JP2023547578A - 新規な獣用子宮注入剤、その調製方法及び使用 - Google Patents

Abstract

本発明は、新規な獣用子宮注入剤の調製方法を提供し、獣用医薬製剤の分野に属し、吸着担体をリファキシミン自己マイクロエマルジョン、成長修復因子とそれぞれ混合して、自己マイクロエマルジョン担持粒子、及び成長修復因子担持粒子を調製し、第１マトリックスと第２マトリックスと注射用水とを混合して注射マトリックスを調製し、前記注射マトリックスを前記自己マイクロエマルジョン担持粒子、前記成長修復因子担持粒子と混合した後、凍結乾燥して前記子宮注入剤を調製する。本発明は、成長修復因子の細胞成長促進作用とゲルマトリックスによる細胞成長微小環境を利用して、子宮内膜上皮細胞の修復を速め、損傷組織の再生を促進し、防護障壁を確立することにより、子宮内での新たな感染の発生を予防し、子宮内膜炎の発症率を低下させることができる。【選択図】図１

Description

本発明は、獣用医薬製剤の分野に関し、具体的には、新規な獣用子宮注入剤、その調製方法及び使用に関する。

乳牛子宮内膜炎は牛を飼うときによく見られる疾患であり、発症率が高いものの、病死率は低く、多くの場合慢性なものである。この疾患は牛の繁殖能力を厳重に低下させるだけでなく、乳の生産量をある程度低下させ、深刻な場合泌乳能力を失わせ、症状が深刻ならばまた不妊を引き起こすこともあり、廃棄するしなかい結果を招く場合があり、また例えば子宮炎などその他の疾患を引き起こしやすい。近年、乳牛の飼育規模の拡大に伴い、人工授精技術の普遍的な応用と相まって、この疾患の発生は持続的な増加傾向にあり、乳牛養殖産業の経済効果を厳重に損ない、このため、予防と治療を行うことが必要とされる。

リファキシミンはリファマイシンＳＶの人工半合成誘導体である。他のリファマイシン系抗菌薬と同様に、細菌ＤＮＡ－依存性ＲＮＡポリメラーゼのβ－サブユニットと不可逆的に結合することで細菌ＲＮＡの合成を阻害し、最終的に細菌タンパク質の合成を阻害する。リファキシミンは抗菌スペクトルが広く、ほとんどのグラム陽性好気性菌に対して高度な抗菌活性を有し、グラム陰性菌のうち大腸菌、サルモネラ菌、志賀氏菌やグラム陽性嫌気性菌に対しても良い抗菌活性を有する。リファキシミンは子宮内投与の場合ほとんど吸収されず、組織吸収レベルが低く、生体の正常細菌群に悪影響がなく、明らかな毒性や副作用がないため、リファキシミンの子宮内灌流は乳牛子宮炎の治療に非常に適している。

子宮注入療法は乳牛の子宮内に抗菌薬を灌流し、乳牛の子宮内膜炎の発生を治療、予防することを指す。しかし、現在市販されている子宮注入剤の多くは殺菌効果を主な目的としており、子宮の表皮や組織の修復を両立させることはできず、「治療」だけを重視し、「予防」を無視し、しかし、乳牛の分娩や助産において子宮内膜に損傷を与えることがあり、しかも乳牛の流産、難産、胎衣が排出できない、人工授精操作が規範化されていないなどはすべて病原菌に侵入の機会を提供し、病原菌はこのようなときに大量に集積し、関連疾患を引き起こす可能性が高く、そのため、注入剤が子宮表皮、組織の修復にも作用することは非常に必要である。

上記課題に対して、本発明は、新規な獣用子宮注入剤、その調製方法及び使用を提供する。

本発明の目的は、以下の技術的解決手段によって達成される。
新規な獣用子宮注入剤の調製方法であって、
リファキシミン自己マイクロエマルジョンを調製するステップ（１）と、
吸着担体と前記リファキシミン自己マイクロエマルジョンとを混合して、自己マイクロエマルジョン担持粒子を調製し、吸着担体と成長修復因子とを混合して、成長修復因子担持粒子を調製するステップ（２）と、
第１マトリックスと第２マトリックスと注射用水とを混合して注射マトリックスを調製し、前記注射マトリックスと前記自己マイクロエマルジョン担持粒子、前記成長修復因子担持粒子とを混合して前記子宮注入剤を調製するステップ（３）とを含み、
前記吸着担体は、ケイ酸カルシウム、親水性ヒュームドシリカ、微結晶セルロースのうちの１種又は複数種であり、
前記成長修復因子は、オリゴペプチド－１、銅ペプチドのうちの１種又は２種である表皮細胞成長因子を含み、
前記第１マトリックスは、水溶性シルクフィブロイン、キトサン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、ポリビニルアルコールのうちの１種又は複数種であり、
前記第２マトリックスは、メチルビニルエーテル－無水マレイン酸共重合体、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、プロピレントリオールのうちの１種又は複数種である。

好ましくは、前記リフォキシミン自己マイクロエマルション中のリフォキシミンの濃度が１８ｗｔ．％以下であり、より好ましくは、１～６ｗｔ．％であり、最も好ましくは４ｗｔ．％である。

好ましくは、前記リフォキシミン自己マイクロエマルション、前記吸着担体、前記表皮細胞成長因子、前記第１マトリックス、及び前記第２マトリックスの質量比が、（１～１０）：（０．３～１．８）：（０．０５～０．３）：（５～１４）：（０．４５～０．６５）である。

好ましくは、前記成長修復因子は、コラーゲンペプチド及び／又はヒアルロン酸ナトリウムをさらに含む。

好ましくは、前記リフォキシミン自己マイクロエマルション中のリフォキシミンの濃度が４ｗｔ．％であり、前記吸着担体は質量比２：１のケイ酸カルシウムと親水性ヒュームドシリカとの混合物であり、前記成長修復因子は質量比０．３：１：３の表皮細胞成長因子、コラーゲンペプチド及びヒアルロン酸ナトリウムの混合物であり、前記第１マトリックスは水溶性シルクフィブロインであり、前記第２マトリックスはメチルビニルエーテル－無水マレイン酸共重合体であり、前記リフォキシミン自己マイクロエマルジョン、前記吸着担体、前記成長修復因子、前記第１マトリックス、前記第２マトリックスの質量比は５：１：４．３：１０：０．５である。

好ましくは、前記ステップ（３）で調製された前記子宮注入剤を凍結乾燥するステップ（４）をさらに含む。

好ましくは、前記リファキシミン自己マイクロエマルジョンの調製方法は、乳化剤と乳助剤とを均一に混合した後、油相溶液を添加し、さらに均一に混合した後、リファキシミンを添加して溶解することにより、前記リファキシミン自己マイクロエマルジョンを調製することである。

好ましくは、前記乳化剤は、ポリオキシエチレンヒマシ油、ヒマシ油ポリオキシエチレンエーテル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油エーテル、プロピレングリコールモノラウリン酸グリセリル、カプリロカプロイルポリオキシ-８－グリセリド、トウェン８０、トウェン２０のうちの１種又は複数種である。

前記乳化助剤は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール４００、ポリエチレングリコール６００、ジエチレングリコールモノエチルエーテルのうちの１種又は複数種である。

前記油相溶液は、中鎖トリグリセリド、ミリスチン酸イソプロピル、オレイン酸エチル、カプリル酸デカン酸モノグリセリド、カプリル酸デカン酸トリグリセリド、カプリル酸デカン酸コハク酸トリグリセリドのうちの１種又は複数種である。

