JP2023551821A - ウイルス感染を治療するための方法及び組成物 - Google Patents

Abstract

本開示は、コロナウイルス感染症を治療又は予防するための方法であって、治療有効量のラクトフェリン、又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質の受容体結合ドメインに融合させた組換えラクトフェリンを含む治療有効量のタンパク質融合体の投与を含む方法を提供する。提供されるのはまた、治療有効量のラクトフェリンと、イベルメクチンなどの第２の薬物治療との同時投与を含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を治療又は予防するための方法である。提供されるのはまた、治療有効量のラクトフェリンと、イベルメクチンなどの第２の薬物治療との同時投与を含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を治療又は予防するための方法である。【選択図】図１

Description

関連出願の相互参照
本出願は、その開示の全体が参照によって本明細書に組み込まれる、２０２０年１１月２５日に出願された米国仮特許出願第６３／１１８，０９６号の利益を主張する。

配列表の組み込み
「HAN0002101US_ST25」という名称のファイルに含有され、Microsoft Windowsオペレーティングシステムで測定された場合に３６．６キロバイトであり、２０２０年１１月２日に作成された配列表を、本明細書と共に電子出願し、参照によって本明細書に組み込む。

開示の分野
本開示は、ウイルス学に関する。より詳細には、本開示は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス感染を治療及び予防するための方法及び組成物に関する。

開示の簡単な概要
一態様では、本開示は、（ａ）ラクトフェリンタンパク質又はその断片と；（ｂ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質又はその断片と；（ｃ）リンカーとを含む組換えポリペプチドを提供し；ここで、ラクトフェリンタンパク質又はその断片は、宿主細胞表面上のＨＳＰＧに結合し、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質又はその断片は、宿主細胞表面上のＡＣＥ２受容体に結合し、ここで、ラクトフェリン又はその断片とＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質又はその断片との両方の結合が、ウイルスの結合を防止する。一実施形態では、ラクトフェリンは、野生型のラクトフェリンタンパク質又はその断片又は組換え型のラクトフェリン又はその断片を含む。他の実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質配列は、本明細書で配列番号１～２として記述され、ラクトフェリンは、配列番号３～４に記述される配列を含む。別の実施形態では、ウイルスは、コロナウイルス科（Coronaviridae）のウイルスである。別の実施形態では、コロナウイルス科（Coronaviridae）ウイルスは、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）である。別の実施形態では、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルスは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である。別の実施形態では、本開示は、本明細書に記載した通りの組換えポリペプチドを含む医薬組成物を提供する。

別の態様では、本開示は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に曝露された対象におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を予防又は治療する方法であって、治療又は予防有効量の本明細書に記載した通りの医薬組成物を対象に投与することを含む方法を提供する。一実施形態では、医薬組成物は、経口、粘膜、鼻咽腔、又は非経口経路を介して投与される。別の実施形態では、この方法は、治療有効量の少なくとも第２の治療薬をさらに含む。

別の態様では、本開示は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に曝露された対象におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を予防又は治療する方法であって、（ａ）予防有効量のラクトフェリンタンパク質又はその断片；又は（ｂ）予防有効量のラクトフェリンタンパク質又はその断片と予防有効量のイベルメクチン；又は（ｃ）予防有効量の組換えラクトフェリンタンパク質又はその断片；又は（ｄ）予防有効量の組換えラクトフェリンタンパク質又はその断片と予防有効量のイベルメクチンを、対象に投与することを含む方法を提供する。

別の態様では、本開示は、初期段階のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を治療する方法であって、（ａ）治療有効量のラクトフェリンタンパク質又はその断片；又は（ｂ）治療有効量のラクトフェリンタンパク質又はその断片と治療有効量のイベルメクチン；又は（ｃ）治療有効量の組換えラクトフェリンタンパク質又はその断片；又は（ｄ）治療有効量の組換えラクトフェリンタンパク質又はその断片と治療有効量のイベルメクチンを、対象に投与することを含む方法を提供する。

別の態様では、本開示は、初期段階のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を治療する方法であって、（ａ）治療有効量のラクトフェリンタンパク質又はその断片；又は（ｂ）治療有効量のラクトフェリンタンパク質又はその断片と治療有効量のイベルメクチン；又は（ｃ）治療有効量の組換えラクトフェリンタンパク質又はその断片；又は（ｄ）治療有効量の組換えラクトフェリンタンパク質又はその断片と治療有効量のイベルメクチンを、対象に投与することを含む方法を提供する。一実施形態では、ラクトフェリンは、野生型のラクトフェリン又は組換え型のラクトフェリン又はその断片を含む。一実施形態では、ラクトフェリンタンパク質は、ヒトラクトフェリンである。別の実施形態では、ラクトフェリンタンパク質は、対象における細胞の細胞膜に結合し、結合時に細胞に取り込まれる。別の実施形態では、ラクトフェリンは、細胞質に存在する。

本開示は、さらに、本明細書に記載した通りのいくつかの実施形態を記述する。

いくつかの実施形態では、本開示は、ａ）ラクトフェリンタンパク質又はその断片と；ｂ）リンカーと；ｃ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）－タンパク質又はその断片とを含む組換えポリペプチドを提供し；ここで、ラクトフェリンタンパク質又はその断片は、宿主細胞表面上のヘパラン硫酸プロテオグリカン（ＨＳＰＧ）に結合し、Ｓ－タンパク質又はその断片は、宿主細胞表面上のＡＣＥ２受容体に結合し、組換えポリペプチドは、ウイルスの宿主細胞への結合を阻害する。

いくつかの実施形態では、スパイクタンパク質は、配列番号１～２に記述される配列を含む。

いくつかの実施形態では、ラクトフェリンタンパク質は、配列番号３～４に記述される配列を含む。

いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号５～６に記述される配列を含む。

いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、配列番号７～８に記述される配列を含む。

いくつかの実施形態では、この方法は、免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃ－ドメインをさらに含む。

いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、配列番号９～１０に記述される配列を含む。

いくつかの実施形態では、ウイルスは、コロナウイルス科（Coronaviridae）のウイルスである。

いくつかの実施形態では、コロナウイルス科（Coronaviridae）ウイルスは、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）である。

いくつかの実施形態では、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルスは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である。

いくつかの実施形態では、本開示は、ａ）ラクトフェリンタンパク質又はその断片と；ｂ）リンカーと；ｃ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）－タンパク質又はその断片とを含む医薬組成物を提供し；ここで、ラクトフェリンタンパク質又はその断片は、宿主細胞表面上のヘパラン硫酸プロテオグリカン（ＨＳＰＧ）に結合し、Ｓ－タンパク質又はその断片は、宿主細胞表面上のＡＣＥ２受容体に結合し、組換えポリペプチドは、ウイルスの宿主細胞への結合を阻害する。

いくつかの実施形態では、本開示は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に曝露された対象におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を予防又は治療する方法であって、ａ）ラクトフェリンタンパク質又はその断片と；ｂ）リンカーと；ｃ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）－タンパク質又はその断片とを含む治療又は予防有効量の医薬組成物を、対象に投与することを含む方法を提供し；ここで、ラクトフェリンタンパク質又はその断片は、宿主細胞表面上のヘパラン硫酸プロテオグリカン（ＨＳＰＧ）に結合し、Ｓ－タンパク質又はその断片は、宿主細胞表面上のＡＣＥ２受容体に結合し、組換えポリペプチドは、ウイルスの宿主細胞への結合を阻害する。

いくつかの実施形態では、医薬組成物は、経口、粘膜、鼻咽腔、又は非経口経路を介して投与される。

いくつかの実施形態では、この方法は、治療有効量の少なくとも第２の治療薬をさらに含む。

いくつかの実施形態では、第２の治療薬は、イベルメクチン、レムデシビル（登録商標）、モノクローナル抗体、Regeneron（登録商標）、ヒドロキシクロロキン、モルヌピラビル、及び／又はパキロビッドを含む。

いくつかの実施形態では、本開示は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に曝露された対象におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を予防又は治療する方法であって、（ａ）予防有効量のラクトフェリンタンパク質又はその断片；又は（ｂ）予防有効量のイベルメクチン；又は（ｃ）予防有効量のラクトフェリンタンパク質又はその断片と予防有効量のイベルメクチン；又は（ｄ）予防有効量の組換えラクトフェリンタンパク質又はその断片；又は（ｅ）予防有効量の組換えラクトフェリンタンパク質又はその断片と予防有効量のイベルメクチンを、対象に投与することを含む方法を提供する。

いくつかの実施形態では、本開示は、初期段階のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を治療又は予防する方法であって、（ａ）治療有効量のラクトフェリンタンパク質又はその断片；又は（ｂ）治療有効量のラクトフェリンタンパク質又はその断片と治療有効量のイベルメクチン；又は（ｃ）治療有効量の組換えラクトフェリンタンパク質又はその断片；又は（ｄ）治療有効量の組換えラクトフェリンタンパク質又はその断片と治療有効量のイベルメクチンを、対象に投与することを含む方法を提供する。

いくつかの実施形態では、本開示は、後期段階のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を治療又は予防する方法であって、（ａ）治療有効量のラクトフェリンタンパク質又はその断片；又は（ｂ）治療有効量のラクトフェリンタンパク質又はその断片と治療有効量のイベルメクチン；又は（ｃ）治療有効量の組換えラクトフェリンタンパク質又はその断片；又は（ｄ）治療有効量の組換えラクトフェリンタンパク質又はその断片と治療有効量のイベルメクチンを、対象に投与することを含む方法を提供する。

いくつかの実施形態では、ラクトフェリンタンパク質は、ヒトラクトフェリンである。

いくつかの実施形態では、ラクトフェリンタンパク質は、対象における細胞の細胞膜に結合し、結合時に細胞に取り込まれる。

いくつかの実施形態では、ラクトフェリンは、細胞質に存在する。

図面の簡単な説明
ヘパリン結合タンパク質を、ヘパリン結合モチーフ「ＸＢＢＢＸＸＢＸ」及び「ＸＢＢＢＸＸＢＸ」（ここで、Ｘは、疎水性親水性（hydropathic）残基であり、Ｂは、アルギニン又はリジンの塩基性残基である）（Antiviral Research, 181, 10487:1-9, 2020）として公知のアミノ酸配列によって特定することができることを示す。これらのヘパリン結合モチーフは、図１Ａに示す通り、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質中に存在する。 ヘパリン結合タンパク質を、ヘパリン結合モチーフ「ＸＢＢＢＸＸＢＸ」及び「ＸＢＢＢＸＸＢＸ」（ここで、Ｘは、疎水性親水性（hydropathic）残基であり、Ｂは、アルギニン又はリジンの塩基性残基である）（Antiviral Research, 181, 10487:1-9, 2020）として公知のアミノ酸配列によって特定することができることを示す。これらのヘパリン結合モチーフは、図１Ｂに示す通り、ラクトフェリン中に存在する。 これらのヘパリン結合部位は、図１Ｃ（枠）に示す通り、複数種の哺乳類からのラクトフェリンにおいて保存される。これらの種からのラクトフェリンは、図３に示されるデータと同様の抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２活性を有すると考えられる。 ラクトフェリン（ＬＦ）－Ｆｃ－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２－ＲＢＤ組換えポリペプチド（ＬＦ－Ｆｃ－ＲＢＤ）の、ＤＮＡ（上、配列番号９に相当する）及びタンパク質（下、配列番号１０に相当する）配列を示す。ＩＬ２リーダーは、大文字の下線付きテキストで示され；リンカーは、小文字の下線付きの太字のテキストで示される。 ラクトフェリン（ＬＦ）－Ｆｃ－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２－ＲＢＤ組換えポリペプチド（ＬＦ－Ｆｃ－ＲＢＤ）の、ＤＮＡ（上、配列番号９に相当する）及びタンパク質（下、配列番号１０に相当する）配列を示す。リンカーは、小文字の下線付きの太字のテキストで示され；ヒトＬＦは、大文字の通常のテキストで示される。 ラクトフェリン（ＬＦ）－Ｆｃ－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２－ＲＢＤ組換えポリペプチド（ＬＦ－Ｆｃ－ＲＢＤ）の、ＤＮＡ（上、配列番号９に相当する）及びタンパク質（下、配列番号１０に相当する）配列を示す。Ｆｃ領域は、大文字のイタリック体のテキストで示され；ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクＲＢＤ（Ａｒｇ３１９～Ｐｈｅ５４１）は、小文字のイタリック体のテキストで示される。 ラクトフェリン（ＬＦ）－Ｆｃ－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２－ＲＢＤ組換えポリペプチド（ＬＦ－Ｆｃ－ＲＢＤ）の、ＤＮＡ（上、配列番号９に相当する）及びタンパク質（下、配列番号１０に相当する）配列を示す。ＩＬ２リーダーは、大文字の下線付きテキストで示され；ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクＲＢＤ（Ａｒｇ３１９～Ｐｈｅ５４１）は、小文字のイタリック体のテキストで示される。 ラクトフェリン（ＬＦ）－Ｆｃ－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２－ＲＢＤ組換えポリペプチド（ＬＦ－Ｆｃ－ＲＢＤ）の、ＤＮＡ（上、配列番号９に相当する）及びタンパク質（下、配列番号１０に相当する）配列を示す。リンカーは、小文字の下線付きの太字のテキストで示され；ヒトＬＦは、大文字の通常のテキストで示される。 ラクトフェリン（ＬＦ）－Ｆｃ－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２－ＲＢＤ組換えポリペプチド（ＬＦ－Ｆｃ－ＲＢＤ）の、ＤＮＡ（上、配列番号９に相当する）及びタンパク質（下、配列番号１０に相当する）配列を示す。Ｆｃ領域は、大文字のイタリック体のテキストで示される。 ＶｅｒｏＥ６／ＴＭＰＲＳＳ２細胞における、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２疑似ウイルス感染に対するラクトフェリンの効果を示す。レーン２～４（左から右）は、イネにおいて製造されたヒトラクトフェリンを示す。レーン５～７は、ヒト乳汁からのヒトラクトフェリンを示す。 ヒトラクトフェリン（ＬＦ）－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２－ＲＢＤ組換えポリペプチド（ｈＬＦ－ＣｏＶ２－ＲＢＤ）の、ＤＮＡ（上、配列番号７に相当する）及びタンパク質（下、配列番号８に相当する）配列を示す。シグナルペプチドは、大文字の下線付きテキストで示され；成熟したヒトＬＦは、大文字の通常のテキストで示され；ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクＲＢＤ（Ａｒｇ３１９～Ｐｈｅ５４１）は、大文字のイタリック体のテキストで示される。 ヒトラクトフェリン（ＬＦ）－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２－ＲＢＤ組換えポリペプチド（ｈＬＦ－ＣｏＶ２－ＲＢＤ）の、ＤＮＡ（上、配列番号７に相当する）及びタンパク質（下、配列番号８に相当する）配列を示す。４－Ｇｌｙリンカーは、小文字の下線付きの太字のテキストで示される。 ヒトラクトフェリン（ＬＦ）－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２－ＲＢＤ組換えポリペプチド（ｈＬＦ－ＣｏＶ２－ＲＢＤ）の、ＤＮＡ（上、配列番号７に相当する）及びタンパク質（下、配列番号８に相当する）配列を示す。シグナルペプチドは、大文字の下線付きテキストで示され；成熟したヒトＬＦは、大文字の通常のテキストで示され；ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクＲＢＤ（Ａｒｇ３１９～Ｐｈｅ５４１）は、大文字のイタリック体のテキストで示される。 ヒトラクトフェリン（ＬＦ）－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２－ＲＢＤ組換えポリペプチド（ｈＬＦ－ＣｏＶ２－ＲＢＤ）の、ＤＮＡ（上、配列番号７に相当する）及びタンパク質（下、配列番号８に相当する）配列を示す。４－Ｇｌｙリンカーは、小文字の下線付きの太字のテキストで示される。 ヒトラクトフェリン－Ｆｃ－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤコンストラクト（ｈＬＦ－Ｆｃ－ＣｏＶ２ＲＢＤ）を示す。 ＶｅｒｏＥ６／ＴＭＰＲＳＳ２細胞におけるＭＬＶ－Ｓｐｐの感染力に対する、ラクトフェリン（ＬＦ）とイベルメクチン（ＩＶＭ）との組み合わせ効果を実証する。 標的細胞（上）、及びＴＭＰＲＳＳ２で安定的にトランスフェクションされたＶｅｒｏＥ６細胞における、ＭＬＶ－Ｓｐｐの感染力を示す。クローン＃７を、ＶｅｒｏＥ６／Ｔｍｐｒｓｓ２標的細胞として使用した。 ＶｅｒｏＥ６細胞（左上）における、ＭＬＶ－Ｓｐｐの感染力を示す。 ２９３／ＡＣＥ２細胞（左下）における、ＭＬＶ－Ｓｐｐの感染力を示す。 ＢＨＫ／ＡＣＥ２細胞（右上）における、ＭＬＶ－Ｓｐｐの感染力を示す。 ３つすべての細胞型の比較（右下）を示す。 ヒトラクトフェリン（ＬＦ）の、ＤＮＡ（上、配列番号３に相当する）及びタンパク質（下、配列番号４に相当する）配列を示す。シグナルペプチドは、どちらの配列においても下線付きである。 ヒトラクトフェリン（ＬＦ）の、ＤＮＡ（上、配列番号３に相当する）及びタンパク質（下、配列番号４に相当する）配列を示す。シグナルペプチドは、どちらの配列においても下線付きである。 ヘパリンによって阻害される、細胞膜上のＨＳＰＧ受容体へのｈＬＦ結合を実証する。右列に示される通り、ヘパリンが存在する場合には、細胞膜上のｈＬＦ染色は存在しない。 ２．５μＭ、１０μＭ、及び５０μＭのｈＬＦと共に２４時間インキュベートされ、抗ＬＦ抗体を使用して可視化された場合、ｈＬＦが、ＶｅｒｏＥ６／Ｔｍｐｒｓｓ２（ＶＥ６／Ｔ）細胞に入ることを実証する。 ｈＬＦが、細胞に入り、蓄積し、試験される２４時間までの間、細胞中で損なわれないままであることを実証する、ウエスタンブロットを示す。細胞は、０．５、２、６、及び２４時間、２．５μＭ、１０μＭ、及び５０μＭのｈＬＦに曝露させた。ＬＦは、２０分間の１：１，０００希釈の抗ＬＦ抗体（ｓｃ－５３４９８）で検出した。細胞溶解物中に見られるＬＦは、処理されていない対照ＬＦと共に移動する。

