JP2023539247A - Ｇｌｐ－１受容体アゴニスト融合物をコードするウイルスベクター及びネコの代謝性疾患の治療におけるその使用 - Google Patents

Abstract

ネコにおけるＩＩ型糖尿病を治療するための組成物及び方法が提供される。ネコＧＬＰ－１受容体アゴニストをコードする配列を含む核酸分子を含むウイルスベクターが提供される。【選択図】なし

Description

米国では、４００匹当たり１匹のネコと５００匹当たり１匹のイヌが、人間の糖尿病と同様の症状を有する。現在の標準治療は、頻繁に動物病院を訪れ、その都度診断を受けることに併せて、飼い主による１日２回のインスリン注射であるが、これらは、これらの動物の飼い主にとって高価で、時間がかかり、かつ不便である。

ＩＩ型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）は、ネコに見られる最も一般的な形態であり、症例の約９０％を占めている。危険因子には、加齢、性別が雄であること、肥満、室内飼い、運動不足、品種、及び長時間作用型又は反復ステロイド又は酢酸メゲストロール投与が含まれる。これらの因子は、インスリン感受性の低下につながり、インスリンを産生するためのβ細胞への需要を増加させる。Ｇｏｔｔｌｅｉｂ ａｎｄ Ｒａｎｄ，Ｍａｎａｇｉｎｇ ｆｅｌｉｎｅ ｄｉａｂｅｔｅｓ：ｃｕｒｒｅｎｔ ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ，Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ：Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｒｅｐｏｒｔｓ，Ｊｕｎｅ ２０１８：９ ３３－４２。

グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ－１）は、グルコース恒常性において中心的な役割を果たす内因性ペプチドホルモンである。ＧＬＰ－１受容体アゴニストは、現在、糖尿病の治療のためにヒトで使用されている。ＧＬＰ－１及び他のＧＬＰ－１受容体アゴニストは、インスリン放出を増強し、インスリン感受性を増加させ、β細胞の喪失を防止し、また胃内容排出を遅延させることによって、高血糖を制御する能力を有する。アゴニストをより長い半減期を有するタンパク質に融合させることによって、天然ホルモンの短い半減期を克服するように設計されたＧＬＰ－１受容体アゴニストは、Ｔ２ＤＭの治療のための重要な治療薬として浮上している。

ネコでの使用に適合された、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ－１）受容体アゴニスト融合タンパク質をコードするウイルスベクターが、本明細書で提供される。これらのウイルスベクターは、いくつかの実施形態では、融合パートナーを含まないＧＬＰ－１受容体アゴニストのベクター媒介送達と比較して、又はネコでの使用に適合していない融合パートナーと比較して、ネコでのＧＬＰ－１受容体アゴニストの持続的発現、及び／又は半減期の増加を達成し得る。そのようなウイルスベクターの製造及び使用方法が更に提供される。

一態様では、融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含む核酸を含むウイルスベクターが提供される。融合タンパク質は、（ａ）分泌シグナルペプチドを含むリーダー配列と、（ｂ）グルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）受容体アゴニストと、（ｃ）（ｉ）ネコＩｇＧ Ｆｃ若しくはその機能的バリアント、又は（ｉｉ）ネコアルブミン若しくはその機能的バリアントのいずれかを含む融合ドメインと、を含む。一実施形態では、ベクターは、アデノ随伴ウイルスベクターである。

一実施形態では、（ｉ）リーダー配列の分泌シグナルペプチドが、ネコトロンビンシグナルペプチドを含み、（ｉｉ）リーダー配列が、ネコトロンビンプロペプチドを含み、かつ／又は（ｉｉｉ）リーダー配列が、ネコトロンビンリーダー配列を含む。別の実施形態では、リーダー配列は、ネコＩＬ－２リーダー配列を含む。一実施形態では、ＧＬＰ－１受容体アゴニストは、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、及びその機能的バリアントから選択される。

一実施形態では、融合ドメインは、配列番号１１の配列、又はそれと少なくとも９０％の同一性を共有する配列、又はその機能的バリアントを有するネコＩｇＧ Ｆｃである。別の実施形態では、融合ドメインは、配列番号１２の配列、又はそれと少なくとも９０％の同一性を共有する配列、又はその機能的バリアントを有するネコアルブミンである。

別の実施形態では、ウイルスベクターは、ＡＡＶカプシドと、ＡＡＶカプシド中にパッケージングされたベクターゲノムとを含み、このベクターゲノムは、ＡＡＶ逆位末端反復（ＩＴＲ）、融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列、及び融合タンパク質の発現を指示する調節配列を含む。

別の態様では、ネコの代謝性疾患の治療に使用するのに好適な薬学的組成物が提供される。組成物は、水性液体と、本明細書に記載されるウイルスベクターとを含む。

更に別の態様では、本明細書に記載されるウイルスベクターの使用は、代謝性疾患、任意選択的には糖尿病を有するネコ対象を治療するための医薬の製造のために提供される。

別の態様では、代謝性疾患を有するネコ対象を治療する方法が提供される。方法は、有効量の本明細書に記載されるウイルスベクター又は組成物をネコ対象に投与することを含む。
本発明の他の態様及び利点は、以下の本発明の詳細な説明から、容易に明らかとなるであろう。

デュラグルチドの概略図である。 アルビグルチドの概略図である。 ＨＥＫ２９３細胞におけるＧＬＰ－１発現を示す棒グラフである。ＨＥＫ２９３細胞を、ネコＧＬＰ１Ｒアゴニストを発現するプラスミドでトランスフェクトし、トランスフェクションの４８時間後に、活性ＧＬＰ－１発現を、活性型ＧＬＰ－１（７－３６）に特異的なＥＬＩＳＡによって測定した（図２Ａ）。図１Ｂは、対照に対して測定された応答比を示す。培養上清中のＧＬＰ－１活性を、細胞ベースのＧＬＰ－１活性アッセイ（ＧｅｎｅＢＬＡｚｅｒ ＧＬＰ１Ｒ－ＣＲＥ－ｂｌａ ＣＨＯ－Ｋ１細胞ベースのアッセイ）によって測定した。ｆｅＴｒｂ．ｆｅＧＬＰ１－ＩｇＧ Ｆｃ（ＣＢ７．ネコデュルラグルチド（ｆｅＴｒｂ）．ｒＢＧ）を用いた融合タンパク質構築物は、試験した構築物のうち最高の発現／活性を示した。 Ｒａｇ１ＫＯマウスにおけるＧＬＰ－１のパイロット発現を示す。Ｒａｇ１ＫＯ雌マウスに、示されるベクターのＩ．Ｍ．を介して、１×１０^１１ＧＣ／マウスを投薬した。毎週採血が行われた。ＧＬＰ－１ＥＬＩＳＡ及びＧＬＰ－１活性アッセイを実施した。図３Ａは、処置マウスの毎週の採血から行われたＧＬＰ－１ＥＬＩＳＡの結果を示す。図３Ｂは、注射後２１日目における血清ＧＬＰ－１活性を示す。 ＡＡＶｒｈ９１．ＣＢ７．ＣＩ．ネコデュルラグルチド（ｆｅＴｒｂｓｓ）及びｐＡＡＶ．ＣＢ７．ＣＩ．ｆｅＧＬＰ１－ＳＡ（ｆｅＴｒｂ）．ＲＢＧを用いて実施したネコ研究の結果を示す。ネコは、Ｉ．Ｍ．注射を介して様々な用量のベクターで処置され、導入遺伝子の発現及び体重は、注射後少なくとも２８日間記録された。図４Ａは、１７週までに５×１０^１１ＧＣ／ｋｇのＡＡＶｒｈ９１．ＣＢ７．ＣＩ．ネコデュルラグルチド（ｆｅＴｒｂｓｓ）で処置した個々のネコの週ごとの体重を示す。図４Ｂは、図４Ａからのネコについての対応する血清レベルｆｅ－ＧＬＰ－１－Ｆｃを示す（平均＋／－ＳＤで示す）。図４Ｃは、５×１０^１１ＧＣ／ｋｇ、１×１０^１１ＧＣ／ネコ、１×１０^１０ＧＣ／ネコ、又は１×１０^９ＧＣ／ネコのいずれかでのＡＡＶｒｈ９１．ＣＢ７．ＣＩ．ネコデュルラグルチド（ｆｅＴｒｂｓｓ）のＩＭ投与２８日後のＡＡＶ用量と血清ネコＧＬＰ－１－Ｆｃレベルとの関係を示す。（示されるデータは、平均＋／－ＳＤ、ｎ＋４／群である）図４Ｄは、１×１０^１１ＧＣ／ネコのｐＡＡＶ．ＣＢ７．ＣＩ．ｆｅＧＬＰ１－ＳＡ（ｆｅＴｒｂ）．ＲＢＧを投与されたネコにおける、２８日間にわたるｆｅ－ＧＬＰ－１－ＳＡの相対発現を示す（平均＋／－ＳＤ、ｎ＝４）。図４Ｅは、上記のコホートからの２８日目のネコの血清中のｆｅ－ＧＬＰ－１タンパク質の活性の比較である。図４Ｆは、体重減少［］を示す。図４Ｇは、動物におけるネコＧＬＰ１Ｆｃ発現を示す。 ｐＡＡＶ．ＣＢ７．ＣＩ．ネコデュルラグルチド（ｆｅＴｒｂｓｓ）．ＲＢＧのプラスミドマップである。 ｐＡＡＶ．ＣＢ７．ＣＩ．ネコアルビグルチド（ｆｅＴｒｂ）．ＲＢＧのプラスミドマップである。 ｐＡＡＶ．ＣＢ７．ＣＩ．ｆｅＧＬＰ１－ＳＡ（ｆｅＴｒｂ）．ＲＢＧのプラスミドマップである。 ネコトロンビンシグナル配列（配列番号１４）を有するネコデュラグルチドを含むアミノ酸配列を示す。 ネコトロンビンシグナル配列（配列番号１８）を有するネコアルビグルチドを含むアミノ酸配列を示す。 ネコトロンビンシグナル配列（配列番号１６）を有するネコＧＬＰ１－ＳＡを含むアミノ酸配列を示す。 ＡＡＶネコＧＬＰ－１－ＳＡの筋肉内注射の０～１８２日後の試験日におけるｆＧＬＰ－１－ＳＡの血清濃度のグラフを示す。点線は、標的治療閾値を示す。 ＡＡＶネコＧＬＰ－１－Ｆｃの筋肉内注射後の３３０日間のネコＧＬＰ－１－Ｆｃの血清濃度のグラフを示す。 ＡＡＶ ｆＧＬＰ－１－Ｆｃ処置ネコにおける抗導入遺伝子産物抗体応答のグラフを示す。 ＡＡＶネコＧＬＰ－１－ＳＡの筋肉内注入後の３３６日間のｆＧＬＰ－１－ＳＡの発現のグラフを示す（群当たりｎ＝４）。

長時間作用型ＧＬＰ－１受容体アゴニスト融合タンパク質発現構築物は、ネコ科動物での使用のために開発されている。分泌シグナルペプチドを含むリーダー配列、並びに得られた融合タンパク質の循環時間を延長することを意図した融合ドメインが提供される。

本明細書に記載の組成物及び方法は、ネコ科動物における使用を意図している。ネコ（ネコ科）という用語は、とりわけチーター、プーマ、ジャガー、ヒョウ、ライオン、オオヤマネコ、トラ、及び飼いネコを含む３７種のネコのいずれかを指す。好ましい一実施形態では、対象は、飼いネコである。

多数の経路を介して、特にｒＡＡＶベクター等の組換えベクターによって媒介されるインビボでの発現によって、これらの構築物をそれを必要とする対象に送達することが記載される。Ｔ２ＤＭ又はメタボリックシンドロームを治療することを必要とする獣医学的対象におけるレジメンにおいて、これらの構築物を使用し、対象におけるＧＬＰ－１の半減期を増加させる方法も提供される。加えて、対象におけるＧＬＰ－１の活性を増強するための方法が提供される。また、それを必要とする獣医学的対象における体重減少を誘導するための方法も提供される。

グルカゴン様ペプチド１又はＧＬＰ－１は、プログルカゴン遺伝子の転写産物に由来するインクレチンである。インビボでは、グルカゴン遺伝子は、ＧＬＰ－１及びＧＬＰ－２の２つの形態であるグルカゴンを形成するためにタンパク質分解処理される１８０個のアミノ酸プレプロポリペプチドを発現する。元の配列決定研究は、ＧＬＰ－１が３７個のア
ミノ酸残基を有することを示した。しかしながら、後続の情報は、このペプチドがプロペプチドであり、アミノ末端から６個のアミノ酸を除去して、ＧＬＰ－１の活性型であるＧＬＰ－１（７－３７）の形態に更に処理されたことを示した。３７位のグリシンもまた、インビボでアミドに形質転換されて、ＧＬＰ－１（７－３６）アミドを形成する。ＧＬＰ－１（７－３７）及びＧＬＰ－１（７－３６）アミドは、同等の効力を有するインスリン刺激ホルモンである。したがって、本明細書で使用される場合、本明細書で有用であるＧＬＰ－１の生物学的に「活性」な形態は、ＧＬＰ－１－（７－３７）及びＧＬＰ－１－（７－３６）ＮＨ_２である。

ＧＬＰ－１受容体アゴニストは、グルカゴン様ペプチドの作用を模倣する抗糖尿病薬のクラスである。ＧＬＰ－１は、消化中に腸から放出された後に体に影響を与えるいくつかの天然に存在するインクレチン化合物の１つである。ＧＬＰ－１受容体に結合し活性化することにより、ＧＬＰ－１受容体アゴニストは、血糖値を低下させることができ、これはＴ２ＤＭ患者が血糖制御を成し遂げるのに役立つ。本明細書で使用される場合、「ＧＬＰ－１受容体アゴニスト」という用語は、ＧＬＰ－１又はその機能的断片、ＧＬＰ－１のアミノ酸配列バリアント又はその機能的断片、及びＧＬＰ－１受容体の他のポリペプチドアゴニスト（例えば、エキセジン－４及びそのバリアント）を指す。本開示は、ＧＬＰ－１受容体アゴニストの１つ以上のコピー、並びにかかる融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド及びベクターを含む融合タンパク質を提供する。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、（ａ）分泌シグナルペプチドを含むリーダー配列と、（ｂ）グルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）受容体アゴニストと、（ｃ）（ｉ）ネコＩｇＧ Ｆｃ若しくはその機能的バリアント、又は（ｉｉ）ネコアルブミン若しくはその機能的バリアントのいずれかを含む融合ドメインと、を含む融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含む。一実施形態では、融合タンパク質は、ネコトロンビンリーダー配列、ＧＬＰ－１受容体アゴニスト、及びネコＩｇＧ Ｆｃ又はその機能的バリアントを含む。別の実施形態では、融合タンパク質は、ネコトロンビンリーダー、ＧＬＰ－１受容体アゴニスト、及びネコアルブミン又はその機能的バリアントを含む。別の実施形態では、融合タンパク質は、ネコトロンビンリーダー、ＧＬＰ－１受容体アゴニストの２つのコピー、及びネコアルブミン又はその機能的バリアントを含む。別の実施形態では、融合タンパク質は、ネコトロンビンリーダー、ＧＬＰ－１受容体アゴニストの２つのコピー、及びネコＩｇＧ
Ｆｃ又はその機能的バリアントを含む。

いくつかの実施形態では、ＧＬＰ－１受容体アゴニストは、野生型配列の機能を保持する、本明細書に記載の、又は当該技術分野で既知のＧＬＰ－１核酸又はアミノ酸配列から最大約１０％のバリエーションを含み得るバリアントを含む。本明細書で使用する場合、「機能を保持する」とは、必ずしも同じレベルの発現又は活性ではないが、核酸又はアミノ酸が野生型配列と同じ方式で機能することを意味する。例えば、一実施形態では、機能的バリアントは、野生型配列と比較して、増加した発現又は活性を有する。別の実施形態では、機能的バリアントは、野生型配列と比較して、発現又は活性が低下している。一実施形態では、機能的バリアントは、野生型配列と比較して、発現又は活性の１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％以上の増加又は減少を有する。

ＧＬＰ－１受容体アゴニストを安定化融合ドメインに融合させるいくつかのヒト用薬物は、当該技術分野において既知である。これらには、アルビグルチド、リラグルチド、デュラグルチド、及びリキシセナチド（化学名デス－３８－プロリン－エキセンジン－４（ヘロデルマ・ススペクツム（Ｈｅｌｏｄｅｒｍａ ｓｕｓｐｅｃｔｕｍ））－（１－３９）－ぺプチジルペンタ－Ｌ－リシル－Ｌ－リシンアミドとしても知られている）が含まれる。本開示では、接頭辞「ネコ（ｆｅ）」が先行するヒト用薬物の用語は、ヒト融合ドメインがその融合ドメインのネコ相同体で置き換えられ、ＧＬＰ－１受容体アゴニストがヒ
トタンパク質の断片又はバリアントであり、ＧＬＰ－１受容体アゴニストがその断片又はバリアントのネコ相同体で置き換えられる、ヒト用薬物のバリアントを指す。

デュラグルチドは、各モノマーが１つのＧＬＰ－１類似体部分及び１つのＩｇＧ４Ｆｃ領域からなるジスルフィド結合ホモ二量体融合ペプチドである。Ｙｕ Ｍ，ｅｔ ａｌ．（２０１８）Ｂａｔｔｌｅ ｏｆ ＧＬＰ－１ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．デュラグルチドの概略図を図１Ａに示す。ＷＯ２００５／０００８９２Ａ２を参照されたい（参照により本明細書に組み込まれる）。

アルビグルチドは、ヒトアルブミンに融合したＧＬＰ－１類似体の２つのコピーで構成される組換えタンパク質である。この分子は、ＤＰＰ－４分解に対する耐性を改善するために、ＧＬＰ－１類似体の両方のコピーにおいてＡｌａに対してＧｌｙ８置換を有する。アルビグルチドの概略図を図１Ｂに示す。

一実施形態では、融合物は、ネコの異種配列と組み合わせたＧＬＰ－１類似体を含む。ＧＬＰ－１類似体とは、天然ネコＧＬＰ－１（７－３７）と少なくとも９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、若しくは１００％の同一性を共有するポリペプチドを意味する。一実施形態では、ＧＬＰ－１類似体は、天然配列と比較して、最大で１、２、又は３個のアミノ酸置換を有する。天然ネコＧＬＰ－１（１－３７）は、ＨＤＥＦＥＲＨＡＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＲＧ（配列番号１）の配列を有し、ＧＬＰ－１（７－３７）は、ＨＡＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＲＧ（配列番号２）の配列を有する。いくつかの実施形態では、天然ＧＬＰ－１配列を変更して、その１つ以上の特徴を最適化することが望ましい。例えば、一実施形態では、ＧＬＰ－１類似体は、天然配列と比較して、Ａ８Ｇ、Ｇ２２Ｅ、及びＲ３６Ｇから選択される１つ、２つ、又は３つのアミノ酸置換を含有する（参照として完全長の天然ＧＬＰ－１番号付けを使用する）。明確にするために、ＧＬＰ－１（７－３７）に関して、これらのアミノ酸置換は、Ａ２Ｇ、Ｇ１６Ｅ、及びＲ３０Ｇである。これらの置換は、ＤＰＰ－４不活性化からの保護（Ａ８Ｇ）、溶解度の増加（Ｇ２２Ｅ）、及び潜在的なＴ細胞エピトープを除去するために３６位（Ｒ３６Ｇ）のアルギニンをグリシン残基で置換することによる免疫原性の低下を含む、ＧＬＰ－１の臨床プロファイルの有効性を改善することが示されている。一実施形態では、ＧＬＰ－１類似体は、ネコＧＬＰ－１のＤＰＰ－ＩＶ耐性バリアントである。一実施形態では、ＧＬＰ－１類似体は、配列番号３：ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＥＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＧＧを含む、又はそれからなる配列を有する。別の実施形態では、ＧＬＰ－１類似体は、配列番号４：ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＲＧを含む、又はそれからなる配列を有する。別の実施形態では、ＧＬＰ－１受容体アゴニストは、配列番号５：ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＰＳ（エキセジン－４）を含む、又はそれからなる配列を有するか、又はその機能的バリアントを有する。一実施形態では、バリアントは、配列番号５と少なくとも９０％の同一性、９５％の同一性、９７％の同一性、９８％の同一性、９９％の同一性、又は１００％の同一性を共有する。別の実施形態では、ＧＬＰ－１受容体アゴニストは、配列番号６：ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＬＳＫＱＭＥＥＥＡＶＲＬＦＩＥＷＬＫＮＧＧＰＳＳＧＡＰＰＳＫＫＫＫＫＫを含む、又はそれからなる配列を有するか、又はその機能的バリアントを有する。一実施形態では、バリアントは、配列番号６と少なくとも９０％の同一性、９５％の同一性、９７％の同一性、９８％の同一性、９９％の同一性、又は１００％の同一性を共有する。一実施形態では、ＧＬＰ－１類似体の２つ以上のコピーが融合タンパク質に存在する。別の実施形態では、ＧＬＰ－１受容体アゴニストは、ＧＬＰ－１（７－３７）又はそのＤＰＰ－ＩＶ耐性バリアントの２つのタンデムコピーである。

融合タンパク質は、分泌シグナルペプチドを含み得るリーダー配列を含み得る。本明細書で使用される場合、「リーダー配列」という用語は、ポリペプチドの任意のＮ末端配列を指す。

リーダー配列は、投与が最終的に意図されるのと同じ種、すなわち、ネコ科動物に由来し得る。本明細書で使用される場合、「由来する」又は「から由来する」という用語は、配列又はタンパク質が特定の対象種に由来するか、又は特定の対象種に由来するタンパク質又は配列と同じ配列を共有することを意味する。例えば、ネコに「由来する」リーダー配列は、ネコで発現されるのと同じリーダー配列と同じ配列（又は本明細書で定義されるようなそのバリアント）を共有する。しかしながら、指定された核酸又はアミノ酸は、実際にはネコから供給される必要はない。類似のタンパク質（例えば、相同体）の突然変異誘発、又は核酸若しくはアミノ酸配列の人工産生を含む、所望の配列を産生することができる様々な技術が当該技術分野で既知である。「誘導された」核酸又はアミノ酸は、誘導された配列の実際の供給源にかかわらず、それが「誘導」される種において同じ核酸又はアミノ酸の機能を保持する。

「アミノ酸置換」という用語及びその同義語は、アミノ酸を別の代替アミノ酸で置き換えることによるアミノ酸配列の修飾を包含することを意図している。置換は、保存的置換であり得る。それは、非保存的置換であってもよい。保存的という用語は、２つのアミノ酸を指す場合、それらのアミノ酸が、当業者によって認識される一般的な特性を共有することを意味することを意図している。例えば、疎水性非酸性側鎖を有するアミノ酸、疎水性酸性側鎖を有するアミノ酸、親水性非酸性側鎖を有するアミノ酸、親水性酸性側鎖を有するアミノ酸、及び親水性塩基性側鎖を有するアミノ酸。一般的な特性はまた、疎水性側鎖を有するアミノ酸、脂肪族疎水性側鎖を有するアミノ酸、芳香族疎水性側鎖を有するアミノ酸、極性中性側鎖を有するアミノ酸、電荷を有する側鎖を有するアミノ酸、電荷を有する酸性側鎖を有するアミノ酸、及び電荷を有する塩基性側鎖を有するアミノ酸であってもよい。天然に存在するアミノ酸及び天然に存在しないアミノ酸の両方が、当該技術分野で既知であり、実施形態では、代替アミノ酸として使用され得る。アミノ酸を置換するための方法は、当業者に周知であり、アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列の変異を含むが、これに限定されない。本明細書における「１つ以上」への言及は、例えば、１、２、３、４、５、６、又はそれ超の個々の実施形態を包含することを意図する。