好ましくは、前記乳化剤、共乳化剤及び前記油相溶液の質量比は、４：１：５である。

本発明の他の目的は、上記調製方法により調製された注入剤の使用方法であって、具体的には、前記注入剤を注射用水に添加して溶解し、均一に振った後、注入剤が懸濁ヒドロゾルの状態になると子宮内灌流を行う方法を提供することである。

本発明の有益な効果は、以下のとおりである。
（１）本発明では、自己マイクロエマルジョン系を用いて難溶性薬物であるリファキシミンを可溶化し、吸着剤をリファキシミン自己マイクロエマルジョンと成長修復因子とそれぞれ混合してからハイドロゲルに分散して懸濁させることで、薬物含有自己マイクロエマルジョン及び表皮細胞成長因子の安定性を向上させるとともに、ヒドロゲルは注射時の痛みを軽減し、また、成長修復因子の細胞成長促進作用とハイドロゲルが提供する細胞成長マイクロ環境を利用して、子宮内膜表皮細胞の修復を速め、損傷組織の再生を促進し、防護障壁を確立することができ、子宮内膜にすでに存在する感染を治愈し、乳牛の体を健康に回復させることを速めるだけでなく、子宮内の新しい感染の発生を予防し、子宮内膜炎の発症率を下げることができる。ハイドロゲルに比べて、凍結乾燥粉末は貯蔵しやすく、製品の安定性は貯蔵条件の影響を受けにくく、精製水を加えて再溶解することが可能である。

（２）従来の子宮注入剤は主に抗菌薬物を直接注入して殺菌効果を得るものであり、子宮表皮と組織の修復を両立することができず、本発明は、成長修復因子を添加してヒドロゲルに分散させることにより、増殖を促進し、修復を加速し、予防と治療を両立させる目的を達成し、ただし、添加された成長修復因子はミクロエマルジョンとハイドロゲルの水相環境中での安定性が劣るため、本発明は吸着剤を添加して成長修復因子をハイドロゲルに懸濁させることで、水相環境中での安定性を向上させる。

（３）本発明により調製されたリファキシミン子宮注入剤は、温度感受性注入剤である、注射前は流動性の良い流体状態であり、懸濁させた薬物担持粒子を簡単に均一に分散させることができ、注入抵抗が低く、粒径が小さく、粘度が低く、使いやすいという特徴があり、温度が３５℃～４０℃に達するとインビボに注射し、半固体のハイドロゲル状態になり、ハイドロゲルを直接注入するより更に均一に付着して子宮内壁を覆い、毛穴を閉鎖して、防菌層を形成することができ、インビボで形成したハイドロゲルの生物の付着性が非常に良く、ハイドロゲルは重力の作用によって子宮の底に堆積しにくい。本発明により調製された子宮注入剤がインビボで形成したハイドロゲル系は、生体に吸収、利用されることができ、無毒で環境に優しい。

図面を用いて本発明をさらに説明するが、図面における実施例は本発明の限定を構成するものではなく、当業者が創造的な努力を必要とせずに以下の図面に基づいて他の図面を得ることもできる。

自己マイクロエマルションの擬似三相図である。

本発明は、以下の実施例を参照してさらに説明される。
本発明の実施例は、リファキシミン自己マイクロエマルジョン、吸着担体、成長修復因子、ゲルマトリックス、Ｇａｎｔｒｅｚ ＡＮ及び注射用水からなるリファキシミン子宮注入剤に関し、前記吸着担体はケイ酸カルシウムを含み、前記成長修復因子は、オリゴペプチド－１及び／又は銅ペプチドを含む表皮細胞成長因子、コラーゲンペプチド及びヒアルロン酸ナトリウムを含む。

自己マイクロエマルション系（ＳＭＥＤＤＳ）は、油、界面活性剤及び界面活性助剤、又は少量の水からなる均一で透明な溶液であり、疎水性で、吸収しにくい、又は加水分解しやすい薬物の担体として機能し得る。薬物を油滴に包み込むことにより、インビボで体液に遭遇すると自発的に分散しＯ／Ｗ型マイクロエマルジョンを形成する。この系は薬物の溶解度を高め、表面張力を下げ、透過性を高めるなどの優位性を通じて薬物の生物利用度を著しく高めることができる。

ケイ酸カルシウム（型番：ＦＬＯＲＩＴＥ ＰＳ－１０）は、流動性に優れた白色微粒子であり、ケイ酸カルシウムは、非晶質化ＡＰＩを微細孔に被覆することにより、水溶性に劣るＡＰＩの溶解を促進する固体分散体を調製することができる。一方、ケイ酸カルシウムは吸液性の良い合成ケイ酸カルシウムでもあり、従来の多孔質材料とは異なり、独特の花弁状の結晶構造、非常に顕著な孔径や孔容積を有する。これらの大きな細孔は液体吸収量にとって重要な要素であり、自重の５倍の液体を吸収して粉末状にすることができる。ケイ酸カルシウムの大きな細孔は垂直方向に拡大し続け、細孔の開口はその体積に比べて小さい面積であり、細孔内に充填された液体を外部の酸素、蒸気、その他の元素から保護する良好な環境を有するようになる。ケイ酸カルシウムはＡＰＩの安定化剤としてのみならず、優れた液体担体として医薬製剤に適用できる。

表皮細胞成長因子は人インビボの重要な活性蛋白質ポリペプチド物質であり、ヒト細胞の増殖、成長を強力に促進し、損傷した粘膜を迅速に修復し、人体の自己免疫力を回復することができ、皮膚の表皮組織に迅速に入り、損傷した粘膜を修復し、その分化、増殖、移転を促進し、最後に損傷領域をカバーし、粘膜の再生を完了し、免疫力を増強し、生体自身の機能を回復する。表皮細胞成長因子自体の特性のため、低温条件がその活性を維持するのに役立ち、室温以上の条件では活性が徐々に低下し、このため、単一成分の場合は一般的に凍結乾燥粉末として冷蔵保管されており、表皮細胞成長因子を用いて製剤を調製する際にはその安定性を十分に考慮する必要がある。

ハイドロゲルは親水性高分子鎖が架橋してなるネットワーク状分子構造を有する材料であり、人体組織と類似の保水特性と力学的性質を有するため、多種の組織器官の修復や再建に広く応用されており、他の投与経路や植え込み方式に比べ、注射可能なハイドロゲルは多種の優位性がある。ハイドロゲルは天然の軟組織と類似の構造を持っており、系内の高含水率の特性は構造と機能上細胞外マトリックス成分を模擬することができ、サイトカインや薬物などの活性物質を有効にアンカーしたり放出したりすることができるとともに、酸素、栄養物質やその他の代謝産物に対して高透過性を有し、細胞の増殖と分化、及び細胞の増殖と移動をサポートするために必要な場所を提供する。天然高分子シルクフィブロインを基体とする注射可能なヒドロゲルは弱い抗原性、良好な細胞粘着性、吸収性及び生物安全性を有し、天然高分子ヒドロゲルは細胞成長、分化活動に有利であり、細胞成長、コラーゲン沈着などの過程に微小環境を提供する。

Ｇａｎｔｒｅｚ ＡＮは、ポリメチルビニルエーテル／無水マレイン酸共重合体であり、水及び／又はエタノールに可溶であり、高極性でべたつき感がなく、湿潤粘着強度及び生体粘着性に優れたフィルムを形成することができる。製膜性、粘着性に優れているので、包帯へのスプレーやストーマ用粘着剤として好適である。

