JP2023550043A - 抗Ａｘｌ抗体、抗体断片およびそれらの免疫コンジュゲートを用いたＡｘｌ発現癌の治療方法 - Google Patents

抗Ａｘｌ抗体、抗体断片およびそれらの免疫コンジュゲートを用いたＡｘｌ発現癌の治療方法 Download PDF

Info

Publication number
JP2023550043A
JP2023550043A JP2023528206A JP2023528206A JP2023550043A JP 2023550043 A JP2023550043 A JP 2023550043A JP 2023528206 A JP2023528206 A JP 2023528206A JP 2023528206 A JP2023528206 A JP 2023528206A JP 2023550043 A JP2023550043 A JP 2023550043A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
antibody
axl
antibodies
cancer
body weight
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2023528206A
Other languages
English (en)
Inventor
エリック シーバス
フィリップ マーティン
Original Assignee
バイオアトラ インコーポレイテッド
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by バイオアトラ インコーポレイテッド filed Critical バイオアトラ インコーポレイテッド
Publication of JP2023550043A publication Critical patent/JP2023550043A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68031—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being an auristatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/77—Internalization into the cell
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

Ａｘｌ発現癌の治療方法が提供される。本方法は、Ａｘｌタンパク質に特異的に結合する重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域を有するポリペプチド、該ポリペプチドを含む抗体または抗体断片、および／またはそれらの免疫コンジュゲート化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む。免疫コンジュゲート化合物は、切断可能なリンカーを介して１つ以上の薬物に結合した条件付き活性型生物学的製剤（ＣＡＢ）抗Ａｘｌ抗体（ＣＡＢ－Ａｘｌ－ＡＤＣ）である。免疫コンジュゲートは、ｍＡｂＢＡ３０１１ー切断可能リンカー－ＭＭＡＥ（ｎ）またはその薬学的に許容される塩であり、ｍＡｂＢＡ３０１１は抗体または抗体断片であり、ＭＭＡＥはモノメチルアウリスタチンＥであり、（ｎ）は１から４の間の整数である。また、本ポリペプチド、または本ポリペプチドを含む抗体および抗体断片とを含む免疫コンジュゲート、医薬組成物およびキットも提供される。

Description

関連出願との相互参照本出願は、２０２０年１１月１２日に出願された米国仮出願第６３／１３３０４０号の優先権を主張し、その開示全体は、参照により本明細書に具体的に援用される。
配列表参照
本出願には、２０２０年１０月１４日に作成され、１２，０００バイトを含む「ＢＩＡＴ－１０３４＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｌｉｓｔｉｎｇ」という名前のテキストファイルとして本書とともに提出された配列表が含まれる。このテキストファイルに含まれる資料は、参照により本明細書に援用される。
本開示は、Ａｘｌ発現癌の治療のための方法に関する。本方法は、それを必要とする対象に、約０．３ｍｇ／ｋｇ～約１．８ｍｇ／ｋｇの抗Ａｘｌ抗体、抗体断片および／または前記抗体および抗体断片の免疫コンジュゲートを週に１回投与することを含む。
Ａｘｌタンパク質（Ａｒｋ、ＵＦＯ、Ｔｙｒｏ－７としても公知）は、キナーゼのＴｙｒｏ－３ファミリーにおける受容体チロシンキナーゼである。Ｔｙｒｏ－３受容体キナーゼは、細胞外領域中の２つの免疫グロビン様ドメインおよび二重フィブロネクチンＩＩＩ型リピートと細胞質キナーゼドメインとの組合せを特徴とする。Ｔｙｒｏ－３受容体キナーゼについてのリガンドはＧａｓ６（成長停止特異的（ｇｒｏｗｔｈ－ａｒｒｅｓｔ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ）６）およびプロテインＳであり、これらは４３％のアミノ酸配列同一性を示し、類似のドメイン構造を共有する２つのビタミンＫ依存的タンパク質である。それぞれのタンパク質は、１１個のｇ－カルボキシグルタミン酸残基を含有するＮ末端Ｇｌａドメインとそれに続く４つの上皮成長因子（ＥＧＦ）様モジュール、および２つのタンデムラミニンＧドメインからなるＣ末端性ホルモン結合グロビン（ＳＨＢＧ）様構造を有する。ＳＨＢＧドメインは、Ｔｙｒｏ－３受容体キナーゼ結合および活性化に必須であり、十分である一方、ＧＩａドメインは負荷電膜リン脂質に結合し、アポトーシス細胞のＴｙｒｏ－３キナーゼ媒介食作用において重要な役割を担う。
Ａｘｌ活性化は、ＰＩ－３－キナーゼ／Ａｋｔ（Ｆｒａｎｋｅ ｅｔ ａｌ．、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，ｖｏｌ．２２，ｐｐ．８９８３－８９９８，２００３）および他の主要な経路、例えば、Ｒａｓ／Ｅｒｋおよびβ－カテニン／ＴＣＦ（Ｇｏｒｕｐｐｉ ｅｔ ａｌ．、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．、ｖｏｌ．２１，ｐｐ．９０２－９１５，２００１）を介するシグナリングをもたらす。Ａｘｌは、一連の正常組織、例として、脳、心臓、骨格筋、器官の嚢およびいくつかの他の器官の結合組織中で弱く発現され、単球中で発現されるがリンパ球中では発現されない。Ａｘｌによって誘導されるＡｋｔリン酸化は、線維芽細胞（Ｇｏｒｕｐｐｉ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ．， ｖｏｌ． １７， ｐｐ． ４４４２－４４５３ １９９７）、内皮細胞（Ｈａｓａｎｂａｓｉｃ ｅｔ ａｌ．， Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｈｅａｒｔ Ｃｉｒｃ Ｐｈｙｓｉｏｌ， ｖｏｌ． ２８７， Ｈ１２０７－Ｈ１２１３， ２００４、血管平滑筋細胞 （Ｍｅｌａｒａｇｎｏ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ． Ｃａｒｄｉｏｌ．， ｖｏｌ． ３７， ｐｐ． ８８１－８８７， ２００４） およびニューロン（Ａｌｌｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ． Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．， ｖｏｌ． １３， ｐｐ．１９１－２０１， １９９９）の生存に関与していることが報告されている。さらに、Ａｘｌは、細胞接着および走化性における役割を担う。それというのも、Ａｘｌノックアウト動物が血小板インテグリンＩＩｂ３の低減した活性化の結果として損傷した血小板凝集物安定化および血栓形成を呈するためである。
ＡｘｌまたはそのリガンドＧａｓ６の機能不全は、種々のヒト癌の病因に関与する。Ａｘｌの過剰発現は、様々な癌種で実証されている、例えば、乳房 （Ｍｅｒｉｃ ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ｖｏｌ． ８， ｐｐ． ３６１－３６７， ２００２； Ｂｅｒｃｌａｚ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｎ．Ｏｎｃｏｌ．， ｖｏｌ． １２， ｐｐ． ８１９－８２４， ２００１）、大腸（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｔ．Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ， ｖｏｌ． ８３， ｐｐ． ５７９－５８４， １９９９； Ｃｒａｖｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｔ．Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ，ｖｏｌ． ６０， ｐｐ． ７９１－７９７， １９９５）、前立腺 （Ｊａｃｏｂ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔ．Ｐｒｅｙ．， ｖｏｌ． ２３， ｐｐ． ３２５－３３２， １９９９）、肺 （Ｗｉｍｍｅｌ ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ， ｖｏｌ． ３７， ｐｐ． ２２６４－２２７４， ２００１）、胃 （Ｗｕ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ｖｏｌ． ２２， ｐｐ． １０７１－１０７８， ２００２）、卵巣（Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．， Ｏｎｃｏｌｏｇｙ， ｖｏｌ． ６６， ｐｐ． ４５０－４５７， ２００４）、子宮内膜 （Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｎ．Ｏｎｃｏｌ．， ｖｏｌ． １４， ｐｐ． ８９８－９０６， ２００３）、腎臓 （Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｎ．Ｏｎｃｏｌ．， ｖｏｌ． １４， ｐｐ． ８９８－９０６， ２００３）、肝細胞 （Ｔｓｏｕ ｅｔ ａｌ．， Ｇｅｎｏｍｉｃｓ， ｖｏｌ． ５０， ｐｐ． ３３１－３４０， １９９８）、甲状腺（Ｉｔｏ ｅｔ ａｌ．， Ｔｈｙｒｏｉｄ， ｖｏｌ． １２， ｐｐ． ９７１－９７５， ２００２； Ｉｔｏ ｅｔ ａｌ．， Ｔｈｙｒｏｉｄ， ｖｏｌ． ９， ｐｐ． ５６３－５６７， １９９９）、および さらに慢性骨髄性白血病において（Ｊａｎｓｓｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｏｎｃｏｇｅｎｅ， ｖｏｌ． ６， ｐｐ． ２１１３－２１２０， １９９１； Ｂｒａｕｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｏｎｃｏｇｅｎｅ， ｖｏｌ． １４， ｐｐ． ２６１９－２６３１ １９９７； Ｏ’Ｂｒｙａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ．， ｖｏｌ． １１， ｐｐ． ５０１６－５０３１， １９９１）， 急性骨髄性白血病（Ｒｏｃｈｌｉｔｚ ｅｔ ａｌ．， Ｌｅｕｋｅｍｉａ， ｖｏｌ． １３， ｐｐ． １３５２－１３５８， １９９９），、骨肉腫 （Ｎａｋａｎｏ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ｖｏｌ． ２７０， ｐｐ． ５７０２－５７０５， ２００３）、メラノーマ （ｖａｎ Ｇｉｎｋｅｌ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ｖｏｌ． ６４， ｐｐ． １２８－１３４， ２００４）、および 頭頸部扁平上皮癌において （Ｇｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｂｒ Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ．， ｖｏｌ． ９４， ｐｐ． １４４６－５， ２００６）。
近年、ホスホチロシンシグナリングのプロファイリングにより、活性化ＡｘｌがＮＳＣＬＣの原発腫瘍の約５％において検出された（Ｒｉｋｏｖａ ｅｔ ａｌ，Ｃｅｌｌ，ｖｏｌ．１３１，ｐｐ．１１９０－１２０３，２００７）。Ａｘｌの発現は標的化学療法薬によって誘導され、薬剤誘導性のＡｘｌ発現は急性骨髄性白血病における化学療法への耐性をもたらす（Ｈｏｎｇ ｅｔ ａｌ， Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔｅｒｓ， ｖｏｌ．２６８， ｐｐ．３１４－３２４， ２００８）。また、消化管間質腫瘍（Ｍｅｈａｄｅｖａｎ， ｅｔ ａｌ， Ｏｎｃｏｇｅｎｅ， ｖｏｌ．２６， ｐｐ．３９０９－３９１９， ２００７）および乳癌（Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， ｖｏｌ．２８１， ｐｐ．６８７１－６８７８， ２００９）において、それぞれイマチニブおよびラパチニブ／ハーセプチンに耐性を示す。
さらに、Ａｘｌは、腫瘍転移に関連することが同定されている。それというも、Ａｘｌは、非侵襲性細胞と比較して侵襲性乳癌細胞株において上方調節されるためである。ｉｎ ｖｉｔｒｏで、Ａｘｌ活性は遊走および侵入に要求されることが見出され、この活性は抗体処理により阻害することができた（国際公開第０４／００８１４７号パンフレット）。同様に、Ａｘｌのドミナントネガティブ型の発現を介する（Ｖａｊｋｏｃｚｙ，Ｐ．、ｅｔ ａｌ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｕ．Ｓ．Ａ．、ｖｏｌ．１０３，ｐｐ．５７９９－５８０４，２００５）またはＡｘｌのｓｉＲＮＡ媒介下方調節による（Ｈｏｌｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、ｖｏｌ．６５，ｐｐ．９２９４－９３０３，２００５）ｉｎ ｖｉｖｏでのＡｘｌ活性の停止は、マウス異種移植実験において皮下および同所細胞成長を妨害した。
したがって、抗Ａｘｌモノクローナル抗体は癌の治療における使用について記載されている。例えば、抗Ａｘｌ抗体に関する刊行物としては、国際公開第２００９／０６３９６５号パンフレット、国際公開第２００９／０６２６９０号パンフレット、国際公開第２０１１／０１４４５７号パンフレット、米国特許出願公開第２０１４／０２２７２８３号明細書、および米国特許第８，８５３，３６９号明細書が挙げられる。米国特許出願公開第２０１４／０２２７２８３号明細書は、モノクローナル抗Ａｘｌ抗体ならびに診断および治療方法におけるその使用を開示している。国際公開第２００９／０６２６９０号パンフレットは、Ａｘｌタンパク質の細胞外ドメインに結合し、少なくとも部分的にＡｘｌ活性を阻害し得る抗体を開示している。
これらのモノクローナル抗Ａｘｌ抗体は、患者の身体の任意の位置、例として治療が意図される腫瘍の位置において類似の親和性でＡｘｌに結合する。非腫瘍環境中でのＡｘｌへのこのような抗体の結合は、それらの環境中でＡｘｌの正常機能に対する悪影響を有し、したがって顕著な副作用を引き起こし得ると予測される。本発明は、非腫瘍環境中でのＡｘｌへの結合親和性と比較して腫瘍微小環境中でＡｘｌへの高い結合親和性を有する条件的に活性な抗Ａｘｌ抗体および抗体断片を提供する。本発明の抗Ａｘｌ抗体および抗体断片は、当分野において公知のモノクローナル抗Ａｘｌ抗体と比較して同等または大きな抗癌効力を、低減した副作用で有すると予測される。これは、抗Ａｘｌ抗体および抗体断片のより高い投与量の投与またはより高頻度の治療も許容し、したがってより有効な治療選択を提供し得る。
癌は、世界的に見ても大きな健康上の負担となり続けている。米国（ＵＳ）では、心臓病に次いで２番目に多い死因であり、４人に１人近くを占めている（米国癌協会２０１１）。固形腫瘍の治療には、特に大きな課題がある。例えば、肺癌は数十年前から世界で最も多い癌であり、２００８年には推定１６１万人の新規患者が発生し、新規癌全体の１２．７％を占めている。また、癌による死因としては最も多く、１３８万人（全体の１８．２％）が死亡している（ＧＬＯＢＯＣＡＮ ２００８）。非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）は、肺癌全体の約８０％から８５％を占めている。近年、免疫療法（プログラムデスリガンド１抗体）や標的療法（上皮増殖因子受容体、未分化リンパ腫キナーゼ阻害剤など）が進歩しているが、それでもＮＳＣＬＣ患者の限られた部分しか治療法の恩恵を受けていない。
軟部肉腫（ＳＴＳ）は間葉系由来の癌で、最新の世界保健機関（ＷＨＯ）の分類（ＷＨＯ ２０１３）によると、１００以上の組織学的サブタイプが存在する。また、ＳＴＳの治療は基本的に緩和的であり、治癒の可能性が激減するため、その管理は困難な問題である。報告されている全生存期間の中央値は約１２～１８ヶ月である（Ｃｉｏｆｆｉ ２０１２； Ｍａｒｔｉｎ－Ｌｉｂｅｒａｌ ２０１４）。残念ながら、癌治療の進歩にもかかわらず、より効果的で毒性の低い治療法、特に既存の治療法に反応しない、あるいは耐性ができた進行した患者さんに対するアンメットメディカルニーズが存在し続けている。
一態様において、本発明は、Ａｘｌタンパク質に特異的に結合する単離されたポリペプチド、およびそのような治療を必要とするヒトにポリペプチドを投与することを含むＡｘｌ発現腫瘍の治療方法におけるポリペプチドの使用を提供する。
本発明のポリペプチドは、６つの相補性決定領域Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｌ１、Ｌ２およびＬ３を含み、
Ｈ１配列がＸ１ＧＸ２Ｘ３ＭＸ４（配列番号１）（Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３およびＸ４はそれぞれ独立してアミノ酸を表す）であり：ここで
Ｘ１は、ＴまたはＡまたはＷであり、
Ｘ２は、ＨまたはＡであり、
Ｘ３は、ＴまたはＩであり、
Ｘ４は、ＮまたはＩであり、
Ｈ２配列が、ＬＩＫＸ５ＳＮＧＧＴＸ６ＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号２）（Ｘ５およびＸ６はそれぞれ独立してアミノ酸を表す）であり：ここで
Ｘ５は、ＰまたはＮであり、
Ｘ６は、ＳまたはＩまたはＴであり、
Ｈ３配列が ＧＸ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４ＤＹＸ１５Ｘ１６（配列番号３）（Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９、Ｘ１０、Ｘ１１、Ｘ１２、Ｘ１３、Ｘ１４、Ｘ１５およびＸ１６は、それぞれ独立してアミノ酸を表す）であって
Ｘ７は、ＨまたはＤまたはＥまたはＰまたはＲまたはＷであり、
Ｘ８は、ＹまたはＮであり、
Ｘ９は、ＥまたはＡまたはＤまたはＦまたはＧまたはＨまたはＩまたはＬまたはＭまたはＮまたはＲまたはＶまたはＹであり、
Ｘ１０は、ＳまたはＤまたはＭまたはＮまたはＱであり、
Ｘ１１は、ＹまたはＣまたはＥまたはＰであり、
Ｘ１２は、ＦまたはＥまたはＮまたはＳまたはＴまたはＶであり、
Ｘ１３は、ＡまたはＤまたはＧまたはＬまたはＹであり、
Ｘ１４は、ＭまたはＥまたはＦであり、
Ｘ１５は、ＷまたはＡまたはＤまたはＨまたはＬまたはＮまたはＰまたはＲまたはＴであり、
Ｘ１６は、ＧまたはＨであり、
Ｌ１配列がＫＡＳＱＤＸ１７Ｘ１８ＳＸ１９ＶＸ２０（配列番号４）（Ｘ１７、Ｘ１８、Ｘ１９、およびＸ２０はそれぞれ独立してアミノ酸を表す）であって、
Ｘ１７は、ＶまたはＤまたはＧまたはＮまたはＷであり、
Ｘ１８は、ＳまたはＶであり、
Ｘ１９は、ＡまたはＬまたはＭであり、
Ｘ２０は、ＡまたはＤまたはＮまたはＱであり、
Ｌ２配列がＸ２１Ｘ２２Ｘ２３ＴＲＸ２４Ｔ（配列番号５）（Ｘ２１、Ｘ２２、Ｘ２３、およびＸ２４はそれぞれ独立してアミノ酸を表す）であって、
Ｘ２１は、ＷまたはＦであり、
Ｘ２２は、ＡまたはＩまたはＮまたはＰまたはＱであり、
Ｘ２３は、ＳまたはＤであり、
Ｘ２４は、ＨまたはＤであり、
Ｌ３配列がＱＥＸ２５Ｘ２６ＳＸ２７Ｘ２８Ｘ２９Ｘ３０（配列番号６）（Ｘ２５、Ｘ２６、Ｘ２７、Ｘ２８、Ｘ２９、およびＸ３０はそれぞれ独立してアミノ酸を表す）であり、
Ｘ２５は、ＨまたはＣまたはＦまたはＩまたはＬまたはＱまたはＳまたはＴまたはＶまたはＹであり、
Ｘ２６は、ＦまたはＣまたはＤまたはＥまたはＧまたはＮまたはＳであり、
Ｘ２７は、ＴまたはＣまたはＰであり、
Ｘ２８は、ＰまたはＡまたはＣまたはＤまたはＥまたはＨまたはＫまたはＳまたはＴまたはＶまたはＷであり、
Ｘ２９は、ＬまたはＧまたはＲであり、
Ｘ３０は、ＴまたはＩまたはＲであり、
本発明のポリペプチドは、以下の６つのＣＤＲを有する親ポリペプチドは除外される。
Ｈ１ ＝ ＴＧＨＴＭＮ、
Ｈ２ ＝ ＬＩＫＰＳＮＧＧＴＳＹＮＱＫＦＫＧ、
Ｈ３ ＝ ＧＨＹＥＳＹＦＡＭＤＹＷＧ、
Ｌ１ ＝ ＫＡＳＱＤＶＳＳＡＶＡ、
Ｌ２ ＝ ＷＡＳＴＲＨＴ、および
Ｌ３ ＝ ＱＥＨＦＳＴＰＬＴ。
別の態様において、本発明は、親ポリペプチドに対して、ＣＤＲ Ｈ１、Ｈ２およびＨ３に最大１つの置換を有し、親ポリペプチドに対して、ＣＤＲ Ｌ１、Ｌ２およびＬ３に最大１つの置換を有する上記のような単離ポリペプチドを提供する。これには、親ポリペプチドに対して、ＣＤＲ Ｈ１、Ｈ２およびＨ３に１つの置換を有する単離ポリペプチド、親ポリペプチドに対して、ＣＤＲ Ｌ１、Ｌ２およびＬ３に１つの置換を有する単離ポリペプチド、親ポリペプチドに対して、ＣＤＲ Ｈ１、Ｈ２およびＨ３、ならびにＣＤＲ Ｌ１、Ｌ２およびＬ３に、親ポリペプチドと比較して１つの置換を有する単離ポリペプチドが挙げられる。ＣＤＲのＨ１、Ｈ２、Ｈ３の可能な組み合わせを図１Ａに、ＣＤＲのＬ１、Ｌ２、Ｌ３の可能な組み合わせを図１Ｂに示す。
別態様において、本発明は、Ａｘｌタンパク質に特異的に結合する単離されたポリペプチド、およびそのような治療を必要とするヒトにポリペプチドを投与することを含むＡｘｌ発現腫瘍の治療方法におけるポリペプチドの使用を提供し、ここで、その単離ポリペプチドは、配列番号２０から選ばれた重鎖可変領域および配列番号２１から選ばれた軽鎖可変領域を含む。
さらに別の態様では、本発明は、少なくとも１つの本発明の前記単離ポリペプチドを含む抗Ａｘｌ抗体もしくは抗体断片、または免疫コンジュゲートを提供する
別の態様では、本発明は、Ａｘｌ発現腫瘍の治療のために、上記の抗Ａｘｌ抗体もしくは抗体断片、または免疫コンジュゲートを使用する方法を提供する。
さらに別の態様において、本発明は、場合により、化学療法剤、放射性原子、細胞分裂阻害剤および細胞傷害剤から選択される薬剤にコンジュゲートしている本発明の抗体または抗体断片を含む免疫コンジュゲートを提供するとともに、そのような免疫コンジュゲートを投与することを含む、Ａｘｌ発現腫瘍の治療方法を提供する。
一態様において、免疫コンジュゲートは、条件的に活性な活性生物学的製剤（ＣＡＢ）抗Ａｘｌ抗体が、切断可能リンカー（ＣＡＢ－Ａｘｌ－ＡＤＣ）を介して１つ以上の異種分子に結合された抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）である。ＣＡＢ－Ａｘｌ－ＡＤＣは、ｍＡｂＢＡ３０１１－切断可能リンカー－ＭＭＡＥ（ｎ）であってもよく、ここで異種分子がモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）であり、（ｎ）が（１と４を含む）１～４の整数である。
さらに別の態様では、本発明は、そのような治療を必要とするヒト対象に、ｍＡｂＢＡ３０１－切断可能リンカー－ＭＭＡＥ（ｎ）を投与することを含む、Ａｘｌ発現腫瘍を治療する方法を提供する、ここで、ｍＡｂＢＡ３０１は、配列番号１４のｈｃＣＤＲ１、配列番号１５のｈｃＣＤＲ２および配列番号１６のｈｃＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、および 配列番号１７のｌｃＣＤＲ１、配列番号１８のｌｃＣＤＲ２、配列番号１９のｌｃＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を有する抗体または抗体断片であり； ＭＭＡＥはモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）であり、（ｎ）は（１と４を含む）１～４の整数である。
さらに別の態様において、本発明は、本発明のポリペプチド、抗体もしくは抗体断片、または免疫コンジュゲートを薬学的に許容される担体と一緒に含む医薬組成物を提供する。
さらに別の態様において、本発明は、本発明のポリペプチド、抗体もしくは抗体断片、または免疫コンジュゲートを含む、Ａｘｌ発現腫瘍を診断または治療するための使用説明書を有する診断または治療のためのキットを提供する。
別の態様では、本発明は、そのような治療を必要とするヒト対象に、ｍＡｂＢＡ３０１切断可能リンカー－ＭＭＡＥ（ｎ）および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を投与することを含む、Ａｘｌ発現腫瘍の治療方法を提供し、ここで、医薬組成物は、静脈内注入により２１日ごとに１日目と８日目に１．８ ｍｇ／ヒト対象体重ｋｇの用量で投与される。ｍＡｂＢＡ３０１は、配列番号１４のｈｃＣＤＲ１、配列番号１５のｈｃＣＤＲ２及び配列番号１６のｈｃＣＤＲ３を含む重鎖可変領域および、配列番号１７のｌｃＣＤＲ１、配列番号１８のｌｃＣＤＲ２、配列番号１９のｌｃＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を有する抗体又は抗体断片であり；（ｎ）は、（１と４を含む）１～４の整数であり、好ましくは、（ｎ）は、４に等しい。
一態様において、ｍＡｂＢＡ３０１の重鎖可変領域は、配列番号２０を含み、ｍＡｂＢＡ３０１の軽鎖可変領域は、配列番号２１を含む。
さらなる態様では、切断可能リンカーはｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢである。
さらなる態様において、Ａｘｌ発現腫瘍は、肉腫、腺癌、または非小細胞肺癌であり、好ましくは、Ａｘｌ発現腫瘍は、肉腫である。
さらなる態様において、方法は、プログラム死受容体－１（ＰＤ－１）遮断抗体を投与することをさらに含む。
さらなる態様において、Ａｘｌ発現腫瘍は、少なくとも７０の腫瘍膜Ｐスコアを有する。
さらなる態様において、本方法は、顆粒球コロニー刺激因子またはその類似体を投与することをさらに含む。
さらなる態様において、薬学的に許容される担体は、６．０のｐＨを有し、２０ｍＭヒスチジン－ＨＣｌ、７０ｍｇ／ｍＬスクロースおよび０．５ｍｇ／ｍＬポリソルベート８０を含む。
図１Ａ－Ｂは、本発明の抗Ａｘｌ抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域の配列アラインメントをそれぞれ示す。
図２は、ｐＨ６．０およびｐＨ７．４におけるＡｘｌ細胞外ドメインへの本発明の種々の条件的に活性な抗体の結合（ＯＤ４５０）を示す。これらの条件的に活性な抗体は、ｐＨ７．４よりもｐＨ６．０において活性であった。
図３は、Ａｘｌ細胞外ドメインに対する本発明の種々の条件的に活性な抗体の選択性を示す。選択性は、ｐＨ６．０における結合パートナーに対する結合親和性と、ｐＨ７．４における同一の結合パートナーに対する結合親和性の比として計測した。
図４は、実施例１に記載のとおり、本発明の条件的に活性な抗体が凝集しないことを示すサイズ排除クロマトグラフを示す。
図５は、実施例１に記載のとおり、ＥＬＩＳＡアッセイにより計測された熱ショック前後の本発明の条件的に活性な抗体の熱安定性を示す。
図６Ａ－Ｂは、実施例１におけるＳＰＲアッセイにより計測された本発明の条件的に活性な抗体の選択性を示す。
図７は、ＫＲＥＢＳ緩衝液中でのＡｘｌへの本発明の抗Ａｘｌ抗体の結合についてのｐＨ依存的結合プロファイルを示す。
図８Ａ－Ｅは、Ａ５４９細胞を使用する別の細胞殺傷試験の結果を示す。本発明の抗Ａｘｌ抗体をｐＨ６．０およびｐＨ７．４において異なる抗体濃度において細胞殺傷に用いた。
図９Ａ－Ｄは、異なる緩衝液中および異なるｐＨレベルにおける本発明の抗Ａｘｌ抗体についてのヒトＡｘｌおよびカニクイザルＡｘｌに対する結合親和性を示す。
図１０Ａ－Ｈは、デュオマイシン（ｄｕｏｍｙｃｉｎ）にコンジュゲートさせた本発明の抗Ａｘｌ抗体による異なるｐＨレベルにおける異なる細胞株の細胞殺傷を示す。
図１１は、ゲムシタビンにコンジュゲートさせた本発明の抗Ａｘｌ抗体による異なるｐＨレベルにおけるＡ５４９細胞の細胞殺傷を示す。
図１２は、本発明のデュオマイシンコンジュゲート抗Ａｘｌ抗体による異種移植マウスの治療の腫瘍体積に対する効果を示す。
図１３Ａ－Ｂは、カニクイザルの血液中での本発明のデュオマイシンコンジュゲート抗Ａｘｌ抗体の存在の、コンジュゲートの注射後の経時的な検出を示す。
図１４Ａは、カニクイザルの血液中でのアスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）の存在の、コンジュゲートの注射直前（前（Ｄ－３））に開始し注射３日後（後（Ｄ－３））までの経時的な検出を示す。
図１４Ｂは、カニクイザルの血液中でのアラニンアスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＬＴ）の存在の、コンジュゲートの注射直前（前（Ｄ－３））に開始し注射３日後（後（Ｄ－３））までの経時的な検出を示す。
図１５は、コンジュゲートの注射後のカニクイザルの血液中での経時的なリンパ球数を示す。
図１６Ａ－Ｂは、ＬＣＬＣ１０３ＨおよびＤＵ１４５をそれぞれ受けたマウスのｉｎ ｖｉｖｏ処置を示す。
図１７Ａ－Ｄは、異種移植マウスモデルにおけるＢＡ３０１１の抗腫瘍効果を示す。ＢＡ３０１１の抗腫瘍効果は、免疫不全動物にＡｘｌを発現させたヒト腫瘍細胞株由来の異種移植腫瘍を用いたｉｎ ｖｉｖｏで実証した。ＮＳＣＬＣ （ＬＣＬＣ１０３Ｈ； 図１７Ａ）、前立腺 （ＤＵ１４５； 図１７Ｂ）、膵臓腫瘍 （ＭＩＡＰａＣａ２； 図１７Ｃ） の腫瘍細胞株をこのｉｎ ｖｉｖｏマウスモデルシステムで試験した。
図１８は、例示的な用量漸増フローチャートである。
図１９に例示的な投与スケジュールを示す。
図２０は、１．８ ｍｇ／ｋｇ Ｑ３Ｗまたは２Ｑ３ＷのＢＡ３０１１－ＣＡＢ－Ａｘｌ－ＡＤＣ－ＭＭＡＥを投与した患者における標的病変の合計の変化を示す。腫瘍膜パーセントスコア（ＴｍＰＳ）におけるＡＸＬの細胞膜スコアリングは、≧１＋、≧２＋、または≧３＋のいずれかの強度のパーセンテージを合計することで算出される。したがって、スコアは０から１００の範囲である。腫瘍膜スコアと腫瘍細胞質スコアの区別がつかない患者は除外する。
図２１は、癌の兆候（ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎ）別のＡｘｌ細胞膜のＨスコアの平均値を示す。
図２２は、１．８ ｍｇ／ｋｇ Ｑ３Ｗ（ｄ１）または２Ｑ３Ｗ（ｄ１，８）の用量の第１相試験のＡｘｌ ＴｍＰＳ ≧ ７０を有する肉腫患者における標的病変総数の変化率（ベストレスポンス）を示す。
図２３は、第１相試験において評価可能な肉腫患者において、試験した全用量におけるＡｘｌ ＴｍＰＳカテゴリー別の標的病変の合計の変化率（ベストレスポンス）を示す。
図２４は、第１相試験における評価可能な肉腫患者において、試験した全用量での来院時およびＡｘｌ ＴｍＰＳカテゴリー別の標的病変の合計の変化率を示す。
定義
本明細書において提供される実施例の理解を容易にするため、ある高頻度に使用される用語を本明細書において定義する。
測定された量に関連して、本明細書で使用される「約」という用語は、測定を行い、測定の目的および使用される測定装置の精度に見合った測定を行い、取り扱いを行う当業者によって予測されるであろう測定量の通常の変動を指す。別段の指示がない限り、「約」は、提供された値の＋／－１０％の変動を指す。
本明細書で使用される「親和性」という用語は、分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合性相互作用の合計の強度を指す。別段の指示がない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、結合対（例えば、抗体と抗原）のメンバー間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子ＸのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（Ｋｄ）によって表すことができる。親和性は、本明細書に記載されるものを含め、当該技術分野で既知の一般的な方法によって測定することができる。結合親和性を測定するための具体的な例証的かつ例示的な実施形態は、以下に記載されている。
用語「親和性成熟」は、抗体を参照して使用される場合、変更を保有しない親抗体または抗体断片と比較して１つ以上の超可変領域（ＨＶＲ）中の１つ以上の変更を有する抗体または抗体断片を指し、そのような変更は、抗原についての抗体または抗体断片の親和性の改善をもたらす。
本明細書で使用される「アミノ酸」という用語は、アミノ基（－－ＮＨ２）およびカルボキシル基（－－ＣＯＯＨ）を含有する任意の有機化合物を指し、好ましくは、遊離基として、または代替的にペプチド結合の一部として縮合した後のいずれかである。「２０個の天然にコードされたポリペプチドを形成するα－アミノ酸」は当該技術分野で理解され、アラニン（ａｌａまたはＡ）、アルギニン（ａｒｇまたはＲ）、アスパラギン（ａｓｎまたはＮ）、アスパラギン酸（ａｓｐまたはＤ）、システイン（ｃｙｓまたはＣ）、グルタミン酸（ｇｌｕまたはＥ）、グルタミン（ｇｉｎまたはＱ）、グリシン（ｇｌｙまたはＧ）、ヒスチジン（ｈｉｓまたはＨ）、イソロイシン（ｉｌｅまたはＩ）、ロイシン（ｌｅｕまたはＬ）、リジン（ｌｙｓまたはＫ）、メチオニン（ｍｅｔまたはＭ）、フェニルアラニン（ｐｈｅまたはＦ）、プロリン（ｐｒｏまたはＰ）、セリン（ｓｅｒまたはＳ）、スレオニン（ｔｈｒまたはＴ）、トリプトファン（ｔｉｐまたはＷ）、チロシン（ｔｙｒまたはＹ）、およびバリン（ｖａｌまたはＶ）を指す。
本明細書で使用する「薬剤」という用語は、例えば、医薬、治療、または薬理化合物を含む、元素、化合物、または分子実体を意味する。薬剤は、天然または合成、あるいはそれらの組み合わせであり得る。
「抗癌剤」とは、治療レジメンの一部として、単独または他の薬剤と組み合わせて、癌細胞に対して細胞傷害または細胞分裂停止作用を発揮する薬剤のことである。例えば、抗癌剤は、腫瘍増殖を抑制し、腫瘍増殖を停止させ、および／または既に存在する腫瘍の退縮を引き起こすことができる薬剤である。
本明細書において使用される用語「抗血管新生剤」は、血管の発生をある程度遮断し、または妨げる化合物を指す。抗血管新生剤は、例えば、血管新生の促進に関与する増殖因子または増殖因子受容体に結合する小分子または抗体であり得る。一実施形態において、抗血管新生剤は、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）に結合する抗体または抗体断片、例えば、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））である。
「細胞傷害効果」とは、細胞増殖の阻害を意味する。「細胞傷害剤」とは、細胞に対して細細胞傷害または細胞分裂停止作用を有し、それによって細胞集団内のそれぞれの細胞を枯渇させ、または増殖を抑制する薬剤をいう。本明細書で使用される「抗体断片」という用語は、無傷の抗体が結合する抗原に結合する無傷抗体の一部を含む無傷の抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、限定されるものではないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディ；直鎖抗体；一本鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）が挙げられる。由来する抗体の抗原（例えば、ポリペプチド抗原）に選択的に結合するいくらかの能力を保持するこれらの抗体断片は、当分野において周知の方法（例えば、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ、前掲参照）を使用して作製することができる。
本明細書において使用される用語「抗体」は、インタクト免疫グロブリン分子を指す。抗体または抗体断片は、分取量の抗原を免疫親和性クロマトグラフィーにより単離するために使用することができる。このような抗体または抗体断片の種々の他の使用は、疾患（例えば、新生物形成）を診断および／または病期分類するため、ならびに疾患、例えば、新生物形成、自己免疫疾患、ＡＩＤＳ、心血管疾患、感染症などを治療するための治療用途のためのものである。キメラヒト様ヒト化または完全ヒト抗体または抗体断片は、ヒト患者への投与に特に有用である。
Ｆａｂ断片は、抗体分子の一価の抗原結合断片からなり、酵素のパパインで抗体分子全体を消化することによって産生され、無傷の軽鎖および重鎖の一部からなる断片を得ることができる。
抗体分子のＦａｂ’断片は、全抗体分子をペプシンで処理し、続いて還元して、インタクトな軽鎖と重鎖の一部分とからなる分子を生じさせることによって得ることができる。このように処理した抗体分子１つにつき２つのＦａｂ’断片が得られる。
抗体の（Ｆａｂ’）２断片は、続く還元なしに全抗体分子を酵素ペプシンで処理することによって得ることができる。（Ｆａｂ’）２断片は、２つのジスルフィド結合によって一体に保持された２つのＦａｂ’断片の二量体である。
Ｆｖ断片は、軽鎖の可変領域と、２つの鎖として発現される重鎖の可変領域とを含有する遺伝子操作断片として定義される。
本明細書において使用される用語「抗Ａｘｌ抗体」、抗Ａｘｌ抗体断片および「Ａｘｌに結合する抗体または抗体断片」は、抗体または抗体断片がＡｘｌの標的化における診断および／または治療剤として有用であるように十分な親和性でＡｘｌに結合し得る抗体または抗体断片を指す。一実施形態において、非関連非Ａｘｌタンパク質への抗Ａｘｌ抗体または抗体断片の結合の程度は、例えば、放射性免疫アッセイ（ＲＩＡ）により計測してＡｘｌへの抗体または抗体断片の結合の約１０％未満である。特定の実施形態において、Ａｘｌに結合する抗体または抗体断片は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（例えば、１０－８Ｍ以下、または１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、または１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。特定の実施形態において、抗Ａｘｌ抗体または抗体断片は、異なる種からのＡｘｌ間で保存されるＡｘｌのエピトープに結合する。
本明細書において使用される用語「血管新生障害」は、血管新生の任意の機能不全、例として、非新生物形成および新生物形成病態の両方を指す。新生物形成病態としては、限定されるものではないが、下記のもの（例えば、「癌」参照）が挙げられる。非腫瘍性疾患には、非限定的に、以下のものが含まれる：不所望または異常な肥大、関節炎、リウマチ関節炎（ＲＡ）、乾癬、乾癬性プラーク、サルコイドーシス、アテローム性硬化症、アテローム性プラーク、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症などの増殖性網膜症、後水晶体線維形成症、血管新生緑内障、加齢性黄斑変性症など、糖尿病性黄斑浮腫、角膜新生血管、角膜移植片新生血管、角膜移植片拒絶反応、網膜／脈絡膜新生血管、角膜新生血管（ルベオーシス）、眼新生血管疾患、血管再狭窄、動静脈奇形（ＡＶＭ）、髄膜腫、血管腫、血管線維腫、甲状腺機能亢進症（グレーブ病を含む）、角膜などの組織移植、慢性炎症、肺炎、急性肺障害／ＡＲＤＳ、敗血症、原発性肺高血圧症、悪性肺水腫、脳浮腫（例えば、急性脳卒中／閉鎖性頭部外傷／外傷に伴うもの）、滑膜炎症、ＲＡにおけるパンヌス形成、骨化性筋炎、肥大性骨形成症、変形性関節症（ＯＡ）、難治性腹水、多嚢胞性卵巣疾患、子宮内膜症、サードスペース液性疾患（膵炎、コンパートメント症候群、熱傷、腸疾患）、子宮筋腫、早産、ＩＢＤ（クローン病、潰瘍性大腸炎）などの慢性炎症、腎移植片拒絶反応、炎症性腸疾患、ネフローゼ症候群、望ましくないまたは異常な組織塊の成長（非癌性）、血友病性関節症、肥厚性瘢痕、毛髪の成長阻害 オスラー・ウェーバー症候群、化膿性肉芽腫後水晶体線維形成症、強皮症、トラコーマ、血管の癒着、滑膜炎、皮膚炎、子癇前症、腹水、心嚢水（心膜炎に伴うものなど）、胸水。
本明細書において使用される用語「血管新生」は、既存の血管からの新たな血管、特に、限定されるものではないが、新たな腫瘍供給血管の成長に寄与する全てのＡｘｌ関与プロセスを指す。これらのプロセスとしては、複数の細胞イベント、例えば、血管内皮細胞の増殖、生存、遊走および出芽、周皮細胞の誘引および遊走ならびに血管安定化のための基底膜形成、血管灌流、または間質もしくは新生物細胞による血管新生因子の分泌が挙げられ、それらのプロセスは、Ａｘｌの非触媒または触媒活性、好ましくは、例として、Ａｘｌリン酸化および／またはＡｘｌ媒介シグナル伝達により刺激または媒介される。
本明細書において使用される用語「Ａｘｌ」は、特に示されない限り、任意の脊椎動物資源、例として、哺乳動物、例えば、霊長類（例えば、ヒト）およびげっ歯類（例えば、マウスおよびラット）からの任意のネイティブＡｘｌを指す。この用語は、「全長」のプロセシングを受けていないＡｘｌおよび細胞中でのプロセシングから生じるＡｘｌの任意の形態を包含する。この用語は、Ａｘｌの天然存在バリアント、例えば、スプライスバリアントまたはアレルバリアントも包含する。ヒトＡｘｌのアミノ酸配列は当分野において周知であり、公開データベース、例えば、ＧｅｎＢａｎｋから利用可能である。
本明細書において使用される用語「Ａｘｌ活性化」は、Ａｘｌ受容体の活性化、またはリン酸化を指す。一般に、Ａｘｌ活性化は、シグナル伝達（例えば、Ａｘｌまたは基質ポリペプチド中のＡｘｌ受容体リン酸化チロシン残基の細胞内キナーゼドメインにより引き起こされるもの）をもたらす。Ａｘｌ活性化は、目的のＡｘｌ受容体へのＡｘｌリガンド（Ｇａｓ６）結合により媒介され得る。ＡｘｌへのＧａｓ６結合は、Ａｘｌのキナーゼドメインを活性化させ、それによりＡｘｌ中のチロシン残基のリン酸化および／または追加の基質ポリペプチド中のチロシン残基のリン酸化をもたらし得る。
本明細書において使用される用語「Ａｘｌ媒介抗アポトーシス」は、ヒト細胞、好ましくは、限定されるものではないが、ヒト癌細胞を、プログラム細胞死（アポトーシス）から妨害する全てのＡｘｌ関与プロセスを指す。特にそれは、ヒト細胞、好ましくは、限定されるものではないが、ヒト癌細胞を、増殖因子離脱、低酸素、化学療法剤もしくは放射線への曝露、またはＦａｓ／Ａｐｏ－１受容体媒介シグナリングの開始を介するアポトーシスの誘導から妨害し、Ａｘｌの非触媒または触媒活性、好ましくは、例として、Ａｘｌリン酸化および／またはＡｘｌ媒介シグナル伝達により刺激または媒介されるプロセスを指す。
本明細書で使用される「結合」という用語は、抗原上の特定の構造（例えば、抗原決定基またはエピトープ）の存在に応じた相互作用を有する、抗体の可変領域またはＦｖと抗原との相互作用を指す。例えば、抗体の可変領域またはＦｖは、一般的にタンパク質というよりも、特定のタンパク質の構造を認識して、それに結合する。本明細書で使用される場合、「特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｉｎｄｉｎｇ）」または「特異的に結合する（ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ）」という用語は、抗体可変領域またはＦｖが、他のタンパク質とよりも特定の抗原と、頻繁に、迅速に、長い持続時間、および／または高い親和性で、結合または会合することを意味する。例えば、抗体の可変領域またはＦｖは、他の抗原に結合するよりも高い親和性で、結合活性（ａｖｉｄｉｔｙ）で、容易に、および／または長い持続時間、その抗原と特異的に結合する。別の例では、抗体の可変領域またはＦｖは、多反応性の天然抗体によって（すなわち、ヒトで天然に見られる様々な抗原に結合することが知られている天然の抗体によって）一般に認識される関連タンパク質または他の細胞表面タンパク質、あるいは抗原に対する親和性よりも実質的に高い親和性で、細胞表面タンパク質（抗原）に結合する。しかしながら、「特異的に結合する」は、別の抗原の排他的な結合または検出不可能な結合を必ずしも必要とせず、これは、「選択的結合」という用語によって意味される。一例において、抗原に結合する抗体可変領域またはＦｖ（または他の結合領域）の「特異的結合」は、抗体可変領域またはＦｖが、１００ｎＭ以下、例えば、５０ｎＭ以下、例えば、２０ｎＭ以下、例えば、１５ｎＭ以下、または１０ｎＭ以下、または５ｎＭ以下、２ｎＭ以下、または１ｎＭ以下の平衡定数（ＫＤ）で抗原に結合することを意味する。
本明細書で使用される「癌」および「癌性」という用語は、典型的には、無調節の細胞増殖／増殖を特徴とする哺乳動物における生理学的状態を指すかまたは説明する。癌の例としては、限定されるものではないが、癌腫、リンパ腫（例えば、ホジキンおよび非ホジキンリンパ腫）、芽細胞腫、肉腫、および白血病が挙げられる。かかる癌のより具体的な例としては、扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、腹膜癌、肝細胞癌、消化器癌、膵臓癌、神経膠腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝細胞腫、乳癌、結腸癌、大腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌、肝臓癌、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝癌、白血病および他のリンパ増殖性障害、ならびに様々な種類の頭頸部癌が挙げられる。
本明細書で使用される「細胞増殖性障害」および「増殖性障害」という用語は、ある程度の異常な細胞増殖に関連する障害を指す。一実施形態では、細胞増殖性障害は、癌である。
本明細書で使用される「化学療法剤」という用語は、癌の治療に有用な化学物質を指す。化学療法剤の例としては、チオテパおよびシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））などのアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファンなどのアルキルスルホネート；ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、ウレドーパなどのアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミドおよびトリメチロメラミンを含むエチレンイミンおよびメチルアメラミン；アセトゲニン（特にブラタシンおよびブラタシノン）；デルタ－９－テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標））；ベータラパコン；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトテシン（合成類似体トポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標））、ＣＰＴ－１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、アセチルカンプトテシン、スコポレクチン、および９－アミノカンプトテシンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシンおよびビゼレシン合成類似体を含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸；テニポシド；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体ＫＷ－２１８９およびＣＢ１－ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコディクチン；スポンジスタチン；クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベムビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムスチンなどのニトロソウレア；エンジイン抗生物質などの抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特にカリケアマイシンガンマ１ＩおよびカリケアマイシンオメガＩ１（例えば、Ｎｉｃｏｌａｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３－１８６（１９９４）を参照されたい）；経口α－４インテグリン阻害剤のＣＤＰ３２３；ダイネマイシンＡを含むダイネマイシン；エスペラミシン；ならびにネオカルジノスタチン発色団および関連する色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オートラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）、モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシン、ドキソルビシンＨＣｌリポソーム注射（ＤＯＸＩＬ（登録商標））、リポソームドキソルビシンＴＬＣ Ｄ－９９（ＭＹＯＣＥＴ（登録商標））、ペグリレイト化リポソームドキソルビシン（ＣＡＥＬＹＸ（登録商標）、およびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣなどのマイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；メトトレキサート、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））、テガフール（ＵＦＴＯＲＡＬ（登録商標））、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））、エポチロン、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）などの代謝拮抗剤；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサートなどの葉酸類似体；フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどのプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンなどのピリミジン類似体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなどのアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗副腎剤；フロリン酸などの葉酸補充剤；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキサート；デフォファミン；デメコルシン；ジアジコン；エルホルミチン；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン；メイタンシンおよびアンサマイトシンなどのメイタンシノイド類；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖複合体（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｒｅｇ．）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２’－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特に、Ｔ－２トキシン、ベラクリンＡ、ロリジンＡ、アンギジン）；ウレタン；ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標））、パクリタキセルのアルブミン改変ナノ粒子製剤（ＡＢＲＡＸＡＮＥ（商標））、およびドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標））；クロランブシル；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチン、オキサリプラチン（例えば、ＥＬＯＸＡＴＩＮ（登録商標））、およびカルボプラチンなどの白金剤；ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ（登録商標））、ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））、ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））、ビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））などのチューブリン重合による微小管の形成を防ぐビンカ；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ロイコボリン；ノバントロン；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロネート；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦ（登録商標））；ベキサロテン（ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（登録商標））を含むレチノイン酸などのレチノイド；クロドロネート（例えば、ＢＯＮＥＦＯＳ（登録商標）またはＯＳＴＡＣ（登録商標））、エチドロネート（ＤＩＤＲＯＣＡＬ（登録商標））、ＮＥ－５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート（ＺＯＭＥＴＡ（登録商標））、アレンドロネート（ＦＯＳＡＭＡＸ（登録商標））、パミドロネート（ＡＲＥＤＩＡ（登録商標））、チルドロネート（ＳＫＥＬＩＤ（登録商標））などのビスホスホネート）、またはリセドロネート（ＡＣＴＯＮＥＬ（登録商標））；トロキサシタビン（１，３－ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、例えば、ＰＫＣ－α、Ｒａｆ、Ｈ－Ｒａｓ、および上皮増殖因子受容体（ＥＧＦ－Ｒ）などの異常な細胞増殖に関与するシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの；ＴＨＥＲＡＴＯＰＥ（登録商標）ワクチンおよび遺伝子治療ワクチンなどのワクチン、例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、およびＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチン；トポイソメラーゼ１阻害剤（例えば、ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標））；ｒｍＲＨ（例えば、ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標））；ＢＡＹ４３９００６（ソラフェニブ、Ｂａｙｅｒ）；ＳＵ－１１２４８（スニチニブ、ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ）；ペリフォシン、ＣＯＸ－２阻害剤（例えば、セレコキシブまたはエトリコキシブ）、プロテオソーム阻害剤（例えば、ＰＳ３４１）；ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標））；ＣＣＩ－７７９；ティピファルニブ（Ｒ１１５７７）；オラフェニブ、ＡＢＴ５１０；オブリメルセンナトリウム（ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（登録商標））などのＢｃｌ－２阻害剤；ピクサントロン；ＥＧＦＲ阻害剤（以下の定義を参照されたい）；チロシンキナーゼ阻害剤（以下の定義を参照されたい）；ラパマイシン（シロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標））などのセリン・スレオニンキナーゼ阻害剤；ロナファルニブ（ＳＣＨ６６３６、ＳＡＲＡＳＡＲ（商標））などのファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤；および上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体；ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾロンの併用療法の略語）などの上記の２つ以上の組み合わせ；ならびにＦＯＬＦＯＸ（５－ＦＵおよびロイコボリンと組み合わせたオキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（商標））による治療レジメンの略語）が挙げられる。
本明細書で定義される化学療法剤としては、癌の増殖を促進し得るホルモンの効果を調節、低減、遮断、または阻害するように作用する「抗ホルモン剤」または「内分泌治療剤」が挙げられる。それらは、それら自体がホルモンであってもよく、限定されないが、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標））、４－ヒドロキシタモキシフェン、トレミフェン（ＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標））、イドキシフェン、ドロロキシフェン、ラロキシフェン（ＥＶＩＳＴＡ（登録商標）、トリオキシフェン、ケオキシフェン、およびＳＥＲＭ３などの選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）、を含む混合アゴニスト／アンタゴニストプロファイルを有する抗エストロゲン；フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標））およびＥＭ８００（エストロゲン受容体（ＥＲ）の二量体化を遮断し、ＤＮＡ結合を阻害し、ＥＲ代謝回転を増加させ、かつ／またはＥＲレベルを抑制し得る薬剤など）のアゴニスト特性のない純粋な抗エストロゲン；ホルメスタンおよびエキセメスタン（ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標））などのステロイド性アロマターゼ阻害剤を含むアロマターゼ阻害剤、ならびにアナストラゾール（ＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標））、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標））およびアミノグルテチミドなどの非ステロイド性アロマターゼ阻害剤、ならびにボロゾール（ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標））、酢酸メゲストロール（ＭＥＧＡＳＥ（登録商標））、ファドロゾール、および４（５）－イミダゾールを含む他のアロマターゼ阻害剤；リュープロリド（ＬＵＰＲＯＮ（登録商標）およびＥＬＩＧＡＲＤ（登録商標））、ゴセレリン、ブセレリン、およびトリプトレリンを含む黄体形成ホルモン放出ホルモンアゴニスト；酢酸メゲストロールおよび酢酸メドロキシプロゲステロンなどのプロゲスチン、ジエチルスチルベストロールおよびプレマリンなどのエストロゲン、フルオキシメステロンド、全トランスレチオン酸、ならびにフェンレチニドなどのアンドロゲン／レチノイドを含む性ステロイド；オナプリストン；抗プロゲステロン；エストロゲン受容体ダウンレギュレーター（ＥＲＤ）；フルタミド、ニルタミド、およびビカルタミドなどの抗アンドロゲン；ならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体；ならびに上記の２つ以上の組み合わせ、が含まれる。
本明細書で使用される「キメラ」抗体という用語は、重鎖および／または軽鎖の一部が特定の供給源または種に由来し、重鎖および／または軽鎖の残りが異なる供給源または種に由来する抗体を指す。
本明細書において使用される用語、抗体の「クラス」は、その重鎖により保有される定常ドメインまたは定常領域のタイプを指す。５つの主要な抗体のクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭが存在し、これらのいくつかはサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２にさらに分類することができる。異なる免疫グロブリンのクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、およびμと呼ばれる。
本明細書において使用される用語「条件的に活性な抗体」および「条件的に活性な抗体断片」は、腫瘍微小環境中の条件の値において、非腫瘍微小環境中の同一条件の異なる値と比較して活性である抗体または抗体断片を指す。非腫瘍微小環境中の条件と比較する場合、腫瘍微小環境中の条件としては、より低いｐＨ、より高い濃度の乳酸塩および／またはピルビン酸塩、低酸素、より低い濃度のグルコース、ならびにわずかに高い温度を挙げることができる。例えば、一実施形態において、条件的に活性な抗体または抗体断片は、正常な体温において実質的に不活性であり得るが、腫瘍微小環境中に見出すことができるより高温において活性であり得る。さらに別の実施形態において、条件的に活性な抗体または抗体断片は、腫瘍微小環境中で存在し得る低含酸素環境よりも正常な含酸素血液中で低活性であり得る。当業者に公知の腫瘍微小環境中の他の条件が存在し、それらは抗Ａｘｌ抗体または抗体断片がその条件の異なる値において異なる活性を有することを誘発し得る本発明における条件としての使用に選択することもできる。
本明細書において使用される用語「構成的」は、例えば、Ａｘｌ活性に適用される場合、リガンドの存在にも他の活性化分子の存在にも依存的でない受容体キナーゼの連続的なシグナリング活性を指す。受容体キナーゼの性質に応じて、活性の全ては構成的であり得、または受容体の活性は、他の分子（例えば、リガンド）の結合によりさらに活性化され得る。受容体キナーゼの活性化をもたらす細胞イベントは、当業者の間で周知である。例えば、活性化としては、より高次の受容体複合体へのオリゴマー化、例えば、二量体化、三量体化などを挙げることができる。複合体は、単一種のタンパク質、すなわち、ホモ複合体を含み得る。あるいは、複合体は、少なくとも２つの異なるタンパク質種、すなわち、ヘテロ複合体を含み得る。複合体形成は、例えば、細胞の表面上の受容体の正常または突然変異形態の過剰発現により引き起こされ得る。複合体形成は、受容体中の１つ以上の特異的突然変異によっても引き起こされ得る。
本明細書で使用される「細胞分裂阻害剤」という用語は、インビトロまたはインビボのいずれかで細胞の増殖を停止させる化合物または組成物を指す。したがって、細胞分裂阻害剤は、Ｓ期の細胞の割合を著しく低減するものであり得る。細胞分裂阻害剤のさらなる例としては、Ｇ０／Ｇ１停止またはＭ期停止を誘導することによって、細胞周期進行を遮断する薬剤が挙げられる。ヒト化抗Ｈｅｒ２抗体であるトラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））がＧ０／Ｇ１停止を誘導する細胞分裂阻害剤の一例である。古典的なＭ期遮断剤としては、ビンカ（ビンクリスチンおよびビンブラスチン）、タキサン、ならびにトポイソメラーゼＩＩ阻害剤（ドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシド、およびブレオマイシンなど）が挙げられる。Ｇ１を停止する特定の薬剤、例えば、タモキシフェン、プレドニゾン、ダカルバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキサート、５－フルオロウラシル、およびａｒａ－ＣなどのＤＮＡアルキル化剤も、Ｓ期停止に溢流する。さらなる情報は、Ｍｅｎｄｅｌｓｏｈｎ ａｎｄ Ｉｓｒａｅｌ，ｅｄｓ．，Ｔｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ，Ｃｈａｐｔｅｒ １，ｅｎｔｉｔｌｅｄ”Ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ，ａｎｄ ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ ｄｒｕｇｓ”ｂｙ Ｍｕｒａｋａｍｉ ｅｔ ａｌ．（Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，１９９５）、例えば１３頁、に見出すことができる。タキサン（パクリタキセルおよびドセタキセル）は、両方ともイチイ樹に由来する抗癌剤である。ヨーロッパイチイ由来のドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ）は、パクリタキセルの半合成類似体（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）である。パクリタキセルおよびドセタキセルは、チューブリン二量体からの微小管の構築を促進し、脱重合を妨げることによって微小管を安定化させ、細胞内の有糸分裂の阻害をもたらす。
本明細書で使用される「細胞傷害剤」という用語は、細胞機能を阻害もしくは阻止する、かつ／または細胞死もしくは破壊を引き起こす物質を指す。細胞傷害剤としては、限定されないが、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、およびＬｕの放射性同位体）、化学療法剤または化学療法薬（例えば、メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシン、または他のインターカレート剤）、増殖阻害剤、核酸分解酵素などの酵素およびその断片、抗生物質、細菌、真菌、植物または動物起源の小分子毒素または酵素活性毒素などの毒素で、その断片および／またはバリアントを含む、ならびに以下に開示される様々な抗腫瘍剤または抗癌剤が挙げられる。
本明細書で使用される「ダイアボディ」という用語は、２つの抗原結合部位を有する小さな抗体断片を指し、この断片は、同じポリペプチド鎖（ＶＨ－ＶＬ）の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に結合した重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。同じ鎖上の２つのドメイン間の対合を可能にするには短すぎるリンカーを使用することによって、ドメインは別の鎖の相補的なドメインと対合し、２つの抗原結合部位を生成するよう強制される。
本明細書において使用される用語「検出可能に標識する」は、物理的または化学的手段による直接または間接的のいずれかの検出または計測が試料中のＣＴＣの存在を示す任意の物質を指す。有用な検出可能標識の代表的な例としては、限定されるものではないが、以下のもの：光吸収、蛍光、反射、光散乱、燐光、または発光特性に基づき直接または間接的に検出可能な分子またはイオン；放射性により検出可能な分子またはイオン；核磁気共鳴または常磁性により検出可能な分子またはイオンが挙げられる。例えば、光吸収性または蛍光に基づいて間接的に検出可能な分子群の中には、適切な基質を、例えば、非光吸収性分子から光吸収性分子に、または非蛍光性分子から蛍光性分子に変換させる様々な酵素が含まれる。
本明細書において使用される用語「診断」は、疾患または障害に対する対象の感受性の測定、対象が疾患または障害を現在罹患しているか否かに関する決定、疾患または障害を罹患している対象の予後診断（例えば、前転移または転移癌性状態、癌の病期、または治療法に対する癌の応答性の同定）、および治療方針（例えば、治療法の効果または効力に関する情報を提供するための対象病態のモニタリング）を指す。一部の実施形態では、本発明の診断方法は、早期癌の検出において特に有用である。
本明細書で使用される「診断剤」という用語は、直接的または間接的に検出することができ、診断目的で使用される分子を指す。診断剤は、対象または試料に投与されてもよい。診断剤は、それ自体が提供され得るか、または条件的に活性な抗体などのビヒクルにコンジュゲートされ得る。
本明細書で使用される「エフェクター機能」という用語は、抗体のアイソタイプによって異なる抗体のＦｃ領域に起因する、それらの生物学的活性を指す。抗体のエフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御、およびＢ細胞活性化が挙げられる。
本明細書において使用される用語、薬剤、例えば、医薬製剤の「有効量」は、投与量において、および必要な期間にわたり、所望の治療または予防結果を達成するために有効な量を指す。
本明細書で使用される「Ｆｃ領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部を含有する免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。この用語は、ネイティブ配列のＦｃ領域およびバリアントのＦｃ領域を含む。一実施形態では、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６またはＰｒｏ２３０から重鎖のカルボキシ末端まで伸びる。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端のリジン（Ｌｙｓ４４７）は存在してもしなくてもよい。本明細書で特に明記しない限り、Ｆｃ領域または定常領域におけるアミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９９１に記載されているように、ＥＵ付番システム（ＥＵインデックスとも呼ばれる）に従っている。
本明細書において使用される用語「フレームワーク」または「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲまたは重鎖中のＨ１～３および軽鎖中のＬ１～３）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般に、４つのＦＲドメイン：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４からなる。したがって、ＨＶＲおよびＦＲ配列は、一般に、ＶＨ（またはＶＬ）中の以下の配列：ＦＲ１－Ｈ１（Ｌ１）－ＦＲ２－Ｈ２（Ｌ２）－ＦＲ３－Ｈ３（Ｌ３）－ＦＲ４に出現する。
「完全長抗体」、「無傷抗体」、または「全抗体」という用語は、抗原結合可変領域（ＶＨまたはＶＬ）、ならびに軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）および重鎖定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３）を含む抗体を指す。定常ドメインは、ネイティブ配列の定常ドメイン（例えば、ヒトネイティブ配列の定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列バリアントであり得る。それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、完全長抗体を、異なる「クラス」に割り当てることができる。完全長抗体には、５つの主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭがあり、これらのうちのいくつかは、「サブクラス」（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、およびＩｇＡ２にさらに分割され得る。異なるクラスの抗体に対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、およびμと呼ばれる。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造および三次元構成は、よく知られている。
本明細書で使用される「宿主細胞」、「宿主細胞株」、および「宿主細胞培養物」という用語は、互換的に使用され、外因性の核酸が導入された細胞（かかる細胞の後代を含む）を指す。宿主細胞には、「形質転換体」および「形質転換細胞」が含まれ、継代回数にかかわらず、初代形質転換細胞およびそれに由来する後代が含まれる。後代は、核酸含有量が親細胞と完全に同一でなくてよく、突然変異を含有し得る。最初に形質転換された細胞においてスクリーニングまたは選択されたものと同じ機能または生物学的活性を有する変異体後代が本明細書に含まれる。
本明細書で使用される「ヒト抗体」という用語は、ヒトもしくはヒト細胞によって産生される抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列、またはヒト抗体のレパートリーもしくは他のヒト抗体のコード配列を利用する非ヒト源に由来するアミノ酸配列を有する抗体である。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を明確に除外する。
本明細書において使用される用語「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択において、最も一般に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからのものである。一般に、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１－３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ Ｍｄ．（１９９１）、ｖｏｌｓ．１－３におけるようなサブグループである。一実施形態において、ＶＬについてのサブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．、前掲におけるようなサブグループカッパＩである。一実施形態において、ＶＨについてのサブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．、前掲におけるようなサブグループＩＩＩである。
本明細書において使用される用語「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲからのアミノ酸残基およびヒトＦＲからのアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。特定の実施形態において、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、そのドメイン中ではＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全てまたは実質的に全てが非ヒト抗体のものに対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てがヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は、任意選択的に、ヒト抗体に由来する抗体の定常領域の少なくとも一部を含み得る。抗体、例えば、非ヒト抗体の「ヒト化形態」は、ヒト化を経た抗体を指す。
本明細書において使用される用語「超可変領域」または「ＨＶＲ」は、配列が超可変的であり、および／または構造的に定義されたループ（「超可変ループ」）を形成する抗体可変ドメインの領域のそれぞれを指す。一般に、ネイティブ四鎖抗体は、６つのＨＶＲ；ＶＨ中の３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、およびＶＬ中の３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）を含む。ＨＶＲは一般に、超可変ループからの、および／または「相補性決定領域」（ＣＤＲ）からのアミノ酸残基を含み、後者は配列変動性が最も高く、および／または抗原認識に関与する。例示的な超可変ループは、アミノ酸残基２６～３２（Ｌ１）、５０～５２（Ｌ２）、９１～９６（Ｌ３）、２６～３２（Ｈ１）、５３～５５（Ｈ２）、および９６～１０１（Ｈ３）において生じる（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、ｖｏｌ．１９６，ｐｐ．９０１－９１７ １９８７）。例示的なＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、およびＣＤＲ－Ｈ３）は、Ｌ１のアミノ酸残基２４～３４、Ｌ２のアミノ酸残基５０～５６、Ｌ３のアミノ酸残基８９～９７、Ｈ１のアミノ酸残基３１～３５Ｂ、Ｈ２のアミノ酸残基５０～６５、およびＨ３のアミノ酸残基９５～１０２に生じる（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．， Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， ５ｔｈ Ｅｄ． Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， Ｍｄ．１９９１）。ＶＨ中のＣＤＲ１を除き、ＣＤＲは一般に、超可変ループを形成するアミノ酸残基を含む。ＣＤＲは、抗原と接触する残基である「特異性決定残基」、または「ＳＤＲ」も含む。ＳＤＲは、短縮型ＣＤＲ、またはａ－ＣＤＲと呼ばれるＣＤＲの領域内に含有される。例示的なａ－ＣＤＲ（ａ－ＣＤＲ－Ｌ１、ａ－ＣＤＲ－Ｌ２、ａ－ＣＤＲ－Ｌ３、ａ－ＣＤＲ－Ｈ１、ａ－ＣＤＲ－Ｈ２、ａ－ＣＤＲ－Ｈ３）は、Ｌ１のアミノ酸残基３１－３４、Ｌ２のアミノ酸残基５０－５５、Ｌ３のアミノ酸残基８９－９６、Ｈ１のアミノ酸残基３１－３５Ｂ、Ｈ２のアミノ酸残基５０－５８、およびＨ３のアミノ酸残基９５－１０２において生じる（Ｓｅｅ Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ， Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．， ｖｏｌ．１３， ｐｐ．１６１９－１６３３， ２００８）。特に示されない限り、可変ドメイン中のＨＶＲ残基および他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、本明細書においてＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．、前掲に従って番号付けされる。
本明細書で使用される「免疫コンジュゲート」という用語は、限定されないが、細胞傷害剤を含む、１つ以上の異種分子にコンジュゲートされる抗体である。
本明細書で使用される「個体」または「対象」という用語は、哺乳動物を指す。哺乳動物には、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、およびウマ）、霊長類（例えば、ヒト、およびサルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、ならびにげっ歯類（例えば、マウスおよびラット）が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、個体または対象は、ヒトである。
「有害事象」（ＡＥ）（有害体験ともいう）とは、医薬品の使用に一時的に関連する好ましくない意図しない徴候（検査値異常など）、症状、疾病を意味し、因果関係の判断を意味するものではない。ＡＥは、薬剤のあらゆる使用（例えば、適応外使用、他の薬剤との併用）、および過剰摂取を含むあらゆる投与経路、製剤、用量で発生し得る。ＡＥ は、以下のいずれかの結果をもたらす場合、「重大」とみなされる：
－ 死亡（基礎疾患による死亡を除く）
－ 生命を脅かすものである
－ 入院を必要とする、または既存の入院を延長する。
－ 通常の生活機能を遂行する能力の持続的または重大な不能または実質的な障害
－ 先天性異常／先天的障害
－ 重要な医学的事象であるかー 死亡に至らず、生命を脅かすこともなく、入院を必要としない重要な医学的事象は、適切な医学的判断に基づき、患者を危険にさらし、この定義に記載された結果のいずれかを防ぐために医学的または外科的介入を必要とする場合に、重篤と見なされる。
本明細書で使用する「阻害する」又は「の阻害」という用語は、測定可能な量だけ減少させること、又は完全に防止することを意味する。
本明細書で使用される「細胞増殖または増殖の阻害」という用語は、細胞の増殖（ｇｒｏｗｔｈ）または増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）を、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％減少させることを意味し、細胞死を誘導することを含む。
本明細書で使用される「単離された」抗体という用語は、その天然の環境の成分から分離されたものである。一部の実施形態において、抗体は、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）またはクロマトグラフィー（例えば、イオン交換または逆相ＨＰＬＣ）により測定して９５％または９９％超の純度まで精製される。抗体純度の評価方法の概説としては、例えば、Ｆｌａｔｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ，ｖｏｌ．８４８，ｐｐ．７９－８７，２００７を参照されたい。
本明細書において使用される用語「単離」核酸は、その天然環境の構成成分から分離された核酸分子を指す。単離核酸は、通常核酸分子を含有する細胞中に含有される核酸分子を含むが、その核酸分子は、染色体外に、またはその天然の染色体位置とは異なる染色体位置に存在する。
本明細書において使用される用語「抗Ａｘｌ抗体をコードする単離核酸」は、抗体重鎖および軽鎖（またはそれらの断片）をコードする１つ以上の核酸分子を指し、単一のベクターまたは別個のベクター中のそのような核酸分子、および宿主細胞中の１つ以上の位置に存在するそのような核酸分子を含む。
本明細書において使用される用語「リガンド非依存的」は、例えば、受容体シグナリング活性に適用される場合、リガンドの存在に依存的でないシグナリング活性を指す。リガンド非依存的キナーゼ活性を有する受容体は、必ずしも、キナーゼ活性の追加の活性化を産生するためのその受容体へのリガンドの結合を除外しない。
本明細書において使用される用語「転移」は、癌細胞が原発腫瘍から分散し、リンパおよび／または血管中に浸透し、血流を介して循環し、体内の他箇所の正常組織中の遠位病巣中で成長する（転移）ことを支持する全てのＡｘｌ関与プロセスを指す。特に、これは、転移の基盤をなし、Ａｘｌの非触媒または触媒活性、好ましくは、例として、Ａｘｌリン酸化および／またはＡｘｌ媒介シグナル伝達により刺激または媒介される腫瘍細胞の細胞イベント、例えば、増殖、遊走、足場非依存性、アポトーシスの回避、または血管新生因子の分泌を指す。
本明細書で使用される「微小環境」という用語は、組織または身体の他の領域とは、不変的または一時的、物理的または化学的な違いを有する組織または身体の任意の部分または領域を意味する。腫瘍の場合、本明細書で使用される「腫瘍微小環境」という用語は、腫瘍が存在する環境を指し、腫瘍内の非細胞領域、および腫瘍組織の直外であるが癌細胞自体の細胞内区画には関係しない領域である。腫瘍および腫瘍微小環境は、密接に関連し、常に相互作用する。腫瘍はその微小環境を変化させることができ、微小環境は腫瘍の増殖および拡散に影響を及ぼし得る。典型的には、腫瘍微小環境は、５．８～７．０の範囲、より一般には、６．２～６．８の範囲、最も一般には、６．４～６．８の範囲の低ｐＨを有する。他方で、正常な生理学的ｐＨは、典型的には７．２～７．８の範囲である。腫瘍微小環境はまた、血漿と比較して、グルコースおよび他の栄養素の濃度が低いが、乳酸の濃度が高いことも知られている。さらに、腫瘍微小環境は、正常生理学的温度よりも０．３～１℃高い温度を有し得る。腫瘍微小環境は、Ｇｉｌｌｉｅｓ ｅｔ ａｌ．、"ＭＲＩ ｏｆ ｔｈｅ Ｔｕｍｏｒ Ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ，"Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ Ｉｍａｇｉｎｇ，ｖｏｌ．１６，ｐｐ．４３０－４５０，２００２に考察されている。「非腫瘍微小環境」という用語は、腫瘍以外の部位における微小環境を指す。
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、その集団を含む個々の抗体は同一であり、かつ／または同じエピトープに結合するが、例えば、天然に存在する変異を含有するか、またはモノクローナル抗体調製物の産生中に生じる可能性のあるバリアント抗体は除外され、かかるバリアントは概して少量存在している。典型的には異なる決定基（エピトープ）に対して特異的な異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して特異的である。したがって、「モノクローナル」という修飾語は、実質的に均質な抗体の集団から得られるような抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものとして解釈されるべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、様々な技法によって作製することができ、限定されないが、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、およびヒト免疫グロブリン遺伝子座のすべてまたは一部を含有するトランスジェニック動物を利用する方法を含み、モノクローナル抗体を作製するためのかかる方法および他の例示的な方法が、本明細書に記載される。
本明細書で使用される「ネイキッド抗体（ｎａｋｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」という用語は、異種部分（例えば、細胞傷害性部分）または放射標識にコンジュゲートされていない抗体を指す。ネイキッド抗体は、医薬製剤に存在してもよい。
本明細書において使用される用語「ネイティブ抗体」は、変動する構造を有する天然存在の免疫グロブリン分子を指す。例えば、ネイティブＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合している２本の同一軽鎖および２本の同一重鎖から構成される約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端にかけ、それぞれの重鎖は、可変重鎖ドメインまたは重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）と、それに続く３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３）を有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端にかけ、それぞれの軽鎖は、可変軽鎖ドメインまたは軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）と、それに続く定常軽鎖（ＣＬ）ドメインを有する。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づきカッパ（κ）およびラムダ（λ）と呼ばれる２つのタイプの一方に割り当てることができる。
本明細書で使用される「添付文書」という用語は、治療製品の市販のパッケージに習慣的に含まれる説明書を指し、かかる治療製品の使用に関する適応症、使用法、投与量、投与法、併用療法、禁忌、および／または警告についての情報を含む。
本明細書で使用される参照ポリペプチド配列に関して「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」という用語は、配列を整列させ、必要に応じて最大のパーセント配列同一性を達成するようにギャップを導入し、任意の保存的置換を配列同一性の一部として考慮せず、参照ポリペプチド配列のアミノ酸残基と同一である候補配列のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のための整列は、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して、当該技術分野の技術範囲内の様々な方法で達成することができる。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大の整列を達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列を整列するための適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書における目的の場合、アミノ酸配列同一性のパーセント値は、配列比較のコンピュータプログラムであるＡＬＩＧＮ－２を使用して生成される。ＡＬＩＧＮ－２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって作成され、ソースコードは、米国著作権局（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．，２０５５９）にユーザ文書とともに提出されており、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７のもとで登録されている。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆ．から公的に入手可能であるか、またはソースコードからコンパイルされ得る。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ Ｖ４．０Ｄを含むＵＮＩＸオペレーティングシステムで使用するには、コンパイルする必要がある。すべての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ－２プログラムによって設定され、変化しない。
ＡＬＩＧＮ－２がアミノ酸配列比較に用いられる状況では、所与のアミノ酸配列Ｂと、それとの、またはそれに対する、所与のアミノ酸配列Ａのアミノ酸配列同一性％（代替的に、所与のアミノ酸配列Ｂと、それとの、またはそれに対する、特定のアミノ酸配列同一性％を有する、またはそれを含む所与のアミノ酸配列Ａ、と表現することもできる）は、以下のように計算される：
１００ ＊ （Ｘ／Ｙ）
（式中、Ｘは、配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ－２によりＡおよびＢのそのプログラムのアラインメントにおいて同一マッチとしてスコアリングされたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂ中のアミノ酸残基の総数である）。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、Ｂに対するＡの％アミノ酸配列同一性は、Ａに対するＢの％アミノ酸配列同一性と等しくないことが理解されるであろう。特に明記しない限り、本明細書で使用されるすべての％アミノ酸配列同一性値は、ＡＬＩＧＮ－２コンピュータプログラムを使用して、前項に記載されているように得られる。
本明細書で使用される「医薬製剤」という用語は、その中に含まれる活性成分の生物学的活性を有効にするような形態であり、製剤が投与される対象に対して許容されない毒性のある追加の成分を含まない製剤を指す。
本明細書で使用される「薬学的に許容される担体」という用語は、対象に対して無毒である活性成分以外の医薬製剤中の成分を指す。薬学的に許容される担体としては、限定されないが、緩衝剤、賦形剤、安定剤、または防腐剤が挙げられる。
本明細書で使用される「精製された」および「単離された」という用語は、本発明による抗体またはヌクレオチド配列を指し、示された分子が、同じ種類の他の生体高分子の実質的な不在下で、存在することを指す。本明細書で使用される「精製された」という用語は、好ましくは、同じ種類の生体高分子の少なくとも７５重量％、より好ましくは、少なくとも８５重量％、さらにより好ましくは、９５重量％、最も好ましくは、少なくとも９８重量％が存在することを意味する。特定のポリペプチドをコードする「単離された」核酸分子は、ポリペプチドをコードしない他の核酸分子を実質的に含まない核酸分子を指すが、分子は、組成物の基本的特徴に有害な影響を与えないいくつかの追加の塩基または部分を含み得る。
本明細書で使用される「組換え抗体」という用語は、抗体をコードする核酸を含む組換え宿主細胞によって発現される抗体（例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体もしくはヒト抗体、またはその抗原結合断片）を指す。組換え抗体を産生するための「宿主細胞」の例としては、以下のものが挙げられる。組換え抗体を産生するための「宿主細胞」の例としては、（１）哺乳動物細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、ＣＯＳ、骨髄腫細胞（Ｙ０細胞およびＮＳ０細胞を含む）、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）、Ｈｅｌａ細胞およびＶｅｒｏ細胞、（２）昆虫細胞、例えば、ｓｆ９、ｓｆ２１およびＴｎ５、（３）植物細胞、例えば、ニコチアナ属に属する植物（例えば、Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ）；（４）酵母細胞、例えば、サッカロマイセス属（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）またはアスペルギルス属（例えば、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）に属するもの、（５）細菌細胞、例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ細胞またはＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ細胞など、が挙げられる。
用語「治療的有効量」の本発明の抗体または抗体断片は、任意の医学的治療に適用可能な妥当な利益／リスク比において疾患または疾病を治療するために十分な量の抗体または抗体断片を意味する。しかしながら、本発明の抗体または抗体断片および組成物の総１日使用量は、正当な医学的判断の範囲内で担当医により決定されることが理解される。任意の特定の患者に対する特定の治療有効用量のレベルは、様々な要因に依存し、治療される障害および障害の重症度、使用される特定の抗体または抗体断片の活性、使用される特定の組成物、患者の年齢、体重、全般的な健康、性別、および食生活、使用される特定の抗体または抗体断片の投与時間、投与経路、および排泄率、治療期間、使用される特定の抗体と組み合わせてまたは同時に使用される薬物、ならびに医療分野で既知の同様の要因が含まれるであろう。例えば、所望の治療効果を達成するのに必要なレベルよりも低いレベルで化合物の投与を開始し、所望の効果が達成されるまで徐々に投与量を増加させることは、当該技術分野で既知である。
本明細書で使用される「単鎖Ｆｖ」（「ｓｃＦｖ」）という用語は、共有結合されたＶＨ：：ＶＬヘテロ二量体であり、これは通常、ペプチドでコードされたリンカーによって連結された遺伝子をコードする、ＶＨおよびＶＬを含む遺伝子融合から発現される。「ｄｓＦｖ」は、ジスルフィド結合によって安定化されたＶＨ：：ＶＬヘテロ二量体である。二価および多価の抗体断片は、一価ｓｃＦｖの会合によって自発的に形成され得るか、またはペプチドリンカーで一価ｓｃＦｖを結合することによって生成され得る（二価ｓｃ（Ｆｖ）２など）。
本明細書で使用される「治療」、「治療する」、または「治療すること」という用語は、治療される個体の自然経過を改変する試みにおける臨床介入を指し、予防のために、または臨床病理の過程でのいずれかで行うことができる。治療の望ましい効果には、疾患の発生または再発の予防、症状の軽減、疾患の任意の直接的または間接的な病理学的結果の減少、転移の予防、疾患進行速度の低減、疾患状態の寛解または緩和、ならびに寛解または予後の改善が含まれるが、これらに限定されない。一部の実施形態において、本発明の抗体または抗体断片は、疾患の発生を遅延させ、または疾患の進行を減速させるために使用される。特定の実施形態において、本発明の抗体または抗体断片は、腫瘍増殖の発生または再発の防止、腫瘍の進行または退行に関連する症状の緩和、癌に関連する直接的または間接的な病理学的結果の減少、腫瘍転移の防止、腫瘍退行の増強、腫瘍進行の減少または阻害、および寛解または予後の改善の誘導に使用される。
本明細書で使用される「腫瘍」という用語は、悪性または良性にかかわらず、すべての腫瘍細胞増殖および増殖、ならびにすべての前癌性および癌性細胞および組織を指す。「癌」、「癌性」、「細胞増殖性障害」、「増殖性障害」、および「腫瘍」という用語は、本明細書で言及されるように互いに排他的ではない。
本明細書で使用される「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、抗体の抗原への結合に関与する抗体の重鎖または軽鎖のドメインを指す。ネイティブ抗体の重鎖および軽鎖の可変ドメイン（それぞれ、ＶＨおよびＶＬ）は一般に、それぞれのドメインが４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）および３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む類似の構造を有する（例えば、Ｋｉｎｄｔ ｅｔ ａｌ．Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ ｅｄ．、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．、ｐａｇｅ ９１（２００７）参照）。単一のＶＨまたはＶＬドメインは、抗原結合の特異性を付与するのに十分であり得る。さらに、特定の抗原に結合する抗体または抗体断片は、その抗原に結合する抗体からのＶＨまたはＶＬドメインを使用して単離してそれぞれ相補的なＶＬまたはＶＨドメインのライブラリーをスクリーニングすることができる。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，ｖｏｌ．１５０，ｐｐ．８８０－８８７，１９９３、Ｃｌａｒｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，ｖｏｌ．３５２，ｐｐ．６２４－６２８，１９９１を参照されたい。
本明細書で使用される「ベクター」という用語は、それに連結された別の核酸を増殖させることができる核酸分子を指す。この用語は、自己複製核酸構造としてのベクター、ならびにそれが導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターを含む。特定のベクターは、それらが作動可能に連結された核酸の発現を誘導することができる。かかるベクターは、本明細書において「発現ベクター」と称される。
（詳細な記載）
例示的な目的で、本発明の原理が、様々な例示的な実施形態を参照することによって説明される。本発明のある特定の実施形態が本明細書に具体的に説明されるが、当業者は、同じ原理が他のシステムおよび方法に同等に適用可能であり、それに使用され得ることを容易に理解するであろう。本発明の開示される実施形態を詳細に説明する前に、本発明は、その適用において、示される任意の特定の実施形態の詳細に限定されないことを理解されたい。加えて、本明細書で使用される専門用語は、説明を目的とし、限定を目的とするものではない。さらに、特定の方法は、特定の順序で本明細書に提示されるステップを参照して説明されるが、多くの場合、これらのステップは、当業者によって理解され得るように任意の順序で実行することができ、したがって、新規の方法は、本明細書に開示されるステップの特定の配置に限定されない。
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈により明らかにそうではないと指示されない限り、複数の参照を含むことに留意されたい。さらに、用語「ａ」（または「ａｎ」）、「１つ以上」、および「少なくとも１つ」は、本明細書において互換的に使用され得る。「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、および「から構築される（ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ｆｒｏｍ）」という用語も互換的に使用され得る。
別段の指示がない限り、本明細書および特許請求の範囲で使用される成分の量、分子量などの特性、パーセント、比率、反応条件などを表すすべての数は、「約」という用語が存在するか否かにかかわらず、すべての事例において「約」という用語によって修飾されるものとして理解されるべきである。したがって、そうでないと指示されない限り、本明細書および特許請求の範囲に記載される数値パラメータは、本開示によって取得されようとする所望の特性に応じて変化し得る近似値である。少なくとも、特許請求の範囲への均等論の適用を限定する試みとしてではなく、各数値パラメータは、少なくとも報告された有効桁数に照らして、かつ通常の丸め手法を適用することによって、解釈されるべきである。本開示の広範な範囲を述べた数値範囲およびパラメータは近似値であるにもかかわらず、具体例に示された数値は、可能な限り正確に報告される。しかしながら、いずれの数値も、それぞれの試験測定で見出された標準偏差から必然的に起因する特定の誤差を本質的に含んでいる。
本明細書に開示される各成分、化合物、置換基、またはパラメータは、単独での使用、または本明細書に開示される各々の他の成分、化合物、置換基、またはパラメータのうちの１つ以上と組み合わせての使用について開示されているものとして解釈されるべきであることを理解されたい。
また、本明細書に開示される各成分、化合物、置換基、またはパラメータの各量／値または各量／値の範囲は、本明細書に開示される任意の他の成分、化合物、置換基、またはパラメータについて開示される各量／値または各量／値の範囲と組み合わせて開示されているものとして解釈されるべきであり、したがって、本説明の目的のために、本明細書に開示される２つ以上の成分、化合物、置換基、またはパラメータについての量／値または量／値の範囲の任意の組み合わせも、互いに組み合わせて開示されていることを理解されたい。
本明細書に開示される各範囲の各下限は、同じ成分、化合物、置換基、またはパラメータについて本明細書に開示される各範囲の各上限と組み合わせて開示されるものと解釈されるべきであることがさらに理解される。したがって、２つの範囲の開示は、各範囲の各下限を各範囲の各上限と組み合わせることによって導かれる４つの範囲の開示として解釈されるべきである。３つの範囲の開示は、各範囲の各下限を各範囲の各上限などと組み合わせることによって導かれる９つの範囲の開示として解釈されるべきである。さらに、説明または例で開示される構成要素、化合物、置換基、またはパラメータの特定の量／値は、範囲の下限または上限のいずれかの開示として解釈されるべきであり、したがって、本出願の他箇所で開示される同じ構成要素、化合物、置換基、またはパラメータの範囲の任意の他の下限または上限あるいは特定の量／値と組み合わせて、その構成要素、化合物、置換基、またはパラメータの範囲を形成することができる。
抗Ａｘｌ抗体または抗体断片の領域
一態様において、本発明は、Ａｘｌタンパク質に特異的に結合する単離されたポリペプチド、およびそのような治療を必要とするヒトにポリペプチドを投与することを含むＡｘｌ発現腫瘍の治療方法におけるポリペプチドの使用を提供する。
本発明のポリペプチドは、６つの相補性決定領域Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｌ１、Ｌ２およびＬ３を含み、
Ｈ１配列がＸ１ＧＸ２Ｘ３ＭＸ４（配列番号１）（Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３およびＸ４はそれぞれ独立してアミノ酸を表す）であり：ここで
Ｘ１は、ＴまたはＡまたはＷであり、
Ｘ２は、ＨまたはＡであり、
Ｘ３は、ＴまたはＩであり、
Ｘ４は、ＮまたはＩであり、
Ｈ２配列がＬＩＫＸ５ＳＮＧＧＴＸ６ＹＮＱＫＦＫＧ（配列番号２）（Ｘ５およびＸ６はそれぞれ独立してアミノ酸を表す）であって、
Ｘ５は、ＰまたはＮであり、
Ｘ６は、ＳまたはＩまたはＴであり、
Ｈ３配列がＧＸ７Ｘ８Ｘ９Ｘ１０Ｘ１１Ｘ１２Ｘ１３Ｘ１４ＤＹＸ１５Ｘ１６（配列番号３）（Ｘ７、Ｘ８、Ｘ９、Ｘ１０、Ｘ１１、Ｘ１２、Ｘ１３、Ｘ１４、Ｘ１５およびＸ１６は、それぞれ独立してアミノ酸を表す）であって、
Ｘ７は、ＨまたはＤまたはＥまたはＰまたはＲまたはＷであり、
Ｘ８は、ＹまたはＮであり、
Ｘ９は、ＥまたはＡまたはＤまたはＦまたはＧまたはＨまたはＩまたはＬまたはＭまたはＮまたはＲまたはＶまたはＹであり、
Ｘ１０は、ＳまたはＤまたはＭまたはＮまたはＱであり、
Ｘ１１は、ＹまたはＣまたはＥまたはＰであり、
Ｘ１２は、ＦまたはＥまたはＮまたはＳまたはＴまたはＶであり、
Ｘ１３は、ＡまたはＤまたはＧまたはＬまたはＹであり、
Ｘ１４は、ＭまたはＥまたはＦであり、
Ｘ１５は、ＷまたはＡまたはＤまたはＨまたはＬまたはＮまたはＰまたはＲまたはＴであり、
Ｘ１６は、ＧまたはＨであり、
Ｌ１配列がＫＡＳＱＤＸ１７Ｘ１８ＳＸ１９ＶＸ２０（配列番号４）（Ｘ１７、Ｘ１８、Ｘ１９、およびＸ２０はそれぞれ独立してアミノ酸を表す）であって、
Ｘ１７は、ＶまたはＤまたはＧまたはＮまたはＷであり、
Ｘ１８は、ＳまたはＶであり、
Ｘ１９は、ＡまたはＬまたはＭであり、
Ｘ２０は、ＡまたはＤまたはＮまたはＱであり、
Ｌ２配列がＸ２１Ｘ２２Ｘ２３ＴＲＸ２４Ｔ（配列番号５）（Ｘ２１、Ｘ２２、Ｘ２３、およびＸ２４はそれぞれ独立してアミノ酸を表す）であって、
Ｘ２１は、ＷまたはＦであり、
Ｘ２２は、ＡまたはＩまたはＮまたはＰまたはＱであり、
Ｘ２３は、ＳまたはＤであり、
Ｘ２４は、ＨまたはＤであり、
Ｌ３配列がＱＥＸ２５Ｘ２６ＳＸ２７Ｘ２８Ｘ２９Ｘ３０（配列番号６）（Ｘ２５、Ｘ２６、Ｘ２７、Ｘ２８、Ｘ２９、およびＸ３０はそれぞれ独立してアミノ酸を表す）であり、
Ｘ２５は、ＨまたはＣまたはＦまたはＩまたはＬまたはＱまたはＳまたはＴまたはＶまたはＹであり、
Ｘ２６は、ＦまたはＣまたはＤまたはＥまたはＧまたはＮまたはＳであり、
Ｘ２７は、ＴまたはＣまたはＰであり、
Ｘ２８は、ＰまたはＡまたはＣまたはＤまたはＥまたはＨまたはＫまたはＳまたはＴまたはＶまたはＷであり、
Ｘ２９は、ＬまたはＧまたはＲであり、
Ｘ３０は、ＴまたはＩまたはＲであり、
本発明のポリペプチドは、以下の６つのＣＤＲを有する親ポリペプチドは除外される。
Ｈ１ ＝ ＴＧＨＴＭＮ、
Ｈ２ ＝ ＬＩＫＰＳＮＧＧＴＳＹＮＱＫＦＫＧ、
Ｈ３ ＝ ＧＨＹＥＳＹＦＡＭＤＹＷＧ、
Ｌ１ ＝ ＫＡＳＱＤＶＳＳＡＶＡ、
Ｌ２ ＝ ＷＡＳＴＲＨＴ、および
Ｌ３ ＝ ＱＥＨＦＳＴＰＬＴ。
別の態様において、本発明は、親ポリペプチドに対して、ＣＤＲ Ｈ１、Ｈ２およびＨ３に最大１つの置換を有し、親ポリペプチドに対して、ＣＤＲ Ｌ１、Ｌ２およびＬｅに最大１つの置換を有する上記のような単離ポリペプチドを提供する。これには、親ポリペプチドに対して、ＣＤＲ Ｈ１、Ｈ２およびＨ３に１つの置換を有する単離ポリペプチド、親ポリペプチドに対して、ＣＤＲ Ｌ１、Ｌ２およびＬ３に１つの置換を有する単離ポリペプチド、親ポリペプチドに対して、ＣＤＲ Ｈ１、Ｈ２およびＨ３、ならびにＣＤＲ Ｌ１、Ｌ２およびＬ３に、親ポリペプチドと比較して１つの置換を有する単離ポリペプチドが挙げられる。ＣＤＲのＨ１、Ｈ２、Ｈ３の可能な組み合わせを図１Ａに、ＣＤＲのＬ１、Ｌ２、Ｌ３の可能な組み合わせを図１Ｂに示す。
重鎖可変領域のアラインメントを図１Ａに示し、相補性決定領域Ｈ１、Ｈ２、およびＨ３に枠を付す。
軽鎖可変領域のアラインメントを図１Ｂに示し、相補性決定領域Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３に枠を付す。
本発明は、これらの単離重鎖可変領域ポリペプチドおよび単離軽鎖可変領域ポリペプチドを、親抗体から、米国特許第８，７０９，７５５号明細書に開示の方法を使用して同定した。親抗体（０６３－ｈｕｍ１０Ｆ１０）の重鎖可変領域および軽鎖可変領域も図１Ａ～１Ｂにアラインして単離重鎖可変領域ポリペプチドおよび単離軽鎖可変領域ポリペプチド中の突然変異を示す。
テンプレート抗体中のそれぞれの位置を１つずつランダム化する包括的位置進化（Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｐｏｓｉｔｉｏｎａｌ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ）（ＣＰＥ）を使用して野生型抗体をコードするＤＮＡを進化させて突然変異抗体ライブラリーを生成した。ライブラリー中のそれぞれの突然変異抗体は、１つのみの単一点突然変異を有する。ライブラリー中の突然変異抗体は、ＥＬＩＳＡによりｐＨ７．４と比べたｐＨ６．０におけるＡｘｌに対する選択的結合親和性についての同時にスクリーニングすることにより生成した。２つの突然変異抗体希釈物：１：３および１：９希釈物を使用した。１：３または１：９希釈物のいずれかのもとでｐＨ６．０とｐＨ７．４とにおける結合親和性の少なくとも１．５の比を有する突然変異抗体を、重鎖および軽鎖可変領域のそれぞれにおいて示される単一点突然変異を有する条件的に活性な抗体として選択する（表１および２）。
別の態様において、本発明は、図１Ａに表される重鎖可変領域および図１Ｂに提示される軽鎖可変領域を同定した。一部の重鎖可変領域は、配列番号１１～１３を有するＤＮＡ配列によりコードされる。一部の軽鎖可変領域は、配列番号７～１０を有するＤＮＡ配列によりコードされる。これらの重鎖および軽鎖可変領域は、Ａｘｌに特異的に結合し得る。これらの重鎖および軽鎖可変領域の１つを含む抗体は、非腫瘍微小環境中のｐＨよりも腫瘍微小環境中に見出されるｐＨにおいてＡｘｌに対して高い結合親和性を有することが見出された。
本発明は、Ａｘｌに特異的に結合し得る、図１Ａ～１Ｂに提示され、配列番号９～１３を有するＤＮＡ配列によりコードされる重鎖および軽鎖可変領域のバリアントも含む。これらのバリアントを誘導するため、重鎖可変領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）（Ｈ１～Ｈ３）および軽鎖可変領域のＣＤＲ（Ｌ１～Ｌ３）がインタクトのままであるべきことが決定された。
これらのバリアントを誘導する際、本明細書に記載のプロセスが案内役となる。これらの重鎖および軽鎖可変領域のバリアントは、重鎖および軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列中に適切な改変を導入することにより、またはペプチド合成により調製することができる。このような改変としては、例えば、抗体または抗体断片のアミノ酸配列内の残基からの欠失、および／またはそれらの残基への挿入、および／またはそれらの残基の置換が挙げられる。欠失、挿入、および置換の任意の組合せを作製して最終構築物に到達し得るが、ただし、最終構築物は、所望の特性の少なくとも１つ、例えば、抗原結合を保有するものとする。
置換、挿入、および欠失バリアント
ある特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体または抗体断片バリアントが提供される。置換変異誘発の目的の部位としては、ＣＤＲおよびフレームワーク領域（ＦＲ）が挙げられる。保存的置換は、表３に、「保存的置換」の見出しの下で示されている。より実質的な変化は、表３に、「例示的な置換」の見出しの下で提供され、アミノ酸側鎖のクラスに関しては、以下でさらに説明される。アミノ酸置換を目的の抗体または抗体断片に導入することができ、その生成物を、所望の活性、例えば、抗原結合の保持／改善、または免疫原性の減少についてスクリーニングすることができる。

