JP2023536902A - Ｇｌｕｔ１発現のためのアデノ随伴ウイルスベクターおよびその使用 - Google Patents

Abstract

本明細書では、ＧＬＵＴ１タンパク質またはその機能的バリアントを発現するためのベクターとして組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ビリオンを使用した、ＧＬＵＴ１欠損症症候群および関連障害のための遺伝子療法が提供される。ｒＡＡＶビリオンは、内皮特異的プロモーター、例えば、ＦＬＴ－１またはＴｉｅ－１プロモーターを使用してもよい。キャプシドは、ＡＡＶ６、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ．７４、またはＡＡＶｒｈ．１０キャプシドまたはその機能的バリアントであってもよい。他のプロモーターまたはキャプシドを使用してもよい。さらに、ｒＡＡＶビリオンの大脳内および／または静脈内などによる治療方法、ならびにその他の組成物および方法が提供される。TIFF2023536902000029.tif203166

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年８月５日に出願された米国特許出願第６３／０６１，７２６号に対する優先権を主張するものであり、本内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

配列表に関する記述
本出願に関連する配列表は、紙のコピーの代わりにテキスト形式で提供され、参照により本明細書に組み込まれる。配列表を含むテキストファイルの名前は、ＲＯＰＡ＿０１８＿０１ＷＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔである。テキストファイルは約１９０ＫＢで、２０２１年８月３日に作成され、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して電子的に提出されている。

背景
グルコーストランスポーター１（ＧＬＵＴ１）をコードするＳＬＣ２Ａ１遺伝子の突然変異は、ＧＬＵＴ１欠損症症候群（ＧＬＵＴ１ ＤＳ）と呼ばれる神経発達障害と関連している。ＧＬＵＴ１ ＤＳは、常染色体優性障害であり、しばしば、ハプロ不全を生じ、症候性ヘテロ接合性をもたらすｄｅ ｎｏｖｏ変異を伴う散発性疾患として存在する。

ＧＬＵＴ１はインスリン非依存グルコーストランスポーターである。デビボ病としても知られる古典的なＧＬＵＴ１ ＤＳを有する患者は、低脳グルコース値に苦しみ、以下を特徴とする表現型を呈する：早期発症発作（中央値１２か月）、発達遅延、後天性小頭症（頭部成長の減速）、複雑な運動の障害（痙縮、運動失調、ジストニア）、発作性眼頭運動、および髄液糖減少症、または脳脊髄液（ＣＳＦ）低グルコース濃度。疾患の臨床経過から、早期治療の重要性が明らかである。Ａｌｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｈｉｌｄ Ｎｅｕｒｏｌ．３０（２）：１６０－１６９（２０１５）（非特許文献１）。ＧＬＵＴ１は、血管形成および血液脳関門（ＢＢＢ）の維持を含む、内皮細胞の機能に関与している。しかしながら、ハプロ不全マウスモデルにおける研究は、ＢＢＢの物理的完全性を維持する上でのＧＬＵＴ１の役割に関する矛盾する証拠を提供している。ＧＬＵＴ１の内皮細胞系統特異的ノックアウトは、内皮エネルギーの可用性を低下させ、遊走に影響を与えることなく増殖を減少させ、それによって発生血管形成を遅らせるが（Ｖｅｙｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．２０２０；１２７：４６６－４８２（非特許文献２））、特に内皮細胞においてＧＬＵＴ１発現を回復させる効果は試験されていない。

疾患の治療戦略は以下にて概説される、Ｔａｎｇ ｅｔ ａｌ．Ａｎｎ．Ｃｌｉｎ．Ｔｒａｎｓ．Ｎｅｕｒｏｌ．２０１９；６（９）：１９２３－１９３２（非特許文献３）。現在の標準的なケアはケトン食療法であり、これはグルコースの代わりとなるケトンのレベルを血液中で上昇させて脳に利用可能にする。トリグリセリドトリヘプタノインを用いた治療は、ケトン食療法の代わりとして提案されている。アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを使用した遺伝子療法も試みられている。ニューロンにおいてＧＬＵＴ１欠損症を標的とする、ニューロン特異的プロモーター（例えば、シナプシン）の制御下でＧＬＵＴ１をコードするＡＡＶ９ベクターは、若い出生後のマウスモデルにおいて試験されている。他の研究では、構成的プロモーター（例えば、ＣＭＶプロモーター）または内因性ＧＬＵＴ１遺伝子のプロモーターを使用した。抗痙攣剤の炭酸脱水酵素阻害剤アセタゾラミドおよびその他を含む、様々な小分子も試験されている。

ＧＬＵＴ１のハプロ不全は、脳血管形成を停止し、比較的小さな脳微小血管系をもたらし、これは内皮先端細胞のグルコース依存性に関連し得るが、Ｔａｎｇらは、内皮細胞における低ＧＬＵＴ１が、この病理を誘発させるかどうかは、まだ調査されていないことを観察した。ＧＬＵＴ１タンパク質は、乏突起膠細胞、小膠細胞、および上衣細胞を含む追加の脳細胞で発現する。

遺伝子療法によるＧＬＵＴ１ ＤＳの対処には、複数の課題が存在する。臨床的に意義のある効果を達成するために、必要とされるベクターを用いたＣＮＳのカバレッジの程度、およびどのようなＧＬＵＴ１の治療レベルが必要とされるかは、両方とも非常に予測不可能である。

ＧＬＵＴ１欠損症症候群の治療に対する満たされていないニーズがある。本明細書で提供される遺伝子療法は、このニーズに対処するものである。

Ａｌｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｈｉｌｄ Ｎｅｕｒｏｌ．３０（２）：１６０－１６９（２０１５） Ｖｅｙｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．２０２０；１２７：４６６－４８２ Ｔａｎｇ ｅｔ ａｌ．Ａｎｎ．Ｃｌｉｎ．Ｔｒａｎｓ．Ｎｅｕｒｏｌ．２０１９；６（９）：１９２３－１９３２

概要
本発明は、概して、ＧＬＵＴ１をコードするポリヌクレオチドまたはその機能的バリアントのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベースの送達を用いた神経系疾患または障害のための遺伝子療法に関する。

ＧＬＵＴ１欠損症症候群（ＤＳ）は、適切な神経機能の欠如に根ざした臨床症状を有する神経発達障害であるが、本遺伝子療法は、理論に拘束されることなく、中枢神経系（ＣＮＳ）における血管系の発達および血管形成の誘導に関与する内皮細胞を標的にし得る。発達中の中枢神経系ＣＮＳ血管系へのＡＡＶの直接送達は、その後の内皮先端細胞におけるＧＬＵＴ１タンパク質の発現を伴い、血管形成および神経発達の重要なウィンドウ中にＣＮＳ全体にわたって血管の成長および形成を促進し得る。

一態様では、本開示は、ＧＬＵＴ１またはその機能的バリアントをコードするポリヌクレオチド配列を含み、プロモーターに動作可能に連結される発現カセットを提供する。

一部の実施形態では、プロモーターが、内皮プロモーター、任意選択的に、Ｔｉｅ－１プロモーター、Ｔｉｅ－２（ＴＥＫ）プロモーター、ＦＬＴ－１プロモーター、ＦＬＫ－１（ＫＤＲ）プロモーター、ＩＣＡＭ－２プロモーター、ＶＥ－カドヘリン（ＣＤＨ５）プロモーター、ＶＷＦプロモーター、ＥＮＧプロモーター、ＰＤＧＦＢプロモーター、ＥＳＭ１プロモーター、ＡＰＬＮプロモーター、またはクローディン－５（Ｐｌｅ２６１）プロモーターであり、内皮プロモーターはＧｌｕｔ１プロモーターではない。

一部の実施形態では、プロモーターが、ＦＬＴ－１プロモーターである。

一部の実施形態では、ＦＬＴ－１プロモーターが、ヒトＦＬＴ－１（ｈＦＴＬ－１）プロモーターである。

一部の実施形態では、ｈＦＴＬ－１プロモーターが、配列番号１と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を共有する。

一部の実施形態では、プロモーターが、Ｔｉｅ－１プロモーターである。

一部の実施形態では、Ｔｉｅ－１プロモーターが、ヒトＴｉｅ－１（ｈＴｉｅ－１）プロモーターである。

一部の実施形態では、ｈＦＴＬ－１プロモーターが、配列番号２と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を共有する。

一部の実施形態では、プロモーターが、血管内皮－カドヘリン（ＶＥ－カドヘリン）プロモーターである。

一部の実施形態では、ＶＥ－カドヘリンプロモーターが、ヒトＶＥ－カドヘリン（ｈＶＥ－カドヘリン）プロモーターである。

一部の実施形態では、ｈＶＥ－カドヘリンプロモーターが、配列番号３と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を共有する。

一部の実施形態では、プロモーターが、ユビキタスプロモーターである。

一部の実施形態では、プロモーターが、ＣＭＶプロモーターである。

一部の実施形態では、プロモーターが、ＣＡＧプロモーターである。

一部の実施形態では、発現カセットが、ポリＡシグナル、任意選択的にヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）ポリＡを含む。

一部の実施形態では、発現カセットが、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）、任意選択的にＷＰＲＥ（ｘ）を含む。

一部の実施形態では、発現カセットが、配列番号４と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を共有する配列を含む３’非翻訳領域（３’ＵＴＲ）を含む。

一部の実施形態では、ＧＬＵＴ１をコードするポリヌクレオチド配列が、ＳＬＣ２Ａ１ポリヌクレオチドである。

一部の実施形態では、ＳＬＣ２Ａ１ポリヌクレオチドが、ヒトＳＬＣ２Ａ１ポリヌクレオチドである。

一部の実施形態では、ＧＬＵＴ１をコードするポリヌクレオチド配列が、配列番号５と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を共有する。

一部の実施形態では、発現カセットが、５’および３’逆位末端反復（ＩＴＲ）に、任意選択的にＡＡＶ２ ＩＴＲに、隣接する。

一部の実施形態では、発現カセットが、配列番号８～１６、配列番号９７、配列番号９９、および配列番号１０１のいずれか一つと少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を共有する。

別の態様では、本開示は、本開示の発現カセットのいずれか一つを含む遺伝子療法ベクターを提供する。

一部の実施形態では、遺伝子療法ベクターは、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクターである。

一部の実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、ＡＡＶ６、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、またはＡＡＶｒｈ．７４、ＡＡＶｒｈ．１０ベクターまたはその機能的バリアントである。

一部の実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、ＡＡＶ２ベクターではない。

一部の実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、配列番号７６～８２のいずれか一つと９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を共有するキャプシドタンパク質を含む。

別の態様では、本開示は、それを必要とする対象において疾患または障害を治療および／または予防する方法であって、本開示のいずれか一つに記載のベクターを対象に投与する工程を含む、方法を提供する。

一部の実施形態では、疾患または障害は、神経障害である。

一部の実施形態では、疾患または障害は、グルコーストランスポーター１欠損症症候群（ＧＬＵＴ１ ＤＳ）またはデビボ病である。

一部の実施形態では、ベクターは、脳室内（ＩＣＶ）注射により投与される。

一部の実施形態では、投与は、脳内でＧＬＵＴ１をコードするポリヌクレオチド配列の発現の増加をもたらし、および／またはＣＳＦ中のグルコースレベルもしくは乳酸レベルの増加をもたらし、任意選択的に参照ｒＡＡＶベクターと比較して増加したレベルで、任意選択的に増加は、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％またはそれを超える増加である。

一部の実施形態では、投与は、任意選択的に参照ｒＡＡＶベクターと比較して増加したレベルで、脳内でＧＬＵＴ１タンパク質の発現をもたらす。

一部の実施形態では、ベクターは、１Ｅ１１ベクターゲノム（ｖｇ）、１Ｅ１２ｖｇ、１Ｅ１３、１Ｅ１４、２Ｅ１４または３Ｅ１４の用量で投与される。

別の態様では、本開示は、細胞においてＧＬＵＴ１を発現する方法であって、細胞を本開示のベクターのいずれかと接触させる工程を含む、方法を提供する。

一部の実施形態では、細胞は、内皮細胞である。

一部の実施形態では、内皮細胞は、インビボ内皮細胞である。

一部の実施形態では、細胞は、ニューロンである。

一部の実施形態では、ニューロンは、インビボニューロンである。

一部の実施形態では、方法は、対象へのベクターのインビボ投与を含む。

さらなる態様では、本開示は、ポリヌクレオチド（例えば、ベクターゲノム）、医薬組成物、キット、および他の組成物および方法を提供する。

様々な他の態様および実施形態が、以下の詳細な説明に開示されている。本発明は、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される。

図１は、ベクターゲノムの様々な非限定的な例に対するベクター図を示す。 同上。 図２は、ベクターゲノムの非限定的な例のベクター図を示す。ベクターゲノムの全ポリヌクレオチド配列は、配列番号１７である。大文字の部分は、発現カセット（配列番号８）である。 同上。 図３は、ベクターゲノムの非限定的な例のベクター図を示す。ベクターゲノムの全ポリヌクレオチド配列は、配列番号１９である。大文字の部分は、発現カセット（配列番号１０）である。 同上。 図４は、ベクターゲノムの非限定的な例のベクター図を示す。ベクターゲノムの全ポリヌクレオチド配列は、配列番号２１である。大文字の部分は、発現カセット（配列番号１２）である。 同上。 図５は、ベクターゲノムの非限定的な例のベクター図を示す。ベクターゲノムの全ポリヌクレオチド配列は、配列番号９６である。大文字の部分は、発現カセット（配列番号９７）である。ベクターゲノムの全ポリヌクレオチド配列の代替は、配列番号２３である。発現カセットの代替は、配列番号１４である。 同上。 図６は、ベクターゲノムの非限定的な例のベクター図を示す。ベクターゲノムの全ポリヌクレオチド配列は、配列番号２５である。大文字の部分は、発現カセット（配列番号１６）である。 同上。 図７は、ベクターゲノムの非限定的な例のベクター図を示す。ベクターゲノムの全ポリヌクレオチド配列は、配列番号９８である。大文字の部分は、発現カセット（配列番号９９）である。 同上。 図８は、ベクターゲノムの非限定的な例のベクター図を示す。ベクターゲノムの全ポリヌクレオチド配列は、配列番号１００である。大文字の部分は、発現カセット（配列番号１０１）である。 同上。 図９。ｈＧｌｕｔ１タンパク質ＣＨＯ－Ｌｅｃ２細胞のＡＡＶ９－媒介発現である。ＣＨＯ－Ｌｅｃ２細胞は、いくつかの内皮特異的プロモーター（すなわちｈＦＬＴ１、ｍＴｉｅ１またはｈＧｌｕｔ１）のうちの一つ、またはユビキタスＣＭＶプロモーターによって駆動されるｈＧｕｔ１導入遺伝子タンパク質を発現するＡＡＶ９ベクターで、形質導入された。［ＳＬＣ２Ａ１＝ＧＬＵＴ１遺伝子〕。 図１０Ａ～１０Ｃ。ヒト脳微小血管系内皮細胞（ｈＣＭＥＣ／ｄ３）のトランスフェクション後の導入遺伝子タンパク質（Ｇｌｕｔ１－ＧＦＰ）の発現。図１０Ａ。Ｇｌｕｔ１－ＧＦＰ導入遺伝子の発現を駆動するいくつかの内皮細胞プロモーターのうちの一つを含有する構築物を用いたトランスフェクションの７２時間後のＧＦＰ蛍光である。図１０Ｂ。二つのユビキタスプロモーター（ＣＭＶまたはＣＡＧ）、Ｇｌｕｔ１を含まない対照ベクター（ＣＭＶ－ＧＦＰ）、またはトランスフェクションなし（ＮＦＸなし）のうちの一つを含有する構築物を用いたトランスフェクション後７２時間のＧＦＰ蛍光である。Ｏｐｅｒｅｔｔａ ＣＬＳ（商標）（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ（登録商標））を使用して取得された画像。図１０Ｃ。対象プロモーター（ｈＦＬＴ１、ｍＴｉｅ、ｈＴｉｅ、またはｈＧｌｕｔ１）、およびＧＬＵＴ１（ＳＬＣ２Ａ１）遺伝子（Ｔ２Ａ リンク－ＧＦＰ）、ならびにＡＡＶ２逆位末端反復（ＩＴＲ）に隣接した調節エレメントを含有する発現カセットの図である。 図１１Ａ～１１Ｃ。ヒトＧＬＵＴ１（ＳＬＣ２Ａ１）の発現後のｈＣＭＥＣ／ｄ３細胞における２－デオキシ－Ｄ－グルコース（グルコース）取り込みである。ヒト脳微小血管内皮細胞（ｈＣＭＥＣ／ｄ３）を、ＣＡＧ－ＧＦＰ（陰性対照）のいずれかを発現するプラスミド、またはいくつかの内皮特異的プロモーター（すなわち、ｈＦＬＴ１、ｍＴｉｅ１もしくはｈＧｌｕｔ１）のうちの一つによって、またはユビキタスＣＭＶプロモーターによって駆動されるｈＧＬＵＴ１－ｔ２Ａ－ｅＧＦＰ導入遺伝子を用いてトランスフェクトした。グルコース取り込みは、培地中の０．５ｍＭの２－デオキシ－Ｄ－グルコース（２－ＤＧ）を有する発光ベースのキット（Ｐｒｏｍｅｇａ（登録商標））を使用して測定された。グルコース取り込みは、位相差画像法を使用して総細胞によって正規化された〔エラーバーは、Ｓ．Ｅ．Ｍを表す；状態当たりｎ＝６の複製〕。図１１Ａ。グルコース（２－ＤＧ）取り込みは、最初の実験で、トランスフェクションの７２時間後に測定された。図１１Ｂ。グルコース（２－ＤＧ）取り込みは、第二の実験において、トランスフェクションの７２時間後に測定された。図１１Ｃ。グルコース（２－ＤＧ）取り込みは、トランスフェクションの９６時間後に測定された。 図１２Ａ～１２Ｂ。ヒトＧＬＵＴ１（ＳＬＣ２Ａ１）の発現後のｈＣＭＥＣ／ｄ３細胞における２－デオキシ－Ｄ－グルコース（グルコース）取り込みである。ヒト脳微小血管内皮細胞（ｈＣＭＥＣ／ｄ３）を、いくつかの内皮特異的プロモーター（すなわち、ｈＦＬＴ１、ｍＴｉｅ１またはｈＧｌｕｔ１）のうちの一つによって、またはユビキタスＣＭＶプロモーターによって駆動されるｈＧＬＵＴ１－ｔ２Ａ－ｅＧＦＰ導入遺伝子を発現するプラスミドでトランスフェクトした。非トランスフェクトｈＣＭＥＣ／ｄ３は、対照（ＣＯＮ）として使用された。グルコース取り込みは、培地中の２－デオキシ－Ｄ－グルコースの様々な濃度（０ｍＭ、０．１ｍＭ、０．５ｍＭまたは１．０ｍＭ）を有する発光ベースのキット（Ｐｒｏｍｅｇａ（登録商標））を使用して測定された。グルコース取り込みは、製造業者の推奨に従って実施されたＲｅａｌＴｉｍｅ－ＧｌｏＭＴ細胞生存率アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ（登録商標））を用いた多重化により、細胞単位で正規化された。図１２Ａは、ヒトＧｌｕｔ１（ＳＬＣ２Ａ１）を７２時間の時点で発現させた後のｈＣＭＥＣ／ｄ３細胞におけるグルコース取り込みを示す。図１２Ｂは、ヒトＧｌｕｔ１（ＳＬＣ２Ａ１）を９６時間の時点で発現させた後のｈＣＭＥＣ／ｄ３細胞におけるグルコース取り込みを示す。 図１３。ｈＣＭＥＣ／ｄ３細胞におけるｈＧＬＵＴ１（ＳＬＣ２Ａ１）のＡＡＶ９－媒介発現後の２－デオキシ－Ｄ－グルコース（グルコース）取り込み。ヒト脳微小血管内皮細胞（ｈＣＭＥＣ／ｄ３）を、ＣＡＧ－ＧＦＰ（陰性対照）のいずれかを発現するＡＡＶ９ベクター（３ｘ１０^５ベクターゲノム／細胞）、またはいくつかの内皮特異的プロモーター（すなわち、ｈＦＬＴ１、ｍＴｉｅ１もしくはｈＧｌｕｔ１）のうちの一つによって、またはユビキタスＣＭＶプロモーターによって駆動されるｈＧＬＵＴ１導入遺伝子を用いて形質導入した。グルコース（２－ＤＧ）取り込みは、発光ベースのＧｌｕｃｏｓｅ Ｕｐｔａｋｅ－Ｇｌｏキット（Ｐｒｏｍｅｇａ（登録商標））を使用して形質導入後７２時間で測定され、ＲｅａｌＴｉｍｅ－Ｇｌｏ ＭＴ細胞生存率アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ（登録商標））を使用して細胞当たりで正規化された〔エラーバーは、Ｓ．Ｅ．Ｍを表す；状態当たりｎ＝４の複製〕。

