JP2023529713A - スライドにカバーガラスを装着するシステム及び方法 - Google Patents
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Abstract
スライド上の試料にカバーガラスを装着するシステム及び方法には、カバーガラステープが用いられる。本システム及び方法は、カバーガラス装着のためのキシレン及び他の毒性溶媒の使用を低減又は排除することができる。【選択図】図1
Description
本開示は、分析のためのスライドの作製に関し、より詳細には、スライド上に試料をマウントし、カバーガラスを装着する(coverslipping)ことに関する。
[関連出願の相互参照]
本願は、2020年6月12日に出願された米国仮特許出願第63/038,264号の利益を主張し、その内容の全体が本明細書の一部をなすものとする。
本願は、2020年6月12日に出願された米国仮特許出願第63/038,264号の利益を主張し、その内容の全体が本明細書の一部をなすものとする。
組織学的分析(histological analysis)のための組織試料の作製には、概して、(例えば、ホルマリンを使用した)試料の固定、試料のパラフィンへの包埋(embedding)、包埋された試料のミクロトームによる切片化、及び組織切片のスライド上へのマウントが含まれる。続いて、パラフィンは、通常、溶媒で処理することによって除去され、組織試料は、色素、染色剤又は他の試薬で処理することができる。かかる処理の後、通常、封入剤が試料に適用され、カバーガラスが試料及びスライドに適用される。例えば、液体マウント剤(mountant)が試料上に付着され、カバーガラス(coverslip)が適用され、次いで溶媒が乾燥される。
組織スライドは、通常、キシレン(xylene)ベースの方法又は水性ベースの方法のいずれかを用いてカバーガラスが装着される(coverslipped)。キシレンベースの方法が水性ベースの方法よりも信頼性が高く永続的であると考えられていることから、臨床病理学者は概してキシレンベースの方法を好んでいる。
封入剤は、カバーガラス装着試料を作製する際に、1つ以上の目的を果たしうる。封入剤は、撮像中に試料を定位置に保持するのに役立ち、試料の乾燥を防止しうる。封入剤は、撮像に使用される対物レンズにとって所望の屈折率を有することが望ましい。封入剤はまた、長期保管のために経時的に試料を保存することに寄与しうる。例示的な封入剤は、Agilent Technologies, Inc.製のDako Mounting Mediumである。Dako Mounting Mediumは、トルエン及びキシレンを含有しており、自動ガラスカバースリッパ(automated glass coverslipper)とともに使用するために設計された低粘度の速乾性封入剤である。
液体封入剤を用いたカバーガラス装着(coverslipping)の手法には、幾つかの欠点がある。マウント剤は、スライドの縁部を覆い、自動ハンドリングを妨げる可能性がある。一部の封入剤の分配には、粘性材料の流体処理が必要となり、それによって、配管が詰まり、機器上に残留化学膜が残る可能性がある。ユーザによって手動で装填されたカバーガラスは、詰まったり壊れたりして処理の中断を引き起こす可能性がある。マウント剤の量は、少なすぎると空隙又は気泡が残り、多すぎると側面から滲み出る可能性があるため、非常に重要である。また、適用後に長時間の乾燥ステップが必要となる。
カバーガラス装着に対する別の手法は、マウント剤をコーティングした酢酸セルローステープ(Sakura Tissue Tek, Sakura Finetek Japan Co., Ltd. Tokyo, Japan)を使用するものである。しかしながら、このテープはキシレンを使用して活性化されている。
キシレンが有毒かつ可燃性であると考えられることから、キシレンの使用は、既存の多くのカバーガラス装着のための手法に対して重大な欠点となる。キシレンを使用するカバーガラス装着器具(coverslipping instrumentation)は、換気用の化学的安全フード内に位置決めすべきことが推奨されているため、複雑性が増大し、運用コストが高くなる。キシレンは、欧州連合によって潜在的な発癌物質として指定されており、多くの国の種々の当局において非推奨であることから、カバーガラス装着プロセスからキシレンを排除することが望まれている。
既存の一部の手法の別の欠点は、カバーガラス装着試料中に水の存在が十分に許容されないことである。しかしながら、免疫組織化学(IHC:immunohistochemistry)等の一部の試料処理では、最終染色ステップが水性であるため、カバーガラスを装着する前に試料を溶媒で脱水する必要がある。水中の試料が許容されるカバーガラス装着手法であれば、このステップを排除又は自動化することができるため、有利である。
既存の一部の水性カバーガラス装着法は、カバーガラスがスライドに固定されておらず(付加的な接着ステップを必要とする)、数日間で試料が乾燥し、長期保管に適さないという理由で、臨床使用には信頼性が低いと考えられている。
本開示は、病理試料にカバーガラスを装着する改善されたシステム及び方法を提供する。
本システム及び方法は、既存のシステム及び方法を上回る1つ以上の利点を提供することができ、該利点として、例えば、キシレン及び他の毒性溶媒の低減又は排除と、機械的操作の数を減少させ、液体マウント剤の分配及びカバーガラスのハンドリングを排除することによって、自動カバーガラス装着を簡略化することと、スライド縁部のマウント剤汚損又はコーティングを低減又は排除することによって、カバーガラス装着スライドの自動ハンドリングの信頼性を改善することと、ハンドリング前の溶媒乾燥の必要性を排除することによって、処理速度を改善することと、水性湿潤試料の使用を許容し、又は可能にすることによって、IHC処理を加速することと、が挙げられる。
本方法の一部の実施形態では、接着剤は試料に浸透し、及び/又は試料に結合し(つまり、浸透又は結合あるいはそれらの両方)、それによってより長い保管安定性が得られる。
種々の実施形態について記載する前に、本開示の教示は、記載される特定の実施形態に限定されないことを理解されたい。別段定義されない限り、本明細書において使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示が属する分野の当業者によって一般的に理解される意味を有する。本明細書において参照される全ての特許及び刊行物は、その全体が引用することにより明示的に本明細書の一部をなすものとする。
本明細書において使用される場合、「略(approximately)」及び「約(about)」という用語は、通常の意味に加えて、当業者にとって許容可能な限度又は量内であることを意味する。「約」という用語は、概して、示された数の±15%を指す。例えば、「約10」は、8.5~11.5の範囲を示すことができる。例えば、「略同じ」とは、当業者には比較される事物が同じであるとみなされることを意味する。本開示において、数値範囲には、その範囲を規定する数字が含まれる。記載の値又は記載の範囲内にある値と、他の任意の記載の値又は記載の範囲内にある値との間の各下位範囲も開示されるものとする。記載の範囲が限度値を含む場合、含まれる限度値のいずれか又は双方を除外した範囲も本開示に含まれる。
本明細書において使用される場合、「a」、「an」、及び「the」という用語は、文脈によって別段明記されない限り、単数及び複数の双方の指示対象を含む。したがって、例えば、「a fluid」は、1つの流体及び複数の流体を含む。別段示されない限り、「第1」、「第2」、「第3」という用語、及び他の序数は、本明細書において、本システム及び方法の異なる要素を区別するために使用され、数値的な制限を与えるようには意図されない。第1の層及び第2の層と称する場合、構成要素が2つの層のみを有することを意味するように解釈すべきではない。第1の要素及び第2の要素を有する構成要素は、別段示されない限り、第3の要素、第4の要素、第5の要素(以下略)も含むことができる。
