JP2023534947A - 重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２型に中和活性を有するペプチド - Google Patents
重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２型に中和活性を有するペプチド Download PDFInfo
- Publication number
- JP2023534947A JP2023534947A JP2023502628A JP2023502628A JP2023534947A JP 2023534947 A JP2023534947 A JP 2023534947A JP 2023502628 A JP2023502628 A JP 2023502628A JP 2023502628 A JP2023502628 A JP 2023502628A JP 2023534947 A JP2023534947 A JP 2023534947A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cov
- sars
- peptide
- present
- acute respiratory
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 103
- 241000315672 SARS coronavirus Species 0.000 title claims description 13
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title description 33
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 title description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 27
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 241001678559 COVID-19 virus Species 0.000 claims abstract description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 41
- 229940096437 Protein S Drugs 0.000 claims description 20
- 101710198474 Spike protein Proteins 0.000 claims description 20
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 15
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 10
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 7
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 claims description 5
- 108020004084 membrane receptors Proteins 0.000 claims description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 2
- 208000025721 COVID-19 Diseases 0.000 abstract description 19
- 208000037847 SARS-CoV-2-infection Diseases 0.000 abstract description 19
- 108090000975 Angiotensin-converting enzyme 2 Proteins 0.000 description 14
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 13
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 12
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 102100035765 Angiotensin-converting enzyme 2 Human genes 0.000 description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 description 11
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 10
- 101000629318 Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 Spike glycoprotein Proteins 0.000 description 8
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 8
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 7
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 6
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 4
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 4
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 4
- 102000053723 Angiotensin-converting enzyme 2 Human genes 0.000 description 3
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 3
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 102100031673 Corneodesmosin Human genes 0.000 description 2
- 101710139375 Corneodesmosin Proteins 0.000 description 2
- 208000001528 Coronaviridae Infections Diseases 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 201000003176 Severe Acute Respiratory Syndrome Diseases 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 2
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 2
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 2
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 2
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N (2r,3r,4s,5r,6s)-4,5-dimethoxy-2-(methoxymethyl)-3-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trimethoxy-6-(methoxymethyl)oxan-2-yl]oxy-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4,5,6-trimethoxy-2-(methoxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxane Chemical compound CO[C@@H]1[C@@H](OC)[C@H](OC)[C@@H](COC)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](OC)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OC)[C@H](OC)O[C@@H]2COC)OC)O[C@@H]1COC LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N 0.000 description 1
- WHTVZRBIWZFKQO-AWEZNQCLSA-N (S)-chloroquine Chemical compound ClC1=CC=C2C(N[C@@H](C)CCCN(CC)CC)=CC=NC2=C1 WHTVZRBIWZFKQO-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 1