発明の詳細な説明
定義
セクション見出しは、組織目的のみを目的としており、記述された主題を特定の態様または実施形態に限定するものとして解釈されるべきではない。

別途定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が関連する当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと類似または同等の方法および材料を本発明の実施において使用することができるが、好適な方法および材料を以下に記載する。本明細書に記載されたすべての刊行物、特許出願、特許、およびその他の参考文献は、その全体が参照により明示的に組み込まれる。矛盾する場合は、定義を含めて本明細書が優先される。更に、本明細書に記載される材料、方法、および実施例は、例示に過ぎず、限定することを意図するものではない。

本明細書に記載されるすべての刊行物および特許は、それぞれの個々の刊行物または特許が、参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示されているかのように、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。矛盾する場合は、本明細書の任意の定義を含めて本出願が優先される。しかしながら、本明細書に引用される任意の参照文献、記事、刊行物、特許、特許公開、および特許出願の言及は、有効な先行技術を構成するか、または世界の任意の国で共通の一般知識の一部を形成するという承認または任意の形態の提案とされるものではなく、またそのように解釈されるべきではない。

本記載では、別段の示唆がない限り、任意の濃度範囲、パーセンテージ範囲、比範囲、または整数範囲は、列挙された範囲内の任意の整数の値、および適切な場合にはその分数（例えば、整数の１０分の１および１００分の１など）を含むと理解されるべきである。用語「約」は、数字または数の直前にある場合、その数字または数がプラスまたはマイナス１０％の範囲であることを意味する。本明細書で使用される場合、用語「ａ」および「ａｎ」は、別段の示唆がない限り、列挙された構成要素のうちの「一つ以上」を指すことが理解されるべきである。代替物（例えば、「または」）の使用は、代替物のいずれか一方、両方、またはそれらの任意の組み合わせのいずれかを意味すると理解されるべきである。用語「および／または」は、選択肢の一方または両方を意味すると理解されるべきである。本明細書で使用される場合、用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」は同義で使用される。

本明細書で使用される場合、用語「同一性」および「同一である」は、ポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列に関して、ＢＬＡＳＴアルゴリズムによって生成されたアライメントなどの、その「クエリー」配列と「対象」配列とのアライメントにおける、完全に一致している残基のパーセンテージを指す。同一性は、特に明記しない限り、対象配列の全長にわたって計算される。したがって、クエリー配列が、対象配列と整列しているときに、対象配列中の残基の少なくともｘ％（切り捨て）が、クエリー配列中の対応する残基と完全に一致するように整列される場合、クエリー配列は、対象配列と「少なくともｘ％の同一性を共有する」。対象配列が可変位置（例えば、Ｘで示される残基）を有する場合、クエリー配列中の任意の残基へのアライメントは、一致としてカウントされる。

本明細書で使用される場合、「ＡＡＶベクター」または「ｒＡＡＶベクター」は、ＡＡＶ末端反復配列（ＩＴＲ）が隣接する一つ以上の対象ポリヌクレオチド（または導入遺伝子）を含む組換えベクターを指す。かかるＡＡＶベクターは、ｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子産物をコードし発現するプラスミドでトランスフェクトされた宿主細胞中に存在するとき、複製され、感染性ウイルス粒子にパッケージングされ得る。あるいは、ＡＡＶベクターは、ｒｅｐ遺伝子とｃａｐ遺伝子を発現するように安定的に操作された宿主細胞を使用して、感染性粒子にパッケージングされてもよい。

本明細書で使用される場合、「ＡＡＶビリオン」または「ＡＡＶウイルス粒子」または「ＡＡＶベクター粒子」は、少なくとも一つのＡＡＶキャプシドタンパク質およびキャプシド化ポリヌクレオチドＡＡＶベクターから構成されるウイルス粒子を指す。本明細書で使用される場合、粒子が、異種ポリヌクレオチド（すなわち、哺乳動物細胞に送達される導入遺伝子などの野生型ＡＡＶゲノム以外のポリヌクレオチド）を含む場合、通常、これは、「ＡＡＶベクター粒子」または単に「ＡＡＶベクター」と呼ばれる。したがって、ＡＡＶベクター粒子の産生は、ベクターがＡＡＶベクター粒子内に含まれるため、必然的にＡＡＶベクターの産生を含む。

本明細書で使用される場合、「プロモーター」は、真核細胞においてポリヌクレオチドからのＲＮＡ転写の開始を促進することができるポリヌクレオチド配列を指す。

本明細書で使用される場合、「ベクターゲノム」は、ベクター（例えば、ｒＡＡＶビリオン）によってパッケージングされたポリヌクレオチド配列を指し、隣接配列（ＡＡＶ中、逆位末端反復）を含む。用語「発現カセット」および「ポリヌクレオチドカセット」は、隣接ＩＴＲ配列間のベクターゲノムの部分を指す。「発現カセット」は、ベクターゲノムが、発現を駆動するエレメント（例えば、プロモーター）に動作可能に連結された遺伝子産物をコードする少なくとも一つの遺伝子を含むことを意味する。

本明細書で使用される場合、用語「必要とする患者」または「必要とする対象」は、本明細書に開示される組換え遺伝子療法ベクターまたは遺伝子編集システムを用いた治療または改善に適している疾患、障害、または状態のリスクのあるまたは罹患している患者または対象を指す。必要とする患者または対象は、例えば、中枢神経系に関連する障害と診断された患者または対象であってもよい。対象は、ＳＬＣ２Ａ１遺伝子内の突然変異、またはＳＬＣ２Ａ１遺伝子のすべてもしくは一部の欠失、または遺伝子調節配列を有してもよく、これらはＧＬＵＴ１タンパク質の異常な発現を引き起こす。「対象」および「患者」は、本明細書では互換的に使用される。本明細書に記載される方法によって治療される対象は、新生児、幼児、年少者または成人であってよい。

本明細書で使用される場合、用語「バリアント」または「機能的バリアント」は、互換的に、親タンパク質の一つまたは複数の所望の活性を保持する親タンパク質と比較して、一つ以上のアミノ酸置換、挿入、または欠失を有するタンパク質を指す。

本明細書で使用される場合、「遺伝的破壊」は、遺伝子における機能の部分的または完全な喪失または異常な活動を意味する。例えば、対象は、対象の少なくとも一部の細胞（例えば、内皮細胞および／またはニューロン）において、ＧＬＵＴ１タンパク質の発現を減少させるか、またはＧＬＵＴ１タンパク質の喪失もしくは異常機能をもたらす、ＳＬＣ２Ａ１遺伝子の発現または機能における遺伝的破壊に苦しみ得る。

本明細書で使用される場合、「治療する」とは、疾患または障害の一つまたは複数の症状を改善することを指す。用語「予防する」は、疾患もしくは障害の一つまたは複数の症状の発症を遅延もしくは中断すること、またはＳＬＣ２Ａ１関連神経系疾患もしくは障害、例えば、ＧＬＵＴ１欠損症症候群（ＧＬＵＴ１ ＤＳ）の進行を遅らせることを指す。
ＧＬＵＴ１タンパク質またはポリヌクレオチド

本開示は、グルコーストランスポーター１（ＧＬＵＴ１）タンパク質に関連する組成物および使用方法を企図する。ＳＬＣ２Ａ１における様々な変異は、ＧＬＵＴ１ ＤＳと関連していることが知られている。遺伝性およびｄｅ ｎｏｖｏ変異の両方が観察されている。一部の事例では、ヘテロ接合性ミスセンス変異は、疾患を引き起こすのに十分である。

ＧＬＵＴ１のポリペプチド配列は以下の通りである。
ＭＥＰＳＳＫＫＬＴＧＲＬＭＬＡＶＧＧＡＶＬＧＳＬＱＦＧＹＮＴＧＶＩＮＡＰＱＫＶＩＥＥＦＹＮＱＴＷＶＨＲＹＧＥＳＩＬＰＴＴＬＴＴＬＷＳＬＳＶＡＩＦＳＶＧＧＭＩＧＳＦＳＶＧＬＦＶＮＲＦＧＲＲＮＳＭＬＭＭＮＬＬＡＦＶＳＡＶＬＭＧＦＳＫＬＧＫＳＦＥＭＬＩＬＧＲＦＩＩＧＶＹＣＧＬＴＴＧＦＶＰＭＹＶＧＥＶＳＰＴＡＬＲＧＡＬＧＴＬＨＱＬＧＩＶＶＧＩＬＩＡＱＶＦＧＬＤＳＩＭＧＮＫＤＬＷＰＬＬＬＳＩＩＦＩＰＡＬＬＱＣＩＶＬＰＦＣＰＥＳＰＲＦＬＬＩＮＲＮＥＥＮＲＡＫＳＶＬＫＫＬＲＧＴＡＤＶＴＨＤＬＱＥＭＫＥＥＳＲＱＭＭＲＥＫＫＶＴＩＬＥＬＦＲＳＰＡＹＲＱＰＩＬＩＡＶＶＬＱＬＳＱＱＬＳＧＩＮＡＶＦＹＹＳＴＳＩＦＥＫＡＧＶＱＱＰＶＹＡＴＩＧＳＧＩＶＮＴＡＦＴＶＶＳＬＦＶＶＥＲＡＧＲＲＴＬＨＬＩＧＬＡＧＭＡＧＣＡＩＬＭＴＩＡＬＡＬＬＥＱＬＰＷＭＳＹＬＳＩＶＡＩＦＧＦＶＡＦＦＥＶＧＰＧＰＩＰＷＦＩＶＡＥＬＦＳＱＧＰＲＰＡＡＩＡＶＡＧＦＳＮＷＴＳＮＦＩＶＧＭＣＦＱＹＶＥＱＬＣＧＰＹＶＦＩＩＦＴＶＬＬＶＬＦＦＩＦＴＹＦＫＶＰＥＴＫＧＲＴＦＤＥＩＡＳＧＦＲＱＧＧＡＳＱＳＤＫＴＰＥＥＬＦＨＰＬＧＡＤＳＱＶ
（配列番号：２６）。

一部の実施形態では、ＧＬＵＴ１タンパク質は、配列番号：２６）と、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるポリペプチド配列を含む。

一部の実施形態では、本開示は、キャプシドおよびベクターゲノムを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ビリオンを提供し、ベクターゲノムは、プロモーターに動作可能に連結されたＧＬＵＴ１タンパク質またはその機能的バリアントをコードするポリヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、本開示は、キャプシドおよびベクターゲノムを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ビリオンを提供し、ベクターゲノムは、プロモーターに動作可能に連結されたＧＬＵＴ１タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含む。ＧＬＵＴ１タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、以下と、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるポリヌクレオチド配列を含み得る。
ＡＴＧＧＡＧＣＣＣＡＧＣＡＧＣＡＡＧＡＡＧＣＴＧＡＣＧＧＧＴＣＧＣＣＴＣＡＴＧＣＴＧＧＣＣＧＴＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＧＣＴＴＧＧＣＴＣＣＣＴＧＣＡＧＴＴＴＧＧＣＴＡＣＡＡＣＡＣＴＧＧＡＧＴＣＡＴＣＡＡＴＧＣＣＣＣＣＣＡＧＡＡＧＧＴＧＡＴＣＧＡＧＧＡＧＴＴＣＴＡＣＡＡＣＣＡＧＡＣＡＴＧＧＧＴＣＣＡＣＣＧＣＴＡＴＧＧＧＧＡＧＡＧＣＡＴＣＣＴＧＣＣＣＡＣＣＡＣＧＣＴＣＡＣＣＡＣＧＣＴＣＴＧＧＴＣＣＣＴＣＴＣＡＧＴＧＧＣＣＡＴＣＴＴＴＴＣＴＧＴＴＧＧＧＧＧＣＡＴＧＡＴＴＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＣＴＧＴＧＧＧＣＣＴＴＴＴＣＧＴＴＡＡＣＣＧＣＴＴＴＧＧＣＣＧＧＣＧＧＡＡＴＴＣＡＡＴＧＣＴＧＡＴＧＡＴＧＡＡＣＣＴＧＣＴＧＧＣＣＴＴＣＧＴＧＴＣＣＧＣＣＧＴＧＣＴＣＡＴＧＧＧＣＴＴＣＴＣＧＡＡＡＣＴＧＧＧＣＡＡＧＴＣＣＴＴＴＧＡＧＡＴＧＣＴＧＡＴＣＣＴＧＧＧＣＣＧＣＴＴＣＡＴＣＡＴＣＧＧＴＧＴＧＴＡＣＴＧＣＧＧＣＣＴＧＡＣＣＡＣＡＧＧＣＴＴＣＧＴＧＣＣＣＡＴＧＴＡＴＧＴＧＧＧＴＧＡＡＧＴＧＴＣＡＣＣＣＡＣＡＧＣＣＣＴＴＣＧＴＧＧＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＣＴＧＧＧＣＡＴＣＧＴＣＧＴＣＧＧＣＡＴＣＣＴＣＡＴＣＧＣＣＣＡＧＧＴＧＴＴＣＧＧＣＣＴＧＧＡＣＴＣＣＡＴＣＡＴＧＧＧＣＡＡＣＡＡＧＧＡＣＣＴＧＴＧＧＣＣＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＡＧＣＡＴＣＡＴＣＴＴＣＡＴＣＣＣＧＧＣＣＣＴＧＣＴＧＣＡＧＴＧＣＡＴＣＧＴＧＣＴＧＣＣＣＴＴＣＴＧＣＣＣＣＧＡＧＡＧＴＣＣＣＣＧＣＴＴＣＣＴＧＣＴＣＡＴＣＡＡＣＣＧＣＡＡＣＧＡＧＧＡＧＡＡＣＣＧＧＧＣＣＡＡＧＡＧＴＧＴＧＣＴＡＡＡＧＡＡＧＣＴＧＣＧＣＧＧＧＡＣＡＧＣＴＧＡＣＧＴＧＡＣＣＣＡＴＧＡＣＣＴＧＣＡＧＧＡＧＡＴＧＡＡＧＧＡＡＧＡＧＡＧＴＣＧＧＣＡＧＡＴＧＡＴＧＣＧＧＧＡＧＡＡＧＡＡＧＧＴＣＡＣＣＡＴＣＣＴＧＧＡＧＣＴＧＴＴＣＣＧＣＴＣＣＣＣＣＧＣＣＴＡＣＣＧＣＣＡＧＣＣＣＡＴＣＣＴＣＡＴＣＧＣＴＧＴＧＧＴＧＣＴＧＣＡＧＣＴＧＴＣＣＣＡＧＣＡＧＣＴＧＴＣＴＧＧＣＡＴＣＡＡＣＧＣＴＧＴＣＴＴＣＴＡＴＴＡＣＴＣＣＡＣＧＡＧＣＡＴＣＴＴＣＧＡＧＡＡＧＧＣＧＧＧＧＧＴＧＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＴＧＴＡＴＧＣＣＡＣＣＡＴＴＧＧＣＴＣＣＧＧＴＡＴＣＧＴＣＡＡＣＡＣＧＧＣＣＴＴＣＡＣＴＧＴＣＧＴＧＴＣＧＣＴＧＴＴＴＧＴＧＧＴＧＧＡＧＣＧＡＧＣＡＧＧＣＣＧＧＣＧＧＡＣＣＣＴＧＣＡＣＣＴＣＡＴＡＧＧＣＣＴＣＧＣＴＧＧＣＡＴＧＧＣＧＧＧＴＴＧＴＧＣＣＡＴＡＣＴＣＡＴＧＡＣＣＡＴＣＧＣＧＣＴＡＧＣＡＣＴＧＣＴＧＧＡＧＣＡＧＣＴＡＣＣＣＴＧＧＡＴＧＴＣＣＴＡＴＣＴＧＡＧＣＡＴＣＧＴＧＧＣＣＡＴＣＴＴＴＧＧＣＴＴＴＧＴＧＧＣＣＴＴＣＴＴＴＧＡＡＧＴＧＧＧＴＣＣＴＧＧＣＣＣＣＡＴＣＣＣＡＴＧＧＴＴＣＡＴＣＧＴＧＧＣＴＧＡＡＣＴＣＴＴＣＡＧＣＣＡＧＧＧＴＣＣＡＣＧＴＣＣＡＧＣＴＧＣＣＡＴＴＧＣＣＧＴＴＧＣＡＧＧＣＴＴＣＴＣＣＡＡＣＴＧＧＡＣＣＴＣＡＡＡＴＴＴＣＡＴＴＧＴＧＧＧＣＡＴＧＴＧＣＴＴＣＣＡＧＴＡＴＧＴＧＧＡＧＣＡＡＣＴＧＴＧＴＧＧＴＣＣＣＴＡＣＧＴＣＴＴＣＡＴＣＡＴＣＴＴＣＡＣＴＧＴＧＣＴＣＣＴＧＧＴＴＣＴＧＴＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＡＣＣＴＡＣＴＴＣＡＡＡＧＴＴＣＣＴＧＡＧＡＣＴＡＡＡＧＧＣＣＧＧＡＣＣＴＴＣＧＡＴＧＡＧＡＴＣＧＣＴＴＣＣＧＧＣＴＴＣＣＧＧＣＡＧＧＧＧＧＧＡＧＣＣＡＧＣＣＡＡＡＧＴＧＡＣＡＡＧＡＣＡＣＣＣＧＡＧＧＡＧＣＴＧＴＴＣＣＡＴＣＣＣＣＴＧＧＧＧＧＣＴＧＡＴＴＣＣＣＡＡＧＴＧ
（配列番号５）