概して、図面及び図面に示された様々な要素は、縮尺どおりに描かれていないことが理解される。さらに、「上」、「下」、「頂」、「底」、「上側」、「下側」、「左」、「右」、「鉛直」、及び「水平」等の相対的な用語は、添付図面に示されうるような様々な要素の互いに対する関係を説明するために使用される。これらの相対的な用語は、図面に示される向きに加えて、装置及び/又は要素(つまり、装置又は要素あるいはそれらの両方)の異なる向きを包含するように意図されることが理解される。例えば、毛細管処理モジュールが図面の視点に対して反転される場合、例えば、別の要素の「上」として記載される要素は、ここではその要素の「下」となる。同様に、装置が図面の視点に対して90度回転される場合、例えば、「鉛直」として記載される要素は、ここでは「水平」となる。
本明細書で使用される場合、「スライド(slide)」とは、生体試料又は化学的試料のための少なくとも1つの実質的に平坦な表面を有する任意の試料ホルダ、支持体又は基材を指す。スライドは、少なくとも1つの試料を支持しうるキャリア、顕微鏡スライド、試験管、チップ、アレイ、又はディスクでありうる。スライドは、通常、第1の主スライド表面及び第2の主スライド表面を有する。主スライド面は、通常、長軸及び短軸、例えば長方形の長軸及び短軸を有する。
試料は、種々の方法でスライド上に配設することができる。一部の実施形態では、試料は、組織又は細胞の層又はスライス等の生体試料である。しばしば、試料は、組織学的分析のための組織切片又は細胞スメア又はペレットである。組織又は他の試料は、ホルムアルデヒド中又はパラフィン等の包埋媒体中で保存することができる。パラフィン又は他の包埋媒体中の試料は、脱パラフィン化(deparaffinization)等のステップに供することができ、それによって、試料を覆い、及び/又は浸潤する(つまり、覆い又は湿潤するあるいはそれらの両方)パラフィン又は他の包埋媒体が除去される。
本発明の方法及びシステムは、カバーガラステープ等のカバーガラスを用いることができ、このテープは、試料用のカバーガラス(coverslip)である。本明細書で使用される場合、用語「テープ(tape)」は、テープ、ストリップ、バンド、パッチ、及び他の比較的平坦な形態を包含する。組織切片にカバーガラスを装着する際に使用する接着剤としては、試料及びスライドへの十分に強力な接着を提供するものが望ましい。
本明細書で使用される場合、「自動」又は「自動化(automated)」とは、機械的デバイス、コンピュータ、及び/又は電子制御(つまり、機械的デバイス、コンピュータ、又は電子制御あるいはそれらの全て)若しくは信号によって実質的に実行される複数のステップを意味するが、説明される特徴又はステップのうちの1つを手動で置換する等、一部の人間の介入ステップを除外するものではない。本明細書で使用される場合、自動カバーガラス装着システムはまた、1つ以上の試料作製ステップを行う自動溶媒交換システム又は他の自動装置を含みうる。
[図示の実施形態の説明]
本開示は、被覆標本スライドを作製する改善された方法及びシステムを提供する。
本開示は、被覆標本スライドを作製する改善された方法及びシステムを提供する。
一部の実施形態では、カバーガラステープ(coverslip tape)は、第1のリール上に提供されるか、又は巻き付けられており、カバーガラステープは、第1のリールからカバーガラス装着領域を横断して第2のリールまで延在するか、又は巻き出される。カバーガラステープは、カバーガラステープの第1の切片がスライドの領域に適用された後に、(第1のリールから一部分を巻き出し、第2のリールに一部分を巻き付けること等によって)カバーガラス装着領域を横切って前進することができる。このようにして、カバーガラステープの第2の切片を次のスライド上に位置決めすることができる。
一部の実施形態では、本開示は、以下の要素、すなわち任意選択のスライドキャリアモジュール200と、任意選択の溶媒交換モジュール500と、カバーガラステープ等のカバーガラスを分配し、それを試料及びスライドに適用し、それを定位置に堅固に押圧するカバーガラス装着モジュール400と、を備えるカバーガラス装着システム100に関する。
スライドにカバーガラスを装着するための例示的な一般的プロセスを図1に示している。設定サブプロセス又は領域において、ユーザは、試料が配設されたスライド10をスライドキャリア20に装填する。ユーザは、スライドキャリア20内にスライド10を提供し、次いで、該スライドキャリア20は、溶媒タンク30内に浸漬されうる。組織切片等の試料12がスライド10上に配設される。スライド10は、試料領域14及びスライドバーコード16を含みうる。1つの実施形態では、溶媒タンクは、水である入力溶媒を収容する。スライドキャリアの一例を図2に示している。スライドキャリア20は、溶媒タンク30に浸漬されうる。スライドキャリアハンドル21は、スライドキャリア20と一体化されうるか、又はスライドキャリア20をロックオン及びロックオフしうる。スライドキャリアハンドル21は、溶媒タンクへのスライドキャリア20の浸漬及び溶媒タンクからのスライドキャリア20の取り出しを容易にする。スライドキャリアハンドル21は、フランジ22を含むことができ、該フランジ22は、スライドキャリアを移動させるロボットアームによって係合されうる。スライド10は、包埋媒体の除去、又は試料から溶媒を除去するため、又は試料に新しい溶媒を適用するため等、1つ以上の目的のために溶媒タンク30に浸漬されうる。一部の実施形態では、溶媒タンク30は、封入剤として好適な予備湿潤(prewet)溶媒を含む。他の実施形態では、溶媒タンク30は、アッセイ溶媒又は水等、マウント以外の目的のための入力溶媒を含み、入力溶媒は、その後、予備湿潤溶媒と交換することができる。所望の期間の後、スライドキャリア20は、溶媒タンク30から取り出され、スライドキャリアモジュール200に配置され、カバーガラス装着モジュールへと移動する。設定中に、ユーザはまた、スライド10に適用されるカバーガラステープの長さ等のカバーガラス装着のためのプロトコルを入力する。図3A及び図3Bは、スライドキャリアモジュール200によりスライドキャリア20が溶媒タンクから取り出され、各スライド10がカバーガラス装着モジュール400に順次移送される様子を示している。スライド10は、スライドキャリアモジュール200内に垂直に保持される。スライドリムーバは、単一のスライド10の短辺に係合し、スライド10を上方に押し上げてスライドキャリア20から出すことができるようなサイズである。手順の前述の部分のうちの1つ以上は、ユーザによって行われるのではなく、自動化されてもよいことが理解されるであろう。
カバーガラス装着サブプロセス又は領域において、スライド10は、スライドキャリア20から取り出され、処理のために支持体に移送される。支持体は、溶媒交換モジュール及び/又はカバーガラス装着モジュール(つまり、溶媒交換モジュール又はカバーガラス装着モジュールあるいはそれらの両方)の一部であってもよく、これらは以下でより詳細に説明される。一部の実施形態では、スライド10は、カバーガラステープが適用される前に溶媒交換に供される。他の実施形態では、スライド10は既にカバーガラス装着のために好適となっている。カバーガラスがスライドに適用された後、カバーガラス装着スライドは、スライドキャリア20(以前と同じスライドキャリア又は異なるスライドキャリアでありうる)内に配置される。手順の前述の部分のうちの1つ以上は、自動化されうるか、又はユーザによって行われうることが理解されるであろう。
