JP2023536169A - 改善された抗原結合受容体 - Google Patents

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Abstract

本発明は一般に、ＥＵナンバリングによるアミノ酸変異Ｐ３２９Ｇを含むＦｃドメインに特異的に結合することができる抗原結合受容体に関する。本発明はまた、治療用抗体の変異型Ｆｃドメインに特異的に結合する／それと相互作用することによって動員される抗原結合受容体で形質導入されたＴ細胞に関する。さらに、本発明は、本発明の形質導入Ｔ細胞及び／又は本発明の抗原結合受容体をコードする核酸分子、ベクター、並びに変異型Ｆｃドメインを含む腫瘍標的化抗体を含むキットに関する。【選択図】図１Ａ

Description

発明の分野
本発明は一般に、ＥＵナンバリングによるアミノ酸変異Ｐ３２９Ｇを含むＦｃドメインに特異的に結合することができる抗原結合受容体に関する。本発明はまた、治療用抗体の変異型Ｆｃドメインに特異的に結合する／それと相互作用することによって動員される抗原結合受容体で形質導入されたＴ細胞に関する。さらに、本発明は、本発明の形質導入Ｔ細胞及び／又は本発明の抗原結合受容体をコードする核酸分子、ベクター、並びに変異型Ｆｃドメインを含む腫瘍標的化抗体を含むキットに関する。
背景
養子Ｔ細胞療法（ＡＣＴ）は、がん特異的Ｔ細胞を使用する強力な治療アプローチである（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｒｅｓｔｉｆｏ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３４８（６２３０）（２０１５），６２－６８）。ＡＣＴは、天然に存在する腫瘍特異的細胞、又はＴ細胞若しくはキメラ抗原受容体を使用した遺伝子操作によって特異的にされたＴ細胞を使用し得る（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｒｅｓｔｉｆｏ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３４８（６２３０）（２０１５），６２－６８）。ＡＣＴは、進行性及び他の治療抵抗性疾患、例えば、急性リンパ性白血病、非ホジキンリンパ腫又は黒色腫に罹患している患者でさえも、治療に成功し、寛解を誘導することができる（Ｄｕｄｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２６（３２）（２００８），５２３３－５２３９；Ｇｒｕｐｐ ｅｔ ａｌ．，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３６８（１６）（２０１３），１５０９－１５１８；Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ．（２０１５）３３（６）：５４０－５４９，ｄｏｉ：１０．１２００／ＪＣＯ．２０１４．５６．２０２５．Ｅｐｕｂ ２０１４ Ａｕｇ ２５）。
しかしながら、印象的な臨床的有効性にもかかわらず、ＡＣＴは治療関連毒性によって制限される。ＡＣＴで使用される操作されたＴ細胞の特異性並びに結果として生じるオンターゲット及びオフターゲット効果は、主に、抗原結合受容体に実装された腫瘍標的化抗原結合部分によって駆動される。腫瘍抗原の非排他的発現又は発現レベルの時間的差は、治療の許容できない毒性のために、重篤な副作用又はＡＣＴの停止さえももたらし得る。
さらに、効率的な腫瘍細胞溶解のための腫瘍特異的Ｔ細胞の利用可能性は、インビボでの操作されたＴ細胞の長期生存及び増殖能力に依存する。一方、Ｔ細胞のインビボでの生存及び増殖はまた、健常組織の損傷をもたらし得る制御されないＴ細胞応答の持続に起因する望ましくない長期効果をもたらし得る（Ｇｒｕｐｐ ｅｔ ａｌ．２０１３ Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３６８（１６）：１５０９－１８，Ｍａｕｄｅ ｅｔ ａｌ．２０１４ ２０１４ Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３７１（１６）：１５０７－１７）。
重篤な治療関連毒性を制限し、ＡＣＴの安全性を改善するための１つのアプローチは、免疫シナプスにアダプター分子を導入することによってＴ細胞の活性化及び増殖を制限することである。そのようなアダプター分子は、例えば最近記載された葉酸－ＦＩＴＣスイッチ（Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ ２０１５；１３７：２８３２－２８３５）のような小分子二峰性スイッチを含む。さらなるアプローチには、Ｔ細胞の特異性を誘導して腫瘍細胞を標的化するタグを含む人工的に改変された抗体が含まれた（Ｍａ ｅｔ ａｌ．ＰＮＡＳ ２０１６；１１３（４）：Ｅ４５０－４５８，Ｃａｏ ｅｔ ａｌ．Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ ２０１６；１２８：１－６，Ｒｏｇｅｒｓ ｅｔ ａｌ．ＰＮＡＳ ２０１６；１１３（４）：Ｅ４５９－４６８，Ｔａｍａｄａ ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２０１２；１８（２３）：６４３６－６４４５）。
しかしながら、既存のアプローチにはいくつかの制限がある。分子スイッチに依存する免疫学的シナプスは、免疫応答を誘発するか、非特異的なオフターゲット効果をもたらす可能性がある追加の要素の導入を必要とする。さらに、そのような多成分システムの複雑さは、治療有効性及び忍容性を制限する可能性がある。一方、既存の治療用モノクローナル抗体におけるタグ構造の導入は、これらの構築物の有効性及び安全性プロファイルに影響を及ぼし得る。さらに、タグを付加することは、そのような抗体の産生をより複雑にし、更なる安全性試験を更に必要とする更なる改変及び精製工程を必要とする。
さらに、非ヒト抗体又は部分的ヒト抗体のインビボ使用は、抗イディオタイプ又はヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）を含む抗薬物抗体（ＡＤＡ）の形成をもたらし得る（Ｂｌａｎｃｏ ｅｔ ａｌ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７，９６－１０６（１９９７））。これらのＡＤＡは、薬物動態特性、投与された抗体の安全性及び機能性に影響を及ぼす可能性があり、ヒト化はこれに取り組むために適用されている（Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ ＰＮＡＳ ８９，４２８５－４２８９（１９９２））。同様に、ＡＤＡがマウスベースのＣＡＲ－Ｔ細胞について認められている。ヒト抗マウスＩｇＧ抗体は、ＣＡＲ形質導入Ｔ細胞と共に発生することが知られているが、有害な臨床結果を有しないと考えられてきた。Ｍａｕｓらは、ＣＡＲに特異的なＩｇＥ抗体を介している可能性が最も高い、ＣＡＲ改変Ｔ細胞に起因するアナフィラキシーを初めて記載した。これらの結果は、マウス抗体に由来する抗原結合受容体の潜在的な免疫原性が、特に断続的な投薬スケジュールを用いて投与される場合、安全性の問題であり得ることを示している（Ｍａｕｓ ｅｔ ａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ １，２６－３１（２０１３））。したがって、がん患者のニーズを満たすためには、標的腫瘍療法、特に養子Ｔ細胞療法を改善する必要がある。したがって、ＡＣＴの安全性及び有効性を改善し、上記の欠点を克服する可能性を有する改善された手段を提供することが依然として必要とされている。
発明の概要
本発明は、改善された特性を有する抗原結合受容体、特に、形質導入細胞において安定であり高度に発現されるヒト化抗原結合受容体を提供する。
アンカリング膜貫通ドメインと細胞外ドメインとを含む抗原結合受容体であって、細胞外ドメインが、
（ｉ）配列番号１の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、配列番号２又は配列番号４０のＨＣＤＲ２及び配列番号３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
（ｉｉ）配列番号４の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、配列番号５のＬＣＤＲ２及び配列番号６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と
を含む抗原結合部分を含む、抗原結合受容体が本明細書において提供される。
一実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号８、配列番号４１、配列番号４４及び配列番号１２６からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号１２７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、アンカリング膜貫通ドメインは、ＣＤ８、ＣＤ４、ＣＤ３ｚ、ＦＣＧＲ３Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＤＡＰ１０若しくはＤＡＰ１２膜貫通ドメイン又はそのフラグメントからなる群より選択される膜貫通ドメインであり、特に、アンカリング膜貫通ドメインは、ＣＤ８膜貫通ドメイン又はそのフラグメントである。
一実施形態では、抗原結合受容体は、少なくとも１つの刺激シグナル伝達ドメイン及び／又は少なくとも１つの同時刺激シグナル伝達ドメインを含む。
一実施形態では、少なくとも１つの刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ｚの細胞内ドメイン、ＦＣＧＲ３Ａの細胞内ドメイン及びＮＫＧ２Ｄの細胞内ドメイン又は刺激シグナル伝達活性を保持するそのフラグメントからなる群より個別に選択され、特に、少なくとも１つの刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ｚ細胞内ドメイン又はＣＤ３ｚ刺激シグナル伝達活性を保持するそのフラグメントである。
一実施形態では、少なくとも１つの同時刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７の細胞内ドメイン、ＣＤ２８の細胞内ドメイン、ＣＤ１３７の細胞内ドメイン、ＯＸ４０の細胞内ドメイン、ＩＣＯＳの細胞内ドメイン、ＤＡＰ１０の細胞内ドメイン及びＤＡＰ１２の細胞内ドメイン又は同時刺激シグナル伝達活性を保持するそれらのフラグメントからなる群より個別に選択される。
一実施形態では、抗原結合受容体は、少なくとも１つのＣＤ２８同時刺激ドメイン若しくはそのフラグメント、及び／又は、少なくとも１つのＣＤ１３７同時刺激ドメイン若しくはＣＤ２８同時刺激活性を保持するそのフラグメントを含む。
一実施形態では、抗原結合受容体は、ＣＤ３ｚの細胞内ドメインを含む刺激シグナル伝達ドメイン又はＣＤ３ｚ刺激シグナル伝達活性を保持するそのフラグメントを含み、かつＣＤ２８の細胞内ドメインを含む同時刺激シグナル伝達ドメイン又はＣＤ２８同時刺激シグナル伝達活性を保持するそのフラグメントを含む。
一実施形態では、抗原結合受容体は、ＣＤ３ｚの細胞内ドメインを含む１つの刺激シグナル伝達ドメイン又はＣＤ３ｚ刺激シグナル伝達活性を保持するそのフラグメントを含み、かつＣＤ１３７の細胞内ドメインを含む１つの同時刺激シグナル伝達ドメイン又はＣＤ１３７同時刺激シグナル伝達活性を保持するそのフラグメントを含む。
一実施形態では、抗原結合部分は、Ｃ末端において、アンカリング膜貫通ドメインのＮ末端に、任意にペプチドリンカーを介して連結されている。
一実施形態では、抗原結合部分の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）は、Ｃ末端において、アンカリング膜貫通ドメインのＮ末端に、任意にペプチドリンカーを介して連結されており、かつ／又は、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）は、Ｃ末端において、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）のＮ末端に、任意にペプチドリンカーを介して連結されている。
一実施形態では、本明細書に記載する抗原結合受容体を発現することができるＴ細胞が提供される。
一実施形態では、本明細書に記載する抗原結合受容体をコードする、単離されたポリヌクレオチドが提供される。
一実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドを含むベクター、特に発現ベクターを提供する。
一実施形態では、
（Ａ）本明細書に記載の抗原結合受容体を発現することができる、形質導入Ｔ細胞と、
（Ｂ）標的細胞抗原に結合し、かつＥＵナンバリングによるアミノ酸変異Ｐ３２９Ｇを含むＦｃドメインを含む抗体と
を含む、キットが提供される。
一実施形態では、
（Ａ）本明細書に記載する抗原結合受容体をコードする、単離されたポリヌクレオチドと、
（Ｂ）標的細胞抗原に結合し、かつＥＵナンバリングによるアミノ酸変異Ｐ３２９Ｇを含むＦｃドメインを含む抗体と
を含む、キットが提供される。
一実施形態では、標的細胞抗原は、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、メソテリン（ＭＳＬＮ）、ＣＤ２０、葉酸受容体１（ＦＯＬＲ１）及びテネイシン（ＴＮＣ）からなる群より選択される。
一実施形態では、医薬として使用するための本明細書に記載のキットが提供される。
一実施形態では、疾患の治療において使用するための、特にがんの治療において使用するための、本明細書に記載のキットが提供される。
一実施形態では、標的細胞抗原に結合し、かつＥＵナンバリングによるアミノ酸変異Ｐ３２９Ｇを含むＦｃドメインを含む抗体の投与前、投与と同時、又は投与後に投与される、医薬として使用するための、本明細書に記載の形質導入Ｔ細胞が提供される。
一実施形態では、治療は、標的細胞抗原に結合し、かつＥＵナンバリングによるアミノ酸変異Ｐ３２９Ｇを含むＦｃドメインを含む抗体の投与前、投与と同時、又は投与後の形質導入Ｔ細胞の投与を含む。
一実施形態では、対象における疾患を治療する方法であって、本明細書に記載の抗原結合受容体を発現することができる形質導入Ｔ細胞を対象に投与すること、及び、形質導入Ｔ細胞の投与前、投与と同時、又は投与後に、治療有効量の、標的細胞抗原に結合し、かつＥＵナンバリングによるアミノ酸変異Ｐ３２９Ｇを含むＦｃドメインを含む抗体を投与することを含む、方法が提供される。
一実施形態では、標的細胞の溶解を誘導する方法であって、標的細胞を、標的細胞抗原に結合し、かつＥＵナンバリングによるアミノ酸変異Ｐ３２９Ｇを含むＦｃドメインを含む抗体の存在下で、本明細書に記載の抗原結合受容体を発現することができる形質導入Ｔ細胞と接触させることを含む、方法が提供される。
一実施形態では、がんの治療のための医薬の製造のための、本明細書に記載の抗原結合受容体、本明細書に記載のポリヌクレオチド又は本明細書に記載の形質導入Ｔ細胞の使用が提供される。
ｓｃＦｖフォーマットの抗Ｐ３２９Ｇ結合部分を有する第２世代キメラ抗原結合受容体の概略図。ＶＨ×ＶＬ ｓｃＦｖ（図１Ａ）配向及びＶＬ×ＶＨ（図１Ｂ）配向。図１Ｃ及び図１Ｄは、それぞれ図１Ａ及び図１Ｂに示される抗原結合受容体をコードするＤＮＡ構築物を示す。 異なるヒト化ｓｃＦｖバリアントのＣＡＲ表面発現（図２Ａ）及び形質導入対照としての役割を果たす相関するＧＦＰ発現（図２Ｂ）を示す。 結合部分としてＰ３２９Ｇバインダーの異なるヒト化バージョンを使用する抗Ｐ３２９Ｇ ＣＡＲ ＪｕｒｋａｔレポーターＴ細胞の非特異的シグナル伝達の評価。活性化を、抗Ｐ３２９Ｇ ＣＡＲ Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴレポーターアッセイを使用して、異なるＦｃバリアントを有する抗体の存在下で、又はＰ３２９Ｇ Ｆｃバリアントを含むが標的細胞を含まない条件下のいずれかで、ＣＤ３下流シグナル伝達の強度の定量化によって評価した。３連の技術平均値を示し、エラーバーはＳＤを示す。 ＦｏｌＲ１に対する高い（１６Ｄ５）、中程度（１６Ｄ５ Ｗ９６Ｙ）又は低い（１６Ｄ５ Ｇ４９Ｓ／Ｋ５３Ａ）親和性を有する抗体と組み合わせて、高い（ＨｅＬａ－ＦｏｌＲ１）、中程度（Ｓｋｏｖ３）及び低い（ＨＴ２９）標的発現レベルを有するＦｏｌＲ１＋標的細胞の存在下で異なるヒト化バージョンのＰ３２９Ｇバインダーを使用する抗Ｐ ３２９Ｇ ＣＡＲ ＪｕｒｋａｔレポーターＴ細胞の活性化。活性化を、抗Ｐ３２９Ｇ ＣＡＲ Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴレポーターアッセイを使用したＣＤ３下流シグナル伝達の強度の定量化によって評価した。３連の技術平均値を示し、エラーバーはＳＤを示す。 結合部分としてＰ３２９Ｇバインダーの異なるヒト化バージョンを使用する抗Ｐ３２９Ｇ ＣＡＲ Ｊｕｒｋａｔ ＮＦＡＴレポーターＴ細胞の活性化。レポーター細胞の活性を、ＩｇＧ及びＨｅＬａ（ＦｏｌＲ１＋）標的細胞を標的とする抗ＦｏｌＲ１（１６Ｄ５）Ｐ３２９Ｇ ＩｇＧ１の存在下で評価した（図５Ａ）。抗体の用量依存性活性化を、抗Ｐ３２９Ｇ ＣＡＲ Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴレポーターアッセイを使用したＣＤ３下流シグナル伝達の強度の定量化によって評価し、曲線下面積を計算した（図５Ｂ）。３連の技術平均値を示し、エラーバーはＳＤを示す。 結合部分としてＰ３２９Ｇバインダーの異なるヒト化バージョンを使用する抗Ｐ３２９Ｇ ＣＡＲ Ｊｕｒｋａｔ ＮＦＡＴレポーターＴ細胞の活性化。レポーター細胞の活性を、ＩｇＧ及びＨｅＬａ（ＨＥＲ２＋）標的細胞を標的とする抗ＨＥＲ２（ペルツズマブ）Ｐ３２９Ｇ ＩｇＧ１の存在下で評価した（図６Ａ）。抗体の用量依存性活性化を、抗Ｐ３２９Ｇ ＣＡＲ Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴレポーターアッセイを使用したＣＤ３下流シグナル伝達の強度の定量化によって評価し、曲線下面積を計算した（図６Ｂ）。３連の技術平均値を示し、エラーバーはＳＤを示す。 ジスルフィド安定化ＶＨｘＶＬ１ ｓｃＦｖバリアントのＣＡＲ表面発現を示す。
詳細な説明
定義
用語は、以下に他の意味であると定義されていない限り、当該技術分野で一般的に使用されるように本明細書で使用される。
本明細書の目的において「受容体ヒトフレームワーク」とは、以下に定義するように、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークに由来する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワーク又は重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク「由来の」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含んでいてもよく、又はアミノ酸配列の変更を含んでいてもよい。いくつかの態様では、アミノ酸変更の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、又は２以下である。いくつかの態様では、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列又はヒトコンセンサスフレームワーク配列と配列が同一である。
「活性化Ｆｃ受容体」は、抗体のＦｃドメインによる連結の後に、エフェクター機能を発揮するために受容体を含む細胞を刺激するシグナル伝達事象を誘発するＦｃ受容体である。ヒト活性化Ｆｃ受容体としては、ＦｃγＲＩＩＩａ（ＣＤ１６ａ）、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩａ（ＣＤ３２）及びＦｃαＲＩ（ＣＤ８９）が挙げられる。
「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」（「ＡＤＣＣ」）は、免疫エフェクター細胞による、抗体で被覆された標的細胞の溶解を引き起こす免疫機構である。標的細胞は、Ｆｃ領域を含む抗体又はその誘導体が、一般的にＦｃ領域に対してＮ末端であるタンパク質部分を介して、特異的に結合する細胞である。本明細書で使用される場合、「減少したＡＤＣＣ」という用語は、上記で定義されたＡＤＣＣの機構による、標的細胞を取り囲む培地中の所与の濃度の抗体で所与の時間に溶解される標的細胞の数の減少、及び／又はＡＤＣＣの機構による、所与の時間に所与の数の標的細胞の溶解を達成するために必要な、標的細胞を取り囲む培地中の抗体の濃度の増加のいずれかとして定義される。ＡＤＣＣの減少は、同じ標準的な産生、精製、製剤化及び保存方法（当業者に知られている）を使用して、同じ種類の宿主細胞によって産生される同じ抗体によって媒介されるが、操作されていないＡＤＣＣと比較している。例えば、そのＦｃドメインを含む抗体によって媒介されるＡＤＣＣの低下である、ＡＤＣＣを低下させるアミノ酸置換は、Ｆｃドメイン中にこのアミノ酸置換を含まない同じ抗体によって媒介されるＡＤＣＣに対するものである。ＡＤＣＣを測定するのに適したアッセイは、当該技術分野で周知である（例えば、ＰＣＴ国際公開第２００６／０８２５１５号又は同第２０１２／１３０８３１号を参照されたい）。
薬剤、例えば、医薬組成物の「有効量」は、所望の治療結果又は予防結果を達成するために必要な投薬量及び所要期間で有効な量を指す。
「親和性」は、分子（例えば、抗体）とその結合パートナー（例えば、抗原）との単一の結合部位の間の非共有性相互作用の合計の強度を指す。別途示されない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば、抗体及び抗原）間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は一般に、解離定数（ＫＤ）によって表し得る。親和性は、本明細書に記載するものを含め、当技術分野で一般的な方法によって測定することができる。結合親和性を測定するための具体的な例証的及び例示的な方法が以下に説明される。
「アミノ酸」という用語は、天然アミノ酸及び合成アミノ酸、並びに天然アミノ酸と類似の様式で機能するアミノ酸類似体及びアミノ酸模倣体を指す。天然に存在するアミノ酸は、遺伝子コードによってコードされたもの、並びに後に修飾されるもの、例えば、ヒドロキシプロリン、γ－カルボキシグルタマート、及びＯ－ホスホセリンである。アミノ酸類似体は、天然アミノ酸と同じ塩基化学構造を有する化合物、すなわち、水素、アミノ基、及びＲ基へ結合したα炭素、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウムを指す。このような類似体は、修飾されたＲ基（例えば、ノルロイシン）又は修飾されたペプチド主鎖を有するが、天然に存在するアミノ酸と同じ塩基化学構造を保有している。アミノ酸模倣体は、アミノ酸の一般的か化学構造とは異なる構造を有するが、天然アミノ酸と類似の様式で機能する化合物を指す。アミノ酸は、ＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ生化学命名法委員会によって推奨されるアミノ酸の一般的に公知の３文字表記によって又は１文字表記によって本明細書で言及されてもよい。
本明細書で使用される場合、「アミノ酸変異」という用語は、アミノ酸の置換、欠失、挿入、及び修飾を包含することを意味する。置換、欠失、挿入及び修飾の任意の組み合わせは、最終構築物が、所望の特徴、例えば、Ｆｃ受容体に対する結合の低減、又は別のペプチドとの会合の増加を有する限り、最終構築物に到達するように行うことができる。アミノ酸配列の欠失及び挿入は、アミノ末端及び／又はカルボキシ末端のアミノ酸の欠失及び挿入を含む。特定のアミノ酸変異は、アミノ酸の置換である。例えば、Ｆｃ領域の結合特性を変更する目的のために、非保存的アミノ酸置換、すなわち、１つのアミノ酸を、構造特性及び／又は化学特性が異なる別のアミノ酸と置き換えることが特に好ましい。アミノ酸の置換には、非天然アミノ酸による置き換え、又は２０種類の標準的なアミノ酸の天然アミノ酸誘導体（例えば、４－ヒドロキシプロリン、３－メチルヒスチジン、オルニチン、ホモセリン、５－ヒドロキシリジン）による置き換えが含まれる。アミノ酸変異は、当該技術分野で周知の遺伝的方法又は化学的方法を用いて生じさせることができる。遺伝的方法には、特定部位の突然変異誘発、ＰＣＲ、遺伝子合成等が含まれ得る。遺伝子工学以外の方法によってアミノ酸の側鎖基を変える方法、例えば、化学修飾も有用な場合があることが想定される。同じアミノ酸変異を示すために、本明細書で様々な名称を使用することができる。例えば、Ｆｃドメインの位置３２９のプロリンからグリシンへの置換は、３２９Ｇ、Ｇ３２９、Ｇ３２９、Ｐ３２９Ｇ又はＰｒｏ３２９Ｇｌｙと示すことができる。
「抗体」という用語は、本明細書では最も広い意味で使用され、それらが所望の抗原結合活性を呈する限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）及び抗体フラグメントを含むがこれらに限定されない、様々な抗体構造を包含する。
「抗体フラグメント」は、インタクト抗体が結合する抗原を結合するインタクト抗体の一部を含むインタクト抗体以外の分子を指す。抗体フラグメントの例としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディ；線状抗体；一本鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ及びｓｃＦａｂ）；単一ドメイン抗体（ｄＡｂ）；並びに、抗体フラグメントから形成した多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない。特定の抗体フラグメントの総説としては、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ａｎｄ Ｈｕｄｓｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２３：１１２６－１１３６（２００５）を参照されたい。
「抗原結合ドメイン」という用語は、ある抗原の一部又は全てに特異的に結合し、ある抗原の一部又は全てに対して相補的な抗体の一部を指す。抗原結合ドメインは、例えば、１つ又は複数の抗体可変ドメイン（抗体可変領域とも呼ばれる）によって与えられてもよい。特に、抗原結合ドメインは、抗体軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、抗体重鎖可変ドメイン（ＶＨ）とを含む。
本明細書で使用される場合、「抗原結合分子」という用語は、最も広範な意味で、抗原決定基を特異的に結合する分子を指す。抗原結合分子の例は、免疫グロブリン及びその誘導体、例えばそのフラグメント、並びに抗原結合受容体及びその誘導体である。
本明細書で使用される場合、「抗原結合部分」という用語は、抗原決定基に特異的に結合するポリペプチド分子を指す。一実施形態では、抗原結合部分は、それが結合している実体（例えば、抗原結合部分を含む抗原結合受容体を発現する細胞）を標的部位、例えば抗原決定基を持つ特定の種類の腫瘍細胞又は腫瘍間質に向けることができる。抗原結合部分は、本明細書に更に定義される抗体及びそのフラグメントを含む。特定の抗原結合部分は、抗体重鎖可変領域と抗体軽鎖可変領域（例えばｓｃＦｖフラグメント）とを含む、抗体の抗原結合ドメインを含む。特定の実施形態では、抗原結合部分は、本明細書で更に定義され、当該技術分野で知られているような抗体定常領域を含んでいてもよい。有用な重鎖定常領域は、α、δ、ε、γ又はμの５つのアイソタイプのいずれかを含む。有用な軽鎖定常領域は、κ及びλの２つのアイソタイプのいずれかを含む。
本発明の文脈において、「抗原結合受容体」という用語は、アンカリング膜貫通ドメインと、少なくとも１つの抗原結合部分を含む細胞外ドメインとを含む抗原結合分子に関する。抗原結合受容体は、異なる源由来のポリペプチド部分からつくられることができる。したがって、抗原結合受容体はまた、「融合タンパク質」及び／又は「キメラタンパク質」としても理解されることもできる。通常、融合タンパク質とは、元々別個のタンパク質についてコードした２つ以上の遺伝子（又は好ましくはｃＤＮＡ）の結合を経て創出されるタンパク質である。この融合遺伝子（又は融合ｃＤＮＡ）の翻訳は結果的に、好ましくは元々のタンパク質の各々に由来する機能的特性を有する一本鎖ポリペプチドを生じる。組換え融合タンパク質は、生物学的研究又は治療薬において使用するための組換えＤＮＡ技術によって人工的に創出される。本発明の抗原結合受容体の更なる詳細を本明細書において下記に記載する。本発明の文脈において、ＣＡＲ（キメラ抗原受容体）は、スペーサー配列によって、例えば、胞内シグナル伝達ドメインにそれ自体が融合したアンカリング膜貫通ドメインに融合した抗原結合部分を含む細胞外部分を含む抗原結合受容体であると理解されている。
「抗原結合部位」は、抗原との相互作用を与える抗原結合分子の部位、すなわち１つ又は複数のアミノ酸残基を指す。例えば、抗体の抗原結合部位は、相補性決定領域（ＣＤＲ）からのアミノ酸残基を含む。天然の免疫グロブリン分子は、典型的には、２つの抗原結合部位を含み、Ｆａｂ分子は、典型的には、１つの抗原結合部位を有する。
「抗原結合ドメイン」という用語は、抗原の一部又は全部に特異的に結合し、かつこれらに相補的である領域を含む、抗体又は抗原結合受容体の一部を指す。抗原結合ドメインは、例えば、１つ以上の免疫グロブリン可変ドメイン（可変領域とも呼ばれる）によって与えられてもよい。特に、抗原結合ドメインは、免疫グロブリン軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と免疫グロブリン重鎖可変ドメイン（ＶＨ）とを含む。
本明細書で使用される場合、「抗原決定基」という用語は、「抗原」及び「エピトープ」と同義であり、抗原結合部分－抗原複合体を形成する、抗原結合部分が結合するポリペプチド高分子上の部位（例えば、アミノ酸の連続伸長部又は異なる領域の非連続アミノ酸で構成される立体配座構造）を指す。有用な抗原決定基は、例えば、腫瘍細胞の表面上に、ウイルス感染した細胞の表面上に、他の罹患した細胞の表面上に、免疫細胞の表面上に、血清中で遊離して、かつ／又は細胞外マトリックス（ＥＣＭ）内に認めることができる。特に明記しない限り、本明細書において抗原と称されるタンパク質は、哺乳動物、例えば、霊長類（例えばヒト）及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）を含め、任意の脊椎動物源由来の任意の天然形態のタンパク質であってもよい。特定の実施形態では、抗原は、ヒトタンパク質である。本発明の特定のタンパク質について言及される場合、この用語は、「全長」の未処理のタンパク質、及び細胞の処理から得られるタンパク質の任意の形態を包含する。この用語はまた、天然に存在するタンパク質バリアント、例えば、スプライスバリアント又は対立遺伝子バリアントを包含する。
本発明による「変異型Ｆｃドメインを含む抗体」、すなわち治療用抗体は、１、２、３又はそれ以上の結合ドメインを有し得、単一特異性、二重特異性又は多重特異性であり得る。抗体は、単一の種に由来する完全長であり得、又は、キメラ化若しくはヒト化することができる。２つを超える抗原結合ドメインを有する抗体について、いくつかの結合ドメインは、同一であってもよく、かつ／又は同じ特異性を有していてもよい。
本明細書で使用される「ＡＴＤ」という用語は、細胞の細胞膜（複数可）において組み込むことのできるポリペプチド鎖を規定する「アンカリング膜貫通ドメイン」を指す。ＡＴＭは、細胞外ポリペプチドドメイン及び／又は細胞内ポリペプチドドメインに融合することができ、この中でこれらの細胞外ポリペプチドドメイン及び／又は細胞内ポリペプチドドメインは、細胞膜に閉じ込められることになる。本発明の抗原結合受容体の文脈において、ＡＴＭは、本発明の抗原結合受容体の膜への付着及び閉じ込めを与える。本発明の抗原結合受容体は、少なくとも１つのＡＴＭと、抗原結合部分を含む細胞外ドメインとを含む。さらに、ＡＴＭは、細胞内シグナル伝達ドメインに融合され得る。
「特異的結合」とは、その結合が抗原選択性であり、望ましくない相互作用又は非特異的な相互作用とは判別できることを意味する。抗原結合部分が特定の抗原決定基に結合する能力は、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）又は当業者には知られている他の技術、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術（ＢＩＡｃｏｒｅ機器で分析される）（Ｌｉｌｊｅｂｌａｄ ｅｔ ａｌ．，Ｇｌｙｃｏ Ｊ １７，３２３－３２９（２０００））、及び従来の結合アッセイ（Ｈｅｅｌｅｙ，Ｅｎｄｏｃｒ Ｒｅｓ ２８，２１７－２２９（２００２））のいずれかによって測定することができる。一実施形態では、無関係なタンパク質に対する抗原結合部分の結合度は、例えばＳＰＲによって測定される抗原に対する抗原結合部分の結合の約１０％未満である。特定の実施形態では、抗原に結合する抗原結合部分、又はこの抗原結合部分を含む抗原結合分子は、解離定数（ＫＤ）が、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０－８Ｍ以下、例えば、１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば、１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）である。
本明細書で採用されるような「ＣＤＲ」という用語は、当技術分野で周知である「相補性決定領域」に関する。ＣＤＲは、分子の特異性を決定し及び特異的リガンドと接触させる免疫グロブリン又は抗原結合受容体の部分である。ＣＤＲは、分子の最も可変的な部分であり、これらの分子の抗原結合多様性に寄与する。各Ｖドメインにおいては３つのＣＤＲ領域、すなわちＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３がある。ＣＤＲ－Ｈは、可変重鎖のＣＤＲ領域を示し、ＣＤＲ－Ｌは、可変軽鎖のＣＤＲ領域に関する。ＶＨは、可変重鎖を意味し、ＶＬは、可変軽鎖を意味する。Ｉｇ由来領域のＣＤＲ領域は、「Ｋａｂａｔ」（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、５ｔｈ ｅｄｉｔ．ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ｎｏ．９１－３２４２ Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（１９９１）；Ｃｈｏｔｈｉａ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６（１９８７），９０１－９１７）又は「Ｃｈｏｔｈｉａ」（Ｎａｔｕｒｅ ３４２（１９８９），８７７－８８３）に記載されるように決定され得る。
「ＣＤ３ｚ」という用語は、「Ｔ細胞受容体Ｔ３ゼータ鎖」及び「ＣＤ２４７」としても公知のＴ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３ゼータ鎖を指す。
「キメラ抗原受容体」又は「キメラ受容体」又は「ＣＡＲ」という用語は、スペーサー配列によって（例えば、ＣＤ３ｚ及びＣＤ２８の）細胞内シグナル伝達／共シグナル伝達ドメインに融合した抗原結合部分（例えば、一本鎖抗体ドメイン）の細胞外部分から構成された抗原結合受容体を指す。