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- WFZFMHDDZRBTFH-CZEFNJPISA-N 2-[(e)-2-(5-carbamimidoyl-1-benzofuran-2-yl)ethenyl]-1-benzofuran-5-carboximidamide;dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.NC(=N)C1=CC=C2OC(/C=C/C=3OC4=CC=C(C=C4C=3)C(=N)N)=CC2=C1 WFZFMHDDZRBTFH-CZEFNJPISA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 229940127399 DNA Polymerase Inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- SHIBSTMRCDJXLN-UHFFFAOYSA-N Digoxigenin Natural products C1CC(C2C(C3(C)CCC(O)CC3CC2)CC2O)(O)C2(C)C1C1=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVTJGGGYKAMDBN-UHFFFAOYSA-N Dioxetane Chemical class C1COO1 BVTJGGGYKAMDBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- OFFWOVJBSQMVPI-RMLGOCCBSA-N Kaletra Chemical compound N1([C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C[C@H](O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)COC=2C(=CC=CC=2C)C)CC=2C=CC=CC=2)CCCNC1=O.N([C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C[C@H](O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)OCC=1SC=NC=1)CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N(C)CC1=CSC(C(C)C)=N1 OFFWOVJBSQMVPI-RMLGOCCBSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 235000010643 Leucaena leucocephala Nutrition 0.000 description 1
- 240000007472 Leucaena leucocephala Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 108010067902 Peptide Library Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 229940122277 RNA polymerase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 101001024637 Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 1
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-O acridine;hydron Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3[NH+]=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 239000003430 antimalarial agent Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 125000004057 biotinyl group Chemical group [H]N1C(=O)N([H])[C@]2([H])[C@@]([H])(SC([H])([H])[C@]12[H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000006287 biotinylation Effects 0.000 description 1
- 238000007413 biotinylation Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960001714 calcium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000378 calcium silicate Substances 0.000 description 1
- 229910052918 calcium silicate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960003340 calcium silicate Drugs 0.000 description 1
- 235000012241 calcium silicate Nutrition 0.000 description 1
- OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N calcium;dioxido(oxo)silane Chemical compound [Ca+2].[O-][Si]([O-])=O OYACROKNLOSFPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229960003677 chloroquine Drugs 0.000 description 1
- WHTVZRBIWZFKQO-UHFFFAOYSA-N chloroquine Natural products ClC1=CC=C2C(NC(C)CCCN(CC)CC)=CC=NC2=C1 WHTVZRBIWZFKQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- QONQRTHLHBTMGP-UHFFFAOYSA-N digitoxigenin Natural products CC12CCC(C3(CCC(O)CC3CC3)C)C3C11OC1CC2C1=CC(=O)OC1 QONQRTHLHBTMGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N digoxigenin Chemical compound C1([C@@H]2[C@@]3([C@@](CC2)(O)[C@H]2[C@@H]([C@@]4(C)CC[C@H](O)C[C@H]4CC2)C[C@H]3O)C)=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000006126 farnesylation Effects 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 229940014259 gelatin Drugs 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003365 immunocytochemistry Methods 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 230000000951 immunodiffusion Effects 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 230000026045 iodination Effects 0.000 description 1
- 238000006192 iodination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 229940113983 lopinavir / ritonavir Drugs 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N luminol Chemical compound O=C1NNC(=O)C2=C1C(N)=CC=C2 HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000034217 membrane fusion Effects 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 125000001421 myristyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229940127073 nucleoside analogue Drugs 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000001151 other effect Effects 0.000 description 1
- 125000001312 palmitoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000008823 permeabilization Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002250 progressing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- RWWYLEGWBNMMLJ-MEUHYHILSA-N remdesivir Drugs C([C@@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@@](C#N)(O1)C=1N2N=CN=C(N)C2=CC=1)O)OP(=O)(N[C@@H](C)C(=O)OCC(CC)CC)OC1=CC=CC=C1 RWWYLEGWBNMMLJ-MEUHYHILSA-N 0.000 description 1
- RWWYLEGWBNMMLJ-YSOARWBDSA-N remdesivir Chemical compound NC1=NC=NN2C1=CC=C2[C@]1([C@@H]([C@@H]([C@H](O1)CO[P@](=O)(OC1=CC=CC=C1)N[C@H](C(=O)OCC(CC)CC)C)O)O)C#N RWWYLEGWBNMMLJ-YSOARWBDSA-N 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 1
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 125000004079 stearyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000019635 sulfation Effects 0.000 description 1