アミノ酸は、一般的な側鎖の特性に従ってグループ化され得る：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ
（５）鎖の配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスと交換することを伴う。
１つのタイプの置換バリアントは、親抗体（例えば、ヒト化抗体またはヒト抗体）の１つ以上の超可変領域残基の置換を含む。一般に、さらなる試験のために選択されて得られるバリアントは、親抗体に対してある生物学的特性の改変（例えば、改善）（例えば、親和性の増加、免疫原性の減少）を有し、および／または親抗体のある生物学的特性を実質的に保持する。例示的な置換バリアントは親和性成熟抗体であり、例えば、ファージディスプレイベースの親和性成熟技術、例えば、本明細書に記載のものを使用して簡便に生成することができる。簡潔に述べると、１つ以上のＣＤＲ残基を突然変異させ、バリアント抗体をファージ上でディスプレイさせ、特定の生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングする。
例えば、抗体親和性を改善するために、ＣＤＲにおいて改変（例えば、置換）を行ってもよい。かかる改変は、ＣＤＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセス中に高頻度で変異を受けるコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，ｖｏｌ．２０７，ｐｐ．１７９－１９６，２００８を参照）、および／またはＳＤＲ（ａ－ＣＤＲ）において行うことができ、得られたバリアントＶＨまたはＶＬを、結合親和性について試験する。二次ライブラリを構築し、それから再選択することによる親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．１７８，ｐｐ．１－３７，２００１に記載されている。親和性成熟の一部の実施形態では、多様性は、様々な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャフリング、またはオリゴヌクレオチド特異的変異誘発）のいずれかによって、成熟のために選択された可変遺伝子に導入される。次いで、二次ライブラリが作製される。次いで、ライブラリをスクリーニングして、所望の親和性を有する任意の抗体バリアントを特定する。多様性を導入するための別の方法は、いくつかのＣＤＲ残基（例えば、１回当たり４～６個の残基）がランダム化されるＣＤＲ特異的なアプローチを伴う。抗原結合に関与するＣＤＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング変異誘発またはモデリングを使用して、特異的に特定され得る。特にＣＤＲ－Ｈ３およびＣＤＲ－Ｌ３を標的化することが多い。
ある実施形態において、置換、挿入、または欠失は、このような変更が抗原に結合する抗体または抗体断片の能力を実質的に低減させない限り、１つ以上のＨＶＲ内で生じてよい。例えば、結合親和性を実質的に低下させない保存的改変（例えば、本明細書に提供される保存的置換）は、ＣＤＲにおいて行われ得る。かかる改変は、ＣＤＲの「ホットスポット」またはＳＤＲの外側であり得る。上記に提供されるバリアントＶＨおよびＶＬ配列のある特定の実施形態では、各ＣＤＲは、改変されていないか、または１つ、２つまたは３つ以上のアミノ酸置換を含まないかのいずれかである。
突然変異誘発のために標的化することができる抗体の残基または領域を同定する有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，ｖｏｌ．２４４，ｐｐ．１０８１－１０８５，１９８９により記載されるとおり「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。この方法では、標的残基または標的残基の群（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、およびｇｌｕなどの荷電残基）が特定され、中性または負に帯電したアミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）に置き換えられて、抗体または抗体断片と抗原との相互作用が影響を受けるかどうかを決定する。さらなる置換は、最初の置換に対して機能的な感受性を示すアミノ酸位置に導入されてもよい。代替的または追加的に、抗原－抗体複合体の結晶構造により、抗体または抗体断片と抗原との間の接触点が特定される。かかる接触残基および隣接残基は、置換の候補として標的とされてもよく、または排除されてもよい。バリアントをスクリーニングして、それらが所望の特性を含むかどうかを決定してもよい。
アミノ酸配列挿入としては、１残基～１００以上の残基を含有するポリペプチドの長さの範囲であるアミノおよび／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が挙げられる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体の他の挿入バリアントとしては、抗体のＮ末端またはＣ末端に、抗体の血清半減期を増加させる酵素（例えば、ＡＤＥＰＴ）またはポリペプチドの融合が挙げられる。
本明細書に記載の抗体のアミノ酸配列の修飾が企図される。例えば、抗体の結合親和性および／または他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。非ヒト動物に由来する抗体のＶＨおよびＶＬ中のＣＤＲのみを、単にヒト抗体のＶＨおよびＶＬ中のＦＲに移植することによって、ヒト化抗体が産生される場合、抗原結合活性は、非ヒト動物に由来するもとの抗体の抗原結合活性と比較して、低下することが知られている。ＣＤＲのみならずＦＲにおいても、非ヒト抗体のＶＨおよびＶＬのいくつかのアミノ酸残基が、抗原結合活性に直接的または間接的に関連していると考えられる。したがって、これらのアミノ酸残基を、ヒト抗体のＶＨおよびＶＬのＦＲに由来する異なるアミノ酸残基で置換すると、結合活性が低減するであろう。この問題を解決するためには、ヒトＣＤＲで移植された抗体において、ヒト抗体のＶＨおよびＶＬのＦＲのアミノ酸配列の中で、抗体への結合に直接関連するアミノ酸残基、またはＣＤＲのアミノ酸残基と相互作用するアミノ酸残基、または抗体の三次元構造を維持し、抗原への結合に直接関連するアミノ酸残基を特定する試みが必要になる。減少した抗原結合活性は、特定されたアミノ酸を、非ヒト動物由来のもとの抗体のアミノ酸残基で置換することによって、増加させることができる。
改変および変化は、本発明の抗体の構造中で、およびそれらをコードするＤＮＡ配列中で作製することができ、所望の特徴を有する抗体をコードする機能的分子を依然として得る。
アミノ配列の変更を行う際には、アミノ酸の親水性指標を考慮してもよい。タンパク質に相互作用の生物学的機能を付与する際の親水性アミノ酸指標の重要性は、当該技術分野で一般に理解されている。アミノ酸の相対的な親水性の特徴は、得られるタンパク質の二次構造に寄与することが受け入れられており、続いて、タンパク質と、他の分子、例えば、酵素、基質、受容体、ＤＮＡ、抗体、抗原などとの相互作用を定義する。各アミノ酸には、それらの疎水性および電荷特徴に基づいて親水性指数が割り当てられており、それらは、イソロイシン（＋４．５）、バリン（＋４．２）、ロイシン（＋３．８）、フェニルアラニン（＋２．８）、システイン／シスチン（＋２．５）、メチオニン（＋１．９）、アラニン（＋１．８）、グリシン（－０．４）、スレオニン（－０．７）、セリン（－０．８）、トリプトファン（－０．９）、チロシン（－１．３）、プロリン（－１．６）、ヒスチジン（－３．２）、グルタミン酸（－３．５）、グルタミン（－３．５）、アスパラギン酸（－３．５）、アスパラギン（－３．５）、リジン（－３．９）、およびアルギニン（－４．５）である。
本発明のさらなる目的は、本発明の抗体の機能保存的バリアントも包含する。
「機能保存的バリアント」は、タンパク質または酵素中の所与のアミノ酸残基が、ポリペプチドの全体的な立体構造および機能を変更せずに変化したもの、例として、限定されるものではないが、類似の特性（例えば、極性、水素結合ポテンシャル、酸性、塩基性、疎水性、芳香族など）を有するアミノ酸によるアミノ酸の置き換えである。保存されたアミノ酸として示されたもの以外のアミノ酸は、タンパク質において異なる場合があり、その結果、機能が類似する任意の２つのタンパク質間のタンパク質またはアミノ酸配列のパーセント配列類似性が変化する場合あり、例えば、類似性がＭＥＧＡＬＩＧＮアルゴリズムに基づくクラスター法などの整列スキームに従って決定された場合、７０％～９９％であり得る。「機能保存的バリアント」はまた、ＢＬＡＳＴまたはＦＡＳＴＡアルゴリズムによって決定した場合、少なくとも６０％のアミノ酸同一性、好ましくは、少なくとも７５％、より好ましくは、少なくとも８５％、さらに好ましくは、少なくとも９０％、さらにより好ましくは、少なくとも９５％を有するポリペプチドを含み、それが比較されるネイティブタンパク質または親タンパク質と同じまたは実質的に類似の特性または機能を有する。
２つのアミノ酸配列は、より短い配列の全長と比べて８０％超、好ましくは、８５％超、好ましくは、９０％超のアミノ酸が同一であり、または約９０％超、好ましくは、９５％超が類似（機能的に同一）である場合、「実質的に相同」または「実質的に類似」である。好ましくは、類似または相同の配列は、例えば、ＧＣＧ（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｐｒｏｇｒａｍ Ｍａｎｕａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ＧＣＧ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ７，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）パイルアッププログラム、またはＢＬＡＳＴ、ＦＡＳＴＡなどの配列比較アルゴリズムのうちのいずれかを使用した整列によって特定される。
例えば、あるアミノ酸は、活性の認識可能な損失なしでタンパク質構造中で他のアミノ酸により置換することができる。タンパク質の相互作用キャパシティおよび性質がタンパク質の生物学的機能活性を定めるため、あるアミノ酸置換をタンパク質配列中で、および無論、そのＤＮＡコード配列中で作製することができる一方、それにもかかわらず、同様の特性を有するタンパク質を得る。したがって、本発明の抗体または抗体断片の配列、あるいは当該抗体もしくは抗体断片をコードする対応するＤＮＡ配列において、それらの生物学的活性を著しく損なうことなく、様々な変更が行われ得ることが企図される。
当該技術分野では、特定のアミノ酸は、類似の親水性指標またはスコアを有する他のアミノ酸によって置換されてもよく、依然として同様の生物学的活性を有するタンパク質をもたらし、すなわち、依然として生物学的機能で同等なタンパク質が得られることが知られている。
上記概略のとおり、したがって、アミノ酸置換は、一般に、アミノ酸側鎖置換基の相対的類似性、例えば、それらの疎水性、親水性、電荷、サイズなどに基づく。種々の上記の特徴を考慮する例示的な置換は当業者に周知であり、それとしては、アルギニンおよびリジン；グルタミン酸およびアスパラギン酸；セリンおよびトレオニン；グルタミンおよびアスパラギン；ならびにバリン、ロイシンおよびイソロイシンが挙げられる。
グリコシル化バリアント
ある実施形態において、本明細書において提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加または減少させるように変更される。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が生成または除去されるように、アミノ酸配列を改変することによって都合よく達成され得る。
抗体がＦｃ領域を含む場合、それに結合する炭水化物は、改変され得る。哺乳動物細胞によって産生されるネイティブ抗体は、典型的には、分岐二分岐オリゴ糖を含み、概して、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７にＮ結合によって結合されている。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．ＴＩＢＴＥＣＨ，ｖｏｌ．１５，ｐｐ．２６－３２，１９９７を参照されたい。オリゴ糖は、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、およびシアル酸、ならびに二分岐オリゴ糖構造の「幹」中のＧｌｃＮＡｃに結合したフコースを含み得る。一部の実施形態において、本発明の抗体中のオリゴ糖の改変は、ある改善された特性を有する抗体バリアントを作出するために作製することができる。
一実施形態では、Ｆｃ領域に（直接または間接的に）結合するフコースを欠く炭水化物構造を有する抗体バリアントが提供される。例えば、かかる抗体中のフコースの量は、１％～８０％、１％～６５％、５％～６５％、または２０％～４０％であり得る。フコースの量は、例えばＷＯ２００８／０７７５４６に記載されているように、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析によって測定されるように、Ａｓｎ２９７に結合したすべての糖構造（例えば、複合体、ハイブリッド、および高マンノース構造）の合計に対して、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域内の位置約２９７に位置するアスパラギン残基（Ｆｃ領域残基のＥｕ付番）を指すが、Ａｓｎ２９７は、抗体におけるわずかな配列のバリエーションのために、位置２９７の約プラスマイナス３アミノ酸上流または下流、すなわち、位置２９４～３００に位置し得る。かかるフコシル化バリアントは、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許公開第ＵＳ２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）、同第ＵＳ２００４／００９３６２１号（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｏｇｙｏ Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照されたい。「脱フコシル化」または「フコース欠損」抗体バリアントに関連する刊行物の例としては、ＵＳ２００３／０１５７１０８、ＷＯ２０００／６１７３９、ＷＯ２００１／２９２４６、ＵＳ２００３／０１１５６１４、ＵＳ２００２／０１６４３２８、ＵＳ２００４／００９３６２１、ＵＳ２００４／０１３２１４０、ＵＳ２００４／０１１０７０４、ＵＳ２００４／０１１０２８２、ＵＳ２００４／０１０９８６５、ＷＯ２００３／０８５１１９、ＷＯ２００３／０８４５７０、ＷＯ２００５／０３５５８６、ＷＯ２００５／０３５７７８、ＷＯ２００５／０５３７４２、ＷＯ２００２／０３１１４０、Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，ｖｏｌ．３３６，ｐｐ．１２３９－１２４９，２００４、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．，ｖｏｌ．８７，ｐｐ．６１４－６２２，２００４が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生することができる細胞株の例としては、タンパク質フコシル化が欠損したＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．，ｖｏｌ．２４９，ｐｐ．５３３－５４５，１９８６、米国特許公開第ＵＳ２００３／０１５７１０８Ａ号、およびＷＯ２００４／０５６３１２Ａ１（特に実施例１１））、ならびにα－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子（ＦＵＴ８）ノックアウトＣＨＯ細胞などのノックアウト細胞株（例えば、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．，ｖｏｌ．８７，ｐｐ．６１４－６２２，２００４；Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，ｖｏｌ．９４，ｐｐ．６８０－６８８，２００６、およびＷＯ２００３／０８５１０７が挙げられる。
二分岐オリゴ糖を含む抗体バリアントが、さらに提供され、例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖が、ＧｌｃＮＡｃによって二分される。かかる抗体バリアントは、低減されたフコシル化および／または改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。かかる抗体バリアントの例は、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８、米国特許第６，６０２，６８４号、およびＵＳ２００５／０１２３５４６に記載されている。また、Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖中に少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体バリアントも提供される。かかる抗体バリアントは、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。かかる抗体バリアントは、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７、ＷＯ１９９８／５８９６４、およびＷＯ１９９９／２２７６４に記載されている。
Ｆｃ領域バリアント
ある実施形態において、１つ以上のアミノ酸改変を本明細書において提供される抗体のＦｃ領域中に導入し、それによりＦｃ領域バリアントを生成することができる。Ｆｃ領域バリアントは、１つ以上のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のＦｃ領域）を含み得る。
ある特定の実施形態では、本発明は、すべてではないが一部のエフェクター機能を有する抗体バリアントが企図され、これにより、インビボでの抗体の半減期が重要であるが、特定のエフェクター機能（ＡＤＣＣなど）が不要であるかまたは有害である用途の場合、望ましい候補となる。インビトロおよび／またはインビボの細胞傷害性アッセイを実施して、ＣＤＣおよび／またはＡＤＣＣ活性の低減／枯渇を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実施して抗体がＦｃγＲ結合を欠く（したがって、ＡＤＣＣ活性を欠く可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能を保持することを確保することができる。ＡＤＣＣを媒介する初代細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現し、一方、単核細胞は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、ｖｏｌ．９，ｐｐ．４５７－４９２，１９９１の４６４頁の表５にまとめられている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，ｖｏｌ．８３，ｐｐ．７０５９－７０６３，１９８６も参照されたい）およびＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，ｖｏｌ．８２，ｐｐ．１４９９－１５０２，１９８５、米国特許第５，８２１，３３７号（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，ｖｏｌ．１６６，ｐｐ．１３５１－１３６１，１９８７も参照されたい）に記載されている。代替的に、非放射性アッセイ法が用いられ得る（例えば、フローサイトメトリーのためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，Ｃａｌｉｆ．）、およびＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）を参照されたい）。かかるアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。代替的または追加的に、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，ｖｏｌ．９５，ｐｐ．６５２－６５６，１９９８に開示されているような動物モデルにおいて評価され得る。Ｃ１ｑ結合アッセイを行って、抗体がＣ１ｑに結合できず、したがって、ＣＤＣ活性を欠くことを確認することもできる。例えば、ＷＯ２００６／０２９８７９およびＷＯ２００５／１００４０２のＣ１ｑおよびＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体の活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行ってもよい（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，ｖｏｌ．２０２，ｐｐ．１６３－１７１，１９９６、Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，ｖｏｌ．１０１，ｐｐ．１０４５－１０５２，２００３、およびＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ，ａｎｄ Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ，ｖｏｌ．１０３，ｐｐ．２７３８－２７４３，２００４を参照されたい）。また、ＦｃＲｎ結合およびインビボクリアランス／半減期の決定は、当該技術分野で既知の方法を使用して行うことができる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，ｖｏｌ．１８，ｐｐ．１７５９－１７６９，２００６を参照されたい）。
減少したエフェクター機能を有する抗体としては、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７および３２９の１つ以上の置換を有するもの（米国特許第６，７３７，０５６号明細書）が挙げられる。かかるＦｃ変異体としては、残基２６５および２９７のアラニンへの置換を有する、いわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体（米国特許第７，３３２，５８１号）を含む、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７、および３２７のうちの２つ以上において置換を有するＦｃ変異体が挙げられる。
ＦｃＲへの結合が改善または減少したある種の抗体バリアントが記載されている。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号；ＷＯ２００４／０５６３１２号、およびＳｈｉｅｌｄｓら、Ｊ． Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．， ｖｏｌ．９， ｐｐ．６５９１－６６０４， ２００１を参照）。
ある特定の実施形態では、抗体バリアントは、ＡＤＣＣを改善する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の位置２９８、３３３、および／または３３４における置換（残基のＥＵ付番）を有するＦｃ領域を含む。
一部の実施形態において、変更された（すなわち、改善され、または縮小した）Ｃ１ｑ結合および／または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）をもたらす変更、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号明細書、国際公開第９９／５１６４２号パンフレット、およびＩｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、ｖｏｌ．１６４，ｐｐ．４１７８－４１８４，２０００に記載のものが、Ｆｃ領域中で作製される。
母体ＩｇＧの胎児への移行に関与する新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）（Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，ｖｏｌ．１１７，ｐｐ．５８７－５９３，１９７６およびＫｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，ｖｏｌ．２４，ｐ．２４９，１９９４）への結合の改善および半減期の増加を伴う抗体は、ＵＳ２００５／００１４９３４に記載されている。これらの抗体は、それに１つ以上の置換を有するＦｃ領域を含み、Ｆｃ領域のＦｃＲｎへの結合を改善する。かかるＦｃバリアントには、Ｆｃ領域の残基：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、または４３４のうちの１つ以上において置換を有するバリアントが含まれる（例えば、Ｆｃ領域の残基４３４の置換、米国特許第７，３７１，８２６号）。Ｆｃ領域バリアントの他の例に関しては、Ｄｕｎｃａｎ＆Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ，ｖｏｌ．３２２，ｐｐ．７３８－７４０，１９８８、米国特許第５，６４８，２６０号、同第５，６２４，８２１号、およびＷＯ９４／２９３５１も参照されたい。
システインエンジニアリング抗体バリアント
ある実施形態において、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基により置換されているシステインエンジニアリング抗体、例えば、「ｔｈｉｏＭＡｂ」を作出することが望ましい場合がある。特定の実施形態では、抗体がアクセス可能な部位で、残基の置換が生じる。これらの残基をシステインで置換することによって、反応性チオール基が、抗体のアクセス可能な部位に配置され、本明細書にさらに記載されるように、抗体を、薬物部分またはリンカー－薬物部分などの他の部分にコンジュゲートして、免疫コンジュゲートが作製され得る。ある特定の実施形態では、以下の残基のうちの任意の１つ以上が、システインで置換され得る：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔ付番）、重鎖のＡ１１８（ＥＵ付番）、および重鎖Ｆｃ領域の５４００（ＥＵ付番）。システイン改変抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載されているように生成され得る。
抗体誘導体
ある実施形態において、本明細書において提供される抗体または抗体断片は、当分野において公知の容易に利用可能な追加の非タンパク質部分を含有するようにさらに改変することができる。抗体または抗体断片の誘導体化に好適な部分としては、限定されないが、水溶性ポリマーが挙げられる。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、限定されないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、ならびにデキストランまたはポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコールホモポリマー、プロリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにそれらの混合物が挙げられる。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水におけるその安定性から、製造上の利点を有し得る。ポリマーは、任意の分子量のものであり得、分岐でも非分岐でもよい。抗体または抗体断片に付着しているポリマーの数は変動し得、２つ以上のポリマーが付着している場合、それらは同一または異なる分子であり得る。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数および／または種類は、限定されないが、改良されるべき抗体または抗体断片の特定の特性または機能、誘導体が所定の条件下で療法に使用されるかどうかなどを含む、考慮事項に基づいて決定することができる。
別の実施形態において、放射線への曝露により選択的に加熱することができる抗体または抗体断片および非タンパク質部分のコンジュゲートが提供される。一実施形態では、非タンパク質性部分は、カーボンナノチューブである（Ｋａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，ｖｏｌ．１０２，ｐｐ．１１６００－１１６０５，２００５）。放射線は、任意の波長であってもよく、限定されないが、通常の細胞を傷つけないが、抗体－非タンパク質性部分に近接する細胞が死滅する温度まで非タンパク質性部分を加熱する波長を含む。
別の態様において、本発明は、単離重鎖可変領域ポリペプチドまたは単離軽鎖可変領域ポリペプチドを含む抗Ａｘｌ抗体または抗体断片を提供する。単離重鎖可変領域ポリペプチドは、それぞれ、配列番号１～３を有するＨ１、Ｈ２、およびＨ３領域を含む。単離軽鎖可変領域ポリペプチドは、それぞれ、配列番号４～６を有するＬ１、Ｌ２、およびＬ３領域を含む。
本発明の抗Ａｘｌ抗体または抗体断片は、腫瘍微小環境中の条件下で、非腫瘍微小環境中の条件下よりも高いＡｘｌに対する結合親和性を有する。一実施形態において、腫瘍微小環境中の条件および非腫瘍微小環境中の条件は、両方のｐＨである。したがって、本発明の抗Ａｘｌ抗体または抗体断片は、約５．～約６．８のｐＨにおいてＡｘｌに選択的に結合し得るが、正常な生理学的環境中に見出される７．２～７．８のｐＨにおいてはより低いＡｘｌに対する結合親和性を有する。実施例３～４に示されるとおり、抗Ａｘｌ抗体または抗体断片は、ｐＨ６．０においてｐＨ７．４よりも高い結合親和性を有する。
特定の実施形態では、本発明の抗Ａｘｌ抗体又は抗体断片は、腫瘍微小環境における条件下でのＡｘｌとの解離定数（Ｋｄ）が、約≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（例えば、１０－８Ｍ以下、または１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、または１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）である。一実施形態では、腫瘍微小環境における条件の値での、Ａｘｌとの抗体または抗体断片のＫｄと、非腫瘍微小環境における同じ条件の異なる値でのＫｄとの比は、少なくとも約１．５：１、少なくとも約２：１、少なくとも約３：１、少なくとも約４：１、少なくとも約５：１、少なくとも約６：１、少なくとも約７：１、少なくとも約８：１、少なくとも約９：１、少なくとも約１０：１、少なくとも約２０：１、少なくとも約３０：１、少なくとも約５０：１、少なくとも約７０：１、または少なくとも約１００：１である。
一実施形態では、Ｋｄは、以下のアッセイを使用して、目的の抗体およびその抗原のＦａｂバージョンで行われる放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、Ｆａｂを、非標識抗原の滴定系列の存在下で最小濃度の（１２５Ｉ）標識抗原で平衡化し、次いで抗Ｆａｂ抗体でコーティングされたプレートを用いて、結合した抗原を捕捉することによって測定される（例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５－８８１（１９９９）を参照されたい）。アッセイの条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、５０ｍＭの炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中の５μｇ／ｍｌの捕捉抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ Ｌａｂｓ）で一晩コーティングし、その後、ＰＢＳ中の２％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミンで２～５時間室温（およそ２３℃）でブロッキングする。非吸着プレート（Ｎｕｎｃ＃２６９６２０）中、１００ｐＭまたは２６ｐＭの［１２５Ｉ］－抗原を、目的のＦａｂの段階希釈液と混合する（例えば、Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７：４５９３－４５９９（１９９７）における抗ＶＥＧＦ抗体Ｆａｂ－１２の評価と一致している）。次いで、目的のＦａｂを一晩インキュベートするが、インキュベーションは、平衡に到達することを確実にするために、より長い時間（例えば、約６５時間）継続してもよい。その後、混合物を捕捉プレートに移して、室温でインキュベートする（例えば、１時間）。次いで、溶液を除去し、プレートをＰＢＳ中の０．１％のポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ－２０（登録商標））で８回洗浄する。プレートが乾燥したら、１５０μｌ／ウェルのシンチラント（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ－２０（商標）、Ｐａｃｋａｒｄ）を添加し、プレートを、ＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）ガンマカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ）で１０分間カウントする。競合結合アッセイで使用するために、最大結合の２０％以下を与える各Ｆａｂの濃度を選択する。
別の実施形態によれば、Ｋｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）－２０００またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）－３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）を使用した表面プラズモン共鳴アッセイを使用して、固定化抗原ＣＭ５チップを用いて、２５℃で、約１０応答単位（ＲＵ）で測定される。簡潔に述べると、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）を供給業者の説明書に従ってＮ－エチル－Ｎ’－（３－ジメチルアミノプロピル）－カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）およびＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）により活性化させる。抗原を、１０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）で５μｇ／ｍｌ（約０．２μＭ）に希釈した後、５μｌ／分の流量で注入して、およそ１０応答単位（ＲＵ）のカップリングされたタンパク質を達成する。抗原の注入後、１Ｍのエタノールアミンを注入して、未反応の基をブロックする。動態測定のために、Ｆａｂの２倍段階希釈液（０．７８ｎＭ～５００ｎＭ）を、２５℃で、約２５μｌ／分の流量で、０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ－２０（商標））界面活性剤（ＰＢＳＴ）を含むＰＢＳ中に注入する。会合速度（ｋｏｎ）および解離速度（ｋｏｆｆ）は、会合センサグラムおよび解離センサグラムを同時に適合させることによって、単純一対一ラングミュア結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）評価ソフトウェアバージョン３．２）を使用して計算される。平衡解離定数（Ｋｄ）は、ｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として計算する。例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５－８８１（１９９９）を参照されたい。上記の表面プラズモン共鳴アッセイによってオンレートが１０６Ｍ－１ｓ－１を超える場合、オンレートは、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中の２０ｎＭの抗抗原抗体（Ｆａｂ形態）の２５℃における蛍光発光強度（励起＝２９５ｎｍ、発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍバンドパス）の増加または減少を測定する蛍光クエンチ技法を使用して、ストップフローを装備した分光光度計（Ａｖｉｖ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）または撹拌キュベットを備えた８０００系ＳＬＭ－ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）などの分光計で測定されるように、抗原の濃度を増加させながら、決定することができる。
本発明の抗Ａｘｌ抗体は、キメラ、ヒト化またはヒト抗体であり得る。一実施形態において、抗Ａｘｌ抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディまたはＦ（ａｂ’）２断片および抗体断片から形成される多重特異的抗体を用いる。別の実施形態において、抗体は、本明細書において定義される全長抗体、例えば、インタクトＩｇＧ抗体または他の抗体クラスまたはアイソタイプである。ある抗体断片の概説については、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．、ｖｏｌ．９，ｐｐ．１２９－１３４，２００３参照。ｓｃＦｖ断片の概説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｅｎ，ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．、（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）、ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）参照；国際公開第９３／１６１８５号パンフレット；および米国特許第５，５７１，８９４号明細書および同第５，５８７，４５８号明細書も参照。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、増加したインビボ半減期を有するＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片の考察については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。
本発明のダイアボディは、二価または二重特異性であり得る。例えば、ダイアボディの例について、ＥＰ４０４，０９７、ＷＯ１９９３／０１１６１、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）、およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，ｖｏｌ．９０，ｐｐ．６４４４－６４４８，１９９３を参照されたい。また、トリアボディおよびテトラボディの例は、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，ｖｏｌ．９，ｐｐ．１２９－１３４，２００３に記載されている。
一部の実施形態では、本発明は、単一ドメイン抗体断片を含み、重鎖可変ドメインのすべてもしくは一部、または抗体の軽鎖可変ドメインのすべてもしくは一部を含む。ある特定の実施形態では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，Ｍａｓｓ．、例えば、米国特許第６，２４８，５１６Ｂ１号を参照されたい）。
抗体断片は、種々の技術、例として、限定されるものではないが、本明細書に記載のとおりインタクト抗体のタンパク質分解消化および組換え宿主細胞（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）またはファージ）による産生により作製することができる。
一部の実施形態において、本発明の抗Ａｘｌ抗体は、キメラ抗体であり得る。特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、およびＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，ｖｏｌ．８１，ｐｐ．６８５１－６８５５，（１９８４）に記載されている。一例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、またはサルなどの非ヒト霊長類に由来する可変領域）およびヒト定常領域を含む。さらなる例では、キメラ抗体は、抗体のクラスまたはサブクラスが、親抗体のクラスまたはサブクラスと比較して変更された「クラススイッチ（ｃｌａｓｓ ｓｗｉｔｃｈｅｄ）」抗体である。キメラ抗体には、その抗原結合断片が含まれる。
ある特定の実施形態では、本発明のキメラ抗体は、ヒト化抗体である。典型的には、かかる非ヒト抗体は、親非ヒト抗体の特異性および親和性を保持しながら、ヒトに対する免疫原性を低減するためにヒト化される。一般に、ヒト化抗体は、１つ以上の可変ドメインを含み、ＣＤＲ（またはその一部）が、非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（またはその一部）が、ヒト抗体配列に由来する。また、ヒト化抗体は、任意選択的に、ヒト定常領域の少なくとも一部を含んでいてもよい。一部の実施形態では、ヒト化抗体のいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体の特異性または親和性を回復または改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＣＤＲ残基が由来する抗体）由来の対応する残基で置換される。
ヒト化抗体およびそれらを作製する方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．，ｖｏｌ．１３，ｐｐ．１６１９－１６３３，２００８に概説されており、さらに、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，ｖｏｌ．３３２，ｐｐ．３２３－３２９，１９８８、Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，ｖｏｌ．８６，ｐｐ．１００２９－１００３３，１９８９、米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号、および同第７，０８７，４０９号、Ｋａｓｈｍｉｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ，ｖｏｌ．３６，ｐｐ．２５－３４，２００５（ＳＤＲ（ａ－ＣＤＲ）グラフトについて記載）、Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，ｖｏｌ．２８，ｐｐ．４８９－４９８，１９９１（「再表面形成（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）」について記載）、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ，ｖｏｌ．３６，ｐｐ．４３－６０，２００５（「ＦＲシャフリング」について記載）、ならびにＯｓｂｏｕｒｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ，ｖｏｌ．３６，ｐｐ．６１－６８，２００５およびＫｌｉｍｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，ｖｏｌ．８３，ｐｐ．２５２－２６０，２０００（ＦＲシャフリングに対する「誘導選択（ｇｕｉｄｅｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）」アプローチについて記載）に記載されている。
ヒト化のために使用され得るヒトフレームワーク領域としては、限定されないが、「最良適合（ｂｅｓｔ－ｆｉｔ）」法を使用して選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，ｖｏｌ．１５１，ｐ．２２９６，１９９３を参照されたい）、軽鎖または重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，ｖｏｌ．８９，ｐ．４２８５，１９９２およびＰｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，ｖｏｌ．１５１，ｐ．２６２３，１９９３を参照されたい）、ヒト成熟（体細胞変異）フレームワーク領域またはヒト生殖系列フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．，ｖｏｌ．１３，ｐｐ．１６１９－１６３３，２００８を参照されたい）、およびＦＲライブラリのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，ｖｏｌ．２７２，ｐｐ．１０６７８－１０６８４，１９９７およびＲｏｓｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，ｖｏｌ．２７１，ｐｐ．２２６１１－２２６１８，１９９６を参照されたい）が挙げられる。
一部の実施形態において、本発明の抗Ａｘｌ抗体は、多重特異的抗体、例えば、二重特異的抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある実施形態において、結合特異性のあるものはＡｘｌについてのものであり、他方は別の抗原についてのものである。ある実施形態において、二重特異的抗体は、Ａｘｌの２つの異なるエピトープに結合し得る。二重特異的抗体は、Ａｘｌを発現する細胞に対して細胞傷害剤を局在化させるために使用することもできる。二重特異性抗体は、完全長抗体または抗体断片として調製され得る。
多重特異性抗体を作製するための技法としては、限定されないが、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖対の組換え共発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ，ｖｏｌ．３０５，ｐｐ．５３７－５４０，１９８３、ＷＯ９３／０８８２９、およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．ｖｏｌ．１０，ｐｐ．３６５５－３６５９，１９９１を参照されたい）、および「ノブインホール（ｋｎｏｂ－ｉｎ－ｈｏｌｅ）」工学（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号を参照されたい）が挙げられる。また、多重特異性抗体は、抗体Ｆｃ－ヘテロ二量体分子を作製するための静電ステアリング効果（ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ ｓｔｅｅｒｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔｓ）を操作すること（ＷＯ２００９／０８９００４Ａ１）、２つ以上の抗体または断片を架橋すること（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、およびＢｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，ｖｏｌ．２２９，ｐｐ．８１－８３，１９８５を参照されたい）、ロイシンジッパーを使用して二重特異性抗体を産生すること（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，ｖｏｌ．１４８，ｐｐ．１５４７－１５５３，１９９２を参照されたい）、二重特異性抗体断片を作製するために「ダイアボディ」技術を使用すること（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，ｖｏｌ．９０，ｐｐ．６４４４－６４４８，１９９３を参照されたい）、および一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）二量体を使用すること（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，ｖｏｌ．１５２，ｐｐ．５３６８－５３７４，１９９４を参照されたい）、ならびに三重特異性抗体を調製すること（例えば、Ｔｕｔｔ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，ｖｏｌ．１４７，ｐｐ．６０－６９，１９９１に記載されている）によっても作製され得る。
「オクトパス抗体（Ｏｃｔｏｐｕｓ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」を含む、３つ以上の機能性抗原結合部位を有する改変抗体も本明細書に含まれる（例えば、ＵＳ２００６／００２５５７６Ａ１を参照されたい）。
抗体または抗体断片としては、Ａｘｌおよび別の異なる抗原に結合する抗原結合部位を含む「二重作用Ｆａｂ」または「ＤＡＦ」も挙げられる（例えば、米国特許出願公開第２００８／００６９８２０号明細書参照）。
本発明の抗Ａｘｌ抗体または抗体断片は、米国特許出願公開第２０１６／００１７０４０号明細書に詳述されている組換え法および組成物を使用して産生することができる。
本発明の抗Ａｘｌ抗体または抗体断片の物理的／化学的特性および／または生物学的活性は、当分野において公知の種々のアッセイにより試験および計測することができる。これらのアッセイのいくつかは、米国特許第８，８５３，３６９号に記載されている。

