JP2023548116A - ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原の検出のためのハイスループットイムノアッセイおよび方法 - Google Patents
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原の検出のためのハイスループットイムノアッセイおよび方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2023548116A JP2023548116A JP2023526005A JP2023526005A JP2023548116A JP 2023548116 A JP2023548116 A JP 2023548116A JP 2023526005 A JP2023526005 A JP 2023526005A JP 2023526005 A JP2023526005 A JP 2023526005A JP 2023548116 A JP2023548116 A JP 2023548116A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cov
- sars
- antibody
- nucleocapsid
- detection
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 51
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 34
- 241001678559 COVID-19 virus Species 0.000 title claims description 42
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 title claims description 24
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title abstract description 28
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title abstract description 28
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title abstract description 27
- 101001024637 Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 Nucleoprotein Proteins 0.000 claims abstract description 32
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 36
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 25
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 claims description 16
- 241000315672 SARS coronavirus Species 0.000 claims description 9
- 238000012203 high throughput assay Methods 0.000 claims description 8
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 claims description 8
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 8
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 claims description 7
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 7
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims description 7
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 7
- 108090001074 Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 claims description 5
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 claims description 5
- 241000494545 Cordyline virus 2 Species 0.000 claims description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 abstract description 8
- 238000010586 diagram Methods 0.000 abstract 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 13
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 201000003176 Severe Acute Respiratory Syndrome Diseases 0.000 description 5
- 238000012733 comparative method Methods 0.000 description 5
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- 208000025721 COVID-19 Diseases 0.000 description 4
- 108010089610 Nuclear Proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000007999 Nuclear Proteins Human genes 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- 239000006163 transport media Substances 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 2
- 238000002869 basic local alignment search tool Methods 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 239000012992 electron transfer agent Substances 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N luminol Chemical class O=C1NNC(=O)C2=C1C(N)=CC=C2 HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 239000006174 pH buffer Substances 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 2
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 2
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 108091006197 SARS-CoV-2 Nucleocapsid Protein Proteins 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 150000008061 acetanilides Chemical class 0.000 description 1