一実施形態では、リーダーは、ネコトロンビン（第ＩＩ因子）配列である。一実施形態では、トロンビンリーダーは、配列番号７：ＭＡＨＩＲＧＬＷＬＰＧＣＬＡＬＡＡＬＣＳＬＶＨＳＱＨＶＦＬＡＰＱＱＡＬＳＬＬＱＲＶＲＲで示される配列を有するか、又は最大で１、２、若しくは３個のアミノ酸置換を有するその機能的バリアントを有する。いくつかの実施形態では、リーダーは、シグナルペプチド及びプロペプチドを含む。一実施形態では、リーダー配列の分泌シグナルペプチドは、ネコトロンビンシグナルペプチドを含む。一実施形態では、シグナルペプチドは、ＭＡＨＩＲＧＬＷＬＰＧＣＬＡＬＡＡＬＣＳＬＶＨＳ（配列番号８）、又は最大で１、２、若しくは３個のアミノ酸置換を有するその機能的バリアントである。別の実施形態では、リーダー配列は、ネコトロンビンプロペプチドを含む。一実施形態では、プロペプチドは、ＱＨＶＦＬＡＰＱＱＡＬＳＬＬＱＲＶＲＲ（配列番号９）の配列、又は最大で１、２、若しくは３個のアミノ酸置換を有するその機能的バリアントを有する。

一実施形態では、リーダーは、ネコＩＬ－２配列である。一実施形態では、ＩＬ－２リーダーは、配列番号１０：ＭＹＫＩＱＬＬＳＣＩＡＬＴＬＩＬＶＴＮＳで示される配列、又は最大で１、２、若しくは３個のアミノ酸置換を有するその機能的バリアントを有する。

一実施形態では、所望のリーダーの機能的バリアントは、野生型配列の機能を保持する、本明細書に記載の、又は当該技術分野で既知のリーダー核酸又はアミノ酸配列から最大約１０％のバリエーションを含み得るバリアントを含む。

いくつかの実施形態では、プロペプチド及びＧＬＰ－１ペプチドの両方についてのコード領域は、プロペプチド及びＧＬＰ－１のコード配列の間にリンカーを伴うことなく単一の核酸配列に組み込まれる。

融合タンパク質は、融合ドメインを更に含む。融合ドメインは、一実施形態では、ネコＩｇＧ Ｆｃ断片（例えば、ＩｇＧ１ａ、ＩｇＧ１ｂ、又はＩｇＧ２）又はその機能的バリアントである。免疫グロブリンは、典型的には、インビボで長い循環半減期を有する。ＧＬＰ－１受容体アゴニスト（及びリーダー）をＩｇＧ Ｆｃに融合させることによって、ＧＬＰ－１の機能が維持されたまま、融合タンパク質の循環時間が延長される。

ネコＩｇＧ定常ドメインの２つのサブクラス、ＩｇＧ１及びＩｇＧ２が記載されており、ＩｇＧ１が優勢なサブクラス（約９８％）である。ネコＩＧＨＧ１重鎖遺伝子の２つの対立遺伝子（Ｃγ１ａ及びＣγ１ｂ）は、ＩｇＧ重鎖１ａ及び１ｂタンパク質をコードし、各遺伝子の使用頻度は、それぞれ約６２％及び３６％であることが報告されている。Ｌｕ ｅｔ ａｌ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｆｅｌｉｎｅ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｍＲＮＡｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｆｅｌｉｎｉｚｅｄ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｓｐｅｃｉｆｉｃ
ｔｏ ｆｅｌｉｎｅ ｐａｎｌｅｕｋｏｐｅｎｉａ ｖｉｒｕｓ，Ｓｃｉ Ｒｅｐ．Ｏｃｔ．２０１７；７：１２７１３、これらは参照により本明細書に組み込まれる。

本明細書で使用される場合、免疫グロブリンのＦｃ部分は、免疫学の分野における用語に一般的に付与される意味を有する。具体的には、この用語は、抗体からの２つの抗原結合領域（Ｆａｂ断片）を含有しない抗体断片を指す。Ｆｃ部分は、非共有結合相互作用及びジスルフィド結合によって会合する、両方の重鎖からの抗体の定常領域からなる。Ｆｃ部分は、ヒンジ領域を含み、ＣＨ２及びＣＨ３ドメインを通って抗体のｃ末端まで延在し得る。Ｆｃ部分は、１つ以上のグリコシル化部位を更に含み得る。一実施形態では、融合ドメインは、ネコＩｇＧ Ｆｃである。Ｆｃドメインは、ネコＩｇＧ１ａ、ネコＩｇＧ１ｂ、又はネコＩｇＧ２を含む任意のネコＩｇＧに由来することができる。一実施形態では、ネコＩｇＧ Ｆｃは、配列番号１１である：
ＡＲＫＴＤＨＰＰＧＰＫＰＣＤＣＰＫＣＰＰＰＥＭＬＧＧＰＳＩＦＩＦＰＰＫＰＫＤＴＬＳＩＳＲＴＰＥＶＴＣＬＶＶＤＬＧＰＤＤＳＤＶＱＩＴＷＦＶＤＮＴＱＶＹＴＡＫＴＳＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＰＩＬＨＱＤＷＬＫＧＫＥＦＫＣＫＶＮＳＫＳＬＰＳＰＩＥＲＴＩＳＫＡＫＧＱＰＨＥＰＱＶＹＶＬＰＰＡＱＥＥＬＳＲＮＫＶＳＶＴＣＬＩＫＳＦＨＰＰＤＩＡＶＥＷＥＩＴＧＱＰＥＰＥＮＮＹＲＴＴＰＰＱＬＤＳＤＧＴＹＦＶＹＳＫＬＳＶＤＲＳＨＷＱＲＧＮＴＹＴＣＳＶＳＨＥＡＬＨＳＨＨＴＱＫＳＬＴＱＳＰＧ．別の実施形態では、ネコＩｇＧ Ｆｃは、配列番号１１に対して少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９９％の同一性、又は少なくとも１００％の同一性を共有する。

別の実施形態では、融合ドメインは、ネコアルブミン又はその機能的バリアントである。一実施形態では、ネコアルブミンは、配列番号１２である：
ＥＡＨＱＳＥＩＡＨＲＦＮＤＬＧＥＥＨＦＲＧＬＶＬＶＡＦＳＱＹＬＱＱＣＰＦＥＤＨＶＫＬＶＮＥＶＴＥＦＡＫＧＣＶＡＤＱＳＡＡＮＣＥＫＳＬＨＥＬＬＧＤＫＬＣＴＶＡＳＬＲＤＫＹＧＥＭＡＤＣＣＥＫＫＥＰＥＲＮＥＣＦＬＱＨＫＤＤＮＰＧＦＧＱＬＶＴＰＥＡＤＡＭＣＴＡＦＨＥＮＥＱＲＦＬＧＫＹＬＹＥＩＡＲＲＨＰＹＦＹＡＰＥＬＬＹＹＡＥＥＹＫＧＶＦＴＥＣＣＥＡＡＤＫＡＡＣＬＴＰＫＶＤＡＬＲＥＫＶＬＡＳＳＡＫＥＲＬＫＣ
ＡＳＬＱＫＦＧＥＲＡＦＫＡＷＳＶＡＲＬＳＱＫＦＰＫＡＥＦＡＥＩＳＫＬＶＴＤＬＡＫＩＨＫＥＣＣＨＧＤＬＬＥＣＡＤＤＲＡＤＬＡＫＹＩＣＥＮＱＤＳＩＳＴＫＬＫＥＣＣＧＫＰＶＬＥＫＳＨＣＩＳＥＶＥＲＤＥＬＰＡＤＬＰＰＬＡＶＤＦＶＥＤＫＥＶＣＫＮＹＱＥＡＫＤＶＦＬＧＴＦＬＹＥＹＳＲＲＨＰＥＹＳＶＳＬＬＬＲＬＡＫＥＹＥＡＴＬＥＫＣＣＡＴＤＤＰＰＡＣＹＡＨＶＦＤＥＦＫＰＬＶＥＥＰＨＮＬＶＫＴＮＣＥＬＦＥＫＬＧＥＹＧＦＱＮＡＬＬＶＲＹＴＫＫＶＰＱＶＳＴＰＴＬＶＥＶＳＲＳＬＧＫＶＧＳＫＣＣＴＨＰＥＡＥＲＬＳＣＡＥＤＹＬＳＶＶＬＮＲＬＣＶＬＨＥＫＴＰＶＳＥＲＶＴＫＣＣＴＥＳＬＶＮＲＲＰＣＦＳＡＬＱＶＤＥＴＹＶＰＫＥＦＳＡＥＴＦＴＦＨＡＤＬＣＴＬＰＥＡＥＫＱＩＫＫＱＳＡＬＶＥＬＬＫＨＫＰＫＡＴＥＥＱＬＫＴＶＭＧＤＦＧＳＦＶＤＫＣＣＡＡＥＤＫＥＡＣＦＡＥＥＧＰＫＬＶＡＡＡＱＡＡＬＡ．別の実施形態では、ネコアルブミンは、配列番号１２に対して少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９９％の同一性、又は少なくとも１００％の同一性を共有する。

本開示の融合タンパク質のインビボ機能及び安定性は、例えば、潜在的に望ましくないドメイン相互作用を防止するために、又は他の理由で、小さなペプチドリンカーを添加することによって最適化され得る。更に、グリシンリッチリンカーは、ＧＬＰ－１類似体部分が、膵臓のβ細胞等の標的細胞上のＧＬＰ－１受容体と生産的に相互作用することができるように、ある程度の構造的柔軟性を提供し得る。したがって、ＧＬＰ－１類似体のＣ末端及び融合タンパク質の融合ドメインのＮ末端は、一実施形態では、リンカーを介して融合される。一実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１３）という配列を有するＧリッチペプチドリンカーの１、１．５又は２回の反復を含む。

一実施形態では、融合タンパク質は、（ａ）ネコトロンビンリーダー、（ｂ）ＧＬＰ－１（７－３７）のＤＰＰ－ＩＶ耐性バリアント、リンカー、及び（ｃ）ネコＩｇＧ Ｆｃを含む。一実施形態では、融合タンパク質は、配列番号１４の配列、又はそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％同一の配列を有する。
配列番号１４
ＭＡＨＩＲＧＬＷＬＰＧＣＬＡＬＡＡＬＣＳＬＶＨＳＱＨＶＦＬＡＰＱＱＡＬＳＬＬＱＲＶＲＲＨＧＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＥＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＧＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＡＲＫＴＤＨＰＰＧＰＫＰＣＤＣＰＫＣＰＰＰＥＭＬＧＧＰＳＩＦＩＦＰＰＫＰＫＤＴＬＳＩＳＲＴＰＥＶＴＣＬＶＶＤＬＧＰＤＤＳＤＶＱＩＴＷＦＶＤＮＴＱＶＹＴＡＫＴＳＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＰＩＬＨＱＤＷＬＫＧＫＥＦＫＣＫＶＮＳＫＳＬＰＳＰＩＥＲＴＩＳＫＡＫＧＱＰＨＥＰＱＶＹＶＬＰＰＡＱＥＥＬＳＲＮＫＶＳＶＴＣＬＩＫＳＦＨＰＰＤＩＡＶＥＷＥＩＴＧＱＰＥＰＥＮＮＹＲＴＴＰＰＱＬＤＳＤＧＴＹＦＶＹＳＫＬＳＶＤＲＳＨＷＱＲＧＮＴＹＴＣＳＶＳＨＥＡＬＨＳＨＨＴＱＫＳＬＴＱＳＰＧ

一実施形態では、融合タンパク質をコードする配列は、配列番号１５であるか、又はそれに対して少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％同一の配列である。
配列番号１５
ａｔｇｇｃｔｃａｃａｔｃａｇａｇｇａｃｔｔｔｇｇｃｔｇｃｃｔｇｇｃｔｇｔｃｔｇｇｃｔｃｔｇｇｃｔｇｃｔｃｔｇｔｇｔｔｃｔｃｔｇｇｔｇｃａｃａｇｃｃａｇｃａｃｇｔｇｔｔｔｃｔｇｇｃｃｃｃｔｃａｇｃａｇｇｃｔｃｔｇｔｃｃｃｔｇｃｔｇｃａａａｇａｇｔｔａｇａａｇｇｃａｃｇｇｃｇａｇｇｇｃａｃｃｔｔｃａｃｃｔｃｃｇａｃｇｔｇｔｃｔａｇｃｔａｃｃｔｇｇａａｇａａｃａｇｇｃｃｇｃｃａａａｇａｇｔｔｔａｔｃｇｃｃｔｇｇｃｔｇｇｔｃａａａｇｇｔｇｇｃｇｇｃｇｇａｇｇｃｇｇａｇｇａａｇｃｇｇｔｇｇｃｇｇａｇｇｔｔｃａｇｇｔｇｇｔｇｇｔｇｇａｔｃｔｇｃｃａｇａａａｇａｃｃｇ
ａｃｃａｔｃｃｔｃｃｔｇｇａｃｃｔａａｇｃｃｔｔｇｃｇａｃｔｇｃｃｃｔａａｇｔｇｔｃｃｔｃｃａｃｃｔｇａｇａｔｇｃｔｃｇｇｃｇｇａｃｃｃａｇｃａｔｃｔｔｃａｔｃｔｔｃｃｃａｃｃｔａａｇｃｃａａａｇｇａｃａｃｃｃｔｇａｇｃａｔｃａｇｃａｇａａｃｃｃｃｔｇａａｇｔｇａｃｃｔｇｃｃｔｇｇｔｃｇｔｔｇａｔｃｔｇｇｇｃｃｃｃｇａｃｇａｔａｇｃｇａｃｇｔｇｃａｇａｔｃａｃｔｔｇｇｔｔｔｇｔｇｇａｃａａｃａｃｃｃａｇｇｔｇｔａｃａｃａｇｃｃａａｇａｃａａｇｃｃｃｃａｇａｇａｇｇａａｃａｇｔｔｃａａｃａｇｃａｃｃｔａｃａｇａｇｔｇｇｔｇｔｃｃｇｔｇｃｔｇｃｃｃａｔｃｃｔｇｃａｃｃａｇｇａｔｔｇｇｃｔｇａａｇｇｇｃａａａｇａａｔｔｃａａｇｔｇｃａａａｇｔｇａａｃａｇｃａａｇａｇｃｃｔｇｃｃｔｔｃｔｃｃａａｔｃｇａｇｃｇｇａｃｃａｔｃａｇｃａａｇｇｃｃａａｇｇｇａｃａｇｃｃｔｃａｃｇａｇｃｃｔｃａｇｇｔｇｔａｃｇｔｃｃｔｇｃｃｔｃｃｔｇｃｔｃａａｇａｇｇａａｃｔｇａｇｃｃｇｇａａｃａａａｇｔｇｔｃｃｇｔｇａｃｃｔｇｔｃｔｇａｔｃａａｇａｇｃｔｔｔｃａｃｃｃａｃｃｔｇａｔａｔｃｇｃｃｇｔｇｇａａｔｇｇｇａｇａｔｃａｃａｇｇｃｃａｇｃｃｔｇａｇｃｃｔｇａｇａａｃａａｃｔａｃｃｇｇａｃｔａｃｃｃｃｔｃｃａｃａｇｃｔｇｇａｃｔｃｃｇａｔｇｇｃａｃｃｔａｃｔｔｃｇｔｇｔａｃａｇｃａａｇｃｔｇａｇｃｇｔｇｇａｃａｇａａｇｃｃａｃｔｇｇｃａｇｃｇｇｇｇｃａａｔａｃｃｔａｃａｃｃｔｇｔｔｃｃｇｔｇｔｃｔｃａｃｇａｇｇｃｃｃｔｇｃａｃａｇｃｃａｃｃａｃａｃａｃａｇａａｇｔｃｔｃｔｇａｃａｃａｇａｇｃｃｃｃｇｇｃｔｇａ

一実施形態では、融合タンパク質は、（ａ）ネコトロンビンリーダー、（ｂ）ＧＬＰ－１（７－３７）のＤＰＰ－ＩＶ耐性バリアント、リンカー、及び（ｃ）ネコアルブミンを含む。一実施形態では、融合タンパク質は、配列番号１６の配列、又はそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％同一の配列を有する。
配列番号１６
ＭＡＨＩＲＧＬＷＬＰＧＣＬＡＬＡＡＬＣＳＬＶＨＳＱＨＶＦＬＡＰＱＱＡＬＳＬＬＱＲＶＲＲＨＧＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＥＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＡＳＥＡＨＱＳＥＩＡＨＲＦＮＤＬＧＥＥＨＦＲＧＬＶＬＶＡＦＳＱＹＬＱＱＣＰＦＥＤＨＶＫＬＶＮＥＶＴＥＦＡＫＧＣＶＡＤＱＳＡＡＮＣＥＫＳＬＨＥＬＬＧＤＫＬＣＴＶＡＳＬＲＤＫＹＧＥＭＡＤＣＣＥＫＫＥＰＥＲＮＥＣＦＬＱＨＫＤＤＮＰＧＦＧＱＬＶＴＰＥＡＤＡＭＣＴＡＦＨＥＮＥＱＲＦＬＧＫＹＬＹＥＩＡＲＲＨＰＹＦＹＡＰＥＬＬＹＹＡＥＥＹＫＧＶＦＴＥＣＣＥＡＡＤＫＡＡＣＬＴＰＫＶＤＡＬＲＥＫＶＬＡＳＳＡＫＥＲＬＫＣＡＳＬＱＫＦＧＥＲＡＦＫＡＷＳＶＡＲＬＳＱＫＦＰＫＡＥＦＡＥＩＳＫＬＶＴＤＬＡＫＩＨＫＥＣＣＨＧＤＬＬＥＣＡＤＤＲＡＤＬＡＫＹＩＣＥＮＱＤＳＩＳＴＫＬＫＥＣＣＧＫＰＶＬＥＫＳＨＣＩＳＥＶＥＲＤＥＬＰＡＤＬＰＰＬＡＶＤＦＶＥＤＫＥＶＣＫＮＹＱＥＡＫＤＶＦＬＧＴＦＬＹＥＹＳＲＲＨＰＥＹＳＶＳＬＬＬＲＬＡＫＥＹＥＡＴＬＥＫＣＣＡＴＤＤＰＰＡＣＹＡＨＶＦＤＥＦＫＰＬＶＥＥＰＨＮＬＶＫＴＮＣＥＬＦＥＫＬＧＥＹＧＦＱＮＡＬＬＶＲＹＴＫＫＶＰＱＶＳＴＰＴＬＶＥＶＳＲＳＬＧＫＶＧＳＫＣＣＴＨＰＥＡＥＲＬＳＣＡＥＤＹＬＳＶＶＬＮＲＬＣＶＬＨＥＫＴＰＶＳＥＲＶＴＫＣＣＴＥＳＬＶＮＲＲＰＣＦＳＡＬＱＶＤＥＴＹＶＰＫＥＦＳＡＥＴＦＴＦＨＡＤＬＣＴＬＰＥＡＥＫＱＩＫＫＱＳＡＬＶＥＬＬＫＨＫＰＫＡＴＥＥＱＬＫＴＶＭＧＤＦＧＳＦＶＤＫＣＣＡＡＥＤＫＥＡＣＦＡＥＥＧＰＫＬＶＡＡＡＱＡＡＬＡ．

一実施形態では、融合タンパク質をコードする配列は、配列番号１７であるか、又はそれに対して少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％同一の配列である。
配列番号１７
ａｔｇｇｃｔｃａｃａｔｃａｇａｇｇａｃｔｔｔｇｇｃｔｇｃｃｔｇｇｃｔｇｔｃｔｇｇｃｔｃｔｇｇｃｔｇｃｔｃｔｇｔｇｔｔｃｔｃｔｇｇｔｇｃａｃａｇｃｃａｇｃａｃｇｔｇｔｔｔｃｔｇｇｃｃｃｃｔｃａｇｃａｇｇｃｔｃｔｇｔｃｃｃｔｇｃｔｇｃａａａｇａ
ｇｔｔａｇａａｇｇｃａｃｇｇｃｇａｇｇｇｃａｃｃｔｔｃａｃｃｔｃｃｇａｃｇｔｇｔｃｃａｇｃｔａｃｃｔｇｇａａｇａａｃａｇｇｃｃｇｃｃａａａｇａｇｔｔｔａｔｃｇｃｃｔｇｇｃｔｇｇｔｃａａａｇｇｃｇｇｃｇｇａｇｇａｔｃｔｇｇｃｇｇａｇｇｔｇｇａａｇｃｇｇａｇｇｃｇｇａｇｃｔｔｃｔｇａａｇｃｃｃａｃｃａｇｔｃｔｇａｇａｔｃｇｃｃｃａｃｃｇｇｔｔｃａａｃｇａｃｃｔｇｇｇｃｇａａｇａａｃａｃｔｔｃａｇａｇｇｃｃｔｇｇｔｇｃｔｇｇｔｇｇｃｃｔｔｔａｇｃｃａｇｔａｃｃｔｇｃａｇｃａｇｔｇｃｃｃｃｔｔｃｇａｇｇａｔｃａｃｇｔｇａａｇｃｔｇｇｔｃａａｃｇａａｇｔｇａｃｃｇａｇｔｔｃｇｃｃａａｇｇｇｃｔｇｔｇｔｇｇｃｃｇａｔｃａｇｔｃｔｇｃｃｇｃｃａａｔｔｇｃｇａｇａａｇｔｃｔｃｔｇｃａｃｇａｇｃｔｇｃｔｇｇｇｃｇａｔａａｇｃｔｇｔｇｔａｃａｇｔｇｇｃｃａｇｃｃｔｇｃｇｇｇａｔａａｇｔａｃｇｇｃｇａｇａｔｇｇｃｃｇａｃｔｇｃｔｇｃｇａｇａａｇａａａｇａｇｃｃｃｇａｇａｇａａａｃｇａｇｔｇｃｔｔｃｃｔｇｃａｇｃａｃａａｇｇａｃｇａｃａａｃｃｃｔｇｇｃｔｔｔｇｇｃｃａｇｃｔｇｇｔｔａｃａｃｃｔｇａｇｇｃｃｇａｃｇｃｃａｔｇｔｇｃａｃｃｇｃｃｔｔｃｃａｃｇａｇａａｃｇａｇｃａｇａｇａｔｔｃｃｔｇｇｇｃａａｇｔａｃｃｔｇｔａｃｇａｇａｔｃｇｃｃａｇａｃｇｇｃａｃｃｃｃｔａｃｔｔｔｔａｃｇｃｃｃｃｔｇａｇｃｔｇｃｔｇｔａｃｔａｃｇｃｃｇａａｇａｇｔａｃａａｇｇｇｃｇｔｇｔｔｃａｃｃｇａｇｔｇｔｔｇｃｇａｇｇｃｃｇｃｔｇａｔａａｇｇｃｃｇｃｔｔｇｔｃｔｇａｃａｃｃｃａａａｇｔｇｇａｃｇｃｃｃｔｇａｇａｇａａａａｇｇｔｇｃｔｇｇｃｃｔｃｃａｇｃｇｃｃａａａｇａａａｇａｃｔｇａａｇｔｇｃｇｃｃｔｃｔｃｔｇｃａａａａｇｔｔｃｇｇｃｇａｇａｇａｇｃｃｔｔｃａａｇｇｃｔｔｇｇａｇｃｇｔｇｇｃａａｇａｃｔｇａｇｃｃａｇａａｇｔｔｃｃｃｃａａｇｇｃｃｇａｇｔｔｔｇｃｃｇａｇａｔｃａｇｃａａｇｃｔｃｇｔｇａｃｃｇａｃｃｔｇｇｃｃａａｇａｔｃｃａｃａａａｇａｇｔｇｃｔｇｃｃａｃｇｇｃｇａｃｃｔｇｃｔｇｇａａｔｇｃｇｃｔｇａｃｇａｔａｇａｇｃｃｇａｔｃｔｇｇｃｔａａｇｔａｃａｔｃｔｇｃｇａｇａａｃｃａｇｇａｃａｇｃａｔｃａｇｃａｃｃａａｇｃｔｇａａａｇａｇｔｇｃｔｇｃｇｇｃａａｇｃｃｃｇｔｇｃｔｇｇａａａａｇａｇｃｃａｃｔｇｔａｔｃａｇｃｇａｇｇｔｇｇａａｃｇｇｇａｃｇａｇｃｔｇｃｃｔｇｃｔｇａｔｃｔｇｃｃｔｃｃｔｃｔｇｇｃｃｇｔｇｇａｃｔｔｃｇｔｃｇａｇｇａｃａａａｇａａｇｔｇｔｇｃａａｇａａｃｔａｃｃａａｇａｇｇｃｃａａｇｇａｃｇｔｇｔｔｃｃｔｇｇｇａａｃｃｔｔｔｃｔｇｔａｃｇａｇｔａｃｔｃｔｃｇｇｃｇｇｃａｃｃｃｃｇａｇｔａｔｔｃｃｇｔｔａｇｃｃｔｇｃｔｇｃｔｇｃｇｇｃｔｇｇｃａａａａｇａｇｔａｃｇａｇｇｃｃａｃａｃｔｇｇａａａａｇｔｇｃｔｇｃｇｃｃａｃｃｇａｃｇａｔｃｃｔｃｃａｇｃｃｔｇｔｔａｃｇｃｃｃａｃｇｔｇｔｔｃｇａｃｇａｇｔｔｃａａｇｃｃｃｃｔｇｇｔｇｇａａｇａａｃｃｃｃａｃａａｃｃｔｇｇｔｃａａｇａｃｃａａｃｔｇｃｇａａｃｔｇｔｔｃｇａｇａａｇｃｔｇｇｇｃｇａｇｔａｃｇｇｃｔｔｃｃａｇａａｃｇｃｃｃｔｇｃｔｃｇｔｇｃｇｇｔａｃａｃｃａａｇａａｇｇｔｇｃｃｃｃａｇｇｔｔｔｃｃａｃａｃｃｔａｃａｃｔｇｇｔｃｇａｇｇｔｇｔｃｃｃｇｃｔｃｔｃｔｇｇｇｃａａａｇｔｇｇｇｃａｇｃａａｇｔｇｃｔｇｔａｃａｃａｃｃｃａｇａｇｇｃｃｇａｇａｇａｃｔｇａｇｃｔｇｃｇｃｃｇａｇｇａｔｔａｔｃｔｇａｇｃｇｔｇｇｔｇｃｔｇａａｃａｇａｃｔｇｔｇｃｇｔｇｃｔｇｃａｃｇａｇａａａａｃｃｃｃｔｇｔｇｔｃｔｇａｇｃｇｃｇｔｇａｃｃａａｇｔｇｔｔｇｔａｃｃｇａｇａｇｃｃｔｇｇｔｃａａｃａｇａｃｇｇｃｃｔｔｇｃｔｔｔａｇｃｇｃｃｃｔｇｃａａｇｔｃｇａｃｇａｇａｃａｔａｃｇｔｇｃｃａａａａｇａｇｔｔｃａｇｃｇｃｃｇａｇａｃａｔｔｃａｃｃｔｔｃｃａｃｇｃｃｇａｃｃｔｇｔｇｔａｃａｃｔｇｃｃｃｇａｇｇｃｃｇａａａａｇｃａｇａｔｃａａｇａａａｃａｇａｇｃｇｃｃｃｔｇｇｔｃｇａａｃｔｇｃｔｇａａｇｃａｃａａｇｃｃｔａａｇｇｃｃａｃｃｇａｇｇａａｃａｇｃｔｇａａａａｃｃｇｔｇａｔｇｇｇｃｇａｃｔｔｃｇｇｃａｇｃｔｔｃｇｔｇｇａｔａａｇｔｇｃｔｇｔｇｃｃｇｃｔｇａｇｇａｃａａａｇａｇｇｃｃｔｇｃｔｔｃｇｃｔｇａａｇａｇｇｇｃｃｃｔａａｇｔｔｇｇｔｔｇｃｃｇｃｔｇｃｔｃａａｇｃｔｇｃｃｃｔｇｇｃｃｔｇａｔａａ