一部の実施形態では、ＧＬＵＴ１タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列は、コドン最適化配列である。ＧＬＵＴ１タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、以下と、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるポリヌクレオチド配列を含み得る。
ＡＴＧＧＡＡＣＣＡＴＣＡＴＣＣＡＡＡＡＡＧＣＴＧＡＣＣＧＧＡＣＧＡＣＴＧＡＴＧＣＴＴＧＣＡＧＴＴＧＧＣＧＧＴＧＣＧＧＴＣＴＴＧＧＧＧＡＧＣＣＴＧＣＡＧＴＴＴＧＧＧＴＡＣＡＡＴＡＣＴＧＧＣＧＴＡＡＴＣＡＡＴＧＣＣＣＣＧＣＡＧＡＡＧＧＴＴＡＴＴＧＡＡＧＡＡＴＴＴＴＡＣＡＡＴＣＡＡＡＣＧＴＧＧＧＴＡＣＡＴＣＧＣＴＡＣＧＧＴＧＡＡＴＣＣＡＴＴＣＴＴＣＣＴＡＣＡＡＣＴＣＴＧＡＣＣＡＣＡＣＴＣＴＧＧＡＧＣＣＴＴＴＣＴＧＴＡＧＣＧＡＴＴＴＴＴＴＣＣＧＴＣＧＧＧＧＧＣＡＴＧＡＴＡＧＧＡＴＣＡＴＴＴＴＣＣＧＴＣＧＧＴＣＴＴＴＴＴＧＴＧＡＡＣＣＧＣＴＴＴＧＧＣＣＧＧＡＧＡＡＡＴＴＣＣＡＴＧＣＴＧＡＴＧＡＴＧＡＡＴＣＴＴＣＴＣＧＣＴＴＴＣＧＴＧＡＧＴＧＣＣＧＴＣＣＴＣＡＴＧＧＧＡＴＴＴＡＧＴＡＡＡＣＴＧＧＧＴＡＡＡＴＣＴＴＴＣＧＡＧＡＴＧＴＴＧＡＴＡＣＴＧＧＧＧＡＧＡＴＴＴＡＴＴＡＴＣＧＧＣＧＴＧＴＡＴＴＧＴＧＧＴＴＴＧＡＣＣＡＣＧＧＧＣＴＴＴＧＴＡＣＣＡＡＴＧＴＡＴＧＴＴＧＧＣＧＡＧＧＴＴＴＣＴＣＣＧＡＣＡＧＣＡＴＴＧＡＧＡＧＧＴＧＣＡＣＴＣＧＧＧＡＣＣＴＴＧＣＡＣＣＡＧＴＴＧＧＧＣＡＴＣＧＴＡＧＴＡＧＧＡＡＴＣＣＴＴＡＴＡＧＣＧＣＡＡＧＴＴＴＴＣＧＧＧＣＴＣＧＡＴＴＣＣＡＴＣＡＴＧＧＧＧＡＡＣＡＡＡＧＡＴＣＴＣＴＧＧＣＣＡＴＴＧＣＴＣＣＴＣＴＣＡＡＴＡＡＴＴＴＴＴＡＴＡＣＣＧＧＣＡＴＴＧＣＴＴＣＡＧＴＧＴＡＴＴＧＴＴＣＴＴＣＣＴＴＴＴＴＧＣＣＣＡＧＡＧＴＣＣＣＣＴＡＧＧＴＴＣＣＴＧＣＴＣＡＴＡＡＡＣＡＧＧＡＡＴＧＡＧＧＡＧＡＡＴＣＧＣＧＣＴＡＡＧＴＣＣＧＴＧＴＴＧＡＡＡＡＡＡＣＴＴＡＧＧＧＧＡＡＣＴＧＣＡＧＡＣＧＴＴＡＣＴＣＡＣＧＡＴＴＴＧＣＡＡＧＡＧＡＴＧＡＡＧＧＡＧＧＡＡＴＣＴＡＧＧＣＡＡＡＴＧＡＴＧＣＧＣＧＡＧＡＡＧＡＡＧＧＴＴＡＣＣＡＴＡＣＴＣＧＡＡＣＴＣＴＴＣＣＧＣＴＣＣＣＣＣＧＣＧＴＡＣＡＧＧＣＡＧＣＣＣＡＴＴＣＴＴＡＴＣＧＣＧＧＴＣＧＴＣＴＴＧＣＡＧＴＴＧＴＣＡＣＡＡＣＡＧＴＴＧＡＧＴＧＧＧＡＴＴＡＡＴＧＣＡＧＴＴＴＴＣＴＡＴＴＡＴＡＧＣＡＣＧＴＣＣＡＴＡＴＴＴＧＡＡＡＡＡＧＣＡＧＧＣＧＴＣＣＡＡＣＡＡＣＣＴＧＴＣＴＡＴＧＣＡＡＣＴＡＴＡＧＧＣＴＣＡＧＧＣＡＴＴＧＴＡＡＡＣＡＣＡＧＣＧＴＴＴＡＣＴＧＴＡＧＴＡＴＣＡＣＴＧＴＴＴＧＴＣＧＴＴＧＡＧＣＧＧＧＣＴＧＧＴＣＧＡＡＧＧＡＣＣＴＴＧＣＡＣＣＴＣＡＴＡＧＧＡＣＴＧＧＣＧＧＧＣＡＴＧＧＣＧＧＧＣＴＧＴＧＣＧＡＴＴＣＴＴＡＴＧＡＣＡＡＴＴＧＣＧＣＴＣＧＣＧＣＴＧＴＴＧＧＡＡＣＡＧＣＴＴＣＣＧＴＧＧＡＴＧＴＣＣＴＡＴＣＴＣＴＣＴＡＴＡＧＴＡＧＣＡＡＴＡＴＴＴＧＧＡＴＴＴＧＴＴＧＣＡＴＴＴＴＴＴＧＡＡＧＴＴＧＧＧＣＣＣＧＧＡＣＣＴＡＴＣＣＣＣＴＧＧＴＴＣＡＴＣＧＴＣＧＣＧＧＡＧＣＴＣＴＴＴＴＣＣＣＡＡＧＧＣＣＣＡＡＧＡＣＣＧＧＣＴＧＣＣＡＴＴＧＣＴＧＴＴＧＣＡＧＧＣＴＴＣＴＣＡＡＡＣＴＧＧＡＣＧＡＧＴＡＡＴＴＴＣＡＴＡＧＴＡＧＧＴＡＴＧＴＧＴＴＴＣＣＡＧＴＡＴＧＴＴＧＡＡＣＡＧＣＴＣＴＧＴＧＧＧＣＣＣＴＡＴＧＴＣＴＴＴＡＴＣＡＴＣＴＴＴＡＣＴＧＴＧＴＴＧＣＴＣＧＴＧＴＴＧＴＴＣＴＴＴＡＴＣＴＴＣＡＣＴＴＡＴＴＴＣＡＡＡＧＴＡＣＣＣＧＡＧＡＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＧＡＣＧＴＴＴＧＡＣＧＡＧＡＴＴＧＣＡＴＣＴＧＧＴＴＴＴＡＧＡＣＡＡＧＧＡＧＧＴＧＣＣＴＣＡＣＡＧＡＧＴＧＡＴＡＡＡＡＣＣＣＣＧＧＡＧＧＡＡＴＴＧＴＴＴＣＡＴＣＣＧＣＴＧＧＧＡＧＣＣＧＡＣＴＣＡＣＡＧＧＴＣ
（配列番号２７）

任意選択的に、ベクターゲノムをコードするポリヌクレオチド配列は、ＧＣＣＡＣＣＡＴＧＧ（配列番号２８）を含むがこれに限定されないコザック配列を含んでもよい。コザック配列は、ＧＬＵＴ１タンパク質またはその機能的バリアントをコードするポリヌクレオチド配列と重複してもよい。例えば、ベクターゲノムは、以下と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるポリヌクレオチド配列（コザックは下線あり）を含んでもよい。
ｇｃｃａｃｃＡＴＧＧＡＧＣＣＣＡＧＣＡＧＣＡＡＧＡＡＧＣＴＧＡＣＧＧＧＴＣＧＣＣＴＣＡＴＧＣＴＧＧＣＣＧＴＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＧＣＴＴＧＧＣＴＣＣＣＴＧＣＡＧＴＴＴＧＧＣＴＡＣＡＡＣＡＣＴＧＧＡＧＴＣＡＴＣＡＡＴＧＣＣＣＣＣＣＡＧＡＡＧＧＴＧＡＴＣＧＡＧＧＡＧＴＴＣＴＡＣＡＡＣＣＡＧＡＣＡＴＧＧＧＴＣＣＡＣＣＧＣＴＡＴＧＧＧＧＡＧＡＧＣＡＴＣＣＴＧＣＣＣＡＣＣＡＣＧＣＴＣＡＣＣＡＣＧＣＴＣＴＧＧＴＣＣＣＴＣＴＣＡＧＴＧＧＣＣＡＴＣＴＴＴＴＣＴＧＴＴＧＧＧＧＧＣＡＴＧＡＴＴＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＣＴＧＴＧＧＧＣＣＴＴＴＴＣＧＴＴＡＡＣＣＧＣＴＴＴＧＧＣＣＧＧＣＧＧＡＡＴＴＣＡＡＴＧＣＴＧＡＴＧＡＴＧＡＡＣＣＴＧＣＴＧＧＣＣＴＴＣＧＴＧＴＣＣＧＣＣＧＴＧＣＴＣＡＴＧＧＧＣＴＴＣＴＣＧＡＡＡＣＴＧＧＧＣＡＡＧＴＣＣＴＴＴＧＡＧＡＴＧＣＴＧＡＴＣＣＴＧＧＧＣＣＧＣＴＴＣＡＴＣＡＴＣＧＧＴＧＴＧＴＡＣＴＧＣＧＧＣＣＴＧＡＣＣＡＣＡＧＧＣＴＴＣＧＴＧＣＣＣＡＴＧＴＡＴＧＴＧＧＧＴＧＡＡＧＴＧＴＣＡＣＣＣＡＣＡＧＣＣＣＴＴＣＧＴＧＧＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＣＡＣＣＡＧＣＴＧＧＧＣＡＴＣＧＴＣＧＴＣＧＧＣＡＴＣＣＴＣＡＴＣＧＣＣＣＡＧＧＴＧＴＴＣＧＧＣＣＴＧＧＡＣＴＣＣＡＴＣＡＴＧＧＧＣＡＡＣＡＡＧＧＡＣＣＴＧＴＧＧＣＣＣＣＴＧＣＴＧＣＴＧＡＧＣＡＴＣＡＴＣＴＴＣＡＴＣＣＣＧＧＣＣＣＴＧＣＴＧＣＡＧＴＧＣＡＴＣＧＴＧＣＴＧＣＣＣＴＴＣＴＧＣＣＣＣＧＡＧＡＧＴＣＣＣＣＧＣＴＴＣＣＴＧＣＴＣＡＴＣＡＡＣＣＧＣＡＡＣＧＡＧＧＡＧＡＡＣＣＧＧＧＣＣＡＡＧＡＧＴＧＴＧＣＴＡＡＡＧＡＡＧＣＴＧＣＧＣＧＧＧＡＣＡＧＣＴＧＡＣＧＴＧＡＣＣＣＡＴＧＡＣＣＴＧＣＡＧＧＡＧＡＴＧＡＡＧＧＡＡＧＡＧＡＧＴＣＧＧＣＡＧＡＴＧＡＴＧＣＧＧＧＡＧＡＡＧＡＡＧＧＴＣＡＣＣＡＴＣＣＴＧＧＡＧＣＴＧＴＴＣＣＧＣＴＣＣＣＣＣＧＣＣＴＡＣＣＧＣＣＡＧＣＣＣＡＴＣＣＴＣＡＴＣＧＣＴＧＴＧＧＴＧＣＴＧＣＡＧＣＴＧＴＣＣＣＡＧＣＡＧＣＴＧＴＣＴＧＧＣＡＴＣＡＡＣＧＣＴＧＴＣＴＴＣＴＡＴＴＡＣＴＣＣＡＣＧＡＧＣＡＴＣＴＴＣＧＡＧＡＡＧＧＣＧＧＧＧＧＴＧＣＡＧＣＡＧＣＣＴＧＴＧＴＡＴＧＣＣＡＣＣＡＴＴＧＧＣＴＣＣＧＧＴＡＴＣＧＴＣＡＡＣＡＣＧＧＣＣＴＴＣＡＣＴＧＴＣＧＴＧＴＣＧＣＴＧＴＴＴＧＴＧＧＴＧＧＡＧＣＧＡＧＣＡＧＧＣＣＧＧＣＧＧＡＣＣＣＴＧＣＡＣＣＴＣＡＴＡＧＧＣＣＴＣＧＣＴＧＧＣＡＴＧＧＣＧＧＧＴＴＧＴＧＣＣＡＴＡＣＴＣＡＴＧＡＣＣＡＴＣＧＣＧＣＴＡＧＣＡＣＴＧＣＴＧＧＡＧＣＡＧＣＴＡＣＣＣＴＧＧＡＴＧＴＣＣＴＡＴＣＴＧＡＧＣＡＴＣＧＴＧＧＣＣＡＴＣＴＴＴＧＧＣＴＴＴＧＴＧＧＣＣＴＴＣＴＴＴＧＡＡＧＴＧＧＧＴＣＣＴＧＧＣＣＣＣＡＴＣＣＣＡＴＧＧＴＴＣＡＴＣＧＴＧＧＣＴＧＡＡＣＴＣＴＴＣＡＧＣＣＡＧＧＧＴＣＣＡＣＧＴＣＣＡＧＣＴＧＣＣＡＴＴＧＣＣＧＴＴＧＣＡＧＧＣＴＴＣＴＣＣＡＡＣＴＧＧＡＣＣＴＣＡＡＡＴＴＴＣＡＴＴＧＴＧＧＧＣＡＴＧＴＧＣＴＴＣＣＡＧＴＡＴＧＴＧＧＡＧＣＡＡＣＴＧＴＧＴＧＧＴＣＣＣＴＡＣＧＴＣＴＴＣＡＴＣＡＴＣＴＴＣＡＣＴＧＴＧＣＴＣＣＴＧＧＴＴＣＴＧＴＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＡＣＣＴＡＣＴＴＣＡＡＡＧＴＴＣＣＴＧＡＧＡＣＴＡＡＡＧＧＣＣＧＧＡＣＣＴＴＣＧＡＴＧＡＧＡＴＣＧＣＴＴＣＣＧＧＣＴＴＣＣＧＧＣＡＧＧＧＧＧＧＡＧＣＣＡＧＣＣＡＡＡＧＴＧＡＣＡＡＧＡＣＡＣＣＣＧＡＧＧＡＧＣＴＧＴＴＣＣＡＴＣＣＣＣＴＧＧＧＧＧＣＴＧＡＴＴＣＣＣＡＡＧＴＧ
（配列番号２９）