図4A~図4Eは、カバーガラス装着モジュール400の例示的な実施形態を示している。スライドは、図4及び図5Aに示すように、カバーガラス装着モジュール400内のスライドマウントテーブル402上に位置決めされる。概して、スライドは、その長軸が、スライドマウントテーブル402が移動する方向、及び/又はカバーガラステープディスペンサがスライドマウントテーブルに対して移動する方向(つまり、スライドマウントテーブル402が移動する方向又はカバーガラステープディスペンサがスライドマウントテーブルに対して移動する方向あるいはそれらの両方)と整合するように位置決めされる。スライドマウントテーブル402は、手動又は自動動作によって移動させることができる。例えば、スライドマウントテーブル402は、リニアステージ403に取り付けることができ、該リニアステージ403は、自動化された直線運動を提供する。一部の実施形態では、スライドは、その長軸が、カバーガラステープがリールから巻き出される方向と整列するように位置決めされる。カバーガラス装着モジュール400は、カバーガラステープディスペンサアセンブリ404を含んでおり、該カバーガラステープディスペンサアセンブリ404は、カバーガラステープの供給源が巻き付けられたリール406を備える。剥離ライナモータ(release liner motor)は、剥離ライナアセンブリ408上の剥離ライナを転がして、ソーステープアセンブリ416内のソーステープ410を、カバーガラステープディスペンサアセンブリ418を通して引き出す。剥離ライナ412は、押出スロット420を通過し、押出ガイド422上を通過する剥離されたテープ414から分離される。剥離されたテープが位置センサ424をトリガすると、剥離ライナモータが停止する。
一部の実施形態では、本システムは、圧力を印加し、スライド上にカバーガラステープを積層するためのラミネータアセンブリ430を備える。ラミネータアセンブリ430は、所望の又は所定の圧力及び/又は速度(つまり、圧力又は速度あるいはそれらの両方)でカバーガラステープを水平方向に転がすラミネータローラ434を含みうる。ラミネータアセンブリ430はまた、ラミネータローラ434をスライドマウントテーブル402に対して垂直に移動させるため、及び/又はカバーガラステープ414に印加される圧力を増加又は減少させるため(つまり、ラミネータローラ434をスライドマウントテーブル402に対して垂直に移動させるため又はカバーガラステープ414に印加される圧力を増加又は減少させるためあるいはそれらの両方)のラミネータアクチュエータ432を含みうる。一部の実施形態では、スライドマウントテーブル402は、スライド10の長軸に沿った水平移動のために構成されている。かかる移動は、ステージによって提供されうる。図4C~図4Eの例示的な実施形態に示すように、スライドマウントテーブル402は、ラミネータ開始位置436に移動され、ラミネータアクチュエータ432は、スライド10がラミネータアクチュエータ432によって位置決めされると、ラミネータローラ434を使用してスライド10上に剥離されたテープ414を押圧する。十分な長さのカバーガラステープ414がスライド10に適用された後、適用されたカバーガラステープは、ソーステープから切断されうる。図4Dの例示的な実施形態に示すように、ナイフアクチュエータ442は、切断スロット446を通してナイフ444を延伸させて、剥離されたテープ414が適切な長さに切断されるようにする。リニアステージは、ラミネータ開始位置436からラミネータ終了位置438まで制御された速度で移動して、剥離されたカバーガラステープ414をスライド10上に押圧する。
カバーガラス装着モジュール400は、ラミネータローラ434がスライドと同一平面上にあるように構成されている。ラミネータの力及びラミネーション速度もまた、カバーガラス装着モジュール400によって制御される。一部の実施形態では、10ニュートン/インチ~300ニュートン/インチのローララミネータ力、又はスライドに接触するローラの150ニュートン/インチ~250ニュートン/インチの力が好適であることが分かっている。一部の実施形態では、ASTM D2240タイプA又はタイプDスケールによって決定されるように、10~80、特に20~30のショアデュロメータ硬度を有するラミネータローラが有用であった。一部の実施形態では、0.01mm/秒~10mm/秒、特に0.1mm/秒~0.5mm/秒の積層速度(lamination speed)が有用であった。ラミネータ開始位置とラミネータ終了位置との間でスライドマウントテーブルが複数回の移動するため、スライドへのカバーガラステープの積層は、複数回のパスで行うことができる。一部の実施形態では、1回~10回の積層パス、又は2回~4回の積層パスが好適であることが分かっている。
積層が完了した後、ラミネータアクチュエータ432はラミネータローラ434を後退させ、リニアステージ403はスライドマウントテーブルを抜き取り位置(unload position)に移動させる。スライドキャリアモジュールは、スライドをスライドキャリア(通常は出力スライドキャリア)に移送する。
本方法の一部の実施形態では、カバーガラステープを適用する前に試料上の溶媒を交換することが望ましい場合がある。図5は、溶媒交換(すなわち、本発明のカバーガラス装着法において望ましくない溶媒を除去し、所望の溶媒を適用する)のための例示的な新規の溶媒交換モジュール500を示している。例えば、望ましくない溶媒とは、色素を試料に適用するために使用される入力溶媒とすることができ、予備湿潤溶媒が封入剤と適合するように選択されてもよい。従来の手法では、予備湿潤溶媒としてキシレンが使用されるが、上述したように、キシレンは望ましいものではない。他の有用な予備湿潤溶媒としては、水、ヘキサン、エタノール、イソプロピルアルコール、Clearify(登録商標)及び他の溶媒が挙げられる。また、これらの溶媒の混合物、並びに界面活性剤及びプロピレングリコールを含む湿潤を増強するための他の物質の添加も有用であった。入力溶媒(試料を処理するために溶媒タンク内で使用される溶媒でありうる)が予備湿潤溶媒として適切でない場合、入力溶媒を予備湿潤溶媒に変更するためのプロセス経路を提供する溶媒交換モジュール500を本システムに含めることができる。再現可能かつ完全な溶媒交換を確実にするために、1つ又は複数の中間溶媒を連続的に使用することが有用でありうる。
例示的な実施形態では、図5に示すように、スライド10は、支持体上に配設され、この支持体は、この場合、スライド10から除去される溶媒を収集する溶媒戻り部550(例えば、真空チャック)である。吸引を行うために、真空チャック又は他の溶媒戻り部550は、溶媒トラップ552を通して溶媒戻りポンプ551に接続されうる。真空チャック550は、スライドマウントテーブル上に配設されうるか、又はスライドマウントテーブルと一体化されうる。図5において、スライドマウントテーブルは、第1のエアナイフ510から始まり、第1の溶媒源522から第1の溶媒を分配する第1のディスペンサ520、第2のエアナイフ530、及び第2の溶媒源542から第2の溶媒を分配する第2のディスペンサ540へと移動する。第1のエアナイフ510及び第2のエアナイフ530は、流量計511、531に流体接続され、該流量計511、531は、エアナイフ510、530に供給されるガスを制御、決定、又は測定する。流量計511、531は、空気供給源514又は他のガス源から空気又は他のガスを受け取り、これらは、エアナイフ510、530に直接、又は圧力調節器513、空気流弁512、及び流量計511、531等の1つ以上の他のデバイスを介して接続することができる。
本方法の1つの実施形態では、スライド上の入力溶媒は、水であり、溶媒交換モジュール500を通過する。該溶媒交換モジュール500では、アルコール溶媒が使用される。このアルコール溶媒は、エタノール含有溶媒、例えば、100%エタノール、又は少なくとも92%エタノール若しくは少なくとも96%エタノールを含有する水溶液でありうる。一部の実施形態では、第1の溶媒源522、第1のエアナイフ510、及び第1のディスペンサ520のみが使用され、アルコール溶媒は、予備湿潤溶媒として機能する。付加的なエアナイフ、ディスペンサ、及び溶媒が溶媒交換モジュールに付加されうることも企図される。溶媒ディスペンサは、当業者に知られているような種々の形状を有する噴霧器、ブラシ、スタンプ、又はドリップチューブでありうる。
