｒｌｄ Ｊｏｕｒｎａｌ．２０１１；１１：１２１－９（ＰＭＩＤ：２１２１８２６９）、Ｂｏｕｌｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００５；１４２（３）：４５４－６０（ＰＭＩＤ：１６２９７１５７）、Ｓａｍｉ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ．２００７；２０（８）：３９７－４０３、Ｂｏｕｌｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．２００３；１６（９）：７０７－１１、Ａｓｈｆｉｅｌｄ ｅｔ ａｌ．Ｉ Ｄｒｕｇｓ．２００６；９（８）：５５４－９、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００５；２３（３）：３４９－５４、Ｄｕｎｎ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．２００６；１５（４）：７１０－２１、Ｌｉｄｄｙ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１０；４５（２）、Ｌｉｄｄｙ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｍｅｄ．２０１２；１８（６）：９８０－７、Ｏａｔｅｓ，ｅｔ ａｌ．Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．２０１３；２（２）：ｅ２２８９１、ＭｃＣｏｒｍａｃｋ，ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２０１３ Ａｐｒ；６２（４）：７７３－８５、Ｂｏｓｓｉ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２０１４；６３（５）：４３７－４８、及びＯａｔｅｓ，ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１５ Ｏｃｔ；６７（２ Ｐｔ Ａ）：６７－７４（それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているものを含む、抗原特異的ＴＣＲ、モノクローナルＴＣＲ（ＭＴＣＲ）、単鎖ＭＴＣＲ、高親和性ＣＤＲ２変異体ＴＣＲ、ＣＤＩ結合ＭＴＣＲ、高親和性ＮＹ－ＥＳＯ ＴＣＲ、ＶＹＧ ＨＬＡ－Ａ２４テロメラーゼＴＣＲが挙げられる。いくつかの例では、有用なＴＣＲには、抗原：ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＲＴ－１、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＣＥＡ、ｇｐ１００、ＷＴ１、ＨＢＶ、ｇａｇ（ＷＴ及び／又はａ／６）、Ｐ５３、ＤＲ４に結合したＴＲＡＩＬ、ＨＰＶ－１６（Ｅ６及び／又はＥ７）、サバイビン、ＫＲＡＳ変異体、ＳＳＸ２、ＭＡＧＥ－Ａ１０、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＡＦＰなどのうちの１つを標的化するものが含まれる。
遺伝子操作細胞療法における細胞と細胞工学
本明細書に記載の遺伝子操作細胞療法での、受容体を発現し、投与される細胞の中には、遺伝子操作された細胞がある。細胞工学には、レトロウイルス形質導入、トランスフェクション、又は形質転換などによる、細胞を含む組成物への組換え又は遺伝子操作された成分をコードする核酸の導入が含まれ得る。
細胞は、哺乳動物細胞などの真核細胞であってもよく、典型的にはヒト細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、血液、骨髄、リンパ、又はリンパ器官に由来し、自然免疫又は適応免疫の細胞などの免疫系の細胞、例えば、樹状細胞（ＤＣ）、単球、マクロファージ、及びリンパ球（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、又はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞）を含む骨髄細胞又はリンパ球細胞である。他の例示的な細胞には、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）を含む多分化能幹細胞及び多能性幹細胞などの幹細胞が含まれる。細胞は、対象から直接単離されたもの、及び／又は対象から単離されて凍結されたものなどの初代細胞であり得る。いくつかの実施形態では、細胞は、機能、活性化状態、成熟度、分化の可能性、拡大、再循環、局在化、及び／又は持続能力、抗原特異性、抗原受容体の種類、特定の器官若しくは区画における存在、マーカー若しくはサイトカイン分泌プロファイル、及び／又は分化の程度によって定義されるような、全Ｔ細胞集団、ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞、及びこれらのサブ集団などの、Ｔ細胞又は他の細胞型の１つ以上のサブセットを含む。治療される対象に関して、細胞は、同種異系及び／又は自家であり得る。本方法の中には、既製の方法も含まれる。いくつかの態様では、既製技術などでは、細胞は、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）などの幹細胞など、多能性及び／又は多分化能性である。いくつかの実施形態では、本方法は、凍結保存の前又は後に、対象から細胞を単離すること、それらを調製、処理、培養、及び／又は遺伝子操作すること、並びにそれらを同じ対象に再導入することを含む。Ｔ細胞及び／又はＣＤ４＋細胞及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞のサブタイプ及びサブ集団の中には、ナイーブＴ（ＴＮ）細胞、エフェクターＴ細胞（ＴＥＦＦ）、メモリーＴ細胞及びそのサブタイプ、例えば、幹細胞メモリーＴ（ＴＳＣＭＸセントラルメモリーＴ（ＴＣＭＸエフェクターメモリーＴ（ＴＥＭ）、若しくは最終分化したエフェクターメモリーＴ細胞など、、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、未熟Ｔ細胞、成熟Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、粘膜関連不変Ｔ（ＭＡＩＴ）細胞、天然に存在する適応制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞、ＴＨ１細胞、ＴＨ２細胞、ＴＨ３細胞、ＴＨ１７細胞、ＴＨ９細胞、ＴＨ２２細胞などのヘルパーＴ細胞、濾胞性ヘルパーＴ細胞、α／βＴ細胞、及びデルタ／γＴ細胞が存在する。
いくつかの実施形態では、細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。いくつかの実施形態では、細胞は、単球又は顆粒球、例えば、骨髄細胞、マクロファージ、好中球、樹状細胞、マスト細胞、好酸球、及び／又は好塩基球を含む。
いくつかの実施形態では、核酸は、異種由来、例えば、細胞又は細胞から得られるサンプル中には通常は存在しないものであり、例えば、別の生物又は細胞から得られる核酸であり、それは、例えば、通常は、遺伝子操作される細胞及び／又はこのような細胞が由来する生物中に見出されない核酸である。いくつかの実施形態では、核酸は、複数の異なる細胞型からの様々なドメインをコードする核酸のキメラ性の組み合わせを含むものを含む、自然界には見出されない核酸など、天然に存在しない。
いくつかの実施形態では、遺伝子操作された細胞の調製には、１つ以上の培養工程及び／又は調製工程が含まれる。ＣＡＲなどのトランスジェニック受容体をコードする核酸を導入するための細胞は、生体サンプル、例えば、対象から得られるか、又は対象に由来するサンプルなどのサンプルから単離することができる。いくつかの実施形態では、細胞が単離される対象は、疾病若しくは疾患を有する対象、又は細胞療法を必要とする対象、又は細胞療法が投与される対象である。いくつかの実施形態における対象は、細胞が単離、処理、及び／又は遺伝子操作される、遺伝子操作細胞療法などの、特定の治療的介入を必要とするヒトである。
したがって、いくつかの実施形態における細胞は、初代細胞、例えば、初代ヒト細胞である。サンプルには、対象から直接採取した組織、体液、及び他のサンプルだけでなく、分離、遠心分離、遺伝子操作（例えば、ウイルスベクターによる形質導入）、洗浄、及び／又はインキュベーションなどの１つ以上の処理工程から得られたサンプルが含まれ得る。生体サンプルは、生物学的供給源から直接得られたサンプル、又は処理されたサンプルであり得る。生体サンプルには、血液、血漿、血清、脳脊髄液、滑液、尿、及び汗などの体液、組織、及び器官サンプル（それらに由来する処理サンプルを含む）が含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの態様では、細胞が由来するか又は単離されるサンプルは、血液又は血液由来サンプルであるか、又はアフェレーシス若しくは白血球アフェレーシス産物であるか、又はそれらに由来する。非限定的な例示的なサンプルとしては、全血、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）、白血球、骨髄、胸腺、組織生検、腫瘍、白血病、リンパ腫、リンパ節、腸管関連リンパ組織、粘膜関連リンパ組織、脾臓、他のリンパ組織、肝臓、肺、胃、腸、結腸、腎臓、膵臓、乳房、骨、前立腺、子宮頸部、精巣、卵巣、扁桃腺、若しくは他の器官、及び／又はそれらに由来する細胞が挙げられる。サンプルには、遺伝子操作細胞療法、例えば、養子細胞療法との関連において、自家供給源及び同種異系供給源からのサンプルが含まれる。
いくつかの実施形態では、細胞は、細胞株、例えば、Ｔ細胞株に由来する。いくつかの実施形態における細胞は、異種供給源、例えば、マウス、ラット、非ヒト霊長類、及びブタから得られる。
いくつかの実施形態では、細胞の単離には、１つ以上の調製工程及び／又は非親和性ベースの細胞分離工程が含まれる。いくつかの例では、細胞は、例えば、不要な成分を除去し、所望の成分を濃縮し、特定の試薬に感受性のある細胞を溶解又は除去するために、１つ以上の試薬の存在下で洗浄、遠心分離、及び／又はインキュベートされる。いくつかの例では、細胞は、密度、付着特性、サイズ、感受性、及び／又は特定の成分に対する耐性などの１つ以上の特性に基づいて分離される。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８＋細胞は、例えば、それぞれのサブ集団に関連する表面抗原に基づくポジティブ選択又はネガティブ選択などによって、ナイーブ細胞、セントラルメモリー細胞、エフェクターメモリー細胞、及び／又はセントラルメモリー幹細胞が更に富化されるか、又は枯渇される。いくつかの実施形態では、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）細胞の富化は、投与後の長期生存、拡大、及び／又は生着を向上させるなど、有効性を高めるために行われ、これは、いくつかの態様では、このようなサブ集団において特に堅牢である。Ｔｅｒａｋｕｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．１：７２－８２（２０１２）、Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３５（９）：６８９－７０１（２０１２）を参照のこと。いくつかの実施形態では、ＴＣＭ富化したＣＤ８＋Ｔ細胞とＣＤ４＋Ｔ細胞とを組み合わせると、有効性が更に増強される。
実施形態では、メモリーＴ細胞は、ＣＤ８＋末梢血リンパ球のＣＤ６２Ｌ＋サブセットとＣＤ６２Ｌ－サブセットとの両方に存在する。ＰＢＭＣは、抗ＣＤ８抗体及び抗ＣＤ６２Ｌ抗体を使用するなどして、ＣＤ６２Ｌ－ＣＤ８＋画分及び／又はＣＤ６２Ｌ＋ＣＤ８＋画分を富化又は枯渇させることができる。
いくつかの実施形態では、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）細胞の富化は、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ３、及び／又はＣＤ１２７のポジティブ発現又は高い表面発現に基づいており、いくつかの態様では、ＣＤ４５ＲＡ及び／又はグランザイムＢを発現又は高発現する細胞のネガティブ選択に基づく。いくつかの態様では、ＴＣＭ細胞について富化されたＣＤ８＋集団の単離は、ＣＤ４、ＣＤ１４、ＣＤ４５ＲＡを発現する細胞の枯渇と、ＣＤ６２Ｌを発現する細胞のポジティブ選択又は富化によって行われる。一態様では、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）細胞の富化は、ＣＤ４発現に基づいて選択された細胞のネガティブ画分から開始して行われ、これは、ＣＤ１４及びＣＤ４５ＲＡの発現に基づくネガティブ選択、並びにＣＤ６２Ｌに基づくポジティブ選択に供される。このような選択は、いくつかの態様では同時に行われ、他の態様ではいずれかの順序で連続的に行われる。いくつかの態様では、ＣＤ８＋細胞集団又はサブ集団を調製する際に使用されるのと同じＣＤ４発現ベースの選択工程が、ＣＤ４＋細胞集団又はサブ集団を生成する際にも使用され、その結果、ＣＤ４ベースの分離からのポジティブ画分とネガティブ画分との両方が保持され、任意選択で１つ以上の更なるポジティブ選択工程又はネガティブ選択工程に続いて、本方法の後続工程で使用される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される細胞集団は、複数の細胞表面マーカーについて染色された細胞が流体流で運ばれるフローサイトメトリーを介して収集及び富化（又は枯渇）される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される細胞集団は、分取スケール（ＦＡＣＳ）選別によって収集及び富化（又は枯渇）される。特定の実施形態では、本明細書に記載される細胞集団は、ＦＡＣＳベースの検出システムと組み合わせた微小電気機械システム（ＭＥＭＳ）チップの使用によって収集及び富化（又は枯渇）される（例えば、国際公開第２０１０／０３３１４０号，Ｃｈｏ ｅｔ ａｌ，Ｌａｂ Ｃｈｉｐ １０，１５６７－１５７３（２０１０）、及びＧｏｄｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｐｈｏｔｏｎ．１（５）：３５５－３７６（２００８）を参照のこと）。どちらの場合も、細胞を複数のマーカーで標識できるため、明確に定義されたＴ細胞サブセットを高純度で単離することができる。
いくつかの実施形態では、細胞は、遺伝子操作の前に、又は遺伝子工学と関連してインキュベート及び／又は培養される。インキュベーション工程には、培養、カルチベーション、刺激、活性化、及び／又は増殖が含まれ得る。インキュベーション及び／又は遺伝子操作は、ユニット、チャンバー、ウェル、カラム、チューブ、チュービングセット、バルブ、バイアル、培養皿、バッグ、又は細胞を培養又はカルチベーションするための他の容器などの培養容器内で行われてもよい。いくつかの実施形態では、組成物又は細胞は、刺激条件又は刺激剤の存在下でインキュベートされる。このような条件には、集団内の細胞の増殖、拡大、活性化、及び／又は生存を誘導するため、抗原曝露を模倣するため、かつ／又は組換え抗原受容体の導入などの遺伝子操作のために細胞をプライミングするために設計された条件が含まれる。
条件には、特定の媒地、温度、酸素含有量、二酸化炭素含有量、時間、薬剤、例えば、栄養素、アミノ酸、抗生物質、イオン、及び／又はサイトカイン、ケモカイン、抗原、結合相手、融合タンパク質、組換え可溶性受容体などの刺激因子、並びに細胞を活性化するように設計された任意の他の薬剤のうちの１つ以上が含まれ得る。
いくつかの実施形態では、刺激条件又は刺激剤には、ＴＣＲ複合体の細胞内シグナル伝達ドメインを活性化することができる１つ以上の薬剤、例えば、リガンドが含まれる。いくつかの態様では、薬剤は、Ｔ細胞においてＴＣＲ／ＣＤ３細胞内シグナル伝達カスケードをオンにするか、又は開始する。このような薬剤には、ＴＣＲ成分及び／又は共刺激受容体に特異的な抗体、例えば、ビーズなどの固体支持体に結合した抗ＣＤ３、抗ＣＤ２８などの抗体、及び／又は１つ以上のサイトカインが含まれ得る。任意選択で、拡大方法は、抗ＣＤ３抗体及び／又は抗ＣＤ２８抗体を培地に（例えば、少なくとも約０．５ｎｇ／ｍｌの濃度で）添加する工程を更に含んでもよい。いくつかの実施形態では、刺激剤には、例えば、少なくとも約１０単位／ｍＬのＩＬ－２濃度のＩＬ－２及び／又はＩＬ－１５が含まれる。
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、非分裂末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）などのフィーダー細胞を（例えば、得られる細胞の集団が、拡大される初期集団中の各Ｔリンパ球に対して少なくとも約５、１０、２０、又は４０個以上のＰＢＭＣフィーダー細胞を含むように）培養開始組成物に添加し、（例えば、Ｔ細胞の数を拡大するのに十分な時間）培養物をインキュベートすることによって拡大される。いくつかの態様では、非分裂フィーダー細胞は、ガンマ線を照射したＰＢＭＣフィーダー細胞を含むことができる。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、細胞分裂を防止するために、約３０００～３６００ラドの範囲のガンマ線で照射される。いくつかの態様では、フィーダー細胞は、Ｔ細胞の集団を添加する前に培地に添加される。
いくつかの実施形態では、刺激条件には、ヒトＴリンパ球の増殖に好適な温度、例えば、少なくとも摂氏約２５°Ｃ、一般に少なくとも約３０°Ｃ、及び一般に摂氏３７°Ｃ又は摂氏約３７°Ｃが含まれる。任意選択で、インキュベーションは、非分裂ＥＢＶ形質転換リンパ芽球様細胞（ＬＣＬ）をフィーダー細胞として添加することを更に含むことができる。ＬＣＬは、約６０００～１０，０００ラドの範囲のガンマ線で照射することができる。いくつかの態様におけるＬＣＬフィーダー細胞は、少なくとも約１０：１のＬＣＬフィーダー細胞対初期Ｔリンパ球の比など、任意の好適な量で提供される。
実施形態では、抗原特異的なＣＤ４＋Ｔ細胞及び／又はＣＤ８＋Ｔ細胞などの抗原特異的Ｔ細胞は、ナイーブＴリンパ球又は抗原特異的Ｔリンパ球を抗原で刺激することによって得られる。例えば、抗原特異的Ｔ細胞株又はクローンは、感染した対象からＴ細胞を単離し、この細胞を同じ抗原を用いてインビトロで刺激することによって、サイトメガロウイルス抗原に対して生成することができる。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される遺伝子操作細胞療法は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）療法を含む。ＴＩＬ療法の治療剤には、腫瘍浸潤リンパ球が含まれ得る。腫瘍濾過リンパ球とは、血流を離れて腫瘍に向かって移動したリンパ球（例えば、白血球）を指すことができる。遺伝子操作細胞療法で使用することができる腫瘍浸潤リンパ球には、単核免疫細胞及び多形核免疫細胞の両方、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、好中球、樹状細胞、マスト細胞、好酸球、及び好塩基球が含まれ得る。ＴＩＬは、腫瘍間質内及び腫瘍自体の内部に見られる。治療用途のために、ＴＩＬは、対象の腫瘍から得ることができ、例えば、切除された腫瘍組織から単離することができる。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、外科的に切除された腫瘍からエクスビボで拡大される。単離するには、切除した腫瘍組織を断片化又は分離して単一細胞懸濁液にし、そこから周知の分離手法を介してＴＩＬを単離することができる。複数の個々の培養物を確立し、個別に増殖させ、特定の腫瘍認識についてアッセイすることができる。ＴＩＬは、上述の細胞拡大と同様に、２４個のウェルプレート内で高用量のＩＬ－２を使用して数週間かけて拡大させることができる。次いで、ＴＩＬ株を腫瘍反応性の提示に関して選択にかけることができ、次に、選択されたＴＩＬ株を更に拡大することができる。いくつかの実施形態では、選択されたＴＩＬは、約２週間の期間にわたって抗ＣＤ３活性化を使用する急速拡大プロトコル（ＲＥＰ）で更に拡大される。その後、最後のＲＥＰ後のＴＩＬを腫瘍患者に注入して戻すことができる。
遺伝子操作細胞療法の投与
いくつかの実施形態では、遺伝子操作細胞療法は、細胞療法を受ける対象から、又はそのような対象に由来するサンプルから、細胞が単離及び／又は別様に調製される自家移植によって行われる。したがって、いくつかの態様では、細胞は、治療を必要とする対象、例えば、患者に由来し、単離及び処理後の細胞を、同じ対象に投与する。
