JP2023551533A - 前庭神経鞘腫関連症状を治療するための抗ｖｅｇｆ抗体構築物及び関連する方法 - Google Patents

前庭神経鞘腫関連症状を治療するための抗ｖｅｇｆ抗体構築物及び関連する方法 Download PDF

Info

Publication number
JP2023551533A
JP2023551533A JP2023533228A JP2023533228A JP2023551533A JP 2023551533 A JP2023551533 A JP 2023551533A JP 2023533228 A JP2023533228 A JP 2023533228A JP 2023533228 A JP2023533228 A JP 2023533228A JP 2023551533 A JP2023551533 A JP 2023551533A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
vegf
construct
aav
amino acids
seq
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2023533228A
Other languages
English (en)
Inventor
シモンズ，エマニュエル，ジョン
ング，ロバート
マッケナ，マイケル
Original Assignee
アコーオス インコーポレイテッド
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by アコーオス インコーポレイテッド filed Critical アコーオス インコーポレイテッド
Publication of JP2023551533A publication Critical patent/JP2023551533A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/16—Otologicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/22—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against growth factors ; against growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
    • A61K48/0066—Manipulation of the nucleic acid to modify its expression pattern, e.g. enhance its duration of expression, achieved by the presence of particular introns in the delivered nucleic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/0075—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the delivery route, e.g. oral, subcutaneous
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A61K9/0021—Intradermal administration, e.g. through microneedle arrays, needleless injectors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0046—Ear
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • C07K14/55—IL-2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
    • C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2750/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14151—Methods of production or purification of viral material
    • C12N2750/14152—Methods of production or purification of viral material relating to complementing cells and packaging systems for producing virus or viral particles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/42—Vector systems having a special element relevant for transcription being an intron or intervening sequence for splicing and/or stability of RNA
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/50—Vector systems having a special element relevant for transcription regulating RNA stability, not being an intron, e.g. poly A signal

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本開示は、プロモーターに作動可能に連結されたコード配列を含む構築物であって、該コード配列が血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）結合剤またはその一部をコードする、構築物を提供する。いくつかの実施形態では、構築物はＡＡＶ構築物である。いくつかの実施形態では、ＡＡＶ構築物はＡＡＶ粒子の一部である。本明細書に記載の構築物及びＡＡＶ粒子を含む組成物は、難聴、例えば、前庭神経鞘腫に関連する難聴の治療に有用であり得る。【選択図】図６Ａ

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年１２月１日に出願された米国仮特許出願第６３／１２０，１８９号及び２０２１年２月２３日に出願された同第６３／１５２，８３２号に対する優先権を主張するものであり、それぞれの内容全体は、参照により本明細書に組み込まれる。
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０２１年１１月１９日に作成された該ＡＳＣＩＩコピーは、２０１３６１５－０５０３＿（ＡＫ０２０＿ＷＯ）＿ＳＬ．ｔｘｔという名称であり、サイズは３２８，５４０バイトである。
難聴には、伝音性（外耳道または中耳から生じる）、感音性（内耳または聴神経から生じる）、または混合性があり得る。感音性難聴は、哺乳動物の内耳の細胞（例えば、有毛細胞）の機能不全によって引き起こされる難聴を含む。感音性難聴の非限定的な原因としては、騒音への曝露、頭部外傷、ウイルス感染、自己免疫性内耳疾患、遺伝性難聴、加齢、内耳の奇形、メニエール病、耳硬化症、及び腫瘍が挙げられる。本明細書で説明されるように、難聴の別の原因は、前庭神経鞘腫（ＶＳ）であり得、これは、例えば、内耳から脳につながる神経上で発生する腫瘍である。
本開示は、対象への抗ＶＥＧＦタンパク質（例えば、ラニビズマブ、ベバシズマブ、及び／またはアフリベルセプト）の投与が、新生血管形成と関連する状態、疾患、または障害の治療に有用であり得るという認識を提供する。本開示は、抗ＶＥＧＦタンパク質の投与が必ずしも容易であるとは限らないことをさらに認識している。例えば、抗ＶＥＧＦタンパク質の投与は、新生血管形成に関連する細胞及び組織において局所的に適切なレベルの抗ＶＥＧＦタンパク質を提供するような方法で達成されるべきである。
本開示は、抗ＶＥＧＦタンパク質（例えば、ラニビズマブ、ベバシズマブ、及び／またはアフリベルセプト）を発現し得る抗ＶＥＧＦ構築物の投与が、新生血管形成と関連する状態、疾患、または障害の治療に有用であり得ることを提供する。特に、抗ＶＥＧＦタンパク質（例えば、ラニビズマブ、ベバシズマブ、及び／またはアフリベルセプト）をコードする組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）構築物は、耳及び目の新生血管形成と関連する状態、疾患、または障害を治療するのに特に有用であり得、特に、ｒＡＡＶＡｎｃ８０カプシドとともに使用してｒＡＡＶＡｎｃ８０－抗ＶＥＧＦ粒子を形成する場合に有用であり得る。
とりわけ、本開示は、プロモーターに作動可能に連結されたコード配列を含む構築物を提供し、該コード配列は、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）結合剤またはその一部（本明細書では総称して抗ＶＥＧＦタンパク質とも呼ばれる）をコードする。
いくつかの実施形態では、プロモーターは、誘導性プロモーター、構成的プロモーター、または組織特異的プロモーターである。いくつかの実施形態では、プロモーターは、ＣＡＧプロモーター、ＣＢＡプロモーター、ＣＭＶプロモーター、またはＣＢ７プロモーターである。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号４９または５０、配列番号６４、及び／または配列番号６５に記載の核酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、コード配列は、霊長類コード配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、コード配列は、ヒトコード配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、コード配列は、操作されたコード配列であるか、またはそれを含む。
いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ結合剤またはその一部は、霊長類ＶＥＧＦ結合剤である。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ結合剤は、ヒトＶＥＧＦ結合剤であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ結合剤は、ヒト化ＶＥＧＦ結合剤であるか、またはそれを含む。
いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ結合剤は、少なくとも１つのＶＥＧＦタンパク質に結合することができる。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＶＥＧＦタンパク質は、ＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ｂ、ＶＥＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦ－Ｄ、またはそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＶＥＧＦタンパク質は、ＶＥＧＦ－Ａである。
いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ結合剤は、少なくとも１つのポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ結合剤は、抗体またはその断片であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、抗体断片は、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｄ’断片、相補性決定領域（ＣＤＲ）、単鎖Ｆｖ、またはＦｃドメインである。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ結合剤は、免疫グロブリン重鎖、免疫グロブリン軽鎖、もしくはそれらの組み合わせであるか、またはそれを含む。
いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ結合剤は、配列番号１６に記載のアミノ配列を含むポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ結合剤は、配列番号２０に記載のアミノ配列を含むポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ結合剤は、配列番号１６に記載のアミノ配列を含むポリペプチドと、配列番号２０に記載のアミノ配列を含むポリペプチドとを含む。
いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ結合剤は、ラニビズマブであるか、またはそれを含む。
いくつかの実施形態では、コード配列は、配列番号１３に記載の核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、コード配列は、配列番号１９に記載の核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、コード配列は、配列番号１３に記載の核酸配列と、配列番号１９に記載の核酸配列とを含む。
いくつかの実施形態では、コード配列は、配列番号１０３に記載の核酸配列であるか、またはそれを含む。
いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ結合剤は、配列番号２４に記載のアミノ配列を含むポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ結合剤は、配列番号２５に記載のアミノ配列を含むポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ結合剤は、配列番号２４に記載のアミノ配列を含むポリペプチドと、配列番号２５に記載のアミノ配列を含むポリペプチドとを含む。
いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ結合剤は、ベバシズマブであるか、またはそれを含む。
いくつかの実施形態では、コード配列は、配列番号１０８に記載の核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、コード配列は、配列番号１０９に記載の核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、コード配列は、配列番号１０８に記載の核酸配列と、配列番号１０９に記載の核酸配列とを含む。
いくつかの実施形態では、コード配列は、配列番号２２に記載の核酸配列であるか、またはそれを含む。
いくつかの実施形態では、コード配列は、それぞれがシグナルペプチドをコードする１つ以上の核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの核酸配列は、インターロイキン２（ＩＬ２）シグナルペプチドをコードする。
いくつかの実施形態では、コード配列は、自己切断ペプチドをコードする１つ以上の配列を含む。いくつかの実施形態では、自己切断ペプチドは、ｔｈｏｓｅａ ａｓｉｇｎａウイルス２Ａ（Ｔ２Ａ）ペプチドである。
いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ結合剤は、Ｆｃドメインを含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１１１に記載のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、コード配列は、配列番号１１０に記載の核酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ結合剤は、ＶＥＧＦ受容体の１つ以上の細胞外ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ受容体の１つ以上の細胞外ドメインは、配列番号１１２に記載のアミノ配列を含む細胞外ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ結合剤は、ＶＥＧＦ受容体の２つの細胞外ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、コード配列は、それぞれがシグナルペプチドをコードする１つ以上の核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの核酸配列は、ＩＬ２シグナルペプチドをコードする。
いくつかの実施形態では、構築物は、２つのＡＡＶ逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む。いくつかの実施形態では、２つのＡＡＶ ＩＴＲは、コード配列及びプロモーターに隣接する。
いくつかの実施形態では、２つのＡＡＶ ＩＴＲは、ＡＡＶ２ ＩＴＲであるか、またはそれに由来する。
いくつかの実施形態では、２つのＡＡＶ ＩＴＲは、配列番号４５または４７に記載の核酸配列を含む５’ＩＴＲと、配列番号４６または４８に記載の核酸配列を含む３’ＩＴＲとを含む。
いくつかの実施形態では、構築物は、配列番号９０、９１、９２、９３、９４、１０６、または１０７のいずれかに記載の核酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、構築物は、配列番号９５または９６のいずれかに記載の核酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の構築物は、新生血管形成及び／または耳科疾患に関連する１つ以上の症状を特徴とする耳科疾患の治療に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の構築物の使用は、新生血管形成及び／または耳科疾患に関連する１つ以上の症状を特徴とする耳科疾患を治療するための医薬を製造するために提供される。いくつかの実施形態では、耳科疾患に関連する１つ以上の症状は、難聴、有毛細胞の変性、内耳液の生化学的環境の変化、迷路内タンパク質の上昇、内リンパ水腫、蝸牛開口部閉塞（ｃｏｃｈｌｅａｒ ａｐｅｒｔｕｒｅ ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｏｎ）、迷路内出血、蝸牛血管供給の途絶、耳鳴り、めまい、難治性頭痛、顔面神経障害、三叉神経障害、顔面麻痺、顔面の感覚異常、水頭症、小脳ヘルニア、または死亡を含む。
本開示は、本明細書に記載の構築物を含むＡＡＶ粒子をさらに提供する。
いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ－ｒｈ８、ＡＡＶ－ｒｈ１０、ＡＡＶ－ｒｈ３９、ＡＡＶ－ｒｈ４３、もしくはＡＡＶ Ａｎｃ８０カプシドであるか、またはそれに由来するｒＡＡＶカプシドを含む。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶカプシドは、ｒＡＡＶ Ａｎｃ８０カプシドである。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ Ａｎｃ８０カプシドは、ｒＡＡＶ Ａｎｃ８０Ｌ６５カプシドである。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＡＡＶ粒子は、新生血管形成及び／または耳科疾患に関連する１つ以上の症状を特徴とする耳科疾患の治療に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＡＡＶ粒子の使用は、新生血管形成及び／または耳科疾患に関連する１つ以上の症状を特徴とする耳科疾患を治療するための医薬を製造するためのものである。いくつかの実施形態では、耳科疾患に関連する１つ以上の症状は、難聴、有毛細胞の変性、内耳液の生化学的環境の変化、迷路内タンパク質の上昇、内リンパ水腫、蝸牛開口部閉塞、迷路内出血、蝸牛血管供給の途絶、耳鳴り、めまい、難治性頭痛、顔面神経障害、三叉神経障害、顔面麻痺、顔面の感覚異常、水頭症、小脳ヘルニア、または死亡を含む。
本開示は、本明細書に記載の構築物及び／または本明細書に記載のＡＡＶ粒子を含む組成物を提供する。
いくつかの実施形態では、組成物は、医薬組成物である。いくつかの実施形態では、組成物は、薬学的に許容される担体を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＡＡＶ粒子、例えばｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ粒子を含む組成物（例えば、医薬組成物）は、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬの用量（例えば、量）で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＡＡＶ粒子、例えばｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ粒子を含む組成物（例えば、医薬組成物）は、２．５×１０１２ｖｇ／ｍＬ＋／－１０％の用量（例えば、量）で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＡＡＶ粒子、例えばｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ粒子を含む組成物（例えば、医薬組成物）は、５×１０１２ｖｇ／ｍＬ＋／－１０％の用量（例えば、量）で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＡＡＶ粒子、例えばｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ粒子を含む組成物（例えば、医薬組成物）は、１×１０１３ｖｇ／ｍＬ＋／－１０％の用量（例えば、量）で投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＡＡＶ粒子、例えばｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ粒子を含む組成物（例えば、医薬組成物）は、約１×１０１０～約１×１０１３ｖｇ／蝸牛の用量で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＡＡＶ粒子、例えばｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ粒子を含む組成物（例えば、医薬組成物）は、約２．３×１０１１ｖｇ／蝸牛の用量で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＡＡＶ粒子、例えばｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ粒子を含む組成物（例えば、医薬組成物）は、約４．５×１０１１ｖｇ／蝸牛の用量で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＡＡＶ粒子、例えばｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ粒子を含む組成物（例えば、医薬組成物）は、約９×１０１１ｖｇ／蝸牛の用量で投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＡＡＶ粒子、例えばｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ粒子を含む組成物（例えば、医薬組成物）は、約０．０１ｍＬ～０．１ｍＬの容量で対象に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＡＡＶ粒子、例えばｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ粒子を含む組成物（例えば、医薬組成物）は、約０．０９ｍＬの容量で対象に投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、耳科疾患、例えば哺乳動物における耳科疾患の治療に使用するためのものであり、耳科疾患は、新生血管形成及び／または耳科疾患に関連する１つ以上の症状を特徴とする。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の構築物の使用は、耳科疾患、例えば哺乳動物における耳科疾患を治療するための医薬を製造するために提供され、耳科疾患は、新生血管形成及び／または耳科疾患に関連する１つ以上の症状を特徴とする。いくつかの実施形態では、耳科疾患に関連する１つ以上の症状は、難聴、有毛細胞の変性、内耳液の生化学的環境の変化、迷路内タンパク質の上昇、内リンパ水腫、蝸牛開口部閉塞、迷路内出血、蝸牛血管供給の途絶、耳鳴り、めまい、難治性頭痛、顔面神経障害、三叉神経障害、顔面麻痺、顔面の感覚異常、水頭症、小脳ヘルニア、死亡、またはそれらの組み合わせを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、内耳障害、例えば哺乳動物における内耳障害の治療に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の構築物の使用は、内耳障害、例えば哺乳動物における内耳障害を治療するための医薬を製造するために提供される。いくつかの実施形態では、内耳障害は、聴神経腫瘍、前庭神経鞘腫、または神経線維腫症ＩＩ型を含む。いくつかの実施形態では、内耳障害は、聴神経腫瘍であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、内耳障害は、前庭神経鞘腫であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、内耳障害は、神経線維腫症ＩＩ型であるか、またはそれを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、前庭神経鞘腫、例えば哺乳動物における前庭神経鞘腫の治療に使用するためのものである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の構築物の使用は、前庭神経鞘腫、例えば哺乳動物における前庭神経鞘腫を治療するための医薬を製造するために提供される。
本明細書に開示される任意の方法または使用のいくつかの実施形態では、哺乳動物はヒトである。
本開示はまた、細胞を提供する。いくつかの実施形態では、細胞は、本明細書に記載の構築物、本明細書に記載のｒＡＡＶ粒子、及び／または本明細書に記載の組成物を含む。
いくつかの実施形態では、細胞は、ｉｎ ｖｉｖｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ、またはｉｎ ｖｉｔｒｏに存在する。
いくつかの実施形態では、細胞は、哺乳動物細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、ヒト細胞である。いくつかの実施形態では、ヒト細胞は、対象の耳の中に存在する。
いくつかの実施形態では、細胞は不死化され、安定な細胞株を生成する。
本開示は、システムを提供する。システムは、本明細書に記載の構築物、本明細書に記載のｒＡＡＶ粒子、本明細書に記載の組成物、及び／または本明細書に記載の細胞を含む。
本開示は、方法を提供する。いくつかの実施形態では、方法は、細胞を、本明細書に記載の構築物、本明細書に記載のｒＡＡＶ粒子、及び／または本明細書に記載の組成物と接触させることを含む。
いくつかの実施形態では、細胞は、対象の細胞である。
いくつかの実施形態では、細胞は、耳細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、内耳細胞である。いくつかの実施形態では、内耳細胞は、外有毛細胞である。いくつかの実施形態では、内耳細胞は、内有毛細胞である。
いくつかの実施形態では、内耳細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏに存在する。
いくつかの実施形態では、方法は、本明細書に記載の構築物、本明細書に記載のｒＡＡＶ粒子、及び／または本明細書に記載の組成物を、対象の内耳に導入することを含む。
いくつかの実施形態では、構築物、ｒＡＡＶ粒子、または組成物は、対象の蝸牛に導入される。いくつかの実施形態では、構築物、ｒＡＡＶ粒子、または組成物は、正円窓膜注入を介して導入される。
いくつかの実施形態では、方法は、対象の聴力レベルを測定することを含む。いくつかの実施形態では、聴力レベルは、聴性脳幹反応（ＡＢＲ）検査を実施することによって測定される。
いくつかの実施形態では、方法は、対象の聴力レベルを基準聴力レベルと比較することを含む。いくつかの実施形態では、基準聴力レベルは、公表されたまたは過去の基準聴力レベルである。
いくつかの実施形態では、対象の聴力レベルは、本明細書に記載の構築物、本明細書に記載のｒＡＡＶ粒子、及び／または本明細書に記載の組成物が導入された後に測定され、基準聴力レベルは、本明細書に記載の構築物、本明細書に記載のｒＡＡＶ粒子、及び／または本明細書に記載の組成物が導入される前に測定された対象の聴力レベルである。
いくつかの実施形態では、方法は、対象における血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）結合剤またはその一部のレベルを測定することを含む。
いくつかの実施形態では、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）結合剤またはその一部のレベルは、対象の内耳で測定される。いくつかの実施形態では、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）結合剤またはその一部のレベルは、対象の蝸牛において測定される。
いくつかの実施形態では、方法は、対象における血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）結合剤またはその一部のレベルを、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）結合剤またはその一部の基準レベルと比較することを含む。
いくつかの実施形態では、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）結合剤またはその一部の基準レベルは、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）結合剤またはその一部の公表されたまたは過去の基準レベルである。
いくつかの実施形態では、対象における血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）結合剤またはその一部のレベルは、本明細書に記載の構築物、本明細書に記載のＡＡＶ粒子、及び／または本明細書に記載の組成物が導入された後に測定され、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）結合剤またはその一部の基準レベルは、本明細書に記載の構築物、本明細書に記載のＡＡＶ粒子、及び／または本明細書に記載の組成物が導入される前に測定された、対象における血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）結合剤またはその一部のレベルである。
いくつかの実施形態では、方法は、対象の腫瘍寸法または体積を測定することを含む。いくつかの実施形態では、寸法は、腫瘍全体の最大直径または長さである。
いくつかの実施形態では、方法は、対象の腫瘍寸法または体積を、それぞれ基準の腫瘍寸法または体積と比較することを含む。
いくつかの実施形態では、基準の腫瘍寸法または体積は、公表されたまたは過去の基準の腫瘍寸法または体積である。
いくつかの実施形態では、対象の腫瘍寸法または体積は、本明細書に記載の構築物、本明細書に記載のＡＡＶ粒子、及び／または本明細書に記載の組成物が導入された後に測定され、基準の腫瘍寸法または体積は、本明細書に記載の構築物、本明細書に記載のＡＡＶ粒子、及び／または本明細書に記載の組成物が導入される前に測定された対象の腫瘍寸法または体積である。
いくつかの実施形態では、方法は、本明細書に記載の構築物、本明細書に記載のｒＡＡＶ粒子、及び／または本明細書に記載の組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、難聴を治療する方法である。
いくつかの実施形態では、対象は、新生血管形成を特徴とする耳科疾患に罹患しているか、またはそのリスクがある。いくつかの実施形態では、耳科疾患は、聴神経腫瘍であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、耳科疾患は、前庭神経鞘腫であるか、またはそれを含む。
いくつかの実施形態では、方法は、本明細書に記載の構築物、本明細書に記載のｒＡＡＶ粒子、及び／または本明細書に記載の組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、内耳障害を治療する方法である。いくつかの実施形態では、内耳障害は、聴神経腫瘍、前庭神経鞘腫、または神経線維腫症ＩＩ型である。
本明細書に開示される任意の方法または使用のいくつかの実施形態では、対象はヒトである。
いくつかの実施形態では、耳科疾患に関連する１つ以上の症状は、本明細書に記載の構築物、本明細書に記載のＡＡＶ粒子、及び／または本明細書に記載の組成物の投与後に緩和または軽快される。いくつかの実施形態では、１つ以上の症状は、難聴、有毛細胞の変性、内耳液の生化学的環境の変化、迷路内タンパク質の上昇、内リンパ水腫、蝸牛開口部閉塞、迷路内出血、蝸牛血管供給の途絶、耳鳴り、めまい、難治性頭痛、顔面神経障害、三叉神経障害、顔面麻痺、顔面の感覚異常、水頭症、小脳ヘルニア、または死亡を含む。
いくつかの実施形態では、方法は、前庭神経鞘腫を治療する方法である。
いくつかの実施形態では、方法は、ＶＥＧＦのレベルを調節する方法である。
いくつかの実施形態では、方法は、活性ＶＥＧＦのレベルを調節する方法である。
いくつかの実施形態では、方法は、ＶＥＧＦの活性を低下させる方法である。
本開示は、細胞を、本明細書に記載の構築物と、ＡＡＶ Ｒｅｐ遺伝子、ＡＡＶ Ｃａｐ遺伝子、ＡＡＶ ＶＡ遺伝子、ＡＡＶ Ｅ２ａ遺伝子、及びＡＡＶ Ｅ４遺伝子を含む１つ以上の構築物と接触させることを含む方法を提供する。
いくつかの実施形態では、細胞は、内耳細胞である。いくつかの実施形態では、内耳細胞は、外有毛細胞である。いくつかの実施形態では、内耳細胞は、内有毛細胞である。いくつかの実施形態では、内耳細胞は、対象の耳の中に存在する。いくつかの実施形態では、内耳細胞は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏに存在する。
本開示は、本明細書に記載の１つ以上の細胞を含む細胞の集団を提供し、該集団は、安定した細胞株であるか、またはそれを含む。
方法及び材料が、本発明で使用するために本明細書に記載されているが、当該技術分野で知られている他の適切な方法及び材料も使用することができる。材料、方法、及び例は、例示的なものであり、限定することを意図していない。本明細書に記載された全ての刊行物、特許出願、特許、配列、データベースエントリ、及び他の参考文献は、参照によりその全体が組み込まれる。矛盾が生じる場合は、定義を含めて本明細書が優先される。
定義
本開示の範囲は、本明細書に添付の特許請求の範囲によって定義され、本明細書に記載の特定の実施形態によって限定されない。当業者は、本明細書を読んで、そのような記載された実施形態と同等であり得るか、または別途特許請求の範囲に含まれ得る様々な変更を認識するであろう。一般に、本明細書で使用される用語は、特に明確に指示がない限り、当該技術分野で理解される意味に従う。特定の用語の明示的な定義が以下に提供されるが、本明細書全体で特定の例におけるこれらの及び他の用語の意味は、文脈から当業者には明らかであろう。
特許請求の範囲において請求項の要素を修飾するための「第１」、「第２」、「第３」などの順序を示す用語の使用は、それ自体が、請求項のある要素の、別の要素に対する優先、先行、または順序を、またはある方法の行為が実行される時間的順序を、暗示するものではなく、ある特定の名称を有する請求項のある要素を、同一の名称（順序を示す用語の使用を別にして）を有する別の要素から区別し、これらの請求項の要素を区別するためのラベルとして使用されているに過ぎない。
本明細書で使用される冠詞「ａ」及び「ａｎ」は、その反対のことが明示されない限り、複数形の指示対象を含むと理解されるべきである。ある群の１つ以上のメンバーの間に「または」を含む請求項または記載は、その反対のことが示されるか、または別途文脈から明白でない限り、１つ、２つ以上、または全ての群メンバーが、所与の製品またはプロセスにおいて存在するか、それに用いられるか、または別途関連している場合に、成立すると考えられる。いくつかの実施形態では、群のきっかり１つのメンバーが、所与の製品またはプロセスに存在するか、それに用いられるか、または別途関連している。いくつかの実施形態では、２つ以上、または全ての群メンバーが、所与の製品またはプロセスに存在するか、それに採用されるか、または別途関連している。本開示は、別途指示されない限り、または矛盾もしくは不整合が生じることが当業者に明らかでない限り、列挙された請求項のうちの１つ以上からの１つ以上の限定、要素、条項、説明用語などが、同じ基本請求項に従属する別の請求項（または、適切な場合には任意の他の請求項）に導入される、あらゆる変形、組み合わせ、及び並べ替えを包含することを理解されたい。要素がリストとして（例えば、マーカッシュグループまたは類似の形式で）提示されている場合、要素の各亜群も開示され、任意の要素（複数可）が、その群から削除され得ることを理解されたい。一般に、実施形態または態様が特定の要素、特徴などを「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」と言及される場合、特定の実施形態または態様は、そのような要素、特徴など「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔ）」または「本質的にそれらからなる（ｃｏｎｓｉｓｔ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）、ということが理解されるべきである。簡潔にするために、それらの実施形態は、あらゆる場合において、本明細書でそれほど多くの言葉で具体的に記載されていない。また、任意の実施形態または態様を特許請求の範囲から明示的に除外することが、その特定の除外が本明細書に記載されているかどうかにかかわらず可能であることも理解されたい。
本明細書を通して、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドが文字列（例えば、ポリヌクレオチドの場合、アデノシン、シチジン、グアノシン、及びチミジンをそれぞれ示すＡ、Ｃ、Ｇ、Ｔ）によって表される場合、当該ポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、左から右に、５’から３’またはＮ末端からＣ末端の順に示される。
投与：本明細書で使用される場合、「投与」という用語は、典型的には、対象またはシステムへの作用物質の送達を達成するための、対象またはシステムへの組成物の投与を指す。いくつかの実施形態では、作用物質は、組成物であるか、またはそれに含まれ、いくつかの実施形態では、作用物質は、組成物またはその１つ以上の成分の代謝を通じて生成される。当業者であれば、適切な状況において、対象、例えばヒトへの投与のために利用され得る様々な経路を認識するであろう。例えば、いくつかの実施形態では、投与は、全身的または局所的であり得る。いくつかの実施形態では、全身投与は、静脈内投与であり得る。いくつかの実施形態では、投与は、局所的であり得る。局所投与は、例えば、正円窓膜を通じた注入、または鼓室階、中央階への注入、内リンパ、外リンパ、及び／またはカナロストミー後の内リンパを通じた注入による蝸牛の外リンパへの送達を含むことができる。いくつかの実施形態では、投与は、単回投与のみを含んでもよい。いくつかの実施形態では、投与は、一定回数の投与の適用を含んでもよい。いくつかの実施形態では、投与は、間欠的（例えば、時間的に分離された複数の投与）及び／または周期的（例えば、共通の期間によって分離された個々の投与）投与である投与を含んでもよい。いくつかの実施形態では、投与は、少なくとも選択された期間にわたる、連続投与（例えば、灌流）を含んでもよい。
アレル：本明細書で使用する場合、「アレル」という用語は、特定の多型ゲノム遺伝子座の２つ以上の既存の遺伝子バリアントのうちの１つを指す。
軽快：本明細書で使用する場合、「軽快」という用語は、対象の状態の予防、軽減、または状態の緩和、または状態の改善を指す。軽快には、疾患、障害、または状態の完全な回復または完全な予防が含まれ得るが、必須ではない。
アミノ酸：本明細書で使用される場合、「アミノ酸」という用語は、最も広い意味で、例えば、１つ以上のペプチド結合の形成を通じて、ポリペプチド鎖に組み込まれ得る任意の化合物及び／または物質を指す。いくつかの実施形態では、アミノ酸は、一般構造、例えば、Ｈ２Ｎ－Ｃ（Ｈ）（Ｒ）－ＣＯＯＨを有する。いくつかの実施形態では、アミノ酸は、天然に存在するアミノ酸である。いくつかの実施形態では、アミノ酸は非天然アミノ酸であり、いくつかの実施形態では、アミノ酸はＤ－アミノ酸であり、いくつかの実施形態では、アミノ酸はＬ－アミノ酸である。「標準アミノ酸」は、天然に存在するペプチドに一般的に見られる２０種類の標準Ｌ－アミノ酸のいずれかを指す。「非標準アミノ酸」は、合成的に調製されたか、天然源から得られたかにかかわらず、標準アミノ酸以外の任意のアミノ酸を指す。いくつかの実施形態では、ポリペプチド中のカルボキシ末端のアミノ酸及び／またはアミノ末端のアミノ酸を含むアミノ酸は、上記の一般的な構造と比較して、構造修飾を含むことができる。例えば、いくつかの実施形態では、アミノ酸は、一般構造と比較して、メチル化、アミド化、アセチル化、ＰＥＧ化、グリコシル化、リン酸化、及び／または置換（例えば、アミノ基、カルボン酸基、１つ以上のプロトン、及び／またはヒドロキシル基の）により修飾され得る。いくつかの実施形態では、このような修飾は、例えば、修飾アミノ酸を含むポリペプチドの血中半減期を、それ以外は同一の非修飾アミノ酸を含むものと比較して変化させ得る。いくつかの実施形態では、そのような修飾は、修飾アミノ酸を含むポリペプチドの関連する活性を、それ以外は同一の非修飾アミノ酸を含むものと比較して著しく変化させない。
抗体：本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、特定の標的抗原に特異的に結合するのに十分な標準的な免疫グロブリン配列要素を含むポリペプチドを指す。当該技術分野で知られているように、天然に産生されるようなインタクト抗体は、２つの同一の重鎖ポリペプチド（各約５０ｋＤ）と、２つの同一の軽鎖ポリペプチド（各約２５ｋＤ）から構成され、互いに結合して一般的に「Ｙ字型」構造と称されるものになるおよそ１５０ｋＤの四量体の作用物質である。各重鎖は、１つのアミノ末端可変（ＶＨ）ドメイン（Ｙ字構造の先端に位置する）と、それに続く３つの定常ドメイン：ＣＨ１、ＣＨ２、及びカルボキシ末端ＣＨ３（Ｙの幹部分の基部に位置する）の少なくとも４つのドメイン（それぞれ約１１０アミノ酸長）から構成される。「スイッチ」として知られている短い領域は、重鎖可変領域及び定常領域を接続する。「ヒンジ」は、ＣＨ２及びＣＨ３ドメインを抗体の残りの部分に接続する。このヒンジ領域中の２つのジスルフィド結合は、インタクト抗体において２つの重鎖ポリペプチドを互いに接続する。各軽鎖は、アミノ末端可変（ＶＬ）ドメインと、それに続くカルボキシ末端定常（ＣＬ）ドメインの２つのドメインから構成され、この２つのドメインは、互いに別の「スイッチ」によって分離されている。インタクト抗体の四量体は、重鎖と軽鎖が１つのジスルフィド結合により互いに連結した２つの重鎖－軽鎖二量体から構成され、２つの他のジスルフィド結合が重鎖ヒンジ領域を互いに接続することにより、二量体が互いに接続して四量体を形成している。天然に産生される抗体はまた、典型的にはＣＨ２ドメイン上で、グリコシル化されている。天然抗体の各ドメインは、圧縮された逆平行βバレルで互いにパッキングされた２枚のβシート（例えば、３本鎖、４本鎖、または５本鎖シート）から形成された「免疫グロブリンフォールド」を特徴とする構造を有する。各可変ドメインは、「相補性決定領域」（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）として知られる３つの超可変ループと、４つのある程度不変の「フレームワーク」領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４）を含む。天然抗体が折り畳まれるとき、ＦＲ領域はドメインの構造的フレームワークを提供するβシートを形成し、重鎖と軽鎖の両方のＣＤＲループ領域は、Ｙ構造の先端に位置する単一の超可変抗原結合部位を作るように３次元空間にまとめられる。天然に存在する抗体のＦｃ領域は、補体系の要素に結合し、また、エフェクター細胞（例えば、細胞毒性を媒介するエフェクター細胞を含む）上の受容体にも結合する。当該技術分野で知られているように、Ｆｃ領域のＦｃ受容体に対する親和性及び／または他の結合特性は、グリコシル化または他の修飾によって調節され得る。いくつかの実施形態では、本発明に従って産生及び／または利用される抗体は、グリコシル化Ｆｃドメインを含み、そのようなグリコシル化を修飾または操作したＦｃドメインを含む。本発明の目的のために、特定の実施形態では、天然抗体に見られるような十分な免疫グロブリンドメイン配列を含む任意のポリペプチドまたはポリペプチドの複合体は、そのようなポリペプチドが天然に産生されるか（例えば、抗原に反応する生物によって産生される）、または組換え工学、化学合成、または他の人工システムもしくは方法論によって産生されるかどうかにかかわらず、「抗体」と称され、及び／または「抗体」として使用され得る。いくつかの実施形態では、抗体はポリクローナルであり、いくつかの実施形態では、抗体はモノクローナルである。いくつかの実施形態では、抗体は、マウス、ウサギ、霊長類、またはヒト抗体に特徴的な定常領域配列を有する。いくつかの実施形態では、抗体配列要素は、当該技術分野で知られているように、ヒト化、霊長類化、キメラなどである。さらに、本明細書で使用される場合「抗体」という用語は、適切な実施形態では（別段の記載がない限り、または文脈から明らかでない限り）、代替形態の抗体の構造的特徴及び機能的特徴を利用するための、任意の当該技術分野で知られている、または開発された構築物もしくは構成を指すことができる。例えば、いくつかの実施形態では、本発明に従って利用される抗体は、これらに限定されないが、インタクトなＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、またはＩｇＭ抗体、二重または多重特異性抗体（例えば、Ｚｙｂｏｄｉｅｓ（登録商標）など）、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ’断片、Ｆｄ断片、及び単離されたＣＤＲまたはそのセットなどの抗体断片、単鎖Ｆｖ、ポリペプチド－Ｆｃ融合体、単一ドメイン抗体（例えば、ＩｇＮＡＲまたはその断片などのサメ単一ドメイン抗体）、カメロイド抗体、マスク抗体（例えば、Ｐｒｏｂｏｄｉｅｓ（登録商標））、Ｓｍａｌｌ Ｍｏｄｕｌａｒ ＩｍｍｕｎｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ（ＳＭＩＰ（商標））、単鎖またはタンデムダイアボディ（ＴａｎｄＡｂ（登録商標））、ＶＨＨ、Ａｎｔｉｃａｌｉｎｓ（登録商標）、Ｎａｎｏｂｏｄｉｅｓ（登録商標）、ミニボディ、ＢｉＴＥ（登録商標）、アンキリンリピートタンパク質またはＤＡＲＰＩＮ（登録商標）、Ａｖｉｍｅｒｓ（登録商標）、ＤＡＲＴ、ＴＣＲ様抗体、Ａｄｎｅｃｔｉｎｓ（登録商標）、Ａｆｆｉｌｉｎｓ（登録商標）、Ｔｒａｎｓ－ｂｏｄｉｅｓ（登録商標）、Ａｆｆｉｂｏｄｉｅｓ（登録商標）、ＴｒｉｍｅｒＸ（登録商標）、ＭｉｃｒｏＰｒｏｔｅｉｎｓ、Ｆｙｎｏｍｅｒｓ（登録商標）、Ｃｅｎｔｙｒｉｎｓ（登録商標）、及びＫＡＬＢＩＴＯＲ（登録商標）から選択される構成のものである。いくつかの実施形態では、抗体は、重鎖及び／または軽鎖可変ドメインを含むことができる。いくつかの実施形態では、抗体は、定常ドメインを含まなくてもよい。いくつかの実施形態では、抗体は、天然に産生された場合に有するであろう共有結合修飾（例えば、グリカンの結合）を欠いていてもよい。いくつかの実施形態では、抗体は、共有結合修飾（例えば、グリカンの結合、ペイロード［例えば、検出可能部分、治療薬部分、触媒的部分など］、または他のペンダント基［例えば、ポリエチレングリコールなど］）を含んでもよい。
およそまたは約：本明細書で使用される場合、「およそ」または「約」という用語は、言及された基準値と類似する値を含む、１つ以上の目的の値に適用され得る。いくつかの実施形態では、「およそ」または「約」という用語は、別段の記載がない限り、または別途内容から明らかでない限り、言及された基準値の±１０％（を上回るまたは下回る）以内に入る値の範囲を指す（かかる数が可能な値の１００％を超え得る場合を除く）。例えば、いくつかの実施形態では、「およそ」または「約」という用語は、基準値の１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれ未満の値の範囲を包含し得る。
関連する／結合する：本明細書で使用される場合、「関連する／結合する」という用語は、一方の存在、レベル、及び／または形態が他方のそれと相関する場合、２つの事象または実体は互いに「関連する」と表される。例えば、特定の実体（例えば、ポリペプチド、遺伝子シグネチャー、代謝物、微生物など）は、その存在、レベル、及び／または形態が、疾患、障害、または状態の発生率及び／または感受性と相関する場合（例えば、関連集団全体において）、特定の疾患、障害、または状態と関連するとみなされる。いくつかの実施形態では、２つ以上の実体が、直接的または間接的に相互作用し、その結果、それらが互いに物理的に近接している、及び／または近接したままである場合、それらは互いに物理的に「結合する」。いくつかの実施形態では、互いに物理的に結合している２つ以上の実体は、互いに共有結合的に連結している。いくつかの実施形態では、互いに物理的に結合している２つ以上の実体は、互いに共有結合的に連結していないが、例えば、水素結合、ファンデルワールス相互作用、疎水性相互作用、磁性、及びそれらの組み合わせによって非共有結合的に結合している。
生物学的に活性な：本明細書で使用される場合、「生物学的に活性な」という用語は、目的の作用物質または実体によって達成される観察可能な生物学的効果または結果を指す。例えば、いくつかの実施形態では、特異的結合相互作用は、生物学的活性である。いくつかの実施形態では、生物学的経路または事象の調節（例えば、誘導、増強、または阻害）は、生物学的活性である。いくつかの実施形態では、生物学的活性の存在または程度は、目的の生物学的経路または事象によって産生される直接的または間接的な生成物の検出を通じて評価される。
特徴的部分：本明細書で使用される場合、「特徴的部分」という用語は、広義には、その存在（または非存在）が、物質の特定の特徴、特性、または活性の存在（または非存在）と相関する物質の部分を指す。いくつかの実施形態では、物質の特徴的部分は、共通の特定の特徴、特性または活性を有する所与の物質及び関連する物質に見られ、共通の特定の特徴、特性または活性を有していない物質には見られない部分である。いくつかの実施形態では、特徴的部分は、インタクトな物質と、共通の少なくとも１つの機能的特徴を有する。例えば、いくつかの実施形態では、タンパク質またはポリペプチドの「特徴的部分」は、共にタンパク質またはポリペプチドの特徴を成す連続的なアミノ酸ストレッチまたは連続的なアミノ酸ストレッチの集合を含む部分である。いくつかの実施形態では、そのような連続ストレッチの各々は、一般に、少なくとも２、５、１０、１５、２０、５０、またはそれ以上のアミノ酸を含む。一般に、物質（例えば、タンパク質、抗体などの）の特徴的部分は、上記の配列及び／または構造の同一性に加えて、関連するインタクトな物質と、共通の少なくとも１つの機能的特徴を有する部分である。いくつかの実施形態では、特徴的部分は生物学的に活性であり得る。
特徴的な配列：本明細書で使用される場合、「特徴的な配列」という用語は、ポリペプチドまたは核酸のファミリーの全てのメンバーに見られる配列であり、したがって、当業者がファミリーのメンバーを定義するために使用することができる。
特徴的な配列要素：本明細書で使用される場合、「特徴的な配列要素」という語句は、ポリマー（例えば、ポリペプチドまたは核酸の）に見られる、そのポリマーの特徴的部分を表す配列要素を指す。いくつかの実施形態では、特徴的な配列要素の存在は、ポリマーの特定の活性または特性の存在またはレベルと相関する。いくつかの実施形態では、特徴的な配列要素の存在（または非存在）は、特定のポリマーを、そのようなポリマーの特定のファミリーまたはグループのメンバー（または非メンバー）として定義する。特徴的な配列要素は、典型的には、少なくとも２つの単量体（例えば、アミノ酸またはヌクレオチド）を含む。いくつかの実施形態では、特徴的な配列要素は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、またはそれ以上の単量体（例えば、連続的に連結した単量体）を含む。いくつかの実施形態では、特徴的な配列要素は、共通の配列要素を有するポリマー間で長さが異なっていても、いなくてもよい１つ以上のスペーサー領域によって間隔をあけられた連続的な単量体の少なくとも第１及び第２のストレッチを含む。
併用療法：本明細書で使用される場合、「併用療法」という用語は、対象が２つ以上の治療レジメン（例えば、２つ以上の治療薬）に同時に曝露される状況を指す。いくつかの実施形態では、２つ以上の作用物質が同時に投与され得る。いくつかの実施形態では、２つ以上の作用物質が逐次的に投与され得る。いくつかの実施形態では、２つ以上の作用物質は、重複する投与レジメンで投与され得る。
同等：本明細書で使用される場合、「同等」という用語は、互いに同一ではあり得ないが、その比較を可能にするには十分類似しており、その結果、当業者が観測した差異または類似性に基づいて、結論を合理的に導き得ることを理解するであろう２つ以上の作用物質、実体、状況、条件のセット、対象、集団などを指す。いくつかの実施形態では、同等の作用物質、実体、状況、条件のセット、対象、集団などのセットは、複数の実質的に同一の特徴と、１つまたは少数の異なる特徴を特徴とする。当業者であれば、任意の所与の状況において、２つ以上のそのような作用物質、実体、状況、条件のセット、対象、集団などが、同等であるとみなされるために、状況に応じてどの程度の同一性が必要であるかを理解されよう。例えば、当業者であれば、異なる一連の環境、刺激、作用物質、実体、状況、条件のセット、対象、集団などの下で、またはこれらの一連のものにより得られた結果または観察された現象の相違が、変動するそれらの特徴の変動によって引き起こされるか、またはそれを示すという合理的な結論を保証するのに十分な数及び種類の実質的に同一な特徴によって特徴付けられた場合、一連の作用物質、実体、状況、条件のセット、対象、集団などは、互いに同等であることを認識するであろう。
構築物：本明細書で使用される場合、「構築物」という用語は、少なくとも１つの異種ポリヌクレオチドを保持することができるポリヌクレオチドを含む組成物を指す。いくつかの実施形態では、構築物は、プラスミド、トランスポゾン、コスミド、人工染色体（例えば、ヒト人工染色体（ＨＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ））またはウイルス構築物、及び任意のＧａｔｅｗａｙ（登録商標）プラスミドであり得る。構築物は、例えば、発現のための十分なシス作用エレメントを含むことができ、発現のための他のエレメントは、宿主霊長類細胞により、またはｉｎ ｖｉｔｒｏ発現システムで供給され得る。構築物は、適切な制御エレメントに結合した際に複製可能な任意の遺伝子エレメント（例えば、プラスミド、トランスポゾン、コスミド、人工染色体、またはウイルス構築物など）を含み得る。したがって、いくつかの実施形態では、「構築物」は、クローニング及び／または発現構築物、及び／またはウイルス構築物（例えば、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）構築物、アデノウイルス構築物、レンチウイルス構築物、またはレトロウイルス構築物）を含み得る。
保存的：本明細書で使用される場合、「保存的」という用語は、類似の化学的特性（例えば、電荷または疎水性）を有する側鎖Ｒ基を有する別のアミノ酸残基によるアミノ酸残基の置換を含む、保存的アミノ酸置換を表す事例を指す。一般に、保存的アミノ酸置換は、例えば、リガンドに結合する受容体の能力など、タンパク質の目的の機能特性を実質的に変化させない。類似の化学的特性を有する側鎖を持つアミノ酸のグループの例としては、以下が挙げられる：グリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）、アラニン（Ａｌａ、Ａ）、バリン（Ｖａｌ、Ｖ）、ロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）、及びイソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）などの脂肪族側鎖；セリン（Ｓｅｒ、Ｓ）及びスレオニン（Ｔｈｒ、Ｔ）などの脂肪族－ヒドロキシ側鎖；アスパラギン（Ａｓｎ、Ｎ）及びグルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）などのアミド含有側鎖；フェニルアラニン（Ｐｈｅ、Ｆ）、チロシン（Ｔｙｒ、Ｙ）、及びトリプトファン（Ｔｒｐ、Ｗ）などの芳香族側鎖；リジン（Ｌｙｓ、Ｋ）、アルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）、及びヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）などの塩基性側鎖；アスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）及びグルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）などの酸性側鎖；ならびにシステイン（Ｃｙｓ、Ｃ）及びメチオニン（Ｍｅｔ、Ｍ）などの含硫側鎖。保存的アミノ酸置換基としては、例えば、バリン／ロイシン／イソロイシン（Ｖａｌ／Ｌｅｕ／Ｉｌｅ、Ｖ／Ｌ／Ｉ）、フェニルアラニン／チロシン（Ｐｈｅ／Ｔｙｒ、Ｆ／Ｙ）、リジン／アルギニン（Ｌｙｓ／Ａｒｇ、Ｋ／Ｒ）、アラニン／バリン（Ａｌａ／Ｖａｌ、Ａ／Ｖ）、グルタミン酸／アスパラギン酸（Ｇｌｕ／Ａｓｐ、Ｅ／Ｄ）、及びアスパラギン／グルタミン（Ａｓｎ／Ｇｌｎ、Ｎ／Ｑ）が挙げられる。いくつかの実施形態では、保存的アミノ酸置換は、例えば、アラニンスキャニング変異誘発で使用されるように、タンパク質中の任意の天然の残基のアラニンとの置換であり得る。いくつかの実施形態では、保存的置換は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＧｏｎｎｅｔ，Ｇ．Ｈ．ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５６：１４４３－１４４５に開示されたＰＡＭ２５０対数尤度行列において正の値を有するように行われる。いくつかの実施形態では、置換は、その置換がＰＡＭ２５０対数尤度行列において非負の値を有する、中程度に保守的な置換である。当業者であれば、異なる種由来の同じタンパク質間で保存されていないアミノ酸の変化（例えば、置換、付加、欠失など）は、タンパク質の機能に影響を与える可能性が低く、したがって、これらのアミノ酸は変異のために選択されるべきであることを理解するであろう。異なる種由来の同じタンパク質間で保存されているアミノ酸は、変化（例えば、欠失、付加、置換など）させてはならず、それは、これらの変異がタンパク質の機能に変化をもたらす可能性が高いためである。