実施例１
新規な獣用子宮注入剤は、１００ｍｌ換算で、リファキシミン自己マイクロエマルジョン５ｇ、吸着担体１ｇ、成長修復因子（オリゴペプチド－１／銅ペプチド：コラーゲンペプチド：ヒアルロン酸ナトリウム＝０．３：１：３）４．３ｇ、水溶性シルクフィブロイン１０ｇ、Ｇａｎｔｒｅｚ ＡＮ ０．５ｇ、残部の注射用水からなり、

その調製方法は、以下のステップを含む。

（１）ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油エーテル（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＲＨ ４０）９．６ｇ、ジエチレングリコールモノエチルエーテル（Ｔｒａｎｓｃｕｔｏｌ Ｐ）４８ｇをそれぞれ秤量してボルテックスミキサーに投入してボルテックス混合し、カプリル酸カプリン酸モノグリセリド（Ｃａｐｍｕｌ ＭＣＭ）３８．４ｇを上記混合物に添加し、ボルテックス混合し、空白自己マイクロエマルジョンを得、４ｇのリファキシミンを前記空白自己マイクロエマルジョンに溶解し、リファキシミン自己マイクロエマルジョンを調製した。
（２）ケイ酸カルシウム（ＦＬＯＲＩＴＥ ＰＳ－１０）と親水性ヒュームドシリカ（ＡＥＲＯＳＩＬ ３８０）を質量比２：１で角錐ミキサーに入れて均一に混合し、吸着担体混合物を調製した。
（３）配合量の９０％の吸着担体を原料タンクに入れ、配合量のリファキシミン自己マイクロエマルジョンを添加して均一に撹拌し、自己マイクロエマルジョン担持粒子を調製した。
（４）配合量の残部（１０％）の吸着担体を角錐ミキサーに入れて、配合量の成長修復因子を添加して均一に撹拌し、成長修復因子担持粒子を調製した。
（５）配合量の水溶性シルクフィブロイン、Ｇａｎｔｒｅｚ ＡＮ、注射用水をボルテックスミキサーに添加し、常温下で液体が清澄なゾル状態になるまで混合撹拌した後、前記自己ミクロエマルジョン担持粒子と前記成長修復因子担持粒子を添加し、ボルテックスせん断を１０～１５ｍｉｎ行い、真空凍結乾燥し、窒素ガスを充填して密封し、含有量の規格０．２ｇ：１００ｍｌのリファキシミン子宮注入剤凍結乾燥粉末を調製し、凍結乾燥粉末は遮光下冷蔵保管し、使用する時に注射用水（１００ｍＬ／部、０．２ｇリファキシミン／部換算）を添加して溶解し、均一に振って、注入剤が懸濁ハイドロゾル状態になると、子宮内灌流を行った。
調製環境温度を２０℃～２５℃、湿度を６０％以下に制御した。

実施例２
吸着剤を含まないこと、プロセスにおいてリファキシミン自己マイクロエマルジョンと成長修復因子を元のステップ（５）に直接添加し、リファキシミン子宮注入剤を調製したこと以外、実施例１と同様であり、具体的なステップは以下の通りである。
新規な獣用子宮注入剤は、１００ｍｌ換算で、リファキシミン自己マイクロエマルジョン５ｇ、成長修復因子（オリゴペプチド－１／銅ペプチド：コラーゲンペプチド：ヒアルロン酸ナトリウム＝０．３：１：３）４．３ｇ、水溶性シルクフィブロイン１０ｇ、Ｇａｎｔｒｅｚ ＡＮ ０．５ｇ、残部の注射用水からなり、
その調製方法は、以下のステップを含む。

（１）ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油エーテル（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＲＨ ４０）９．６ｇ、ジエチレングリコールモノエチルエーテル（Ｔｒａｎｓｃｕｔｏｌ Ｐ）４８ｇをそれぞれ秤量してボルテックスミキサーに投入してボルテックス混合し、カプリル酸カプリン酸モノグリセリド（Ｃａｐｍｕｌ ＭＣＭ）３８．４ｇを上記混合物に添加し、ボルテックス混合し、空白自己マイクロエマルジョンを得、４ｇのリファキシミンを前記空白自己マイクロエマルジョンに溶解し、リファキシミン自己マイクロエマルジョンを調製した。
（２）配合量の水溶性シルクフィブロイン、Ｇａｎｔｒｅｚ ＡＮ、注射用水をボルテックスミキサーに添加し、常温下で液体が清澄ゾル状態になるまで混合撹拌した後、前記リファキシミン自己マイクロエマルジョンと配合量の成長修復因子を添加し、ボルテックスせん断を１０～１５ｍｉｎ行い、真空凍結乾燥し、窒素ガスを充填して密封し、含有量の規格０．２ｇ：１００ｍｌのリファキシミン子宮注入剤凍結乾燥粉末を調製し、凍結乾燥粉末は遮光下冷蔵保管し、使用する時に注射用水（１００ｍＬ／部、０．２ｇリファキシミン／部換算）を添加して溶解し、均一に振って、注入剤が懸濁ハイドロゾル状態になると、子宮内灌流を行った。
調製環境温度を２０℃～２５℃、湿度を６０％以下に制御した。

実施例３
前記吸着担体が親水性ヒュームドシリカであったこと以外、実施例１と同様であり、具体的なステップは以下の通りである。
新規な獣用子宮注入剤は、１００ｍｌ換算で、リファキシミン自己マイクロエマルジョン５ｇ、親水性ヒュームドシリカ１ｇ、成長修復因子（オリゴペプチド－１／銅ペプチド：コラーゲンペプチド：ヒアルロン酸ナトリウム＝０．３：１：３）４．３ｇ、水溶性シルクフィブロイン１０ｇ、Ｇａｎｔｒｅｚ ＡＮ ０．５ｇ、残部の注射用水からなり、
その調製方法は、以下のステップを含む。

（１）ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油エーテル（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＲＨ ４０）９．６ｇ、ジエチレングリコールモノエチルエーテル（Ｔｒａｎｓｃｕｔｏｌ Ｐ）４８ｇをそれぞれ秤量してボルテックスミキサーに投入してボルテックス混合し、カプリル酸カプリン酸モノグリセリド（Ｃａｐｍｕｌ ＭＣＭ）３８．４ｇを上記混合物に添加し、ボルテックス混合し、空白自己マイクロエマルジョンを得、４ｇのリファキシミンを前記空白自己マイクロエマルジョンに溶解し、リファキシミン自己マイクロエマルジョンを調製した。
（２）配合量の９０％の吸着担体を原料タンクに入れ、配合量のリフォキシミン自己マイクロエマルションを添加して均一に撹拌し、マイクロエマルマイション担持粒子を調製した。
（３）配合量の残部（１０％）の吸着担体を角錐ミキサーに入れて、配合量の成長修復因子を添加して均一に撹拌し、成長修復因子担持粒子を調製した。
（４）配合量の水溶性シルクフィブロイン、Ｇａｎｔｒｅｚ ＡＮ、注射用水をボルテックスミキサーに添加し、常温下で液体が清澄なゾル状態になるまで混合撹拌した後、前記自己マイクロエマルション担持粒子と前記成長修復因子担持粒子を添加し、ボルテックスせん断を１０～１５ｍｉｎ行い、真空凍結乾燥し、窒素ガスを充填して密封し、含有量規格０．２ｇ：１００ｍｌのリフォキシミン子宮注入剤凍結乾燥粉末を調製し、凍結乾燥粉末は遮光下冷蔵保管し、使用する時に注射水（１００ｍＬ／部、リフォキシミン０．２ｇ／部換算）を添加して溶解し、均一に振って、注入剤が懸濁ハイドロゾル状態になると、子宮内灌流を行った。
調製環境温度を２０℃～２５℃、湿度を６０％以下に制御した。