配列の簡単な説明
配列番号１－ＳＡＲＳ－ＣｏＶスパイク受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）リガンドのＤＮＡ配列。

配列番号２－ＳＡＲＳ－ＣｏＶスパイク受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）リガンドのアミノ酸配列。

配列番号３－図９（上）に相当する、ヒトラクトフェリン（ＬＦ）のＤＮＡ配列（２１３７塩基対）。この図におけるシグナルペプチドをコードする配列は、下線付きである。

配列番号４－図９（下）に相当する、ヒトラクトフェリン（ＬＦ）のアミノ酸配列（７１１アミノ酸）。この図におけるシグナルペプチドは、下線付きである。

配列番号５－４－グリシン（Ｇｌｙ）リンカーのＤＮＡ配列。

配列番号６－４－グリシン（Ｇｌｙ）リンカーのアミノ酸配列。

配列番号７－図４（上）に相当する、ｈＬＦ－ＣｏＶ２－ＲＢＤコンストラクトのＤＮＡ配列。

配列番号８－図４（下）に相当する、ｈＬＦ－ＣｏＶ２－ＲＢＤコンストラクトのアミノ酸配列。

配列番号９－図２（上）に相当する、ＬＦ－Ｆｃ－ＲＢＤコンストラクトのＤＮＡ配列。

配列番号１０－図２（下）に相当する、ＬＦ－Ｆｃ－ＲＢＤコンストラクトのアミノ酸配列。

本開示の詳細な説明
エンベロープウイルスは、宿主細胞の表面上の受容体と相互作用するスパイク（Ｓ）タンパク質又はエンベロープ（Ｅ又はＥｎｖ）タンパク質などのその表面タンパク質を使用する受容体介在性エンドサイトーシスによって細胞に侵入する。Ｅｎｖタンパク質と細胞表面受容体との間の相互作用は、「鍵と鍵穴(lock-and-key)」様式で作用する。Ｅｎｖタンパク質は、受容体内の結合ポケットによって認識される、１つ以上の立体構造的なエピトープを有する。エピトープの３Ｄ構造は、アミノ酸配列によって決定される。ある種のウイルスは、１つのみの細胞受容体を使用するのに対して、他のウイルスは、２つ以上を使用する。２つ以上の受容体を利用するウイルスについては、協同的リガンド相互作用が、重要な役割を果たし、結合プロセスはおそらく連続的である、すなわち、第１のリガンドの結合が第２のリガンドの結合を誘発する。このプロセスが起こるウイルスの例には、ＨＩＶ（ここではＣＣＲ５の結合がＣＤ４結合のための結合部位を開く）、及びＨＣＶ（ここではＨＳＰＧ及び／又はＳＲＢ１の結合がＣＤ８１結合を可能にする）が含まれる。

宿主細胞上のウイルス受容体へのウイルス結合の第２の機構は、電荷相互作用を介するものである。ウイルスのＥｎｖタンパク質は、進化的に保存される正に帯電したドメインを有することが公知である。細胞受容体の負に帯電したドメインは、このプロセスに関与する。これらの部位は、細胞を感染させるウイルスのための単独の受容体であり得るか、又は第２の受容体、すなわち補助受容体であり得る。結合ポケットの電荷は、酸性アミノ酸によって、又はタンパク質の硫酸化によって、例えば宿主のハウスキーピング酵素によって供与され得る。タンパク質を硫酸化する公知の方式は２つ存在し、そのうちの１つは、（ＨＩＶがそうであるように）チロシン硫酸化を介して生じ、もう一つは、ヘパラン硫酸（ＨＳ）などの糖によって生じ、これはＨＣＶに当てはまる。現在、いくつのエンベロープウイルスがその受容体介在性侵入プロセスのために糖をベースにする硫酸基を使用するかどうかは正確にはわかっていない。

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、世界中で病気と死をもたらしている、現在のＣＯＶＩＤ－１９世界的パンデミックの原因である。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、コロナウイルス科（Coronaviridae）のメンバーのウイルスである一本鎖プラス鎖ＲＮＡウイルスである。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、スパイク（Ｓ）糖タンパク質と、アンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）受容体内の荷電アミノ酸残基との間の相互作用によって、ヒト細胞に感染する。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を含めた多くのコロナウイルスのＳタンパク質は、２つの別のサブユニット、すなわちＳ１（受容体と結合する）とＳ２（ウイルスの膜と細胞の膜との融合を誘発する）に切断され、これらの２つの別のサブユニットとして機能する（図１参照）。この切断は、標的細胞におけるビリオン構築及び分泌中に、Ｓ１／Ｓ２フーリン切断部位で、フーリンプロテアーゼによって起こる。これとは対照的に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶのＳタンパク質は切断されず、たとえ２つのタンパク質がそれぞれの間におよそ７０％の相同性を有していたとしても、単一のタンパク質として機能する。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＳタンパク質は、フーリン切断を可能にし、且つＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｓタンパク質中には存在しない、ＰＲＲＡＲペンタペプチド挿入を、Ｓ１／Ｓ２切断部位に有する。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質の高いアルギニン（Ｒ）含有量は、ウイルスとＨＳＰＧＲとの予測される高い電荷相互作用をもたらす。Ｓ１／Ｓ２フーリン切断部位は、プロデューサー細胞では不完全である。これは、ウイルス侵入中に、標的細胞中で、ＴＭＰＲＳＳ２、すなわち宿主細胞由来のセリンプロテアーゼによって、さらに切断される。Ｓ２タンパク質は、エンドソームにおいて、カテプシンによって、Ｓ２’部位で刺激され（これは、低ｐＨで活性化される）、結果として融合ペプチドが放出される。

多くのウイルスは、それ自体を１つ以上の細胞表面受容体に付着させることによってその宿主細胞に侵入する。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、細胞への付着のためのヘパラン硫酸プロテオグリカン（ＨＳＰＧ）と組み合わせて、細胞への侵入のためのＡＣＥ２受容体を利用する。ＨＳＰＧが、すべての細胞型において発現されるハウスキーピングタンパク質であるのに対し、ＡＣＥ２受容体は、気道、肺、胃腸管、心臓、腎臓、及び肝臓を含めた複数の器官、並びに血管の内膜において高度に発現される。この理由から、ＣＯＶＩＤ－１９は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のウイルス感染によって引き起こされる内皮疾患であると考えられる。ＨＳＰＧのグリコサミノグリカン成分は、ヘパラン硫酸（ＨＳ）である。結合時に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質受容体結合ドメインは、構造変化を受ける。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、ＣＤ１４７を、付着受容体として使用することができ、ＣＤ１４７は、肺に見られるが、赤血球（ＲＢＣ）及び血管内皮において、より多く発現される。ＣＤ１４７は、Ｔ細胞にも見られるが、Ｔ細胞におけるその機能は、免疫抑制に関連する可能性があるものの、不明である。上記に基づき、本発明者らは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染した患者へのラクトフェリンの投与が、宿主細胞へのウイルスの侵入を減じることを突き止めた。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症は、肺、心臓、血管、肝臓、及び腎臓を含めた複数の器官における内膜におけるＡＣＥ２受容体を下方調節し、ＣＯＶＩＤ－１９患者における多臓器不全の原因である内皮の炎症及び血栓形成を引き起こす。

したがって、いくつかの実施形態では、本開示は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染した患者への、単独で又はイベルメクチン（ＩＶＭ）と組み合わせた治療有効量のＬＦの投与を含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を予防及び治療するための組換えポリペプチド、医薬組成物、及び関連する方法を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載した通りの使用のためのラクトフェリンは、本明細書に記載した通りの組換えポリペプチド中に存在することができ、ここで、ラクトフェリン又はその断片は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質の受容体結合ドメインに融合される。いくつかの実施形態では、ＬＦ、すなわち野生型のＬＦ又は組換え融合タンパク質中に存在するＬＦのこうした投与は、患者におけるＣＯＶＩＤ－１９に伴う症状の改善をもたらす。したがって、本開示は、細胞表面受容体を使用して細胞を感染させる能力があるあらゆるウイルスの治療及び該ウイルスに対するワクチン接種を包含することを意図する。

本明細書で他に指定されない限り、本明細書に記載した通りの組換えタンパク質、組成物、及び／又は方法は、本明細書に例示された手順又は当技術分野で周知の慣例的に実施される方法に従って実施することができる。例えば、Methods in Enzymology,Volume 289:Solid-Phase Peptide Synthesis,J.N.Abelson,M.I.Simon,G.B.Fields(Editors),Academic Press;1st edition(1997)(ISBN-13:978-0121821906);米国特許第４，９６５，３４３号及び第５，８４９，９５４号;Sambrook et al.,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Press,N.Y.,(3rd ed.,2000);Brent et al.,Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley&Sons,Inc.(2003);Davis et al.,Basic Methods in Molecular Biology,Elsevier Science Publishing,Inc.,New York,USA(1986);又はMethods in Enzymology:Guide to Molecular Cloning Techniques Vol.152,S.L.Berger and A.R.Kimmel Eds.,Academic Press Inc.,San Diego,USA(1987);Current Protocols in Protein Science(CPPS)(John E.Coligan,et al.,ed.,John Wiley and Sons,Inc.),Current Protocols in Cell Biology(CPCB)(Juan S.Bonifacino et al.ed.,John Wiley and Sons,Inc.),及びCulture of Animal Cells:A Manual of Basic Technique by R.Ian Freshney,Publisher:Wiley-Liss;5th edition (2005),Animal Cell Culture Methods(Methods in Cell Biology,Vol.57,Jennie P.Mather and David Barnes editors,Academic Press, 1st edition,1998)を参照のこと。以下のセクションは、本開示の方法を実施するための追加的な指針を提供する。

本開示の実施形態は、それを必要とする対象におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス感染を予防又は治療する方法であって、治療又は予防有効量のＬＦを対象に投与することを含む方法を提供する。ＬＦは、ＣＯＶＩＤ－１９感染症に使用された場合に、病状及び死亡率を改善することが示される。いくつかの実施形態では、ＬＦは、患者におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を治療するための、単独型の治療法として使用することができる。他の実施形態では、ＬＦは、初期の感染症に使用される場合の治療のための、イベルメクチン（ＩＶＭ）などの他の利用可能な治療法と組み合わせて使用することができる。他の実施形態では、単独で又はＩＶＭなどの他の治療法と組み合わせたＬＦを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の予防法又は予防薬として使用することができる。

本開示の実施形態は、（ａ）ラクトフェリンタンパク質又はその断片と；（ｂ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質又はその断片と；（ｃ）リンカーとを含む組換えポリペプチドを提供し；ここで、ラクトフェリンタンパク質又はその断片は、宿主細胞表面上のＨＳＰＧに結合し、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質又はその断片は、宿主細胞表面上のＡＣＥ２受容体に結合し、ここで、ラクトフェリン又はその断片とＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質又はその断片との両方の結合が、ウイルスの結合を防止する。他の実施形態は、初期段階と後期段階の両方のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を治療又は予防する方法又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を治療する方法であって、（ａ）予防有効量のラクトフェリンタンパク質又はその断片；又は（ｂ）予防有効量のラクトフェリンタンパク質又はその断片と予防有効量のイベルメクチン；又は（ｃ）予防有効量の組換えラクトフェリンタンパク質又はその断片；又は（ｄ）予防有効量の組換えラクトフェリンタンパク質又はその断片と予防有効量のイベルメクチンを、対象に投与することを含む方法を提供する。

ヒトラクトフェリン
ヒトラクトフェリンは、８．７のｐＩを有する７０～８０ｋＤａの塩基性タンパク質である。ラクトフェリンは、トランスフェリンファミリーのメンバーであり、乳汁、血液、及び外分泌液（涙、唾液、鼻汁（nose drop））中に見られる。乳汁及び血液中のラクトフェリンの濃度は、約１０μＭである。ラクトフェリンタンパク質は、２つの球状ドメイン：Ｎ－及びＣ－小球を有し、これらはそれぞれ、２つのドメイン、Ｎ１及びＮ２、又はＣ１及びＣ２を有する。各小球は、１つのグリコシル化部位と、鉄、亜鉛、及び銅の２つのイオンと結合する１つの金属結合部位を有する。

ラクトフェリンは、炎症の間の（乳酸が蓄積する場合の）酸性ｐＨ条件下で、トランスフェリンよりも３０倍高い鉄親和性を有する。ラクトフェリンは、タンパク質の濃度次第で、オリゴマーとして見られる（このプロセスにはＣａが関与する）。ラクトフェリンは、ピリミジン依存性ＲＮＡｓｅであり、乳汁、涙、及び鼻汁（nasal droplet）中でのＲＮＡｓｅ活性の源である。ラクトフェリンはまた、二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）固定化のために使用されるｄｓＤＮＡ結合タンパク質である。ラクトフェリンはまた、限定はされないが、ＨＳＶ、ＣＭＶ、ＨＩＶ、ＭＬＶ、ＨＣＶ、ハンタウイルス、ロタウイルス、ポリオ、ＲＳＶ、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶを含めたいくつかのウイルスに対する抗ウイルス活性を有する。さらに、ラクトフェリンレベルは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ感染症に感染した患者では上方調節される（BMC Immunology 6:2, 2005）。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２が、赤血球に一度侵入すると、ウイルスタンパク質が、細胞中のヘム基から鉄を放出し、臓器障害を引き起こす、また、低酸素血症及び乳酸レベルの上昇をもたらす。ラクトフェリンは、ヘムを安定化し、放出された毒性の鉄イオンを捕捉する。マラリアの治療については、ヒドロキシクロロキンは、マラリア感染によって引き起こされる損傷を受けたヘムの重合を阻害する。損傷を受けたヘムは、鉄イオンを放出し、感染した細胞を溶解させる。マラリア原虫（Plasmodium）は、ヘムを重合することによって、細胞死を防止する。

ラクトフェリンは、宿主細胞、例えばヒト宿主細胞の細胞表面上に存在するＨＳＰＧへの結合時に、細胞によって取り込まれ得る。ラクトフェリンは、細胞に一度に取り込まれると、細胞質中で検出することができる。この相互作用は、ヘパリンによって阻害され、その結果、ヘパリンが存在する場合には、細胞膜上にＬＦ染色は見られない。

ラクトフェリンは、ＨＳＰＧ受容体に結合することによって、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ感染を遮断することが公知である（PLoS ONE 6:e23710, 2011）。細胞表面上のＨＳＰＧによって提供されるアンカー部位が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶと宿主細胞との間の最初の接触を可能にする。ＳＡＲＳ－ＣｏＶは、ＨＳＰＧに結合することによって、細胞膜に転がり込み、その後の細胞侵入につながる特異的な侵入受容体を探す。ラクトフェリンは、ＨＳＰＧに結合することによって、ＳＡＲＳ－ＣｏＶの感染を遮断する。ラクトフェリンは、細胞表面ＨＳＰＧ分子に結合し、ウイルスと宿主細胞との間の予備的な相互作用を防止し、それによって、その後の内部移行プロセスを防止する。ＶｅｒｏＥ６細胞に感染させるためにＳＡＲＳ－ＣｏＶ疑似ウイルスを使用するインビトロ実験は、ラクトフェリンの添加又は細胞表面ＨＳＰＧの酵素的除去が、ＳＡＲＳ疑似ウイルス侵入を防止することを実証した。

類似の実験において、７０－アミノ酸ＡＣＥ２受容体結合部位ペプチドを有する組換えラクトフェリン－Ｓタンパク質融合体は、Ｓ（及び７０アミノ酸ペプチド）が、酵素又は細胞機能変化を伴わずに、その酵素活性部位から離れたＡＣＥ２受容体と結合することが示された。この結果は、低分子阻害剤を使用して実証された。この型の融合タンパク質は、ラクトフェリンが細胞表面上のＨＳＰＧに結合することと、Ｓタンパク質上の受容体結合部位が細胞表面上のＡＣＥ２受容体に結合することとの両方を可能にし、それによって、宿主細胞上の受容体と補助受容体の両方を妨害し、ウイルスの細胞への侵入を防止する。実際、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質の受容体結合ドメインは、マカクにおいて完全長Ｓタンパク質としてのワクチンとして使用された場合に、防御的であると示されていた（Science 10:1126, May 2020）。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載した通りの組換えタンパク質（ここで、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質の受容体結合ドメインは、ラクトフェリンと融合される）は、宿主細胞表面受容体（例えば、ＡＣＥ２受容体及びＨＳＰＧ）に結合し、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスの結合が宿主細胞に結合及び侵入するのを防げる。この手法は、組換えタンパク質がウイルス粒子自体に結合して細胞へのウイルスの付着を防止する当技術分野の他の研究とは異なる。本開示は、むしろ、宿主細胞に結合し、細胞表面受容体を有効に妨害してウイルス粒子が細胞に結合及び感染することができないようにする、組換えタンパク質を開示する。