対照：本明細書で使用される場合、「対照」という用語は、結果が比較される標準としての「対照」という当該技術分野で理解される意味を指す。典型的には、対照は、変動要素についての結論を出すために変動要素を分離することにより、実験における整合性を高めるために用いる。いくつかの実施形態では、対照は、比較対象物を得るための試験反応またはアッセイと同時に行われる反応またはアッセイである。例えば、ある実験では、「試験」（すなわち、試験される変動要素）が適用される。第２の実験では、「対照」に、当該試験される変動要素は適用されない。いくつかの実施形態では、対照は、既存対照（例えば、既に実施された試験もしくはアッセイ、または既に知られている量もしくは結果の）である。いくつかの実施形態では、対照は、印刷、または他の方法で保存された記録であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、対照は陽性対照である。いくつかの実施形態では、対照は陰性対照である。
判定、測定、評価、検討、アッセイ、及び分析：本明細書で使用される場合、「判定」、「測定」、「評価」、「検討」、「アッセイ」、及び「分析」という用語は、測定の任意の形態を指すために互換的に使用することができ、ある要素が存在するか否かを判定することを含む。これらの用語には、定量的及び／または定性的な判定の両方が含まれる。アッセイは、相対的であっても絶対的であってもよい。例えば、いくつかの実施形態では、「～の存在をアッセイする」は、存在するものの量を判定すること、及び／または存在の有無を判定することであり得る。
操作された：一般に、本明細書で使用される場合、「操作された」という用語は、人の手によって操作された態様を指す。例えば、細胞または生物が、その遺伝情報が変化するように操作された（例えば、以前に存在しなかった新しい遺伝子物質が、例えば、形質転換、交配、体細胞交雑、トランスフェクション、形質導入、または他の機構によって導入されたか、または以前に存在した遺伝子物質が、例えば、置換または欠失変異によって、または交配プロトコルによって変化または除去された）場合、「操作された」とみなされる。一般的な慣行であり、当業者には理解されているとおり、操作されたポリヌクレオチドまたは細胞の子孫は、通常、実際の操作が先行する実体に対して行われていても、依然として「操作された」とみなされる。いくつかの実施形態では、「操作された」は、コード配列の「ヒト化」を含む。いくつかの実施形態では、「ヒト化」は、イントロン及び調節エレメントなどのヒト非コード配列を非ヒト配列に導入することを含むことができる。いくつかの実施形態では、「ヒト化」は、ヒトの使用のためにヌクレオチド配列をコドン最適化することを含むことができる。いくつかの実施形態では、「ヒト化」は、ポリペプチドの一部（例えば、ドメイン、例えば、フレームワーク領域または相補性ドメイン領域など）またはヌクレオチド配列（例えば、コードされたまたは非コードの）をヒトポリペプチドまたはヌクレオチド配列で置き換えることを含むことができる。
賦形剤：本明細書で使用される場合、「賦形剤」という用語は、例えば、所望の稠度または安定化効果を提供または寄与するために、医薬組成物に含めることができる不活性（例えば、非治療薬）物質を指す。いくつかの実施形態では、好適な医薬賦形剤としては、例えば、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが挙げられ得る。
発現：本明細書で使用される場合、核酸配列の「発現」という用語は、核酸配列から任意の遺伝子産物（例えば、転写産物、例えば、ｍＲＮＡ、例えば、ポリペプチドなど）を生成することを指す。いくつかの実施形態では、遺伝子産物は転写産物であり得る。いくつかの実施形態では、遺伝子産物はポリペプチドであり得る。いくつかの実施形態では、核酸配列の発現は、以下のうちの１つ以上を含む：（１）ＤＮＡ配列からのＲＮＡテンプレートの生成（例えば、転写による）；（２）ＲＮＡ転写産物のプロセシング（例えば、スプライシング、編集、５’キャップ形成、及び／または３’末端形成による）；（３）ポリペプチドまたはタンパク質へのＲＮＡの翻訳；及び／または（４）ポリペプチドまたはタンパク質の翻訳後修飾。
機能的：本明細書で使用される場合、「機能的」という用語は、それを特徴付ける特性及び／または活性を呈する形態で存在するものを表す。例えば、いくつかの実施形態では、「機能的」生物学的分子は、それを特徴付ける特性及び／または活性を呈する形態にある生物学的分子である。いくつかのそのような実施形態では、機能的な生物学的分子は、「非機能的」バージョンが「機能的」分子と同じまたは同等の特性及び／または活性を呈さないという点で、非機能的である別の生物学的分子と比較して特徴付けられる。生物学的分子は、１つの機能、２つの機能（すなわち、二機能性）、または多くの機能（すなわち、多機能性）を有してもよい。
遺伝子：本明細書で使用される場合、「遺伝子」という用語は、遺伝子産物（例えば、ＲＮＡ産物、例えば、ポリペプチド産物）をコードする染色体中のＤＮＡ配列を指す。いくつかの実施形態では、遺伝子は、コード配列（すなわち、特定の産物をコードする配列）を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子は、非コード配列を含む。いくつかの特定の実施形態では、遺伝子は、コード（例えば、エクソン）配列及び非コード（例えば、イントロン）配列の両方を含み得る。いくつかの実施形態では、遺伝子は、例えば、遺伝子発現の１つ以上の態様（例えば、細胞型特異的発現、誘導性発現など）を制御またはこれに影響を及ぼし得る１つ以上の調節配列（例えば、プロモーター、エンハンサーなど）及び／またはイントロン配列を含み得る。本明細書で使用される場合、「遺伝子」という用語は、一般に、ポリペプチドまたはその断片をコードする核酸の一部を指し、この用語は、文脈から当業者にとって明らかであるように、任意選択で調節配列を包含し得る。この定義は、「遺伝子」という用語の非タンパク質コード発現単位への適用を排除することを意図したものではなく、ほとんどの場合、本明細書で使用するこの用語は、ポリペプチドをコードする核酸を指すことを明確にすることを意図したものである。いくつかの実施形態では、遺伝子はポリペプチドをコードし得るが、そのポリペプチドは機能的でない可能性があり、例えば、遺伝子バリアントは、野生型遺伝子と比較して同じように、または全く機能しないポリペプチドをコードし得る。いくつかの実施形態では、遺伝子は、いくつかの実施形態では、閾値レベルを超えて毒性である可能性がある転写産物をコードし得る。いくつかの実施形態では、遺伝子はポリペプチドをコードし得るが、そのポリペプチドは、機能的でない可能性があり、及び／または閾値レベルを超えて毒性である可能性がある。
難聴：本明細書で使用される場合、「難聴」という用語は、生物の聴力の部分的または完全な不能に対して使用され得る。いくつかの実施形態では、難聴は後天性であり得る。いくつかの実施形態では、難聴は遺伝性であり得る。いくつかの実施形態では、難聴は遺伝子性であり得る。いくつかの実施形態では、難聴は、疾患または外傷（例えば、身体的外傷、難聴をもたらす１つ以上の作用物質による治療など）の結果であり得る。いくつかの実施形態では、難聴は、１つ以上の既知の遺伝的原因及び／または症候群によるものであり得る。いくつかの実施形態では、難聴は、未知の病因であり得る。いくつかの実施形態では、難聴は、補聴器または他の治療の使用によって軽減される場合もあれば、軽減されない場合もある。
異種：本明細書で使用される場合、「異種」という用語は、別の領域及び／または別の分子と比較した、特定の分子の１つ以上の領域に関して使用され得る。例えば、いくつかの実施形態では、異種ポリペプチドドメインとは、ポリペプチドドメインが自然には一緒に（例えば、同じポリペプチド内で）存在しないことを指す。例えば、人の手によって作製された融合タンパク質において、あるポリペプチド由来のポリペプチドドメインは、異なるポリペプチド由来のポリペプチドドメインに融合され得る。このような融合タンパク質では、２つのポリペプチドドメインは、自然には一緒に存在しないため、互いに対して「異種」とみなされることになる。
同一性：本明細書で使用される場合、「同一性」という用語は、高分子間、例えば、核酸分子間（例えば、ＤＮＡ分子及び／またはＲＮＡ分子）及び／またはポリペプチド分子間の全体的な関連性を指す。いくつかの実施形態では、高分子は、それらの配列が少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％同一である場合、互いに「実質的に同一」であるとみなされる。２つの核酸またはポリペプチド配列の同一性パーセントの計算は、例えば、最適な比較のために２つの配列を整列させることによって行うことができる（例えば、最適なアラインメントのために第１及び第２の配列の一方または両方にギャップを導入することができ、非同一配列は比較のために無視することができる）。いくつかの実施形態では、比較のために整列された配列の長さは、基準配列の長さの少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または実質的に１００％であり、次いで、対応する位置のヌクレオチドが比較される。第１の配列の位置が、第２の配列の対応する位置と同じ残基（例えば、ヌクレオチドまたはアミノ酸）で占められている場合、２つの分子（すなわち、第１及び第２の）は、その位置において同一である。２つの配列間の同一性パーセントは、２つの配列の最適なアラインメントのために導入する必要があるギャップの数、及び各ギャップの長さを考慮した、比較される２つの配列が共通で有する同一の位置の数の関数である。配列の比較及び２つの配列間の同一性パーセントの決定は、数学的アルゴリズムを使用して達成することができる。例えば、２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、Ｍｅｙｅｒｓ ａｎｄ Ｍｉｌｌｅｒ（ＣＡＢＩＯＳ，１９８９，４：１１－１７、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）のアルゴリズムを使用して決定することができ、これは、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれている。いくつかの実施形態では、ＡＬＩＧＮプログラムで行われる核酸配列比較は、ＰＡＭ１２０ウエイト残基テーブル、１２のギャップ長ペナルティ、及び４のギャップペナルティを使用する。
改善、増加、増強、抑制、または低減：本明細書で使用される場合、「改善する」、「増加する」、「増強する」、「抑制する」、「低減する」、またはそれらの文法的同等物は、ベースラインまたは他の基準測定値と比較した値を示す。いくつかの実施形態では、値は、ベースラインまたは他の基準測定値と統計的に有意な差がある。いくつかの実施形態では、適切な基準測定値は、特定の作用物質もしくは治療が存在しない（例えば、その前及び／または後に）以外は同等な条件下での、または適切な同等な基準作用物質の存在下での、特定のシステム（例えば、単一の固体）における測定値であるか、またはそれを含み得る。いくつかの実施形態では、適切な基準測定値は、関連する作用物質または治療の存在下で、特定の方法で応答することが知られているかまたは予期される、同等のシステムにおける測定値であるか、またはそれを含み得る。いくつかの実施形態では、適切な基準は陰性基準であり、いくつかの実施形態では、適切な基準は陽性基準である。
核酸：本明細書で使用される場合、「核酸」という用語は、その最も広義において、オリゴヌクレオチド鎖に組み込まれる、または組み込まれ得る任意の化合物及び／または物質を指す。いくつかの実施形態では、核酸は、ホスホジエステル結合を介してオリゴヌクレオチド鎖に組み込まれる、または組み込まれ得る、化合物及び／または物質である。文脈から明らかなように、いくつかの実施形態では、「核酸」は、個々の核酸残基（例えば、ヌクレオチド及び／またはヌクレオシド）を指し、いくつかの実施形態では、「核酸」は、個々の核酸残基を含むオリゴヌクレオチド鎖を指す。いくつかの実施形態では、「核酸」は、ＲＮＡであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、「核酸」は、ＤＮＡであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、核酸は、１つ以上の天然の核酸残基であるか、それを含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、核酸は、１つ以上の天然の核酸類似体であるか、それを含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、核酸類似体は、ホスホジエステル骨格を利用しない点で核酸と異なる。代替的にまたは付加的に、いくつかの実施形態では、核酸は、ホスホジエステル結合ではなく、１つ以上のホスホロチオエート及び／または５’－Ｎ－ホスホロアミダイト結合を有する。いくつかの実施形態では、核酸は、１つ以上の天然ヌクレオシド（例えば、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウリジン、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、デオキシグアノシン、及びデオキシシチジン）であるか、それを含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、核酸は、１つ以上のヌクレオシド類似体（例えば、２－アミノアデノシン、２－チオチミジン、イノシン、ピロロ－ピリミジン、３－メチルアデノシン、５－メチルシチジン、Ｃ－５プロピニル－シチジン、Ｃ－５プロピニル－ウリジン、２－アミノアデノシン、Ｃ５－ブロモウリジン、Ｃ５－フルオロウリジン、Ｃ５－ヨードウリジン、Ｃ５－プロピニル－ウリジン、Ｃ５－プロピニル－シチジン、Ｃ５－メチルシチジン、２－アミノアデノシン、７－デアザアデノシン、７－デアザグアノシン、８－オキソアデノシン、８－オキソグアノシン、０（６）－メチルグアニン、２－チオシチジン、メチル化塩基、インターカレート塩基、及びこれらの組み合わせ）であるか、それを含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、核酸は、天然の核酸のものと比較して、１つ以上の修飾糖（例えば、２’－フルオロリボース、リボース、２’－デオキシリボース、アラビノース、及びヘキソース）を含む。いくつかの実施形態では、核酸は、ＲＮＡまたはタンパク質などの機能的遺伝子産物をコードするヌクレオチド配列を有する。いくつかの実施形態では、核酸は、１つ以上のイントロンを含む。いくつかの実施形態では、核酸は、天然源からの単離、相補的テンプレートに基づく重合による酵素的合成（ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏ）、組換え細胞またはシステムでの複製、及び化学的合成のうちの１つ以上によって調製される。いくつかの実施形態では、核酸は、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２０、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、５０００またはそれ以上の残基長である。いくつかの実施形態では、核酸は部分的または全体的に一本鎖であり、いくつかの実施形態では、核酸は部分的または全体的に二本鎖である。いくつかの実施形態では、核酸は、ポリペプチドをコードする、またはそれをコードする配列に相補的である少なくとも１つのエレメントを含むヌクレオチド配列を有する。いくつかの実施形態では、核酸は、酵素活性を有する。
作動可能に連結された：本明細書で使用される場合、記載されている構成要素が、それらの意図される様式でそれらが機能することを可能にする関係にある並置を指す。機能的エレメントに対して「作動可能に連結された」制御エレメントは、機能的エレメントの発現及び／または活性が、その制御エレメントに適合する条件下で達成されるように結合される。いくつかの実施形態では、「作動可能に連結された」制御エレメントは、目的のコードエレメントと連続している（例えば、共有結合的に連結している）；いくつかの実施形態では、制御エレメントは、目的の機能的エレメントにトランスで、または他の方法で作用する。いくつかの実施形態では、「作動可能に連結された」とは、調節配列と異種核酸配列との間の機能的連結を指し、後者の発現をもたらす。例えば、第１の核酸配列は、第１の核酸配列が第２の核酸配列と機能的関係に配置される場合、第２の核酸配列と作動可能に連結されている。いくつかの実施形態では、例えば、機能的連結は、転写制御を含み得る。例えば、プロモーターは、そのプロモーターがコード配列の転写または発現に影響を及ぼす場合、コード配列に作動可能に連結されている。作動可能に連結されたＤＮＡ配列は、互いに連続することができ、例えば、２つのタンパク質コード領域を繋げるために必要な場合、同じリーディングフレームにある。
医薬組成物：本明細書で使用される場合、「医薬組成物」という用語は、活性剤が１つ以上の薬学的に許容される担体とともに製剤化された組成物を指す。いくつかの実施形態では、活性剤は、関連する集団に投与された場合に所定の治療効果を達成する統計的に有意な確率を示す治療レジメンでの投与に適した単位用量で存在する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、固体または液体形態での投与のために特別に製剤化されてもよく、これには、例えば、注射剤、例えば、水性もしくは非水性の溶液もしくは懸濁液、または外耳道に投与されるように設計された点耳薬の投与に適合されたものが含まれる。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、特定の器官または区画のいずれかへの注入、例えば、耳への直接注入、または全身への注入、例えば静脈内注入による投与のために製剤化され得る。いくつかの実施形態では、製剤は、ドレンチ（水性または非水性溶液または懸濁液）、錠剤、ボーラス、散剤、顆粒剤、ペースト、カプセル剤、散剤などであるか、またはそれを含み得る。いくつかの実施形態では、活性剤は、単離された、精製された、または純粋な化合物であるか、またはそれを含み得る。
薬学的に許容される：本明細書で使用される場合、例えば、本明細書で開示される医薬組成物を製剤化するために使用される担体、希釈剤、または賦形剤に関して使用することができる「薬学的に許容される」という用語は、担体、希釈剤、または賦形剤が組成物の他の成分と適合性があり、そのレシピエントに有害ではないことを意味する。
薬学的に許容される担体：本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」という用語は、対象化合物をある器官もしくは身体の一部から別の器官もしくは身体の一部に運搬または輸送することに関与する液体または固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、または溶媒封入材料などの薬学的に許容される材料、組成物、またはビヒクルを意味する。各担体は、製剤の他の成分と適合し、かつ患者に有害でないという意味において「許容され」なければならない。薬学的に許容される担体として機能することができる材料のいくつかの例としては、糖、例えば、ラクトース、グルコース、及びスクロース；デンプン、例えば、トウモロコシデンプン及びジャガイモデンプン；セルロース、及びその誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、及び酢酸セルロース；粉末トラガカント；麦芽；ゼラチン；タルク；賦形剤、例えば、カカオバター及び坐剤用ワックス；油、例えば、ピーナッツ油、綿実油、ヒマワリ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油、及び大豆油；グリコール、例えば、プロピレングリコール；ポリオール、例えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、及びポリエチレングリコール；エステル、例えば、オレイン酸エチル及びラウリン酸エチル；寒天；緩衝剤、例えば、水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウム；アルギン酸；無発熱物質水；等張生理食塩水；リンゲル液；エチルアルコール；ｐＨ緩衝液；ポリエステル、ポリカーボネート、及び／またはポリ酸無水物；ならびに医薬製剤に用いられる他の非毒性の適合物質が挙げられる。
ポリアデニル化：本明細書で使用される場合、「ポリアデニル化」は、ポリアデニル部分またその修飾バリアントとメッセンジャーＲＮＡ分子との共有結合による連結を指す。真核生物では、ほとんどのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）分子は、３’末端でポリアデニル化される。いくつかの実施形態では、３’ポリ（Ａ）テールは、酵素であるポリアデニル酸ポリメラーゼの作用によってプレｍＲＮＡに付加されるアデニンヌクレオチドの長い配列（例えば、５０、６０、７０、１００、２００、５００、１０００、２０００、３０００、４０００、または５０００）（配列番号１１７）である。高等真核生物では、ポリ（Ａ）テールは、特定の配列であるポリアデニル化シグナルまたは「ポリ（Ａ）配列」を含む転写産物に付加され得る。ポリ（Ａ）テール及びそれに結合したタンパク質は、エキソヌクレアーゼによる分解からｍＲＮＡを保護するのを助ける。ポリアデニル化は、転写の終結、ｍＲＮＡの核外への搬出、及び翻訳に影響を与える可能性がある。通常、ポリアデニル化は、ＤＮＡのＲＮＡへの転写直後に核内で生じるだけでなく、さらに、その後に細胞質でも生じ得る。転写が終結した後、ｍＲＮＡ鎖は、ＲＮＡポリメラーゼに関連するエンドヌクレアーゼ複合体の作用により切断され得る。切断部位は、切断部位の近くにある塩基配列ＡＡＵＡＡＡの存在を特徴とし得る。ｍＲＮＡが切断された後、アデノシン残基が、切断部位の遊離した３’末端に付加され得る。本明細書で使用される場合、「ポリ（Ａ）配列」は、エンドヌクレアーゼによるｍＲＮＡの切断、及び切断されたｍＲＮＡの３’末端への一連のアデノシンの付加を誘発する配列である。
ポリペプチド：本明細書で使用される場合、「ポリペプチド」という用語は、典型的にはペプチド結合によって連結された残基（例えば、アミノ酸）の任意の重合鎖を指す。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、天然に存在するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、天然に存在しないアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、人の手の作用によって設計及び／または作製されるという点で操作されたアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、またはその両方を含むか、またはそれらからなり得る。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ポリペプチドのＮ末端、ポリペプチドのＣ末端、またはそれらの任意の組み合わせにおいて、１つ以上のペンダント基または他の修飾、例えば、１つ以上のアミノ酸側鎖の修飾または結合を含み得る。いくつかの実施形態では、そのようなペンダント基または修飾は、アセチル化、アミド化、脂質化、メチル化、ＰＥＧ化など（それらの組み合わせを含む）であり得る。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、Ｌ－アミノ酸、Ｄ－アミノ酸、またはその両方を含み得、当該技術分野で知られている任意の様々なアミノ酸修飾または類似体を含み得る。いくつかの実施形態では、有用な修飾は、例えば、末端アセチル化、アミド化、メチル化などであるか、またはそれを含み得る。いくつかの実施形態では、タンパク質は、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、合成アミノ酸、及びそれらの組み合わせを含み得る。「ペプチド」という用語は、一般に、約１００アミノ酸未満、約５０アミノ酸未満、２０アミノ酸未満、または１０アミノ酸未満の長さを有するポリペプチドを指すのに用いられる。いくつかの実施形態では、タンパク質は、抗体、抗体断片、その生物学的に活性な部分、及び／またはその特徴的部分である。
ポリヌクレオチド：本明細書で使用される場合、「ポリヌクレオチド」という用語は、核酸の任意の重合鎖を指す。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＲＮＡであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＤＮＡであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、１つ以上の天然の核酸残基であるか、それを含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、１つ以上の天然の核酸類似体であるか、それを含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド類似体は、ホスホジエステル骨格を利用しない点で核酸と異なる。代替的にまたは付加的に、いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、ホスホジエステル結合ではなく、１つ以上のホスホロチオエート及び／または５’－Ｎ－ホスホロアミダイト結合を有する。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、１つ以上の天然ヌクレオシド（例えば、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウリジン、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、デオキシグアノシン、及びデオキシシチジン）であるか、それを含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、１つ以上のヌクレオシド類似体（例えば、２－アミノアデノシン、２－チオチミジン、イノシン、ピロロ－ピリミジン、３－メチルアデノシン、５－メチルシチジン、Ｃ－５プロピニル－シチジン、Ｃ－５プロピニル－ウリジン、２－アミノアデノシン、Ｃ５－ブロモウリジン、Ｃ５－フルオロウリジン、Ｃ５－ヨードウリジン、Ｃ５－プロピニル－ウリジン、Ｃ５－プロピニル－シチジン、Ｃ５－メチルシチジン、２－アミノアデノシン、７－デアザアデノシン、７－デアザグアノシン、８－オキソアデノシン、８－オキソグアノシン、０（６）－メチルグアニン、２－チオシチジン、メチル化塩基、インターカレート塩基、及びこれらの組み合わせ）であるか、それを含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、天然の核酸のものと比較して、１つ以上の修飾糖（例えば、２’－フルオロリボース、リボース、２’－デオキシリボース、アラビノース、及びヘキソース）を含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＲＮＡまたはタンパク質などの機能的遺伝子産物をコードするヌクレオチド配列を有する。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、１つ以上のイントロンを含む。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、天然源からの単離、相補的テンプレートに基づく重合による酵素的合成（ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏ）、組換え細胞またはシステムでの複製、及び化学的合成のうちの１つ以上によって調製される。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０．１７０、１８０、１９０、２０、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、５０００またはそれ以上の残基長である。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは部分的または全体的に一本鎖であり、いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは部分的または全体的に二本鎖である。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、ポリペプチドをコードする、またはそれをコードする配列の相補体である少なくとも１つのエレメントを含むヌクレオチド配列を有する。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、酵素活性を有する。
タンパク質：本明細書で使用される場合、「タンパク質」という用語は、ポリペプチド（すなわち、ペプチド結合によって互いに連結された少なくとも２つのアミノ酸の鎖）を指す。タンパク質は、アミノ酸以外の部分（例えば、糖タンパク質、プロテオグリカンなどであってもよい）を含んでもよく、及び／またはそうでなければプロセシングもしくは修飾されていてもよい。当業者であれば、「タンパク質」は、細胞によって産生される完全なポリペプチド鎖（シグナル配列を有することも有さないこともある）であり得るか、またはその特徴的部分であり得ることを理解するであろう。当業者であれば、タンパク質が複数のポリペプチド鎖、例えば、１つ以上のジスルフィド結合によって連結されたもの、または他の手段によって結合したものを含み得る場合があることを理解するであろう。
組換え：本明細書で使用される場合、「組換え」という用語は、組換え手段によって設計、操作、調製、発現、作製、製造、及び／または単離されたポリペプチド、例えば、宿主細胞にトランスフェクトされた組換え発現構築物を用いて発現されたポリペプチド；組換えコンビナトリアルヒトポリペプチドライブラリから単離されたポリペプチド；動物（例えば、マウス、ウサギ、ヒツジ、魚など）から単離されたポリペプチドであって、トランスジェニックであるか、さもなければポリペプチドもしくはその１つ以上の構成要素（複数可）、部分（複数可）、エレメント（複数可）、もしくはドメイン（複数可）をコードする及び／またはそれを直接発現する１つもしくは複数の遺伝子、または遺伝子構成要素を発現するように操作された動物から単離されたポリペプチド；及び／または、選択された核酸配列エレメントを互いにスプライシングまたはライゲーションすること、選択された配列エレメントを化学的に合成すること、及び／またはポリペプチドもしくはその１つ以上の構成要素（複数可）、部分（複数可）、エレメント（複数可）、もしくはドメイン（複数可）をコードする及び／またはそれを直接発現する核酸を別の方法で生成することを含む任意の他の手段によって調製、発現、作製、もしくは単離されたポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、そのような選択された配列エレメントの１つ以上は、天然に見出される。いくつかの実施形態では、そのような選択された配列エレメントの１つ以上は、ｉｎ ｓｉｌｉｃｏで設計される。いくつかの実施形態では、１つ以上のそのような選択された配列エレメントは、例えば、目的の供給源生物（例えば、ヒト、マウスなど）の生殖系列において、例えば、天然供給源または合成供給源に由来する公知の配列エレメントの変異誘発（例えば、ｉｎ－ｖｉｖｏまたはｉｎ－ｖｉｔｒｏ）から生じる。
基準：本明細書で使用される場合、「基準」という用語は、比較が行われる標準または対照を表す。例えば、いくつかの実施形態では、目的の作用物質、動物、個体、集団、試料、配列、または値は、基準または対照の作用物質、動物、個体、集団、試料、配列、または値と比較される。いくつかの実施形態では、基準または対照は、目的の試験または判定と実質的に同時に試験及び／または判定される。いくつかの実施形態では、基準または対照は、既存の基準または対照であり、任意選択で有形の媒体に具現化される。典型的には、当業者には理解されるであろうが、基準または対照は、評価中のものと同等の条件または環境下で判定または特性決定される。当業者であれば、特定の可能性のある基準または対照への信頼及び／または比較を正当化するのに十分な類似性が存在する場合を理解するだろう。いくつかの実施形態では、基準は陰性対照基準である。いくつかの実施形態では、基準は陽性対照基準である。
調節エレメント：本明細書で使用される場合、「調節エレメント」または「調節配列」という用語は、１つ以上の特定の遺伝子の発現を何らかの方法で調節するＤＮＡの非コード領域を指す。いくつかの実施形態では、そのような遺伝子は、所与の調節エレメントに並置されているか、またはその「近傍にある」。いくつかの実施形態では、そのような遺伝子は、所与の調節エレメントからかなり離れた場所に位置する。いくつかの実施形態では、調節エレメントは、１つ以上の遺伝子の転写を損なうか、または促進する。いくつかの実施形態では、調節エレメントは、調節される遺伝子に対してシスに位置し得る。いくつかの実施形態では、制御エレメントは、調節される遺伝子に対してトランスに位置し得る。例えば、いくつかの実施形態では、調節配列は、調節配列に作動可能に連結された遺伝子産物の発現を調節する核酸配列を指す。いくつかのそのような実施形態では、この配列は、遺伝子産物の発現を調節するエンハンサー配列及び他の調節エレメントであってもよい。
試料：本明細書で使用される場合、「試料」という用語は、典型的には、目的の供給源から得られた、またはそれに由来する材料のアリコートを指す。いくつかの実施形態では、目的の供給源は、生物学的または環境的供給源である。いくつかの実施形態では、目的の供給源は、細胞または生物、例えば、微生物（例えば、ウイルス）、植物、または動物（例えば、ヒト）であるか、またはそれを含み得る。いくつかの実施形態では、目的の供給源は、生物学的組織または生体液であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、生物学的組織または生体液は、羊水、房水、腹水、胆汁、骨髄、血液、母乳、脳脊髄液、耳垢、乳糜、糜汁、射精液、内リンパ、滲出液、糞便、胃酸、胃液、リンパ、粘液、心膜液、外リンパ、腹膜液、胸膜液、膿、粘膜分泌物、唾液、皮脂、精液、血清、恥垢、喀痰、滑液、汗、涙、尿、膣分泌物、硝子体液、吐物、及び／またはそれらの組み合わせもしくは成分（複数可）であるか、またはそれを含み得る。いくつかの実施形態では、生体液は、細胞内液、細胞外液、血管内液（血漿）、間質液、リンパ液、及び／または細胞通過液であるか、またはそれを含み得る。いくつかの実施形態では、生体液は、植物滲出液であるか、またはそれを含み得る。いくつかの実施形態では、生物学的組織または試料は、例えば、吸引、生検（例えば、細針または組織生検）、スワブ（例えば、口腔、鼻腔、皮膚、または膣スワブ）、スクレイピング、手術、洗浄または灌流（例えば、気管支肺胞、管、鼻、眼、口腔、子宮、膣、または他の洗浄または灌流）により得てもよい。いくつかの実施形態では、生体試料は、個体から得られた細胞であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、試料は、任意の適切な手段によって目的の供給源から直接得られた「一次試料」である。いくつかの実施形態では、文脈から明らかなように、「試料」という用語は、一次試料を処理することによって（例えば、１つ以上の成分を除去することによって、及び／または１つ以上の作用物質を添加することによって）得られる調製物を指す。例えば、半透膜を用いたろ過である。このような「処理された試料」は、例えば、試料から抽出されたか、または一次試料を核酸の増幅もしくは逆転写、特定の成分の単離及び／または精製などの１つ以上の技術に供することによって得られた核酸もしくはタンパク質を含み得る。
対象：本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、生物、典型的には哺乳動物（例えば、ヒト、いくつかの実施形態では、出生前のヒト形態を含む）を指す。いくつかの実施形態では、対象は、関連する疾患、障害、または状態に罹患している。いくつかの実施形態では、対象は、疾患、障害、または状態に罹患しやすい。いくつかの実施形態では、対象は、疾患、障害、または状態の１つ以上の症状または特徴を呈する。いくつかの実施形態では、対象は、疾患、障害、または状態のいかなる症状または特徴も呈さない。いくつかの実施形態では、対象は、疾患、障害、または状態に対する感受性、またはそのリスクを特徴付ける１つ以上の特徴を有する人である。いくつかの実施形態では、対象は患者である。いくつかの実施形態では、対象は、診断及び／または治療が行われる及び／または行われたことのある個体である。
実質的に：本明細書で使用される場合、「実質的に」という用語は、目的の特徴もしくは特性の全てまたはほぼ全ての範囲もしくは程度を表す定性的状態を指す。当業者には、生物学的及び化学的な現象が、完了する、及び／または完了まで進行する、または絶対的な結果を達成するもしくはそれを回避することは、たとえあってもまれであることを理解するであろう。したがって、「実質的に」という用語は、多くの生物学的及び化学的現象に本来的に存在する完全性の潜在的な欠如を表現するために本明細書で使用される。
治療：本明細書で使用される場合、「治療」（「治療する」または「治療すること」ともいう）という用語は、特定の疾患、障害、及び／または状態の１つ以上の症状、特徴、及び／または原因の部分的または完全な緩和、軽快、排除、逆転、軽減、抑制、発症の遅延、重症度の低減、及び／または発生率の低減を行う治療法の任意の実施を指す。いくつかの実施形態では、そのような治療は、関連する疾患、障害、及び／または状態の兆候を呈さない対象、及び／または疾患、障害、及び／または状態の初期兆候のみを呈する対象の治療であり得る。代替的にまたは付加的に、そのような治療は、関連する疾患、障害、及び／または状態の１つ以上の確立された徴候を呈する対象の治療であり得る。いくつかの実施形態では、治療は、関連する疾患、障害、及び／または状態に罹患していると診断された対象の治療であり得る。いくつかの実施形態では、治療は、所与の疾患、障害、及び／または状態の発症リスクの増大と統計的に相関する１つ以上の感受性因子を有することが知られている対象の治療であり得る。
腫瘍：本明細書で使用される場合、「腫瘍」という用語は、細胞または組織の異常増殖を指す。いくつかの実施形態では、腫瘍は、前がん性（例えば、良性）、悪性、前転移性、転移性、及び／または非転移性である細胞を含み得る。いくつかの実施形態では、腫瘍は、がんに関連しているか、またはがんの徴候である。いくつかの実施形態では、腫瘍は、分散型腫瘍または液体腫瘍であり得る。いくつかの実施形態では、腫瘍は、固形腫瘍であり得る。
バリアント：本明細書で使用される場合、「バリアント」という用語は、あるもののバージョンを指し、例えば、別のバージョンと何らかの形で異なる遺伝子配列を指す。あるものがバリアントであるかどうかを判断するために、通常、基準バージョンが選択され、バリアントはその基準バージョンと比較して異なっている。いくつかの実施形態では、バリアントは、野生型配列と同じまたは異なる（例えば、増加または減少した）レベルの活性または機能性を有することができる。例えば、いくつかの実施形態では、バリアントは、例えば、阻害性核酸、例えば、ｍｉＲＮＡによる分解に抵抗するようにコドン最適化されている場合、野生型配列と比較して改善された機能性を有することができる。このようなバリアントは、本明細書において機能獲得型バリアントと呼ばれる。いくつかの実施形態では、バリアントは、活性もしくは機能性の低下もしくは排除、または負の結果（例えば、細胞死につながる慢性脱分極をもたらす電気活性の増加）をもたらす活性の変化を有する。このようなバリアントは、本明細書では機能喪失型バリアントと呼ばれる。例えば、いくつかの実施形態では、遺伝子配列は、機能的なタンパク質をコードし、その遺伝子を含むゲノムを有する種のメンバーの大部分に存在する野生型配列である。いくつかのそのような実施形態では、機能獲得型バリアントは、野生型遺伝子配列に対して１つ以上のヌクレオチドの相違を含む遺伝子配列であり得る。いくつかの実施形態では、機能獲得型バリアントは、対応する野生型（例えば、非コドン最適化）バージョンよりも改善された特性（例えば、分解に対する感受性が低い、例えば、ｍｉＲＮＡ媒介性分解に対する感受性が低い）を有し得る転写産物またはポリペプチドをコードするコドン最適化配列である。いくつかの実施形態では、機能喪失型バリアントは、野生型転写産物及び／またはポリペプチドと比較して何らかの形で欠陥がある（例えば、機能低下、非機能化）転写産物またはポリペプチドをもたらす１つ以上の変化を有する。
ＶＥＧＦ阻害剤：本明細書で使用される場合、「ＶＥＧＦ阻害剤」という用語は、「抗ＶＥＧＦタンパク質」という用語と交換可能に使用される。
前庭神経鞘腫（ＶＳ）が発生する一般的な領域を含む、ヒト耳の代表的な解剖学的構造の概略図である。 内耳道内のＶＳ（幅５ｍｍ未満）の位置をグラフ化した図である。この分析では、小型の内耳道内ＶＳ（内耳道内に完全に位置するもの）の大部分は、ＭＲＩスキャンからの測定値に基づくと、内耳道底に近い位置（例えば、蝸牛の基底部から数ミリメートル以内）に位置していた（Ｋｏｅｎ ２０２０、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。これらの３８個の腫瘍の発生源を内耳道の長さの外側、中央、内側３分の１に局限した場合、６０％が外側３分の１（内耳に隣接）内で発生していた（Ｋｏｅｎ ２０２０、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）；これらの腫瘍の分布を、内耳道の長さ（個人間の適度な内耳道の長さ［ｍｍ］のばらつきについて正規化）のパーセントの関数として分析すると、曲線下面積の約８５％が内耳道の外側（内耳に隣接）半分内にあった（Ｋｏｅｎ ２０２０、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。 内耳の概略図であり、左側の前庭系と右側の蝸牛（鼓室階、前庭階）との間の外リンパの流体連通を示す。米国仮特許出願第６３／１５２，８３２号（参照によりその内容全体は本明細書に組み込まれる）の図３Ａ～図３Ｂに示されるように、外リンパは薄紫色で示されている。Ａは、渦巻き状蝸牛の概略図である。図示した蝸牛の回転数は、マウス内耳を代表するものである。Ｂは、蝸牛の断面を示す概略図である。この概略図では、鼓室階と前庭階は外リンパで満たされ、中階は内リンパで満たされている（Ｔａｌａｅｉ ２０１９、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。 本明細書に記載の投与方法の概略図である。Ａは、本明細書に記載の送達デバイスの画像を含む（付録Ａ、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。図示されている送達デバイスは、正円窓膜を通じて注入流体を蝸牛内に投与するためのものであり、挿入深さをガイドするためのストッパーを備える。ストッパーは、米国仮特許出願第６３／１５２，８３２号（参照によりその内容全体は本明細書に組み込まれる）の図４Ａに緑色で示されている。Ｂは、卵円窓内の送達デバイスの、鼓室階から前庭階へ（蝸牛頂点のヘリコトレマでの連通を介して）、そしてアブミ骨底板に配置された通気部を通じて蝸牛外に出る注入流体の予想される流れを示す画像を含む（Ｔａｌｅｉ ２０１９、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。 Ａは、簡略化された内因性ＡＡＶ構築物の模式図である。Ｂは、簡略化された組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）構築物の模式図である。 本明細書に記載の例示的なｒＡＡＶ構築物の一連の概略図である。例示的なｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ構築物であり、とりわけ、自己切断ペプチドをコードする配列によって分離された免疫グロブリン重鎖可変ドメインと免疫グロブリン軽鎖可変ドメインとをコードする配列を含むものである。このような構築物は、本明細書では「ＶＨ／ＶＬ構築物」または「ｒＡＡＶ－ＶＨ／ＶＬ構築物」と呼ばれる。例示的なｒＡＡＶ－ＶＨ／ＶＬとしては、ラニビズマブをコードするｒＡＡＶ－ＶＨ／ＶＬであるｒＡＡＶ－ラニビズマブ及びｒＡＡＶ－ラニビズマブ－ＰＣが挙げられる。 本明細書に記載の例示的なｒＡＡＶ構築物の一連の概略図である。例示的なｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ構築物であり、とりわけ、免疫グロブリン重鎖可変ドメイン、任意選択の免疫グロブリン重鎖定常ドメイン、免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン、任意選択の免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン、及び緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）をコードする配列を含むものである。これらの構成要素のそれぞれは、自己切断ペプチドをコードする配列によって分離され得る。そのような構築物は、「ＡＢＧＦＰ構築物」または「ｒＡＡＶ－ＡＢＧＦＰ構築物」と呼ばれ得る。例示的なｒＡＡＶ－ＡＢＧＦＰとしては、ラニビズマブまたはベバシズマブをコードするｒＡＡＶ－ＡＢＧＦＰであるｒＡＡＶ－ラニビズマブ－ＧＦＰ及びｒＡＡＶ－ベバシズマブ－ＧＦＰが挙げられる。 本明細書に記載の例示的なｒＡＡＶ構築物の一連の概略図である。例示的なｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ構築物であり、とりわけ、免疫グロブリン重鎖（免疫グロブリン重鎖可変ドメイン及び免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む）と免疫グロブリン軽鎖（免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン及び免疫グロブリン軽鎖定常ドメインを含む）とをコードする配列を含み、その鎖が自己切断ペプチドをコードする配列によって分離されるものである。そのような構築物は、本明細書では「ＡＢ構築物」または「ｒＡＡＶ－ＡＢ構築物」と呼ばれる。例示的なｒＡＡＶ－ＡＢとしては、ベバシズマブをコードするｒＡＡＶ－ＡＢであるｒＡＡＶ－ベバシズマブ及びｒＡＡＶ－ベバシズマブ－ＰＣが挙げられる。 本明細書に記載の例示的なｒＡＡＶ構築物の一連の概略図である。例示的なｒＡＡＶ構築物であり、とりわけ、ＶＥＧＦ受容体細胞外ドメイン１、ＶＥＧＦ受容体細胞外ドメイン２、及びヒト免疫グロブリンγ（ＩｇＧ）Ｆｃの一部をコードする配列を含むものである。そのような構築物は、「ＶＥＧＦ ＴＲＡＰ構築物」または「ｒＡＡＶ－ＴＲＡＰ構築物」と呼ばれ得る。例示的なｒＡＡＶ－ＴＲＡＰとしては、アフリベルセプトをコードするｒＡＡＶ－ＴＲＡＰであるｒＡＡＶ－アフリベルセプト及びｒＡＡＶ－アフリベルセプト－ＰＣが挙げられる。 本明細書に記載の例示的なｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ構築物のトランスフェクションまたは形質導入を用いた、異なる抗ＶＥＧＦタンパク質、ラニビズマブ及びベバシズマブのＨＥＫ細胞発現を示すウェスタンブロットを含む。レーンは図の上部に沿って記されており、予測されたタンパク質サイズは図の左側に記されている。レーン２～８は還元タンパク質を含み、レーン１０～１６は非還元タンパク質を含む。レーン１：染色済みのＰａｇｅＲｕｌｅｒ（商標）タンパク質ラダー。レーン２：非トランスフェクト／陰性対照。レーン３：ｒＡＡＶ－ベバシズマブ－ＰＣ構築物によるトランスフェクション。レーン４：ｒＡＡＶ－ラニビズマブ－ＧＦＰ構築物によるトランスフェクション。レーン５：ｒＡＡＶ－ラニビズマブ－ＰＣ構築物によるトランスフェクション。レーン６：感染多重度（ＭＯＩ）７．５×１０４でのｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＰＣ粒子による形質導入。レーン７：２．２×１０５のＭＯＩでのｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＰＣ粒子による形質導入。レーン８：５．５×１０５のＭＯＩでのｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＰＣ粒子による形質導入。レーン９：染色済みのＰａｇｅＲｕｌｅｒ（商標）タンパク質ラダー。レーン１０：非トランスフェクト／陰性対照。レーン１１：ｒＡＡＶ－ベバシズマブ－ＰＣ構築物によるトランスフェクション。レーン１２：ｒＡＡＶ－ラニビズマブ－ＧＦＰ構築物によるトランスフェクション。レーン１３：ｒＡＡＶ－ラニビズマブ－ＰＣ構築物によるトランスフェクション。レーン１４：７．５×１０４のＭＯＩでのｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＰＣ粒子による形質導入。レーン１５：２．２×１０５のＭＯＩでのｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＰＣ粒子による形質導入。レーン１６：５．５×１０５のＭＯＩでのｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＰＣ粒子による形質導入。 Ｏｃｔｅｔ（登録商標）ＨＴＸバイオセンサー装置により、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）解析ソフトウェア、Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ ＨＴ１０．０を使用して測定した、本明細書に記載の特定の抗ＶＥＧＦタンパク質の親和性を示す一連のグラフである。結合剤として組換えヒトＶＥＧＦを用いた緩衝液中での対照マウス抗ヒトＶＥＧＦモノクローナル抗体（抗ｈＶＥＧＦ ＭｍＡｂ）の親和性を示すグラフである。このアッセイでは、抗ｈＶＥＧＦ ＭｍＡｂを１００μｇ／ｍＬでＣＭ中で調製し、次に１×キネティクス緩衝液で最終濃度１０μｇ／ｍＬに希釈した。 Ｏｃｔｅｔ（登録商標）ＨＴＸバイオセンサー装置により、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）解析ソフトウェア、Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ ＨＴ１０．０を使用して測定した、本明細書に記載の特定の抗ＶＥＧＦタンパク質の親和性を示す一連のグラフである。結合剤として組換えヒトＶＥＧＦを使用して、配列番号９０に対応するｒＡＡＶ－ラニビズマブ－ＰＣ構築物をトランスフェクトしたＨＥＫ細胞からの培養培地中の分泌型タンパク質の親和性を示すグラフである。 Ｏｃｔｅｔ（登録商標）ＨＴＸバイオセンサー装置により、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）解析ソフトウェア、Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ ＨＴ１０．０を使用して測定した、本明細書に記載の特定の抗ＶＥＧＦタンパク質の親和性を示す一連のグラフである。結合剤として組換えヒトＶＥＧＦを使用して、配列番号９３に対応するｒＡＡＶ－ベバシズマブ－ＰＣ構築物をトランスフェクトしたＨＥＫ細胞からの培養培地中の分泌型タンパク質の親和性を示すグラフである。 Ｏｃｔｅｔ（登録商標）ＨＴＸバイオセンサー装置により、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）解析ソフトウェア、Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ ＨＴ１０．０を使用して測定した、本明細書に記載の特定の抗ＶＥＧＦタンパク質の親和性を示す一連のグラフである。結合剤として組換えヒトＶＥＧＦをトランスフェクトしなかったＨＥＫ細胞からの対照培養培地（ＣＭ）中の分泌型タンパク質の親和性を示すグラフである。 ＡＡＶ進化系統の系統発生及び祖先配列再構築のグラフ図である。樹状図は、ＡＡＶの進化経路をモデル化しており、ＡＡＶ４及び５血清型の初期の種分化が、Ａｎｃ８０という単一のノードに並行している。実線付きの白丸は、祖先配列再構築によって再構築された進化的中間体を表す。点線付きの白丸は、ＡＡＶＡｎｃ８０バリアント周辺の確率的配列空間のライブラリを表す。サブクレードは明確さのために折り畳まれている（Ｚｉｎｎ ２０１５、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。 ＡＡＶＡｎｃ８０カプシド表面の構造モデリングの概略図である。ビリオンの外部（上）及び内部（下）を視覚化するＶＰ１三量体でのＡＡＶ２（左）とＡＡＶ８（右）とを比較したアミノ酸変化の構造マッピングである。ＡＡＶＡｎｃ８０にはいくつかの異なる残基があり、Ａｎｃ８０Ｌｉｂにはいくつかの曖昧な、したがってダイモルフィックな残基がある（Ｚｉｎｎ ２０１５、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。米国仮特許出願第６３／１５２，８３２号（参照によりその内容全体は本明細書に組み込まれる）の図１０に示すように、異なる残基は青で示され、曖昧でダイモルフィックな残基は赤で示される。 新生児マウスにおける正円窓膜送達による天然に存在するＡＡＶ血清型及びＡＡＶＡｎｃ８０バリアントのｉｎ ｖｉｖｏでの蝸牛形質導入を表す代表的な蛍光画像を含む。マウス（Ｐ１）に、高感度ＧＦＰ（ｅＧＦＰ）をコードする構築物を含む異なるＡＡＶカプシド（ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ８、ＡＡＶ６［図示せず］、及びＡＡＶＡｎｃ８０）を注入した。ファロイジンはアクチンを標識し、米国仮特許出願第６３／１５２，８３２号（参照によりその内容全体は本明細書に組み込まれる）の図１１に赤で示されている。ｅＧＦＰ陽性内有毛細胞（ＩＨＣ）及び外有毛細胞（ＯＨＣ）の定量化により、高感度ＧＦＰをコードする構築物を含むｒＡＡＶＡｎｃ８０（ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ｅＧＦＰ）の送達後、基底部から頂部までおよそ９０～１００％の形質導入効率が示された（Ｌａｎｄｅｇｇｅｒ ２０１７、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。 新生児マウスにおける正円窓膜送達によるｒＡＡＶＡｎｃ８０粒子のｉｎ ｖｉｖｏでの前庭形質導入を表す代表的な蛍光画像を含む。マウス（Ｐ１）に、ＡＡＶＡｎｃ８０－ｅＧＦＰ及びファロイジン染色標識アクチンを注入した。ｅＧＦＰは緑で示され、ファロイジンは米国仮特許出願第６３／１５２，８３２号（参照によりその内容全体は本明細書に組み込まれる）の図１２において赤で示されている。形質導入は、卵形嚢のＩ型及びＩＩ型有毛細胞の両方（パネル（Ａ））、ならびに半規管稜の細胞（パネル（Ｂ））で観察された（Ｌａｎｄｅｇｇｅｒ ２０１７、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。 成体マウスにおける後半規管送達によるｒＡＡＶＡｎｃ８０粒子のｉｎ ｖｉｖｏでの蝸牛形質導入を表す代表的な蛍光画像を含む。マウス（７週齢）にｒＡＡＶＡｎｃ８０－ｅＧＦＰ粒子を注入した。パネル（Ａ）は、注入した蝸牛の中央蝸牛軸の断面の低倍率図を含み、パネルで（Ｉ）と表されるＩＨＣ、パネルで（Ｏ）と表されるＯＨＣ、パネルで（ＳＬ）と表されるラセン板縁、パネルで（ＲＭ）と表されるライスナー膜、及びパネルで（ＳＧ）と表されるラセン神経節における、ｅＧＦＰシグナルを示す。パネル（Ｂ１）及びパネル（Ｂ２）は、蝸牛の頂部領域（パネル（Ｂ１））及び中間部領域（パネル（Ｂ２））のコルチ器の高倍率図を含む。ｅＧＦＰ陽性細胞の定量化により、ＩＨＣのおよそ１００％が形質導入されたのに対し、ＯＨＣの形質導入は頂部から基底部に向かって減少していることが示された。パネル（Ｃ）は、ｅＧＦＰシグナルがラセン神経節の細胞のサブセット（ニューロン及びサテライトグリア細胞）で検出されたことを示す低倍率図である（Ｓｕｚｕｋｉ ２０１７、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。この図に提供されたパネルのカラー画像は、米国仮特許出願第６３／１５２，８３２号（参照によりその内容全体は本明細書に組み込まれる）の図１３に示されている。 成体マウスにおける後半規管送達によるｒＡＡＶＡｎｃ８０－ｅＧＦＰのｉｎ ｖｉｖｏでの前庭形質導入を表す代表的な蛍光画像を含む。マウス（７週齢）にｒＡＡＶＡｎｃ８０－ｅＧＦＰを注入した。パネル（Ａ１）及びパネル（Ａ２）は、前庭の断面の低倍率図を含み、卵形嚢及び球形嚢の両方におけるｅＧＦＰシグナルを示す。パネル（Ｂ）及びパネル（Ｃ）は、前庭の末端器官（パネル（Ｂ）：卵形嚢；パネル（Ｃ）：膨大部稜）の断面の高倍率図を含み、支持細胞及び有毛細胞でのｅＧＦＰ発現を示す。白塗り矢印は、形質導入された支持細胞の例を示す（有毛細胞は図示せず）（Ｓｕｚｕｋｉ ２０１７、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。この図に提供されたパネルのカラー画像は、米国仮特許出願第６３／１５２，８３２号（参照によりその内容全体は本明細書に組み込まれる）の図１４に示されている。 成体マウスにおける耳道の開窓を伴った正円窓膜送達を介した天然に存在するＡＡＶ２血清型のｉｎ ｖｉｖｏでの蝸牛及び前庭形質導入をｒＡＡＶＡｎｃ８０バリアントと比較して表す代表的な蛍光画像を含む。マウス（４週齢）に、ｅＧＦＰをコードする異なるＡＡＶ粒子（ＡＡＶ２及びｒＡＡＶＡｎｃ８０を図示し；ＡＡＶ１、ＡＡＶ８、及びＡＡＶ９は図示せず）を注入した。ＡＡＶ２と比較して、ｒＡＡＶＡｎｃ８０媒介性形質導入は、同等のＩＨＣ及びＯＨＣ形質導入率を示した（パネル（Ａ１）とパネル（Ａ２））が、より広い形質導入を、ラセン神経節細胞（パネル（Ｂ１）とパネル（Ｂ２））及び球形嚢の有毛細胞（パネル（Ｃ１）とパネル（Ｃ２）：全体；パネル（Ｄ１）とパネル（Ｄ２）：一部）で示した（Ｏｍｉｃｈｉ ２０２０、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。この図に提供されたパネルのカラー画像は、米国仮特許出願第６３／１５２，８３２号（参照によりその内容全体は本明細書に組み込まれる）の図１５に示されている。 本明細書に開示される抗ＶＥＧＦタンパク質を含むｒＡＡＶＡｎｃ８０粒子（ｒＡＡＶＡｎｃ８０－抗ＶＥＧＦ）によるＷＴ新生児（Ｐ２）マウスの蝸牛外植片の形質導入後の、蝸牛外植片におけるＲＮＡ発現及び蝸牛外植片培地における分泌型タンパク質発現のグラフ図である。ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＰＣ粒子（配列番号９３に記載の構築物）またはｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ粒子（配列番号９０に記載の構築物）によりＷＴマウスの蝸牛外植片の細胞が形質導入され、抗ＶＥＧＦタンパク質をコードするｍＲＮＡの発現及び分泌を駆動した。Ａは、ＲＮＡ発現分析を表し、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣまたはｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＰＣをそれぞれ与えられた外植片の細胞におけるラニビズマブ及びベバシズマブをコードするｍＲＮＡの発現を示す。ビヒクルを与えられた外植片では発現は検出されなかった。結果は、平均＋ＳＤとして示される。Ｂは、様々な濃度（１．４Ｅ１０、２．８Ｅ１０、または４．２Ｅ１０ｖｇ）のｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ粒子を与えられた外植片の培地で検出されたラニビズマブのメソスケールディスカバリー（ＭＳＤ）法による定量化を表す。ラニビズマブは、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ粒子を与えられた外植片の培地で検出されたが、ビヒクルを与えられた外植片では検出されなかった。白丸は個々の試料（ｎ＝４／群）におけるラニビズマブ濃度を示し、バーは平均を示す。 本明細書に記載のｒＡＡＶＡｎｃ８０－抗ＶＥＧＦ粒子により形質導入されたＣＢＡ／ＣａＪマウスの内耳を示す、第１の試験（本明細書では「試験１」と呼ぶ）の代表的な低倍率蛍光染色画像を含む。画像は、１．４Ｅ１０ｖｇ／蝸牛でｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ（配列番号９０に記載の構築物）粒子、１．２Ｅ１０ｖｇ／蝸牛でｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＰＣ（配列番号９３に記載の構築物）粒子、またはビヒクル対照のいずれかを蝸牛内投与した後の、顕微鏡下切開した蝸牛の中間回転の代表的な蝸牛の顕微鏡写真である。抗ＶＥＧＦタンパク質発現を検出するために、感覚上皮を以下に対する一次抗体で免疫染色した：有毛細胞マーカーであるファロイジン（これらの顕微鏡写真においてラセン板縁のわずかな非特異的標識も示す）及びラニビズマブ（「抗Ｆａｂ染色」）。米国仮特許出願第６３／１５２，８３２号（参照によりその内容全体は本明細書に組み込まれる）の図１７に示すように、ファロイジンは赤で示され、ラニビズマブは緑で示されている。ラニビズマブとベバシズマブが共通で有するタンパク質のＦａｂセグメントを検出するために、ヒト抗ラニビズマブ抗体を使用した。ＩＨＣ、及びＯＨＣの外側にある支持細胞で明確な標識が検出された。蝸牛の神経線維領域ではバックグラウンド染色が検出され（例えば、粒子注入蝸牛とビヒクル注入蝸牛の両方で神経線維の標識が明らかであった）、この特定領域での信頼できる発現評価ができなかった。 試験１からの代表的な蛍光染色画像を含み、１．４Ｅ１０ｖｇ／蝸牛でｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ（配列番号９０に記載の構築物）粒子、または１．２Ｅ１０ｖｇ／蝸牛でｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＰＣ（配列番号９３に記載の構築物）粒子により形質導入されたＣＢＡ／ＣａＪマウスの内耳を、非注入及び／またはビヒクル注入対照と比較して表す。ＩＨＣ及びＯＨＣを抗ミオシンＶＩＩａ抗体で免疫染色し、公開されている蝸牛図（Ｖｉｂｅｒｇ ａｎｄ Ｃａｎｌｏｎ，２００４、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を用いて８、１６、及び３２ｋＨｚ領域で画像化した。対照の非注入耳の画像は、対照ビヒクル注入耳の対側の耳から得たものである。スケールバー＝２０μｍ。この図に提供されたパネルのカラー画像は、米国仮特許出願第６３／１５２，８３２号（参照によりその内容全体は本明細書に組み込まれる）の図１８に示されている。 試験１からの代表的な共焦点画像を含み、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ（配列番号９０に記載の構築物）により形質導入されたＣＢＡ／ＣａＪマウスの集団の形質導入された有毛細胞及びニューロンを表す。パネル（Ａ）及びパネル（Ｃ）は、抗Ｆａｂ抗体で免疫染色された形質導入細胞を表す。パネル（Ｂ）及びパネル（Ｄ）は、抗ニューロフィラメント２００で免疫染色された神経細胞突起を表す。ビヒクル注入試料（パネル（Ａ）及び（Ｂ））ならびにｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ粒子注入試料（パネル（Ｃ）及び（Ｄ））はいずれも、内溝領域に、形質導入された神経細胞突起があるが、コルチ器にはない。ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ粒子注入試料のみが、形質導入された内有毛細胞及び外有毛細胞を有する。スケールバー＝２０μｍ。この図に提供されたパネルのカラー画像は、米国仮特許出願第６３／１５２，８３２号（参照によりその内容全体は本明細書に組み込まれる）の図１９に示されている。 試験１からのグラフ図であり、１．４Ｅ１０ｖｇ／蝸牛でｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ（配列番号９０に記載の構築物）粒子、または１．２Ｅ１０ｖｇ／蝸牛でｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＰＣ（配列番号９３に記載の構築物）粒子により形質導入されたＣＢＡ／ＣａＪマウスのＩＨＣ及びＯＨＣ数のヒストグラムを、非注入及び／またはビヒクル注入対照と比較して表す。この分析で利用されたデータセットの代表的な集団は図１８に示されている。Ａは、非注入対照、ビヒクル注入対照、及び被験物質についてのＯＨＣ数を表す。Ｂは、非注入対照、ビヒクル注入対照、及び被験物質についてのＩＨＣ数を表す。Ａ及びＢの両方の数を、治療群及び周波数領域の関数として定量化及びグラフ化した。各群のＮは、９匹または１０匹のいずれかであり、データは、平均＋／－平均の標準誤差（Ｓ．Ｅ．Ｍ）として示される。対照の非注入耳の定量は、対照のビヒクル注入耳の対側の耳から行った。ブラケットを除いて、非注入耳と比較して＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、及び＊＊＊ｐ＜０．００１を得た。ｐ値は、二元配置ＡＮＯＶＡと、その後の事後Ｔｕｋｅｙ検定によって決定した。 有毛細胞（ＨＣ）及び非有毛細胞（非ＨＣ）の形質導入頻度のグラフ図である。この分析で利用されたデータセットの代表的な集団は図１８に示されている。Ａは、非注入対照、ビヒクル注入対照、及び被験物質についての有毛細胞（ＨＣ）数を表す。Ｂは、非注入対照、ビヒクル注入対照、及び被験物質についての非有毛細胞（非ＨＣ）数を表す。データは試験１からのものであり、１．４Ｅ１０ｖｇ／蝸牛でｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ（配列番号９０に記載の構築物）粒子、または１．２Ｅ１０ｖｇ／蝸牛でｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＰＣ（配列番号９３に記載の構築物）粒子により形質導入されたＣＢＡ／ＣａＪマウスの集団の代表値である。形質導入された（Ｆａｂ＋）有毛細胞（Ａ）及び非有毛細胞（Ｂ）の定量値は、両方の性別からのデータを組み合わせて、治療群及び周波数領域の関数としてグラフ化される。各群のＮは、９匹または１０匹のいずれかであり、データは、平均＋／－平均の標準誤差（Ｓ．Ｅ．Ｍ）として示される。対照の非注入耳の定量値は、対照ビヒクル注入耳の対側の耳から得たものである。試料間にばらつきがあるため、統計的な比較は行わなかった。 試験２からの代表的な高倍率画像を含み、１．４Ｅ１０ｖｇ／蝸牛でのｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ（配列番号９０に記載の構築物）粒子による蝸牛の形質導入の蛍光染色を表す。抗ラニビズマブ（ｍＡｂ）標識を示す注入された蝸牛の３つの領域からの蝸牛の顕微鏡写真（６３×）を示す。各列は注入されたマウスから取得した共焦点画像スタックによる最大投影を表し、各行は蝸牛の頂部（８ｋＨｚ）、中間部（１６ｋＨｚ）、及び基底部（３２ｋＨｚ）の周波数領域を表す。各行の右側には、免疫染色で陽性の初代細胞タイプが記載されている。蝸牛の神経線維領域ではかなりのバックグラウンド染色が検出され（例えば、注入蝸牛と非注入蝸牛［非注入蝸牛は図示せず］の両方で神経線維の標識が明らかであった）、この特定領域での信頼できる発現評価ができなかった。抗ラニビズマブが緑色で標識されたこの図に提供されたパネルのカラー画像は、米国仮特許出願第６３／１５２，８３２号（参照によりその内容全体は本明細書に組み込まれる）の図２２に示されている。 試験２からの血清中の分泌型抗ＶＥＧＦタンパク質の検出及び定量化のグラフ図であり、１．４Ｅ１０ｖｇ／蝸牛でのｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ（配列番号９０に記載の構築物）粒子の蝸牛内送達後のものである。抗ＶＥＧＦタンパク質が、ビヒクル注入マウスの血清に比べてｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ粒子注入マウスの血清において高い濃度であることが電気化学発光を用いて検出された。白丸は個々の試料（ビヒクル、ｎ＝７；ラニビズマブ、ｎ＝９）における抗ＶＥＧＦタンパク質濃度を示し、バーは平均を示す。 試験１からのマウス脳脊髄液（ＣＳＦ）中の分泌型抗ＶＥＧＦタンパク質の検出及び定量化のグラフ図であり、１．４Ｅ１０ｖｇ／蝸牛でのｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ（配列番号９０に記載の構築物）粒子、または１．２Ｅ１０ｖｇ／蝸牛でのｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＰＣ（配列番号９３に記載の構築物）粒子の蝸牛内送達後のものである。抗ＶＥＧＦタンパク質（ラニビズマブまたはベバシズマブ）は、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－抗ＶＥＧＦ粒子を投与したマウスのＣＳＦにおいてＭＳＤを用いて検出されたが、ビヒクルを投与したマウスのＣＳＦにおいては検出されなかった。白丸は個々の試料（ビヒクル、ｎ＝１０；ラニビズマブ、ｎ＝９；ベバシズマブ、ｎ＝４）における抗ＶＥＧＦタンパク質濃度を示し、バーは平均を表す。 １．４Ｅ１０ｖｇ／蝸牛でのｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ（配列番号９０に記載の構築物）粒子、または１．２Ｅ１０ｖｇ／蝸牛でのｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＰＣ（配列番号９３に記載の構築物）粒子の蝸牛内投与前後の試験１マウスの聴性脳幹反応（ＡＢＲ）閾値のグラフ図である。平均ＡＢＲ閾値は、ビヒクル注入マウス及びｒＡＡＶＡｎｃ８０粒子注入マウスを含む、蝸牛内手術後の全群で上昇した。平均ＡＢＲ閾値は、ｒＡＡＶＡｎｃ８０粒子を注入した耳及びビヒクルを注入した耳において、手術前に測定したベースラインＡＢＲと比較して上昇した。エラーバーは標準偏差を表す。 ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ粒子（配列番号９０に記載の構築物）の蝸牛内送達後の試験２マウスの歪成分耳音響放射（ＤＰＯＡＥ）及びＡＢＲ閾値のグラフ図である。蝸牛及び聴力機能（ＡがＤＰＯＡＥ、ＢがＡＢＲをそれぞれ示す）は、例示的なｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ粒子を投与されたマウスにおいて、非注入マウスと比較して正常な平均閾値を示した。＊は、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ粒子を投与された１匹のマウスが機能試験中に死亡したため、この動物ではＤＰＯＡＥ及びＣｈｉｒｐ音誘発ＡＢＲのみが死亡前に測定され、したがって、８、１６、及び３２ｋＨｚのＡＢＲではＮ＝２であったことを示す。エラーバーは標準偏差を表す。 ＶＳまでの距離と比較した抗ＶＥＧＦタンパク質濃度（ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ粒子（配列番号９１に記載の構築物）を与えられたＮＨＰの測定濃度を使用してモデル化した）を表す概略説明図及びグラフモデルを提供する。Ａは、計算モデル化アプローチの概略図である：９０μＬ球内の一定の抗ＶＥＧＦタンパク質の供給源の三次元拡散を、球の表面、例えば、鼓室階／底（ｆｕｎｄｕｓ）の境界からの距離（ｍｍ）に関連して表すものである。底から腫瘍（５ｍｍ未満の幅）の内側境界及び外側境界までの距離は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＫｏｅｎ ２０２０（直近では図２）から得られたデータより推定した。Ｂは、外リンパの抗ＶＥＧＦタンパク質濃度は拡散距離とともに減少するが、内耳道内の腫瘍の近傍では報告された生物学的に活性な範囲（Ｙ軸で１０～１００％、Ｘ軸で０～１１ｍｍの間の領域）内にとどまることを示す保守的なモデル化アプローチを表す。推定された抗ＶＥＧＦタンパク質濃度は、拡散係数の選択によって異なり、報告された３つの拡散係数に基づく範囲（実点による網掛け領域）として表される。網掛けを含むＢのカラー画像は、米国仮特許出願第６３／１５２，８３２号（参照によりその内容全体は本明細書に組み込まれる）の図２７Ｂに提供される。生物学的に活性な範囲、及び予測される治療関連範囲は、約２８ｎｇ／ｍＬと推定され；ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞増殖アッセイにおいてＶＥＧＦ－Ａの生物学的活性を５０％阻害するのに必要な濃度は、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ ２０１７（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されているように１１～２７ｎｇ／ｍＬである。 内有毛細胞（ＩＨＣ）の形質導入事象を、アブミ骨底板の通気部を伴ってＡＡＶＡｎｃ８０－ｅＧＦＰを蝸牛内（ＲＷＭ）に投与された７匹のＮＨＰ（片側６匹、両側１匹）と、アブミ骨底板の通気部なしでＡＡＶＡｎｃ８０－ｅＧＦＰを蝸牛内（ＲＷＭ）に投与された２匹のＮＨＰ（両側）について示す。蝸牛を、３週間の生存期間後にＩＨＣでのｅＧＦＰ発現について分析した。マカクのＩＨＣでは、高用量（ＮＨＰのＭ６～Ｍ９で見られる）で約８０％～１００％の形質導入効率が達成でき、低用量（ＮＨＰのＭ１～Ｍ３で見られる）でｅＧＦＰ発現の頂部から基底部への勾配が観察された。アブミ骨底板の通気部なしで手術を受けた動物では、蝸牛の頂部７５％の領域で散発的な形質導入が観察されただけであった。 本開示の態様による、内耳に流体を送達するためのデバイスの斜視図を示す。 本開示の態様による、曲針サブアセンブリの側面図を示す。 本開示の態様による、内耳に流体を送達するためのデバイスの斜視図を示す。 本開示の態様による、デバイスの遠位端に結合した曲針サブアセンブリの斜視図を示す。
特定の実施形態では、本開示は、新生血管形成に関連する耳科疾患を有する対象の治療を意図したｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ粒子に関する。特定の実施形態では、新生血管形成に関連するそのような耳科疾患は、前庭神経鞘腫（ＶＳ）、または内耳道内の前庭蝸牛神経周囲の細胞で形成される良性腫瘍である。特定の実施形態では、初期のＶＳに関連する一般的な症状として、難聴、耳鳴り、及びめまいが挙げられ、腫瘍が成長し続けると、脳幹が圧迫されるおそれがあり、より深刻な病的状態、まれなケースでは死亡につながることが大いに懸念される。
特定の実施形態では、本開示は、例えば本明細書に記載の内耳障害を有する対象の治療を意図したｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ粒子に関する。いくつかの実施形態では、内耳障害は、聴神経腫瘍、前庭神経鞘腫、または神経線維腫症ＩＩ型を含む。いくつかの実施形態では、内耳障害は、聴神経腫瘍であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、内耳障害は、前庭神経鞘腫であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、内耳障害は、神経線維腫症ＩＩ型であるか、またはそれを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、前庭神経鞘腫を有する対象の治療を意図したｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ粒子に関する。
特定の場合では、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）の阻害剤による治療は、現在の標準治療である外科的切除及び／または放射線治療などの侵襲的な代替手段を用いるのではなく、進行性のＶＳ腫瘍を弱める可能性をもたらす。特定の実施形態では、臨床データは、有効性の観点から、ＶＳ腫瘍を有する患者における全身投与ＶＥＧＦ阻害剤の使用を裏付けるが、ＶＥＧＦ阻害剤の長期的な全身投与は、重大な安全上の懸念が伴う。特定の実施形態では、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦは、抗ＶＥＧＦタンパク質の局所的な発現及び分泌を促進するために内耳への遺伝子導入によってＶＳを有する個体を治療するように設計及び意図される。特定の実施形態では、目的は、ＶＳ部位で治療用ＶＥＧＦ阻害剤（例えば、抗ＶＥＧＦタンパク質、例えば、ベバシズマブ、ラニビズマブ、及び／またはアフリベルセプト）を局所的に曝露し、それにより全身曝露を制限し、全身投与に伴う副作用の可能性を最小化することである。
特定の実施形態では、内耳の蝸牛及び前庭細胞は、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦによって形質導入され、抗ＶＥＧＦタンパク質を、ＶＳ腫瘍が位置する前庭蝸牛神経の間質及び神経周囲腔と拡散的に連続した蝸牛流体である外リンパに分泌する。特定の実施形態では、内耳道に沿った拡散に対する障壁がないことにより、外リンパで発現した治療用抗ＶＥＧＦタンパク質が神経間質内の意図するＶＳ標的に到達するための潜在的な経路が提供される。特定の実施形態では、蝸牛軸の形質導入細胞は、所望の抗ＶＥＧＦタンパク質が神経の間質液に直接分泌されるように配置される。
特定の実施形態では、本明細書に記載の組成物（例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦを含む）の漸増用量が、片側散発性進行性ＶＳを有する個体（例えば、それを必要とする哺乳動物、例えば、ヒト患者）に対して片側蝸牛内注射を介して投与される。特定の実施形態では、これらの腫瘍の成長速度は可変であり、一部のＶＳ腫瘍は進行しない。特定の実施形態では、個体（例えば、哺乳動物、例えば、ヒト）は、連続した画像評価で安定した腫瘍の証拠を有する個体を除いた、進行の明確な証拠を示す腫瘍を有する個体に限定され得る。特定の実施形態では、これらの腫瘍の成長速度は可変であり、一部のＶＳ腫瘍は進行しない。特定の実施形態では、個体（例えば、それを必要とする哺乳動物、例えば、ヒト患者）は、連続した画像評価で腫瘍体積が増加している証拠を有する個体を除いた、進行していないことの明確な証拠を示す腫瘍を有する個体に限定され得る。
特定の実施形態では、より大きな腫瘍（複数可）（例えば、脳幹を圧迫する可能性がより高い腫瘍）を有する個体（例えば、それを必要とする哺乳動物、例えば、ヒト患者）は、本明細書に記載の組成物による治療から除外されるが、それは、いくつかの実施形態では、これらの個体が、命に関わるおそれのある腫瘍関連続発症のリスクが高く、これを外科的切除及び放射線治療の現在の標準治療で回避できる可能性があるためである。特定の実施形態では、より大きな腫瘍（例えば、脳幹を圧迫する可能性がより高い腫瘍）を有する個体（例えば、それを必要とする哺乳動物、例えば、ヒト患者）は、本明細書に記載の組成物による治療の明確な対象となるが、それは、いくつかの実施形態では、これらの個体が、命に関わるおそれのある腫瘍関連続発症のリスクが高く、これを外科的切除及び放射線治療の現在の標準治療よりも侵襲性の低い方法で、及び／またはより効力が高く、もしくは同等の効力で本明細書に記載の組成物を使用して回避できる可能性があるためである。
特定の実施形態では、腫瘍サイズが脳幹に影響を与える可能性が低い、成長中の腫瘍を有する個体（例えば、哺乳動物、例えば、ヒト）は、必要に応じて将来の外科的切除及び／または放射線照射の候補のままでありながら、本明細書に記載の組成物による介入（例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ療法）から最大の利益を享受する可能性がある。特定の実施形態では、腫瘍サイズが脳幹に影響を与える可能性がある、成長中の腫瘍を有する個体（例えば、哺乳動物、例えば、ヒト）は、必要に応じて将来の外科的切除及び／または放射線照射の候補のままでありながら、本明細書に記載の組成物による介入（例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ療法）から最大の利益を享受する可能性がある。
特定の実施形態では、本明細書では、個体、例えば哺乳動物、例えばヒトの内耳に、（ａ）シグナルペプチドに作動可能に連結された抗体重鎖可変ドメインを含むポリペプチド及びシグナルペプチドに作動可能に連結された抗体軽鎖可変ドメインを含むポリペプチド；または（ｂ）シグナルペプチドに作動可能に連結された抗原結合抗体断片（例えば、ＦａｂまたはｓｃＦｖ）を含むポリペプチド、をコードする構築物のヌクレオチド配列を含むｒＡＡＶ粒子の有効量、例えば、治療有効量を導入することを含む方法が提供される。
特定の実施形態では、本明細書に記載の組成物（例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ）は、耳科外科医によって管理された無菌条件下で手術室で投与され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書では、個体、例えば、それを必要とする哺乳動物、例えば、ヒトの内耳及び／または内耳道における、抗体のレベルを増加させる方法であって、哺乳動物の内耳に、（ａ）シグナルペプチドに作動可能に連結された抗体重鎖可変ドメインを含むポリペプチド及びシグナルペプチドに作動可能に連結された抗体軽鎖可変ドメインを含むポリペプチド；または（ｂ）シグナルペプチドに作動可能に連結された抗原結合抗体断片（例えば、ＦａｂまたはｓｃＦｖ）を含むポリペプチド、をコードするヌクレオチド配列を含むｒＡＡＶ粒子の有効量、例えば、治療有効量を導入することを含み、該導入が、個体、例えば哺乳動物、例えばヒトの内耳における抗体または抗原結合抗体断片のレベルの上昇をもたらす、方法が提供される。
いくつかの実施形態では、本開示は、個体、例えば、それを必要とする哺乳動物、例えば、ヒトの内耳障害を治療するための方法であって、哺乳動物の内耳に、（ａ）シグナルペプチドに作動可能に連結された抗体重鎖可変ドメインを含むポリペプチド及びシグナルペプチドに作動可能に連結された抗体軽鎖可変ドメインを含むポリペプチド；または（ｂ）シグナルペプチドに連結された抗原結合抗体断片を含むポリペプチド、をコードするヌクレオチド配列を含むｒＡＡＶ粒子の有効量、例えば、治療有効量を導入することを含み、該導入が、哺乳動物の内耳障害の治療をもたらす、方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本明細書では、個体、例えば、それを必要とする哺乳動物、例えば、ヒトの内耳におけるＶＥＧＦ活性を低下させる方法であって、哺乳動物の内耳に、（ａ）シグナルペプチドに作動可能に連結された抗体重鎖可変ドメインを含むポリペプチド及びシグナルペプチドに作動可能に連結された抗体軽鎖可変ドメインを含むポリペプチド；または（ｂ）シグナルペプチドに作動可能に連結された抗原結合抗体断片（例えば、ＦａｂまたはｓｃＦｖ）を含むポリペプチド、をコードするヌクレオチド配列を含むｒＡＡＶ粒子の有効量、例えば、治療有効量を導入すること［ここで、（ａ）のポリペプチドは、ＶＥＧＦに特異的に結合してＶＥＧＦ活性を低下させる抗体をコードし、（ｂ）のポリペプチドは、ＶＥＧＦに特異的に結合してＶＥＧＦ活性を低下させる抗原結合抗体断片をコードする］を含み、該導入が、個体、例えば、哺乳動物またはヒトの内耳におけるＶＥＧＦ活性の低下をもたらす、方法が提供される。
いくつかの実施形態では、本明細書では、個体（例えば、哺乳動物、例えば、ヒト）の内耳における新生血管形成に関連する耳科疾患、例えば、聴神経腫瘍、ＶＳ、または神経線維腫症ＩＩ型を治療する方法であって、個体の内耳に、（ａ）シグナルペプチドに作動可能に連結された抗体重鎖可変ドメインを含むポリペプチド及びシグナルペプチドに作動可能に連結された抗体軽鎖可変ドメインを含むポリペプチド；または（ｂ）シグナルペプチドに作動可能に連結された抗原結合抗体断片（例えば、ＦａｂまたはｓｃＦｖ）を含むポリペプチド、をコードするヌクレオチド配列を含むｒＡＡＶ粒子の有効量（例えば、治療有効量）を導入すること［ここで、（ａ）のポリペプチドは、ＶＥＧＦに特異的に結合してＶＥＧＦ活性を低下させる抗体をコードし、（ｂ）のポリペプチドは、ＶＥＧＦに特異的に結合してＶＥＧＦ活性を低下させる抗原結合抗体断片をコードする］を含み、該導入が、新生血管形成を伴う耳科疾患、例えば、個体の内耳における聴神経腫瘍またはＶＳの治療をもたらす、方法が提供される。
いくつかの実施形態では、本明細書では、シグナルペプチドに作動可能に連結された可溶性ＶＥＧＦ受容体をコードするヌクレオチド配列を含むｒＡＡＶ粒子の有効量（例えば、治療有効量）を個体（例えば、哺乳動物、例えば、ヒト）の内耳に導入することを含む方法が提供される。
いくつかの実施形態では、本開示は、それを必要とする個体（例えば、哺乳動物、例えば、ヒト）の内耳における可溶性ＶＥＧＦ受容体のレベルを増加させる方法であって、個体の内耳に、シグナルペプチドに作動可能に連結された可溶性ＶＥＧＦ受容体をコードするヌクレオチド配列を含むｒＡＡＶ粒子の有効量（例えば、治療有効量）を導入することを含み、該導入が、個体の内耳における可溶性ＶＥＧＦ受容体のレベルの増加をもたらす、方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本明細書では、それを必要とする個体（例えば、哺乳動物、例えば、ヒト）の内耳障害を治療するための方法であって、シグナルペプチドに作動可能に連結された可溶性ＶＥＧＦ受容体の少なくとも一部をコードするヌクレオチド配列を含むｒＡＡＶ粒子の有効量（例えば、治療有効量）を個体の内耳に導入することを含み、該導入が、個体の内耳障害の治療をもたらす、方法が提供される。
いくつかの実施形態では、本明細書では、それを必要とする個体（例えば、哺乳動物、例えば、ヒト）の内耳におけるＶＥＧＦ活性を低下させる方法であって、シグナルペプチドに作動可能に連結された可溶性ＶＥＧＦ受容体の少なくとも一部をコードするヌクレオチド配列を含むｒＡＡＶ粒子の有効量（例えば、治療有効量）を個体の内耳に導入することを含み、該導入が、個体の内耳におけるＶＥＧＦ活性の低下をもたらす、方法が提供される。
いくつかの実施形態では、本明細書では、個体（例えば、哺乳動物、例えば、ヒト）の内耳（例えば、内耳道を含む）における新生血管形成、聴神経腫瘍、ＶＳ、または神経線維腫症２型に関連する耳科疾患を治療する方法であって、シグナルペプチドに作動可能に連結されたＶＥＧＦ受容体の少なくとも一部をコードするヌクレオチド配列をコードするヌクレオチド配列を含むｒＡＡＶ粒子の有効量（例えば、治療有効量）を個体の内耳に導入することを含み、該導入が、個体の内耳における新生血管形成、聴神経腫瘍、ＶＳ、または神経線維腫症ＩＩ型に関連する耳科疾患の治療をもたらす、方法が提供される。
他の実施形態では、本開示はまた、本明細書に記載の任意のｒＡＡＶ粒子を含むキットも提供する。
組成物、キット、及び方法のさらなる非限定的な態様が本明細書に記載されており、これらは制限なく任意の組み合わせで使用することができる。
本開示は、特に、内耳道におけるＶＳ腫瘍環境に近接し、拡散的に連続している蝸牛及び前庭系の細胞において、分泌型抗ＶＥＧＦタンパク質を局所的に発現させることにより、新生血管形成に関連する耳科疾患、例えばＶＳを有する個体を治療するための遺伝子治療方法、例えば、本明細書に開示される組成物を使用する方法を提供する。いくつかの実施形態では、本方法は、抗ＶＥＧＦタンパク質（ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ）をコードする相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）を含有する構築物を含むｒＡＡＶ粒子を使用して蝸牛に遺伝子導入することを含む。理論に拘束されることを望むものではないが、いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ（例えば、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－抗ＶＥＧＦ）によって形質導入された内耳の蝸牛及び前庭細胞は、外リンパならびに前庭蝸牛神経（上前庭神経と下前庭神経及び蝸牛神経で構成される）の間質及び神経周囲腔に抗ＶＥＧＦタンパク質を分泌できると考えられている。ＶＳ腫瘍の大部分は、前庭蝸牛神経を収容する内耳道の外側３分の１、蝸牛に最も近い部分に発生する（図１～３）。この内耳道に沿った拡散に対する障壁がないことにより、蝸牛神経は、その外側端に外リンパ、その内側端にＣＳＦを有する流体の連続体に浸されており、したがって、外リンパから神経間質への拡散は、外リンパで発現した治療用抗ＶＥＧＦタンパク質が、意図するＶＳ標的に到達するための潜在的な経路を提供する。ＶＥＧＦ阻害剤が腫瘍の制御及び退縮をもたらす正確な機序は完全には理解されていないが、いくつかの実施形態では、機序は、内皮細胞増殖の阻害による血管透過性の低下及び／または異常な血管新生、ならびに腫瘍血管系の正常化を含む（Ｂｒａｓｔｉａｎｏｓ ２００９、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
現在までに、ヒトにおけるｒＡＡＶ粒子を用いた内耳への導入を含む遺伝子導入臨床試験は知られていないが、高度から重度難聴の治療のためにヒトアトナール（Ａｔｏｎａｌ）転写因子（Ｈａｔｈ１）の相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）をコードする構築物を含むアデノウイルス粒子を評価する臨床試験が、２０１４年に開始され２０１９年に完了した（Ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ ２０２０ａ［ＮＣＴ０２１３２１３０］、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される送達アプローチは、内耳細胞の形質導入のための合成ＡＡＶカプシド（例えば、ＡＡＶＡｎｃ８０）、及び／または蝸牛に直接標的化送達するためのデバイスを含む。
ＶＳ患者の現在の標準治療には、いくつかのアプローチといくつかの治療目的が含まれている（Ｄｏｈｅｒｔｙ ２００６；Ｋａｕｌ ２０１８、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。治療には、画像診断／観察、手術、及び放射線治療が含まれる。治療目的には、聴力温存が含まれ得るが、多くの場合、患者は完全または部分的な聴覚障害を呈し、腫瘍のサイズと成長により、治療の必然的な結果として難聴を甘受する、より積極的な介入が必要になる場合がある。手術及び放射線照射はどちらも副作用を伴うが、重要なことには、どちらも観察のみと比較して生活の質の指標の改善とは関連していない（Ｃａｒｌｓｏｎ ２０１５、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）ため、腫瘍の成長の影響を軽減できる侵襲性の低い治療法が明らかに必要とされている。
ＮＦ２患者における腫瘍の成長及び関連する難聴を制御するためのベバシズマブの全身投与による臨床効果は、重大なリスクがないわけではなく、治療効果を維持するために必要とされる継続的な静脈内注入が重篤な合併症のリスクも高めている。ＮＦ２に対してベバシズマブを使用した研究のメタ分析では、１２５名の患者を含む５つの臨床試験集団のメタ分析に基づいて、重篤な毒性（グレード３または４）のプールされた発生率は１７％であった（Ｌｕ ２０１９、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。高血圧、タンパク尿、肝臓酵素の上昇、動脈血栓塞栓事象（ＡＴＥ）、静脈血栓塞栓事象、出血、ならびに手術及び創傷治癒合併症は全て、高用量のベバシズマブ療法と関連している（Ｃｈｅｎ ２００９；Ｈａｎｎａ ２０１９、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。本明細書では、特に、ＶＳを治療するための代替的アプローチが開示され、例えば、高レベルの循環抗ＶＥＧＦタンパク質（例えば、ベバシズマブ）を必要とせず、いくつかの実施形態では、治療薬分子への全身曝露に関連する事象に関して患者のリスクを低くすることができる。
いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦを内耳に送達するための蝸牛内投与経路の使用、内耳細胞の形質導入、及びその後の抗ＶＥＧＦタンパク質（例えば、ベバシズマブ、ラニビズマブ、及び／またはアフリベルセプト）の発現及び／または分泌により、腫瘍に近接した治療薬の持続的なデポが生成され得る。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦによって形質導入された内耳の蝸牛及び前庭細胞は、抗ＶＥＧＦタンパク質を近くの室（例えば、外リンパ、及び蝸牛軸の細胞、例えば、ラセン神経節ニューロン及びサテライトグリア細胞）に分泌し得る、及び／または蝸牛神経の間質液に直接タンパク質を分泌し得る。いくつかの実施形態では、内耳道に沿った拡散に対する障壁がないことにより、蝸牛神経は、その外側端（ＶＳ腫瘍の大部分が発生する蝸牛に最も近い場所［図１～３］）に外リンパ、その内側端にＣＳＦを有する流体の連続体に浸されることになる。いくつかの実施形態では、外リンパから神経間質への拡散は、外リンパで発現した治療用抗ＶＥＧＦタンパク質が、意図するＶＳ標的に到達するための潜在的な経路を提供する。
いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦを内耳に送達するための蝸牛内投与経路の使用、内耳細胞の形質導入、及びその後の抗ＶＥＧＦタンパク質（例えば、ベバシズマブ、ラニビズマブ、及び／またはアフリベルセプト）の発現及び／または分泌により、非蝸牛組織または流体区画に、治療上関連しないまたは検出不能なレベルの抗ＶＥＧＦタンパク質がもたらされる。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦタンパク質は、血清、ＣＳＦ、肝臓、脾臓、脳幹、聴覚皮質、下顎リンパ節、またはそれらの組み合わせにおいて、治療上関連しないまたは検出不能なレベルで存在する。
いくつかの実施形態では、腫瘍表面での抗ＶＥＧＦタンパク質への局所曝露は、血流からの抗ＶＥＧＦタンパク質の溢出と比較して、ＶＥＧＦにアクセスし中和するための拡散経路が異なるにもかかわらず、腫瘍の成長を制御することができる。例えば、Ｌｉｃｈｔｅｎｂｅｌｄ ｅｔ ａｌ．，１９９９（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）は、抗ＶＥＧＦタンパク質をマウスの腫瘍に局所的に適用し、血管透過性の有意な低下を観察したが、注目すべきは、同程度でマウスの血管透過性の低下を達成した全身投与と比較して２０倍低い用量であったことである（Ｙｕａｎ １９９６、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
理論に束縛されることを望むものではないが、いくつかの実施形態では、ＶＳを取り囲む流体での抗ＶＥＧＦタンパク質への低レベルだが持続的な曝露が、例えば、腫瘍血管の透過性の低下及び腫瘍血管系の正常化などの様々な機序を通じて、腫瘍の成長を安定化及び／または低減し得ると考えられている。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦタンパク質の循環レベルを最小限に抑えることにより、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦの耳への局所送達、及び結果として生じる抗ＶＥＧＦタンパク質の腫瘍微小環境での曝露が、抗ＶＥＧＦタンパク質の全身投与に伴う有害事象のリスクを最小化しながら、永続的な治療上の利点を提供することができる。
前庭神経鞘腫（ＶＳ）
ＶＳ（聴神経腫瘍とも呼ばれる）は、前庭蝸牛神経（第８脳神経とも呼ばれる）を覆うシュワン細胞の新形成に起因する、良性で、通常は成長の遅い腫瘍（複数可）である。ＶＳは、多くの場合、音及び平衡感覚に関する情報を内耳から脳へ伝達する役割を担う神経である前庭蝸牛神経の上前庭枝または下前庭枝で発生する（例えば、図１～３を参照）。これらの腫瘍は、多くの場合、内耳道内に発生し（例えば、内耳のすぐ近く）、小脳橋角にまで及ぶことがある。腫瘍は、散発性の片側性腫瘍として発生するか、まれではあるが両側性腫瘍（一般的に神経線維腫症２型（ＮＦ２）の状態で発生する）として発生する可能性がある。ＶＳの発生が多い領域は、前庭蝸牛神経に沿った部分である（例えば、図１～３を参照）。小さな小管内腫瘍（幅５ｍｍ未満）が、例えば、蝸牛に最も近い、内耳道の外側３分の１内に生じ得る（Ｋｏｅｎ ２０２０、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
ＶＳに関連する一般的な症状としては、難聴、耳鳴り、及びめまいが挙げられる。腫瘍が成長を続け、内耳道の外側及び頭蓋腔内へと拡大すると、脳幹を圧迫する可能性があり、より重篤な病的状態及び生存に対する危機が重大な懸念となる。現在の標準治療では、小さいまたは成長していない腫瘍は観察のみであり得るが、大きい及び／または進行性の腫瘍には外科的切除及び／または放射線治療が適応されている。
特定の実施形態では、本明細書に記載の組成物及び方法は、ＶＳに関連する症状及び／またはＶＳを治療するための現在の標準治療法を低減及び／または軽快することができる。そのような症状としては、これらに限定されないが、難聴、有毛細胞の変性、内耳液の生化学的環境の変化、迷路内タンパク質の上昇、内リンパ水腫、蝸牛開口部閉塞、迷路内出血、蝸牛血管供給の途絶、耳鳴り、めまい、難治性頭痛、顔面神経障害、三叉神経障害、顔面麻痺、顔面の感覚異常、水頭症、小脳ヘルニア、及び／または死亡が挙げられ得る。
発見されたＶＳ腫瘍が無症状で、他の徴候のために画像診断を受けていた患者で確認された数が増えていることは注目に値する（Ｒｅｚｎｉｔｓｋｙ ２０１９、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。いくつかの症例では、ＶＳの症状は、蝸牛神経の圧迫及び前庭蝸牛神経（第８脳神経）の前庭枝の侵襲から生じ得る。顔面神経は腫瘍によって引き伸ばされて広がることが多いが、顔面麻痺は一般にまれである。いくつかの症例では、顔面の感覚情報を脳へ伝達する役割を担う近傍の三叉神経が圧迫され、顔面の感覚異常を生じ得る。組織学的には良性であっても、いくつかの症例では、大きな腫瘍が脳幹を圧迫し、水頭症、小脳ヘルニア、そしてまれに死亡に至る。
ＶＳによって誘発される難聴は、例えば、蝸牛神経の圧迫及び／または蝸牛の機能障害によって生じると考えられており、このことは、ほとんどの症例で蝸牛の病変が存在することによって裏付けられている。ＶＳ誘発型難聴の機序としては、例えば、有毛細胞の変性、内耳液の生化学的環境の変化（例えば、腫瘍からの毒性サイトカイン）、迷路内タンパク質の上昇、内リンパ水腫、蝸牛開口部閉塞、迷路内出血、及び／または蝸牛血管供給の途絶が含まれると仮定されている（Ｒｏｏｓｌｉ ２０１２；Ｄｉｌｗａｌｉ ２０１５；Ｒｅｍｅｎｓｃｈｎｅｉｄｅｒ ２０１７、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
現在の治療法は、腫瘍の成長に関連するリスクを低減し得るが、難聴または耳鳴りの安定化とは関連せず、多くの場合、片側性の残存聴力の低下、難治性頭痛、及び顔面神経の損傷などの副作用をもたらす可能性がある（Ｐｅｄｒｏｓａ １９９４；Ｓａｍｐａｔｈ １９９７；Ｓａｒｄｈａｒａ ２０２０、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。まれではあるが、放射線治療は、二次性悪性腫瘍のさらなるリスクも伴う（Ｋａｐｕｒｃｈ ２０１６、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ＶＳの現在の治療レジメンによる聴力温存の推定値は様々であるが、外科的切除術の大規模な後ろ向き比較において、Ａｎｓａｒｉは、使用した外科的アプローチ、ならびに腫瘍サイズ及び位置に応じて、平均的な術後難聴の範囲が４０．６～８２．７％であったことを報告した。これには中頭蓋窩法及び後Ｓ状静脈洞法などの外科的アプローチが含まれ、腫瘍サイズによっては、特に聴力温存を大いに促進するために、経迷路法によるアプローチよりも優先され得る（Ａｎｓａｒｉ ２０１２、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。神経外科学会からのガイドラインでは、放射線手術、顕微手術、または観察を検討している患者に、１０年以内に５０～７５％の確率で難聴になることを予期して助言を行うことを推奨しており、これらの治療の選択肢のそれぞれで１０年後の聴力温存の可能性が中程度に低い（＞２５～５０％と定義）確率しかないことを記述している（Ｃａｒｌｓｏｎ ２０１８、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。現在利用可能なＶＳの標準治療には、聴力改善の可能性を伴うものはない。
散発性ＶＳの治療に関する意思決定は複雑である。腫瘍の存在は、通常、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）によって確認され、初期の標準治療は症状の重症度と腫瘍サイズに基づいている。診断時には、およそ２０～３０％の症例が１ｃｍ未満、およそ３０％の症例が１～２ｃｍ（両端値を含む）、残りの症例（およそ４０～５０％）が２ｃｍ超である（Ｐｅｒｉｓ－Ｃｅｌｄａ ２０１９、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ＭＲＩスキャナーの可用性及び利用率の増加に伴い、一般に、これらの腫瘍は、より早期に（より小さく）発見され、無症状の段階で発見されることが多くなっている（Ｒｅｚｎｉｔｓｋｙ ２０１９、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。特定の実施形態では、本開示は、０．５ｃｍ未満、１ｃｍ未満、２ｃｍ未満、３ｃｍ未満、４ｃｍ未満、または５ｃｍ未満の腫瘍の成長を停止もしくは遅延させる、及び／または縮小させるのに特に適している可能性がある組成物及び方法を提供する。
いくつかの症例では、ＶＳは可変であり、多くの場合予測不可能な成長速度を示す。このような腫瘍の固有の挙動は、画像診断法、腫瘍サイズの推定、及び成長の定義のばらつきによってさらに複雑になる（Ｋｏｎｄｚｉｏｌｋａ ２０１２、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。全体的な腫瘍の成長は平均しておよそ１ｍｍ／年であるが、全腫瘍の３０～６０％は低成長または明らかな成長を示さず、成長するものについては、年間線形速度は２～３ｍｍ／年である（Ｐａｌｄｏｒ ２０１６；Ｌｅｅｓ ２０１８、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。小さな腫瘍を有する一部の患者では、治療はＭＲＩスキャンのみから構成され、腫瘍が測定可能な成長を示す場合、または症状が悪化する場合にのみ追加の治療が検討される（ＭａｃＫｅｉｔｈ ２０１３；Ｋｉｒｃｈｍａｎｎ ２０１７、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。腫瘍が成長し続け、したがって脳幹圧迫などの続発症のリスクが大幅に増加している一部の患者では、現在の治療の選択肢は、外科的切除、放射線照射（Ｇｏｌｆｉｎｏｓ ２０１６、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、またはこれらのアプローチのいくつかの組み合わせを含む。これらの治療は、腫瘍の成長に関連するリスクを低減し得るが、難聴の長期安定化（Ｃａｒｌｓｏｎ ２０１８、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）または耳鳴りの改善（Ｓａｒｄｈａｒａ ２０２０、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）とは関連せず、多くの場合、片側性の残存聴力の低下、難治性頭痛（Ｐｅｄｒｏｓａ １９９４、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、及び顔面神経の損傷（Ｓａｍｐａｔｈ １９９７、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）などの副作用をもたらす可能性がある。現在、全ＶＳ症例の約半数は、最終的に外科的切除及び／または放射線照射を必要とする。いくつかの実施形態では、本開示は、難聴、語音理解の低下、耳鳴り、生活の質の低下、脳幹圧迫、及び／または死亡などの腫瘍の成長に関連するリスクを低減する組成物及び方法を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、腫瘍の成長、難聴、有毛細胞の変性、内耳液の生化学的環境の変化、迷路内タンパク質の上昇、内リンパ水腫、蝸牛開口部閉塞、迷路内出血、蝸牛血管供給の途絶、耳鳴り、めまい、難治性頭痛、顔面神経障害、三叉神経障害、顔面麻痺、顔面の感覚異常、水頭症、小脳ヘルニア、及び／または死亡などの関連するリスクを低減する組成物及び方法を提供する。
外科的治療及び放射線治療の両方における近代的かつ最新の改善にもかかわらず、いくつかの実施形態では、観察という保守的なアプローチが支持されており；腫瘍が成長していない限り、これは、残存する聴力機能を温存し、介入治療による悪影響の可能性を最小限に抑えるための現時点での最善の戦略となっている（ＭａｃＫｅｉｔｈ ２０１３；Ｋｉｒｃｈｍａｎｎ ２０１７；Ｔｏｒｒｅｓ Ｍａｌｄｏｎａｄｏ ２０１９、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。いくつかの実施形態では、改善された治療は、ＶＳの停滞及び／または退縮を促進し、したがって、外科的切除または放射線治療を含むより侵襲的なアプローチの必要性を回避することができるものである。
米国では、ＶＳの総発生率は、人口１０万人あたりの新規症例が１．０９～１．９８と推定され、したがって、米国では毎年３，３００～６，３００人の患者がＶＳと診断されている（Ｋｓｈｅｔｔｒｙ ２０１５；Ｏｓｔｒｏｍ ２０１８、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。報告されている発生率が近年増加していることは、人口の高齢化と画像診断技術の継続的な向上の組み合わせに起因している。ＶＳ患者の現在の標準治療には、いくつかのアプローチといくつかの治療目的が含まれている（Ｄｏｈｅｒｔｙ ２００６；Ｋａｕｌ ２０１８、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。治療には、画像診断／観察、手術、及び放射線治療が含まれる。治療目的には、聴力温存が含まれ得るが、多くの場合、患者は完全または部分的な聴覚障害を呈し、難聴を甘受する腫瘍のサイズと成長により、治療の必然的な結果として、より積極的な介入が必要になる場合がある。手術及び放射線照射はどちらも副作用を伴うが、重要なことには、どちらも観察のみと比較して生活の質の指標の改善とは関連していない（Ｃａｒｌｓｏｎ ２０１５、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）ため、腫瘍の成長の影響を軽減できる侵襲性の低い治療法が明らかに必要とされている。
成長中の腫瘍、または脳幹を圧迫している腫瘍、または脳幹を最終的に圧迫する可能性がある腫瘍を有する患者の多くでは、観察のみでは許容できず、神経機能への影響を防ぐために外科的切除または放射線照射が必要になる場合がある。症例によっては、顔面神経を少しも損傷させずに、腫瘍全体を摘出することは不可能である。これらの場合、顔面神経機能を維持するために亜全摘出が行われることが多いが、この治療法では、成長を続ける可能性のある腫瘍が残存する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物及び方法は、外科的切除及び／または放射線治療と組み合わせた併用療法として利用され得る。いくつかの実施形態では、そのような併用療法アプローチは、顔面神経損傷、または残存腫瘍の細胞成長のリスクを低減する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物、例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦを利用する本明細書に記載の治療アプローチは、外科的切除及び／または放射線照射などの現在の標準治療と関連する副作用を回避及び／または最小限に抑えながら、腫瘍の成長を薬学的に弱める。
ＶＳの現在の標準治療は、画像診断技術が進歩し、腫瘍の成長を特定及び追跡する能力が向上したため、過去２～３０年にわたり進化してきた。多くの腫瘍が低速または低成長を示し、低い成長速度が維持される限り聴力に影響を与えないであろうという認識の高まりとともに、保守的で観察的な「経過観察（ｗａｉｔ ａｎｄ ｒｅｓｃａｎ）」アプローチへ向かう傾向が進んでいる（ＭａｃＫｅｉｔｈ ２０１３；Ｒｅｚｎｉｔｓｋｙ ２０１９、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
特定の実施形態では、本明細書に記載の介入、方法、及び／または組成物は、例えば、腫瘍の成長の停止、聴力の安定化、及び／または外科的切除及び／または放射線治療などのより侵襲的な治療アプローチの必要性の回避によって保守的な治療アプローチを強化する可能性を含む、利点を含んでいる。ＶＳの成長を停止させることは実質的な臨床的利益をもたらすと考えられるが、いくつかの実施形態では、ベバシズマブで治療したＮＦ２患者のＶＳ腫瘍の研究（Ｈｕａｎｇ ２０１８；Ｐｌｏｔｋｉｎ ２０１９、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）で示されるように、本明細書に記載の組成物（例えばｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ）を利用する方法及び治療が、腫瘍の停滞のみならず、腫瘍の収縮、語音理解の回復、及び語音理解の知覚された困難の軽減を促進する可能性がある。さらに、全身投与されたＶＥＧＦ阻害剤を用いた研究では、ＮＦ２患者のＶＳに関連する症状を含む、ＮＦ２関連の生活の質の改善が示されている（Ｐｌｏｔｋｉｎ ２０１９、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。しかしながら、これらの全身投与は、多くの場合、負の副作用を伴う。これらの初期の研究結果は、抗ＶＥＧＦタンパク質治療が、ＶＳに関連する症状を軽快し、潜在的に闘う可能性があることを示唆し得る。特定の実施形態では、本明細書に記載の組成物（例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ）は、侵襲性の低い治療法、及び腫瘍と拡散的に連続した抗ＶＥＧＦタンパク質の持続的かつ局所的な発現を可能にし得、新生血管形成と関連する耳科疾患（例えば、ＶＳ）を有する患者に対して、副作用を伴う全身治療を行わずに抗ＶＥＧＦ治療のより集中的かつ改善された利点をもたらす可能性がある。
ＶＳにおける血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）とＶＥＧＦ阻害剤
新たな血管の発生及び脈管化は、多くの腫瘍の成長モデルにおいて重要な因子であることが判明しており、ＶＳの成長に重要である可能性がある。ＶＥＧＦは血管新生の主要な調節因子の一つである。特定の場合では、ＶＥＧＦタンパク質及びその受容体は散発性ＶＳ腫瘍で発現され（Ｃａｙｅ－Ｔｈｏｍａｓｅｎ ２００３；Ｐｌｏｔｋｉｎ ２００９、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、例えば１８２個の切除された散発性ＶＳ腫瘍の研究において調査された全ての腫瘍はＶＥＧＦ受容体を発現していた（Ｋｏｕｔｓｉｍｐｅｌａｓ ２０１２、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。場合によっては、このタイプの神経鞘腫におけるＶＥＧＦタンパク質及び／または受容体の発現レベルは、連続ＭＲＩによって測定された腫瘍の成長速度及び／または成長指数（Ｃａｙｅ－Ｔｈｏｍａｓｅｎ ２００５；Ｋｏｕｔｓｉｍｐｅｌａｓ ２００７、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）ならびに微小血管密度（Ｋｏｕｔｓｉｍｐｅｌａｓ ２００７、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）と相関することが示されており、ＶＥＧＦ発現がＶＳの成長に関与することが示唆される。さらに、ＶＥＧＦ阻害剤（ベバシズマブ）による全身治療は、ＶＳを有するＮＦ２患者の成長を制御し、聴力を改善するのに有効であった。理論に束縛されるものではないが、ＶＥＧＦ阻害剤を使用することにより、血管の成長、例えば、腫瘍の脈管化を制御することで、腫瘍の成長、例えば、ＶＳの成長を制御できると考えられる。
ＶＥＧＦ遺伝子は血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）をコードし、以前はｆｍｓ様チロシンキナーゼ（Ｆｌｔ－１）として知られていた。ＶＥＧＦタンパク質は、血管内皮細胞の移動及び増殖を誘導するヘパリン結合性タンパク質である。野生型ＶＥＧＦタンパク質をコードするタンパク質及びヌクレオチド配列の非限定的な例を本明細書に記載する。
いくつかの実施形態では、腫瘍表面での抗ＶＥＧＦタンパク質への局所曝露は、血流からの抗ＶＥＧＦタンパク質の溢出と比較して、ＶＥＧＦにアクセスし中和するための拡散経路が異なるにもかかわらず、腫瘍の成長を制御する可能性を有する。例えば、Ｌｉｃｈｔｅｎｂｅｌｄ ｅｔ ａｌ．，１９９９（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）は、抗ＶＥＧＦタンパク質をマウスの腫瘍に局所的に適用し、血管透過性の有意な低下を観察したが、注目すべきは、同程度でマウスの血管透過性の低下を達成した全身投与と比較して２０倍低い用量であったことである（Ｙｕａｎ １９９６、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物（例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦを含む）は、ＶＳを囲む流体での抗ＶＥＧＦタンパク質への低レベルだが持続的な曝露を提供し、したがって、腫瘍の成長を安定化及び／または低減する可能性を有する。特定の実施形態では、本明細書に記載の組成物（例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦを含む）は、腫瘍血管の透過性の低下及び／または腫瘍血管系の正常化によって腫瘍の成長を安定化及び／または低減する。
特定の実施形態では、ＶＳに対する抗ＶＥＧＦタンパク質療法、例えば本明細書に記載の療法は、外科的切除及び／または放射線治療などの侵襲的代替手段を必要とせずに腫瘍の成長を弱め、それにより例えば外科的切除及び／または放射線治療の合併症を回避する。全身投与されたＶＥＧＦ阻害剤（ベバシズマブ）は、神経線維腫症２型（ＮＦ２）（ＮＦ２の生殖細胞変異から生じる腫瘍もＶＥＧＦ及びその受容体を高度に発現する）の患者において、ＶＳの成長及び難聴続発症の安定化または軽減に有効性を示す可能性があることが示唆されている（Ｐｌｏｔｋｉｎ ２００９；Ｐｌｏｔｋｉｎ ２０１２；Ｌｕ ２０１９、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。しかしながら、ＮＦ２患者でのＶＳの成長を制御するためのＶＥＧＦ阻害剤の全身投与もまた、副作用を伴う可能性があり、１２５名の患者を含む５つの臨床試験参加者の集団のメタ分析において、重篤な毒性（グレード３または４）のプールされた発生率は１７％であった（Ｌｕ ２０１９、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
特定の実施形態では、本明細書に記載の組成物（例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ）は、例えば、抗ＶＥＧＦタンパク質の発現及び分泌を促進する、内耳への遺伝子導入によってＶＳを有する個体（例えば、哺乳動物、例えば、ヒト）を治療する方法において使用することができる。特定の実施形態では、本明細書に記載の組成物、例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦは、抗ＶＥＧＦタンパク質への局所曝露（例えば、内耳での）を提供する。特定の実施形態では、ＶＳ部位での抗ＶＥＧＦタンパク質への局所曝露（例えば内耳での）は、全身曝露を制限し、及び／または副作用の可能性を低減、例えば最小化する。特定の実施形態では、本明細書に記載の組成物（例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ）は、全長マウス抗ヒトＶＥＧＦモノクローナル抗体由来のヒト化モノクローナル抗体断片（Ｆａｂ）であるラニビズマブ（４８キロダルトン［ｋＤａ］）を含む。特定の実施形態では、ラニビズマブはＶＥＧＦに結合し、その受容体ＶＥＧＦＲ－１及び／またはＶＥＧＦＲ－２へのＶＥＧＦ結合を阻害し、それにより、血管漏出、異常な血管新生、及び／または腫瘍の成長を低減する（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ ２０１７、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
特定の実施形態では、内耳の蝸牛及び前庭細胞は、本明細書に記載の組成物（例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦを含む）によって形質導入される。特定の実施形態では、これらの細胞タイプ及び／または他の細胞タイプは、腫瘍が存在する前庭蝸牛神経（例えば、上前庭神経と下前庭神経及び蝸牛神経で構成される）の間質及び神経周囲腔と拡散的に連続した内耳流体である外リンパに抗ＶＥＧＦタンパク質を分泌し得る。いくつかの実施形態では、ＶＳ腫瘍の大部分は、前庭蝸牛神経を収容する内耳道の外側３分の１（蝸牛に最も近い部分）に発生する。いくつかの実施形態では、この内耳道に沿った拡散に対する障壁がないことにより、蝸牛神経は、その外側端に外リンパ、その内側端にＣＳＦを有する流体の連続体に浸されており、したがって、外リンパから神経間質への拡散は、外リンパで発現した治療用抗ＶＥＧＦタンパク質が、意図するＶＳ標的に到達するための潜在的な経路を提供する（Ｒａｓｋ－Ａｎｄｅｒｓｅｎ ２００６、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。いくつかの実施形態では、蝸牛軸内のラセン神経節ニューロン及び／またはそれらのサテライトグリア細胞が、本明細書に記載の組成物（例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦを含む）によって形質導入及び／またはトランスフェクトされ、これらの細胞は、蝸牛神経の間質液に直接タンパク質を分泌されるように配置される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物（例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ）の蝸牛内投与は、基礎病因にかかわらず、新生血管形成に関連する耳科疾患（例えば、ＶＳ）を有する個体（例えば、哺乳動物、例えば、ヒト）において、将来的な治療の必要性を排除し、生理的聴力を温存する可能性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物（例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ）の蝸牛内投与は、外科的切除及び／または放射線治療などの侵襲的な治療アプローチ、ならびに関連する生理的聴力の低下を遅延させる可能性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物（例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ）の蝸牛内投与の後に、その後の標準治療が続く。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物（例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ）の蝸牛内投与は、放射線治療の前及び／または後に行われる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物（例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ）の投与は、腫瘍の感受性を高め、より低い放射線量を可能にすることによって、放射線治療に対する個体（例えば、哺乳動物、例えば、ヒト）の奏効を改善し得る（Ｋｏｕｔｓｉｍｐｅｌａｓ ２０１２；Ｇａｏ ２０１５、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
上述のように、新たな血管の発生及び脈管化は、ＶＳの成長において重要な因子であることが判明しており（Ｋｏｕｔｓｉｍｐｅｌａｓ ２００７；Ｗｏｎｇ ２０１０、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、ＶＥＧＦは血管新生の主要な調節因子の１つである。血管新生効果に加えて、ＶＥＧＦは、放射線照射によって誘発されるアポトーシスに対する細胞の保護及び耐性ももたらす（Ｋｏｕｔｓｉｍｐｅｌａｓ ２０１２、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。過去１０年間で、ＶＥＧＦ阻害剤によりＶＳの成長を停止または逆転できることを実証する臨床データが出てきている。ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））は、現在、ＮＦ２の状態において、ＶＳ患者での有効性の予備的証拠が実証されている唯一の薬理学的製剤である。
最初の臨床的証拠は、１０年以上前にＰｌｏｔｋｉｎらによるセミナル論文で発表された（Ｐｌｏｔｋｉｎ ２００９、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。この研究では、ベースラインの腫瘍サイズが２．２～３８．７ｃｍ３、ベースラインの年間成長率が９～１２１％で、ほとんどが難聴を呈している１０名のＮＦ２患者（男性６名、女性４名、年齢中央値２５歳）に、平均１２ヶ月間（３～１９ヶ月）、２週間ごとにベバシズマブ５ｍｇ／ｋｇを全身投与した。ベバシズマブを繰り返し投与した後、１０名中９名の患者で腫瘍が縮小し、６名の患者がＭＲＩで腫瘍体積が少なくとも２０％減少するという奏効を示した。１１～１６ヶ月のフォローアップ期間中も６名中４名の患者で奏効が維持された。腫瘍が小さくなった１０名中９名の最良の治療効果の中央値は、２６％の体積減少であった。聴力検査が可能な７名の患者のうち、ベースライン検査と比較して、４名は単語認識スコアの有意な増加として定義される改善を示し、２名は安定した難聴を示し、１名は進行性の難聴を示した（Ｐｌｏｔｋｉｎ ２００９、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。かかる結果は、本アプローチが、腫瘍の成長が持続している患者に見られる進行性の難聴を回復させる可能性があることを示唆し得る。
この最初の発表の後、ベバシズマブを全身静脈内投与した（２週間ごとに５ｍｇ／ｋｇを６～４１ヶ月間；期間の中央値１４ヶ月）ＮＦ２患者３１名の大規模な後ろ向き検討が報告された（Ｐｌｏｔｋｉｎ ２０１２、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。同様の患者集団の本研究では、評価された患者の５７％が、ベースラインからの単語認識スコアの増加として定義される聴力の改善を示し、５５％が、ベースラインと比較して腫瘍体積の少なくとも２０％の減少と定義されるＸ線写真での奏効を示した。長期的な治療効果を評価すると、１年後には患者の９０％で聴力が安定または改善し、これらの患者の６１％では３年後もその傾向が維持された。さらに、患者の８８％が１年間の治療後に腫瘍サイズが安定または減少し、これらの患者の５４％が３年後も安定したままであった（Ｐｌｏｔｋｉｎ ２０１２、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
直近では、Ｐｌｏｔｋｉｎらが、進行性ＶＳを有するＮＦ２患者におけるベバシズマブ全身静脈内投与の多施設前向き第２相有効性試験の結果を発表した（Ｐｌｏｔｋｉｎ ２０１９、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。この試験では、患者（年齢中央値２３歳）は、ベバシズマブを１０ｍｇ／ｋｇで２週間ごとに６ヶ月間全身投与され、その後、５ｍｇ／ｋｇで３週間ごとに１８ヶ月間全身投与された。これまでの知見と一致して、中間試験の結果は、治療の６ヶ月後に参加者の４１％で聴力の改善が見られ、３２％でＸ線写真での奏効が見られたことを示した。
ＶＳを有するＮＦ２患者に対する全身投与したベバシズマブの予備的な有効性及び安全性は、米国及び欧州にわたって実施された８つの臨床試験の治療結果のメタ分析でも検討されている（Ｋｉｌｌｅｅｎ ２０１９；Ｋａｒａｊａｎｎｉｓ ２０１９；Ｌｕ ２０１９、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。これらの８つの研究全体で１９６の神経鞘腫を有する１６１名のＮＦ２患者が、２週間ごとに５～１０ｍｇ／ｋｇの範囲のベバシズマブを投与され（研究全体の平均範囲は１１～２２ヶ月）、治療結果を評価された。これらの研究全体で、合わせたデータから、神経鞘腫のおよそ４１％でＸ線写真での奏効（少なくとも２０％の体積減少）、神経鞘腫のおよそ４７％で腫瘍の安定性、神経鞘腫のおよそ７％で腫瘍の進行（少なくとも２０％の体積増加）が確認された。聴力測定データが得られた患者では、これらのベバシズマブの投与は、およそ２０％の個体で聴力改善、およそ６９％の個体で聴力温存（難聴の安定化）、およそ６％の個体で難聴の悪化と関連していた。報告されたフォローアップ期間中、１１％の患者でその後の外科的介入が必要となった。さらに、重篤な毒性（高血圧、タンパク尿、及び無月経を含む）などのベバシズマブの副作用も評価された。１２５名の患者を含む臨床試験参加者の５つの集団のメタ分析に基づいて、重篤な毒性（グレード３または４）のプールされた発生率は１７％であった（Ｌｕ ２０１９、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。特定の実施形態では、本開示は、治療用抗ＶＥＧＦタンパク質の全身送達に関連する負の結果を潜在的に回避しながら、新生血管形成に関連する耳科疾患を効果的に治療するという長年のニーズを満たすのに適した方法及び組成物を提供する。
上記の一連の臨床データ（腫瘍収縮において約３０％～６０％を超える奏効率を示す）は、ＶＥＧＦ阻害剤の全身的使用に共通の副作用を伴うにもかかわらず、ＶＳの成長を抑制し、難聴の関連症状を改善するためのＶＥＧＦ阻害剤の全身的使用を支持している（Ｐｌｏｔｋｉｎ ２００９；Ｐｌｏｔｋｉｎ ２０１２；Ｌｕ ２０１９；Ｐｌｏｔｋｉｎ ２０１９、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。治療を行わない場合、ＶＳの平均成長率は０．４～２．９ｍｍ／年で変動し（Ｙｏｓｈｉｍｏｔｏ ２００５、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、最大２１２名の患者の試験では、腫瘍の自然縮小は腫瘍の０～１１％であったと報告されており（Ｔｓｃｈｕｄｉ ２０００；Ｓｌａｔｔｅｒｙ ２００４；Ｐｅｙｒｅ ２０１３；Ｓｃｈｎｕｒｍａｎ ２０１９、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、または患者１２６１名の大規模な研究では、腫瘍の自然縮小は腫瘍の３．８％であったと報告されている（Ｈｕａｎｇ ２０１３、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。全身性の抗ＶＥＧＦタンパク質治療の限界は、これまで、全身への悪影響が避けられないことであった。特定の実施形態では、本開示は、抗ＶＥＧＦタンパク質を投与する方法を提供する。特定の実施形態では、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）送達機構を利用する方法及び組成物が提供される。特定の実施形態では、そのようなＡＡＶは、組換え構築物を含み、組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）と称される。このような構築物の実施形態は、以下でさらに詳細に説明される。特定の実施形態では、局所的な抗ＶＥＧＦタンパク質、例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦを、蝸牛内に、例えば、腫瘍、例えば、ＶＳの位置に近接して送達するための組成物が提供される。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ阻害剤、例えばｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦの蝸牛内への投与は、ＶＥＧＦ阻害剤の全身送達に伴う副作用を軽減する。
ＶＳの治療のために蝸牛内投与経路を介して送達される遺伝子治療粒子の生物学的に活性な用量範囲を評価するには不十分であるにもかかわらず、いくつかのマウスモデルを利用して、ＶＥＧＦ阻害剤が腫瘍の血管透過性を低下させるという生物学的妥当性を裏付けるデータが生成されている。頭蓋窓モデルを用いて、Ｙｕａｎらは様々なヒト腫瘍細胞株を移植し、ＶＥＧＦ／ＶＰＦ（血管透過性因子）に対する中和抗体またはリン酸緩衝生理食塩水対照を静脈内ボーラス投与した（Ｙｕａｎ １９９６、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。著者らは、抗体治療群のアルブミンへの腫瘍血管透過性が対応する対照群よりも低く、連続治療後に腫瘍血管の直径が小さくなり、最終的に消失したことを示した。これらのデータは、内因性ＶＥＧＦ／ＶＰＦの中和によって腫瘍の血管透過性が低下可能であることを実証している（Ｙｕａｎ １９９６、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。より最近では、坐骨神経モデルと頭蓋内窓モデルの両方を使用して、Ｇａｏらは、両側ＶＳに対する抗ＶＥＧＦタンパク質治療の背後にある機序を特徴付けた（Ｇａｏ ２０１５、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。このグループは、ヒトＨＥＩ１９３神経鞘腫細胞を、マウス坐骨神経鞘または頭蓋窓移植マウスの右半球の軟膜とクモ膜との間のいずれかに注入した。腫瘍サイズが４ｍｍ径に達した後、ＶＥＧＦ阻害剤ベバシズマブを５ｍｇ／ｋｇ／週、腹腔内（ＩＰ）投与した。得られたデータは、マウスの腫瘍浮腫を緩和し、神経機能を改善し、腫瘍血管系を一過性に正常化したことを示した。
これらの研究から、マウスにおける神経鞘腫の進行を遅らせるためのＶＥＧＦ阻害剤の使用について科学的根拠を裏付ける概念実証データが得られ、これは、アバスチン（登録商標）で全身治療したＮＦ２患者における予備臨床データ（Ｐｌｏｔｋｉｎ ２００９；Ｐｌｏｔｋｉｎ ２０１２；Ｌｕ ２０１９；Ｐｌｏｔｋｉｎ ２０１９、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）と一致する。これらの先行研究の１つの限界は、限られた標的部位における永続的な曝露レベルを反映していないことである。
特定の実施形態では、本明細書に開示される方法及び組成物（例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦを含む）は、限られた標的部位、例えば、内耳において、持続的なＶＥＧＦ阻害剤のレベルをもたらす。理論に拘束されることを望むものではないが、本明細書に開示される組成物、例えばＶＥＧＦ阻害剤は、周囲の液槽からの直接取り込みを通じてＶＳ腫瘍細胞に入り得ると考えられており、その液槽は、神経間質を通じて内耳の外リンパ区画と連通しており、そこから抗ＶＥＧＦタンパク質の内耳供給が拡散され得る。腫瘍を有するマウスにおいて、抗ＶＥＧＦタンパク質を血流を通じてではなく腫瘍組織に局所的に適用すると、血管透過性の低下などの有益な効果がもたらされた（Ｌｉｃｈｔｅｎｂｅｌｄ １９９９、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
特定の実施形態では、本開示は、ＶＥＧＦ阻害剤、例えばｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦを腫瘍部位に局所的に送達するのに適した方法及び組成物を提供する。いくつかの実施形態では、これらの方法及び組成物は、抗ＶＥＧＦタンパク質による腫瘍の成長の制御の利点を維持しながら、ＶＥＧＦ阻害剤の全身投与について記録されている重篤な毒性のリスクを最小化する可能性を有する。特定の実施形態では、本開示は、内耳細胞の形質導入に適した方法及び組成物を提供する。いくつかの実施形態では、内耳細胞の形質導入は、腫瘍の部位及び／またはその近傍において、最小限の全身曝露で抗ＶＥＧＦタンパク質の長期的な発現を可能にし得る。
ＶＥＧＦポリヌクレオチド配列
とりわけ、本開示は、ポリヌクレオチド、例えば、ＶＥＧＦ遺伝子またはその特徴的部分を含むポリヌクレオチド、ならびにそのようなポリヌクレオチドを含む組成物、ならびにそのようなポリヌクレオチド及び／または組成物を利用する方法を提供する。
いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ遺伝子またはその特徴的部分を含むポリヌクレオチドは、ＤＮＡまたはＲＮＡであり得る。いくつかの実施形態では、ＤＮＡは、ゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡであり得る。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、ｍＲＮＡであり得る。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＶＥＧＦ遺伝子のエクソン及び／またはイントロンを含む。
いくつかの実施形態では、遺伝子産物は、ＶＥＧＦ遺伝子またはその特徴的部分を含むポリヌクレオチドから発現される。いくつかの実施形態では、このようなポリヌクレオチドの発現は、１つ以上の制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー、スプライス部位、ポリアデニル化部位、翻訳開始部位など）を利用することができる。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるポリヌクレオチドは、１つ以上の制御エレメントを含むことができる。
いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ遺伝子は、哺乳動物ＶＥＧＦ遺伝子である。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ遺伝子は、マウスＶＥＧＦ遺伝子である。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ遺伝子は、霊長類ＶＥＧＦ遺伝子である。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ遺伝子は、ヒトＶＥＧＦ遺伝子である。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ遺伝子は、ゲノムＤＮＡ配列である。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ遺伝子は、タンパク質産物をコードするＲＮＡ配列である。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ遺伝子は、タンパク質産物をコードする相補的ＲＮＡ配列をコードする相補的ＤＮＡ配列である。
いくつかの実施形態では、例示的なヒトＶＥＧＦ遺伝子は、ヒト染色体位置６ｐ２１．１；現在の２０２０アセンブリの位置ＮＣ＿０００００６．１２（４３７７０２０９．．４３７８６４８７）に見出され、ＮＣＢＩ参照配列番号：ＮＧ＿００８７３２．１でＶＥＧＦ－Ａとしても知られている。いくつかの実施形態では、例示的なヒトＶＥＧＦ遺伝子は、ＶＥＧＦ－Ａ遺伝子内に包含されるｃＤＮＡ配列（例えば、ＶＥＧＦ－Ａ転写バリアント１、転写バリアント２、転写バリアント３など）である。いくつかの実施形態では、例示的なヒトＶＥＧＦ遺伝子は、ＶＥＧＦ－Ａの少なくとも９つの既知の転写アイソフォームのうちの１つであり、当業者であれば、これらの転写アイソフォームは選択的スプライシングを受けて選択的翻訳アイソフォームを生成し得ることを理解するであろう。いくつかの実施形態では、例示的なヒトＶＥＧＦ－Ａ遺伝子は、ＶＥＧＦアイソフォームＡをコードする転写バリアント１によって表されるｃＤＮＡ配列である（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１０２５３６６．３）。いくつかの実施形態では、例示的なヒトＶＥＧＦ－Ａ遺伝子は、ＶＥＧＦアイソフォームＢをコードする転写バリアント２によって表されるｃＤＮＡ配列である（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００３３７６．６）。いくつかの実施形態では、例示的なヒトＶＥＧＦ－Ａ遺伝子は、ＶＥＧＦアイソフォームＣをコードする転写バリアント３によって表されるｃＤＮＡ配列である（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１０２５３６７．３）。いくつかの実施形態では、例示的なヒトＶＥＧＦ－Ａ遺伝子は、ＶＥＧＦアイソフォームＤをコードする転写バリアント４によって表されるｃＤＮＡ配列である（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１０２５３６８．３）。いくつかの実施形態では、例示的なヒトＶＥＧＦ－Ａ遺伝子は、ＶＥＧＦアイソフォームＥをコードする転写バリアント５によって表されるｃＤＮＡ配列である（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１０２５３６９．３）。いくつかの実施形態では、例示的なヒトＶＥＧＦ－Ａ遺伝子は、ＶＥＧＦアイソフォームＦをコードする転写バリアント６によって表されるｃＤＮＡ配列である（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１０２５３７０．３）。いくつかの実施形態では、例示的なヒトＶＥＧＦ－Ａ遺伝子は、ＶＥＧＦアイソフォームＧをコードする転写バリアント７によって表されるｃＤＮＡ配列である（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１０３３７５６．３）。いくつかの実施形態では、例示的なヒトＶＥＧＦ－Ａ遺伝子は、ＶＥＧＦアイソフォームＨをコードする転写バリアント８によって表されるｃＤＮＡ配列である（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１１７１６２２．２）。いくつかの実施形態では、例示的なヒトＶＥＧＦ－Ａ遺伝子は、ＶＥＧＦアイソフォームＲをコードする転写バリアントによって表されるｃＤＮＡ配列である（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１２０４３８５．２）。
いくつかの実施形態では、例示的なヒトＶＥＧＦ遺伝子は、ヒト染色体位置１１ｑ１３．１、位置ＮＣ＿００００１１．１０（６４２３４５８４．．６４２３９２６４）に見出され、ＶＥＧＦ－Ｂ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＧ＿０２９８２３．１）として知られている。いくつかの実施形態では、例示的なヒトＶＥＧＦ遺伝子は、ＶＥＧＦ－Ｂ遺伝子内に包含されるｃＤＮＡ配列、例えば、ＶＥＧＦ－Ｂ転写バリアント１６７（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１２４３７３３．２）、及び／または転写バリアント１８６（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００３３７７．５）である。
いくつかの実施形態では、例示的なヒトＶＥＧＦ遺伝子は、ヒト染色体位置４ｑ３４．１－ｑ３４．３、位置ＮＣ＿０００００４．１２（１７６６８３５３８．．１７６７９２９２２、相補体）に見出され、ＶＥＧＦ－Ｃ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＧ＿０３４２１６．１）として知られている。いくつかの実施形態では、例示的なヒトＶＥＧＦ遺伝子は、ＶＥＧＦ－Ｃ遺伝子内に包含されるｃＤＮＡ配列、例えば、ＶＥＧＦ－Ｃ転写バリアント１（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００５４２９．５）である。
いくつかの実施形態では、例示的なヒトＶＥＧＦ遺伝子は、ヒト染色体位置Ｘｐ２２．２、位置ＮＣ＿００００２３．１１（１５３４５５９６．．１５３８４４１３、相補体）に見出され、ＶＥＧＦ－Ｄ（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＧ＿０１２５０９．１）として知られている。いくつかの実施形態では、例示的なヒトＶＥＧＦ遺伝子は、ＶＥＧＦ－Ｄ遺伝子内に包含されるゲノム配列またはｃＤＮＡ配列、例えば、ＶＥＧＦ－Ｄ転写バリアント１（ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００４４６９．５）である。
ＶＥＧＦタンパク質配列
特定の実施形態では、目的のタンパク質は、ＶＥＧＦ－Ａ遺伝子のアイソフォームである。この遺伝子は、ＰＤＧＦ（血小板由来増殖因子）／ＶＥＧＦ（血管内皮増殖因子）ファミリー（ＰＤＧＦ／ＶＥＧＦ）のメンバーである。これは、ヘパリン結合タンパク質をコードしており、通常ジスルフィド結合したホモ二量体として存在する。この増殖因子は、血管内皮細胞の増殖及び移動を誘導し、生理的及び病理学的な血管新生の両方に必須である。異なるアイソフォームをコードする選択的にスプライシングされた転写バリアントが記載されている。上流の非ＡＵＧ（ＣＵＧ）コドンからの選択的翻訳の開始が、さらなるアイソフォームをもたらすという実質的な証拠が存在する。いくつかの実施形態では、目的のタンパク質は、内因性ＶＥＧＦ－Ａの機能の阻害剤である。
例示的なヒトＶＥＧＦ－ＡアイソフォームＬ－ＶＥＧＦ２０６前駆体（アイソフォームＡとしても知られる）アミノ酸配列（配列番号１）
ＭＴＤＲＱＴＤＴＡＰＳＰＳＹＨＬＬＰＧＲＲＲＴＶＤＡＡＡＳＲＧＱＧＰＥＰＡＰＧＧＧＶＥＧＶＧＡＲＧＶＡＬＫＬＦＶＱＬＬＧＣＳＲＦＧＧＡＶＶＲＡＧＥＡＥＰＳＧＡＡＲＳＡＳＳＧＲＥＥＰＱＰＥＥＧＥＥＥＥＥＫＥＥＥＲＧＰＱＷＲＬＧＡＲＫＰＧＳＷＴＧＥＡＡＶＣＡＤＳＡＰＡＡＲＡＰＱＡＬＡＲＡＳＧＲＧＧＲＶＡＲＲＧＡＥＥＳＧＰＰＨＳＰＳＲＲＧＳＡＳＲＡＧＰＧＲＡＳＥＴＭＮＦＬＬＳＷＶＨＷＳＬＡＬＬＬＹＬＨＨＡＫＷＳＱＡＡＰＭＡＥＧＧＧＱＮＨＨＥＶＶＫＦＭＤＶＹＱＲＳＹＣＨＰＩＥＴＬＶＤＩＦＱＥＹＰＤＥＩＥＹＩＦＫＰＳＣＶＰＬＭＲＣＧＧＣＣＮＤＥＧＬＥＣＶＰＴＥＥＳＮＩＴＭＱＩＭＲＩＫＰＨＱＧＱＨＩＧＥＭＳＦＬＱＨＮＫＣＥＣＲＰＫＫＤＲＡＲＱＥＫＫＳＶＲＧＫＧＫＧＱＫＲＫＲＫＫＳＲＹＫＳＷＳＶＹＶＧＡＲＣＣＬＭＰＷＳＬＰＧＰＨＰＣＧＰＣＳＥＲＲＫＨＬＦＶＱＤＰＱＴＣＫＣＳＣＫＮＴＤＳＲＣＫＡＲＱＬＥＬＮＥＲＴＣＲＣＤＫＰＲＲ
例示的なヒトＶＥＧＦ－ＡアイソフォームＬ－ＶＥＧＦ１８９前駆体（アイソフォームＢとしても知られる）アミノ酸配列（配列番号２）
ＭＴＤＲＱＴＤＴＡＰＳＰＳＹＨＬＬＰＧＲＲＲＴＶＤＡＡＡＳＲＧＱＧＰＥＰＡＰＧＧＧＶＥＧＶＧＡＲＧＶＡＬＫＬＦＶＱＬＬＧＣＳＲＦＧＧＡＶＶＲＡＧＥＡＥＰＳＧＡＡＲＳＡＳＳＧＲＥＥＰＱＰＥＥＧＥＥＥＥＥＫＥＥＥＲＧＰＱＷＲＬＧＡＲＫＰＧＳＷＴＧＥＡＡＶＣＡＤＳＡＰＡＡＲＡＰＱＡＬＡＲＡＳＧＲＧＧＲＶＡＲＲＧＡＥＥＳＧＰＰＨＳＰＳＲＲＧＳＡＳＲＡＧＰＧＲＡＳＥＴＭＮＦＬＬＳＷＶＨＷＳＬＡＬＬＬＹＬＨＨＡＫＷＳＱＡＡＰＭＡＥＧＧＧＱＮＨＨＥＶＶＫＦＭＤＶＹＱＲＳＹＣＨＰＩＥＴＬＶＤＩＦＱＥＹＰＤＥＩＥＹＩＦＫＰＳＣＶＰＬＭＲＣＧＧＣＣＮＤＥＧＬＥＣＶＰＴＥＥＳＮＩＴＭＱＩＭＲＩＫＰＨＱＧＱＨＩＧＥＭＳＦＬＱＨＮＫＣＥＣＲＰＫＫＤＲＡＲＱＥＫＫＳＶＲＧＫＧＫＧＱＫＲＫＲＫＫＳＲＹＫＳＷＳＶＰＣＧＰＣＳＥＲＲＫＨＬＦＶＱＤＰＱＴＣＫＣＳＣＫＮＴＤＳＲＣＫＡＲＱＬＥＬＮＥＲＴＣＲＣＤＫＰＲＲ
例示的なヒトＶＥＧＦ－ＡアイソフォームＶＥＧＦ１１１前駆体アミノ酸配列（配列番号３）
ＭＮＦＬＬＳＷＶＨＷＳＬＡＬＬＬＹＬＨＨＡＫＷＳＱＡＡＰＭＡＥＧＧＧＱＮＨＨＥＶＶＫＦＭＤＶＹＱＲＳＹＣＨＰＩＥＴＬＶＤＩＦＱＥＹＰＤＥＩＥＹＩＦＫＰＳＣＶＰＬＭＲＣＧＧＣＣＮＤＥＧＬＥＣＶＰＴＥＥＳＮＩＴＭＱＩＭＲＩＫＰＨＱＧＱＨＩＧＥＭＳＦＬＱＨＮＫＣＥＣＲＣＤＫＰＲＲ
例示的なヒトＶＥＧＦ－ＡアイソフォームＶＥＧＦ１２１前駆体アミノ酸配列（配列番号４）
ＭＮＦＬＬＳＷＶＨＷＳＬＡＬＬＬＹＬＨＨＡＫＷＳＱＡＡＰＭＡＥＧＧＧＱＮＨＨＥＶＶＫＦＭＤＶＹＱＲＳＹＣＨＰＩＥＴＬＶＤＩＦＱＥＹＰＤＥＩＥＹＩＦＫＰＳＣＶＰＬＭＲＣＧＧＣＣＮＤＥＧＬＥＣＶＰＴＥＥＳＮＩＴＭＱＩＭＲＩＫＰＨＱＧＱＨＩＧＥＭＳＦＬＱＨＮＫＣＥＣＲＰＫＫＤＲＡＲＱＥＫＣＤＫＰＲＲ
例示的なヒトＶＥＧＦ－ＡアイソフォームＶＥＧＦ１４５前駆体アミノ酸配列（配列番号５）
ＭＮＦＬＬＳＷＶＨＷＳＬＡＬＬＬＹＬＨＨＡＫＷＳＱＡＡＰＭＡＥＧＧＧＱＮＨＨＥＶＶＫＦＭＤＶＹＱＲＳＹＣＨＰＩＥＴＬＶＤＩＦＱＥＹＰＤＥＩＥＹＩＦＫＰＳＣＶＰＬＭＲＣＧＧＣＣＮＤＥＧＬＥＣＶＰＴＥＥＳＮＩＴＭＱＩＭＲＩＫＰＨＱＧＱＨＩＧＥＭＳＦＬＱＨＮＫＣＥＣＲＰＫＫＤＲＡＲＱＥＫＫＳＶＲＧＫＧＫＧＱＫＲＫＲＫＫＳＲＹＫＳＷＳＶＣＤＫＰＲＲ
例示的なヒトＶＥＧＦ－ＡアイソフォームＶＥＧＦ１６５Ａ前駆体アミノ酸配列（配列番号６）
ＭＮＦＬＬＳＷＶＨＷＳＬＡＬＬＬＹＬＨＨＡＫＷＳＱＡＡＰＭＡＥＧＧＧＱＮＨＨＥＶＶＫＦＭＤＶＹＱＲＳＹＣＨＰＩＥＴＬＶＤＩＦＱＥＹＰＤＥＩＥＹＩＦＫＰＳＣＶＰＬＭＲＣＧＧＣＣＮＤＥＧＬＥＣＶＰＴＥＥＳＮＩＴＭＱＩＭＲＩＫＰＨＱＧＱＨＩＧＥＭＳＦＬＱＨＮＫＣＥＣＲＰＫＫＤＲＡＲＱＥＮＰＣＧＰＣＳＥＲＲＫＨＬＦＶＱＤＰＱＴＣＫＣＳＣＫＮＴＤＳＲＣＫＡＲＱＬＥＬＮＥＲＴＣＲＣＤＫＰＲＲ
例示的なヒトＶＥＧＦ－ＡアイソフォームＶＥＧＦ１８９前駆体アミノ酸配列（配列番号７）
ＭＮＦＬＬＳＷＶＨＷＳＬＡＬＬＬＹＬＨＨＡＫＷＳＱＡＡＰＭＡＥＧＧＧＱＮＨＨＥＶＶＫＦＭＤＶＹＱＲＳＹＣＨＰＩＥＴＬＶＤＩＦＱＥＹＰＤＥＩＥＹＩＦＫＰＳＣＶＰＬＭＲＣＧＧＣＣＮＤＥＧＬＥＣＶＰＴＥＥＳＮＩＴＭＱＩＭＲＩＫＰＨＱＧＱＨＩＧＥＭＳＦＬＱＨＮＫＣＥＣＲＰＫＫＤＲＡＲＱＥＫＫＳＶＲＧＫＧＫＧＱＫＲＫＲＫＫＳＲＹＫＳＷＳＶＰＣＧＰＣＳＥＲＲＫＨＬＦＶＱＤＰＱＴＣＫＣＳＣＫＮＴＤＳＲＣＫＡＲＱＬＥＬＮＥＲＴＣＲＣＤＫＰＲＲ
例示的なヒトＶＥＧＦ－ＡアイソフォームＶＥＧＦ２０６前駆体アミノ酸配列（配列番号８）
ＭＮＦＬＬＳＷＶＨＷＳＬＡＬＬＬＹＬＨＨＡＫＷＳＱＡＡＰＭＡＥＧＧＧＱＮＨＨＥＶＶＫＦＭＤＶＹＱＲＳＹＣＨＰＩＥＴＬＶＤＩＦＱＥＹＰＤＥＩＥＹＩＦＫＰＳＣＶＰＬＭＲＣＧＧＣＣＮＤＥＧＬＥＣＶＰＴＥＥＳＮＩＴＭＱＩＭＲＩＫＰＨＱＧＱＨＩＧＥＭＳＦＬＱＨＮＫＣＥＣＲＰＫＫＤＲＡＲＱＥＫＫＳＶＲＧＫＧＫＧＱＫＲＫＲＫＫＳＲＹＫＳＷＳＶＹＶＧＡＲＣＣＬＭＰＷＳＬＰＧＰＨＰＣＧＰＣＳＥＲＲＫＨＬＦＶＱＤＰＱＴＣＫＣＳＣＫＮＴＤＳＲＣＫＡＲＱＬＥＬＮＥＲＴＣＲＣＤＫＰＲＲ
特定の実施形態では、目的のタンパク質は、ＶＥＧＦ－Ｂ遺伝子のアイソフォームである。この遺伝子は、ＰＤＧＦ／ＶＥＧＦのメンバーをコードする。ＶＥＧＦファミリーメンバーは、血管の形成を調節し、内皮細胞の生理機能に関与する。このメンバーは、ＶＥＧＦＲ－１（血管内皮増殖因子受容体１）及びＮＲＰ－１（ニューロピリン－１）に対するリガンドである。いくつかの実施形態では、目的のタンパク質は、内因性ＶＥＧＦ－Ｂの機能の阻害剤である。
例示的なヒトＶＥＧＦ－ＢアイソフォームＶＥＧＦＢ－１６７前駆体アミノ酸配列（配列番号９）
ＭＳＰＬＬＲＲＬＬＬＡＡＬＬＱＬＡＰＡＱＡＰＶＳＱＰＤＡＰＧＨＱＲＫＶＶＳＷＩＤＶＹＴＲＡＴＣＱＰＲＥＶＶＶＰＬＴＶＥＬＭＧＴＶＡＫＱＬＶＰＳＣＶＴＶＱＲＣＧＧＣＣＰＤＤＧＬＥＣＶＰＴＧＱＨＱＶＲＭＱＩＬＭＩＲＹＰＳＳＱＬＧＥＭＳＬＥＥＨＳＱＣＥＣＲＰＫＫＫＤＳＡＶＫＰＤＳＰＲＰＬＣＰＲＣＴＱＨＨＱＲＰＤＰＲＴＣＲＣＲＣＲＲＲＳＦＬＲＣＱＧＲＧＬＥＬＮＰＤＴＣＲＣＲＫＬＲＲ
例示的なヒトＶＥＧＦ－ＢアイソフォームＶＥＧＦＢ－１８６前駆体アミノ酸配列（配列番号１０）
ＭＳＰＬＬＲＲＬＬＬＡＡＬＬＱＬＡＰＡＱＡＰＶＳＱＰＤＡＰＧＨＱＲＫＶＶＳＷＩＤＶＹＴＲＡＴＣＱＰＲＥＶＶＶＰＬＴＶＥＬＭＧＴＶＡＫＱＬＶＰＳＣＶＴＶＱＲＣＧＧＣＣＰＤＤＧＬＥＣＶＰＴＧＱＨＱＶＲＭＱＩＬＭＩＲＹＰＳＳＱＬＧＥＭＳＬＥＥＨＳＱＣＥＣＲＰＫＫＫＤＳＡＶＫＰＤＲＡＡＴＰＨＨＲＰＱＰＲＳＶＰＧＷＤＳＡＰＧＡＰＳＰＡＤＩＴＨＰＴＰＡＰＧＰＳＡＨＡＡＰＳＴＴＳＡＬＴＰＧＰＡＡＡＡＡＤＡＡＡＳＳＶＡＫＧＧＡ
特定の実施形態では、目的のタンパク質は、ＶＥＧＦ－Ｃ遺伝子のアイソフォームである。この遺伝子によってコードされるタンパク質は、ＰＤＧＦ／ＶＥＧＦファミリーのメンバーである。コードされたタンパク質は、血管新生及び内皮細胞の増殖を促進し、さらに血管の透過性にも影響を与えることができる。前駆体タンパク質は、さらに、ＶＥＧＦＲ－２及びＶＥＧＦＲ－３受容体に結合して活性化することができる完全にプロセシングされた形態に切断される。いくつかの実施形態では、目的のタンパク質は、内因性ＶＥＧＦ－Ｃの機能の阻害剤である。
例示的なヒトＶＥＧＦ－Ｃ前駆体アミノ酸配列（配列番号１１）
ＭＨＬＬＧＦＦＳＶＡＣＳＬＬＡＡＡＬＬＰＧＰＲＥＡＰＡＡＡＡＡＦＥＳＧＬＤＬＳＤＡＥＰＤＡＧＥＡＴＡＹＡＳＫＤＬＥＥＱＬＲＳＶＳＳＶＤＥＬＭＴＶＬＹＰＥＹＷＫＭＹＫＣＱＬＲＫＧＧＷＱＨＮＲＥＱＡＮＬＮＳＲＴＥＥＴＩＫＦＡＡＡＨＹＮＴＥＩＬＫＳＩＤＮＥＷＲＫＴＱＣＭＰＲＥＶＣＩＤＶＧＫＥＦＧＶＡＴＮＴＦＦＫＰＰＣＶＳＶＹＲＣＧＧＣＣＮＳＥＧＬＱＣＭＮＴＳＴＳＹＬＳＫＴＬＦＥＩＴＶＰＬＳＱＧＰＫＰＶＴＩＳＦＡＮＨＴＳＣＲＣＭＳＫＬＤＶＹＲＱＶＨＳＩＩＲＲＳＬＰＡＴＬＰＱＣＱＡＡＮＫＴＣＰＴＮＹＭＷＮＮＨＩＣＲＣＬＡＱＥＤＦＭＦＳＳＤＡＧＤＤＳＴＤＧＦＨＤＩＣＧＰＮＫＥＬＤＥＥＴＣＱＣＶＣＲＡＧＬＲＰＡＳＣＧＰＨＫＥＬＤＲＮＳＣＱＣＶＣＫＮＫＬＦＰＳＱＣＧＡＮＲＥＦＤＥＮＴＣＱＣＶＣＫＲＴＣＰＲＮＱＰＬＮＰＧＫＣＡＣＥＣＴＥＳＰＱＫＣＬＬＫＧＫＫＦＨＨＱＴＣＳＣＹＲＲＰＣＴＮＲＱＫＡＣＥＰＧＦＳＹＳＥＥＶＣＲＣＶＰＳＹＷＫＲＰＱＭＳ
特定の実施形態では、目的のタンパク質は、ＶＥＧＦ－Ｄ遺伝子のアイソフォームである。この遺伝子によってコードされたタンパク質は、ＰＤＧＦ／ＶＥＧＦファミリーのメンバーであり、血管新生、リンパ管新生、及び内皮細胞の増殖において活性である。この分泌型タンパク質は、ＶＥＧＦＲ－２及びＶＥＧＦＲ－３受容体に結合し、それを活性化する複数のプロセシング形態を生成する複雑なタンパク質分解成熟を受ける。このタンパク質は、構造的及び機能的にＶＥＧＦ－Ｃに類似している。いくつかの実施形態では、目的のタンパク質は、内因性ＶＥＧＦ－Ｄの機能の阻害剤である。
例示的なヒトＶＥＧＦ－Ｄ前駆体アミノ酸配列（配列番号１２）
ＭＹＲＥＷＶＶＶＮＶＦＭＭＬＹＶＱＬＶＱＧＳＳＮＥＨＧＰＶＫＲＳＳＱＳＴＬＥＲＳＥＱＱＩＲＡＡＳＳＬＥＥＬＬＲＩＴＨＳＥＤＷＫＬＷＲＣＲＬＲＬＫＳＦＴＳＭＤＳＲＳＡＳＨＲＳＴＲＦＡＡＴＦＹＤＩＥＴＬＫＶＩＤＥＥＷＱＲＴＱＣＳＰＲＥＴＣＶＥＶＡＳＥＬＧＫＳＴＮＴＦＦＫＰＰＣＶＮＶＦＲＣＧＧＣＣＮＥＥＳＬＩＣＭＮＴＳＴＳＹＩＳＫＱＬＦＥＩＳＶＰＬＴＳＶＰＥＬＶＰＶＫＶＡＮＨＴＧＣＫＣＬＰＴＡＰＲＨＰＹＳＩＩＲＲＳＩＱＩＰＥＥＤＲＣＳＨＳＫＫＬＣＰＩＤＭＬＷＤＳＮＫＣＫＣＶＬＱＥＥＮＰＬＡＧＴＥＤＨＳＨＬＱＥＰＡＬＣＧＰＨＭＭＦＤＥＤＲＣＥＣＶＣＫＴＰＣＰＫＤＬＩＱＨＰＫＮＣＳＣＦＥＣＫＥＳＬＥＴＣＣＱＫＨＫＬＦＨＰＤＴＣＳＣＥＤＲＣＰＦＨＴＲＰＣＡＳＧＫＴＡＣＡＫＨＣＲＦＰＫＥＫＲＡＡＱＧＰＨＳＲＫＮＰ
ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ－Ｒ、及びＶＥＧＦ結合タンパク質
いくつかの実施形態では、目的のタンパク質は、ＶＥＧＦに結合できるタンパク質である。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ結合タンパク質は、抗体及び／またはその断片であるか、またはそれを含み得る。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ結合タンパク質は、血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）タンパク質及び／またはその断片であるか、またはそれを含み得る。
上記のように、ＶＥＧＦ阻害剤が腫瘍の血管透過性を低下させるという生物学的妥当性を裏付け得るデータが生成されている。いくつかの実施形態では、そのようなデータは、ＶＥＧＦ阻害剤が腫瘍の血管透過性を低下させるという生物学的妥当性を裏付けるデータを生成するために利用されてきたマウスモデルを使用して生成された。いくつかの実施形態では、このようなマウスモデルは、例えば、ＶＳの治療のために、蝸牛内投与経路を介して送達される遺伝子治療粒子の生物学的に活性な用量範囲を評価するのに理想的ではない。頭蓋窓モデルを用いて、Ｙｕａｎらは様々なヒト腫瘍細胞株を移植し、ＶＥＧＦ／ＶＰＦ（血管透過性因子）に対する中和抗体またはリン酸緩衝生理食塩水対照を静脈内ボーラス投与した（Ｙｕａｎ １９９６、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。著者らは、抗体治療群のアルブミンへの腫瘍血管透過性が対応する対照群よりも低く、連続治療後に腫瘍血管の直径が小さくなり、最終的に消失したことを示した。これらのデータは、内因性ＶＥＧＦ／ＶＰＦの中和によって腫瘍の血管透過性が低下可能であることを実証している（Ｙｕａｎ １９９６、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。より最近では、坐骨神経モデルと頭蓋内窓モデルの両方を使用して、Ｇａｏらは、両側ＶＳに対する抗ＶＥＧＦタンパク質治療の背後にある機序を特徴付けようとした（Ｇａｏ ２０１５、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。このグループは、ヒトＨＥＩ１９３神経鞘腫細胞を、マウス坐骨神経鞘または頭蓋窓移植マウスの右半球の軟膜とクモ膜との間のいずれかに注入した。腫瘍サイズが４ｍｍ径に達した後、ＶＥＧＦ阻害剤ベバシズマブを５ｍｇ／ｋｇ／週、腹腔内（ＩＰ）経路を介して投与した。得られたデータは、マウスの腫瘍浮腫を緩和し、神経機能を改善し、腫瘍血管系を一過性に正常化することを示した。
まとめると、これらの研究から、マウスにおける神経鞘腫の進行を遅らせるためのＶＥＧＦ阻害剤の使用について科学的根拠を裏付ける概念実証データが得られ、これは、アバスチン（登録商標）で全身治療したＮＦ２患者における予備臨床データ（Ｐｌｏｔｋｉｎ ２００９；Ｐｌｏｔｋｉｎ ２０１２；Ｌｕ ２０１９；Ｐｌｏｔｋｉｎ ２０１９、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）と一致する。これらの先行研究の１つの限界は、限られた標的部位における永続的な曝露レベルを反映していないことである。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法及び組成物は、限られた標的部位、例えば個体、例えば哺乳動物、例えばヒトの内耳において、持続的なＶＥＧＦ阻害剤、例えばｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦのレベルをもたらす。理論に拘束されることを望むものではないが、いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ阻害剤は、周囲の液槽からの直接取り込みを通じてＶＳ腫瘍細胞に入り得ると考えられており、その液槽は、神経間質を通じて内耳の外リンパ区画と連通しており、そこから抗ＶＥＧＦタンパク質の内耳供給が拡散され得る。腫瘍を有するマウスにおいて、抗ＶＥＧＦタンパク質を血流を通じてではなく腫瘍組織に局所的に適用すると、血管透過性の低下などの有益な効果がもたらされた（Ｌｉｃｈｔｅｎｂｅｌｄ １９９９、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
抗ＶＥＧＦ抗体
本明細書に記載される任意の抗体のいくつかの実施形態では、該抗体は、ＶＥＧＦ抗原（例えば、本明細書に記載される任意の例示的なＶＥＧＦタンパク質、例えば、成熟ヒトＶＥＧＦ－Ａ、成熟ヒトＶＥＧＦ－Ｂ、成熟ヒトＶＥＧＦ－Ｃ、及び成熟ヒトＶＥＧＦ－Ｄのうちの１つ以上）に結合することができる（例えば、本明細書に記載の任意の結合親和性）。
本明細書に記載のいくつかの実施形態では、抗体は、ＶＥＧＦ（例えば、本明細書に記載される任意の例示的なＶＥＧＦタンパク質のうちの１つ以上、例えば、成熟ヒトＶＥＧＦ－Ａ、成熟ヒトＶＥＧＦ－Ｂ、成熟ヒトＶＥＧＦ－Ｃ、及び成熟ヒトＶＥＧＦ－Ｄのうちの１つ以上）の活性を低下させることができる。いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＥＧＦ（例えば、本明細書に記載される任意の例示的なＶＥＧＦタンパク質のうちの１つ以上、例えば、成熟ヒトＶＥＧＦ－Ａ、成熟ヒトＶＥＧＦ－Ｂ、成熟ヒトＶＥＧＦ－Ｃ、及び成熟ヒトＶＥＧＦ－Ｄのうちの１つ以上）がその受容体の１つ以上（例えば、１つ以上のＶＥＧＦ受容体）に結合するのを阻害することができる。例えば、ＷＯ１９９８／０４５３３１、ＵＳ９，０７９，９５３、ＵＳ２０１５／０１４７３１７、ＵＳ２０１６／０２８９３１４、Ｐｌｏｔｋｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｏｔｏｌｏｇｙ＆Ｎｅｕｒｏｔｏｌｏｇｙ ３３：１０４６－１０５２（２０１２）；及びＦｅｒｒａｒａ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ ３３３（２）：３２８－３３５（これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと。いくつかの実施形態では、抗体は、下流シグナル伝達（例えば、ＶＥＧＦ受容体、例えば、本明細書に記載の任意の例示的なＶＥＧＦ受容体の１つ以上、例えば、ヒトＶＥＧＦＲ－１、ヒトＶＥＧＦＲ－２、及びヒトＶＥＧＦＲ－３のうちの１つ以上の下流のシグナル伝達）を低下させることができる。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ活性の低下は、間接的に、以下を通じて検出され得る。例えば、ＶＳ腫瘍サイズ、及び／または本明細書に記載のＶＳ関連症状の変化、例えば、聴力の増加（例えば、聴力の１％～約４００％の増加（または本明細書に記載のこの範囲の任意の部分範囲））またはＶＳ腫瘍サイズの減少（例えば、１％～９９％、１％～９５％、１％～９０％、１％～８５％、１％～８０％、１％～７５％、１％～７０％、１％～６５％、１％～６０％、１％～５５％、１％～５０％、１％～４５％、１％～４０％、１％～３５％、１％～３０％、１％～２５％、１％～２０％、１％～１５％、１％～１０％、１％～５％、５％～９９％、５％～９５％、５％～９０％、５％～８５％、５％～８０％、５％～７５％、５％～７０％、５％～６５％、５％～６０％、５％～５５％、５％～５０％、５％～４５％、５％～４０％、５％～３５％、５％～３０％、５％～２５％、５％～２０％、５％～１５％、５％～１０％、１０％～９９％、１０％～９５％、１０％～９０％、１０％～８５％、１０％～８０％、１０％～７５％、１０％～７０％、１０％～６５％、１０％～６０％、１０％～５５％、１０％～５０％、１０％～４５％、１０％～４０％、１０％～３５％、１０％～３０％、１０％～２５％、１０％～２０％、１０％～１５％、１５％～９９％、１５％～９５％、１５％～９０％、１５％～８５％、１５％～８０％、１５％～７５％、１５％～７０％、１５％～６５％、１５％～６０％、１５％～５５％、１５％～５０％、１５％～４５％、１５％～４０％、１５％～３５％、１５％～３０％、１５％～２５％、１５％～２０％、２０％～９９％、２０％～９５％、２０％～９０％、２０％～８５％、２０％～８０％、２０％～７５％、２０％～７０％、２０％～６５％、２０％～６０％、２０％～５５％、２０％～５０％、２０％～４５％、２０％～４０％、２０％～３５％、２０％～３０％、２０％～２５％、２５％～９９％、２５％～９５％、２５％～９０％、２５％～８５％、２５％～８０％、２５％～７５％、２５％～７０％、２５％～６５％、２５％～６０％、２５％～５５％、２５％～５０％、２５％～４５％、２５％～４０％、２５％～３５％、２５％～３０％、３０％～９９％、３０％～９５％、３０％～９０％、３０％～８５％、３０％～８０％、３０％～７５％、３０％～７０％、３０％～６５％、３０％～６０％、３０％～５５％、３０％～５０％、３０％～４５％、３０％～４０％、３０％～３５％、３５％～９９％、３５％～９５％、３５％～９０％、３５％～８５％、３５％～８０％、３５％～７５％、３５％～７０％、３５％～６５％、３５％～６０％、３５％～５５％、３５％～５０％、３５％～４５％、３５％～４０％、４０％～９９％、４０％～９５％、４０％～９０％、４０％～８５％、４０％～８０％、４０％～７５％、４０％～７０％、４０％～６５％、４０％～６０％、４０％～５５％、４０％～５０％、４０％～４５％、４５％～９９％、４５％～９５％、４５％～９０％、４５％～８５％、４５％～８０％、４５％～７５％、４５％～７０％、４５％～６５％、４５％～６０％、４５％～５５％、４５％～５０％、５０％～９９％、５０％～９５％、５０％～９０％、５０％～８５％、５０％～８０％、５０％～７５％、５０％～７０％、５０％～６５％、５０％～６０％、５０％～５５％、５５％～９９％、５５％～９５％、５５％～９０％、５５％～８５％、５５％～８０％、５５％～７５％、５５％～７０％、５５％～６５％、５５％～６０％、６０％～９９％、６０％～９５％、６０％～９０％、６０％～８５％、６０％～８０％、６０％～７５％、６０％～７０％、６０％～６５％、６５％～９９％、６５％～９５％、６５％～９０％、６５％～８５％、６５％～８０％、６５％～７５％、６５％～７０％、７０％～９９％、７０％～９５％、７０％～９０％、７０％～８５％、７０％～８０％、７０％～７５％、７５％～９９％、７５％～９５％、７５％～９０％、７５％～８５％、７５％～８０％、８０％～９９％、８０％～９５％、８０％～９０％、８０％～８５％、８５％～９９％、８５％～９５％、８５％～９０％、９０％～９９％、９０％～９５％、または９５％～９９％の減少）、及び／また聴神経腫瘍の１つ以上の症状（例えば、聴力低下、耳鳴り、回転性めまい、生活の質の低下など）の重症度と比較した、哺乳動物における聴神経腫瘍、ＶＳ、または神経線維腫症ＩＩ型の１つ以上の症状の重症度、及び／または本明細書に記載の任意のｒＡＡＶ粒子を投与する前の、哺乳動物における聴神経腫瘍、ＶＳ、または神経線維腫症ＩＩ型のそれぞれのサイズ。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ活性の低下はｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイで検出され得る。
いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化抗体、キメラ抗体、または多価抗体であり得る。いくつかの実施形態では、抗体は、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、ＶＨＨドメイン、ＶＮＡＲドメイン、（ｓｃＦｖ）２、ミニボディ、またはＢｉＴＥであり得る。いくつかの実施形態では、抗体は、ＤＶＤ－Ｉｇ、及び二重親和性再標的化抗体（ＤＡＲＴ）、ｔｒｉｏｍａｂ、共通のＬＣを有するｋｉｈ ＩｇＧ、クロスマブ、オルト－Ｆａｂ ＩｇＧ、２－イン－１－ＩｇＧ、ＩｇＧ－ＳｃＦｖ、ｓｃＦｖ２－Ｆｃ、バイ－ナノボディ、タンデム抗体、ＤＡＲＴ－Ｆｃ、ｓｃＦｖ－ＨＡＳ－ｓｃＦｖ、ＤＮＬ－Ｆａｂ３、ＤＡＦ（２－イン－１または４－イン－１）、ＤｕｔａＭａｂ、ＤＴ－ＩｇＧ、ノブインホール共通ＬＣ、ノブインホールアセンブリー、チャージペア抗体、Ｆａｂ－アーム交換抗体、ＳＥＥＤボディ、Ｔｒｉｏｍａｂ、ＬＵＺ－Ｙ、Ｆｃａｂ、ｋλ－ボディ、直交Ｆａｂ、ＤＶＤ－ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｈ）－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－（Ｈ）ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－（Ｌ）－ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ、Ｈ）－Ｆｃ、ＩｇＧ（Ｈ）－Ｖ、Ｖ（Ｈ）－ＩｇＧ、ＩｇＧ（Ｌ）－Ｖ、Ｖ（Ｌ）－ＩｇＧ、ＫＩＨ ＩｇＧ－ｓｃＦａｂ、２ｓｃＦｖ－ＩｇＧ、ＩｇＧ－２ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ４－Ｉｇ、Ｚｙｂｏｄｙ、ＤＶＩ－ＩｇＧ、ナノボディ、ナノボディ－ＨＳＡ、ダイアボディ、ＴａｎｄＡｂ、ｓｃダイアボディ、ｓｃダイアボディ－ＣＨ３、ダイアボディ－ＣＨ３、トリプルボディ、ミニ抗体、ミニボディ、ＴｒｉＢｉミニボディ、ｓｃＦｖ－ＣＨ３ ＫＩＨ、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－ＣＨ－ＣＬ－ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２－ｓｃＦＶ２、ｓｃＦｖ－ＫＩＨ、Ｆａｂ－ｓｃＦｖ－Ｆｃ、四価ＨＣＡｂ、ｓｃダイアボディ－Ｆｃ、ダイアボディ－Ｆｃ、タンデムｓｃＦｖ－Ｆｃ、イントラボディ、ドックアンドロック二重特異性抗体、ＩｍｍＴＡＣ、ＨＳＡボディ、ｓｃダイアボディ－ＨＡＳ、タンデムｓｃＦｖ、ＩｇＧ－ＩｇＧ、Ｃｏｖ－Ｘ－ボディ、及びｓｃＦｖ１－ＰＥＧ－ｓｃＦｖ２であり得る。
抗体のさらなる例としては、Ｆｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、及びＦａｂ’断片が挙げられる。抗体のさらなる例としては、ＩｇＧの抗原結合断片（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４の抗原結合断片）（例えば、ヒトもしくはヒト化ＩｇＧ（例えば、ヒトもしくはヒト化ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４）の抗原結合断片）、ＩｇＡの抗原結合断片（例えば、ＩｇＡ１もしくはＩｇＡ２の抗原結合断片）（例えば、ヒトもしくはヒト化ＩｇＡ（例えば、ヒトもしくはヒト化ＩｇＡ１もしくはＩｇＡ２）の抗原結合断片）、ＩｇＤの抗原結合断片（例えば、ヒトもしくはヒト化ＩｇＤの抗原結合断片）、ＩｇＥの抗原結合断片（例えば、ヒトもしくはヒト化ＩｇＥの抗原結合断片）、またはＩｇＭの抗原結合断片（例えば、ヒトもしくはヒト化ＩｇＭの抗原結合断片）が挙げられる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される任意の抗体は、ＶＥＧＦに特異的に結合し得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される任意の抗体は、ＰＤＧＦ／ＶＥＧＦに特異的に結合し得る。
ＶＨＨドメインは、ラクダ科に見出だすことができる単一の単量体可変抗体ドメインである。ＶＮＡＲドメインは、軟骨魚類に見出だすことができる単一の単量体可変抗体ドメインである。ＶＨＨドメイン及びＶＮＡＲドメインの非限定的な態様は、例えば、Ｃｒｏｍｉｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１５：２５４３－２５５７，２０１６；Ｄｅ Ｇｅｎｓｔ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０：１８７－１９８，２００６；Ｄｅ Ｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３２：２６３－２７０，２０１４；Ｋｉｊａｎｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ １０：１６１－１７４，２０１５；Ｋｏｖａｌｅｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．１４：１５２７－１５３９，２０１４；Ｋｒａｈ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｃｏｌ．３８：２１－２８，２０１６；Ｍｕｊｉｃ－Ｄｅｌｉｃ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．３５：２４７－２５５，２０１４；Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ，Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７４：２７７－３０２，２００１；Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．２６：２３０－２３５，２００１；Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．８２：７７５－７９７，２０１３；Ｒａｈｂａｒｉｚａｄｅｈ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｎｖｅｓｔ．４０：２９９－３３８，２０１１；Ｖａｎ Ａｕｄｅｎｈｏｖｅ ｅｔ ａｌ．，ＥＢｉｏＭｅｄｉｃｉｎｅ ８：４０－４８，２０１６；Ｖａｎ Ｂｏｃｋｓｔａｅｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ １０：１２１２－１２２４，２００９；Ｖｉｎｃｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．９１１：１５－２６，２０１２；及びＷｅｓｏｌｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８：１５７－１７４，２００９（これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。
いくつかの実施形態では、「Ｆｖ」断片は、１つの重鎖可変ドメイン及び１つの軽鎖可変ドメインの非共有結合二量体を含む。
いくつかの実施形態では、「Ｆａｂ」断片は、Ｆｖ断片の重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインに加えて、軽鎖の定常ドメイン及び重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）を含む。
いくつかの実施形態では、「Ｆ（ａｂ’）２」断片は、ジスルフィド結合によってヒンジ領域付近で連結した２つのＦａｂ断片を含む。
いくつかの実施形態では、「二重可変ドメイン免疫グロブリン」または「ＤＶＤ－Ｉｇ」は、例えば、ＤｉＧｉａｍｍａｒｉｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．８９９：１４５－１５６，２０１２；Ｊａｋｏｂ ｅｔ ａｌ．，ＭＡＢｓ ５：３５８－３６３，２０１３；ならびに米国特許第７，６１２，１８１号；同第８，２５８，２６８号；同第８，５８６，７１４号；同第８，７１６，４５０号；同第８，７２２，８５５号；同第８，７３５，５４６号；及び同第８，８２２，６４５号（これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている多価性及び多重特異性結合タンパク質を指す。
いくつかの実施形態では、薬物親和性応答性標的安定性（ＤＡＲＴＳ）アッセイについて記載され、例えば、Ｇａｒｂｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ １３：７９９－８０１，２０１４（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に示されるように実行される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の抗体の解離定数（ＫＤ）は、例えば、ＶＥＧＦタンパク質（例えば、本明細書に記載の任意のＶＥＧＦタンパク質、例えば、成熟ヒトＶＥＧＦ－Ａ、成熟ヒトＶＥＧＦ－Ｂ、成熟ヒトＶＥＧＦ－Ｃ、及び成熟ヒトＶＥＧＦ－Ｄのうちの１つ以上）に対して表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を用いてリン酸緩衝生理食塩水中で測定して、１×１０－５Ｍ未満（例えば、０．５×１０－５Ｍ未満、１×１０－６Ｍ未満、０．５×１０－６Ｍ未満、１×１０－７Ｍ未満、０．５×１０－７Ｍ未満、１×１０－８Ｍ未満、０．５×１０－８Ｍ未満、１×１０－９Ｍ未満、０．５×１０－９Ｍ未満、１×１０－１０Ｍ未満、０．５×１０－１０Ｍ未満、１×１０－１１Ｍ未満、０．５×１０－１１Ｍ未満、または１×１０－１２Ｍ未満）である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の抗体のＫＤは、ＶＥＧＦタンパク質（例えば、本明細書に記載の任意のＶＥＧＦタンパク質、例えば、成熟ヒトＶＥＧＦ－Ａ、成熟ヒトＶＥＧＦ－Ｂ、成熟ヒトＶＥＧＦ－Ｃ、及び成熟ヒトＶＥＧＦ－Ｄのうちの１つ以上）に対して表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を用いてリン酸緩衝生理食塩水中で測定して、約１×１０－１２Ｍ～約１×１０－５Ｍ、約０．５×１０－５Ｍ、約１×１０－６Ｍ、約０．５×１０－６Ｍ、約１×１０－７Ｍ、約０．５×１０－７Ｍ、約１×１０－８Ｍ、約０．５×１０－８Ｍ、約１×１０－９Ｍ、約０．５×１０－９Ｍ、約１×１０－１０Ｍ、約０．５×１０－１０Ｍ、約１×１０－１１Ｍ、または約０．５×１０－１１Ｍ（両端値を含む）；約０．５×１０－１１Ｍ～約１×１０－５Ｍ、約０．５×１０－５Ｍ、約１×１０－６Ｍ、約０．５×１０－６Ｍ、約１×１０－７Ｍ、約０．５×１０－７Ｍ、約１×１０－８Ｍ、約０．５×１０－８Ｍ、約１×１０－９Ｍ、約０．５×１０－９Ｍ、約１×１０－１０Ｍ、約０．５×１０－１０Ｍ、または約１×１０－１１Ｍ（両端値を含む）；約１×１０－１１Ｍ～約１×１０－５Ｍ、約０．５×１０－５Ｍ、約１×１０－６Ｍ、約０．５×１０－６Ｍ、約１×１０－７Ｍ、約０．５×１０－７Ｍ、約１×１０－８Ｍ、約０．５×１０－８Ｍ、約１×１０－９Ｍ、約０．５×１０－９Ｍ、約１×１０－１０Ｍ、または約０．５×１０－１０Ｍ（両端値を含む）；約０．５×１０－１０Ｍ～約１×１０－５Ｍ、約０．５×１０－５Ｍ、約１×１０－６Ｍ、約０．５×１０－６Ｍ、約１×１０－７Ｍ、約０．５×１０－７Ｍ、約１×１０－８Ｍ、約０．５×１０－８Ｍ、約１×１０－９Ｍ、約０．５×１０－９Ｍ、または約１×１０－１０Ｍ（両端値を含む）；約１×１０－１０Ｍ～約１×１０－５Ｍ、約０．５×１０－５Ｍ、約１×１０－６Ｍ、約０．５×１０－６Ｍ、約１×１０－７Ｍ、約０．５×１０－７Ｍ、約１×１０－８Ｍ、約０．５×１０－８Ｍ、約１×１０－９Ｍ、または約０．５×１０－９Ｍ（両端値を含む）；約０．５×１０－９Ｍ～約１×１０－５Ｍ、約０．５×１０－５Ｍ、約１×１０－６Ｍ、約０．５×１０－６Ｍ、約１×１０－７Ｍ、約０．５×１０－７Ｍ、約１×１０－８Ｍ、約０．５×１０－８Ｍ、または約１×１０－９Ｍ（両端値を含む）；約１×１０－９Ｍ～約１×１０－５Ｍ、約０．５×１０－５Ｍ、約１×１０－６Ｍ、約０．５×１０－６Ｍ、約１×１０－７Ｍ、約０．５×１０－７Ｍ、約１×１０－８Ｍ、または約０．５×１０－８Ｍ（両端値を含む）；約０．５×１０－８Ｍ～約１×１０－５Ｍ、約０．５×１０－５Ｍ、約１×１０－６Ｍ、約０．５×１０－６Ｍ、約１×１０－７Ｍ、約０．５×１０－７Ｍ、または約１×１０－８Ｍ（両端値を含む）；約１×１０－８Ｍ～約１×１０－５Ｍ、約０．５×１０－５Ｍ、約１×１０－６Ｍ、約０．５×１０－６Ｍ、約１×１０－７Ｍ、または約０．５×１０－７Ｍ（両端値を含む）；約０．５×１０－７Ｍ～約１×１０－５Ｍ、約０．５×１０－５Ｍ、約１×１０－６Ｍ、約０．５×１０－６Ｍ、または約１×１０－７Ｍ（両端値を含む）；約１×１０－７Ｍ～約１×１０－５Ｍ、約０．５×１０－５Ｍ、約１×１０－６Ｍ、または約０．５×１０－６Ｍ（両端値を含む）；約０．５×１０－６Ｍ～約１×１０－５Ｍ、約０．５×１０－５Ｍ、または約１×１０－６Ｍ（両端値を含む）；約１×１０－６Ｍ～約１×１０－５Ｍ、または約０．５×１０－５Ｍ（両端値を含む）；または約０．５×１０－５Ｍ～約１×１０－５Ｍ（両端値を含む）である。
本明細書に記載の任意の抗体のＫＤ値を決定するために、当該技術分野で知られている様々な異なる方法が使用され得る（例えば、電気泳動移動度シフトアッセイ、フィルター結合アッセイ、表面プラズモン共鳴、及び二分子結合動態アッセイなど）。
本明細書に記載の任意の抗体のいくつかの実施形態では、対象（例えば、ヒト）における抗体の半減期は、類似対象における対照抗体（例えば、本明細書に記載の任意の対照抗体または条件）の半減期と比較して、約０．５倍～約４倍（例えば、約０．５倍～約３．５倍、約０．５倍～約３倍、約０．５倍～約２．５倍、約０．５倍～約２倍、約０．５倍～約１．５倍、約０．５倍～約１倍、約１倍～約４倍、約１倍～約３．５倍、約１倍～約３倍、約１倍～約２．５倍、約１倍～約２倍、約１．５倍～約４倍、約１．５倍～約３．５倍、約１．５倍～約３倍、約１．５倍～約２．５倍、約１．５倍～約２倍、約２倍～約４倍、約２倍～約３．５倍、約２倍～約３倍、約２倍～約２．５倍、約２．５倍～約４倍、約２．５倍～約３．５倍、約２．５倍～約３倍、約３倍～約４倍、約３倍～約３．５倍、または約３．５倍～約４倍）減少する。例えば、Ｌｅａｂｍａｎ ｅｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ．５（６）：８９６－９０３，２０１３（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は、Ｆｃ領域内に哺乳動物の半減期を減少させる１つ以上のアミノ酸置換を有し、対照抗体は、Ｆｃ領域内のこのような１つ以上のアミノ酸置換のうちの少なくとも１つを欠く（例えば、全てを欠く）。
いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦに特異的に結合する抗体は、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔａｔｉｎ（登録商標））である。ベバシズマブ（フルサイズ抗体約１５０ｋＤａ）は、ＶＥＧＦ－Ａの全てのアイソフォームを阻害する。ベバシズマブは、２００４年に結腸癌向けに米国食品医薬品局（ＦＤＡ）の承認を受けており、静脈内（ＩＶ）用量の場合４．０～７．５ｍｇ／ｋｇを２～３週間（血漿中半減期２１日）、硝子体内（ＩＶＴ）用量の場合０．０５ｍＬ中に１．２５ｍｇ（半減期５．６日）である。ベバシズマブのＶＥＧＦ１６５（ＶＥＧＦ－Ａ）に対するＫＤは５８ｐＭである。例えば、ＷＯ２０１７／０５０８２５（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと。
いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦに特異的に結合する抗体は、ラニビズマブ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））である。ラニビズマブ（約５０ｋＤａ）は、ＶＥＧＦ－Ａの全てのアイソフォームを阻害する。ラニビズマブは、２００６年に眼科使用向けにＦＤＡの承認を受けており、静脈内（ＩＶ）用量の場合４．０～７．５ｍｇ／ｋｇを２～３週間（血漿中半減期０．５日）、硝子体内（ＩＶＴ）用量の場合０．０５ｍＬ中に０．５ｍｇ（半減期３．２日）である。ラニビズマブのＶＥＧＦ－Ａ１６５（配列番号６によって表されるＶＥＧＦ－Ａアイソフォーム１６５）に対するＫＤは４６ｐＭである。例えば、ＷＯ２０１４／１７８０７８（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと。
いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦに特異的に結合する抗体は、セバシズマブ（ＡＰＸ００３／ＳＩＭ－ＢＤ０８０１）またはその特徴的部分である。
特定の実施形態では、本明細書に記載の組成物（例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ）内に含まれる抗ＶＥＧＦタンパク質コード配列は、網膜、ならびに膠芽腫及び他のがんでの病理学的な脈管化に対して承認されているＶＥＧＦ阻害剤から選択され、例えば、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））；アフリベルセプト（Ｅｙｌｅａ（登録商標））；ジブ－アフリベルセプト（Ｚａｌｔｒａｐ（登録商標））；ブロルシズマブ（Ｂｅｏｖｕ（登録商標））；及び／またはラニビズマブ（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標））が挙げられる。さらに、いくつかの実施形態では、非臨床及び臨床開発の様々な段階にあるこれらの製品の多くのバイオシミラー、及びラニビズマブのバイオシミラーであるＲａｚｕｍａｂ（登録商標）が利用され得る。
ラニビズマブ、アフリベルセプト、及びブロルシズマブは、それぞれ滲出型加齢黄斑変性（ＡＭＤ）に対する硝子体内反復投与が承認されており、ラニビズマブ及びアフリベルセプトは、さらに網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）、糖尿病黄斑浮腫（ＤＭＥ）、及び糖尿病網膜症（ＤＲ）に対する硝子体内反復投与が承認されている。標的化局所送達とそれに伴う全身曝露の減少により、ＶＥＧＦ阻害剤の静脈内治療レジメンよりも、安全性プロファイルの改善（血栓塞栓事象の発生率の低下を含む）がもたらされ得ることが確認されている。これらの治療薬の遺伝子治療バージョンは、現在、ＡＭＤ及びＤＭＥに対して臨床開発中である（Ｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ ２０２０ｂ、２０２０ｃ、及び２０２０ｄ［ＮＣＴ０３０６６２５８，ＮＣＴ０３７４８７８４，及びＮＣＴ０４４１８４２７］、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。アフリベルセプトは、ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分に融合したヒトＶＥＧＦ受容体１及び２の細胞外ドメインの部分からなる組換え融合タンパク質（９７ｋＤａ）であり、滲出型ＡＭＤ及びＤＭＥの臨床試験において、硝子体内反復投与により眼に局所的に送達された場合に有効であることが示されている。ベバシズマブと同様に、ジブ－アフリベルセプトも静脈内注入が承認されており、出血及び創傷治癒に関して同様のリスクと警告を伴う（Ｓａｎｏｆｉ－Ａｖｅｎｔｉｓ ＵＳ ２０２０、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
滲出型加齢黄斑変性（ＡＭＤ）患者の研究では、硝子体内注入を介して投与されたベバシズマブ及びラニビズマブなどの抗ＶＥＧＦタンパク質の臨床用量の局所的送達が、４ヶ月目の視力の有意な改善と関連していた；しかしながら、同時点で、ＶＥＧＦ血漿レベルは、ベバシズマブを注入したコホートでのみ有意に低下した（Ｃａｒｎｅｉｒｏ ２０１２、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。特定の実施形態では、本開示に記載の方法及び組成物は、ベバシズマブの全身送達に関連する、及び／または急性局所送達に関連する可能性のある、血漿ＶＥＧＦレベルの低下に対する解決策を提供する。特定の研究では、薬物動態学的研究での知見と一致する結果が実証されており、例えば、ウサギでは、硝子体内注入後に血清中にベバシズマブが検出されるが、ラニビズマブは検出されない（Ｂａｋｒｉ ２００７、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ＡＭＤにおけるピボタル試験の臨床安全性データの検討は、最長２年間のラニビズマブの硝子体内反復投与は、重大な安全性リスクとは関連しないことを示唆している（Ｓｃｈｍｉｄｔ－Ｅｒｆｕｒｔｈ ２０１０、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
ラニビズマブ
ラニビズマブは、ヒト化モノクローナル抗体断片（Ｆａｂ）であり、硝子体内投与により眼内に局所的に送達された場合、アフリベルセプトと同様の臨床効果及び同等の血栓塞栓事象の発生率を有する（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ ２０１７、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ラニビズマブは、ＶＥＧＦに結合してこれを中和するＩｇＧ１ Ｆａｂである。ラニビズマブは、ヒトＶＥＧＦ－Ａタンパク質の全ての既知のアイソフォームに結合し、同族の受容体（ＶＥＧＦＲ－１及びＶＥＧＦＲ－２）との相互作用を妨げることによって、生物学的活性を阻害すると考えられている。ラニビズマブは、Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標）というブランド名で販売されている。網膜静脈閉塞症後の黄斑浮腫、加齢黄斑変性（滲出型）、及び糖尿病黄斑浮腫などの適応症でＦＤＡに承認されている。ベバシズマブと比較して、ラニビズマブは８倍を超える高い結合能と６６倍を超える高い結合親和性を示す（Ｋｌｅｔｔｎｅｒ ２００８；Ｙａｎｇ ２０１４、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。これらの違いにより、ラニビズマブのＶＥＧＦ誘導性内皮増殖に対するＩＣ５０は、ベバシズマブの６分の１となり、ラニビズマブはＶＥＧＦ活性に対して０．３７ナノモル（ｎＭ）（１ミリリットルあたり約１７ナノグラム［ｎｇ／ｍｌ］のラニビズマブ；Ｙａｎｇ ２０１４、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）まで臨床的に関連する影響を及ぼす。重要なことに、ラニビズマブはまた、Ｆｃ領域を欠いているため、分子はＦｃのリサイクリングを回避でき、フルサイズ抗体（１４９ｋＤａ）よりも著しく小さくなる（４８ｋＤａ）（Ｍｅｙｅｒ ２０１１、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。いくつかの実施形態では、このより小さい分子サイズは、標的部位への拡散、腫瘍間質への血管外漏出能力、及び／または腫瘍内の標的部位への拡散効率を改善するのに有利であり得る（Ｘｅｎａｋｉ ２０１７、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、ｒＡＡＶ遺伝子治療産物に発展するためのラニビズマブのコード配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物（例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ）は、蝸牛に送達され得、蝸牛内投与は、低い全身曝露をもたらし得、それにより静脈内投与と比較して改善された安全性プロファイルをもたらすことができる。
特定の実施形態では、本開示は、Ｆｃ領域を欠く抗ＶＥＧＦタンパク質であるラニビズマブを含む組成物を提供する。ベバシズマブに見られる抗体Ｆｃ領域は、Ｆｃ受容体媒介性の輸送を通じた生物学的障壁を越えたベバシズマブの分散、及びベバシズマブの免疫応答の活性化を可能にすると考えられる（Ｋｉｍ ２００９；Ｍｅｙｅｒ ２０１１、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。特定の研究では、ベバシズマブと比較して、ラニビズマブは、高度に希釈した場合に１７倍高い結合能と６倍高い結合親和性を示し得ることが示唆されており（Ｆｅｒｒａｒａ ２００６；Ｋｌｅｔｔｎｅｒ ２００８、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、このことから低濃度での、より高い特異的活性が示唆される。いくつかの実施形態では、ラニビズマブのより小さい分子サイズ（４８ｋＤａ、ベバシズマブの１４９ｋＤａと比較）はまた、標的部位への拡散、腫瘍間質への血管外漏出能力、及び／または腫瘍内の標的部位への拡散効率を改善するのに有利であり得る（Ｘｅｎａｋｉ ２０１７、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ及び／またはその抗原提示断片に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＶＥＧＦタンパク質は、抗体である。いくつかの実施形態では、そのような抗体は、ラニビズマブの免疫グロブリン軽鎖可変ドメインに対して少なくとも８０％（例えば、少なくとも８２％、少なくとも８４％、少なくとも８６％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９６％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）同一である配列であるか、またはそれを含む免疫グロブリン軽鎖可変ドメインを含み、及び／またはラニビズマブの免疫グロブリン重鎖可変ドメインに対して少なくとも８０％（例えば、少なくとも８２％、少なくとも８４％、少なくとも８６％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９６％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）同一である配列であるか、またはそれを含む免疫グロブリン重鎖可変ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ及び／またはその抗原提示断片に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＶＥＧＦタンパク質は、抗体である。いくつかの実施形態では、そのような抗体は、特に、ラニビズマブの免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであるか、またはそれを含む免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン、及び／またはラニビズマブの免疫グロブリン重鎖可変ドメインであるか、またはそれを含む免疫グロブリン重鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、もしくは１５個のアミノ酸置換を含むことを除いて、ラニビズマブの免疫グロブリン軽鎖可変ドメインの配列であるか、もしくはそれを含む免疫グロブリン軽鎖可変ドメインを含み（配列番号２０によって表される）、及び／または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、もしくは１５個のアミノ酸置換を含むことを除いて、ラニビズマブの免疫グロブリン軽鎖可変ドメインの配列であるか、もしくはそれを含む免疫グロブリン重鎖可変ドメインを含む（配列番号１６、１７、または１８によって表される）。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、ラニビズマブの免疫グロブリン軽鎖可変ドメインにおける３つのＣＤＲ、及び／またはラニビズマブの免疫グロブリン重鎖可変ドメインにおける３つのＣＤＲを含む。
例示的なラニビズマブ重鎖ヌクレオチド配列（配列番号１３）
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＣＴＴＧＴＴＣＡＡＣＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＧＡＧＣＴＧＴＧＣＣＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＡＣＴＡＣＧＧＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＣＡＡＡＧＧＣＣＴＴＧＡＡＴＧＧＧＴＣＧＧＡＴＧＧＡＴＣＡＡＣＡＣＣＴＡＣＡＣＣＧＧＣＧＡＧＣＣＡＡＣＡＴＡＣＧＣＣＧＣＣＧＡＣＴＴＣＡＡＧＣＧＧＡＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＣＣＴＧＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＡＧＴＡＴＣＣＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＣＡＣＣＡＧＣＣＡＣＴＧＧＴＡＣＴＴＴＧＡＣＧＴＧＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＣＡＣＡＣＴＧＧＴＣＡＣＡＧＴＧＴＣＴＡＧＣＧＣＣＴＣＴＡＣＡＡＡＧＧＧＣＣＣＣＡＧＣＧＴＴＴＴＣＣＣＡＣＴＧＧＣＴＣＣＴＡＧＣＡＧＣＡＡＧＴＣＴＡＣＣＡＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＡＧＣＣＧＣＴＣＴＧＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＴＣＣＣＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＣＧＴＧＴＣＣＴＧＧＡＡＴＴＣＴＧＧＣＧＣＴＣＴＧＡＣＡＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＴＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＡＡＧＣＡＧＣＧＧＣＣＴＧＴＡＣＴＣＴＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧＴＣＧＴＧＡＣＡＧＴＧＣＣＡＡＧＣＡＧＣＴＣＴＣＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＴＧＴＧＡＡＣＣＡＣＡＡＧＣＣＴＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＧＧＴＧＧＡＡＣＣＣＡＡＧＡＧＣＴＧＣＧＡＣＡＡＧＡＣＣＣＡＣＡＣＣＧＧＣＡＡＧ
例示的なラニビズマブ重鎖ヌクレオチド配列（配列番号１４）
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＣＴＴＧＴＴＣＡＡＣＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＧＡＧＣＴＧＴＧＣＣＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＡＣＴＡＣＧＧＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＣＡＡＡＧＧＣＣＴＴＧＡＡＴＧＧＧＴＣＧＧＡＴＧＧＡＴＣＡＡＣＡＣＣＴＡＣＡＣＣＧＧＣＧＡＧＣＣＡＡＣＡＴＡＣＧＣＣＧＣＣＧＡＣＴＴＣＡＡＧＣＧＧＡＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＣＣＴＧＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＡＧＴＡＴＣＣＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＣＡＣＣＡＧＣＣＡＣＴＧＧＴＡＣＴＴＴＧＡＣＧＴＧＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＣＡＣＡＣＴＧＧＴＣＡＣＡＧＴＧＴＣＴＡＧＣＧＣＣＴＣＴＡＣＡＡＡＧＧＧＣＣＣＣＡＧＣＧＴＴＴＴＣＣＣＡＣＴＧＧＣＴＣＣＴＡＧＣＡＧＣＡＡＧＴＣＴＡＣＣＡＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＡＧＣＣＧＣＴＣＴＧＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＴＣＣＣＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＣＧＴＧＴＣＣＴＧＧＡＡＴＴＣＴＧＧＣＧＣＴＣＴＧＡＣＡＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＴＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＡＡＧＣＡＧＣＧＧＣＣＴＧＴＡＣＴＣＴＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧＴＣＧＴＧＡＣＡＧＴＧＣＣＡＡＧＣＡＧＣＴＣＴＣＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＴＧＴＧＡＡＣＣＡＣＡＡＧＣＣＴＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＧＧＴＧＧＡＡＣＣＣＡＡＧＡＧＣＴＧＣＧＡＣＡＡＧＡＣＣＣＡＣＡＡＧ
例示的なラニビズマブ重鎖ヌクレオチド配列（配列番号１５）
ＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＣＴＴＧＴＴＣＡＡＣＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＧＡＧＣＴＧＴＧＣＣＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＡＣＴＡＣＧＧＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＣＡＡＡＧＧＣＣＴＴＧＡＡＴＧＧＧＴＣＧＧＡＴＧＧＡＴＣＡＡＣＡＣＣＴＡＣＡＣＣＧＧＣＧＡＧＣＣＡＡＣＡＴＡＣＧＣＣＧＣＣＧＡＣＴＴＣＡＡＧＣＧＧＡＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＣＣＴＧＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＡＧＴＡＴＣＣＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＣＡＣＣＡＧＣＣＡＣＴＧＧＴＡＣＴＴＴＧＡＣＧＴＧＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＣＡＣＡＣＴＧＧＴＣＡＣＡＧＴＧＴＣＴＡＧＣＧＣＣＴＣＴＡＣＡＡＡＧＧＧＣＣＣＣＡＧＣＧＴＴＴＴＣＣＣＡＣＴＧＧＣＴＣＣＴＡＧＣＡＧＣＡＡＧＴＣＴＡＣＣＡＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＡＧＣＣＧＣＴＣＴＧＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＴＣＣＣＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＣＧＴＧＴＣＣＴＧＧＡＡＴＴＣＴＧＧＣＧＣＴＣＴＧＡＣＡＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＴＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＡＡＧＣＡＧＣＧＧＣＣＴＧＴＡＣＴＣＴＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧＴＣＧＴＧＡＣＡＧＴＧＣＣＡＡＧＣＡＧＣＴＣＴＣＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＴＧＴＧＡＡＣＣＡＣＡＡＧＣＣＴＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＧＧＴＧＧＡＡＣＣＣＡＡＧＡＧＣ
例示的なラニビズマブ重鎖アミノ酸配列（配列番号１６）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＡＤＦＫＲＲＦＴＦＳＬＤＴＳＫＳＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＹＰＹＹＹＧＴＳＨＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＧＫ
例示的なラニビズマブ重鎖アミノ酸配列（配列番号１７）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＡＤＦＫＲＲＦＴＦＳＬＤＴＳＫＳＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＹＰＹＹＹＧＴＳＨＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＬ
例示的なラニビズマブ重鎖アミノ酸配列（配列番号１８）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＡＤＦＫＲＲＦＴＦＳＬＤＴＳＫＳＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＹＰＹＹＹＧＴＳＨＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳ
例示的なラニビズマブ軽鎖ヌクレオチド配列（配列番号１９）
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＣＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＴＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＴＡＧＣＧＣＣＡＧＣＣＡＧＧＡＣＡＴＣＴＣＣＡＡＣＴＡＣＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＡＡＡＧＣＣＣＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＣＴＡＡＧＧＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＴＴＣＡＣＡＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＣＴＣＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＡＴＣＴＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴＡＣＡＧＣＡＣＣＧＴＧＣＣＴＴＧＧＡＣＡＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＡＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＣＧＧＡＣＴＧＴＧＧＣＣＧＣＴＣＣＴＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＴＣＣＡＣＣＴＡＧＣＧＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＣＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＣＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＡＧＡＡＧＣＣＡＡＧＧＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＡＧＴＧＧＡＣＡＡＴＧＣＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣＡＡＣＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡＧＣＧＴＧＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＴＣＣＡＡＧＧＡＴＡＧＣＡＣＣＴＡＴＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＧＡＧＣＡＡＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＧＣＡＣＡＡＡＧＴＧＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＧＡＣＣＣＡＣＣＡＧＧＧＣＣＴＴＴＣＴＡＧＣＣＣＴＧＴＧＡＣＣＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＣＧＧＧＧＣＧＡＡＴＧＴ
例示的なラニビズマブ軽鎖アミノ酸配列（配列番号２０）
ＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＶＬＩＹＦＴＳＳＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
重鎖及び軽鎖ラニビズマブヌクレオチド配列を含む例示的な切断可能ポリペプチド（配列番号１０３）
ＡＴＧＴＡＣＣＧＧＡＴＧＣＡＧＣＴＧＣＴＧＡＧＣＴＧＴＡＴＣＧＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＡＡＴＴＣＴＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＣＴＴＧＴＴＣＡＡＣＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＧＡＧＣＴＧＴＧＣＣＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＡＣＴＡＣＧＧＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＣＡＡＡＧＧＣＣＴＴＧＡＡＴＧＧＧＴＣＧＧＡＴＧＧＡＴＣＡＡＣＡＣＣＴＡＣＡＣＣＧＧＣＧＡＧＣＣＡＡＣＡＴＡＣＧＣＣＧＣＣＧＡＣＴＴＣＡＡＧＣＧＧＡＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＣＣＴＧＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＡＧＴＡＴＣＣＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＣＡＣＣＡＧＣＣＡＣＴＧＧＴＡＣＴＴＴＧＡＣＧＴＧＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＣＡＣＡＣＴＧＧＴＣＡＣＡＧＴＧＴＣＴＡＧＣＧＣＣＴＣＴＡＣＡＡＡＧＧＧＣＣＣＣＡＧＣＧＴＴＴＴＣＣＣＡＣＴＧＧＣＴＣＣＴＡＧＣＡＧＣＡＡＧＴＣＴＡＣＣＡＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＡＧＣＣＧＣＴＣＴＧＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＴＣＣＣＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＣＧＴＧＴＣＣＴＧＧＡＡＴＴＣＴＧＧＣＧＣＴＣＴＧＡＣＡＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＴＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＡＡＧＣＡＧＣＧＧＣＣＴＧＴＡＣＴＣＴＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧＴＣＧＴＧＡＣＡＧＴＧＣＣＡＡＧＣＡＧＣＴＣＴＣＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＴＧＴＧＡＡＣＣＡＣＡＡＧＣＣＴＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＧＧＴＧＧＡＡＣＣＣＡＡＧＡＧＣＴＧＣＧＡＣＡＡＧＡＣＣＣＡＣＡＣＣＧＧＣＡＡＧＣＧＧＡＡＧＡＧＡＡＧＡＧＧＣＴＣＴＧＧＣＧＡＡＧＧＣＡＧＡＧＧＣＡＧＣＣＴＧＣＴＴＡＣＡＴＧＴＧＧＣＧＡＣＧＴＧＧＡＡＧＡＧＡＡＣＣＣＣＧＧＡＣＣＴＡＴＧＴＡＴＡＧＡＡＴＧＣＡＧＣＴＣＣＴＧＴＣＣＴＧＣＡＴＴＧＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＧＣＴＣＴＣＧＴＧＡＣＣＡＡＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＣＡＧＣＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＴＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＴＡＧＣＧＣＣＡＧＣＣＡＧＧＡＣＡＴＣＴＣＣＡＡＣＴＡＣＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＡＡＡＧＣＣＣＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＣＴＡＡＧＧＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＴＴＣＡＣＡＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＣＴＣＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＡＴＣＴＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴＡＣＡＧＣＡＣＣＧＴＧＣＣＴＴＧＧＡＣＡＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＡＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＣＧＧＡＣＴＧＴＧＧＣＣＧＣＴＣＣＴＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＴＣＣＡＣＣＴＡＧＣＧＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＣＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＣＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＡＧＡＡＧＣＣＡＡＧＧＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＡＧＴＧＧＡＣＡＡＴＧＣＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣＡＡＣＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡＧＣＧＴＧＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＴＣＣＡＡＧＧＡＴＡＧＣＡＣＣＴＡＴＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＧＡＧＣＡＡＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＧＣＡＣＡＡＡＧＴＧＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＧＡＣＣＣＡＣＣＡＧＧＧＣＣＴＴＴＣＴＡＧＣＣＣＴＧＴＧＡＣＣＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＣＧＧＧＧＣＧＡＡＴＧＴ
重鎖及び軽鎖ラニビズマブを含む例示的な切断可能ポリペプチド（配列番号２１）
ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＡＤＦＫＲＲＦＴＦＳＬＤＴＳＫＳＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＹＰＹＹＹＧＴＳＨＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＧＫＲＫＲＲＧＳＧＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳＤＩＱＬＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＶＬＩＹＦＴＳＳＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
ベバシズマブ
ベバシズマブは、ＶＥＧＦに対するヒト化モノクローナル全長抗体であり、膠芽腫、大腸癌、肺癌、腎臓癌、子宮頸癌、及び卵巣癌の治療のために静脈内注入が承認されている。しかしながら、ベバシズマブ治療の主な欠点は、定期的な静脈内注入を継続する必要があることと、高血圧、タンパク尿、肝臓酵素の上昇、動脈血栓塞栓事象（ＡＴＥ）、静脈血栓塞栓事象、出血、ならびに手術及び創傷治癒合併症を含む、全身循環における高用量投与に伴う副作用である。現在、ベバシズマブは、ＶＳ患者での有効性の予備的臨床証拠が実証されている唯一の薬理学的製剤である。
いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ及び／またはその抗原提示断片に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＶＥＧＦタンパク質は、抗体である。いくつかの実施形態では、そのような抗体は、ベバシズマブの免疫グロブリン軽鎖可変ドメインに対して少なくとも８０％（例えば、少なくとも８２％、少なくとも８４％、少なくとも８６％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９６％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）同一である配列であるか、またはそれを含む免疫グロブリン軽鎖可変ドメインを含み、及び／またはベバシズマブの免疫グロブリン重鎖可変ドメインに対して少なくとも８０％（例えば、少なくとも８２％、少なくとも８４％、少なくとも８６％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９６％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）同一である配列であるか、またはそれを含む免疫グロブリン重鎖可変ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ及び／またはその抗原提示断片に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＶＥＧＦタンパク質は、抗体である。いくつかの実施形態では、そのような抗体は、ベバシズマブの免疫グロブリン軽鎖可変ドメインであるか、またはそれを含む免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン、及び／またはベバシズマブの免疫グロブリン重鎖可変ドメインであるか、またはそれを含む免疫グロブリン重鎖可変ドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、もしくは１５個のアミノ酸置換を含むことを除いて、ベバシズマブの免疫グロブリン軽鎖可変ドメインの配列であるか、もしくはそれを含む免疫グロブリン軽鎖可変ドメインを含み、及び／または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、もしくは１５個のアミノ酸置換を含むことを除いて、ベバシズマブの免疫グロブリン重鎖可変ドメインの配列であるか、もしくはそれを含む免疫グロブリン重鎖可変ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ及び／またはその抗原提示断片に特異的に結合する本明細書に記載の抗ＶＥＧＦタンパク質は、抗体である。いくつかの実施形態では、そのような抗体は、ベバシズマブの免疫グロブリン軽鎖定常ドメインであるか、またはそれを含む免疫グロブリン軽鎖（例えば、免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン及び免疫グロブリン軽鎖定常ドメインを含む）、及び／またはベバシズマブの免疫グロブリン重鎖定常ドメインであるか、またはそれを含む免疫グロブリン重鎖（例えば、免疫グロブリン重鎖可変ドメイン及び免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、もしくは１５個のアミノ酸置換を含むことを除いて、ベバシズマブの免疫グロブリン軽鎖定常ドメインの配列であるか、もしくはそれを含む免疫グロブリン軽鎖定常ドメインを含み、及び／または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、もしくは１５個のアミノ酸置換を含むことを除いて、ベバシズマブの免疫グロブリン重鎖定常ドメインの配列であるか、もしくはそれを含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、第１の抗原結合ドメインは、ベバシズマブの免疫グロブリン軽鎖可変ドメインにおける３つのＣＤＲ、及び／またはベバシズマブの免疫グロブリン重鎖可変ドメインにおける３つのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合ドメインは、ベバシズマブの免疫グロブリン軽鎖可変ドメインにおける３つのＣＤＲ、及び／またはベバシズマブの免疫グロブリン重鎖可変ドメインにおける３つのＣＤＲを含む。
例示的なベバシズマブヌクレオチド配列（配列番号２２）
ＡＴＧＴＡＣＣＧＧＡＴＧＣＡＧＣＴＧＣＴＧＡＧＣＴＧＴＡＴＣＧＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＡＡＴＴＣＴＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＣＴＴＧＴＴＣＡＡＣＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＧＡＧＣＴＧＴＧＣＣＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＡＡＣＴＡＣＧＧＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＣＡＡＡＧＧＣＣＴＴＧＡＡＴＧＧＧＴＣＧＧＡＴＧＧＡＴＣＡＡＣＡＣＣＴＡＣＡＣＣＧＧＣＧＡＧＣＣＡＡＣＡＴＡＣＧＣＣＧＣＣＧＡＣＴＴＣＡＡＧＣＧＧＡＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＣＣＴＧＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＡＧＴＡＴＣＣＣＣＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＣＡＧＣＡＧＣＣＡＣＴＧＧＴＡＣＴＴＴＧＡＣＧＴＧＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＣＡＣＡＣＴＧＧＴＣＡＣＡＧＴＧＴＣＴＡＧＣＧＣＣＴＣＴＡＣＡＡＡＧＧＧＣＣＣＣＡＧＣＧＴＴＴＴＣＣＣＡＣＴＧＧＣＴＣＣＴＡＧＣＡＧＣＡＡＧＴＣＴＡＣＣＡＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＡＧＣＣＧＣＴＣＴＧＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＴＣＣＣＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＣＧＴＧＴＣＣＴＧＧＡＡＴＴＣＴＧＧＣＧＣＴＣＴＧＡＣＡＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＴＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＡＡＧＣＡＧＣＧＧＣＣＴＧＴＡＣＴＣＴＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧＴＣＧＴＧＡＣＡＧＴＧＣＣＡＡＧＣＡＧＣＴＣＴＣＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＴＧＴＧＡＡＣＣＡＣＡＡＧＣＣＴＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＧＧＴＧＧＡＡＣＣＣＡＡＧＡＧＣＴＧＣＧＡＣＡＡＧＡＣＣＣＡＣＡＣＣＴＧＴＣＣＴＣＣＡＴＧＴＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＡＡＣＴＧＣＴＣＧＧＣＧＧＡＣＣＴＴＣＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＴＣＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＴＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＣＣＣＣＴＧＡＡＧＴＧＡＣＣＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＧＴＧＴＣＣＣＡＣＧＡＧＧＡＴＣＣＣＧＡＡＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＡＴＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＡＧＴＧＣＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＣＣＡＡＧＣＣＴＡＧＡＧＡＧＧＡＡＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＡＧＴＧＧＴＧＴＣＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＡＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣＡＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＴＧＣＴＣＣＴＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＴＡＧＧＧＡＡＣＣＣＣＡＧＧＴＴＴＡＣＡＣＡＣＴＧＣＣＴＣＣＡＡＧＣＣＧＧＧＡＡＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＴＴＣＣＧＡＴＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＡＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＣＣＡＧＣＣＡＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＡＡＣＣＣＣＴＣＣＴＧＴＧＣＴＧＧＡＣＡＧＣＧＡＣＧＧＣＴＣＡＴＴＣＴＴＣＣＴＧＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＣＡＡＧＴＣＣＡＧＡＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＴＴＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＣＣＡＧＡＡＧＴＣＴＣＴＧＡＧＣＣＴＧＴＣＴＣＣＴＧＧＣＡＡＧＣＧＧＡＡＧＡＧＡＡＧＡＧＧＣＴＣＴＧＧＣＧＡＡＧＧＣＡＧＡＧＧＣＡＧＣＣＴＧＣＴＴＡＣＡＴＧＴＧＧＣＧＡＣＧＴＧＧＡＡＧＡＧＡＡＣＣＣＣＧＧＡＣＣＴＡＴＧＴＡＴＡＧＡＡＴＧＣＡＧＣＴＣＣＴＧＴＣＣＴＧＣＡＴＴＧＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＧＣＴＣＴＣＧＴＧＡＣＣＡＡＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＴＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＴＡＧＣＧＣＣＡＧＣＣＡＧＧＡＣＡＴＣＴＣＣＡＡＣＴＡＣＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＡＡＡＧＣＣＣＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＣＴＡＡＧＧＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＴＴＣＡＣＡＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＣＴＣＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＡＴＣＴＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴＡＣＡＧＣＡＣＣＧＴＧＣＣＴＴＧＧＡＣＡＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＡＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＣＧＧＡＣＴＧＴＧＧＣＣＧＣＴＣＣＴＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＴＣＣＡＣＣＴＡＧＣＧＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＣＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＣＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＡＧＡＡＧＣＣＡＡＧＧＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＡＧＴＧＧＡＣＡＡＴＧＣＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣＡＡＣＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡＧＣＧＴＧＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＴＣＣＡＡＧＧＡＴＡＧＣＡＣＣＴＡＴＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＧＡＧＣＡＡＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＧＣＡＣＡＡＡＧＴＧＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＧＡＣＣＣＡＣＣＡＧＧＧＣＣＴＴＴＣＴＡＧＣＣＣＴＧＴＧＡＣＣＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＣＧＧＧＧＣＧＡＡＴＧＴ
重鎖及び軽鎖ベバシズマブアミノ酸配列を含む例示的な切断可能なポリペプチド（配列番号２３）
ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＡＤＦＫＲＲＦＴＦＳＬＤＴＳＫＳＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＹＰＨＹＹＧＳＳＨＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫＲＫＲＲＧＳＧＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＶＬＩＹＦＴＳＳＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
例示的なベバシズマブ重鎖ヌクレオチド配列（配列番号１０８）
ＡＴＧＴＡＣＣＧＧＡＴＧＣＡＧＣＴＧＣＴＧＡＧＣＴＧＴＡＴＣＧＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＡＡＴＴＣＴＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＣＴＴＧＴＴＣＡＡＣＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＧＡＧＣＴＧＴＧＣＣＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＡＡＣＴＡＣＧＧＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＣＡＡＡＧＧＣＣＴＴＧＡＡＴＧＧＧＴＣＧＧＡＴＧＧＡＴＣＡＡＣＡＣＣＴＡＣＡＣＣＧＧＣＧＡＧＣＣＡＡＣＡＴＡＣＧＣＣＧＣＣＧＡＣＴＴＣＡＡＧＣＧＧＡＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＣＣＴＧＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＡＧＴＡＴＣＣＣＣＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＣＡＧＣＡＧＣＣＡＣＴＧＧＴＡＣＴＴＴＧＡＣＧＴＧＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＣＡＣＡＣＴＧＧＴＣＡＣＡＧＴＧＴＣＴＡＧＣＧＣＣＴＣＴＡＣＡＡＡＧＧＧＣＣＣＣＡＧＣＧＴＴＴＴＣＣＣＡＣＴＧＧＣＴＣＣＴＡＧＣＡＧＣＡＡＧＴＣＴＡＣＣＡＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＡＧＣＣＧＣＴＣＴＧＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＴＣＣＣＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＣＧＴＧＴＣＣＴＧＧＡＡＴＴＣＴＧＧＣＧＣＴＣＴＧＡＣＡＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＴＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＡＡＧＣＡＧＣＧＧＣＣＴＧＴＡＣＴＣＴＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧＴＣＧＴＧＡＣＡＧＴＧＣＣＡＡＧＣＡＧＣＴＣＴＣＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＴＧＴＧＡＡＣＣＡＣＡＡＧＣＣＴＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＧＧＴＧＧＡＡＣＣＣＡＡＧＡＧＣＴＧＣＧＡＣＡＡＧＡＣＣＣＡＣＡＣＣＴＧＴＣＣＴＣＣＡＴＧＴＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＡＡＣＴＧＣＴＣＧＧＣＧＧＡＣＣＴＴＣＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＴＣＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＴＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＣＣＣＣＴＧＡＡＧＴＧＡＣＣＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＧＴＧＴＣＣＣＡＣＧＡＧＧＡＴＣＣＣＧＡＡＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＡＴＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＡＧＴＧＣＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＣＣＡＡＧＣＣＴＡＧＡＧＡＧＧＡＡＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＡＧＴＧＧＴＧＴＣＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＡＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣＡＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＴＧＣＴＣＣＴＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＴＡＧＧＧＡＡＣＣＣＣＡＧＧＴＴＴＡＣＡＣＡＣＴＧＣＣＴＣＣＡＡＧＣＣＧＧＧＡＡＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＴＴＣＣＧＡＴＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＡＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＣＣＡＧＣＣＡＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＡＡＣＣＣＣＴＣＣＴＧＴＧＣＴＧＧＡＣＡＧＣＧＡＣＧＧＣＴＣＡＴＴＣＴＴＣＣＴＧＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＣＡＡＧＴＣＣＡＧＡＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＴＴＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＣＣＡＧＡＡＧＴＣＴＣＴＧＡＧＣＣＴＧＴＣＴＣＣＴＧＧＣＡＡＧ
例示的なベバシズマブ重鎖アミノ酸配列（配列番号２４）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＹＴＦＴＮＹＧＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＡＤＦＫＲＲＦＴＦＳＬＤＴＳＫＳＴＡＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＹＰＨＹＹＧＳＳＨＷＹＦＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
例示的なベバシズマブ軽鎖ヌクレオチド配列（配列番号１０９）
ＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＴＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＴＡＧＣＧＣＣＡＧＣＣＡＧＧＡＣＡＴＣＴＣＣＡＡＣＴＡＣＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＡＡＡＧＣＣＣＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＣＴＡＡＧＧＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＴＴＣＡＣＡＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＣＴＣＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＡＴＣＴＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴＡＣＡＧＣＡＣＣＧＴＧＣＣＴＴＧＧＡＣＡＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＡＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＣＧＧＡＣＴＧＴＧＧＣＣＧＣＴＣＣＴＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＴＣＣＡＣＣＴＡＧＣＧＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＣＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＣＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＡＧＡＡＧＣＣＡＡＧＧＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＡＧＴＧＧＡＣＡＡＴＧＣＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣＡＡＣＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡＧＣＧＴＧＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＴＣＣＡＡＧＧＡＴＡＧＣＡＣＣＴＡＴＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＧＡＧＣＡＡＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＧＣＡＣＡＡＡＧＴＧＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＧＡＣＣＣＡＣＣＡＧＧＧＣＣＴＴＴＣＴＡＧＣＣＣＴＧＴＧＡＣＣＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＣＧＧＧＧＣＧＡＡＴＧＴ
例示的なベバシズマブ軽鎖アミノ酸配列（配列番号２５）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＳＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＶＬＩＹＦＴＳＳＬＨＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
ＶＥＧＦ ＴＲＡＰ
可溶性ＶＥＧＦ受容体（本明細書では、ＶＥＧＦ ＴＲＡＰとも呼ばれる）は、シグナルペプチド（例えば、本明細書に記載の例示的なシグナルペプチドのいずれか）に作動可能に連結された１つ以上（例えば、２つまたは３つ）の哺乳動物ＶＥＧＦ受容体（複数可）（例えば、ＶＥＧＦＲ－１、ＶＥＧＦＲ－２、及びＶＥＧＦＲ－３のうちの１つ以上）の細胞外領域の一部を含むポリペプチドであり、該可溶性ＶＥＧＦ受容体は、１つ以上の哺乳動物ＶＥＧＦタンパク質（複数可）（例えば、ＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ｂ、ＶＥＧＦ－Ｃ、及びＶＥＧＦ－Ｄのうちの１つ以上（例えば、２、３、または４つ）、例えば、ヒト野生型ＶＥＧＦ－Ａ、ヒト野生型ＶＥＧＦ－Ｂ、ヒト野生型ＶＥＧＦ－Ｃ、及びヒト野生型ＶＥＧＦ－Ｄのうちの１つ以上（例えば、２、３、または４つ）に特異的に結合することができる。
いくつかの例では、可溶性ＶＥＧＦ受容体は、ＶＥＧＦＲ－１の細胞外領域の一部（例えば、約１０アミノ酸～約７３２アミノ酸、約１０アミノ酸～約７００アミノ酸、約１０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約１０アミノ酸～約６００アミノ酸、約１０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約１０アミノ酸～約５００アミノ酸、約１０アミノ酸～約４５０アミノ酸、約１０アミノ酸～約４００アミノ酸、約１０アミノ酸～約３５０アミノ酸、約１０アミノ酸～約３００アミノ酸、約１０アミノ酸～約２５０アミノ酸、約１０アミノ酸～約２００アミノ酸、約１０アミノ酸～約１５０アミノ酸、約１０アミノ酸～約１００アミノ酸、約１０アミノ酸～約５０アミノ酸、約５０アミノ酸～約７３２アミノ酸、約５０アミノ酸～約７００アミノ酸、約５０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約５０アミノ酸～約６００アミノ酸、約５０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約５０アミノ酸～約５００アミノ酸、約５０アミノ酸～約４５０アミノ酸、約５０アミノ酸～約４００アミノ酸、約５０アミノ酸～約３５０アミノ酸、約５０アミノ酸～約３００アミノ酸、約５０アミノ酸～約２５０アミノ酸、約５０アミノ酸～約２００アミノ酸、約５０アミノ酸～約１５０アミノ酸、約５０アミノ酸～約１００アミノ酸、約１００アミノ酸～約７３２アミノ酸、約１００アミノ酸～約７００アミノ酸、約１００アミノ酸～約６５０アミノ酸、約１００アミノ酸～約６００アミノ酸、約１００アミノ酸～約５５０アミノ酸、約１００アミノ酸～約５００アミノ酸、約１００アミノ酸～約４５０アミノ酸、約１００アミノ酸～約４００アミノ酸、約１００アミノ酸～約３５０アミノ酸、約１００アミノ酸～約３００アミノ酸、約１００アミノ酸～約２５０アミノ酸、約１００アミノ酸～約２００アミノ酸、約１００アミノ酸～約１５０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約７３２アミノ酸、約１５０アミノ酸～約７００アミノ酸、約１５０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約６００アミノ酸、約１５０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約５００アミノ酸、約１５０アミノ酸～約４５０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約４００アミノ酸、約１５０アミノ酸～約３５０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約３００アミノ酸、約１５０アミノ酸～約２５０アミノ酸、約１５０アミノ酸～約２００アミノ酸、約２００アミノ酸～約７３２アミノ酸、約２００アミノ酸～約７００アミノ酸、約２００アミノ酸～約６５０アミノ酸、約２００アミノ酸～約６００アミノ酸、約２００アミノ酸～約５５０アミノ酸、約２００アミノ酸～約５００アミノ酸、約２００アミノ酸～約４５０アミノ酸、約２００アミノ酸～約４００アミノ酸、約２００アミノ酸～約３５０アミノ酸、約２００アミノ酸～約３００アミノ酸、約２００アミノ酸～約２５０アミノ酸、約２５０アミノ酸～約７３２アミノ酸、約２５０アミノ酸～約７００アミノ酸、約２５０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約２５０アミノ酸～約６００アミノ酸、約２５０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約２５０アミノ酸～約５００アミノ酸、約２５０アミノ酸～約４５０アミノ酸、約２５０アミノ酸～約４００アミノ酸、約２５０アミノ酸～約３５０アミノ酸、約２５０アミノ酸～約３００アミノ酸、約３００アミノ酸～約７３２アミノ酸、約３００アミノ酸～約７００アミノ酸、約３００アミノ酸～約６５０アミノ酸、約３００アミノ酸～約６００アミノ酸、約３００アミノ酸～約５５０アミノ酸、約３００アミノ酸～約５００アミノ酸、約３００アミノ酸～約４５０アミノ酸、約３００アミノ酸～約４００アミノ酸、約３００アミノ酸～約３５０アミノ酸、約３５０アミノ酸～約７３２アミノ酸、約３５０アミノ酸～約７００アミノ酸、約３５０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約３５０アミノ酸～約６００アミノ酸、約３５０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約３５０アミノ酸～約５００アミノ酸、約３５０アミノ酸～約４５０アミノ酸、約３５０アミノ酸～約４００アミノ酸、約４００アミノ酸～約７３２アミノ酸、約４００アミノ酸～約７００アミノ酸、約４００アミノ酸～約６５０アミノ酸、約４００アミノ酸～約６００アミノ酸、約４００アミノ酸～約５５０アミノ酸、約４００アミノ酸～約５００アミノ酸、約４００アミノ酸～約４５０アミノ酸、約４５０アミノ酸～約７３２アミノ酸、約４５０アミノ酸～約７００アミノ酸、約４５０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約４５０アミノ酸～約６００アミノ酸、約４５０アミノ酸～約５５０アミノ酸、約４５０アミノ酸～約５００アミノ酸、約５００アミノ酸～約７３２アミノ酸、約５００アミノ酸～約７００アミノ酸、約５００アミノ酸～約６５０アミノ酸、約５００アミノ酸～約６００アミノ酸、約５００アミノ酸～約５５０アミノ酸、約５５０アミノ酸～約７３２アミノ酸、約５５０アミノ酸～約７００アミノ酸、約５５０アミノ酸～約６５０アミノ酸、約５５０アミノ酸～約６００アミノ酸、約６００アミノ酸～約７３２アミノ酸、約６００アミノ酸～約７００アミノ酸、約６００アミノ酸～約６５０アミノ酸、約６５０アミノ酸～約７３２アミノ酸、約６５０アミノ酸～約７００アミノ酸、または約７００アミノ酸～約７３２アミノ酸）（例えば、野生型ヒトＶＥＧＦＲ－１からの連続配列（例えば、野生型ヒトＶＥＧＦＲ－１（例えば、配列番号２７、２９、３１、もしくは３３）からの細胞外領域に１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、または７つ）の免疫グロブリン様ドメインを含む連続配列、または野生型ヒトＶＥＧＦＲ－１からの連続配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８２％、少なくとも８４％、少なくとも８６％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９６％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）同一である配列、例えば、配列番号２７、２９、３１、もしくは３３の連続配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８２％、少なくとも８４％、少なくとも８６％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９６％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）同一である配列）を含む。
いくつかの例では、可溶性ＶＥＧＦ受容体は、ＶＥＧＦＲ－２の細胞外領域の一部（例えば、約２０アミノ酸～約７４５アミノ酸、または本明細書に記載のこの範囲の任意の部分範囲）（例えば、野生型ヒトＶＥＧＦＲ－２からの連続配列（例えば、野生型ヒトＶＥＧＦＲ－２（例えば、配列番号３５）からの細胞外領域に１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、または７つ）の免疫グロブリン様ドメインを含む連続配列、または野生型ヒトＶＥＧＦＲ－２からの連続配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８２％、少なくとも８４％、少なくとも８６％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９６％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）同一である配列、例えば、配列番号３５における連続配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８２％、少なくとも８４％、少なくとも８６％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９６％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）同一である配列）を含む。
いくつかの例では、可溶性ＶＥＧＦ受容体は、ＶＥＧＦＲ－１の細胞外領域の一部（例えば、本明細書に記載のＶＥＧＦＲ－１の細胞外領域の任意の部分）及びＶＥＧＦＲ－２の細胞外領域の一部（例えば、本明細書に記載のＶＥＧＦＲ－２の細胞外領域の任意の部分）を含む。例えば、可溶性ＶＥＧＦ受容体は、野生型ヒトＶＥＧＦＲ－１からの細胞外領域に１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、または７つ）の免疫グロブリン様ドメインと、野生型ヒトＶＥＧＦＲ－２からの細胞外領域に１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、または７つ）の免疫グロブリン様ドメインを含み得る（例えば、アフリベルセプト）。
いくつかの例では、可溶性ＶＥＧＦ受容体は、ＶＥＧＦＲ－３の細胞外領域の一部（例えば、約２０アミノ酸～約７５１アミノ酸、または本明細書に記載のこの範囲の任意の部分範囲）（例えば、野生型ヒトＶＥＧＦＲ－３からの連続配列（例えば、野生型ヒトＶＥＧＦＲ－３（例えば、配列番号３７、３９、または４１）からの細胞外領域に１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、または７つ）の免疫グロブリン様ドメインを含む連続配列、または野生型ヒトＶＥＧＦＲ－３からの連続配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８２％、少なくとも８４％、少なくとも８６％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９６％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）同一である配列、例えば、配列番号３７、３９、または４１における連続配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８２％、少なくとも８４％、少なくとも８６％、少なくとも８８％、少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９４％、少なくとも９６％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）同一である配列））を含む。
異なる哺乳動物ＶＥＧＦＲ－１、異なる哺乳動物ＶＥＧＦＲ－２、及び異なる哺乳動物ＶＥＧＦＲ－３の細胞外領域の非限定的な例が本明細書に記載されている。野生型ＶＥＧＦ受容体タンパク質をコードするタンパク質及びヌクレオチド配列の非限定的な例を以下に示す。当業者であれば理解することができるように、種間で保存されているアミノ酸における置換がタンパク質の機能の変化をもたらす可能性が高い一方で、種間で保存されていないアミノ酸位置における置換は、タンパク質の機能に影響を及ぼす可能性が低い。
ヒト染色体位置１３ｑ１２．３に見出されるＶＥＧＦＲ－１遺伝子は、血管内皮増殖因子受容体（ＶＥＧＦＲ）ファミリーのメンバーを含む３３のエクソンをコードする。ＶＥＧＦＲファミリーメンバーは、７つの免疫グロブリン（Ｉｇ）様ドメインを有する細胞外リガンド結合領域、膜貫通セグメント、及び細胞質ドメイン内のチロシンキナーゼ（ＴＫ）ドメインを含む受容体型チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）である。このタンパク質は、ＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ｂ、及び胎盤増殖因子に結合し、血管新生及び脈管形成に重要な役割を果たす。この受容体の発現は、血管内皮細胞、胎盤栄養膜細胞、及び末梢血単球に見出される。この遺伝子には、異なるアイソフォームをコードする複数の転写バリアントが見つかっている。アイソフォームには、全長膜貫通型受容体アイソフォームと短縮型の可溶性アイソフォームが含まれる。
例示的なヒトＶＥＧＦＲ－１アイソフォーム１ ｃＤＮＡ配列（配列番号２６）
ＡＴＣＧＡＧＧＴＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＣＴＣＧＧＡＧＣＧＣＧＣＣＡＧＧＣＧＧＡＣＡＣＴＣＣＴＣＴＣＧＧＣＴＣＣＴＣＣＣＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＴＣＧＧＡＧＣＧＧＧＣＴＣＣＧＧＧＧＣＴＣＧＧＧＴＧＣＡＧＣＧＧＣＣＡＧＣＧＧＧＣＧＣＣＴＧＧＣＧＧＣＧＡＧＧＡＴＴＡＣＣＣＧＧＧＧＡＡＧＴＧＧＴＴＧＴＣＴＣＣＴＧＧＣＴＧＧＡＧＣＣＧＣＧＡＧＡＣＧＧＧＣＧＣＴＣＡＧＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＡＡＣＧＡＧＡＧＧＡＣＧＧＡＣＴＣＴＧＧＣＧＧＣＣＧＧＧＴＣＧＴＴＧＧＣＣＧＣＧＧＧＧＡＧＣＧＣＧＧＧＣＡＣＣＧＧＧＣＧＡＧＣＡＧＧＣＣＧＣＧＴＣＧＣＧＣＴＣＡＣＣＡＴＧＧＴＣＡＧＣＴＡＣＴＧＧＧＡＣＡＣＣＧＧＧＧＴＣＣＴＧＣＴＧＴＧＣＧＣＧＣＴＧＣＴＣＡＧＣＴＧＴＣＴＧＣＴＴＣＴＣＡＣＡＧＧＡＴＣＴＡＧＴＴＣＡＧＧＴＴＣＡＡＡＡＴＴＡＡＡＡＧＡＴＣＣＴＧＡＡＣＴＧＡＧＴＴＴＡＡＡＡＧＧＣＡＣＣＣＡＧＣＡＣＡＴＣＡＴＧＣＡＡＧＣＡＧＧＣＣＡＧＡＣＡＣＴＧＣＡＴＣＴＣＣＡＡＴＧＣＡＧＧＧＧＧＧＡＡＧＣＡＧＣＣＣＡＴＡＡＡＴＧＧＴＣＴＴＴＧＣＣＴＧＡＡＡＴＧＧＴＧＡＧＴＡＡＧＧＡＡＡＧＣＧＡＡＡＧＧＣＴＧＡＧＣＡＴＡＡＣＴＡＡＡＴＣＴＧＣＣＴＧＴＧＧＡＡＧＡＡＡＴＧＧＣＡＡＡＣＡＡＴＴＣＴＧＣＡＧＴＡＣＴＴＴＡＡＣＣＴＴＧＡＡＣＡＣＡＧＣＴＣＡＡＧＣＡＡＡＣＣＡＣＡＣＴＧＧＣＴＴＣＴＡＣＡＧＣＴＧＣＡＡＡＴＡＴＣＴＡＧＣＴＧＴＡＣＣＴＡＣＴＴＣＡＡＡＧＡＡＧＡＡＧＧＡＡＡＣＡＧＡＡＴＣＴＧＣＡＡＴＣＴＡＴＡＴＡＴＴＴＡＴＴＡＧＴＧＡＴＡＣＡＧＧＴＡＧＡＣＣＴＴＴＣＧＴＡＧＡＧＡＴＧＴＡＣＡＧＴＧＡＡＡＴＣＣＣＣＧＡＡＡＴＴＡＴＡＣＡＣＡＴＧＡＣＴＧＡＡＧＧＡＡＧＧＧＡＧＣＴＣＧＴＣＡＴＴＣＣＣＴＧＣＣＧＧＧＴＴＡＣＧＴＣＡＣＣＴＡＡＣＡＴＣＡＣＴＧＴＴＡＣＴＴＴＡＡＡＡＡＡＧＴＴＴＣＣＡＣＴＴＧＡＣＡＣＴＴＴＧＡＴＣＣＣＴＧＡＴＧＧＡＡＡＡＣＧＣＡＴＡＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＴＡＧＡＡＡＧＧＧＣＴＴＣＡＴＣＡＴＡＴＣＡＡＡＴＧＣＡＡＣＧＴＡＣＡＡＡＧＡＡＡＴＡＧＧＧＣＴＴＣＴＧＡＣＣＴＧＴＧＡＡＧＣＡＡＣＡＧＴＣＡＡＴＧＧＧＣＡＴＴＴＧＴＡＴＡＡＧＡＣＡＡＡＣＴＡＴＣＴＣＡＣＡＣＡＴＣＧＡＣＡＡＡＣＣＡＡＴＡＣＡＡＴＣＡＴＡＧＡＴＧＴＣＣＡＡＡＴＡＡＧＣＡＣＡＣＣＡＣＧＣＣＣＡＧＴＣＡＡＡＴＴＡＣＴＴＡＧＡＧＧＣＣＡＴＡＣＴＣＴＴＧＴＣＣＴＣＡＡＴＴＧＴＡＣＴＧＣＴＡＣＣＡＣＴＣＣＣＴＴＧＡＡＣＡＣＧＡＧＡＧＴＴＣＡＡＡＴＧＡＣＣＴＧＧＡＧＴＴＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＡＡＡＡＡＡＴＡＡＧＡＧＡＧＣＴＴＣＣＧＴＡＡＧＧＣＧＡＣＧＡＡＴＴＧＡＣＣＡＡＡＧＣＡＡＴＴＣＣＣＡＴＧＣＣＡＡＣＡＴＡＴＴＣＴＡＣＡＧＴＧＴＴＣＴＴＡＣＴＡＴＴＧＡＣＡＡＡＡＴＧＣＡＧＡＡＣＡＡＡＧＡＣＡＡＡＧＧＡＣＴＴＴＡＴＡＣＴＴＧＴＣＧＴＧＴＡＡＧＧＡＧＴＧＧＡＣＣＡＴＣＡＴＴＣＡＡＡＴＣＴＧＴＴＡＡＣＡＣＣＴＣＡＧＴＧＣＡＴＡＴＡＴＡＴＧＡＴＡＡＡＧＣＡＴＴＣＡＴＣＡＣＴＧＴＧＡＡＡＣＡＴＣＧＡＡＡＡＣＡＧＣＡＧＧＴＧＣＴＴＧＡＡＡＣＣＧＴＡＧＣＴＧＧＣＡＡＧＣＧＧＴＣＴＴＡＣＣＧＧＣＴＣＴＣＴＡＴＧＡＡＡＧＴＧＡＡＧＧＣＡＴＴＴＣＣＣＴＣＧＣＣＧＧＡＡＧＴＴＧＴＡＴＧＧＴＴＡＡＡＡＧＡＴＧＧＧＴＴＡＣＣＴＧＣＧＡＣＴＧＡＧＡＡＡＴＣＴＧＣＴＣＧＣＴＡＴＴＴＧＡＣＴＣＧＴＧＧＣＴＡＣＴＣＧＴＴＡＡＴＴＡＴＣＡＡＧＧＡＣＧＴＡＡＣＴＧＡＡＧＡＧＧＡＴＧＣＡＧＧＧＡＡＴＴＡＴＡＣＡＡＴＣＴＴＧＣＴＧＡＧＣＡＴＡＡＡＡＣＡＧＴＣＡＡＡＴＧＴＧＴＴＴＡＡＡＡＡＣＣＴＣＡＣＴＧＣＣＡＣＴＣＴＡＡＴＴＧＴＣＡＡＴＧＴＧＡＡＡＣＣＣＣＡＧＡＴＴＴＡＣＧＡＡＡＡＧＧＣＣＧＴＧＴＣＡＴＣＧＴＴＴＣＣＡＧＡＣＣＣＧＧＣＴＣＴＣＴＡＣＣＣＡＣＴＧＧＧＣＡＧＣＡＧＡＣＡＡＡＴＣＣＴＧＡＣＴＴＧＴＡＣＣＧＣＡＴＡＴＧＧＴＡＴＣＣＣＴＣＡＡＣＣＴＡＣＡＡＴＣＡＡＧＴＧＧＴＴＣＴＧＧＣＡＣＣＣＣＴＧＴＡＡＣＣＡＴＡＡＴＣＡＴＴＣＣＧＡＡＧＣＡＡＧＧＴＧＴＧＡＣＴＴＴＴＧＴＴＣＣＡＡＴＡＡＴＧＡＡＧＡＧＴＣＣＴＴＴＡＴＣＣＴＧＧＡＴＧＣＴＧＡＣＡＧＣＡＡＣＡＴＧＧＧＡＡＡＣＡＧＡＡＴＴＧＡＧＡＧＣＡＴＣＡＣＴＣＡＧＣＧＣＡＴＧＧＣＡＡＴＡＡＴＡＧＡＡＧＧＡＡＡＧＡＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＴＡＧＣＡＣＣＴＴＧＧＴＴＧＴＧＧＣＴＧＡＣＴＣＴＡＧＡＡＴＴＴＣＴＧＧＡＡＴＣＴＡＣＡＴＴＴＧＣＡＴＡＧＣＴＴＣＣＡＡＴＡＡＡＧＴＴＧＧＧＡＣＴＧＴＧＧＧＡＡＧＡＡＡＣＡＴＡＡＧＣＴＴＴＴＡＴＡＴＣＡＣＡＧＡＴＧＴＧＣＣＡＡＡＴＧＧＧＴＴＴＣＡＴＧＴＴＡＡＣＴＴＧＧＡＡＡＡＡＡＴＧＣＣＧＡＣＧＧＡＡＧＧＡＧＡＧＧＡＣＣＴＧＡＡＡＣＴＧＴＣＴＴＧＣＡＣＡＧＴＴＡＡＣＡＡＧＴＴＣＴＴＡＴＡＣＡＧＡＧＡＣＧＴＴＡＣＴＴＧＧＡＴＴＴＴＡＣＴＧＣＧＧＡＣＡＧＴＴＡＡＴＡＡＣＡＧＡＡＣＡＡＴＧＣＡＣＴＡＣＡＧＴＡＴＴＡＧＣＡＡＧＣＡＡＡＡＡＡＴＧＧＣＣＡＴＣＡＣＴＡＡＧＧＡＧＣＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＴＣＴＴＡＡＴＣＴＴＡＣＣＡＴＣＡＴＧＡＡＴＧＴＴＴＣＣＣＴＧＣＡＡＧＡＴＴＣＡＧＧＣＡＣＣＴＡＴＧＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＴＧＴＡＴＡＣＡＣＡＧＧＧＧＡＡＧＡＡＡＴＣＣＴＣＣＡＧＡＡＧＡＡＡＧＡＡＡＴＴＡＣＡＡＴＣＡＧＡＧＡＴＣＡＧＧＡＡＧＣＡＣＣＡＴＡＣＣＴＣＣＴＧＣＧＡＡＡＣＣＴＣＡＧＴＧＡＴＣＡＣＡＣＡＧＴＧＧＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＴＣＣＡＣＣＡＣＴＴＴＡＧＡＣＴＧＴＣＡＴＧＣＴＡＡＴＧＧＴＧＴＣＣＣＣＧＡＧＣＣＴＣＡＧＡＴＣＡＣＴＴＧＧＴＴＴＡＡＡＡＡＣＡＡＣＣＡＣＡＡＡＡＴＡＣＡＡＣＡＡＧＡＧＣＣＴＧＧＡＡＴＴＡＴＴＴＴＡＧＧＡＣＣＡＧＧＡＡＧＣＡＧＣＡＣＧＣＴＧＴＴＴＡＴＴＧＡＡＡＧＡＧＴＣＡＣＡＧＡＡＧＡＧＧＡＴＧＡＡＧＧＴＧＴＣＴＡＴＣＡＣＴＧＣＡＡＡＧＣＣＡＣＣＡＡＣＣＡＧＡＡＧＧＧＣＴＣＴＧＴＧＧＡＡＡＧＴＴＣＡＧＣＡＴＡＣＣＴＣＡＣＴＧＴＴＣＡＡＧＧＡＡＣＣＴＣＧＧＡＣＡＡＧＴＣＴＡＡＴＣＴＧＧＡＧＣＴＧＡＴＣＡＣＴＣＴＡＡＣＡＴＧＣＡＣＣＴＧＴＧＴＧＧＣＴＧＣＧＡＣＴＣＴＣＴＴＣＴＧＧＣＴＣＣＴＡＴＴＡＡＣＣＣＴＣＴＴＴＡＴＣＣＧＡＡＡＡＡＴＧＡＡＡＡＧＧＴＣＴＴＣＴＴＣＴＧＡＡＡＴＡＡＡＧＡＣＴＧＡＣＴＡＣＣＴＡＴＣＡＡＴＴＡＴＡＡＴＧＧＡＣＣＣＡＧＡＴＧＡＡＧＴＴＣＣＴＴＴＧＧＡＴＧＡＧＣＡＧＴＧＴＧＡＧＣＧＧＣＴＣＣＣＴＴＡＴＧＡＴＧＣＣＡＧＣＡＡＧＴＧＧＧＡＧＴＴＴＧＣＣＣＧＧＧＡＧＡＧＡＣＴＴＡＡＡＣＴＧＧＧＣＡＡＡＴＣＡＣＴＴＧＧＡＡＧＡＧＧＧＧＣＴＴＴＴＧＧＡＡＡＡＧＴＧＧＴＴＣＡＡＧＣＡＴＣＡＧＣＡＴＴＴＧＧＣＡＴＴＡＡＧＡＡＡＴＣＡＣＣＴＡＣＧＴＧＣＣＧＧＡＣＴＧＴＧＧＣＴＧＴＧＡＡＡＡＴＧＣＴＧＡＡＡＧＡＧＧＧＧＧＣＣＡＣＧＧＣＣＡＧＣＧＡＧＴＡＣＡＡＡＧＣＴＣＴＧＡＴＧＡＣＴＧＡＧＣＴＡＡＡＡＡＴＣＴＴＧＡＣＣＣＡＣＡＴＴＧＧＣＣＡＣＣＡＴＣＴＧＡＡＣＧＴＧＧＴＴＡＡＣＣＴＧＣＴＧＧＧＡＧＣＣＴＧＣＡＣＣＡＡＧＣＡＡＧＧＡＧＧＧＣＣＴＣＴＧＡＴＧＧＴＧＡＴＴＧＴＴＧＡＡＴＡＣＴＧＣＡＡＡＴＡＴＧＧＡＡＡＴＣＴＣＴＣＣＡＡＣＴＡＣＣＴＣＡＡＧＡＧＣＡＡＡＣＧＴＧＡＣＴＴＡＴＴＴＴＴＴＣＴＣＡＡＣＡＡＧＧＡＴＧＣＡＧＣＡＣＴＡＣＡＣＡＴＧＧＡＧＣＣＴＡＡＧＡＡＡＧＡＡＡＡＡＡＴＧＧＡＧＣＣＡＧＧＣＣＴＧＧＡＡＣＡＡＧＧＣＡＡＧＡＡＡＣＣＡＡＧＡＣＴＡＧＡＴＡＧＣＧＴＣＡＣＣＡＧＣＡＧＣＧＡＡＡＧＣＴＴＴＧＣＧＡＧＣＴＣＣＧＧＣＴＴＴＣＡＧＧＡＡＧＡＴＡＡＡＡＧＴＣＴＧＡＧＴＧＡＴＧＴＴＧＡＧＧＡＡＧＡＧＧＡＧＧＡＴＴＣＴＧＡＣＧＧＴＴＴＣＴＡＣＡＡＧＧＡＧＣＣＣＡＴＣＡＣＴＡＴＧＧＡＡＧＡＴＣＴＧＡＴＴＴＣＴＴＡＣＡＧＴＴＴＴＣＡＡＧＴＧＧＣＣＡＧＡＧＧＣＡＴＧＧＡＧＴＴＣＣＴＧＴＣＴＴＣＣＡＧＡＡＡＧＴＧＣＡＴＴＣＡＴＣＧＧＧＡＣＣＴＧＧＣＡＧＣＧＡＧＡＡＡＣＡＴＴＣＴＴＴＴＡＴＣＴＧＡＧＡＡＣＡＡＣＧＴＧＧＴＧＡＡＧＡＴＴＴＧＴＧＡＴＴＴＴＧＧＣＣＴＴＧＣＣＣＧＧＧＡＴＡＴＴＴＡＴＡＡＧＡＡＣＣＣＣＧＡＴＴＡＴＧＴＧＡＧＡＡＡＡＧＧＡＧＡＴＡＣＴＣＧＡＣＴＴＣＣＴＣＴＧＡＡＡＴＧＧＡＴＧＧＣＴＣＣＴＧＡＡＴＣＴＡＴＣＴＴＴＧＡＣＡＡＡＡＴＣＴＡＣＡＧＣＡＣＣＡＡＧＡＧＣＧＡＣＧＴＧＴＧＧＴＣＴＴＡＣＧＧＡＧＴＡＴＴＧＣＴＧＴＧＧＧＡＡＡＴＣＴＴＣＴＣＣＴＴＡＧＧＴＧＧＧＴＣＴＣＣＡＴＡＣＣＣＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＡＴＧＧＡＴＧＡＧＧＡＣＴＴＴＴＧＣＡＧＴＣＧＣＣＴＧＡＧＧＧＡＡＧＧＣＡＴＧＡＧＧＡＴＧＡＧＡＧＣＴＣＣＴＧＡＧＴＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＴＧＡＡＡＴＣＴＡＴＣＡＧＡＴＣＡＴＧＣＴＧＧＡＣＴＧＣＴＧＧＣＡＣＡＧＡＧＡＣＣＣＡＡＡＡＧＡＡＡＧＧＣＣＡＡＧＡＴＴＴＧＣＡＧＡＡＣＴＴＧＴＧＧＡＡＡＡＡＣＴＡＧＧＴＧＡＴＴＴＧＣＴＴＣＡＡＧＣＡＡＡＴＧＴＡＣＡＡＣＡＧＧＡＴＧＧＴＡＡＡＧＡＣＴＡＣＡＴＣＣＣＡＡＴＣＡＡＴＧＣＣＡＴＡＣＴＧＡＣＡＧＧＡＡＡＴＡＧＴＧＧＧＴＴＴＡＣＡＴＡＣＴＣＡＡＣＴＣＣＴＧＣＣＴＴＣＴＣＴＧＡＧＧＡＣＴＴＣＴＴＣＡＡＧＧＡＡＡＧＴＡＴＴＴＣＡＧＣＴＣＣＧＡＡＧＴＴＴＡＡＴＴＣＡＧＧＡＡＧＣＴＣＴＧＡＴＧＡＴＧＴＣＡＧＡＴＡＣＧＴＡＡＡＴＧＣＴＴＴＣＡＡＧＴＴＣＡＴＧＡＧＣＣＴＧＧＡＡＡＧＡＡＴＣＡＡＡＡＣＣＴＴＴＧＡＡＧＡＡＣＴＴＴＴＡＣＣＧＡＡＴＧＣＣＡＣＣＴＣＣＡＴＧＴＴＴＧＡＴＧＡＣＴＡＣＣＡＧＧＧＣＧＡＣＡＧＣＡＧＣＡＣＴＣＴＧＴＴＧＧＣＣＴＣＴＣＣＣＡＴＧＣＴＧＡＡＧＣＧＣＴＴＣＡＣＣＴＧＧＡＣＴＧＡＣＡＧＣＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＣＣＴＣＧＣＴＣＡＡＧＡＴＴＧＡＣＴＴＧＡＧＡＧＴＡＡＣＣＡＧＴＡＡＡＡＧＴＡＡＧＧＡＧＴＣＧＧＧＧＣＴＧＴＣＴＧＡＴＧＴＣＡＧＣＡＧＧＣＣＣＡＧＴＴＴＣＴＧＣＣＡＴＴＣＣＡＧＣＴＧＴＧＧＧＣＡＣＧＴＣＡＧＣＧＡＡＧＧＣＡＡＧＣＧＣＡＧＧＴＴＣＡＣＣＴＡＣＧＡＣＣＡＣＧＣＴＧＡＧＣＴＧＧＡＡＡＧＧＡＡＡＡＴＣＧＣＧＴＧＣＴＧＣＴＣＣＣＣＧＣＣＣＣＣＡＧＡＣＴＡＣＡＡＣＴＣＧＧＴＧＧＴＣＣＴＧＴＡＣＴＣＣＡＣＣＣＣＡＣＣＣＡＴＣＴＡＧＡＧＴＴＴＧＡＣＡＣＧＡＡＧＣＣＴＴＡＴＴＴＣＴＡＧＡＡＧＣＡＣＡＴＧＴＧＴＡＴＴＴＡＴＡＣＣＣＣＣＡＧＧＡＡＡＣＴＡＧＣＴＴＴＴＧＣＣＡＧＴＡＴＴＡＴＧＣＡＴＡＴＡＴＡＡＧＴＴＴＡＣＡＣＣＴＴＴＡＴＣＴＴＴＣＣＡＴＧＧＧＡＧＣＣＡＧＣＴＧＣＴＴＴＴＴＧＴＧＡＴＴＴＴＴＴＴＡＡＴＡＧＴＧＣＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＡＣＴＡＡＣＡＡＧＡＡＴＧＴＡＡＣＴＣＣＡＧＡＴＡＧＡＧＡＡＡＴＡＧＴＧＡＣＡＡＧＴＧＡＡＧＡＡＣＡＣＴＡＣＴＧＣＴＡＡＡＴＣＣＴＣＡＴＧＴＴＡＣＴＣＡＧＴＧＴＴＡＧＡＧＡＡＡＴＣＣＴＴＣＣＴＡＡＡＣＣＣＡＡＴＧＡＣＴＴＣＣＣＴＧＣＴＣＣＡＡＣＣＣＣＣＧＣＣＡＣＣＴＣＡＧＧＧＣＡＣＧＣＡＧＧＡＣＣＡＧＴＴＴＧＡＴＴＧＡＧＧＡＧＣＴＧＣＡＣＴＧＡＴＣＡＣＣＣＡＡＴＧＣＡＴＣＡＣＧＴＡＣＣＣＣＡＣＴＧＧＧＣＣＡＧＣＣＣＴＧＣＡＧＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＧＧＧＣＡＡＣＡＡＧＣＣＣＧＴＴＡＧＣＣＣＣＡＧＧＧＡＴＣＡＣＴＧＧＣＴＧＧＣＣＴＧＡＧＣＡＡＣＡＴＣＴＣＧＧＧＡＧＴＣＣＴＣＴＡＧＣＡＧＧＣＣＴＡＡＧＡＣＡＴＧＴＧＡＧＧＡＧＧＡＡＡＡＧＧＡＡＡＡＡＡＡＧＣＡＡＡＡＡＧＣＡＡＧＧＧＡＧＡＡＡＡＧＡＧＡＡＡＣＣＧＧＧＡＧＡＡＧＧＣＡＴＧＡＧＡＡＡＧＡＡＴＴＴＧＡＧＡＣＧＣＡＣＣＡＴＧＴＧＧＧＣＡＣＧＧＡＧＧＧＧＧＡＣＧＧＧＧＣＴＣＡＧＣＡＡＴＧＣＣＡＴＴＴＣＡＧＴＧＧＣＴＴＣＣＣＡＧＣＴＣＴＧＡＣＣＣＴＴＣＴＡＣＡＴＴＴＧＡＧＧＧＣＣＣＡＧＣＣＡＧＧＡＧＣＡＧＡＴＧＧＡＣＡＧＣＧＡＴＧＡＧＧＧＧＡＣＡＴＴＴＴＣＴＧＧＡＴＴＣＴＧＧＧＡＧＧＣＡＡＧＡＡＡＡＧＧＡＣＡＡＡＴＡＴＣＴＴＴＴＴＴＧＧＡＡＣＴＡＡＡＧＣＡＡＡＴＴＴＴＡＧＡＡＣＴＴＴＡＣＣＴＡＴＧＧＡＡＧＴＧＧＴＴＣＴＡＴＧＴＣＣＡＴＴＣＴＣＡＴＴＣＧＴＧＧＣＡＴＧＴＴＴＴＧＡＴＴＴＧＴＡＧＣＡＣＴＧＡＧＧＧＴＧＧＣＡＣＴＣＡＡＣＴＣＴＧＡＧＣＣＣＡＴＡＣ