- 238000005670 sulfation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 210000004243 sweat Anatomy 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N texas red Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC(S(Cl)(=O)=O)=CC=C1C(C1=CC=2CCCN3CCCC(C=23)=C1O1)=C2C1=C(CCC1)C3=[N+]1CCCC3=C2 MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
- G01N2333/08—RNA viruses
- G01N2333/165—Coronaviridae, e.g. avian infectious bronchitis virus
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2469/00—Immunoassays for the detection of microorganisms
- G01N2469/10—Detection of antigens from microorganism in sample from host
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
本発明は、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２型（Ｓｅｖｅｒｅ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ２，ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）のタンパク質又はその一部を特異的に認知するペプチド、前記ペプチドを含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の予防又は治療用組成物、及び前記ペプチドを含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２検出用組成物に関する。
Description
本発明は、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２型（Ｓｅｖｅｒｅ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ２，ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２）に中和活性を有するペプチド及びその用途に関する。
重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２型（Ｓｅｖｅｒｅ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ２，ＳＡＲＳ－Ｃｏｖ－２）は、一本鎖ＲＮＡ（ｓｉｎｇｌｅ－ｓｔｒａｎｄｅｄ ＲＮＡ）ウイルスでコロナウイルス亜科に属し、２０１９年１２月中国の武漢で発生した原因不明の肺炎患者により初めて原因ウイルスが発見された。重症急性呼吸器症候群の感染症と混同しないように、世界保健機関（ＷＨＯ）は「２０１９年コロナウイルス感染症ウイルス」又は「２０１９年コロナウイルス感染症類索ウイルス」と称したりもする。
２０１９年１２月から２０２０年７月初まで全世界２１４ヶ国で１，１５７万名の感染患者が発生し、このうち５３７，１３８人が死亡し、致死率は４．６４に達するものと知られている。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の臨床的症状は、発熱を伴った呼吸器症状が主に現われ、主な脆弱対象は６０代以上の基底基礎疾患及び免疫疾患などを患っている高齢者である。以前のウイルスとは異なる力強い伝染性、急速な症状悪化を見せ、最初の発生報告後の３ヶ月余りの２０２０年３月にＷＨＯでは世界的大流行、パンデミックを宣言した。
いまだに特別な治療剤はないが、抗ウイルス剤に関する研究が進められ、ＲＮＡポリメラーゼ抑制剤であるレムデシビル、マラリア治療剤であるクロロキン、抗レトロヒト免疫不全ウイルス１型プロテアーゼ抑制剤であるロピナビル／リトナビルなどの抗ウイルス治療剤が細胞水準においてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の抑制効果を示すものと報告された。しかし、現在まで効果があると知られている治療剤は、実際の臨床ではその効果が僅かであるか、多様な副作用を引き起こすことがあるため問題となっている。
ここに、本発明者達は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を抑制することができる新たな治療剤を開発するために鋭意努力した結果、本発明のペプチドがコロナウイルス感染症の予防、改善又は治療に有用に用いられ得ることを確認し、本発明を完成した。
本発明の一目的は、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２型（Ｓｅｖｅｒｅ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ２，ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）のタンパク質又はその一部を特異的に認知するペプチドを提供することにある。
本発明の他の一目的は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の予防又は治療用組成物を提供することにある。
本発明のまた他の一目的は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の予防又は治療方法を提供することにある。
本発明のまた他の一目的は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の予防又は治療に用いるための組成物を提供することにある。
本発明のまた他の一目的は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２検出用組成物を提供することにある。
本発明のまた他の一目的は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を検出する方法を提供することにある。
本発明のまた他の一目的は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の検出に用いるための組成物を提供することにある。
本発明のまた他の一目的は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染又は疾患を診断するためのキットを提供することにある。
このため、本発明の一側面は、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２型（Ｓｅｖｅｒｅ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ２，ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）のタンパク質又はその一部を特異的に認知するペプチドを提供する。
また、本発明の他の一側面は、前記ペプチドを含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の予防又は治療用組成物を提供する。
また、本発明のまた他の一側面は、前記ペプチド又は前記ペプチドを含む組成物を個体に投与する段階を含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の予防又は治療方法を提供する。
また、本発明のまた他の一側面は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の予防又は治療に用いるための、前記ペプチド又は前記ペプチドを含む組成物を提供する。
また、本発明の他の一側面は、前記ペプチドを含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２検出用組成物を提供する。
また、本発明のまた他の一側面は、前記ペプチド又は前記ペプチドを含む組成物を生物学的サンプルと接触させる段階を含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の検出方法を提供する。
また、本発明のまた他の一側面は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の検出に用いるための、前記ペプチド又は前記ペプチドを含む組成物を提供する。
本発明のまた他の一側面は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染又は疾患を診断するためのキットを提供する。
本発明の配列番号１から配列番号６のアミノ酸配列より構成された群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチドは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面のスパイクタンパク質に結合してＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和させることにより、ウイルスと宿主細胞の膜融合を阻害する効果があるので、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染を予防、治療又は診断する用途として用いられ得る。
但し、本発明の効果は、前記で言及した効果に制限されず、言及されなかったまた他の効果は、下記の記載から当業者に明確に理解され得るであろう。
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明の一側面は、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２型（Ｓｅｖｅｒｅ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ２，ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）のタンパク質又はその一部を特異的に認知し、配列番号１から配列番号６の配列より構成された群から選択されるいずれか１つのアミノ酸配列を含むペプチドを提供する。
