JP2023536618A - Ｃｓｒｐ３（システイン及びグリシンリッチタンパク質３）遺伝子治療 - Google Patents

Ｃｓｒｐ３（システイン及びグリシンリッチタンパク質３）遺伝子治療 Download PDF

Info

Publication number
JP2023536618A
JP2023536618A JP2023507388A JP2023507388A JP2023536618A JP 2023536618 A JP2023536618 A JP 2023536618A JP 2023507388 A JP2023507388 A JP 2023507388A JP 2023507388 A JP2023507388 A JP 2023507388A JP 2023536618 A JP2023536618 A JP 2023536618A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
polynucleotide
vector
mlp
promoter
seq
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2023507388A
Other languages
English (en)
Other versions
JPWO2022031756A5 (ja
Inventor
クリストファー ディーン ハーツォグ
チェスター ビッテンコート サクラメント
ラジ プラバカール
デイビッド リックス
Original Assignee
スペースクラフト セブン リミテッド ライアビリティ カンパニー
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by スペースクラフト セブン リミテッド ライアビリティ カンパニー filed Critical スペースクラフト セブン リミテッド ライアビリティ カンパニー
Publication of JP2023536618A publication Critical patent/JP2023536618A/ja
Publication of JPWO2022031756A5 publication Critical patent/JPWO2022031756A5/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
    • C07K14/4705—Regulators; Modulating activity stimulating, promoting or activating activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4716—Muscle proteins, e.g. myosin, actin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/07—Animals genetically altered by homologous recombination
    • A01K2217/072—Animals genetically altered by homologous recombination maintaining or altering function, i.e. knock in
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/07—Animals genetically altered by homologous recombination
    • A01K2217/075—Animals genetically altered by homologous recombination inducing loss of function, i.e. knock out
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2227/00—Animals characterised by species
    • A01K2227/10—Mammal
    • A01K2227/105—Murine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2267/00—Animals characterised by purpose
    • A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
    • A01K2267/0306—Animal model for genetic diseases
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2750/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

例えばアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを使用した、心筋症に関連するＣＳＲＰ３（システイン及びグリシンリッチタンパク質３）関連遺伝子欠損に対する遺伝子治療を本明細書において提供する。ベクターのプロモーターは、ＭＨＣＫ７プロモーター又は心筋トロポニンＴ（ＨＴＮＮＴ２）プロモーターであり得る。カプシドは、ＡＡＶ９もしくはＡＡＶｒｈ７４カプシド又はその機能的バリアントであり得る。他のプロモーター又はカプシドを使用してもよい。さらに、治療方法、例えば静脈内、冠動脈内、頸動脈内、又は心臓内のｒＡＡＶベクターの投与による治療方法、ならびに他の組成物及び方法も提供する。TIFF2023536618000032.tif191139