実施例４
前記吸着担体が微結晶セルロースであったこと以外、実施例１と同様であり、具体的なステップは以下の通りである。
新規な獣用子宮注入剤は、１００ｍｌ換算で、リフォキシミン自己マイクロエマルジョン５ｇ、微結晶セルロース１ｇ、成長修復因子（オリゴペプチド－１／銅ペプチド：コラーゲンペプチド：ヒアルロン酸ナトリウム＝０．３：１：３）４．３ｇ、水溶性シルクフィブロイン１０ｇ、Ｇａｎｔｒｅｚ ＡＮ ０．５ｇ、残部の注射水からなり、
その調製方法は、以下のステップを含む。

（１）ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油エーテル（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＲＨ ４０）９．６ｇ、ジエチレングリコールモノエチルエーテル（Ｔｒａｎｓｃｕｔｏｌ Ｐ）４８ｇをそれぞれ秤量してボルテックスミキサーに投入してボルテックス混合し、カプリル酸デカン酸モノグリセリド（Ｃａｐｍｕｌ ＭＣＭ）３８．４ｇを上記混合物に添加し、ボルテックス混合し、空白自己マイクロエマルジョンを得、４ｇのリフォキシミンを前記空白自己マイクロエマルジョンに溶解し、リフォキシミン自己マイクロエマルジョンを調製した。
（２）配合量の９０％の吸着担体を原料タンクに入れ、配合量のリフォキシミン自己マイクロエマルションを添加して均一に撹拌し、マイクロエマルマイション担持粒子を調製した。
（３）配合量の残部（１０％）の吸着担体を角錐ミキサーに入れて、配合量の成長修復因子を添加して均一に撹拌し、成長修復因子担持粒子を調製した。
（４）配合量の水溶性シルクフィブロイン、Ｇａｎｔｒｅｚ ＡＮ、注射用水をボルテックスミキサーに添加し、常温下で液体が清澄なゾル状態になるまで混合撹拌した後、前記自己マイクロエマルション担持粒子と前記成長修復因子担持粒子を添加し、ボルテックスせん断を１０～１５ｍｉｎ行い、真空凍結乾燥し、窒素ガスを充填して密封し、含有量規格０．２ｇ：１００ｍｌのリフォキシミン子宮注入剤凍結乾燥粉末を調製し、凍結乾燥粉末は遮光下冷蔵保管し、使用する時に注射水（１００ｍＬ／部、リフォキシミン０．２ｇ／部換算）を添加して溶解し、均一に振って、注入剤が懸濁ハイドロゾル状態になると、子宮内灌流を行った。
調製環境温度を２０℃～２５℃、湿度を６０％以下に制御した。

実施例５
前記第１マトリックス、第２マトリックスがそれぞれポリビニルアルコール及びプロパントリオールであったこと以外、実施例１と同様であり、具体的なステップは以下の通りである。
新規な獣用子宮注入剤は、１００ｍｌ換算で、リファキシミン自己マイクロエマルジョン５ｇ、吸着担体１ｇ、成長修復因子（オリゴペプチド－１／銅ペプチド：コラーゲンペプチド：ヒアルロン酸ナトリウム＝０．３：１：３）４．３ｇ、ポリビニルアルコール１３ｇ、プロパントリオール０．６５ｇ、残部の注射用水からなり、
その調製方法は、以下のステップを含む。

（１）ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油エーテル（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＲＨ ４０）９．６ｇ、ジエチレングリコールモノエチルエーテル（Ｔｒａｎｓｃｕｔｏｌ Ｐ）４８ｇをそれぞれ秤量してボルテックスミキサーに投入してボルテックス混合し、カプリル酸カプリン酸モノグリセリド（Ｃａｐｍｕｌ ＭＣＭ）３８．４ｇを上記混合物に添加し、ボルテックス混合し、空白自己マイクロエマルジョンを得、４ｇのリファキシミンを前記空白自己マイクロエマルジョンに溶解し、リファキシミン自己マイクロエマルジョンを調製した。
（２）ケイ酸カルシウム（ＦＬＯＲＩＴＥ ＰＳ－１０）と親水性ヒュームドシリカ（ＡＥＲＯＳＩＬ ３８０）を質量比２：１で角錐ミキサーに入れて均一に混合し、吸着担体混合物を調製した。
（３）配合量の９０％の吸着担体を原料タンクに入れ、配合量のリファキシミン自己マイクロエマルジョンを添加して均一に撹拌し、自己マイクロエマルジョン担持粒子を調製した。
（４）配合量の残部（１０％）の吸着担体を角錐ミキサーに入れて、配合量の成長修復因子を添加して均一に撹拌し、成長修復因子担持粒子を調製した。
（５）混合量のポリビニルアルコール、プロパントリオール、注射用水をボルテックスミキサーに添加し、常温下で液体が清澄なゾル状態になるまで混合撹拌した後、前記自己ミクロエマルジョン担持粒子と前記成長修復因子担持粒子を添加し、ボルテックスせん断を１０～１５ｍｉｎ行い、真空凍結乾燥し、窒素ガスを充填して密封し、含有量の規格０．２ｇ：１００ｍｌのリファキシミン子宮注入剤凍結乾燥粉末を調製し、凍結乾燥粉末は遮光下冷蔵保管し、使用する時に注射用水（１００ｍＬ／部、０．２ｇリファキシミン／部換算）を添加して溶解し、均一に振って、注入剤が懸濁ハイドロゾル状態になると、子宮内灌流を行った。
調製環境温度を２０℃～２５℃、湿度を６０％以下に制御した。

比較例１（第１マトリックス、第２マトリックス不含）
新規な獣用子宮注入剤は、１００ｍｌ換算で、残部のリファキシミン自己マイクロエマルジョン、吸着担体０．１ｇ、成長修復因子（オリゴペプチド－１／銅ペプチド：コラーゲンペプチド：ヒアルロン酸ナトリウム＝０．３：１：３）４．３ｇからなり、
その調製方法は、以下のステップを含む。

（１）ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油エーテル（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＲＨ ４０）９．６ｇ、ジエチレングリコールモノエチルエーテル（Ｔｒａｎｓｃｕｔｏｌ Ｐ）４８ｇをそれぞれ秤量してボルテックスミキサーに投入してボルテックス混合し、カプリル酸カプリン酸モノグリセリド（Ｃａｐｍｕｌ ＭＣＭ）３８．４ｇを上記混合物に添加し、ボルテックス混合し、空白自己マイクロエマルジョンを得、４ｇのリファキシミンを前記空白自己マイクロエマルジョンに溶解し、リファキシミン自己マイクロエマルジョンを調製した。
（２）ケイ酸カルシウム（ＦＬＯＲＩＴＥ ＰＳ－１０）と親水性ヒュームドシリカ（ＡＥＲＯＳＩＬ ３８０）を質量比２：１で角錐ミキサーに入れて均一に混合し、吸着担体混合物を調製した。
（３）吸着担体を角錐ミキサーに入れて、配合量の成長修復因子を添加して均一に撹拌し、成長修復因子担持粒子を調製した。
（４）前記成長修復因子担持粒子をリファキシミン自己マイクロエマルジョンに添加し、ボルテックスせん断を１０～１５ｍｉｎ行い、リファキシミン子宮注入剤を得た。
調製環境温度を２０℃～２５℃、湿度を６０％以下に制御した。