図6は、噴霧器602が第1のディスペンサとして使用される溶媒交換モジュール600の別の例示的な実施形態を示している。スライド10は、支持体604上に配設されており、空気流606は、第1のエアナイフ608によってスライド10の先端に方向付けられ、入力溶媒610をスライド10の後端に蓄積させる。噴霧器602は、スライド10が支持体604内の真空チャックによって左から右に移動されるときに、スライド10の先端上に予備湿潤溶媒612を噴霧する。
図7Aは、溶媒交換ヘッドが交換液を分配し、試料から水又は他の望ましくない溶媒を除去する溶媒交換モジュール700の別の実施形態を示している。キャピラリ力(capillary force)により、スライドと溶媒交換ヘッドとによって形成されるキャピラリ間隙内に分配された交換液が保持され、溶媒がスライドから流れ落ちることが防止される。図7Aに示す実施形態では、スライド10と溶媒交換ヘッド702との間にキャピラリ間隙が形成される。溶媒交換ヘッド702は、少なくとも1つの分配孔及び少なくとも1つの排出孔を備えており、それを通して交換液をスライド10上に分配することができ、かつ排出液をスライドから除去することができる。溶媒交換モジュール700は、スライド10から距離をおいて溶媒交換ヘッド702を位置決めするように構成され、その距離は、スライドと溶媒交換ヘッド702の溶媒交換面との間にキャピラリ間隙を形成するために十分に小さい。例えば、この距離は、1600μm未満、又は800μm未満、又は400μm未満、又は200μm未満、又は100μm未満、又は50μm未満でありうる。一部の実施形態では、溶媒交換ヘッド702は、溶媒交換ヘッドの中央に分配孔と、スライドの縁部付近の溶媒交換ヘッドの各端部に1つずつ、2つの排出孔とを備える。一部の実施形態では、交換溶媒が溶媒交換ヘッドの下に維持されるように、排出孔(複数の場合もある)は分配孔(複数の場合もある)よりも大きい。溶媒交換ヘッド702は、交換液がスライドの試料及び染色領域の実質的に全体にわたって流れるように、スライド10に沿って一方向又は前後に1回以上移動させることができる。例えば、溶媒交換ヘッドは、試料を少なくとも1回、2回、3回、4回、5回、又はそれ以上通過することができる。複数回の往復運動により、溶媒交換の効率を増加させることができる。分配孔及び排出孔(複数の場合もある)を通る液体流の速度は、キャピラリ間隙内に液体の層流を提供するように選択すべきである。例えば、一部の実施形態では、排出孔(複数の場合もある)を通る流量は、分配孔を通る流量が2.4mL/s超であるとき、2.6mL/s未満でありうる(又は2つの排出孔のそれぞれを1.3mL/s超の流量が通る)。流量は、分配ライン及び戻りラインに接続されたポンプによって設定することができる。染色面積を最大化するために、ヘッドは、スライド縁部まで移動できる必要があるが、漏出を防止するために縁部を越えて延在してはならない。
交換溶媒(エタノール等)を含む交換液が、リザーバ704からの分配ライン706からスライド10上に分配され、排出液がスライドから除去され、戻りライン708、710を通ってリザーバ704に戻される。分配ライン706及び戻りライン708、710を通る液体の流れは、ポンプ707、709、711によって提供される。交換溶媒は、キャピラリ力によって溶媒交換ヘッド702の下に維持され、装置の設計により、スライド上面からの漏出又はウィッキング(wicking)が制限される。スライド上に残留する交換溶媒の量は、溶媒交換ヘッド702の下のスライドの最終通過中に制御することができ、これにより、スライドのカバーガラス装着においてより安定した結果が得られる。一部の実施形態では、エタノール等の交換溶媒からのガスは、石炭フィルタ712を有するヒュームフード(hume hood)713を使用すること等によって収集され、これによりガスが所望のレベル未満に保たれ、安全性が確保される。交換溶媒の大部分がスライド10を通過し、望ましくない溶媒とともに排出孔を通って除去され、次にリザーバ704に戻される。結果として、リザーバ内の交換液は、より多くのスライドが溶媒交換ヘッド702によって処理されるにつれて希釈され、最終的に、リザーバ704内の交換液は、ユーザによって補充されなければならない。例えば、リザーバ内の交換液は、最初に、エタノール等の交換溶媒の96%v/vの濃度を有していてもよく、ユーザは、交換溶媒の濃度が90%v/v又は別の所定の限界に到達した際にリザーバを交換又は補充してもよい。リザーバ704内の交換溶媒を希釈する水を減らすために、ユーザは、本溶媒交換方法が使用される前に、スライド上の水を除去するための付加的なステップを行ってもよい。
図7Bは、図7Aの装置における溶媒交換ヘッド702を示している。一部の実施形態では、溶媒交換ヘッド702は、スライドの幅と実質的に同じ幅を有する。溶媒交換ヘッド702は、1つの中央分配孔714及び2つの排出孔716、717を有し、キャピラリ間隙への流れ抵抗を低減し、ヘッドの下の容積の交換時間を短縮する。しかしながら、好適な溶媒交換ヘッドは、任意の所望の数、例えば、1つ、2つ、3つ、4つ、5つ、6つ又はそれ以上の分配孔及び排出孔を備えうる。交換液及び除去液の流れは、1つ以上のポンプによって制御することができる。一部の実施形態では、溶媒交換モジュールは、分配ライン及び戻りラインのそれぞれのための別個のポンプを備え、代替として、一部の実施形態では、モジュールは、分配ラインのためのものと、戻りラインのための1つのポンプとを備える。図7Bにおいて、排出孔716、717は、排出孔の周りに隆起表面718、719を有すること等によって、分配孔714の周りの領域よりも小さいキャピラリ間隙を有する領域に位置決めされる。
図8は、上述したスライド装填、溶媒交換、カバーガラス装着、及びスライド抜き取りのアクティビティ及びモジュールを実装する、被覆試料スライドを作製するための全体的な機器プロトコルの例示的な実施形態を示している。より一般的には、図8は、被覆試料スライドを作製する本方法の種々の実施形態を示している。スライドを処理するための命令を含む1つ以上のサブルーチンが、コントローラに入力される。試料を有するスライドがスライドキャリア内に提供され、スライドキャリアは、溶媒交換モジュール及びカバーガラス装着モジュールを備えた機器に装填される。アクチュエータは、スライドキャリアからスライドを選択する。機器内のバーコードリーダがスライドを識別し、識別情報がコントローラに伝達され、コントローラは、スライドを処理用の場所に方向付ける信号を提供する。そのスライドに対する指示が溶媒除去を必要とする場合、スライドは、図5、図6又は図7Aによるモジュール等の溶媒除去モジュールに移動される。スライドは、ステージ又はコンベヤ等の支持体上に配置され、該支持体は、1つの軸に沿って、好ましくはその長軸に沿ってスライドを移動させる。エアナイフを作動させて、スライド上の入力溶媒が除去される。一部の実施形態では、モジュールはまた、予備湿潤溶媒等の溶媒を適用するための溶媒ディスペンサを含む。スライドは、カバーガラス装着モジュールに移動させることができる。一部の実施形態では、同じ支持体(ステージ等)が溶媒交換モジュールからカバーガラス装着モジュールに移動する。カバーガラステープは、ディスペンサアセンブリから押し出され、ステージは、スライドの後端がカバーガラステープの先端の下にあるようにスライドを位置決めする。ステージ及び/又はディスペンサアセンブリ(つまり、ステージ又はディスペンサアセンブリあるいはそれらの両方)は、スライドの長軸の方向(カバーガラステープを押し出す方向と実質的に同じであることが好ましい)に直線的に移動する。ラミネータアセンブリは、ラミネータ(ローラ等)を延伸させる。カバーガラステープを好適な長さに切断して、スライド上の試料が被覆される。ラミネータは、カバーガラステープに圧力を印加し、カバーガラステープをスライドに付着させる。ラミネータアセンブリは、ラミネータを後退させる。次に、ステージはスライドを抜き取り位置(unloading location)に移動させ、そこでアクチュエータがスライドを取り出し、スライドを出力スライドキャリア内に配置する。