いくつかの実施形態では、遺伝子操作細胞療法は、細胞療法を受ける対象又は細胞療法を最終的に受ける対象以外の対象、例えば、第１の対象から細胞が単離及び／又は別様に調製される同種異系移植によって行われる。このような実施形態では、細胞は、次いで、同じ種の異なる対象、例えば、第２の対象に投与される。いくつかの実施形態では、第１の対象と第２の対象とは、遺伝的に同一である。いくつかの実施形態では、第１の対象と第２の対象とは、遺伝的に類似している。いくつかの実施形態では、第２の対象は、第１の対象と同じＨＬＡクラス又はスーパータイプを発現する。
細胞は、任意の好適な手段によって投与することができる。細胞は、腫瘍負荷の低減などの、治療効果を達成するための投与計画で投与される。用量及び投与は、免疫チェックポイントタンパク質のアゴニストの投与スケジュールに部分的に依存することができ、遺伝子操作細胞療法の投与の開始前、開始後、及び／又は開始と同時に投与することができる。遺伝子操作細胞療法の様々な投与スケジュールには、様々な時点にわたる単回投与又は複数回投与、ボーラス投与、及びパルス注入が含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、組換え抗原受容体、例えば、ＣＡＲ若しくはＴＣＲで遺伝子操作されたＴ細胞、又は腫瘍浸潤細胞などの、遺伝子操作細胞療法の細胞は、医薬組成物又は製剤などの組成物又は製剤として提供される。このような組成物は、疾病、疾患、及び障害の治療などにおいて、提供される方法に従って使用することができる。
いくつかの実施形態では、遺伝子操作されたＴ細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞）などの遺伝子操作細胞療法は、薬学的に許容される担体とともに製剤化される。いくつかの態様では、担体の選択は、部分的には、特定の細胞又は薬剤によって、及び／又は投与方法によって決定される。したがって、様々な好適な製剤が存在する。例えば、医薬組成物は、防腐剤を含むことができる。好適な防腐剤としては、例えば、メチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸ナトリウム、及び塩化ベンザルコニウムを挙げることができる。いくつかの態様では、２つ以上の防腐剤の混合物が使用される。防腐剤又はその混合物は、典型的には全組成物の約０．０００１重量％～約２重量％の量で存在する。担体については、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に記載されている。薬学的に許容される担体は、一般に、使用される薬量及び濃度ではレシピエントに対して無毒であり、リン酸、クエン酸、及び他の有機酸などの緩衝液、アスコルビン酸及びメチオニンなどの抗酸化剤、防腐剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチル若しくはベンジルアルコール、メチルパラベン又はプロピルパラベンなどのアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３－ペンタノール、及びｍ－クレゾールなど）、低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド、血清アルブミン、ゼラチン、若しくは免疫グロブリンなどのタンパク質、ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、若しくはリジンなどのアミノ酸、グルコース、マンノース、若しくはデキストリンなどの、単糖類、二糖類、及び他の炭水化物、ＥＤＴＡなどのキレート剤、スクロース、マンニトール、トレハロース、若しくはソルビトールなどの糖類、ナトリウムなどの塩形成性対イオン、金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質複合体）、及び／又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含むが、これらに限定されない。
いくつかの態様では、緩衝剤が組成物中に含まれる。好適な緩衝剤としては、例えば、クエン酸、クエン酸ナトリウム、リン酸、リン酸カリウム、並びに他の様々な酸及び塩が挙げられる。いくつかの態様では、２つ以上の緩衝剤の混合物が使用される。緩衝剤又はその混合物は、典型的には全組成物の約０．００１重量％～約４重量％の量で存在する。投与可能な医薬組成物を調製するための方法が知られている。例示的な方法は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ；２１ｓｔ ｅｄ．（Ｍａｙ１，２００５）により詳細に記載されている。
製剤には、水性懸濁液が含まれ得る。また、製剤又は組成物は、細胞又は薬剤で治療される特定の症状、疾病、又は疾患に有用な複数の活性成分を含むこともでき、それぞれの活性は、互いに悪影響を及ぼさない。このような活性成分は、意図した目的に有効な量で組み合わせて存在するのが適切である。したがって、いくつかの実施形態では、医薬組成物は、化学療法剤、例えば、アスパラギナーゼ、ブスルファン、カルボプラチン、シスプラチン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシ尿素、メトトレキサート、パクリタキセル、リツキシマブ、ビンブラスチン、ビンクリスチンなどの、他の薬学的に活性な薬剤又は薬物を更に含む。
いくつかの実施形態における医薬組成物は、治療上有効量又は予防有効量など、疾病又は疾患を治療するのに有効な量の細胞を含む。いくつかの実施形態における治療効果又は予防効果は、治療対象の定期的な評価によって監視される。状態に応じた数日以上にわたる反復投与の場合、所望の病徴の抑制が生じるまで治療が繰り返される。ただし、他の投薬計画も有用である場合があり、決定することができる。所望の薬量は、組成物の単回ボーラス投与によって、組成物の複数回ボーラス投与によって、又は組成物の連続注入投与によって送達することができる。
細胞は、標準的な投与方法、製剤、及び／又はデバイスを使用して投与することができる。製剤と、組成物の保存及び投与のためのシリンジ及びバイアルなどのデバイスが提供される。細胞に関しては、投与は、自己由来であっても異種由来であってもよい。例えば、免疫応答性細胞又は前駆細胞は、１人の対象から得られ、同じ対象又は異なる適合する対象に投与することができる。末梢血液由来の免疫応答性細胞又はその子孫（例えば、インビボ、エクスビボ、又はインビトロ由来）は、カテーテル投与、全身注射、局所注射、静脈内注射、又は非経口投与を含む局所注射を介して投与することができる。治療組成物（例えば、遺伝子修飾免疫応答性細胞を含む医薬組成物）を投与するとき、単位薬量の注射可能な形態（溶液、懸濁液、エマルション）で製剤化することができる。
製剤には、経口、静脈内、腹腔内、皮下、肺、経皮、筋肉内、鼻腔内、バッカル、舌下、又は坐剤投与用の製剤が含まれる。いくつかの実施形態では、薬剤又は細胞集団は、非経口的に投与される。本明細書で使用される場合、「非経口」という用語には、静脈内、筋肉内、皮下、直腸、膣、及び腹腔内投与が含まれる。いくつかの実施形態では、薬剤又は細胞集団は、静脈内、腹腔内、又は皮下注射による末梢全身送達を使用して対象に投与される。
いくつかの実施形態における組成物は、滅菌液体製剤、例えば、等張水溶液、懸濁液、エマルション、分散液、又は粘性組成物として提供され、いくつかの態様では選択されたｐＨに緩衝され得る。液体製剤は、通常、ゲル、他の粘性組成物、及び固体組成物よりも調製が容易である。加えて、液体組成物は、特に注射による投与がやや簡便である。一方、粘性組成物は、特定の組織とのより長い接触時間を提供するために、適切な粘度範囲内で製剤化することができる。液体組成物又は粘性組成物は、例えば、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール）、及びこれらの好適な混合物を含む溶媒又は分散媒であり得る担体を含むことができる。
滅菌注射用溶液は、滅菌水、生理食塩水、グルコース、デキストロースなどの好適な担体、希釈剤、又は賦形剤との混合物などの溶媒に細胞を組み込むことによって調製することができる。また、組成物は、凍結乾燥することができる。組成物は、投与経路及び所望の調製物に応じて、湿潤剤、分散剤、又は乳化剤（例えば、メチルセルロース）、ｐＨ緩衝剤、ゲル化又は粘度増強添加剤、防腐剤、香味剤、着色剤などの補助剤を含むことができる。いくつかの態様では、好適な調製物を調製するために標準テキストが参照され得る。
抗菌防腐剤、抗酸化剤、キレート剤、及び緩衝剤を含む、組成物の安定性及び滅菌性を高める様々な添加剤を添加することができる。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などによって確実に行うことができる。
インビボ投与に使用される製剤は、一般に滅菌である。滅菌性は、例えば、滅菌濾過膜を通した濾過によって容易に達成され得る。
疾病の治療の場合、適切な薬量は、治療される疾病の種類、薬剤又は複数の薬剤の種類、細胞又は組換え受容体の種類、疾病の重症度及び経過、薬剤又は細胞の投与目的が予防目的あるいは治療目的のどちらであるか、以前の療法、対象の病歴及び薬剤又は細胞に対する反応、並びに主治医の判断に依存し得る。組成物は、いくつかの実施形態では、一度に、又は一連の治療にわたって対象に適切に投与される。
場合によっては、細胞療法は、細胞を含む単一の医薬組成物として投与される。いくつかの実施形態では、所与の用量は、細胞又は薬剤の単回ボーラス投与によって投与される。いくつかの実施形態では、それは、例えば、３日以内の期間にわたる細胞若しくは薬剤の複数回ボーラス投与によって、又は細胞若しくは薬剤の連続注入投与によって投与される。
いくつかの実施形態では、提供される方法に従って、ある用量の細胞が対象に投与される。いくつかの実施形態では、用量のサイズ又はタイミングは、対象における特定の疾病又は疾患に応じて決定される。
特定の実施形態では、細胞、又は細胞のサブタイプの個々の集団は、例えば、１０万～約５００億個の細胞（例えば、約５００万個の細胞、約２５００万個の細胞、約５億個の細胞、約１０億個の細胞、約５０億個の細胞、約２００億個の細胞、約３００億個の細胞、約４００億個の細胞、又は前述の値のいずれか２つによって定義される範囲）、１００万～約５００億個の細胞（例えば、約５００万個の細胞、約２５００万個の細胞、約５億個の細胞、約１０億個の細胞、約５０億個の細胞、約２００億個の細胞、約３００億個の細胞、約４００億個の細胞、又は前述の値のいずれか２つによって定義される範囲）、約１０００万～約１０００億個の細胞（例えば、約２０００万個の細胞、約３０００万個の細胞、約４０００万個の細胞、約６０００万個の細胞、約７０００万個の細胞、約８０００万個の細胞、約９０００万個の細胞、約１００億個の細胞、約２５０億個の細胞、約５００億個の細胞、約７５０億個の細胞、約９００億個の細胞、又は前述の値のいずれか２つによって定義される範囲）、場合によっては、約１億個の細胞～約５００億個の細胞（例えば、約１億２０００万個の細胞、約２億５０００万個の細胞、約３億５０００万個の細胞、約４億５０００万個の細胞、約６億５０００万個の細胞、約８億個の細胞、約９億個の細胞、約３０億個の細胞、約３００億個の細胞、約４５０億個の細胞）など、約１０万～約１０００億個の範囲の細胞及び／又は対象の体重１キログラムあたりの細胞の当該量で、又はこれらの範囲内の任意の値及び／又は対象の体重１キログラムあたりの値で対象に投与される。薬量は、疾病又は障害及び／又は患者及び／又は他の治療に特有の属性に応じて変化し得る。いくつかの実施形態では、このような値は、組換え受容体発現細胞の数を指し、他の実施形態では、それらは、投与されるＴ細胞又はＰＢＭＣ又は総細胞の数を指す。
いくつかの実施形態では、遺伝子操作細胞療法は、対象の体重１ｋｇあたり少なくとも０．１×１０６細胞／ｋｇ又は少なくとも約０．１×１０６細胞／ｋｇ又は０．１×１０６細胞／ｋｇ又は約０．１×１０６細胞／ｋｇ、少なくとも０．２×１０６細胞／ｋｇ又は少なくとも約０．２×１０６細胞／ｋｇ又は０．２×１０６細胞／ｋｇ又は約０．２×１０６細胞／ｋｇ、少なくとも０．３×１０６細胞／ｋｇ又は少なくとも約０．３×１０６細胞／ｋｇ又は０．３×１０６細胞／ｋｇ又は約０．３×１０６細胞／ｋｇ、少なくとも０．４×１０６細胞／ｋｇ又は少なくとも約０．４×１０６細胞／ｋｇ又は０．４×１０６細胞／ｋｇ又は約０．４×１０６細胞／ｋｇ、少なくとも０．５×１０６細胞／ｋｇ又は少なくとも約０．５×１０６細胞／ｋｇ又は０．５×１０６細胞／ｋｇ又は約０．５×１０６細胞／ｋｇ、少なくとも１×１０６細胞／ｋｇ又は少なくとも約１×１０６細胞／ｋｇ又は１×１０６細胞／ｋｇ又は約１×１０６細胞／ｋｇ、少なくとも２．０×１０６細胞／ｋｇ又は少なくとも約２．０×１０６細胞／ｋｇ又は２．０×１０６細胞／ｋｇ又は約２．０×１０６細胞／ｋｇ、少なくとも３×１０６細胞／ｋｇ又は少なくとも約３×１０６細胞／ｋｇ又は３×１０６細胞／ｋｇ又は約３×１０６細胞／ｋｇ、又は少なくとも５×１０６細胞／ｋｇ又は少なくとも約５×１０６細胞／ｋｇ又は５×１０６細胞／ｋｇ又は約５×１０６細胞／ｋｇである細胞の数を含む用量の投与を含む。いくつかの実施形態では、細胞療法は、対象の体重１ｋｇあたり０．１×１０６細胞／ｋｇ～１．０×１０７細胞／ｋｇ若しくは約０．１×１０６細胞／ｋｇ～約１．０×１０７細胞／ｋｇ、０．５×１０６細胞／ｋｇ～５×１０６細胞／ｋｇ若しくは約０．５×１０６細胞／ｋｇ～約５×１０６細胞／ｋｇ、０．５×１０６細胞／ｋｇ～３×１０６細胞／ｋｇ若しくは約０．５×１０６細胞／ｋｇ～約３×１０６細胞／ｋｇ、０．５×１０６細胞／ｋｇ～２×１０６細胞／ｋｇ若しくは約０．５×１０６細胞／ｋｇ～約２×１０６細胞／ｋｇ、０．５×１０６細胞／ｋｇ～１×１０６細胞／ｋｇ若しくは約０．５×１０６細胞／ｋｇ～約１×１０６細胞／ｋｇ、対象の体重１ｋｇあたり１．０×１０６細胞／ｋｇ～５×１０６細胞／ｋｇ若しくは約１．０×１０６細胞／ｋｇ～約５×１０６細胞／ｋｇ、１．０×１０６細胞／ｋｇ～３×１０６細胞／ｋｇ若しくは約１．０×１０６細胞／ｋｇ～約３×１０６細胞／ｋｇ、１．０×１０６細胞／ｋｇ～２×１０６細胞／ｋｇ若しくは約１．０×１０６細胞／ｋｇ～約２×１０６細胞／ｋｇ、対象の体重１ｋｇあたり２．０×１０６細胞／ｋｇ～５×１０６細胞／ｋｇ若しくは約２．０×１０６細胞／ｋｇ～約５×１０６細胞／ｋｇ、２．０×１０６細胞／ｋｇ～３×１０６細胞／ｋｇ若しくは約２．０×１０６細胞／ｋｇ～約３×１０６細胞／ｋｇ、又は対象の体重１ｋｇあたり３．０×１０６細胞／ｋｇ～５×１０６細胞／ｋｇ若しくは約３．０×１０６細胞／ｋｇ～約５×１０６細胞／ｋｇ（それぞれ両端含む）の細胞数を含む用量の投与を含む。
いくつかの実施形態では、細胞の用量は、４×１０５細胞／ｋｇ～１×１０６細胞／ｋｇ若しくは約４×１０５細胞／ｋｇ～約１×１０６細胞／ｋｇ、又は６×１０５細胞／ｋｇ～８×１０５細胞／ｋｇ若しくは約６×１０５細胞／ｋｇ～約８×１０５細胞／ｋｇなど、２×１０５細胞／ｋｇ～２×１０６細胞／ｋｇ若しくは約２×１０５細胞／ｋｇ～約２×１０６細胞／ｋｇを含む。いくつかの実施形態では、細胞の用量は、３×１０５細胞／ｋｇ若しくは約３×１０５細胞／ｋｇ以下、４×１０５細胞／ｋｇ若しくは約４×１０５細胞／ｋｇ以下、５×１０５細胞／ｋｇ若しくは約５×１０５細胞／ｋｇ以下、６×１０５細胞／ｋｇ若しくは約６×１０５細胞／ｋｇ以下、７×１０５細胞／ｋｇ若しくは約７×１０５細胞／ｋｇ以下、８×１０５細胞／ｋｇ若しくは約８×１０５細胞／ｋｇ以下、９×１０５細胞／ｋｇ若しくは約９×１０５細胞／ｋｇ以下、１×１０６細胞／ｋｇ若しくは約１×１０６細胞／ｋｇ以下、又は２×１０６細胞／ｋｇ若しくは約２×１０６細胞／ｋｇ以下など、対象の体重１ｋｇあたり２×１０５個以下の細胞（細胞／ｋｇ）（例えば、ＣＡＲ発現細胞などの抗原発現細胞）を含む。いくつかの実施形態では、細胞の用量は、少なくとも３×１０５細胞／ｋｇ若しくは少なくとも約３×１０５細胞／ｋｇ若しくは３×１０５細胞／ｋｇ若しくは約３×１０５細胞／ｋｇ、少なくとも４×１０５細胞／ｋｇ若しくは少なくとも約４×１０５細胞／ｋｇ若しくは４×１０５細胞／ｋｇ若しくは約４×１０５細胞／ｋｇ、少なくとも５×１０５細胞／ｋｇ若しくは少なくとも約５×１０５細胞／ｋｇ若しくは５×１０５細胞／ｋｇ若しくは約５×１０５細胞／ｋｇ、少なくとも６×１０５細胞／ｋｇ若しくは少なくとも約６×１０５細胞／ｋｇ若しくは６×１０５細胞／ｋｇ若しくは約６×１０５細胞／ｋｇ、少なくとも７×１０５細胞／ｋｇ若しくは少なくとも約７×１０５細胞／ｋｇ若しくは７×１０５細胞／ｋｇ若しくは約７×１０５細胞／ｋｇ、少なくとも８×１０５細胞／ｋｇ若しくは少なくとも約８×１０５細胞／ｋｇ若しくは８×１０５細胞／ｋｇ若しくは約８×１０５細胞／ｋｇ、少なくとも９×１０５細胞／ｋｇ若しくは少なくとも約９×１０５細胞／ｋｇ若しくは９×１０５細胞／ｋｇ若しくは約９×１０５細胞／ｋｇ、少なくとも１×１０６細胞／ｋｇ若しくは少なくとも約１×１０６細胞／ｋｇ若しくは１×１０６細胞／ｋｇ若しくは約１×１０６細胞／ｋｇ、又は少なくとも２×１０６細胞／ｋｇ若しくは少なくとも約２×１０６細胞／ｋｇ若しくは２×１０６細胞／ｋｇ若しくは約２×１０６細胞／ｋｇなど、対象の体重１ｋｇあたり少なくとも２×１０５個若しくは少なくとも約２×１０５個若しくは２×１０５個若しくは約２×１０５個の細胞（細胞／ｋｇ）（例えば、ＣＡＲ発現細胞などの抗原発現細胞）を含む。
特定の実施形態では、細胞、又は細胞のサブタイプの個々の集団は、例えば、１００万～約５００億個の細胞（例えば、約５００万個の細胞、約２５００万個の細胞、約５億個の細胞、約１０億個の細胞、約５０億個の細胞、約２００億個の細胞、約３００億個の細胞、約４００億個の細胞、又は前述の値のいずれか２つによって定義される範囲）、約１０００万～約１０００億個の細胞など（例えば、約２０００万個の細胞、約３０００万個の細胞、約４０００万個の細胞、約６０００万個の細胞、約７０００万個の細胞、約８０００万個の細胞、約９０００万個の細胞、約１００億個の細胞、約２５０億個の細胞、約５００億個の細胞、約７５０億個の細胞、約９００億個の細胞、又は前述の値のいずれか２つによって定義される範囲）、場合によっては、約１億個の細胞～約５００億個の細胞（例えば、約１億２０００万個の細胞、約２億５０００万個の細胞、約３億５０００万個の細胞、約４億５０００万個の細胞、約６億５０００万個の細胞、約８億個の細胞、約９億個の細胞、約３０億個の細胞、約３００億個の細胞、約４５０億個の細胞）など、約１００万～約１０００億個の範囲の細胞及び／又は体重１キログラムあたりの細胞の当該量で、又はこれらの範囲内の任意の値及び／又は体重１キログラムあたりの値で対象に投与される。細胞の用量は、疾病又は障害及び／又は患者及び／又は他の治療に特有の属性に応じて変化してよい。
いくつかの実施形態では、細胞の用量は、細胞の用量が対象の体表面積又は体重に結びつかない、又はそれに基づかないように、細胞の均一用量又は細胞の固定用量である。いくつかの実施形態では、例えば、対象がヒトである場合、用量には、約１×１０８個未満の総数の組換え受容体（例えば、ＣＡＲ）発現細胞、Ｔ細胞、又は末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、例えば、２×１０６、５×１０６、１×１０７、５×１０７、若しくは１×１０８個の総数のこのような細胞など、約１×１０６～１×１０８個の範囲の、又は前述の値のいずれか２つの間の範囲のこのような細胞が含まれる。いくつかの実施形態では、対象がヒトである場合、用量には、約１×１０６～３×１０８個の総数の組換え受容体（例えば、ＣＡＲ）発現細胞、例えば、１×１０７、５×１０７、１×１０８、若しくは１．５×１０８個の総数のこのような細胞など、約１×１０７～２×１０８個の範囲の、又は前述の値のいずれか２つの間の範囲のこのような細胞が含まれる。いくつかの実施形態では、患者は、複数回投与され、用量の各々又は合計用量は、前述の値のいずれかの範囲内にあり得る。いくつかの実施形態では、細胞の用量には、１×１０５～５×１０８若しくは約１×１０５～約５×１０８個の総数の組換え受容体発現Ｔ細胞若しくはＴ細胞、１×１０５～１×１０８個の総数の組換え受容体発現Ｔ細胞若しくはＴ細胞、５×１０５～１×１０７若しくは約５×１０５～約１×１０７個の総数の組換え受容体発現Ｔ細胞若しくはＴ細胞、又は１×１０６～１×１０７若しくは約１×１０６～約１×１０７個の総数の組換え受容体発現Ｔ細胞若しくはＴ細胞の投与（それぞれ両端含む）が含まれる。
いくつかの実施形態では、用量のＴ細胞には、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、又はＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞が含まれる。いくつかの実施形態では、例えば、対象がヒトである場合、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞を含む用量などの用量のＣＤ８＋Ｔ細胞には、約１×１０６～１×１０８個の総数の組換え受容体（例えば、ＣＡＲ）発現ＣＤ８＋細胞、例えば、１×１０７、２．５×１０７、５×１０７、７．５×１０７、若しくは１×１０８個の総数のそうした細胞などの、約５×１０６～１×１０８個の範囲の、又は前述の値のいずれか２つの間の範囲のこのような細胞が含まれる。いくつかの実施形態では、患者は、複数回投与され、用量の各々又は合計用量は、前述の値のいずれかの範囲内にあり得る。いくつかの実施形態では、細胞の用量には、約１×１０７～７．５×１０７個の総数の組換え受容体発現ＣＤ８＋Ｔ細胞、１×１０７～２．５×１０７個の総数の組換え受容体発現ＣＤ８＋Ｔ細胞、１×１０７～７．５×１０７若しくは約１×１０７～７．５×１０７個の総数の組換え受容体発現ＣＤ８＋Ｔ細胞の投与（それぞれ両端含む）が含まれる。いくつかの実施形態では、細胞の用量は、約１×１０７、２．５×１０７、５×１０７、７．５×１０７、又は１×１０８個の総数の組換え受容体発現ＣＤ８＋Ｔ細胞の投与を含む。