別の実施形態では、融合タンパク質は、（ａ）ネコトロンビンリーダー、（ｂ）ネコＧ
ＬＰ－１（７－３７）又はそのＤＰＰ－ＩＶ耐性バリアントの２つのタンデムコピー、リンカー、及び（ｃ）ネコアルブミンを含む。一実施形態では、融合タンパク質は、配列番号１８の配列、又はそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％同一の配列を有する。
配列番号１８
ＭＡＨＩＲＧＬＷＬＰＧＣＬＡＬＡＡＬＣＳＬＶＨＳＱＨＶＦＬＡＰＱＱＡＬＳＬＬＱＲＶＲＲＨＧＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＲＨＧＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＲＥＡＨＱＳＥＩＡＨＲＦＮＤＬＧＥＥＨＦＲＧＬＶＬＶＡＦＳＱＹＬＱＱＣＰＦＥＤＨＶＫＬＶＮＥＶＴＥＦＡＫＧＣＶＡＤＱＳＡＡＮＣＥＫＳＬＨＥＬＬＧＤＫＬＣＴＶＡＳＬＲＤＫＹＧＥＭＡＤＣＣＥＫＫＥＰＥＲＮＥＣＦＬＱＨＫＤＤＮＰＧＦＧＱＬＶＴＰＥＡＤＡＭＣＴＡＦＨＥＮＥＱＲＦＬＧＫＹＬＹＥＩＡＲＲＨＰＹＦＹＡＰＥＬＬＹＹＡＥＥＹＫＧＶＦＴＥＣＣＥＡＡＤＫＡＡＣＬＴＰＫＶＤＡＬＲＥＫＶＬＡＳＳＡＫＥＲＬＫＣＡＳＬＱＫＦＧＥＲＡＦＫＡＷＳＶＡＲＬＳＱＫＦＰＫＡＥＦＡＥＩＳＫＬＶＴＤＬＡＫＩＨＫＥＣＣＨＧＤＬＬＥＣＡＤＤＲＡＤＬＡＫＹＩＣＥＮＱＤＳＩＳＴＫＬＫＥＣＣＧＫＰＶＬＥＫＳＨＣＩＳＥＶＥＲＤＥＬＰＡＤＬＰＰＬＡＶＤＦＶＥＤＫＥＶＣＫＮＹＱＥＡＫＤＶＦＬＧＴＦＬＹＥＹＳＲＲＨＰＥＹＳＶＳＬＬＬＲＬＡＫＥＹＥＡＴＬＥＫＣＣＡＴＤＤＰＰＡＣＹＡＨＶＦＤＥＦＫＰＬＶＥＥＰＨＮＬＶＫＴＮＣＥＬＦＥＫＬＧＥＹＧＦＱＮＡＬＬＶＲＹＴＫＫＶＰＱＶＳＴＰＴＬＶＥＶＳＲＳＬＧＫＶＧＳＫＣＣＴＨＰＥＡＥＲＬＳＣＡＥＤＹＬＳＶＶＬＮＲＬＣＶＬＨＥＫＴＰＶＳＥＲＶＴＫＣＣＴＥＳＬＶＮＲＲＰＣＦＳＡＬＱＶＤＥＴＹＶＰＫＥＦＳＡＥＴＦＴＦＨＡＤＬＣＴＬＰＥＡＥＫＱＩＫＫＱＳＡＬＶＥＬＬＫＨＫＰＫＡＴＥＥＱＬＫＴＶＭＧＤＦＧＳＦＶＤＫＣＣＡＡＥＤＫＥＡＣＦＡＥＥＧＰＫＬＶＡＡＡＱＡＡＬＡ

一実施形態では、融合タンパク質は、配列番号２０の配列、又はそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％同一の配列を有する。
配列番号２０
ＭＡＨＩＲＧＬＷＬＰＧＣＬＡＬＡＡＬＣＳＬＶＨＳＱＨＶＦＬＡＰＱＱＡＬＳＬＬＱＲＶＲＲＨＧＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＲＥＡＨＱＳＥＩＡＨＲＦＮＤＬＧＥＥＨＦＲＧＬＶＬＶＡＦＳＱＹＬＱＱＣＰＦＥＤＨＶＫＬＶＮＥＶＴＥＦＡＫＧＣＶＡＤＱＳＡＡＮＣＥＫＳＬＨＥＬＬＧＤＫＬＣＴＶＡＳＬＲＤＫＹＧＥＭＡＤＣＣＥＫＫＥＰＥＲＮＥＣＦＬＱＨＫＤＤＮＰＧＦＧＱＬＶＴＰＥＡＤＡＭＣＴＡＦＨＥＮＥＱＲＦＬＧＫＹＬＹＥＩＡＲＲＨＰＹＦＹＡＰＥＬＬＹＹＡＥＥＹＫＧＶＦＴＥＣＣＥＡＡＤＫＡＡＣＬＴＰＫＶＤＡＬＲＥＫＶＬＡＳＳＡＫＥＲＬＫＣＡＳＬＱＫＦＧＥＲＡＦＫＡＷＳＶＡＲＬＳＱＫＦＰＫＡＥＦＡＥＩＳＫＬＶＴＤＬＡＫＩＨＫＥＣＣＨＧＤＬＬＥＣＡＤＤＲＡＤＬＡＫＹＩＣＥＮＱＤＳＩＳＴＫＬＫＥＣＣＧＫＰＶＬＥＫＳＨＣＩＳＥＶＥＲＤＥＬＰＡＤＬＰＰＬＡＶＤＦＶＥＤＫＥＶＣＫＮＹＱＥＡＫＤＶＦＬＧＴＦＬＹＥＹＳＲＲＨＰＥＹＳＶＳＬＬＬＲＬＡＫＥＹＥＡＴＬＥＫＣＣＡＴＤＤＰＰＡＣＹＡＨＶＦＤＥＦＫＰＬＶＥＥＰＨＮＬＶＫＴＮＣＥＬＦＥＫＬＧＥＹＧＦＱＮＡＬＬＶＲＹＴＫＫＶＰＱＶＳＴＰＴＬＶＥＶＳＲＳＬＧＫＶＧＳＫＣＣＴＨＰＥＡＥＲＬＳＣＡＥＤＹＬＳＶＶＬＮＲＬＣＶＬＨＥＫＴＰＶＳＥＲＶＴＫＣＣＴＥＳＬＶＮＲＲＰＣＦＳＡＬＱＶＤＥＴＹＶＰＫＥＦＳＡＥＴＦＴＦＨＡＤＬＣＴＬＰＥＡＥＫＱＩＫＫＱＳＡＬＶＥＬＬＫＨＫＰＫＡＴＥＥＱＬＫＴＶＭＧＤＦＧＳＦＶＤＫＣＣＡＡＥＤＫＥＡＣＦＡＥＥＧＰＫＬＶＡＡＡＱＡＡＬＡ

一実施形態では、融合タンパク質をコードする配列は、配列番号１９であるか、又はそれに対して少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％同一の配列である。
配列番号１９
ａｔｇｇｃｔｃａｃａｔｃａｇａｇｇａｃｔｔｔｇｇｃｔｇｃｃｔｇｇｃｔｇｔｃｔｇｇｃｔｃｔｇｇｃｔｇｃｔｃｔｇｔｇｔｔｃｔｃｔｇｇｔｇｃａｃａｇｃｃａｇｃａｃｇｔｇｔｔｔｃｔｇｇｃｃｃｃｔｃａｇｃａｇｇｃｔｃｔｇｔｃｃｃｔｇｃｔｇｃａａａｇａｇｔｔａｇａａｇｇｃａｃｇｇｃｇａｇｇｇｃａｃｃｔｔｃａｃｃｔｃｃｇａｃｇｔｇｔｃｔａｇｃｔａｃｃｔｇｇａａｇｇａｃａｇｇｃｃｇｃｃａａａｇａｇｔｔｔａｔｃｇｃｃｔｇｇｃｔｇｇｔｃａａａｇｇｃａｇａｃａｃｇｇｃｇａａｇｇｇａｃａｔｔｃａｃａａｇｃｇａｃｇｔｇｔｃｃｔｃｔｔａｔｃｔｃｇａａｇｇｃｃａｇｇｃｔｇｃｔａａａｇａｇｔｔｃａｔｔｇｃｔｔｇｇｃｔｃｇｔｇａａｇｇｇｃａｇａｇａｇｇｃｃｃａｃｃａｇｔｃｔｇａｇａｔｃｇｃｃｃａｃａｇａｔｔｃａａｃｇａｃｃｔｇｇｇｃｇａａｇａａｃａｃｔｔｃａｇａｇｇｃｃｔｇｇｔｇｃｔｇｇｔｇｇｃｃｔｔｃａｇｃｃａｇｔａｔｃｔｇｃａｇｃａｇｔｇｃｃｃｃｔｔｃｇａｇｇａｃｃａｃｇｔｇａａｇｃｔｇｇｔｃａａｃｇａａｇｔｇａｃｃｇａｇｔｔｃｇｃｃａａｇｇｇｃｔｇｔｇｔｇｇｃｃｇａｔｃａｇｔｃｔｇｃｃｇｃｃａａｔｔｇｃｇａｇａａｇｔｃｔｃｔｇｃａｃｇａｇｃｔｇｃｔｇｇｇｃｇａｔａａｇｃｔｇｔｇｔａｃａｇｔｇｇｃｃａｇｃｃｔｇｃｇｇｇａｔａａｇｔａｃｇｇｃｇａｇａｔｇｇｃｃｇａｃｔｇｃｔｇｃｇａｇａａｇａａａｇａｇｃｃｃｇａｇａｇａａａｃｇａｇｔｇｃｔｔｃｃｔｇｃａｇｃａｃａａｇｇａｃｇａｃａａｃｃｃｔｇｇｃｔｔｔｇｇｃｃａｇｃｔｇｇｔｔａｃａｃｃｔｇａｇｇｃｃｇａｃｇｃｃａｔｇｔｇｃａｃｃｇｃｃｔｔｃｃａｃｇａｇａａｃｇａｇｃａｇａｇａｔｔｃｃｔｇｇｇｃａａｇｔａｃｃｔｇｔａｃｇａｇａｔｃｇｃｃａｇａｃｇｇｃａｃｃｃｃｔａｃｔｔｔｔａｃｇｃｃｃｃｔｇａｇｃｔｇｃｔｇｔａｃｔａｃｇｃｃｇａａｇａｇｔａｃａａｇｇｇｃｇｔｇｔｔｃａｃｃｇａｇｔｇｔｔｇｃｇａｇｇｃｃｇｃｔｇａｔａａｇｇｃｃｇｃｔｔｇｔｃｔｇａｃａｃｃｃａａａｇｔｇｇａｃｇｃｃｃｔｇａｇａｇａａａａｇｇｔｇｃｔｇｇｃｃｔｃｃａｇｃｇｃｃａａａｇａａａｇａｃｔｇａａｇｔｇｃｇｃｃｔｃｔｃｔｇｃａａａａｇｔｔｃｇｇｃｇａｇａｇａｇｃｃｔｔｃａａｇｇｃｔｔｇｇａｇｃｇｔｇｇｃａａｇａｃｔｇａｇｃｃａｇａａｇｔｔｃｃｃｃａａｇｇｃｃｇａｇｔｔｔｇｃｃｇａｇａｔｃａｇｃａａｇｃｔｃｇｔｇａｃｃｇａｃｃｔｇｇｃｃａａｇａｔｃｃａｃａａａｇａｇｔｇｃｔｇｃｃａｃｇｇｃｇａｃｃｔｇｃｔｇｇａａｔｇｃｇｃｔｇａｃｇａｔａｇａｇｃｃｇａｔｃｔｇｇｃｔａａｇｔａｃａｔｃｔｇｃｇａｇａａｃｃａｇｇａｃａｇｃａｔｃａｇｃａｃｃａａｇｃｔｇａａａｇａｇｔｇｃｔｇｃｇｇｃａａｇｃｃｃｇｔｇｃｔｇｇａａａａｇａｇｃｃａｃｔｇｔａｔｃａｇｃｇａｇｇｔｇｇａａｃｇｇｇａｃｇａｇｃｔｇｃｃｔｇｃｔｇａｔｃｔｇｃｃｔｃｃｔｃｔｇｇｃｃｇｔｇｇａｃｔｔｃｇｔｃｇａｇｇａｃａａａｇａａｇｔｇｔｇｃａａｇａａｃｔａｃｃａａｇａｇｇｃｃａａｇｇａｃｇｔｇｔｔｃｃｔｇｇｇａａｃｃｔｔｔｃｔｇｔａｃｇａｇｔａｃｔｃｔｃｇｇｃｇｇｃａｃｃｃｃｇａｇｔａｔｔｃｃｇｔｔａｇｃｃｔｇｃｔｇｃｔｇｃｇｇｃｔｇｇｃａａａａｇａｇｔａｃｇａｇｇｃｃａｃａｃｔｇｇａａａａｇｔｇｃｔｇｃｇｃｃａｃｃｇａｃｇａｔｃｃｔｃｃａｇｃｃｔｇｔｔａｃｇｃｃｃａｃｇｔｇｔｔｃｇａｃｇａｇｔｔｃａａｇｃｃｃｃｔｇｇｔｇｇａａｇａａｃｃｃｃａｃａａｃｃｔｇｇｔｃａａｇａｃｃａａｃｔｇｃｇａａｃｔｇｔｔｃｇａｇａａｇｃｔｇｇｇｃｇａｇｔａｃｇｇｃｔｔｃｃａｇａａｃｇｃｃｃｔｇｃｔｃｇｔｇｃｇｇｔａｃａｃｃａａｇａａｇｇｔｇｃｃｃｃａｇｇｔｔｔｃｃａｃａｃｃｔａｃａｃｔｇｇｔｃｇａｇｇｔｇｔｃｃｃｇｃｔｃｔｃｔｇｇｇｃａａａｇｔｇｇｇｃａｇｃａａｇｔｇｃｔｇｔａｃａｃａｃｃｃａｇａｇｇｃｃｇａｇａｇａｃｔｇａｇｃｔｇｃｇｃｃｇａｇｇａｔｔａｔｃｔｇａｇｃｇｔｇｇｔｇｃｔｇａａｃａｇａｃｔｇｔｇｃｇｔｇｃｔｇｃａｃｇａｇａａａａｃｃｃｃｔｇｔｇｔｃｔｇａｇｃｇｃｇｔｇａｃｃａａｇｔｇｔｔｇｔａｃｃｇａｇａｇｃｃｔｇｇｔｃａａｃａｇａｃｇｇｃｃｔｔｇｃｔｔｔａｇｃｇｃｃｃｔｇｃａａｇｔｃｇａｃｇａｇａｃａｔａｃｇｔｇｃｃａａａａｇａｇｔｔｃａｇｃｇｃｃｇａｇａｃａｔｔｃａｃｃｔｔｃｃａｃｇｃｃｇａｃｃｔｇｔｇｔａｃａｃｔｇｃｃｃｇａｇｇｃｃｇａａａａｇｃａｇａｔｃａａｇａａａｃａｇａｇｃｇｃｃｃｔｇｇｔｃｇａａｃｔｇｃｔｇａａｇｃａｃａａｇｃｃｔａａｇｇｃｃａｃｃｇａｇｇａａｃａｇｃｔｇａａａａｃｃｇｔｇａｔｇｇｇｃｇａｃｔｔｃｇｇｃａｇｃｔｔｃｇｔｇｇａｔａａｇｔｇｃｔｇｔｇｃｃｇｃｔｇａｇｇａｃａａ
ａｇａｇｇｃｃｔｇｃｔｔｃｇｃｔｇａａｇａｇｇｇｃｃｃｔａａｇｔｔｇｇｔｔｇｃｃｇｃｔｇｃｔｃａａｇｃｔｇｃｃｃｔｇｇｃｃｔｇａｔａａ

リーダー配列、ＧＬＰ－１受容体アゴニスト、又は融合ドメインのバリアント又は断片が所望される場合、これらのペプチドのコード配列は、野生型核酸配列の部位特異的変異誘発を使用して生成され得る。代替的又は追加的に、ウェブベース又は市販のコンピュータプログラム、並びにサービスベース会社を使用して、アミノ酸配列をＲＮＡ及び／又はｃＤＮＡの両方を含む核酸コード配列に逆翻訳し得る。例えば、ＥＭＢＯＳＳによるｂａｃｋｔｒａｎｓｅｑ、ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｓｔ／；Ｇｅｎｅ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ （ｇｅｎｅｉｎｆｉｎｉｔｙ．ｏｒｇ／ｓｍｓ－／ｓｍｓ＿ｂａｃｋｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ．ｈｔｍｌ）；ＥｘＰａｓｙ（ｅｘｐａｓｙ．ｏｒｇ／ｔｏｏｌｓ／）を参照されたい。一実施形態では、ＲＮＡ及び／又はｃＤＮＡコード配列は、投与が最終的に意図される対象種、すなわちネコにおける最適な発現のために設計される。

コード配列は、コドン最適化を使用して最適な発現のために設計され得る。コドン最適化されたコード領域は、様々な異なる方法によって設計することができる。この最適化は、オンラインで利用可能な方法、公開された方法、又はコドン最適化サービスを提供する会社を使用して実行され得る。１つのコドン最適化方法は、例えば、国際特許出願公開第２０１５／０１２９２４号に記載され、参照により本明細書に組み込まれる。簡潔に述べると、生成物をコードする核酸配列は、同義コドン配列で修飾される。好適には、産物のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）の全長を修飾する。しかしながら、いくつかの実施形態では、ＯＲＦの断片のみを改変してもよい。これらの方法のうちの１つを使用することによって、任意の所与のポリペプチド配列に頻度を適用し、ポリペプチドをコードするコドン最適化コード領域の核酸断片を産生し得る。

本明細書に提供されるリーダー配列、ＧＬＰ－１受容体アゴニスト、融合ドメイン、及び融合タンパク質に加えて、これらのポリペプチドをコードする核酸配列が提供される。一実施形態では、本明細書に記載のＧＬＰ－１ペプチドをコードする核酸配列が提供される。いくつかの実施形態では、これは、配列番号１のＧＬＰ－１配列をコードする任意の核酸配列を含み得る。別の実施形態では、これは、配列番号２のＧＬＰ－１配列を含む任意の核酸を含む。別の実施形態では、これは、配列番号３のＧＬＰ－１配列を含む任意の核酸を含む。別の実施形態では、これは、配列番号４のＧＬＰ－１配列を含む任意の核酸を含む。別の実施形態では、これは、配列番号５のＧＬＰ－１配列を含む任意の核酸を含む。別の実施形態では、これは、配列番号６のＧＬＰ－１配列を含む任意の核酸を含む。

一実施形態では、本明細書に記載のＧＬＰ－１融合タンパク質をコードする核酸配列が提供される。別の実施形態では、これは、配列番号１４のＧＬＰ－１融合タンパク質をコードする任意の核酸配列を含む。別の実施形態では、これは、配列番号１６のＧＬＰ－１融合タンパク質をコードする任意の核酸配列を含む。別の実施形態では、これは、配列番号１８のＧＬＰ－１融合タンパク質をコードする任意の核酸配列を含む。別の実施形態では、これは、配列番号２０のＧＬＰ－１融合タンパク質をコードする任意の核酸配列を含む。