免疫コンジュゲート
別の態様において、本発明はまた、１つ以上の細胞傷害剤、例えば、化学療法剤または化学療法薬、成長阻害剤、毒素（例えば、細菌、真菌、植物、または動物起源のタンパク質毒素、酵素活性毒素、またはそれらの断片）、または放射性同位体にコンジュゲートしている本明細書の抗Ａｘｌ抗体を含む免疫コンジュゲートを提供する。
一実施形態では、免疫コンジュゲートは、抗体－薬物コンジュゲート（ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ、ＡＤＣ）であり、抗体が１つ以上の薬物にコンジュゲートされ、限定されないが、マイタンシノイド（米国特許第５，２０８，０２０号、同第５，４１６，０６４号、および欧州特許第ＥＰ０４２５２３５Ｂ１号を参照されたい）、モノメチルアウリスタチン薬物部分ＤＥおよびＤＦなどのアウリスタチン（ＭＭＡＥおよびＭＭＡＦ）（米国特許第５，６３５，４８３号および同第５，７８０，５８８号、ならびに同第７，４９８，２９８号を参照されたい）、ドラスタチン、カリケアマイシンまたはその誘導体（米国特許第５，７１２，３７４号、同第５，７１４，５８６号、同第５，７３９，１１６号、同第５，７６７，２８５号、同第５，７７０，７０１号、同第５，７７０，７１０号、同第５，７７３，００１号、および同第５，８７７，２９６号、Ｈｉｎｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，ｖｏｌ．５３，ｐｐ．３３３６－３３４２，１９９３、ならびにＬｏｄｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，ｖｏｌ．５８，ｐｐ．２９２５－２９２８，１９９８を参照されたい）、ダウノマイシンまたはドキソルビシンなどのアントラサイクリン（Ｋｒａｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，ｖｏｌ．１３，ｐｐ．４７７－５２３，２００６、Ｊｅｆｆｒｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ，ｖｏｌ．１６，ｐｐ．３５８－３６２，２００６、Ｔｏｒｇｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，ｖｏｌ．１６，ｐｐ．７１７－７２１，２００５、Ｎａｇｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，ｖｏｌ．９７，ｐｐ．８２９－８３４，２０００、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．＆ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ，ｖｏｌ．１２，ｖｏｌ．１５２９－１５３２，２００２、Ｋｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，ｖｏｌ．４５，ｐｐ．４３３６－４３４３，２００２、および米国特許第６，６３０，５７９号を参照されたい）、メトトレキサート、ビンデシン、タキサン（ドセタキセル、パクリタキセル、ラロタキセル、テセタキセル、およびオルタタキセルなど）、トリコテセン、ならびにＣＣ１０６５が挙げられる。別の実施形態では、免疫コンジュゲートは、酵素的に活性な毒素またはその断片にコンジュゲートされた本明細書に記載の抗体を含み、限定されないが、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合性活性断片、エクソトキシンＡ鎖（緑膿菌Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ－サルシン、シナアブラギリ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ジアンチンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウ（Ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ－Ｓ）、ニガウリ（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルシン、クロチン、サボンソウ（Ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン、マイトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、およびトリコテセンが挙げられる。
別の実施形態において、免疫コンジュゲートは、放射性コンジュゲートを形成するために放射性原子にコンジュゲートしている本明細書に記載の抗体を含む。放射性コンジュゲートの産生には、様々な放射性同位体が利用可能である。例としては、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、およびＬｕの放射性同位体が挙げられる。放射性コンジュゲートを検出に使用する場合、それは、シンチグラフィー試験のための放射性原子、例えば、ｔｃ９９ｍもしくはＩ１２３、または核磁気共鳴（ＮＭＲ）イメージング（磁気共鳴イメージング、ｍｒｉとしても公知）用のスピン標識、例えば、ヨウ素－１２３、さらにヨウ素－１３１、インジウム－１１１、フッ素－１９、炭素－１３、窒素－１５、酸素－１７、ガドリニウム、マンガンを含み得る。
抗体と細胞傷害剤とのコンジュゲートは、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（アジプイミド酸ジメチルＨＣｌなど）、活性エステル（スベリン酸ジサクシンイミジルなど）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビス－アジド化合物（ビス（ｐ－アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス－ジアゾニウム誘導体（ビス－（ｐ－ジアゾニウムベンゾイル）－エチレンジアミンなど）、ジイソシアネート（トルエン２，６－ジイソシアネートなど）、およびビス活性フッ素化合物（１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼンなど）などの様々な二官能性タンパク質カップリング剤を使用して作製することができる。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，ｖｏｌ．２３８，ｐｐ．１０９８－，１９８７に記載されているように調製され得る。炭素－１４標識１－イソチオシアナトベンジル－３－メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ－ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドを抗体にコンジュゲートするための例示的なキレート剤である。ＷＯ９４／１１０２６を参照されたい。リンカーは、細胞内の細胞傷害剤の放出を促進する「切断可能リンカー」であり得る。例えば、酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、光不安定性リンカー、ジメチルリンカーまたはジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，ｖｏｌ．５２，ｐｐ．１２７－１３１，１９９２、米国特許第５，２０８，０２０号）を使用してもよい。
本明細書に含まれるイムノコンジュゲートは、以下を明示的に企図するものであるが、これに限定されるものでないが、市販されている（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ．，Ｕ．Ｓ．Ａから）ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ－ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＬＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ－ＥＭＣＳ、スルホ－ＧＭＢＳ、スルホ－ＫＭＵＳ、スルホ－ＭＢＳ、スルホ－ＳＩＡＢ、スルホ－ＳＭＣＣ、およびスルホ－ＳＭＰＢ、ならびにＳＶＳＢ（スクシンイミジル－（４－ビニルスルホン）安息香酸塩）を含むが、これらに限定されない架橋試薬で調製された免疫コンジュゲートが挙げられる。
ＡＤＣの例示的な実施形態は、腫瘍細胞を標的化する抗体（Ａｂ）、薬物部分（Ｄ）、およびＡｂをＤに付着させるリンカー部分（Ｌ）を含む。一部の実施形態では、抗体は、リジンおよび／またはシステインなどの１つ以上のアミノ酸残基を介して、リンカー部分（Ｌ）に結合される。
例示的なＡＤＣは、Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）ｐとしての式Ｉを有し、式中、ｐは、１～約２０である。一部の実施形態では、抗体にコンジュゲートされ得る薬物部分の数は、遊離システイン残基の数によって制限される。一部の実施形態では、遊離システイン残基は、本明細書に記載の方法によって抗体アミノ酸配列に導入される。式Ｉの例示的なＡＤＣとしては、限定されるものではないが、１、２、３、または４つのエンジニアリングされたシステインアミノ酸を有する抗体が挙げられる（Ｌｙｏｎ ｅｔ ａｌ．、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍ．、ｖｏｌ．５０２，ｐｐ．１２３－１３８，２０１２）。一部の実施形態では、１つ以上の遊離システイン残基が既に改変を使用せずに抗体中に存在し、その場合、既存の遊離システイン残基を使用して抗体を薬物にコンジュゲートすることができる。一部の実施形態において、抗体は、１つ以上の遊離システイン残基を生成するために抗体のコンジュゲーション前に還元条件に曝露される。
本発明は、切断可能リンカーを介して少なくとも１つの薬物部分に結合した条件的に活性な生物学的製剤（ＣＡＢ）抗Ａｘｌ抗体（ＣＡＢ－Ａｘｌ－ＡＤＣ）を含む抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）とＡｘｌ発現腫瘍の治療に対するその使用を包含する。そのようなＡＤＣは、好ましくは、医薬組成物またはキットで、治療を必要とする対象に送達される。いくつかの実施形態において、薬剤部分は、モノメチルウリスタチン薬剤部分ＤＥおよびＤＦ（ＭＭＡＥおよびＭＭＡＦ）などの少なくとも１つの細胞傷害剤である。ＣＡＢ－Ａｘｌ抗体は、ＭＭＡＥ（抗チューブリン剤であるドラスタチン１０の合成アナログ）と結合した切断可能なペプチドリンカーを介して、抗体の重鎖および軽鎖のシステインに化学的に結合させ、薬物と抗体の比率（ＤＡＲ）を４近くにすることができる。いくつかの実施形態では、抗Ａｘｌ抗体を含む抗体薬物コンジュゲートは、ｖｃ－ＰＡＢリンカーを介してＭＭＡＥに共有結合している。結合後、ＣＡＢ－Ａｘｌ－ＡＤＣは腫瘍細胞内に取り込まれ、ペプチドリンカーがプロテアーゼによって切断され、ＭＭＡＥを放出する。Ａｘｌを発現している腫瘍細胞に特異的にＭＭＡＥを送達することで、腫瘍細胞のさらなる増殖を抑制し、腫瘍を縮小させることが期待される。
いくつかの実施形態では、抗体薬物コンジュゲートは、医薬組成物として対象に送達される。
いくつかの実施形態において、ＣＡＢ－Ａｘｌ－ＡＤＣは、Ａｂ－切断可能リンカー－ＭＭＡＥ（ｎ）であり、ＭＭＡＥはモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）であり、（ｎ）は（１と４を含む）１～４の整数である。本発明の例示的なＣＡＢ－Ａｘｌ－ＡＤＣは、以下の化学構造を有する：
またはその薬学的に許容される塩であり、ここでＡｂは抗Ａｘｌ抗体であり、Ｓは該抗体の硫黄原子である。
いくつかの実施形態では、ＣＡＢ－Ａｘｌ－ＡＤＣは、Ａｂ部分としてのｍＡｂ、システイン結合マレイミド（ＭＣ）、およびバリンおよびシトルリン（ｖｃ）を含む切断可能ペプチドリンカーに続くＭＭＡＥを含むいくつかの異なる部分を含む。例えば、ＣＡＢ－Ａｘｌ－ＡＤＣはｍＡｂ切断可能リンカー－ＭＭＡＥ（ｎ）である。好ましくは、ジペプチドバリン－シトルリン（ｖｃ）を含む切断可能リンカーを介してモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）に結合した条件的に活性な生物学的製剤（ＣＡＢ）抗Ａｘｌヒト化モノクローナル抗体（ｍＡｂ）（免疫グロブリンＩｇＧ１）であるｍＡｂＢＡ３０１１－ ＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ 抗体－薬物コンジュゲートであり、このジペプチドは、パラアミノベンジルアルコール（ＰＡＢ）（自己崩壊部分）に結合している（ＣＡＢ－Ａｘｌ－ＡＤＣ）。抗体部分（ｍＡｂ）であるＢＡ３０１１は、スルフヒドリル結合を介してＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥに結合し、Ａｘｌチロシンキナーゼ増殖因子阻害剤に特異的であり、腫瘍微小環境（ＴＭＥ）内で見られる条件でＡｘｌに特異的かつ可逆的に結合し、ＴＭＥ外のＡｘｌへの結合は減少するため、正常細胞よりも腫瘍に対する選択性の利点を与えることができる。
抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、例えば、強力な細胞傷害剤や毒素をｍＡｂに結合させるもので、毒性を増加させずに有効性を高めることができるため、ネイキッド抗体による治療よりも進歩した治療法である。ＣＤ３３陽性急性骨髄性白血病の治療薬としてゲムツズマブ オゾガマイシン（Ｍｙｌｏｔａｒｇ（登録商標））のライセンス供与により、臨床的有用性が証明されている。現在、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）では、ブレンツキシマブ・ベドチン（Ａｄｃｅｔｒｉｓ（登録商標））とアドトラスツズマブ・エムタンシン（Ｋａｄｃｙｌａ（登録商標））の２つのＡＤＣが承認されている。
本発明は、異なる疾患や組織に関連する標的組織（腫瘍など）に対して、定義された生理学的条件下で優先的に結合するＣＡＢ抗体（他の生物製剤も同様）を提供する。ＣＡＢによる条件付きかつ可逆的な結合は、腫瘍外毒性や免疫原性の低減、組織を介した薬物沈着の回避、薬物動態（ＰＫ）の改善などを目的とする。例えば、癌では、Ｗａｒｂｕｒｇが提唱した独特の細胞代謝により、低ｐＨ、高乳酸といった特徴的な微小環境が形成される（Ｗａｒｂｕｒｇ １９２４； Ｗａｒｂｕｒｇ １９５６）。メクボタマブ・ベドチン（ＢＡ３０１１）は、進行性固形腫瘍の患者に対する抗癌剤として開発された条件的に活性な生物学的製剤抗ＡＸＬ抗体－薬物コンジュゲート（ＣＡＢ－ＡＸＬ－ＡＤＣ）である。ＢＡ３０１１は、ユニークなＴＭＥを利用し、Ａｘｌを発現している腫瘍に近接すると、その標的に優先的に結合する。しかし、ＢＡ３０１１は適切な環境がない条件では、Ａｘｌへの結合が減少する。ＡＸＬは、肉腫を含むいくつかの腫瘍種で高発現する細胞表面膜貫通型受容体タンパク質チロシンキナーゼである。ＡＸＬ発現の増加は、化学療法、プログラム死－１（ＰＤ－１）阻害剤、分子標的治療、放射線治療に対する腫瘍抵抗性と関連している。ＢＡ３０１１のようなＣＡＢの活性化された結合特性は可逆的であり、疾患組織から正常組織、疾患組織の微小環境へと移行する際に永久的な変化がないようにする。ＢＡ３０１１は、ＣＡＢ特性を実現するために、非抗体配列を付加していないヒト化ｍＡｂである。
ＢＡ３０１１は、抗プログラム死－１（ＰＤ－１）および抗プログラム死リガンド－１（ＰＤ－Ｌ１）治療抗体などのチェックポイント阻害剤と組み合わせて投与することも可能である。一般に、多くのＡＤＣ、特に細胞傷害ペイロードとしてＭＭＡＥを使用するＡＤＣは、免疫腫瘍学（ＩＯ）療法との組み合わせで試験されている（Ｇｅｒｂｅｒ ２０１６）。腫瘍細胞の免疫原性細胞死（ＩＣＤ）は、ある種の細胞傷害化合物によって誘導され、腫瘍へのエフェクターＴ細胞の動員を強力に刺激するものである。さらに、いくつかの細胞傷害性薬剤は、樹状細胞の活性化と成熟を直接刺激するため、ＩＯ化合物と組み合わせることで、抗腫瘍免疫応答が改善される。その中でも、いくつかの細胞傷害剤は、現在ＡＤＣのペイロードとして利用されている。したがって、ＡＤＣとＩＯ化合物の併用療法は、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞の腫瘍コアへの動員を増加させることにより、免疫チェックポイント阻害剤の現在の限界を克服することができると期待されている。臨床試験に関しては、ＩＯ化合物とＡＤＣの相乗効果により、腫瘍特異的な免疫学的記憶の形成が進み、最終的にはより多くの癌患者の割合で耐久性のある反応が得られる可能性があるため、ＡＤＣ－ＩＯ組み合わせは癌領域の医薬品開発に幅広い影響を与える可能性がある（Ｃｏａｔｓ ２０１９）。ＢＡ３０１１とチェックポイント阻害剤の併用に関して、ＰＤ－１治療抵抗性メラノーマ患者のトランスクリプトーム解析から、免疫抑制、血管新生、マクロファージ走化性、細胞外マトリックスリモデリング、上皮間葉転換（ＥＭＴ）に関わる一連の上昇した遺伝子が明らかにされた。アップレギュレーションされる遺伝子の中には、ＢＡ３０１１の標的であるＡｘｌが含まれている（Ｈｕｇｏ ２０１６； Ｂｕ ２０１６）。ＰＤ－１耐性腫瘍におけるＡｘｌのアップレギュレーションは、この集団における耐性および再発における役割を強く示唆しており、ＢＡ３０１１をニボルマブなどのＰＤ－１阻害剤と併用する十分な根拠となる。
例示的なリンカー
「リンカー」（Ｌ）は、１つ以上の部分、例えば、薬物部分（Ｄ）を抗体（Ａｂ）に結合して免疫コンジュゲート、例えば、式ＩのＡＤＣを形成するために使用することができる二官能性または多官能性部分である。一部の実施形態において、ＡＤＣは、薬物におよび抗体に共有結合するための反応性官能基を有するリンカーを使用して調製することができる。例えば、一部の実施形態において、抗体（Ａｂ）のシステインチオールは、リンカーの反応性官能基または薬物－リンカー中間体との結合を形成してＡＤＣを作製し得る。
一態様において、リンカーは、抗体上に存在する遊離システインと反応して共有結合を形成し得る官能基を有する。このような反応性官能基の非限定的な例としては、マレイミド、ハロアセトアミド、α－ハロアセチル、活性化エステル、例えば、スクシンイミドエステル、４－ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、テトラフルオロフェニルエステル、無水物、酸塩化物、塩化スルホニル、イソシアネート、およびイソチオシアネートが挙げられる。例えば、Ｋｌｕｓｓｍａｎ，ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｖｏｌ．１５，ｐｐ．７６５－７７３，２００４の７６６頁におけるコンジュゲーション法参照。
一部の実施形態において、リンカーは、抗体上に存在する求電子基と反応し得る官能基を有する。例示的なそのような求電子基としては、限定されるものではないが、アルデヒドおよびケトンカルボニル基が挙げられる。一部の実施形態において、リンカーの反応性官能基のヘテロ原子が、抗体上の求電子基と反応し、抗体単位への共有結合を形成し得る。非限定的な例示的なこのような反応性官能基としては、限定されるものではないが、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレート、およびアリールヒドラジドが挙げられる。
リンカーは、１つ以上のリンカー構成成分を含み得る。例示的なリンカー構成成分としては、６－マレイミドカプロイル（「ＭＣ」）、マレイミドプロパノイル（「ＭＰ」）、バリン－シトルリン（「ｖａｌ－ｃｉｔ」または「ｖｃ」）、アラニン－フェニルアラニン（「ａｌａ－ｐｈｅ」）、ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（「ＰＡＢ」）、Ｎ－スクシンイミジル４－（２－ピリジルチオ）ペンタノエート（「ＳＰＰ」）、および４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１カルボキシレート（「ＭＣＣ」）が挙げられる。種々のリンカー構成成分が当分野において公知であり、それらの一部が以下に記載される。
リンカーは、薬物の放出を容易にする「切断可能リンカー」であり得る。切断可能リンカーの非限定的な例としては、酸不安定性リンカー（例えば、ヒドラゾンを含む）、プロテアーゼ感受性（例えば、ペプチダーゼ感受性）リンカー、光不安定性リンカー、またはジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉ ｅｔ ａｌ．、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，ｖｏｌ．５２，ｐｐ．１２７－１３１，１９９２；米国特許第５，２０８，０２０号明細書）が挙げられる。
ある実施形態において、リンカーは、以下の式ＩＩ：－Ａａ－Ｗｗ－Ｙｙ－（式中、Ａは、「ストレッチャー単位」であり、ａは、０～１の整数であり；Ｗは、「アミノ酸単位」であり、ｗは、０～１２の整数であり；Ｙは「スペーサー単位」であり、ｙは、０、１、または２である）を有する。式ＩＩのリンカーを含むＡＤＣは、式Ｉ（Ａ）：Ａｂ－（Ａａ－Ｗｗ－Ｙｙ－Ｄ）ｐ（式中、Ａｂ、Ｄ、およびｐは、式Ｉについて上記定義のとおりである）を有する。このようなリンカーの例示的な実施形態は、米国特許第７，４９８，２９８号に記載されている。
一部の実施形態において、リンカー構成成分は、抗体を別のリンカー構成成分にまたは薬物部分に結合させる「ストレッチャー単位」（Ａ）を含む。非限定的な例示的なストレッチャー単位が以下に示される（式中、波線は、抗体、薬物、または追加のリンカー構成成分への共有結合の部位を示す）。
一部の実施形態において、リンカー構成成分は、「アミノ酸単位」（Ｗ）を含む。一部のそのような実施形態において、アミノ酸単位は、プロテアーゼによるリンカーの開裂を可能にし、それにより細胞内プロテアーゼ、例えば、リソソーム酵素への曝露時に免疫コンジュゲートからの薬物の放出を容易にする（Ｄｏｒｏｎｉｎａ ｅｔ ａｌ．、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、ｖｏｌ．２１，ｐｐ．７７８－７８４，２００３）。例示的なアミノ酸単位としては、限定されるものではないが、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、およびペンタペプチドが挙げられる。例示的なジペプチドとしては、限定されるものではないが、バリン－シトルリン（ｖｃまたはｖａｌ－ｃｉｔ）、アラニン－フェニルアラニン（ａｆまたはａｌａ－ｐｈｅ）、フェニルアラニン－リジン（ｆｋまたはｐｈｅ－ｌｙｓ）；フェニルアラニン－ホモリジン（ｐｈｅ－ｈｏｍｏｌｙｓ）；およびＮ－メチル－バリン－シトルリン（Ｍｅ－ｖａｌ－ｃｉｔ）が挙げられる。例示的なトリペプチドとしては、限定されるものではないが、グリシン－バリン－シトルリン（ｇｌｙ－ｖａｌ－ｃｉｔ）およびグリシン－グリシン－グリシン（ｇｌｙ－ｇｌｙ－ｇｌｙ）が挙げられる。アミノ酸単位は、天然に生じるアミノ酸残基および／または微量アミノ酸および／または非天然存在アミノ酸類似体、例えば、シトルリンを含み得る。アミノ酸単位は、特定の酵素、例えば、腫瘍関連プロテアーゼ、カテプシンＢ、Ｃ、およびＤ、またはプラスミンプロテアーゼによる酵素的開裂のために設計および最適化することができる。
典型的には、ペプチドタイプリンカーは、２つ以上のアミノ酸および／またはペプチド断片間のペプチド結合を形成することにより調製することができる。このようなペプチド結合は、例えば、脂質相合成法（例えば、Ｅ．Ｓｃｈｒｏｄｅｒ ａｎｄ Ｋ．Ｌｕｅｂｋｅ（１９６５）"Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ"、ｖｏｌｕｍｅ １，ｐｐ７６－１３６，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ）に従って調製することができる。
一部の実施形態において、リンカー構成成分は、抗体を薬物部分に直接、またはストレッチャー単位および／もしくはアミノ酸単位を介して結合する「スペーサー」単位（Ｙ）を含む。スペーサー単位は、「自己崩壊型（ｓｅｌｆ－ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ）」または「非自己崩壊型」であり得る。「非自己崩壊型」スペーサー単位は、ＡＤＣの開裂時にスペーサー単位の一部または全部が薬物部分に結合しているままのものである。非自己崩壊型スペーサー単位の例としては、限定されるものではないが、グリシンスペーサー単位およびグリシン－グリシンスペーサー単位が挙げられる。一部の実施形態において、腫瘍細胞関連プロテアーゼによるグリシン－グリシンスペーサー単位を含有するＡＤＣの酵素的開裂が、ＡＤＣの残部からのグリシン－グリシン－薬物部分の放出をもたらす。一部のそのような実施形態において、グリシン－グリシン－薬物部分は、腫瘍細胞中で加水分解ステップに供され、したがってグリシン－グリシンスペーサー単位を薬物部分から開裂する。
「自己崩壊型」スペーサー単位は、薬物部分の放出を可能にする。ある実施形態において、リンカーのスペーサー単位は、ｐ－アミノベンジル単位を含む。一部のそのような実施形態において、ｐ－アミノベンジルアルコールは、アミド結合を介してアミノ酸単位に付着しており、カルバメート、メチルカルバメート、またはカルボネートが、ベンジルアルコールと薬物との間に作製される（Ｈａｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ，ｖｏｌ．１５，ｐｐ．１０８７－１１０３，２００５）。一部の実施形態において、スペーサー単位は、ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢ）を含む。一部の実施形態において、自己崩壊リンカーを含むＡＤＣは、構造：
（式中、Ｑは、－Ｃ１～Ｃ８アルキル、－Ｏ－（Ｃ１～Ｃ８アルキル）、－ハロゲン、－ニトロ、または－シアノであり、ｍは、０～４範囲の整数であり；Ｘは、１つ以上の追加のスペーサー単位であり得、または不存在であり得；ｐは、１～約２０の範囲である）を有する。一部の実施形態において、ｐは、１～１０、１～７、１～５、または１～４の範囲である。非限定的な例示的なＸスペーサー単位としては、
（式中、Ｒ１およびＲ２は、ＨおよびＣ１～Ｃ６アルキルから独立して選択される）。一部の実施形態において、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ－ＣＨ３である。
自己崩壊型スペーサーの他の例としては、限定されるものではないが、ＰＡＢ基と電子的に類似する芳香族化合物、例えば、２－アミノイミダゾール－５－メタノール誘導体（米国特許第７，３７５，０７８号明細書；Ｈａｙ ｅｔ ａｌ．、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、ｖｏｌ．９，ｐ．２２３７－、１９９９）およびオルト－またはパラ－アミノベンジルアセタールが挙げられる。いくつかの実施形態では、アミド結合加水分解時に環化を受けるスペーサー、例えば、置換および非置換４－アミノ酪酸アミド（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓ ｅｔ ａｌ．， Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｂｉｏｌｏｇｙ， ｖｏｌ． ２， ｐｐ． ２２３－， １９９５）、適切に置換されたビシクロ［２．２．１］およびビシクロ［２．２．２］環系（Ｓｔｏｒｍ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．， ｖｏｌ． ９４， ｐ． ５８１５－， １９７２）および２－アミノフェニルプロピオン酸アミド（Ａｍｓｂｅｒｒｙら、Ｊ． Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．， ５５巻、５８６７頁、１９９０）を使用することができる。グリシン残基のα－炭素への薬物の結合は、ＡＤＣにおいて有用であり得る自己崩壊型スペーサーの別の例である（Ｋｉｎｇｓｂｕｒｙ ｅｔ ａｌ．、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、ｖｏｌ．２７，ｐ．１４４７，１９８４）。
一部の実施形態において、リンカーＬは、分岐する多官能性リンカー部分を介して２つ以上の薬物部分が抗体に共有結合するための樹状型リンカーであり得る（Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ，ｖｏｌ．１２，ｐｐ．２２１３－２２１５，２００２；Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｖｏｌ．１１，ｐｐ．１７６１－１７６８，２００３）。樹状リンカーは、ＡＤＣの効力に関連する薬物と抗体とのモル比、すなわち、負荷を増加させ得る。したがって、抗体が１つのみの反応性システインチオール基を担持する場合、複数の薬物部分が、樹状リンカーを介して付着され得る。
非限定的な例示的リンカーは、式ＩのＡＤＣの関連において以下に示される：
（式中、Ｒ１およびＲ２は、ＨおよびＣ１～Ｃ６アルキルから独立して選択される）。一部の実施形態において、Ｒ１およびＲ２は、それぞれ－ＣＨ３である。
（式中、ｎは、０～１２である）。一部の実施形態において、ｎは、２～１０である。一部の実施形態において、ｎは、４～８である。
さらなる非限定的な例示的なＡＤＣとしては、構造：
それぞれのＲは、独立してＨまたはＣ１～Ｃ６アルキルであり；ｎは、１～１２である）が挙げられる。
一部の実施形態において、リンカーは、溶解度および／または反応性をモジュレートする基により置換されている。非限定的な例として、荷電置換基、例えば、スルホネート（－ＳＯ３ －）またはアンモニウムは、リンカー試薬の水溶性を増加させ、リンカー試薬と抗体および／もしくは薬物部分とのカップリング反応を容易にし得、またはＡＤＣを調製するために用いられる合成経路に応じて、Ａｂ－Ｌ（抗体－リンカー中間体）とＤとのカップリング反応、もしくはＤ－Ｌ（薬物－リンカー中間体）とＡｂとのカップリング反応を容易にし得る。一部の実施形態において、リンカーの一部を抗体にカップリングし、リンカーの一部を薬物にカップリングし、次いでＡｂ－（リンカー部分）ａを薬物－（リンカー部分）ｂにカップリングして式ＩのＡＤＣを形成する。
本発明の化合物は、以下のリンカー試薬を用いて調製されたＡＤＣを明示的に想定しているが、これに限定されるものではない：ビスマレイミドトリオキシエチレングリコール（ＢＭＰＥＯ）、Ｎ－（β－マレイミドプロピルオキシ）－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＢＭＰＳ）、Ｎ－（ε－マレイミドカプロイルオキシ）スクシンイミドエステル（ＥＭＣＳ）、Ｎ－［γ－マレイミドブチリルオキシ］スクシンイミドエステル（ＧＭＢＳ）、１，６－ヘキサン－ビスビニルスルホン（ＨＢＶＳ）、スクシンイミジル ４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシ－（６－アミドカプレート）（ＬＣ－ＳＭＣＣ）、ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、４－（４－Ｎ－マレイミドフェニル）酪酸ヒドラジド、スクシンイミジル ３－（ブロモアセトアミド）プロピオネート（ＳＢＡＰ）、スクシンイミジルヨードアセテート（ＳＩＡ）、スクシンイミジル（４－ヨードアセチル）アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、Ｎ－スクシンイミジル－４－（２－ピリジルチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）、スクシンイミジル ４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、スクシンイミジル４－（ｐ－マレイミドフェニル）ブチレート（ＳＭＰＢ）、スクシンイミジル６－［（β－マレイミドプロピオンアミド）ヘキサノエート］（ＳＭＰＨ）、イミノチオラン（ＩＴ）、スルホＥＭＣＳ、スルホＧＭＢＳ、スルホＫＭＵＳ、スルホＭＢＳ、スルホＳＩＡＢ、スルホＳＭＣＣ、およびスルホＳＭＰＢ、およびスクシンイミジル－（４－ビニルスルホン）ベンゾエート（ＳＶＳＢ）、およびビスマレイミド試薬を含む：ジチオビスマレイミドエタン（ＤＴＭＥ）、１，４－ビスマレイミドブタン（ＢＭＢ）、１，４ ビスマレイミド－２，３－ジヒドロキシブタン（ＢＭＤＢ）、ビスマレイミドヘキサン（ＢＭＨ）、ビスマレイミドエタン（ＢＭＯＥ）、ＢＭ（ＰＥＧ）２ （下に示す）、およびＢＭ（ＰＥＧ）３ （下に示す）；イミドエステルの二官能性誘導体（アジプイミド酸ジメチルＨＣｌなど）、活性エステル（スベリン酸ジサクシンイミジルなど）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビス－アジド化合物（ビス（ｐ－アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス－ジアゾニウム誘導体（ビス－（ｐ－ジアゾニウムベンゾイル）－エチレンジアミンなど）、ジイソシアネート（トルエン２，６－ジイソシアネートなど）、およびビス活性フッ素化合物（１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼンなど）。一部の実施形態において、ビス－マレイミド試薬は、チオール含有薬物部分、リンカー、またはリンカー－薬物中間体への抗体中のシステインのチオール基の付着を可能にする。チオール基と反応性である他の官能基としては、限定されるものではないが、ヨードアセトアミド、ブロモアセトアミド、ビニルピリジン、ジスルフィド、ピリジルジスルフィド、イソシアネート、およびイソチオシアネートが挙げられる。
特定の有用なリンカー試薬は、種々の商業的供給源、例えば、Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｉｎｃ．（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ， Ｉｌｌ．）、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．（Ｂｏｕｌｄｅｒ， Ｃｏｌｏ．）から入手するか、当技術分野で記載されている手順に従い合成され得る；例えば、Ｔｏｋｉ ｅｔ ａｌ、Ｊ． Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、６７巻、１８６６～１８７２頁、２００２年；Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ、３８巻、５２５７～６０頁、１９９７年；Ｗａｌｋｅｒ、Ｊ． Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．， ６０巻、５３５２～５３５５頁、１９９５年；Ｆｒｉｓｃｈら、Ｂｉｏｓｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．， ７巻、１８０～１８６頁、１９９５年；米国特許第６，２１４，３４５号；ＷＯ ０２／０８８１７２号；ＵＳ２００３１３０１８９号；ＵＳ２００３０９６７４３号；ＷＯ ０３／０２６５７７号；ＷＯ ０３／０４３５８３号；およびＷＯ ０４／０３２８２８号が挙げられる。
炭素－１４標識１－イソチオシアナトベンジル－３－メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ－ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドを抗体にコンジュゲートするための例示的なキレート剤である。例えば、国際公開第９４／１１０２６号パンフレット参照。