いくつかの実施形態では、細胞、例えば、組換え受容体発現Ｔ細胞の用量は、単回用量として対象に投与されるか、又は２週間、１ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、１年以上の期間内に１回だけ投与される。
遺伝子操作細胞療法の文脈では、細胞の所与の「用量」の投与とは、所与の量又は数の細胞を単一組成物及び／又は単一連続投与、例えば、単回注射又は連続注入として投与することを含み、また、所与の量又は数の細胞を分割用量として、複数の個々の組成物又は注入で提供して、３日以内などの特定の期間にわたって投与することも含む。したがって、状況によっては、用量は、単一の時点で与えられるか、又は開始される、指定された数の細胞の単回投与又は連続投与である。しかしながら、状況によっては、用量は、３日間若しくは２日間にわたって１日に１回など、３日以内の期間にわたる複数回注射又は注入で、又は１日の期間にわたる複数回注入で投与される。
したがって、いくつかの態様では、用量の細胞は、単一の医薬組成物において投与される。いくつかの実施形態では、用量の細胞は、用量の細胞を集合的に含む複数の組成物において投与される。
いくつかの実施形態では、「分割用量」という用語は、１日を超えて投与されるように分割される用量を指す。このタイプの投与は、本発明の方法に含まれ、単回投与とみなされる。いくつかの実施形態では、分割用量の細胞は、用量の細胞を集合的に含む複数の組成物において、３日以内の期間にわたって投与される。したがって、細胞の用量は、分割用量、例えば、経時的に投与される分割用量として投与され得る。例えば、いくつかの実施形態では、用量は、２日間又は３日間にわたって対象に投与され得る。分割投薬の例示的な方法には、１日目に用量の２５％を投与し、２日目に用量の残りの７５％を投与することが含まれる。他の実施形態では、用量の３３％を１日目に投与し、残りの６７％を２日目に投与してもよい。いくつかの態様では、用量の１０％が１日目に投与され、用量の３０％が２日目に投与され、用量の６０％が３日目に投与される。いくつかの実施形態では、分割用量は、３日を超えて分散されない。いくつかの実施形態では、細胞の用量は、疾病負荷を低減するのに効果的であるのに十分な量とすることができる。
いくつかの実施形態では、細胞は、所望の薬量で投与され、この薬量には、いくつかの態様では、細胞若しくは細胞型（複数可）の所望の用量若しくは数、及び／又は細胞型の所望の比率が含まれる。したがって、いくつかの実施形態における細胞の薬量は、細胞の総数（又は体重１ｋｇあたりの数）、及びＣＤ４＋対ＣＤ８＋の比率など、個々の集団又はサブタイプの所望の比率に基づく。いくつかの実施形態では、細胞の薬量は、個々の集団における細胞又は個々の細胞型の所望の総数（又は体重１ｋｇあたりの数）に基づく。いくつかの実施形態では、薬量は、総細胞の所望の数、所望の比率、及び個々の集団における細胞の所望の総数などの特徴の組み合わせに基づく。
いくつかの実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞及びＣＤ４＋Ｔ細胞などの細胞の集団又はサブタイプは、Ｔ細胞の所望の用量など、総細胞の所望の用量で、又はその許容差（ｔｏｌｅｒａｔｅｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ）内で投与される。いくつかの態様では、所望の用量は、細胞の所望の数、又は細胞が投与される対象の単位体重あたりの細胞の所望の数、例えば、細胞／ｋｇである。いくつかの態様では、所望の用量は、細胞の最小数又は単位体重あたりの細胞の最小数以上である。いくつかの態様では、所望の用量で投与された総細胞のうち、個々の集団又はサブタイプは、所望の産出比（ＣＤ４＋対ＣＤ８＋の比率）で、又はこれに近い比で、例えば、特定の許容差内又はこのような比率の誤差内に存在する。いくつかの実施形態では、細胞は、ＣＤ４＋細胞の所望の用量及び／又はＣＤ８＋細胞の所望の用量など、細胞の個々の集団又はサブタイプのうちの１つ以上の所望の用量で、又はその許容差内で投与される。いくつかの態様では、所望の用量は、サブタイプ又は集団の細胞の所望の数、又は細胞が投与される対象の単位体重あたりのこのような細胞の所望数、例えば、細胞／ｋｇである。いくつかの態様では、所望の用量は、集団若しくはサブタイプの細胞の最小数、又は単位体重あたりの集団若しくはサブタイプの細胞の最小数以上である。したがって、いくつかの実施形態では、薬量は、総細胞の所望の固定用量及び所望の比率に基づき、かつ／又は１つ以上の、例えば、個々のサブタイプ若しくはサブ集団の各々の所望の固定用量に基づく。したがって、いくつかの実施形態では、薬量は、Ｔ細胞の所望の固定用量若しくは最小用量及びＣＤ４＋細胞対ＣＤ８＋細胞の所望の比率に基づき、かつ／又はＣＤ４＋細胞及び／若しくはＣＤ８＋細胞の所望の固定用量若しくは最小用量に基づく。
いくつかの実施形態では、細胞は、ＣＤ４＋細胞及びＣＤ８＋細胞又はサブタイプなどの、複数の細胞集団又はサブタイプの所望の産出比で、又はその許容範囲内で投与される。いくつかの態様では、所望の比率は、特定の比率であるか、又は比率の範囲であり、例えば、いくつかの実施形態では、所望の比率（例えば、ＣＤ４＋細胞の、ＣＤ８＋細胞に対する比率）は、５：１～５：１若しくは約５：１～約５：１（又は約１：５超かつ約５：１未満）、又は１：３～３：１若しくは約１：３～約３：１（又は約１：３超かつ約３：１未満）であり、例えば、２：１～１：５若しくは約２：１～約１：５（又は約１：５超かつ約２：１未満であり、例えば、５：１、４．５：１、４：１、３．５：１、３：１、２．５：１、２：１、１．９：１、１．８：１、１．７：１、１．６：１、１．５：１、１．４：１、１．３：１、１．２：１、１．１：１、１：１、１：１．１、１：１．２、１：１．３、１：１．４、１：１．５、１：１．６、１：１．７、１：１．８、１：１．９、１：２、１：２．５、１：３、１：３．５、１：４、１：４．５、若しくは１：５、又は約５：１、約４．５：１、約４：１、約３．５：１、約３：１、約２．５：１、約２：１、約１．９：１、約１．８：１、約１．７：１、約１．６：１、約１．５：１、約１．４：１、約１．３：１、約１．２：１、約１．１：１、約１：１、約１：１．１、約１：１．２、約１：１．３、約１：１．４、約１：１．５、約１：１．６、約１：１．７、約１：１．８、約１：１．９、１：２、約１：２．５、約１：３、約１：３．５、約１：４、約１：４．５、若しくは約１：５などである。いくつかの態様では、許容差は、所望の比率の約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％であり、これらの範囲内の任意の値を含む。
特定の実施形態では、細胞の数及び／又は濃度とは、組換え受容体（例えば、ＣＡＲ）発現細胞の数を指す。他の実施形態では、細胞の数及び／又は濃度とは、投与される全ての細胞、Ｔ細胞、又は末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の数又は濃度を指す。
いくつかの態様では、用量のサイズは、以前の治療、例えば、化学療法に対する対象の応答、腫瘍量、大きさ、サイズ、若しくは転移の程度、範囲、若しくはタイプなど対象における疾病負荷、病期、並びに／又は対象が毒性転帰、例えば、ＣＲＳ、マクロファージ活性化症候群、腫瘍溶解症候群、神経毒性、及び／若しくは投与される細胞及び／若しくは組換え受容体に対する宿主免疫応答を発症する可能性若しくは発生率などの、１つ以上の基準に基づいて決定される。
いくつかの実施形態では、１回以上の後続用量の細胞が対象に投与される。いくつかの実施形態では、後続用量の細胞は、１回目の用量の細胞の投与開始から、７日、１４日、２１日、２８日、若しくは３５日よりも後、又は約７日、１４日、２１日、２８日、若しくは３５日よりも後に投与される。後続用量の細胞は、最初の用量より多くても、ほぼ同じでも、又は少なくてもよい。いくつかの実施形態では、１回目の用量の細胞及び／又は２回目の用量の細胞の投与などの、Ｔ細胞療法の投与を繰り返すことができる。
使用方法
本開示のシステム及び組成物は、様々な用途に有用である。本開示の遺伝子操作された細胞を使用して治療することができる疾病及び障害には、炎症性疾患、がん、及び感染症が含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される組成物のシステムは、がんを治療するために使用される。
本開示の方法、組成物、及び計画によって治療することができるがんの非限定的な例としては、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）（非Ｔ細胞ＡＬＬを含む）、急性骨髄性白血病、Ｂ細胞性前リンパ球性白血病、Ｂ細胞性急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍、バーキットリンパ腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄白血病、慢性若しくは急性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、ヘアリー細胞白血病、ホジキン病、悪性リンパ増殖性疾患、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、意義不明の単クローン性γグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、多発性骨髄腫、骨髄異形成及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、形質細胞増殖性疾患（無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫若しくは無痛性骨髄腫）を含む、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞腫瘍、形質細胞腫（形質細胞疾患、孤立性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、髄外性形質細胞腫、及び多発性形質細胞腫を含む）、ＰＯＥＭＳ症候群（Ｃｒｏｗ－Ｆｕｋａｓｅ症候群、高月病、及びＰＥＰ症候群としても知られている）、縦隔原発Ｂ細胞性大細胞型リンパ腫（ＰＭＢＣ）、小細胞若しくは大細胞濾胞性リンパ腫、脾臓辺縁帯リンパ腫（ＳＭＺＬ）、全身性アミロイド軽鎖アミロイドーシス、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、Ｔ細胞リンパ腫、形質転換濾胞性リンパ腫若しくはワルデンストロームマクログロブリン血症、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、形質転換濾胞性リンパ腫（ＴＦＬ）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣＬ）、多発性骨髄腫、ヘアリー細胞リンパ腫／白血病、又はこれらの組み合わせを含む。
本明細書の方法、組成物、及び療法で治療された腫瘍は、安定した腫瘍増殖をもたらし得る（例えば、１つ以上の腫瘍のサイズが、１％、５％、１０％、１５％、又は２０％を超えて増加しない、かつ／又は転移しない）。いくつかの実施形態では、腫瘍は、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２週間、又はそれ以上の期間、安定化される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２ケ月、又はそれ以上の期間、安定化される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０年、又はそれ以上の期間、安定化される。いくつかの実施形態では、腫瘍のサイズ又は腫瘍細胞の数は、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％以上減少する。いくつかの実施形態では、腫瘍は、完全に除去されるか、又は検出レベル未満に減少する。いくつかの実施形態では、対象は、治療後、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２週間、又はそれ以上の期間、無腫瘍のまま（例えば、寛解期）である。いくつかの実施形態では、対象は、治療後、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２ケ月、又はそれ以上の期間、無腫瘍のままである。いくつかの実施形態では、対象は、治療後、少なくとも約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０年、又はそれ以上の期間、無腫瘍のままである。腫瘍細胞の死は、治療の前後で細胞を数えること、又は生細胞若しくは死細胞（例えば、生きている標的細胞又は死んでいる標的細胞）に関連するマーカーのレベルを測定することを含むが、これらに限定されない、任意の好適な方法によって決定することができる。細胞死の程度は、任意の好適な方法によって決定することができる。いくつかの実施形態では、細胞死の程度は、開始条件に関して決定される。例えば、個体は、既知のサイズの開始細胞量又は既知の濃度の循環標的細胞など、既知の開始量の標的細胞を有することができる。このような場合、細胞死の程度は、開始細胞集団に対する治療後の生存細胞の比率として表すことができる。いくつかの実施形態では、細胞死の程度は、好適な細胞死アッセイによって決定することができる。様々な細胞死アッセイが利用可能であり、様々な検出方法を利用することができる。検出方法の例には、細胞染色、顕微鏡検査、フローサイトメトリー、細胞選別、及びこれらの組み合わせの使用が含まれるが、これらに限定されない。
治療期間の完了後に腫瘍が外科的切除を受けるとき、腫瘍サイズの縮小における治療の有効性は、切除された組織の壊死（すなわち、死滅）の割合を測定することによって決定することができる。いくつかの実施形態では、治療は、切除された組織の壊死割合が約２０％より大きい（例えば、少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は１００％）場合、治療上有効である。いくつかの実施形態では、切除された組織の壊死割合は、１００％である、すなわち、生きた腫瘍組織は存在しないか、又は検出可能ではない。
以下の実施例は、本開示のいくつかの実施形態を更に説明するために提供されるが、本開示の範囲を限定することを意図するものではなく、当業者に知られている他の手順、方法論、又は技法を代わりに使用し得ることは、それらの例示的な性質によって理解されるであろう。
実施例１：標的化サイトカイン構築物のクローニングと精製
組換えＤＮＡ技術
組換えＤＮＡ操作を含む技術は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ；Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８９に以前に記載されている。全ての試薬は、製造業者の説明書に従って使用された。ＤＮＡ配列は、両鎖シーケンシング（ｄｏｕｂｌｅ ｓｔｒａｎｄ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）によって決定された。
遺伝子合成
所望の遺伝子セグメントは、適切なテンプレートを使用してＰＣＲによって生成されたか、又はＴｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｐｌｅａｓａｎｔｏｎ、ＣＡ）、ＡＴＵＭ（Ｎｅｗａｒｋ、ＣＡ）、Ｇｅｎｅｗｉｚ（Ｓｏｕｔｈ Ｐｌａｉｎｆｉｅｌｄ、ＮＪ）、又はＧｅｎｅＳｃｒｉｐｔ（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）において、合成オリゴヌクレオチドから合成した。設計された制限エンドヌクレアーゼ切断部位に隣接する遺伝子セグメントを消化し、その後、それぞれの発現ベクターにクローニングした。ＤＮＡを形質転換細菌から精製し、ＵＶ可視分光法（ＵＶ ｖｉｓｉｂｌｅ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）によって濃度を測定した。ＤＮＡシーケンシングを使用して、サブクローニングされた遺伝子断片のＤＮＡ配列を確認した。
抗体遺伝子の単離
遺伝子操作された細胞によって発現されたドメイン又は受容体を標的とする抗体（例えば、遺伝子操作された細胞によって発現されたｓｃＦｖ、又は遺伝子操作された細胞によって発現されたタグ、又は遺伝子操作された細胞によって発現されたＣＡＲ若しくはＴＣＲの一部であるタグを標的とする抗体）は、インビトロディスプレイシステム又はインビボ免疫化のいずれかを使用して生成された。インビトロディスプレイ方法では、非免疫ヒト抗体ファージライブラリーを、５～６ラウンドにわたってパンニングして、標的抗原に対する抗体を単離した。パニング後、ＥＬＩＳＡで非特異的抗原よりも標的抗原への特異的結合を示した個々のファージクローンが同定された。続いて、特異的バインダの重鎖Ｖドメイン及び軽鎖ＶドメインのＤＮＡ断片がクローニングされ、配列決定された。一方、抗体は、抗原の組換え型でマウス及びラマを免疫化することによっても生成された。マウスの免疫化から、ハイブリドーマ法を使用して抗体を単離した。簡単に説明すると、免疫化後、脾臓及び／又はリンパ節からのＢ細胞を骨髄腫細胞株と融合させてハイブリドーマ細胞を生成した。次いで、ＥＬＩＳＡを使用してハイブリドーマクローンを個々にスクリーニングし、抗原に特異的な抗体を発現するクローンを同定した。最後に、抗体の重鎖Ｖドメイン及び軽鎖ＶドメインのＤＮＡ断片を特定のハイブリドーマからクローニングし、その後配列決定した。ラマの免疫化のために、末梢Ｂ細胞から抗体遺伝子をクローニングし、ファージミドベクターに連結してファージディスプレイ抗体ライブラリーを生成した。次に、抗体は、対象の抗原に対してファージライブラリーをパニングすることを通して単離された。パニング後、ＥＬＩＳＡを使用して、非特異的抗原よりも標的抗原への特異的結合を示した個々のファージクローンが同定された。その後続いて、特異的バインダの重鎖Ｖドメイン及び軽鎖ＶドメインのＤＮＡ断片がクローニングされ、配列決定された。次いで、非ヒト起源（マウス及びラマ）からの抗体をヒト化して、非ヒトフレームワーク及び相補性決定領域の変異を除去した。
標的化サイトカイン構築物のクローニング
ヒト免疫グロブリンの軽鎖及び重鎖のヌクレオチド配列に関する一般事項は、Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．ＩＭＧＴ（登録商標）のＩＭＧＴ（登録商標）（ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ（登録商標））、ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）２５ｙｅａｒｓ ｏｎ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０１５ Ｊａｎ；４３．に記載されている。重鎖Ｖドメイン及び軽鎖Ｖドメインの増幅されたＤＮＡ断片を、哺乳動物発現ベクター含むヒトＩｇＧ１にインフレームで（ｉｎ ｆｒａｍｅ）挿入した。ＩＬ－２サイトカイン、又はその機能的断片若しくはバリアントを含む例示的な標的化サイトカイン構築物については、構築物のＩＬ－２部分を、ＩｇＧ重鎖のＣ末端とＩＬ－２のＮ末端との間の（Ｇ４Ｓ）３ １５アミノ酸長（１５－ｍｅｒ）リンカーを使用して、重鎖を用いてインフレームでクローニングした。ＩｇＧ重鎖のＣ末端リジン残基は、ＩＬ－２部分を融合した後に除去された。単一のＩＬ－２遺伝子が完全なＩｇＧに融合された構築物を生成するには、２つの重鎖プラスミドを構築し、ＩｇＧ ＣＨ３ドメインのノブイントゥホール修飾によって容易にされるヘテロ二量体化のためにトランスフェクトする必要があった。ＩＬ－２部分に接続された「ホール」重鎖は、ＣＨ３ドメインにＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ変異を保有していたが、融合していない「ノブ」重鎖は、ＣＨ３ドメインにＳ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗ変異を保有していた（ＥＵ番号付け）。ＦｃγＲ結合／エフェクター機能を廃止し、ＦｃＲの共活性化を防止するために、ＩｇＧ重鎖の各々のＣＨ２ドメインにＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ（ＥＵ番号付け）変異を導入した。抗体ＩＬ－２融合構築物の発現は、ＣＭＶプロモータによって駆動され、転写は、コード配列の下流に位置する合成ポリＡシグナル配列によって終了した。