抗体の「クラス」は、その重鎖によって保有される定常ドメイン又は定常領域の型を指す。抗体には、次の５種類の主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭがあり、これらのうちのいくつかは、下位クラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２に更に分けることができる。特定の態様では、抗体はＩｇＧ１アイソタイプである。特定の態様では、抗体は、Ｆｃ領域エフェクター機能を低減させるためのＰ３２９Ｇ、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ変異を有するＩｇＧ１アイソタイプのものである。他の態様では、抗体はＩｇＧ２アイソタイプのものである。特定の態様では、抗体は、ＩｇＧ４抗体の安定性を改善するためにヒンジ領域にＳ２２８Ｐ変異を有するＩｇＧ４アイソタイプのものである。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２種類の１つに割り当てられ得る。
本出願で使用される場合、「ヒト由来の定常領域」又は「ヒト定常領域」という用語は、サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、若しくはＩｇＧ４のヒト抗体の定常重鎖領域、及び／又は定常軽鎖カッパ若しくはラムダ領域を示す。そのような定常領域はヒト又はヒト化抗体で使用することができ、これらは当技術分野で公知であり、例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄ．，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）に記載されている（また、例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｇ．，ａｎｄ Ｗｕ，Ｔ．Ｔ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２８（２０００）２１４－２１８；Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７２（１９７５）２７８５－２７８８も参照されたい）。本明細書で特に明記されない限り、定常領域におけるアミノ酸残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄ．，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１），ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ９１－３２４２に記載されるような、ＥＵナンバリングシステム（ＫａｂａｔのＥＵインデックスとも呼ばれる）に従う。
「クロスオーバー（クロスオーバー）」Ｆａｂ分子（「クロスＦａｂ」とも称される）とは、Ｆａｂ重鎖と軽鎖の可変ドメインが交換されている（即ち互いによって置き替えられている）Ｆａｂ分子を意味し、即ちクロスオーバーＦａｂ分子は、軽鎖可変ドメインＶＬ及び重鎖定常ドメイン１ＣＨ１（ＶＬ－ＣＨ１、Ｎ末端からＣ末端の方向に）で構成されるペプチド鎖と、重鎖可変ドメインＶＨ及び軽鎖定常ドメインＣＬ（ＶＨ－ＣＬ、Ｎ末端からＣ末端の方向に）で構成されるペプチド鎖とを含む。明確性のために、Ｆａｂ軽鎖及びＦａｂ重鎖の可変ドメインが交換されているクロスオーバーＦａｂ分子において、重鎖定常ドメイン１ ＣＨ１を含むペプチド鎖は、本明細書では、クロスオーバーＦａｂ分子の「重鎖」と呼ばれる。
本明細書で使用する場合の「ＣＳＤ」という用語は、同時刺激シグナル伝達ドメインを指す。
「エフェクター機能」とは、抗体のＦｃ領域に起因する生物学的活性のことで、抗体のアイソタイプによって異なる。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）のダウンレギュレーション、並びにＢ細胞活性化が挙げられる。
本明細書で使用される場合、「操作する、操作される、操作すること」という用語は、天然に存在するか、又は組換えポリペプチド又はこれらのフラグメントのペプチド骨格の任意の操作又は翻訳後修飾を含むと考えられる。操作することは、アミノ酸配列の修飾、グリコシル化パターンの修飾、又は個々のアミノ酸の側鎖基の修飾、及びこれらのアプローチの組合せを含む。
「発現カセット」という用語は、標的細胞における特定の核酸の転写が可能な一連の特定の核酸要素を有する、組換えで又は合成で生じるポリヌクレオチドを指す。組換え発現カセットは、プラスミド、染色体、ミトコンドリアＤＮＡ、プラスチドＤＮＡ、ウイルス又は核酸フラグメントに組み込むことができる。典型的には、発現ベクターの組換え発現カセット部分は、配列の中でも特に、転写される核酸配列と、プロモーターとを含む。特定の実施形態では、本発明の発現カセットは、本発明の二重特異性抗原結合分子をコードするポリヌクレオチド配列又はそのフラグメントを含む。
「Ｆａｂ分子」は、免疫グロブリンの重鎖（「Ｆａｂ重鎖」）のＶＨドメイン及びＣＨ１ドメインと、免疫グロブリンの軽鎖（「Ｆａｂ軽鎖」）のＶＬドメイン及びＣＬドメインとからなるタンパク質を指す。
「Ｆｃドメイン」又は「Ｆｃ領域」という用語は、本明細書において、定常領域の少なくとも一部を含有する免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を規定するために使用される。この用語は、天然配列Ｆｃ領域及びバリアントＦｃ領域を含む。ＩｇＧ重鎖のＦｃ領域の境界は、わずかに変動してもよいが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は通常、Ｃｙｓ２２６から、又はＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシ末端まで伸長するよう規定されている。しかしながら、宿主細胞によって産生される抗体は、重鎖のＣ末端から１つ又は複数、特に１つ又は２つのアミノ酸の翻訳後開裂を受けてもよい。したがって、全長重鎖をコードする特定の核酸分子の発現によって、宿主細胞によって産生する抗体は、全長重鎖を含んでいてもよく、又は全長重鎖の開裂したバリアントを含んでいてもよい（本明細書で「開裂したバリアント重鎖」とも呼ばれる）。これは、重鎖の最終的な２つのＣ末端アミノ酸がグリシン（Ｇ４４６）及びリジン（Ｋ４４７、Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによるナンバリング）である場合であってもよい。したがって、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）、又はＣ末端グリシン（Ｇｌｙ４４６）及びリジン（Ｋ４４７）が存在してもよく、又は存在していなくてもよい。Ｆｃドメイン（又は本明細書に定義されるＦｃドメインのサブユニット）を含む重鎖のアミノ酸配列は、特に示されていない場合には、本明細書では、Ｃ末端グリシン－リジンジペプチドを含まずに示される。本発明の一実施形態では、本明細書で特定されるＦｃドメインのサブユニットを含む重鎖は、更なるＣ末端グリシン－リジンジペプチド（Ｇ４４６及びＫ４４７、ナンバリングはＫａｂａｔのＥＵインデックスによる）を含む。本発明の一実施形態では、本明細書で特定されるＦｃドメインのサブユニットを含む重鎖は、更なるＣ末端グリシン残基（Ｇ４４６、ナンバリングはＫａｂａｔのＥＵインデックスによる）を含む。本明細書中に記載される医薬組成物等の本発明の組成物は、本発明の抗原結合分子の集団を含む。抗原結合分子の集合は、全長重鎖を含む分子と、開裂したバリアント重鎖を含む分子とを含んでいてもよい。抗原結合分子の集合は、全長重鎖を有する分子と、開裂したバリアント重鎖を有する分子との混合物からなっていてもよく、抗原結合分子の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％又は少なくとも９０％は、開裂したバリアント重鎖を有する。本発明の一実施形態では、本発明の抗原結合分子の集合を含む組成物は、更なるＣ末端グリシン－リジンジペプチド（Ｇ４４６及びＫ４４７、ナンバリングはＫａｂａｔのＥＵインデックスによる）を含む、本明細書で特定されるＦｃドメインのサブユニットを含む重鎖を含む抗原結合分子を含む。本発明の一実施形態では、本発明の抗原結合分子の集合を含む組成物は、更なるＣ末端グリシン残基（Ｇ４４６、ナンバリングはＫａｂａｔのＥＵインデックスによる）を含む、本明細書で特定されるＦｃドメインのサブユニットを含む重鎖を含む免疫活性化Ｆｃドメイン結合分子を含む。本発明の一実施形態では、そのような組成物は、本明細書で特定されるＦｃドメインのサブユニットを含む重鎖を含む分子、更なるＣ末端グリシン残基（Ｇ４４６、ナンバリングはＫａｂａｔのＥＵインデックスによる）を含む本明細書で特定されるＦｃドメインのサブユニットを含む重鎖を含む分子、更なるＣ末端グリシン－リジンジペプチド（Ｇ４４６及びＫ４４７、ナンバリングはＫａｂａｔのＥＵインデックスによる）を含む本明細書で特定されるＦｃドメインのサブユニットを含む重鎖を含む分子で構成される抗原結合分子の集合を含む。本明細書で特に明記されない限り、Ｆｃ領域又は定常領域におけるアミノ酸残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１（上も参照されたい）に記載されるような、ＥＵナンバリングシステム（ＥＵインデックスとも呼ばれる）に従う。本明細書で使用される場合、Ｆｃドメインの「サブユニット」とは、二量体のＦｃドメインを形成する２つのポリペプチドの１つ、すなわち、免疫グロブリン重鎖のＣ末端定常領域を含み、安定した自己会合が可能なポリペプチドを意味する。例えば、ＩｇＧ Ｆｃドメインのサブユニットは、ＩｇＧ ＣＨ２及びＩｇＧ ＣＨ３定常ドメインを含む。
「フレームワーク」又は「ＦＲ」は、相補性決定領域（ＣＤＲ）以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般に、４つのＦＲドメイン：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４からなる。したがって、ＣＤＲ及びＦＲ配列は、一般的に、ＶＨ（又はＶＬ）中において以下の配列で現れる：ＦＲ１－ＣＤＲ－Ｈ１（ＣＤＲ－Ｌ１）－ＦＲ２－ＣＤＲ－Ｈ２（ＣＤＲ－Ｌ２）－ＦＲ３－ＣＤＲ－Ｈ３（ＣＤＲ－Ｌ３）－ＦＲ４。
「完全長抗体」、「インタクトな抗体」、及び「全抗体」という用語は、本明細書で、天然抗体構造と実質的に同様の構造を有するか、又は本明細書に定義されるＦｃ領域を含有する重鎖を有する抗体を指すように同義に使用される。
「融合した」が意味するのは、構成要素（例えば、Ｆａｂ及び膜貫通ドメイン）が、ペプチド結合によって直接的に又は１つ以上のペプチドリンカーを介して連結されていることである。
「宿主細胞」、「宿主細胞株」及び「宿主細胞培養」という用語は互換的に使用され、外因性核酸が導入された細胞、及びそのような細胞の子孫を含む細胞を指す。宿主細胞には、「形質転換体」及び「形質転換細胞」が含まれ、これらは、継代数によらず、一次形質転換細胞及びそれに由来する子孫を含む。子孫は、親細胞と完全に同一の核酸含量でない場合があるが、変異を含んでもよい。本明細書では、最初に形質転換された細胞においてスクリーニング又は選択されたものと同じ機能又は生物学的活性を有する変異体の子孫が、含まれる。
「ヒト抗体」とは、ヒト若しくはヒト細胞により産生された抗体、又はヒト抗体レパートリなどのヒト抗体をコードする配列を利用した非ヒト由来の抗体に対応するアミノ酸配列を有する抗体である。このヒト抗体の定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を明確に除外する。
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨフレームワーク配列の選択において、最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからである。一般に、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１－３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤ（１９９１），ｖｏｌｓ．１－３におけるようなサブグループである。一態様では、ＶＬの場合、サブグループは、上述のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．に記載のように、サブグループカッパＩである。一態様では、ＶＨの場合、サブグループは、上述のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．に記載のように、サブグループカッパＩＩＩである。
「ヒト化」抗体（例えば、ヒト化ｓｃＦｖフラグメント）とは、非ヒトＣＤＲ由来のアミノ酸残基及びヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。特定の態様では、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの全てを実質的に含み、そのドメイン中ではＣＤＲの全て又は実質的に全てが非ヒト抗体のＣＤＲに対応し、ＦＲの全て又は実質的に全てがヒト抗体のＦＲに対応することになる。ヒト化抗体は、任意に、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部を含んでいてもよい。抗体、例えば、非ヒト抗体の「ヒト化形態」は、ヒト化を受けた抗体を指す。
本明細書で使用する場合、用語「超可変領域」又は「ＨＶＲ」とは、配列内で超可変可能であり、抗原結合特異性を決定する、抗体可変ドメインの領域、例えば「相補性決定領域」（ＣＤＲ）のそれぞれを意味する。
一般に、抗体は６つのＣＤＲを含み、３つがＶＨ中にあり（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３）、３つがＶＬ中にある（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３）。本明細書における例示的なＣＤＲとしては、以下：
（ａ）アミノ酸残基２６～３２（Ｌ１）、５０～５２（Ｌ２）、９１～９６（Ｌ３）、２６～３２（Ｈ１）、５３～５５（Ｈ２）、及び９６～１０１（Ｈ３）で生じる超可変ループ（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））、
（ｂ）アミノ酸残基２４－３４（Ｌ１）、５０－５６（Ｌ２）、８９－９７（Ｌ３）、３１－３５ｂ（Ｈ１）、５０－６５（Ｈ２）及び９５－１０２（Ｈ３）に存在するＣＤＲ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ（１９９１））；並びに
（ｃ）アミノ酸残基２７ｃ－３６（Ｌ１）、４６－５５（Ｌ２）、８９－９６（Ｌ３）、３０－３５ｂ（Ｈ１）、４７－５８（Ｈ２）及び９３－１０１（Ｈ３）で生じる抗原接触（ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２－７４５（１９９６））が挙げられる。
特に指示がない限り、ＣＤＲは、上記Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．に従い決定される。当業者は、ＣＤＲの表記は、上記Ｃｈｏｔｈｉａ、上記ＭｃＣａｌｌｕｍ、又は、任意の他の、科学的に認可された命名システムに従い決定することができることを理解するであろう。
「免疫コンジュゲート」とは、細胞傷害剤を含むがこれらに限定されない、１つ以上の異種分子にコンジュゲートされた抗体のことである。
「個体」又は「対象」は、哺乳動物である。哺乳動物としては、家畜動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト及び非ヒト霊長類、例えば、サル）、ウサギ及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）が含まれるが、これらに限定されない。特定の態様では、個体又は対象はヒトである。
「単離された」抗体とは、その自然環境の構成要素から分離されているものである。いくつかの態様では、抗体は、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等電点（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）又はクロマトグラフィー（例えば、イオン交換又は逆相ＨＰＬＣ）法によって決定される場合、純度が９５％又は９９％より高くなるまで精製される。抗体純度の評価のための方法の総説については、例えば、Ｆｌａｔｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ ８４８：７９－８７（２００７）を参照されたい。
「免疫グロブリン分子」という用語は、天然に存在する抗体の構造を有するタンパク質を指す。例えば、ＩｇＧクラスの免疫グロブリンは、約１５０，０００ダルトンのヘテロテトラマー糖タンパク質であり、ジスルフィド結合した２つの軽鎖と２つの重鎖で構成される。Ｎ末端からＣ末端に向かって、それぞれの重鎖は、可変重鎖ドメイン又は重鎖可変領域とも呼ばれる可変ドメイン（ＶＨ）と、その後に重鎖定常領域とも呼ばれる３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３）と、を有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端に向かって、それぞれの軽鎖は、可変軽鎖ドメイン又は軽鎖可変領域とも呼ばれる可変ドメイン（ＶＬ）と、その後に軽鎖定常領域とも呼ばれる定常軽鎖（ＣＬ）ドメインと、を有する。免疫グロブリンの重鎖は、α（ＩｇＡ）、δ（ＩｇＤ）、ε（ＩｇＥ）、γ（ＩｇＧ）又はμ（ＩｇＭ）と呼ばれる５種類の１つに割り当てられてもよく、このいくつかは、例えば、γ１（ＩｇＧ１）、γ２（ＩｇＧ２）、γ３（ＩｇＧ３）、γ４（ＩｇＧ４）、α１（ＩｇＡ１）及びα２（ＩｇＡ２）等の更なるサブタイプに分けられてもよい。免疫グロブリンの軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２種類のうちの１つに割り当てられてもよい。免疫グロブリンは、免疫グロブリンヒンジ領域を介して接続する、２つのＦａｂ分子とＦｃドメインとから本質的になる。
「単離された核酸」分子又はポリヌクレオチドが意図するのは、その天然環境から取り出された核酸分子、ＤＮＡ又はＲＮＡである。例えば、ベクターにおいて含有されるポリペプチドをコードする組換えポリヌクレオチドは、本発明の目的のために単離されていると考えられる。単離されたポリヌクレオチドの更なる例としては、異種性宿主細胞において維持された組換えポリヌクレオチド、又は溶液中の精製された（部分的に又は実質的に）、ポリヌクレオチドが挙げられる。単離されたポリヌクレオチドは、元々ポリヌクレオチド分子を含有する細胞において含有されているポリヌクレオチド分子を含むが、ポリヌクレオチド分子は、染色体外に存在するか、又はその天然の染色体位置とは異なる染色体位置に存在する。単離されたＲＮＡ分子は、本発明のインビボ又はインビトロＲＮＡ転写産物と、陽性及び陰性の鎖形態と、二本鎖形態とを含む。本発明による単離されたポリヌクレオチド又は核酸は、合成によって産生されるかかる分子を更に含む。加えて、ポリヌクレオチド又は核酸は、プロモーター、リボソーム結合部位、又は転写ターミネーター等の調節要素であってもよく、又は調節要素を含んでいてもよい。
本発明の参照ヌクレオチド配列に対して少なくとも、例えば９５％「同一の」ヌクレオチド配列を有する核酸又はポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチド配列が、参照ヌクレオチド配列の各１００ヌクレオチドあたり５個までの点突然変異を含んでいてもよいことを除けば、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が、参照配列と同一であることを意図している。言い換えると、参照ヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを得るために、参照配列内のヌクレオチドの５％までが、欠失していてもよく、若しくは別のヌクレオチドで置換されていてもよく、又は参照配列内の全ヌクレオチドの５％までが、参照配列内へと挿入されていてもよい。参照配列のこのような変更は、参照ヌクレオチド配列の５’若しくは３’末端位置で、又はこれら末端位置の間のどの位置で起こってもよく、参照配列中の残基間に個々に散在してもよいし、又は参照配列内に１つ以上の連続した群として散在してもよい。実際問題 として、任意の特定のポリヌクレオチド配列が、本発明のヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一であるかどうかは、ポリペプチドについて後で考察するもの（例えば、ＡＬＩＧＮ－２）のような公知のコンピュータプログラムを用いて、従来通りに決定することができる。
「単離されたポリペプチド］又はそのバリアント、若しくはその誘導体が意図するのは、その天然の環境にはないポリペプチドである。特定のレベルの精製は、必要とされない。例えば、単離されたポリペプチドは、その生来の環境又は天然環境から取り出すことができる。宿主細胞内で発現する組換え産生されたポリペプチド及びタンパク質は、任意の適切な技術によって、分離され、分画され、又は部分的に若しくは実質的に精製された、ネイティブポリペプチド又は組換えポリペプチドと同様に、本発明の目的のために単離されると考えられる。
「Ｆｃドメインの第１のサブユニット及び第２のサブユニットの会合を促進する修飾」は、ホモ二量体を形成するためのＦｃドメインサブユニットを含むペプチドと同一のポリペプチドとの会合を減らすか又は防ぐ、ペプチド骨格の操作又はＦｃドメインサブユニットの翻訳後修飾である。会合を促進する修飾は、本明細書で使用される場合、特に、会合することが望ましい２つのＦｃドメインサブユニット（すなわち、Ｆｃドメインの第１のサブユニット及び第２のサブユニット）それぞれに対し、別個の修飾を含み、修飾は、２つのＦｃドメインサブユニットの会合を促進するように、互いに相補性である。例えば、会合を促進する修飾は、それぞれ立体的又は静電的に望ましい会合を行うように、Ｆｃドメインサブユニットの片方又は両方の構造又は電荷を変えてもよい。したがって、（ヘテロ）二量化は、第１のＦｃドメインサブユニットを含むポリペプチドと、第２のＦｃドメインサブユニットを含むポリペプチドとの間で起こり、それぞれのサブユニットに融合する更なる構成要素（例えば、抗原結合部分）が同じではないという意味で、同一ではない場合がある。いくつかの実施形態では、会合を促進する修飾は、Ｆｃドメイン内のアミノ酸変異、具体的には、アミノ酸置換を含む。特定の実施形態では、会合を促進する修飾は、Ｆｃドメインの２つのサブユニットそれぞれに、別個のアミノ酸変異、特定的にはアミノ酸置換を含む。
本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体が同一であり、かつ／又は同一のエピトープと結合しているが、例えば、天然に存在する変異を含むか、又はモノクローナル抗体調製物の産生中に生じる可能性のあるバリアント抗体を除いて、そのようなバリアントは、一般的に微量で存在する。典型的には異なる決定基（エピトープ）に対して指向する異なる抗体を含むポリクローナル抗体製剤とは対照的に、モノクローナル抗体製剤のそれぞれのモノクローナル抗体は、１つの抗原上の単一の決定基に対して指向する。したがって、改変詞「モノクローナル」は、抗体の実質的に均一な集合から得られる抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするように解釈すべきではない。例えば、本発明に従うモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部又は一部を含むトランスジェニック動物を利用する方法を含むがこれらに限定されない様々な技術によって作製することができ、そのような方法及び本明細書に記載されているモノクローナル抗体を作製するための他の例示的な方法を含むがこれらに限定されない。
「ネイキッド抗体」とは、異種部位（例えば、細胞毒性部位）又は放射性標識にコンジュゲートされていない抗体を指す。ネイキッド抗体は、医薬組成物中に存在していてもよい。
「ネイティブ抗体」とは、様々な構造を持つネイティブに存在する免疫グロブリン分子を指す。例えば、ネイティブＩｇＧ抗体は、２本の同一の軽鎖と２本の同一の重鎖がジスルフィド結合したものを含む、約１５０，０００ダルトンのヘテロテトラメリック糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端まで、各重鎖は、可変重ドメイン又は重鎖可変領域とも呼ばれる可変ドメイン（ＶＨ）を有し、それに続いて３つの定常重ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）を有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端まで、各軽鎖は、可変軽ドメイン又は軽鎖可変領域とも呼ばれる可変ドメイン（ＶＬ）を有し、それに続いて定常軽（ＣＬ）ドメインを有する。
参照ポリペプチド配列に対する「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」は、アラインメントの目的で、配列をアラインメントし、最大の配列同一性率を達成するために、必要ならばギャップを導入した後、配列同一性の一部として任意の保存的置換を考慮せずに、参照ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である、候補配列におけるアミノ酸残基の割合であると定義される。アミノ酸配列同一性率を決定するためのアラインメントは、当該技術分野の技術の範囲内にある種々の様式で、例えば、公的に入手可能なコンピュータソフトウェア、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ、Ｍｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア又はＦＡＳＴＡプログラムパッケージを用いて達成することができる。当業者であれば、比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列のアラインメントのための適切なパラメータを決定することができる。あるいは、同一性率の値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ－２を使用して生成することができる。ＡＬＩＧＮ－２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって作成されており、ソースコードは、Ｕ．Ｓ．Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ Ｏｆｆｉｃｅ（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．，２０５５９）のユーザドキュメンテーションにファイルされており、Ｕ．Ｓ．Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ Ｒｅｇｉｓｔｒａｔｉｏｎ Ｎｏ．ＴＸＵ５１００８７の下に登録されており、かつ、国際公開第２００１／００７６１１号に記載されている。
特に断りのない限り、本明細書での目的のために、アミノ酸配列同一性率の値は、ＦＡＳＴＡパッケージバージョン３６．３．８ｃのｇｇｓｅａｒｃｈプログラムを使用するか、又はその後にＢＬＯＳＵＭ５０比較マトリクスを使用して生成される。ＦＡＳＴＡプログラムパッケージは、Ｗ．Ｒ．Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｄ．Ｊ．Ｌｉｐｍａｎ（１９８８），「Ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ｔｏｏｌｓ ｆｏｒ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ」ＰＮＡＳ ８５：２４４４－２４４８；Ｗ．Ｒ．Ｐｅａｒｓｏｎ（１９９６）「Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ」Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：２２７－２５８；及び、Ｐｅａｒｓｏｎ ｅｔ．ａｌ．（１９９７）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ４６：２４－３６により記載されており、ｗｗｗ．ｆａｓｔａ．ｂｉｏｃｈ．ｖｉｒｇｉｎｉａ．ｅｄｕ／ｆａｓｔａ＿ｗｗｗ２／ｆａｓｔａ＿ｄｏｗｎ．ｓｈｔｍｌ又はｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｓｓｓ／ｆａｓｔａから公に利用可能である。あるいは、ｇｇｓｅａｒｃｈ（グローバルタンパク質：タンパク質）プログラム及びデフォルトオプション（ＢＬＯＳＵＭ５０；ｏｐｅｎ：－１０；ｅｘｔ：－２；Ｋｔｕｐ＝２）を使用して、ｆａｓｔａ．ｂｉｏｃｈ．ｖｉｒｇｉｎｉａ．ｅｄｕ／ｆａｓｔａ＿ｗｗｗ２／ｉｎｄｅｘ．ｃｇｉでアクセス可能な公共サーバを使用して配列を比較し、ローカルではなくグローバルなアライメントを確実に実行することができる。アミノ酸同一性率は、アウトプットアラインメントヘッダーで与えられる。「核酸分子」という用語は、ポリヌクレオチドによって含まれるプリン塩基及びピリミジン塩基を含む塩基の配列に関し、それにより塩基は、核酸分子の一次構造を表す。本明細書では、核酸分子という用語は、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ＲＮＡ、ＤＮＡの合成形態、及びこれらの分子のうちの２つ以上を含む混合ポリマーを含む。加えて、核酸分子という用語は、センス鎖及びアンチセンス鎖の両方を含む。その上、本明細書に説明される核酸分子は、当業者に容易に理解されるように、非天然の又は誘導体化されたヌクレオチド塩基を含有することができる。
「パッケージ添付文書」との用語は、治療製品の市販パッケージに通常含まれる指示を指すために用いられ、このような治療製品に関する適応症、使用、投薬量、投与、併用療法、禁忌及び／又は警告に関する情報を含む。
「医薬組成物」という用語は、医薬組成物の中に含有される有効成分の生物活性を有効にするような形態にあり、かつ製剤が投与される対象に対して許容し得ないほど毒性である追加の構成要素を含有しない調製物を指す。医薬組成物は通常、１つ以上の医薬的に許容され得る担体（複数可）を含む。
「薬学的に許容され得る担体」は、医薬組成物中の成分であって、有効成分以外であり、対象にとって毒性ではない成分を指す。薬学的に許容され得る担体には、緩衝剤、賦形剤、安定剤、又は防腐剤が含まれるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、「ポリペプチド」という用語は、アミド結合（ペプチド結合としても知られている）によって線形に接続した単量体（アミノ酸）で構成される分子を指す。
「ポリペプチド」という用語は、２つ以上のアミノ酸の任意の鎖を指し、特定の長さの産物を指さない。したがって、ペプチド、ジペプチド、トリペプチド、オリゴペプチド、「タンパク質」、「アミノ酸鎖」、又は２つ以上のアミノ酸の鎖を指すために使用される任意の他の用語は、「ポリペプチド」の定義に含まれ、「ポリペプチド」との用語は、これらのいずれかの用語の代わりに、又は相互に置き換え可能に使用されてもよい。「ポリペプチド」という用語も、限定されないが、グリコシル化、アセチル化、リン酸化、アミド化、既知の保護／ブロック基による誘導体化、タンパク質分解による開裂、又は天然に存在しないアミノ酸による修飾を含め、ポリペプチドの発現後修飾の産物を指すことを意図している。ポリペプチドは、天然の生物源から誘導されてもよく、又は組換え技術によって産生されてもよいが、指定の核酸配列から必ずしも翻訳されない。ポリペプチドは、化学合成によるものを含め、任意の様式で生じてもよい。本発明のポリペプチドは、約３以上、５以上、１０以上、２０以上、２５以上、５０以上、７５以上、１００以上、２００以上、５００以上、１，０００以上、又は２，０００以上のアミノ酸の大きさであってよい。ポリペプチドは、規定の三次元構造を有することができるが、ポリペプチドは、そのような構造を必ずしも有するものではない。規定の三次元構造を有するポリペプチドは、折りたたまれていると呼ばれ、規定の三次元構造を有していないがむしろ多数の異なる立体配座を採用することができるポリペプチドは、折りたたまれていないと呼ばれる。
「ポリヌクレオチド」といの用語は、単離された核酸分子又は構築物、例えば、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、ウイルス由来のＲＮＡ、又はプラスミドＤＮＡ（ｐＤＮＡ）を指す。ポリヌクレオチドは、従来のホスホジエステル結合又は従来の結合以外の結合（例えば、アミド結合、例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）において認められるもの）を含んでいてもよい。「核酸分子」という用語は、１つ以上の任意の核酸セグメント、例えば、ポリヌクレオチド中に存在するＤＮＡフラグメント又はＲＮＡフラグメントを指す。
「結合の低減」、例えば、Ｆｃ受容体に対する結合の低減は、例えば、ＳＰＲによって測定される場合、それぞれの相互作用についての親和性の低下を指す。明確性のために、本用語はまた、親和性のゼロ（又は分析方法の検出限界を下回る）までの低減、すなわち、相互作用の完全な終止も含む。逆に、「結合上昇」は、個々の相互作用に対する結合親和性における上昇を指す。
「調節配列」という用語は、ライゲートされたコード配列の発現をもたらすのに必要であるＤＮＡ配列を指す。このような制御配列の性質は、宿主生物によって異なる。原核生物において、制御配列は概して、プロモーター、リボソーム結合部位、及びターミネーターを含む。真核生物において、概して、制御配列は、プロモーター、ターミネーター、及びいくつかの場合においてはエンハンサー、転写活性化因子又は転写因子を含む。「制御配列」という用語は、最低限の全ての構成要素において、発現に必要である存在を含むことが意図されており、また、追加の有利な構成要素も含むことができる。
本明細書で使用する場合、「一本鎖」という用語は、ペプチド結合によって線状に連結されたアミノ酸単量体を含む分子を指す。特定の実施形態において、抗原結合部分のうちの１つは、一本鎖Ｆａｂ分子、すなわち、Ｆａｂ軽鎖及びＦａｂ重鎖がペプチドリンカーによって接続されて単一のペプチド鎖を形成するＦａｂ分子である。特定のこのような実施形態において、Ｆａｂ軽鎖のＣ末端は、一本鎖Ｆａｂ分子におけるＦａｂ重鎖のＮ末端に接続される。好ましい一実施形態では、抗原結合部分はｓｃＦｖフラグメントである。
本明細書で使用する場合の「ＳＳＤ」という用語は、「刺激シグナル伝達ドメイン」を指す。
本明細書で使用される場合、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」（及びその文法的な変化形、例えば、「治療（ｔｒｅａｔ）する」又は「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」）は、治療される個体において疾患の本来の経過を変える試行における臨床的介入を指し、予防のために、又は臨床病理の経過の間に行うことができる。治療の所望の効果としては、疾患の発症又は再発を予防すること、症候の軽減、疾患の任意の直接的又は間接的な病理学的結果の減弱、転移を予防すること、疾患進行率を低下させること、病状の寛解又は緩和、及び回復又は改良された予後が挙げられる。いくつかの態様では、本発明の抗体は、疾患の発症を遅延させるために、又は疾患の進行を遅らせるために使用される。
本明細書で使用する「Ｔ細胞活性化」は、増殖、分化、サイトカイン分泌、細胞傷害性エフェクター分子の放出、細胞傷害性活性、及び活性化マーカーの発現から選択される、Ｔリンパ球、特に細胞傷害性Ｔリンパ球の１つ又は複数の細胞応答を指す。本発明の免疫活性化Ｆｃドメイン結合分子は、Ｔ細胞活性化を誘導することができる。Ｔ細胞活性化を測定するために適したアッセイは、当技術分野で既知であり、本明細書に記載されている。
薬剤、例えば薬学的組成物の「治療有効量」とは、所望の治療的又は予防的結果を得るのに必要な用量及び期間での有効な量を指す。薬剤の治療有効量は、例えば、疾患の副作用を除去し、低下させ、遅延させ、最小限にし、又は予防する。