本システム及び方法において、清浄なカバーガラステープを任意の形態で使用するために提供することができる。一部の実施形態では、清浄なカバーガラステープは、カバーガラスソーステープとして提供され、カバーガラス装着ソーステープは、カバーガラステープを清浄に保つため、及び/又はスライドへのその適用を容易にするため(つまり、カバーガラステープを清浄に保つため又はスライドへのその適用を容易にするためあるいはそれらの両方)の1つ以上の特徴を有する。カバーガラスソーステープ902の例示的な構成を図9に示している。カバーガラスソーステープ902は、概して、裏材層904及び接着層906を備える。一部の構成では、カバーガラスソーステープ902はまた、剥離層908を備える。剥離層908は、カバーガラスソーステープ902がリールに巻き付けて提供される場合に特に望ましい。
一部の実施形態では、カバーガラスソーステープは、キスカット(kiss cut)部分を備え、該キスカット部分は、カバーガラステープとして使用される部分の境界内に軽切削部(light cut)を含む。カバーガラスがキスカットで作製される場合、それらは裏材から剥がすことができる。複数のキスカット部分を剥離層等のストリップ上に直線的に位置決めすることができる。
図10、図11A及び図11B、図12及び図13は、有利でありうる種々のカバーガラスソーステープの例示的な実施形態を示している。図10では、カバーガラスソーステープ1002は、テープディスペンサアセンブリを通して引き出される剥離ライナ1004を含み、剥離されたテープ1006は、ガイド表面1008上に押し出され、ナイフ1010で切断される。図11A及び図11Bにおいて、キスカットソーステープ1102は、1組のキスカットカバーガラス1104から構成され、光学的に透明な裏材及び感圧接着剤を有する一連のキスカット領域として、連続剥離ライナ1106上に設けられている。キスカットカバーガラスソーステープ1102は、一連のキスカットカバーガラス1104が剥離ライナ1106の長さに沿って均一に位置決めされるように作製されている。テープディスペンサアセンブリ1108は、移動制御のための位置センサを使用して、右側に示すように各キスカットカバーガラスを押し出す。図12において、フレームカットされたカバーガラスソーステープ1202は、カバーガラス1206を画定するための穿孔1204を有しており、テープリールを使用してテープをスライド上で前進させる。環状パンチ1208は、フレームカットされたカバーガラス1206を剥離し、カバーガラス1206をスライドに取り付ける。テープの残りの部分(穿孔(perforate)されたカバーガラスが剥離された後)は、テープリール1210上に収集することができる。図13では、カバーガラスソーステープ1302は、剥離ライナを有していない。テープ駆動機構1304は、ナイフ1306によって切断された各長さのテープを押し出して、各スライド10に適用する。その他、バーコードリーダ、エアナイフ、カバーガラステープディスペンサ、ラミネータ、及びカバーガラステープカッタ又はナイフ等の上述したような構成要素がある。
スライド処理に対する一部の従来の手法では、水中のスライドが一連のアルコール浴(alcohol bath)に浸漬され、キシレン浴(xylene bath)への浸漬の前の確実な脱水が行われる。したがって、本システムの一部の例示的な実施形態では、図14に示すように、自動バスケットムーバは、70%エタノール、95%エタノール、100%エタノール、及びClearify(登録商標)を含むスライド浴等の一連のスライド浴又はタンク間でスライドキャリアを移動させる。図14はまた、本明細書に記載されるスライド作製システムの一実施形態内の配置を示している。図15に示されるスライド作製システムの第2の構成では、スライドマウントテーブルにより、エアナイフと溶媒ディスペンサとの間でスライドが移動する。
一部の実施形態では、本システムは、スライドキャリアのための保管ユニットを備える。例えば、システムは、1つ、2つ、3つ、4つ、5つ、又はそれ以上のスライドキャリアのための入力保管部及び出力保管部を備えてもよい。一部の実施形態では、本システムを用いて、スライドキャリアからスライドが回収され、必要に応じてスライドが処理され、同じスライドキャリアにスライドが戻される。例として、処理には、最初に溶媒交換を行い、次にカバーガラスを装着し、次にスライドを回収されたスライドキャリアに戻すことが含まれうる。これにより、処理されたスライドを受け取る新しいスライドキャリアが不要となるため、機器が簡素化され、それにより、スライドキャリアのハンドリングが少なくなり、機器内部でのバスケットのハンドリングが減少する。例えば、一部の実施形態では、バスケットは、水中で装填され、スライド処理が開始するときに水から取り出される。一部の実施形態では、スライド処理は、組織試料の乾燥から生じるアーチファクトが低減又は排除されている時間内に完了することができる。例えば、一部の実施形態では、スライド処理は約15秒で完了し、20枚のスライドを有するバスケットが5分で処理することができる。これにより、スライドが水から出る最長時間は4分45秒であるため、組織試料の乾燥から生じるアーチファクトを低減又は排除することができる。一部の実施形態では、溶媒交換プロセスは、約5秒以下で完了する。一部の実施形態では、カバーガラス装着プロセスは、約5秒以下で完了する。一部の実施形態では、スライドをスライドキャリアに戻すプロセスは、約5秒以下で完了する。
一部の実施形態では、本システムは、インサイチュハイブリダイゼーション(in situ hybridization)等の免疫組織化学アッセイ(immunohistochemistry assay)以外のアッセイに供されたスライドの自動カバーガラス装着のために使用することができる。かかる実施形態では、システムは、スライドキャリアをドライ装填するオプションと、交換溶媒を適用する代わりにアッセイ用の封入剤(mounting medium)(例えば、FISH封入剤)を適用するディスペンサとを含む。
[材料]
一部の実施形態では、カバーガラステープは、3M(商標)Microfluidic Diagnostic Tape 9795R又は他の透明接着テープ等の材料から作製することができる。一部の実施形態では、カバーガラステープは片面である(すなわち、片面のみに接着剤が配設されている)。一部の実施形態では、カバーガラステープは、遅延粘着性接着剤を含む。カバーガラステープは、50ミクロン~500ミクロン、好ましくは100ミクロン~300ミクロンの厚さを有しうる。接着剤の厚さは、5ミクロン~200ミクロン、好ましくは15ミクロン~30ミクロンでありうる。
一部の実施形態では、カバーガラステープは、3M(商標)Microfluidic Diagnostic Tape 9795R又は他の透明接着テープ等の材料から作製することができる。一部の実施形態では、カバーガラステープは片面である(すなわち、片面のみに接着剤が配設されている)。一部の実施形態では、カバーガラステープは、遅延粘着性接着剤を含む。カバーガラステープは、50ミクロン~500ミクロン、好ましくは100ミクロン~300ミクロンの厚さを有しうる。接着剤の厚さは、5ミクロン~200ミクロン、好ましくは15ミクロン~30ミクロンでありうる。