比較例２（第２マトリックス不含）
新規な獣用子宮注入剤は、１００ｍｌ換算で、リファキシミン自己マイクロエマルジョン５ｇ、吸着担体１ｇ、成長修復因子（オリゴペプチド－１／銅ペプチド：コラーゲンペプチド：ヒアルロン酸ナトリウム＝０．３：１：３）４．３ｇ、キトサン９ｇ、残部の注射用水からなり、
その調製方法は、以下のステップを含む。

（１）ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油エーテル（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＲＨ ４０）９．６ｇ、ジエチレングリコールモノエチルエーテル（Ｔｒａｎｓｃｕｔｏｌ Ｐ）４８ｇをそれぞれ秤量してボルテックスミキサーに投入してボルテックス混合し、カプリル酸カプリン酸モノグリセリド（Ｃａｐｍｕｌ ＭＣＭ）３８．４ｇを上記混合物に添加し、ボルテックス混合し、空白自己マイクロエマルジョンを得、４ｇのリファキシミンを前記空白自己マイクロエマルジョンに溶解し、リファキシミン自己マイクロエマルジョンを調製した。
（２）ケイ酸カルシウム（ＦＬＯＲＩＴＥ ＰＳ－１０）と親水性ヒュームドシリカ（ＡＥＲＯＳＩＬ ３８０）を質量比２：１で角錐ミキサーに入れて均一に混合し、吸着担体混合物を調製した。
（３）配合量の９０％の吸着担体を原料タンクに入れ、配合量のリファキシミン自己マイクロエマルジョンを添加して均一に撹拌し、自己マイクロエマルジョン担持粒子を調製した。
（４）配合量の残部（１０％）の吸着担体を角錐ミキサーに入れて、配合量の成長修復因子を添加して均一に撹拌し、成長修復因子担持粒子を調製した。
（５）配合量のキトサン、注射水をボルテックスミキサーに添加し、常温下で液体が清澄なゾル状態になるまで混合撹拌した後、前記マイクロエマルジョン担持粒子と前記成長修復因子担持粒子を添加し、ボルテックスせん断を１０～１５ｍｉｎ行い、真空凍結乾燥し、窒素ガスを充填して密封し、含有量の規格０．２ｇ：１００ｍｌのリファキシミン子宮注入剤凍結乾燥粉末を調製し、凍結乾燥粉末は遮光下冷蔵保管し、使用する時に注射水（１００ｍＬ／部、リフォキシミン０．２ｇ／部換算）を添加して溶解し、均一に振って、注入剤が懸濁ハイドロゾル状態になると、子宮内灌流を行った。
調製環境温度を２０℃～２５℃、湿度を６０％以下に制御した。

比較例３（成長修復因子不含）
新規な獣用子宮注入剤は、１００ｍｌ換算で、リフォキシミン自己マイクロエマルジョン５ｇ、吸着担体０．９ｇ、水溶性シルクフィブロイン１０ｇ、Ｇａｎｔｒｅｚ ＡＮ ０．５ｇ、残部の注射用水からなり、
その調製方法は、以下のステップを含む。

（１）ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油エーテル（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＲＨ ４０）９．６ｇ、ジエチレングリコールモノエチルエーテル（Ｔｒａｎｓｃｕｔｏｌ Ｐ）４８ｇをそれぞれ秤量してボルテックスミキサーに投入してボルテックス混合し、カプリル酸カプリン酸モノグリセリド（Ｃａｐｍｕｌ ＭＣＭ）３８．４ｇを上記混合物に添加し、ボルテックス混合し、空白自己マイクロエマルジョンを得、４ｇのリファキシミンを前記空白自己マイクロエマルジョンに溶解し、リファキシミン自己マイクロエマルジョンを調製した。
（２）ケイ酸カルシウム（ＦＬＯＲＩＴＥ ＰＳ－１０）と親水性ヒュームドシリカ（ＡＥＲＯＳＩＬ ３８０）を質量比２：１で角錐ミキサーに入れて均一に混合し、吸着担体混合物を調製した。
（３）吸着担体を原料タンクに入れ、配合量のリファキシミン自己マイクロエマルジョンを添加して均一に撹拌し、自己マイクロエマルジョン担持粒子を調製した。
（４）配合量の水溶性シルクフィブロイン、Ｇａｎｔｒｅｚ ＡＮ、注射用水をボルテックスミキサーに添加し、常温下で液体が清澄なゾル状態になるまで混合撹拌した後、前記自己ミクロエマルジョン担持粒子と前記成長修復因子担持粒子を添加し、ボルテックスせん断を１０～１５ｍｉｎ行い、真空凍結乾燥し、窒素ガスを充填して密封し、含有量の規格０．２ｇ：１００ｍｌのリファキシミン子宮注入剤凍結乾燥粉末を調製し、凍結乾燥粉末は遮光下冷蔵保管し、使用する時に注射用水（１００ｍＬ／部、０．２ｇリファキシミン／部換算）を添加して溶解し、均一に振って、注入剤が懸濁ハイドロゾル状態になると、子宮内灌流を行った。
調製環境温度を２０℃～２５℃、湿度を６０％以下に制御した。

実験例
（一）加速安定性実験
製剤品質基準草案を基礎として、中国動物薬典２０２０版付録中の『動物薬安定性試験指導原則』に基づき、実施例１～実施例５、比較例１～比較例３に対して加速安定性試験を行い、通常包装規格の製剤サンプルの性状及び含有量などについて考察、測定を行った。
実施例１～実施例５、比較例１～比較例３を市販の包装材（ガラス瓶）に入れて密封し、室温２５℃で放置してサンプルを残して６カ月間考察し、１カ月目、２カ月目、３カ月目、６カ月目にサンプルを採取して考察した。

加速安定性実験の結果を次の表に示す。

その結果から、次のことが明らかになった。
（１）実施例１、実施例５、比較例２、比較例３は、加速安定性に優れており、安定性の優劣は、実施例１、実施例５、比較例２、比較例３＞実施例３＞実施例４＞実施例２＞比較例１であった。
（２）実施例３（吸着担体は親水性ヒュームドシリカ）は、６ヶ月間加速後再溶解したところ、顕微鏡下でわずかに析出したリファキシミン結晶がヒドロゾル中に分散していることを確認し、一方、実施例１、実施例５、比較例２、比較例３は、全て吸着担体が質量比２：１のケイ酸カルシウムと親水性ヒュームドシリカとの混合物であり、このことから、ケイ酸カルシウムの吸着容量がより大きく、より多くの自己ミクロエマルジョンを吸着できることを示し、このため、吸着担体はケイ酸カルシウムと親水性ヒュームドシリカとの組み合わせが好ましく、実施例１、実施例５、比較例２、比較例３の加速安定性データから分かるように、吸着担体はリファキシミン自己ミクロエマルジョンを効果的に保護でき、リファキシジン子宮注入剤凍結乾燥粉末及びその再溶解した直接灌流子宮注入剤の安定性を高めることができた。
（３）実施例４（吸着担体は微結晶セルロース）は、３カ月加速後再溶解し始めたときにケーキが認められ、６カ月加速後再溶解すると様々な大きさの塊が瓶底に沈着し、ヒドロゾル状になりにくく、顕微鏡下で観察したところ、リファキシミン結晶粉末が析出していることを認め、このことから、親水性ヒュームドシリカやケイ酸カルシウムに比べて微結晶セルロースの吸着容量が小さく、凍結乾燥再溶解後の再分散性、懸濁性も劣ることを示した。
（４）実施例２（吸着剤不含）は、吸着剤による保護がないため、リファキシミン自己マイクロエマルジョンがヒドロゾル系に直接分散しており、加速２ケ月目から再溶解後に分離現象が現れ、加速時間が長くなればなるほど、分離現象が顕著になり、しかも子宮注入剤凍結乾燥粉末中のリファキシミン含有量も明らかに低下し、このことから、吸着剤は子宮注入剤凍結乾燥粉末製剤とその有効成分の安定性に重要な作用があることを示した。
（５）比較例１（自己マイクロエマルション投与系）は、成長修復因子担持粒子を懸濁したリファキシミン自己マイクロエマルション製剤であり、自己マイクロエマルジョンはリファキシミンの溶解度を高め、生物利用度を高めることができるが、製剤性状と有効成分の分解から、比較例１の加速安定性が悪いことを発見し、比較例１のリファキシミン子宮注入剤の貯蔵有効期間は最も短いと予測した。