- 230000003466 anti-cipated effect Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 210000003928 nasal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000007039 two-step reaction Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
- G01N2333/08—RNA viruses
- G01N2333/165—Coronaviridae, e.g. avian infectious bronchitis virus
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2469/00—Immunoassays for the detection of microorganisms
- G01N2469/10—Detection of antigens from microorganism in sample from host
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本明細書で開示されるのは、ハイスループット法を用いた、臨床サンプル中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシド抗原を迅速に検出するための方法、試薬および装置である。【選択図】なし
Description
（関連出願の相互参照）
この出願は、２０２１年１０月２８日に出願された米国仮特許出願第６３／１０６，８３０に基づき優先権を主張し、その内容全体が参照により本明細書に援用される。
この出願は、２０２１年１０月２８日に出願された米国仮特許出願第６３／１０６，８３０に基づき優先権を主張し、その内容全体が参照により本明細書に援用される。
（技術分野）
本開示は、一般に、ウイルス抗原の検出のためのイムノアッセイおよび関連方法に関する。より具体的には、本開示は、自動化および半自動化されたハイスループットイムノアッセイを用いたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス抗原検出に関する。
本開示は、一般に、ウイルス抗原の検出のためのイムノアッセイおよび関連方法に関する。より具体的には、本開示は、自動化および半自動化されたハイスループットイムノアッセイを用いたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス抗原検出に関する。
２０２０年３月１１日、世界保健機関は、コロナウイルス感染症（ＣＯＶＩＤ－１９として知られるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）大流行をパンデミックと宣言した。２０１９年１２月下旬に中国の武漢で最初に疾患が報告されてから、世界２１６以上の国および地域に広がっている。ウイルスの迅速な検出は、ウイルスの拡散を封じ込めるのに最も重要なツールである。抗原の検出により、疫学者および公衆衛生当局は、無症状であっても疾患を拡散する可能性がある個人を高レベルの信頼性で確認することができる。しかし、何万人ものキャリアの疑いのある者、有症者、および感染集団内の無症状者を検査することは、手動の方法およびラテラルフロー装置等の迅速検査を用いて達成することはできない。したがって、Ｏｒｔｈｏ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＶＩＴＲＯＳ（登録商標）（０８８６９、ニュージャージー、ラリタン、ＵＳ Ｒｏｕｔｅ２０２、デラウェア１００１のＣｒｉｍｓｏｎ Ｕ．Ｓ．Ａｓｓｅｔｓ ＬＬＣ有限責任会社の登録商標）イムノアッセイ製品等の自動および半自動の免疫診断装置を用いた高特異性、高感度のイムノアッセイに対する差し迫った需要がある。
本開示は、臨床サンプル中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原を検出するのに有用なイムノアッセイを提供する。
したがって、本明細書で開示されるのは、ハイスループットアッセイを行うことができるイムノアッセイシステムを提供すること；患者サンプルを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドを認識する捕捉抗体、捕捉抗体と異なる位置でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドを認識する検出抗体、ならびに捕捉抗体、検出抗体、およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドを含む複合体を検出する手段と反応させること；および捕捉抗体、検出抗体、およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドを含む複合体を検出すること；を含み、反応および検出のステップはイムノアッセイシステムで行われる、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドの存在についてサンプルをハイスループットで検査する方法である。
また、本明細書で開示されるのは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドを認識する捕捉抗体およびそれに会合した固体支持体；捕捉抗体と異なる位置でＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドを認識する検出抗体；捕捉抗体、検出抗体、およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドを含む複合体を検出する手段；およびアッセイを行うための取り扱い説明書を含む、ハイスループットイムノアッセイシステムで、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシド存在について患者サンプルをハイスループットで検査をするためのキットである。
いくつかの実施形態では、ハイスループットアッセイを行うことができるイムノアッセイシステムは、Ｏｒｔｈｏ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＶＩＴＲＯＳ（登録商標）である。
いくつかの実施形態では、捕捉抗体は、固体支持体に会合している。いくつかの実施形態では、捕捉抗体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドに特異的なモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、捕捉抗体は、ウサギモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、検出抗体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドに特異的なモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、検出抗体は、マウスモノクローナル抗体である。
いくつかの実施形態では、捕捉抗体および検出抗体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１以外のコロナウイルスと交差反応しない。いくつかの実施形態では、検出抗体はコンジュゲートであり、各コンジュゲートは約１００個の西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）分子および２５個のイムノグロブリン分子を含む。
いくつかの実施形態では、患者サンプルは、鼻咽頭ぬぐい液または前鼻腔ぬぐい液である。
主題の開示のさらなる特徴および利点は、添付の図面と併せて考えれば以下の説明から明らかになるであろう。
本発明の非限定的な実施形態は、添付の図を参照して例として説明されるが、これは模式図であり、縮尺通りに描かれることを意図していない。図中、図示された同一またはほぼ同一の各構成要素は、通常、単一の数字により表される。明瞭化のために、すべての図中の全ての構成要素が表示されていないし、当業者が本発明を理解するために図示が必要でない場合、本発明の各実施形態の全ての構成要素が示されてもいない。
本明細書で開示されるのは、ＣＯＶＩＤ－１９として知られる疾患に関連するウイルスであるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染した、または感染した疑いのある患者の鼻咽頭ぬぐい液サンプル、前鼻腔ぬぐい液サンプル等の鼻腔ぬぐい液、および唾液サンプルを含む患者サンプル中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスの存在を検出するためのハイスループットアッセイである。