本明細書に記載のウイルスベクターの特定の実施形態では、ウイルスベクターは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ウイルスベクター又は組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）である。本明細書で使用される場合の「組換えＡＡＶ」又は「ｒＡＡＶ」という用語は、天然に存在するアデノ随伴ウイルス、当業者に利用可能な、及び／又は本明細書に記載の組成物及び方法の観点において利用可能なアデノ随伴ウイルス、並びに人工ＡＡＶを指す。アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ウイルスベクターは、ＡＡＶタンパク質カプシドを有するＡＡＶ ＤＮａｓｅ耐性粒子であり、その中にパッケージングされた発現カセットは、標的細胞に送
達するためのＡＡＶの逆位末端反復配列（ＩＴＲ）に隣接している（併せて「ベクターゲノム」と称される）。ＡＡＶカプシドは、６０カプシド（ｃａｐ）タンパク質サブユニット、ＶＰ１、ＶＰ２、及びＶＰ３からなり、選択されるＡＡＶに応じて、およそ１：１：１０～１：１：２０の比で二十面体対称に配置される。上で特定されたように、ＡＡＶウイルスベクターのカプシドの供給源として、様々なＡＡＶが選択されてもよい。一実施形態では、ＡＡＶカプシドは、ＡＡＶｒｈ９１カプシド又はそのバリアントである。特定の実施形態では、カプシドタンパク質は、ｒＡＡＶベクターの名称で「ＡＡＶ」という用語の後の数値又は数値と文字との組み合わせによって指定される。特に明記しない限り、本明細書に記載のＡＡＶカプシド、ＩＴＲ、及び他の選択されるＡＡＶ成分は、限定されないが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶｈｕ３７、ＡＡＶｒｈ３２．３３、ＡＡＶＡｎｃ８０、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶｒｈ８、ＡＡＶｒｈ７４、ＡＡＶ－ＤＪ８、ＡＡＶ－ＤＪ、ＡＡＶｈｕ．３７、ＡＡＶｒｈ．６４Ｒ１、及びＡＡＶｈｕ６８として特定されたＡＡＶを含む任意のＡＡＶの中から容易に選択され得る。例えば、米国特許出願公開第２００７－００３６７６０－Ａ１号、米国特許出願公開第２００９－０１９７３３８－Ａ１号、ＥＰ１３１０５７１を参照されたい。ＷＯ２００３／０４２３９７（ＡＡＶ７及び他のサルＡＡＶ）、米国特許第７７９０４４９号及び米国特許第７２８２１９９号（ＡＡＶ８）、ＷＯ２００５／０３３３２１及びＵＳ７，９０６，１１１（ＡＡＶ９）、並びにＷＯ２００６／１１０６８９、及びＷＯ２００３／０４２３９７（ｒｈ１０）、ＷＯ２００５／０３３３２１、ＷＯ２０１８／１６０５８２（ＡＡＶｈｕ６８）も参照されたく、これらは参照により本明細書に組み込まれる。他の好適なＡＡＶには、ＡＡＶｒｈ９０［２０２０年４月２８日に出願された、ＰＣＴ／ＵＳ２０／３０２７３］、ＡＡＶｒｈ９１［２０２０年４月２８日に出願された、ＰＣＴ／ＵＳ２０／０３０２６６、現在の公開ＷＯ２０２０／２２３２３１、公開日２０２０年１１月５日］ＡＡＶｒｈ９２、ＡＡＶｒｈ９３、ＡＡＶｒｈ９１．９３［２０２０年４月２８日に出願された、ＰＣＴ／ＵＳ２０／３０２８１］が含まれ得るが、これらに限定されず、これらは参照により本明細書に組み込まれる。他の好適なＡＡＶには、２０１９年１０月２１日に出願された米国仮特許出願第６２／９２４，１１２号、及び２０２０年５月１５日に出願された米国仮特許出願第６３／０２５，７５３号に記載されるＡＡＶ３Ｂバリアントが含まれ、そこには、ＡＡＶ３Ｂ．ＡＲ２．０１、ＡＡＶ３Ｂ．ＡＲ２．０２、ＡＡＶ３Ｂ．ＡＲ２．０３、ＡＡＶ３Ｂ．ＡＲ２．０４、ＡＡＶ３Ｂ．ＡＲ２．０５、ＡＡＶ３Ｂ．ＡＲ２．０６、ＡＡＶ３Ｂ．ＡＲ２．０７、ＡＡＶ３Ｂ．ＡＲ２．０８、ＡＡＶ３Ｂ．ＡＲ２．１０、ＡＡＶ３Ｂ．ＡＲ２．１１、ＡＡＶ３Ｂ．ＡＲ２．１２、ＡＡＶ３Ｂ．ＡＲ２．１３、ＡＡＶ３Ｂ．ＡＲ２．１４、ＡＡＶ３Ｂ．ＡＲ２．１５、ＡＡＶ３Ｂ．ＡＲ２．１６、又はＡＡＶ３Ｂ．ＡＲ２．１７が記載されており、これらは参照により本明細書に組み込まれる。また、２０２１年８月１３日に出願された国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２１／４５９４５号、２０２０年８月１４日に出願された米国仮特許出願第６３／０６５，６１６号、及び２０２０年１１月４日に出願された米国仮特許出願第６３／１０９，７３４号を参照にされたい（それらは全て参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。これらの文書はまた、ｒＡＡＶを生成するために選択され得る他のＡＡＶカプシドについても記載されており、参照により組み込まれる。ヒト又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ）から単離又は操作され、十分に特徴付けられたＡＡＶのうち、ヒトＡＡＶ２は、遺伝子導入ベクターとして開発された最初のＡＡＶであり、種々の標的組織及び動物モデルにおける効率的な遺伝子導入実験に広く使用されている。

本明細書で使用される場合、ＡＡＶに関して、「バリアント」という用語は、既知のＡＡＶ配列に由来する任意のＡＡＶ配列を意味し、保存的アミノ酸置換を有するＡＡＶ配列、及びアミノ酸配列又は核酸配列にわたって少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％以上の配列同一性を共有するＡＡＶ配列を含む。別の実施形態では、ＡＡＶカプシドは、任意の記載又は既知のＡＡＶカプシド配列から最大約１
０％のバリエーションを含み得るバリアントを含む。すなわち、ＡＡＶカプシドは、本明細書に提供され、かつ／又は当該技術分野で既知のＡＡＶカプシドと、約９０％の同一性～約９９．９％の同一性、約９５％～約９９％の同一性、又は約９７％～約９８％の同一性を共有する。一実施形態では、ＡＡＶカプシドは、ＡＡＶカプシドと少なくとも９５％の同一性を共有する。ＡＡＶカプシドの同一性パーセントを決定する場合、比較は、可変タンパク質（例えば、ｖｐ１、ｖｐ２、又はｖｐ３）のうちのいずれかにわたって行われ得る。

一実施形態では、ウイルスベクターは、ＡＡＶ８のカプシド又はその機能的バリアントを有するｒＡＡＶである。一実施形態では、ウイルスベクターは、ＡＡＶｒｈ９１のカプシド又はその機能的バリアントを有するｒＡＡＶである。一実施形態では、ウイルスベクターは、ＡＡＶ３．ＡＲ．２．１２のカプシド又はその機能的バリアントを有するｒＡＡＶである。一実施形態では、ウイルスベクターは、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ６４Ｒ１、ＡＡＶｈｕ３７、又はＡＡＶｒｈ１０から選択されるカプシドを有するｒＡＡＶである。

特定の実施形態では、新規の単離されたＡＡＶｒｈ９１カプシドが提供される。ＡＡＶｒｈ９１カプシドをコードする核酸配列は、配列番号２４に提供され、コードされたアミノ酸配列は、配列番号２６に提供される。ＡＡＶｒｈ９１（配列番号２６）のｖｐ１、ｖｐ２、及びｖｐ３のうちの少なくとも１つを含むｒＡＡＶが、本明細書に提供される。また、ＡＡＶｒｈ９１（配列番号２４）のｖｐ１、ｖｐ２、及びｖｐ３のうちの少なくとも１つによってコードされるＡＡＶカプシドを含むｒＡＡＶも、本明細書に提供される。ＡＡＶｒｈ９１のアミノ酸配列をコードする核酸配列は、配列番号２４に提供され、コードされるアミノ酸配列は、配列番号２６に提供される。また、ＡＡＶｒｈ９１ｅｎｇ（配列番号２５）のｖｐ１、ｖｐ２、及びｖｐ３のうちの少なくとも１つによってコードされるＡＡＶカプシドを含むｒＡＡＶも、本明細書に提供される。特定の実施形態では、ｖｐ１、ｖｐ２、及び／又はｖｐ３は、ＡＡＶｒｈ９１（配列番号２６）の完全長カプシドタンパク質である。他の実施形態では、ｖｐ１、ｖｐ２、及び／又はｖｐ３は、Ｎ末端及び／又はＣ末端の切断（例えば、約１～約１０個のアミノ酸の切断）を有する。

特定の実施形態では、ＡＡＶｒｈ９１カプシドは、（１）配列番号２６の１～７３６の予測アミノ酸配列をコードする核酸配列からの発現によって産生されるｖｐ１タンパク質、配列番号２４から産生されるｖｐ１タンパク質、又は配列番号２６の１～７３６の予測アミノ酸配列をコードする配列番号２４に対して少なくとも７０％同一の核酸配列から産生されるｖｐ１タンパク質から選択されるＡＡＶｒｈ９１ ｖｐ１タンパク質の異種集合体、配列番号２６の少なくとも約１３８～７３６のアミノ酸の予測アミノ酸配列をコードする核酸配列からの発現によって産生されるｖｐ２タンパク質、配列番号２４の少なくともヌクレオチド４１２～２２０８を含む配列から産生されるｖｐ２タンパク質、又は配列番号２６の少なくとも約１３８～７３６のアミノ酸の予測アミノ酸配列をコードする配列番号２４の少なくともヌクレオチド４１２～２２０８に対して少なくとも７０％同一の核酸配列から産生されるｖｐ２タンパク質から選択されるＡＡＶｒｈ９１ ｖｐ２タンパク質の異種集合体、配列番号２６の少なくとも約２０３～７３６のアミノ酸の予測アミノ酸配列をコードする核酸配列からの発現から産生されるｖｐ３タンパク質、配列番号２４の少なくともヌクレオチド６０７～２２０８を含む配列から産生されるｖｐ３タンパク質、又は配列番号２６の少なくとも約２０３～７３６のアミノ酸の予測アミノ酸配列をコードする配列番号２４の少なくともヌクレオチド６０７～２２０８に対して少なくとも７０％同一の核酸配列から産生されるｖｐ３タンパク質から選択されるＡＡＶｒｈ９１ ｖｐ３タンパク質の異種集合体を含むＡＡＶｒｈ９１カプシドタンパク質、並びに／あるいは（２）配列番号２６のアミノ酸配列をコードする核酸配列の産物であるｖｐ１タンパク質の異種集合体、配列番号２６の少なくとも約１３８～７３６のアミノ酸のアミノ酸配列をコードする核酸配列の産物であるｖｐ２タンパク質の異種集合体、及び配列番号２６の少な
くとも約２０３～７３６のアミノ酸をコードする核酸配列の産物であるｖｐ３タンパク質の異種集合体であって、ｖｐ１、ｖｐ２及びｖｐ３タンパク質が、配列番号２６のアスパラギン－グリシン対中の少なくとも２つの高度脱アミド化アスパラギン（Ｎ）を含むアミノ酸修飾を有する部分集合体を含有し、任意選択的に、他の脱アミド化アミノ酸を含む部分集合体を更に含み、脱アミド化が、アミノ酸の変化をもたらす、異種集合体、並びに（Ｂ）ＡＡＶｒｈ９１カプシド中のベクターゲノムであって、ベクターゲノムが、ＡＡＶ逆位末端反復配列を含む核酸分子、及び宿主細胞中で産物の発現を指示する配列と作動可能に連結される産物をコードする非ＡＡＶ核酸配列を含む、ベクターゲノム、のうちの１つ以上を特徴とする。

特定の実施形態では、ＡＡＶｒｈ９１カプシドは、（１）配列番号２６の１～７３６の予測アミノ酸配列をコードする核酸配列からの発現によって産生されるｖｐ１タンパク質、配列番号２５から産生されるｖｐ１タンパク質、又は配列番号２６の１～７３６の予測アミノ酸配列をコードする配列番号２５に対して少なくとも７０％同一の核酸配列から産生されるｖｐ１タンパク質から選択されるＡＡＶｒｈ９１ ｖｐ１タンパク質の異種集合体、配列番号２６の少なくとも約１３８～７３６のアミノ酸の予測アミノ酸配列をコードする核酸配列からの発現によって産生されるｖｐ２タンパク質、配列番号２５の少なくともヌクレオチド４１２～２２０８を含む配列から産生されるｖｐ２タンパク質、又は配列番号２６の少なくとも約１３８～７３６のアミノ酸の予測アミノ酸配列をコードする配列番号２５の少なくともヌクレオチド４１２～２２０８に対して少なくとも７０％同一の核酸配列から産生されるｖｐ２タンパク質から選択されるＡＡＶｒｈ９１ ｖｐ２タンパク質の異種集合体、配列番号２６の少なくとも約２０３～７３６のアミノ酸の予測アミノ酸配列をコードする核酸配列からの発現から産生されるｖｐ３タンパク質、配列番号２５の少なくともヌクレオチド６０７～２２０８を含む配列から産生されるｖｐ３タンパク質、又は配列番号２６の少なくとも約２０３～７３６のアミノ酸の予測アミノ酸配列をコードする配列番号２５の少なくともヌクレオチド６０７～２２０８に対して少なくとも７０％同一の核酸配列から産生されるｖｐ３タンパク質から選択されるＡＡＶｒｈ９１ ｖｐ３タンパク質の異種集合体を含むＡＡＶｒｈ９１カプシドタンパク質、並びに／あるいは（２）配列番号２６のアミノ酸配列をコードする核酸配列の産物であるｖｐ１タンパク質の異種集合体、配列番号２６の少なくとも約１３８～７３６のアミノ酸のアミノ酸配列をコードする核酸配列の産物であるｖｐ２タンパク質の異種集合体、及び配列番号２６の少なくとも約２０３～７３６のアミノ酸をコードする核酸配列の産物であるｖｐ３タンパク質の異種集合体であって、ｖｐ１、ｖｐ２及びｖｐ３タンパク質が、配列番号２６のアスパラギン－グリシン対中の少なくとも２つの高度脱アミド化アスパラギン（Ｎ）を含むアミノ酸修飾を有する部分集合体を含有し、任意選択的に、他の脱アミド化アミノ酸を含む部分集合体を更に含み、脱アミド化が、アミノ酸の変化をもたらす、異種集合体、並びに（Ｂ）ＡＡＶｒｈ９１カプシド中のベクターゲノムであって、ベクターゲノムが、ＡＡＶ逆位末端反復配列を含む核酸分子、及び宿主細胞中で産物の発現を指示する配列と作動可能に連結される産物をコードする非ＡＡＶ核酸配列を含む、ベクターゲノム、以下のうちの１つ以上を特徴とする。

特定の実施形態では、ＡＡＶｒｈ９１のｖｐ１、ｖｐ２、及びｖｐ３タンパク質は、配列番号２６のアスパラギン－グリシン対中に少なくとも２つの高度脱アミド化アスパラギン（Ｎ）を含むアミノ酸修飾を有する亜集団を含み、任意選択的に、他の脱アミド化アミノ酸を含む亜集団を更に含み、脱アミド化が、アミノ酸変化をもたらす。配列番号２６の数と比較して、Ｎ－Ｇ対のＮ５７、Ｎ３８３、及び／又はＮ５１２で、高いレベルの脱アミド化が観察される。脱アミド化は、他の残基において観察されている。特定の実施形態では、ＡＡＶｒｈ９１は、脱アミド化された他の残基を有し得（例えば、典型的には１０％未満）、かつ／又はリン酸化（例えば、存在する場合、約２～約３０％、若しくは約２～約２０％、若しくは約２～約１０％の範囲で）（例えば、Ｓ１４９で）、又は酸化（例
えば、約Ｗ２２、約Ｍ２１１、Ｗ２４７、Ｍ４０３、Ｍ４３５、Ｍ４７１、Ｗ４７８、Ｗ５０３、約Ｍ５３７、約Ｍ５４１、約Ｍ５５９、約Ｍ５９９、Ｍ６３５、及び／若しくはＷ６９５のうちの１つ以上で）を含む他の修飾を有し得る。任意選択的に、Ｗは、キヌレニンに酸化し得る。

特定の実施形態では、ＡＡＶｒｈ９１カプシドは、上記の表で特定される１つ以上の位置、提供される範囲で修飾されており、トリプシン酵素を用いた質量分析を使用して決定される。特定の実施形態では、１つ以上の位置、又はＮに続くグリシンは、本明細書に記載されるように修飾されている。残基番号は、本明細書に提供されるＡＡＶｒｈ９１配列に基づく。配列番号２６を参照されたい。

特定の実施形態では、ＡＡＶｒｈ９１カプシドは、配列番号２６のアミノ酸配列をコードする核酸配列の産物であるｖｐ１タンパク質の異種集団、配列番号２６の少なくとも約アミノ酸１３８～７３６でのアミノ酸配列をコードする核酸配列の産物であるｖｐ２タンパク質の異種集団、及び配列番号２６の少なくともアミノ酸２０３～７３６をコードする核酸配列の産物であるｖｐ３タンパク質の異種集団を含む。

特定の実施形態では、修飾ＡＡＶｒｈ９１の核酸配列は、天然ＡＡＶｒｈ９１カプシドよりも低い脱アミド化を含むカプシドを有する変異体ｒＡＡＶを生成するために使用され得る。かかる変異ｒＡＡＶは、免疫原性が低下しており、かつ／又は貯蔵、特に懸濁形態での貯蔵の際の安定性を増加させ得る。

一態様では、組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）が提供される。ｒＡＡＶは、アデノ随伴ウイルスｒｈ９１に由来するＡＡＶカプシドと、ＡＡＶカプシドにパッケージングされたベクターゲノムとを含み、当該ベクターゲノムは、ＡＡＶ逆位末端反復（ＩＴＲ）、配列番号１４のネコＧＬＰ－１受容体アゴニストのコード配列、及びネコＧＬＰ－１受容体アゴニストの発現を指示する調節配列を含む。

一実施形態では、ｒＡＡＶは、ｓｃＡＡＶである。略称「ｓｃ」は、自己相補性（ｓｅｌｆ－ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ）を指す。「自己相補的ＡＡＶ」は、組換えＡＡＶ核酸配列によって担持されるコード領域が、分子内二本鎖ＤＮＡ鋳型を形成するように設計されている発現カセットを有するプラスミド又はベクターを指す。感染時には、第２の鎖の細胞媒介性合成を待つのではなく、ｓｃＡＡＶの２つの相補性の片割れが会合して、即時の複製及び転写に備えのある１つの二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）ユニットを形成するであろう。例えば、Ｄ Ｍ ＭｃＣａｒｔｙ ｅｔ ａｌ，“Ｓｅｌｆ－ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ
（ｓｃＡＡＶ） ｖｅｃｔｏｒｓ ｐｒｏｍｏｔｅ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｔｒａｎｓ
ｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ ｏｆ ＤＮＡ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，（Ａｕｇｕｓｔ ２００１），Ｖｏｌ ８，Ｎｕｍｂｅｒ １６，Ｐａｇｅｓ １２４８－１２５４を参照されたい。自己相補的なＡＡＶは、例えば、米国特許第６，５９６，５３５号、同第７，１２５，７１７号、及び同第７，４５６，６８３号に記載されており、その各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

一実施形態では、本明細書に記載されるＧＬＰ－１構築物をコードする核酸配列は、任意の好適な遺伝子エレメント、例えば、裸のＤＮＡ、ファージ、トランスポゾン、コスミド、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ）、エピソームなどに操作され、それらは、例えば、パッケージング宿主細胞中でＤＮＡ又はＲＮＡウイルスベクター運ぶナノ粒子を生成するために、及び／又は対象の宿主細胞への送達のために、その上に担持されるＧＬＰ－１配列を宿主細胞へと導入する。一実施形態では、遺伝子エレメントは、プラスミドである。選択される遺伝子要素は、トランスフェクション、エレクトロポレーション、リポソーム送達、膜融合技術、高速ＤＮＡコーティングペレット、ウイルス感染、及びプロトプラスト融合を含む任意の好適な方法によって送達され得る。かかる構築物を作製するために使用される方法は、核酸操作における当業者に既知であり、遺伝子工学、組換え工学、及び合成技法を含む。例えば、Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（２０１２）を参照されたい。

本明細書で使用される場合、「宿主細胞」という用語は、ベクター（例えば、組換えＡＡＶ又はｒＡＡＶ）が産生プラスミドから産生されるパッケージング細胞株を指し得る。代替的に、「宿主細胞」という用語は、本明細書に記載の遺伝子産物の発現が望まれる任意の標的細胞を指し得る。したがって、「宿主細胞」は、任意の手段、例えば、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、マイクロインジェクション、形質転換、ウイルス感染、トランスフェクション、リポソーム送達、膜融合技術、高速ＤＮＡコーティングペレット、ウイルス感染、及びプロトプラスト融合によって細胞に導入された外因性又は異種ＤＮＡを含有する原核細胞又は真核細胞（例えば、バクテリア細胞、ヒト細胞、若しくは昆虫細胞）を指す。本明細書の特定の実施形態では、「宿主細胞」という用語は、本明細書に記載される組成物のインビトロ評価のための様々な哺乳動物種の細胞の培養物を指す。本明細書の他の実施形態では、「宿主細胞」という用語は、ウイルスベクター又は組換えウイルスを生成及びパッケージングするために使用される細胞を指す。更なる一実施形態では、「宿主細胞」という用語は、腸細胞、小腸細胞、膵臓細胞、肝臓細胞である。

本明細書で使用される場合、「標的細胞」という用語は、異種核酸配列又はタンパク質の発現が所望される任意の標的細胞を指す。一実施形態では、標的細胞は、肝臓細胞である。一実施形態では、標的細胞は、筋細胞である。

本明細書で使用される場合、「発現カセット」とは、生物学的に有用な核酸配列と、核酸配列（例えば、タンパク質、酵素、又は他の有用な遺伝子産物、ｍＲＮＡなどをコードする遺伝子ｃＤＮＡ）及びその遺伝子産物の転写、翻訳、並びに／若しくは発現を指示又は調節する、それと作動可能に連結される調節配列と、を含む、核酸分子を指す。本明細書で使用される場合、「作動可能に連結される」配列は、核酸配列と連続又は非連続である調節配列（エレメントとも称される）及びトランス又はシス核酸配列で作用する調節配列の両方を含む。かかる調節配列は、典型的には、例えば、プロモーター、エンハンサー、転写因子、転写終結因子、イントロン、翻訳効率を向上させる配列（すなわち、コザックコンセンサス配列）、スライシング及びポリアデニル化配列などの効率的なＲＮＡプロセシングシグナル、細胞質ｍＲＮＡを安定化する配列、例えば、ウッドチャック肝炎ウイ
ルス（ＷＨＰ）翻訳後調節要素（ＷＰＲＥ）、及びＴＡＴＡシグナルのうちの１つ以上を含む。発現カセットは、他の要素の中で、遺伝子配列の上流（５’～）の調節配列、例えば、プロモーター、エンハンサー、イントロンなどのうちの１つ以上、及びエンハンサー、又は遺伝子配列の下流（３’～）の調節配列、例えば、ポリアデニル化部位を含む３’非翻訳領域（３’ＵＴＲ）のうちの１つ以上を含み得る。特定の実施形態では、調節配列は、遺伝子産物の核酸配列と作動可能に連結され、調節配列は、介在する核酸配列、すなわち、５’非翻訳領域（５’ＵＴＲ）によって、遺伝子産物の核酸配列から分離される。特定の実施形態では、発現カセットは、１つ以上の遺伝子産物の核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、発現カセットは、モノシストロン性又はバイシストロン性発現カセットであり得る。他の実施形態では、「導入遺伝子」という用語は、標的細胞に挿入される外因性供給源からの１つ以上のＤＮＡ配列を指す。
典型的には、かかる発現カセットは、ウイルスベクターを生成するために使用することができ、ウイルスゲノムのパッケージングシグナルに隣接する本明細書に記載される遺伝子産物のコード配列、及び本明細書に記載のものなどの他の発現制御配列を含む。特定の実施形態では、ベクターゲノムは、２つ以上の発現カセットを含み得る。