一部の実施形態では、コザック配列は、以下のうちのいずれか一つを含むまたはからなる代替コザック配列である：
（ｇｃｃ）ｇｃｃＲｃｃＡＵＧＧ（配列番号３０）
ＡＧＮＮＡＵＧＮ；
ＡＮＮＡＵＧＧ；
ＡＣＣＡＵＧＧ、および
ＧＡＣＡＣＣＡＵＧＧ（配列番号３１）。

一部の実施形態では、ベクターゲノムは、コザック配列を含まない。

ベクターゲノム
本開示のＡＡＶビリオンは、ベクターゲノムを含む。ベクターゲノムは、発現カセット（またはポリヌクレオチド配列の発現を必要としない遺伝子編集用途のためのポリヌクレオチドカセット）を含んでもよい。任意の好適な逆位末端反復（ＩＴＲ）を使用してもよい。ＩＴＲは、キャプシドと同じ血清型由来であってもよく、または異なる血清型由来であってもよい（例えば、ＡＡＶ２ ＩＴＲが使用され得る）。

一部の実施形態では、５’ＩＴＲは、以下と、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるポリヌクレオチド配列を含む。
ＣＣＴＧＣＡＧＧＣＡＧＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣＣＧＧＧＣＡＡＡＧＣＣＣＧＧＧＣＧＴＣＧＧＧＣＧＡＣＣＴＴＴＧＧＴＣＧＣＣＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＴＡＧＧＧＧＴＴＣＣＴ
（配列番号３２）

一部の実施形態では、５’ＩＴＲは、以下と、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるポリヌクレオチド配列を含む。
ＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣＣＧＧＧＣＡＡＡＧＣＣＣＧＧＧＣＧＴＣＧＧＧＣＧＡＣＣＴＴＴＧＧＴＣＧＣＣＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＴＡＧＧＧＧＴＴＣＣＴＴＧＴＡＧＴＴＡＡＴＧＡＴＴＡＡＣＣＣＧＣＣＡＴＧＣＴＡＣＴＴＡＴＣＴＡＣＧＴＡ
（配列番号６）

一部の実施形態では、５’ＩＴＲは、以下と、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるポリヌクレオチド配列を含む。
ＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣＣＧＧＧＣＡＡＡＧＣＣＣＧＧＧＣＧＴＣＧＧＧＣＧＡＣＣＴＴＴＧＧＴＣＧＣＣＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＴＡＧＧＧＧＴＴＣＣＴＴＧＴＡＧＴＴＡＡＴＧＡＴＴＡＡＣＣＣＧＣＣＡＴＧＣＴＡＣＴＴＡＴＣＴＡＣＧＴＡ
（配列番号３３）

一部の実施形態では、３’ＩＴＲは、以下と、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるポリヌクレオチド配列を含む。
ＡＧＧＡＡＣＣＣＣＴＡＧＴＧＡＴＧＧＡＧＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＧＧＣＧＡＣＣＡＡＡＧＧＴＣＧＣＣＣＧＡＣＧＣＣＣＧＧＧＣＴＴＴＧＣＣＣＧＧＧＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＣＴＧＣＣＴＧＣＡＧＧ
（配列番号３４）

一部の実施形態では、３’ＩＴＲは、以下と、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるポリヌクレオチド配列を含む。
ＴＡＣＧＴＡＧＡＴＡＡＧＴＡＧＣＡＴＧＧＣＧＧＧＴＴＡＡＴＣＡＴＴＡＡＣＴＡＣＡＡＧＧＡＡＣＣＣＣＴＡＧＴＧＡＴＧＧＡＧＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＧＧＣＧＡＣＣＡＡＡＧＧＴＣＧＣＣＣＧＡＣＧＣＣＣＧＧＧＣＴＴＴＧＣＣＣＧＧＧＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣ
（配列番号７）

一部の実施形態では、ベクターゲノムは、例えば、以下と、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一である一つ以上のフィラー（ｆｉｌｌｅｒ）配列を含む。
ＧＣＧＧＣＡＡＴＴＣＡＧＴＣＧＡＴＡＡＣＴＡＴＡＡＣＧＧＴＣＣＴＡＡＧＧＴＡＧＣＧＡＴＴＴＡＡＡＴＡＣＧＣＧＣＴＣＴＣＴＴＡＡＧＧＴＡＧＣＣＣＣＧＧＧＡＣＧＣＧＴＣＡＡＴＴＧＡＣＴＡＣＡＡＡＣＣＧＡＧＴＡＴＣＴＧＣＡＧＡＧＧＧＣＣＣＴＧＣＧＴＡＴＧ（配列番号３５）
ＣＴＴＣＴＧＡＧＧＣＧＧＡＡＡＧＡＡＣＣＡＧＡＴＣＣＴＣＴＣＴＴＡＡＧＧＴＡＧＣＡＴＣＧＡＧＡＴＴＴＡＡＡＴＴＡＧＧＧＡＴＡＡＣＡＧＧＧＴＡＡＴＧＧＣＧＣＧＧＧＣＣＧＣ（配列番号３６）
ＧＴＴＡＣＣＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＣＡＧＴＧＧＣＡＣＡＴＴＴＣＴＧＣＴＣＡＣＴＧＣＡＡＣＣＴＣＣＴＣＣＴＣＣＣＴＧＧＧＴＴＣ（配列番号３７）

プロモーター
一部の実施形態では、ＧＬＵＴ１タンパク質またはその機能的バリアントをコードするポリヌクレオチド配列は、プロモーターに動作可能に連結される。

本開示は、様々なプロモーターの使用を企図する。本開示の実施形態で有用なプロモーターとしては、限定されないが、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター、またはＣＭＶエンハンサーと、ニワトリベータ－アクチンプロモーターおよびウサギベータ－グロビン遺伝子の一部（ＣＡＧ）とから構成されるプロモーター配列が挙げられる。場合によっては、プロモーターは合成プロモーターであってもよい。合成プロモーターの例は、Ｓｃｈｌａｂａｃｈ ｅｔ ａｌ ＰＮＡＳ ＵＳＡ １０７（６）：２５３８－４３（２０１０）により提供される。一部の実施形態では、プロモーターは、以下と、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるポリヌクレオチド配列を含む。
ＡＣＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＴＧＡＣＣＧＣＣＣＡＡＣＧＡＣＣＣＣＣＧＣＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＡＡＴＧＡＣＧＴＡＴＧＴＴＣＣＣＡＴＡＧＴＡＡＣＧＣＣＡＡＴＡＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＧＴＧＧＡＧＴＡＴＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＣＴＧＣＣＣＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＴＡＴＣＡＴＡＴＧＣＣＡＡＧＴＡＣＧＣＣＣＣＣＴＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＡＴＴＡＴＧＣＣＣＡＧＴＡＣＡＴＧＡＣＣＴＴＡＴＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＴＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＴＡＣＧＴＡＴＴＡＧＴＣＡＴＣＧＣＴＡＴＴＡＣＣＡＴＧＧＴＣＧＡＧＧＴＧＡＧＣＣＣＣＡＣＧＴＴＣＴＧＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＣＣＣＡＴＣＴＣＣＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＣＣＣＣＡＡＴＴＴＴＧＴＡＴＴＴＡＴＴＴＡＴＴＴＴＴＴＡＡＴＴＡＴＴＴＴＧＴＧＣＡＧＣＧＡＴＧＧＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＡＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＡＧＡＧＧＴＧＣＧＧＣＧＧＣＡＧＣＣＡＡＴＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＧＣＴＣＣＧＡＡＡＧＴＴＴＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＴＡＴＡＡＡＡＡＧＣＧＡＡＧＣＧＣＧＣＧＧＣＧＧＧＣＧＧ
（配列番号３８）

一部の実施形態では、ＧＬＵＴ１タンパク質、またはその機能的バリアントをコードするポリヌクレオチド配列は、誘導性プロモーターに動作可能に連結される。誘導性プロモーターは、薬剤の添加若しくは蓄積に応答して、または薬剤の除去、分解、若しくは希釈に応答して、ポリヌクレオチド配列を転写的に発現させるか、または転写的に発現させないように構成され得る。薬剤は薬物であってもよい。薬剤は、テトラサイクリンまたはその誘導体の一つであってもよく、これには限定されないが、ドキシサイクリンが含まれる。場合によっては、誘導性プロモーターは、ｔｅｔ－ｏｎプロモーター、ｔｅｔ－ｏｆｆプロモーター、化学的に調節されたプロモーター、物理的に調節されたプロモーター（すなわち、光の存在若しくは不在、または低温若しくは高温に応答するプロモーター）である。誘導性プロモーターには、重金属イオン誘導性プロモーター（マウス乳腺腫瘍ウイルス（ｍＭＴＶ）プロモーターまたは様々な成長ホルモンプロモーターなど）、およびＴ７ ＲＮＡポリメラーゼの存在下で活性なＴ７ファージ由来のプロモーターが含まれる。誘導性プロモーターのこのリストは非限定的である。

場合によっては、プロモーターは、非神経細胞よりもニューロンで発現を駆動することができるプロモーターなどの組織特異的プロモーターである。一部の実施形態では、組織特異的プロモーターは、ニューロン特異的プロモーターである。一部の実施形態では、組織特異的プロモーターは、ｈＳＹＮ１（ヒトシナプシン）、ＩＮＡ（アルファインターネキシン）、ＮＥＳ（ネスチン）、ＴＨ（チロシンヒドロキシラーゼ）、ＦＯＸＡ２（フォークヘッドボックスＡ２）、ＣａＭＫＩＩ（カルモジュリン依存性タンパク質キナーゼＩＩ）、およびＮＳＥ（ニューロン特異的エノラーゼ）を含むがこれに限定されない、任意の様々なニューロン特異的プロモーターから選択される。場合によっては、プロモーターはユビキタスプロモーターである。「ユビキタスプロモーター」は、実験条件または臨床条件下で組織特異的ではないプロモーターを指す。場合によっては、ユビキタスプロモーターは、ＣＭＶ、ＣＡＧ、ＵＢＣ、ＰＧＫ、ＥＦ１－アルファ、ＧＡＰＤＨ、ＳＶ４０、ＨＢＶ、ニワトリベータ－アクチン、およびヒトベータ－アクチンプロモーターのうちのいずれか一つである。

一部の実施形態では、プロモーター配列は、表３から選択される。一部の実施形態では、プロモーターは、配列番号１～３および３９～５１と、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるポリヌクレオチド配列を含む。

（表３）

好ましい実施形態では、ベクターゲノムは、配列番号１と、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるポリヌクレオチド配列を含む。好ましい実施形態では、ベクターゲノムは、配列番号２と、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるポリヌクレオチド配列を含む。好ましい実施形態では、ベクターゲノムは、配列番号３と、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるポリヌクレオチド配列を含む。

プロモーターの更なる例示的な例は、シミアンウイルス４０由来のＳＶ４０後期プロモーター、バキュロウイルス多面体エンハンサー／プロモーターエレメント、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ＨＳＶ ｔｋ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）由来の最初期プロモーター、およびＬＴＲエレメントを含む様々なレトロウイルスプロモーターである。多種多様な他のプロモーターが既知であり、当技術分野で一般的に利用可能であり、多くのそのようなプロモーターの配列は、ＧｅｎＢａｎｋデータベースなどの配列データベースで利用可能である。

その他の調節エレメント
場合によっては、本開示のベクターは、エンハンサー、イントロン、ポリＡシグナル、２Ａペプチドコード配列、ＷＰＲＥ（ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント）、およびＨＰＲＥ（Ｂ型肝炎転写後調節エレメント）からなる群から選択される一つまたは複数の調節エレメントを更に含む。

一部の実施形態では、ベクターはＣＭＶエンハンサーを含む。

特定の実施形態では、ベクターは、一つまたは複数のエンハンサーを含む。特定の実施形態では、エンハンサーは、ＣＭＶエンハンサー配列、ＧＡＰＤＨエンハンサー配列、β－アクチンエンハンサー配列、またはＥＦ１－αエンハンサー配列である。前述の配列は、当該技術分野で公知である。例えば、ＣＭＶ最初期（ＩＥ）エンハンサーの配列は、以下のとおりである。
ＣＧＴＴＡＣＡＴＡＡＣＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＴＧＡＣＣＧＣＣＣＡＡＣＧＡＣＣＣＣＣＧＣＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＡＡＴＧＡＣＧＴＡＴＧＴＴＣＣＣＡＴＡＧＴＡＡＣＧＣＣＡＡＴＡＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＧＴＧＧＡＧＴＡＴＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＣＴＧＣＣＣＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＴＡＴＣＡＴＡＴＧＣＣＡＡＧＴＡＣＧＣＣＣＣＣＴＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＡＴＴＡＴＧＣＣＣＡＧＴＡＣＡＴＧＡＣＣＴＴＡＴＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＴＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＴＡＣＧＴＡＴＴＡＧＴＣＡＴＣＧＣＴＡＴＴＡＣＣＡＴＧ
（配列番号５２）

特定の実施形態では、ベクターは、一つまたは複数のイントロンを含む。特定の実施形態では、イントロンは、ウサギグロビンイントロン配列、ニワトリβ－アクチンイントロン配列、合成イントロン配列、またはＥＦ１－αイントロン配列である。

ある特定の実施形態では、ベクターはポリＡ配列を含む。特定の実施形態では、ポリＡ配列は、ウサギグロビンポリＡ配列、ヒト成長ホルモンポリＡ配列、ウシ成長ホルモンポリＡ配列、ＰＧＫポリＡ配列、ＳＶ４０ポリＡ配列、またはＴＫポリＡ配列である。一部の実施形態では、ポリＡシグナルは、ウシ成長ホルモンポリアデニル化シグナル（ｂＧＨｐＡ）であってもよい。

特定の実施形態では、ベクターは、一つまたは複数の転写物安定化エレメントを含む。特定の実施形態では、転写物安定化エレメントは、ＷＰＲＥ配列、ＨＰＲＥ配列、足場付着領域、３’ＵＴＲ、または５’ＵＴＲである。特定の実施形態では、ベクターは、５’ＵＴＲおよび３’ＵＴＲの両方を含む。

一部の実施形態では、ベクターは、表４から選択される５’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む。一部の実施形態では、ベクターゲノムは、配列番号５３～６１のいずれか一つと、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるポリヌクレオチド配列を含む。

（表４）

一部の実施形態では、ベクターは、表５から選択される３’非翻訳領域を含む。一部の実施形態では、ベクターゲノムは、配列番号６２～７０のいずれか一つと、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるポリヌクレオチド配列を含む。

（表５）

一部の実施形態では、ベクターは、表６から選択されるポリアデニル化（ポリＡ）シグナルを含む。一部の実施形態では、ポリＡシグナルは、配列番号７１～７５のいずれか一つと、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるポリヌクレオチド配列を含む。

（表６）

例示的ベクターゲノムは、配列番号１７～２５として提供される図２～８に示される。各配列の大文字の部分は、発現カセット（配列番号８～１６、配列番号９７、配列番号９９、および配列番号１０１）である。一部の実施形態では、ベクターゲノムは、任意選択的に小文字でＩＴＲ配列を有するまたは有さない、配列番号８～１６、配列番号９７、配列番号９９、および配列番号１０１のいずれか一つと、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を共有するポリヌクレオチド配列を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。コード配列は下線付きである。発現カセットは大文字である。