ＩＬ－２ポリペプチドを有する例示的な標的化サイトカイン構築物の調製
実施例で使用されるＩＬ－２ポリペプチドを有する標的化サイトカイン構築物をコードする構築物は、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）を使用して、指数増殖するＥｘｐｉ２９３細胞を哺乳動物発現ベクターで同時にトランスフェクトすることによって産生した。簡単に説明すると、ＩＬ－２を含む標的化サイトカイン構築物は、タンパク質Ａマトリックスを使用する親和性クロマトグラフィーによって最初に精製された。タンパク質Ａカラムを平衡化し、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で洗浄した。標的化サイトカイン構築物を、２０ｍＭクエン酸ナトリウム、５０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ３．６で溶出した。溶出した画分をプールし、１０ｍＭのＭＥＳ、２５ｍＭの塩化ナトリウム、ｐＨ６で透析した。イオン交換クロマトグラフ（Ｍｏｎｏ－Ｓ，ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用してタンパク質を更に精製し、ホモ二量体よりもヘテロ二量体を精製した。タンパク質をロードした後、カラムを１０ｍＭのＭＥＳ、２５ｍＭの塩化ナトリウム、ｐＨ６で洗浄する。次いで、タンパク質を、１０ｍＭのＭＥＳ、ｐＨ６の緩衝液中で２５ｍＭ～最大５００ｍＭまでの塩化ナトリウムの勾配を増加させて溶出した。ヘテロ二量体に対応する主要な溶離液ピークを収集し、濃縮した。次いで、精製タンパク質を、ＰＢＳ中でサイズ排除クロマトグラフィー（Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によって精製した。
精製されたＩＬ－２を含む標的化サイトカイン構築物のタンパク質濃度は、アミノ酸配列に基づいて計算されたモル吸光係数を使用して、２８０ｎｍでの光学密度（ＯＤ）を測定することによって決定された。標的化サイトカイン構築物の純度、完全性、及び単量体状態を、還元剤（５ｍＭ １，４－ジチオスレイトール）の存在下及び不在下でＳＤＳ－ＰＡＧＥによって分析し、クーマシーブルー（ＳｉｍｐｌｅＢｌｕｅ（商標） ＳａｆｅＳｔａｉｎ，Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で染色した。ＮｕＰＡＧＥ（登録商標） Ｐｒｅ－Ｃａｓｔゲルシステム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を製造業者の説明書に従って使用した（４～２０％のトリス－グリシンゲル又は３～１２％のビス－トリス）。免疫複合体サンプルの凝集体含有量は、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００ １０／３００ＧＬ分析用サイズ排除カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して分析した。
レンチウイルスベクター構築物のクローニング
この研究で使用したレンチウイルスベクター（ＬＶＶ）は、プラスミドｐＡＬＤ－Ｌｅｎｔｉ ＧＦＰ（Ａｌｄｅｖｒｏｎ）から修飾された。具体的には、ｐＡＬＤ－Ｌｅｎｔｉ ＧＦＰのプロモータ領域をＥＦ１ａプロモータ配列に置換した。ＦＭＣ６３ ｓｃＦｖを発現するＣＡＲ遺伝子をインフレームでクローニングして、ｐＬＶＶ－ＦＭＣ６３プラスミドを生成した。また、ｍｙｃポリペプチド（ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬ）をＦＭＣ６３のＮ末端領域又はＣ末端領域に挿入して、それぞれ、ｐＬＶＶ－ＦＭＣ６３－Ｎ－ｍｙｃ又はｐＬＶＶ－ＦＭＣ６３－Ｃ－ｍｙｃを作成した。ＥＧＦＲｔを共発現させるために、Ｐ２Ａ（ＡＴＮＦＳＬＬＫＱＡＧＤＶＥＥＮＰＧＰ）及びＥＧＦＲｔ導入遺伝子からなるシーケンシングをＦＭＣ６３ ｓｃＦｖ領域の下流に挿入して、ｐＬＶＶ－ＦＭＣ６３－ＥＧＦＲｔを生成した。ＴＣＲ構築物については、Ｎ－ｍｙｃ－ＴＣＲα鎖－Ｐ２Ａ－ＨＡタグ－ＴＣＲβ鎖からなる５’→３’（５’ ｔｏ ３’）配列をインフレームでクローニングして、ｐＬＶＶ－ＴＣＲを生成した。
ＥＧＦＴｔタグの配列は、次のとおりである。
ＲＫＶＣＮＧＩＧＩＧＥＦＫＤＳＬＳＩＮＡＴＮＩＫＨＦＫＮＣＴＳＩＳＧＤＬＨＩＬＰＶＡＦＲＧＤＳＦＴＨＴＰＰＬＤＰＱＥＬＤＩＬＫＴＶＫＥＩＴＧＦＬＬＩＱＡＷＰＥＮＲＴＤＬＨＡＦＥＮＬＥＩＩＲＧＲＴＫＱＨＧＱＦＳＬＡＶＶＳＬＮＩＴＳＬＧＬＲＳＬＫＥＩＳＤＧＤＶＩＩＳＧＮＫＮＬＣＹＡＮＴＩＮＷＫＫＬＦＧＴＳＧＱＫＴＫＩＩＳＮＲＧＥＮＳＣＫＡＴＧＱＶＣＨＡＬＣＳＰＥＧＣＷＧＰＥＰＲＤＣＶＳＣＲＮＶＳＲＧＲＥＣＶＤＫＣＮＬＬＥＧＥＰＲＥＦＶＥＮＳＥＣＩＱＣＨＰＥＣＬＰＱＡＭＮＩＴＣＴＧＲＧＰＤＮＣＩＱＣＡＨＹＩＤＧＰＨＣＶＫＴＣＰＡＧＶＭＧＥＮＮＴＬＶＷＫＹＡＤＡＧＨＶＣＨＬＣＨＰＮＣＴＹＧＣＴＧＰＧＬＥＧＣＰＴＮＧＰＫＩＰＳＩＡＴＧＭＶＧＡＬＬＬＬＬＶＶＡＬＧＩＧＬＦＭ
レンチウイルス粒子の産生
レンチウイルスは、３－プラスミドパッケージングシステムを使用して生成された。具体的には、３つのプラスミド、ｐＡＬＤ－ＶＳＶ－Ｇ、ｐＡＬＤ－ＧａｇＰｏｌ、及びｐＡＬＤ－Ｒｅｖ（Ａｌｄｅｖｒｏｎ）を、ｐＬＶＶベクターとともに２３９個の細胞に同時トランスフェクトして、ウイルスを生成した。レンチウイルスは、Ｇｉｂｃｏ（商標） ＬＶ－ＭＡＸ（商標）レンチウイルス生産システム（カタログ番号Ａ３５６８４）を使用し、製造業者のプロトコルに従って生産される。簡単に説明すると、２９３個の細胞を１ｍｌあたり５０万個の細胞として播種し、８％のＣＯ２の加湿雰囲気下で３７°Ｃのインキュベータ内で振盪（１２５ｒｐｍ）しながら３日間培養した。細胞密度が１ｍＬあたり５００～６００万個の細胞に達した後、次いで、培養物を１ｍＬあたり３５０万個の細胞に希釈して一晩培養した。翌日、製造業者のプロトコルに従って、細胞にプラスミドをトランスフェクトした。培養は、トランスフェクションの４８～５５時間後に採取された。次いで、細胞を１３００ｘｇで１５分間遠心沈降させた。次いで、レンチウイルスを含む培養上清を収集して濾過し、その後－８０°Ｃで保存した。
実施例２：遺伝子操作されていないＴ細胞よりもＣＡＲ遺伝子操作されたＴ細胞の優先的な活性化及び増殖を実証するためのインビトロアッセイ
ＣＡＲ Ｔ細胞の生成と培養
Ｔ細胞は、ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ（商標）ヒトＴ細胞富化カクテル（幹細胞）を使用して単離され、５ｎｇ／ｍＬのｒｈＩＬ－２（Ｒ＆Ｄ）、又は１ｎｇ／ｍＬのｒｈＩＬ－７及びｒｈＩＬ－１５（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）の両方、のいずれかを補充したＡＩＭ－Ｖ培地（Ｇｉｂｃｏ）及び製造業者推奨濃度のＴ Ｃｅｌｌ ＴｒａｎｓＡｃｔ（商標）、ヒト抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）中に１ｘ１０６／ｍＬで３６～４８時間再懸濁した。次いで、細胞をＯｐｔｉ－ＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ）で１回洗浄し、再懸濁し、９６ウェル平底プレートに５０×１０３細胞／ウェルで２５μｌにプレーティングした。Ｔ細胞は、５μｇ／ｍｌの硫酸プロタミン（ＭＰ ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）の存在下、１／８に希釈した既製のＦＭＣ６３－４１ＢＢ－３ｚレンチウイルス粒子（ＰｒｏＭａｂ）を用いて、１０００ｇ、３０°Ｃで９０分間スピノキュレーションにより形質導入された。スピノキュレーションの６～８時間後、５ｎｇ／ｍｌのｒｈＩＬ－２（Ｒ＆Ｄ）又は１ｎｇ／ｍｌのｒｈＩＬ－７及びｒｈＩＬ－１５（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）を補充したＡＩＭ－Ｖ培地（Ｇｉｂｃｏ）２００μｌを添加した。培地添加の４８時間後、抗ＦＭＣ６３（ＦＭ６３、Ａｃｒｏ ｂｉｏ）を使用するフローサイトメトリーにより細胞のＣＡＲ発現をチェックした。それぞれのサイトカインを含むＡＩＭ－Ｖ又はＲＰＭＩ培地（＋ＦＢＳ及びＧｌｕｔａｍａｘ）を細胞に１日おきに補充し、細胞を０．２～２×１０６／ｍＬの密度で最大２８日間維持した。
遺伝子操作されていないＴ細胞を上回るＣＡＲ遺伝子操作されたＴ細胞の選択的活性化を測定するためのＳＴＡＴ５活性化アッセイ
典型的には、ＣＡＲ Ｔ細胞を３回洗浄し、無血清ＲＰＭＩ１６４０又はＡＩＭ－Ｖ培地に２×１０６細胞／ｍＬで再懸濁し、９６ウェルＵ底プレートに分注し（ウェルあたり５０μＬ）、一晩（１８～２４時間）静置した。ＩＬ－２を含む標的化サイトカイン構築物、並びに組換えヒトＩＬ－２及び対照（ＨＡ標的）融合タンパク質などの、対照タンパク質を所望の濃度に希釈し、ウェルに添加した（２倍の刺激として５０μＬを添加）。インキュベーションは、通常、３７°Ｃで３０分間実施された。次に、細胞を表面マーカー：ＣＤ８α（ＳＫ１、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ；ＲＰＡ－Ｔ８、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、及びＦＭＣ６３ｓｃＦｖ（ＦＭ６３、Ａｃｒｏｂｉｏ）に対する抗体で染色し、４％のＰＦＡを用いて室温で１０分間固定した。固定後、製造業者のプロトコルに従って、細胞を事前に冷却したＰｈｏｓｆｌｏｗ Ｐｅｒｍ緩衝液ＩＩＩ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）中で透過処理した。透過処理後、細胞は、細胞内ｐＳＴＡＴ５［ｐＹ６９４］、クローン４７、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、及び表面マーカーＣＤ３（ＵＣＨＴ１、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＣＤ４（ＲＰＡ－Ｔ４、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、及びＣＤ２５（Ｍ－Ａ２５１、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）に対する抗体で染色され、フローサイトメーターで分析した。ＣＡＲ＋細胞は、ＦＭＣ６３ ｓｃＦｖ結合によって決定された。データは、ｐＳＴＡＴ５ポジティブパーセントとして、場合によっては、ｐＳＴＡＴ５平均蛍光強度（ＭＦＩ）として表され、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍにインポートされて、各構築物のＥＣ５０値を決定した。
結果を、抗ＣＡＲ抗体及びサイトカインＩＬ２ｍ１を含む構築物については図２に、抗ＣＡＲ抗体及びサイトカインＩＬ２ｍ２を含む構築物については図３に示す。
ＳＴＡＴ５活性化アッセイは、図１２Ａ、図１３Ａ、図１４Ａ、及び図１５Ａに示す追加の構築物を用いて行われた。図１３Ａに示す構築物は、抗ｓｃＦｖ抗体（例えば、ＣＤ１９標的化ｓｃＦｖ（ＦＭＣ６３ｓｃＦｖ）を含むＣＡＲに対する抗イディオタイプ抗体）及びＩＬ－２サイトカインバリアント（ＩＬ２ｍ１、ＩＬｍ２、ＩＬ２ｍ３、ＩＬ２ｍ４、又はＩＬｍ５）を含み、図１４Ａに示す構築物は、ＣＡＲ Ｔ細胞表面に別々に発現されるタグを標的とする抗タグ抗体（例えば、タグはＥＧＦＲｔであり、抗体は抗ＥＧＦＲｔである）及びＩＬ－２サイトカインバリアント（ＩＬ２ｍ１、ＩＬｍ２、ＩＬ２ｍ３、ＩＬ２ｍ４、又はＩＬｍ５）を含み、図１５Ａに示す構築物は、ＣＡＲ分子内で発現される埋め込みタグを標的とする抗タグ抗体（例えば、タグはｍｙｃであり、抗体は抗ｍｙｃ抗体である）及びＩＬ－２サイトカインバリアント（ＩＬ２ｍ１、ＩＬｍ２、ＩＬ２ｍ３、ＩＬ２ｍ４、又はＩＬｍ５）を含み、図１６Ａに示す構築物は、ＴＣＲ内で発現される埋め込みタグを標的とする抗タグ抗体（例えば、タグはｍｙｃであり、抗体は抗ｍｙｃ抗体である）及びサイトカイン（ＩＬ２ｍ１、ＩＬｍ２、ＩＬ２ｍ３、ＩＬ２ｍ４、又はＩＬｍ５）を含む。
結果を図１２Ｂ～図１２Ｆ（図１２Ａの構築物について）、図１３Ｂ～図１３Ｆ（図１３Ａの構築物について）、図１４Ｂ～図１４Ｆ（図１４Ａの構築物について）、及び図１５Ｂ（図１５Ａの構築物について）示す。各構築物について、ＣＡＲ＋細胞のＳＴＡＴ５活性化は、ＣＡＲ－細胞のＳＴＡＴ５活性化と比較して有意に増強され、本開示のいくつかの例示的な標的化構築物による、遺伝子操作されていないＴ細胞を上回るＣＡＲ遺伝子操作されたＴ細胞の選択的活性化が示された。
結果を図１５Ｂに示す（図１５Ａの構築物の細胞結合ドメインについて）。示された構築物の細胞結合ドメインは、ＴＣＲ内で発現される埋め込みタグに結合する。
インビトロでの標的化サイトカイン治療による、遺伝子操作されていないＴ細胞を上回るＣＡＲ遺伝子操作されたＴ細胞の選択的な増殖
上記のように生成及び維持されたＣＡＲ Ｔ細胞をＲＰＭＩ１６４０（Ｇｉｂｃｏ）＋１０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）及び１％のＧｌｕｔａｍａｘ（Ｇｉｂｃｏ）で３回洗浄し、０．５ｘ１０６／ｍＬで再懸濁し、それぞれのＣＡＲ指向性サイトカイン濃度で４８ウェルプレートウェルあたり０．５ｍＬで播種した。ＣＡＲ＋細胞の発現頻度及び数を１日おきに測定し、表面及び細胞内フローサイトメトリーのために１００μＬの細胞を取り出し、５倍濃度のＣＡＲ標的化構築物１００μＬを補充した。増殖により密度が２ｘ１０６細胞／ｍｌを超えるまで増加した場合、ウェルを２つに分割した。細胞は、マーカーＣＤ３（ＵＣＨＴ１、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＣＤ４（ＲＰＡ－Ｔ４、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＣＤ８α（ＳＫ１、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ；ＲＰＡ－Ｔ８、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＦＭＣ６３ ｓｃＦｖ（ＦＭ６３、Ａｃｒｏｂｉｏ）、ＣＤ６２Ｌ（ＤＲＥＧ－５６、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＣＤ４５ＲＯ（ＵＣＨＬ１、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＣＤ４５ＲＡ（ＨＩ１００、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）ＣＣＲ７（１５０５０３、ＢＤ）、及びＴＣＦ１（７Ｆ１１Ａ１０、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）について染色され、フローサイトメーターで分析された。総数は、フローサイトメーターによって一定の体積にわたって収集されたイベントの数から逆計算された。図４に示す結果は、対照ＩＬ２又はサイトカインに融合していない抗ＣＡＲ抗体と比較して、本開示の例示的なＣＡＲ指向性構築物（抗ＣＡＲ－ＩＬ２ｍ１及び抗ＣＡＲＩＬ２ｍ２）の存在下でのＣＡＲ遺伝子操作されたＴ細胞（ＣＡＲ＋細胞の割合（左パネル）又はＣＡＲ＋細胞の総数（右パネル）で測定）の選択的な増殖を実証している。
実施例３：標的化サイトカイン治療によるＣＡＲ遺伝子操作されたＴ細胞のより良好な生着、持続性、及び特性を実証するためのインビボマウスモデル
皮下ＮＳＧモデルについては、ＮＳＧマウスの側腹部に１×１０６のＮＡＬＭ６又はＲａｊｉ腫瘍を皮下注射し、その後、腫瘍が直径５～８ｍｍに達したときに、実施例２に記載のように産生されたＣＡＲ－Ｔ細胞を０．１～０．５×１０６個注入した。次いで、ＣＡＲ－Ｔ注入後の指定された時点で、マウスをＰＢＳ又はＣＡＲ標的化ＩＬ－２で治療する。腫瘍サイズは、キャリパーを介して少なくとも週に２回測定され、末梢血が採取され、指定された時点でフローサイトメトリーによって分析され、ＣＡＲ－Ｔの発現頻度と表現型が特徴付けられる。腫瘍負荷が１０００ｍｍ３を超えたときに、マウスを殺処分する。
ｉ．ｖ．ＮＳＧモデルについては、ＮＳＧマウスに、０．５×１０６のルシフェラーゼ形質導入ＮＡＬＭ６又はＲａｊｉ腫瘍を静脈内注射し、その後、実施例２に記載のように産生された０．５ＭのＣＡＲ－Ｔ細胞を注入する。次いで、ＣＡＲ－Ｔ注入後の指定された時点で、マウスをＰＢＳ又はＣＡＲ標的化ＩＬ－２で治療する。ＣＡＲ－Ｔの発現頻度と表現型とを特徴付けるために、指定された時点で末梢血が採取され、フローサイトメトリーによって分析される。マウスは、生体内撮像システム（ＩＶＩＳ）を使用して少なくとも週に２回撮像され、発光を介して腫瘍負荷を測定する。
ｓ．ｃ．同系モデルについては、Ｃ５７ＢＬ６／Ｊマウスに、１×１０６のｈＣＤ１９形質導入Ｂ１６Ｆ１０、ＭＣ３８、又はＥＬ４腫瘍を皮下注射する。腫瘍が直径５～８ｍｍに達した後、１×１０６個のｈＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ形質導入マウスＴ細胞を静脈内に注入する。マウスは、ＣＡＲ－Ｔ注入後に示すように、ＣＡＲ標的化ＩＬ－２又はＰＢＳのいずれかで治療される。ＣＡＲ－Ｔの発現頻度と表現型とを特徴付けるために、指定された時点で末梢血が採取され、フローサイトメトリーによって分析される。いくつかの例では、マウスは、移送前にシクロホスファミドを使用して事前調整される。ＴＩＬ分析では、治療後に腫瘍が採取され、分解され、機能性と表現型との特徴付けのためにフローサイトメトリーによって分析される。これらの実験では、マウスｈＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを使用してインビトロで活性化され、４１ＢＢ／ＣＤ３ｚ又はＣＤ２８／ＣＤ３ｚ細胞内ドメインを有するｈＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ構築物をコードするレトロウイルスを使用して形質導入されたＣ５７ＢＬ６／Ｊ脾細胞から選択されたＣＤ３＋Ｔ細胞から産生される。
実施例４ 遺伝子操作された細胞におけるＳＴＡＴ３活性化の評価
ＩＬ－１０又はＩＬ－２１が遺伝子操作された細胞を活性化する能力は、フローサイトメトリーでＳＴＡＴ３のリン酸化を測定することによって決定された。遺伝子操作された細胞を無血清ＲＰＭＩ１６４０の培地に４０×１０６細胞／ｍＬで再懸濁し、９６ウェルＵ底プレートに分注した（ウェルあたり５０μＬ）。標的化融合タンパク質及び組換え野生型サイトカインを含む対照タンパク質及び対照融合タンパク質を、所望の濃度に希釈し、ウェルに添加した（２倍の刺激として５０μＬを添加）。インキュベーションは、通常、３７°Ｃで１０～２０分間実施された。メタノール透過処理後に適用できなかった抗体ＣＤ８ａ（ＳＫ１、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＣＤ４（ＲＰＡ－Ｔ４、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＣＤ６２Ｌ（ＤＲＥＧ－５６、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、及びＣＤ１９（ＨＩＢ１９、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）は、刺激後すぐにウェルに直接添加され、氷上で１０分間インキュベートされた。染色は、氷冷した８％のＰＦＡ（最終４％）１００μＬを用いて氷上で１０分間停止した。細胞を洗浄緩衝液（ＰＢＳ中２％のＦＢＳ）で洗浄した。細胞を、１００μＬの事前に冷却したＰｈｏｓｆｌｏｗ Ｐｅｒｍ緩衝液ＩＩＩ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）中、氷上で４５分間透過処理した。細胞を洗浄緩衝液で洗浄し、遺伝子操作されていない細胞よりも遺伝子操作された細胞に結合する抗体を用いて４°Ｃで３０～４５分間染色した。データは、ｐＳＴＡＴ３ポジティブパーセントとして、場合によってはｐＳＴＡＴ３平均蛍光強度（ＭＦＩ）として表され、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍにインポートされた。
本開示の好ましい実施形態を本明細書に示し説明してきたが、このような実施形態が単なる例として提供されたものであることは当業者には明らかであろう。当業者であれば、本開示から逸脱することなく、数多くの変形、変更、及び置換を思いつくであろう。本開示を実施する際には、本開示の実施形態に対する様々な代替が採用され得ることを理解されたい。以下の特許請求の範囲は、本開示の範囲を定義し、これらの特許請求の範囲内の方法及び構造、並びにそれらの均等物がそれによってカバーされることが意図されている。