ラクトフェリンの複数の同族体（これらの間にはいくつかの保存領域が存在する）が、当技術分野で公知且つ利用可能である。例えば、ウシラクトフェリンは、ヒトラクトフェリンとの７７％相同性を有する。本明細書に記載した通り、あらゆるラクトフェリンタンパク質又はその機能性断片を、本開示に従って使用することができるが、例示的なラクトフェリンを、本明細書で配列番号４として記述する。したがって、本明細書に記載した通りのコロナウイルスの治療のためのラクトフェリン又はそのバリアントの使用は、例えば、限定はされないが、ヒトラクトフェリン、ウシラクトフェリン、ヒツジラクトフェリン、ウマラクトフェリン、又はラクトフェリンを産生するあらゆる哺乳類又は種からのラクトフェリンを含めた、あらゆるラクトフェリンを包含することができる。さらに、いくつかの実施形態では、他の種、例えばイネなどの植物種において発現又は製造された組換えラクトフェリン（例えば、Ventria Bioscience）を使用することができ、本開示の範囲内に包含される。組換えラクトフェリンは、有効な抗ウイルス薬物であり、低μＭ範囲で有効である。本明細書に記載した通り、ラクトフェリンは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のための、単独型のウイルス治療として使用することもできるし、又は本明細書に記載した通りのイベルメクチンなどの１つ以上の他の治療又は治療法との組み合わせ療法で使用することもできる。他の実施形態では、本明細書に記載した通りの組換えポリペプチドを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の治療のために、患者に単独で投与することもできるし、又はイベルメクチンなどの１つ以上の他の治療又は治療法との組み合わせ療法で使用することもできる。他の実施形態では、組換えポリペプチドを、本明細書に記載した通りの２つ以上の薬物治療と組み合わせることができる。本明細書に記載した通りの組換えポリペプチドと１種以上の薬物とのあらゆる組み合わせを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を治療するために、本明細書で使用することができる。

本明細書に記載した通り、ＬＦは、限定はされないが、ＨＳＶ、ＣＭＶ、ＨＩＶ、ＭＬＶ、ＨＣＶ、ハンタ、ロタ、ポリオ、ＲＳＶ、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶを含めたいくつかのウイルスに対する抗ウイルス活性を有する。いくつかの実施形態では、本開示の方法及び組成物を使用して、限定はされないが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を含めたあらゆるコロナウイルスを治療又は予防することができる。ＬＦのレベルは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ感染中に上方調節される（BMC Immunology, 2005, 6:2）。

イベルメクチン
アベルメクチンは、日本において細菌ストレプトマイセス・アベルミティリス（Streptomyces avermitilis）から発見され、アベルメクチンから、イベルメクチン、すなわちより大きい効力且つより低い毒性の誘導体が、１９８１年に世に出された。イベルメクチンは、河川盲目症及びリンパ系フィラリア症の発生率を急激に低下させてきており、また、増えつつある数の他の寄生虫症に対する有効性を示す。イベルメクチンは、無脊椎動物細胞膜の塩化物イオンに対する透過性を増大させることによって働き、細胞内過分極、それに続く麻痺及び死をもたらす。

２０１９年の時点で、イベルメクチンは、３ｍｇ錠剤処方で、米国においてジェネリック処方薬として利用可能である。イベルメクチンは、米国において、限定はされないが、Heartgard（登録商標）、Sklice、及びストロメクトールを含めたいくつかの商品名で販売されている。

イベルメクチンはまた、マラリア原虫自体と、それを運ぶ蚊の両方に対して毒性があるので、マラリアの予防にも使用される。大規模臨床試験は、まだ行われていないが、マラリアをコントロールするために必要な高用量のイベルメクチンの使用は、おそらく安全である。

イベルメクチンは、ＺＫＶ、ＹＦＶ、ＷＮＶ、ＤＥＮＶ、ＶＥＥＶ、ＣＨＩＫＶ、ＳＦＶ、ＳＩＮＶ、鳥インフルエンザＡウイルスを含めたいくつかのＲＮＡウイルスに対する抗ウイルス効果を有する（J Antibiotics 2020, 73:593-602）。イベルメクチンは、２．２～２．８μＭのＩＣ５０で、サル腎臓細胞培養物におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の複製を阻害し、ＣＯＶＩＤ－１９のための転用される潜在的な候補薬物となる（Antiviral Res 2020, 178, 104787）。当初、細胞培養物において使用されるこれらの用量は、臨床使用については実行不可能と考えられた；しかし、イベルメクチンの抗ウイルス効果は、より低い用量で、ＣＯＶＩＤ－１９を有する患者においてすぐに実証された。

７月の時点で、イベルメクチンは、１９件の進行中及び１８件の計画された臨床試験において研究中であった。最近、ＣＯＶＩＤ－１９の予防のためのイベルメクチンの有効性及び安全性を確立するために、ハイリスク医療従事者での臨床試験が行われている。３日の間隔を空ける３００μｇ／ｋｇの用量でのイベルメクチン予防の２回の投与は、医療従事者間でＣＯＶＩＤ－１９感染の７３％低下を伴っていた（medRxiv 1101/2020）。

イベルメクチンについての、可能性が高い抗ウイルス作用機序には、宿主細胞のプロセスの抑制、特にインポーチンα／β１による核輸送の阻害（Antiviral Res, 2020, 177, 104760）、又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ３－ＣＬウイルスプロテアーゼ（Nature, 2021, 4:93, 1-10）の阻害が含まれる。イベルメクチンはまた、その潜在的な細胞受容体ＣＤ１４７へのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス結合の阻害に関与している（bioRxiv）。とはいえ、この受容体への直接的なＳＡＲＳ－ＣｏＶスパイク結合の証拠は、やはり報告されていなかった（bioRxiv doi.org/10.1101/2020.07.25. 221036）。イベルメクチンは、様々な寄生虫を治療するために使用される、ＦＤＡ承認薬物である。イベルメクチンは、ＣＤ１４７結合部位のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質を標的にし、ウイルスのＲＢＣ及びＴ細胞への侵入を阻害する。イベルメクチンはまた、ウイルスが感染を増強するために宿主の抗ウイルス応答を抑制することによって乗っ取る重要な細胞内輸送プロセスの一部である宿主のインポーチンα／β－１核輸送タンパク質を阻害することによって、ウイルス複製阻害剤として作用する。

本明細書に記載した通り、本発明者らは、ＬＦとイベルメクチン（ＩＶＭ）との組み合わせを使用する、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症のための新規の予防的及び治療的処置を特定した。例えば、ＬＦタンパク質又はその断片は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染に曝露された又はその症状（すなわち、ＣＯＶＩＤ－１９疾患）がある患者に投与することができる。他の実施形態では、組換え融合タンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）を用いて生成することができ、単独で又はＬＦと組み合わせて使用することができる。これらの実験から、ＬＦが、標的細胞（ＶｅｒｏＥ６又はＶｅｒｏＥ６／Ｔｍｐｒｓｓ２）におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の効率的な阻害剤であることが決定され、ＨＳＰＧに対する増大された親和性を有するので、阻害は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に対して効率的である（doi.org/10.1016/j.antiviral.2020.104873）。

ウイルス感染の予防のための組換えポリペプチド
いくつかの実施形態では、本開示は、（ａ）ラクトフェリンタンパク質又はその断片と；（ｂ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質又はその断片と；（ｃ）リンカーとを含む組換えポリペプチドを提供し；ここで、ラクトフェリンタンパク質又はその断片は、宿主細胞表面上のＨＳＰＧに結合し、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質又はその断片は、宿主細胞表面上のＡＣＥ２受容体に結合し、ここで、ラクトフェリン又はその断片とＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質又はその断片との両方の結合が、ウイルスの結合を防止する。

こうした組換えポリペプチドは、宿主細胞上の細胞表面受容体へのウイルスの結合を模倣して、宿主細胞表面上に存在するタンパク質に結合する。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、組換えタンパク質が宿主細胞表面上の２つ以上の受容体（例えば、ＡＣＥ２受容体及び／又はＨＳＰＧ）に協同的に結合することを可能にする、２つ以上のポリペプチド断片を有することができる。このようにして、細胞表面受容体は、結合され、ウイルス粒子による結合に利用できず、細胞へのウイルスの侵入を有効に防止し、ウイルスの感染力を低下又は防止させる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載した通りの融合分子は、ラクトフェリンタンパク質又はその結合部分などの１つ以上のエレメントと、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質の受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）とを含むことができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載した通りの融合タンパク質は、ラクトフェリンタンパク質又はバリアント又はその部分と、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質又はその部分とを含むことができる。いくつかの実施形態では、ＬＦと、Ｓタンパク質又はＳタンパク質ＲＢＤは、４－グリシン（Ｇｌｙ）リンカーなどのリンカーによって隔てることができる。例示的なリンカーは、本明細書では配列番号５～６として提供される。いくつかの実施形態では、これらのエレメントの合成の及び／又は遺伝子操作されたバリアントも、本開示の範囲内に包含される。

これらを含むあらゆる組換えポリペプチド又は組成物の活性又は半減期を増大させるために、本明細書に記載した通りのＬＦタンパク質又はその断片及び／又はＳタンパク質ＲＢＤを、より大きな分子又は担体に融合又は結合させることができる。例えば、ＬＦ又はその断片及びＳタンパク質ＲＢＤを、免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃ－ドメインのすべて又は一部に融合させることができる（例えば、Ｉｇ Ｆｃドメインに融合させたヒトラクトフェリンタンパク質と、配列番号９～１０に記述された及び図２に示された通りのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＢＤとを含むコンストラクト）。こうした融合は、組換えポリペプチド抗体に、抗体依存性の細胞媒介性の細胞傷害を媒介する、粘膜区画に到達する、及び胎盤を通過して輸送する能力を含めた、エフェクター機能を与える。

したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載した通りの組換えポリペプチドは、組換え融合ポリペプチド中に存在する細胞表面受容体に加えて、免疫グロブリンのＦｃ結合領域を含有することができる。いくつかの実施形態では、本開示の組換えポリペプチドは、例えば、限定はされないが、Ｉｇの定常重鎖、可変重鎖、定常軽鎖、可変軽鎖、ヒンジ領域、及び／又はＦｃドメイン、並びにそのバリアントのすべて又は部分を含めた、免疫グロブリン分子又は抗体の一部分を含有することもできる。例えば、本明細書に記載した通りの組換えポリペプチドは、ヒトＩｇＧの一部分と組み合わせることができる。必要に応じて、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、及びそのバリアントを含めた、あらゆる型の免疫グロブリンを使用することができる。

例えば、本明細書に記載した通りの組換えポリペプチドは、Ｉｇ－Ｆｃ断片のＮ末端又はＣ末端でＬＦ又はその断片及び／又はウイルスのＳタンパク質ＲＢＤ又はその断片を連結することによって構築することができる。組換えポリペプチドのエレメントを、あらゆる配置で直接的に結びつけてもよいし、又はスペーサー又はリンカー領域によって隔ててもよい。こうしたスペーサー又はリンカー領域は、いくつかの実施形態において、ウイルスのＳタンパク質又は断片及びＬＦの適切な配置（これらが宿主細胞表面受容体に連続的又は協同的に結合することができる、及び／又は構成要素のそれぞれの適切な機能を確実にすることができるような配置）にとって有益であり得る。本明細書に記載した通りの組換えポリペプチドのエレメントは、任意の順序で連結することができる。いくつかの実施形態では、ＬＦタンパク質又はその断片を、本明細書に記載した通りのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）受容体結合ドメインに連結して、組換えＬＦ－ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクＲＢＤ融合タンパク質を生成することができる。いくつかの実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクＲＢＤタンパク質を、ＬＦタンパク質のＣ末端に連結することができる。当業者によって理解されるであろう通り、本開示に従って組換えポリペプチド又は融合タンパク質への包含に有用であると特定されている本明細書の構成要素は、本明細書に開示されたあらゆるウイルスに対するあらゆる細胞表面受容体及び／又は補助受容体を有するバリアント、及びタンパク質エレメント又はその断片のいずれかのあらゆる有用な領域が含まれるように、いくつかの方式で変更することができる。こうした組換えポリペプチド及びそのバリアントも、本開示の範囲に包含される。

ウイルス感染の治療のための組み合わせ療法
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載した通りのウイルス感染を治療するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、こうした方法は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に曝露された対象におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を予防又は治療するために有用であり得、（ａ）予防有効量のラクトフェリンタンパク質又はその断片；又は（ｂ）予防有効量のラクトフェリンタンパク質又はその断片と予防有効量のイベルメクチン；又は（ｃ）予防有効量の組換えラクトフェリンタンパク質又はその断片；又は（ｄ）予防有効量の組換えラクトフェリンタンパク質又はその断片と予防有効量のイベルメクチンを、対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、こうした方法は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の初期段階の感染症を治療することもできるし、又は本明細書に記載した通りのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の後期段階の感染症を治療することもできる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載した通りの有用なラクトフェリンタンパク質は、ヒトラクトフェリンタンパク質である。いくつかの実施形態では、ラクトフェリンタンパク質は、対象における細胞の細胞膜に結合し、結合時に細胞に取り込まれる。示された通り及び本明細書に記載した通り、細胞によって取り込まれるラクトフェリンは、細胞質に存在し、検出可能である。

こうした方法は、本明細書に記載した通りの組換えポリペプチド又は治療用組成物の、必要とする患者又は対象への投与を含む。他の実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を治療又は予防するための、本開示の方法が提供される。こうした方法は、本明細書に記載した通りの治療又は予防有効量の医薬組成物と、少なくとも第２の治療薬を、対象に投与することを含む。当業者によって理解されるであろう通り、ウイルス感染を治療するためのあらゆる薬物を、第２の治療又は治療法として使用することができる。こうした薬物の例は、本明細書に記載した通りであり、限定はされないが、例えば、イベルメクチン、レムデシビル（登録商標）、Regeneron（登録商標）、ヒドロキシクロロキン、モルヌピラビル、パキロビッド、又は適切と判断されるあらゆる他の抗ウイルス薬が含まれ得る。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスの細胞侵入機構に基づくと、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を治療するのに有用であり得る薬物には、限定はされないが、ＴＭＰＲＳＳ２セリンプロテアーゼの阻害剤及びアンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）の阻害剤が含まれ得る。

ＡＣＥ２、すなわちＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＳタンパク質に対する宿主細胞受容体の結合の遮断、及び／又はウイルスのＳタンパク質プライミングに必要とされるＴＭＰＲＳＳ２の阻害（例えば、メシル酸カモスタット（Foipan（商標））、すなわちＡＣＥ２及びＴＭＰＲＳＳ２を発現するＨｅＬａ細胞におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ及びＨＣｏＶ－ＮＬ６３による感染を部分的に遮断する臨床的に証明された市販のセリンプロテアーゼ阻害剤での、又は合成のセリンプロテアーゼ阻害剤であるメシル酸ナファモスタット（Buipel（商標））での阻害）は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の細胞侵入を防止することができる。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の治療のための、当技術分野で公知の他の薬物には、リン酸クロロキン（Resochin（商標））及びヒドロキシクロロキン（Quensyl（商標）、Plaquenil（商標）、Hydroquin（商標）、Dolquine（商標）、及びQuinoric（商標））が含まれ得、また、適応外の抗ウイルス薬、例えばヌクレオチド類似体レムデシビル、ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤ロピナビル及びリトナビル、広域スペクトル抗ウイルス薬アルビドール及びファビピラビル、並びに当技術分野で公知の利用可能な抗ウイルスファイトケミカルも、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の蔓延並びに現在のＣＯＶＩＤ－１９パンデミックの罹患率及び死亡率を制限することができる。高血圧及び慢性心不全の治療のための標準薬であるＡＣＥ阻害剤は、これまでのところ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を治療するのに有用であると証明されていない。いくつかの他の薬物及び化合物は、ＡＣＥ２受容体を阻害することが示されているが、ＡＣＥ阻害剤は、ＡＣＥ２受容体を阻害するとは思われないからである。これらの薬物のいずれかは、本開示の範囲内に包含される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載した通りの薬物（限定はされないが、上に列挙された薬物、並びに、特に、ラクトフェリン、アジスロマイシン、亜鉛、シアル酸が含まれる）を、本明細書に記載した通りのウイルス感染を治療するために使用することができる。いくつかの実施形態では、ウイルス感染、特にＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を治療するための、当技術分野で公知のあらゆる薬物（例えば、限定はされないが、クロロキン、ヒドロキシクロロキン、レムデシビル、リトナビル／ロピナビル（Kaletra（商標））、メシル酸カモスタット、メシル酸ナファモスタット（Buipel（商標））、塩酸セファランチン／セラメクチン／メフロキン、ロピナビル／リトナビル（Kaletra（商標））、ファビピラビル（アビガン（Avigan）（商標））、ウミフェノビル（Arbidol（商標））、３Ｃｌｐｒｏ、フラボノイド、例えば、ルテオリン、ミリセチン、アピゲニン、ケルセチン、ケンフェロール、バイカリン、ウォゴノシド、エモジン、リジェネロン（Regeneron）、レスベラトロールなど、モルヌピラビル、及び／又はパキロビッドが含まれる）を使用することができる。

いくつかの実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の治療のための本明細書に記載した通りの薬物、例えば、ラクトフェリン及び／又はイベルメクチンを、本明細書に記載した通りの組換えポリペプチドと組み合わせることができる。他の実施形態では、本明細書に記載した通りの薬物を、組み合わせ療法のための本明細書に記載した通りの別の薬物と組み合わせることができる。例えば、非限定的な実施形態において、ラクトフェリンを、イベルメクチン、アジスロマイシン、亜鉛、及びレムデシビルのうちの１つ以上と組み合わせることができる。他の実施形態では、アジスロマイシンを、亜鉛及びレムデシビルと組み合わせることができる。本開示に従って、あらゆる薬物治療を、本明細書に記載した通りのあらゆる他の薬物治療と組み合わせることもできるし、又は本明細書に記載した通りの組換えポリペプチドと組み合わせることもできる。本明細書に記載した通りのいくつかの薬物治療が、当技術分野で公知且つ利用可能である。本開示は、本明細書に記載した通りの組換えポリペプチドと、本明細書に記載した通りの１種以上の薬物などの少なくとも第２の薬物治療又は治療法との施与を含む、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のための新規の治療を提供する。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載した通りの組換えポリペプチド又はその組成物を、例えば、ラクトフェリン、イベルメクチン、アジスロマイシン、亜鉛、又はレムデシビルなどの１つ以上の組み合わせと組み合わせることができる。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載した通りの組換えポリペプチド又はその組成物を、ラクトフェリン及び／又はイベルメクチンと組み合わせることができる。いくつかの実施形態では、ＬＦを、患者に、本明細書に記載した通りの組換えポリペプチドと、又はイベルメクチンなどの別の薬物と、同時投与することができる。本明細書に記載した通り、ＬＦ及び／又はＩＶＭを、単回投与で又は反復投与で、患者に投与することができる。ＬＦ及びＩＶＭの投薬量が、当技術分野で利用可能であるので、あらゆる適切な用量のＬＦ及び／又はＩＶＭを、臨床医(clinician)によって適切と判断される通りに、対象に投与することができる。