カバーガラステープは感圧接着剤を含み、これは、一部の実施形態では、複数のシリコーン系及びアクリル系配合物から選択することができる。現在、3M Company(ミネソタ州メープルウッド)、Polymer Science, Inc.(インディアナ州モンティチェロ)、及びAdhesives Research, Inc.(ペンシルベニア州グレンロック)等の企業によって、消費者用電子機器ディスプレイ及び他の用途のための透明かつ光学的に透明な裏材材料及び接着剤が製造されている。好適な接着剤の例としては、アクリロニトリルコポリマー(例えば、ブタジエン-アクリロニトリルポリマー(BACNポリマー)、ブタジエン-アクリロニトリル-イソプレンポリマー(BACNIポリマー))、スチレンコポリマー(例えば、スチレン/ブタジエン/スチレン(SBSポリマー)、スチレン/イソプレン/スチレン(SISポリマー)、及びスチレン/エチレン/ブチレン/スチレン(SEBSポリマー))、並びにアクリレートコポリマー等の低粘着性感圧接着剤が挙げられる。所望であれば、ポリマー材料のブレンド及び混合物を使用してもよい。感圧接着剤はまた、十分な酸化防止剤、UV安定剤及び架橋剤を含有していてもよい。
カバーガラステープはまた、通常光学的に透明なポリマーフィルムである裏材を含む。好適なポリマーフィルム材料としては、二酢酸セルロース、三酢酸セルロース、ポリエチレンテレフタレート、スチレン-アクリロニトリル、及びポリメチルメタクリレートフィルムが挙げられる。一部の実施形態では、裏材は、環状オレフィンポリマー又は環状オレフィンコポリマーである。一部の実施形態では、裏材は、50ミクロン~300ミクロンの厚さを有する。一部の実施形態では、カバーガラステープはまた、ポリマーフィルムと感圧接着剤との間に結合層を含みうる。適切な結合層材料の選択は、使用される感圧接着剤及び裏材のタイプに基づいて行うことができる。結合層として有用であることが知られている多くの材料が有用であり、例えば、ポリ塩化ビニル、塩化ビニル/酢酸ビニルコポリマー、ポリ塩化ビニリデンのような塩素含有ポリマー、ポリカルボジイミド及びエチレン酢酸ビニルポリマー及びコポリマー、酸又は無水物変性ポリエチレン、プロピレン及びエチレン酢酸ビニルポリマー及びコポリマーを使用することができる。
[パラメータ]
一部の実施形態では、カバーガラステープ全体及び/又はその個々の構成要素(つまり、カバーガラステープ全体又はその個々の構成要素あるいはそれらの両方)の屈折率は、1~2、又は1.2~1.8、又は1.45~1.65でありうる。一部の実施形態では、屈折率は、スライドの屈折率と実質的に整合するように選択される。
一部の実施形態では、カバーガラステープ全体及び/又はその個々の構成要素(つまり、カバーガラステープ全体又はその個々の構成要素あるいはそれらの両方)の屈折率は、1~2、又は1.2~1.8、又は1.45~1.65でありうる。一部の実施形態では、屈折率は、スライドの屈折率と実質的に整合するように選択される。
一部の実施形態では、カバーガラステープの光の視感透過率(ASTM D1003-95に従って決定される)は、少なくとも約85%又は少なくとも75%である。
一部の実施形態では、接着剤は、約0.1N/25mm幅~約3.0N/25mm幅の180°剥離接着力値を示しうる。
一部の実施形態では、接着剤は、少なくとも約2kN/m2、又は少なくとも約4kN/m2の動的せん断強度を示しうる。
[カバーガラス装着の前後における試料の作製方法]
本方法は、分析用の試料を作製するため、及び/又は処理後の試料を安定化させるため(つまり、分析用の試料を作製するため又は処理後の試料を安定化させるためあるいはそれらの両方)に、カバーガラス装着の前又は後に付加的なステップを含みうる。概して、試料は、任意の好適な技術によって、分析及び/又は保管(つまり、分析又は保管あるいはそれらの両方)のために作製されうる。一部の実施形態では、試料は、包埋媒体を有しており、これは、スライド上に配置された後に除去される。包埋媒体を除去するためのステップ(複数の場合もある)は、FFPEブロックからの組織切片等のほとんどの試料がパラフィンに包埋されていることから、概して脱パラフィン化(deparaffinization)と称される。脱パラフィン化は、スライド上の試料から包埋媒体を除去する任意の技術の代表例である。組織化学的分析のために、一部の実施形態では、標的回収プロセスは、試料を、高pH又は低pHに調整されたMES緩衝液又はクエン酸緩衝液等の好適な緩衝液と接触させ、好適な温度(約95℃)以上に加熱することによって行われる。これは、熱誘導エピトープ回復(HIER:heat-induced epitope retrieval)と称される。或いは、試料は、ペプシン、プロテイナーゼK若しくは別の消化酵素を適用することによるタンパク質分解消化、又はギ酸等の酸による酸ベースの抗原回復のいずれかに供され、その後、抗体等のアッセイ試薬によるアクセスを容易にするためにそれをインキュベートすることができる。本発明の方法及びシステムはまた、カバーガラステープを適用する前に、試料に対するin situハイブリダイゼーション(ISH:in-situ hybridization)ベースのアッセイを使用して分子分析を行うための1つ以上のプロセスを含みうる。ISHは、緩衝液の存在下での加熱による核酸の変性(denaturation)、及び蛍光in situハイブリダイゼーション(FISH:fluorescence in-situ hybridization)のための蛍光標識核酸プローブのハイブリダイゼーション、又は発色in situハイブリダイゼーション(CISH:chromogenic in-situ hybridization)のための色素原の適用を必要とする。ISH試料は、封入剤及びカバーガラスの適用前に乾燥される。
本方法は、分析用の試料を作製するため、及び/又は処理後の試料を安定化させるため(つまり、分析用の試料を作製するため又は処理後の試料を安定化させるためあるいはそれらの両方)に、カバーガラス装着の前又は後に付加的なステップを含みうる。概して、試料は、任意の好適な技術によって、分析及び/又は保管(つまり、分析又は保管あるいはそれらの両方)のために作製されうる。一部の実施形態では、試料は、包埋媒体を有しており、これは、スライド上に配置された後に除去される。包埋媒体を除去するためのステップ(複数の場合もある)は、FFPEブロックからの組織切片等のほとんどの試料がパラフィンに包埋されていることから、概して脱パラフィン化(deparaffinization)と称される。脱パラフィン化は、スライド上の試料から包埋媒体を除去する任意の技術の代表例である。組織化学的分析のために、一部の実施形態では、標的回収プロセスは、試料を、高pH又は低pHに調整されたMES緩衝液又はクエン酸緩衝液等の好適な緩衝液と接触させ、好適な温度(約95℃)以上に加熱することによって行われる。これは、熱誘導エピトープ回復(HIER:heat-induced epitope retrieval)と称される。或いは、試料は、ペプシン、プロテイナーゼK若しくは別の消化酵素を適用することによるタンパク質分解消化、又はギ酸等の酸による酸ベースの抗原回復のいずれかに供され、その後、抗体等のアッセイ試薬によるアクセスを容易にするためにそれをインキュベートすることができる。本発明の方法及びシステムはまた、カバーガラステープを適用する前に、試料に対するin situハイブリダイゼーション(ISH:in-situ hybridization)ベースのアッセイを使用して分子分析を行うための1つ以上のプロセスを含みうる。ISHは、緩衝液の存在下での加熱による核酸の変性(denaturation)、及び蛍光in situハイブリダイゼーション(FISH:fluorescence in-situ hybridization)のための蛍光標識核酸プローブのハイブリダイゼーション、又は発色in situハイブリダイゼーション(CISH:chromogenic in-situ hybridization)のための色素原の適用を必要とする。ISH試料は、封入剤及びカバーガラスの適用前に乾燥される。
以下の実施例は、本開示を例示するものであり、決して本開示を限定するものと見なされるべきではない。
[実施例1]