Claims (176)

  1. 遺伝子操作された細胞に対する標的化サイトカイン構築物であって、
    細胞結合ドメインであって、（ｉ）前記遺伝子操作された細胞に外因的に導入されたキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）若しくはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）のドメイン、（ｉｉ）前記遺伝子操作された細胞の表面に選択的に発現されたタグ分子、（ｉｉｉ）前記遺伝子操作された細胞に外因的に導入されたＣＡＲの一部であるポリペプチドタグ、（ｉｖ）前記遺伝子操作された細胞に外因的に導入されたＴＣＲの一部であるポリペプチドタグ、又は（ｖｉ）（ｉ）～（ｖ）の任意の組み合わせ、のうちの少なくとも１つを標的とする細胞結合ドメインと、
    サイトカインタンパク質又はその機能的断片若しくはバリアントと、を含む、標的化サイトカイン構築物。
  2. 前記標的化サイトカイン構築物は、遺伝子操作されていない細胞の活性化と比較して、１０倍以上の効力で前記遺伝子操作された細胞を選択的に活性化する、請求項１に記載の標的化サイトカイン構築物。
  3. 前記効力は、ｐＳＴＡＴ５活性化アッセイ又はｐＳＴＡＴ３活性化アッセイによって測定される、請求項２に記載の標的化サイトカイン構築物。
  4. 前記ＣＡＲの前記ドメインは、ｓｃＦｖである、請求項１～３のいずれか一項に記載の標的化サイトカイン構築物。
  5. 前記遺伝子操作されていない細胞は、表面に、前記ＣＡＲ、前記ＴＣＲ、又は前記タグ分子を発現しない、請求項２～４のいずれか一項に記載の標的化サイトカイン構築物。
  6. 前記細胞結合ドメインは、抗体又はその抗原結合断片を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載の標的化サイトカイン構築物。
  7. 前記抗体又はその抗原結合断片は、二価又は一価である、請求項６に記載の標的化サイトカイン構築物。
  8. 前記サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１、若しくはそれらの機能的断片、若しくはそれらのバリアント、又はこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１～７のいずれか一項に記載の標的化サイトカイン構築物。
  9. 前記サイトカインは、ＩＬ－２ポリペプチド、又はその機能的断片、又はそのバリアントである、請求項８に記載の標的化サイトカイン構築物。
  10. 前記ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を有する野生型ＩＬ－２ポリペプチドの結合親和性と比較して、配列番号２のアミノ酸配列を有するＩＬ－２Ｒαポリペプチドに対して少なくとも約５０％低下した結合親和性を示す、請求項９に記載の標的化サイトカイン構築物。
  11. 前記ＩＬ－２ポリペプチドは、前記配列番号１のアミノ酸配列を有する野生型ＩＬ－２ポリペプチドの前記結合親和性と比較して、配列番号３のアミノ酸配列を有するＩＬ－２Ｒβポリペプチドに対して少なくとも約５０％低下した結合親和性、及び／又は配列番号４のアミノ酸配列を有するＩＬ－２Ｒγポリペプチドに対して少なくとも約５０％低下した結合親和性を示す、請求項１０に記載の標的化サイトカイン構築物。
  12. 前記ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号１に対して１つ以上のアミノ酸置換を有する配列番号１の前記配列を含み、前記１つ以上の置換は、Ｑ１１、Ｈ１６、Ｌ１８、Ｌ１９、Ｄ２０、Ｑ２２、Ｒ３８、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｙ４５、Ｅ６２、Ｐ６５、Ｅ６８、Ｖ６９、Ｌ７２、Ｄ８４、Ｓ８７、Ｎ８８、Ｖ９１、Ｉ９２、Ｔ１２３、Ｑ１２６、Ｓ１２７、Ｉ１２９、及びＳ１３０からなる群から選択される、配列番号１の位置における１つ又は複数の置換を含む、請求項９～１１のいずれか一項に記載の標的化サイトカイン構築物。
  13. 前記１つ以上の置換は、配列番号１に対してＦ４２Ａアミノ酸置換又はＦ４２Ｋアミノ酸置換を含む、請求項１２に記載の標的化サイトカイン構築物。
  14. 前記１つ以上の置換は、配列番号１に対してＲ３８Ａ、Ｒ３８Ｄ、Ｒ３８Ｅ、Ｅ６２Ｑ、Ｅ６８Ａ、Ｅ６８Ｑ、Ｅ６８Ｋ、又はＥ６８Ｒアミノ酸置換を更に含む、請求項１３に記載の標的化サイトカイン構築物。
  15. 前記１つ以上の置換は、配列番号１に対して、Ｈ１６Ｅ、Ｈ１６Ｄ、Ｄ２０Ｎ、Ｍ２３Ａ、Ｍ２３Ｒ、Ｍ２３Ｋ、Ｓ８７Ｋ、Ｓ８７Ａ、Ｄ８４Ｌ、Ｄ８４Ｎ、Ｄ８４Ｖ、Ｄ８４Ｈ、Ｄ８４Ｙ、Ｄ８４Ｒ、Ｄ８４Ｋ、Ｎ８８Ａ、Ｎ８８Ｇ、Ｎ８８Ｓ、Ｎ８８Ｔ、Ｎ８８Ｒ、Ｎ８８Ｉ、Ｎ８８Ｄ、Ｖ９１Ａ、Ｖ９１Ｔ、Ｖ９１Ｅ、Ｉ９２Ａ、Ｅ９５Ｓ、Ｅ９５Ａ、Ｅ９５Ｒ、Ｔ１２３Ａ、Ｔ１２３Ｅ、Ｔ１２３Ｋ、Ｔ１２３Ｑ、Ｑ１２６Ａ、Ｑ１２６Ｓ、Ｑ１２６Ｔ、Ｑ１２６Ｅ、Ｓ１２７Ａ、Ｓ１２７Ｅ、Ｓ１２７Ｋ、又はＳ１２７Ｑアミノ酸置換を更に含む、請求項１４に記載の標的化サイトカイン構築物。
  16. 前記１つ以上の置換は、配列番号１と比較してアミノ酸変異Ｃ１２５Ａを更に含む、請求項１５に記載の標的化サイトカイン構築物。
  17. 前記ＩＬ－２ポリペプチドは、以下のセットのアミノ酸置換（配列番号１の配列に対する）：Ｒ３８Ｅ及びＦ４２Ａ；Ｒ３８Ｄ及びＦ４２Ａ；Ｆ４２Ａ及びＥ６２Ｑ；Ｒ３８Ａ及びＦ４２Ｋ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ｓ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ｇ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ｄ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＶ９１Ｅ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｈ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｋ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｒ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ｅ及びＦ４２Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ｅ及びＦ４２Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＮ８８Ｓ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＮ８８Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＮ８８Ｇ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＮ８８Ｄ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＶ９１Ｅ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｈ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｋ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｒ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ｄ及びＦ４２Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ｄ及びＦ４２Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＮ８８Ｓ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＮ８８Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＮ８８Ｇ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＮ８８Ｄ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＶ９１Ｅ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＤ８４Ｈ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＤ８４Ｋ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＤ８４Ｒ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ａ、及びＦ４２Ｋ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ａ、及びＦ４２Ｋ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＱ１２６Ｓ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＮ８８Ｓ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＮ８８Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＮ８８Ｇ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＮ８８Ｄ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＶ９１Ｅ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｈ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｋ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｒ；Ｈ１６Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＥ６２Ｑ；Ｈ１６Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＥ６２Ｑ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｃ１２５Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｃ１２５Ａ、及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｄ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｄ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｄ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｃ１２５Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＥ６２Ｑ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＥ６２Ｑ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｃ１２５Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；並びにＦ４２Ａ、Ｃ１２５Ａ及びＱ１２６Ｓのうちの１つを有する、配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項９に記載の標的化サイトカイン構築物。
  18. 前記ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号１１～９０からなる群から選択される配列と少なくとも約８５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項９に記載の標的化サイトカイン構築物。
  19. 前記ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号４３、４８、５２、４９、及び１５６からなる群から選択される配列と少なくとも約７５％同一である配列を含む、請求項９に記載の標的化サイトカイン構築物。
  20. 前記サイトカインは、ＩＬ－７ポリペプチド、又はその機能的断片、又はそのバリアントである、請求項８に記載の標的化サイトカイン構築物。
  21. 前記ＩＬ－７ポリペプチドは、配列番号９４のアミノ酸配列を含むＩＬ－７Ｒａポリペプチドに対して、配列番号９１のアミノ酸配列を含む野生型ＩＬ－７ポリペプチドの、前記ＩＬ－７Ｒａポリペプチドへの結合親和性と比較して、少なくとも約５０％低下した結合親和性を示す、請求項２０に記載の標的化サイトカイン構築物。
  22. 前記ＩＬ－７ポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒｇポリペプチドに対して、配列番号９１の前記アミノ酸配列を含む野生型ＩＬ－７ポリペプチドの、前記ＩＬ－２Ｒｇポリペプチドへの結合親和性と比較して、少なくとも約５０％低下した結合親和性を示す、請求項２１に記載の標的化サイトカイン構築物。
  23. 前記ＩＬ－７ポリペプチドは、配列番号９１に対して１つ以上の置換を有する、配列番号９１の前記配列を含む、請求項２０～２２のいずれか一項に記載の標的化サイトカイン構築物。
  24. 前記１つ以上の置換は、位置Ｋ１０、Ｑ１１、Ｓ１４、Ｖ１５、Ｖ１８、Ｑ２２、Ｌ３５、Ｎ３６、Ｄ７４、Ｌ７７、Ｌ８０、Ｋ８１、Ｅ８４、Ｉ８８、Ｒ１３３、Ｑ１３６、Ｅ１３７、Ｔ１４０、Ｎ１４３、及びＫ１４４から選択される位置にある、請求項２３に記載の標的化サイトカイン構築物。
  25. 位置Ｋ８１の前記置換は、Ｋ８１Ａであり、位置Ｔ１４０の前記置換は、Ｋ１４０Ａである、請求項２４に記載の標的化サイトカイン構築物。
  26. 前記サイトカインは、ＩＬ－１０ポリペプチド、又はその機能的断片、又はそのバリアントである、請求項８に記載の標的化サイトカイン構築物。
  27. 前記ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号９６のアミノ酸配列を含むＩＬ－１０ＲＡポリペプチドに対して、配列番号９５のアミノ酸配列を含む野生型ＩＬ－１０ポリペプチドの、前記ＩＬ－１０ＲＡポリペプチドへの結合親和性と比較して、少なくとも約５０％低下した結合親和性を示す、請求項２６に記載の標的化サイトカイン構築物。
  28. 前記ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号９７のアミノ酸配列を含むＩＬ－１０ＲＢポリペプチドに対して、配列番号９５の前記アミノ酸配列を含む野生型ＩＬ－１０ポリペプチドの、前記ＩＬ－１０ＲＢポリペプチドへの結合親和性と比較して、少なくとも約５０％増加した結合親和性を示す、請求項２７に記載の標的化サイトカイン構築物。
  29. 前記ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号９５に対して１つ以上の置換を有する、配列番号９５の配列を含む、請求項２６に記載の標的化サイトカイン構築物。
  30. 前記ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号９９～１１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２９に記載の標的化サイトカイン構築物。
  31. 前記サイトカインは、ＩＬ－２１ポリペプチド、又はその機能的断片、又はそのバリアントである、請求項８に記載の標的化サイトカイン構築物。
  32. 前記ＩＬ－２１ポリペプチドは、配列番号９３のアミノ酸配列を含むＩＬ－２１Ｒポリペプチドに対して、配列番号９２のアミノ酸配列を含む野生型ＩＬ－２１ポリペプチドの、前記ＩＬ－２１Ｒポリペプチドへの結合親和性と比較して、少なくとも約５０％低下した結合親和性を示す、請求項３１に記載の標的化サイトカイン構築物。
  33. 前記ＩＬ－２１ポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒｇポリペプチドに対して、配列番号９２のアミノ酸配列を含む野生型ＩＬ－２１ポリペプチドの、前記ＩＬ－２Ｒｇポリペプチドへの結合親和性と比較して、少なくとも約５０％低下した結合親和性を示す、請求項３２に記載の標的化サイトカイン構築物。
  34. 前記ＩＬ－２１ポリペプチドは、配列番号１１５に対して１つ以上の置換を有する、配列番号１１５の配列を含む、請求項３１に記載の標的化サイトカイン構築物。
  35. １つ以上の位置における前記置換は、位置Ｒ５、Ｉ８、Ｒ９、Ｒ１１、Ｑ１２、Ｉ１４、Ｄ１５、Ｄ１８、Ｑ１９、Ｙ２３、Ｒ６５、Ｓ７０、Ｋ７２、Ｋ７３、Ｋ７５、Ｒ７６、Ｋ７７、Ｓ８０、Ｑ１１６、及びＫ１１７から選択され、前記位置の番号付けは、配列番号１１５の前記アミノ酸配列に従った番号である、請求項３４に記載の標的化サイトカイン構築物。
  36. 前記遺伝子操作された細胞は、Ｔ細胞受容体を発現するＴ細胞（ＴＣＲ－Ｔ細胞）、γδＴ細胞、多能性幹細胞由来のＴ細胞又は人工多能性幹細胞由来のＴ細胞、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、多能性幹細胞由来のＮＫ細胞又は人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）由来のＮＫ細胞、キメラ抗原受容体を発現するように遺伝子操作されたＴ細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）、ＣＤ８陽性Ｔ細胞、ＣＤ４陽性Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球、ＣＡＲ－ＮＫ細胞、γδＴ細胞、骨髄細胞、造血系細胞、造血幹細胞及び前駆細胞（ＨＳＣ）、造血多分化能前駆細胞（ＭＰＰ）、プレＴ細胞前駆細胞、Ｔ細胞前駆細胞、ＮＫ細胞前駆細胞のうちの少なくとも１つを含む、請求項１～３５のいずれか一項に記載の標的化サイトカイン構築物。
  37. 前記標的化サイトカイン構築物は、前記遺伝子操作された細胞を含む療法と組み合わせて対象に投与するのに好適である、請求項１～３６のいずれか一項に記載の標的化サイトカイン構築物。
  38. 前記遺伝子操作された細胞は、前記対象にとって自家である、請求項３７に記載の標的化サイトカイン構築物。
  39. 前記遺伝子操作された細胞は、前記対象にとって同種異系由来である、請求項３８に記載の標的化サイトカイン構築物。
  40. 前記対象は、ヒトである、請求項３７～３９のいずれか一項に記載の標的化サイトカイン構築物。
  41. 前記対象は、がんを患っている、請求項４０に記載の標的化サイトカイン構築物。