ハイスループットとは、ロボット、データ処理／制御ソフトウェア、液体操作装置、高感度検出器を用いた、生物学および化学の分野で使用される方法を意味し、ハイスループットスクリーニングにより、臨床検査室の科学者は、１時間または１日等の短時間で、数百、数千、または数百万もの化学的、遺伝学的、または薬学的な検査を迅速に行うことができる。このプロセスを通じて、疾患プロセスに関わる活性化合物、抗体、または遺伝子を迅速に同定することができる。
本開示の実施形態では、アッセイは、ＶＩＴＲＯＳ（登録商標）システム（Ｏｒｔｈｏ－Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、ラリタン、ＮＪ）等のハイスループットアッセイ装置で行う。内容全体が参照により本明細書に援用され、イムノアッセイおよび方法に関して教示する。米国特許第７，２５０，３０３号明細書を参照されたい。ハイスループット装置の非限定的な例には、ＶＩＴＲＯＳ（登録商標）ＸＴ７６００および５６００Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、ＶＩＴＲＯＳ（登録商標）３６００Ｉｍｍｕｎｏｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｓｙｓｔｅｍ、およびその同等物が含まれる。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２についてサンプルを検査する方法のひとつは、リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）を用いてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２リボ核酸（ＲＮＡ）の存在を検出することである。別の方法は、ウイルスに関連するタンパク質抗原を検出することである。いくつかのそのような検査は、インフルエンザ、ＲＳＶ、またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１等の他の呼吸器系ウイルスについて検査を発展させてきた診断会社により紹介されてきた。ヌクレオカプシド抗原は独特で、比較的変異に安定的で、かつ多いコピー数で存在するため、抗原検査は一般的にヌクレオカプシド抗原を検出する。コピー数（各ウイルス粒子に存在するタンパク質の数）は、１ウイルスあたり約１０００個の核タンパク質分子であると考えられる。核タンパク質はヌクレオカプシドタンパク質としても知られている。
鼻咽頭ぬぐい液または前鼻腔ぬぐい液等の上気道検体は、診断試験に有用である。いくつかの実施形態では、唾液サンプルもＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原の検出のために有用である。
本発明者らは、溶解バッファーで手動での前処理ステップ、続いて化学発光検出を使用するＶＩＴＲＯＳ（登録商標）Ｉｍｍｕｎｏｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ解析装置で試験することを含む検査を開発した。ＶＩＴＲＯＳ（登録商標）アッセイのプロトコールは、前処理プロトコールでウイルスを溶解した後に、２ステップの免疫アッセイを使用して抗原を検出する。免疫測定法は、捕捉抗体および検出抗体を含む抗体ペアを使用し、両抗体はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２核タンパク質に特異的である。ある実施形態では、２つの抗体はモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体であってもよく、マウス、ラット、ヤギ、ウサギから選択される種、またはモノクローナル抗体を産生することができる他の任意の種由来であってもよい。いくつかの実施形態では、捕捉抗体はウサギ抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２核タンパク質モノクローナル抗体であり、検出抗体はマウス抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２核タンパク質モノクローナル抗体であるが、それぞれの抗体の由来となる種は限定されない。いくつかの実施形態では、抗体は組換え発現システムから産生される。いくつかの実施形態では、抗体はＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１コロナウイルスと交差反応し得るが、他のコロナウイルスとは交差反応しない。
アッセイ試薬の特徴は、検出シグナルを増幅するためのポリ西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）検出抗体コンジュゲートの使用である。各コンジュゲート分子は、約１００個のＨＲＰ分子および２５個のイムノグロブリン分子を含むように見積もられているため、各結合事象は通常のＨＲＰコンジュゲートの最大２０倍のシグナルを生成する。典型的なＨＲＰコンジュゲートは、２～５個のＨＲＰ分子に共有結合した１個のイムノグロブリン分子を含む。
本開示のアッセイは、２段階反応を含む免疫測定技術である。第１段階では、サンプル中に存在するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシド抗原が、マイクロウェル上にコーティングされたモノクローナル抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２と結合する。結合しなかったサンプルは洗浄により除去される。第２段階では、ＨＲＰ標識モノクローナル抗ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２がコンジュゲート試薬に添加される。コンジュゲートは、第１段階でウェルに捕捉された任意のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドと特異的に結合する。結合しなかったコンジュゲートは、その後の洗浄ステップで除去される。結合したＨＲＰコンジュゲートは、発光反応により測定される。発光を生成する基質（ルミノール誘導体および過酸塩）を含む試薬および電子移動剤をウェルに加える。結合したコンジュゲート中のＨＲＰは、ルミノール誘導体の酸化を触媒し、光を発生させる。電子移動剤（置換されたアセトアニリド）は、生成される光のレベルを増加し、その放出を長くする。サンプルに存在するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原の量が増加するにつれて、シグナルからカットオフまでの数値が増加する。
（実施例１．アッセイ手順）
アッセイ手順は、以下および図１で説明する。
１．患者から鼻腔または鼻咽頭ぬぐい液を採取し、最大３日間の短期間の保存のために試験管内の１～３ｍＬウイルス輸送用培地（ＶＴＭ）に入れる。
２．ぬぐい液を中に含む４００μＬのＶＴＭ液と１０×溶解バッファー１００μＬとの混合によりサンプルを前処理して、ウイルスを溶解させる。ＶＴＭ／溶解バッファー混合物をボルテックスし、その後迅速検査のためにＶＩＴＲＯＳ（登録商標）解析装置に入れる。
３．解析装置で、以下のプロトコールを実行する。
ａ．コーティングされたマイクロウェル内で８０μＬのサンプル（ＶＴＭ４部＋１０×溶解バッファー１部）および２０μＬのアッセイ試薬（ｐＨ緩衝剤とタンパク質を含む希釈剤）を混合する。
ｂ．３７℃で３０分間インキュベートする。
ｃ．ウェルを吸引し、洗浄する。
ｄ．１２５μＬのＨＲＰコンジュゲート試薬（タンパク質と共にｐＨ緩衝剤中で検出抗体に複合体化したポリＨＲＰを含む）を加える。
ｅ．３７℃で８分間インキュベートする。
ｆ．１００μＬのシグナル試薬（５０μＬのＳＲ－Ａ＋５０μＬのＳＲ－Ｂ）を加える。
ｇ．５分間インキュベートし、その後ルミノメーターでシグナルを読み取る。
アッセイ手順は、以下および図１で説明する。
１．患者から鼻腔または鼻咽頭ぬぐい液を採取し、最大３日間の短期間の保存のために試験管内の１～３ｍＬウイルス輸送用培地（ＶＴＭ）に入れる。