（二）チキソトロピー－相転移温度及び相転移時間
本発明の子宮注入剤の相転移温度及び相転移時間を試験管倒立法により検出した。
１、相転移温度：液体状態の子宮注入剤２５ｍｌをバイアルに取り、バイアルを蓄熱式磁力加熱撹拌器に入れて、１℃＊５ｍｉｎ^－１の速度で２５℃～５０℃の温度範囲においてゆっくり昇温し、水銀温度計で温度を記録し、バイアル反転法によりバイアル内の液体が凝固する時の温度Ｔを測定した。

実験結果を次の表に示す。

その結果から、次のことが明らかになった。
（１）実施例１、実施例３、比較例３の子宮注入剤は、低温（２５℃～３２℃）で懸濁ヒドロゾル状態であり、３７℃の条件下では懸濁ヒドロゲル構造に変化し、反転すると流動せず、その相転移温度は３７℃であり、子宮注入剤をインビボ（約３８℃～３９℃）に灌流するとチキソトロピー性によりヒドロゲルになるような研究開発の目的に適合する。
（２）実施例１と比較して、比較例２では、水溶性シルクフィブロインのみからハイドロゲルマトリックスを調製したが、相転移温度は実施例１に近かった（約３８℃）。
（３）実施例１と比較して、実施例２の担持自己マイクロエマルジョンと成長修復因子がヒドロゾル系に直接分散されており、この結果、実施例２の相転移温度は４０℃となり、実施例２の液体子宮注入剤を子宮内に灌流してもチキソトロピー性によりヒドロゲルになることができるが、ヒドロゲルの粘度は低かった。
（４）実施例１と比較して、実施例４の吸着担体は微結晶セルロースに変更され、その相転移温度は３４℃になり、その結果、子宮注入剤が灌流中に気温の影響を受けやすくなる可能性があり、子宮注入剤は輸精管による灌流中にすでに部分的に凝固し、輸精管を閉塞し、灌流操作を継続することができず、製品の使用実行性に深刻な影響を与えた。
（５）実施例１と比較して、実施例５のヒドロゲルマトリックスが異なるため、液体子宮注入剤は３１℃で懸濁ヒドロゲル構造となり、実施例４と同様に、製品の使用実行性に深刻な影響を与えた。
（６）比較例１の子宮注入剤には温感受性チキソトロピーがなく、その結果、乳牛の子宮内での粘着性が悪くなった。
２、相転移時間：ヒドロゾル状態の子宮注入剤２５ｍｌを入れたガラス管３本を３８．５℃の恒温水浴鍋に入れ、子宮注入剤の変化を観察した。ガラス管を倒立させた後に子宮注入剤が流れなくなった場合には、その液体がヒドロゲルとなると考えられ、必要な最短時間はゲル化時間となった。

３つの子宮注入剤のゲル化時間の実験結果を次の表に示す。

その結果、実施例１、実施例３、実施例４、比較例２、比較例３の液体子宮注入剤は、３８．５℃の条件下でハイドロゲル状態になった時間が近く、実施例５の平均ゲル化時間は短く（約２７ｓ）、これらの液体子宮注入剤は乳牛の子宮に注入した後、均一に分散し、ハイドロゲルとなって子宮粘膜に付着し、薬効を発揮することができ、一方、実施例２は、ゲル化時間が長く、比較例１の子宮注入剤と同様に、乳牛の子宮に注入した後に流動可能な液体子宮注入剤は子宮底部に沈着し、子宮粘膜全体に均一に分散できない可能性がある。

（三）傷口に対する注射剤のフィット性のテスト
組織に対する注入剤ゲルの粘着性及びフィット性を評価するテスト方法では、ラットを選び、麻酔薬を腹腔内に注入して麻酔した後、背中の毛を剃り、直径１ｃｍの円形傷口をはさみで切り、液体の子宮注入剤を円形傷口に注入し、異なる変形により傷口に対するヒドロゲルのフィット性を観察した。
その結果から明らかなように、
（１）ピンセットで傷口を横方向、縦方向に引っ張っても、ラットの頭を両手でつかみ、足をねじって傷口を引っ張っても、異なる変形作用の下で、実施例１、実施例３、実施例４、比較例３のハイドロゲルはラットは傷口に対する粘着性が良好であり、ハイドロゲルと組織の間の剥離や亀裂を観察しておらず、このことから、ハイドロゲルは非常に良いフィット性を有し、組織に対して良好な粘着特性、傷口を閉鎖する作用があることを証明した。
（２）異なる変形作用の下で、実施例２、比較例２のハイドロゲルとラットの傷口上の組織との間に少しの剥離が見られた。
（３）実施例５のハイドロゲルは成膜性が最も良く、密着性が最も良かった。
（４）比較例１の液体子宮注入剤は、傷口箇所でハイドロゲルを形成できなかった。

（四）インビトロ分解性能のテスト
テスト方法：同じ重量、同じ体積の注入剤ゲル塊を５部取り、卵白リゾチーム（１０ｍｇ／ｍ Ｌ）を含むＰＢＳにそれぞれ浸漬し、完全に分解するまで３８．５℃の恒温でハイドロゲルのＰＢＳ中の状態を観察し、時間を記録した。

５つのハイドロゲル塊のインビトロ分解時間の結果を次の表に示す。

その結果、実施例１、実施例３、実施例４及び比較例３の液体子宮注入剤により形成されたハイドロゲルは、経時的にゆっくりと分解し、約１８ｈで完全に分解し、実施例２と比較例２のハイドロゲルの分解は速く、約１６ｈで完全に分解し、これらの処方はすべてリファキシミン子宮注入剤の「放乳期０日」の休薬期間の要件を満たし、一方、実施例５のハイドロゲル塊は丸１日（２４ｈ）でまだ完全に分解しておらず、休薬期間は合格しないが、約３２ｈでも完全に分解した。

（五）組織適合性とインビボ分解性のテスト
テスト方法：健康な成年雄ＳＤラットを選び、水と食事を自由に摂取させ、一定の環境温度と湿度を維持し、環境に適応させた。ラット背部皮下に本発明で得られた液体子宮注入剤を０．５ｍ Ｌ注射した後、それぞれ０ｈ、３ｈ、６ｈ、１０ｈ、１４ｈ、１８ｈ、２２ｈに注射部位の周囲組織の反応状況を観察した。
実験結果：ラット背部皮下に液体子宮注入剤を注射した後の常規の観察結果から明らかに用に、実施例１～実施例５及び比較例１～比較例３の液体子宮注入剤がインビボで形成したゲルの生体適合性は良好であり、注入初期に明らかな包嚢、毛細血管充血などの組織炎症反応が見られず、皮下組織との相互性が良好であり、各ゲル塊の皮下組織での分解時間は「インビトロ分解性能のテスト」の結果とほぼ一致し、比較例１（自己マイクロエマルション投与系）の子宮注入剤は約６ｍｉｎで皮下組織に完全に吸収された。
このことから、実施例５がインビボで形成したハイドロゲルの分解時間が長すぎることに加えて、他の４つの実施例で調製された子宮注入剤はすべて良好な組織適合性と生分解性を有し、本発明により調製された子宮注入剤は、生体内のハイドロゲルを組織に吸収・利用することができ、しかも第２マトリックスと成長修復因子（比較例２と比較例３）を添加しなくても、そのハイドロゲル塊の生体内の組織適合性に影響を及ぼさず、また、自己マイクロエマルジョン投与系（比較例１）は組織に迅速に吸収されて、薬効を発揮することができた。