アデノ随伴ウイルスベクター
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）は複製欠損パルボウイルスであり、その一本鎖ＤＮＡゲノムは約４．７ｋｂの長さであり、二つの約１４５ヌクレオチド逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む。ＡＡＶには複数の既知のバリアントがあり、抗原エピトープによって分類される場合、血清型と呼ばれることもある。ＡＡＶ血清型のゲノムのヌクレオチド配列は既知である。例えば、ＡＡＶ－１の全ゲノムは、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＣ＿００２０７７で提供され、ＡＡＶ－２の全ゲノムは、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＣ＿００１４０１およびＳｒｉｖａｓｔａｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，４５：５５５－５６４（１９８３）で提供され、ＡＡＶ－３の全ゲノムは、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＣ＿１８２９で提供され、ＡＡＶ－４の全ゲノムは、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＣ＿００１８２９で提供され、ＡＡＶ－５のゲノムは、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＦ０８５７１６で提供され、ＡＡＶ－６の全ゲノムは、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＣ＿００ １８６２で提供され、ＡＡＶ－７およびＡＡＶ－８ゲノムの少なくとも一部は、それぞれＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＸ７５３２４６およびＡＸ７５３２４９で提供され、ＡＡＶ－９のゲノムは、Ｇａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７８：６３８１－６３８８（２００４）で提供され、ＡＡＶ－１０のゲノムはＭｏｌ．Ｔｈｅｒ．，１３（１）：６７－７６ （２００６）で提供され、ＡＡＶ－１１ゲノムはＶｉｒｏｌｏｇｙ，３３０（２）：３７５－３８３（２００４）で提供される。ＡＡＶｒｈ．７４ゲノムの配列は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第９，４３４，９２８号で提供されている。ウイルスＤＮＡ複製（ｒｅｐ）、キャプシド形成／パッケージング、および宿主細胞染色体組込みを導くシス作用配列は、ＡＡＶ ＩＴＲ内に含まれる。三つのＡＡＶプロモーター（それらの相対マップ位置からｐ５、ｐ１９、およびｐ４０と命名）は、ｒｅｐ遺伝子およびｃａｐ遺伝子をコードする二つのＡＡＶ内部オープンリーディングフレームの発現を駆動する。単一のＡＡＶイントロン（ヌクレオチド２１０７および２２２７）のディファレンシャルスプライシング（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｓｐｌｉｃｉｎｇ）と連動して二つのｒｅｐプロモーター（ｐ５およびｐ１９）は、ｒｅｐ遺伝子から四つのｒｅｐタンパク質（ｒｅｐ７８、ｒｅｐ６８、ｒｅｐ５２、およびｒｅｐ４０）を産生する。Ｒｅｐタンパク質は、ウイルスゲノムの複製を最終的に担う複数の酵素特性を有する。ｃａｐ遺伝子は、ｐ４０プロモーターから発現され、三つのキャプシドタンパク質ＶＰ１，ＶＰ２、およびＶＰ３をコードする。選択的スプライシングおよび非コンセンサス翻訳開始部位は、三つの関連するキャプシドタンパク質の産生に関与する。単一のコンセンサスポリアデニル化部位は、ＡＡＶゲノムのマップ位置９５にある。ＡＡＶのライフサイクルと遺伝学は、Ｍｕｚｙｃｚｋａ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｔｏｐｉｃｓ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１５８：９７－１２９（１９９２）で概説されている。

ＡＡＶは、例えば遺伝子療法などで外来ＤＮＡを細胞に送達するためのベクターとして魅力的な独自の特徴を有している。培養中の細胞のＡＡＶ感染は非細胞変性であり、ヒトおよび他の動物の自然感染は無症状および無症候性である。更に、ＡＡＶは多くの哺乳動物細胞に感染し、インビボで多くの異なる組織を標的化する可能性を許容する。更に、ＡＡＶはゆっくりと分裂する細胞と分裂しない細胞に形質導入し、転写的に活性な核エピソーム（染色体外エレメント）として、これらの細胞の生存期間に本質的に存続することができる。ＡＡＶプロウイルスゲノムは、プラスミド内にクローン化ＤＮＡとして挿入され、これにより組換えゲノムの構築が実現可能となる。更に、ＡＡＶ複製およびゲノムのキャプシド化を指示するシグナルは、ＡＡＶゲノムのＩＴＲ内に含まれているため、ゲノムの内部約４．３ｋｂの一部またはすべて（複製および構造キャプシドタンパク質、ｒｅｐ－ｃａｐをコードする）は、外来ＤＮＡで置換されてもよい。ＡＡＶベクターを生成するために、ｒｅｐタンパク質およびｃａｐタンパク質をトランスで提供してもよい。ＡＡＶのもう一つの重要な特徴は、ＡＡＶが非常に安定した強力なウイルスであることである。アデノウイルスの不活化に使用される条件（５６°～６５℃で数時間）に容易に耐え、ＡＡＶの低温保存の重要性を軽減する。ＡＡＶは凍結乾燥することもできる。最後に、ＡＡＶ感染細胞は重複感染に耐性がない。

ｒＡＡＶゲノム中のＡＡＶ ＤＮＡは、組換えウイルスが誘導され得る任意のＡＡＶバリアントまたは血清型由来であってもよく、ＡＡＶバリアントまたは血清型には、ＡＡＶ－１、 ＡＡＶ－２、ＡＡＶ－３、ＡＡＶ－４、ＡＡＶ－５、ＡＡＶ－６、ＡＡＶ－７、ＡＡＶ－８、ＡＡＶ－９、ＡＡＶ－１０、ＡＡＶ－１１、ＡＡＶ－１２、ＡＡＶ－１３、およびＡＡＶｒｈ１０が含まれるが、これらに限定されない。シュードタイプ化されたｒＡＡＶの製造は、例えば、ＷＯ０１／８３６９２に開示されている。キャプシド変異を伴うｒＡＡＶなどの他のタイプのｒＡＡＶバリアントも意図されている。例えば、Ｍａｒｓｉｃ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，２２（１１）：１９００－１９０９（２０１４）を参照されたい。様々なＡＡＶ血清型のゲノムのヌクレオチド配列は、当該技術分野で公知である。

場合によっては、ｒＡＡＶは自己相補的なゲノムを含む。本明細書で定義されるように、「自己相補的」または「二本鎖」ゲノムを含むｒＡＡＶは、ＭｃＣａｒｔｙ ｅｔ ａｌ．に記載されるように、ｒＡＡＶのコード領域が分子内二本鎖ＤＮＡ鋳型を形成するように構成されるように操作されたｒＡＡＶを指す。自己相補的な組換えアデノ随伴ウイルス（ｓｃＡＡＶ）ベクターは、ＤＮＡ合成とは独立した効率的な形質導入を促進する。Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ．８（１６）：１２４８－５４（２００１）。本開示は、感染（形質導入のような）時に、ｒＡＡＶゲノムの第二の鎖の細胞介在性合成を待つのではなく、ｓｃＡＡＶの二つの相補的な半分が、すぐに複製及び転写ができる一つの二重鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）ユニットを形成するので、場合によっては、自己相補的ゲノムを含むｒＡＡＶの使用を企図する。ｒＡＡＶに見られる完全コード容量（４．７～６ｋｂ）の代わりに、自己相補的ゲノムを含むｒＡＡＶは、その量の約半分（約２．４ｋｂ）しか保持できないことが理解されよう。

他の場合では、ｒＡＡＶベクターは一本鎖のゲノムを含む。本明細書で定義されるように、「単一標準」ゲノムは、自己相補的ではないゲノムを指す。ほとんどの場合、非組換えＡＡＶは一本鎖ＤＮＡゲノムを有している。ｒＡＡＶは、細胞の効率的な形質導入を達成するためにｓｃＡＡＶであるべきといういくつかの兆候があった。しかしながら、本開示は、ｒＡＡＶベクターの他の遺伝子改変が、標的細胞において最適な遺伝子転写を得るために有益であり得るという理解の下で、自己相補的ゲノムではなく、一本鎖ゲノムを有するかもしれないｒＡＡＶベクターを企図している。場合によっては、本開示は、マウス眼の前眼部への効率的な遺伝子導入を達成できる一本鎖ｒＡＡＶベクターに関する。Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｓｉｎｇｌｅ ｓｔｒａｎｄｅｄ ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ ａｃｈｉｅｖｅｓ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｔｏ ａｎｔｅｒｉｏｒ ｓｅｇｍｅｎｔ ｉｎ ｔｈｅ ｍｏｕｓｅ ｅｙｅ．ＰＬｏＳ ＯＮＥ １２（８）：ｅ０１８２４７３（２０１７）を参照されたい。

場合によっては、ｒＡＡＶベクターは、血清型ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、 ＡＡＶｒｈ１０、又はＡＡＶｒｈ７４のベクターである。シュードタイプ化されたｒＡＡＶの産生は、例えば、ＷＯ ０１／８３６９２に開示されている。キャプシド変異を伴うｒＡＡＶなどの他のタイプのｒＡＡＶバリアントも意図されている。例えば、Ｍａｒｓｉｃ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，２２（１１）：１９００－１９０９（２０１４）を参照されたい。場合によっては、ｒＡＡＶベクターは血清型ＡＡＶ９のベクターである。いくつかの実施形態では、当該ｒＡＡＶベクターは、血清型ＡＡＶ９のベクターであり、一本鎖ゲノムを含む。いくつかの実施形態では、当該ｒＡＡＶベクターは、血清型ＡＡＶ９のベクターであり、自己相補的ゲノムを含む。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、ＡＡＶ２の逆位末端反復（ＩＴＲ）の配列を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶベクターはＡＡＶ２ゲノムを含み、その結果、ｒＡＡＶベクターはＡＡＶ－２／９ベクター、ＡＡＶ－２／６ベクター、またはＡＡＶ－２／８ベクターである。

最も良く知られているＡＡＶに対する完全長配列およびキャプシド遺伝子の配列は、米国特許第８，５２４，４４６号に提供され、その全体が本明細書に組み込まれる。

ＡＡＶベクターは、野生型ＡＡＶ配列を含んでよく、または野生型ＡＡＶ配列に対する一つ以上の改変を含んでもよい。ある特定の実施形態では、ＡＡＶベクターは、キャプシドタンパク質、例えば、ＶＰ１，ＶＰ２および／またはＶＰ３内に、例えば置換、欠失、または挿入などの一つ以上のアミノ酸改変を含む。特定の実施形態では、改変は、ＡＡＶベクターが対象に提供されるとき、免疫原性の低下をもたらす。

ｒＡＡＶのキャプシドタンパク質は、ｒＡＡＶが内皮細胞、またはより具体的には内皮先端細胞などの対象の特定標的組織に標的化されるように改変されてもよい。一部の実施形態ではは、ｒＡＡＶは対象の脳室内に直接注射される。

一部の実施形態では、ｒＡＡＶビリオンは、ＡＡＶ２ ｒＡＡＶビリオンである。キャプシドの多くは、ＡＡＶ２キャプシドまたはその機能的バリアントである。一部の実施形態では、ＡＡＶ２キャプシドは、例えば、以下などの参照ＡＡＶ２キャプシドと少なくとも９８％、９９％、または１００％の同一性を共有する。
ＭＡＡＤＧＹＬＰＤＷＬＥＤＴＬＳＥＧＩＲＱＷＷＫＬＫＰＧＰＰＰＰＫＰＡＥＲＨＫＤＤＳＲＧＬＶＬＰＧＹＫＹＬＧＰＦＮＧＬＤＫＧＥＰＶＮＥＡＤＡＡＡＬＥＨＤＫＡＹＤＲＱＬＤＳＧＤＮＰＹＬＫＹＮＨＡＤＡＥＦＱＥＲＬＫＥＤＴＳＦＧＧＮＬＧＲＡＶＦＱＡＫＫＲＶＬＥＰＬＧＬＶＥＥＰＶＫＴＡＰＧＫＫＲＰＶＥＨＳＰＶＥＰＤＳＳＳＧＴＧＫＡＧＱＱＰＡＲＫＲＬＮＦＧＱＴＧＤＡＤＳＶＰＤＰＱＰＬＧＱＰＰＡＡＰＳＧＬＧＴＮＴＭＡＴＧＳＧＡＰＭＡＤＮＮＥＧＡＤＧＶＧＮＳＳＧＮＷＨＣＤＳＴＷＭＧＤＲＶＩＴＴＳＴＲＴＷＡＬＰＴＹＮＮＨＬＹＫＱＩＳＳＱＳＧＡＳＮＤＮＨＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＣＨＦＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＮＷＧＦＲＰＫＲＬＮＦＫＬＦＮＩＱＶＫＥＶＴＱＮＤＧＴＴＴＩＡＮＮＬＴＳＴＶＱＶＦＴＤＳＥＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＱＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＶＰＱＹＧＹＬＴＬＮＮＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＴＦＳＹＴＦＥＤＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＳＲＴＮＴＰＳＧＴＴＴＱＳＲＬＱＦＳＱＡＧＡＳＤＩＲＤＱＳＲＮＷＬＰＧＰＣＹＲＱＱＲＶＳＫＴＳＡＤＮＮＮＳＥＹＳＷＴＧＡＴＫＹＨＬＮＧＲＤＳＬＶＮＰＧＰＡＭＡＳＨＫＤＤＥＥＫＦＦＰＱＳＧＶＬＩＦＧＫＱＧＳＥＫＴＮＶＤＩＥＫＶＭＩＴＤＥＥＥＩＲＴＴＮＰＶＡＴＥＱＹＧＳＶＳＴＮＬＱＲＧＮＲＱＡＡＴＡＤＶＮＴＱＧＶＬＰＧＭＶＷＱＤＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＨＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＬＫＨＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＮＰＳＴＴＦＳＡＡＫＦＡＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＩＱＹＴＳＮＹＮＫＳＶＮＶＤＦＴＶＤＴＮＧＶＹＳＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＮＬ
（配列番号７６）

一部の実施形態では、ｒＡＡＶビリオンは、ＡＡＶ９ ｒＡＡＶビリオンである。キャプシドの多くは、ＡＡＶ９キャプシドまたはその機能的バリアントである。一部の実施形態では、ＡＡＶ９キャプシドは、例えば、以下などの参照ＡＡＶ９キャプシドと少なくとも９８％、９９％、または１００％の同一性を共有する。
ＭＡＡＤＧＹＬＰＤＷＬＥＤＮＬＳＥＧＩＲＥＷＷＡＬＫＰＧＡＰＱＰＫＡＮＱＱＨＱＤＮＡＲＧＬＶＬＰＧＹＫＹＬＧＰＧＮＧＬＤＫＧＥＰＶＮＡＡＤＡＡＡＬＥＨＤＫＡＹＤＱＱＬＫＡＧＤＮＰＹＬＫＹＮＨＡＤＡＥＦＱＥＲＬＫＥＤＴＳＦＧＧＮＬＧＲＡＶＦＱＡＫＫＲＬＬＥＰＬＧＬＶＥＥＡＡＫＴＡＰＧＫＫＲＰＶＥＱＳＰＱＥＰＤＳＳＡＧＩＧＫＳＧＡＱＰＡＫＫＲＬＮＦＧＱＴＧＤＴＥＳＶＰＤＰＱＰＩＧＥＰＰＡＡＰＳＧＶＧＳＬＴＭＡＳＧＧＧＡＰＶＡＤＮＮＥＧＡＤＧＶＧＳＳＳＧＮＷＨＣＤＳＱＷＬＧＤＲＶＩＴＴＳＴＲＴＷＡＬＰＴＹＮＮＨＬＹＫＱＩＳＮＳＴＳＧＧＳＳＮＤＮＡＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＣＨＦＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＮＷＧＦＲＰＫＲＬＮＦＫＬＦＮＩＱＶＫＥＶＴＤＮＮＧＶＫＴＩＡＮＮＬＴＳＴＶＱＶＦＴＤＳＤＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＥＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＩＰＱＹＧＹＬＴＬＮＤＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＱＦＳＹＥＦＥＮＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＳＫＴＩＮＧＳＧＱＮＱＱＴＬＫＦＳＶＡＧＰＳＮＭＡＶＱＧＲＮＹＩＰＧＰＳＹＲＱＱＲＶＳＴＴＶＴＱＮＮＮＳＥＦＡＷＰＧＡＳＳＷＡＬＮＧＲＮＳＬＭＮＰＧＰＡＭＡＳＨＫＥＧＥＤＲＦＦＰＬＳＧＳＬＩＦＧＫＱＧＴＧＲＤＮＶＤＡＤＫＶＭＩＴＮＥＥＥＩＫＴＴＮＰＶＡＴＥＳＹＧＱＶＡＴＮＨＱＳＡＱＡＱＡＱＴＧＷＶＱＮＱＧＩＬＰＧＭＶＷＱＤＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＮＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＭＫＨＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＤＰＰＴＡＦＮＫＤＫＬＮＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＩＱＹＴＳＮＹＹＫＳＮＮＶＥＦＡＶＮＴＥＧＶＹＳＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＮＬ
（配列番号７７）