２．ぬぐい液を中に含む４００μＬのＶＴＭ液と１０×溶解バッファー１００μＬとの混合によりサンプルを前処理して、ウイルスを溶解させる。ＶＴＭ／溶解バッファー混合物をボルテックスし、その後迅速検査のためにＶＩＴＲＯＳ（登録商標）解析装置に入れる。
３．解析装置で、以下のプロトコールを実行する。
ａ．コーティングされたマイクロウェル内で８０μＬのサンプル（ＶＴＭ４部＋１０×溶解バッファー１部）および２０μＬのアッセイ試薬（ｐＨ緩衝剤とタンパク質を含む希釈剤）を混合する。
ｂ．３７℃で３０分間インキュベートする。
ｃ．ウェルを吸引し、洗浄する。
ｄ．１２５μＬのＨＲＰコンジュゲート試薬（タンパク質と共にｐＨ緩衝剤中で検出抗体に複合体化したポリＨＲＰを含む）を加える。
ｅ．３７℃で８分間インキュベートする。
ｆ．１００μＬのシグナル試薬（５０μＬのＳＲ－Ａ＋５０μＬのＳＲ－Ｂ）を加える。
ｇ．５分間インキュベートし、その後ルミノメーターでシグナルを読み取る。
コーティングされたマイクロウェルは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２核タンパク質に対するビオチン標識捕捉抗体でオーバーコートされた、ストレプトアビジンがコーティングされたウェルを含む。オーバーコートのステップでは、１ｍｇ／ｋｇのビオチンコンジュゲート濃度で、１４０μＬ／ウェルのコーティング溶液を適用する。一晩のインキュベーションの後ウェルを洗浄し、その後タンパク質－糖溶液（ＴＳＳＢ）でオーバーコートし、その後乾燥し、試薬パックに詰める。
アッセイは、－２０℃で凍結保存された３％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含むリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中に調製された組換えＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシド抗原を用いて校正される。
（実施例２．検出限界の決定）
プールした鼻腔洗浄液に熱不活性化したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスをさまざまな希釈濃度で加えた液を評価することにより検出限界（ＬｏＤ）を決定した。５０μＬのウイルス粒子溶液を乾燥ぬぐい液に加え、その後ぬぐい液を２ｍＬの輸送用培地に入れた。ＶＩＴＲＯＳ（登録商標）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原検査を用いて、溶出ウイルス粒子を含む輸送用培地を繰り返し試験した（ｎ＝２０）。ＬｏＤは、反応ありの結果が２０回中最低１９回再現される最低ウイルス濃度として定義される。試験は、７種の輸送用培地のタイプにわたって行われ、ＬｏＤは１ｍＬあたり５．０×１０２ＴＣＩＤ５０（５０％組織培養感染量）～１ｍＬあたり３．０×１０３ＴＣＩＤ５０の範囲であった（表１）。
プールした鼻腔洗浄液に熱不活性化したＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスをさまざまな希釈濃度で加えた液を評価することにより検出限界（ＬｏＤ）を決定した。５０μＬのウイルス粒子溶液を乾燥ぬぐい液に加え、その後ぬぐい液を２ｍＬの輸送用培地に入れた。ＶＩＴＲＯＳ（登録商標）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原検査を用いて、溶出ウイルス粒子を含む輸送用培地を繰り返し試験した（ｎ＝２０）。ＬｏＤは、反応ありの結果が２０回中最低１９回再現される最低ウイルス濃度として定義される。試験は、７種の輸送用培地のタイプにわたって行われ、ＬｏＤは１ｍＬあたり５．０×１０２ＴＣＩＤ５０（５０％組織培養感染量）～１ｍＬあたり３．０×１０３ＴＣＩＤ５０の範囲であった（表１）。
（実施例３．鼻咽頭検体での臨床性能の特徴）
発症の７日以内にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスに接触した疑いのある患者からの残余サンプルを用いて、ＶＩＴＲＯＳ（登録商標）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原検査の臨床性能の特徴を評価した。サンプルは、以下の２つの臨床試験の間に採取した。
発症の７日以内にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスに接触した疑いのある患者からの残余サンプルを用いて、ＶＩＴＲＯＳ（登録商標）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原検査の臨床性能の特徴を評価した。サンプルは、以下の２つの臨床試験の間に採取した。
鼻咽頭サンプルは、採取時と試験時の間、冷凍保存した。ＦＤＡ緊急使用許可の、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の検出のための高感度リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ）アッセイをこれらの試験の比較法として使用した。
試験は、ＲＴ－ＰＣＲ試験の結果を知らないオペレーターにより行われた。ＶＩＴＲＯＳ（登録商標）試験のそれぞれの日に、ＶＩＴＲＯＳ（登録商標）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ａｎｔｉｇｅｎ Ｃｏｎｔｒｏｌを用いて外部コントロール試験を行った。ＣＯＶＩＤ－１９が疑われる個々の症状のある患者（発症から７日以内）から採取した１０５の鼻咽頭検体で、ＶＩＴＲＯＳ（登録商標）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原検査の性能を確立し、ペアのＮＰぬぐい液でのＲＴ－ＰＣＲと比較した。
アッセイ性能とサイクル閾値との相関のより良い理解のために、ＶＩＴＲＯＳ（登録商標）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原検査の性能は、比較法のサイクル閾値（Ｃｔ）数で階層化した陽性結果を収集し、評価した。
ＲＴ－ＰＣＲアッセイ間でＣＴ値は標準化しておらず、アッセイ間で比較することはできない。ＣＴ値は、患者のウイルス量、ヒトがどれだけの感染性であり得るか、またはいつヒトが隔離もしくは検疫から解放され得るかを決定するために使用されるべきではない。したがって、ＶＩＴＲＯＳ（登録商標）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原検査での陰性結果は、個人に感染性がないことを立証せず、隔離または感染制御の判断のために使用されるべきではない。すべての陰性結果は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の診断のための推定であり、分子ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２アッセイで確認する必要があるかもしれない。
（実施例４．前鼻腔検体での臨床性能の特徴）
発症の７日以内にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスに接触した疑いのある患者からの残余サンプルを用いて、ＶＩＴＲＯＳ（登録商標）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原検査の臨床性能の特徴を評価した。サンプルは、４１名の女性患者および１１１名の男性患者から採取した。６サンプルは２１歳未満の患者のものであり、１１６サンプルは２１～６０歳の患者のものであり、３０サンプルは６０歳超の患者のものであった。鼻腔サンプルは、採取時と試験時の間、冷凍保存した。ＦＤＡ緊急使用許可の、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の検出のための高感度ＲＴ－ＰＣＲアッセイをこの試験の比較法として使用した。