一実施形態では、発現カセットは、ＧＬＰ－１構築物コード配列（例えば、ＧＬＰ－１融合タンパク質のコード配列）、プロモーターを含む核酸分子を指し、それらのための他の調節配列を含んでいてもよく、このカセットは、遺伝要素に操作されてもよく、かつ／又はウイルスベクターのカプシド（例えば、ウイルス粒子）にパッケージングされてもよい。典型的に、ウイルスベクターを産生するためのそのような発現カセットは、ウイルスゲノムのパッケージングシグナルに隣接する本明細書に記載のＧＬＰ－１構築物配列と、本明細書に記載されるものなどの他の発現制御配列とを含有する。本明細書に記載されるように、発言制御配列のいずれかは、例えば、コドン最適化を含む当該技術分野で既知の技法を使用して特定の種に対して最適化することができる。

発現カセットは、典型的には、発現制御配列の一部として、プロモーター配列を含有する。一実施形態では、肝臓特異的プロモーターサイロキシン結合グロブリン（ＴＢＧ）が使用される。本明細書に記載されるプラスミド及びベクターでは、ＣＢ７プロモーターが使用される。ＣＢ７は、サイトメガロウイルスエンハンサーエレメントを有するニワトリβアクチンプロモーターである。代替的に、他の肝臓特異的プロモーター、例えば、Ｔｈｅ Ｌｉｖｅｒ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｇｅｎｅ Ｐｒｏｍｏｔｅｒ Ｄａｔａｂａｓｅ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ｒｕｌａｉ．ｓｃｈｌ．ｅｄｕ／ＬＳＰＤに列挙されているものを使用してもよく、α１抗トリプシン（Ａ１ＡＴ）、ヒトアルブミン（Ｍｉｙａｔａｋｅ ｅｔ ａｌ．、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７１：５１２４ ３２（１９９７））、ｈｕｍＡｌｂ、Ｂ型肝炎ウイルスコアプロモーター（Ｓａｎｄｉｇ ｅｔ ａｌ．、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．３：１００２ ９（１９９６））、又はＴＴＲ最小エンハンサー／プロモーター、α－アンチトリプシンプロモーター、又は肝臓特異的プロモーター（ＬＳＰ）（Ｗｕ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．１６：２８０－２８９（２００８））を含むが、これらに限定されない。ウイルスプロモーター、構成的プロモーター、調節可能プロモーター［例えば、ＷＯ２０１１／１２６８０８及びＷＯ２０１３／０４９４３を参照されたい］、又は生理学的キューに応答するプロモーターなどの他のプロモーターが使用され得、本明細書に記載されるベクターに利用され得る。

プロモーターに加えて、発現カセット及び／又はベクターは、好適な転写開始配列、終結配列、エンハンサー配列、スプライシング及びポリアデニル化（ポリＡ）シグナルなどの効率的なＲＮＡプロセシングシグナル、細胞質ｍＲＮＡを安定化させる配列、翻訳効率を高める配列（すなわち、コザックコンセンサス配列）、タンパク質の安定性を増強させる配列、及び必要に応じて、コードされた生成物の分泌を増強させる配列を含み得る。好適なポリＡ配列の例としては、例えば、ＳＶ４０、又はウシ成長ホルモン（ｂＧＨ）、ヒ
ト成長ホルモン（ｈＧＨ）、ＳＶ４０、ウサギβ－グロビン（ウサギグロビンポリＡ；ＲＧＢとも称される）、修飾ＲＧＢ（ｍＲＧＢ）、及びＴＫポリＡが挙げられる。好適なエンハンサーの例には、例えば、とりわけαフェトタンパク質エンハンサー、ＴＴＲ最小プロモーター／エンハンサー、ＬＳＰ（ＴＨ結合グロブリンプロモータ／α１－マイクログロブリン／ビクニンエンハンサー）が含まれる。一実施形態では、ポリＡは、ウサギグロビンポリＡである。

これらの制御配列は、ＧＬＰ－１構築物配列に「作動可能に連結されている」。本明細書で使用される場合、「作動可能に連結された」という用語は、目的の遺伝子に連続している発現制御配列、及びトランスで又は離れて作用して目的の遺伝子を制御する発現制御配列の両方を指す。

一実施形態では、５’ＩＴＲ、ＣＢ７プロモーター、ニワトリβアクチンイントロン、配列番号１４の融合タンパク質のコード配列、ウサギグロビンポリＡ、及び３’ＩＴＲを含むｒＡＡＶが提供される。一実施形態では、５’ＩＴＲ、ＣＢ７プロモーター、ニワトリβアクチンイントロン、配列番号１６の融合タンパク質のコード配列、ウサギグロビンポリＡ、及び３’ＩＴＲを含むｒＡＡＶが提供される。一実施形態では、５’ＩＴＲ、ＣＢ７プロモーター、ニワトリβアクチンイントロン、配列番号１８の融合タンパク質のコード配列、ウサギグロビンポリＡ、及び３’ＩＴＲを含むｒＡＡＶが提供される。一実施形態では、５’ＩＴＲ、ＣＢ７プロモーター、ニワトリβアクチンイントロン、配列番号２０の融合タンパク質のコード配列、ウサギグロビンポリＡ、及び３’ＩＴＲを含むｒＡＡＶが提供される。

発現カセットをＡＡＶウイルス粒子にパッケージングするために必要な最小限の配列は、ＡＡＶ５’及び３’ＩＴＲであり、これらは、カプシドと同じＡＡＶ起源であってもよく、又は（ＡＡＶ擬似型を作製するために）異なるＡＡＶ起源であってもよい。一実施形態では、ＡＡＶ２からのＩＴＲ配列、又はその欠失型バージョン（ΔＩＴＲ）が、利便性のため、及び規制承認を加速させるために使用される。しかしながら、他のＡＡＶ供給源に由来するＩＴＲが選択され得る。好ましくは、ＩＴＲの供給源は、製造のためにトランスで提供されるＲｅｐタンパク質の供給源と同じである。典型的には、ＡＡＶベクターのための発現カセットは、ＡＡＶ ５’ＩＴＲと、ＧＬＰ－１融合タンパク質コード配列と、任意の調節配列と、ＡＡＶ ３’ＩＴＲと、を含む。しかしながら、これらのエレメントの他の構成も好適であり得る。Ｄ配列及び末端分解部位（ｔｒｓ）が欠失している、ΔＩＴＲと称される５’ＩＴＲの短縮バージョンが記載されている。他の実施形態では、全長ＡＡＶ５’及び３’ＩＴＲが使用される。

発現カセットをビリオンにパッケージングするために、ＩＴＲは、遺伝子と同じ構築物中のシスで必要とされる唯一のＡＡＶ構成要素である。一実施形態では、複製（ｒｅｐ）及び／又はカプシド（ｃａｐ）のコード配列は、ＡＡＶベクターを生成するために、ＡＡＶゲノムから除去され、トランスで供給されるか又はパッケージング細胞株によって供給される。例えば、上述のように、疑似型ＡＡＶは、ＡＡＶカプシドの供給源とは異なる供給源からのＩＴＲを含有し得る。一実施形態では、キメラＡＡＶカプシドが利用されてもよい。更に他のＡＡＶ成分が選択され得る。このようなＡＡＶ配列の供給源は、本明細書で記載されており、かつ学術的、商業的、又は公的資源（例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から単離又は入手することができる。ＡＡＶ配列は、文献又はデータベース、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（登録商標）、ＰｕｂＭｅｄ（登録商標）などで利用可能であるような公開された配列を参照することによって、合成又は他の好適な手段を通して入手され得る。

対象に送達するのに好適なＡＡＶウイルスベクターを生成し、単離するための方法は、
当該技術分野において既知である。例えば、米国特許第７７９０４４９号、米国特許第７２８２１９９号、ＷＯ２００３／０４２３９７、ＷＯ２００５／０３３３２１、ＷＯ２００６／１１０６８９、及びＵＳ７５８８７７２Ｂ２］を参照されたい。１つの系では、プロデューサー細胞株は、ＩＴＲに隣接する導入遺伝子をコードする構築物、並びにｒｅｐ及びｃａｐをコードする構築物で一過性にトランスフェクトされる。第２の系では、ｒｅｐ及びｃａｐを安定的に供給するパッケージング細胞株は、ＩＴＲに隣接する導入遺伝子をコードする構築物で一過性にトランスフェクトされる。これらの系の各々では、ＡＡＶビリオンは、ヘルパーアデノウイルス又はヘルペスウイルスへの感染に応答して産生され、ｒＡＡＶを汚染ウイルスから分離することを必要とする。より最近では、ＡＡＶを復元するためにヘルパーウイルスへの感染を必要としない系が開発されており、必要なヘルパー機能（すなわち、アデノウイルスＥ１、Ｅ２ａ、ＶＡ、及びＥ４、又はヘルペスウイルスＵＬ５、ＵＬ８、ＵＬ５２、及びＵＬ２９、並びにヘルペスウイルスポリメラーゼ）もまた、トランスで系によって供給される。これらのより新しい系では、ヘルパー機能は、必要とされるヘルパー機能をコードする構築物での細胞の一過性トランスフェクションによって供給され得るか、又は細胞は、ヘルパー機能をコードする遺伝子を安定的に含有するように操作され得、その発現は、転写レベル又は転写後レベルで制御され得る。更に別の系では、ＩＴＲに隣接する導入遺伝子及びｒｅｐ／ｃａｐ遺伝子は、バキュロウイルス由来のベクターによる感染によって、昆虫細胞に導入される。これらの産生システムに関するレビューについては、概して、例えば、Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００９，“Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ－ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ ｈｙｂｒｉｄ ｆｏｒ ｌａｒｇｅ－ｓｃａｌｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，”Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２０：９２２－９２９を参照されたい（その各々の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。これら及び他のＡＡＶ産生系を作製及び使用する方法はまた、以下の米国特許に記載されており、これらの各々の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる：５，１３９，９４１、５，７４１，６８３、６，０５７，１５２、６，２０４，０５９、６，２６８，２１３、６，４９１，９０７、６，６６０，５１４、６，９５１，７５３、７，０９４，６０４、７，１７２，８９３、７，２０１，８９８、７，２２９，８２３、及び７，４３９，０６５。一般に、例えば、Ｇｒｉｅｇｅｒ＆Ｓａｍｕｌｓｋｉ，２００５，“Ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ ａｓ ａ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｖｅｃｔｏｒ：Ｖｅｃｔｏｒ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，”Ａｄｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｅｎｇｉｎ／Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．９９：１１９－１４５、Ｂｕｎｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００８，“Ｒｅｃｅｎｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ ｉｎ ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ ｖｅｃｔｏｒ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，”Ｊ．Ｇｅｎｅ Ｍｅｄ．１０：７１７－７３３、及び以下に引用される参考文献を参照されたく、これらの各々は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。本発明の任意の実施形態を構築するために使用される方法は、核酸操作における技術者に既知であり、遺伝子工学、組換え工学、及び合成技術を含む。例えば、Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（２０１２）を参照されたい。同様に、ｒＡＡＶビリオンを産生する方法は周知であり、好適な方法の選択は、本発明を限定するものではない。例えば、Ｋ．Ｆｉｓｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，（１９９３）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７０：５２０－５３２及び米国特許第５，４７８，７４５号を参照されたい。

本明細書に記載のｒＡＡＶは、内側にパッケージングされたベクターゲノムを有する選択されたカプシドを含む。ベクターゲノム（又はｒＡＡＶゲノム）は、５’及び３’ＡＡＶ逆位末端反復（ＩＴＲ）、融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列、及び融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列の宿主細胞のゲノムへの挿入を指示する
調節配列を含む。一実施形態では、ベクターゲノムは、配列番号２１で示される配列、又はそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、若しくは少なくとも９９％の同一性を共有する配列である。一実施形態では、ベクターゲノムは、配列番号２２で示される配列、又はそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、若しくは少なくとも９９％の同一性を共有する配列である。一実施形態では、ベクターゲノムは、配列番号２３で示される配列、又はそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、若しくは少なくとも９９％の同一性を共有する配列である。一実施形態では、配列番号２１のｎｔ１９９～３１２５の配列を有するか、又はそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、若しくは少なくとも９９％の同一性を共有する配列を有する発現カセットが、提供される。一実施形態では、配列番号２２のｎｔ１９９～４１９４の配列を有するか、又はそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、若しくは少なくとも９９％の同一性を共有する配列を有する発現カセットが、提供される。一実施形態では、配列番号２３のｎｔ１９９～４１４３の配列を有するか、又はそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、若しくは少なくとも９９％の同一性を共有する配列を有する発現カセットが、提供される。

本明細書で使用される場合、「ベクターゲノム」は、ウイルス粒子を形成するパルボウイルス（例えば、ｒＡＡＶ）カプシドの内側にパッケージングされた核酸配列を指す。かかる核酸配列は、ＡＡＶ逆位末端反復配列（ＩＴＲ）を含有する。本明細書の例では、ベクターゲノムは、少なくとも５’から３’に、ＡＡＶ ５’ＩＴＲ、コード配列（すなわち、導入遺伝子）、及びＡＡＶ ３’ＩＴＲを含む。ＡＡＶ２からのＩＴＲ、カプシドとは異なる供給源ＡＡＶ、又は全長ＩＴＲ以外が選択され得る。特定の実施形態では、ＩＴＲは、産生中のｒｅｐ機能又はトランス相補性ＡＡＶを提供するＡＡＶと同じＡＡＶ供給源由来である。更に、他のＩＴＲ、例えば、自己相補的（ｓｃＡＡＶ）ＩＴＲが使用され得る。一本鎖ＡＡＶ及び自己相補的（ｓｃ）ＡＡＶの両方がｒＡＡＶに含まれる。導入遺伝子は、目的のポリペプチド、タンパク質、機能性ＲＮＡ分子（例えば、ｍｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ阻害剤）、又は他の遺伝子産物をコードするベクター配列とは異種の核酸コード配列である。核酸コード配列は、標的組織の細胞中で導入遺伝子の転写、翻訳、及び／又は発現を可能にする様式で調節要素に作動可能に連結される。ベクターゲノムの好適な成分が本明細書でより詳細に考察される。一実施例では、「ベクターゲノム」は、最低限でも５’から３’に、ベクター特異的配列と、（標的配列においてその発現を指示する）調節制御配列に作動可能に連結されたＧＬＰ－１構築物をコードする核酸とを含み、ベクター特異的配列は、ベクターゲノムをウイルスベクターカプシド又はエンベロープタンパク質に特異的にパッケージングする末端反復配列であり得る。例えば、ＡＡＶ逆位末端反復は、ＡＡＶ及び特定の他のパルボウイルスカプシドにパッケージングするために利用される。

ベクターのＡＡＶ配列は、典型的には、シス作用性５’及び３’逆位末端反復配列を含む（例えば、Ｂ．Ｊ．Ｃａｒｔｅｒ，ｉｎ “Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓｅｓ”，ｅｄ．，Ｐ．Ｔｉｊｓｓｅｒ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，ｐｐ．１５５ １６８（１９９０）を参照されたい）。ＩＴＲ配列は、約１４５ｂｐの長さである。好ましくは、実質的にＩＴＲをコードする全体配列が分子内で使用されるが、これらの配列のある程度の軽微な修飾が許容される。これらのＩＴＲ配列を修飾する能力は、当該技術分野の範囲内である。（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ，“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ．Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ”，２ｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８９）、及びＫ．Ｆｉｓｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７０：５２０ ５３２（１９９６）を参照されたい）。本発明で使用されるこのような分子の一例は、導入遺伝子を含有する「シス作用性」プラスミドであり、選択された導入遺伝子配列及び関連する調節エレメントは、５’及び３’ＡＡＶ ＩＴＲ配列に隣接している。一実施形態では、ＩＴＲは
、カプシドを供給するのとは異なるＡＡＶ由来である。一実施形態では、ＡＡＶ２由来のＩＴＲ配列である。しかしながら、他のＡＡＶ供給源に由来するＩＴＲが選択され得る。Ｄ配列及び末端分解部位（ｔｒｓ）が欠失している、ΔＩＴＲと称される５’ＩＴＲの短縮バージョンが記載されている。特定の実施形態では、ベクターゲノムは、外部Ａエレメントが欠失している、１３０塩基対の短縮ＡＡＶ２ ＩＴＲを含む。理論に拘束されたくはないが、短縮されたＩＴＲは、内部（Ａ’）要素を鋳型として使用して、ベクターＤＮＡ増幅中に１４５塩基対の野生型長に戻されると考えられる。他の実施形態では、全長ＡＡＶ５’及び３’ＩＴＲが使用される。ＩＴＲの供給源がＡＡＶ２由来であり、ＡＡＶカプシドが別のＡＡＶ供給源由来である場合、得られるベクターは、擬似型と称され得る。しかしながら、これらのエレメントの他の構成も好適であり得る。

任意選択的に、本明細書に記載されるＧＬＰ－１構築物は、ｒＡＡＶ以外のウイルスベクターを介して送達されてもよい。かかる他のウイルスベクターは、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、レンチウイルス、レトロウイルスなどを含むが、これらに限定されない、遺伝子療法に好適な任意のウイルスを含んでもよく、使用されてもよい。好適には、これらの他のベクターのうちの１つが生成される場合、それは、複製欠損ウイルスベクターとして産生される。

「複製欠損ウイルス」又は「ウイルスベクター」は、合成又は人工ウイルス粒子を指し、ここで、目的の遺伝子を含有する発現カセットは、ウイルスカプシド又はエンベロープ中にパッケージングされ、同様にウイルスカプシド又はエンベロープ内にパッケージングされた任意のウイルスゲノム配列は、複製欠損である、すなわち、それらは、後代ビリオンを生成することができないが、標的細胞に感染する能力を保持する。一実施形態では、ウイルスベクターのゲノムは、複製に必要とされる酵素をコードする遺伝子を含まないが（ゲノムは、人工ゲノムの増幅及びパッケージングに必要とされるシグナルに隣接する目的の導入遺伝子のみを含有する「ガットレス（ｇｕｔｌｅｓｓ）」であるように操作されることができる）、これらの遺伝子は、産生中に供給され得る。したがって、それは、後代ビリオンによる複製及び感染が、複製に必要とされるウイルス酵素の存在下以外で生じることができないために、遺伝子療法における使用のために安全であると考えられる。

本明細書に記載のウイルスベクター構築物を含む組成物も提供される。本明細書に記載の薬学的組成物は、任意の好適な経路又は異なる経路の組み合わせによって、それを必要とするネコ対象に送達されるように設計される。肝臓への直接送達（任意選択的に静脈内、肝動脈を介して、又は移植によって）、経口、吸入、鼻腔内、気管内、動脈内、眼内、静脈内、筋肉内、皮下、皮膚内、及び他の非経口投与経路。本明細書に記載のウイルスベクターは、単一の組成物又は複数の組成物で送達されてもよい。任意選択的に、２つ以上の異なるＡＡＶ、又は複数のウイルスが送達され得る［例えば、ＷＯ２０１１／１２６８０８及びＷＯ２０１３／０４９４９３を参照されたい］。別の実施形態では、複数のウイルスは、異なる複製欠陥ウイルス（例えば、ＡＡＶ及びアデノウイルス）を含有し得る。一実施形態では、投与は、筋肉内である。別の実施形態では、投与は、静脈内である。

複製欠陥ウイルスは、遺伝子導入及び遺伝子療法用途で使用するための生理学的に許容される担体と共に製剤化することができる。ＡＡＶウイルスベクターの場合、ゲノムコピー（「ＧＣ」）の定量化を、製剤中に含有される用量の尺度として使用し得る。当該技術分野で既知の任意の方法を使用して、本発明の複製欠損ウイルス組成物のゲノムコピー（ＧＣ）数を決定することができる。ＡＡＶのＧＣ数滴定を行うための１つの方法は、以下の通りである。精製されたＡＡＶベクター試料は、まずＤＮａｓｅで処理され、非カプシド化ＡＡＶゲノムＤＮＡ又は産生プロセスからの汚染プラスミドＤＮＡを排除する。次いで、ヌクレアーゼ耐性粒子を熱処理に供して、カプシドからゲノムを放出させる。次に、ウイルスゲノムの特定の領域（通常はポリＡシグナル）を標的とするプライマー／プロー
ブセットを使用したリアルタイムＰＣＲによって、放出されたゲノムを定量化する。ゲノムコピーを決定するための別の好適な方法は、定量的ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）、特に最適化されたｑＰＣＲ又はデジタル液滴ＰＣＲである［Ｌｏｃｋ Ｍａｒｔｉｎ，ｅｔ ａｌ，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ．Ａｐｒｉｌ ２０１４，２５（２）：１１５－１２５．ｄｏｉ：１０．１０８９／ｈｇｔｂ．２０１３．１３１、編集に先立ちオンラインで公開、２０１３月１２月１３日］。
また、複製欠損ウイルス組成物は、約１．０×１０^９ＧＣ～約１．０×１０^１５ＧＣの範囲にある量の複製欠損ウイルスを含有する投与量単位で製剤化することができる。別の実施形態では、この量のウイルスゲノムは、分割用量で送達され得る。一実施形態では、用量は、約５～１０ｋｇの平均ネコ対象について、約１．０×１０^１０ＧＣ～約３．０×１０^１３ＧＣである。別の実施形態では、用量は、約１×１０^９ＧＣである。例えば、ＡＡＶウイルスの用量は、約１×１０^１０ＧＣ、１×１０^１１ＧＣ、約５×１０^１１ＧＣ、約１×１０^１２ＧＣ、約５×１０^１２ＧＣ、又は約１×１０^１３ＧＣであり得る。別の実施形態では、用量は、ネコ対象について、約１．０×１０^９ＧＣ／ｋｇ～約３．０×１０^１３ＧＣ／ｋｇである。別の実施形態では、用量は、約１×１０^９ＧＣ／ｋｇである。例えば、ＡＡＶウイルスの用量は、約１×１０^１０ＧＣ／ｋｇ、１×１０^１１ＧＣ／ｋｇ、約５×１０^１１ＧＣ／ｋｇ、約１×１０^１２ＧＣ／ｋｇ、約５×１０^１２ＧＣ／ｋｇ、又は約１×１０^１３ＧＣ／ｋｇであり得る。一実施形態では、構築物は、獣医対象に対して１μＬ～約１００ｍＬの体積で送達され得る。様々な獣医学的動物への物質の投与に関する良好な慣行の考察については、例えば、Ｄｉｅｈｌ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ
Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，２１：１５－２３（２００１）を参照されたい。本文書は、参照により本明細書に組み込まれる。本明細書で使用される場合、「投薬量」又は「量」という用語は、対象に治療の過程で送達される総投薬量若しくは総量、又は単一単位（又は複数単位若しくは分割投薬量）投与で送達される量を指し得る。

上述の組換えベクターは、公開された方法に従って宿主細胞に送達され得る。好ましくは、生理学的に適合性のある担体に懸濁されたｒＡＡＶは、ネコを含む所望の対象に投与され得る。好適な担体は、導入ウイルスが指向する適応症の観点で、当業者によって容易に選択され得る。例えば、１つの好適な担体は、生理食塩水を含み、様々な緩衝溶液（例えば、リン酸緩衝食塩水）と共に製剤化され得る。他の例示的な担体としては、滅菌生理食塩水、ラクトース、スクロース、リン酸カルシウム、ゼラチン、デキストラン、寒天、ペクチン、ピーナッツ油、ゴマ油、及び水が挙げられる。担体の選択は、本発明の制限ではない。