Description

関連出願への相互参照
本出願は、２０２０年８月５日に出願された米国特許出願第６３／０６１，７２７号に対する優先権を主張するものであり、これらの内容は参照によりその全体が本明細書中に組み込まれる。
配列表に関する記述
本出願に関連する配列表は、紙のコピーの代わりにテキスト形式で提供され、参照により本明細書中に組み込まれる。配列表を含むテキストファイルの名前は、ＲＯＰＡ＿０２０＿０１ＷＯ＿ＳＴ２５．ｔｘｔである。テキストファイルは約１２０ＫＢで、２０２１年８月３日に作成され、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して電子的に提出されている。
背景
システイン及びグリシンリッチタンパク質３（ＣＳＲＰ３）は、筋ＬＩＭタンパク質（ＭＬＰ）をコードする。ＣＳＲＰ３中の遺伝的欠損は、常染色体優性心筋症、肥大型心筋症（ＨＣＭ）及び拡張型心筋症（ＤＣＭ）の両方に関連付けられる。なぜなら、タンパク質の異なるドメインにおける常染色体優性変異は異なる表現型とリンクしているためである。ＭＬＰレベルを減少させる機能喪失型変異は、タンパク質の誤った局在化及びプロテアソーム媒介性分解を起こし、心筋及び骨格筋における正常なシグナル伝達経路の破壊をもたらし得る。ＭＬＰレベル又は細胞内局在化における変化はまた、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー、ネマリンミオパチー、及び肢帯型筋ジストロフィー２Ｂ型を含む骨格筋症に関連付けられる。アイソフォームＭＬＰ－ｂタンパク質のレベルにおける変化、又はＭＬＰ：ＭＬＰ－ｂ比率の調節不全は、肢帯型筋ジストロフィー２Ａ型、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、及び皮膚筋炎の患者において検出されている。
ＣＳＲＰ３患者は、特定の変異に依存して変動する症状を示すが、しかし、一般的な症状は、閉塞性ＨＣＭ又はＤＣＭ、心室肥大（１４～３２ｍｍの範囲の心室中隔を伴う）、心室頻拍、運動不耐性、狭心症を含む。Ｉ－ＩＩの軽度ＮＹＨＡ（ニューヨーク心臓協会）スコアが一般的である。心臓突然死が、例えば、Ｃ５８Ｇ変異を保有する家族において観察されている。一つの試験では、筋生検を提供したＣ５８Ｇ保因者の大部分が、診察時に労作性筋肉痛及び痙攣を訴えた。
ＣＳＲＰ３関連疾患又は障害に対する治療についての満たされていないニーズがある。本明細書中で提供する遺伝子治療によってこのニーズに対処する。
概要
本発明は、一般的に、ＭＬＰを発現するベクター又はその機能的バリアントを使用した、疾患又は障害、例えば心臓疾患又は障害に対する遺伝子治療に関する。
一態様では、本開示は、発現カセット、及び、場合により、隣接しているアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）逆位末端反復（ＩＴＲ）を含むポリヌクレオチドを提供し、当該ポリヌクレオチドは、プロモーターに動作可能に連結された、筋ＬＩＭタンパク質（ＭＬＰ）又はその機能的バリアントをコードするポリヌクレオチド配列を含む。
一部の実施形態では、プロモーターは心臓特異的プロモーターである。
一部の実施形態では、プロモーターは筋特異的プロモーターである。
一部の実施形態では、プロモーターは心筋細胞特異的プロモーターである。
一部の実施形態では、プロモーターはＭＨＣＫ７プロモーターである。
一部の実施形態では、ＭＨＣＫ７プロモーターは、配列番号３１と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有する。
一部の実施形態では、プロモーターは、心筋トロポニンＴ（ｈＴＮＮＴ２）プロモーターである。
一部の実施形態では、ｈＴＮＮＴ２プロモーターは、配列番号３２と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有する。
一部の実施形態では、発現カセットは、心筋トロポニンＴ（ｈＴＮＮＴ２）遺伝子のエクソン１を含み、場合により、当該ｈＴＮＮＴ２プロモーター及びエクソン１は一緒に、配列番号３２と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有する。
一部の実施形態では、プロモーターはユビキタスプロモーター、場合により、ＣＭＶプロモーター又はＣＡＧプロモーターである。
一部の実施形態では、発現カセットはポリＡシグナルを含む。
一部の実施形態では、ポリＡシグナルはヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）ポリＡである。
一部の実施形態では、発現カセットは、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）、場合により、ＷＰＲＥ（ｘ）を含む。
一部の実施形態では、筋ＬＩＭタンパク質（ＭＬＰ）又はその機能的バリアントは、ＭＬＰである。
一部の実施形態では、ＭＬＰはヒトＭＬＰである。
一部の実施形態では、ＭＬＰはＭＬＰアイソフォームＡである。
一部の実施形態では、ＭＬＰは、配列番号１と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有する。
一部の実施形態では、ＭＬＰはＭＬＰアイソフォームＢである。
一部の実施形態では、ＭＬＰは、配列番号２と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有する。
一部の実施形態では、ＭＬＰは、配列番号３と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有する。
一部の実施形態では、ＭＬＰは、配列番号４と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有する。
一部の実施形態では、ＭＬＰをコードするポリヌクレオチド配列は、システイン及びグリシンリッチタンパク質３（ＣＳＲＰ３）ポリヌクレオチドである。
一部の実施形態では、ＣＳＲＰ３ポリヌクレオチドは、ヒトＣＳＲＰ３ポリヌクレオチドである。
一部の実施形態では、ＭＬＰをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号５と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有する。
一部の実施形態では、ＭＬＰをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号７と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有する。
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは少なくとも約２．４ｋｂ、最大で約２．６ｋｂ、又は約２．４ｋｂ～約２．６ｋｂの間を含む。
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは少なくとも約３．０ｋｂ、最大で約３．３ｋｂ、又は約３．０ｋｂ～約３．３ｋｂの間を含む。
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは少なくとも約２．４ｋｂ、少なくとも約２．６ｋｂ、少なくとも約３．０ｋｂ、少なくとも約３．３ｋｂ、少なくとも約３．５ｋｂ、少なくとも約３．７ｋｂ、少なくとも約３．９ｋｂ、少なくとも約４．１ｋｂ、又は少なくとも約４．３ｋｂを含む。
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、少なくとも約２．６ｋｂ、少なくとも約３．０ｋｂ、最大で約３．３ｋｂ、最大で約３．５ｋｂ、最大で約３．７ｋｂ、最大で約３．９ｋｂ、最大で約４．１ｋｂ、最大で約４．３ｋｂ、又は最大で約４．５ｋｂを含む。
一部の実施形態では、発現カセットは、配列番号８～１１のいずれか一つと少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有する。
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号１２～１５のいずれか一つと少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有する。
一部の実施形態では、発現カセットは、５’及び３’逆位末端反復（ＩＴＲ）、場合により、ＡＡＶ２ ＩＴＲ、場合により、配列番号２０～２６のいずれか一つと少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有するＩＴＲにより隣接されている。
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは自己相補的である。
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、発現カセット及び当該発現カセットの逆相補体を含む。
一部の実施形態では、発現カセット及び当該発現カセットの逆相補体は、５’及び３’逆位末端反復（ＩＴＲ）、場合により、ＡＡＶ２ ＩＴＲ、場合により、配列番号２３又は配列番号２６と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有するＩＴＲにより隣接されている。
別の態様では、本開示は、本開示のポリヌクレオチドを含む遺伝子治療ベクターを提供する。
一部の実施形態では、遺伝子治療ベクターは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターである。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、ＡＡＶ９又はその機能的バリアントである。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、配列番号７７のいずれか一つと９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有するカプシドタンパク質を含む。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、ＡＡＶｒｈ１０又はその機能的バリアントである。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、配列番号７９のいずれか一つと９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有するカプシドタンパク質を含む。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、ＡＡＶ６又はその機能的バリアントである。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、配列番号７８のいずれか一つと９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有するカプシドタンパク質を含む。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、ＡＡＶｒｈ７４又はその機能的バリアントである。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、配列番号８０のいずれか一つと９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有するカプシドタンパク質を含む。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、自己相補的ＡＡＶベクターである。
別の態様では、本開示は、本開示のベクターを対象に投与する工程を含む、それを必要とする対象において疾患又は障害を治療及び／又は予防する方法を提供する。
一部の実施形態では、疾患又は障害は心臓障害である。
一部の実施形態では、疾患又は障害は心不全である。
一部の実施形態では、疾患又は障害は肥大型心筋症である。
一部の実施形態では、疾患又は障害は拡張型心筋症である。
一部の実施形態では、対象は哺乳動物である。
一部の実施形態では、対象は霊長類である。
一部の実施形態では、対象はヒトである。
一部の実施形態では、対象は、配列番号１の配列を有するヒトＭＬＰをコードするヒトＣＳＲＰ３と比べて、Ｃ５８Ｇ、Ｌ４４Ｐ、Ｓ５４Ｒ、Ｅ５５Ｇ、及び／又はＫ６９Ｒから選択されるアミノ酸置換を起こす、ＣＳＲＰ３遺伝子中の変異を有する。
一部の実施形態では、ベクターは、静脈内注射、心臓内注射、心臓内注入、及び／又は心臓カテーテル法により投与される。
一部の実施形態では、投与は、ＭＬＰ発現を少なくとも約５％だけ増加させる。
一部の実施形態では、投与は、ＭＬＰ発現を少なくとも約３０％だけ増加させる。
一部の実施形態では、投与は、ＭＬＰ発現を少なくとも約７０％だけ増加させる。
一部の実施形態では、投与は、ＭＬＰ発現を約５％～約１０％だけ増加させる。
一部の実施形態では、投与は、ＭＬＰ発現を約３０％～約５０％だけ増加させる。
一部の実施形態では、投与は、ＭＬＰ発現を約７０％～約１００％だけ増加させる。
一部の実施形態では、本方法は、疾患又は障害を治療及び／又は予防する。
別の態様では、本開示は、本開示のベクターを含む医薬組成物を提供する。
別の態様では、本開示は、本開示のベクター又は医薬組成物及び場合により使用説明書を含むキットを提供する。
別の態様では、本開示は、場合により本明細書中に開示する方法のいずれかによる、疾患又は障害の治療における本開示の組成物の使用を提供する。
別の態様では、本開示は、場合により本明細書中に開示する方法のいずれかによる、疾患又は障害の治療における使用のための本開示の組成物を提供する。
別の態様では、本開示は、細胞を本開示のベクターと接触させる工程を含む、筋ＬＩＭタンパク質（ＭＬＰ）又はその機能的バリアントを発現する方法を提供する。
一部の実施形態では、細胞は心筋細胞である。
一部の実施形態では、心筋細胞はヒト心筋細胞である。
一部の実施形態では、プロモーターはＭＨＣＫ７プロモーターであり、ＭＬＰの発現レベルが、ｈＴＮＮＴ２プロモーターを有するベクターで形質導入された細胞におけるＭＬＰの発現レベルよりも少なくとも２倍高い。
一部の実施形態では、プロモーターはＭＨＣＫ７プロモーターであり、ＭＬＰの発現レベルが、ｈＴＮＮＴ２プロモーターを有するベクターで形質導入された細胞におけるＭＬＰの発現レベルよりも２倍～１０倍の間で高い。
様々な他の態様及び実施形態が、続く詳細な説明において開示されている。本発明は、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される。
図１は、ベクターゲノムの非限定的な例のベクター図を示す。ベクターゲノムの全ポリヌクレオチド配列は、配列番号１２である。大文字で書かれた部分は、発現カセット（配列番号８）である。 同上。 図２は、ベクターゲノムの非限定的な例のベクター図を示す。ベクターゲノムの全ポリヌクレオチド配列は、配列番号１３である。大文字で書かれた部分は、発現カセット（配列番号９）である。 同上。 図３は、ベクターゲノムの非限定的な例のベクター図を示す。ベクターゲノムの全ポリヌクレオチド配列は、配列番号１４である。大文字で書かれた部分は、発現カセット（配列番号１０）である。 同上。 図４は、ベクターゲノムの非限定的な例のベクター図を示す。ベクターゲノムの全ポリヌクレオチド配列は、配列番号１５である。大文字で書かれた部分は、発現カセット（配列番号１１）である。 同上。 図５Ａは、形質導入されたＣＨＯ－Ｌｅｃ２におけるＣＳＲＰ３発現を示す。図５Ｂは、形質導入された心筋細胞（分化ＡＣ１６細胞株－Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（登録商標）ｃａｔ＃ＳＣＣ１０９）におけるＣＳＲＰ３発現を示す。細胞を、各々のベクターからの３Ｅ５ ＭＯＩで形質導入し、６日後、細胞溶解物を回収し、ウェスタンブロットを、抗ＣＳＲＰ３ポリクローナル抗体（Ｔｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｈｅｒ（登録商標）ＰＡ５－２９１５５ １：１０００）を使用して実施した。
発明の詳細な説明
本開示は、ＭＬＰをコードするポリヌクレオチドを送達するＣＳＰＲＰ３用の遺伝子治療ベクターを、使用の方法、ならびに他の組成物及び方法と共に提供した。ＣＳＰＲＰ３関連障害の治療は、ＣＳＰＲＰ３関連障害の大半の形態の常染色体優性の性質、ならびに、タンパク質発現のレベル及びＭＬＰアイソフォーム間のバランスが、健康な対象における正常な機能に重大であることを示唆するエビデンスにより複雑化されている。さらに、心臓における成功裏の遺伝子治療は、予測不可能である。心筋細胞は、遺伝子治療で標的とする、特に困難な細胞型である。本明細書中に開示する組成物及び方法によって、この問題に対処する。
定義
セクション見出しは、組織目的のみを目的としており、記述された主題を特定の態様又は実施形態に限定するものとして解釈されるべきではない。
別途定義されない限り、本明細書中で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が関連する当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書中に記載するものと類似又は同等の方法及び材料を本発明の実施において使用することができるが、適切な方法及び材料を以下に記載する。本明細書に記載されたすべての刊行物、特許出願、特許、及びその他の参考文献は、その全体が参照により明示的に組み込まれる。矛盾する場合は、定義を含めて本明細書が優先される。また、本明細書中に記載する材料、方法、及び実施例は、例証に過ぎず、限定することを意図するものではない。
本明細書中に記載する全ての刊行物及び特許は、各々の個々の刊行物又は特許が、参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示されているかのように、それらの全体が参照により本明細書中に組み込まれる。矛盾する場合は、本明細書の任意の定義を含めて本出願が優先される。しかし、本明細書中で引用される任意の参照文献、記事、刊行物、特許、特許公開、及び特許出願の言及は、それらが有効な先行技術を構成する、又は世界の任意の国で共通の一般知識の一部を形成するという承認、又は任意の形態の提案とされるものではなく、またそのように解釈されるべきではない。
本記載では、別段の示唆がない限り、任意の濃度範囲、パーセンテージ範囲、比範囲、又は整数範囲は、列挙された範囲内の任意の整数の値、及び適切な場合にはその分数（例えば、整数の１０分の１及び１００分の１など）を含むと理解されるべきである。用語「約」は、数字又は数の直前にある場合、その数字又は数がプラス又はマイナス１０％の範囲であることを意味する。本明細書で使用される場合、用語「ａ」及び「ａｎ」は、別段の示唆がない限り、列挙された構成要素のうちの「一つ以上」を指すことが理解されるべきである。代替物（例、「又は」）の使用は、代替物のいずれか一方、両方、又はそれらの任意の組み合わせのいずれかを意味すると理解されるべきである。用語「及び／又は」は、選択肢の一方又は両方を意味すると理解されるべきである。本明細書中で使用される場合、用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」及び「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」は同義で使用される。
本明細書中で使用される場合、用語「同一性」及び「同一である」は、ポリペプチド又はポリヌクレオチド配列に関して、例えばＢＬＡＳＴアルゴリズムにより生成されたアライメントなどの、その「クエリー」配列と「対象」配列とのアライメントにおける、正確に一致している残基のパーセンテージを指す。同一性は、特に明記しない限り、対象配列の全長にわたって計算される。したがって、クエリー配列が、対象配列と整列しているときに、対象配列中の残基の少なくともｘ％（切り捨て）が、クエリー配列中の対応する残基と完全に一致するように整列される場合、クエリー配列は、対象配列と「少なくともｘ％の同一性を共有する」。対象配列が可変位置（例、Ｘで示される残基）を有する場合、クエリー配列中の任意の残基へのアライメントは、一致としてカウントされる。
本明細書中で使用される場合、「ＡＡＶベクター」又は「ｒＡＡＶベクター」は、ＡＡＶ末端反復配列（ＩＴＲ）が隣接する一つ以上の目的のポリヌクレオチド（又は導入遺伝子）を含む組換えベクターを指す。そのようなＡＡＶベクターは、ｒｅｐ及びｃａｐ遺伝子産物をコードし発現するプラスミドでトランスフェクトされた宿主細胞中に存在する場合に、複製され、感染性ウイルス粒子中にパッケージングすることができる。あるいは、ＡＡＶベクターは、ｒｅｐ遺伝子及びｃａｐ遺伝子を発現するように安定的に操作された宿主細胞を使用して、感染性粒子中にパッケージングすることができる。
本明細書中で使用される場合、「ＡＡＶビリオン」又は「ＡＡＶウイルス粒子」又は「ＡＡＶベクター粒子」は、少なくとも一つのＡＡＶカプシドタンパク質及びカプシド化ポリヌクレオチドＡＡＶベクターで構成されるウイルス粒子を指す。本明細書中で使用される場合、粒子が、異種ポリヌクレオチド（即ち、哺乳動物細胞に送達される導入遺伝子などの野生型ＡＡＶゲノム以外のポリヌクレオチド）を含む場合、通常、これは、「ＡＡＶベクター粒子」又は単に「ＡＡＶベクター」と呼ばれる。このように、ＡＡＶベクター粒子の産生は、ベクターがＡＡＶベクター粒子内に含まれるため、必然的にＡＡＶベクターの産生を含む。
本明細書中で使用される場合、「プロモーター」は、真核細胞においてポリヌクレオチドからのＲＮＡ転写の開始を促進することが可能なポリヌクレオチド配列を指す。
本明細書中で使用される場合、「ベクターゲノム」は、ベクター（例、ｒＡＡＶビリオン）によりパッケージングされたポリヌクレオチド配列を指し、隣接配列（ＡＡＶ中、逆位末端反復）を含む。用語「発現カセット」及び「ポリヌクレオチドカセット」は、隣接ＩＴＲ 配列間のベクターゲノムの部分を指す。「発現カセット」は、ベクターゲノムが、発現を駆動するエレメント（例、プロモーター）に動作可能に連結された遺伝子産物をコードする少なくとも一つの遺伝子を含むことを意味する。