いくつかの実施形態では、ＬＦの用量には、限定はされないが、約２００μｇ／ｋｇの単一用量が含まれ得る。いくつかの実施形態では、第２の又はさらなる用量が、本明細書に記載した通りに対象に与えられる。いくつかの実施形態では、ＬＦの用量は、１日あたり約１００ｍｇ（０．１ｇ）～約５ｇ（約０．１ｇ、約０．２ｇ、約０．３ｇ、約０．４ｇ、約０．５ｇ、約０．６ｇ、約０．７ｇ、約０．８ｇ、約０．９ｇ、約１．０ｇ、約１．１ｇ、約１．２ｇ、約１．３ｇ、約１．４ｇ、約１．５ｇ、約１．６ｇ、約１．７ｇ、約１．８ｇ、約１．９ｇ、約２．０ｇ、約２．１ｇ、約２．２ｇ、約２．３ｇ、約２．４ｇ、約２．５ｇ、約２．６ｇ、約２．７ｇ、約２．８ｇ、約２．９ｇ、約３．０ｇ、約３．１ｇ、約３．２ｇ、約３．３ｇ、約３．４ｇ、約３．５ｇ、約３．６ｇ、約３．７ｇ、約３．８ｇ、約３．９ｇ、約４．０ｇ、約４．１ｇ、約４．２ｇ、約４．３ｇ、約４．４ｇ、約４．５ｇ、約４．６ｇ、約４．７ｇ、約４．８ｇ、約４．９ｇ、又は約５．０ｇなどが含まれる）であり得る。

いくつかの実施形態では、ＬＦの用量には、限定はされないが、約２００μｇ／ｋｇの単一用量が含まれ得る。いくつかの実施形態では、第２の又はさらなる用量が、本明細書に記載した通りに対象に与えられる。いくつかの実施形態では、ＩＶＭの用量は、特定の連続した日数の間（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０日間など）、１日あたり６００μｇ／ｋｇ又は１２００μｇ／ｋｇであり得る。したがって、いくつかの実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の治療に適したＩＶＭの用量は、約１００μｇ／ｋｇ、又は約２００μｇ／ｋｇ、又は約３００μｇ／ｋｇ、又は約４００μｇ／ｋｇ、又は約５００μｇ／ｋｇ、又は約６００μｇ／ｋｇ、又は約７００μｇ／ｋｇ、又は約８００μｇ／ｋｇ、又は約９００μｇ／ｋｇ、又は約１０００μｇ／ｋｇ、又は約１１００μｇ／ｋｇ、又は約１２００μｇ／ｋｇ、又は約１３００μｇ／ｋｇ、又は約１４００μｇ／ｋｇ、又は約１５００μｇ／ｋｇ、又は約１６００μｇ／ｋｇ、又は約１７００μｇ／ｋｇ、又は約１８００μｇ／ｋｇ、又は約１９００μｇ／ｋｇ、又は約２０００μｇ／ｋｇなどであり得る。

組換えポリペプチドをコードする発現系及びベクター
本明細書に詳述する通り、本開示は、ウイルス感染に対する長期のインビボでの防御又はウイルス感染の治療を必要とする哺乳類対象に投与することができる医薬組成物及び治療用組成物を提供する。こうした組成物は、典型的には、発現系、例えば、本明細書に記載した通りの組換えポリヌクレオチドをコードする又は発現する、ポリヌクレオチド配列、発現ベクター、又はウイルスベクターを含有する。本開示の組成物は、本明細書に記載した通りのウイルスの感染に対する強力且つ長期の防御を提供する、本明細書に記載した通りの組換えポリペプチドの、対象又は患者（例えば、ヒト又は非ヒト霊長類）における最適なインビボ活性又は同時発現を可能にする。本明細書に記載した通りの組換えポリペプチドの最適発現は、種々の機構を介して達成することができる。こうした最適発現は、組換えポリペプチドをコードする発現ベクターの所望される構造設計を使用して、又は、発現ベクター中の適切な調節エレメントの使用によって、達成することができる。さらに、本開示の組換えポリペプチドのインビボでの最適発現は、本明細書に記載した通りの組換えポリペプチドの細胞内レベルの測定によって、さらに最適化することができる。ポリペプチドの適切なレベルの決定のためのあらゆる定量法を、必要に応じて使用することができる。こうした試験は、すべて、当技術分野で周知の標準の定量法又はプロトコルを介して容易に実施することができる。

他の実施形態では、ウイルスの中和活性を、中和アッセイなどの当技術分野で公知のあらゆるアッセイを使用して評価することができる。

いくつかの好ましい実施形態では、本明細書に記載した通りの組換えポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列は、本明細書に記載した通りのウイルスベースの発現ベクター又は発現系中で、発現制御配列（例えば、プロモーター配列）に動作可能に連結される。本明細書に記載した通りの組換えタンパク質及び方法に適したウイルスベクターのいくつかの例には、限定はされないが、レトロウイルスベースのベクター、例えばレンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、ワクシニアベクター、α－ウイルスベクター、麻疹ウイルスベクター（ＭＳＶ）、又は水疱性口内炎ベクター（ＶＳＶ）が含まれる。いくつかの実施形態では、本開示に有用であり得るアデノウイルスベクターは、Ａｄ５、Ａｄ２６であり得る。いくつかの実施形態では、本開示の組成物は、本明細書に記載した通りの組換えポリペプチドを発現する組換えＡＡＶベクター（ｒＡＡＶ）又はベクターを内部に有するウイルス粒子を含有することができる。いくつかの実施形態では、本開示に有用なワクシニアベクターは、カナリアポックス(Canary Pox)ベクターであり得る。いくつかの実施形態では、ベクターの構造は、例えば発現制御エレメント（例えば、プロモーター又はエンハンサー配列）を含めた組換えポリペプチドの、発現の最適化のために又は所望される細胞内レベルを達成するために、必要に応じて改変することができる。

当技術分野で周知の種々のプロモーター配列を、本開示に従って使用することができる。これには、限定はされないが、例えば、ＣＭＶプロモーター、伸長因子－Ｉ（短）（ＥＦＳ）プロモーター、ニワトリアクチン（ＣＢＡ）プロモーター、ＥＦ－ｌａプロモーター、ヒトデスミン（ＤＥＳ）プロモーター、Ｍｉｎｉ ＴＫプロモーター、及びヒトチロキシン結合グロブリン（ＴＢＧ）プロモーターが含まれる。さらに、本開示の発現ベクターは、組換えポリペプチドの最適発現を達成するために、いくつかの調節エレメントを含むことができる。例えば、組換えポリペプチドの発現を上昇させるために、５’－エンハンサーエレメント及び／又は５’－ＷＰＲＥエレメントを含めることができる。ＷＰＲＥは、ウッドチャックＢ型肝炎ウイルス（ＷＨＹＳ）ゲノムの塩基対１０９３～１６８４との１００％相同性を有する転写後応答エレメントである。これは、哺乳類発現カセットの３’ＵＴＲにおいて使用される場合、ｍＲＮＡ安定性及びタンパク質収量を有意に増大させることができる。本明細書で使用する場合、「発現カセット」は、動作可能に連結された第２のポリヌクレオチド配列の転写を開始することが可能な少なくとも１つの第１のポリヌクレオチド配列と、任意に、第２のポリヌクレオチド配列に動作可能に連結された転写終結配列とを含むポリヌクレオチド配列を指す。本明細書で使用する場合、発現カセットは、本明細書に記載した通りのプロモーターに動作可能に連結された本明細書に記載した通りの組換えポリペプチドをコードする外来性核酸を含むことができる。

対象又は患者において、本明細書に記載した通りの組換えポリペプチドを発現させることによって、ヒトなどの対象における、ウイルス感染に対する有効且つ長期のインビボでの防御及び／又はウイルス感染の治療。こうした方法については、対象に、治療的に又は薬学的に有効な量の、本開示の組換えポリペプチド又は治療用組成物又は発現系を含有する医薬組成物を投与することができる。いくつかの関連する実施形態では、本開示は、対象において本明細書に記載した通りの組換えポリペプチドを最適に発現させるための発現系を含有する治療用組成物を提供する。発現系は、ポリヌクレオチド配列又は発現ベクター、並びに、宿主細胞又は対象へのポリヌクレオチド配列の送達を媒介することが可能なリポソーム又は他の脂質含有複合体、及び他の巨大分子複合体であり得る。対象への投与時に、本開示の組換えポリペプチドを発現させるために、種々の発現ベクター又は系を用いることができる。いくつかの実施形態では、発現ベクター又は発現系は、ウイルスベクターをベースにすることができる。いくつかの他の実施形態では、発現系は、デオキシリボ核酸及びリボ核酸配列を含めた、本明細書に記載した通りの組換えポリペプチドのためのコード配列を内部に有するポリヌクレオチド配列から構成される。いくつかの実施形態では、発現ベクター又は系は、組換えウイルスの形態で、対象に投与される。例えば、組換えウイルスは、組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、例えば、自己相補的なアデノ随伴ウイルス（ｓｃＡＡＶ）ベクターであり得る。こうしたウイルス送達方法は、高レベルのタンパク質治療薬の安全な、目立たない、持続される発現を可能にする。

上に記載した通り、対象におけるウイルス感染を予防又は治療するために、本開示の治療用組成物を使用する場合、組換えポリペプチドの発現レベルを、治療プロセス中に検査することができる。いくつかの実施形態では、投与された組換えポリペプチド又は組成物は、対象の血漿中で検出可能なウイルスＲＮＡのコピーの数を、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００倍、７５０、１０００、又はそれ以上減少させるのに十分である量の、対象における組換えポリペプチドの発現をもたらす。いくつかの好ましい実施形態では、本開示の組換えポリペプチド又は治療薬又は医薬組成物での対象又は患者の治療は、ウイルスＲＮＡの、治療される対象の血液又は血漿中で検出不可能なレベルへの低下をもたらす。こうした検出不可能なレベルは、リアルタイム逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（リアルタイムＲＴ ＰＣＲ）アッセイにおける、１ｍＬの血漿あたり５０コピーよりも少ないウイルスのＲＮＡと定義することができる。

本明細書に記載した通りの発現ベクターは、コード配列と、遺伝子送達及び／又は遺伝子発現をさらに調節する、又は有益な性質を別の方法で提供する、他の構成要素又は機能性とを含有することができる。こうした他の構成要素には、例えば、細胞への結合又はターゲティングに影響を与える構成要素（細胞型又は組織特異的結合）を媒介する構成要素が含まれる）；細胞によるベクターの取り込みに影響を与える構成要素；取り込み後の細胞内の導入された遺伝子の局在性に影響を与える構成要素（核内局在性を媒介する薬剤など）；及び遺伝子の発現に影響を与える構成要素が含まれる。こうした構成要素には、マーカー、例えば、ベクターによって送達された核酸を担っている及び発現している細胞を検出又は選択するために使用することができる検出可能な及び／又は選択可能なマーカーも含まれるであろう。こうした構成要素を、ベクターの天然の特徴として提供することもできるし（結合及び取り込みを媒介する構成要素又は機能性を有するある種のウイルスベクターの使用など）、ベクターを、こうした機能性を提供するように改変することもできる。選択可能なマーカーは、ポジティブ、ネガティブ、又は二機能性であり得る。ポジティブ選択可能なマーカーが、マーカーを有する細胞の選択を可能にするのに対し、ネガティブ選択可能なマーカーは、マーカーを有する細胞が、選択的に除去されるようにする。こうした様々なマーカー遺伝子は、二機能性（すなわち、ポジティブ／ネガティブ）マーカーを含めて、記載されている（例えば、国際公開第９２／０８７９６号；及び国際公開第９４／２８１４３号を参照のこと）。こうしたマーカー遺伝子は、遺伝子治療の状況において好都合であり得る、制御の追加的な尺度を提供することができる。非常に様々なこうしたベクターが、当技術分野で公知であり、一般に入手可能である。

本開示に適した発現ベクター又は系には、限定はされないが、単離されたポリヌクレオチド配列、例えば、染色体外で維持することができるプラスミドベースのベクター、及びウイルスベクター、例えば、組換えアデノウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、パピローマウイルス、又はアデノ随伴ウイルス（リポソーム、例えば、中性又はカチオン性リポソーム、例えばＤＯＳＰＡ／ＤＯＰＥ、ＤＯＧＳ／ＤＯＰＥ、又はＤＭＲＩＥ／ＤＯＰＥリポソーム中に存在する、及び／又はＤＮＡ－抗ＤＮＡ抗体－カチオン性脂質（ＤＯＴＭＡ／ＤＯＰＥ）複合体などの他の分子と結合させた、ウイルスベクター及び非ウイルスベクターが含まれる）が含まれる。例示的な遺伝子ウイルスベクターは、当技術分野で公知であり、また、以下に記載される。ベクターは、限定はされないが、筋肉内、頬側、直腸内、静脈内、又は冠内投与を含めた、あらゆる経路を介して投与することができ、細胞への移行は、電気穿孔及び／又はイオン導入を使用して促進することができる。

いくつかの実施形態は、対象又は患者において本明細書に記載した通りの組換えポリペプチドを最適に発現させるためのアデノ随伴ウイルスベクター又はアデノウイルスベクターを用いることができる。アデノウイルスベクターは、ゲノムからのウイルスの遺伝子発現を担う初期（Ｅｌ Ａ及びＥｌ Ｂ）遺伝子を欠失させることによって、複製不全にすることができる。これは、染色体外形態で、宿主細胞まで安定的に維持され得る。これらのベクターは、複製する細胞と複製しない細胞の両方にトランスフェクションする能力を有する。アデノ随伴ウイルスベクターは、非病原性のパルボウイルスから得られる、組換え型のアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）を指す。これは、細胞性免疫応答を基本的に誘発せず、大抵の系において数か月持続する導入遺伝子発現をもたらす。アデノ随伴ウイルスベクターはまた、アデノウイルスのように、複製する細胞と複製しない細胞に感染する能力を有し、また、ヒトに対して非病原性であると考えられる。

ウイルス感染を予防するための医薬組成物又は治療用組成物
いくつかの実施形態では、本開示は、生ウイルス発現ベクターと、本明細書に記載した通りの組換えポリペプチドを発現するポリヌクレオチド配列とを含む、治療用組成物又は医薬組成物を提供する。ウイルスベクターは、上に詳細に記載されており、また、当業者に公知であろう。いくつかの実施形態では、本明細書に記載した通りの発現ベクターは、アデノウイルスベクター、ワクシニアベクター、α－ウイルスベクター、麻疹ウイルスベクター（ＭＳＶ）、又は水疱性口内炎ベクター（ＶＳＶ）であり得る。当技術分野で公知且つ利用可能な他のベクターも、本明細書に記載した通りに使用することができる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載した通りの組換えポリペプチドは、対象又は患者に投与されることとなる医薬組成物又は治療用組成物として提供することができる。本開示の組成物は、本明細書に記載した通りの組換えポリペプチドを単一の単位で含むこともできるし、或いは、いくつかの実施形態では、本明細書に記載した通りの組換えポリペプチドは、細胞への侵入を防止するためにウイルスタンパク質と別々に結合する２つ以上の構成要素又はサブユニットを含むこともできる。いくつかの実施形態では、異なる構成要素、例えばペプチド又はポリヌクレオチド鎖を、対象又は患者への投与の前に、共有結合によって又は非共有結合によって結合させることができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載した通りの組換えポリペプチドは、複数の異なるポリペプチド鎖（例えば、免疫グロブリン重鎖及び軽鎖）を含有することができる。いくつかの実施形態では、宿主細胞表面受容体に結合するために、１つ以上のポリペプチド鎖が必要とされる可能性がある。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載した通りの組換えポリペプチドは、十分に構築された融合タンパク質として、対象又は患者に提供する又は投与することができる。或いは、いくつかの実施形態では、本明細書に記載した通りの組換えポリペプチドは、細胞への侵入を防止するためにウイルスタンパク質に別々に結合する２つ以上の構成要素又はサブユニットを含むことができる。いくつかの実施形態では、異なる構成要素、例えばペプチド又はポリヌクレオチド鎖を、対象又は患者への投与の前に、共有結合によって又は非共有結合によって結合させることができる。生ウイルスベクターが提供される本開示の実施形態については、こうしたベクターは、単一の実体としての組換え融合タンパク質をコードすることもできるし、本明細書に記載した通りの組換え融合タンパク質へとインビボで構築させることができる離れた別の構成成分又はサブユニットをコードすることもできる。