用語「価数」は、本明細書で使用される場合、抗原結合分子内の特定数の抗原結合部位の存在を示す。したがって、用語「抗原に対する一価の結合」は、抗原結合分子内の抗原に特異的な１つ（及び１つを超えない）抗原結合部位の存在を示す。
「可変領域」又は「可変ドメイン」という用語は、抗原に対する抗体の結合に関与する抗体重鎖又は抗体軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれＶＨ及びＶＬ）は、一般的に、類似の構造を有し、それぞれのドメインは、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）とを含む（例えば、Ｋｉｎｄｔ ｅｔ ａｌ．Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，ｐａｇｅ ９１（２００７）を参照。）単一のＶＨ又はＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するために充分であり得る。さらに、特定の抗原に結合する抗体は、抗原に結合する抗体のＶＨ又はＶＬドメインを使用し、それぞれ、相補的ＶＬ又はＶＨドメインのライブラリーをスクリーニングして、単離してもよい。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０－８８７（１９９３）；Ｃｌａｒｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８（１９９１）を参照のこと。
「ベクター」という用語は、本明細書では、連結している別の核酸を増殖可能な核酸分子を指す。この用語には、自己複製する核酸構造としてのベクターだけでなく、ベクターが導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターも含まれる。特定のベクターは、作動可能に連結された核酸の発現を指示することができる。そのようなベクターを本明細書では、「発現ベクター」と呼ぶ。
変異型Ｆｃドメインに特異的に結合することができる抗原結合受容体
本発明は、抗体、例えばがん細胞を標的とする治療用抗体の変異型Ｆｃドメインに特異的に結合することができる抗原結合受容体に関する。好ましい一態様では、本発明は、ＥＵナンバリングによるアミノ酸変異Ｐ３２９Ｇを含む変異型Ｆｃドメインに特異的に結合することができる抗原結合受容体に関する。本発明の抗原結合受容体は、変異型Ｆｃドメインに特異的に結合することはできるが、親非変異型Ｆｃドメインには特異的に結合することができない少なくとも１つの抗原結合部分を含む細胞外ドメインを含む。好ましい実施形態では、抗原結合受容体の抗原結合部分は、ヒト化又はヒト抗原結合部分、例えばヒト化又はヒトｓｃＦｖである。好ましい一実施形態では、アミノ酸変異はＰ３２９Ｇであり、ＥＵナンバリングによるアミノ酸変異Ｐ３２９Ｇを含む変異型Ｆｃドメインへの特異的結合は２５°ＣでＳＰＲによって測定される。
本発明はさらに、本明細書に記載の抗原結合受容体を用いた、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、γδＴ細胞又はナチュラルキラー（ＮＫ）Ｔ細胞、好ましくはＣＤ８＋Ｔ細胞などのＴ細胞の形質導入、及び変異型Ｆｃドメイン（例えば、ＥＵナンバリングによるアミノ酸変異Ｐ３２９Ｇを含むＦｃドメイン）を含む抗体分子、例えば治療用抗体による、例えば腫瘍へのそれらの標的化動員に関する。一実施形態では、抗体は、腫瘍細胞の表面に天然に存在する腫瘍特異的抗原に特異的に結合することができる。
添付の実施例に示されるように、概念実証として、Ｐ３２９Ｇ変異を含む治療用抗体（配列番号１０２の重鎖と配列番号１０３の軽鎖とを含む抗ＣＤ２０抗体によって表される）に特異的に結合することができる本発明のアンカリング膜貫通ドメイン及びヒト化細胞外ドメインを含む抗原結合受容体（配列番号２０に示されるＤＮＡ配列によってコードされる配列番号７）を構築した。ＶＨ３ＶＬ１－ＣＤ８ＡＴＤ－ＣＤ１３７ＣＳＤ－ＣＤ３ｚＳＳＤ融合タンパク質（配列番号２０に示されるＤＮＡ配列によってコードされる配列番号７）を発現する形質導入Ｔ細胞（Ｊｕｒｋａｔ ＮＦＡＴ Ｔ細胞）は、ＦｃドメインにＰ３２９Ｇ変異を含む抗ＣＤ２０抗体とＣＤ２０陽性腫瘍細胞との共インキュベーションによって強く活性化することができた。
Ｐ３２９Ｇ変異を含む腫瘍抗原に対する抗体と、ＶＨ３ＶＬ１－ＣＤ８ＡＴＤ－ＣＤ１３７ＣＳＤ－ＣＤ３ｚＳＳＤ融合タンパク質（配列番号２０に示されるＤＮＡ配列によってコードされる配列番号７）を発現する形質導入Ｔ細胞との組み合わせによる腫瘍細胞の治療は、驚くべきことに、ＶＬ１ＶＨ３－ＣＤ８ＡＴＤ－ＣＤ１３７ＣＳＤ－ＣＤ３ｚＳＳＤ（配列番号３３に示されるＤＮＡ配列によってコードされる配列番号３１）を発現する形質導入Ｔ細胞と比較して、形質導入Ｔ細胞のより強い活性化をもたらす。
ＶＨ３ＶＬ１－ＣＤ８ＡＴＤ－ＣＤ１３７ＣＳＤ－ＣＤ３ｚＳＳＤ融合タンパク質において、ＶＨドメイン（ＶＨ３）は、そのＣ末端において、ペプチドリンカーを介してＶＬドメイン（ＶＬ１）のＮ末端に融合され、ｓｃＦｖを形成する。ｓｃＦｖは、そのＣ末端（ＶＬドメインのＣ末端）において、ペプチドリンカーを介してアンカリング膜貫通ドメイン（ＡＴＤ）に融合される。一方、ＶＬ１ＶＨ３－ＣＤ８ＡＴＤ－ＣＤ１３７ＣＳＤ－ＣＤ３ｚＳＳＤ融合タンパク質において、ＶＬドメイン（ＶＬ１）は、そのＣ末端において、ペプチドリンカーを介してＶＨドメイン（ＶＨ３）のＮ末端に融合され、ｓｃＦｖを形成する。ｓｃＦｖは、そのＣ末端（ＶＨドメインのＣ末端）において、ペプチドリンカーを介してアンカリング膜貫通ドメイン（ＡＴＤ）に融合される。理論に拘束されるものではないが、ＶＨ３ＶＬ１－ＣＤ８ＡＴＤ－ＣＤ１３７ＣＳＤ－ＣＤ３ｚＳＳＤ融合タンパク質が、ＶＬ１ＶＨ３－ＣＤ２８ＡＴＤ－ＣＤ１３７ＣＳＤ－ＣＤ３ｚＳＳＤと比較して、形質導入Ｔ細胞のより強い活性化をもたらすという観察結果は、ＶＬドメインとアンカリングドメインとの（ペプチドリンカーを介した）融合が、より強力な抗原結合受容体をもたらすことを示唆している。これは予想外であり、驚くべきことである。
ＶＨドメインＶＨ３とＶＬドメインＶＬ１との組み合わせ（両方とも本発明者らによって同定された）は、これらの可変ドメインがヒト化抗体ドメインであるため、特に好ましい。理論に拘束されるものではないが、ヒト化抗体ドメインは、そのようなヒト化抗体ドメインを含む抗原結合部分をヒト患者に適用する場合、副作用が少ない（例えば、抗薬物抗体（ＡＤＡ）の形成がより少ない）と予想され得るので好ましい。しかしながら、ヒト化は、抗原結合部分（例えば、非ヒト源に由来するもの）の結合の喪失をもたらし得る。添付の実施例に示すように、ヒト化ＶＨ３及びＶＬ１ドメインは、ＥＵナンバリングによるアミノ酸変異Ｐ３２９Ｇを含むＦｃドメインへの結合を保持する。この結果は、例えば、他のヒト化ＶＨ及びＶＬドメインが、ＥＵナンバリングによるアミノ酸変異Ｐ３２９Ｇを含むＦｃドメインと同等の結合を保持できないことによって示されるように予想外である。
したがって、本発明の好ましい一実施形態では、ＥＵナンバリングによるアミノ酸変異Ｐ３２９Ｇを含むＦｃドメインに特異的に結合することができるヒト化抗原結合部分を含む抗原結合受容体が提供される。本発明の概念及びその構成要素（ヒト化抗原結合受容体及び治療用抗体）は、本明細書において以下に更に詳細に記載される。
本発明によれば、変異型Ｆｃドメインを含む（例えば、ＥＵナンバリングによるアミノ酸変異Ｐ３２９Ｇを含む）腫瘍特異的抗体、すなわち治療用抗体と、変異型Ｆｃドメインに特異的に結合することができる抗原結合部位を含む細胞外ドメインからなる／からなる抗原結合受容体を導入したＴ細胞のペアリングにより、Ｔ細胞の特異的活性化及びその後の腫瘍細胞の溶解が得られる。このアプローチは、Ｔ細胞が変異型Ｆｃドメインを含む抗体の非存在下では不活性であり得るので、従来のＴ細胞ベースのアプローチに比べて有意な安全上の利点をもたらす。したがって、本発明は、ＩｇＧ型抗体が、Ｔ細胞のためのガイダンスとして腫瘍細胞をマーク又は標識するために使用され、形質導入Ｔ細胞が、ＩｇＧ型抗体の変異型Ｆｃドメインに対する特異性を提供することによって腫瘍細胞に対して特異的に標的化される、汎用的な治療プラットフォームを提供する。腫瘍細胞の表面上の抗体の変異型Ｆｃドメインに結合した後、本明細書に記載の形質導入Ｔ細胞は活性化され、腫瘍細胞はその後溶解される。プラットフォームは、多様な（既存の又は新たに開発された）標的抗体の使用、又は異なる抗原特異性を有するがＦｃドメインに同じ変異（例えばＰ３２９Ｇ変異など）を含む複数の抗体の同時適用を可能にすることによって柔軟かつ特異的である。Ｔ細胞活性化の程度は、共適用される治療用抗体の投与量を調整することによって、又は異なる抗体特異性若しくはフォーマットに切り替えることによって更に調整することができる。本発明による形質導入Ｔ細胞は、本明細書に記載のＦｃドメインへの変異が天然又は非変異型免疫グロブリンでは起こらないので、変異型Ｆｃドメインを含む標的化抗体の同時適用なしでは不活性である。したがって、一実施形態では、変異型Ｆｃドメインは、（ヒト）免疫グロブリンに天然には存在しない。
したがって、本発明は、変異型Ｆｃドメインに特異的に結合することができる少なくとも１つの抗原結合部分を含む細胞外ドメインを含む抗原結合受容体であって、少なくとも１つの抗原結合部分が親非変異型Ｆｃドメインに特異的に結合することができない、抗原結合受容体に関する。エフェクター機能は、本明細書中に更に記載されるように、抗体に基づく腫瘍療法の重篤な副作用をもたらし得るので、がん療法においてエフェクター機能が低下した治療用抗体を使用することが特に望ましい場合がある。
本発明の文脈において、抗原結合受容体は、Ｔ細胞内又はＴ細胞上に天然には存在しない細胞外ドメインを含む。したがって、抗原結合受容体は、本発明の抗原結合受容体を発現する細胞に調整された結合特異性を提供することができる。本発明の抗原結合受容体（複数可）を形質導入された細胞、例えばＴ細胞は、変異型Ｆｃドメインに特異的に結合することができるようになるが、非変異型親Ｆｃドメインには特異的に結合することはできない。特異性は、抗原結合受容体の細胞外ドメインの抗原結合部分によって提供される。本発明の文脈において、本明細書中で説明されるように、変異型Ｆｃドメインに特異的に結合することができる抗原結合部分は、変異型Ｆｃドメインに結合／と相互作用するが、非変異型親Ｆｃドメインには／とは結合しない。
抗原結合部分
本発明の例示的な一実施形態では、概念実証として、アミノ酸変異Ｐ３２９Ｇを含む変異型Ｆｃドメインに特異的に結合することができるヒト化抗原結合受容体及び該抗原結合受容体を発現するエフェクター細胞が提供される。Ｐ３２９Ｇ変異は、Ｆｃγ受容体への結合及び関連するエフェクター機能を低減させる。したがって、Ｐ３２９Ｇ変異を含む変異型Ｆｃドメインは、非変異型Ｆｃドメインと比較して低下した又は消失した親和性でＦｃγ受容体に結合する。
一実施形態では、抗原結合部分は、安定な会合が可能な第１及び第２のサブユニットから構成される変異型Ｆｃドメインに特異的に結合することができる。一実施形態では、ＦｃドメインはＩｇＧ、具体的にはＩｇＧ１又はＩｇＧ４のＦｃドメインである。一実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒトＦｃドメインである。一実施形態では、変異型Ｆｃドメインは、天然のＩｇＧ１Ｆｃドメインと比較して、Ｆｃ受容体に対する結合親和性の低下及び／又はエフェクター機能の低下を示す。一実施形態では、Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体への結合及び／又はエフェクター機能を低下させる１又は複数のアミノ酸変異を含む。
好ましい一実施形態では、変異型ＦｃドメインはＰ３２９Ｇ変異を含む。したがって、Ｐ３２９Ｇ変異を含む変異型Ｆｃドメインは、非変異型Ｆｃドメインと比較して低下した又は消失した親和性でＦｃγ受容体に結合する。
一実施形態において、抗原結合受容体は抗原結合部分を含む細胞外ドメインを含む。一実施形態では、抗原結合部分は、ＥＵナンバリングによるアミノ酸変異Ｐ３２９Ｇを含むＦｃドメインに特異的に結合することができる。
一実施形態では、抗原結合部分は、以下の少なくとも１つを含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）：
（ａ）ＲＹＷＭＮ（配列番号１）の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ Ｈ）１アミノ酸配列；
（ｂ）ＥＩＴＰＤＳＳＴＩＮＹＡＰＳＬＫＧ（配列番号２）又はＥＩＴＰＤＳＳＴＩＮＹＴＰＳＬＫＧ（配列番号４０）のＣＤＲ Ｈ２アミノ酸配列；及び
（ｃ）ＰＹＤＹＧＡＷＦＡＳ（配列番号３）のＣＤＲ Ｈ３アミノ酸配列を含む。
一実施形態では、抗原結合部分は、以下の少なくとも１つを含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）：
（ｄ）ＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮ（配列番号４）の軽鎖（ＣＤＲ Ｌ）１アミノ酸配列；
（ｅ）ＧＴＮＫＲＡＰ（配列番号５）のＣＤＲ Ｌ２アミノ酸配列；及び
（ｆ）ＡＬＷＹＳＮＨＷＶ（配列番号６）のＣＤＲ Ｌ３アミノ酸配列を含む。
好ましい一実施形態では、抗原結合部分は、以下を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）：
（ａ）ＲＹＷＭＮ（配列番号１）の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ Ｈ）１アミノ酸配列；
（ｂ）ＥＩＴＰＤＳＳＴＩＮＹＡＰＳＬＫＧ（配列番号２）又はＥＩＴＰＤＳＳＴＩＮＹＴＰＳＬＫＧ（配列番号４０）のＣＤＲ Ｈ２アミノ酸配列；
（ｃ）ＰＹＤＹＧＡＷＦＡＳ（配列番号３）のＣＤＲ Ｈ３アミノ酸配列；
及び、以下を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）：
（ｄ）ＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮ（配列番号４）の軽鎖（ＣＤＲ Ｌ）１アミノ酸配列；
（ｅ）ＧＴＮＫＲＡＰ（配列番号５）のＣＤＲ Ｌ２アミノ酸配列；及び
（ｆ）ＡＬＷＹＳＮＨＷＶ（配列番号６）のＣＤＲ Ｌ３アミノ酸配列を含む。
１つの特定の実施形態では、抗原結合部分は、以下を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）：
（ａ）ＲＹＷＭＮ（配列番号１）の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ Ｈ）１アミノ酸配列；
（ｂ）ＥＩＴＰＤＳＳＴＩＮＹＡＰＳＬＫＧ（配列番号２）のＣＤＲ Ｈ２アミノ酸配列：
（ｃ）ＰＹＤＹＧＡＷＦＡＳ（配列番号３）のＣＤＲ Ｈ３アミノ酸配列；
及び、以下を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）：
（ｄ）ＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮ（配列番号４）の軽鎖（ＣＤＲ Ｌ）１アミノ酸配列；
（ｅ）ＧＴＮＫＲＡＰ（配列番号５）のＣＤＲ Ｌ２アミノ酸配列；及び
（ｆ）ＡＬＷＹＳＮＨＷＶ（配列番号６）のＣＤＲ Ｌ３アミノ酸配列を含む。
他の特定の実施形態では、抗原結合部分は、以下を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）：
（ａ）ＲＹＷＭＮ（配列番号１）の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ Ｈ）１アミノ酸配列；
（ｂ）ＥＩＴＰＤＳＳＴＩＮＹＴＰＳＬＫＧ（配列番号４０）のＣＤＲ Ｈ２アミノ酸配列；
（ｃ）ＰＹＤＹＧＡＷＦＡＳ（配列番号３）のＣＤＲ Ｈ３アミノ酸配列；
及び、以下を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）：
（ｄ）ＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮ（配列番号４）の軽鎖（ＣＤＲ Ｌ）１アミノ酸配列；
（ｅ）ＧＴＮＫＲＡＰ（配列番号５）のＣＤＲ Ｌ２アミノ酸配列；及び
（ｆ）ＡＬＷＹＳＮＨＷＶ（配列番号６）のＣＤＲ Ｌ３アミノ酸配列を含む。
一実施形態では、抗原結合部分は、配列番号８、配列番号４１及び配列番号４４からなる群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。
一実施形態では、抗原結合部分は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。
一実施形態では、抗原結合部分は、配列番号４１のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。
一実施形態では、抗原結合部分は、配列番号４４のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。
一実施形態では、抗原結合部分は、配列番号１２６のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。
一実施形態では、抗原結合部分は、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。
一実施形態では、抗原結合部分は、配列番号１２７のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。
一実施形態では、抗原結合部分は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む。
一実施形態では、抗原結合部分は、配列番号４１のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む。
一実施形態では、抗原結合部分は、配列番号４４のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、配列番号９のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む。
他の実施形態では、抗原結合部分は、配列番号１２６のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、配列番号１２７のアミノ酸配列に対して少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む。
好ましい実施形態では、抗原結合部分は、配列番号８のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、配列番号９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む。
別の好ましい実施形態では、抗原結合部分は、配列番号１２６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、配列番号１２７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む。
一実施形態では、抗原結合部分はｓｃＦｖ、又はｓｃＦａｂである。好ましい一実施形態では、抗原結合部分はｓｃＦｖである。
一実施形態では、抗原結合部分は重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含み、ＶＨドメインはＶＬドメインに、特にペプチドリンカーを介して連結されている。一実施形態では、ＶＬドメインのＣ末端は、特にペプチドリンカーを介してＶＨドメインのＮ末端に連結される。好ましい実施形態では、ＶＨドメインのＣ末端は、特にペプチドリンカーを介してＶＬドメインのＮ末端に連結される。一実施形態では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号１６）を含む。
一実施形態において、抗原結合部分は、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と、リンカーとからなるポリペプチドであるｓｃＦｖであり、可変ドメイン及びリンカーは、Ｎ末端からＣ末端への方向において次の立体配置のうちの１つを有する：ａ）ＶＨ－リンカー－ＶＬ、又はｂ）ＶＬ－リンカー－ＶＨ。好ましい実施形態において、ｓｃＦｖは、立体配置ＶＨ－リンカー－ＶＬを有する。
一実施形態では、抗原結合部分は、配列番号１０、配列番号１２２及び配列番号１２４からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、抗原結合部分は、配列番号１０のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一実施形態において、抗原結合部分は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、抗原結合部分は、配列番号１２２のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一実施形態において、抗原結合部分は、配列番号１２２のアミノ酸配列を含む。
一実施形態では、抗原結合部分は、配列番号１２４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一実施形態において、抗原結合部分は、配列番号１２４のアミノ酸配列を含む。
本明細書に説明するようなｓｃＦｖフラグメント及びｓｃＦａｂフラグメントなど、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む抗原結合部分は、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間に鎖間ジスルフィド架橋を導入することによって更に安定し得る。したがって、一実施形態において、本発明による抗原結合受容体において含まれるｓｃＦｖフラグメント（複数可）及び／又はｓｃＦａｂフラグメント（複数可）は、システイン残基の挿入を介した鎖間ジスルフィド結合の生成によって更に安定化される（例えば、Ｋａｂａｔの番号付けによる可変重鎖における位置４４及び可変軽鎖における位置１００）。一実施形態では、アミノ酸のシステインによる少なくとも１つの置換（特に、Ｋａｂａｔのナンバリングによる可変重鎖の４４位及び／又は可変軽鎖の１００位）を含む上記で提供されたＶＨ及び／又はＶＬ配列のいずれか１つが提供される。
一実施形態では、抗原結合部分は、配列番号１２８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む。一実施形態において、抗原結合部分は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含む。
アンカリング膜貫通ドメイン（ＡＴＤ）
本発明の文脈において、本発明の抗原結合受容体のアンカリング膜貫通ドメインは、哺乳動物プロテアーゼのための切断部位を有しないことを特徴とし得る。本発明の文脈において、プロテアーゼは、プロテアーゼの開裂部位を含む膜貫通ドメインのアミノ酸配列を加水分解することができるタンパク質分解性酵素を指す。プロテアーゼという用語は、エンドペプチダーゼ及びエキソペプチダーゼの両方を含む。本発明の文脈において、とりわけＣＤ命名法によって規定されるような膜貫通タンパク質の任意のアンカリング膜貫通ドメインが、本発明の抗原結合受容体を作製するために使用され得る。
したがって、本発明の文脈において、アンカリング膜貫通ドメインは、ネズミ／マウス又は好ましくはヒト膜貫通ドメインの部分を含むことができる。このようなアンカリング膜貫通ドメインについての例は、例えば、（配列番号２４に示されるＤＮＡ配列によってコードされるような）本明細書に配列番号１１において示されるようなアミノ酸配列を有する、ＣＤ８の膜貫通ドメインである。本発明の文脈において、本発明の抗原結合受容体のアンカリング膜貫通ドメインは、（配列番号２４に示されるＤＮＡ配列によってコードされるような）配列番号１１に示されるようなアミノ酸配列を含んでもよい／からなってもよい。
別の実施形態では、本明細書において提供される抗原結合受容体は、（配列番号７０に示されるｃＤＮＡ配列によってコードされるような）配列番号６１に示されるようなヒト完全長ＣＤ２８タンパク質のアミノ酸１５３～１７９、１５４～１７９、１５５～１７９、１５６～１７９、１５７～１７９、１５８～１７９、１５９～１７９、１６０～１７９、１６１～１７９、１６２～１７９、１６３～１７９、１６４～１７９、１６５～１７９、１６６～１７９、１６７～１７９、１６８～１７９、１６９～１７９、１７０～１７９、１７１～１７９、１７２～１７９、１７３～１７９、１７４～１７９、１７５～１７９、１７６～１７９、１７７～１７９又は１７８～１７９に位置するＣＤ２８の膜貫通ドメインを含んでもよい。
あるいは、とりわけ、ＣＤ命名法によって与えられるように、膜貫通ドメインを有する任意のタンパク質は、本発明の抗原結合受容体タンパク質のアンカリング膜貫通ドメインとして使用してもよい。
いくつかの実施形態では、アンカリング膜貫通ドメインは、ＣＤ２７（配列番号５８によってコードされる配列番号５９）、ＣＤ１３７（配列番号６６によってコードされる配列番号６７）、ＯＸ４０（配列番号７０によってコードされる配列番号７１）、ＩＣＯＳ（配列番号７４によってコードされる配列番号７５）、ＤＡＰ１０（配列番号７９によってコードされる配列番号８０）、ＤＡＰ１２（配列番号８２によってコードされる配列番号８３）、ＣＤ３ｚ（配列番号８７によってコードされる配列番号８８）、ＦＣＧＲ３Ａ（配列番号９１によってコードされる配列番号９０）、ＮＫＧ２Ｄ（配列番号９５によってコードされる配列番号９４）、ＣＤ８（配列番号１２０によってコードされる配列番号１１９）からなる群のいずれか１つの膜貫通ドメイン、又は抗原結合受容体を膜にアンカリングする能力を保持するその膜貫通フラグメントを含む。
ヒト配列は、例えば、アンカリング膜貫通ドメインの（部分）が細胞外空間から、したがって患者の免疫系にアクセス可能であり得るので、共通の発明の文脈において有益であり得る。好ましい実施形態では、アンカリング膜貫通ドメインはヒト配列を含む。そのような実施形態では、アンカリング膜貫通ドメインは、ヒトＣＤ２７（配列番号５６によってコードされる配列番号５７）、ヒトＣＤ１３７（配列番号６４によってコードされる配列番号６５）、ヒトＯＸ４０（配列番号６８によってコードされる配列番号６９）、ヒトＩＣＯＳ（配列番号７２によってコードされる配列番号７３）、ヒトＤＡＰ１０（配列番号７７によってコードされる配列番号７８）、ヒトＤＡＰ１２（配列番号８０によってコードされる配列番号８１）、ヒトＣＤ３ｚ（配列番号８５によってコードされる配列番号８６）、ヒトＦＣＧＲ３Ａ（配列番号８９によってコードされる配列番号８８）、ヒトＮＫＧ２Ｄ（配列番号９３によってコードされる配列番号９２）、ヒトＣＤ８（配列番号１１８によってコードされる配列番号１１７）からなる群のいずれか１つの膜貫通ドメイン、又は抗原結合受容体を膜にアンカリングする能力を保持するその膜貫通フラグメントを含む。
刺激シグナル伝達ドメイン（ＳＳＤ）及び同時刺激シグナル伝達ドメイン（ＣＳＤ）
好ましくは、本発明の抗原結合受容体は、少なくとも１つの刺激シグナル伝達ドメイン及び／又は少なくとも１つの同時刺激シグナル伝達ドメインを含む。したがって、本明細書において提供される抗原結合受容体は、好ましくは、刺激シグナル伝達ドメインを含み、これがＴ細胞活性化を与える。本明細書において提供される抗原結合受容体は、ネズミ／マウス若しくはヒトＣＤ３ｚ（ヒトＣＤ３ｚのＵｎｉＰｒｏｔ登録は、Ｐ２０９６３のフラグメント部分／ポリペプチド部分（配列番号２のバージョン番号１７７、ネズミ／マウスＣＤ３ｚのＵｎｉＰｒｏｔ登録は、Ｐ２４１６１（一次引用可能受入番号）又はバージョン番号１４３及び配列番号１のＱ９Ｄ３Ｇ３（二次引用可能受入番号）である））、ＦＣＧＲ３Ａ（ヒトＦＣＧＲ３ＡのＵｎｉＰｒｏｔ登録は、Ｐ０８６３７である（配列番号２のバージョン番号１７８））、又はＮＫＧ２Ｄ（ヒトＮＫＧ２ＤのＵｎｉＰｒｏｔ登録は、Ｐ２６７１８である（配列番号１のバージョン番号１５１）、ネズミ／マウスＮＫＧ２ＤのＵｎｉＰｒｏｔ登録は、Ｏ５４７０９である（配列番号２のバージョン番号１３２））である刺激シグナル伝達ドメインを含み得る。
したがって、本明細書において提供される抗原結合受容体において含まれる刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ｚ、ＦＣＧＲ３Ａ又はＮＫＧ２Ｄの完全長のフラグメント／ポリペプチド部分であってもよい。ネズミ／マウス完全長ＣＤ３ｚ又はＮＫＧ２Ｄのアミノ酸配列を、本明細書では配列番号８６（ＣＤ３ｚ）、９０（ＦＣＧＲ３Ａ）又は９４（ＮＫＧ２Ｄ）（配列番号８７（ＣＤ３ｚ）、９１（ＦＣＧＲ３Ａ）又は９５（ＮＫＧ２Ｄ）に示すＤＮＡ配列によってコードされるネズミ／マウス）として示す。ヒト完全長ＣＤ３ｚ、ＦＣＧＲ３Ａ又はＮＫＧ２Ｄのアミノ酸配列は、本明細書では配列番号８４（ＣＤ３ｚ）、８８（ＦＣＧＲ３Ａ）又は９２（ＮＫＧ２Ｄ）（配列番号８５（ＣＤ３ｚ）、８９（ＦＣＧＲ３Ａ）又は９３（ＮＫＧ２Ｄ）に示されるＤＮＡ配列によってコードされるヒト）として示されている。本発明の抗原結合受容体は、ＣＤ３ｚ、ＦＣＧＲ３Ａ又はＮＫＧ２Ｄのフラグメントを刺激ドメインとして含んでもよく、ただし、少なくとも１つのシグナル伝達ドメインが含まれることを条件とする。特に、ＣＤ３ｚ、ＦＣＧＲ３Ａ、又はＮＫＧ２Ｄの任意の部分／フラグメントは、少なくとも１つのシグナル伝達の原因が含まれる限り、刺激ドメインとして適切である。しかしながら、より好ましくは、本発明の抗原結合受容体は、ヒト起源に由来するポリペプチドを含む。したがって、より好ましくは、本明細書において提供される抗原結合受容体は、本明細書では配列番号８４（ＣＤ３ｚ）、８８（ＦＣＧＲ３Ａ）又は９２（ＮＫＧ２Ｄ）（配列番号８５（ＣＤ３ｚ）、８９（ＦＣＧＲ３Ａ）又は９３（ＮＫＧ２Ｄ）に示されるＤＮＡ配列によってコードされるヒト）として示すアミノ酸配列を含む。一実施形態では、本発明の抗原結合受容体は、配列番号１３に示されるアミノ酸配列（配列番号２６に示されるＤＮＡ配列によってコードされる）を含み得るか、又はそれからなり得る。さらなる実施形態では、抗原結合受容体は、配列番号１３に示されるような配列、又は配列番号１３と比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９若しくは３０個までの置換、欠失若しくは挿入を有しかつ刺激シグナル伝達活性を有することを特徴とする配列を含む。刺激シグナル伝達ドメイン（ＳＳＤ）を含む抗原結合受容体の具体的な立体配置は、本明細書で以下に並びに実施例及び図面において与えられる。刺激シグナル伝達活性は、例えばＥＬＩＳＡによって測定されるようなサイトカイン（ＩＬ－２、ＩＦＮγ、ＴＮＦα）放出の増強、（細胞数の増強によって測定されるような）増殖活性の増強、又はＬＤＨ放出アッセイによって測定されるような溶解活性の増強によって決定することができる。
さらに、本明細書において提供される抗原結合受容体は、好ましくは、Ｔ細胞に更なる活性を提供する少なくとも１つの同時刺激シグナル伝達ドメインを含む。本明細書において提供される抗原結合受容体は、ネズミ／マウス又はヒトＣＤ２８（ヒトＣＤ２８のＵｎｉＰｒｏｔ登録は、Ｐ１０７４７であり（配列番号１のバージョン番号１７３）、ネズミ／マウスＣＤ２８のＵｎｉＰｒｏｔ登録は、Ｐ３１０４１である（配列番号２のバージョン番号１３４））、ＣＤ１３７（ヒトＣＤ１３７のＵｎｉＰｒｏｔ登録は、Ｑ０７０１１であり（配列番号１のバージョン番号１４５）、ネズミ／マウスＣＤ１３７のＵｎｉＰｒｏｔ登録は、Ｐ２０３３４である（配列番号１のバージョン番号１３９））、ＯＸ４０（ヒトＯＸ４０のＵｎｉＰｒｏｔ登録は、Ｐ２３５１０であり（配列番号１のバージョン番号１３８）、ネズミ／マウスＯＸ４０のＵｎｉＰｒｏｔ登録は、Ｐ４３４８８である（配列番号１のバージョン番号１１９））、ＩＣＯＳ（ヒトＩＣＯＳのＵｎｉＰｒｏｔ登録は、Ｑ９Ｙ６Ｗ８であり（配列番号１のバージョン番号１２６））、ネズミ／マウスＩＣＯＳのＵｎｉＰｒｏｔ登録は、Ｑ９ＷＶ４０（一次引用可能受入番号）若しくはＱ９ＪＬ１７（二次引用可能受入番号）であり、バージョン番号１０２及び配列バージョン２））、ＣＤ２７（ヒトＣＤ２７のＵｎｉＰｒｏｔ登録は、Ｐ２６８４２であり（配列番号２のバージョン番号１６０）、ネズミ／マウスＣＤ２７のＵｎｉｐｒｏｔ登録は、Ｐ４１２７２である（配列バージョン１のバージョン番号１３７））、４－１－ＢＢ（ネズミ／マウス４－１－ＢＢのＵｎｉＰｒｏｔ登録は、Ｐ２０３３４であり（配列バージョン１のバージョン番号１４０）、ヒト４－１－ＢＢのＵｎｉＰｒｏｔ登録は、Ｑ０７０１１である（配列バージョンのバージョン番号１４６））、ＤＡＰ１０（ヒトＤＡＰ１０のＵｎｉＰｒｏｔ登録は、Ｑ９ＵＢＪ５であり（配列番号１のバージョン番号２５）、ネズミ／マウスＤＡＰ１０のＵｎｉＰｒｏｔ登録は、Ｑ９ＱＵＪ０（一次引用可能受入番号）若しくはＱ９Ｒ１Ｅ７（二次引用可能受入番号）であり、バージョン番号１０１及び配列番号１））又はＤＡＰ１２（ヒトＤＡＰ１２のＵｎｉＰｒｏｔ登録は、Ｏ４３９１４であり（バージョン番号１４６及び配列番号１）、ネズミ／マウスＤＡＰ１２のＵｎｉＰｒｏｔ登録は、Ｏ０５４８８５（一次引用可能受入番号）若しくはＱ９Ｒ１Ｅ７（二次引用可能受入番号）であり、バージョン番号１２３及び配列番号１）のフラグメント／ポリペプチド部分である同時刺激シグナル伝達ドメインを含んでもよい。本発明の特定の実施形態では、本発明の抗原結合受容体は、本明細書で定義される同時刺激シグナル伝達ドメインの１つ又は複数、すなわち１、２、３、４、５、６又は７つを含み得る。したがって、本発明の文脈において、本発明の抗原結合受容体は、ネズミ／マウス又は好ましくはヒトＣＤ１３７のフラグメント／ポリペプチド部分を第１の同時刺激シグナル伝達ドメインとして含んでもよく、第２の同時刺激シグナル伝達ドメインは、ネズミ／マウス又は好ましくはヒトＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＤＡＰ１０及びＤＡＰ１２、又はこれらのフラグメントからなる群から選択される。好ましくは、本発明の抗原結合受容体は、ヒト起源に由来する同時刺激シグナル伝達ドメインを含む。したがって、より好ましくは、本発明の抗原結合受容体において含まれる同時刺激シグナル伝達ドメイン（複数可）は、（配列番号２５に示されるＤＮＡ配列によってコードされるような）配列番号１２に示されるようなアミノ酸配列を含んでもよいか又はアミノ酸配列からなってもよい。
したがって、本明細書において提供される抗原結合受容体において任意に含まれてもよい同時刺激シグナル伝達ドメインは、完全長のＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＤＡＰ１０又はＤＡＰ１２のフラグメント／ポリペプチド部分である。ネズミ／マウス完全長ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、ＤＡＰ１０及びＤＡＰ１２のアミノ酸配列を、本明細書中では配列番号５９（ＣＤ２７）、６３（ＣＤ２８）、６７（ＣＤ１３７）、７１（ＯＸ４０）、７５（ＩＣＯＳ）、７９（ＤＡＰ１０）又は８３（ＤＡＰ１２）として示す（配列番号５８（ＣＤ２７）、６２（ＣＤ２８）、６６（ＣＤ１３７）、７０（ＯＸ４０）、７４（ＩＣＯＳ）、７８（ＤＡＰ１０）又は８２（ＤＡＰ１２）に示されるＤＮＡ配列によってコードされるネズミ／マウス）。しかしながら、ヒト配列は、本発明の文脈において最も好ましいので、本明細書において提供される抗原結合受容体タンパク質において任意に含まれ得る同時刺激シグナル伝達ドメインは、ヒト完全長ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＤＡＰ１０又はＤＡＰ１２のフラグメント／ポリペプチド部分である。ヒト完全長ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＤＡＰ１０又はＤＡＰ１２のアミノ酸配列は、本明細書では、配列番号５７、（ＣＤ２７）、６１（ＣＤ２８）、６５（ＣＤ１３７）、６９（ＯＸ４０）、７３（ＩＣＯＳ）、７７（ＤＡＰ１０）又は８１（ＤＡＰ１２）（配列番号５６（ＣＤ２７）、６０（ＣＤ２８）、６４（ＣＤ１３７）、６８（ＯＸ４０）、７２（ＩＣＯＳ）、７６（ＤＡＰ１０）又は８０（ＤＡＰ１２）に示されるＤＮＡ配列によってコードされるヒト）として示されている。