ＴＴＴＴＧＧＣＴＣＣＴＣＴＡＧＴＡＡＧＡＴＧＣＡＣＴＧＡＡＡＡＣＴＴＡＧＣＣＡＧＡＧＴＴＡＧＧＴＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＣＣＡＴＧＡＴＧＧＣＣＴＴＡＣＡＣＴＧＡＡＡＡＴＧＴＣＡＣＡＴＴＣＴＡＴＴＴＴＧＧＧＴＡＴＴＡＡＴＡＴＡＴＡＧＴＣＣＡＧＡＣＡＣＴＴＡＡＣＴＣＡＡＴＴＴＣＴＴＧＧＴＡＴＴＡＴＴＣＴＧＴＴＴＴＧＣＡＣＡＧＴＴＡＧＴＴＧＴＧＡＡＡＧＡＡＡＧＣＴＧＡＧＡＡＧＡＡＴＧＡＡＡＡＴＧＣＡＧＴＣＣＴＧＡＧＧＡＧＡＧＧＡＧＴＴＴＴＣＴＣＣＡＴＡＴＣＡＡＡＡＣＧＡＧＧＧＣＴＧＡＴＧＧＡＧＧＡＡＡＡＡＧＧＴＣＡＡＴＡＡＧＧＴＣＡＡＧＧＧＡＡＡＡＣＣＣＣＧＴＣＴＣＴＡＴＡＣＣＡＡＣＣＡＡＡＣＣＡＡＴＴＣＡＣＣＡＡＣＡＣＡＧＴＴＧＧＧＡＣＣＣＡＡＡＡＣＡＣＡＧＧＡＡＧＴＣＡＧＴＣＡＣＧＴＴＴＣＣＴＴＴＴＣＡＴＴＴＡＡＴＧＧＧＧＡＴＴＣＣＡＣＴＡＴＣＴＣＡＣＡＣＴＡＡＴＣＴＧＡＡＡＧＧＡＴＧＴＧＧＡＡＧＡＧＣＡＴＴＡＧＣＴＧＧＣＧＣＡＴＡＴＴＡＡＧＣＡＣＴＴＴＡＡＧＣＴＣＣＴＴＧＡＧＴＡＡＡＡＡＧＧＴＧＧＴＡＴＧＴＡＡＴＴＴＡＴＧＣＡＡＧＧＴＡＴＴＴＣＴＣＣＡＧＴＴＧＧＧＡＣＴＣＡＧＧＡＴＡＴＴＡＧＴＴＡＡＴＧＡＧＣＣＡＴＣＡＣＴＡＧＡＡＧＡＡＡＡＧＣＣＣＡＴＴＴＴＣＡＡＣＴＧＣＴＴＴＧＡＡＡＣＴＴＧＣＣＴＧＧＧＧＴＣＴＧＡＧＣＡＴＧＡＴＧＧＧＡＡＴＡＧＧＧＡＧＡＣＡＧＧＧＴＡＧＧＡＡＡＧＧＧＣＧＣＣＴＡＣＴＣＴＴＣＡＧＧＧＴＣＴＡＡＡＧＡＴＣＡＡＧＴＧＧＧＣＣＴＴＧＧＡＴＣＧＣＴＡＡＧＣＴＧＧＣＴＣＴＧＴＴＴＧＡＴＧＣＴＡＴＴＴＡＴＧＣＡＡＧＴＴＡＧＧＧＴＣＴＡＴＧＴＡＴＴＴＡＴＧＡＴＧＴＣＴＧＣＡＣＣＴＴＣＴＧＣＡＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＡＧＣＴＧＧＡＧＡＧＧＣＡＡＣＡＧＴＧＧＡＴＴＧＣＴＧＣＴＴＣＴＴＧＧＧＧＡＧＡＡＧＡＧＴＡＴＧＣＴＴＣＣＴＴＴＴＡＴＣＣＡＴＧＴＡＡＴＴＴＡＡＣＴＧＴＡＧＡＡＣＣＴＧＡＧＣＴＣＴＡＡＧＴＡＡＣＣＧＡＡＧＡＡＴＧＴＡＴＧＣＣＴＣＴＧＴＴＣＴＴＡＴＧＴＧＣＣＡＣＡＴＣＣＴＴＧＴＴＴＡＡＡＧＧＣＴＣＴＣＴＧＴＡＴＧＡＡＧＡＧＡＴＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＴＣＡＧＣＡＣＡＴＴＣＣＣＴＡＧＴＧＡＧＣＣＴＡＣＴＧＧＣＴＣＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＴＴＴＴＧＴＧＧＡＡＧＡＣＴＣＡＣＴＡＧＣＣＡＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＧＴＧＧＧＡＣＡＧＴＣＣＴＣＴＣＣＡＣＣＡＡＧＡＴＣＴＡＡＡＴＣＣＡＡＡＣＡＡＡＡＧＣＡＧＧＣＴＡＧＡＧＣＣＡＧＡＡＧＡＧＡＧＧＡＣＡＡＡＴＣＴＴＴＧＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＴＴＴＡＣＡＴＡＣＧＣＡＡＡＣＣＡＣＣＴＧＴＧＡＣＡＧＣＴＧＧＣＡＡＴＴＴＴＡＴＡＡＡＴＣＡＧＧＴＡＡＣＴＧＧＡＡＧＧＡＧＧＴＴＡＡＡＣＡＣＡＧＡＡＡＡＡＡＧＡＡＧＡＣＣＴＣＡＧＴＣＡＡＴＴＣＴＣＴＡＣＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＣＡＡＡＴＣＡＧＡＴＡＡＴＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＡＴＡＧＴＧＡＴＡＡＣＡＡＡＴＡＡＡＡＣＣＴＴＡＧＣＴＡＴＴＣＡＴＧＴＣＴＴＧＡＴＴＴＣＡＡＴＡＡＴＴＡＡＴＴＣＴＴＡＡＴＣＡＴＴＡＡＧＡＧＡＣＣＡＴＡＡＴＡＡＡＴＡＣＴＣＣＴＴＴＴＣＡＡＧＡＧＡＡＡＡＧＣＡＡＡＡＣＣＡＴＴＡＧＡＡＴＴＧＴＴＡＣＴＣＡＧＣＴＣＣＴＴＣＡＡＡＣＴＣＡＧＧＴＴＴＧＴＡＧＣＡＴＡＣＡＴＧＡＧＴＣＣＡＴＣＣＡＴＣＡＧＴＣＡＡＡＧＡＡＴＧＧＴＴＣＣＡＴＣＴＧＧＡＧＴＣＴＴＡＡＴＧＴＡＧＡＡＡＧＡＡＡＡＡＴＧＧＡＧＡＣＴＴＧＴＡＡＴＡＡＴＧＡＧＣＴＡＧＴＴＡＣＡＡＡＧＴＧＣＴＴＧＴＴＣＡＴＴＡＡＡＡＴＡＧＣＡＣＴＧＡＡＡＡＴＴＧＡＡＡＣＡＴＧＡＡＴＴＡＡＣＴＧＡＴＡＡＴＡＴＴＣＣＡＡＴＣＡＴＴＴＧＣＣＡＴＴＴＡＴＧＡＣＡＡＡＡＡＴＧＧＴＴＧＧＣＡＣＴＡＡＣＡＡＡＧＡＡＣＧＡＧＣＡＣＴＴＣＣＴＴＴＣＡＧＡＧＴＴＴＣＴＧＡＧＡＴＡＡＴＧＴＡＣＧＴＧＧＡＡＣＡＧＴＣＴＧＧＧＴＧＧＡＡＴＧＧＧＧＣＴＧＡＡＡＣＣＡＴＧＴＧＣＡＡＧＴＣＴＧＴＧＴＣＴＴＧＴＣＡＧＴＣＣＡＡＧＡＡＧＴＧＡＣＡＣＣＧＡＧＡＴＧＴＴＡＡＴＴＴＴＡＧＧＧＡＣＣＣＧＴＧＣＣＴＴＧＴＴＴＣＣＴＡＧＣＣＣＡＣＡＡＧＡＡＴＧＣＡＡＡＣＡＴＣＡＡＡＣＡＧＡＴＡＣＴＣＧＣＴＡＧＣＣＴＣＡＴＴＴＡＡＡＴＴＧＡＴＴＡＡＡＧＧＡＧＧＡＧＴＧＣＡＴＣＴＴＴＧＧＣＣＧＡＣＡＧＴＧＧＴＧＴＡＡＣＴＧＴＡＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＧＧＴＧＴＡＴＧＴＧＴＧＴＴＴＴＧＴＧＣＡＴＡＡＣＴＡＴＴＴＡＡＧＧＡＡＡＣＴＧＧＡＡＴＴＴＴＡＡＡＧＴＴＡＣＴＴＴＴＡＴＡＣＡＡＡＣＣＡＡＧＡＡＴＡＴＡＴＧＣＴＡＣＡＧＡＴＡＴＡＡＧＡＣＡＧＡＣＡＴＧＧＴＴＴＧＧＴＣＣＴＡＴＡＴＴＴＣＴＡＧＴＣＡＴＧＡＴＧＡＡＴＧＴＡＴＴＴＴＧＴＡＴＡＣＣＡＴＣＴＴＣＡＴＡＴＡＡＴＡＡＡＣＴＴＣＣＡＡＡＡＡＣＡＣＡ
例示的なヒトＶＥＧＦＲ－１アイソフォーム１前駆体アミノ酸配列（配列番号２７）
ＭＶＳＹＷＤＴＧＶＬＬＣＡＬＬＳＣＬＬＬＴＧＳＳＳＧＳＫＬＫＤＰＥＬＳＬＫＧＴＱＨＩＭＱＡＧＱＴＬＨＬＱＣＲＧＥＡＡＨＫＷＳＬＰＥＭＶＳＫＥＳＥＲＬＳＩＴＫＳＡＣＧＲＮＧＫＱＦＣＳＴＬＴＬＮＴＡＱＡＮＨＴＧＦＹＳＣＫＹＬＡＶＰＴＳＫＫＫＥＴＥＳＡＩＹＩＦＩＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＱＩＳＴＰＲＰＶＫＬＬＲＧＨＴＬＶＬＮＣＴＡＴＴＰＬＮＴＲＶＱＭＴＷＳＹＰＤＥＫＮＫＲＡＳＶＲＲＲＩＤＱＳＮＳＨＡＮＩＦＹＳＶＬＴＩＤＫＭＱＮＫＤＫＧＬＹＴＣＲＶＲＳＧＰＳＦＫＳＶＮＴＳＶＨＩＹＤＫＡＦＩＴＶＫＨＲＫＱＱＶＬＥＴＶＡＧＫＲＳＹＲＬＳＭＫＶＫＡＦＰＳＰＥＶＶＷＬＫＤＧＬＰＡＴＥＫＳＡＲＹＬＴＲＧＹＳＬＩＩＫＤＶＴＥＥＤＡＧＮＹＴＩＬＬＳＩＫＱＳＮＶＦＫＮＬＴＡＴＬＩＶＮＶＫＰＱＩＹＥＫＡＶＳＳＦＰＤＰＡＬＹＰＬＧＳＲＱＩＬＴＣＴＡＹＧＩＰＱＰＴＩＫＷＦＷＨＰＣＮＨＮＨＳＥＡＲＣＤＦＣＳＮＮＥＥＳＦＩＬＤＡＤＳＮＭＧＮＲＩＥＳＩＴＱＲＭＡＩＩＥＧＫＮＫＭＡＳＴＬＶＶＡＤＳＲＩＳＧＩＹＩＣＩＡＳＮＫＶＧＴＶＧＲＮＩＳＦＹＩＴＤＶＰＮＧＦＨＶＮＬＥＫＭＰＴＥＧＥＤＬＫＬＳＣＴＶＮＫＦＬＹＲＤＶＴＷＩＬＬＲＴＶＮＮＲＴＭＨＹＳＩＳＫＱＫＭＡＩＴＫＥＨＳＩＴＬＮＬＴＩＭＮＶＳＬＱＤＳＧＴＹＡＣＲＡＲＮＶＹＴＧＥＥＩＬＱＫＫＥＩＴＩＲＤＱＥＡＰＹＬＬＲＮＬＳＤＨＴＶＡＩＳＳＳＴＴＬＤＣＨＡＮＧＶＰＥＰＱＩＴＷＦＫＮＮＨＫＩＱＱＥＰＧＩＩＬＧＰＧＳＳＴＬＦＩＥＲＶＴＥＥＤＥＧＶＹＨＣＫＡＴＮＱＫＧＳＶＥＳＳＡＹＬＴＶＱＧＴＳＤＫＳＮＬＥＬＩＴＬＴＣＴＣＶＡＡＴＬＦＷＬＬＬＴＬＦＩＲＫＭＫＲＳＳＳＥＩＫＴＤＹＬＳＩＩＭＤＰＤＥＶＰＬＤＥＱＣＥＲＬＰＹＤＡＳＫＷＥＦＡＲＥＲＬＫＬＧＫＳＬＧＲＧＡＦＧＫＶＶＱＡＳＡＦＧＩＫＫＳＰＴＣＲＴＶＡＶＫＭＬＫＥＧＡＴＡＳＥＹＫＡＬＭＴＥＬＫＩＬＴＨＩＧＨＨＬＮＶＶＮＬＬＧＡＣＴＫＱＧＧＰＬＭＶＩＶＥＹＣＫＹＧＮＬＳＮＹＬＫＳＫＲＤＬＦＦＬＮＫＤＡＡＬＨＭＥＰＫＫＥＫＭＥＰＧＬＥＱＧＫＫＰＲＬＤＳＶＴＳＳＥＳＦＡＳＳＧＦＱＥＤＫＳＬＳＤＶＥＥＥＥＤＳＤＧＦＹＫＥＰＩＴＭＥＤＬＩＳＹＳＦＱＶＡＲＧＭＥＦＬＳＳＲＫＣＩＨＲＤＬＡＡＲＮＩＬＬＳＥＮＮＶＶＫＩＣＤＦＧＬＡＲＤＩＹＫＮＰＤＹＶＲＫＧＤＴＲＬＰＬＫＷＭＡＰＥＳＩＦＤＫＩＹＳＴＫＳＤＶＷＳＹＧＶＬＬＷＥＩＦＳＬＧＧＳＰＹＰＧＶＱＭＤＥＤＦＣＳＲＬＲＥＧＭＲＭＲＡＰＥＹＳＴＰＥＩＹＱＩＭＬＤＣＷＨＲＤＰＫＥＲＰＲＦＡＥＬＶＥＫＬＧＤＬＬＱＡＮＶＱＱＤＧＫＤＹＩＰＩＮＡＩＬＴＧＮＳＧＦＴＹＳＴＰＡＦＳＥＤＦＦＫＥＳＩＳＡＰＫＦＮＳＧＳＳＤＤＶＲＹＶＮＡＦＫＦＭＳＬＥＲＩＫＴＦＥＥＬＬＰＮＡＴＳＭＦＤＤＹＱＧＤＳＳＴＬＬＡＳＰＭＬＫＲＦＴＷＴＤＳＫＰＫＡＳＬＫＩＤＬＲＶＴＳＫＳＫＥＳＧＬＳＤＶＳＲＰＳＦＣＨＳＳＣＧＨＶＳＥＧＫＲＲＦＴＹＤＨＡＥＬＥＲＫＩＡＣＣＳＰＰＰＤＹＮＳＶＶＬＹＳＴＰＰＩ
このバリアント（２）は、ｓＦｌｔ１またはｓＶＥＧＦＲ－１としても知られており、バリアント１と比較して３’コード領域及び３’ＵＴＲが異なっている。コードされた可溶性タンパク質（アイソフォーム２）は、短く特有のＣ末端を持ち、アイソフォーム１の膜貫通領域及び細胞質領域を欠く。
例示的なヒトＶＥＧＦＲ－１アイソフォーム２（ｓＶＥＧＦＲ－１としても知られる）ｃＤＮＡ配列（配列番号２８）
ＡＴＣＧＡＧＧＴＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＣＴＣＧＧＡＧＣＧＣＧＣＣＡＧＧＣＧＧＡＣＡＣＴＣＣＴＣＴＣＧＧＣＴＣＣＴＣＣＣＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＴＣＧＧＡＧＣＧＧＧＣＴＣＣＧＧＧＧＣＴＣＧＧＧＴＧＣＡＧＣＧＧＣＣＡＧＣＧＧＧＣＧＣＣＴＧＧＣＧＧＣＧＡＧＧＡＴＴＡＣＣＣＧＧＧＧＡＡＧＴＧＧＴＴＧＴＣＴＣＣＴＧＧＣＴＧＧＡＧＣＣＧＣＧＡＧＡＣＧＧＧＣＧＣＴＣＡＧＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＡＡＣＧＡＧＡＧＧＡＣＧＧＡＣＴＣＴＧＧＣＧＧＣＣＧＧＧＴＣＧＴＴＧＧＣＣＧＣＧＧＧＧＡＧＣＧＣＧＧＧＣＡＣＣＧＧＧＣＧＡＧＣＡＧＧＣＣＧＣＧＴＣＧＣＧＣＴＣＡＣＣＡＴＧＧＴＣＡＧＣＴＡＣＴＧＧＧＡＣＡＣＣＧＧＧＧＴＣＣＴＧＣＴＧＴＧＣＧＣＧＣＴＧＣＴＣＡＧＣＴＧＴＣＴＧＣＴＴＣＴＣＡＣＡＧＧＡＴＣＴＡＧＴＴＣＡＧＧＴＴＣＡＡＡＡＴＴＡＡＡＡＧＡＴＣＣＴＧＡＡＣＴＧＡＧＴＴＴＡＡＡＡＧＧＣＡＣＣＣＡＧＣＡＣＡＴＣＡＴＧＣＡＡＧＣＡＧＧＣＣＡＧＡＣＡＣＴＧＣＡＴＣＴＣＣＡＡＴＧＣＡＧＧＧＧＧＧＡＡＧＣＡＧＣＣＣＡＴＡＡＡＴＧＧＴＣＴＴＴＧＣＣＴＧＡＡＡＴＧＧＴＧＡＧＴＡＡＧＧＡＡＡＧＣＧＡＡＡＧＧＣＴＧＡＧＣＡＴＡＡＣＴＡＡＡＴＣＴＧＣＣＴＧＴＧＧＡＡＧＡＡＡＴＧＧＣＡＡＡＣＡＡＴＴＣＴＧＣＡＧＴＡＣＴＴＴＡＡＣＣＴＴＧＡＡＣＡＣＡＧＣＴＣＡＡＧＣＡＡＡＣＣＡＣＡＣＴＧＧＣＴＴＣＴＡＣＡＧＣＴＧＣＡＡＡＴＡＴＣＴＡＧＣＴＧＴＡＣＣＴＡＣＴＴＣＡＡＡＧＡＡＧＡＡＧＧＡＡＡＣＡＧＡＡＴＣＴＧＣＡＡＴＣＴＡＴＡＴＡＴＴＴＡＴＴＡＧＴＧＡＴＡＣＡＧＧＴＡＧＡＣＣＴＴＴＣＧＴＡＧＡＧＡＴＧＴＡＣＡＧＴＧＡＡＡＴＣＣＣＣＧＡＡＡＴＴＡＴＡＣＡＣＡＴＧＡＣＴＧＡＡＧＧＡＡＧＧＧＡＧＣＴＣＧＴＣＡＴＴＣＣＣＴＧＣＣＧＧＧＴＴＡＣＧＴＣＡＣＣＴＡＡＣＡＴＣＡＣＴＧＴＴＡＣＴＴＴＡＡＡＡＡＡＧＴＴＴＣＣＡＣＴＴＧＡＣＡＣＴＴＴＧＡＴＣＣＣＴＧＡＴＧＧＡＡＡＡＣＧＣＡＴＡＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＴＡＧＡＡＡＧＧＧＣＴＴＣＡＴＣＡＴＡＴＣＡＡＡＴＧＣＡＡＣＧＴＡＣＡＡＡＧＡＡＡＴＡＧＧＧＣＴＴＣＴＧＡＣＣＴＧＴＧＡＡＧＣＡＡＣＡＧＴＣＡＡＴＧＧＧＣＡＴＴＴＧＴＡＴＡＡＧＡＣＡＡＡＣＴＡＴＣＴＣＡＣＡＣＡＴＣＧＡＣＡＡＡＣＣＡＡＴＡＣＡＡＴＣＡＴＡＧＡＴＧＴＣＣＡＡＡＴＡＡＧＣＡＣＡＣＣＡＣＧＣＣＣＡＧＴＣＡＡＡＴＴＡＣＴＴＡＧＡＧＧＣＣＡＴＡＣＴＣＴＴＧＴＣＣＴＣＡＡＴＴＧＴＡＣＴＧＣＴＡＣＣＡＣＴＣＣＣＴＴＧＡＡＣＡＣＧＡＧＡＧＴＴＣＡＡＡＴＧＡＣＣＴＧＧＡＧＴＴＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＡＡＡＡＡＡＴＡＡＧＡＧＡＧＣＴＴＣＣＧＴＡＡＧＧＣＧＡＣＧＡＡＴＴＧＡＣＣＡＡＡＧＣＡＡＴＴＣＣＣＡＴＧＣＣＡＡＣＡＴＡＴＴＣＴＡＣＡＧＴＧＴＴＣＴＴＡＣＴＡＴＴＧＡＣＡＡＡＡＴＧＣＡＧＡＡＣＡＡＡＧＡＣＡＡＡＧＧＡＣＴＴＴＡＴＡＣＴＴＧＴＣＧＴＧＴＡＡＧＧＡＧＴＧＧＡＣＣＡＴＣＡＴＴＣＡＡＡＴＣＴＧＴＴＡＡＣＡＣＣＴＣＡＧＴＧＣＡＴＡＴＡＴＡＴＧＡＴＡＡＡＧＣＡＴＴＣＡＴＣＡＣＴＧＴＧＡＡＡＣＡＴＣＧＡＡＡＡＣＡＧＣＡＧＧＴＧＣＴＴＧＡＡＡＣＣＧＴＡＧＣＴＧＧＣＡＡＧＣＧＧＴＣＴＴＡＣＣＧＧＣＴＣＴＣＴＡＴＧＡＡＡＧＴＧＡＡＧＧＣＡＴＴＴＣＣＣＴＣＧＣＣＧＧＡＡＧＴＴＧＴＡＴＧＧＴＴＡＡＡＡＧＡＴＧＧＧＴＴＡＣＣＴＧＣＧＡＣＴＧＡＧＡＡＡＴＣＴＧＣＴＣＧＣＴＡＴＴＴＧＡＣＴＣＧＴＧＧＣＴＡＣＴＣＧＴＴＡＡＴＴＡＴＣＡＡＧＧＡＣＧＴＡＡＣＴＧＡＡＧＡＧＧＡＴＧＣＡＧＧＧＡＡＴＴＡＴＡＣＡＡＴＣＴＴＧＣＴＧＡＧＣＡＴＡＡＡＡＣＡＧＴＣＡＡＡＴＧＴＧＴＴＴＡＡＡＡＡＣＣＴＣＡＣＴＧＣＣＡＣＴＣＴＡＡＴＴＧＴＣＡＡＴＧＴＧＡＡＡＣＣＣＣＡＧＡＴＴＴＡＣＧＡＡＡＡＧＧＣＣＧＴＧＴＣＡＴＣＧＴＴＴＣＣＡＧＡＣＣＣＧＧＣＴＣＴＣＴＡＣＣＣＡＣＴＧＧＧＣＡＧＣＡＧＡＣＡＡＡＴＣＣＴＧＡＣＴＴＧＴＡＣＣＧＣＡＴＡＴＧＧＴＡＴＣＣＣＴＣＡＡＣＣＴＡＣＡＡＴＣＡＡＧＴＧＧＴＴＣＴＧＧＣＡＣＣＣＣＴＧＴＡＡＣＣＡＴＡＡＴＣＡＴＴＣＣＧＡＡＧＣＡＡＧＧＴＧＴＧＡＣＴＴＴＴＧＴＴＣＣＡＡＴＡＡＴＧＡＡＧＡＧＴＣＣＴＴＴＡＴＣＣＴＧＧＡＴＧＣＴＧＡＣＡＧＣＡＡＣＡＴＧＧＧＡＡＡＣＡＧＡＡＴＴＧＡＧＡＧＣＡＴＣＡＣＴＣＡＧＣＧＣＡＴＧＧＣＡＡＴＡＡＴＡＧＡＡＧＧＡＡＡＧＡＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＴＡＧＣＡＣＣＴＴＧＧＴＴＧＴＧＧＣＴＧＡＣＴＣＴＡＧＡＡＴＴＴＣＴＧＧＡＡＴＣＴＡＣＡＴＴＴＧＣＡＴＡＧＣＴＴＣＣＡＡＴＡＡＡＧＴＴＧＧＧＡＣＴＧＴＧＧＧＡＡＧＡＡＡＣＡＴＡＡＧＣＴＴＴＴＡＴＡＴＣＡＣＡＧＡＴＧＴＧＣＣＡＡＡＴＧＧＧＴＴＴＣＡＴＧＴＴＡＡＣＴＴＧＧＡＡＡＡＡＡＴＧＣＣＧＡＣＧＧＡＡＧＧＡＧＡＧＧＡＣＣＴＧＡＡＡＣＴＧＴＣＴＴＧＣＡＣＡＧＴＴＡＡＣＡＡＧＴＴＣＴＴＡＴＡＣＡＧＡＧＡＣＧＴＴＡＣＴＴＧＧＡＴＴＴＴＡＣＴＧＣＧＧＡＣＡＧＴＴＡＡＴＡＡＣＡＧＡＡＣＡＡＴＧＣＡＣＴＡＣＡＧＴＡＴＴＡＧＣＡＡＧＣＡＡＡＡＡＡＴＧＧＣＣＡＴＣＡＣＴＡＡＧＧＡＧＣＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＴＣＴＴＡＡＴＣＴＴＡＣＣＡＴＣＡＴＧＡＡＴＧＴＴＴＣＣＣＴＧＣＡＡＧＡＴＴＣＡＧＧＣＡＣＣＴＡＴＧＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＴＧＴＡＴＡＣＡＣＡＧＧＧＧＡＡＧＡＡＡＴＣＣＴＣＣＡＧＡＡＧＡＡＡＧＡＡＡＴＴＡＣＡＡＴＣＡＧＡＧＧＴＧＡＧＣＡＣＴＧＣＡＡＣＡＡＡＡＡＧＧＣＴＧＴＴＴＴＣＴＣＴＣＧＧＡＴＣＴＣＣＡＡＡＴＴＴＡＡＡＡＧＣＡＣＡＡＧＧＡＡＴＧＡＴＴＧＴＡＣＣＡＣＡＣＡＡＡＧＴＡＡＴＧＴＡＡＡＡＣＡＴＴＡＡＡＧＧＡＣＴＣＡＴＴＡＡＡＡＡＧＴＡＡＣＡＧＴＴＧＴＣＴＣＡＴＡＴＣＡＴＣＴＴＧＡＴＴＴＡＴＴＧＴＣＡＣＴＧＴＴＧＣＴＡＡＣＴＴＴＣＡＧＧＣＴＣＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＣＴＣＣＴＣＣＣＡＡＡＡＴＧＡＧＴＴＣＧＧＡＧＡＴＧＡＴＡＧＣＡＧＴＡＡＴＡＡＴＧＡＧＡＣＣＣＣＣＧＧＧＣＣＣＣＡＧＣＴＣＴＧＧＧＣＣＣＣＣＣＡＴＴＣＡＧＧＣＣＧＡＧＧＧＧＧＣＴＧＣＴＣＣＧＧＧＧＧＧＣＣＧＡＣＴＴＧＧＴＧＣＡＣＧＴＴＴＧＧＡＴＴＴＧＧＡＧＧＡＴＣＣＣＴＧＣＡＣＴＧＣＣＴＴＣＴＣＴＧＴＧＴＴＴＧＴＴＧＣＴＣＴＴＧＣＴＧＴＴＴＴＣＴＣＣＴＧＣＣＴＧＡＴＡＡＡＣＡＡＣＡＡＣＴＴＧＧＧＡＴＧＡＴＣＣＴＴＴＣＣＴＴＣＣＡＴＴＴＴＧＡＴＧＣＣＡＡＣＣＴＣＴＴＴＴＴＡＴＴＴＴＴＡＡＧＴＧＴＴＧＡＡＧＣＴＧＣＡＣＡＡＡＣＴＧＡＡＴＡＡＴＴＴＡＡＡＣＡＡＡＴＧＣＴＧＧＴＴＴＣＴＧＣＣＡＡＡＧＡＴＧＧＡＣＡＣＧＡＡＴＡＡＧＴＴＡＡＴＴＴＴＣＣＡＧＣＴＣＡＧＡＡＴＧＡＧＴＡＣＡＧＴＴＧＡＡＴＴＴＧＡＧＡＣＴＣＴＧＴＣＧＧＡＣＴＴＣＴＧＣＣＴＧＧＴＴＴＴＡＴＴＴＧＧＧＡＣＴＡＴＴＴＣＡＴＣＴＧＣＴＣＴＴＧＡＴＴＴＧＴＡＡＡＴＡＧＣＡＣＣＴＧＧＡＴＡＧＣＡＡＧＴＴＡＴＡＡＴＧＣＴＴＡＴＴＴＡＴＴＴＧＡＡＡＡＴＧＣＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＣＧＴＴＡＡＧＣＡＣＡＴＴＴＡＴＣＴＴＧＡＡＣＴＧＧＡＧＣＴＴＣＴＡＡＡＡＴＧＧＧＣＣＣＣＡＧＧＧＧＴＧＣＡＡＧＡＴＧＴＴＧＧＴＧＴＡＡＴＴＣＡＧＡＧＡＴＡＧＴＡＡＡＧＧＴＴＴＡＴＣＧＣＡＧＴＧＴＧＡＡＴＴＡＴＡＡＧＡＧＴＣＣＡＴＣＣＡＡＡＴＣＡＡＣＧＴＣＣＣＣＴＣＣＣＴＣＣＴＣＴＣＡＴＧＣＧＡＴＣＣＡＧＧＴＡＡＴＴＡＴＧＣＡＧＴＴＡＧＴＧＣＣＡＣＡＧＴＡＧＡＣＴＡＧＣＣＴＡＧＣＡＡＡＧＧＧＴＴＴＧＣＴＣＣＴＴＧＣＴＧＴＣＴＣＴＧＡＣＴＧＣＡＣＣＡＣＡＣＡＧＣＴＡＴＴＧＡＴＧＧＣＡＧＣＴＧＡＡＡＧＡＡＡＧＴＧＧＡＴＣＡＴＧＣＣＴＴＡＡＴＴＴＴＡＡＡＴＡＴＴＣＣＴＧＴＣＣＴＣＴＧＧＴＴＡＴＴＡＴＴＴＴＡＡＧＧＡＡＣＴＴＣＡＴＣＡＴＧＴＴＡＡＡＡＴＧＡＣＡＧＣＡＴＴＣＡＡＡＧＧＴＧＴＡＣＣＡＣＡＡＴＣＡＡＴＴＴＡＴＣＡＡＧＧＡＡＡＴＡＡＡＧＧＣＴＡＴＴＧＴＡＡＣＣＡＧＡＧＡＴＴＴＡＡＴＧＣＡＴＴＣＴＴＣＴＡＡＡＴＧＴＡＡＡＴＴＴＡＡＡＡＴＴＴＧＣＣＣＴＴＴＡＡＡＡＡＡＧＴＣＣＡＣＴＴＴＣＣＣＣＡＴＡＴＧＣＡＡＡＴＧＴＴＡＡＴＡＧＧＡＴＴＴＴＴＡＴＧＧＧＧＡＴＴＡＡＧＡＡＧＣＧＧＣＡＡＡＡＣＴＡＣＡＧＡＡＧＣＡＧＡＡＴＴＣＡＡＡＧＴＡＡＴＴＴＡＡＡＡＡＡＴＡＣＡＣＡＣＣＡＧＴＴＴＴＡＡＡＴＣＡＡＧＡＧＡＡＧＴＴＧＴＡＡＴＣＴＣＴＴＧＴＴＴＴＡＡＧＣＴＴＧＣＧＴＴＴＧＡＧＧＧＡＡＡＡＴＧＡＣＴＴＴＴＴＣＡＣＣＡＡＴＴＴＡＡＴＡＴＧＣＡＴＴＧＴＴＣＴＧＴＴＧＴＴＴＴＴＡＴＴＴＡＴＧＡＴＴＧＡＴＣＡＴＴＡＴＡＴＧＴＧＡＣＴＴＧＣＡＴＡＡＡＣＴＡＴＴＴＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＣＴＡＴＡＡＴＧＡＣＣＡＡＡＡＴＡＧＣＣＡＴＧＧＣＴＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＧＴＧＧＣＴＧＧＧＣＡＧＴＴＣＡＡＴＡＧＧＡＧＧＴＧＡＣＡＡＴＡＴＧＡＣＡＡＣＴＴＣＴＣＡＡＧＣＴＴＧＧＧＡＡＣＴＣＡＣＣＡＧＡＣＴＧＴＴＴＣＣＴＣＣＴＴＴＡＧＧＴＡＡＣＡＧＡＴＴＣＴＧＴＣＣＣＡＣＧＧＣＴＡＡＡＣＴＴＧＴＣＴＴＴＣＡＣＧＴＧＧＧＡＡＴＴＧＣＴＴＴＴＧＴＣＡＡＡＣＧＴＧＡＡＡＧＡＧＴＡＡＡＣＡＡＴＡＧＣＡＴＴＴＣＣＣＣＡＧＡＡＴＧＣＣＡＧＴＴＴＴＡＴＧＧＡＧＣＣＣＣＡＡＡＴＧＣＴＣＴＧＡＡＡＡＣＡＡＴＴＡＧＴＡＡＣＣＴＧＧＡＡＧＴＴＧＴＣＡＧＣＣＣＡＡＡＧＧＡＡＡＧＡＡＡＡＡＴＣＡＡＴＴＧＴＡＴＣＴＴＧＡＡＡＴＴＴＴＡＣＣＴＡＴＧＧＣＴＣＴＴＴＧＧＣＣＴＧＧＣＴＴＣＴＴＴＧＴＴＣＡＴＴＡＴＡＡＧＴＴＡＧＴＧＴＧＴＴＣＣＴＴＣＡＧＧＡＡＡＣＡＡＴＧＣＣＴＴＡＡＴＡＣＣＡＴＡＧＡＡＣＡＴＧＧＧＧＧＣＣＴＴＡＡＴＡＧＴＴＧＣＴＡＡＣＡＴＴＡＡＡＡＡＡＧＣＡＡＡＣＡＧＡＡＴＧＡＴＴＧＡＧＧＧＡＴＣＣＴＴＡＴＧＡＡＡＡＣＡＡＡＡＴＧＧＴＧＡＡＴＴＧＧＡＣＡＴＧＣＡＧＡＡＣＣＴＡＣＣＡＴＴＴＣＣＴＴＣＣＣＣＴＧＴＴＴＧＣＡＡＴＴＴＴＴＧＴＧＧＧＧＡＧＧＧＧＡＧＧＡＴＧＴＴＡＧＴＡＴＴＴＡＣＡＡＡＡＧＡＴＧＡＴＴＴＴＡＡＧＡＡＣＴＴＣＣＡＡＧＡＧＡＴＧＡＧＴＴＴＡＡＧＡＡＴＴＣＣＡＴＡＧＡＧＴＡＴＴＡＧＴＴＧＴＴＣＡＣＴＧＴＧＴＡＡＴＴＡＡＴＣＣＴＴＣＣＧＧＡＧＡＧＴＣＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＡＡＡＧＡＡＡＣＴＴＴＴＧＧＧＴＧＧＧＴＴＴＴＧＴＴＴＴＴＴＡＴＴＡＧＴＴＡＣＣＣＴＡＧＧＧＧＴＡＴＧＴＴＡＣＣＣＴＧＧＧＧＴＡＴＧＡＡＧＧＧＡＧＧＴＧＡＡＧＡＴＡＡＣＧＧＡＧＧＧＧＧＧＡＧＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＧＧＡＧＡＡＡＡＡＡＧＧＡＧＣＣＴＡＡＡＡＴＧＧＧＧＡＡＴＡＡＴＴＧＡＡＡＴＧＧＡＡＣＡＧＧＧＧＧＴＧＴＧＡＧＧＣＴＧＧＴＴＣＣＴＣＡＧＴＣＣＣＣＡＴＴＣＣＡＡＡＣＧＧＡＧＧＡＴＡＧＡＡＧＣＴＧＴＧＴＡＴＴＴＡＴＧＴＧＡＣＣＴＧＧＣＡＧＡＴＣＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＴＡＡＣＡＣＴＧＡＡＡＡＧＴＧＡＡＡＧＡＡＣＣＴＧＧＴＧＧＧＣＡＧＣＴＡＴＣＴＴＴＧＧＣＴＡＣＴＧＡＴＡＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＡＴＧＴＣＴＧＴＴＡＡＴＴＣＴＧＡＴＴＴＴＣＴＣＡＡＴＴＴＧＡＡＧＧＧＡＴＣＡＧＣＴＡＣＡＣＴＧＴＴＡＡＡＴＴＴＴＧＧＡＡＡＧＣＣＡＣＴＡＣＣＴＡＣＴＴＣＣＡＴＣＡＡＧＴＡＡＣＴＴＡＧＧＴＴＴＣＧＡＡＡＴＡＴＧＧＧＴＴＣＡＡＣＧＣＡＣＣＴＣＣＣＴＴＡＴＴＣＡＡＡＡＴＧＴＣＡＡＡＡＴＡＧＡＴＴＡＴＴＡＴＡＡＴＧＴＡＴＡＡＡＧＴＡＡＧＡＡＴＴＧＡＣＡＡＡＡＴＡＴＧＡＴＴＣＴＴＧＧＧＴＴＧＡＴＴＧＧＴＣＡＴＴＴＡＧＡＡＡＣＴＡＧＣＣＡＡＡＡＧＴＧＡＧＡＣＴＴＴＴＡＡＴＧＴＡＧＡＡＣＡＴＴＴＴＴＣＡＧＡＡＡＴＧＧＧＴＡＣＡＡＡＧＡＡＡＡＡＴＧＣＡＴＡＴＴＡＣＴＧＴＡＴＡＴＴＴＣＡＧＡＧＴＧＴＴＴＡＴＧＴＧＡＡＣＣＴＴＧＴＡＴＴＴＡＡＴＴＧＡＧＡＧＴＣＣＣＡＴＧＴＡＣＧＴＴＣＴＧＣＡＧＣＣＴＴＴＴＴＧＣＴＧＣＴＴＣＴＡＴＣＡＴＣＴＧＡＡＧＴＴＴＧＴＧＴＡＧＴＡＣＡＡＡＴＡＡＧＧＣＣＴＴＴＧＧＧＡＴＴＣＴＴＡＡＴＧＡＣＡＴＴＴＡＴＧＴＴＡＡＡＡＴＧＴＴＣＴＣＴＴＣＴＣＴＴＴＡＡＡＣＡＣＣＧＴＴＴＴＣＣＡＡＴＣＣＡＣＣＴＧＴＣＡＧＧＧＡＧＴＣＣＡＡＡＴＣＧＴＧＴＣＴＧＴＧＴＴＧＡＴＧＡＴＧＣＴＡＴＡＣＴＴＴＧＴＡＧＣＴＡＧＡＡＡＡＡＣＡＡＴＴＴＴＡＧＴＧＴＴＧＴＧＧＧＣＴＣＴＧＴＡＴＴＣＡＧＡＣＴＴＣＣＴＴＴＴＴＡＣＡＡＧＡＣＣＧＡＴＧＧＧＣＡＧＴＧＡＴＡＧＡ


ＴＴＡＴＴＴＴＡＴＣＡＴＡＴＴＴＡＡＴＧＣＡＴＧＧＧＡＡＡＴＡＧＴＧＴＧＣＴＧＡＧＧＡＡＧＣＴＡＴＴＡＡＡＡＧＴＡＴＡＡＣＴＣＡＧＴＧＡＡＴＴＧＧＧＴＣＴＧＡＧＴＴＴＴＡＡＡＴＧＡＧＡＴＡＴＴＴＣＡＡＡＡＴＴＧＧＣＴＴＧＣＣＡＣＴＧＴＡＡＡＡＧＣＧＡＣＴＡＡＡＴＡＡＴＡＡＴＡＴＧＡＴＡＣＴＧＴＴＣＴＴＴＡＴＧＡＴＣＴＴＧＴＣＡＴＧＴＴＴＣＡＣＴＧＡＴＡＴＧＴＴＴＧＧＧＧＴＣＴＴＣＡＣＴＡＴＧＴＡＡＡＡＡＡＴＧＴＣＡＡＡＡＴＴＧＴＡＡＴＧＡＧＣＡＡＧＣＡＴＧＴＡＣＡＡＧＴＡＧＴＣＧＴＡＡＡＴＣＡＡＡＧＧＴＴＴＴＡＡＡＣＡＧＧＡＣＴＧＣＡＴＴＴＴＣＡＡＴＴＡＧＧＡＡＡＡＧＣＴＧＴＴＴＧＧＣＡＧＡＴＡＧＣＡＴＣＣＡＡＴＧＣＡＡＡＡＡＣＡＧＡＡＡＴＡＴＣＧＴＡＡＣＧＴＴＣＴＧＣＴＴＡＧＴＧＧＧＣＡＡＧＡＴＡＡＧＡＴＡＧＧＡＡＡＧＡＣＡＴＧＣＴＣＡＡＡＧＡＧＧＣＡＡＡＡＧＡＡＴＣＡＴＴＧＣＴＡＴＣＡＴＴＣＡＴＴＣＴＡＣＡＣＴＡＧＴＴＴＧＡＡＧＡＡＧＴＴＴＴＴＧＴＡＣＡＴＣＡＧＡＧＣＡＣＴＴＣＣＴＴＣＡＧＣＡＣＡＣＴＴＴＴＴＴＧＣＣＴＴＣＡＧＡＴＴＴＣＡＴＴＴＴＴＴＡＴＡＡＡＡＴＧＡＧＡＡＧＡＣＴＡＡＴＧＡＴＡＡＡＣＴＧＴＡＧＡＡＡＴＣＡＡＡＡＴＴＴＡＴＴＧＡＧＡＡＡＴＣＴＧＴＴＴＣＴＣＣＴＡＡＣＡＧＡＴＡＧＴＡＡＣＣＣＴＧＣＣＡＴＧＡＴＡＴＡＣＴＡＣＴＴＣＡＡＣＡＡＴＧＴＴＡＴＡＡＡＡＴＴＴＡＴＧＴＧＡＴＡＡＴＡＴＡＣＡＴＴＴＴＡＡＣＣＴＧＧＧＡＴＴＴＣＴＡＡＡＴＴＧＣＴＴＴＡＡＣＡＡＡＴＧＣＴＡＡＴＣＣＴＧＡＧＡＧＴＴＧＣＣＣＴＧＣＡＧＧＡＣＴＣＡＡＡＡＧＧＧＡＡＡＧＧＴＴＴＴＧＧＧＡＣＧＴＧＧＣＡＧＡＡＣＣＣＴＧＣＡＧＧＧＡＣＡＴＧＧＡＡＴＴＡＡＧＧＣＣＡＴＴＧＣＡＡＴＧＴＡＴＣＡＴＣＴＴＴＧＴＡＧＣＡＴＴＧＴＣＡＴＣＡＣＴＣＣＴＡＡＧＣＴＧＣＣＴＴＣＡＣＡＧＴＴＴＴＡＧＴＡＣＡＣＴＡＡＧＡＴＧＡＧＧＡＡＡＴＣＧＡＡＡＡＴＧＧＧＣＡＧＡＧＡＡＡＧＣＴＣＡＴＡＣＴＧＴＡＴＡＡＴＴＧＡＡＧＡＣＡＧＴＧＡＣＡＧＡＧＡＡＣＧＴＧＴＣＡＧＴＴＡＴＧＣＣＡＡＡＡＣＴＣＴＴＴＴＧＡＴＴＴＣＴＧＴＴＣＣＡＧＧＡＴＴＴＣＣＡＡＣＡＡＧＡＧＧＧＧＡＡＡＧＧＡＡＴＧＡＣＴＴＧＧＧＡＧＧＧＴＧＧＧＡＡＡＧＡＣＡＴＴＡＧＧＡＧＴＴＧＴＴＴＴＴＡＴＴＴＴＴＴＡＣＣＴＴＧＧＡＡＧＣＴＴＴＡＧＣＴＡＣＣＡＡＴＣＣＡＧＴＡＣＣＣＴＣＣＴＡＡＣＴＡＧＡＡＴＧＴＡＴＡＣＡＣＡＴＣＡＧＣＡＧＧＡＣＴＧＡＣＴＧＡＣＴＡＣＴＴＣＡＴＴＡＧＡＧＡＴＡＴＡＣＴＧＴＡＣＴＣＡＴＴＧＧＧＧＧＣＣＴＴＧＧＧＧＧＴＡＣＴＧＣＴＧＴＴＣＴＴＡＴＧＴＧＧＧＡＴＴＴＴＡＡＴＧＴＴＧＴＡＡＴＧＴＡＴＴＧＣＡＴＣＴＴＡＡＴＧＴＡＴＴＧＡＡＴＴＣＡＴＴＴＴＧＴＴＧＴＡＣＴＡＴＡＴＴＧＧＴＴＧＧＣＡＴＴＴＴＡＴＴＡＡＡＡＴＡＡＡＴＴＧＴＡＴＴＧＴＡＴＣＡＴＡＴＴＴＧＴＡＴＧＴＴＴＴＡＡＧＡＧＡＡＡＡＴＡＡＴＡＴＡＡＡＡＴＡＣＡＡＴＡＴＴＴＧＴＡＣＴＡＴＴＡＴＡＴＡＧＴＧＣＡＡＡＡＡＣＴＡＣＡＡＡＴＣＴＧＴＧＣＣＴＣＴＧＣＣＴＣＴＴＧＡＡＴＴＡＡＴＴＣＴＴＴＧＧＴＴＧＣＴＴＧＣＡＴＴＴＧＧＧＡＡＧＧＧＡＡＴＧＧＡＧＡＡＡＧＧＡＡＡＧＡＡＣＣＡＡＴＡＡＡＧＣＴＴＴＣＡＡＡＧＴＴＣＡＡＧＡＡＡ
例示的なヒトＶＥＧＦＲ－１アイソフォーム２（ｓＶＥＧＦＲ－１としても知られる）前駆体アミノ酸配列（配列番号２９）
ＭＶＳＹＷＤＴＧＶＬＬＣＡＬＬＳＣＬＬＬＴＧＳＳＳＧＳＫＬＫＤＰＥＬＳＬＫＧＴＱＨＩＭＱＡＧＱＴＬＨＬＱＣＲＧＥＡＡＨＫＷＳＬＰＥＭＶＳＫＥＳＥＲＬＳＩＴＫＳＡＣＧＲＮＧＫＱＦＣＳＴＬＴＬＮＴＡＱＡＮＨＴＧＦＹＳＣＫＹＬＡＶＰＴＳＫＫＫＥＴＥＳＡＩＹＩＦＩＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＱＩＳＴＰＲＰＶＫＬＬＲＧＨＴＬＶＬＮＣＴＡＴＴＰＬＮＴＲＶＱＭＴＷＳＹＰＤＥＫＮＫＲＡＳＶＲＲＲＩＤＱＳＮＳＨＡＮＩＦＹＳＶＬＴＩＤＫＭＱＮＫＤＫＧＬＹＴＣＲＶＲＳＧＰＳＦＫＳＶＮＴＳＶＨＩＹＤＫＡＦＩＴＶＫＨＲＫＱＱＶＬＥＴＶＡＧＫＲＳＹＲＬＳＭＫＶＫＡＦＰＳＰＥＶＶＷＬＫＤＧＬＰＡＴＥＫＳＡＲＹＬＴＲＧＹＳＬＩＩＫＤＶＴＥＥＤＡＧＮＹＴＩＬＬＳＩＫＱＳＮＶＦＫＮＬＴＡＴＬＩＶＮＶＫＰＱＩＹＥＫＡＶＳＳＦＰＤＰＡＬＹＰＬＧＳＲＱＩＬＴＣＴＡＹＧＩＰＱＰＴＩＫＷＦＷＨＰＣＮＨＮＨＳＥＡＲＣＤＦＣＳＮＮＥＥＳＦＩＬＤＡＤＳＮＭＧＮＲＩＥＳＩＴＱＲＭＡＩＩＥＧＫＮＫＭＡＳＴＬＶＶＡＤＳＲＩＳＧＩＹＩＣＩＡＳＮＫＶＧＴＶＧＲＮＩＳＦＹＩＴＤＶＰＮＧＦＨＶＮＬＥＫＭＰＴＥＧＥＤＬＫＬＳＣＴＶＮＫＦＬＹＲＤＶＴＷＩＬＬＲＴＶＮＮＲＴＭＨＹＳＩＳＫＱＫＭＡＩＴＫＥＨＳＩＴＬＮＬＴＩＭＮＶＳＬＱＤＳＧＴＹＡＣＲＡＲＮＶＹＴＧＥＥＩＬＱＫＫＥＩＴＩＲＧＥＨＣＮＫＫＡＶＦＳＲＩＳＫＦＫＳＴＲＮＤＣＴＴＱＳＮＶＫＨ
このバリアント（３）は、バリアント１と比較して３’コード領域及び３’ＵＴＲが異なっている。コードされた可溶性タンパク質（アイソフォーム３）は、短く特有のＣ末端を持ち、アイソフォーム１の膜貫通領域及び細胞質領域を欠く。
例示的なヒトＶＥＧＦＲ－１アイソフォーム３ ｃＤＮＡ配列（配列番号３０）
ＡＴＣＧＡＧＧＴＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＣＴＣＧＧＡＧＣＧＣＧＣＣＡＧＧＣＧＧＡＣＡＣＴＣＣＴＣＴＣＧＧＣＴＣＣＴＣＣＣＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＴＣＧＧＡＧＣＧＧＧＣＴＣＣＧＧＧＧＣＴＣＧＧＧＴＧＣＡＧＣＧＧＣＣＡＧＣＧＧＧＣＧＣＣＴＧＧＣＧＧＣＧＡＧＧＡＴＴＡＣＣＣＧＧＧＧＡＡＧＴＧＧＴＴＧＴＣＴＣＣＴＧＧＣＴＧＧＡＧＣＣＧＣＧＡＧＡＣＧＧＧＣＧＣＴＣＡＧＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＡＡＣＧＡＧＡＧＧＡＣＧＧＡＣＴＣＴＧＧＣＧＧＣＣＧＧＧＴＣＧＴＴＧＧＣＣＧＣＧＧＧＧＡＧＣＧＣＧＧＧＣＡＣＣＧＧＧＣＧＡＧＣＡＧＧＣＣＧＣＧＴＣＧＣＧＣＴＣＡＣＣＡＴＧＧＴＣＡＧＣＴＡＣＴＧＧＧＡＣＡＣＣＧＧＧＧＴＣＣＴＧＣＴＧＴＧＣＧＣＧＣＴＧＣＴＣＡＧＣＴＧＴＣＴＧＣＴＴＣＴＣＡＣＡＧＧＡＴＣＴＡＧＴＴＣＡＧＧＴＴＣＡＡＡＡＴＴＡＡＡＡＧＡＴＣＣＴＧＡＡＣＴＧＡＧＴＴＴＡＡＡＡＧＧＣＡＣＣＣＡＧＣＡＣＡＴＣＡＴＧＣＡＡＧＣＡＧＧＣＣＡＧＡＣＡＣＴＧＣＡＴＣＴＣＣＡＡＴＧＣＡＧＧＧＧＧＧＡＡＧＣＡＧＣＣＣＡＴＡＡＡＴＧＧＴＣＴＴＴＧＣＣＴＧＡＡＡＴＧＧＴＧＡＧＴＡＡＧＧＡＡＡＧＣＧＡＡＡＧＧＣＴＧＡＧＣＡＴＡＡＣＴＡＡＡＴＣＴＧＣＣＴＧＴＧＧＡＡＧＡＡＡＴＧＧＣＡＡＡＣＡＡＴＴＣＴＧＣＡＧＴＡＣＴＴＴＡＡＣＣＴＴＧＡＡＣＡＣＡＧＣＴＣＡＡＧＣＡＡＡＣＣＡＣＡＣＴＧＧＣＴＴＣＴＡＣＡＧＣＴＧＣＡＡＡＴＡＴＣＴＡＧＣＴＧＴＡＣＣＴＡＣＴＴＣＡＡＡＧＡＡＧＡＡＧＧＡＡＡＣＡＧＡＡＴＣＴＧＣＡＡＴＣＴＡＴＡＴＡＴＴＴＡＴＴＡＧＴＧＡＴＡＣＡＧＧＴＡＧＡＣＣＴＴＴＣＧＴＡＧＡＧＡＴＧＴＡＣＡＧＴＧＡＡＡＴＣＣＣＣＧＡＡＡＴＴＡＴＡＣＡＣＡＴＧＡＣＴＧＡＡＧＧＡＡＧＧＧＡＧＣＴＣＧＴＣＡＴＴＣＣＣＴＧＣＣＧＧＧＴＴＡＣＧＴＣＡＣＣＴＡＡＣＡＴＣＡＣＴＧＴＴＡＣＴＴＴＡＡＡＡＡＡＧＴＴＴＣＣＡＣＴＴＧＡＣＡＣＴＴＴＧＡＴＣＣＣＴＧＡＴＧＧＡＡＡＡＣＧＣＡＴＡＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＴＡＧＡＡＡＧＧＧＣＴＴＣＡＴＣＡＴＡＴＣＡＡＡＴＧＣＡＡＣＧＴＡＣＡＡＡＧＡＡＡＴＡＧＧＧＣＴＴＣＴＧＡＣＣＴＧＴＧＡＡＧＣＡＡＣＡＧＴＣＡＡＴＧＧＧＣＡＴＴＴＧＴＡＴＡＡＧＡＣＡＡＡＣＴＡＴＣＴＣＡＣＡＣＡＴＣＧＡＣＡＡＡＣＣＡＡＴＡＣＡＡＴＣＡＴＡＧＡＴＧＴＣＣＡＡＡＴＡＡＧＣＡＣＡＣＣＡＣＧＣＣＣＡＧＴＣＡＡＡＴＴＡＣＴＴＡＧＡＧＧＣＣＡＴＡＣＴＣＴＴＧＴＣＣＴＣＡＡＴＴＧＴＡＣＴＧＣＴＡＣＣＡＣＴＣＣＣＴＴＧＡＡＣＡＣＧＡＧＡＧＴＴＣＡＡＡＴＧＡＣＣＴＧＧＡＧＴＴＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＡＡＡＡＡＡＴＡＡＧＡＧＡＧＣＴＴＣＣＧＴＡＡＧＧＣＧＡＣＧＡＡＴＴＧＡＣＣＡＡＡＧＣＡＡＴＴＣＣＣＡＴＧＣＣＡＡＣＡＴＡＴＴＣＴＡＣＡＧＴＧＴＴＣＴＴＡＣＴＡＴＴＧＡＣＡＡＡＡＴＧＣＡＧＡＡＣＡＡＡＧＡＣＡＡＡＧＧＡＣＴＴＴＡＴＡＣＴＴＧＴＣＧＴＧＴＡＡＧＧＡＧＴＧＧＡＣＣＡＴＣＡＴＴＣＡＡＡＴＣＴＧＴＴＡＡＣＡＣＣＴＣＡＧＴＧＣＡＴＡＴＡＴＡＴＧＡＴＡＡＡＧＣＡＴＴＣＡＴＣＡＣＴＧＴＧＡＡＡＣＡＴＣＧＡＡＡＡＣＡＧＣＡＧＧＴＧＣＴＴＧＡＡＡＣＣＧＴＡＧＣＴＧＧＣＡＡＧＣＧＧＴＣＴＴＡＣＣＧＧＣＴＣＴＣＴＡＴＧＡＡＡＧＴＧＡＡＧＧＣＡＴＴＴＣＣＣＴＣＧＣＣＧＧＡＡＧＴＴＧＴＡＴＧＧＴＴＡＡＡＡＧＡＴＧＧＧＴＴＡＣＣＴＧＣＧＡＣＴＧＡＧＡＡＡＴＣＴＧＣＴＣＧＣＴＡＴＴＴＧＡＣＴＣＧＴＧＧＣＴＡＣＴＣＧＴＴＡＡＴＴＡＴＣＡＡＧＧＡＣＧＴＡＡＣＴＧＡＡＧＡＧＧＡＴＧＣＡＧＧＧＡＡＴＴＡＴＡＣＡＡＴＣＴＴＧＣＴＧＡＧＣＡＴＡＡＡＡＣＡＧＴＣＡＡＡＴＧＴＧＴＴＴＡＡＡＡＡＣＣＴＣＡＣＴＧＣＣＡＣＴＣＴＡＡＴＴＧＴＣＡＡＴＧＴＧＡＡＡＣＣＣＣＡＧＡＴＴＴＡＣＧＡＡＡＡＧＧＣＣＧＴＧＴＣＡＴＣＧＴＴＴＣＣＡＧＡＣＣＣＧＧＣＴＣＴＣＴＡＣＣＣＡＣＴＧＧＧＣＡＧＣＡＧＡＣＡＡＡＴＣＣＴＧＡＣＴＴＧＴＡＣＣＧＣＡＴＡＴＧＧＴＡＴＣＣＣＴＣＡＡＣＣＴＡＣＡＡＴＣＡＡＧＴＧＧＴＴＣＴＧＧＣＡＣＣＣＣＴＧＴＡＡＣＣＡＴＡＡＴＣＡＴＴＣＣＧＡＡＧＣＡＡＧＧＴＧＴＧＡＣＴＴＴＴＧＴＴＣＣＡＡＴＡＡＴＧＡＡＧＡＧＴＣＣＴＴＴＡＴＣＣＴＧＧＡＴＧＣＴＧＡＣＡＧＣＡＡＣＡＴＧＧＧＡＡＡＣＡＧＡＡＴＴＧＡＧＡＧＣＡＴＣＡＣＴＣＡＧＣＧＣＡＴＧＧＣＡＡＴＡＡＴＡＧＡＡＧＧＡＡＡＧＡＡＴＡＡＧＡＴＧＧＣＴＡＧＣＡＣＣＴＴＧＧＴＴＧＴＧＧＣＴＧＡＣＴＣＴＡＧＡＡＴＴＴＣＴＧＧＡＡＴＣＴＡＣＡＴＴＴＧＣＡＴＡＧＣＴＴＣＣＡＡＴＡＡＡＧＴＴＧＧＧＡＣＴＧＴＧＧＧＡＡＧＡＡＡＣＡＴＡＡＧＣＴＴＴＴＡＴＡＴＣＡＣＡＧＡＴＧＴＧＣＣＡＡＡＴＧＧＧＴＴＴＣＡＴＧＴＴＡＡＣＴＴＧＧＡＡＡＡＡＡＴＧＣＣＧＡＣＧＧＡＡＧＧＡＧＡＧＧＡＣＣＴＧＡＡＡＣＴＧＴＣＴＴＧＣＡＣＡＧＴＴＡＡＣＡＡＧＴＴＣＴＴＡＴＡＣＡＧＡＧＡＣＧＴＴＡＣＴＴＧＧＡＴＴＴＴＡＣＴＧＣＧＧＡＣＡＧＴＴＡＡＴＡＡＣＡＧＡＡＣＡＡＴＧＣＡＣＴＡＣＡＧＴＡＴＴＡＧＣＡＡＧＣＡＡＡＡＡＡＴＧＧＣＣＡＴＣＡＣＴＡＡＧＧＡＧＣＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＴＣＴＴＡＡＴＣＴＴＡＣＣＡＴＣＡＴＧＡＡＴＧＴＴＴＣＣＣＴＧＣＡＡＧＡＴＴＣＡＧＧＣＡＣＣＴＡＴＧＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＣＡＧＧＡＡＴＧＴＡＴＡＣＡＣＡＧＧＧＧＡＡＧＡＡＡＴＣＣＴＣＣＡＧＡＡＧＡＡＡＧＡＡＡＴＴＡＣＡＡＴＣＡＧＡＧＡＴＣＡＧＧＡＡＧＣＡＣＣＡＴＡＣＣＴＣＣＴＧＣＧＡＡＡＣＣＴＣＡＧＴＧＡＴＣＡＣＡＣＡＧＴＧＧＣＣＡＴＣＡＧＣＡＧＴＴＣＣＡＣＣＡＣＴＴＴＡＧＡＣＴＧＴＣＡＴＧＣＴＡＡＴＧＧＴＧＴＣＣＣＣＧＡＧＣＣＴＣＡＧＡＴＣＡＣＴＴＧＧＴＴＴＡＡＡＡＡＣＡＡＣＣＡＣＡＡＡＡＴＡＣＡＡＣＡＡＧＡＧＣＣＴＧＡＡＣＴＧＴＡＴＡＣＡＴＣＡＡＣＧＴＣＡＣＣＡＴＣＧＴＣＡＴＣＧＴＣＡＴＣＡＴＣＡＣＣＡＴＴＧＴＣＡＴＣＡＴＣＡＴＣＡＴＣＡＴＣＧＴＣＡＴＣＡＴＣＡＴＣＡＴＣＡＴＣＡＴＡＧＣＴＡＴＣＡＴＣＡＴＴＡＴＣＡＴＣＡＴＣＡＴＣＡＴＣＡＴＣＡＴＣＡＴＣＡＴＡＧＣＴＡＣＣＡＴＴＴＡＴＴＧＡＡＡＡＣＴＡＴＴＡＴＧＴＧＴＣＡＡＣＴＴＣＡＡＡＧＡＡＣＴＴＡＴＣＣＴＴＴＡＧＴＴＧＧＡＧＡＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＴＣＡＴＡＡＣＡＡＴＡＡＣＡＡＡＴＧＧＣＣＧＧＧＣＡＴＧＧＴＧＧＣＴＣＡＣＧＣＣＴＧＴＡＡＴＣＣＣＡＧＣＡＣＴＴＴＧＧＧＡＧＧＣＣＡＡＧＧＣＡＧＧＴＧＧＡＴＣＡＴＴＴＧＡＧＧＴＣＡＧＧＡＧＴＴＣＡＡＧＡＣＣＡＧＣＣＴＧＡＣＣＡＡＧＡＴＧＧＴＧＡＡＡＴＧＣＴＧＴＣＴＣＴＡＴＴＡＡＡＡＡＴＡＣＡＡＡＡＴＴＡＧＣＣＡＧＧＣＡＴＧＧＴＧＧＣＴＣＡＴＧＣＣＴＧＴＡＡＴＧＣＣＡＧＣＴＡＣＴＣＧＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＡＣＡＧＧＡＧＡＡＴＣＡＣＴＴＧＡＡＣＣＣＡＧＧＡＧＧＣＡＧＡＧＧＴＴＧＣＡＧＧＧＡＧＣＣＧＡＧＡＴＣＧＴＧＴＡＣＴＧＣＡＣＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＣＡＡＣＡＡＧＡＧＣＧＡＡＡＣＴＣＣＧＴＣＴＣＡＡＡＡＡＡＣＡＡＡＴＡＡＡＴＡＡＡＴＡＡＡＴＡＡＡＴＡＡＡＣＡＧＡＣＡＡＡＡＴＴＣＡＣＴＴＴＴＴＡＴＴＣＴＡＴＴＡＡＡＣＴＴＡＡＣＡＴＡＣＡＴＧＣＡＴＴＡＡ
例示的なヒトＶＥＧＦＲ－１アイソフォーム３ ｃＤＮＡ配列（配列番号３１）
ＭＶＳＹＷＤＴＧＶＬＬＣＡＬＬＳＣＬＬＬＴＧＳＳＳＧＳＫＬＫＤＰＥＬＳＬＫＧＴＱＨＩＭＱＡＧＱＴＬＨＬＱＣＲＧＥＡＡＨＫＷＳＬＰＥＭＶＳＫＥＳＥＲＬＳＩＴＫＳＡＣＧＲＮＧＫＱＦＣＳＴＬＴＬＮＴＡＱＡＮＨＴＧＦＹＳＣＫＹＬＡＶＰＴＳＫＫＫＥＴＥＳＡＩＹＩＦＩＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＱＩＳＴＰＲＰＶＫＬＬＲＧＨＴＬＶＬＮＣＴＡＴＴＰＬＮＴＲＶＱＭＴＷＳＹＰＤＥＫＮＫＲＡＳＶＲＲＲＩＤＱＳＮＳＨＡＮＩＦＹＳＶＬＴＩＤＫＭＱＮＫＤＫＧＬＹＴＣＲＶＲＳＧＰＳＦＫＳＶＮＴＳＶＨＩＹＤＫＡＦＩＴＶＫＨＲＫＱＱＶＬＥＴＶＡＧＫＲＳＹＲＬＳＭＫＶＫＡＦＰＳＰＥＶＶＷＬＫＤＧＬＰＡＴＥＫＳＡＲＹＬＴＲＧＹＳＬＩＩＫＤＶＴＥＥＤＡＧＮＹＴＩＬＬＳＩＫＱＳＮＶＦＫＮＬＴＡＴＬＩＶＮＶＫＰＱＩＹＥＫＡＶＳＳＦＰＤＰＡＬＹＰＬＧＳＲＱＩＬＴＣＴＡＹＧＩＰＱＰＴＩＫＷＦＷＨＰＣＮＨＮＨＳＥＡＲＣＤＦＣＳＮＮＥＥＳＦＩＬＤＡＤＳＮＭＧＮＲＩＥＳＩＴＱＲＭＡＩＩＥＧＫＮＫＭＡＳＴＬＶＶＡＤＳＲＩＳＧＩＹＩＣＩＡＳＮＫＶＧＴＶＧＲＮＩＳＦＹＩＴＤＶＰＮＧＦＨＶＮＬＥＫＭＰＴＥＧＥＤＬＫＬＳＣＴＶＮＫＦＬＹＲＤＶＴＷＩＬＬＲＴＶＮＮＲＴＭＨＹＳＩＳＫＱＫＭＡＩＴＫＥＨＳＩＴＬＮＬＴＩＭＮＶＳＬＱＤＳＧＴＹＡＣＲＡＲＮＶＹＴＧＥＥＩＬＱＫＫＥＩＴＩＲＤＱＥＡＰＹＬＬＲＮＬＳＤＨＴＶＡＩＳＳＳＴＴＬＤＣＨＡＮＧＶＰＥＰＱＩＴＷＦＫＮＮＨＫＩＱＱＥＰＥＬＹＴＳＴＳＰＳＳＳＳＳＳＰＬＳＳＳＳＳＳＳＳＳＳＳＳ
このバリアント（４）は、バリアント１と比較して３’コード領域及び３’ＵＴＲが異なっている。コードされた可溶性タンパク質（アイソフォーム４）は、短く特有のＣ末端を持ち、アイソフォーム１の膜貫通領域及び細胞質領域を欠く。
例示的なヒトＶＥＧＦＲ－１アイソフォーム４ ｃＤＮＡ配列（配列番号３２）
ＡＴＣＧＡＧＧＴＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＣＴＣＧＧＡＧＣＧＣＧＣＣＡＧＧＣＧＧＡＣＡＣＴＣＣＴＣＴＣＧＧＣＴＣＣＴＣＣＣＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＴＣＧＧＡＧＣＧＧＧＣＴＣＣＧＧＧＧＣＴＣＧＧＧＴＧＣＡＧＣＧＧＣＣＡＧＣＧＧＧＣＧＣＣＴＧＧＣＧＧＣＧＡＧＧＡＴＴＡＣＣＣＧＧＧＧＡＡＧＴＧＧＴＴＧＴＣＴＣＣＴＧＧＣＴＧＧＡＧＣＣＧＣＧＡＧＡＣＧＧＧＣＧＣＴＣＡＧＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＡＡＣＧＡＧＡＧＧＡＣＧＧＡＣＴＣＴＧＧＣＧＧＣＣＧＧＧＴＣＧＴＴＧＧＣＣＧＣＧＧＧＧＡＧＣＧＣＧＧＧＣＡＣＣＧＧＧＣＧＡＧＣＡＧＧＣＣＧＣＧＴＣＧＣＧＣＴＣＡＣＣＡＴＧＧＴＣＡＧＣＴＡＣＴＧＧＧＡＣＡＣＣＧＧＧＧＴＣＣＴＧＣＴＧＴＧＣＧＣＧＣＴＧＣＴＣＡＧＣＴＧＴＣＴＧＣＴＴＣＴＣＡＣＡＧＧＡＴＣＴＡＧＴＴＣＡＧＧＴＴＣＡＡＡＡＴＴＡＡＡＡＧＡＴＣＣＴＧＡＡＣＴＧＡＧＴＴＴＡＡＡＡＧＧＣＡＣＣＣＡＧＣＡＣＡＴＣＡＴＧＣＡＡＧＣＡＧＧＣＣＡＧＡＣＡＣＴＧＣＡＴＣＴＣＣＡＡＴＧＣＡＧＧＧＧＧＧＡＡＧＣＡＧＣＣＣＡＴＡＡＡＴＧＧＴＣＴＴＴＧＣＣＴＧＡＡＡＴＧＧＴＧＡＧＴＡＡＧＧＡＡＡＧＣＧＡＡＡＧＧＣＴＧＡＧＣＡＴＡＡＣＴＡＡＡＴＣＴＧＣＣＴＧＴＧＧＡＡＧＡＡＡＴＧＧＣＡＡＡＣＡＡＴＴＣＴＧＣＡＧＴＡＣＴＴＴＡＡＣＣＴＴＧＡＡＣＡＣＡＧＣＴＣＡＡＧＣＡＡＡＣＣＡＣＡＣＴＧＧＣＴＴＣＴＡＣＡＧＣＴＧＣＡＡＡＴＡＴＣＴＡＧＣＴＧＴＡＣＣＴＡＣＴＴＣＡＡＡＧＡＡＧＡＡＧＧＡＡＡＣＡＧＡＡＴＣＴＧＣＡＡＴＣＴＡＴＡＴＡＴＴＴＡＴＴＡＧＴＧＡＴＡＣＡＧＧＴＡＧＡＣＣＴＴＴＣＧＴＡＧＡＧＡＴＧＴＡＣＡＧＴＧＡＡＡＴＣＣＣＣＧＡＡＡＴＴＡＴＡＣＡＣＡＴＧＡＣＴＧＡＡＧＧＡＡＧＧＧＡＧＣＴＣＧＴＣＡＴＴＣＣＣＴＧＣＣＧＧＧＴＴＡＣＧＴＣＡＣＣＴＡＡＣＡＴＣＡＣＴＧＴＴＡＣＴＴＴＡＡＡＡＡＡＧＴＴＴＣＣＡＣＴＴＧＡＣＡＣＴＴＴＧＡＴＣＣＣＴＧＡＴＧＧＡＡＡＡＣＧＣＡＴＡＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＴＡＧＡＡＡＧＧＧＣＴＴＣＡＴＣＡＴＡＴＣＡＡＡＴＧＣＡＡＣＧＴＡＣＡＡＡＧＡＡＡＴＡＧＧＧＣＴＴＣＴＧＡＣＣＴＧＴＧＡＡＧＣＡＡＣＡＧＴＣＡＡＴＧＧＧＣＡＴＴＴＧＴＡＴＡＡＧＡＣＡＡＡＣＴＡＴＣＴＣＡＣＡＣＡＴＣＧＡＣＡＡＡＣＣＡＡＴＡＣＡＡＴＣＡＴＡＧＡＴＧＴＣＣＡＡＡＴＡＡＧＣＡＣＡＣＣＡＣＧＣＣＣＡＧＴＣＡＡＡＴＴＡＣＴＴＡＧＡＧＧＣＣＡＴＡＣＴＣＴＴＧＴＣＣＴＣＡＡＴＴＧＴＡＣＴＧＣＴＡＣＣＡＣＴＣＣＣＴＴＧＡＡＣＡＣＧＡＧＡＧＴＴＣＡＡＡＴＧＡＣＣＴＧＧＡＧＴＴＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＡＡＡＡＡＡＴＡＡＧＡＧＡＧＣＴＴＣＣＧＴＡＡＧＧＣＧＡＣＧＡＡＴＴＧＡＣＣＡＡＡＧＣＡＡＴＴＣＣＣＡＴＧＣＣＡＡＣＡＴＡＴＴＣＴＡＣＡＧＴＧＴＴＣＴＴＡＣＴＡＴＴＧＡＣＡＡＡＡＴＧＣＡＧＡＡＣＡＡＡＧＡＣＡＡＡＧＧＡＣＴＴＴＡＴＡＣＴＴＧＴＣＧＴＧＴＡＡＧＧＡＧＴＧＧＡＣＣＡＴＣＡＴＴＣＡＡＡＴＣＴＧＴＴＡＡＣＡＣＣＴＣＡＧＴＧＣＡＴＡＴＡＴＡＴＧＡＴＡＡＡＧＣＡＴＴＣＡＴＣＡＣＴＧＴＧＡＡＡＣＡＴＣＧＡＡＡＡＣＡＧＣＡＧＧＴＧＣＴＴＧＡＡＡＣＣＧＴＡＧＣＴＧＧＣＡＡＧＣＧＧＴＣＴＴＡＣＣＧＧＣＴＣＴＣＴＡＴＧＡＡＡＧＴＧＡＡＧＧＣＡＴＴＴＣＣＣＴＣＧＣＣＧＧＡＡＧＴＴＧＴＡＴＧＧＴＴＡＡＡＡＧＡＴＧＧＧＴＴＡＣＣＴＧＣＧＡＣＴＧＡＧＡＡＡＴＣＴＧＣＴＣＧＣＴＡＴＴＴＧＡＣＴＣＧＴＧＧＣＴＡＣＴＣＧＴＴＡＡＴＴＡＴＣＡＡＧＧＡＣＧＴＡＡＣＴＧＡＡＧＡＧＧＡＴＧＣＡＧＧＧＡＡＴＴＡＴＡＣＡＡＴＣＴＴＧＣＴＧＡＧＣＡＴＡＡＡＡＣＡＧＴＣＡＡＡＴＧＴＧＴＴＴＡＡＡＡＡＣＣＴＣＡＣＴＧＣＣＡＣＴＣＴＡＡＴＴＧＴＣＡＡＴＧＴＧＡＡＡＣＣＣＣＡＧＡＴＴＴＡＣＧＡＡＡＡＧＧＣＣＧＴＧＴＣＡＴＣＧＴＴＴＣＣＡＧＡＣＣＣＧＧＣＴＣＴＣＴＡＣＣＣＡＣＴＧＧＧＣＡＧＣＡＧＡＣＡＡＡＴＣＣＴＧＡＣＴＴＧＴＡＣＣＧＣＡＴＡＴＧＧＴＡＴＣＣＣＴＣＡＡＣＣＴＡＣＡＡＴＣＡＡＧＴＧＧＴＴＣＴＧＧＣＡＣＣＣＣＴＧＴＡＡＣＣＡＴＡＡＴＣＡＴＴＣＣＧＡＡＧＣＡＡＧＧＴＧＴＧＡＣＴＴＴＴＧＴＴＣＣＡＡＴＡＡＴＧＡＡＧＡＧＴＣＣＴＴＴＡＴＣＣＴＧＧＡＴＧＣＴＧＡＣＡＧＣＡＡＣＡＴＧＧＧＡＡＡＣＡＧＡＡＴＴＧＡＧＡＧＣＡＴＣＡＣＴＣＡＧＣＧＣＡＴＧＧＣＡＡＴＡＡＴＡＧＡＡＧＧＡＡＡＧＡＡＴＡＡＧＣＴＴＣＣＡＣＣＡＧＣＴＡＡＣＡＧＴＴＣＴＴＴＣＡＴＧＴＴＧＣＣＡＣＣＴＡＣＡＡＧＣＴＴＣＴＣＴＴＣＣＡＡＣＴＡＣＴＴＣＣＡＴＴＴＣＣＴＴＣＣＧＴＧＡ
例示的なヒトＶＥＧＦＲ－１アイソフォーム４ ｃＤＮＡ配列（配列番号３３）
ＭＶＳＹＷＤＴＧＶＬＬＣＡＬＬＳＣＬＬＬＴＧＳＳＳＧＳＫＬＫＤＰＥＬＳＬＫＧＴＱＨＩＭＱＡＧＱＴＬＨＬＱＣＲＧＥＡＡＨＫＷＳＬＰＥＭＶＳＫＥＳＥＲＬＳＩＴＫＳＡＣＧＲＮＧＫＱＦＣＳＴＬＴＬＮＴＡＱＡＮＨＴＧＦＹＳＣＫＹＬＡＶＰＴＳＫＫＫＥＴＥＳＡＩＹＩＦＩＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＱＩＳＴＰＲＰＶＫＬＬＲＧＨＴＬＶＬＮＣＴＡＴＴＰＬＮＴＲＶＱＭＴＷＳＹＰＤＥＫＮＫＲＡＳＶＲＲＲＩＤＱＳＮＳＨＡＮＩＦＹＳＶＬＴＩＤＫＭＱＮＫＤＫＧＬＹＴＣＲＶＲＳＧＰＳＦＫＳＶＮＴＳＶＨＩＹＤＫＡＦＩＴＶＫＨＲＫＱＱＶＬＥＴＶＡＧＫＲＳＹＲＬＳＭＫＶＫＡＦＰＳＰＥＶＶＷＬＫＤＧＬＰＡＴＥＫＳＡＲＹＬＴＲＧＹＳＬＩＩＫＤＶＴＥＥＤＡＧＮＹＴＩＬＬＳＩＫＱＳＮＶＦＫＮＬＴＡＴＬＩＶＮＶＫＰＱＩＹＥＫＡＶＳＳＦＰＤＰＡＬＹＰＬＧＳＲＱＩＬＴＣＴＡＹＧＩＰＱＰＴＩＫＷＦＷＨＰＣＮＨＮＨＳＥＡＲＣＤＦＣＳＮＮＥＥＳＦＩＬＤＡＤＳＮＭＧＮＲＩＥＳＩＴＱＲＭＡＩＩＥＧＫＮＫＬＰＰＡＮＳＳＦＭＬＰＰＴＳＦＳＳＮＹＦＨＦＬＰ
ヒト染色体位置４ｑ１２に見出されるＶＥＧＦＲ－２遺伝子は、血管内皮増殖因子受容体ファミリー（ＶＥＧＦＲ）のメンバーを含む３０のエクソンをコードし、ＶＥＧＦ－Ａの受容体をコードする２つの遺伝子のうちの１つである。この受容体は、キナーゼ挿入ドメイン受容体として知られ、ＩＩＩ型受容体型チロシンキナーゼである。これは、ＶＥＧＦ－Ａ誘導性内皮増殖、生存、移動、管の形態形成、及び出芽の主要メディエーターとして機能する。この受容体のシグナル伝達及びトラフィッキングは、Ｒａｂ ＧＴＰａｓｅ、Ｐ２Ｙプリンヌクレオチド受容体、インテグリンαＶβ３、Ｔ細胞タンパク質チロシンホスファターゼなどを含む、複数の因子によって調節されている。
例示的なヒトＶＥＧＦＲ－２ ｃＤＮＡ配列（配列番号３４）
ＡＣＴＧＡＧＴＣＣＣＧＧＧＡＣＣＣＣＧＧＧＡＧＡＧＣＧＧＴＣＡＡＴＧＴＧＴＧＧＴＣＧＣＴＧＣＧＴＴＴＣＣＴＣＴＧＣＣＴＧＣＧＣＣＧＧＧＣＡＴＣＡＣＴＴＧＣＧＣＧＣＣＧＣＡＧＡＡＡＧＴＣＣＧＴＣＴＧＧＣＡＧＣＣＴＧＧＡＴＡＴＣＣＴＣＴＣＣＴＡＣＣＧＧＣＡＣＣＣＧＣＡＧＡＣＧＣＣＣＣＴＧＣＡＧＣＣＧＣＧＧＴＣＧＧＣＧＣＣＣＧＧＧＣＴＣＣＣＴＡＧＣＣＣＴＧＴＧＣＧＣＴＣＡＡＣＴＧＴＣＣＴＧＣＧＣＴＧＣＧＧＧＧＴＧＣＣＧＣＧＡＧＴＴＣＣＡＣＣＴＣＣＧＣＧＣＣＴＣＣＴＴＣＴＣＴＡＧＡＣＡＧＧＣＧＣＴＧＧＧＡＧＡＡＡＧＡＡＣＣＧＧＣＴＣＣＣＧＡＧＴＴＣＴＧＧＧＣＡＴＴＴＣＧＣＣＣＧＧＣＴＣＧＡＧＧＴＧＣＡＧＧＡＴＧＣＡＧＡＧＣＡＡＧＧＴＧＣＴＧＣＴＧＧＣＣＧＴＣＧＣＣＣＴＧＴＧＧＣＴＣＴＧＣＧＴＧＧＡＧＡＣＣＣＧＧＧＣＣＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＧＴＴＴＧＣＣＴＡＧＴＧＴＴＴＣＴＣＴＴＧＡＴＣＴＧＣＣＣＡＧＧＣＴＣＡＧＣＡＴＡＣＡＡＡＡＡＧＡＣＡＴＡＣＴＴＡＣＡＡＴＴＡＡＧＧＣＴＡＡＴＡＣＡＡＣＴＣＴＴＣＡＡＡＴＴＡＣＴＴＧＣＡＧＧＧＧＡＣＡＧＡＧＧＧＡＣＴＴＧＧＡＣＴＧＧＣＴＴＴＧＧＣＣＣＡＡＴＡＡＴＣＡＧＡＧＴＧＧＣＡＧＴＧＡＧＣＡＡＡＧＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＡＣＴＧＡＧＴＧＣＡＧＣＧＡＴＧＧＣＣＴＣＴＴＣＴＧＴＡＡＧＡＣＡＣＴＣＡＣＡＡＴＴＣＣＡＡＡＡＧＴＧＡＴＣＧＧＡＡＡＴＧＡＣＡＣＴＧＧＡＧＣＣＴＡＣＡＡＧＴＧＣＴＴＣＴＡＣＣＧＧＧＡＡＡＣＴＧＡＣＴＴＧＧＣＣＴＣＧＧＴＣＡＴＴＴＡＴＧＴＣＴＡＴＧＴＴＣＡＡＧＡＴＴＡＣＡＧＡＴＣＴＣＣＡＴＴＴＡＴＴＧＣＴＴＣＴＧＴＴＡＧＴＧＡＣＣＡＡＣＡＴＧＧＡＧＴＣＧＴＧＴＡＣＡＴＴＡＣＴＧＡＧＡＡＣＡＡＡＡＡＣＡＡＡＡＣＴＧＴＧＧＴＧＡＴＴＣＣＡＴＧＴＣＴＣＧＧＧＴＣＣＡＴＴＴＣＡＡＡＴＣＴＣＡＡＣＧＴＧＴＣＡＣＴＴＴＧＴＧＣＡＡＧＡＴＡＣＣＣＡＧＡＡＡＡＧＡＧＡＴＴＴＧＴＴＣＣＴＧＡＴＧＧＴＡＡＣＡＧＡＡＴＴＴＣＣＴＧＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＡＡＧＧＧＣＴＴＴＡＣＴＡＴＴＣＣＣＡＧＣＴＡＣＡＴＧＡＴＣＡＧＣＴＡＴＧＣＴＧＧＣＡＴＧＧＴＣＴＴＣＴＧＴＧＡＡＧＣＡＡＡＡＡＴＴＡＡＴＧＡＴＧＡＡＡＧＴＴＡＣＣＡＧＴＣＴＡＴＴＡＴＧＴＡＣＡＴＡＧＴＴＧＴＣＧＴＴＧＴＡＧＧＧＴＡＴＡＧＧＡＴＴＴＡＴＧＡＴＧＴＧＧＴＴＣＴＧＡＧＴＣＣＧＴＣＴＣＡＴＧＧＡＡＴＴＧＡＡＣＴＡＴＣＴＧＴＴＧＧＡＧＡＡＡＡＧＣＴＴＧＴＣＴＴＡＡＡＴＴＧＴＡＣＡＧＣＡＡＧＡＡＣＴＧＡＡＣＴＡＡＡＴＧＴＧＧＧＧＡＴＴＧＡＣＴＴＣＡＡＣＴＧＧＧＡＡＴＡＣＣＣＴＴＣＴＴＣＧＡＡＧＣＡＴＣＡＧＣＡＴＡＡＧＡＡＡＣＴＴＧＴＡＡＡＣＣＧＡＧＡＣＣＴＡＡＡＡＡＣＣＣＡＧＴＣＴＧＧＧＡＧＴＧＡＧＡＴＧＡＡＧＡＡＡＴＴＴＴＴＧＡＧＣＡＣＣＴＴＡＡＣＴＡＴＡＧＡＴＧＧＴＧＴＡＡＣＣＣＧＧＡＧＴＧＡＣＣＡＡＧＧＡＴＴＧＴＡＣＡＣＣＴＧＴＧＣＡＧＣＡＴＣＣＡＧＴＧＧＧＣＴＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＧＡＡＣＡＧＣＡＣＡＴＴＴＧＴＣＡＧＧＧＴＣＣＡＴＧＡＡＡＡＡＣＣＴＴＴＴＧＴＴＧＣＴＴＴＴＧＧＡＡＧＴＧＧＣＡＴＧＧＡＡＴＣＴＣＴＧＧＴＧＧＡＡＧＣＣＡＣＧＧＴＧＧＧＧＧＡＧＣＧＴＧＴＣＡＧＡＡＴＣＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＡＣＣＴＴＧＧＴＴＡＣＣＣＡＣＣＣＣＣＡＧＡＡＡＴＡＡＡＡＴＧＧＴＡＴＡＡＡＡＡＴＧＧＡＡＴＡＣＣＣＣＴＴＧＡＧＴＣＣＡＡＴＣＡＣＡＣＡＡＴＴＡＡＡＧＣＧＧＧＧＣＡＴＧＴＡＣＴＧＡＣＧＡＴＴＡＴＧＧＡＡＧＴＧＡＧＴＧＡＡＡＧＡＧＡＣＡＣＡＧＧＡＡＡＴＴＡＣＡＣＴＧＴＣＡＴＣＣＴＴＡＣＣＡＡＴＣＣＣＡＴＴＴＣＡＡＡＧＧＡＧＡＡＧＣＡＧＡＧＣＣＡＴＧＴＧＧＴＣＴＣＴＣＴＧＧＴＴＧＴＧＴＡＴＧＴＣＣＣＡＣＣＣＣＡＧＡＴＴＧＧＴＧＡＧＡＡＡＴＣＴＣＴＡＡＴＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＧＡＴＴＣＣＴＡＣＣＡＧＴＡＣＧＧＣＡＣＣＡＣＴＣＡＡＡＣＧＣＴＧＡＣＡＴＧＴＡＣＧＧＴＣＴＡＴＧＣＣＡＴＴＣＣＴＣＣＣＣＣＧＣＡＴＣＡＣＡＴＣＣＡＣＴＧＧＴＡＴＴＧＧＣＡＧＴＴＧＧＡＧＧＡＡＧＡＧＴＧＣＧＣＣＡＡＣＧＡＧＣＣＣＡＧＣＣＡＡＧＣＴＧＴＣＴＣＡＧＴＧＡＣＡＡＡＣＣＣＡＴＡＣＣＣＴＴＧＴＧＡＡＧＡＡＴＧＧＡＧＡＡＧＴＧＴＧＧＡＧＧＡＣＴＴＣＣＡＧＧＧＡＧＧＡＡＡＴＡＡＡＡＴＴＧＡＡＧＴＴＡＡＴＡＡＡＡＡＴＣＡＡＴＴＴＧＣＴＣＴＡＡＴＴＧＡＡＧＧＡＡＡＡＡＡＣＡＡＡＡＣＴＧＴＡＡＧＴＡＣＣＣＴＴＧＴＴＡＴＣＣＡＡＧＣＧＧＣＡＡＡＴＧＴＧＴＣＡＧＣＴＴＴＧＴＡＣＡＡＡＴＧＴＧＡＡＧＣＧＧＴＣＡＡＣＡＡＡＧＴＣＧＧＧＡＧＡＧＧＡＧＡＧＡＧＧＧＴＧＡＴＣＴＣＣＴＴＣＣＡＣＧＴＧＡＣＣＡＧＧＧＧＴＣＣＴＧＡＡＡＴＴＡＣＴＴＴＧＣＡＡＣＣＴＧＡＣＡＴＧＣＡＧＣＣＣＡＣＴＧＡＧＣＡＧＧＡＧＡＧＣＧＴＧＴＣＴＴＴＧＴＧＧＴＧＣＡＣＴＧＣＡＧＡＣＡＧＡＴＣＴＡＣＧＴＴＴＧＡＧＡＡＣＣＴＣＡＣＡＴＧＧＴＡＣＡＡＧＣＴＴＧＧＣＣＣＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＣＣＡＡＴＣＣＡＴＧＴＧＧＧＡＧＡＧＴＴＧＣＣＣＡＣＡＣＣＴＧＴＴＴＧＣＡＡＧＡＡＣＴＴＧＧＡＴＡＣＴＣＴＴＴＧＧＡＡＡＴＴＧＡＡＴＧＣＣＡＣＣＡＴＧＴＴＣＴＣＴＡＡＴＡＧＣＡＣＡＡＡＴＧＡＣＡＴＴＴＴＧＡＴＣＡＴＧＧＡＧＣＴＴＡＡＧＡＡＴＧＣＡＴＣＣＴＴＧＣＡＧＧＡＣＣＡＡＧＧＡＧＡＣＴＡＴＧＴＣＴＧＣＣＴＴＧＣＴＣＡＡＧＡＣＡＧＧＡＡＧＡＣＣＡＡＧＡＡＡＡＧＡＣＡＴＴＧＣＧＴＧＧＴＣＡＧＧＣＡＧＣＴＣＡＣＡＧＴＣＣＴＡＧＡＧＣＧＴＧＴＧＧＣＡＣＣＣＡＣＧＡＴＣＡＣＡＧＧＡＡＡＣＣＴＧＧＡＧＡＡＴＣＡＧＡＣＧＡＣＡＡＧＴＡＴＴＧＧＧＧＡＡＡＧＣＡＴＣＧＡＡＧＴＣＴＣＡＴＧＣＡＣＧＧＣＡＴＣＴＧＧＧＡＡＴＣＣＣＣＣＴＣＣＡＣＡＧＡＴＣＡＴＧＴＧＧＴＴＴＡＡＡＧＡＴＡＡＴＧＡＧＡＣＣＣＴＴＧＴＡＧＡＡＧＡＣＴＣＡＧＧＣＡＴＴＧＴＡＴＴＧＡＡＧＧＡＴＧＧＧＡＡＣＣＧＧＡＡＣＣＴＣＡＣＴＡＴＣＣＧＣＡＧＡＧＴＧＡＧＧＡＡＧＧＡＧＧＡＣＧＡＡＧＧＣＣＴＣＴＡＣＡＣＣＴＧＣＣＡＧＧＣＡＴＧＣＡＧＴＧＴＴＣＴＴＧＧＣＴＧＴＧＣＡＡＡＡＧＴＧＧＡＧＧＣＡＴＴＴＴＴＣＡＴＡＡＴＡＧＡＡＧＧＴＧＣＣＣＡＧＧＡＡＡＡＧＡＣＧＡＡＣＴＴＧＧＡＡＡＴＣＡＴＴＡＴＴＣＴＡＧＴＡＧＧＣＡＣＧＧＣＧＧＴＧＡＴＴＧＣＣＡＴＧＴＴＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＴＴＣＴＴＧＴＣＡＴＣＡＴＣＣＴＡＣＧＧＡＣＣＧＴＴＡＡＧＣＧＧＧＣＣＡＡＴＧＧＡＧＧＧＧＡＡＣＴＧＡＡＧＡＣＡＧＧＣＴＡＣＴＴＧＴＣＣＡＴＣＧＴＣＡＴＧＧＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＡＣＴＣＣＣＡＴＴＧＧＡＴＧＡＡＣＡＴＴＧＴＧＡＡＣＧＡＣＴＧＣＣＴＴＡＴＧＡＴＧＣＣＡＧＣＡＡＡＴＧＧＧＡＡＴＴＣＣＣＣＡＧＡＧＡＣＣＧＧＣＴＧＡＡＧＣＴＡＧＧＴＡＡＧＣＣＴＣＴＴＧＧＣＣＧＴＧＧＴＧＣＣＴＴＴＧＧＣＣＡＡＧＴＧＡＴＴＧＡＡＧＣＡＧＡＴＧＣＣＴＴＴＧＧＡＡＴＴＧＡＣＡＡＧＡＣＡＧＣＡＡＣＴＴＧＣＡＧＧＡＣＡＧＴＡＧＣＡＧＴＣＡＡＡＡＴＧＴＴＧＡＡＡＧＡＡＧＧＡＧＣＡＡＣＡＣＡＣＡＧＴＧＡＧＣＡＴＣＧＡＧＣＴＣＴＣＡＴＧＴＣＴＧＡＡＣＴＣＡＡＧＡＴＣＣＴＣＡＴＴＣＡＴＡＴＴＧＧＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＡＡＴＧＴＧＧＴＣＡＡＣＣＴＴＣＴＡＧＧＴＧＣＣＴＧＴＡＣＣＡＡＧＣＣＡＧＧＡＧＧＧＣＣＡＣＴＣＡＴＧＧＴＧＡＴＴＧＴＧＧＡＡＴＴＣＴＧＣＡＡＡＴＴＴＧＧＡＡＡＣＣＴＧＴＣＣＡＣＴＴＡＣＣＴＧＡＧＧＡＧＣＡＡＧＡＧＡＡＡＴＧＡＡＴＴＴＧＴＣＣＣＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＡＡＧＧＧＧＣＡＣＧＡＴＴＣＣＧＴＣＡＡＧＧＧＡＡＡＧＡＣＴＡＣＧＴＴＧＧＡＧＣＡＡＴＣＣＣＴＧＴＧＧＡＴＣＴＧＡＡＡＣＧＧＣＧＣＴＴＧＧＡＣＡＧＣＡＴＣＡＣＣＡＧＴＡＧＣＣＡＧＡＧＣＴＣＡＧＣＣＡＧＣＴＣＴＧＧＡＴＴＴＧＴＧＧＡＧＧＡＧＡＡＧＴＣＣＣＴＣＡＧＴＧＡＴＧＴＡＧＡＡＧＡＡＧＡＧＧＡＡＧＣＴＣＣＴＧＡＡＧＡＴＣＴＧＴＡＴＡＡＧＧＡＣＴＴＣＣＴＧＡＣＣＴＴＧＧＡＧＣＡＴＣＴＣＡＴＣＴＧＴＴＡＣＡＧＣＴＴＣＣＡＡＧＴＧＧＣＴＡＡＧＧＧＣＡＴＧＧＡＧＴＴＣＴＴＧＧＣＡＴＣＧＣＧＡＡＡＧＴＧＴＡＴＣＣＡＣＡＧＧＧＡＣＣＴＧＧＣＧＧＣＡＣＧＡＡＡＴＡＴＣＣＴＣＴＴＡＴＣＧＧＡＧＡＡＧＡＡＣＧＴＧＧＴＴＡＡＡＡＴＣＴＧＴＧＡＣＴＴＴＧＧＣＴＴＧＧＣＣＣＧＧＧＡＴＡＴＴＴＡＴＡＡＡＧＡＴＣＣＡＧＡＴＴＡＴＧＴＣＡＧＡＡＡＡＧＧＡＧＡＴＧＣＴＣＧＣＣＴＣＣＣＴＴＴＧＡＡＡＴＧＧＡＴＧＧＣＣＣＣＡＧＡＡＡＣＡＡＴＴＴＴＴＧＡＣＡＧＡＧＴＧＴＡＣＡＣＡＡＴＣＣＡＧＡＧＴＧＡＣＧＴＣＴＧＧＴＣＴＴＴＴＧＧＴＧＴＴＴＴＧＣＴＧＴＧＧＧＡＡＡＴＡＴＴＴＴＣＣＴＴＡＧＧＴＧＣＴＴＣＴＣＣＡＴＡＴＣＣＴＧＧＧＧＴＡＡＡＧＡＴＴＧＡＴＧＡＡＧＡＡＴＴＴＴＧＴＡＧＧＣＧＡＴＴＧＡＡＡＧＡＡＧＧＡＡＣＴＡＧＡＡＴＧＡＧＧＧＣＣＣＣＴＧＡＴＴＡＴＡＣＴＡＣＡＣＣＡＧＡＡＡＴＧＴＡＣＣＡＧＡＣＣＡＴＧＣＴＧＧＡＣＴＧＣＴＧＧＣＡＣＧＧＧＧＡＧＣＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＡＣＣＣＡＣＧＴＴＴＴＣＡＧＡＧＴＴＧＧＴＧＧＡＡＣＡＴＴＴＧＧＧＡＡＡＴＣＴＣＴＴＧＣＡＡＧＣＴＡＡＴＧＣＴＣＡＧＣＡＧＧＡＴＧＧＣＡＡＡＧＡＣＴＡＣＡＴＴＧＴＴＣＴＴＣＣＧＡＴＡＴＣＡＧＡＧＡＣＴＴＴＧＡＧＣＡＴＧＧＡＡＧＡＧＧＡＴＴＣＴＧＧＡＣＴＣＴＣＴＣＴＧＣＣＴＡＣＣＴＣＡＣＣＴＧＴＴＴＣＣＴＧＴＡＴＧＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧＡＡＧＴＡＴＧＴＧＡＣＣＣＣＡＡＡＴＴＣＣＡＴＴＡＴＧＡＣＡＡＣＡＣＡＧＣＡＧＧＡＡＴＣＡＧＴＣＡＧＴＡＴＣＴＧＣＡＧＡＡＣＡＧＴＡＡＧＣＧＡＡＡＧＡＧＣＣＧＧＣＣＴＧＴＧＡＧＴＧＴＡＡＡＡＡＣＡＴＴＴＧＡＡＧＡＴＡＴＣＣＣＧＴＴＡＧＡＡＧＡＡＣＣＡＧＡＡＧＴＡＡＡＡＧＴＡＡＴＣＣＣＡＧＡＴＧＡＣＡＡＣＣＡＧＡＣＧＧＡＣＡＧＴＧＧＴＡＴＧＧＴＴＣＴＴＧＣＣＴＣＡＧＡＡＧＡＧＣＴＧＡＡＡＡＣＴＴＴＧＧＡＡＧＡＣＡＧＡＡＣＣＡＡＡＴＴＡＴＣＴＣＣＡＴＣＴＴＴＴＧＧＴＧＧＡＡＴＧＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＡＡＡＧＣＡＧＧＧＡＧＴＣＴＧＴＧＧＣＡＴＣＴＧＡＡＧＧＣＴＣＡＡＡＣＣＡＧＡＣＡＡＧＣＧＧＣＴＡＣＣＡＧＴＣＣＧＧＡＴＡＴＣＡＣＴＣＣＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＡＣＡＣＣＡＣＣＧＴＧＴＡＣＴＣＣＡＧＴＧＡＧＧＡＡＧＣＡＧＡＡＣＴＴＴＴＡＡＡＧＣＴＧＡＴＡＧＡＧＡＴＴＧＧＡＧＴＧＣＡＡＡＣＣＧＧＴＡＧＣＡＣＡＧＣＣＣＡＧＡＴＴＣＴＣＣＡＧＣＣＴＧＡＣＴＣＧＧＧＧＡＣＣＡＣＡＣＴＧＡＧＣＴＣＴＣＣＴＣＣＴＧＴＴＴＡＡＡＡＧＧＡＡＧＣＡＴＣＣＡＣＡＣＣＣＣＣＡＡＣＴＣＣＴＧＧＡＣＡＴＣＡＣＡＴＧＡＧＡＧＧＴＧＣＴＧＣＴＣＡＧＡＴＴＴＴＣＡＡＧＴＧＴＴＧＴＴＣＴＴＴＣＣＡＣＣＡＧＣＡＧＧＡＡＧＴＡＧＣＣＧＣＡＴＴＴＧＡＴＴＴＴＣＡＴＴＴＣＧＡＣＡＡＣＡＧＡＡＡＡＡＧＧＡＣＣＴＣＧＧＡＣＴＧＣＡＧＧＧＡＧＣＣＡＧＴＣＴＴＣＴＡＧＧＣＡＴＡＴＣＣＴＧＧＡＡＧＡＧＧＣＴＴＧＴＧＡＣＣＣＡＡＧＡＡＴＧＴＧＴＣＴＧＴＧＴＣＴＴＣＴＣＣＣＡＧＴＧＴＴＧＡＣＣＴＧＡＴＣＣＴＣＴＴＴＴＴＣＡＴＴＣＡＴＴＴＡＡＡＡＡＧＣＡＴＴＴＡＴＣＡＴＧＣＣＣＣＣＴＧＣＴＧＣＧＧＧＴＣＴＣＡＣＣＡＴＧＧＧＴＴＴＡＧＡＡＣＡＡＡＧＡＣＧＴＴＣＡＡＧＡＡＡＴＧＧＣＣＣＣＡＴＣＣＴＣＡＡＡＧＡＡＧＴＡＧＣＡＧＴＡＣＣＴＧＧＧＧＡＧＣＴＧＡＣＡＣＴＴＣＴＧＴＡＡＡＡＣＴＡＧＡＡＧＡＴＡＡＡＣＣＡＧＧＣＡＡＴＧＴＡＡＧＴＧＴＴＣＧＡＧＧＴＧＴＴＧＡＡＧＡＴＧＧＧＡＡＧＧＡＴＴＴＧＣＡＧＧＧＣＴＧＡＧＴＣＴＡＴＣＣＡＡＧＡＧＧＣＴＴＴＧＴＴＴＡＧＧＡＣＧＴＧＧＧＴＣＣＣＡＡＧＣＣＡＡＧＣＣＴＴＡＡＧＴＧＴＧＧＡＡＴＴＣＧＧＡＴＴＧＡＴＡＧＡＡＡＧＧＡＡＧＡＣＴＡＡＣＧＴＴＡＣＣＴＴＧＣＴＴＴＧＧＡＧＡＧＴＡＣＴＧＧＡＧＣＣＴＧＣＡＡＡＴＧＣＡＴＴＧＴＧＴＴＴＧＣＴＣＴＧＧＴＧＧＡＧＧＴＧＧＧＣＡＴＧＧＧＧＴＣＴＧＴＴＣＴＧＡＡＡＴＧＴＡＡＡＧＧＧＴＴＣＡＧＡＣＧＧＧＧＴＴＴＣＴＧＧＴＴＴＴＡＧＡＡＧＧＴＴＧＣＧＴＧＴＴＣＴＴＣＧＡＧＴＴＧＧＧＣＴＡＡＡＧＴＡＧＡＧＴＴＣＧＴＴＧＴＧＣＴＧＴＴＴＣＴＧＡＣＴＣＣＴＡＡＴＧＡＧＡＧＴＴＣＣＴＴＣＣＡＧＡＣＣＧＴＴＡＣＧＴＧＴＣＴＣＣＴＧＧＣＣＡＡＧＣＣＣＣＡＧＧＡＡＧＧＡＡＡＴＧＡＴＧ


ＣＡＧＣＴＣＴＧＧＣＴＣＣＴＴＧＴＣＴＣＣＣＡＧＧＣＴＧＡＴＣＣＴＴＴＡＴＴＣＡＧＡＡＴＡＣＣＡＣＡＡＡＧＡＡＡＧＧＡＣＡＴＴＣＡＧＣＴＣＡＡＧＧＣＴＣＣＣＴＧＣＣＧＴＧＴＴＧＡＡＧＡＧＴＴＣＴＧＡＣＴＧＣＡＣＡＡＡＣＣＡＧＣＴＴＣＴＧＧＴＴＴＣＴＴＣＴＧＧＡＡＴＧＡＡＴＡＣＣＣＴＣＡＴＡＴＣＴＧＴＣＣＴＧＡＴＧＴＧＡＴＡＴＧＴＣＴＧＡＧＡＣＴＧＡＡＴＧＣＧＧＧＡＧＧＴＴＣＡＡＴＧＴＧＡＡＧＣＴＧＴＧＴＧＴＧＧＴＧＴＣＡＡＡＧＴＴＴＣＡＧＧＡＡＧＧＡＴＴＴＴＡＣＣＣＴＴＴＴＧＴＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＴＣＣＣＣＡＡＣＣＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＣＣＧＣＡＡＣＣＣＡＴＣＡＧＴＡＴＴＴＴＡＧＴＴＡＴＴＴＧＧＣＣＴＣＴＡＣＴＣＣＡＧＴＡＡＡＣＣＴＧＡＴＴＧＧＧＴＴＴＧＴＴＣＡＣＴＣＴＣＴＧＡＡＴＧＡＴＴＡＴＴＡＧＣＣＡＧＡＣＴＴＣＡＡＡＡＴＴＡＴＴＴＴＡＴＡＧＣＣＣＡＡＡＴＴＡＴＡＡＣＡＴＣＴＡＴＴＧＴＡＴＴＡＴＴＴＡＧＡＣＴＴＴＴＡＡＣＡＴＡＴＡＧＡＧＣＴＡＴＴＴＣＴＡＣＴＧＡＴＴＴＴＴＧＣＣＣＴＴＧＴＴＣＴＧＴＣＣＴＴＴＴＴＴＴＣＡＡＡＡＡＡＧＡＡＡＡＴＧＴＧＴＴＴＴＴＴＧＴＴＴＧＧＴＡＣＣＡＴＡＧＴＧＴＧＡＡＡＴＧＣＴＧＧＧＡＡＣＡＡＴＧＡＣＴＡＴＡＡＧＡＣＡＴＧＣＴＡＴＧＧＣＡＣＡＴＡＴＡＴＴＴＡＴＡＧＴＣＴＧＴＴＴＡＴＧＴＡＧＡＡＡＣＡＡＡＴＧＴＡＡＴＡＴＡＴＴＡＡＡＧＣＣＴＴＡＴＡＴＡＴＡＡＴＧＡＡＣＴＴＴＧＴＡＣＴＡＴＴＣＡＣＡＴＴＴＴＧＴＡＴＣＡＧＴＡＴＴＡＴＧＴＡＧＣＡＴＡＡＣＡＡＡＧＧＴＣＡＴＡＡＴＧＣＴＴＴＣＡＧＣＡＡＴＴＧＡＴＧＴＣＡＴＴＴＴＡＴＴＡＡＡＧＡＡＣＡＴＴＧＡＡＡＡＡＣＴＴＧＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡ
例示的なヒトＶＥＧＦＲ－２前駆体アミノ酸配列（配列番号３５）
ＭＱＳＫＶＬＬＡＶＡＬＷＬＣＶＥＴＲＡＡＳＶＧＬＰＳＶＳＬＤＬＰＲＬＳＩＱＫＤＩＬＴＩＫＡＮＴＴＬＱＩＴＣＲＧＱＲＤＬＤＷＬＷＰＮＮＱＳＧＳＥＱＲＶＥＶＴＥＣＳＤＧＬＦＣＫＴＬＴＩＰＫＶＩＧＮＤＴＧＡＹＫＣＦＹＲＥＴＤＬＡＳＶＩＹＶＹＶＱＤＹＲＳＰＦＩＡＳＶＳＤＱＨＧＶＶＹＩＴＥＮＫＮＫＴＶＶＩＰＣＬＧＳＩＳＮＬＮＶＳＬＣＡＲＹＰＥＫＲＦＶＰＤＧＮＲＩＳＷＤＳＫＫＧＦＴＩＰＳＹＭＩＳＹＡＧＭＶＦＣＥＡＫＩＮＤＥＳＹＱＳＩＭＹＩＶＶＶＶＧＹＲＩＹＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＰＦＶＡＦＧＳＧＭＥＳＬＶＥＡＴＶＧＥＲＶＲＩＰＡＫＹＬＧＹＰＰＰＥＩＫＷＹＫＮＧＩＰＬＥＳＮＨＴＩＫＡＧＨＶＬＴＩＭＥＶＳＥＲＤＴＧＮＹＴＶＩＬＴＮＰＩＳＫＥＫＱＳＨＶＶＳＬＶＶＹＶＰＰＱＩＧＥＫＳＬＩＳＰＶＤＳＹＱＹＧＴＴＱＴＬＴＣＴＶＹＡＩＰＰＰＨＨＩＨＷＹＷＱＬＥＥＥＣＡＮＥＰＳＱＡＶＳＶＴＮＰＹＰＣＥＥＷＲＳＶＥＤＦＱＧＧＮＫＩＥＶＮＫＮＱＦＡＬＩＥＧＫＮＫＴＶＳＴＬＶＩＱＡＡＮＶＳＡＬＹＫＣＥＡＶＮＫＶＧＲＧＥＲＶＩＳＦＨＶＴＲＧＰＥＩＴＬＱＰＤＭＱＰＴＥＱＥＳＶＳＬＷＣＴＡＤＲＳＴＦＥＮＬＴＷＹＫＬＧＰＱＰＬＰＩＨＶＧＥＬＰＴＰＶＣＫＮＬＤＴＬＷＫＬＮＡＴＭＦＳＮＳＴＮＤＩＬＩＭＥＬＫＮＡＳＬＱＤＱＧＤＹＶＣＬＡＱＤＲＫＴＫＫＲＨＣＶＶＲＱＬＴＶＬＥＲＶＡＰＴＩＴＧＮＬＥＮＱＴＴＳＩＧＥＳＩＥＶＳＣＴＡＳＧＮＰＰＰＱＩＭＷＦＫＤＮＥＴＬＶＥＤＳＧＩＶＬＫＤＧＮＲＮＬＴＩＲＲＶＲＫＥＤＥＧＬＹＴＣＱＡＣＳＶＬＧＣＡＫＶＥＡＦＦＩＩＥＧＡＱＥＫＴＮＬＥＩＩＩＬＶＧＴＡＶＩＡＭＦＦＷＬＬＬＶＩＩＬＲＴＶＫＲＡＮＧＧＥＬＫＴＧＹＬＳＩＶＭＤＰＤＥＬＰＬＤＥＨＣＥＲＬＰＹＤＡＳＫＷＥＦＰＲＤＲＬＫＬＧＫＰＬＧＲＧＡＦＧＱＶＩＥＡＤＡＦＧＩＤＫＴＡＴＣＲＴＶＡＶＫＭＬＫＥＧＡＴＨＳＥＨＲＡＬＭＳＥＬＫＩＬＩＨＩＧＨＨＬＮＶＶＮＬＬＧＡＣＴＫＰＧＧＰＬＭＶＩＶＥＦＣＫＦＧＮＬＳＴＹＬＲＳＫＲＮＥＦＶＰＹＫＴＫＧＡＲＦＲＱＧＫＤＹＶＧＡＩＰＶＤＬＫＲＲＬＤＳＩＴＳＳＱＳＳＡＳＳＧＦＶＥＥＫＳＬＳＤＶＥＥＥＥＡＰＥＤＬＹＫＤＦＬＴＬＥＨＬＩＣＹＳＦＱＶＡＫＧＭＥＦＬＡＳＲＫＣＩＨＲＤＬＡＡＲＮＩＬＬＳＥＫＮＶＶＫＩＣＤＦＧＬＡＲＤＩＹＫＤＰＤＹＶＲＫＧＤＡＲＬＰＬＫＷＭＡＰＥＴＩＦＤＲＶＹＴＩＱＳＤＶＷＳＦＧＶＬＬＷＥＩＦＳＬＧＡＳＰＹＰＧＶＫＩＤＥＥＦＣＲＲＬＫＥＧＴＲＭＲＡＰＤＹＴＴＰＥＭＹＱＴＭＬＤＣＷＨＧＥＰＳＱＲＰＴＦＳＥＬＶＥＨＬＧＮＬＬＱＡＮＡＱＱＤＧＫＤＹＩＶＬＰＩＳＥＴＬＳＭＥＥＤＳＧＬＳＬＰＴＳＰＶＳＣＭＥＥＥＥＶＣＤＰＫＦＨＹＤＮＴＡＧＩＳＱＹＬＱＮＳＫＲＫＳＲＰＶＳＶＫＴＦＥＤＩＰＬＥＥＰＥＶＫＶＩＰＤＤＮＱＴＤＳＧＭＶＬＡＳＥＥＬＫＴＬＥＤＲＴＫＬＳＰＳＦＧＧＭＶＰＳＫＳＲＥＳＶＡＳＥＧＳＮＱＴＳＧＹＱＳＧＹＨＳＤＤＴＤＴＴＶＹＳＳＥＥＡＥＬＬＫＬＩＥＩＧＶＱＴＧＳＴＡＱＩＬＱＰＤＳＧＴＴＬＳＳＰＰＶ
ＶＥＧＦＲ－３遺伝子は、ヒト染色体位置５ｑ３５．３に見出され、血管内皮増殖因子受容体ファミリー（ＶＥＧＦＲ）のメンバーを含む３５のエクソンをコードする。この遺伝子は、血管内皮増殖因子Ｃ及びＤのチロシンキナーゼ受容体をコードする。このタンパク質はリンパ管新生及びリンパ管内皮の維持に関与すると考えられている。
例示的なヒトＶＥＧＦＲ－３アイソフォーム１ ｃＤＮＡ配列（配列番号３６）
ＡＣＴＴＴＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＣＣＧＣＧＧＣＣＧＣＴＣＧＧＧＴＣＧＧＡＣＣＣＡＣＧＣＧＣＡＧＣＧＧＣＣＧＧＡＧＡＴＧＣＡＧＣＧＧＧＧＣＧＣＣＧＣＧＣＴＧＴＧＣＣＴＧＣＧＡＣＴＧＴＧＧＣＴＣＴＧＣＣＴＧＧＧＡＣＴＣＣＴＧＧＡＣＧＧＣＣＴＧＧＴＧＡＧＴＧＧＣＴＡＣＴＣＣＡＴＧＡＣＣＣＣＣＣＣＧＡＣＣＴＴＧＡＡＣＡＴＣＡＣＧＧＡＧＧＡＧＴＣＡＣＡＣＧＴＣＡＴＣＧＡＣＡＣＣＧＧＴＧＡＣＡＧＣＣＴＧＴＣＣＡＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＣＣＣＴＣＧＡＧＴＧＧＧＣＴＴＧＧＣＣＡＧＧＡＧＣＴＣＡＧＧＡＧＧＣＧＣＣＡＧＣＣＡＣＣＧＧＡＧＡＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＧＧＧＴＧＧＴＧＣＧＡＧＡＣＴＧＣＧＡＧＧＧＣＡＣＡＧＡＣＧＣＣＡＧＧＣＣＣＴＡＣＴＧＣＡＡＧＧＴＧＴＴＧＣＴＧＣＴＧＣＡＣＧＡＧＧＴＡＣＡＴＧＣＣＡＡＣＧＡＣＡＣＡＧＧＣＡＧＣＴＡＣＧＴＣＴＧＣＴＡＣＴＡＣＡＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＧＣＡＣＧＣＡＴＣＧＡＧＧＧＣＡＣＣＡＣＧＧＣＣＧＣＣＡＧＣＴＣＣＴＡＣＧＴＧＴＴＣＧＴＧＡＧＡＧＡＣＴＴＴＧＡＧＣＡＧＣＣＡＴＴＣＡＴＣＡＡＣＡＡＧＣＣＴＧＡＣＡＣＧＣＴＣＴＴＧＧＴＣＡＡＣＡＧＧＡＡＧＧＡＣＧＣＣＡＴＧＴＧＧＧＴＧＣＣＣＴＧＴＣＴＧＧＴＧＴＣＣＡＴＣＣＣＣＧＧＣＣＴＣＡＡＴＧＴＣＡＣＧＣＴＧＣＧＣＴＣＧＣＡＡＡＧＣＴＣＧＧＴＧＣＴＧＴＧＧＣＣＡＧＡＣＧＧＧＣＡＧＧＡＧＧＴＧＧＴＧＴＧＧＧＡＴＧＡＣＣＧＧＣＧＧＧＧＣＡＴＧＣＴＣＧＴＧＴＣＣＡＣＧＣＣＡＣＴＧＣＴＧＣＡＣＧＡＴＧＣＣＣＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＴＧＣＧＡＧＡＣＣＡＣＣＴＧＧＧＧＡＧＡＣＣＡＧＧＡＣＴＴＣＣＴＴＴＣＣＡＡＣＣＣＣＴＴＣＣＴＧＧＴＧＣＡＣＡＴＣＡＣＡＧＧＣＡＡＣＧＡＧＣＴＣＴＡＴＧＡＣＡＴＣＣＡＧＣＴＧＴＴＧＣＣＣＡＧＧＡＡＧＴＣＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＴＧＧＴＡＧＧＧＧＡＧＡＡＧＣＴＧＧＴＣＣＴＧＡＡＣＴＧＣＡＣＣＧＴＧＴＧＧＧＣＴＧＡＧＴＴＴＡＡＣＴＣＡＧＧＴＧＴＣＡＣＣＴＴＴＧＡＣＴＧＧＧＡＣＴＡＣＣＣＡＧＧＧＡＡＧＣＡＧＧＣＡＧＡＧＣＧＧＧＧＴＡＡＧＴＧＧＧＴＧＣＣＣＧＡＧＣＧＡＣＧＣＴＣＣＣＡＧＣＡＧＡＣＣＣＡＣＡＣＡＧＡＡＣＴＣＴＣＣＡＧＣＡＴＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＣＡＣＡＡＣＧＴＣＡＧＣＣＡＧＣＡＣＧＡＣＣＴＧＧＧＣＴＣＧＴＡＴＧＴＧＴＧＣＡＡＧＧＣＣＡＡＣＡＡＣＧＧＣＡＴＣＣＡＧＣＧＡＴＴＴＣＧＧＧＡＧＡＧＣＡＣＣＧＡＧＧＴＣＡＴＴＧＴＧＣＡＴＧＡＡＡＡＴＣＣＣＴＴＣＡＴＣＡＧＣＧＴＣＧＡＧＴＧＧＣＴＣＡＡＡＧＧＡＣＣＣＡＴＣＣＴＧＧＡＧＧＣＣＡＣＧＧＣＡＧＧＡＧＡＣＧＡＧＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＴＧＣＣＣＧＴＧＡＡＧＣＴＧＧＣＡＧＣＧＴＡＣＣＣＣＣＣＧＣＣＣＧＡＧＴＴＣＣＡＧＴＧＧＴＡＣＡＡＧＧＡＴＧＧＡＡＡＧＧＣＡＣＴＧＴＣＣＧＧＧＣＧＣＣＡＣＡＧＴＣＣＡＣＡＴＧＣＣＣＴＧＧＴＧＣＴＣＡＡＧＧＡＧＧＴＧＡＣＡＧＡＧＧＣＣＡＧＣＡＣＡＧＧＣＡＣＣＴＡＣＡＣＣＣＴＣＧＣＣＣＴＧＴＧＧＡＡＣＴＣＣＧＣＴＧＣＴＧＧＣＣＴＧＡＧＧＣＧＣＡＡＣＡＴＣＡＧＣＣＴＧＧＡＧＣＴＧＧＴＧＧＴＧＡＡＴＧＴＧＣＣＣＣＣＣＣＡＧＡＴＡＣＡＴＧＡＧＡＡＧＧＡＧＧＣＣＴＣＣＴＣＣＣＣＣＡＧＣＡＴＣＴＡＣＴＣＧＣＧＴＣＡＣＡＧＣＣＧＣＣＡＧＧＣＣＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＧＧＣＣＴＡＣＧＧＧＧＴＧＣＣＣＣＴＧＣＣＴＣＴＣＡＧＣＡＴＣＣＡＧＴＧＧＣＡＣＴＧＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＡＣＡＣＣＣＴＧＣＡＡＧＡＴＧＴＴＴＧＣＣＣＡＧＣＧＴＡＧＴＣＴＣＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＡＧＣＡＧＣＡＡＧＡＣＣＴＣＡＴＧＣＣＡＣＡＧＴＧＣＣＧＴＧＡＣＴＧＧＡＧＧＧＣＧＧＴＧＡＣＣＡＣＧＣＡＧＧＡＴＧＣＣＧＴＧＡＡＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＧＣＣＴＧＧＡＣＡＣＣＴＧＧＡＣＣＧＡＧＴＴＴＧＴＧＧＡＧＧＧＡＡＡＧＡＡＴＡＡＧＡＣＴＧＴＧＡＧＣＡＡＧＣＴＧＧＴＧＡＴＣＣＡＧＡＡＴＧＣＣＡＡＣＧＴＧＴＣＴＧＣＣＡＴＧＴＡＣＡＡＧＴＧＴＧＴＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＧＧＴＧＧＧＣＣＡＧＧＡＴＧＡＧＣＧＧＣＴＣＡＴＣＴＡＣＴＴＣＴＡＴＧＴＧＡＣＣＡＣＣＡＴＣＣＣＣＧＡＣＧＧＣＴＴＣＡＣＣＡＴＣＧＡＡＴＣＣＡＡＧＣＣＡＴＣＣＧＡＧＧＡＧＣＴＡＣＴＡＧＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＧＧＴＧＣＴＣＣＴＧＡＧＣＴＧＣＣＡＡＧＣＣＧＡＣＡＧＣＴＡＣＡＡＧＴＡＣＧＡＧＣＡＴＣＴＧＣＧＣＴＧＧＴＡＣＣＧＣＣＴＣＡＡＣＣＴＧＴＣＣＡＣＧＣＴＧＣＡＣＧＡＴＧＣＧＣＡＣＧＧＧＡＡＣＣＣＧＣＴＴＣＴＧＣＴＣＧＡＣＴＧＣＡＡＧＡＡＣＧＴＧＣＡＴＣＴＧＴＴＣＧＣＣＡＣＣＣＣＴＣＴＧＧＣＣＧＣＣＡＧＣＣＴＧＧＡＧＧＡＧＧＴＧＧＣＡＣＣＴＧＧＧＧＣＧＣＧＣＣＡＣＧＣＣＡＣＧＣＴＣＡＧＣＣＴＧＡＧＴＡＴＣＣＣＣＣＧＣＧＴＣＧＣＧＣＣＣＧＡＧＣＡＣＧＡＧＧＧＣＣＡＣＴＡＴＧＴＧＴＧＣＧＡＡＧＴＧＣＡＡＧＡＣＣＧＧＣＧＣＡＧＣＣＡＴＧＡＣＡＡＧＣＡＣＴＧＣＣＡＣＡＡＧＡＡＧＴＡＣＣＴＧＴＣＧＧＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＧＡＡＧＣＣＣＣＴＣＧＧＣＴＣＡＣＧＣＡＧＡＡＣＴＴＧＡＣＣＧＡＣＣＴＣＣＴＧＧＴＧＡＡＣＧＴＧＡＧＣＧＡＣＴＣＧＣＴＧＧＡＧＡＴＧＣＡＧＴＧＣＴＴＧＧＴＧＧＣＣＧＧＡＧＣＧＣＡＣＧＣＧＣＣＣＡＧＣＡＴＣＧＴＧＴＧＧＴＡＣＡＡＡＧＡＣＧＡＧＡＧＧＣＴＧＣＴＧＧＡＧＧＡＡＡＡＧＴＣＴＧＧＡＧＴＣＧＡＣＴＴＧＧＣＧＧＡＣＴＣＣＡＡＣＣＡＧＡＡＧＣＴＧＡＧＣＡＴＣＣＡＧＣＧＣＧＴＧＣＧＣＧＡＧＧＡＧＧＡＴＧＣＧＧＧＡＣＧＣＴＡＴＣＴＧＴＧＣＡＧＣＧＴＧＴＧＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＧＧＣＴＧＣＧＴＣＡＡＣＴＣＣＴＣＣＧＣＣＡＧＣＧＴＧＧＣＣＧＴＧＧＡＡＧＧＣＴＣＣＧＡＧＧＡＴＡＡＧＧＧＣＡＧＣＡＴＧＧＡＧＡＴＣＧＴＧＡＴＣＣＴＴＧＴＣＧＧＴＡＣＣＧＧＣＧＴＣＡＴＣＧＣＴＧＴＣＴＴＣＴＴＣＴＧＧＧＴＣＣＴＣＣＴＣＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＴＣＴＧＴＡＡＣＡＴＧＡＧＧＡＧＧＣＣＧＧＣＣＣＡＣＧＣＡＧＡＣＡＴＣＡＡＧＡＣＧＧＧＣＴＡＣＣＴＧＴＣＣＡＴＣＡＴＣＡＴＧＧＡＣＣＣＣＧＧＧＧＡＧＧＴＧＣＣＴＣＴＧＧＡＧＧＡＧＣＡＡＴＧＣＧＡＡＴＡＣＣＴＧＴＣＣＴＡＣＧＡＴＧＣＣＡＧＣＣＡＧＴＧＧＧＡＡＴＴＣＣＣＣＣＧＡＧＡＧＣＧＧＣＴＧＣＡＣＣＴＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＣＴＣＧＧＣＴＡＣＧＧＣＧＣＣＴＴＣＧＧＧＡＡＧＧＴＧＧＴＧＧＡＡＧＣＣＴＣＣＧＣＴＴＴＣＧＧＣＡＴＣＣＡＣＡＡＧＧＧＣＡＧＣＡＧＣＴＧＴＧＡＣＡＣＣＧＴＧＧＣＣＧＴＧＡＡＡＡＴＧＣＴＧＡＡＡＧＡＧＧＧＣＧＣＣＡＣＧＧＣＣＡＧＣＧＡＧＣＡＣＣＧＣＧＣＧＣＴＧＡＴＧＴＣＧＧＡＧＣＴＣＡＡＧＡＴＣＣＴＣＡＴＴＣＡＣＡＴＣＧＧＣＡＡＣＣＡＣＣＴＣＡＡＣＧＴＧＧＴＣＡＡＣＣＴＣＣＴＣＧＧＧＧＣＧＴＧＣＡＣＣＡＡＧＣＣＧＣＡＧＧＧＣＣＣＣＣＴＣＡＴＧＧＴＧＡＴＣＧＴＧＧＡＧＴＴＣＴＧＣＡＡＧＴＡＣＧＧＣＡＡＣＣＴＣＴＣＣＡＡＣＴＴＣＣＴＧＣＧＣＧＣＣＡＡＧＣＧＧＧＡＣＧＣＣＴＴＣＡＧＣＣＣＣＴＧＣＧＣＧＧＡＧＡＡＧＴＣＴＣＣＣＧＡＧＣＡＧＣＧＣＧＧＡＣＧＣＴＴＣＣＧＣＧＣＣＡＴＧＧＴＧＧＡＧＣＴＣＧＣＣＡＧＧＣＴＧＧＡＴＣＧＧＡＧＧＣＧＧＣＣＧＧＧＧＡＧＣＡＧＣＧＡＣＡＧＧＧＴＣＣＴＣＴＴＣＧＣＧＣＧＧＴＴＣＴＣＧＡＡＧＡＣＣＧＡＧＧＧＣＧＧＡＧＣＧＡＧＧＣＧＧＧＣＴＴＣＴＣＣＡＧＡＣＣＡＡＧＡＡＧＣＴＧＡＧＧＡＣＣＴＧＴＧＧＣＴＧＡＧＣＣＣＧＣＴＧＡＣＣＡＴＧＧＡＡＧＡＴＣＴＴＧＴＣＴＧＣＴＡＣＡＧＣＴＴＣＣＡＧＧＴＧＧＣＣＡＧＡＧＧＧＡＴＧＧＡＧＴＴＣＣＴＧＧＣＴＴＣＣＣＧＡＡＡＧＴＧＣＡＴＣＣＡＣＡＧＡＧＡＣＣＴＧＧＣＴＧＣＴＣＧＧＡＡＣＡＴＴＣＴＧＣＴＧＴＣＧＧＡＡＡＧＣＧＡＣＧＴＧＧＴＧＡＡＧＡＴＣＴＧＴＧＡＣＴＴＴＧＧＣＣＴＴＧＣＣＣＧＧＧＡＣＡＴＣＴＡＣＡＡＡＧＡＣＣＣＣＧＡＣＴＡＣＧＴＣＣＧＣＡＡＧＧＧＣＡＧＴＧＣＣＣＧＧＣＴＧＣＣＣＣＴＧＡＡＧＴＧＧＡＴＧＧＣＣＣＣＴＧＡＡＡＧＣＡＴＣＴＴＣＧＡＣＡＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＡＣＧＣＡＧＡＧＴＧＡＣＧＴＧＴＧＧＴＣＣＴＴＴＧＧＧＧＴＧＣＴＴＣＴＣＴＧＧＧＡＧＡＴＣＴＴＣＴＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＣＴＣＣＣＣＧＴＡＣＣＣＴＧＧＧＧＴＧＣＡＧＡＴＣＡＡＴＧＡＧＧＡＧＴＴＣＴＧＣＣＡＧＣＧＧＣＴＧＡＧＡＧＡＣＧＧＣＡＣＡＡＧＧＡＴＧＡＧＧＧＣＣＣＣＧＧＡＧＣＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＧＣＣＡＴＡＣＧＣＣＧＣＡＴＣＡＴＧＣＴＧＡＡＣＴＧＣＴＧＧＴＣＣＧＧＡＧＡＣＣＣＣＡＡＧＧＣＧＡＧＡＣＣＴＧＣＡＴＴＣＴＣＧＧＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＣＴＧＧＧＧＧＡＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＧＧＣＡＧＧＧＧＣＣＴＧＣＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＧＧＡＧＧＴＣＴＧＣＡＴＧＧＣＣＣＣＧＣＧＣＡＧＣＴＣＴＣＡＧＡＧＣＴＣＡＧＡＡＧＡＧＧＧＣＡＧＣＴＴＣＴＣＧＣＡＧＧＴＧＴＣＣＡＣＣＡＴＧＧＣＣＣＴＡＣＡＣＡＴＣＧＣＣＣＡＧＧＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＧＡＣＡＧＣＣＣＧＣＣＡＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＧＣＣＡＣＡＧＣＣＴＧＧＣＣＧＣＣＡＧＧＴＡＴＴＡＣＡＡＣＴＧＧＧＴＧＴＣＣＴＴＴＣＣＣＧＧＧＴＧＣＣＴＧＧＣＣＡＧＡＧＧＧＧＣＴＧＡＧＡＣＣＣＧＴＧＧＴＴＣＣＴＣＣＡＧＧＡＴＧＡＡＧＡＣＡＴＴＴＧＡＧＧＡＡＴＴＣＣＣＣＡＴＧＡＣＣＣＣＡＡＣＧＡＣＣＴＡＣＡＡＡＧＧＣＴＣＴＧＴＧＧＡＣＡＡＣＣＡＧＡＣＡＧＡＣＡＧＴＧＧＧＡＴＧＧＴＧＣＴＧＧＣＣＴＣＧＧＡＧＧＡＧＴＴＴＧＡＧＣＡＧＡＴＡＧＡＧＡＧＣＡＧＧＣＡＴＡＧＡＣＡＡＧＡＡＡＧＣＧＧＣＴＴＣＡＧＣＴＧＴＡＡＡＧＧＡＣＣＴＧＧＣＣＡＧＡＡＴＧＴＧＧＣＴＧＴＧＡＣＣＡＧＧＧＣＡＣＡＣＣＣＴＧＡＣＴＣＣＣＡＡＧＧＧＡＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＣＴＧＡＧＣＧＧＧＧＧＧＣＣＣＧＡＧＧＡＧＧＣＣＡＧＧＴＧＴＴＴＴＡＣＡＡＣＡＧＣＧＡＧＴＡＴＧＧＧＧＡＧＣＴＧＴＣＧＧＡＧＣＣＡＡＧＣＧＡＧＧＡＧＧＡＣＣＡＣＴＧＣＴＣＣＣＣＧＴＣＴＧＣＣＣＧＣＧＴＧＡＣＴＴＴＣＴＴＣＡＣＡＧＡＣＡＡＣＡＧＣＴＡＣＴＡＡＧＣＡＧＣＡＴＣＧＧＡＣＡＡＧＡＣＣＣＣＣＡＧＣＡＣＴＴＧＧＧＧＧＴＴＣＡＧＧＣＣＣＧＧＣＡＧＧＧＣＧＧＧＣＡＧＡＧＧＧＣＴＧＧＡＧＧＣＣＣＡＧＧＣＴＧＧＧＡＡＣＴＣＡＴＣＴＧＧＴＴＧＡＡＣＴＣＴＧＧＴＧＧＣＡＣＡＧＧＡＧＴＧＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＡＧＡＣＴＴＣＣＣＡＧＣＴＡＧＧＡＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＴＣＣＡＧＧＣＣＣＡＡＧＧＣＴＣＣＣＧＧＡＡＴＴＣＣＧＴＣＡＣＣＡＣＧＡＣＴＧＧＣＣＡＧＧＧＣＣＡＣＧＣＴＣＣＡＧＣＴＧＣＣＣＣＧＧＣＣＣＣＴＣＣＣＣＣＴＧＡＧＡＴＴＣＡＧＡＴＧＴＣＡＴＴＴＡＧＴＴＣＡＧＣＡＴＣＣＧＣＡＧＧＴＧＣＴＧＧＴＣＣＣＧＧＧＧＣＣＡＧＣＡＣＴＴＣＣＡＴＧＧＧＡＡＴＧＴＣＴＣＴＴＴＧＧＣＧＡＣＣＴＣＣＴＴＴＣＡＴＣＡＣＡＣＴＧＧＧＴＧＧＴＧＧＣＣＴＧＧＴＣＣＣＴＧＴＴＴＴＣＣＣＡＣＧＡＧＧＡＡＴＣＴＧＴＧＧＧＴＣＴＧＧＧＡＧＴＣＡＣＡＣＡＧＴＧＴＴＧＧＡＧＧＴＴＡＡＧＧＣＡＴＡＣＧＡＧＡＧＣＡＧＡＧＧＴＣＴＣＣＣＡＡＡＣＧＣＣＣＴＴＴＣＣＴＣＣＴＣＡＧＧＣＡＣＡＣＡＧＣＴＡＣＴＣＴＣＣＣＣＡＣＧＡＧＧＧＣＴＧＧＣＴＧＧＣＣＴＣＡＣＣＣＡＣＣＣＣＴＧＣＡＣＡＧＴＴＧＡＡＧＧＧＡＧＧＧＧＣＴＧＴＧＴＴＴＣＣＡＴＣＴＣＡＡＡＧＡＡＧＧＣＡＴＴＴＧＣＡＧＧＧＴＣＣＴＣＴＴＣＴＧＧＧＣＣＴＧＡＣＣＡＡＡＣＡＧＣＣＡＡＣＴＡＧＣＣＣＣＴＧＧＧＧＴＧＧＣＣＡＣＣＡＧＴＡＴＧＡＣＡＧＴＡＴＴＡＴＡＣＧＣＴＧＧＣＡＡＣＡＣＡＧＡＧＧＣＡＧＣＣＣＧＣＡＣＡＣＣＴＧＣＧＣＣＴＧＧＧＴＧＴＴＧＡＧＡＧＣＣＡＴＣＣＴＧＣＡＡＧＴＣＴＴＴＴＴＣＡＡＣＡＧＡＡＣＴＴＣＡＣＡＧＡＣＴＧＴＴＡＧＡＧＣＴＧＣＴＧＡＧＡＡＧＡＡＴＴＴＧＣＴＴＴＣＣＧＡＡＴＴＣＡＧＣＣＴＧＧＡＡＧＧＣＧＣＣＣＡＧＧＧＡＣＡＧＣＴＧＴＡＣＴＧＡＧＴＣＴＡＧＡＴＧＡＣＴＣＴＧＡＣＣＣＣＣＧＣＣＣＣＡＧＧＴＣＡＡＧＧＣＣＡＧＣＡＧＡＧＣＡＧＴＣＡＧＴＧＣＣＴＣＴＧＧＡＧＡＡＧＧＣＣＣＴＴＧＣＴＣＴＣＣＣＡＣＣＴＧＧＣＣＣＡＧＡＣＴＣＣＧＡＧＧＡＧＣＣＴＧＧＧＴＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＣＧＧＴＣＴＧＧＴＴＣＴＴＣＣＣＴＴＴＡＧＡＧＣＣＣＧＧＡＴＣＴＧＣＣＡＣＣＴＧＣＧＧＣＣＣＣＴＣＣＣＡＡＧＣＣＧＴＧＡＡＣＣＡＧＣＴＣＡＴＧＡＧＡＧＡＴＧＡＡＣＡＣＴ