本明細書において、用語「ペプチド」は、ペプチド結合によりアミノ酸残基が互いに結合して形成された線状又は環状の分子を意味する。前記ペプチドの製作は、本技術分野において公知の通常の生物学的又は化学的合成方法により達成され得ることであり、一例として、固相合成技術（ｓｏｌｉｄ－ｐｈａｓｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）のような方法により達成され得る。
前記「ペプチド」は、機能に影響を及ぼさない範囲内で、アミノ酸残基の欠失、挿入、置換又はこれらの組み合わせにより異なる配列を有するアミノ酸の変異体、又は断片であってよい。前記ペプチドの活性を全体的に変更させないアミノ酸交換は本技術分野に公知となっている。場合によっては、リン酸化（ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ）、硫化（ｓｕｌｆａｔｉｏｎ）、アクリル化（ａｃｒｙｌａｔｉｏｎ）、糖化（ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）、メチル化（ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ）、ファルネシル化（ｆａｒｎｅｓｙｌａｔｉｏｎ）などに変形されてよい。したがって、本発明は、配列番号１から６より構成された群から選択されるいずれか１つのアミノ酸配列を含むペプチドと実質的に同一のアミノ酸配列を有するペプチド及びその変異体、又はその活性断片を含む。前記実質的に同一のタンパク質とは、前記配列番号１から６より構成された群から選択されるいずれか１つのアミノ酸配列と７５％以上、好ましくは８０％以上、例えば、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９８％以上、又は９９％以上の配列相同性を有するアミノ酸配列を意味するが、これに限定されず、７５％以上のアミノ酸配列の相同性を有して同一の活性を有するならば本発明の範囲に含まれる。また、本発明のペプチドは、標的化配列、タグ（ｔａｇ）、標識された残基、半減期又はペプチド安定性を増加させるための特定の目的で製造されたアミノ酸配列をさらに含むことができる。
また、より良い化学的安定性、強化された薬理特性（半減期、吸収性、力価、効能など）、変更された特異性（例えば、広範囲な生物学的活性スペクトラム）、減少した抗原性を獲得するために、本発明のペプチドのＮ－末端又はＣ－末端に保護基が結合されていてよい。例えば、前記保護基は、アセチル基、フルオレニルメトキシカルボニル基、ホルミル基、パルミトイル基、ミリスチル基、ステアリル基又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）であってよいが、ペプチドの改質、特に、ペプチドの安定性を増進させることができる成分であれば、制限なく含むことができる。前記「安定性」は、生体内タンパク質切断酵素の攻撃から本発明のペプチドを保護する生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）での安定性だけでなく、貯蔵安定性（例えば、常温貯蔵安定性）も含む意味として用いられる。
一具現例において、本発明のペプチドは、次に構成された群から選択される：
ＲＳＹＭＴＴＨＨＥＱＦ（配列番号１）；
ＫＦＮＲＲＨＨ（配列番号２）；
ＫＹＬＬＶＨＲＰＹＹＲＲ（配列番号３）；
ＷＶＰＹＱＡＲＶＰＹＰＲ（配列番号４）；
ＲＬＹＣＫＮＧＧＦＦＬＲ（配列番号５）；及び
ＫＨＲＧＧＧＮＲＲ（配列番号６）。
ＲＳＹＭＴＴＨＨＥＱＦ（配列番号１）；
ＫＦＮＲＲＨＨ（配列番号２）；
ＫＹＬＬＶＨＲＰＹＹＲＲ（配列番号３）；
ＷＶＰＹＱＡＲＶＰＹＰＲ（配列番号４）；
ＲＬＹＣＫＮＧＧＦＦＬＲ（配列番号５）；及び
ＫＨＲＧＧＧＮＲＲ（配列番号６）。
本発明のペプチドは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質（Ｓｐｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ，Ｓ ｐｒｏｔｅｉｎ）に特異的に結合することができる。さらに具体的に、本発明のペプチドは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質に存在するＲＢＤ（Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｂｉｎｄｉｎｇ ｄｏｍａｉｎ）に特異的に結合することができる。
本明細書における用語「特異的に結合」は、関心対象のタンパク質、すなわち、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質又はその一部であるＲＢＤに結合するが、サンプル中の他の分子は実質的に認識せず結合しないことを意味する。
本発明のペプチドは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面のスパイクタンパク質に特異的に結合して宿主細胞の細胞膜受容体とスパイクタンパク質の結合を抑制することができる。
前記宿主細胞の細胞膜受容体は、アンジオテンシン変換酵素２（Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ－ｃｏｎｖｅｒｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ２，ＡＣＥ２）であり、アンジオテンシン変換酵素２は、真核生物と細菌で発見される膜貫通タンパク質であって、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を含むコロナウイルスが細胞に侵入する際に用いる受容体である。
一具現例において、本発明のペプチドがＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の表面のスパイクタンパク質ＲＢＤに特異的に結合してＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和させることができ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２が宿主細胞の細胞膜に結合することを阻害し得ることを確認した。
本明細書における用語「中和」は、中和が達成されるメカニズムに関係なく、生体内において及び／又は試験管内においてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２が複製されることを阻害する能力を意味する。一具現例において、本発明のペプチドは、標的細胞にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２が付着してウイルス膜と細胞膜が融合されることを阻害することによりＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を中和させる。
本発明の他の一側面は、前記ペプチドを含む重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２型（Ｓｅｖｅｒｅ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ２，ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）感染の予防又は治療用薬学的組成物を提供する。
また、本発明は、前記ペプチド又は前記ペプチドを含む組成物を個体に投与する段階を含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の予防又は治療方法を提供する。
また、本発明は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の予防又は治療に用いるための、前記ペプチド又は前記ペプチドを含む組成物を提供する。前記組成物は、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２型の表面のスパイクタンパク質に結合して宿主細胞の細胞膜受容体とスパイクタンパク質の結合を抑制することによりＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染を予防したり治療することができる。
本発明のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染の予防又は治療用薬学的組成物は、それぞれ通常の方法により散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁液、エマルジョン、シロップ、エアロゾルなどの経口用製剤、外用剤、坐剤、及び滅菌注射溶液の形態に剤形化されて用いることができ、剤形化のために前記ペプチド以外に薬剤学的に許容される担体、賦形剤又は希釈剤をさらに含むことができる。
前記薬学的に許容される担体は、製剤時に通常用いられるラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシア、ゴム、リン酸カルシウム、アルギネート、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微小結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、メチルセルロース、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、滑石、ステアリン酸マグネシウム、ミネラルオイルなどを含むことができる。
前記薬学的組成物は、前記成分の他に、潤滑剤、湿潤剤、甘味剤、香味剤、乳化剤、懸濁液剤、保存剤などを追加でさらに含むことができる。
前記薬学的組成物は、目的とする方法により経口投与するか非経口投与（例えば、筋肉内、静脈内、腹腔内、皮下、皮内、又は局所に適用）することができ、投与量は、患者の状態及び体重、疾病の程度、薬物形態、投与経路及び時間により異なるが、当業者により適切に選択されてよい。