本明細書中で使用される場合、用語「必要としている患者」又は「必要としている対象」は、本明細書中に開示する組換え遺伝子治療ベクター又は遺伝子編集システムを用いた治療又は寛解に適している疾患、障害、又は状態のリスクのある又は罹患している患者又は対象を指す。必要とする患者又は対象は、例えば、心臓に関連する障害と診断された患者又は対象であってもよい。対象は、ＣＳＲＰ３遺伝子中の変異、あるいはＣＳＲＰ３遺伝子の全部もしくは一部の又は遺伝子調節配列の欠失を有し得るが、それによってＭＬＰタンパク質の異常な発現が起こる。「対象」及び「患者」は、本明細書中では互換的に使用される。本明細書中に記載する方法により治療される対象は、成人又は子供であってよい。対象は年齢において広範であり得る。
本明細書中で使用される場合、用語「バリアント」又は「機能的バリアント」は、互換的に、親タンパク質の一つ以上の所望の活性を保持する親タンパク質と比較して、一つ以上のアミノ酸置換、挿入、又は欠失を有するタンパク質を指す。
本明細書中で使用される場合、「遺伝的破壊」は、遺伝子における機能の部分的又は完全な喪失あるいは異常な活性を意味する。例えば、対象は、対象の少なくとも一部の細胞（例、心臓細胞）において、ＭＬＰタンパク質の発現を減少させる、又はＭＬＰタンパク質の喪失もしくは異常機能をもたらす、ＣＳＲＰ３遺伝子における発現又は機能における遺伝的破壊を被り得る。
本明細書中で使用される場合、「治療する」は、疾患又は障害の一つ以上の症状を寛解させることを指す。用語「予防する」は、疾患もしくは障害の一つ以上の症状の発症を遅延もしくは中断させること、又はＣＳＲＰ３関連疾患もしくは障害、例えば、肥大型心筋症（ＨＣＭ）、拡張型心筋症（ＤＣＭ）、又は骨格筋症の進行を遅らせることを指す。
ＭＬＰタンパク質又はポリヌクレオチド
本開示は、筋ＬＩＭプロテイン（ＭＬＰ）タンパク質に関連する組成物及び使用の方法を企図する。ＣＳＲＰ３における様々な変異が、肥大型心筋症（ＨＣＭ）又は拡張型心筋症（ＤＣＭ）と関連していることが公知である。遺伝性変異及びデノボ変異の両方が観察されている。一部の症例では、ヘテロ接合性ミスセンス変異が、疾患を起こすのに十分である。
ＭＬＰのポリペプチド配列は以下の通りである：
ＭＰＮＷＧＧＧＡＫＣＧＡＣＥＫＴＶＹＨＡＥＥＩＱＣＮＧＲＳＦＨＫＴＣＦＨＣＭＡＣＲＫＡＬＤＳＴＴＶＡＡＨＥＳＥＩＹＣＫＶＣＹＧＲＲＹＧＰＫＧＩＧＹＧＱＧＡＧＣＬＳＴＤＴＧＥＨＬＧＬＱＦＱＱＳＰＫＰＡＲＳＶＴＴＳＮＰＳＫＦＴＡＫＦＧＥＳＥＫＣＰＲＣＧＫＳＶＹＡＡＥＫＶＭＧＧＧＫＰＷＨＫＴＣＦＲＣＡＩＣＧＫＳＬＥＳＴＮＶＴＤＫＤＧＥＬＹＣＫＶＣＹＡＫＮＦＧＰＴＧＩＧＦＧＧＬＴＱＱＶＥＫＫＥ
（配列番号１）。
ＭＬＰの第二のアイソフォームは、以下のポリペプチド配列を有する：
ＭＰＮＷＧＧＧＡＫＣＧＡＣＥＫＴＶＹＨＡＥＥＩＱＣＮＧＲＳＦＨＫＴＣＦＨＣＳＰＱＳＲＨＡＱＬＰＰＡＴＬＰＮＳＬＲＳＬＥＳＰＲＳＡＬＤＶＡＳＱＳＭＬＬＲＲＬＷＥＶＡＳＬＧＴＲＰＶＳＡＶＰＳＶＧＲＶＷＳＰＱＭＳＬＴＫＭＧＮＦＩＡＫＦＡＭＰＫＩＬＡＰＲＶＬＧＬＥＡＬＨＮＫＷＫＲＫＮＥＥＶＲＲＦＳＤＦＬＲＡ
（配列番号２）。
ＭＬＰの別のアイソフォームは、以下のポリペプチド配列を有する：
ＭＰＮＷＧＧＧＡＫＣＧＡＣＥＫＴＶＹＨＡＥＥＩＱＣＮＧＲＳＦＨＫＴＣＦＨＣＬＣ
（配列番号３）。
ＭＬＰの別のアイソフォームは、以下のポリペプチド配列を有する：
ＭＰＮＷＧＧＧＡＫＣＧＡＣＥＫＴＶＹＨＡＥＥＩＱＣＮＧＲＳＦＨＫＴＣＦＨＣＴＬＡＱＤＬＦＰＬＣＨＬＷＥＥＳＧＶＨＫＣ
（配列番号４）。
一部の実施形態では、ＭＬＰタンパク質は、配列番号１－４のいずれか一つと少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリペプチド配列を含む。
一部の実施形態では、本開示は、カプシド及びベクターゲノムを含む、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ビリオンを提供し、当該ベクターゲノムは、プロモーターに動作可能に連結されたＭＬＰ又はその機能的バリアントをコードするポリヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、本開示は、カプシド及びベクターゲノムを含む、組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ビリオンを提供し、当該ベクターゲノムは、プロモーターに動作可能に連結されたＭＬＰをコードするポリヌクレオチド配列を含む。ＭＬＰをコードするポリヌクレオチドは、
ＡＴＧＣＣＡＡＡＣＴＧＧＧＧＣＧＧＡＧＧＣＧＣＡＡＡＡＴＧＴＧＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＡＡＡＧＡＣＣＧＴＣＴＡＣＣＡＴＧＣＡＧＡＡＧＡＡＡＴＣＣＡＧＴＧＣＡＡＴＧＧＡＡＧＧＡＧＴＴＴＣＣＡＣＡＡＧＡＣＧＴＧＴＴＴＣＣＡＣＴＧＣＡＴＧＧＣＣＴＧＣＡＧＧＡＡＧＧＣＴＣＴＴＧＡＣＡＧＣＡＣＧＡＣＡＧＴＣＧＣＧＧＣＴＣＡＴＧＡＧＴＣＧＧＡＧＡＴＣＴＡＣＴＧＣＡＡＧＧＴＧＴＧＣＴＡＴＧＧＧＣＧＣＡＧＡＴＡＴＧＧＣＣＣＣＡＡＡＧＧＧＡＴＣＧＧＧＴＡＴＧＧＡＣＡＡＧＧＣＧＣＴＧＧＣＴＧＴＣＴＣＡＧＣＡＣＡＧＡＣＡＣＧＧＧＣＧＡＧＣＡＴＣＴＣＧＧＣＣＴＧＣＡＧＴＴＣＣＡＡＣＡＧＴＣＣＣＣＡＡＡＧＣＣＧＧＣＡＣＧＣＴＣＡＧＴＴＡＣＣＡＣＣＡＧＣＡＡＣＣＣＴＴＣＣＡＡＡＴＴＣＡＣＴＧＣＧＡＡＧＴＴＴＧＧＡＧＡＧＴＣＣＧＡＧＡＡＧＴＧＣＣＣＴＣＧＡＴＧＴＧＧＣＡＡＧＴＣＡＧＴＣＴＡＴＧＣＴＧＣＴＧＡＧＡＡＧＧＴＴＡＴＧＧＧＡＧＧＴＧＧＣＡＡＧＣＣＴＴＧＧＣＡＣＡＡＧＡＣＣＴＧＴＴＴＣＣＧＣＴＧＴＧＣＣＡＴＣＴＧＴＧＧＧＡＡＧＡＧＴＣＴＧＧＡＧＴＣＣＡＣＡＡＡＴＧＴＣＡＣＴＧＡＣＡＡＡＧＡＴＧＧＧＧＡＡＣＴＴＴＡＴＴＧＣＡＡＡＧＴＴＴＧＣＴＡＴＧＣＣＡＡＡＡＡＴＴＴＴＧＧＣＣＣＣＡＣＧＧＧＴＡＴＴＧＧＧＴＴＴＧＧＡＧＧＣＣＴＴＡＣＡＣＡＡＣＡＡＧＴＧＧＡＡＡＡＧＡＡＡＧＡＡ
（配列番号５）と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリヌクレオチド配列を含み得る。
場合により、ベクターゲノムをコードするポリヌクレオチド配列は、ＧＣＣＡＣＣＡＴＧＧ（配列番号６）を含むがこれに限定されないコザック配列を含み得る。Ｋｏｚａｋ配列は、ＭＬＰタンパク質又はその機能的バリアントをコードするポリヌクレオチド配列と重複してもよい。例えば、ベクターゲノムは、
ｇｃｃａｃｃＡＴＧＣＣＡＡＡＣＴＧＧＧＧＣＧＧＡＧＧＣＧＣＡＡＡＡＴＧＴＧＧＡＧＣＣＴＧＴＧＡＡＡＡＧＡＣＣＧＴＣＴＡＣＣＡＴＧＣＡＧＡＡＧＡＡＡＴＣＣＡＧＴＧＣＡＡＴＧＧＡＡＧＧＡＧＴＴＴＣＣＡＣＡＡＧＡＣＧＴＧＴＴＴＣＣＡＣＴＧＣＡＴＧＧＣＣＴＧＣＡＧＧＡＡＧＧＣＴＣＴＴＧＡＣＡＧＣＡＣＧＡＣＡＧＴＣＧＣＧＧＣＴＣＡＴＧＡＧＴＣＧＧＡＧＡＴＣＴＡＣＴＧＣＡＡＧＧＴＧＴＧＣＴＡＴＧＧＧＣＧＣＡＧＡＴＡＴＧＧＣＣＣＣＡＡＡＧＧＧＡＴＣＧＧＧＴＡＴＧＧＡＣＡＡＧＧＣＧＣＴＧＧＣＴＧＴＣＴＣＡＧＣＡＣＡＧＡＣＡＣＧＧＧＣＧＡＧＣＡＴＣＴＣＧＧＣＣＴＧＣＡＧＴＴＣＣＡＡＣＡＧＴＣＣＣＣＡＡＡＧＣＣＧＧＣＡＣＧＣＴＣＡＧＴＴＡＣＣＡＣＣＡＧＣＡＡＣＣＣＴＴＣＣＡＡＡＴＴＣＡＣＴＧＣＧＡＡＧＴＴＴＧＧＡＧＡＧＴＣＣＧＡＧＡＡＧＴＧＣＣＣＴＣＧＡＴＧＴＧＧＣＡＡＧＴＣＡＧＴＣＴＡＴＧＣＴＧＣＴＧＡＧＡＡＧＧＴＴＡＴＧＧＧＡＧＧＴＧＧＣＡＡＧＣＣＴＴＧＧＣＡＣＡＡＧＡＣＣＴＧＴＴＴＣＣＧＣＴＧＴＧＣＣＡＴＣＴＧＴＧＧＧＡＡＧＡＧＴＣＴＧＧＡＧＴＣＣＡＣＡＡＡＴＧＴＣＡＣＴＧＡＣＡＡＡＧＡＴＧＧＧＧＡＡＣＴＴＴＡＴＴＧＣＡＡＡＧＴＴＴＧＣＴＡＴＧＣＣＡＡＡＡＡＴＴＴＴＧＧＣＣＣＣＡＣＧＧＧＴＡＴＴＧＧＧＴＴＴＧＧＡＧＧＣＣＴＴＡＣＡＣＡＡＣＡＡＧＴＧＧＡＡＡＡＧＡＡＡＧＡＡ
（配列番号７）と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリヌクレオチド配列（Ｋｏｚａｋに下線を引いている）を含んでもよい。
一部の実施形態では、Ｋｏｚａｋ配列は、
（ｇｃｃ）ｇｃｃＲｃｃＡＵＧＧ（配列番号１６）；
（ｇｃｃ）ｇｃｃＲｃｃＡＵＧＣ（配列番号１７）；
ＡＧＮＮＡＵＧＮ；
ＡＮＮＡＵＧＧ；
ＡＮＮＡＵＧＣ；
ＡＣＣＡＵＧＧ；
ＡＣＣＡＵＧＣ；
ＧＡＣＡＣＣＡＵＧＧ（配列番号１８）；及び
ＧＡＣＡＣＣＡＵＧＣ（配列番号１９）のいずれか一つを含む、又はそれからなる代替Ｋｏｚａｋ配列である。
一部の実施形態では、ベクターゲノムは、Ｋｏｚａｋ配列を含まない。
ベクターゲノム
本開示のＡＡＶビリオンは、ベクターゲノムを含む。ベクターゲノムは、発現カセット（又はポリヌクレオチド配列の発現を要求しない遺伝子編集用途のためのポリヌクレオチドカセット）を含んでもよい。任意の適切な逆位末端反復（ＩＴＲ）を使用してもよい。ＩＴＲは、カプシドと同じ血清型からであってもよく、又は異なる血清型からであってもよい（例、ＡＡＶ２ ＩＴＲが使用され得る）。
一部の実施形態では、５’ＩＴＲは、
ＣＣＴＧＣＡＧＧＣＡＧＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣＣＧＧＧＣＡＡＡＧＣＣＣＧＧＧＣＧＴＣＧＧＧＣＧＡＣＣＴＴＴＧＧＴＣＧＣＣＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＴＡＧＧＧＧＴＴＣＣＴ
（配列番号２０）と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリヌクレオチド配列を含む。
一部の実施形態では、５’ＩＴＲは、
ＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣＣＧＧＧＣＡＡＡＧＣＣＣＧＧＧＣＧＴＣＧＧＧＣＧＡＣＣＴＴＴＧＧＴＣＧＣＣＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＴＡＧＧＧＧＴＴＣＣＴＴＧＴＡＧＴＴＡＡＴＧＡＴＴＡＡＣＣＣＧＣＣＡＴＧＣＴＡＣＴＴＡＴＣＴＡＣＧＴＡ
（配列番号２１）と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリヌクレオチド配列を含む。
一部の実施形態では、５’ＩＴＲは、
ＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣＣＧＧＧＣＡＡＡＧＣＣＣＧＧＧＣＧＴＣＧＧＧＣＧＡＣＣＴＴＴＧＧＴＣＧＣＣＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＴＡＧＧＧＧＴＴＣＣＴＴＧＴＡＧＴＴＡＡＴＧＡＴＴＡＡＣＣＣＧＣＣＡＴＧＣＴＡＣＴＴＡＴＣＴＡＣＧＴＡ
（配列番号２２）と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリヌクレオチド配列を含む。
一部の実施形態では、５’ＩＴＲは、
ＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＣＣＣＧＧＧＣＡＡＡＧＣＣＣＧＧＧＣＧＴＣＧＧＧＣＧＡＣＣＴＴＴＧＧＴＣＧＣＣＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴＧＧＣＣＡＡＣＴＣＣＡＴＣＡＣＴＡＧＧＧＧＴＴＣＣＴ
（配列番号２３）と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリヌクレオチド配列を含む。
一部の実施形態では、３’ＩＴＲは、
ＡＧＧＡＡＣＣＣＣＴＡＧＴＧＡＴＧＧＡＧＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＧＧＣＧＡＣＣＡＡＡＧＧＴＣＧＣＣＣＧＡＣＧＣＣＣＧＧＧＣＴＴＴＧＣＣＣＧＧＧＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＣＴＧＣＣＴＧＣＡＧＧ
（配列番号２４）と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリヌクレオチド配列を含む。
一部の実施形態では、３’ＩＴＲは、
ＴＡＣＧＴＡＧＡＴＡＡＧＴＡＧＣＡＴＧＧＣＧＧＧＴＴＡＡＴＣＡＴＴＡＡＣＴＡＣＡＡＧＧＡＡＣＣＣＣＴＡＧＴＧＡＴＧＧＡＧＴＴＧＧＣＣＡＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＧＧＣＧＡＣＣＡＡＡＧＧＴＣＧＣＣＣＧＡＣＧＣＣＣＧＧＧＣＴＴＴＧＣＣＣＧＧＧＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣ
（配列番号２５）と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリヌクレオチド配列を含む。
一部の実施形態では、３’ＩＴＲは、
ＡＧＧＡＡＣＣＣＣＴＡＧＴＧＡＴＧＧＡＧＡＣＴＣＣＣＴＣＴＣＴＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＴＣＧＣＴＣＡＣＴＧＡＧＧＣＣＧＧＧＣＧＡＣＣＡＡＡＧＧＴＣＧＣＣＣＧＡＣＧＣＣＣＧＧＧＣＴＴＴＧＣＣＣＧＧＧＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡＧＣＧＡＧＣＧＣＧＣＡＧＡＧＡＧＧＧＡＧＴ
（配列番号２６）と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリヌクレオチド配列を含む。
一部の実施形態では、ベクターゲノムは、例えば、
ＧＣＧＧＣＡＡＴＴＣＡＧＴＣＧＡＴＡＡＣＴＡＴＡＡＣＧＧＴＣＣＴＡＡＧＧＴＡＧＣＧＡＴＴＴＡＡＡＴＡＣＧＣＧＣＴＣＴＣＴＴＡＡＧＧＴＡＧＣＣＣＣＧＧＧＡＣＧＣＧＴＣＡＡＴＴＧＡＣＴＡＣＡＡＡＣＣＧＡＧＴＡＴＣＴＧＣＡＧＡＧＧＧＣＣＣＴＧＣＧＴＡＴＧ（配列番号２７）；
ＣＴＴＣＴＧＡＧＧＣＧＧＡＡＡＧＡＡＣＣＡＧＡＴＣＣＴＣＴＣＴＴＡＡＧＧＴＡＧＣＡＴＣＧＡＧＡＴＴＴＡＡＡＴＴＡＧＧＧＡＴＡＡＣＡＧＧＧＴＡＡＴＧＧＣＧＣＧＧＧＣＣＧＣ（配列番号２８）；又は
ＧＴＴＡＣＣＣＡＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＣＡＧＴＧＧＣＡＣＡＴＴＴＣＴＧＣＴＣＡＣＴＧＣＡＡＣＣＴＣＣＴＣＣＴＣＣＣＴＧＧＧＴＴＣ（配列番号２９）
と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である、一つ以上のフィラー（ｆｉｌｌｅｒ）配列を含む。
プロモーター
一部の実施形態では、ＭＬＰタンパク質又はその機能的バリアントをコードするポリヌクレオチド配列は、プロモーターに動作可能に連結される。
本開示は、様々なプロモーターの使用を企図する。本開示の実施形態において有用なプロモーターは、限定されないが、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ホスホグリセリン酸キナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター、又はＣＭＶエンハンサーならびにニワトリベータ－アクチンプロモーター及びウサギベータ－グロビン遺伝子の一部（ＣＡＧ）で構成されるプロモーター配列を含む。一部の場合では、プロモーターは合成プロモーターであってもよい。例示的な合成プロモーターが、Ｓｃｈｌａｂａｃｈ ｅｔ ａｌ．ＰＮＡＳ ＵＳＡ１０７（６）：２５３８－４３（２０１０）により提供されている。一部の実施形態では、プロモーターは、
ＡＣＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＴＧＡＣＣＧＣＣＣＡＡＣＧＡＣＣＣＣＣＧＣＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＡＡＴＧＡＣＧＴＡＴＧＴＴＣＣＣＡＴＡＧＴＡＡＣＧＣＣＡＡＴＡＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＧＴＧＧＡＧＴＡＴＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＣＴＧＣＣＣＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＴＡＴＣＡＴＡＴＧＣＣＡＡＧＴＡＣＧＣＣＣＣＣＴＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＡＴＴＡＴＧＣＣＣＡＧＴＡＣＡＴＧＡＣＣＴＴＡＴＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＴＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＴＡＣＧＴＡＴＴＡＧＴＣＡＴＣＧＣＴＡＴＴＡＣＣＡＴＧＧＴＣＧＡＧＧＴＧＡＧＣＣＣＣＡＣＧＴＴＣＴＧＣＴＴＣＡＣＴＣＴＣＣＣＣＡＴＣＴＣＣＣＣＣＣＣＣＴＣＣＣＣＡＣＣＣＣＣＡＡＴＴＴＴＧＴＡＴＴＴＡＴＴＴＡＴＴＴＴＴＴＡＡＴＴＡＴＴＴＴＧＴＧＣＡＧＣＧＡＴＧＧＧＧＧＣＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＡＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＡＧＡＧＧＴＧＣＧＧＣＧＧＣＡＧＣＣＡＡＴＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＧＣＴＣＣＧＡＡＡＧＴＴＴＣＣＴＴＴＴＡＴＧＧＣＧＡＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＧＧＣＣＣＴＡＴＡＡＡＡＡＧＣＧＡＡＧＣＧＣＧＣＧＧＣＧＧＧＣＧＧ
（配列番号３０）と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリヌクレオチド配列を含む。
一部の実施形態では、ＭＬＰタンパク質又はその機能的バリアントをコードするポリヌクレオチド配列は、誘導性プロモーターに動作可能に連結される。誘導性プロモーターは、薬剤の添加もしくは蓄積に応答して、又は薬剤の除去、分解、もしくは希釈に応答して、ポリヌクレオチド配列を転写的に発現させる、又は転写的に発現させないように構成され得る。薬剤は薬物であってもよい。薬剤は、テトラサイクリン又はその誘導体の一つであってもよく、これには限定されないが、ドキシサイクリンが含まれる。一部の場合では、誘導性プロモーターは、ｔｅｔ－ｏｎプロモーター、ｔｅｔ－ｏｆｆプロモーター、化学的に調節されたプロモーター、物理的に調節されたプロモーター（即ち、光の存在もしくは非存在に、又は低温もしくは高温に応答するプロモーター）である。誘導性プロモーターは、重金属イオン誘導性プロモーター（例えばマウス乳腺腫瘍ウイルス（ｍＭＴＶ）プロモーター又は様々な成長ホルモンプロモーターなど）、及びＴ７ ＲＮＡポリメラーゼの存在において活性であるＴ７ファージからのプロモーターを含む。誘導性プロモーターのこのリストは非限定的である。
一部の場合では、プロモーターは、非心臓細胞中よりも心臓細胞中でより大きな範囲で発現を駆動することが可能なプロモーターなどの組織特異的プロモーターである。一部の実施形態では、組織特異的プロモーターは、限定されないが、デスミン（Ｄｅｓ）、アルファ－ミオシン重鎖（α－ＭＨＣ）、ミオシン軽鎖２（ＭＬＣ－２）、心筋トロポニンＣ（ｃＴｎＣ）、心筋トロポニンＴ（ｈＴＮＮＴ２）、筋クレアチンキナーゼ（ＣＫ）、及びそれらのプロモーター／エンハンサー領域、例えばＭＨＣＫ７などの組み合わせを含む、任意の様々な心臓細胞特異的プロモーターから選択される。一部の場合では、プロモーターはユビキタスプロモーターである。「ユビキタスプロモーター」は、実験条件又は臨床条件下で組織特異的ではないプロモーターを指す。一部の場合では、ユビキタスプロモーターは、ＣＭＶ、ＣＡＧ、ＵＢＣ、ＰＧＫ、ＥＦ１－アルファ、ＧＡＰＤＨ、ＳＶ４０、ＨＢＶ、ニワトリベータ－アクチン、及びヒトベータ－アクチンプロモーターのいずれか一つである。
一部の実施形態では、プロモーター配列は、表３から選択される。一部の実施形態では、プロモーターは、配列番号３１－５１のいずれか一つと少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリヌクレオチド配列を含む。
Figure 2023536618000002
Figure 2023536618000003
Figure 2023536618000004
Figure 2023536618000005
Figure 2023536618000006
Figure 2023536618000007
Figure 2023536618000008
Figure 2023536618000009
Figure 2023536618000010
Figure 2023536618000011
Figure 2023536618000012
Figure 2023536618000013
好ましい実施形態では、ベクターゲノムは、配列番号３１と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリヌクレオチド配列を含む。好ましい実施形態では、ベクターゲノムは、配列番号３２と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリヌクレオチド配列を含む。好ましい実施形態では、ベクターゲノムは、配列番号３３と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリヌクレオチド配列を含む。
プロモーターのさらなる例証的な例は、シミアンウイルス４０からのＳＶ４０後期プロモーター、バキュロウイルス多面体エンハンサー／プロモーターエレメント、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ（ＨＳＶ ｔｋ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）からの最初期プロモーター、及びＬＴＲエレメントを含む様々なレトロウイルスプロモーターである。多種多様な他のプロモーターが公知であり、当技術分野において一般的に利用可能であり、多くのそのようなプロモーターの配列は、ＧｅｎＢａｎｋデータベースなどの配列データベースにおいて利用可能である。
他の調節エレメント