ＧＴＧＧＧＡＴＣＣＡＣＴＣＡＧＧＡＡＧＧＣＴＣＧＧＧＧＣＴＧＧＣＡＣＡＡＡＧＧＡＣＣＡＣＣＣＡＧＣＡＴＴＧＣＣＣＴＧＴＧＣＣＡＣＣＣＡＧＣＡＣＴＣＡＧＴＧＧＡＣＡＴＴＣＴＧＧＧＧＡＣＣＴＧＣＣＴＴＣＡＧＣＣＴＴＴＴＣＣＴＧＣＣＣＴＧＴＧＣＣＴＧＡＣＡＴＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＧＣＴＧＧＴＣＡＧＡＡＴＧＣＣＧＣＣＣＴＣＣＣＡＧＡＧＧＡＧＣＡＧＣＣＧＡＧＡＧＡＴＣＣＣＣＴＧＡＡＧＧＣＴＧＧＡＧＧＣＡＴＴＣＴＧＣＴＣＡＧＧＡＣＣＣＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＴＣＡＣＡＧＴＧＣＣＣＡＡＣＣＡＴＣＴＣＡＣＣＡＧＧＡＧＡＡＡＧＡＧＣＣＡＣＡＴＣＣＣＣＡＣＧＴＴＡＧＧＡＣＣＡＣＧＧＡＧＡＣＴＧＡＣＣＡＣＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＣＣＣＣＡＡＡＣＣＣＡＣＧＣＡＣＣＡＧＡＣＧＣＴＴＧＣＡＧＧＡＣＡＧＧＣＧＣＣＧＣＧＣＡＧＣＧＧＧＣＡＧＧＧＧＣＴＴＧＣＣＣＧＧＣＣＧＡＣＣＣＴＣＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＣＴＣＣＣＣＣＡＣＴＧＣＧＣＧＴＴＡＣＴＣＣＡＧＧＡＴＡＴＧＣＣＧＡＧＴＧＣＡＣＧＴＡＴＡＡＧＧＴＣＡＴＣＴＴＣＧＴＣＧＴＣＣＣＣＧＴＧＧＡＣＣＴＣＣＣＣＣＴＴＣＣＴＣＴＧＣＡＣＧＴＣＧＴＣＣＡＡＣＧＴＧＧＧＡＣＴＧＧＣＧＴＧＴＣＡＧＧＣＴＴＣＣＣＴＧＧＧＡＧＧＡＴＣＴＧＧＡＧＧＴＴＧＴＴＣＴＣＴＧＣＡＧＡＧＡＡＣＣＡＧＣＣＴＧＧＣＴＣＣＴＧＧＣＧＣＧＣＡＣＣＴＣＴＧＣＴＣＣＣＴＴＣＴＣＣＴＣＡＣＴＡＣＣＣＡＣＣＣＡＣＧＣＡＴＧＴＡＣＣＧＧＧＡＡＡＡＡＡＡＣＴＡＣＴＡＴＧＣＣＣＴＴＣＴＡＧＡＣＣＡＴＧＴＴＣＴＧＡＧＡＡＡＡＧＡＴＣＧＡＡＡＡＴＡＴＴＴＡＡＣＡＡＧＡＧＡＴＡＡＴＡＡＴＡＡＡＴＣＴＧＡＴＧＣＣＧＧＴＣＴＴＴＧＴＧＴＧＴＧＴＴＧＣＧＧＡ
例示的なヒトＶＥＧＦＲ－３アイソフォーム１前駆体アミノ酸配列（配列番号３７）
ＭＱＲＧＡＡＬＣＬＲＬＷＬＣＬＧＬＬＤＧＬＶＳＧＹＳＭＴＰＰＴＬＮＩＴＥＥＳＨＶＩＤＴＧＤＳＬＳＩＳＣＲＧＱＨＰＬＥＷＡＷＰＧＡＱＥＡＰＡＴＧＤＫＤＳＥＤＴＧＶＶＲＤＣＥＧＴＤＡＲＰＹＣＫＶＬＬＬＨＥＶＨＡＮＤＴＧＳＹＶＣＹＹＫＹＩＫＡＲＩＥＧＴＴＡＡＳＳＹＶＦＶＲＤＦＥＱＰＦＩＮＫＰＤＴＬＬＶＮＲＫＤＡＭＷＶＰＣＬＶＳＩＰＧＬＮＶＴＬＲＳＱＳＳＶＬＷＰＤＧＱＥＶＶＷＤＤＲＲＧＭＬＶＳＴＰＬＬＨＤＡＬＹＬＱＣＥＴＴＷＧＤＱＤＦＬＳＮＰＦＬＶＨＩＴＧＮＥＬＹＤＩＱＬＬＰＲＫＳＬＥＬＬＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＶＷＡＥＦＮＳＧＶＴＦＤＷＤＹＰＧＫＱＡＥＲＧＫＷＶＰＥＲＲＳＱＱＴＨＴＥＬＳＳＩＬＴＩＨＮＶＳＱＨＤＬＧＳＹＶＣＫＡＮＮＧＩＱＲＦＲＥＳＴＥＶＩＶＨＥＮＰＦＩＳＶＥＷＬＫＧＰＩＬＥＡＴＡＧＤＥＬＶＫＬＰＶＫＬＡＡＹＰＰＰＥＦＱＷＹＫＤＧＫＡＬＳＧＲＨＳＰＨＡＬＶＬＫＥＶＴＥＡＳＴＧＴＹＴＬＡＬＷＮＳＡＡＧＬＲＲＮＩＳＬＥＬＶＶＮＶＰＰＱＩＨＥＫＥＡＳＳＰＳＩＹＳＲＨＳＲＱＡＬＴＣＴＡＹＧＶＰＬＰＬＳＩＱＷＨＷＲＰＷＴＰＣＫＭＦＡＱＲＳＬＲＲＲＱＱＱＤＬＭＰＱＣＲＤＷＲＡＶＴＴＱＤＡＶＮＰＩＥＳＬＤＴＷＴＥＦＶＥＧＫＮＫＴＶＳＫＬＶＩＱＮＡＮＶＳＡＭＹＫＣＶＶＳＮＫＶＧＱＤＥＲＬＩＹＦＹＶＴＴＩＰＤＧＦＴＩＥＳＫＰＳＥＥＬＬＥＧＱＰＶＬＬＳＣＱＡＤＳＹＫＹＥＨＬＲＷＹＲＬＮＬＳＴＬＨＤＡＨＧＮＰＬＬＬＤＣＫＮＶＨＬＦＡＴＰＬＡＡＳＬＥＥＶＡＰＧＡＲＨＡＴＬＳＬＳＩＰＲＶＡＰＥＨＥＧＨＹＶＣＥＶＱＤＲＲＳＨＤＫＨＣＨＫＫＹＬＳＶＱＡＬＥＡＰＲＬＴＱＮＬＴＤＬＬＶＮＶＳＤＳＬＥＭＱＣＬＶＡＧＡＨＡＰＳＩＶＷＹＫＤＥＲＬＬＥＥＫＳＧＶＤＬＡＤＳＮＱＫＬＳＩＱＲＶＲＥＥＤＡＧＲＹＬＣＳＶＣＮＡＫＧＣＶＮＳＳＡＳＶＡＶＥＧＳＥＤＫＧＳＭＥＩＶＩＬＶＧＴＧＶＩＡＶＦＦＷＶＬＬＬＬＩＦＣＮＭＲＲＰＡＨＡＤＩＫＴＧＹＬＳＩＩＭＤＰＧＥＶＰＬＥＥＱＣＥＹＬＳＹＤＡＳＱＷＥＦＰＲＥＲＬＨＬＧＲＶＬＧＹＧＡＦＧＫＶＶＥＡＳＡＦＧＩＨＫＧＳＳＣＤＴＶＡＶＫＭＬＫＥＧＡＴＡＳＥＨＲＡＬＭＳＥＬＫＩＬＩＨＩＧＮＨＬＮＶＶＮＬＬＧＡＣＴＫＰＱＧＰＬＭＶＩＶＥＦＣＫＹＧＮＬＳＮＦＬＲＡＫＲＤＡＦＳＰＣＡＥＫＳＰＥＱＲＧＲＦＲＡＭＶＥＬＡＲＬＤＲＲＲＰＧＳＳＤＲＶＬＦＡＲＦＳＫＴＥＧＧＡＲＲＡＳＰＤＱＥＡＥＤＬＷＬＳＰＬＴＭＥＤＬＶＣＹＳＦＱＶＡＲＧＭＥＦＬＡＳＲＫＣＩＨＲＤＬＡＡＲＮＩＬＬＳＥＳＤＶＶＫＩＣＤＦＧＬＡＲＤＩＹＫＤＰＤＹＶＲＫＧＳＡＲＬＰＬＫＷＭＡＰＥＳＩＦＤＫＶＹＴＴＱＳＤＶＷＳＦＧＶＬＬＷＥＩＦＳＬＧＡＳＰＹＰＧＶＱＩＮＥＥＦＣＱＲＬＲＤＧＴＲＭＲＡＰＥＬＡＴＰＡＩＲＲＩＭＬＮＣＷＳＧＤＰＫＡＲＰＡＦＳＥＬＶＥＩＬＧＤＬＬＱＧＲＧＬＱＥＥＥＥＶＣＭＡＰＲＳＳＱＳＳＥＥＧＳＦＳＱＶＳＴＭＡＬＨＩＡＱＡＤＡＥＤＳＰＰＳＬＱＲＨＳＬＡＡＲＹＹＮＷＶＳＦＰＧＣＬＡＲＧＡＥＴＲＧＳＳＲＭＫＴＦＥＥＦＰＭＴＰＴＴＹＫＧＳＶＤＮＱＴＤＳＧＭＶＬＡＳＥＥＦＥＱＩＥＳＲＨＲＱＥＳＧＦＳＣＫＧＰＧＱＮＶＡＶＴＲＡＨＰＤＳＱＧＲＲＲＲＰＥＲＧＡＲＧＧＱＶＦＹＮＳＥＹＧＥＬＳＥＰＳＥＥＤＨＣＳＰＳＡＲＶＴＦＦＴＤＮＳＹ
このバリアント（２）は、バリアント１と比較して、選択的３’末端エクソンを含む。その結果、アイソフォーム（２）はアイソフォーム１と比較してＣ末端が短くなっている。
例示的なヒトＶＥＧＦＲ－３アイソフォーム２ ｃＤＮＡ配列（配列番号３８）
ＡＣＴＴＴＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＣＣＧＣＧＧＣＣＧＣＴＣＧＧＧＴＣＧＧＡＣＣＣＡＣＧＣＧＣＡＧＣＧＧＣＣＧＧＡＧＡＴＧＣＡＧＣＧＧＧＧＣＧＣＣＧＣＧＣＴＧＴＧＣＣＴＧＣＧＡＣＴＧＴＧＧＣＴＣＴＧＣＣＴＧＧＧＡＣＴＣＣＴＧＧＡＣＧＧＣＣＴＧＧＴＧＡＧＴＧＧＣＴＡＣＴＣＣＡＴＧＡＣＣＣＣＣＣＣＧＡＣＣＴＴＧＡＡＣＡＴＣＡＣＧＧＡＧＧＡＧＴＣＡＣＡＣＧＴＣＡＴＣＧＡＣＡＣＣＧＧＴＧＡＣＡＧＣＣＴＧＴＣＣＡＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＣＣＣＴＣＧＡＧＴＧＧＧＣＴＴＧＧＣＣＡＧＧＡＧＣＴＣＡＧＧＡＧＧＣＧＣＣＡＧＣＣＡＣＣＧＧＡＧＡＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＧＧＧＴＧＧＴＧＣＧＡＧＡＣＴＧＣＧＡＧＧＧＣＡＣＡＧＡＣＧＣＣＡＧＧＣＣＣＴＡＣＴＧＣＡＡＧＧＴＧＴＴＧＣＴＧＣＴＧＣＡＣＧＡＧＧＴＡＣＡＴＧＣＣＡＡＣＧＡＣＡＣＡＧＧＣＡＧＣＴＡＣＧＴＣＴＧＣＴＡＣＴＡＣＡＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＧＣＡＣＧＣＡＴＣＧＡＧＧＧＣＡＣＣＡＣＧＧＣＣＧＣＣＡＧＣＴＣＣＴＡＣＧＴＧＴＴＣＧＴＧＡＧＡＧＡＣＴＴＴＧＡＧＣＡＧＣＣＡＴＴＣＡＴＣＡＡＣＡＡＧＣＣＴＧＡＣＡＣＧＣＴＣＴＴＧＧＴＣＡＡＣＡＧＧＡＡＧＧＡＣＧＣＣＡＴＧＴＧＧＧＴＧＣＣＣＴＧＴＣＴＧＧＴＧＴＣＣＡＴＣＣＣＣＧＧＣＣＴＣＡＡＴＧＴＣＡＣＧＣＴＧＣＧＣＴＣＧＣＡＡＡＧＣＴＣＧＧＴＧＣＴＧＴＧＧＣＣＡＧＡＣＧＧＧＣＡＧＧＡＧＧＴＧＧＴＧＴＧＧＧＡＴＧＡＣＣＧＧＣＧＧＧＧＣＡＴＧＣＴＣＧＴＧＴＣＣＡＣＧＣＣＡＣＴＧＣＴＧＣＡＣＧＡＴＧＣＣＣＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＴＧＣＧＡＧＡＣＣＡＣＣＴＧＧＧＧＡＧＡＣＣＡＧＧＡＣＴＴＣＣＴＴＴＣＣＡＡＣＣＣＣＴＴＣＣＴＧＧＴＧＣＡＣＡＴＣＡＣＡＧＧＣＡＡＣＧＡＧＣＴＣＴＡＴＧＡＣＡＴＣＣＡＧＣＴＧＴＴＧＣＣＣＡＧＧＡＡＧＴＣＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＴＧＧＴＡＧＧＧＧＡＧＡＡＧＣＴＧＧＴＣＣＴＧＡＡＣＴＧＣＡＣＣＧＴＧＴＧＧＧＣＴＧＡＧＴＴＴＡＡＣＴＣＡＧＧＴＧＴＣＡＣＣＴＴＴＧＡＣＴＧＧＧＡＣＴＡＣＣＣＡＧＧＧＡＡＧＣＡＧＧＣＡＧＡＧＣＧＧＧＧＴＡＡＧＴＧＧＧＴＧＣＣＣＧＡＧＣＧＡＣＧＣＴＣＣＣＡＧＣＡＧＡＣＣＣＡＣＡＣＡＧＡＡＣＴＣＴＣＣＡＧＣＡＴＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＣＡＣＡＡＣＧＴＣＡＧＣＣＡＧＣＡＣＧＡＣＣＴＧＧＧＣＴＣＧＴＡＴＧＴＧＴＧＣＡＡＧＧＣＣＡＡＣＡＡＣＧＧＣＡＴＣＣＡＧＣＧＡＴＴＴＣＧＧＧＡＧＡＧＣＡＣＣＧＡＧＧＴＣＡＴＴＧＴＧＣＡＴＧＡＡＡＡＴＣＣＣＴＴＣＡＴＣＡＧＣＧＴＣＧＡＧＴＧＧＣＴＣＡＡＡＧＧＡＣＣＣＡＴＣＣＴＧＧＡＧＧＣＣＡＣＧＧＣＡＧＧＡＧＡＣＧＡＧＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＴＧＣＣＣＧＴＧＡＡＧＣＴＧＧＣＡＧＣＧＴＡＣＣＣＣＣＣＧＣＣＣＧＡＧＴＴＣＣＡＧＴＧＧＴＡＣＡＡＧＧＡＴＧＧＡＡＡＧＧＣＡＣＴＧＴＣＣＧＧＧＣＧＣＣＡＣＡＧＴＣＣＡＣＡＴＧＣＣＣＴＧＧＴＧＣＴＣＡＡＧＧＡＧＧＴＧＡＣＡＧＡＧＧＣＣＡＧＣＡＣＡＧＧＣＡＣＣＴＡＣＡＣＣＣＴＣＧＣＣＣＴＧＴＧＧＡＡＣＴＣＣＧＣＴＧＣＴＧＧＣＣＴＧＡＧＧＣＧＣＡＡＣＡＴＣＡＧＣＣＴＧＧＡＧＣＴＧＧＴＧＧＴＧＡＡＴＧＴＧＣＣＣＣＣＣＣＡＧＡＴＡＣＡＴＧＡＧＡＡＧＧＡＧＧＣＣＴＣＣＴＣＣＣＣＣＡＧＣＡＴＣＴＡＣＴＣＧＣＧＴＣＡＣＡＧＣＣＧＣＣＡＧＧＣＣＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＧＧＣＣＴＡＣＧＧＧＧＴＧＣＣＣＣＴＧＣＣＴＣＴＣＡＧＣＡＴＣＣＡＧＴＧＧＣＡＣＴＧＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＡＣＡＣＣＣＴＧＣＡＡＧＡＴＧＴＴＴＧＣＣＣＡＧＣＧＴＡＧＴＣＴＣＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＡＧＣＡＧＣＡＡＧＡＣＣＴＣＡＴＧＣＣＡＣＡＧＴＧＣＣＧＴＧＡＣＴＧＧＡＧＧＧＣＧＧＴＧＡＣＣＡＣＧＣＡＧＧＡＴＧＣＣＧＴＧＡＡＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＧＣＣＴＧＧＡＣＡＣＣＴＧＧＡＣＣＧＡＧＴＴＴＧＴＧＧＡＧＧＧＡＡＡＧＡＡＴＡＡＧＡＣＴＧＴＧＡＧＣＡＡＧＣＴＧＧＴＧＡＴＣＣＡＧＡＡＴＧＣＣＡＡＣＧＴＧＴＣＴＧＣＣＡＴＧＴＡＣＡＡＧＴＧＴＧＴＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＧＧＴＧＧＧＣＣＡＧＧＡＴＧＡＧＣＧＧＣＴＣＡＴＣＴＡＣＴＴＣＴＡＴＧＴＧＡＣＣＡＣＣＡＴＣＣＣＣＧＡＣＧＧＣＴＴＣＡＣＣＡＴＣＧＡＡＴＣＣＡＡＧＣＣＡＴＣＣＧＡＧＧＡＧＣＴＡＣＴＡＧＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＧＧＴＧＣＴＣＣＴＧＡＧＣＴＧＣＣＡＡＧＣＣＧＡＣＡＧＣＴＡＣＡＡＧＴＡＣＧＡＧＣＡＴＣＴＧＣＧＣＴＧＧＴＡＣＣＧＣＣＴＣＡＡＣＣＴＧＴＣＣＡＣＧＣＴＧＣＡＣＧＡＴＧＣＧＣＡＣＧＧＧＡＡＣＣＣＧＣＴＴＣＴＧＣＴＣＧＡＣＴＧＣＡＡＧＡＡＣＧＴＧＣＡＴＣＴＧＴＴＣＧＣＣＡＣＣＣＣＴＣＴＧＧＣＣＧＣＣＡＧＣＣＴＧＧＡＧＧＡＧＧＴＧＧＣＡＣＣＴＧＧＧＧＣＧＣＧＣＣＡＣＧＣＣＡＣＧＣＴＣＡＧＣＣＴＧＡＧＴＡＴＣＣＣＣＣＧＣＧＴＣＧＣＧＣＣＣＧＡＧＣＡＣＧＡＧＧＧＣＣＡＣＴＡＴＧＴＧＴＧＣＧＡＡＧＴＧＣＡＡＧＡＣＣＧＧＣＧＣＡＧＣＣＡＴＧＡＣＡＡＧＣＡＣＴＧＣＣＡＣＡＡＧＡＡＧＴＡＣＣＴＧＴＣＧＧＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＧＡＡＧＣＣＣＣＴＣＧＧＣＴＣＡＣＧＣＡＧＡＡＣＴＴＧＡＣＣＧＡＣＣＴＣＣＴＧＧＴＧＡＡＣＧＴＧＡＧＣＧＡＣＴＣＧＣＴＧＧＡＧＡＴＧＣＡＧＴＧＣＴＴＧＧＴＧＧＣＣＧＧＡＧＣＧＣＡＣＧＣＧＣＣＣＡＧＣＡＴＣＧＴＧＴＧＧＴＡＣＡＡＡＧＡＣＧＡＧＡＧＧＣＴＧＣＴＧＧＡＧＧＡＡＡＡＧＴＣＴＧＧＡＧＴＣＧＡＣＴＴＧＧＣＧＧＡＣＴＣＣＡＡＣＣＡＧＡＡＧＣＴＧＡＧＣＡＴＣＣＡＧＣＧＣＧＴＧＣＧＣＧＡＧＧＡＧＧＡＴＧＣＧＧＧＡＣＧＣＴＡＴＣＴＧＴＧＣＡＧＣＧＴＧＴＧＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＧＧＣＴＧＣＧＴＣＡＡＣＴＣＣＴＣＣＧＣＣＡＧＣＧＴＧＧＣＣＧＴＧＧＡＡＧＧＣＴＣＣＧＡＧＧＡＴＡＡＧＧＧＣＡＧＣＡＴＧＧＡＧＡＴＣＧＴＧＡＴＣＣＴＴＧＴＣＧＧＴＡＣＣＧＧＣＧＴＣＡＴＣＧＣＴＧＴＣＴＴＣＴＴＣＴＧＧＧＴＣＣＴＣＣＴＣＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＴＣＴＧＴＡＡＣＡＴＧＡＧＧＡＧＧＣＣＧＧＣＣＣＡＣＧＣＡＧＡＣＡＴＣＡＡＧＡＣＧＧＧＣＴＡＣＣＴＧＴＣＣＡＴＣＡＴＣＡＴＧＧＡＣＣＣＣＧＧＧＧＡＧＧＴＧＣＣＴＣＴＧＧＡＧＧＡＧＣＡＡＴＧＣＧＡＡＴＡＣＣＴＧＴＣＣＴＡＣＧＡＴＧＣＣＡＧＣＣＡＧＴＧＧＧＡＡＴＴＣＣＣＣＣＧＡＧＡＧＣＧＧＣＴＧＣＡＣＣＴＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＣＴＣＧＧＣＴＡＣＧＧＣＧＣＣＴＴＣＧＧＧＡＡＧＧＴＧＧＴＧＧＡＡＧＣＣＴＣＣＧＣＴＴＴＣＧＧＣＡＴＣＣＡＣＡＡＧＧＧＣＡＧＣＡＧＣＴＧＴＧＡＣＡＣＣＧＴＧＧＣＣＧＴＧＡＡＡＡＴＧＣＴＧＡＡＡＧＡＧＧＧＣＧＣＣＡＣＧＧＣＣＡＧＣＧＡＧＣＡＣＣＧＣＧＣＧＣＴＧＡＴＧＴＣＧＧＡＧＣＴＣＡＡＧＡＴＣＣＴＣＡＴＴＣＡＣＡＴＣＧＧＣＡＡＣＣＡＣＣＴＣＡＡＣＧＴＧＧＴＣＡＡＣＣＴＣＣＴＣＧＧＧＧＣＧＴＧＣＡＣＣＡＡＧＣＣＧＣＡＧＧＧＣＣＣＣＣＴＣＡＴＧＧＴＧＡＴＣＧＴＧＧＡＧＴＴＣＴＧＣＡＡＧＴＡＣＧＧＣＡＡＣＣＴＣＴＣＣＡＡＣＴＴＣＣＴＧＣＧＣＧＣＣＡＡＧＣＧＧＧＡＣＧＣＣＴＴＣＡＧＣＣＣＣＴＧＣＧＣＧＧＡＧＡＡＧＴＣＴＣＣＣＧＡＧＣＡＧＣＧＣＧＧＡＣＧＣＴＴＣＣＧＣＧＣＣＡＴＧＧＴＧＧＡＧＣＴＣＧＣＣＡＧＧＣＴＧＧＡＴＣＧＧＡＧＧＣＧＧＣＣＧＧＧＧＡＧＣＡＧＣＧＡＣＡＧＧＧＴＣＣＴＣＴＴＣＧＣＧＣＧＧＴＴＣＴＣＧＡＡＧＡＣＣＧＡＧＧＧＣＧＧＡＧＣＧＡＧＧＣＧＧＧＣＴＴＣＴＣＣＡＧＡＣＣＡＡＧＡＡＧＣＴＧＡＧＧＡＣＣＴＧＴＧＧＣＴＧＡＧＣＣＣＧＣＴＧＡＣＣＡＴＧＧＡＡＧＡＴＣＴＴＧＴＣＴＧＣＴＡＣＡＧＣＴＴＣＣＡＧＧＴＧＧＣＣＡＧＡＧＧＧＡＴＧＧＡＧＴＴＣＣＴＧＧＣＴＴＣＣＣＧＡＡＡＧＴＧＣＡＴＣＣＡＣＡＧＡＧＡＣＣＴＧＧＣＴＧＣＴＣＧＧＡＡＣＡＴＴＣＴＧＣＴＧＴＣＧＧＡＡＡＧＣＧＡＣＧＴＧＧＴＧＡＡＧＡＴＣＴＧＴＧＡＣＴＴＴＧＧＣＣＴＴＧＣＣＣＧＧＧＡＣＡＴＣＴＡＣＡＡＡＧＡＣＣＣＣＧＡＣＴＡＣＧＴＣＣＧＣＡＡＧＧＧＣＡＧＴＧＣＣＣＧＧＣＴＧＣＣＣＣＴＧＡＡＧＴＧＧＡＴＧＧＣＣＣＣＴＧＡＡＡＧＣＡＴＣＴＴＣＧＡＣＡＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＡＣＧＣＡＧＡＧＴＧＡＣＧＴＧＴＧＧＴＣＣＴＴＴＧＧＧＧＴＧＣＴＴＣＴＣＴＧＧＧＡＧＡＴＣＴＴＣＴＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＣＴＣＣＣＣＧＴＡＣＣＣＴＧＧＧＧＴＧＣＡＧＡＴＣＡＡＴＧＡＧＧＡＧＴＴＣＴＧＣＣＡＧＣＧＧＣＴＧＡＧＡＧＡＣＧＧＣＡＣＡＡＧＧＡＴＧＡＧＧＧＣＣＣＣＧＧＡＧＣＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＧＣＣＡＴＡＣＧＣＣＧＣＡＴＣＡＴＧＣＴＧＡＡＣＴＧＣＴＧＧＴＣＣＧＧＡＧＡＣＣＣＣＡＡＧＧＣＧＡＧＡＣＣＴＧＣＡＴＴＣＴＣＧＧＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＣＴＧＧＧＧＧＡＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＧＧＣＡＧＧＧＧＣＣＴＧＣＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＧＧＡＧＧＴＣＴＧＣＡＴＧＧＣＣＣＣＧＣＧＣＡＧＣＴＣＴＣＡＧＡＧＣＴＣＡＧＡＡＧＡＧＧＧＣＡＧＣＴＴＣＴＣＧＣＡＧＧＴＧＴＣＣＡＣＣＡＴＧＧＣＣＣＴＡＣＡＣＡＴＣＧＣＣＣＡＧＧＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＧＡＣＡＧＣＣＣＧＣＣＡＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＧＣＣＡＣＡＧＣＣＴＧＧＣＣＧＣＣＡＧＧＴＡＴＴＡＣＡＡＣＴＧＧＧＴＧＴＣＣＴＴＴＣＣＣＧＧＧＴＧＣＣＴＧＧＣＣＡＧＡＧＧＧＧＣＴＧＡＧＡＣＣＣＧＴＧＧＴＴＣＣＴＣＣＡＧＧＡＴＧＡＡＧＡＣＡＴＴＴＧＡＧＧＡＡＴＴＣＣＣＣＡＴＧＡＣＣＣＣＡＡＣＧＡＣＣＴＡＣＡＡＡＧＧＣＴＣＴＧＴＧＧＡＣＡＡＣＣＡＧＡＣＡＧＡＣＡＧＴＧＧＧＡＴＧＧＴＧＣＴＧＧＣＣＴＣＧＧＡＧＧＡＧＴＴＴＧＡＧＣＡＧＡＴＡＧＡＧＡＧＣＡＧＧＣＡＴＡＧＡＣＡＡＧＡＡＡＧＣＧＧＣＴＴＣＡＧＧＴＡＧＣＴＧＡＡＧＣＡＧＡＧＡＧＡＧＡＧＡＡＧＧＣＡＧＣＡＴＡＣＧＴＣＡＧＣＡＴＴＴＴＣＴＴＣＴＣＴＧＣＡＣＴＴＡＴＡＡＧＡＡＡＧＡＴＣＡＡＡＧＡＣＴＴＴＡＡＧＡＣＴＴＴＣＧＣＴＡＴＴＴＣＴＴＣＴＡＣＴＧＣＴＡＴＣＴＡＣＴＡＣＡＡＡＣＴＴＣＡＡＡＧＡＧＧＡＡＣＣＡＧＧＡＧＧＡＣＡＡＧＡＧＧＡＧＣＡＴＧＡＡＡＧＴＧＧＡＣＡＡＧＧＡＧＴＧＴＧＡＣＣＡＣＴＧＡＡＧＣＡＣＣＡＣＡＧＧＧＡＧＧＧＧＴＴＡＧＧＣＣＴＣＣＧＧＡＴＧＡＣＴＧＣＧＧＧＣＡＧＧＣＣＴＧＧＡＴＡＡＴＡＴＣＣＡＧＣＣＴＣＣＣＡＣＡＡＧＡＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＣＡＧＡＧＴＧＴＴＣＣＣＴＧＡＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＧＡＡＡＧＧＧＡＧＡＣＧＣＣＣＴＴＴＣＡＴＧＧＴＣＴＧＣＴＧＡＧＴＡＡＣＡＧＧＴＧＣＣＴＴＣＣＣＡＧＡＣＡＣＴＧＧＣＧＴＴＡＣＴＧＣＴＴＧＡＣＣＡＡＡＧＡＧＣＣＣＴＣＡＡＧＣＧＧＣＣＣＴＴＡＴＧＣＣＡＧＣＧＴＧＡＣＡＧＡＧＧＧＣＴＣＡＣＣＴＣＴＴＧＣＣＴＴＣＴＡＧＧＴＣＡＣＴＴＣＴＣＡＣＡＡＴＧＴＣＣＣＴＴＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＣＣＣＴＧＴＧＣＣＣＡＣＣＡＧＴＴＡＴＴＣＣＴＴＧＧＴＡＡＴＡＴＧＡＧＴＡＡＴＡＣＡＴＣＡＡＡＧＡＧＴＡＧＴＡＴＴＡＡＡＡＧＣＴＡＡＴＴＡＡＴＣＡＴＧＴＴＴＡＴＡＣＴＡＡ
例示的なヒトＶＥＧＦＲ－３アイソフォーム１前駆体アミノ酸配列（配列番号３９）
ＭＱＲＧＡＡＬＣＬＲＬＷＬＣＬＧＬＬＤＧＬＶＳＧＹＳＭＴＰＰＴＬＮＩＴＥＥＳＨＶＩＤＴＧＤＳＬＳＩＳＣＲＧＱＨＰＬＥＷＡＷＰＧＡＱＥＡＰＡＴＧＤＫＤＳＥＤＴＧＶＶＲＤＣＥＧＴＤＡＲＰＹＣＫＶＬＬＬＨＥＶＨＡＮＤＴＧＳＹＶＣＹＹＫＹＩＫＡＲＩＥＧＴＴＡＡＳＳＹＶＦＶＲＤＦＥＱＰＦＩＮＫＰＤＴＬＬＶＮＲＫＤＡＭＷＶＰＣＬＶＳＩＰＧＬＮＶＴＬＲＳＱＳＳＶＬＷＰＤＧＱＥＶＶＷＤＤＲＲＧＭＬＶＳＴＰＬＬＨＤＡＬＹＬＱＣＥＴＴＷＧＤＱＤＦＬＳＮＰＦＬＶＨＩＴＧＮＥＬＹＤＩＱＬＬＰＲＫＳＬＥＬＬＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＶＷＡＥＦＮＳＧＶＴＦＤＷＤＹＰＧＫＱＡＥＲＧＫＷＶＰＥＲＲＳＱＱＴＨＴＥＬＳＳＩＬＴＩＨＮＶＳＱＨＤＬＧＳＹＶＣＫＡＮＮＧＩＱＲＦＲＥＳＴＥＶＩＶＨＥＮＰＦＩＳＶＥＷＬＫＧＰＩＬＥＡＴＡＧＤＥＬＶＫＬＰＶＫＬＡＡＹＰＰＰＥＦＱＷＹＫＤＧＫＡＬＳＧＲＨＳＰＨＡＬＶＬＫＥＶＴＥＡＳＴＧＴＹＴＬＡＬＷＮＳＡＡＧＬＲＲＮＩＳＬＥＬＶＶＮＶＰＰＱＩＨＥＫＥＡＳＳＰＳＩＹＳＲＨＳＲＱＡＬＴＣＴＡＹＧＶＰＬＰＬＳＩＱＷＨＷＲＰＷＴＰＣＫＭＦＡＱＲＳＬＲＲＲＱＱＱＤＬＭＰＱＣＲＤＷＲＡＶＴＴＱＤＡＶＮＰＩＥＳＬＤＴＷＴＥＦＶＥＧＫＮＫＴＶＳＫＬＶＩＱＮＡＮＶＳＡＭＹＫＣＶＶＳＮＫＶＧＱＤＥＲＬＩＹＦＹＶＴＴＩＰＤＧＦＴＩＥＳＫＰＳＥＥＬＬＥＧＱＰＶＬＬＳＣＱＡＤＳＹＫＹＥＨＬＲＷＹＲＬＮＬＳＴＬＨＤＡＨＧＮＰＬＬＬＤＣＫＮＶＨＬＦＡＴＰＬＡＡＳＬＥＥＶＡＰＧＡＲＨＡＴＬＳＬＳＩＰＲＶＡＰＥＨＥＧＨＹＶＣＥＶＱＤＲＲＳＨＤＫＨＣＨＫＫＹＬＳＶＱＡＬＥＡＰＲＬＴＱＮＬＴＤＬＬＶＮＶＳＤＳＬＥＭＱＣＬＶＡＧＡＨＡＰＳＩＶＷＹＫＤＥＲＬＬＥＥＫＳＧＶＤＬＡＤＳＮＱＫＬＳＩＱＲＶＲＥＥＤＡＧＲＹＬＣＳＶＣＮＡＫＧＣＶＮＳＳＡＳＶＡＶＥＧＳＥＤＫＧＳＭＥＩＶＩＬＶＧＴＧＶＩＡＶＦＦＷＶＬＬＬＬＩＦＣＮＭＲＲＰＡＨＡＤＩＫＴＧＹＬＳＩＩＭＤＰＧＥＶＰＬＥＥＱＣＥＹＬＳＹＤＡＳＱＷＥＦＰＲＥＲＬＨＬＧＲＶＬＧＹＧＡＦＧＫＶＶＥＡＳＡＦＧＩＨＫＧＳＳＣＤＴＶＡＶＫＭＬＫＥＧＡＴＡＳＥＨＲＡＬＭＳＥＬＫＩＬＩＨＩＧＮＨＬＮＶＶＮＬＬＧＡＣＴＫＰＱＧＰＬＭＶＩＶＥＦＣＫＹＧＮＬＳＮＦＬＲＡＫＲＤＡＦＳＰＣＡＥＫＳＰＥＱＲＧＲＦＲＡＭＶＥＬＡＲＬＤＲＲＲＰＧＳＳＤＲＶＬＦＡＲＦＳＫＴＥＧＧＡＲＲＡＳＰＤＱＥＡＥＤＬＷＬＳＰＬＴＭＥＤＬＶＣＹＳＦＱＶＡＲＧＭＥＦＬＡＳＲＫＣＩＨＲＤＬＡＡＲＮＩＬＬＳＥＳＤＶＶＫＩＣＤＦＧＬＡＲＤＩＹＫＤＰＤＹＶＲＫＧＳＡＲＬＰＬＫＷＭＡＰＥＳＩＦＤＫＶＹＴＴＱＳＤＶＷＳＦＧＶＬＬＷＥＩＦＳＬＧＡＳＰＹＰＧＶＱＩＮＥＥＦＣＱＲＬＲＤＧＴＲＭＲＡＰＥＬＡＴＰＡＩＲＲＩＭＬＮＣＷＳＧＤＰＫＡＲＰＡＦＳＥＬＶＥＩＬＧＤＬＬＱＧＲＧＬＱＥＥＥＥＶＣＭＡＰＲＳＳＱＳＳＥＥＧＳＦＳＱＶＳＴＭＡＬＨＩＡＱＡＤＡＥＤＳＰＰＳＬＱＲＨＳＬＡＡＲＹＹＮＷＶＳＦＰＧＣＬＡＲＧＡＥＴＲＧＳＳＲＭＫＴＦＥＥＦＰＭＴＰＴＴＹＫＧＳＶＤＮＱＴＤＳＧＭＶＬＡＳＥＥＦＥＱＩＥＳＲＨＲＱＥＳＧＦＲ
このバリアント（３）は、バリアント１と比較して、選択的３’末端エクソンを含む。その結果、アイソフォーム（３）はアイソフォーム１と比較してＣ末端が短くなっている。
例示的なヒトＶＥＧＦＲ－３アイソフォーム２ ｃＤＮＡ配列（配列番号４０）
ＡＣＴＴＴＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＣＣＧＣＧＧＣＣＧＣＴＣＧＧＧＴＣＧＧＡＣＣＣＡＣＧＣＧＣＡＧＣＧＧＣＣＧＧＡＧＡＴＧＣＡＧＣＧＧＧＧＣＧＣＣＧＣＧＣＴＧＴＧＣＣＴＧＣＧＡＣＴＧＴＧＧＣＴＣＴＧＣＣＴＧＧＧＡＣＴＣＣＴＧＧＡＣＧＧＣＣＴＧＧＴＧＡＧＴＧＧＣＴＡＣＴＣＣＡＴＧＡＣＣＣＣＣＣＣＧＡＣＣＴＴＧＡＡＣＡＴＣＡＣＧＧＡＧＧＡＧＴＣＡＣＡＣＧＴＣＡＴＣＧＡＣＡＣＣＧＧＴＧＡＣＡＧＣＣＴＧＴＣＣＡＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＧＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＣＣＣＴＣＧＡＧＴＧＧＧＣＴＴＧＧＣＣＡＧＧＡＧＣＴＣＡＧＧＡＧＧＣＧＣＣＡＧＣＣＡＣＣＧＧＡＧＡＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＧＧＧＴＧＧＴＧＣＧＡＧＡＣＴＧＣＧＡＧＧＧＣＡＣＡＧＡＣＧＣＣＡＧＧＣＣＣＴＡＣＴＧＣＡＡＧＧＴＧＴＴＧＣＴＧＣＴＧＣＡＣＧＡＧＧＴＡＣＡＴＧＣＣＡＡＣＧＡＣＡＣＡＧＧＣＡＧＣＴＡＣＧＴＣＴＧＣＴＡＣＴＡＣＡＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＧＣＡＣＧＣＡＴＣＧＡＧＧＧＣＡＣＣＡＣＧＧＣＣＧＣＣＡＧＣＴＣＣＴＡＣＧＴＧＴＴＣＧＴＧＡＧＡＧＡＣＴＴＴＧＡＧＣＡＧＣＣＡＴＴＣＡＴＣＡＡＣＡＡＧＣＣＴＧＡＣＡＣＧＣＴＣＴＴＧＧＴＣＡＡＣＡＧＧＡＡＧＧＡＣＧＣＣＡＴＧＴＧＧＧＴＧＣＣＣＴＧＴＣＴＧＧＴＧＴＣＣＡＴＣＣＣＣＧＧＣＣＴＣＡＡＴＧＴＣＡＣＧＣＴＧＣＧＣＴＣＧＣＡＡＡＧＣＴＣＧＧＴＧＣＴＧＴＧＧＣＣＡＧＡＣＧＧＧＣＡＧＧＡＧＧＴＧＧＴＧＴＧＧＧＡＴＧＡＣＣＧＧＣＧＧＧＧＣＡＴＧＣＴＣＧＴＧＴＣＣＡＣＧＣＣＡＣＴＧＣＴＧＣＡＣＧＡＴＧＣＣＣＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＴＧＣＧＡＧＡＣＣＡＣＣＴＧＧＧＧＡＧＡＣＣＡＧＧＡＣＴＴＣＣＴＴＴＣＣＡＡＣＣＣＣＴＴＣＣＴＧＧＴＧＣＡＣＡＴＣＡＣＡＧＧＣＡＡＣＧＡＧＣＴＣＴＡＴＧＡＣＡＴＣＣＡＧＣＴＧＴＴＧＣＣＣＡＧＧＡＡＧＴＣＧＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＴＧＧＴＡＧＧＧＧＡＧＡＡＧＣＴＧＧＴＣＣＴＧＡＡＣＴＧＣＡＣＣＧＴＧＴＧＧＧＣＴＧＡＧＴＴＴＡＡＣＴＣＡＧＧＴＧＴＣＡＣＣＴＴＴＧＡＣＴＧＧＧＡＣＴＡＣＣＣＡＧＧＧＡＡＧＣＡＧＧＣＡＧＡＧＣＧＧＧＧＴＡＡＧＴＧＧＧＴＧＣＣＣＧＡＧＣＧＡＣＧＣＴＣＣＣＡＧＣＡＧＡＣＣＣＡＣＡＣＡＧＡＡＣＴＣＴＣＣＡＧＣＡＴＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＣＡＣＡＡＣＧＴＣＡＧＣＣＡＧＣＡＣＧＡＣＣＴＧＧＧＣＴＣＧＴＡＴＧＴＧＴＧＣＡＡＧＧＣＣＡＡＣＡＡＣＧＧＣＡＴＣＣＡＧＣＧＡＴＴＴＣＧＧＧＡＧＡＧＣＡＣＣＧＡＧＧＴＣＡＴＴＧＴＧＣＡＴＧＡＡＡＡＴＣＣＣＴＴＣＡＴＣＡＧＣＧＴＣＧＡＧＴＧＧＣＴＣＡＡＡＧＧＡＣＣＣＡＴＣＣＴＧＧＡＧＧＣＣＡＣＧＧＣＡＧＧＡＧＡＣＧＡＧＣＴＧＧＴＧＡＡＧＣＴＧＣＣＣＧＴＧＡＡＧＣＴＧＧＣＡＧＣＧＴＡＣＣＣＣＣＣＧＣＣＣＧＡＧＴＴＣＣＡＧＴＧＧＴＡＣＡＡＧＧＡＴＧＧＡＡＡＧＧＣＡＣＴＧＴＣＣＧＧＧＣＧＣＣＡＣＡＧＴＣＣＡＣＡＴＧＣＣＣＴＧＧＴＧＣＴＣＡＡＧＧＡＧＧＴＧＡＣＡＧＡＧＧＣＣＡＧＣＡＣＡＧＧＣＡＣＣＴＡＣＡＣＣＣＴＣＧＣＣＣＴＧＴＧＧＡＡＣＴＣＣＧＣＴＧＣＴＧＧＣＣＴＧＡＧＧＣＧＣＡＡＣＡＴＣＡＧＣＣＴＧＧＡＧＣＴＧＧＴＧＧＴＧＡＡＴＧＴＧＣＣＣＣＣＣＣＡＧＡＴＡＣＡＴＧＡＧＡＡＧＧＡＧＧＣＣＴＣＣＴＣＣＣＣＣＡＧＣＡＴＣＴＡＣＴＣＧＣＧＴＣＡＣＡＧＣＣＧＣＣＡＧＧＣＣＣＴＣＡＣＣＴＧＣＡＣＧＧＣＣＴＡＣＧＧＧＧＴＧＣＣＣＣＴＧＣＣＴＣＴＣＡＧＣＡＴＣＣＡＧＴＧＧＣＡＣＴＧＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＡＣＡＣＣＣＴＧＣＡＡＧＡＴＧＴＴＴＧＣＣＣＡＧＣＧＴＡＧＴＣＴＣＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＡＧＣＡＧＣＡＡＧＡＣＣＴＣＡＴＧＣＣＡＣＡＧＴＧＣＣＧＴＧＡＣＴＧＧＡＧＧＧＣＧＧＴＧＡＣＣＡＣＧＣＡＧＧＡＴＧＣＣＧＴＧＡＡＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＧＣＣＴＧＧＡＣＡＣＣＴＧＧＡＣＣＧＡＧＴＴＴＧＴＧＧＡＧＧＧＡＡＡＧＡＡＴＡＡＧＡＣＴＧＴＧＡＧＣＡＡＧＣＴＧＧＴＧＡＴＣＣＡＧＡＡＴＧＣＣＡＡＣＧＴＧＴＣＴＧＣＣＡＴＧＴＡＣＡＡＧＴＧＴＧＴＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＧＧＴＧＧＧＣＣＡＧＧＡＴＧＡＧＣＧＧＣＴＣＡＴＣＴＡＣＴＴＣＴＡＴＧＴＧＡＣＣＡＣＣＡＴＣＣＣＣＧＡＣＧＧＣＴＴＣＡＣＣＡＴＣＧＡＡＴＣＣＡＡＧＣＣＡＴＣＣＧＡＧＧＡＧＣＴＡＣＴＡＧＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＧＧＴＧＣＴＣＣＴＧＡＧＣＴＧＣＣＡＡＧＣＣＧＡＣＡＧＣＴＡＣＡＡＧＴＡＣＧＡＧＣＡＴＣＴＧＣＧＣＴＧＧＴＡＣＣＧＣＣＴＣＡＡＣＣＴＧＴＣＣＡＣＧＣＴＧＣＡＣＧＡＴＧＣＧＣＡＣＧＧＧＡＡＣＣＣＧＣＴＴＣＴＧＣＴＣＧＡＣＴＧＣＡＡＧＡＡＣＧＴＧＣＡＴＣＴＧＴＴＣＧＣＣＡＣＣＣＣＴＣＴＧＧＣＣＧＣＣＡＧＣＣＴＧＧＡＧＧＡＧＧＴＧＧＣＡＣＣＴＧＧＧＧＣＧＣＧＣＣＡＣＧＣＣＡＣＧＣＴＣＡＧＣＣＴＧＡＧＴＡＴＣＣＣＣＣＧＣＧＴＣＧＣＧＣＣＣＧＡＧＣＡＣＧＡＧＧＧＣＣＡＣＴＡＴＧＴＧＴＧＣＧＡＡＧＴＧＣＡＡＧＡＣＣＧＧＣＧＣＡＧＣＣＡＴＧＡＣＡＡＧＣＡＣＴＧＣＣＡＣＡＡＧＡＡＧＴＡＣＣＴＧＴＣＧＧＴＧＣＡＧＧＣＣＣＴＧＧＡＡＧＣＣＣＣＴＣＧＧＣＴＣＡＣＧＣＡＧＡＡＣＴＴＧＡＣＣＧＡＣＣＴＣＣＴＧＧＴＧＡＡＣＧＴＧＡＧＣＧＡＣＴＣＧＣＴＧＧＡＧＡＴＧＣＡＧＴＧＣＴＴＧＧＴＧＧＣＣＧＧＡＧＣＧＣＡＣＧＣＧＣＣＣＡＧＣＡＴＣＧＴＧＴＧＧＴＡＣＡＡＡＧＡＣＧＡＧＡＧＧＣＴＧＣＴＧＧＡＧＧＡＡＡＡＧＴＣＴＧＧＡＧＴＣＧＡＣＴＴＧＧＣＧＧＡＣＴＣＣＡＡＣＣＡＧＡＡＧＣＴＧＡＧＣＡＴＣＣＡＧＣＧＣＧＴＧＣＧＣＧＡＧＧＡＧＧＡＴＧＣＧＧＧＡＣＧＣＴＡＴＣＴＧＴＧＣＡＧＣＧＴＧＴＧＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＧＧＣＴＧＣＧＴＣＡＡＣＴＣＣＴＣＣＧＣＣＡＧＣＧＴＧＧＣＣＧＴＧＧＡＡＧＧＣＴＣＣＧＡＧＧＡＴＡＡＧＧＧＣＡＧＣＡＴＧＧＡＧＡＴＣＧＴＧＡＴＣＣＴＴＧＴＣＧＧＴＡＣＣＧＧＣＧＴＣＡＴＣＧＣＴＧＴＣＴＴＣＴＴＣＴＧＧＧＴＣＣＴＣＣＴＣＣＴＣＣＴＣＡＴＣＴＴＣＴＧＴＡＡＣＡＴＧＡＧＧＡＧＧＣＣＧＧＣＣＣＡＣＧＣＡＧＡＣＡＴＣＡＡＧＡＣＧＧＧＣＴＡＣＣＴＧＴＣＣＡＴＣＡＴＣＡＴＧＧＡＣＣＣＣＧＧＧＧＡＧＧＴＧＣＣＴＣＴＧＧＡＧＧＡＧＣＡＡＴＧＣＧＡＡＴＡＣＣＴＧＴＣＣＴＡＣＧＡＴＧＣＣＡＧＣＣＡＧＴＧＧＧＡＡＴＴＣＣＣＣＣＧＡＧＡＧＣＧＧＣＴＧＣＡＣＣＴＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＣＴＣＧＧＣＴＡＣＧＧＣＧＣＣＴＴＣＧＧＧＡＡＧＧＴＧＧＴＧＧＡＡＧＣＣＴＣＣＧＣＴＴＴＣＧＧＣＡＴＣＣＡＣＡＡＧＧＧＣＡＧＣＡＧＣＴＧＴＧＡＣＡＣＣＧＴＧＧＣＣＧＴＧＡＡＡＡＴＧＣＴＧＡＡＡＧＡＧＧＧＣＧＣＣＡＣＧＧＣＣＡＧＣＧＡＧＣＡＣＣＧＣＧＣＧＣＴＧＡＴＧＴＣＧＧＡＧＣＴＣＡＡＧＡＴＣＣＴＣＡＴＴＣＡＣＡＴＣＧＧＣＡＡＣＣＡＣＣＴＣＡＡＣＧＴＧＧＴＣＡＡＣＣＴＣＣＴＣＧＧＧＧＣＧＴＧＣＡＣＣＡＡＧＣＣＧＣＡＧＧＧＣＣＣＣＣＴＣＡＴＧＧＴＧＡＴＣＧＴＧＧＡＧＴＴＣＴＧＣＡＡＧＴＡＣＧＧＣＡＡＣＣＴＣＴＣＣＡＡＣＴＴＣＣＴＧＣＧＣＧＣＣＡＡＧＣＧＧＧＡＣＧＣＣＴＴＣＡＧＣＣＣＣＴＧＣＧＣＧＧＡＧＡＡＧＴＣＴＣＣＣＧＡＧＣＡＧＣＧＣＧＧＡＣＧＣＴＴＣＣＧＣＧＣＣＡＴＧＧＴＧＧＡＧＣＴＣＧＣＣＡＧＧＣＴＧＧＡＴＣＧＧＡＧＧＣＧＧＣＣＧＧＧＧＡＧＣＡＧＣＧＡＣＡＧＧＧＴＣＣＴＣＴＴＣＧＣＧＣＧＧＴＴＣＴＣＧＡＡＧＡＣＣＧＡＧＧＧＣＧＧＡＧＣＧＡＧＧＣＧＧＧＣＴＴＣＴＣＣＡＧＡＣＣＡＡＧＡＡＧＣＴＧＡＧＧＡＣＣＴＧＴＧＧＣＴＧＡＧＣＣＣＧＣＴＧＡＣＣＡＴＧＧＡＡＧＡＴＣＴＴＧＴＣＴＧＣＴＡＣＡＧＣＴＴＣＣＡＧＧＴＧＧＣＣＡＧＡＧＧＧＡＴＧＧＡＧＴＴＣＣＴＧＧＣＴＴＣＣＣＧＡＡＡＧＴＧＣＡＴＣＣＡＣＡＧＡＧＡＣＣＴＧＧＣＴＧＣＴＣＧＧＡＡＣＡＴＴＣＴＧＣＴＧＴＣＧＧＡＡＡＧＣＧＡＣＧＴＧＧＴＧＡＡＧＡＴＣＴＧＴＧＡＣＴＴＴＧＧＣＣＴＴＧＣＣＣＧＧＧＡＣＡＴＣＴＡＣＡＡＡＧＡＣＣＣＣＧＡＣＴＡＣＧＴＣＣＧＣＡＡＧＧＧＣＡＧＴＧＣＣＣＧＧＣＴＧＣＣＣＣＴＧＡＡＧＴＧＧＡＴＧＧＣＣＣＣＴＧＡＡＡＧＣＡＴＣＴＴＣＧＡＣＡＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＡＣＧＣＡＧＡＧＴＧＡＣＧＴＧＴＧＧＴＣＣＴＴＴＧＧＧＧＴＧＣＴＴＣＴＣＴＧＧＧＡＧＡＴＣＴＴＣＴＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＣＴＣＣＣＣＧＴＡＣＣＣＴＧＧＧＧＴＧＣＡＧＡＴＣＡＡＴＧＡＧＧＡＧＴＴＣＴＧＣＣＡＧＣＧＧＣＴＧＡＧＡＧＡＣＧＧＣＡＣＡＡＧＧＡＴＧＡＧＧＧＣＣＣＣＧＧＡＧＣＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＧＣＣＡＴＡＣＧＣＣＧＣＡＴＣＡＴＧＣＴＧＡＡＣＴＧＣＴＧＧＴＣＣＧＧＡＧＡＣＣＣＣＡＡＧＧＣＧＡＧＡＣＣＴＧＣＡＴＴＣＴＣＧＧＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＣＴＧＧＧＧＧＡＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＧＧＣＡＧＧＧＧＣＣＴＧＣＡＡＧＡＧＧＡＡＧＡＧＧＡＧＧＴＣＴＧＣＡＴＧＧＣＣＣＣＧＣＧＣＡＧＣＴＣＴＣＡＧＡＧＣＴＣＡＧＡＡＧＡＧＧＧＣＡＧＣＴＴＣＴＣＧＣＡＧＧＴＧＴＣＣＡＣＣＡＴＧＧＣＣＣＴＡＣＡＣＡＴＣＧＣＣＣＡＧＧＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＧＡＣＡＧＣＣＣＧＣＣＡＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＧＣＣＡＣＡＧＣＣＴＧＧＣＣＧＣＣＡＧＧＴＡＴＴＡＣＡＡＣＴＧＧＧＴＧＴＣＣＴＴＴＣＣＣＧＧＧＴＧＣＣＴＧＧＣＣＡＧＡＧＧＧＧＣＴＧＡＧＡＣＣＣＧＴＧＧＴＴＣＣＴＣＣＡＧＧＡＴＧＡＡＧＡＣＡＴＴＴＧＡＧＧＡＡＴＴＣＣＣＣＡＴＧＡＣＣＣＣＡＡＣＧＡＣＣＴＡＣＡＡＡＧＧＣＴＣＴＧＴＧＧＡＣＡＡＣＣＡＧＡＣＡＧＡＣＡＧＴＧＧＧＡＴＧＧＴＧＣＴＧＧＣＣＴＣＧＧＡＧＧＡＧＴＴＴＧＡＧＣＡＧＡＴＡＧＡＧＡＧＣＡＧＧＣＡＴＡＧＡＣＡＡＧＡＡＡＧＣＧＧＣＴＴＣＡＧＡＧＧＡＡＣＣＡＧＧＡＧＧＡＣＡＡＧＡＧＧＡＧＣＡＴＧＡＡＡＧＴＧＧＡＣＡＡＧＧＡＧＴＧＴＧＡＣＣＡＣＴＧＡＡＧＣＡＣＣＡＣＡＧＧＧＡＧＧＧＧＴＴＡＧＧＣＣＴＣＣＧＧＡＴＧＡＣＴＧＣＧＧＧＣＡＧＧＣＣＴＧＧＡＴＡＡＴＡＴＣＣＡＧＣＣＴＣＣＣＡＣＡＡＧＡＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＣＡＧＡＧＴＧＴＴＣＣＣＴＧＡＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＧＡＡＡＧＧＧＡＧＡＣＧＣＣＣＴＴＴＣＡＴＧＧＴＣＴＧＣＴＧＡＧＴＡＡＣＡＧＧＴＧＣＣＴＴＣＣＣＡＧＡＣＡＣＴＧＧＣＧＴＴＡＣＴＧＣＴＴＧＡＣＣＡＡＡＧＡＧＣＣＣＴＣＡＡＧＣＧＧＣＣＣＴＴＡＴＧＣＣＡＧＣＧＴＧＡＣＡＧＡＧＧＧＣＴＣＡＣＣＴＣＴＴＧＣＣＴＴＣＴＡＧＧＴＣＡＣＴＴＣＴＣＡＣＡＡＴＧＴＣＣＣＴＴＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＣＣＣＴＧＴＧＣＣＣＡＣＣＡＧＴＴＡＴＴＣＣＴＴＧＧＴＡＡＴＡＴＧＡＧＴＡＡＴＡＣＡＴＣＡＡＡＧＡＧＴＡＧＴＡＴＴＡＡＡＡＧＣＴＡＡＴＴＡＡＴＣＡＴＧＴＴＴＡＴＡＣＴＡＡ
例示的なヒトＶＥＧＦＲ－３アイソフォーム１前駆体アミノ酸配列（配列番号４１）
ＭＱＲＧＡＡＬＣＬＲＬＷＬＣＬＧＬＬＤＧＬＶＳＧＹＳＭＴＰＰＴＬＮＩＴＥＥＳＨＶＩＤＴＧＤＳＬＳＩＳＣＲＧＱＨＰＬＥＷＡＷＰＧＡＱＥＡＰＡＴＧＤＫＤＳＥＤＴＧＶＶＲＤＣＥＧＴＤＡＲＰＹＣＫＶＬＬＬＨＥＶＨＡＮＤＴＧＳＹＶＣＹＹＫＹＩＫＡＲＩＥＧＴＴＡＡＳＳＹＶＦＶＲＤＦＥＱＰＦＩＮＫＰＤＴＬＬＶＮＲＫＤＡＭＷＶＰＣＬＶＳＩＰＧＬＮＶＴＬＲＳＱＳＳＶＬＷＰＤＧＱＥＶＶＷＤＤＲＲＧＭＬＶＳＴＰＬＬＨＤＡＬＹＬＱＣＥＴＴＷＧＤＱＤＦＬＳＮＰＦＬＶＨＩＴＧＮＥＬＹＤＩＱＬＬＰＲＫＳＬＥＬＬＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＶＷＡＥＦＮＳＧＶＴＦＤＷＤＹＰＧＫＱＡＥＲＧＫＷＶＰＥＲＲＳＱＱＴＨＴＥＬＳＳＩＬＴＩＨＮＶＳＱＨＤＬＧＳＹＶＣＫＡＮＮＧＩＱＲＦＲＥＳＴＥＶＩＶＨＥＮＰＦＩＳＶＥＷＬＫＧＰＩＬＥＡＴＡＧＤＥＬＶＫＬＰＶＫＬＡＡＹＰＰＰＥＦＱＷＹＫＤＧＫＡＬＳＧＲＨＳＰＨＡＬＶＬＫＥＶＴＥＡＳＴＧＴＹＴＬＡＬＷＮＳＡＡＧＬＲＲＮＩＳＬＥＬＶＶＮＶＰＰＱＩＨＥＫＥＡＳＳＰＳＩＹＳＲＨＳＲＱＡＬＴＣＴＡＹＧＶＰＬＰＬＳＩＱＷＨＷＲＰＷＴＰＣＫＭＦＡＱＲＳＬＲＲＲＱＱＱＤＬＭＰＱＣＲＤＷＲＡＶＴＴＱＤＡＶＮＰＩＥＳＬＤＴＷＴＥＦＶＥＧＫＮＫＴＶＳＫＬＶＩＱＮＡＮＶＳＡＭＹＫＣＶＶＳＮＫＶＧＱＤＥＲＬＩＹＦＹＶＴＴＩＰＤＧＦＴＩＥＳＫＰＳＥＥＬＬＥＧＱＰＶＬＬＳＣＱＡＤＳＹＫＹＥＨＬＲＷＹＲＬＮＬＳＴＬＨＤＡＨＧＮＰＬＬＬＤＣＫＮＶＨＬＦＡＴＰＬＡＡＳＬＥＥＶＡＰＧＡＲＨＡＴＬＳＬＳＩＰＲＶＡＰＥＨＥＧＨＹＶＣＥＶＱＤＲＲＳＨＤＫＨＣＨＫＫＹＬＳＶＱＡＬＥＡＰＲＬＴＱＮＬＴＤＬＬＶＮＶＳＤＳＬＥＭＱＣＬＶＡＧＡＨＡＰＳＩＶＷＹＫＤＥＲＬＬＥＥＫＳＧＶＤＬＡＤＳＮＱＫＬＳＩＱＲＶＲＥＥＤＡＧＲＹＬＣＳＶＣＮＡＫＧＣＶＮＳＳＡＳＶＡＶＥＧＳＥＤＫＧＳＭＥＩＶＩＬＶＧＴＧＶＩＡＶＦＦＷＶＬＬＬＬＩＦＣＮＭＲＲＰＡＨＡＤＩＫＴＧＹＬＳＩＩＭＤＰＧＥＶＰＬＥＥＱＣＥＹＬＳＹＤＡＳＱＷＥＦＰＲＥＲＬＨＬＧＲＶＬＧＹＧＡＦＧＫＶＶＥＡＳＡＦＧＩＨＫＧＳＳＣＤＴＶＡＶＫＭＬＫＥＧＡＴＡＳＥＨＲＡＬＭＳＥＬＫＩＬＩＨＩＧＮＨＬＮＶＶＮＬＬＧＡＣＴＫＰＱＧＰＬＭＶＩＶＥＦＣＫＹＧＮＬＳＮＦＬＲＡＫＲＤＡＦＳＰＣＡＥＫＳＰＥＱＲＧＲＦＲＡＭＶＥＬＡＲＬＤＲＲＲＰＧＳＳＤＲＶＬＦＡＲＦＳＫＴＥＧＧＡＲＲＡＳＰＤＱＥＡＥＤＬＷＬＳＰＬＴＭＥＤＬＶＣＹＳＦＱＶＡＲＧＭＥＦＬＡＳＲＫＣＩＨＲＤＬＡＡＲＮＩＬＬＳＥＳＤＶＶＫＩＣＤＦＧＬＡＲＤＩＹＫＤＰＤＹＶＲＫＧＳＡＲＬＰＬＫＷＭＡＰＥＳＩＦＤＫＶＹＴＴＱＳＤＶＷＳＦＧＶＬＬＷＥＩＦＳＬＧＡＳＰＹＰＧＶＱＩＮＥＥＦＣＱＲＬＲＤＧＴＲＭＲＡＰＥＬＡＴＰＡＩＲＲＩＭＬＮＣＷＳＧＤＰＫＡＲＰＡＦＳＥＬＶＥＩＬＧＤＬＬＱＧＲＧＬＱＥＥＥＥＶＣＭＡＰＲＳＳＱＳＳＥＥＧＳＦＳＱＶＳＴＭＡＬＨＩＡＱＡＤＡＥＤＳＰＰＳＬＱＲＨＳＬＡＡＲＹＹＮＷＶＳＦＰＧＣＬＡＲＧＡＥＴＲＧＳＳＲＭＫＴＦＥＥＦＰＭＴＰＴＴＹＫＧＳＶＤＮＱＴＤＳＧＭＶＬＡＳＥＥＦＥＱＩＥＳＲＨＲＱＥＳＧＦＲＧＴＲＲＴＲＧＡ
融合タンパク質
融合タンパク質またはキメラタンパク質は、もともと別々のタンパク質をコードしていた２つ以上の遺伝子を連結することによって作製されたタンパク質である。融合遺伝子の翻訳により、元のタンパク質のそれぞれに由来する機能特性を持つ単一または複数のポリペプチドが作製される。組換え融合タンパク質は人工的に作製され、得られたタンパク質は、異なる機能及び／または物理化学的パターンを有する基礎的なポリペプチドを有し得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＶＥＧＦタンパク質組成物は、本明細書に記載の１つ以上のＶＥＧＦ－Ｒタンパク質またはその特徴的部分の融合体を含む。
例えば、抗体融合タンパク質は、特定の抗原を標的とする抗体と、免疫応答を改変し得る、またはがん細胞に直接的な損傷を誘発し得るタンパク質とを組み合わせることができる。例えば、細胞溶解性融合タンパク質は、抗体を毒素に結合させることで、がん細胞を排除する抗体の効力を高める。これらのいわゆる「免疫毒素」は、その効力を毒素に由来し、その特異性をそれらが結合している抗体または抗体断片に由来する。特定の実施形態では、そのような融合タンパク質は、「免疫サイトカイン」を生成するためのサイトカインと融合したポリペプチド（例えば、抗体及び／またはその特徴的部分）を含み得る。そのような融合タンパク質は、腫瘍標的化抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体）とサイトカイン（自然免疫応答メディエーター）とを組み合わせることができる。いくつかのそのような実施形態では、これは、腫瘍微小環境における免疫系の局所的活性化を増加させ、がん細胞及び／または腫瘍（例えば、ＶＳ）の排除を支援する可能性がある。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の抗ＶＥＧＦタンパク質（例えば、抗体、可溶性ＶＥＧＦ受容体、及び／またはその特徴的ＶＥＧＦ結合部分）は、Ｆｃ領域に１つ以上の（例えば２、３、４、５、６、７、８、９、または１０）アミノ酸置換を含み得、これは、哺乳動物における抗体及び／または可溶性ＶＥＧＦ受容体の半減期を、例えば、１つ以上のアミノ酸置換のうちの少なくとも１つを含まないそれ以外は同一の抗体及び／または可溶性ＶＥＧＦ受容体の半減期と比較して、減少させる。哺乳動物における抗体及び／または可溶性ＶＥＧＦ受容体の半減期を決定する方法は、当該技術分野で周知である。抗体及び／または可溶性ＶＥＧＦ受容体の半減期を減少させることができるＦｃ変異における点変異の非限定的な例は、Ｌｅａｂｍａｎ ｅｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ ５（６）：８９６－９０３，２０１３（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。
アフリベルセプト
特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＶＥＧＦタンパク質はアフリベルセプトである。アフリベルセプトは、ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分に融合したヒトＶＥＧＦ受容体１及び２の細胞外ドメインの部分からなる組換え融合タンパク質である。アフリベルセプトは、タンパク質分子量およそ９７キロダルトン（ｋＤａ）の二量体糖タンパク質であり、総分子量のさらに１５％を構成し得る翻訳後グリコシル化を含む場合があり、結果として総分子量は１１５ｋＤａとなり得る。アフリベルセプトはＦＤＡの承認を受けており、新生血管性（滲出型）加齢黄斑変性、網膜静脈閉塞症後の黄斑浮腫、糖尿病黄斑浮腫、転移性大腸癌、及び糖尿病網膜症の治療に適応されている。
特定の実施形態では、アフリベルセプトはＶＥＧＦ－ＴＲＡＰとして機能する。本明細書に記載の特定の例示的な抗体ベースのＶＥＧＦ結合戦略、例えば、ラニビズマブ及び／またはベバシズマブを利用するものとは対照的に、いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ－ＴＲＡＰは、ＶＥＧＦＲ－１受容体の第２の結合ドメイン及びＶＥＧＦＲ－２受容体の第３のドメインを組み込む。これらの細胞外タンパク質配列をヒトＩｇＧ骨格のＦｃセグメントに融合させることにより、非常に高いＶＥＧＦ結合親和性（Ｋｄ約１ｐＭ）を有するキメラタンパク質が生成される。ラニビズマブ及びベバシズマブと同様に、アフリベルセプトなどのＶＥＧＦ－ＴＲＡＰは、ＶＥＧＦ－Ａファミリーの全ての異性体と結合し、ＶＥＧＦ－Ｂ及び胎盤増殖因子とも結合する。特定の実施形態では、アフリベルセプトタンパク質は、ＩＬ２ＳＳ（以下に記載）などの適切な分泌シグナル配列にコンジュゲートされる。特定の実施形態では、ＶＥＧＦ－ＴＲＡＰタンパク質産物は、配列番号４３または４４によって表される。
例示的なアフリベルセプトヌクレオチドコード配列（配列番号４２）
ＡＴＧＴＡＣＣＧＧＡＴＧＣＡＧＣＴＧＣＴＧＡＧＣＴＧＴＡＴＣＧＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＡＡＴＴＣＴＡＧＣＧＡＴＡＣＣＧＧＣＡＧＡＣＣＣＴＴＣＧＴＧＧＡＡＡＴＧＴＡＣＡＧＣＧＡＧＡＴＣＣＣＣＧＡＧＡＴＣＡＴＣＣＡＣＡＴＧＡＣＣＧＡＧＧＧＣＡＧＡＧＡＧＣＴＧＧＴＣＡＴＣＣＣＣＴＧＣＡＧＡＧＴＧＡＣＡＡＧＣＣＣＣＡＡＣＡＴＣＡＣＣＧＴＧＡＣＴＣＴＧＡＡＧＡＡＧＴＴＣＣＣＴＣＴＧＧＡＣＡＣＡＣＴＧＡＴＣＣＣＣＧＡＣＧＧＣＡＡＧＡＧＡＡＴＣＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＣＣＧＧＡＡＧＧＧＣＴＴＣＡＴＣＡＴＣＡＧＣＡＡＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＡＡＡＧＡＧＡＴＣＧＧＣＣＴＧＣＴＧＡＣＣＴＧＴＧＡＡＧＣＣＡＣＣＧＴＧＡＡＴＧＧＣＣＡＣＣＴＧＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＡＣＴＡＣＣＴＧＡＣＡＣＡＣＡＧＡＣＡＧＡＣＣＡＡＣＡＣＣＡＴＣＡＴＣＧＡＣＧＴＧＧＴＧＣＴＧＡＧＣＣＣＴＡＧＣＣＡＣＧＧＣＡＴＴＧＡＡＣＴＧＴＣＴＧＴＧＧＧＣＧＡＧＡＡＧＣＴＧＧＴＧＣＴＧＡＡＣＴＧＴＡＣＣＧＣＣＡＧＡＡＣＣＧＡＧＣＴＧＡＡＣＧＴＧＧＧＣＡＴＣＧＡＣＴＴＣＡＡＣＴＧＧＧＡＧＴＡＣＣＣＣＡＧＣＡＧＣＡＡＧＣＡＣＣＡＧＣＡＣＡＡＧＡＡＡＣＴＧＧＴＣＡＡＣＣＧＧＧＡＣＣＴＧＡＡＡＡＣＣＣＡＧＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＡＧＡＴＧＡＡＧＡＡＡＴＴＣＣＴＧＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＧＡＣＧＧＣＧＴＧＡＣＣＡＧＡＴＣＴＧＡＣＣＡＧＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＣＡＴＧＴＧＣＣＧＣＣＡＧＣＴＣＴＧＧＣＣＴＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＡＡＡＣＡＧＣＡＣＣＴＴＣＧＴＧＣＧＧＧＴＧＣＡＣＧＡＧＡＡＧＧＡＣＡＡＧＡＣＣＣＡＣＡＣＣＴＧＴＣＣＴＣＣＡＴＧＴＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＡＡＣＴＧＣＴＣＧＧＣＧＧＡＣＣＴＴＣＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＴＣＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＴＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＣＣＣＣＴＧＡＡＧＴＧＡＣＣＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＧＴＧＴＣＣＣＡＣＧＡＧＧＡＴＣＣＣＧＡＡＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＡＴＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＡＧＴＧＣＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＣＣＡＡＧＣＣＴＡＧＡＧＡＧＧＡＡＣＡＧＴＡＣＡＡＴＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＡＧＴＧＧＴＧＴＣＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＡＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣＡＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＴＧＣＴＣＣＴＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＴＡＧＧＧＡＡＣＣＣＣＡＧＧＴＴＴＡＣＡＣＡＣＴＧＣＣＴＣＣＡＡＧＣＡＧＧＧＡＣＧＡＧＣＴＧＡＣＡＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＴＴＣＣＧＡＴＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＡＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＣＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＡＡＣＣＣＣＴＣＣＴＧＴＧＣＴＧＧＡＣＡＧＣＧＡＣＧＧＣＴＣＡＴＴＣＴＴＣＣＴＧＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＡＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＴＴＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＣＣＡＧＡＡＧＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＴＣＴＣＣＴＧＧＡ
例示的なアフリベルセプトアミノ酸配列（配列番号４３）
ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
例示的なアフリベルセプト細胞外（ＥＣ）ドメインアミノ酸配列（配列番号１１２）
ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫ
例示的なアフリベルセプトアミノ酸配列（配列番号４４）
ＳＤＴＧＲＰＦＶＥＭＹＳＥＩＰＥＩＩＨＭＴＥＧＲＥＬＶＩＰＣＲＶＴＳＰＮＩＴＶＴＬＫＫＦＰＬＤＴＬＩＰＤＧＫＲＩＩＷＤＳＲＫＧＦＩＩＳＮＡＴＹＫＥＩＧＬＬＴＣＥＡＴＶＮＧＨＬＹＫＴＮＹＬＴＨＲＱＴＮＴＩＩＤＶＶＬＳＰＳＨＧＩＥＬＳＶＧＥＫＬＶＬＮＣＴＡＲＴＥＬＮＶＧＩＤＦＮＷＥＹＰＳＳＫＨＱＨＫＫＬＶＮＲＤＬＫＴＱＳＧＳＥＭＫＫＦＬＳＴＬＴＩＤＧＶＴＲＳＤＱＧＬＹＴＣＡＡＳＳＧＬＭＴＫＫＮＳＴＦＶＲＶＨＥＫＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
例示的な断片、結晶化可能（Ｆｃ）ヌクレオチド配列（配列番号１１０）
ＧＡＣＡＡＧＡＣＣＣＡＣＡＣＣＴＧＴＣＣＴＣＣＡＴＧＴＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＡＡＣＴＧＣＴＣＧＧＣＧＧＡＣＣＴＴＣＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＴＣＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＴＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＣＣＣＣＴＧＡＡＧＴＧＡＣＣＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＧＴＧＴＣＣＣＡＣＧＡＧＧＡＴＣＣＣＧＡＡＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＡＴＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＡＧＴＧＣＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＣＣＡＡＧＣＣＴＡＧＡＧＡＧＧＡＡＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＡＧＴＧＧＴＧＴＣＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＡＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣＡＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＴＧＣＴＣＣＴＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＴＡＧＧＧＡＡＣＣＣＣＡＧＧＴＴＴＡＣＡＣＡＣＴＧＣＣＴＣＣＡＡＧＣＣＧＧＧＡＡＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＴＴＣＣＧＡＴＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＡＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＣＣＡＧＣＣＡＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＡＡＣＣＣＣＴＣＣＴＧＴＧＣＴＧＧＡＣＡＧＣＧＡＣＧＧＣＴＣＡＴＴＣＴＴＣＣＴＧＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＣＡＡＧＴＣＣＡＧＡＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＴＴＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＣＣＡＧＡＡＧＴＣＴＣＴＧＡＧＣＣＴＧＴＣＴＣＣＴＧＧＣ
例示的な断片、結晶化可能（Ｆｃ）アミノ酸配列（配列番号１１１）
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ
構築物
とりわけ、本開示は、本明細書に記載のいくつかのポリヌクレオチドがポリヌクレオチド構築物であることを提供する。本開示によるポリヌクレオチド構築物は、抗ＶＥＧＦタンパク質、例えば、抗ＶＥＧＦ抗体及び／または可溶性ＶＥＧＦ受容体（例えば、抗ＶＥＧＦ－ＴＲＡＰタンパク質（例えば、アフリベルセプトなどの融合タンパク質））を含むポリヌクレオチドを組み込むコスミド、プラスミド（例えば、裸の、またはリポソームに含まれる）、及びウイルス構築物（例えば、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、及びアデノ随伴ウイルス構築物）を含む、当該技術分野で知られている全てのものを含む。当業者であれば、本明細書に記載の任意のポリヌクレオチドを作製するために、適切な構築物及び細胞を選択することができるであろう。いくつかの実施形態では、構築物は、プラスミド（例えば、細胞の内部で自律的に複製することができる環状ＤＮＡ分子）である。いくつかの実施形態では、構築物は、コスミド（例えば、ｐＷＥまたはｓＣｏｓシリーズ）であり得る。
いくつかの実施形態では、構築物はウイルス構築物である。いくつかの実施形態では、ウイルス構築物は、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、またはアデノ随伴ウイルス構築物である。いくつかの実施形態では、構築物は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）構築物である（例えば、Ａｓｏｋａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２０：６９９－７０８０，２０１２（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。ＷＴ ＡＡＶゲノムの簡略化された例は、図５のパネル（Ａ）に表され、一方、組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）構築物の簡略化された例は、図５のパネル（Ｂ）に表される。いくつかの実施形態では、ウイルス構築物はアデノウイルス構築物である。いくつかの実施形態では、ウイルス構築物はまた、アルファウイルスに基づくか、またはアルファウイルスに由来し得る。アルファウイルスとしては、シンドビス（及びＶＥＥＶ）ウイルス、アウラウイルス、ババンキウイルス、バーマフォレストウイルス、ベバルウイルス、カバソウウイルス（Ｃａｂａｓｓｏｕ ｖｉｒｕｓ）、チクングニアウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、エバーグレードウイルス（Ｅｖｅｒｇｌａｄｅｓ ｖｉｒｕｓ）、フォートモーガンウイルス（Ｆｏｒｔ Ｍｏｒｇａｎ ｖｉｒｕｓ）、ゲタウイルス、ハイランドＪウイルス（Ｈｉｇｈｌａｎｄｓ Ｊ ｖｉｒｕｓ）、キジラガチウイルス（Ｋｙｚｙｌａｇａｃｈ ｖｉｒｕｓ）、マヤロウイルス、メトリウイルス（Ｍｅ Ｔｒｉ ｖｉｒｕｓ）、ミデルバーグウイルス（Ｍｉｄｄｅｌｂｕｒｇ ｖｉｒｕｓ）、モッソダスペドラスウイルス（Ｍｏｓｓｏ ｄａｓ Ｐｅｄｒａｓ ｖｉｒｕｓ）、ムカンボウイルス、ヌドゥムウイルス、オニョンニョンウイルス、ピクスナウイルス（Ｐｉｘｕｎａ ｖｉｒｕｓ）、リオネグロウイルス、ロスリバーウイルス、サケ膵臓病ウイルス（Ｓａｌｍｏｎ ｐａｎｃｒｅａｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ）、セムリキフォレストウイルス、ミナミゾウアザラシウイルス（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｅｌｅｐｈａｎｔ ｓｅａｌ ｖｉｒｕｓ）、トナテウイルス（Ｔｏｎａｔｅ ｖｉｒｕｓ）、トロカラウイルス（Ｔｒｏｃａｒａ ｖｉｒｕｓ）、ウナウイルス（Ｕｎａ ｖｉｒｕｓ）、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、及びワタロアウイルスが挙げられる。一般に、このようなウイルスのゲノムは、宿主細胞の細胞質で翻訳可能な非構造タンパク質（例えば、レプリコン）と構造タンパク質（例えば、カプシド及びエンベロープ）をコードする。ロスリバーウイルス、シンドビスウイルス、セムリキフォレストウイルス（ＳＦＶ）、及びベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＶＥＥＶ）は全て、コード配列送達用のウイルス構築物を作製するために使用されている。アルファウイルスのエンベロープ糖タンパク質及びレトロウイルスのカプシドを組み合わせることにより、シュードタイプウイルスを形成することができる。アルファウイルス構築物の例は、米国特許公開番号第２０１５００５０２４３号、同第２００９０３０５３４４号、及び同第２００６０１７７８１９号に見出すことができ、構築物及びその製造方法は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本明細書で提供される構築物は、異なるサイズであってもよい。いくつかの実施形態では、構築物はプラスミドであり、最大約１ｋｂ、最大約２ｋｂ、最大約３ｋｂ、最大約４ｋｂ、最大約５ｋｂ、最大約６ｋｂ、最大約７ｋｂ、最大約８ｋｂ、最大約９ｋｂ、最大約１０ｋｂ、最大約１１ｋｂ、最大約１２ｋｂ、最大約１３ｋｂ、最大約１４ｋｂ、または最大約１５ｋｂの全長を含み得る。いくつかの実施形態では、構築物はプラスミドであり、約１ｋｂ～約２ｋｂ、約１ｋｂ～約３ｋｂ、約１ｋｂ～約４ｋｂ、約１ｋｂ～約５ｋｂ、約１ｋｂ～約６ｋｂ、約１ｋｂ～約７ｋｂ、約１ｋｂ～約８ｋｂ、約１ｋｂ～約９ｋｂ、約１ｋｂ～約１０ｋｂ、約１ｋｂ～約１１ｋｂ、約１ｋｂ～約１２ｋｂ、約１ｋｂ～約１３ｋｂ、約１ｋｂ～約１４ｋｂ、または約１ｋｂ～約１５ｋｂの範囲の全長を有し得る。
いくつかの実施形態では、構築物はウイルス構築物であり、最大１０ｋｂの総ヌクレオチド数を有し得る。いくつかの実施形態では、ウイルス構築物は、約１ｋｂ～約２ｋｂ、１ｋｂ～約３ｋｂ、約１ｋｂ～約４ｋｂ、約１ｋｂ～約５ｋｂ、約１ｋｂ～約６ｋｂ、約１ｋｂ～約７ｋｂ、約１ｋｂ～約８ｋｂ、約１ｋｂ～約９ｋｂ、約１ｋｂ～約１０ｋｂ、約２ｋｂ～約３ｋｂ、約２ｋｂ～約４ｋｂ、約２ｋｂ～約５ｋｂ、約２ｋｂ～約６ｋｂ、約２ｋｂ～約７ｋｂ、約２ｋｂ～約８ｋｂ、約２ｋｂ～約９ｋｂ、約２ｋｂ～約１０ｋｂ、約３ｋｂ～約４ｋｂ、約３ｋｂ～約５ｋｂ、約３ｋｂ～約６ｋｂ、約３ｋｂ～約７ｋｂ、約３ｋｂ～約８ｋｂ、約３ｋｂ～約９ｋｂ、約３ｋｂ～約１０ｋｂ、約４ｋｂ～約５ｋｂ、約４ｋｂ～約６ｋｂ、約４ｋｂ～約７ｋｂ、約４ｋｂ～約８ｋｂ、約４ｋｂ～約９ｋｂ、約４ｋｂ～約１０ｋｂ、約５ｋｂ～約６ｋｂ、約５ｋｂ～約７ｋｂ、約５ｋｂ～約８ｋｂ、約５ｋｂ～約９ｋｂ、約５ｋｂ～約１０ｋｂ、約６ｋｂ～約７ｋｂ、約６ｋｂ～約８ｋｂ、約６ｋｂ～約９ｋｂ、約６ｋｂ～約１０ｋｂ、約７ｋｂ～約８ｋｂ、約７ｋｂ～約９ｋｂ、約７ｋｂ～約１０ｋｂ、約８ｋｂ～約９ｋｂ、約８ｋｂ～約１０ｋｂ、または約９ｋｂ～約１０ｋｂの範囲の総ヌクレオチド数を有し得る。
いくつかの実施形態では、構築物はレンチウイルス構築物であり、最大８ｋｂの総ヌクレオチド数を有し得る。いくつかの例では、レンチウイルス構築物は、約１ｋｂ～約２ｋｂ、約１ｋｂ～約３ｋｂ、約１ｋｂ～約４ｋｂ、約１ｋｂ～約５ｋｂ、約１ｋｂ～約６ｋｂ、約１ｋｂ～約７ｋｂ、約１ｋｂ～約８ｋｂ、約２ｋｂ～約３ｋｂ、約２ｋｂ～約４ｋｂ、約２ｋｂ～約５ｋｂ、約２ｋｂ～約６ｋｂ、約２ｋｂ～約７ｋｂ、約２ｋｂ～約８ｋｂ、約３ｋｂ～約４ｋｂ、約３ｋｂ～約５ｋｂ、約３ｋｂ～約６ｋｂ、約３ｋｂ～約７ｋｂ、約３ｋｂ～約８ｋｂ、約４ｋｂ～約５ｋｂ、約４ｋｂ～約６ｋｂ、約４ｋｂ～約７ｋｂ、約４ｋｂ～約８ｋｂ、約５ｋｂ～約６ｋｂ、約５ｋｂ～約７ｋｂ、約５ｋｂ～約８ｋｂ、約６ｋｂ～約８ｋｂ、約６ｋｂ～約７ｋｂ、または約７ｋｂ～約８ｋｂの総ヌクレオチド数を有し得る。
いくつかの実施形態では、構築物はアデノウイルス構築物であり、最大８ｋｂの総ヌクレオチド数を有し得る。いくつかの実施形態では、アデノウイルス構築物は、約１ｋｂ～約２ｋｂ、約１ｋｂ～約３ｋｂ、約１ｋｂ～約４ｋｂ、約１ｋｂ～約５ｋｂ、約１ｋｂ～約６ｋｂ、約１ｋｂ～約７ｋｂ、約１ｋｂ～約８ｋｂ、約２ｋｂ～約３ｋｂ、約２ｋｂ～約４ｋｂ、約２ｋｂ～約５ｋｂ、約２ｋｂ～約６ｋｂ、約２ｋｂ～約７ｋｂ、約２ｋｂ～約８ｋｂ、約３ｋｂ～約４ｋｂ、約３ｋｂ～約５ｋｂ、約３ｋｂ～約６ｋｂ、約３ｋｂ～約７ｋｂ、約３ｋｂ～約８ｋｂ、約４ｋｂ～約５ｋｂ、約４ｋｂ～約６ｋｂ、約４ｋｂ～約７ｋｂ、約４ｋｂ～約８ｋｂ、約５ｋｂ～約６ｋｂ、約５ｋｂ～約７ｋｂ、約５ｋｂ～約８ｋｂ、約６ｋｂ～約７ｋｂ、約６ｋｂ～約８ｋｂ、または約７ｋｂ～約８ｋｂの範囲の総ヌクレオチド数を有し得る。
本明細書に記載される任意の構築物は、制御配列、例えば、転写開始配列、転写終結配列、プロモーター配列、エンハンサー配列、ＲＮＡスプライシング配列、ポリアデニル化（ポリ（Ａ））配列、コザックコンセンサス配列、及び／または転写前もしくは転写後の調節及び／または制御エレメントを収容し得る追加の非翻訳領域、の群から選択された制御配列をさらに含み得る。いくつかの実施形態では、プロモーターは、ネイティブプロモーター、構成的プロモーター、誘導性プロモーター、及び／または組織特異的プロモーターであり得る。制御配列の非限定的な例が本明細書に記載される。
ＡＡＶ粒子
とりわけ、本開示は、抗ＶＥＧＦタンパク質、例えば抗ＶＥＧＦ抗体及び／または抗ＶＥＧＦ－ＴＲＡＰタンパク質をコードする組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）構築物を含む、本明細書に記載のＡＡＶカプシドを含むＡＡＶ粒子を提供する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶ粒子は、構築物株及びカプシド株を説明する血清型を有するものとして記載され得る。例えば、いくつかの実施形態では、ＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ２として記載され得、その場合、該粒子は、ＡＡＶ２カプシド、及び特徴的ＡＡＶ２末端逆位反復（ＩＴＲ）を含む構築物を有する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶ粒子は、カプシド及び構築物が異なるＡＡＶ株に由来するシュードタイプとして記載され得、例えば、ＡＡＶ２／９は、ＡＡＶ２ ＩＴＲ及びＡＡＶ９カプシドを利用する構築物を含むＡＡＶ粒子を指す。この同じ命名法は、ｒＡＡＶカプシド、構築物、及び／または粒子にも使用することができる。
特定の実施形態では、ｒＡＡＶ粒子を使用する遺伝子治療は、次のいくつかの理由で内耳障害の有望な治療法である：（１）聴覚及び前庭感覚上皮を含む内耳が、中枢神経系におけるものと同様に免疫監視機構を改変していること（Ｆｕｊｉｏｋａ ２０１４、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）；（２）蝸牛のコルチ器の感覚細胞及び支持細胞は有糸分裂後であり、これによりｒＡＡＶの単回投与後の長期発現が可能となり得ること；ならびに（３）成人及び小児の両方における複数の投与経路を介したｒＡＡＶ送達の総合的な臨床経験が、特に局所的送達及び／または低～中用量での投与において、送達ビヒクルとしてのｒＡＡＶの強力な安全性プロファイルを示唆していること。
ｒＡＡＶ粒子を利用した臨床試験は２０年以上前に始まり、ｒＡＡＶ粒子は、全身投与で最大およそ１Ｅ１５ｖｇ以上の用量で数十の臨床試験で数百人の参加者に投与されてきた（Ｆｌｏｔｔｅ １９９６；Ｆｌｏｔｔｅ ２０１３；Ｐａｒｅｎｔｅ ２０１８；Ｗａｎｇ ２０１９、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ｒＡＡＶ粒子がｉｎ ｖｉｖｏ遺伝子導入に使用された試験の数は、着実に増加している。その安全性プロファイルは、幅広い標的組織への形質導入効率の高さとともに、ｒＡＡＶ粒子をｉｎ ｖｉｖｏ遺伝子治療の最適なプラットフォームとして確立した（Ｗａｎｇ ２０１９、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ｒＡＡＶ技術は、共凝集障害、遺伝性失明、及び神経変性疾患を含む様々な状態に対して臨床応用に成功している（Ｃｏｌｅｌｌａ ２０１８；Ｗａｎｇ ２０１９、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦタンパク質をコードする構築物を含むｒＡＡＶ粒子を含む組成物は、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦと称される。Ａｎｃ８０カプシドが利用される特定の組成物では、このような組成物は、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－抗ＶＥＧＦと称され得る。いくつかの実施形態では、これらの組成物は、ＡＫ－抗ＶＥＧＦとも称され得る。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－抗ＶＥＧＦ粒子は、特定のｒＡＡＶ構築物を含み、例えば、図６のパネル（Ａ）によって表される構築物を含んでもよい。そのような構築物は、本明細書では、ＶＨ／ＶＬ構築物、及び／またはｒＡＡＶＡｎｃ８０－ＶＨ／ＶＬと呼ばれ；例示的なｒＡＡＶＡｎｃ８０－ＶＨ／ＶＬ構築物はラニビズマブをコードする。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－抗ＶＥＧＦ粒子は、図６のパネル（Ｂ）によって表される構築物を含み、該構築物は、抗体ＧＦＰ構築物（ＡＢＧＦＰ）及び／またはｒＡＡＶＡｎｃ８０－ＡＢＧＦＰと呼ばれ得；例示的なｒＡＡＶＡｎｃ８０－ＡＢＧＦＰ構築物は、ＧＦＰに転写的に連結したラニビズマブまたはべバシズマブをコードする。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－抗ＶＥＧＦ構築物は、図６のパネル（Ｃ）によって表される構築物を含み、該構築物は、抗体（ＡＢ）構築物、及び／またはｒＡＡＶＡｎｃ８０－ＡＢと称される得；例示的なｒＡＡＶＡｎｃ８０－ＡＢ構築物は、ベバシズマブをコードする。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－抗ＶＥＧＦ構築物は、図６のパネル（Ｄ）によって表される構築物を含み、該構築物は、抗ＶＥＧＦ－ＴＲＡＰ（ＴＲＡＰ）、及び／またはｒＡＡＶＡｎｃ８０－ＴＲＡＰと称され得；例示的なｒＡＡＶＡｎｃ８０－ＴＲＡＰ構築物はアフリベルセプトをコードする。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物、例えばｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦは遺伝子治療組成物であり、ＶＳ患者の治療を目的とする。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）粒子の血清型１、２、８、及び９の共通祖先と推定されるＡＡＶＡｎｃ８０（Ｚｉｎｎ ２０１５、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を、眼内投与後のＶＥＧＦの阻害のためにこれまでに最適化された抗体断片（Ｆａｂ）であるラニビズマブの配列をコードする導入遺伝子の送達ビヒクルとして含む（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ ２０１７、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、直径およそ２６ナノメートル（ｎｍ）の非エンベロープ型正二十面体ビリオンである。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物、例えば、合成ＡＡＶＡｎｃ８０カプシド配列がベースとするアデノ随伴ウイルスは、Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ科の非病原性、一本鎖ＤＮＡゲノム含有、ヘルパーウイルス依存性メンバーである。
組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）粒子は、野生型アデノ随伴ウイルスに見られるのと同じ全体的なカプシド構造を保持しながら、ウイルスタンパク質コード配列を欠くゲノムをカプシド封入し、その場所に治療用遺伝子発現カセットが挿入されている。ウイルス由来の唯一の配列は逆位末端反復（ＩＴＲ）配列であり、これは粒子生成時のゲノム複製及びパッケージングを導くために必要である。ウイルスコード配列の除去は、ｒＡＡＶ粒子のパッケージング能力を最大化し、ｉｎ ｖｉｖｏで送達された場合の免疫原性及び細胞毒性の低減に寄与する（Ｗａｎｇ ２０１９、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
ＡＡＶＡｎｃ８０は、合理的に設計されたＡＡＶカプシドであり、その配列は祖先配列再構築によって推定された（Ｚｉｎｎ ２０１５、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。哺乳動物の内耳におけるＡＡＶＡｎｃ８０の最初に報告された使用により、蝸牛及び前庭有毛細胞における高い形質導入効率と、ノックインマウスモデルにおける聴覚、蝸牛、及び前庭機能の回復の証拠が明らかとなった（Ｌａｎｄｅｇｇｅｒ ２０１７；Ｐａｎ ２０１７、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。その後の研究により、ＡＡＶＡｎｃ８０の蝸牛及び前庭細胞の形質導入効率が、他のＡＡＶ血清型よりも有意に高いことがマウスにおいて（Ｌａｎｄｅｇｇｅｒ ２０１７；Ｔａｏ ２０１８；Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ ２０１８；Ｏｍｉｃｈｉ ２０２０、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、そして非ヒト霊長類において（Ａｎｄｒｅｓ－Ｍａｔｅｏｓ ２０１９、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）確認されている。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物、例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦは、次の２つの構成要素を含む：ＡＡＶＡｎｃ８０（Ａｎｃ８０Ｌ６５とも称される；Ｚｉｎｎ ２０１５、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）カプシドと、抗ＶＥＧＦタンパク質をコードする一本鎖ｒＡＡＶ ＤＮＡゲノム、例えば、ｒＡＡＶ－ＶＨ／ＶＬ（例えば、ラニビズマブ）、ｒＡＡＶ－ＡＢ（例えば、ベバシズマブ）、ｒＡＡＶ－ＡＢＧＦＰ（例えば、ＧＦＰでタグ標識された抗体、例えば、ＧＦＰでタグ標識されたラニビズマブまたはベバシズマブ）、及び／または該ＡＡＶＡｎｃ８０カプシドによりカプシド封入されたｒＡＡＶ－ＴＲＡＰ（例えば、アフリベルセプト）である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物、例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦは、次の２つの構成要素を含む：ＡＡＶＡｎｃ８０（Ａｎｃ８０Ｌ６５とも称される；Ｚｉｎｎ ２０１５、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）カプシドと、該ＡＡＶＡｎｃ８０カプシドによりカプシド封入された、ＩＴＲ配列を除く３０００～５０００ヌクレオチドの一本鎖ＤＮＡゲノム（例えば、図６のパネル（Ａ）～（Ｄ）により示される）である。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物、例えば．組換え構築物ＤＮＡゲノムは、ＡＡＶ２ ＩＴＲ配列に隣接し、以下のプロモーター及び調節配列をコードする真核生物の発現カセットを含む：サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）初期エンハンサーエレメント；５’フランキング領域と第２のエクソンの近位領域との間に位置するニワトリβアクチン（ＣβＡ）遺伝子配列；及びウサギβグロビン（ＲβＧ）遺伝子由来の３’スプライスアクセプター配列（一般にＣＡＧプロモーターと呼ばれる）（Ｍｉｙａｚａｋｉ １９８９；Ｎｉｗａ １９９１；Ｏｒｂａｎ ２００９、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。いくつかの実施形態では、このハイブリッド調節エレメントに続いて、ラニビズマブ重鎖及び軽鎖をコードするバイシストロニックカセットが、フリン及びｔｈｏｓｅａ ａｓｉｇｎａウイルス由来のプロテアーゼ２Ａ（Ｔ２Ａ）切断部位によって分離されている。いくつかの実施形態では、タンパク質の分泌を促進するために、２０のアミノ酸のヒトインターロイキン－２（ＩＬ－２）リーダー配列が、各Ｆａｂ鎖の上流に位置する。本明細書に開示される組成物のいくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦタンパク質コード配列の下流に、ウシ成長ホルモンポリアデニル化部位が存在する。
ＶＳの現在の標準治療は、画像診断技術が進歩し、腫瘍の成長を特定及び追跡する能力が向上したため、過去２～３０年にわたり進化してきた。多くの腫瘍が低速または低成長を示し、低い成長速度が維持される限り聴力に影響を与えないであろうという認識の高まりとともに、保守的で観察的な「経過観察」アプローチへ向かう傾向が進んでいる（ＭａｃＫｅｉｔｈ ２０１３；Ｒｅｚｎｉｔｓｋｙ ２０１９、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物、例えばｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦの重要な潜在的利点は、例えば、腫瘍の成長の停止、聴力の安定化、及び／または外科的切除及び／または放射線治療などのより侵襲的な治療アプローチの必要性の回避によって、この保守的な治療アプローチを強化する可能性である。理論に束縛されるものではないが、いくつかの実施形態では、ＶＳの成長を停止させることは実質的な臨床的利益をもたらすと考えられるが、ＮＦ２患者のベバシズマブで治療したＶＳ腫瘍の研究（Ｈｕａｎｇ ２０１８；Ｐｌｏｔｋｉｎ ２０１９、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）で示されるように、本明細書に開示の組成物、例えばｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ治療は、腫瘍の停滞のみならず、腫瘍の収縮、語音理解の回復、及び／または語音理解の知覚された困難の軽減を促進する可能性もある。さらに、全身投与されたＶＥＧＦ阻害剤を用いた研究では、ＮＦ２患者のＶＳに関連する症状を含む、ＮＦ２関連の生活の質の改善が示されている（Ｐｌｏｔｋｉｎ ２０１９、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。いくつかの実施形態では、これらの臨床データは、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ投与、及び腫瘍と拡散的に連続した抗ＶＥＧＦタンパク質の持続的かつ局所的な発現が、ＶＳの患者にこれらの追加の利点を提供する可能性を有することを示唆している。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物、例えばｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦの蝸牛内投与は、基礎病因にかかわらず、将来的な治療の必要性を排除し、ＶＳ患者の生理的聴力を温存する可能性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、外科的切除及び／または放射線治療などの侵襲的な治療アプローチ、ならびに関連する生理的聴力の低下を遅延させ得る。本明細書に開示される任意の方法のいくつかの実施形態では、方法は、標準治療の実施をさらに含む。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦタンパク質治療は、腫瘍の感受性を高め、より低い放射線量を可能にすることによって放射線治療に対する対象の応答を改善し得るため、放射線治療をその後受ける対象にも潜在的な利点があり得る（Ｋｏｕｔｓｉｍｐｅｌａｓ ２０１２；Ｇａｏ ２０１５、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
ＡＡＶ構築物
本開示は、抗ＶＥＧＦ抗体及び／または可溶性ＶＥＧＦ受容体（例えば、融合タンパク質アフリベルセプトなどの抗ＶＥＧＦ ＴＲＡＰタンパク質）を含むポリヌクレオチド構築物を提供する。本明細書に記載のいくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体及び／または可溶性ＶＥＧＦ受容体を含むポリヌクレオチドは構築物と称され、ＡＡＶカプシド内に包含されてｒＡＡＶ粒子を作製し得る。特定の実施形態では、ｒＡＡＶ構築物はベクターとも称され得、ベクターゲノム（ｖｇ）として、例えば、ミリリットル（ｍＬ）あたりのｖｇとして定量化され得る。ＷＴ ＡＡＶゲノムの簡略化された概略図は、図５のパネル（Ａ）に描写され、ｒＡＡＶ構築物の簡略化された概略図は、図５のパネル（Ｂ）に描写されている。
いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド構築物は、天然に存在するＡＡＶゲノム構築物に由来する、またはそこから改変された１つ以上の構成要素を含む。いくつかの実施形態では、ＡＡＶ構築物由来の配列は、ＡＡＶ１構築物、ＡＡＶ２構築物、ＡＡＶ３構築物、ＡＡＶ４構築物、ＡＡＶ５構築物、ＡＡＶ６構築物、ＡＡＶ７構築物、ＡＡＶ８構築物、ＡＡＶ９構築物、ＡＡＶ２．７ｍ８構築物、ＡＡＶ８ＢＰ２構築物、ＡＡＶ２９３構築物、またはＡＡＶＡｎｃ８０構築物である。本明細書で使用することができる追加の例示的なＡＡＶ構築物は、当該技術分野で知られている。例えば、Ｋａｎａａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ ８：１８４－１９７，２０１７；Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１６（７）：１２５２－１２６０，２００８；Ａｄａｃｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．５：３０７５，２０１４；Ｉｓｇｒｉｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．１０（１）：４２７，２０１９；及びＧａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７８（１２）：６３８１－６３８８，２００４（これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと。
いくつかの実施形態では、提供される構築物は、コード配列、例えば、抗ＶＥＧＦ遺伝子またはその特徴的部分、１つ以上の調節配列及び／または制御配列、ならびに任意選択で５’及び３’ＡＡＶ由来の逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む。５’及び３’ＡＡＶ由来のＩＴＲが利用されるいくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド構築物は、組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）構築物と称され得る。いくつかの実施形態では、提供されたｒＡＡＶ構築物は、ＡＡＶカプシドにパッケージングされてｒＡＡＶ粒子を形成する。
いくつかの実施形態では、ＡＡＶ由来の配列（ポリヌクレオチド構築物に含まれる）は、典型的には、シス作用性５’及び３’ＩＴＲ配列を含む（例えば、Ｂ．Ｊ．Ｃａｒｔｅｒ，“Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓｅｓ，”ｅｄ．，Ｐ．Ｔｉｊｓｓｅｒ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，ｐｐ．１５５ １６８，１９９０（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。典型的なＡＡＶ２由来のＩＴＲ配列は、約１４５ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、典型的なＩＴＲ配列の少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％）が、本明細書に提供される構築物に組み込まれる。これらのＩＴＲ配列を改変する能力は、当業者の技術範囲内である（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ．Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ”，２ｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９；及びＫ．Ｆｉｓｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｖｉｒｏｌ．７０：５２０ ５３２，１９９６（これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）などのテキストを参照のこと）。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意のコード配列及び／または構築物は、５’及び３’ＡＡＶ ＩＴＲ配列に隣接する。ＡＡＶ ＩＴＲ配列は、現在同定されているＡＡＶ型を含む、任意の既知のＡＡＶから得ることができる。
いくつかの実施形態では、本開示に従って記載され、当該技術分野で公知のパターンのポリヌクレオチド構築物（例えば、Ａｓｏｋａｎ ｅｔ ａｌ，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２０：６９９－７０８０，２０１２（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと）は、典型的には、コード配列またはその一部、少なくとも１つの及び／または制御配列、ならびに任意選択で５’及び３’ＡＡＶ逆位末端反復（ＩＴＲ）から構成される。いくつかの実施形態では、提供された構築物は、カプシドにパッケージングされてｒＡＡＶ粒子を作製することができる。ｒＡＡＶ粒子は、選択された標的細胞に送達され得る。いくつかの実施形態では、提供された構築物は、構築物配列と異種である核酸配列（例えば、阻害性核酸配列）である追加の任意選択のコード配列を含み、これは、目的のポリペプチド、タンパク質、機能性ＲＮＡ分子（例えば、ｍｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ阻害剤）または他の遺伝子産物をコードする。いくつかの実施形態では、核酸コード配列は、標的組織の細胞におけるコード配列の転写、翻訳、及び／または発現を可能にする様式で、構成要素に作動可能に連結される、及び／またはこれを制御する。
図５のパネル（Ａ）に示すように、改変されていないＡＡＶ内因性ゲノムは、ＩＴＲに隣接した２つのオープンリーディングフレームである「ｃａｐ」及び「ｒｅｐ」を含む。図５のパネル（Ｂ）に示すように、例示的なｒＡＡＶ構築物は、同様に、コード領域、例えば、コード配列（例えば、抗ＶＥＧＦ遺伝子）に隣接するＩＴＲを含む。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ構築物はまた、プラスミド構築物をトランスフェクトされた細胞または本開示によって産生されたウイルスに感染した細胞においてその転写、翻訳、及び／または発現を可能にする様式で、コード配列に作動可能に連結された従来の制御エレメントを含む。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ構築物は、任意選択で、プロモーター（図５のパネル（Ｂ）に示す）、エンハンサー、非翻訳領域（例えば、５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ）、コザック配列、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、スプライシング部位（例えば、アクセプター部位、ドナー部位）、ポリアデニル化部位（図５のパネル（Ｂ）に示す）、またはその任意の組み合わせを含む。このような追加のエレメントは、本明細書でさらに説明される。
いくつかの実施形態では、構築物はｒＡＡＶ構築物である。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ構築物は、少なくとも５００ｂｐ、少なくとも１ｋｂ、少なくとも１．５ｋｂ、少なくとも２ｋｂ、少なくとも２．５ｋｂ、少なくとも３ｋｂ、少なくとも３．５ｋｂ、少なくとも４ｋｂ、または少なくとも４．５ｋｂを含み得る。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ構築物は、最大で７．５ｋｂ、最大で７ｋｂ、最大で６．５ｋｂ、最大で６ｋｂ、最大で５．５ｋｂ、最大で５ｋｂ、最大で４．５ｋｂ、最大で４ｋｂ、最大で３．５ｋｂ、最大で３ｋｂ、または最大で２．５ｋｂを含み得る。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ構築物は、約１ｋｂ～約２ｋｂ、約１ｋｂ～約３ｋｂ、約１ｋｂ～約４ｋｂ、約１ｋｂ～約５ｋｂ、約２ｋｂ～約３ｋｂ、約２ｋｂ～約４ｋｂ、約２ｋｂ～約５ｋｂ、約３ｋｂ～約４ｋｂ、約３ｋｂ～約５ｋｂ、または約４ｋｂ～約５ｋｂを含み得る。
本明細書に記載の任意の構築物は、調節配列及び／または制御配列、例えば、転写開始配列、転写終結配列、プロモーター配列、エンハンサー配列、ＲＮＡスプライシング配列、ポリアデニル化（ポリ（Ａ））配列、コザックコンセンサス配列、及び／またはそれらの任意の組み合わせの群から選択される制御配列をさらに含むことができる。いくつかの実施形態では、プロモーターは、ネイティブプロモーター、構成的プロモーター、誘導性プロモーター、及び／または組織特異的プロモーターであり得る。制御配列の非限定的な例が本明細書に記載される。
例示的な構築物構成要素
逆位末端反復配列（ＩＴＲ）
構築物のＡＡＶ由来配列は、典型的には、シス作用性５’及び３’ＩＴＲを含む（例えば、Ｂ．Ｊ．Ｃａｒｔｅｒ，“Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓｅｓ，”ｅｄ．，Ｐ．Ｔｉｊｓｓｅｒ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，ｐｐ．１５５ １６８（１９９０）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。一般に、ＩＴＲはヘアピンを形成することができる。ヘアピンを形成する能力は、ＩＴＲの自己プライミング能力に寄与し得、第２のＤＮＡ鎖のプライマーゼ非依存性合成を可能にする。ＩＴＲはまた、ｒＡＡＶ粒子におけるｒＡＡＶ構築物の効率的なカプシド形成を支援することができる。
いくつかの実施形態では、本開示のｒＡＡＶ粒子（例えば、ＡＡＶ２／Ａｎｃ８０粒子）は、５’及び３’ＡＡＶ ＩＴＲ配列に隣接したコード配列（例えば、抗ＶＥＧＦ遺伝子）及び関連するエレメントを含むｒＡＡＶ構築物を含み得る。いくつかの実施形態では、ＩＴＲは、約１４５個の核酸であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、ＩＴＲをコードする配列の全てまたは実質的に全てが使用される。ＡＡＶ ＩＴＲ配列は、現在同定されている哺乳動物ＡＡＶ型を含む、任意の既知のＡＡＶから得ることができる。いくつかの実施形態では、ＩＴＲは、ＡＡＶ２ ＩＴＲである。
本開示で用いられる構築物分子の例は、導入遺伝子を含む「シス作用性」構築物であり、選択された導入遺伝子配列及び関連する調節エレメントは、５’側または「左」及び３’側または「右」のＡＡＶ ＩＴＲ配列に隣接する。５’及び左という表記は、センス方向に左から右に読んだ、構築物全体に対するＩＴＲ配列の位置を指す。例えば、いくつかの実施形態では、５’’側または左のＩＴＲは、構築物がセンス方向で直線的に描写された場合に、所与の構築物のプロモーターに最も近い（ポリアデニル化配列とは対照的に）ＩＴＲである。同時に、３’及び右という表記は、センス方向に左から右に読んだ、構築物全体に対するＩＴＲ配列の位置を指す。例えば、いくつかの実施形態では、３’側または右のＩＴＲは、構築物がセンス方向で直線的に描写された場合に、所与の構築物のポリアデニル化配列に最も近い（プロモーター配列とは対照的に）ＩＴＲである。本明細書で提供されるＩＴＲは、センス鎖に従って、５’から３’の順序で描写される。したがって、当業者であれば、センス方向からアンチセンス方向に変換する場合、５’側または「左」方向のＩＴＲは、３’側または「右」のＩＴＲとしても描写され得ることを理解するであろう。さらに、所与のセンスＩＴＲ配列（例えば、５’側／左のＡＡＶ ＩＴＲ）をアンチセンス配列（例えば、３’側／右のＩＴＲ配列）に変換することは、十分に当業者の能力の範囲内である。当業者であれば、所与のＩＴＲ配列を５’側／左もしくは３’側／右のＩＴＲのいずれか、またはそのアンチセンスバージョンとして使用するために改変する方法を理解するであろう。
例えば、ＩＴＲ（例えば、５’ＩＴＲ）は、配列番号４５に記載の配列を有することができる。いくつかの実施形態では、ＩＴＲ（例えば、３’ＩＴＲ）は、配列番号４６に記載の配列を有することができる。いくつかの実施形態では、ＩＴＲは、当該技術分野で知られているように１以上の改変、例えば切断、欠失、置換、または挿入を含む。いくつかの実施形態では、ＩＴＲは、１４５未満のヌクレオチド、例えば、１２７、１３０、１３４、または１４１のヌクレオチドを含む。例えば、いくつかの実施形態では、ＩＴＲは、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、または１４５のヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ＩＴＲ（例えば、５’ＩＴＲ）は、配列番号４７に記載の配列を有することができる。いくつかの実施形態では、ＩＴＲ（例えば、３’ＩＴＲ）は、配列番号４８に記載の配列を有することができる。
５’ＡＡＶ ＩＴＲ配列の非限定的な例は、配列番号４５である。３’ＡＡＶ ＩＴＲ配列の非限定的な例は、配列番号４６である。５’ＡＡＶ ＩＴＲ配列の非限定的な例は、配列番号４７である。３’ＡＡＶ ＩＴＲ配列の非限定的な例は、配列番号４８である。いくつかの実施形態では、本開示のｒＡＡＶ構築物は、５’ＡＡＶ ＩＴＲ及び／または３’ＡＡＶ ＩＴＲを含む。いくつかの実施形態では、５’ＡＡＶ ＩＴＲ配列は、配列番号４５である。いくつかの実施形態では、３’ＡＡＶ ＩＴＲ配列は、配列番号４６である。いくつかの実施形態では、５’及び３’ＡＡＶ ＩＴＲ（例えば、配列番号４５及び４６、または４７及び４８）は、コード配列の一部、例えば、抗ＶＥＧＦ遺伝子（例えば、配列番号１３、１４、１５、１９、２２、４２及び／または１０３）の全てまたは一部に隣接する。これらのＩＴＲ配列を改変する能力は、当業者の技術範囲内である（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ．Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ”，２ｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８９）；及びＫ．Ｆｉｓｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｖｉｒｏｌ．７０：５２０ ５３２（１９９６）（これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）などのテキストを参照のこと）。いくつかの実施形態では、５’ＩＴＲ配列は、配列番号４５または４７によって表される５’ＩＴＲ配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一である。いくつかの実施形態では、３’ＩＴＲ配列は、配列番号４６または４８によって表される３’ＩＴＲ配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一である。
例示的な５’ＡＡＶ ＩＴＲ（配列番号４５）
ＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣＣＧＧＧＣＡＡＡＧＣＣＣＧＧＧＣＧＴＣＧＧＧＣＧＡＣＣＴＴＴＧＧＴＣＧＣＣＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＴＡＧＧＧＧＴＴＣＣＴ
例示的な３’ＡＡＶ ＩＴＲ（配列番号４６）
ＡＧＧＡＡＣＣＣＣＴＡＧＴＧＡＴＧＧＡＧＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＧＧＣＧＡＣＣＡＡＡＧＧＴＣＧＣＣＣＧＡＣＧＣＣＣＧＧＧＣＴＴＴＧＣＣＣＧＧＧＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡ
例示的な５’ＡＡＶ ＩＴＲ（配列番号４７）
ＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣＣＧＧＧＣＧＴＣＧＧＧＣＧＡＣＣＴＴＴＧＧＴＣＧＣＣＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＴＡＧＧＧＧＴＴＣＣＴ
例示的な３’ＡＡＶ ＩＴＲ（配列番号４８）
ＡＧＧＡＡＣＣＣＣＴＡＧＴＧＡＴＧＧＡＧＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＧＧＣＧＡＣＣＡＡＡＧＧＴＣＧＣＣＣＧＡＣＧＣＣＣＧＧＧＣＴＴＴＧＣＣＣＧＧＧＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧ
プロモーター
いくつかの実施形態では、構築物（例えば、ｒＡＡＶ構築物）はプロモーターを含む。「プロモーター」という用語は、作動可能に連結された遺伝子（例えば、抗ＶＥＧＦ遺伝子）の転写を促進及び／または開始することができる酵素／タンパク質によって認識されるＤＮＡ配列を指す。例えば、プロモーターは、典型的には、例えば、ＲＮＡポリメラーゼ及び／または任意の関連因子が結合し、そこから転写を開始することができるヌクレオチド配列を指す。したがって、いくつかの実施形態では、構築物（例えば、ｒＡＡＶ構築物）は、本明細書に記載の非限定的な例のプロモーターの１つに作動可能に連結されたプロモーターを含む。
いくつかの実施形態では、プロモーターは、誘導性プロモーター、構成的プロモーター、哺乳動物細胞プロモーター、ウイルスプロモーター、キメラプロモーター、操作されたプロモーター、組織特異的プロモーター、または当該技術分野で知られている任意の他の種類のプロモーターである。いくつかの実施形態では、プロモーターは、哺乳動物ＲＮＡポリメラーゼＩＩプロモーターなどのＲＮＡポリメラーゼＩＩプロモーターである。いくつかの実施形態では、プロモーターはＲＮＡポリメラーゼＩＩＩプロモーターであり、これらに限定されないが、ＨＩプロモーター、ヒトＵ６プロモーター、マウスＵ６プロモーター、またはブタＵ６プロモーターが挙げられる。概して、プロモーターは、内耳細胞内で転写を促進することができるものである。いくつかの実施形態では、プロモーターは、蝸牛特異的プロモーターまたは蝸牛指向性プロモーターである。いくつかの実施形態では、プロモーターは、有毛細胞特異的プロモーター、または支持細胞特異的プロモーターである。
本明細書で使用され得る様々なプロモーターが当該技術分野で知られている。本明細書で使用され得るプロモーターの非限定的な例としては、以下が挙げられる：ヒトＥＦ１α、ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）（米国特許第５，１６８，０６２号、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、ヒトユビキチンＣ（ＵＢＣ）、マウスホスホグリセリン酸キナーゼ１、ポリオーマアデノウイルス、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）、β－グロビン、βアクチン、α－フェトプロテイン、γ－グロビン、β－インターフェロン、γ－グルタミルトランスフェラーゼ、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）、ラウス肉腫ウイルス、ラットインスリン、グリセルアルデヒド－３－リン酸デヒドロゲナーゼ、メタロチオネインＩＩ（ＭＴ ＩＩ）、アミラーゼ、カテプシン、ＭＩムスカリン受容体、レトロウイルスＬＴＲ（例えば、ヒトＴ細胞白血病ウイルスＨＴＬＶ）、ＡＡＶ ＩＴＲ、インターロイキン２、コラゲナーゼ、血小板由来増殖因子、アデノウイルス５ Ｅ２、ストロメライシン、マウスＭＸ遺伝子、グルコース調節タンパク質（ＧＲＰ７８及びＧＲＰ９４）、α－２－マクログロブリン、ビメンチン、ＭＨＣクラスＩ遺伝子 Ｈ－２κｂ、ＨＳＰ７０、プロリフェリン、腫瘍壊死因子、甲状腺刺激ホルモンａ遺伝子、免疫グロブリン軽鎖、Ｔ細胞受容体、ＨＬＡ ＤＱａ及びＤＱ、インターロイキン２受容体、ＭＨＣクラスＩＩ、ＭＨＣクラスＩＩ ＨＬＡ－ＤＲａ、筋クレアチンキナーゼ、プレアルブミン（トランスサイレチン）、エラスターゼＩ、アルブミン遺伝子、ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ＨＡ－ｒａｓ、神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）、Ｈ２Ｂ（ＴＨ２Ｂ）ヒストン、ラット成長ホルモン、ヒト血清アミロイド（ＳＡＡ）、トロポニンＩ（ＴＮ Ｉ）、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ヒト免疫不全ウイルス、及びテナガザル白血病ウイルス（ＧＡＬＶ）プロモーター。プロモーターのさらなる例は、当該技術分野で知られている。例えば、Ｌｏｄｉｓｈ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ ２００７（これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと。いくつかの実施形態では、プロモーターは、ＣＭＶ最初期プロモーターである。いくつかの実施形態では、プロモーターは、ＣＡＧプロモーターまたはＣＡＧ／ＣＢＡプロモーターである。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号４９を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、プロモーターは、配列番号５０を含むか、またはそれからなる。特定の実施形態では、プロモーターは、配列番号５１に例示されるＣＭＶ／ＣＢＡエンハンサー／プロモーター構築物を含む。特定の実施形態では、プロモーターは、配列番号５２に例示されるＣＭＶ／ＣＢＡエンハンサー／プロモーター構築物を含む。特定の実施形態では、プロモーターは、配列番号５３に例示されるＣＡＧプロモーターまたはＣＭＶ／ＣＢＡ／ＳＶ－４０エンハンサー／プロモーター構築物を含む。特定の実施形態では、プロモーターは、配列番号５４に例示されるＣＡＧプロモーターまたはＣＭＶ／ＣＢＡ／ＳＶ－４０エンハンサー／プロモーター構築物を含む。いくつかの実施形態では、プロモーター配列は、配列番号４９または５０によって表されるプロモーター配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一である。いくつかの実施形態では、エンハンサー－プロモーター配列は、配列番号５１、５２、５３、または５４によって表されるエンハンサー－プロモーター配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一である。
「構成的」プロモーターという用語は、タンパク質（例えば、抗ＶＥＧＦタンパク質）をコードする核酸と作動可能に連結された際に、ほとんどまたは全ての生理的条件下で、細胞において核酸からＲＮＡを転写させるヌクレオチド配列のことを指す。
構成的プロモーターの例としては、限定されないが、以下が挙げられる：レトロウイルスラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）ＬＴＲプロモーター、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター（例えば、Ｂｏｓｈａｒｔ ｅｔ ａｌ，Ｃｅｌｌ ４１：５２１－５３０，１９８５（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと）、ＳＶ４０プロモーター、ジヒドロ葉酸レダクターゼプロモーター、βアクチンプロモーター、ホスホグリセロールキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター、及びＥＦｌ－αプロモーター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）。
誘導性プロモーターは、遺伝子発現の調節を可能にし、外因的に供給される化合物、温度などの環境因子、または特定の生理学的状態、例えば急性期、細胞の特定の分化状態の存在によって、または複製中の細胞のみにおいて、調節され得る。誘導性プロモーター及び誘導システムは、様々な市販の供給源（限定されるものではないが、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、及びＡｒｉａｄを含む）から入手可能である。誘導性プロモーターのさらなる例が当該技術分野で知られている。
外因的に供給される化合物によって調節される誘導性プロモーターの例としては、以下が挙げられる：亜鉛誘導性ヒツジメタロチオネイン（ＭＴ）プロモーター、デキサメタゾン（Ｄｅｘ）誘導性マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）プロモーター、Ｔ７ポリメラーゼプロモーターシステム（ＷＯ９８／１００８８、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）；エクジソン昆虫プロモーター（Ｎｏ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９３：３３４６－３３５１，１９９６、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、テトラサイクリン抑制システム（Ｇｏｓｓｅｎ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８９：５５４７－５５５１，１９９２、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、テトラサイクリン誘導システム（Ｇｏｓｓｅｎ ｅｔ ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６８：１７６６－１７６９，１９９５；また、Ｈａｒｖｅｙ ｅｔ ａｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，２：５１２－５１８，１９９８（これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと）、ＲＵ４８６誘導システム（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１５：２３９－２４３，１９９７及びＷａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．４：４３２－４４１，１９９７、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、及びラパマイシン誘導システム（Ｍａｇａｒｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１００：２８６５－２８７２，１９９７、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
「組織特異的」プロモーターという用語は、ある特定の特異的細胞タイプ及び／または組織内でのみ活性を有するプロモーターを指す（例えば、特異的遺伝子の転写は、組織特異的プロモーターに結合する転写調節及び／または制御タンパク質を発現する細胞内でのみ生じる）。いくつかの実施形態では、調節及び／または制御配列は組織特異的遺伝子発現能を付与する。いくつかの場合において、組織特異的調節及び／または制御配列は、組織特異的様式で転写を誘導する組織特異的転写因子に結合する。
いくつかの実施形態では、組織特異的プロモーターは蝸牛特異的プロモーターである。いくつかの実施形態では、組織特異的プロモーターは蝸牛有毛細胞特異的プロモーターである。蝸牛有毛細胞特異的プロモーターの非限定的な例としては、これらに限定されないが、ＡＴＯＨ１プロモーター、ＰＯＵ４Ｆ３プロモーター、ＬＨＸ３プロモーター、ＭＹＯ７Ａプロモーター、ＭＹＯ６プロモーター、α９ＡＣＨＲプロモーター、及びαｌ０ＡＣＨＲプロモーターが挙げられる。いくつかの実施形態では、プロモーターは、ＰＲＥＳＴＩＮプロモーターまたはＯＮＣＯＭＯＤプロモーターなどの蝸牛有毛細胞特異的プロモーターである。例えば、Ｚｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ４０５：１４９－１５５，２０００；Ｔｉａｎ ｅｔ ａｌ．Ｄｅｖ．Ｄｙｎ．２３ ｌ：１９９－２０３，２００４；及びＲｙａｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖ．Ｏｔｏｒｈｉｎｏｌａｒｙｎｇｏｌ．６６：９９－１１５，２００９（これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと。
いくつかの実施形態では、組織特異的プロモーターは、耳細胞特異的プロモーターである。いくつかの実施形態では、組織特異的プロモーターは、内耳細胞特異的プロモーターである。内耳非感覚細胞特異的プロモーターの非限定的な例としては、これらに限定されないが、ＧＪＢ２、ＧＪＢ６、ＳＬＣ２６Ａ４、ＴＥＣＴＡ、ＤＦＮＡ５、ＣＯＣＨ、ＮＤＰ、ＳＹＮ１、ＧＦＡＰ、ＰＬＰ、ＴＡＫ１、またはＳＯＸ２１が挙げられる。いくつかの実施形態では、蝸牛非感覚細胞特異的プロモーターは、内耳支持細胞特異的プロモーターであり得る。内耳支持細胞特異的プロモーターの非限定的な例としては、これらに限定されないが、ＳＯＸ２、ＦＧＦＲ３、ＰＲＯＸ１、ＧＬＡＳＴ１、ＬＧＲ５、ＨＥＳ１、ＨＥＳ５、ＮＯＴＣＨ１、ＪＡＧ１、ＣＤＫＮ１Ａ、ＣＤＫＮ１Ｂ、ＳＯＸ１０、Ｐ７５、ＣＤ４４、ＨＥＹ２、ＬＦＮＧ、またはＳ１００ｂが挙げられる。
いくつかの実施形態では、提供されるｒＡＡＶ構築物は、ＣＡＧ、ＣＢＡ、ＣＭＶ、またはＣＢ７プロモーターから選択されるプロモーター配列を含む。本明細書に記載の任意の治療用組成物のいくつかの実施形態では、第１及び／または単独のｒＡＡＶ構築物は、蝸牛及び／または内耳特異的プロモーターから選択される少なくとも１つのプロモーター配列をさらに含む。
例示的なＣＢＡプロモーター（配列番号４９）
ＧＴＣＧＡＧＧＴＧＡＧＣＣＣＣＡＣＧＴＴＣＴＧＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＣＣＣＡＴＣＴＣＣＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＣＣＣＣＡＡＴＴＴＴＧＴＡＴＴＴＡＴＴＴＡＴＴＴＴＴＴＡＡＴＴＡＴＴＴＴＧＴＧＣＡＧＣＧＡＴＧＧＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＡＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＡＧＡＧＧＴＧＣＧＧＣＧＧＣＡＧＣＣＡＡＴＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＧＣＴＣＣＧＡＡＡＧＴＴＴＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＴＡＴＡＡＡＡＡＧＣＧＡＡＧＣＧＣＧＣＧＧＣＧＧＧＣＧ
例示的なＣＢＡプロモーター（配列番号５０）
ＧＴＣＧＡＧＧＴＧＡＧＣＣＣＣＡＣＧＴＴＣＴＧＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＣＣＣＡＴＣＴＣＣＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＣＣＣＣＡＡＴＴＴＴＧＴＡＴＴＴＡＴＴＴＡＴＴＴＴＴＴＡＡＴＴＡＴＴＴＴＧＴＧＣＡＧＣＧＡＴＧＧＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＡＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＡＧＡＧＧＴＧＣＧＧＣＧＧＣＡＧＣＣＡＡＴＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＧＣＴＣＣＧＡＡＡＧＴＴＴＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＴＡＴＡＡＡＡＡＧＣＧＡＡＧＣＧＣＧＣＧＧＣＧＧＧＣＧ
例示的なＣＭＶ／ＣＢＡエンハンサー／プロモーター（配列番号５１）
ＧＡＣＡＴＴＧＡＴＴＡＴＴＧＡＣＴＡＧＴＴＡＴＴＡＡＴＡＧＴＡＡＴＣＡＡＴＴＡＣＧＧＧＧＴＣＡＴＴＡＧＴＴＣＡＴＡＧＣＣＣＡＴＡＴＡＴＧＧＡＧＴＴＣＣＧＣＧＴＴＡＣＡＴＡＡＣＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＴＧＡＣＣＧＣＣＣＡＡＣＧＡＣＣＣＣＣＧＣＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＡＡＴＧＡＣＧＴＡＴＧＴＴＣＣＣＡＴＡＧＴＡＡＣＧＣＣＡＡＴＡＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＧＴＧＧＡＣＴＡＴＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＣＴＧＣＣＣＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＴＡＴＣＡＴＡＴＧＣＣＡＡＧＴＡＣＧＣＣＣＣＣＴＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＡＴＴＡＴＧＣＣＣＡＧＴＡＣＡＴＧＡＣＣＴＴＡＴＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＴＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＴＡＣＧＴＡＴＴＡＧＴＣＡＴＣＧＣＴＡＴＴＡＣＣＡＴＧＧＧＴＣＧＡＧＧＴＧＡＧＣＣＣＣＡＣＧＴＴＣＴＧＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＣＣＣＡＴＣＴＣＣＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＣＣＣＣＡＡＴＴＴＴＧＴＡＴＴＴＡＴＴＴＡＴＴＴＴＴＴＡＡＴＴＡＴＴＴＴＧＴＧＣＡＧＣＧＡＴＧＧＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＡＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＡＧＡＧＧＴＧＣＧＧＣＧＧＣＡＧＣＣＡＡＴＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＧＣＴＣＣＧＡＡＡＧＴＴＴＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＴＡＴＡＡＡＡＡＧＣＧＡＡＧＣＧＣＧＣＧＧＣＧＧＧＣＧ
例示的なＣＭＶ／ＣＢＡエンハンサー／プロモーター（配列番号５２）
ＧＡＣＡＴＴＧＡＴＴＡＴＴＧＡＣＴＡＧＴＴＡＴＴＡＡＴＡＧＴＡＡＴＣＡＡＴＴＡＣＧＧＧＧＴＣＡＴＴＡＧＴＴＣＡＴＡＧＣＣＣＡＴＡＴＡＴＧＧＡＧＴＴＣＣＧＣＧＴＴＡＣＡＴＡＡＣＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＴＧＡＣＣＧＣＣＣＡＡＣＧＡＣＣＣＣＣＧＣＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＡＡＴＧＡＣＧＴＡＴＧＴＴＣＣＣＡＴＡＧＴＡＡＣＧＣＣＡＡＴＡＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＧＴＧＧＡＣＴＡＴＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＣＴＧＣＣＣＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＴＡＴＣＡＴＡＴＧＣＣＡＡＧＴＡＣＧＣＣＣＣＣＴＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＡＴＴＡＴＧＣＣＣＡＧＴＡＣＡＴＧＡＣＣＴＴＡＴＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＴＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＴＡＣＧＴＡＴＴＡＧＴＣＡＴＣＧＣＴＡＴＴＡＣＣＡＴＧＧＧＴＣＧＡＧＧＴＧＡＧＣＣＣＣＡＣＧＴＴＣＴＧＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＣＣＣＡＴＣＴＣＣＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＣＣＣＣＡＡＴＴＴＴＧＴＡＴＴＴＡＴＴＴＡＴＴＴＴＴＴＡＡＴＴＡＴＴＴＴＧＴＧＣＡＧＣＧＡＴＧＧＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＡＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＡＧＡＧＧＴＧＣＧＧＣＧＧＣＡＧＣＣＡＡＴＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＧＣＴＣＣＧＡＡＡＧＴＴＴＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＴＡＴＡＡＡＡＡＧＣＧＡＡＧＣＧＣＧＣＧＧＣＧＧＧＣＧ
例示的なＣＡＧエンハンサー／プロモーター（配列番号５３）
ＧＡＣＡＴＴＧＡＴＴＡＴＴＧＡＣＴＡＧＴＴＡＴＴＡＡＴＡＧＴＡＡＴＣＡＡＴＴＡＣＧＧＧＧＴＣＡＴＴＡＧＴＴＣＡＴＡＧＣＣＣＡＴＡＴＡＴＧＧＡＧＴＴＣＣＧＣＧＴＴＡＣＡＴＡＡＣＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＴＧＡＣＣＧＣＣＣＡＡＣＧＡＣＣＣＣＣＧＣＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＡＡＴＧＡＣＧＴＡＴＧＴＴＣＣＣＡＴＡＧＴＡＡＣＧＣＣＡＡＴＡＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＧＴＧＧＡＣＴＡＴＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＣＴＧＣＣＣＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＴＡＴＣＡＴＡＴＧＣＣＡＡＧＴＡＣＧＣＣＣＣＣＴＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＡＴＴＡＴＧＣＣＣＡＧＴＡＣＡＴＧＡＣＣＴＴＡＴＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＴＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＴＡＣＧＴＡＴＴＡＧＴＣＡＴＣＧＣＴＡＴＴＡＣＣＡＴＧＧＧＴＣＧＡＧＧＴＧＡＧＣＣＣＣＡＣＧＴＴＣＴＧＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＣＣＣＡＴＣＴＣＣＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＣＣＣＣＡＡＴＴＴＴＧＴＡＴＴＴＡＴＴＴＡＴＴＴＴＴＴＡＡＴＴＡＴＴＴＴＧＴＧＣＡＧＣＧＡＴＧＧＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＡＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＡＧＡＧＧＴＧＣＧＧＣＧＧＣＡＧＣＣＡＡＴＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＧＣＴＣＣＧＡＡＡＧＴＴＴＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＴＡＴＡＡＡＡＡＧＣＧＡＡＧＣＧＣＧＣＧＧＣＧＧＧＣＧＧＧＡＧＴＣＧＣＴＧＣＧＴＴＧＣＣＴＴＣＧＣＣＣＣＧＴＧＣＣＣＣＧＣＴＣＣＧＣＧＣＣＧＣＣＴＣＧＣＧＣＣＧＣＣＣＧＣＣＣＣＧＧＣＴＣＴＧＡＣＴＧＡＣＣＧＣＧＴＴＡＣＴＣＣＣＡＣＡＧＧＴＧＡＧＣＧＧＧＣＧＧＧＡＣＧＧＣＣＣＴＴＣＴＣＣＴＣＣＧＧＧＣＴＧＴＡＡＴＴＡＧＣＧＣＴＴＧＧＴＴＴＡＡＴＧＡＣＧＧＣＴＣＧＴＴＴＣＴＴＴＴＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＧＴＧＡＡＡＧＣＣＴＴＡＡＡＧＧＧＣＴＣＣＧＧＧＡＧＧＧＣＣＣＴＴＴＧＴＧＣＧＧＧＧＧＧＧＡＧＣＧＧＣＴＣＧＧＧＧＧＧＴＧＣＧＴＧＣＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＧＧＡＧＣＧＣＣＧＣＧＴＧＣＧＧＣＣＣＧＣＧＣＴＧＣＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧＴＧＡＧＣＧＣＴＧＣＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＴＴＴＧＴＧＣＧＣＴＣＣＧＣＧＴＧＴＧＣＧＣＧＡＧＧＧＧＡＧＣＧＣＧＧＣＣＧＧＧＧＧＣＧＧＴＧＣＣＣＣＧＣＧＧＴＧＣＧＧＧＧＧＧＧＣＴＧＣＧＡＧＧＧＧＡＡＣＡＡＡＧＧＣＴＧＣＧＴＧＣＧＧＧＧＴＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＧＧＧＧＧＴＧＡＧＣＡＧＧＧＧＧＴＧＴＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＧＴＣＧＧＧＣＴＧＴＡＡＣＣＣＣＣＣＣＣＴＧＣＡＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＧＡＧＴＴＧＣＴＧＡＧＣＡＣＧＧＣＣＣＧＧＣＴＴＣＧＧＧＴＧＣＧＧＧＧＣＴＣＣＧＴＧＣＧＧＧＧＣＧＴＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＴＣＧＣＣＧＴＧＣＣＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＴＧＧＣＧＧＣＡＧＧＴＧＧＧＧＧＴＧＣＣＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＣＧＣＣＴＣＧＧＧＣＣＧＧＧＧＡＧＧＧＣＴＣＧＧＧＧＧＡＧＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＣＣＧＧＡＧＣＧＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧＴＣＧＡＧＧＣＧＣＧＧＣＧＡＧＣＣＧＣＡＧＣＣＡＴＴＧＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＴＡＡＴＣＧＴＧＣＧＡＧＡＧＧＧＣＧＣＡＧＧＧＡＣＴＴＣＣＴＴＴＧＴＣＣＣＡＡＡＴＣＴＧＴＧＣＧＧＡＧＣＣＧＡＡＡＴＣＴＧＧＧＡＧＧＣＧＣＣＧＣＣＧＣＡＣＣＣＣＣＴＣＴＡＧＣＧＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＧＡＡＧＣＧＧＴＧＣＧＧＣＧＣＣＧＧＣＡＧＧＡＡＧＧＡＡＡＴＧＧＧＣＧＧＧＧＡＧＧＧＣＣＴＴＣＧＴＧＣＧＴＣＧＣＣＧＣＧＣＣＧＣＣＧＴＣＣＣＣＴＴＣＴＣＣＣＴＣＴＣＣＡＧＣＣＴＣＧＧＧＧＣＴＧＴＣＣＧＣＧＧＧＧＧＧＡＣＧＧＣＴＧＣＣＴＴＣＧＧＧＧＧＧＧＡＣＧＧＧＧＣＡＧＧＧＣＧＧＧＧＴＴＣＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＧＴＧＴＧＡＣＣＧＧＣＧＧＣＴＣＴＡＧＡＧＣＣＴＣＴＧＣＴＡＡＣＣＡＴＧＴＴＣＡＴＧＣＣＴＴＣＴＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＡＣＡＧ
例示的なＣＡＧエンハンサー／プロモーター（配列番号５４）
ＧＡＣＡＴＴＧＡＴＴＡＴＴＧＡＣＴＡＧＴＴＡＴＴＡＡＴＡＧＴＡＡＴＣＡＡＴＴＡＣＧＧＧＧＴＣＡＴＴＡＧＴＴＣＡＴＡＧＣＣＣＡＴＡＴＡＴＧＧＡＧＴＴＣＣＧＣＧＴＴＡＣＡＴＡＡＣＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＴＧＡＣＣＧＣＣＣＡＡＣＧＡＣＣＣＣＣＧＣＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＡＡＴＧＡＣＧＴＡＴＧＴＴＣＣＣＡＴＡＧＴＡＡＣＧＣＣＡＡＴＡＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＧＴＧＧＡＣＴＡＴＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＣＴＧＣＣＣＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＴＡＴＣＡＴＡＴＧＣＣＡＡＧＴＡＣＧＣＣＣＣＣＴＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＡＴＴＡＴＧＣＣＣＡＧＴＡＣＡＴＧＡＣＣＴＴＡＴＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＴＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＴＡＣＧＴＡＴＴＡＧＴＣＡＴＣＧＣＴＡＴＴＡＣＣＡＴＧＧＧＴＣＧＡＧＧＴＧＡＧＣＣＣＣＡＣＧＴＴＣＴＧＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＣＣＣＡＴＣＴＣＣＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＣＣＣＣＡＡＴＴＴＴＧＴＡＴＴＴＡＴＴＴＡＴＴＴＴＴＴＡＡＴＴＡＴＴＴＴＧＴＧＣＡＧＣＧＡＴＧＧＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＡＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＡＧＡＧＧＴＧＣＧＧＣＧＧＣＡＧＣＣＡＡＴＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＧＣＴＣＣＧＡＡＡＧＴＴＴＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＴＡＴＡＡＡＡＡＧＣＧＡＡＧＣＧＣＧＣＧＧＣＧＧＧＣＧＧＧＡＧＴＣＧＣＴＧＣＧＴＴＧＣＣＴＴＣＧＣＣＣＣＧＴＧＣＣＣＣＧＣＴＣＣＧＣＧＣＣＧＣＣＴＣＧＣＧＣＣＧＣＣＣＧＣＣＣＣＧＧＣＴＣＴＧＡＣＴＧＡＣＣＧＣＧＴＴＡＣＴＣＣＣＡＣＡＧＧＴＧＡＧＣＧＧＧＣＧＧＧＡＣＧＧＣＣＣＴＴＣＴＣＣＴＣＣＧＧＧＣＴＧＴＡＡＴＴＡＧＣＧＣＴＴＧＧＴＴＴＡＡＴＧＡＣＧＧＣＴＣＧＴＴＴＣＴＴＴＴＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＧＴＧＡＡＡＧＣＣＴＴＡＡＡＧＧＧＣＴＣＣＧＧＧＡＧＧＧＣＣＣＴＴＴＧＴＧＣＧＧＧＧＧＧＧＡＧＣＧＧＣＴＣＧＧＧＧＧＧＴＧＣＧＴＧＣＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＧＧＡＧＣＧＣＣＧＣＧＴＧＣＧＧＣＣＣＧＣＧＣＴＧＣＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧＴＧＡＧＣＧＣＴＧＣＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＴＴＴＧＴＧＣＧＣＴＣＣＧＣＧＴＧＴＧＣＧＣＧＡＧＧＧＧＡＧＣＧＣＧＧＣＣＧＧＧＧＧＣＧＧＴＧＣＣＣＣＧＣＧＧＴＧＣＧＧＧＧＧＧＧＣＴＧＣＧＡＧＧＧＧＡＡＣＡＡＡＧＧＣＴＧＣＧＴＧＣＧＧＧＧＴＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＧＧＧＧＧＴＧＡＧＣＡＧＧＧＧＧＴＧＴＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＧＴＣＧＧＧＣＴＧＴＡＡＣＣＣＣＣＣＣＣＴＧＣＡＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＧＡＧＴＴＧＣＴＧＡＧＣＡＣＧＧＣＣＣＧＧＣＴＴＣＧＧＧＴＧＣＧＧＧＧＣＴＣＣＧＴＧＣＧＧＧＧＣＧＴＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＴＣＧＣＣＧＴＧＣＣＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＴＧＧＣＧＧＣＡＧＧＴＧＧＧＧＧＴＧＣＣＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＣＧＣＣＴＣＧＧＧＣＣＧＧＧＧＡＧＧＧＣＴＣＧＧＧＧＧＡＧＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＣＣＧＧＡＧＣＧＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧＴＣＧＡＧＧＣＧＣＧＧＣＧＡＧＣＣＧＣＡＧＣＣＡＴＴＧＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＴＡＡＴＣＧＴＧＣＧＡＧＡＧＧＧＣＧＣＡＧＧＧＡＣＴＴＣＣＴＴＴＧＴＣＣＣＡＡＡＴＣＴＧＴＧＣＧＧＡＧＣＣＧＡＡＡＴＣＴＧＧＧＡＧＧＣＧＣＣＧＣＣＧＣＡＣＣＣＣＣＴＣＴＡＧＣＧＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＧＡＡＧＣＧＧＴＧＣＧＧＣＧＣＣＧＧＣＡＧＧＡＡＧＧＡＡＡＴＧＧＧＣＧＧＧＧＡＧＧＧＣＣＴＴＣＧＴＧＣＧＴＣＧＣＣＧＣＧＣＣＧＣＣＧＴＣＣＣＣＴＴＣＴＣＣＣＴＣＴＣＣＡＧＣＣＴＣＧＧＧＧＣＴＧＴＣＣＧＣＧＧＧＧＧＧＡＣＧＧＣＴＧＣＣＴＴＣＧＧＧＧＧＧＧＡＣＧＧＧＧＣＡＧＧＧＣＧＧＧＧＴＴＣＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＧＴＧＴＧＡＣＣＧＧＣＧＧＣＴＣＴＡＧＡＧＣＣＴＣＴＧＣＴＡＡＣＣＡＴＧＴＴＣＡＴＧＣＣＴＴＣＴＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＡＣＡＧ
特定の実施形態では、プロモーターは、配列番号５５に記載の内因性ヒトＡＴＯＨ１エンハンサー－プロモーターである。いくつかの実施形態では、エンハンサー－プロモーター配列は、配列番号５５によって表されるエンハンサー－プロモーター配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一である。
例示的なヒトＡＴＯＨ１エンハンサー－プロモーター（配列番号５５）
ＣＴＡＴＧＧＡＧＴＴＴＧＣＡＴＡＡＣＡＡＡＣＧＴＴＴＧＧＣＡＧＣＴＣＧＣＴＣＴＣＴＴＡＣＡＣＴＣＣＡＴＴＡＡＣＡＡＧＣＴＧＴＡＡＣＡＴＡＴＡＧＣＴＧＣＡＧＧＴＴＧＣＴＡＴＡＡＴＣＴＣＡＴＴＡＡＴＡＴＴＴＴＧＧＡＡＡＣＴＴＧＡＡＴＡＴＴＧＡＧＴＡＴＴＴＣＴＧＡＧＴＧＣＴＣＡＴＴＣＣＣＣＡＴＡＴＧＣＣＡＧＣＣＡＣＴＴＣＴＧＣＣＡＴＧＣＴＧＡＣＴＧＧＴＴＣＣＴＴＴＣＴＣＴＣＣＡＴＴＡＴＴＡＧＣＡＡＴＴＡＧＣＴＴＣＴＴＡＣＣＴＴＣＣＡＡＡＧＴＣＡＧＡＴＣＣＡＡＧＧＴＡＴＣＣＡＡＧＡＴＡＣＴＡＧＣＡＡＡＧＧＡＡＴＣＡＡＣＴＡＴＧＴＧＴＧＣＡＡＧＴＴＡＡＧＣＡＴＧＣＴＴＡＡＴＡＴＣＡＣＣＣＡＡＡＣＡＡＡＣＡＡＡＧＡＧＧＣＡＧＣＡＴＴＴＣＴＴＡＡＡＧＴＡＡＴＧＡＡＧＡＴＡＧＡＴＡＡＡＴＣＧＧＧＴＴＡＧＴＣＣＴＴＴＧＣＧＡＣＡＣＴＧＣＴＧＧＴＧＣＴＴＴＣＴＡＧＡＧＴＴＴＴＡＴＡＴＡＴＴＴＴＡＡＧＣＡＧＣＴＴＧＣＴＴＴＡＴＡＴＴＣＴＧＴＣＴＴＴＧＣＣＴＣＣＣＡＣＣＣＣＡＣＣＡＧＣＡＣＴＴＴＴＡＴＴＴＧＴＧＧＡＧＧＧＴＴＴＴＧＧＣＴＣＧＣＣＡＣＡＣＴＴＴＧＧＧＡＡＡＣＴＴＡＴＴＴＧＡＴＴＴＣＡＣＧＧＡＧＡＧＣＴＧＡＡＧＧＡＡＧＡＴＣＡＴＴＴＴＴＧＧＣＡＡＣＡＧＡＣＡＡＧＴＴＴＡＡＡＣＡＣＧＡＴＴＴＣＴＡＴＧＧＧＡＣＡＴＴＧＣＴＡＡＣＴＧＧＧＧＣＣＣＣＴＡＡＧＧＡＧＡＡＡＧＧＧＧＡＡＡＣＴＧＡＧＣＧＧＡＧＡＡＴＧＧＧＴＴＡＡＡＴＣＣＴＴＧＧＡＡＧＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＧＣＡＧＧＧＧＡＧＧＡＧＡＧＡＡＧＴＣＧＧＡＧＧＡＧＴＡＴＡＡＡＧＡＡＡＡＧＧＡＣＡＧＧＡＡＣＣＡＡＧＡＡＧＣＧＴＧＧＧＧＧＴＧＧＴＴＴＧＣＣＧＴＡＡＴＧＴＧＡＧＴＧＴＴＴＣＴＴＡＡＴＴＡＧＡＧＡＡＣＧＧＴＴＧＡＣＡＡＴＡＧＡＧＧＧＴＣＴＧＧＣＡＧＡＧＧＣＴＣＣＴＧＧＣＣＧＣＧＧＴＧＣＧＧＡＧＣＧＴＣＴＧＧＡＧＣＧＧＡＧＣＡＣＧＣＧＣＴＧＴＣＡＧＣＴＧＧＴＧＡＧＣＧＣＡＣＴＣＴＣＣＴＴＴＣＡＧＧＣＡＧＣＴＣＣＣＣＧＧＧＧＡＧＣＴＧＴＧＣＧＧＣＣＡＣＡＴＴＴＡＡＣＡＣＣＡＴＣＡＴＣＡＣＣＣＣＴＣＣＣＣＧＧＣＣＴＣＣＴＣＡＡＣＣＴＣＧＧＣＣＴＣＣＴＣＣＴＣＧＴＣＧＡＣＡＧＣＣＴＴＣＣＴＴＧＧＣＣＣＣＣＡＣＣＡＧＣＡＧＡＧＣＴＣＡＣＡＧＴＡＧＣＧＡＧＣＧＴＣＴＣＴＣＧＣＣＧＴＣＴＣＣＣＧＣＡＣＴＣＧＧＣＣＧＧＧＧＣＣＴＣＴＣＴＣＣＴＣＣＣＣＣＡＧＣＴＧＣＧＣＡＧＣＧＧＧＡＧＣＣＧＣＣＡＣＴＧＣＣＣＡＣＴＧＣＡＣＣＴＣＣＣＡＧＣＡＡＣＣＡＧＣＣＣＡＧＣＡＣＧＣＡＡＡＧＡＡＧＣＴＧＣＧＣＡＡＡＧＴＴＡＡＡＧＣＣＡＡＧＣＡＡＴＧＣＣＡＡＧＧＧＧＡＧＧＧＧＡＡＧＣＴＧＧＡＧＧＣＧＧＧＣＴＴＴＧＡＧＴＧＧＣＴＴＣＴＧＧＧＣＧＣＣＴＧＧＣＧＧＧＴＣＣＡＧＡＡＴＣＧＣＣＣＡＧＡＧＣＣＧＣＣＣＧＣＧＧＴＣＧＴＧＣＡＣＡＴＣＴＧＡＣＣＣＧＡＧＴＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＡＧＣＣＧＡＧＡＧＣＣＧＧＣＴＣＣＧＣＡＣＣＧＣＴＣＣＣＧＣＡＣＣＣＣＡＧＣＣＧＣＣＧＧＧＧＴＧＧＴＧＡＣＡＣＡＣＡＣＣＧＧＡＧＴＣＧＡＡＴＴＡＣＡＧＣＣＣＴＧＣＡＡＴＴＡＡＣＡＴＡＴＧＡＡＴＣＴＧＡＣＧＡＡＴＴＴＡＡＡＡＧＡＡＧＧＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＣＣＴＧＡＧＣＡＧＧＣＴＴＧＧＧＡＧＴＣＣＴＣＴＧＣＡＣＡＣＡＡＧＡＡＣＴＴＴＴＣＴＣＧＧＧＧＴＧＴＡＡＡＡＡＣＴＣＴＴＴＧＡＴＴＧＧＣＴＧＣＴＣＧＣＡＣＧＣＧＣＣＴＧＣＣＣＧＣＧＣＣＣＴＣＣＡＴＴＧＧＣＴＧＡＧＡＡＧＡＣＡＣＧＣＧＡＣＣＧＧＣＧＣＧＡＧＧＡＧＧＧＧＧＴＴＧＧＧＡＧＡＧＧＡＧＣＧＧＧＧＧＧＡＧＡＣＴＧＡＧＴＧＧＣＧＣＧＴＧＣＣＧＣＴＴＴＴＴＡＡＡＧＧＧＧＣＧＣＡＧＣＧＣＣＴＴＣＡＧＣＡＡＣＣＧＧＡＧＡＡＧＣＡＴＡＧＴＴＧＣＡＣＧＣＧＡＣＣＴＧＧＴＧＴＧＴＧＡＴＣＴＣＣＧＡＧＴＧＧＧＴＧＧＧＧＧＡＧＧＧＴＣＧＡＧＧＡＧＧＧＡＡＡＡＡＡＡＡＡＴＡＡＧＡＣＧＴＴＧＣＡＧＡＡＧＡＧＡＣＣＣＧＧＡＡＡＧＧＧＣＣＴＴＴＴＴＴＴＴＧＧＴＴＧＡＧＣＴＧＧＴＧＴＣＣＣＡＧＴＧＣＴＧＣＣＴＣＣＧＡＴＣＣＴＧＡＧＣＣＴＣＣＧＡＧＣＣＴＴＴＧＣＡＧＴＧＣＡＡ
特定の実施形態では、プロモーターは、配列番号５６または５７に記載の内因性ヒトＳＬＣ２６Ａ４即時（ｉｍｍｅｄｉａｔｅ）プロモーターである。特定の実施形態では、プロモーターは、配列番号５８、５９、または６０に記載の内因性ヒトＳＬＣ２６Ａ４エンハンサー－プロモーターである。いくつかの実施形態では、エンハンサー－プロモーター配列は、配列番号５６、５７、５８、５９、または６０によって表されるプロモーターまたはエンハンサー－プロモーター配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一である。特定の実施形態では、プロモーターは、配列番号５８、５９、または６０内に含まれるヒトＳＬＣ２６Ａ４内因性エンハンサー－プロモーター配列である。
例示的なヒトＳＬＣ２６Ａ４即時プロモーター（配列番号５６）
ＣＴＧＣＣＴＴＣＴＧＡＧＡＧＣＧＣＴＡＴＡＡＡＧＧＣＡＧＣＧＧＡＡＧＧＧＴＡＧＴＣＣＧＣＧＧＧＧＣＡＴＴＣＣＧＧＧＣＧＧ
例示的なヒトＳＬＣ２６Ａ４即時プロモーター（配列番号５７）
ＣＴＣＴＡＧＧＣＧＧＧＣＴＣＴＧＣＴＣＴＴＣＴＴＴＡＡＧＧＡＧＴＣＣＣＡＣＡＧＧＧＣＣＴＧＧＣＣＣＧＣＣＣＣＴＧＡＣＣＴ
例示的なヒトＳＬＣ２６Ａ４エンハンサープロモーター（配列番号５８）
ＴＡＡＡＧＡＧＴＴＧＴＧＡＧＴＴＧＴＧＴＡＧＧＴＧＡＧＴＴＧＣＣＡＴＧＧＡＧＣＴＡＣＡＡＡＴＡＴＧＡＧＴＴＧＡＴＡＴＴＣＴＧＡＡＡＴＣＣＴＡＧＡＣＡＧＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＧＧＴＴＡＡＧＡＡＡＡＡＴＣＣＴＴＡＴＧＣＡＣＴＣＡＣＴＴＧＣＡＡＡＧＡＴＡＴＣＣＡＣＡＧＣＡＴＧＣＴＣＴＴＡＡＴＧＧＡＧＡＡＡＡＡＣＡＡＡＧＣＣＴＴＡＧＡＴＣＡＡＡＴＡＴＧＴＡＡＡＧＴＡＡＴＴＴＴＴＡＧＴＴＴＴＴＴＧＡＡＡＡＧＧＴＡＴＧＴＴＴＧＧＧＣＴＡＴＡＧＡＴＡＡＡＴＣＴＧＴＴＣＡＡＡＡＡＡＣＡＴＧＡＧＡＧＡＡＧＡＴＡＡＴＡＡＴＧＧＴＴＧＡＡＡＧＧＡＧＡＣＡＣＡＧＴＧＣＴＴＧＣＣＣＴＣＡＡＧＡＡＧＴＴＴＴＴＧＴＣＴＡＧＴＧＡＧＧＧＡＧＡＧＡＧＡＡＣＴＴＧＴＡＴＧＴＡＡＡＴＡＡＡＡＴＴＧＴＧＴＴＡＣＴＡＡＧＧＴＡＧＡＴＡＧＴＧＡＧＡＡＧＴＡＡＣＴＴＡＡＧＡＧＡＧＧＡＴＣＡＧＡＴＡＡＧＧＴＡＴＴＡＡＧＡＧＡＡＴＡＣＡＧＡＡＡＡＧＧＧＴＣＴＧＧＡＴＴＡＡＴＴＣＴＧＡＡＣＡＧＣＡＴＣＡＡＡＧＡＡＴＧＴＴＣＴＴＧＣＡＡＧＡＧＡＴＡＧＴＧＴＴＴＴＣＡＣＣＡＧＡＴＣＴＴＧＡＡＧＧＴＡＴＧＧＡＴＧＡＧＧＧＴＡＴＡＣＡＧＡＧＴＧＡＧＴＡＴＡＴＴＣＡＧＡＴＴＣＴＡＣＴＴＴＡＡＡＡＣＡＡＡＴＡＣＴＴＴＣＣＴＣＴＧＴＴＧＴＡＧＴＧＧＡＧＴＴＧＡＧＣＴＡＴＡＣＡＴＣＣＡＡＣＡＡＴＡＡＴＧＡＡＡＡＡＡＴＡＣＡＣＧＣＡＴＡＴＡＴＡＣＡＴＡＴＡＴＧＧＡＧＡＧＡＧＡＴＡＣＡＴＡＴＴＴＴＡＧＴＡＣＡＴＧＴＡＧＣＡＡＴＴＧＡＴＴＡＡＴＡＡＡＴＧＴＡＣＡＧＴＴＴＡＡＧＴＣＧＣＡＴＧＣＡＡＡＡＣＣＴＴＧＧＡＧＴＧＡＴＡＧＣＡＡＡＣＴＴＣＡＴＴＧＴＡＧＧＡＴＧＴＴＴＡＧＣＡＧＣＡＴＣＴＣＴＧＧＴＣＴＣＴＡＣＴＣＡＣＴＡＧＡＴＣＣＣＡＡＴＡＧＣＡＴＣＴＣＣＣＴＡＧＧＴＧＴＧＡＣＡＡＣＣＡＡＡＡＡＴＧＴＣＴＣＣＡＧＧＣＡＴＴＧＡＣＣＴＣＴＧＧＡＧＧＣＡＡＡＡＡＡＡＧＣＣＣＴＴＴＡＴＴＡＡＧＡＡＣＣＡＧＴＧＧＴＡＴＡＣＡＴＡＡＧＴＡＡＡＡＣＡＴＡＣＡＣＡＡＧＡＧＡＴＴＣＣＴＣＣＣＣＴＣＴＴＣＴＣＴＧＴＡＴＧＴＧＡＡＴＡＡＡＡＡＴＴＧＣＡＡＡＧＴＴＣＡＴＧＡＣＣＴＧＧＡＴＴＴＴＣＣＴＴＴＴＡＧＧＴＴＴＣＴＴＣＴＴＴＡＧＴＧＧＴＴＣＴＴＡＡＣＴＴＣＡＴＴＧＧＧＴＧＡＡＧＴＡＡＧＣＣＴＴＴＧＡＡＧＡＴＣＴＧＴＴＧＡＡＡＧＣＴＧＴＴＧＡＣＴＣＡＴＴＣＡＣＴＴＣＴＣＡＧＧＡＡＡＡＣＧＣＡＣＡＴＧＣＴＧＡＣＴＡＣＣＡＴＴＴＣＡＧＡＧＡＡＴＴＴＧＣＡＴＣＡＧＧＧＴＴＣＴＣＴＧＧＧＧＡＧＧＡＧＴＴＣＴＧＡＧＴＴＣＴＧＴＴＴＣＣＡＧＧＡＧＣＴＣＧＴＡＧＡＡＴＴＧＴＣＡＴＧＧＴＣＴＧＣＡＴＡＴＧＣＡＡＧＧＣＡＧＧＴＧＧＡＴＴＡＣＧＧＡＡＧＧＴＴＧＡＴＧＴＡＣＡＧＡＧＧＴＣＴＧＴＡＴＴＴＴＧＧＡＧＣＣＴＣＴＴＣＴＧＴＡＴＴＴＡＣＴＴＣＡＧＡＡＣＡＣＴＡＡＣＡＡＴＣＡＧＧＣＧＡＧＡＡＴＧＴＴＣＴＧＧＴＴＴＡＴＣＡＡＡＣＣＣＴＴＣＣＴＴＣＴＧＣＣＴＴＴＣＡＴＣＴＴＡＡＣＣＡＴＧＣＡＴＴＡＧＴＴＴＴＡＡＣＡＡＡＧＴＴＣＡＴＣＣＣＡＡＣＡＧＡＡＧＡＣＡＡＡＡＣＡＣＴＧＡＴＧＡＧＧＴＡＧＧＡＴＡＧＣＴＣＣＡＧＣＴＣＣＴＣＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＴＣＴＡＧＴＣＴＴＧＡＴＴＴＣＣＡＴＧＴＡＧＴＣＣＡＧＴＴＴＡＴＴＣＣＴＴＣＣＣＴＧＡＴＴＧＴＣＣＡＧＧＡＧＡＡＴＧＡＧＡＡＡＡＡＧＡＡＡＡＡＡＣＡＧＡＧＴＣＴＡＧＴＧＧＧＴＡＡＧＡＡＡＧＧＧＣＣＡＣＣＴＧＧＡＣＧＧＣＴＴＧＡＴＴＴＧＧＡＴＴＧＴＧＡＡＡＴＡＡＡＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＴＧＣＡＣＡＣＧＴＡＧＡＡＴＡＡＧＴＧＧＣＴＡＡＡＡＴＣＴＧＡＧＴＡＡＡＴＣＧＴＧＡＡＣＴＣＴＣＴＧＴＡＴＣＣＴＣＣＡＣＣＣＡＴＴＧＡＡＴＡＣＴＣＣＴＡＡＡＡＧＡＣＴＴＴＣＴＡＧＡＡＡＴＴＣＡＡＧＧＡＣＴＴＡＴＴＡＡＴＡＴＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＣＣＡＴＴＧＴＴＣＣＴＣＴＴＣＴＣＣＴＣＣＣＣＡＴＧＴＧＧＴＡＴＧＡＧＡＧＣＡＣＣＴＧＴＧＧＣＡＧＧＣＴＣＣＣＡＧＡＧＡＣＣＡＣＧＧＡＣＣＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＧＧＣＧＧＧＣＴＣＴＧＣＴＣＴＴＣＴＴＴＡＡＧＧＡＧＴＣＣＣＡＣＡＧＧＧＣＣＴＧＧＣＣＣＧＣＣＣＣＴＧＡＣＣＴＣＧＣＡＡＣＣＣＴＴＧＡＧＡＴＴＡＧＴＡＡＣＧＧＧＡＴＧＡＧＴＧＡＧＧＡＴＣＣＧＧＧＴＧＧＣＣＣＣＴＧＣＧＴＧＧＣＡＧＣＣＡＧＴＡＡＧＡＧＴＣＴＣＡＧＣＣＴＴＣＣＣＧＧＴＴＣＧＧＧＡＡＡＧＧＧＧＡＡＧＡＡＴＧＣＡＧＧＡＧＧＧＧＴＡＧＧＡＴＴＴＣＴＴＴＣＣＴＧＡＴＡＧＧＡＴＣＧＧＴＴＧＧＧＡＡＡＧＡＣＣＧＣＡＧＣＣＴＧＴＧＴＧＴＧＴＣＴＴＴＣＣＣＴＴＣＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＴＣＴＧＴＴＧＣＴＣＣＧＴＡＡＡＴＡＡＡＡＣＧＴＣＣＣＡＣＴＧＣＣＴＴＣＴＧＡＧＡＧＣＧＣＴＡＴＡＡＡＧＧＣＡＧＣＧＧＡＡＧＧＧＴＡＧＴＣＣＧＣＧＧＧＧＣ
例示的なヒトＳＬＣ２６Ａ４エンハンサープロモーター（配列番号５９）
ＧＧＣＴＧＣＴＣＧＧＡＡＡＡＣＡＧＧＡＣＧＡＧＧＧＧＡＧＡＧＡＣＴＴＧＣＴＣＡＡＴＡＡＧＣＴＧＡＡＡＧＴＴＣＴＧＣＣＣＣＣＧＡＧＡＧＧＧＣＴＧＣＧＡＣＡＧＣＴＧＣＴＧＧＡＡＴＧＴＧＣＣＴＧＣＡＧＣＧＴＣＣＧＣＣＴＣＴＴＧＧＧＧＡＣＣＣＧＣＧＧＡＧＣＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＧＧＴＴＣＣＡＣＧＣＣＴＧＧＣＣＣＧＧＧＧＧＴＣＴＧＣＡＣＣＴＣＴＣＣＴＣＣＡＧＴＧＣＧＣＡＣＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＧＴＣＣＣＧＧＧＴＣＡＧＧＴＧＣＧＧＧＧＡＧＧＧＡＧＧＧＡＡＴＣＴＣＡＧＴＧＴＣＣＣＣＴＴＣＣＡＧＣＣＴＴＧＣＡＡＧＣＧＣＣＴＴＴＧＧＣＣＣＣＴＧＣＣＣＣＡＧＣＣＣＣＴＣＧＧＴＴＴＧＧＧＧＧＡＧＡＴＴＴＣＡＧＡＡＣＧＣＧＧＡＣＡＧＣＧＣＣＣＴＧＧＣＴＧＣＧＧＧＣＣＡＴＡＧＧＧＧＡＣＴＧＧＧＴＧＧＡＡＣＴＣＧＧＧＡＡＧＣＣＣＣＣＡＧＡＧＣＡＧＧＧＧＣＴＴＡＣＴＣＧＣＴＴＣＡＡＧＴＴＴＧＧＧＧＡＡＣＣＣＣＧＧＧＣＡＧＣＧＧＧＴＧＣＡＧＧＣＣＡＣＧＡＧＡＣＣＣＧＡＡＧＧＴＴＣＴＣＡＧＧＴＧＣＣＣＣＣＣＴＧＣＡＧＧＣＴＧＧＣＣＧＴＧＣＧＣＧＣＣＧＴＧＧＧＧＣＧＣＴＴＧＴＣＧＣＧＡＧＣＧＣＣＧＡＧＧＧＣＴＧＣＡＧＧＡＣＧＣＧＧＡＣＣＡＧＡＣＴＣＧＣＧＧＴＧＣＡＧＧＧＧＧＧＣＣＴＧＧＣＴＧＣＡＧＣＴＡＡＣＡＧＧＴＧＡＴＣＣＣＧＴＴＣＴＴＴＣＴＧＴＴＣＣＴＣＧＣＴＣＴＴＣＣＣＣＴＣＣＧＡＴＣＧＴＣＣＴＣＧＣＴＴＡＣＣＧＣＧＴＧＴＣＣＴＣＣＣＴＣＣＴＣＧＣＴＧＴＣＣＴＣＴＧＧＣＴＣＧＣＡＧＧＴＣＡＴＧＧＣＡＧＣＧＣＣＡＧＧＣＧＧＣＡＧＧＴＣＧＧＡＧＣＣＧＣＣＧＣＡＧＣＴＣＣＣＣＧＡＧＴＡＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＴＡＣＡＴＧＧＴＧＴＣＧＣＧＧＣＣＧＧＴＣＴＡＣＡＧＣＧＡＧＣＴＣＧＣＴＴＴＣＣＡＧＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＡＧＣＧＧＣＧＣＣＴＧＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＡＧＡＣＧＣＴＧＣＧＧＧＡＧＡＧＣＣＴＧＧＣＣＡＡＧＴＧＣＴＧＣＡＧＧＴＡＧＣＧＧＣＣＧＣＧＣＧＧＧＣＣＴＧＣＧＴＡＧＡＧＡＧＡＡＧＣＧＧＡＧＣＧＧＧＧＣＧＴＣＣＡＣＧＣＣＴＴＧＧＧＧＡＧＧＧＡＡＧＧＧＣＧＴＣＣＣＣＡＧＣＧＧＧＣＧＡＧＡＧＴＧＧＧＧＴＧＣＧＧＧＣＧＧＣＧＧＡＧＣＣＣＣＴＧＧＧＣＧＣＣＡＧＣＴＧＣＴＴＣＴＣＣＣＡＧＡＧＧＣＣＣＧＡＣＴＴＴＣＧＧＴＣＴＣＣＧＧＴＣＣＴＣＣＡＣＧＣＣＧＣＣＣＴＴＣＴＧＧＴＧＧＧＡＧＧＧＴＧＧＣＴＣＣＡＴＣＡＧＴＣＴＣＧＧＧＣＣＣＧＡＡＡＴＧＡＡＣＴＴＡＣＣＴＧＧＧＡＡＡＣＴＣＧＣＣＴＴＴＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＧＧＴＴＣＴＡＧＧＡＧＣＣＣＣＧＴＣＴＣＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＣＴＣＴＧＡＡＧＧＡＡＡＣＴＴＧＧＡＧＴＧＣＣＴＣＴＴＧＧＧＧＴＡＣＡＧＴＧＧＧＴＣＣＣＴＧＴＴＧＣＣＴＴＣＴＴＧＧＧＡＧＣＴＴＧＴＴＴＡＡＡＴＧＡＡＡＴＧＡＡＴＡＧＧＧＡＡＡＣＣＣＡＧＣＴＣＴＴＧＡＣＣＡＧＧＡＧＧＡＧＴＣＣＴＴＧＡＡＡＣＡＣＴＣＡＡＧＣＴＡＡＧＴＡＧＧＣＧＧＧＣＴＡＣＣＡＴＴＣＡＧＴＴＡＧＡＧＡＣＣＡＧＧＡＴＧＣＡＡＧＣＴＡＧＡＡＣＣＣＡＧＧＧＧＡＧＣＧＣＧＧＧＧＴＧＴＧＣＣＡＡＧＴＡＣＴＴＣＡＴＣＡＧＣＡＧＧＣＴＧＴＧＧＧＡＣＣＣＣＴＧＧＧＧＡＡＡＧＣＣＡＣＣＣＴＣＡＧＴＣＴＣＴＡＡＡＣＣＣＡＡＡＣＡＴＧＣＣＧＴＡＡＣＴＡＧＡＴＧＴＣＡＣＡＡＡＣＡＴＡＡＡＧＡＡＡＴＴＡＧＡＧＴＴＴＣＴＡＡＡＡＣＣＴＴＴＣＡＴＴＡＴＡＧ
例示的なヒトＳＬＣ２６Ａ４エンハンサープロモーター（配列番号６０）
ＣＧＧＡＡＧＧＴＴＧＡＴＧＴＡＣＡＧＡＧＧＴＣＴＧＴＡＴＴＴＴＧＧＡＧＣＣＴＣＴＴＣＴＧＴＡＴＴＴＡＣＴＴＣＡＧＡＡＣＡＣＴＡＡＣＡＡＴＣＡＧＧＣＧＡＧＡＡＴＧＴＴＣＴＧＧＴＴＴＡＴＣＡＡＡＣＣＣＴＴＣＣＴＴＣＴＧＣＣＴＴＴＣＡＴＣＴＴＡＡＣＣＡＴＧＣＡＴＴＡＧＴＴＴＴＡＡＣＡＡＡＧＴＴＣＡＴＣＣＣＡＡＣＡＧＡＡＧＡＣＡＡＡＡＣＡＣＴＧＡＴＧＡＧＧＴＡＧＧＡＴＡＧＣＴＣＣＡＧＣＴＣＣＴＣＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＴＣＴＡＧＴＣＴＴＧＡＴＴＴＣＣＡＴＧＴＡＧＴＣＣＡＧＴＴＴＡＴＴＣＣＴＴＣＣＣＴＧＡＴＴＧＴＣＣＡＧＧＡＧＡＡＴＧＡＧＡＡＡＡＡＧＡＡＡＡＡＡＣＡＧＡＧＴＣＴＡＧＴＧＧＧＴＡＡＧＡＡＡＧＧＧＣＣＡＣＣＴＧＧＡＣＧＧＣＴＴＧＡＴＴＴＧＧＡＴＴＧＴＧＡＡＡＴＡＡＡＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＴＧＣＡＣＡＣＧＴＡＧＡＡＴＡＡＧＴＧＧＣＴＡＡＡＡＴＣＴＧＡＧＴＡＡＡＴＣＧＴＧＡＡＣＴＣＴＣＴＧＴＡＴＣＣＴＣＣＡＣＣＣＡＴＴＧＡＡＴＡＣＴＣＣＴＡＡＡＡＧＡＣＴＴＴＣＴＡＧＡＡＡＴＴＣＡＡＧＧＡＣＴＴＡＴＴＡＡＴＡＴＡＧＡＡＡＣＣＴＧＧＣＣＡＴＴＧＴＴＣＣＴＣＴＴＣＴＣＣＴＣＣＣＣＡＴＧＴＧＧＴＡＴＧＡＧＡＧＣＡＣＣＴＧＴＧＧＣＡＧＧＣＴＣＣＣＡＧＡＧＡＣＣＡＣＧＧＡＣＣＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＧＧＣＧＧＧＣＴＣＴＧＣＴＣＴＴＣＴＴＴＡＡＧＧＡＧＴＣＣＣＡＣＡＧＧＧＣＣＴＧＧＣＣＣＧＣＣＣＣＴＧＡＣＣＴＣＧＣＡＡＣＣＣＴＴＧＡＧＡＴＴＡＧＴＡＡＣＧＧＧＡＴＧＡＧＴＧＡＧＧＡＴＣＣＧＧＧＴＧＧＣＣＣＣＴＧＣＧＴＧＧＣＡＧＣＣＡＧＴＡＡＧＡＧＴＣＴＣＡＧＣＣＴＴＣＣＣＧＧＴＴＣＧＧＧＡＡＡＧＧＧＧＡＡＧＡＡＴＧＣＡＧＧＡＧＧＧＧＴＡＧＧＡＴＴＴＣＴＴＴＣＣＴＧＡＴＡＧＧＡＴＣＧＧＴＴＧＧＧＡＡＡＧＡＣＣＧＣＡＧＣＣＴＧＴＧＴＧＴＧＴＣＴＴＴＣＣＣＴＴＣＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＴＣＴＧＴＴＧＣＴＣＣＧＴＡＡＡＴＡＡＡＡＣＧＴＣＣＣＡＣＴＧＣＣＴＴＣＴＧＡＧＡＧＣＧＣＴＡＴＡＡＡＧＧＣＡＧＣＧＧＡＡＧＧＧＴＡＧＴＣＣＧＣＧＧＧＧＣＡＴＴＣＣＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＣＧＡＧＣＡＧＡＧＡＣＡＧＧＴＧＡＧＴＴ
特定の実施形態では、プロモーターは、配列番号６１に記載のヒトＬＧＲ５エンハンサー－プロモーターである。いくつかの実施形態では、エンハンサー－プロモーター配列は、配列番号６１によって表されるエンハンサー－プロモーター配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一である。いくつかの実施形態では、プロモーターは配列番号６１内に含まれるヒトＬＧＲ５内因性エンハンサー－プロモーター配列である。
例示的なヒトＬＧＲ５エンハンサー－プロモーター（配列番号６１）
ＡＧＧＧＣＴＡＴＴＴＧＴＡＣＣＴＣＡＡＣＧＡＧＧＧＣＴＴＣＴＣＴＣＣＡＡＧＡＡＡＧＣＣＣＴＧＡＡＴＣＣＴＴＴＴＣＣＴＣＣＴＴＴＴＴＣＣＴＧＣＡＧＡＴＴＣＡＣＴＡＴＡＧＧＡＣＡＣＴＴＴＴＴＧＡＡＧＣＡＡＧＡＧＣＡＴＧＣＡＴＴＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＧＣＴＣＴＧＣＡＧＣＧＧＴＴＣＴＣＡＧＡＧＣＣＣＡＧＴＧＴＣＡＣＴＣＡＣＡＴＡＧＧＴＧＧＧＡＣＴＧＣＴＣＴＣＡＧＴＴＣＡＧＡＧＡＧＣＧＣＴＧＧＧＡＣＡＣＴＴＡＡＧＡＴＧＡＡＡＡＧＴＣＣＣＴＧＧＡＡＧＴＴＡＧＣＡＡＡＣＡＧＣＣＡＴＣＴＧＴＣＡＣＴＣＴＧＧＣＡＴＣＧＡＴＴＴＡＣＴＡＡＡＡＧＴＧＡＣＴＴＣＴＡＧＧＧＴＡＴＴＣＴＡＡＡＣＣＡＣＴＴＴＴＡＡＡＡＡＡＣＡＡＡＴＧＡＧＴＣＡＣＴＴＣＧＡＣＴＴＣＣＴＣＡＣＣＣＣＧＣＡＡＧＡＧＡＴＡＧＧＡＡＧＧＣＡＧＣＡＧＴＧＧＡＧＴＧＣＴＣＧＣＴＣＡＧＧＡＧＣＴＧＴＡＴＴＴＧＴＴＴＡＧＣＧＡＴＴＡＧＣＣＴＡＧＡＧＣＴＴＴＧＡＴＴＴＴＡＧＧＧＣＡＡＡＡＧＣＧＡＧＣＣＡＧＡＣＡＧＴＧＣＧＧＣＡＧＡＣＧＴＡＡＧＧＡＴＣＡＡＡＡＡＧＧＣＣＡＣＣＴＡＴＣＡＴＴＣＧＣＣＧＧＧＧＡＣＧＣＣＴＧＣＣＴＣＣＴＴＡＣＣＣＴＧＡＴＡＡＣＧＴＡＡＣＴＡＴＴＴＣＴＣＴＧＣＡＴＡＧＧＡＴＴＴＴＡＧＴＴＴＴＴＧＴＧＴＴＴＴＴＧＴＴＴＴＧＴＴＴＴＡＴＴＣＴＧＴＴＴＡＡＴＣＡＣＴＴＣＡＡＧＴＡＴＣＴＣＡＴＣＣＡＴＴＡＴＴＴＧＡＡＧＣＧＧＧＣＴＣＧＧＡＧＧＡＡＡＣＧＴＧＣＣＧＣＡＴＣＣＴＣＣＡＧＴＣＣＴＴＧＴＧＣＧＴＣＴＧＴＴＴＡＧＧＴＣＴＣＴＣＣＧＡＡＧＣＡＧＧＴＣＣＣＴＣＴＣＧＡＣＴＣＴＴＡＧＡＴＣＴＧＧＧＴＣＴＣＣＡＧＣＡＣＧＣＡＴＧＡＡＧＧＧＧＴＡＡＧＧＧＴＧＧＧＧＧＧＧＴＣＣＣＣＴＡＴＴＣＣＧＧＣＧＣＧＣＧＧＣＧＴＴＧＡＧＣＡＣＴＧＡＡＴＣＴＴＣＣＡＧＧＣＧＧＡＧＧＣＴＣＡＧＴＧＧＧＡＧＣＧＣＣＧＡＧＡＡＣＴＣＧＣＣＡＧＴＡＣＣＧＣＧＣＧＣＴＧＣＣＴＧＣＴＧＣＣＴＧＣＴＧＣＣＴＣＣＣＡＧＣＣＣＡＧＧＡＣＴＴＧＧＧＡＡＡＧＧＡＧＧＧＡＧＧＧＧＡＣＡＡＧＴＧＧＡＧＧＧＡＡＡＧＴＧＧＧＧＣＣＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＴＧＣＣＴＧＧＧＡＡＧＣＣＡＧＧＣＴＧＣＧＣＴＧＡＣＧＴＣＡＣＴＧＧＧＣＧＣＧＣＡＡＴＴＣＧＧＧＣＴＧＧＡＧＣＧＣＴＴＴＡＡＡＡＡＡＣＧＡＧＣＧＴＧＣＡＡＧＣＡＧＡＧＡＴＧＣＴＧＣＴＣＣＡＣＡＣＣＧＣＴＣＡＧＧＣＣＧＣＧＡＧＣＡＧＣＡＧＣＡＡＧＧＣＧＣＡＣＣＧＣＣＡＣＴＧＴＣＧＣＣＧＣＴＧＣＡＧＣＣＡＧＧＧＣＴＧＣＴＣＣＧＡＡＧＧＣＣＧＧＣＧＴＧＧＣＧＧＣＡＡＣＣＧＧＣＡＣＣＴＣＴＧＴＣＣＣＣＧＣＣＧＣＧＣＴＴＣＴＣＣＴＣＧＣＣＧＣＣＣＡＣＧＣＣＧＴＧＧＧＧＴＣＡＧＧＡＡＣＧＣＧＧＣＧＴＣＴＧＧＣＧＣＴＧＣＡＧＡＣＧＣＣＣＧＣＴＧＡＧＴＴＧＣＡＧＡＡＧＣＣＣＡＣＧＧＡＧＣＧＧＣＧＣＣＣＧＧＣＧＣＧＣＣＡＣＧＧＣＣＣＧＴＡＧＣＡＧＴＣＣＧＧＴＧＣＴＧＣＴＣＴＣＣＧＣＣＣＧＣＧＴＣＣＧＧＣＴＣＧＴＧＧＣＣＣＣＣＴＡＣＴＴＣＧＧＧＣＡＣＣＧＡＣＣＧＧＴ
特定の実施形態では、プロモーターは、配列番号６２に記載のヒトＳＹＮ１エンハンサー－プロモーターである。いくつかの実施形態では、エンハンサー－プロモーター配列は、配列番号６２によって表されるエンハンサー－プロモーター配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一である。いくつかの実施形態では、プロモーターは配列番号６２内に含まれるヒトＳＹＮ１内因性エンハンサー－プロモーター配列である。
例示的なヒトＳＹＮ１エンハンサー－プロモーター（配列番号６２）
ＴＧＣＧＴＡＴＧＡＧＴＧＣＡＡＧＴＧＧＧＴＴＴＴＡＧＧＡＣＣＡＧＧＡＴＧＡＧＧＣＧＧＧＧＴＧＧＧＧＧＴＧＣＣＴＡＣＣＴＧＡＣＧＡＣＣＧＡＣＣＣＣＧＡＣＣＣＡＣＴＧＧＡＣＡＡＧＣＡＣＣＣＡＡＣＣＣＣＣＡＴＴＣＣＣＣＡＡＡＴＴＧＣＧＣＡＴＣＣＣＣＴＡＴＣＡＧＡＧＡＧＧＧＧＧＡＧＧＧＧＡＡＡＣＡＧＧＡＴＧＣＧＧＣＧＡＧＧＣＧＣＧＴＧＣＧＣＡＣＴＧＣＣＡＧＣＴＴＣＡＧＣＡＣＣＧＣＧＧＡＣＡＧＴＧＣＣＴＴＣＧＣＣＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＡＣＣＧＣＣＧＣＣＴＣＡＧＣＡＣＴＧＡＡＧＧＣＧＣＧＣＴＧＡＣＧＴＣＡＣＴＣＧＣＣＧＧＴＣＣＣＣＣＧＣＡＡＡＣＴＣＣＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＣＡＣＣＴＴＧＧＴＣＧＣＧＴＣＣＧＣＧＣＣＧＣＣＧＣＣＧＧＣＣＣＡＧＣＣＧＧＡＣＣＧＣＡＣＣＡＣＧＣＧＡＧＧＣＧＣＧＡＧＡＴＡＧＧＧＧＧＧＣＡＣＧＧＧＣＧＣＧＡＣＣＡＴＣＴＧＣＧＣＴＧＣＧＧＣＧＣＣＧＧＣＧＡＣＴＣＡＧＣＧＣＴＧＣＣＴＣＡＧＴＣＴＧＣＧＧＴＧＧＧＣＡＧＣＧＧＡＧＧＡＧＴＣＧＴＧＴＣＧＴＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＧＣＡＧＴＣＧＡＧＡＡ
特定の実施形態では、プロモーターは、配列番号６３に記載のヒトＧＦＡＰエンハンサー－プロモーターである。いくつかの実施形態では、エンハンサー－プロモーター配列は、配列番号６３によって表されるエンハンサー－プロモーター配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一である。いくつかの実施形態では、プロモーターは配列番号６３内に含まれるヒトＧＦＡＰ内因性エンハンサー－プロモーター配列である。
例示的なヒトＧＦＡＰエンハンサー－プロモーター（配列番号６３）
ＣＣＣＡＣＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＴＧＣＴＧＧＧＡＣＴＣＡＣＡＧＡＧＧＧＡＧＡＣＣＴＣＡＧＧＡＧＧＣＡＧＴＣＴＧＴＣＣＡＴＣＡＣＡＴＧＴＣＣＡＡＡＴＧＣＡＧＡＧＣＡＴＡＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＧＧＣＧＣＡＧＴＧＧＣＧＣＡＣＡＡＣＴＧＴＡＡＴＴＣＣＡＧＣＡＣＴＴＴＧＧＧＡＧＧＣＴＧＡＴＧＴＧＧＡＡＧＧＡＴＣＡＣＴＴＧＡＧＣＣＣＡＧＡＡＧＴＴＣＴＡＧＡＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＣＡＡＣＡＴＧＧＣＡＡＧＡＣＣＣＴＡＴＣＴＣＴＡＣＡＡＡＡＡＡＡＧＴＴＡＡＡＡＡＡＴＣＡＧＣＣＡＣＧＴＧＴＧＧＴＧＡＣＡＣＡＣＡＣＣＴＧＴＡＧＴＣＣＣＡＧＣＴＡＴＴＣＡＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＴＧＡＧＧＧＧＡＴＣＡＣＴＴＡＡＧＧＣＴＧＧＧＡＧＧＴＴＧＡＧＧＣＴＧＣＡＧＴＧＡＧＴＣＧＴＧＧＴＴＧＣＧＣＣＡＣＴＧＣＡＣＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＧＣＡＡＣＡＧＴＧＡＧＡＣＣＣＴＧＴＣＴＣＡＡＡＡＧＡＣＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡＧＡＡＣＡＴＡＴＣＣＴＧＧＴＧＴＧＧＡＧＴＡＧＧＧＧＡＣＧＣＴＧＣＴＣＴＧＡＣＡＧＡＧＧＣＴＣＧＧＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＧＧＣＴＣＴＧＴＧＡＧＣＴＧＧＧＧＡＧＧＡＧＧＣＡＧＡＣＡＧＣＣＡＧＧＣＣＴＴＧＴＣＴＧＣＡＡＧＣＡＧＡＣＣＴＧＧＣＡＧＣＡＴＴＧＧＧＣＴＧＧＣＣＧＣＣＣＣＣＣＡＧＧＧＣＣＴＣＣＴＣＴＴＣＡＴＧＣＣＣＡＧＴＧＡＡＴＧＡＣＴＣＡＣＣＴＴＧＧＣＡＣＡＧＡＣＡＣＡＡＴＧＴＴＣＧＧＧＧＴＧＧＧＣＡＣＡＧＴＧＣＣＴＧＣＴＴＣＣＣＧＣＣＧＣＡＣＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＣＴＣＡＡＡＴＧＣＣＴＴＣＣＧＡＧＡＡＧＣＣＣＡＴＴＧＡＧＣＡＧＧＧＧＧＣＴＴＧＣＡＴＴＧＣＡＣＣＣＣＡＧＣＣＴＧＡＣＡＧＣＣＴＧＧＣＡＴＣＴＴＧＧＧＡＴＡＡＡＡＧＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＣＣＣＴＡＧＧＧＧＣＴＧＣＣＣＴＴＧＣＴＧＴＧＴＧＧＣＧＣＣＡＣＣＧＧＣＧＧＴＧＧＡＧＡＡＣＡＡＧＧＣＴＣＴＡＴＴＣＡＧＣＣＴＧＴＧＣＣＣＡＧＧＡＡＡＧＧＧＧＡＴＣＡＧＧＧＧＡＴＧＣＣＣＡＧＧＣＡＴＧＧＡＣＡＧＴＧＧＧＴＧＧＣＡＧＧＧＧＧＧＧＡＧＡＧＧＡＧＧＧＣＴＧＴＣＴＧＣＴＴＣＣＣＡＧＡＡＧＴＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＡＡＡＴＧＧＧＴＧＡＧＧＧＧＡＣＴＧＧＧＣＡＧＧＧＴＴＣＴＧＡＣＣＣＴＧＴＧＧＧＡＣＣＡＧＡＧＴＧＧＡＧＧＧＣＧＴＡＧＡＴＧＧＡＣＣＴＧＡＡＧＴＣＴＣＣＡＧＧＧＡＣＡＡＣＡＧＧＧＣＣＣＡＧＧＴＣＴＣＡＧＧＣＴＣＣＴＡＧＴＴＧＧＧＣＣＣＡＧＴＧＧＣＴＣＣＡＧＣＧＴＴＴＣＣＡＡＡＣＣＣＡＴＣＣＡＴＣＣＣＣＡＧＡＧＧＴＴＣＴＴＣＣＣＡＴＣＴＣＴＣＣＡＧＧＣＴＧＡＴＧＴＧＴＧＧＧＡＡＣＴＣＧＡＧＧＡＡＡＴＡＡＡＴＣＴＣＣＡＧＴＧＧＧＡＧＡＣＧＧＡＧＧＧＧＴＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＡＣＧＧＧＧＣＧＣＴＧＣＡＧＧＡＡＴＡＡＡＧＡＣＧＡＧＣＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＡＧＣＴＣＡＴＧＴＧＴＡＡＣＧＧＣＴＴＴＧＴＧＧＡＧＣＴＧＴＣＡＡＧＧＣＣＴＧＧＴＣＴＣＴＧＧＧＡＧＡＧＡＧＧＣＡＣＡＧＧＧＡＧＧＣＣＡＧＡＣＡＡＧＧＡＡＧＧＧＧＴＧＡＣＣＴＧＧＡＧＧＧＡＣＡＧＡＴＣＣＡＧＧＧＧＣＴＡＡＡＧＴＣＣＴＧＡＴＡＡＧＧＣＡＡＧＡＧＡＧＴＧＣＣＧＧＣＣＣＣＣＴＣＴＴＧＣＣＣＴＡＴＣＡＧＧＡＣＣＴＣＣＡＣＴＧＣＣＡＣＡＴＡＧＡＧＧＣＣＡＴＧＡＴＴＧＡＣＣＣＴＴＡＧＡＣＡＡＡＧＧＧＣＴＧＧＴＧＴＣＣＡＡＴＣＣＣＡＧＣＣＣＣＣＡＧＣＣＣＣＡＧＡＡＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＴＧＡＡＴＧＧＧＣＡＧＡＧＡＧＣＡＧＧＡＡＴＧＴＧＧＧＡＣＡＴＣＴＧＴＧＴＴＣＡＡＧＧＧＡＡＧＧＡＣＴＣＣＡＧＧＡＧＴＣＴＧＣＴＧＧＧＡＡＴＧＡＧＧＣＣＴＡＧＴＡＧＧＡＡＡＴＧＡＧＧＴＧＧＣＣＣＴＴＧＡＧＧＧＴＡＣＡＧＡＡＣＡＧＧＴＴＣＡＴＴＣＴＴＣＧＣＣＡＡＡＴＴＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＴＧＣＡＧＧＣＡＣＴＴＡＣＡＧＣＴＧＡＧＴＧＡＧＡＴＡＡＴＧＣＣＴＧＧＧＴＴＡＴＧＡＡＡＴＣＡＡＡＡＡＧＴＴＧＧＡＡＡＧＣＡＧＧＴＣＡＧＡＧＧＴＣＡＴＣＴＧＧＴＡＣＡＧＣＣＣＴＴＣＣＴＴＣＣＣＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴＧＴＧＡＧＡＣＡＡＧＧＴＣＴＣＴＣＴＣＴＧＴＴＧＣＣＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＣＧＣＡＡＡＣＡＣＡＧＣＴＣＡＣＴＧＣＡＧＣＣＴＣＡＡＣＣＴＡＣＴＧＧＧＣＴＣＡＡＧＣＡＡＴＣＣＴＣＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＣＴＣＣＣＡＡＡＧＴＧＣＴＧＧＧＡＴＴＡＣＡＡＧＣＡＴＧＡＧＣＣＡＣＣＣＣＡＣＴＣＡＧＣＣＣＴＴＴＣＣＴＴＣＣＴＴＴＴＴＡＡＴＴＧＡＴＧＣＡＴＡＡＴＡＡＴＴＧＴＡＡＧＴＡＴＴＣＡＴＣＡＴＧＧＴＣＣＡＡＣＣＡＡＣＣＣＴＴＴＣＴＴＧＡＣＣＣＡＣＣＴＴＣＣＴＡＧＡＧＡＧＡＧＧＧＴＣＣＴＣＴＴＧＣＴＴＣＡＧＣＧＧＴＣＡＧＧＧＣＣＣＣＡＧＡＣＣＣＡＴＧＧＴＣＴＧＧＣＴＣＣＡＧＧＴＡＣＣＡＣＣＴＧＣＣＴＣＡＴＧＣＡＧＧＡＧＴＴＧＧＣＧＴＧＣＣＣＡＧＧＡＡＧＣＴＣＴＧＣＣＴＣＴＧＧＧＣＡＣＡＧＴＧＡＣＣＴＣＡＧＴＧＧＧＧＴＧＡＧＧＧＧＡＧＣＴＣＴＣＣＣＣＡＴＡＧＣＴＧＧＧＣＴＧＣＧＧＣＣＣＡＡＣＣＣＣＡＣＣＣＣＣＴＣＡＧＧＣＴＡＴＧＣＣＡＧＧＧＧＧＴＧＴＴＧＣＣＡＧＧＧＧＣＡＣＣＣＧＧＧＣＡＴＣＧＣＣＡＧＴＣＴＡＧＣＣＣＡＣＴＣＣＴＴＣＡＴＡＡＡＧＣＣＣＴＣＧＣＡＴＣＣＣＡＧＧＡＧＣＧＡＧＣＡＧＡＧＣＣＡＧＡＧＣＡＧＧＴＴＧＧＡＧＡＧＧＡＧＡＣＧＣＡＴＣＡＣＣＴＣＣＧＣＴＧＣＴＣＧＣ
エンハンサー
いくつかの例では、構築物はエンハンサー配列を含み得る。「エンハンサー」という用語は、目的のタンパク質（例えば、抗ＶＥＧＦタンパク質）をコードする核酸の転写レベルを増加させることができるヌクレオチド配列を指す。エンハンサー配列（一般的に５０～１５００塩基対長）は、概して、転写関連タンパク質（例えば、転写因子）にさらなる結合部位を提供することによって転写レベルを増加させる。いくつかの実施形態では、エンハンサー配列はイントロン配列内に見出される。プロモーター配列とは異なり、エンハンサー配列は、（例えば、プロモーターと比較して）転写開始部位からはるかに遠く離れて作用することができる。エンハンサーの非限定的な例としては、ＲＳＶエンハンサー、ＣＭＶエンハンサー、及び／またはＳＶ４０エンハンサーが挙げられる。いくつかの実施形態では、構築物は、配列番号６４によって例示されるＣＭＶエンハンサーを含む。いくつかの実施形態では、エンハンサー配列は、配列番号６４によって表されるエンハンサー配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一である。いくつかの実施形態では、ＳＶ－４０由来のエンハンサーは、配列番号６５によって例示されるＳＶ－４０ Ｔイントロン配列である。いくつかの実施形態では、エンハンサー配列は、配列番号６５によって表されるエンハンサー配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一である。
例示的なＣＭＶエンハンサー（配列番号６４）
ＧＡＣＡＴＴＧＡＴＴＡＴＴＧＡＣＴＡＧＴＴＡＴＴＡＡＴＡＧＴＡＡＴＣＡＡＴＴＡＣＧＧＧＧＴＣＡＴＴＡＧＴＴＣＡＴＡＧＣＣＣＡＴＡＴＡＴＧＧＡＧＴＴＣＣＧＣＧＴＴＡＣＡＴＡＡＣＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＴＧＡＣＣＧＣＣＣＡＡＣＧＡＣＣＣＣＣＧＣＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＡＡＴＧＡＣＧＴＡＴＧＴＴＣＣＣＡＴＡＧＴＡＡＣＧＣＣＡＡＴＡＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＧＴＧＧＡＣＴＡＴＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＣＴＧＣＣＣＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＴＡＴＣＡＴＡＴＧＣＣＡＡＧＴＡＣＧＣＣＣＣＣＴＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＡＴＴＡＴＧＣＣＣＡＧＴＡＣＡＴＧＡＣＣＴＴＡＴＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＴＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＴＡＣＧＴＡＴＴＡＧＴＣＡＴＣＧＣＴＡＴＴＡＣＣＡＴＧＧ
例示的なＳＶ－４０合成イントロン（配列番号６５）
ＧＧＡＧＴＣＧＣＴＧＣＧＴＴＧＣＣＴＴＣＧＣＣＣＣＧＴＧＣＣＣＣＧＣＴＣＣＧＣＧＣＣＧＣＣＴＣＧＣＧＣＣＧＣＣＣＧＣＣＣＣＧＧＣＴＣＴＧＡＣＴＧＡＣＣＧＣＧＴＴＡＣＴＣＣＣＡＣＡＧＧＴＧＡＧＣＧＧＧＣＧＧＧＡＣＧＧＣＣＣＴＴＣＴＣＣＴＣＣＧＧＧＣＴＧＴＡＡＴＴＡＧＣＧＣＴＴＧＧＴＴＴＡＡＴＧＡＣＧＧＣＴＣＧＴＴＴＣＴＴＴＴＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＧＴＧＡＡＡＧＣＣＴＴＡＡＡＧＧＧＣＴＣＣＧＧＧＡＧＧＧＣＣＣＴＴＴＧＴＧＣＧＧＧＧＧＧＧＡＧＣＧＧＣＴＣＧＧＧＧＧＧＴＧＣＧＴＧＣＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＧＧＡＧＣＧＣＣＧＣＧＴＧＣＧＧＣＣＣＧＣＧＣＴＧＣＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧＴＧＡＧＣＧＣＴＧＣＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＴＴＴＧＴＧＣＧＣＴＣＣＧＣＧＴＧＴＧＣＧＣＧＡＧＧＧＧＡＧＣＧＣＧＧＣＣＧＧＧＧＧＣＧＧＴＧＣＣＣＣＧＣＧＧＴＧＣＧＧＧＧＧＧＧＣＴＧＣＧＡＧＧＧＧＡＡＣＡＡＡＧＧＣＴＧＣＧＴＧＣＧＧＧＧＴＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＧＧＧＧＧＴＧＡＧＣＡＧＧＧＧＧＴＧＴＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＧＴＣＧＧＧＣＴＧＴＡＡＣＣＣＣＣＣＣＣＴＧＣＡＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＧＡＧＴＴＧＣＴＧＡＧＣＡＣＧＧＣＣＣＧＧＣＴＴＣＧＧＧＴＧＣＧＧＧＧＣＴＣＣＧＴＧＣＧＧＧＧＣＧＴＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＴＣＧＣＣＧＴＧＣＣＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＴＧＧＣＧＧＣＡＧＧＴＧＧＧＧＧＴＧＣＣＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＣＧＣＣＴＣＧＧＧＣＣＧＧＧＧＡＧＧＧＣＴＣＧＧＧＧＧＡＧＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＣＣＧＧＡＧＣＧＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧＴＣＧＡＧＧＣＧＣＧＧＣＧＡＧＣＣＧＣＡＧＣＣＡＴＴＧＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＴＡＡＴＣＧＴＧＣＧＡＧＡＧＧＧＣＧＣＡＧＧＧＡＣＴＴＣＣＴＴＴＧＴＣＣＣＡＡＡＴＣＴＧＴＧＣＧＧＡＧＣＣＧＡＡＡＴＣＴＧＧＧＡＧＧＣＧＣＣＧＣＣＧＣＡＣＣＣＣＣＴＣＴＡＧＣＧＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＧＡＡＧＣＧＧＴＧＣＧＧＣＧＣＣＧＧＣＡＧＧＡＡＧＧＡＡＡＴＧＧＧＣＧＧＧＧＡＧＧＧＣＣＴＴＣＧＴＧＣＧＴＣＧＣＣＧＣＧＣＣＧＣＣＧＴＣＣＣＣＴＴＣＴＣＣＣＴＣＴＣＣＡＧＣＣＴＣＧＧＧＧＣＴＧＴＣＣＧＣＧＧＧＧＧＧＡＣＧＧＣＴＧＣＣＴＴＣＧＧＧＧＧＧＧＡＣＧＧＧＧＣＡＧＧＧＣＧＧＧＧＴＴＣＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＧＴＧＴＧＡＣＣＧＧＣＧＧＣＴＣＴＡＧＡＧＣＣＴＣＴＧＣＴＡＡＣＣＡＴＧＴＴＣＡＴＧＣＣＴＴＣＴＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＡＣＡＧ
非翻訳領域：５’ＵＴＲと３’ＵＴＲ
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の構築物は、５’ＵＴＲまたは３’ＵＴＲなどの非翻訳領域（ＵＴＲ）を含み得る。遺伝子のＵＴＲは、転写されるが翻訳されない。５’ＵＴＲは、転写開始部位で始まり、開始コドンまで続くが、開始コドンは含まない。３’ＵＴＲは終止コドンの直後から始まり、転写終結シグナルまで続く。ＵＴＲの調節及び／または制御機能を、本明細書に記載の任意の構築物、組成物、キット、または方法に組み込み、抗ＶＥＧＦタンパク質の発現を増強するか、さもなければ調節することができる。
天然の５’ＵＴＲには、翻訳開始に関与する配列が含まれている。いくつかの実施形態では、５’ＵＴＲは、リボソームが多くの遺伝子の翻訳を開始するプロセスに関与することが一般に知られているコザック配列のような配列を含み得る。コザック配列は、コンセンサス配列ＣＣＲ（Ａ／Ｇ）ＣＣＡＵＧＧを有し、ここでＲは開始コドン（ＡＵＧ）の３塩基上流のプリン（ＡまたはＧ）であり、開始コドンの後には別の「Ｇ」が続く。５’ＵＴＲはまた、伸長因子の結合に関与する二次構造を形成することが知られている。
いくつかの実施形態では、５’ＵＴＲは、本明細書に記載の任意の構築物に含まれる。５’ＵＴＲの非限定的な例（以下の遺伝子からのものを含む：アルブミン、血清アミロイドＡ、アポリポタンパク質Ａ／Ｂ／Ｅ、トランスフェリン、αフェトプロテイン、エリスロポエチン、及び第ＶＩＩＩ因子）を使用して、核酸分子、例えば、ｍＲＮＡの発現を強化することができる。
いくつかの実施形態では、蝸牛内の細胞によって転写されるｍＲＮＡからの５’ＵＴＲが、本明細書に記載の任意の構築物、組成物、キット、及び方法に含まれ得る。いくつかの実施形態では、５’ＵＴＲは、内因性遺伝子座に由来し、内因性配列の全てまたは一部を含み得る。
３’ＵＴＲは、目的の遺伝子の終止コドンのすぐ３’側に見出される。いくつかの実施形態では、蝸牛内の細胞によって転写されるｍＲＮＡからの３’ＵＴＲが、本明細書に記載の任意の構築物、組成物、キット、及び方法に含まれ得る。いくつかの実施形態では、３’ＵＴＲは、内因性遺伝子座に由来し、内因性配列の全てまたは一部を含み得る。
３’ＵＴＲは、その中に組み込まれたアデノシンとウリジン（ＲＮＡ形態の場合）またはチミジン（ＤＮＡ形態の場合）のストレッチを有することが知られている。これらのＡＵリッチシグネチャーは、高い回転率を有する遺伝子内で特に広く見られる。これらの配列的特徴及び機能的特性に基づいて、ＡＵリッチエレメント（ＡＲＥ）は以下の３つのクラスに分離することができる（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍａｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１５：５７７７－５７８８，１９９５；Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍａｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１５：２０１０－２０１８，１９９５、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。クラスＩ ＡＲＥは、Ｕリッチ領域内にいくつかの分散したＡＵＵＵＡモチーフのコピーを含む。例えば、ｃ－Ｍｙｃ及びＭｙｏＤ ｍＲＮＡは、クラスＩ ＡＲＥを含む。クラスＩＩ ＡＲＥは、２つ以上の重複するＵＵＡＵＵＵＡ（Ｕ／Ａ）（Ｕ／Ａ）九量体を有する。ＧＭ－ＣＳＦ及びＴＮＦ－α ｍＲＮＡは、クラスＩＩ ＡＲＥを含む例である。クラスＩＩＩ ＡＲＥはそれほど十分に定義されていない。これらのＵリッチ領域はＡＵＵＵＡモチーフを含まず、このクラスにおけるよく研究された２つの例としてｃ－Ｊｕｎ及びミオゲニンｍＲＮＡがある。
ＡＲＥに結合するほとんどのタンパク質はメッセンジャーを不安定にすることが知られており、一方ＥＬＡＶファミリーのメンバー、とりわけＨｕＲはｍＲＮＡの安定性を増加させることが実証されている。ＨｕＲは、これら３つのクラス全てのＡＲＥに結合する。ＨｕＲ特異的結合部位を核酸分子の３’ＵＴＲに導入操作（ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ）することにより、ＨｕＲ結合、ひいてはｉｎ ｖｉｖｏでのメッセージの安定化がもたらされ得る。
いくつかの実施形態では、３’ＵＴＲ ＡＲＥの導入、除去、または修飾を用いて、抗ＶＥＧＦタンパク質をコードするｍＲＮＡの安定性を調節することができる。他の実施形態では、ＡＲＥを除去するか、または変異させて、抗ＶＥＧＦタンパク質の細胞内安定性を増加させ、ひいてはその翻訳及び産生を増加させることができる。
他の実施形態では、非ＡＲＥ配列が５’または３’ＵＴＲに組み込まれてもよい。いくつかの実施形態では、イントロンまたはイントロン配列の部分は、本明細書で提供される任意の構築物、組成物、キット、及び方法において、ポリヌクレオチドの隣接領域に組み込まれ得る。イントロン配列の組み込みは、タンパク質産生及びｍＲＮＡレベルを増加させ得る。
内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）
いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦタンパク質をコードする構築物は、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を含み得る。ＩＲＥＳは複合的な二次構造を形成しており、この構造により、ＩＲＥＳの位置からすぐ下流のｍＲＮＡによって任意の位置から翻訳を開始させることができる（例えば、Ｐｅｌｌｅｔｉｅｒ ａｎｄ Ｓｏｎｅｎｂｅｒｇ，Ｍａｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．８（３）：１１０３－１１１２，１９８８（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。
当業者に知られているＩＲＥＳ配列はいくつか存在し、例えば、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）、脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）、ヒトライノウイルス（ＨＲＶ）、コオロギ麻痺ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、及びポリオウイルス（ＰＶ）からのＩＲＥＳ配列が挙げられる。例えば、Ａｌｂｅｒｔｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｅｌｌ，Ｇａｒｌａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００２；及びＨｅｌｌｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．１５（１３）：１５９３－６１２，２００１（これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと。
いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦタンパク質、または抗ＶＥＧＦタンパク質の一部をコードする構築物に組み込まれるＩＲＥＳ配列は、口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）２Ａ配列である。口蹄疫ウイルス２Ａ配列は、ポリタンパク質の切断を媒介することが示されている小さなペプチド（およそ１８アミノ酸長）である（Ｒｙａｎ，ＭＤ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ ４：９２８－９３３，１９９４；Ｍａｔｔｉｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７０：８１２４－８１２７，１９９６；Ｆｕｒｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ８：８６４－８７３，２００１；及びＨａｌｐｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｌａｎｔ Ｊｏｕｒｎａｌ ４：４５３－４５９，１９９９、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。２Ａ配列の切断活性は、プラスミド及び遺伝子治療構築物（ＡＡＶ及びレトロウイルス）を含む人工システムにおいてこれまでに実証されている（Ｒｙａｎ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ ４：９２８－９３３，１９９４；Ｍａｔｔｉｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ７０：８１２４－８１２７，１９９６；Ｆｕｒｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ８：８６４－８７３，２００１；及びＨａｌｐｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｌａｎｔ Ｊｏｕｒｎａｌ ４：４５３－４５９，１９９９；ｄｅ Ｆｅｌｉｐｅ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ６：１９８－２０８，１９９９；ｄｅ Ｆｅｌｉｐｅ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ Ｉ Ｉ：１９２１－１９３１，２０００；及びＫｌｕｍｐ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ８：８１１－８１７，２００１、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
ＩＲＥＳはｒＡＡＶ構築物で利用できる。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦタンパク質のＣ末端部分をコードする構築物は、ポリヌクレオチド内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を含むことができる。いくつかの実施形態では、ＩＲＥＳは、２つ以上の構築物を含む組成物の一部であり得る。いくつかの実施形態では、ＩＲＥＳは、単一の遺伝子転写産物から２つ以上のポリペプチドを産生するために使用される。
分泌及び切断シグナル
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される任意の構築物は、分泌シグナル、切断部位、及び／またはリンカー配列を含み得る。いくつかの実施形態では、これらの部位は翻訳されたタンパク質において機能的であり、翻訳後修飾及び／またはプロセシング事象をもたらす。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の構築物は、比較的長い前駆体ポリペプチドに翻訳され、そのような前駆体ポリペプチドは、次に、翻訳後修飾及び／またはプロセシングを受け得、これには内因性の細胞酵素が関与する可能性がある。このようなプロセシングステップは、複数のペプチドを生成し、このようなペプチドの生物学的機能は、１つのペプチドのみによって、または協調して作用する複数のペプチドの機能によって達成され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される構築物は、シグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、シグナル配列、標的化シグナル、局在化シグナル、局在化配列、輸送ペプチド、リーダー配列、またはリーダーペプチドであり得る。いくつかの実施形態では、そのような配列は、一般に短い（例えば、およそ１６～３０アミノ酸長）。いくつかの実施形態では、そのようなシグナルペプチドは、目的のペプチドのＮ末端に存在する。いくつかの実施形態では、２つ以上のシグナルペプチドが翻訳産物中に存在し得る。いくつかの実施形態では、例示的なシグナルペプチドは、インターロイキン－２（ＩＬ２ＳＳ）からの分泌シグナルを含む。いくつかの実施形態では、例示的なシグナルペプチドは、配列番号６６または６７によって表されるヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、そのようなアミノ酸配列は、配列番号６８によって表され、そのような配列と９５％、９０％、８５％、８０％、または７５％同一であり得る。当業者であれば、別の分泌シグナル配列が存在し、本明細書に記載の構築物に組み込まれ得ることを認識するであろう。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される構築物は、リンカーペプチドを含む。いくつかの実施形態では、リンカーペプチドは、翻訳産物において２つ以上の機能的ペプチドを連結するために利用される。いくつかの実施形態では、そのようなリンカーペプチドは、内因性ペプチダーゼの認識配列などの追加の機能的配列を含み得る。いくつかの実施形態では、そのようなリンカー配列は、フリン切断シグナルを含む。いくつかの実施形態では、フリン切断シグナルを含む例示的なリンカー配列は、配列番号７１によって表されるヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、そのようなリンカー配列はフリン切断シグナルを含み、配列番号７２によって表すことができるか、またはそのような配列とおよそ９０％、８０％、７０％、または６０％類似し得る。いくつかの実施形態では、リンカーペプチド配列は、１アミノ酸長、２アミノ酸長、３アミノ酸長、４アミノ酸長、５アミノ酸長、６アミノ酸長、７アミノ酸長、８アミノ酸長、９アミノ酸長、１０アミノ酸長、１１アミノ酸長、１２アミノ酸長、１３アミノ酸長、１４アミノ酸長、１５アミノ酸長、１６アミノ酸長、１７アミノ酸長、１８アミノ酸長、１９アミノ酸長、または２０アミノ酸長であり得る。いくつかの実施形態では、リンカーペプチド配列は、最大５０アミノ酸長であり得る。当業者であれば、別のリンカー配列が存在し（機能的であってもなくても）、本明細書に記載の構築物に組み込まれ得ることを認識するだろう。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される構築物は、翻訳中にポリペプチド切断及び／またはペプチド結合の形成の失敗を誘導するペプチド配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の構築物は、いくつかの実施形態では２Ａ自己切断ペプチドであり得る、自己切断ペプチドを含み得る。いくつかの実施形態では、そのようなペプチドは、およそ１８～２２アミノ酸長、例えば、１８アミノ酸長、１９アミノ酸長、２０アミノ酸長、２１アミノ酸長、または２２アミノ酸長である。いくつかの実施形態では、そのようなペプチドは、タンパク質の翻訳中にリボソームスキッピングを誘発し得る。いくつかの実施形態では、２Ａ自己切断ペプチドは、ＤｘＥｘＮＰＧＰ（配列番号１１５）のコア配列モチーフによって表され、様々なウイルスファミリーにおいて内因的に存在する。いくつかの実施形態では、自己切断ペプチドは、リボソームがペプチド結合を作成できないようにすることによって、単一の転写産物からポリタンパク質を生成する。いくつかの実施形態では、自己切断及び／または切断シグナルは、配列番号６９によって表されるヌクレオチド配列によってコードされる。いくつかの実施形態では、自己切断及び／または切断シグナルは、配列番号７０、またはおよそ９５％、９０％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、もしくは５０％の同一性を共有する配列によって表される。当業者であれば、別のペプチド切断配列が存在し（自己切断型または内因性細胞機構の助けを必要とするもの）、本明細書に記載の構築物に組み込まれ得ることを認識するだろう。
例示的なシグナル分泌ヌクレオチド配列（配列番号６６）
ＡＴＧＴＡＣＣＧＧＡＴＧＣＡＧＣＴＧＣＴＧＡＧＣＴＧＴＡＴＣＧＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＡＡＴＴＣＴ
例示的なシグナル分泌ヌクレオチド配列（配列番号６７）
ＡＴＧＴＡＴＡＧＡＡＴＧＣＡＧＣＴＣＣＴＧＴＣＣＴＧＣＡＴＴＧＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＧＣＴＣＴＣＧＴＧＡＣＣＡＡＣＡＧＣ
例示的なシグナル分泌アミノ酸配列（配列番号６８）
ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ
例示的な切断シグナルヌクレオチド配列（配列番号６９）
ＧＧＣＴＣＴＧＧＣＧＡＡＧＧＣＡＧＡＧＧＣＡＧＣＣＴＧＣＴＴＡＣＡＴＧＴＧＧＣＧＡＣＧＴＧＧＡＡＧＡＧＡＡＣＣＣＣＧＧＡＣＣＴ
例示的な切断シグナルアミノ酸配列（配列番号７０）
ＧＳＧＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰ
例示的なリンカー／切断シグナルヌクレオチド配列（配列番号７１）
ＧＡＣＡＡＧＡＣＣＣＡＣＡＣＣＧＧＣＡＡＧＣＧＧＡＡＧＡＧＡＡＧＡ
例示的なリンカー／切断シグナルアミノ酸配列（配列番号７２）
ＤＫＴＨＴＧＫＲＫＲＲ
スプライス部位
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される任意の構築物は、転写中に生じるＲＮＡプロセシング中に機能する、スプライスドナー及び／またはスプライスアクセプター配列を含むことができる。いくつかの実施形態では、スプライス部位はトランススプライシングに関与する。
例示的なスプライスドナーイントロン（配列番号７３）
ＧＴＡＡＧＴＡＴＣＡＡＧＧＴＴＡＣＡＡＧＡＣＡＧＧＴＴＴＡＡＧＧＡＧＡＣＣＡＡＴＡＧＡＡＡＣＴＧＧＧＣＴＴＧＴＣＧＡＧＡＣＡＧＡＧＡＡＧＡＣＴＣＴＴＧＣＧＴＴＴＣＴ
例示的なスプライスアクセプターイントロン（配列番号７４）
ＧＡＴＡＧＧＣＡＣＣＴＡＴＴＧＧＴＣＴＴＡＣＴＧＡＣＡＴＣＣＡＣＴＴＴＧＣＣＴＴＴＣＴＣＴＣＣＡＣＡＧ
ポリアデニル化配列
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される構築物は、ポリアデニル化（ポリ（Ａ））シグナル配列を含み得る。真核生物のほとんどの新生ｍＲＮＡは、その３’末端にポリ（Ａ）テールを有し、これは、ポリ（Ａ）シグナル配列によって駆動される一次転写産物の切断と、共役したポリアデニル化反応とを含む複合プロセス中に付加される（例えば、Ｐｒｏｕｄｆｏｏｔ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ １０８：５０１－５１２，２００２（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。ポリ（Ａ）テールは、ｍＲＮＡの安定性及び移行性をもたらす（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｅｌｌ，Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｂ．Ａｌｂｅｒｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，１９９４、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。いくつかの実施形態では、ポリ（Ａ）シグナル配列は、コード配列に対して３’側に位置する。
本明細書で使用される場合、「ポリアデニル化」は、メッセンジャーＲＮＡ分子へのポリアデニル部分、またはその修飾バリアントの共有結合を指す。真核生物では、ほとんどのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）分子は、３’末端でポリアデニル化される。３’ポリ（Ａ）テールは、酵素であるポリアデニル酸ポリメラーゼの作用によってプレｍＲＮＡに付加されるアデニンヌクレオチドの長い配列（例えば、５０、６０、７０、１００、２００、５００、１０００、２０００、３０００、４０００、または５０００）（配列番号１１７）である。いくつかの実施形態では、ポリ（Ａ）テールは、特定の配列、例えば、ポリ（Ａ）シグナルを含む転写産物上に付加される。ポリ（Ａ）テール及び関連するタンパク質は、エキソヌクレアーゼによる分解からｍＲＮＡを保護するのに役立つ。ポリアデニル化はまた、転写終結、ｍＲＮＡの核外への搬出、及び翻訳において役割を果たす。ポリアデニル化は、通常、ＤＮＡのＲＮＡへの転写直後に核内で生じるが、より後で細胞質においても生じ得る。転写が終結した後、ｍＲＮＡ鎖は、ＲＮＡポリメラーゼに関連するエンドヌクレアーゼ複合体の作用によって切断される。切断部位は通常、切断部位の近くにある塩基配列ＡＡＵＡＡＡの存在を特徴とする。ｍＲＮＡが切断された後、アデノシン残基が切断部位の遊離３’末端に付加される。
本明細書で使用される場合、「ポリ（Ａ）シグナル配列」または「ポリアデニル化シグナル配列」は、エンドヌクレアーゼによるｍＲＮＡの切断、及び切断されたｍＲＮＡの３’末端への一連のアデノシンの付加を誘発する配列である。
使用され得るいくつかのポリ（Ａ）配列が存在し、これには、ウシ成長ホルモン（ｂＧＨ）（Ｗｏｙｃｈｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８１（１３）：３９４４－３９４８，１９８４；米国特許第５，１２２，４５８号、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、マウス－β－グロビン、マウス－α－グロビン（Ｏｒｋｉｎ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．４（２）：４５３－４５６，１９８５；Ｔｈｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ７１（２）：３１３－３１９，１９８８、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、ヒトコラーゲン、ポリオーマウイルス（Ｂａｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｍａｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１５（９）：４７８３－４７９０，１９９５、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ遺伝子（ＨＳＶ ＴＫ）、ＩｇＧ重鎖遺伝子ポリアデニル化シグナル（ＵＳ２００６／００４０３５４、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）（Ｓｚｙｍａｎｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍａｌ．Ｔｈｅｒａｐｙ １５（７）：１３４０－１３４７，２００７、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、ＳＶ４０後期及び初期ポリ（Ａ）部位などのＳＶ４０ポリ（Ａ）部位からなる群（Ｓｃｈｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍａｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１２（１２）：５３８６－５３９３，１９９２、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に由来するものが含まれる。
ポリ（Ａ）シグナル配列は、ＡＡＴＡＡＡであり得る。ＡＡＴＡＡＡ配列は、ポリアデニル化をシグナル伝達可能であるＡＡＴＡＡＡに相同な他のヘキサヌクレオチド配列と置換されてもよく、このような配列には、ＡＴＴＡＡＡ、ＡＧＴＡＡＡ、ＣＡＴＡＡＡ、ＴＡＴＡＡＡ、ＧＡＴＡＡＡ、ＡＣＴＡＡＡ、ＡＡＴＡＴＡ、ＡＡＧＡＡＡ、ＡＡＴＡＡＴ、ＡＡＡＡＡＡ、ＡＡＴＧＡＡ、ＡＡＴＣＡＡ、ＡＡＣＡＡＡ、ＡＡＴＣＡＡ、ＡＡＴＡＡＣ、ＡＡＴＡＧＡ、ＡＡＴＴＡＡ、またはＡＡＴＡＡＧが含まれる（例えば、ＷＯ０６／１２４１４（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。
いくつかの実施形態では、ポリ（Ａ）シグナル配列は、合成ポリアデニル化部位であり得る（例えば、Ｌｅｖｉｔｔ ｅｌ ａｌ，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．３（７）：１０１９－１０２５，１９８９（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に基づくＰｒｏｍｅｇａのｐＣｌ－ｎｅｏ発現構築物を参照のこと）。いくつかの実施形態では、ポリ（Ａ）シグナル配列は、可溶性ニューロピリン－１（ｓＮＲＰ）（ＡＡＡＴＡＡＡＡＴＡＣＧＡＡＡＴＧ）（配列番号１１６）のポリアデニル化シグナルである（例えば、ＷＯ０５／０７３３８４（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。いくつかの実施形態では、ポリ（Ａ）シグナル配列は、ＳＶ４０ポリ（Ａ）部位を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリ（Ａ）シグナルは、配列番号７６を含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリ（Ａ）シグナル配列は、ｂＧＨｐＡを含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、ポリ（Ａ）シグナルは、配列番号７５を含むか、またはそれからなる。ポリ（Ａ）シグナル配列のさらなる例は、当該技術分野で知られている。いくつかの実施形態では、ポリ（Ａ）配列は、配列番号７５または７６によって表されるポリ（Ａ）配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一である。
例示的なｂＧＨポリ（Ａ）シグナル配列（配列番号７５）
ＣＴＧＴＧＣＣＴＴＣＴＡＧＴＴＧＣＣＡＧＣＣＡＴＣＴＧＴＴＧＴＴＴＧＣＣＣＣＴＣＣＣＣＣＧＴＧＣＣＴＴＣＣＴＴＧＡＣＣＣＴＧＧＡＡＧＧＴＧＣＣＡＣＴＣＣＣＡＣＴＧＴＣＣＴＴＴＣＣＴＡＡＴＡＡＡＡＴＧＡＧＧＡＡＡＴＴＧＣＡＴＣＧＣＡＴＴＧＴＣＴＧＡＧＴＡＧＧＴＧＴＣＡＴＴＣＴＡＴＴＣＴＧＧＧＧＧＧＴＧＧＧＧＴＧＧＧＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＧＧＧＡＧＧＡＴＴＧＧＧＡＡＧＡＣＡＡＴＡＧＣＡＧＧＣＡＴＧＣＴＧＧＧＧＡＴＧＣＧＧＴＧＧＧＣＴＣＴＡＴＧＧ
例示的なＳＶ４０ポリ（Ａ）シグナル配列（配列番号７６）
ＡＡＣＴＴＧＴＴＴＡＴＴＧＣＡＧＣＴＴＡＴＡＡＴＧＧＴＴＡＣＡＡＡＴＡＡＡＧＣＡＡＴＡＧＣＡＴＣＡＣＡＡＡＴＴＴＣＡＣＡＡＡＴＡＡＡＧＣＡＴＴＴＴＴＴＴＣＡＣＴＧＣＡＴＴＣＴＡＧＴＴＧＴＧＧＴＴＴＧＴＣＣＡＡＡＣＴＣＡＴＣＡＡＴＧＴＡＴＣＴＴＡ
追加の配列
いくつかの実施形態では、本開示の構築物は、１つ以上のクローニング部位を含み得る。いくつかのそのような実施形態では、クローニング部位は、対象への投与のために製造される前に完全に除去されない場合がある。いくつかの実施形態では、クローニング部位は、リンカー配列として、ヌクレオチド及び／またはペプチド切断シグナルとして、及び／またはコザック部位の一部としてなどの機能的役割を有し得る。当業者には理解されるように、クローニング部位は、それらの所望の機能を保持しながら、一次配列が著しく異なっていてもよい。いくつかの実施形態では、構築物は、クローニング部位の任意の組み合わせを含み得、例示的なクローニング部位は、配列番号７７～８２によって表される。
例示的なクローニング部位Ａ（配列番号７７）
ＴＴＧＴＣＧＡＣＧＣＧＧＣＣＧＣＡＣＧＣＧＴ
例示的なクローニング部位Ｂ（配列番号７８）
ＣＴＣＣＴＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＣＴＧＧＴＴＡＴＴＧＴＧＡＣＣＧＧＴＧＣＣＡＣＣ
例示的なクローニング部位Ｃ（配列番号７９）
ＴＡＡＧＡＧＣＴＣＧＣＴＧＡＴＣＡＧＣＣＴＣＧＡ
例示的なクローニング部位Ｄ（配列番号８０）
ＡＡＧＣＴＴＧＡＡＴＴＣＡＧＣＴＧＡＣＧＴＧＣＣＴＣＧＧＡＣＣＧＣＣＴＡＧＧ
例示的なクローニング部位Ｅ（配列番号８１）
ＧＣＧＧＣＣＧＣＡＣＧＣＧＴ
例示的なクローニング部位Ｆ（配列番号８２）
ＡＡＧＣＴＴＧＡＡＴＴＣＡＧＣＴＧＡＣＧＴＧＣＣＴＣＧＧＡＣＣＧＣＴ
不安定化ドメイン
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される任意の構築物は、任意選択で、タンパク質発現を時間的に制御するための不安定化ドメインをコードする配列（「不安定化配列」）を含み得る。不安定化配列の非限定的な例としては、ＦＫ５０６配列、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）配列をコードする配列、または他の例示的な不安定化配列が挙げられる。
安定化リガンドの不在下では、不安定化配列に作動可能に連結したタンパク質配列はユビキチン化により分解される。これに対し、安定化リガンドの存在下ではタンパク質分解が阻害され、不安定化配列に作動可能に連結したタンパク質配列が活発に発現することが可能になる。タンパク質発現の安定化における陽性対照として、タンパク質発現は従来的な手段によって検出することができ、このような手段には、酵素、放射線撮影、比色、蛍光、または他の分光撮影アッセイ；蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）アッセイ；免疫学的アッセイ（例えば、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、及び免疫組織化学法）が含まれる。
不安定化配列のさらなる例が当該技術分野で知られている。いくつかの実施形態では、不安定化配列は、ＦＫ５０６－及びラパマイシン結合タンパク質（ＦＫＢＰ１２）配列であり、安定化リガンドはＳｈｉｅｌｄ－１（Ｓｈｌｄ１）である（Ｂａｎａｓｚｙｎｓｋｉ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｃｅｌｌ １２６（５）：９９５－１００４、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。いくつかの実施形態では、不安定化配列はＤＨＦＲ配列であり、安定化リガンドはトリメトプリム（ＴＭＰ）である（Ｉｗａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ １７：９８１－９８８、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
いくつかの実施形態では、不安定化配列はＦＫＢＰ１２配列であり、対象細胞（例えば、支持蝸牛外有毛細胞）内でＦＫＢＰ１２遺伝子を保持するｒＡＡＶ構築物の存在が、ウェスタンブロット法によって検出される。いくつかの実施形態では、不安定化配列は、本明細書に記載の任意のｒＡＡＶ構築物の時間特異的活性を検証するのに使用することができる。
例示的なＤＨＦＲ不安定化アミノ酸配列（配列番号８３）
ＭＩＳＬＩＡＡＬＡＶＤＹＶＩＧＭＥＮＡＭＰＷＮＬＰＡＤＬＡＷＦＫＲＮＴＬＮＫＰＶＩＭＧＲＨＴＷＥＳＩＧＲＰＬＰＧＲＫＮＩＩＬＳＳＱＰＳＴＤＤＲＶＴＷＶＫＳＶＤＥＡＩＡＡＣＧＤＶＰＥＩＭＶＩＧＧＧＲＶＩＥＱＦＬＰＫＡＱＫＬＹＬＴＨＩＤＡＥＶＥＧＤＴＨＦＰＤＹＥＰＤＤＷＥＳＶＦＳＥＦＨＤＡＤＡＱＮＳＨＳＹＣＦＥＩＬＥＲＲ
例示的なＤＨＦＲ不安定化ヌクレオチド配列（配列番号８４）
ＧＧＴＡＣＣＡＴＣＡＧＴＣＴＧＡＴＴＧＣＧＧＣＧＴＴＡＧＣＧＧＴＡＧＡＴＴＡＣＧＴＴＡＴＣＧＧＣＡＴＧＧＡＡＡＡＣＧＣＣＡＴＧＣＣＧＴＧＧＡＡＣＣＴＧＣＣＴＧＣＣＧＡＴＣＴＣＧＣＣＴＧＧＴＴＴＡＡＡＣＧＣＡＡＣＡＣＣＴＴＡＡＡＴＡＡＡＣＣＣＧＴＧＡＴＴＡＴＧＧＧＣＣＧＣＣＡＴＡＣＣＴＧＧＧＡＡＴＣＡＡＴＣＧＧＴＣＧＴＣＣＧＴＴＧＣＣＡＧＧＡＣＧＣＡＡＡＡＡＴＡＴＴＡＴＣＣＴＣＡＧＣＡＧＴＣＡＡＣＣＧＡＧＴＡＣＧＧＡＣＧＡＴＣＧＣＧＴＡＡＣＧＴＧＧＧＴＧＡＡＧＴＣＧＧＴＧＧＡＴＧＡＡＧＣＣＡＴＣＧＣＧＧＣＧＴＧＴＧＧＴＧＡＣＧＴＡＣＣＡＧＡＡＡＴＣＡＴＧＧＴＧＡＴＴＧＧＣＧＧＣＧＧＴＣＧＣＧＴＴＡＴＴＧＡＡＣＡＧＴＴＣＴＴＧＣＣＡＡＡＡＧＣＧＣＡＡＡＡＡＣＴＧＴＡＴＣＴＧＡＣＧＣＡＴＡＴＣＧＡＣＧＣＡＧＡＡＧＴＧＧＡＡＧＧＣＧＡＣＡＣＣＣＡＴＴＴＣＣＣＧＧＡＴＴＡＣＧＡＧＣＣＧＧＡＴＧＡＣＴＧＧＧＡＡＴＣＧＧＴＡＴＴＣＡＧＣＧＡＡＴＴＣＣＡＣＧＡＴＧＣＴＧＡＴＧＣＧＣＡＧＡＡＣＴＣＴＣＡＣＡＧＣＴＡＴＴＧＣＴＴＴＧＡＧＡＴＴＣＴＧＧＡＧＣＧＧＣＧＡＴＡＡ
例示的な不安定化ドメイン（配列番号８５）
ＡＴＣＡＧＴＣＴＧＡＴＴＧＣＧＧＣＧＴＴＡＧＣＧＧＴＡＧＡＴＴＡＣＧＴＴＡＴＣＧＧＣＡＴＧＧＡＡＡＡＣＧＣＣＡＴＧＣＣＧＴＧＧＡＡＣＣＴＧＣＣＴＧＣＣＧＡＴＣＴＣＧＣＣＴＧＧＴＴＴＡＡＡＣＧＣＡＡＣＡＣＣＴＴＡＡＡＴＡＡＡＣＣＣＧＴＧＡＴＴＡＴＧＧＧＣＣＧＣＣＡＴＡＣＣＴＧＧＧＡＡＴＣＡＡＴＣＧＧＴＣＧＴＣＣＧＴＴＧＣＣＡＧＧＡＣＧＣＡＡＡＡＡＴＡＴＴＡＴＣＣＴＣＡＧＣＡＧＴＣＡＡＣＣＧＡＧＴＡＣＧＧＡＣＧＡＴＣＧＣＧＴＡＡＣＧＴＧＧＧＴＧＡＡＧＴＣＧＧＴＧＧＡＴＧＡＡＧＣＣＡＴＣＧＣＧＧＣＧＴＧＴＧＧＴＧＡＣＧＴＡＣＣＡＧＡＡＡＴＣＡＴＧＧＴＧＡＴＴＧＧＣＧＧＣＧＧＴＣＧＣＧＴＴＡＴＴＧＡＡＣＡＧＴＴＣＴＴＧＣＣＡＡＡＡＧＣＧＣＡＡＡＡＡＣＴＧＴＡＴＣＴＧＡＣＧＣＡＴＡＴＣＧＡＣＧＣＡＧＡＡＧＴＧＧＡＡＧＧＣＧＡＣＡＣＣＣＡＴＴＴＣＣＣＧＧＡＴＴＡＣＧＡＧＣＣＧＧＡＴＧＡＣＴＧＧＧＡＡＴＣＧＧＴＡＴＴＣＡＧＣＧＡＡＴＴＣＣＡＣＧＡＴＧＣＴＧＡＴＧＣＧＣＡＧＡＡＣＴＣＴＣＡＣＡＧＣＴＡＴＴＧＣＴＴＴＧＡＧＡＴＴＣＴＧＧＡＧＣＧＧＣＧＡ
例示的なＦＫＢＰ１２不安定化ペプチドアミノ酸配列（配列番号８６）
ＭＧＶＥＫＱＶＩＲＰＧＮＧＰＫＰＡＰＧＱＴＶＴＶＨＣＴＧＦＧＫＤＧＤＬＳＱＫＦＷＳＴＫＤＥＧＱＫＰＦＳＦＱＩＧＫＧＡＶＩＫＧＷＤＥＧＶＩＧＭＱＩＧＥＶＡＲＬＲＣＳＳＤＹＡＹＧＡＧＧＦＰＡＷＧＩＱＰＮＳＶＬＤＦＥＩＥＶＬＳＶＱ
レポーター配列またはエレメント
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される構築物は、任意選択で、レポーターポリペプチド及び／またはタンパク質をコードする配列（「レポーター配列」）を含み得る。レポーター配列の非限定的な例としては、β－ラクタマーゼ、β－ガラクトシダーゼ（ＬａｃＺ）、アルカリホスファターゼ、チミジンキナーゼ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、赤色蛍光タンパク質、ｍＣｈｅｒｒｙ蛍光タンパク質、黄色蛍光タンパク質、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）、及びルシフェラーゼをコードするＤＮＡ配列が挙げられる。レポーター配列のさらなる例は、当該技術分野で知られている。レポーター配列は、その発現を駆動する制御エレメントに結合した際、酵素、放射線撮影、比色、蛍光、または他の分光撮影アッセイ；蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）アッセイ；免疫学的アッセイ（例えば、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、及び免疫組織化学法）を含む、従来的な手段によって検出可能なシグナルを提供することができる。
いくつかの実施形態では、レポーター配列はＬａｃＺ遺伝子であり、哺乳動物細胞（例えば、蝸牛有毛細胞）におけるＬａｃＺ遺伝子を保持する構築物の存在が、β－ガラクトシダーゼ活性についてのアッセイによって検出される。レポーターが蛍光タンパク質（例えば、緑色蛍光タンパク質）またはルシフェラーゼである場合、哺乳動物細胞（例えば、蝸牛有毛細胞）における蛍光タンパク質またはルシフェラーゼを保持する構築物の存在は、蛍光技法（例えば、蛍光顕微鏡法またはＦＡＣＳ）により、またはルミノメーター（例えば、分光光度計またはＩＶＩＳ撮像装置）において光生成により測定され得る。いくつかの実施形態では、レポーター配列を用いて、本明細書に記載の任意の構築物の組織特異的標的化能力及び組織特異的プロモーター調節及び／または制御活性を検証することができる。
いくつかの実施形態では、レポーター配列はＦＬＡＧタグ（例えば、３ｘＦＬＡＧタグ）であり、哺乳動物細胞（例えば、内耳細胞、例えば、蝸牛有毛細胞または支持細胞）中のＦＬＡＧタグを保持する構築物の存在は、タンパク質結合または検出アッセイ（例えば、ウェスタンブロット法、免疫組織化学法、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、質量分析法）により検出される。例示的な３ｘＦＬＡＧタグ配列は、配列番号８７として提供される。
いくつかの実施形態では、レポーター配列は、高感度緑色蛍光タンパク質（ｅＧＦＰ）タグ（例えば、ｅＧＦＰタグ）であり、哺乳動物細胞（例えば、内耳細胞、例えば、蝸牛有毛細胞または支持細胞）におけるｅＧＦＰタグを保持する構築物の存在は、蛍光、タンパク質結合、または検出アッセイ（例えば、ウェスタンブロット法、免疫組織化学法、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、質量分析法）により検出される。例示的なｅＧＦＰタグ配列は、配列番号１０４及び１０５として提供される。
例示的な３ｘＦＬＡＧタグ配列（配列番号８７）
ＧＧＡＴＣＣＣＧＧＧＣＴＧＡＣＴＡＣＡＡＡＧＡＣＣＡＴＧＡＣＧＧＴＧＡＴＴＡＴＡＡＡＧＡＴＣＡＴＧＡＣＡＴＣＧＡＣＴＡＣＡＡＧＧＡＴＧＡＣＧＡＴＧＡＣＡＡＧ
例示的な高感度緑色蛍光タンパク質（ｅＧＦＰ）ヌクレオチド配列（配列番号１０４）
ＭＶＳＫＧＥＥＬＦＴＧＶＶＰＩＬＶＥＬＤＧＤＶＮＧＨＫＦＳＶＳＧＥＧＥＧＤＡＴＹＧＫＬＴＬＫＦＩＣＴＴＧＫＬＰＶＰＷＰＴＬＶＴＴＬＴＹＧＶＱＣＦＳＲＹＰＤＨＭＫＱＨＤＦＦＫＳＡＭＰＥＧＹＶＱＥＲＴＩＦＦＫＤＤＧＮＹＫＴＲＡＥＶＫＦＥＧＤＴＬＶＮＲＩＥＬＫＧＩＤＦＫＥＤＧＮＩＬＧＨＫＬＥＹＮＹＮＳＨＮＶＹＩＭＡＤＫＱＫＮＧＩＫＶＮＦＫＩＲＨＮＩＥＤＧＳＶＱＬＡＤＨＹＱＱＮＴＰＩＧＤＧＰＶＬＬＰＤＮＨＹＬＳＴＱＳＡＬＳＫＤＰＮＥＫＲＤＨＭＶＬＬＥＦＶＴＡＡＧＩＴＬＧＭＤＥＬＹＫ
例示的な高感度緑色蛍光タンパク質（ｅＧＦＰ）アミノ酸配列（配列番号１０５）
ＡＴＧＧＴＧＡＧＣＡＡＧＧＧＣＧＡＧＧＡＧＣＴＧＴＴＣＡＣＣＧＧＧＧＴＧＧＴＧＣＣＣＡＴＣＣＴＧＧＴＣＧＡＧＣＴＧＧＡＣＧＧＣＧＡＣＧＴＡＡＡＣＧＧＣＣＡＣＡＡＧＴＴＣＡＧＣＧＴＧＴＣＣＧＧＣＧＡＧＧＧＣＧＡＧＧＧＣＧＡＴＧＣＣＡＣＣＴＡＣＧＧＣＡＡＧＣＴＧＡＣＣＣＴＧＡＡＧＴＴＣＡＴＣＴＧＣＡＣＣＡＣＣＧＧＣＡＡＧＣＴＧＣＣＣＧＴＧＣＣＣＴＧＧＣＣＣＡＣＣＣＴＣＧＴＧＡＣＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＴＡＣＧＧＣＧＴＧＣＡＧＴＧＣＴＴＣＡＧＣＣＧＣＴＡＣＣＣＣＧＡＣＣＡＣＡＴＧＡＡＧＣＡＧＣＡＣＧＡＣＴＴＣＴＴＣＡＡＧＴＣＣＧＣＣＡＴＧＣＣＣＧＡＡＧＧＣＴＡＣＧＴＣＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＣＣＡＴＣＴＴＣＴＴＣＡＡＧＧＡＣＧＡＣＧＧＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＣＧＣＧＣＣＧＡＧＧＴＧＡＡＧＴＴＣＧＡＧＧＧＣＧＡＣＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＡＣＣＧＣＡＴＣＧＡＧＣＴＧＡＡＧＧＧＣＡＴＣＧＡＣＴＴＣＡＡＧＧＡＧＧＡＣＧＧＣＡＡＣＡＴＣＣＴＧＧＧＧＣＡＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＴＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＣＡＧＣＣＡＣＡＡＣＧＴＣＴＡＴＡＴＣＡＴＧＧＣＣＧＡＣＡＡＧＣＡＧＡＡＧＡＡＣＧＧＣＡＴＣＡＡＧＧＴＧＡＡＣＴＴＣＡＡＧＡＴＣＣＧＣＣＡＣＡＡＣＡＴＣＧＡＧＧＡＣＧＧＣＡＧＣＧＴＧＣＡＧＣＴＣＧＣＣＧＡＣＣＡＣＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＣＡＣＣＣＣＣＡＴＣＧＧＣＧＡＣＧＧＣＣＣＣＧＴＧＣＴＧＣＴＧＣＣＣＧＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＣＴＧＡＧＣＡＣＣＣＡＧＴＣＣＧＣＣＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＡＣＣＣＣＡＡＣＧＡＧＡＡＧＣＧＣＧＡＴＣＡＣＡＴＧＧＴＣＣＴＧＣＴＧＧＡＧＴＴＣＧＴＧＡＣＣＧＣＣＧＣＣＧＧＧＡＴＣＡＣＴＣＴＣＧＧＣＡＴＧＧＡＣＧＡＧＣＴＧＴＡＣＡＡＧ
ＡＡＶカプシド
本開示は、ＡＡＶカプシドにパッケージングされた１つ以上のポリヌクレオチド構築物を提供する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶカプシドは、ＡＡＶ２、３、４、５、６、７、８、９、１０、ｒｈ８、ｒｈ１０、ｒｈ３９、ｒｈ４３、もしくはＡｎｃ８０血清型、またはその１つ以上のハイブリッドのＡＡＶカプシドからであるか、またはそれに由来する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶカプシドは、ＡＡＶ祖先血清型からのものである。いくつかの実施形態では、ＡＡＶカプシドは、祖先（Ａｎｃ）ＡＡＶカプシドである。Ａｎｃカプシドは、確率の高い祖先配列を決定するために進化的確率及び進化的モデリングを使用して構築された構築物配列から作成される。したがって、Ａｎｃカプシド／構築物配列が自然界に存在していたかは不明である。例えば、いくつかの実施形態では、ＡＡＶカプシドはＡｎｃ８０カプシド（例えば、Ａｎｃ８０Ｌ６５カプシド）である。いくつかの実施形態では、ＡＡＶカプシドは、配列番号８８を含むテンプレートヌクレオチドコード配列を使用して作成される。いくつかの実施形態では、カプシドは、配列番号８９によって表されるポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、カプシドは、配列番号８９によって表されるポリペプチドに対して少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％の配列同一性を有するポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、カプシドは、配列番号１１３によって表されるポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、カプシドは、配列番号１１３によって表されるポリペプチドに対して少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％の配列同一性を有するポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、カプシドは、配列番号１１４によって表されるポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、カプシドは、配列番号１１４によって表されるポリペプチドに対して少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％の配列同一性を有するポリペプチドを含む。