一部の実施形態では、ｒＡＡＶビリオンは、ＡＡＶ６ ｒＡＡＶビリオンである。キャプシドの多くは、ＡＡＶ６キャプシドまたはその機能的バリアントである。一部の実施形態では、ＡＡＶ６キャプシドは、例えば、以下などの参照ＡＡＶ６キャプシドと少なくとも９８％、９９％、または１００％の同一性を共有する。
ＭＡＡＤＧＹＬＰＤＷＬＥＤＮＬＳＥＧＩＲＥＷＷＤＬＫＰＧＡＰＫＰＫＡＮＱＱＫＱＤＤＧＲＧＬＶＬＰＧＹＫＹＬＧＰＦＮＧＬＤＫＧＥＰＶＮＡＡＤＡＡＡＬＥＨＤＫＡＹＤＱＱＬＫＡＧＤＮＰＹＬＲＹＮＨＡＤＡＥＦＱＥＲＬＱＥＤＴＳＦＧＧＮＬＧＲＡＶＦＱＡＫＫＲＶＬＥＰＦＧＬＶＥＥＧＡＫＴＡＰＧＫＫＲＰＶＥＱＳＰＱＥＰＤＳＳＳＧＩＧＫＴＧＱＱＰＡＫＫＲＬＮＦＧＱＴＧＤＳＥＳＶＰＤＰＱＰＬＧＥＰＰＡＴＰＡＡＶＧＰＴＴＭＡＳＧＧＧＡＰＭＡＤＮＮＥＧＡＤＧＶＧＮＡＳＧＮＷＨＣＤＳＴＷＬＧＤＲＶＩＴＴＳＴＲＴＷＡＬＰＴＹＮＮＨＬＹＫＱＩＳＳＡＳＴＧＡＳＮＤＮＨＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＣＨＦＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＮＷＧＦＲＰＫＲＬＮＦＫＬＦＮＩＱＶＫＥＶＴＴＮＤＧＶＴＴＩＡＮＮＬＴＳＴＶＱＶＦＳＤＳＥＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＱＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＩＰＱＹＧＹＬＴＬＮＮＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＴＦＳＹＴＦＥＤＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＮＲＴＱＮＱＳＧＳＡＱＮＫＤＬＬＦＳＲＧＳＰＡＧＭＳＶＱＰＫＮＷＬＰＧＰＣＹＲＱＱＲＶＳＫＴＫＴＤＮＮＮＳＮＦＴＷＴＧＡＳＫＹＮＬＮＧＲＥＳＩＩＮＰＧＴＡＭＡＳＨＫＤＤＫＤＫＦＦＰＭＳＧＶＭＩＦＧＫＥＳＡＧＡＳＮＴＡＬＤＮＶＭＩＴＤＥＥＥＩＫＡＴＮＰＶＡＴＥＲＦＧＴＶＡＶＮＬＱＳＳＳＴＤＰＡＴＧＤＶＨＶＭＧＡＬＰＧＭＶＷＱＤＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＨＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＬＫＨＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＮＰＰＡＥＦＳＡＴＫＦＡＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＶＱＹＴＳＮＹＡＫＳＡＮＶＤＦＴＶＤＮＮＧＬＹＴＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＰＬ
（配列番号７８）

一部の実施形態では、ｒＡＡＶビリオンは、ＡＡＶｒｈ．１０ ｒＡＡＶビリオンである。キャプシドの多くは、ＡＡＶｒｈ．１０キャプシドまたはその機能的バリアントである。一部の実施形態では、ＡＡＶｒｈ．１０キャプシドは、例えば、以下などの参照ＡＡＶｒｈ．１０キャプシドと少なくとも９８％、９９％、または１００％の同一性を共有する。
ＭＡＡＤＧＹＬＰＤＷＬＥＤＮＬＳＥＧＩＲＥＷＷＤＬＫＰＧＡＰＫＰＫＡＮＱＱＫＱＤＤＧＲＧＬＶＬＰＧＹＫＹＬＧＰＦＮＧＬＤＫＧＥＰＶＮＡＡＤＡＡＡＬＥＨＤＫＡＹＤＱＱＬＫＡＧＤＮＰＹＬＲＹＮＨＡＤＡＥＦＱＥＲＬＱＥＤＴＳＦＧＧＮＬＧＲＡＶＦＱＡＫＫＲＶＬＥＰＬＧＬＶＥＥＧＡＫＴＡＰＧＫＫＲＰＶＥＰＳＰＱＲＳＰＤＳＳＴＧＩＧＫＫＧＱＱＰＡＫＫＲＬＮＦＧＱＴＧＤＳＥＳＶＰＤＰＱＰＩＧＥＰＰＡＧＰＳＧＬＧＳＧＴＭＡＡＧＧＧＡＰＭＡＤＮＮＥＧＡＤＧＶＧＳＳＳＧＮＷＨＣＤＳＴＷＬＧＤＲＶＩＴＴＳＴＲＴＷＡＬＰＴＹＮＮＨＬＹＫＱＩＳＮＧＴＳＧＧＳＴＮＤＮＴＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＣＨＦＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＮＷＧＦＲＰＫＲＬＮＦＫＬＦＮＩＱＶＫＥＶＴＱＮＥＧＴＫＴＩＡＮＮＬＴＳＴＩＱＶＦＴＤＳＥＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＱＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＩＰＱＹＧＹＬＴＬＮＮＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＥＦＳＹＱＦＥＤＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＳＲＴＱＳＴＧＧＴＡＧＴＱＱＬＬＦＳＱＡＧＰＮＮＭＳＡＱＡＫＮＷＬＰＧＰＣＹＲＱＱＲＶＳＴＴＬＳＱＮＮＮＳＮＦＡＷＴＧＡＴＫＹＨＬＮＧＲＤＳＬＶＮＰＧＶＡＭＡＴＨＫＤＤＥＥＲＦＦＰＳＳＧＶＬＭＦＧＫＱＧＡＧＫＤＮＶＤＹＳＳＶＭＬＴＳＥＥＥＩＫＴＴＮＰＶＡＴＥＱＹＧＶＶＡＤＮＬＱＱＱＮＡＡＰＩＶＧＡＶＮＳＱＧＡＬＰＧＭＶＷＱＮＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＮＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＬＫＨＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＤＰＰＴＴＦＳＱＡＫＬＡＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＩＱＹＴＳＮＹＹＫＳＴＮＶＤＦＡＶＮＴＤＧＴＹＳＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＮＬ
（配列番号７９）

一部の実施形態では、ｒＡＡＶビリオンは、ＡＡＶ８ ｒＡＡＶビリオンである。キャプシドの多くは、ＡＡＶ８キャプシドまたはその機能的バリアントである。一部の実施形態では、ＡＡＶ８キャプシドは、例えば、以下などの参照ＡＡＶ８キャプシドと少なくとも９８％、９９％、または１００％の同一性を共有する。
ＭＡＡＤＧＹＬＰＤＷＬＥＤＮＬＳＥＧＩＲＥＷＷＡＬＫＰＧＡＰＫＰＫＡＮＱＱＫＱＤＤＧＲＧＬＶＬＰＧＹＫＹＬＧＰＦＮＧＬＤＫＧＥＰＶＮＡＡＤＡＡＡＬＥＨＤＫＡＹＤＱＱＬＱＡＧＤＮＰＹＬＲＹＮＨＡＤＡＥＦＱＥＲＬＱＥＤＴＳＦＧＧＮＬＧＲＡＶＦＱＡＫＫＲＶＬＥＰＬＧＬＶＥＥＧＡＫＴＡＰＧＫＫＲＰＶＥＰＳＰＱＲＳＰＤＳＳＴＧＩＧＫＫＧＱＱＰＡＲＫＲＬＮＦＧＱＴＧＤＳＥＳＶＰＤＰＱＰＬＧＥＰＰＡＡＰＳＧＶＧＰＮＴＭＡＡＧＧＧＡＰＭＡＤＮＮＥＧＡＤＧＶＧＳＳＳＧＮＷＨＣＤＳＴＷＬＧＤＲＶＩＴＴＳＴＲＴＷＡＬＰＴＹＮＮＨＬＹＫＱＩＳＮＧＴＳＧＧＡＴＮＤＮＴＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＣＨＦＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＮＷＧＦＲＰＫＲＬＳＦＫＬＦＮＩＱＶＫＥＶＴＱＮＥＧＴＫＴＩＡＮＮＬＴＳＴＩＱＶＦＴＤＳＥＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＱＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＩＰＱＹＧＹＬＴＬＮＮＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＱＦＴＹＴＦＥＤＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＳＲＴＱＴＴＧＧＴＡＮＴＱＴＬＧＦＳＱＧＧＰＮＴＭＡＮＱＡＫＮＷＬＰＧＰＣＹＲＱＱＲＶＳＴＴＴＧＱＮＮＮＳＮＦＡＷＴＡＧＴＫＹＨＬＮＧＲＮＳＬＡＮＰＧＩＡＭＡＴＨＫＤＤＥＥＲＦＦＰＳＮＧＩＬＩＦＧＫＱＮＡＡＲＤＮＡＤＹＳＤＶＭＬＴＳＥＥＥＩＫＴＴＮＰＶＡＴＥＥＹＧＩＶＡＤＮＬＱＱＱＮＴＡＰＱＩＧＴＶＮＳＱＧＡＬＰＧＭＶＷＱＮＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＮＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＬＫＨＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＤＰＰＴＴＦＮＱＳＫＬＮＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＩＱＹＴＳＮＹＹＫＳＴＳＶＤＦＡＶＮＴＥＧＶＹＳＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＮＬ
（配列番号８０）

一部の実施形態では、ｒＡＡＶビリオンは、ＡＡＶｒｈ．７４ ｒＡＡＶビリオンである。キャプシドの多くは、ＡＡＶｒｈ．７４キャプシドまたはその機能的バリアントである。一部の実施形態では、ＡＡＶｒｈ．７４キャプシドは、例えば、以下などの参照ＡＡＶｒｈ．７４キャプシドと少なくとも９８％、９９％、または１００％の同一性を共有する。
ＭＡＡＤＧＹＬＰＤＷＬＥＤＮＬＳＥＧＩＲＥＷＷＤＬＫＰＧＡＰＫＰＫＡＮＱＱＫＱＤＮＧＲＧＬＶＬＰＧＹＫＹＬＧＰＦＮＧＬＤＫＧＥＰＶＮＡＡＤＡＡＡＬＥＨＤＫＡＹＤＱＱＬＱＡＧＤＮＰＹＬＲＹＮＨＡＤＡＥＦＱＥＲＬＱＥＤＴＳＦＧＧＮＬＧＲＡＶＦＱＡＫＫＲＶＬＥＰＬＧＬＶＥＳＰＶＫＴＡＰＧＫＫＲＰＶＥＰＳＰＱＲＳＰＤＳＳＴＧＩＧＫＫＧＱＱＰＡＫＫＲＬＮＦＧＱＴＧＤＳＥＳＶＰＤＰＱＰＩＧＥＰＰＡＧＰＳＧＬＧＳＧＴＭＡＡＧＧＧＡＰＭＡＤＮＮＥＧＡＤＧＶＧＳＳＳＧＮＷＨＣＤＳＴＷＬＧＤＲＶＩＴＴＳＴＲＴＷＡＬＰＴＹＮＮＨＬＹＫＱＩＳＮＧＴＳＧＧＳＴＮＤＮＴＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＣＨＦＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＮＷＧＦＲＰＫＲＬＮＦＫＬＦＮＩＱＶＫＥＶＴＱＮＥＧＴＫＴＩＡＮＮＬＴＳＴＩＱＶＦＴＤＳＥＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＱＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＩＰＱＹＧＹＬＴＬＮＮＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＥＦＳＹＮＦＥＤＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＳＲＴＱＳＴＧＧＴＡＧＴＱＱＬＬＦＳＱＡＧＰＮＮＭＳＡＱＡＫＮＷＬＰＧＰＣＹＲＱＱＲＶＳＴＴＬＳＱＮＮＮＳＮＦＡＷＴＧＡＴＫＹＨＬＮＧＲＤＳＬＶＮＰＧＶＡＭＡＴＨＫＤＤＥＥＲＦＦＰＳＳＧＶＬＭＦＧＫＱＧＡＧＫＤＮＶＤＹＳＳＶＭＬＴＳＥＥＥＩＫＴＴＮＰＶＡＴＥＱＹＧＶＶＡＤＮＬＱＱＱＮＡＡＰＩＶＧＡＶＮＳＱＧＡＬＰＧＭＶＷＱＮＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＮＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＬＫＨＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＤＰＰＴＴＦＮＱＡＫＬＡＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＩＱＹＴＳＮＹＹＫＳＴＮＶＤＦＡＶＮＴＥＧＴＹＳＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＮＬ
（配列番号８１）

一部の実施形態では、ｒＡＡＶビリオンは、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ ｒＡＡＶビリオンまたはその神経栄養性のバリアントであり、例えば、国際特許公開第ＷＯ２０１５／０３８９５８Ａ１号および第ＷＯ２０１７／１００６７１Ａ１号に開示されているものなどであるが、これらに限定されない。例えば、ＡＡＶキャプシドは、配列ＴＬＡＶＰＦＫ（配列番号８３）またはＫＦＰＶＡＬＴ（配列番号８４）からの少なくとも４つの連続アミノ酸を含んでもよく、例えば、ＡＡＶ９のアミノ酸５８８および５８９をコードする配列の間に挿入される。

キャプシドの多くは、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂキャプシドまたはその機能的バリアントである。一部の実施形態では、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂキャプシドは、例えば、以下などの参照ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂキャプシドと少なくとも９８％、９９％、または１００％の同一性を共有する。
ＭＡＡＤＧＹＬＰＤＷＬＥＤＮＬＳＥＧＩＲＥＷＷＡＬＫＰＧＡＰＱＰＫＡＮＱＱＨＱＤＮＡＲＧＬＶＬＰＧＹＫＹＬＧＰＧＮＧＬＤＫＧＥＰＶＮＡＡＤＡＡＡＬＥＨＤＫＡＹＤＱＱＬＫＡＧＤＮＰＹＬＫＹＮＨＡＤＡＥＦＱＥＲＬＫＥＤＴＳＦＧＧＮＬＧＲＡＶＦＱＡＫＫＲＬＬＥＰＬＧＬＶＥＥＡＡＫＴＡＰＧＫＫＲＰＶＥＱＳＰＱＥＰＤＳＳＡＧＩＧＫＳＧＡＱＰＡＫＫＲＬＮＦＧＱＴＧＤＴＥＳＶＰＤＰＱＰＩＧＥＰＰＡＡＰＳＧＶＧＳＬＴＭＡＳＧＧＧＡＰＶＡＤＮＮＥＧＡＤＧＶＧＳＳＳＧＮＷＨＣＤＳＱＷＬＧＤＲＶＩＴＴＳＴＲＴＷＡＬＰＴＹＮＮＨＬＹＫＱＩＳＮＳＴＳＧＧＳＳＮＤＮＡＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＣＨＦＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＮＷＧＦＲＰＫＲＬＮＦＫＬＦＮＩＱＶＫＥＶＴＤＮＮＧＶＫＴＩＡＮＮＬＴＳＴＶＱＶＦＴＤＳＤＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＥＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＩＰＱＹＧＹＬＴＬＮＤＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＱＦＳＹＥＦＥＮＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＳＲＴＩＮＧＳＧＱＮＱＱＴＬＫＦＳＶＡＧＰＳＮＭＡＶＱＧＲＮＹＩＰＧＰＳＹＲＱＱＲＶＳＴＴＶＴＱＮＮＮＳＥＦＡＷＰＧＡＳＳＷＡＬＮＧＲＮＳＬＭＮＰＧＰＡＭＡＳＨＫＥＧＥＤＲＦＦＰＬＳＧＳＬＩＦＧＫＱＧＴＧＲＤＮＶＤＡＤＫＶＭＩＴＮＥＥＥＩＫＴＴＮＰＶＡＴＥＳＹＧＱＶＡＴＮＨＱＳＡＱＴＬＡＶＰＦＫＡＱＡＱＴＧＷＶＱＮＱＧＩＬＰＧＭＶＷＱＤＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＮＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＭＫＨＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＤＰＰＴＡＦＮＫＤＫＬＮＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＩＱＹＴＳＮＹＹＫＳＮＮＶＥＦＡＶＮＴＥＧＶＹＳＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＮＬ
（配列番号８２）

本開示のｒＡＡＶビリオンに使用される更なるＡＡＶキャプシドには、国際特許公開第ＷＯ２００９／０１２１７６Ａ２号および第ＷＯ２０１５／１６８６６６Ａ２号に開示されているものが含まれる。

理論に拘束されるものではないが、本発明者らは、ＡＡＶ９ベクターまたはＡＡＶｒｈ．１０ベクターが、ベクターの広範なＣＮＳ分布を付与するであろうと決定した。理論に拘束されるものではないが、本発明者らはさらに、ＡＡＶ６ベクターが標的内皮細胞にいくらかの特異性を提供し得ると決定した。ＡＡＶ８およびＡＡＶｒｈ．１０を含むがこれに限定されない他のベクター血清型を使用してもよい。

一部の実施形態では、ｒＡＡＶベクターはＡＡＶ２ベクターではない。理論に拘束されるものではないが、本発明者らは、場合によっては、ＡＡＶ２ベクターの使用が、内皮細胞に加えて、または内皮細胞の代わりに神経細胞の形質導入をもたらすと決定した。理論に拘束されるものではないが、本発明者らはさらに、ＣＮＳ内のＡＡＶ２ベクターの広がりは、ヘパラン硫酸プロテオグリカン（ＨＳＰＧ）受容体とのその相互作用によって制限されることを決定した。

医薬組成物およびキット
一態様では、本開示は、本開示のｒＡＡＶビリオンと、一つまたは複数の薬学的に許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む医薬組成物を提供する。

例えば、注射による投与の目的のために、滅菌水溶液などの様々な溶液を使用することができる。このような水溶液は、所望により緩衝されてもよく、液体希釈剤は、生理食塩水またはグルコースによって最初に等張することができる。遊離酸（ＤＮＡは酸性リン酸基を含有する）または薬理学的に許容可能な塩としてのｒＡＡＶの溶液は、例えば０．００１％または０．０１％のＰｏｌｏｘａｍｅｒ １８８などの界面活性剤と好適に混合された水中で調製することができる。ｒＡＡＶの分散体は、グリセロール、液体ポリエチレングリコールおよびその混合物、ならびに油中で調製されてもよい。通常の保存および使用の条件下で、これらの調製物は、微生物の増殖を防ぐための防腐剤を含有する。この関連で、使用される滅菌水性媒体はすべて、当業者に周知の標準技術によって容易に取得可能である。