例示的な薬物部分
１）メイタンシンおよびメイタンシノイド
一部の実施態様において、免疫コンジュゲートは、１つ以上のメイタンシノイド分子にコンジュゲートしている抗体を含む。メイタンシノイドはメイタンシンの誘導体であり、チューブリン重合を阻害することにより作用する有糸分裂阻害剤である。メイタンシンは、最初、東アフリカ低木のメイテナス・セラタ（Ｍａｙｔｅｎｕｓ ｓｅｒｒａｔａ）から単離された（米国特許第３８９６１１１号明細書）。続いて、ある微生物もメイタンシノイド、例えば、メイタンシノールおよびＣ－３メイタンシノールエステルを生成することが発見された（米国特許第４１５１０４２号明細書）。合成メイタンシノイドは、例えば、米国特許第４，１３７，２３０； ４，２４８，８７０； ４，２５６，７４６； ４，２６０，６０８； ４，２６５，８１４； ４，２９４，７５７； ４，３０７，０１６； ４，３０８，２６８； ４，３０８，２６９； ４，３０９，４２８； ４，３１３，９４６； ４，３１５，９２９； ４，３１７，８２１； ４，３２２，３４８； ４，３３１，５９８； ４，３６１，６５０； ４，３６４，８６６； ４，４２４，２１９； ４，４５０，２５４； ４，３６２，６６３； および４，３７１，５３３に開示されている。
メイタンシノイド薬物部分は、（ｉ）発酵もしくは化学修飾、または発酵産物の誘導体化により調製することが比較的利用しやすく、（ｉｉ）抗体への非ジスルフィドリンカーを介するコンジュゲーションに好適な官能基による誘導体化に従い、（ｉｉｉ）血漿中で安定であり、（ｉｖ）種々の腫瘍細胞株に対して有効であるため、抗体－薬物コンジュゲートの有力な薬物部分である。
メイタンシノイド薬物部分としての使用に好適なあるメイタンシノイドは当分野において公知であり、公知の方法に従って天然の供給源から単離することができ、または遺伝子操作技術を使用して産生することができる（例えば、Ｙｕ ｅｔ ａｌ．、ＰＮＡＳ，ｖｏｌ．９９，ｐｐ．７９６８－７９７３，２００２参照）。また、メイタンシノイドは、公知の方法に従って合成により調製することもできる。
例示的なメイタンシノイド薬物部分としては、例えば、以下の修飾された芳香環を有するものが挙げられるが、これらに限定されるものではない：Ｃ－１９－デクロロ（米国特許第４２５６７４６号）（例えば、アンサミントシンＰ２のアルミニウムリチウム水素化還元により調製）； Ｃ－２０－ヒドロキシ（またはＣ－２０－デメチル）＋／－Ｃ－１９－デクロロ（米国特許第４３６１６５０号および第４３０７０１６号）（例えば、ストレプトマイセスまたは放線菌を用いて脱メチル化するか、ＬＡＨを用いて脱塩素化することにより調製）；および Ｃ－２０－デメトキシ、Ｃ－２０－アシルオキシ（－ＯＣＯＲ）、＋／－デクロロ（米国特許第４２９４７５７号）（例えば、アシルクロリドを用いたアシル化によって調製）、および 芳香環の他の位置に修飾を有するもの。
例示的なメイタンシノイド薬物部分はまた、以下のような修飾を有するものを含む：Ｃ－９－ＳＨ（米国特許第４４２４２１９号）（例えば、メイタンシノールとＨ２ＳまたはＰ２Ｓ５との反応により調製される）； Ｃ－１４－アルコキシメチル（デメトキシ／ＣＨ２ＯＲ）（米国特許第４３３１５９８号）； Ｃ－１４－ヒドロキシメチルまたはアシルオキシメチル（ＣＨ２ＯＨまたはＣＨ２ＯＡｃ）（米国特許第４４５０２５４号）（例えば、Ｎｏｃａｒｄｉａから調製）； Ｃ－１５－ヒドロキシ／アシルオキシ（米国特許第４３６４８６６号）（例えば、ストレプトマイセスによるメイタンシノールの変換によって調製される）； Ｃ－１５－メトキシ（米国特許第４３１３９４６号および第４３１５９２９号）（例えば、Ｔｒｅｗｉａ ｎｕｄｌｆｌｏｒａから単離されたもの）； Ｃ－１８－Ｎ－デメチル（米国特許第４３６２６６３号および第４３２２３４８号）（例えば、ストレプトマイセスによるメイタンシノールの脱メチル化によって調製される）；および ４，５－デオキシ（米国特許第４，３７１，５３３号）（例えば、メイタンシノールの三塩化チタン／ＬＡＨ還元により調製される）。
メイタンシノイド化合物上の多くの位置が結合位置として有用である。例えば、慣用のカップリング技術を使用してヒドロキシル基との反応によりエステル結合を形成することができる。一部の実施形態において、反応は、ヒドロキシル基を有するＣ－３位、ヒドロキシメチルにより修飾されているＣ－１４位、ヒドロキシル基により修飾されているＣ－１５位、およびヒドロキシル基を有するＣ－２０位において生じ得る。一部の実施形態において、結合は、メイタンシノールまたはメイタンシノール類似体のＣ－３位において形成される。
メイタンシノイド薬物部分としては、以下の構造：
（式中、波線は、ＡＤＣのリンカーへのメイタンシノイド薬物部分の硫黄原子の共有結合を示す）を有するものが挙げられる。それぞれのＲは、独立してＨまたはＣ１－Ｃ６アルキルであり得る。アミド基を硫黄原子に結合するアルキレン鎖は、メタニル、エタニルまたはプロピル、すなわち、ｍが１、２または３であってもよい（米国特許第６３３４１０号；米国特許第５２０８０２０号；Ｃｈａｒｉ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ｖｏｌ． ５２， ｐｐ． １２７－１３１， １９９２； Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｌｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ｖｏｌ． ９３， ｐｐ． ８６１８－８６２３， １９９６）。
本発明のＡＤＣでは、メイタンシノイド薬物部分のすべての立体異性体、すなわちキラル炭素のＲおよびＳ配置の任意の組み合わせが想定される（米国特許第７２７６４９７号；米国特許第６９１３７４８号；米国特許第６４４１１６３号；米国特許第６３３４１０号（ＲＥ３９１５１）、米国特許第５２０８０２０号； Ｗｉｄｄｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ （２００６） Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ４９：４３９２－４４０８。一部の実施態様において、メイタンシノイド薬物部分は、以下の立体化学を有する：
メイタンシノイド薬物部分の例示的な実施態様としては、限定されるものではないが、構造：
（式中、波線は、抗体－薬物コンジュゲートのリンカー（Ｌ）への薬物の硫黄原子の共有結合を示す）を有するＤＭ１；ＤＭ３およびＤＭ４が挙げられる。
ＤＭ１が抗体のチオール基にＢＭＰＥＯリンカーを介して結合している例示的な抗体－薬物コンジュゲートは、構造および略記号：
（式中、Ａｂは、抗体であり；ｎは、０、１、または２であり；ｐは、１～約２０である）を有する。一部の実施形態において、ｐは、１～１０であり、ｐは、１～７であり、ｐは、１～５であり、またはｐは、１～４である。
メイタンシノイドを含有する免疫コンジュゲート、その作製方法およびその治療的使用は、例えば、米国特許第５，２０８，０２０号明細書および同第５，４１６，０６４号明細書；米国特許出願公開第２００５／０２７６８１２Ａ１号明細書；および欧州特許第０４２５２３５Ｂ１号明細書に開示されている。Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，ｖｏｌ．９３，ｐｐ．８６１８－８６２３，１９９６；およびＣｈａｒｉ ｅｔ ａｌ．、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，ｖｏｌ．５２，ｐｐ．１２７－１３１，１９９２も参照。
一部の実施形態において、抗体－メイタンシノイドコンジュゲートは、抗体の生物学的活性もメイタンシノイド分子の生物学的活性も実質的に縮小させずに、メイタンシノイド分子に抗体を化学的に結合させることにより調製することができる。例えば、米国特許第５，２０８，０２０号明細書参照。一部の実施形態において、抗体分子当たりコンジュゲートしている平均３～４つのメイタンシノイド分子を有するＡＤＣは、抗体の機能にも溶解度にも悪影響を及ぼさずに標的細胞の細胞毒性の向上において効力を示している。一部の例において、毒素／抗体の１つの分子であっても、ネイキッド抗体の使用と比べて細胞毒性を向上させることが予測される。
抗体－メイタンシノイドコンジュゲートを作製するための例示的な結合基としては、例えば、本明細書に記載のものならびに米国特許第５，２０８，０２０号明細書；欧州特許第０４２５２３５Ｂ１号明細書；Ｃｈａｒｉ ｅｔ ａｌ．、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，ｖｏｌ．５２，ｐｐ．１２７－１３１、１９９２；米国特許出願公開第２００５／０２７６８１２Ａ１号明細書；および米国特許出願公開第２００５／０１６９９３Ａ１号明細書に開示のものが挙げられる。

（２）アウリスタチンおよびドラスタチン
薬物部分としては、ドラスタチン、アウリスタチン、ならびにそれらの類似体および誘導体が挙げられる（米国特許第５，６３５，４８３号明細書；米国特許第５，７８０，５８８号明細書；米国特許第５，７６７，２３７号明細書；米国特許第６，１２４，４３１号明細書）。アウリスタチンは、海産軟体動物化合物ドラスタチン－１０の誘導体である。特定の理論に拘泥されないが、ドラスタチンやオーリスタチンは、微小管ダイナミクス、ＧＴＰ加水分解、核・細胞分裂を阻害すること （Ｗｏｙｋｅ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．， ｖｏｌ． ４５， ｐｐ． ３５８０－３５８４， ２００１）、抗癌活性（米国特許第５６６３１４９号）および抗真菌活性（Ｐｅｔｔｉｔ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．， ｖｏｌ． ４２， ｐｐ． ２９６１－２９６５， １９９８）を有することがしめされている。ドラスタチン／アウリスタチン薬物部分は、ペプチド性薬物部分のＮ（アミノ）末端またはＣ（カルボキシル）末端を介して抗体に付着させることができる（国際公開第０２／０８８１７２号パンフレット；Ｄｏｒｏｎｉｎａ ｅｔ ａｌ．、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．２１，ｐｐ．７７８－７８４，２００３；Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ ｅｔ ａｌ．、Ｂｌｏｏｄ，ｖｏｌ．１０２，ｐｐ．１４５８－１４６５，２００３）。
例示的なアウリスタチンの実施態様としては、米国特許第７，４９８，２９８号明細書および米国特許第７，６５９，２４１号明細書に開示のＮ末端結合モノメチルアウリスタチン薬物部分ＤＥおよびＤＦが挙げられる：
（式中、ＤＥおよびＤＦの波線は、抗体または抗体－リンカー構成成分への共有結合部位を示し、独立してそれぞれの位置において、
Ｒ２は、ＨおよびＣ１～Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ３～Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１～Ｃ８アルキル－アリール、Ｃ１～Ｃ８アルキル－（Ｃ３～Ｃ８炭素環）、Ｃ３～Ｃ８複素環およびＣ１～Ｃ８アルキル－（Ｃ３～Ｃ８複素環）から選択され；
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ３～Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１～Ｃ８アルキル－アリール、Ｃ１～Ｃ８アルキル－（Ｃ３～Ｃ８炭素環）、Ｃ３～Ｃ８複素環およびＣ１～Ｃ８アルキル－（Ｃ３～Ｃ８複素環）から選択され；
Ｒ５は、Ｈおよびメチルから選択され；
またはＲ４およびＲ５は共同で炭素環式環を形成し、式－（ＣＲａＲｂ）ｎ－（式中、ＲａおよびＲｂは、Ｈ、Ｃ１～Ｃ８アルキルおよびＣ３～Ｃ８炭素環式化合物から独立して選択され、ｎは、２、３、４、５および６から選択される）を有し；
Ｒ６は、ＨおよびＣ１～Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ３～Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１～Ｃ８アルキル－アリール、Ｃ１～Ｃ８アルキル－（Ｃ３～Ｃ８炭素環）、Ｃ３～Ｃ８複素環およびＣ１～Ｃ８アルキル－（Ｃ３～Ｃ８複素環）から選択され；
それぞれのＲ８は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１～Ｃ８アルキル、Ｃ３～Ｃ８炭素環およびＯ－（Ｃ１～Ｃ８アルキル）から独立して選択され；
Ｒ９は、ＨおよびＣ１～Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ１０は、アリールまたはＣ３～Ｃ８複素環から選択され；
Ｚは、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、またはＮＲ１２であり、Ｒ１２は、Ｃ１～Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１１は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ２０アルキル、アリール、Ｃ３～Ｃ８複素環、－（Ｒ１３Ｏ）ｍ－Ｒ１４、または（Ｒ１３Ｏ）ｍ－ＣＨ（Ｒ１５）２から選択され；
ｍは、１～１０００の範囲の整数であり；
Ｒ１３は、Ｃ２～Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１４は、ＨまたはＣ１～Ｃ８アルキルであり；
ｅのそれぞれの存在は、独立してＨ、ＣＯＯＨ、－（ＣＨ２）ｎ－Ｎ（Ｒ１６）２、－（ＣＨ２）ｎ－ＳＯ３Ｈ、または（ＣＨ２）ｎ－ＳＯ３－Ｃ１～Ｃ８アルキルであり；
ｅのそれぞれの存在は、独立してＨ、Ｃ１～Ｃ８アルキル、または（ＣＨ２）ｎ－ＣＯＯＨであり；
Ｒ１８は、－Ｃ（Ｒ８）２－Ｃ（Ｒ８）２－アリール、－Ｃ（Ｒ８）２－Ｃ（Ｒ８）２（Ｃ３～Ｃ８複素環）、およびＣ（Ｒ８）２－Ｃ（Ｒ８）２（Ｃ３～Ｃ８炭素環）から選択され；
ｎは０～６の範囲の整数である）。
一実施態様において、Ｒ３、Ｒ４およびＲ７は、独立してイソプロピルまたはｓｅｃ－ブチルであり、Ｒ５は、－Ｈまたはメチルである。例示的な実施態様において、Ｒ３およびＲ４は、それぞれイソプロピルであり、Ｒ５は、－Ｈであり、Ｒ７は、ｓｅｃ－ブチルである。
さらに他の実施態様において、Ｒ２およびＲ６は、それぞれメチルであり、Ｒ９は－Ｈである。
さらに他の実施態様において、Ｒ８のそれぞれの存在は、－ＯＣＨ３である。
例示的な実施態様において、Ｒ３およびＲ４は、それぞれイソプロピルであり、Ｒ２およびＲ６は、それぞれメチルであり、Ｒ５は、－Ｈであり、Ｒ７は、ｓｅｃ－ブチルであり、Ｒ８のそれぞれの存在は、－ＯＣＨ３であり、Ｒ９は、－Ｈである。
一実施態様において、Ｚは、－Ｏ－またはＮＨ－である。
一実施態様において、Ｒ１０は、アリールである。
例示的な実施態様において、Ｒ１０は、－フェニルである。
例示的な実施態様において、Ｚが－Ｏ－である場合、Ｒ１１は、－Ｈ、メチルまたはｔ－ブチルである。
一実施態様において、Ｚが－ＮＨである場合、Ｒ１１は、－ＣＨ（Ｒ１５）２であり、Ｒ１５は、－（ＣＨ２）ｎ－Ｎ（Ｒ１６）２であり、Ｒ１６は、－Ｃ１～Ｃ８アルキルまたは（ＣＨ２）ｎ－ＣＯＯＨである。
別の実施態様において、Ｚが－ＮＨである場合、Ｒ１１は、－ＣＨ（Ｒ１５）２であり、Ｒ１５は、－（ＣＨ２）ｎ－ＳＯ３Ｈである。
式ＤＥの例示的なアウリスタチンの実施態様はＭＭＡＥであり、式中、波線は、抗体－薬物コンジュゲートのリンカー（Ｌ）への共有結合を示す：
式ＤＥの例示的なアウリスタチンの実施態様はＭＭＡＥであり、式中、波線は、抗体－薬物コンジュゲートのリンカー（Ｌ）への共有結合を示す：
他の例示的な実施態様としては、ペンタペプチドアウリスタチン薬物部分のＣ末端におけるフェニルアラニンカルボキシ修飾を有するモノメチルバリン化合物（国際公開第２００７／００８８４８号パンフレット）およびペンタペプチドアウリスタチン薬物部分のＣ末端におけるフェニルアラニン側鎖修飾を有するモノメチルバリン化合物（国際公開第２００７／００８６０３号パンフレット）が挙げられる。
ＭＭＡＦおよび種々のリンカー構成成分を含む式ＩのＡＤＣの非限定的な例示的な実施態様としては、Ａｂ－ＭＣ－ＰＡＢ－ＭＭＡＦおよびＡｂ－ＰＡＢ－ＭＭＡＦも挙げられる。タンパク質分解により切断可能でないリンカーにより抗体に付着しているＭＭＡＦを含む免疫コンジュゲートは、タンパク質分解により切断可能リンカーにより抗体に付着しているＭＭＡＦを含む免疫コンジュゲートと同等の活性を保有することが示されている（Ｄｏｒｏｎｉｎａ ｅｔ ａｌ．、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．、ｖｏｌ．１７，ｐｐ．１１４－１２４，２００６参照）。一部のこのような実施形態において、薬物放出は細胞中の抗体分解に影響されると考えられる。
典型的には、ペプチドベースの薬物部分は、２つ以上のアミノ酸および／またはペプチド断片間でペプチド結合を形成することにより調製することができる。このようなペプチド結合は、例えば、ペプチド化学の分野において周知の液相合成法に従って調製することができる（例えば、Ｅ．Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ ａｎｄ Ｋ．Ｌｕｅｂｋｅ，"Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ"、ｖｏｌｕｍｅ １，ｐｐ ７６－１３６，１９６５，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ参照）。アウリスタチン／ドラスタチン薬物部分は、いくつかの実施形態において、以下の方法に従って調製することができる：米国特許第７４９８２９８号、米国特許第５６３５４８３号、米国特許第５７８０５８８号；Ｐｅｔｔｉｔ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．， ｖｏｌ． １１１， ｐｐ． ５４６３－５４６５， １９９８； Ｐｅｔｔｉｔ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｔｉ－Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ， ｖｏｌ． １３， ｐｐ． ２４３－２７７， １９９８； Ｐｅｔｔｉｔ ｅｔ ａｌ．， Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ｖｏｌ． ６， ｐｐ． ７１９－７２５， １９９６； Ｐｅｔｔｉｔ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ． ｖｏｌ． １５， ｐｐ． ８５９－８６３， １９９６； および Ｄｏｒｏｎｉｎａ ， Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．， ｖｏｌ． ２１， ｐｐ． ７７８－７８４， ２００３。
いくつかの実施形態では、ＭＭＡＥなどの式ＤＥ、およびＭＭＡＦなどの式ＤＥのアウリスタチン／ドラスタチン薬物部分、ならびにＭＣ－ＭＭＡＦ、ＭＣ－ＭＭＡＥ、ＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢ－ＭＭＡＦ、およびＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥなどの薬物リンカー中間体およびその誘導体は、米国特許第７４９８２９８号；Ｄｏｒｏｎｉｎａ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．， ｖｏｌ． １７， ｐｐ． １１４－１２４， ２００６； ａｎｄ Ｄｏｒｏｎｉｎａ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈ．， ｖｏｌ． ２１， ｐｐ． ７７８－７８４， ２００３ に記載されており、その後、目的の抗体にコンジュゲートされる。
（３）カリケアミシン
一部の実施態様において、免疫コンジュゲートは、１つ以上のカリケアマイシン分子にコンジュゲートしている抗体を含む。抗生物質のカリケアマイシンファミリー、およびそれらの類似体は、サブピコモル濃度において二本鎖ＤＮＡ分解を産生し得る（Ｈｉｎｍａｎ ｅｔ ａｌ．、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，ｖｏｌ．５３，ｐｐ．３３３６－３３４２，１９９３；Ｌｏｄｅ ｅｔ ａｌ．、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，ｖｏｌ．５８，ｐｐ．２９２５－２９２８，１９９８）。カリケアマイシンは、細胞内作用部位を有するが、ある例において、細胞膜を容易に通過しない。したがって、抗体媒介内在化を介するこれらの薬剤の細胞取り込みは、一部の実施形態において、それらの細胞毒性効果を大きく向上させ得る。カリケアマイシン薬物部分を有する抗体－薬物コンジュゲートを調製する非限定的な例示的方法は、例えば、米国特許第５，７１２，３７４号明細書；米国特許第５，７１４，５８６号明細書；米国特許第５，７３９，１１６号明細書；および米国特許第５，７６７，２８５号明細書に記載されている。