本明細書で提供されるように、ＡＡＶカプシド及びｒＡＡＶ構築物（例えば、ＡＡＶ ＩＴＲを含む）の任意の組み合わせが、本開示の組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）粒子において使用され得る。例えば、野生型またはバリアントＡＡＶ２ ＩＴＲ及びＡｎｃ８０カプシド、野生型またはバリアントＡＡＶ２ ＩＴＲ及びＡＡＶ６カプシドなどである。本開示のいくつかの実施形態では、ＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ２構成要素（例えば、カプシド及びＩＴＲはＡＡＶ２血清型である）から構成される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ２／６、ＡＡＶ２／８、またはＡＡＶ２／９粒子（例えば、ＡＡＶ２ ＩＴＲを有するＡＡＶ構築物を有するＡＡＶ６、ＡＡＶ８、またはＡＡＶ９カプシド）である。本開示のいくつかの実施形態では、ＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ２／Ａｎｃ８０粒子であり、コード配列の一部、例えば、抗ＶＥＧＦタンパク質をコードする配列（例えば、配列番号１３、１４、１５、１９、２２、４２、及び／または１０３）に隣接するＡＡＶ２ ＩＴＲ（例えば、配列番号４５及び４６、または４７及び４８）を有するＡＡＶ構築物をカプシド封入するＡｎｃ８０カプシド（例えば、配列番号８９、配列番号１１３、または配列番号１１４のポリペプチドを含む）を含む。他のＡＡＶ粒子は当該技術分野で知られており、例えば、Ｓｈａｒｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ Ｂｕｌｌ．２０１０ Ｆｅｂ １５；８１（２－３）：２７３（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。いくつかの実施形態では、カプシド配列は、配列番号８８または８９によってそれぞれ表されるカプシドヌクレオチドまたはアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一である。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるプラットフォーム送達アプローチは、現在の天然に存在するウイルスの進化系統を再構成する祖先ＡＡＶ（ＡＡＶＡｎｃ）カプシドとして知られる合成ＡＡＶカプシドのライブラリを組み合わせる。いくつかの実施形態では、これらのＡＡＶカプシドは、生成物候補を蝸牛に直接送達するための新規の低侵襲な投与処置と組み合わされる。いくつかの実施形態では、送達アプローチは、このライブラリからのＡＡＶＡｎｃ８０カプシドバリアント（Ａｎｃ８０Ｌ６５としても知られる）を利用する。いくつかの実施形態では、そのようなカプシドは、ｒＡＡＶ粒子を作成するために利用され、そのような粒子は、本明細書に記載の構築物、例えば本明細書に記載の抗ＶＥＧＦタンパク質を含む構築物を加えることによって作成され、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－抗ＶＥＧＦを作成する。いくつかの実施形態では、そのような粒子は、異常な血管成長を引き起こし得るタンパク質であるＶＥＧＦの阻害剤のためのｃＤＮＡを送達し得る。いくつかの実施形態では、そのような治療は、新生血管形成を特徴とする耳科障害のためのものであり、例えば、第８脳神経とも呼ばれる前庭蝸牛神経の腫瘍であるＶＳの治療のためのものである。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物はＡＡＶＡｎｃ８０カプシドを含み、これは合理的に設計された合成ＡＡＶカプシドであり、その配列は祖先配列再構成によって推測されたものである。祖先配列再構築は、天然に存在するアデノ随伴ウイルスから入手可能な配列情報を使用し、系統学的及び統計的予測の結果として、様々な中間進化ノードでの配列の祖先状態を特定する（図９）。ＡＡＶＡｎｃ８０の作成中に、９つのノードが再構成され、ＡＡＶ系統全体のｉｎ ｓｉｌｉｃｏ由来配列がｄｅ ｎｏｖｏで合成され、特性決定された。これにより、広く研究されているＡＡＶ血清型１、２、８、及び９の推定祖先であるＡｎｃ８０ライブラリノード（Ａｎｃ８０Ｌｉｂ）が特定された。続いて、Ａｎｃ８０Ｌｉｂタンパク質配列が逆翻訳され、遺伝子合成によって生成され、個々のクローンがパッケージング、感染性、及び生物学的特性について個別に評価された。いくつかの実施形態では、これらの結果に基づいて、６５番目のＡｎｃ８０ＬｉｂクローンであるＡＡＶＡｎｃ８０（Ａｎｃ８０Ｌ６５）を、さらなる特性決定のために選択した。ＡＡＶＡｎｃ８０カプシドバリアントは独特な組成を有する；ＡＡＶ８及びＡＡＶ２の配列は、ＡＡＶＡｎｃ８０からそれぞれおよそ９％と１２％のみ異なるが、ＡＡＶＡｎｃ８０の構造モデリングにより、その粒子の外表面の約２０％が、カプシド表面全体に分散する様式で、既知の循環ＡＡＶ（図９及び図１０）から異なっていることが示された（Ｚｉｎｎ ２０１５、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
いくつかの実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでの遺伝子治療粒子としてのＡＡＶＡｎｃ８０の性能が特性決定されており、ＡＡＶＡｎｃ８０を含むｒＡＡＶ粒子は、広く適用可能な遺伝子治療粒子として作用する可能性を示している。いくつかの実施形態では、マウス及び非ヒト霊長類（ＮＨＰ）で実施された研究により、ＡＡＶＡｎｃ８０が、静脈内注入後に肝臓を標的とした場合に、全身毒性の明らかな兆候なしに、ＡＡＶ８と同様の形質導入効率を有することが示されている（Ｚｉｎｎ ２０１５；Ｍｕｒｉｌｌｏ ２０１９、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。いくつかの実施形態では、ＡＡＶＡｎｃ８０は、マウス前眼部（Ｗａｎｇ ２０１７、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、マウス及びＮＨＰ網膜（Ｚｉｎｎ ２０１５；Ｃａｒｖａｌｈｏ ２０１８、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、マウス骨格筋（Ｚｉｎｎ ２０１５、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、全身及び実質内送達によるマウス中枢神経系（ＣＮＳ）（Ｈｕｄｒｙ ２０１８、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、ならびにマウス腎臓（Ｉｋｅｄａ ２０１８、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）への指向性及び効率的な形質導入を示した。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物（例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦを含む）は、ＡＡＶＡｎｃ８０カプシドを含む。いくつかの実施形態では、ＡＡＶＡｎｃ８０カプシドは、蝸牛細胞及び前庭細胞への高い形質導入効率を示す。ＡＡＶＡｎｃ８０は、合理的に設計されたＡＡＶカプシドであり、その配列は祖先配列再構築によって推測されたものである（Ｚｉｎｎ ２０１５、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。祖先配列再構築は、天然に存在するＡＡＶから入手可能な配列情報を使用し、系統学的及び統計的予測の結果として、様々な中間進化ノードでの配列の祖先状態を特定する。文献に記載されているように、ＡＡＶ系統全体にわたるｉｎ ｓｉｌｉｃｏ由来配列のｄｅ ｎｏｖｏ合成及び特性決定により、広く研究されているＡＡＶ血清型１、２、８、及び９の推定祖先であるＡｎｃ８０ライブラリ（Ａｎｃ８０Ｌｉｂ）ノードが特定された。その後、Ａｎｃ８０Ｌｉｂ配列の評価により、６５番目のＡｎｃ８０ＬｉｂクローンであるＡＡＶＡｎｃ８０（Ａｎｃ８０Ｌ６５）がさらに特性決定された。これらの研究から、ＡＡＶＡｎｃ８０カプシドバリアントは、ＡＡＶ８と同様の形質導入効率を有する安定かつ機能的なＡＡＶバリアントをもたらす、異なる外表面粒子分布を有する独特の組成を持つことが示された（Ｚｉｎｎ２０１５、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。哺乳動物の内耳におけるＡＡＶＡｎｃ８０の最初に報告された使用により、蝸牛及び前庭有毛細胞における高い形質導入効率が明らかとなった（Ｌａｎｄｅｇｇｅｒ ２０１７、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。複数のその後の独立した調査により、ＡＡＶＡｎｃ８０の蝸牛及び前庭細胞の形質導入効率は、他のＡＡＶ血清型と比較して増加していることが、様々な年齢のマウスにおいて（Ｌａｎｄｅｇｇｅｒ ２０１７；Ｔａｏ ２０１８；Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ ２０１８；Ｏｍｉｃｈｉ ２０２０、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、そして非ヒト霊長類において（Ａｎｄｒｅｓ－Ｍａｔｅｏｓ ２０１９、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）確認されており、ＡＡＶＡｎｃ８０は、他の多くのＡＡＶカプシドと比較して、より高い形質導入効率と広い指向性を有する。
ＡＡＶ粒子を使用する遺伝子治療は、次のいくつかの理由で内耳障害の有望な治療法である：例えば、（１）聴覚及び前庭感覚上皮を含む内耳は、中枢神経系におけるものと同様に免疫監視機構を改変していること（Ｆｕｊｉｏｋａ ２０１４、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）；（２）蝸牛のコルチ器の感覚細胞及び支持細胞は有糸分裂後であり、これによりＡＡＶの単回投与後の長期発現が可能となり得ること；ならびに（３）成人及び小児の両方における複数の投与経路を介したｒＡＡＶ送達の総合的な臨床経験が、特に局所送達及び／または低～中用量での投与において、送達ビヒクルとしてのＡＡＶの強力な安全性プロファイルを示唆していること。
２０年以上前の初期臨床試験から始まり、ｒＡＡＶ粒子は、全身投与で最大およそ１Ｅ１５ｖｇ以上の用量で数十の臨床試験で数百人の参加者に投与されてきた（Ｆｌｏｔｔｅ １９９６；Ｆｌｏｔｔｅ ２０１３；Ｐａｒｅｎｔｅ ２０１８；Ｗａｎｇ ２０１９、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ＡＡＶ粒子がｉｎ ｖｉｖｏ遺伝子導入に使用された試験の数は、着実に増加している。その安全性プロファイルは、幅広い標的組織への形質導入効率の高さとともに、ｒＡＡＶ粒子をｉｎ ｖｉｖｏ遺伝子治療の最適なプラットフォームとして確立した（Ｗａｎｇ ２０１９、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ｒＡＡＶ技術は、凝固障害、遺伝性失明、及び神経変性疾患を含む様々な状態に対して臨床応用に成功している（Ｃｏｌｅｌｌａ ２０１８；Ｗａｎｇ ２０１９、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
ｒＡＡＶ粒子製品（アリポジーンティパルボベク；Ｇｌｙｂｅｒａ（登録商標））は、２０１２年にリポ蛋白リパーゼ欠損症の治療に欧州医薬品庁（ＥＭＡ）から初めて承認された。その後、確定診断された両アレル性ＲＰＥ６５変異による網膜ジストロフィーの治療用のボレチジーンネパルボベック－ｒｚｙｌ（Ｌｕｘｔｕｒｎａ（登録商標））と、ＳＭＮ１遺伝子の両アレル性変異を有する脊髄性筋萎縮症（ＳＭＡ）の治療用のオナセムノゲンアベパルボベク－ｘｉｏｉ（Ｚｏｌｇｅｎｓｍａ（登録商標））という２つのｒＡＡＶ製品が、それぞれ２０１７年及び２０１９年に米国食品医薬品局（ＦＤＡ）により承認された；ボレチジーンネパルボベック－ｒｚｙｌ（Ｌｕｘｔｕｒｎａ（登録商標））はまた、遺伝性網膜ジストロフィーによる視力低下（ＲＰＥ６５遺伝子の変異が原因の場合）の治療用にもＥＭＡにより承認された。
いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ粒子を含む薬物及び生物学的製剤は、それらを外リンパに送達することによって、内耳の多くの標的細胞に到達することができる。外リンパは、脳脊髄液（ＣＳＦ）と組成が非常に類似しており（Ｌｙｓａｇｈｔ ２０１１、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、それと拡散的に連続している流体である。外リンパは、内耳の骨迷路に収容された蝸牛及び前庭系の感覚細胞、神経細胞、及び支持細胞のほとんどを浸している（図１及び図３）。いくつかの実施形態では、本明細書に開示された組成物、例えばｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦが送達される蝸牛の外リンパ腔は、鼓室階と前庭階という２つの階または通路を含み、これらはヘリコトレマを介して蝸牛ラセンの頂点で互いに連続している。内耳の多くの細胞は、組織内の間質腔を通じて外リンパと流体連通している。
いくつかの実施形態では、本明細書では、本明細書に開示された組成物、例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦを、アブミ骨底板に位置する通気部を伴って正円窓膜を通じて内耳の外リンパ液に送達する、蝸牛内投与用の無菌の使い捨て送達デバイスも開示する。いくつかの実施形態では、この蝸牛内投与アプローチにおいて、本明細書に開示される組成物、例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦは、組成物が鼓室階を通って、次にヘリコトレマでの接続を介して前庭階を通って、流体経路を辿ってアブミ骨底板の通気部まで灌流するように、卵円窓内のアブミ骨底板に通気部を伴って正円窓膜を通じて鼓室階に投与される（図４）。いくつかの実施形態では、注入ポートとは異なる通気部の存在により、蝸牛の全長にわたって薬剤をより均一に分散させることができ、内耳内での追加の流体圧の有害な上昇が防止される。いくつかの実施形態では、この二重窓、注入、及び通気技術を用いた前庭細胞の形質導入によって証明されるように、この送達アプローチは、本明細書に開示される組成物、例えば、注入物の前庭系への拡散も可能にする。いくつかの実施形態では、プロセス全体は、外耳道を通じた比較的非外傷性のアプローチで対象において達成され得る；外科的投与処置に関する追加の情報については、図１及び実施例を参照のこと。
マウスにおけるＡＡＶＡｎｃ８０形質導入に関する多くの研究が公開されている。異なるタイプのウイルスベクター（例えば、アデノウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター）が、動物モデルでの内耳への遺伝子送達について検討されてきた（Ｃｈｅｎ ２００１；Ｗｅｎｚｅｌ ２００７；Ｈｕｓｓｅｍａｎ ２００９、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）；しかしながら、ｒＡＡＶ粒子は、許容可能な安全性プロファイルと、ノックアウト及びノックインマウスモデルでの聴覚、蝸牛、及び前庭機能の回復を含む、長期にわたる導入遺伝子発現を考えると、蝸牛への直接遺伝子送達のための有望なツールと思われる（Ａｋｉｌ ２０１２；Ｋｉｍ ２０１６；Ｐａｎ ２０１７；Ａｋｉｌ ２０１９；Ａｌ－Ｍｏｙｅｄ ２０１９；Ｇｙｏｒｇｙ ２０１９、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。新生児及び成体マウスの両方において、いくつかのＡＡＶ血清型が、異なる外科的アプローチ及び用量を使用して、内耳に送達されている（Ａｋｉｌ ２０１２；Ａｓｋｅｗ ２０１５；Ｃｈｉｅｎ ２０１６；Ｌａｎｄｅｇｇｅｒ ２０１７；Ｓｕｚｕｋｉ ２０１７；Ｔａｏ ２０１８；Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ ２０１８；Ａｋｉｌ ２０１９；Ａｌ－Ｍｏｙｅｄ ２０１９；Ｇｙｏｒｇｙ ２０１９；Ｋｉｍ ２０１９；Ｏｍｉｃｈｉ ２０２０、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。蝸牛及び前庭器官の異なる細胞タイプでのＧＦＰ発現によって評価される形質導入効率は、マウスの生後年齢、粒子を送達するために使用する方法、及び評価する血清型またはカプシドバリアントによって異なる。
いくつかの実施形態では、ＡＡＶＡｎｃ８０バリアントは、他のＡＡＶカプシドと比較して、新生児及び成体マウスでの蝸牛及び前庭感覚細胞（有毛細胞）ならびに蝸牛及び前庭器官の補助細胞の高効率標的化を示した（Ｌａｎｄｅｇｇｅｒ ２０１７；Ｓｕｚｕｋｉ ２０１７；Ｏｍｉｃｈｉ ２０２０、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。Ａｎｃ８０新生児の指向性及び遺伝子導入効率を、経正円窓投与により生後１日目（Ｐ１）に注入されたＣ５７ＢＬ／６マウスにおいてｉｎ ｖｉｖｏで評価した（Ｌａｎｄｅｇｇｅｒ ２０１７、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。先行研究と一致して、ＡＡＶ２、ＡＡＶ６、及びＡＡＶ８は、ＩＨＣの低割合を標的とし、ＡＡＶ１は、より高効率でＩＨＣを形質導入できたが、ＯＨＣの形質導入は最小限であった；対照的に、ＡＡＶＡｎｃ８０（１．７Ｅ９ｖｇ／蝸牛）は、蝸牛または聴力機能に悪影響を与えることなく、ＩＨＣの約１００％及びＯＨＣの約９０％（図１１）を形質導入することができた（Ｌａｎｄｅｇｇｅｒ ２０１７、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。いくつかの実施形態では、前庭系において、ＡＡＶＡｎｃ８０により、前庭機能に影響を与えることなく、卵形嚢のＩ型及びＩＩ型有毛細胞、ならびに半規管稜の細胞が形質導入された（図１２）（Ｌａｎｄｅｇｇｅｒ ２０１７、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
後半規管を介した異なる投与経路を使用して、成体（７週齢）ＣＢＡ／ＣａＪマウスにおいて、ＡＡＶＡｎｃ８０の指向性及び遺伝子導入効率を評価した（Ｓｕｚｕｋｉ ２０１７、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。ＡＡＶＡｎｃ８０（９．６Ｅ８ ｖｇ／蝸牛）は、正常な蝸牛及び聴力機能を温存しながら、蝸牛の感覚細胞及び補助細胞（蝸牛の長さ全体にわたってＩＨＣのおよそ１００％、及びＯＨＣのかなりの部分を含む）、ラセン板縁及びライスネル膜の細胞、ならびに蝸牛軸の細胞（例えば、ラセン神経節ニューロン及びサテライトグリア細胞）（図１３）を標的とした（Ｓｕｚｕｋｉ ２０１７、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。前庭系の複数の細胞タイプもまた形質導入され（有毛細胞のサブセットならびに卵形嚢及び半規管稜及び球形嚢の支持細胞の実質的に１００％を含む）（図１４）、全て前庭機能に悪影響を及ぼさなかった（Ｓｕｚｕｋｉ ２０１７、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
より最近では、成体（４週齢）のＣ３Ｈ／ＦｅＪマウスにおけるＡＡＶＡｎｃ８０のｉｎ ｖｉｖｏ形質導入が、本明細書で利用される送達経路（後半規管の開窓を伴った正円窓膜送達を介する）を用いて評価され、天然に存在する血清型ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ８、及びＡＡＶ９による形質導入と直接比較された（Ｏｍｉｃｈｉ ２０２０、参照によりその全体を本明細書に組み込まれる）。全ての粒子は、対照のような（未注入の）ＡＢＲ閾値によって示されるように、聴力機能に悪影響を与えることなく、ある程度の形質導入を生じた。ＡＡＶＡｎｃ８０（５．５Ｅ９ ｖｇ／蝸牛）により、蝸牛の全長にわたってＩＨＣを実質的に１００％、蝸牛の位置に応じてＯＨＣのおよそ２７～６６％が形質導入された（図１５）。ＡＡＶＡｎｃ８０と比較してＡＡＶ２によるＯＨＣの形質導入効率がわずかに高い（３．６８Ｅ９ ｖｇ／蝸牛）にもかかわらず、ＡＡＶＡｎｃ８０は、球形嚢のｅＧＦＰ陽性有毛細胞及び蝸牛のラセン神経節ニューロンによって証明されるようにＡＡＶ２よりも著しく広い指向性を維持し；これらの同じ細胞タイプにおいて、ＡＡＶ２はほとんどまたは全く形質導入を生じなかった（図１５）（Ｏｍｉｃｈｉ ２０２０、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
いくつかの実施形態では、新生児マウスから成体マウスにおいて、蝸牛ＩＨＣ及びＯＨＣ、支持細胞、蝸牛ラセン神経節の細胞、卵形嚢、球形嚢、及び膨大部稜の前庭有毛細胞、ならびに蝸牛及び前庭支持／補助細胞を含む広範囲の内耳細胞タイプを標的とするＡＡＶＡｎｃ８０の能力は、例えば、ＡＡＶＡｎｃ８０が内耳の障害に対する遺伝子治療アプローチの開発を促進し得ることを示唆している。
特定の実施形態では、レポーター構築物を使用して非ヒト霊長類（ＮＨＰ）においてプラットフォーム及び支持研究を実施して、内耳でのＡＡＶＡｎｃ８０形質導入を評価する。いくつかの実施形態では、探索的プラットフォーム及び他の支持研究をＮＨＰにおいて実施し、ＡＡＶＡｎｃ８０指向性及びＡＡＶＡｎｃ８０粒子の送達の用量依存的効果を評価する。いくつかの実施形態では、ＮＨＰの内耳細胞タイプへのＡＡＶＡｎｃ８０カプシド指向性の評価は、高感度ＧＦＰ（ｅＧＦＰ）レポーター導入遺伝子をコードする構築物を含み、正円窓膜を通じた蝸牛内注入を介して送達されるｒＡＡＶＡｎｃ８０粒子を使用して促進される。いくつかの実施形態では、このような粒子は、本明細書に記載のように、蝸牛に直接効率的に送達するための新規デバイスの開発にも有用であり得る。
いくつかの実施形態では、ＮＨＰの耳は、蝸牛有毛細胞の形質導入効率及び有毛細胞の形質導入の用量依存性について組織学的に評価された。いくつかの実施形態では、そのような耳は、蝸牛及び／または前庭器官における細胞タイプの形質導入の広さについても分析された。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｒＡＡＶ粒子（例えば、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－抗ＶＥＧＦを含む）により形質導入された内耳細胞の集団を増やすことで、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－抗ＶＥＧＦの場合、分泌型抗ＶＥＧＦタンパク質の持続的なデポを内耳が維持できる可能性が支持されると考えられ；ひいては、このタンパク質が、隣接する内耳道における腫瘍の部位と近接的及び拡散的に連続してＶＳの成長を制御できる可能性を有する。いくつかの実施形態では、有毛細胞の生存に対する処置、既存の中和抗体（ＮＡｂ）の存在下での形質導入、及び対側の（未注入の）耳の任意の潜在的な形質導入の耐性も、ＮＨＰにおいて評価した。結果は実施例に要約されている。
いくつかの実施形態では、合理的に設計された合成ＡＡＶＡｎｃ８０Ｌ６５カプシドバリアント（ＡＡＶＡｎｃ８０）は、正円窓膜投与用に設計された送達デバイスを使用して、用量依存的に霊長類ＩＨＣを形質導入するのに非常に効率的である。いくつかの実施形態では、約６．０×１０１０ｖｇ／蝸牛以上の用量で、導入遺伝子をコードする構築物を含むＡＡＶＡｎｃ８０粒子を使用して、注入された耳におけるＩＨＣのおよそ７５～１００％の形質導入が達成される。
いくつかの実施形態では、ＡＡＶＡｎｃ８０に対する既存の中和抗体は、血清中少なくとも中程度のレベルで、粒子が蝸牛内投与経路を介して送達される場合に、ＩＨＣを阻害しない、または細胞の形質導入を支持しない。
いくつかの実施形態では、注入された耳の定性評価は、複数の蝸牛及び前庭細胞タイプにわたる形質導入を実証し、それらの全ては、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－抗ＶＥＧＦによる形質導入後に抗ＶＥＧＦタンパク質が外リンパ、または蝸牛神経の間質液に直接分泌されるように配置され、それにより前庭蝸牛神経間隙での拡散を通じてＶＳの成長を制御する可能性がある。
例示的なＡＡＶ Ａｎｃ８０カプシドＤＮＡ配列（配列番号８８）
ＡＴＧＧＣＴＧＣＣＧＡＴＧＧＴＴＡＴＣＴＴＣＣＡＧＡＴＴＧＧＣＴＣＧＡＧＧＡＣＡＡＣＣＴＣＴＣＴＧＡＧＧＧＣＡＴＴＣＧＣＧＡＧＴＧＧＴＧＧＧＡＣＴＴＧＡＡＡＣＣＴＧＧＡＧＣＣＣＣＧＡＡＡＣＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＣＣＡＧＣＡＡＡＡＧＣＡＧＧＡＣＧＡＣＧＧＣＣＧＧＧＧＴＣＴＧＧＴＧＣＴＴＣＣＴＧＧＣＴＡＣＡＡＧＴＡＣＣＴＣＧＧＡＣＣＣＴＴＣＡＡＣＧＧＡＣＴＣＧＡＣＡＡＧＧＧＧＧＡＧＣＣＣＧＴＣＡＡＣＧＣＧＧＣＧＧＡＣＧＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＣＧＡＧＣＡＣＧＡＣＡＡＧＧＣＣＴＡＣＧＡＣＣＡＧＣＡＧＣＴＣＡＡＡＧＣＧＧＧＴＧＡＣＡＡＴＣＣＧＴＡＣＣＴＧＣＧＧＴＡＴＡＡＣＣＡＣＧＣＣＧＡＣＧＣＣＧＡＧＴＴＴＣＡＧＧＡＧＣＧＴＣＴＧＣＡＡＧＡＡＧＡＴＡＣＧＴＣＴＴＴＴＧＧＧＧＧＣＡＡＣＣＴＣＧＧＧＣＧＡＧＣＡＧＴＣＴＴＣＣＡＧＧＣＣＡＡＧＡＡＧＣＧＧＧＴＴＣＴＣＧＡＡＣＣＴＣＴＣＧＧＴＣＴＧＧＴＴＧＡＧＧＡＡＧＧＣＧＣＴＡＡＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＧＧＡＡＡＧＡＡＧＡＧＡＣＣＧＧＴＡＧＡＧＣＡＡＴＣＡＣＣＣＣＡＧＧＡＡＣＣＡＧＡＣＴＣＣＴＣＴＴＣＧＧＧＣＡＴＣＧＧＣＡＡＧＡＡＡＧＧＣＣＡＧＣＡＧＣＣＣＧＣＧＡＡＧＡＡＧＡＧＡＣＴＣＡＡＣＴＴＴＧＧＧＣＡＧＡＣＡＧＧＣＧＡＣＴＣＡＧＡＧＴＣＡＧＴＧＣＣＣＧＡＣＣＣＴＣＡＡＣＣＡＣＴＣＧＧＡＧＡＡＣＣＣＣＣＣＧＣＡＧＣＣＣＣＣＴＣＴＧＧＴＧＴＧＧＧＡＴＣＴＡＡＴＡＣＡＡＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＣＧＧＴＧＧＣＧＣＴＣＣＡＡＴＧＧＣＡＧＡＣＡＡＴＡＡＣＧＡＡＧＧＣＧＣＣＧＡＣＧＧＡＧＴＧＧＧＴＡＡＣＧＣＣＴＣＡＧＧＡＡＡＴＴＧＧＣＡＴＴＧＣＧＡＴＴＣＣＡＣＡＴＧＧＣＴＧＧＧＣＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＴＣＡＣＣＡＣＣＡＧＣＡＣＣＣＧＡＡＣＣＴＧＧＧＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＣＴＡＣＡＡＣＡＡＣＣＡＣＣＴＣＴＡＣＡＡＧＣＡＡＡＴＣＴＣＣＡＧＣＣＡＡＴＣＧＧＧＡＧＣＡＡＧＣＡＣＣＡＡＣＧＡＣＡＡＣＡＣＣＴＡＣＴＴＣＧＧＣＴＡＣＡＧＣＡＣＣＣＣＣＴＧＧＧＧＧＴＡＴＴＴＴＧＡＣＴＴＴＡＡＣＡＧＡＴＴＣＣＡＣＴＧＣＣＡＣＴＴＣＴＣＡＣＣＡＣＧＴＧＡＣＴＧＧＣＡＧＣＧＡＣＴＣＡＴＣＡＡＣＡＡＣＡＡＣＴＧＧＧＧＡＴＴＣＣＧＧＣＣＣＡＡＧＡＧＡＣＴＣＡＡＣＴＴＣＡＡＧＣＴＣＴＴＣＡＡＣＡＴＣＣＡＧＧＴＣＡＡＧＧＡＧＧＴＣＡＣＧＡＣＧＡＡＴＧＡＴＧＧＣＡＣＣＡＣＧＡＣＣＡＴＣＧＣＣＡＡＴＡＡＣＣＴＴＡＣＣＡＧＣＡＣＧＧＴＴＣＡＧＧＴＣＴＴＴＡＣＧＧＡＣＴＣＧＧＡＡＴＡＣＣＡＧＣＴＣＣＣＧＴＡＣＧＴＣＣＴＣＧＧＣＴＣＴＧＣＧＣＡＣＣＡＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＣＣＴＣＣＧＴＴＣＣＣＧＧＣＧＧＡＣＧＴＣＴＴＣＡＴＧＡＴＴＣＣＴＣＡＧＴＡＣＧＧＧＴＡＣＣＴＧＡＣＴＣＴＧＡＡＣＡＡＴＧＧＣＡＧＴＣＡＧＧＣＣＧＴＧＧＧＣＣＧＴＴＣＣＴＣＣＴＴＣＴＡＣＴＧＣＣＴＧＧＡＧＴＡＣＴＴＴＣＣＴＴＣＴＣＡＡＡＴＧＣＴＧＡＧＡＡＣＧＧＧＣＡＡＣＡＡＣＴＴＴＧＡＧＴＴＣＡＧＣＴＡＣＡＣＧＴＴＴＧＡＧＧＡＣＧＴＧＣＣＴＴＴＴＣＡＣＡＧＣＡＧＣＴＡＣＧＣＧＣＡＣＡＧＣＣＡＡＡＧＣＣＴＧＧＡＣＣＧＧＣＴＧＡＴＧＡＡＣＣＣＣＣＴＣＡＴＣＧＡＣＣＡＧＴＡＣＣＴＧＴＡＣＴＡＣＣＴＧＴＣＴＣＧＧＡＣＴＣＡＧＡＣＣＡＣＧＡＧＴＧＧＴＡＣＣＧＣＡＧＧＡＡＡＴＣＧＧＡＣＧＴＴＧＣＡＡＴＴＴＴＣＴＣＡＧＧＣＣＧＧＧＣＣＴＡＧＴＡＧＣＡＴＧＧＣＧＡＡＴＣＡＧＧＣＣＡＡＡＡＡＣＴＧＧＣＴＡＣＣＣＧＧＧＣＣＣＴＧＣＴＡＣＣＧＧＣＡＧＣＡＡＣＧＣＧＴＣＴＣＣＡＡＧＡＣＡＧＣＧＡＡＴＣＡＡＡＡＴＡＡＣＡＡＣＡＧＣＡＡＣＴＴＴＧＣＣＴＧＧＡＣＣＧＧＴＧＣＣＡＣＣＡＡＧＴＡＴＣＡＴＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＧＡＧＡＣＴＣＴＣＴＧＧＴＡＡＡＴＣＣＣＧＧＴＣＣＣＧＣＴＡＴＧＧＣＡＡＣＣＣＡＣＡＡＧＧＡＣＧＡＣＧＡＡＧＡＣＡＡＡＴＴＴＴＴＴＣＣＧＡＴＧＡＧＣＧＧＡＧＴＣＴＴＡＡＴＡＴＴＴＧＧＧＡＡＡＣＡＧＧＧＡＧＣＴＧＧＡＡＡＴＡＧＣＡＡＣＧＴＧＧＡＣＣＴＴＧＡＣＡＡＣＧＴＴＡＴＧＡＴＡＡＣＣＡＧＴＧＡＧＧＡＡＧＡＡＡＴＴＡＡＡＡＣＣＡＣＣＡＡＣＣＣＡＧＴＧＧＣＣＡＣＡＧＡＡＣＡＧＴＡＣＧＧＣＡＣＧＧＴＧＧＣＣＡＣＴＡＡＣＣＴＧＣＡＡＴＣＧＴＣＡＡＡＣＡＣＣＧＣＴＣＣＴＧＣＴＡＣＡＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＡＣＡＧＴＣＡＡＧＧＡＧＣＣＴＴＡＣＣＴＧＧＣＡＴＧＧＴＣＴＧＧＣＡＧＡＡＣＣＧＧＧＡＣＧＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＧＧＴＣＣＴＡＴＣＴＧＧＧＣＣＡＡＧＡＴＴＣＣＴＣＡＣＡＣＧＧＡＣＧＧＡＣＡＣＴＴＴＣＡＴＣＣＣＴＣＧＣＣＧＣＴＧＡＴＧＧＧＡＧＧＣＴＴＴＧＧＡＣＴＧＡＡＡＣＡＣＣＣＧＣＣＴＣＣＴＣＡＧＡＴＣＣＴＧＡＴＴＡＡＧＡＡＴＡＣＡＣＣＴＧＴＴＣＣＣＧＣＧＡＡＴＣＣＴＣＣＡＡＣＴＡＣＣＴＴＣＡＧＴＣＣＡＧＣＴＡＡＧＴＴＴＧＣＧＴＣＧＴＴＣＡＴＣＡＣＧＣＡＧＴＡＣＡＧＣＡＣＣＧＧＡＣＡＧＧＴＣＡＧＣＧＴＧＧＡＡＡＴＴＧＡＡＴＧＧＧＡＧＣＴＧＣＡＧＡＡＡＧＡＡＡＡＣＡＧＣＡＡＡＣＧＣＴＧＧＡＡＣＣＣＡＧＡＧＡＴＴＣＡＡＴＡＣＡＣＴＴＣＣＡＡＣＴＡＣＡＡＣＡＡＡＴＣＴＡＣＡＡＡＴＧＴＧＧＡＣＴＴＴＧＣＴＧＴＴＧＡＣＡＣＡＡＡＴＧＧＣＧＴＴＴＡＴＴＣＴＧＡＧＣＣＴＣＧＣＣＣＣＡＴＣＧＧＣＡＣＣＣＧＴＴＡＣＣＴＣＡＣＣＣＧＴＡＡＴＣＴＧ
例示的なＡＡＶ Ａｎｃ８０カプシドアミノ酸配列（配列番号８９）
ＭＡＡＤＧＹＬＰＤＷＬＥＤＮＬＳＥＧＩＲＥＷＷＤＬＫＰＧＡＰＫＰＫＡＮＱＱＫＱＤＤＧＲＧＬＶＬＰＧＹＫＹＬＧＰＦＮＧＬＤＫＧＥＰＶＮＡＡＤＡＡＡＬＥＨＤＫＡＹＤＱＱＬＫＡＧＤＮＰＹＬＲＹＮＨＡＤＡＥＦＱＥＲＬＱＥＤＴＳＦＧＧＮＬＧＲＡＶＦＱＡＫＫＲＶＬＥＰＬＧＬＶＥＥＧＡＫＴＡＰＧＫＫＲＰＶＥＱＳＰＱＥＰＤＳＳＳＧＩＧＫＫＧＱＱＰＡＫＫＲＬＮＦＧＱＴＧＤＳＥＳＶＰＤＰＱＰＬＧＥＰＰＡＡＰＳＧＶＧＳＮＴＭＡＡＧＧＧＡＰＭＡＤＮＮＥＧＡＤＧＶＧＮＡＳＧＮＷＨＣＤＳＴＷＬＧＤＲＶＩＴＴＳＴＲＴＷＡＬＰＴＹＮＮＨＬＹＫＱＩＳＳＱＳＧＡＳＴＮＤＮＴＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＣＨＦＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＮＷＧＦＲＰＫＲＬＮＦＫＬＦＮＩＱＶＫＥＶＴＴＮＤＧＴＴＴＩＡＮＮＬＴＳＴＶＱＶＦＴＤＳＥＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＱＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＩＰＱＹＧＹＬＴＬＮＮＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＥＦＳＹＴＦＥＤＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＳＲＴＱＴＴＳＧＴＡＧＮＲＴＬＱＦＳＱＡＧＰＳＳＭＡＮＱＡＫＮＷＬＰＧＰＣＹＲＱＱＲＶＳＫＴＡＮＱＮＮＮＳＮＦＡＷＴＧＡＴＫＹＨＬＮＧＲＤＳＬＶＮＰＧＰＡＭＡＴＨＫＤＤＥＤＫＦＦＰＭＳＧＶＬＩＦＧＫＱＧＡＧＮＳＮＶＤＬＤＮＶＭＩＴＳＥＥＥＩＫＴＴＮＰＶＡＴＥＱＹＧＴＶＡＴＮＬＱＳＳＮＴＡＰＡＴＧＴＶＮＳＱＧＡＬＰＧＭＶＷＱＮＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＨＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＬＫＨＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＮＰＰＴＴＦＳＰＡＫＦＡＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＩＱＹＴＳＮＹＮＫＳＴＮＶＤＦＡＶＤＴＮＧＶＹＳＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＮＬ
例示的なＡＡＶ Ａｎｃ８０カプシドアミノ酸配列（配列番号１１３）
ＭＡＡＤＧＹＬＰＤＷＬＥＤＮＬＳＥＧＩＲＥＷＷＤＬＫＰＧＡＰＫＰＫＡＮＱＱＫＱＤＤＧＲＧＬＶＬＰＧＹＫＹＬＧＰＦＮＧＬＤＫＧＥＰＶＮＡＡＤＡＡＡＬＥＨＤＫＡＹＤＱＱＬＫＡＧＤＮＰＹＬＲＹＮＨＡＤＡＥＦＱＥＲＬＱＥＤＴＳＦＧＧＮＬＧＲＡＶＦＱＡＫＫＲＶＬＥＰＬＧＬＶＥＥＧＡＫＴＡＰＧＫＫＲＰＶＥＱＳＰＱＥＰＤＳＳＳＧＩＧＫＫＧＱＱＰＡＸ１ＫＲＬＮＦＧＱＴＧＤＳＥＳＶＰＤＰＱＰＬＧＥＰＰＡＡＰＳＧＶＧＳＮＴＭＸ２ＡＧＧＧＡＰＭＡＤＮＮＥＧＡＤＧＶＧＮＡＳＧＮＷＨＣＤＳＴＷＬＧＤＲＶＩＴＴＳＴＲＴＷＡＬＰＴＹＮＮＨＬＹＫＱＩＳＳＱＳＧＸ３ＳＴＮＤＮＴＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＣＨＦＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＮＷＧＦＲＰＫＸ４ＬＮＦＫＬＦＮＩＱＶＫＥＶＴＴＮＤＧＴＴＴＩＡＮＮＬＴＳＴＶＱＶＦＴＤＳＥＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＱＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＩＰＱＹＧＹＬＴＬＮＮＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＸ５ＦＳＹＴＦＥＤＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＳＲＴＱＴＴＳＧＴＡＧＮＲＸ６ＬＱＦＳＱＡＧＰＳＳＭＡＮＱＡＫＮＷＬＰＧＰＣＹＲＱＱＲＶＳＫＴＸ７ＮＱＮＮＮＳＮＦＡＷＴＧＡＴＫＹＨＬＮＧＲＤＳＬＶＮＰＧＰＡＭＡＴＨＫＤＤＥＤＫＦＦＰＭＳＧＶＬＩＦＧＫＱＧＡＧＮＳＮＶＤＬＤＮＶＭＩＴＸ８ＥＥＥＩＫＴＴＮＰＶＡＴＥＸ９ＹＧＴＶＡＴＮＬＱＳＸ１０ＮＴＡＰＡＴＧＴＶＮＳＱＧＡＬＰＧＭＶＷＱＸ１１ＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＨＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＬＫＨＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＮＰＰＴＴＦＳＰＡＫＦＡＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＩＱＹＴＳＮＹＮＫＳＴＮＶＤＦＡＶＤＴＮＧＶＹＳＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＮＬ
例示的なＡＡＶ Ａｎｃ８０カプシドアミノ酸配列（配列番号１１４）
ＭＡＡＤＧＹＬＰＤＷＬＥＤＮＬＳＥＧＩＲＥＷＷＤＬＫＰＧＡＰＫＰＫＡＮＱＱＫＱＤＤＧＲＧＬＶＬＰＧＹＫＹＬＧＰＦＮＧＬＤＫＧＥＰＶＮＡＡＤＡＡＡＬＥＨＤＫＡＹＤＱＱＬＫＡＧＤＮＰＹＬＲＹＮＨＡＤＡＥＦＱＥＲＬＱＥＤＴＳＦＧＧＮＬＧＲＡＶＦＱＡＫＫＲＶＬＥＰＬＧＬＶＥＥＧＡＫＴＡＰＧＫＫＲＰＶＥＱＳＰＱＥＰＤＳＳＳＧＩＧＫＫＧＱＱＰＡＲＫＲＬＮＦＧＱＴＧＤＳＥＳＶＰＤＰＱＰＬＧＥＰＰＡＡＰＳＧＶＧＳＮＴＭＡＡＧＧＧＡＰＭＡＤＮＮＥＧＡＤＧＶＧＮＡＳＧＮＷＨＣＤＳＴＷＬＧＤＲＶＩＴＴＳＴＲＴＷＡＬＰＴＹＮＮＨＬＹＫＱＩＳＳＱＳＧＧＳＴＮＤＮＴＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＣＨＦＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＮＷＧＦＲＰＫＫＬＮＦＫＬＦＮＩＱＶＫＥＶＴＴＮＤＧＴＴＴＩＡＮＮＬＴＳＴＶＱＶＦＴＤＳＥＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＱＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＩＰＱＹＧＹＬＴＬＮＮＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＱＦＳＹＴＦＥＤＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＳＲＴＱＴＴＳＧＴＡＧＮＲＴＬＱＦＳＱＡＧＰＳＳＭＡＮＱＡＫＮＷＬＰＧＰＣＹＲＱＱＲＶＳＫＴＴＮＱＮＮＮＳＮＦＡＷＴＧＡＴＫＹＨＬＮＧＲＤＳＬＶＮＰＧＰＡＭＡＴＨＫＤＤＥＤＫＦＦＰＭＳＧＶＬＩＦＧＫＱＧＡＧＮＳＮＶＤＬＤＮＶＭＩＴＮＥＥＥＩＫＴＴＮＰＶＡＴＥＥＹＧＴＶＡＴＮＬＱＳＡＮＴＡＰＡＴＧＴＶＮＳＱＧＡＬＰＧＭＶＷＱＤＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＨＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＬＫＨＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＮＰＰＴＴＦＳＰＡＫＦＡＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＩＱＹＴＳＮＹＮＫＳＴＮＶＤＦＡＶＤＴＮＧＶＹＳＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＮＬ
例示的なＡＡＶ粒子
特定の実施形態では、本開示は、ｒＡＡＶ２／Ａｎｃ８０Ｌ６５－ＣＡＧ．ラニビズマブ．ｂＧＨを含む粒子を含むｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ組成物に関する。特定の実施形態では、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ組成物は、以下を含む：ａ）合理的に設計された合成ＡＡＶカプシドであるＡｎｃ８０Ｌ６５；ｂ）ＡＡＶ２由来の逆位末端反復（上流及び下流）；ｃ）サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）初期エンハンサーエレメント、５’フランキング領域と第２のエクソンの近位領域の間に位置するニワトリβアクチン（ＣβＡ）遺伝子配列及びウサギβグロビン（ＲβＧ）遺伝子由来の３’スプライシング配列（Ｍｉｙａｚａｋｉ １９８９；Ｎｉｗａ １９９１；及びＯｒｂａｎ ２００９、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）（これらは合わせて一般にＣＡＧプロモーターと称される）（上流）；ｄ）ｉ）フリン及びｔｈｏｓｅａ ａｓｉｇｎａウイルス由来のプロテアーゼ２Ａ（Ｔ２Ａ）切断部位によって分離された、ラニビズマブ重鎖及び軽鎖可変領域をコードするバイシストロニックカセットと、ｉｉ）タンパク質分泌を促進するために各Ｆａｂ鎖の上流にクローニングされた２０アミノ酸のヒトインターロイキン２（ＩＬ－２）リーダー配列とを含む、ラニビズマブ（抗体断片［Ｆａｂ］）コード配列；ならびにｅ）ウシ成長ホルモン（ｂＧＨ）ポリアデニル化（ｐＡ）シグナル（下流）。
特定の実施形態では、本開示は、ｒＡＡＶ２／Ａｎｃ８０Ｌ６５－ＣＡＧ．ベバシズマブ．ｂＧＨを含む粒子を含むｒＡＡＶＡｎｃ８０－抗ＶＥＧＦ組成物に関する。特定の実施形態では、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ組成物は、以下を含む：ａ）合理的に設計された合成ＡＡＶカプシドであるＡｎｃ８０Ｌ６５；ｂ）ＡＡＶ２由来の逆位末端反復（上流及び下流）；ｃ）サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）初期エンハンサーエレメント、５’フランキング領域と第２のエクソンの近位領域の間に位置するニワトリβアクチン（ＣβＡ）遺伝子配列及びウサギβグロビン（ＲβＧ）遺伝子由来の３’スプライシング配列（Ｍｉｙａｚａｋｉ １９８９；Ｎｉｗａ １９９１；Ｏｒｂａｎ ２００９、これらの各々はその全体が本明細書に組み込まれる）（これらは合わせて一般にＣＡＧプロモーターと称される）（上流）；ｄ）ｉ）フリン及びｔｈｏｓｅａ ａｓｉｇｎａウイルス由来のプロテアーゼ２Ａ（Ｔ２Ａ）切断部位によって分離された、重鎖及び軽鎖可変及び定常領域をコードするバイシストロニックカセットと、ｉｉ）タンパク質分泌を促進するために各Ｆａｂ鎖の上流にクローニングされた２０アミノ酸のヒトインターロイキン２（ＩＬ－２）リーダー配列とを含む、ベバシズマブコード配列（Ｆａｂ及びＦｃ領域を含む抗体）；ならびにｅ）ウシ成長ホルモン（ｂＧＨ）ポリアデニル化（ｐＡ）シグナル（下流）。
特定の実施形態では、本開示は、ｒＡＡＶ２／Ａｎｃ８０Ｌ６５－ＣＡＧ．アフリベルセプト．ｂＧＨを含む粒子を含むｒＡＡＶＡｎｃ８０－抗ＶＥＧＦ組成物に関する。特定の実施形態では、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ組成物は、以下を含む：ａ）合理的に設計された合成ＡＡＶカプシドであるＡｎｃ８０Ｌ６５；ｂ）ＡＡＶ２由来の逆位末端反復（上流及び下流）；ｃ）サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）初期エンハンサーエレメント、５’フランキング領域と第２のエクソンの近位領域の間に位置するニワトリβアクチン（ＣβＡ）遺伝子配列及びウサギβグロビン（ＲβＧ）遺伝子由来の３’スプライシング配列（Ｍｉｙａｚａｋｉ １９８９；Ｎｉｗａ １９９１；Ｏｒｂａｎ ２００９、これらの各々はその全体が本明細書に組み込まれる）（これらは合わせて一般にＣＡＧプロモーターと称される）（上流）；ｄ）ｉ）任意選択で２０アミノ酸のヒトインターロイキン－２（ＩＬ－２）リーダー配列と、ｉｉ）ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分に融合したヒトＶＥＧＦ受容体１及び２の細胞外ドメインの部分からなる組換え融合タンパク質とを含む、アフリベルセプトコード配列；ならびにｅ）ウシ成長ホルモン（ｂＧＨ）ポリアデニル化（ｐＡ）シグナル（下流）。
組成物
とりわけ、本開示は組成物を提供する。いくつかの実施形態では、組成物は、本明細書に記載の構築物を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、本明細書に記載の１つ以上の構築物を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、本明細書に記載の複数の構築物を含む。いくつかの実施形態では、複数の構築物が組成物中に含まれる場合、構築物はそれぞれ異なる。
いくつかの実施形態では、組成物は、本明細書に記載のｒＡＡＶ粒子を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、本明細書に記載の１つ以上のｒＡＡＶ粒子を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、複数のｒＡＡＶ粒子を含む。いくつかの実施形態では、複数のｒＡＡＶ粒子が組成物中に含まれる場合、ｒＡＡＶ粒子はそれぞれ異なる。
いくつかの実施形態では、組成物は、抗ＶＥＧＦタンパク質を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、細胞を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、医薬組成物であるか、またはそれを含む。
いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－抗ＶＥＧＦ粒子は、ＡＡＶＡｎｃ８０カプシドと、ＶＥＧＦを阻害するために臨床的に使用される４８キロダルトン（ｋＤａ）のヒト化モノクローナル抗体断片（Ｆａｂ）であるラニビズマブをコードする一本鎖ＤＮＡゲノムとから構成される。特定の実施形態では、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－抗ＶＥＧＦは、ＣＲＯまたは企業内運用ＧＭＰ施設で製造される。
いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－抗ＶＥＧＦは、ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）２９３上皮細胞の一過性トランスフェクションによって産生される。いくつかの実施形態では、清澄化された細胞採取物は、アフィニティークロマトグラフィーによって精製され、その後、塩化セシウム等密度勾配分離によってさらに精製及び濃縮され、完全なｒＡＡＶＡｎｃ８０粒子が得られる。いくつかの実施形態では、製剤緩衝液は、０．１～５ｍＭの範囲のリン酸一カリウム（例えば、１．５ｍＭのリン酸一カリウム）、１～２０ｍＭの範囲のリン酸二ナトリウム（例えば、８．１ｍＭのリン酸二ナトリウム）、０．１～１０ｍＭの範囲の塩化カリウム（例えば、２．７ｍＭの塩化カリウム）、１００～１０００ｍＭの範囲の塩化ナトリウム（例えば、１７２ｍＭの塩化ナトリウム）、及び０．０００１～０．００１％の範囲のポロキサマー（例えば、０．００１％のポロキサマー１８８）を含有する滅菌水から構成される。いくつかの実施形態では、一旦精製され、製剤化されると、構築物を含むｒＡＡＶＡｎｃ８０粒子は、原薬と呼ばれる。いくつかの実施形態では、原薬は、その後、滅菌ろ過され（例えば、０．２ミクロン［μｍ］フィルターを使用）、滅菌バイアルに単回使用のために無菌充填されて栓をされる。いくつかの実施形態では、これらのバイアルに入れられたアリコートは製剤を構成し、投与日まで適切な温度で保存される（例えば、４℃～－１００℃、例えば、－６５℃以下）。
いくつかの実施形態では、別個の希釈製剤を作製することができ（例えば、ＡＡＶＡｎｃ８０希釈剤）、製剤緩衝液と同等またはそれに近い組成であり得る。いくつかの実施形態では、そのような希釈剤は、滅菌ろ過（０．２μｍフィルター）され、滅菌バイアルに単回使用のために無菌充填され、投与日まで適切な温度で保存され得る（例えば、４℃～－１００℃、例えば、－６５℃以下）。いくつかの実施形態では、希釈製剤は、本明細書に記載の原薬の用量に必要な濃度を調製するために利用される。
投薬及び投与量
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物、例えば、本明細書に開示される１つまたは複数のＡＡＶベクターは、単回投与または複数回投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、単回投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、複数回投与、例えば、２、３、４、５、６、７、８、９または１０回投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物（例えば、本明細書に開示される１つまたは複数のｒＡＡＶ構築物を含む組成物）は、約０．０１ｍＬ、約０．０２ｍＬ、約０．０３ｍＬ、約０．０４ｍＬ、約０．０５ｍＬ、約０．０６ｍＬ、約０．０７ｍＬ、約０．０８ｍＬ、約０．０９ｍＬ、約１．００ｍＬ、約１．１０ｍＬ、約１．２０ｍＬ、約１．３０ｍＬ、約１．４０ｍＬ、約１．５０ｍＬ、約１．６０ｍＬ、約１．７０ｍＬ、約１．８０ｍＬ、約１．９０ｍＬ、または約２．００ｍＬの容量で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、約０．０１ｍＬの容量で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、約０．０２ｍＬの容量で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、約０．０３ｍＬの容量で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、約０．０４ｍＬの容量で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、約０．０５ｍＬの容量で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、約０．０６ｍＬの容量で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、約０．０７ｍＬの容量で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、約０．０８ｍＬの容量で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、約０．０９ｍＬの容量で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、約１．００ｍＬの容量で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、約１．１０ｍＬの容量で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、約１．２０ｍＬの容量で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、約１．３０ｍＬの容量で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、約１．４０ｍＬの容量で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、約１．５０ｍＬの容量で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、約１．６０ｍＬの容量で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、約１．７０ｍＬの容量で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、約１．８０ｍＬの容量で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、約１．９０ｍＬの容量で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、約２．００ｍＬの容量で投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物（例えば、本明細書に開示される１つまたは複数のｒＡＡＶ構築物を含む組成物）は、約０．０１～２．００ｍＬ、約０．０２～１．９０ｍＬ、約０．０３～１．８ｍＬ、約０．０４～１．７０ｍＬ、約０．０５～１．６０ｍＬ、約０．０６～１．５０ｍＬ、約０．０６～１．４０ｍＬ、約０．０７～１．３０ｍＬ、約０．０８～１．２０ｍＬ、または約０．０９～１．１０ｍＬの容量で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物（例えば、本明細書に開示される１つまたは複数のｒＡＡＶ構築物を含む組成物）は、約０．０１～２．００ｍＬ、約０．０２～２．００ｍＬ、約０．０３～２．００ｍＬ、約０．０４～２．００ｍＬ、約０．０５～２．００ｍＬ、約０．０６～２．００ｍＬ、約０．０７～２．００ｍＬ、約０．０８～２．００ｍＬ、約０．０９～２．００ｍＬ、約０．０１～１．９０ｍＬ、約０．０１～１．８０ｍＬ、約０．０１～１．７０ｍＬ、約０．０１～１．６０ｍＬ、約０．０１～１．５０ｍＬ、約０．０１～１．４０ｍＬ、約０．０１～１．３０ｍＬ、約０．０１～１．２０ｍＬ、約０．０１～１．１０ｍＬ、約０．０１～１．００ｍＬ、約０．０１～０．０９ｍＬの容量で投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物（例えば、本明細書に開示される１つまたは複数のｒＡＡＶ構築物を含む組成物）は、約０．０１ｍＬ～約０．３０ｍＬ、約０．０１ｍＬ～約０．２５ｍＬ、約０．０１ｍＬ～約０．２０ｍＬ、約０．０１ｍＬ～約０．１５ｍＬ、約０．０１ｍＬ～約０．１４ｍＬ、約０．０１ｍＬ～約０．１３ｍＬ、約０．０１ｍＬ～約０．１２ｍＬ、約０．０１ｍＬ～約０．１１ｍＬ、約０．０１ｍＬ～約０．１０ｍＬ、約０．０１ｍＬ～約０．０９ｍＬ、約０．０１ｍＬ～約０．０８ｍＬ、約０．０１ｍＬ～約０．０７ｍＬ、約０．０１ｍＬ～約０．０６ｍＬ、約０．０１ｍＬ～約０．０５ｍＬ、約０．０１ｍＬ～約０．０４ｍＬ、約０．０１ｍＬ～約０．０３ｍＬ、または約０．０１ｍＬ～約０．０２ｍＬの容量で投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物（例えば、本明細書に開示される１つまたは複数のｒＡＡＶ構築物を含む組成物）は、約０．０２ｍＬ～約０．３０ｍＬ、０．０３ｍＬ～約０．３０ｍＬ、０．０４ｍＬ～約０．３０ｍＬ、０．０５ｍＬ～約０．３０ｍＬ、０．０６ｍＬ～約０．３０ｍＬ、０．０７ｍＬ～約０．３０ｍＬ、０．０８ｍＬ～約０．３０ｍＬ、０．０９ｍＬ～約０．３０ｍＬ、０．１０ｍＬ～約０．３０ｍＬ、０．１１ｍＬ～約０．３０ｍＬ、０．１２ｍＬ～約０．３０ｍＬ、０．１３ｍＬ～約０．３０ｍＬ、０．１４ｍＬ～約０．３０ｍＬ、０．１５ｍＬ～約０．３０ｍＬ、０．１６ｍＬ～約０．３０ｍＬ、０．１７ｍＬ～約０．３０ｍＬ、０．１８ｍＬ～約０．３０ｍＬ、０．１９ｍＬ～約０．３０ｍＬ、０．２０ｍＬ～約０．３０ｍＬ、または０．２５ｍＬ～約０．３０ｍＬの容量で投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物（例えば、本明細書に開示される１つまたは複数のｒＡＡＶ構築物を含む組成物）は、約０．０１ｍＬ～約０．０３ｍＬ、約０．０２ｍＬ～約０．２５ｍＬ、約０．０３ｍＬ～約０．２０ｍＬ、約０．０４ｍＬ～約０．１８ｍＬ、約０．０５ｍＬ～約０．１６ｍＬ、約０．０６ｍＬ～約０．１４ｍＬ、約０．０７ｍＬ～約０．１２ｍＬ、または約０．０８ｍＬ～約０．１ｍＬの容量で投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物（例えば、本明細書に開示される１つまたは複数のｒＡＡＶ構築物を含む組成物）は、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約９×１０１４ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約８×１０１４ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約７×１０１４ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約６×１０１４ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約５×１０１４ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約４×１０１４ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約３×１０１４ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約２×１０１４ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１４ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約９×１０１３ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約８×１０１３ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約７×１０１３ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約６×１０１３ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約５×１０１３ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約４×１０１３ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約３×１０１３ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約２×１０１３ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１３ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約９×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約８×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約７×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約６×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約５×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約４×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約３×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約２×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約９．５×１０１１ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約９×１０１１ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約８．５×１０１１ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約８×１０１１ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約７．５×１０１１ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約７×１０１１ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約６．５×１０１１ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約６×１０１１ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約５．５×１０１１ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約５×１０１１ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約４．５×１０１１ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約４×１０１１ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約３．５×１０１１ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約３×１０１１ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約２．５×１０１１ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約２×１０１１ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約１．５×１０１１ｖｇ／ｍＬの量で投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物（例えば、本明細書に開示される１つまたは複数のｒＡＡＶ構築物を含む組成物）は、約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬ、約２×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬ、約３×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬ、約４×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬ、約５×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬ、約６×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬ、約７×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬ、約８×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬ、約９×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１２ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬ、約２×１０１２ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬ、約３×１０１２ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬ、約４×１０１２ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬ、約５×１０１２ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬ、約６×１０１２ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬ、約７×１０１２ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬ、約８×１０１２ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬ、約９×１０１２ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１３ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬ、約２×１０１３ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬ、約３×１０１３ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬ、約４×１０１３ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬ、約５×１０１３ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬ、約６×１０１３ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬ、約７×１０１３ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬ、約８×１０１３ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬ、約９×１０１３ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１４ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬ、約２×１０１４ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬ、約３×１０１４ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬ、約４×１０１４ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬ、約５×１０１４ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬ、約６×１０１４ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬ、約７×１０１４ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬ、約８×１０１４ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬ、または約９×１０１４ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬの量で投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物（例えば、本明細書に開示される１つまたは複数のｒＡＡＶ構築物を含む組成物）は、少なくとも１×１０１１、少なくとも５×１０１１、少なくとも１×１０１２、少なくとも１×１０１２、少なくとも２×１０１２、少なくとも３×１０１２、少なくとも４×１０１２、少なくとも５×１０１２、少なくとも６×１０１２、少なくとも７×１０１２、少なくとも８×１０１２、少なくとも９×１０１２、少なくとも１×１０１３、少なくとも２×１０１３、少なくとも３×１０１３、少なくとも４×１０１３、少なくとも５×１０１３、少なくとも６×１０１３、少なくとも７×１０１３、少なくとも８×１０１３、少なくとも９×１０１３、または少なくとも１×１０１４ベクターゲノム（ｖｇ）／ミリリットル（ｍＬ）（ｖｇ／ｍＬ）の量で投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物（例えば、本明細書に開示される１つまたは複数のｒＡＡＶ構築物を含む組成物）は、最大１×１０１５、最大５×１０１４、最大１×１０１４、最大５×１０１３、最大１×１０１３、最大９×１０１２、最大８×１０１２、最大７×１０１２、最大６×１０１２、最大５×１０１２、最大４×１０１２、最大３×１０１２、最大２×１０１２、または最大１×１０１２ベクターゲノム（ｖｇ）／ミリリットル（ｍＬ）の量で投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物（例えば、本明細書に開示される１つまたは複数のｒＡＡＶ構築物を含む組成物）は、約１×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約１．１×１０１２ｖｇ／ｍＬ、１．２×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約１．３×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約１．４×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約１．５×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約１．６×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約１．７×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約１．８×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約１．９×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約２．０×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約２．１×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約２．２×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約２．３×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約２．４×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約２．５×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約２．６×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約２．７×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約２．８×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約２．９×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約３．０×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約３．１×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約３．２×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約３．３×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約３．４×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約３．５×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約３．６×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約３．７×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約３．８×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約３．９×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約４．０×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約４．１×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約４．２×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約４．３×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約４．４×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約４．５×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約４．６×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約４．７×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約４．８×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約４．９×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約５．０×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約５．１×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約５．２×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約５．３×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約５．４×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約５．５×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約５．６×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約５．７×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約５．８×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約５．９×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約６．０×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約７．０×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約８．０×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約９．０×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約９．１×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約９．２×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約９．３×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約９．４×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約９．５×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約９．６×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約９．７×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約９．８×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約９．９×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１３ｖｇ／ｍＬ、１．１×１０１３ｖｇ／ｍＬ、１．２×１０１３ｖｇ／ｍＬ、１．３×１０１３ｖｇ／ｍＬ、１．４×１０１３ｖｇ／ｍＬ、１．５×１０１３ｖｇ／ｍＬ、１．６×１０１３ｖｇ／ｍＬ、１．７×１０１３ｖｇ／ｍＬ、１．８×１０１３ｖｇ／ｍＬ、１．９×１０１３ｖｇ／ｍＬ、２×１０１３ｖｇ／ｍＬ、５×１０１３ｖｇ／ｍＬ、または１×１０１４ｖｇ／ｍＬの量で投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物（例えば、本明細書に開示される１つまたは複数のｒＡＡＶ構築物を含む組成物）は、２．５×１０１２ｖｇ／ｍＬ＋／－１０％の量で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物（例えば、本明細書に開示される１つまたは複数のｒＡＡＶ構築物を含む組成物）は、２．５×１０１２ｖｇ／ｍＬの量で投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物（例えば、本明細書に開示される１つまたは複数のｒＡＡＶ構築物を含む組成物）は、５×１０１２ｖｇ／ｍＬ＋／－１０％の量で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物（例えば、本明細書に開示される１つまたは複数のｒＡＡＶ構築物を含む組成物）は、５×１０１２ｖｇ／ｍＬの量で投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物（例えば、本明細書に開示される１つまたは複数のｒＡＡＶ構築物を含む組成物）は、１×１０１３ｖｇ／ｍＬ＋／－１０％の量で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物（例えば、本明細書に開示される１つまたは複数のｒＡＡＶ構築物を含む組成物）は、１×１０１３ｖｇ／ｍＬの量で投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物（例えば、本明細書に開示される１つまたは複数のｒＡＡＶ構築物を含む組成物）は、約１×１０１０～約１×１０１３ｖｇ／蝸牛、約２×１０１０～約１×１０１３ｖｇ／蝸牛、約３×１０１０～約１×１０１３ｖｇ／蝸牛、約４×１０１０～約１×１０１３ｖｇ／蝸牛、約５×１０１０～約１×１０１３ｖｇ／蝸牛、約６×１０１０～約１×１０１３ｖｇ／蝸牛、約７×１０１０～約１×１０１３ｖｇ／蝸牛、約８×１０１０～約１×１０１３ｖｇ／蝸牛、約９×１０１０～約１×１０１３ｖｇ／蝸牛、約１×１０１１～約１×１０１３ｖｇ／蝸牛、約２×１０１１～約１×１０１３ｖｇ／蝸牛、約３×１０１１～約１×１０１３ｖｇ／蝸牛、約４×１０１１～約１×１０１３ｖｇ／蝸牛、約５×１０１１～約１×１０１３ｖｇ／蝸牛、約６×１０１１～約１×１０１３ｖｇ／蝸牛、約７×１０１１～約１×１０１３ｖｇ／蝸牛、約８×１０１１～約１×１０１３ｖｇ／蝸牛、約９×１０１１～約１×１０１３ｖｇ／蝸牛、約１×１０１２～約１×１０１３ｖｇ／蝸牛、約２×１０１２～約１×１０１３ｖｇ／蝸牛、約３×１０１２～約１×１０１３ｖｇ／蝸牛、約４×１０１２～約１×１０１３ｖｇ／蝸牛、約５×１０１２～約１×１０１３ｖｇ／蝸牛、約６×１０１２～約１×１０１３ｖｇ／蝸牛、約７×１０１２～約１×１０１３ｖｇ／蝸牛、約８×１０１２～約１×１０１３ｖｇ／蝸牛、または約９×１０１２～約１×１０１３ｖｇ／蝸牛の量で投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物（例えば、本明細書に開示される１つまたは複数のｒＡＡＶ構築物を含む組成物）は、約１×１０１０～約１×１０１３ｖｇ／蝸牛、約１×１０１０～約９×１０１２ｖｇ／蝸牛、約１×１０１０～約８×１０１２ｖｇ／蝸牛、約１×１０１０～約７×１０１２ｖｇ／蝸牛、約１×１０１０～約６×１０１２ｖｇ／蝸牛、約１×１０１０～約５×１０１２ｖｇ／蝸牛、約１×１０１０～約４×１０１２ｖｇ／蝸牛、約１×１０１０～約３×１０１２ｖｇ／蝸牛、約１×１０１０～約２×１０１２ｖｇ／蝸牛、約１×１０１０～約１×１０１２ｖｇ／蝸牛、約１×１０１０～約９×１０１１ｖｇ／蝸牛、約１×１０１０～約８×１０１１ｖｇ／蝸牛、約１×１０１０～約７×１０１１ｖｇ／蝸牛、約１×１０１０～約６×１０１１ｖｇ／蝸牛、約１×１０１０～約５×１０１１ｖｇ／蝸牛、約１×１０１０～約４×１０１１ｖｇ／蝸牛、約１×１０１０～約３×１０１１ｖｇ／蝸牛、約１×１０１０～約２×１０１１ｖｇ／蝸牛、約１×１０１０～約１×１０１１ｖｇ／蝸牛、約１×１０１０～約９×１０１０ｖｇ／蝸牛、約１×１０１０～約８×１０１０ｖｇ／蝸牛、約１×１０１０～約７×１０１０ｖｇ／蝸牛、約１×１０１０～約６×１０１０ｖｇ／蝸牛、約１×１０１０～約５×１０１０ｖｇ／蝸牛、約１×１０１０～約４×１０１０ｖｇ／蝸牛、約１×１０１０～約３×１０１０ｖｇ／蝸牛、約１×１０１０～約２×１０１０ｖｇ／蝸牛の量で投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物（例えば、本明細書に開示される１つまたは複数のｒＡＡＶ構築物を含む組成物）は、約１×１０１０～約１×１０１３ｖｇ／蝸牛、約５×１０１０～約５×１０１２ｖｇ／蝸牛、約８×１０１０～約１×１０１２ｖｇ／蝸牛、約１×１０１１～約９×１０１１ｖｇ／蝸牛、約２×１０１１～約８×１０１１ｖｇ／蝸牛、約２．５×１０１１～約５×１０１１ｖｇ／蝸牛、約３×１０１１～約４．５×１０１１ｖｇ／蝸牛の量で投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物（例えば、本明細書に開示される１つまたは複数のｒＡＡＶ構築物を含む組成物）は、約１×１０１０ｖｇ／蝸牛、約５×１０１０ｖｇ／蝸牛、約１×１０１１ｖｇ／蝸牛、約１．５×１０１１ｖｇ／蝸牛、約２×１０１１ｖｇ／蝸牛、約２．１×１０１１ｖｇ／蝸牛、２．２×１０１１ｖｇ／蝸牛、２．３×１０１１ｖｇ／蝸牛、２．４×１０１１ｖｇ／蝸牛、約２．５×１０１１ｖｇ／蝸牛、２．６×１０１１ｖｇ／蝸牛、２．７×１０１１ｖｇ／蝸牛、２．８×１０１１ｖｇ／蝸牛、２．９×１０１１ｖｇ／蝸牛、約３×１０１１ｖｇ／蝸牛、３．１×１０１１ｖｇ／蝸牛、３．２×１０１１ｖｇ／蝸牛、３．３×１０１１ｖｇ／蝸牛、３．４×１０１１ｖｇ／蝸牛、約３．５×１０１１ｖｇ／蝸牛、３．６×１０１１ｖｇ／蝸牛、３．７×１０１１ｖｇ／蝸牛、３．８×１０１１ｖｇ／蝸牛、３．９×１０１１ｖｇ／蝸牛、約４×１０１１ｖｇ／蝸牛、４．１×１０１１ｖｇ／蝸牛、４．２×１０１１ｖｇ／蝸牛、４．３×１０１１ｖｇ／蝸牛、４．４×１０１１ｖｇ／蝸牛、約４．５×１０１１ｖｇ／蝸牛、４．６×１０１１ｖｇ／蝸牛、４．７×１０１１ｖｇ／蝸牛、４．８×１０１１ｖｇ／蝸牛、４．９×１０１１ｖｇ／蝸牛、約５×１０１１ｖｇ／蝸牛、約５．５×１０１１ｖｇ／蝸牛、約６×１０１１ｖｇ／蝸牛、約６．５×１０１１ｖｇ／蝸牛、約７×１０１１ｖｇ／蝸牛、約７．５×１０１１ｖｇ／蝸牛、約８×１０１１ｖｇ／蝸牛、約８．５×１０１１ｖｇ／蝸牛、約９×１０１１ｖｇ／蝸牛、約９．５×１０１１ｖｇ／蝸牛、約１×１０１２ｖｇ／蝸牛の量で投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物（例えば、本明細書に開示される１つまたは複数のｒＡＡＶ構築物を含む組成物）は、２．３×１０１１ｖｇ／蝸牛＋／－１０％の量で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物（例えば、本明細書に開示される１つまたは複数のｒＡＡＶ構築物を含む組成物）は、２．３×１０１１ｖｇ／蝸牛の量で投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物（例えば、本明細書に開示される１つまたは複数のｒＡＡＶ構築物を含む組成物）は、４．５×１０１１ｖｇ／蝸牛＋／－１０％の量で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物（例えば、本明細書に開示される１つまたは複数のｒＡＡＶ構築物を含む組成物）は、４．５×１０１１ｖｇ／蝸牛の量で投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物（例えば、本明細書に開示される１つまたは複数のｒＡＡＶ構築物を含む組成物）は、９×１０１１ｖｇ／蝸牛＋／－１０％の量で投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物（例えば、本明細書に開示される１つまたは複数のｒＡＡＶ構築物を含む組成物）は、９×１０１１ｖｇ／蝸牛の量で投与される。
単一のＡＡＶ構築物組成物
いくつかの実施形態では、本開示は、単一の構築物から構成されるｒＡＡＶ粒子を含む組成物またはシステムを提供する。いくつかのそのような実施形態では、単一の構築物は、抗ＶＥＧＦ遺伝子の機能的（例えば、前述のように、及び／またはそれ以外の他の機能的、例えば、コドン最適化された）コピーをコードするポリヌクレオチドを送達し得る。いくつかの実施形態では、構築物はｒＡＡＶ構築物であるか、またはそれを含む。本明細書に記載のいくつかの実施形態では、単一のｒＡＡＶ構築物は、標的細胞（例えば、内耳細胞）において全長抗ＶＥＧＦメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）またはその特徴的タンパク質を発現することが可能である。いくつかの実施形態では、単一の構築物（例えば、本明細書に記載の任意の構築物）は、機能的抗ＶＥＧＦタンパク質（例えば、機能的抗ＶＥＧＦタンパク質を生成する任意の構築物）をコードする配列を含み得る。いくつかの実施形態では、単一の構築物（例えば、本明細書に記載の任意の構築物）は、機能的抗ＶＥＧＦタンパク質（例えば、機能的抗ＶＥＧＦタンパク質を生成する任意の構築物）をコードする配列と、任意選択で追加のポリペプチド配列（例えば、調節配列、及び／またはレポーター配列）とを含み得る。
いくつかの実施形態では、単一の構築物組成物またはシステムは、本明細書に記載の例示的な構築物構成要素のいずれかまたは全てを含み得る。いくつかの実施形態では、例示的な単一の構築物は、配列番号９０によって表される。いくつかの実施形態では、例示的な単一の構築物は、配列番号９１によって表される。いくつかの実施形態では、例示的な単一の構築物は、配列番号９２によって表される。いくつかの実施形態では、例示的な単一の構築物は、配列番号９３によって表される。いくつかの実施形態では、例示的な単一の構築物は、配列番号９４によって表される。いくつかの実施形態では、例示的な単一の構築物は、配列番号９５によって表される。いくつかの実施形態では、例示的な単一の構築物は、配列番号９６によって表される。いくつかの実施形態では、例示的な単一の構築物は、配列番号１０６によって表される。いくつかの実施形態では、例示的な単一の構築物は、配列番号１０７によって表される。いくつかの実施形態では、例示的な単一の構築物は、配列番号９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、１０６、または１０７によって表される配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％同一である。当業者であれば、構築物が、コドン最適化、新規であるが機能的同等物（例えば、サイレント変異）の導入、レポーター配列の付加、及び／または他の日常的な改変を含む追加の改変を受け得ることを認識するであろう。
いくつかの実施形態では、構築物は、配列番号９０に記載の配列を有し、この構築物は、ｒＡＡＶ－ラニビズマブ－ＰＣ構築物と称され得、図６のパネル（Ａ）に示す概略図の例示的実施形態であり、抗ＶＥＧＦタンパク質ラニビズマブをコードする。いくつかの実施形態では、例示的な構築物は、以下を含む：配列番号４７によって例示される５’ＩＴＲ、任意選択で配列番号８１によって例示されるクローニング部位、配列番号６４によって例示されるＣＭＶエンハンサー、配列番号５０によって例示されるＣＢＡプロモーター、配列番号６５によって例示されるキメライントロン、任意選択で配列番号７８によって例示されるクローニング部位、配列番号１０３によって例示される抗ＶＥＧＦコード領域、任意選択で配列番号７９によって例示されるクローニング部位、配列番号７５によって例示されるポリ（Ａ）部位、任意選択で配列番号８２によって例示されるクローニング部位、及び配列番号４８によって例示される３’ＩＴＲ。
いくつかの実施形態では、構築物は、配列番号９１に記載の配列を有し、この構築物は、ｒＡＡＶ－ラニビズマブ構築物と称され得、図６のパネル（Ａ）に示す概略図の例示的実施形態であり、抗ＶＥＧＦタンパク質ラニビズマブをコードする。いくつかの実施形態では、例示的な構築物は、以下を含む：配列番号４５によって例示される５’ＩＴＲ、任意選択で配列番号７７によって例示されるクローニング部位、配列番号６４によって例示されるＣＭＶエンハンサー、配列番号４９によって例示されるＣＢＡプロモーター、配列番号６５によって例示されるキメライントロン、任意選択で配列番号７８によって例示されるクローニング部位、配列番号１０３によって例示される抗ＶＥＧＦコード領域、任意選択で配列番号７９によって例示されるクローニング部位、配列番号７５によって例示されるポリ（Ａ）部位、任意選択で配列番号８０によって例示されるクローニング部位、及び配列番号４６によって例示される３’ＩＴＲ。
いくつかの実施形態では、構築物は、配列番号９２に記載の配列を有し、この構築物は、ｒＡＡＶ－ラニビズマブ．２構築物と称され得、図６のパネル（Ａ）に示す概略図の例示的実施形態であり、抗ＶＥＧＦタンパク質ラニビズマブをコードする。いくつかの実施形態では、例示的な構築物は、以下を含む：配列番号４５によって例示される５’ＩＴＲ、任意選択で配列番号７７によって例示されるクローニング部位、配列番号６４によって例示されるＣＭＶエンハンサー、配列番号５０によって例示されるＣＢＡプロモーター、配列番号６５によって例示されるキメライントロン、任意選択で配列番号７８によって例示されるクローニング部位、配列番号１０３によって例示される抗ＶＥＧＦコード領域、任意選択で配列番号７９によって例示されるクローニング部位、配列番号７５によって例示されるポリ（Ａ）部位、任意選択で配列番号８０によって例示されるクローニング部位、及び配列番号４６によって例示される３’ＩＴＲ。
いくつかの実施形態では、構築物は、配列番号１０６に記載の配列を有し、この構築物は、ｒＡＡＶ－ラニビズマブ－ＧＦＰ構築物と称され得、図６のパネル（Ｂ）に示す概略図の例示的実施形態であり、抗ＶＥＧＦタンパク質ラニビズマブをコードする。いくつかの実施形態では、例示的な構築物は、以下を含む：配列番号４７によって例示される５’ＩＴＲ、任意選択で配列番号８１によって例示されるクローニング部位、配列番号６４によって例示されるＣＭＶエンハンサー、配列番号５０によって例示されるＣＢＡプロモーター、配列番号６５によって例示されるキメライントロン、任意選択で配列番号７８によって例示されるクローニング部位、配列番号１０３によって例示される抗ＶＥＧＦコード領域、任意選択で配列番号１０４によって例示されるレポーター配列、任意選択で配列番号７９によって例示されるクローニング部位、配列番号７５によって例示されるポリ（Ａ）部位、任意選択で配列番号８２によって例示されるクローニング部位、及び配列番号４８によって例示される３’ＩＴＲ。
いくつかの実施形態では、構築物は、配列番号９３に記載の配列を有し、この構築物は、ｒＡＡＶ－ベバシズマブ－ＰＣ構築物と称され得、図６のパネル（Ｃ）に示す概略図の例示的実施形態であり、抗ＶＥＧＦタンパク質ベバシズマブをコードする。いくつかの実施形態では、例示的な構築物は、以下を含む：配列番号４７によって例示される５’ＩＴＲ、任意選択で配列番号８１によって例示されるクローニング部位、配列番号６４によって例示されるＣＭＶエンハンサー、配列番号５０によって例示されるＣＢＡプロモーター、配列番号６５によって例示されるキメライントロン、任意選択で配列番号７８によって例示されるクローニング部位、配列番号２２によって例示される抗ＶＥＧＦコード領域、任意選択で配列番号７９によって例示されるクローニング部位、配列番号７５によって例示されるポリ（Ａ）部位、任意選択で配列番号８２によって例示されるクローニング部位、及び配列番号４８によって例示される３’ＩＴＲ。
いくつかの実施形態では、構築物は、配列番号９４に記載の配列を有し、この構築物は、ｒＡＡＶ－ベバシズマブ構築物と称され得、図６のパネル（Ｃ）に示す概略図の例示的実施形態であり、抗ＶＥＧＦタンパク質ベバシズマブをコードする。いくつかの実施形態では、例示的な構築物は、以下を含む：配列番号４５によって例示される５’ＩＴＲ、任意選択で配列番号７７によって例示されるクローニング部位、配列番号６４によって例示されるＣＭＶエンハンサー、配列番号４９によって例示されるＣＢＡプロモーター、配列番号６５によって例示されるキメライントロン、任意選択で配列番号７８によって例示されるクローニング部位、配列番号２２によって例示される抗ＶＥＧＦコード領域、任意選択で配列番号７９によって例示されるクローニング部位、配列番号７５によって例示されるポリ（Ａ）部位、任意選択で配列番号８０によって例示されるクローニング部位、及び配列番号４６によって例示される３’ＩＴＲ。
いくつかの実施形態では、構築物は、配列番号１０７に記載の配列を有し、この構築物は、ｒＡＡＶ－ベバシズマブ－ＧＦＰ構築物と称され得、図６のパネル（Ｂ）に示す概略図の例示的実施形態であり、抗ＶＥＧＦタンパク質ベバシズマブをコードする。いくつかの実施形態では、例示的な構築物は、以下を含む：配列番号４７によって例示される５’ＩＴＲ、任意選択で配列番号８１によって例示されるクローニング部位、配列番号６４によって例示されるＣＭＶエンハンサー、配列番号５０によって例示されるＣＢＡプロモーター、配列番号６５によって例示されるキメライントロン、任意選択で配列番号７８によって例示されるクローニング部位、配列番号２２によって例示される抗ＶＥＧＦコード領域、任意選択で配列番号１０４によって例示されるレポーター配列、任意選択で配列番号７９によって例示されるクローニング部位、配列番号７５によって例示されるポリ（Ａ）部位、任意選択で配列番号８２によって例示されるクローニング部位、及び配列番号４８によって例示される３’ＩＴＲ。
いくつかの実施形態では、構築物は、配列番号９５に記載の配列を有し、この構築物は、ｒＡＡＶ－アフリベルセプト－ＰＣ構築物と称され得、図６のパネル（Ｄ）に示す概略図の例示的実施形態であり、抗ＶＥＧＦタンパク質アフリベルセプトをコードする。いくつかの実施形態では、例示的な構築物は、以下を含む：配列番号４７によって例示される５’ＩＴＲ、任意選択で配列番号８１によって例示されるクローニング部位、配列番号６４によって例示されるＣＭＶエンハンサー、配列番号５０によって例示されるＣＢＡプロモーター、配列番号６５によって例示されるキメライントロン、任意選択で配列番号７８によって例示されるクローニング部位、配列番号４２によって例示される抗ＶＥＧＦコード領域、任意選択で配列番号７９によって例示されるクローニング部位、配列番号７５によって例示されるポリ（Ａ）部位、任意選択で配列番号８２によって例示されるクローニング部位、及び配列番号４８によって例示される３’ＩＴＲ。
いくつかの実施形態では、構築物は、配列番号９６に記載の配列を有し、この構築物は、ｒＡＡＶ－アフリベルセプト構築物と称され得、図６のパネル（Ｄ）に示す概略図の例示的実施形態であり、抗ＶＥＧＦタンパク質アフリベルセプトをコードする。いくつかの実施形態では、例示的な構築物は、以下を含む：配列番号４５によって例示される５’ＩＴＲ、任意選択で配列番号７７によって例示されるクローニング部位、配列番号６４によって例示されるＣＭＶエンハンサー、配列番号４９によって例示されるＣＢＡプロモーター、配列番号６５によって例示されるキメライントロン、任意選択で配列番号７８によって例示されるクローニング部位、配列番号４２によって例示される抗ＶＥＧＦコード領域、任意選択で配列番号７９によって例示されるクローニング部位、配列番号７５によって例示されるポリ（Ａ）部位、任意選択で配列番号８０によって例示されるクローニング部位、及び配列番号４６によって例示される３’ＩＴＲ。
特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦタンパク質をコードする構築物を含むｒＡＡＶＡｎｃ８０粒子を生成し、これを使用して当該構築物の生物学的活性及び内耳耐性を、ＶＳに対する局所的抗ＶＥＧＦ療法の生物学的妥当性及び合理的安全性を裏付けるために評価した。いくつかの実施形態では、そのような評価を、以下のアプローチ／モデルを用いた一連の試験を通じて行った：細胞株の形質導入及び／またはトランスフェクション、蝸牛外植片の形質導入及び／またはトランスフェクション；野生型マウス細胞の蝸牛内投与及び形質導入；及び／またはＮＨＰ細胞の蝸牛内投与及び形質導入。特定の抗ＶＥＧＦ粒子の概要を表１に示す。
例示的なｒＡＡＶ－ラニビズマブ－ＰＣ構築物配列（配列番号９０）
ＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣＣＧＧＧＣＧＴＣＧＧＧＣＧＡＣＣＴＴＴＧＧＴＣＧＣＣＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＴＡＧＧＧＧＴＴＣＣＴＧＣＧＧＣＣＧＣＡＣＧＣＧＴＧＡＣＡＴＴＧＡＴＴＡＴＴＧＡＣＴＡＧＴＴＡＴＴＡＡＴＡＧＴＡＡＴＣＡＡＴＴＡＣＧＧＧＧＴＣＡＴＴＡＧＴＴＣＡＴＡＧＣＣＣＡＴＡＴＡＴＧＧＡＧＴＴＣＣＧＣＧＴＴＡＣＡＴＡＡＣＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＴＧＡＣＣＧＣＣＣＡＡＣＧＡＣＣＣＣＣＧＣＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＡＡＴＧＡＣＧＴＡＴＧＴＴＣＣＣＡＴＡＧＴＡＡＣＧＣＣＡＡＴＡＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＧＴＧＧＡＣＴＡＴＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＣＴＧＣＣＣＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＴＡＴＣＡＴＡＴＧＣＣＡＡＧＴＡＣＧＣＣＣＣＣＴＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＡＴＴＡＴＧＣＣＣＡＧＴＡＣＡＴＧＡＣＣＴＴＡＴＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＴＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＴＡＣＧＴＡＴＴＡＧＴＣＡＴＣＧＣＴＡＴＴＡＣＣＡＴＧＧＧＴＣＧＡＧＧＴＧＡＧＣＣＣＣＡＣＧＴＴＣＴＧＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＣＣＣＡＴＣＴＣＣＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＣＣＣＣＡＡＴＴＴＴＧＴＡＴＴＴＡＴＴＴＡＴＴＴＴＴＴＡＡＴＴＡＴＴＴＴＧＴＧＣＡＧＣＧＡＴＧＧＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＡＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＡＧＡＧＧＴＧＣＧＧＣＧＧＣＡＧＣＣＡＡＴＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＧＣＴＣＣＧＡＡＡＧＴＴＴＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＴＡＴＡＡＡＡＡＧＣＧＡＡＧＣＧＣＧＣＧＧＣＧＧＧＣＧＧＧＡＧＴＣＧＣＴＧＣＧＴＴＧＣＣＴＴＣＧＣＣＣＣＧＴＧＣＣＣＣＧＣＴＣＣＧＣＧＣＣＧＣＣＴＣＧＣＧＣＣＧＣＣＣＧＣＣＣＣＧＧＣＴＣＴＧＡＣＴＧＡＣＣＧＣＧＴＴＡＣＴＣＣＣＡＣＡＧＧＴＧＡＧＣＧＧＧＣＧＧＧＡＣＧＧＣＣＣＴＴＣＴＣＣＴＣＣＧＧＧＣＴＧＴＡＡＴＴＡＧＣＧＣＴＴＧＧＴＴＴＡＡＴＧＡＣＧＧＣＴＣＧＴＴＴＣＴＴＴＴＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＧＴＧＡＡＡＧＣＣＴＴＡＡＡＧＧＧＣＴＣＣＧＧＧＡＧＧＧＣＣＣＴＴＴＧＴＧＣＧＧＧＧＧＧＧＡＧＣＧＧＣＴＣＧＧＧＧＧＧＴＧＣＧＴＧＣＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＧＧＡＧＣＧＣＣＧＣＧＴＧＣＧＧＣＣＣＧＣＧＣＴＧＣＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧＴＧＡＧＣＧＣＴＧＣＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＴＴＴＧＴＧＣＧＣＴＣＣＧＣＧＴＧＴＧＣＧＣＧＡＧＧＧＧＡＧＣＧＣＧＧＣＣＧＧＧＧＧＣＧＧＴＧＣＣＣＣＧＣＧＧＴＧＣＧＧＧＧＧＧＧＣＴＧＣＧＡＧＧＧＧＡＡＣＡＡＡＧＧＣＴＧＣＧＴＧＣＧＧＧＧＴＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＧＧＧＧＧＴＧＡＧＣＡＧＧＧＧＧＴＧＴＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＧＴＣＧＧＧＣＴＧＴＡＡＣＣＣＣＣＣＣＣＴＧＣＡＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＧＡＧＴＴＧＣＴＧＡＧＣＡＣＧＧＣＣＣＧＧＣＴＴＣＧＧＧＴＧＣＧＧＧＧＣＴＣＣＧＴＧＣＧＧＧＧＣＧＴＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＴＣＧＣＣＧＴＧＣＣＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＴＧＧＣＧＧＣＡＧＧＴＧＧＧＧＧＴＧＣＣＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＣＧＣＣＴＣＧＧＧＣＣＧＧＧＧＡＧＧＧＣＴＣＧＧＧＧＧＡＧＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＣＣＧＧＡＧＣＧＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧＴＣＧＡＧＧＣＧＣＧＧＣＧＡＧＣＣＧＣＡＧＣＣＡＴＴＧＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＴＡＡＴＣＧＴＧＣＧＡＧＡＧＧＧＣＧＣＡＧＧＧＡＣＴＴＣＣＴＴＴＧＴＣＣＣＡＡＡＴＣＴＧＴＧＣＧＧＡＧＣＣＧＡＡＡＴＣＴＧＧＧＡＧＧＣＧＣＣＧＣＣＧＣＡＣＣＣＣＣＴＣＴＡＧＣＧＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＧＡＡＧＣＧＧＴＧＣＧＧＣＧＣＣＧＧＣＡＧＧＡＡＧＧＡＡＡＴＧＧＧＣＧＧＧＧＡＧＧＧＣＣＴＴＣＧＴＧＣＧＴＣＧＣＣＧＣＧＣＣＧＣＣＧＴＣＣＣＣＴＴＣＴＣＣＣＴＣＴＣＣＡＧＣＣＴＣＧＧＧＧＣＴＧＴＣＣＧＣＧＧＧＧＧＧＡＣＧＧＣＴＧＣＣＴＴＣＧＧＧＧＧＧＧＡＣＧＧＧＧＣＡＧＧＧＣＧＧＧＧＴＴＣＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＧＴＧＴＧＡＣＣＧＧＣＧＧＣＴＣＴＡＧＡＧＣＣＴＣＴＧＣＴＡＡＣＣＡＴＧＴＴＣＡＴＧＣＣＴＴＣＴＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＡＣＡＧＣＴＣＣＴＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＣＴＧＧＴＴＡＴＴＧＴＧＡＣＣＧＧＴＧＣＣＡＣＣＡＴＧＴＡＣＣＧＧＡＴＧＣＡＧＣＴＧＣＴＧＡＧＣＴＧＴＡＴＣＧＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＡＡＴＴＣＴＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＣＴＴＧＴＴＣＡＡＣＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＧＡＧＣＴＧＴＧＣＣＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＡＣＴＡＣＧＧＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＣＡＡＡＧＧＣＣＴＴＧＡＡＴＧＧＧＴＣＧＧＡＴＧＧＡＴＣＡＡＣＡＣＣＴＡＣＡＣＣＧＧＣＧＡＧＣＣＡＡＣＡＴＡＣＧＣＣＧＣＣＧＡＣＴＴＣＡＡＧＣＧＧＡＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＣＣＴＧＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＡＧＴＡＴＣＣＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＣＡＣＣＡＧＣＣＡＣＴＧＧＴＡＣＴＴＴＧＡＣＧＴＧＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＣＡＣＡＣＴＧＧＴＣＡＣＡＧＴＧＴＣＴＡＧＣＧＣＣＴＣＴＡＣＡＡＡＧＧＧＣＣＣＣＡＧＣＧＴＴＴＴＣＣＣＡＣＴＧＧＣＴＣＣＴＡＧＣＡＧＣＡＡＧＴＣＴＡＣＣＡＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＡＧＣＣＧＣＴＣＴＧＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＴＣＣＣＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＣＧＴＧＴＣＣＴＧＧＡＡＴＴＣＴＧＧＣＧＣＴＣＴＧＡＣＡＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＴＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＡＡＧＣＡＧＣＧＧＣＣＴＧＴＡＣＴＣＴＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧＴＣＧＴＧＡＣＡＧＴＧＣＣＡＡＧＣＡＧＣＴＣＴＣＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＴＧＴＧＡＡＣＣＡＣＡＡＧＣＣＴＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＧＧＴＧＧＡＡＣＣＣＡＡＧＡＧＣＴＧＣＧＡＣＡＡＧＡＣＣＣＡＣＡＣＣＧＧＣＡＡＧＣＧＧＡＡＧＡＧＡＡＧＡＧＧＣＴＣＴＧＧＣＧＡＡＧＧＣＡＧＡＧＧＣＡＧＣＣＴＧＣＴＴＡＣＡＴＧＴＧＧＣＧＡＣＧＴＧＧＡＡＧＡＧＡＡＣＣＣＣＧＧＡＣＣＴＡＴＧＴＡＴＡＧＡＡＴＧＣＡＧＣＴＣＣＴＧＴＣＣＴＧＣＡＴＴＧＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＧＣＴＣＴＣＧＴＧＡＣＣＡＡＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＣＡＧＣＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＴＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＴＡＧＣＧＣＣＡＧＣＣＡＧＧＡＣＡＴＣＴＣＣＡＡＣＴＡＣＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＡＡＡＧＣＣＣＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＣＴＡＡＧＧＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＴＴＣＡＣＡＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＣＴＣＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＡＴＣＴＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴＡＣＡＧＣＡＣＣＧＴＧＣＣＴＴＧＧＡＣＡＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＡＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＣＧＧＡＣＴＧＴＧＧＣＣＧＣＴＣＣＴＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＴＣＣＡＣＣＴＡＧＣＧＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＣＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＣＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＡＧＡＡＧＣＣＡＡＧＧＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＡＧＴＧＧＡＣＡＡＴＧＣＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣＡＡＣＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡＧＣＧＴＧＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＴＣＣＡＡＧＧＡＴＡＧＣＡＣＣＴＡＴＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＧＡＧＣＡＡＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＧＣＡＣＡＡＡＧＴＧＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＧＡＣＣＣＡＣＣＡＧＧＧＣＣＴＴＴＣＴＡＧＣＣＣＴＧＴＧＡＣＣＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＣＧＧＧＧＣＧＡＡＴＧＴＴＡＡＧＡＧＣＴＣＧＣＴＧＡＴＣＡＧＣＣＴＣＧＡＣＴＧＴＧＣＣＴＴＣＴＡＧＴＴＧＣＣＡＧＣＣＡＴＣＴＧＴＴＧＴＴＴＧＣＣＣＣＴＣＣＣＣＣＧＴＧＣＣＴＴＣＣＴＴＧＡＣＣＣＴＧＧＡＡＧＧＴＧＣＣＡＣＴＣＣＣＡＣＴＧＴＣＣＴＴＴＣＣＴＡＡＴＡＡＡＡＴＧＡＧＧＡＡＡＴＴＧＣＡＴＣＧＣＡＴＴＧＴＣＴＧＡＧＴＡＧＧＴＧＴＣＡＴＴＣＴＡＴＴＣＴＧＧＧＧＧＧＴＧＧＧＧＴＧＧＧＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＧＧＧＡＧＧＡＴＴＧＧＧＡＡＧＡＣＡＡＴＡＧＣＡＧＧＣＡＴＧＣＴＧＧＧＧＡＴＧＣＧＧＴＧＧＧＣＴＣＴＡＴＧＧＡＡＧＣＴＴＧＡＡＴＴＣＡＧＣＴＧＡＣＧＴＧＣＣＴＣＧＧＡＣＣＧＣＴＡＧＧＡＡＣＣＣＣＴＡＧＴＧＡＴＧＧＡＧＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＧＧＣＧＡＣＣＡＡＡＧＧＴＣＧＣＣＣＧＡＣＧＣＣＣＧＧＧＣＴＴＴＧＣＣＣＧＧＧＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧ
例示的なｒＡＡＶ－ラニビズマブ構築物配列（配列番号９１）
ＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣＣＧＧＧＣＡＡＡＧＣＣＣＧＧＧＣＧＴＣＧＧＧＣＧＡＣＣＴＴＴＧＧＴＣＧＣＣＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＴＡＧＧＧＧＴＴＣＣＴＴＴＧＴＣＧＡＣＧＣＧＧＣＣＧＣＡＣＧＣＧＴＧＡＣＡＴＴＧＡＴＴＡＴＴＧＡＣＴＡＧＴＴＡＴＴＡＡＴＡＧＴＡＡＴＣＡＡＴＴＡＣＧＧＧＧＴＣＡＴＴＡＧＴＴＣＡＴＡＧＣＣＣＡＴＡＴＡＴＧＧＡＧＴＴＣＣＧＣＧＴＴＡＣＡＴＡＡＣＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＴＧＡＣＣＧＣＣＣＡＡＣＧＡＣＣＣＣＣＧＣＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＡＡＴＧＡＣＧＴＡＴＧＴＴＣＣＣＡＴＡＧＴＡＡＣＧＣＣＡＡＴＡＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＧＴＧＧＡＣＴＡＴＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＣＴＧＣＣＣＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＴＡＴＣＡＴＡＴＧＣＣＡＡＧＴＡＣＧＣＣＣＣＣＴＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＡＴＴＡＴＧＣＣＣＡＧＴＡＣＡＴＧＡＣＣＴＴＡＴＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＴＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＴＡＣＧＴＡＴＴＡＧＴＣＡＴＣＧＣＴＡＴＴＡＣＣＡＴＧＧＧＴＣＧＡＧＧＴＧＡＧＣＣＣＣＡＣＧＴＴＣＴＧＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＣＣＣＡＴＣＴＣＣＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＣＣＣＣＡＡＴＴＴＴＧＴＡＴＴＴＡＴＴＴＡＴＴＴＴＴＴＡＡＴＴＡＴＴＴＴＧＴＧＣＡＧＣＧＡＴＧＧＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＡＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＡＧＡＧＧＴＧＣＧＧＣＧＧＣＡＧＣＣＡＡＴＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＧＣＴＣＣＧＡＡＡＧＴＴＴＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＴＡＴＡＡＡＡＡＧＣＧＡＡＧＣＧＣＧＣＧＧＣＧＧＧＣＧＧＧＡＧＴＣＧＣＴＧＣＧＴＴＧＣＣＴＴＣＧＣＣＣＣＧＴＧＣＣＣＣＧＣＴＣＣＧＣＧＣＣＧＣＣＴＣＧＣＧＣＣＧＣＣＣＧＣＣＣＣＧＧＣＴＣＴＧＡＣＴＧＡＣＣＧＣＧＴＴＡＣＴＣＣＣＡＣＡＧＧＴＧＡＧＣＧＧＧＣＧＧＧＡＣＧＧＣＣＣＴＴＣＴＣＣＴＣＣＧＧＧＣＴＧＴＡＡＴＴＡＧＣＧＣＴＴＧＧＴＴＴＡＡＴＧＡＣＧＧＣＴＣＧＴＴＴＣＴＴＴＴＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＧＴＧＡＡＡＧＣＣＴＴＡＡＡＧＧＧＣＴＣＣＧＧＧＡＧＧＧＣＣＣＴＴＴＧＴＧＣＧＧＧＧＧＧＧＡＧＣＧＧＣＴＣＧＧＧＧＧＧＴＧＣＧＴＧＣＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＧＧＡＧＣＧＣＣＧＣＧＴＧＣＧＧＣＣＣＧＣＧＣＴＧＣＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧＴＧＡＧＣＧＣＴＧＣＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＴＴＴＧＴＧＣＧＣＴＣＣＧＣＧＴＧＴＧＣＧＣＧＡＧＧＧＧＡＧＣＧＣＧＧＣＣＧＧＧＧＧＣＧＧＴＧＣＣＣＣＧＣＧＧＴＧＣＧＧＧＧＧＧＧＣＴＧＣＧＡＧＧＧＧＡＡＣＡＡＡＧＧＣＴＧＣＧＴＧＣＧＧＧＧＴＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＧＧＧＧＧＴＧＡＧＣＡＧＧＧＧＧＴＧＴＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＧＴＣＧＧＧＣＴＧＴＡＡＣＣＣＣＣＣＣＣＴＧＣＡＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＧＡＧＴＴＧＣＴＧＡＧＣＡＣＧＧＣＣＣＧＧＣＴＴＣＧＧＧＴＧＣＧＧＧＧＣＴＣＣＧＴＧＣＧＧＧＧＣＧＴＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＴＣＧＣＣＧＴＧＣＣＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＴＧＧＣＧＧＣＡＧＧＴＧＧＧＧＧＴＧＣＣＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＣＧＣＣＴＣＧＧＧＣＣＧＧＧＧＡＧＧＧＣＴＣＧＧＧＧＧＡＧＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＣＣＧＧＡＧＣＧＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧＴＣＧＡＧＧＣＧＣＧＧＣＧＡＧＣＣＧＣＡＧＣＣＡＴＴＧＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＴＡＡＴＣＧＴＧＣＧＡＧＡＧＧＧＣＧＣＡＧＧＧＡＣＴＴＣＣＴＴＴＧＴＣＣＣＡＡＡＴＣＴＧＴＧＣＧＧＡＧＣＣＧＡＡＡＴＣＴＧＧＧＡＧＧＣＧＣＣＧＣＣＧＣＡＣＣＣＣＣＴＣＴＡＧＣＧＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＧＡＡＧＣＧＧＴＧＣＧＧＣＧＣＣＧＧＣＡＧＧＡＡＧＧＡＡＡＴＧＧＧＣＧＧＧＧＡＧＧＧＣＣＴＴＣＧＴＧＣＧＴＣＧＣＣＧＣＧＣＣＧＣＣＧＴＣＣＣＣＴＴＣＴＣＣＣＴＣＴＣＣＡＧＣＣＴＣＧＧＧＧＣＴＧＴＣＣＧＣＧＧＧＧＧＧＡＣＧＧＣＴＧＣＣＴＴＣＧＧＧＧＧＧＧＡＣＧＧＧＧＣＡＧＧＧＣＧＧＧＧＴＴＣＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＧＴＧＴＧＡＣＣＧＧＣＧＧＣＴＣＴＡＧＡＧＣＣＴＣＴＧＣＴＡＡＣＣＡＴＧＴＴＣＡＴＧＣＣＴＴＣＴＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＡＣＡＧＣＴＣＣＴＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＣＴＧＧＴＴＡＴＴＧＴＧＡＣＣＧＧＴＧＣＣＡＣＣＡＴＧＴＡＣＣＧＧＡＴＧＣＡＧＣＴＧＣＴＧＡＧＣＴＧＴＡＴＣＧＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＡＡＴＴＣＴＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＣＴＴＧＴＴＣＡＡＣＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＧＡＧＣＴＧＴＧＣＣＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＡＣＴＡＣＧＧＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＣＡＡＡＧＧＣＣＴＴＧＡＡＴＧＧＧＴＣＧＧＡＴＧＧＡＴＣＡＡＣＡＣＣＴＡＣＡＣＣＧＧＣＧＡＧＣＣＡＡＣＡＴＡＣＧＣＣＧＣＣＧＡＣＴＴＣＡＡＧＣＧＧＡＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＣＣＴＧＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＡＧＴＡＴＣＣＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＣＡＣＣＡＧＣＣＡＣＴＧＧＴＡＣＴＴＴＧＡＣＧＴＧＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＣＡＣＡＣＴＧＧＴＣＡＣＡＧＴＧＴＣＴＡＧＣＧＣＣＴＣＴＡＣＡＡＡＧＧＧＣＣＣＣＡＧＣＧＴＴＴＴＣＣＣＡＣＴＧＧＣＴＣＣＴＡＧＣＡＧＣＡＡＧＴＣＴＡＣＣＡＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＡＧＣＣＧＣＴＣＴＧＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＴＣＣＣＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＣＧＴＧＴＣＣＴＧＧＡＡＴＴＣＴＧＧＣＧＣＴＣＴＧＡＣＡＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＴＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＡＡＧＣＡＧＣＧＧＣＣＴＧＴＡＣＴＣＴＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧＴＣＧＴＧＡＣＡＧＴＧＣＣＡＡＧＣＡＧＣＴＣＴＣＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＴＧＴＧＡＡＣＣＡＣＡＡＧＣＣＴＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＧＧＴＧＧＡＡＣＣＣＡＡＧＡＧＣＴＧＣＧＡＣＡＡＧＡＣＣＣＡＣＡＣＣＧＧＣＡＡＧＣＧＧＡＡＧＡＧＡＡＧＡＧＧＣＴＣＴＧＧＣＧＡＡＧＧＣＡＧＡＧＧＣＡＧＣＣＴＧＣＴＴＡＣＡＴＧＴＧＧＣＧＡＣＧＴＧＧＡＡＧＡＧＡＡＣＣＣＣＧＧＡＣＣＴＡＴＧＴＡＴＡＧＡＡＴＧＣＡＧＣＴＣＣＴＧＴＣＣＴＧＣＡＴＴＧＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＧＣＴＣＴＣＧＴＧＡＣＣＡＡＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＣＡＧＣＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＴＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＴＡＧＣＧＣＣＡＧＣＣＡＧＧＡＣＡＴＣＴＣＣＡＡＣＴＡＣＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＡＡＡＧＣＣＣＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＣＴＡＡＧＧＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＴＴＣＡＣＡＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＣＴＣＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＡＴＣＴＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴＡＣＡＧＣＡＣＣＧＴＧＣＣＴＴＧＧＡＣＡＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＡＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＣＧＧＡＣＴＧＴＧＧＣＣＧＣＴＣＣＴＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＴＣＣＡＣＣＴＡＧＣＧＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＣＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＣＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＡＧＡＡＧＣＣＡＡＧＧＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＡＧＴＧＧＡＣＡＡＴＧＣＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣＡＡＣＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡＧＣＧＴＧＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＴＣＣＡＡＧＧＡＴＡＧＣＡＣＣＴＡＴＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＧＡＧＣＡＡＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＧＣＡＣＡＡＡＧＴＧＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＧＡＣＣＣＡＣＣＡＧＧＧＣＣＴＴＴＣＴＡＧＣＣＣＴＧＴＧＡＣＣＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＣＧＧＧＧＣＧＡＡＴＧＴＴＡＡＧＡＧＣＴＣＧＣＴＧＡＴＣＡＧＣＣＴＣＧＡＣＴＧＴＧＣＣＴＴＣＴＡＧＴＴＧＣＣＡＧＣＣＡＴＣＴＧＴＴＧＴＴＴＧＣＣＣＣＴＣＣＣＣＣＧＴＧＣＣＴＴＣＣＴＴＧＡＣＣＣＴＧＧＡＡＧＧＴＧＣＣＡＣＴＣＣＣＡＣＴＧＴＣＣＴＴＴＣＣＴＡＡＴＡＡＡＡＴＧＡＧＧＡＡＡＴＴＧＣＡＴＣＧＣＡＴＴＧＴＣＴＧＡＧＴＡＧＧＴＧＴＣＡＴＴＣＴＡＴＴＣＴＧＧＧＧＧＧＴＧＧＧＧＴＧＧＧＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＧＧＧＡＧＧＡＴＴＧＧＧＡＡＧＡＣＡＡＴＡＧＣＡＧＧＣＡＴＧＣＴＧＧＧＧＡＴＧＣＧＧＴＧＧＧＣＴＣＴＡＴＧＧＡＡＧＣＴＴＧＡＡＴＴＣＡＧＣＴＧＡＣＧＴＧＣＣＴＣＧＧＡＣＣＧＣＣＴＡＧＧＡＧＧＡＡＣＣＣＣＴＡＧＴＧＡＴＧＧＡＧＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＧＧＣＧＡＣＣＡＡＡＧＧＴＣＧＣＣＣＧＡＣＧＣＣＣＧＧＧＣＴＴＴＧＣＣＣＧＧＧＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡ
例示的なｒＡＡＶ－ラニビズマブ．２構築物配列（配列番号９２）
ＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣＣＧＧＧＣＡＡＡＧＣＣＣＧＧＧＣＧＴＣＧＧＧＣＧＡＣＣＴＴＴＧＧＴＣＧＣＣＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＴＡＧＧＧＧＴＴＣＣＴＴＴＧＴＣＧＡＣＧＣＧＧＣＣＧＣＡＣＧＣＧＴＧＡＣＡＴＴＧＡＴＴＡＴＴＧＡＣＴＡＧＴＴＡＴＴＡＡＴＡＧＴＡＡＴＣＡＡＴＴＡＣＧＧＧＧＴＣＡＴＴＡＧＴＴＣＡＴＡＧＣＣＣＡＴＡＴＡＴＧＧＡＧＴＴＣＣＧＣＧＴＴＡＣＡＴＡＡＣＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＴＧＡＣＣＧＣＣＣＡＡＣＧＡＣＣＣＣＣＧＣＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＡＡＴＧＡＣＧＴＡＴＧＴＴＣＣＣＡＴＡＧＴＡＡＣＧＣＣＡＡＴＡＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＧＴＧＧＡＣＴＡＴＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＣＴＧＣＣＣＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＴＡＴＣＡＴＡＴＧＣＣＡＡＧＴＡＣＧＣＣＣＣＣＴＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＡＴＴＡＴＧＣＣＣＡＧＴＡＣＡＴＧＡＣＣＴＴＡＴＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＴＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＴＡＣＧＴＡＴＴＡＧＴＣＡＴＣＧＣＴＡＴＴＡＣＣＡＴＧＧＧＴＣＧＡＧＧＴＧＡＧＣＣＣＣＡＣＧＴＴＣＴＧＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＣＣＣＡＴＣＴＣＣＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＣＣＣＣＡＡＴＴＴＴＧＴＡＴＴＴＡＴＴＴＡＴＴＴＴＴＴＡＡＴＴＡＴＴＴＴＧＴＧＣＡＧＣＧＡＴＧＧＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＡＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＡＧＡＧＧＴＧＣＧＧＣＧＧＣＡＧＣＣＡＡＴＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＧＣＴＣＣＧＡＡＡＧＴＴＴＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＴＡＴＡＡＡＡＡＧＣＧＡＡＧＣＧＣＧＣＧＧＣＧＧＧＣＧＧＧＡＧＴＣＧＣＴＧＣＧＴＴＧＣＣＴＴＣＧＣＣＣＣＧＴＧＣＣＣＣＧＣＴＣＣＧＣＧＣＣＧＣＣＴＣＧＣＧＣＣＧＣＣＣＧＣＣＣＣＧＧＣＴＣＴＧＡＣＴＧＡＣＣＧＣＧＴＴＡＣＴＣＣＣＡＣＡＧＧＴＧＡＧＣＧＧＧＣＧＧＧＡＣＧＧＣＣＣＴＴＣＴＣＣＴＣＣＧＧＧＣＴＧＴＡＡＴＴＡＧＣＧＣＴＴＧＧＴＴＴＡＡＴＧＡＣＧＧＣＴＣＧＴＴＴＣＴＴＴＴＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＧＴＧＡＡＡＧＣＣＴＴＡＡＡＧＧＧＣＴＣＣＧＧＧＡＧＧＧＣＣＣＴＴＴＧＴＧＣＧＧＧＧＧＧＧＡＧＣＧＧＣＴＣＧＧＧＧＧＧＴＧＣＧＴＧＣＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＧＧＡＧＣＧＣＣＧＣＧＴＧＣＧＧＣＣＣＧＣＧＣＴＧＣＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧＴＧＡＧＣＧＣＴＧＣＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＴＴＴＧＴＧＣＧＣＴＣＣＧＣＧＴＧＴＧＣＧＣＧＡＧＧＧＧＡＧＣＧＣＧＧＣＣＧＧＧＧＧＣＧＧＴＧＣＣＣＣＧＣＧＧＴＧＣＧＧＧＧＧＧＧＣＴＧＣＧＡＧＧＧＧＡＡＣＡＡＡＧＧＣＴＧＣＧＴＧＣＧＧＧＧＴＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＧＧＧＧＧＴＧＡＧＣＡＧＧＧＧＧＴＧＴＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＧＴＣＧＧＧＣＴＧＴＡＡＣＣＣＣＣＣＣＣＴＧＣＡＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＧＡＧＴＴＧＣＴＧＡＧＣＡＣＧＧＣＣＣＧＧＣＴＴＣＧＧＧＴＧＣＧＧＧＧＣＴＣＣＧＴＧＣＧＧＧＧＣＧＴＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＴＣＧＣＣＧＴＧＣＣＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＴＧＧＣＧＧＣＡＧＧＴＧＧＧＧＧＴＧＣＣＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＣＧＣＣＴＣＧＧＧＣＣＧＧＧＧＡＧＧＧＣＴＣＧＧＧＧＧＡＧＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＣＣＧＧＡＧＣＧＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧＴＣＧＡＧＧＣＧＣＧＧＣＧＡＧＣＣＧＣＡＧＣＣＡＴＴＧＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＴＡＡＴＣＧＴＧＣＧＡＧＡＧＧＧＣＧＣＡＧＧＧＡＣＴＴＣＣＴＴＴＧＴＣＣＣＡＡＡＴＣＴＧＴＧＣＧＧＡＧＣＣＧＡＡＡＴＣＴＧＧＧＡＧＧＣＧＣＣＧＣＣＧＣＡＣＣＣＣＣＴＣＴＡＧＣＧＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＧＡＡＧＣＧＧＴＧＣＧＧＣＧＣＣＧＧＣＡＧＧＡＡＧＧＡＡＡＴＧＧＧＣＧＧＧＧＡＧＧＧＣＣＴＴＣＧＴＧＣＧＴＣＧＣＣＧＣＧＣＣＧＣＣＧＴＣＣＣＣＴＴＣＴＣＣＣＴＣＴＣＣＡＧＣＣＴＣＧＧＧＧＣＴＧＴＣＣＧＣＧＧＧＧＧＧＡＣＧＧＣＴＧＣＣＴＴＣＧＧＧＧＧＧＧＡＣＧＧＧＧＣＡＧＧＧＣＧＧＧＧＴＴＣＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＧＴＧＴＧＡＣＣＧＧＣＧＧＣＴＣＴＡＧＡＧＣＣＴＣＴＧＣＴＡＡＣＣＡＴＧＴＴＣＡＴＧＣＣＴＴＣＴＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＡＣＡＧＣＴＣＣＴＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＣＴＧＧＴＴＡＴＴＧＴＧＡＣＣＧＧＴＧＣＣＡＣＣＡＴＧＴＡＣＣＧＧＡＴＧＣＡＧＣＴＧＣＴＧＡＧＣＴＧＴＡＴＣＧＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＡＡＴＴＣＴＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＣＴＴＧＴＴＣＡＡＣＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＧＡＧＣＴＧＴＧＣＣＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＡＣＴＡＣＧＧＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＣＡＡＡＧＧＣＣＴＴＧＡＡＴＧＧＧＴＣＧＧＡＴＧＧＡＴＣＡＡＣＡＣＣＴＡＣＡＣＣＧＧＣＧＡＧＣＣＡＡＣＡＴＡＣＧＣＣＧＣＣＧＡＣＴＴＣＡＡＧＣＧＧＡＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＣＣＴＧＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＡＧＴＡＴＣＣＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＣＡＣＣＡＧＣＣＡＣＴＧＧＴＡＣＴＴＴＧＡＣＧＴＧＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＣＡＣＡＣＴＧＧＴＣＡＣＡＧＴＧＴＣＴＡＧＣＧＣＣＴＣＴＡＣＡＡＡＧＧＧＣＣＣＣＡＧＣＧＴＴＴＴＣＣＣＡＣＴＧＧＣＴＣＣＴＡＧＣＡＧＣＡＡＧＴＣＴＡＣＣＡＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＡＧＣＣＧＣＴＣＴＧＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＴＣＣＣＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＣＧＴＧＴＣＣＴＧＧＡＡＴＴＣＴＧＧＣＧＣＴＣＴＧＡＣＡＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＴＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＡＡＧＣＡＧＣＧＧＣＣＴＧＴＡＣＴＣＴＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧＴＣＧＴＧＡＣＡＧＴＧＣＣＡＡＧＣＡＧＣＴＣＴＣＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＴＧＴＧＡＡＣＣＡＣＡＡＧＣＣＴＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＧＧＴＧＧＡＡＣＣＣＡＡＧＡＧＣＴＧＣＧＡＣＡＡＧＡＣＣＣＡＣＡＣＣＧＧＣＡＡＧＣＧＧＡＡＧＡＧＡＡＧＡＧＧＣＴＣＴＧＧＣＧＡＡＧＧＣＡＧＡＧＧＣＡＧＣＣＴＧＣＴＴＡＣＡＴＧＴＧＧＣＧＡＣＧＴＧＧＡＡＧＡＧＡＡＣＣＣＣＧＧＡＣＣＴＡＴＧＴＡＴＡＧＡＡＴＧＣＡＧＣＴＣＣＴＧＴＣＣＴＧＣＡＴＴＧＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＧＣＴＣＴＣＧＴＧＡＣＣＡＡＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＣＡＧＣＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＴＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＴＡＧＣＧＣＣＡＧＣＣＡＧＧＡＣＡＴＣＴＣＣＡＡＣＴＡＣＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＡＡＡＧＣＣＣＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＣＴＡＡＧＧＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＴＴＣＡＣＡＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＣＴＣＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＡＴＣＴＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴＡＣＡＧＣＡＣＣＧＴＧＣＣＴＴＧＧＡＣＡＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＡＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＣＧＧＡＣＴＧＴＧＧＣＣＧＣＴＣＣＴＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＴＣＣＡＣＣＴＡＧＣＧＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＣＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＣＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＡＧＡＡＧＣＣＡＡＧＧＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＡＧＴＧＧＡＣＡＡＴＧＣＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣＡＡＣＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡＧＣＧＴＧＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＴＣＣＡＡＧＧＡＴＡＧＣＡＣＣＴＡＴＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＧＡＧＣＡＡＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＧＣＡＣＡＡＡＧＴＧＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＧＡＣＣＣＡＣＣＡＧＧＧＣＣＴＴＴＣＴＡＧＣＣＣＴＧＴＧＡＣＣＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＣＧＧＧＧＣＧＡＡＴＧＴＴＡＡＧＡＧＣＴＣＧＣＴＧＡＴＣＡＧＣＣＴＣＧＡＣＴＧＴＧＣＣＴＴＣＴＡＧＴＴＧＣＣＡＧＣＣＡＴＣＴＧＴＴＧＴＴＴＧＣＣＣＣＴＣＣＣＣＣＧＴＧＣＣＴＴＣＣＴＴＧＡＣＣＣＴＧＧＡＡＧＧＴＧＣＣＡＣＴＣＣＣＡＣＴＧＴＣＣＴＴＴＣＣＴＡＡＴＡＡＡＡＴＧＡＧＧＡＡＡＴＴＧＣＡＴＣＧＣＡＴＴＧＴＣＴＧＡＧＴＡＧＧＴＧＴＣＡＴＴＣＴＡＴＴＣＴＧＧＧＧＧＧＴＧＧＧＧＴＧＧＧＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＧＧＧＡＧＧＡＴＴＧＧＧＡＡＧＡＣＡＡＴＡＧＣＡＧＧＣＡＴＧＣＴＧＧＧＧＡＴＧＣＧＧＴＧＧＧＣＴＣＴＡＴＧＧＡＡＧＣＴＴＧＡＡＴＴＣＡＧＣＴＧＡＣＧＴＧＣＣＴＣＧＧＡＣＣＧＣＣＴＡＧＧＡＧＧＡＡＣＣＣＣＴＡＧＴＧＡＴＧＧＡＧＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＧＧＣＧＡＣＣＡＡＡＧＧＴＣＧＣＣＣＧＡＣＧＣＣＣＧＧＧＣＴＴＴＧＣＣＣＧＧＧＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡ
例示的なｒＡＡＶ－ラニビズマブ－ＧＦＰ構築物配列（配列番号１０６）
ＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣＣＧＧＧＣＧＴＣＧＧＧＣＧＡＣＣＴＴＴＧＧＴＣＧＣＣＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＴＡＧＧＧＧＴＴＣＣＴＧＣＧＧＣＣＧＣＡＣＧＣＧＴＧＡＣＡＴＴＧＡＴＴＡＴＴＧＡＣＴＡＧＴＴＡＴＴＡＡＴＡＧＴＡＡＴＣＡＡＴＴＡＣＧＧＧＧＴＣＡＴＴＡＧＴＴＣＡＴＡＧＣＣＣＡＴＡＴＡＴＧＧＡＧＴＴＣＣＧＣＧＴＴＡＣＡＴＡＡＣＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＴＧＡＣＣＧＣＣＣＡＡＣＧＡＣＣＣＣＣＧＣＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＡＡＴＧＡＣＧＴＡＴＧＴＴＣＣＣＡＴＡＧＴＡＡＣＧＣＣＡＡＴＡＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＧＴＧＧＡＣＴＡＴＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＣＴＧＣＣＣＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＴＡＴＣＡＴＡＴＧＣＣＡＡＧＴＡＣＧＣＣＣＣＣＴＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＡＴＴＡＴＧＣＣＣＡＧＴＡＣＡＴＧＡＣＣＴＴＡＴＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＴＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＴＡＣＧＴＡＴＴＡＧＴＣＡＴＣＧＣＴＡＴＴＡＣＣＡＴＧＧＧＴＣＧＡＧＧＴＧＡＧＣＣＣＣＡＣＧＴＴＣＴＧＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＣＣＣＡＴＣＴＣＣＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＣＣＣＣＡＡＴＴＴＴＧＴＡＴＴＴＡＴＴＴＡＴＴＴＴＴＴＡＡＴＴＡＴＴＴＴＧＴＧＣＡＧＣＧＡＴＧＧＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＡＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＡＧＡＧＧＴＧＣＧＧＣＧＧＣＡＧＣＣＡＡＴＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＧＣＴＣＣＧＡＡＡＧＴＴＴＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＴＡＴＡＡＡＡＡＧＣＧＡＡＧＣＧＣＧＣＧＧＣＧＧＧＣＧＧＧＡＧＴＣＧＣＴＧＣＧＴＴＧＣＣＴＴＣＧＣＣＣＣＧＴＧＣＣＣＣＧＣＴＣＣＧＣＧＣＣＧＣＣＴＣＧＣＧＣＣＧＣＣＣＧＣＣＣＣＧＧＣＴＣＴＧＡＣＴＧＡＣＣＧＣＧＴＴＡＣＴＣＣＣＡＣＡＧＧＴＧＡＧＣＧＧＧＣＧＧＧＡＣＧＧＣＣＣＴＴＣＴＣＣＴＣＣＧＧＧＣＴＧＴＡＡＴＴＡＧＣＧＣＴＴＧＧＴＴＴＡＡＴＧＡＣＧＧＣＴＣＧＴＴＴＣＴＴＴＴＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＧＴＧＡＡＡＧＣＣＴＴＡＡＡＧＧＧＣＴＣＣＧＧＧＡＧＧＧＣＣＣＴＴＴＧＴＧＣＧＧＧＧＧＧＧＡＧＣＧＧＣＴＣＧＧＧＧＧＧＴＧＣＧＴＧＣＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＧＧＡＧＣＧＣＣＧＣＧＴＧＣＧＧＣＣＣＧＣＧＣＴＧＣＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧＴＧＡＧＣＧＣＴＧＣＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＴＴＴＧＴＧＣＧＣＴＣＣＧＣＧＴＧＴＧＣＧＣＧＡＧＧＧＧＡＧＣＧＣＧＧＣＣＧＧＧＧＧＣＧＧＴＧＣＣＣＣＧＣＧＧＴＧＣＧＧＧＧＧＧＧＣＴＧＣＧＡＧＧＧＧＡＡＣＡＡＡＧＧＣＴＧＣＧＴＧＣＧＧＧＧＴＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＧＧＧＧＧＴＧＡＧＣＡＧＧＧＧＧＴＧＴＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＧＴＣＧＧＧＣＴＧＴＡＡＣＣＣＣＣＣＣＣＴＧＣＡＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＧＡＧＴＴＧＣＴＧＡＧＣＡＣＧＧＣＣＣＧＧＣＴＴＣＧＧＧＴＧＣＧＧＧＧＣＴＣＣＧＴＧＣＧＧＧＧＣＧＴＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＴＣＧＣＣＧＴＧＣＣＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＴＧＧＣＧＧＣＡＧＧＴＧＧＧＧＧＴＧＣＣＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＣＧＣＣＴＣＧＧＧＣＣＧＧＧＧＡＧＧＧＣＴＣＧＧＧＧＧＡＧＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＣＣＧＧＡＧＣＧＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧＴＣＧＡＧＧＣＧＣＧＧＣＧＡＧＣＣＧＣＡＧＣＣＡＴＴＧＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＴＡＡＴＣＧＴＧＣＧＡＧＡＧＧＧＣＧＣＡＧＧＧＡＣＴＴＣＣＴＴＴＧＴＣＣＣＡＡＡＴＣＴＧＴＧＣＧＧＡＧＣＣＧＡＡＡＴＣＴＧＧＧＡＧＧＣＧＣＣＧＣＣＧＣＡＣＣＣＣＣＴＣＴＡＧＣＧＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＧＡＡＧＣＧＧＴＧＣＧＧＣＧＣＣＧＧＣＡＧＧＡＡＧＧＡＡＡＴＧＧＧＣＧＧＧＧＡＧＧＧＣＣＴＴＣＧＴＧＣＧＴＣＧＣＣＧＣＧＣＣＧＣＣＧＴＣＣＣＣＴＴＣＴＣＣＣＴＣＴＣＣＡＧＣＣＴＣＧＧＧＧＣＴＧＴＣＣＧＣＧＧＧＧＧＧＡＣＧＧＣＴＧＣＣＴＴＣＧＧＧＧＧＧＧＡＣＧＧＧＧＣＡＧＧＧＣＧＧＧＧＴＴＣＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＧＴＧＴＧＡＣＣＧＧＣＧＧＣＴＣＴＡＧＡＧＣＣＴＣＴＧＣＴＡＡＣＣＡＴＧＴＴＣＡＴＧＣＣＴＴＣＴＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＡＣＡＧＣＴＣＣＴＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＣＴＧＧＴＴＡＴＴＧＴＧＡＣＣＧＧＴＧＣＣＡＣＣＡＴＧＴＡＣＣＧＧＡＴＧＣＡＧＣＴＧＣＴＧＡＧＣＴＧＴＡＴＣＧＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＡＡＴＴＣＴＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＣＴＴＧＴＴＣＡＡＣＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＧＡＧＣＴＧＴＧＣＣＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＡＣＴＡＣＧＧＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＣＡＡＡＧＧＣＣＴＴＧＡＡＴＧＧＧＴＣＧＧＡＴＧＧＡＴＣＡＡＣＡＣＣＴＡＣＡＣＣＧＧＣＧＡＧＣＣＡＡＣＡＴＡＣＧＣＣＧＣＣＧＡＣＴＴＣＡＡＧＣＧＧＡＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＣＣＴＧＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＡＧＴＡＴＣＣＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＣＡＣＣＡＧＣＣＡＣＴＧＧＴＡＣＴＴＴＧＡＣＧＴＧＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＣＡＣＡＣＴＧＧＴＣＡＣＡＧＴＧＴＣＴＡＧＣＧＣＣＴＣＴＡＣＡＡＡＧＧＧＣＣＣＣＡＧＣＧＴＴＴＴＣＣＣＡＣＴＧＧＣＴＣＣＴＡＧＣＡＧＣＡＡＧＴＣＴＡＣＣＡＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＡＧＣＣＧＣＴＣＴＧＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＴＣＣＣＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＣＧＴＧＴＣＣＴＧＧＡＡＴＴＣＴＧＧＣＧＣＴＣＴＧＡＣＡＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＴＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＡＡＧＣＡＧＣＧＧＣＣＴＧＴＡＣＴＣＴＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧＴＣＧＴＧＡＣＡＧＴＧＣＣＡＡＧＣＡＧＣＴＣＴＣＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＴＧＴＧＡＡＣＣＡＣＡＡＧＣＣＴＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＧＧＴＧＧＡＡＣＣＣＡＡＧＡＧＣＴＧＣＧＡＣＡＡＧＡＣＣＣＡＣＡＣＣＧＧＣＡＡＧＣＧＧＡＡＧＡＧＡＡＧＡＧＧＣＴＣＴＧＧＣＧＡＡＧＧＣＡＧＡＧＧＣＡＧＣＣＴＧＣＴＴＡＣＡＴＧＴＧＧＣＧＡＣＧＴＧＧＡＡＧＡＧＡＡＣＣＣＣＧＧＡＣＣＴＡＴＧＴＡＴＡＧＡＡＴＧＣＡＧＣＴＣＣＴＧＴＣＣＴＧＣＡＴＴＧＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＧＣＴＣＴＣＧＴＧＡＣＣＡＡＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＣＡＧＣＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＴＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＴＡＧＣＧＣＣＡＧＣＣＡＧＧＡＣＡＴＣＴＣＣＡＡＣＴＡＣＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＡＡＡＧＣＣＣＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＣＴＡＡＧＧＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＴＴＣＡＣＡＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＣＴＣＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＡＴＣＴＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴＡＣＡＧＣＡＣＣＧＴＧＣＣＴＴＧＧＡＣＡＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＡＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＣＧＧＡＣＴＧＴＧＧＣＣＧＣＴＣＣＴＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＴＣＣＡＣＣＴＡＧＣＧＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＣＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＣＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＡＧＡＡＧＣＣＡＡＧＧＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＡＧＴＧＧＡＣＡＡＴＧＣＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣＡＡＣＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡＧＣＧＴＧＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＴＣＣＡＡＧＧＡＴＡＧＣＡＣＣＴＡＴＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＧＡＧＣＡＡＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＧＣＡＣＡＡＡＧＴＧＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＧＡＣＣＣＡＣＣＡＧＧＧＣＣＴＴＴＣＴＡＧＣＣＣＴＧＴＧＡＣＣＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＣＧＧＧＧＣＧＡＡＴＧＴＡＴＧＧＴＧＡＧＣＡＡＧＧＧＣＧＡＧＧＡＧＣＴＧＴＴＣＡＣＣＧＧＧＧＴＧＧＴＧＣＣＣＡＴＣＣＴＧＧＴＣＧＡＧＣＴＧＧＡＣＧＧＣＧＡＣＧＴＡＡＡＣＧＧＣＣＡＣＡＡＧＴＴＣＡＧＣＧＴＧＴＣＣＧＧＣＧＡＧＧＧＣＧＡＧＧＧＣＧＡＴＧＣＣＡＣＣＴＡＣＧＧＣＡＡＧＣＴＧＡＣＣＣＴＧＡＡＧＴＴＣＡＴＣＴＧＣＡＣＣＡＣＣＧＧＣＡＡＧＣＴＧＣＣＣＧＴＧＣＣＣＴＧＧＣＣＣＡＣＣＣＴＣＧＴＧＡＣＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＴＡＣＧＧＣＧＴＧＣＡＧＴＧＣＴＴＣＡＧＣＣＧＣＴＡＣＣＣＣＧＡＣＣＡＣＡＴＧＡＡＧＣＡＧＣＡＣＧＡＣＴＴＣＴＴＣＡＡＧＴＣＣＧＣＣＡＴＧＣＣＣＧＡＡＧＧＣＴＡＣＧＴＣＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＣＣＡＴＣＴＴＣＴＴＣＡＡＧＧＡＣＧＡＣＧＧＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＣＧＣＧＣＣＧＡＧＧＴＧＡＡＧＴＴＣＧＡＧＧＧＣＧＡＣＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＡＣＣＧＣＡＴＣＧＡＧＣＴＧＡＡＧＧＧＣＡＴＣＧＡＣＴＴＣＡＡＧＧＡＧＧＡＣＧＧＣＡＡＣＡＴＣＣＴＧＧＧＧＣＡＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＴＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＣＡＧＣＣＡＣＡＡＣＧＴＣＴＡＴＡＴＣＡＴＧＧＣＣＧＡＣＡＡＧＣＡＧＡＡＧＡＡＣＧＧＣＡＴＣＡＡＧＧＴＧＡＡＣＴＴＣＡＡＧＡＴＣＣＧＣＣＡＣＡＡＣＡＴＣＧＡＧＧＡＣＧＧＣＡＧＣＧＴＧＣＡＧＣＴＣＧＣＣＧＡＣＣＡＣＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＣＡＣＣＣＣＣＡＴＣＧＧＣＧＡＣＧＧＣＣＣＣＧＴＧＣＴＧＣＴＧＣＣＣＧＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＣＴＧＡＧＣＡＣＣＣＡＧＴＣＣＧＣＣＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＡＣＣＣＣＡＡＣＧＡＧＡＡＧＣＧＣＧＡＴＣＡＣＡＴＧＧＴＣＣＴＧＣＴＧＧＡＧＴＴＣＧＴＧＡＣＣＧＣＣＧＣＣＧＧＧＡＴＣＡＣＴＣＴＣＧＧＣＡＴＧＧＡＣＧＡＧＣＴＧＴＡＣＡＡＧＴＡＡＧＡＧＣＴＣＧＣＴＧＡＴＣＡＧＣＣＴＣＧＡＣＴＧＴＧＣＣＴＴＣＴＡＧＴＴＧＣＣＡＧＣＣＡＴＣＴＧＴＴＧＴＴＴＧＣＣＣＣＴＣＣＣＣＣＧＴＧＣＣＴＴＣＣＴＴＧＡＣＣＣＴＧＧＡＡＧＧＴＧＣＣＡＣＴＣＣＣＡＣＴＧＴＣＣＴＴＴＣＣＴＡＡＴＡＡＡＡＴＧＡＧＧＡＡＡＴＴＧＣＡＴＣＧＣＡＴＴＧＴＣＴＧＡＧＴＡＧＧＴＧＴＣＡＴＴＣＴＡＴＴＣＴＧＧＧＧＧＧＴＧＧＧＧＴＧＧＧＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＧＧＧＡＧＧＡＴＴＧＧＧＡＡＧＡＣＡＡＴＡＧＣＡＧＧＣＡＴＧＣＴＧＧＧＧＡＴＧＣＧＧＴＧＧＧＣＴＣＴＡＴＧＧＡＡＧＣＴＴＧＡＡＴＴＣＡＧＣＴＧＡＣＧＴＧＣＣＴＣＧＧＡＣＣＧＣＴＡＧＧＡＡＣＣＣＣＴＡＧＴＧＡＴＧＧＡＧＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＧＧＣＧＡＣＣＡＡＡＧＧＴＣＧＣＣＣＧＡＣＧＣＣＣＧＧＧＣＴＴＴＧＣＣＣＧＧＧＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧ
例示的なｒＡＡＶ－ベバシズマブ－ＰＣ構築物配列（配列番号９３）
ＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣＣＧＧＧＣＧＴＣＧＧＧＣＧＡＣＣＴＴＴＧＧＴＣＧＣＣＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＴＡＧＧＧＧＴＴＣＣＴＧＣＧＧＣＣＧＣＡＣＧＣＧＴＧＡＣＡＴＴＧＡＴＴＡＴＴＧＡＣＴＡＧＴＴＡＴＴＡＡＴＡＧＴＡＡＴＣＡＡＴＴＡＣＧＧＧＧＴＣＡＴＴＡＧＴＴＣＡＴＡＧＣＣＣＡＴＡＴＡＴＧＧＡＧＴＴＣＣＧＣＧＴＴＡＣＡＴＡＡＣＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＴＧＡＣＣＧＣＣＣＡＡＣＧＡＣＣＣＣＣＧＣＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＡＡＴＧＡＣＧＴＡＴＧＴＴＣＣＣＡＴＡＧＴＡＡＣＧＣＣＡＡＴＡＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＧＴＧＧＡＣＴＡＴＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＣＴＧＣＣＣＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＴＡＴＣＡＴＡＴＧＣＣＡＡＧＴＡＣＧＣＣＣＣＣＴＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＡＴＴＡＴＧＣＣＣＡＧＴＡＣＡＴＧＡＣＣＴＴＡＴＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＴＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＴＡＣＧＴＡＴＴＡＧＴＣＡＴＣＧＣＴＡＴＴＡＣＣＡＴＧＧＧＴＣＧＡＧＧＴＧＡＧＣＣＣＣＡＣＧＴＴＣＴＧＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＣＣＣＡＴＣＴＣＣＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＣＣＣＣＡＡＴＴＴＴＧＴＡＴＴＴＡＴＴＴＡＴＴＴＴＴＴＡＡＴＴＡＴＴＴＴＧＴＧＣＡＧＣＧＡＴＧＧＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＡＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＡＧＡＧＧＴＧＣＧＧＣＧＧＣＡＧＣＣＡＡＴＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＧＣＴＣＣＧＡＡＡＧＴＴＴＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＴＡＴＡＡＡＡＡＧＣＧＡＡＧＣＧＣＧＣＧＧＣＧＧＧＣＧＧＧＡＧＴＣＧＣＴＧＣＧＴＴＧＣＣＴＴＣＧＣＣＣＣＧＴＧＣＣＣＣＧＣＴＣＣＧＣＧＣＣＧＣＣＴＣＧＣＧＣＣＧＣＣＣＧＣＣＣＣＧＧＣＴＣＴＧＡＣＴＧＡＣＣＧＣＧＴＴＡＣＴＣＣＣＡＣＡＧＧＴＧＡＧＣＧＧＧＣＧＧＧＡＣＧＧＣＣＣＴＴＣＴＣＣＴＣＣＧＧＧＣＴＧＴＡＡＴＴＡＧＣＧＣＴＴＧＧＴＴＴＡＡＴＧＡＣＧＧＣＴＣＧＴＴＴＣＴＴＴＴＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＧＴＧＡＡＡＧＣＣＴＴＡＡＡＧＧＧＣＴＣＣＧＧＧＡＧＧＧＣＣＣＴＴＴＧＴＧＣＧＧＧＧＧＧＧＡＧＣＧＧＣＴＣＧＧＧＧＧＧＴＧＣＧＴＧＣＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＧＧＡＧＣＧＣＣＧＣＧＴＧＣＧＧＣＣＣＧＣＧＣＴＧＣＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧＴＧＡＧＣＧＣＴＧＣＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＴＴＴＧＴＧＣＧＣＴＣＣＧＣＧＴＧＴＧＣＧＣＧＡＧＧＧＧＡＧＣＧＣＧＧＣＣＧＧＧＧＧＣＧＧＴＧＣＣＣＣＧＣＧＧＴＧＣＧＧＧＧＧＧＧＣＴＧＣＧＡＧＧＧＧＡＡＣＡＡＡＧＧＣＴＧＣＧＴＧＣＧＧＧＧＴＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＧＧＧＧＧＴＧＡＧＣＡＧＧＧＧＧＴＧＴＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＧＴＣＧＧＧＣＴＧＴＡＡＣＣＣＣＣＣＣＣＴＧＣＡＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＧＡＧＴＴＧＣＴＧＡＧＣＡＣＧＧＣＣＣＧＧＣＴＴＣＧＧＧＴＧＣＧＧＧＧＣＴＣＣＧＴＧＣＧＧＧＧＣＧＴＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＴＣＧＣＣＧＴＧＣＣＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＴＧＧＣＧＧＣＡＧＧＴＧＧＧＧＧＴＧＣＣＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＣＧＣＣＴＣＧＧＧＣＣＧＧＧＧＡＧＧＧＣＴＣＧＧＧＧＧＡＧＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＣＣＧＧＡＧＣＧＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧＴＣＧＡＧＧＣＧＣＧＧＣＧＡＧＣＣＧＣＡＧＣＣＡＴＴＧＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＴＡＡＴＣＧＴＧＣＧＡＧＡＧＧＧＣＧＣＡＧＧＧＡＣＴＴＣＣＴＴＴＧＴＣＣＣＡＡＡＴＣＴＧＴＧＣＧＧＡＧＣＣＧＡＡＡＴＣＴＧＧＧＡＧＧＣＧＣＣＧＣＣＧＣＡＣＣＣＣＣＴＣＴＡＧＣＧＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＧＡＡＧＣＧＧＴＧＣＧＧＣＧＣＣＧＧＣＡＧＧＡＡＧＧＡＡＡＴＧＧＧＣＧＧＧＧＡＧＧＧＣＣＴＴＣＧＴＧＣＧＴＣＧＣＣＧＣＧＣＣＧＣＣＧＴＣＣＣＣＴＴＣＴＣＣＣＴＣＴＣＣＡＧＣＣＴＣＧＧＧＧＣＴＧＴＣＣＧＣＧＧＧＧＧＧＡＣＧＧＣＴＧＣＣＴＴＣＧＧＧＧＧＧＧＡＣＧＧＧＧＣＡＧＧＧＣＧＧＧＧＴＴＣＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＧＴＧＴＧＡＣＣＧＧＣＧＧＣＴＣＴＡＧＡＧＣＣＴＣＴＧＣＴＡＡＣＣＡＴＧＴＴＣＡＴＧＣＣＴＴＣＴＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＡＣＡＧＣＴＣＣＴＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＣＴＧＧＴＴＡＴＴＧＴＧＡＣＣＧＧＴＧＣＣＡＣＣＡＴＧＴＡＣＣＧＧＡＴＧＣＡＧＣＴＧＣＴＧＡＧＣＴＧＴＡＴＣＧＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＡＡＴＴＣＴＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＣＴＴＧＴＴＣＡＡＣＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＧＡＧＣＴＧＴＧＣＣＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＡＡＣＴＡＣＧＧＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＣＡＡＡＧＧＣＣＴＴＧＡＡＴＧＧＧＴＣＧＧＡＴＧＧＡＴＣＡＡＣＡＣＣＴＡＣＡＣＣＧＧＣＧＡＧＣＣＡＡＣＡＴＡＣＧＣＣＧＣＣＧＡＣＴＴＣＡＡＧＣＧＧＡＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＣＣＴＧＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＡＧＴＡＴＣＣＣＣＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＣＡＧＣＡＧＣＣＡＣＴＧＧＴＡＣＴＴＴＧＡＣＧＴＧＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＣＡＣＡＣＴＧＧＴＣＡＣＡＧＴＧＴＣＴＡＧＣＧＣＣＴＣＴＡＣＡＡＡＧＧＧＣＣＣＣＡＧＣＧＴＴＴＴＣＣＣＡＣＴＧＧＣＴＣＣＴＡＧＣＡＧＣＡＡＧＴＣＴＡＣＣＡＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＡＧＣＣＧＣＴＣＴＧＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＴＣＣＣＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＣＧＴＧＴＣＣＴＧＧＡＡＴＴＣＴＧＧＣＧＣＴＣＴＧＡＣＡＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＴＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＡＡＧＣＡＧＣＧＧＣＣＴＧＴＡＣＴＣＴＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧＴＣＧＴＧＡＣＡＧＴＧＣＣＡＡＧＣＡＧＣＴＣＴＣＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＴＧＴＧＡＡＣＣＡＣＡＡＧＣＣＴＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＧＧＴＧＧＡＡＣＣＣＡＡＧＡＧＣＴＧＣＧＡＣＡＡＧＡＣＣＣＡＣＡＣＣＴＧＴＣＣＴＣＣＡＴＧＴＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＡＡＣＴＧＣＴＣＧＧＣＧＧＡＣＣＴＴＣＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＴＣＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＴＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＣＣＣＣＴＧＡＡＧＴＧＡＣＣＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＧＴＧＴＣＣＣＡＣＧＡＧＧＡＴＣＣＣＧＡＡＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＡＴＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＡＧＴＧＣＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＣＣＡＡＧＣＣＴＡＧＡＧＡＧＧＡＡＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＡＧＴＧＧＴＧＴＣＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＡＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣＡＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＴＧＣＴＣＣＴＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＴＡＧＧＧＡＡＣＣＣＣＡＧＧＴＴＴＡＣＡＣＡＣＴＧＣＣＴＣＣＡＡＧＣＣＧＧＧＡＡＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＴＴＣＣＧＡＴＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＡＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＣＣＡＧＣＣＡＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＡＡＣＣＣＣＴＣＣＴＧＴＧＣＴＧＧＡＣＡＧＣＧＡＣＧＧＣＴＣＡＴＴＣＴＴＣＣＴＧＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＣＡＡＧＴＣＣＡＧＡＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＴＴＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＣＣＡＧＡＡＧＴＣＴＣＴＧＡＧＣＣＴＧＴＣＴＣＣＴＧＧＣＡＡＧＣＧＧＡＡＧＡＧＡＡＧＡＧＧＣＴＣＴＧＧＣＧＡＡＧＧＣＡＧＡＧＧＣＡＧＣＣＴＧＣＴＴＡＣＡＴＧＴＧＧＣＧＡＣＧＴＧＧＡＡＧＡＧＡＡＣＣＣＣＧＧＡＣＣＴＡＴＧＴＡＴＡＧＡＡＴＧＣＡＧＣＴＣＣＴＧＴＣＣＴＧＣＡＴＴＧＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＧＣＴＣＴＣＧＴＧＡＣＣＡＡＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＴＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＴＡＧＣＧＣＣＡＧＣＣＡＧＧＡＣＡＴＣＴＣＣＡＡＣＴＡＣＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＡＡＡＧＣＣＣＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＣＴＡＡＧＧＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＴＴＣＡＣＡＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＣＴＣＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＡＴＣＴＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴＡＣＡＧＣＡＣＣＧＴＧＣＣＴＴＧＧＡＣＡＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＡＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＣＧＧＡＣＴＧＴＧＧＣＣＧＣＴＣＣＴＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＴＣＣＡＣＣＴＡＧＣＧＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＣＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＣＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＡＧＡＡＧＣＣＡＡＧＧＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＡＧＴＧＧＡＣＡＡＴＧＣＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣＡＡＣＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡＧＣＧＴＧＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＴＣＣＡＡＧＧＡＴＡＧＣＡＣＣＴＡＴＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＧＡＧＣＡＡＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＧＣＡＣＡＡＡＧＴＧＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＧＡＣＣＣＡＣＣＡＧＧＧＣＣＴＴＴＣＴＡＧＣＣＣＴＧＴＧＡＣＣＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＣＧＧＧＧＣＧＡＡＴＧＴＴＡＡＧＡＧＣＴＣＧＣＴＧＡＴＣＡＧＣＣＴＣＧＡＣＴＧＴＧＣＣＴＴＣＴＡＧＴＴＧＣＣＡＧＣＣＡＴＣＴＧＴＴＧＴＴＴＧＣＣＣＣＴＣＣＣＣＣＧＴＧＣＣＴＴＣＣＴＴＧＡＣＣＣＴＧＧＡＡＧＧＴＧＣＣＡＣＴＣＣＣＡＣＴＧＴＣＣＴＴＴＣＣＴＡＡＴＡＡＡＡＴＧＡＧＧＡＡＡＴＴＧＣＡＴＣＧＣＡＴＴＧＴＣＴＧＡＧＴＡＧＧＴＧＴＣＡＴＴＣＴＡＴＴＣＴＧＧＧＧＧＧＴＧＧＧＧＴＧＧＧＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＧＧＧＡＧＧＡＴＴＧＧＧＡＡＧＡＣＡＡＴＡＧＣＡＧＧＣＡＴＧＣＴＧＧＧＧＡＴＧＣＧＧＴＧＧＧＣＴＣＴＡＴＧＧＡＡＧＣＴＴＧＡＡＴＴＣＡＧＣＴＧＡＣＧＴＧＣＣＴＣＧＧＡＣＣＧＣＴＡＧＧＡＡＣＣＣＣＴＡＧＴＧＡＴＧＧＡＧＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＧＧＣＧＡＣＣＡＡＡＧＧＴＣＧＣＣＣＧＡＣＧＣＣＣＧＧＧＣＴＴＴＧＣＣＣＧＧＧＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧ
例示的なｒＡＡＶ－ベバシズマブ構築物配列（配列番号９４）
ＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣＣＧＧＧＣＡＡＡＧＣＣＣＧＧＧＣＧＴＣＧＧＧＣＧＡＣＣＴＴＴＧＧＴＣＧＣＣＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＴＡＧＧＧＧＴＴＣＣＴＴＴＧＴＣＧＡＣＧＣＧＧＣＣＧＣＡＣＧＣＧＴＧＡＣＡＴＴＧＡＴＴＡＴＴＧＡＣＴＡＧＴＴＡＴＴＡＡＴＡＧＴＡＡＴＣＡＡＴＴＡＣＧＧＧＧＴＣＡＴＴＡＧＴＴＣＡＴＡＧＣＣＣＡＴＡＴＡＴＧＧＡＧＴＴＣＣＧＣＧＴＴＡＣＡＴＡＡＣＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＴＧＡＣＣＧＣＣＣＡＡＣＧＡＣＣＣＣＣＧＣＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＡＡＴＧＡＣＧＴＡＴＧＴＴＣＣＣＡＴＡＧＴＡＡＣＧＣＣＡＡＴＡＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＧＴＧＧＡＣＴＡＴＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＣＴＧＣＣＣＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＴＡＴＣＡＴＡＴＧＣＣＡＡＧＴＡＣＧＣＣＣＣＣＴＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＡＴＴＡＴＧＣＣＣＡＧＴＡＣＡＴＧＡＣＣＴＴＡＴＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＴＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＴＡＣＧＴＡＴＴＡＧＴＣＡＴＣＧＣＴＡＴＴＡＣＣＡＴＧＧＧＴＣＧＡＧＧＴＧＡＧＣＣＣＣＡＣＧＴＴＣＴＧＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＣＣＣＡＴＣＴＣＣＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＣＣＣＣＡＡＴＴＴＴＧＴＡＴＴＴＡＴＴＴＡＴＴＴＴＴＴＡＡＴＴＡＴＴＴＴＧＴＧＣＡＧＣＧＡＴＧＧＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＡＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＡＧＡＧＧＴＧＣＧＧＣＧＧＣＡＧＣＣＡＡＴＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＧＣＴＣＣＧＡＡＡＧＴＴＴＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＴＡＴＡＡＡＡＡＧＣＧＡＡＧＣＧＣＧＣＧＧＣＧＧＧＣＧＧＧＡＧＴＣＧＣＴＧＣＧＴＴＧＣＣＴＴＣＧＣＣＣＣＧＴＧＣＣＣＣＧＣＴＣＣＧＣＧＣＣＧＣＣＴＣＧＣＧＣＣＧＣＣＣＧＣＣＣＣＧＧＣＴＣＴＧＡＣＴＧＡＣＣＧＣＧＴＴＡＣＴＣＣＣＡＣＡＧＧＴＧＡＧＣＧＧＧＣＧＧＧＡＣＧＧＣＣＣＴＴＣＴＣＣＴＣＣＧＧＧＣＴＧＴＡＡＴＴＡＧＣＧＣＴＴＧＧＴＴＴＡＡＴＧＡＣＧＧＣＴＣＧＴＴＴＣＴＴＴＴＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＧＴＧＡＡＡＧＣＣＴＴＡＡＡＧＧＧＣＴＣＣＧＧＧＡＧＧＧＣＣＣＴＴＴＧＴＧＣＧＧＧＧＧＧＧＡＧＣＧＧＣＴＣＧＧＧＧＧＧＴＧＣＧＴＧＣＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＧＧＡＧＣＧＣＣＧＣＧＴＧＣＧＧＣＣＣＧＣＧＣＴＧＣＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧＴＧＡＧＣＧＣＴＧＣＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＴＴＴＧＴＧＣＧＣＴＣＣＧＣＧＴＧＴＧＣＧＣＧＡＧＧＧＧＡＧＣＧＣＧＧＣＣＧＧＧＧＧＣＧＧＴＧＣＣＣＣＧＣＧＧＴＧＣＧＧＧＧＧＧＧＣＴＧＣＧＡＧＧＧＧＡＡＣＡＡＡＧＧＣＴＧＣＧＴＧＣＧＧＧＧＴＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＧＧＧＧＧＴＧＡＧＣＡＧＧＧＧＧＴＧＴＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＧＴＣＧＧＧＣＴＧＴＡＡＣＣＣＣＣＣＣＣＴＧＣＡＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＧＡＧＴＴＧＣＴＧＡＧＣＡＣＧＧＣＣＣＧＧＣＴＴＣＧＧＧＴＧＣＧＧＧＧＣＴＣＣＧＴＧＣＧＧＧＧＣＧＴＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＴＣＧＣＣＧＴＧＣＣＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＴＧＧＣＧＧＣＡＧＧＴＧＧＧＧＧＴＧＣＣＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＣＧＣＣＴＣＧＧＧＣＣＧＧＧＧＡＧＧＧＣＴＣＧＧＧＧＧＡＧＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＣＣＧＧＡＧＣＧＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧＴＣＧＡＧＧＣＧＣＧＧＣＧＡＧＣＣＧＣＡＧＣＣＡＴＴＧＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＴＡＡＴＣＧＴＧＣＧＡＧＡＧＧＧＣＧＣＡＧＧＧＡＣＴＴＣＣＴＴＴＧＴＣＣＣＡＡＡＴＣＴＧＴＧＣＧＧＡＧＣＣＧＡＡＡＴＣＴＧＧＧＡＧＧＣＧＣＣＧＣＣＧＣＡＣＣＣＣＣＴＣＴＡＧＣＧＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＧＡＡＧＣＧＧＴＧＣＧＧＣＧＣＣＧＧＣＡＧＧＡＡＧＧＡＡＡＴＧＧＧＣＧＧＧＧＡＧＧＧＣＣＴＴＣＧＴＧＣＧＴＣＧＣＣＧＣＧＣＣＧＣＣＧＴＣＣＣＣＴＴＣＴＣＣＣＴＣＴＣＣＡＧＣＣＴＣＧＧＧＧＣＴＧＴＣＣＧＣＧＧＧＧＧＧＡＣＧＧＣＴＧＣＣＴＴＣＧＧＧＧＧＧＧＡＣＧＧＧＧＣＡＧＧＧＣＧＧＧＧＴＴＣＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＧＴＧＴＧＡＣＣＧＧＣＧＧＣＴＣＴＡＧＡＧＣＣＴＣＴＧＣＴＡＡＣＣＡＴＧＴＴＣＡＴＧＣＣＴＴＣＴＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＡＣＡＧＣＴＣＣＴＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＣＴＧＧＴＴＡＴＴＧＴＧＡＣＣＧＧＴＧＣＣＡＣＣＡＴＧＴＡＣＣＧＧＡＴＧＣＡＧＣＴＧＣＴＧＡＧＣＴＧＴＡＴＣＧＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＡＡＴＴＣＴＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＣＴＴＧＴＴＣＡＡＣＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＧＡＧＣＴＧＴＧＣＣＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＡＡＣＴＡＣＧＧＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＣＡＡＡＧＧＣＣＴＴＧＡＡＴＧＧＧＴＣＧＧＡＴＧＧＡＴＣＡＡＣＡＣＣＴＡＣＡＣＣＧＧＣＧＡＧＣＣＡＡＣＡＴＡＣＧＣＣＧＣＣＧＡＣＴＴＣＡＡＧＣＧＧＡＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＣＣＴＧＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＡＧＴＡＴＣＣＣＣＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＣＡＧＣＡＧＣＣＡＣＴＧＧＴＡＣＴＴＴＧＡＣＧＴＧＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＣＡＣＡＣＴＧＧＴＣＡＣＡＧＴＧＴＣＴＡＧＣＧＣＣＴＣＴＡＣＡＡＡＧＧＧＣＣＣＣＡＧＣＧＴＴＴＴＣＣＣＡＣＴＧＧＣＴＣＣＴＡＧＣＡＧＣＡＡＧＴＣＴＡＣＣＡＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＡＧＣＣＧＣＴＣＴＧＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＴＣＣＣＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＣＧＴＧＴＣＣＴＧＧＡＡＴＴＣＴＧＧＣＧＣＴＣＴＧＡＣＡＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＴＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＡＡＧＣＡＧＣＧＧＣＣＴＧＴＡＣＴＣＴＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧＴＣＧＴＧＡＣＡＧＴＧＣＣＡＡＧＣＡＧＣＴＣＴＣＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＴＧＴＧＡＡＣＣＡＣＡＡＧＣＣＴＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＧＧＴＧＧＡＡＣＣＣＡＡＧＡＧＣＴＧＣＧＡＣＡＡＧＡＣＣＣＡＣＡＣＣＴＧＴＣＣＴＣＣＡＴＧＴＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＡＡＣＴＧＣＴＣＧＧＣＧＧＡＣＣＴＴＣＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＴＣＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＴＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＣＣＣＣＴＧＡＡＧＴＧＡＣＣＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＧＴＧＴＣＣＣＡＣＧＡＧＧＡＴＣＣＣＧＡＡＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＡＴＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＡＧＴＧＣＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＣＣＡＡＧＣＣＴＡＧＡＧＡＧＧＡＡＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＡＧＴＧＧＴＧＴＣＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＡＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣＡＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＴＧＣＴＣＣＴＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＴＡＧＧＧＡＡＣＣＣＣＡＧＧＴＴＴＡＣＡＣＡＣＴＧＣＣＴＣＣＡＡＧＣＣＧＧＧＡＡＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＴＴＣＣＧＡＴＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＡＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＣＣＡＧＣＣＡＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＡＡＣＣＣＣＴＣＣＴＧＴＧＣＴＧＧＡＣＡＧＣＧＡＣＧＧＣＴＣＡＴＴＣＴＴＣＣＴＧＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＣＡＡＧＴＣＣＡＧＡＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＴＴＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＣＣＡＧＡＡＧＴＣＴＣＴＧＡＧＣＣＴＧＴＣＴＣＣＴＧＧＣＡＡＧＣＧＧＡＡＧＡＧＡＡＧＡＧＧＣＴＣＴＧＧＣＧＡＡＧＧＣＡＧＡＧＧＣＡＧＣＣＴＧＣＴＴＡＣＡＴＧＴＧＧＣＧＡＣＧＴＧＧＡＡＧＡＧＡＡＣＣＣＣＧＧＡＣＣＴＡＴＧＴＡＴＡＧＡＡＴＧＣＡＧＣＴＣＣＴＧＴＣＣＴＧＣＡＴＴＧＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＧＣＴＣＴＣＧＴＧＡＣＣＡＡＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＴＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＴＡＧＣＧＣＣＡＧＣＣＡＧＧＡＣＡＴＣＴＣＣＡＡＣＴＡＣＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＡＡＡＧＣＣＣＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＣＴＡＡＧＧＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＴＴＣＡＣＡＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＣＴＣＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＡＴＣＴＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴＡＣＡＧＣＡＣＣＧＴＧＣＣＴＴＧＧＡＣＡＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＡＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＣＧＧＡＣＴＧＴＧＧＣＣＧＣＴＣＣＴＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＴＣＣＡＣＣＴＡＧＣＧＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＣＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＣＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＡＧＡＡＧＣＣＡＡＧＧＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＡＧＴＧＧＡＣＡＡＴＧＣＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣＡＡＣＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡＧＣＧＴＧＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＴＣＣＡＡＧＧＡＴＡＧＣＡＣＣＴＡＴＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＧＡＧＣＡＡＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＧＣＡＣＡＡＡＧＴＧＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＧＡＣＣＣＡＣＣＡＧＧＧＣＣＴＴＴＣＴＡＧＣＣＣＴＧＴＧＡＣＣＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＣＧＧＧＧＣＧＡＡＴＧＴＴＡＡＧＡＧＣＴＣＧＣＴＧＡＴＣＡＧＣＣＴＣＧＡＣＴＧＴＧＣＣＴＴＣＴＡＧＴＴＧＣＣＡＧＣＣＡＴＣＴＧＴＴＧＴＴＴＧＣＣＣＣＴＣＣＣＣＣＧＴＧＣＣＴＴＣＣＴＴＧＡＣＣＣＴＧＧＡＡＧＧＴＧＣＣＡＣＴＣＣＣＡＣＴＧＴＣＣＴＴＴＣＣＴＡＡＴＡＡＡＡＴＧＡＧＧＡＡＡＴＴＧＣＡＴＣＧＣＡＴＴＧＴＣＴＧＡＧＴＡＧＧＴＧＴＣＡＴＴＣＴＡＴＴＣＴＧＧＧＧＧＧＴＧＧＧＧＴＧＧＧＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＧＧＧＡＧＧＡＴＴＧＧＧＡＡＧＡＣＡＡＴＡＧＣＡＧＧＣＡＴＧＣＴＧＧＧＧＡＴＧＣＧＧＴＧＧＧＣＴＣＴＡＴＧＧＡＡＧＣＴＴＧＡＡＴＴＣＡＧＣＴＧＡＣＧＴＧＣＣＴＣＧＧＡＣＣＧＣＣＴＡＧＧＡＧＧＡＡＣＣＣＣＴＡＧＴＧＡＴＧＧＡＧＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＧＧＣＧＡＣＣＡＡＡＧＧＴＣＧＣＣＣＧＡＣＧＣＣＣＧＧＧＣＴＴＴＧＣＣＣＧＧＧＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡ
例示的なｒＡＡＶ－ベバシズマブ－ＧＦＰ構築物配列（配列番号１０７）
ＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣＣＧＧＧＣＧＴＣＧＧＧＣＧＡＣＣＴＴＴＧＧＴＣＧＣＣＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＴＡＧＧＧＧＴＴＣＣＴＧＣＧＧＣＣＧＣＡＣＧＣＧＴＧＡＣＡＴＴＧＡＴＴＡＴＴＧＡＣＴＡＧＴＴＡＴＴＡＡＴＡＧＴＡＡＴＣＡＡＴＴＡＣＧＧＧＧＴＣＡＴＴＡＧＴＴＣＡＴＡＧＣＣＣＡＴＡＴＡＴＧＧＡＧＴＴＣＣＧＣＧＴＴＡＣＡＴＡＡＣＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＴＧＡＣＣＧＣＣＣＡＡＣＧＡＣＣＣＣＣＧＣＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＡＡＴＧＡＣＧＴＡＴＧＴＴＣＣＣＡＴＡＧＴＡＡＣＧＣＣＡＡＴＡＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＧＴＧＧＡＣＴＡＴＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＣＴＧＣＣＣＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＴＡＴＣＡＴＡＴＧＣＣＡＡＧＴＡＣＧＣＣＣＣＣＴＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＡＴＴＡＴＧＣＣＣＡＧＴＡＣＡＴＧＡＣＣＴＴＡＴＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＴＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＴＡＣＧＴＡＴＴＡＧＴＣＡＴＣＧＣＴＡＴＴＡＣＣＡＴＧＧＧＴＣＧＡＧＧＴＧＡＧＣＣＣＣＡＣＧＴＴＣＴＧＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＣＣＣＡＴＣＴＣＣＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＣＣＣＣＡＡＴＴＴＴＧＴＡＴＴＴＡＴＴＴＡＴＴＴＴＴＴＡＡＴＴＡＴＴＴＴＧＴＧＣＡＧＣＧＡＴＧＧＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＡＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＡＧＡＧＧＴＧＣＧＧＣＧＧＣＡＧＣＣＡＡＴＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＧＣＴＣＣＧＡＡＡＧＴＴＴＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＴＡＴＡＡＡＡＡＧＣＧＡＡＧＣＧＣＧＣＧＧＣＧＧＧＣＧＧＧＡＧＴＣＧＣＴＧＣＧＴＴＧＣＣＴＴＣＧＣＣＣＣＧＴＧＣＣＣＣＧＣＴＣＣＧＣＧＣＣＧＣＣＴＣＧＣＧＣＣＧＣＣＣＧＣＣＣＣＧＧＣＴＣＴＧＡＣＴＧＡＣＣＧＣＧＴＴＡＣＴＣＣＣＡＣＡＧＧＴＧＡＧＣＧＧＧＣＧＧＧＡＣＧＧＣＣＣＴＴＣＴＣＣＴＣＣＧＧＧＣＴＧＴＡＡＴＴＡＧＣＧＣＴＴＧＧＴＴＴＡＡＴＧＡＣＧＧＣＴＣＧＴＴＴＣＴＴＴＴＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＧＴＧＡＡＡＧＣＣＴＴＡＡＡＧＧＧＣＴＣＣＧＧＧＡＧＧＧＣＣＣＴＴＴＧＴＧＣＧＧＧＧＧＧＧＡＧＣＧＧＣＴＣＧＧＧＧＧＧＴＧＣＧＴＧＣＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＧＧＡＧＣＧＣＣＧＣＧＴＧＣＧＧＣＣＣＧＣＧＣＴＧＣＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧＴＧＡＧＣＧＣＴＧＣＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＴＴＴＧＴＧＣＧＣＴＣＣＧＣＧＴＧＴＧＣＧＣＧＡＧＧＧＧＡＧＣＧＣＧＧＣＣＧＧＧＧＧＣＧＧＴＧＣＣＣＣＧＣＧＧＴＧＣＧＧＧＧＧＧＧＣＴＧＣＧＡＧＧＧＧＡＡＣＡＡＡＧＧＣＴＧＣＧＴＧＣＧＧＧＧＴＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＧＧＧＧＧＴＧＡＧＣＡＧＧＧＧＧＴＧＴＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＧＴＣＧＧＧＣＴＧＴＡＡＣＣＣＣＣＣＣＣＴＧＣＡＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＧＡＧＴＴＧＣＴＧＡＧＣＡＣＧＧＣＣＣＧＧＣＴＴＣＧＧＧＴＧＣＧＧＧＧＣＴＣＣＧＴＧＣＧＧＧＧＣＧＴＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＴＣＧＣＣＧＴＧＣＣＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＴＧＧＣＧＧＣＡＧＧＴＧＧＧＧＧＴＧＣＣＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＣＧＣＣＴＣＧＧＧＣＣＧＧＧＧＡＧＧＧＣＴＣＧＧＧＧＧＡＧＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＣＣＧＧＡＧＣＧＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧＴＣＧＡＧＧＣＧＣＧＧＣＧＡＧＣＣＧＣＡＧＣＣＡＴＴＧＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＴＡＡＴＣＧＴＧＣＧＡＧＡＧＧＧＣＧＣＡＧＧＧＡＣＴＴＣＣＴＴＴＧＴＣＣＣＡＡＡＴＣＴＧＴＧＣＧＧＡＧＣＣＧＡＡＡＴＣＴＧＧＧＡＧＧＣＧＣＣＧＣＣＧＣＡＣＣＣＣＣＴＣＴＡＧＣＧＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＧＡＡＧＣＧＧＴＧＣＧＧＣＧＣＣＧＧＣＡＧＧＡＡＧＧＡＡＡＴＧＧＧＣＧＧＧＧＡＧＧＧＣＣＴＴＣＧＴＧＣＧＴＣＧＣＣＧＣＧＣＣＧＣＣＧＴＣＣＣＣＴＴＣＴＣＣＣＴＣＴＣＣＡＧＣＣＴＣＧＧＧＧＣＴＧＴＣＣＧＣＧＧＧＧＧＧＡＣＧＧＣＴＧＣＣＴＴＣＧＧＧＧＧＧＧＡＣＧＧＧＧＣＡＧＧＧＣＧＧＧＧＴＴＣＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＧＴＧＴＧＡＣＣＧＧＣＧＧＣＴＣＴＡＧＡＧＣＣＴＣＴＧＣＴＡＡＣＣＡＴＧＴＴＣＡＴＧＣＣＴＴＣＴＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＡＣＡＧＣＴＣＣＴＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＣＴＧＧＴＴＡＴＴＧＴＧＡＣＣＧＧＴＧＣＣＡＣＣＡＴＧＴＡＣＣＧＧＡＴＧＣＡＧＣＴＧＣＴＧＡＧＣＴＧＴＡＴＣＧＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＡＡＴＴＣＴＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＡＴＣＴＧＧＣＧＧＣＧＧＡＣＴＴＧＴＴＣＡＡＣＣＴＧＧＣＧＧＣＴＣＴＣＴＧＡＧＡＣＴＧＡＧＣＴＧＴＧＣＣＧＣＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＡＣＣＴＴＣＡＣＣＡＡＣＴＡＣＧＧＣＡＴＧＡＡＣＴＧＧＧＴＣＣＧＡＣＡＧＧＣＣＣＣＴＧＧＣＡＡＡＧＧＣＣＴＴＧＡＡＴＧＧＧＴＣＧＧＡＴＧＧＡＴＣＡＡＣＡＣＣＴＡＣＡＣＣＧＧＣＧＡＧＣＣＡＡＣＡＴＡＣＧＣＣＧＣＣＧＡＣＴＴＣＡＡＧＣＧＧＡＧＡＴＴＣＡＣＣＴＴＣＡＧＣＣＴＧＧＡＣＡＣＣＡＧＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＧＣＣＴＡＣＣＴＧＣＡＧＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＧＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＣＧＣＣＧＴＧＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＣＡＡＧＴＡＴＣＣＣＣＡＣＴＡＣＴＡＣＧＧＣＡＧＣＡＧＣＣＡＣＴＧＧＴＡＣＴＴＴＧＡＣＧＴＧＴＧＧＧＧＡＣＡＧＧＧＣＡＣＡＣＴＧＧＴＣＡＣＡＧＴＧＴＣＴＡＧＣＧＣＣＴＣＴＡＣＡＡＡＧＧＧＣＣＣＣＡＧＣＧＴＴＴＴＣＣＣＡＣＴＧＧＣＴＣＣＴＡＧＣＡＧＣＡＡＧＴＣＴＡＣＣＡＧＣＧＧＡＧＧＡＡＣＡＧＣＣＧＣＴＣＴＧＧＧＣＴＧＴＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＴＣＣＣＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＣＣＧＴＧＴＣＣＴＧＧＡＡＴＴＣＴＧＧＣＧＣＴＣＴＧＡＣＡＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＴＣＣＡＧＣＴＧＴＧＣＴＧＣＡＡＡＧＣＡＧＣＧＧＣＣＴＧＴＡＣＴＣＴＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧＴＣＧＴＧＡＣＡＧＴＧＣＣＡＡＧＣＡＧＣＴＣＴＣＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＴＧＴＧＡＡＣＣＡＣＡＡＧＣＣＴＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＧＧＴＧＧＡＡＣＣＣＡＡＧＡＧＣＴＧＣＧＡＣＡＡＧＡＣＣＣＡＣＡＣＣＴＧＴＣＣＴＣＣＡＴＧＴＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＡＡＣＴＧＣＴＣＧＧＣＧＧＡＣＣＴＴＣＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＴＣＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＴＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＣＣＣＣＴＧＡＡＧＴＧＡＣＣＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＧＴＧＴＣＣＣＡＣＧＡＧＧＡＴＣＣＣＧＡＡＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＡＴＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＡＧＴＧＣＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＣＣＡＡＧＣＣＴＡＧＡＧＡＧＧＡＡＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＡＧＴＧＧＴＧＴＣＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＡＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣＡＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＴＧＣＴＣＣＴＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＡＧＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＴＡＧＧＧＡＡＣＣＣＣＡＧＧＴＴＴＡＣＡＣＡＣＴＧＣＣＴＣＣＡＡＧＣＣＧＧＧＡＡＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＣＧＴＧＡＡＧＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＴＴＣＣＧＡＴＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＡＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＣＣＡＧＣＣＡＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＡＡＣＣＣＣＴＣＣＴＧＴＧＣＴＧＧＡＣＡＧＣＧＡＣＧＧＣＴＣＡＴＴＣＴＴＣＣＴＧＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＣＡＡＧＴＣＣＡＧＡＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＴＴＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＣＣＡＧＡＡＧＴＣＴＣＴＧＡＧＣＣＴＧＴＣＴＣＣＴＧＧＣＡＡＧＣＧＧＡＡＧＡＧＡＡＧＡＧＧＣＴＣＴＧＧＣＧＡＡＧＧＣＡＧＡＧＧＣＡＧＣＣＴＧＣＴＴＡＣＡＴＧＴＧＧＣＧＡＣＧＴＧＧＡＡＧＡＧＡＡＣＣＣＣＧＧＡＣＣＴＡＴＧＴＡＴＡＧＡＡＴＧＣＡＧＣＴＣＣＴＧＴＣＣＴＧＣＡＴＴＧＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＧＣＴＣＴＣＧＴＧＡＣＣＡＡＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＡＧＣＣＣＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＴＣＴＧＣＣＴＣＴＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＡＧＴＧＡＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＴＡＧＣＧＣＣＡＧＣＣＡＧＧＡＣＡＴＣＴＣＣＡＡＣＴＡＣＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＡＡＡＧＣＣＣＧＧＣＡＡＧＧＣＣＣＣＴＡＡＧＧＴＧＣＴＧＡＴＣＴＡＣＴＴＣＡＣＡＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＣＴＣＣＧＧＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＧＡＴＴＴＴＣＴＧＧＣＴＣＴＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＡＴＣＴＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＴＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＴＡＣＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴＡＣＡＧＣＡＣＣＧＴＧＣＣＴＴＧＧＡＣＡＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＡＡＡＧＧＴＧＧＡＡＡＴＣＡＡＧＣＧＧＡＣＴＧＴＧＧＣＣＧＣＴＣＣＴＡＧＣＧＴＧＴＴＣＡＴＣＴＴＴＣＣＡＣＣＴＡＧＣＧＡＣＧＡＧＣＡＧＣＴＧＡＡＧＴＣＴＧＧＣＡＣＡＧＣＣＴＣＴＧＴＣＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＧＡＧＡＡＧＣＣＡＡＧＧＴＧＣＡＧＴＧＧＡＡＡＧＴＧＧＡＣＡＡＴＧＣＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣＡＡＣＡＧＣＣＡＡＧＡＧＡＧＣＧＴＧＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＴＣＣＡＡＧＧＡＴＡＧＣＡＣＣＴＡＴＡＧＣＣＴＧＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＡＣＴＧＡＧＣＡＡＧＧＣＣＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＧＣＡＣＡＡＡＧＴＧＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＧＡＣＣＣＡＣＣＡＧＧＧＣＣＴＴＴＣＴＡＧＣＣＣＴＧＴＧＡＣＣＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＣＧＧＧＧＣＧＡＡＴＧＴＡＴＧＧＴＧＡＧＣＡＡＧＧＧＣＧＡＧＧＡＧＣＴＧＴＴＣＡＣＣＧＧＧＧＴＧＧＴＧＣＣＣＡＴＣＣＴＧＧＴＣＧＡＧＣＴＧＧＡＣＧＧＣＧＡＣＧＴＡＡＡＣＧＧＣＣＡＣＡＡＧＴＴＣＡＧＣＧＴＧＴＣＣＧＧＣＧＡＧＧＧＣＧＡＧＧＧＣＧＡＴＧＣＣＡＣＣＴＡＣＧＧＣＡＡＧＣＴＧＡＣＣＣＴＧＡＡＧＴＴＣＡＴＣＴＧＣＡＣＣＡＣＣＧＧＣＡＡＧＣＴＧＣＣＣＧＴＧＣＣＣＴＧＧＣＣＣＡＣＣＣＴＣＧＴＧＡＣＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＴＡＣＧＧＣＧＴＧＣＡＧＴＧＣＴＴＣＡＧＣＣＧＣＴＡＣＣＣＣＧＡＣＣＡＣＡＴＧＡＡＧＣＡＧＣＡＣＧＡＣＴＴＣＴＴＣＡＡＧＴＣＣＧＣＣＡＴＧＣＣＣＧＡＡＧＧＣＴＡＣＧＴＣＣＡＧＧＡＧＣＧＣＡＣＣＡＴＣＴＴＣＴＴＣＡＡＧＧＡＣＧＡＣＧＧＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＣＧＣＧＣＣＧＡＧＧＴＧＡＡＧＴＴＣＧＡＧＧＧＣＧＡＣＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＡＣＣＧＣＡＴＣＧＡＧＣＴＧＡＡＧＧＧＣＡＴＣＧＡＣＴＴＣＡＡＧＧＡＧＧＡＣＧＧＣＡＡＣＡＴＣＣＴＧＧＧＧＣＡＣＡＡＧＣＴＧＧＡＧＴＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＣＡＧＣＣＡＣＡＡＣＧＴＣＴＡＴＡＴＣＡＴＧＧＣＣＧＡＣＡＡＧＣＡＧＡＡＧＡＡＣＧＧＣＡＴＣＡＡＧＧＴＧＡＡＣＴＴＣＡＡＧＡＴＣＣＧＣＣＡＣＡＡＣＡＴＣＧＡＧＧＡＣＧＧＣＡＧＣＧＴＧＣＡＧＣＴＣＧＣＣＧＡＣＣＡＣＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＡＣＡＣＣＣＣＣＡＴＣＧＧＣＧＡＣＧＧＣＣＣＣＧＴＧＣＴＧＣＴＧＣＣＣＧＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＣＴＧＡＧＣＡＣＣＣＡＧＴＣＣＧＣＣＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＡＣＣＣＣＡＡＣＧＡＧＡＡＧＣＧＣＧＡＴＣＡＣＡＴＧＧＴＣＣＴＧＣＴＧＧＡＧＴＴＣＧＴＧＡＣＣＧＣＣＧＣＣＧＧＧＡＴＣＡＣＴＣＴＣＧＧＣＡＴＧＧＡＣＧＡＧＣＴＧＴＡＣＡＡＧＴＡＡＧＡＧＣＴＣＧＣＴＧＡＴＣＡＧＣＣＴＣＧＡＣＴＧＴＧＣＣＴＴＣＴＡＧＴＴＧＣＣＡＧＣＣＡＴＣＴＧＴＴＧＴＴＴＧＣＣＣＣＴＣＣＣＣＣＧＴＧＣＣＴＴＣＣＴＴＧＡＣＣＣＴＧＧＡＡＧＧＴＧＣＣＡＣＴＣＣＣＡＣＴＧＴＣＣＴＴＴＣＣＴＡＡＴＡＡＡＡＴＧＡＧＧＡＡＡＴＴＧＣＡＴＣＧＣＡＴＴＧＴＣＴＧＡＧＴＡＧＧＴＧＴＣＡＴＴＣＴＡＴＴＣＴＧＧＧＧＧＧＴＧＧＧＧＴＧＧＧＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＧＧＧＡＧＧＡＴＴＧＧＧＡＡＧＡＣＡＡＴＡＧＣＡＧＧＣＡＴＧＣＴＧＧＧＧＡＴＧＣＧＧＴＧＧＧＣＴＣＴＡＴＧＧＡＡＧＣＴＴＧＡＡＴＴＣＡＧＣＴＧＡＣＧＴＧＣＣＴＣＧＧＡＣＣＧＣＴＡＧＧＡＡＣＣＣＣＴＡＧＴＧＡＴＧＧＡＧＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＧＧＣＧＡＣＣＡＡＡＧＧＴＣＧＣＣＣＧ