注射可能な使用に適した医薬品形態としては、これらに限定されないが、滅菌水溶液または分散液、並びに滅菌注射溶液または分散液の即時調製のための滅菌粉末が挙げられる。いずれの場合も、形態は滅菌されており、容易に注射可能な（ｓｙｒｉｎｇａｂｉｌｉｔｙ）程度に流動的でなければならない。製造および保管の条件下で安定であり、細菌および真菌などの微生物の汚染作用に対して保護されていなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）、それらの好適な混合物、および植物油を含有する溶媒または分散媒体であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散体の場合に必要な粒子サイズの維持によって、および界面活性剤の使用によって維持することができる。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどによってもたらされ得る。多くの場合、等張剤、例えば、糖または塩化ナトリウムを含めることが好ましい。注射用組成物の長期間の吸収は、吸収を遅らせる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンの使用によってもたらされ得る。

滅菌注射可能な溶液は、必要に応じて、上記で列挙された様々な他の成分と、適切な溶媒中に必要な量のｒＡＡＶを組み込み、その後に濾過滅菌することにより調製され得る。一般的に、分散剤は、滅菌された活性成分を、基本的な分散媒体および上記で列挙されたものから必要とされる他の成分を含有する滅菌ビヒクルに組み込むことによって調製される。滅菌された注射用溶液の調製のための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、真空乾燥および凍結乾燥技術であり、活性成分に加えて、事前に滅菌濾過された溶液からの任意の追加の所望の成分の粉末が得られる。

別の態様では、本開示は、本開示のｒＡＡＶビリオンと使用説明書とを含む、キットを含む。

使用方法
ある態様において、本開示は、細胞においてＧＬＵＴ１活性を増加させる方法を提供し、この方法は、細胞を本開示のｒＡＡＶと接触させることを含む。別の態様では、本開示は、対象におけるＧＬＵＴ１活性を増加させる方法を提供し、この方法は、本開示のｒＡＡＶに投与することを含む。一部の実施形態では、細胞および／または対象は、ＳＬＣ２Ａ１メッセンジャーＲＮＡまたはＧＬＵＴ１タンパク質の発現レベルおよび／または活性が欠損しており、および／またはＳＬＣ２Ａ１における機能喪失突然変異を含む。細胞は、内皮細胞、例えば、内皮先端細胞であってもよい。

一部の実施形態では、本方法は、内皮先端細胞の正常な機能を回復させる。一部の実施形態では、方法は、細胞培養および／またはインビボでのＧＬＵＴ１トランスポータータンパク質発現レベルを回復させる。一部の実施形態では、本方法は、細胞培養および／またはインビボでの正常なグルコース輸送および代謝（例えば、解糖、乳酸産生）を回復させる。一部の実施形態では、本方法は、中枢神経系（ＣＮＳ）における正常な血管形成および／または微小血管系の発達を回復させる。

治療方法
別の態様では、本開示は、疾患または障害の治療を必要とする対象においてそれを治療する方法を提供し、この方法は、有効量の本開示のｒＡＡＶビリオンを対象に投与することを含む。一部の実施形態では、疾患又は障害は、神経系疾患または障害である。一部の実施形態では、対象は、ＳＬＣ２Ａ１発現または機能における遺伝的破壊に苦しむ。一部の実施形態では、疾患または障害は、ＧＬＵＴ１欠損症症候群（ＧＬＵＴ１ ＤＳ）である。

ＧＬＵＴ１タンパク質のＣＮＳへのＡＡＶ－媒介送達は、寿命を延ばし、神経変性、早期発症発作、発達遅延、後天性小頭症（頭部成長の減速）、複雑な運動の障害（痙縮、運動失調、ジストニア）、発作性眼頭運動、および／または低乳酸および／または脳脊髄液低グルコース濃度（髄液糖減少症）を、予防、減少、軽減、または減退させ得る。一部の実施形態では、本方法は、例えば、新生児、幼児、または年少者の疾患経過の早期での治療を提供する。

本明細書に開示される方法は、脳および／またはＣＮＳにおける効率的な生体分布を提供し得る。それらは、すべての、またはかなりの割合の内皮細胞（例えば、内皮先端細胞）において持続的な発現をもたらし得る。特に、本明細書に開示される方法は、対象の成長および老化を通して、ＧＬＵＴ１タンパク質の長期継続的な発現を提供し得る。

併用療法も本発明によって企図される。本発明の方法の標準的な医学的治療（例えば、コルチコステロイド又は局所的減圧薬）との組み合わせが、新規の療法との組み合わせと同様に、具体的に企図される。場合によっては、対象は、本明細書に記載されるｒＡＡＶの投与に対する免疫反応を防止または低減するためにステロイドおよび／または免疫抑制剤の組み合わせで治療され得る。

治療有効量のｒＡＡＶベクター、例えば、脳室内（ＩＣＶ）または大槽内（ＩＣＭ）注射は、脳重量で、約１ｅ１２ｖｇ／ｋｇ～約５ｅ１２ｖｇ／ｋｇ、または約１ｅ１３ｖｇ／ｋｇ～約５ｅ１３ｖｇ／ｋｇ、または約１ｅ１４ｖｇ／ｋｇ～約５ｅ１４ｖｇ／ｋｇ、または約１ｅ１５ｖｇ／ｋｇ～約５ｅ１５ｖｇ／ｋｇのｒＡＡＶの用量である。本発明はまた、これらの範囲のｒＡＡＶベクターを含む組成物を含む。

例えば、特定の実施形態では、治療有効量のｒＡＡＶベクターは、約１ｅ１０ｖｇ、約２ｅ１０ｖｇ、約３ｅ１０ｖｇ、約４ｅ１０ｖｇ、約５ｅ１０ｖｇ、約６ｅ１０ｖｇ、約７ｅ１０ｖｇ、約８ｅ１０ｖｇ、約９ｅ１０ｖｇ、約１ｅ１２ｖｇ、約２ｅ１２ｖｇ、約３ｅ１２ｖｇ、約４ｅ１２ｖｇ、約４ｅ１３ｖｇ、および４ｅ１４ｖｇの用量である。本発明はまた、これらの用量のｒＡＡＶベクターを含む組成物を含む。

一部の実施形態では、例えば、ＩＣＶ注射が行われる場合、治療有効量のｒＡＡＶベクターは、１ｅ１０ｖｇ／半球～２ｅ１４ｖｇ／半球の範囲、または約１ｅ１０ｖｇ／半球、約１ｅ１１ｖｇ／半球、約１ｅ１２ｖｇ／半球、約１Ｅ１３ｖｇ／半球、または約１ｅ１４ｖｇ／半球の用量である。一部の実施形態では、例えば、ＩＣＭ注射が行われる場合、治療有効量のｒＡＡＶベクターは、合計２ｅ１０ｖｇ～合計２ｅ１４ｖｇの範囲、または合計約２ｅ１０ｖｇ、合計約２ｅ１１ｖｇ、合計約２ｅ１２ｖｇ、合計約２ｅ１３ｖｇ、または合計約２ｅ１４ｖｇの用量である。

一部の実施形態では、治療用組成物は、注入された治療用組成物の体積当たり、約１ｅ９、１ｅ１０、または１ｅ１１を超えるｒＡＡＶベクターのゲノムを含む。実施形態の場合では、治療用組成物は、１ｍＬ当たりおよそ１ｅ１１、１ｅ１２、１ｅ１３、または１ｅ１４を超えるｒＡＡＶベクターのゲノムを含む。ある特定の実施形態では、治療用組成物は、１ｍＬ当たり約１ｅ１４、１ｅ１３または１ｅ１２未満のｒＡＡＶベクターのゲノムを含む。

患者における機能改善、臨床的有用性または有効性のエビデンスは、発作性眼頭運動の分析、発作頻度減少の代替マーカー（全般性強直性間代発作およびミオクロニー発作）、脳脊髄液中の乳酸および／またはグルコース濃度（ＣＳＦ）、発達障害、舞踏病、ジストニア、および小頭症の評価によって評価され得る。認知機能、運動機能、言語機能の測定には、Ｃｏｌｕｍｂｉａ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｏｒｅ、Ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｅｓｔｉｍａｔｅ、Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ、言語・非言語認知能力、視覚と運動の統合、６分間歩行テストなどの標準的な疾患評価尺度を使用する。ピーボディ発達運動尺度２（ＰＤＭＳ－２）およびベイリー乳幼児発達尺度３を含む認知・発達評価を、子供の障害のレベルに応じて適用する。粗大運動機能測定（ＧＦＭＦ－８８）、小児障害評価表（ＰＥＤＩ）。これらの尺度、あるいは類似の尺度、ならびに患者の申告によるＱＯＬに関する成果として、３段階評価（平均持続時間の減少、変化なし、増加）のＣａｒｅｇｉｖｅｒ Ｇｌｏｂａｌ Ｉｍｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｃｈａｎｇｅ ｉｎ Ｓｅｉｚｕｒｅ Ｄｕｒａｔｉｏｎ（ＣＧＩＣＳＤ）、Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ Ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｉｎｖｅｎｔｏｒｙ（ＰｅｄｓＱＬ（商標））およびＶｉｎｅｌａｎｄ Ａｄａｐｔｉｖｅ Ｂｅｈａｖｉｏｒ Ｓｃａｌｅｓ－２ｎｄ などが疾患の構成要素の改善を実証し得る。ベースラインおよび治療後の脳磁気共鳴撮像は、年齢を適合させた患者の対照データおよびＧＬＵＴ１欠損症患者の過去のデータと比較して、患者の年齢に応じた脳容積の改善または正常化を示し得る。

臨床的有用性は、寿命の延長、神経発達の正常化、髄液中のグルコース濃度の正常化、発作性眼頭運動頻度の減少または大きさの減少、てんかん発作活動（ミオクロニー、クローニー、全般性剛直間代性の、および／またはてんかん性の痙攣など）の減少または消失、痙縮、ジストニア、および／または運動失調などの複合運動障害の改善または解消、ならびにＣｏｌｕｍｂｉａ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｏｒｅおよび／または６分間歩行テストの成績の改善または正常化によって確認することができる。神経保護作用および／または神経回復作用の証拠は、先に述べた全ての測定基準および／または磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）において、全体の脳の大きさ、小頭症および／または皮質および／または小脳の萎縮の欠如を特徴づけることにより明らかになり得る。

一部の実施形態では、方法は、内因性Ｇｌｕｔ１プロモーターまたはユビキタスプロモーターを含むベクターを接触させた細胞、または投与された対象の細胞と比較して、細胞によるグルコース取り込みの増加をもたらす。場合によっては、増加は、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％である。場合によっては、増加は、少なくとも１．１倍、少なくとも１．２倍、少なくとも１．３倍、少なくとも１．４倍、少なくとも１．５倍、少なくとも１．６倍、少なくとも１．７倍、または少なくとも１．８倍である。ベクターは、本明細書に開示される任意のベクターであり得る。細胞は、内皮細胞または神経細胞であり得る。例えば、本方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏのいずれにおいても、ヒト脳微小血管系内皮細胞によるグルコースの取り込みを増加させ得る。

組成物の投与
組成物の有効用量の投与は、限定されないが、静脈内、大脳内、髄腔内、大槽内、または脳室内投与を含む、当技術分野の標準的な経路によるものであり得る。場合によっては、投与は、静脈内、脳内、くも膜下腔内、大槽内、または脳室内注射を含む。投与は、トレンデレンブルク傾斜を伴う、又は伴わないくも膜下腔内注射によって行われてもよい。大槽内（ＩＣＭ）送達は、髄腔内（ＩＴ）空間でのカテーテル挿入を介して達成され得る。脳室内注射は、脳磁気共鳴撮像（ＭＲＩ）誘導による脳神経外科標的化を介して達成され得る。

一部の実施形態では、本開示は、有効用量の本発明のｒＡＡＶおよび組成物の全身投与を提供する。例えば、全身投与は、全身が影響を受けるように循環系に投与され得る。全身投与には、注射または点滴による静脈内投与が含まれる。

特に、本発明のｒＡＡＶの投与は、ｒＡＡＶ組換えベクターを動物の標的組織に輸送する任意の物理的方法を使用することによって達成され得る。投与には、以下に限定されないが、中枢神経系（ＣＮＳ）または脳脊髄液（ＣＳＦ）への注射、および／または脳への直接の注射が含まれる。

一部の実施形態では、本開示の方法は、脳室内、大槽内、くも膜下腔内、または脳実質内の送達を含む。注入は、注入ポンプを使用して、専用カニューレ、カテーテル、シリンジ／針を使用して行われてもよい。任意選択的に、注射部位の標的化は、ＭＲＩガイドイメージングを用いて達成されてもよい。投与は、有効量のｒＡＡＶビリオン、またはｒＡＡＶビリオンを含む医薬組成物のＣＮＳへの送達を含み得る。これらは、例えば、片側脳室内注入法、両側脳室内注入法、トレンデレンブルク傾斜手順を伴う大槽内（ｉｎｔｒａｃｉｓｔｅｒｎａｌ ｍａｇｎａ）注入、またはトレンデレンブルク傾斜処置を伴わない大槽内注入、トレンデレンブルク傾斜処置を伴うくも膜下腔内注入、またはトレンデレンブルク傾斜処置を伴わないくも膜下腔内注入を介して達成され得る。本開示の組成物は、更に静脈内投与されてもよい。

ＣＮＳへの直接送達には、脳室内、片側または両側、特定の神経細胞領域、あるいは神経細胞標的を含むより一般的な脳領域を標的とすることが考えられる。個々の患者の脳室内空間、脳領域および／または神経標的の選択、並びにその後のＡＡＶの術中送達は、多数の撮像技術（ＭＲＩ、ＣＴ、ＭＲＩマージと組み合わせたＣＴ）を使用して、任意の数のソフトウェア計画プログラム（例えば、Ｓｔｅａｌｔｈ Ｓｙｓｔｅｍ、Ｃｌｅａｒｐｏｉｎｔ Ｎｅｕｒｏｎａｖｉｇａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ、Ｂｒａｉｎｌａｂ、Ｎｅｕｒｏｉｎｓｐｉｒｅなど）を採用することによって達成することができる。脳室内空間または脳領域の標的化および送達には、標準的な定位固定フレーム（Ｌｅｋｓｅｌｌ、ＣＲＷ）の使用が関与するか、または術中ＭＲＩの有無に関わらず、フレームレスアプローチを使用することができる。ＡＡＶの実際の送達は、ＡＡＶベクターの吸着を防止するために、材料で被覆した内側ルーメンを有する、または有さない針またはカニューレを通した注射による場合がある（例えば、Ｓｍａｒｔｆｌｏｗカニューレ、ＭＲＩ Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｓカニューレ）。送達デバイスは、シリンジと、事前に注入速度と注入量がプログラムされた自動注入ポンプまたはマイクロ注入ポンプからなる。シリンジ／針の組み合わせ、または針のためのガイドカニューレのみは、定位固定フレームと直接インターフェイスで接続されてもよい。注入は、一定の流量、または対流性強化送達による変動速度を含みうる。

実施例１：前臨床生物活性および有効性
組換えＡＡＶビリオンは、図２～８に開示されるベクターゲノムを使用して産生される。これらは、ＧＬＵＴ１欠損疾患の結果として、疾患モデルマウスで評価される。一つのモデルは、ＧＬＵＴ１遺伝子をｆｌｏｘ化し、構成的プロモーターまたは内皮特異的プロモーター（例えば、Ｔｉｅ－２）からＣｒｅ／ｌｏｘを発現する遺伝子改変動物と交配させたものである。得られたマウスは、ＧＬＵＴ１座位でヘテロ接合性ヌルであり、ヒト疾患を模倣する発達表現型を呈する。ＧＬＵＴ１欠損の第二のモデルマウスは、マウスＧＬＵＴ－１遺伝子のプロモーターとエクソン１領域の標的破壊によって作製されたヘテロ接合型ハプロ不全マウス（ＧＬＵＴ－１^＋／－マウス）である。その他の動物モデルとしては、ＧＬＵＴ１遺伝子がＳ３２４Ｐ点変異を有するＧＬＵＴ１ ＤＳモデルを含み得る。

遺伝子発現および用量反応は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ（内皮細胞株および神経細胞株を使用）およびｉｎ ｖｉｖｏ（野生型およびＧＬＵＴ１ ＤＳモデルマウスを使用）で評価される。培養細胞（ヒト胚性腎細胞２９３、ＨＥＫ２９３；ヒト臍帯静脈内皮細胞、 ＨＵＶＥＣ；ヒト脳由来内皮細胞、ｂＥＮＤ３；ヒト脳微小血管系内皮細胞、 ＨＢＥＣ－５ｉ；ヒト脳微小血管内皮細胞株、ｈＣＭＥＣ／Ｄ３（血液脳関門モデル）；ヒトグリア性オリゴデンドロシスハイブリッド細胞、ＭＯ３．１３；ヒト神経芽細胞腫、ＳＬＣ２Ａ１発現ベクターでトランスフェクトされたＳＨ－ＳＹ５Ｙ）は、定量リアルタイムＰＣＲ分析によって形質導入効率を、ＥＬＩＳＡおよび／またはウェスタンブロットによりＧＬＵＴ１レベルを明らかにする。ＡＡＶベクター構築物の概念および有効性の証明は、ＧＬＵＴ１ ＤＳマウスを用いて、ＧＬＵＴ１ ＤＳ変異マウス対照との比較で、免疫標識によるＣＮＳでの導入遺伝子（ＧＬＵＴ１タンパク質）の発現、ＣＮＳでの脳毛細血管密度の増強および／または血管サイズの増加、ポジトロン断層法（ＰＥＴ）による脳糖化の増加、ＣＳＦグルコースレベルまたは乳酸レベルおよび／またはＣＳＦ／血中グルコース比の増加、ＣＳＦ乳酸レベルの増加、および回転ロードや垂直ポール評価などの標準的評価による運動性能の向上によってｉｎ ｖｉｖｏで明らかにされるであろう。ＧＬＵＴ１ ＤＳマウスを用いたｉｎ ｖｉｖｏでの遺伝子発現と有効性は、ＡＡＶベクター構築物を静脈内または脳室内への直接注入により投与し、これらの投与経路を単独または組み合わせて使用することにより明らかになるであろう。