１つの好ましい実施形態において、抗原結合受容体は、ＣＤ２８又はそのフラグメントを同時刺激シグナル伝達ドメインとして含む。本明細書において提供される抗原結合受容体は、ＣＤ２８のフラグメントを同時刺激シグナル伝達ドメインとして含んでもよく、ただし、ＣＤ２８の少なくとも１つのシグナル伝達ドメインが含まれることを条件とする。特に、ＣＤ２８の任意の部分／フラグメントは、ＣＤ２８のシグナル伝達の原因のうちの少なくとも１つが含まれる限り、本発明の抗原結合受容体に適切である。同時刺激シグナル伝達ドメインＰＹＡＰ（ＣＤ２８のＡＡ２０８～２１１）及びＹＭＮＭ（ＣＤ２８のＡＡ１９１～１９４）は、先に列挙したＣＤ２８ポリペプチドの機能及び機能の効果について有益である。ＹＭＮＭドメインのアミノ酸配列は、配列番号９６に示されており、ＰＹＡＰドメインのアミノ酸配列は、配列番号９７に示されている。したがって、本発明の抗原結合受容体において、ＣＤ２８ポリペプチドは好ましくは、配列ＹＭＮＭ（配列番号９６）及び／又は配列ＰＹＡＰ（配列番号９７）を有するＣＤ２８ポリペプチドの細胞内ドメインに由来する配列を含む。他の実施形態では、本発明の抗原結合受容体において、これらのドメインの一方又は両方が、それぞれＦＭＮＭ（配列番号９８）及び／又はＡＹＡＡ（配列番号９９）に変異している。これらの変異のいずれも、抗原結合受容体を含む形質導入細胞が増殖する能力に影響を及ぼすことなくサイトカインを放出する能力を低下させ、形質導入細胞の生存率、したがって治療可能性を延長するために有利に使用することができる。又は、換言すれば、そのような非機能的変異は、好ましくは、インビボにおいて、本明細書中に提供される抗原結合受容体により形質導入される細胞の持続性を高める。しかしながら、これらのシグナル伝達の原因は、本明細書において提供される抗原結合受容体の細胞内ドメイン内の任意の部位に存在し得る。
別の好ましい実施形態では、抗原結合受容体は、ＣＤ１３７又はそのフラグメントを同時刺激シグナル伝達ドメインとして含む。本明細書において提供される抗原結合受容体は、ＣＤ１３７のフラグメントを同時刺激シグナル伝達ドメインとして含んでもよく、ただし、ＣＤ１３７の少なくとも１つのシグナル伝達ドメインが含まれることを条件とする。特に、ＣＤ１３７の任意の部分／フラグメントは、ＣＤ１３７のシグナル伝達の原因のうちの少なくとも１つが含まれる限り、本発明の抗原結合受容体に適切である。好ましい一実施形態では、本発明の抗原結合受容体タンパク質に含まれるＣＤ１３７ポリペプチドは、配列番号：１２に示すアミノ酸配列（配列番号２５に示されるＤＮＡ配列によってコードされる）を含むか、又はこれからなる。
同時刺激シグナル伝達ドメイン（ＣＳＤ）を含む抗原結合受容体の具体的な立体配置は、本明細書で以下に並びに実施例及び図面において与えられる。同時刺激シグナル伝達活性は、例えばＥＬＩＳＡによって測定されるようなサイトカイン（ＩＬ－２、ＩＦＮγ、ＴＮＦα）放出の増強、（細胞数の増強によって測定されるような）増殖活性の増強、又はＬＤＨ放出アッセイによって測定されるような溶解活性の増強によって決定することができる。上述のように、本発明の一実施形態では、抗原結合受容体の同時刺激シグナル伝達ドメインは、形質導入Ｔ細胞のような本明細書に記載の形質導入細胞のサイトカイン産生、増殖及び溶解活性として定義されるヒトＣＤ２８及び／又はＣＤ１３７遺伝子Ｔ細胞活性に由来し得る。ＣＤ２８及び／又はＣＤ１３７の活性は、ＥＬＩＳＡによるサイトカインの放出、又はインターフェロン－ガンマ（ＩＦＮ－γ）又はインターロイキン２（ＩＬ－２）などのサイトカインのフローサイトメトリー、例えばｋｉ６７測定によって測定されるＴ細胞の増殖、フローサイトメトリーによる細胞定量、又は標的細胞のリアルタイムインピーダンス測定によって評価される溶解活性によって（例えば、Ｔｈａｋｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｓｅｎｓ Ｂｉｏｅｌｅｃｔｒｏｎ．３５（１）（２０１２），５０３－５０６；Ｋｒｕｔｚｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．６９９（２０１１），１７９－２０２；Ｅｋｋｅｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．７５（５）（２００７），２２９１－２２９６；Ｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．９９（５）（２００２），２９８３－２９８８；Ｄｕｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ Ｄｉｆｆｅｒ．２１（１２）（２０１４），１８２５－１８３７，Ｅｒｒａｔｕｍ ｉｎ：Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ Ｄｉｆｆｅｒ．２１（１２）（２０１４），１６１に記載されているようなＩＣＥＬＬｌｉｇｅｎｃｅ機器を使用することによって）測定することができる。
リンカー及びシグナルペプチド
さらに、本明細書において提供される抗原結合受容体は、少なくとも１つのリンカー（又は「スペーサー」）を含み得る。リンカーは、通常、最大２０アミノ酸の長さを有するペプチドである。したがって、本発明の文脈において、リンカーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０アミノ酸の長さを有し得る。例えば、本明細書において提供される抗原結合受容体は、変異型Ｆｃドメイン、アンカリング膜貫通ドメイン、同時刺激シグナル伝達ドメイン及び／又は刺激シグナル伝達ドメインに特異的に結合することができる少なくとも１つの抗原結合部分を含む細胞外ドメイン間のリンカーを含み得る。さらに、本明細書において提供される抗原結合受容体は、抗原結合部分に、特に抗原結合部分の免疫グロブリンドメイン間（例えばｓｃＦｖのＶＨドメインとＶＬドメインとの間）にリンカーを含み得る。そのようなリンカーは、抗原結合受容体（すなわち、少なくとも１つの抗原結合部分を含む細胞外ドメイン、アンカリング膜貫通ドメイン、同時刺激シグナル伝達ドメイン及び／又は刺激シグナル伝達ドメイン）の異なるポリペプチドが独立して折りたたまれ、予想通りに挙動する確率を高めるという利点を有する。したがって、本発明の文脈において、少なくとも１つの抗原結合部分を含む細胞外ドメイン、アンカリング膜貫通ドメイン、同時刺激シグナル伝達ドメイン及び刺激シグナル伝達ドメインは、一本鎖多機能ポリペプチドに含まれ得る。一本鎖融合構築物は、例えば、少なくとも１つの抗原結合部分を含む細胞外ドメイン（複数可）、アンカリング膜貫通ドメイン（複数可）、同時刺激シグナル伝達ドメイン（複数可）及び／又は刺激シグナル伝達ドメイン（複数可）を含むポリペプチド（複数可）からなってもよい。したがって、抗原結合部分、アンカリング膜貫通ドメイン、同時刺激シグナル伝達ドメイン及び刺激シグナル伝達ドメインは、本明細書に記載の１つ又は複数の同一又は異なるペプチドリンカーによって連結され得る。例えば、本明細書において提供される抗原結合受容体において、少なくとも１つの抗原結合部分を含む細胞外ドメインとアンカリング膜貫通ドメインとの間のリンカーは、配列番号１７に示すアミノ酸配列を含み得るか、又はそれらからなり得る。別の実施形態では、抗原結合部分とアンカリング膜貫通ドメインとの間のリンカーは、配列番号１９に示されるアミノ及びアミノ酸配列を含むか、又はこれからなる。したがって、アンカリング膜貫通ドメイン、同時刺激シグナル伝達ドメイン及び／又は刺激ドメインは、ペプチドリンカーによって又はそれに代わるものとしてドメインの直接的な融合によって互いに接続されてもよい。
本発明による好ましい実施形態において、細胞外ドメインにおいて含まれる抗原結合部分は、１０～約２５個のアミノ酸の短鎖リンカーペプチドで接続された抗体の重鎖（ＶＨ）及び軽鎖（ＶＬ）の可変ドメインの融合タンパク質である一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）である。リンカーは、通常、可撓性のためにグリシンが豊富であり、溶解度のためにセリン又はトレオニンが豊富であり、ＶＨのＮ末端とＶＬのＣ末端とを、又はその逆で接続することができる。好ましい実施形態において、リンカーは、ＶＬドメインのＮ末端をＶＨドメインのＣ末端と連結する。例えば、本明細書で提供される抗原結合受容体では、リンカーは、配列番号１６に示されるアミノ酸配列を有し得る。ｓｃＦｖ抗体は、例えばＨｏｕｓｔｏｎ，Ｊ．Ｓ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ．２０３（１９９１）４６－９６）に記載されている。
本発明によるいくつかの実施形態では、細胞外ドメインに含まれる抗原結合部分は、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、抗体定常ドメイン１（ＣＨ１）、抗体軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、抗体軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）及びリンカーからなるポリペプチドである単鎖Ｆａｂフラグメント又はｓｃＦａｂであり、当該抗体ドメイン及び当該リンカーは、Ｎ末端からＣ末端方向に次の順序：（ａ）ＶＨ－ＣＨ１－リンカー－ＶＬ－ＣＬ、（ｂ）ＶＬ－ＣＬ－リンカー－ＶＨ－ＣＨ１、（ｃ）ＶＨ－ＣＬ－リンカー－ＶＬ－ＣＨ１、又は（ｄ）ＶＬ－ＣＨ１－リンカー－ＶＨ－ＣＬのうちの１つを有し；かつ当該リンカーは、少なくとも３０アミノ酸、好ましくは３２～５０アミノ酸のポリペプチドである。当該一本鎖Ｆａｂフラグメントは、ＣＬドメインとＣＨ１ドメインとの間の天然ジスルフィド結合によって安定化される。
本明細書において提供される抗原結合受容体又はその一部はシグナルペプチドを含み得る。このようなシグナルペプチドは、Ｔ細胞膜の表面にタンパク質をもたらすことになる。例えば、本明細書において提供される抗原結合受容体では、シグナルペプチドは、（配列番号１０１に示されるＤＮＡ配列によってコードされるような）配列番号１００に示されるようなアミノ酸アミノ酸配列を有してもよい。
変異型Ｆｃドメインに特異的に結合することができるＴ細胞活性化抗原結合受容体
本明細書に記載の抗原結合受容体の成分は、様々な構成で互いに融合してＴ細胞活性化抗原結合受容体を生成することができる。
いくつかの実施形態において、抗原結合受容体は、アンカリング膜貫通ドメインへ結合した、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とから構成された細胞外ドメインを含む。好ましい実施形態において、ＶＨドメインは、Ｃ末端で、任意にペプチドリンカーを経て、ＶＬドメインのＮ末端へ融合する。他の実施形態において、抗原結合受容体はさらに、刺激シグナル伝達ドメイン及び／又は同時刺激シグナル伝達ドメインを含む。具体的なこのような実施形態において、抗原結合受容体は、１つ以上のペプチドリンカーによって結合したＶＨドメイン及びＶＬドメインと、アンカリング膜貫通ドメインと、任意に刺激シグナル伝達ドメインとから本質的になり、ＶＨドメインは、Ｃ末端で、ＶＬドメインのＮ末端に融合し、かつＶＬドメインは、Ｃ末端でアンカリング膜貫通ドメインのＮ末端に融合し、アンカリング膜貫通ドメインは、Ｃ末端で刺激シグナル伝達ドメインのＮ末端に融合する。任意に、抗原結合受容体はさらに、同時刺激シグナル伝達ドメインを含む。１つのこのような具体的な実施形態において、抗原結合受容体は、ＶＨドメイン及びＶＬドメインと、アンカリング膜貫通ドメインと、刺激シグナル伝達ドメインと、１つ以上のペプチドリンカーによって結合した同時刺激シグナル伝達ドメインとから本質的になり、ＶＨドメインは、Ｃ末端で、ＶＬドメインのＮ末端に融合し、かつＶＬドメインは、Ｃ末端でアンカリング膜貫通ドメインのＮ末端に融合し、アンカリング膜貫通ドメインは、Ｃ末端で刺激シグナル伝達ドメインのＮ末端に融合し、刺激シグナル伝達ドメインは、Ｃ末端で同時刺激シグナル伝達ドメインのＮ末端に融合する。代替的な実施形態において、同時刺激シグナル伝達ドメインは、刺激シグナル伝達ドメインの代わりに、アンカリング膜貫通ドメインに結合する。好ましい実施形態において、抗原結合受容体は、ＶＨドメイン及びＶＬドメインと、アンカリング膜貫通ドメインと、同時刺激シグナル伝達ドメインと、１つ以上のペプチドリンカーによって結合した刺激シグナル伝達ドメインとから本質的になり、ＶＨドメインは、Ｃ末端で、ＶＬドメインのＮ末端に融合し、かつＶＬドメインは、Ｃ末端でアンカリング膜貫通ドメインのＮ末端に融合し、アンカリング膜貫通ドメインは、Ｃ末端で同時刺激シグナル伝達ドメインのＮ末端に融合し、同時刺激シグナル伝達ドメインは、Ｃ末端で刺激シグナル伝達ドメインのＮ末端に融合する。
抗原結合部分、アンカリング膜貫通ドメイン及び同時刺激シグナル伝達ドメイン及び／又は同時刺激シグナル伝達ドメインは、互いに直接的に、又は１つ以上のアミノ酸、典型的には約２～２０個のアミノ酸を含む１つ以上のペプチドリンカーを経て融合してもよい。ペプチドリンカーは、当該技術分野に知られており、本明細書に説明されている。適切な非免疫原性ペプチドリンカーとしては、例えば、（Ｇ４Ｓ）ｎペプチドリンカー、（ＳＧ４）ｎペプチドリンカー、（Ｇ４Ｓ）ｎペプチドリンカー又はＧ４（ＳＧ４）ｎペプチドリンカーが挙げられ、「ｎ」は概して、１～１０の、典型的には２～４の数である。抗原結合部分とアンカリング膜貫通ドメインとを結合させるための好ましいペプチドリンカーは、配列番号１７によるＧＧＧＧＳ（Ｇ４Ｓ）である。抗原結合部分とアンカリング膜貫通ドメインとを結合させるための別の好ましいペプチドリンカーは、配列番号１９によるＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤ（ＣＤ８ｓｔａｌｋ）である。可変重鎖ドメイン（ＶＨ）と可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）とを結合させるのに適した例示的なペプチドリンカーは、配列番号１６によるＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳ（Ｇ４Ｓ）４である。
加えて、リンカーは、免疫グロブリンヒンジ領域（の一部）を含んでいてもよい。特に、抗原結合部分が、アンカリング膜貫通ドメインのＮ末端に融合する場合、免疫グロブリンヒンジ領域又はその一部を介して、追加のペプチドリンカーを用いて、又は用いずに融合することができる。
本明細書に説明するように、本発明の抗原結合受容体は、少なくとも１つの抗原結合部分を含む細胞外ドメインを含む。標的細胞抗原に特異的に結合することができる単一の抗原結合部分を有する抗原結合受容体は、特に抗原結合受容体の高発現が必要とされる場合に有用かつ好ましい。そのような場合、標的細胞抗原に特異的な２つ以上の抗原結合部分の存在は、抗原結合受容体の発現効率を制限し得る。しかしながら、その他の場合においては、標的部位へのターゲティングを最適化するために、又は標的細胞抗原の架橋を可能にするために、標的細胞抗原に特異的な２つ以上の抗原結合部分を含む抗原結合受容体を有することは有利であることとなる。
特定の一実施形態では、抗原結合受容体は、（ＥＵナンバリングによる）Ｐ３２９Ｇ変異を含む変異型Ｆｃドメイン、特にＩｇＧ１ Ｆｃドメインに特異的に結合することができる１つの抗原結合部分を含む。一実施形態では、変異型Ｆｃドメインに特異的に結合することができるが非変異型親Ｆｃドメインには特異的に結合することができない抗原結合部分はｓｃＦｖである。
一実施形態では、抗原結合部分は、ｓｃＦｖフラグメントのＣ末端において、アンカリング膜貫通ドメインのＮ末端に、任意にペプチドリンカーを介して融合されている。一実施形態では、ペプチドリンカーは、アミノ酸配列ＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤ（配列番号１９）を含む。一実施形態では、アンカリング膜貫通ドメインは、ＣＤ８、ＣＤ４、ＣＤ３ｚ、ＦＣＧＲ３Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＤＡＰ１０若しくはＤＡＰ１２膜貫通ドメイン又はそのフラグメントからなる群より選択される膜貫通ドメインである。好ましい実施形態では、アンカリング膜貫通ドメインは、ＣＤ８膜貫通ドメイン又はそのフラグメントである。特定の実施形態では、アンカリング膜貫通ドメインは、ＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むか、又はこれからなる。一実施形態では、抗原結合受容体はさらに、同時刺激シグナル伝達ドメイン（ＣＳＤ）を含む。一実施形態では、抗原結合受容体のアンカリング膜貫通ドメインは、Ｃ末端において、同時刺激シグナル伝達ドメインのＮ末端に融合される。一実施形態では、同時刺激シグナル伝達ドメインは、本明細書で前述したＣＤ２７の細胞内ドメイン、ＣＤ２８の細胞内ドメイン、ＣＤ１３７の細胞内ドメイン、ＯＸ４０の細胞内ドメイン、ＩＣＯＳの細胞内ドメイン、ＤＡＰ１０の細胞内ドメイン及びＤＡＰ１２の細胞内ドメイン又はそれらのフラグメントからなる群より個別に選択される。好ましい実施形態では、同時刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８の細胞内ドメイン又はそのフラグメントである。好ましい一実施形態では、同時刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８の細胞内ドメイン又はＣＤ２８シグナル伝達を保持するそのフラグメントを含む。別の好ましい実施形態では、同時刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ１３７の細胞内ドメイン又はＣＤ１３７シグナル伝達を保持するそのフラグメントを含む。特定の実施形態では、同時刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号１２を含むか、又はこれからなる。一実施形態では、抗原結合受容体はさらに、刺激シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態では、抗原結合受容体の同時刺激シグナル伝達ドメインは、Ｃ末端において、刺激シグナル伝達ドメインのＮ末端に融合される。一実施形態では、少なくとも１つの刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ｚ、ＦＣＧＲ３Ａ及びＮＫＧ２Ｄの細胞内ドメイン、又はそれらのフラグメントからなる群より個別に選択される。好ましい一実施形態では、同時刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ｚの細胞内ドメイン又はＣＤ３ｚシグナル伝達を保持するそのフラグメントである。特定の実施形態では、同時刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号１３を含むか、又はこれからなる。
一実施形態では、抗原結合受容体は、レポータータンパク質、特にＧＦＰ又はその増強類似体に融合される。一実施形態では、抗原結合受容体は、Ｃ末端において、ｅＧＦＰ（増強された緑色蛍光タンパク質）のＮ末端に、任意に本明細書に記載のペプチドリンカーを介して融合される。好ましい実施形態では、ペプチドリンカーは、配列番号１８によるＧＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（Ｔ２Ａ）である。
特定の一実施形態では、抗原結合受容体はアンカリング膜貫通ドメインと、少なくとも１つの抗原結合部分を含む細胞外ドメインとを含み、少なくとも１つの抗原結合部分は、変異型Ｆｃドメインに特異的に結合することができるが非変異型親Ｆｃドメインには特異的に結合することができないｓｃＦｖであり、変異型Ｆｃドメインは（ＥＵナンバリングによる）Ｐ３２９Ｇ変異を含む。Ｐ３２９Ｇ変異はＦｃγ受容体結合を低下させる。一実施形態では、本発明の抗原結合受容体はアンカリング膜貫通ドメイン（ＡＴＤ）、同時刺激シグナル伝達ドメイン（ＣＳＤ）及び刺激シグナル伝達ドメイン（ＳＳＤ）を含む。そのような一実施形態では、抗原結合受容体はｓｃＦｖ－ＡＴＤ－ＣＳＤ－ＳＳＤという構成を有する。好ましい一実施形態では、抗原結合受容体はＶＨ－ＶＬ－ＡＴＤ－ＣＳＤ－ＳＳＤという構成を有する。より具体的なそのような実施形態において、抗原結合受容体は、ＶＨ－リンカー－ＶＬ－リンカー－ＡＴＤ－ＣＳＤ－ＳＳＤという構成を有する。
特定の一実施形態では、抗原結合部分はＰ３２９Ｇ変異を含む変異型Ｆｃドメインに特異的に結合することができるｓｃＦｖであって、抗原結合部分は、配列番号１、配列番号２及び配列番号３からなる群より選択される少なくとも１つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と配列番号４、配列番号５、配列番号６の群から選択される少なくとも１つの軽鎖ＣＤＲとを含む。
別の特定の実施形態では、抗原結合部分はＰ３２９Ｇ変異を含む変異型Ｆｃドメインに特異的に結合することができるｓｃＦｖであって、抗原結合部分は、配列番号１、配列番号４０及び配列番号３からなる群より選択される少なくとも１つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と配列番号４、配列番号５、配列番号６の群から選択される少なくとも１つの軽鎖ＣＤＲとを含む。
好ましい一実施形態では、抗原結合部分はＰ３２９Ｇ変異を含む変異型Ｆｃドメインに特異的に結合することができるｓｃＦｖであって、抗原結合部分は、相補性決定領域（ＣＤＲＨ）１アミノ酸配列ＲＹＷＭＮ（配列番号１）、ＣＤＲＨ２アミノ酸配列ＥＩＴＰＤＳＳＴＩＮＹＡＰＳＬＫＧ（配列番号２）、ＣＤＲＨ３アミノ酸配列ＰＹＤＹＧＡＷＦＡＳ（配列番号３）、軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲＬ）１アミノ酸配列ＲＳＳＴＧＡＶＴＳＮＹＡＮ（配列番号４）、ＣＤＲＬ２アミノ酸配列ＧＴＮＫＲＡＰ（配列番号５）及びＣＤＲＬ３アミノ酸配列ＡＬＷＹＳＮＨＷＶ（配列番号６）を含む。
一実施形態では、本発明は、Ｎ末端からＣ末端に向かって順に以下を含む抗原結合受容体を提供する：
（ｉ）配列番号１の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号２の重鎖ＣＤＲ２、配列番号３の重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、
（ｉｉ）ペプチドリンカー、特に配列番号１６のペプチドリンカー、
（ｉｉｉ）配列番号４の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５の軽鎖ＣＤＲ２及び配列番号６の軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、
（ｉｖ）ペプチドリンカー、特に配列番号１９のペプチドリンカー、
（ｖ）アンカリング膜貫通ドメイン、特に配列番号１１のアンカリング膜貫通ドメイン、
（ｖｉ）同時刺激シグナル伝達ドメイン、特に配列番号１２の同時刺激シグナル伝達ドメイン、及び
（ｖｉｉ）刺激シグナル伝達ドメイン、特に配列番号１３の刺激シグナル伝達ドメイン。
一実施形態では、本発明は、Ｎ末端からＣ末端に向かって順に以下を含む抗原結合受容体を提供する：
（ｉ）配列番号１の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、配列番号４０の重鎖ＣＤＲ２、配列番号３の重鎖ＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、
（ｉｉ）ペプチドリンカー、特に配列番号１６のペプチドリンカー、
（ｉｉｉ）配列番号４の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５の軽鎖ＣＤＲ２及び配列番号６の軽鎖ＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、
（ｉｖ）ペプチドリンカー、特に配列番号１９のペプチドリンカー、
（ｖ）アンカリング膜貫通ドメイン、特に配列番号１１のアンカリング膜貫通ドメイン、
（ｖｉ）同時刺激シグナル伝達ドメイン、特に配列番号１２の同時刺激シグナル伝達ドメイン、及び
（ｖｉｉ）刺激シグナル伝達ドメイン、特に配列番号１３の刺激シグナル伝達ドメイン。
一実施形態では、本発明は、Ｎ末端からＣ末端に向かって順に以下を含む抗原結合受容体を提供する：
（ｉ）重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、
（ｉｉ）ペプチドリンカー、特に配列番号１６のペプチドリンカー、
（ｉｉｉ）配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、
ＶＨドメイン及びＶＬドメインは、ＥＵナンバリングによるアミノ酸変異Ｐ３２９Ｇを含むＦｃドメインに結合する抗原結合部分を形成することができ、
（ｉｖ）ペプチドリンカー、特に配列番号１９のペプチドリンカー、
（ｖ）アンカリング膜貫通ドメイン、特に、配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアンカリング膜貫通ドメイン、
（ｖｉ）同時刺激シグナル伝達ドメイン、特に、配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である同時刺激シグナル伝達ドメイン、及び
（ｖｉｉ）刺激シグナル伝達ドメイン、特に、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である刺激シグナル伝達ドメイン。
一実施形態では、本発明は、Ｎ末端からＣ末端に向かって順に以下を含む抗原結合受容体を提供する：
（ｉ）配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、
（ｉｉ）ペプチドリンカー、特に配列番号１６のペプチドリンカー、
（ｉｉｉ）配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、
（ｉｖ）ペプチドリンカー、特に配列番号１９のペプチドリンカー、
（ｖ）アンカリング膜貫通ドメイン、特に、配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアンカリング膜貫通ドメイン、
（ｖｉ）同時刺激シグナル伝達ドメイン、特に、配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である同時刺激シグナル伝達ドメイン、及び
（ｖｉｉ）刺激シグナル伝達ドメイン、特に、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である刺激シグナル伝達ドメイン。
一実施形態では、本発明は、Ｎ末端からＣ末端に向かって順に以下を含む抗原結合受容体を提供する：
（ｉ）配列番号４１のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、
（ｉｉ）ペプチドリンカー、特に配列番号１６のペプチドリンカー、
（ｉｉｉ）配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、
（ｉｖ）ペプチドリンカー、特に配列番号１９のペプチドリンカー、
（ｖ）アンカリング膜貫通ドメイン、特に、配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアンカリング膜貫通ドメイン、
（ｖｉ）同時刺激シグナル伝達ドメイン、特に、配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である同時刺激シグナル伝達ドメイン、及び
（ｖｉｉ）刺激シグナル伝達ドメイン、特に、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である刺激シグナル伝達ドメイン。
一実施形態では、本発明は、Ｎ末端からＣ末端に向かって順に以下を含む抗原結合受容体を提供する：
（ｉ）配列番号４４のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、
（ｉｉ）ペプチドリンカー、特に配列番号１６のペプチドリンカー、
（ｉｉｉ）配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、
（ｉｖ）ペプチドリンカー、特に配列番号１９のペプチドリンカー、
（ｖ）アンカリング膜貫通ドメイン、特に、配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアンカリング膜貫通ドメイン、
（ｖｉ）同時刺激シグナル伝達ドメイン、特に、配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である同時刺激シグナル伝達ドメイン、及び
（ｖｉｉ）刺激シグナル伝達ドメイン、特に、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である刺激シグナル伝達ドメイン。
一実施形態では、本発明は、Ｎ末端からＣ末端に向かって順に以下を含む抗原結合受容体を提供する：
（ｉ）配列番号１２６のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、
（ｉｉ）ペプチドリンカー、特に配列番号１６のペプチドリンカー、
（ｉｉｉ）配列番号１２７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、
（ｉｖ）ペプチドリンカー、特に配列番号１９のペプチドリンカー、
（ｖ）アンカリング膜貫通ドメイン、特に、配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアンカリング膜貫通ドメイン、
（ｖｉ）同時刺激シグナル伝達ドメイン、特に、配列番号１２のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である同時刺激シグナル伝達ドメイン、及び
（ｖｉｉ）刺激シグナル伝達ドメイン、特に、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一である刺激シグナル伝達ドメイン。
一実施形態では、配列番号７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む抗原結合受容体が提供される。一実施形態では、配列番号７のアミノ酸配列を含む抗原結合受容体が提供される。
一実施形態では、配列番号１２１のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む抗原結合受容体が提供される。一実施形態では、配列番号１２１のアミノ酸配列を含む抗原結合受容体が提供される。
一実施形態では、配列番号１２３のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む抗原結合受容体が提供される。一実施形態では、配列番号１２３のアミノ酸配列を含む抗原結合受容体が提供される。
一実施形態では、配列番号１２５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む抗原結合受容体が提供される。一実施形態では、配列番号１２５のアミノ酸配列を含む抗原結合受容体が提供される。
一実施形態では、抗原結合受容体は、レポータータンパク質、特にＧＦＰ又はその増強類似体に融合される。一実施形態では、抗原結合受容体は、Ｃ末端において、ｅＧＦＰ（増強された緑色蛍光タンパク質）のＮ末端に、任意に本明細書に記載のペプチドリンカーを介して融合される。好ましい実施形態では、ペプチドリンカーは、配列番号１８のＧＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰ（Ｔ２Ａ）である。
本発明の抗原結合受容体を発現することができる、形質導入細胞
本発明の更なる態様は、本発明の抗原結合受容体を発現することができる、形質導入Ｔ細胞である。本明細書に記載の抗原結合受容体は、Ｔ細胞中及び／又はその表面上に天然には含まれずかつ正常な（非形質転換）Ｔ細胞の中又は上に（内在性に）発現していない分子に関する。したがって、Ｔ細胞内及び／又はＴ細胞上の本発明の抗原結合受容体は、Ｔ細胞に人工的に導入される。本発明の文脈において、該Ｔ細胞、好ましくはＣＤ８＋Ｔ細胞は、本明細書で定義される治療される対象から単離／取得され得る。したがって、該Ｔ細胞中及び／又はその表面上に人工的に導入され、続いて提示される本明細書に記載の抗原結合受容体は、（Ｉｇ由来）免疫グロブリン、好ましくは抗体、特に抗体のＦｃドメインに（インビトロ又はインビボで）アクセス可能な１つ又は複数の抗原結合部分を含むドメインを含む。本発明の文脈において、これらの人工的に導入された分子は、本明細書で以下に記載される（レトロウイルス、レンチウイルス又は非ウイルス）形質導入後に該Ｔ細胞中及び／又はその表面上に提示される。したがって、形質導入後、本発明によるＴ細胞は、免疫グロブリン、好ましくは本明細書に記載のＦｃドメインに特異的変異を含む（治療用）抗体によって、標的細胞の存在下で活性化され得る。
本発明はまた、本発明の抗原結合受容体をコードする核酸分子（複数可）によってコードされる抗原結合受容体を発現する形質導入Ｔ細胞に関する。したがって、本発明の文脈において、形質導入細胞は、本発明の抗原結合受容体をコードする核酸分子又は本発明の抗原結合受容体を発現する本発明のベクターを含み得る。
本発明の文脈において、「形質転換されたＴ細胞」という用語は、遺伝的に修飾されたＴ細胞（すなわち、核酸分子が意図的に導入されたＴ細胞）に関する。本明細書で提供される形質導入Ｔ細胞は、本発明のベクターを含み得る。好ましくは、本明細書において提供される形質導入Ｔ細胞は、本発明の抗原結合受容体をコードする核酸分子及び／又は本発明のベクターを含む。本発明の形質導入Ｔ細胞は、外来ＤＮＡ（すなわち、Ｔ細胞に導入された核酸分子）を一過性又は安定に発現するＴ細胞であり得る。特に、本発明の抗原結合受容体をコードする核酸分子は、レトロウイルス又はレンチウイルスの形質転換を用いることによって、Ｔ細胞のゲノム内へと安定して組み込むことができる。ｍＲＮＡトランスフェクションを使用することによって、本発明の抗原結合受容体をコードする核酸分子を一過性に発現させることができる。好ましくは、本明細書で提供される形質導入Ｔ細胞は、ウイルスベクター（例えば、レトロウイルスベクター又はレンチウイルスベクター）を介してＴ細胞に核酸分子を導入することによって遺伝子改変されている。したがって、抗原結合受容体の発現は構成的であり得、抗原結合受容体の細胞外ドメインは細胞表面上で検出可能であり得る。抗原結合受容体のこの細胞外ドメインは、本明細書で定義される抗原結合受容体の完全な細胞外ドメインを含み得るが、その一部も含み得る。必要とされる最小限の大きさは、抗原結合受容体における抗原結合部分の抗原結合部位である。
抗原結合受容体が誘導性又は抑制性プロモーターの制御下でＴ細胞に導入される場合、発現は条件付き又は誘導性であってもよい。そのような誘導性又は抑制性プロモーターの例は、アルコールデヒドロゲナーゼＩ（ａｌｃＡ）遺伝子プロモーター及びトランス活性化タンパク質ＡｌｃＲを含有する転写系であり得る。ａｌｃＡプロモーターに連結された目的の遺伝子の発現を制御するために、異なる農業用のアルコール系製剤が使用される。さらに、テトラサイクリン応答性プロモーター系は、テトラサイクリンの存在下で遺伝子発現系を活性化又は抑制するように機能することができる。システムの要素のいくつかには、テトラサイクリンリプレッサータンパク質（ＴｅｔＲ）、テトラサイクリンオペレーター配列（ｔｅｔＯ）、及び、ＴｅｔＲと単純ヘルペスウイルスタンパク質１６（ＶＰ１６）活性化配列との融合であるテトラサイクリン転写活性化因子融合タンパク質（ｔＴＡ）が含まれる。さらに、ステロイド応答性プロモーター、金属制御又は病原性関連（ＰＲ）タンパク質関連プロモーターを使用することができる。