ＡＣＧＣＣＣＧＧＧＣＴＴＴＧＣＣＣＧＧＧＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧ
例示的なｒＡＡＶ－アフリベルセプト－ＰＣ構築物配列（配列番号９５）
ＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣＣＧＧＧＣＧＴＣＧＧＧＣＧＡＣＣＴＴＴＧＧＴＣＧＣＣＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＴＡＧＧＧＧＴＴＣＣＴＧＣＧＧＣＣＧＣＡＣＧＣＧＴＧＡＣＡＴＴＧＡＴＴＡＴＴＧＡＣＴＡＧＴＴＡＴＴＡＡＴＡＧＴＡＡＴＣＡＡＴＴＡＣＧＧＧＧＴＣＡＴＴＡＧＴＴＣＡＴＡＧＣＣＣＡＴＡＴＡＴＧＧＡＧＴＴＣＣＧＣＧＴＴＡＣＡＴＡＡＣＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＴＧＡＣＣＧＣＣＣＡＡＣＧＡＣＣＣＣＣＧＣＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＡＡＴＧＡＣＧＴＡＴＧＴＴＣＣＣＡＴＡＧＴＡＡＣＧＣＣＡＡＴＡＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＧＴＧＧＡＣＴＡＴＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＣＴＧＣＣＣＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＴＡＴＣＡＴＡＴＧＣＣＡＡＧＴＡＣＧＣＣＣＣＣＴＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＡＴＴＡＴＧＣＣＣＡＧＴＡＣＡＴＧＡＣＣＴＴＡＴＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＴＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＴＡＣＧＴＡＴＴＡＧＴＣＡＴＣＧＣＴＡＴＴＡＣＣＡＴＧＧＧＴＣＧＡＧＧＴＧＡＧＣＣＣＣＡＣＧＴＴＣＴＧＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＣＣＣＡＴＣＴＣＣＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＣＣＣＣＡＡＴＴＴＴＧＴＡＴＴＴＡＴＴＴＡＴＴＴＴＴＴＡＡＴＴＡＴＴＴＴＧＴＧＣＡＧＣＧＡＴＧＧＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＡＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＡＧＡＧＧＴＧＣＧＧＣＧＧＣＡＧＣＣＡＡＴＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＧＣＴＣＣＧＡＡＡＧＴＴＴＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＴＡＴＡＡＡＡＡＧＣＧＡＡＧＣＧＣＧＣＧＧＣＧＧＧＣＧＧＧＡＧＴＣＧＣＴＧＣＧＴＴＧＣＣＴＴＣＧＣＣＣＣＧＴＧＣＣＣＣＧＣＴＣＣＧＣＧＣＣＧＣＣＴＣＧＣＧＣＣＧＣＣＣＧＣＣＣＣＧＧＣＴＣＴＧＡＣＴＧＡＣＣＧＣＧＴＴＡＣＴＣＣＣＡＣＡＧＧＴＧＡＧＣＧＧＧＣＧＧＧＡＣＧＧＣＣＣＴＴＣＴＣＣＴＣＣＧＧＧＣＴＧＴＡＡＴＴＡＧＣＧＣＴＴＧＧＴＴＴＡＡＴＧＡＣＧＧＣＴＣＧＴＴＴＣＴＴＴＴＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＧＴＧＡＡＡＧＣＣＴＴＡＡＡＧＧＧＣＴＣＣＧＧＧＡＧＧＧＣＣＣＴＴＴＧＴＧＣＧＧＧＧＧＧＧＡＧＣＧＧＣＴＣＧＧＧＧＧＧＴＧＣＧＴＧＣＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＧＧＡＧＣＧＣＣＧＣＧＴＧＣＧＧＣＣＣＧＣＧＣＴＧＣＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧＴＧＡＧＣＧＣＴＧＣＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＴＴＴＧＴＧＣＧＣＴＣＣＧＣＧＴＧＴＧＣＧＣＧＡＧＧＧＧＡＧＣＧＣＧＧＣＣＧＧＧＧＧＣＧＧＴＧＣＣＣＣＧＣＧＧＴＧＣＧＧＧＧＧＧＧＣＴＧＣＧＡＧＧＧＧＡＡＣＡＡＡＧＧＣＴＧＣＧＴＧＣＧＧＧＧＴＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＧＧＧＧＧＴＧＡＧＣＡＧＧＧＧＧＴＧＴＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＧＴＣＧＧＧＣＴＧＴＡＡＣＣＣＣＣＣＣＣＴＧＣＡＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＧＡＧＴＴＧＣＴＧＡＧＣＡＣＧＧＣＣＣＧＧＣＴＴＣＧＧＧＴＧＣＧＧＧＧＣＴＣＣＧＴＧＣＧＧＧＧＣＧＴＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＴＣＧＣＣＧＴＧＣＣＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＴＧＧＣＧＧＣＡＧＧＴＧＧＧＧＧＴＧＣＣＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＣＧＣＣＴＣＧＧＧＣＣＧＧＧＧＡＧＧＧＣＴＣＧＧＧＧＧＡＧＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＣＣＧＧＡＧＣＧＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧＴＣＧＡＧＧＣＧＣＧＧＣＧＡＧＣＣＧＣＡＧＣＣＡＴＴＧＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＴＡＡＴＣＧＴＧＣＧＡＧＡＧＧＧＣＧＣＡＧＧＧＡＣＴＴＣＣＴＴＴＧＴＣＣＣＡＡＡＴＣＴＧＴＧＣＧＧＡＧＣＣＧＡＡＡＴＣＴＧＧＧＡＧＧＣＧＣＣＧＣＣＧＣＡＣＣＣＣＣＴＣＴＡＧＣＧＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＧＡＡＧＣＧＧＴＧＣＧＧＣＧＣＣＧＧＣＡＧＧＡＡＧＧＡＡＡＴＧＧＧＣＧＧＧＧＡＧＧＧＣＣＴＴＣＧＴＧＣＧＴＣＧＣＣＧＣＧＣＣＧＣＣＧＴＣＣＣＣＴＴＣＴＣＣＣＴＣＴＣＣＡＧＣＣＴＣＧＧＧＧＣＴＧＴＣＣＧＣＧＧＧＧＧＧＡＣＧＧＣＴＧＣＣＴＴＣＧＧＧＧＧＧＧＡＣＧＧＧＧＣＡＧＧＧＣＧＧＧＧＴＴＣＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＧＴＧＴＧＡＣＣＧＧＣＧＧＣＴＣＴＡＧＡＧＣＣＴＣＴＧＣＴＡＡＣＣＡＴＧＴＴＣＡＴＧＣＣＴＴＣＴＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＡＣＡＧＣＴＣＣＴＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＣＴＧＧＴＴＡＴＴＧＴＧＡＣＣＧＧＴＧＣＣＡＣＣＡＴＧＴＡＣＣＧＧＡＴＧＣＡＧＣＴＧＣＴＧＡＧＣＴＧＴＡＴＣＧＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＡＡＴＴＣＴＡＧＣＧＡＴＡＣＣＧＧＣＡＧＡＣＣＣＴＴＣＧＴＧＧＡＡＡＴＧＴＡＣＡＧＣＧＡＧＡＴＣＣＣＣＧＡＧＡＴＣＡＴＣＣＡＣＡＴＧＡＣＣＧＡＧＧＧＣＡＧＡＧＡＧＣＴＧＧＴＣＡＴＣＣＣＣＴＧＣＡＧＡＧＴＧＡＣＡＡＧＣＣＣＣＡＡＣＡＴＣＡＣＣＧＴＧＡＣＴＣＴＧＡＡＧＡＡＧＴＴＣＣＣＴＣＴＧＧＡＣＡＣＡＣＴＧＡＴＣＣＣＣＧＡＣＧＧＣＡＡＧＡＧＡＡＴＣＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＣＣＧＧＡＡＧＧＧＣＴＴＣＡＴＣＡＴＣＡＧＣＡＡＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＡＡＡＧＡＧＡＴＣＧＧＣＣＴＧＣＴＧＡＣＣＴＧＴＧＡＡＧＣＣＡＣＣＧＴＧＡＡＴＧＧＣＣＡＣＣＴＧＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＡＣＴＡＣＣＴＧＡＣＡＣＡＣＡＧＡＣＡＧＡＣＣＡＡＣＡＣＣＡＴＣＡＴＣＧＡＣＧＴＧＧＴＧＣＴＧＡＧＣＣＣＴＡＧＣＣＡＣＧＧＣＡＴＴＧＡＡＣＴＧＴＣＴＧＴＧＧＧＣＧＡＧＡＡＧＣＴＧＧＴＧＣＴＧＡＡＣＴＧＴＡＣＣＧＣＣＡＧＡＡＣＣＧＡＧＣＴＧＡＡＣＧＴＧＧＧＣＡＴＣＧＡＣＴＴＣＡＡＣＴＧＧＧＡＧＴＡＣＣＣＣＡＧＣＡＧＣＡＡＧＣＡＣＣＡＧＣＡＣＡＡＧＡＡＡＣＴＧＧＴＣＡＡＣＣＧＧＧＡＣＣＴＧＡＡＡＡＣＣＣＡＧＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＡＧＡＴＧＡＡＧＡＡＡＴＴＣＣＴＧＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＧＡＣＧＧＣＧＴＧＡＣＣＡＧＡＴＣＴＧＡＣＣＡＧＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＣＡＴＧＴＧＣＣＧＣＣＡＧＣＴＣＴＧＧＣＣＴＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＡＡＡＣＡＧＣＡＣＣＴＴＣＧＴＧＣＧＧＧＴＧＣＡＣＧＡＧＡＡＧＧＡＣＡＡＧＡＣＣＣＡＣＡＣＣＴＧＴＣＣＴＣＣＡＴＧＴＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＡＡＣＴＧＣＴＣＧＧＣＧＧＡＣＣＴＴＣＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＴＣＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＴＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＣＣＣＣＴＧＡＡＧＴＧＡＣＣＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＧＴＧＴＣＣＣＡＣＧＡＧＧＡＴＣＣＣＧＡＡＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＡＴＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＡＧＴＧＣＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＣＣＡＡＧＣＣＴＡＧＡＧＡＧＧＡＡＣＡＧＴＡＣＡＡＴＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＡＧＴＧＧＴＧＴＣＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＡＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣＡＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＴＧＣＴＣＣＴＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＴＡＧＧＧＡＡＣＣＣＣＡＧＧＴＴＴＡＣＡＣＡＣＴＧＣＣＴＣＣＡＡＧＣＡＧＧＧＡＣＧＡＧＣＴＧＡＣＡＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＴＴＣＣＧＡＴＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＡＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＣＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＡＡＣＣＣＣＴＣＣＴＧＴＧＣＴＧＧＡＣＡＧＣＧＡＣＧＧＣＴＣＡＴＴＣＴＴＣＣＴＧＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＡＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＴＴＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＣＣＡＧＡＡＧＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＴＣＴＣＣＴＧＧＡＴＡＡＧＡＧＣＴＣＧＣＴＧＡＴＣＡＧＣＣＴＣＧＡＣＴＧＴＧＣＣＴＴＣＴＡＧＴＴＧＣＣＡＧＣＣＡＴＣＴＧＴＴＧＴＴＴＧＣＣＣＣＴＣＣＣＣＣＧＴＧＣＣＴＴＣＣＴＴＧＡＣＣＣＴＧＧＡＡＧＧＴＧＣＣＡＣＴＣＣＣＡＣＴＧＴＣＣＴＴＴＣＣＴＡＡＴＡＡＡＡＴＧＡＧＧＡＡＡＴＴＧＣＡＴＣＧＣＡＴＴＧＴＣＴＧＡＧＴＡＧＧＴＧＴＣＡＴＴＣＴＡＴＴＣＴＧＧＧＧＧＧＴＧＧＧＧＴＧＧＧＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＧＧＧＡＧＧＡＴＴＧＧＧＡＡＧＡＣＡＡＴＡＧＣＡＧＧＣＡＴＧＣＴＧＧＧＧＡＴＧＣＧＧＴＧＧＧＣＴＣＴＡＴＧＧＡＡＧＣＴＴＧＡＡＴＴＣＡＧＣＴＧＡＣＧＴＧＣＣＴＣＧＧＡＣＣＧＣＴＡＧＧＡＡＣＣＣＣＴＡＧＴＧＡＴＧＧＡＧＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＧＧＣＧＡＣＣＡＡＡＧＧＴＣＧＣＣＣＧＡＣＧＣＣＣＧＧＧＣＴＴＴＧＣＣＣＧＧＧＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧ
例示的なｒＡＡＶ－アフリベルセプト構築物配列（配列番号９６）
ＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣＣＧＧＧＣＡＡＡＧＣＣＣＧＧＧＣＧＴＣＧＧＧＣＧＡＣＣＴＴＴＧＧＴＣＧＣＣＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＴＡＧＧＧＧＴＴＣＣＴＴＴＧＴＣＧＡＣＧＣＧＧＣＣＧＣＡＣＧＣＧＴＧＡＣＡＴＴＧＡＴＴＡＴＴＧＡＣＴＡＧＴＴＡＴＴＡＡＴＡＧＴＡＡＴＣＡＡＴＴＡＣＧＧＧＧＴＣＡＴＴＡＧＴＴＣＡＴＡＧＣＣＣＡＴＡＴＡＴＧＧＡＧＴＴＣＣＧＣＧＴＴＡＣＡＴＡＡＣＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＴＧＡＣＣＧＣＣＣＡＡＣＧＡＣＣＣＣＣＧＣＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＡＡＴＧＡＣＧＴＡＴＧＴＴＣＣＣＡＴＡＧＴＡＡＣＧＣＣＡＡＴＡＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＧＴＧＧＡＣＴＡＴＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＣＴＧＣＣＣＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＴＡＴＣＡＴＡＴＧＣＣＡＡＧＴＡＣＧＣＣＣＣＣＴＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＡＴＴＡＴＧＣＣＣＡＧＴＡＣＡＴＧＡＣＣＴＴＡＴＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＴＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＴＡＣＧＴＡＴＴＡＧＴＣＡＴＣＧＣＴＡＴＴＡＣＣＡＴＧＧＧＴＣＧＡＧＧＴＧＡＧＣＣＣＣＡＣＧＴＴＣＴＧＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＣＣＣＡＴＣＴＣＣＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＣＣＣＣＡＡＴＴＴＴＧＴＡＴＴＴＡＴＴＴＡＴＴＴＴＴＴＡＡＴＴＡＴＴＴＴＧＴＧＣＡＧＣＧＡＴＧＧＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＡＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＡＧＡＧＧＴＧＣＧＧＣＧＧＣＡＧＣＣＡＡＴＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＧＣＴＣＣＧＡＡＡＧＴＴＴＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＴＡＴＡＡＡＡＡＧＣＧＡＡＧＣＧＣＧＣＧＧＣＧＧＧＣＧＧＧＡＧＴＣＧＣＴＧＣＧＴＴＧＣＣＴＴＣＧＣＣＣＣＧＴＧＣＣＣＣＧＣＴＣＣＧＣＧＣＣＧＣＣＴＣＧＣＧＣＣＧＣＣＣＧＣＣＣＣＧＧＣＴＣＴＧＡＣＴＧＡＣＣＧＣＧＴＴＡＣＴＣＣＣＡＣＡＧＧＴＧＡＧＣＧＧＧＣＧＧＧＡＣＧＧＣＣＣＴＴＣＴＣＣＴＣＣＧＧＧＣＴＧＴＡＡＴＴＡＧＣＧＣＴＴＧＧＴＴＴＡＡＴＧＡＣＧＧＣＴＣＧＴＴＴＣＴＴＴＴＣＴＧＴＧＧＣＴＧＣＧＴＧＡＡＡＧＣＣＴＴＡＡＡＧＧＧＣＴＣＣＧＧＧＡＧＧＧＣＣＣＴＴＴＧＴＧＣＧＧＧＧＧＧＧＡＧＣＧＧＣＴＣＧＧＧＧＧＧＴＧＣＧＴＧＣＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＧＧＡＧＣＧＣＣＧＣＧＴＧＣＧＧＣＣＣＧＣＧＣＴＧＣＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧＴＧＡＧＣＧＣＴＧＣＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＴＴＴＧＴＧＣＧＣＴＣＣＧＣＧＴＧＴＧＣＧＣＧＡＧＧＧＧＡＧＣＧＣＧＧＣＣＧＧＧＧＧＣＧＧＴＧＣＣＣＣＧＣＧＧＴＧＣＧＧＧＧＧＧＧＣＴＧＣＧＡＧＧＧＧＡＡＣＡＡＡＧＧＣＴＧＣＧＴＧＣＧＧＧＧＴＧＴＧＴＧＣＧＴＧＧＧＧＧＧＧＴＧＡＧＣＡＧＧＧＧＧＴＧＴＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＧＴＣＧＧＧＣＴＧＴＡＡＣＣＣＣＣＣＣＣＴＧＣＡＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＧＡＧＴＴＧＣＴＧＡＧＣＡＣＧＧＣＣＣＧＧＣＴＴＣＧＧＧＴＧＣＧＧＧＧＣＴＣＣＧＴＧＣＧＧＧＧＣＧＴＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＴＣＧＣＣＧＴＧＣＣＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＴＧＧＣＧＧＣＡＧＧＴＧＧＧＧＧＴＧＣＣＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＣＧＣＣＴＣＧＧＧＣＣＧＧＧＧＡＧＧＧＣＴＣＧＧＧＧＧＡＧＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＣＣＧＧＡＧＣＧＣＣＧＧＣＧＧＣＴＧＴＣＧＡＧＧＣＧＣＧＧＣＧＡＧＣＣＧＣＡＧＣＣＡＴＴＧＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＴＡＡＴＣＧＴＧＣＧＡＧＡＧＧＧＣＧＣＡＧＧＧＡＣＴＴＣＣＴＴＴＧＴＣＣＣＡＡＡＴＣＴＧＴＧＣＧＧＡＧＣＣＧＡＡＡＴＣＴＧＧＧＡＧＧＣＧＣＣＧＣＣＧＣＡＣＣＣＣＣＴＣＴＡＧＣＧＧＧＣＧＣＧＧＧＧＣＧＡＡＧＣＧＧＴＧＣＧＧＣＧＣＣＧＧＣＡＧＧＡＡＧＧＡＡＡＴＧＧＧＣＧＧＧＧＡＧＧＧＣＣＴＴＣＧＴＧＣＧＴＣＧＣＣＧＣＧＣＣＧＣＣＧＴＣＣＣＣＴＴＣＴＣＣＣＴＣＴＣＣＡＧＣＣＴＣＧＧＧＧＣＴＧＴＣＣＧＣＧＧＧＧＧＧＡＣＧＧＣＴＧＣＣＴＴＣＧＧＧＧＧＧＧＡＣＧＧＧＧＣＡＧＧＧＣＧＧＧＧＴＴＣＧＧＣＴＴＣＴＧＧＣＧＴＧＴＧＡＣＣＧＧＣＧＧＣＴＣＴＡＧＡＧＣＣＴＣＴＧＣＴＡＡＣＣＡＴＧＴＴＣＡＴＧＣＣＴＴＣＴＴＣＴＴＴＴＴＣＣＴＡＣＡＧＣＴＣＣＴＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＣＴＧＧＴＴＡＴＴＧＴＧＡＣＣＧＧＴＧＣＣＡＣＣＡＴＧＴＡＣＣＧＧＡＴＧＣＡＧＣＴＧＣＴＧＡＧＣＴＧＴＡＴＣＧＣＣＣＴＧＴＣＴＣＴＧＧＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＡＡＴＴＣＴＡＧＣＧＡＴＡＣＣＧＧＣＡＧＡＣＣＣＴＴＣＧＴＧＧＡＡＡＴＧＴＡＣＡＧＣＧＡＧＡＴＣＣＣＣＧＡＧＡＴＣＡＴＣＣＡＣＡＴＧＡＣＣＧＡＧＧＧＣＡＧＡＧＡＧＣＴＧＧＴＣＡＴＣＣＣＣＴＧＣＡＧＡＧＴＧＡＣＡＡＧＣＣＣＣＡＡＣＡＴＣＡＣＣＧＴＧＡＣＴＣＴＧＡＡＧＡＡＧＴＴＣＣＣＴＣＴＧＧＡＣＡＣＡＣＴＧＡＴＣＣＣＣＧＡＣＧＧＣＡＡＧＡＧＡＡＴＣＡＴＣＴＧＧＧＡＣＡＧＣＣＧＧＡＡＧＧＧＣＴＴＣＡＴＣＡＴＣＡＧＣＡＡＣＧＣＣＡＣＣＴＡＣＡＡＡＧＡＧＡＴＣＧＧＣＣＴＧＣＴＧＡＣＣＴＧＴＧＡＡＧＣＣＡＣＣＧＴＧＡＡＴＧＧＣＣＡＣＣＴＧＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＡＣＴＡＣＣＴＧＡＣＡＣＡＣＡＧＡＣＡＧＡＣＣＡＡＣＡＣＣＡＴＣＡＴＣＧＡＣＧＴＧＧＴＧＣＴＧＡＧＣＣＣＴＡＧＣＣＡＣＧＧＣＡＴＴＧＡＡＣＴＧＴＣＴＧＴＧＧＧＣＧＡＧＡＡＧＣＴＧＧＴＧＣＴＧＡＡＣＴＧＴＡＣＣＧＣＣＡＧＡＡＣＣＧＡＧＣＴＧＡＡＣＧＴＧＧＧＣＡＴＣＧＡＣＴＴＣＡＡＣＴＧＧＧＡＧＴＡＣＣＣＣＡＧＣＡＧＣＡＡＧＣＡＣＣＡＧＣＡＣＡＡＧＡＡＡＣＴＧＧＴＣＡＡＣＣＧＧＧＡＣＣＴＧＡＡＡＡＣＣＣＡＧＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＡＧＡＴＧＡＡＧＡＡＡＴＴＣＣＴＧＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＣＧＡＣＧＧＣＧＴＧＡＣＣＡＧＡＴＣＴＧＡＣＣＡＧＧＧＣＣＴＧＴＡＣＡＣＡＴＧＴＧＣＣＧＣＣＡＧＣＴＣＴＧＧＣＣＴＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＡＡＡＣＡＧＣＡＣＣＴＴＣＧＴＧＣＧＧＧＴＧＣＡＣＧＡＧＡＡＧＧＡＣＡＡＧＡＣＣＣＡＣＡＣＣＴＧＴＣＣＴＣＣＡＴＧＴＣＣＴＧＣＴＣＣＡＧＡＡＣＴＧＣＴＣＧＧＣＧＧＡＣＣＴＴＣＣＧＴＧＴＴＣＣＴＧＴＴＴＣＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＴＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＧＡＴＧＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＣＣＣＣＴＧＡＡＧＴＧＡＣＣＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＧＴＧＴＣＣＣＡＣＧＡＧＧＡＴＣＣＣＧＡＡＧＴＧＡＡＧＴＴＣＡＡＴＴＧＧＴＡＣＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＡＧＴＧＣＡＣＡＡＣＧＣＣＡＡＧＡＣＣＡＡＧＣＣＴＡＧＡＧＡＧＧＡＡＣＡＧＴＡＣＡＡＴＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＡＧＴＧＧＴＧＴＣＣＧＴＧＣＴＧＡＣＣＧＴＧＣＴＧＣＡＣＣＡＧＧＡＴＴＧＧＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＡＡＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＧＴＣＣＡＡＣＡＡＧＧＣＣＣＴＧＣＣＴＧＣＴＣＣＴＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＴＡＧＧＧＡＡＣＣＣＣＡＧＧＴＴＴＡＣＡＣＡＣＴＧＣＣＴＣＣＡＡＧＣＡＧＧＧＡＣＧＡＧＣＴＧＡＣＡＡＡＧＡＡＣＣＡＧＧＴＧＴＣＣＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＧＣＴＴＣＴＡＣＣＣＴＴＣＣＧＡＴＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＡＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＣＣＡＧＣＣＴＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＡＡＣＣＣＣＴＣＣＴＧＴＧＣＴＧＧＡＣＡＧＣＧＡＣＧＧＣＴＣＡＴＴＣＴＴＣＣＴＧＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＧＡＣＡＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＡＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＣＡＡＣＧＴＧＴＴＣＡＧＣＴＧＣＡＧＣＧＴＧＡＴＧＣＡＣＧＡＧＧＣＣＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＣＣＡＧＡＡＧＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＴＣＴＣＣＴＧＧＡＴＡＡＧＡＧＣＴＣＧＣＴＧＡＴＣＡＧＣＣＴＣＧＡＣＴＧＴＧＣＣＴＴＣＴＡＧＴＴＧＣＣＡＧＣＣＡＴＣＴＧＴＴＧＴＴＴＧＣＣＣＣＴＣＣＣＣＣＧＴＧＣＣＴＴＣＣＴＴＧＡＣＣＣＴＧＧＡＡＧＧＴＧＣＣＡＣＴＣＣＣＡＣＴＧＴＣＣＴＴＴＣＣＴＡＡＴＡＡＡＡＴＧＡＧＧＡＡＡＴＴＧＣＡＴＣＧＣＡＴＴＧＴＣＴＧＡＧＴＡＧＧＴＧＴＣＡＴＴＣＴＡＴＴＣＴＧＧＧＧＧＧＴＧＧＧＧＴＧＧＧＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＧＧＧＡＧＧＡＴＴＧＧＧＡＡＧＡＣＡＡＴＡＧＣＡＧＧＣＡＴＧＣＴＧＧＧＧＡＴＧＣＧＧＴＧＧＧＣＴＣＴＡＴＧＧＡＡＧＣＴＴＧＡＡＴＴＣＡＧＣＴＧＡＣＧＴＧＣＣＴＣＧＧＡＣＣＧＣＣＴＡＧＧＡＧＧＡＡＣＣＣＣＴＡＧＴＧＡＴＧＧＡＧＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＧＧＣＧＡＣＣＡＡＡＧＧＴＣＧＣＣＣＧＡＣＧＣＣＣＧＧＧＣＴＴＴＧＣＣＣＧＧＧＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡ
複数のＡＡＶ構築物組成物
本開示は、タンパク質（例えば、抗ＶＥＧＦタンパク質）をコードするいくつかのコード配列が、コード配列を複数の部分（これらはそれぞれ異なる構築物に含まれる）に分割することによって送達され得ることを認識する。いくつかの実施形態では、本明細書では、少なくとも２つの異なる構築物（例えば、２、３、４、５、または６）を含む組成物またはシステムが提供される。いくつかの実施形態では、少なくとも２つの異なる構築物のそれぞれは、コード領域（例えば、標的タンパク質、例えば、内耳標的タンパク質、例えば、抗ＶＥＧＦタンパク質をコードする）の異なる部分をコードするコード配列を含み、コードされた部分の各々は、少なくとも１０アミノ酸（例えば、少なくとも約１０アミノ酸、少なくとも約２０アミノ酸、少なくとも約３０アミノ酸、少なくとも約６０アミノ酸、少なくとも約７０アミノ酸、少なくとも約８０アミノ酸、少なくとも約９０アミノ酸、少なくとも約１００アミノ酸、少なくとも約１１０アミノ酸、少なくとも約１２０アミノ酸、少なくとも約１３０アミノ酸、少なくとも約１４０アミノ酸、少なくとも約１５０アミノ酸、少なくとも約１６０アミノ酸、少なくとも約１７０アミノ酸、少なくとも約１８０アミノ酸、少なくとも約１９０アミノ酸、少なくとも約２００アミノ酸、少なくとも約２１０アミノ酸、少なくとも約２２０アミノ酸、少なくとも約２３０アミノ酸、少なくとも約２４０アミノ酸、少なくとも約２５０アミノ酸、少なくとも約２６０アミノ酸、少なくとも約２７０アミノ酸、少なくとも約２８０アミノ酸、少なくとも約２９０アミノ酸、少なくとも約３００アミノ酸、少なくとも約３１０アミノ酸、少なくとも約３２０アミノ酸、少なくとも約３３０アミノ酸、少なくとも約３４０アミノ酸、少なくとも約３５０アミノ酸、少なくとも約３６０アミノ酸、少なくとも約３７０アミノ酸、少なくとも約３８０アミノ酸、少なくとも約３９０アミノ酸、少なくとも約４００アミノ酸、少なくとも約４１０アミノ酸、少なくとも約４２０アミノ酸、少なくとも約４３０アミノ酸、少なくとも約４４０アミノ酸、少なくとも約４５０アミノ酸、少なくとも約４６０アミノ酸、少なくとも約４７０アミノ酸、少なくとも約４８０アミノ酸、少なくとも約４９０アミノ酸、少なくとも約５００アミノ酸、少なくとも約５１０アミノ酸、少なくとも約５２０アミノ酸、少なくとも約５３０アミノ酸、少なくとも約５４０アミノ酸、少なくとも約５５０アミノ酸、少なくとも約５６０アミノ酸、少なくとも約５７０アミノ酸、少なくとも約５８０アミノ酸、少なくとも約５９０アミノ酸、少なくとも約６００アミノ酸、少なくとも約６１０アミノ酸、少なくとも約６２０アミノ酸、少なくとも約６３０アミノ酸、少なくとも約６４０アミノ酸、少なくとも約６５０アミノ酸、少なくとも約６６０アミノ酸、少なくとも約６７０アミノ酸、少なくとも約６８０アミノ酸、少なくとも約６９０アミノ酸、少なくとも約７００アミノ酸、少なくとも約７１０アミノ酸、少なくとも約７２０アミノ酸、少なくとも約７３０アミノ酸、少なくとも約７４０アミノ酸、少なくとも約７５０アミノ酸、少なくとも約７６０アミノ酸、少なくとも約７７０アミノ酸、少なくとも約７８０アミノ酸、少なくとも約７９０アミノ酸、少なくとも約８００アミノ酸、少なくとも約８１０アミノ酸、または少なくとも約８２０アミノ酸）であり、該コードされた部分の各々のアミノ酸配列は、コードされた部分の異なる一方のアミノ酸配列と任意選択で部分的に重なり得；少なくとも２つの異なる構築物の単一の構築物は活性標的タンパク質をコードせず；対象細胞（例えば、動物細胞、例えば、霊長類細胞、例えば、ヒト細胞）に導入された場合に、少なくとも２つの異なるものは互いに相同組換えを起こし、ここで、組換えられた核酸が、活性標的タンパク質（例えば、抗ＶＥＧＦタンパク質）をコードする。いくつかの実施形態では、核酸構築物の１つは、標的タンパク質（例えば、抗ＶＥＧＦタンパク質）の一部をコードするコード配列を含むことができ、コードされた部分は、最大約８２０アミノ酸（例えば、最大約１０アミノ酸、最大約２０アミノ酸、最大約３０アミノ酸、最大約６０アミノ酸、最大約７０アミノ酸、最大約８０アミノ酸、最大約９０アミノ酸、最大約１００アミノ酸、最大約１１０アミノ酸、最大約１２０アミノ酸、最大約１３０アミノ酸、最大約１４０アミノ酸、最大約１５０アミノ酸、最大約１６０アミノ酸、最大約１７０アミノ酸、最大約１８０アミノ酸、最大約１９０アミノ酸、最大約２００アミノ酸、最大約２１０アミノ酸、最大約２２０アミノ酸、最大約２３０アミノ酸、最大約２４０アミノ酸、最大約２５０アミノ酸、最大約２６０アミノ酸、最大約２７０アミノ酸、最大約２８０アミノ酸、最大約２９０アミノ酸、最大約３００アミノ酸、最大約３１０アミノ酸、最大約３２０アミノ酸、最大約３３０アミノ酸、最大約３４０アミノ酸、最大約３５０アミノ酸、最大約３６０アミノ酸、最大約３７０アミノ酸、最大約３８０アミノ酸、最大約３９０アミノ酸、最大約４００アミノ酸、最大約４１０アミノ酸、最大約４２０アミノ酸、最大約４３０アミノ酸、最大約４４０アミノ酸、最大約４５０アミノ酸、最大約４６０アミノ酸、最大約４７０アミノ酸、最大約４８０アミノ酸、最大約４９０アミノ酸、最大約５００アミノ酸、最大約５１０アミノ酸、最大約５２０アミノ酸、最大約５３０アミノ酸、最大約５４０アミノ酸、最大約５５０アミノ酸、最大約５６０アミノ酸、最大約５７０アミノ酸、最大約５８０アミノ酸、最大約５９０アミノ酸、最大約６００アミノ酸、最大約６１０アミノ酸、最大約６２０アミノ酸、最大約６３０アミノ酸、最大約６４０アミノ酸、最大約６５０アミノ酸、最大約６６０アミノ酸、最大約６７０アミノ酸、最大約６８０アミノ酸、最大約６９０アミノ酸、最大約７００アミノ酸、最大約７１０アミノ酸、最大約７２０アミノ酸、最大約７３０アミノ酸、最大約７４０アミノ酸、最大約７５０アミノ酸、最大約７６０アミノ酸、最大約７７０アミノ酸、最大約７８０アミノ酸、最大約７９０アミノ酸、最大約８００アミノ酸、最大約８１０アミノ酸、または最大約８２０アミノ酸）である。
いくつかの実施形態では、構築物のそれぞれのコードされた部分のアミノ酸配列は、コードされた部分の異なる一方のアミノ酸配列と部分的にすら重複しない。いくつかの実施形態では、構築物のコードされた部分のアミノ酸配列は、異なる構築物のコードされた部分のアミノ酸配列と部分的に重複する。いくつかの実施形態では、各構築物のコードされた部分のアミノ酸配列は、少なくとも１つの異なる構築物のコードされた部分のアミノ酸配列と部分的に重複する。いくつかの実施形態では、重複するアミノ酸配列は、約１０アミノ酸残基～約８２０アミノ酸の間、またはこの範囲の任意の部分範囲である（例えば、約１０アミノ酸、約２０アミノ酸、約３０アミノ酸、約６０アミノ酸、約７０アミノ酸、約８０アミノ酸、約９０アミノ酸、約１００アミノ酸、約１１０アミノ酸、約１２０アミノ酸、約１３０アミノ酸、約１４０アミノ酸、約１５０アミノ酸、約１６０アミノ酸、約１７０アミノ酸、約１８０アミノ酸、約１９０アミノ酸、約２００アミノ酸、約２１０アミノ酸、約２２０アミノ酸、約２３０アミノ酸、約２４０アミノ酸、約２５０アミノ酸、約２６０アミノ酸、約２７０アミノ酸、約２８０アミノ酸、約２９０アミノ酸、約３００アミノ酸、約３１０アミノ酸、約３２０アミノ酸、約３３０アミノ酸、約３４０アミノ酸、約３５０アミノ酸、約３６０アミノ酸、約３７０アミノ酸、約３８０アミノ酸、約３９０アミノ酸、約４００アミノ酸、約４１０アミノ酸、約４２０アミノ酸、約４３０アミノ酸、約４４０アミノ酸、約４５０アミノ酸、約４６０アミノ酸、約４７０アミノ酸、約４８０アミノ酸、約４９０アミノ酸、約５００アミノ酸、約５１０アミノ酸、約５２０アミノ酸、約５３０アミノ酸、約５４０アミノ酸、約５５０アミノ酸、約５６０アミノ酸、約５７０アミノ酸、約５８０アミノ酸、約５９０アミノ酸、約６００アミノ酸、約６１０アミノ酸、約６２０アミノ酸、約６３０アミノ酸、約６４０アミノ酸、約６５０アミノ酸、約６６０アミノ酸、約６７０アミノ酸、約６８０アミノ酸、約６９０アミノ酸、約７００アミノ酸、約７１０アミノ酸、約７２０アミノ酸、約７３０アミノ酸、約７４０アミノ酸、約７５０アミノ酸、約７６０アミノ酸、約７７０アミノ酸、約７８０アミノ酸、約７９０アミノ酸、約８００アミノ酸、約８１０アミノ酸、または約８２０アミノ酸長）。
いくつかの例では、所望の遺伝子産物（例えば、治療用遺伝子産物）は、少なくとも２つの異なる構築物によってコードされる。いくつかの実施形態では、少なくとも２つの異なる構築物のそれぞれは、潜在的なコード領域の異なるセグメントを含み、該コード領域は、イントロン及び／または調節領域などの非コード配列を含んでも含まなくてもよい。いくつかの実施形態では、少なくとも２つの異なる構築物は、同じ細胞を形質導入する。いくつかの実施形態では、形質導入された細胞は、２つの異なる構築物を転写及び翻訳する。いくつかの実施形態では、翻訳されたポリペプチドは、次いで、三次及び／または四次構造レベルで組み合わさり、機能的な抗ＶＥＧＦタンパク質を作成し得る。例えば、いくつかの実施形態では、ラニビズマブ軽鎖及びラニビズマブ重鎖は、少なくとも２つの異なる構築物上にコードされ、翻訳後に組み合わされて、本明細書に記載の様式及び当該技術分野で知られている様式でラニビズマブタンパク質を形成する。
いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦ遺伝子を含む本明細書に記載の組成物は、天然に存在する及び／または合成イントロン配列を含む。イントロンは、内因性ゲノムＤＮＡ配列（例えば、内耳細胞標的ゲノムＤＮＡ（例えば、ＶＥＧＦ及び／またはＶＥＧＦ－ＲゲノムＤＮＡ配列））に存在するイントロンのヌクレオチド配列を含み得る。いくつかの実施形態では、異なるイントロンセグメントは重複する。いくつかの実施形態では、異なるイントロンセグメントは、配列において最大約１２，０００ヌクレオチド長重複する（例えば、最大約１００ヌクレオチド、最大約２００ヌクレオチド、最大約３００ヌクレオチド、最大約６００ヌクレオチド、最大約７００ヌクレオチド、最大約８００ヌクレオチド、最大約９００ヌクレオチド、最大約１，０００ヌクレオチド、最大約１，１００ヌクレオチド、最大約１，２００ヌクレオチド、最大約１，３００ヌクレオチド、最大約１，４００ヌクレオチド、最大約１，５００ヌクレオチド、最大約１，６００ヌクレオチド、最大約１，７００ヌクレオチド、最大約１，８００ヌクレオチド、最大約１，９００ヌクレオチド、最大約２，０００ヌクレオチド、最大約２，１００ヌクレオチド、最大約２，２００ヌクレオチド、最大約２，３００ヌクレオチド、最大約２，４００ヌクレオチド、最大約２，５００ヌクレオチド、最大約２，６００ヌクレオチド、最大約２，７００ヌクレオチド、最大約２，８００ヌクレオチド、最大約２，９００ヌクレオチド、最大約３，０００ヌクレオチド、最大約３，１００ヌクレオチド、最大約３，２００ヌクレオチド、最大約３，３００ヌクレオチド、最大約３，４００ヌクレオチド、最大約３，５００ヌクレオチド、最大約３，６００ヌクレオチド、最大約３，７００ヌクレオチド、最大約３，８００ヌクレオチド、最大約３，９００ヌクレオチド、最大約４，０００ヌクレオチド、最大約４，１００ヌクレオチド、最大約４，２００ヌクレオチド、最大約４，３００ヌクレオチド、最大約４，４００ヌクレオチド、最大約４，５００ヌクレオチド、最大約４，６００ヌクレオチド、最大約４，７００ヌクレオチド、最大約４，８００ヌクレオチド、最大約４，９００ヌクレオチド、最大約５，０００ヌクレオチド、最大約５，１００ヌクレオチド、最大約５，２００ヌクレオチド、最大約５，３００ヌクレオチド、最大約５，４００ヌクレオチド、最大約５，５００ヌクレオチド、最大約５，６００ヌクレオチド、最大約５，７００ヌクレオチド、最大約５，８００ヌクレオチド、最大約５，９００ヌクレオチド、最大約６，０００ヌクレオチド、最大約６，１００ヌクレオチド、最大約６，２００ヌクレオチド、最大約６，３００ヌクレオチド、最大約６，４００ヌクレオチド、最大約６，５００ヌクレオチド、最大約６，６００ヌクレオチド、最大約６，７００ヌクレオチド、最大約６，８００ヌクレオチド、最大約６，９００ヌクレオチド、最大約７，０００ヌクレオチド、最大約７，１００ヌクレオチド、最大約７，２００ヌクレオチド、最大約７，３００ヌクレオチド、最大約７，４００ヌクレオチド、最大約７，５００ヌクレオチド、最大約７，６００ヌクレオチド、最大約７，７００ヌクレオチド、最大約７，８００ヌクレオチド、最大約７，９００ヌクレオチド、最大約８，０００ヌクレオチド、最大約８，１００ヌクレオチド、最大約８，２００ヌクレオチド、最大約８，３００ヌクレオチド、最大約８，４００ヌクレオチド、最大約８，５００ヌクレオチド、最大約８，６００ヌクレオチド、最大約８，７００ヌクレオチド、最大約８，８００ヌクレオチド、最大約８，９００ヌクレオチド、最大約９，０００ヌクレオチド、最大約９，１００ヌクレオチド、最大約９，２００ヌクレオチド、最大約９，３００ヌクレオチド、最大約９，４００ヌクレオチド、最大約９，５００ヌクレオチド、最大約９，６００ヌクレオチド、最大約９，７００ヌクレオチド、最大約９，８００ヌクレオチド、最大約９，９００ヌクレオチド、最大約１０，０００ヌクレオチド、最大約１０，１００ヌクレオチド、最大約１０，２００ヌクレオチド、最大約１０，３００ヌクレオチド、最大約１０，４００ヌクレオチド、最大約１０，５００ヌクレオチド、最大約１０，６００ヌクレオチド、最大約１０，７００ヌクレオチド、最大約１０，８００ヌクレオチド、最大約１０，９００ヌクレオチド、最大約１１，０００ヌクレオチド、最大約１１，１００ヌクレオチド、最大約１１，２００ヌクレオチド、最大約１１，３００ヌクレオチド、最大約１１，４００ヌクレオチド、最大約１１，５００ヌクレオチド、最大約１１，６００ヌクレオチド、最大約１１，７００ヌクレオチド、最大約１１，８００ヌクレオチド、最大約１１，９００ヌクレオチド、または最大約１２，０００ヌクレオチド）。いくつかの実施形態では、異なる構築物のいずれか２つにおける重複ヌクレオチド配列は、標的遺伝子（例えば、抗ＶＥＧＦ遺伝子）の１つ以上のエクソンの一部または全てを含み得る。
いくつかの実施形態では、組成物またはシステムは、２つ、３つ、４つ、または５つの異なる構築物であるか、またはそれを含む。組成物中の異なる構築物の数が２である組成物では、２つの異なる構築物の第１のものは、タンパク質（例えば、抗ＶＥＧＦタンパク質）のＮ末端部分をコードするコード配列を含み得、これはリード部分、第１の構築物、または５’部分と呼ばれ得る（例えば、少なくとも２つの抗体鎖、例えば、重鎖可変領域及び／または軽鎖可変領域をコードする配列のうちの１つ）。いくつかの例では、標的遺伝子のＮ末端部分は、少なくとも約１０アミノ酸長である（例えば、少なくとも約１０アミノ酸、少なくとも約２０アミノ酸、少なくとも約３０アミノ酸、少なくとも約６０アミノ酸、少なくとも約７０アミノ酸、少なくとも約８０アミノ酸、少なくとも約９０アミノ酸、少なくとも約１００アミノ酸、少なくとも約１１０アミノ酸、少なくとも約１２０アミノ酸、少なくとも約１３０アミノ酸、少なくとも約１４０アミノ酸、少なくとも約１５０アミノ酸、少なくとも約１６０アミノ酸、少なくとも約１７０アミノ酸、少なくとも約１８０アミノ酸、少なくとも約１９０アミノ酸、少なくとも約２００アミノ酸、少なくとも約２１０アミノ酸、少なくとも約２２０アミノ酸、少なくとも約２３０アミノ酸、少なくとも約２４０アミノ酸、少なくとも約２５０アミノ酸、少なくとも約２６０アミノ酸、少なくとも約２７０アミノ酸、少なくとも約２８０アミノ酸、少なくとも約２９０アミノ酸、少なくとも約３００アミノ酸、少なくとも約３１０アミノ酸、少なくとも約３２０アミノ酸、少なくとも約３３０アミノ酸、少なくとも約３４０アミノ酸、少なくとも約３５０アミノ酸、少なくとも約３６０アミノ酸、少なくとも約３７０アミノ酸、少なくとも約３８０アミノ酸、少なくとも約３９０アミノ酸、少なくとも約４００アミノ酸、少なくとも約４１０アミノ酸、少なくとも約４２０アミノ酸、少なくとも約４３０アミノ酸、少なくとも約４４０アミノ酸、少なくとも約４５０アミノ酸、少なくとも約４６０アミノ酸、少なくとも約４７０アミノ酸、少なくとも約４８０アミノ酸、少なくとも約４９０アミノ酸、少なくとも約５００アミノ酸、少なくとも約５１０アミノ酸、少なくとも約５２０アミノ酸、少なくとも約５３０アミノ酸、少なくとも約５４０アミノ酸、少なくとも約５５０アミノ酸、少なくとも約５６０アミノ酸、少なくとも約５７０アミノ酸、少なくとも約５８０アミノ酸、少なくとも約５９０アミノ酸、少なくとも約６００アミノ酸、少なくとも約６１０アミノ酸、少なくとも約６２０アミノ酸、少なくとも約６３０アミノ酸、少なくとも約６４０アミノ酸、少なくとも約６５０アミノ酸、少なくとも約６６０アミノ酸、少なくとも約６７０アミノ酸、少なくとも約６８０アミノ酸、少なくとも約６９０アミノ酸、少なくとも約７００アミノ酸、少なくとも約７１０アミノ酸、少なくとも約７２０アミノ酸、少なくとも約７３０アミノ酸、少なくとも約７４０アミノ酸、少なくとも約７５０アミノ酸、少なくとも約７６０アミノ酸、少なくとも約７７０アミノ酸、少なくとも約７８０アミノ酸、少なくとも約７９０アミノ酸、少なくとも約８００アミノ酸、少なくとも約８１０アミノ酸、または少なくとも約８２０アミノ酸）。いくつかの例では、第１の構築物は、プロモーター（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で知られている任意のプロモーター）及びコザック配列（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で知られている任意の例示的なコザック配列）の一方または両方を含む。いくつかの例では、第１の構築物は、誘導性プロモーター、構成的プロモーター、または組織特異的プロモーターであるプロモーターを含む。いくつかの例では、２つの異なる構築物のうちの第２のものは、タンパク質のＣ末端部分をコードするコード配列を含み、これは末端部分、第２の構築物、または３’部分と呼ばれ得る（例えば、少なくとも２つの抗体鎖、例えば、重鎖可変領域及び／または軽鎖可変領域をコードする配列のうちの１つ）。いくつかの例では、標的タンパク質のＣ末端部分は、少なくとも約１０アミノ酸長である（例えば、少なくとも約１０アミノ酸、少なくとも約２０アミノ酸、少なくとも約３０アミノ酸、少なくとも約６０アミノ酸、少なくとも約７０アミノ酸、少なくとも約８０アミノ酸、少なくとも約９０アミノ酸、少なくとも約１００アミノ酸、少なくとも約１１０アミノ酸、少なくとも約１２０アミノ酸、少なくとも約１３０アミノ酸、少なくとも約１４０アミノ酸、少なくとも約１５０アミノ酸、少なくとも約１６０アミノ酸、少なくとも約１７０アミノ酸、少なくとも約１８０アミノ酸、少なくとも約１９０アミノ酸、少なくとも約２００アミノ酸、少なくとも約２１０アミノ酸、少なくとも約２２０アミノ酸、少なくとも約２３０アミノ酸、少なくとも約２４０アミノ酸、少なくとも約２５０アミノ酸、少なくとも約２６０アミノ酸、少なくとも約２７０アミノ酸、少なくとも約２８０アミノ酸、少なくとも約２９０アミノ酸、少なくとも約３００アミノ酸、少なくとも約３１０アミノ酸、少なくとも約３２０アミノ酸、少なくとも約３３０アミノ酸、少なくとも約３４０アミノ酸、少なくとも約３５０アミノ酸、少なくとも約３６０アミノ酸、少なくとも約３７０アミノ酸、少なくとも約３８０アミノ酸、少なくとも約３９０アミノ酸、少なくとも約４００アミノ酸、少なくとも約４１０アミノ酸、少なくとも約４２０アミノ酸、少なくとも約４３０アミノ酸、少なくとも約４４０アミノ酸、少なくとも約４５０アミノ酸、少なくとも約４６０アミノ酸、少なくとも約４７０アミノ酸、少なくとも約４８０アミノ酸、少なくとも約４９０アミノ酸、少なくとも約５００アミノ酸、少なくとも約５１０アミノ酸、少なくとも約５２０アミノ酸、少なくとも約５３０アミノ酸、少なくとも約５４０アミノ酸、少なくとも約５５０アミノ酸、少なくとも約５６０アミノ酸、少なくとも約５７０アミノ酸、少なくとも約５８０アミノ酸、少なくとも約５９０アミノ酸、少なくとも約６００アミノ酸、少なくとも約６１０アミノ酸、少なくとも約６２０アミノ酸、少なくとも約６３０アミノ酸、少なくとも約６４０アミノ酸、少なくとも約６５０アミノ酸、少なくとも約６６０アミノ酸、少なくとも約６７０アミノ酸、少なくとも約６８０アミノ酸、少なくとも約６９０アミノ酸、少なくとも約７００アミノ酸、少なくとも約７１０アミノ酸、少なくとも約７２０アミノ酸、少なくとも約７３０アミノ酸、少なくとも約７４０アミノ酸、少なくとも約７５０アミノ酸、少なくとも約７６０アミノ酸、少なくとも約７７０アミノ酸、少なくとも約７８０アミノ酸、少なくとも約７９０アミノ酸、少なくとも約８００アミノ酸、少なくとも約８１０アミノ酸、または少なくとも約８２０アミノ酸）。いくつかの例では、第２の構築物はポリ（Ａ）配列をさらに含む。
組成物内の異なる構築物の数が２であるいくつかの例では、２つの構築物のうちの１つによってコードされるＮ末端部分は、抗ＶＥＧＦタンパク質（例えば、配列番号１６、１７、１８、２０、２１、２３、及び／または４３）のアミノ酸位置１位～アミノ酸位置８２０位付近、またはこの範囲の任意の部分範囲を含む部分を含むことができる（例えば、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸１０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸２０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸３０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸６０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸７０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸８０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸９０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸１００、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸１１０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸１２０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸１３０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸１４０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸１５０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸１６０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸１７０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸１８０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸１９０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸２００、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸２１０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸２２０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸２３０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸２４０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸２５０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸２６０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸２７０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸２８０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸２９０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸３００、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸３１０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸３２０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸３３０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸３４０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸３５０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸３６０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸３７０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸３８０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸３９０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸４００、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸４１０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸４２０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸４３０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸４４０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸４５０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸４６０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸４７０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸４８０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸４９０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸５００、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸５１０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸５２０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸５３０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸５４０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸５５０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸５６０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸５７０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸５８０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸５９０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸６００、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸６１０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸６２０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸６３０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸６４０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸６５０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸６６０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸６７０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸６８０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸６９０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸７００、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸７１０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸７２０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸７３０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸７４０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸７５０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸７６０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸７７０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸７８０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸７９０、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸８００、アミノ酸１～少なくとも約アミノ酸８１０、またはアミノ酸１～少なくとも約アミノ酸８２０）。組成物内の異なる構築物の数が２であるいくつかの例では、前駆体抗ＶＥＧＦタンパク質のＮ末端部分は、抗ＶＥＧＦタンパク質（例えば、配列番号１６、１７、１８、２０、２１、２３、及び／または４３）のアミノ酸位置１位～アミノ酸位置８２０位付近、またはこの範囲の任意の部分範囲を含む部分を含むことができる（例えば、アミノ酸１～最大約アミノ酸１０、アミノ酸１～最大約アミノ酸２０、アミノ酸１～最大約アミノ酸３０、アミノ酸１～最大約アミノ酸６０、アミノ酸１～最大約アミノ酸７０、アミノ酸１～最大約アミノ酸８０、アミノ酸１～最大約アミノ酸９０、アミノ酸１～最大約アミノ酸１００、アミノ酸１～最大約アミノ酸１１０、アミノ酸１～最大約アミノ酸１２０、アミノ酸１～最大約アミノ酸１３０、アミノ酸１～最大約アミノ酸１４０、アミノ酸１～最大約アミノ酸１５０、アミノ酸１～最大約アミノ酸１６０、アミノ酸１～最大約アミノ酸１７０、アミノ酸１～最大約アミノ酸１８０、アミノ酸１～最大約アミノ酸１９０、アミノ酸１～最大約アミノ酸２００、アミノ酸１～最大約アミノ酸２１０、アミノ酸１～最大約アミノ酸２２０、アミノ酸１～最大約アミノ酸２３０、アミノ酸１～最大約アミノ酸２４０、アミノ酸１～最大約アミノ酸２５０、アミノ酸１～最大約アミノ酸２６０、アミノ酸１～最大約アミノ酸２７０、アミノ酸１～最大約アミノ酸２８０、アミノ酸１～最大約アミノ酸２９０、アミノ酸１～最大約アミノ酸３００、アミノ酸１～最大約アミノ酸３１０、アミノ酸１～最大約アミノ酸３２０、アミノ酸１～最大約アミノ酸３３０、アミノ酸１～最大約アミノ酸３４０、アミノ酸１～最大約アミノ酸３５０、アミノ酸１～最大約アミノ酸３６０、アミノ酸１～最大約アミノ酸３７０、アミノ酸１～最大約アミノ酸３８０、アミノ酸１～最大約アミノ酸３９０、アミノ酸１～最大約アミノ酸４００、アミノ酸１～最大約アミノ酸４１０、アミノ酸１～最大約アミノ酸４２０、アミノ酸１～最大約アミノ酸４３０、アミノ酸１～最大約アミノ酸４４０、アミノ酸１～最大約アミノ酸４５０、アミノ酸１～最大約アミノ酸４６０、アミノ酸１～最大約アミノ酸４７０、アミノ酸１～最大約アミノ酸４８０、アミノ酸１～最大約アミノ酸４９０、アミノ酸１～最大約アミノ酸５００、アミノ酸１～最大約アミノ酸５１０、アミノ酸１～最大約アミノ酸５２０、アミノ酸１～最大約アミノ酸５３０、アミノ酸１～最大約アミノ酸５４０、アミノ酸１～最大約アミノ酸５５０、アミノ酸１～最大約アミノ酸５６０、アミノ酸１～最大約アミノ酸５７０、アミノ酸１～最大約アミノ酸５８０、アミノ酸１～最大約アミノ酸５９０、アミノ酸１～最大約アミノ酸６００、アミノ酸１～最大約アミノ酸６１０、アミノ酸１～最大約アミノ酸６２０、アミノ酸１～最大約アミノ酸６３０、アミノ酸１～最大約アミノ酸６４０、アミノ酸１～最大約アミノ酸６５０、アミノ酸１～最大約アミノ酸６６０、アミノ酸１～最大約アミノ酸６７０、アミノ酸１～最大約アミノ酸６８０、アミノ酸１～最大約アミノ酸６９０、アミノ酸１～最大約アミノ酸７００、アミノ酸１～最大約アミノ酸７１０、アミノ酸１～最大約アミノ酸７２０、アミノ酸１～最大約アミノ酸７３０、アミノ酸１～最大約アミノ酸７４０、アミノ酸１～最大約アミノ酸７５０、アミノ酸１～最大約アミノ酸７６０、アミノ酸１～最大約アミノ酸７７０、アミノ酸１～最大約アミノ酸７８０、アミノ酸１～最大約アミノ酸７９０、アミノ酸１～最大約アミノ酸８００、アミノ酸１～最大約アミノ酸８１０、またはアミノ酸１～最大約アミノ酸８２０）。
組成物内の異なる構築物の数が２であるいくつかの例では、２つの構築物のうちの１つによってコードされるＣ末端部分は、抗ＶＥＧＦタンパク質（例えば、配列番号１６、１７、１８、２０、２１、２３、及び／または４３）の最終アミノ酸（例えば、アミノ酸位置８２０位付近）からアミノ酸位置１位付近、またはこの範囲の任意の部分範囲を含む部分を含むことができる（例えば、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸１０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸２０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸３０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸６０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸７０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸８０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸９０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸１００、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸１１０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸１２０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸１３０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸１４０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸１５０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸１６０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸１７０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸１８０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸１９０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸２００、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸２１０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸２２０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸２３０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸２４０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸２５０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸２６０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸２７０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸２８０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸２９０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸３００、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸３１０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸３２０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸３３０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸３４０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸３５０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸３６０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸３７０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸３８０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸３９０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸４００、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸４１０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸４２０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸４３０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸４４０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸４５０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸４６０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸４７０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸４８０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸４９０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸５００、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸５１０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸５２０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸５３０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸５４０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸５５０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸５６０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸５７０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸５８０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸５９０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸６００、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸６１０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸６２０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸６３０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸６４０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸６５０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸６６０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸６７０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸６８０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸６９０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸７００、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸７１０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸７２０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸７３０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸７４０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸７５０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸７６０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸７７０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸７８０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸７９０、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸８００、アミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸８１０、またはアミノ酸８２０～少なくとも約アミノ酸８２０）。組成物内の異なる構築物の数が２であるいくつかの例では、前駆体抗ＶＥＧＦタンパク質のＣ末端部分は、抗ＶＥＧＦタンパク質（例えば、配列番号１６、１７、１８、２０、２１、２３、及び／または４３）の最終アミノ酸（例えば、アミノ酸位置８２０位付近）から最大アミノ酸位置１位付近、またはこの範囲の任意の部分範囲を含む部分を含むことができる（例えば、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸１０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸２０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸３０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸６０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸７０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸８０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸９０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸１００、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸１１０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸１２０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸１３０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸１４０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸１５０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸１６０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸１７０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸１８０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸１９０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸２００、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸２１０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸２２０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸２３０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸２４０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸２５０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸２６０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸２７０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸２８０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸２９０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸３００、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸３１０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸３２０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸３３０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸３４０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸３５０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸３６０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸３７０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸３８０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸３９０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸４００、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸４１０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸４２０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸４３０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸４４０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸４５０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸４６０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸４７０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸４８０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸４９０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸５００、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸５１０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸５２０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸５３０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸５４０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸５５０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸５６０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸５７０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸５８０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸５９０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸６００、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸６１０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸６２０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸６３０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸６４０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸６５０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸６６０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸６７０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸６８０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸６９０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸７００、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸７１０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸７２０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸７３０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸７４０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸７５０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸７６０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸７７０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸７８０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸７９０、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸８００、アミノ酸８２０～最大約アミノ酸８１０、またはアミノ酸８２０～最大約アミノ酸８２０、またはこれらの間の任意の長さの配列）。
いくつかの実施形態では、スプライス部位はトランススプライシングに関与する。いくつかの実施形態では、スプライスドナー部位（Ｔｒａｐａｎｉ ｅｔ ａｌ．ＥＭＢＯ Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．６（２）：１９４－２１１，２０１４、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）は、Ｎ末端構築物において、コード配列に続く。Ｃ末端構築物において、スプライスアクセプター部位は、抗ＶＥＧＦ遺伝子の第２の部分に対するコード配列の直前にサブクローニングされ得る。いくつかの実施形態では、コード配列内に、サイレント変異を導入し、制限消化のための追加の部位を生成することができる。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される任意の構築物は、新生血管形成を特徴とする耳科疾患（例えば、ＶＳ）に関連する症状の軽快のために動物に投与するのに適した組成物に含まれることができる。
医薬組成物
特定の実施形態では、本開示の組成物は、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ製剤緩衝液と組成が同等またはほぼ同等の、別個の希釈製剤（ＡＡＶ希釈製剤）に関する。特定の実施形態では、希釈製剤は、製造され、滅菌ろ過され（０．２μｍフィルター）、単回使用バイアルに無菌充填される。特定の実施形態では、製剤緩衝液は、１．５ｍＭのリン酸一カリウム、８．１ｍＭのリン酸二ナトリウム、２．７ｍＭの塩化カリウム、１７２ｍＭの塩化ナトリウム、及び０．００１％のポロキサマー１８８を含有する滅菌水を含む。特定の実施形態では、希釈製剤は、目的の哺乳動物（例えば、それを必要とするヒト）での使用のために記載された用量に必要な濃度を調製するために利用される。
とりわけ、本開示は医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される組成物は、新生血管形成を特徴とする耳科疾患（例えば、ＶＳ）に関連する症状の軽快のために、動物に投与するのに適している。
いくつかの実施形態では、本開示の医薬組成物は、例えば、ポリヌクレオチド、例えば、本明細書に記載の１つ以上の構築物を含み得る。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、１つ以上のＡＡＶ粒子、例えば、本明細書に記載のように、１つ以上のＡＡＶ血清型カプシドによりカプシド封入された１つ以上のｒＡＡＶ構築物を含み得る。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、１つ以上の薬学的または生理学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を含む。本明細書で使用される場合、「医薬的に許容される担体」という用語は、医薬品投与に適合する溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤、抗真菌剤などを含む。また、補助的な活性化合物も、本明細書に記載される任意の組成物に組み込むことができる。このような組成物は、１つ以上の緩衝液（例えば、中性緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水など）；１つ以上の炭水化物（例えば、グルコース、マンノース、スクロース、及びデキストラン）；マンニトール；１つ以上のタンパク質、ポリペプチド、もしくはアミノ酸（例えば、グリシン）；１つ以上の酸化防止剤；１つ以上のキレート剤（例えば、ＥＤＴＡもしくはグルタチオン）；及び／または１つ以上の防腐剤を含み得る。いくつかの実施形態では、製剤は、注射液、注射用ゲル、薬物放出カプセルなどの剤形である。
いくつかの実施形態では、本開示の組成物は、静脈内投与用に製剤化される。いくつかの実施形態では、本開示の組成物は、蝸牛内投与用に製剤化される。いくつかの実施形態では、治療用組成物は、脂質ナノ粒子、ポリマーナノ粒子、ミニサークルＤＮＡ及び／またはＣＥＬｉＤ ＤＮＡを含むように製剤化される。
いくつかの実施形態では、治療用組成物は合成外リンパ液を含むように製剤化される。例えば、いくつかの実施形態では、合成外リンパ液は、２０～２００ｍＭのＮａＣｌ；１～５ｍＭのＫＣｌ；０．１～１０ｍＭのＣａＣｌ２；１～１０ｍＭのグルコース；及び２～５０ｍＭのＨＥＰＥＳを含み、ｐＨは約６～約９である。いくつかの実施形態では、治療用組成物は生理学的に許容される溶液に適切な希釈で製剤化される（例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌ．１１０：１－１９，２００５、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるに記載されているように、ＮａＣｌ １２０ｍＭ；ＫＣｌ ３．５ｍＭ；ＣａＣｌ２ １．５ｍＭ；グルコース ５．５ｍＭ；ＨＥＰＥＳ ２０ｍＭを含む人工外リンパ液が、ＮａＯＨでタイトレーションされ、そのｐＨが７．５になるように調整される（総Ｎａ＋濃度１３０ｍＭ））。いくつかの実施形態では、治療用組成物は、生理学的に好適な溶液を含むように製剤化される。例えば、いくつかの実施形態では、生理学的に好適な溶液は、以下の最終濃度になるように調製されたプルロニック酸Ｆ６８を含む市販の１×ＰＢＳを含む：８．１０ｍＭのリン酸二ナトリウム、１．５ｍＭのリン酸一カリウム、２．７ｍＭの塩化カリウム、１７２ｍＭの塩化ナトリウム、及び０．００１％のプルロニック酸Ｆ６８）。いくつかの実施形態では、別のプルロニック酸が利用される。いくつかの実施形態では、別のイオン濃度が利用される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の医薬組成物は、本明細書に記載の核酸または任意の構築物の哺乳動物細胞中への進入を促進する１つ以上の作用物質（例えば、リポソームまたはカチオン性脂質）をさらに含むことができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の構築物は、天然ポリマー及び／または合成ポリマーを用いて製剤化することができる。本明細書に記載の任意の組成物に含まれ得るポリマーの非限定的な例としては、これらに限定されないが、ＤＹＮＡＭＩＣ ＰＯＬＹＣＯＮＪＵＧＡＴＥ（登録商標）（Ａｒｒｏｗｈｅａｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｒｐ．，Ｐａｓａｄｅｎａ，Ｃａｌｉｆ．）、Ｍｉｒｕｓ Ｂｉｏ（Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）及びＲｏｃｈｅ Ｍａｄｉｓｏｎ（Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）による製剤、ＰｈａｓｅＲＸポリマー製剤（例えば、限定されるものではないが、ＳＭＡＲＴＴ ＰＯＬＹＭＥＲ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ（登録商標）（ＰｈａｓｅＲＸ，Ｓｅａｔｔｌｅ，Ｗａｓｈ．））、ＤＭＲＩ／ＤＯＰＥ、ポロキサマー、Ｖｉｃａｌ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）によるＶＡＸＦＥＣＴＩＮ（登録商標）アジュバント、キトサン、Ｃａｌａｎｄｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（Ｐａｓａｄｅｎａ，Ｃａｌｉｆ．）によるシクロデキストリン、デンドリマー及びポリ（乳酸－グリコール酸共重合体）（ＰＬＧＡ）ポリマー、ＲＯＮＤＥＬ（商標）（ＲＮＡｉ／オリゴヌクレオチドナノ粒子送達）ポリマー（Ａｒｒｏｗｈｅａｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｐａｓａｄｅｎａ，Ｃａｌｉｆ．）、ならびにｐＨ反応性ブロック共重合体（例えば、限定されるものではないが、ＰｈａｓｅＲＸ（Ｓｅａｔｔｌｅ，Ｗａｓｈ．）により生産されるもの）が挙げられ得る。これらのポリマーのうちの多くは、哺乳動物細胞へのｉｎ ｖｉｖｏでのオリゴヌクレオチドの送達において有効性を実証した（例えば、ｄｅＦｏｕｇｅｒｏｌｌｅｓ，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１９：１２５-１３２，２００８；Ｒｏｚｅｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０４：１２９８２－１２８８７，２００７；Ｒｏｚｅｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０４：１２９８２－１２８８７，２００７；Ｈｕ－Ｌｉｅｓｋｏｖａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６５：８９８４－８９８２，２００５；Ｈｅｉｄｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０４：５７１５－５７２１，２００７（これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。
いくつかの実施形態では、組成物は、薬学的に許容される担体（例えば、リン酸緩衝生理食塩水、生理食塩水、または静菌水）を含む。製剤化すると、いくつかの実施形態では、溶液は、投与剤形に適合した様式で、かつ治療上有効であるような量で投与され得る。いくつかの実施形態では、製剤は、注射液、注射用ゲル、薬物放出カプセルなどの様々な剤形で投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される組成物は、その意図される投与経路に適合するように製剤化することができる。意図される投与経路の非限定的な例としては、局所投与（例えば、蝸牛内投与）がある。
いくつかの実施形態では、提供される組成物は、１つの核酸構築物を含む。いくつかの実施形態では、提供される組成物は、２つ以上の異なる構築物を含む。いくつかの実施形態では、単一の核酸構築物を含む組成物は、抗ＶＥＧＦタンパク質及び／またはその機能的特徴部分をコードするコード配列を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、抗ＶＥＧＦタンパク質及び／またはその機能的特徴部分をコードするコード配列を含む単一の核酸構築物を含み、哺乳動物細胞に導入されると、そのコード配列は哺乳動物細胞のゲノムに組み込まれる。いくつかの実施形態では、組成物は、少なくとも２つの異なる構築物を含み（例えば、構築物は、抗ＶＥＧＦタンパク質の異なる部分をコードするコード配列を含み、該構築物は、哺乳動物細胞において、活性抗ＶＥＧＦタンパク質（例えば、全長のラニビズマブ、ベバシズマブ、またはアフリベルセプトタンパク質）をコードする配列を生成するために組み合わせることができる）、それにより、関連するＶＳ、及び／または新生血管形成を特徴とし、本明細書に記載の抗ＶＥＧＦタンパク質治療に適した他の耳科関連疾患を治療する。
また、本明細書に記載される任意の組成物を含むキットも提供される。いくつかの実施形態では、キットは、固体組成物（例えば、本明細書に記載される少なくとも２つの異なる構築物を含む凍結乾燥組成物）と、凍結乾燥組成物を可溶化させるための液体とを含み得る。いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載される任意の組成物を含む充填済みシリンジを含み得る。
いくつかの実施形態では、キットは、（例えば、水性組成物、例えば、水性医薬組成物として製剤化された）本明細書に記載される任意の組成物を含むバイアルを含む。いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載される任意の方法を実施するための説明書を含み得る。
遺伝子改変細胞
本開示はまた、本明細書に記載の任意の核酸、構築物、または組成物を含む細胞（例えば動物細胞、例えば哺乳動物細胞、例えば霊長類細胞、例えばヒト細胞）も提供する。いくつかの実施形態では、動物細胞はヒト細胞（例えば、ヒト支持細胞またはヒト有毛細胞）である。他の実施形態では、動物細胞は非ヒト哺乳動物である（例えば、サル細胞、ネコ科細胞、イヌ科細胞など）。当業者は、本明細書に記載の核酸及び構築物を任意の動物細胞（例えば、獣医学的介入に好適である任意の動物の支持細胞または有毛細胞）に導入できることを理解するであろう。構築物の非限定的な例、及び構築物を動物細胞に導入するための方法が本明細書に記載される。
いくつかの実施形態では、動物細胞は、有毛細胞及び／または支持細胞を含む、内耳の任意の細胞であり得る。そのような細胞の非限定的な例としては、以下が挙げられる：ヘンゼン細胞、ダイテルス細胞、内リンパ嚢及び管の細胞、球形嚢、卵形嚢、及び膨大部の移行細胞、内有毛細胞及び外有毛細胞、ラセン靭帯細胞、ラセン神経節細胞、ラセン隆起細胞、外側球形嚢細胞、辺縁細胞、中間細胞、基底細胞、内柱細胞、外柱細胞、クラウディウス細胞、内側境界細胞、内指節細胞、または血管条の細胞。
いくつかの実施形態では、動物細胞は、蝸牛の特殊化した細胞である。いくつかの実施形態では、動物細胞は有毛細胞である。いくつかの実施形態では、動物は、蝸牛内有毛細胞または蝸牛外有毛細胞である。いくつかの実施形態では、動物細胞は、蝸牛内有毛細胞である。いくつかの実施形態では、動物細胞は、蝸牛外有毛細胞である。
いくつかの実施形態では、動物細胞はｉｎ ｖｉｔｒｏに存在する。いくつかの実施形態では、動物細胞は、動物、例えば霊長類及び／またはヒトに内因的に存在する細胞タイプのものである。いくつかの実施形態では、動物細胞は、動物から得られ、ｅｘ ｖｉｖｏで培養した自家細胞である。
方法
とりわけ、本開示は、脈管化に関連する耳科疾患、例えばＶＳを有する対象を治療するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、方法は、本明細書に記載の組成物を対象の内耳（例えば、蝸牛）に導入することを含む。例えば、本明細書では、いくつかの実施形態では、対象（例えば、動物、例えば、哺乳動物、例えば、霊長類、例えば、ヒト）の内耳（例えば、蝸牛）に、有効量、例えば、治療有効量の、本明細書に記載の任意の組成物を投与することを含む方法が提供される。本明細書に開示される任意の方法のいくつかの実施形態では、対象は、欠損のある内耳細胞標的遺伝子（例えば、その遺伝子によってコードされる支持細胞及び／または聴覚細胞標的タンパク質の発現及び／または活性の低下をもたらす変異、例えば、ＮＦ２における変異を有する支持細胞及び／または聴覚細胞標的遺伝子）を有するとこれまでに同定されている。本明細書に開示される任意の方法のいくつかの実施形態は、導入または投与ステップの前に、対象が欠損のある内耳細胞標的遺伝子を有することを判定することをさらに含む。本明細書に開示される任意の方法のいくつかの実施形態は、対象において内耳細胞標的遺伝子の変異を検出することをさらに含み得る。本明細書に開示される任意の方法のいくつかの実施形態は、対象が非症候性または症候性感音難聴を有すると同定または診断することをさらに含むことができる。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、ＶＳを有する対象、例えば哺乳動物、例えばヒト、例えば患者の治療のために、本明細書に開示される組成物、例えばｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦを投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、外科的送達を介して、例えば、蝸牛に送達される。
いくつかの実施形態では、対象は、進行性腫瘍、例えば、連続スキャンにおいて少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％の成長率を有する腫瘍、例えば、進行の証拠を有する腫瘍を有する。いくつかの実施形態では、対象は、進行性腫瘍、例えば、継続的スキャンにおいて少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％の成長率を有する腫瘍、例えば、進行の証拠を有する腫瘍を有する。
いくつかの実施形態では、対象は、安定した腫瘍、例えば、連続スキャンにおいて５％未満、１０％未満、２０％未満、または３０％未満の成長率を有する腫瘍、例えば、実質的な進行の証拠を欠いている腫瘍を有する。いくつかの実施形態では、対象は、安定した腫瘍、例えば、継続的スキャンにおいて５％未満、１０％未満、２０％未満、または３０％未満の成長率を有する腫瘍、例えば、実質的な進行の証拠を欠いている腫瘍を有する。
いくつかの実施形態では、対象は、最大寸法が２ｃｍ以上の腫瘍（例えば、小脳橋角部に浸潤し、脳幹を圧迫する可能性がある腫瘍）を有していない。いくつかの実施形態では、対象は、外科的切除及び放射線治療の現在の標準治療で回避され得る、生命を脅かす可能性のある腫瘍関連続発症のリスクが高くない。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、外科的切除または放射線を施すことをさらに含む。
いくつかの実施形態では、対象は、最大寸法が２ｃｍ以上の腫瘍（例えば、小脳橋角部に浸潤し、脳幹を圧迫する可能性がある腫瘍）を有する。いくつかの実施形態では、対象は、本明細書に記載の方法及び組成物の投与を通じて回避され得る、生命を脅かす可能性のある腫瘍関連続発症のリスクが高い。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物は、現在の標準治療法との併用療法として利用され、例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、外科的切除または放射線を施すことをさらに含む。
いくつかの実施形態では、対象は、対側の耳に重度の聾がない。いくつかの実施形態では、対象は、対側の耳に聴力機能を有する。いくつかの実施形態では、対象は、語音聴取及び環境認識などの重要な聴覚領域へのアクセスを維持することができる。いくつかの実施形態では、ＮＦ２を有する対象は、本明細書に開示される組成物を投与されない。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物の安全性及び耐性は、片側散発性進行性ＶＳで評価することができる。本明細書に開示される任意の方法のいくつかの実施形態では、対象は、小さい（最大寸法２ｃｍ未満）及び／または片側散発性腫瘍の進行性の成長を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物、例えばｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦの安全性及び耐性は、本明細書に開示される対象において評価することができる。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物、例えばｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦは、蝸牛内投与のための滅菌懸濁液として製剤化される。いくつかの実施形態では、組成物は、構築物を、少なくとも１×１０１１、少なくとも５×１０１１、少なくとも１×１０１２、少なくとも１×１０１２、少なくとも２×１０１２、少なくとも３×１０１２、少なくとも４×１０１２、少なくとも５×１０１２、少なくとも６×１０１２、少なくとも７×１０１２、少なくとも８×１０１２、少なくとも９×１０１２、少なくとも１×１０１３、少なくとも２×１０１３、少なくとも３×１０１３、少なくとも４×１０１３、少なくとも５×１０１３、少なくとも６×１０１３、少なくとも７×１０１３、少なくとも８×１０１３、少なくとも９×１０１３、または少なくとも１×１０１４ベクターゲノム（ｖｇ）／ミリリットル（ｍＬ）（ｖｇ／ｍＬ）の量で含む。いくつかの実施形態では、組成物は、構築物を、最大１×１０１５、最大５×１０１４、最大１×１０１４、最大５×１０１３、最大１×１０（１３）、最大９×１０１２、最大８×１０１２、最大７×１０１２、最大６×１０１２、最大５×１０１２、最大４×１０（１２）、最大３×１０１２、最大２×１０１２、または最大１×１０１２ベクターゲノム（ｖｇ）／ミリリットル（ｍＬ）の量で含む。いくつかの実施形態では、組成物は、構築物を、約１×１０１２ｖｇ／ｍＬ～１×１０１３ｖｇ／ｍＬ、約５×１０（１２）ｖｇ／ｍＬ～５×１０１３ｖｇ／ｍＬ、または約１×１０１３ｖｇ／ｍＬ～２×１０１３ｖｇ／ｍＬの量で含む。
いくつかの実施形態では、組成物は、構築物を、約１×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約１．１×１０１２ｖｇ／ｍＬ、１．２×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約１．３×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約１．４×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約１．５×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約１．６×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約１．７×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約１．８×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約１．９×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約２．０×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約２．１×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約２．２×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約２．３×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約２．４×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約２．５×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約２．６×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約２．７×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約２．８×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約２．９×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約３．０×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約３．１×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約３．２×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約３．３×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約３．４×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約３．５×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約３．６×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約３．７×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約３．８×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約３．９×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約４．０×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約４．１×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約４．２×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約４．３×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約４．４×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約４．５×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約４．６×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約４．７×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約４．８×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約４．９×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約５．０×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約５．１×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約５．２×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約５．３×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約５．４×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約５．５×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約５．６×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約５．７×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約５．８×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約５．９×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約６．０×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約７．０×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約８．０×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約９．０×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約９．１×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約９．２×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約９．３×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約９．４×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約９．５×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約９．６×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約９．７×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約９．８×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約９．９×１０１２ｖｇ／ｍＬ、約１×１０１３ｖｇ／ｍＬ、１．１×１０１３ｖｇ／ｍＬ、１．２×１０１３ｖｇ／ｍＬ、１．３×１０１３ｖｇ／ｍＬ、１．４×１０１３ｖｇ／ｍＬ、１．５×１０１３ｖｇ／ｍＬ、１．６×１０１３ｖｇ／ｍＬ、１．７×１０１３ｖｇ／ｍＬ、１．８×１０１３ｖｇ／ｍＬ、１．９×１０１３ｖｇ／ｍＬ、２×１０１３ｖｇ／ｍＬ、５×１０１３ｖｇ／ｍＬ、または１×１０１４ｖｇ／ｍＬの量で含む。
いくつかの実施形態では、組成物は、構築物を２．５×１０１２ｖｇ／ｍＬ＋／－１０％の量で含む。
いくつかの実施形態では、組成物は、構築物を５×１０１２ｖｇ／ｍＬ＋／－１０％の量で含む。
いくつかの実施形態では、組成物は、構築物を１×１０１３ｖｇ／ｍＬ＋／－１０％の量で含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物、例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦは、耳科手術の経験を積んだ専門医師会認定の外科医によって制御された無菌条件下で手術室で投与される。いくつかの実施形態では、投与処置は、顕微鏡または内視鏡支援下経外耳道的試験的鼓室開放術及びレーザー支援下微細アブミ骨底開窓術（ｍｉｃｒｏｓｔａｐｅｄｏｔｏｍｙ）の後に、本明細書に開示される組成物、例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ粒子を含む溶液、例えば、約０．０９ｍＬを送達する正円窓注入を行う。経外耳道的試験的鼓室開放術は、中耳の構造を露出させるために用いられる一般的な処置であり、経外耳道的試験的鼓室開放術は、例えば、耳硬化症の患者に対して、レーザー支援下アブミ骨摘出術（アブミ骨底板の除去）またはアブミ骨底開窓術（アブミ骨底板に穴を開ける）を伴うことが多い。いくつかの実施形態では、アブミ骨底板のおよそ０．２５ｍｍの通気孔（耳科用レーザーを用いて作製される）は、迷路内圧の有害な上昇の可能性を防止するのに役立つ。
いくつかの実施形態では、本明細書では、本明細書に開示される組成物を、アブミ骨底板に位置する通気部を伴って正円窓膜を通じて内耳の外リンパ液に投与する、無菌の使い捨て送達デバイスを開示する。いくつかの実施形態では、このカスタムデバイスは、蝸牛内投与経路用に特別に設計されているため、例えば、治療薬の安全性及び有効性の可能性の両方に関して、入手可能な物質よりも利点をもたらす。いくつかの実施形態では、送達デバイスの設計要素には、以下が含まれる：注入された流体の無菌性の維持；内耳に導入される気泡の最小化；制御された流速で少量を正確に送達する能力（標準ポンプの使用と合わせて）；正円窓膜を明視化し、外科医による外耳道を通じた送達を可能にすること；正円窓膜、もしくは正円窓膜から先の蝸牛構造への損傷の最小化；及び／または正円窓膜を通じた逆流の最小化。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される任意の方法は、対象、例えば哺乳動物、例えばヒト、例えば患者、例えば片側進行性散発性ＶＳを有する対象における安全性及び耐性を評価するための用量漸増試験を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物、例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦは、本明細書に開示される投与レジメンで投与される。いくつかの実施形態では、投与レジメンは、本明細書に開示される組成物、例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦの、例えば、本明細書に記載の用量の片側または両側蝸牛内投与を含む。いくつかの実施形態では、投与レジメンは、少なくとも０．０１ｍＬ、少なくとも０．０２ｍＬ、少なくとも０．０３ｍＬ、少なくとも０．０４ｍＬ、少なくとも０．０５ｍＬ、少なくとも０．０６ｍＬ、少なくとも０．０７ｍＬ、少なくとも０．０８ｍＬ、少なくとも０．０９ｍＬ、少なくとも０．１０ｍＬ、少なくとも０．１１ｍＬ、少なくとも０．１２ｍＬ、少なくとも０．１３ｍＬ、少なくとも０．１４ｍＬ、少なくとも０．１５ｍＬ、少なくとも０．１６ｍＬ、少なくとも０．１７ｍＬ、少なくとも０．１８ｍＬ、少なくとも０．１９ｍＬ、または少なくとも０．２０ｍＬ／蝸牛の容量で送達することを含む。いくつかの実施形態では、投与レジメンは、最大０．３０ｍＬ、最大０．２５ｍＬ、最大０．２０ｍＬ、最大０．１５ｍＬ、最大０．１４ｍＬ、最大０．１３ｍＬ、最大０．１２ｍＬ、最大０．１１ｍＬ、最大０．１０ｍＬ、最大０．０９ｍＬ、最大０．０８ｍＬ、最大０．０７ｍＬ、最大０．０６ｍＬ、または最大０．０５ｍＬ／蝸牛の容量で送達することを含む。いくつかの実施形態では、投与レジメンは、例えば、集団に応じて、約０．０５ｍＬ、約０．０６ｍＬ、約０．０７ｍＬ、約０．０８ｍＬ、約０．０９ｍＬ、約０．１０ｍＬ、約０．１１ｍＬ、約０．１２ｍＬ、約０．１３ｍＬ、約０．１４ｍＬ、または約０．１５ｍＬ／蝸牛の容量で送達することを含む。
いくつかの実施形態では、投与レジメンは、約０．０１ｍＬ～約０．３０ｍＬ、約０．０１ｍＬ～約０．２５ｍＬ、約０．０１ｍＬ～約０．２０ｍＬ、約０．０１ｍＬ～約０．１５ｍＬ、約０．０１ｍＬ～約０．１４ｍＬ、約０．０１ｍＬ～約０．１３ｍＬ、約０．０１ｍＬ～約０．１２ｍＬ、約０．０１ｍＬ～約０．１１ｍＬ、約０．０１ｍＬ～約０．１０ｍＬ、約０．０１ｍＬ～約０．０９ｍＬ、約０．０１ｍＬ～約０．０８ｍＬ、約０．０１ｍＬ～約０．０７ｍＬ、約０．０１ｍＬ～約０．０６ｍＬ、約０．０１ｍＬ～約０．０５ｍＬ、約０．０１ｍＬ～約０．０４ｍＬ、約０．０１ｍＬ～約０．０３ｍＬ、または約０．０１ｍＬ～約０．０２ｍＬの容量で送達することを含む。
いくつかの実施形態では、投与レジメンは、約０．０２ｍＬ～約０．３０ｍＬ、０．０３ｍＬ～約０．３０ｍＬ、０．０４ｍＬ～約０．３０ｍＬ、０．０５ｍＬ～約０．３０ｍＬ、０．０６ｍＬ～約０．３０ｍＬ、０．０７ｍＬ～約０．３０ｍＬ、０．０８ｍＬ～約０．３０ｍＬ、０．０９ｍＬ～約０．３０ｍＬ、０．１０ｍＬ～約０．３０ｍＬ、０．１１ｍＬ～約０．３０ｍＬ、０．１２ｍＬ～約０．３０ｍＬ、０．１３ｍＬ～約０．３０ｍＬ、０．１４ｍＬ～約０．３０ｍＬ、０．１５ｍＬ～約０．３０ｍＬ、０．１６ｍＬ～約０．３０ｍＬ、０．１７ｍＬ～約０．３０ｍＬ、０．１８ｍＬ～約０．３０ｍＬ、０．１９ｍＬ～約０．３０ｍＬ、０．２０ｍＬ～約０．３０ｍＬ、または０．２５ｍＬ～約０．３０ｍＬの容量で送達することを含む。
いくつかの実施形態では、投与レジメンは、約０．０１ｍＬ～約０．０３ｍＬ、約０．０２ｍＬ～約０．２５ｍＬ、約０．０３ｍＬ～約０．２０ｍＬ、約０．０４ｍＬ～約０．１８ｍＬ、約０．０５ｍＬ～約０．１６ｍＬ、約０．０６ｍＬ～約０．１４ｍＬ、約０．０７ｍＬ～約０．１２ｍＬ、または約０．０８ｍＬ～約０．１ｍＬの容量で送達することを含む。
いくつかの実施形態では、散発性進行性ＶＳを有する対象は、通常、片側で発症する。いくつかの実施形態では、片側性散発性進行性ＶＳを有する対象に、本明細書に開示される組成物の片側投与が行われる。いくつかの実施形態では、ＮＦ２を有する対象は、通常、両側性ＶＳを示す。いくつかの実施形態では、ＮＦ２を有する対象は、本明細書に開示される組成物の片側または両側投与のいずれかで投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、片側散発性進行性ＶＳを有する対象（例えば、１８～８０歳）に片側蝸牛内注入を介して投与される本明細書に開示される組成物、例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦの漸増用量の安全性及び耐性を評価する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物、例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦは、腫瘍の成長を阻害する。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される任意の方法は、本明細書に開示される組成物、例えばｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦの安全性及び耐性の評価を含む。いくつかの実施形態では、散発性進行性ＶＳを治療するための本明細書に開示される組成物、例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦの有効性の評価は、無作為化された制御された設定（同時の非介入観察群を使用する）で実施される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される任意の方法は、本明細書に開示される組成物、例えばｒＡＡＶ抗ＶＥＧＦの最適用量の決定を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される任意の方法は、より広いＶＳ集団における、本明細書に開示される組成物、例えばｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦの有効性の評価を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される任意の方法は、例えば、両側性ＶＳ腫瘍（ＮＦ２の状況における）を含む、最適な投与レジメンの決定を含む。
本明細書に開示される任意の方法のいくつかの実施形態では、該方法は、現在の標準治療、例えば、腫瘍の外科的切除及び／または放射線治療の実施をさらに含む。
本明細書に開示される任意の方法のいくつかの実施形態では、血清中で検出される既存の中和抗体（ＮＡｂ）は、蝸牛内投与経路によって送達されるｒＡＡＶ粒子の形質導入に実質的に影響を及ぼさない。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物を投与された対象は、例えば本明細書に記載される、既存の中和抗体（ＮＡｂ）を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物を投与された対象は、例えば本明細書に記載される、既存の中和抗体（ＮＡｂ）を有しない。
いくつかの実施形態では、本明細書では、対象、例えば動物、例えば哺乳動物、例えば霊長類、例えばヒトの内耳で抗ＶＥＧＦタンパク質（例えば、ラニビズマブ、ベバシズマブ、及び／またはアフリベルセプトタンパク質）を発現することによって新生血管形成を特徴とする疾患（例えば、ＶＳ）を軽快、及び／または治療する方法が提供される。いくつかの実施形態では、方法は、本明細書に記載の任意の組成物の有効量、例えば、治療有効量を対象の内耳に投与することを含み、該投与は、抗ＶＥＧＦタンパク質の発現により新生血管形成を特徴とする疾患を軽快及び／または治療する。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦタンパク質を産生する内耳標的細胞は、感覚細胞、例えば有毛細胞、及び／または非感覚細胞、例えば支持細胞、及び／または内耳細胞の全てまたは任意のサブセットであり得る。
本明細書ではまた、対象（例えば、動物、例えば、哺乳動物、例えば、霊長類、例えば、ヒト）の内耳細胞の任意のサブセットにおける抗ＶＥＧＦタンパク質の発現レベルを増加させる方法であって、対象の内耳に、有効量、例えば、治療有効量の本明細書に記載の任意の組成物を投与することを含み、該投与が、対象の内耳の任意の細胞サブセットにおける抗ＶＥＧＦタンパク質（例えば、ラニビズマブ、ベバシズマブ、及び／またはアフリベルセプト）の発現レベルの上昇をもたらす、方法も提供される。いくつかの実施形態では、内耳標的細胞は、感覚細胞、例えば有毛細胞、及び／または非感覚細胞、例えば支持細胞、及び／または内耳細胞の全てまたは任意のサブセットであり得る。
本明細書ではまた、新生血管形成を特徴とする耳科関連疾患を有すると同定された対象（例えば、動物、例えば、哺乳動物、例えば、霊長類、例えば、ヒト）において、ＶＳ関連症状（例えば、難聴、耳鳴り、回転性めまい、めまい、耳閉塞感、顔のしびれ、顔面の感覚異常、頭痛、ぎこちない歩行、及び／または精神錯乱など）を治療する方法であって、該対象の内耳に、有効量、例えば、治療有効量の本明細書に記載の任意の組成物を投与することを含む、方法も提供される。本明細書ではまた、対象の内耳に、有効量、例えば、治療有効量の本明細書に記載の任意の組成物を投与することを含む、方法も提供される。
本明細書ではまた、ＶＳの治療のための外科的方法も提供される。いくつかの実施形態では、該方法は、対象の蝸牛に切開部、例えば、第１の切開部を第１の切開点に導入するステップと、有効量、例えば、治療有効量の本明細書で提供される任意の組成物を蝸牛内に投与するステップとを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、切開点、例えば、第１の切開点で対象に投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、第１の切開部内に、または第１の切開部を通じて対象に投与される。
本明細書に記載の任意の方法のいくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の組成物は、蝸牛の卵円窓膜内に、またはそれを通じて対象に投与される。本明細書に記載の任意の方法のいくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の組成物は、蝸牛の正円窓膜内に、またはそれを通じて対象に投与される。本明細書に記載の任意の方法のいくつかの実施形態では、組成物は、正円窓膜に複数の切開部を作出することができる医療デバイスを用いて投与される。いくつかの実施形態では、医療デバイスは複数のマイクロニードルを含む。いくつかの実施形態では、医療デバイスは、略円形の第１の面を含む複数のマイクロニードルを含み、各マイクロニードルは少なくとも約１０ミクロンの直径を有する。いくつかの実施形態では、医療デバイスは、組成物を保持することができる基部及び／またはリザーバーを含む。いくつかの実施形態では、医療デバイスは、組成物を移送可能な内腔を個々に含む複数の中空マイクロニードルを含む。いくつかの実施形態では、医療デバイスは、少なくとも部分真空を生成するための手段を含む。
いくつかの実施形態では、本開示の技術を使用して、難聴を有するか、または難聴のリスクがある対象を治療する。いくつかの実施形態では、本開示の技術を使用して、耳鳴りを有するか、または耳鳴りのリスクがある対象を治療する。いくつかの実施形態では、本開示の技術を使用して、回転性めまいを有するか、または回転性めまいのリスクがある対象を治療する。いくつかの実施形態では、本開示の技術を使用して、ＶＳ腫瘍の成長を有するか、またはＶＳ腫瘍の成長のリスクがある対象を治療する。いくつかの実施形態では、本開示の技術を使用して、ＶＳに関連する無数の症状及び／または標準治療のＶＳ治療選択肢を有するか、またはそのリスクがある対象を治療する。例えば、いくつかの実施形態では、対象は、ＮＦ２の少なくとも１つの病原性バリアントに起因する症状を有する。当業者であれば、ＮＦ２の多くの異なる変異が、病原性バリアントをもたらし得ることを理解するであろう。いくつかのそのような実施形態では、病原性バリアントは、新生血管形成を特徴とする疾患の可能性を高めることによって、難聴、耳鳴り、回転性めまい、腫瘍の成長などを引き起こす、または引き起こすリスクがある。
いくつかの実施形態では、ＶＳ関連症状（例えば、難聴、耳鳴り、回転性めまい、めまい、耳閉塞感、顔のしびれ、顔面麻痺、頭痛、ぎこちない歩行、及び／または精神錯乱など）を経験している対象を、該ＶＳ関連症状を引き起こしている可能性がある１以上の変異が存在するかどうか、及びその場所を決定するために評価する。いくつかのそのような実施形態では、特定の遺伝子産物または機能の状態が（例えば、タンパク質または配列決定分析を介して）評価される。本明細書に記載の任意の方法のいくつかの実施形態では、対象または動物は哺乳動物であり、いくつかの実施形態では、哺乳動物は、家畜、農場動物、動物園動物、非ヒト霊長類、またはヒトである。本明細書に記載の任意の方法のいくつかの実施形態では、動物、対象、または哺乳動物は、成体、ティーンエイジャー、若齢個体、幼齢個体、幼児期個体、乳児期個体、または新生児期個体である。本明細書に記載の任意の方法のいくつかの実施形態では、動物、対象、または哺乳動物は、１～５、１～１０、１～２０、１～３０、１～４０、１～５０、１～６０、１～７０、１～８０、１～９０、１～１００、１～１１０、２～５、２～１０、１０～２０、２０～３０、３０～４０、４０～５０、５０～６０、６０～７０、７０～８０、８０～９０、９０～１００、１００～１１０、１０～３０、１０～４０、１０～５０、１０～６０、１０～７０、１０～８０、１０～９０、１０～１００、１０～１１０、２０～４０、２０～５０、２０～６０、２０～７０、２０～８０、２０～９０、２０～１００、２０～１１０、３０～５０、３０～６０、３０～７０、３０～８０、３０～９０、３０～１００、４０～６０、４０～７０、４０～８０、４０～９０、４０～１００、５０～７０、５０～８０、５０～９０、５０～１００、６０～８０、６０～９０、６０～１００、７０～９０、７０～１００、７０～１１０、８０～１００、８０～１１０、または９０～１１０歳である。本明細書に記載の任意の方法のいくつかの実施形態では、対象または哺乳動物は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１１ヶ月齢である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の方法及び／または組成物は、ＶＳ関連症状（例えば、難聴、耳鳴り、回転性めまい、めまい、耳閉塞感、顔のしびれ、顔面の感覚異常、頭痛、ぎこちない歩行、及び／または精神錯乱など）の改善（複数可）をもたらし得る。いくつかの実施形態では、そのような症状は、少なくとも１０日間、少なくとも１５日間、少なくとも２０日間、少なくとも２５日間、少なくとも３０日間、少なくとも３５日間、少なくとも４０日間、少なくとも４５日間、少なくとも５０日間、少なくとも５５日間、少なくとも６０日間、少なくとも６５日間、少なくとも７０日間、少なくとも７５日間、少なくとも８０日、少なくとも８５日間、少なくとも１００日間、少なくとも１０５日間、少なくとも１１０日間、少なくとも１１５日間、少なくとも１２０日間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも７ヶ月間、少なくとも８ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１０ヶ月間、少なくとも１１ヶ月間、または少なくとも１２ヶ月間、それを必要とする対象において、測定され、決定される（例えば、本明細書に記載のまたは当該技術分野で知られている、そのような症状の改善を判定するための任意の測定基準を用いて）。
いくつかの実施形態では、対象（例えば、動物、例えば、哺乳動物、例えば、ヒト）は、ＶＳ関連症状（例えば、難聴、耳鳴り、回転性めまい、めまい、耳閉塞感、顔のしびれ、顔面の感覚異常、頭痛、ぎこちない歩行、及び／または精神錯乱など）を有するか、または発症するリスクがある。いくつかの実施形態では、対象（例えば、動物、例えば、哺乳動物、例えば、ヒト）は、ＮＦ２遺伝子に変異を有するとこれまでに同定されている。いくつかの実施形態では、対象（例えば動物、例えば哺乳動物、例えばヒト）は、新生血管形成を特徴とする疾患、例えばＶＳに関連することが当該技術分野で知られているＮＦ２遺伝子の任意の変異を有する。いくつかのそのような実施形態では、対象（例えば、動物、例えば哺乳動物、例えばヒト）は、これまでに同定されていなかったＶＳに関連する遺伝子の変異の保因者であると同定されている（例えば、遺伝子検査によって）。いくつかのそのような実施形態では、同定された変異は新規である可能性があり（例えば、過去に文献に記載されていない）、ＶＳに罹患している、またはＶＳに罹患しやすい対象の治療方法は、特定の患者の変異（複数可）に合わせて個別化される。
いくつかの実施形態では、対象（例えば、動物、例えば、哺乳動物、例えば、ヒト）は、ＮＦ２遺伝子の変異の保因者であると同定されている（例えば、遺伝子検査によって）。いくつかの実施形態では、対象（例えば、動物、例えば、哺乳動物、例えば、ヒト）は、ＮＦ２遺伝子に変異を有すると同定されており、ＶＳ関連症状（複数可）（例えば、難聴、耳鳴り、回転性めまい、めまい、耳閉塞感、顔のしびれ、顔面の感覚異常、頭痛、ぎこちない歩行、及び／または精神錯乱など）と診断されている。いくつかの実施形態では、対象（例えば、動物、例えば哺乳動物、例えばヒト）は、新生血管形成を特徴とする疾患に関連する症状を有すると同定されている。
いくつかの実施形態では、ＶＳ及びＶＳ関連症状（複数可）（例えば、難聴、耳鳴り、回転性めまい、めまい、耳閉塞感、顔のしびれ、顔面の感覚異常、頭痛、ぎこちない歩行、及び／または精神錯乱など）の治療の成功は、これらに限定されないが、聴力検査、耳鳴り検査、歩行検査、認知機能検査、画像診断技術、及び／または診断バイオマーカーの採取を含む、当該技術分野で知られている従来の方法のいずれかを使用して、対象において判定することができる。例えば、機能的聴力検査の非限定的な例は、様々な種類の聴力測定アッセイ（例えば、純音検査、語音検査、中耳の検査、聴性脳幹反応、及び耳音響放射）である。
本明細書で提供される任意の方法のいくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の組成物の２回以上の用量が、対象の蝸牛内に導入または投与される。これらの方法のいずれかのいくつかの実施形態は、組成物の第１の用量を対象の蝸牛内に導入または投与することと、第１の用量の導入または投与後に対象の聴力機能を評価することと、組成物の追加の用量を、正常範囲内の聴力機能を有していないことが判明した（例えば、当該技術分野で知られている任意の聴力検査を用いて判定して）対象の蝸牛内に投与することと、を含み得る。
本明細書で提供される任意の方法のいくつかの実施形態では、組成物は、蝸牛内投与用に製剤化することができる。本明細書に記載の任意の方法のいくつかの実施形態では、本明細書に記載される組成物は、蝸牛内投与または局所投与を介して投与することができる。本明細書に記載の任意の方法のいくつかの実施形態では、組成物は、医療デバイス（例えば、本明細書に記載される任意の例示的な医療デバイス）の使用によって投与される。
いくつかの実施形態では、蝸牛内投与は、本明細書に記載されるまたは当該技術分野で知られている任意の方法を用いて実施することができる。例えば、いくつかの実施形態では、組成物は、以下の外科的技法を用いて、蝸牛内に投与または導入することができる。まず、０度、２．５ｍｍ硬性内視鏡での明視化を用いて、外耳道を洗浄し、ラウンドナイフを用いておよそ５ｍｍの鼓膜外耳道皮弁に沿って細い切開線を入れる。次いで、鼓膜外耳道皮弁を挙上し、中耳後方に進入する。鼓索神経を特定して分割し、キュレットを使用して上鼓室側壁骨（ｓｃｕｔａｌ ｂｏｎｅ）を取り除き、正円窓膜を露出させる。投与または導入された組成物の頂部への分散を強化するために、手術用レーザーを用いて、卵円窓に小さな２ｍｍの開窓部を作出して、組成物の経正円窓膜注入中の外リンパ移動を可能とすることができる。次いで、微量注入デバイスをプライミングし、術野に入れる。デバイスを正円窓へと動かし、先端部を正円窓の骨突出部内に設置して、マイクロニードル（複数可）による膜の穿通を可能にする。フットペダルを連動させて、組成物を測定された一定量で注入できるようにする。次いで、デバイスを取り出し、正円窓及びアブミ骨底板をゲルフォームパッチで封止する。
本明細書で提供される任意の方法のいくつかの実施形態では、対象は、ＶＳ及び／またはＶＳ関連症状を有するか、または発症するリスクがある。本明細書で提供される任意の方法のいくつかの実施形態では、対象は、ＶＳ発生に関与する遺伝子に変異を有することがこれまでに同定されており、そのような遺伝子は、支持細胞及び／または有毛細胞で発現され得る。
いくつかの実施形態では、対象細胞はｉｎ ｖｉｔｒｏに存在する。いくつかの実施形態では、対象細胞は、初めに対象から得られ、ｅｘ ｖｉｖｏで培養される。いくつかの実施形態では、対象細胞は、それ以外は健康であると考えられ、ｅｘ ｖｉｖｏで培養及び増殖される。いくつかの実施形態では、対象細胞は、内耳細胞標的遺伝子に欠損があるとこれまでに判定されている。いくつかの実施形態では、対象細胞は、有毛細胞標的遺伝子に欠損があるとこれまでに判定されている。いくつかの実施形態では、対象細胞は、支持細胞標的遺伝子に欠損があるとこれまでに判定されている。
デバイス、投与、及び手術方法
本明細書では、難聴（例えば、非症候性感音性難聴または症候性感音性難聴）を治療するための治療用送達システムが提供される。いくつかの実施形態では、治療用送達システムは、ｉ）それを必要とする対象の内耳の正円窓膜に１つまたは複数の切開部を作出することができる医療デバイスと、ｉｉ）有効用量の組成物（例えば、本明細書に記載される任意の組成物）と、を含む。いくつかの実施形態では、医療デバイスは複数のマイクロニードルを含む。
本明細書に開示される任意の方法のいくつかの実施形態では、対象は、本明細書に開示される組成物、例えばｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦの投与を含む治療を受ける。いくつかの実施形態では、対象は、本明細書に開示される組成物の投与を含む、少なくとも１つの追加の治療を受けることができる。いくつかの実施形態では、対象は、各被験物質組成物（例えば、ｒＡＡＶ粒子を含む溶液）の投与の間に少なくとも３０日間モニターされる。
特定の実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物は、追加の積極的介入を伴わないＭＲＩによる継続的観察、定位放射線治療（ＳＲＳ）、分割放射線治療（ＦＲＴ）、及び／またはマイクロサージャリー（ＭＳ）などの特定の現在の治療選択肢との併用療法として利用される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物は、ＭＲＩを使用した継続的観察を伴う併用療法として利用される。特定の実施形態では、ＭＲＩ測定は、腫瘍の成長、腫瘍の停滞、または腫瘍の退縮を特定し得る。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法を追加介入を伴わない継続的観察と組み合わせると、継続的ＭＲＩベースの観察のみを利用する方法と比較して、聴力温存率が向上する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物は、当該技術分野で知られている放射線治療（例えば、ガンマナイフ手術）との併用療法として利用される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物及び方法による治療の前または後に、単回有効量の放射線が腫瘍に送達される（例えば、５～１０ｇｙの放射線、７～１２ｇｙの放射線、９～１４ｇｙの放射線、１１～１６ｇｙの放射線、１３～１８ｇｙの放射線、または１２～１７ｇｙの放射線）。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物を利用する併用療法は、必要な放射線量プロファイルを低減し、放射線プロファイルが腫瘍に隣接する構造と重なる可能性を低減する。いくつかの実施形態では、この併用療法アプローチは、脳神経または脳幹構造の放射線手術誘発性機能障害の可能性を低減する。いくつかの実施形態では、併用療法アプローチは、蝸牛または関連する脳幹核への放射線量の増加に関連する術後難聴を低減する。いくつかの実施形態では、併用療法アプローチは、術後水頭症の可能性を低減する。いくつかの実施形態では、併用療法アプローチは、術後二次性悪性腫瘍の可能性を低減する。いくつかの実施形態では、併用療法アプローチは、腫瘍の成長を遅延させ、腫瘍の成長を阻止し、及び／または腫瘍サイズを縮小させる。いくつかの実施形態では、併用療法アプローチは、放射線手術の有効性を高め、例えば、腫瘍の成長を停止する可能性を高め、追加の治療の必要性を低減し、聴力温存の可能性を高め、永続的な顔面神経障害の可能性を低減し、三叉神経障害の可能性を低減し、及び/または水頭症の可能性を低減する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物は、当該技術分野で知られている分割放射線治療との併用療法として利用される。いくつかの実施形態では、有効量の放射線を、数週間にわたって（例えば、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間、１１週間、１２週間、または１２週間以上）、複数回の微量投与（例えば、約５回の微量投与、約１０回の微量投与、約１５回の微量投与、約２０回の微量投与、約２５回の微量投与、または約３０回の微量投与）を通じて腫瘍に照射することで、合わせると腫瘍に１回の大量の放射線（例えば、約３０ｇｙ、約４０ｇｙ、約５０ｇｙ約６０ｇｙ、または約７０ｇｙの放射線）が照射されることとなり、これは、本明細書に記載の組成物及び方法による治療の前、間、または後に実施される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の併用療法アプローチは、新生血管形成の阻害を伴う腫瘍の継続的な損傷をもたらす一方で、周囲の組織が投与の間に治癒することを可能にする。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の併用療法アプローチは、分割放射線療法の有効性を高め、例えば、平均腫瘍停止率を高め、５年のアクチュアリーレートを高め、追加の治療が必要となる可能性を低減し、聴力温存を向上し、顔面神経障害を発症する可能性を低減し、三叉神経障害を発症する可能性を低減し、及び／または水頭症の可能性を低減する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法及び組成物は、当該技術分野で知られている外科的介入との併用療法として利用される。いくつかの実施形態では、そのような併用療法アプローチは、脳神経の損傷、脳脊髄液（ＣＳＦ）の漏出、及び／または術後感染症などのさらなる外科的合併症の可能性を低減しながら、外科的介入の有効性を高める。いくつかの実施形態では、そのような組み合わせアプローチは、追加の治療が必要となる可能性を低減し、聴力温存の可能性を高め、永続的な顔面神経障害の可能性を低減し、ＣＳＦ患者に関連する急性の病的状態の可能性を低減し、及び／または死亡の可能性を低減する。
本明細書ではまた、難聴（例えば、非症候性感音性難聴または症候性感音性難聴）を治療するための外科的方法も提供される。いくつかの実施形態では、方法は、対象の蝸牛に第１の切開部を第１の切開点に導入するステップと、治療有効量の本明細書で提供される任意の組成物を蝸牛内に投与するステップとを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、第１の切開点で対象に投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、第１の切開部内に、または第１の切開部を通じて対象に投与される。
いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ阻害剤の全身投与を、ＮＦ２患者でのＶＳの治療について評価しており、これらの試験の結果は、ＶＳを治療するためのＶＥＧＦ阻害剤の使用に関する予備的な臨床的証拠を提供する。いくつかの実施形態では、ＮＦ２患者は、一般に両耳の聴力の低下をもたらす両側神経鞘腫を呈するため、本明細書に開示される組成物の投与に大きなリスクを伴う。いくつかの実施形態では、ＮＦ２を有する対象は、本明細書に開示される組成物を投与されない。いくつかの実施形態では、ＮＦ２を有する対象は、例えば、本明細書に開示される組成物、例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦの安全性及び有効性に基づいて、本明細書に開示される組成物を投与される（片側または両側の蝸牛内投与を介して送達される）。
いくつかの実施形態では、散発性ＶＳ腫瘍はＶＥＧＦを発現し（Ｓａｉｔｏ ２００３；Ｃａｙｅ－Ｔｈｏｍａｓｅｎ ２００３、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、ＶＥＧＦ発現のレベルは、例えば、腫瘍の成長率と相関する（Ｃａｙｅ－Ｔｈｏｍａｓｅｎ ２００３；Ｃａｙｅ－Ｔｈｏｍａｓｅｎ ２００５、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。本明細書に開示される任意の方法のいくつかの実施形態では、対象は、進行性の散発性ＶＳ（例えば、連続するスキャンにわたって少なくとも２０％の成長率を有する単一の腫瘍として定義される）を有するが、その腫瘍は、１年間の追加の観察期間が経過しても、さらなる腫瘍関連続発症（難聴を除く）のリスクが高くならない程度に依然として小さい。いくつかの実施形態では、対象は、侵襲的外科的切除及び／または放射線治療を受けている、または受けることになる成人である。本明細書に開示される任意の方法のいくつかの実施形態では、該方法は、安全な用量、例えば開始用量（期待されるＮＯＡＥＬの８倍未満）を評価することを含む。いくつかの実施形態では、開始用量は、腫瘍位置に近接した組織及び流体においてＶＥＧＦ阻害剤曝露レベルをもたらす。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物（例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ）は、外リンパへの送達を通じて内耳の多くの標的細胞に到達し得る。外リンパは、脳脊髄液（ＣＳＦ）と組成が非常に類似しており、それと拡散的に連続している流体である（Ｌｙｓａｇｈｔ ２０１１、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。外リンパは、内耳の骨迷路に収容された蝸牛及び前庭系の感覚細胞、神経細胞、及び支持細胞のほとんどを浸している。いくつかの実施形態では、本明細書に開示された組成物（例えばｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦを含む）が送達される蝸牛の外リンパ腔は、鼓室階と前庭階という２つの階または通路を含み、これらはヘリコトレマを介して蝸牛ラセンの頂点で互いに連続している。内耳の多くの細胞は、組織内の組織間隙を通じて外リンパと流体連通している。
本明細書に記載の送達デバイスによるｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ組成物の蝸牛内投与は、典型的には正円窓膜を通じて行われる（図１を参照）。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、蝸牛内投与用の無菌の使い捨て送達デバイスを使用して、個体（例えば、哺乳動物、例えば、ヒト）に送達される。特定の実施形態では、本明細書に記載の組成物は、アブミ骨底板に位置する通気部を伴って正円窓膜を通じて内耳の外リンパ液に送達される。特定の実施形態では、蝸牛内投与アプローチは、ｒＡＡＶ粒子が鼓室階を通って、次にヘリコトレマでの接続を介して前庭階を通って、流体経路を辿ってアブミ骨底板の通気部まで灌流するように、卵円窓内のアブミ骨底板の通気部を伴って正円窓膜を通じて鼓室階内に本明細書に記載の組成物を投与することを含む。いくつかの実施形態では、注入ポートとは異なる通気部の存在により、蝸牛の全長にわたって薬剤をより均一に及び／または制御して分散させることができ、及び／または内耳内での追加の流体圧の有害な上昇が防止される。いくつかの実施形態では、この送達アプローチはまた、注入物の前庭系への拡散を可能にする。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるようなプロセスは、外耳道を通じた比較的非外傷性のアプローチで患者において達成することができる。
本明細書で提供される任意の方法のいくつかの実施形態では、本明細書に記載される任意の組成物は、蝸牛の卵円窓膜内に、またはそれを通じて対象に投与される。本明細書で提供される任意の方法のいくつかの実施形態では、本明細書に記載される任意の組成物は、蝸牛の正円窓膜内に、またはそれを通じて対象に投与される。本明細書で提供される任意の方法のいくつかの実施形態では、組成物は、正円窓膜に複数の切開部を作出することができる医療デバイスを用いて投与される。いくつかの実施形態では、医療デバイスは複数のマイクロニードルを含む。いくつかの実施形態では、医療デバイスは、略円形の第１の面を含む複数のマイクロニードルを含み、各マイクロニードルは少なくとも約１０ミクロンの直径を有する。いくつかの実施形態では、医療デバイスは、組成物を保持することができる基部及び／またはリザーバーを含む。いくつかの実施形態では、医療デバイスは、組成物を移送可能な内腔を個々に含む複数の中空マイクロニードルを含む。いくつかの実施形態では、医療デバイスは、少なくとも部分真空を生成するための手段を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書では、本明細書に開示される組成物を、アブミ骨底板に位置する通気部を伴って正円窓膜を通じて内耳の外リンパ液に投与する、無菌の使い捨て送達デバイスを開示する。いくつかの実施形態では、このカスタムデバイスは、蝸牛内投与経路用に特別に設計されているため、治療薬の安全性及び有効性の可能性の両方に関して、入手可能な物質及び汎用手術器具よりも利点をもたらす。送達デバイスの設計要素には、以下が含まれる：注入された流体の無菌性の維持；内耳に導入される気泡の最小化；制御された流速で少量を正確に送達する能力（標準ポンプの使用と合わせて）；正円窓膜を明視化し、外科医による外耳道を通じた送達を可能にすること；正円窓膜、もしくは正円窓膜から先の蝸牛構造への損傷の最小化；及び正円窓膜を通じた逆流の最小化。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物、例えばｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦを約０．０９ｍＬ、蝸牛の外リンパに送達した後、カスタムの専用デバイスを耳から取り除く。
内耳への送達は、感覚細胞及び非感覚支持細胞／構造が弱く、アクセスが不可能であるために困難であり、意図しない損傷を伴わない外科的アプローチの種類が制限される。いくつかの実施形態では、流体で満たされた蝸牛腔の適切な通気により、流体量の増加による内耳の損傷が防止される。
哺乳動物の内耳の構造及び機能は、霊長類と他の哺乳動物間での妊娠及び出生を比較して蝸牛の発達タイミングに違いがあるにもかかわらず、哺乳動物全体で高度に保存されている（Ｍａｎｌｅｙ ２０１７、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。マウスの蝸牛の発達は出生時にまだ進行中であり、生後１２日目頃に聴力が始まる（Ｐ１２；Ｂｌａｎｋｉｎａ ２０１２、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。対照的に、ヒトでは、子宮内で完全な蝸牛の発達を経て、妊娠２５週から２８週までに聴力の開始を経験する（Ｌｉｔｏｖｓｋｙ ２０１５、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。潜在的な治療法の開発及び耳でのその送達において考慮しなければならない成熟した内耳の２つの重要な構造的側面は以下の通りである：１）種間での内耳サイズの違い；ならびに２）蝸牛の外リンパと脳脊髄液（ＣＳＦ）との間を走る蝸牛水管の開存性。本明細書に開示される任意の方法のいくつかの実施形態では、蝸牛容積は、例えば、動物からヒトへの用量の外挿に使用される。
いくつかの実施形態では、対象が齧歯類、例えばマウスである場合、注入時の動物の年齢に依存せず、ロバストで信頼性の高い形質導入を実証した、後半規管の開窓を伴った正円窓膜を通じた送達を含む、Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，２０１８に記載の外科的アプローチが用いられる（Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ ２０１８、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。側頭骨にアクセスするために耳介後部が切開される。胸鎖乳突筋の一部を切離して、耳胞（ｏｔｉｃ ｂｕｌｌａ）を露出させる。直径０．５～０．６ｍｍの耳科用ドリルを使用して、該耳胞に小さな穴を開け、次に、その穴を広げて、アブミ骨動脈と正円窓膜を明視下に置いた。耳科用ドリル（直径０．５～０．６ｍｍ）で後半規管の開窓を行い、蝸牛投与中の内耳の通気部として機能させた。ホウケイ酸キャピラリーピペットと１０ｕＬハミルトンシリンジからなるマウス送達デバイスで正円窓膜を貫通させ、ウイルス粒子を含む溶液１μＬ（総内耳容積のおよそ４０～５０％）を正円窓膜を通じて鼓室階に３００ｎＬ／分の速度で送達する。
いくつかの実施形態では、対象がＮＨＰである場合、耳介後部を切開し、軟部組織を骨膜のレベルまで切開した。いくつかの実施形態では、骨膜を切開し、持ち上げて乳様突起骨を露出させる。経皮質乳様突起削開術は、高速切削とダイヤモンドドリルバーを組み合わせて行われる。その後、顔面神経窩が開放され、適切に正円窓と卵円窓（ＯＷ）を明視下に置けるようにした。ＯＷのアブミ骨底板の開窓は、ローゼン針を使用して行われる。他のモデルと同様に、開窓により内耳に損傷を与えることなく、より大量の注入が可能となり、さらに、通気により、ｒＡＡＶ粒子を含む溶液が蝸牛の頂点に向かって流れることが可能になる。ｒＡＡＶ粒子を含む３０μＬの溶液（総内耳容積のおよそ４０～５０％）が、正円窓膜を通じて３０μＬ／分の速度で送達される。
いくつかの実施形態では、対象が哺乳動物、例えばヒトである場合、例えば出生時であっても関連する構造が比較的大きいため、外耳道を通じた侵襲性の低いアプローチが使用される。いくつかの実施形態では、臨床投与処置は、経外耳道的試験的鼓室開放術及びレーザー支援下微細アブミ骨底開窓術（リン酸チタニルカリウム［ＫＴＰ］またはＣＯ２耳科用レーザーを使用してアブミ骨底板に小さな通気孔［およそ０．２５ｍｍ］を開ける）の後に、正円窓注入を行い、３分以内に正円窓膜を通じて、本明細書に開示する組成物、例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ粒子を含む約０．０９ｍＬ（または９０μＬ、総内耳容積のおよそ４０～５０％）の溶液を送達する。いくつかの実施形態では、通気は、迷路内圧の潜在的な有害な上昇を防止するのに役立つ。経外耳道的試験的鼓室開放術は、中耳の構造を露出させるために用いられる一般的な処置であり、経外耳道的試験的鼓室開放術は、例えば、耳硬化症の患者に対して、レーザー支援下アブミ骨摘出術（アブミ骨底板の除去）またはアブミ骨底開窓術（アブミ骨底板に穴を開ける）を伴うことが多い。
いくつかの実施形態では、本開示は、外耳道を通じて中耳及び／または内耳にアクセスするための、低侵襲で十分に認められた外科的手法を利用する送達アプローチについて説明する。この処置は、中耳と内耳との間の物理的障壁の１つを卵円窓で開窓することと、その後、本明細書に開示されるデバイス、例えば、図３３～３６に示されるようなデバイス（またはマイクロカテーテル）を使用して、本明細書に開示される組成物を、制御された流速で、一定の体積で、正円窓膜を介して送達することとを含む。
いくつかの実施形態では、哺乳動物（例えば、齧歯類（例えば、マウス、ラット、ハムスター、またはウサギ）、霊長類（例えば、ＮＨＰ（例えば、マカク、チンパンジー、サル、または類人猿））またはヒト）に対する外科的処置は、蝸牛の全長にわたってＡＡＶベクター形質導入率を高めるために通気を含み得る。いくつかの実施形態では、手術中に通気部がない場合、通気部を伴った手術後のＡＡＶベクター蝸牛細胞形質導入率と比較して、ＡＡＶベクター蝸牛細胞形質導入率が低い可能性がある。いくつかの実施形態では、通気部は、蝸牛全体でＩＨＣの約７５～１００％の形質導入率を促進する。いくつかの実施形態では、通気により、蝸牛の基底部で約５０～７０％、約６０～８０％、約７０～９０％、または約８０～１００％のＩＨＣ形質導入率が可能になる（図２８参照）。いくつかの実施形態では、通気により、蝸牛の頂部で約５０～７０％、約６０～８０％、約７０～９０％、または約８０～１００％のＩＨＣ形質導入率が可能になる（図２８参照）。
本明細書に記載の送達デバイスは、手術室の無菌領域に置かれ、チューブの端が無菌領域から取り出され、本明細書に開示の組成物（例えば、１つ以上のＡＡＶベクター）を充填したシリンジに接続され、ポンプに取り付けられ得る。空気を除去するためにシステムを適切にプライミングした後、明視化下で（外科用顕微鏡、内視鏡、及び／または遠位端カメラ）針を中耳に通すことができる。ＲＷＭを貫通させるために針（またはマイクロニードル）を使用してもよい。針は、ストッパーがＲＷＭに接触するまで挿入することができる。次いで、本明細書に開示される組成物が、選択された持続時間、制御された流速で内耳に送達される間、デバイスはその位置に保持され得る。いくつかの実施形態では、流速（または注入速度）は、約３０μＬ／分、または約２５μＬ／分～約３５μＬ／分、または約２０μＬ／分～約４０μＬ／分、または約２０μＬ／分～約７０μＬ／分、または約２０μＬ／分～約９０μＬ／分、または約２０μＬ／分～約１００μＬ／分の流速を含み得る。いくつかの実施形態では、流速は、約２０μＬ／分、約３０μＬ／分、約４０μＬ／分、約５０μＬ／分、約６０μＬ／分、約７０μＬ／分、約８０μＬ／分、約９０μＬ／分、または約１００μＬ／分である。いくつかの実施形態では、選択された持続時間（すなわち、本明細書に開示される組成物が流れている時間）は、約３分、または約２．５分～約３．５分、または約２分～約４分、または約１．５分～約４．５分、または約１分～約５分であり得る。いくつかの実施形態では、内耳に流れる本明細書に開示される組成物の総量は、約０．０９ｍＬ、または約０．０８ｍＬ～約０．１０ｍＬ、または約０．０７ｍＬ～約０．１１ｍＬであり得る。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物の総量は、内耳の容積の約４０％～約５０％に相当する。
送達が完了すると、デバイスは取り外すことができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のデバイスは、単回使用の使い捨て製品として構成され得る。他の実施形態では、本明細書に記載のデバイスは、例えば、交換可能及び／または滅菌可能な針サブアセンブリを有する、複数回使用の滅菌可能な製品として構成され得る。単回使用デバイスは、投与が完了した後、適切に廃棄することができる（例えば、バイオハザード鋭利器材容器に入れる）。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、１つまたは複数のｒＡＡＶ構築物を含む。いくつかの実施形態では、複数のｒＡＡＶ構築物が組成物中に含まれる場合、ｒＡＡＶ構築物はそれぞれ異なる。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ構築物は、例えば本明細書に記載の抗ＶＥＧＦコード領域を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、本明細書に記載のＡＡＶ構築物を含むｒＡＡＶ粒子を含む。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ粒子は、Ａｎｃ８０カプシドによりカプシド封入される。いくつかの実施形態では、Ａｎｃ８０カプシドは、配列番号８９のポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、Ａｎｃ８０カプシドは、配列番号１１３のポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、Ａｎｃ８０カプシドは、配列番号１１４のポリペプチドを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、外科的処置によって対象に投与することができる。いくつかの実施形態では、投与、例えば外科的処置を介した投与は、本明細書に記載の送達デバイスを介して本明細書に開示の組成物を内耳に注入することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される外科的処置は、経外耳道的鼓室開放術を行うことと、レーザー支援下微細アブミ骨底開窓術を行うことと、本明細書に記載の送達デバイスを介して本明細書に開示される組成物を内耳に注入することと、を含む。
いくつかの実施形態では、外科的処置は、経外耳道的鼓室開放術を行うことと、レーザー支援下微細アブミ骨底開窓術を行うことと、本明細書に記載の送達デバイスを介して本明細書に開示される組成物を内耳に注入することと、対象の正円窓及び／または卵円窓の周りにシーラントを適用することと、対象の鼓膜外耳道皮弁を解剖学的位置まで下げることとを含む。
いくつかの実施形態では、外科的処置は、経外耳道的鼓室開放術を行うことと、対象の正円窓を準備することと、レーザー支援下微細アブミ骨底開窓術を行うことと、内耳への送達のために本明細書に記載の送達デバイスと本明細書に開示される組成物の両方を準備することと、送達デバイスを介して本明細書に開示される組成物を内耳に注入することと、対象の正円窓及び／または卵円窓の周りにシーラントを適用することと、対象の鼓膜外耳道皮弁を解剖学的位置まで下げることとを含む。
いくつかの実施形態では、レーザー支援下微細アブミ骨底開窓術の実施は、ＫＴＰ耳科用レーザー及び／またはＣＯ２耳科用レーザーを使用することを含む。
別の例として、本明細書に開示される組成物は、蝸牛内投与経路のために特別に設計されたデバイス及び／またはシステムを使用して投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のデバイスの設計要素には、以下が含まれ得る：注入された流体の無菌性の維持；内耳に導入される気泡の最小化；制御された速度で少量を正確に送達する能力；外科医による外耳道を通じた送達；正円窓膜（ＲＷＭ）、もしくは内耳、例えば、ＲＷＭから先の蝸牛構造への損傷の最小化；及び／またはＲＷＭを通じた注入流体の逆流の最小化。
本明細書で提供されるデバイス、システム、及び方法はまた、本明細書で開示される組成物の内耳への送達から恩恵を受けるであろう状態及び障害（例えば本明細書に記載の聴覚障害を含むがこれらに限定されない）を治療するために、組成物を安全かつ効率的に内耳に送達する可能性についても説明する。別の例として、アブミ骨底板に通気部を配置し、ＲＷＭを通じて注入することにより、本明細書に開示される組成物は、作用部位での希釈を最小限に抑えて蝸牛全体に分散される。記載されたデバイスの開発により、外科的投与処置をヒトの外耳道を通じて実施することができる。記載されたデバイスは、ある量の流体を蝸牛の外リンパ内に注入した後、耳から取り外すことができる。対象において、デバイスは、外科用顕微鏡制御下で、または内視鏡と共に、外耳道を通じて進めることができる。
本明細書に開示される方法のいずれかで使用するための例示的なデバイスが、図２９～３２に記載される。図２９は、流体を内耳に送達するための例示的なデバイス１０を示す。デバイス１０は、刻み付きハンドル１２、及び伸縮式ハイポチューブ針支持体２４に結合した遠位ハンドル接着剤１４（例えば、Ｌｏｃｔｉｔｅ ４０１４などのエポキシ）を含む。刻み付きハンドル１２（またはハンドル部分）は、グリップを強化するために、刻み模様及び／または溝を含むことができる。刻み付きハンドル１２（またはハンドル部分）は、約５ｍｍ～約１５ｍｍ厚、または約５ｍｍ～約１２ｍｍ厚、または約６ｍｍ～約１０ｍｍ厚、または約６ｍｍ～約９ｍｍ厚、または約７ｍｍ～約８ｍｍ厚であり得る。刻み付きハンドル１２（またはハンドル部分）は、使用中に流体がデバイス１０を通過できるように中空であってもよい。デバイス１０は、刻み付きハンドル１２の近位端１８にある近位ハンドル接着剤１６と、デバイス１０の遠位端２０にあるストッパー２８（図３０に示す）を有する針サブアセンブリ２６（図３０に示す）と、張力緩和機構２２とを含み得る。張力緩和機構２２は、Ｓａｎｔｏｐｒｅｎｅ材料、Ｐｅｂａｘ材料、ポリウレタン材料、シリコーン材料、ナイロン材料、及び／または熱可塑性エラストマーから構成され得る。伸縮式ハイポチューブ針支持体２４は、その中に配置された曲針３８（図３０に示される）を取り囲んで支持する。
さらに図２９を参照すると、ストッパー２８は、熱可塑性材料またはプラスチックポリマー（ＵＶ硬化ポリマーなど）及び他の適切な材料から構成され得、曲針３８が外耳道の奥まで挿入されすぎるのを防止するため（例えば、曲針３８が側壁または他の内耳構造に挿入されるのを防止するため）に使用され得る。デバイス１０はまた、刻み付きハンドル１２と、伸縮式ハイポチューブ針支持体２４に結合した遠位ハンドル接着剤１４との間に配置されたテーパー部分２３を含み得る。刻み付きハンドル１２（またはハンドル部分）は、ハンドル部分１２の遠位端にテーパー部分２３を含み得る。デバイス１０はまた、デバイス１０の近位端１６に流体的に接続されたチューブ３６を含み得、デバイスを上流の構成要素（例えば、ポンプ、シリンジ、及び／またはいくつかの実施形態では制御システム及び／または電源（図示せず）に結合され得る上流の構成要素）に接続する流体入口ラインとして機能する。いくつかの実施形態では、曲針３８（図３０に示す）は、遠位端２０から、伸縮式ハイポチューブ針支持体２４を通り、テーパー部２３を通り、刻み付きハンドル１２を通り、張力緩和機構２２を通って延び、チューブ３６に直接流体接続する。他の実施形態では、曲針３８は、刻み付きハンドルの中空内部と流体接続し（例えば、伸縮式ハイポチューブ針支持体２４を介して）、近位端１６においてチューブ３６と流体接続する。曲針３８がデバイス１０の内部を貫通していない実施形態では、治療用流体がデバイス１０（比較的低い圧力（例えば、約１パスカル～約５０Ｐａ、または約２Ｐａ～約２０Ｐａ、または約３Ｐａ～約１０Ｐａ）で動作する）から漏出するのを防ぐために、接触面積（例えば、重なり合った入れ子式ハイポチューブ４２の間）、公差、及び／または接続する構成要素間の密閉性が十分に必要である。
図３０は、本開示の実施形態の態様による、曲針サブアセンブリ２６の側面図を示す。曲針サブアセンブリ２６は、曲げ部３２を有する針３８を含む。曲針サブアセンブリ２６はまた、曲げ部３２に結合したストッパー２８を含み得る。曲げ部３２は、耳の膜（例えば、ＲＷＭ）を穿刺するために、デバイス１０の遠位端２０に傾斜先端３４を含む。針３８、曲げ部３２、及び傾斜先端３４は、流体がそこを通じて流れることができるように中空である。曲げ部３２の角度４６（図３３に示す）は変化し得る。ストッパー２８の形状は、円筒形、ディスク形、環形、ドーム形、及び／または他の適切な形状であってもよい。ストッパー２８は、曲げ部３２上の適所に成形され得る。例えば、ストッパー２８は、接着剤または圧縮嵌合を使用して、曲げ部３２を中心として同心状に配置され得る。接着剤の例としては、ＵＶ硬化接着剤（Ｄｙｍａｘ２０３Ａ－ＣＴＨ－Ｆ－Ｔなど）、エラストマー接着剤、熱硬化性接着剤（エポキシまたはポリウレタンなど）、またはエマルジョン接着剤（ポリ酢酸ビニルなど）が挙げられる。ストッパー２８は、傾斜先端３４が所望の挿入深さで耳に挿入されるように、曲げ部３２を中心として同心状に嵌合する。曲針３８は、インクリメンタルフォーミング及び他の適切な技術を使用して、直針から形成され得る。
図３１は、流体を内耳に送達するための例示的なデバイス１０の斜視図を示す。チューブ３６は、長さ（図３１の寸法１１）が約１３００ｍｍ～約１６００ｍｍ、または約１４００ｍｍ～約１５００ｍｍ、または約１４３０ｍｍ～約１４５０ｍｍであり得る。張力緩和機構２２は、長さ（図３１の寸法１５）が約２５ｍｍ～約３０ｍｍ、または長さが約２０ｍｍ～約３５ｍｍであり得る。ハンドル１２は、長さ（図３１の寸法１３）が約１５５．４ｍｍ、または約１５０ｍｍ～約１６０ｍｍ、または約１４０ｍｍ～約１７０ｍｍであり得る。伸縮式ハイポチューブ針支持体２４は、２つ以上の入れ子式ハイポチューブ、例えば、３つの入れ子式ハイポチューブ４２Ａ、４２Ｂ、及び４２Ｃ、または４つの入れ子式ハイポチューブ４２Ａ、４２Ｂ、４２Ｃ、及び４２Ｄを有し得る。ハイポチューブ４２Ａ、４２Ｂ、４２Ｃ、及び先端アセンブリ２６の全長（図３１の寸法１７）は、約２５ｍｍ～約４５ｍｍ、または約３０ｍｍ～約４０ｍｍ、または約３５ｍｍであり得る。さらに、伸縮式ハイポチューブ針支持体２４は、約３６ｍｍ、または約２５ｍｍ～約４５ｍｍ、または約３０ｍｍ～約４０ｍｍの長さを有し得る。３つの入れ子式ハイポチューブ４２Ａ、４２Ｂ、及び４２Ｃは各々、長さがそれぞれ３．５ｍｍ、８．０ｍｍ、及び１９．８ｍｍ、±約２０％であり得る。伸縮式ハイポチューブ針支持体２４の最も内側の入れ子になったハイポチューブ（または最も狭い部分）は、針３８を中心として同心状に配置され得る。
図３２は、本開示の実施形態の態様による、デバイス１０の遠位端２０に結合された曲針サブアセンブリ２６の斜視図を示す。図３２に示すように、曲針サブアセンブリ２６は、曲げ部３２に結合された針３８を含み得る。他の実施形態では、曲針３８は、単一の針（例えば、所望の角度４６を含むようにその後曲げられる直針）であり得る。針３８は、３３ゲージの針であってもよく、または約３２～約３４まで、または約３１～３５までのゲージを含んでもよい。より細いゲージでは、チューブ３６がよじれたり損傷したりしないように注意する必要がある。針３８をハンドル１２に取り付けて、針３８を内耳に安全かつ正確に配置することができる。図３２に示すように、曲針サブアセンブリ２６は、曲げ部３２を中心として配置されたストッパー２８を含み得る。図３２はまた、曲げ部３２が、耳の膜（例えば、ＲＷＭ）を穿刺するための傾斜先端３４を含み得ることを示す。ストッパー２８は、約０．５ｍｍ、または約０．４ｍｍ～約０．６ｍｍ、または約０．３ｍｍ～約０．７ｍｍの高さ４８を有し得る。曲げ部３２は、約１．４５ｍｍ、または約１．３５ｍｍ～約１．５５ｍｍ、または約１．２ｍｍ～約１．７ｍｍの長さ５２を有し得る。他の実施形態では、曲げ部３２は、ストッパー２８の遠位端と傾斜先端３４の遠位端との間の距離が約０．５ｍｍ～約１．７ｍｍ、または約０．６ｍｍ～約１．５ｍｍ、または約０．７ｍｍ～約１．３ｍｍ、または約０．８ｍｍ～約１．２ｍｍとなるように、２．０ｍｍを超える長さを有し得る。図３２は、ストッパー２８が、円筒形、ディスク形、及び／またはドーム形の形状を有し得ることを示す。当業者であれば、他の形状を使用できることを理解するであろう。
対象を治療する方法
本開示は、とりわけ、本明細書に記載の技術を使用して、新生血管形成を特徴とする耳科疾患（例えば、聴神経腫瘍、例えば、ＶＳ）に罹患しているか、またはそのリスクがある対象の基礎疾患及び／または症状を治療することができることを提供する。
いくつかの実施形態では、方法は、本明細書に記載の構築物（例えば、ｒＡＡＶ構築物）、粒子（例えば、ｒＡＡＶ粒子）、または本明細書に記載の組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、方法は治療方法である。いくつかの実施形態では、対象は、新生血管形成を特徴とする耳科疾患（例えば、ＶＳなどの聴神経腫瘍）に罹患しているか、またはそのリスクがある対象である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の構築物（例えば、ｒＡＡＶ構築物）、粒子（例えば、ｒＡＡＶ粒子）、または本明細書に記載の組成物を対象に投与することは、新生血管形成を特徴とする耳科疾患（例えば、ＶＳなどの聴神経腫瘍）に関連する１つ以上の症状を緩和及び／または軽快し得る。症状としては、難聴、有毛細胞の変性、内耳液の生化学的環境の変化、迷路内タンパク質の上昇、内リンパ水腫、蝸牛開口部閉塞、迷路内出血、蝸牛血管供給の途絶、耳鳴り、めまい、難治性頭痛、顔面神経障害、三叉神経障害、顔面麻痺、顔面の感覚異常、水頭症、小脳ヘルニア、及び／または死亡が挙げられ得る。
いくつかの実施形態では、新生血管形成を特徴とする耳科疾患（例えば、聴神経腫瘍、例えば、ＶＳ）は、遺伝子変異（例えば、欠失変異、フレームシフト変異、ナンセンス変異、低形質変異、高形質変異、新形質変異、異常な過剰発現、異常な過小発現など）に関連する。いくつかの実施形態では、新生血管形成を特徴とする耳科疾患（例えば、聴神経腫瘍、例えば、ＶＳ）に罹患しているか、またはそのリスクがある対象は、耳科腫瘍の進行に関連する遺伝子に変異を有する可能性があり、この変異は、本明細書に記載のように特徴付けられ得る。
いくつかの実施形態では、対象は、本明細書に記載の技術（例えば、リアルタイムＰＣＲ、定量的リアルタイムＰＣＲ、ウェスタンブロット法、免疫沈降法、免疫組織化学法、質量分析法、または免疫蛍光法、遺伝子及び／またはタンパク質の発現の間接的な表現型決定（例えば、機能性聴力検査、ＡＢＲ、ＤＰＯＡＥなどを通じて）など）による治療の前、間、及び／または後に遺伝的及び／または症状的に特徴付けられる。いくつかの実施形態では、新生血管形成を特徴とする耳科疾患（例えば、聴神経腫瘍、例えば、ＶＳ）に罹患しているか、またはそのリスクがある対象は、組織サンプリング（例えば、１つ以上の内耳細胞を含む、例えば、１つ以上の有毛細胞及び／または１つ以上の支持細胞を含む）を通じて特徴付けられたそれらの関連疾患状態を有し得る。いくつかの実施形態では、組織は、本明細書に記載の任意の技術（例えば、方法論、例えば、組成物、例えば、構築物を含む組成物、及び／または粒子など）の実施前、実施中、及び／または実施後に、有毛細胞及び／または支持細胞の形態を決定するために形態学的分析を通して評価される。いくつかのそのような実施形態では、標準的な免疫組織化学的または組織学的分析を行うことができる。いくつかの実施形態では、細胞がｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで使用される場合、追加の免疫細胞化学的または免疫組織化学的分析を行うことができる。いくつかの実施形態では、１つ以上のタンパク質または転写産物の１つ以上のアッセイ（例えば、ウェスタンブロット法、ＥＬＩＳＡ、ポリメラーゼ連鎖反応）を、対象またはｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞集団からの１つ以上の試料に対して実施することができる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の構築物（例えば、ｒＡＡＶ構築物）、粒子（例えば、ｒＡＡＶ粒子）、または本明細書に記載の組成物を対象に投与することにより、本明細書に記載の技術による治療前に行われた免疫組織化学的検査と比較して、または対照集団と比較して、対象の免疫組織化学的評価（例えば、上記に記載の検査）が改善する。
難聴、耳鳴り、めまい、及び／または語音の症状を改善するための対象の治療
いくつかの実施形態では、新生血管形成を特徴とする耳科疾患（例えば、聴神経腫瘍、例えば、ＶＳ）に罹患しているか、またはそのリスクがある対象は、聴力機能によって特徴付けられる治療レジメンを受けることができる。いくつかの実施形態では、治療レジメンの機能性は聴力機能によって特徴付けられ、このような聴力機能は、本明細書に記載の組成物及び方法による治療前、治療後、及び／または治療中に聴性脳幹反応測定（ＡＢＲ）を使用して個体において判定される。いくつかの実施形態では、治療レジメンの機能性は聴力機能によって特徴付けられ、このような聴力機能は、本明細書に記載の組成物及び方法による治療前、治療後、及び／または治療中に歪成分耳音響放射（ＤＰＯＡＥ）を測定することによって個体において判定される。いくつかのそのような実施形態では、聴力測定値は、対象の片耳または両耳から取得される。いくつかのそのような実施形態では、記録は、同じ対象の以前の記録、及び／または例えば、正常な聴力として定義される許容聴力範囲と比較して難聴を定義するために使用される、そのような応答測定値における既知の閾値と比較される。いくつかの実施形態では、対象は、任意の治療を受ける前にＡＢＲ及び／またはＤＰＯＡＥ測定値が記録される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の１つ以上の技術により治療された対象は、治療前と比較して、治療後にＡＢＲ及び／またはＤＰＯＡＥ測定値で改善を有することになる。いくつかの実施形態では、ＡＢＲ及び／またはＤＰＯＡＥ測定値は、治療が行われた後、及び治療後の定期的なフォローアップ時に取得される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の技術による治療により、本明細書に記載の技術による治療前に行われた検査と比較して、または対照集団と比較して、対象の検査評価（例えば、上記の検査）が改善する。
いくつかの実施形態では、新生血管形成を特徴とする耳科疾患（例えば、聴神経腫瘍、例えば、ＶＳ）に罹患しているか、またはそのリスクがある対象は、語音、語音理解、及び／または音認識の機能としての聴力機能によって特徴付けられる治療レジメンを有し得る。いくつかの実施形態では、治療レジメンの機能性は、語音パターン認識の判定を通じて特徴付けられ、及び／または言語療法士によって判定される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の技術を用いた治療薬の治療レジメンの機能性は、純音検査によって判定される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の技術を用いた治療薬の治療レジメンの機能性は、骨導検査によって判定される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の技術を用いた治療薬の治療レジメンの機能性は、音響反射検査によって判定される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の技術を用いた治療薬の治療レジメンの機能性は、ティンパノメトリーによって判定される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の技術による治療薬の治療レジメンの機能性は、当該技術分野で知られている聴力分析の任意の組み合わせによって判定される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の技術を用いた治療薬の治療レジメンの機能性は、全体的に、及び／または対象の片耳もしくは両耳から測定される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の技術による治療薬の治療レジメンの機能性は、レジメン後に取得された記録及び／または専門的な分析を、同じ対象の以前の記録及び／または分析、及び／または例えば、正常な聴力として定義される許容聴力範囲と比較して難聴を定義するために使用されるそのような応答測定値における既知の閾値と比較して利用する。いくつかの実施形態では、治療対象には、任意の治療を受ける前に、語音パターン認識、純音検査、骨導検査、音響反射検査、及び／またはティンパノメトリー測定及び／または分析が実施される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の１つ以上の技術により治療された対象は、治療前と比較して、治療後に語音パターン認識、純音検査、骨導検査、音響反射検査、及び／またはティンパノメトリー測定で改善を有することになる。いくつかの実施形態では、語音パターン認識、純音検査、骨導検査、音響反射検査、及び／またはティンパノメトリー測定は、治療が行われた後、及び治療後の定期的なフォローアップ時に取得される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の技術による治療により、本明細書に記載の技術による治療前に行われた検査と比較して、または対照集団と比較して、対象の検査評価（例えば、上記の検査）が改善する。
いくつかの実施形態では、新生血管形成を特徴とする耳科疾患（例えば、聴神経腫瘍、例えば、ＶＳ）に罹患しているか、またはそのリスクがある対象は、聴性行動反応評価を含む方法を通じて治療の機能評価を受け得る。いくつかの実施形態では、聴性行動反応評価は、適切なマスキングを伴った気導曲線及び骨導曲線を有する純音聴力検査、語音聴力検査、静寂下での語音（Ｗｏｒｄｓ ｉｎ ｑｕｉｅｔ）、または騒音分析での語音（ｗｏｒｄｓ ｉｎ ｎｏｉｓｅ ａｎａｌｙｓｉｓ）を含む。いくつかの実施形態では、聴性行動反応評価は、聴性脳幹反応検査による電気生理学的聴力検査を含む。いくつかの実施形態では、聴性行動反応評価は、標準化された質問票を含む：ＨＨＩＡ：成人用の難聴障害度質問票、ＤＨＩ：めまい障害度質問票、ＴＨＩ：耳鳴障害度質問票、ＰＡＮＱＯＬ：Ｐｅｎｎ聴神経腫瘍ＱＯＬ質問票（ＱｏＬ）。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の技術による治療により、本明細書に記載の技術による治療前に行われた検査と比較して、または対照集団と比較して、対象の検査評価（例えば、上記の検査）が改善する。
いくつかの実施形態では、新生血管形成を特徴とする耳科疾患（例えば、聴神経腫瘍、例えば、ＶＳ）に罹患しているか、またはそのリスクがある対象は、耳、前庭、及び／または全身の有害事象の評価、ならびに血液学、臨床化学、及び／または尿検査パラメータの評価によってモニターされ得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の技術による治療を受けている対象は、血液中の抗ＶＥＧＦタンパク質レベル、ならびに耳スワブ、鼻スワブ、唾液、及び血液中の構築物ＤＮＡについて評価され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の技術による治療を受けている対象は、カプシド及び／または分泌された導入遺伝子産物に対する潜在的な体液性免疫応答の評価のために採血され得る。
いくつかの実施形態では、新生血管形成を特徴とする耳科疾患（例えば、聴神経腫瘍、例えば、ＶＳ）に罹患しているか、またはそのリスクがある対象は、ＡＢＲ検査を通じてその治療機能を分析され得る。いくつかの実施形態では、ＡＢＲ検査は、対象の蝸牛、蝸牛神経、及び脳幹が各音刺激に応答するかどうかを測定し、そのような検査は、多くの場合、耳の健康状態の尺度として使用される。いくつかの実施形態では、対象の脳幹が確実に処理できる各刺激周波数の最低強度（閾値）を測定することに加えて、閾値上刺激に応答する波Ｉの振幅を測定して、蝸牛有毛細胞から聴覚神経への求心性の情報の流れの整合性を評価することができる。いくつかの実施形態では、ＡＢＲ閾値は、対象の耳を通過し、脳幹によって処理される最低レベルの音に関する重要な情報を提供することができ、ＡＢＲ波Ｉの振幅における閾値上応答は、内有毛細胞の基底部と聴神経の樹状突起との間のリボンシナプス接続の整合性を反映するもの（ｐｒｏｘｙ）として使用が増えている。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の技術による治療により、本明細書に記載の技術による治療前に行われた検査と比較して、または対照集団と比較して、対象のＡＢＲ評価が改善する。
いくつかの実施形態では、新生血管形成を特徴とする耳科疾患（例えば、聴神経腫瘍、例えば、ＶＳ）に罹患しているか、またはそのリスクがある対象は、ＤＰＯＡＥベース検査を通じてその治療機能を分析され得る。いくつかの実施形態では、ＤＰＯＡＥは、蝸牛の外有毛細胞の動きによって生成される音であり、変換器及びマイクロホンの組み合わせを用いて外耳道で非侵襲的に測定される。いくつかの実施形態では、誘発されたＤＰＯＡＥの大きさは、外有毛細胞機能の有用な尺度である。いくつかの実施形態では、２つの原音（ｆ１及びｆ２）が耳に与えられ、刺激周波数及び歪み周波数において蝸牛流体に圧力変化を引き起こす機械的振動が生成される。いくつかの実施形態では、これらの圧力変化は、耳を逆方向に駆動し、中耳、次いで鼓膜を活性化して、外耳道内で音を生成する。いくつかの実施形態では、ＤＰＯＡＥは、ＡＢＲで使用されるのと同じ検査周波数（８、１６、３２ｋＨｚ）で収集され、対象がＡＢＲの麻酔下にある間に実行され得る。いくつかの実施形態では、ｆ２は８、１６、及び３２ｋＨｚを中心とし、ｆ１＝ｆ２×０．８＋１０ｄＢである。いくつかの実施形態では、各周波数において、音は、５ｄＢずつ上昇させた１０～８０ｄＢ ＳＰＬから与えられる。いくつかの実施形態では、ＤＰＯＡＥは外有毛細胞機能を評価し、したがって、典型的には、歪成分放射応答の振幅として測定される応答の強度の閾値上評価として使用される。いくつかの実施形態では、３つ全ての検査周波数が使用される。いくつかの実施形態では、検査された周波数ごとに信頼できる歪成分応答が得られない場合があり、そのような場合、適宜分析を行ってもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の技術による治療により、本明細書に記載の技術による治療前に行われた検査と比較して、または対照集団と比較して、対象のＢＰＯＡＥ評価が改善する。
腫瘍サイズ及び／または血管系を縮小するための対象の治療
いくつかの実施形態では、新生血管形成を特徴とする耳科疾患（例えば、聴神経腫瘍、例えば、ＶＳ）に罹患しているか、またはそのリスクがある対象は、画像診断ベース技術を通じてその治療機能を分析され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物及び方法による個体の治療の有効性は、放射線撮影法を使用して測定することができる。いくつかの実施形態では、そのような放射線撮影法は、これらに限定されないが、コンピュータ断層撮影法（ＣＴ）（コンピュータ体軸断層撮影（ＣＡＴ）スキャンとしても知られる）、Ｘ線、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、三次元流体減衰反転回復（３Ｄ－ＦＬＡＩＲ）ＭＲＩ、陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）、及び／またはＰＥＴ－ＣＴスキャンを含むことができる。適切であり得る追加の放射線撮影技術及び方法は、当該技術分野で知られている。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の技術による治療により、本明細書に記載の技術による治療前に行われた検査と比較して、または対照集団と比較して、対象の画像ベースの評価が改善する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の技術による対象の治療（複数可）は、放射線撮影技術によって測定されるＶＳサイズの縮小に関連する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の技術による対象の治療（複数可）は、放射線撮影技術によって測定されるＶＳサイズの停滞に関連する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の技術による対象の治療（複数可）は、放射線撮影技術によって測定されるＶＳサイズの成長の減速に関連する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の技術による対象の治療（複数可）は、三次元流体減衰反転回復（３Ｄ－ＦＬＡＩＲ）ＭＲＩにおける流体のシグナル強度の低下と関連する。特定の実施形態では、３Ｄ ＦＬＡＩＲ画像上での高い蝸牛シグナルとＶＳ患者の難聴との間には相関関係がある。特定の実施形態では、本明細書に記載の技術による対象の治療（複数可）は、ＶＳを有する対象におけるＦＬＡＩＲ画像上の蝸牛シグナルの増強に関連する外リンパ腔内のタンパク質の濃度を低下させる。
神経機能を改善するための対象の治療
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の技術による対象の治療（複数可）は、神経機能の改善に関連する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の技術による対象の治療（複数可）は、腫瘍浮腫を緩和する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の技術による対象の治療（複数可）は、個体の腫瘍脈管系を一過性に及び／または安定的に正常化する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の技術による対象の治療（複数可）は、語音理解の改善及び／または回復に関連する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の技術による対象の治療（複数可）は、患者が知覚する語音理解の困難の減少に関連する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の技術による対象の治療（複数可）は、個体の報告された生活の質の改善及び／または回復に関連する。
疾患状態の特性決定方法
とりわけ、本開示は、対象、例えば、ＶＳに罹患しているか、またはそのリスクがある対象の疾患状態の特性決定方法を提供する。いくつかの実施形態では、疾患状態は、遺伝子における変異の存在（または非存在）を測定することによって特性決定することができる。「遺伝子における変異」という用語は、既知のコンセンサス機能性遺伝子における改変を指し、コンセンサス機能性タンパク質と比較して、１つ以上のアミノ酸の欠失、１つ以上のアミノ酸置換、及び１つ以上のアミノ酸挿入、のうちの１つ以上を有するタンパク質の産生をもたらす、及び／または変異を有しない哺乳動物細胞におけるコードされたタンパク質の発現されたレベルと比較して、哺乳動物細胞におけるコードされたタンパク質の発現されたレベルの減少をもたらす。いくつかの実施形態では、変異は、１つ以上のアミノ酸（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、またはそれ以上のアミノ酸）の欠失を有するタンパク質の産生をもたらし得る。いくつかの実施形態では、変異は、遺伝子におけるフレームシフトをもたらし得る。「フレームシフト」という用語は、当該技術分野において、コード配列のリーディングフレームのシフトをもたらすコード配列の任意の変異を包含することが知られている。いくつかの実施形態では、フレームシフトは、非機能性タンパク質をもたらし得る。いくつかの実施形態では、点変異は、ナンセンス変異（例えば、遺伝子のエクソンにおいて未成熟終止コドンをもたらす）であり得る。ナンセンス変異は、機能的である場合も、そうでない場合もある短縮型タンパク質（対応するコンセンサス機能性タンパク質と比較して）の産生をもたらし得る。いくつかの実施形態では、変異は、ｍＲＮＡもしくはタンパク質、またはｍＲＮＡ及びタンパク質の両方の発現の喪失（またはレベルの減少）をもたらし得る。いくつかの実施形態では、変異は、コンセンサス機能性タンパク質と比較して１つ以上の生物活性（機能）の喪失または減少を有する、変化したタンパク質の産生をもたらし得る。
いくつかの実施形態では、変異は、遺伝子への１つ以上のヌクレオチドの挿入である。いくつかの実施形態では、変異は、遺伝子の調節配列及び／または制御配列、すなわち、コード配列ではない遺伝子の一部分にある。いくつかの実施形態では、調節配列及び／または制御配列における変異は、プロモーターまたはエンハンサー領域にあり得、遺伝子の適切な転写を阻止または低減し得る。いくつかの実施形態では、変異は、タンパク質と相互作用することが知られている既知の異種遺伝子にある。
遺伝子ｍＲＮＡ及び／またはタンパク質の遺伝子型決定方法及び／または発現もしくは活性を検出する方法は、当該技術分野で知られている（例えば、Ｉｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｗｏｒｌｄ Ｊ Ｏｔｏｒｈｉｎｏｌａｒｙｎｇｏｌ．２０１３ Ｍａｙ ２８；３（２）：２６－３４、及びＲｏｅｓｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ Ｊ Ｍｏｌ Ｓｃｉ．２０１８ Ｊａｎ；１９（１）：２０９（これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。いくつかの実施形態では、ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現レベルを、直接的に検出することができる（例えば、タンパク質の検出、ｍＲＮＡの検出など）。遺伝子の発現及び／または活性を直接検出するために使用され得る技法の非限定的な例としては、例えば、リアルタイムＰＣＲ、定量的リアルタイムＰＣＲ、ウェスタンブロット法、免疫沈降法、免疫組織化学法、質量分析法、または免疫蛍光法が挙げられる。いくつかの実施形態では、遺伝子及び／またはタンパク質の発現を、間接的に検出することができる（例えば、機能的聴力検査、ＡＢＲ、ＤＰＯＡＥなどを通じて）。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の任意の作用物質（例えば、組成物、例えば、構築物を含む組成物、及び／または粒子など）の投与前及び投与後に、組織試料（例えば、１つ以上の内耳細胞を含む、例えば、１つ以上の有毛細胞及び／または１つ以上の支持細胞を含む）を形態学的分析によって評価して、有毛細胞及び／または支持細胞の形態を決定することができる。いくつかのそのような実施形態では、標準的な免疫組織化学的または組織学的分析を行うことができる。いくつかの実施形態では、細胞がｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで使用される場合、追加の免疫細胞化学的または免疫組織化学的分析を行うことができる。いくつかの実施形態では、１つ以上のタンパク質または転写産物の１つ以上のアッセイ（例えば、ウェスタンブロット法、ＥＬＩＳＡ、ポリメラーゼ連鎖反応）を、対象またはｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞集団からの１つ以上の試料に対して実施することができる。
難聴、耳鳴り、めまい、及び症状の回復の評価
いくつかの実施形態では、聴力機能は、本明細書に記載の組成物及び方法による治療前、治療後、及び／または治療中に聴性脳幹反応測定（ＡＢＲ）を使用して個体において判定される。いくつかの実施形態では、聴力機能は、本明細書に記載の組成物及び方法による治療前、治療後、及び／または治療中に歪成分耳音響放射（ＤＰＯＡＥ）を測定することによって個体において判定される。いくつかのそのような実施形態では、測定値は、対象の片耳または両耳から取得される。いくつかのそのような実施形態では、記録は、同じ対象の以前の記録、及び／または例えば、正常な聴力として定義される許容聴力範囲と比較して難聴を定義するために使用される、そのような応答測定値における既知の閾値と比較される。いくつかの実施形態では、対象は、任意の治療を受ける前にＡＢＲ及び／またはＤＰＯＡＥ測定値が記録される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の１つ以上の技術により治療された対象は、治療前と比較して、治療後にＡＢＲ及び／またはＤＰＯＡＥ測定値で改善を有することになる。いくつかの実施形態では、ＡＢＲ及び／またはＤＰＯＡＥ測定値は、治療が行われた後、及び治療後の定期的なフォローアップ時に取得される。
いくつかの実施形態では、聴力機能は、語音パターン認識を使用して判定されるか、または言語療法士によって判定される。いくつかの実施形態では、聴力機能は、純音検査によって判定される。いくつかの実施形態では、聴力機能は、骨伝導検査によって判定される。いくつかの実施形態では、聴力機能は、音響反射検査によって判定される。いくつかの実施形態では、聴力機能はティンパノメトリーによって判定される。いくつかの実施形態では、聴力機能は、当該技術分野で知られている聴力分析の任意の組み合わせによって判定される。いくつかのそのような実施形態では、測定は全体的に、及び／または対象の片耳もしくは両耳から測定される。いくつかのそのような実施形態では、記録及び／または専門的な分析は、同じ対象の以前の記録及び／または分析、及び／または例えば、正常な聴力として定義される許容聴力範囲と比較して難聴を定義するために使用される、そのような応答測定値における既知の閾値と比較される。いくつかの実施形態では、対象には、任意の治療を受ける前に、語音パターン認識、純音検査、骨導検査、音響反射検査、及び／またはティンパノメトリー測定及び／または分析が実施される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の１つ以上の技術により治療された対象は、治療前と比較して、治療後に語音パターン認識、純音検査、骨導検査、音響反射検査、及び／またはティンパノメトリー測定で改善を有することになる。いくつかの実施形態では、語音パターン認識、純音検査、骨導検査、音響反射検査、及び／またはティンパノメトリー測定は、治療が行われた後、及び治療後の定期的なフォローアップ時に取得される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される任意の方法は、聴性行動反応評価を含む。いくつかの実施形態では、聴性行動反応評価は、適切なマスキングを伴った気導曲線及び骨導曲線を有する純音聴力検査、語音聴力検査、静寂下での語音、または騒音下での語音を含む。いくつかの実施形態では、聴性行動反応評価は、聴性脳幹反応検査による電気生理学的聴力検査を含む。いくつかの実施形態では、聴性行動反応評価は、標準化された質問票を含む：ＨＨＩＡ：成人用の難聴障害度質問票、ＤＨＩ：めまい障害度質問票、ＴＨＩ：耳鳴障害度質問票、ＰＡＮＱＯＬ：Ｐｅｎｎ聴神経腫瘍ＱＯＬ質問票（ＱｏＬ）。
本明細書に開示される任意の方法のいくつかの実施形態では、安全性及び有効性は、耳、前庭、及び全身の有害事象、ならびに血液学、臨床化学、及び／または尿検査パラメータの評価によってモニターされ得る。本明細書に開示される任意の方法のいくつかの実施形態では、評価される追加のパラメータには、血液中の抗ＶＥＧＦタンパク質レベル、ならびに耳スワブ、鼻スワブ、唾液、及び血液中の構築物ＤＮＡが含まれる。本明細書に開示される任意の方法のいくつかの実施形態では、カプシド及び分泌された導入遺伝子産物に対する潜在的な体液性免疫応答の評価のために、血液を採取することもできる。
ＡＢＲ検査は、動物の蝸牛、蝸牛神経、及び脳幹が各音刺激に応答するかどうかを測定し、多くの場合、耳の健康状態の尺度として使用される。これと同じ標準的な検査は、病院で新生児の聴力を検査するために一般的に使用されており、実験動物で使用される標準的な聴力検査である。いくつかの実施形態では、ＡＢＲ検査は、マウスにケタミン／キシラジン麻酔薬のＩＰ投与量を注入して、動き及び筋肉アーチファクトを最小限に抑え、測定電極の配置を補助することを含む。いくつかの実施形態では、ＡＢＲ検査（ＤＰＯＡＥと同時に両方の耳で行う場合）が完了するまでにおよそ４５分かかるため、麻酔薬の追加投与が必要になる場合がある。いくつかの実施形態では、麻酔薬の初回投与は、ケタミン（１００ｍｇ／ｋｇ）及びキシラジン（１０ｍｇ／ｋｇ）ＩＰからなり、必要に応じて、元のケタミン用量の１／４～１／２からなるケタミンのみが追加投与される。いくつかの実施形態では、獣医師の推奨に基づいて、キシラジンの再投与は行われない。いくつかの実施形態では、皮膚表面を通る経皮記録電極は、３つの標準的な場所（耳の間で等距離にある頭蓋骨の頂点、検査耳の耳介の後ろの乳様突起上、及び接地電極用に反対側の耳の耳介の後ろの乳様突起上）に配置される。いくつかの実施形態では、刺激は、５ｄＢずつ上昇させた１０～８０ｄＢ ＳＰＬで、低（８ｋＨｚ）、中（１６ｋＨｚ）、及び高（３２ｋＨｚ）周波数の純音ピップ刺激（０．１ｍｓの立上がり立下がり、１．５ｍｓの持続時間）からなる。いくつかの実施形態では、刺激は３０／秒の速度で与えられ、５１２のアーチファクトのない平均が各刺激レベルで取得される。いくつかの実施形態では、ＡＢＲを、群に応じて２～３の別の時点；ベースライン及び最終４～６週で収集した。一部の動物は、手術後３週目にも検査した。いくつかの実施形態では、動物の脳幹が確実に処理できる各刺激周波数の最低強度（閾値）を測定することに加えて、閾値上刺激に応答する波Ｉの振幅を測定して、蝸牛有毛細胞から聴覚神経への求心性の情報の流れの整合性を評価することができる。いくつかの実施形態では、ＡＢＲ閾値は、動物の耳を通過し、脳幹によって処理される最低レベルの音に関する重要な情報を提供することができ、ＡＢＲ波Ｉの振幅における閾値上応答は、内有毛細胞の基底部と聴神経の樹状突起との間のリボンシナプス接続の整合性を反映するものとして使用が増えている。
ＤＰＯＡＥは、蝸牛の外有毛細胞の動きによって生成される音であり、変換器及びマイクロホンの組み合わせを用いて外耳道で非侵襲的に測定される。いくつかの実施形態では、誘発されたＤＰＯＡＥの大きさは、外有毛細胞機能の有用な尺度である。これと同じ標準的な検査もまた、病院で新生児の聴力を検査するために一般的に使用されており、実験動物で使用される標準的な聴力検査である。いくつかの実施形態では、２つの原音（ｆ１及びｆ２）が耳に与えられ、刺激周波数及び歪み周波数において蝸牛流体に圧力変化を引き起こす機械的振動が生成される。いくつかの実施形態では、これらの圧力変化は、耳を逆方向に駆動し、中耳、次いで鼓膜を活性化して、外耳道内で音を生成する。いくつかの実施形態では、ＤＰＯＡＥは、ＡＢＲで使用されるのと同じ検査周波数（８、１６、３２ｋＨｚ）で、ＡＢＲの麻酔下にある間に収集される。いくつかの実施形態では、ｆ２は８、１６、及び３２ｋＨｚを中心とし、ｆ１＝ｆ２×０．８＋１０ｄＢである。いくつかの実施形態では、各周波数において、音は、５ｄＢずつ上昇させた１０～８０ｄＢ ＳＰＬから与えられる。いくつかの実施形態では、ＤＰＯＡＥは外有毛細胞機能を評価し、したがって、典型的には、歪成分放射応答の振幅として測定される応答の強度の閾値上評価として使用される。いくつかの実施形態では、３つ全ての検査周波数が使用される。いくつかの実施形態では、検査された周波数ごとに信頼できる歪成分応答が得られない場合があり、そのような場合、適宜分析を行ってもよい。
腫瘍サイズ及び血管系の評価
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物及び方法による個体の治療の有効性は、放射線撮影法を使用して測定することができる。いくつかの実施形態では、そのような放射線撮影法は、コンピュータ断層撮影法（ＣＴ）（コンピュータ体軸断層撮影（ＣＡＴ）スキャンとしても知られる）、Ｘ線、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、三次元流体減衰反転回復（３Ｄ－ＦＬＡＩＲ）ＭＲＩ、陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）、及び／またはＰＥＴ－ＣＴスキャンを含み得る。好適であり得るさらなる放射線撮影技術及び方法は、当該技術分野で知られている。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法及び／または組成物による個体の治療は、放射線撮影技術によって測定されるＶＳサイズの縮小に関連する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法及び／または組成物による個体の治療は、放射線撮影技術によって測定されるＶＳサイズの停滞に関連する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法及び／または組成物による個体の治療は、放射線撮影技術によって測定されるＶＳサイズの成長の減速に関連する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法及び／または組成物による個体の治療は、三次元流体減衰反転回復（３Ｄ－ＦＬＡＩＲ）ＭＲＩにおける流体のシグナル強度の低下と関連する。特定の実施形態では、３Ｄ ＦＬＡＩＲ画像上での高い蝸牛シグナルとＶＳ患者の難聴との間には相関関係がある。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法及び／または組成物は、ＶＳを有する対象におけるＦＬＡＩＲ画像上の蝸牛シグナルの増強に関連する外リンパ腔内のタンパク質の濃度を低下させる。
神経機能の評価
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法及び／または組成物による個体の治療は、神経機能の改善に関連する。いくつかの実施形態では、方法及び／または組成物による個体の治療は、腫瘍浮腫を軽減する。いくつかの実施形態では、方法及び／または組成物による個体の治療は、個体の腫瘍脈管系を一過性に及び／または安定的に正常化する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法及び／または組成物による個体の治療は、語音理解の改善及び／または回復に関連する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法及び／または組成物による個体の治療は、患者が知覚する語音理解の困難の減少に関連する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法及び／または組成物による個体の治療は、個体の報告された生活の質の改善及び／または回復に関連する。
生体試料中の抗ＶＥＧＦタンパク質濃度の評価
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、本明細書に記載の組成物による治療前、治療中、及び／または治療後に、個体からの１つ以上の生体試料中の抗ＶＥＧＦタンパク質濃度を評価することを含む。
これらの方法のいくつかの実施形態では、治療、例えば、本明細書に記載の組成物の１回または２回以上の投与の後に、抗ＶＥＧＦタンパク質の発現が増加する。いくつかの実施形態では、対照レベルと比較して、例えば、本明細書に記載の任意の構築物（複数可）を含む組成物の導入前の抗ＶＥＧＦタンパク質の発現レベルと比較して、本明細書に記載の活性抗ＶＥＧＦタンパク質の発現が増加する。
標的ＲＮＡ及び／またはタンパク質の発現及び／または活性を検出する方法は、当該技術分野で知られている。いくつかの実施形態では、内耳細胞標的タンパク質の発現レベルを、直接検出することができる（例えば、内耳細胞標的タンパク質または標的ｍＲＮＡの検出）。標的ＲＮＡまたはタンパク質の発現及び／または活性を直接検出するために使用され得る技法の非限定的な例としては、リアルタイムＰＣＲ、ウェスタンブロット法、免疫沈降法、免疫組織化学法、質量分析法、または免疫蛍光法が挙げられる。いくつかの実施形態では、内耳細胞標的タンパク質の発現を、間接的に検出することができる（例えば、機能的聴力検査により）。
いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ粒子の体内分布及び／または排出分析が実施される。いくつかの実施形態では、例えば抗ＶＥＧＦタンパク質を発現するために、ｃＤＮＡを送達するためのｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ複製欠損型ｒＡＡＶ粒子を含む組成物が本明細書に開示される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｒＡＡＶ粒子を使用して、ＶＳを有するか、またはＶＳを発症するリスクがある対象、例えばヒト、例えば患者を治療する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、蝸牛内経路を介して投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、本明細書に記載のｒＡＡＶ粒子の用量で投与される（例えば、ベクターゲノムｑＰＣＲ分析によって測定される）。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、身体の局所領域に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、身体の局所領域、例えば、蝸牛及び／または外リンパにおいて、構築物配列の検出可能な発現をもたらす。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、血管の拡張及び全身曝露を制限することが予想される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、蝸牛においてより高いレベルの構築物配列をもたらすが、非蝸牛組織または流体区画、例えば、肝臓、脾臓、リンパ節、脳幹、聴覚皮質、血清、及び／またはＣＳＦではもたらさない。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、採取された非蝸牛組織及び流体において、低いが検出可能なレベルの構築物配列をもたらす。いくつかの実施形態では、非蝸牛組織における構築物配列の発現は、治療上関連しないレベルである。いくつかの実施形態では、構築物配列のレベルは、概して、６ヶ月までに全体的に低下した。いくつかの実施形態では、構築物配列のレベルは、血液試料中で経時的に、例えば、本明細書に開示される組成物の蝸牛内投与後１ヶ月で、減少する。
本明細書に開示される任意の方法のいくつかの実施形態では、体内分布及び排出に関連する流体（例えば、血液、血清、尿、唾液、鼻及び耳のスワブ、ならびにＣＳＦ液）が採取及び／または評価される。本明細書に開示される任意の方法のいくつかの実施形態では、非標的組織が採取及び／または評価される。いくつかの実施形態では、カプシドバリアントは向性を決定すると予想される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、カプシドバリアント、例えばＡＡＶＡｎｃ８０カプシドバリアントを含む。いくつかの実施形態では、カプシドバリアントを含む本明細書に開示される組成物を、例えば、同一の投与経路を介して、同一の粒子製剤で、及び／または同等もしくはより低い粒子用量で送達することは、体内分布及び排出パターンに違いをもたらすことはないと予想される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物、例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦは、約５×１０（１２）総ｖｇ／蝸牛未満のレベルで投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物、例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦは、約５×１０１３ｖｇ／ｍＬ未満のレベルで投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物の用量は、例えば、量の限界及びｒＡＡＶ粒子濃度の関数である。
対照的に、ｒＡＡＶ粒子を使用した臨床試験では、全身投与経路を介して１×１０１４ｖｇ／ｋｇを超える量が送達され、いくつかのケースでは、生後６ヶ月未満の参加者に送達された（ＡｖｅＸｉｓ ２０１９、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
比較的低用量のｒＡＡＶ粒子を用いた他の局所送達では、標的領域を超えた広範な体内分布（例えば全身にわたる）、または広範なｒＡＡＶ粒子の排出（排泄／分泌；一般にｑＰＣＲなどの方法により基礎となる構築物ＤＮＡ濃度が測定される）は報告されていない。例えば、７．５×１０１１ｖｇ／眼の用量で両側に送達されたＬｕｘｔｕｒｎａ（登録商標）について、眼の標的領域を超えた低レベルの分散（特に、試験動物の粒子注入眼の視神経、視交叉、脾臓及び肝臓、ならびに散発的にリンパ節で）が報告されている。同様に、第３相臨床試験では、参加者の４５％の涙にｒＡＡＶ粒子が一過性かつ低レベルで排出され、また、１．５×１０１１ｖｇ／眼の用量で両側に送達されたＬｕｘｔｕｒｎａ（登録商標）の網膜下投与直後の数日間、参加者の１０％の血清（全血ではない）試料でも低レベルで検出された（Ｒｕｓｓｅｌｌ ２０１７；Ｓｐａｒｋ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ２０１７、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される任意の方法は、例えば、検証されたｑＰＣＲ法を使用して、蝸牛への片側投与後に、経時的に血液（例えば、血清及び全血）中のｒＡＡＶ粒子配列の分散を評価することを含む。いくつかの実施形態では、対象からの排出を評価するために、追加の検体（例えば、外耳道スワブ、鼻スワブ、唾液、及び尿）が採取される。いくつかの実施形態では、少なくとも３つの連続した陰性検体が得られるまで、検体が対象から収集される。
いくつかの実施形態では、ＶＳ関連難聴と相関するタンパク質は、本明細書に記載の組成物及び／または方法による治療前、治療中、及び／または治療後に測定される。特定の実施形態では、そのようなＶＳ関連難聴関連タンパク質には、μ－クリスタリン（ＣＲＹＭ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質２（ＬＲＰ２）、免疫グロブリン（Ｉｇ）γ－４鎖Ｃ領域、Ｉｇκ鎖Ｃ領域、補体Ｃ３、免疫グロブリン重定常γ３、及び／またはケモカイン受容体－４（ＣＸＣＲ４）が挙げられる。
いくつかの実施形態では、ＡＡＶカプシド及び／または粒子に対する免疫原性が測定される。全身適用と比較して比較的低用量で局所領域に送達されたＡＡＶカプシド及び／または粒子に対する免疫原性では、一般に免疫応答の特定のパターンは得られなかった；重要なことに、体液性及び細胞媒介性免疫学的モニタリングの両方により観察された応答（例えば、それぞれ酵素結合免疫吸着アッセイ［ＥＬＩＳＡ］／中和抗体［ＮＡｂ］及び酵素結合免疫吸着スポット［ＥＬＩＳＰＯＴ］アッセイによる）は、若干の免疫学的保護を提供する投与経路（ＲＯＡ）（複数可）（例えば、脳への直接投与）に関して、大部分は臨床的相関がなかった。
本明細書に開示される任意の方法のいくつかの実施形態では、蝸牛内ＲＯＡは、例えば、非開存蝸牛水管を有する種（例えば、ＮＨＰ及びヒト）において、同様のレベルの保護を提供すると予想される。本明細書に開示される任意の方法のいくつかの実施形態では、対象は、本明細書に開示される組成物、例えばｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦの投与の３日前からおよそ１７日間、短い周術期の免疫調節レジメン（例えば全身性経口コルチコステロイド）を受ける。いくつかの実施形態では、免疫調節レジメンは、外科的投与処置に関連する炎症を軽減する。いくつかの実施形態では、免疫調節レジメンはまた、カプシド（例えば、ＡＡＶＡｎｃ８０）または基礎となる構築物（例えば、導入遺伝子産物、例えば、抗ＶＥＧＦタンパク質）のいずれかに対する免疫反応の可能性をさらに低減し得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される任意の方法は、本明細書に開示される組成物の投与に応答した体液性免疫（例えば、抗体応答）を評価することをさらに含む。いくつかの実施形態では、蝸牛内ＲＯＡを介して送達される場合の本明細書に開示される組成物の形質導入に対する、既存の免疫の効果（例えば血清ＮＡｂレベルによって測定される）が評価される。いくつかの実施形態では、既存のＮＡｂレベルは、蝸牛内投与経路によって送達されるＡＡＶ粒子の形質導入を阻害しない。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される任意の方法は、ＡＡＶカプシド及び／または導入遺伝子産物（例えば、分泌型タンパク質）の両方に対する潜在的な全身の体液性応答について血清を評価することをさらに含む。いくつかの実施形態では、全身の体液性応答の評価に対応して、本明細書に開示される組成物、例えばｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦの両側蝸牛内投与のための治療間隔を定めることができる。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される任意の方法は、例えば、局所投与経路（ＲＯＡ）、例えば、蝸牛内投与を介して送達されるｒＡＡＶ粒子からのＡＡＶ粒子、カプシド、及び／または構築物（例えば、基礎となる導入遺伝子）産物のいずれかに対して、細胞傷害性Ｔ細胞応答をもたらさない。例えば、Ｌｕｘｔｕｒｎａ（登録商標）のラベルには、臨床的に有意な細胞傷害性Ｔ細胞応答を有する対象がいなかったことが記載されており（Ｓｐａｒｋ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ２０１７、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、臨床開発プログラム中に単離された陽性インターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）ＥＬＩＳＰＯＴアッセイの結果が得られたが（Ｂｅｎｎｅｔｔ ２０１２、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、臨床プログラムにおいて、臨床的な炎症反応は観察されず用量制限毒性が見られなかったことから、これらの単離結果の重要性は不明である。
特定の実施形態では、本明細書に記載の任意の組成物または組成物の産物の薬物動態が測定され、収集される。特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦタンパク質が分泌され、先行技術では、高用量の全身性抗ＶＥＧＦタンパク質を、高用量で経時的に全身に送達した場合（２～３週間ごとに５～１５ｍｇ／ｋｇ）、高血圧、タンパク尿、肝酵素の上昇、動脈血栓塞栓事象、静脈血栓塞栓事象、出血、ならびに手術及び創傷治癒合併症を伴うと説明されている。本明細書に開示される任意の方法のいくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は局所的に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物の局所送達は、任意の１つ以上の有害なオフターゲット効果の可能性を低下させる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物の局所送達は、いかなる有害なオフターゲット効果ももたらさない。本明細書に開示される任意の方法のいくつかの実施形態では、対象は、血清中の抗ＶＥＧＦタンパク質（例えば、電気化学発光アッセイを使用して）、バイタルサイン、尿検査、及び／または臨床化学をモニターすることによってフォローアップされる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物を投与された対象のモニタリングは、早期の介入及び／または任意のオフターゲット効果の最小化を可能にする。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物の投与後、抗ＶＥＧＦタンパク質を測定するために血清を採取して分析することができる。いくつかの実施形態では、そのような測定は、組成物投与前（ベースライン）、投与後２週目、及び適切な期間（例えば、３ヶ月、６ヶ月、１年、２年、３年、４年、または５年超）毎月行われ得る。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦタンパク質は、ビヒクルまたは本明細書に記載のｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ粒子の用量のいずれかを蝸牛内送達された個体において、ベースライン時または投与後の任意の時点で、個体の血清中に検出されない。
本明細書に開示される任意の方法のいくつかの実施形態では、方法は、使用する抗ＶＥＧＦタンパク質の存在について血清を採取及び／または評価することを含む（例えば、本明細書に記載の電気化学発光アッセイ）。
製造方法
ＡＡＶシステムは、一般に当該技術分野で周知である（例えば、Ｋｅｌｌｅｈｅｒ ａｎｄ Ｖｏｓ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１７（６）：１１１０－１７（１９９４）；Ｃｏｔｔｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８９（１３）：６０９４－９８（１９９２）；Ｃｕｒｉｅｌ，Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎ，１３（２－３）：１４１－６４（１９９４）；Ｍｕｚｙｃｚｋａ，Ｃｕｒｒ Ｔｏｐ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１５８：９７－１２９（１９９２）；及びＡｓｏｋａｎ Ａ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．，２０（４）：６９９－７０８（２０１２）（これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。ＡＡＶ構築物を生成及び使用するための方法は、例えば、米国特許第５，１３９，９４１号、同第４，７９７，３６８号、及びＰＣＴ出願ＵＳ２０１９／０６０３２８に記載されており、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
ウイルス構築物を得るための方法は、当該技術分野で知られている。例えば、ＡＡＶ構築物を産生するために、この方法は典型的には、ＡＡＶカプシドタンパク質またはその断片をコードする核酸配列；機能的なｒｅｐ遺伝子；ＡＡＶ逆位末端反復（ＩＴＲ）及びコード配列で構成される組換えＡＡＶ構築物；及び／または組換えＡＡＶ構築物のＡＡＶカプシドタンパク質へのパッケージングを可能にするのに十分なヘルパー機能、を含む宿主細胞を培養することを含む。
いくつかの実施形態では、ＡＡＶカプシド内にＡＡＶ構築物をパッケージングするために宿主細胞内で培養される構成要素は、トランスで宿主細胞に提供され得る。あるいは、任意の１つ以上の構成要素（例えば、組換えＡＡＶ構築物、ｒｅｐ配列、ｃａｐ配列、及び／またはヘルパー機能）は、当業者に既知の方法を使用して、１つ以上のそのような構成要素を含むように操作された安定した宿主細胞によって提供され得る。いくつかの実施形態では、そのような安定な宿主細胞は、誘導性プロモーターの制御下にあるそのような構成要素（複数可）を含む。いくつかの実施形態では、そのような構成要素（複数可）は、構成的プロモーターの制御下にあってもよい。いくつかの実施形態では、選択された安定な宿主細胞は、構成的プロモーターの制御下にある選択された構成要素（複数可）及び１つ以上の誘導性プロモーターの制御下にある他の選択された構成要素（複数可）を含み得る。例えば、ＨＥＫ２９３細胞（構成的プロモーターの制御下でＥ１ヘルパー機能を含む）に由来するが、誘導性プロモーターの制御下でｒｅｐ及び／またはｃａｐタンパク質を含む安定な宿主細胞を生成することができる。他の安定な宿主細胞は、当業者によって常法を使用して生成され得る。
本開示のＡＡＶを産生するために必要な組換えＡＡＶ構築物、ｒｅｐ配列、ｃａｐ配列、及びヘルパー機能は、任意の適切な遺伝子エレメント（例えば、構築物）を使用して、パッケージング宿主細胞に送達され得る。選択された遺伝子エレメントは、例えば、核酸操作の当該技術分野で、例えば当業者に知られている、遺伝子工学、組換え工学、及び合成技術を含む任意の好適な方法によって送達され得る（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。同様に、ＡＡＶ粒子を生成する方法は周知であり、任意の好適な方法を本開示で使用することができる（例えば、Ｋ．Ｆｉｓｈｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７０：５２０－５３２（１９９３）及び米国特許第５，４７８，７４５号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。
いくつかの実施形態では、組換えＡＡＶは、三重トランスフェクション法を用いて産生され得る（例えば、米国特許第６，００１，６５０号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載される）。いくつかの実施形態では、組換えＡＡＶは、ＡＡＶ粒子、ＡＡＶヘルパー機能構築物、及び補助機能構築物にパッケージングされる組換えＡＡＶ構築物（コード配列を含む）を宿主細胞にトランスフェクトすることによって産生される。ＡＡＶヘルパー機能構築物は、生産的なＡＡＶ複製及びカプシド封入のためにトランスで機能する「ＡＡＶヘルパー機能」配列（例えば、ｒｅｐ及びｃａｐ）をコードする。いくつかの実施形態では、ＡＡＶヘルパー機能構築物は、検出可能な野生型ＡＡＶ粒子（例えば、機能的ｒｅｐ及びｃａｐ遺伝子を含むＡＡＶ粒子）を生成することなく効率的なＡＡＶ構築物産生を支援する。本開示での使用に好適な構築物の非限定的な例には、ｐＨＬＰ１９（例えば、米国特許第６，００１，６５０号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと）及びｐＲｅｐ６ｃａｐ６構築物（例えば、米国特許第６，１５６，３０３号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと）が挙げられる。補助機能構築物は、ＡＡＶが複製を依存する非ＡＡＶ由来ウイルス及び／または細胞機能（例えば、「補助機能」）のヌクレオチド配列をコードする。補助機能は、ＡＡＶ遺伝子転写の活性化、ステージ特異的ＡＡＶ ｍＲＮＡスプライシング、ＡＡＶ ＤＮＡ複製、ｃａｐ発現産物の合成、及びＡＡＶカプシドアセンブリに関与する部分を含むがこれらに限定されない、ＡＡＶ複製に必要な機能が含まれ得る。ウイルスベースの補助機能は、アデノウイルス、ヘルペスウイルス（単純ヘルペスウイルス１型以外）、及びワクシニアウイルスなどの任意の既知のヘルパーウイルスに由来し得る。
対象への送達に好適であるＡＡＶウイルス構築物を生成及び単離するためのさらなる方法は、例えば、米国特許第７，７９０，４４９号；米国特許第７，２８２，１９９号；ＷＯ２００３／０４２３９７；ＷＯ２００５／０３３３２１、ＷＯ２００６／１１０６８９；及び米国特許第７，５８８，７７２号に記載されており、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。あるシステムでは、産生細胞株に、ＩＴＲに隣接したコード配列をコードする構築物と、ｒｅｐ及びｃａｐをコードする構築物（複数可）を一過性にトランスフェクトする。別のシステムでは、ｒｅｐ及びｃａｐを安定して供給するパッケージング細胞株に、ＩＴＲに隣接したコード配列をコードする構築物を一過性にトランスフェクトする。これらのシステムのそれぞれで、ＡＡＶ粒子はヘルパーアデノウイルスまたはヘルペスウイルスの感染に応答して産生され、ＡＡＶは混入ウイルスから分離される。他のシステムでは、ＡＡＶを回収するためにヘルパーウイルスに感染する必要はなく、ヘルパー機能（例えば、アデノウイルスＥ１、Ｅ２ａ、ＶＡ、及びＥ４、またはヘルペスウイルスＵＬ５、ＵＬ８、ＵＬ５２、及びＵＬ２９、ならびにヘルペスウイルスポリメラーゼ）も、システムによりトランスで供給される。このようなシステムでは、ヘルパー機能をコードする構築物を細胞に一過性にトランスフェクションすることによってヘルパー機能を供給することができ、またはヘルパー機能をコードする遺伝子を安定的に含むように細胞を操作することができ、その発現は転写レベルもしくは転写後レベルで制御することができる。
いくつかの実施形態では、精製後のウイルス構築物力価が測定される。いくつかの実施形態では、力価は、定量的ＰＣＲを使用して測定される。特定の実施形態では、構築物に特異的なＴａｑＭａｎプローブを利用して、構築物レベルを測定する。特定の実施形態では、ＴａｑＭａｎプローブは、配列番号９７によって表され、フォワード及びリバース増幅プライマーは、それぞれ配列番号９８及び９９によって例示される。
構築物の定量化のための例示的なＴａｑＭａｎプローブ（配列番号９７）
／５６－ＦＡＭ／ＴＡＡＴＴＣＣＡＡ／ＺＥＮ／ＣＣＡＧＣＡＧＡＧＴＣＡＧＧＧＣ／３ＩＡＢｋＦＱ／
構築物の定量化のための例示的なフォワードｑＰＣＲプライマー（配列番号９８）
ＧＡＴＡＣＡＧＣＴＡＧＡＧＴＣＣＴＧＡＴＴＧＣ
構築物の定量化のための例示的なリバースｑＰＣＲプライマー（配列番号９９）
ＧＡＴＣＴＧＣＣＡＡＧＴＡＣＣＴＣＡＣＴＡＴＧ
本明細書に記載されるように、いくつかの実施形態では、本開示のウイルス構築物は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）構築物である。ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３（例えば、ＡＡＶ３Ｂ）、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、及びＡＡＶ Ａｎｃ８０、ならびにそれらのバリアントを含む、いくつかのＡＡＶ血清型が特性決定されている。いくつかの実施形態では、ＡＡＶ粒子は、ＡＡＶ２／６、ＡＡＶ２／８、ＡＡＶ２／９、またはＡＡＶ２／Ａｎｃ８０粒子である（例えば、ＡＡＶ６、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、またはＡｎｃ８０カプシドを有し、ＡＡＶ２ ＩＴＲを有する構築物を有する）。他のＡＡＶ粒子及び構築物は、例えば、Ｓｈａｒｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ Ｂｕｌｌ．２０１０ Ｆｅｂ １５；８１（２－３）：２７３（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。一般に、任意のＡＡＶ粒子を使用して、本明細書に記載のコード配列を送達することができる。しかしながら、血清型は異なる向性を有し、例えば、それらは異なる組織に優先的に感染する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶ構築物は自己相補型ＡＡＶ構築物である。
本開示は、とりわけ、ＡＡＶベースの構築物を作製する方法を提供する。いくつかの実施形態では、そのような方法は、宿主細胞の使用を含む。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、哺乳動物細胞である。宿主細胞は、ＡＡＶヘルパー構築物、ＡＡＶミニ遺伝子プラスミド、補助機能構築物、及び／または組換えＡＡＶの産生に関連する他のトランスファーＤＮＡ、のレシピエントとして使用され得る。この用語には、トランスフェクトされた元の細胞の子孫が含まれる。したがって、本明細書で使用される「宿主細胞」は、外因性ＤＮＡ配列がトランスフェクトされた細胞を指す場合がある。単一の親細胞の子孫は、自然、偶発的、または意図的な変異により、必ずしも元の親と、形態において、またはゲノム若しくは全ＤＮＡの相補性において、完全に同一であるとは限らないことが理解される。
対象への送達に好適であるＡＡＶ粒子を生成及び単離するためのさらなる方法は、例えば、米国特許第７，７９０，４４９号；米国特許第７，２８２，１９９号；ＷＯ２００３／０４２３９７；ＷＯ２００５／０３３３２１、ＷＯ２００６／１１０６８９；及び米国特許第７，５８８，７７２号に記載されており、これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。あるシステムでは、産生細胞株に、ＩＴＲに隣接したコード配列をコードする構築物と、ｒｅｐ及びｃａｐをコードする構築物（複数可）を一過性にトランスフェクトする。別のシステムでは、ｒｅｐ及びｃａｐを安定して供給するパッケージング細胞株に、ＩＴＲに隣接したコード配列をコードする構築物を一過性にトランスフェクトする。これらのシステムのそれぞれで、ＡＡＶ粒子はヘルパーアデノウイルスまたはヘルペスウイルスの感染に応答して生成され、ＡＡＶ粒子は混入ウイルスから分離される。他のシステムでは、ＡＡＶ粒子を回収するためにヘルパーウイルスに感染する必要はなく、ヘルパー機能（例えば、アデノウイルスＥ１、Ｅ２ａ、ＶＡ、及びＥ４、またはヘルペスウイルスＵＬ５、ＵＬ８、ＵＬ５２、及びＵＬ２９、ならびにヘルペスウイルスポリメラーゼ）も、システムによりトランスで供給される。このようなシステムでは、ヘルパー機能をコードする構築物を細胞に一過性にトランスフェクションすることによってヘルパー機能を供給することができ、またはヘルパー機能をコードする遺伝子を安定的に含むように細胞を操作することができ、その発現は転写レベルもしくは転写後レベルで制御することができる。
さらに別のシステムでは、ＩＴＲに隣接したコード配列及びｒｅｐ／ｃａｐ遺伝子を、バキュロウイルスベースの構築物による感染によって昆虫宿主細胞に導入する。このような産生システムは、当該技術分野で知られている（例えば、一般に、Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２０：９２２－９２９（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。これら及び他のＡＡＶ産生システムの作製及び使用方法はまた、米国特許第５，１３９，９４１号、同第５，７４１，６８３号、同第６，０５７，１５２号、同第６，２０４，０５９号、同第６，２６８，２１３号、同第６，４９１，９０７号、同第６，６６０，５１４号、同第６，９５１，７５３号、同第７，０９４，６０４号、同第７，１７２，８９３号、同第７，２０１，８９８号、同第７，２２９，８２３号、及び同第７，４３９，０６５号（これらの各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）にも記載されている。
本明細書に開示される任意の方法のいくつかの実施形態では、分析試験のフォーカスしたセット及びより短い安定性試験プロトコルが、本明細書に開示される組成物、例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ、例えば、ＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ原薬（ＤＳ）に使用される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物、例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦのＤＳ及び医薬品（ＤＰ）は非常に類似しており、例えば、ＤＳからのＤＰ製造を構成するのは、追加のろ過工程とバイアル化のみである。いくつかの実施形態では、ＤＰは、より包括的な分析試験及びより長い安定性試験プロトコルを受ける。いくつかの実施形態では、ＤＳは長期間保管されず、例えば、ＤＳはＤＳからＤＰ製造に迅速に移される。いくつかの実施形態では、ＤＳは、充填／仕上げプロセス前に保管、例えば－６５℃以下で保持される。
本明細書に開示される任意の方法のいくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物、例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦのＤＳ及びＤＰの安定性は、例えば、外観、ベクターゲノム力価（ｄｄＰＣＲ）、効力、及び／またはバイオバーデン（ＤＳ）または無菌性（ＤＰ）を含む生成物の安定性を示すアッセイを使用して評価される。いくつかの実施形態では、効力アッセイは、規格の確立を支持するのに十分なデータが生成されると規格を含む。いくつかの実施形態では、ＤＳ及びＤＰは、約６週間、２～８℃の安定状態に置かれる。いくつかの実施形態では、ＤＳは、２～８℃で長期間保管されない。いくつかの実施形態では、ＤＰは、目標保管温度（－６５℃以下）で６０ヶ月間保管される。いくつかの実施形態では、ＤＳは、約１２ヶ月間、保管される（例えば安定状態に置かれる）。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物、例えばｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦの効力及び強度は、アッセイ、例えば本明細書に記載されるアッセイのマトリックスを用いて評価される。いくつかの実施形態では、アッセイは、複数の製品特性を評価することを含み、製品の機能的活性、一貫性、安定性を評価するため、及び／または何らかの変更が製造プロセスに導入された後に同等性の証拠を提供するために使用される。いくつかの実施形態では、ｄｄＰＣＲ力価アッセイは、本明細書に開示される組成物を対象に投与する前に、適合性について適格性確認される。いくつかの実施形態では、抗ＶＥＧＦタンパク質の発現は、哺乳動物細胞株においてｉｎ ｖｉｔｒｏで評価される。いくつかの実施形態では、タンパク質発現は、いくつかの感染多重度（ＭＯＩ）にわたって評価され、参照標準と比較される。いくつかの実施形態では、機能的バイオアッセイは、例えば、抗ＶＥＧＦ活性を測定するための市販のキット及び公表された方法を含む、本明細書に開示される方法において使用される。いくつかの実施形態では、効力を評価する機能的バイオアッセイが使用され、例えば、発現された抗ＶＥＧＦタンパク質の生物活性の高感度で定量的な尺度が使用される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される製造方法が利用される。いくつかの実施形態では、製造方法は、ｒＡＡＶ粒子の品質特性に影響を与えたり、または関連研究の解釈に影響を与えたりすることはないと予想される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、２つの構成要素、例えばＡＡＶＡｎｃ８０カプシド（Ｚｉｎｎ ２０１５、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）と、ＡＡＶＡｎｃ８０カプシドによってカプシド封入された、逆位末端反復（ＩＴＲ）配列を除く３５５５個のヌクレオチドの一本鎖ＤＮＡゲノム（一例として図６のパネル（Ａ）により表され、配列番号９２により表される構築物）とを含む組換え粒子、例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物、例えば、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ粒子は、例えば、ＶＥＧＦを阻害するために臨床的に使用される４８ｋＤａのヒト化モノクローナルＦａｂ（全長マウス抗ヒトＶＥＧＦモノクローナル抗体Ａ．４．６．１に由来）であるラニビズマブを発現する。
本開示は、以下の実施例を参照することによりさらに詳述される。これらの実施例は、例示の目的で提供されるに過ぎず、別段の明記がない限り、限定することを意図するものではない。したがって、本開示は、決して以下の実施例に限定されるものとして解釈されるべきでなく、むしろ、本明細書に提供される教示の結果として明白となる、ありとあらゆる変形形態を包含するように解釈されるべきである。
当業者であれば、前述の説明及び以下の実施例、ならびに当該技術分野で知られていることを使用して、本開示の技術を作製及び利用することができると考えられる。
実施例１：ウイルス構築物の構築
この実施例では、本明細書に記載される抗ＶＥＧＦタンパク質をコードする例示的なウイルス構築物の生成についての説明を提供する。当業者であれば、本実施例に従って同様の構築物を作製できることを容易に理解するであろう。例えば、哺乳動物、霊長類、またはヒト由来の抗ＶＥＧＦタンパク質を、単一、二重、または多重構築物戦略の下で発現するｒＡＡＶ構築物を生成することができる。ＡＡＶ血清型１、２、３、４、５、６、７、８、９、ｒｈ８、ｒｈｌ０、ｒｈ３９、ｒｈ４３、及びＡｎｃ８０はそれぞれ、抗ＶＥＧＦタンパク質構築物を封入し、ｒＡＡＶ粒子を形成するために調製され得る。とりわけ、ｒＡＡＶ粒子は、Ｐｒｙａｄｋｉｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｃｌｉｎ．Ｄｅｖｅｌ．２：１５００９，２０１５（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）により概説される（ｉ）コンカテマー化－トランスプライシング戦略、（ｉｉ）ハイブリッドイントロン－相同組換え－トランスプライシング戦略、（ｉｉｉ）エクソン相同組換え戦略、及び／または（ｉｖ）単一構築物戦略を試験するために利用され得る。
実施例１．１：ｒＡＡＶ－ラニビズマブ、ｒＡＡＶ－ラニビズマブ－ＰＣ、及びｒＡＡＶ－ベバシズマブ－ＰＣ構築物の構築
この実施例では、本明細書に記載される、ｒＡＡＶ－ラニビズマブ、ｒＡＡＶ－ラニビズマブ－ＧＦＰ、及びｒＡＡＶ－ベバシズマブ－ＰＣ構築物の生成についての説明を提供する。第１の組換え生成構築物は、配列番号９０に記載の配列を有した。この構築物は、実施例を通して「ｒＡＡＶ－ラニビズマブ－ＰＣ構築物」と呼ばれる。ｒＡＡＶ－ラニビズマブ－ＰＣ構築物は、図６のパネル（Ａ）に示される概略図によって表されるｒＡＡＶ－ＶＨ／ＶＬ構築物の例示的な実施形態であり、ラニビズマブをコードする配列を含む。第２の組換え生成構築物は、配列番号９１に記載の配列を有した。この構築物は、実施例を通して「ｒＡＡＶ－ラニビズマブ構築物」と呼ばれる。ｒＡＡＶ－ラニビズマブ構築物は、図６のパネル（Ａ）に示される概略図によって表されるｒＡＡＶ－ＶＨ／ＶＬ構築物の例示的な実施形態であり、ラニビズマブをコードする配列を含む。第３の組換え生成構築物は、配列番号１０６に記載の配列を有した。この構築物は、実施例を通して「ｒＡＡＶ－ラニビズマブ－ＧＦＰ構築物」と呼ばれる。ｒＡＡＶ－ラニビズマブ－ＧＦＰ構築物は、図６のパネル（Ｂ）に示される概略図によって表されるｒＡＡＶ－ＡＢＧＦＰ構築物の例示的な実施形態であり、ラニビズマブをコードする配列を含む。第４の組換え生成構築物は、配列番号９３に記載の配列を有した。この構築物は、実施例を通して「ｒＡＡＶ－ベバシズマブ－ＰＣ構築物」と呼ばれる。ｒＡＡＶ－ベバシズマブ－ＰＣ構築物は、図６のパネル（Ｃ）に示される概略図によって表されるｒＡＡＶ－ＡＢ構築物の例示的な実施形態であり、抗ＶＥＧＦタンパク質ベバシズマブをコードする配列を含む。
上記の特定の構築物、ＡＡＶ Ｒｅｐ及びＣａｐ遺伝子を有するトランスプラスミド、ならびにアデノウイルスゲノム由来の必須領域を有するヘルパープラスミドを、ＨＥＫ２９３細胞中で共トランスフェクトした。次いで、ＡＡＶＡｎｃ８０カプシドを上記のｒＡＡＶ構築物と共に生成し、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ、及びｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＰＣ粒子のいずれかを形成した。
実施例１．２：ｒＡＡＶ－ベバシズマブ、ｒＡＡＶ－ベバシズマブ－ＧＦＰ、ｒＡＡＶ－アフリベルセプト－ＰＣ、及びｒＡＡＶ－アフリベルセプト構築物の構築
この実施例では、本明細書に記載される、ｒＡＡＶ－ベバシズマブ、ｒＡＡＶ－ベバシズマブ－ＧＦＰ、ｒＡＡＶ－アフリベルセプト－ＰＣ、及びｒＡＡＶ－アフリベルセプト構築物の生成についての説明を提供する。１つの構築物は、配列番号９４に記載の配列を有する。この構築物は、実施例を通して「ｒＡＡＶ－ベバシズマブ構築物」と呼ばれる。ｒＡＡＶ－ベバシズマブ構築物は、図６のパネル（Ｃ）に示される概略図によって表されるｒＡＡＶ－ＡＢ構築物の例示的な実施形態であり、抗ＶＥＧＦタンパク質ベバシズマブをコードする配列を含む。別の構築物は、配列番号１０７に記載の配列を有する。この構築物は、実施例を通して「ｒＡＡＶ－ベバシズマブ－ＧＦＰ構築物」と呼ばれる。ｒＡＡＶ－ベバシズマブ－ＧＦＰ構築物は、図６のパネル（Ｂ）に示される概略図によって表されるｒＡＡＶ－ＡＢＧＦＰ構築物の例示的な実施形態であり、抗ＶＥＧＦタンパク質ベバシズマブをコードする配列を含む。別の構築物は、配列番号９５に記載の配列を有する。この構築物は、実施例を通して「ｒＡＡＶ－アフリベルセプト－ＰＣ構築物」と呼ばれる。ｒＡＡＶ－アフリベルセプト－ＰＣ構築物は、図６のパネル（Ｄ）に示される概略図によって表されるｒＡＡＶ－ＴＲＡＰ構築物の例示的な実施形態であり、抗ＶＥＧＦタンパク質アフリベルセプトをコードする配列を含む。別の構築物は、配列番号９６に記載の配列を有する。この構築物は、実施例を通して「ｒＡＡＶ－アフリベルセプト構築物」と呼ばれる。ｒＡＡＶ－アフリベルセプト構築物は、図６のパネル（Ｄ）に示される概略図によって表されるｒＡＡＶ－ＴＲＡＰ構築物の例示的な実施形態であり、抗ＶＥＧＦタンパク質アフリベルセプトをコードする配列を含む。ｒＡＡＶ粒子は、Ｘｉａｏ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｖｉｒｏｌ．７３（５）：３９９４－４００３，１９９９（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるアデノウイルスフリーの方法によるトランスフェクションによって生成される。上記の個々のｒＡＡＶ－ベバシズマブ－ＰＣ、ｒＡＡＶ－ベバシズマブ－ＧＦＰ、ｒＡＡＶ－アフリベルセプト－ＰＣ、またはｒＡＡＶ－アフリベルセプト構築物、ＡＡＶ Ｒｅｐ及びＣａｐ遺伝子を有するトランスプラスミド、ならびにアデノウイルスゲノム由来の必須領域を有するヘルパープラスミドを、ＨＥＫ２９３細胞中で共トランスフェクトした。次いで、ＡＡＶＡｎｃ８０カプシドを上記のｒＡＡＶ構築物と共に生成し、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＰＣ、ｒＡＡＶ－Ａｎｃ８０－ラニビズマブ－ＧＦＰ、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－アフリベルセプト－ＰＣ、及びｒＡＡＶＡｎｃ８０－アフリベルセプト粒子のいずれかを形成した。
実施例２：ウイルス粒子の精製
この実施例では、本明細書に記載される抗ＶＥＧＦタンパク質をコードする構築物を精製するために使用できる方法についての説明を提供する。
実施例２．１：ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ、及びｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＰＣ粒子の精製
この実施例は、抗ＶＥＧＦタンパク質をコードするｒＡＡＶ粒子、例えば実施例１で形成されたもの、を精製するために使用できる方法についての説明を提供する。実施例１．１で産生されたｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ、及びｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＰＣ粒子を、Ｐｒｙａｄｋｉｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２：１５００９，２０１５（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載のように、２回の連続的な塩化セシウム（ＣｓＣｌ）密度勾配によってそれぞれ独立して精製した。２回目のＣｓＣｌ密度勾配遠心分離工程の後、ＣｓＣｌ密度勾配管から１１個の５００μＬ画分を回収し、１×ＰＢＳ中での透析により精製した。画分をドットブロットによって分析して、ｒＡＡＶゲノムを含有する粒子を判定した。各調製物のウイルスゲノム数（ｖｇ）を、ＡＡＶ構築物ゲノムのＩＴＲ領域に対応するプライマー及びプローブを用いて、定量的リアルタイムＰＣＲベースの力価測定法によって測定した（例えば、Ｂａｒｔｏｌｉ ｅｔ ａｌ．Ｇｅｎｅ．Ｔｈｅｒ．１３：２０－２８，２００６（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。
実施例２．２：ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＧＦＰ、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＧＦＰ、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－アフリベルセプト、及びｒＡＡＶＡｎｃ８０－アフリベルセプト－ＰＣ粒子の精製
この実施例は、抗ＶＥＧＦタンパク質をコードするｒＡＡＶ粒子、例えば実施例１で形成されたもの、を精製するために使用できる方法についての説明を提供する。実施例１．１で産生されたｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ粒子、ならびに実施例１．２で産生されたｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＧＦＰ、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－アフリベルセプト－ＰＣ、及びｒＡＡＶＡｎｃ８０－アフリベルセプト粒子を、Ｐｒｙａｄｋｉｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２：１５００９，２０１５（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載のように、２回の連続的な塩化セシウム（ＣｓＣｌ）密度勾配によってそれぞれ独立して精製した。２回目のＣｓＣｌ密度勾配遠心分離工程の後、ＣｓＣｌ密度勾配管から１１個の５００μＬ画分を回収し、１×ＰＢＳ中での透析により精製した。画分をドットブロットによって分析して、ｒＡＡＶゲノムを含有する画分を判定した。各調製物のウイルスゲノム数（ｖｇ）を、ＡＡＶ構築物ゲノムのＩＴＲ領域に対応するプライマー及びプローブを用いて、定量的リアルタイムＰＣＲベースの力価測定法によって測定した（例えば、Ｂａｒｔｏｌｉ ｅｔ ａｌ．Ｇｅｎｅ．Ｔｈｅｒ．１３：２０－２８，２００６（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。
実施例２．３：ｒＡＡＶＡｎｃ８０粒子の精製
この実施例はまた、抗ＶＥＧＦタンパク質をコードするｒＡＡＶ粒子、例えば実施例１で形成されたものを精製するために使用できるさらなる方法の説明を提供する。ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ粒子を、トランスフェクションの７２時間後に以下の方法で精製した。１０％のＴｒｉｔｏｎを溶液に添加し（最終濃度２％）、細胞培養物をセルシェーカー上で３７℃で１時間インキュベートした。続いて、１００Ｕ／ｍＬのベンゾナーゼ及び２ｕＭのＭｇＣｌ２を添加し、細胞をセルシェーカー上で３７℃で２時間インキュベートした。次に、ＮａＣｌ（１５０ｕＭ）を添加し、細胞をセルシェーカー上で３７℃で２０分間インキュベートした。試料を２０００×ｇで１０分間遠心分離した。上清を清潔な容器に移し、－８０℃で保管するか、または直ちにタンジェンシャルフローろ過（ＴＦＦ）にかけた。ろ過された上清を、次にＡＶＢカラムに充填し、ＡＶＢカラムクロマトグラフィー及びｒＡＡＶろ過に供した。ろ過された溶出液を、次にＣｓＣｌ密度勾配遠心分離（ＲＩ＝１．３９０５－１．３９１５，スピン速度＝６５，０００ＲＰＭ，１５℃で１６ｈ以上）にかけた。次に、精製された全粒子試料を最終ラウンドのＴＦＦにかけ、製剤を後の使用のためにバイアルに入れた。
実施例３：ｒＡＡＶＡｎｃ８０－抗ＶＥＧＦ粒子の製剤化
この実施例は、本明細書に記載の抗ＶＥＧＦタンパク質をコードする構築物を含むウイルス粒子を含む組成物の調製に関する。
実施例３．１：ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ、及びｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＰＣ粒子の製剤化
本明細書に記載の抗ＶＥＧＦタンパク質をそれぞれコードする構築物ｒＡＡＶ－ラニビズマブ、ｒＡＡＶ－ラニビズマブ－ＰＣ、またはｒＡＡＶ－ベバシズマブ－ＰＣを含むｒＡＡＶＡｎｃ８０粒子を、定量デジタル液滴（ｄｄ）ＰＣＲで測定された適切な力価（例えば、およそ１．３９１３ｖｇ／ｍＬ）まで、上記の実施例に記載のように、産生及び精製した。次に、精製粒子を生理学的に許容される溶液に既知の希釈度（例えば、６×１０４、１．３×１０５、１．８×１０５、４．５×１０９、及び１．３×１０１０ｖｇ／ｍＬ）で準備した。使用された生理学的に許容される溶液は、以下の最終濃度になるように調製されたプルロニック酸Ｆ６８を含む市販の１×ＰＢＳを含んだ：８．１０ｍＭのリン酸二ナトリウム、１．５ｍＭのリン酸一カリウム、２．７ｍＭの塩化カリウム、１７２ｍＭの塩化ナトリウム、及び０．００１％のプルロニック酸Ｆ６８）。ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ粒子、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ粒子、またはｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＰＣ粒子の力価定量を、フォワードプライマー配列：ＣＣＧＡＴＴＴＣＧＧＣＣＴＡＴＴＧＧＴＴＡ（配列番号１００）、リバースプライマー配列ＣＴＧＴＧＧＡＧＡＧＡＡＡＧＧＣＡＡＡＧＴ（配列番号１０１）、及び適切な蛍光体（ＦＡＭ）を有するプローブ配列ＧＧＣＡＣＣＴＡＴＴＧＧＴＣＴＴＡＣＴＧＡＣＡＴＣＣ（配列番号１０２）を用いて行った。
実施例３．２：ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ、及びｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＰＣ粒子の製剤化
本明細書に記載の抗ＶＥＧＦタンパク質をそれぞれコードする構築物ｒＡＡＶ－ラニビズマブ－ＧＦＰ、ｒＡＡＶ－ベバシズマブ、ｒＡＡＶ－ベバシズマブ－ＧＦＰ、ｒＡＡＶ－アフリベルセプト、またはｒＡＡＶ－アフリベルセプト－ＰＣを含むｒＡＡＶＡｎｃ８０粒子を、定量デジタル液滴（ｄｄ）ＰＣＲで測定された適切な力価（例えば、およそ１．３９１３ｖｇ／ｍＬ）まで、上記の実施例に記載のように、産生及び精製した。次に、精製粒子を生理学的に許容される溶液に既知の希釈度（例えば、６×１０４、１．３×１０５、１．８×１０５、４．５×１０９、及び１．３×１０１０ｖｇ／ｍＬ）で準備した。生理学的に許容される溶液は、プルロニック酸Ｆ６８を含む市販の１×ＰＢＳを含むことができ、以下の最終濃度になるように調製することができる：８．１０ｍＭのリン酸二ナトリウム、１．５ｍＭのリン酸一カリウム、２．７ｍＭの塩化カリウム、１７２ｍＭの塩化ナトリウム、及び０．００１％のプルロニック酸Ｆ６８）。ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＧＦＰ粒子、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ粒子、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＧＦＰ粒子、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－アフリベルセプト粒子、またはｒＡＡＶＡｎｃ８０－アフリベルセプト－ＰＣ粒子の力価定量を、フォワードプライマー配列：ＣＣＧＡＴＴＴＣＧＧＣＣＴＡＴＴＧＧＴＴＡ（配列番号１００）、リバースプライマー配列ＣＴＧＴＧＧＡＧＡＧＡＡＡＧＧＣＡＡＡＧＴ（配列番号１０１）、及び適切な蛍光体（例えば、ＦＡＭ）を有するプローブ配列ＧＧＣＡＣＣＴＡＴＴＧＧＴＣＴＴＡＣＴＧＡＣＡＴＣＣ（配列番号１０２）を用いて行った。
実施例４：デバイスの説明
この実施例は、本明細書に記載の抗ＶＥＧＦタンパク質をコードする構築物を含むｒＡＡＶ粒子を含むｒＡＡＶ粒子の内耳への送達に適したデバイスに関する。正円窓膜を一貫して安全に穿通するように設計された特殊なマイクロカテーテルを使用して、本明細書で提供される組成物を対象の蝸牛に送達することができる（例えば、図４に示すように）。マイクロカテーテルは、送達処置を実施する外科医が、外耳道を介して中耳腔に進入させ、マイクロカテーテルの末端を正円窓膜に接触させることができるような形状となっている。マイクロカテーテルの遠位端は、約１０ミクロン～約１０００ミクロンの直径を有する少なくとも１つのマイクロニードルを含むことができ、これにより、本明細書に記載の構築物を含むｒＡＡＶ粒子（例えば、抗ＶＥＧＦタンパク質のコード配列を含む）が内耳を損傷しない速度（例えば、生理学的に許容される速度、例えば、およそ３０μＬ／分～およそ９０μＬ／分の速度）で鼓室階の蝸牛外リンパに進入するのに十分であるが、外科的修復を行わずに治癒できるほど小さい穿孔が正円窓膜に作出される。マイクロニードル（複数可）に近位のマイクロカテーテルの残りの部分には、所定の力価（例えば、およそ１×１０１２～５×１０１３ｖｇ／ｍＬ）のｒＡＡＶ／人工外リンパ製剤を充填した。マイクロカテーテルの近位端は、およそ３０μＬ～およそ１００μＬの正確で少量の注入を可能にするマイクロマニピュレーターに接続される。
実施例５：細胞株から産生された抗ＶＥＧＦタンパク質の発現及び分泌
この実施例は、例示的な構築物の形質導入及び／またはトランスフェクション、ならびに本明細書に記載の例示的なタンパク質の発現及び分泌に関する。
実施例５．１：ｒＡＡＶ－ラニビズマブ－ＰＣ、ｒＡＡＶ－ラニビズマブ－ＧＦＰ、及びｒＡＡＶ－ベバシズマブ－ＰＣ構築物からのタンパク質の発現及び分泌
細胞株（例えば、ＨＥＫ２３９ＦＴ）は、本明細書に記載される、例示的なｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ構築物によりトランスフェクトするか、または例示的なｒＡＡＶＡｎｃ８０－抗ＶＥＧＦ粒子により形質導入した。トランスフェクション事象のために、ＨＥＫ２９３ＦＴ細胞を、培養容量４００μＬを有する２４ウェルプレートフォーマットにおいて７×１０４細胞／ウェルで一晩播種した。およそ８００ｎｇの抗ＶＥＧＦ構築物ｒＡＡＶ－ラニビズマブ－ＰＣ、ｒＡＡＶ－ベバシズマブ－ＰＣ、またはｒＡＡＶ－ラニビズマブ－ＧＦＰ（実施例１に記載）を、ｊｅｔｐｒｉｍｅトランスフェクション試薬（Ｐｏｌｙｐｌｕｓ－ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ（登録商標）ＳＡ）を使用して細胞にトランスフェクトした。形質導入事象のために、ＨＥＫ２９３ＦＴ細胞を、培養容量５０μＬを有する９６ウェルプレートフォーマットにおいて４×１０４細胞／ウェルで、２μＭのエトポシド（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ３４１２０５２５ＭＧ）の存在下で６時間播種し、例示的なｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＰＣ粒子（実施例１に記載）を、それぞれ７．５×１０４、２．２×１０５、及び５．５×１０５のＭＯＩで培地に添加した。トランスフェクトまたは形質導入された細胞の場合、各試料の処理後７２時間で上清を回収した。タンパク質発現分析のために、３０μＬの試料を４～１２％のＢｉｓ－Ｔｒｉｓタンパク質ゲルの個々のウェルにロードし、当該技術分野で知られている標準的なウェスタンブロッティング手順を実施した。バンディングパターンを、一次検出プローブとして試験抗ラニビズマブ抗体（Ｆａｂエピトープを標的とする；Ａｂｃａｍ、ａｂ１６８６８４－２５ＵＧから供給）を、二次検出プローブとして抗ヒトＩｇＧを用いて、蛍光リーダーを使用して測定した（図７参照）。
実施例５．２：ｒＡＡＶ－ラニビズマブ、及びｒＡＡＶ－ベバシズマブ、ｒＡＡＶ－ベバシズマブ－ＧＦＰ、ｒＡＡＶ－アフリベルセプト、及びｒＡＡＶ－アフリベルセプト－ＰＣ構築物からのタンパク質の発現及び分泌
細胞株（例えば、ＨＥＫ２３９ＦＴ）は、本明細書に記載される、例示的な抗ＶＥＧＦ構築物によりトランスフェクトするか、または例示的なｒＡＡＶＡｎｃ８０－抗ＶＥＧＦ粒子により形質導入した。トランスフェクション事象のために、ＨＥＫ２９３ＦＴ細胞を、培養容量４００μＬを有する２４ウェルプレートフォーマットにおいて、およそ７×１０４細胞／ウェルで一晩播種した。およそ８００ｎｇのｒＡＡＶ－ラニビズマブ、ｒＡＡＶ－ベバシズマブ、ｒＡＡＶ－ベバシズマブ－ＧＦＰ、ｒＡＡＶ－アフリベルセプト－ＰＣ、またはｒＡＡＶ－アフリベルセプト構築物（例えば、実施例１に記載）を、ｊｅｔｐｒｉｍｅトランスフェクション試薬（Ｐｏｌｙｐｌｕｓ－ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ（登録商標）ＳＡ）を使用して細胞にトランスフェクトした。形質導入事象のために、ＨＥＫ２９３ＦＴ細胞を、培養容量５０μＬを有する９６ウェルプレートフォーマットにおいて４×１０４細胞／ウェルで、２μＭのエトポシド（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ３４１２０５２５ＭＧ）の存在下で６時間播種した。ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＧＦＰ、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＧＦＰ、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－アフリベルセプト－ＰＣ、またはｒＡＡＶＡｎｃ８０－アフリベルセプト（例えば、実施例１に記載）を、７．５×１０４、２．２×１０５、及び／または５．５×１０５のＭＯＩで細胞培地に添加した。トランスフェクトまたは形質導入された細胞の場合、各試料の処理後およそ７２時間で上清を回収した。タンパク質発現分析のために、３０μＬの試料を４～１２％のＢｉｓ－Ｔｒｉｓタンパク質ゲルの個々のウェルにロードし、当該技術分野で知られている標準的なウェスタンブロッティング手順を実施した。バンディングパターンを、一次検出プローブとして試験抗ラニビズマブ（Ｆａｂエピトープを標的とする；Ａｂｃａｍ、ａｂ１６８６８４－２５ＵＧから供給）及び試験抗アフリベルセプト抗体を、二次検出プローブとして抗ヒトＩｇＧを用いて、蛍光リーダーを使用して測定した。
実施例６：細胞株から産生された抗ＶＥＧＦタンパク質の結合活性
この実施例は、上記の実施例５に記載のように産生された例示的な抗ＶＥＧＦタンパク質の結合活性を測定する方法を記載する。
実施例６．１：抗ＶＥＧＦタンパク質ラニビズマブ及びベバシズマブの結合活性
上記の実施例５に記載のトランスフェクションにより産生された例示的な抗ＶＥＧＦタンパク質ラニビズマブまたはベバシズマブの結合活性を、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）ＨＴＸバイオセンサー装置を使用して分析した。第１セットの対照実験を、プラズモン表面共鳴装置を較正するために、例えば、結合剤として組換えヒトＶＥＧＦを用いて対照細胞馴化培地に添加したマウス抗ヒトＶＥＧＦモノクローナル抗体（抗ｈＶＥＧＦ ＭｍＡｂ；Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＭＡＢ２９３－１００）を用いて行った（図８のパネル（Ａ））。第２セットの実験を、実施例１に記載の例示的な構築物ｒＡＡＶ－ラニビズマブ－ＰＣ、またはｒＡＡＶ－ベバシズマブ－ＰＣのトランスフェクション後のＨＥＫ２９３ＴＦ細胞からの馴化培地、または対照の非トランスフェクション細胞馴化培地に含まれる粒子のＶＥＧＦ結合活性を測定するために行った。試験材料のグラフ結果を図８のパネル（Ｂ）またはパネル（Ｃ）に示し、対照培地は図８のパネル（Ｄ）に示される。
試験試料は、実施例１に記載される、構築物ｒＡＡＶ－ラニビズマブ－ＰＣ、またはｒＡＡＶ－ベバシズマブ－ＰＣをトランスフェクトしたＨＥＫ２９３ＴＦ細胞から分泌され、培地中に存在する可溶性ラニビズマブ及びベバシズマブを含んだ。試料は、細胞馴化培地を１×キネティクス緩衝液（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ、１８－１１０５）で１：１０に希釈し、３８４ウェル試料プレートに分注することにより調製した。陽性対照として、抗ｈＶＥＧＦ ＭｍＡｂ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＭＡＢ２９３－１００）を１０μｇ／ｍＬの濃度で希釈した。捕捉剤である組換えヒトＶＥＧＦ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，２９３－ＶＥ－０１０）を２００ｎＭ～３．１２５ｎＭまで連続した１：２の希釈比で希釈した。
馴化培地試料及びマウス抗ヒトＶＥＧＦ抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）試料の結合親和性は、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）ＨＴＸバイオセンサー装置において１×キネティクス緩衝液で測定した。結合の特徴及び値はＯｃｔｅｔ（登録商標）解析ソフトウェア、Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ ＨＴ１０．０により作成した。収集されたデータは表２に表され、それぞれのＫＤ、平衡会合定数（ｋａ）、及び解離（ｋｄｉｓ）が記載されている。
抗ｈＶＥＧＦマウス抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）は高い結合親和性を示した。同様に、ラニビズマブまたはベバシズマブをコードするｒＡＡＶ構築物は、ヒトＶＥＧＦに対して高い結合親和性を示した。対照馴化培地試料の結合データからは、ＫＤ値を推定することはできなかった。まとめると、これらのデータは、本明細書で提供される構築物が、抗ＶＥＧＦタンパク質ラニビズマブまたはベバシズマブの発現及び分泌をもたらし得ること、ならびに本明細書で提供される構築物が、哺乳動物の内耳において抗ＶＥＧＦタンパク質を発現するために使用され得ることを示す。
分泌されたラニビズマブはビオチン化組換えヒトＶＥＧＦ（Ａｃｒｏ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，ＶＥ５－Ｈ８２１０）と１６８ｐＭのＫＤで結合することができ、分泌されたベバシズマブは３３０ｐＭのＫＤで結合することができた（陽性対照マウス抗ヒトＶＥＧＦ組換え抗体［Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＭＡＢ２９３－１００］の場合ＫＤ＝２２９ｐＭ）。ラニビズマブ及びベバシズマブのＶＥＧＦ－Ａ１６５に対する結合親和性が、それぞれ２０．６及び３５．１ｐＭであったことと比較して（Ｐａｐａｄｏｐｏｕｌｏｓ ２０１２、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、これらのデータは、抗ＶＥＧＦタンパク質コード配列を含むプラスミド形態のｒＡＡＶ構築物が、許容できる結合親和性でタンパク質をｉｎ ｖｉｔｒｏで産生できることを示唆している。
実施例６．２：抗ＶＥＧＦタンパク質ラニビズマブ、ベバシズマブ、及びアフリベルセプトの結合活性
本明細書に記載された例示的な抗ＶＥＧＦ結合剤の結合活性を、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）ＨＴＸバイオセンサー装置を使用して分析した。抗ＶＥＧＦタンパク質は、実施例１に記載された、例示的な構築物ｒＡＡＶ－ラニビズマブ、ｒＡＡＶ－ベバシズマブ、ｒＡＡＶ－ラニビズマブ－ＧＦＰ、ｒＡＡＶ－ベバシズマブ－ＧＦＰ、ｒＡＡＶ－アフリベルセプト－ＰＣ、もしくはｒＡＡＶ－アフリベルセプトのトランスフェクション、またはＡＡＶ Ａｎｃ８０カプシド内に含まれ、ｒＡＡＶ粒子、例えば、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ粒子、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ粒子、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＧＦＰ粒子、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＧＦＰ粒子、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－アフリベルセプト－ＰＣ粒子、もしくはｒＡＡＶＡｎｃ８０－アフリベルセプト粒子を形成する同じ構築物の形質導入後に、細胞株（例えば、ＨＥＫ２９３ＦＴ細胞）で産生される。第１セットの対照実験を、プラズモン表面共鳴装置を較正するために、例えば、結合剤として組換えヒトＶＥＧＦを用いた対照馴化培地中のマウス抗ヒトＶＥＧＦモノクローナル抗体（抗ｈＶＥＧＦ ＭｍＡｂ；Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＭＡＢ２９３－１００）を用いて行った。第２セットの実験を、本明細書に記載の例示的な構築物またはｒＡＡＶ粒子のトランスフェクションまたは形質導入後のＨＥＫ２９３ＴＦ細胞からの馴化培地、または対照馴化培地のヒトＶＥＧＦ結合活性を測定するために行った。グラフの結果は、トランスジェニック抗ＶＥＧＦタンパク質の例示的な結合活性を表す。
試験試料は、本明細書に記載（例えば、実施例１に記載）の構築物により形質導入またはトランスフェクトされたＨＥＫ２９３ＴＦ細胞から分泌され、培地中に存在する可溶性ラニビズマブ、ベバシズマブ、及び／またはアフリベルセプトを含む。試料は、細胞馴化培地を１×キネティクス緩衝液（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ、１８－１１０５）で１：１０に希釈し、３８４ウェル試料プレートに分注することにより調製した。陽性対照として、抗ｈＶＥＧＦ ＭｍＡｂ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＭＡＢ２９３－１００）を１０μｇ／ｍＬの濃度で希釈した。捕捉剤である組換えヒトＶＥＧＦ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，２９３－ＶＥ－０１０）を２００ｎＭ～３．１２５ｎＭまで連続した１：２の希釈比で希釈した。
馴化培地試料及びマウス抗ヒトＶＥＧＦ抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）試料の結合親和性は、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）ＨＴＸバイオセンサー装置において１×キネティクス緩衝液で測定した。結合の特徴及び値はＯｃｔｅｔ（登録商標）解析ソフトウェア、Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ ＨＴ１０．０により作成した。収集されたデータを、ＫＤ、平衡会合定数（ｋａ）、及び解離速度（ｋｄｉｓ）として表した。
実施例７：抗ＶＥＧＦタンパク質産生のｅｘ ｖｉｖｏ実証
この実施例は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで増殖した哺乳動物の蝸牛外植片での抗ＶＥＧＦタンパク質を発現するｒＡＡＶ構築物の導入及び発現解析に関するものである。蝸牛外植片の培養モデルは、ｉｎ ｖｉｖｏで見られる固有の細胞環境内でのｒＡＡＶ粒子の形質導入及び発現を試験するために、蝸牛の感覚有毛細胞及び非感覚支持細胞の形態及び分子特性を模倣する信頼できる実験システムを提供できる。
実施例７．１：抗ＶＥＧＦタンパク質ラニビズマブ及びベバシズマブのｅｘ ｖｉｖｏ産生
本明細書では、ｒＡＡＶ－ラニビズマブ－ＰＣまたはｒＡＡＶ－ベバシズマブ－ＰＣ（実施例１に記載）によって例示される構築物ｒＡＡＶ－ＶＨ／ＶＬまたはｒＡＡＶ－ＡＢを含むｒＡＡＶ（例えば、ｒＡＡＶＡｎｃ８０）粒子によって形質導入された新生児（Ｐ２）野生型（ＷＴ）マウスの蝸牛外植片からの抗ＶＥＧＦタンパク質発現及び分泌のｅｘ ｖｉｖｏ評価について記載する。これらの実験では、コルチ器を切開し、カバーガラスに載せ、ビヒクルまたは様々な用量のｒＡＡＶ粒子－ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ粒子もしくはｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＰＣ粒子のいずれかと共に３～４日間インキュベートした。ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＰＣ粒子を１．２Ｅ１０、２．４Ｅ１０、及び３．５Ｅ１０ｖｇ／外植片で形質導入し、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ粒子を１．４Ｅ１０、２．８Ｅ１０、及び４．２Ｅ１０ｖｇ／外植片で形質導入した。
外植片を取り囲む培地を採取し、従来のＥＬＩＳＡ分析よりも高感度かつ広いダイナミックレンジで分析物を定量するための電気化学発光検出技術を採用したプラットフォームであるＭＳＤイムノアッセイを使用して分析した。試料とインキュベートする前に、ストレプトアビジンでコートされたＭＳＤアッセイプレートをブロッキングし、ビオチン化ＶＥＧＦリガンドでコートした。次いで、アッセイプレートに結合した抗ＶＥＧＦタンパク質を、タグ付きヤギポリクローナル抗κ軽鎖（ｐＡｂ）抗体で検出した（図１６のパネル（Ｂ））。ＧＡＰＤＨ（ハウスキーピング対照）及び抗ＶＥＧＦタンパク質をコードするヌクレオチド（ベバシズマブまたはラニビズマブをコードするｍＲＮＡ産物）についてのＴａｑｍａｎプライマープローブを用いた定量リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（ｑＲＴ－ＰＣＲ）を使用したリボ核酸（ＲＮＡ）発現分析のために外植片を溶解した（図１６のパネル（Ａ））。
抗ＶＥＧＦ ＲＮＡは、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－抗ＶＥＧＦ粒子を与えられた外植片で検出されたが、ビヒクルを与えられた外植片では検出されず（図１６のパネル（Ａ））、分泌型抗ＶＥＧＦタンパク質は、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－抗ＶＥＧＦ粒子を与えられた外植片の培地で検出されたが、ビヒクルを与えられた外植片の培地では検出されなかった（図１６のパネル（Ｂ））。これらのデータは、抗ＶＥＧＦタンパク質をコードする構築物を含むｒＡＡＶＡｎｃ８０－抗ＶＥＧＦ粒子をＷＴマウス蝸牛にｅｘ ｖｉｖｏで投与すると、形質導入された細胞から標的タンパク質の発現及び分泌が得られることを示唆している。蝸牛外植片の結果は、少なくともｉｎ ｖｉｖｏでの耐性を判定し、抗ＶＥＧＦタンパク質のｉｎ ｖｉｖｏ分泌レベルを評価するための、ＷＴマウスにｒＡＡＶＡｎｃ８０－抗ＶＥＧＦ粒子を蝸牛内注入するｉｎ ｖｉｖｏ試験を支持する。
実施例７．２：抗ＶＥＧＦタンパク質ラニビズマブ、ベバシズマブ、及びアフリベルセプトのｅｘ ｖｉｖｏ産生
モックｒＡＡＶ粒子またはｒＡＡＶ粒子ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＧＦＰ、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＧＦＰ、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－アフリベルセプト－ＰＣ、またはｒＡＡＶＡｎｃ８０－アフリベルセプト（例えば、実施例１に記載）を調製し、新生児（Ｐ２）野生型（ＷＴ）マウスの蝸牛外植片に、好適なＭＯＩ（例えば、１．２Ｅ１０、１．４Ｅ１０、２．４Ｅ１０、２．８Ｅ１０、３．５Ｅ１０、及び／または４．２Ｅ１０ｖｇ／外植片など）で形質導入した。これらの実験では、コルチ器を切開し、カバーガラスに載せ、ビヒクルまたは様々な用量のｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ粒子、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＧＦＰ粒子、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ粒子、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＧＦＰ粒子、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－アフリベルセプト－ＰＣ粒子、またはｒＡＡＶＡｎｃ８０－アフリベルセプト粒子（実施例１に記載される）のいずれかと共に３～４日間インキュベートした。外植片を取り囲む培地を採取し、ＭＳＤイムノアッセイを使用して分析した。試料とインキュベートする前に、ストレプトアビジンでコートされたＭＳＤアッセイプレートをブロッキングし、ビオチン化ＶＥＧＦリガンドでコートした。次いで、アッセイプレートに結合した抗ＶＥＧＦタンパク質（例えば、ラニビズマブ、ベバシズマブ、及び／またはアフリベルセプト）を、タグ付きヤギポリクローナル抗κ軽鎖（ｐＡｂ）抗体で検出した。
任意選択で、野生型外植片に形質導入された（ｅｘ ｖｉｖｏ）ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ構築物からのｍＲＮＡ発現レベルを測定するための実験が行われる。モックｒＡＡＶ粒子、またはＡｎｃ８０カプシドによってカプシド封入されたｒＡＡＶ構築物を含むｒＡＡＶ粒子（例えば、実施例１に記載のもの）を調製し、好適なＭＯＩ（例えば、上記のもの、及び／またはおよそ４．５×１０９ｖｇ／蝸牛または１．５×１０１０ｖｇ／蝸牛のＭＯＩ）で外植片に形質導入した。上清を回収し、３５０μＬのＲＬＴ Ｐｌｕｓ ＲＮＡ溶解緩衝液（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて形質導入後７２時間で細胞を採取し、ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｃｒｏ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いてＲＮＡ試料を調製した。相対的ｍＲＮＡ発現レベルを、抗ＶＥＧＦタンパク質をコードするヌクレオチド特異的増幅プライマー（例えば、ベバシズマブ、ラニビズマブ、及び／またはアフリベルセプトをコードするヌクレオチドに特異的なプライマー）及びＴａｑＭａｎプローブを用いた定量リアルタイムＰＣＲを使用して測定し、適切な対照（例えば、対照としてのマウスＧＡＰＤＨプローブ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ））と比較した。強力かつ用量依存的な抗ＶＥＧＦタンパク質をコードするｍＲＮＡの産生が観察された。可溶性及び分泌型抗ＶＥＧＦタンパク質レベルを、上記のように測定した。
実施例８：モデル動物における外科的方法及びｒＡＡＶ粒子分析
本実施例は、老齢マウスの内耳への本明細書に記載の技術（例えば、構築物、粒子、及び／または組成物）の導入に関する。抗ＶＥＧＦタンパク質をコードする構築物を含むｒＡＡＶ粒子を、製剤緩衝液（例えば、人工外リンパ、またはプルロニック酸Ｆ６８を含む１×ＰＢＳ）中で調製し、次いで、Ｓｈｕ ｅｔ ａｌ．（Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，ｄｏｉ・１０ １０８９／ｈｕｍ．２０１６ ０５３，Ｊｕｎｅ ２０１６、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）によって記載されるようにマウスの鼓室階に投与した。Ｐ１５より老齢の雄及び雌のマウスに、キシラジン（およそ５～１０ｍｇ／ｋｇ）及びケタミン（およそ９０～１２０ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内注射を使用して麻酔をかけた。電気温熱パッドを用いて体温を３７℃に維持した。右耳介後部から切開し、鼓室胞及び後半規管を露出させた。該鼓室胞を外科用針で穿孔し、小さい穴を広げて、蝸牛へアクセスできるようにした。鼓室階の蝸牛側壁の骨を、膜性側壁を無傷なままで残すように、歯科用ドリルで薄くした。次に、後三半規管にドリルで小さな穴をあけた。カナロストミーの開存性を、ゆっくりとした外リンパの漏れを明視化することで確認した。ガラス製マイクロピペットと組み合わせたナノリットルマイクロインジェクションシステムを使用して、構築物含有緩衝液（例えば、人工外リンパ、またはプルロニック酸Ｆ６８を含む１×ＰＢＳ中の蝸牛あたりおよそ４．５×１０９～５×１０１０ｖｇの本明細書に記載のｒＡＡＶ構築物）を合計およそ１μＬ、２ｎＬ／秒の速度で鼓室階に送達させた。ガラス製マイクロピペットは、注入後５分間留置した。蝸牛開窓術及び注入後、鼓室胞及び後三半規管の開口部を脂肪の小片で封止し、筋肉及び皮膚を縫合した。マウスを麻酔から覚醒させ、マウスの疼痛を０．１５ｍｇ／ｋｇのブプレノルフィン塩酸塩で３日間管理した。
本実施例に記載されているような試験は、片側性の進行性散発性ＶＳを有する成人参加者におけるファースト・イン・ヒューマン安全性及び用量漸増試験の準備のために実施される。ｒＡＡＶの蝸牛内送達（例えば、ＡＡＶＡｎｃ８０、例えば、ＡＡＶＡｎｃ８０－抗ＶＥＧＦ）を使用して、内耳の蝸牛細胞及び前庭細胞を形質導入することができ、それらは、その後、抗ＶＥＧＦタンパク質を外リンパに、または蝸牛神経の間質液に直接分泌すると予想される。内耳道に沿った拡散に対する障壁がないことにより、蝸牛神経は、その外側端（ＶＳ腫瘍の大部分が発生する蝸牛に最も近い部分（図１及び図３））に外リンパ、その内側端にＣＳＦを有する流体の連続体に浸されており、したがって、外リンパから神経間質への拡散は、外リンパで発現した治療用抗ＶＥＧＦタンパク質が、意図するＶＳ標的に到達するための経路を提供する。
マウスでは、外科的アプローチ、例えば、Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，２０１８に記載されている外科的アプローチを、本明細書に記載のｒＡＡＶ粒子の送達に利用することができる（Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ ２０１８、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。具体的には、後半規管の開窓による正円窓膜を通じた送達であり、これは、注入時の動物の年齢に依存せず、ロバストで信頼性の高い形質導入を実証している（Ｙｏｓｈｉｍｕｒａ ２０１８、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。側頭骨にアクセスするために耳介後部を切開した。胸鎖乳突筋の一部を切離して、耳胞を露出させた。直径０．５～０．６ｍｍの耳科用ドリルを使用して、該耳胞に小さな穴を開け、次に、その穴を広げて、アブミ骨動脈と正円窓膜を明視下に置いた。耳科用ドリル（直径０．５～０．６ｍｍ）で後半規管の開窓を行い、蝸牛投与中の内耳の通気部として機能させた。ホウケイ酸キャピラリーピペットと１０ｕＬハミルトンシリンジを含むマウス送達デバイスで正円窓膜を貫通させ、ウイルス粒子を含む溶液１μＬ（総内耳容積のおよそ４０～５０％）を正円窓膜を通じて鼓室階に３００ｎＬ／分の速度で送達した。抗ＶＥＧＦタンパク質をコードする構築物を含むＡＡＶＡｎｃ８０粒子の試験は、成熟した蝸牛を持つマウスで行った。
実施例９：マウスにおける抗ＶＥＧＦタンパク質のトランスジェニック発現、分析、及び画像診断
この実施例は、マウスにおける抗ＶＥＧＦタンパク質のトランスジェニック発現、ならびにその後の該動物の画像診断及び表現型分析に関する。
実施例９．１：マウスにおける抗ＶＥＧＦタンパク質ラニビズマブ及びベバシズマブのｉｎ ｖｉｖｏ発現及び画像診断
抗ＶＥＧＦをコードする構築物を含む本明細書に記載のｒＡＡＶ粒子の蝸牛内送達後に、本明細書に記載の抗ＶＥＧＦタンパク質を含む組成物に対する生物学的耐性及び／または曝露を評価した（ＣＳＦ及び血清中の抗ＶＥＧＦレベルの測定を含む）。ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ粒子またはｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＰＣ粒子（実施例１に記載）をＰ３０ ＷＴ ＣＢＡ／ＣａＪマウスに注入した。試験１の群の概要は表３に見出すことができる。本明細書に記載の追加の試験（本明細書では「試験２」と呼ぶ）も実施し、その結果は以下に記載し、試験群の概要は表４に見出すことができる。これらの試験により、外科的導入、ｒＡＡＶ粒子の形質導入、及びその後の分泌型抗ＶＥＧＦタンパク質の発現及びそれへの曝露に関連するデータを取得した。これらの結果を以下に要約し、その詳細は図１７～２６に見出すことができる。これらの試験では、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ粒子またはｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＰＣ粒子（実施例１に記載）を、後半規管の開窓（本明細書に記載のように）を伴った正円窓膜を通じた片側蝸牛内注入によって投与した。ビヒクル対照動物には製剤緩衝液を注入した。
ＣＡＢ／ＣａＪ野生型マウスに麻酔をかけ、本明細書に記載の組成物の導入に備えた。ビヒクル対照、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ粒子、またはｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＰＣ粒子（実施例１に記載）を調製し、正円窓膜を通じてマウス内耳に導入した。ｒＡＡＶ粒子の導入は以下の手順で行った：Ａ）耳介前部を切開して蝸牛胞を露出させ、Ｂ）マイクロピペットプラー（ｃａｔ＃Ｐ８７－Ｓｕｔｔｅｒ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）で最終外径約１０μｍになるように引いたガラス製マイクロピペット（ｃａｔ＃４８７８－ＷＰＩ）を用いて、ｒＡＡＶ粒子を含む組成物を鼓室階に手動で送達し（マイクロピペットはＮａｎｏｌｉｔｅｒ ２０００マイクロマニピュレーター－ＷＰＩによって保持される）、内耳細胞へのアクセスを可能にし、Ｃ）適切な緩衝液中に適切な濃度で本明細書に記載の組成物１μＬ（実施例１に記載、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ粒子をおよそ１．４×１０１０ｖｇ／蝸牛、またはｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＰＣ粒子をおよそ１．２×１０１０ｖｇ／蝸牛；それぞれプルロニック酸Ｆ６８を含む１×ＰＢＳで希釈）を、０．３μＬ／分の放出速度（ＭＩＣＲＯ４マイクロ注入コントローラー－ＷＰＩにより制御）で各試験蝸牛に注入した。陰性対照としてビヒクルを用いて偽手術を上記のように行った。追加の介入なしに、マウスを手術から回復させた。注入後５週間で、動物を安楽死させ、脳脊髄液（ＣＳＦ）試料、血清試料、及び免疫蛍光分析用の内耳切片を採取した。
本明細書に記載のｒＡＡＶ粒子（ｒＡＡＶＡｎｃ８０－抗ＶＥＧＦ粒子）による内耳形質導入の結果としての抗ＶＥＧＦタンパク質曝露を評価するために、蝸牛内送達後４～５週目の終了時に血液及びＣＳＦを採取し、ＣＳＦ及び血清中の抗ＶＥＧＦタンパク質レベルをＭＳＤイムノアッセイを用いて測定した（例えば、実施例７に記載のように）。ＣＳＦ内の可溶性抗ＶＥＧＦタンパク質（ラニビズマブまたはベバシズマブ）のレベルを測定し、２．７１～１９．２９ｎｇ／ｍＬの範囲であった。これらの流体を採取した後、マウスを経心灌流し、蝸牛を採取して組織学的評価のために浸漬固定した。蝸牛試料を脱灰し、顕微鏡下切開した。切開したコルチ器のホールマウント及び横断切片を、抗ラニビズマブ（Ａｂｃａｍ、ａｂ１６８６８４－２５ＵＧ、ｍＡｂ）で染色し、本明細書に記載の構築物のトランスジェニック発現を測定し、抗ファロイジン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ａ１２３８１）染色を用いて、異なる内耳細胞タイプを特徴付け（図１７）、抗ミオシンＶＩＩａ染色を用いて、有毛細胞を標識した（図１８に図示され、図２０で定量化される）。また、試料の半分を支持細胞を標識するために抗Ｓｏｘ２で染色し、残りの半分を神経細胞突起を標識するために抗ニューロフィラメント２００で染色した（図１９）。免疫染色組織の共焦点分析を用いて、形質導入効率／抗ＶＥＧＦ発現、及び細胞生存を特定した（図２０及び図２１）。
抗ＶＥＧＦタンパク質の発現は、強度ではなくシグナルの出現に基づいて評価した。特定の理論に拘束されることを望むものではないが、この理由の１つは、ポリクローナル二次抗体が、マウスモノクローナル一次抗ラニビズマブ抗体（上記のＭｍＡｂ）にコンジュゲートした場合に、対応する小さいサイズのヒト化マウス抗体ラニビズマブをモノクローナル一次抗ラニビズマブ抗体にコンジュゲートさせた場合と比較して、ヒト化マウス抗体ベバシズマブ上の多くのエピトープに結合する可能性があるためであり得る。内有毛細胞は、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ粒子またはｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＰＣ粒子（実施例１に記載のもの、結果は図１７に図示され、図２１で定量化される）を与えられた蝸牛の大部分（１９耳のうち１７耳）において導入遺伝子を強固に発現した。これらの１７の蝸牛のうち、１４はまた、ＯＨＣ及び／または非有毛細胞のサブセットでの発現も示した。ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ粒子を与えられた耳と、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＰＣ粒子を与えられた耳との間で、細胞のアイデンティティ及び発現パターンに実質的な差は検出されなかった。
蝸牛組織におけるこの発現が、抗ＶＥＧＦタンパク質（ラニビズマブまたはベバシズマブ）の産生及び分泌につながったことを確認した。動物からＣＳＦ（大槽からサンプリング）及び血清試料を採取し、分析した（図２３及び２４）。外リンパ中の抗ＶＥＧＦタンパク質濃度もまた、外リンパとＣＳＦとの間の抗ＶＥＧＦタンパク質曝露の比率をよりよく理解するために測定することができる。マウスの外リンパ試料の採取は、技術的に困難な場合がある。本実施例では、１つの外リンパ試料を採取した。抗ＶＥＧＦタンパク質（ラニビズマブまたはベバシズマブ）は、ｒＡＡＶ粒子を注入した動物のＣＳＦで検出されたが、ビヒクルを注入した対照では検出されなかった（図２４）。ＭＳＤアッセイによる分泌型抗ＶＥＧＦタンパク質の検出は、ラニビズマブとベバシズマブの間の定性的比較に限定されたが、これは、蝸牛組織での発現の検出に使用されたのと同様のポリクローナル二次抗体の使用によるものである（上述の通り）（エピトープの利用性が高いためにｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＰＣ粒子を与えられた耳の試料についてより強いシグナルが観測される）。特定の理論に縛られることを望むものではないが、ＣＳＦにおける抗ＶＥＧＦタンパク質の明確な検出は、開存している蝸牛水管を介したこの種における外リンパ液とＣＳＦ間のコミュニケーションによるものであり得る。
マウス血清を、ラニビズマブを検出する抗κ軽鎖（ｐＡｂ）抗体を用いたＭＳＤアッセイ（上記及び実施例７に記載）を介して抗ＶＥＧＦタンパク質（ラニビズマブ）を評価した。ビヒクルを注入した動物と比較して、ｒＡＡＶ－ラニビズマブ－ＰＣ粒子を蝸牛内送達されたマウスは、送達後４～５週間で血清中で高いレベルの抗ＶＥＧＦタンパク質（ラニビズマブ）を示した（図２３）。
ｒＡＡＶ－ラニビズマブ、ｒＡＡＶ－ラニビズマブ－ＧＦＰ、ｒＡＡＶ－ベバシズマブ－ＰＣ、ｒＡＡＶ－ベバシズマブ、ｒＡＡＶ－ベバシズマブ－ＧＦＰ、ｒＡＡＶ－アフリベルセプト－ＰＣ、またはｒＡＡＶ－アフリベルセプト粒子（例えば、ラニビズマブ、ベバシズマブ、またはアフリベルセプトを含む）を蝸牛内送達されたマウス由来の血清を評価することができる。
試験２もまた、可能性のある外科的課題を示す新たなデータに対処するために、同じパラメータ、例えば、マウス系統、年齢、ｒＡＡＶカプシド、ラニビズマブをコードする構築物、及び蝸牛内投与処置を使用して実施した。本試験は、特定の実施形態では、ラニビズマブがベバシズマブと比較した場合に、以下の異なる特徴を有し得るため、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ粒子（実施例１に記載）を利用した：例えば、より高い結合能及びより高い結合親和性、Ｆｃドメインがないこと、ならびに分子量が小さいこと。ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ粒子（実施例１に記載）を、後半規管の開窓（本明細書に記載のように）を伴った正円窓膜を通じた片側蝸牛内注入によって１．４Ｅ１０ｖｇ／蝸牛で投与した。ビヒクルを注入したマウスの未注入の耳を対照として使用した。試験終了後、動物を経心灌流し、蝸牛を採取し、脱灰し、以下の標識を使用して共焦点顕微鏡画像診断のために顕微鏡下切開した：導入遺伝子発現を検出する抗ラニビズマブ（ｍＡｂ）；有毛細胞を標識する抗ミオシンＶＩＩａ；及び蝸牛神経線維（例えば、橈骨神経線維）の突起を標識する抗Ｔｕｊ１。
本試験における感覚上皮の蝸牛組織構造は、内有毛細胞及び外有毛細胞、外側支持細胞、ならびにラセン板縁の歯間細胞を含む複数の細胞タイプにおいて、蝸牛の長さ全体にわたって抗ＶＥＧＦタンパク質（ラニビズマブ）発現の広範な発現分布を示した（図２２）。概して、有毛細胞は、マウス１の蝸牛の最頂部領域でいくつかのＩＨＣ損失が観察されたことを除いて、蝸牛の分析領域に存在していた。
実施例９．２：マウスにおけるｉｎ ｖｉｖｏでのラニビズマブ及びベバシズマブの送達及び産生の表現型分析
本明細書に記載のｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ粒子を、マウスにおける蝸牛耐性について評価した。例示的なｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ粒子またはｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＰＣ粒子（実施例１に記載）の蝸牛内送達後のマウスにおける形質導入及びその後のタンパク質分泌を評価するために実施された試験の一部として、全体的な耐性、聴力機能、及び蝸牛有毛細胞の生存率も評価し、外科的投与及び導入遺伝子発現の蝸牛耐性を評価した。蝸牛内送達後４～５週間を通して、体重またはボディコンディションスコアの有害な変化は、原因不明で送達後１週間で死亡した１匹を除いて検出されなかった（外科的合併症または健康観察での異常所見は見られなかった）。旋回運動またはヘッドボビングによって証明される、前庭系の損傷の兆候は検出されなかった。
ＡＢＲによる聴力機能の評価は、手術前と手術後４～５週間（安楽死の直前）に実施した。ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ粒子またはｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＰＣ粒子を投与した群と、ビヒクルを投与した群で、閾値シフトが観察された。閾値シフトは群間で同様の程度であり、導入遺伝子発現によるものではなく、外科的処置による蝸牛への損傷の可能性が示唆された（図２５）。
機能評価（ＡＢＲ；図２５）と一致して、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ粒子またはｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＰＣ粒子を投与した群と、ビヒクルを投与した群で有毛細胞の損失が検出されたが、未注入（対側）対照の耳では検出されなかった。蝸牛の基底部の基底膜の損傷は、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－抗ＶＥＧＦ粒子を投与した１９耳中１６耳、ビヒクルを投与した１０耳中９耳で検出され、これらの損傷領域での外有毛細胞のその後の損失は、１６ｋＨｚ及び３２ｋＨｚで顕著であった（図１８）。全体としてはＩＨＣ損失は顕著ではなく、散発的なＩＨＣ損失が、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－抗ＶＥＧＦ粒子を投与した１９耳中２耳の８ｋＨｚ周波数領域においてのみ検出された（図１８）。この特定の試験（本明細書では「試験１」と呼ぶ）では、投与経路で有毛細胞の損傷が生したが、機能評価と耳全体の細胞生存との間の一貫性から、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－抗ＶＥＧＦ粒子またはビヒクルのいずれを投与されたかにかかわらず、細胞損失はｒＡＡＶカプシド毒性、導入遺伝子発現、またはその後のタンパク質分泌ではなく、外科的処置によるものであり得ることが示唆された。
外科的処置が細胞の損失をもたらし得るという知見を踏まえ、試験２を実施した。この試験では、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ粒子（実施例１に記載）の蝸牛内送達後４週間で、基底膜の系統的損傷及びその後のＯＨＣの損失はなく、極頂部及び基底部での散発的損失のみが示された（図２２）。対応する領域での全体的な有毛細胞生存率の定性的評価と一致して、蝸牛機能（ＤＰＯＡＥ）及び聴力機能（ＡＢＲ）の評価は、投与後４週間で、未注入対照と比較して正常な閾値を示した（図２６のパネル（Ａ）及び（Ｂ））。
組み合わされたデータから、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－抗ＶＥＧＦ粒子（ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ－ＰＣ粒子またはｒＡＡＶＡｎｃ８０－ベバシズマブ－ＰＣ粒子（実施例１に記載のもの）など）の送達が、マウスに導入されると、有毛細胞及び種々の支持細胞の両方を含む複数の細胞タイプでの導入遺伝子発現と、ＣＳＦでの分泌型抗ＶＥＧＦタンパク質（ラニビズマブまたはベバシズマブ）の検出をもたらしたことが明らかとなった。マウスでは、抗ＶＥＧＦタンパク質がＣＳＦ中に存在したが、特定の理論に縛られることを望むものではないが、これは、この種の動物では開存している蝸牛水管を介した外リンパとＣＳＦの活発な流体交換を通じて生じる可能性がある。これらの結果は、１）蝸牛細胞における強固な抗ＶＥＧＦタンパク質の発現と、２）ＣＳＦにおける分泌型抗ＶＥＧＦタンパク質の検出を示し、非ヒト霊長類などの解剖学的に関連性が高く応用可能な種にプログラムを進めることを支持するものである。
実施例１０：前庭神経鞘腫（ＶＳ）のマウスモデルにおける抗ＶＥＧＦタンパク質をコードするｍＲＮＡ及びタンパク質発現のトランスジェニック発現の表現型解析
本実施例は、マウスモデル（例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ２０１９（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載のモデル）におけるＶＳに関連する表現型の分析に関する。モデルマウスを、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．に記載のように準備し、マウスを適切な期間（例えば、約１週間）手術から回復させた後、麻酔をかけ、本明細書に記載の組成物の導入に備えた。Ａｎｃ８０カプシドによってカプシド封入されたモックｒＡＡＶ粒子またはｒＡＡＶ構築物（例えば、実施例１に記載のものなど）を調製し、正円窓膜を通じてマウス内耳に導入した。ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ粒子の導入は、以下の工程で行った：Ａ）耳介前部を切開して蝸牛胞を露出させ、Ｂ）マイクロピペットプラー（例えば、ｃａｔ＃Ｐ８７－Ｓｕｔｔｅｒ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）で最終外径約１０μｍになるように吸引したガラス製マイクロピペット（例えば、ｃａｔ＃４８７８－ＷＰＩ）を用いて、ｒＡＡＶ粒子を含む組成物を鼓室階に手動で送達し（例えば、マイクロピペットはＮａｎｏｌｉｔｅｒ ２０００マイクロマニピュレーター－ＷＰＩによって保持される）、内耳細胞へのアクセスを可能にし、Ｃ）本明細書に記載の組成物１μＬ（例えば、本明細書に記載のｒＡＡＶ構築物を、プルロニック酸Ｆ６８を含む１×ＰＢＳ中、およそ４．５×１０９～５×１０１０ｖｇ／蝸牛）を、０．３μＬ／分の放出速度（例えば、ＭＩＣＲＯ４マイクロ注入コントローラー－ＷＰＩにより制御）で各試験蝸牛に注入した。陰性対照としてビヒクルを用いて偽手術を上記のように行った。追加の介入なしに、マウスを手術から回復させた。
術後適当な間隔（例えば、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、及び８週間）で、片側または両側に組成物または偽注射を与えられたＶＳマウスモデルに、腹腔内に送達されたペントバルビタールナトリウム（例えば、３５ｍｇ／ｋｇ）で麻酔をかけた。その後、接地され、音響的及び電気的に絶縁された試験室内のヘッドホルダーにマウスを配置し、維持した。誘発電位検出システム（例えば、Ｓｍａｒｔ ＥＰ ３．９０，Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｔ Ｈｅａｒｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉａｍｉ，ＦＬ，ＵＳＡ）を使用して、マウスの聴性脳幹反応（ＡＢＲ）の閾値を測定した。クリック音、ならびに様々な強度（例えば、１０～１３０ｄＢ ＳＰＬ）での８、１６、及び３２ｋＨｚのトーンバーストを使用して、試験マウスのＡＢＲを誘発した。応答シグナルは、マウスの耳に腹外側方向に挿入された皮下針電極で記録した。この実施例は、本明細書に記載の例示的な構築物（例えば、実施例１に記載のもの）の導入により、ＶＳ誘発症状を軽減及び／または予防できることを確認するものであり、さらなる分析は、正確な投与時間枠と、抗ＶＥＧＦタンパク質発現がＶＳ誘発症状を抑制するためにどのように作用するかを測定する助けとなり得る。結果はＡＢＲトレースとして表され、試験動物及び／または耳は、対照（非注入動物または非注入耳を含み得る）と比較した。ＡＢＲパフォーマンスの改善は、対照の耳との比較の場合は試験耳で、対照の動物との比較の場合は試験動物で観察した。刺激に対する応答の改善は、注入耳から非注入耳へのクロスオーバーにより、非注入耳でも観察される場合がある。
術後適当な間隔（例えば、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、及び８週間）で、片側または両側に組成物または偽注射を与えられたＶＳマウスモデルに麻酔をかけた（例えば、腹腔内に送達されたペントバルビタールナトリウム（３５ｍｇ／ｋｇ）で）。その後、マウスを安楽死させ、ＶＳ腫瘍を採取した。腫瘍体積、転写パターン、タンパク質組成、及び／または組織構造を比較した。本明細書に記載の例示的な組成物を注入した試験マウスは、対照の非注入ＶＳモデルマウスと比較して、腫瘍体積の減少、転写パターンの変化、タンパク質組成の変化、及び／または組織構造の変化を示した。
内耳毒性の可能性を評価するために、肉眼検査後、蝸牛を処理、切開、及び染色することができ、ｃｙｔｏｃｏｃｈｌｅｏｇｒａｍ解析を実施して、ＩＨＣ及び／またはＯＨＣの損失を評価することができる。反対側の蝸牛／耳を、中耳及び内耳の組織病理学的及び顕微鏡的評価（例えば、認定病理医による）のために処理し、任意の肉眼的及び顕微鏡的病変を評価することができる。
実施例１１：非ヒト霊長類動物モデルにおける抗ＶＥＧＦ ｍＲＮＡ及びタンパク質発現のトランスジェニック発現の解析
本実施例は、非ヒト霊長類（ＮＨＰ）におけるｒＡＡＶＡｎｃ８０－抗ＶＥＧＦ粒子のｉｎ ｖｉｖｏ試験を提供する。これらの試験は、とりわけ、本明細書に記載の方法及び／または組成物の投与後の耐性、毒性、及び表現型反応を測定し得る。ＮＨＰとヒトとの間の内耳の生理学的類似性は、マウスモデルで見られるものよりも顕著であるため、適切なＮＨＰモデル（例えば、カニクイザル（Ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃｑｕｅ）、別名Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）が、この目的のために利用される。ＮＨＰ動物モデルであるマカクは、霊長類の内耳の形態をほぼ代表する内耳の形態を有しており、蝸牛水管が開存していないため、外リンパに投与された注入物の量を予測可能かつ定量的に評価することが容易になる。ヒトと比較してＮＨＰの外耳道の直径は比較的狭いため、この動物モデルに必要な外科的アプローチはより侵襲的である（外耳道を通じてではなく、乳様突起／顔面神経窩を通じて進入する）。特定の理論に束縛されることを望まないが、前述の理由から、このアプローチは予想される伝音損失、外科的外傷、またはその両方を過大評価する可能性がある。総内耳容積がヒトの約３分の１であるにもかかわらず、マカクの蝸牛は解剖学的に類似しており、提示の薬物送達プロセス（例えば、正円窓膜注入）自体は、先に概説した様式で実施した。本明細書に記載のｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ粒子の蝸牛内投与を分析及び調査するために、マカクは、安全性及び耐性の両方、ならびにＶＳ及び／または関連腫瘍に近接して有効な抗ＶＥＧＦタンパク質曝露レベルをもたらすのに必要なｒＡＡＶ粒子の用量を評価するための最も実用的な解剖学的に正しい動物モデルを代表する。
実施例１１．１：ＮＨＰでの抗ＶＥＧＦタンパク質ラニビズマブのｉｎ ｖｉｖｏ発現及び分析
ＮＨＰにおいて、本明細書に記載のｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ粒子（例えば、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－抗ＶＥＧＦ）を以下のように送達した：耳介後部を切開し、軟部組織を骨膜のレベルまで切開した。骨膜を切開し、持ち上げて乳様突起骨を露出させた。経皮質乳様突起削開術を、高速切削とダイヤモンドドリルバーを組み合わせて行った。その後、顔面神経窩が開放され、適切に正円窓と卵円窓（ＯＷ）を明視下に置けるようにした。ＯＷのアブミ骨底板の開窓を、ローゼン針を使用して行った。他のモデルと同様に、開窓により内耳に損傷を与えることなく、より大量の注入が可能となり、さらに、通気により、ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ粒子を含む溶液が蝸牛の頂点に向かって流れることが可能になる。ウイルス粒子を含む３０μＬの溶液（総内耳容積のおよそ４０～５０％）を、正円窓膜を通じて３０μＬ／分の速度で送達した。
本明細書に記載の組成物及び方法を、ＮＨＰ（カニクイザル）においてｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ粒子（実施例１に記載）の同時両側蝸牛内投与を使用して、その後２ヶ月または６ヶ月の回復期間を経て、局所及び全身の耐性について評価した。とりわけ、この評価により、１）局所的及び全身的な耐性が実証され、２）ｒＡＡＶＡｎｃ８０－抗ＶＥＧＦ粒子の蝸牛内投与後の外リンパ、ＣＳＦ、血清、及び他の組織における抗ＶＥＧＦタンパク質の発現レベルの評価が可能となった。低用量群と高用量群の両方を使用した。低用量群及び高用量群は、ＮＨＰでのこれまでのプラットフォーム及び支持研究に基づいており、高用量に対応する濃度付近の用量（３．０Ｅ１１ｖｇ／蝸牛に相当する１．０Ｅ１３ｖｇ／ｍＬ；ヒト換算で９．０Ｅ１１ｖｇ／蝸牛）は、ＮＨＰの有毛細胞における病変と関連しなかったが、より高濃度（１．１Ｅ１２ｖｇ／蝸牛に相当する３．７Ｅ１３ｖｇ／ｍＬ；ヒト換算で３．３Ｅ１２ｖｇ／蝸牛）では、一部の動物の有毛細胞において潜在的なカプシド関連の病変と関連していた。ここで実施された試験には、抗ＶＥＧＦタンパク質レベルを測定する（例えば、ＭＳＤにより）ための試料を確実に得るために、外リンパ液を採取することを主目的とした追加の高用量群及びビヒクル群が含まれた。これらの別群は、外リンパの採取がほぼ常に周囲の蝸牛に損傷を与えるために必要であった。
これらの実験から得られた結果は、抗ＶＥＧＦタンパク質（ラニビズマブ）がＮＨＰの外リンパで検出されたことを示している。ビヒクルを注入した対照ＮＨＰの外リンパでは抗ＶＥＧＦタンパク質は検出されず、投与後期間（２ヶ月または６ヶ月）にかかわらず、どのＮＨＰの末端ＣＳＦでも抗ＶＥＧＦタンパク質は検出されなかった。
図２７は、内耳から典型的なＶＳ部位への拡散特性を推定するために外リンパ曝露レベルを組み込んだ計算モデルを示す。内耳道を通る抗ＶＥＧＦタンパク質の拡散の計算モデリング（図２７に図示されている）から、外リンパ中の抗ＶＥＧＦレベルが、報告された初期ＶＳ部位の範囲内で生物学的に活性な閾値濃度（ラニビズマブのＩＣ５０）を超えることが予測された。ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞増殖アッセイにおいてＶＥＧＦ－Ａの生物学的活性を５０％阻害するのに必要な濃度は、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ ２０１７（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されているように１１～２７ｎｇ／ｍＬである。
血清の抗ＶＥＧＦタンパク質レベルをＮＨＰで評価したところ、検出された抗ＶＥＧＦタンパク質のレベルは、全てのＮＨＰで最小～検出不可能であった。抗ＶＥＧＦタンパク質は、どのＮＨＰのどの非蝸牛組織ライセート（肝臓、脾臓、脳幹、左右の聴覚皮質、及び左右の下顎リンパ節を含む）でも検出されなかった。
ＶＳ腫瘍の成長を制御し、ＶＳ腫瘍の症状を緩和する全身性抗ＶＥＧＦタンパク質の有効性を示す臨床データと併せて考えると、これらの実験は、抗ＶＥＧＦタンパク質への局所曝露により腫瘍サイズを縮小し、及び／または腫瘍の成長及びその続発症を制御し、それにより抗ＶＥＧＦタンパク質の反復全身投与に関連する副作用を抑制するために、抗ＶＥＧＦタンパク質の内耳デポを生成することの実現可能性を明らかにした。
実施例１２：ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブを送達されたＮＨＰの表現型分析
上述のように、ｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ粒子（実施例１に記載）を用いてＮＨＰ（カニクイザル）での曝露及び耐性試験を実施した。試験では、粒子を両側に蝸牛内に送達し、ＮＨＰでのｒＡＡＶＡｎｃ８０－抗ＶＥＧＦ粒子の局所及び全身への影響を評価した。とりわけ、この試験は、蝸牛耐性（投与後６ヶ月までの連続的なＡＢＲ測定；投与後２ヶ月及び６ヶ月目のｃｙｔｏｃｏｃｈｌｅｏｇｒａｍ；ならびに投与後２ヶ月及び６ヶ月目の耳の組織病変）を知るためのデータを提供した。
２つの例示的な用量（用量１及び用量２）のｒＡＡＶＡｎｃ８０－ラニビズマブ粒子（実施例１に記載）またはビヒクルの両側蝸牛内投与を、経乳様突起／顔面神経窩外科的アプローチを使用して実施し、上記のように正円窓及び卵円窓にアクセスした。用量１は、用量２よりも少なかった。
投与後、蝸牛内投与及び／または試験ｒＡＡＶＡｎｃ８０－抗ＶＥＧＦ粒子に関連する有意な臨床観察は記録されなかった。軽度の神経学的徴候は、前庭系に影響を与える可能性のある外科的手技に関連すると考えられ、ＮＨＰは医学的介入なしに回復した。全体として、２ヶ月及び６ヶ月の回復を含む全てのＮＨＰの臨床観察結果は、主に、内耳手術後の一時的な所見として予想されたものであった。
実施例１３：ヒト投与
本実施例は、難聴及び／または偶発的もしくは症候群（例えば、神経線維腫症－２）に関連して生じるＶＳに関連する追加の症状を有する対象の治療を開示する。
ヒトでは、上記のモデル生物で利用されるアプローチと比較して、本明細書に記載の作用物質の送達のための侵襲性の低いアプローチを、例えば、外耳道を通じて利用することができる；いくつかの実施形態のように、ヒトでは、出生時でさえ関連構造が比較的大きいため、より実用的である。簡単に言うと、本明細書に記載の臨床投与方法は、経外耳道的試験的鼓室開放術及びレーザー支援下微細アブミ骨底開窓術（リン酸チタニルカリウム［ＫＴＰ］またはＣＯ２耳科用レーザーを使用してアブミ骨底板に小さな通気孔［およそ０．２５ｍｍ］を開ける）の後に、正円窓注入を行い、３分以内に正円窓膜を通じて、本明細書に記載のｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ粒子を含む約０．０９ｍＬ（または９０μＬ、総内耳容積のおよそ４０～５０％）の溶液を送達することを含むことができる。非臨床及び死体モデルと同様に、通気は、迷路内圧の潜在的な有害な上昇を防止するのに役立つ。臨床投与処置及び送達デバイスに関する追加情報は、本開示全体を通して見出すことができる。
患者は、片側性または両側性ＶＳを有すると診断され得る（例えば、ＭＲＩによる判定）。臨床投与処置は、経外耳道的試験的鼓室開放術及びレーザー支援下微細アブミ骨底開窓術後に、正円窓注入を行い、短時間で正円窓膜を通じて、適切な力価で本明細書に記載のｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ粒子を含む適切な量の溶液を送達することであり得る。手術の前に、手術される耳を識別し、機関の要件に沿って確認するために耳の上に消えないマーカーで印を付けてもよい。本明細書に記載のｒＡＡＶ粒子の利用可能性は、麻酔が投与される前に確認することができる。全身麻酔の導入後、対象は仰臥位に置かれ、頭は横に向けられ、手術耳は上に向けられた。耳は、ベタジンで準備され、通常の方法でドレープをかけられ得る。手術用顕微鏡または内視鏡を使用して、外耳道の四象限ブロックに麻酔（例えば、エピネフリンを含む１％リドカイン）をかけた。後部鼓膜外耳道皮弁を展開し、中耳に進入して卵円窓と正円窓の両方を露出させた。この際、マイクロキュレットまたはドリルを使用して、骨性管及び鼓膜の接合部にある少量の骨を除去する必要がある場合がある。適切なレーザー（例えば、ＫＴＰまたはＣＯ２耳科レーザー）を使用して、アブミ骨底板に小さな穴（例えば、およそ０．２５ｍｍ）を作出した。このような穴は、注入中に通気部として機能し、迷路内圧の潜在的な有害な上昇を防止することができる。次に、注入カテーテルを、注入デバイスの先端近くのストッパーによって決定される適切な深さ（例えば、１ｍｍを超えない）まで、正円窓膜を通過させることができる。正円窓を露出させるには、偽膜または突出した骨の除去が必要な場合がある。適切な量の溶液が注入されている間、送達デバイスは所定の位置に保持することができる。カテーテルを抜去すると、血液／組織パッチ及び／またはシーラント液滴（例えば、ヒアルロン酸ナトリウム、例えば、Ｈｅａｌｏｎ（登録商標））を正円窓膜及びアブミ骨底板上に置き、２４～４８時間かけて生体治癒が起こる間に両窓の機能的密閉を行った。その後、鼓膜外耳道皮弁を解剖学的位置に戻し、抗生物質を含浸させた吸収性ゼラチンスポンジで所定の位置に保持した。
適切な間隔で、対象はフォローアップ画像分析（例えば、ＭＲＩ分析）を受けて、腫瘍体積及び／または腫瘍の成長速度を測定され得る。本明細書に記載の例示的な方法及び／または組成物で治療された対象は、本明細書に記載の例示的な方法及び／または組成物で治療されていない対象と比較して、腫瘍体積の減少及び／または腫瘍の成長速度の低下を示し得る。
送達には、無菌の使い捨て送達デバイスが使用される。そのようなデバイスは、本明細書に記載の生成物候補ｒＡＡＶ－抗ＶＥＧＦ粒子を正円窓膜を通じて蝸牛内に安全かつ効果的に送達できるように設計されている。送達デバイスは、本明細書に記載の遺伝子治療用生成物候補の送達に使用することが意図されており、多くの場合、蝸牛内投与経路と組み合わせて使用される。使い捨てデバイスは、アブミ骨底板に位置する通気部を伴って正円窓膜を通じて内耳の外リンパ液に被験物質を送達するために開発することができ；デバイスのフォームファクターは、外耳道を通じた正円窓膜へのアプローチを最適化する。カスタムデバイスは、このような蝸牛内投与経路のために特別に設計されているため、治療薬の安全性と有効性の可能性の両方に関して、市販の材料よりも有利である（図４）。デバイスの特定の設計要素には、これらに限定されないが、以下が含まれる：注入された流体の無菌性の維持；内耳に導入される気泡の最小化；制御された流速で少量を正確に送達する能力（標準ポンプの使用と合わせて）；正円窓膜を明視化し、外科医による外耳道を通じた送達を可能にすること；正円窓膜、もしくは正円窓膜から先の蝸牛構造への損傷の最小化；及び／または正円窓膜を通じた逆流の最小化。
例示的な実施形態
実施形態１．プロモーターに作動可能に連結されたコード配列を含む構築物であって、前記コード配列が血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）結合剤またはその一部をコードする、前記構築物。
実施形態２．前記プロモーターが、誘導性プロモーター、構成的プロモーター、または組織特異的プロモーターである、実施形態１に記載の構築物。
実施形態３．前記プロモーターが、ＣＡＧプロモーター、ＣＢＡプロモーター、ＣＭＶプロモーター、またはＣＢ７プロモーターである、実施形態１または２に記載の構築物。
実施形態４．前記プロモーターが、配列番号６４、配列番号４９、及び／または配列番号６５に記載の核酸配列を含む、実施形態１～３のいずれか１つに記載の構築物。
実施形態５．前記コード配列が、霊長類コード配列であるか、またはそれを含む、実施形態１～４のいずれか１つに記載の構築物。
実施形態６．前記ＶＥＧＦ結合剤またはその一部が、霊長類ＶＥＧＦ結合剤である、実施形態１～５のいずれか１つに記載の構築物。
実施形態７．前記コード配列が、ヒトコード配列であるか、またはそれを含む、実施形態１～４のいずれか１つに記載の構築物。
実施形態８．前記ＶＥＧＦ結合剤が、ヒトＶＥＧＦ結合剤であるか、またはそれを含む、実施形態１～４または６のいずれか１つに記載の構築物。
実施形態９．前記コード配列が、操作されたコード配列であるか、またはそれを含む、実施形態１～４のいずれか１つに記載の構築物。
実施形態１０．前記ＶＥＧＦ結合剤が、ヒト化ＶＥＧＦ結合剤であるか、またはそれを含む、実施形態１～４または９のいずれか１つに記載の構築物。
実施形態１１．前記ＶＥＧＦ結合剤が、少なくとも１つのＶＥＧＦタンパク質またはその断片に結合することができる、実施形態１～１０のいずれか１つに記載の構築物。
実施形態１２．前記少なくとも１つのＶＥＧＦタンパク質が、ＶＥＧＦ－Ａ、ＶＥＧＦ－Ｂ、ＶＥＧＦ－Ｃ、ＶＥＧＦ－Ｄ、またはそれらの組み合わせである、実施形態１１に記載の構築物。
実施形態１３．前記少なくとも１つのＶＥＧＦタンパク質が、ＶＥＧＦ－Ａであるか、またはそれを含む、実施形態１１に記載の構築物。
実施形態１４．前記ＶＥＧＦ結合剤が、少なくとも１つのポリペプチドを含む、実施形態１～１３のいずれか１つに記載の構築物。
実施形態１５．前記ＶＥＧＦ結合剤が、抗体もしくはその断片であるか、またはそれを含む、実施形態１～１４のいずれか１つに記載の構築物。
実施形態１６．前記抗体断片が、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｄ’断片、相補性決定領域（ＣＤＲ）、単鎖Ｆｖ、またはＦｃドメインである、実施形態１５に記載の構築物。
実施形態１７．前記ＶＥＧＦ結合剤が、免疫グロブリン重鎖、免疫グロブリン軽鎖、もしくはそれらの組み合わせであるか、またはそれを含む、実施形態１～１５のいずれか１つに記載の構築物。
実施形態１８．前記ＶＥＧＦ結合剤が、
（ｉ）配列番号１６に記載のアミノ配列を含むポリペプチド、
（ｉｉ）配列番号２０に記載のアミノ配列を含むポリペプチド、または
（ｉｉｉ）それらの組み合わせ、
を含む、実施形態１～１５または１７のいずれか１つに記載の構築物。
実施形態１９．前記ＶＥＧＦ結合剤が、ラニビズマブであるか、またはそれを含む、実施形態１８に記載の構築物。
実施形態２０．前記コード配列が、
（ｉ）配列番号１３を含む核酸配列、
（ｉｉ）配列番号１９を含む核酸配列、または
（ｉｉｉ）それらの組み合わせ、
を含む、実施形態１～１５または１７～１９のいずれか１つに記載の構築物。
実施形態２１．前記コード配列が、それぞれがシグナルペプチドをコードする１つ以上の核酸配列を含む、実施形態１～２０のいずれか１つに記載の構築物。
実施形態２２．少なくとも１つの核酸配列が、インターロイキン２（ＩＬ２）シグナルペプチドをコードする、実施形態２１に記載の構築物。
実施形態２３．前記コード配列が、自己切断ペプチドをコードする１つ以上の配列を含む、実施形態１～２２のいずれか１つに記載の構築物。
実施形態２４．前記自己切断ペプチドが、ｔｈｏｓｅａ ａｓｉｇｎａウイルス２Ａ（Ｔ２Ａ）ペプチドである、実施形態２３に記載の構築物。
実施形態２５．前記コード配列が、配列番号２１に記載の核酸配列であるか、またはそれを含む、実施形態１～１５または１７～２４のいずれか１つに記載の構築物。
実施形態２６．前記ＶＥＧＦ結合剤が、
（ｉ）配列番号２４に記載のアミノ配列を含むポリペプチド、
（ｉｉ）配列番号２５に記載のアミノ配列を含むポリペプチド、または
（ｉｉｉ）それらの組み合わせ、
を含む、実施形態１～１５または１７のいずれか１つに記載の構築物。
実施形態２７．前記ＶＥＧＦ結合剤が、ベバシズマブであるか、またはそれを含む、実施形態２６に記載の構築物。
実施形態２８．前記コード配列が、
（ｉ）配列番号１０８を含む核酸配列、
（ｉｉ）配列番号１０９を含む核酸配列、または
（ｉｉｉ）それらの組み合わせ、
を含む、実施形態１～１５、１７、２６、または２７のいずれか１つに記載の構築物。
実施形態２９．前記コード配列が、それぞれがシグナルペプチドをコードする１つ以上の配列を含む、実施形態２６～２８のいずれか１つに記載の構築物。
実施形態３０．少なくとも１つの核酸配列が、ＩＬ２シグナルペプチドをコードする、実施形態２９に記載の構築物。
実施形態３１．前記コード配列が、自己切断ペプチドをコードする１つ以上の配列を含む、実施形態２６～３０のいずれか１つに記載の構築物。
実施形態３２．前記自己切断ペプチドが、Ｔ２Ａペプチドである、実施形態３１に記載の構築物。
実施形態３３．前記コード配列が、配列番号２２に記載の核酸配列であるか、またはそれを含む、実施形態１～１５、１７、または２６～３２のいずれか１つに記載の構築物。
実施形態３４．前記ＶＥＧＦ結合剤が、Ｆｃドメインを含む、実施形態１～１５のいずれか１つに記載の構築物。
実施形態３５．前記Ｆｃドメインが配列番号１１１に記載のアミノ酸配列を含む、実施形態１～１５または３４のいずれか１つに記載の構築物。
実施形態３６．前記コード配列が、配列番号１１０に記載の核酸配列を含む、実施形態１～１５、３４、または３５のいずれか１つに記載の構築物。
実施形態３７．前記ＶＥＧＦ結合剤がＶＥＧＦ受容体の１つ以上の細胞外ドメインを含む、実施形態１～１５、または３４～３６のいずれか１つに記載の構築物。
実施形態３８．前記ＶＥＧＦ受容体の１つ以上の細胞外ドメインが、配列番号１１２に記載のアミノ配列を含む、実施形態３７に記載の構築物。
実施形態３９．前記ＶＥＧＦ結合剤がＶＥＧＦ受容体の２つの細胞外ドメインを含む、実施形態１～１５、または３４～３８のいずれか１つに記載の構築物。
実施形態４０．前記コード配列が、それぞれがシグナルペプチドをコードする１つ以上の核酸配列を含む、実施形態３４～３９のいずれか１つに記載の構築物。
実施形態４１．少なくとも１つの核酸配列が、ＩＬ２シグナルペプチドをコードする、実施形態４０に記載の構築物。
実施形態４２．前記コード配列及びプロモーターに隣接する、２つのＡＡＶ逆位末端反復（ＩＴＲ）をさらに含む、実施形態１～４１のいずれか１つに記載の構築物。
実施形態４３．前記２つのＡＡＶ ＩＴＲが、ＡＡＶ２ ＩＴＲであるか、またはそれに由来する、実施形態４２に記載の構築物。
実施形態４４．前記２つのＡＡＶ ＩＴＲが、配列番号４５または４７に記載の核酸配列を含む５’ＩＴＲと、配列番号４６または４８に記載の核酸配列を含む３’ＩＴＲと、を含む、実施形態４２または４３に記載の構築物。
実施形態４５．配列番号９０、９１、９２、９３、９４、１０６、または１０７のいずれかに記載の核酸配列を含む、実施形態１に記載の構築物。
実施形態４６．配列番号９５または９６のいずれかに記載の核酸配列を含む、実施形態１に記載の構築物。
実施形態４７．実施形態１～４６のいずれか１つに記載の構築物を含むＡＡＶ粒子。
実施形態４８．ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ－ｒｈ８、ＡＡＶ－ｒｈ１０、ＡＡＶ－ｒｈ３９、ＡＡＶ－ｒｈ４３、もしくはＡＡＶ Ａｎｃ８０カプシドであるか、またはそれに由来するＡＡＶカプシドをさらに含む、実施形態４７に記載のＡＡＶ粒子。
実施形態４９．前記ＡＡＶカプシドがＡＡＶ Ａｎｃ８０カプシドである、実施形態４８に記載のＡＡＶ粒子。
実施形態５０．実施形態１～４６のいずれか１つに記載の構築物を含む組成物。
実施形態５１．実施形態４７～５０のいずれか１つに記載のＡＡＶ粒子を含む組成物。
実施形態５２．前記ＡＡＶ粒子が、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ－ｒｈ８、ＡＡＶ－ｒｈ１０、ＡＡＶ－ｒｈ３９、ＡＡＶ－ｒｈ４３、もしくはＡＡＶ Ａｎｃ８０カプシドであるか、またはそれに由来するＡＡＶカプシドを含む、実施形態５１に記載の組成物。
実施形態５３．前記ＡＡＶ粒子のＡＡＶカプシドがＡＡＶ Ａｎｃ８０カプシドである、実施形態５２に記載の組成物。
実施形態５４．前記ＡＡＶ Ａｎｃ８０カプシドがＡＡＶ Ａｎｃ８０Ｌ６５カプシドである、実施形態５３に記載の組成物。
実施形態５５．医薬組成物である、実施形態５０～５４のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態５６．薬学的に許容される担体をさらに含む、実施形態５５に記載の組成物。
実施形態５７．約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬの用量で製剤化される、実施形態５５または５６に記載の組成物。
実施形態５８．約１×１０１０～約１×１０１３ｖｇ／蝸牛の用量で製剤化される、実施形態５５～５７のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態５９．約０．０１ｍＬ～０．１ｍＬの容量で投与される、実施形態５５～５８のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態６０．実施形態５０～５９のいずれか１つに記載の組成物を含む細胞。
実施形態６１．ｉｎ ｖｉｖｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ、またはｉｎ ｖｉｔｒｏに存在する、実施形態６０に記載の細胞。
実施形態６２．哺乳動物細胞である、実施形態６０または６１に記載の細胞。
実施形態６３．前記哺乳動物細胞がヒト細胞である、実施形態６２に記載の細胞。
実施形態６４．細胞が不死化され、安定な細胞株を生成する、実施形態６０に記載の細胞。
実施形態６５．前記ヒト細胞が対象の耳の中に存在する、実施形態６３に記載の細胞。
実施形態６６．前記ヒト細胞が内耳細胞である、実施形態６３に記載の細胞。
実施形態６７．前記内耳細胞が、内有毛細胞、外有毛細胞、またはその両方である、実施形態６６に記載の細胞。
実施形態６８．実施形態５０～５９のいずれか１つに記載の組成物を含むシステム。
実施形態６９．内耳細胞を、実施形態１～４６のいずれか１つに記載の構築物と接触させることを含む方法。
実施形態７０．内耳細胞を、実施形態４７～４９のいずれか１つに記載のＡＡＶ粒子と接触させることを含む方法。
実施形態７１．内耳細胞を、実施形態５０～５９のいずれか１つに記載の組成物と接触させることを含む方法。
実施形態７２．前記内耳細胞が外有毛細胞である、実施形態６９～７１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７３．前記内耳細胞が内有毛細胞である、実施形態６９～７１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７４．前記内耳細胞が対象の耳の中に存在する、実施形態６９～７３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７５．前記内耳細胞がｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏに存在する、実施形態６９～７３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７６．細胞を、
（ｉ）実施形態１～４６のいずれか１つに記載の構築物、ならびに
（ｉｉ）ＡＡＶ Ｒｅｐ遺伝子、ＡＡＶ Ｃａｐ遺伝子、ＡＡＶ ＶＡ遺伝子、ＡＡＶ Ｅ２ａ遺伝子、及びＡＡＶ Ｅ４遺伝子を含む１つ以上の構築物
と接触させることを含む、方法。
実施形態７７．前記細胞が内耳細胞である、実施形態７６に記載の方法。
実施形態７８．前記内耳細胞が外有毛細胞である、実施形態７７に記載の方法。
実施形態７９．前記内耳細胞が内有毛細胞である、実施形態７７に記載の方法。
実施形態８０．前記内耳細胞がｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏに存在する、実施形態７７～７９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態８１．実施形態１～４６のいずれか１つに記載の構築物を対象の内耳に導入することを含む方法。
実施形態８２．実施形態４７～４９のいずれか１つに記載のＡＡＶ粒子を対象の内耳に導入することを含む方法。
実施形態８３．実施形態５０～５９のいずれか１つに記載の組成物を対象の内耳に導入することを含む方法。
実施形態８４．前記構築物、ＡＡＶ粒子、または組成物が前記対象の蝸牛に導入される、実施形態８１～８３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態８５．前記構築物、ＡＡＶ粒子、または組成物が正円窓膜注入によって導入される、実施形態８１～８４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態８６．前記対象の聴力レベルを測定することをさらに含む、実施形態６９～７５及び８１～８５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態８７．聴力レベルが、聴性脳幹反応（ＡＢＲ）検査を実施することによって測定される、実施形態８６に記載の方法。
実施形態８８．前記対象の聴力レベルを基準聴力レベルと比較することをさらに含む、実施形態８６または８７に記載の方法。
実施形態８９．前記基準聴力レベルが、公表されたまたは過去の基準聴力レベルである、実施形態８８に記載の方法。
実施形態９０．前記対象の聴力レベルが、実施形態１～４６のいずれか１つに記載の構築物、実施形態４７～４９のいずれか１つに記載のＡＡＶ粒子、または実施形態５０～５９のいずれか１つに記載の組成物を導入した後に測定され、前記基準聴力レベルが、実施形態１～４６のいずれか１つに記載の構築物、実施形態４７～４９のいずれか１つに記載のＡＡＶ粒子、または実施形態５０～５９のいずれか１つに記載の組成物を導入する前に測定された前記対象の聴力レベルである、実施形態８９に記載の方法。
実施形態９１．対象における血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）結合剤またはその一部のレベルを測定することをさらに含む、実施形態６９～７５及び８１～９０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９２．前記血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）結合剤またはその一部のレベルが前記対象の内耳で測定される、実施形態９１に記載の方法。
実施形態９３．前記血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）結合剤またはその一部のレベルが前記対象の蝸牛で測定される、実施形態９１または９２に記載の方法。
実施形態９４．前記対象における血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）結合剤またはその一部のレベルを、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）結合剤またはその一部の基準レベルと比較することをさらに含む、実施形態６９～７５及び８１～９３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９５．前記血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）結合剤またはその一部の基準レベルが、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）結合剤またはその一部の公表されたまたは過去の基準レベルである、実施形態９４に記載の方法。
実施形態９６．前記対象における前記血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）結合剤またはその一部のレベルが、実施形態１～４６のいずれか１つに記載の構築物、実施形態４７～４９のいずれか１つに記載のＡＡＶ粒子、または実施形態５０～５９のいずれか１つに記載の組成物を導入した後に測定され、前記血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）結合剤またはその一部の基準レベルが、実施形態１～４６のいずれか１つに記載の構築物、実施形態４７～４９のいずれか１つに記載のＡＡＶ粒子、または実施形態５０～５９のいずれか１つに記載の組成物を導入する前に測定された前記対象の前記血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）結合剤またはその一部のレベルである、実施形態９１～９５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９７．対象の腫瘍の体積を測定することをさらに含む、実施形態６９～７５及び８１～９６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９８．前記対象の腫瘍の体積を基準腫瘍体積と比較することをさらに含む、実施形態９７に記載の方法。
実施形態９９．前記基準腫瘍体積が、公表されたまたは過去の基準腫瘍体積である、実施形態９８に記載の方法。
実施形態１００．前記対象の腫瘍の体積が、実施形態１～４６のいずれか１つに記載の構築物、実施形態４７～４９のいずれか１つに記載のＡＡＶ粒子、または実施形態５０～５９のいずれか１つに記載の組成物を導入した後に測定され、前記基準腫瘍体積が、実施形態１～４６のいずれか１つに記載の構築物、実施形態４７～４９のいずれか１つに記載のＡＡＶ粒子、または実施形態５０～５９のいずれか１つに記載の組成物を導入する前に測定された前記対象の腫瘍の体積である、実施形態９７～９９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１０１．実施形態１～４６のいずれか１つに記載の構築物、実施形態４７～４９のいずれか１つに記載のＡＡＶ粒子、または実施形態５０～５９のいずれか１つに記載の組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、難聴を治療する、または内耳障害を治療する方法。
実施形態１０２．前記対象が、新生血管形成を特徴とする耳科疾患に罹患しているか、またはそのリスクがある、実施形態７４及び８１～１０１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１０３．前記耳科疾患が、聴神経腫瘍であるか、またはそれを含む、実施形態１０２に記載の方法。
実施形態１０４．前記耳科疾患が、前庭神経鞘腫であるか、またはそれを含む、実施形態１０２に記載の方法。
実施形態１０５．前記前庭神経鞘腫を有する対象が、神経線維腫症２型（ＮＦ２）を有する、実施形態１０４に記載の方法。
実施形態１０６．前記耳科疾患に関連する１つ以上の症状が緩和または軽快される、実施形態１０２～１０５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１０７．前記１つ以上の症状が、難聴、有毛細胞の変性、内耳液の生化学的環境の変化、迷路内タンパク質の上昇、内リンパ水腫、蝸牛開口部閉塞、迷路内出血、蝸牛血管供給の途絶、耳鳴り、めまい、難治性頭痛、顔面神経障害、三叉神経障害、顔面麻痺、顔面の感覚異常、水頭症、小脳ヘルニア、死亡、またはそれらの組み合わせを含む、実施形態１０６に記載の方法。
実施形態１０８．前庭神経鞘腫を治療する方法である、実施形態６９～７５、８１～１０２、及び１０４～１０７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１０９．ＶＥＧＦのレベルを調節する方法である、実施形態６９～７５及び８１～１０７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１１０．活性ＶＥＧＦのレベルを調節する方法である、実施形態６９～７５及び８１～１０７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１１１．ＶＥＧＦの活性を低下する方法である、実施形態６９～７５及び８１～１０７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１１２．新生血管形成及び／または前記耳科疾患に関連する１つ以上の症状を特徴とする前記耳科疾患の治療に使用するための、実施形態１～４６のいずれか１つに記載の構築物。
実施形態１１３．新生血管形成及び／または前記耳科疾患に関連する１つ以上の症状を特徴とする前記耳科疾患の治療に使用するための、実施形態４７～４９のいずれか１つに記載のＡＡＶ粒子。
実施形態１１４．新生血管形成及び／または前記耳科疾患に関連する１つ以上の症状を特徴とする前記耳科疾患の治療に使用するための、実施形態５０～５９のいずれか１つに記載の組成物。
実施形態１１５．前記耳科疾患に関連する１つ以上の症状が、難聴、有毛細胞の変性、内耳液の生化学的環境の変化、迷路内タンパク質の上昇、内リンパ水腫、蝸牛開口部閉塞、迷路内出血、蝸牛血管供給の途絶、耳鳴り、めまい、難治性頭痛、顔面神経障害、三叉神経障害、顔面麻痺、顔面の感覚異常、水頭症、小脳ヘルニア、死亡、もしくはそれらの組み合わせを含む、実施形態１１２に記載の構築物、実施形態１１３に記載のＡＡＶ粒子、または実施形態１１４に記載の組成物。
実施形態１１６．新生血管形成及び／または前記耳科疾患に関連する１つ以上の症状を特徴とする前記耳科疾患を治療するための医薬を製造するための、実施形態１～４６のいずれか１つに記載の構築物の使用。
実施形態１１７．新生血管形成及び／または前記耳科疾患に関連する１つ以上の症状を特徴とする前記耳科疾患を治療するための医薬を製造するための、実施形態４７～４９のいずれか１つに記載の粒子の使用。
実施形態１１８．新生血管形成及び／または前記耳科疾患に関連する１つ以上の症状を特徴とする前記耳科疾患を治療するための医薬を製造するための、実施形態５０～５９のいずれか１つに記載の組成物の使用。
実施形態１１９．前記耳科疾患に関連する１つ以上の症状が、難聴、有毛細胞の変性、内耳液の生化学的環境の変化、迷路内タンパク質の上昇、内リンパ水腫、蝸牛開口部閉塞、迷路内出血、蝸牛血管供給の途絶、耳鳴り、めまい、難治性頭痛、顔面神経障害、三叉神経障害、顔面麻痺、顔面の感覚異常、水頭症、小脳ヘルニア、死亡、またはそれらの組み合わせを含む、実施形態１１６～１１８のいずれか１つに記載の使用。
実施形態１２０．安定な細胞株であるか、またはそれを含む、実施形態６０～６７のいずれか１つに記載の１つ以上の細胞を含む細胞の集団。
実施形態１２１．実施形態５０～５９のいずれか１つに記載の組成物を含むキット。
実施形態１２２．前記組成物がデバイスに予め充填されている、実施形態１２１に記載のキット。
実施形態１２３．前記デバイスがマイクロカテーテルである、実施形態１２２に記載のキット。
実施形態１２４．前記マイクロカテーテルが、外耳道を介して中耳腔に進入し、前記マイクロカテーテルの末端をＲＷＭに接触させることができるような形状となっている、実施形態１２３に記載のキット。
実施形態１２５．前記マイクロカテーテルの遠位端が、１０～１０００ミクロンの間の直径を有する少なくとも１つのマイクロニードルから構成される、実施形態１２３または１２４に記載のキット。
実施形態１２６．デバイスをさらに含む、実施形態１２１～１２５のいずれか１つに記載のキット。
実施形態１２７．前記デバイスが、図２９～３２のいずれか１つに記載のデバイスである、実施形態１２６に記載のキット。
実施形態１２８．前記デバイスが、曲げ部及び傾斜先端を含む針を含む、実施形態１２２～１２７のいずれか１つに記載のキット。