一部の場合では、本開示のベクターは、エンハンサー、イントロン、ポリＡシグナル、２Ａペプチドコード配列、ＷＰＲＥ（ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント）、及びＨＰＲＥ（Ｂ型肝炎転写後調節エレメント）からなる群から選択される一つ以上の調節エレメントをさらに含む。
一部の実施形態では、ベクターはＣＭＶエンハンサーを含む。
特定の実施形態では、ベクターは、一つ以上のエンハンサーを含む。特定の実施形態では、エンハンサーは、ＣＭＶエンハンサー配列、ＧＡＰＤＨエンハンサー配列、β－アクチンエンハンサー配列、又はＥＦ１－αエンハンサー配列である。前述の配列は、当技術分野において公知である。例えば、ＣＭＶ最初期（ＩＥ）エンハンサーの配列は、
ＡＣＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＴＧＡＣＣＧＣＣＣＡＡＣＧＡＣＣＣＣＣＧＣＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＡＡＴＧＡＣＧＴＡＴＧＴＴＣＣＣＡＴＡＧＴＡＡＣＧＣＣＡＡＴＡＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＧＧＴＧＧＡＧＴＡＴＴＴＡＣＧＧＴＡＡＡＣＴＧＣＣＣＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＡＡＧＴＧＴＡＴＣＡＴＡＴＧＣＣＡＡＧＴＡＣＧＣＣＣＣＣＴＡＴＴＧＡＣＧＴＣＡＡＴＧＡＣＧＧＴＡＡＡＴＧＧＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣＡＴＴＡＴＧＣＣＣＡＧＴＡＣＡＴＧＡＣＣＴＴＡＴＧＧＧＡＣＴＴＴＣＣＴＡＣＴＴＧＧＣＡＧＴＡＣＡＴＣＴＡＣＧＴＡＴＴＡＧＴＣＡＴＣＧＣＴＡＴＴＡＣＣＡ
（配列番号５０）である。
特定の実施形態では、ベクターは、一つ以上のイントロンを含む。特定の実施形態では、イントロンは、ウサギグロビンイントロン配列、ニワトリβ－アクチンイントロン配列、合成イントロン配列、ＳＶ４０イントロン、又はＥＦ１－αイントロン配列である。
特定の実施形態では、ベクターはポリＡ配列を含む。特定の実施形態では、ポリＡ配列は、ウサギグロビンポリＡ配列、ヒト成長ホルモンポリＡ配列、ウシ成長ホルモンポリＡ配列、ＰＧＫポリＡ配列、ＳＶ４０ポリＡ配列、又はＴＫポリＡ配列である。一部の実施形態では、ポリＡシグナルは、ウシ成長ホルモンポリアデニル化シグナル（ｂＧＨｐＡ）であってもよい。
特定の実施形態では、ベクターは、一つ以上の転写物安定化エレメントを含む。特定の実施形態では、転写物安定化エレメントは、ＷＰＲＥ配列、ＨＰＲＥ配列、足場付着領域、３’ＵＴＲ、又は５’ＵＴＲである。特定の実施形態では、ベクターは、５’ＵＴＲ及び３’ＵＴＲの両方を含む。
一部の実施形態では、ベクターは、表４から選択される５’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む。一部の実施形態では、ベクターゲノムは、配列番号５１～６１のいずれか一つと少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリヌクレオチド配列を含む。
Figure 2023536618000014
Figure 2023536618000015
Figure 2023536618000016
Figure 2023536618000017
Figure 2023536618000018
一部の実施形態では、ベクターは、表５から選択される３’非翻訳領域を含む。一部の実施形態では、ベクターゲノムは、配列番号６２－７０のいずれか一つと少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリヌクレオチド配列を含む。
Figure 2023536618000019
Figure 2023536618000020
Figure 2023536618000021
Figure 2023536618000022
Figure 2023536618000023
一部の実施形態では、ベクターは、表６から選択されるポリアデニル化（ポリＡ）シグナルを含む。一部の実施形態では、ポリＡシグナルは、配列番号７１－７５のいずれか一つと少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一であるポリヌクレオチド配列を含む。
Figure 2023536618000024
Figure 2023536618000025
例証的なベクターゲノムが、図１－４中に描写されており、配列番号１２～１５として提供される。各々の配列の発現カセットを大文字で書いており、配列番号８～１１である。一部の実施形態では、ベクターゲノムは、配列番号８～１１のいずれか一つと少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一性を共有するポリヌクレオチド配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなり、場合により、小文字のＩＴＲ配列を伴う又は伴わない。コード配列を大文字で書いている。
アデノ随伴ウイルスベクター
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）は複製欠損パルボウイルスであり、その一本鎖ＤＮＡゲノムは約４．７ｋｂの長さであり、二つの１４５ヌクレオチド逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む。ＡＡＶには複数の公知のバリアントがあり、抗原エピトープにより分類される場合、血清型と呼ばれることもある。ＡＡＶ血清型のゲノムのヌクレオチド配列は公知である。例えば、ＡＡＶ－１の全ゲノムは、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＣ＿００２０７７で提供されている；ＡＡＶ－２の全ゲノムは、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＣ＿００１４０１及びＳｒｉｖａｓｔａｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，４５：５５５－５６４（１９８３）で提供されている；ＡＡＶ－３の全ゲノムは、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＣ＿１８２９で提供されている；ＡＡＶ－４の全ゲノムは、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＣ＿００１８２９で提供されている；ＡＡＶ－５ゲノムは、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＦ０８５７１６で提供されている；ＡＡＶ－６の全ゲノムは、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＣ＿００１８６２で提供されている；ＡＡＶ－７及びＡＡＶ－８ゲノムの少なくとも一部は、それぞれＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＸ７５３２４６及びＡＸ７５３２４９で提供されている；ＡＡＶ－９ゲノムは、Ｇａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７８：６３８１－６３８８（２００４）で提供されている；ＡＡＶ－１０ゲノムは、Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．，１３（１）：６７－７６（２００６）で提供されている；ならびにＡＡＶ－１１ゲノムは、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，３３０（２）：３７５－３８３（２００４）で提供されている。ＡＡＶｒｈ．７４ゲノムの配列は、参照により本明細書中に組み込まれる米国特許第９，４３４，９２８号で提供されている。ウイルスＤＮＡ複製（ｒｅｐ）、カプシド形成／パッケージング、及び宿主細胞染色体組込みに方向付けるシス作用配列は、ＡＡＶ ＩＴＲ内に含まれる。三つのＡＡＶプロモーター（それらの相対マップ位置についてｐ５、ｐ１９、及びｐ４０と命名）は、ｒｅｐ遺伝子及びｃａｐ遺伝子をコードする二つのＡＡＶ内部オープンリーディングフレームの発現を駆動する。二つのｒｅｐプロモーター（ｐ５及びｐ１９）は、単一のＡＡＶイントロン（ヌクレオチド２１０７及び２２２７）のディファレンシャルスプライシング（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｓｐｌｉｃｉｎｇ）と連動し、ｒｅｐ遺伝子から四つのｒｅｐタンパク質（ｒｅｐ７８、ｒｅｐ６８、ｒｅｐ５２、及びｒｅｐ４０）の産生をもたらす。Ｒｅｐタンパク質は、ウイルスゲノムの複製を最終的に担う複数の酵素特性を持つ。ｃａｐ遺伝子は、ｐ４０プロモーターから発現され、それは、三つのカプシドタンパク質ＶＰ１，ＶＰ２、及びＶＰ３をコードする。選択的スプライシング及び非コンセンサス翻訳開始部位は、三つの関連するカプシドタンパク質の産生に関与する。単一のコンセンサスポリアデニル化部位は、ＡＡＶゲノムのマップ位置９５に位置付けられる。ＡＡＶのライフサイクル及び遺伝学は、Ｍｕｚｙｃｚｋａ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｔｏｐｉｃｓ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１５８：９７－１２９（１９９２）で概説されている。
ＡＡＶは、例えば、遺伝子治療において外来ＤＮＡを細胞に送達するためのベクターとして魅力的となる独自の特色を持つ。培養中の細胞のＡＡＶ感染は非細胞変性であり、ヒト及び他の動物の自然感染は無症状及び無症候性である。さらに、ＡＡＶは多くの哺乳動物細胞に感染し、インビボで多くの異なる組織を標的化する可能性を許容する。さらに、ＡＡＶはゆっくりと分裂する細胞と分裂しない細胞に形質導入し、転写的に活性な核エピソーム（染色体外エレメント）として、これらの細胞の生存期間にわたり本質的に存続することができる。ＡＡＶプロウイルスゲノムは、プラスミド中でクローン化ＤＮＡとして挿入され、これによって組換えゲノムの構築が実現可能となる。さらに、ＡＡＶ複製及びゲノムのカプシド化を指示するシグナルは、ＡＡＶゲノムのＩＴＲ内に含まれているため、ゲノムの内部約４．３ｋｂの一部又は全部（複製及び構造カプシドタンパク質、ｒｅｐ－ｃａｐをコードする）は、外来ＤＮＡで置換されてもよい。ＡＡＶベクターを生成するために、ｒｅｐタンパク質及びｃａｐタンパク質をトランスで提供してもよい。ＡＡＶの別の重要な特色は、ＡＡＶが極度に安定した強力なウイルスであることである。アデノウイルスの不活化に使用される条件（５６°～６５℃で数時間）に容易に耐え、ＡＡＶの低温保存の重要性を軽減する。ＡＡＶは凍結乾燥することもできる。最後に、ＡＡＶ感染細胞は重複感染に耐性がない。
本発明の実施において有用な遺伝子送達ウイルスベクターは、分子生物学の技術分野において周知の方法論を利用して構築することができる。典型的には、導入遺伝子を担持するウイルスベクターは、導入遺伝子、適切な調節エレメント、及びウイルスタンパク質の産生のために必要なエレメントをコードするポリヌクレオチドから構築され、これは細胞形質導入を媒介する。そのような組換えウイルスは、当技術分野において公知の技術により、例えば、パッケージング細胞をトランスフェクトすることにより、又はヘルパープラスミドもしくはウイルスを用いた一過性トランスフェクションにより産生され得る。ウイルスパッケージング細胞の典型的な例は、ＨｅＬａ細胞、ＳＦ９細胞（場合により、バキュロウイルスヘルパーベクターを伴う）、２９３細胞などを含むが、これらに限定されない。ヘルペスウイルスベースのシステムを使用してＡＡＶベクターを産生することができ、ＵＳＵＳ２０１７０２１８３９５Ａ１に記載されているとおりである。そのような複製欠損組換えウイルスを産生するための詳細なプロトコルが、例えば、Ｗ０９５／１４７８５、Ｗ０９６／２２３７８、米国特許第５，８８２，８７７号、米国特許第６，０１３，５１６号、米国特許第４，８６１，７１９号、米国特許第５，２７８，０５６号、及びＷ０９４／１９４７８に記載されており、それら各々の完全な内容が参照により本明細書に組み込まれる。
本発明の実践において有用なＡＡＶベクターは、アデノウイルスベース及びヘルパーフリーのシステムを含む様々なシステムを使用して、ＡＡＶビリオン（ウイルス粒子）中にパッケージングすることができる。ＡＡＶ生物学における標準的な方法は、Ｋｗｏｎ ａｎｄ Ｓｃｈａｆｆｅｒ．Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ．（２００８）２５（３）：４８９－９９；Ｗｕ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．（２００６）１４（３）：３１６－２７．Ｂｕｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．（２００４）１０（２）：３０２－１７；Ｇｒｉｍｍ ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．（２００３）３（４）：２８１－３０４；Ｄｅｙｌｅ ＤＲ，Ｒｕｓｓｅｌｌ ＤＷ．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．（２００９）１１（４）：４４２－４４７；ＭｃＣａｒｔｙ ｅｔ ａｌ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．（２００１）８（１６）：１２４８－５４；及びＤｕａｎ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．（２００１）４（４）：３８３－９１において記載されている方法を含む。ヘルパーフリーのシステムは、ＵＳ６，００４，７９７；ＵＳ７，５８８，７７２；及びＵＳ７，０９４，６０４に記載されているシステムを含んだ。
ｒＡＡＶゲノム中のＡＡＶ ＤＮＡは、組換えウイルスが誘導され得る任意のＡＡＶバリアント又は血清型からであってもよく、ＡＡＶバリアント又は血清型には、ＡＡＶ－１、ＡＡＶ－２、ＡＡＶ－３、ＡＡＶ－４、ＡＡＶ－５、ＡＡＶ－６、ＡＡＶ－７、ＡＡＶ－８、ＡＡＶ－９、ＡＡＶ－１０、ＡＡＶ－１１、ＡＡＶ－１２、ＡＡＶ－１３、及びＡＡＶｒｈ１０が含まれるが、これらに限定されない。シュードタイプ化されたｒＡＡＶの産生は、例えば、ＷＯ０１／８３６９２に開示されている。他の型のｒＡＡＶバリアント、例えば、カプシド変異を伴うｒＡＡＶなども企図されている。例えば、Ｍａｒｓｉｃ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，２２（１１）：１９００－１９０９（２０１４）を参照のこと。様々なＡＡＶ血清型のゲノムのヌクレオチド配列が、当技術分野において公知である。
一部の場合では、ｒＡＡＶは自己相補的なゲノムを含む。本明細書中で定義されるように、「自己相補的」又は「二本鎖」ゲノムを含むｒＡＡＶは、ＭｃＣａｒｔｙ ｅｔ ａｌ．Ｓｅｌｆ－ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ （ｓｃＡＡＶ）ｖｅｃｔｏｒｓ ｐｒｏｍｏｔｅ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ ｏｆ ＤＮＡ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ．８（１６）：１２４８－５４（２００１）において記載されているように、ｒＡＡＶのコード領域が分子内二本鎖ＤＮＡ鋳型を形成するように構成されるように操作されたｒＡＡＶを指す。本開示は、一部の場合では、自己相補的ゲノムを含むｒＡＡＶの使用を企図する。なぜなら、感染（例えば形質導入など）時に、ｒＡＡＶゲノムの第二の鎖の細胞媒介性合成を待つよりもむしろ、ｓｃＡＡＶの二つの相補的な半分が会合して、即時の複製及び転写のための準備ができている一つの二重鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）ユニットを形成するためである。ｒＡＡＶにおいて見出される完全コード容量（４．７～６ｋｂ）の代わりに、自己相補的ゲノムを含むｒＡＡＶは、その量の約半分（およそ２．４ｋｂ）だけを保持することが理解されよう。
他の場合では、ｒＡＡＶベクターは一本鎖ゲノムを含む。本明細書中で定義されるように、「単一標準」ゲノムは、自己相補的ではないゲノムを指す。大半の場合では、非組換えＡＡＶは一本鎖ＤＮＡゲノムを有する。ｒＡＡＶは、細胞の効率的な形質導入を達成するためにｓｃＡＡＶであるべきといういくつかの指標があった。本開示は、しかし、ｒＡＡＶベクターの他の遺伝子改変が、標的細胞において最適な遺伝子転写を得るために有益であり得るという理解から、自己相補的ゲノムではなく、一本鎖ゲノムを有するかもしれないｒＡＡＶベクターを企図している。一部の場合では、本開示は、マウス眼の前眼部への効率的な遺伝子導入を達成することが可能な一本鎖ｒＡＡＶベクターに関する。Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｓｉｎｇｌｅ ｓｔｒａｎｄｅｄ ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｉｒｕｓ ａｃｈｉｅｖｅｓ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｔｏ ａｎｔｅｒｉｏｒ ｓｅｇｍｅｎｔ ｉｎ ｔｈｅ ｍｏｕｓｅ ｅｙｅ．ＰＬｏＳ ＯＮＥ１２（８）：ｅ０１８２４７３（２０１７）を参照のこと。
一部の場合では、ｒＡＡＶベクターは、血清型ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ１３、ＡＡＶｒｈ１０、又はＡＡＶｒｈ７４である。シュードタイプ化されたｒＡＡＶの産生は、例えば、ＷＯ０１／８３６９２に開示されている。他の型のｒＡＡＶバリアント、例えば、カプシド変異を伴うｒＡＡＶなども企図されている。例えば、Ｍａｒｓｉｃ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，２２（１１）：１９００－１９０９（２０１４）を参照のこと。一部の場合では、ｒＡＡＶベクターは血清型ＡＡＶ９である。一部の実施形態では、当該ｒＡＡＶベクターは、血清型ＡＡＶ９であり、一本鎖ゲノムを含む。一部の実施形態では、当該ｒＡＡＶベクターは、血清型ＡＡＶ９であり、自己相補的ゲノムを含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、ＡＡＶ２の逆位末端反復（ＩＴＲ）配列を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶベクターはＡＡＶ２ゲノムを含み、ｒＡＡＶベクターはＡＡＶ－２／９ベクター、ＡＡＶ－２／６ベクター、又はＡＡＶ－２／８ベクターである。
最も公知であるＡＡＶについての全長配列及びカプシド遺伝子についての配列が、米国特許第８，５２４，４４６号において提供され、その全体が本明細書中に組み込まれる。
ＡＡＶベクターは、野生型ＡＡＶ配列を含んでよく、又はそれらは野生型ＡＡＶ配列に対する一つ以上の改変を含んでもよい。特定の実施形態では、ＡＡＶベクターは、カプシドタンパク質、例えば、ＶＰ１、ＶＰ２及び／又はＶＰ３内に、一つ以上のアミノ酸改変、例えば、置換、欠失、又は挿入を含む。特定の実施形態では、改変は、ＡＡＶベクターが対象に提供される場合、低下した免疫原性を提供する。
ｒＡＡＶのカプシドタンパク質は、ｒＡＡＶが、目的の特定標的組織、例えば内皮細胞、又はより具体的には内皮端細胞などに標的化されるように改変されてもよい。一部の実施形態では、ｒＡＡＶは、対象の脳室内空間中に直接注射される。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶビリオンは、ＡＡＶ２ ｒＡＡＶビリオンである。カプシドの多くは、ＡＡＶ２カプシド又はその機能的バリアントである。一部の実施形態では、ＡＡＶ２カプシドは、参照ＡＡＶ２カプシド、例えば
ＭＡＡＤＧＹＬＰＤＷＬＥＤＴＬＳＥＧＩＲＱＷＷＫＬＫＰＧＰＰＰＰＫＰＡＥＲＨＫＤＤＳＲＧＬＶＬＰＧＹＫＹＬＧＰＦＮＧＬＤＫＧＥＰＶＮＥＡＤＡＡＡＬＥＨＤＫＡＹＤＲＱＬＤＳＧＤＮＰＹＬＫＹＮＨＡＤＡＥＦＱＥＲＬＫＥＤＴＳＦＧＧＮＬＧＲＡＶＦＱＡＫＫＲＶＬＥＰＬＧＬＶＥＥＰＶＫＴＡＰＧＫＫＲＰＶＥＨＳＰＶＥＰＤＳＳＳＧＴＧＫＡＧＱＱＰＡＲＫＲＬＮＦＧＱＴＧＤＡＤＳＶＰＤＰＱＰＬＧＱＰＰＡＡＰＳＧＬＧＴＮＴＭＡＴＧＳＧＡＰＭＡＤＮＮＥＧＡＤＧＶＧＮＳＳＧＮＷＨＣＤＳＴＷＭＧＤＲＶＩＴＴＳＴＲＴＷＡＬＰＴＹＮＮＨＬＹＫＱＩＳＳＱＳＧＡＳＮＤＮＨＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＣＨＦＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＮＷＧＦＲＰＫＲＬＮＦＫＬＦＮＩＱＶＫＥＶＴＱＮＤＧＴＴＴＩＡＮＮＬＴＳＴＶＱＶＦＴＤＳＥＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＱＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＶＰＱＹＧＹＬＴＬＮＮＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＴＦＳＹＴＦＥＤＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＳＲＴＮＴＰＳＧＴＴＴＱＳＲＬＱＦＳＱＡＧＡＳＤＩＲＤＱＳＲＮＷＬＰＧＰＣＹＲＱＱＲＶＳＫＴＳＡＤＮＮＮＳＥＹＳＷＴＧＡＴＫＹＨＬＮＧＲＤＳＬＶＮＰＧＰＡＭＡＳＨＫＤＤＥＥＫＦＦＰＱＳＧＶＬＩＦＧＫＱＧＳＥＫＴＮＶＤＩＥＫＶＭＩＴＤＥＥＥＩＲＴＴＮＰＶＡＴＥＱＹＧＳＶＳＴＮＬＱＲＧＮＲＱＡＡＴＡＤＶＮＴＱＧＶＬＰＧＭＶＷＱＤＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＨＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＬＫＨＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＮＰＳＴＴＦＳＡＡＫＦＡＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＩＱＹＴＳＮＹＮＫＳＶＮＶＤＦＴＶＤＴＮＧＶＹＳＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＮＬ
（配列番号７６）と少なくとも９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有する。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶビリオンは、ＡＡＶ９ ｒＡＡＶビリオンである。カプシドの多くは、ＡＡＶ９カプシド又はその機能的バリアントである。一部の実施形態では、ＡＡＶ９カプシドは、参照ＡＡＶ９カプシド、例えば
ＭＡＡＤＧＹＬＰＤＷＬＥＤＮＬＳＥＧＩＲＥＷＷＡＬＫＰＧＡＰＱＰＫＡＮＱＱＨＱＤＮＡＲＧＬＶＬＰＧＹＫＹＬＧＰＧＮＧＬＤＫＧＥＰＶＮＡＡＤＡＡＡＬＥＨＤＫＡＹＤＱＱＬＫＡＧＤＮＰＹＬＫＹＮＨＡＤＡＥＦＱＥＲＬＫＥＤＴＳＦＧＧＮＬＧＲＡＶＦＱＡＫＫＲＬＬＥＰＬＧＬＶＥＥＡＡＫＴＡＰＧＫＫＲＰＶＥＱＳＰＱＥＰＤＳＳＡＧＩＧＫＳＧＡＱＰＡＫＫＲＬＮＦＧＱＴＧＤＴＥＳＶＰＤＰＱＰＩＧＥＰＰＡＡＰＳＧＶＧＳＬＴＭＡＳＧＧＧＡＰＶＡＤＮＮＥＧＡＤＧＶＧＳＳＳＧＮＷＨＣＤＳＱＷＬＧＤＲＶＩＴＴＳＴＲＴＷＡＬＰＴＹＮＮＨＬＹＫＱＩＳＮＳＴＳＧＧＳＳＮＤＮＡＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＣＨＦＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＮＷＧＦＲＰＫＲＬＮＦＫＬＦＮＩＱＶＫＥＶＴＤＮＮＧＶＫＴＩＡＮＮＬＴＳＴＶＱＶＦＴＤＳＤＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＥＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＩＰＱＹＧＹＬＴＬＮＤＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＱＦＳＹＥＦＥＮＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＳＫＴＩＮＧＳＧＱＮＱＱＴＬＫＦＳＶＡＧＰＳＮＭＡＶＱＧＲＮＹＩＰＧＰＳＹＲＱＱＲＶＳＴＴＶＴＱＮＮＮＳＥＦＡＷＰＧＡＳＳＷＡＬＮＧＲＮＳＬＭＮＰＧＰＡＭＡＳＨＫＥＧＥＤＲＦＦＰＬＳＧＳＬＩＦＧＫＱＧＴＧＲＤＮＶＤＡＤＫＶＭＩＴＮＥＥＥＩＫＴＴＮＰＶＡＴＥＳＹＧＱＶＡＴＮＨＱＳＡＱＡＱＡＱＴＧＷＶＱＮＱＧＩＬＰＧＭＶＷＱＤＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＮＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＭＫＨＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＤＰＰＴＡＦＮＫＤＫＬＮＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＩＱＹＴＳＮＹＹＫＳＮＮＶＥＦＡＶＮＴＥＧＶＹＳＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＮＬ
（配列番号７７）と少なくとも９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有する。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶビリオンは、ＡＡＶ６ ｒＡＡＶビリオンである。カプシドの多くは、ＡＡＶ９カプシド又はその機能的バリアントである。一部の実施形態では、ＡＡＶ６カプシドは、参照ＡＡＶ６カプシド、例えば
ＭＡＡＤＧＹＬＰＤＷＬＥＤＮＬＳＥＧＩＲＥＷＷＤＬＫＰＧＡＰＫＰＫＡＮＱＱＫＱＤＤＧＲＧＬＶＬＰＧＹＫＹＬＧＰＦＮＧＬＤＫＧＥＰＶＮＡＡＤＡＡＡＬＥＨＤＫＡＹＤＱＱＬＫＡＧＤＮＰＹＬＲＹＮＨＡＤＡＥＦＱＥＲＬＱＥＤＴＳＦＧＧＮＬＧＲＡＶＦＱＡＫＫＲＶＬＥＰＦＧＬＶＥＥＧＡＫＴＡＰＧＫＫＲＰＶＥＱＳＰＱＥＰＤＳＳＳＧＩＧＫＴＧＱＱＰＡＫＫＲＬＮＦＧＱＴＧＤＳＥＳＶＰＤＰＱＰＬＧＥＰＰＡＴＰＡＡＶＧＰＴＴＭＡＳＧＧＧＡＰＭＡＤＮＮＥＧＡＤＧＶＧＮＡＳＧＮＷＨＣＤＳＴＷＬＧＤＲＶＩＴＴＳＴＲＴＷＡＬＰＴＹＮＮＨＬＹＫＱＩＳＳＡＳＴＧＡＳＮＤＮＨＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＣＨＦＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＮＷＧＦＲＰＫＲＬＮＦＫＬＦＮＩＱＶＫＥＶＴＴＮＤＧＶＴＴＩＡＮＮＬＴＳＴＶＱＶＦＳＤＳＥＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＱＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＩＰＱＹＧＹＬＴＬＮＮＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＴＦＳＹＴＦＥＤＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＮＲＴＱＮＱＳＧＳＡＱＮＫＤＬＬＦＳＲＧＳＰＡＧＭＳＶＱＰＫＮＷＬＰＧＰＣＹＲＱＱＲＶＳＫＴＫＴＤＮＮＮＳＮＦＴＷＴＧＡＳＫＹＮＬＮＧＲＥＳＩＩＮＰＧＴＡＭＡＳＨＫＤＤＫＤＫＦＦＰＭＳＧＶＭＩＦＧＫＥＳＡＧＡＳＮＴＡＬＤＮＶＭＩＴＤＥＥＥＩＫＡＴＮＰＶＡＴＥＲＦＧＴＶＡＶＮＬＱＳＳＳＴＤＰＡＴＧＤＶＨＶＭＧＡＬＰＧＭＶＷＱＤＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＨＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＬＫＨＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＮＰＰＡＥＦＳＡＴＫＦＡＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＶＱＹＴＳＮＹＡＫＳＡＮＶＤＦＴＶＤＮＮＧＬＹＴＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＰＬ
（配列番号７８）と少なくとも９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有する。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶビリオンは、ＡＡＶｒｈ．１０ ｒＡＡＶビリオンである。カプシドの多くは、ＡＡＶ９カプシド又はその機能的バリアントである。一部の実施形態では、ＡＡＶｒｈ．１０カプシドは、参照ＡＡＶｒｈ．１０カプシド、例えば
ＭＡＡＤＧＹＬＰＤＷＬＥＤＮＬＳＥＧＩＲＥＷＷＤＬＫＰＧＡＰＫＰＫＡＮＱＱＫＱＤＤＧＲＧＬＶＬＰＧＹＫＹＬＧＰＦＮＧＬＤＫＧＥＰＶＮＡＡＤＡＡＡＬＥＨＤＫＡＹＤＱＱＬＫＡＧＤＮＰＹＬＲＹＮＨＡＤＡＥＦＱＥＲＬＱＥＤＴＳＦＧＧＮＬＧＲＡＶＦＱＡＫＫＲＶＬＥＰＬＧＬＶＥＥＧＡＫＴＡＰＧＫＫＲＰＶＥＰＳＰＱＲＳＰＤＳＳＴＧＩＧＫＫＧＱＱＰＡＫＫＲＬＮＦＧＱＴＧＤＳＥＳＶＰＤＰＱＰＩＧＥＰＰＡＧＰＳＧＬＧＳＧＴＭＡＡＧＧＧＡＰＭＡＤＮＮＥＧＡＤＧＶＧＳＳＳＧＮＷＨＣＤＳＴＷＬＧＤＲＶＩＴＴＳＴＲＴＷＡＬＰＴＹＮＮＨＬＹＫＱＩＳＮＧＴＳＧＧＳＴＮＤＮＴＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＣＨＦＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＮＷＧＦＲＰＫＲＬＮＦＫＬＦＮＩＱＶＫＥＶＴＱＮＥＧＴＫＴＩＡＮＮＬＴＳＴＩＱＶＦＴＤＳＥＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＱＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＩＰＱＹＧＹＬＴＬＮＮＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＥＦＳＹＱＦＥＤＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＳＲＴＱＳＴＧＧＴＡＧＴＱＱＬＬＦＳＱＡＧＰＮＮＭＳＡＱＡＫＮＷＬＰＧＰＣＹＲＱＱＲＶＳＴＴＬＳＱＮＮＮＳＮＦＡＷＴＧＡＴＫＹＨＬＮＧＲＤＳＬＶＮＰＧＶＡＭＡＴＨＫＤＤＥＥＲＦＦＰＳＳＧＶＬＭＦＧＫＱＧＡＧＫＤＮＶＤＹＳＳＶＭＬＴＳＥＥＥＩＫＴＴＮＰＶＡＴＥＱＹＧＶＶＡＤＮＬＱＱＱＮＡＡＰＩＶＧＡＶＮＳＱＧＡＬＰＧＭＶＷＱＮＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＮＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＬＫＨＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＤＰＰＴＴＦＳＱＡＫＬＡＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＩＱＹＴＳＮＹＹＫＳＴＮＶＤＦＡＶＮＴＤＧＴＹＳＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＮＬ
（配列番号７９）と少なくとも９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有する。
一部の実施形態では、カプシドタンパク質は、転移プラスミドに対してトランスでプラスミド上に供給されるポリヌクレオチドによりコードされる。野生型ＡＡＶｒｈ７４キャップのポリヌクレオチド配列は以下の通りである：
ＡＡＶｒｈ７４カプシドコード配列（配列番号８０）
ＡＴＧＧＣＴＧＣＣＧＡＴＧＧＴＴＡＴＣＴＴＣＣＡＧＡＴＴＧＧＣＴＣＧＡＧＧＡＣＡＡＣＣＴＣＴＣＴＧＡＧＧＧＣＡＴＴＣＧＣＧＡＧＴＧＧＴＧＧＧＡＣＣＴＧＡＡＡＣＣＴＧＧＡＧＣＣＣＣＧＡＡＡＣＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＣＣＡＧＣＡＡＡＡＧＣＡＧＧＡＣＡＡＣＧＧＣＣＧＧＧＧＴＣＴＧＧＴＧＣＴＴＣＣＴＧＧＣＴＡＣＡＡＧＴＡＣＣＴＣＧＧＡＣＣＣＴＴＣＡＡＣＧＧＡＣＴＣＧＡＣＡＡＧＧＧＧＧＡＧＣＣＣＧＴＣＡＡＣＧＣＧＧＣＧＧＡＣＧＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＣＧＡＧＣＡＣＧＡＣＡＡＧＧＣＣＴＡＣＧＡＣＣＡＧＣＡＧＣＴＣＣＡＡＧＣＧＧＧＴＧＡＣＡＡＴＣＣＧＴＡＣＣＴＧＣＧＧＴＡＴＡＡＴＣＡＣＧＣＣＧＡＣＧＣＣＧＡＧＴＴＴＣＡＧＧＡＧＣＧＴＣＴＧＣＡＡＧＡＡＧＡＴＡＣＧＴＣＴＴＴＴＧＧＧＧＧＣＡＡＣＣＴＣＧＧＧＣＧＣＧＣＡＧＴＣＴＴＣＣＡＧＧＣＣＡＡＡＡＡＧＣＧＧＧＴＴＣＴＣＧＡＡＣＣＴＣＴＧＧＧＣＣＴＧＧＴＴＧＡＡＴＣＧＣＣＧＧＴＴＡＡＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＧＧＡＡＡＧＡＡＧＡＧＡＣＣＧＧＴＡＧＡＧＣＣＡＴＣＡＣＣＣＣＡＧＣＧＣＴＣＴＣＣＡＧＡＣＴＣＣＴＣＴＡＣＧＧＧＣＡＴＣＧＧＣＡＡＧＡＡＡＧＧＣＣＡＧＣＡＧＣＣＣＧＣＡＡＡＡＡＡＧＡＧＡＣＴＣＡＡＴＴＴＴＧＧＧＣＡＧＡＣＴＧＧＣＧＡＣＴＣＡＧＡＧＴＣＡＧＴＣＣＣＣＧＡＣＣＣＴＣＡＡＣＣＡＡＴＣＧＧＡＧＡＡＣＣＡＣＣＡＧＣＡＧＧＣＣＣＣＴＣＴＧＧＴＣＴＧＧＧＡＴＣＴＧＧＴＡＣＡＡＴＧＧＣＴＧＣＡＧＧＣＧＧＴＧＧＣＧＣＴＣＣＡＡＴＧＧＣＡＧＡＣＡＡＴＡＡＣＧＡＡＧＧＣＧＣＣＧＡＣＧＧＡＧＴＧＧＧＴＡＧＴＴＣＣＴＣＡＧＧＡＡＡＴＴＧＧＣＡＴＴＧＣＧＡＴＴＣＣＡＣＡＴＧＧＣＴＧＧＧＣＧＡＣＡＧＡＧＴＣＡＴＣＡＣＣＡＣＣＡＧＣＡＣＣＣＧＣＡＣＣＴＧＧＧＣＣＣＴＧＣＣＣＡＣＣＴＡＣＡＡＣＡＡＣＣＡＣＣＴＣＴＡＣＡＡＧＣＡＡＡＴＣＴＣＣＡＡＣＧＧＧＡＣＣＴＣＧＧＧＡＧＧＡＡＧＣＡＣＣＡＡＣＧＡＣＡＡＣＡＣＣＴＡＣＴＴＣＧＧＣＴＡＣＡＧＣＡＣＣＣＣＣＴＧＧＧＧＧＴＡＴＴＴＴＧＡＣＴＴＣＡＡＣＡＧＡＴＴＣＣＡＣＴＧＣＣＡＣＴＴＴＴＣＡＣＣＡＣＧＴＧＡＣＴＧＧＣＡＧＣＧＡＣＴＣＡＴＣＡＡＣＡＡＣＡＡＣＴＧＧＧＧＡＴＴＣＣＧＧＣＣＣＡＡＧＡＧＧＣＴＣＡＡＣＴＴＣＡＡＧＣＴＣＴＴＣＡＡＣＡＴＣＣＡＡＧＴＣＡＡＧＧＡＧＧＴＣＡＣＧＣＡＧＡＡＴＧＡＡＧＧＣＡＣＣＡＡＧＡＣＣＡＴＣＧＣＣＡＡＴＡＡＣＣＴＴＡＣＣＡＧＣＡＣＧＡＴＴＣＡＧＧＴＣＴＴＴＡＣＧＧＡＣＴＣＧＧＡＡＴＡＣＣＡＧＣＴＣＣＣＧＴＡＣＧＴＧＣＴＣＧＧＣＴＣＧＧＣＧＣＡＣＣＡＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＣＣＴＣＣＧＴＴＣＣＣＧＧＣＧＧＡＣＧＴＣＴＴＣＡＴＧＡＴＴＣＣＴＣＡＧＴＡＣＧＧＧＴＡＣＣＴＧＡＣＴＣＴＧＡＡＣＡＡＴＧＧＣＡＧＴＣＡＧＧＣＴＧＴＧＧＧＣＣＧＧＴＣＧＴＣＣＴＴＣＴＡＣＴＧＣＣＴＧＧＡＧＴＡＣＴＴＴＣＣＴＴＣＴＣＡＡＡＴＧＣＴＧＡＧＡＡＣＧＧＧＣＡＡＣＡＡＣＴＴＴＧＡＡＴＴＣＡＧＣＴＡＣＡＡＣＴＴＣＧＡＧＧＡＣＧＴＧＣＣＣＴＴＣＣＡＣＡＧＣＡＧＣＴＡＣＧＣＧＣＡＣＡＧＣＣＡＧＡＧＣＣＴＧＧＡＣＣＧＧＣＴＧＡＴＧＡＡＣＣＣＴＣＴＣＡＴＣＧＡＣＣＡＧＴＡＣＴＴＧＴＡＣＴＡＣＣＴＧＴＣＣＣＧＧＡＣＴＣＡＡＡＧＣＡＣＧＧＧＣＧＧＴＡＣＴＧＣＡＧＧＡＡＣＴＣＡＧＣＡＧＴＴＧＣＴＡＴＴＴＴＣＴＣＡＧＧＣＣＧＧＧＣＣＴＡＡＣＡＡＣＡＴＧＴＣＧＧＣＴＣＡＧＧＣＣＡＡＧＡＡＣＴＧＧＣＴＡＣＣＣＧＧＴＣＣＣＴＧＣＴＡＣＣＧＧＣＡＧＣＡＡＣＧＣＧＴＣＴＣＣＡＣＧＡＣＡＣＴＧＴＣＧＣＡＧＡＡＣＡＡＣＡＡＣＡＧＣＡＡＣＴＴＴＧＣＣＴＧＧＡＣＧＧＧＴＧＣＣＡＣＣＡＡＧＴＡＴＣＡＴＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＧＡＧＡＣＴＣＴＣＴＧＧＴＧＡＡＴＣＣＴＧＧＣＧＴＴＧＣＣＡＴＧＧＣＴＡＣＣＣＡＣＡＡＧＧＡＣＧＡＣＧＡＡＧＡＧＣＧＡＴＴＴＴＴＴＣＣＡＴＣＣＡＧＣＧＧＡＧＴＣＴＴＡＡＴＧＴＴＴＧＧＧＡＡＡＣＡＧＧＧＡＧＣＴＧＧＡＡＡＡＧＡＣＡＡＣＧＴＧＧＡＣＴＡＴＡＧＣＡＧＣＧＴＧＡＴＧＣＴＡＡＣＣＡＧＣＧＡＧＧＡＡＧＡＡＡＴＡＡＡＧＡＣＣＡＣＣＡＡＣＣＣＡＧＴＧＧＣＣＡＣＡＧＡＡＣＡＧＴＡＣＧＧＣＧＴＧＧＴＧＧＣＣＧＡＴＡＡＣＣＴＧＣＡＡＣＡＧＣＡＡＡＡＣＧＣＣＧＣＴＣＣＴＡＴＴＧＴＡＧＧＧＧＣＣＧＴＣＡＡＴＡＧＴＣＡＡＧＧＡＧＣＣＴＴＡＣＣＴＧＧＣＡＴＧＧＴＧＴＧＧＣＡＧＡＡＣＣＧＧＧＡＣＧＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＧＧＧＴＣＣＣＡＴＣＴＧＧＧＣＣＡＡＧＡＴＴＣＣＴＣＡＴＡＣＧＧＡＣＧＧＣＡＡＣＴＴＴＣＡＴＣＣＣＴＣＧＣＣＧＣＴＧＡＴＧＧＧＡＧＧＣＴＴＴＧＧＡＣＴＧＡＡＧＣＡＴＣＣＧＣＣＴＣＣＴＣＡＧＡＴＣＣＴＧＡＴＴＡＡＡＡＡＣＡＣＡＣＣＴＧＴＴＣＣＣＧＣＧＧＡＴＣＣＴＣＣＧＡＣＣＡＣＣＴＴＣＡＡＴＣＡＧＧＣＣＡＡＧＣＴＧＧＣＴＴＣＴＴＴＣＡＴＣＡＣＧＣＡＧＴＡＣＡＧＴＡＣＣＧＧＣＣＡＧＧＴＣＡＧＣＧＴＧＧＡＧＡＴＣＧＡＧＴＧＧＧＡＧＣＴＧＣＡＧＡＡＧＧＡＧＡＡＣＡＧＣＡＡＡＣＧＣＴＧＧＡＡＣＣＣＡＧＡＧＡＴＴＣＡＧＴＡＣＡＣＴＴＣＣＡＡＣＴＡＣＴＡＣＡＡＡＴＣＴＡＣＡＡＡＴＧＴＧＧＡＣＴＴＴＧＣＴＧＴＣＡＡＴＡＣＴＧＡＧＧＧＴＡＣＴＴＡＴＴＣＣＧＡＧＣＣＴＣＧＣＣＣＣＡＴＴＧＧＣＡＣＣＣＧＴＴＡＣＣＴＣＡＣＣＣＧＴＡＡＴＣＴＧＴＡＡ
本開示は、配列番号２～４、及びその相同体又は機能的バリアントを含む、ＡＡＶｒｈ７４ ＶＰ１、ＶＰ２、及びＶＰ３についてのタンパク質配列をさらに提供する。
ＡＡＶｒｈ７４ ＶＰ１（配列番号８１）
ＭＡＡＧＧＧＡＰＭＡＤＮＮＥＧＡＤＧＶＧＳＳＳＧＮＷＨＣＤＳＴＷＬＧＤＲＶＩＴＴＳＴＲＴＷＡＬＰＴＹＮＮＨＬＹＫＱＩＳＮＧＴＳＧＧＳＴＮＤＮＴＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＣＨＦＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＮＷＧＦＲＰＫＲＬＮＦＫＬＦＮＩＱＶＫＥＶＴＱＮＥＧＴＫＴＩＡＮＮＬＴＳＴＩＱＶＦＴＤＳＥＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＱＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＩＰＱＹＧＹＬＴＬＮＮＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＥＦＳＹＮＦＥＤＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＳＲＴＱＳＴＧＧＴＡＧＴＱＱＬＬＦＳＱＡＧＰＮＮＭＳＡＱＡＫＮＷＬＰＧＰＣＹＲＱＱＲＶＳＴＴＬＳＱＮＮＮＳＮＦＡＷＴＧＡＴＫＹＨＬＮＧＲＤＳＬＶＮＰＧＶＡＭＡＴＨＫＤＤＥＥＲＦＦＰＳＳＧＶＬＭＦＧＫＱＧＡＧＫＤＮＶＤＹＳＳＶＭＬＴＳＥＥＥＩＫＴＴＮＰＶＡＴＥＱＹＧＶＶＡＤＮＬＱＱＱＮＡＡＰＩＶＧＡＶＮＳＱＧＡＬＰＧＭＶＷＱＮＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＮＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＬＫＨＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＤＰＰＴＴＦＮＱＡＫＬＡＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＩＱＹＴＳＮＹＹＫＳＴＮＶＤＦＡＶＮＴＥＧＴＹＳＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＮＬ
ＡＡＶｒｈ７４ ＶＰ２（配列番号８２）
ＳＴＩＱＶＦＴＤＳＥＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＱＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＩＰＱＹＧＹＬＴＬＮＮＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＥＦＳＹＮＦＥＤＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＳＲＴＱＳＴＧＧＴＡＧＴＱＱＬＬＦＳＱＡＧＰＮＮＭＳＡＱＡＫＮＷＬＰＧＰＣＹＲＱＱＲＶＳＴＴＬＳＱＮＮＮＳＮＦＡＷＴＧＡＴＫＹＨＬＮＧＲＤＳＬＶＮＰＧＶＡＭＡＴＨＫＤＤＥＥＲＦＦＰＳＳＧＶＬＭＦＧＫＱＧＡＧＫＤＮＶＤＹＳＳＶＭＬＴＳＥＥＥＩＫＴＴＮＰＶＡＴＥＱＹＧＶＶＡＤＮＬＱＱＱＮＡＡＰＩＶＧＡＶＮＳＱＧＡＬＰＧＭＶＷＱＮＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＮＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＬＫＨＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＤＰＰＴＴＦＮＱＡＫＬＡＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＩＱＹＴＳＮＹＹＫＳＴＮＶＤＦＡＶＮＴＥＧＴＹＳＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＮＬ
ＡＡＶｒｈ７４ ＶＰ３（配列番号８３）
ＲＴＧＮＮＦＥＦＳＹＮＦＥＤＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＳＲＴＱＳＴＧＧＴＡＧＴＱＱＬＬＦＳＱＡＧＰＮＮＭＳＡＱＡＫＮＷＬＰＧＰＣＹＲＱＱＲＶＳＴＴＬＳＱＮＮＮＳＮＦＡＷＴＧＡＴＫＹＨＬＮＧＲＤＳＬＶＮＰＧＶＡＭＡＴＨＫＤＤＥＥＲＦＦＰＳＳＧＶＬＭＦＧＫＱＧＡＧＫＤＮＶＤＹＳＳＶＭＬＴＳＥＥＥＩＫＴＴＮＰＶＡＴＥＱＹＧＶＶＡＤＮＬＱＱＱＮＡＡＰＩＶＧＡＶＮＳＱＧＡＬＰＧＭＶＷＱＮＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＮＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＬＫＨＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＤＰＰＴＴＦＮＱＡＫＬＡＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＩＱＹＴＳＮＹＹＫＳＴＮＶＤＦＡＶＮＴＥＧＴＹＳＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＮＬ
特定の場合では、ＡＡＶｒｈ７４カプシドは、配列番号２において示されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、例えば、配列番号２において示されるＡＡＶｒｈ７４ ＶＰ１のアミノ酸配列と少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、又は８９％、より典型的には９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上同一の配列を含む、あるいはそれから本質的になる、あるいはさらにそれからなるポリペプチドを含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、例えば、配列番号３において示されるＡＡＶｒｈ７４ ＶＰ２のアミノ酸配列と少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、又は８９％、より典型的には９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上同一の配列を含む、あるいはそれから本質的になる、あるいはさらにそれからなるポリペプチドを含む。一部の実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、例えば、配列番号４において示されるＡＡＶｒｈ７４ ＶＰ３のアミノ酸配列と少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、又は８９％、より典型的には９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれ以上同一の配列を含む、あるいはそれから本質的になる、あるいはさらにそれからなるポリペプチドを含む。