本発明の薬学的組成物は、薬学的に有効な量で投与する。本発明における「薬学的に有効な量」は、医学的治療に適用可能な合理的な受恵／危険の比率で疾患を治療するのに十分な量を意味し、有効用量の水準は、患者の疾患の種類、重症度、薬物の活性、薬物に対する敏感度、投与時間、投与経路及び排出比率、治療期間、同時に用いられる薬物を含んだ要素、及びその他医学分野によく知られている要素により決定されてよい。前記薬学的組成物は、個別治療剤で投与するか他の治療剤と併用して投与されてよく、従来の治療剤とは同時に、別途に、又は順次に投与されてよく、単一又は多重投与されてよい。前記要素を全て考慮して副作用なく最小限の量で最大の効果を得ることができる量を投与するのが重要であり、これは当業者により容易に決定されてよい。
前記薬学的組成物の有効量は、患者の年齢、性別、状態、体重、体内への活性成分の吸収度、不活性率、排泄速度、疾病の種類、併用する薬物に応じて異なり得るし、投与経路、肥満の重症度、性別、体重、年齢などに応じて増減してもよく、例えば、前記薬学的組成物を１日当たり、患者体重１ｋｇ当たり約０．０００１μｇから５００ｍｇ、好ましくは０．０１μｇから１００ｍｇで投与してもよい。
本発明の薬学的組成物は、さらに、少なくとも１つの他の治療剤を含むことができる。例えば、前記ペプチドとともに、インターフェロン、抗－Ｓタンパク質モノクローナル抗体、抗－Ｓタンパク質ポリクローナル抗体、ヌクレオシド類似体、ＤＮＡポリメラーゼ阻害剤、ｓｉＲＮＡ製剤又は治療ワクチンを抗ウイルス薬物としてさらに含むことができる。これらは、本発明のペプチドと組み合わせて用いられ得る。本明細書における「組み合わせて」は、別個の剤形として又は１つの単一の併用剤形として同時に、又は任意の順序で別個の剤形で順次投与する療法によることを意味する。
前記「個体（ｓｕｂｊｅｃｔ）」は、本願のペプチド又は前記ペプチドを含む組成物の投与を要する個体（ｓｕｂｊｅｃｔ ｉｎ ｎｅｅｄ ｔｈｅｒｅｏｆ）であってよく、前記投与を要する個体は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症に対して診断を受けた個体、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染症状が発現された個体だけではなく、前記疾患や症状の発現を予防するか健康改善のために投与を希望する個体を含むものであってよい。
前記「投与」は、任意の適切な方法で患者に所定の物質を提供することを意味し、本発明のペプチドの投与経路は、目的の組織に到達することができる限り、一般的な全ての経路を介して経口又は非経口投与されてよい。また、前記ペプチド又は前記ペプチドを含む組成物は、活性物質が標的細胞に移動することができる任意の装置により投与されてよい。
また他の一側面において、本発明は、前記ペプチドを含む重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２型（Ｓｅｖｅｒｅ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ２，ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）検出用組成物を提供する。
また、本発明は、前記ペプチド又は前記ペプチドを含む組成物を生物学的サンプルと接触させる段階を含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の検出方法を提供する。
また、本発明は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の検出に用いるための、前記ペプチド又は前記ペプチドを含む組成物を提供する。
本発明のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２検出用組成物は、生物学的サンプルと前記ペプチドを接触させた後反応を確認して生物学的サンプル内にＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の存否を検出するのに用いることができる。
本発明のペプチドは、検出可能に標識されてよい。本発明に用いられ得る標識の例としては、酵素、放射性同位元素、コロイド金属、蛍光化合物、化学発光化合物及び生物発光化合物がある。通常用いられる標識は、蛍光物質（例えば、フルオレセイン、ローダミン、テキサスレッドなど）、酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、β－ガラクトシダーゼ、アルカリフォスファターゼ）、放射性同位元素（例えば、３２Ｐ又は１２５Ｉ）、ビオチン、ジゴキシゲニン、コロイド金属、化学発光又は生物発光化合物（例えば、ジオキセタン、ルミノール又はアクリジニウム）を含む。酵素又はビオチニル基の共有結合法、ヨウ素化法、リン酸化法、ビオチン化法などの標識方法が当分野によく知られている。
前記ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の存否の検出は、酵素免疫分析法（ＥＬＩＳＡ）、ウェスタンブロッティング（Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ）、免疫蛍光（Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ）、免疫組織化学染色（Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｓｔａｉｎｉｎｇ）、フローサイトメトリー（Ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ）、兔疫細胞化学法、放射能免疫分析法（ＲＩＡ）、免疫沈澱分析法（Ｉｍｍｕｎｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ）、免疫拡散分析法（Ｉｍｍｕｎｏｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ａｓｓａｙ）、補体固定分析法（Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ｆｉｘａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ）及びタンパク質チップ（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｈｉｐ）よりなる群から選択されたいずれか１つにより実施されてよい。
前記酵素免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）には、固体支持体に付着されたペプチドを認知する標識された抗体を用いる直接的ＥＬＩＳＡ、固体支持体に付着されたペプチドを認知する抗体の複合体において捕獲抗体を認知する標識された二次抗体を用いる間接的ＥＬＩＳＡなど、多様なＥＬＩＳＡ方法を含む。
前記生物学的サンプルは、対象体の痰、唾、血液、汗、呼吸器組織及び唾液よりなる群から選択されたいずれか１つであってよいが、これに限定されず、当業界に知られている通常の方法でサンプルを準備することができる。
本発明はまた、前記ペプチドを含むＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染又は疾患を診断するためのキットを提供する。
本明細書における用語「ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染又は疾患」は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による細胞又は対象体の感染で生じる病理学的状態を意味し、例えば、前記疾患は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２により引き起こされる呼吸器疾患であってよい。
本発明の診断用キットにおいて、キットには固体担体が含まれてよい。本発明のペプチドは、固体担体に付着されてよく、このような固体担体は、多孔性又は非多孔性、平面又は非平面であってよい。
以下、本発明を実施例及び実験例により詳細に説明する。
但し、下記実施例及び実験例は、本発明を例示するためのものに過ぎず、本発明の内容が下記実施例及び実験例によって限定されるものではない。
［実施例１］
本発明のペプチドの選別
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質（Ｓｐｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ、Ｓ ｐｒｏｔｅｉｎ）とアンジオテンシン変換酵素２（Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ－ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ２，ＡＣＥ２）の結合を阻害するペプチドを開発するために、ペプチドライブラリからスクリーニングを介して６種のペプチドを選別した。選別されたペプチドの配列と分子量測定器を用いて測定したペプチドの分子量を下記表１に記載した。
本発明のペプチドの選別
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質（Ｓｐｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ、Ｓ ｐｒｏｔｅｉｎ）とアンジオテンシン変換酵素２（Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ－ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ２，ＡＣＥ２）の結合を阻害するペプチドを開発するために、ペプチドライブラリからスクリーニングを介して６種のペプチドを選別した。選別されたペプチドの配列と分子量測定器を用いて測定したペプチドの分子量を下記表１に記載した。
［実施例２］
本発明のペプチドのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質ＲＢＤに対する結合能の確認
本発明のペプチドがＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の宿主細胞の侵入を遮断することができるのかを確認するため、先ず、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質内のＲＢＤを本発明のペプチドが認識して結合することができるのかを確認した。
本発明のペプチドのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質ＲＢＤに対する結合能の確認