発症の７日以内にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスに接触した疑いのある患者からの残余サンプルを用いて、ＶＩＴＲＯＳ（登録商標）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原検査の臨床性能の特徴を評価した。サンプルは、４１名の女性患者および１１１名の男性患者から採取した。６サンプルは２１歳未満の患者のものであり、１１６サンプルは２１～６０歳の患者のものであり、３０サンプルは６０歳超の患者のものであった。鼻腔サンプルは、採取時と試験時の間、冷凍保存した。ＦＤＡ緊急使用許可の、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の検出のための高感度ＲＴ－ＰＣＲアッセイをこの試験の比較法として使用した。
試験は、ＲＴ－ＰＣＲ試験の結果を知らないオペレーターにより行われた。ＶＩＴＲＯＳ（登録商標）試験のそれぞれの日に、ＶＩＴＲＯＳ（登録商標）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ａｎｔｉｇｅｎ Ｃｏｎｔｒｏｌを用いて外部コントロール試験を行った。ＣＯＶＩＤ－１９が疑われる個々の症状のある患者（発症から７日以内）から採取した１５２の鼻腔検体で、ＶＩＴＲＯＳ（登録商標）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原検査の以下の性能を確立し、ペアの前鼻腔ぬぐい液でのＲＴ－ＰＣＲと比較した。ＮＰぬぐい液でのペアのＲＴ－ＰＣＲと比較した性能も以下の表５Ａ～Ｂに示す。
アッセイ性能とサイクル閾値との相関のより良い理解のために、ＶＩＴＲＯＳ（登録商標）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原検査の性能は、比較法のサイクル閾値（Ｃｔ）数で階層化した陽性結果を収集し、評価した（表６）。
（実施例５．ＶＩＴＲＯＳ（登録商標）鼻腔対ＲＴ－ＰＣＲ鼻咽頭の結果の臨床的一致度）
開示のＶＩＴＲＯＳ（登録商標）アッセイの、比較対象であるＲＴ－ＰＣＲ鼻咽頭の結果と比較した一致度を以下の表７Ａ～Ｂに示す。
開示のＶＩＴＲＯＳ（登録商標）アッセイの、比較対象であるＲＴ－ＰＣＲ鼻咽頭の結果と比較した一致度を以下の表７Ａ～Ｂに示す。
異なるサンプル型でのアッセイ性能とサイクル閾値との相関のより良い理解のために、ＶＩＴＲＯＳ（登録商標）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原検査の性能は、鼻咽頭サンプルでの比較法Ｃ）数で階層化した鼻腔サンプルでの陽性結果を収集し、評価した（表８）。
（実施例６．交差反応アッセイ）
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－存在下および非存在下で疑わしいサンプル用いて、微生物の交差反応の可能性についてＶＩＴＲＯＳ（登録商標）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原検査を評価した。交差反応の可能性がある微生物は、細菌については１０ＣＦＵ／ｍｌ以上、ウイルスについては１０ｐｆｕ／ｍｌ以上の濃度で溶液に入れた。結果を以下の表９にまとめる。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－存在下および非存在下で疑わしいサンプル用いて、微生物の交差反応の可能性についてＶＩＴＲＯＳ（登録商標）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原検査を評価した。交差反応の可能性がある微生物は、細菌については１０ＣＦＵ／ｍｌ以上、ウイルスについては１０ｐｆｕ／ｍｌ以上の濃度で溶液に入れた。結果を以下の表９にまとめる。
ウェット試験に利用できなかった微生物の存在下でのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルスとの交差反応の可能性を推定するために、国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）が運営するＢａｓｉｃ Ｌｏｃａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｓｅａｒｃｈ Ｔｏｏｌ（ＢＬＡＳＴ）を用いたｉｎ ｓｉｌｉｃｏ解析を使用して、タンパク質配列の相同性の度合いを評価した。
Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｐ．ｊｉｒｏｖｅｃｉｉ、またはＨＣｏｖ－ＨＫＵ１との間にはタンパク質配列の相同性は見られなかったため、交差反応は除外することができる。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドタンパク質とＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１との間の比較では、９０．５２％の相同性が示され、この試験において有意な交差反応性が生じるであろうことが示唆される。
（実施例７．アッセイに干渉しない物質）
干渉についてＶＩＴＲＯＳ（登録商標）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原検査を評価した。試験した化合物では、表１０に示す濃度で、非反応および弱反応のサンプルでの試験の臨床的解釈に反するものはなかった。
干渉についてＶＩＴＲＯＳ（登録商標）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原検査を評価した。試験した化合物では、表１０に示す濃度で、非反応および弱反応のサンプルでの試験の臨床的解釈に反するものはなかった。
特に明記しない限り、明細書および特許請求の範囲で使用される成分量、分子量、反応条件などの量を表すすべての数字は、すべての事例において、「約」という用語によって加減されると理解されるべきである。したがって、反対に示されない限り、本明細書および添付する特許請求の範囲に示す数値パラメータは、本発明によって得られようとする所望の特性に応じて変動し得る近似値である。少なくとも、等価物としての適用を特許請求の範囲に限定しようとするものではなく、各数値パラメータは、報告された有効数字の数に照らして、通常の丸め手段を適用することによって、少なくとも解釈されるべきである。本発明の広い範囲を示す数値範囲およびパラメータは近似値であるにもかかわらず、特定の実施例で示す数値は、可能な限り正確に報告されている。ただし、いかなる数値にも、それぞれの試験測定で見られる標準偏差から必然的に生じる誤差が本質的に含まれている。
本発明を説明する文脈で（特に以下の請求項の文脈で）使用される用語「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」、および類似の言及は、別段の記載がない限り、または文脈によって明らかに矛盾しない限り、単数形および複数形の両方をカバーすると解釈されるべきである。本明細書における値の範囲の列挙は、単に、範囲内に含まれるそれぞれの個別の値を個々に言及するための略記法として機能することを意図している。本明細書で別段の記載がない限り、個々の値は、本明細書で個々に列挙されているかのように、本明細書に組み込まれる。本明細書に記載されるすべての方法は、本明細書に別段の記載がない限り、または文脈によって明らかに矛盾しない限り、任意の適切な順序で実行することができる。本明細書で提供されるあらゆる全ての実施例、または例示的な言語（例えば、「のような」）の使用は、本発明をよりよく明らかにすることを意図しており、別途請求項に記載された発明の範囲を限定するものではない。本明細書中の記載は、本発明の実施に不可欠な、請求項以外の要素を示すものと解釈されるべきではない。
本明細書に開示した本発明の代替要素または実施形態のグループ化は、限定として解釈されるべきではない。各グループの構成要素は、個別に、またはグループの他の構成要素または本明細書で見られる他の要素との任意の組み合わせで参照され、主張され得る。利便性や特許性の理由から、グループの１以上の構成要素が、グループに含まれるか、またはグループから削除されることが予想される。そのような包含または削除が発生した場合、本明細書は変更されたグループを含むものと見なされ、添付の特許請求の範囲で使用されるマーカッシュグループのすべての記載を満たす。
本明細書では、発明者が知る本発明を実施するための最良の形態を含む、本発明のいくつかの実施形態について説明する。もちろん、これらの説明された実施形態の変形は、前述の説明を読めば当業者に明らかであろう。発明者は、当業者がそのような変形を適切に使用することを期待し、発明者は、本明細書に具体的に記載した以外の方法で本発明を実施することを意図している。したがって、本発明は、適用される法律によって許可されるように、添付の特許請求の範囲に記載された主題の変更および同等物の一切を含む。さらに、考えうるあらゆる変形をした上述の要素の組み合わせは、本明細書に別段の記載がない限り、または文脈によって明らかに矛盾しない限り、本発明に含まれる。