（４）ピロロベンゾジアゼピン類
一部の実施形態において、ＡＤＣは、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）を含む。一部の実施形態において、ＰＤＢ二量体は特異的ＤＮＡ配列を認識し、それに結合する。天然産物アントラマイシンであるＰＢＤは、１９６５年に最初に報告された（Ｌｅｉｍｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、ｖｏｌ．８７，ｐｐ．５７９３－５７９５，１９６５；Ｌｅｉｍｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、ｖｏｌ．８７，ｐｐ．５７９１－５７９３，１９６５）。それ以来、天然に存在するＰＢＤおよび類似体が数多く報告されており（Ｔｈｕｒｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｃｈｅｍ． Ｒｅｖ． ｖｏｌ． １９９４， ｐｐ． ４３３－４６５ １９９４）、三環式ＰＢＤ足場の二量体を含む（米国特許第６８８４７９９号； 米国特許第７０４９３１１号； 米国特許第 ７０６７５１１号； 米国特許第７２６５１０５号；米国特許第７５１１０３２号； 米国特許第 ７５２８１２６号； 米国特許第 ７５５７０９９号）。いかなる特定の理論にも拘束されるものではないが、二量体構造が、Ｂ型ＤＮＡの副溝との等螺旋性（ｉｓｏｈｅｌｉｃｉｔｙ）に適切な三次元形状を付与し、結合部位における滑合をもたらすと考えられる（Ｋｏｈｎ，Ｉｎ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ＩＩＩ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．３－１１（１９７５）；Ｈｕｒｌｅｙ ａｎｄ Ｎｅｅｄｈａｍ－ＶａｎＤｅｖａｎｔｅｒ，Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．、ｖｏｌ．１９，ｐｐ．２３０－２３７，１９８６）。Ｃ２アリール置換基を担持する二量体ＰＢＤ化合物は、細胞毒性剤として有用であることが示されている（Ｈａｒｔｌｅｙ ｅｔ ａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、ｖｏｌ．７０，ｐｐ．６８４９－６８５８，２０１０；Ａｎｔｏｎｏｗ，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．ｖｏｌ．５３，ｐｐ．２９２７－２９４１，２０１０；Ｈｏｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ａｎｄ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ，ｖｏｌ．１９，ｐｐ．６４６３－６４６６，２００９）。
ＰＢＤ二量体は抗体にコンジュゲートされており、得られるＡＤＣは、抗癌特性を有することが示されている。非限定的な例示的なＰＢＤ二量体上の結合部位としては、５員ピロロ環、ＰＢＤ単位の間のテザー、およびＮ１０－Ｃ１１イミン基が挙げられる（国際公開第２００９／０１６５１６号パンフレット；米国特許出願公開第２００９／３０４７１０号明細書；米国特許出願公開第２０１０／０４７２５７号明細書；米国特許出願公開第２００９／０３６４３１号明細書；米国特許出願公開第２０１１／０２５６１５７号明細書；国際公開第２０１１／１３０５９８号パンフレット）。
非限定的な例示的ＡＤＣのＰＢＤ二量体構成成分は、式Ａ：
のもの、ならびにその塩および溶媒和物（式中、
波線は、リンカーへの共有結合部位を示し；
点線は、Ｃ１とＣ２との間またはＣ２とＣ３との間の二重結合の任意選択の存在を示し；
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、＝Ｏ、＝ＣＨ２、ＣＮ、Ｒ、ＯＲ、＝ＣＨ－ＲＤ、＝Ｃ（ＲＤ）２、Ｏ－ＳＯ２－Ｒ、ＣＯ２ＲおよびＣＯＲから独立して選択され、場合により、ハロまたはジハロからさらに選択され、ＲＤは、Ｒ、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＲ、ＣＨＯ、ＣＯ２Ｈ、およびハロから独立して選択され；
Ｒ６およびＲ９は、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎおよびハロから独立して選択され；
Ｒ７は、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎおよびハロから独立して選択され；
Ｑは、Ｏ、Ｓ、およびＮＨから独立して選択され、
Ｒ１１は、ＨもしくはＲのいずれかであり、またはＱがＯである場合、ＳＯ３Ｍであり、Ｍは、金属陽イオンであり；
ＲおよびＲ’は、場合により置換されているＣ１～８アルキル、Ｃ１～１２アルキル、Ｃ３～８ヘテロシクリル、Ｃ３～２０複素環、およびＣ５～２０アリール基からそれぞれ独立して選択され、場合により、基ＮＲＲ’との関連で、ＲおよびＲ’は、それらが付着している窒素原子と一緒になって、場合により置換されている４、５、６、または７員複素環式環を形成し；
Ｒ１２、Ｒ１６、Ｒ１９、およびＲ１７は、それぞれＲ２、Ｒ６、Ｒ９、およびＲ７について定義されるとおりであり、
Ｒ"は、Ｃ３～１２アルキレン基であり、その鎖は、１つ以上のヘテロ原子、例えば、Ｏ、Ｓ、Ｎ（Ｈ）、ＮＭｅ、および／または芳香環、例えば、ベンゼンまたはピリジンにより中断されていてよく、それらの環は、場合により置換されており；
ＸおよびＸ’は、Ｏ、Ｓ、およびＮ（Ｈ）から独立して選択される）である。
一部の実施形態において、ＲおよびＲ’は、場合により置換されているＣ１～１２アルキル、Ｃ３～２０複素環、およびＣ５～２０アリール基からそれぞれ独立して選択され、場合により、基ＮＲＲ’との関連で、ＲおよびＲ’は、それらが付着している窒素原子と一緒になって、場合により置換されている４、５、６、または７員複素環式環を形成する。いくつかの実施形態において、Ｒ９およびＲ１９はＨであり、いくつかの実施形態において、Ｒ６およびＲ１６はＨである。
一部の実施形態において、Ｒ７およびＲ１７は両方とも、ＯＲ７Ａであり、Ｒ７Ａは、場合により置換されているＣ１～４アルキルである。一部の実施形態において、Ｒ７Ａは、Ｍｅである。一部の実施形態において、Ｒ７Ａは、Ｃｈ２Ｐｈであり、Ｐｈは、フェニル基である。一部の実施形態において、Ｘは、Ｏである。一部の実施形態において、Ｒ１１は、Ｈである。一部の実施形態において、それぞれの単量体単位中のＣ２とＣ３との間に二重結合が存在する。
一部の実施形態において、Ｒ２およびＲ１２は、ＨおよびＲから独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ２およびＲ１２は、独立してＲである。一部の実施形態において、Ｒ２およびＲ１２は、独立して、場合により置換されているＣ５～２０アリールまたはＣ５～７アリールまたはＣ８～１０アリールである。一部の実施形態において、Ｒ２およびＲ１２は、独立して、場合により置換されているフェニル、チエニル、ナフチル、ピリジル、キノリニル、またはイソキノリニルである。一部の実施形態において、Ｒ２およびＲ１２は、＝Ｏ、＝ＣＨ２、＝ＣＨ－ＲＤ、および＝Ｃ（ＲＤ）２から独立して選択される。一部の実施形態において、Ｒ２およびＲ１２は、それぞれ＝ＣＨ２である。いくつかの実施形態において、Ｒ２及びＲ１２は、それぞれＨであり、いくつかの実施形態において、Ｒ２及びＲ１２は、それぞれ＝Ｏである。一部の実施形態において、Ｒ２およびＲ１２は、それぞれ＝ＣＦ２である。一部の実施形態において、Ｒ２および／またはＲ１２は、独立して＝Ｃ（ＲＤ）２である。一部の実施形態において、Ｒ２および／またはＲ１２は、独立して＝ＣＨ－ＲＤである。
一部の実施形態において、Ｒ２および／またはＲ１２が＝ＣＨ－ＲＤである場合、それぞれの基は、独立して、以下に示される立体配置のいずれかを有し得る：
一部の実施形態において、＝ＣＨ－ＲＤは、立体配置（Ｉ）である。一部の実施形態において、Ｒ"は、Ｃ３アルキレン基またはＣ５アルキレン基である。
ＰＢＤ二量体－ｖａｌ－ｃｉｔ－ＰＡＢ－ＡｂおよびＰＢＤ二量体－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ－ＰＡＢ－Ａｂのリンカーは、プロテアーゼ切断可能である一方、ＰＢＤ二量体－マレイミド－アセタールのリンカーは、酸不安定性である。
ＰＢＤ二量体およびＰＢＤ二量体を含むＡＤＣは、当分野において公知の方法に従って調製することができる。例えば、国際公開第２００９／０１６５１６号パンフレット；米国特許出願公開第２００９／３０４７１０号明細書；米国特許出願公開第２０１０／０４７２５７号明細書；米国特許出願公開第２００９／０３６４３１号明細書；米国特許出願公開第２０１１／０２５６１５７号明細書；国際公開第２０１１／１３０５９８号パンフレット参照。
（５）アントラサイクリン類
一部の実施形態において、ＡＤＣは、アントラサイクリンを含み得る。アントラサイクリンは、細胞毒性活性を示す抗生物質化合物である。特定の理論に拘泥されるつもりはないが、アントラサイクリン類は、以下のような様々なメカニズムで細胞を殺すように作用することが研究で指摘されている：１） 薬物分子が細胞のＤＮＡにインターカレーションすることにより、ＤＮＡ依存性の核酸合成を阻害する； ２） 薬物によるフリーラジカルの生成で、それが細胞高分子と反応して細胞に損傷を与える、および／または３）薬剤分子と細胞膜との相互作用（例えば、Ｃ． Ｐｅｔｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， “Ｔｒａｎｓｐｏｒｔ Ａｎｄ Ｓｔｏｒａｇｅ Ｏｆ Ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ Ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｌｅｕｋｅｍｉａ” ｉｎ Ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ； Ｎ． Ｒ． Ｂａｃｈｕｒ， “Ｆｒｅｅ Ｒａｄｉｃａｌ Ｄａｍａｇｅ” ｉｄ． ａｔ ｐｐ． ９７－１０２を参照）。アントラサイクリン類は、その細胞傷害潜在性のため、多数の癌、例として、白血病、乳癌、肺癌、卵巣腺癌、および肉腫の治療において使用されている （例えば Ｐ． Ｈ－Ｗｉｅｒｎｉｋ， ｉｎ Ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ：Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｓｔａｔｕｓ Ａｎｄ Ｎｅｗ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ ｐ １１を参照）。
非限定的な例示的なアントラサイクリンとしては、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ダウノマイシン、ネモルビシン、およびそれらの誘導体が挙げられる。ダウノルビシンおよびドキソルビシンの免疫コンジュゲートおよびプロドラッグが調製され、研究されている （Ｋｒａｔｚ ｅｔ ａｌ．， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， ｖｏｌ． １３， ｐｐ． ４７７－５２３， ２００６； Ｊｅｆｆｒｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔｅｒｓ， ｖｏｌ． １６， ｐｐ． ３５８－３６２． １９９６； Ｔｏｒｇｏｖ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．， ｖｏｌ． １６， ｐｐ． ７１７－７２１， ２００５； Ｎａｇｙ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ｖｏｌ． ９７， ｐｐ． ８２９－８３４， ２０００； Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｏｒｇ． ＆ Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔｅｒｓ， ｖｏｌ． １２， ｐｐ． １５２９－１５３２， ２００２； Ｋｉｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， ｖｏｌ． ４５， ｐｐ． ４３３６－４３４３， ２００２； ＥＰ ０３２８１４７； Ｕ．Ｓ． Ｐａｔ． Ｎｏ． ６，６３０，５７９）抗体－薬物コンジュゲートＢＲ９６－ドキソルビシンは、腫瘍関連抗原ルイス－Ｙと特異的に反応し、第Ｉ相および第ＩＩ相試験において評価されている（Ｓａｌｅｈ ｅｔ ａｌ．、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．１８，ｐｐ．２２８２－２２９２，２０００；Ａｊａｎｉ ｅｔ ａｌ．、Ｃａｎｃｅｒ Ｊｏｕｒ．、ｖｏｌ．６，ｐｐ．７８－８１，２０００；Ｔｏｌｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．１７，ｐｐ．４７８－４８４，１９９９）。
ＰＮＵ－１５９６８２は、ネモルビシンの強力な代謝産物（または誘導体）である（Ｑｕｉｎｔｉｅｒｉ ｅｔ ａｌ．、Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，ｖｏｌ．１１，ｐｐ．１６０８－１６１７，２００５）。ネモルビシンは、ドキソルビシンの配糖体アミノに２－メトキシモルフォリノ基を有する半合成アナログで、臨床評価が行われており（Ｇｒａｎｄｉ ｅｔ ａｌ． Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔ．Ｒｅｖ． ｖｏｌ．１７， ｐｐ． １３３－１３８， １９９０； Ｒｉｐａｍｏｎｔｉ ｅｔ ａｌ． Ｂｒｉｔ．Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ， ｖｏｌ． ６５， ｐｐ． ７０３－７０７， １９９２）、肝細胞癌に対する第ＩＩ／ＩＩＩ相試験を含む（Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ， ｖｏｌ． ２２， Ａｂｓ１４４８， ２００３； Ｑｕｉｎｔｉｅｒｉ， Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， ｖｏｌ． ４４：１ｓｔ Ｅｄ， Ａｂｓ ４６４９， ２００３； Ｐａｃｃｉａｒｉｎｉ ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒ．Ｃｌｉｎ． Ｏｎｃｏｌｏｇｙ， ｖｏｌ． ２４， ｐ． １４１１６， ２００６）。
アントラサイクリン、例として、ＰＮＵ－１５９６８２は、いくつかの結合部位、および種々のリンカー（米国特許出願公開第２０１１／００７６２８７号明細書；国際公開第２００９／０９９７４１号パンフレット；米国特許出願公開第２０１０／００３４８３７号明細書；国際公開第２０１０／００９１２４号パンフレット）、例として、本明細書に記載のリンカーを介して抗体にコンジュゲートさせることができる。
ＰＮＵ－１５９６８２マレイミドアセタール－Ａｂのリンカーは酸不安定性である一方、ＰＮＵ－１５９６８２－ｖａｌ－ｃｉｔ－ＰＡＢ－Ａｂ、ＰＮＵ－１５９６８２－ｖａｌ－ｃｉｔ－ＰＡＢ－スペーサー－Ａｂ、およびＰＮＵ－１５９６８２－ｖａｌ－ｃｉｔ－ＰＡＢ－スペーサー（Ｒ１Ｒ２）－Ａｂのリンカーは、プロテアーゼ切断可能である。
（６）他の薬物部分
また、薬剤部位としては、ゲルダナマイシン（Ｍａｎｄｌｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｎａｔ． Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．， ｖｏｌ． ９２， ｐｐ． １５７３－１５８１， ２０００； Ｍａｎｄｌｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔｅｒｓ， ｖｏｌ． １０， ｐｐ． １０２５－１０２８， ２０００； Ｍａｎｄｌｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．， ｖｏｌ． １３， ｐｐ． ７８６－７９１， ２００２）； および酵素的に活性な毒素またはその断片を含み、限定されないが、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合性活性断片、エクソトキシンＡ鎖（緑膿菌Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ－サルシン、シナアブラギリ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ジアンチンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウ（Ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ－Ｓ）、ニガウリ（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルシン、クロチン、サボンソウ（Ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン、マイトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、およびトリコテセンが挙げられる。例えば、国際公開第９３／２１２３２号パンフレット参照。
薬物部分には、核酸分解活性を有する化合物（例えば、リボヌクレアーゼまたはＤＮＡエンドヌクレアーゼ）も含まれる。
ある特定の実施形態では、免疫コンジュゲートは、高放射性原子を含んでもよい。種々の放射性同位体が放射性コンジュゲート抗体の産生に利用可能である。例としては、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、およびＬｕの放射性同位体が挙げられる。一部の実施形態において、免疫コンジュゲートを検出に使用する場合、それは、シンチグラフィー試験のための放射性原子、例えば、Ｔｃ９９もしくはＩ１２３、または核磁気共鳴（ＮＭＲ）イメージング（磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）としても公知）用のスピン標識、例えば、ジルコニウム－８９、ヨウ素－１２３、ヨウ素－１３１、インジウム－１１１、フッ素－１９、炭素－１３、窒素－１５、酸素－１７、ガドリニウム、マンガンまたは鉄を含み得る。ジルコニウム－８９は、様々な金属キレート剤に複合体化され、例えば、ＰＥＴ画像撮影のために抗体にコンジュゲートされてもよい（ＷＯ２０１１／０５６９８３）。
放射標識または他の標識は、既知の方法で免疫コンジュゲートに組み込んでもよい。例えば、ペプチドは、例えば、１つ以上の水素の代わりに１つ以上のフッ素－１９原子を含む好適なアミノ酸前駆体を使用して生合成または化学合成され得る。一部の実施形態では、Ｔｃ９９、Ｉ１２３、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、およびＩｎ１１１などの標識は、抗体中のシステイン残基を介して結合され得る。一部の実施形態では、イットリウム－９０は、抗体のリジン残基を介して結合され得る。一部の実施形態では、ＩＯＤＯＧＥＮ法（Ｆｒａｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，ｖｏｌ．８０，ｐｐ．４９－５７，１９７８）を使用して、ヨウ素－１２３を組み込むことができる。“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｓｃｉｎｔｉｇｒａｐｈｙ”（Ｃｈａｔａｌ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ １９８９）は、特定の他の方法を記載している。
ある特定の実施形態では、免疫コンジュゲートは、プロドラッグ活性化酵素にコンジュゲートされた抗体を含んでいてもよい。一部のかかる実施形態では、プロドラッグ活性化酵素は、プロドラッグ（例えば、ペプチジル化学療法剤、ＷＯ８１／０１１４５を参照されたい）を、抗癌剤などの活性薬物に変換する。かかる免疫コンジュゲートは、一部の実施形態では、抗体依存性酵素媒介プロドラッグ療法（「アデプト」）において有用である。抗体にコンジュゲートされ得る酵素としては、限定されないが、リン酸含有プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用なアルカリホスファターゼ、硫酸含有プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用なアリールスルファターゼ、無毒な５－フルオロシトシンを抗癌薬の５－フルオロウラシルに変換するのに有用なシトシンデアミナーゼ、セラチアプロテアーゼ、熱分解、スブチリシン、カルボキシペプチダーゼおよびカテプシン（カテプシンＢおよびＬなど）などのペプチド含有プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用なプロテアーゼ、Ｄ－アミノ酸置換基を含有するプロドラッグを変換するのに有用なＤ－アラニルカルボキシペプチダーゼ、β－ガラクトシダーゼおよびノイラミニダーゼなど、それぞれ、グリコシル化プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用な炭水化物切断酵素、β－ラクタムで誘導体化された薬物を遊離薬物に変換するのに有用なβ－ラクタマーゼ、ペニシリンＶアミダーゼおよびペニシリンＧアミダーゼなどのそれぞれフェノキシアセチル基またはフェニルアセチル基を持つアミン窒素で誘導体化された薬物を遊離薬物に変換するのに有用なペニシリンアミダーゼ、が挙げられる。一部の実施形態では、酵素は、当該技術分野で周知の組換えＤＮＡ技法によって、抗体に共有結合され得る。例えば、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，ｖｏｌ．３１２，ｐｐ．６０４－６０８，１９８４を参照されたい。
薬物負荷
薬物負荷は、式Ｉの分子における抗体当たりの薬物部分の平均数ｐにより表される。薬物負荷は、抗体当たり１～２０個の薬物部分（Ｄ）の範囲であり得る。式ＩのＡＤＣは、１～２０個の範囲の薬物部分とコンジュゲートしている抗体の集団を含む。コンジュゲーション反応からのＡＤＣ調製において使用される抗体当たりの薬物部分の平均数は、慣用の手段、例えば、質量分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、およびＨＰＬＣにより特徴付けすることができる。また、ｐの単位でのＡＤＣの定量分布を測定することもできる。一部の例において、ｐがある値である同種ＡＤＣを、他の薬物負荷を有するＡＤＣから分離し、精製し、特徴付けることは、逆相ＨＰＬＣまたは電気泳動のような手段により達成することができる。
一部の抗体－薬物コンジュゲートについて、ｐは、抗体上の付着部位の数により限定され得る。例えば、上記の特定の例示的な実施形態のように、結合がシステインチオールである場合、抗体は、１つまたはいくつかのシステインチオール基のみを有してもよく、またはリンカーが結合され得る１つまたはいくつかの十分に反応性のあるチオール基のみを有してもよい。ある特定の実施形態では、より高い薬物負荷、例えば、ｐ＞５では、特定の抗体－薬物コンジュゲートの凝集、不溶性、毒性、または細胞透過性の喪失を引き起こし得る。ある特定の実施形態では、ＡＤＣの平均薬物負荷は、１～約８、約２～約６、または約３～約５の範囲である。実際、あるＡＤＣについて、抗体当たりの薬物部分の最適な比は、８未満であり得、約２～約５であり得ることが示されている（米国特許第７，４９８，２９８号明細書）。
ある実施形態において、理論上の最大数よりも少ない薬物部分を、コンジュゲーション反応の間に抗体にコンジュゲートさせる。抗体は、例えば、以下に考察されるように、薬物－リンカー中間体またはリンカー試薬と反応しないリジン残基を含有し得る。一般に、抗体は、薬物部分に結合され得る多くの遊離および反応性システインチオール基を含有せず；実際、抗体中のほとんどのシステインチオール残基は、ジスルフィド架橋として存在する。ある特定の実施形態では、抗体は、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）またはトリカルボニルエチルホスフィン（ＴＣＥＰ）などの還元剤で還元されて、部分的または全体的な還元条件下で、反応性のシステインチオール基を生成し得る。ある特定の実施形態では、抗体は、リジンまたはシステインなどの反応性求核基を明らかにするために変性条件に供される。
ＡＤＣの負荷（薬物／抗体比）は、異なる方法で、例えば、（ｉ）抗体に対する薬物－リンカー中間体またはリンカー試薬のモル過剰を制限すること、（ｉｉ）コンジュゲーションの反応時間または温度を制限すること、および（ｉｉｉ）システインチオール修飾の部分的または限定的な還元条件によって調節され得る。
２つ以上の求核基が薬物－リンカー中間体またはリンカー試薬と反応する場合、得られる生成物は、抗体に付着している１つ以上の薬物部分の分布を有するＡＤＣの混合物であることが理解される。抗体当たりの薬物の平均数は、抗体に特異的であり、薬物に特異的である二重ＥＬＩＳＡ抗体アッセイにより混合物から算出することができる。個々のＡＤＣは、質量分析法により混合物中で同定し、ＨＰＬＣ、例えば、疎水性相互作用クロマトグラフィーにより分離することができる（例えば、ＭｃＤｏｎａｇｈ ｅｔ ａｌ．、Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇｒ．Ｄｅｓｉｇｎ ＆ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ， ｖｏｌ．１９，ｐｐ．２９９－３０７，２００６；Ｈａｍｂｌｅｔｔ ｅｔ ａｌ．、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、ｖｏｌ．１０，ｐｐ．７０６３－７０７０，２００４参照）。ある実施形態において、単一の負荷値を有する同種ＡＤＣを、電気泳動またはクロマトグラフィーによりコンジュゲーション混合物から単離することができる。
免疫コンジュゲートを調製するある方法
式ＩのＡＤＣである免疫コンジュゲートは、当業者に公知の有機化学反応、条件、および試薬を採用したいくつかのルートによって調製することができ、以下を含む：（１） 抗体の求核基と二価のリンカー試薬とを反応させて共有結合を介してＡｂ－Ｌを形成し、次いで薬物部位Ｄと反応させること；および （２） 薬物部位の求核基と２価のリンカー試薬を反応させ、共有結合を介してＤ－Ｌを形成し、その後、抗体の求核基と反応させること。後者の経路を介して式ＩのＡＤＣを調製する例示的な方法は、米国特許第７，４９８，２９８号明細書に記載されている。
抗体上の求核基としては、限定されるものではないが、（ｉ）Ｎ末端アミン基、（ｉｉ）側鎖アミン基、例えば、リジン、（ｉｉｉ）側鎖チオール基、例えば、システイン、および（ｉｖ）抗体がグリコシル化される糖ヒドロキシルまたはアミノ基が挙げられる。アミン、チオール、およびヒドロキシル基は求核性であり、リンカー部分およびリンカー試薬上の求電子基、例として、（ｉ）活性エステル、例えば、ＮＨＳエステル、ＨＯＢｔエステル、ハロホルメート、および酸ハロゲン化物；（ｉｉ）アルキルおよびベンジルハロゲン化物、例えば、ハロアセトアミド；ならびに（ｉｉｉ）アルデヒド、ケトン、カルボキシル、およびマレイミド基と反応して共有結合を形成し得る。ある抗体は、還元可能な鎖間ジスルフィド、すなわちシステイン架橋を有する。抗体は、抗体が完全にまたは部分的に還元されるように、還元剤、例えば、ＤＴＴ（ジチオトレイトール）またはトリカルボニルエチルホスフィン（ＴＣＥＰ）による処理によりリンカー試薬とのコンジュゲーションに対して反応性とすることができる。したがって、それぞれのシステイン架橋は、理論上、２つの反応性チオール求核剤を形成する。追加の求核基は、リジン残基の修飾を介して、例えば、リジン残基を２－イミノチオラン（Ｔｒａｕｔ試薬）と反応させてアミンをチオールに変換させることにより抗体中に導入することができる。反応性チオール基も、１、２、３、４つ以上のシステイン残基を導入することにより（例えば、１つ以上の非ネイティブシステインアミノ酸残基を含むバリアント抗体を調製することにより）抗体中に導入することができる。
本発明の抗体－薬物コンジュゲートは、抗体上の求電子基、例えば、アルデヒドまたはケトンカルボニル基と、リンカー試薬または薬物上の求核基との間の反応によっても産生することができる。リンカー試薬上の有用な求核基としては、限定されるものではないが、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレート、およびアリールヒドラジドが挙げられる。一実施形態において、抗体は、リンカー試薬または薬物上の求核置換基と反応し得る求電子部分を導入するように修飾される。別の実施形態において、グリコシル化抗体の糖を、例えば、過ヨウ素酸塩酸化試薬により酸化してリンカー試薬または薬物部分のアミン基と反応し得るアルデヒド基またはケトン基を形成することができる。得られるイミンシッフ塩基群は、安定した結合を形成し得、または例えば、ホウ化水素試薬により還元して安定したアミン結合を形成することができる。一実施形態において、グリコシル化抗体の炭水化物部分と、ガラクトースオキシダーゼまたはメタ過ヨウ素酸ナトリウムのいずれかとの反応は、薬物上の適切な基と反応し得る抗体中のカルボニル（アルデヒドおよびケトン）基を生じさせ得る（Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）。別の実施形態において、Ｎ末端セリンまたはトレオニン残基を含有する抗体はメタ過ヨウ素酸ナトリウムと反応し、第１のアミノ酸の代わりにアルデヒドを産生し得る（Ｇｅｏｇｈｅｇａｎ ＆ Ｓｔｒｏｈ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．、ｖｏｌ．３，ｐｐ．１３８－１４６，１９９２；米国特許第５，３６２，８５２号明細書）。このようなアルデヒドは、薬物部分またはリンカー求核剤と反応させることができる。
薬物部位上の例示的な求核基としては、リンカー部位やリンカー試薬の親電子基と反応して共有結合を形成することができる、アミン、チオール、ヒドロキシル、ヒドラジド、オキシム、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレート、およびアリールヒドラジド基を含むが、これらに限定されず、リンカー部位やリンカー試薬の親電子基は以下を含む：（ｉ） ＮＨＳエステル、ＨＯＢｔエステル、ハロホルメート、酸ハライドなどの活性エステル類； （ｉｉ）ハロ酢酸アミドのようなアルキルおよびベンジルハライド； （ｉｉｉ）アルデヒド基、ケトン基、カルボキシル基およびマレイミド基。
ＡＤＣを調製するために使用することができる非限定的な例示的な架橋試薬は、本明細書において「例示的なリンカー」と題されるセクションに記載される。このような架橋試薬を使用して２つの部分、例として、タンパク質性部分および化学部分を結合させる方法は、当分野において公知である。一部の実施形態において、抗体および細胞毒性剤を含む融合タンパク質は、例えば、組換え技術またはペプチド合成により作製することができる。組換えＤＮＡ分子は、互いに隣接しており、またはコンジュゲートの所望の特性を破壊しないリンカーペプチドをコードする領域によって隔離されている、コンジュゲートの抗体および細胞毒性部分をコードする領域を含み得る。
さらに別の実施形態において、抗体は、腫瘍のプレターゲティングにおいて利用するために「受容体」（例えば、ストレプトアビジン）にコンジュゲートさせることができ、その腫瘍のプレターゲティングにおいては、抗体－受容体コンジュゲートを患者に投与し、次いでクリアリング剤を使用して血液循環から非結合コンジュゲートを除去し、次いで細胞毒性剤（例えば、薬物または放射性ヌクレオチド）にコンジュゲートしている「リガンド」（例えば、アビジン）を投与する。
診断および検出のための方法および組成物
ある実施形態において、本明細書において提供される抗Ａｘｌ抗体または抗体断片のいずれも、生物学的試料中のＡｘｌの存在の検出に使用することができる。本明細書において使用される用語「検出すること」は、定量または定性的検出を包含する。ある特定の実施形態では、生体試料は、乳房、膵臓、食道、肺および／または脳の細胞または組織などの細胞または組織を含む。
本発明のさらなる態様は、Ａｘｌレベルが体内の少なくとも１つの場所において正常な生理学的レベルから増加または減少する癌または別の疾患を診断および／またはモニタリングするための本発明の抗Ａｘｌ抗体に関する。
好ましい実施形態において、本発明の抗体または抗体断片は、検出可能な分子または物質、例えば、上記の蛍光分子、放射性分子または当分野において公知の任意の他の標識により標識することができる。例えば、本発明の抗体は、放射性分子により標識することができる。例えば、好適な放射性分子としては、限定されないが、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１１１Ｉｎ、１８６Ｒｅ、および１８８Ｒｅなどのシンチグラフィー研究に使用される放射性原子が挙げられる。また、本発明の抗体または抗体断片は、ヨウ素－１２３、ヨウ素－１３１、インジウム－Ｉ１１、フッ素－１９、炭素－１３、窒素－１５、酸素－１７、ガドリニウム、マンガン、または鉄などの核磁気共鳴（ＮＭＲ）イメージングのためのスピン標識でも標識され得る。抗体の投与後、患者内の放射標識抗体の分布が検出される。任意の好適な既知の方法を使用することができる。一部の非限定的な例としては、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）、ポジトロン放射断層撮影（ＰＥＴ）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、蛍光、化学発光、および超音波撮影が挙げられる。
本発明の抗体または抗体断片は、Ａｘｌ過剰発現に関連する癌および疾患の診断および病期分類に有用であり得る。Ａｘｌ過剰発現に関連する癌としては、扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、胃癌、膵臓癌、膠芽腫や神経線維腫症などのグリア細胞腫瘍、子宮頸癌、卵巣癌、肝癌、膀胱癌、ヘパトーマ（肝細胞癌）、乳癌、結腸癌、メラノーマ、大腸癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ ｃａｎｃｅｒ）、腎臓癌（ｒｅｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝癌、肉腫、血液がん（白血病）、星細胞腫、および各種頭頸部癌等、またはＡｘｌ発現または過剰発現の過剰増殖性疾患を含み得る。
本発明の抗体または抗体断片は、Ａｘｌ発現が増加または減少する癌以外の疾患の診断に有用であり得る。（可溶性または細胞Ａｘｌ形態の両方をそのような診断に使用することができる。典型的には、かかる診断方法は、患者から得られた生体試料の使用を伴う。本明細書において使用される用語「生物学的試料」は、診断またはモニタリングアッセイにおいて使用することができる対象から得られる種々の試料タイプを包含する。生体試料としては、限定されないが、生物起源の血液および他の液体試料、生検標本またはそれに由来する組織培養物もしくは細胞などの固体組織試料、ならびにその後代が挙げられる。例えば、生物学的試料としては、Ａｘｌ過剰発現に関連する癌、および好ましい実施形態において、神経膠腫、胃癌、肺癌、膵臓癌、乳癌、前立腺癌、腎臓癌、肝臓癌および子宮内膜癌を有すると疑われる個体から回収される組織試料から得られる細胞が挙げられる。生体試料は、臨床試料、培養物中の細胞、細胞上清、細胞溶解物、血清、血漿、生体液、および組織試料を包含する。
特定の実施形態において、本発明は、本発明の抗体を使用して対象からの細胞上のＡｘｌを検出することにより対象におけるＡｘｌ過剰発現に関連する癌を診断する方法である。特に、前記方法は、
対象の生物学的試料を、本発明による抗体または抗体断片と、抗体または抗体断片がＡｘｌを発現する生物学的試料の細胞との複合体を形成するのに好適な条件下で接触させるステップ；ならびに
前記複合体を検出および／または定量するステップ（前記複合体の検出は、Ａｘｌ過剰発現に関連する癌を示す）を含み得る。
癌の進行をモニタリングするため、方法による方法を異なる時点において繰り返して試料への抗体結合が増加または減少するか否かを決定することができ、それから、癌が進行、退縮または安定しているか否かを決定することができる。
特定の実施形態において、本発明は、Ａｘｌの発現もしくは過剰発現またはＡｘｌの可溶性形態の減少もしくは増加に関連する疾患を診断する方法である。このような疾患の例としては、ヒト免疫障害、血栓疾患（血栓症およびアテローム血栓症）、および心血管疾患を挙げることができる。
一実施形態において、診断または検出の方法において使用される抗Ａｘｌ抗体または抗体断片が提供される。さらなる態様において、生物学的試料中のＡｘｌの存在を検出する方法が提供される。さらなる態様において、生物学的試料中のＡｘｌの量を定量する方法が提供される。ある実施形態において、本方法は、生物学的試料を、本明細書に記載の抗Ａｘｌ抗体または抗体断片と、Ａｘｌへの抗Ａｘｌ抗体または抗体断片の結合を許容する条件下で接触させること、および抗Ａｘｌ抗体または抗体断片とＡｘｌとの間で複合体が形成されるか否かを検出することを含む。かかる方法は、インビトロまたはインビボで実施してもよい。一実施形態において、抗Ａｘｌ抗体または抗体断片は、治療法に適格の対象を選択するために使用される。一部の実施形態において、治療法は、対象への抗Ａｘｌ抗体または抗体断片の投与を含む。
ある実施形態において、標識抗Ａｘｌ抗体または抗体断片が提供される。標識としては、限定されないが、直接的に検出される標識または部分（例えば、蛍光標識、発色標識、電子密度標識、化学発光標識、および放射性標識）、ならびに、間接的に（例えば、酵素反応または分子相互作用によって）検出される酵素またはリガンドなどの部分が挙げられる。例示的な標識としては、限定されないが、放射性同位体（３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、および１３１Ｉ）、またはフルオロフォア（希土類キレート、またはフルオレセインおよびその誘導体、ローダミンおよびその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロンなど）、ルセリフェラーゼ（例えば、ホタルルシフェラーゼおよび細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４，７３７，４５６号））、ルシフェリン、２，３－ジヒドロフタラジンジオン、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖オキシダーゼ（例えば、グルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、ならびにグルコース－６－リン酸デヒドロゲナーゼ）、複素環オキシダーゼ（ウリカーゼ、キサンチンオキシダーゼなど）、過酸化水素を用いて色素前駆体を酸化するカップリングされた酵素（例えば、ＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ、またはマイクロペルオキシダーゼ）、ビオチン／アビジン、バクテリファージ標識、安定なフリーラジカルなどが挙げられる。
医薬製剤
抗Ａｘｌ抗体または抗体断片は、細胞殺傷活性を有する。この細胞殺傷活性は、複数の異なる細胞株のタイプに及ぶ。さらに、これらの抗原または抗体断片は、細胞傷害剤にコンジュゲートされると腫瘍サイズを低減させ得、低減した毒性を示し得る。本出願の実施例３および６～９参照。したがって、抗Ａｘｌ抗体、その断片または免疫コンジュゲートは、Ａｘｌ発現に関連する増殖性疾患の治療に有用であり得る。抗体、断片、または免疫コンジュゲートは、単独で、または任意の好適な薬剤もしくは他の従来の治療と組み合わせて使用することができる。
抗Ａｘｌ抗体または抗体断片は、ＡｘｌおよびまたはＧａｓ６発現、過剰発現または活性化に関連する過剰増殖性疾患を治療するために使用することができる。Ａｘｌ発現についての要求以外の、治療することができる癌のタイプまたは組織に対する特定の限定は存在しない。例えば、扁平上皮癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、胃癌、膵臓癌、神経膠芽腫や神経線維腫症などのグリア細胞腫瘍、子宮頸癌、卵巣癌、肝癌、膀胱癌、ヘパトーマ（肝細胞癌）、乳癌、結腸癌、メラノーマ、大腸癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ ｃａｎｃｅｒ）、腎臓癌（ｒｅｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝癌、肉腫、血液がん（白血病）、星細胞腫、および各種頭頸部癌等を含む。より好ましい癌は、膠芽細胞腫、胃癌、肺癌、膵臓癌、乳癌、前立腺癌、腎臓癌、肝臓癌および子宮内膜癌である。
抗Ａｘｌ抗体または抗体断片は自然免疫応答の強力な活性化因子であり、したがって、ヒト免疫障害、例えば、敗血症の治療において使用することができる。本発明の抗Ａｘｌ抗体または抗体断片は、免疫化、例えば、ワクチンのためのアジュバントとして、ならびに例えば、細菌、ウイルスおよび寄生虫に対する抗感染剤として使用することもできる。
抗Ａｘｌ抗体または抗体断片は、血栓疾患、例えば、静脈および動脈血栓症ならびにアテローム血栓症から保護し、それを予防し、または治療するために使用することができる。抗Ａｘｌ抗体または抗体断片は、心血管疾患から保護し、それを予防し、または治療するため、ならびにウイルス、例えば、ラッサおよびエボラウイルスの侵入を予防し、または阻害するため、ならびにウイルス感染を治療するために使用することもできる。
本明細書に記載の治療方法の実施形態のそれぞれにおいて、抗Ａｘｌモノクローナル抗体、抗体断片または抗Ａｘｌモノクローナル免疫コンジュゲートは、治療が求められる疾患または障害の管理に関連する慣用の方法と一致する様式で送達することができる。本明細書の開示に従い、有効量の抗体、抗体断片または免疫コンジュゲートは、かかる治療を必要とする対象に、疾患または障害を予防または治療するのに十分な時間および条件下で、投与される。したがって、本発明の一態様は、Ａｘｌの発現に関連する疾患の治療が必要とされる対象に治療有効量の本発明の抗体、抗体断片または免疫コンジュゲートを投与することを含む、Ａｘｌの発現に関連する疾患を治療する方法に関する。
投与のため、抗Ａｘｌモノクローナル抗体、抗体断片または免疫コンジュゲートを、医薬組成物として配合することができる。抗Ａｘｌモノクローナル抗体、抗体断片または抗体－薬物コンジュゲートを含む医薬組成物は、医薬組成物を調製する公知の方法に従って配合することができる。かかる方法では、治療分子は、典型的には、薬学的に許容される担体を含有する混合物、溶液、または組成物と組み合わせられる。
薬学的に許容される担体は、レシピエント患者によって許容され得る物質である。滅菌リン酸緩衝食塩水は、薬学的に許容される担体の一例である。他の適切な薬学的に許容される担体は、当業者によく知られている。（例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ （ｅｄ．）， Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ （Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ， １９ｔｈ ｅｄ． １９９５） 参照） 製剤は、１つ以上の賦形剤、防腐剤、可溶化剤、緩衝剤、バイアル表面でのタンパク質損失を防止するアルブミンなどをさらに含んでもよい。
医薬組成物の形態、投与経路、投与量、およびレジメンは、治療される状態、病気の重症度、患者の年齢、体重、および性別などに当然依存する。これらの検討事項は、当業者が考慮して好適な医薬組成物を配合することができる。本発明の医薬組成物は、局所投与、経口投与、非経口投与、鼻腔内投与、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、または眼内投与などのために製剤化することができる。
好ましくは、医薬組成物は、注射可能な製剤のために、薬学的に許容されるビヒクルを含有する。これらは、特定の等張無菌生理食塩水溶液（リン酸一ナトリウムもしくは二ナトリウム、塩化ナトリウム、カリウム、カルシウムもしくはマグネシウムなどまたはそのような塩の混合物）、または例えば、無菌水もしくは生理食塩水の添加時に注射液の構成を可能とする乾燥、特に凍結乾燥組成物中で存在し得る。
一部の実施形態では、時に「安定剤」としても知られる張化剤は、組成物中の液体の張性を調整または維持するために存在する。タンパク質および抗体などの大きな荷電性の生体分子とともに使用される場合、それらは、「安定剤」と称されることが多く、なぜなら、それらがアミノ酸側鎖の荷電基と相互作用することで、分子間相互作用および分子内相互作用の可能性を低下させることができるためである。張化剤は、医薬組成物の０．１～２５重量％、好ましくは１～５重量％の任意の量で存在し得る。好ましい張化剤としては、多価糖アルコール、好ましくはグリセリン、エリスリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、およびマンニトールなどの三価以上の糖アルコールが挙げられる。
さらなる賦形剤としては、以下のうちの１つ以上として機能し得る薬剤が挙げられる：（１）増量剤、（２）溶解促進剤、（３）安定剤、および（４）ならびに変性または容器壁への付着を防止する薬剤。かかる賦形剤としては、多価糖アルコール（上に列挙）、アミノ酸（例えば、アラニン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、リジン、オルニチン、ロイシン、２－フェニルアラニン、グルタミン酸、スレオニン）、有機糖または糖アルコール（例えば、スクロース、ラクトース、ラクチトール、トレハロース、スタキオース、マンノース、ソルボース、キシロース、リボース、リビトール、ミオイニシトース、ミオニシトール、ガラクトース、ガラクチトール、グリセロール、シクリトール（例えば、イノシトール）、ポリエチレングリコール）、硫黄含有還元剤（例えば、ウレア、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、α－モチオグリセロールおよびチオ硫酸ナトリウム）、低分子量タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチンまたは他の免疫グロブリン）、親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）、単糖（例えば、キシロース、マンノース、フルクトース、グルコース）、二糖（例えば、ラクトース、マルトース、スクロース）、三糖（例えば、ラフィノース）ならびに多糖（例えば、デキストリンまたはデキストラン）が挙げられ得る。
非イオン性界面活性剤または洗剤（「湿潤剤」としても知られる）は、治療剤の可溶化を助けるとともに、撹拌で誘導される凝集から治療タンパク質を保護するために使用することができ、これはまた、活性の治療タンパク質または抗体の変性を引き起こすことなく、製剤が剪断表面の負荷に曝露されることを可能にする。非イオン性界面活性剤は、約０．０５ｍｇ／ｍｌ～約１．０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約０．０７ｍｇ／ｍｌ～約０．２ｍｇ／ｍｌの濃度範囲で存在してもよい。
好適な非イオン性界面活性剤としては、ポリソルベート（２０、４０、６０、６５、８０など）、ポリオキサマー（１８４、１８８など）、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）ポリオール、ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）、ポリオキシエチレンソルビタンモノエーテル（ＴＷＥＥＮ（登録商標）－２０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）－８０など）、ラウロマクロゴール４００、ステアリン酸ポリオキシル４０、ポリオキシエチレン水素化ヒマシ油１０、５０および６０、モノステアリン酸グリセロール、スクロース脂肪酸エステル、メチルセルロースおよびカルボキシメチルセルロースが挙げられる。使用可能な陰イオン性洗剤としては、ラウリル硫酸ナトリウム、スルホコハク酸ジオクチルナトリウム、およびスルホン酸ジオクチルナトリウムが挙げられる。陽イオン性洗剤としては、塩化ベンザルコニウムまたは塩化ベンゼトニウムが挙げられる。
投与に使用される用量は、種々のパラメータに応じて、特に、使用される投与方式、関連病変、または代替的に所望の治療期間に応じて適合させることができる。医薬組成物を調製するために、有効量の抗体または抗体断片を、薬学的に許容される担体または水性培地中に溶解または分散させることができる。
注射用に好適な剤形には、滅菌水溶液または分散液、ゴマ油、ピーナッツ油またはプロピレングリコール水溶液を含む製剤、および無菌の注射可能な溶液または分散液の即時調製のための無菌粉末が含まれる。全ての場合において、剤形は無菌でなければならず、容易な注射針通過性（ｓｙｒｉｎｇｅａｂｉｌｉｔｙ）が存在する程度に流動性でなければならない。製造および保存の条件下で安定でなければならず、また、細菌および真菌などの微生物の汚染作用から保護される必要がある。
遊離塩基または薬理学的に許容される塩としての活性な化合物の溶液は、界面活性剤と好適に混合された水中で調製することができる。分散物は、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、およびそれらの混合物中、ならびに油中で調製することもできる。通常の保存および使用の条件下で、これらの調製物は、微生物の成長を防止するための防腐剤を含有する。
抗体または抗体断片は、中性または塩形態の組成物に配合することができる。薬学的に許容される塩としては、酸付加塩（タンパク質の遊離アミノ基で形成される）が挙げられ、無機酸（例えば、塩酸もしくはリン酸など）、または酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸などの有機酸で形成される。また、遊離カルボキシル基で形成される塩は、無機塩基（例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、または水酸化第二鉄など）、およびイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、プロカインなどの有機塩基に由来し得る。
担体はまた、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、それらの好適な混合物、および植物油を含有する溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、必要な粒径を維持することによって、および界面活性剤の使用によって維持することができる。微生物の作用の予防は、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどの様々な抗菌剤および抗真菌剤によってもたらすことができる。多くの場合、等張剤、例えば、糖または塩化ナトリウムを含むことが好ましい。注射組成物の吸収延長は、その組成物中に吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを使用することによりもたらすことができる。
滅菌注射溶液は、必要に応じて、上に列挙されたもの以外の成分を１つ以上含む適切な溶媒に、必要量の活性化合物を組み込み、続いて濾過滅菌することによって調製される。一般に、分散液は、滅菌ビヒクルに様々な滅菌活性成分を組み込むことによって調製され、基本の分散媒と、上に列挙されたものから必要とされる他の成分と、を含有する。滅菌注射溶液を調製するための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、真空乾燥および凍結乾燥技法であり、予め濾過滅菌されたその溶液から、活性成分および任意の追加の所望の成分の粉末を得る。
また、直接注射のために、より多くの溶液、またはより高い濃度の溶液の調製も企図され、溶媒としてジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を使用することで、非常に迅速な浸透がもたらされ、小さな腫瘍領域に高濃度の活性剤が送達されることが想定される。
製剤化の際、溶液は、投薬製剤と適合性のある様式で、かつ治療的に有効な量で投与される。製剤は、上に記載の注射用溶液の種類などの様々な剤形で容易に投与されるが、薬物放出カプセルなども使用することができる。
水溶液での非経口投与の場合、必要に応じて、溶液を好適に緩衝し、液体希釈剤を最初に十分な生理食塩水またはグルコースで等張にする必要がある。これらの特定の水溶液は、静脈内、筋肉内、皮下、および腹腔内投与に特に好適である。これに関連して、用いることができる無菌水性媒体は、本開示に照らして当業者に公知である。例えば、１投与量を１ｍｌの等張ＮａＣｌ溶液中で溶解させることができ、１０００ｍｌの皮下点滴療法用液体に添加し、または提案される注入部位に注射することができる（例えば、"Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ"１５ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ｐａｇｅｓ １０３５－１０３８ ａｎｄ １５７０－１５８０参照）。投与量のいくらかの変動が、治療される対象の病態に応じて必然的に生じる。投与の責任者は、いずれにしても、個々の対象に適切な用量を決定する。
抗体または抗体断片は、治療混合物内に１用量あたり０．０００１～１０．０ミリグラム、または約０．００１～５ミリグラム、または約０．００１～１ミリグラム、または約０．００１～０．１ミリグラム、または約０．１～１．０またはさらには約１０ミリグラムを送達するように配合することができる。複数回用量を選択される時間間隔において投与することもできる。
静脈内注射または筋肉内注射などの非経口投与のために製剤化された化合物に加えて、他の薬学的に許容される剤形としては、例えば、経口投与のための錠剤または他の固形物、徐放カプセル、ならびに現在使用されている任意の他の剤形が挙げられる。
ある特定の実施形態では、抗体または抗体断片を宿主細胞に導入するために、リポソームおよび／またはナノ粒子の使用が企図される。リポソームおよび／またはナノ粒子の形成および使用は、当業者に既知である。
ナノカプセルは、概して、安定した再現性のある方法で、化合物を捕捉することができる。細胞内ポリマーの過負荷による副作用を回避するために、このような超微細粒子（０．１μｍ前後のサイズ）は、一般に、インビボで分解され得るポリマーを使用して設計される。これらの要件を満たす生分解性ポリアルキル－シアノアクリレートナノ粒子が本発明における使用のために企図され、このような粒子は容易に作製することができる。
リポソームは、水性媒体中に分散しており、多層同心円状二重層小胞（多層状小胞（ｍｕｌｔｉｌａｍｅｌｌａｒ ｖｅｓｉｃｌｅ、ＭＬＶ）とも称される）を自発的に形成するリン脂質から形成される。ＭＬＶは、一般に２５ｎｍ～４μｍの直径を有する。ＭＬＶの超音波処理により、コア内に水溶液を含有する、直径が２００～５００Åの範囲の小さな単層小胞（ＳＵＶ）が形成される。リポソームの物理的特徴は、ｐＨ、イオン強度、および二価カチオンの存在に依存する。
本明細書に記載の抗Ａｘｌ抗体または抗体断片を含有する医薬配合物は、所望の純度の程度を有するそのような抗体または抗体断片を１つ以上の任意選択の薬学的に許容可能な担体（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））と混合することにより、凍結乾燥配合物または水溶液の形態で調製される。薬学的に許容される担体は、一般に、使用される投与量および濃度においてレシピエントに無毒であり、限定されないが、緩衝剤（リン酸、クエン酸、および他の有機酸など）、酸化防止剤（アスコルビン酸およびメチオニンを含む）、防腐剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムなど）、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチル、またはベンジルアルコール、アルキルパラベン（メチルパラベンまたはプロピルパラベンなど）、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３－ペンタノール、およびｍ－クレゾール）、低分子量ポリペプチド（約１０残基未満）、タンパク質（血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなど）、親水性ポリマー（ポリビニルピロリドンなど）、アミノ酸（グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジンなど）、単糖、二糖、および他の炭水化物（グルコース、マンノース、またはデキストリンを含む）、キレート剤（ＥＤＴＡなど）、糖類（スクロース、マンニトール、トレハロース、またはソルビトールなど）、塩形成対イオン（ナトリウムなど）、金属錯体（例えば、Ｚｎタンパク質錯体）、ならびに／または非イオン性界面活性剤（ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）など）が挙げられる。
本明細書における例示的な薬学的に許容可能な担体としては、間質液（ｉｎｓｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ）薬物分散剤、例えば可溶性中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ヒト可溶性ＰＨ－２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質、例えばｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）がさらに挙げられる。ｒＨｕＰＨ２０を含む、特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰおよび使用方法は、米国特許公開第２００５／０２６０１８６号および同第２００６／０１０４９６８号に記載されている。一態様では、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼなどの１つ以上の追加のグリコサミノグリカナーゼと組み合わされる。
例示的な凍結乾燥抗体配合物は、米国特許第６，２６７，９５８号明細書に記載されている。水性抗体配合物としては、米国特許第６，１７１，５８６号明細書および国際公開第２００６／０４４９０８号パンフレットに記載のものが挙げられ、後者の配合物はヒスチジン－酢酸緩衝液を含む。
本明細書における製剤は、治療される特定の適応症に対する必要に応じて、２つ以上の活性成分も含有し得る。好ましくは、互いに悪影響を与えない相補的な活性を有する成分を単一の製剤に組み合わせてもよい。例えば、ＥＧＦＲアンタゴニスト（例えば、エルロチニブ）、抗アンドロゲン剤（例えば、抗ＶＥＧＦ抗体であり得るＶＥＧＦアンタゴニスト）または化学療法剤（例えば、タキソイドまたは白金剤）を、本発明の抗Ａｘｌ抗体、抗体断片または免疫コンジュゲートに加えて提供することが望ましい場合がある。かかる活性成分は、意図された目的に効果的な量で、組み合わせて存在するのが好適である。
活性成分は、例えば、コアセルベーション技法によって、または界面重合によって調製されるマイクロカプセルに封入されてもよい。例えば、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、およびナノカプセル）中、またはマクロエマルジョン中に、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセル、およびポリ（メチルメタクリレート）マイクロカプセルを使用してもよい。かかる技法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に開示されている。
持続放出調製物を調製することができる。持続放出調製物の好適な例としては、抗体または抗体断片を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられ、マトリックスは、成形品の形態、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルであり得る。
インビボ投与に使用される製剤は、一般に、無菌である。滅菌は、例えば、濾過滅菌膜を介した濾過によって容易に達成され得る。