本開示は、ウイルス感染を阻害する、予防する、又は治療するための、治療用組成物又は発現系を使用する医薬組成物及び関連する方法を提供する。提供されるのはまた、ウイルス感染を予防又は治療するための医薬品の製造のための、本明細書に記載されたポリヌクレオチド、ポリペプチド、及び発現ベクター又は系の使用である。医薬組成物は、治療的製剤又は予防的製剤のいずれかであり得る。典型的には、医薬組成物は、１つ以上の活性成分と、任意にいくつかの不活性な成分を含有することができる。いくつかの実施形態では、活性成分は、本明細書に記載した通りの組換えポリペプチド、発現ベクター、又は発現系であり得る。いくつかの他の実施形態では、活性成分には、本開示の発現系に加えて、他の抗ウイルス剤が含まれ得る。この組成物は、１つ以上の薬学的に許容し得る賦形剤、及び任意に他の治療成分（例えば、抗生物質又は抗ウイルス薬）をさらに含むことができる。薬学的に許容し得る様々な添加剤も、こうした組成物において使用することができる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載した通りの医薬組成物中の発現系は、本明細書に記載した通りの組換えポリペプチドを最適に発現することができる、発現ベクター又はある種のウイルス粒子を含有することができる。一般に、特定の結果を達成するために投与されるベクター又はウイルスの粒子の量は、限定はされないが、選択される遺伝子及びプロモーター、状態、患者固有のパラメータ、例えば、身長、体重、及び年齢、及び予防又は治療が達成されることとなるかどうかを含めた様々な因子に応じて変動することとなる。本開示のベクター又はウイルス粒子は、好都合には、例えば血流への（例えば、冠動脈内）投与に適した製剤の形態で提供することができる。適切な投与様式は、最良には、標準の手順に従って、各患者について個別に、医師(medical practitioner)又は臨床医(clinician)によって決定することができる。

本開示の医薬組成物は、当技術分野で周知の標準の手順に従って調製することができる。例えば、Remingtons Pharmaceutical Sciences,19th Ed.,Mack Publishing Company,Easton,Pa.,1995；Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems,J.R.Robinson, ed.,Marcel Dekker,Inc.,New York,1978；米国特許第４，６５２，４４１号；第４，９１７，８９３号；第４，６７７，１９１号；第４，７２８，７２１号；及び第４，６７５，１８９号を参照のこと。本開示の医薬組成物は、ウイルス感染を予防又は治療するために、様々な治療的又は予防的用途で容易に用いることができる。ウイルス感染を発症するリスクがある対象については、ウイルス感染に対する予防的防御を提供するために、本開示のワクチン組成物を投与することができる。具体的な対象及び状態に応じて、本開示の組成物を、当業者に公知の様々な投与様式、例えば、筋肉内、皮下、静脈内、動脈内、関節内、腹腔内、経口、粘膜、鼻咽腔、又は非経口経路によって、対象又は患者に投与することができる。鼻腔スプレーは、本明細書に記載した通りの予防的又は治療的処置を施すための有効な方式を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載した通りの組成物は、選択された疾患又は状態又はその１つ以上の症状を予防する、阻害する、及び／又は改善するのに十分な時間及び条件で、こうした治療を必要とする対象に投与することができる。治療的適用については、組成物は、本明細書に記載された治療有効量の発現系を含有することができる。予防的適用については、本明細書に記載した通りの組成物は、本明細書に記載した通りの予防有効量の発現系を含有することができる。発現系（発現ベクター又はウイルス粒子）の適切な量は、治療又は予防されることとなる具体的な疾患又は状態、重症度、対象の年齢、及び具体的な対象の他の個人属性（例えば、対象の一般的健康状態及び対象の免疫系の頑健性）に基づいて決定することができる。有効な投薬量の決定は、動物モデル研究（すなわち、霊長類、イヌなど）、それに続くヒト臨床試験、及び対象における標的とされる疾患症状又は状態の出現又は重症度を有意に低下させる投与プロトコルを用いてさらに導くことができる。

予防的適用については、あらゆる症状に先立って、例えば、感染に先立って、本明細書に記載した通りの組成物を提供することができる。免疫原性組成物の予防的投与は、あらゆるその後の感染を予防又は改善するように作用することができる。したがって、いくつかの実施形態では、治療されることとなる対象は、例えばウイルスへの曝露又は曝露の可能性が原因で、ウイルス感染を有する又はウイルス感染にかかるリスクがある対象である。治療有効量の開示された治療用組成物の投与後に、対象又は患者を、ウイルス感染、ウイルス感染に伴う症状、又はこれらの両方について観察することができる。

治療的適用については、疾患又は感染症の症状の発症時又は発症後に、例えば、ウイルス感染の症状の出現後に、又は感染症の診断後に、本明細書に記載した通りの組成物を提供することができる。したがって、本明細書に記載した通りの組成物は、感染症の予測される重症度、期間、又は程度、及び／又は随伴する疾患症状を減弱させるようにウイルスへの予測される曝露の前に、又はウイルスへの曝露又は曝露の疑いの後に、又は感染症の実際の開始後に、提供することができる。

いくつかの実施形態では、本開示のベクター又はウイルス粒子は、単回又は反復投与に有効な量のベクターを含有する剤形で提供することができる。ウイルスベクターについては、有効な用量は、臨床医(clinician)又は開業医(practitioner)によって適切と判断されるあらゆる範囲であり得る。組換えポリペプチド、ベクター、ウイルス粒子、発現系、又は組成物の投与は、リン酸緩衝生理食塩水などの緩衝液、又は他の適切な緩衝液又は希釈剤中であり得る。緩衝液又は希釈剤の量は、変動する可能性があり、臨床医又は開業医によって決定されるであろう。プラスミドＤＮＡ単独、又は他の巨大分子との複合体中のプラスミドＤＮＡの送達については、投与されることとなるＤＮＡの量は、レシピエントに有益な効果をもたらす量であろう。例えば、０．０００１～１ｍｇ又はそれ以上、例えば最大１ｇ（個々の又は分割用量で）、例えば０．００１～０．５ｍｇ、又は０．０１～０．１ｍｇのＤＮＡを投与することができる。本開示の組換えポリペプチドの送達については、投与される量は、レシピエントに有益な効果をもたらす量であろう。例えば、０．０００１～１００ｇ又はそれ以上、例えば最大１ｇ（個々の又は分割用量で）、例えば０．００１～０．５ｇ、又は０．０１～０．１ｇの組換えポリペプチドを投与することができる。

いくつかの実施形態では、本開示の組成物は、ウイルス感染を治療又は予防するための、当技術分野で公知の他の薬剤と組み合わせることができる。これらには、ウイルス感染を治療するための、当技術分野で公知又は利用可能なあらゆる薬物、例えば、ヌクレオシド系逆転写酵素阻害剤、非ヌクレオシド系逆転写酵素阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、及び融合タンパク質阻害剤などの、抗体又は他の抗ウイルス剤が含まれ得る。組成物と１種以上の公知の抗ウイルス剤との投与は、同時又は連続的であり得る。

ラクトフェリン及びイベルメクチンの投薬量は、例えば、医師（physician）によって適切と判断される、あらゆる投薬量であり得る。

ウイルス感染を予防するためのＲＮＡ分子
いくつかの実施形態では、本開示は、ウイルス感染の治療又は予防のためのＲＮＡ分子を提供する。こうしたＲＮＡ分子は、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を発現する第１のリボヌクレオチド配列と；本明細書に記載した通りの組換えポリペプチドを発現する第２のリボヌクレオチド配列とを含むことができる。

本明細書で使用する場合、「ＩＲＥＳ」は、真核生物のリボソームをｍＲＮＡに動員することができる、ＲＮＡエレメント、又はＲＮＡ分子の領域を指す。ＩＲＥＳは、開始複合体の構築のために５’キャップを必要とせずに、タンパク質翻訳の開始を可能にする。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載した通りのＲＮＡ分子へのＩＲＥＳの導入は、タンパク質合成のより大きなプロセスの一部としての、キャップ非依存性方式での、本開示の組換えポリペプチドの生成を可能にする。真核生物の翻訳では、タンパク質翻訳の開始は、典型的には、ｍＲＮＡ分子の５’末端で起こる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載した通りのＲＮＡ分子に含まれるＩＲＥＳは、組換えポリペプチドが、こうした核酸分子又はその組成物が投与される対象又は患者の細胞によって翻訳されることを可能にする。Ｔ７プロモーター（配列番号１９に提供されるものなど）は、ＩＲＥＳの上流に付加することができる。大規模ＲＮＡ産生は、例えばＴ７ポリメラーゼを使用して、インビトロで達成することができる。ＲＮＡは、リポソームを伴って又は伴わずに生理食塩水に入れて皮下注射することができる。注射されたＲＮＡは、患者の細胞内で翻訳されることとなり、得られた翻訳された組換えポリペプチドは、分泌される。

本明細書に記載した通りの組換えポリペプチドは、複数の異なるポリペプチド鎖（例えば、免疫グロブリン重鎖及び軽鎖）を含有することができる。いくつかの実施形態では、宿主細胞表面受容体タンパク質又はその断片に結合するために、１つ以上のポリペプチド鎖が必要とされる可能性がある。

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を予防又は治療するための方法
いくつかの実施形態では、本開示は、それを必要とする対象におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を予防又は治療する方法であって、本明細書に記載した通りのＬＦを含む治療又は予防有効量の医薬組成物を対象に投与することを含む方法を提供する。こうした方法は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の症状を改善又は治療するのに有効なあらゆる用量のＬＦの投与を含むことができる。

本開示の方法は、本明細書に記載した通りに、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を有する対象又は患者の感染症を治療又は予防することができる。本明細書に記載した通りの、ＬＦを単独で又はＩＶＭと組み合わせて含む組成物の投与は、本明細書に記載した通りの臨床設定であってもよいし、又は臨床医（clinician）又は開業医（practitioner）によって適切と判断される代わりの設定であってもよい。こうした化合物又はポリペプチドの投与のためのさらなる実施形態は、本明細書の他の場所に記載されている通りである。

いくつかの実施形態では、ＬＦを含むこうした組成物を、患者におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の治療のための他の治療法又は治療、例えばＩＶＭと組み合わせることができる。ＬＦの投与、又はＬＦとＩＶＭなどの別の薬物治療との同時投与は、ＣＯＶＩＤ－１９症状の日数を、１日以上減らす、例えば、症状を、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５日など、減らすことができる。他の実施形態では、ＣＯＶＩＤ－１９の症状を、１週以上（例えば、限定はされないが、１週、２週、３週、４週、５週、６週、７週、又は８週、又はそれ以上が含まれる）減らすことができる。他の実施形態では、ＬＦの投与、又はＬＦとＩＶＭなどの別の薬物治療との同時投与は、ＣＯＶＩＤ－１９症状の重症度又は期間を、１０％、又は２０％、又は３０％、又は４０％、又は５０％、又は６０％、又は７０％、又は８０％、又は９０％、又は１００％減らすことができる。

核酸の発現
本開示に有用なポリヌクレオチドは、発現コンストラクト中に提供することができる。本開示の発現コンストラクトには、一般に、発現コンストラクトが発現されることとなる意図される宿主細胞において機能性である調節エレメントが含まれる。したがって、当業者は、例えば、細菌宿主細胞、酵母宿主細胞、哺乳類宿主細胞、及びヒト宿主細胞に使用するために、調節エレメントを選択することができる。核内遺伝子の発現のために使用される調節エレメントには、プロモーター、転写終結配列、翻訳終結配列、エンハンサー、及びポリアデニル化要素が含まれる。本明細書で使用する場合、用語「発現コンストラクト」は、転写をもたらす核酸配列と、動作可能に連結された核酸配列との組み合わせを指す。本明細書で使用する場合、用語「動作可能に連結された」は、構成要素が、その意図される方式で機能することを可能にする関係である、記載された構成要素の並置を指す。一般に、動作可能に連結された構成要素は、隣接する関係である。

本開示の発現コンストラクトは、本開示のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列に動作可能に連結されたプロモーター配列を含むことができる。プロモーターを、当技術分野で公知の標準の技術を使用して、ポリヌクレオチドに組み込むことができる。プロモーターの複数のコピー又は複数のプロモーターを、本開示の発現コンストラクト内に使用することができる。好ましい実施形態では、プロモーターは、その天然の遺伝子環境での転写開始点からの距離とほぼ同じ、発現コンストラクト中の転写開始点からの距離に配置することができる。プロモーター活性の実質的低下がなければ、この距離のいくらかの変動は許容される。転写開始点は、典型的には、発現コンストラクトに含まれる。

本開示の核内発現コンストラクトは、転写終結配列、翻訳終結配列、シグナルペプチドをコードする配列、及び／又はエンハンサーエレメントを任意に含有することができる。転写終結領域は、典型的には、真核生物又はウイルスの遺伝子配列の３’非翻訳領域から得ることができる。転写終結配列は、効率的な終結をもたらすように、コード配列の下流に配置することができる。シグナルペプチド配列は、動作可能に連結された成熟したポリペプチドの、特定の細胞小器官区画からタンパク質作用の部位及び細胞外環境までの範囲にわたる広範な翻訳後の細胞の目的地への再配置を担う、タンパク質のアミノ末端に典型的には存在する、短いアミノ酸配列である。本開示のポリペプチドとの使用については、動作可能に連結されたシグナルペプチド配列の使用を介して、遺伝子産物を、意図される細胞内及び／又は細胞外の目的地に標的化することが企図される。古典的なエンハンサーは、遺伝子転写を増大させるシス作用性エレメントであり、発現コンストラクト内に含めることもできる。古典的なエンハンサーエレメントは、当技術分野で公知であり、限定はされないが、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）初期プロモーターエンハンサーエレメント、及びＳＶ４０エンハンサーエレメントが含まれる。遺伝子発現を亢進するイントロン介在性エンハンサーエレメントも、当技術分野で公知である。これらのエレメントは、転写される領域内に存在しなければならず、また、方向依存性である。

ＳＶ４０ポリＡシグナルなどの、発現コンストラクトから転写されるｍＲＮＡのポリアデニル化を誘導するＤＮＡ配列も、発現コンストラクトに含めることができ、限定はされないが、オクトピンシンターゼ又はノパリンシンターゼシグナルが含まれる。

本開示のポリヌクレオチドは、ＲＮＡ又はＤＮＡ、又はそのハイブリッドから構成され得る。本開示はまた、本明細書に開示されたポリヌクレオチドと配列において相補的であるポリヌクレオチドを包含する。本開示のポリヌクレオチド及びポリペプチドは、精製された又は単離された形態で提供することができる。

核酸
ＤＮＡ分子を単離及び操作するために、当業者に周知のいくつもの方法を使用することができる。例えば、以前に記載されている通り、ＰＣＲ技術を使用して、特定の出発ＤＮＡ分子を増幅する及び／又は出発ＤＮＡ分子のバリアントを生成することができる。ＤＮＡ分子又はその断片はまた、化学的手段によって断片を直接的に合成することを含めた、当技術分野で公知のあらゆる技術によって得ることができる。したがって、本明細書に記載した通りの核酸のすべて又は一部を合成することができる。

本明細書で使用する場合、用語「核酸」及び「ポリヌクレオチド」は、一本鎖又は二本鎖形態の、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、又はデオキシリボヌクレオチドとリボヌクレオチドポリマーの混合を指し、他に限定されない限り、天然に存在するヌクレオチドと同様の方式で機能することができる、天然のヌクレオチドの公知の類似体を包含するであろう。ポリヌクレオチド配列には、ＲＮＡに転写されるＤＮＡ鎖配列、及び転写されるＤＮＡ鎖に対して相補的である鎖配列が含まれる。ポリヌクレオチド配列には、全長配列と、全長配列から得られるより短い配列との両方も含まれる。ポリヌクレオチド配列には、それぞれの鎖としての又は二本鎖での、センス鎖とアンチセンス鎖との両方が含まれる。

キット
本開示は、本明細書に記載した通りの組換えポリペプチドを含む１つ以上の単回使用容器を含むキットをさらに提供する。いくつかの実施形態では、本開示のキットは、対象又は患者への投与のためのウイルスベクターを提供することができる。いくつかの実施形態では、キットは、対象又は患者への投与のための、本明細書に記載した通りの組換えポリペプチドを含む医薬組成物を提供することができる。他の実施形態では、本明細書に記載した通りの組換えポリペプチド、ＲＮＡ、ウイルスベクター、及び／又は医薬組成物の投与のための無菌の試薬及び／又は供給物を、必要に応じて提供することができる。キットは、細胞形質転換及び／又はトランスフェクションのための試薬、ウイルス及び／又は細胞培養液、又はこれらの両方をさらに含むことができる。

本開示のキット中に提供される構成要素には、例えば、本明細書に記載した通りの方法を実施するのに有用なあらゆる出発材料が含まれ得る。こうしたキットは、例えば、核酸アッセイ、例えば、ＰＣＲ又はＲＴ－ＰＣＲアッセイ、ルシフェラーゼ（Ｌｕｃ）アッセイ、細胞形質転換／トランスフェクション、ウイルス／細胞培養液、血液アッセイ、すなわち、全血球計算（ＣＢＣ）、ウイルス力価／ウイルス負荷アッセイ、抗体アッセイ、ウイルス抗原検出アッセイ、ウイルスＤＮＡ又はＲＮＡ検出アッセイ、ウイルス中和アッセイ、遺伝的相補性アッセイ、又は本開示に従って有用なあらゆるアッセイを含めた様々なアッセイに使用するための、１つ以上のこうした試薬又は構成成分を含むことができる。レトロウイルスなどの、ウマにおいて遺伝子又はゲノム変化又は変異をもたらすウイルス株については、ウイルス配列の特定のための、宿主ゲノム内のある種のジェノタイピング解析が有用であり得、本開示内に包含される。構成成分は、必要に応じて、凍結乾燥させた、乾燥させた、又は乾いた形態で提供することもできるし、本開示による使用に適した水溶液又は他の液体媒体中で提供することもできる。