一部の実施形態では、ｒＡＡＶビリオンは、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂ ｒＡＡＶビリオン又はその好中球性バリアントであり、例えば、国際特許公開第２０１５／０３８９５８Ａ１号及び国際特許公開第２０１７／１００６７１Ａ１号において開示されているものなどであるが、これらに限定されない。例えば、ＡＡＶカプシドは、配列ＴＬＡＶＰＦＫ（配列番号８５）又はＫＦＰＶＡＬＴ（配列番号８６）からの少なくとも４つの連続アミノ酸を含んでもよく、例えば、ＡＡＶ９のアミノ酸５８８及び５８９をコードする配列の間に挿入される。
カプシドの多くは、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂカプシド又はその機能的バリアントである。一部の実施形態では、ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂカプシドは、参照ＡＡＶ－ＰＨＰ．Ｂカプシド、例えば
ＭＡＡＤＧＹＬＰＤＷＬＥＤＮＬＳＥＧＩＲＥＷＷＡＬＫＰＧＡＰＱＰＫＡＮＱＱＨＱＤＮＡＲＧＬＶＬＰＧＹＫＹＬＧＰＧＮＧＬＤＫＧＥＰＶＮＡＡＤＡＡＡＬＥＨＤＫＡＹＤＱＱＬＫＡＧＤＮＰＹＬＫＹＮＨＡＤＡＥＦＱＥＲＬＫＥＤＴＳＦＧＧＮＬＧＲＡＶＦＱＡＫＫＲＬＬＥＰＬＧＬＶＥＥＡＡＫＴＡＰＧＫＫＲＰＶＥＱＳＰＱＥＰＤＳＳＡＧＩＧＫＳＧＡＱＰＡＫＫＲＬＮＦＧＱＴＧＤＴＥＳＶＰＤＰＱＰＩＧＥＰＰＡＡＰＳＧＶＧＳＬＴＭＡＳＧＧＧＡＰＶＡＤＮＮＥＧＡＤＧＶＧＳＳＳＧＮＷＨＣＤＳＱＷＬＧＤＲＶＩＴＴＳＴＲＴＷＡＬＰＴＹＮＮＨＬＹＫＱＩＳＮＳＴＳＧＧＳＳＮＤＮＡＹＦＧＹＳＴＰＷＧＹＦＤＦＮＲＦＨＣＨＦＳＰＲＤＷＱＲＬＩＮＮＮＷＧＦＲＰＫＲＬＮＦＫＬＦＮＩＱＶＫＥＶＴＤＮＮＧＶＫＴＩＡＮＮＬＴＳＴＶＱＶＦＴＤＳＤＹＱＬＰＹＶＬＧＳＡＨＥＧＣＬＰＰＦＰＡＤＶＦＭＩＰＱＹＧＹＬＴＬＮＤＧＳＱＡＶＧＲＳＳＦＹＣＬＥＹＦＰＳＱＭＬＲＴＧＮＮＦＱＦＳＹＥＦＥＮＶＰＦＨＳＳＹＡＨＳＱＳＬＤＲＬＭＮＰＬＩＤＱＹＬＹＹＬＳＲＴＩＮＧＳＧＱＮＱＱＴＬＫＦＳＶＡＧＰＳＮＭＡＶＱＧＲＮＹＩＰＧＰＳＹＲＱＱＲＶＳＴＴＶＴＱＮＮＮＳＥＦＡＷＰＧＡＳＳＷＡＬＮＧＲＮＳＬＭＮＰＧＰＡＭＡＳＨＫＥＧＥＤＲＦＦＰＬＳＧＳＬＩＦＧＫＱＧＴＧＲＤＮＶＤＡＤＫＶＭＩＴＮＥＥＥＩＫＴＴＮＰＶＡＴＥＳＹＧＱＶＡＴＮＨＱＳＡＱＴＬＡＶＰＦＫＡＱＡＱＴＧＷＶＱＮＱＧＩＬＰＧＭＶＷＱＤＲＤＶＹＬＱＧＰＩＷＡＫＩＰＨＴＤＧＮＦＨＰＳＰＬＭＧＧＦＧＭＫＨＰＰＰＱＩＬＩＫＮＴＰＶＰＡＤＰＰＴＡＦＮＫＤＫＬＮＳＦＩＴＱＹＳＴＧＱＶＳＶＥＩＥＷＥＬＱＫＥＮＳＫＲＷＮＰＥＩＱＹＴＳＮＹＹＫＳＮＮＶＥＦＡＶＮＴＥＧＶＹＳＥＰＲＰＩＧＴＲＹＬＴＲＮＬ
（配列番号８４）と少なくとも９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有する。
本開示のｒＡＡＶビリオンにおいて使用されるさらなるＡＡＶカプシドは、特許公開第ＷＯ２００９／０１２１７６Ａ２号及び第ＷＯ２０１５／１６８６６６Ａ２号において開示されているものを含む。
理論に拘束されるものではないが、本発明者らは、ＡＡＶ９ベクター、ＡＡＶｒｈ．７４、又はＡＡＶｒｈ．１０ベクターが、ベクターに望ましい心臓指向性を付与することを決定した。理論に拘束されるものではないが、本発明者らはさらに、ＡＡＶ９ベクター、ＡＡＶｒｈ．７４、又はＡＡＶｒｈ．１０ベクターが、心臓細胞に所望の特異性を提供し得ることを決定した。
医薬組成物及びキット
一態様では、本開示は、本開示のｒＡＡＶビリオン及び一つ以上の医薬的に許容可能な担体、希釈剤、又は賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
例えば、注射による投与の目的のために、様々な溶液、例えば滅菌水溶液などを用いることができる。そのような水溶液は、所望の場合には緩衝化することができ、液体希釈剤は、生理食塩水又はグルコースで最初に等張にすることができる。遊離酸（ＤＮＡは酸性リン酸基を含む）又は薬理学的に許容可能な塩としてのｒＡＡＶの溶液は、例えば、０．００１％又は０．０１％の界面活性剤、例えばＰｏｌｏｘａｍｅｒ１８８などと適切に混合された水中で調製することができる。ｒＡＡＶの分散体は、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、及びそれらの混合物中で、ならびに油中で調製することができる。通常の保存及び使用の条件下で、これらの調製物は、微生物の増殖を防ぐための防腐剤を含む。この関連で、用いられる滅菌水性媒体は全て、当業者に周知の標準技術により容易に取得可能である。
注射可能な使用のために適切な医薬形態は、これらに限定されないが、滅菌水溶液又は分散液及び滅菌注射溶液又は分散液の即時調製のための滅菌粉末を含む。いずれの場合も、形態は滅菌されており、容易に注射可能な（ｓｙｒｉｎｇａｂｉｌｉｔｙ）程度に流動的でなければならない。製造及び保管の条件下で安定であり、細菌及び真菌などの微生物の汚染作用に対して保護されていなければならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）、それらの適切な混合物、及び植物油を含有する溶媒又は分散媒体であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散体の場合に必要な粒子サイズの維持によって、及び界面活性剤の使用によって維持することができる。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどによってもたらされ得る。多くの場合、等張剤、例えば、糖又は塩化ナトリウムを含めることが好ましい。注射用組成物の長期吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンの使用によりもたらされ得る。
滅菌注射溶液は、必要に応じて、上で列挙された様々な他の成分と、適した溶媒中に必要な量のｒＡＡＶを組み込み、それに続く濾過滅菌により調製され得る。一般的に、分散剤は、滅菌された活性成分を、基本的な分散媒体及び上記で列挙されたものから必要とされる他の成分を含有する滅菌ビヒクルに組み込むことによって調製される。滅菌注射用溶液の調製のための滅菌粉末の場合では、好ましい調製の方法は、真空乾燥及び凍結乾燥技術であり、活性成分に加えて、以前に滅菌濾過されたその溶液からの任意の追加の所望の成分の粉末がもたらされる。
別の態様では、本開示は、本開示のｒＡＡＶビリオン及び使用説明書を含むキットを含む。
使用の方法
ある態様では、本開示は、細胞においてＭＬＰ活性を増加させる方法を提供し、細胞を本開示のｒＡＡＶと接触させることを含む。別の態様では、本開示は、対象におけるＭＬＰ活性を増加させる方法を提供し、本開示のｒＡＡＶを投与することを含む。一部の実施形態では、細胞及び／又は対象は、ＣＳＲＰ３メッセンジャーＲＮＡ又はＭＬＰタンパク質の発現レベル及び／又は活性において欠損しており、ならびに／あるいはＣＳＲＰ３における機能喪失変異を含む。細胞は、心臓細胞、例えば、心筋細胞であり得る。
一部の実施形態では、本方法によって、細胞培養中での及び／又はインビボでの心臓細胞、例えば心筋細胞などの生存が促進される。一部の実施形態では、本方法によって、心臓の機能が促進及び／又は回復される。
治療の方法
別の態様では、本開示は、それを必要とする対象において疾患又は障害を治療する方法を提供し、有効量の本開示のｒＡＡＶビリオンを対象に投与することを含む。一部の実施形態では、疾患又は障害は心臓疾患又は障害である。例証的な心臓障害は、心不全、肥大型心筋症、及び拡張型心筋症を含む。一部の実施形態では、対象は、ＣＳＲＰ３発現又は機能における遺伝的破壊を被る。一部の実施形態では、疾患又は障害はＨＣＭ又はＤＣＭである。一部の実施形態では、疾患又は障害は家族性肥大型心筋症－１２（ＣＭＨ１２）である。一部の実施形態では、疾患又は障害は拡張型心筋症－１Ｍ（ＣＭＤ１Ｍ）である。一部の実施形態では、疾患又は障害は骨格筋症である。一部の実施形態では、疾患又は障害は、顔面肩甲上腕筋ジストロフィー、ネマリンミオパチー、又は肢帯型筋ジストロフィー２Ｂ型である。一部の実施形態では、疾患又は障害は、肢帯型筋ジストロフィー２Ａ型、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、又は皮膚筋炎である。
心臓へのＭＬＰタンパク質のＡＡＶ媒介性送達によって、寿命が増加し、心臓細胞の変性、心不全、瘢痕、駆出率の低下、不整脈、狭心症、閉塞性ＨＣＭ又はＤＣＭ、心室肥大（ＩＶＳ：範囲１４～３２ｍｍ）、心室頻拍、軽度ＮＹＨＡスコアＩ～ＩＩ共通、運動不耐性、狭心症（胸痛）、心臓突然死、労作性筋痛及び痙攣が予防又は減弱され得る。
本明細書中に開示する方法によって、心臓における効率的な生体分布が提供され得る。それらによって、心臓細胞、例えば、心筋細胞の全て、又は実質的な割合での持続的な発現がもたらされ得る。注目すべきことに、本明細書中に開示する方法によって、ＡＡＶベクター投与後の対象の寿命を通して、ＭＬＰタンパク質の持続性の発現が提供され得る。
併用治療も本発明により企図される。本発明の方法と標準的な医学的治療（例、コルチコステロイド又は局所的減圧薬）の組み合わせが、新規の治療との組み合わせと同様に、具体的に企図される。一部の場合では、対象は、本明細書中に記載するｒＡＡＶの投与に対する免疫応答を防止又は低減するためにステロイド及び／又は免疫抑制剤の併用で治療され得る。
一部の実施形態では、ＡＡＶベクターは、対象の総体重の１キログラム（ｖｇ）当たりのＡＡＶベクターの約１×１０１２～５×１０１４の間のベクターゲノム（ｖｇ）の用量（ｖｇ／ｋｇ）で投与される。一部の実施形態では、ＡＡＶベクターは、約１×１０１３～５×１０１４ｖｇ／ｋｇの間の用量で投与される。一部の実施形態では、ＡＡＶベクターは、約５×１０１３～３×１０１４ｖｇ／ｋｇの間の用量で投与される。一部の実施形態では、ＡＡＶベクターは、約５×１０１３～１×１０１４ｖｇ／ｋｇの間の用量で投与される。一部の実施形態では、ＡＡＶベクターは、約１×１０１２ｖｇ／ｋｇ未満、約３×１０１２ｖｇ／ｋｇ未満、約５×１０１２ｖｇ／ｋｇ未満、約７×１０１２ｖｇ／ｋｇ未満、約１×１０１３ｖｇ／ｋｇ未満、約３×１０１３ｖｇ／ｋｇ未満、約５×１０１３ｖｇ／ｋｇ未満、約７×１０１３ｖｇ／ｋｇ未満、約１×１０１４ｖｇ／ｋｇ未満、約３×１０１４ｖｇ／ｋｇ未満、約５×１０１４ｖｇ／ｋｇ未満、約７×１０１４ｖｇ／ｋｇ未満、約１×１０１５ｖｇ／ｋｇ未満、約３×１０１５ｖｇ／ｋｇ未満、約５×１０１５ｖｇ／ｋｇ未満、又は約７×１０１５ｖｇ／ｋｇ未満の用量で投与される。
一部の実施形態では、ＡＡＶベクターは、約１×１０１２ｖｇ／ｋｇ、約３×１０１２ｖｇ／ｋｇ、約５×１０１２ｖｇ／ｋｇ、約７×１０１２ｖｇ／ｋｇ、約１×１０１３ｖｇ／ｋｇ、約３×１０１３ｖｇ／ｋｇ、約５×１０１３ｖｇ／ｋｇ、約７×１０１３ｖｇ／ｋｇ、約１×１０１４ｖｇ／ｋｇ、約３×１０１４ｖｇ／ｋｇ、約５×１０１４ｖｇ／ｋｇ、約７×１０１４ｖｇ／ｋｇ、約１×１０１５ｖｇ／ｋｇ、約３×１０１５ｖｇ／ｋｇ、約５×１０１５ｖｇ／ｋｇ、又は約７×１０１５ｖｇ／ｋｇの用量で投与される。
一部の実施形態では、ＡＡＶベクターは１×１０１２ｖｇ／ｋｇ、３×１０１２ｖｇ／ｋｇ、５×１０１２ｖｇ／ｋｇ、７×１０１２ｖｇ／ｋｇ、１×１０１３ｖｇ／ｋｇ、３×１０１３ｖｇ／ｋｇ、５×１０１３ｖｇ／ｋｇ、７×１０１３ｖｇ／ｋｇ、１×１０１４ｖｇ／ｋｇ、３×１０１４ｖｇ／ｋｇ、５×１０１４ｖｇ／ｋｇ、７×１０１４ｖｇ／ｋｇ、１×１０１５ｖｇ／ｋｇ、３×１０１５ｖｇ／ｋｇ、５×１０１５ｖｇ／ｋｇ、又は７×１０１５ｖｇ／ｋｇの用量で投与される。
一部の実施形態では、ＡＡＶベクターは、対象の総体重の１キログラム当たり、ＡＡＶベクター（ｖｇ）の約１×１０１２～５×１０１４ベクターゲノム（ｖｇ）の用量（ｖｇ／ｋｇ）で全身的に投与される。一部の実施形態では、ＡＡＶベクターは、約１×１０１３～５×１０１４ｖｇ／ｋｇの間の用量で全身的に投与される。一部の実施形態では、ＡＡＶベクターは、約５×１０１３～３×１０１４ｖｇ／ｋｇの間の用量で全身的に投与される。一部の実施形態では、ＡＡＶベクターは、約５×１０１３～１×１０１４ｖｇ／ｋｇの間の用量で全身的に投与される。一部の実施形態では、ＡＡＶベクターは、約１×１０１２ｖｇ／ｋｇ未満、約３×１０１２ｖｇ／ｋｇ未満、約５×１０１２ｖｇ／ｋｇ未満、約７×１０１２ｖｇ／ｋｇ未満、約１×１０１３ｖｇ／ｋｇ未満、約３×１０１３ｖｇ／ｋｇ未満、約５×１０１３ｖｇ／ｋｇ未満、約７×１０１３ｖｇ／ｋｇ未満、約１×１０１４ｖｇ／ｋｇ未満、約３×１０１４ｖｇ／ｋｇ未満、約５×１０１４ｖｇ／ｋｇ未満、約７×１０１４ｖｇ／ｋｇ未満、約１×１０１５ｖｇ／ｋｇ未満、約３×１０１５ｖｇ／ｋｇ未満、約５×１０１５ｖｇ／ｋｇ未満、又は約７×１０１５ｖｇ／ｋｇ未満の用量で全身的に投与される。
一部の実施形態では、ＡＡＶベクターは、約１×１０１２ｖｇ／ｋｇ、約３×１０１２ｖｇ／ｋｇ、約５×１０１２ｖｇ／ｋｇ、約７×１０１２ｖｇ／ｋｇ、約１×１０１３ｖｇ／ｋｇ、約３×１０１３ｖｇ／ｋｇ、約５×１０１３ｖｇ／ｋｇ、約７×１０１３ｖｇ／ｋｇ、約１×１０１４ｖｇ／ｋｇ、約３×１０１４ｖｇ／ｋｇ、約５×１０１４ｖｇ／ｋｇ、約７×１０１４ｖｇ／ｋｇ、約１×１０１５ｖｇ／ｋｇ、約３×１０１５ｖｇ／ｋｇ、約５×１０１５ｖｇ／ｋｇ、又は約７×１０１５ｖｇ／ｋｇの用量で全身的に投与される。
一部の実施形態では、ＡＡＶベクターは、１×１０１２ｖｇ／ｋｇ、３×１０１２ｖｇ／ｋｇ、５×１０１２ｖｇ／ｋｇ、７×１０１２ｖｇ／ｋｇ、１×１０１３ｖｇ／ｋｇ、３×１０１３ｖｇ／ｋｇ、５×１０１３ｖｇ／ｋｇ、７×１０１３ｖｇ／ｋｇ、１×１０１４ｖｇ／ｋｇ、３×１０１４ｖｇ／ｋｇ、５×１０１４ｖｇ／ｋｇ、７×１０１４ｖｇ／ｋｇ、１×１０１５ｖｇ／ｋｇ、３×１０１５ｖｇ／ｋｇ、５×１０１５ｖｇ／ｋｇ、又は７×１０１５ｖｇ／ｋｇの用量で全身的に投与される。
一部の実施形態では、ＡＡＶベクターは、対象の総体重の１キログラム当たりＡＡＶベクター（ｖｇ）の約１×１０１２～５×１０１４ベクターゲノム（ｖｇ）の間の用量（ｖｇ／ｋｇ）で静脈内投与される。一部の実施形態では、ＡＡＶベクターは、約１×１０１３～５×１０１４ｖｇ／ｋｇの間の用量で静脈内投与される。一部の実施形態では、ＡＡＶベクターは、約５×１０１３～３×１０１４ｖｇ／ｋｇの間の用量で静脈内投与される。一部の実施形態では、ＡＡＶベクターは、約５×１０１３～１×１０１４ｖｇ／ｋｇの間の用量で静脈内投与される。一部の実施形態では、ＡＡＶベクターは、約１×１０１２ｖｇ／ｋｇ未満、約３×１０１２ｖｇ／ｋｇ未満、約５×１０１２ｖｇ／ｋｇ未満、約７×１０１２ｖｇ／ｋｇ未満、約１×１０１３ｖｇ／ｋｇ未満、約３×１０１３ｖｇ／ｋｇ未満、約５×１０１３ｖｇ／ｋｇ未満、約７×１０１３ｖｇ／ｋｇ未満、約１×１０１４ｖｇ／ｋｇ未満、約３×１０１４ｖｇ／ｋｇ未満、約５×１０１４ｖｇ／ｋｇ未満、約７×１０１４ｖｇ／ｋｇ未満、約１×１０１５ｖｇ／ｋｇ未満、約３×１０１５ｖｇ／ｋｇ未満、約５×１０１５ｖｇ／ｋｇ未満、又は約７×１０１５ｖｇ／ｋｇ未満の用量で静脈内投与される。
一部の実施形態では、ＡＡＶベクターは、約１×１０１２ｖｇ／ｋｇ、約３×１０１２ｖｇ／ｋｇ、約５×１０１２ｖｇ／ｋｇ、約７×１０１２ｖｇ／ｋｇ、約１×１０１３ｖｇ／ｋｇ、約３×１０１３ｖｇ／ｋｇ、約５×１０１３ｖｇ／ｋｇ、約７×１０１３ｖｇ／ｋｇ、約１×１０１４ｖｇ／ｋｇ、約３×１０１４ｖｇ／ｋｇ、約５×１０１４ｖｇ／ｋｇ、約７×１０１４ｖｇ／ｋｇ、約１×１０１５ｖｇ／ｋｇ、約３×１０１５ｖｇ／ｋｇ、約５×１０１５ｖｇ／ｋｇ、又は約７×１０１５ｖｇ／ｋｇの用量で静脈内投与される。
一部の実施形態では、ＡＡＶベクターは、１×１０１２ｖｇ／ｋｇ、３×１０１２ｖｇ／ｋｇ、５×１０１２ｖｇ／ｋｇ、７×１０１２ｖｇ／ｋｇ、１×１０１３ｖｇ／ｋｇ、３×１０１３ｖｇ／ｋｇ、５×１０１３ｖｇ／ｋｇ、７×１０１３ｖｇ／ｋｇ、１×１０１４ｖｇ／ｋｇ、３×１０１４ｖｇ／ｋｇ、５×１０１４ｖｇ／ｋｇ、７×１０１４ｖｇ／ｋｇ、１×１０１５ｖｇ／ｋｇ、３×１０１５ｖｇ／ｋｇ、５×１０１５ｖｇ／ｋｇ、又は７×１０１５ｖｇ／ｋｇの用量で静脈内投与される。
機能改善のエビデンス、患者における臨床的有益性又は有効性が、ニューヨーク心臓協会機能分類（ＮＹＨＡクラス）、病理学的心電図、左心室の拡張終期／収縮終期直径、最大心室間壁厚、最大後壁厚、ピークＥ及びピークＡ速度、ピーク早期及びピーク後期伝達充填速度、拡張期早期及び拡張期後期組織ドップラー速度、高血圧、ならびに心肥大の程度における変化により明らかにされ得る。追加の心筋組織学によって、ベースライン又は疾患適合対照患者と比較して、心筋細胞の肥大における低下、筋細胞アレイの低下ならびに間質性及び血管周囲線維症の低下、ならびに瘢痕を示すＡＡＶ媒介性ＭＬＰの有益性が明らかになり得る。
組成物の投与
組成物の有効用量の投与は、限定されないが、全身的、局所的、直接注射、静脈内、心臓内投与を含む、当技術分野において標準の経路により得る。一部の場合では、投与は、全身的、局所的、直接注射、静脈内、心臓内注射を含む。投与は、心臓カテーテル法により実施してもよい。
一部の実施形態では、本開示は、有効用量の本発明のｒＡＡＶ及び組成物の局所投与及び全身投与を提供する。例えば、全身投与は、全身が影響を受けるように、循環系中への投与であり得る。全身投与は、注射、注入、又は移植を通じた親（ｐａｒｅｎｔａｌ）投与を含む。本明細書中に開示する組成物のための投与の経路は、静脈内（「ＩＶ」）投与、腹腔内（「ＩＰ」）投与、筋肉内（「ＩＭ」）投与、病変内投与、もしくは皮下（「ＳＣ」）投与、又は徐放装置、例えば、ミニ浸透圧ポンプ、デポ製剤などの移植を含む。一部の実施形態では、本開示の方法は、本開示のＡＡＶベクター、又はその医薬組成物を、静脈内、筋肉内、動脈内、腎内、尿道内、心臓内、冠動脈内、心筋内、皮内、硬膜外、皮下、腹腔内、脳室内、イオントフォレーシス、又は頭蓋内投与により投与することを含む。
特に、本発明のｒＡＡＶの投与は、ｒＡＡＶ組換えベクターを動物の標的組織中に輸送する任意の物理的方法を使用することにより達成され得る。投与は、以下に限定されないが、心臓中への注射を含む。
一部の実施形態では、本開示の方法は、心臓内送達を含む。注入は、注入ポンプを使用して、専用カニューレ、カテーテル、シリンジ／針を使用して実施してもよい。投与は、心臓への、有効量のｒＡＡＶビリオン、又はｒＡＡＶビリオンを含む医薬組成物の送達を含み得る。これらは、例えば、静脈内、筋肉内、動脈内、腎内、尿道内、心臓内、冠動脈内、心筋内、皮内、硬膜外、皮下、腹腔内、脳室内、イオントフォレーシス、又は頭蓋内投与を介して達成され得る。本開示の組成物は、さらに静脈内投与されてもよい。
本明細書中に開示する治療の方法は、心室肥大、心室頻拍、軽度ＮＹＨＡスコアＩ－ＩＩ共通、運動不耐性、及び狭窄を含むがこれに限定されない一つ以上の症状を低下及び／又は予防し得る。
実施例１：前臨床生物活性及び有効性
図１～４中に例証するベクターを、培養心筋細胞（例、誘導多能性幹細胞心筋細胞、ｉＰＳＣ－ＣＭ）を使用してインビトロでテストする。ＭＬＰの発現を、免疫蛍光及びウェスタンブロットにより評価する。リン酸化アッセイによって、タンパク質キナーゼＣ－アルファ（ＰＫＣ－Ａ）自己リン酸化における低下が明らかになる。
選択されたベクターを、心筋症のＭＬＰ欠損又はＭＬＰ変異マウスモデル（例、Ｃ５８Ｇノックイン（ＫＩ）モデル又はＷ４Ｒ ＫＩモデル）を使用してインビボでテストする。有効性は、心エコーを使用した左心室駆出率（ＬＶＥＦ）及び／又は左室拡張末期圧（ＬＶＥＤ）、全心臓重量における低下（例、脛骨長に対して標準化）、ｄＰ／ｄｔｍａｘ、ｄＰ／ｄｔｍｉｎ、及び弛緩定数タウでの左室性能の侵襲的血行動態評価、あるいは組織学的評価での左及び／又は右心室肥大における低下を測定することにより決定する。加えて、マウスモデルにおけるインビボ有効性は、限定されないが、心房性ナトリウム利尿因子（Ｎｐｐａ）遺伝子発現、脳性ナトリウム利尿ペプチド（Ｎｐｐｂ）遺伝子発現、及びベータミオシン重鎖タンパク質発現を含むバイオマーカーを測定することにより評価する。生理学的有効性は、プロテインキナーゼＣ－アルファ（ＰＫＣ－Ａ）活性、心臓におけるリン酸化ＭＬＰ、ユビキチンプロテアソーム分解活性についてテストすることにより決定する。治療に対する応答における正常化又は軽減が、ＡＡＶベクターについて観察される。
実施例２：ヒト心筋細胞におけるタンパク質発現
図１～４中に例証するベクターを、対照細胞株（ＣＨＯ－Ｌｅｃ２；図５Ａ）及び培養心筋細胞（分化ＡＣ１６細胞株；図５Ｂ）を使用してインビトロでテストした。筋ＬＩＭタンパク質（ＭＬＰ；ＣＳＲＰ３によりコードされるタンパク質）の発現を、ウェスタンブロットにより評価した。
図５Ａは、形質導入されたＣＨＯ－Ｌｅｃ２におけるＣＳＲＰ３発現を示す。図５Ｂは、形質導入された心筋細胞（分化ＡＣ１６細胞株－Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（登録商標）ｃａｔ＃ＳＣＣ１０９）におけるＣＳＲＰ３発現を示す。細胞を、各々のベクターからの３Ｅ５ ＭＯＩで形質導入し、６日後、細胞溶解物を回収し、ウェスタンブロットを、抗ＣＳＲＰ３ポリクローナル抗体（Ｔｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｈｅｒ（登録商標）ＰＡ５－２９１５５ １：１０００）を使用して実施した。
ＣＳＲＰ３導入遺伝子からのＭＬＰタンパク質の発現は、ｈＴＮＮＴ２（“ｈＴｎＴ”）プロモーターを使用した場合よりも、ＭＨＣＫ７プロモーターを使用した場合の方が高い。ＡＡＶベクターのＡＡＶ９血清型及びＡＡＶｒｈ７４血清型の両方が、心筋細胞細胞株を形質導入することが可能である。ＭＬＰタンパク質の発現は、図５Ｂにおけるデータに基づくと、ＡＡＶ９ベクターよりもＡＡＶｒｈ７４ベクターの方が明らかに高い。