  42. 前記がんは、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）（非Ｔ細胞ＡＬＬを含む）、急性骨髄性白血病、Ｂ細胞性前リンパ球性白血病、Ｂ細胞性急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍、バーキットリンパ腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄白血病、慢性若しくは急性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、ヘアリー細胞白血病、ホジキン病、悪性リンパ増殖性疾患、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、意義不明の単クローン性γグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、多発性骨髄腫、骨髄異形成及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、形質細胞増殖性疾患（無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫若しくは無痛性骨髄腫）を含む、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞腫瘍、形質細胞腫（形質細胞疾患、孤立性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、髄外性形質細胞腫、及び多発性形質細胞腫を含む）、ＰＯＥＭＳ症候群（Ｃｒｏｗ－Ｆｕｋａｓｅ症候群、高月病、及びＰＥＰ症候群としても知られている）、縦隔原発Ｂ細胞性大細胞型リンパ腫（ＰＭＢＣ）、小細胞若しくは大細胞濾胞性リンパ腫、脾臓辺縁帯リンパ腫（ＳＭＺＬ）、全身性アミロイド軽鎖アミロイドーシス、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、Ｔ細胞リンパ腫、形質転換濾胞性リンパ腫若しくはワルデンストロームマクログロブリン血症、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、形質転換濾胞性リンパ腫（ＴＦＬ）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣＬ）、多発性骨髄腫、ヘアリー細胞リンパ腫／白血病、肺がん、小細胞肺がん、非小細胞肺（ＮＳＣＬ）がん、細気管支肺胞細胞肺がん、扁平上皮がん、肺腺がん、肺扁平上皮がん、腹膜がん、頭頸部がん、骨がん、膵臓がん、皮膚がん、頭頸部のがん、皮膚若しくは眼球内黒色腫、甲状腺がん、子宮がん、消化器がん、卵巣がん、直腸がん、肛門部のがん、胃がん、胃がん、結腸がん、乳がん、子宮内膜がん、子宮がん、卵管のがん腫、子宮頸部のがん腫、膣のがん腫、外陰がん、ホジキン病、食道がん、小腸がん、内分泌系がん、甲状腺がん、副甲状腺がん、副腎がん、軟部組織の肉腫、尿道がん、陰茎がん、前立腺がん、膀胱がん、腎臓若しくは尿管がん、腎細胞がん、腎盂のがん腫、中皮腫、膀胱がん、肝臓がん、ヘパトーマ、肝細胞がん、子宮頸がん、唾液腺がん、胆道がん、中枢神経系（ＣＮＳ）の腫瘍、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、多形神経膠芽腫、星状細胞腫、シュワン細胞腫、上衣腫、髄芽腫、髄膜腫、扁平上皮がん、下垂体腺腫、及びユーイング肉腫、並びに、これらのがんのいずれかの難治性バージョン、又はこれらのがんのうちの１つ以上の組み合わせである、請求項４１に記載の標的化サイトカイン構築物。
  43. 医薬組成物であって、請求項１～４２のいずれか一項に記載の標的化サイトカイン構築物と、薬学的に許容される賦形剤、担体、若しくは希釈剤のうちの少なくとも１つ、又はこれらの任意の組み合わせと、を含む、医薬組成物。
  44. 遺伝子操作された細胞の集団を更に含む、請求項４３に記載の医薬組成物。
  45. 請求項１～４２のいずれか一項に記載の標的化サイトカイン構築物を含む医薬組成物と、前記標的化サイトカイン構築物を対象に投与するために明記された説明書と、を含む、細胞療法キット。
  46. 遺伝子操作された細胞の集団を含む医薬組成物と、前記遺伝子操作された細胞の集団を前記対象に投与するために明記された説明書と、を更に含む、請求項４５に記載の細胞療法キット。
  47. 前記標的化サイトカイン構築物を含む前記医薬組成物及び前記遺伝子操作された細胞の集団を含む前記医薬組成物は、連続投与用又は同時投与用である、請求項４６に記載の細胞療法キット。
  48. 対象における疾患を治療する方法であって、前記方法は、（ａ）遺伝子操作された細胞と、（ｂ）標的化サイトカイン構築物と、を含む、最適治療計画を前記対象に施すことを含み、 前記（ｂ）標的化サイトカイン構築物は、
    （ｉ）前記遺伝子操作された細胞に外因的に導入された受容体又はドメインに結合する細胞結合ドメインと、
    （ｉｉ）サイトカインタンパク質又はその機能的断片若しくはバリアントと、を含む、方法。
  49. 前記標的化サイトカイン構築物は、遺伝子操作されていない細胞の集団の活性化と比較して、１０倍以上の効力で、遺伝子操作された細胞の集団を選択的に活性化する、請求項４８に記載の方法。
  50. 前記標的化サイトカイン構築物を投与すると、前記遺伝子操作されていない細胞の集団の活性化と比較して、遺伝子操作された細胞の集団の活性化の増加をもたらす、請求項４９に記載の方法。
  51. 前記活性化は、ｐＳＴＡＴ５活性化アッセイ又はｐＳＴＡＴ３活性化アッセイによって測定される、請求項５０に記載の方法。
  52. 前記標的化サイトカイン構築物を投与すると、遺伝子操作されていない細胞の集団の拡大及び／又は増殖と比較して、遺伝子操作された細胞の集団の拡大及び／又は増殖の増加をもたらす、請求項４８に記載の方法。
  53. 前記標的化サイトカイン構築物を投与すると、遺伝子操作された細胞の集団のインビボ持続性が、遺伝子操作されていない細胞の集団のインビボ持続性と比較して、増加する、請求項４８に記載の方法。
  54. 前記遺伝子操作されていない細胞は、ＣＡＲ、ＴＣＲ、又はタグ分子を発現しない、請求項５０～５３のいずれか一項に記載の方法。
  55. 前記標的化サイトカイン構築物を投与すると、遺伝子操作された細胞の集団の活性化、拡大、及び／又は増殖は、前記標的化サイトカイン構築物なしで投与されたときの、前記遺伝子操作された細胞の集団の活性化、拡大、及び／又は増殖と比較して、増加する、請求項４８に記載の方法。
  56. 前記拡大及び／又は増殖は、インビボ又はインビトロで行われる、請求項５５に記載の方法。
  57. 前記標的化サイトカイン構築物を投与すると、前記遺伝子操作された細胞の集団のインビボ持続性が、前記標的化サイトカイン構築物なしで投与されたときの、前記遺伝子操作された細胞の集団のインビボ持続性と比較して、増加する、請求項４８に記載の方法。
  58. 前記遺伝子操作された細胞の集団の前記インビボ持続性は、約１５日、約３０日～約１年の期間を含む、請求項５７に記載の方法。
  59. 前記標的化サイトカイン構築物を投与すると、前記遺伝子操作された細胞の集団の枯渇の速度及び／又は程度は、前記標的化サイトカイン構築物なしで投与されたときの、前記遺伝子操作された細胞の集団の枯渇の速度及び／又は程度と比較して、低下する、請求項４８に記載の方法。
  60. 前記標的化サイトカイン構築物を投与すると、前記遺伝子操作された細胞の選択的増強がもたらされ、非標的化サイトカイン又はその機能的断片若しくはバリアントとともに投与されたときの、遺伝子操作された細胞の集団の特異的富化と比較して、前記遺伝子操作された細胞の集団の特異的富化が増強される、請求項４８に記載の方法。
  61. 前記標的化サイトカイン構築物の投与は、前記対象から単離された生体サンプル中のＴｒｅｇ細胞の数を、非標的化サイトカイン又はその機能的断片若しくはバリアントを投与された対象から単離された生体サンプル中のＴｒｅｇ細胞の数と比較して、増加させない、請求項４８に記載の方法。
  62. 前記生体サンプルは、腫瘍生検又は末梢血液のうちの少なくとも１つである、請求項６１に記載の方法。
  63. 前記対象には、プレコンディショニングレジメンが事前に投与されている、請求項４８～６２のいずれか一項に記載の方法。
  64. 前記標的化サイトカイン構築物の投与により、前記プレコンディショニングレジメンの重大度又は期間のうちの少なくとも１つが低減される、請求項６３に記載の方法。
  65. プレコンディショニングレジメンを使用して、前記遺伝子操作された細胞の集団が拡大可能となるように、内因性リンパ球集団を減少させる、請求項６４に記載の方法。
  66. 前記プレコンディショニングレジメンは、リンパ球枯渇剤を投与することを含む、請求項６３～６５のいずれか一項に記載の方法。
  67. 前記標的化サイトカイン構築物を投与すると、前記遺伝子操作された細胞の生着に必要なリンパ球枯渇の程度が低下する、請求項６６に記載の方法。
  68. 前記プレコンディショニングレジメンは、化学療法剤を前記対象に投与することを含む、請求項６３～６７のいずれか一項に記載の方法。
  69. 前記化学療法剤は、フルダラビン及びシクロホスファミドのうちの少なくとも１つである、請求項６８に記載の方法。
  70. 前記プレコンディショニングレジメンは、放射線治療を含む、請求項６３～６９のいずれか一項に記載の方法。
  71. 前記プレコンディショニングレジメンは、枯渇性抗体を投与することを含む、請求項６３～７０のいずれか一項に記載の方法。
  72. 前記枯渇性抗体は、アレムツズマブである、請求項７１に記載の方法。
  73. 前記対象には、プレコンディショニングレジメンが投与されていない、請求項４８～６２のいずれか一項に記載の方法。
  74. 遺伝子操作細胞療法を投与する前にプレコンディショニングレジメンを投与する必要性を排除するか、又はその重大度を最小限に抑える方法であって、 前記方法は、最適治療計画を対象に施すことを含み、 前記最適治療計画は、
    （ａ）遺伝子操作された細胞と、
    （ｂ）標的化サイトカイン構築物と、を含み、 前記（ｂ）標的化サイトカイン構築物は、（ｉ）前記遺伝子操作された細胞に外因的に導入された受容体又はドメインに結合する細胞結合ドメインと、（ｉｉ）サイトカインタンパク質又はその機能的断片若しくはバリアントと、を含む、方法。
  75. 前記対象には、プレコンディショニングレジメンが投与されていない、請求項７４に記載の方法。
  76. 前記標的化サイトカイン構築物は、遺伝子操作されていない細胞の活性化と比較して、１０倍以上の効力で、遺伝子操作された細胞を選択的に活性化する、請求項７５に記載の方法。
  77. 前記活性化は、ｐＳＴＡＴ５活性化アッセイ又はｐＳＴＡＴ３活性化アッセイによって測定される、請求項７６に記載の方法。
  78. 前記遺伝子操作されていない細胞は、前記細胞に外因的に導入された受容体又はドメインを含まない、請求項７６又は７７に記載の方法。
  79. 前記標的化サイトカイン構築物は、前記遺伝子操作された細胞の投与後、２日、３日、６日、１２日、１５日、３０日、６０日、若しくは９０日以上の期間内、又は約２日、約３日、約６日、約１２日、約１５日、約３０日、約６０日、若しくは約９０日以上の期間内に投与される、請求項４８～７８のいずれか一項に記載の方法。
  80. 前記標的化サイトカイン構築物は、前記遺伝子操作された細胞を投与するのと同時に投与される、請求項４８～７９のいずれか一項に記載の方法。
  81. 前記最適治療計画における前記遺伝子操作された細胞の有効用量は、前記遺伝子操作された細胞を投与することを含むが、前記標的化サイトカイン構築物を投与することを含まない参照最適治療計画の有効用量より低い、請求項４８～８０のいずれか一項に記載の方法。
  82. 前記最適治療計画における前記遺伝子操作された細胞の前記有効用量は、前記参照最適治療計画における前記遺伝子操作された細胞の有効薬量より少なくとも約１．５倍～約１０００倍低い、請求項８１に記載の方法。
  83. 対象における遺伝子操作細胞療法の有効性を高める方法であって、 前記方法は、最適治療計画を対象に施すことにより、前記対象における前記遺伝子操作細胞療法の前記有効性を高めること、を含み、 前記最適治療計画は、
    （ａ）遺伝子操作された細胞と、
    （ｂ）標的化サイトカイン構築物と、を含み、 前記（ｂ）標的化サイトカイン構築物は、（ｉ）前記遺伝子操作された細胞に外因的に導入された受容体又はドメインに結合する細胞結合ドメインと、（ｉｉ）サイトカインタンパク質又はその機能的断片若しくはバリアントと、を含む、方法。
  84. 前記標的化サイトカイン構築物は、遺伝子操作されていない細胞の活性化と比較して、１０倍以上の効力で、遺伝子操作された細胞を選択的に活性化する、請求項８３に記載の方法。
  85. 前記遺伝子操作されていない細胞は、前記細胞に外因的に導入された受容体又はドメインを含まない、請求項８３又は８４に記載の方法。
  86. 前記効力は、ｐＳＴＡＴ５活性化アッセイ又はｐＳＴＡＴ３活性化アッセイによって測定される、請求項７６～８５のいずれか一項に記載の方法。
  87. Ｂ細胞形成不全の消失を経験した対象を治療する方法であって、前記方法は、標的化サイトカイン構築物を前記対象に投与することを含み、 前記標的化サイトカイン構築物は、
    （ｉ）遺伝子操作された細胞に外因的に導入された受容体又はドメインに結合する細胞結合ドメインと、
    （ｉｉ）サイトカインタンパク質又はその機能的断片若しくはバリアントと、を含む、方法。
  88. 疾患又は疾病を治療する方法であって、前記方法は、（ａ）遺伝子操作された細胞と、（ｂ）標的化サイトカイン構築物と、を含む、最適治療計画を対象に施すことを含み、 前記（ｂ）標的化サイトカイン構築物は、
    （ｉ）前記遺伝子操作された細胞に外因的に導入された受容体又はドメインに結合する細胞結合ドメインと、
    （ｉｉ）サイトカインタンパク質又はその機能的断片若しくはバリアントと、を含み、前記標的化サイトカイン構築物を投与することにより、前記最適治療計画における前記遺伝子操作された細胞の有効用量を、前記遺伝子操作された細胞を投与することを含むが、前記標的化サイトカイン構築物を含まない参照最適治療計画における前記遺伝子操作された細胞の有効用量に対して、低減させる、方法。
  89. 前記最適治療計画における前記遺伝子操作された細胞の前記有効用量は、前記参照最適治療計画における前記遺伝子操作された細胞の有効薬量より少なくとも約１．５倍～約１０００倍低い、請求項８８に記載の方法。
  90. 前記遺伝子操作された細胞は、組成物中で提供され、前記組成物は、ポイントオブケアで生成され、前記細胞の集団を培養することなく患者に投与される、請求項４８～８９のいずれか一項に記載の方法。
  91. 対象において遺伝子操作された細胞を標的化する方法であって、前記方法は、細胞結合ドメイン及び修飾サイトカイン又はその機能的断片若しくはバリアントを含む標的化サイトカイン構築物を前記対象に投与することを含み、前記遺伝子操作された細胞は、（ｉ）前記修飾サイトカイン又はその機能的断片若しくはバリアントに対する受容体、及び（ｉｉ）前記細胞結合ドメインに対する標的抗原を発現する、方法。
  92. 対象において遺伝子操作された細胞の集団を富化する方法であって、前記方法は、細胞結合ドメイン及び修飾サイトカイン又はその機能的断片若しくはバリアントを含む標的化サイトカイン構築物を前記対象に投与することを含み、前記遺伝子操作された細胞は、（ｉ）前記修飾サイトカイン又はその機能的断片若しくはバリアントに対する受容体、及び（ｉｉ）前記細胞結合ドメインに対する標的抗原を発現する、方法。
  93. 前記遺伝子操作された細胞は、前記対象においてインビボで生成される、請求項９１又は９２に記載の方法。
  94. 前記対象は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体タンパク質（ＴＣＲ）を発現する核酸を含む、核酸担体を事前に投与されている、請求項９３に記載の方法。
  95. 前記核酸担体は、直鎖状ポリヌクレオチド、イオン性化合物又は両親媒性化合物と会合したポリヌクレオチド、プラスミド、及びウイルスのうちの少なくとも１つである、請求項９４に記載の方法。
  96. 前記核酸担体は、ナノ担体である、請求項９４に記載の方法。
  97. 前記核酸担体は、ウイルスベクターであり、前記ウイルスベクターは、センダイウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、又はレンチウイルスベクターのうちの少なくとも１つである、請求項９４に記載の方法。
  98. 前記核酸は、ＤＮＡ又はＲＮＡである、請求項９４～９７のいずれか一項に記載の方法。
  99. 前記ＲＮＡは、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）である、請求項９８に記載の方法。
  100. 前記核酸担体は、免疫細胞を標的化するための標的化部分を更に含む、請求項９４～９９のいずれか一項に記載の方法。
  101. 前記免疫細胞は、骨髄細胞、Ｔ細胞、又はＮＫ細胞を含む、請求項１００に記載の方法。
  102. 前記Ｔ細胞は、Ｔリンパ球を含む、請求項１０１に記載の方法。
  103. 前記Ｔ細胞又は前記ＮＫ細胞は、前記対象においてインビボで前記遺伝子操作された細胞を生成するために、前記ベクター又は前記核酸担体によって誘導される、請求項１０１又は１０２に記載の方法。
  104. 前記標的化サイトカイン構築物を投与することにより、インビボで生成された遺伝子操作された細胞の集団の活性化、拡大、及び／又は増殖は、前記対象が前記標的化サイトカイン構築物を投与されないときの、インビボで生成された前記遺伝子操作された細胞の集団の活性化、拡大、及び／又は増殖と比較して、増加する、請求項９２～１０３のいずれか一項に記載の方法。
  105. 前記標的化サイトカイン構築物を投与することにより、インビボで生成された遺伝子操作された細胞の集団の持続性が、前記対象が前記標的化サイトカイン構築物を投与されないときの、インビボで生成された前記遺伝子操作された細胞の集団の持続性と比較して、増加する、請求項９２～１０４のいずれか一項に記載の方法。
  106. 前記標的化サイトカイン構築物を投与することにより、インビボで生成された遺伝子操作された細胞の集団の枯渇の速度及び／又は程度は、前記標的化サイトカイン構築物なしで投与されたときの、インビボで生成された前記遺伝子操作された細胞の集団の枯渇の速度及び／又は程度と比較して、低下する、請求項９２～１０５のいずれか一項に記載の方法。
  107. 前記標的化サイトカイン構築物を投与することにより、インビボで生成された前記遺伝子操作された細胞の選択的増強がもたらされ、非標的化サイトカイン又はその機能的断片若しくはバリアントとともに投与されたときの、遺伝子操作された細胞の集団の特異的富化と比較して、インビボで生成された前記遺伝子操作された細胞の集団の特異的富化が増強される、請求項９２～１０６のいずれか一項に記載の方法。
  108. 前記標的化サイトカイン構築物を投与することは、前記対象から単離された生体サンプル中のＴｒｅｇ細胞の数を、非標的化サイトカイン又はその機能的断片若しくはバリアントを投与された対象から単離された生体サンプル中のＴｒｅｇ細胞の数と比較して、増加させない、請求項９２～１０７のいずれか一項に記載の方法。
  109. 前記生体サンプルは、腫瘍生検又は末梢血液のうちの少なくとも１つである、請求項１０８に記載の方法。
  110. 前記遺伝子操作された細胞の集団の前記持続性は、少なくとも約３０日～約１年の期間を含む、請求項１０５～１０９のいずれか一項に記載の方法。
  111. 遺伝子操作された細胞の集団を富化する方法であって、前記方法は、前記遺伝子操作された細胞の前記集団を、細胞結合ドメイン及び修飾サイトカイン又はその機能的断片若しくはバリアントを含む標的化サイトカイン構築物と接触させることを含み、前記遺伝子操作された細胞は、（ｉ）前記修飾サイトカイン又はその機能的断片若しくはバリアントに対する受容体、及び（ｉｉ）前記細胞結合ドメインに対する標的抗原を発現する、方法。
  112. 前記サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１、若しくはそれらの機能的断片、若しくはそれらのバリアント、又はこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項４８～１１１のいずれか一項に記載の方法。
  113. 前記サイトカインは、（ｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒβポリペプチドに結合する、かつ／又はこれを活性化するＩＬ－２Ｒβγアゴニストポリペプチド、及び（ｉｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒγポリペプチドに結合する、かつ／又はこれを活性化するＩＬ－２Ｒβγポリペプチドアゴニストポリペプチドのうちの少なくとも１つである、請求項４８～１１２のいずれか一項に記載の方法。
  114. 前記サイトカインは、ＩＬ－２ポリペプチド、又はその機能的断片、又はそのバリアントである、請求項１１２又は１１３に記載の方法。
  115. 前記ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒαポリペプチドに対して、配列番号１のアミノ酸配列を含む野生型ＩＬ－２ポリペプチドの、前記ＩＬ－２Ｒαポリペプチドへの結合親和性と比較して、少なくとも約５０％低下した結合親和性を示す、請求項１１４に記載の方法。
  116. 前記ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含む野生型ＩＬ－２ポリペプチドの、前記ＩＬ－２Ｒβポリペプチドへの結合親和性と比較して、配列番号３のアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒβポリペプチドに対して少なくとも約５０％低下した結合親和性、及び／又は配列番号４のアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒγポリペプチドに対して少なくとも約５０％低下した結合親和性を示す、請求項１１５に記載の方法。
  117. 前記サイトカインは、配列番号９４のアミノ酸配列を含むＩＬ－７Ｒａポリペプチドに対して、配列番号９１のアミノ酸配列を含む野生型ＩＬ－７ポリペプチドの、前記ＩＬ－７Ｒａポリペプチドへの結合親和性と比較して、少なくとも約５０％低下した結合親和性を示すＩＬ－７ポリペプチドである、請求項１１２に記載の方法。