本開示に有用なキットはまた、追加の試薬、例えば、本明細書に記載した通りの、緩衝液、基質、抗体、リガンド、検出試薬、培地構成成分、（ＭｇＣｌ_２を含めた塩など）、ポリメラーゼ酵素、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、発現ベクターなど、ＤＮＡ単離、ＤＮＡ／ＲＮＡトランスフェクションのための試薬なども含むことができる。こうした試薬又は構成成分は、当技術分野で周知である。適切な場合には、こうしたキットに含まれる試薬は、プライマー対又は複数のプライマー対と同じ容器又は培地中に提供することができる。いくつかの実施形態では、こうした試薬は、第２の又は追加の別の容器（これには、追加の組成物又は試薬を入れる及び適切には分注することができる）に入れることができる。或いは、試薬は、単一の容器手段で提供することができる。本開示のキットはまた、必要に応じて個々の構成成分の保管に必要とされるものを含めて、包装構成要素、使用のための説明書も含むことができる。本明細書に記載した通りのこうしたキットは、病院、治療センター、又は臨床現場などの臨床現場で使用するために製剤化することもできるし、必要に応じて個人使用のために製剤化することもできる。

定義
提供される定義及び方法は、本開示を定義し、当分野の技術者を本開示の実施に導く。他に記述されない限り、用語は、関連技術の技術者による通常の用法に従って理解されるべきである。分子生物学における一般用語の定義は、Alberts et al.,Molecular Biology of The Cell,5th Edition,Garland Science Publishing,Inc.:New York,2007;Rieger et al.,Glossary of Genetics:Classical and Molecular,5th edition,Springer-Verlag:New York,1991;King et al,A Dictionary of Genetics,6th ed.,Oxford University Press:New York,2002;and Lewin,Genes IX,Oxford University Press:New York,2007において参照することもできる。37 CFR§1.822に記述されている通りのＤＮＡ塩基についての命名法を使用する。

本明細書で使用する場合、用語「抗原」又は「免疫原」は、対象における免疫応答を誘発することが可能な物質、典型的にはタンパク質を指すために互換的に使用される。この用語はまた、（直接的に、又はタンパク質をコードするヌクレオチド配列又はベクターを対象に投与することによって）対象に一度投与されると、そのタンパク質に向けられる体液性及び／又は細胞性型の免疫応答を誘発することができるという意味で、免疫学的に活性なタンパク質を指す。

機能的に同様のアミノ酸をもたらす保存的アミノ酸置換は、当技術分野で周知である。次の６つの群それぞれは、互いに保存的置換であるアミノ酸を含有する：１）アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）；２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）；アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）；５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）；及び６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）。タンパク質内のすべての残基位置が、他の「保存的」置換を許容することにはならない。例えば、あるアミノ酸残基が、タンパク質の機能にとって不可欠であるならば、他の保存的置換は、その活性を崩壊させる可能性がある。例えば、抗体の標的エピトープへの特異的な結合は、標的エピトープ内の保存的変異によって崩壊する可能性がある。

いくつかの実施形態では、保存的アミノ酸置換、例えば、ある酸性又は塩基性アミノ酸を別のものと置換することは、多くの場合、本明細書に記載した通りの組換えポリペプチドの生物活性に影響を与えずに行うことができる。この類の配列の小さい変更は、これらの変化が、ペプチド又は融合ポリペプチドがウイルスのその宿主細胞への侵入を中和する能力に実質的に（例えば、１５％以上）影響しないという条件で、本明細書に開示されたペプチドのいずれかにおいて行うことができる。

本明細書で使用する場合、「補助受容体」とは、ウイルスのＥｎｖタンパク質と相互作用する主要な又は第１の受容体の後に又はそれと同時に結合する又は結合される受容体をいう。本明細書で使用する場合、「受容体」は、ウイルスの細胞への侵入のための単独の受容体であってもよいし、又は二次的な受容体、すなわち、補助受容体であってもよい。受容体は、宿主細胞上に存在し、ウイルスのＥｎｖタンパク質と相互作用又は結合する。エンベロープウイルスなどのウイルスの、宿主細胞への侵入は、宿主細胞表面受容体及び補助受容体に協同的に結合するエンベロープ糖タンパク質を必要とする。

本明細書で使用する場合、「エピトープ」は、抗原決定基を指す。エピトープは、特定の免疫応答を誘発するような、抗原性である、分子上の特定の化学基又はペプチド配列である。例えば、エピトープは、Ｂ及び／又はＴ細胞がそれに応答するウイルスＥｎｖタンパク質又は抗原の領域である。エピトープは、隣接アミノ酸と、タンパク質の三次フォールディングによって並置された非隣接アミノ酸の両方から形成され得る。

本明細書で使用する場合、化合物、薬物、ワクチン、又は他の薬剤の「有効量」は、所望される反応をもたらす、例えば状態又は疾患の徴候又は症状を軽減又は除去するのに十分である量を指す。例えば、本明細書に記載した通り、有効量は、宿主細胞へのウイルスの侵入を阻害する、又はウイルスの複製を阻害する、又はウイルス感染の外面的な症状を測定できる程度変化させるのに必要な量であり得る。一般に、この量は、ウイルス複製又は感染力を測定できる程度阻害するのに十分となる。対象に投与される場合、ウイルスの侵入又は複製の阻害をインビトロで達成することが示されている標的組織（例えば、リンパ球の）濃度が得られることとなる投薬量が、一般に、使用されることとなる。いくつかの例では、「有効量」は、障害又は疾患のいずれかの１つ以上の症状及び／又は根本的原因を治療する（予防が含まれる）量である。一例では、有効量は、治療有効量である。一例では、有効量は、特定の疾患又は状態の１つ以上の徴候又は症状が出現するのを妨げる量である。

本明細書で使用する場合、「融合タンパク質」は、ペプチド結合を介して共に連結されて単一のタンパク質が作製されている、少なくとも２つの関連しないタンパク質由来のアミノ酸配列を含有する組換えポリペプチド又はタンパク質を指す。関連しないアミノ酸配列は、互いに直接連結させることもできるし、リンカー配列を使用して連結させることもできる。本明細書で使用する場合、そのアミノ酸配列が、その天然の環境（例えば、細胞内部）で、ペプチド結合を介して通常には共に連結されないならば、タンパク質は関連しない。例えば、本明細書に記載した通り、スパイクタンパク質ＲＢＤに融合された組換えラクトフェリンタンパク質などの１つ以上の宿主細胞表面受容体のアミノ酸配列は、ペプチド結合を介して共に連結されることが通常には見られない。

本明細書で使用する場合、「遺伝子送達」は、遺伝子導入のための、外来性ポリヌクレオチドの細胞への導入を指し、ターゲティング、結合、取り込み、輸送、局在化、レプリコン組み込み、及び発現を包含することができる。

本明細書で使用する場合、「遺伝子導入」は、外来性ポリヌクレオチドの細胞への導入を指し、これは、ターゲティング、結合、取り込み、輸送、局在化、及びレプリコン組み込みを包含することができるが、遺伝子のその後の発現とは異なり、これは意味しない。

本明細書で使用する場合、「遺伝子発現」又は「発現」は、遺伝子転写、翻訳、及び翻訳後修飾のプロセスを指す。

本明細書で使用する場合、「対象」又は「患者」は、哺乳類と分類されるあらゆる動物、例えば、ヒト及び非ヒト哺乳類を指す。非ヒト動物の例としては、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウサギなどが挙げられる。他に記述されない限り、用語「患者」又は「対象」は、本明細書では互換的に使用される。いくつかの実施形態では、本開示の治療的適用に適している対象は、霊長類、例えばヒト及び非ヒト霊長類であり得る。

本明細書で使用する場合、ポリヌクレオチド又はベクターの、宿主細胞又は対象への投与は、あらゆる慣例的に実施される方法を介する、細胞又は対象への導入を指す。これには、当技術分野で周知の通りの「形質導入」、「トランスフェクション」、「形質転換」、又は「形質導入すること」が含まれる。これらの用語はすべて、外来性ポリヌクレオチド、例えばｒＡＡＶベクター中の導入遺伝子の、ポリヌクレオチド、例えば細胞中の導入遺伝子の発現をもたらす宿主細胞への導入のための標準のプロセスを指し、外来性ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するための組換えウイルスの使用が含まれる。細胞中のポリヌクレオチドの形質導入、トランスフェクション、又は形質転換は、限定はされないが、例えばＥＬＩＳＡ、フローサイトメトリー、及びウエスタンブロットによるタンパク質発現（定常状態レベルが含まれる）、アッセイ、例えばノーザンブロット、サザンブロット、レポーター機能（Ｌｕｃ）アッセイによるＤＮＡ及びＲＮＡの測定、及び／又はゲルシフト移動度アッセイを含めて、当業者に周知である方法によって決定することができる。外来性ポリヌクレオチドの導入のために使用される方法には、ウイルス感染又はトランスフェクション、リポフェクション、形質転換、及び電気穿孔、並びに他の非ウイルス遺伝子送達技術などの、周知の技術が含まれる。導入されたポリヌクレオチドは、宿主細胞中で安定的に又は一過性に維持され得る。

本開示で使用される転写調節配列には、一般に、少なくとも１つの転写プロモーターが含まれ、また、転写の１つ以上のエンハンサー及び／又はターミネーターも含まれ得る。「動作可能に連結された」は、そのように記載された構成要素が、協調的に機能することを可能にする関係である、２つ以上の構成要素の配置を指す。実例として、転写調節配列又はプロモーターは、ＴＲＳ又はプロモーターがコード配列の転写を促進するならば、コード配列に動作可能に連結される。動作可能に連結されたＴＲＳは、一般に、コード配列とシスで連結されるが、必ずしも直接的に隣接している必要はない。

用語「治療すること」又は「緩和すること」には、疾患（例えばウイルス感染）の症状、合併症、若しくは生化学的徴候の発症を予防する若しくは遅延させる、症状を緩和する、又は疾患、状態、若しくは障害のさらなる出現を抑止若しくは阻害するための、対象への化合物又は薬剤の投与が含まれる。治療を必要とする対象には、疾患又は障害を既に患っている対象、並びに疾患又は障害を発症するリスクがある対象が含まれる。治療は、予防的（疾患の発症を予防若しくは遅延させること、又は臨床症状若しくはその無症候性症状の顕在化を予防すること）、又は疾患の顕在化後の症状の治療的抑制若しくは緩和であり得る。

「ベクター」は、細胞に導入することができる、担体を伴う又は伴わない核酸である。１つ以上のポリペプチドをコードする遺伝子の発現を誘導することが可能なベクターは、「発現ベクター」と称される。本開示に適したベクターの例には、例えば、ウイルスベクター、プラスミドベクター、リポソーム、及び他の遺伝子送達ビヒクルが含まれる。

本明細書で使用する場合、「ドメイン」は、ポリペプチド全体又はポリペプチドの機能性部分のアミノ酸配列を含むポリペプチドを指す。ある種の機能性サブ配列（subsequence）は公知であり、これらが公知でないならば、公知の配列を切断し、切断された配列が機能性ポリペプチドを産生するかどうかを決定することによって決定することができる。

本明細書で使用する場合、「発現コンストラクト」は、これが投与されたレシピエントにおいて機能するために転写及び翻訳させることができる、コードされる外来性核酸タンパク質を含む核酸コンストラクトを指す。いくつかの実施形態では、こうした発現コンストラクトは、ＤＮＡ配列、ＲＮＡ配列、又はその組み合わせを含むことができる。いくつかの実施形態では、こうしたコンストラクトを、遺伝子操作して、ヒト患者などの対象又は患者における投与に適したベクターに入れることができる。例えば、本明細書に記載した通り、本開示のコンストラクトは、（ａ）ラクトフェリン（ＬＦ）又はその断片と、（ｂ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）とを含む組換えポリペプチドをコードする核酸配列を含むことができる。

いくつかの実施形態では、発現コンストラクトは、ウイルスベクターとして、対象又は患者に提供することができる。ウイルスベクターは、当技術分野で周知であり、また、本開示に適したあらゆるウイルスベクターであり得る。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載した通りのコンストラクトには、限定はされないが、アデノウイルスベクター、α－ウイルスベクター、麻疹ウイルスベクター（ＭＳＶ）、又は水疱性口内炎ベクター（ＶＳＶ）が含まれ得る。当業者は、ヒト対象などの対象又は患者への投与に適したウイルスベクターを特定することができるであろう。

本明細書で使用する場合、「外来性配列」は、宿主細胞の外側に起源をもつ核酸配列を指す。外来性配列は、ＤＮＡ配列、ＲＮＡ配列、又はその組み合わせであり得る。当技術分野で利用可能なあらゆる種類の核酸を、当業者によって理解されるであろう通り、本開示に従って使用することができる。こうした核酸配列は、それが送達されることとなる細胞と異なる種、又は同じ種から得ることができる。いくつかの実施形態では、本開示による外来性核酸配列は、対象は患者への投与に適した本明細書に記載した通りの組換えポリペプチドをコードすることができる。こうした組換えポリペプチドは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染を治療又は予防するために、対象又は患者に投与することができる。

いくつかの実施形態では、本開示のある種の実施形態を説明及び主張するために使用される成分、特性、例えば分子量、反応条件などの量を表す数は、場合によっては、用語「約」によって修飾されるものと理解するべきである。いくつかの実施形態では、用語「約」は、ある値が、その値を決定するために用いられている装置又は方法に対する平均値の標準偏差を含むことを示すために使用される。いくつかの実施態様では、明細書及び添付の特許請求の範囲に記述する数値パラメータは、概数であり、これは、特定の実施形態によって得られることが求められる所望される特性に応じて変動し得る。いくつかの実施形態では、数値パラメータは、報告された有効桁数に照らして、また、通常の丸め技術を適用することによって解釈されるべきである。本開示の広範にわたるいくつかの実施形態を記述する数値範囲及びパラメータは概数であるが、具体的な例において記述される数値は、可能な限り正確に報告される。本開示のいくつかの実施形態において示される数値は、そのそれぞれの試験測定において見られる標準偏差に必然的に起因する、いくらかの誤差を含有する可能性がある。本明細書の値の範囲の記述は、単に、範囲内にあるそれぞれ別の値を個々に言及する簡便表記方法としての役割を果たすことを意図するに過ぎない。本明細書で他に指定されない限り、それぞれ個々の値は、あたかもそれが本明細書に個々に列挙されるかのように本明細書に組み込まれる。

いくつかの実施形態では、特定の実施形態を説明する状況で（特に、以下の特許請求の範囲のうちのいくつかの状況で）使用される用語「ａ」及び「ａｎ」及び「ｔｈｅ」及び同様の言及は、他に具体的に記述されない限り、単数と複数の両方を包含すると解釈することができる。いくつかの実施形態では、特許請求の範囲を含めて本明細書で使用される用語「又は」は、代替のみを指すことを明示的に示すのでなければ又は代替が相互排他的でなければ、「及び／又は」を意味するために使用される。

用語「を含む(comprise)」、「を有する(have)」、「が含まれる(include)」、及び「を含有すること」は、制約のない連結動詞である。「を含む(comprises)」、「を含むこと」、「を有する(has)」、「を有すること」、「が含まれる(includes)」、及び「が含まれること」などの、これらの動詞の１つ以上のあらゆる形態又は時制も、制約がない。例えば、１つ以上のステップ「を含む(comprises)」、「を有する(has)」、「が含まれる(includes)」あらゆる方法は、その１つ以上のステップのみを有することに限定されず、他の列挙されていないステップも包含することができる。同様に、１つ以上の特徴「を含む(comprises)」、「を有する(has)」、「が含まれる(includes)」あらゆる組成物又は装置は、その１つ以上の特徴は、その１つ以上の特徴のみを有することに限定されず、他の列挙されていない特徴を包含することができる。

本明細書に記載されたすべての方法は、本明細書で他に指定される又は文脈によってそうではないと明確に否定されるのではない限り、あらゆる好適な順序で実施することができる。本明細書のある種の実施形態に関して提供される、ありとあらゆる例、又は例示的な言葉（例えば「などの」）の使用は、単に、本開示をより明らかにするためのものであり、別に主張される本開示の範囲に対する制限を与えない。本明細書内のどの言葉も、本開示の実施に不可欠ないずれかの非請求の要素を示すと解釈されるべきではない。

本明細書に開示された本開示の代替要素又は実施形態のグループ分けは、限定と解釈されるべきではない。各グループのメンバーは、個々に、又はグループの他のメンバー又は本明細書に見られる他の要素とのあらゆる組み合わせで、言及及び主張することができる。あるグループの１つ以上のメンバーは、便宜又は特許性という理由で、グループに含めることも、グループから削除することもできる。

本開示を詳細に記載しており、添付の特許請求の範囲で定義された本開示の範囲を逸脱せずに、改変、変更、及び等価な実施形態が可能であることは明らかであろう。さらに、本開示におけるすべての例が、非限定的な例として提供されることを理解するべきである。

実施例
本開示の実施形態の例を、以下の実施例に提供する。以下の実施例は、例示目的でのみ、また、本開示を使用する当業者を援助するために示される。これらの実施例は、決して本開示の範囲を他に限定することを意図するものではない。

実施例１．ラクトフェリンはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の効率的な阻害剤である。
ラクトフェリンは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスの細胞への侵入をインビトロで防止することが判明した。図３は、植物性ラクトフェリン（中央）、及びヒト乳汁から単離されたヒトラクトフェリンの、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２疑似ウイルスの感染力に対する効果を示す。

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を有する患者又は対象へのラクトフェリンの投与は、いずれかの重大な副作用を生じることが見込まれず、ラクトフェリンの抗ウイルス活性は、ウイルスの逃避変異によって影響を受けないであろう。さらに、ラクトフェリンは、このタンパク質が、触媒部位から離れて結合するので、ＡＣＥ２受容体活性を妨げない。ラクトフェリンは、限定はされないが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を含めたコロナウイルス科（Coronaviridae）のあらゆるウイルスについても、同様の結果を提供することが予測されるであろう。

ラクトフェリンの投与は、例えば、限定はされないが、経口、粘膜、鼻咽腔、及び／又は非経口を含めたいくつかの製剤のうちの１つで、患者又は対象に与えられる。大規模ＧＭＰ生成は、本明細書に記載した通りのこうした方法に利用可能である。