治療方法および組成物
本明細書において提供される抗Ａｘｌ抗体もしくは抗体断片または免疫コンジュゲートのいずれも、治療方法において使用することができる。一態様において、医薬品として使用される抗Ａｘｌ抗体もしくは抗体断片または免疫コンジュゲートが提供される。さらなる態様において、癌（例えば、乳癌、非小細胞肺癌、膵臓癌、脳腫瘍、膵臓、脳、腎臓、卵巣、胃、白血病、子宮内膜、結腸、前立腺、甲状腺、肝臓の癌、骨肉腫、および／またはメラノーマ）の治療において使用される抗Ａｘｌ抗体もしくは抗体断片または免疫コンジュゲートが提供される。ある実施形態において、治療の方法において使用される抗Ａｘｌ抗体もしくは抗体断片または免疫コンジュゲートが提供される。ある実施形態において、本発明は、個体に有効量の抗Ａｘｌ抗体もしくは抗体断片または免疫コンジュゲートを投与することを含む、癌を有する個体を治療する方法において使用される抗Ａｘｌ抗体もしくは抗体断片または免疫コンジュゲートを提供する。ある実施形態において、本発明は、個体に有効量の抗Ａｘｌ抗体または抗体断片を投与することを含む、免疫障害（例えば、自己免疫障害）、心血管障害（例えば、アテローム性動脈硬化症、高血圧、血栓症）、感染性疾患（例えば、エボラウイルス、マールブルグウイルス）または糖尿病を有する個体を治療する方法において使用される抗Ａｘｌ抗体もしくは抗体断片または免疫コンジュゲートを提供する。１つのそのような実施形態において、本方法は、個体に有効量の少なくとも１つの追加の治療剤、例えば、下記のものを投与することをさらに含む。さらなる実施形態において、本発明は、血管新生の阻害、細胞増殖の阻害、免疫機能の阻害、炎症性サイトカイン分泌（例えば、腫瘍関連マクロファージからのもの）の阻害、腫瘍血管系（例えば、腫瘍内血管系または腫瘍関連血管系）の阻害、および／または腫瘍間質機能の阻害において使用される抗Ａｘｌ抗体もしくは抗体断片または免疫コンジュゲートを提供する。
特定の実施形態において、本発明は、個体の血管新生の阻害、細胞増殖の阻害、免疫機能の阻害、炎症性サイトカイン分泌（例えば、腫瘍関連マクロファージからのもの）の阻害、腫瘍血管系（例えば、腫瘍内血管系または腫瘍関連血管系）の阻害、および／または腫瘍間質機能の阻害の方法において使用される抗Ａｘｌ抗体もしくは抗体断片または免疫コンジュゲート片を提供し、前記方法は、個体に有効量の抗Ａｘｌ抗体もしくは抗体断片または免疫コンジュゲートを投与して血管新生を阻害し、細胞増殖を阻害し、免疫機能を阻害し、炎症性サイトカイン分泌（例えば、腫瘍関連マクロファージからのもの）を阻害し、腫瘍血管系発生（例えば、腫瘍内血管系または腫瘍関連血管系）を阻害し、および／または腫瘍間質機能を阻害することを含む。上記いずれかの実施形態に係る「個体」は、好ましくは、ヒトである。
さらなる態様において、本発明は、医薬品の製造または調製における抗Ａｘｌ抗体もしくは抗体断片または免疫コンジュゲートの使用を提供する。一実施形態において、医薬品は、癌（一部の実施形態において、乳癌、非小細胞肺癌、膵臓癌、脳腫瘍、膵臓、脳、腎臓、卵巣、胃、白血病、子宮内膜、結腸、前立腺、甲状腺、肝臓の癌、骨肉腫、および／またはメラノーマ）の治療用である。さらなる実施形態において、医薬品は、癌を有する個体に有効量の医薬品を投与することを含む、癌を治療する方法において使用される。さらなる実施形態において、医薬品は、個体に有効量の抗Ａｘｌ抗体または抗体断片を投与することを含む、免疫障害（例えば、自己免疫障害）、心血管障害（例えば、アテローム動脈硬化症、高血圧、血栓症）、感染性疾患（例えば、エボラウイルス、マールブルグウイルス）または糖尿病を治療する方法において使用される。１つのそのような実施形態において、本方法は、個体に有効量の少なくとも１つの追加の治療剤、例えば、下記のものを投与することをさらに含む。さらなる実施形態では、薬剤は、血管新生、細胞増殖、免疫機能、炎症性サイトカインの分泌（例えば、腫瘍関連マクロファージ由来）、腫瘍血管構造（例えば、腫瘍内血管構造または腫瘍関連血管構造）、および／または腫瘍間質機能を阻害するための薬剤である。さらなる実施形態において、医薬は、個体の血管新生の阻害、細胞増殖の阻害、免疫機能の阻害、炎症性サイトカイン分泌（例えば、腫瘍関連マクロファージからのもの）の阻害、腫瘍血管系（例えば、腫瘍内血管系または腫瘍関連血管系）の阻害、および／または腫瘍間質機能の阻害の方法において使用され、前記方法は、個体に有効量の医薬を投与して血管新生を阻害し、細胞増殖を阻害し、免疫機能を促進し、炎症性サイトカイン分泌（例えば、腫瘍関連マクロファージからのもの）を誘導し、腫瘍血管系発生（例えば、腫瘍内血管系または腫瘍関連血管系）を阻害し、および／または腫瘍間質機能を阻害することを含む。上記実施形態のいずれかによる「個体」は、ヒトであってもよい。
さらなる態様では、本発明は、癌を治療するための方法を提供する。一実施形態において、本方法は、そのような癌を有する個体に有効量の抗Ａｘｌ抗体もしくは抗体断片または免疫コンジュゲートを投与することを含む。１つのそのような実施形態において、本方法は、個体に有効量の少なくとも１つの下記の追加の治療剤を投与することをさらに含む。上記実施形態のいずれかによる「個体」は、ヒトであってもよい。
Ａｘｌは１４０ｋＤａの細胞表面貫通型受容体タンパク質チロシンキナーゼで、ＴＹＲＯ３、Ａｘｌ、ＭＥＲ（ＴＡＭ；Ｌａｉ １９９１； Ｏ’Ｂｒｙａｎ １９９１）などの近縁受容体のサブファミリーに属する。ＴＡＭの活性化とシグナル伝達は、細胞の生存、増殖、移動、接着など、様々な細胞反応に関与している（Ｈａｆｉｚｉ ２００６）。Ａｘｌはもともと慢性骨髄性白血病の患者から癌遺伝子として同定され、過剰発現すると形質転換能を示す（Ｊａｎｓｓｅｎ １９９１； Ｏ’Ｂｒｙａｎ １９９１）。Ａｘｌの過剰発現は、様々なヒトの癌で報告されており（Ｃｒａｖｅｎ １９９５； Ｉｔｏ １９９９； Ｂｅｒｃｌａｚ ２００１； Ｓｕｎ ２００４； Ｓｈｉｅｈ ２００５）、肺癌（Ｓｈｉｅｈ ２００５）、前立腺癌（Ｓａｉｎａｇｈｉ ２００５）、乳癌（Ｍｅｒｉｃ ２００２）、胃癌（Ｗｕ ２００２）や腎細胞癌（Ｃｈｕｎｇ ２００３）や神経膠芽腫（Ｈｕｔｔｅｒｅｒ ２００８）における浸潤や転移に関連している。
最近の研究では、「チロシンキナーゼスイッチ」を介したＡｘｌの過剰発現が、消化管間質腫瘍のイマチニブに対する抵抗性をもたらすことが示された（Ｍａｈａｄｅｖａｎ ２００７）。Ａｘｌの発現は化学療法剤によって誘導され、Ａｘｌの過剰発現は急性骨髄性白血病における薬剤耐性をもたらす（Ｈｏｎｇ ２００８）。Ａｘｌはまた、内皮細胞の移動とチューブ形成を制御することが示されている（Ｈｏｌｌａｎｄ ２００５）。これらのことから、Ａｘｌは腫瘍形成の多面的な制御に関与している可能性が示唆された。
Ａｘｌを発現する固形腫瘍の種類は、いくつかの理由から注目されている。これらの疾患のそれぞれにおいて、新たな治療選択肢に対するアンメットニーズは高い。前臨床試験では、Ａｘｌを標的とすることで、ＮＳＣＬＣやメラノーマなど様々なタイプの腫瘍において抗腫瘍活性が得られる可能性が示唆されている。Ａｘｌ－ＡＤＣの提案されたメカニズムや基礎となる生物学と合わせて考えると、これらの悪性腫瘍に対する抗腫瘍活性が期待される。Ａｘｌは、例えば、平滑筋肉腫、ユーイング肉腫、脂肪肉腫の攻撃的なサブタイプを含む多数のヒト肉腫で高度に発現し、活性化している（Ｍａｙ ２０１５； Ｆｌｅｕｒｅｎ ２０１４； Ｄａｎｔａｓ－Ｂａｒｂｏｓａ ２０１７）．平滑筋肉腫（ＬＭＳ）は、成人の肉腫の１５％を占め、転移期の治療が困難な疾患である。ＴＹＲＯ３やＡｘｌを含むＴＡＭ受容体やそのリガンドは、ＬＭＳを含む複数の悪性腫瘍で過剰発現または活性化されている。ＬＭＳ患者、特に転移を起こした患者では、ＴＹＲＯ３およびＧＡＳ６の発現量が高い。クリゾチニブとフォレチニブは、ＬＭＳにおいてＴＹＲＯ３およびＡｘｌの不活性化による有効な抗腫瘍活性を示し、進行したＬＭＳに対してＴＹＲＯ３およびＡｘｌ阻害剤を用いた臨床試験が必要であることを示している。これらのデータは、ＡｘｌがＡｘｌ発現肉腫の新規治療ターゲットとなりうることを示唆している。
免疫療法、特にＰＤ－１遮断療法は、この１０年間で画期的な腫瘍学的治療法として台頭してきた。最近のＳＡＲＣ０２８試験（Ｐｅｔｉｔｐｒｅｚ ２０２０）では、治験薬のＰＤ－１阻害剤に反応した未分化多形肉腫患者のほとんど（７５％）がＰＤ－Ｌ１陽性の腫瘍を有しており、ＰＤ－１阻害剤との併用治療が示唆された。免疫バイオマーカーの発現は肉腫のサブタイプによって異なり、免疫療法への反応と関連する可能性がある（Ｐｅｔｉｔｐｒｅｚ ２０２０）。免疫細胞脱分化型脂肪肉腫と未分化型多形肉腫。リンパ球浸潤と三次リンパ構造を有する肉腫は、チェックポイント阻害剤ニボルマブに反応することが示されている（Ｐｅｔｉｔｐｒｅｚ ２０２０）。これらを総合すると、ＰＤ－１阻害剤を併用することで、炎症性軟部肉腫の患者において、より良い治療成績が得られる可能性が示唆される。小児肉腫患者において、ＢＡ３０１１による治療は、発達障害、骨格障害、性腺障害を引き起こすことはないと予想される。Ａｘｌノックアウト対立遺伝子を持つホモ接合体のマウスは、明らかに正常な表現型を示す（Ｌｕ １９９９）。
本発明のこの態様において、Ａｘｌ発現腫瘍を治療する方法が提供される。いくつかの実施形態において、方法は、本発明の抗Ａｘｌ抗体もしくは抗体断片、または抗Ａｘｌ抗体もしくは抗体断片を含む免疫コンジュゲートを投与することを含む。
一実施形態では、Ａｘｌ発現腫瘍を治療する方法は、化学療法剤、放射性原子、細胞増殖抑制剤および細胞毒性剤から選択される薬剤にコンジュゲートしている本発明の抗体または抗体断片を含む免疫コンジュゲートを投与することを含む。免疫コンジュゲートは、条件付き活性生物学的（ＣＡＢ）抗Ａｘｌ抗体が、切断可能なリンカー（ＣＡＢ－Ａｘｌ－ＡＤＣ）を介して１つ以上の薬剤部分に結合された抗体－薬剤コンジュゲート（ＡＤＣ）である。例えば、ＣＡＢ－Ａｘｌ－ＡＤＣは、ｍＡｂＢＡ３０１１－切断可能リンカー－ＭＭＡＥ（ｎ）であり、薬物部位はモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）で、（ｎ）は（１と４を含む）１～４の整数である。
いくつかの実施形態では、本発明は、薬剤部分がモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）であり、（ｎ）が（１と４を含む）１～４の整数であるｍＡｂＢＡ３０１１－切断可能リンカー－ＭＭＡＥ（ｎ）などのＣＡＢ－Ａｘｌ－ＡＤＣを、約０．３ｍｇ／ｋｇから約２．０ｍｇ／ｋｇの用量で、２１日ごとに１～２回、２１日ごとに１日目と８日目に、または１４日ごとに１日と８日にいずれかの用量で投与される治療レジメンで提供する。このような治療レジメンは驚くほど有効であり、そのような用量および間隔で投与された本発明の抗体－薬物コンジュゲートは、驚くほど高い奏効率と許容できる毒性または忍容性プロフィールを提供するからである。したがって、本方法は、ＣＡＢ－Ａｘｌ－ＡＤＣ抗体－薬物コンジュゲートを対象に投与するための投与レジメンを提供する。いくつかの実施形態において、投与レジメンは、他の投与レジメンと比較して、対象が療法に応答する確率を高める。いくつかの実施形態において、投与レジメンは、他の投与レジメンと比較して、対象が有害事象（用量制限毒性を含む）に罹患する確率を増加させない。また、本発明は、投与レジメンに続く維持療法を提供する。
特定の実施形態では、ｍＡｂＢＡ３０１１－切断可能なリンカー－ＭＭＡＥ（ｎ）は、約０．３ｍｇ／ｋｇ～約１．８ｍｇ／ｋｇの用量で、２１日ごとに１回もしくは２回、２１日間ごとに１日目と８日目に、または１４日間ごとに１日目と８日目に投与される。好適には、ｍＡｂＢＡ３０１１－切断可能なリンカー－ＭＭＡＥ（ｎ）は、約０．８ｍｇ／ｋｇ～約１．８ｍｇ／ｋｇの用量で、２１日ごとに１回もしくは２回、２１日間ごとに１日目と８日目に、または１４日間ごとに１日目と８日目に投与される。
本発明のｍＡｂＢＡ３０１１－切断可能リンカー－ＭＭＡＥ（ｎ）のようなＣＡＢ－Ａｘｌ－ＡＤＣは、異なる疾患や組織に関連する定義された生理学的条件下で優先的に結合する。例えば、癌では、Ｗａｒｂｕｒｇが提唱した独特の細胞代謝により、低ｐＨ、高乳酸といった特徴的な微小環境が形成される（Ｗａｒｂｕｒｇ １９２４； Ｗａｒｂｕｒｇ １９５６）。本発明のｍＡｂＢＡ３０１１－切断可能リンカー－ＭＭＡＥ（ｎ） は、特異的なＴＭＥを利用し、Ａｘｌを発現する腫瘍に近接するとその標的に選択的に結合する。ｍＡｂＢＡ３０１１－切断可能リンカー－ＭＭＡＥ（ｎ）の活性化された結合特性は可逆的であり、病的正常組織から病的組織微小環境へ移行する際に永久的な変化はない。特に、ｍＡｂＢＡ３０１１－切断可能リンカー－ＭＭＡＥ（ｎ）は、これらの特性を達成するために非抗体配列を付加することなく、ヒト化ｍＡｂ（ＢＡ３０１１）を含む。
特定の態様において、Ａｘｌ発現腫瘍を治療する方法は、そのような治療を必要とするヒト対象に、ｍＡｂＢＡ３０１－切断可能リンカー－ＭＭＡＥ（ｎ）を投与することを含み、ｍＡｂＢＡ３０１は、配列番号１４のｈｃＣＤＲ１、配列番号１５のｈｃＣＤＲ２および配列番号１６のｈｃＣＤＲ３を含む重鎖可変領域および、配列番号１７のｌｃＣＤＲ１、配列番号１８のｌｃＣＤＲ２、配列番号１９のｌｃＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を有する抗体または抗体断片であり； ＭＭＡＥはモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）であり、（ｎ）は（１と４を含む）１～４の整数である。
さらに別の態様において、本発明は、本発明のポリペプチド、抗体もしくは抗体断片、または免疫コンジュゲートを薬学的に許容可能な担体と一緒に含む医薬組成物を提供する。
別の実施形態では、本発明の方法において有用なポリペプチド、抗体もしくは抗体断片、または免疫コンジュゲートは、Ａｘｌ発現腫瘍を診断または治療するための使用説明書を有するキットに含まれる。
さらに別の実施形態では、Ａｘｌ発現腫瘍を治療する方法は、そのような治療を必要とするヒト対象に、ｍＡｂＢＡ３０１ー切断可能リンカー－ＭＭＡＥ（ｎ）および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を投与することを含み、ここで、医薬組成物は、静脈内注入により２１日ごとに１日目と８日目に１．８ ｍｇ／ヒト対象体重ｋｇの用量で投与される。ｍＡｂＢＡ３０１は、配列番号１４のｈｃＣＤＲ１、配列番号１５のｈｃＣＤＲ２及び配列番号１６のｈｃＣＤＲ３を含む重鎖可変領域および、配列番号１７のｌｃＣＤＲ１、配列番号１８のｌｃＣＤＲ２、配列番号１９のｌｃＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を有する抗体又は抗体断片であり；（ｎ）は、（１と４を含む）１～４の整数であり、好ましくは、（ｎ）は、４に等しい。
特定の実施形態において、重鎖可変領域は、配列番号２０を含み、ｍＡｂＢＡ３０１の軽鎖可変領域は、配列番号２１を含む。
別の実施形態では、切断可能なリンカーは、ｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢである。
特定の実施形態において、Ａｘｌ発現腫瘍は、肉腫、腺癌、または非小細胞肺癌である。好ましくは、Ａｘｌ発現腫瘍は肉腫である。
特定の実施形態では、方法は、プログラム死受容体－１（ＰＤ－１）遮断抗体を投与することをさらに含む。
さらに別の実施形態では、Ａｘｌ発現腫瘍は、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、または少なくとも９５の腫瘍膜Ｐスコアを持つ。好ましくは、Ａｘｌ発現腫瘍は、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、または少なくとも９５の腫瘍膜Ｐスコアを有する。
特定の実施形態では、方法は、顆粒球コロニー刺激因子またはその類似体を投与することをさらに含む。
さらに別の実施形態では、薬学的に許容される担体は、ｐＨ６．０を有し、２０ｍＭヒスチジン－ＨＣｌ、７０ｍｇ／ｍＬスクロースおよび０．５ｍｇ／ｍＬポリソルベート８０を含む。
さらなる態様において、本発明は、免疫障害（例えば、自己免疫障害）、心血管障害（例えば、アテローム性動脈硬化症、高血圧、血栓症）、感染性疾患（例えば、エボラウイルス、マールブルグウイルス）または糖尿病を治療する方法を提供する。１つのそのような実施形態において、本方法は、個体に有効量の少なくとも１つの下記の追加の治療剤を投与することをさらに含む。上記実施形態のいずれかによる「個体」は、ヒトであってもよい。
さらなる態様では、本発明は、個体において、血管新生、細胞増殖、免疫機能、炎症性サイトカインの分泌（例えば、腫瘍関連マクロファージ由来）、腫瘍血管構造（例えば、腫瘍内血管構造または腫瘍関連血管構造）、および／または腫瘍間質機能を阻害するための方法を提供する。一実施形態において、本方法は、個体に有効量の抗Ａｘｌ抗体または抗体断片を投与して血管新生を阻害し、細胞増殖を阻害し、免疫機能を促進し、炎症性サイトカイン分泌（例えば、腫瘍関連マクロファージからのもの）を誘導し、腫瘍血管系発生（例えば、腫瘍内血管系または腫瘍関連血管系）を阻害し、および／または腫瘍間質機能を阻害することを含む。一実施形態において、「個体」は、ヒトである。
さらなる態様において、本発明は、例えば、上記治療方法のいずれかにおいて使用される、本明細書において提供される抗Ａｘｌ抗体または抗体断片のいずれかを含む医薬配合物を提供する。一実施形態において、医薬配合物は、本明細書において提供される抗Ａｘｌ抗体または抗体断片のいずれかおよび薬学的に許容可能な担体を含む。別の実施形態において、医薬配合物は、本明細書において提供される抗Ａｘｌ抗体または抗体断片のいずれかおよび少なくとも１つの追加の治療剤、例えば、下記のものを含む。
上に記載の各治療およびそれぞれの治療において、本発明の抗体または抗体断片は、単独で、免疫コンジュゲートとして、または治療中の他の薬剤と組み合わせて使用することができる。例えば、本発明の抗体は、少なくとも１つの追加の治療剤と同時投与され得る。ある特定の実施形態では、追加の治療剤は、抗血管新生剤である。ある特定の実施形態では、追加の治療剤は、ＶＥＧＦアンタゴニスト（一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体、例えば、ベバシズマブ）である。ある特定の実施形態では、追加の治療剤は、ＥＧＦＲアンタゴニスト（一部の実施形態では、エルロチニブ）である。ある特定の実施形態では、追加の治療剤は、化学療法剤および／または細胞分裂阻害剤である。ある特定の実施形態では、追加の治療剤は、タキソイド（例えば、パクリタキセル）および／または白金剤（例えば、カルボプラチナ）である。ある実施形態において、追加の治療剤は、患者の免疫または免疫系を向上させる薬剤である。
上記のかかる併用療法は、併用投与（２つ以上の治療剤が同じまたは別個の製剤に含まれる）、ならびに個別投与を包含し、この場合、抗体または抗体断片の投与は、追加の治療剤および／またはアジュバントの投与の前に、同時に、および／または後に生じ得る。抗体または抗体断片もまた、放射線療法と併用され得る。
抗体または抗体断片は、良好な医療行為と一致する様式で、配合し、投薬し、投与することができる。これに関連する検討事項の因子としては、治療される特定の障害、治療される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床病態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与のスケジューリング、および医師に公知の他の因子が挙げられる。抗体または抗体断片は、必ずしも必要はないが、任意選択的に、当の障害を予防または治療するために現在使用されている１つ以上の薬剤とともに製剤化される。かかる他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗体または抗体断片の量、障害または治療の種類、および上で考察された他の要因に依存する。これらは、概して、本明細書に記載される同じ投与量および投与経路で、または本明細書に記載の投与量の約１～９９％で、または経験的／臨床的に適切であると判断された任意の投与量および任意の経路によって使用される。
疾患の予防または治療のために、抗体または抗体断片の適切な投与量（単独でまたは１つ以上の他の追加の治療薬と組み合わせて使用する場合）は、治療する疾患の種類、抗体または抗体断片の種類、疾患の重症度および経過、抗体または抗体断片が予防目的または治療目的で投与されるかどうか、以前の療法、患者の病歴および抗体または抗体断片に対する応答、ならびに主治医の裁量に依存する。抗体または抗体断片は、患者に一度に、または一連の治療にわたって好適に投与される。疾患のタイプおよび重症度に応じて、例えば、１回以上の別個の投与によるものであるか、連続注入によるものであるかにかかわらず、約１μｇ／ｋｇ～４０ｍｇ／ｋｇの抗体または抗体断片が、患者への投与のための初回候補投与量であり得る。１つの典型的な１日投与量は、上記因子に応じて、約１μｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ以上の範囲であり得る。数日以上にわたる繰り返し投与の場合、状態に応じて、治療は、疾患症状の所望の抑制が生じるまで一般に持続するであろう。かかる用量は、例えば、毎週または３週間毎に断続的に投与され得る（例えば、患者が約２～約２０回、または例えば、約６回の用量の抗体または抗体断片を受容する）。より高い初回負荷用量、次いで１回以上のより低い用量を投与することができる。しかしながら、他の投与レジメンが有用な場合がある。この治療法の進行は、慣用の技術およびアッセイにより容易にモニタリングされる。
上記配合物または治療方法のいずれも、抗Ａｘｌ抗体の代わりに、またはそれに加えて本発明の抗体断片または免疫コンジュゲートを使用して実施することができることが理解される。
腫瘍を撲滅するための宿主の免疫機能の向上は、関心が増加している主題である。従来の方法としては、（ｉ）ＡＰＣの増強、例えば（ａ）外来のＭＨＣのアロ抗原をコードするＤＮＡを腫瘍に注入すること、または（ｂ）生検腫瘍細胞を、腫瘍の免疫抗原認識の確率を増加させる遺伝子でトランスフェクションすること（例えば、免疫刺激サイトカイン、ＧＭ－ＣＳＦ、共刺激分子Ｂ７．１、Ｂ７．２）、（ｉｉｉ）養子細胞免疫療法、または活性化腫瘍特異的Ｔ細胞による治療が挙げられる。養子細胞免疫療法は、腫瘍浸潤宿主Ｔリンパ球を単離すること、例えば、ＩＬ－２もしくは腫瘍またはその両方による刺激を通して、インビトロで集団を拡大することを含む。さらに、機能不全の単離Ｔ細胞を、抗ＰＤ－Ｌ１抗体のインビトロ適用により活性化することもできる。次いで、そのように活性化されたＴ細胞を、宿主に再投与してもよい。これらの方法のうちの１つ以上を、本発明の抗体、抗体断片、または免疫コンジュゲートの投与と組み合わせて使用することができる。
癌に対する伝統的な療法には、以下が含まれる：（ｉ）放射線療法（例えば、放射線療法、Ｘ線療法、照射）、または癌細胞を死滅させ、腫瘍を縮小させるための電離放射線の使用。放射線療法は、外部ビーム放射線療法（ＥＢＲＴ）を介して、または内部で近接照射療法を介して投与することができる、（ｉｉ）化学療法、または一般に急速に分裂細胞に影響を与える細胞傷害性薬の適用、（ｉｉｉ）標的療法、または癌細胞の調節解除されたタンパク質に特異的に影響を与える薬剤（例えば、チロシンキナーゼ阻害剤のイマチニブ、ゲフィチニブ；モノクローナル抗体、光力学療法）、（ｉｖ）免疫療法、または宿主の免疫応答の増強（例えば、ワクチン）、（ｖ）ホルモン療法、またはホルモンの遮断（例えば、腫瘍がホルモン感受性である場合）、（ｖｉ）血管新生阻害剤、または血管の形成および成長の遮断、ならびに（ｖｉｉ）緩和ケア、または疼痛、悪心、嘔吐、下痢および出血を低減するためのケアの質を改善することを対象とした治療。モルヒネおよびオキシコドンなどの鎮痛薬、オンダンセトロンおよびアプレピタントなどの制吐剤は、より積極的な治療レジメンを可能にすることができる。
癌の治療において、癌免疫の治療のための既に記載されている慣用の治療のいずれも、抗Ａｘｌ抗体または抗体断片の投与前、投与後または投与と同時に実施することができる。さらに、抗Ａｘｌ抗体または抗体断片は、慣用の癌治療、例えば、腫瘍結合抗体（例えば、モノクローナル抗体、毒素コンジュゲートモノクローナル抗体）および／または化学療法剤の投与前、投与後または投与と同時に投与することができる。
投与レジメン
本発明は、Ａｘｌ発現腫瘍の処置のための投与レジメンを提供する。投与レジメンは 、本発明の抗Ａｘｌ抗体もしくは抗体断片、または抗Ａｘｌ抗体もしくは抗体断片を含む免疫コンジュゲートを、本明細書に記載のように、約０．３ｍｇ／ｋｇ体重～約２．０ｍｇ／ｋｇ体重、０．４ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、０．５ｍｇ／ｋｇ体重から約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、０．６ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、０．７ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、０．９ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、１．０ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、１．１ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、１．２ｍｇ／ｋｇ体重～約１．３ｍｇ／ｋｇ体重、０．７ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、１．４ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、１．５ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、１．６ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、または １．７ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重を、少なくとも２週間（例えば、１４日間）または３週間（例えば、２１日間）投与することを含む。より好ましくは、約０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重を、少なくとも２週間（例えば、１４日間）または３週間（例えば、２１日間）投与する。週用量は、週１回投与（１週間に１回）または分割投与（例えば、１週間に２回以上）により行うことができる。
特定の実施形態では、投与レジメンは 、本明細書に記載の本発明のポリペプチド、抗体もしくは抗体断片、または免疫コンジュゲートを、０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．６ｍｇ／ｋｇ体重、０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．４ｍｇ／ｋｇ体重、０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．２ｍｇ／ｋｇ体重または０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．０ｍｇ／ｋｇ体重で、少なくとも２週間（例えば、１４ 日間）または ３ 週間（例えば、２１ 日間）投与することを含む。週用量は、週１回投与（１週間に１回）または分割投与（例えば、１週間に２回以上）により行うことができる。
特定の実施形態では、投与レジメンは、本明細書に記載の抗体－薬物コンジュゲートを、約０．３ｍｇ／ｋｇ体重～約２．０ｍｇ／ｋｇ体重、０．４ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、０．５ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、０．６ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、０．７ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約 １．８ｍｇ／ｋｇ体重、０．９ｍｇ／ｋｇ体重～約 １．８ｍｇ／ｋｇ体重、１．０ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、１．１ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、１．２ｍｇ／ｋｇ体重～約１．３ｍｇ／ｋｇ体重、０．７ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、１．４ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、１．５ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、１．６ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、または１．７ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重で、少なくとも２週間（例えば、１４ 日間）または ３ 週間（例えば、２１ 日間）投与することを含む。より好ましくは、約０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重を、少なくとも２週間（例えば、１４日間）または３週間（例えば、２１日間）投与する。週用量は、週１回投与（１週間に１回）または分割投与（例えば、１週間に２回以上）により行うことができる。
いくつかの実施形態では、投与レジメンは 、抗体ー薬物コンジュゲートを、本明細書に記載のとおり、０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．６ｍｇ／ｋｇ体重、０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．４ｍｇ／ｋｇ体重、０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．２ｍｇ／ｋｇ体重または０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．０ｍｇ／ｋｇ体重で、少なくとも２週間（例えば、１４ 日間）または ３ 週間（例えば、２１ 日間）投与することを含む。週用量は、週１回投与（１週間に１回）または分割投与（例えば、１週間に２回以上）により行うことができる。
特定の実施形態において、週用量は、分割投与として、または週１回投与として、少なくとも１の２週間（例えば、１４日間）の治療サイクル、または少なくとも１の３週間（例えば、２１日間）の治療サイクルにわたって投与される。いくつかの実施形態では、用量は１４日間の治療サイクルの１日目と８日目に週１回投与される。好ましくは、週用量は、分割投与として、または週１回投与として、２以上の１４日間の治療サイクル、さらに好ましくは、３以上、４以上、５以上、またはさらに６以上の治療サイクルにわたって投与される。いくつかの実施形態では、週用量は、３以下、４以下、５以下、または６以下の治療サイクルの間、投与される。いくつかの実施形態では、用量は、２１日の治療サイクルの１日目および８日目に、週１回投与として投与される。好ましくは、週用量は、分割投与として、または週１回投与として、２以上の２１日間の治療サイクル、さらに好ましくは、３以上、４以上、５以上、またはさらに６以上の治療サイクルにわたって投与される。いくつかの実施形態では、週用量は、３以下、４以下、５以下、または６以下の治療サイクルの間、投与される。好ましくは、治療サイクルの間に休薬期間が設けられる。
例えば、いくつかの好適な実施形態では、投与レジメンは、抗体－薬物コンジュゲートを、総週用量約０．３ｍｇ／ｋｇ体重～約２．０ｍｇ／ｋｇ体重、０．４ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、０．５ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、０．６ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、０．７ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約 １．８ｍｇ／ｋｇ体重、０．９ｍｇ／ｋｇ体重～約 １．８ｍｇ／ｋｇ体重、１．０ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、１．１ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、１．２ｍｇ／ｋｇ体重～約１．３ｍｇ／ｋｇ体重、０．７ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、１．４ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、１．５ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、１．６ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、または１．７ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重で、少なくとも２週間（例えば、１４ 日間）または ３ 週間（例えば、２１ 日間）投与する。いくつかの実施形態では、治療サイクルは１４日以上となる。いくつかの実施形態では、治療は２１日以上となる。週用量は、週１回投与（１週間に１回）または分割投与（例えば、１週間に２回以上）により行うことができる。
例えば、いくつかの好ましい実施形態では、投与レジメンは、抗体－薬物コンジュゲートの総週用量、約０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．６ｍｇ／ｋｇ体重、０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．４ｍｇ／ｋｇ体重、０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．２ｍｇ／ｋｇ体重または０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．０ｍｇ／ｋｇ体重が、少なくとも２の治療サイクルにわたって投与され、各治療サイクルの間に１週間の休薬期間が設けられる（例えば、８週間に６回の週１回投与）。いくつかの実施形態では、治療サイクルは１４日以上となる。いくつかの実施形態では、治療サイクルは２１日以上となる。週用量は、週１回投与（１週間に１回）または分割投与（例えば、１週間に２回以上）により行うことができる。
いくつかの実施形態では、抗体薬物コンジュゲートの週用量は、週１回投与（週に１回）または分割投与（例えば、週に２回以上）として約０．８ｍｇ／ｋｇ体重投与される。いくつかの実施形態では、抗体薬物コンジュゲートの週用量は、週１回投与（週に１回）または分割送達（例えば、週に２回以上）として約０．９ｍｇ／ｋｇ体重投与される。いくつかの実施形態では、抗体薬物コンジュゲートの週用量は、週１回投与（週に１回）または分割投与（例えば、週に２回以上）として約１．０ｍｇ／ｋｇ体重投与される。いくつかの実施形態では、抗体薬物コンジュゲートの週用量は、週１回投与（週に１回）または分割投与（例えば、週に２回以上）として約１．１ｍｇ／ｋｇ体重投与される。いくつかの実施形態では、抗体薬物コンジュゲートの週用量は、週１回投与（週に１回）または分割投与（例えば、週に２回以上）として約１．２ｍｇ／ｋｇ体重投与される。いくつかの実施形態では、抗体薬物コンジュゲートの週用量は、週１回投与（週に１回）または分割送達（例えば、週に２回以上）として約１．３ｍｇ／ｋｇ体重投与される。いくつかの実施形態では、抗体薬物コンジュゲートの週用量は、週１回投与（週に１回）または分割投与（例えば、週に２回以上）として約１．４ｍｇ／ｋｇ体重投与される。いくつかの実施形態では、抗体薬物コンジュゲートの週用量は、週１回投与（週に１回）または分割投与（例えば、週に２回以上）として約１．５ｍｇ／ｋｇ体重投与される。いくつかの実施形態では、抗体薬物コンジュゲートの週用量は、週１回投与（週に１回）または分割送達（例えば、週に２回以上）として約１．６ｍｇ／ｋｇ体重投与される。いくつかの実施形態では、抗体薬物コンジュゲートの週用量は、週１回投与（週に１回）または分割投与（例えば、週に２回以上）として約１．７ｍｇ／ｋｇ体重投与される。いくつかの実施形態では、抗体薬物コンジュゲートの週用量は、週１回投与（週に１回）または分割投与（例えば、週に２回以上）として約１．８ｍｇ／ｋｇ体重投与される。いくつかの実施形態において、抗体薬物コンジュゲートの週用量は、対象の体重について０．８、０．９、１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７または１．８ｍｇ／ｋｇとなる。
２週間（１４日間）の治療サイクルと治療サイクルの間に１週間の休薬期間を設ける治療サイクルは、３週間（２１日間）の治療サイクルと呼ぶこともでき、この場合、抗体薬物コンジュゲートは３週間の治療サイクルの３週間のうち２週間投与される。同様に、３週間（２１日間）の治療サイクルと治療サイクルの間に１週間の休薬期間を設ける治療サイクルは、４週間（２８日間）の治療サイクルと呼ぶこともでき、この場合、抗体薬物コンジュゲートは４週間の治療サイクルの４週間のうち３週間投与される。従って、いくつかの実施形態において、用量は、３週間の治療サイクルの３週間のうち２週間、分割投与として、または週１回投与として、毎週投与されるか、または用量は、４週間の治療サイクルの４週間のうち３週間、分割投与として、または週１回投与として、毎週投与される。いくつかの実施形態において、用量は、２１日間の治療サイクルの１日目および８日目に週１回投与として投与されるか、または用量は、２８日間の治療サイクルの１日目および８日目に週１回投与として投与される。好ましくは、分割投与として、または週１回投与として、週用量は、２以上の４週間治療サイクル、さらに好ましくは、３以上、４以上、５以上、またはさらに６以上の４週間治療サイクル（例えば、２、３、４、５、または６連続治療サイクル）投与される。いくつかの実施形態では、週用量は、３以下、４以下、５以下、または６以下の治療サイクルの間、投与される。例えば、いくつかの好ましい実施形態では、投与レジメンは、分割投与として、または週１回投与として、総週用量約０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．６ｍｇ／ｋｇ体重、０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．４ｍｇ／ｋｇ体重、０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．２ｍｇ／ｋｇ体重、または０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．０ｍｇ／ｋｇ体重の抗体－薬物コンジュゲートを、３週間のうち２週間、少なくとも２の３週間の治療サイクルで投与することを含む。例えば、いくつかの好ましい実施形態では、投与レジメンは、分割投与として、または週１回投与として、総週用量約０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．６ｍｇ／ｋｇ体重、０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．４ｍｇ／ｋｇ体重、０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．２ｍｇ／ｋｇ体重、または０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．０ｍｇ／ｋｇ体重の抗体－薬物コンジュゲートを、４週間のうち３週間、少なくとも２の４週間の治療サイクルで投与することを含む。
いくつかの好ましい実施形態では、投与レジメンは、分割投与として、または週１回投与として、総週用量約０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．６ｍｇ／ｋｇ体重、０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．４ｍｇ／ｋｇ体重、０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．２ｍｇ／ｋｇ体重、または０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．０ｍｇ／ｋｇ体重の抗体－薬物複合体を、３週間のうち２週間、１サイクル、２サイクル、３サイクル、４サイクル、または５サイクルの４週間治療サイクル（例えば、６週間に週１回投与を４サイクル、９週間に週１回投与を６サイクル、１２週間に週１回投与を８サイクル）で投与することを含む。
いくつかの好ましい実施形態では、投与レジメンは、分割投与として、または週１回投与として、総週用量約０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．６ｍｇ／ｋｇ体重、０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．４ｍｇ／ｋｇ体重、０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．２ｍｇ／ｋｇ体重、または０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．０ｍｇ／ｋｇ体重の抗体－薬物複合体を、４週間のうち３週間、１、２、３、４、または５の４週間治療サイクル（例えば、８週間に週１回投与を６サイクル、１２週間に週１回投与を９サイクル、１６週間に週１回投与を１２サイクル）で投与することを含む。
１つ以上の治療サイクルの後または治療サイクル中（例えば、第２の治療サイクルの１４～２１日目または第２の治療サイクルの２１～２８日目）、対象を評価し（例えば、臨床検査または診断検査を通じて）、対象が治療スケジュールに留まるべきかどうかを決定することができる。例えば、１回以上の２８日間治療サイクル（例えば、１、２、３、４、５、または６の２８日間治療サイクル）の後またはその間に、対象を評価（例えば、臨床評価および／または診断評価）することができる。評価に応じて、対象は治療を中止するか、治療サイクルを追加して治療を継続するか、維持療法を開始する。対象が治療を継続する場合、１以上の追加治療サイクルの後に、対象をさらに評価することができる。継続的な評価に応じて、対象は治療を中止するか、治療サイクルを追加して治療を継続するか、維持療法を開始する。
本発明は、対象が検出可能な癌を有さないことを示す評価の後、例えば、ＣＤ３０発現癌に対して陰性である（すなわち、診断検査が対象において癌を検出できない）診断検査の後、対象が毎週の治療サイクル（例えば、２週間の治療サイクルまたは３週間の治療サイクル）に留まる実施形態を包含する。例えば、いくつかの実施形態では、対象、このような評価の後、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２またはそれ以上の治療サイクルの間、毎週の治療サイクルを継続する。いくつかの実施形態では、対象は、少なくとも２、３以下、４以下、５以下、または６以下の治療サイクルの間、毎週の治療サイクルを継続する。癌の有無や重症度の判定に用いられる診断検査の一例として、陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）がある。
一部の実施形態では、対象は、１以上、好ましくは２以上（例えば、１、２、３、４、５、または６）の治療サイクル（例えば、４週間の治療サイクル）の後に維持療法を開始する。一部の実施形態では、対象は、検出可能な癌がほとんどないことを示す評価後、例えば、対象者が完全奏効を示したことを示す評価後に、維持療法を開始する。本明細書において、維持療法とは、抗体－薬物コンジュゲートの投与スケジュールを短縮し、同一または異なる投与量で行う療法を指す。維持療法中、抗体－薬物コンジュゲートは、好ましくは、少なくとも２週間の治療期間に１回、３週間の治療期間に１回、２週間の治療期間の１日目と８日目、または３週間の治療期間の１日目と８日目に投与される。これらの維持療法サイクルの後、対象をさらに評価し（例えば、臨床検査または診断検査により）、対象が維持療法を継続すべきか、通常の治療を継続すべきか、または治療を中止すべきかを決定することができる。一部の実施形態では、維持療法は２週間から４週間に１回、または３週間から６週間に１回行われる。維持療法中に投与される抗体薬物コンジュゲートの用量は、例えば、１回当たり約０．３ｍｇ／ｋｇ体重～約２．０ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは約０．６ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは約１．２ｍｇ／ｋｇ体重～約２．０ｍｇ／ｋｇ体重、さらに好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重の範囲であり得、１．８ｍｇ／ｋｇが例示的な用量である。
いくつかの実施形態では、約０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは約０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．２ｍｇ／ｋｇ体重の抗体薬物コンジュゲートの用量での週１回治療の終了後、評価を行い。この場合、対象は、抗体－薬物コンジュゲートを、約０．３ｍｇ／ｋｇ体重～約２ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは約０．６ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは約１．２ｍｇ／ｋｇ体重～約２．０ｍｇ／ｋｇ体重、さらに好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、約１．８ｍｇ／ｋｇの用量で、２～４週間に１回、または３～６週間に１回投与することを含む維持療法を開始する。一部の実施形態では、毎週の治療の終了後（例えば、１、２、３、４または５回の治療サイクル）、対象は、２週間に１回の投与スケジュール（例えば、２週間の維持療法サイクルの１日目に治療）を開始する、例えば、２週間の維持療法サイクルの１日目に治療）を開始し、抗体薬物コンジュゲートを、約０．４ｍｇ／ｋｇ体重～約２ｍｇ／ｋｇ体重、約０．６ｍｇ／ｋｇ体重～約２．０ｍｇ／ｋｇ体重、または約０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重（約１．８ｍｇ／ｋｇが好ましい）の用量で投与する。一部の実施形態では、毎週の治療の終了後（例えば、１、２、３、４または５回の治療サイクル）、対象は、３週間に１回の投与スケジュール（例えば、３週間の維持療法サイクルの１日目に治療）を開始する、例えば、２週間の維持療法サイクルの１日目に治療）を開始し、抗体薬物コンジュゲートを、約０．４ｍｇ／ｋｇ体重～約２ｍｇ／ｋｇ体重、約０．６ｍｇ／ｋｇ体重～約２．０ｍｇ／ｋｇ体重、または約０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重（約１．８ｍｇ／ｋｇが好ましい）の用量で投与する。
本発明は、対象が、抗体薬物コンジュゲートの週用量を、分割投与、または週１回投与され、総週用量が 約０．８ｍｇ／ｋｇ患者体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、約０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．６ｍｇ／ｋｇ体重、約０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．４ｍｇ／ｋｇ体重、約０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．２ｍｇ／ｋｇ体重又は 約０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．０ｍｇ／ｋｇ体重であり、３週間のうち２週間、１、２、３、４、５、６の２１日間投与サイクルの後、２～４週間ごとに投与され、好ましくは２週間ごとに、１回あたり約０．４ｍｇ／ｋｇ体重～約２ｍｇ／ｋｇ体重、約０．６ｍｇ／ｋｇ体重～約２．０ｍｇ／ｋｇ体重、または約０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重の抗体薬物コンジュゲートを、２以上の維持療法サイクルにわたって投与する。一部の実施形態では、週１回の投与サイクルは、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０以上の治療サイクルとなり、２週間ごとの投与スケジュールは、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０以上の維持療法サイクルとなる。いくつかの実施形態では、週１回の投与サイクルは、２、３、４、５、または６以下の治療サイクルとなる。
本発明は、対象が、抗体薬物コンジュゲートの週用量を、分割投与、または週１回投与され、総週用量が 約０．８ｍｇ／ｋｇ患者体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重、約０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．６ｍｇ／ｋｇ体重、約０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．４ｍｇ／ｋｇ体重、約０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．２ｍｇ／ｋｇ体重又は 約０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．０ｍｇ／ｋｇ体重であり、４週間のうち３週間、１、２、３、４、５、６回の２８日間投与サイクルの後、３～６週間ごとに投与され、好ましくは２週間ごとに、１回あたり約０．４ｍｇ／ｋｇ体重～約２ｍｇ／ｋｇ体重、約０．６ｍｇ／ｋｇ体重～約２．０ｍｇ／ｋｇ体重、または約０．８ｍｇ／ｋｇ体重～約１．８ｍｇ／ｋｇ体重の抗体薬物コンジュゲートを、３以上の維持療法サイクルにわたって投与する。一部の実施形態では、１週間ごとの投与サイクルは、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０回以上の治療サイクルとなり、３週間ごとの投与スケジュールは、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０以上の維持療法サイクルとなる。いくつかの実施形態では、週１回の投与サイクルは、２、３、４、５、または６以下の治療サイクルとなる。
本発明は、対象が、抗体薬物コンジュゲートの週用量を、分割投与として、または週１回投与として、対象の体重の約０．８ｍｇ／ｋｇ～約１．８ｍｇ／ｋｇの総週用量で、３週間のうち２週間（例えば、２１日間の治療サイクルの１日目および８日目）に１、２、３、４、５、または６の２１日間の治療サイクルで投与され、その後、２～４週間ごとに投与される実施形態を包含する。好ましくは、２週間ごとに、抗体薬物コンジュゲートを体重あたり約１．８ｍｇ／ｋｇの用量で、２以上の維持療法サイクルである（例えば、２週間ごとに体重あたり約１．８ｍｇ／ｋｇの用量で、２以上の２週間の維持療法サイクル）。好ましくは、２週間ごとに、抗体薬物コンジュゲートを体重あたり約０．８ｍｇ／ｋｇの用量で、２以上の維持療法サイクルである（例えば、２週間ごとに体重あたり約０．８ｍｇ／ｋｇの用量で、２以上の２週間の維持療法サイクル）。
本発明は、対象が、４週間のうち３週間（例えば、２８日間の治療サイクルの１日目および８日目）、１、２、３、４、５、または６回の２８日間の治療サイクルにおいて、対象の体重の約０．８ｍｇ／ｋｇ～約１．８ｍｇ／ｋｇの総用量の抗体薬物コンジュゲートを、分割投与として、または週１回投与として、週１回投与され、その後、３～６週間ごとに投与される実施形態を包含する。好ましくは、３週間ごとに、抗体薬物コンジュゲートを体重あたり約１．８ｍｇ／ｋｇの用量で、２以上の維持療法サイクルである（例えば、３週間ごとに体重あたり約１．８ｍｇ／ｋｇの用量で、２以上の３週間の維持療法サイクル）。好ましくは、３週間ごとに、抗体薬物コンジュゲートを体重あたり約０．８ｍｇ／ｋｇの用量で、２以上の維持療法サイクルである（例えば、３週間ごとに体重あたり約０．８ｍｇ／ｋｇの用量で、２以上の３週間の維持療法サイクル）。
本発明は、本発明の方法によって治療される対象が、本発明のｍＡｂＢＡ３０１－切断可能リンカー－ＭＭＡＥ（ｎ）抗体薬物コンジュゲートによって治療されているが、週１回の投与レジメン以外のスケジュール（例えば、抗体薬物コンジュゲート約１．８ｍｇ／ｋｇ体重の用量で２週間ごとに２週間以上の治療サイクルで投与するか、または３週間ごとに３週間以上の治療サイクルで投与する）で治療され、１、２、３、４、５、または６を超えない治療サイクルで、本明細書に記載の週１回投与レジメンに切り替える態様を含む。週１回の投与レジメンの後、患者は任意で、本明細書に記載されるような維持療法を開始することができる。
抗体－薬物コンジュゲートは、好ましくは単剤療法として投与される。「単剤療法」という用語は、抗体薬物コンジュゲートが治療サイクル中に対象に投与される唯一の抗癌剤であることを意味する。しかし、他の治療薬も、本明細書に記載されているように対象に投与することができる。例えば、プログラム死受容体－１（ＰＤ－１）遮断抗体、顆粒球コロニー刺激因子またはその類似体などである。さらに、例えば炎症、疼痛、体重減少、全身倦怠感など、基礎にある癌そのものではなく、癌に関連する症状を治療するために、抗炎症剤または他の薬剤を癌を有する対象に投与することも、単剤療法の期間中に可能である。本発明の方法で治療される対象は、抗抗体薬物コンジュゲートを投与する前に、抗癌剤による前治療を終えていることが好ましい。いくつかの実施形態において、対象は、抗体薬物コンジュゲートによる治療の少なくとも１週間前（好ましくは、２、３、４、５、６、７、または８週間前）に、抗癌剤による前治療を完了している。対象はまた、好ましくは、抗体薬物コンジュゲートによる最初の治療サイクルの終了後少なくとも２週間（好ましくは少なくとも３、４、５、６、７、または８週間）、好ましくは抗体薬物コンジュゲートの最終投与終了後少なくとも２週間（好ましくは少なくとも３、４、５、６、７、または８週間）、追加の抗癌剤による治療を受けない。本発明の方法は、Ａｘｌ発現腫瘍の治療のために、対象に本発明の抗Ａｘｌ抗体もしくは抗体断片、または抗Ａｘｌ抗体もしくは抗体断片を含む免疫コンジュゲートを投与することを包含する。
いくつかの実施形態では、本発明の抗Ａｘｌ抗体または抗体断片を含む免疫複合体を対象に投与し、抗Ａｘｌ抗体がＡｘｌ発現腫瘍細胞に結合した後、抗体－薬物コンジュゲートは細胞内に内在化し、薬物は放出される。例えば、本発明の方法は、Ａｘｌ発現腫瘍の治療のために、対象にｍＡｂＢＡ３０１１－切断可能リンカー－ＭＭＡＥ（ｎ）抗体－薬物コンジュゲートを投与することを包含している。 結合後、ｍＡｂＢＡ３０１１－切断可能リンカー－ＭＭＡＥ（ｎ）抗体－薬物複合体は腫瘍細胞内に取り込まれ、そこでペプチドリンカーがプロテアーゼによって切断され、ＭＭＡＥが放出される。Ａｘｌを発現している腫瘍細胞に特異的にＭＭＡＥを送達することで、腫瘍細胞のさらなる増殖を抑制し、腫瘍を縮小させることが期待される。
本発明の方法で治療する対象は、Ａｘｌ発現癌と診断されたか、またはＡｘｌ発現癌が疑われる対象である。診断は、例えば、組織生検を含む当該技術分野で既知の方法によって行うことができる。
製品およびキット
本発明の別の態様において、上記障害の治療、予防および／または診断に有用な材料を含有する製品が提供される。製品は、容器と、容器にまたは容器と関連付けられたラベルまたは添付文書とを含む。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、静脈内輸液バッグなどが挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成され得る。容器は、組成物を、それ自体で、あるいは状態の治療、予防、および／または診断に有効な別の組成物と組み合わせて保持し、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、静脈内輸液バッグ、または皮下注射針によって穿刺可能なストッパーを有するバイアルであり得る）。組成物中の少なくとも１つの活性剤は、本発明の抗体または抗体断片である。ラベルまたは添付文書は、組成物が、選択される状態を治療するために使用されることを示す。さらに、製品は、（ａ）第１の容器（組成物がその中に含有され、組成物が抗体または抗体断片が含まれる）、および（ｂ）第２の容器（組成物がその中に含有され、組成物がさらなる細胞傷害剤またはそれ以外の治療剤を含む）を含んでいてもよい。本発明のこの実施形態における製品は、組成物を特定の病態を治療するために使用することができることを示す添付文書をさらに含み得る。あるいは、またはさらに、製品は、薬学的に許容可能な緩衝液、例えば、注射用の静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー液およびデキストロース溶液を含む第２（または第３）の容器をさらに含み得る。他の緩衝液、希釈剤、フィルタ、針、およびシリンジを含む、商業的観点および使用者の観点から望ましい他の材料をさらに含み得る。
上記製品のいずれも、抗Ａｘｌ抗体に代えて、またはそれに加えて本発明の免疫コンジュゲートを含み得ることが理解される。
最後に、本発明はまた、少なくとも１つの本発明の抗体または抗体断片を含むキットを提供する。本発明のポリペプチド、抗体もしくは抗体断片、または抗体薬物コンジュゲートを含有するキットは、Ａｘｌ発現（増加または減少）の検出において、または治療もしくは診断アッセイにおいて使用される。本発明のキットは、固体支持体、例えば、組織培養プレートまたはビーズ（例えば、セファロースビーズ）にカップリングされた抗体を含み得る。例えば、ＥＬＩＳＡまたはウェスタンブロットにおける、インビトロでのＡｘｌの検出および定量のための抗体を含有するキットを提供することができる。検出に有用なかかる抗体は、蛍光標識または放射標識などの標識とともに提供され得る。
キットは、それらの使用に関する説明書をさらに含む。一部の実施形態では、説明書は、インビトロ診断キットに関して、米国食品医薬品局によって要求される説明書を含む。一部の実施形態において、キットは、試料中の脳脊髄液の存在または不存在を、前記試料中のＡｘｌの存在または不存在に基づき診断するための説明書をさらに含む。一部の実施形態では、キットは１つ以上の抗体または抗体断片を含む。他の実施形態では、キットは、１つ以上の酵素、酵素阻害剤または酵素活性化剤をさらに含む。さらに他の実施形態では、キットは、１つ以上のクロマトグラフィー化合物をさらに含む。さらに他の実施形態では、キットは、分光学的アッセイ用に試料を調製するために使用される１つ以上の化合物をさらに含む。さらなる実施形態において、キットは、指示薬の強度、色スペクトル、または他の物理的属性に従ってＡｘｌの存在または不存在を解釈するための比較参照材料をさらに含む。

腫瘍におけるＡｘｌの細胞膜スコアリング（腫瘍膜Ｐスコア）
Ａｘｌは腫瘍細胞とマクロファージのサブセットで反応性を示す。腫瘍細胞では、Ａｘｌは主に細胞膜に局在するが、細胞質にも観察される。Ａｘｌを発現するマクロファージは、腫瘍細胞／巣の間や腫瘍に隣接する間質（腫瘍関連間質または腫瘍間質）内に存在することが多い。Ａｘｌマクロファージ染色は、細胞膜または細胞質に局在するが、すべてのマクロファージがＡｘｌで標識されるわけではない。
ＣＤ６８はマクロファージの細胞質に発現しており、この免疫細胞タイプを識別するための標準的なバイオマーカーである。マクロファージは組織サンプル全体に存在しうるが、腫瘍細胞間（腫瘍塊内）や腫瘍／間質界面（腫瘍関連間質）に存在する場合に最も注目されることが多い。
Ａｘｌは腫瘍細胞とマクロファージの両方で発現しているため、本発明では各サンプルの連続切片におけるＡｘｌとＣＤ６８の染色を比較するためにスコアリング法を用いる。このようにして、ＣＤ６８バイオマーカーは、Ａｘｌで染色された腫瘍中のマクロファージを同定するために使用される。すなわち、ＣＤ６８連続切片は腫瘍細胞とマクロファージにおけるＡｘｌ反応性を区別するために使用される。この方法を用いると、Ａｘｌ細胞膜染色は腫瘍細胞でのみスコア化される。ＣＤ６８染色は、マクロファージを除いたＡｘｌ腫瘍スコア（以下「腫瘍膜Ｐスコア」）を提供するために、Ａｘｌの評価から「差し引かれる」。
ＡｘｌおよびＣＤ６８をスコア化するために使用されるアプローチは、以下に記載されるように、ホルマリン固定、パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）腫瘍サンプルにおける免疫組織化学（ＩＨＣ）を含むがこれらに限定されない方法によって検出され得る。また、すべてのサンプルはヘマトキシリン・エオジン（Ｈ＆Ｅ）で染色し、形態学的評価を行い、スコアリングに役立てる。
腫瘍におけるＡｘｌ細胞膜発現は半定量的にスコア化される。スコアリングの主な要素は、適切な微分強度で染色された細胞の割合である。
パーセンテージスコアは、サンプルごとの細胞膜染色の浸透度を表すために割り当てられる。パーセンテージは、以下のいずれかの増分を含むがこれに限定されない増分で推定され、報告される：０、１、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％。
本発明の特定の実施形態において、Ａｘｌ発現腫瘍は、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の腫瘍膜Ｐスコアを有する。好ましくは、Ａｘｌ発現腫瘍は少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、または少なくとも９５％の腫瘍膜Ｐスコアを有する。
細胞膜染色の強度の差は、４段階の半定量的なスケール（０、１＋、２＋、３＋）を用いて記録される。このスケールでは、０＝ｎｕｌｌ、陰性、または非特異的染色、１＋＝低濃度または弱い染色、２＋＝中濃度または中程度の染色、３＋＝高濃度または強い染色である。
腫瘍細胞のみにおけるＡｘｌ反応性（マクロファージを除いたＡｘｌ腫瘍染色）を評価する場合、ＡｘｌとＣＤ６８（マクロファージバイオマーカー）の両方の染色スライドが連続的に必要である。 ＣＤ６８による染色は、腫瘍の領域におけるＡｘｌによる染色と密接に比較される。ＡｘｌとＣＤ６８の両方で染色される細胞は、Ａｘｌ反応性マクロファージ（腫瘍細胞ではない）とみなされ、Ａｘｌスコアから除外される。
マクロファージにおけるＡｘｌ染色は、陽性の細胞タイプが混在している場合、腫瘍細胞の細胞膜染色をスコア化することを困難にする。マクロファージを除く腫瘍の細胞膜上のＡｘｌ発現を癌の兆候（ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎ）別に完全に理解するために、標準的なパーセントスコアとＨスコアの両方のアプローチを用いて、観察された反応性のパターンを捕捉することができる。

パーセントスコア法
パーセントスコアは、≧１＋、≧２＋、≧３＋のいずれかの強度のパーセンテージを合計することで算出される。したがって、スコアは０から１００の範囲である。
パーセントスコア≧１＋＝（１＋での％）＋（２＋での％）＋（３＋での％）
パーセントスコア≧２＋＝（２＋での％）＋（３＋での％）
パーセントスコア≧３＋の割合＝（３＋での％）。

Ｈスコア法
Ｈスコアは、発現強度（茶色い染色）を持つ細胞の割合に、対応する差分強度を４段階の半定量スケール（０、１＋、２＋、３＋）で掛けたものを合計して算出する。したがって、スコアは０から３００の範囲である。
Ｈスコア＝［（＜１での％）ｘ０］＋［（１＋での％）ｘ１］＋［（２＋での％）ｘ２］＋［（３＋での％）ｘ３］

マクロファージ染色のスコアリング
－ 前述のように、ＣＤ６８はマクロファージの標準的なバイオマーカーであり、Ａｘｌはこのタイプの細胞で発現することがある。
－ ＣＤ６８とＡｘｌで染色したスライドを用いて、各腫瘍組織におけるＣＤ６８陽性マクロファージとＡｘｌ陽性マクロファージの相対量を評価する。
－ マクロファージは、以下の領域におけるＣＤ６８およびＡｘｌ陽性について推定される：腫瘍塊内（「腫瘍」と呼ばれる）、および腫瘍関連間質または腫瘍と相互作用する間質内（「腫瘍－間質」と呼ばれる）。腫瘍－間質は腫瘍に対する柔組織の反応を表す。間質反応は、腫瘍塊の外縁または「面」の外側または隣接する部分である。
－ 腫瘍では、ＣＤ６８またはＡｘｌ陽性マクロファージで構成される腫瘍塊または腫瘍巣の細胞の割合（０～１００％）をスコア化する。
－ 腫瘍－間質では、ＡｘｌとＣＤ６８のマクロファージ量を０－３の半定量的尺度を用いてスコア化した。このスケールでは、０は陽性マクロファージがないこと、１は陽性マクロファージの密度が低いこと、２は陽性マクロファージの密度が中程度であること、３は陽性マクロファージの密度が高いことを示す。

腫瘍細胞質におけるＡｘｌのスコアリング
－ びまん性Ａｘｌ細胞質染色を示す腫瘍の割合（％陽性細胞）は、０～１００％の範囲で推定される。このような染色の平均強度は、０～３のスケールを用いて推定される。このスケールでは、０は細胞質染色なし、１は弱い細胞質染色、２は中程度の細胞質染色、３は強いまたは高い細胞質染色を表す。
－ 細胞質における強いＡｘｌ染色は、潜在的な膜シグナルを識別することを困難にする。
以下の実施例は、限定されるものではないが、本開示の軟ゼラチンカプセル剤の説明のためのものである。当該技術分野で通常遭遇し、かつ当業者には明らかである様々な条件およびパラメータの他の好適な修正および適合は、本開示の範囲内である。

［実施例］
実施例１：Ａｘｌに対する条件的に活性な抗体
Ａｘｌは、条件的に活性な抗体によりアクセス可能な細胞外ドメインを有する細胞表面膜貫通チロシンキナーゼである。この細胞表面タンパク質は、甲状腺癌組織中で高度に発現され、多くの他の癌、例えば、肉腫、骨髄増殖性障害、前立腺癌細胞、または乳癌において過剰発現される。ＡＸＬ発現の増加は、化学療法、プログラム死－１（ＰＤ－１）阻害剤、分子標的治療、放射線治療に対する腫瘍抵抗性と関連している。Ａｘｌタンパク質の細胞外ドメインに対する条件的に活性な抗体が本明細書において開発された。
Ａｘｌに対する野生型抗体（図１Ａの０６３－ｈｕｍ１０Ｆ１０－ＨＣの重鎖可変領域および図１Ｂの０６３－ｈｕｍ１０Ｆ１０－ＨＣの軽鎖可変領域を有する）を、テンプレート抗体として選択した。テンプレート抗体中のそれぞれの位置を１つずつランダム化する方法である包括的位置進化（ＣＰＥ）を使用して野生型抗体をコードするＤＮＡを進化させて突然変異抗体ライブラリーを生成した。ライブラリー中のそれぞれの突然変異抗体は、１つのみの単一点突然変異を有する。ＥＬＩＳＡにより測定してｐＨ７．４と比べてｐＨ６．０においてＡｘｌに対する選択結合親和性についての同時スクリーニングにより、ライブラリー中の突然変異抗体を生成した。
同時に、突然変異抗体の発現レベルも、製造プロセスにおけるより高いフィールドの目的のために最適化した。ＦＬＡＧタグを使用してスクリーニングを血清中で行った。それというのも、スクリーニングについて偽陽性を引き起こし得る血清中のヒト抗体が存在したためである。スクリーニング緩衝液は、炭酸塩緩衝液（ringerを有するＫｒｅｂｓ緩衝液－ＰＢＳと異なるが標準的な緩衝液）であった。生成された条件的に活性な抗体は、両方とも野生型抗体と比較してｐＨ６．０においてＡｘｌに対する高い親和性を有するが、ｐＨ７．４においてＡｘｌに対する低い親和性を有することが見出された。選択された突然変異抗体（ｓｃＦｖ）の一部を図２に表す。ｐＨ７．４よりもｐＨ６．０において活性が高かった一方、ｐＨ６．０とｐＨ７．４との活性比は少なくとも１１倍であった（図３）。
さらに、これらの条件的に活性な活性は全て、以下の表４に示されるとおり高い発現レベルを有し、列「クローン」は抗体を示し、発現レベル「ｍｇ／ｍｌ」を第２の列に示す。
これらの抗体のクローンをサービス提供業者に要求される発現レベル（「オーダー量」、予測発現レベル）で送付した。しかしながら、これらの抗体の実際の発現レベル（「送達量」）は極めて高く、予測発現レベルを超過した。
条件的に活性な抗体は、テンプレートとしてのＢＡＰ０６３．９－１３－１抗体を使用して図４において実証されるとおり緩衝液中で凝集を示さなかった。ＢＡＰ０６３．９－１３－１抗体をサイズ排除クロマトグラフィーにより分析した。図４において、１つのみのピークが検出され、抗体がほとんど凝集せず、または全く凝集しないことを実証した。
条件的に活性な抗体を、表面プラズモン表面（ＳＰＲ）も使用してアッセイしてＡｘｌに対するオンおよびオフ速度を計測した。ＳＰＲアッセイは、条件的に活性な抗体についてのオンおよびオフ速度を計測することが公知であった。ＳＰＲアッセイは、重炭酸塩の存在下で実施した。条件的に活性な抗体のインビボのオンおよびオフ速度（動物およびヒトにおけるもの）は、条件的に活性な抗体に極めて重要な特徴である。
条件的に活性な抗体は、陰性対照（ｐＨ６．０およびｐＨ７．４の両方において類似の結合親和性を有するＢＡＰ０６３ １０Ｆ１０）と比較してｐＨ６．０において高い結合親和性およびｐＨ７．４において低い結合親和性を有することが観察された（図５）。さらに、室温から６０℃への温度上昇は、ＥＬＩＳＡアッセイ結果を有意に変更しなかった（図５）。ＥＬＩＳＡアッセイは、それらの条件的に活性な抗体がｐＨ７．４と比較してｐＨ６．０において高度に選択的であることも示した（図６Ａ～６Ｂは、一例として１つの抗体を示す）。
条件的に活性な生物抗体を表５にまとめる。これらの抗体の２つを、ｓｃＦｖとして発現させた（ＢＡＰ０６３．９－１３．３およびＢＡＰ０６３．９－４８．３）。１時間の６０℃において抗体のインキュベーションは、抗体のほとんどの親和性を変化させなかった（「熱安定性」）。
条件的に活性な抗体は、本発明によりＣＴＣの表面上のＡｘｌタンパク質を検出するために使用することができる。

実施例２：抗Ａｘｌ抗体のｐＨ依存的結合親和性
本発明の抗Ａｘｌ抗体の一部を、異なるｐＨレベルにおいて緩衝液中で試験した。緩衝液の１つのタイプは、１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）が存在するＫＲＥＢＳ緩衝液であった。ＫＲＥＢＳ緩衝液は、５～７．４の範囲のｐＨを有するように滴定した。ＥＬＩＳＡアッセイ（ＯＤ４５０）を使用してＡｘｌについての抗体の結合親和性を計測し、結果を図７に提示する。２つの対照抗体（ＢＡＰ０６３－３８３１およびＢＡＰ０６３－３８１８）は、ｐＨの変化により有意に影響されなかった結合親和性を有するため、条件的に活性でなかった。他方、本発明の抗Ａｘｌ抗体は、Ａｘｌについてのその結合親和性がｐＨに依存的であったため、条件的に活性であった（図７）。

実施例３：抗Ａｘｌ抗体による細胞殺傷
Ａ５４９細胞を使用して本発明の抗Ａｘｌ抗体の細胞殺傷活性を試験した。結果を図８Ａ－８Ｅに示す。細胞殺傷活性を２つのｐＨレベル：６．０および７．４において計測し、腫瘍微小環境中のｐＨおよび正常の生理学的ｐＨをそれぞれ表した。種々の抗体濃度における細胞殺傷の割合を図８Ａ～８Ｅに示す。
２つの試験は、一貫した細胞殺傷結果を与えた。陰性対照（抗Ａｘｌヒト化ＷＴ）は、Ａ５４９細胞についてｐＨ６．０およびｐＨ７．４において類似の細胞殺傷活性を示した（図８Ａ）。対照的に、本発明の抗Ａｘｌ抗体は、特に、抗体がＡ５４９細胞を飽和しない低い抗体濃度においてｐＨ７．４における細胞殺傷活性と比較してｐＨ６．０において有意に高い細胞殺傷活性を示した（図８Ｂ～８Ｅ）。

実施例４：抗Ａｘｌ抗体によるｃｙｎｏ－Ａｘｌに対する結合親和性
本発明の抗Ａｘｌ抗体によるｃｙｎｏ－Ａｘｌに対する結合親和性を計測し、６．０および７．４のｐＨにおいて２つの異なる緩衝液中でヒトＡｘｌ（ｈＡｘｌ）の結合親和性と比較した。結果を図９Ａー９Ｄに示す。ｃｙｎｏ－Ａｘｌは、非ヒト霊長類、すなわち、サル類カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｑｕｅｓ）からのＡｘｌタンパク質である。
対照（ＢＡ－３８３１－ＷＴ）は、２つの緩衝液中でｐＨ６．０および７．４の両方においてヒトＡｘｌ（ｈＡｘｌ）およびカニクイザルＡｘｌ（ｃｙｎｏ－Ａｘｌ）の両方に対して類似の結合親和性を示した（図９Ａ）。本発明の抗Ａｘｌ抗体は、２つの緩衝液の一方でｈＡｘｌおよびｃｙｎｏ－Ａｘｌについての類似の結合親和性プロファイルを示し、すなわち、ｐＨ６．０におけるｃｙｎｏ－Ａｘｌに対する結合親和性と比較してｐＨ７．４におけるｃｙｎｏ－Ａｘｌに対する結合親和性が低かった（図９Ｂ～９Ｄ）。他方の緩衝液中のｐＨ６．０およびｐＨ７．０における結合親和性の差異は、有意でなかった。