  118. 前記ＩＬ－７ポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒｇポリペプチドに対して、配列番号９１の前記アミノ酸配列を含む野生型ＩＬ－７ポリペプチドの、前記ＩＬ－２Ｒｇポリペプチドへの結合親和性と比較して、５０％以上低下した結合親和性を示す、請求項１１７に記載の方法。
  119. 前記サイトカインは、配列番号９６のアミノ酸配列を含むＩＬ－１０ＲＡポリペプチドに対して、配列番号９５のアミノ酸配列を含む野生型ＩＬ－１０ポリペプチドの、前記ＩＬ－１０ＲＡポリペプチドへの結合親和性と比較して、少なくとも約５０％低下した結合親和性を示すＩＬ－１０ポリペプチドである、請求項１１２に記載の方法。
  120. 前記ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号９７のアミノ酸配列を含むＩＬ－１０ＲＢポリペプチドに対して、配列番号９５のアミノ酸配列を含む野生型ＩＬ－１０ポリペプチドの、前記ＩＬ－１０ＲＢポリペプチドへの結合親和性と比較して、少なくとも約５０％増加した結合親和性を示す、請求項１１９に記載の方法。
  121. 前記サイトカインは、配列番号９３のアミノ酸配列を含むＩＬ－２１Ｒポリペプチドに対して、配列番号９２のアミノ酸配列を含む野生型ＩＬ－２１ポリペプチドの、前記ＩＬ－２１Ｒポリペプチドへの結合親和性と比較して、５０％以上低下した結合親和性を示すＩＬ－２１ポリペプチドである、請求項１２０に記載の方法。
  122. 前記ＩＬ－２１ポリペプチドは、配列番号４のアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒｇポリペプチドに対して、配列番号９２のアミノ酸配列を含む野生型ＩＬ－２１ポリペプチドの、前記ＩＬ－２Ｒｇポリペプチドへの結合親和性と比較して、少なくとも約５０％低下した結合親和性を示す、請求項１２１に記載の方法。
  123. 前記サイトカインは、配列番号１に対して１つ以上のアミノ酸置換を有する配列番号１の配列を含むＩＬ－２ポリペプチドであり、前記１つ以上の置換は、Ｑ１１、Ｈ１６、Ｌ１８、Ｌ１９、Ｄ２０、Ｑ２２、Ｒ３８、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｙ４５、Ｅ６２、Ｐ６５、Ｅ６８、Ｖ６９、Ｌ７２、Ｄ８４、Ｓ８７、Ｎ８８、Ｖ９１、Ｉ９２、Ｔ１２３、Ｑ１２６、Ｓ１２７、Ｉ１２９、及びＳ１３０からなる群から選択される、配列番号１の位置における１つ又は複数の置換を含む、請求項１１２に記載の方法。
  124. 前記１つ以上の置換は、配列番号１に対してＦ４２Ａアミノ酸置換又はＦ４２Ｋアミノ酸置換を含む、請求項１２３に記載の方法。
  125. 前記１つ以上の置換は、配列番号１に対してＲ３８Ａ、Ｒ３８Ｄ、Ｒ３８Ｅ、Ｅ６２Ｑ、Ｅ６８Ａ、Ｅ６８Ｑ、Ｅ６８Ｋ、又はＥ６８Ｒアミノ酸置換を更に含む、請求項１２４に記載の方法。
  126. 前記１つ以上の置換は、配列番号１に対して、Ｈ１６Ｅ、Ｈ１６Ｄ、Ｄ２０Ｎ、Ｍ２３Ａ、Ｍ２３Ｒ、Ｍ２３Ｋ、Ｓ８７Ｋ、Ｓ８７Ａ、Ｄ８４Ｌ、Ｄ８４Ｎ、Ｄ８４Ｖ、Ｄ８４Ｈ、Ｄ８４Ｙ、Ｄ８４Ｒ、Ｄ８４Ｋ、Ｎ８８Ａ、Ｎ８８Ｇ、Ｎ８８Ｓ、Ｎ８８Ｔ、Ｎ８８Ｒ、Ｎ８８Ｉ、Ｎ８８Ｄ、Ｖ９１Ａ、Ｖ９１Ｔ、Ｖ９１Ｅ、Ｉ９２Ａ、Ｅ９５Ｓ、Ｅ９５Ａ、Ｅ９５Ｒ、Ｔ１２３Ａ、Ｔ１２３Ｅ、Ｔ１２３Ｋ、Ｔ１２３Ｑ、Ｑ１２６Ａ、Ｑ１２６Ｓ、Ｑ１２６Ｔ、Ｑ１２６Ｅ、Ｓ１２７Ａ、Ｓ１２７Ｅ、Ｓ１２７Ｋ、又はＳ１２７Ｑアミノ酸置換を更に含む、請求項１２５に記載の方法。
  127. 前記１つ以上の置換は、配列番号１と比較してアミノ酸変異Ｃ１２５Ａを更に含む、請求項１２６に記載の方法。
  128. 前記サイトカインは、配列番号１１～９０からなる群から選択される配列と少なくとも約８５％同一であるアミノ酸配列を含むＩＬ－２ポリペプチドである、請求項１１２に記載の方法。
  129. 前記サイトカインは、配列番号４３、４８、５２、４９、及び１５６からなる群から選択される配列と少なくとも約８５％同一であるアミノ酸配列を含むＩＬ－２ポリペプチドである、請求項１１２に記載の方法。
  130. 前記サイトカインは、以下のセットのアミノ酸置換（配列番号１の配列に対する）：Ｒ３８Ｅ及びＦ４２Ａ；Ｒ３８Ｄ及びＦ４２Ａ；Ｆ４２Ａ及びＥ６２Ｑ；Ｒ３８Ａ及びＦ４２Ｋ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ｓ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ｇ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ｄ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＶ９１Ｅ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｈ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｋ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｒ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ｅ及びＦ４２Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ｅ及びＦ４２Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＮ８８Ｓ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＮ８８Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＮ８８Ｇ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＮ８８Ｄ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＶ９１Ｅ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｈ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｋ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｒ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ｄ及びＦ４２Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ｄ及びＦ４２Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＮ８８Ｓ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＮ８８Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＮ８８Ｇ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＮ８８Ｄ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＶ９１Ｅ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＤ８４Ｈ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＤ８４Ｋ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＤ８４Ｒ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ａ、及びＦ４２Ｋ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ａ、及びＦ４２Ｋ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＱ１２６Ｓ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＮ８８Ｓ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＮ８８Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＮ８８Ｇ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＮ８８Ｄ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＶ９１Ｅ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｈ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｋ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｒ；Ｈ１６Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＥ６２Ｑ；Ｈ１６Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＥ６２Ｑ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｃ１２５Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｃ１２５Ａ、及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｄ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｄ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｄ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｃ１２５Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＥ６２Ｑ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＥ６２Ｑ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｃ１２５Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；並びにＦ４２Ａ、Ｃ１２５Ａ及びＱ１２６Ｓのうちの１つを有する、配列番号１のアミノ酸配列を含む、ＩＬ－２ポリペプチドである、請求項１１２に記載の方法。
  131. 前記サイトカインは、ＩＬ－７ポリペプチド、又はその機能的断片若しくはバリアントである、請求項１１２に記載の方法。
  132. 前記ＩＬ－７ポリペプチドは、配列番号９１に対して１つ以上の置換を有する、配列番号９１の配列を含む、請求項１３１に記載の方法。
  133. １つ以上の位置における前記置換は、位置Ｋ１０、Ｑ１１、Ｓ１４、Ｖ１５、Ｖ１８、Ｑ２２、Ｌ３５、Ｎ３６、Ｄ７４、Ｌ７７、Ｌ８０、Ｋ８１、Ｅ８４、Ｉ８８、Ｒ１３３、Ｑ１３６、Ｅ１３７、Ｔ１４０、Ｎ１４３、及びＫ１４４から選択される、請求項１３２に記載の方法。
  134. 位置Ｋ８１の前記置換は、Ｋ８１Ａであり、位置Ｔ１４０の前記置換は、Ｋ１４０Ａである、請求項１３３に記載の方法。
  135. 前記サイトカインは、ＩＬ－１０ポリペプチド、又はその機能的断片若しくはバリアントである、請求項１１２に記載の方法。
  136. 前記ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号９５に対して１つ以上の置換を有する、配列番号９５の配列を含む、請求項１３５に記載の方法。
  137. 変異体ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号９９～１１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１３６に記載の方法。
  138. 前記サイトカインは、ＩＬ－２１ポリペプチド、又はその機能的断片、又はそのバリアントである、請求項１１２に記載の方法。
  139. 前記ＩＬ－２１ポリペプチドは、配列番号１１５に対して１つ以上の置換を有する、配列番号１１５の配列を含む、請求項１３８に記載の方法。
  140. １つ以上の位置における前記置換は、位置Ｒ５、Ｉ８、Ｒ９、Ｒ１１、Ｑ１２、Ｉ１４、Ｄ１５、Ｄ１８、Ｑ１９、Ｙ２３、Ｒ６５、Ｓ７０、Ｋ７２、Ｋ７３、Ｋ７５、Ｒ７６、Ｋ７７、Ｓ８０、Ｑ１１６、及びＫ１１７から選択され、前記位置の番号付けは、配列番号１１５の前記アミノ酸配列に従った番号である、請求項１３９に記載の方法。
  141. 前記遺伝子操作された細胞は、Ｔ細胞受容体を発現するＴ細胞（ＴＣＲ－Ｔ細胞）、γδＴ細胞、多能性幹細胞由来のＴ細胞又は人工多能性幹細胞由来のＴ細胞、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、多能性幹細胞由来のＮＫ細胞又は人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）由来のＮＫ細胞、キメラ抗原受容体を発現するように遺伝子操作されたＴ細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）、ＣＤ８陽性Ｔ細胞、ＣＤ４陽性Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球、ＣＡＲ－ＮＫ細胞、γδＴ細胞、骨髄細胞、造血系細胞、造血幹細胞及び前駆細胞（ＨＳＣ）、造血多分化能前駆細胞（ＭＰＰ）、プレＴ細胞前駆細胞、Ｔ細胞前駆細胞、ＮＫ細胞前駆細胞のうちの少なくとも１つを含む、請求項４８～１４０のいずれか一項に記載の方法。
  142. 前記遺伝子操作された細胞は、前記対象にとって自家である、請求項１４１に記載の方法。
  143. 前記遺伝子操作された細胞は、前記対象にとって同種異系由来である、請求項１４２に記載の方法。
  144. 前記対象は、ヒトである、請求項４８～１４３のいずれか一項に記載の方法。
  145. 前記対象は、がんを患っている、請求項４８～１４４のいずれか一項に記載の方法。
  146. 前記がんは、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）（非Ｔ細胞ＡＬＬを含む）、急性骨髄性白血病、Ｂ細胞性前リンパ球性白血病、Ｂ細胞性急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍、バーキットリンパ腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄白血病、慢性若しくは急性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、ヘアリー細胞白血病、ホジキン病、悪性リンパ増殖性疾患、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、意義不明の単クローン性γグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、多発性骨髄腫、骨髄異形成及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、形質細胞増殖性疾患（無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫若しくは無痛性骨髄腫）を含む、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞腫瘍、形質細胞腫（形質細胞疾患、孤立性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、髄外性形質細胞腫、及び多発性形質細胞腫を含む）、ＰＯＥＭＳ症候群（Ｃｒｏｗ－Ｆｕｋａｓｅ症候群、高月病、及びＰＥＰ症候群としても知られている）、縦隔原発Ｂ細胞性大細胞型リンパ腫（ＰＭＢＣ）、小細胞若しくは大細胞濾胞性リンパ腫、脾臓辺縁帯リンパ腫（ＳＭＺＬ）、全身性アミロイド軽鎖アミロイドーシス、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、Ｔ細胞リンパ腫、形質転換濾胞性リンパ腫若しくはワルデンストロームマクログロブリン血症、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、形質転換濾胞性リンパ腫（ＴＦＬ）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣＬ）、多発性骨髄腫、ヘアリー細胞リンパ腫／白血病、肺がん、小細胞肺がん、非小細胞肺（ＮＳＣＬ）がん、細気管支肺胞細胞肺がん、扁平上皮がん、肺腺がん、肺扁平上皮がん、腹膜がん、頭頸部がん、骨がん、膵臓がん、皮膚がん、頭頸部のがん、皮膚若しくは眼球内黒色腫、甲状腺がん、子宮がん、消化器がん、卵巣がん、直腸がん、肛門部のがん、胃がん、胃がん、結腸がん、乳がん、子宮内膜がん、子宮がん、卵管のがん腫、子宮頸部のがん腫、膣のがん腫、外陰がん、ホジキン病、食道がん、小腸がん、内分泌系がん、甲状腺がん、副甲状腺がん、副腎がん、軟部組織の肉腫、尿道がん、陰茎がん、前立腺がん、膀胱がん、腎臓若しくは尿管がん、腎細胞がん、腎盂のがん腫、中皮腫、膀胱がん、肝臓がん、ヘパトーマ、肝細胞がん、子宮頸がん、唾液腺がん、胆道がん、中枢神経系（ＣＮＳ）の腫瘍、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、多形神経膠芽腫、星状細胞腫、シュワン細胞腫、上衣腫、髄芽腫、髄膜腫、扁平上皮がん、下垂体腺腫、及びユーイング肉腫、並びに、これらのがんのいずれかの難治性バージョン、又はこれらのがんのうちの１つ以上の組み合わせである、請求項１４５に記載の方法。
  147. 遺伝子操作された細胞との併用療法に使用するための標的化サイトカイン構築物であって、融合タンパク質は、（ｉ）細胞結合ドメイン、及び（ｉｉ）サイトカインタンパク質若しくはその機能的断片若しくはバリアントを含み、前記細胞結合ドメインは、
    （ａ）前記遺伝子操作された細胞の表面に外因的に発現された受容体若しくはドメインに特異的な抗体若しくはその抗原結合断片を含む、
    （ｂ）前記遺伝子操作された細胞上で発現された抗原結合タンパク質のドメインに特異的な抗体若しくはその抗原結合断片を含む、
    （ｃ）タグに特異的であり、前記タグは、前記遺伝子操作された細胞によって共発現されるか、若しくは前記遺伝子操作された細胞によって発現される受容体の一部である、
    （ｄ）前記遺伝子操作された細胞によって標的化された抗原に由来するドメインである、又は
    （ｅ）（ａ）～（ｄ）の任意の組み合わせを含む、標的化サイトカイン構築物。
  148. 前記遺伝子操作された細胞によって発現される前記受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、請求項１４７に記載の標的化サイトカイン構築物。
  149. 前記サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１、若しくはそれらの機能的断片、若しくはそれらのバリアント、又はこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される、請求項１４８に記載の標的化サイトカイン構築物。
  150. 前記サイトカインは、ＩＬ－２ポリペプチド、又はその機能的断片、又はそのバリアントである、請求項１４９に記載の標的化サイトカイン構築物。
  151. 前記ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号１に対して１つ以上のアミノ酸置換を有する配列番号１の配列を含み、前記１つ以上の置換は、Ｑ１１、Ｈ１６、Ｌ１８、Ｌ１９、Ｄ２０、Ｑ２２、Ｒ３８、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｙ４５、Ｅ６２、Ｐ６５、Ｅ６８、Ｖ６９、Ｌ７２、Ｄ８４、Ｓ８７、Ｎ８８、Ｖ９１、Ｉ９２、Ｔ１２３、Ｑ１２６、Ｓ１２７、Ｉ１２９、及びＳ１３０からなる群から選択される、配列番号１の位置における１つ又は複数の置換を含む、請求項１５０に記載の標的化サイトカイン構築物。
  152. 前記１つ以上の置換は、配列番号１に対してＦ４２Ａアミノ酸置換又はＦ４２Ｋアミノ酸置換を含む、請求項１５１に記載の標的化サイトカイン構築物。
  153. 前記１つ以上の置換は、配列番号１に対してＲ３８Ａ、Ｒ３８Ｄ、Ｒ３８Ｅ、Ｅ６２Ｑ、Ｅ６８Ａ、Ｅ６８Ｑ、Ｅ６８Ｋ、又はＥ６８Ｒアミノ酸置換を更に含む、請求項１５１又は１５２に記載の標的化サイトカイン構築物。