本実施例では、感圧接着剤(3M9795R)を含む透明テープを、カバーガラステープとして使用するための適合性について評価した。子宮組織をホルマリン固定パラフィン包埋(FFPE:formalin fixation and paraffin embedding)のために処理し、5μm切片に切断し、スライド上にマウントした。切片試料を脱脂し、ヘマトキシリン及びエオシンを用いて染色し、エタノールで脱水し、次いで予備湿潤溶媒としてのClearify(登録商標)に浸漬した。
本実施例では、感圧接着剤(3M9795R)を含む透明テープを、カバーガラステープとして使用するための適合性について評価した。子宮組織をホルマリン固定パラフィン包埋(FFPE:formalin fixation and paraffin embedding)のために処理し、5μm切片に切断し、スライド上にマウントした。切片試料を脱脂し、ヘマトキシリン及びエオシンを用いて染色し、エタノールで脱水し、次いで予備湿潤溶媒としてのClearify(登録商標)に浸漬した。
3M Company(ミネソタ州メープルウッド)製のテープ3M9795Rには、剥離ライナを有するシリコーン接着剤でコーティングされた透明ポリプロピレン裏材が含まれる。24mm幅のテープのロールを、図4Aに示すようなカバーガラス装着モジュール上に装填した。カバーガラス装着モジュールは、図10に示すように、接着テープを分配するように構成された。スライドをClearify(登録商標)予備湿潤溶媒浴から手動で取り出し、スライドテーブル402上に置き、コンピュータを使用して装置を作動させた。カバーガラステープを各スライドに適用し、続いて積層した。ラミネータアクチュエータ圧力は80psiであり、リニアステージ速度は10mm/sであった。カバーガラス装着試料の走査画像の例を図16に示している。
[実施例2]
本実施例では、本発明のカバーガラステープが標本及びスライドに付着した後に、本発明のカバーガラステープを除去する能力を評価する。実施例1の試料の一部を用いて、適用後にカバーガラスを除去する試みを行った。カバーガラステープは、3分後に第1の試料から容易に剥がされ、無傷の組織試料、並びにClearify(登録商標)で洗い流すことができる軟質接着剤の残留物が残った。第2の試料については、カバーガラステープを1週間後に剥がしたところ、組織試料の多くがスライドから浮き上がっていた。第3の試料については、カバーガラステープを60℃で1ヶ月保管した後に剥がしたところ、試料はスライドから完全に浮き上がっていた。Clearify(登録商標)等の溶媒は、接着剤と相互作用し、接着剤を軟化させ、接着剤を組織内に膨潤させると考えられる。時間の経過とともにClearify(登録商標)は蒸発し、組織は接着剤で充填された状態になる。
本実施例では、本発明のカバーガラステープが標本及びスライドに付着した後に、本発明のカバーガラステープを除去する能力を評価する。実施例1の試料の一部を用いて、適用後にカバーガラスを除去する試みを行った。カバーガラステープは、3分後に第1の試料から容易に剥がされ、無傷の組織試料、並びにClearify(登録商標)で洗い流すことができる軟質接着剤の残留物が残った。第2の試料については、カバーガラステープを1週間後に剥がしたところ、組織試料の多くがスライドから浮き上がっていた。第3の試料については、カバーガラステープを60℃で1ヶ月保管した後に剥がしたところ、試料はスライドから完全に浮き上がっていた。Clearify(登録商標)等の溶媒は、接着剤と相互作用し、接着剤を軟化させ、接着剤を組織内に膨潤させると考えられる。時間の経過とともにClearify(登録商標)は蒸発し、組織は接着剤で充填された状態になる。
[実施例3]
本実施例では、加速エージングプロトコルを使用して、実施例1で作製したカバーガラス装着試料スライドを評価した。カバーガラス装着試料スライドを60℃で数週間保管して、2.3年、3.3年、及び4.3年にわたる色素の潜在的な退色を評価した。図16は、種々の時点でのカバーガラス装着試料の画像を提供している。Ultramountカバーガラス装着を用いたカバーガラス装着試料では、ヘマトキシリン色素の退色が見られたが、3M9795Rカバーガラス装着試料は、比較的安定であった。
本実施例では、加速エージングプロトコルを使用して、実施例1で作製したカバーガラス装着試料スライドを評価した。カバーガラス装着試料スライドを60℃で数週間保管して、2.3年、3.3年、及び4.3年にわたる色素の潜在的な退色を評価した。図16は、種々の時点でのカバーガラス装着試料の画像を提供している。Ultramountカバーガラス装着を用いたカバーガラス装着試料では、ヘマトキシリン色素の退色が見られたが、3M9795Rカバーガラス装着試料は、比較的安定であった。
[実施例4]
本実施例では、アルコール予備湿潤溶媒を用いて本発明のカバーガラス装着技術を評価する。実施例1と同様に、子宮組織の試料をスライド上に置き、ヘマトキシリンで染色し、実施例1に記載したように、カバーガラス装着モジュールを用いて3M9795Rによりカバーガラスを装着した。100%エタノール、100%イソプロピルアルコール(IPA)、及びこれらのそれぞれが1%プロピレングリコールを含む、異なる予備湿潤溶液を使用した。優れたカバーガラス性能が達成された。図17は、カバーガラス装着試料の画像を示している。
本実施例では、アルコール予備湿潤溶媒を用いて本発明のカバーガラス装着技術を評価する。実施例1と同様に、子宮組織の試料をスライド上に置き、ヘマトキシリンで染色し、実施例1に記載したように、カバーガラス装着モジュールを用いて3M9795Rによりカバーガラスを装着した。100%エタノール、100%イソプロピルアルコール(IPA)、及びこれらのそれぞれが1%プロピレングリコールを含む、異なる予備湿潤溶液を使用した。優れたカバーガラス性能が達成された。図17は、カバーガラス装着試料の画像を示している。
[実施例5]
本実施例では、IHC染色試料に対する本発明のカバーガラス装着技術を評価する。試料を種々の予備湿潤溶媒、すなわちClearify(登録商標)及びアルコール及びポリエチレングリコールと接触させた。マイクロ非湿潤化の効果と、良好なIHC画像を構築する能力とを評価した。マルチブロック試料は、抗体が3,3’-ジアミノベンジジン(DAB)で染色され、核がヘマトキシリンで対比染色されるIHCを用いた染色を除いて、実施例1と同様の方法で作製した。カバーガラスとして3M9795Rを使用して、Clearify(登録商標)予備湿潤溶媒を使用することで、図18のパネル(a)に示すように、マイクロドライアウトの領域をもたらすことが見出された。図18のパネル(b)及び(c)に示すように、エタノール及び1%プロピレングリコールの予備湿潤溶液を使用することで、カバーガラス装着を改善することができた。これらのカバーガラス装着試料は、溶媒ボイドを示さなかった。
本実施例では、IHC染色試料に対する本発明のカバーガラス装着技術を評価する。試料を種々の予備湿潤溶媒、すなわちClearify(登録商標)及びアルコール及びポリエチレングリコールと接触させた。マイクロ非湿潤化の効果と、良好なIHC画像を構築する能力とを評価した。マルチブロック試料は、抗体が3,3’-ジアミノベンジジン(DAB)で染色され、核がヘマトキシリンで対比染色されるIHCを用いた染色を除いて、実施例1と同様の方法で作製した。カバーガラスとして3M9795Rを使用して、Clearify(登録商標)予備湿潤溶媒を使用することで、図18のパネル(a)に示すように、マイクロドライアウトの領域をもたらすことが見出された。図18のパネル(b)及び(c)に示すように、エタノール及び1%プロピレングリコールの予備湿潤溶液を使用することで、カバーガラス装着を改善することができた。これらのカバーガラス装着試料は、溶媒ボイドを示さなかった。
[実施例6]
本実施例では、FISH試料に対する本発明のカバーガラス装着技術の使用を評価する。実施例1と同様に試料を作製し、それらをFISHについて染色した。Dako Fluorescence Mounting Mediumを予備湿潤溶媒として試料に適用し、次いで試料を3M Company(ミネソタ州メープルウッド)製の3M8211アクリル転写テープ及びカバーガラスで被覆した。カバーガラス装着スライド上での蛍光顕微鏡検査により、核酸染色のフォーカスと細胞対比染色とが明らかとなった。テープによる実験(図19B)では、対照(図19A)よりも蛍光バックグラウンドが高かった。