Claims (50)

  1. プロモーターに作動可能に連結されたコード配列を含む構築物であって、前記コード配列が血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）結合剤またはその一部をコードする、前記構築物。
  2. 前記プロモーターが、ＣＡＧプロモーター、ＣＢＡプロモーター、ＣＭＶプロモーター、またはＣＢ７プロモーターである、請求項１に記載の構築物。
  3. 前記ＶＥＧＦ結合剤が、抗体もしくはその断片であるか、または抗体もしくはその断片を含む、請求項１または２に記載の構築物。
  4. 前記抗体断片が、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｄ’断片、相補性決定領域（ＣＤＲ）、単鎖Ｆｖ、またはＦｃドメインである、請求項３に記載の構築物。
  5. 前記ＶＥＧＦ結合剤が、免疫グロブリン重鎖、免疫グロブリン軽鎖、もしくはそれらの組み合わせであるか、または免疫グロブリン重鎖、免疫グロブリン軽鎖、もしくはそれらの組み合わせを含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の構築物。
  6. 前記ＶＥＧＦ結合剤が、
    （ｉ）配列番号１６に記載のアミノ配列を含むポリペプチド、
    （ｉｉ）配列番号２０に記載のアミノ配列を含むポリペプチド、または
    （ｉｉｉ）それらの組み合わせ、
    を含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の構築物。
  7. 前記ＶＥＧＦ結合剤が、ラニビズマブであるか、またはラニビズマブを含む、請求項６に記載の構築物。
  8. 前記コード配列が、
    （ｉ）配列番号１３を含む核酸配列、
    （ｉｉ）配列番号１９を含む核酸配列、または
    （ｉｉｉ）それらの組み合わせ、
    を含む、請求項１～３または５～６のいずれか１項に記載の構築物。
  9. 前記コード配列が、それぞれがシグナルペプチドをコードする１つ以上の核酸配列を含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の構築物。
  10. 少なくとも１つの核酸配列が、インターロイキン２（ＩＬ２）シグナルペプチドをコードする、請求項９に記載の構築物。
  11. 前記コード配列が、自己切断ペプチドをコードする１つ以上の配列を含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載の構築物。
  12. 前記自己切断ペプチドが、ｔｈｏｓｅａ ａｓｉｇｎａウイルス２Ａ（Ｔ２Ａ）ペプチドである、請求項１１に記載の構築物。
  13. 前記コード配列が、配列番号２１に記載の核酸配列であるか、または、配列番号２１に記載の核酸配列を含む、請求項１～３または５～１２のいずれか１項に記載の構築物。
  14. ２つのＡＡＶ逆位末端反復（ＩＴＲ）をさらに含み、前記２つのＡＡＶ ＩＴＲは、前記コード配列及びプロモーターに隣接する、請求項１～１３のいずれか１項に記載の構築物。
  15. 前記２つのＡＡＶ ＩＴＲが、ＡＡＶ２ ＩＴＲであるか、またはＡＡＶ２ ＩＴＲに由来する、請求項１４に記載の構築物。
  16. 前記２つのＡＡＶ ＩＴＲが、配列番号４５または４７に記載の核酸配列を含む５’ＩＴＲと、配列番号４６または４８に記載の核酸配列を含む３’ＩＴＲを含む、請求項１４または１５に記載の構築物。
  17. 前記構築物が、配列番号９０、９１、９２、または１０６のいずれかに記載の核酸配列を含む、請求項１に記載の構築物。
  18. 請求項１～１７のいずれか１項に記載の構築物を含むＡＡＶ粒子。
  19. ＡＡＶカプシドをさらに含む、請求項１８に記載のＡＡＶ粒子であって、前記ＡＡＶカプシドは、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ－ｒｈ８、ＡＡＶ－ｒｈ１０、ＡＡＶ－ｒｈ３９、ＡＡＶ－ｒｈ４３、もしくはＡＡＶ Ａｎｃ８０カプシドであるか、またはそれに由来する、粒子。
  20. 前記ＡＡＶカプシドが、ＡＡＶ Ａｎｃ８０カプシドであり、ＡＡＶ Ａｎｃ８０Ｌ６５カプシドであってもよい、請求項１９に記載のＡＡＶ粒子。
  21. 前記ＡＡＶカプシドが、配列番号１１３または配列番号１１４に記載のポリペプチドを含む、請求項１９または２０に記載のＡＡＶ粒子。
  22. 請求項１～１７のいずれか１項に記載の構築物または請求項１８～２１のいずれか１項に記載のＡＡＶ粒子を含む、組成物。
  23. 前記組成物が、薬学的に許容される担体をさらに含む医薬組成物である、請求項２２に記載の組成物。
  24. 約１×１０１１ｖｇ／ｍＬ～約１×１０１５ｖｇ／ｍＬの用量で製剤化される、請求項２２または２３に記載の組成物。
  25. 約１×１０１０～約１×１０１３ｖｇ／蝸牛の用量で製剤化される、請求項２２～２４のいずれか１項に記載の組成物。
  26. 約０．０１ｍＬ～０．１ｍＬの容量で投与される、請求項２２～２５のいずれか１項に記載の組成物。
  27. 内耳細胞を、請求項１～１７のいずれか１項に記載の構築物、請求項１８～２１のいずれか１項に記載のＡＡＶ粒子、または請求項２２～２６のいずれか１項に記載の組成物と接触させることを含む、方法。
  28. 細胞を、
    （ｉ）請求項１～１７のいずれか１項に記載の構築物、ならびに
    （ｉｉ）ＡＡＶ Ｒｅｐ遺伝子、ＡＡＶ Ｃａｐ遺伝子、ＡＡＶ ＶＡ遺伝子、ＡＡＶ Ｅ２ａ遺伝子、及びＡＡＶ Ｅ４遺伝子を含む１つ以上の構築物
    と接触させることを含む、方法。
  29. 請求項１～１７のいずれか１項に記載の構築物、請求項１８～２１のいずれか１項に記載のＡＡＶ粒子、または請求項２２～２６のいずれか１項に記載の組成物を対象の内耳に導入することを含む、方法。
  30. 前記対象の聴力レベルを測定することをさらに含む、請求項２９に記載の方法。
  31. 前記対象の前記聴力レベルを基準聴力レベルと比較することをさらに含む、請求項３０に記載の方法。
  32. 前記対象の前記聴力レベルが、請求項１～１７のいずれか１項に記載の構築物、請求項１８～２１のいずれか１項に記載のＡＡＶ粒子、または請求項２２～２６のいずれか１項に記載の組成物を導入した後に測定され、前記基準聴力レベルが、請求項１～１７のいずれか１項に記載の構築物、請求項１８～２１のいずれか１項に記載のＡＡＶ粒子、または請求項２２～２６のいずれか１項に記載の組成物を導入する前に測定された前記対象の聴力レベルである、請求項３１に記載の方法。
  33. 対象における血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）結合剤またはその一部のレベルを測定することをさらに含む、請求項２９～３２のいずれか１項に記載の方法。
  34. 前記対象における前記血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）結合剤またはその一部の前記レベルを、前記血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）結合剤またはその一部の基準レベルと比較することをさらに含む、請求項３３に記載の方法。
  35. 対象の腫瘍の体積を測定することをさらに含む、請求項２９～３４のいずれか１項に記載の方法。
  36. 前記対象の腫瘍の体積を基準腫瘍体積と比較することをさらに含む、請求項３５に記載の方法。
  37. 請求項１～１７のいずれか１項に記載の構築物、請求項１８～２１のいずれか１項に記載のＡＡＶ粒子、または請求項２２～２６のいずれか１項に記載の組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、難聴を治療する方法。
  38. 請求項１～１７のいずれか１項に記載の構築物、請求項１８～２１のいずれか１項に記載のＡＡＶ粒子、または請求項２２～２６のいずれか１項に記載の組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、哺乳動物における内耳障害を治療する方法。
  39. 前記内耳障害が、聴神経腫瘍、前庭神経鞘腫、または神経線維腫症ＩＩ型である、請求項３８に記載の方法。
  40. 請求項１～１７のいずれか１項に記載の構築物、請求項１８～２１のいずれか１項に記載のＡＡＶ粒子、または請求項２２～２６のいずれか１項に記載の組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、哺乳動物における前庭神経鞘腫を治療する方法。
  41. 新生血管形成を特徴とする耳科疾患及び／または前記耳科疾患に関連する１つ以上の症状の治療に使用するための、請求項１～１７のいずれか１項に記載の構築物、請求項１８～２１のいずれか１項に記載のＡＡＶ粒子、または請求項２２～２６のいずれか１項に記載の組成物。
  42. 内耳障害の前記治療に使用するための、請求項１～１７のいずれか１項に記載の構築物、請求項１８～２１のいずれか１項に記載のＡＡＶ粒子、または請求項２２～２６のいずれか１項に記載の組成物。
  43. 前記内耳障害が、聴神経腫瘍、前庭神経鞘腫、または神経線維腫症ＩＩ型である、請求項４２に記載の使用のための構築物。
  44. 神経鞘腫の前記治療に使用するための、請求項１～１７のいずれか１項に記載の構築物、請求項１８～２１のいずれか１項に記載のＡＡＶ粒子、または請求項２２～２６のいずれか１項に記載の組成物。
  45. 新生血管形成を特徴とする耳科疾患及び／または前記耳科疾患に関連する１つ以上の症状を治療するための医薬を製造するための、請求項１～１７のいずれか１項に記載の構築物、請求項１８～２１のいずれか１項に記載の粒子、または請求項２２～２６のいずれか１項に記載の組成物の使用。
  46. 内耳障害を治療するための医薬を製造するための、請求項１～１７のいずれか１項に記載の構築物、請求項１８～２１のいずれか１項に記載の粒子、または請求項２２～２６のいずれか１項に記載の組成物の使用。
  47. 前記内耳障害が、聴神経腫瘍、前庭神経鞘腫、または神経線維腫症ＩＩ型である、請求項４６に記載の使用。
  48. 前庭神経鞘腫を治療するための医薬を製造するための、請求項１～１７のいずれか１項に記載の構築物、請求項１８～２１のいずれか１項に記載の粒子、または請求項２２～２６のいずれか１項に記載の組成物の使用。
  49. 前記哺乳動物がヒトである、請求項３７～４０のいずれか１項に記載の方法、請求項４１～４４のいずれか１項に記載の使用のためのＡＡＶ構築物、または請求項４５～４８のいずれか１項に記載の使用。
  50. 請求項１～１７のいずれか１項に記載の構築物、請求項１８～２１のいずれか１項に記載の粒子、または請求項２２～２６のいずれか１項に記載の組成物を含む、キット。
JP2023533228A 2020-12-01 2021-11-30 前庭神経鞘腫関連症状を治療するための抗ｖｅｇｆ抗体構築物及び関連する方法 Pending JP2023551533A (ja)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202063120189P 2020-12-01 2020-12-01
US63/120,189 2020-12-01
US202163152832P 2021-02-23 2021-02-23
US63/152,832 2021-02-23
PCT/US2021/061205 WO2022119839A1 (en) 2020-12-01 2021-11-30 Anti-vegf antibody constructs and related methods for treating vestibular schwannoma associated symptoms