発現は、使用される系に応じて、構成的（ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅ）又は構成上（ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ）であり得る。本発明の抗原結合受容体は、本明細書において提供する形質導入Ｔ細胞の表面に発現させることができる。抗原結合受容体の細胞外部分（すなわち、抗原結合受容体の細胞外ドメインは、細胞表面上で検出できるのに対し、細胞内部分（すなわち、同時刺激シグナル伝達ドメイン（複数可）及び刺激シグナル伝達ドメイン）は、細胞表面上で検出することができない。抗原結合受容体の細胞外ドメインの検出は、この細胞外ドメインに特異的に結合する抗体を用いて、又は細胞外ドメインが結合可能な変異型Ｆｃドメインによって行うことができる。細胞外ドメインは、これらの抗体又はＦｃドメインを用いて、フローサイトメトリー又は顕微鏡法によって検出することができる。
他の細胞にも本発明の抗原結合受容体を形質導入することができ、それによって標的細胞に指向させることができる。これらの更なる細胞には、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、自然リンパ球系細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞又は好中球が含まれるが、これらに限定されない。優先的には、該免疫細胞はリンパ球である。白血球の表面上の本発明の抗原結合受容体のトリガーは、細胞が由来する系統にかかわらず、変異型Ｆｃドメインを含む治療用抗体と併せて、細胞を標的細胞に対して細胞傷害性にする。細胞傷害性は、抗原結合受容体に対して選択された刺激シグナル伝達ドメイン又は同時刺激シグナル伝達ドメインとは無関係に起こることになっており、追加のサイトカインの外来性供給に依存していない。したがって、本発明の形質導入細胞は、例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、γδＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）細胞、骨髄系細胞又は間葉系幹細胞であり得る。好ましくは、本明細書で提供される形質導入細胞はＴ細胞（例えば、自己Ｔ細胞）であり、より好ましくは形質導入細胞はＣＤ８＋Ｔ細胞である。したがって、本発明の文脈において、形質導入細胞はＣＤ８＋Ｔ細胞である。さらに、本発明の文脈において、形質導入細胞は自己Ｔ細胞である。したがって、本発明の文脈おいて、形質導入細胞は、好ましくは自己ＣＤ８＋Ｔ細胞である。対象から単離された自己細胞（例えば、Ｔ細胞）の使用に加えて、本発明はまた、同種異系細胞の使用も包含する。したがって、本発明の文脈において、形質導入細胞は、同種異系細胞、例えば、同種異系ＣＤ８＋Ｔ細胞であってもよい。同種異系という用語は、例えば本明細書に記載の抗原結合受容体発現形質導入細胞によって治療される個体／対象に適合するヒト白血球抗原（ＨＬＡ）である非血縁ドナー個体／対象に由来する細胞を指す。自己細胞は、本明細書に記載の形質導入細胞で治療される対象から上記のように単離される／得られる細胞を指す。
本発明の形質導入細胞は、さらなる核酸分子、例えばサイトカインをコードする核酸分子と同時形質導入され得る。
本発明はまた、本発明の抗原結合受容体を発現する形質導入Ｔ細胞の製造方法であって、Ｔ細胞に本発明のベクターを形質導入する工程、形質導入Ｔ細胞を、該形質導入細胞の中又は上に抗原結合受容体を発現させる条件下で培養する工程、及び該形質導入Ｔ細胞を回収する工程を含む方法に関する。
本発明の文脈において、本発明の形質導入細胞は、好ましくは、対象（好ましくはヒト患者）から細胞（例えば、Ｔ細胞、好ましくはＣＤ８＋Ｔ細胞）を単離することによって産生される。患者又はドナーから細胞（例えばＴ細胞、好ましくはＣＤ８＋Ｔ細胞）を単離／取得する方法は当技術分野で周知であり、例えば、患者又はドナーからの本発明の細胞（例えばＴ細胞、好ましくはＣＤ８＋Ｔ細胞）の文脈において、細胞は採血又は骨髄の除去によって単離し得る。患者の試料として細胞を単離／取得した後、細胞（例えば、Ｔ細胞）を試料の他の成分から分離する。試料から細胞（例えば、Ｔ細胞）を分離するためのいくつかの方法が公知であり、限定するものではないが、例えば、患者又はドナーからの末梢血試料から細胞を得るための白血球アフェレーシス、ＦＡＣＳ細胞選別装置を使用して細胞を単離／得ることを含む。単離された／得られた細胞Ｔ細胞は、その後、例えば、抗ＣＤ３抗体を使用することによって、抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８モノクローナル抗体を使用することによって、かつ／又は抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ２８抗体及びインターロイキン－２（ＩＬ－２）を使用することによって培養及び増殖される（例えば、Ｄｕｄｌｅｙ，Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２６（２００３），３３２－３４２又はＤｕｄｌｅｙ，Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２６（２００８），５２３３－５２３９を参照のこと）。
その後の工程において、細胞（例えば、Ｔ細胞）は、当該分野で公知の方法（例えば、Ｌｅｍｏｉｎｅ，Ｊ Ｇｅｎｅ Ｍｅｄ ６（２００４），３７４－３８６を参照のこと）によって人工的／遺伝子的に改変／形質導入される。細胞（例えば、Ｔ細胞）に形質導入する方法は当技術分野で公知であり、核酸又は組換え核酸を形質導入する場合、限定されないが、例えばエレクトロポレーション法、リン酸カルシウム法、カチオン性脂質法又はリポソーム法が挙げられる。形質導入される核酸は、市販のトランスフェクション試薬、例えばリポフェクタミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製、カタログ番号：１１６６８０２７）を使用することによって、従来法で高効率に形質導入することができる。ベクターを使用する場合、ベクターは、プラスミドベクター（すなわち、ウイルスベクターではないベクター）である限り、上述の核酸と同様に形質導入することができる。本発明の文脈において、細胞（例えば、Ｔ細胞）に形質導入する方法としては、レトロウイルス又はレンチウイルスＴ細胞形質導入、非ウイルスベクター（例えば、ｓｌｅｅｐｉｎｇ ｂｅａｕｔｙミニサークルベクトル）、並びにｍＲＮＡトランスフェクションが挙げられる。「ｍＲＮＡトランスフェクション」とは、この例では本発明の抗原結合受容体などの目的のタンパク質を、形質導入される細胞において一過性に発現させるための当業者に周知の方法を指す。簡単に記載すると、エレクトロポレーションシステム（例えばＧｅｎｅ Ｐｕｌｓｅｒ、Ｂｉｏ－Ｒａｄなど）を使用することによって、本発明の抗原結合受容体をコードするｍＲＮＡを細胞にエレクトロポレーションし、その後、上記の標準的な細胞（例えば、Ｔ細胞）培養プロトコルによって培養することができる（Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．１３（１）（２００６），１５１－１５９を参照のこと）。本発明の形質導入細胞は、レンチウイルス、又は最も好ましくはレトロウイルス形質導入によって作製することができる。
この文脈において、細胞に形質導入するのに適したレトロウイルスベクターは当技術分野で公知であり、例えば、ＳＡＭＥＮ ＣＭＶ／ＳＲａ（Ｃｌａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３（１９９９），５０７－５１３），ＬＺＲＳ－ｉｄ３－ＩＨＲＥＳ（Ｈｅｅｍｓｋｅｒｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８６（１９９７），１５９７－１６０２），ＦｅＬＶ（Ｎｅｉｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３０８（１９８４），８１４－８２０），ＳＡＸ（Ｋａｎｔｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３（１９８６），６５６３－６５６７），ｐＤＯＬ（Ｄｅｓｉｄｅｒｉｏ，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６７（１９８８），３７２－３８８），Ｎ２（Ｋａｓｉｄ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７（１９９０），４７３－４７７），ＬＮＬ６（Ｔｉｂｅｒｇｈｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ８４（１９９４），１３３３－１３４１），ｐＺｉｐＮＥＯ（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５３（１９９４），３６３０－３６３８），ＬＡＳＮ（Ｍｕｌｌｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．７（１９９６），１１２３－１１２９），ｐＧ１ＸｓＮａ（Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８４（１９９６），２０３１－２０３６），ＬＣＮＸ（Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．８（１９９７），１０４１－１０４８），ＳＦＧ（Ｇａｌｌａｒｄｏ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ９０（１９９７），ａｎｄ ＬＸＳＮ（Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．８（１９９７），１０４１－１０４８），ＳＦＧ（Ｇａｌｌａｒｄｏ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ９０（１９９７），９５２－９５７），ＨＭＢ－Ｈｂ－Ｈｕ（Ｖｉｅｉｌｌａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９４（１９９７），１１５９５－１１６００），ｐＭＶ７（Ｃｏｃｈｌｏｖｉｕｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．４６（１９９８），６１－６６），ｐＳＴＩＴＣＨ（Ｗｅｉｔｊｅｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ５（１９９８），１１９５－１２０３），ｐＬＺＲ（Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１０（１９９９），１２３－１３２），ｐＢＡＧ（Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１０（１９９９），９７７－９８２），ｒＫａｔ．４３．２６７ｂｎ（Ｇｉｌｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２５（２００２），１３９－１５１），ｐＬＧＳＮ（Ｅｎｇｅｌｓ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１４（２００３），１１５５－１１６８），ｐＭＰ７１（Ｅｎｇｅｌｓ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１４（２００３），１１５５－１１６８），ｐＧＣＳＡＭ（Ｍｏｒｇａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７１（２００３），３２８７－３２９５），ｐＭＳＧＶ（Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７４（２００５），４４１５－４４２３），ｏｒ ｐＭＸ（ｄｅ Ｗｉｔｔｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８１（２００８），５１２８－５１３６）である。本発明の文脈において、細胞（例えば、Ｔ細胞）に形質導入するための適切なレンチウイルスベクターは、例えば、ＰＬ－ＳＩＮレンチウイルスベクター（Ｈｏｔｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｔｈｏｄｓ．６（５）（２００９），３７０－３７６），ｐ１５６ＲＲＬ－ｓｉｎＰＰＴ－ＣＭＶ－ＧＦＰ－ＰＲＥ／ＮｈｅＩ（Ｃａｍｐｅａｕ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ４（８）（２００９），ｅ６５２９），ｐＣＭＶＲ８．７４（Ａｄｄｇｅｎｅ Ｃａｔａｌｏｇｏｕｅ Ｎｏ．：２２０３６），ＦＵＧＷ（Ｌｏｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２９５（５５５６）（２００２），８６８－８７２，ｐＬＶＸ－ＥＦ１（Ａｄｄｇｅｎｅカタログ番号６４３６８），ｐＬＶＥ（Ｂｒｕｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ １１１（９）（２０１４），Ｅ７９８－８０６），ｐＣＤＨ１－ＭＣＳ１－ＥＦ１（Ｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７（１１）（２００９），１７５６－１７７０），ｐＳＬＩＫ（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１６（４）（２０１４），３４５－３５６），ｐＬＪＭ１（Ｓｏｌｏｍｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ．４５（１２）（２０１３），１４２８－３０），ｐＬＸ３０２（Ｋａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ Ｓｉｇｎａｌ．６（２８７）（２０１３），ｒｓ１３），ｐＨＲ－ＩＧ（Ｘｉｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｅｒｅｂ Ｂｌｏｏｄ Ｆｌｏｗ Ｍｅｔａｂ．３３（１２）（２０１３），１８７５－８５），ｐＲＲＬＳＩＮ（Ａｄｄｇｅｎｅ Ｃａｔａｌｏｇｏｕｅ Ｎｏ．：６２０５３），ｐＬＳ（Ｍｉｙｏｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｖｉｒｏｌ．７２（１０）（１９９８），８１５０－８１５７），ｐＬＬ３．７（Ｌａｚｅｂｎｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２８３（７）（２００８），１１０７８－８２），ＦＲＩＧ（Ｒａｉｓｓｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．５７（２０１３），２３－３２），ｐＷＰＴ（Ｒｉｔｚ－Ｌａｓｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ．４６（６）（２００３），８１０－８２１），ｐＢＯＢ（Ｍａｒｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２２（１－２）（２００４），５－１１），ｏｒ ｐＬＥＸ（Ａｄｄｇｅｎｅカタログ番号２７９７６）である。
本発明の形質転換された細胞は好ましくは、その天然環境の外側の、制御されていない条件下で成長する。特に、「培養する」という用語は、多細胞真核生物（好ましくはヒト患者由来）に由来する細胞（例えば、本発明の形質導入細胞（複数可））をインビトロで増殖させることを意味する。細胞を培養することは、生来の組織源から分離された細胞を活きたままにする実験技術である。本明細書では、本発明の形質転換された細胞は、形質転換された細胞の中又は上で、本発明の抗原結合受容体の発現を可能にする条件下で培養される。発現又は導入遺伝子（すなわち、本発明の抗原結合受容体の）を可能にする条件は当技術分野で一般的に公知であり、例えば作動性抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８抗体、並びにインターロイキン２（ＩＬ－２）、インターロイキン７（ＩＬ－７）、インターロイキン１２（ＩＬ－１２）及び／又はインターロイキン１５（ＩＬ－１５）などのサイトカインの添加が挙げられる。培養された形質導入細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔ）における本発明の抗原結合受容体の発現後、形質導入細胞は培養物（すなわち、培養培地から）から回収（すなわち、再抽出される）される。
したがって、本発明の方法によって得ることができる本発明の核酸分子によってコードされる抗原結合受容体を発現する形質導入細胞、好ましくはＴ細胞、特にＣＤ８＋Ｔも本発明に包含される。
核酸分子
本発明の更なる態様は、本発明の１つ又はいくつかの抗原結合受容体をコードする核酸及びベクターである。本発明の抗原結合受容体をコードする例示的な核酸分子を配列番号２０に示す。本発明の核酸分子は、調節配列の制御下であってよい。例えば、本発明の抗原結合受容体の発現誘導を可能にするプロモーター、転写エンハンサー及び／又は配列を採用してもよい。本発明の文脈において、核酸分子は、構成プロモーター又は誘導性プロモーターの制御下で発現する。適切なプロモーターは、例えば、ＣＭＶプロモーター（Ｑｉｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ５（５）（２０１０），ｅ１０６１１）、ＵＢＣプロモーター（Ｑｉｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ５（５）（２０１０），ｅ１０６１１）、ＰＧＫ（Ｑｉｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ５（５）（２０１０），ｅ１０６１１）、ＥＦ１Ａプロモーター（Ｑｉｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ５（５）（２０１０），ｅ１０６１１）、ＣＡＧＧプロモーター（Ｑｉｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ５（５）（２０１０），ｅ１０６１１）、ＳＶ４０プロモーター（Ｑｉｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ５（５）（２０１０），ｅ１０６１１）、ＣＯＰＩＡプロモーター（Ｑｉｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ５（５）（２０１０），ｅ１０６１１）、ＡＣＴ５Ｃプロモーター（Ｑｉｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ５（５）（２０１０），ｅ１０６１１）、ＴＲＥプロモーター（Ｑｉｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．５（５）（２０１０），ｅ１０６１１）、Ｏｃｔ３／４プロモーター、Ｓ３６７－Ｓ３６７（Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ９（２００４），Ｓ３６７－Ｓ３６７（ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｙｍｔｈｅ．２００４．０６．９０４））、又はＮａｎｏｇプロモーター（Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ．１５（５）（２００５），３１７－２４）である。したがって、本発明はまた、本発明に記載の核酸分子（複数可）を含むベクター（複数可）に関する。本明細書では、ベクターという用語は、導入された細胞において自己複製することができる環状又は線状の核酸分子に関する。選択が所望の機能に依存するであろう多くの適切なベクターは、分子生物学における当業者に公知であり、プラスミド、コスミド、ウイルス、バクテリオファージ及び遺伝子工学において従来より使用されている他のベクターを含む。当業者に周知である方法は、種々のプラスミドベクターを構築するために使用することができ、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（ｌｏｃ ｃｉｔ．）ａｎｄ Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．（１９８９），（１９９４）において説明されている技術を参照されたい。あるいは、本発明のポリヌクレオチド及びベクターは、標的細胞への送達のためにリポソーム内へと再構成することができる。以下でさらに詳細に論じるように、クローニングベクターを使用してＤＮＡの個々の配列を単離した。関連する配列は、特定のポリペプチドの発現を必要とする発現ベクター内へと移すことができる。典型的なクローニングベクターは、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫ、ｐＧＥＭ、ｐＵＣ９、ｐＢＲ３２２、ｐＧＡ１８及びｐＧＢＴ９を含む。典型的な発現ベクターは、ｐＴＲＥ、ｐＣＡＬ－ｎ－ＥＫ、ｐＥＳＰ－１、ｐＯＰ１３ＣＡＴを含む。
本発明はまた、本明細書で定義される抗原結合受容体をコードする核酸分子（複数可）に作動可能に連結された調節配列である核酸分子（複数可）を含むベクター（複数可）に関する。本発明の文脈において、ベクターはポリシストロニックであり得る。このような調節配列（制御要素）は、当業者に公知であり、プロモーター、スプライスカセット、翻訳開始コドン、ベクター（複数可）内へインサートを導入するための翻訳及び挿入部位を含むことができる。本発明の文脈において、核酸分子（複数可）は、真核細胞又は原核細胞における発現を可能にする発現制御配列へ作用するように連結される。ベクター（複数可）は、本明細書に定義されるような抗原結合受容体をコードする核酸分子（複数可）を含む発現ベクター（複数可）であると想定される。作用可能に連結されたとは、そのように説明される構成要素が、意図する様式で機能することができる関係性にある事実を指す。コード配列へ作用可能に連結された制御配列は、コード配列の発現が制御配列と互換性のある条件下で達成されるような方法でライゲートされる。制御配列がプロモーターである場合、二本鎖核酸が好ましくは使用されることは当業者に明白である。
本発明の文脈において、列挙されたベクター（複数可）は、発現ベクター（複数可）である。発現ベクターとは、選択された細胞を形質転換するのに使用することができる構築物であり、選択された細胞におけるコード配列の発現を準備する。発現ベクター（複数可）は、例えば、ベクター（複数可）、バイナリーベクター（複数可）又は組込みベクター（複数可）をクローニングすることであり得る。発現は、核酸分子から好ましくは翻訳可能なｍＲＮＡ内への転写を含む。原核細胞及び／又は真核細胞における発現を確保する調節要素は、当業者に周知である。真核細胞の場合において、細胞は普通、転写の開始を確保するプロモーターと、任意に、転写の終結及び転写産物の安定化を確保するポリＡシグナルとを含む。原核宿主細胞における発現を可能にする考えられ得る調節要素は、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉにおけるＰＬプロモーター、ｌａｃプロモーター、ｔｒｐプロモーター若しくはｔａｃプロモーターを含み、真核宿主細胞における発現を可能にする調節要素の例は、酵母におけるＡＯＸ１プロモーター若しくはＧＡＬ１プロモーターであり、又は哺乳動物細胞及び他の動物細胞におけるＣＭＶプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＲＳＶプロモーター（ラウス肉腫ウイルス）、ＣＭＶエンハンサー、ＳＶ４０エンハンサー若しくはグロビンイントロンである。
転写の開始の原因となる要素の他に、このような調節要素はまた、ポリヌクレオチドの下流に、ＳＶ４０－ポリＡ部位又はｔｋ－ポリＡ部位のような、転写終結シグナルも含むことができる。さらに、使用される発現系に応じて、ポリペプチドを細胞区画へ差し向けることができる、又はポリペプチドを培地中へと分泌することができる、リーダー配列をコードするシグナルペプチドは、列挙された核酸配列のコード配列へ付加されてもよく、当技術分野で周知であり、また、例えば、添付の実施例も参照されたい。
リーダー配列（複数可）は、適切な相において、翻訳配列、開始配列及び終止配列、並びに好ましくは、翻訳されたタンパク質又はその部分を細胞周辺腔又は細胞外培地内へと分泌するのを差し向けることができるリーダー配列と重合する。任意に、異種性配列は、所望の特徴、例えば、発現した組換え産物の安定化又は簡素化した精製を付与するＮ末端特定ペプチドを含む抗原結合受容体をコードすることができる。上記を参照のこと。この脈絡において、適切な発現ベクターは、Ｏｋａｙａｍａ－Ｂｅｒｇ ｃＤＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ ｐｃＤＶ１（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、ｐＣＤＭ８、ｐＲｃ／ＣＭＶ、ｐｃＤＮＡ１、ｐｃＤＮＡ３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎｅ）、ｐＥＦ－ＤＨＦＲ、ｐＥＦ－ＡＤＡ若しくはｐＥＦ－ｎｅｏ（Ｒａｕｍ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ ５０（２００１），１４１－１５０）又はｐＳＰＯＲＴ１（ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ）など、当技術分野で公知である。
本発明の文脈において、発現制御配列は、真核細胞を形質転換又はトランスフェクトすることができるベクター中の真核プロモーター系であるが、原核細胞用の制御配列も使用され得る。ベクターが適切な細胞に組み込まれると、細胞は、ヌクレオチド配列の高レベル発現に適した条件下で、所望に応じて維持される。さらなる調節エレメントには、転写エンハンサー及び翻訳エンハンサーが含まれ得る。有利には、本発明の上述のベクターは、選択可能なマーカー及び／又はスコアリング可能なマーカーを含む。形質転換細胞、例えば植物組織及び植物の選択に有用な選択マーカー遺伝子は、当業者に周知であり、例えば、メトトレキサートに対する耐性を付与するｄｈｆｒ（Ｒｅｉｓｓ，Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ．（Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．Ａｄｖ．）１３（１９９４），１４３－１４９）、アミノグリコシドであるネオマイシン、カナマイシン及びパラマイシンに対する耐性を付与するｎｐｔ（Ｈｅｒｒｅｒａ－Ｅｓｔｒｅｌｌａ，ＥＭＢＯ Ｊ．２（１９８３），９８７－９９５）、及びハイグロマイシンに対する耐性を付与するｈｙｇｒｏ（Ｍａｒｓｈ，Ｇｅｎｅ ３２（１９８４），４８１－４８５）に対する選択の基礎として代謝拮抗薬耐性を含む。さらなる選択可能な遺伝子、すなわち細胞がトリプトファンの代わりにインドールを利用することを可能にするｔｒｐＢ、ヒスチジンの代わりにヒスチノールを利用することを可能にするｈｉｓＤ（Ｈａｒｔｍａｎ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５（１９８８）、８０４７）、マンノースを細胞が利用することを可能にするマンノース－６－ホスフェート（国際公開第９４／２０６２７号）及びオルニチンデカルボキシラーゼ阻害剤、２－（ジフルオロメチル）－ＤＬ－オルニチン、ＤＦＭＯに対する耐性を付与するＯＤＣ（オルニチンデカルボキシラーゼ）（ＭｃＣｏｎｌｏｇｕｅ，１９８７，Ｉｎ：Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｅｄ．）又はブラストサイジンＳに対する耐性を付与するアスペルギルス・テレウス由来のデアミナーゼ（Ｔａｍｕｒａ，Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５９（１９９５）、２３３６－２３３８）が記載されている。
有用なスコアリング可能マーカーも当業者に公知であり、市販されている。有利には、該マーカーは、ルシフェラーゼ（Ｇｉａｃｏｍｉｎ，Ｐｌ．Ｓｃｉ．１１６（１９９６），５９－７２；Ｓｃｉｋａｎｔｈａ，Ｊ．Ｂａｃｔ．１７８（１９９６），１２１）、緑色蛍光タンパク質（Ｇｅｒｄｅｓ，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．３８９（１９９６），４４－４７）又はβ－グルクロニダーゼ（Ｊｅｆｆｅｒｓｏｎ，ＥＭＢＯ Ｊ．６（１９８７），３９０１－３９０７）をコードする遺伝子である。この実施形態は、列挙されたベクターを含む細胞、組織及び生物の単純かつ迅速なスクリーニングに特に有用である。
上記のように、列挙された核酸分子（複数可）は、単独で、又はベクター（複数可）の一部として使用されて、例えば養子Ｔ細胞療法のためだけでなく、遺伝子療法目的のためにも、細胞内で本発明の抗原結合受容体を発現させることができる。本明細書に記載の抗原結合受容体のいずれか１つをコードするＤＮＡ配列（複数可）を含む核酸分子又はベクター（複数可）が細胞に導入され、そして目的のポリペプチドが産生される。エクスビボ又はインビボ技術によって細胞に治療遺伝子を導入することに基づく遺伝子治療は、遺伝子導入の最も重要な用途の１つである。インビトロ又はインビボ遺伝子治療のための方法又は遺伝子送達系における適切なベクター、方法又は遺伝子送達系は、文献に記載されており、当業者に公知である；例えば、Ｇｉｏｒｄａｎｏ，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２（１９９６），５３４－５３９；Ｓｃｈａｐｅｒ，Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．７９（１９９６），９１１－９１９；Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５６（１９９２），８０８－８１３；Ｖｅｒｍａ，Ｎａｔｕｒｅ ３８９（１９９４），２３９；Ｉｓｎｅｒ，Ｌａｎｃｅｔ ３４８（１９９６），３７０－３７４；Ｍｕｈｌｈａｕｓｅｒ，Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．７７（１９９５），１０７７－１０８６；Ｏｎｏｄｅｒａ，Ｂｌｏｏｄ ９１（１９９８），３０－３６；Ｖｅｒｍａ，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．５（１９９８），６９２－６９９；Ｎａｂｅｌ，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１１（１９９７），２８９－２９２；Ｖｅｒｚｅｌｅｔｔｉ，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．９（１９９８），２２４３－５１；Ｗａｎｇ，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２（１９９６），７１４－７１６；ＷＯ ９４／２９４６９；ＷＯ ９７／００９５７；ＵＳ ５，５８０，８５９；ＵＳ ５，５８９，４６６；又はＳｃｈａｐｅｒ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ７（１９９６），６３５－６４０を参照のこと。列挙された核酸分子（複数可）及びベクター（複数可）は、直接的な導入のために、又はリポソーム若しくはウイルスベクター（例えば、アデノウイルス、レトロウイルス）を介した細胞への導入のために設計され得る。本発明の文脈において、該細胞は、Ｔ細胞、例えばＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ３＋Ｔ細胞、γδＴ細胞又はナチュラルキラー（ＮＫ）Ｔ細胞、好ましくはＣＤ８＋Ｔ細胞である。
上記に従って、本発明は、本明細書で定義される抗原結合受容体のポリペプチド配列をコードする核酸分子を含む、遺伝子工学において従来から使用されているベクター、特にプラスミド、コスミド及びバクテリオファージを誘導する方法に関する。本発明の文脈において、該ベクターは、発現ベクター及び／又は遺伝子導入若しくは標的化ベクターである。レトロウイルス、ワクシニアウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス又はウシパピローマウイルスなどのウイルスに由来する発現ベクターは、列挙されたポリヌクレオチド又はベクターを標的細胞集団に送達するために使用され得る。
当業者に周知の方法を使用して、組換えベクター（複数可）を構築することができる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（ｌｏｃ ｃｉｔ．）、Ａｕｓｕｂｅｌ（１９８９，ｌｏｃ ｃｉｔ．）又は他の標準的な教科書に記載されている技術を参照されたい。あるいは、列挙された核酸分子及びベクターは、標的細胞への送達のためにリポソーム内へと再構成することができる。本発明の核酸分子を含有するベクターは、細胞宿主の種類に応じて異なる周知の方法によって宿主細胞に移入することができる。例えば、塩化カルシウムトランスフェクションは原核細胞に一般的に利用され、リン酸カルシウム処理又はエレクトロポレーションは他の細胞宿主に使用され得る。上記のＳａｍｂｒｏｏｋを参照されたい。列挙されたベクターは、とりわけ、ｐＥＦ－ＤＨＦＲ、ｐＥＦ－ＡＤＡ又はｐＥＦ－ｎｅｏであり得る。ベクターｐＥＦ－ＤＨＦＲ、ｐＥＦ－ＡＤＡ及びｐＥＦ－ｎｅｏは、当技術分野において、例えばＭａｃｋ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９２（１９９５），７０２１－７０２５及びＲａｕｍ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ ５０（２００１），１４１－１５０に記載されている。
本発明はまた、本明細書に記載のベクターで形質導入されたＴ細胞を提供する。該Ｔ細胞は、上記ベクターの少なくとも１つ又は上記核酸分子の少なくとも１つをＴ細胞又はその前駆細胞に導入することによって産生され得る。Ｔ細胞における該少なくとも１つのベクター又は少なくとも１つの核酸分子の存在は、変異型Ｆｃドメインに特異的に結合することができる抗原結合部分を含む細胞外ドメインを含む上記の抗原結合受容体をコードする遺伝子の発現を媒介する。本発明のベクターはポリシストロニックであり得る。
Ｔ細胞又はその前駆細胞の中に導入される説明された核酸分子（複数可）又はベクター（複数可）は、細胞のゲノム内へと組み込むことができるか又は染色体外で維持することができる。
標的細胞抗原
上述のように、変異型Ｆｃドメイン、特にアミノ酸変異Ｐ３２９Ｇ（ＥＵナンバリングによる）を含むＦｃドメインを含む本明細書に記載の抗体の（Ｉｇ由来）ドメイン（複数可）は、標的細胞表面分子、例えば腫瘍細胞の表面に天然に存在する腫瘍特異的抗原に対する特異性を有する抗原相互作用部位を含む。本発明の文脈において、そのような抗体は、本発明の抗原結合受容体を含む本明細書に記載の形質導入Ｔ細胞を標的細胞（例えば、腫瘍細胞）と物理的に接触させ、形質導入Ｔ細胞は活性化される。本発明の形質導入Ｔ細胞の活性化は、本明細書に記載の標的細胞の溶解を優先的にもたらす。