最後に、本明細書に開示された本発明の実施形態は、本発明の原理を例示するものであることを理解すべきである。採用され得る他の変更は、本発明の範囲内である。したがって、限定ではなく実施例として、本発明の代替構成を本明細書の教示に従って利用することができる。したがって、本発明は、示され、記載されたとおりに正確に限定されるものではない。
（付記）
（付記１）
ハイスループットアッセイを行うことができるイムノアッセイシステムを提供するステップと、
患者サンプルを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドを認識する捕捉抗体、前記捕捉抗体と異なる位置で前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドを認識する検出抗体、ならびに、前記捕捉抗体、前記検出抗体、および前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドを含む複合体を検出する手段と反応させるステップと、
前記捕捉抗体、前記検出抗体、および前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドを含む前記複合体を検出するステップと、
を含み、
前記反応させるステップおよび前記検出するステップは前記イムノアッセイシステムで行われる、
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドの存在についてサンプルをハイスループットで検査する方法。
（付記１）
ハイスループットアッセイを行うことができるイムノアッセイシステムを提供するステップと、
患者サンプルを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドを認識する捕捉抗体、前記捕捉抗体と異なる位置で前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドを認識する検出抗体、ならびに、前記捕捉抗体、前記検出抗体、および前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドを含む複合体を検出する手段と反応させるステップと、
前記捕捉抗体、前記検出抗体、および前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドを含む前記複合体を検出するステップと、
を含み、
前記反応させるステップおよび前記検出するステップは前記イムノアッセイシステムで行われる、
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドの存在についてサンプルをハイスループットで検査する方法。
（付記２）
ハイスループットアッセイを行うことができる前記イムノアッセイシステムは、Ｏｒｔｈｏ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＶＩＴＲＯＳ（登録商標）装置である、付記１に記載の方法。
ハイスループットアッセイを行うことができる前記イムノアッセイシステムは、Ｏｒｔｈｏ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＶＩＴＲＯＳ（登録商標）装置である、付記１に記載の方法。
（付記３）
前記捕捉抗体は、固体支持体に会合している、付記１または２に記載の方法。
前記捕捉抗体は、固体支持体に会合している、付記１または２に記載の方法。
（付記４）
前記捕捉抗体は、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドに特異的なモノクローナル抗体である、付記１～３のいずれか１つに記載の方法。
前記捕捉抗体は、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドに特異的なモノクローナル抗体である、付記１～３のいずれか１つに記載の方法。
（付記５）
前記捕捉抗体は、ウサギモノクローナル抗体である、付記４に記載の方法。
前記捕捉抗体は、ウサギモノクローナル抗体である、付記４に記載の方法。
（付記６）
前記検出抗体は、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドに特異的なモノクローナル抗体である、付記１～５のいずれか１つに記載の方法。
前記検出抗体は、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドに特異的なモノクローナル抗体である、付記１～５のいずれか１つに記載の方法。
（付記７）
前記検出抗体は、マウスモノクローナル抗体である、付記６に記載の方法。
前記検出抗体は、マウスモノクローナル抗体である、付記６に記載の方法。
（付記８）
前記アッセイは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１以外のコロナウイルスと交差反応しない、付記１～７のいずれか１つに記載の方法。
前記アッセイは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１以外のコロナウイルスと交差反応しない、付記１～７のいずれか１つに記載の方法。
（付記９）
前記検出抗体はコンジュゲート状であり、各コンジュゲートは約１００個の西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）分子および２５個のイムノグロブリン分子を含む、付記１～８のいずれか１つに記載の方法。
前記検出抗体はコンジュゲート状であり、各コンジュゲートは約１００個の西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）分子および２５個のイムノグロブリン分子を含む、付記１～８のいずれか１つに記載の方法。
（付記１０）
前記患者サンプルは、鼻咽頭ぬぐい液または前鼻腔ぬぐい液である、付記１～９のいずれか１つに記載の方法。
前記患者サンプルは、鼻咽頭ぬぐい液または前鼻腔ぬぐい液である、付記１～９のいずれか１つに記載の方法。
（付記１１）
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドを認識する捕捉抗体およびそれに会合した固体支持体と、
前記捕捉抗体と異なる位置で前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドを認識する検出抗体と、
前記捕捉抗体、前記検出抗体、および前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドを含む複合体を検出する手段と、
アッセイを行うための取り扱い説明書と、
を含む、
ハイスループットイムノアッセイシステムで、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドの存在についてサンプルをハイスループットで検査をするためのキット。
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドを認識する捕捉抗体およびそれに会合した固体支持体と、
前記捕捉抗体と異なる位置で前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドを認識する検出抗体と、
前記捕捉抗体、前記検出抗体、および前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドを含む複合体を検出する手段と、
アッセイを行うための取り扱い説明書と、
を含む、
ハイスループットイムノアッセイシステムで、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドの存在についてサンプルをハイスループットで検査をするためのキット。
（付記１２）
前記ハイスループットイムノアッセイシステムは、Ｏｒｔｈｏ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＶＩＴＲＯＳ（登録商標）である、付記１１に記載のキット。