別の実施形態では、組成物は、担体、希釈剤、賦形剤及び／又はアジュバントを含む。

特定の実施形態では、ヒト患者への投与のために、ｒＡＡＶは、食塩水、界面活性剤、並びに薬学的及び／又は生理学的に適合性のある塩、又は塩の混合物を含有する水性溶液中に好適に懸濁される。好適には、製剤は、生理学的に許容されるｐＨ、例えば、ｐＨ６～９、又はｐＨ６．０～７．５、又はｐＨ６．２～７．７、又はｐＨ６．５～７．５、ｐＨ７．０～７．７、又はｐＨ７．２～７．８、又は約ｐＨ７．０の範囲に調整される。特定の実施形態では、製剤は、約６．０、約６．１、約６．２、約６．３、約６．４、約６．５、約６．６、約６．７、約６．８、約６．９、約７．０、約７．１、約７．２、約７．３、約７．４、約７．５、約７．６、約７．７、又は約７．８のｐＨに調整される。特定の実施形態では、髄腔内送達の場合、約７．２８～約７．３２、約６．０～約７．５、約６．２～約７．７、約７．５～約７．８、約６．０、約６．１、約６．２、約６．３、約６．４、約６．５、約６．６、約６．７、約６．８、約６．９、約７．０、約７．１、約７．２、約７．３、約７．４、約７．５、約７．６、約７．７、又は約７．８のｐＨが望ましい可能性がある。特定の実施形態では、静脈送達のためには、約６．８～約７．２のｐＨが望ましい可能性がある。しかしながら、より広範囲にある他のｐＨ、及びこれら
の下位範囲が、他の送達経路のために選択され得る。

任意選択的に、本発明の組成物は、ｒＡＡＶ及び／又はバリアント及び担体に加えて、防腐剤又は化学的安定剤などの他の従来の薬学的成分を含み得る。好適な例示的な防腐剤には、クロロブタノール、ソルビン酸カリウム、ソルビン酸、二酸化硫黄、没食子酸プロピル、パラベン、エチルバニリン、グリセリン、フェノール、及びパラクロロフェノールが含まれる。好適な化学的安定剤には、ゼラチン及びアルブミンが含まれる。

本明細書で使用される場合、「担体」は、任意の及び全ての溶媒、分散媒体、ビヒクル、コーティング、希釈剤、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤、緩衝液、担体溶液、懸濁液、コロイドなどを含む。薬学的活性物質に対するかかる媒体及び薬剤の使用は、当該技術分野において周知である。補足活性成分を組成物中に組み込むこともできる。「薬学的に許容される」という語句は、宿主に投与されるときにアレルギー又は類似の有害反応を生じない分子実体及び組成物を指す。リポソーム、ナノカプセル、微粒子、ミクロスフェア、脂質粒子、小胞などの送達ビヒクルが、本発明の組成物を好適な宿主細胞又は標的細胞に導入するために使用され得る。詳細には、ｒＡＡＶベクター送達導入遺伝子は、脂質粒子、リポソーム、小胞、ナノスフィア、又はナノ粒子などに封入化された送達のいずれかのために製剤化され得る。

一実施形態では、組成物は、対象への送達に好適な最終製剤を含み、例えば、生理的に適合するｐＨ及び塩濃度に緩衝される水性液体懸濁液である。任意選択的に、１つ以上の界面活性剤が製剤中に存在する。別の実施形態では、組成物は、対象への投与のために希釈される濃縮物として輸送され得る。他の実施形態では、組成物は、投与時に凍結乾燥され、再構成され得る。

好適な界面活性剤、又は界面活性剤の組み合わせは、非毒性である非イオン性界面活性剤の中から選択されてもよい。一実施形態では、例えば、中性ｐＨを有し、８４００の平均分子量を有する、ポロキサマー１８８としても知られている、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）Ｆ６８［ＢＡＳＦ］などの、一級ヒドロキシル基末端の二機能的ブロックコポリマー界面活性剤が選択される。他の界面活性剤及び他のポロキサマー、すなわち、ポリオキシエチレン（ポリ（エチレンオキシド））の２つの親水性鎖に隣接するポリオキシプロピレン（ポリ（プロピレンオキシド））の中心疎水性鎖からなる非イオン性トリブロックコポリマー、ＳＯＬＵＴＯＬ ＨＳ １５（マクロゴール－１５ヒドロキシステアレート）、ＬＡＢＲＡＳＯＬ（ポリオキシカプリル酸グリセリド）、ポリオキシ１０オレイルエーテル、ＴＷＥＥＮ（ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル）、エタノール、及びポリエチレングリコールが選択され得る。一実施形態では、製剤は、ポロキサマーを含有する。これらのコポリマーは、一般的に、文字「Ｐ」（ポロキサマーの場合）の後に３桁の数字で命名され、最初の２桁×１００は、ポリオキシプロピレンコアのおおよその分子質量を与え、最後の１桁×１０は、ポリオキシエチレン含有量のパーセンテージを与える。一実施形態では、ポロキサマー１８８が選択される。界面活性剤は、懸濁液の最大約０．０００５％～約０．００１％の量で存在してもよい。

ベクターの用量は、主に、治療される状態、ネコ患者の年齢、体重、及び健康状態などの要因に依存し、したがって、患者間で異なる。例えば、ウイルスベクターの治療上有効なヒト投薬量は、概して、約２５～約１０００マイクロリットル～約１００ｍＬの範囲の、（４．５ｋｇの平均的なネコ対象を治療するために）約１×１０^９～１×１０^１６ゲノムウイルスベクターの濃度（その範囲内の全ての整数又は分数量を含む。特定の実施形態では、ネコ患者は、範囲内の全ての整数又は分数量を含む、約１×１０^９ＧＣ／ネコ～約１×１０^１２ＧＣ^／ネコ、又は約１×１０^１０ＧＣ／ネコ～約１×１０^１１ＧＣ／ネコで投与される。

本発明の組成物は、治療される領域のサイズ、使用されるウイルス力価、投与経路、及び本方法の所望の効果に応じて、範囲内の全ての数値を含めて、約０．１μＬ～約１０ｍＬの容量で送達され得る。一実施形態では、容量は、約５０μＬである。別の実施形態では、容量は、約７０μＬである。別の実施形態では、容量は、約１００μＬである。別の実施形態では、容量は、約１２５μＬである。別の実施形態では、容量は、約１５０μＬである。別の実施形態では、容量は、約１７５μＬである。更に別の実施形態では、容量は、約２００μＬである。別の実施形態では、容量は、約２５０μＬである。別の実施形態では、容量は、約３００μＬである。別の実施形態では、容量は、約４５０μＬである。別の実施形態では、容量は、約５００μＬである。別の実施形態では、容量は、約６００μＬである。別の実施形態では、容量は、約７５０μＬである。別の実施形態では、容量は、約８５０μＬである。別の実施形態では、容量は、約１０００μＬである。別の実施形態では、容量は、約１．５ｍＬである。別の実施形態では、容量は、約２ｍＬである。別の実施形態では、容量は、約２．５ｍＬである。別の実施形態では、容量は、約３ｍＬである。別の実施形態では、容量は、約３．５ｍＬである。別の実施形態では、容量は、約４ｍＬである。別の実施形態では、容量は、約５ｍＬである。別の実施形態では、容量は、約５．５ｍＬである。別の実施形態では、容量は、約６ｍＬである。別の実施形態では、容量は、約６．５ｍＬである。別の実施形態では、容量は、約７ｍＬである。別の実施形態では、容量は、約８ｍＬである。別の実施形態では、容量は、約８．５ｍＬである。別の実施形態では、容量は、約９ｍＬである。別の実施形態では、容量は、約９．５ｍＬである。別の実施形態では、容量は、約１０ｍＬである。

いくつかの実施形態では、調節配列の制御下にある所望の導入遺伝子をコードする核酸配列を有する組換えアデノ随伴ウイルスの濃度は、組成物中、望ましくは、１ミリリットル当たり約１０^７～１０^１４個のベクターゲノム（ｖｇ／ｍＬ）（ゲノムコピー／ｍＬ（ＧＣ／ｍＬ）とも呼ばれる）の範囲である。

一実施形態では、組成物中のｒＡＡＶの投薬量は、体重の約１．０×１０^９ＧＣ／ｋｇ～約３．０×１０^１３ＧＣ／ｋｇである。一実施形態では、投与量は、約１×１０^１１ＧＣ／ｋｇである。一実施形態では、投与量は、約１．０×１０^１３ＧＣ／ｋｇである。一実施形態では、投与量は、約１．０×１０^１２ＧＣ／ｋｇである。一実施形態では、投与量は、約５．０×１０^１２ＧＣ／ｋｇである。本明細書に記載の全ての範囲は、エンドポイントを含む。

一実施形態では、有効投与量（送達される総ゲノムコピー）は、約１０^７～１０^１３ベクターゲノムである。一実施形態では、総投与量は、約１０^８ゲノムコピーである。一実施形態では、総投与量は、約１０^９ゲノムコピーである。一実施形態では、総投与量は、約１０^１０ゲノムコピーである。一実施形態では、総投与量は、約１０^１１ゲノムコピーである。一実施形態では、総投与量は、約１０^１２ゲノムコピーである。一実施形態では、総投与量は、約１０^１３ゲノムコピーである。一実施形態では、総投与量は、約１０^１４ゲノムコピーである。一実施形態では、総投与量は、約１０^１５ゲノムコピーである。

毒性などの望ましくない効果のリスクを低減するために、ウイルスの最低有効濃度を利用することが望ましい。更に、これらの範囲の他の投与量及び投与容量は、治療される対象（好ましくは、ヒト）の身体状態、対象の年齢、特定の障害、及び進行性の場合、発症した障害の程度を考慮して、主治医によって選択され得る。

本明細書に記載されるウイルスベクター及び他の構築物は、ＧＬＰ－１融合タンパク質構築物をそれを必要とする対象に送達するための、半減期が増加したＧＬＰ－１を対象に供給するための、及び／又は対象におけるＩ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病若しくはメタボリッ
クシンドロームを治療するための医薬を調製するために使用されてもよい。したがって、別の態様では、糖尿病を治療する方法が提供される。本方法は、本明細書に記載される組成物を、それを必要とするネコ対象に投与することを含む。一実施形態では、組成物は、本明細書に記載されるＧＬＰ－１融合タンパク質発現カセットを含有するウイルスベクターを含む。

本明細書で使用される場合、「治療」又は「治療すること」という用語は、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）、又はメタボリックシンドロームの１つ以上の症状を軽減する目的で、本明細書に記載される１つ以上の化合物又は組成物を対象に投与することを包含すると定義される。したがって、「治療」は、所与の対象において、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、又はメタボリックシンドロームの進行を低減すること、症状の重症度を低減すること、疾患の進行を遅延させること、又は療法の有効性を増加させること、のうちの１つ以上を含み得る。

本明細書で使用される場合、「寛解」という用語は、ネコがもはや糖尿病の臨床的徴候を示さず、正常な血糖値を有する場合に、インスリン治療を中止する能力を指す。

別の実施形態では、ネコにおけるＴ２ＤＭを治療するための方法が提供される。方法は、本明細書に記載される融合タンパク質をコードする配列を含む核酸分子を含むウイルスベクターを投与することを含む。

別の態様では、ネコにおける代謝性疾患を治療する方法が提供される。本方法は、本明細書に記載される組成物を、それを必要とするネコ対象に投与することを含む。一実施形態では、組成物は、本明細書に記載されるＧＬＰ－１融合タンパク質発現カセットを含有するウイルスベクターを含む。一実施形態では、代謝性疾患は、Ｉ型糖尿病である。一実施形態では、代謝性疾患は、ＩＩ型糖尿病である。一実施形態では、代謝性疾患は、メタボリックシンドロームである。

別の態様では、ネコ対象において体重を減少させる方法が提供される。本方法は、本明細書に記載される組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む。一実施形態では、組成物は、本明細書に記載されるＧＬＰ－１融合タンパク質発現カセットを含有するウイルスベクターを含む。

治療の経過は、任意選択的に、同じウイルスベクター（例えば、ＡＡＶｒｈ９１ベクター）又は異なるウイルスベクター（例えば、ＡＡＶｒｈ９１及びＡＡＶ３Ｂ．ＡＲ２．１２）の反復投与を伴ってもよい。本明細書に記載のウイルスベクターを使用して、更に他の組み合わせが選択されてもよい。任意選択的に、本明細書に記載の組成物は、他の糖尿病薬又はタンパク質ベースの療法（例えば、ＧＬＰ－１類似体、インスリン、経口抗高血糖薬（スルホニル尿素、ビグアナイド、チアゾリジンジオン、及びアルファグルコイダーゼ阻害剤）を含む）を含むレジメンで組み合わせることができる。任意選択的に、本明細書に記載される組成物は、食事療法及び運動療法を含む生活習慣の変化を伴うレジメンにおいて組み合わされてもよい。特定の実施形態では、ＡＡＶベクター及び併用療法は、本質的に同時に投与される。他の実施形態では、ＡＡＶベクターが初めに投与される。他の実施形態では、併用療法が初めに投与される。

一実施形態では、組成物は、有効量のインスリンと組み合わせて投与される。限定されないが、プロタミン亜鉛組換えヒトインスリン（ＰｒｏＺｉｎｃ（登録商標））、ブタインスリン亜鉛懸濁液（Ｖｅｔｓｕｌｉｎ（登録商標））、及びインスリングラルギン（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））を含む、種々の市販のインスリン製品が、当該技術分野で既知である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるｒＡＡＶとインスリンとの組み
合わせは、ウイルスベクターでの治療前と比較して、対象におけるインスリン用量要件を減少させる。そのような用量要件は、１０％以上、２０％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、又は９０％以上低減され得る。治療する医師は、対象が必要とするインスリンの正しい投薬量を決定することができる。例えば、対象は、インスリン又は他の療法を使用して治療されてもよく、治療医は、ＡＡＶベクターの投与時に継続してもよい。かかるインスリン又は他の併用療法は、その後、必要に応じて、継続、低減、又は中止されてもよい。

一実施形態では、遺伝子療法のための本明細書に記載の発現カセット、ベクターゲノム、ｒＡＡＶを含む組成物、又は他の組成物は、患者当たり単回用量として送達される。一実施形態では、対象は、治療有効量の本明細書に記載の組成物を送達される。本明細書で使用される場合、「治療有効量」は、治療目標を達成するために十分なＧＬＰ１－Ｆｃの量を標的細胞に送達して発現する、発現カセット若しくはベクター、又はその組み合わせの量を指す。特定の実施形態では、治療目標は、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、又はメタボリックシンドロームの症状のうちの１つ以上を緩和又は治療することである。「治療有効量」は、ネコ患者ではなく動物モデルに基づいて決定されてもよい。別の実施形態では、治療目標は、対象の代謝性疾患の寛解である。

特定の実施形態では、有効な用量及び／又は方法は、少なくとも３ヶ月、少なくとも６ヶ月、又は少なくとも１２ヶ月の間、対象の血清中で融合タンパク質の発現をもたらす。特定の実施形態では、有効用量及び／又は方法は、少なくとも３ヶ月、少なくとも６ヶ月、又は少なくとも１２ヶ月の間、少なくとも３，０００ピコモル（ｐＭ）、少なくとも５，０００ｐＭ、少なくとも１０，０００ｐｍ、少なくとも２５，０００ｐＭ、又は少なくとも５０，０００ｐＭの血清濃度で、対象における融合タンパク質の発現をもたらす。他の実施形態では、有効用量及び／又は方法は、３～１２ヶ月、６～１２ヶ月、又は１２ヶ月の間、３，０００ピコモル（ｐＭ）～２００，０００ｐＭ、５，０００ピコモル（ｐＭ）～２００，０００ｐＭ、１０，０００ピコモル（ｐＭ）～２００，０００ｐＭ、２５，０００ピコモル（ｐＭ）～２００，０００ｐＭ又は５０，０００ピコモル（ｐＭ）～２００，０００ｐＭの血清濃度で、対象における融合タンパク質の発現をもたらす。特定の実施形態では、有効な用量及び／又は方法は、少なくとも３ヶ月、少なくとも６ヶ月、又は少なくとも１２ヶ月の間、治療有効濃度で、対象において、融合タンパク質の発現をもたらす。

他の実施形態では、治療目標は、血清フルクトサミンの還元である。特定の実施形態では、有効量及び／又は方法は、対象の血清フルクトサミンを約６％減少させるのに有効である。別の実施形態では、有効量及び／又は方法は、対象の血清フルクトサミンを５％～１０％減少させるのに有効である。更に別の実施形態では、有効量及び／又は方法は、対象の血清フルクトサミンを約１０％減少させるのに有効である。別の実施形態では、有効量及び／又は方法は、対象の血清フルクトサミンを１０％～２０％減少させるのに有効である。列挙された範囲内の他の範囲及び整数が企図される。本明細書で使用される場合、ｖｐカプシドタンパク質を指すために使用されるとき、「異種」という用語又はその任意の文法的変形は、例えば、異なる改変アミノ酸配列を有するｖｐ１、ｖｐ２、又はｖｐ３モノマー（タンパク質）を有する、同じではない要素からなる集団を指す。配列番号２０は、ＡＡＶｒｈ９１ ｖｐ１タンパク質のコードされたアミノ酸配列を提供する。ｖｐ１、ｖｐ２、及びｖｐ３タンパク質（代替的にアイソフォームと称される）に関連して使用される「異種」という用語は、カプシド内のｖｐ１、ｖｐ２、及びｖｐ３タンパク質のアミノ酸配列の違いを指す。ＡＡＶカプシドは、予測されたアミノ酸残基の修飾を有する、ｖｐ１タンパク質内、ｖｐ２タンパク質内、及びｖｐ３タンパク質内に亜集団を含有する。これらの亜集団は、最低限、特定の脱アミド化アスパラギン（Ｎ又はＡｓｎ）残基を含む。例えば、特定の亜集団は、アスパラギン－グリシン対における少なくとも１つ、２つ
、３つ、又は４つの高度に脱アミド化されたアスパラギン（Ｎ）位置を含み、任意選択的に他の脱アミド化アミノ酸を更に含み、脱アミド化は、アミノ酸変化及び他の任意選択的な修飾をもたらす。

本明細書で使用される場合、ｖｐタンパク質の「亜集団」は、別途指定されない限り、少なくとも１つの定義された共通の特徴を有し、少なくとも１つの群メンバーから、参照群の全てのメンバーよりも少ないメンバーからなるｖｐタンパク質の群を指す。例えば、ｖｐ１タンパク質の「亜集団」は、別途指定されない限り、組み立てられたＡＡＶカプシド中の少なくとも１つの（１）ｖｐ１タンパク質であり、全てのｖｐ１タンパク質未満である。ｖｐ３の「亜集団」は、別途指定されない限り、組み立てられたＡＡＶカプシドにおいて、１つのｖｐ３タンパク質から、全てのｖｐ３タンパク質よりも少なくてもよい。例えば、組み立てられたＡＡＶカプシドにおいて、ｖｐ１タンパク質は、ｖｐタンパク質の亜集団であり得、ｖｐ２タンパク質は、ｖｐタンパク質の別の亜集団であり得、ｖｐ３はなお、ｖｐタンパク質の更なる亜集団である。別の例では、ｖｐ１、ｖｐ２、及びｖｐ３タンパク質は、例えば、少なくとも１つ、２つ、３つ、又は４つの高度脱アミド化アスパラギン、例えば、アスパラギン－グリシン対で異なる修飾を有する亜集団を含み得る。

本明細書で使用される場合、ｒＡＡＶの「ストック」は、ｒＡＡＶの集団を指す。脱アミド化に起因するカプシドタンパク質の不均一性にもかかわらず、ストック内のｒＡＡＶは、同一のベクターゲノムを５つ共有することが予想される。ストックは、例えば、選択されたＡＡＶカプシドタンパク質及び選択された産生系に特徴的な不均一な脱アミド化パターンを有するカプシドを有するｒＡＡＶを含み得る。ストックは、単一の産生系から産生されてもよく、又は産生系の複数の実行からプールされてもよい。本明細書に記載されるものを含むが、これらに限定されない様々な産生系が選択され得る。

本明細書で使用される場合、「ＧＬＰ－１構築物」、「ＧＬＰ－１発現構築物」、及び同義語は、リーダー及び融合ドメインと組み合わせて本明細書に記載されるＧＬＰ－１配列を含む。用語「ＧＬＰ－１構築物」、「ＧＬＰ－１発現構築物」及び同義語は、ＧＬＰ－１融合タンパク質をコードする核酸配列又はその発現産物を指すために使用され得る。

核酸配列の文脈において、「同一性パーセント（％）」、「配列同一性」、「配列同一性パーセント」、又は「同一パーセント」という用語は、対応のために整列させたときに同じである２つの配列中の塩基を指す。配列同一性の比較の長さは、ゲノムの全長、遺伝子コード配列の全長、又は、少なくとも約１００～１５０個のヌクレオチドの断片にわたってもよく、又はこれが所望される。しかしながら、例えば、少なくとも約９個のヌクレオチド、通常は少なくとも約２０～２４個のヌクレオチド、少なくとも約２８～３２個のヌクレオチド、少なくとも約３６個以上のヌクレオチドの、より小さい断片間の同一性も望まれ得る。多重配列整列プログラムはまた、核酸配列についても利用可能である。かかるプログラムの例としては、インターネット上のウェブサーバを通してアクセス可能な「Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ」、「ＣＡＰ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｓｓｅｍｂｌｙ」、「ＢＬＡＳＴ」、「ＭＡＰ」、及び「ＭＥＭＥ」が挙げられる。かかるプログラムの他のソースは、当業者に既知である。代替的に、Ｖｅｃｔｏｒ ＮＴＩユーティリティもまた使用される。また、当該技術分野で既知のいくつかのアルゴリズムが存在し、上に記載のプログラムに含まれるものを含め、ヌクレオチド配列同一性を測定するために使用することができる。別の例として、ポリヌクレオチド配列は、ＧＣＧバージョン６．１のプログラムであるＦａｓｔａ（商標）を使用して比較することができる。Ｆａｓｔａ（商標）は、照会及び検索配列の間の最良の重複領域の整列及び配列同一性パーセントを提供する。例えば、核酸配列間のパーセント配列同一性は、本明細書に参考として組み込まれる、ＧＣＧ Ｖｅｒｓｉｏｎ ６．１で提供される、そのデフォルトパラメータ（ワードサイズ６及びスコアリングマトリックスのためのＮＯＰＡＭ因子）を用いるＦａｓｔａ（商標）を使用して
決定することができる。

「高度に保存された」という用語は、少なくとも８０％の同一性、好ましくは少なくとも９０％の同一性、より好ましくは９７％を超える同一性を意味する。同一性は、当業者に既知のアルゴリズム及びコンピュータプログラムを用いることによって、当業者によって容易に決定される。

上限範囲で特に明記しない限り、同一性のパーセンテージは、同一性の最小レベルであり、参照配列に対して最大１００％の同一性までの全てのより高いレベルを包含することが理解されるであろう。特に明記しない限り、同一性のパーセンテージは、同一性の最小レベルであり、参照配列に対して最大１００％の同一性までの全てのより高いレベルを包含することが理解されるであろう。例えば、「９５％の同一性」及び「少なくとも９５％の同一性」は、互換的に使用され得、参照配列に対する９５、９６、９７、９８、９９、最大１００％までの同一性、及びそれらの間の全ての画分を含む。

アミノ酸配列の文脈における「同一性パーセント（％）」、「配列同一性」、「配列同一性パーセント」、又は「同一なパーセント」という用語は、対応するように整列させたときに同じである２つの配列中の残基を指す。同一性パーセントは、タンパク質の全長ポリペプチド、ポリペプチド、約７０個のアミノ酸、約１００個のアミノ酸、若しくはそのペプチド断片にわたるアミノ酸配列、又は配列をコードする対応する核酸配列について容易に決定することができる。好適なアミノ酸断片は、長さが少なくとも約８個のアミノ酸であり得、最大で約１５０個であり得る。一般に、２つの異なる配列間の「同一性」、「相同性」、又は「類似性」に言及する場合、「同一性」、「相同性」、又は「類似性」は、「整列された」配列を参照して決定される。「整列された」配列又は「整列」とは、複数の核酸配列又はタンパク質（アミノ酸）配列を指し、参照配列と比較して、多くの場合、欠損又は追加塩基又はアミノ酸についての補正を含む。整列は、公的又は商業的に利用可能な様々な多重配列整列プログラムのいずれかを使用して行われる。配列整列プログラムは、アミノ酸配列について利用可能であり、例えば、「Ｃｌｕｓｔａｌ Ｘ」、「ＭＡＰ」、「ＰＩＭＡ」、「ＭＳＡ」、「ＢＬＯＣＫＭＡＫＥＲ」、「ＭＥＭＥ」、及び「Ｍａｔｃｈ－Ｂｏｘ」プログラムが挙げられる。一般的に、これらのプログラムのいずれかをデフォルト設定で使用するが、当業者は、これらの設定を必要に応じて変更し得る。代替的に、当業者は、参照のアルゴリズム及びプログラムによって提供されるものと少なくとも同じレベルの同一性又は整列を提供する、別のアルゴリズム又はコンピュータプログラムを利用することができる。例えば、Ｊ．Ｄ．Ｔｈｏｍｓｏｎ ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．，“Ａ ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔｓ”，２７（１３）：２６８２－２６９０（１９９９）を参照されたい。