実施例２：内皮プロモーターを用いたＧＬＵＴ１発現のＩＮ ＶＩＴＲＯ評価
ヒト脳微小血管系内皮細胞（ｈＣＭＥＣ／Ｄ３）を使用して、ｉｎ ｖｉｔｒｏで遺伝子発現を評価した。ｈＦＬＴ１、ｍＴＩＥ１、ｈＧｌｕｔ１、またはＣＭＶプロモーターの制御下でＳＬＣ２Ａ１をコードするＡＡＶ９ベクター（図１０Ｃに図示）をトランスフェクトしたｈＣＭＥＣ／Ｄ３細胞によるＧｌｕｔ１の発現を評価した（図９）。内皮プロモーター（ｈＦＬＴ１およびｍＴＩＥ１）からの発現は、Ｇｌｕｔ１プロモーターからの発現と同等であり、ＣＭＶプロモーターからの発現よりもはるかに低いものであった。これらの構築物間の発現レベルの類似したパターンが、免疫蛍光顕微鏡法によって観察された（図１０Ａおよび図１０Ｂ）。

驚くべきことに、内皮プロモーターの制御下で遺伝子をトランスフェクションまたは形質導入したヒト脳微小血管系内皮細胞による２－デオキシ－Ｄ－グルコース（２－ＤＧ）の取り込みは、制御Ｇｌｕｔ１プロモーターよりも大きく、ｈＦＬＴ－１プロモーターは最高レベルの２－ＤＧ（グルコース）の取り込みを示した（図１１Ａ～１１Ｃ、図１２および図１３）。ｈＦＬＴ－１プロモーター構築物でのより大きな２－ＤＧ（グルコース）取り込みの発見はまた、２－ＤＧ濃度の範囲（図１２Ａ；０、０．１、０．５、および１ｍＭ）およびトランスフェクション後の様々な時点（図１２Ｂ）で観察され、いくつかの事例において、ＣＭＶプロモーターで観察されるものと同等またはわずかに大きいことが見いだされた（図１１Ａ～１１Ｃ；図１２Ａ、図１２Ｂ；図１３）。

図９は、ヒト脳微小血管系内皮細胞（ｈＣＭＥＣ／ｄ３）のトランスフェクション後の導入遺伝子タンパク質（Ｇｌｕｔ１－ＧＦＰ）の発現である。

図１０Ａ。Ｇｌｕｔ１－ＧＦＰ導入遺伝子の発現を駆動するいくつかの内皮細胞プロモーターのうちの一つを含有する構築物を用いたトランスフェクションの７２時間後のＧＦＰ蛍光である。

図１０Ｂ。二つのユビキタスプロモーター（ＣＭＶまたはＣＡＧ）、Ｇｌｕｔ１を含まない対照ベクター（ＣＭＶ－ＧＦＰ）、またはトランスフェクションなし（ＮＦＸなし）のうちの一つを含有する構築物を用いたトランスフェクション後７２時間のＧＦＰ蛍光である。Ｏｐｅｒｅｔｔａ ＣＬＳ（商標）（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ（登録商標））を使用して取得された画像。

図１０Ｃ。対象プロモーター（ｈＦＬＴ１、ｍＴｉｅ、ｈＴｉｅ、またはｈＧｌｕｔ１）、およびＧＬＵＴ１（ＳＬＣ２Ａ１）遺伝子（Ｔ２Ａ リンク－ＧＦＰ）、ならびにＡＡＶ２逆位末端反復（ＩＴＲ）に隣接した調節エレメントを含有する発現カセットの図である。

図１１Ａ～１１Ｃ。ヒトＧＬＵＴ１（ＳＬＣ２Ａ１）の発現後のｈＣＭＥＣ／ｄ３細胞における２－デオキシ－Ｄ－グルコース（グルコース）取り込みである。ヒト脳微小血管内皮細胞（ｈＣＭＥＣ／ｄ３）に、ＣＡＧ－ＧＦＰ（ＣＯＮ；陰性対照）、またはいくつかの内皮特異的プロモーター（すなわち、ｈＦＬＴ１、ｍＴｉｅ、ｈＴｉｅまたはｈＧｌｕｔ１）またはユビキタスＣＭＶまたはＣＡＧプロモーターによるｈＧＬＵＴ１－ｔ２Ａ－ｅＧＦＰ導入遺伝子を発現するプラスミドをトランスフェクションさせた。グルコース取り込みは、培地中の０．５ｍＭの２－デオキシグルコース（２－ＤＧ）を有する発光ベースのキット（Ｐｒｏｍｅｇａ（登録商標））を使用して測定された。グルコース（２－ＤＧ）取り込みは、位相差画像法を使用して全細胞で正規化された〔エラーバーは、Ｓ．Ｅ．Ｍを表す；状態当たりｎ＝６の複製〕。

図１１Ａ。グルコース（２－ＤＧ）取り込みは、最初の実験で、トランスフェクションの７２時間後に測定された。

図１１Ｂ。グルコース（２－ＤＧ）取り込みは、第二の実験において、トランスフェクションの７２時間後に測定された。

図１１Ｃ。グルコース（２－ＤＧ）取り込みは、トランスフェクションの９６時間後に測定された。

図１２Ａ。ヒトＧｌｕｔ１（ＳＬＣ２Ａ１）の発現後のｈＣＭＥＣ／Ｄ３細胞における７２時間時点のグルコース（２－ＤＧ）取り込みを示す。

図１２Ｂ。ヒトＧｌｕｔ１（ＳＬＣ２Ａ１）の発現後のｈＣＭＥＣ／Ｄ３細胞における９６時間時点のグルコース（２－ＤＧ）取り込みを示す。

図１３。ｈＣＭＥＣ／Ｄ３細胞におけるｈＧＬＵＴ１（ＳＬＣ２Ａ１）のＡＡＶ９を介する発現に伴う２－デオキシ－Ｄ－グルコース（グルコース）の取り込みを示す。ヒト脳微小血管内皮細胞（ｈＣＭＥＣ／ｄ３）を、ＣＡＧ－ＧＦＰ（陰性対照）のいずれかを発現するＡＡＶ９ベクター（３ｘ１０^５ ベクターゲノム／細胞）、またはいくつかの内皮特異的プロモーター（すなわち、ｈＦＬＴ１、ｍＴｉｅ１もしくはｈＧｌｕｔ１）のうちの一つによって、またはユビキタスＣＭＶプロモーターによって駆動されるｈＧＬＵＴ１導入遺伝子を用いて形質導入した。グルコース（２－ＤＧ）取り込みは、発光ベースのＧｌｕｃｏｓｅ Ｕｐｔａｋｅ－Ｇｌｏキット（Ｐｒｏｍｅｇａ（登録商標））を使用して形質導入後７２時間で測定され、ＲｅａｌＴｉｍｅ－Ｇｌｏ ＭＴ細胞生存率アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ（登録商標））を使用して細胞当たりで正規化された〔エラーバーは、Ｓ．Ｅ．Ｍを表す；状態当たりｎ＝４の複製〕。

実施例３：ＧＬＵＴ１欠損動物モデルにおける内皮プロモーターを用いたＡＡＶ９を介したＧＬＵＴ１発現のＩＮ ＶＩＶＯ評価
ＧＬＵＴ１欠損症症候群（ＤＳ）モデルマウスにおいて、ＡＡＶ９を介したＧｌｕｔ１トランスポータータンパク質の発現のｉｎ ｖｉｖｏ効果を評価する一連の実験を実施する。このモデルでは、マウスＧＬＵＴ－１遺伝子のプロモーターとエクソン１領域の標的破壊によりヘテロ接合型ハプロ不全マウス（ＧＬＵＴ－１ ＋／－マウス）を用い、発作性、低血糖、小頭症、運動機能の障害など、ヒトＧＬＵＴ ＤＳの特徴を示す（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ，Ｈｕｍ Ｍｏｌ Ｇｅｎ，２００６；Ｔａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｃｏｍｍ，２０１６）。ＡＡＶ９構築物は、ユビキタスプロモーター（ＣＭＶ）またはいくつかの内皮細胞プロモーター（ｈＦＬＴ－１、ｍＴｉｅ、ｈＧｌｕｔ１）のいずれかによってＧＬＵＴ１導入遺伝子を発現させ、異なる用量および異なる投与経路（静脈内または脳室内）で評価される。ＡＡＶ９ベクターを用いた投与後、内皮細胞プロモーター媒介ＧＬＵＴ１導入遺伝子発現が、モデルマウスの機能障害および病理学的障害をどの程度予防または軽減できるかが評価される。ヘテロ接合ハプロ不全マウスに投与されたＡＡＶ９媒介Ｇｌｕｔ１タンパク質発現の潜在的な有益な効果は、未処置のＧＬＵＴ－１ ＋／－対照マウスとの比較で明らかとなり、体重増加の改善または正常化、運動試験（例えば、回転ロッド、垂直ポール評価）での行動性能、ＣＳＦグルコースレベル、脳重量、および脳微小血管構造の完全性およびサイズ（例えば、脳毛細血管密度、血管サイズ、血管分岐点数など）からなる。

Claims (45)

1. プロモーターに動作可能に連結された、ＧＬＵＴ１またはその機能的バリアントをコードするポリヌクレオチド配列を含む、発現カセット。
2. 前記プロモーターが、内皮プロモーター、任意選択的にＴｉｅ－１プロモーター、Ｔｉｅ－２（ＴＥＫ）プロモーター、ＦＬＴ－１プロモーター、ＦＬＫ－１（ＫＤＲ）プロモーター、ＩＣＡＭ－２プロモーター、ＶＥ－カドヘリン（ＣＤＨ５）プロモーター、ＶＷＦプロモーター、ＥＮＧプロモーター、ＰＤＧＦＢプロモーター、ＥＳＭ１プロモーター、ＡＰＬＮプロモーター、またはクローディン－５（Ｐｌｅ２６１）プロモーターであり、ただし、前記内皮プロモーターはＧｌｕｔ１プロモーターではない、請求項１に記載の発現カセット。
3. 前記プロモーターが、ＦＬＴ－１プロモーターである、請求項１または請求項２に記載の発現カセット。
4. 前記ＦＬＴ－１プロモーターが、ヒトＦＬＴ－１（ｈＦＬＴ－１）プロモーターである、請求項３に記載の発現カセット。
5. 前記ｈＦＬＴ－１プロモーターが、配列番号１と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を共有する、請求項４に記載の発現カセット。
6. 前記プロモーターが、Ｔｉｅ－１プロモーターである、請求項１または請求項２に記載の発現カセット。
7. 前記Ｔｉｅ－１プロモーターが、ヒトＴｉｅ－１（ｈＴｉｅ－１）プロモーターである、請求項６に記載の発現カセット。
8. 前記ｈＴｉｅ－１プロモーターが、配列番号２と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を共有する、請求項７に記載の発現カセット。
9. 前記プロモーターが、血管内皮－カドヘリン（ＶＥ－カドヘリン）プロモーターである、請求項１または請求項２に記載の発現カセット。
10. 前記ＶＥ－カドヘリンプロモーターが、ヒトＶＥ－カドヘリン（ｈＶＥ－カドヘリン）プロモーターである、請求項９に記載の発現カセット。
11. 前記ｈＶＥ－カドヘリンプロモーターが、配列番号３と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を共有する、請求項１０に記載の発現カセット。
12. 前記プロモーターが、ユビキタスプロモーターである、請求項１に記載の発現カセット。
13. 前記プロモーターが、ＣＭＶプロモーターである、請求項１または請求項１２に記載の発現カセット。
14. 前記プロモーターが、ＣＡＧプロモーターである、請求項１または請求項１２に記載の発現カセット。
15. ポリＡシグナル、任意選択的にヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）ポリＡを含む、請求項１～１４のいずれか一項に記載の発現カセット。
16. ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）、任意選択的にＷＰＲＥ（ｘ）を含む、請求項１～１５のいずれか一項に記載の発現カセット。
17. 配列番号４と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を共有する配列を含む３’非翻訳領域（３’ＵＴＲ）を含む、請求項１～１６のいずれか一項に記載の発現カセット。
18. ＧＬＵＴ１をコードする前記ポリヌクレオチド配列が、ＳＬＣ２Ａ１ポリヌクレオチドである、請求項１～１７のいずれか一項に記載の発現カセット。
19. 前記ＳＬＣ２Ａ１ポリヌクレオチドが、ヒトＳＬＣ２Ａ１ポリヌクレオチドである、請求項１８に記載の発現カセット。
20. ＧＬＵＴ１をコードする前記ポリヌクレオチド配列が、配列番号５と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を共有する、請求項１７～１９のいずれか一項に記載の発現カセット。
21. ５’および３’逆位末端反復（ＩＴＲ）に、任意選択的にＡＡＶ２ ＩＴＲに、任意選択的に配列番号６または配列番号７と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を共有するＩＴＲに、隣接する、請求項１～２０のいずれか一項に記載の発現カセット。
22. 配列番号８～１６、配列番号９７、配列番号９９、および配列番号１０１のいずれか一つと少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を共有する、請求項１～２１のいずれか一項に記載の発現カセット。
23. 請求項１～２１のいずれか一項に記載の発現カセットを含む、遺伝子療法ベクター。
24. 前記遺伝子療法ベクターが、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクターである、請求項２３に記載のベクター。
25. 前記ｒＡＡＶベクターが、ＡＡＶ６、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈ．７４、またはＡＡＶｒｈ．１０ベクターまたはその機能的バリアントである、請求項２４に記載のベクター。
26. 前記ｒＡＡＶベクターが、ＡＡＶ２ベクターではない、請求項２４または請求項２５に記載のベクター。
27. 前記ｒＡＡＶベクターが、配列番号１５～１７のいずれか一つと９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の同一性を共有するキャプシドタンパク質を含む、請求項２４～２６のいずれか一項に記載のベクター。
28. それを必要とする対象において疾患または障害を治療および／または予防する方法であって、請求項２３～２７のいずれか一項に記載のベクターを前記対象に投与する工程を含む、方法。
29. 前記疾患または障害が、神経障害である、請求項２８に記載の方法。
30. 前記疾患または障害が、グルコーストランスポーター１欠損症症候群（ＧＬＵＴ１ＤＳ）またはデビボ病である、請求項２８または請求項２９に記載の方法。
31. 前記ベクターが、脳室内（ＩＣＶ）注射により投与される、請求項２８～３０のいずれか一項に記載の方法。
32. 前記投与が、任意選択的に参照ｒＡＡＶベクターと比較して増加したレベルで、脳内でＧＬＵＴ１をコードする前記ポリヌクレオチド配列の発現をもたらす、請求項２８～３１のいずれか一項に記載の方法。
33. 前記投与が、任意選択的に参照ｒＡＡＶベクターと比較して増加したレベルで、脳内のＧＬＵＴ１タンパク質の発現の増加、ならびに／またはＣＳＦ中のグルコースレベルおよび／もしくは乳酸レベルの増加をもたらし、任意選択的に前記増加が、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％またはそれを超える増加である、請求項２８～３２のいずれか一項に記載の方法。
34. 前記ベクターが、１Ｅ１２ベクターゲノム（ｖｇ）、１Ｅ１３ｖｇ、１Ｅ１４ｖｇ、または３Ｅ１４ｖｇの用量で投与される、請求項２８～３３のいずれか一項に記載の方法。
35. 内因性Ｇｌｕｔ１プロモーターまたはユビキタスプロモーターを使用して実施される方法と比較して、脳微小血管系内皮細胞によるグルコース取り込みの増加を引き起こす、請求項２８～３４のいずれか一項に記載の方法。
36. 細胞においてＧＬＵＴ１を発現する方法であって、前記細胞を請求項２３～２７のいずれか一項に記載のベクターと接触させる工程を含む、方法。
37. 前記細胞が、内皮細胞である、請求項３６に記載の方法。
38. 前記内皮細胞が、脳微小血管系内皮細胞である、請求項３７に記載の方法。
39. 前記内皮細胞が、インビボ内皮細胞である、請求項３７または請求項３８に記載の方法。
40. 前記細胞がニューロンである、請求項３６に記載の方法。
41. 前記ニューロンが、インビボニューロンである、請求項４０に記載の方法。
42. 対象への前記ベクターのインビボ投与を含む、請求項３６～４０のいずれか一項に記載の方法。
43. 前記ベクターが、前記細胞によるグルコース取り込みの、内因性Ｇｌｕｔ１プロモーターまたはユビキタスプロモーターを含むベクターと接触した細胞と比較した増加を引き起こす、請求項３６～４１のいずれか一項に記載の方法。
44. 請求項２３～２７のいずれか一項に記載のベクターを含む、医薬組成物。
45. 請求項２３～２７のいずれか一項に記載のベクターまたは請求項４３に記載の医薬組成物および任意選択的に使用説明書を含む、キット。

Images