本発明のペプチドがＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の宿主細胞の侵入を遮断することができるのかを確認するため、先ず、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質内のＲＢＤを本発明のペプチドが認識して結合することができるのかを確認した。
具体的に、実験例１において選別した６種のペプチドを２ｍＭのナトリウムバイカーボネートと同一の体積で混合し、９６－ウェルプレートに１００μＬずつ分注した後、４℃で一晩中培養し、ウェル表面をペプチドでコーティングした。０．１％ ＰＢＳ－Ｔ（０．１％ Ｔｗｅｅｎ－２０ ｉｎ ＰＢＳ）で３回洗浄してから、３％ ＢＳＡを１００μＬずつ分注した後、室温で１時間ブロッキングさせ、０．１％ ＰＢＳ－Ｔで３回洗浄した。その後、組換えＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクＲＢＤ－Ｈｉｓ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ，Ｃａｔ．Ｎｏ．：４０５９２－Ｖ０８Ｂ，Ｃｈｉｎａ）をウェル当たり１００ｎｇ処理して室温で２時間反応させた。０．１％ ＰＢＳ－Ｔで３回洗浄した後、抗－Ｈｉｓ抗体－ＨＲＰ（Ａｂｃａｍ，Ｃａｔ．Ｎｏ．：ａｂ１１８７，ＵＳ）を１：１０００でＰＢＳに希釈して処理し、室温で１時間反応させた後、０．１％ ＰＢＳ－Ｔで３回洗浄した。ＴＭＢ溶液（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ，Ｃａｔ．Ｎｏ．：Ｎ３０１，ＵＳ）を１００μＬずつ分注して約５分反応させた後、１Ｍの硫酸５０μＬを処理して反応を終結させた。分光器を用いて、４５０ｎｍ波長でＯ．Ｄ．値を測定した。
その結果、［図１］に示されているように、配列番号１から６のペプチドそれぞれのＲＢＤに対する結合パターンをＥＬＩＳＡで観察したとき、ペプチドの濃度依存的にＲＢＤに対する結合フォルド（ｆｏｌｄ）が増加することを確認した。
これを介し、本発明のペプチドがＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質のＲＢＤを認識し、結合する能力があることが分かる。
［実施例３］
本発明のペプチドのＡＣＥ２－ＲＢＤ結合阻害能の確認
本発明のペプチドがＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の宿主細胞の侵入を遮断することができるのかを確認するため、本発明のペプチドが宿主細胞の膜タンパク質であるＡＣＥ２とＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＲＢＤとの結合を阻害するのかを確認した。
本発明のペプチドのＡＣＥ２－ＲＢＤ結合阻害能の確認
本発明のペプチドがＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の宿主細胞の侵入を遮断することができるのかを確認するため、本発明のペプチドが宿主細胞の膜タンパク質であるＡＣＥ２とＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＲＢＤとの結合を阻害するのかを確認した。
具体的に、２ｍＭのナトリウムバイカーボネートとＡＣＥ２－ＦＣタンパク質（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ，Ｃａｔ．Ｎｏ．：１０１０８－Ｈ０２Ｈ，Ｃｈｉｎａ）を同一の体積で混合し、９６－ウェルプレートに１００ｎｇ／１００μＬ／ウェルずつ分注した後、４℃で一晩中培養し、ウェル表面をＡＣＥ２タンパク質でコーティングした。０．１％ ＰＢＳ－Ｔ（０．１％ Ｔｗｅｅｎ－２０ ｉｎ ＰＢＳ）で３回洗浄してから、３％ ＢＳＡを１００μＬずつ分注した後、室温で１時間ブロッキングさせた。ＰＢＳに組換えＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクＲＢＤ Ｈｉｓ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ，Ｃａｔ．Ｎｏ．：４０５９２－Ｖ０８Ｂ，Ｃｈｉｎａ）１００ｎｇと濃度別のペプチド溶液を混合し、室温で１時間反応させた。ウェルを０．１％ ＰＢＳ－Ｔで３回洗浄した後、前記タンパク質ペプチド混合物をウェルに処理した。室温で２時間反応させた後、０．１％ ＰＢＳ－Ｔで３回洗浄した。抗－Ｈｉｓ抗体－ＨＲＰ（Ａｂｃａｍ，Ｃａｔ．Ｎｏ．：ａｂ１１８７，ＵＳ）を１：１０００でＰＢＳに希釈して処理し、室温で１時間反応させた後、０．１％ ＰＢＳ－Ｔで３回洗浄した。ＴＭＢ溶液（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ，Ｃａｔ．Ｎｏ．：Ｎ３０１，ＵＳ）を１００μＬずつ分注して約５分反応させた後、１Ｍの硫酸５０μＬを処理して反応を終結させた。分光器を用いて、４５０ｎｍ波長でＯ．Ｄ．値を測定した。
その結果、［図２］に示されているように、配列番号１から６のペプチドのそれぞれは、濃度依存的にＡＣＥ２タンパク質に対するＲＢＤの結合を阻害することを確認した。
これを介し、本発明のペプチドがＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質のＲＢＤに結合することにより、ＡＣＥ２タンパク質にスパイクタンパク質が結合することを阻害することが分かる。
［実施例４］
ヒト肺癌細胞における本発明のペプチドのＡＣＥ２－ＲＢＤ結合阻害能の確認
本発明のペプチドに哺乳動物細胞のコロナウイルス感染の予防、改善及び治療の能力があるのかを確認するため、ヒト肺癌細胞株にペプチドを処理した後、宿主細胞のＡＣＥ２に対するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質ＲＢＤの結合能が減少するのかを確認した。
ヒト肺癌細胞における本発明のペプチドのＡＣＥ２－ＲＢＤ結合阻害能の確認
本発明のペプチドに哺乳動物細胞のコロナウイルス感染の予防、改善及び治療の能力があるのかを確認するため、ヒト肺癌細胞株にペプチドを処理した後、宿主細胞のＡＣＥ２に対するＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクタンパク質ＲＢＤの結合能が減少するのかを確認した。
具体的に、ヒト肺癌細胞株（ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍｉｃ ｈｕｍａｎ ａｌｖｅｏｌａｒ ｂａｓａｌ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ）であるＡ５４９細胞（Ｋｏｒｅａｎ Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｅ Ｂａｎｋ，Ｃａｔ．Ｎｏ．：１０１８５，Ｋｏｒｅａ）を６ウェルプレートに５ｘ１０５細胞／ウェルの密度で接種し、２４時間培養した。ＤＭＥＭ培地１ｍＬに組換えＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクＲＢＤ Ｈｉｓ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ，Ｃａｔ．Ｎｏ．：４０５９２－Ｖ０８Ｂ，Ｃｈｉｎａ）５００ｎｇと濃度別のペプチド溶液を混合して室温で１時間反応させて準備した。一日間培養したＡ５４９細胞をＤＭＥＭ培地で洗浄した後、９００μＬの組換えＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクＲＢＤ／ペプチド混合物を細胞に添加した。３７℃のＣＯ２インキュベーターで２時間培養した後、ＰＢＳで細胞を２回洗浄し、溶解バッファー２００μＬ処理して細胞を溶解させた。５Ｘサンプルバッファーを処理してサンプルを準備した後、１０％ＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルを用いてＳＤＳ－ＰＡＧＥを進行した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥを介して分離したタンパク質をＰＶＤＦメンブレンに移動させた後、５％スキームミルクを用いて１時間室温でブロッキングさせた。次に、抗－Ｈｉｓ抗体－ＨＲＰ（Ａｂｃａｍ，Ｃａｔ．Ｎｏ．：ａｂ１１８７，ＵＳ）を１：１０００で５％スキームミルクに希釈してメンブレンと２時間反応させ、０．１％ ＰＢＳ－Ｔ（０．１％ Ｔｗｅｅｎ－２０ ｉｎ ＰＢＳ）で１０分ずつ３回洗浄した。ＥＣＬ溶液（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｃａｔ．Ｎｏ．：ＲＰＮ２２３２，ＵＳ）を用いてフィルムで検出した。
その結果、［図３］に示されているように、本発明の配列番号１から４のペプチドそれぞれがいずれも濃度依存的に宿主細胞のＡＣＥ２とＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２スパイクＲＢＤとの結合を阻害することを確認した。
これを介し、本発明のペプチドがＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のスパイクタンパク質に結合し、宿主細胞のＡＣＥ２にスパイクタンパク質が結合することを阻害することにより、ウイルスが宿主細胞に感染することを予防又は治療することができることが分かる。
［実施例５］
本発明のペプチドのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２細胞感染抑制効果の確認
本発明のペプチドがＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による細胞感染を抑制する効果があるのかを直接的に確認するため、Ｆｏｃｕｓ Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ Ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ Ｔｅｓｔ（ＦＲＮＴ）を行った。
本発明のペプチドのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２細胞感染抑制効果の確認