「ａ」又は「ａｎ」という用語は、１つ以上を指すことに留意されたい。したがって、「ａ」（又は「ａｎ」）、「１つ以上（ｏｎｅ ｏｒ ｍｏｒｅ）」、及び「少なくとも１つ（ａｔ ｌｅａｓｔ ｏｎｅ）」という用語は、本明細書では互換的に使用される。

「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、及び「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、排他的ではなく包括的に解釈されるべきである。「なる（ｃｏｎｓｉｓｔ）」、「なる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」という用語、及びその変形は、包括的ではなく排他的に解釈される必要がある。明細書中の様々な実施形態は、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という言語を使用して提示されるが、他の状況下では、関連する実施形態は、「～からなる」又は「～から本質的になる」という言語を使用して解釈され、記載されることも意図している。

本明細書で使用される場合、「約」という用語は、別途指定されない限り、与えられた参照から１０％（±１０％、例えば、±１、±２、±３、±４、±５、±６、±７、±８、±９、±１０、又はそれらの間の値）の可変性を意味する。

特定の例では、「Ｅ＋＃」という用語又は「ｅ＋＃」という用語は、指数を指すために使用される。例えば、「５Ｅ１０」又は「５ｅ１０」は、５×１０^１０である。これらの用語は、同義的に使用され得る。

本明細書で使用される「調節」又はその変形形態という用語は、生物学的経路の１つ以上の成分を阻害する組成物の能力を指す。

本明細書で使用される場合、「疾患」、「障害」、及び「状態」は、対象における異常な状態を示すために互換的に使用される。

本明細書で別途定義されない限り、本明細書で使用される技術用語及び科学用語は、当業者によって、及び本明細書で使用される多数の用語に対して当業者に一般的な手引きを提供する、公開された文献を参照することによって、一般的に理解されるものと同じ意味を有する。

一実施形態を説明する際の「一実施形態」又は「別の実施形態」への言及は、別段の明示的な指定がない限り、参照される実施形態が別の実施形態（例えば、参照される実施形態の前に説明される実施形態）と相互に排他的であることを意味するものではない。

以下の実施例は、単なる例示であり、本発明を限定することを意図していない。

実施例１－ＧＬＰ－１ベクターの構築
いくつかのＧＬＰ－１受容体アゴニストアミノ酸配列の１つの上流にリーダー配列を配置し、続いて融合ドメインを配置して、ベクターを構築した。得られたタンパク質配列を逆翻訳し、続いて、コザックコンセンサス配列、終止コドン、及びクローニング部位を追加した。配列を作製し、ＣＭＶエンハンサーを有するニワトリβアクチンプロモーターを含有する発現ベクターにクローニングした。発現構築物は、ＡＡＶ２ ＩＴＲに隣接していた。ネコトロンビン－デュルラグルチドアミノ酸配列は、配列番号１４に示される。ネコトロンビン－アルビグルチドアミノ酸配列は、配列番号１８に示される。ネコＧＬＰ－１－ＳＡアミノ酸配列は、配列番号１６に示される。

実施例２－インビトロ発現
構築物のための精製されたプラスミドを、製造業者の説明書に従って、リポフェクタミン２０００を用いて、９０％コンフルエントＨＥＫ２９３細胞の６ウェルプレートの３つ組のウェルにトランスフェクションした。トランスフェクションの４８時間後に上清を採取し、活性型ＧＬＰ－１（７－３６）に特異的なＥＬＩＳＡを使用して、活性ＧＬＰ－１を測定した。３つの構築物の発現を図２Ａに示す。培養上清中のＧＬＰ－１活性を、細胞ベースのＧＬＰ－１活性アッセイ（ＧｅｎｅＢＬＡｚｅｒ ＧＬＰ１Ｒ－ＣＲＥ－ｂｌａ
ＣＨＯ－Ｋ１細胞ベースのアッセイ）によって測定した（図２Ｂ）。ネコデュラグルチド構築物は、発現及び活性アッセイの両方において最高の性能を示した。

実施例３－Ｒａｇ１ＫＯマウスにおけるパイロット発現
以下の構築物を、前述のように、トリプルトランスフェクション及びヨウジキサノール勾配精製により、ＡＡＶｒｈ９１ベクター中にパッケージングした。

ヒトＩＬ２シグナルを有するＡＡＶｒｈ９１．ＣＢ７．ネコデュルラグルチド（ｈＩＬ２）．ｒＢＧ
ネコＩＬ２シグナルを有するＡＡＶｒｈ９１．ＣＢ７．ネコデュルラグルチド（ｆｅＩＬ２）．ｒＢＧ
ＡＡＶｒｈ９１．ＣＢ７．ネコデュルラグルチド（ｆｅＴｒｂ）．ｒＢＧ
ＡＡＶｒｈ９１．ＣＢ７．ネコＧＬＰ１－ＳＡ（ｆｅＴｒｂ）．ｒＢＧ
ＡＡＶｒｈ９１．ＣＢ７．ネコアルビグルチド（ｆｅＴｒｂ）．ｒＢＧ
Ｒａｇ１ＫＯ雌マウスを、ＩＭ注射によるベクター（１×１０^１１ＧＣ／マウス）の静脈内注射で治療した。血清を、５マイクロリットルのＤＰＰ－ＩＶ阻害剤（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を含有する血清分離管中で全血を分離することによって連続的に採取し、上記の活性ＧＬＰ－１発現及び活性についてアッセイした。血清活性ＧＬＰ－１濃度を図３Ａに示し、活性を図３Ｂに示す。これらのデータは、高レベルのＧＬＰ－１アゴニストが、ＡＡＶ送達技術を使用してインビボで発現され得ることを示す。加えて、トロンビンプレプロペプチドリーダーの使用は、ネコＧＬＰ－１－Ｆｃのインビボ発現に有意な利点を付与するようである。

実施例４－ネコにおけるＡＡＶネコＧＬＰ－１－Ｆｃ及びネコＧＬＰ－１－ＳＡの発現及び免疫原性研究
ネコ（ｎ＝４／コホート）を、５×１０^１１ＧＣ／ｋｇ、１×１０^１１ＧＣ／ネコ、１×１０^１０ＧＣ／ネコ、又は１×１０^９ＧＣ／ネコのＡＡＶ－ネコＧＬＰ－１－Ｆｃ（ＡＡＶｒｈ９１．ＣＢ７．ＣＩ．ネコデュルラグルチド（ｆｅＴｒｂｓｓ））のいずれかで処置し、筋肉内に送達した（ＩＭ又はＩ．Ｍ．）。体重（図４Ａ）及びＧＬＰ－１発現（図４Ｂ及び図Ｃ）を記録した。ＧＬＰ－１発現は、ＧＬＰ－１（７－３６）の活性型に特異的なＥＬＩＳＡを使用して評価した。

最初の４週間で体重減少（平均約１０％）が観察された。研究期間中に動物の体重は増加し始めたが、１８週目では、研究開始時よりも平均５％軽くなっていた。

ネコＧＬＰ－１－Ｆｃの長期発現を、高用量（５×１０^１１ＧＣ／ｋｇ）群において１６週間にわたって評価した（図４Ｂ）。このデータは、約２．６×１０^５ｐＭの平均濃度で、約６週目に停滞したネコＧＬＰ－１－Ｆｃの持続的な発現を示す。

２８日目（Ｄ２８）までに、各コホートの平均発現レベルは、１．８×１０^５ｐＭ（５×１０^１１ＧＣ／ｋｇ）、６．５×１０^４ｐＭ（１×１０^１１ＧＣ／ネコ）、及び３．１×１０^３ｐＭ（１×１０^１０ＧＣ／ネコ）であった。１×１０^９ＧＣ／ネココホートにおけるネコＧＬＰ－１－Ｆｃのレベルは、アッセイの感度レベルを下回った。上位３つの用量コホートにおけるネコＧＬＰ－Ｆｃの平均レベルは、予想される治療用量を上回っている。

別個のコホート（ｎ＝４）のネコに、１×１０^１１ＧＣ／ネコのネコＧＬＰ－１－ＳＡ［ＡＡＶｒｈ９１．ＣＢ７．ＣＩ．ネコデュルラグルチド－ＳＡ（ｆｅＴｒｂ）．ｒＢＧ（ｐ５４３２）］を投与した（図４Ｄ）。タンパク質の良好な発現は、平均血清レベルが２．５×１０^３ｐＭを超える２８日目に観察された。

動物の血清中のＧＬＰ－１アゴニストの活性を、細胞ベースのＧＬＰ－１活性アッセイ（ＧｅｎｅＢＬＡｚｅｒ ＧＬＰ－１Ｒ－ＣＲＥ－ｂｌａ ＣＨＯ－Ｋ１細胞ベースのアッセイ）を用いて評価した（図４Ｅ）。これらのデータは、ＡＡＶ－ネコＧＬＰ－ＦｃコホートにおけるＧＬＰ－１活性の明確な用量応答を示し、同様の活性が、ＡＡＶ－ネコＧＬＰ－１－ＳＡの等価用量で見られたことを示している。

実施例５－インスリンを伴う、又は伴わない、ネコにおけるＡＡＶネコＧＬＰ－１－ＳＡの投与後の耐久性発現及び生理学的利益
研究設計
ネコにおける糖尿病（ＤＭ）の管理のために、初期インスリン療法の有無にかかわらず、単一の筋肉内（ＩＭ）注射として投与される、ＡＡＶネコＧＬＰ－１－ＳＡ（ネコ特異的ＧＬＰ－１血清アルブミン融合タンパク質を発現するＤＮＡ導入遺伝子を含有する組換えアデノ随伴ウイルスベクター血清型ｒｈ９１）の有効性及び安全性を評価するための研究を行った。

１０匹のネコを、アーム１又はアーム２に無作為に割り当てた。０日目に、両アームのネコは、ＡＡＶネコＧＬＰ－１－ＳＡの１×１０^１１遺伝子コピー／動物の筋肉内注射を受けた。アーム２のネコも、０日目から毎日インスリン注射を受けた。アーム１のネコは、適切な糖尿病制御のために必要であれば、インスリンを開始することが許可された。研究者は、好ましいブランドのインスリン［ＰｒｏＺｉｎｃ（ｎ＝２）、Ｖｅｔｓｕｌｉｎ（ｎ＝２）、又はグラルギンヒトインスリン（ｎ＝６）］を使用することが許可された。

登録されたネコは糖尿病であったが、治療未経験又は以前に治療されたもののいずれかであるが、現在インスリン又は他の抗糖尿病薬を服用していない。組み入れ基準には、ａ）ＤＭと一致する少なくとも１つの臨床徴候［多尿（ＰＵ）、多脂肪症（ＰＤ）、又は食欲が良好であるにもかかわらず意図しない体重減少］、ｂ）２７０ｍｇ／ｄＬを超える空腹時血糖、ｃ）糖尿、及びｄ）４００μｍｏｌ／Ｌを超える血清フルクトサミン、が含まれる。

ネコＧＬＰ－１－ＳＡの持続的発現
臨床試験の前に、ネコにおける治療上の利益に必要なネコＧＬＰ－１－ＳＡの血清濃度を、組換えＧＬＰ－１－Ｆｃ融合タンパク質、デュラグルチド（商号Ｔｒｕｌｉｃｉｔｙ（登録商標））のヒトにおける既知の値に基づいて推定し、これは、８００ｐＭであり、ＧＬＰ－１－ＳＡ及びＧＬＰ－１－Ｆｃの比較試験におけるＧＬＰ－１－ＳＡの効力の低下を説明するために、標的濃度の２０％の増加を適用した（データは示さず）。得られた値１０００ｐＭを３倍に掛けて、ネコがヒトよりもＧＬＰ－１に対する感受性が低いであろう可能性を説明した。したがって、３０００ｐＭの選択された標的は、対象ネコの血清中のネコＧＬＰ－１－Ｆｃの最小の治療上有効濃度の控えめな推定値を表す。

図９に示されるように、全ての処置されたネコは、１８２日間の研究期間を通して、３，０００ピコモル（ｐＭ）の標的治療閾値を上回るネコＧＬＰ－１－ＳＡタンパク質を発現した。

発現レベルがほぼ一定であることを考慮すると、継続的な発現が期待される。全てのネコの約半数は、約５０，０００ｐＭ以上の持続的なレベルでネコＧＬＰ１－ＳＡを発現した。

データは、全ての処置されたネコが、少なくとも１８０日間、治療閾値濃度を上回る発現を有し、８匹のネコが、閾値を少なくとも５倍上回るネコＧＬＰ－１－ＳＡを発現することを実証する。

インスリンを伴う、又は伴わない、ＡＡＶネコＧＬＰ－１－ＳＡによるフルクトサミンレベルの低下
フルクトサミンは、ヒトにおけるマーカーとしてのＨｂＡ１ｃの使用と同様に、ネコにおける長期的な糖尿病制御を評価するために獣医師によって使用される糖化血清タンパク質である。表１に示されるように、両方の試験アームのネコは、ＡＡＶネコＧＬＰ－１－
ＳＡによる処置に応答してフルクトサミンの低下を示した。注目すべきことに、１４日目（Ｄ１４）に、インスリンの投与を伴うことなく、アーム１の平均フルクトサミンレベルが低下した。１４日目のフルクトサミンレベルのこの少なくとも約９％の低下は、ＡＡＶネコＧＬＰ－１－ＳＡ単独に起因する。両方の研究群において、７０日目（Ｄ７０）まで、フルクトサミン濃度の持続的な低下が観察された。

ＡＡＶネコＧＬＰ－１－ＳＡ及びインスリンを併用した治療とインスリン単独による治療の有効性を比較するために、結果を、２つのブランドのインスリン製品、ＰｒｏＺｉｎｃ（登録商標）及びＶｅｔｓｕｌｉｎ（登録商標）（ａｎｉｍａｌｄｒｕｇｓａｔｆｄａ．ｆｄａ．ｇｏｖで入手可能）に関する公的に入手可能なデータと比較した。研究対象についてのデータは、インスリン投与開始からの日数として報告される（アーム２では０日目、アーム１では様々な日）。表２に示されるように、１４日後、以前にＡＡＶネコＧＬＰ－１－ＳＡを注射された対象は、インスリン単独で処置されたネコよりも低いフルクトサミンを有する（２つの獣医用に承認されたインスリン、ＰｒｏＺｉｎｃ（登録商標）及びＶｅｔｓｕｌｉｎ（登録商標）の履歴データに基づく）。要約すると、フルクトサミンデータは、ＡＡＶネコＧＬＰ－１－ＳＡが単独で有効であるだけでなく、インスリン単独療法と比較してインスリンによる全体的な糖尿病制御も改善することを実証している。

インスリンを伴う、又は伴わない、ＡＡＶネコＧＬＰ－１－ＳＡによる血糖値の低下
血糖値は、糖尿病対照の直接測定値であり、各来院時に測定された。４２日目及び８４日目の訪問時に、インスリンは、完全な９時間の血糖曲線の最初の測定に先立ち、血糖測定の１２時間前に差し控えた。他の全ての日は、ネコがインスリンを投与されていた場合
、朝のインスリン投与後１時間以内の単一の測定値であった。表３は、各動物についてのＤ０からの平均血糖変化を示す。インスリンを伴わない（アーム１、Ｄ１４及びＤ２８）、又はインスリンを伴う（その他の値）、ＡＡＶネコＧＬＰ－１－ＳＡは血糖値の低下を引き起こす。

ＡＡＶネコＧＬＰ－１－ＳＡによって減少したインスリン用量要件
寛解は、ネコがもはや糖尿病の臨床的徴候を示さず、正常な血糖値を有する場合に、インスリン治療を中止する能力として定義される。アーム１の対象のうちの１匹は、７０日目に寛解に入り、研究の終了まで寛解にとどまった。別の対象は、Ｄ５４～Ｄ８４までインスリンを取り除くことができ、したがって、１ヶ月間寛解状態にあった。アーム２の２対象は、１ＩＵ、１日２回という非常に低用量のインスリンでの研究を完了し、これは、寛解に近くあり得るが、少なくとも典型的な用量よりもはるかに低い用量で制御することができることを示唆した。実際の研究３０日目、４２日目、及び６０日目の平均インスリン用量を以下の表４に列挙し、表５のＶｅｔｓｕｌｉｎ（登録商標）及びＰｒｏＺｉｎｃ（登録商標）の履歴データと同時に比較する。

表５の研究データと履歴データとの比較は、ＡＡＶネコＧＬＰ－１－ＳＡでの処置が、ＡＡＶネコＧＬＰ－１－ＳＡなしでインスリン単独を投与されたネコのインスリン投与量を平均用量未満に減少させることを可能にすることを示す。

実施例７－ネコにおけるＡＡＶネコＧＬＰ－１－Ｆｃの投与後の耐久性発現
単一の筋肉内（ＩＭ）注射として投与される、ＡＡＶネコＧＬＰ－１－Ｆｃ（ネコ特異的ＧＬＰ－１Ｆｃ受容体ドメイン融合タンパク質を発現するＤＮＡ導入遺伝子を含有する組換えアデノ随伴ウイルスベクター血清型ｒｈ９１）の有効性及び安全性を評価するための研究を行った。

４匹のネコはそれぞれ、ＡＡＶネコＧＬＰ－１－Ｆｃの５×１０^１１遺伝子コピー／動物の筋肉内注射を受けた。導入遺伝子の発現は、１４日ごとに血漿で測定された。

臨床試験に先立ち、本発明者らは、組換えＧＬＰ－１－Ｆｃ融合タンパク質であるデュラグルチド（商標名Ｔｒｕｌｉｃｉｔｙ（登録商標））８００ｐＭのヒトにおける既知の値に基づいて、ネコにおける治療的利益に必要なネコＧＬＰ－１－Ｆｃの血清中濃度を推定した。この値８００ｐＭを３倍に掛けて、ネコがヒトよりもＧＬＰ－１に対する感受性が低いであろう可能性を説明した。したがって、２４００ｐＭの本発明者らに選択された標的は、対象ネコの血清中のネコＧＬＰ－１－Ｆｃの最小の治療上有効濃度の控えめな推定値を表す。

図１０に示されるように、４匹の動物のうち３匹は、３３０日超にわたって、２，４００ｐＭの治療有効性閾値をはるかに上回る高レベルのネコＧＬＰ－１－Ｆｃを発現した。

１匹の動物は、図１１に示されるように、遺伝子導入タンパク質に対する抗体を獲得し、これは、その動物において観察される低レベルの発現タンパク質と一致する。

これらのデータは、ＡＡＶネコＧＬＰ－１－Ｆｃの単回注射が、高レベルでの遺伝子導入タンパク質の持続的な発現を引き起こすことを示す。

実施例８－健常ネコにおけるＡＡＶネコＧＬＰ－１－ＳＡの投与後の耐久性発現
単一の筋肉内（ＩＭ）注射として投与される、ＡＡＶネコＧＬＰ－１－ＳＡ（ネコ特異的ＧＬＰ－１血清アルブミン融合タンパク質を発現するＤＮＡ導入遺伝子を含有する組換えアデノ随伴ウイルスベクター血清型ｒｈ９１）の有効性及び安全性を評価するための研究を行った。

１６匹のネコは各々、３つの用量レベル、１ｅ１０、１ｅ１１、又は１ｅ１２遺伝子コピー／動物のうちの１つでＡＡＶネコＧＬＰ－１－ＳＡの筋肉内注射を受けた。導入遺伝子の発現は、１４日ごとに血漿で測定された。図１２に示されるように、１６匹全ての動物は、３３０日超にわたって、３，０００ｐＭの治療有効性閾値をはるかに上回る高レベルのＧＬＰ－１－Ｆｃを発現した。遺伝子導入タンパク質に対する抗体を獲得した動物はいなかった。