標的（例えば、腫瘍）細胞の表面に天然に存在する標的細胞抗原（例えば、腫瘍マーカー）の例を本明細書において以下に示し、制限されるものではないが以下が含まれる：ＦＡＰ（線維芽細胞活性化タンパク質）、ＣＥＡ（癌胎児性抗原）、ｐ９５（ｐ９５ＨＥＲ２）、ＢＣＭＡ（Ｂ細胞成熟抗原）、ＥｐＣＡＭ（上皮細胞接着分子）、ＭＳＬＮ（メソテリン）、ＭＣＳＰ（メラノーマコンドロイチン硫酸プロテオグリカン）、ＨＥＲ－１（ヒト上皮成長因子１）、ＨＥＲ－２（ヒト上皮成長因子２）、ＨＥＲ－３（ヒト上皮成長因子３）、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ５２Ｆｌｔ３、葉酸受容体１（ＦＯＬＲ１）、ヒト栄養膜細胞表面抗原２（Ｔｒｏｐ－２）がん抗原１２－５（ＣＡ－１２－５）、ヒト白血球抗原－Ｄ関連（ＨＬＡ－ＤＲ）、ＭＵＣ－１（Ｍｕｃｉｎ－１）、Ａ３３抗原、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ－３）、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、トランスフェリン受容体、ＴＮＣ（テネイシン）、カーボンアンヒドラーゼＩＸ（ＣＡ－ＩＸ）、及び／又はヒト主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）の分子に結合したペプチド。
したがって、本発明の文脈において、本明細書中に記載の抗原結合受容体は、アミノ酸変異Ｐ３２９Ｇ（ＥＵナンバリングによる）を含むＦｃドメイン、すなわち、ＦＡＰ（線維芽細胞活性化タンパク質）、ＣＥＡ（癌胎児性抗原）、ｐ９５（ｐ９５ＨＥＲ２）、ＢＣＭＡ（Ｂ細胞成熟抗原）、ＥｐＣＡＭ（上皮細胞接着分子）、ＭＳＬＮ（メソテリン）、ＭＣＳＰ（メラノーマコンドロイチン硫酸プロテオグリカン）、ＨＥＲ－１（ヒト上皮成長因子１）、ＨＥＲ－２（ヒト上皮成長因子２）、ＨＥＲ－３（ヒト上皮成長因子３）、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ５２Ｆｌｔ３、葉酸受容体１（ＦＯＬＲ１）、ヒト栄養膜細胞表面抗原２（Ｔｒｏｐ－２）がん抗原１２－５（ＣＡ－１２－５）、ヒト白血球抗原－Ｄ関連（ＨＬＡ－ＤＲ）、ＭＵＣ－１（Ｍｕｃｉｎ－１）、Ａ３３抗原、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ－３）、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、トランスフェリン受容体、ＴＮＣ（テネイシン）、カーボンアンヒドラーゼＩＸ（ＣＡ－ＩＸ）、及び／又はヒト主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）の分子に結合したペプチドからなる群から選択される腫瘍細胞の表面上に天然に存在する抗原／マーカーに特異的に結合することができる治療用抗体に結合する。
Ａ３３抗原、ＢＣＭＡ（Ｂ細胞成熟抗原）、がん抗原１２－５（ＣＡ－１２－５）、カーボンアンヒドラーゼＩＸ（ＣＡ－ＩＸ）、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＥＡ（癌胎児性抗原）、ＥｐＣＡＭ（上皮細胞接着分子）、ＦＡＰ（線維芽細胞活性化タンパク質）、ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ－３）、葉酸受容体１（ＦＯＬＲ１）、ＨＥＲ－１（ヒト上皮成長因子１）、ＨＥＲ－２（ヒト上皮成長因子２）、ＨＥＲ－３（ヒト上皮成長因子３）、ヒト白血球抗原－抗原Ｄ関連（ＨＬＡ－ＤＲ）、ＭＳＬＮ（メソテリン）、ＭＣＳＰ（メラノコンドロイチン硫酸プロテオグリカン）、ＭＵＣ－１（ムチン－１）、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜）、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）、ｐ９５（ｐ９５ＨＥＲ２）、トランスフェリン受容体、ＴＮＣ（テネイシン）、ヒト栄養膜細胞表面抗原２（Ｔｒｏｐ－２）の（ヒト）メンバーの配列（複数可）は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔデータベースで入手可能であり、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／？ｑｕｅｒｙ＝ｒｅｖｉｅｗｅｄ％３Ａｙｅｓから検索することができる。これらの（タンパク質）配列は、注釈付き改変配列にも関連する。本発明はまた、本明細書で提供される簡潔な配列の相同配列、及び遺伝子対立遺伝子バリアントなどが使用される技術及び方法を提供する。好ましくは、本明細書の簡潔な配列のそのようなバリアントなどが使用される。好ましくは、そのようなバリアントは遺伝的バリアントである。当業者は、ゲノムＤＮＡ並びにｍＲＮＡ／ｃＤＮＡのエントリーも含み得るこれらのデータバンクエントリーにおけるこれらの（タンパク質）配列の関連コード領域を容易に推定し得る。（ヒト）ＦＡＰ（線維芽細胞活性化タンパク質）の配列（複数可）は、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ１２８８４（エントリーバージョン１６８、配列バージョン５）から得ることができ；（ヒト）ＣＥＡ（癌胎児性抗原）の配列（複数可）は、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ０６７３１（エントリーバージョン１７１、配列バージョン３）から得ることができ；（ヒト）ＥｐＣＡＭ（上皮細胞接着分子）の配列（複数可）は、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１６４２２（エントリーバージョン１１７、配列バージョン２）から得ることができ；（ヒト）ＭＳＬＮ（メソテリン）の配列（複数可）は、ＵｎｉＰｒｏｔエントリー番号Ｑ１３４２１（バージョン番号１３２；配列バージョン２）から得ることができ；（ヒト）ＦＭＳ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ－３）の 配列（複数可）は、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ３６８８８（一次引用アクセッション番号）又はＱ１３４１４（二次アクセッション番号）からバージョン番号１６５及び配列バージョン２で得ることができ；（ヒト）ＭＣＳＰ（黒色腫コンドロイチン硫酸プロテオグリカン）の配列は、ＵｎｉＰｒｏｔエントリー番号Ｑ６ＵＶＫ１（バージョン番号１１８；配列バージョン２）から得ることができ；（ヒト）葉酸受容体１（ＦＯＬＲ１）の配列（複数可）は、ＵｎｉＰｒｏｔエントリー番号Ｐ１５３２８（一次引用アクセッション番号）又はＱ５３ＥＷ２（二次アクセッション番号）からバージョン番号１５３及び配列バージョン３で得ることができ；（ヒト）栄養芽細胞表面抗原２（Ｔｒｏｐ－２）の配列（複数可）は、ＵｎｉＰｒｏｔエントリー番号Ｐ０９７５８（一次引用アクセッション番号）又はＱ１５６５８（二次アクセッション番号）からバージョン番号１７２及び配列バージョン３で得ることができ；（ヒト）ＰＳＣＡ（前立腺幹細胞抗原）の配列（複数可）は、ＵｎｉＰｒｏｔエントリー番号Ｏ４３６５３（一次引用アクセッション番号）又はＱ６ＵＷ９２（二次アクセッション番号）からバージョン番号１３４及び配列バージョン１で得ることができ；（ヒト）ＨＥＲ－１（上皮成長因子受容体）の配列（複数可）は、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ００５３３（エントリーバージョン１７７、配列バージョン２）から得ることができ；（ヒト）ＨＥＲ－２（受容体チロシン－プロテインキナーゼｅｒｂＢ－２）の配列（複数可）は、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ０４６２６（エントリーバージョン１６１、配列バージョン１）から得ることができ；（ヒト）ＨＥＲ－３（受容体チロシン－プロテインキナーゼｅｒｂＢ－３）の配列（複数可）は、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ２１８６０（エントリーバージョン１４０、配列バージョン１）から得ることができ；（ヒト）ＣＤ２０（Ｂ－リンパ球抗原ＣＤ２０）の配列（複数可）は、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１１８３６（エントリーバージョン１１７、配列バージョン１）から得ることができ；（ヒト）ＣＤ２２（Ｂ－リンパ球抗原ＣＤ２２）の配列（複数可）は、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ２０２７３（エントリーバージョン１３５、配列バージョン２）から得ることができ；（ヒト）ＣＤ３３（Ｂ－リンパ球抗原ＣＤ３３）の 配列（複数可）は、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ２０１３８（エントリーバージョン１２９、配列バージョン２）から得ることができ；（ヒト）ＣＡ－１２－５（ムチン１６）の配列（複数可）は、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ８ＷＸＩ７（エントリーバージョン６６、配列バージョン２）から得ることができ；（ヒト）ＨＬＡ－ＤＲの 配列（複数可）は、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ２９９００（エントリーバージョン５９、配列バージョン１）から得ることができ；（ヒト）ＭＵＣ－１（ムチン－１）の配列（複数可）は、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ１５９４１（エントリーバージョン１３５、配列バージョン３）から得ることができ；（ヒト）Ａ３３（細胞表面Ａ３３抗原）の配列（複数可）は、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９９７９５（エントリーバージョン１０４、配列バージョン１）から得ることができ；（ヒト）ＰＳＭＡ（グルタミン酸カルボキシペプチダーゼ
２）の配列（複数可）は、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ０４６０９（エントリーバージョン１３３、配列バージョン１）から得ることができ、（ヒト）トランスフェリン受容体の配列（複数可）は、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ９ＵＰ５２（エントリーバージョン９９、配列バージョン１）及びＰ０２７８６（エントリーバージョン１５２、配列バージョン２）から得ることができ；（ヒト）ＴＮＣ（テネイシン）の配列は、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＰ２４８２１（エントリーバージョン１４１、配列バージョン３）から得ることができ；又は、（ヒト）ＣＡ－ＩＸ（炭酸脱水酵素ＩＸ）の配列（複数可）は、Ｓｗｉｓｓ－ＰｒｏｔデータベースエントリーＱ１６７９０（エントリーバージョン１１５、配列バージョン２）から得ることができる。
好ましい実施形態では、標的細胞抗原は、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、メソテリン（ＭＳＬＮ）、ＣＤ２０、葉酸受容体１（ＦＯＬＲ１）及びテネイシン（ＴＮＣ）からなる群より選択される。
上記の標的細胞抗原のいずれかに特異的に結合することができる抗体は、組換えライブラリーを使用して哺乳動物免疫系及び／又はファージディスプレイを免疫するなど、当技術分野で周知の方法を使用して生成することができる。
本発明に従って使用される抗体は、（ＥＵナンバリングによる）Ｐ３２９Ｇ変異を含むＦｃドメインを含む。Ｐ３２９Ｇ変異は、Ｆｃ受容体結合及び／又はエフェクター機能を低下させ、結合及び／又はエフェクター機能に影響を及ぼす更なるＦｃ変異と組み合わせて使用することができる。したがって、さらなる実施形態では、抗体の変異型Ｆｃドメインは、ネイティブＩｇＧ１ Ｆｃドメインと比較して、Ｆｃ受容体への結合親和性の低減及び／又はエフェクター機能の低減を呈する。かかる一実施形態では、変異型Ｆｃドメイン（又は当該Ｆｃ変異型ドメインを含む抗体）は、ネイティブＩｇＧ１Ｆｃドメイン（又はネイティブＩｇＧ１Ｆｃドメインを含む抗体）と比較して、５０％未満、特に２０％未満、より具体的には１０％未満、とりわけ５％未満の結合親和性をＦｃ受容体に示す、かつ／又はネイティブＩｇＧ１Ｆｃドメイン（又はネイティブＩｇＧ１Ｆｃドメインを含む抗体）と比較して、５０％未満、特に２０％未満、より具体的には１０％未満、とりわけ５％未満のエフェクター機能を示す。一実施形態では、変異型Ｆｃドメイン（又は当該変異型Ｆｃドメインを含む抗体）は、Ｆｃ受容体に実質的に結合しない及び／又はエフェクター機能を誘導しない。特定の実施形態では、Ｆｃ受容体は、Ｆｃγ受容体である。一実施形態では、Ｆｃ受容体は、ヒトＦｃ受容体である。一実施形態では、Ｆｃ受容体は、活性化Ｆｃ受容体である。具体的な実施形態では、Ｆｃ受容体は、活性化ヒトＦｃγ受容体であり、より特定的には、ヒトＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩ又はＦｃγＲＩＩａであり、最も特定的には、ヒトＦｃγＲＩＩＩａである。一実施形態では、エフェクター機能は、ＣＤＣ、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ及びサイトカイン分泌の群から選択される１つ又は複数である。特定の実施形態では、エフェクター機能はＡＤＣＣである。一実施形態では、変異型Ｆｃドメインは、ネイティブＩｇＧ１Ｆｃドメインと比較して、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に実質的に変更された結合親和性を示す。一実施形態では、変異型Ｆｃドメインを含む抗体は、操作されていないＦｃドメインを含む抗体と比較して、２０％未満、特に１０％未満、より詳しくは５％未満の結合親和性をＦｃ受容体に示す。特定の実施形態では、Ｆｃ受容体は、Ｆｃγ受容体である。いくつかの実施形態では、Ｆｃ受容体は、ヒトＦｃ受容体である。いくつかの実施形態では、Ｆｃ受容体は、活性化Ｆｃ受容体である。具体的な実施形態では、Ｆｃ受容体は、活性化ヒトＦｃγ受容体であり、より特定的には、ヒトＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩ又はＦｃγＲＩＩａであり、最も特定的には、ヒトＦｃγＲＩＩＩａである。好ましくは、これらの受容体のそれぞれへの結合が低減される。いくつかの実施形態では、相補性構成要素に対する結合親和性（具体的にはＣ１ｑに対する結合親和性）も低減させる。
ある特定の実施形態では、抗体のＦｃドメインは、非変異型Ｆｃドメインと比較して、エフェクター機能が低減されるように変異している。エフェクター機能の低減には、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）の低減、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の低減、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）の低減、サイトカイン分泌の低減、抗原提示細胞によるイムノコンジュゲート媒介性抗原取り込みの低減、ＮＫ細胞への結合の低減、マクロファージへの結合の低減、単球への結合の低減、多形核細胞への結合の低減、直接的なシグナル伝達誘導性アポトーシスの低減、標的結合抗体との架橋の低減、樹状細胞成熟の低減、又はＴ細胞プライミングの低減の１つ又は複数が挙げられ得るが、これらに限定されない。一実施形態では、エフェクター機能の低減は、ＣＤＣの低減、ＡＤＣＣの低減、ＡＤＣＰの低減及びサイトカイン分泌の低減の群から選択される１つ以上である。特定の実施形態では、エフェクター機能の低減はＡＤＣＣの低減である。一実施形態では、ＡＤＣＣの低減は、操作されていないＦｃドメイン（又は操作されていないＦｃドメインを含む抗体）により誘導されるＡＤＣＣの２０％未満である。
一実施形態では、Ｆｃ受容体へのＦｃドメインの結合親和性及び／又はエフェクター機能を低減するアミノ酸変異は、アミノ酸置換である。一実施形態では、Ｆｃドメインは、Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｎ２９７及びＰ３３１の群から選択される位置にアミノ酸置換を含む。より具体的な実施形態では、Ｆｃドメインは、位置Ｌ２３４及び／又はＬ２３５にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａを含む。かかる一実施形態では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、特にヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。より具体的な実施形態では、更なるアミノ酸置換は、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｄ又はＰ３３１Ｓである。好ましい実施形態では、Ｆｃドメインは、ＥＵナンバリングによるアミノ酸変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇ（「Ｐ３２９Ｇ ＬＡＬＡ」）を含む。かかる一実施形態では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１ Ｆｃドメイン、特にヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。アミノ酸置換の「Ｐ３２９Ｇ ＬＡＬＡ」の組み合わせは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１２／１３０８３１号に記載されているように、ヒトＩｇＩｇＧ１ ＦｃドメインのＦｃγ受容体（同様に補体）結合をほとんど完全に消滅させる。国際公開第２０１２／１３０８３１号は、かかる突然変異Ｆｃドメインの調製方法及びその特性、例えばＦｃ受容体結合又はエフェクター機能の決定方法も記載する。
特定の実施形態では、ＦｃドメインのＮ－グリコシル化は、除去されている。このような一実施形態では、Ｆｃドメインは、Ｎ２９７位におけるアミノ酸置換、特にアラニン（Ｎ２９７Ａ）又はアスパラギン酸（Ｎ２９７Ｄ）によりアスパラギンを置き換えるアミノ酸変異を含む）。
本明細書上記及びＰＣＴ国際公開第２０１２／１３０８３１号に記載されているＦｃドメインに加え、Ｆｃ受容体結合及び／又はエフェクター機能が低減されたＦｃドメインには、Ｆｃドメイン残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７及び３２９の１つ又は複数の変異を有するものも挙げられる（米国特許第６，７３７，０５６号）。このようなＦｃ変異体としては、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０及び２９７のうち２つ以上での変異を有するＦｃ変異体が挙げられ、残基２６５及び２９７がアラニンに変異されている、いわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体を含む（米国特許第７，３３２，５８１号）。
変異Ｆｃドメインは、当該技術分野で周知の遺伝的方法又は化学的方法を用い、アミノ酸の欠失、置換、挿入又は修飾によって調製することができる。遺伝的方法は、コードＤＮＡ配列の部位特異的突然変異誘発、ＰＣＲ、遺伝子合成等を含んでいてもよい。正しいヌクレオチド変化は、例えば、スクリーニングによって確認することができる。
Ｆｃ受容体に対する結合は、例えば、ＥＬＩＳＡによって、又はＢＩＡｃｏｒｅ装置（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）等の標準的な装置と組換え発現によって得られ得るＦｃ受容体を用いた表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって、容易に決定することができる。又は、Ｆｃ受容体に対するＦｃドメイン又はＦｃドメインを含む細胞活性化二重特異性抗原結合分子の結合親和性は、特定のＦｃ受容体を発現することが知られている細胞株（例えば、ＦｃγＩＩＩａ受容体を発現するヒトＮＫ細胞）を用いて評価されてもよい。
Ｆｃドメイン又はＦｃドメインを含む抗体のエフェクター機能は、当該技術分野に既知の方法によって測定することができる。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイの他の例は、米国特許第５，５００，３６２号、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８３，７０５９－７０６３（１９８６）及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８２，１４９９－１５０２（１９８５）、米国特許第５，８２１，３３７号、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １６６，１３５１－１３６１（１９８７）に記載される。あるいは、非放射性アッセイ方法を使用してもよい（例えば、フローサイトメトリー（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ）のためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ、及びＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ））。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核球（ＰＢＭＣ：ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌ）及びナチュラルキラー（Ｎａｔｕｒａｌ Ｋｉｌｌｅｒ：ＮＫ）細胞が挙げられる。或いは、又は加えて、対象となる分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９５，６５２－６５６（１９９８）等に開示されるもの等の動物モデルにおいて評定されてもよい。
いくつかの実施形態では、相補性構成要素に対する（特定的にはＣ１ｑに対する）Ｆｃドメインの結合が低下する。したがって、Ｆｃドメインが低減されたエフェクター機能を有するように改変されるいくつかの実施形態では、上記低減されたエフェクター機能は、低減されたＣＤＣを含む。Ｃ１ｑ結合アッセイを実施して、抗体がＣ１ｑに結合することができ、したがってＣＤＣ活性を有するかどうかを決定することができる。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号及び国際公開第２００５／１００４０２号のＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評定するために、ＣＤＣアッセイを行ってもよい（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２、１６３（１９９６）；Ｃｒａｇｇ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０１、１０４５－１０５２（２００３）；及びＣｒａｇｇ ａｎｄ Ｇｌｅｎｎｉｅ、Ｂｌｏｏｄ １０３、２７３８－２７４３（２００４）を参照されたい）。
キット
本発明の更なる態様は、本発明の抗原結合受容体をコードする核酸及び／又は細胞、好ましくは本発明の抗原結合受容体で形質導入（ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ／ｔｒａｎｓｄｕｃｅｄ）するためのＴ細胞、及び任意に、（ａ）変異型Ｆｃドメインを含む抗体（単数／複数）を含むか、又はそれからなるキットであって、抗原結合受容体が変異型Ｆｃドメインに特異的に結合することができる、キットである。
したがって、
（Ａ）本発明の抗原結合受容体を発現することができる、形質導入Ｔ細胞と、
（Ｂ）標的細胞抗原に結合し、かつＥＵナンバリングによるアミノ酸変異Ｐ３２９Ｇを含むＦｃドメインを含む抗体とを含む、キットが提供される。
さらに、
（Ａ）本発明の抗原結合受容体をコードする、単離されたポリヌクレオチド及び／又はベクターと、
（Ｂ）標的細胞抗原に結合し、かつＥＵナンバリングによるアミノ酸変異Ｐ３２９Ｇを含むＦｃドメインを含む抗体とを含む、キットが提供される。
本発明のキットは、形質導入Ｔ細胞、単離されたポリヌクレオチド及び／又はベクター、並びにＥＵナンバリングによるアミノ酸変異Ｐ３２９Ｇを含むＦｃドメインを含む１つ又は複数の抗体を含み得る。特定の実施形態では、抗体は、治療用抗体、例えば上記に記載されるような腫瘍特異的抗体である。腫瘍特異的抗原は当技術分野で公知であり、上記に記載されている。本発明との関連において、抗体は、本発明の抗原結合受容体を発現する形質導入Ｔ細胞の投与前、投与と同時、又は投与後に投与される。本発明によるキットは、形質導入Ｔ細胞又は形質導入Ｔ細胞を生成するためのポリヌクレオチド／ベクターを含む。この文脈において、形質導入Ｔ細胞は、所与の腫瘍に特異的ではなく、変異型Ｆｃドメインを含む治療用抗体の使用によって任意の腫瘍を標的とすることができるので、ユニバーサルＴ細胞である。本明細書では、ＥＵナンバリングによるアミノ酸変異Ｐ３２９Ｇを含むＦｃドメインを含む抗体の例が本明細書において提供されるが（例えば、配列番号１０２～１１５）、ＥＵナンバリングによるアミノ酸変異Ｐ３２９Ｇを含むＦｃドメインを含む任意の抗体が本発明に従って使用され得、本明細書で提供されるキットに含まれ得る。
具体的な一実施形態において、変異型Ｆｃ領域を含む抗体はＣＤ２０に特異的に結合することができ、配列番号１０２の重鎖配列と配列番号１０３の軽鎖配列とを含む。一実施形態では、変異型Ｆｃ領域を含む抗体はＦＡＰに特異的に結合することができ、配列番号１０４の重鎖配列と配列番号１０５の軽鎖配列とを含む。一実施形態では、変異型Ｆｃ領域を含む抗体はＣＥＡに特異的に結合することができ、配列番号１０６の重鎖配列と配列番号１０７の軽鎖配列、配列番号１０８の重鎖配列と配列番号１０９の軽鎖配列、配列番号１１０の重鎖配列と配列番号１１１の軽鎖配列、又は配列番号１１２の重鎖配列と配列番号１１３の軽鎖配列を含む。さらなる実施形態では、変異型Ｆｃ領域を含む抗体はテネイシン（ＴＮＣ）に特異的に結合することができ、配列番号１１４の重鎖配列と配列番号１１５の軽鎖配列とを含む。
本発明の一実施形態では、配列番号７のアミノ酸配列（「ＶＨ３ＶＬ１－ＣＤ８ＡＴＤ－ＣＤ１３７ＣＳＤ－ＣＤ３ｚＳＳＤ」を発現することができる形質導入Ｔ細胞を含むキットが提供され、又は代替では、キットは、配列番号１０２の重鎖及び配列番号１０３の軽鎖を含む抗体と組み合わせて、配列番号７のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含む（例えば、キットは、配列番号２０の配列を含むポリヌクレオチドを含む）。このキットは、ＣＤ２０陽性がんの治療に用いることができる。
本発明の別の実施形態では、配列番号７のアミノ酸配列（「ＶＨ３ＶＬ１－ＣＤ８ＡＴＤ－ＣＤ１３７ＣＳＤ－ＣＤ３ｚＳＳＤ」を発現することができる形質導入Ｔ細胞を含むキットが提供され、又は代替では、キットは、配列番号１０４の重鎖及び配列番号１０５の軽鎖を含む抗体と組み合わせて、配列番号７のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含む（例えば、キットは、配列番号２０の配列を含むポリヌクレオチドを含む）。このキットは、ＦＡＰ陽性がんの治療に用いることができる。
本発明の別の実施形態では、配列番号７のアミノ酸配列（「ＶＨ３ＶＬ１－ＣＤ８ＡＴＤ－ＣＤ１３７ＣＳＤ－ＣＤ３ｚＳＳＤ」を発現することができる形質導入Ｔ細胞を含むキットが提供され、又は代替では、キットは、配列番号１０６の重鎖及び配列番号１０７の軽鎖を含む抗体と組み合わせて、配列番号７のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含む（例えば、キットは、配列番号２０の配列を含むポリヌクレオチドを含む）。あるいは、配列番号７のアミノ酸配列（「ＶＨ３ＶＬ１－ＣＤ２８ＡＴＤ－ＣＤ１３７ＣＳＤ－ＣＤ３ｚＳＳＤ」を発現することができる形質導入Ｔ細胞を含むキットが提供され、又は代替では、キットは、配列番号１０８の重鎖及び配列番号１０９の軽鎖を含む抗体と組み合わせて、配列番号７のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含む（例えば、キットは、配列番号２０の配列を含むポリヌクレオチドを含む）。このキットは、ＦＡＰ陽性がんの治療に用いることができる。あるいは、配列番号７のアミノ酸配列（「ＶＨ３ＶＬ１－ＣＤ２８ＡＴＤ－ＣＤ１３７ＣＳＤ－ＣＤ３ｚＳＳＤ」を発現することができる形質導入Ｔ細胞を含むキットが提供され、又は代替では、キットは、配列番号１１０の重鎖及び配列番号１１１の軽鎖を含む抗体と組み合わせて、配列番号７のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含む（例えば、キットは、配列番号２０の配列を含むポリヌクレオチドを含む）。別の実施形態では、配列番号７のアミノ酸配列（「ＶＨ３ＶＬ１－ＣＤ８ＡＴＤ－ＣＤ１３７ＣＳＤ－ＣＤ３ｚＳＳＤ」を発現することができる形質導入Ｔ細胞を含むキットが提供され、又は代替では、キットは、配列番号１１２の重鎖及び配列番号１１３の軽鎖を含む抗体と組み合わせて、配列番号７のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含む（例えば、キットは、配列番号２０の配列を含むポリヌクレオチドを含む）。これらキットは、ＣＥＡ陽性がんの治療に用いることができる。
本発明の別の実施形態では、配列番号７のアミノ酸配列（「ＶＨ３ＶＬ１－ＣＤ８ＡＴＤ－ＣＤ１３７ＣＳＤ－ＣＤ３ｚＳＳＤ」を発現することができる形質導入Ｔ細胞を含むキットが提供され、又は代替では、キットは、配列番号１１４の重鎖及び配列番号１１５の軽鎖を含む抗体と組み合わせて、配列番号７のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含む（例えば、キットは、配列番号２０の配列を含むポリヌクレオチドを含む）。このキットは、ＴＮＣ陽性がんの治療に用いることができる。
さらに、本発明のキットの部品は、バイアル若しくはボトルに個別に、又は容器若しくは多容器ユニットに組み合わせて包装することができる。さらに、本発明のキットは、患者細胞、好ましくは本明細書に記載のＴ細胞に、本発明の抗原結合受容体（複数可）を形質導入し、ＧＭＰ（ｈｔｔｐ：／／ｅｃ．ｅｕｒｏｐａ．ｅｕ／ｈｅａｌｔｈ／ｄｏｃｕｍｅｎｔｓ／ｅｕｄｒａｌｅｘ／ｉｎｄｅｘ＿ｅｎ．ｈｔｍの下で欧州委員会によって公表された良好な製造実施のためのガイドラインに記載されているような良好な製造実施）条件下でインキュベートすることができる（閉鎖）バッグ細胞インキュベーションシステムを含み得る。さらに、本発明のキットは、単離された／得られた患者Ｔ細胞に、本発明の抗原結合受容体（複数可）を形質導入し、ＧＭＰ下でインキュベートすることができる（閉鎖）バッグ細胞インキュベーションシステムを含む。さらに、本発明の文脈において、キットはまた、本明細書中に記載される抗原結合受容体（複数可）をコードするベクターを含む場合がある。本発明のキットは、特に、本発明の方法を実施するために有利に使用することができ、本明細書で言及される様々な用途、例えば研究ツール又は医療ツールに使用することができる。キットの製造は、好ましくは、当業者に公知の標準的な手順に従う。
この文脈において、患者由来細胞、好ましくはＴ細胞に、上記のキットを使用して、本明細書に記載の変異型Ｆｃドメインに特異的に結合することができる本発明の抗原結合受容体を形質導入することができる。変異型Ｆｃドメインに特異的に結合することができる抗原結合部分を含む細胞外ドメインは、Ｔ細胞内又はＴ細胞上に天然には存在しない。したがって、本発明のキットを形質導入された患者由来細胞は、抗体、例えば治療用抗体の変異型Ｆｃドメインに特異的に結合する能力を獲得し、変異型Ｆｃドメインを含む治療用抗体との相互作用を介して標的細胞の排除／溶解を誘導することができるようになり、治療用抗体は、腫瘍細胞の表面上に天然に存在する（内因的に発現される）腫瘍特異的抗原に結合することができる。本明細書に記載の抗原結合受容体の細胞外ドメインの結合は、そのＴ細胞を活性化し、変異型Ｆｃドメインを含む治療用抗体を介して腫瘍細胞と物理的に接触させる。非形質導入Ｔ細胞又は内因性Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞）は、変異型Ｆｃドメインを含む治療用抗体の変異型Ｆｃドメインに結合することができない。変異型Ｆｃドメインに特異的に結合することができる細胞外ドメインを含む抗原結合受容体を発現する形質導入Ｔ細胞は、本明細書に記載のＦｃドメインに変異を含まない治療用抗体によって影響されないままである。したがって、本発明の抗原結合受容体分子を発現するＴ細胞は、インビボ及び／又はインビトロで本明細書に記載のＦｃドメインに変異を含む抗体の存在下で標的細胞を溶解する能力を有する。対応する標的細胞は、本明細書に記載の治療用抗体の少なくとも１つ、好ましくは２つの結合ドメインによって認識される表面分子、すなわち腫瘍細胞の表面に天然に存在する腫瘍特異的抗原を発現する細胞を含む。そのような表面分子は、本明細書において以下に特徴付けられる。
標的細胞の溶解は、当技術分野で公知の方法によって検出することができる。したがって、そのような方法は、とりわけ、生理学的インビトロアッセイを含む。そのような生理学的アッセイは、例えば、細胞膜の完全性の喪失（例えば、ＦＡＣＳベースのヨウ化プロピジウムアッセイ、トリパンブルー流入アッセイ、測光的酵素放出アッセイ（ＬＤＨ）、放射測定的５１Ｃｒ放出アッセイ、蛍光測定的ユーロピウム放出及びカルセインＡＭ放出アッセイ）によって、細胞死をモニターし得る。さらなるアッセイは、例えば、測光ＭＴＴ、ＸＴＴ、ＷＳＴ－１及びａｌａｍａｒＢｌｕｅアッセイ、放射測定３Ｈ－Ｔｈｄ取り込みアッセイ、細胞分裂活性を測定するクローン原性アッセイ、及びミトコンドリア膜貫通勾配を測定する蛍光測定ローダミン１２３アッセイによる細胞生存率のモニタリングを含む。さらに、アポトーシスは、例えばＦＡＣＳベースのホスファチジルセリン曝露アッセイ、ＥＬＩＳＡベースのＴＵＮＥＬ試験、カスパーゼ活性アッセイ（測光、蛍光測定又はＥＬＩＳＡベース）又は変化した細胞形態の分析（収縮、膜ブレビング）によってモニターされ得る。
治療的使用及び治療方法
本明細書で提供される分子又は構築物（例えば、抗原結合受容体、形質導入Ｔ細胞及びキット）は、医療現場において、特にがんの治療に特に有用である。例えば、腫瘍は、腫瘍細胞上の標的抗原に結合し変異型Ｆｃドメイン（すなわち、ＥＵナンバリングによるＰ３２９Ｇ変異を含むＦｃドメイン）を含む治療用抗体と併せて、本発明の抗原結合受容体を発現する形質導入Ｔ細胞で治療され得る。したがって、特定の実施形態では、抗原結合受容体、形質導入Ｔ細胞又はキットは、がん、特に上皮、内皮又は中皮起源のがん及び血液のがんの治療において使用される。
治療の腫瘍特異性は、標的細胞抗原に結合する治療用抗体によって提供され、抗体は、本発明の抗原結合受容体を発現する形質導入Ｔ細胞の投与前、投与と同時、又は投与後に投与される。この文脈において、形質導入Ｔ細胞は、所与の腫瘍に特異的ではないが、本発明に従って使用される治療用抗体の特異性に応じて任意の腫瘍を標的とすることができるので、ユニバーサルＴ細胞である。
がんは、上皮、内皮又は中皮起源のがん／癌腫又は血液のがんであり得る。一実施形態では、がん／癌腫は、胃腸がん、膵がん、胆管細胞がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、皮膚がん、口腔がん、胃がん、子宮頸がん、Ｂ細胞リンパ腫及びＴ細胞リンパ腫、骨髄性白血病、卵巣がん、白血病、リンパ性白血病、鼻咽頭がん腫、結腸がん、前立腺がん、腎細胞がん、頭頸部がん、皮膚がん（黒色腫）、尿生殖路のがん、例えば精巣がん、卵巣がん、内皮がん、子宮頸がん及び腎がん、胆管のがん、食道がん、唾液腺のがん及び甲状腺のがん、又は血液腫瘍、神経膠腫、肉腫若しくは骨肉腫のような他の腫瘍性疾患からなる群から選択される。