本発明のペプチドがＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による細胞感染を抑制する効果があるのかを直接的に確認するため、Ｆｏｃｕｓ Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ Ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ Ｔｅｓｔ（ＦＲＮＴ）を行った。
具体的に、Ｖｅｒｏ Ｅ６細胞（ＡＴＣＣ，ＵＳＡ）を９６－ウェルプレートに２ｘ１０４細胞／ウェルの密度で接種した後、９０－１００％ ｃｏｎｆｌｕｅｎｃｙまで培養した。５００ ｆｏｃｕｓ－ｆｏｒｍｉｎｇ ｕｎｉｔｓ（ＦＦＵ）／ｗｅｌｌのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２と濃度別のペプチドサンプルを１：１で混合した後、３７℃で１時間反応させた。ペプチドとウイルス混合物をＶｅｒｏ Ｅ６細胞ｍｏｎｏｌａｙｅｒに処理し、３７℃で１時間培養した。上澄液を除去した後、１．６％カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）が含まれているＤＭＥＭ培地を処理し、３７℃で２４時間培養した。上澄液の除去後、４％パラホルムアルデヒドを処理して細胞を固定した後、ＰＢＳで洗浄した。０．２％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００と１％ ＢＳＡを含むＰＢＳを３０分間処理し、ｃｅｌｌ ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎを進行した後、ＰＢＳで洗浄した。１％ ＢＳＡが含まれているＰＢＳにＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ヌクレオカプシドに対する１次抗体（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ，Ｃｈｉｎａ）を１：１０００で希釈した後、細胞に１時間処理し、ＰＢＳＴ（ＰＢＳ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ １％ Ｔｗｅｅｎ－２０）で洗浄した。１％ ＢＳＡが含まれているＰＢＳに２次抗体（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ，Ｃｈｉｎａ）を１：２０００で希釈した後、細胞に１時間処理し、ＰＢＳＴで洗浄した。ＫＰＬ ＴｒｕｅＢｌｕｅ（登録商標） Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（ＳｅｒａＣａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＵＳＡ）を処理した後、蒸溜水で洗浄してＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ｆｏｃｉの数をエリスポットリーダー（Ｅｌｉｓｐｏｔ ｒｅａｄｅｒ）（Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｌｉｍｉｔｅｄ，ＵＳＡ）で分析した。下記数式を利用してウイルス感染阻害率を計算した。
[数式１]
ウイルス感染阻害率（％）＝（対照群ｆｏｃｉ数 － 処理群ｆｏｃｉ数）／対照群ｆｏｃｉ数 × １００
ウイルス感染阻害率（％）＝（対照群ｆｏｃｉ数 － 処理群ｆｏｃｉ数）／対照群ｆｏｃｉ数 × １００
その結果、表２に示されているように、本発明の配列番号１から４のペプチドをそれぞれ処理したとき、４種のペプチドのいずれも濃度依存的にウイルスの感染阻害率が上昇することを確認した。
これを介し、本発明のペプチドがＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による細胞感染を抑制することにより、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染を予防、改善及び治療することができることが分かる。
Claims (8)
- 重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２型（Ｓｅｖｅｒｅ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ２，ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）のタンパク質又はその一部を特異的に認知し、配列番号１から配列番号６の配列より構成された群から選択されるいずれか１つのアミノ酸配列を含む、ペプチド。
- 前記重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２型のタンパク質は、スパイクタンパク質である、請求項１に記載のペプチド。
- 前記ペプチドは、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２型の表面のスパイクタンパク質に結合して宿主細胞の細胞膜受容体とスパイクタンパク質の結合を抑制するものである、請求項１に記載のペプチド。
- 請求項１に記載のペプチドを含む重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２型（Ｓｅｖｅｒｅ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ２，ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）感染の予防又は治療用薬学的組成物。
- 前記組成物は、重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２型の表面のスパイクタンパク質に結合して宿主細胞の細胞膜受容体とスパイクタンパク質の結合を抑制するものである、請求項４に記載の薬学的組成物。
- 前記薬学的組成物は、薬剤学的に許容される担体、賦形剤又は希釈剤をさらに含むものである、請求項４に記載の薬学的組成物。
- 前記薬学的組成物は、経口用製剤、注射用製剤又は外用剤の形態に剤形化されるものである、請求項４に記載の薬学的組成物。
- 請求項１に記載のペプチドを含む重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２型（Ｓｅｖｅｒｅ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ２，ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）検出用組成物。
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR20200088076 | 2020-07-16 | ||
| KR10-2020-0088076 | 2020-07-16 | ||
| KR10-2021-0030604 | 2021-03-09 | ||
| KR1020210030604A KR102380735B1 (ko) | 2020-07-16 | 2021-03-09 | 제2형 중증급성호흡기증후군 코로나바이러스에 중화 활성을 갖는 펩타이드 |
| PCT/KR2021/009080 WO2022015069A1 (ko) | 2020-07-16 | 2021-07-15 | 제2형 중증급성호흡기증후군 코로나바이러스에 중화 활성을 갖는 펩타이드 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2023534947A true JP2023534947A (ja) | 2023-08-15 |
Family
ID=79555716
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2023502628A Pending JP2023534947A (ja) | 2020-07-16 | 2021-07-15 | 重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２型に中和活性を有するペプチド |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20240051993A1 (ja) |
| EP (1) | EP4183793A4 (ja) |
| JP (1) | JP2023534947A (ja) |
| KR (3) | KR102628158B1 (ja) |
| BR (1) | BR112023000503A2 (ja) |
| MX (1) | MX2023000267A (ja) |
| WO (1) | WO2022015069A1 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20230141227A (ko) * | 2022-03-31 | 2023-10-10 | (주)케어젠 | 항염증 및 항섬유화 활성을 갖는 펩타이드 및 이의 용도 |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR0139159B1 (ko) * | 1994-10-20 | 1998-06-01 | 김광호 | 포커스서보제어장치 |
| NZ565394A (en) * | 2005-07-26 | 2011-04-29 | Cms Peptides Patent Holding Company Ltd | Biologically active peptides comprising PTTKTYFPHF and their uses for non-therapeutically reducing fatigue |
| US20070160981A1 (en) * | 2005-10-24 | 2007-07-12 | Xin Chen | Viral protease |
| WO2008060331A2 (en) * | 2006-05-19 | 2008-05-22 | Amgen Inc. | Antibodies to sars coronavirus |
| KR20080012449A (ko) * | 2006-08-03 | 2008-02-12 | 재단법인서울대학교산학협력재단 | 뉴클레오캡시드 또는 스파이크 단백질을 이용한 사스진단방법 |