Claims (72)

  1. 発現カセット、及び
    場合により、隣接するアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）逆位末端反復（ＩＴＲ）
    を含む、ポリヌクレオチドであって、
    プロモーターに動作可能に連結された、筋ＬＩＭタンパク質（ＭＬＰ）又はその機能的バリアントをコードするポリヌクレオチド配列
    を含む、前記ポリヌクレオチド。
  2. 前記プロモーターが心臓特異的プロモーターである、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
  3. 前記プロモーターが筋特異的プロモーターである、請求項１又は請求項２に記載のポリヌクレオチド。
  4. 前記プロモーターが心筋細胞特異的プロモーターである、請求項１～３のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  5. 前記プロモーターがＭＨＣＫ７プロモーターである、請求項１～４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  6. 前記ＭＨＣＫ７プロモーターが、配列番号３１と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有する、請求項５に記載のポリヌクレオチド。
  7. 前記プロモーターが心筋トロポニンＴ（ｈＴＮＮＴ２）プロモーターである、請求項１～４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  8. 前記ｈＴＮＮＴ２プロモーターが、配列番号３２と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有する、請求項７に記載のポリヌクレオチド。
  9. 前記発現カセットが、前記心筋トロポニンＴ（ｈＴＮＮＴ２）遺伝子のエクソン１を含み、
    場合により、前記ｈＴＮＮＴ２プロモーター及びエクソン１が一緒に、配列番号３２と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有する、
    請求項１～８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  10. 前記プロモーターが、ユビキタスプロモーター、場合によりＣＭＶプロモーター又はＣＡＧプロモーターである、請求項１～４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  11. 前記発現カセットがポリＡシグナルを含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  12. 前記ポリＡシグナルがヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）ポリＡである、請求項１１に記載のポリヌクレオチド。
  13. 前記発現カセットが、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）、場合によりＷＰＲＥ（ｘ）を含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  14. 前記筋ＬＩＭタンパク質（ＭＬＰ）又はその機能的バリアントがＭＬＰである、請求項１～１３のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  15. 前記ＭＬＰがヒトＭＬＰである、請求項１４に記載のポリヌクレオチド。
  16. 前記ＭＬＰがＭＬＰアイソフォームＡである、請求項１４又は請求項１５に記載のポリヌクレオチド。
  17. 前記ＭＬＰが、
    Figure 2023536618000026
    （配列番号１）と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有する、請求項１５又は１６に記載のポリヌクレオチド。
  18. 前記ＭＬＰがＭＬＰアイソフォームＢである、請求項１４又は請求項１５に記載のポリヌクレオチド。
  19. 前記ＭＬＰが、
    Figure 2023536618000027
    （配列番号２）と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有する、請求項１５又は１８に記載のポリヌクレオチド。
  20. 前記ＭＬＰが、
    Figure 2023536618000028
    （配列番号３）と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有する、請求項１５に記載のポリヌクレオチド。
  21. 前記ＭＬＰが、
    Figure 2023536618000029
    （配列番号４）と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有する、請求項１５に記載のポリヌクレオチド。
  22. ＭＬＰをコードする前記ポリヌクレオチド配列が、システイン及びグリシンリッチタンパク質３（ＣＳＲＰ３）ポリヌクレオチドである、請求項１～２１のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  23. 前記ＣＳＲＰ３ポリヌクレオチドがヒトＣＳＲＰ３ポリヌクレオチドである、請求項２２に記載のポリヌクレオチド。
  24. ＭＬＰをコードする前記ポリヌクレオチド配列が、
    Figure 2023536618000030
    （配列番号５）と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有する、請求項１～２３のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  25. ＭＬＰをコードする前記ポリヌクレオチド配列が、
    Figure 2023536618000031
    （配列番号７）と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有する、請求項１～２４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  26. 少なくとも約２．４ｋｂ、最大で約２．６ｋｂ、又は約２．４ｋｂ～約２．６ｋｂの間を含む、請求項１～２５のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  27. 少なくとも約３．０ｋｂ、最大で約３．３ｋｂ、又は約３．０ｋｂ～約３．３ｋｂの間を含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  28. 少なくとも約２．４ｋｂ、少なくとも約２．６ｋｂ、少なくとも約３．０ｋｂ、少なくとも約３．３ｋｂ、少なくとも約３．５ｋｂ、少なくとも約３．７ｋｂ、少なくとも約３．９ｋｂ、少なくとも約４．１ｋｂ、又は少なくとも約４．３ｋｂを含む、請求項１～２７のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  29. 少なくとも約２．６ｋｂ、少なくとも約３．０ｋｂ、最大で約３．３ｋｂ、最大で約３．５ｋｂ、最大で約３．７ｋｂ、最大で約３．９ｋｂ、最大で約４．１ｋｂ、最大で約４．３ｋｂ、又は最大で約４．５ｋｂを含む、請求項１～２８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  30. 前記発現カセットが、配列番号８～１１のいずれか一つと少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有する、請求項１～２９のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  31. 配列番号１２～１５のいずれか一つと少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有する、請求項１～３０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  32. 前記発現カセットが、５’及び３’逆位末端反復（ＩＴＲ）、場合によりＡＡＶ２ ＩＴＲ、場合により、配列番号２０～２６のいずれか一つと少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有するＩＴＲにより隣接されている、請求項１～３１のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  33. 自己相補的である、請求項１～３２のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  34. 前記発現カセット及び前記発現カセットの逆相補体を含む、請求項１～３３のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
  35. 前記発現カセット及び前記発現カセットの前記逆相補体が、５’及び３’逆位末端反復（ＩＴＲ）、場合によりＡＡＶ２ ＩＴＲ、場合により、配列番号２３又は配列番号２６と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有するＩＴＲにより隣接されている、請求項３４に記載のポリヌクレオチド。
  36. 請求項１～３５のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む、遺伝子治療ベクター。
  37. 前記遺伝子治療ベクターが組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）ベクターである、請求項３６に記載のベクター。
  38. 前記ｒＡＡＶベクターがＡＡＶ９又はその機能的バリアントである、請求項３７に記載のベクター。
  39. 前記ｒＡＡＶベクターが、配列番号７７のいずれか一つと９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有するカプシドタンパク質を含む、請求項３８に記載のベクター。
  40. 前記ｒＡＡＶベクターがＡＡＶｒｈ１０又はその機能的バリアントである、請求項３７に記載のベクター。
  41. 前記ｒＡＡＶベクターが、配列番号７９のいずれか一つと９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有するカプシドタンパク質を含む、請求項４０に記載のベクター。
  42. 前記ｒＡＡＶベクターがＡＡＶ６又はその機能的バリアントである、請求項３７に記載のベクター。
  43. 前記ｒＡＡＶベクターが、配列番号７８のいずれか一つと９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有するカプシドタンパク質を含む、請求項４２に記載のベクター。
  44. 前記ｒＡＡＶベクターがＡＡＶｒｈ７４又はその機能的バリアントである、請求項３７に記載のベクター。
  45. 前記ｒＡＡＶベクターが、配列番号８０のいずれか一つと９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の同一性を共有するカプシドタンパク質を含む、請求項４４に記載のベクター。
  46. 前記ｒＡＡＶベクターが自己相補的ＡＡＶベクターである、請求項３６～４５のいずれか一項に記載のベクター。
  47. それを必要とする対象において疾患又は障害を治療及び／又は予防する方法であって、請求項３５～４６のいずれか一項に記載のベクターを前記対象に投与する工程を含む、前記方法。
  48. 前記疾患又は障害が心臓障害である、請求項４７に記載の方法。
  49. 前記疾患又は障害が心不全である、請求項４７又は４８に記載の方法。
  50. 前記疾患又は障害が肥大型心筋症である、請求項４７～４９のいずれか一項に記載の方法。
  51. 前記疾患又は障害が拡張型心筋症である、請求項４７～４９のいずれか一項に記載の方法。
  52. 前記対象が哺乳動物である、請求項４７～５１のいずれか一項に記載の方法。
  53. 前記対象が霊長類である、請求項５２に記載の方法。
  54. 前記対象がヒトである、請求項５３に記載の方法。
  55. 前記対象が、
    配列番号１の配列を有するヒトＭＬＰをコードするヒトＣＳＲＰ３と比べて、Ｃ５８Ｇ、Ｌ４４Ｐ、Ｓ５４Ｒ、Ｅ５５Ｇ、及び／又はＫ６９Ｒから選択されるアミノ酸置換を起こす、ＣＳＲＰ３遺伝子中の変異
    を有する、請求項４５～５４のいずれか一項に記載の方法。
  56. 前記ベクターが、静脈内注射、心臓内注射、心臓内注入、及び／又は心臓カテーテル法により投与される、請求項４７～５５のいずれか一項に記載の方法。
  57. 前記投与によって、ＭＬＰ発現が少なくとも約５％だけ増加する、請求項４７～５６のいずれか一項に記載の方法。
  58. 前記投与によって、ＭＬＰ発現が少なくとも約３０％だけ増加する、請求項４７～５６のいずれか一項に記載の方法。
  59. 前記投与によって、ＭＬＰ発現が少なくとも約７０％だけ増加する、請求項４７～５６のいずれか一項に記載の方法。
  60. 前記投与によって、ＭＬＰ発現が約５％～約１０％だけ増加する、請求項４７～５６のいずれか一項に記載の方法。
  61. 前記投与によって、ＭＬＰ発現が約３０％～約５０％だけ増加する、請求項４７～５６のいずれか一項に記載の方法。
  62. 前記投与によって、ＭＬＰ発現が約７０％～約１００％だけ増加する、請求項４７～５６のいずれか一項に記載の方法。
  63. 前記疾患又は障害を治療及び／又は予防する、請求項４７～６２のいずれか一項に記載の方法。
  64. 請求項３６～４６のいずれか一項に記載のベクターを含む、医薬組成物。
  65. 請求項３４～４６のいずれか一項に記載のベクター又は請求項６４に記載の医薬組成物、及び場合により使用説明書を含む、キット。
  66. 場合により請求項４７～６３のいずれか一項に記載の方法による、疾患又は障害の治療における請求項３６～４６のいずれか一項に記載の組成物の使用。
  67. 場合により請求項４７～６３のいずれか一項に記載の方法による、疾患又は障害の治療における使用のための請求項３６～４６のいずれか一項に記載の組成物。
  68. 細胞を請求項３６～４６のいずれか一項に記載のベクターと接触させる工程を含む、筋ＬＩＭタンパク質（ＭＬＰ）又はその機能的バリアントを発現させる方法。
  69. 前記細胞が心筋細胞である、請求項６８に記載の方法。
  70. 前記心筋細胞がヒト心筋細胞である、請求項６９に記載の方法。
  71. 前記プロモーターがＭＨＣＫ７プロモーターであり、前記ＭＬＰの発現レベルが、ｈＴＮＮＴ２プロモーターを有するベクターで形質導入された細胞におけるＭＬＰの発現レベルよりも少なくとも２倍大きい、請求項６８～７０のいずれか一項に記載の方法。
  72. 前記プロモーターがＭＨＣＫ７プロモーターであり、前記ＭＬＰの発現レベルが、ｈＴＮＮＴ２プロモーターを有するベクターで形質導入された細胞におけるＭＬＰの発現レベルよりも２倍～１０倍大きい、請求項６８～７０のいずれか一項に記載の方法。
JP2023507388A 2020-08-05 2021-08-03 Ｃｓｒｐ３（システイン及びグリシンリッチタンパク質３）遺伝子治療 Pending JP2023536618A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202063061727P 2020-08-05 2020-08-05
US63/061,727 2020-08-05
PCT/US2021/044412 WO2022031756A1 (en) 2020-08-05 2021-08-03 Csrp3 (cysteine and glycine rich protein 3) gene therapy