例えば、腫瘍性疾患及び／又はリンパ腫は、これらの医学的適応症（複数可）に対する特定の構築物で治療することができる。例えば、胃腸がん、膵がん、胆管細胞がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、皮膚がん及び／又は口腔がんは、（ヒト）ＥｐＣＡＭ（腫瘍細胞の表面に天然に存在する腫瘍特異的抗原として）に対する抗体で治療され得る。
胃腸がん、膵がん、胆管細胞がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、皮膚がん及び／又は口腔がんは、ＨＥＲ１、好ましくはヒトＨＥＲ１に対する治療用抗体の投与前、投与と同時又は投与後に投与される本発明の形質導入Ｔ細胞で治療され得る。さらに、胃腸がん、膵がん、胆管細胞がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、皮膚がん、膠芽腫及び／又は口腔がんは、ＭＣＳＰ、好ましくはヒトＭＣＳＰに対する治療用抗体の投与前、投与と同時又は投与後に投与される本発明の形質導入Ｔ細胞で治療され得る。胃腸がん、膵がん、胆管細胞がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、皮膚がん、膠芽腫及び／又は口腔がんは、ＦＯＬＲ１、好ましくはヒトＦＯＬＲ１に対する治療用抗体の投与前、投与と同時又は投与後に投与される本発明の形質導入Ｔ細胞で治療され得る。胃腸がん、膵がん、胆管細胞がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、皮膚がん、膠芽腫及び／又は口腔がんは、Ｔｒｏｐ－２、好ましくはヒトＴｒｏｐ－２に対する治療用抗体の投与前、投与と同時又は投与後に投与される本発明の形質導入Ｔ細胞で治療され得る。胃腸がん、膵がん、胆管細胞がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、皮膚がん、膠芽腫及び／又は口腔がんは、ＰＳＣＡ、好ましくはヒトＰＳＣＡに対する治療用抗体の投与前、投与と同時又は投与後に投与される本発明の形質導入Ｔ細胞で治療され得る。胃腸がん、膵がん、胆管細胞がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、皮膚がん、膠芽腫及び／又は口腔がんは、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、好ましくはヒトＥＧＦＲｖＩＩＩに対する治療用抗体の投与前、投与と同時又は投与後に投与される本発明の形質導入Ｔ細胞で治療され得る。胃腸がん、膵がん、胆管細胞がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、皮膚がん、膠芽腫及び／又は口腔がんは、ＭＳＬＮ、好ましくはヒトＭＳＬＮに対する治療用抗体の投与前、投与と同時又は投与後に投与される本発明の形質導入Ｔ細胞で治療され得る。胃がん、乳がん及び／又は子宮頸がんは、ＨＥＲ２、好ましくはヒトＨＥＲ２に対する治療用抗体の投与前、投与と同時、又は投与後に投与される本発明の形質導入Ｔ細胞で治療され得る。胃がん及び／又は肺がんは、ＨＥＲ３、好ましくはヒトＨＥＲ３に対する治療用抗体の投与前、投与と同時、又は投与後に投与される本発明の形質導入Ｔ細胞で治療され得る。Ｂ細胞リンパ腫及び／又はＴ細胞リンパ腫は、ＣＤ２０、好ましくはヒトＣＤ２０に対する治療用抗体の投与前、投与と同時、又は投与後に投与される本発明の形質導入Ｔ細胞で治療され得る。Ｂ細胞リンパ腫及び／又はＴ細胞リンパ腫は、ＣＤ２２、好ましくはヒトＣＤ２２に対する治療用抗体の投与前、投与と同時、又は投与後に投与される本発明の形質導入Ｔ細胞で治療され得る。骨髄性白血病は、ＣＤ３３、好ましくはヒトＣＤ３３に対する治療用抗体の投与前、投与と同時、又は投与後に投与される本発明の形質導入Ｔ細胞で治療され得る。卵巣がん、肺がん、乳がん及び／又は胃腸がんは、ＣＡ１２－５、好ましくはヒトＣＡ１２－５に対する治療用抗体の投与前、投与と同時又は投与後に投与される本発明の形質導入Ｔ細胞で治療され得る。胃腸がん、白血病及び／又は鼻咽頭癌腫は、ＨＬＡ－ＤＲ、好ましくはヒトＨＬＡ－ＤＲに対する治療用抗体の投与前、投与と同時、又は投与後に投与される本発明の形質導入Ｔ細胞で治療され得る。結腸がん、乳がん、卵巣がん、肺がん及び／又は膵臓がんは、ＭＵＣ－１、好ましくはヒトＭＵＣ－１に対する治療用抗体の投与前、投与と同時、又は投与後に投与される本発明の形質導入Ｔ細胞を伴い得る。結腸がんは、Ａ３３、好ましくはヒトＡ３３に対する治療用抗体の投与前、投与と同時、又は投与後に投与される本発明の形質導入Ｔ細胞で治療され得る。前立腺がんは、ＰＳＭＡ、好ましくはヒトＰＳＭＡに対する治療用抗体の投与前、投与と同時、又は投与後に投与される本発明の形質導入Ｔ細胞で治療され得る。胃腸がん、膵がん、胆管細胞がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、皮膚がん及び／又は口腔がんは、トランスフェリン受容体、好ましくはヒト導入受容体に対する治療薬の投与前、投与と同時、又は投与後に投与される本発明の形質導入Ｔ細胞で治療され得る。膵がん、肺がん及び／又は乳がんは、トランスフェリン受容体、好ましくはトランスフェリン受容体に対する治療用抗体の投与前、投与と同時、又は投与後に投与される本発明の形質導入Ｔ細胞で治療され得る。腎がんは、ＣＡ－ＩＸ、好ましくはヒトＣＡ－ＩＸに対する治療用抗体の投与前、投与と同時、又は投与後に投与される本発明の形質導入Ｔ細胞を伴い得る。
本発明はまた、疾患、悪性疾患、例えば、上皮、内皮又は中皮起源のがん及び／又は血液のがんを治療する方法に関する。本発明の文脈において、該対象はヒトである。
本発明の文脈において、疾患を治療するための特定の方法は、以下の工程：
（ａ）Ｔ細胞、好ましくはＣＤ８＋Ｔ細胞を対象から単離する工程；
（ｂ）単離されたＴ細胞、好ましくはＣＤ８＋Ｔ細胞に、本明細書中に記載される抗原結合受容体を形質導入する工程；及び
（ｃ）形質導入Ｔ細胞、好ましくはＣＤ８＋Ｔ細胞を該対象に投与する工程を含む。
本発明の文脈において、該形質導入Ｔ細胞、好ましくはＣＤ８＋Ｔ細胞、及び／又は治療用抗体（単数／複数）は、静脈内注入によって該対象に同時投与される。
さらに、本発明の文脈において、本発明は、以下の工程を含む、疾患を治療するための方法を提供する：
（ａ）Ｔ細胞、好ましくはＣＤ８＋Ｔ細胞を対象から単離する工程；
（ｂ）単離されたＴ細胞、好ましくはＣＤ８＋Ｔ細胞に、本明細書中に記載される抗原結合受容体を形質導入する工程；
（ｃ）任意に、単離されたＴ細胞、好ましくはＣＤ８＋Ｔ細胞を、Ｔ細胞受容体と同時形質導入する工程；
（ｄ）抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体によってＴ細胞、好ましくはＣＤ８＋Ｔ細胞を増殖させる工程；及び
（ｅ）形質導入Ｔ細胞、好ましくはＣＤ８＋Ｔ細胞を該対象に投与する工程。
上記工程（ｄ）（抗ＣＤ３抗体及び／又は抗ＣＤ２８抗体によるＴＩＬなどのＴ細胞の増殖させる工程を指す）は、インターロイキン－２及び／又はインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）などのサイトカインの存在下で（刺激して）行うこともできる。本発明の文脈において、上記工程（ｄ）（抗ＣＤ３抗体及び／又は抗ＣＤ２８抗体によるＴＩＬなどのＴ細胞の増殖させる工程を指す）は、インターロイキン１２（ＩＬ－１２）、インターロイキン－７（ＩＬ－７）及び／又はインターロイキン－２１（ＩＬ－２１）の存在下で行うこともできる。
治療のための方法は、さらに、本発明に従って使用される抗体の投与を含む。該抗体は、形質導入Ｔ細胞が投与される前、同時に、又は後に投与され得る。本発明との関連において、形質導入Ｔ細胞の投与は、静脈内注入によって行われる。本発明の文脈において、形質導入Ｔ細胞は、治療される対象から単離される／得られる。
本発明はさらに、他の化合物、例えば免疫エフェクター細胞、細胞増殖又は細胞刺激のための活性化シグナルを提供することができる分子との同時投与プロトコルを想定する。該分子は、例えば、Ｔ細胞のさらなる一次活性化シグナル（例えば、さらなる同時刺激分子：Ｂ７ファミリーの分子、Ｏｘ４０Ｌ、４．１ ＢＢＬ、ＣＤ４０Ｌ、抗ＣＴＬＡ－４、抗ＰＤ－１）、又はさらなるサイトカインインターロイキン（例えば、ＩＬ－２）であり得る。
上記の本発明の組成物はまた、任意に、検出のための手段及び方法をさらに含む診断組成物であり得る。
組成物
さらに、本発明は、変異型Ｆｃドメイン（複数可）を有する抗体分子（複数可）、及び／又は本発明の抗原結合受容体を含む形質導入Ｔ細胞（複数可）、及び／又は核酸分子（複数可）、及び本発明の抗原結合受容体をコードするベクター（複数可）を含む組成物（医薬）を提供する。さらに、本発明は、該組成物の１つ又は複数を含むキットを提供する。本発明の文脈において、組成物は、担体、安定剤及び／又は賦形剤の適切な製剤を任意にさらに含む医薬組成物である。したがって、本発明の文脈において、本明細書に記載の抗原結合受容体を含む形質導入Ｔ細胞及び／又は該形質導入Ｔ細胞を含む組成物と組み合わせて投与される、本明細書に定義される変異型Ｆｃドメインを含む抗体分子を含む医薬組成物（医薬）が提供され、該抗体分子は、本発明の抗原結合受容体を含む形質導入Ｔ細胞の投与前、投与と同時、又は投与後に投与される。
「組み合わせて」という用語の使用は、治療レジメンの成分が対象に投与される順序を制限しない。したがって、本明細書中に記載の医薬組成物／医薬は、本発明の抗原結合受容体を含む形質導入Ｔ細胞の投与前、投与と同時、又は投与後の、本明細書中に定義の抗体の投与を包含する。本明細書で使用される「組み合わせて」もまた、本明細書で前に定義される抗体の投与と、本明細書で定義される抗原結合受容体を含む形質導入Ｔ細胞との間のタイミングを制限しない。したがって、２つの成分が同時に（ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ ｗｉｔｈ）／共に（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔｌｙ）投与されない場合、投与は、１分、５分、１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、４時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間若しくは７２時間、又は当業者によって容易に決定される、かつ／若しくは本明細書に記載される任意の適切な時間差によって分離され得る。
本発明の文脈において、「組み合わせて」という用語はまた、本明細書で定義される抗体及び本発明による抗原結合受容体を含む形質導入Ｔ細胞が対象への投与前に一緒にプレインキュベートされる状況も包含する。したがって、２つの成分は、投与前に、例えば、１分間、５分間、１０分間、１５分間、３０分間、４５分間若しくは１時間、又は当業者によって容易に決定される任意の適切な時間プレインキュベートされ得る。本発明は、別の好ましい実施形態では、本明細書で定義される抗体及び本明細書で定義される抗原結合受容体を含む形質導入Ｔ細胞が同時に／共に投与される治療レジメンに関する。本発明の文脈において、本明細書で定義される抗体は、抗原結合受容体を含む形質導入Ｔ細胞が投与された後に投与され得る。
さらに、本明細書で使用される「組み合わせて」は、開示される治療レジメンを、本明細書で定義される抗体、及び本発明の抗原結合受容体を含む形質導入Ｔ細胞、好ましくはＣＤ８＋Ｔ細胞の即時の順序の投与（すなわち、２つの成分の一方を投与し、その後（ある時間間隔をおいて）他方を投与し、その間にいかなる他の治療プロトコルを投与及び／又は実施しない）に限定しない。したがって、本治療レジメンはまた、本明細書中で定義される抗体分子と、本発明による抗原結合受容体を含む形質導入Ｔ細胞、好ましくはＣＤ８＋Ｔ細胞との別個の投与も包含し、投与は、疾患又はその症候の治療又は予防のために必要、かつ／又は好適である１つ又は複数の治療プロトコルによって分離される。そのような介在治療プロトコルの例には、鎮痛薬の投与；化学療法剤の投与、疾患又はその症候の外科的治療が含まれるが、これらに限定されない。したがって、本明細書中に開示される治療レジメンは、本明細書中に定義される抗体、及び本明細書中に定義される抗原結合受容体を含む形質導入Ｔ細胞、好ましくはＣＤ８＋Ｔ細胞を、本明細書中に記載されるか又は当該分野で公知の疾患又はその症候の治療又は予防に適した治療プロトコルなしで、その１つと共に、又は２つ以上と共に、投与することを包含する。
該医薬組成物（複数可）／医薬（複数可）は、注入又は注射によって患者に投与されることが特に想定される。本発明の文脈において、本明細書に記載の抗原結合受容体を含む形質導入Ｔ細胞は、注入又は注射によって患者に投与されるべきである。適切な組成物／医薬の投与は、異なる方法、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、局所又は皮内投与によって行われ得る。
本発明の医薬組成物／医薬は、医薬的に許容され得る担体をさらに含み得る。適切な医薬担体の例は当技術分野で周知であり、リン酸緩衝生理食塩水、水、油／水エマルジョンなどのエマルジョン、様々な種類の湿潤剤、滅菌溶液などが挙げられる。そのような担体を含む組成物は、周知の従来の方法によって製剤化することができる。これらの医薬組成物は、適切な用量で対象に投与することができる。投与レジメンは主治医及び臨床的因子により決定される。医学分野で周知のように、任意の１人の患者の投与量は、患者のサイズ、体表面積、年齢、投与される特定の化合物、性別、投与時間及び投与経路、全身の健康状態、並びに共に投与される他の薬物を含む多くの要因に依存する。一般に、医薬組成物の規則的な投与としてのレジメンは、１日当たり１μｇ～５ｇ単位の範囲であるべきである。しかしながら、持続注入のためのより好ましい投与量は、０．０１μｇ～２ｍｇ、好ましくは０．０１μｇ～１ｍｇ、より好ましくは０．０１μｇ～１００μｇ、さらにより好ましくは０．０１μｇ～５０μｇ、最も好ましくは０．０１μｇ～１０μｇ単位／キログラム体重／時間の範囲であり得る。特に好ましい投与量を以下に列挙する。進行は、定期的な評価によって監視することができる。投与量は様々であるが、ＤＮＡの静脈内投与のための好ましい投与量は、ＤＮＡ分子の約１０６～１０１２コピーである。
本発明の組成物は、局所的又は体系的に投与され得る。投与は、一般に非経口的に、例えば静脈内投与であり；形質導入Ｔ細胞はまた、標的部位に向けて、例えばカテーテルによって動脈内の部位に投与され得る。非経口投与用の調製物には、滅菌水溶液又は非水溶液、懸濁液、及びエマルジョンが含まれる。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの植物油、及びオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルである。水性担体には、水、アルコール性／水性の溶液、エマルジョン又は懸濁液が含まれ、生理食塩水及び緩衝媒体を含む。非経口ビヒクルとしては、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロース及び塩化ナトリウム、乳酸リンゲル液、又は固定油が挙げられる。静脈内ビヒクルには、液体及び栄養補給剤、電解質補給剤（例えばリンゲルデキストロースに基づくもの）などが含まれる。防腐剤及び他の添加剤、例えば、抗菌剤、酸化防止剤、キレート剤、及び不活性ガス等も存在し得る。さらに、本発明の医薬組成物は、好ましくはヒト起源の、例えば血清アルブミン又は免疫グロブリンのようなタンパク質性担体を含み得る。本発明の医薬組成物は、タンパク質性抗体構築物又はそれをコードする核酸分子若しくはベクター（本発明に記載）及び／又は細胞に加えて、医薬組成物の意図する用途に応じて、さらなる生物学的に活性な薬剤を含み得ることが想定される。そのような薬剤は、胃腸系に作用する薬物、細胞増殖抑制薬として作用する薬物、高尿酸血症を予防する薬物、免疫反応を阻害する薬物（例えば、コルチコステロイド）、循環系に作用する薬物及び／又は当技術分野で公知のＴ細胞同時刺激分子若しくはサイトカインなどの薬剤であり得る。
例示的な実施形態
１．アンカリング膜貫通ドメインと細胞外ドメインとを含む抗原結合受容体であって、細胞外ドメインが、
（ｉ）配列番号１の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、配列番号２又は配列番号４０のＨＣＤＲ２及び配列番号３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
（ｉｉ）配列番号４の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、配列番号５のＬＣＤＲ２及び配列番号６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む抗原結合部分を含む、抗原結合受容体。
２．ＶＨドメインが、配列番号８、配列番号４１、配列番号４４及び配列番号１２６からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態１に記載の抗原結合受容体。
３．ＶＬドメインが、配列番号９又は配列番号１２７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態１又は２に記載の抗原結合受容体。
４．アンカリング膜貫通ドメインと細胞外ドメインとを含む抗原結合受容体であって、細胞外ドメインが、配列番号８の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と配列番号９の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む抗原結合部分を含む、抗原結合受容体；又は、アンカリング膜貫通ドメインと細胞外ドメインとを含む抗原結合受容体であって、細胞外ドメインが、配列番号１２６の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と配列番号１２７の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む抗原結合部分を含む、抗原結合受容体。
５．アンカリング膜貫通ドメインと細胞外ドメインとを含む抗原結合受容体であって、細胞外ドメインが、配列番号４１の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と配列番号９の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む抗原結合部分を含む、抗原結合受容体。
６．アンカリング膜貫通ドメインと細胞外ドメインとを含む抗原結合受容体であって、細胞外ドメインが、配列番号４４の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と配列番号９の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）とを含む抗原結合部分を含む、抗原結合受容体。
７．抗原結合部分がｓｃＦｖである、実施形態１～６のいずれか一つ記載の抗原結合受容体。
８．抗原結合部分が、配列番号１０、配列番号１２２、配列番号１２４又は配列番号１２８からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態１～７のいずれか一つに記載の抗原結合受容体。
９．アンカリング膜貫通ドメインと細胞外ドメインとを含む抗原結合受容体であって、細胞外ドメインが抗原結合部分を含み、抗原結合部分が配列番号１０のアミノ酸配列を含む、抗原結合受容体、又はアンカリング膜貫通ドメインと細胞外ドメインとを含む抗原結合受容体であって、細胞外ドメインが抗原結合部分を含み、抗原結合部分が配列番号１２８のアミノ酸配列を含む、抗原結合受容体。
１０．アンカリング膜貫通ドメインと細胞外ドメインとを含む抗原結合受容体であって、細胞外ドメインが抗原結合部分を含み、抗原結合部分が配列番号１２２のアミノ酸配列を含む、抗原結合受容体。
１１．アンカリング膜貫通ドメインと細胞外ドメインとを含む抗原結合受容体であって、細胞外ドメインが抗原結合部分を含み、抗原結合部分が配列番号１２４のアミノ酸配列を含む、抗原結合受容体。
１２．アンカリング膜貫通ドメインが、ＣＤ８、ＣＤ４、ＣＤ３ｚ、ＦＣＧＲ３Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＤＡＰ１０若しくはＤＡＰ１２膜貫通ドメイン又はそのフラグメントからなる群より選択される膜貫通ドメインである、実施形態１～１１のいずれか一つに記載の抗原結合受容体。
１３．アンカリング膜貫通ドメインがＣＤ８膜貫通ドメインであり、特にアンカリング膜貫通ドメインが配列番号１１のアミノ酸配列を含む、実施形態１～１２のいずれか一つ記載の抗原結合受容体。
１４．少なくとも１つの刺激シグナル伝達ドメイン及び／又は少なくとも１つの同時刺激シグナル伝達ドメインをさらに含む、実施形態１～１３のいずれか一つに記載の抗原結合受容体。
１５．少なくとも１つの刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ｚの細胞内ドメイン、ＦＣＧＲ３Ａの細胞内ドメイン及びＮＫＧ２Ｄの細胞内ドメイン又は刺激シグナル伝達活性を保持するそれらのフラグメントからなる群より個別に選択される、実施形態１～１４のいずれか一つに記載の抗原結合受容体。
１６．少なくとも１つの刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ｚの細胞内ドメイン又は刺激シグナル伝達活性を保持するそのフラグメントであり、特に、少なくとも１つの刺激シグナル伝達ドメインが、配列番号１３のアミノ酸配列を含む、実施形態１～１５のいずれか一つ記載の抗原結合受容体。
１７．少なくとも１つの同時刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＤ２７の細胞内ドメイン、ＣＤ２８の細胞内ドメイン、ＣＤ１３７の細胞内ドメイン、ＯＸ４０の細胞内ドメイン、ＩＣＯＳの細胞内ドメイン、ＤＡＰ１０の細胞内ドメイン及びＤＡＰ１２の細胞内ドメイン又は同時刺激シグナル伝達活性を保持するそれらのフラグメントからなる群より個別に選択される、実施形態１～１６のいずれか一つに記載の抗原結合受容体。
１８．ＣＤ１３７同時刺激ドメイン又はＣＤ１３７同時刺激活性を保持するそのフラグメントを含み、特に、配列番号１２のアミノ酸配列を含む同時刺激シグナル伝達ドメインを含む、実施形態１～１７のいずれか一つに記載の抗原結合受容体。
１９．少なくとも１つの同時刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＤ２８細胞内ドメイン又はＣＤ２８同時刺激活性を保持するそのフラグメントである、実施形態１～１８のいずれか一つに記載の抗原結合受容体。
２０．ＣＤ３ｚの細胞内ドメインを含む刺激シグナル伝達ドメイン又はＣＤ３ｚ刺激シグナル伝達活性を保持するそのフラグメントを含み、かつＣＤ２８の細胞内ドメインを含む同時刺激シグナル伝達ドメイン又はＣＤ２８同時刺激シグナル伝達活性を保持するそのフラグメントを含む、実施形態１～１９のいずれか一つに記載の抗原結合受容体。
２１．刺激シグナル伝達ドメインが、配列番号１３のアミノ酸配列を含む、実施形態２０に記載の抗原結合受容体。
２２．ＣＤ３ｚの細胞内ドメインを含む１つの刺激シグナル伝達ドメイン又はＣＤ３ｚ刺激シグナル伝達活性を保持するそのフラグメントを含み、かつＣＤ１３７の細胞内ドメインを含む１つの同時刺激シグナル伝達ドメイン又はＣＤ１３７同時刺激シグナル伝達活性を保持するそのフラグメントを含む、実施形態１～１８のいずれか一つに記載の抗原結合受容体。
２３．刺激シグナル伝達ドメインが配列番号１３のアミノ酸配列を含み、同時刺激シグナル伝達ドメインが配列番号１２のアミノ酸配列を含む、実施形態２２に記載の抗原結合受容体。
２４．細胞外ドメインがアンカリング膜貫通ドメインに、任意にペプチドリンカーを介して連結されている、実施形態１～２３のいずれか一つに記載の抗原結合受容体。
２５．ペプチドリンカーが、配列番号１９のアミノ酸配列を含む、実施形態２４に記載の抗原結合受容体。
２６．アンカリング膜貫通ドメインが、同時シグナル伝達ドメイン又は刺激シグナル伝達ドメインに、任意にペプチドリンカーを介して連結されている、実施形態１４～２５のいずれか一つに記載の抗原結合受容体。
２７．シグナル伝達ドメイン及び／又は同時シグナル伝達ドメインが、任意に少なくとも１つのペプチドリンカーを介して連結されている、実施形態１～２６のいずれか一つに記載の抗原結合受容体。
２８．抗原結合部分が、Ｃ末端において、アンカリング膜貫通ドメインのＮ末端に、任意にペプチドリンカーを介して連結されている、実施形態１～２７のいずれか一つに記載の抗原結合受容体。
２９．軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）が、Ｃ末端において、アンカリング膜貫通のＮ末端に、任意にペプチドリンカーを介して連結されている、実施形態１～２８のいずれか一つに記載の抗原結合受容体。
３０．重鎖可変ドメイン（ＶＨ）が、Ｃ末端において、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）のＮ末端に、任意にペプチドリンカーを介して連結されている、実施形態１～２９のいずれか一つに記載の抗原結合受容体。
３１．抗原結合受容体が１つの同時シグナル伝達ドメインを含み、同時シグナル伝達ドメインが、Ｎ末端において、アンカリング膜貫通ドメインのＣ末端に連結されている、実施形態１４～３０のいずれか一つに記載の抗原結合受容体。
３２．抗原結合受容体がさらに、１つの刺激シグナル伝達ドメインを含み、刺激シグナル伝達ドメインが、Ｎ末端において、同時刺激シグナル伝達ドメインのＣ末端に連結されている、実施形態３１に記載の抗原結合受容体。
３３．抗原結合受容体が、配列番号７又は配列番号１２５のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態１～３２のいずれか一つに記載の抗原結合受容体。
３４．配列番号７のアミノ酸配列を含む抗原結合受容体；又は配列番号１２５のアミノ酸配列を含む抗原結合受容体。
３５．実施形態１～３４のいずれか一つに記載の抗原結合受容体をコードする、単離されたポリヌクレオチド。
３６．実施形態３５に記載の単離されたポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド。
３７．実施形態３５に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター、特に発現ベクター。
３８．実施形態３５に記載のポリヌクレオチド又は実施形態３７に記載のベクターを含む、形質導入Ｔ細胞。
３９．実施形態１～３４のいずれか一つに記載の抗原結合受容体を発現することができる、形質導入Ｔ細胞。
４０．キットであって、
（Ａ）実施形態１～３４のいずれか一つに記載の抗原結合受容体を発現することができる、形質導入Ｔ細胞と、
（Ｂ）標的細胞抗原に結合し、かつＥＵナンバリングによるアミノ酸変異Ｐ３２９Ｇを含むＦｃドメインを含む抗体とを含む、キット。
４１．キットであって、
（Ａ）実施形態１～３４のいずれか一つに記載の抗原結合受容体をコードする、単離されたポリヌクレオチドと、
（Ｂ）標的細胞抗原に結合し、かつＥＵナンバリングによるアミノ酸変異Ｐ３２９Ｇを含むＦｃドメインを含む抗体とを含む、キット。
４２．キットであって、
（Ａ）実施形態３５に記載の単離されたポリヌクレオチド又は実施形態３７に記載のベクターと、
（Ｂ）標的細胞抗原に結合し、かつＥＵナンバリングによるアミノ酸変異Ｐ３２９Ｇを含むＦｃドメインを含む抗体とを含む、キット。
４３．ＦｃドメインがＩｇＧ１又はＩｇＧ４ Ｆｃドメイン、特にヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである、実施形態４０～４２のいずれか一つに記載のキット。
４４．前記標的細胞抗原が、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、メソテリン（ＭＳＬＮ）、ＣＤ２０、葉酸受容体１（ＦＯＬＲ１）及びテネイシン（ＴＮＣ）からなる群より選択される、実施形態４０～４３のいずれか一つに記載のキット。
４５．医薬として使用するための実施形態４０～４４のいずれか一つに記載のキット。
４６．抗原結合受容体を発現する形質導入Ｔ細胞が、標的細胞抗原（特にがん細胞抗原）に結合し、かつＥＵナンバリングによるアミノ酸変異Ｐ３２９Ｇを含むＦｃドメインを含む抗体の投与前、投与と同時、又は投与後に投与される、医薬として使用するための実施形態１～３４のいずれか一つに記載の抗原結合受容体又は実施形態３８～３９のいずれか一つに記載の形質導入Ｔ細胞。
４７．疾患の治療おいて使用するための、特にがんの治療において使用するための、実施形態４０～４５のいずれか一つに記載のキット。
４８．がんの治療において使用するための、実施形態１～３４のいずれか一つに記載の抗原結合受容体又は実施形態３８若しくは３９に記載の形質導入Ｔ細胞であって、治療が、がん細胞抗原に結合し、かつＥＵナンバリングによるアミノ酸変異Ｐ３２９Ｇを含むＦｃドメインを含む抗体の投与前、投与と同時、又は投与後の、抗原結合受容体を発現する形質導入Ｔ細胞の投与を含む、抗原結合受容体又は形質導入Ｔ細胞。
４９．がんが、上皮、内皮又は中皮起源のがん及び血液のがんから選択される、実施形態４７又は４８に記載の使用のための抗原結合受容体、形質導入Ｔ細胞又はキット。
５０．がん抗原が、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、メソテリン（ＭＳＬＮ）、ＣＤ２０、葉酸受容体１（ＦＯＬＲ１）及びテネイシン（ＴＮＣ）からなる群より選択される、実施形態４９に記載の使用のための抗原結合受容体、形質導入Ｔ細胞又はキット。
５１．形質導入Ｔ細胞が、治療される対象から単離された細胞に由来する、実施形態４８～５０のいずれか一つに記載の使用のための抗原結合受容体、形質導入Ｔ細胞又はキット。
５２．形質導入Ｔ細胞が、治療される対象から単離された細胞に由来しない、実施形態４８～５１のいずれか一つに記載の使用のための抗原結合受容体、形質導入Ｔ細胞又はキット。
５３．対象における疾患を治療する方法であって、実施形態１～３４のいずれか一つに記載の抗原結合受容体を発現することができる形質導入Ｔ細胞を対象に投与すること、及び、形質導入Ｔ細胞の投与前、投与と同時、又は投与後に、治療有効量の、標的細胞抗原に結合し、かつＥＵナンバリングによるアミノ酸変異Ｐ３２９Ｇを含むＦｃドメインを含む抗体を投与することを含む、方法。
５４．対象からＴ細胞を単離すること、及び単離されたＴ細胞に実施形態３５のポリヌクレオチド又は実施形態３７のベクターを形質導入することによって形質導入Ｔ細胞を生成することをさらに含む、実施形態４８に記載の方法。
５５．Ｔ細胞が、レトロウイルス若しくはレンチウイルスベクター構築物又は非ウイルスベクター構築物で形質導入される、実施形態５４に記載の方法。
５６．形質導入Ｔ細胞が、静脈内注入によって対象に投与される、実施形態５３～５５のいずれか一つに記載の方法。
５７．形質導入Ｔ細胞を、対象への投与前に抗ＣＤ３抗体及び／又は抗ＣＤ２８抗体と接触させる、実施形態５３～５６のいずれか一つに記載の方法。
５８．形質導入Ｔ細胞を、対象への投与前に少なくとも１つのサイトカイン、好ましくはインターロイキン－２（ＩＬ－２）、インターロイキン－７（ＩＬ－７）、インターロイキン－１５（ＩＬ－１５）及び／若しくはインターロイキン－２１、又はそれらのバリアントと接触させる、実施形態５３～５７のいずれか一つに記載の方法。
５９．疾患ががんである、実施形態５３～５８のいずれか一つに記載の方法。
６０．がんが上皮、内皮又は中皮起源のがん及び血液のがんから選択される、実施形態５９に記載の方法。
６１．標的細胞の溶解を誘導する方法であって、標的細胞を、標的細胞抗原に結合し、かつＥＵナンバリングによるアミノ酸変異Ｐ３２９Ｇを含むＦｃドメインを含む抗体の存在下で、実施形態１～３４のいずれか一つに記載の抗原結合受容体を発現することができる形質導入Ｔ細胞と接触させることを含む、方法。
６２．標的細胞ががん細胞である、実施形態６１に記載の方法。
６３．標的細胞が、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、メソテリン（ＭＳＬＮ）、ＣＤ２０、葉酸受容体１（ＦＯＬＲ１）及びテネイシン（ＴＮＣ）からなる群より選択される抗原を発現する、実施形態６１又は６２に記載の方法。
６４．医薬の製造のための、実施形態１～３４のいずれか一つに記載の抗原結合受容体、実施形態３５に記載のポリヌクレオチド又は実施形態３８若しくは３９に記載の形質導入Ｔ細胞の使用。
６５．医薬ががんの治療用である、実施形態６４に記載の使用。
６６．前記がんが、上皮、内皮又は中皮起源のがん及び血液のがんから選択されることを特徴とする、実施形態６５に記載の使用。
６７．上記に記載されるような発明。
これら及び他の実施形態は、本発明の明細書及び実施例によって開示され、包含される。本発明によって採用される抗体、方法、使用、及び化合物のいずれか１つに関するさらなる文献は、例えば、電子デバイスを使用して、公共の図書館及びデータベースから検索することができる。例えば、インターネット上で利用可能な公共データベース「Ｍｅｄｌｉｎｅ」は、例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＰｕｂＭｅｄ／ｍｅｄｌｉｎｅ．ｈｔｍｌで利用することができる。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｎｆｏｂｉｏｇｅｎ．ｆｒ／、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｆｍｉ．ｃｈ／ｂｉｏｌｏｇｙ／ｒｅｓｅａｒｃｈ＿ｔｏｏｌｓ．ｈｔｍｌ、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｔｉｇｒ．ｏｒｇ／などのさらなるデータベース及びアドレスは当業者に知られており、例えばｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｌｙｃｏｓ．ｃｏｍを使用して取得することもできる。
例示的な配列
Figure 2023536169000002
Figure 2023536169000003
Figure 2023536169000004
Figure 2023536169000005
Figure 2023536169000006
Figure 2023536169000007
Figure 2023536169000008
Figure 2023536169000009
Figure 2023536169000010
Figure 2023536169000011
Figure 2023536169000012
Figure 2023536169000013
Figure 2023536169000014
Figure 2023536169000015
Figure 2023536169000016
Figure 2023536169000017
Figure 2023536169000018
Figure 2023536169000019
Figure 2023536169000020
Figure 2023536169000021
Figure 2023536169000022
Figure 2023536169000023
Figure 2023536169000024
Figure 2023536169000025
Figure 2023536169000026
Figure 2023536169000027
Figure 2023536169000028
Figure 2023536169000029
Figure 2023536169000030
Figure 2023536169000031
Figure 2023536169000032
Figure 2023536169000033
Figure 2023536169000034
Figure 2023536169000035
Figure 2023536169000036