これらのデータは、ＡＡＶネコＧＬＰ－１－ＳＡの単回注射が、高レベルでの遺伝子導入タンパク質の持続的な発現を引き起こすことを示す。

具体的な実施形態
１．（ａ）分泌シグナルペプチドを含むリーダー配列と、（ｂ）グルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）受容体アゴニストと、（ｃ）（ｉ）ネコＩｇＧ Ｆｃ若しくはその機能的バリアント、又は（ｉｉ）ネコアルブミン若しくはその機能的バリアントのいずれかを含む融合ドメインと、を含む融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含む核酸を含む、ウイルスベクター。
２．ベクターが、アデノ随伴ウイルスベクターである、実施形態１に記載のウイルスベクター。
３．（ｉ）リーダー配列の分泌シグナルペプチドが、ネコトロンビンシグナルペプチドを含み、（ｉｉ）リーダー配列が、ネコトロンビンプロペプチドを含み、かつ／又は（ｉｉｉ）リーダー配列が、ネコトロンビンリーダー配列を含む、実施形態１又は２に記載のウイルスベクター。
４．（ｉ）リーダー配列のシグナルペプチドが、ポリペプチド配列ＭＡＨＩＲＧＬＷＬＰＧＣＬＡＬＡＡＬＣＳＬＶＨＳ（配列番号８）、又は最大１、２、若しくは３個のアミノ酸置換を有するその機能的バリアントを含み、（ｉｉ）リーダー配列が、ポリペプチド配列ＱＨＶＦＬＡＰＱＱＡＬＳＬＬＱＲＶＲＲ（配列番号９）、又は最大１、２、若しくは３個のアミノ酸置換を有するその機能的バリアントを含み、かつ／又は（ｉｉｉ）リーダー配列が、ポリペプチド配列ＭＡＨＩＲＧＬＷＬＰＧＣＬＡＬＡＡＬＣＳＬＶＨＳＱＨＶＦＬＡＰＱＱＡＬＳＬＬＱＲＶＲＲ（配列番号７）、又は最大１、２、若しくは３個のアミノ酸置換を有するその機能的バリアントを含む、実施形態３に記載のウイルスベクター。
５．リーダー配列が、ネコＩＬ－２リーダー配列を含む、実施形態１又は２に記載のウイルスベクター。
６．ネコＩＬ－２リーダー配列が、ＭＹＫＩＱＬＬＳＣＩＡＬＴＬＩＬＶＴＮＳ（配列番号１０）の配列配列、又は最大１、２、若しくは３個のアミノ酸置換を有するその機能的バリアントを含む、実施形態５に記載のウイルスベクター。
７．ＧＬＰ－１受容体アゴニストが、ネコＧＬＰ－１（７－３７）又はその機能的バリアントである、実施形態１～６のいずれか１つに記載のウイルスベクター。
８．ＧＬＰ－１受容体アゴニストが、ネコＧＬＰ－１（７－３７）のＤＰＰ－ＩＶ耐性バリアントである、実施形態７に記載のウイルスベクター。
９．ＧＬＰ－１受容体アゴニストが、ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＥＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＧＧ（配列番号３）、又は最大１、２、若しくは３個のアミノ酸置換を有するその機能的バリアントである、実施形態７又は８に記載のウイルスベクター。
１０．ＧＬＰ－１受容体アゴニストが、ネコＧＬＰ－１（１－３７）に対して８位にグリシン（Ｇ）、及び／又はＧＬＰ－１（１－３７）に対して２２位にグルタミン（Ｅ）を含み、任意選択的に、ＧＬＰ－１受容体アゴニストがＨＧＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＥＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＧＧ（配列番号３）である、実施形態９に記載のウイルスベクター。
１１．ＧＬＰ－１受容体アゴニストが、ＨＡＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＲＧ（配列番号２）、ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫＥＦ
ＩＡＷＬＶＫＧＲＧ（配列番号４）、又は最大１、２、若しくは３個のアミノ酸置換を有するそれらの機能的バリアントである、実施形態７又は８に記載のウイルスベクター。
１２．ＧＬＰ－１受容体アゴニストが、ＧＬＰ－１（１－３７）又はその機能的バリアントである、実施形態１～６のいずれか１つに記載のウイルスベクター。
１３．ＧＬＰ－１受容体アゴニストが、ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＲＧ（配列番号４）、又は任意選択的に配列番号４に対して少なくとも９０％又は１００％の同一性を共有するその機能的バリアントである、実施形態１～６のいずれか１つに記載のウイルスベクター。
１４．融合タンパク質が、第２のＧＬＰ－１受容体アゴニストを含む、実施形態１～１３のいずれか１つに記載のウイルスベクター。
１５．ＧＬＰ－１受容体アゴニストが、ＧＬＰ－１（７－３７）又はそのＤＰＰ－ＩＶ耐性バリアントの２つのタンデムコピーである、実施形態１４に記載のウイルスベクター。
１６．ＤＰＰ－ＩＶ耐性バリアントが、ＨＧＥＧＴＦＴＳＤＶＳＳＹＬＥＧＱＡＡＫＥＦＩＡＷＬＶＫＧＲＧ（配列番号４）である、実施形態１５に記載のウイルスベクター。
１７．融合タンパク質が、ＧＬＰ－１受容体アゴニストと融合ドメインとの間にリンカーを更に含む、実施形態１～１６のいずれか１つに記載のウイルスベクター。
１８．融合ドメインが、ネコＩｇＧ Ｆｃ又はその機能的バリアントである、実施形態１～１７のいずれか１つに記載のウイルスベクター。
１９．融合ドメインが、ネコＩｇＧ Ｆｃである、実施形態１８に記載のウイルスベクター。
２０．ネコＩｇＧ Ｆｃが、ネコＩｇＧ２ Ｆｃである、実施形態１８又は１９に記載のウイルスベクター。
２１．ネコＩｇＧ Ｆｃが、ネコＩｇＧ１ａ Ｆｃである、実施形態１８又は１９に記載のウイルスベクター。
２２．ネコＩｇＧ Ｆｃが、ネコＩｇＧ１ｂ Ｆｃである、実施形態１８又は１９に記載のウイルスベクター。
２３．ネコＩｇＧ Ｆｃが、配列番号１１に対して少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９９％の同一性、又は少なくとも１００％の同一性を共有する、実施形態１８又は１９に記載のウイルスベクター。
２４．融合ドメインが、ネコアルブミン又はその機能的バリアントである、実施形態１～１７のいずれか１つに記載のウイルスベクター。
２５．融合ドメインが、ネコアルブミンである、実施形態１８に記載のウイルスベクター。
２６．ネコアルブミンが、配列番号１２に対して少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９９％の同一性、又は少なくとも１００％の同一性を共有する、実施形態２４又は２５に記載のウイルスベクター。
２７．融合タンパク質が、（ａ）ネコトロンビンリーダー、（ｂ）ＧＬＰ－１（７－３７）のＤＰＰ－ＩＶ耐性バリアント、リンカー、及び（ｃ）ネコＩｇＧ Ｆｃを含む、実施形態１に記載のウイルスベクター。
２８．融合タンパク質が、配列番号１４の配列、又はそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、若しくは少なくとも９８％同一の配列を有する、実施形態１又は２６に記載のウイルスベクター。
２９．融合タンパク質をコードする配列が、配列番号１５、又はそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８％同一の配列である、実施形態１又は２６又は２７に記載のウイルスベクター。
３０．融合タンパク質が、（ａ）ネコトロンビンリーダー、（ｂ）ＧＬＰ－１（７－３７）のＤＰＰ－ＩＶ耐性バリアント、リンカー、及び（ｃ）ネコアルブミンを含む、実施形態１に記載のウイルスベクター。
３１．融合タンパク質が、配列番号１６の配列、又はそれに対して少なくとも９０％、
少なくとも９５％、若しくは少なくとも９８％同一の配列を有する、実施形態１又は３０に記載のウイルスベクター。
３２．融合タンパク質をコードする配列が、配列番号１７、又はそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８％同一の配列である、実施形態１又は３０又は３１に記載のウイルスベクター。
３３．融合タンパク質が、（ａ）ネコトロンビンリーダー、（ｂ）ネコＧＬＰ－１（７－３７）又はそのＤＰＰ－ＩＶ耐性バリアントの２つのタンデムコピー、リンカー、及び（ｃ）ネコアルブミンを含む、実施形態１に記載のウイルスベクター。
３４．融合タンパク質が、配列番号１８若しくは配列番号２０の配列、又はそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８％同一の配列を有する、実施形態１又は３３に記載のウイルスベクター。
３５．融合タンパク質をコードする配列が、配列番号１９、又はそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８％同一の配列である、実施形態１又は３３又は３４に記載のウイルスベクター。
３６．
（ａ）ＡＡＶカプシドと、
（ｂ）ＡＡＶカプシド中にパッケージングされたベクターゲノムと、を含み、ベクターゲノムが、ＡＡＶ逆位末端反復（ＩＴＲ）、融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列、及び融合タンパク質の発現を指示する調節配列を含む、実施形態１～３５のいずれか１つに記載のウイルスベクター。
３７．
（ａ）ＡＡＶカプシドと、
（ｂ）ＡＡＶカプシド中にパッケージングされたベクターゲノムとを含み、ベクターゲノムが、ＡＡＶ逆位末端反復（ＩＴＲ）、融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列、及び融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列の宿主細胞のゲノムへの挿入を指示する調節配列を含む、実施形態１～３５のいずれか１つに記載のウイルスベクター。
３８．ウイルスベクターが、ＡＡＶ８のカプシド又はその機能的バリアントを有する組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）である、実施形態１～３７のいずれか１つに記載のウイルスベクター。
３９．ウイルスベクターが、ＡＡＶｒｈ９１のカプシド又はその機能的バリアントを有するｒＡＡＶである、実施形態１～３７のいずれか１つに記載のウイルスベクター。
４０．ウイルスベクターが、ＡＡＶ３Ｂ．ＡＲ２．１２のカプシド又はその機能的バリアントを有するｒＡＡＶである、実施形態１～３７のいずれか１つに記載のウイルスベクター。
４１．ウイルスベクターが、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ６４Ｒ１、ＡＡＶｈｕ３７、又はＡＡＶｒｈ１０から選択されるカプシドを有するｒＡＡＶである、実施形態１～３７のいずれか１つに記載のウイルスベクター。
４２．水性液体と、実施形態１～４１のいずれか１つに記載のウイルスベクターとを含む、ネコの代謝性疾患の治療に使用するのに好適な薬学的組成物。
４３．代謝性疾患、任意選択的に糖尿病を有するネコ対象を治療するための方法において使用するための、実施形態１～４１のいずれか１つに記載のウイルスベクター、又は実施形態４２に記載の薬学的組成物。
４４．代謝性疾患、任意選択的に糖尿病を有するネコ対象を治療するための医薬の製造における、実施形態１～４１のいずれか１つに記載のウイルスベクター又は実施形態４２に記載の薬学的組成物の使用。
４５．組成物が、１×１０^９ＧＣ／ｋｇ～３×１０^１３ＧＣ／ｋｇの用量のｒＡＡＶでネコ対象に投与されるように製剤化され、かつ／又はｒＡＡＶが筋肉内又は静脈内に送達される、実施形態４３又は４４に記載のウイルスベクター又は使用。
４６．代謝性疾患を有するネコ対象を治療する方法であって、ネコ対象に、有効量の実
施形態１～４１のいずれか１つに記載のウイルスベクター又は実施形態４２に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
４７．代謝性疾患が糖尿病である、実施形態４６に記載の方法。
４８．糖尿病がＩ型糖尿病である、実施形態４７に記載の方法。
４９．糖尿病がＩＩ型糖尿病である、実施形態４７に記載の方法。
５０．有効量が、静脈内に投与される、実施形態４５～４９のいずれか１つに記載の方法。
５１．有効量が、筋肉内に投与される、実施形態４５～４９のいずれか１つに記載の方法。
５２．有効量が、１×１０^９ＧＣ／ｋｇ～３×１０^１３ＧＣ／ｋｇ体重のｒＡＡＶである、実施形態４５～５１のいずれか１つに記載の方法。
５３．有効量が、１×１０^１０ＧＣ／ｋｇ～３×１０^１３ＧＣ体重のｒＡＡＶである、実施形態４５～５１のいずれか１つに記載の方法。
５４．方法が、少なくとも３ヶ月、少なくとも６ヶ月、又は少なくとも１２ヶ月の間、対象の血清中で融合タンパク質の発現をもたらす、実施形態５４～５１のいずれか１つに記載の方法。
５５．方法が、少なくとも３ヶ月、少なくとも６ヶ月、又は少なくとも１２ヶ月の間、少なくとも３，０００ピコモル（ｐＭ）、少なくとも５，０００ｐＭ、少なくとも１０，０００ｐｍ、少なくとも２５，０００ｐＭ、又は少なくとも５０，０００ｐＭの血清濃度で、対象における融合タンパク質の発現をもたらす、実施形態５４～５１のいずれか１つに記載の方法。
５６．方法が、３～１２ヶ月、６～１２ヶ月、又は１２ヶ月の間、３，０００ピコモル（ｐＭ）～２００，０００ｐＭ、５，０００ピコモル（ｐＭ）～２００，０００ｐＭ、１０，０００ピコモル（ｐＭ）～２００，０００ｐＭ、２５，０００ピコモル（ｐＭ）～２００，０００ｐＭ又は５０，０００ピコモル（ｐＭ）～２００，０００ｐＭの血清濃度で、対象における融合タンパク質の発現をもたらす、実施形態５４～５１のいずれか１つに記載の方法。
５７．方法が、少なくとも３ヶ月、少なくとも６ヶ月、又は少なくとも１２ヶ月の間、治療有効濃度で、対象において、融合タンパク質の発現をもたらす、実施形態５４～５１のいずれか１つに記載の方法。
５８．方法が、対象の血清フルクトサミンを約６％減少させる、実施形態５４～５７のいずれか１つに記載の方法。
５９．方法が、対象の血清フルクトサミンを５％～１０％減少させる、実施形態５４～５７のいずれか１つに記載の方法。
６０．方法が、対象の血清グルコースを約１０％減少させる、実施形態５４～５９のいずれか１つに記載の方法。
６１．方法が、対象の血清グルコースを１０％～２０％減少させる、実施形態５４～６０のいずれか１つに記載の方法。
６２．方法が、有効量のインスリンを対象に投与することを含む、実施形態５４～６１のいずれか１つに記載の方法。
６３．インスリンが、プロタミン亜鉛組換えヒトインスリン（ＰｒｏＺｉｎｃ（登録商標））、ブタインスリン亜鉛懸濁液（Ｖｅｔｓｕｌｉｎ（登録商標））、及び／又はインスリングラルギン（Ｌａｎｔｕｓ（登録商標））である、実施形態６１に記載の方法。
６４．方法が、ウイルスベクターでの治療前の対象に対するインスリン用量要件と比較して、インスリン用量要件を減少させる、請求項６３の請求項６１に記載の方法。
６５．方法が、対象における代謝性疾患の寛解を引き起こす、請求項５４～６４のいずれか一項に記載の方法。

（配列表フリーテキスト）
以下の情報は、数値識別子＜２２３＞の下でフリーテキストを含む配列を提供する。

本明細書に引用される全ての文書は、参照により本明細書に組み込まれる。２０２０年８月２４日に出願された米国仮特許出願第６３／０６９，４９２号は、その配列表と共に、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。これと共に出願された「２０－９２９２ＰＣＴ＿Ｓｅｑ－Ｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５」とラベルされた配列表並びにその中の配列及びテキストは、参照により組み込まれる。本発明は、特定の実施形態を参照して記載されているが、本発明の趣旨から逸脱することなく修正を行うことができることが理解されよう。かかる修正は、添付の特許請求の範囲の範囲内に収まることが意図される。

Claims (53)

1. （ａ）分泌シグナルペプチドを含むリーダー配列と、（ｂ）グルカゴン様ペプチド－１（ＧＬＰ－１）受容体アゴニストと、（ｃ）（ｉ）ネコＩｇＧ Ｆｃ若しくはその機能的バリアント、又は（ｉｉ）ネコアルブミン若しくはその機能的バリアントのいずれかを含む融合ドメインと、を含む融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含む核酸を含む、ウイルスベクター。
2. 前記ベクターが、アデノ随伴ウイルスベクターである、請求項１に記載のウイルスベクター。
3. （ｉ）前記リーダー配列の前記分泌シグナルペプチドが、ネコトロンビンシグナルペプチドを含み、（ｉｉ）前記リーダー配列が、ネコトロンビンプロペプチドを含み、かつ／又は（ｉｉｉ）前記リーダー配列が、ネコトロンビンリーダー配列を含む、請求項１又は２に記載のウイルスベクター。
4. （ｉ）前記リーダー配列の前記シグナルペプチドが、配列番号８のポリペプチド配列、又は最大１、２、若しくは３個のアミノ酸置換を有するその機能的バリアントを含み、（ｉｉ）前記リーダー配列が、配列番号９のポリペプチド配列、又は最大１、２、若しくは３個のアミノ酸置換を有するその機能的バリアントを含み、かつ／又は（ｉｉｉ）前記リーダー配列が、配列番号７のポリペプチド配列、又は最大１、２、若しくは３個のアミノ酸置換を有するその機能的バリアントを含む、請求項３に記載のウイルスベクター。
5. 前記リーダー配列が、ネコＩＬ－２リーダー配列を含む、請求項１又は２に記載のウイルスベクター。
6. 前記ネコＩＬ－２リーダー配列が、配列番号１０の配列配列、又は最大１、２、若しくは３個のアミノ酸置換を有するその機能的バリアントを含む、請求項５に記載のウイルスベクター。
7. 前記ＧＬＰ－１受容体アゴニストが、ネコＧＬＰ－１（７－３７）又はその機能的バリアントである、請求項１～６のいずれか一項に記載のウイルスベクター。
8. 前記ＧＬＰ－１受容体アゴニストが、ネコＧＬＰ－１（７－３７）のＤＰＰ－ＩＶ耐性バリアントである、請求項７に記載のウイルスベクター。
9. 前記ＧＬＰ－１受容体アゴニストが、配列番号３、又は最大１、２、若しくは３個のアミノ酸置換を有するその機能的バリアントである、請求項７又は８に記載のウイルスベクター。
10. 前記ＧＬＰ－１受容体アゴニストが、ネコＧＬＰ－１（１－３７）に対して８位にグリシン（Ｇ）、及び／又はＧＬＰ－１（１－３７）に対して２２位にグルタミン（Ｅ）を含み、任意選択的に、前記ＧＬＰ－１受容体アゴニストが配列番号３である、請求項９に記載のウイルスベクター。
11. 前記ＧＬＰ－１受容体アゴニストが、配列番号２、配列番号４、又は最大１、２、若しくは３個のアミノ酸置換を有するその配列番号２若しくは配列番号４の機能的バリアントである、請求項７又は８に記載のウイルスベクター。
12. 前記ＧＬＰ－１受容体アゴニストが、ＧＬＰ－１（１－３７）又はその機能的バリアン
    トである、請求項１～６のいずれか一項に記載のウイルスベクター。
13. 前記ＧＬＰ－１受容体アゴニストが、配列番号４、又は任意選択的に配列番号４に対して少なくとも９０％又は１００％の同一性を共有するその機能的バリアントである、請求項１～６のいずれか一項に記載のウイルスベクター。
14. 前記融合タンパク質が、第２のＧＬＰ－１受容体アゴニストを含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載のウイルスベクター。
15. 前記ＧＬＰ－１受容体アゴニストが、ＧＬＰ－１（７－３７）又はそのＤＰＰ－ＩＶ耐性バリアントの２つのタンデムコピーである、請求項１４に記載のウイルスベクター。
16. 前記ＤＰＰ－ＩＶ耐性バリアントが、配列番号４である、請求項１５に記載のウイルスベクター。
17. 前記融合タンパク質が、前記ＧＬＰ－１受容体アゴニストと前記融合ドメインとの間にリンカーを更に含む、請求項１～１６のいずれか一項に記載のウイルスベクター。
18. 前記融合ドメインが、ネコＩｇＧ Ｆｃ又はその機能的バリアントである、請求項１～１７のいずれか一項に記載のウイルスベクター。
19. 前記融合ドメインが、ネコＩｇＧ Ｆｃである、請求項１８に記載のウイルスベクター。
20. 前記ネコＩｇＧ Ｆｃが、ネコＩｇＧ２ Ｆｃである、請求項１８又は１９に記載のウイルスベクター。
21. 前記ネコＩｇＧ Ｆｃが、ネコＩｇＧ１ａ Ｆｃである、請求項１８又は１９に記載のウイルスベクター。
22. 前記ネコＩｇＧ Ｆｃが、ネコＩｇＧ１ｂ Ｆｃである、請求項１８又は１９に記載のウイルスベクター。
23. 前記ネコＩｇＧ Ｆｃが、配列番号１１に対して少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９９％の同一性、又は少なくとも１００％の同一性を共有する、請求項１８又は１９に記載のウイルスベクター。
24. 前記融合ドメインが、ネコアルブミン又はその機能的バリアントである、請求項１～１７のいずれか一項に記載のウイルスベクター。
25. 前記融合ドメインが、ネコアルブミンである、請求項１８に記載のウイルスベクター。
26. 前記ネコアルブミンが、配列番号１２に対して少なくとも９０％の同一性、少なくとも９５％の同一性、少なくとも９９％の同一性、又は少なくとも１００％の同一性を共有する、請求項２４又は２５に記載のウイルスベクター。
27. 前記融合タンパク質が、（ａ）ネコトロンビンリーダー、（ｂ）ＧＬＰ－１（７－３７）のＤＰＰ－ＩＶ耐性バリアント、リンカー、及び（ｃ）ネコＩｇＧ Ｆｃを含む、請求項１に記載のウイルスベクター。
28. 前記融合タンパク質が、配列番号１４の配列、又はそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、若しくは少なくとも９８％同一の配列を有する、請求項１又は２６に記載のウイルスベクター。
29. 前記融合タンパク質をコードする配列が、配列番号１５、又はそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８％同一の配列である、請求項１又は２６又は２７に記載のウイルスベクター。
30. 前記融合タンパク質が、（ａ）ネコトロンビンリーダー、（ｂ）ＧＬＰ－１（７－３７）のＤＰＰ－ＩＶ耐性バリアント、リンカー、及び（ｃ）ネコアルブミンを含む、請求項１に記載のウイルスベクター。
31. 前記融合タンパク質が、配列番号１６の配列、又はそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、若しくは少なくとも９８％同一の配列を有する、請求項１又は３０に記載のウイルスベクター。
32. 前記融合タンパク質をコードする配列が、配列番号１７、又はそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８％同一の配列である、請求項１又は３０又は３１に記載のウイルスベクター。
33. 前記融合タンパク質が、（ａ）ネコトロンビンリーダー、（ｂ）ネコＧＬＰ－１（７－３７）又はそのＤＰＰ－ＩＶ耐性バリアントの２つのタンデムコピー、リンカー、及び（ｃ）ネコアルブミンを含む、請求項１に記載のウイルスベクター。
34. 前記融合タンパク質が、配列番号１８若しくは配列番号２０の配列、又はそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８％同一の配列を有する、請求項１又は３３に記載のウイルスベクター。
35. 前記融合タンパク質をコードする配列が、配列番号１９、又はそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９８％同一の配列である、請求項１又は３３又は３４に記載のウイルスベクター。
36. （ａ）ＡＡＶカプシドと、
    （ｂ）前記ＡＡＶカプシド中にパッケージングされたベクターゲノムとを含み、前記ベクターゲノムが、ＡＡＶ逆位末端反復（ＩＴＲ）、前記融合タンパク質をコードする前記ポリヌクレオチド配列、及び前記融合タンパク質の発現を指示する調節配列を含む、請求項１～３５のいずれか一項に記載のウイルスベクター。
37. （ａ）ＡＡＶカプシドと、
    （ｂ）前記ＡＡＶカプシド中にパッケージングされたベクターゲノムとを含み、前記ベクターゲノムが、ＡＡＶ逆位末端反復（ＩＴＲ）、前記融合タンパク質をコードする前記ポリヌクレオチド配列、及び前記融合タンパク質をコードする前記ポリヌクレオチド配列の宿主細胞のゲノムへの挿入を指示する調節配列を含む、請求項１～３５のいずれか一項に記載のウイルスベクター。
38. 前記ウイルスベクターが、ＡＡＶ８のカプシド又はその機能的バリアントを有する組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）である、請求項１～３７のいずれか一項に記載のウイルスベクター。
39. 前記ウイルスベクターが、ＡＡＶｒｈ９１のカプシド又はその機能的バリアントを有す
    るｒＡＡＶである、請求項１～３７のいずれか一項に記載のウイルスベクター。
40. 前記ウイルスベクターが、ＡＡＶ３Ｂ．ＡＲ２．１２のカプシド又はその機能的バリアントを有するｒＡＡＶである、請求項１～３７のいずれか一項に記載のウイルスベクター。
41. 前記ウイルスベクターが、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ６４Ｒ１、ＡＡＶｈｕ３７、又はＡＡＶｒｈ１０から選択されるカプシドを有するｒＡＡＶである、請求項１～３７のいずれか一項に記載のウイルスベクター。
42. 水性液体と、請求項１～４１のいずれか一項に記載のウイルスベクターとを含む、ネコの代謝性疾患の治療に使用するのに好適な薬学的組成物。
43. 代謝性疾患、任意選択的に糖尿病を有するネコ対象を治療するための方法において使用するための、請求項１～４１のいずれか一項に記載のウイルスベクター、又は請求項４２に記載の薬学的組成物。
44. 代謝性疾患、任意選択的に糖尿病を有するネコ対象を治療するための医薬の製造における、請求項１～４１のいずれか一項に記載のウイルスベクター又は請求項４２に記載の薬学的組成物の使用。
45. 前記組成物が、１×１０^９ＧＣ／ｋｇ～３×１０^１３ＧＣ／ｋｇの用量の前記ｒＡＡＶで前記ネコ対象に投与されるように製剤化され、かつ／又は前記ｒＡＡＶが筋肉内又は静脈内に送達される、請求項４３又は４４に記載のウイルスベクター又は使用。
46. 代謝性疾患を有するネコ対象を治療する方法であって、前記ネコ対象に、有効量の請求項１～４１のいずれか一項に記載のウイルスベクター又は請求項４２に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
47. 前記代謝性疾患が糖尿病である、請求項４６に記載の方法。
48. 前記糖尿病がＩ型糖尿病である、請求項４７に記載の方法。
49. 前記糖尿病がＩＩ型糖尿病である、請求項４７に記載の方法。
50. 前記有効量が、静脈内に投与される、請求項４５～４９のいずれか一項に記載の方法。
51. 前記有効量が、筋肉内に投与される、請求項４５～４９のいずれか一項に記載の方法。
52. 前記有効量が、１×１０^９ＧＣ／ｋｇ～３×１０^１３ＧＣ／ｋｇ体重のｒＡＡＶである、請求項４５～５１のいずれか一項に記載の方法。
53. 前記有効量が、１×１０^１０ＧＣ／ｋｇ～３×１０^１３ＧＣ体重のｒＡＡＶである、請求項４５～５１のいずれか一項に記載の方法。

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