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2023551533A true JP2023551533A (ja) 2023-12-08

Family

ID=80034771

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2023533228A Pending JP2023551533A (ja) 2020-12-01 2021-11-30 前庭神経鞘腫関連症状を治療するための抗ｖｅｇｆ抗体構築物及び関連する方法

Country Status (16)

Country Link
US (1) US20230295287A1 (ja)
EP (1) EP4255570A1 (ja)
JP (1) JP2023551533A (ja)
KR (1) KR20230117179A (ja)
AU (1) AU2021391433A1 (ja)
CA (1) CA3197936A1 (ja)
CL (1) CL2023001561A1 (ja)
CO (1) CO2023007191A2 (ja)
CR (1) CR20230228A (ja)
DO (1) DOP2023000106A (ja)
EC (1) ECSP23049000A (ja)
IL (1) IL303317A (ja)
MX (1) MX2023006451A (ja)
PE (1) PE20240115A1 (ja)
TW (1) TW202237644A (ja)
WO (1) WO2022119839A1 (ja)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20200090927A (ko) 2017-12-19 2020-07-29 아카우오스, 인크. 내이에 대한 치료적 항체의 aav-매개 전달
WO2023150142A1 (en) * 2022-02-02 2023-08-10 Akouos, Inc. Anti-vegf antibody constructs and related methods for treating vestibular schwannoma associated symptoms

Family Cites Families (47)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0173552B1 (en) 1984-08-24 1991-10-09 The Upjohn Company Recombinant dna compounds and the expression of polypeptides such as tpa
US5168062A (en) 1985-01-30 1992-12-01 University Of Iowa Research Foundation Transfer vectors and microorganisms containing human cytomegalovirus immediate-early promoter-regulatory DNA sequence
US4797368A (en) 1985-03-15 1989-01-10 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Adeno-associated virus as eukaryotic expression vector
US5139941A (en) 1985-10-31 1992-08-18 University Of Florida Research Foundation, Inc. AAV transduction vectors
US5436146A (en) 1989-09-07 1995-07-25 The Trustees Of Princeton University Helper-free stocks of recombinant adeno-associated virus vectors
US6268213B1 (en) 1992-06-03 2001-07-31 Richard Jude Samulski Adeno-associated virus vector and cis-acting regulatory and promoter elements capable of expressing at least one gene and method of using same for gene therapy
US5869305A (en) 1992-12-04 1999-02-09 The University Of Pittsburgh Recombinant viral vector system
US5478745A (en) 1992-12-04 1995-12-26 University Of Pittsburgh Recombinant viral vector system
US6204059B1 (en) 1994-06-30 2001-03-20 University Of Pittsburgh AAV capsid vehicles for molecular transfer
US5741683A (en) 1995-06-07 1998-04-21 The Research Foundation Of State University Of New York In vitro packaging of adeno-associated virus DNA
US6093570A (en) 1995-06-07 2000-07-25 The University Of North Carolina At Chapel Hill Helper virus-free AAV production
US6001650A (en) 1995-08-03 1999-12-14 Avigen, Inc. High-efficiency wild-type-free AAV helper functions
US6207457B1 (en) * 1995-09-08 2001-03-27 Avigen, Inc. Targeted nucleotide sequence delivery and integration system
EP0931158A1 (en) 1996-09-06 1999-07-28 The Trustees Of The University Of Pennsylvania An inducible method for production of recombinant adeno-associated viruses utilizing t7 polymerase
DE69829891T2 (de) 1997-04-07 2005-10-06 Genentech, Inc., South San Francisco Anti-VEGF Antikörper
DE69824859T2 (de) 1997-04-14 2005-08-04 Cell Genesys, Inc., Foster City Methoden zur erhöhung der effizienz rekombinanter aav produkte
US6156303A (en) 1997-06-11 2000-12-05 University Of Washington Adeno-associated virus (AAV) isolates and AAV vectors derived therefrom
US6146874A (en) 1998-05-27 2000-11-14 University Of Florida Method of preparing recombinant adeno-associated virus compositions
ATE454445T1 (de) 1998-11-10 2010-01-15 Univ North Carolina Virusvektoren und verfahren für ihre herstellung und verabreichung.
AU2001268149B2 (en) 2000-06-01 2005-08-18 University Of North Carolina At Chapel Hill Methods and compounds for controlled release of recombinant parvovirus vectors
WO2002099035A2 (en) 2001-05-31 2002-12-12 Chiron Corporation Chimeric alphavirus replicon particles
US7045335B2 (en) 2001-09-06 2006-05-16 Alphavax, Inc. Alphavirus replicon vector systems
CA2945734C (en) 2001-11-13 2020-02-25 The Trustees Of The University Of Pennsylvania A method of detecting and/or identifying adeno-associated virus (aav) sequences and isolating novel sequences identified thereby
EP2359869B1 (en) 2001-12-17 2018-12-26 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Adeno-associated virus (AAV) serotype 8 sequences, vectors containing same and uses therefor
US20070015238A1 (en) 2002-06-05 2007-01-18 Snyder Richard O Production of pseudotyped recombinant AAV virions
CA2939103C (en) 2003-09-30 2020-03-24 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Adeno-associated virus (aav) clades, sequences, vectors containing same, and uses therefor
US7557197B2 (en) 2004-01-28 2009-07-07 Oregon Health & Science University Human soluble neuropilin-1 primary polyadenylation signal and uses thereof
WO2006012414A2 (en) 2004-07-20 2006-02-02 Critical Therapeutics, Inc. Novel polyadenylation signal for use in expression vectors
ES2428218T3 (es) 2005-04-07 2013-11-06 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Cápsides de AAV rh48 modificadas, composiciones que las contienen y usos de las mismas
US7612181B2 (en) 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
WO2007120542A2 (en) 2006-03-30 2007-10-25 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Aav capsid library and aav capsid proteins
CA2729949A1 (en) 2008-07-08 2010-01-14 Abbott Laboratories Prostaglandin e2 dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
JP5785941B2 (ja) 2009-06-17 2015-09-30 アッヴィ・バイオセラピューティクス・インコーポレイテッド 抗ｖｅｇｆ抗体とその使用
RU2012112550A (ru) 2009-09-01 2013-10-10 Эбботт Лэборетриз Иммуноглобулины с двумя вариабельными доменами и их применение
CA2775959A1 (en) 2009-10-15 2011-04-21 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
UY32979A (es) 2009-10-28 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
WO2012018790A2 (en) 2010-08-03 2012-02-09 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
WO2013148302A1 (en) 2012-03-26 2013-10-03 THE UNITED STATES OF AMERICA, as represented by THE SECRETARY, DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES, OFFICE OF TECHNOLOGY TRANSFER, NATIONAL INSTITUTES OF HEALTH Delivery of packaged rna to mammalian cells
WO2013181586A2 (en) 2012-06-01 2013-12-05 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Methods related to bevacizumab
RU2646098C2 (ru) 2013-04-30 2018-03-01 Интас Фармасьютикалс Лтд Новый способ клонирования, экспрессии и очистки для получения ранибизумаба
CN115093464A (zh) * 2013-10-11 2022-09-23 马萨诸塞眼科耳科诊所 预测祖先病毒序列的方法及其用途
WO2017050825A1 (en) 2015-09-21 2017-03-30 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) A method for quantifying bevacizumab
GB201518979D0 (en) 2015-10-27 2015-12-09 Univ Leuven Kath Treatment of hepatic steatosis related oligo-ovulation
KR102574810B1 (ko) * 2016-04-15 2023-09-08 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실베니아 습성 연령 관련 황반 변성의 치료를 위한 조성물
KR20200090927A (ko) * 2017-12-19 2020-07-29 아카우오스, 인크. 내이에 대한 치료적 항체의 aav-매개 전달
US20210093734A1 (en) * 2018-02-20 2021-04-01 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions for treatment of wet age-realted macular degeneration
CN113853437A (zh) * 2018-11-07 2021-12-28 阿库斯股份有限公司 腺相关病毒载体用于在内耳中的毛细胞和支持细胞中校正基因缺陷/表达蛋白质的用途

Also Published As

Publication number Publication date
KR20230117179A (ko) 2023-08-07
CR20230228A (es) 2023-07-18
ECSP23049000A (es) 2023-07-31
IL303317A (en) 2023-07-01
CA3197936A1 (en) 2022-06-09
DOP2023000106A (es) 2023-07-16
EP4255570A1 (en) 2023-10-11
PE20240115A1 (es) 2024-01-22
CO2023007191A2 (es) 2023-06-20
AU2021391433A1 (en) 2023-06-22
TW202237644A (zh) 2022-10-01
MX2023006451A (es) 2023-06-15
US20230295287A1 (en) 2023-09-21
CL2023001561A1 (es) 2023-12-01
WO2022119839A1 (en) 2022-06-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11781145B2 (en) Compositions and methods for treating non-age-associated hearing impairment in a human subject
JP7408228B2 (ja) ヒト対象において非加齢性聴力障害を治療するための組成物及び方法
US20230295287A1 (en) Anti-vegf antibody constructs and related methods for treating vestibular schwannoma associated symptoms
US11807867B2 (en) Compositions and methods for treating non-age-associated hearing impairment in a human subject
JP2021530227A (ja) 非症候性感音性聴力喪失の治療方法
WO2023150142A1 (en) Anti-vegf antibody constructs and related methods for treating vestibular schwannoma associated symptoms
CN116568283A (zh) 用于治疗前庭神经鞘瘤相关症状的抗vegf抗体构建体和相关方法
JP2024500786A (ja) Ｃｌｒｎ１関連難聴及び／または視力低下を治療するための組成物及び方法