以下は、本発明の方法及び組成物の例である。先に与えた一般的な説明を考慮すると、種々の他の実施形態が実施されてもよいことは理解される。
組換えＤＮＡ技術
標準的な方法を使用して、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ；Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９に記載されるように、ＤＮＡを操作した。分子生物学的試薬を製造業者の指示書に従って使用した。ヒト免疫グロブリン軽鎖及び重鎖のヌクレオチド配列に関する一般的な情報は、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄ．，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２に記載されている。
ＤＮＡシーケンシング
ＤＮＡ配列は、二本鎖配列決定によって決定した。
遺伝子の合成
必要な場合、所望の遺伝子セグメントは、適切なテンプレートを使用したＰＣＲによって生成されたか、又はＧｅｎｅａｒｔ ＡＧ（Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ，ドイツ）によって、合成オリゴヌクレオチド及びＰＣＲ産物から自動遺伝子合成によって合成した。正確な遺伝子配列が利用できない場合においては、最も近い相同体の配列に基づきオリゴヌクレオチドプライマーを設計し、適切な組織に由来するＲＮＡから、ＲＴ－ＰＣＲにより遺伝子を単離した。単一の制限エンドヌクレアーゼ開裂部位に隣接する遺伝子セグメントを、標準的なクローニング／配列決定ベクター内へとクローニングした。プラスミドＤＮＡを形質転換細菌から精製し、濃度をＵＶ分光法によって測定した。サブクローニングした遺伝子フラグメントのＤＮＡ配列を、ＤＮＡ配列決定によって確認した。それぞれの発現ベクターへのサブクローニングを可能にするために、適切な制限部位を有する遺伝子セグメントを設計した。全ての構築物は、真核細胞における分泌のためのタンパク質を標的とするリーダーペプチドをコードする、５’末端ＤＮＡ配列を含むように設計された。
ＨＥＫ２９３ ＥＢＮＡ又はＣＨＯ ＥＢＮＡ細胞におけるＩｇＧ様タンパク質の産生
ＨＥＫ２９３ ＥＢＮＡ細胞、又はＣＨＯ ＥＢＮＡ細胞を一過性トランスフェクションすることにより、抗体及び二重特異性抗体を生成した。細胞を遠心分離にかけて、培地を、予め暖めたＣＤ ＣＨＯ培地（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ，カタログ番号１０７４３０２９）に交換した。ＣＤ ＣＨＯ培地中で発現ベクターを混合し、ＰＥＩ（ポリエチレンイミン、Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ，カタログ番号２３９６６－１）を添加し、溶液をボルテックスして室温で１０分間インキュベートした。その後、細胞（２Ｍｉｏ／ｍＬ）をベクター／ＰＥＩ溶液と混合して、フラスコに移し、５％ＣＯ２雰囲気の振盪インキュベーター内で、３時間３７℃でインキュベートした。インキュベーション後、補充物（全体積の８０％）を含むＥｘｃｅｌｌ培地を添加した（Ｗ．Ｚｈｏｕ ａｎｄ Ａ．Ｋａｎｔａｒｄｊｉｅｆｆ，Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ ｆｏｒ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ，ＤＯＩ：１０．１００７／９７８－３－６４２－５４０５０－９；２０１４）。トランスフェクションの１日後に、補充物（Ｆｅｅｄ、全体積の１２％）を添加した。７日後に、遠心分離、及びその後の濾過（０．２μｍフィルタ）により細胞上清を回収し、後述の標準的な方法により、回収した上清を精製した。
ＣＨＯ Ｋ１細胞におけるＩｇＧ様タンパク質の産生
或いは、従来の（非ＰＣＲベースの）クローニング技術を伴う、専有のベクターシステムを使用し、（元は、ＡＴＣＣより受託し、Ｅｖｉｔｒｉａにて懸濁培養液中での無血清増殖に適合した）懸濁適応性ＣＨＯ Ｋ１細胞を用い、Ｅｖｉｔｒｉａにより、本明細書で記載される抗体及び二重特異性抗体を調製した。生成のために、Ｅｖｉｔｒｉａは、専有の動物構成成分非含有無血清培地（ｅｖｉＧｒｏｗ及びｅｖｉＭａｋｅ２）、並びに専有のトランスフェクション試薬（ｅｖｉＦｅｃｔ）を用いた。遠心分離、及びその後の濾過（０．２μｍフィルタ）により上清を回収し、標準的な方法により、回収した上清からタンパク質を精製した。
ＩｇＧ様タンパク質の精製
標準的なプロトコルを参照して、濾フィルタにかけた細胞培養上清からタンパク質を精製した。簡単に記載すると、Ｆｃ含有タンパク質を、プロテインＡ－アフィニティークロマトグラフィー（平衡化緩衝液：２０ｍＭクエン酸ナトリウム、２０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．５；溶出緩衝液：２０ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ３．０）によって細胞培養上清から精製した。溶出はｐＨ３．０で達成され、その直後に試料をｐＨ中和した。遠心分離（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ａｍｉｃｏｎ（登録商標）ＵＬＴＲＡ－１５（物品番号：ＵＦＣ９０３０９６）によりタンパク質を濃縮し、凝集したタンパク質を、２０ｍＭヒスチジン、１４０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ６．０のサイズ排除クロマトグラフィーにより、単量体タンパク質から分離した。
ＩｇＧ様タンパク質の分析
Ｐａｃｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９５，４，２４１１－１４２３に従ったアミノ酸配列に基づき計算した質量減衰係数を用いて、２８０ｎｍにおける吸収を測定することにより、精製したタンパク質の濃度を測定した。ＬａｂＣｈｉｐＧＸＩＩ又はＬａｂＣｈｉｐ ＧＸ Ｔｏｕｃｈ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用して、還元剤の存在下及び非存在下で、ＣＥ－ＳＤＳによりタンパク質の純度及び分子量を分析した。凝集物含有量の決定を、ランニング緩衝液（２００ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４、２５０ｍＭ ＫＣｌ ｐＨ６．２、０．０２％ＮａＮ３）中で平衡化した分析用サイズ排除カラム（ＴＳＫｇｅｌ Ｇ３０００ ＳＷ ＸＬ又はＵＰ－ＳＷ３０００）を使用して、２５℃でＨＰＬＣクロマトグラフィーにより実施した。
レンチウイルス上清の調製及びＪｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ細胞の形質導入
約８０％コンフルエントなＨｅｋ２９３Ｔ細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ３２１６）及びＣＡＲをコードする移入ベクター並びにパッケージングベクターｐＣＡＧ－ＶＳＶＧ及びｐｓＰＡＸ２を２：２：１のモル比で使用して、リポフェクタミンＬＴＸ（商標）に基づくトランスフェクションを行った（Ｇｉｒｙ－Ｌａｔｅｒｒｉｅｒｅ Ｍ，ｅｔ ａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２０１１；７３７：１８３－２０９，Ｍｙｂｕｒｇｈ Ｒ，ｅｔ ａｌ Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ．２０１４）。６６時間後、上清を回収し、３５０×ｇで５分間遠心分離し、０．４５μｍポリエーテルスルホンフィルタで濾過してウイルス粒子を回収し、精製した。ウイルス粒子を直接使用するか又は濃縮し（Ｌｅｎｔｉ－ｘ－Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｏｒ、Ｔａｋａｒａ）、Ｊｕｒｋａｔ ＮＦＡＴ Ｔ細胞（ｌｏＲｅｓｐｏｎｓｅ Ｊｕｒｋａｔ ＮＦＡＴ－ＲＥ－ｌｕｃ２Ｐ，Ｐｒｏｍｅｇａ ＃ＣＳ１７６５０１を９００×ｇで２時間及び３１°Ｃでのスピンフェクション（ｓｐｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）ために使用した。
Ｊｕｒｋａｔ ＮＦＡＴ活性化アッセイ
Ｊｕｒｋａｔ ＮＦＡＴ活性化アッセイは、ヒト急性リンパ性白血病レポーター細胞株（ＧｌｏＲｅｓｐｏｎｓｅ Ｊｕｒｋａｔ ＮＦＡＴ－ＲＥ－ｌｕｃ２Ｐ、Ｐｒｏｍｅｇａ＃ＣＳ１７６５０１）のＴ細胞活性化を測定する。この不死化Ｔ細胞株は、ＮＦＡＴ応答エレメント（ＮＦＡＴ－ＲＥ）によって駆動されるルシフェラーゼレポーターを安定的に発現するように遺伝子操作される。さらに、細胞株は、ＣＤ３ｚシグナル伝達ドメインを有するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）構築物を発現する。固定化されたアダプター分子（例えば、腫瘍抗原結合アダプター分子）へのＣＡＲの結合は、Ｔ細胞活性化及びルシフェラーゼの発現をもたらすＣＡＲ架橋をもたらす。基質の添加後、ＮＦＡＴ活性の細胞変化を相対光単位として測定することができる（Ｄａｒｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，Ｖｏｌｕｍｅ ３２，Ｉｓｓｕｅ ５，Ｍａｙ ２０１９，Ｐａｇｅｓ ２０７－２１８，ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０９３／ｐｒｏｔｅｉｎ／ｇｚｚ０２７）。一般に、アッセイは３８４プレート（Ｆａｌｃｏｎ＃３５３９６３白色、透明底部）で行った。標的細胞（ＣＡＲ－Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ細胞）及びエフェクター細胞を、ＲＰＭＩ－１６４０＋１０％ ＦＣＳ＋１％ Ｇｌｕｔａｍａｘ（増殖培地）中にそれぞれ１０μｌで１：５の比（２０００の標的細胞及び１０ ０００のエフェクター細胞）で三重に播種した。さらに、目的の抗体の段階希釈液を増殖培地中で調製して、アッセイプレート中で６７ｎＭ～０．００００６７ｎＭの範囲の最終濃度を得て、合計でウェルあたり３０μｌの最終容量を得た。３８４ウェルプレートを３００ｇ及びＲＴで１分間遠心分離し、湿度雰囲気中、３７°Ｃ及び５％ ＣＯ２でインキュベートした。７時間のインキュベーション後、最終体積の２０％のＯＮＥ－Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼアッセイ（Ｅ６１２０、Ｐｒｏｍｅｇａ）を加え、プレートを３５０×ｇで１分間遠心分離した。その後、Ｔｅｃａｎマイクロプレートリーダーを使用して、ｓ／ウェル当たりの相対発光単位（ＲＬＵ）を直ちに測定した。濃度－応答曲線をフィッティングし、ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍバージョン７を用いてＥＣ５０値を計算した。ｐ値として、ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ ７に列挙されているように、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅスタイルを使用した。＊＝Ｐ≦０．０３３；＊＊＝Ｐ≦０．００２；＊＊＊＝Ｐ≦０．００１を意味する。
実施例１
ヒト化抗Ｐ３２９Ｇ抗体の作製及び特徴付け
親抗Ｐ３２９Ｇ抗体及びヒト化抗Ｐ３２９Ｇ抗体をＨＥＫ細胞において産生させ、ＰｒｏｔｅｉｎＡアフィニティークロマトグラフィー及びサイズ排除クロマトグラフィーによって精製した。全ての抗体を良好な品質で精製した（表２）。
Figure 2023536169000037
抗Ｐ３２９ＧバインダーＭ－１．７．２４の親及び６つのヒト化バリアントのヒトＦｃ（Ｐ３２９Ｇ）への結合
計測手段 Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００
チップ：ＣＭ５（＃７７２）
Ｆｃ１～４：抗ヒトＦａｂ特異的（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ２８－９５８３－２５）
捕捉：６０秒間の５０ｎＭ ＩｇＧ
分析物：ヒトＦｃ（Ｐ３２９Ｇ）（Ｐ１ＡＤ９０００－００４）
ランニング緩衝液：ＨＢＳ－ＥＰ
Ｔ°：２５ °Ｃ
希釈：０．５９ｎＭ～３７．５ｎＭのＨＢＳ－ＥＰにおける２倍希釈
流量：３０μｌ／分
会合：２４０秒
解離：８００秒
再生：１０ｍＭグリシンｐＨ２．１、２×６０秒間
ＳＰＲ実験は、ランニング緩衝液としてＨＢＳ－ＥＰ＋（０．０１Ｍ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４，０．１５Ｍ ＮａＣｌ，０．００５％界面活性剤Ｐ２０（ＢＲ－１００６－６９、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ））を用いて、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００で行った。抗ヒトＦａｂ特異性抗体（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ２８－９５８３－２５）を、ＣＭ５チップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上にアミンカップリングにより直接固定化した。ＩｇＧを５０ｎＭで６０秒間捕捉した。ヒトＦｃ（Ｐ３２９Ｇ）の二倍希釈系列をリガンド上に３０μｌ／分で２４０秒間通過させて、会合相を記録した。解離相を８００秒間監視し、試料溶液からＨＢＳ－ＥＰ＋へのスイッチングによってトリガーした。１０ｍＭグリシンｐＨ２．１を６０秒間２回注入して、各サイクル後にチップ表面を再生した。バルク屈折率差を、参照フローセル１で得られた応答を差し引くことによって補正した。親和性定数を、Ｂｉａｅｖａｌソフトウェア（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、１：１ラングミュア結合へのフィッティングにより、動態速度定数から導出した。測定を、独立した希釈系列を用いて３連で実施した。
以下の試料を、ヒトＦｃ（Ｐ３２９Ｇ）への結合について分析した（表３）。
Figure 2023536169000038
ヒトＩｇＧ１のプラスミン消化に続いてＰｒｏｔｅｉｎＡによる親和性精製及びサイズ排除クロマトグラフィーによって、ヒトＦｃ（Ｐ３２９Ｇ）を調製した。
抗Ｐ３２９ＧバインダーＭ－１．７．２４の親及び６つのヒト化バリアントのヒトＦｃ（Ｐ３２９Ｇ）への結合
解離相は、解離速度を特徴付けるのに役立つように単一の曲線に適合させた。捕捉応答レベルに対する結合の比を計算した。（表４）。
Figure 2023536169000039
ヒトＦｃ（Ｐ３２９Ｇ）に対する抗Ｐ３２９ＧバインダーＭ－１．７．２４の親及び３つのヒト化バリアントの親和性
親と同様の結合パターンを有する３つのヒト化バリアントをより詳細に評価した。１：１ラングミュア結合の速度論定数を表５に要約する。
Figure 2023536169000040
結論
６つのヒトバリアントを作製した。それらのうちの３つ（ＶＨ４ＶＬ１、ＶＨ１ＶＬ２、ＶＨ１ＶＬ３）は、親Ｍ－１．７．２４と比較して、ヒトＦｃ（Ｐ３２９Ｇ）に対する結合の減少を示した。他の３つのヒト化バリアント（ＶＨ１ＶＬ１、ＶＨ２ＶＬ１、ＶＨ３ＶＬ１）は、親バインダーと非常に類似した結合速度論を有し、ヒト化によって親和性を失わなかった。
実施例２
ヒト化抗Ｐ３２９Ｇ抗原結合受容体の調製
ヒト化Ｐ３２９Ｇバリアントの機能性を評価するために、Ｐ３２９Ｇ Ｆｃ変異に特異的なバインダーをコードする重鎖（ＶＨ）及び軽鎖（ＶＬ）ＤＮＡ配列の異なる可変ドメインを一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）結合部分としてクローニングし、第２世代キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の抗原結合ドメインとして使用した。
Ｐ３２９Ｇバインダーの異なるヒト化バリアントは、Ｉｇ重鎖可変主ドメイン（ＶＬ）及びＩｇ軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。ＶＨ及びＶＬは、（Ｇ４Ｓ）４リンカーを介して連結されている。ｓｃＦｖ抗原結合ドメインをアンカリング膜貫通ドメイン（ＡＴＤ）ＣＤ８ａ（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ０１７３２［１８３－２０３］）に融合し、これを細胞内同時刺激シグナル伝達ドメイン（ＣＳＤ）ＣＤ１３７（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｑ０７０１１ＡＡ２１４－２５５）に融合し、次いでこれを刺激シグナル伝達ドメイン（ＳＳＤ）ＣＤ３ζ（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ｐ２０９６３ ＡＡ５２－１６４）に融合した。抗Ｐ３２９Ｇ ＣＡＲのｓｃＦｖを、２つの異なる配向ＶＨｘＶＬ（図１Ａ）又はＶＬｘＶＨ（図１Ｂ）で構築した。ＶＨＶＬ構成についての例示的な発現構築物（ＧＦＰレポーターを含む）のグラフ表示を図１Ｃに示し、ＶＬＶＨ構成については図１Ｄに示す。
実施例３
Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ細胞における抗Ｐ３２９Ｇ抗原結合受容体の発現
異なるヒト化抗Ｐ３２９Ｇ抗原結合受容体をＪｕｒｋａｔ（ＧｌｏＲｅｓｐｏｎｓｅ Ｊｕｒｋａｔ ＮＦＡＴ－ＲＥ－ｌｕｃ２Ｐ、Ｐｒｏｍｅｇａ＃ＣＳ１７６５０１）細胞にウイルス形質導入した。
抗Ｐ３２９Ｇ抗原結合受容体発現をフローサイトメトリーによって評価した。異なるヒト化抗Ｐ３２９Ｇ抗原結合受容体を使用するＪｕｒｋａｔ細胞を回収し、ＰＢＳで洗浄し、９６ウェル平底プレートに５０．０００細胞／ウェルで播種した。異なる濃度（１：５の５００ｎＭ～０ｎＭ連続希釈）のＦｃドメインにＰ３２９Ｇ変異を含む抗体で暗所及び冷蔵庫（４～８°Ｃ）で４５分間染色した後、試料をＦＡＣＳ緩衝液（２％ ＦＢＳ、１０％の０．５Ｍ ＥＤＴＡ、ｐＨ８及び０．５ｇ／Ｌ ＮａＮ３を含有するＰＢＳ）で３回洗浄した。次いで、試料を２．５μｇ／ｍＬのポリクローナル抗ヒトＩｇＧ Ｆｃγフラグメント特異的及びＰＥコンジュゲートＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｆ（ａｂ’）２ヤギフラグメント抗体で、冷蔵庫の暗所で３０分間染色し、フローサイトメトリー（Ｆｏｒｔｅｓｓａ ＢＤ）で分析した。さらに、抗Ｐ３２９Ｇ抗原結合受容体は、細胞内ＧＦＰレポーターを含んでいた（図１Ｃを参照のこと）。
ＧＦＰ発現は同等であるが、Ｐ３２９Ｇバインダーのヒト化バージョン（ＶＨ１ＶＬ１、ＶＨ２ＶＬ１及びＶＨ３ＶＬ１）と比較して、元の非ヒト化バインダーは細胞表面に弱いＣＡＲ標識を示す（図２Ａ）。興味深いことに、ＶＬ１ＶＨ１構築物（図１Ｄ参照）は、高いＧＦＰ発現を示すが、細胞表面上の弱いＣＡＲ標識も示し、これがバインダーの好ましくない確認であることを示している。
全体として、予想外にも、ＶＨ３ＶＬ１バージョンは、最も高いＧＦＰ発現及びＣＡＲ表面発現を示す。さらに、ＶＨＶＬ確認（ＶＨ１ＶＬ１、ＶＨ２ＶＬ１及びＶＨ３ＶＬ１）における全ての試験した構築物は、元の非ヒト化Ｐ３２９Ｇ抗原結合受容体及び興味深いことにＶＬＶＨ確認（ＶＬ１ＶＨ３）における構築物と比較して、Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞への形質導入時に増強されたＧＦＰシグナルを示す。
結論として、ＶＨＶＬ確認は、抗原結合受容体の発現レベル並びに細胞表面への正しいターゲティングに有利であると思われる。
さらに、ヒト化抗Ｐ３２９Ｇ抗原結合受容体の選択性、特異性及び安全性を特徴付けるために、異なる試験を行った。
実施例４
Ｆｃドメイン中にＰ３２９Ｇ変異を含む標的化抗体の存在下での特異的Ｔ細胞活性化
異なるヒト化抗Ｐ３２９Ｇ－ｓｃＦｖバリアントの非特異的結合を排除するために、これらのバリアントを含む抗原結合受容体を発現するＪｕｒｋａｔ ＮＦＡＴ細胞を、ＣＤ２０陽性ＷＳＵＤＬＣＬ２標的細胞及び異なるＦｃバリアント（Ｆｃ野生型、Ｆｃ Ｐ３２９Ｇ変異、ＬＡＬＡ変異、Ｄ２４６Ａ変異又はそれらの組み合わせ）を有する抗ＣＤ２０（ＧＡ１０１）抗体の存在下でのそれらの活性化について評価した。ＣＡＲ－Ｊｕｒｋａｔ ＮＦＡＴ活性化アッセイを上記のように行い、抗ＣＤ２０（ＧＡ１０１）野生型ＩｇＧ１（図３Ａ、抗ＣＤ２０（ＧＡ１０１）Ｐ３２９Ｇ ＬＡＬＡ ＩｇＧ１（図３Ｂ）、抗ＣＤ２０（ＧＡ１０１）ＬＡＬＡ ＩｇＧ１（図３Ｄ）、抗ＣＤ２０（ＧＡ１０１）Ｄ２４６Ａ Ｐ３２９Ｇ ＩｇＧ１（図３Ｆ）又は非特異的ＤＰ－４７ Ｐ３２９Ｇ ＬＡＬＡ ＩｇＧ１（図３Ｅ）を使用して、非特異的結合の可能性を評価した。抗ＣＤ２０（ＧＡ１０１）野生型ＩｇＧ１（図３Ａ）、抗ＣＤ２０（ＧＡ１０１）ＬＡＬＡ ＩｇＧ１（図３Ｄ）又は非特異的ＤＰ－４７ Ｐ３２９Ｇ ＬＡＬＡ ＩｇＧ１（図３Ｅ）については、非特異的抗Ｐ３２９Ｇ ＣＡＲ活性化を検出することができなかった。
特異的な抗Ｐ３２９Ｇ ＣＡＲ活性化を、抗ＣＤ２０（ＧＡ１０１）Ｐ３２９Ｇ ＬＡＬＡ ＩｇＧ１（図３Ｂ）及び抗ＣＤ２０（ＧＡ１０１）Ｄ２４６Ａ Ｐ３２９Ｇ ＩｇＧ１（図３Ｆ）の存在下で検出することができた。評価したＥＣ５０は、全てのヒト化抗Ｐ３２９Ｇバリアント間で同等であり、元のバインダーのＥＣ５０と異ならなかった。
興味深いことに、ＶＨＶＬ立体配座のｓｃＦｖバインダーを含む抗原結合受容体は、元の非ヒト化バインダー及びＶＬＶＨ立体配座のヒト化バインダーと比較して、Ｊｕｒｋａｔ ＮＦＡＴ Ｔ細胞のより強い活性化をもたらす。より高いプラトー（例えば、図３Ｆを参照）は、より強い活性化をもたらす抗原結合受容体の発現レベルの改善及び／又は細胞表面への輸送の改善に起因し得る。さらに、立体配座は、Ｐ３２９Ｇ変異への結合に影響を及ぼし得る。
Ｔ細胞のトニックシグナル伝達又は非特異的活性化をもたらす潜在的な抗原結合ドメインのクラスター化のリスクを調べるために、Ｊｕｒｋａｔ ＮＦＡＴ活性化アッセイを上記のように行ったが、使用した初期抗体濃度を上昇させ、１００ｎＭのＧＡ１０１ Ｐ３２９Ｇ ＬＡＬＡ ＩｇＧ１で段階希釈を開始し、さらに標的細胞を播種しなかった。
図３Ｃに示されるように、全ての試験されたヒト化Ｐ３２９Ｇバリアントについて活性化は検出できず、標的細胞の非存在下での検出可能な受容体クラスター化又は非特異的活性化を示した。
実施例５
様々なレベルの抗原を発現する標的細胞に対するＴ細胞活性化によって評価される様々なヒト化Ｐ３２９Ｇ抗原結合受容体バリアントの感度
さらに、ヒト化抗Ｐ３２９Ｇ抗原結合受容体の感度及び選択性を特徴付けるために、Ｊｕｒｋａｔ ＮＦＡＴ活性化アッセイを上記のように行った。
異なるヒト化抗Ｐ３２９Ｇ－ｓｃＦｖバリアント抗原結合受容体を発現するＪｕｒｋａｔ ＮＦＡＴレポーター細胞を、高（ＨｅＬａ－ＦｏｌＲ１）、中（Ｓｋｏｖ３）及び低（ＨＴ２９）ＦｏｌＲ１陽性標的細胞を識別する能力について評価した。ＦｏｌＲ１に対して高い（１６Ｄ５）（図４Ａ、Ｄ、Ｇ）、中程度（１６Ｄ５ Ｗ９６Ｙ）（図４Ｂ、Ｅ、Ｈ）又は低い（１６Ｄ５ Ｇ４９Ｓ／Ｋ５３Ａ）（図４Ｃ、Ｆ、Ｉ）親和性をもたらす抗体と組み合わせて、Ｊｕｒｋａｔ－Ｒｅｐｏｒｔｅｒ細胞株におけるｓｃＦｖ抗原認識足場として、抗Ｐ３２９Ｇバインダーの異なるバリアントを使用した。高い抗ＦｏｌＲ１ １６Ｄ５（図４Ａ）、中程度の抗ＦｏｌＲ１ １６Ｄ５ Ｗ９６Ｙ（図４Ｂ）及び低い親和性アダプターＩｇＧ抗ＦｏｌＲ１ Ｇ４９Ｓ Ｋ５３Ａ（図４Ｃ）と組み合わせた高発現標的細胞ＨｅＬａ－ＦｏｌＲ１は、用量依存的活性化を示した。高い抗ＦｏｌＲ１ １６Ｄ５（図４Ｄ）、中程度の抗ＦｏｌＲ１ １６Ｄ５ Ｗ９６Ｙ（図４Ｅ）及び低い親和性アダプターＩｇＧ抗ＦｏｌＲ１ Ｇ４９Ｓ Ｋ５３Ａ（図４Ｆ）と組み合わせた中発現標的細胞Ｓｋｏｖ３は、用量依存的活性化を示した。異なる親和性バインダー抗ＦｏｌＲ１ １６Ｄ５（図４Ｇ）、抗ＦｏｌＲ１ １６Ｄ５ Ｗ９６Ｙ（図４Ｈ）又は低親和性アダプター－ＩｇＧ抗ＦｏｌＲ１ Ｇ４９Ｓ Ｋ５３Ａ（図４Ｉ）と組み合わせた低発現標的細胞ＨＴ２９については、シグナルを検出することができなかった。さらに、興味深いことに、ＶＨＶＬフォーマットの抗原結合受容体は、元の非ヒト化バインダー及びＶＬＶＨフォーマットのヒト化バインダーと比較して、Ｊｕｒｋａｔ ＮＦＡＴ Ｔ細胞のより高い活性化をもたらす。ヒト化バリアントＶＨ３ＶＬ１ ｓｃＦｖバインダーは、すべての構築物の中で最も高いシグナル強度をもたらす（図４Ａ～Ｆ）。
さらに、Ｊｕｒｋａｔ ＮＦＡＴ活性化アッセイを、抗ＦｏｌＲ１ １６Ｄ５ Ｐ３２９Ｇ ＬＡＬＡ ＩｇＧ１（図５）又は抗ＨＥＲ２ Ｐ３２９Ｇ ＬＡＬＡ ＩｇＧ１（図６）のいずれかと組み合わせて使用したＨｅＬａ（ＦｏｌＲ１＋及びＨＥＲ２＋）細胞に対して行った。両方とも、ＶＨＶＬ配向がＶＬＶＨ配向と比較して優れているという知見を裏付けている。ヒト化バリアントＶＨ３ＶＬ１は、Ｊｕｒｋａｔ ＮＦＡＴ Ｔ細胞の最も強い活性化をもたらす。
実施例６
Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ細胞におけるさらなる抗Ｐ３２９Ｇ抗原結合受容体の発現
ジスルフィドヒト化抗Ｐ３２９Ｇ抗原結合受容体をＪｕｒｋａｔ（ＧｌｏＲｅｓｐｏｎｓｅ Ｊｕｒｋａｔ ＮＦＡＴ－ＲＥ－ｌｕｃ２Ｐ、Ｐｒｏｍｅｇａ＃ＣＳ１７６５０１）細胞にウイルス形質導入した。抗Ｐ３２９Ｇ抗原結合受容体発現をフローサイトメトリーによって評価した。ジスルフィド安定化ヒト化抗Ｐ３２９Ｇ抗原結合受容体を使用するＪｕｒｋａｔ細胞を回収し、ＰＢＳで洗浄し、９６ウェル平底プレートに５０．０００細胞／ウェルで播種した。異なる濃度（１：１０の６００ｎＭ～０ｎＭ連続希釈）のＦｃドメインにＰ３２９Ｇ変異を含む抗体で暗所及び冷蔵庫（４～８°Ｃ）で４５分間染色した後、試料をＦＡＣＳ緩衝液（２％ ＦＢＳ、１０％の０．５Ｍ ＥＤＴＡ、ｐＨ８及び０．５ｇ／Ｌ ＮａＮ３を含有するＰＢＳ）で３回洗浄した。次いで、試料を２．５μｇ／ｍＬのポリクローナル抗ヒトＩｇＧ Ｆｃγフラグメント特異的及びＰＥコンジュゲートＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｆ（ａｂ’）２ヤギフラグメント抗体で、冷蔵庫の暗所で３０分間染色し、フローサイトメトリー（Ｆｏｒｔｅｓｓａ ＢＤ）で分析した。さらに、抗Ｐ３２９Ｇ抗原結合受容体は、細胞内ＧＦＰレポーターを含んでいた（図１Ｃを参照のこと）。ＣＡＲ発現をＧＦＰシグナルに対して正規化した。
ヒト化バージョンＶＨ３ＶＬ１及びＶＬ１ＶＨ３と比較して、ジスルフィド安定化Ｐ３２９Ｇバインダーは、細胞表面に匹敵するＣＡＲ標識を示す（図７）。

Claims (26)

  1. アンカリング膜貫通ドメインと細胞外ドメインとを含む抗原結合受容体であって、前記細胞外ドメインが、
    （ｉ）配列番号１の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、配列番号２又は配列番号４０のＨＣＤＲ２及び配列番号３のＨＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）と、
    （ｉｉ）配列番号４の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、配列番号５のＬＣＤＲ２及び配列番号６のＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と
    を含む抗原結合部分を含む、抗原結合受容体。
  2. 前記ＶＨドメインが、配列番号８、配列番号４１、配列番号４４及び配列番号１２８からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗原結合受容体。
  3. 前記ＶＬドメインが、配列番号９又は配列番号１２７のアミノ酸配列と少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１又は２に記載の抗原結合受容体。
  4. 前記アンカリング膜貫通ドメインが、ＣＤ８、ＣＤ４、ＣＤ３ｚ、ＦＣＧＲ３Ａ、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＤＡＰ１０若しくはＤＡＰ１２膜貫通ドメイン又はそのフラグメントからなる群より選択される膜貫通ドメインであり、特に、前記アンカリング膜貫通ドメインがＣＤ８膜貫通ドメイン又はそのフラグメントである、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗原結合受容体。
  5. 少なくとも１つの刺激シグナル伝達ドメイン及び／又は少なくとも１つの同時刺激シグナル伝達ドメインをさらに含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗原結合受容体。
  6. 前記少なくとも１つの刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ｚの細胞内ドメイン、ＦＣＧＲ３Ａの細胞内ドメイン及びＮＫＧ２Ｄの細胞内ドメイン又は刺激シグナル伝達活性を保持するそのフラグメントからなる群より個別に選択され、特に、前記少なくとも１つの刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ｚ細胞内ドメイン又はＣＤ３ｚ刺激シグナル伝達活性を保持するそのフラグメントである、請求項１～５のいずれか一項に記載の抗原結合受容体。
  7. 前記少なくとも１つの同時刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＤ２７の細胞内ドメイン、ＣＤ２８の細胞内ドメイン、ＣＤ１３７の細胞内ドメイン、ＯＸ４０の細胞内ドメイン、ＩＣＯＳの細胞内ドメイン、ＤＡＰ１０の細胞内ドメイン及びＤＡＰ１２の細胞内ドメイン又は同時刺激シグナル伝達活性を保持するそれらのフラグメントからなる群より個別に選択される、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗原結合受容体。
  8. 少なくとも１つのＣＤ２８同時刺激ドメイン若しくはＣＤ２８同時刺激活性を保持するそのフラグメント、及び／又は、少なくとも１つのＣＤ１３７同時刺激ドメイン若しくはＣＤ１３７同時刺激活性を保持するそのフラグメントを含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の抗原結合受容体。
  9. ＣＤ３ｚの細胞内ドメインを含む刺激シグナル伝達ドメイン又はＣＤ３ｚ刺激シグナル伝達活性を保持するそのフラグメントを含み、かつＣＤ２８の細胞内ドメインを含む同時刺激シグナル伝達ドメイン又はＣＤ２８同時刺激シグナル伝達活性を保持するそのフラグメントを含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗原結合受容体。
  10. ＣＤ３ｚの細胞内ドメインを含む１つの刺激シグナル伝達ドメイン又はＣＤ３ｚ刺激シグナル伝達活性を保持するそのフラグメントを含み、かつＣＤ１３７の細胞内ドメインを含む１つの同時刺激シグナル伝達ドメイン又はＣＤ１３７同時刺激シグナル伝達活性を保持するそのフラグメントを含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗原結合受容体。
  11. 前記抗原結合部分が、Ｃ末端において、前記アンカリング膜貫通ドメインのＮ末端に、任意にペプチドリンカーを介して連結されている、請求項１～１０のいずれか一項に記載の抗原結合受容体。
  12. 前記抗原結合部分の前記軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）が、Ｃ末端において、前記アンカリング膜貫通ドメインのＮ末端に、任意にペプチドリンカーを介して連結されており、かつ／又は、前記重鎖可変ドメイン（ＶＨ）が、Ｃ末端において、前記軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）のＮ末端に、任意にペプチドリンカーを介して連結されている、請求項１～１１のいずれか一項に記載の抗原結合受容体。
  13. 請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗原結合受容体を発現することができる、形質導入Ｔ細胞。
  14. 請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗原結合受容体をコードする、単離されたポリヌクレオチド。
  15. 請求項１４に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター、特に発現ベクター。
  16. （Ａ）請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗原結合受容体を発現することができる、形質導入Ｔ細胞と、
    （Ｂ）標的細胞抗原に結合し、かつＥＵナンバリングによるアミノ酸変異Ｐ３２９Ｇを含むＦｃドメインを含む抗体と
    を含む、キット。
  17. （Ａ）請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗原結合受容体をコードする、単離されたポリヌクレオチドと、
    （Ｂ）標的細胞抗原に結合し、かつＥＵナンバリングによるアミノ酸変異Ｐ３２９Ｇを含むＦｃドメインを含む抗体と
    を含む、キット。
  18. 前記標的細胞抗原が、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、メソテリン（ＭＳＬＮ）、ＣＤ２０、葉酸受容体１（ＦＯＬＲ１）及びテネイシン（ＴＮＣ）からなる群より選択される、請求項１６又は１７に記載のキット。
  19. 医薬として使用するための請求項１６～１８のいずれか一項に記載のキット。
  20. 疾患の治療において使用するための、特にがんの処置において使用するための、請求項１６～１８のいずれか一項に記載のキット。
  21. 標的細胞抗原に結合し、かつＥＵナンバリングによるアミノ酸変異Ｐ３２９Ｇを含むＦｃドメインを含む抗体の投与前、投与と同時、又は投与後に投与される、医薬として使用するための、請求項１３に記載の形質導入Ｔ細胞。
  22. がんの治療において使用するための、請求項１３に記載の形質導入Ｔ細胞であって、前記治療が、標的細胞抗原に結合し、かつＥＵナンバリングによるアミノ酸変異Ｐ３２９Ｇを含むＦｃドメインを含む抗体の投与前、投与と同時、又は投与後の前記形質導入Ｔ細胞の投与を含む、形質導入Ｔ細胞。
  23. 対象における疾患を治療する方法であって、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗原結合受容体を発現することができる形質導入Ｔ細胞を前記対象に投与すること、及び、前記形質導入Ｔ細胞の投与前、投与と同時、又は投与後に、治療有効量の、標的細胞抗原に結合し、かつＥＵナンバリングによるアミノ酸変異Ｐ３２９Ｇを含むＦｃドメインを含む抗体を投与することを含む、方法。
  24. 標的細胞の溶解を誘導する方法であって、前記標的細胞を、標的細胞抗原に結合し、かつＥＵナンバリングによるアミノ酸変異Ｐ３２９Ｇを含むＦｃドメインを含む抗体の存在下で、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗原結合受容体を発現することができる形質導入Ｔ細胞と接触させることを含む、方法。
  25. がんの治療のための医薬の製造のための、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗原結合受容体、請求項１４に記載のポリヌクレオチド又は請求項１３に記載の形質導入Ｔ細胞の使用。
  26. 実施例のいずれか又は添付の図面のいずれか１つに関して実質的に上記に記載されるような抗原結合受容体。
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