  154. 前記１つ以上の置換は、配列番号１に対して、Ｈ１６Ｅ、Ｈ１６Ｄ、Ｄ２０Ｎ、Ｍ２３Ａ、Ｍ２３Ｒ、Ｍ２３Ｋ、Ｓ８７Ｋ、Ｓ８７Ａ、Ｄ８４Ｌ、Ｄ８４Ｎ、Ｄ８４Ｖ、Ｄ８４Ｈ、Ｄ８４Ｙ、Ｄ８４Ｒ、Ｄ８４Ｋ、Ｎ８８Ａ、Ｎ８８Ｇ、Ｎ８８Ｓ、Ｎ８８Ｔ、Ｎ８８Ｒ、Ｎ８８Ｉ、Ｎ８８Ｄ、Ｖ９１Ａ、Ｖ９１Ｔ、Ｖ９１Ｅ、Ｉ９２Ａ、Ｅ９５Ｓ、Ｅ９５Ａ、Ｅ９５Ｒ、Ｔ１２３Ａ、Ｔ１２３Ｅ、Ｔ１２３Ｋ、Ｔ１２３Ｑ、Ｑ１２６Ａ、Ｑ１２６Ｓ、Ｑ１２６Ｔ、Ｑ１２６Ｅ、Ｓ１２７Ａ、Ｓ１２７Ｅ、Ｓ１２７Ｋ、又はＳ１２７Ｑアミノ酸置換を更に含む、請求項１５１～１５３のいずれか一項に記載の標的化サイトカイン構築物。
  155. 前記１つ以上の置換は、配列番号１と比較してアミノ酸変異Ｃ１２５Ａを更に含む、請求項１５１～１５４のいずれか一項に記載の標的化サイトカイン構築物。
  156. 前記ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号１１～９０からなる群から選択される配列と少なくとも約８５％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１５１～１５５のいずれか一項に記載の標的化サイトカイン構築物。
  157. 前記ＩＬ－２ポリペプチドは、以下のセットのアミノ酸置換（配列番号１の配列に対する）：Ｒ３８Ｅ及びＦ４２Ａ；Ｒ３８Ｄ及びＦ４２Ａ；Ｆ４２Ａ及びＥ６２Ｑ；Ｒ３８Ａ及びＦ４２Ｋ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ｓ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ｇ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＮ８８Ｄ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＶ９１Ｅ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｈ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｋ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｒ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ｅ及びＦ４２Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ｅ及びＦ４２Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＮ８８Ｓ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＮ８８Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＮ８８Ｇ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＮ８８Ｄ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＶ９１Ｅ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｈ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｋ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＤ８４Ｒ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ｄ及びＦ４２Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ｄ及びＦ４２Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＮ８８Ｓ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＮ８８Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＮ８８Ｇ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＮ８８Ｄ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＶ９１Ｅ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＤ８４Ｈ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＤ８４Ｋ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＤ８４Ｒ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ａ、及びＦ４２Ｋ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ａ、及びＦ４２Ｋ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＱ１２６Ｓ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＮ８８Ｓ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＮ８８Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＮ８８Ｇ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＮ８８Ｄ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＶ９１Ｅ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｈ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｋ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｒ；Ｈ１６Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＥ６２Ｑ；Ｈ１６Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＥ６２Ｑ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｅ、Ｆ４２Ａ、Ｃ１２５Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ｄ、Ｆ４２Ａ、Ｃ１２５Ａ、及びＱ１２６Ｓ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｄ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｄ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｄ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｒ３８Ａ、Ｆ４２Ｋ、Ｃ１２５Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、及びＤ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＥ６２Ｑ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＥ６２Ｑ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｃ１２５Ａ及びＱ１２６Ｓ；Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｓ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｇ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｎ８８Ｄ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｖ９１Ｅ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｈ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｋ、及びＣ１２５Ａ；Ｆ４２Ａ、Ｄ８４Ｒ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｄ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；Ｈ１６Ｅ、Ｆ４２Ａ、及びＣ１２５Ａ；並びにＦ４２Ａ、Ｃ１２５Ａ及びＱ１２６Ｓのうちの１つを有する、配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項１５０に記載の標的化サイトカイン構築物。
  158. 前記サイトカインは、配列番号９１に対して１つ以上の置換を有する、配列番号９１の配列を含むＩＬ－７ポリペプチドである、請求項１４９に記載の標的化サイトカイン構築物。
  159. １つ以上の位置における前記置換は、位置Ｋ１０、Ｑ１１、Ｓ１４、Ｖ１５、Ｖ１８、Ｑ２２、Ｌ３５、Ｎ３６、Ｄ７４、Ｌ７７、Ｌ８０、Ｋ８１、Ｅ８４、Ｉ８８、Ｒ１３３、Ｑ１３６、Ｅ１３７、Ｔ１４０、Ｎ１４３、及びＫ１４４から選択される、請求項１５８に記載の標的化サイトカイン構築物。
  160. 位置Ｋ８１及びＴ１４０における前記置換は、Ｋ８１Ａ及びＴ１４０Ａである、請求項１５９に記載の標的化サイトカイン構築物。
  161. 前記サイトカインは、配列番号９５に対して１つ以上の置換を有する、配列番号９５の配列を含むＩＬ－１０ポリペプチドである、請求項１４９に記載の標的化サイトカイン構築物。
  162. 前記ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号９９～１１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１６１に記載の標的化サイトカイン構築物。
  163. 前記サイトカインは、ＩＬ－２１ポリペプチド、又はその機能的断片、又はそのバリアントである、請求項１４９に記載の標的化サイトカイン構築物。
  164. 前記ＩＬ－２１ポリペプチドは、配列番号１１５に対して１つ以上の置換を有する、配列番号１１５の配列を含む、請求項１６３に記載の標的化サイトカイン構築物。
  165. 前記ＩＬ－２１ポリペプチドは、配列番号１１５の前記配列、又は位置Ｒ５、Ｉ８、Ｒ９、Ｒ１１、Ｑ１２、Ｉ１４、Ｄ１５、Ｄ１８、Ｑ１９、Ｙ２３、Ｒ６５、Ｓ７０、Ｋ７２、Ｋ７３、Ｋ７５、Ｒ７６、Ｋ７７、Ｓ８０、Ｑ１１６、及びＫ１１７からなる群から選択される１つ以上の位置におけるアミノ酸置換を含む配列を含み、前記位置の番号付けは、配列番号１１５の前記アミノ酸配列に従った番号である、請求項１６４に記載の標的化サイトカイン構築物。
  166. 前記遺伝子操作された細胞によって共発現される前記タグは、ＥＧＦＲｔタグである、請求項１４７～１６５のいずれか一項に記載の標的化サイトカイン構築物。
  167. 前記遺伝子操作された細胞によって標的化された前記抗原は、腫瘍関連抗原からのネオエピトープ、ＴＳＨＲ、ＣＤ１９、ＣＤ１２３、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ１７１、ＣＳ－１、ＣＬＬ－１、ＣＤ３３、ＥＧＦＲｖｌｌｌ、ＧＤ２、ＧＤ３、ＢＣＭＡ、Ｔｎ Ａｇ、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＦＬＴ３、ＦＡＰ、ＴＡＧ７２、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、メソセリン、ＩＬ－１１Ｒａ、ＰＳＣＡ、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ＬｅｗｉｓＹ、ＣＤ２４、ＰＤＧＦＲ－β、ＳＳＥＡ－４、ＣＤ２０、葉酸受容体α、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＭＵＣ１、ＥＧＦＲ、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、エフリンＢ２、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐ１００、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、ＥｐｈＡ２、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体β、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、ＧｌｏｂｏＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１ Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴ１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ＭＡＧＥ－Ａ１、レグマイン、ＨＰＶ Ｅ６、Ｅ７、ＭＡＧＥ Ａ１、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、精子タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ ２、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、プロスタイン、サバイビン及びテロメラーゼ、ＰＣＴＡ－１／ガレクチン８、メランＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点、ＭＬ－ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１ Ｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ－１、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、ＬＡＩＲ１、ＦＣＡＲ、ＬＩＬＲＡ２、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＢＳＴ２、ＥＭＲ２、ＬＹ７５、ＧＰＣ３、ＦＣＲＬ５、又はＩＧＬＬ１からなる群から選択される、請求項１４７～１６６のいずれか一項に記載の標的化サイトカイン構築物。
  168. 前記遺伝子操作された細胞は、αβＴ細胞受容体を発現するＴ細胞、γδＴ細胞、ＮＫ Ｔ細胞、制御性Ｔ細胞、多能性幹細胞由来のＴ細胞又は人工多能性幹細胞由来のＴ細胞、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、多能性幹細胞由来のＮＫ細胞又は人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）由来のＮＫ細胞、キメラ抗原受容体を発現するように遺伝子操作されたＴ細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）、Ｔ細胞受容体を発現するように遺伝子操作されたＴ細胞（ＴＣＲ－Ｔ細胞）、ＣＤ８陽性Ｔ細胞、ＣＤ４陽性Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球、キメラ抗原受容体を発現するように遺伝子操作されたＮＫ細胞（ＣＡＲ－ＮＫ細胞）、キメラ抗原受容体を発現するように遺伝子操作されたＮＫ Ｔ細胞（ＣＡＲ－ＮＫ Ｔ細胞）、骨髄細胞、造血系細胞、造血幹細胞及び前駆細胞（ＨＳＣ）、造血多分化能前駆細胞（ＭＰＰ）、プレＴ細胞前駆細胞、Ｔ細胞前駆細胞、ＮＫ細胞前駆細胞のうちの少なくとも１つを含む、請求項１４７～１６７のいずれか一項に記載の標的化サイトカイン構築物。
  169. がんを治療する方法であって、前記方法は、遺伝子操作された細胞との併用療法において、請求項１４７～１６８のいずれか一項に記載の標的化サイトカイン構築物を投与することを含む、方法。
  170. 追加の治療剤を投与することを更に含む、請求項１６９に記載の方法。
  171. 前記がんは、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）（非Ｔ細胞ＡＬＬを含む）、急性骨髄性白血病、Ｂ細胞性前リンパ球性白血病、Ｂ細胞性急性リンパ性白血病（「ＢＡＬＬ」）、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍、バーキットリンパ腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄白血病、慢性若しくは急性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、ヘアリー細胞白血病、ホジキン病、悪性リンパ増殖性疾患、ＭＡＬＴリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、意義不明の単クローン性γグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、多発性骨髄腫、骨髄異形成及び骨髄異形成症候群、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、形質細胞増殖性疾患（無症候性骨髄腫（くすぶり型多発性骨髄腫若しくは無痛性骨髄腫）を含む、形質芽球性リンパ腫、形質細胞様樹状細胞腫瘍、形質細胞腫（形質細胞疾患、孤立性骨髄腫、孤立性形質細胞腫、髄外性形質細胞腫、及び多発性形質細胞腫を含む）、ＰＯＥＭＳ症候群（Ｃｒｏｗ－Ｆｕｋａｓｅ症候群、高月病、及びＰＥＰ症候群としても知られている）、縦隔原発Ｂ細胞性大細胞型リンパ腫（ＰＭＢＣ）、小細胞若しくは大細胞濾胞性リンパ腫、脾臓辺縁帯リンパ腫（ＳＭＺＬ）、全身性アミロイド軽鎖アミロイドーシス、Ｔ細胞急性リンパ性白血病（「ＴＡＬＬ」）、Ｔ細胞リンパ腫、形質転換濾胞性リンパ腫若しくはワルデンストロームマクログロブリン血症、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、形質転換濾胞性リンパ腫（ＴＦＬ）、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣＬ）、多発性骨髄腫、ヘアリー細胞リンパ腫／白血病、肺がん、小細胞肺がん、非小細胞肺（ＮＳＣＬ）がん、細気管支肺胞細胞肺がん、扁平上皮がん、肺腺がん、肺扁平上皮がん、腹膜がん、頭頸部がん、骨がん、膵臓がん、皮膚がん、頭頸部のがん、皮膚若しくは眼球内黒色腫、甲状腺がん、子宮がん、消化器がん、卵巣がん、直腸がん、肛門部のがん、胃がん、胃がん、結腸がん、乳がん、子宮内膜がん、子宮がん、卵管のがん腫、子宮頸部のがん腫、膣のがん腫、外陰がん、ホジキン病、食道がん、小腸がん、内分泌系がん、甲状腺がん、副甲状腺がん、副腎がん、軟部組織の肉腫、尿道がん、陰茎がん、前立腺がん、膀胱がん、腎臓若しくは尿管がん、腎細胞がん、腎盂のがん腫、中皮腫、膀胱がん、肝臓がん、ヘパトーマ、肝細胞がん、子宮頸がん、唾液腺がん、胆道がん、中枢神経系（ＣＮＳ）の腫瘍、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、多形神経膠芽腫、星状細胞腫、シュワン細胞腫、上衣腫、髄芽腫、髄膜腫、扁平上皮がん、下垂体腺腫、及びユーイング肉腫、並びに、これらのがんのいずれかの難治性バージョン、又はこれらのがんのうちの１つ以上の組み合わせである、請求項１６９又は１７０に記載の方法。
  172. 医薬組成物であって、請求項１４７～１６８のいずれか一項に記載の標的化サイトカイン構築物と、薬学的に許容される賦形剤、担体、若しくは希釈剤のうちの少なくとも１つ、又はこれらの任意の組み合わせと、を含む、医薬組成物。
  173. 遺伝子操作された細胞の集団を更に含む、請求項１７２に記載の医薬組成物。
  174. 請求項１４７～１６８のいずれか一項に記載の標的化サイトカイン構築物を含む医薬組成物と、前記標的化サイトカイン構築物を対象に投与するために明記された説明書と、を有する、細胞療法キット。
  175. 遺伝子操作された細胞の集団を含む医薬組成物と、前記遺伝子操作された細胞の集団を前記対象に投与するために明記された説明書と、を更に含む、請求項１７４に記載の細胞療法キット。
  176. 前記標的化サイトカイン構築物を含む前記医薬組成物及び前記遺伝子操作された細胞の集団を含む前記医薬組成物は、連続投与用又は同時投与用である、請求項１７５に記載の細胞療法キット。
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