（六）刺激性の評価方法
先の５つの実験結果から、実施例１はリファキシミン子宮注入剤凍結乾燥粉末の最適な処方であり、比較例１と比較例２の処方はいずれも実施例１の処方から１種類の材料を減らしたものであるため、比較例１と比較例２による刺激性は実施例１より小さいと推定できるので、実施例１と比較例１を代表的な処方として刺激性評価を行った。
健康な普通級の成体ニュージーランドウサギ２８匹を無作為にウィルス感染群と対照群に分け、これらのウサギには、子宮炎症状がなく、発情症状がなかった。
ウィルス感染群は正常な推奨用量の１倍、３倍、５倍用量で液体リファキシミン子宮注入剤を投与し、鈍針で薬液を膣内に灌流し、４８時間ごとに１回繰り返し、連続３回使用し、対照群は生理食塩水０．２ｍｌ／ｋｇで同様の操作を行った。
痛み、不安、濁った分泌物の流出、陰部局部の赤腫など、雌性カイウサギの膣内にリファキシミン子宮注入剤を灌流した後の全身状況及び局部反応を観察した。
カイウサギは最後に投与してから２４時間後、空気塞栓法を用いてカイウサギを殺し、解剖して膣標本を取り出し、縦切開し、肉眼で膣粘膜の充血、赤腫、分泌物の増加、びらんなどの刺激表現の有無を観察した。膣粘膜刺激反応スコア表及び膣粘膜刺激強度評価表に基づいて、膣粘膜刺激反応採点及び刺激強度評価を行った。

膣粘膜刺激反応評価表は以下の通りである。

膣粘膜刺激強度評価表は以下の通りである。

前記注入剤によるカイウサギの膣粘膜刺激反応強度を肉眼観察により評価した結果を次の表に示す。

試験結果から、次のことが明らかになった。
（１）投薬中、３群のカイウサギの全身状況に異常が見られず、膣口にも明らかな充血、赤腫や異常な分泌物の流出が見られなかった。
（２）取り出した膣の組織を肉眼で見ると、対照群は膣粘膜の充血、水腫及び出血点を認めておらず、実施例１ウイルス感染群の１つの膣サンプルに軽度の充血、少量の分泌物があっただけであり、２群の膣粘膜刺激指数は０～０．４であり、このことから、実施例１で調製された液体子宮注入剤はカイウサギの膣粘膜刺激強度に対して無刺激性であることを示し、一方、比較例１の膣粘膜刺激指数は０．５であり、このことから、比較例１の液体子宮注入剤は軽度刺激であり、実施例１に比べて刺激性が大きかったことを示している。
（３）３倍用量と５倍用量の実施例１、比較例１のリファキシミン子宮注入剤はいずれも膣粘膜に対する刺激性が小さく、軽度の刺激であった。
以上のことから、実施例１は対照群と刺激性が類似しており、比較例１よりも刺激性が小さかった。

（七）薬効の実験
１．本発明のリファキシミン子宮注入剤灌流による乳牛の乳汁残留の検出方法
ある大型の乳牛養殖場で子宮内膜炎と診断され、しかもいかなる抗菌薬物治療もしていない泌乳牛９頭を選び、本発明の処方１に記載されたリファキシミン子宮注入剤を子宮に注入した。投与前（０ｈ）に空白乳サンプルを採取し、その後、滅菌子宮洗浄器を用いて本発明の液体リファキシミン子宮注入剤１００ｍｌを子宮角内に注入し、４８ｈ後（２日後の同じ時間）に１回繰り返し、計２回投与した。最後の１回投与後の１、４、８、１２、１６、２０、２４、３２、４８、６０ｈ目にそれぞれの乳サンプル１０００ｍｌを採取し（毎回各泌乳領域で２５０ｍｌの乳サンプルを採取し、４つの泌乳領域をサンプリングし、均一に混合する）、ＨＰＬＣ分析を行い、乳サンプル中のリファキシミン含有量を測定し、乳サンプルの血中濃度と時間のデータ結果を下表に示す。

結果から明らかなように、
（１）子宮内膜炎を患った乳牛の子宮に、実施例１、比較例１及び比較例３のリファキシミン子宮注入剤を灌流した後、実施例１と比較例３では、乳中のリファキシミンの動力学的過程はよく似ており、１次吸収１コンパートメントオープンモデルに似ており、乳中のリファキシミン濃度が低く、投与１６ｈ後、乳中のリファキシミン濃度はすでに最低定量限界（方法の定量限界は０．０５μｇ／ｍｌ）にまで低下し、投与２０ｈ後、乳中ではすべてリファキシミンが測定されておらず、すでに乳中の最高残留限界量０．０６μｇ／ｍｌを下回っており、このことから、実施例１は休薬期間の要件を満たし、しかも成長修復因子（比較例３）を添加しなくても乳中のリファキシミンの動力学的過程に影響しないことを示している。
（２）データから、比較例１（自己マイクロエマルジョン投与系）では、１ｈ又は２ｈ時に乳試料の薬物濃度はすでにピークに達し、投与８ｈ後、乳中のリファキシミン濃度は０．０６μｇ／ｍｌ（最高残留限度量）だけを測定し、このことから、自己マイクロエマルジョン投与系は吸収が速く、分解も速く、本発明の子宮注入剤（実施例１）の薬効を発揮する時間が自己マイクロエマルジョン子宮注入剤より長いことを示した。
以上のことから、本発明により調製されたリファキシミン子宮注入剤（実施例１）は、自己マイクロエマルジョンを直接投与するよりも、乳中に薬物が残留するリスクを高めることなく、長期間薬効を発揮することができる。

２、本発明の前記リファキシミン子宮注入剤による乳牛子宮内膜炎の治療効果の試験
治験薬：
本発明の実施例１の前記リファキシミン子宮注入剤、規格１００ｍｌ；
本発明の比較例１の前記リファキシミン子宮注入剤、規格１００ｍｌ、
本発明の比較例３の前記レファキシミン子宮注入剤、規格１００ｍｌ、
対照薬：フルフェニコール子宮注入剤、含有量１０％；
試験方法：
ある大型の乳牛養殖場で子宮内膜炎と診断された乳牛７７頭を選び、無作為に１１群に分け、各群を７頭とし、群分けと処理は試験群分けと処理表に示された。
各薬物は子宮灌流法を用いて処理し、外陰の洗浄と消毒措置を厳格に実行し、個体の牛間交差感染を防止するために、すべて輸精銃のプラスチック外套管を投薬導管として採用し、１回使用すると投棄した。