実施例５：デュオマイシンにコンジュゲートしている抗Ａｘｌ抗体の細胞毒性
デュオマイシンは、タンパク質合成を停止させることにより細胞成長を阻害するため、細胞毒性である。本発明の抗Ａｘｌ抗体の１つ、ＢＡＰ０６３．９ ４００７をデュオマイシンにコンジュゲートさせた。２つの対照ＢＡＰ０６３ｈｕｍＷＴおよびＢ１２（抗Ｂ１２抗体）をこの試験に使用し、それらも両方ともデュオマイシンにコンジュゲートさせた。
いくつかの細胞系を、ｐＨ６．０および７．４において３つのデュオマイシンコンジュゲート抗体（ＢＡＰ０６３．９ ４００７、ＢＡＰ０６３ｈｕｍＷＴ、およびＢ１２）により処理した（図１０Ａ～１０Ｈ）。本発明のデュオマイシンコンジュゲート抗体ＢＡＰ０６３．９ ４００７は、細胞系ＤＵ１４５（前立腺癌細胞）、ＭＤＡ－ＭＤ－２３１（乳癌細胞）、ＰＬ４５（膵臓癌細胞）、およびＡ５４９（腺癌細胞）に対して、ｐＨ６．０においてｐＨ７．４における同一細胞に対する細胞毒性と比較して有意に高い細胞毒性を示した。

実施例６：モデル毒素にコンジュゲートしている抗Ａｘｌ抗体
本発明の抗Ａｘｌ抗体をモデル毒素（例えば、ゲムシタビン）にコンジュゲートさせて条件的に活性な抗体－薬物コンジュゲート（ＣＡＢ－Ａｘｌ－ＡＤＣ）を産生した。最初にＣＡＢ－Ａｘｌ－ＡＤＣを試験して条件的細胞殺傷活性が薬物コンジュゲーションプロセスにより変更されないことを確認した。この試験は、ＣＡＢ－Ａｘｌ－ＡＤＣがｐＨ７．４よりもｐＨ６．０において有意に多くの細胞を殺傷することを示した（図１１）。
次いで、ＣＡＢ－Ａｘｌ－ＡＤＣを、ＭｉａＰａＣａ２異種移植腫瘍を担持するマウスに、１ｍｇ／ｋｇの用量において３週間、週２回注射した。ネイキッドＣＡＢ（コンジュゲーションなしの抗Ａｘｌ抗体）、ビヒクル、毒素単独（非コンジュゲートゲムシタビン）、対照ＡＤＣ、親和性一致抗Ａｘｌ ＡＤＣ（ＡＭ ＡＤＣ）を含めたいくつかの対照をこの試験において使用した。試験は、ＣＡＢ－Ａｘｌ－ＡＤＣ（ＣＡＢ ＡＤＣ）およびＡＭ ＡＤＣが対照と比較して有意に大きな腫瘍のサイズ低減を提供することを示した（図１２）。非コンジュゲート抗Ａｘｌ抗体は、腫瘍のサイズを低減させなかった。この試験は、毒素にコンジュゲートしている抗Ａｘｌ抗体が、腫瘍サイズ低減において親和性一致抗体と同程度に有効であることを示した。

実施例７：サル類カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｑｕｅｓ）における抗Ａｘｌ抗体薬物コンジュゲートの血清濃度
本発明の抗Ａｘｌ抗体の薬物（デュオマイシン）コンジュゲート（ＣＡＢ－ＡＤＣ）を、サル類の雄および雌カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｑｕｅｓ）中に３つの用量：０．１、１、および１０ｍｇ／ｋｇにおいて注射した。ネイキッド抗Ａｘｌ抗体を対照として使用した。親和性一致抗体薬物コンジュゲート（ＡＭ－ＡＤＣ）も対照として使用した。抗体の血清濃度を１週間の期間にわたり計測した（１６８時間、図１３Ａ～１３Ｂ参照）。ＣＡＢ－ＡＤＣは、サル血清中でＡＭ－ＡＤＣ対照よりも長く持続した（図１３Ｂ）。雄および雌サル間の有意差は存在しなかった（図１３Ａ～１３Ｂ）。

実施例８：サル類カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｑｕｅｓ）における抗Ａｘｌ抗体薬物コンジュゲートの毒性
本発明のＣＡＢ－ＡＤＣの毒性をサル類カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ ｍａｃａｑｕｅｓ）において試験した。アスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）およびアラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）は、Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ（ＦＤＡ）による薬物の肝臓毒性の指標として使用されている。血清ＡＳＴおよびＡＬＴレベルを雄および雌サルの両方で計測した（図１４Ａ～１４Ｂ）。１０ｍｇ／ｋｇ投与の３日後において、ビヒクル（ＰＢＳ）は血清中のＡＳＴレベルの変更もＡＬＴレベルの変更も引き起こさなかった一方、一致抗体薬物コンジュゲート（ＡＭ）は極めて高いＡＳＴおよびＡＬＴレベルを示した。ＣＡＢ－ＡＤＣは、ＡＭ対照と比較して有意に低減したＡＳＴおよびＡＬＴレベルを示した。これは、本発明の抗Ａｘｌ抗体薬物コンジュゲートが一致抗体薬物コンジュゲートＡＭに対して有意に低減した肝臓毒性を有することを示した。
本発明の抗Ａｘｌ抗体薬物コンジュゲートは、サルにおいてより小さな炎症を引き起こすことも見出された（図１５）。ＣＡＢ、ＡＭおよびＰＢＳの注射後のサルの血液中のリンパ球数をまとめた。顕著な炎症を引き起こしたＡＭと比較して、本発明の抗Ａｘｌ抗体薬物コンジュゲート（ＣＡＢ－ＡＤＣ）は、サルにおいて軽度の炎症のみを引き起こした。

実施例９：マウスにおけるインビボ実験
マウスに、腫瘍に発達する２つの腫瘍細胞系（ＬＣＬＣ１０３ＨまたはＤＵ１４５）の一方を移植した。抗腫瘍薬モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）による処理後の腫瘍サイズを計測した。ＬＣＬＣ１０３Ｈを受容したマウスについて、マウスを単回用量のビヒクル（陰性対照として）、ＣＡＢ抗Ａｘｌ抗体コンジュゲートＭＭＡＥ ＡＤＣ（ＣＡＢ Ａｘｌ－ＭＭＡＥ）、または非ＣＡＢ抗Ａｘｌ抗体コンジュゲートＭＭＡＥ ＡＤＣＣ（非ＣＡＢ Ａｘｌ－ＭＭＡＥ）により処理した（図１６Ａ）。ＡＤＣにより処理したマウス中の腫瘍は縮小した一方、ビヒクルにより処理したマウス中の腫瘍は増殖し続けた。
さらに、ＤＵ１４５を受容したマウスを、ビヒクル（陰性対照）またはＣＡＢ抗Ａｘｌ抗体コンジュゲートＭＭＡＥ ＡＤＣ（ＣＡＢ Ａｘｌ－ＭＭＡＥ）により２つの異なる濃度（６ｍｇ／ｋｇおよび１０ｍｇ／ｋｇ）において処理した。腫瘍体積を経時的に計測した。腫瘍は、陰性対照群（ビヒクル）において成長し続けた一方、ＡＤＣにより処理したマウスにおいては腫瘍成長は減速した（図１６Ｂ）。

実施例１０： 腫瘍膜Ｐスコア
手順
Ａｘｌ（細胞表面受容体チロシンキナーゼ）の免疫組織化学（ＩＨＣ）染色では、ホルマリン固定、パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）組織におけるＡｘｌの検出のためにＬｉｆｅｓｐａｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社のモノクローナルＭｏｕｓｅ ＩｇＧ ｃｌｏｎｅ ７Ｅ１０ （Ｃａｔ ＃ ＬＳ－Ｂ６１２４）を使用した。
ＣＤ６８のＩＨＣ染色では、マクロファージの検出にＤａｋｏ社（Ｃａｔ ＃ Ｍ０８１４）の標準的なマウスモノクローナル抗体（ｃｌｏｎｅ ＫＰ１）を使用した（表１３）。ＩＨＣ 手順は、ＴｅｃｈＭａｔｅ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｐｌａｔｆｏｒｍ を用いて、以下に示すプロトコルを使用した。
ステップ１：ＦＦＰＥ組織ブロックを４－５μｍの厚さで切り出し、切片を正電荷を持つキャピラリーギャップのスライドガラスにマウントした。スライドは使用前にベーク（６０℃、乾熱）した。
スライドの準備
ａ．マイクロトミーが行われた。４～５ミクロン（４～５μｍ）の切片をＦｉｓｈｅｒ Ｂｉｏｔｅｃｈ ２２－２３０－９００ Ｐｒｏｂｅ－Ｏｎ Ｐｌｕｓ 顕微鏡スライドにマウントした。
ｂ．スライドは６０℃（乾熱）で１時間以上焼き、室温で１５分以上冷却した後、ステップ２を開始する。
ステップ２：組織切片は有機溶媒（キシレン、１００％、４回）を用いて脱ワックスし アルコール系列（１００％、７０％、３０％エタノール）から蒸留水へと下降させ、組織を十分に水和させ、一次抗体やその他の検出試薬を適切に結合させる。
脱ワックス／抗原の事前取得
ａ．室温（２５℃）の無水キシレンを各５分間、４回交換する［攪拌しない］。
ｂ．室温（２５℃）の無水アルコールを各２分間、２回交換する［攪拌しない］。
ｃ．室温（２５℃）の７０％アルコールを各２分間、２回交換する［攪拌しない］。
ｄ．室温（２５℃）の３０％アルコールを各２分間、２回交換する［攪拌しない］。
ｅ．リンス用の室温（２５℃）の蒸留水を２回交換する［最低１６回浸漬インアウトする］。
ｆ．室温（２５℃）の蒸留水に浸したスライド（抗原取得に移る）
ステップ３：組織切片を脱ワックスした後、抗原取得を行った。このステップでは、市販のスチーマー（９７℃以上で２０分間）を熱源として、対になった顕微鏡スライドの間に形成された毛細管の隙間に引き込まれた蒸気熱誘導エピトープ回収（ＳＨＩＥＲ）溶液を使用した（説明については、Ｌａｄｎｅｒら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．；６０巻、３４９３－３５０３頁、２０００年を参照）。
スチームヒート抗原取得
ａ．業務用スチーマーを９８℃以上に予熱。
ｂ．ＡｘｌについてはＳＨＩＥＲ ２（Ｄａｋｏ社製 Ｓ１７００、クエン酸ベース、ｐＨ６．０－６．２）、ＣＤ６８についてはＳＨＩＥＲ １（ＱｕａｌＴｅｋ社製、クエン酸ベース、ｐＨ５．６－６．１）を用いて９８℃、２０分以上で熱誘導抗原・エピトープ回収（ブラック＆デッカー社製 ＨＳ１０００型スチーマーまたは同等品）。最大１０枚のスライドを、１０ｍＬの抗原／エピトープ回収液が正確に入ったＴｅｃｈＭａｔｅ試薬トレイに入れ、きれいなブランクスライドと対にし、試薬をキャピラリーで組織上に引き上げた。
ｃ．回収後５分間冷却し、スライドペアをＴｅｃｈＭａｔｅスライドホルダーにしっかりと挿入し、吸水性のウィックパッドでＳＨＩＥＲ １／ＳＨＩＥＲ ２を排出する。
ｄ．０．０２％ ｖ／ｖ Ｔｗｅｅｎ－２０洗浄剤を含むトリス緩衝生理食塩水（ＴＢＳＴ、ＳＯＰ ＭＦＢ００３に従ってＱｕａｌＴｅｋが２０Ｘストック液として調合し、蒸留／脱イオン水で希釈後、１Ｘ溶液として使用［４℃保存］）で、毛細管現象（ドレインドロー）を利用して手作業で２回洗浄する。
ステップ４：サンプルは、ＴｅｃｈＭａｔｅ装置プラットフォームとＭＩＰプログラム（酵素消化を含まない）またはＭＩＰＥプログラム（１：４０希釈のＰｒｏｔｅｉｎａｓｅ Ｋによる消化を含む）を用いて、表６に概説した一般的手順に従ってＩＨＣ検査した。抗体の連続検出は、抗原または一次抗体に対して高い特異性を持つ ＩＨＣ において採用される。一次抗体の位置は、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）の存在下、抗原部位に不溶性の反応生成物を沈殿させる比色発色剤（ＤＡＢ）の塗布によって最終的に可視化される。細胞や組織の形態を評価するために、ヘマトキシリン（青色染色）を用いて核を対比染色する。

免疫組織化学
マウスＰｏｌｉｎｋ２＋ＨＲＰ試薬（Ｇｏｌｄｅｎ Ｂｒｉｄｇｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ［ＧＢＩ］； Ｃａｔ ＃：Ｄ３７－１１０）は、２－８℃ですぐに使用できるように保存し、以下の手順はすべてＱｕａｌＴｅｋ ＭＩＰＥ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅを実行するＴｅｃｈＭａｔｅ上で室温（２５℃）で自動化する。試薬の交換（洗浄、インキュベーション）は、吸収性の高いウィックパッド（ドレーン）とテックメイト試薬トレイ（ドロー）を使用した毛細管現象（ドレーン－ドロー）で行われる。
ａ．ＴＢＳＴで３回洗浄する。
ｂ．Ａｘｌ用ＴＢＳＴおよびＣＤ６８用Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ Ｋ消化（１：４０希釈、Ｄａｋｏ、Ｃａｔ ＃：Ｓ３０２０）１０分。
ｃ．ＴＢＳＴで３回洗浄する。
ｄ．ヤギブロッキング試薬（ＱＭＬ）、１５分
ｅ．ＴＢＳＴで１回洗浄する。
ｆ．Ａｘｌ （１：１５００） 抗体クローン ７Ｅ１０ （ＬｉｆｅＳｐａｎ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ Ｃａｔ ＃：ＬＳ－Ｂ６１２４） または ＣＤ６８ （１：７５００） 抗体クローン ＫＰ１ （Ｄａｋｏ Ｃａｔ ＃：Ｍ０８１４）、ＱｕａｌＴｅｋ 試薬製造バッファー（ＲＭＢ：０．０１Ｍ リン酸塩、０．１５１Ｍ ＮａＣｌ、１％ ｗ／ｖ ＢＳＡ、０．１％ ｖ／ｖ ＰｒｏＣｌｉｎ ３００、０．２％ ｖ／ｖ Ｔｗｅｅｎ－２０、１％ ｖ／ｖ 正常ヤギ血清、ｐＨ ７．２、ＱｕａｌＴｅｋ により ＳＯＰ ＭＦＢ００２ に従って処方されたもの）で１：１０のワーキングストック（４℃保持、同じく ＲＭＢ 中）から新鮮に１時間希釈したもの。
ｇ．ＴＢＳＴで５回洗浄する。
ｈ．マウスＰｏｌｉｎｋ２＋２次（ＧＢＩキットの一部 Ｃａｔ ＃：Ｄ３７－１１０）、２５分。
ｉ．ＴＢＳＴ洗浄バッファーで２回洗浄する。
ｊ．ペルオキシダーゼブロック（３％ ＵＳＰ Ｈ２Ｏ２，～０．０２％ ｖ／ｖ Ｔｗｅｅｎ－２０添加）、３Ｘ ２．５分（合計７．５分）、試薬の排出をはさむ。
ｋ．ＴＢＳＴで３回洗浄する。
ｌ．マウスＰｏｌｉｎｋ２＋ ＨＲＰコンジュゲートポリマー（ＧＢＩ Ｋｉｔ Ｃａｔ ＃の一部：Ｄ３７－１１０）、２５分
ｍ．ＴＢＳＴで５回洗浄する。
ｎ．ＧＢＩ（Ｃａｔ＃．Ｃ０９－１２）ＤＡＢクロモゲン（ポリマーインキュベーション終了時に、付属の基質バッファー１ｍＬあたり４０μｌのＤＡＢクロモゲン濃縮液を使用して新しく作った試薬）、３回５分（合計１５分）、間に試薬の排出とＴＢＳＴでの洗浄１回を挟む。
ｏ．ＴＢＳＴで４回洗浄する
ｐ． ヘマトキシリンカウンターステイン（１：５）、１分
ｑ．ＴＢＳＴで６回洗浄する。
ｒ．室温（２５℃）の蒸留水に浸したスライド（カバースリップ部に移し替える）。
ステップ５：スライドはペアリングせず、蒸留水で洗浄し、アルコール系列（７０％、９５％、１００％エタノール）および有機溶媒（キシレン、１００％、４回交換）で脱水し、ＣｙｔｏＳｅａｌ（または同等品）で永久的にカバーリングして解釈と保存に使用した。スライドを顕微鏡で観察し、染色性を評価した。
ＦＦＰＥ組織中のＡｘｌのエピトープをアンマスクするために、ＳＨＩＥＲ ２（クエン酸塩ベース、ｐＨ６．０－６．２）溶液を使用した。ＣＤ６８のエピトープをアンマスクするために、ＳＨＩＥＲ １（クエン酸塩ベース、ｐＨ５．６－６．１）溶液を使用した。熱によるエピトープ回収後、ＱＭＬ ｗｏｒｋｍａｔｅ ｓｏｆｔｗａｒｅ ｖ３．９６を作動させたＴｅｃｈＭａｔｅ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を用いて工程を自動化した。この自動化されたプラットフォームでは、キャピラリー・ギャップ・プロセスを使用して、対染色を含むすべての試薬の交換と、その間のバッファー洗浄を行う。すべての工程は室温（２５℃）で行った。
一次抗体と陰性コントロール抗体の作業希釈液の調製には、ヤギ血清入りの試薬製造用緩衝液［ＲＭＢ； ＱｕａｌＴｅｋ’ｓ Ｓａｎｔａ Ｂａｒｂａｒａ ｌａｂ （ＱＭＬ－ＳＢ）製］を使用した。ＦＦＰＥ切片における抗原－一次抗体相互作用部位でのＡｘｌおよびＣＤ６８のターゲット認識は、マウス一次抗体の検出用に設計されたＧＢＩ Ｌａｂｓ社のＰｏｌｉｎｋ－２ Ｐｌｕｓ ＨＲＰキットの試薬を使用した。ＡｘｌおよびＣＤ６８の抗体の仕様および最適化されたＩＨＣアッセイ条件については、表７を参照のこと。

脱水／カバースリップ
ａ．すすぎ用に室温（２５℃）の９５％アルコールを２回（２回）交換する［最低１６回浸漬（インアウト）］。
ｂ．すすぎ用に室温（２５℃）の無水アルコールを６回交換する［最低１６回浸漬インアウト］。
ｃ．室温（２５℃）の無水キシレンを４回交換し、リンスする［最低１６回浸漬インアウト］。
ｄ．Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製８３１２ Ｃｙｔｏｓｅａｌ ＸＹＬまたは同等の非水性半永久的マウントメディアでカバースリップする。
内部プロセス対照
検出試薬の性能を確認するため、対照組織でシグナル強度が確立された種間一致の陽性対照（標準抗体）を各ランで使用した。このプロジェクトの期間中、陽性対照として、ホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）対照扁桃組織を用いたＬＣＡ（マウス由来）またはＦＦＰＥ結腸癌対照組織を用いたＣＫ（サイトケラチン）（マウス由来）を使用した。
Ａｘｌ発現レベルの範囲を含む組織バンクからの肺癌マルチ組織ブロック（ＱＭＴＢ２４６、ＱＭＴＢ３９５）を、各ＩＨＣ検査におけるＡｘｌおよびＣＤ６８の陽性対照として使用した。検出試薬または組織に内在する非特異的染色を判定し、これらの原因による潜在的なバックグラウンド反応性を定義するために、対応するバイオマーカーアッセイ条件に対してマウスＩｇＧ１アイソタイプマッチ陰性対照を用いた。
試験組織
研究室間のアッセイの一致を図るため、組織バンクから合計１３種類のホルマリン固定、パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）肺癌（非小細胞癌腫、ＮＳＣＬＣ）組織を入手した。ＣＬＩＡ感度試験において、ＡｘｌおよびＣＤ６８の検査は、以下の癌兆候のＦＦＰＥ組織サンプルで評価された：メラノーマ（未治療３１名、前に治療１６名）、卵巣癌（未治療５２名）、膵臓癌（未治療３１名、前に治療２名）、肺癌（未治療４３名、前に治療１名）、前立腺癌（未治療５１名）。
未処理のサンプルはすべて組織バンクからのものであった。前処理を施したサンプルはすべてＢｉｏＡｔｌａ社から提供されたものであった。各サンプルの詳細情報は、結果セクションの感度スコアリング表に記載されている。これらの癌サンプルの一部は、メラノーマ、卵巣癌、膵臓癌、肺癌の兆候におけるＡｘｌおよびＣＤ６８ ＩＨＣアッセイのバリデーションテストに使用された。
ＡｘｌおよびＣＤ６８の特異性試験のために、Ｐａｎｔｏｍｉｃｓ， Ｉｎｃ （Ｃａｔ ＃ ＭＮＯ９６１） からＦＤＡマルチノーマルヒト組織マイクロアレイ （ＴＭＡ） スライドを入手した。ＴＭＡ（Ｐ１４７８Ｑ００３５）には、３５の異なる臓器または部位に由来する９６種類のサンプルが含まれている。
スコアリングスキーム
各サンプルの連続切片におけるＡｘｌ染色とＣＤ６８染色の比較採点は、上記の「腫瘍におけるＡｘｌの細胞膜採点（腫瘍膜Ｐスコア）」のセクションで説明したように行った。
結果
ＡｘｌとＣＤ６８ ＩＨＣアッセイの一致（パートＡ）
非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）サンプルの合計１３の異なるＦＦＰＥ肺癌サンプルを、検査施設間の一致性試験に使用した。ＮＳＣＬＣサンプルは、Ａｘｌ細胞膜腫瘍細胞染色の範囲を表していた。
一致性検査用の組織は、ある施設で非ＧＬＰ ＡｘｌおよびＣＤ６８ ＩＨＣアッセイを用いて染色された。また、表７および上記のアッセイ法を用いて、別のオペレーターが別の施設で連続切片（スライド１枚につき１切片の組織で、調製間の材料ロスを最小限に抑えたもの）として染色した。すべてのアッセイテストは、ＴｅｃｈＭａｔｅ自動染色プラットフォームを使って行われた。
Ａｘｌについては、本明細書に記載されているように、０－３＋の微分強度で細胞膜染色を有する腫瘍細胞の割合を記録することによりスコアリングを行った。異なるラボで実施された同一サンプル間の比較は、Ｈスコア［（＜１での％）ｘ０］＋［（１＋での％）ｘ１］＋［（２＋での％）ｘ２］＋［（＋での％）ｘ３］に基づいて行われた。ＣＤ６８については、ＣＤ６８陽性マクロファージで構成される腫瘍細胞の割合（０～１００％）を記録することでスコアリングを行った（腫瘍中の％）。
異なるラボで染色されたサンプル間で Ａｘｌ Ｈスコア と 腫瘍中の割合（Ｐｅｒｃｅｎｔ ｉｎ Ｔｕｍｏｒ ）の ＣＤ６８ スコアを比較する場合、以下の一致度パラメータが設定されている：互いのスコアがプラスマイナス２０％以内であれば一致とみなされ、アッセイ転送を承認するためには検査サンプルの８５％で一致でなければならない。このような条件下で、２つの異なる検査施設で実施した場合、ＮＳＣＬＣ組織セット全体で許容できる一致が認められた。
各施設で染色されたＮＳＣＬＣ検体を比較した採点データが得られた（表４）。各施設サンプル間のＡｘｌ Ｈスコアと腫瘍中の割合（Ｐｅｒｃｅｎｔ ｉｎ Ｔｕｍｏｒ ）の ＣＤ６８ スコアの変化率（もしあれば）を求めた。合計１３検体が両研究所で実施された。これら１３検体のうち、Ａｘｌについては全検体が一致（変化率２０％以内）し、ＣＤ６８については２検体を除くすべてが一致したと考えられる。その結果、Ａｘｌについては１００％、ＣＤ６８については８５％のサンプルセットの一致が得られた。
ＣＤ６８の結果が一致しない場合は、腫瘍に占めるマクロファージの割合のスコアが低いことで説明できる。パーセントスコアが低い場合、テストの性質上、比較スライドの得点間の差は、変化率の高い値に変換される。例えば、２つの施設のサンプル間で５％から２％の得点差は小さいが、０－１００のスケールで見ると大きな変化率になる。このようなサンプルは許容範囲とされた。
得られたアッセイ移管スコアデータおよび確立された一致基準によると、ＡｘｌおよびＣＤ６８アッセイは移管に成功したとみなされた。
パートＢ： ＡｘｌおよびＣＤ６８癌の感度スクリーニング
表７のＡｘｌとＣＤ６８の最適化されたＩＨＣアッセイと表６の一般的なＩＨＣ手順、表８の試薬を用いて、異なる癌兆候のヒト腫瘍組織の連続切片（スライド１枚につき組織の１セクション、準備間の材料の損失は最小限）をスクリーニングすることができた。
ＣＬＩＡ感度スクリーニングの癌兆候とそれぞれの分析検体数は以下の通りである：
メラノーマ（未治療３１名、前に治療１６名）、卵巣癌（未治療５２名）、膵臓癌（未治療３１名、前に治療２名）、肺癌（未治療４３名、前に治療１名）、前立腺癌（未治療５１名）。感度試験用の組織はすべて、ホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）されたヒト癌検体であった。未治療のサンプルはＱｕａｌＴｅｋ社の組織バンクから、前治療のサンプルはＢｉｏＡｔｌａ社からＯＨＳＵ経由で提供された（下記表９）。
ＡｘｌおよびＣＤ６８ ＩＨＣアッセイの感度は、以下の兆候で評価された：メラノーマ（未治療３１名、前に治療１６名）、卵巣癌（未治療５２名）、膵臓癌（未治療３１名、前に治療２名）、肺癌（未治療４３名、前に治療１名）、前立腺癌（未治療５１名）。 組織はすべて、ホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）されたヒト癌検体であった。治療未経験のサンプルはＱｕａｌＴｅｋの組織バンクから、前治療のサンプルは以下の表９に記載されている通りである。
事前の検査で様々なＡｘｌ反応性を示した肺癌組織は、今回の腫瘍スクリーニングで適切な反応性を示すための陽性対照／品質管理（ＱＣ）として使用された。扁桃組織は、ＣＤ６８マクロファージバイオマーカーの対照として使用された。標準的な種一致陽性対照（マウスＣＫ）およびアイソタイプ一致陰性対照（マウスＩｇＧ１）を試験中に含め、期待通りの反応を示した。サンプルはまた、形態学的評価のためにヘマトキシリンとエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色し、スコアリングの助けとした。
Ａｘｌは腫瘍細胞とマクロファージのサブセットで反応性を示す。腫瘍細胞では、Ａｘｌ反応性は主に細胞膜に局在するが、細胞質にも存在することがある。Ａｘｌを発現するマクロファージは、腫瘍細胞間や腫瘍と相互作用する間質（腫瘍関連間質または腫瘍間質）内に存在することがある。すべてのマクロファージがＡｘｌで標識されるわけではない。ＣＤ６８はすべてのマクロファージ（腫瘍内および腫瘍間質）に発現しており、この免疫細胞タイプを同定するための標準的なバイオマーカーである。
腫瘍スクリーンの全組織を評価した。腫瘍のＡｘｌ細胞膜染色は、パーセントスコア（強度≧１＋、≧２＋、≧３＋の割合の合計、値は０～１００）およびＨスコア（各％スコア（０～１００％）に対応する強度スコア（０、１＋、２＋、３＋）を乗じた合計、値は０～３００）により評価した。Ａｘｌは腫瘍細胞とマクロファージの両方で発現しているため、スコアリング手法（上記の腫瘍におけるＡｘｌの細胞膜スコアリング（腫瘍膜Ｐスコア）セクションで説明したとおり）は、連続切片でＣＤ６８染色とＡｘｌ反応性を比較した。ＣＤ６８バイオマーカーは、Ａｘｌスライドのマクロファージ染色を識別して「減算」し、マクロファージを除いたＡｘｌの「腫瘍のみ」スコアを得るために使用された。
本明細書に記載されたスコアリング法には、平均強度でＡｘｌ細胞質染色を有する腫瘍の割合の記録値も含まれる。マクロファージは、ＣＤ６８またはＡｘｌ陽性マクロファージで構成される腫瘍の割合を推定することにより、腫瘍塊内のＣＤ６８およびＡｘｌ陽性について評価した。マクロファージも腫瘍間質内でＡｘｌとＣＤ６８染色の相対量について評価された。
Ａｘｌ腫瘍スクリーニングは、様々な癌の適応症からの代表的なサンプルセットにわたる染色強度の範囲と反応性の豊富さ（浸透度）を理解するために実施された。
メラノーマ、治療歴のあるメラノーマ、卵巣癌、膵臓癌、肺癌、前立腺癌について、評価可能な癌サンプルにおけるＡｘｌとＣＤ６８のスコアリング結果が得られた。
各癌の適応症で検査されたサンプルの多くは、Ａｘｌ細胞膜腫瘍染色は陰性であった（染色強度が０の腫瘍細胞は１００％）。しかし、メラノーマ、卵巣癌、膵臓癌、肺癌の兆候では、スクリーニングしたサンプルの中で、Ａｘｌ細胞膜染色が低い、中程度、高い例も観察された。
メラノーマ、前に治療されたメラノーマ、卵巣癌、膵臓癌、肺癌では、対応する組織領域でＣＤ６８染色と並んで高濃度または中濃度のＡｘｌ染色を示す代表的な画像が観察された。
前立腺癌の兆候については、５１検体が評価され、そのうちゼロ以上のＡｘｌ細胞膜染色を示したのは１検体のみであった。ＣＤ６８バイオマーカーと並んで、前立腺癌におけるＡｘｌの陰性染色の代表的な画像が観察された。前立腺癌の兆候は非反応性が高かったため、その後のＡｘｌ検証のための精度および再現性試験には含まれなかった。
マウスＩｇＧ１アイソタイプマッチ陰性対照は、感度スクリーニングで試験された各組織サンプルに含まれた。これらの対照による染色は非反応であった。
感度スクリーニングのためのＨスコアとパーセントスコア分析
Ａｘｌの感度スクリーニング（ＣＤ６８と併用）は、臨床検査で使用するＡｘｌ陽性のカットオフ値を決定する補助を目的としている。腫瘍（マクロファージを除く）におけるＡｘｌ細胞膜発現の比較評価を助けるため、理論的な陽性度の閾値の違いによりスコアリングデータを分割した。
この解析では、評価可能な前治療歴のあるメラノーマサンプル（ｎ＝１６）をグループ分けし、ＱｕａｌＴｅｋ組織バンクの治療歴のないメラノーマサンプル（ｎ＝３１）とは別に解析した。前治療歴のある膵臓癌（ｎ＝２）および肺癌（ｎ＝１）のサンプルは、それぞれのグループを構成するにはサンプル数が少なすぎるため、感度のサマリーから除外した。これらの兆候のＱｕａｌＴｅｋの組織には、治療歴がないため含まれていなかった。
表１０は、各癌兆候において、Ａｘｌ細胞膜腫瘍染色のＨスコアカットオフ値：≧１、≧５０、≧１００、≧１５０、≧２００、≧２５０を満たした症例の数と割合を示した。また、表１０には、各表示でテストしたサンプル間の平均Ｈスコアを記載している。これらのＡｘｌ反応性の平均Ｈスコアも図２１に示す棒グラフで比較した。
Ｈスコア解析によると、腫瘍のＡｘｌ細胞膜染色については、すべての兆候が非常に低かった（平均兆候Ｈスコア＜２５）。しかし、前治療歴のあるメラノーマ（化学療法、ＩＯ療法、ＴＫＩ療法を含む）症例では、治療歴のないメラノーマおよびその他のすべての未治療症例に対して、全体的に最も高い反応性が観察された。
また、パーセントスコアによる腫瘍のＡｘｌ細胞膜の発現も評価した。パーセントスコア分析のサマリー表は以下の通りである：
表１１は、腫瘍の様々な割合で１＋、２＋、３＋（≧１＋）の強度を考慮した場合の、各癌兆候における陽性例数と割合を示したものである。
考慮した場合の、各癌兆候における陽性例数と割合を示したものである。
表１３は、腫瘍の様々な割合で３＋（≧３＋）の強度を考慮した場合の、各癌兆候における陽性例数と割合を示したものである。
腫瘍細胞の≧１％にＡｘｌ染色があることを陽性のカットオフとする基準を用いた場合、各兆候の以下の症例数及び割合が陽性と判断される：メラノーマ：４／３１（１３％）、前治療歴のあるメラノーマ：５／１６（３１％）、卵巣癌：１０／５２（１９％）、膵臓癌：６／３１（１９％）、肺癌１２／４３（２８％）、前立腺癌：１／５１（２％）。表１０－１３を用いて、その他の陽性閾値／カットオフを検討した。
Ａｘｌは腫瘍細胞では主に細胞膜に発現しているが、細胞質にも局在する。多くの場合、腫瘍の細胞質Ａｘｌ反応性はないか弱かった（０または１＋の強度）。しかし、腫瘍細胞質に強い（２＋または３＋の強度）Ａｘｌ発現が認められたサンプルもあった。このような染色は、Ａｘｌ発現の重要な指標となる可能性がある。
Ａｘｌの細胞膜または細胞質発現がゼロ以上の腫瘍スクリーン試料を観察した。これらのサンプルには、Ａｘｌの細胞膜染色がないサンプル（０％で１００％）も含まれていたが、≧２＋で１０％以上の細胞質染色があった。これらのサンプルは、Ａｘｌ細胞膜反応性はないが、Ａｘｌ細胞質染色が顕著な症例である。このような症例は、Ａｘｌ陽性を判定する際の包含基準として考えられる。
正常組織におけるＡｘｌとＣＤ６８の特異性試験（パートＣ）
表６と表７に記載したＩＨＣ法を用いて、ＡｘｌとＣＤ６８の標的に対する特異性を調べた。特異性検査は、ＦＤＡが推奨するマルチ正常ヒト組織マイクロアレイ（ＴＭＡ）から９６の異なる組織を用いて行われた。ＴＭＡ（Ｐ１４７８Ｑ００３５）はＰａｎｔｏｍｉｃｓ社から購入し（Ｃａｔ ＃ ＭＮＯ９６１， ｍｕｌｔｉ－ｎｏｒｍａｌ ｈｕｍａｎ ｔｉｓｓｕｅｓ， ＦＤＡ， ９６ ｓａｍｐｌｅｓ， ３５ ｏｒｇａｎｓ／ｓｉｔｅｓ ｆｒｏｍ ３ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ， １．５ｍｍ）、表９に完全に記載した。すべての正常組織サンプルの切片をヘマトキシリン・エオジン（Ｈ＆Ｅ）で組織学的に染色し、Ａｘｌ、ＣＤ６８、マウスＩｇＧ１でＩＨＣ染色した。
染色された正常組織はすべて、上記の腫瘍膜Ｐスコアの項で説明したＡｘｌ細胞膜染色のＨスコア法を用いて、正常組織成分（腫瘍とは異なる）の評価を行った。この特異性試験のスコアリングデータには、ＣＤ６８バイオマーカーを用いた各正常組織全体のマクロファージの推定存在量（０～３）も含まれる。正常組織におけるＡｘｌとＣＤ６８の特異性データが得られた。
Ａｘｌは、正常精巣サンプルのＳｅｒｔｏｌｉ細胞における反応性を除き、試験したすべての正常ヒト組織において非反応性の細胞膜染色（０％で１００％）を示した。この特異性検査から、Ａｘｌ抗体とＩＨＣ検査は、腫瘍細胞および精巣の正常細胞のサブセットの標的に対して特異的であることが示唆された。
ＣＤ６８染色は、試験した正常組織全体のマクロファージ量の範囲を表していた。正常組織ではＡｘｌとＣＤ６８の発現が観察された。マウスＩｇＧ１アイソタイプマッチ陰性対照は、試験したすべての正常組織で非反応性であった。
ＡｘｌとＣＤ６８の精度および再現性試験（パートＤ）
感度スクリーニングの結果は、メラノーマ、卵巣癌、膵臓癌、肺癌の兆候におけるＡｘｌおよびＣＤ６８ ＩＨＣアッセイの精度と再現性を試験するための適切な組織を特定するのに役立った。前立腺癌は、腫瘍細胞におけるＡｘｌ細胞膜反応性がほぼ陰性（５０／５１サンプルが０強度で１００％の腫瘍染色を示す）であったため、バリデーションの対象外とした。
メラノーマ、卵巣癌、膵臓癌、肺癌の検証では、腫瘍細胞のＡｘｌ細胞膜染色が広範囲に認められる腫瘍サンプルを適応症ごとに４検体選択し、使用した。サンプルはＡｘｌの発現に基づいて選択され、ＣＤ６８バイオマーカーと連続して実行され、複合検査の妥当性が確認された。ＣＤ６８で実行したサンプルはＡｘｌで選択したサンプルと同じでなければならなかったため、ＣＤ６８の染色の範囲は各表示内で必ずしも観察されず、セット全体に反映された。
各表示の各サンプルは、表７のＩＨＣアッセイと上述のプロトコールに従って、ＡｘｌとＣＤ６８の両方について、１回の実行で３重に実行した（精度）。連続しない日に行われた２回の別々の検査では、同じオペレーターと異なるオペレーターの両方が、同じサンプルをＡｘｌとＣＤ６８で３回繰り返して検査した（再現性）。すべての複製スライドは、連続切片として調製された（スライド調製間の材料の損失を最小限に抑えながら、１スライドにつき組織の１切片を調製）。
言い換えれば、アッセイ内（精度）およびアッセイ間（再現性）は、ＡｘｌおよびＣＤ６８について、選択された４つの腫瘍サンプルのそれぞれについて３つの複製切片（１ランあたり）を用いた３ランシリーズを用いて決定され、その結果、各サンプルについて９つの複製セットが得られた。２人のオペレーターが異なるＴｅｃｈＭａｔｅ装置を用いてアッセイを実施した（オペレーター１、ラン１；オペレーター１、ラン２；オペレーター２、ラン３）。陽性対照、標準対照、陰性対照はそれぞれのランに含まれ、予想通りの反応を示した。
バリデーション中に染色されたすべての複製をレビューし、採点した。腫瘍のＡｘｌ細胞膜染色はパーセントスコア≧１＋で評価した。精度と再現性の試験では、１０％以上の腫瘍細胞が≧１＋の強度で染色された（パーセントスコア ≧１＋、すなわち１０以上）検体を陽性（ＰＯＳ）と呼んだ。腫瘍細胞の０～９％に≧１＋の染色が認められるか、＜１＋の染色しか認められない場合、そのサンプルは陰性（ＮＥＧ）であった。ＣＤ６８は、上記の腫瘍膜Ｐスコアのセクションで説明したように、腫瘍中のマクロファージの推定パーセンテージについて評価した。
精度と再現性試験のための複製は、各サンプルの感度スクリーニングでＡｘｌとＣＤ６８で染色した切片と比較して、病理医が許容範囲と判断した。メラノーマ、卵巣癌、膵臓癌、肺癌については、統計解析および反復を含む完全な検証スコアリング結果が得られた。
Ａｘｌ反応性の細胞パターンは、腫瘍染色のパターン、割合、強度において、すべての複製で類似していた。腫瘍中のＣＤ６８染色の割合も各レプリケートで同じように推定した。この一貫性は、メラノーマ、卵巣癌、膵臓癌、肺癌のＡｘｌとＣＤ６８で観察された。各適応症に対応するマウスＩｇＧ１陰性コントロールが提供された。
統計分析と信頼区間評価
ＩＨＣアッセイ検証の可否は、染色パターンの一貫性の評価、半定量的スコアの統計解析、一致／不一致の推定値のパーセンテージによって決定された。精度・再現性試験の合格は、一致率で計算される選択された９５％信頼区間（ＣＩ）の下限が８５％以上であることを要求する。また、一般的な基準では、複製間の平均の標準誤差（ＳＥＭ）が５を超えないこと、変動係数（ＣＶ）が２０％を超えないこと（パーセントスコア値が１０以上のサンプル）とされている。
各複製セットの平均値、標準偏差（Ｓｔｄ Ｄｅｖ）、平均値の標準誤差（ＳＥＭ）、および変動係数（ＣＶ）を含む、腫瘍におけるＡｘｌパーセンテージスコア≧１＋およびＣＤ６８パーセンテージスコアの検証スコアリング結果の要約を表１４に示す。これらのサンプルの評価には、精度と再現性のある解析のために、≧１＋の強度で染色された腫瘍細胞の１０％以上というＡｘｌの陽性カットオフが適用された。

各バイオマーカーについて検査した４症例の９つのレプリカの各セットのＳＥＭは１．８を超えず、ＣＶは２０％を超えなかった（パーセントスコア ≧１＋ ＞５を持つ症例）。肺癌サンプルＱＭＴＢ２４９－３のＡｘｌ パーセントスコアは、テストした複製物間で１～５の範囲であった。これは、ＦＦＰＥ組織ブロックの連続切片化に伴い、反応性細胞のクラスターが減少したことに起因している。その結果、ＣＶ値は８０％であったが、ＳＥＭは０．６と非常に低く、標準偏差はわずか１．７であった。
パーセント・スコアが低い場合、試験の性質上、複製物間の差は高いＣＶ値に変換される。パーセントスコアが＜１０の場合、サンプルは許容範囲とみなすことができる。サンプルＱＭＴＢ２４９－３は許容範囲内と判断され、その他のサンプルはすべて規定値内であった。
Ａｘｌの信頼区間評価は表１５に示されており、陽性／陰性染色の一致、平均値、標準偏差、平均値の標準誤差（ＳＥＭ）、および９５％信頼区間（ＣＩ）の事前定義Ｚ値が含まれる。この評価では、ＣＩを計算するために使用した基準点は、Ａｘｌ複製物の大部分についての染色結果（陽性または陰性）に基づいていた。例えば、メラノーマサンプルＱ２８３２の９／９複製はＡｘｌ陽性であった。もしＱ２８３２の複製が陰性であったなら、それは大多数に反しており、ＣＩを低下させたであろう。しかし、不一致の結果は出なかった。
Ａｘｌの精度・再現性試験による一対比較では、メラノーマ、卵巣癌、肺癌において、合計３６件の一致と０件の不一致が確認された。膵臓癌では、３５件の一致、０件の不一致の結果が観察された（１件の染色サンプルは評価不能）（表１５）。そのため、Ａｘｌ に対する１０７／１０７のテストは、適切な多数決で一致した。Ａｘｌ ＩＨＣアッセイでは、９５％ＣＩで許容基準を満たした。
ヒトメラノーマ、卵巣癌、膵臓癌、肺癌の兆候における検出のためのＡｘｌおよびＣＤ６８ ＩＨＣアッセイは、臨床検査で使用するためのバリデーションに成功したと考えられた。

実施例１１ ＢＡ３０１１のｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏ活性
ＢＡ３０１１は、ＴＭＥを模倣した条件（ｐＨ６．０－７．０）では高い親和性と特異性でヒトＡｘｌとカニクイザルＡｘｌの両方に結合するが、マウスやラットＡｘｌには結合しないが、正常組織環境を模倣した条件（ｐＨ７．３－７．４）では結合が減少した（Ｓｔｕｂｂｓ ２０００； Ｇｉｌｌｉｅｓ １９９４； ｖａｎ Ｓｌｕｉｓ １９９９； Ｅｓｔｒｅｌｌａ ２０１３； Ａｎｄｅｒｓｏｎ ２０１６）。ｉｎ ｖｉｔｒｏの機能アッセイにおいて、ＢＡ３０１１は腫瘍条件下ではＡｘｌ発現ヒト癌細胞株の細胞毒性を誘導する能力を示したが、正常条件下では細胞毒性は減少した。
ＢＡ３０１１の抗腫瘍効果は、免疫不全動物にＡｘｌを発現させたヒト腫瘍細胞株由来の異種移植腫瘍を用いたｉｎ ｖｉｖｏで実証した。ＮＳＣＬＣ（ＬＣＬＣ１０３Ｈ）、前立腺（ＤＵ１４５）、膵臓腫瘍（ＭＩＡＰａＣａ２）の腫瘍細胞株をこのｉｎ ｖｉｖｏマウスモデルシステムで試験した。腫瘍が約１５０ｍｍ３の大きさで確立されると、動物は指示されたスケジュールに従って指示された用量レベルでＢＡ３０１１で処置された。試験したすべてのモデルで示された対照に対する腫瘍増殖抑制率（ＴＧＩ）を図１７Ａ－１７Ｄに示す。ＢＡ３０１１は、図１７Ｄに示されるように、試験した７モデル中４モデルで７０％以上のＴＧＩを誘導した。ＢＡ３０１１は、試験された用量およびスケジュールにおいて体重減少を誘発せず、その他の毒性の臨床的徴候は認められなかった。

実施例１２ Ｉｎ ｖｉｖｏ毒性学と薬物動態学
ＢＡ３０１１の非臨床試験における静脈内毒性は、サルにおける初回用量範囲確認試験と、ＧＬＰ（Ｇｏｏｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒａｃｔｉｃｅ：医薬品安全性試験実施基準）に準拠した反復用量毒性試験で評価された。ＢＡ３０１１がネズミの酵素に結合しない一方で、カニクイザルのＡｘｌタンパク質に交差反応することから、毒性学的にもカニクイザルが選ばれた。ＢＡ３０１１で観察された毒性の多くは、ＭＭＡＥと結合した他のＡＤＣと同様である。
カニクイザルにＢＡ３０１１を１、５または１０ｍｇ／ｋｇ／用量の静脈内緩徐ボーラス注射で１日目と２２日目に計２回投与した結果、雌では１０ｍｇ／ｋｇ／投与で早期に死亡し、雌雄ともに５および１０ｍｇ／ｋｇ／投与で血液学的な有害な変化が認められ、雄で１０ｍｇ／ｋｇ／投与、雌で５ｍｇ／ｋｇ／投与でリンパ系臓器の病理学的な有害な変化が認められた。体重、心電図（ＥＣＧ）、眼科検査、尿検査において、本試験のどの用量レベルにおいても、被験物質に関連した変化は認められなかった。５および１０ｍｇ／ｋｇ／投与 での結果に基づき、ＢＡ３０１１のＮＯＡＥＬ（ｎｏ－ｏｂｓｅｒｖｅｄ－ａｄｖｅｒｓｅ－ｅｆｆｅｃｔ ｌｅｖｅｌ）は雌雄ともに１ｍｇ／ｋｇ／投与と考えられた。１ｍｇ／ｋｇ／投与時の２２日目のＢＡ３０１１の群平均最大血漿中曝露量（Ｃ０）は２０．０μｇ／ｍＬ、濃度対時間曲線下面積（ＡＵＣ）０－ｉｎｆは３７６μｇ－ｈ／ｍＬであった。最高非重度毒性用量（ＨＮＳＴＤ）は５ｍｇ／ｋｇ／投与で、２２日目のＣ０は１１１μｇ／ｍＬ、ＡＵＣ０－ｉｎｆは２３７０μｇ・ｈ／ｍＬであった。臨床開始用量（０．３ｍｇ）の予測曝露量に基づくと、サルにおけるＨＮＳＴＤは、０．３ｍｇにおける予測ヒトＡＵＣtt（２５３μｇ・ｈ／ｍＬ）の９．４倍、予測ヒト最大観察濃度（Ｃｍａｘ）７．８７μｇ／ｍＬの１４倍となる。

実施例１３ 第Ｉ／ＩＩ相試験
本試験は、１２歳以上の進行性固形腫瘍の成人および青年患者を対象に、ＢＡ３０１１単独およびニボルマブとの併用による安全性、忍容性、ＰＫ、免疫原性、抗腫瘍活性を評価することを目的とした多施設共同オープンラベルの第Ｉ／ＩＩ相試験である。
第１相試験は、用量漸増と用量拡大の２つの部分から構成され、成人の進行性固形腫瘍患者におけるＢＡ３０１１の安全性および忍容性を評価し、ＢＡ３０１１のＭＴＤおよび／またはＲＰ２Ｄを特定することを目的としている。
第２相試験は、進行性難治性肉腫の成人および青年患者を対象に、ＢＡ３０１１単独およびニボルマブとの併用による有効性と安全性を評価する非盲検試験である。本試験は、スクリーニング期間（初回投与２８日前まで）、治療期間、治療終了時（ＥＯＴ）来院（ＩＰ中止時またはＩＰ最終投与後２８日以内）、フォローアップ期間（フォローアップ来院１［ＩＰ最終投与から３ヶ月］、フォローアップ来院２および以降［フォローアップ来院１以降３ヶ月ごと］）で構成されている。
第Ｉ相試験：
一次：
－ 進行性固形腫瘍患者を対象に、用量制限毒性（ＤＬＴ）を含む安全性プロファイルを明らかにし、ＢＡ３０１１の最大耐用量（ＭＴＤ）および／または推奨第２相用量（ＲＰ２Ｄ）およびその他の安全性パラメータを決定する。
二次：
－ ＢＡ３０１１の薬物動態（ＰＫ）を評価する。
－ ＢＡ３０１１の抗腫瘍活性を評価する。
－ ＢＡ３０１１の免疫原性を評価する。

第ＩＩ相試験
一次：
－ ＢＡ３０１１単独およびニボルマブとの併用による抗腫瘍活性を評価する。
－ ＢＡ３０１１の単独投与およびニボルマブとの併用投与の安全性を評価する。
二次：
－ ＢＡ３０１１の単独およびニボルマブとの併用における臨床活性の特徴をさらに明らかにする。
探索：
－ ＢＡ３０１１単独およびニボルマブとの併用におけるＰＫを評価する。
－ ＢＡ３０１１単独およびニボルマブとの併用による免疫原性を評価する。
－ 腫瘍のＡｘｌの状態とＢＡ３０１１に対する臨床効果との関係を調べる。
－ 患者選択あるいはＢＡ３０１１の抗腫瘍活性との相関のための腫瘍および血液ベースのバイオマーカー候補を評価する。
主要評価項目
第１相試験：
－ 安全性ＤＬＴ、ＭＴＤおよび／またはＲＰ２Ｄ、有害事象（ＡＥ）、重篤な有害事象（ＳＡＥ）、臨床検査値およびバイタルサインのベースラインからの変化。
第２相試験：
－ 有効性：全奏効率（ＯＲＲ）。
安全性ＡＥ、ＳＡＥ、臨床検査値およびバイタルサインのベースラインからの変化。

二次評価項目
第１相試験：
－ ＢＡ３０１１のＰＫ ：ＡＤＣ、総抗体およびＭＭＡＥの血漿中濃度、ならびにＣｍａｘ およびＡＵＣを含むＰＫパラメータ。
－ 有効性（拡大コホートのみ）：ＯＲＲ、病勢コントロール率（ＤＣＲ）、奏効までの期間（ＴＴＲ）、奏効期間（ＤＯＲ）、最良客観的奏効（ＯＲ）、無増悪生存期間（ＰＦＳ）、全生存期間（ＯＳ）、腫瘍サイズのベースラインからの変化率。
－ ＢＡ３０１１の免疫原性：検出可能な抗薬物抗体（ＡＤＡ）を発現する患者の数と割合。
第２相試験：
有効性
－ ＤＯＲ
－ ＰＦＳ
－ Ｂｅｓｔ ＯＲ
－ ＤＣＲ
－ ＴＴＲ
－ １２週時点の無増悪率（ＰＦＲ）
－ ＯＳ
－ 腫瘍サイズのベースラインからの変化率
探索的評価項目
第２相試験：
－ ＢＡ３０１１のＰＫ ：ＡＤＣ、総抗体、ＭＭＡＥの血漿中濃度、およびＰＫ
ＣｍａｘとＡＵＣを含むパラメータ。
－ ＢＡ３０１１の免疫原性：検出可能なＡＤＡを発現する患者の数と割合。
－ 腫瘍のＡｘｌ状態とＢＡ３０１１に対する臨床効果との関係。
－ 患者選択あるいはＢＡ３０１１の抗腫瘍活性との相関のための腫瘍および血液ベースのバイオマーカー候補。