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2023536618A true JP2023536618A (ja) 2023-08-28
JPWO2022031756A5 JPWO2022031756A5 (ja) 2024-03-07

Family

ID=80118758

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2023507388A Pending JP2023536618A (ja) 2020-08-05 2021-08-03 Ｃｓｒｐ３（システイン及びグリシンリッチタンパク質３）遺伝子治療

Country Status (11)

Country Link
US (1) US20230257431A1 (ja)
EP (1) EP4192962A1 (ja)
JP (1) JP2023536618A (ja)
KR (1) KR20230042468A (ja)
CN (1) CN116234916A (ja)
AU (1) AU2021321410A1 (ja)
BR (1) BR112023001336A2 (ja)
CA (1) CA3184983A1 (ja)
IL (1) IL300187A (ja)
MX (1) MX2023000994A (ja)
WO (1) WO2022031756A1 (ja)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116194154A (zh) 2020-08-07 2023-05-30 太空飞船七有限责任公司 使用aav载体的plakophilin-2(pkp2)基因疗法
WO2023159190A1 (en) * 2022-02-18 2023-08-24 Ginkgo Bioworks, Inc. Gene therapy for arrhythmogenic cardiomyopathy
WO2023178337A2 (en) * 2022-03-18 2023-09-21 University Of Florida Research Foundation, Incorporated Methods and compositions for treating rbm20 related cardiomyopathy with a viral vector

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK2176283T3 (en) 2007-07-14 2017-02-13 Univ Iowa Res Found METHODS AND COMPOSITIONS FOR TREATMENT OF BRAIN DISEASES
ES2739288T3 (es) 2013-09-13 2020-01-30 California Inst Of Techn Recuperación selectiva
MX2016014220A (es) 2014-05-02 2017-02-06 Genzyme Corp Vectores de aav para la terapia genica de la retina y el snc.
AU2016366549B2 (en) 2015-12-11 2022-11-10 California Institute Of Technology Targeting peptides for directing adeno-associated viruses (AAVs)
CN112272705A (zh) * 2018-06-08 2021-01-26 佛罗里达大学研究基金会有限公司 用于心肌病的aav心脏基因治疗

Also Published As

Publication number Publication date
MX2023000994A (es) 2023-03-01
EP4192962A1 (en) 2023-06-14
AU2021321410A1 (en) 2023-04-06
BR112023001336A2 (pt) 2023-02-14
CA3184983A1 (en) 2022-02-10
WO2022031756A1 (en) 2022-02-10
US20230257431A1 (en) 2023-08-17
IL300187A (en) 2023-03-01
KR20230042468A (ko) 2023-03-28
CN116234916A (zh) 2023-06-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110997923B (zh) 腺相关病毒载体递送肌肉特异性微肌营养不良蛋白以治疗肌营养不良症
US11883506B2 (en) Plakophilin-2 (PKP2) gene therapy using AAV vector
US20230257431A1 (en) Csrp3 (cysteine and glycine rich protein 3) gene therapy
US20210260218A1 (en) Adeno-associated virus vector delivery of muscle specific micro-dystrophin to treat muscular dystrophy
US20230049491A1 (en) Adeno-Associated Virus Vector Delivery of a Fragment of Micro-Dystrophin to Treat Muscular Dystrophy
AU2019216257A1 (en) Gene therapy for limb-girdle muscular dystrophy type 2C
JP7213238B2 (ja) 筋ジストロフィーを治療するための筋特異的マイクロジストロフィンのアデノ随伴ウイルスベクター送達
US20230272422A1 (en) Adeno-associated viral vector for glut1 expression and uses thereof
AU2021312320A1 (en) Gene therapy vector for eEF1A2 and uses thereof
WO2023108129A1 (en) Troponin c (tnnc1) gene therapy using aav vector
TW202409285A (zh) 使用ａａｖ載體之ｂ細胞淋巴瘤２相關抗凋亡３（ｂａｇ３）基因療法
WO2024148332A1 (en) Plakophilin-2 (pkp2) gene therapy using aav vector
WO2023108029A2 (en) Junctophilin-2 (jph2) gene therapy using aav vector
WO2023150563A1 (en) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment and the prevention of cardiomyopathy associated with friedreich ataxia

Legal Events

Date Code Title Description
RD04 Notification of resignation of power of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424

Effective date: 20230522

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20240227