ラクトフェリン－Ｓタンパク質融合体は、宿主細胞表面上のＨＳＰＧとＡＣＥ２受容体の両方を遮断することが可能である。例えば本明細書に記載された（例えば、図１、図４、図５、又は図２に示されるコンストラクト）、又はＳタンパク質（完全長Ｓタンパク質、又は受容体結合ドメイン単独）及びＡＣＥ２受容体に対する結合ドメイン（すなわち、協同的な結合）を有するコンストラクトは、受容体認識の親和性を増大させるであろう。

実施例２．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を予防するための組換えポリペプチド。
いくつかの実施形態では、宿主細胞表面上の両方のウイルス受容体に結合することとなり、それによってウイルスの侵入を防止する、組換えタンパク質を生成することができる。例えば、（ａ）ラクトフェリンタンパク質又はその断片と（ｂ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質又はその断片とを有する組換えタンパク質が生成される。他の実施形態では、（ａ）ラクトフェリンタンパク質又はその断片と（ｂ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質受容体結合ドメイン（ＲＢＤ）又はその断片とを有する組換えタンパク質が生成される。いくつかの実施形態では、これらの２つのタンパク質又はその断片は、本明細書に記載した通りのリンカーと共に連結される。図１、２、４、及び５は、本明細書に記載した通りのＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の治療又は予防に有用な例示的なコンストラクトを提供する。

スパイク（Ｓ）タンパク質については、本明細書に記載した通り、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質は、ＰＲＲＡＲフーリン切断部位で、２つの別のタンパク質、Ｓ１とＳ２に切断される（図１参照）。Ｓ１タンパク質は、宿主細胞へのウイルスの付着に関与し、したがって、完全長Ｓタンパク質を、こうした組換えポリペプチドにおいて使用することもできるし、又はＳタンパク質のＳ１部分又は断片のみ、又はウイルスのその細胞表面受容体への結合に関与する特定のアミノ酸のみ（例えば、７０アミノ酸セグメント）を使用することもできる（Cell 181:1-10, April 16, 2020）。

こうした組換えポリペプチドの患者への投与は、宿主細胞表面上でＨＳＰＧ（ウイルスのアンカー部位）に結合する組換えポリペプチドのラクトフェリン部分（又はラクトフェリン断片）をもたらす。この結合は、細胞表面上のＡＣＥ２受容体に結合するＳタンパク質又はその断片の協同的な結合をもたらす。組換えポリペプチドのラクトフェリンとＳタンパク質成分との結合は、ウイルスの宿主細胞への結合及び融合を防止する。

上に記載された通りの組換えポリペプチドは、ウイルスの細胞への侵入を防止し、患者におけるウイルス量を低下させ、それによってウイルスを治療するために、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２又はその症状を有する患者に投与される。こうした組換えポリペプチドはまた、予防的治療のために、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に曝露されていた患者に投与される。

本明細書に記載した通りの組換えポリペプチド又はその組成物を、本明細書に記載した通りの別の薬物治療又は治療法と組み合わせることができる。例えば、本開示の組換えポリペプチドの投与を、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の治療のために、特に、治療有効量のラクトフェリン、アジスロマイシン、亜鉛、及び／又はレムデシビルのうちの１つ以上と組み合わせることができる。

実施例３．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の曝露後の予防的治療。
いくつかの実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に曝露された患者は、予防又は治療有効量のラクトフェリン（ＬＦ）を投与される。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に曝露された患者へのＬＦの投与は、細胞表面ＨＳＰＧ分子へのＬＦの結合を介して、ウイルス粒子による細胞の結合及びその後の感染を防止し、ウイルスと宿主細胞との間の予備的な相互作用を防止する。このようにして、ＬＦは、ウイルスのその後の内部移行プロセスを防止し、それによって感染を予防する。こうした予防的治療は、鼻腔スプレー又は吸入器などの様々な経路によって、患者に施される。患者は、ウイルス量、及びＣＯＶＩＤ－１９疾患の症状の軽減、並びに血液化学（例えば、限定はされないが、全血球数（ＣＢＣ）が含まれる）、呼吸気量について観察され、必要に応じて胸部Ｘ線検査又はＣＴスキャンが実施される。

いくつかの実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に曝露された患者は、イベルメクチン（ＩＶＭ）と組み合わせて、上に記載された通りの予防又は治療有効量のＬＦを投与される。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に曝露された患者へのＬＦとＩＶＭの投与は、細胞表面ＨＳＰＧ分子へのＬＦの結合を介して、ウイルス粒子による細胞の結合及びその後の感染を防止し、ウイルスと宿主細胞との間の予備的な相互作用を防止する。このようにして、ＬＦは、ウイルスのその後の内部移行プロセスを防止し、それによって感染を予防する。こうした予防的治療は、鼻腔スプレー又は吸入器などの様々な経路によって、患者に施される。患者は、ウイルス量、及びＣＯＶＩＤ－１９疾患の症状の軽減、並びに血液化学（例えば、限定はされないが、全血球数（ＣＢＣ）が含まれる）、呼吸気量について観察され、必要に応じて胸部Ｘ線検査又はＣＴスキャンが実施される。

いくつかの実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に曝露された患者は、予防又は治療有効量の、本明細書に記載した通りの組換えポリペプチドを投与される。本開示によって有用な組換えポリペプチドは、（ａ）ＬＦタンパク質又はその断片と；（ｂ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質又はその断片と；（ｃ）リンカーとを有し、ここで、ＬＦタンパク質又はその断片は、宿主細胞表面上のＨＳＰＧに結合し、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質又はその断片は、宿主細胞表面上のＡＣＥ２受容体に結合し、ここで、ＬＦ又はその断片とＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質又はその断片との両方の結合が、ウイルスの結合を防止する。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に曝露された患者への組換えＬＦ（ｒＬＦ）の投与は、細胞表面ＨＳＰＧ分子へのｒＬＦの結合と細胞表面ＡＣＥ２受容体分子へのｒＬＦの結合を介して、ウイルス粒子による細胞の結合及びその後の感染を防止し、ウイルスの宿主細胞への結合を防止し、それによって感染を予防する。こうした予防的治療は、鼻腔スプレー又は吸入器などの様々な経路によって、患者に施される。患者は、ウイルス量、及びＣＯＶＩＤ－１９疾患の症状の軽減、並びに血液化学（例えば、限定はされないが、全血球数（ＣＢＣ）が含まれる）、呼吸気量について観察され、必要に応じて胸部Ｘ線検査又はＣＴスキャンが実施される。

いくつかの実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に曝露された患者は、ＩＶＭと組み合わせて、上に記載された通りの、予防又は治療有効量の組換えポリペプチド（すなわち、ｒＬＦ）を投与される。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に曝露された患者への組換えＬＦ（ｒＬＦ）の投与は、細胞表面ＨＳＰＧ分子へのｒＬＦの結合と細胞表面ＡＣＥ２受容体分子へのｒＬＦの結合を介して、ウイルス粒子による細胞の結合及びその後の感染を防止し、ウイルスの宿主細胞への結合を防止し、それによって感染を予防する。こうした予防的治療は、鼻腔スプレー又は吸入器などの様々な経路によって、患者に施される。患者は、ウイルス量、及びＣＯＶＩＤ－１９疾患の症状の軽減、並びに血液化学（例えば、限定はされないが、全血球数（ＣＢＣ）が含まれる）、呼吸気量について観察され、必要に応じて胸部Ｘ線検査又はＣＴスキャンが実施される。

実施例４．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の初期段階の感染症の治療。
いくつかの実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の初期段階の感染症の症状がある患者は、治療有効量のＬＦを投与される。初期段階のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の患者へのＬＦの投与は、細胞表面ＨＳＰＧ分子へのＬＦの結合を介して、追加のウイルス粒子による細胞の結合及びその後の感染を防止し、ウイルスと宿主細胞との間の相互作用を防止する。このようにして、ＬＦは、追加のウイルスのその後の内部移行プロセスを防止し、それによってさらなる感染を予防する。こうした治療は、吸入器又は静脈内（ＩＶ）注射などの様々な経路によって、患者に施される。患者は、ウイルス量、及びＣＯＶＩＤ－１９疾患の症状の軽減、並びに血液化学（例えば、限定はされないが、全血球数（ＣＢＣ）が含まれる）、呼吸気量について観察され、必要に応じて胸部Ｘ線検査又はＣＴスキャンが実施される。

いくつかの実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の初期段階の感染症の症状がある患者は、イベルメクチン（ＩＶＭ）と組み合わせて、上に記載された通りの治療有効量のＬＦを投与される。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の初期段階の感染症の患者へのＬＦとＩＶＭの投与は、細胞表面ＨＳＰＧ分子へのＬＦの結合を介して、追加のウイルス粒子による細胞の結合及びその後の感染を防止し、ウイルスと宿主細胞との間のその後の相互作用を防止する。このようにして、ＬＦは、ウイルスのその後の内部移行プロセスを防止し、それによってさらなる感染を予防する。こうした治療は、吸入器又はＩＶ注射などの様々な経路によって、患者に施される。患者は、ウイルス量、及びＣＯＶＩＤ－１９疾患の症状の軽減、並びに血液化学（例えば、限定はされないが、全血球数（ＣＢＣ）が含まれる）、呼吸気量について観察され、必要に応じて胸部Ｘ線検査又はＣＴスキャンが実施される。

いくつかの実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の初期段階の感染症の症状がある患者は、治療有効量の本明細書に記載した通りの組換えポリペプチドを投与される。本開示によって有用な組換えポリペプチドは、（ａ）ＬＦタンパク質又はその断片と；（ｂ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質又はその断片と；（ｃ）リンカーとを有し、ここで、ＬＦタンパク質又はその断片は、宿主細胞表面上のＨＳＰＧに結合し、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質又はその断片は、宿主細胞表面上のＡＣＥ２受容体に結合し、ここで、ＬＦ又はその断片とＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質又はその断片との両方の結合が、ウイルスの結合を防止する。初期段階のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を有する患者への組換えＬＦ（ｒＬＦ）の投与は、細胞表面ＨＳＰＧ分子へのｒＬＦの結合と細胞表面ＡＣＥ２受容体分子へのｒＬＦの結合を介して、ウイルス粒子による細胞の結合及びその後の感染を防止し、ウイルスの宿主細胞への結合を防止し、それによってさらなる感染を予防する。こうした治療は、吸入器又はＩＶ注射などの様々な経路によって、患者に施される。患者は、ウイルス量、及びＣＯＶＩＤ－１９疾患の症状の軽減、並びに血液化学（例えば、限定はされないが、全血球数（ＣＢＣ）が含まれる）、呼吸気量について観察され、必要に応じて胸部Ｘ線検査又はＣＴスキャンが実施される。

いくつかの実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の初期段階の感染症の症状がある患者は、ＩＶＭと組み合わせて、治療有効量の上に記載された通りの組換えポリペプチド（すなわち、ｒＬＦ）を投与される。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に曝露された患者への組換えＬＦ（ｒＬＦ）の投与は、細胞表面ＨＳＰＧ分子へのｒＬＦの結合と細胞表面ＡＣＥ２受容体分子へのｒＬＦの結合を介して、ウイルス粒子による細胞の結合及びその後の感染を防止し、ウイルスの宿主細胞への結合を防止し、それによって感染を予防する。こうした治療は、吸入器又はＩＶ注射などの様々な経路によって、患者に施される。患者は、ウイルス量、及びＣＯＶＩＤ－１９疾患の症状の軽減、並びに血液化学（例えば、限定はされないが、全血球数（ＣＢＣ）が含まれる）、呼吸気量について観察され、必要に応じて胸部Ｘ線検査又はＣＴスキャンが実施される。

実施例５．ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の後期段階の感染症の治療。
いくつかの実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の後期段階の感染症の症状がある患者は、治療有効量のＬＦを投与される。後期段階のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症の患者へのＬＦの投与は、細胞表面ＨＳＰＧ分子へのＬＦの結合を介して、追加のウイルス粒子による細胞の結合及びその後の感染を防止し、ウイルスと宿主細胞との間の相互作用を防止する。このようにして、ＬＦは、追加のウイルスのその後の内部移行プロセスを防止し、それによってさらなる感染を予防する。こうした治療は、吸入器又はＩＶ注射などの様々な経路によって、患者に施される。患者は、ウイルス量、及びＣＯＶＩＤ－１９疾患の症状の軽減、並びに血液化学（例えば、限定はされないが、全血球数（ＣＢＣ）が含まれる）、呼吸気量について観察され、必要に応じて胸部Ｘ線検査又はＣＴスキャンが実施される。

いくつかの実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の後期段階の感染症の症状がある患者は、イベルメクチン（ＩＶＭ）と組み合わせて、上に記載された通りの治療有効量のＬＦを投与される。図３が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２疑似ウイルスの感染力に対する植物ラクトフェリン及びヒト乳汁から単離されたヒトラクトフェリンの効果を実証するのに対し、図６は、ＶｅｒｏＥ６／ＴＭＰＲＳＳ２細胞におけるＭＬＶ－Ｓｐｐの感染力に対する、ラクトフェリン（ＬＦ）とイベルメクチン（ＩＶＭ）との組み合わせ効果を示す。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の後期段階の感染症の患者へのＬＦとＩＶＭの投与は、細胞表面ＨＳＰＧ分子へのＬＦの結合を介して、追加のウイルス粒子による細胞の結合及びその後の感染を防止し、ウイルスと宿主細胞との間のその後の相互作用を防止する。このようにして、ＬＦは、ウイルスのその後の内部移行プロセスを防止し、それによってさらなる感染を予防する。こうした治療は、吸入器又はＩＶ注射などの様々な経路によって、患者に施される。患者は、ウイルス量、及びＣＯＶＩＤ－１９疾患の症状の軽減、並びに血液化学（例えば、限定はされないが、全血球数（ＣＢＣ）が含まれる）、呼吸気量について観察され、必要に応じて胸部Ｘ線検査又はＣＴスキャンが実施される。

いくつかの実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の後期段階の感染症の症状がある患者は、治療有効量の本明細書に記載した通りの組換えポリペプチドを投与される。本開示によって有用な組換えポリペプチドは、（ａ）ＬＦタンパク質又はその断片と；（ｂ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質又はその断片と；（ｃ）リンカーとを有し、ここで、ＬＦタンパク質又はその断片は、宿主細胞表面上のＨＳＰＧに結合し、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質又はその断片は、宿主細胞表面上のＡＣＥ２受容体に結合し、ここで、ＬＦ又はその断片とＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）タンパク質又はその断片との両方の結合が、ウイルスの結合を防止する。例示的なこうした組換えポリペプチドは、図１、図４、図５、又は図２に提供される。後期段階のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を有する患者への組換えＬＦ（ｒＬＦ）の投与は、細胞表面ＨＳＰＧ分子へのｒＬＦの結合と細胞表面ＡＣＥ２受容体分子へのｒＬＦの結合を介して、ウイルス粒子による細胞の結合及びその後の感染を防止し、ウイルスの宿主細胞への結合を防止し、それによってさらなる感染を予防する。こうした治療は、吸入器又はＩＶ注射などの様々な経路によって、患者に施される。患者は、ウイルス量、及びＣＯＶＩＤ－１９疾患の症状の軽減、並びに血液化学（例えば、限定はされないが、全血球数（ＣＢＣ）が含まれる）、呼吸気量について観察され、必要に応じて胸部Ｘ線検査又はＣＴスキャンが実施される。

いくつかの実施形態では、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の後期段階の感染症の症状がある患者は、ＩＶＭと組み合わせて、治療有効量の上に記載された通りの組換えポリペプチド（すなわち、ｒＬＦ）を投与される。後期段階のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を有する患者への組換えＬＦ（ｒＬＦ）の投与は、細胞表面ＨＳＰＧ分子へのｒＬＦの結合と細胞表面ＡＣＥ２受容体分子へのｒＬＦの結合を介して、ウイルス粒子による細胞の結合及びその後の感染を防止し、ウイルスの宿主細胞への結合を防止し、それによって感染を予防する。こうした治療は、吸入器又はＩＶ注射などの様々な経路によって、患者に施される。患者は、ウイルス量、及びＣＯＶＩＤ－１９疾患の症状の軽減、並びに血液化学（例えば、限定はされないが、全血球数（ＣＢＣ）が含まれる）、呼吸気量について観察され、必要に応じて胸部Ｘ線検査又はＣＴスキャンが実施される。いくつかの実施形態では、ＬＦは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染によって損傷を受けたＲＢＣから放出されるＦｅ^＋２イオンを除去することによって、血管内皮の炎症を軽減する。

実施例６．レトロウイルスベースのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２疑似ウイルス粒子。
レトロウイルス（ＭＬＶ）ベースのＳａｒｓ－ＣｏＶ－２疑似ウイルス粒子（ｐｐ）（本明細書ではＭＬＶ－Ｓｐｐと称される）を、宿主細胞の感染を試験するために調製した。

疑似ウイルス感染は、（１）ＳＡＲＳ Ｓタンパク質、（２）ｇａｇ／ｐｏｌコアタンパク質、又は（３）レポーターをコードするプラスミドで同時トランスフェクションしたＶｅｒｏＥ６細胞において又はＶｅｒｏＥ６／Ｔｍｐｒｓｓ２において行った。ウイルス粒子のパッケージング及び出芽は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質を発現する疑似ウイルス粒子をもたらした。図７は、標的細胞（上）、及びＴＭＰＲＳＳ２で安定的にトランスフェクションされたＶｅｒｏＥ６細胞における、ＭＬＶ－Ｓｐｐの感染力の結果を示す。クローン＃７を、ＶｅｒｏＥ６／Ｔｍｐｒｓｓ２標的細胞として使用した。図８は、ＶｅｒｏＥ６細胞（左上）、ＢＨＫ／ＡＣＥ２細胞（右上）、２９３／ＡＣＥ２細胞（左下）における、ＭＬＶ－Ｓｐｐの感染力アッセイについて得られた結果、及び３つすべての細胞型の比較（右下）を示す。