試験の群分けと処理表は次のとおりである。

治療効果の判定：
（１）治癒（完全回復）：治療前後を対照すると、膣から排出された粘液は透明で異臭がなく、その他の臨床症状は消失し、正常な発情周期に回復し、正常に交配させて妊娠した。
（２）有効（明らかに好転）：治療前後を対照すると、子宮は明らかに軟化し、収縮性が強くなり、その他の症状は軽減したが、発情と交配後に妊娠していなかった。
（３）無効（明らかな好転なし）：治療前後を対照すると、治療前と比較して明らかな変化がなかった。
（４）産後から交配初日までの間隔（日）：空白対照群と比較した。
（５）全快受胎率：治療後に全快と判定された牛に精子輸精を行い、発情期内受胎率、一次発情期受胎率及び総受胎率を統計した。

前記リファキシミン子宮注入剤による乳牛子宮内膜炎の臨床治療効果を次の表に示す。

空白対照群の子宮内膜炎にかかった牛７頭の観察期間は１０日であり、病態は何ら改善しなかった。生産に影響を与えないように、すべての牛は観察期間後にすぐに薬を投与して治療した。
臨床治療効果から、実施例１のリフォキシミン子宮注入剤の高用量で灌流する場合、治癒率と有効率はすべて８５．７％であり、中等用量の治癒率と有効率はそれぞれ７１．４％と８５．７％であり、治療効果は低用量群より明らかに優れている。対照薬物であるフルベニコール群の治療効果は比較例３のリフォキシミン子宮注入剤の中等用量と同じであり、治療効果は比較例１の中等用量より良く、治療効果の順は、実施例１＞対照群＞比較例３＞比較例１＞空白群であったが、フルベニコールは、灌流後に乳牛に対して一定の刺激作用があり、躁動不安が認められた。

（八）その他の安定性実験
上述の実験結果から、実施例１が本発明のリフォキシミン子宮注入剤の最適な組み合わせであることを確認でき、製剤品質基準の草案に基づいて、中国動物薬典２０２０版付録中の「動物薬安定性試験指導原則」に基づいて、本発明の子宮注入剤凍結乾燥粉末（実施例１）に対して温度試験、光照射試験、高湿度試験、長期安定性試験を行い、通常の包装規格製剤サンプルの性状、検査中の主要指標及び含有量などについて考察と測定を行い、考察結果に基づいて有効期間を推定した。

（１）温度安定性試験
本発明の製剤を市販の包装材（ガラス瓶）に入れて密封し、冷蔵庫－１５℃、４℃、室温２５℃で３０日間放置してサンプルを残して考察し、５日ごとにサンプルを採取して考察した。結果から、本発明の製剤は上述の条件下で分離、変色などの現象が見られず、再溶解後に明らかなケーキング、分離、析出現象がなく、均一な懸濁ハイドロゾル状を維持し、この製剤の温度安定性が良いことを示した。
（２）照明試験
本発明の製剤を市販の包装材（ガラス瓶）に入れて密封し、蛍光灯を備えた照明ボックス又はその他の適切な照明装置に入れて、照度４５００±５００ｌｘの条件下で１０日間放置し、それぞれ５日目、１０日目にサンプリングした。その結果、本発明の製剤は分離、変色などの現象が見られず、再溶解後に明らかなケーキング、分離、析出現象がなく、均一な水性ゾル状を維持し、本製剤の光安定性が良いことを示した。
（３）高湿度試験
本発明の製剤を市販の包装材（ガラス瓶）に入れて密封し、２５℃±２℃、相対湿度９０％±５％の条件下で１０日間放置し、それぞれ５日目、１０日目にサンプリングして考察した。その結果、本発明の製剤は上述の条件下で吸湿性が要求を満たし、ケーキング、変色などの現象が見られず、再溶解後に明らかなケーキング、分離、析出現象がなく、均一な水性ゾル状を維持し、本製剤の高湿度安定性が良好であることを示した。
（４）有効期間
測定の結果、本製剤は遮光、密閉、２℃～８℃の条件で２４カ月を超えて保存可能であり、暫定的な有効期間は２４カ月であった。
なお、以上の実施例は、本発明の技術的解決手段を説明するためのものに過ぎず、本発明の保護範囲を限定するものではなく、好適実施例を参照して本発明を詳細に説明したが、当業者が理解できるように、本発明の技術的解決手段の本質及び範囲から逸脱することなく、本発明の技術的解決手段を修正又は均等置換することができる。

Claims (8)

1. リファキシミン自己マイクロエマルジョンを調製するステップ（１）と、
   吸着担体と前記リファキシミン自己マイクロエマルジョンとを混合して、自己マイクロエマルジョン担持粒子を調製し、吸着担体と成長修復因子とを混合して、成長修復因子担持粒子を調製するステップ（２）と、
   第１マトリックスと第２マトリックスと注射用水とを混合して注射マトリックスを調製し、前記注射マトリックスと前記自己マイクロエマルジョン担持粒子、前記成長修復因子担持粒子とを混合して前記子宮注入剤を調製するステップ（３）とを含み、
   前記吸着担体は、ケイ酸カルシウム、親水性ヒュームドシリカ、微結晶セルロースのうちの１種又は複数種であり、
   前記成長修復因子は、オリゴペプチド－１、銅ペプチドのうちの１種又は２種である表皮細胞成長因子を含み、
   前記第１マトリックスは、水溶性シルクフィブロイン、キトサン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、ポリビニルアルコールのうちの１種又は複数種であり、
   前記第２マトリックスは、メチルビニルエーテル－無水マレイン酸共重合体、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、プロピレントリオールのうちの１種又は複数種である、ことを特徴とする新規な獣用子宮注入剤の調製方法。
2. 前記リフォキシミン自己マイクロエマルション中のリフォキシミンの濃度が１８ｗｔ．％以下である、ことを特徴とする請求項１に記載の新規な獣用子宮注入剤の調製方法。
3. 前記リフォキシミン自己マイクロエマルション、前記吸着担体、前記表皮細胞成長因子、前記第１マトリックス、及び前記第２マトリックスの質量比が、（１～１０）：（０．３～１．８）：（０．０５～０．３）：（５～１４）：（０．４５～０．６５）である、ことを特徴とする請求項１に記載の新規な獣用子宮注入剤の調製方法。
4. 前記成長修復因子は、コラーゲンペプチド及び／又はヒアルロン酸ナトリウムをさらに含む、ことを特徴とする請求項１に記載の新規な獣用子宮注入剤の調製方法。
5. 前記リフォキシミン自己マイクロエマルション中のリフォキシミンの濃度が４ｗｔ．％であり、前記吸着担体は質量比２：１のケイ酸カルシウムと親水性ヒュームドシリカとの混合物であり、前記成長修復因子は質量比０．３：１：３の表皮細胞成長因子、コラーゲンペプチド及びヒアルロン酸ナトリウムの混合物であり、前記第１マトリックスは水溶性シルクフィブロインであり、前記第２マトリックスはメチルビニルエーテル－無水マレイン酸共重合体であり、前記リフォキシミン自己マイクロエマルジョン、前記吸着担体、前記成長修復因子、前記第１マトリックス、前記第２マトリックスの質量比は５：１：４．３：１０：０．５である、ことを特徴とする請求項１に記載の新規な獣用子宮注入剤の調製方法。
6. 前記ステップ（３）で調製された前記子宮注入剤を凍結乾燥するステップ（４）をさらに含む、ことを特徴とする請求項１に記載の新規な獣用子宮注入剤の調製方法。
7. 請求項１～６のいずれかに記載の調製方法により調製される、ことを特徴とする新規な獣用子宮注入剤。
8. 前記注入剤を注射用水に添加して溶解し、均一に振った後、注入剤溶液が懸濁ヒドロゾル状態になると子宮内灌流を行う、ことを特徴とする請求項７に記載の新規な獣用子宮注入剤の使用方法。

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