参加基準
１．第１相試験：組織学的または細胞学的に切除不能または転移性の局所進行性固形腫瘍であることが確認され、利用可能な標準治療（ＳｏＣ）が無効で、根治療法が利用できない患者、または標準治療が不適応、不耐容、または拒否である患者。
第２相試験：患者の必須要件
－ 組織学的または細胞学的に切除不能または転移性の局所進行肉腫であることが確認されている。
－ 登録前６ヵ月以内に、固形腫瘍における奏効評価基準（ＲＥＣＩＳＴ）第１．１版に基づく進行が記録されていること。
－ 化学療法が不適格であるか、またはアントラサイクリンを含むレジメンを少なくとも１種類受けており、転移性疾患に対する全身療法を過去に最大３ライン（併用レジメンは２ラインまで）受けている（地域の処方情報に従って該当する場合、パゾパニブ、トラベクテジン、エリブリンメシル酸塩、またはタゼメトスタットを含む）。前治療の要件は、治療法が承認されていない肉腫亜型には適用されない。
２．患者はＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１に従って測定可能な病変を有していなければならない。過去に放射線照射された腫瘍病変は、標的病変とみなされるべきではない。
３．第１相試験：患者は１８歳以上でなければならない。
第２相試験：患者は１２歳以上でなければならない。
４．患者はＥＣＯＧ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｓｔａｔｕｓが０または１でなければならない。
５．患者の余命は３ヶ月以上でなければならない。
６．Ａｘｌおよび他の遺伝子発現試験のために、保存腫瘍組織または生検可能な組織をスポンサーが入手できなければならない。すべての患者は、バイオマーカー研究のために治療前の腫瘍標本を提供することに同意しなければならない。保存組織が入手できない場合、患者はスクリーニング中に腫瘍生検を受けることに同意しなければならない。コア針（最低３本のコアサンプルが必要）または摘出生検または切除組織標本が必要。
７．第１相用量拡大および第２相では、患者は保存組織または生検に基づいてＢｉｏＡｔｌａ Ａｘｌ ＩＨＣアッセイで判定されたＡｘｌ陽性疾患でなければならない。十分な細胞量を確保するため、最低３つのコアサンプルが必要である。第１相試験の用量拡大では、Ａｘｌ発現のカットオフは１０％以上の腫瘍細胞で１＋以上である。第２相試験では、パーセントスコアが７０以上（１＋、２＋、３＋の強度で構成される）を陽性とみなす。
８．患者は以下の条件を満たしていなければならない：
－ 放射線療法、化学療法、および／または他の治験用抗癌剤による治療が、試験初回投与の少なくとも５半減期または２週間前に、または生物学的製剤（モノクローナル抗体［ｍＡｂ］など）による治療が、試験初回投与の少なくとも４週間前に完了している（治療に関連した毒性から回復している）。ビスフォスフォネート、デノスマブ、ゴナドトロピン放出ホルモン作動薬または拮抗薬は例外である。
－ 試験開始の少なくとも６週間前に、ナイトロジェンマスタード剤、メルファラン、またはカルムスチン（ＢＣＮＵ）療法による前治療を終了している。
－ 試験開始の少なくとも８週間前に自己造血幹細胞輸注を受けたことがある。
９．患者は十分な臓器機能を有していなければならない。ベースラインの検査値として必要なものは以下の通り：
－ 絶対好中球数が１，５００／μＬ以上または１．５×１０９／Ｌ以上。
－ 血小板≧１００，０００／μＬまたは１００×１０９／Ｌ。
－ ヘモグロビン≧９．０ｇ／ｄＬである。
－ ビリルビン≦１．５×正常上限（ＵＬＮ）である。
－ 血清クレアチニン≦１．５×ＵＬＮ。
－ アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）≦２．５×ＵＬＮ；肝臓に転移がある場合はＡＬＴおよびＡＳＴ≦５×ＵＬＮ。
第２相試験のみ：
－ ＩＮＲ＜１．７，またはプロトロンビン時間が対照より＜ ４秒。
－ アルブミン＞３．５ｇ／ｄＬ。
１０．患者は、治療施設において定期的な採血、試験に関連した評価、毒性の管理に応じることができ、予想される薬剤投与スケジュールを遵守する意思がなければならない。
１１．妊娠可能な女性は、ＢＡ３０１１の初回投与前に血清または尿による妊娠検査結果が陰性であり、試験期間中、バリア／子宮内避妊法またはホルモン法のいずれかの有効な避妊法を使用することに同意しなければならない。
－ 妊娠の可能性のない女性とは、閉経後１年以上経過した女性、または両側卵管結紮術もしくは子宮摘出術を受けた女性である。
－ 妊娠・生殖可能な女性および男性は、本試験に参加している間およびＢＡ３０１１の最終注入後６ヵ月間は、有効な避妊を行うことに同意しなければならない。
１２．患者またはその法的に認められる代理人もしくは法定後見人は、書面によるインフォームド・コンセントを提供しなければならない。１８歳未満の患者については、患者の同意を得なければならない。
除外基準
１．治験責任医師の判断により、患者に臨床的に重大な心疾患がないこと。
２．うっ血性心不全（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｃｌａｓｓ ＩＩ－ＩＶ）または治療を必要とする重篤な不整脈を有していないこと。
３．中等度（Ｃｈｉｌｄ－Ｐｕｇｈ Ｂ）または重度（Ｃｈｉｌｄ－Ｐｕｇｈ Ｃ）の肝障害患者。第１相試験に限り、軽度（Ｃｈｉｌｄ－Ｐｕｇｈ Ａ）の肝障害を有する患者については、ＢＡ３０１１の初回投与量は１．２ｍｇ／ｋｇ １Ｑ３Ｗ（１日目）または１．２ｍｇ／ｋｇ ２Ｑ３Ｗ（１日目および８日目）を超えてはならない。
４．重度の腎機能障害のある患者（ＣｒＣＬが３０ｍＬ／分未満）。
５．中枢神経系（ＣＮＳ）への転移が確認されていないこと。
６．第１相試験のみ：患者は、ＢＡ３０１１初回投与の２週間前に顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）または顆粒球／マクロファージコロニー刺激因子を受けてはならない。
７．患者は、ｍＡｂ治療によるグレード３以上のアレルギー反応の既往歴および本試験中に投与される薬剤に対する既知または疑いのあるアレルギーまたは不耐性がないこと。
８．最初のＢＡ３０１１投与開始前４週間以内に大きな手術を受けていないこと。
９．脳動静脈奇形、脳動脈瘤、脳卒中の既往歴がないこと。
１０．患者は、結合型または非結合型アウリスタチン誘導体／ビンカ結合部位標的ペイロードによる前治療を受けていないこと。
１１．患者は、治療を必要とする活動性および／または進行性の悪性腫瘍を併発していないこと、確定治療を受け、無病となった他の悪性腫瘍患者は適格となる。
１２．グレード２以上の末梢神経障害がないこと。
１３．患者は臨床的に重要な（治験責任医師の判断による）全身性の抗生物質／抗ウイルス薬／抗真菌薬を必要とする活性なウイルス性、細菌性、真菌性の感染症を有していないこと。
１４．ＨＩＶ、活動性Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎の既往がないこと。
１５．患者は妊娠中または授乳中の女性であってはならない。
１６．他の抗悪性腫瘍剤または実験的薬剤との併用療法を行ってはならない。
１７．第１相試験のみ：患者は、プレドニン換算で１２ｍｇ／日以上のコルチコステロイドを同時に使用してはならない。
１８．患者は中等度または強度のＣＹＰ３Ａ誘導剤または阻害剤（カンナビジオールを含む）を使用してはならない。
１９．患者はＰ－糖タンパク質（Ｐ－ｇｐ）阻害剤を使用してはならない。
２０．患者は、治験責任医師または医療モニターの見解において、計画された治療を受ける能力または耐容性を損なうような重篤な基礎疾患を有していないこと。このような場合、スポンサーが指定するメディカルモニターは、患者登録前に、各症例を確認しなければならない。
２１．患者は臨床的に重大な胸水、心嚢水、腹水がないこと（例：正常な臓器機能に影響を及ぼす胸水、および／または経皮的ドレナージや利尿剤によるコントロールを必要とする胸水）。
２２．患者は、肝性脳症の既往歴がないこと、身体検査で測定される臨床的有意腹水が現在あること、薬物またはアルコールの積極的乱用がないこと。
２３．第２相試験のみ：ニボルマブとの併用群に適格であるためには、患者は間質性肺疾患、非感染性肺炎、または肺線維症、急性肺疾患などを含むコントロールされていない疾患の既往歴がないことが必要である。
２４．第２相試験のみ：ニボルマブとの併用群に適格であるためには、患者は登録の４週間前までに、生ワクチンを投与されていないことが必要である。
注：インフルエンザの季節性ワクチンは一般的に不活化ワクチンであり、接種が認められている。経鼻ワクチンは生ワクチンのため禁止される。
２５．第２相試験のみ：ニボルマブ併用群の適応となるためには、活動性の、既知の、または疑われる自己免疫疾患を有する患者は除外される。１型糖尿病、ホルモン補充のみを必要とする甲状腺機能低下症、全身的治療を必要としない皮膚疾患（白斑、乾癬、脱毛症など）、外的誘因がない限り再発が予想されない病態の患者は、登録を許可される場合がある。
２６．第２相試験のみ：ニボルマブとの併用群に適格であるためには、患者は登録前に、コルチコステロイド（プレドニゾン１０ｍｇ以上／日または同等品）またはその他の免疫抑制薬による全身治療が必要な状態であってはならない。
注：現在、または過去に以下のステロイドレジメンを使用していた患者は除外されない：
－ 副腎補充ステロイド（プレドニン１日１０ｍｇ以下または同等量）。
－ 局所、眼、関節内、鼻腔内、または吸入のコルチコステロイドで、全身への吸収は最小限である。
－ 予防的（例：造影剤アレルギーのため）または非自己免疫疾患（例：接触アレルゲンによる遅延型過敏症）の治療のために処方されたコルチコステロイドの短期コース（７日以下）。
２７．第２相試験のみ：ニボルマブ併用群の適応となるためには、患者は、同種幹細胞移植または臓器移植の既往がないことが条件となる。

第１相用量漸増試験（ＢＡ３０１１単独；２１日サイクル）
第１相用量漸増期間中、進行固形腫瘍の成人患者が順次登録され、表１６に示す計画用量でＢＡ３０１１を２１日サイクルで点滴静注する。ＢＡ３０１１は、各コホートに割り当てられた用量レベルに従って、３週間ごとに１回（１Ｑ３Ｗ）または２回（２Ｑ３Ｗ）、それぞれ２１日サイクルの１日目のみ、または１日目と８日目に点滴静注により投与される。ＢＡ３０１１の開始用量は０．３ｍｇ／ｋｇ １Ｑ３Ｗである。各コホートにおいて、ＢＡ３０１１の最初の投与は、最初の患者と２番目の患者の間で最低２４時間ずらされる。
治験薬、投与量、投与方法：
ＢＡ３０１１、０．３ｍｇ／ｋｇから用量漸増 １Ｑ３Ｗ（第１相）、ＲＰ２Ｄ（第２相）、点滴静注。
ニボルマブ（第２相のみ）：１８歳以上の患者：２４０ｍｇ Ｑ２Ｗ； １２～１７歳の患者：３ ｍｇ／ｋｇ Ｑ２Ｗ 静注。
治療期間（月）
患者は、病勢進行、許容できない毒性、またはその他の治療中止の理由が生じるまで治療を受ける。
統計的手法：
安全性解析
ＭＴＤ評価は、ＤＬＴ評価可能集団に基づいて行われる。ＤＬＴ評価可能集団には、第１相用量漸増に登録された患者のうち、ＢＡ３０１１の全用量を１回以上投与され、ＤＬＴ評価期間（ＢＡ３０１１の初回投与から投与１日後２１日までの期間として定義される）までの安全性追跡調査を完了した患者、またはＤＬＴ評価期間中に何らかのＤＬＴを経験した患者が含まれる。ＤＬＴで評価可能でない患者は入れ替えとなる。安全性評価はＡｓ－Ｔｒｅａｔｅｄ Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎに基づいて行われる。有害事象（ＡＥ）はＭｅｄｉｃａｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｆｏｒ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ（ＭｅｄＤＲＡ）によりコード化され、ＮＣＩ ＣＴＣＡＥ ｖ４．０３に従ってグレード付けされ、種類、発生率、重症度、および各ＩＰとの関係がまとめられる。ＡＥとベースライン特性との間に何らかの関連性が認められた場合には、層別化した結果を追加で提示することができる。すべての治療緊急性のあるＡＥは、ＭｅｄＤＲＡシステム臓器クラスと優先期間でまとめられる。ＮＣＩ ＣＴＣＡＥに従った毒性グレードを伴う臨床検査値異常がまとめられる。
有効性の分析
第２相試験の主要評価項目は、ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１による客観的奏効（ＯＲ）で、盲検化された独立中央審査（ＢＩＣＲ）を用いる。客観的奏効率（ＯＲＲ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｒａｔｅ）は、その後の抗癌剤治療を開始する前に、ＣＲまたはＰＲが確認された最良全奏効を示した対象の割合と定義される。ＯＲＲは、２つの治療群（ＢＡ３０１１単独群およびニボルマブ併用群）それぞれにおいて、肉腫のサブタイプごとおよび全体について、正確確率法を用いて９５％信頼区間を推定する。その他の有効性評価項目は、奏効期間（ＤＯＲ）、無増悪生存期間（ＰＦＳ）、最良全奏効率（ＯＲ）、病勢コントロール率（ＤＣＲ）、奏効までの期間（ＴＴＲ）、１２週時点の無増悪率（ＰＦＲ）、全生存期間（ＯＳ）、標的病変の直径和のベースラインからの変化率である。ＰＦＳとＯＳを除くすべての有効性評価項目は、主にフル解析セット（ＦＡＳ）に基づいてまとめられる。ＰＦＳとＯＳはＡｓ－Ｔｒｅａｔｅｄ Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎに基づいてまとめられる。Ｔｉｍｅ－ｔｏ－ｅｖｅｎｔデータは、Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ推定値を用いてまとめられる。奏効率およびその信頼区間は、厳密確率法を用いて推定される。グラフ解析には、腫瘍サイズのベースラインからの変化量と最良変化量について、それぞれスパイダープロットとウォーターフォールプロットが含まれる。
第１相試験の用量漸増では、コホートの拡大やＢＡ３０１１の忍容性に応じて、約３５～７８人のＤＬＴ評価可能な進行固形腫瘍患者を治療する。各コホートには、単一患者コホートを除き、最低３人、最高６人の患者が必要となる。最低６人の患者がＭＴＤで登録される。
ＢＡ３０１１の用量漸増における修正フィボナッチ法
線量漸増のルールは表１７と図１８（線量漸増フローチャート）に示す。３＋３コホートでは少なくとも３人、単一患者コホートでは少なくとも１人が、次のコホートの登録開始前に、サイクル１（すなわち、ＤＬＴ評価期間）の２１日間の安全性評価を完了していなければならない。単一患者コホートでは、グレード２以上の毒性が認められるまで１人の患者のみが登録され、その後、少なくとも３人の患者がその用量およびその後のすべての用量レベルで評価される。３＋３コホートでは、２１日間のＤＬＴ評価期間中に最初の３人の患者でＤＬＴが観察されなければ、次の用量レベルのコホートへの漸増が継続される。ＤＬＴの基準を以下に示す。１サイクル目以降に発生した毒性を含め、これらの患者から得られたすべての利用可能な安全性データは、次の投与レベルに進む前に検討される。次の指定用量レベルへの漸増は、ＭＴＤが確認されるまで続けられる。
第１相用量漸増コホートへの登録は、表１７の用量漸増ルールに基づき、図１８に示すように順次進められる。ＭＴＤを定義するために、患者は最初の治療サイクルにおけるＢＡ３０１１の実際の開始用量に従って評価される。最大投与量（ＭＡＤ）とＭＴＤは、ＤＬＴの発生率に基づいて決定される。ペグフィルグラスチムを併用しない場合と併用した場合の最大耐容量を検討した。ＤＬＴ評価期間中にコホート内の６人中２人以上がＤＬＴを経験した場合、ＭＴＤを超え、そのコホートにはそれ以上患者を登録しない。その前のコホートでは、ＭＴＤを評価し、次の時点で評価する。少なくとも６人の患者が前投与量レベルで治療される。患者６人中１人以下が前投与量レベルでＤＬＴを経験した場合、その投与量レベルはＭＴＤとみなされる。最低６人の患者がＭＴＤで登録される。投与コホートは、安全性および有効性データの進展に伴い、プロトコールに記載されていない低用量も含め、中止および／または低用量での継続が可能である。ＭＴＤおよび／またはＲＰ２Ｄは、データの全体像に基づいて決定される。

個々の患者は、病勢進行、許容できない毒性、またはその他の治療中止の理由が生じるまで、ＢＡ３０１１の投与を継続する。ＢＡ３０１１の高用量レベルで用量制限的な好中球減少が観察された後、ペグフィルグラスチム（またはバイオシミラー）の投与が第１相試験の患者に必要となり、ＢＡ３０１１の各１日目の注入後４８～７２時間の間に行われなければならない。
治療割り当て
第１相用量漸増の間、患者は表１７および図１９に概説されているように、ＢＡ３０１１の用量レベルが漸増するコホートに割り付けられる。ＢＡ３０１１は、各コホートに割り当てられた用量レベルに従って、３週間ごとに１回（１Ｑ３Ｗ）または２回（２Ｑ３Ｗ）、それぞれ２１日サイクルの１日目のみ、または１日目と８日目に点滴静注される。ＢＡ３０１１の開始用量レベルは０．３ｍｇ／ｋｇ １Ｑ３Ｗである。次の指定用量レベルへの漸増は、ＭＴＤが確認されるまで続けられる。投与コホートは、安全性および有効性データの進展に伴い、プロトコールに記載されていない低用量も含め、中止および／または低用量での継続が可能である。第１相用量拡大は、患者が第２相（例えば、ＲＰ２Ｄ）で受けるＢＡ３０１１の用量および治療スケジュールを決定するものであり、Ａｘｌを発現する進行固形腫瘍患者を対象に実施される。ＲＰ２Ｄは、データ全体に基づいて決定され、ＭＴＤを超えない。第１相試験のデータに基づき、第２相試験におけるＢＡ３０１１の用量は１．８ｍｇ／ｋｇＱ２Ｗである。Ｑ２Ｗ投与レジメンの根拠は、２週間ごとの投与スケジュール（２８日サイクル、１サイクル２回投与）を用いたＢＡ３０１１単独投与およびニボルマブとの併用投与の評価に基づく。Ｑ３Ｗ投与コホートで得られたＢＡ３０１１のデータに基づくと、１Ｑ２Ｗ投与にはいくつかの利点がある。１Ｑ２Ｗ投与スケジュールは、経時的にＣｍａｘを低下させ、患者の安全性を向上させる可能性がある。さらに、１日目と８日目の２Ｑ３Ｗ投与と比較して、個々の投与間隔が長くなるため、投与間の回復時間が長くなり、その結果、特に好中球数の減少や肝酵素の上昇に関連する有害事象の発生率が低下する可能性がある。また、１Ｑ２Ｗ投与スケジュールは、サイクルを通してＢＡ３０１１の濃度を高く維持する（すなわち、Ｃｍｉｎを高くする）ことにより、より優れた有効性を示す可能性がある。最後に、１Ｑ２Ｗのスケジュールは、併用療法を受ける患者に必要な来院回数を減らすことができる。ニボルマブの標準的なＱ２Ｗ（２４０ｍｇ）投与スケジュールと一致しているからである。
第２相試験では、登録基準を満たした患者をＢＡ３０１１の単独投与またはニボルマブとの併用投与に割り当てる。Ｂ細胞浸潤を示す腫瘍（ＣＤ２０ ＩＨＣアッセイによる）を有する患者は、ＢＡ３０１１とニボルマブの併用投与に優先的に割り付けられる。
ペグフィルグラスチムに対するアレルギーの場合は、フィルグラスチム（またはバイオシミラー）で代用できる。３サイクル目からは、ペグフィルグラスチムまたはフィルグラスチムの自己投与が可能となる。
用量制限毒性：
ＤＬＴとは、２１日間のＤＬＴ評価期間中に以下の基準のいずれかを満たすこと、または１サイクル目と２サイクル目の間に１週間以上の投与延期を必要とするグレードの治療関連毒性を有することと定義される：
● 非血液毒性
－ 非血液毒性については、ＤＬＴは、少なくとも治療と関連する可能性のあるグレード ３ 以上の毒性（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ （ＮＣＩ） Ｃｏｍｍｏｎ Ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ Ａｄｖｅｒｓｅ Ｅｖｅｎｔｓ （ＣＴＣＡＥ） ｖ４．０３（２０１０年６月１４日発行）を除く）と定義される：
－ グレード３の疲労。
－ ２４時間以内に続くグレード３の吐き気と嘔吐。
グレード３の非血液学的検査値異常で、無症状であり、１４日以内にグレード１またはベースライン（既存の毒性を有する患者が試験に参加した場合）に消失するもの。
－ 予防的ステロイドを使用しない場合の初回発生時のグレード３または４のアレルギー反応または過敏症反応で、適切な臨床的介入により６時間以内に消失するもの。
● 血液毒性
－ ＮＣＩ ＣＴＣＡＥ ｖ４．０３を用いた血液毒性のＤＬＴは以下のように定義される：
－ グレード４の好中球減少が７日以上続く。
－ グレード３または４の発熱性好中球減少症。
－ いつでもグレード４の血小板数（２５，０００／ｍｍ３未満）。
さらに、上記に含まれない臨床的に重要な毒性または持続的な毒性も、ＰＳＣによる検討の結果、ＤＬＴとみなされる場合がある。ＢＡ３０１１の骨髄抑制の可能性を考慮すると、好中球毒性が少なくともグレード１、または予防的ペグフィルグラスチムを投与された患者についてはグレード２に回復するまで、患者を点滴しないことが特に重要である。
第１相用量漸増コホートへの登録は、表１７の用量漸増ルールに基づき、図１８に示すように順次進められる。ＭＴＤを定義するために、患者は最初の治療サイクルにおけるＢＡ３０１１の実際の開始用量に従って評価される。最大投与量（ＭＡＤ）とＭＴＤは、ＤＬＴの発生率に基づいて決定される。ペグフィルグラスチムを併用しない場合と併用した場合の最大耐容量を検討した。ＤＬＴ評価期間中にコホート内の６例中２例以上がＤＬＴを経験した場合、ＭＴＤを超え、そのコホートにはそれ以上患者を登録しない。その後、先行コホートのＭＴＤを評価し、少なくとも６人の患者を先行用量レベルで治療する。患者６人中１人未満が前投与量レベルでＤＬＴを経験した場合、その投与量レベルがＭＴＤとみなされる。

第１相用量拡大試験（ＢＡ３０１１単剤、２１日サイクル）
第１相用量拡大試験は、ＲＰ２Ｄ（セクション３．１．２．１）の決定を支援するものであり、適切と判断され、ＭＴＤを超えない用量およびレジメンでＢＡ３０１１を投与するために登録されたＡｘｌ発現進行固形腫瘍成人患者約３０人を対象に実施される。患者内投与量は任意に変更できる。Ａｘｌ発現固形腫瘍の十分な代表性を確保するために、特定の腫瘍型を有する患者数を制限することができる。個々の患者は、病勢進行、許容できない毒性、またはその他の治療中止の理由が生じるまで、ＢＡ３０１１の投与を継続する。
第２相推奨用量
ＲＰ２Ｄは、データ全体に基づいて決定され、ＭＴＤを超えない。第１相試験のデータに基づき、第２相試験におけるＢＡ３０１１の用量は１．８ｍｇ／ｋｇ Ｑ２Ｗである。Ｑ２Ｗ投与レジメンの根拠は以下の通りである。
ＢＡ３０１１は、２週間ごとの投与スケジュール（２８日サイクル、１サイクル２回投与）を用いて、単独およびニボルマブとの併用で評価される。Ｑ３Ｗ投与コホートで得られたＢＡ３０１１のデータに基づくと、１Ｑ２Ｗ投与はいくつかの利点をもたらす可能性がある。１Ｑ２Ｗ投与スケジュールは、経時的にＣｍａｘを低下させ、患者の安全性を向上させる可能性がある。さらに、１日目と８日目の２Ｑ３Ｗ投与と比較して、個々の投与間隔が長くなるため、投与間の回復時間が長くなり、その結果、特に好中球数の減少や肝酵素の上昇に関連する有害事象の発生率が低下する可能性がある。また、１Ｑ２Ｗ投与スケジュールは、サイクルを通してＢＡ３０１１の濃度を高く維持する（すなわち、Ｃｍｉｎを高くする）ことにより、より優れた有効性を示す可能性がある。最後に、１Ｑ２Ｗスケジュールは、ニボルマブの標準的なＱ２Ｗ（２４０ｍｇ）投与スケジュールと一致しているため、併用療法コホートの患者にとって必要な来院回数を減らすことができる。

第２相試験（ＢＡ３０１１単独またはニボルマブとの併用；２８日サイクル）。
第２相試験は、Ａｘｌ発現腫瘍膜パーセントスコア（ＴｍＰＳ）が７０以上で、ＲＥＣＩＳＴ（Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｉｎ Ｓｏｌｉｄ Ｔｕｍｏｒｓ）バージョン１．１基準により測定可能な病変を有し、登録前６カ月以内にＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１基準による進行が記録された成人および思春期の難治性肉腫患者を対象に、ＢＡ３０１１の単独投与およびニボルマブとの併用投与の有効性と安全性を評価する非盲検試験である。
登録患者は、化学療法に不適格であるか、またはアントラサイクリンを含むレジメンを少なくとも１種類受けており、転移性疾患に対する全身療法を過去に最大３ライン（併用レジメンは２ライン以下）受けていることが必要であり、地域の処方情報に従って該当する場合は、パゾパニブ、トラベクテジン、エリブリンメシル酸塩、またはタゼメトスタットを含む。登録基準を満たした患者は、ＢＡ３０１１単独投与またはニボルマブとの併用投与のいずれかに割り付けられる （１８歳以上の患者：２４０ｍｇを２週間ごと［Ｑ２Ｗ］、１２～１７歳の患者：３ｍｇ／ｋｇをＱ２Ｗで点滴静注）。Ｂ細胞浸潤を示す腫瘍（ＣＤ２０免疫組織化学［ＩＨＣ］アッセイによる）を有する患者は、ＢＡ３０１１とニボルマブの併用投与に優先的に割り付けられる。第１相試験のデータに基づき、第２相試験におけるＢＡ３０１１の用量は１．８ｍｇ／ｋｇＱ２Ｗである。登録は段階的に行われ、まず肉腫のサブタイプごとに約１０人の患者が単剤療法群に登録される。最大７つの肉腫亜型グループが登録可能である：
軟部組織肉腫：
－ 平滑筋肉腫
－ 滑膜肉腫
－ 脂肪肉腫
－ ＧＩＳＴ、皮膚線維肉腫原形腫、炎症性筋線維芽細胞腫、悪性中皮腫を除く、その他の軟部組織肉腫のすべて
骨の肉腫：
－ 骨肉腫
－ ユーイング肉腫
－ その他の骨肉腫（未分化多形肉腫、悪性線維性組織球腫、軟骨肉腫など）
本試験の併用群（ＢＡ３０１１とニボルマブの併用）では、肉腫のサブタイプを問わず２０人の患者が登録される。これら２０人の患者のうち、約１０人はＣＤ２０ ＩＨＣアッセイで判定されたＢ細胞浸潤（ＣＤ２０陽性）を示す腫瘍を有し、１０人はＣＤ２０発現を示さない（ＣＤ２０陰性）患者である。腫瘍の評価は、Ｃ１Ｄ１から１２週までは約６週間ごと、それ以降は８週間ごとに行われる。薬物動態学的、薬力学的（ＰＤ）、免疫原性、およびバイオマーカー評価は、表１９に記載された時点で実施される。患者安全性のモニタリングは登録時に開始され、治験薬の最終投与（ＩＰ）後も継続される。
ＢＡ３０１１のＰＫ、ＰＤ、免疫原性試験のためのサンプル採取のタイムポイントは、表１８（第１相試験）および表１９（第２相試験）に示されている。

中間解析は、各サブタイプまたは治療法（すなわち、ＣＤ２０陽性の腫瘍を有する患者におけるＢＡ３０１１とニボルマブとの併用、またはＣＤ２０陰性の腫瘍を有する患者におけるＢＡ３０１１とニボルマブとの併用）において、そのサブタイプまたは治療法における少なくとも１０人の患者がＩＰ開始後少なくとも１２週間追跡される可能性を有する後に実施される。
閾値を満たす肉腫亜型では、さらに約１５０人の患者が登録される可能性がある。登録された全患者の治療は、病勢進行、許容できない毒性、またはその他の治療中止の理由が生じるまで継続される。
ペグフィルグラスチムまたはフィルグラスチム（またはバイオシミラー）は、治験責任医師の判断により、投与前の好中球数が少ない患者に対して予防的に、または好中球減少症の発生を治療するために使用することができる。ＢＡ３０１１投与前のＡＮＣ値が３０００／μＬまたは３×１０９／Ｌ未満の患者は、好中球減少症のリスクが高まる可能性がある。これらの患者には、ＢＡ３０１１投与４８～７２時間後に予防的ペグフィルグラスチムまたはフィルグラスチム（またはバイオシミラー）を投与することができる。
無作為化と盲検化
両相の試験ともオープンラベルで非ランダム化されている。
医薬品素材とマネジメントの研究
試験薬
ＢＡ３０１１
ＢＡ３０１１は、チャイニーズハムスター卵巣細胞で産生された抗ヒトＡｘｌ細胞外ドメイン組換え型完全長二価ヒト化ｍＡｂ（ＩｇＧ１）で、切断可能なリンカーを用いてＭＭＡＥに結合している。
ニボルマブ
ＯＰＤＩＶＯ （登録商標）（ニボルマブ）は、市販されているプログラム死受容体－１（ＰＤ－１）遮断抗体である。ＯＰＤＩＶＯ （登録商標）（ニボルマブ）の使用に関する詳細な情報は、処方情報を参照すること。
ＢＡ３０１１投与量の計算
投与量の計算は、ｋｇ単位に四捨五入した体重に基づいている。体重が１００ｋｇを超える患者については、ＢＡ３０１１の投与量を１００ｋｇとして計算すべきである。必要な投与量は以下の式で計算される：
例えば、０．２４ｍＬの場合は０．２ｍＬに、０．２５ｍＬの場合は０．３ｍＬに丸める。投与量を供給するために必要なバイアルの数は、総投与量を１バイアルあたりの公称充填量（５ｍＬ）で除して計算し、単位バイアルに切り上げる。
各サイクルの投与量調整は、体重が１日目投与から１０％以上変化した場合にのみ必要である。

投与
ＢＡ３０１１
第１相用量漸増：サイクル１の１日目のＢＡ３０１１の総投与時間は、点滴静注バッグ１００ｍＬ、注入速度６７ｍＬ／ｈｒの場合、約９０分（プラスマイナス１５分）とする。患者が輸液関連反応を経験しない限り、その後のすべての投与について、総投与時間は１００ｍＬで約６０（プラスマイナス１５）分、輸液速度は１００ｍＬ／時であるべきである。
第１相用量拡大試験：ＢＡ３０１１の総投与時間は、患者が輸液関連反応を経験しない限り、サイクル１の１日目は約６０分（プラスマイナス１５分）、それ以降の投与は約３０分（プラスマイナス１５分）とする。
第２相試験：ＢＡ３０１１の投与時間は、１サイクルの１日目以降のすべての点滴で約３０分（プラスマイナス１５分）とする。
Ｂａ３０１１は静脈内プッシュまたはボーラス投与してはならない。 ＢＡ３０１１は、非塩ビ生理食塩水バッグおよび輸液チューブセットのみを使用して、専用の静脈ラインから投与されるべきである。ＢＡ３０１１は、同じ生理食塩水バッグ内で他の薬剤と混合することはできない。
ＢＡ３０１１の高用量レベルで用量制限性の好中球減少症が観察された後、第１相試験の患者には、ＢＡ３０１１の１日目の点滴後４８～７２時間の間にペグフィルグラスチムまたはフィルグラスチム（またはバイオシミラー）の投与が必要となる。ＢＡ３０１１の骨髄抑制の可能性を考慮すると、好中球の毒性が少なくともグレード１、または予防的にペグフィルグラスチムまたはフィルグラスチムを投与された患者についてはグレード２に回復するまで、患者に点滴を行わないことが特に重要である。
ニボルマブ
第２相試験のみ：併用療法を受けるために登録された患者は、ＢＡ３０１１とニボルマブを併用する。（すなわち、１８歳以上の患者：２４０ｍｇ Ｑ２Ｗ；１２～１７歳の患者：３ｍｇ／ｋｇ Ｑ２Ｗ 静注）（Ｄａｖｉｓ ２０２０）。患者のニボルマブ投与量は、試験期間中同じであるべきである。
ＢＡ３０１１とニボルマブを同日に投与する場合、輸液バッグとフィルターはそれぞれ別のものを使用しなければならない。ニボルマブが最初に投与される。２回目の点滴は必ずＢＡ３０１１とし、ニボルマブ点滴終了後少なくとも３０分後に投与する。ニボルマブは３０分の点滴静注で投与する。ニボルマブの投与に関する詳細な指示は、ＯＰＤＩＶＯ（登録商標）（ニボルマブ）の処方情報に記載されている。

患者数
第１相試験の用量漸増では、コホートの拡大やＢＡ３０１１の忍容性に応じて、約３５～７８人のＤＬＴ評価可能な進行固形腫瘍患者を治療する。各コホートには、単一患者コホートを除き、最低３人、最高６人の患者が必要となる。最低６人の患者がＭＴＤで登録される。第１相用量拡大は、Ａｘｌ発現の進行固形腫瘍患者約３０人を追加して実施される。第２相試験では、ＢＡ３０１１単剤療法群にＡｘｌ発現患者（ＴｍＰＳ７０以上）を最低約７０人（最大７つの肉腫サブタイプ群から各１０人の進行性難治性肉腫患者）、併用療法群（ＢＡ３０１１とＰＤ－１併用）にＡｘｌ発現患者（ＴｍＰＳ７０以上）を約２０人（ＣＤ２０陽性患者１０人、ＣＤ２０陰性患者１０人）登録する。中間解析で認められた有効性によっては、さらに約１５０人の患者を追加登録する可能性がある。
治療割り当て
第１相用量漸増期間中、患者は表１６および図１８に概説されるように、ＢＡ３０１１の用量レベルが漸増するコホートに割り付けられる。ＢＡ３０１１は、各コホートに割り当てられた用量レベルに従って、３週間ごとに１回（１Ｑ３Ｗ）または２回（２Ｑ３Ｗ）、それぞれ２１日サイクルの１日目のみ、または１日目と８日目に点滴静注される。ＢＡ３０１１の開始用量レベルは０．３ ｍｇ／ｋｇ １Ｑ３Ｗである。次の指定用量レベルへの漸増は、ＭＴＤが確認されるまで続けられる。第１相用量拡大は、患者が第２相（例えば、ＲＰ２Ｄ）で受けるＢＡ３０１１の用量および治療スケジュールの決定を支援するために設計されており、ＰＳＣが適切と判断したＢＡ３０１１の用量およびレジメンで、Ａｘｌ発現進行性固形腫瘍患者を対象に実施される。スポンサーは、指定されたメディカルモニターおよび治験責任医師と協議の上、データの全体像に基づいてＲＰ２Ｄを決定し、ＭＴＤ を超えないようにする責任を負う。第１相試験のデータに基づき、第２相試験におけるＢＡ３０１１の用量は１．８ｍｇ／ｋｇＱ２Ｗである。Ｑ２Ｗ投与レジメンの根拠はセクション１．６に詳述されている。第２相試験では、登録基準を満たした患者をＢＡ３０１１の単独投与またはニボルマブとの併用投与に割り当てる。Ｂ細胞浸潤を示す腫瘍（ＣＤ２０ ＩＨＣアッセイによる）を有する患者は、ＢＡ３０１１とニボルマブの併用投与に優先的に割り付けられる。

ペグフィルグラスチム投与：
第１相試験：
－ ＢＡ３０１１の高用量レベルで用量制限性の好中球減少症が観察された後、ペグフィルグラスチム（またはバイオシミラー）の投与は、適用される添付文書に従って承認された用量で、ＢＡ３０１１の各第１日目の点滴後４８～７２時間の間に行われなければならない。
－ ２Ｑ３Ｗスケジュールで投与される患者（すなわち、１日目と８日目にＢＡ３０１１を投与される患者）については、各サイクルの１日目投与後２４時間以内にフィルグラスチムを投与し、その後９日目にペグフィルグラスチム（またはバイオシミラー）を任意で投与することが認められる。標準的な化学療法と比較して、抗体と結合したＭＭＡＥの放出速度が遅いため、各サイクルの第１日目の投与後４８～７２時間の間にフィルグラスチムを開始することが推奨される。
ペグフィルグラスチムに対するアレルギーの場合は、フィルグラスチム（またはバイオシミラー）で代用できる。
３サイクル目からは、ペグフィルグラスチムまたはフィルグラスチムの自己投与が可能となる。
第２相試験：
－ ペグフィルグラスチムまたはフィルグラスチム（またはバイオシミラー）は、第２相試験期間中は必要ないが、治験責任医師の判断により、投与前の好中球数が少ない患者に対して予防的に、または好中球減少症の発生を治療するために使用することができる。
ＢＡ３０１１投与前のＡＮＣ値が３０００／μＬまたは３×１０９／Ｌ未満の患者は、好中球減少症のリスクが高まる可能性がある。これらの患者には、ＢＡ３０１１投与４８～７２時間後に予防的にペグフィルグラスチムまたはフィルグラスチム（またはバイオシミラー）を投与することが推奨される。

実施例１４ ＣＡＢ－ＡＸＬ－ＡＤＣであるＭｅｃｂｏｔａｍａｂ Ｖｅｄｏｔｉｎ（ＢＡ３０１１）の進行肉腫患者を対象とした第１相試験の安全性および有効性の中間解析結果
以下の試験では、進行肉腫またはその他の固形癌患者におけるＢＡ３０１１の安全性プロファイル、推奨第２相用量（ＲＰ２Ｄ）、および抗腫瘍活性の予備的証拠が確認された。
方法
ＢＡ３０１１－００１試験は、現在進行中のＢＡ３０１１の多施設共同非盲検第１／２相ヒト初回臨床試験である。
第１相（ＮＣＴ０３４２５２７９）では、ＢＡ３０１１を３週間ごとに１回（Ｑ３Ｗ）または２回（２Ｑ３Ｗ）、静脈内注射で投与された。
第２相（ＮＣＴ０３４２５２７９）は、ＡＸＬ発現腫瘍膜パーセントスコア（ＴｍＰＳ）が５０以上の１２歳以上の進行性難治性肉腫で、測定可能な病変を有し、進行が記録されている患者を対象に、ＢＡ３０１１の単独投与およびＰＤ－１阻害剤との併用投与の有効性と安全性を評価するオープンラベルの進行中の試験である。
結果
患者の転帰とベースライン人口統計
患者の年齢中央値（範囲）は５８．０歳（２４－８０歳）、女性５７．７％、白人８４．６％、ＥＣＯＧスコア０が６９．２％、１が３０．８％であった。
第１相の肉腫患者は平均して４種類以上の前治療を受けていた。
第１相試験では、肉腫患者２６名を含む６０名の患者にＢＡ３０１１が０．３～３．０ｍｇ／ｋｇ Ｑ３Ｗ、１．２～１．８ｍｇ／ｋｇ ２Ｑ３Ｗの用量で投与された。
２２７名の肉腫患者が、ＩＨＣアッセイの検証作業の一部として、また第１相および第２相試験においてＡＸＬ腫瘍膜発現を検査され、約５０％がＴｍＰＳ≧７０であった。ＡＸＬは、試験したすべての肉腫の亜型に一貫した割合で発現しているようであった。
安全性
正常なＡＸＬ発現組織に対する臨床的に意味のある標的上毒性は観察されず、便秘の発生率は低かった。用量制限毒性は、可逆的好中球減少症を含む、試験された最高用量におけるモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）コンジュゲート関連毒性に限定された。
第１相の肉腫患者において、死亡に至る治療関連有害事象（ＴＥＡＥ）は認められず、２例（７．７％）の治療関連ＴＥＡＥが治療中止に至った（表２０）。
１１名の患者にグレード３に関連するＴＥＡＥがみられ、１名の患者にグレード４の好中球減少症がみられたが、これらは可逆的骨髄抑制、一過性の肝酵素上昇、代謝障害など、概してＭＭＡＥに関連するものであった（表２１）。
１サイクル目の治療中にみられた一過性のグレード１～２の肝酵素上昇は、一般に再治療時には再発しなかった。クレアチニン値は治療期間中、概して変化しなかった。
第１相の肉腫患者において、治療に関連するＳＡＥ（グレード２の肝性脳症）が１名に発生した（表２０）。
ＰＫモデリングを含む第１相データの統合的評価に基づいて、ＲＰ２Ｄは１．８ ｍｇ／ｋｇ Ｑ２Ｗと決定された。
ＢＡ３０１１のＰＫプロファイルはほぼ用量比例であり、第１相では半減期が約４日と決定された。
有効性
ＢＡ３０１１の抗腫瘍活性は、肉腫患者におけるＡＸＬ腫瘍膜発現レベルの高さと相関していた。
ベースラインのＴｍＰＳが７０以上で、１．８ｍｇ／ｋｇ（Ｑ３ｗまたは２Ｑ３ｗ）を投与された治療抵抗性の肉腫患者７名のうち、４名に部分奏効（図２０、２２、２３）が確認された。
図２０に示す対象
本試験の肉腫患者における治療効果の延長は、図２４で示された。
結論
本試験の予備的な有効性および安全性の結果から、ＢＡ３０１１単剤療法のベネフィット・リスク・プロファイルは、肉腫患者において良好であると思われた。
臨床的に意味のある標的上（on-target）毒性は認められなかった。第１相試験の肉腫患者において、抗腫瘍活性のエビデンスが観察され、ＡＸＬ腫瘍膜発現の高さは奏効と相関していた。ＡＸＬは、試験したすべての肉腫の亜型に一貫した割合で発現しているようであった。
本発明の構造および機能の詳細とともに、本発明の多くの特徴および利点が前述の説明に記載されているが、しかしながら、本開示は例示的なものに過ぎず、特に付属の特許請求の範囲が表現されている用語の広範な一般的な意味によって示される完全な範囲において、本発明の原理内の部品の形状、サイズおよび配置に関する事項で、詳細な変更が行われ得ることを理解されたい。
本明細書に言及されるすべての文書は、参照によりそれらの全体が本明細書に援用されるか、代替的にそれらが特に信頼される開示を提供する。出願人は、開示された実施形態を公衆に捧げることを意図しておらず、開示された修正または変更が文字通り特許請求の範囲内に含まれない可能性がある限り、それらは均等論の下で本発明の一部であるとみなされる。

Claims (22)

  1. Ａｘｌ発現腫瘍を治療する方法であって、そのような治療を必要とするヒト対象に、ｍＡｂＢＡ３０１－切断可能リンカー－ＭＭＡＥｎおよび薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を投与することを含み、
    医薬組成物は、２１日ごとに１日目および８日目にヒト対象の体重の１．８ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内注入により投与され、
    ｍＡｂＢＡ３０１は、配列番号１４のｈｃＣＤＲ１、配列番号１５のｈｃＣＤＲ２および配列番号１６のｈｃＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに配列番号１７のｌｃＣＤＲ１、配列番号１８のｌｃＣＤＲ２および配列番号１９のｌｃＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を有する抗体または抗体断片であり、
    ｎは（１と４を含む）１～４の整数である、方法。
  2. 重鎖可変領域が配列番号２０を含み、軽鎖可変領域が配列番号２１を含む、請求項１に記載の方法。
  3. 切断可能リンカーがｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢである、請求項１に記載の方法。
  4. Ａｘｌ発現腫瘍が肉腫、腺癌、または非小細胞肺癌である、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。
  5. Ａｘｌ発現腫瘍が肉腫である、請求項４に記載の方法。
  6. プログラム死受容体－１（ＰＤ－１）遮断抗体を投与することをさらに含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
  7. Ａｘｌ発現腫瘍が、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、または少なくとも９５の腫瘍膜Ｐスコアを有する、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。
  8. Ａｘｌ発現腫瘍が、少なくとも７０の腫瘍膜Ｐスコアを有する、請求項７に記載の方法。
  9. 顆粒球コロニー刺激因子またはその類似体を投与することをさらに含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。
  10. 薬学的に許容される担体が、ｐＨ６．０を有し、２０ｍＭヒスチジン－ＨＣｌ、７０ｍｇ／ｍＬスクロースおよび０．５ｍｇ／ｍＬポリソルベート８０を含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。
  11. ｎが４である、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。
  12. Ａｘｌ発現腫瘍を治療する方法であって、そのような治療を必要とするヒト対象に、ｍＡｂＢＡ３０１－切断可能リンカー－ＭＭＡＥｎおよび薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を投与することを含み、
    医薬組成物は、２１日ごとにヒト対象の体重の１．８ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内注入により投与され、
    ｍＡｂＢＡ３０１は、配列番号１４のｈｃＣＤＲ１、配列番号１５のｈｃＣＤＲ２および配列番号１６のｈｃＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに配列番号１７のｌｃＣＤＲ１、配列番号１８のｌｃＣＤＲ２および配列番号１９のｌｃＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を有する抗体または抗体断片であり、
    ｎは（１と４を含む）１～４の整数である。
  13. 重鎖可変領域が配列番号２０を含み、軽鎖可変領域が配列番号２１を含み、請求項１２に記載の方法。
  14. 切断可能リンカーがｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢである、請求項１２に記載の方法。
  15. Ａｘｌ発現腫瘍が肉腫、腺癌、または非小細胞肺癌である、請求項１２～１４のいずれか１項に記載の方法。
  16. Ａｘｌ発現腫瘍が肉腫である、請求項１５に記載の方法。
  17. プログラム死受容体－１（ＰＤ－１）遮断抗体を投与することをさらに含む、請求項１２～１４のいずれか一項に記載の方法。
  18. Ａｘｌ発現腫瘍が、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、または少なくとも９５の腫瘍膜Ｐスコアを有する、請求項１２～１４のいずれか１項に記載の方法。
  19. Ａｘｌ発現腫瘍が、少なくとも７０の腫瘍膜Ｐスコアを有する、請求項１８に記載の方法。
  20. 顆粒球コロニー刺激因子またはその類似体を投与することをさらに含む、請求項１２～１４のいずれか１項に記載の方法。
  21. 薬学的に許容される担体が、ｐＨ６．０を有し、２０ｍＭヒスチジン－ＨＣｌ、７０ｍｇ／ｍＬスクロースおよび０．５ｍｇ／ｍＬポリソルベート８０を含む、請求項１２～１４のいずれか１項に記載の方法。
  22. ｎが４である、請求項１２から１４のいずれか一項に記載の方法。
JP2023528206A 2020-11-12 2021-11-10 抗Ａｘｌ抗体、抗体断片およびそれらの免疫コンジュゲートを用いたＡｘｌ発現癌の治療方法 Pending JP2023550043A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202063113040P 2020-11-12 2020-11-12
US63/113,040 2020-11-12
PCT/US2021/058747 WO2022103811A1 (en) 2020-11-12 2021-11-10 Methods of treating axl-expressing cancers with anti-axl antibodies, antibody fragments and their immunoconjugates

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2023550043A true JP2023550043A (ja) 2023-11-30

Family

ID=81601645

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2023528206A Pending JP2023550043A (ja) 2020-11-12 2021-11-10 抗Ａｘｌ抗体、抗体断片およびそれらの免疫コンジュゲートを用いたＡｘｌ発現癌の治療方法

Country Status (10)

Country Link
EP (1) EP4243877A1 (ja)
JP (1) JP2023550043A (ja)
KR (1) KR20230107615A (ja)
CN (1) CN116635053A (ja)
AU (1) AU2021377224A1 (ja)
CA (1) CA3197822A1 (ja)
IL (1) IL302589A (ja)
MX (1) MX2023005571A (ja)
TW (1) TW202227484A (ja)
WO (1) WO2022103811A1 (ja)

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5683581B2 (ja) * 2009-06-30 2015-03-11 リサーチ ディベロップメント ファウンデーション 免疫グロブリンＦｃポリペプチド
WO2011159980A1 (en) * 2010-06-18 2011-12-22 Genentech, Inc. Anti-axl antibodies and methods of use
US20170260261A1 (en) * 2014-08-28 2017-09-14 Bioatla, Llc Conditionally Active Chimeric Antigen Receptors for Modified T-Cells
US11111505B2 (en) * 2016-03-19 2021-09-07 Exuma Biotech, Corp. Methods and compositions for transducing lymphocytes and regulating the activity thereof
US11149088B2 (en) * 2016-04-15 2021-10-19 Bioatla, Inc. Anti-Axl antibodies, antibody fragments and their immunoconjugates and uses thereof

Also Published As

Publication number Publication date
KR20230107615A (ko) 2023-07-17
EP4243877A1 (en) 2023-09-20
CA3197822A1 (en) 2022-05-19
CN116635053A (zh) 2023-08-22
WO2022103811A1 (en) 2022-05-19
MX2023005571A (es) 2023-07-31
IL302589A (en) 2023-07-01
TW202227484A (zh) 2022-07-16
AU2021377224A1 (en) 2023-06-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7161783B2 (ja) 抗Ａｘｌ抗体、抗体断片およびそれらの免疫コンジュゲートならびにそれらの使用
JP7432253B2 (ja) 抗Ｒｏｒ２抗体、抗体断片、それらの免疫コンジュゲートおよびそれらの使用
JP7445995B2 (ja) 抗ｃｔｌａ４抗体、抗体断片、それらの免疫コンジュゲートおよびそれらの使用
JP2023550043A (ja) 抗Ａｘｌ抗体、抗体断片およびそれらの免疫コンジュゲートを用いたＡｘｌ発現癌の治療方法
TW202342537A (zh) 使用條件性活性抗ror2抗體-藥物結合物之癌症治療
JP2024073454A (ja) 抗ｃｔｌａ４抗体、抗体断片、それらの免疫コンジュゲートおよびそれらの使用
NZ791066A (en) Anti-ctla4 antibodies, antibody fragments, their immunoconjugates and uses thereof