前記ハイスループットイムノアッセイシステムは、Ｏｒｔｈｏ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＶＩＴＲＯＳ（登録商標）である、付記１１に記載のキット。
（付記１３）
前記捕捉抗体は、固体支持体に会合している、付記１１または１２に記載のキット。
前記捕捉抗体は、固体支持体に会合している、付記１１または１２に記載のキット。
（付記１４）
前記捕捉抗体は、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドに特異的なモノクローナル抗体である、付記１１～１３のいずれか１つに記載のキット。
前記捕捉抗体は、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドに特異的なモノクローナル抗体である、付記１１～１３のいずれか１つに記載のキット。
（付記１５）
前記捕捉抗体は、ウサギモノクローナル抗体である、付記１４に記載のキット。
前記捕捉抗体は、ウサギモノクローナル抗体である、付記１４に記載のキット。
（付記１６）
前記検出抗体は、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドに特異的なモノクローナル抗体である、付記１１～１５のいずれか１つに記載のキット。
前記検出抗体は、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドに特異的なモノクローナル抗体である、付記１１～１５のいずれか１つに記載のキット。
（付記１７）
前記検出抗体は、マウスモノクローナル抗体である、付記１６に記載のキット。
前記検出抗体は、マウスモノクローナル抗体である、付記１６に記載のキット。
（付記１８）
前記捕捉抗体および前記検出抗体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１以外のコロナウイルスと交差反応しない、付記１１～１７のいずれか１つに記載のキット。
前記捕捉抗体および前記検出抗体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１以外のコロナウイルスと交差反応しない、付記１１～１７のいずれか１つに記載のキット。
（付記１９）
前記検出抗体はコンジュゲートであり、各前記コンジュゲートは約１００個のＨＲＰ分子および約２５個のイムノグロブリン分子を含む、付記１１～１８のいずれか１つに記載のキット。
前記検出抗体はコンジュゲートであり、各前記コンジュゲートは約１００個のＨＲＰ分子および約２５個のイムノグロブリン分子を含む、付記１１～１８のいずれか１つに記載のキット。
Claims (19)
- ハイスループットアッセイを行うことができるイムノアッセイシステムを提供するステップと、
患者サンプルを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドを認識する捕捉抗体、前記捕捉抗体と異なる位置で前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドを認識する検出抗体、ならびに、前記捕捉抗体、前記検出抗体、および前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドを含む複合体を検出する手段と反応させるステップと、
前記捕捉抗体、前記検出抗体、および前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドを含む前記複合体を検出するステップと、
を含み、
前記反応させるステップおよび前記検出するステップは前記イムノアッセイシステムで行われる、
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドの存在についてサンプルをハイスループットで検査する方法。 - ハイスループットアッセイを行うことができる前記イムノアッセイシステムは、Ｏｒｔｈｏ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＶＩＴＲＯＳ（登録商標）装置である、請求項１に記載の方法。
- 前記捕捉抗体は、固体支持体に会合している、請求項１または２に記載の方法。
- 前記捕捉抗体は、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドに特異的なモノクローナル抗体である、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。
- 前記捕捉抗体は、ウサギモノクローナル抗体である、請求項４に記載の方法。
- 前記検出抗体は、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドに特異的なモノクローナル抗体である、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。
- 前記検出抗体は、マウスモノクローナル抗体である、請求項６に記載の方法。
- 前記アッセイは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１以外のコロナウイルスと交差反応しない、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。
- 前記検出抗体はコンジュゲート状であり、各コンジュゲートは約１００個の西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）分子および２５個のイムノグロブリン分子を含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。
- 前記患者サンプルは、鼻咽頭ぬぐい液または前鼻腔ぬぐい液である、請求項１～９のいずれか１項に記載の方法。
- ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドを認識する捕捉抗体およびそれに会合した固体支持体と、
前記捕捉抗体と異なる位置で前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドを認識する検出抗体と、
前記捕捉抗体、前記検出抗体、および前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドを含む複合体を検出する手段と、
アッセイを行うための取り扱い説明書と、
を含む、
ハイスループットイムノアッセイシステムで、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドの存在についてサンプルをハイスループットで検査をするためのキット。 - 前記ハイスループットイムノアッセイシステムは、Ｏｒｔｈｏ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＶＩＴＲＯＳ（登録商標）である、請求項１１に記載のキット。
- 前記捕捉抗体は、固体支持体に会合している、請求項１１または１２に記載のキット。
- 前記捕捉抗体は、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドに特異的なモノクローナル抗体である、請求項１１～１３のいずれか１項に記載のキット。
- 前記捕捉抗体は、ウサギモノクローナル抗体である、請求項１４に記載のキット。
- 前記検出抗体は、前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドに特異的なモノクローナル抗体である、請求項１１～１５のいずれか１項に記載のキット。
- 前記検出抗体は、マウスモノクローナル抗体である、請求項１６に記載のキット。
- 前記捕捉抗体および前記検出抗体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１以外のコロナウイルスと交差反応しない、請求項１１～１７のいずれか１項に記載のキット。
- 前記検出抗体はコンジュゲートであり、各前記コンジュゲートは約１００個のＨＲＰ分子および約２５個のイムノグロブリン分子を含む、請求項１１～１８のいずれか１項に記載のキット。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US202063106830P | 2020-10-28 | 2020-10-28 | |
| US63/106,830 | 2020-10-28 | ||