| CN102227442B (zh) | 2008-11-28 | 2014-04-16 | 日油株式会社 | Sars冠状病毒的细胞毒性t细胞表位肽及其用途 |
| KR101510742B1 (ko) * | 2013-05-13 | 2015-04-10 | (주)케어젠 | 비만세포―특이적 아팝토시스-유도용 펩타이드 및 이의 용도 |
| BR112015028710A2 (pt) * | 2013-05-16 | 2017-09-19 | Agency Science Tech & Res | Sulfato de heparan hs8 isolado ou substancialmente purificado, composição farmacêutica ou medicamento, implante biocompatível ou prótese, método de formação de um implante ou prótese biocompatível, método de cultivo de células-tronco, método de enriquecimento para unidades formadoras de colônias, meio de cultura, kit de peças, produtos e método para aumentar a estabilidade de um fator de crescimento |
| KR101831887B1 (ko) * | 2016-03-09 | 2018-02-27 | (주)케어젠 | 발모 촉진 활성 및 멜라닌 생성 촉진 활성을 나타내는 펩타이드 및 이의 용도 |
| KR101895228B1 (ko) * | 2017-08-23 | 2018-10-30 | 대한민국 | 중동호흡기증후군 코로나바이러스의 스파이크 단백질에 대한 단일클론항체 및 이의 용도 |
| KR101916899B1 (ko) * | 2017-08-31 | 2018-11-08 | 한국생명공학연구원 | Sars 관련 코로나바이러스 및 mers 관련 코로나바이러스 동시 검출용 프라이머 및 이를 이용한 검출 방법 |
| KR102019008B1 (ko) | 2019-01-31 | 2019-09-05 | 대한민국(관리부서 질병관리본부장) | 메르스 코로나바이러스 뉴클레오캡시드 융합 단백질을 이용한 메르스 코로나바이러스 검출 방법 |
-
2021
- 2021-07-15 US US18/016,046 patent/US20240051993A1/en active Pending
- 2021-07-15 JP JP2023502628A patent/JP2023534947A/ja active Pending
- 2021-07-15 MX MX2023000267A patent/MX2023000267A/es unknown
- 2021-07-15 WO PCT/KR2021/009080 patent/WO2022015069A1/ko active Application Filing
- 2021-07-15 EP EP21842944.7A patent/EP4183793A4/en active Pending
- 2021-07-15 BR BR112023000503A patent/BR112023000503A2/pt unknown
- 2021-08-20 KR KR1020210109990A patent/KR102628158B1/ko active IP Right Grant
- 2021-08-20 KR KR1020210109989A patent/KR102621336B1/ko active IP Right Grant
- 2021-08-20 KR KR1020210109991A patent/KR102628159B1/ko active IP Right Grant
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20220009925A (ko) | 2022-01-25 |
| EP4183793A1 (en) | 2023-05-24 |
| WO2022015069A1 (ko) | 2022-01-20 |
| BR112023000503A2 (pt) | 2023-01-31 |
| MX2023000267A (es) | 2023-02-13 |
| KR102621336B1 (ko) | 2024-01-08 |
| EP4183793A4 (en) | 2024-05-22 |
| KR102628159B1 (ko) | 2024-01-24 |
| KR20220009926A (ko) | 2022-01-25 |
| KR102628158B1 (ko) | 2024-01-24 |
| KR20220009924A (ko) | 2022-01-25 |
| US20240051993A1 (en) | 2024-02-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Moccia et al. | COVID-19-associated cardiovascular morbidity in older adults: a position paper from the Italian Society of Cardiovascular Researches | |
| Cinatl Jr et al. | Development of antiviral therapy for severe acute respiratory syndrome | |
| IL188460A (en) | Diagnostic methods and preparations for the diagnosis and treatment of influenza | |
| US11052073B1 (en) | Sphingosine kinase 2 inhibitor for treating coronavirus infection | |
| Kooshkaki et al. | Coronavirus disease 2019: a brief review of the clinical manifestations and pathogenesis to the novel management approaches and treatments | |
| Güler et al. | Coronavirus disease 2019 (COVID-19): Biophysical and biochemical aspects of SARS-CoV-2 and general characteristics | |
| KR102628158B1 (ko) | 제2형 중증급성호흡기증후군 코로나바이러스에 중화 활성을 갖는 펩타이드 | |
| US20070099855A1 (en) | Glycyrrhizin or derivatives thereof for for treating or preventing severe acute respiratory syndrome (sars) | |
| JP2013510832A (ja) | Ａ型インフルエンザウイルス感染症の治療または予防用のｐａｒ−１アンタゴニスト | |
| KR102380735B1 (ko) | 제2형 중증급성호흡기증후군 코로나바이러스에 중화 활성을 갖는 펩타이드 | |
| US20100266606A1 (en) | Antibody therapy for highly pathogenic avian influenza virus | |
| US20140378502A1 (en) | Par1 Inhibitors for Use in the Treatment or Prevention of Paramyxoviridae Infections | |
| JP7302795B2 (ja) | コロナウイルスの感染防御方法 | |
| CN116568699A (zh) | 对严重急性呼吸综合征冠状病毒2具有中和活性的肽 | |
| AU2005235339B2 (en) | Treatment of fungal infections | |
| EP1898942B1 (en) | Antiproliferative peptides | |
| US20220184053A1 (en) | Sphingosine kinase 2 inhibitor for treating coronavirus infection in moderately severe patients with pneumonia | |
| US20230181681A1 (en) | Peptide for suppressing coronavirus and use thereof | |
| TW202223393A (zh) | 診斷及治療嚴重特殊傳染性肺炎ｃｏｖｉｄ－１９的組成物及方法 | |
| Shin et al. | In vitro and in vivo validation of the antiviral effect of hCypA against SARS-CoV-2 via binding to the RBD of spike protein | |
| WO2004100974A1 (fr) | Utilisation de la molecule hab18g/cd147 comme cible pour l'elaboration d'antagoniste antiviral, et antagoniste antiviral correspondant |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20230120 |
|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20231228 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20240109 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20240409 |