Platinum-GP細胞：６×１０^６細胞／１００ｍｍディッシュ（５／１８）、次のトランスフェクション条件を使用する：５μｇのＧＦＰ－Ｆｌｕｃ、２．５μｇ（－、ＳＤ１９又はＶＳＶ－Ｇ）－２０ｕｌのＬＰ３０００。

プロトコルは、次の通りであった。

コンストラクト及びプラスミド：ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ糖タンパク質配列は、Ｇｅｎｂａｎｋ（受託番号ＭＮ９０８９４７．３）から取得した。ｐＣＭＶプラスミドにクローニングされたコドン最適化Ｓタンパク質ｃＤＮＡ配列は、Sino Biological（ＶＧ４０５８９－ＵＴ）から購入し、本明細書ではｐＳと称する。Ｃ末端の１９アミノ酸欠失を有するＳタンパク質ｃＤＮＡは、ＰＣＲによって合成し、ｐＣＭＶ１４に再挿入して、ｐＳ－ｄ１９を作製した。細胞質側末端がＨＩＶ Ｅｎｖ糖タンパク質末端（ＣＣＳＣＧＳＣＣ）と置き換えられたＳタンパク質ｃＤＮＡを合成し、ｐＣＭＶ１４に再挿入して、ｐＳ－ｈｉｖを作製した。セリンプロテアーゼＴｍｐｒｓｓ２をコードするｃＤＮＡ発現プラスミドは、Sino Biologicalから購入し、ｐＣＭＶ－Ｔｍｐｒｓｓ２と称する。

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２シュードタイプ化粒子（Ｓｐｐ）を、以前に記載されている通りに（J Visualized Expt, 2019, 145:1-9）、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）コアとルシフェラーゼレポーターを用いて産生した。この目的のために、ＧＦＰレポーター遺伝子、ＭＬＶ Ψ－ＲＮＡパッケージングシグナル、並びに５’－及び３’－隣接ＭＬＶ末端反復配列（ＬＴＲ）領域をコードするトランスファーベクタープラスミドｐＢａｂｅ（Cell Biolab #RTV-001）と共に、ＭＬＶ ｇａｇ及びｐｏｌタンパク質を発現するパッケージング細胞株Ｐｔ－ｇｐ（Cell Biolabs、＃ＲＴＶ ００３）を入手した。このベクターを、ショウジョウバエルシフェラーゼ（ＦＬｕｃ）及びＧＦＰレポーター遺伝子を含むように改変した。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓタンパク質をコードする、第２のプラスミドも使用した。これらの２つのプラスミドを、製造者のプロトコルに従ってリポフェクタミン３０００（Thermo）を使用して、パッケージング細胞に同時トランスフェクションした。同時トランスフェクション時に、ウイルスＲＮＡ及びタンパク質が、トランスフェクションされた細胞内に発現され、シュードタイプ化粒子（ｐｐ）の産生が可能になった。これらのｐｐ内で、ルシフェラーゼ遺伝子レポーターとパッケージングシグナルを含有するＲＮＡは、その表面にＳタンパク質を有する、細胞から培養培地に出芽する新生粒子に封入される。培地を回収し、感染力アッセイに使用するために、遠心分離（７００×ｇ、１５分間）によって清澄化した。標的細胞における感染時に、ルシフェラーゼレポーター及び隣接ＬＴＲを含有するウイルスＲＮＡは、細胞内に放出され、レトロウイルスポリメラーゼ活性により、ＤＮＡへのその逆転写、及び宿主細胞ゲノムへの組み込みが可能になる。次いで、感染した細胞におけるｐｐの感染力の定量化を、簡単なルシフェラーゼ活性アッセイを用いて実施する。宿主細胞ゲノムに組み込まれたＤＮＡ配列は、ルシフェラーゼ遺伝子を含有するだけで、ＭＬＶ又はコロナウイルスタンパク質をコードする遺伝子をまったく含有しないので、本質的に、より安全である。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓｐｐは、宿主細胞へのウイルスの侵入を研究するための、天然のビリオンの優れた代替物を提供する。

Ｓｐｐ感染：９４ウェルプレートの１０％ ＦＣＳを含有する１００μｌのＤＭＥＭ完全培地中に、１×１０^４細胞／ウェルを播種した。このプレートを、３７℃の５％ ＣＯ_２の細胞培養インキュベーター中で、一晩（１６～１８時間）インキュベートした。細胞培養上清を除去した。一方、ｐｐを、４０μｌの完全培地中で、３７℃で１時間、示された通りの試験試料と共にプレインキュベートした。細胞を、４０μｌのプレインキュベートされたｐｐ溶液に接種した。細胞を、３７℃、５％ ＣＯ_２の細胞培養インキュベーター中で、２時間インキュベートした。６０μｌのあらかじめ温めた（３７℃）ＤＭＥＭ－Ｃ培地を、各ウェルに添加して、体積を１００μｌに調整した。細胞を、３７℃、５％ ＣＯ_２の細胞培養インキュベーター中で、４８時間インキュベートした。

感染力定量化：感染力を評価するために、ルシフェラーゼアッセイシステム（Luciferase Assay System）（Luciferase Assay system、Promega E4030）を使用した。ルシフェリン基質及び５×ルシフェラーゼアッセイ溶解緩衝液を、室温に達するまで解凍した。ルシフェラーゼアッセイ溶解緩衝液を、滅菌水で１×に希釈した。シュードタイプ化粒子に感染した細胞の上清を吸引した。２０μＬの１×ルシフェラーゼアッセイ溶解緩衝液を、各ウェルに添加した。プレートを揺動機上で、室温で１５分間インキュベートした。各チューブに２０μＬのルシフェリン基質を添加することによって、各ウェルについてマイクロ遠心チューブを調製した。２μＬの溶解物を４μＬのルシフェリン基質を含有する１本のチューブに移すことによって、ルシフェラーゼ活性測定を、１回に１つのウェルで実施した。チューブの壁面上の液体を移動させないように、チューブを軽くはじいて内容物を混合した。次いで、ルミノメーターを使用して発光を測定し、相対発光量（relative light unit）測定値を記録した。

データ分析：ｐｐを生成するためのパッケージング細胞へのダブルトランスフェクションの時に、スパイクコード配列をコードする第２のプラスミドを欠失させる空の（mock）トランスフェクションを実施した。このトランスフェクションは、ｐｐを生成せず、したがって、標的細胞から測定できるルシフェラーゼ活性は、バックグラウンドを表した。この値は、ｄＥｎｖと称され、これを、標準化のために、試料からのＬｕｃ値から引いた。ｐｐ単独を有する形質導入された細胞からの標準化されたＬｕｃ値は、１００％の感染とみなされた。

相対ルシフェラーゼ単位の平均及び標準偏差の算出及びプロッティング：グラフプロッティングソフトウェアを使用して、実験的及び生物学的反復の、ルシフェラーゼアッセイ測定値の平均及び標準偏差を算出した。データを、標準偏差と共に棒グラフとしてプロットした。データについての統計分析のために、少なくとも３つの生物学的反復を、データセットに含めた。

シュードタイプ化粒子感染：細胞を、光学顕微鏡下で、細胞のコンフルエントカーペットの目視確認のために観察した。シュードタイプ化ウイルスのクライオバイアルを、氷上で解凍した。細胞を、０．５ｍＬのあらかじめ温めた（３７℃）ＤＰＢＳで３回洗浄した。

細胞株：ヒト胎児腎臓細胞株２９３（＃ＣＲＬ－１５７３）、及びＳＶ４０ Ｔ抗原を発現する２９３Ｔ（＃ＣＲＬ－３２１６）、ヒト気道上皮細胞株Ｃａｌｕ３（＃ＨＴＢ－５５）、ヒト肺胞上皮細胞株Ａ５４９（＃ＣＣＬ－１８５）、肺組織由来のヒト線維芽細胞ＭＲＣ５（＃ＣＣＬ－１７１）、アフリカミドリザル腎臓細胞株ＶｅｒｏＥ６（＃ＣＲＬ－１５８６）及びＶｅｒｏ ８１（＃ＣＣＬ－８１）を、ＡＴＣＣ（Manassas, VA, USA）から入手した。上述の細胞はすべて、１０％ウシ胎児血清及び１００単位のペニシリン、１００μｇストレプトマイシン、及び０．２５μｇファンギゾン（Fungizone）（１％ ＰＳＦ、Gibco）（１ミリリットルあたり）を含有するダルベッコＭＥＭ中で維持した。ＡＴＣＣからのアカゲザル腎臓細胞株ＬＬＣ－ＭＫ２（＃ＣＣＬ－７）を、１０％ ＦＢＳ及び１％ ＰＳＦを含有するＯｐｔｉ－ＭＥＭ中で維持した。

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓシュードビリオンの生成及びウイルス侵入：シュードビリオンは、ポリエーテルイミド（ＰＥＩ）を使用することによる、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｓ、ＶＳＶ－Ｇをコードする、ｐｓＰＡＸ２、ｐＬｅｎｔｉ－ＧＦＰ、及びプラスミド、又は空ベクターを用いる２９３Ｔ細胞の同時トランスフェクションによって生成した。トランスフェクションの４０及び６４時間後に、上清を回収し、０．４５μｍフィルターを通過させ、８００×ｇで５分間遠心分離して、細胞破壊片を除去した。細胞にシュードビリオンを形質導入するために、細胞を２４ウェルプレートに播種し、シュードビリオンを含有する５００μｌ培地に接種した。一晩のインキュベーション後、細胞に新鮮な培地を供給した。接種の約４０時間後、細胞を、５０％のSteady-glo（Promega）を含有する１２０μｌの培地で、室温で５分間溶解した。形質導入効率は、Modulus IIマイクロプレートリーダー（Turner Biosystems、Sunnyvale, CA, USA）を使用して、ルシフェラーゼ活性の定量化によって測定した。すべての実験は、３連で行い、少なくとも２回以上繰り返した。

疑似ウイルス中和アッセイ。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｓ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｓ、及びＶＳＶ－Ｇシュードビリオンを、段階希釈したポリクローナルウサギ抗ＳＡＲＳ Ｓ１抗体Ｔ６２又は患者血清と共に、氷上で１時間プレインキュベートし、次いで、ウイルス－抗体混合物を、９６ウェルプレート中の２９３／ｈＡＣＥ２細胞に添加した。６時間のインキュベーション後、接種物を、新鮮な培地と置き換えた。細胞を、４０時間後、溶解し、疑似ウイルス形質導入を、先に記載した通りに測定した。補体を失活させるために、実験の前に、患者の血清を、５６℃で３０分間インキュベートした。

実施例７．ラクトフェリンの細胞への内部移行。
ヒトラクトフェリン（ｈＬＦ）の細胞膜局在性を可視化するために、ＶｅｒｏＥ６／Ｔ細胞（０．７５×１０^５細胞／ウェル）を、４℃で１時間冷却し、２．５μＭのｈＬＦと共にインキュベートした。細胞を、洗浄し、４％ ＰＦＡ（Invitrogen）を使用して固定し、抗ｈＬＦ抗体で染色し、共焦点顕微鏡下で蛍光画像を撮影した（図１０、中段）。細胞核を、ＤＡＰＩを使用して可視化した（図１０、下段）。細胞表面と核を同時に可視化するために、上述の共焦点画像（すなわち、図１０、中段及び下段）を重ね合わせ、図１０、上段に示す。したがって、図１０において明らかである通り、ｈＬＦは、細胞膜上のＨＳＰＧ受容体に結合し、これはヘパリンによって阻害される。ｈＬＦの細胞表面（特にＨＳＰＧ受容体）への結合に対するヘパリンの効果を見るために、細胞を、ｈＬＦ及びヘパリン（Ｈ）と共に共インキュベートし、共焦点画像を撮影した（図１０、右列）。

２４ウェルプレート中のＶＥ６／Ｔ細胞（５×１０^４細胞／ウェル）を、２．５μＭ、１０μＭ、及び５０μＭの濃度のｈＬＦと共に２４時間インキュベートした。細胞を、洗浄し、氷冷メタノールで固定し、３％ ＢＳＡ（０．５％トリトンＸ－１００、ＰＢＳ中）でブロックし、一次抗体としての抗ＬＦ抗体（ｓｃ－５３４９８）及び二次抗体としてのＡｌｅｘａ ４８８抗マウスＩｇＧ（Ａ２１２０２、Invitrogen）で染色し、免疫蛍光顕微鏡を使用して画像を撮影した。図１１は、ｈＬＦが細胞に入ることを実証する。

ｈＬＦが、細胞に入り、蓄積し、細胞中で損なわれないままであることを示すために、ＶｅｒｏＥ６／Ｔ細胞（５×１０^４細胞、２４ウェルプレート中）を、２．５μＭ、１０μＭ、及び５０μＭのｈＬＦと共にインキュベートした。細胞を、０．５、２、６、及び２４時間で回収した。次いで、細胞を、溶解し、遠心分離し、細胞質画分を含有する上清をウエスタンブロット分析にかけた（図１２）。試料を、ＳＤＳ及びＤＴＴを含有するゲル泳動用緩衝液中で煮沸し、ＳＤＳ－ＰＡＧＥにかけた。図１３に示す通り、対照レーン（最後の２本のレーン）は、それぞれ、１００ｎｇ及び２００ｎｇのｈＬＦを含有していた。ｈＬＦバンドは、１：１，０００希釈の抗ｈＬＦ抗体（ｓｃ－５３４９８）を使用して検出した。細胞溶解物中に見られるＬＦは、処理されていない対照ＬＦと共に移動した。

Claims (21)

1. ａ）ラクトフェリンタンパク質又はその断片と；
   ｂ）リンカーと；
   ｃ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイク（Ｓ）－タンパク質又はその断片と
   を含む組換えポリペプチド
   （ここで、前記ラクトフェリンタンパク質又はその断片は、宿主細胞表面上のヘパラン硫酸プロテオグリカン（ＨＳＰＧ）に結合し、
   前記Ｓ－タンパク質又はその断片は、前記宿主細胞表面上のＡＣＥ２受容体に結合し、
   前記組換えポリペプチドは、ウイルスの前記宿主細胞への結合を阻害する）。
2. 前記スパイクタンパク質が、配列番号１～２に記述される配列を含む、請求項１に記載の組換えポリペプチド。
3. 前記ラクトフェリンタンパク質が、配列番号３～４に記述される配列を含む、請求項１に記載の組換えポリペプチド。
4. 前記リンカーが、配列番号５～６に記述される配列を含む、請求項１に記載の組換えポリペプチド。
5. 前記組換えポリペプチドが、配列番号７～８に記述される配列を含む、請求項１に記載の組換えポリペプチド。
6. 免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｆｃ－ドメインをさらに含む、請求項１に記載の組換えポリペプチド。
7. 前記組換えポリペプチドが、配列番号９～１０に記述される配列を含む、請求項１に記載の組換えポリペプチド。
8. 前記ウイルスが、コロナウイルス科（Coronaviridae）のウイルスである、請求項１に記載の組換えポリペプチド。
9. 前記コロナウイルス科（Coronaviridae）ウイルスが、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）である、請求項８に記載の組換えポリペプチド。
10. 前記重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）ウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ又はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、請求項９に記載の組換えポリペプチド。
11. 請求項１に記載の組換えポリペプチドを含む医薬組成物。
12. ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に曝露された対象におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を予防又は治療する方法であって、請求項１１に記載の治療又は予防有効量の医薬組成物を、前記対象に投与することを含む方法。
13. 前記医薬組成物が、経口、粘膜、鼻咽腔、又は非経口経路を介して投与される、請求項１１に記載の方法。
14. 治療有効量の少なくとも第２の治療薬をさらに含む、請求項１３に記載の方法。
15. 前記第２の治療薬が、イベルメクチン、レムデシビル（登録商標）、モノクローナル抗体、Regeneron（登録商標）、ヒドロキシクロロキン、モルヌピラビル、及び／又はパキロビッドを含む、請求項１４に記載の方法。
16. ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に曝露された対象におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を予防又は治療する方法であって：
    （ａ）予防有効量のラクトフェリンタンパク質又はその断片；又は
    （ｂ）予防有効量のイベルメクチン；又は
    （ｃ）予防有効量のラクトフェリンタンパク質又はその断片と予防有効量のイベルメクチン；又は
    （ｄ）予防有効量の組換えラクトフェリンタンパク質又はその断片；又は
    （ｅ）予防有効量の組換えラクトフェリンタンパク質又はその断片と予防有効量のイベルメクチン
    を、前記対象に投与することを含む方法。
17. 初期段階のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を治療又は予防する方法であって：
    （ａ）治療有効量のラクトフェリンタンパク質又はその断片；又は
    （ｂ）治療有効量のラクトフェリンタンパク質又はその断片と治療有効量のイベルメクチン；又は
    （ｃ）治療有効量の組換えラクトフェリンタンパク質又はその断片；又は
    （ｄ）治療有効量の組換えラクトフェリンタンパク質又はその断片と治療有効量のイベルメクチン
    を、前記対象に投与することを含む方法。
18. 後期段階のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症を治療又は予防する方法であって：
    （ａ）治療有効量のラクトフェリンタンパク質又はその断片；又は
    （ｂ）治療有効量のラクトフェリンタンパク質又はその断片と治療有効量のイベルメクチン；又は
    （ｃ）治療有効量の組換えラクトフェリンタンパク質又はその断片；又は
    （ｄ）治療有効量の組換えラクトフェリンタンパク質又はその断片と治療有効量のイベルメクチン
    を、前記対象に投与することを含む方法。
19. 前記ラクトフェリンタンパク質が、ヒトラクトフェリンである、請求項１６～１８のいずれか一項に記載の方法。
20. 前記ラクトフェリンタンパク質が、対象における細胞の細胞膜に結合し、結合時に前記細胞に取り込まれる、請求項１９に記載の方法。
21. 前記ラクトフェリンが、細胞質に存在する、請求項２０に記載の方法。

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