| PCT/US2021/057071 WO2022094095A1 (en) | 2020-10-28 | 2021-10-28 | High throughput immunoassays and methods for the detection of sars-cov-2 antigens |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2023548116A true JP2023548116A (ja) | 2023-11-15 |
Family
ID=81258244
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2023526005A Pending JP2023548116A (ja) | 2020-10-28 | 2021-10-28 | ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原の検出のためのハイスループットイムノアッセイおよび方法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20220128560A1 (ja) |
| EP (1) | EP4237440A1 (ja) |
| JP (1) | JP2023548116A (ja) |
| CN (1) | CN116568710A (ja) |
| CA (1) | CA3200152A1 (ja) |
| WO (1) | WO2022094095A1 (ja) |
-
2021
- 2021-10-28 CA CA3200152A patent/CA3200152A1/en active Pending
- 2021-10-28 JP JP2023526005A patent/JP2023548116A/ja active Pending
- 2021-10-28 WO PCT/US2021/057071 patent/WO2022094095A1/en active Application Filing
- 2021-10-28 EP EP21887527.6A patent/EP4237440A1/en active Pending
- 2021-10-28 US US17/513,538 patent/US20220128560A1/en active Pending
- 2021-10-28 CN CN202180073730.2A patent/CN116568710A/zh active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2022094095A1 (en) | 2022-05-05 |
| CA3200152A1 (en) | 2022-05-05 |
| US20220128560A1 (en) | 2022-04-28 |
| EP4237440A1 (en) | 2023-09-06 |
| CN116568710A (zh) | 2023-08-08 |
| WO2022094095A8 (en) | 2023-05-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Hayrapetyan et al. | Enzyme-linked immunosorbent assay: types and applications | |
| Kim et al. | Detection of HIV-1 p24 Gag in plasma by a nanoparticle-based bio-barcode-amplification method | |
| JPH03502241A (ja) | ヒト血清におけるｈｉｖ抗原を検出する酵素免疫検定法 | |
| Lim et al. | Current laboratory diagnosis of coronavirus disease 2019 | |
| Watkins-Riedel et al. | Comparison of SeroMP IgA with four other commercial assays for serodiagnosis of Mycoplasma pneumoniae pneumonia | |
| Cameron et al. | A multiplex microsphere IgG assay for SARS-CoV-2 using ACE2-mediated inhibition as a surrogate for neutralization | |
| US20220120737A1 (en) | Method for detecting sars-cov-2-specific serum human immunoglobulins | |
| CN111273017A (zh) | 一种快速检测新型冠状病毒的荧光免疫层析试剂盒 | |
| CN112964873A (zh) | 基于夹心法的SARS-CoV-2检测试剂盒 | |
| Martinaud et al. | Evaluation of the Quotient® MosaiQ™ COVID-19 antibody microarray for the detection of IgG and IgM antibodies to SARS-CoV-2 virus in humans | |
| McCarron et al. | Hepatitis C antibody detection in dried blood spots | |
| US20210356464A1 (en) | Serological assays for diagnosing or confirming covid-19 virus infections | |
| US20220050106A1 (en) | Methods and kits for detecting sars-coronavirus-2 antigen | |
| CN112964874A (zh) | 基于间接法的SARS-CoV-2检测试剂盒 | |
| JPH03502248A (ja) | アッセイ用水性洗浄液、診断試験キット及び単純ヘルペスウイルスの測定方法 | |
| JP2023548116A (ja) | ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２抗原の検出のためのハイスループットイムノアッセイおよび方法 | |
| CN106404754A (zh) | 一种肺炎衣原体IgM化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法 | |
| Germain et al. | Retrospective study of COVID-19 seroprevalence among tissue donors at the onset of the outbreak before implementation of strict lockdown measures in France | |
| WO2022032497A1 (zh) | 用于检测冠状病毒中和抗体的试剂盒、方法 | |
| JP5168538B2 (ja) | 抗体−抗体コンジュゲートと抗体測定系診断薬への応用 | |
| US20220178914A1 (en) | Lithium heparin as a blocking agent | |
| Tian et al. | Development and Head-to-Head Comparison of Two Colloidal Gold Based Serologic Lateral Flow Assays for SARS-CoV-2 Antibody Tests | |
| Dou et al. | Highly sensitive digital detection of SARS-CoV-2 nucleocapsid protein through single-molecule counting | |
| CN106404755A (zh) | 一种肺炎支原体IgM化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法 | |
| JP2010054516A (ja) | 血清および血漿の測定値乖離を防止する免疫測定法 |