本実施例では、FISH試料に対する本発明のカバーガラス装着技術の使用を評価する。実施例1と同様に試料を作製し、それらをFISHについて染色した。Dako Fluorescence Mounting Mediumを予備湿潤溶媒として試料に適用し、次いで試料を3M Company(ミネソタ州メープルウッド)製の3M8211アクリル転写テープ及びカバーガラスで被覆した。カバーガラス装着スライド上での蛍光顕微鏡検査により、核酸染色のフォーカスと細胞対比染色とが明らかとなった。テープによる実験(図19B)では、対照(図19A)よりも蛍光バックグラウンドが高かった。
[実施例7]
一部の実施形態では、溶媒交換モジュール(図5、図7A、及び図7Bに図示されるもの等)はまた、図20に示すように、リニアステージ403を使用してスライド10の表面にわたって掃引されるキャピラリヘッド360を備えうる。キャピラリヘッドは、0.02mm~3mm、好ましくは0.5mm~2mmの範囲の距離でスライド表面に近接して位置決めされるキャピラリ表面362を備える。キャピラリヘッド360はまた、ディスペンサ(図5の第1のディスペンサ520等)に流体接続された溶媒供給ポート(Solvent Supply Port)364と、溶媒戻り部(溶媒戻り部550等)に流体接続された溶媒戻りポート(Solvent Return Port)366とを備える。溶媒戻り部の流量は、第1のディスペンサ320の流量を超えるように調整され、それによって、キャピラリ表面とスライドとの間の過剰な溶媒を確実に除去する。溶媒戻りポートは、供給流を超える戻り流の空気が吸引されるように設置される。任意選択で、供給流を超える戻り流のために、エアベント(Air Vent)368がキャピラリヘッド上に設けられる。
一部の実施形態では、溶媒交換モジュール(図5、図7A、及び図7Bに図示されるもの等)はまた、図20に示すように、リニアステージ403を使用してスライド10の表面にわたって掃引されるキャピラリヘッド360を備えうる。キャピラリヘッドは、0.02mm~3mm、好ましくは0.5mm~2mmの範囲の距離でスライド表面に近接して位置決めされるキャピラリ表面362を備える。キャピラリヘッド360はまた、ディスペンサ(図5の第1のディスペンサ520等)に流体接続された溶媒供給ポート(Solvent Supply Port)364と、溶媒戻り部(溶媒戻り部550等)に流体接続された溶媒戻りポート(Solvent Return Port)366とを備える。溶媒戻り部の流量は、第1のディスペンサ320の流量を超えるように調整され、それによって、キャピラリ表面とスライドとの間の過剰な溶媒を確実に除去する。溶媒戻りポートは、供給流を超える戻り流の空気が吸引されるように設置される。任意選択で、供給流を超える戻り流のために、エアベント(Air Vent)368がキャピラリヘッド上に設けられる。
[実施例8]
図21A~図21Dに示すように、性能を改善するために、様々な設計のキャピラリヘッド360を使用することができる。重要な設計の変形形態には、溶媒供給ポート364及び溶媒戻りポート366の様々な形状、並びにキャピラリ表面(Capillary Surface)362上のそれらの相対位置が含まれる。キャピラリ表面の輪郭を形成することで、キャピラリヘッドの流れ特性に影響を与えることもできる。
図21A~図21Dに示すように、性能を改善するために、様々な設計のキャピラリヘッド360を使用することができる。重要な設計の変形形態には、溶媒供給ポート364及び溶媒戻りポート366の様々な形状、並びにキャピラリ表面(Capillary Surface)362上のそれらの相対位置が含まれる。キャピラリ表面の輪郭を形成することで、キャピラリヘッドの流れ特性に影響を与えることもできる。
実施例8、図21Aでは、溶媒供給ポート364及び溶媒戻りポート366は、両方とも、スライド幅にわたって広がるスロットとして成形される。両方のポートは、キャピラリ表面362上に位置決めされる。
実施例8、図21Bでは、溶媒戻りポートは、キャピラリ表面363から離れて位置決めされる。この設計は、キャピラリ表面からこぼれた溶媒のみが確実に除去されるという利点を有する。
実施例8、図21Cでは、溶媒供給ポート364及び溶媒戻りポート366は両方とも円形の孔である。この設計は、製造がより単純であり、流れが良好に掃引されるという利点を有する。
実施例8、図21Dでは、キャピラリ表面の端部に位置決めされた2つの溶媒戻りポート366が存在する。この設計は、溶媒供給ポートと溶媒戻りポートとの間の経路がより短いという利点を有する。
[実施例9]
図21Bの設計のキャピラリヘッド360を使用した。キャピラリ表面362は、図22に示すように、キャピラリ表面とスライドとの間のギャップ363が0.5mmとなるようにスライド10の上方に位置決めした。第1のディスペンサ(図5の第1のディスペンサ520等)は、1.5ml/sの速度で第1の溶媒95%エタノールを提供した。溶媒戻りポンプは、50kPaに設定された真空トラップであった。以下のプロトコルは、図4A及び図5に示され、上述されたシステムを使用して、表1で実行された。
図21Bの設計のキャピラリヘッド360を使用した。キャピラリ表面362は、図22に示すように、キャピラリ表面とスライドとの間のギャップ363が0.5mmとなるようにスライド10の上方に位置決めした。第1のディスペンサ(図5の第1のディスペンサ520等)は、1.5ml/sの速度で第1の溶媒95%エタノールを提供した。溶媒戻りポンプは、50kPaに設定された真空トラップであった。以下のプロトコルは、図4A及び図5に示され、上述されたシステムを使用して、表1で実行された。
このプロトコルは、図23に示すように、未染色組織を有するマルチブロック組織切片に対して実施した。組織切片を溶媒交換なしで作製した。図23のパネルaは画像を示し、図23のパネルcは切片のヒートマップを示している。キャピラリヘッド360を意図的にずらし、スライドの上半分のみを処理するこのプロトコルで第2の切片を処理した(図23のパネルbの画像及び図23のパネルdの吸光度ヒートマップ)。
このプロトコルは、KI67及びヘマトキシリンで染色した卵巣組織切片に対しても行った。100%エタノール中に2分間浸漬させることによって処理した対照切片を図24のパネルaに示している。このプロトコルを用いて処理した実験用切片を図24のパネルbに示している。
[例示的な実施形態]
ここで開示されている主題により提供される例示的な実施形態は、以下を含むが、これらに限定されない。
ここで開示されている主題により提供される例示的な実施形態は、以下を含むが、これらに限定されない。
実施形態1。光学顕微法等の光学分析のための被覆試料スライドを作製する方法であって、スライド上の試料(組織切片等)を封入剤と接触させることであって、封入剤は、キシレンを含有しないことと、スライド上の試料をカバーガラスで被覆することであって、カバーガラスは、第1の主表面及び第2の主表面を有し、試料に面する第1の主表面上に感圧接着剤を備えることと、テープに好適な圧力を印加し、それによってカバーガラステープをスライドに付着させることとを含む方法。
実施形態2。カバーガラスは、カバーガラステープを備える、実施形態1に記載の方法。
実施形態3。清浄なカバーガラステープが、テープリールに巻き付けられており、方法は、清浄なカバーガラステープの切片を巻き出し、巻き出された切片をスライドに適用することを更に含む、実施形態2に記載の方法。
実施形態4。清浄なカバーガラステープは、剥離層上にあり、方法は、カバーガラステープを剥離層から分離することを含む、実施形態2又は3に記載の方法。一部の実施形態では、剥離層は剥離層端部を有し、剥離層端部は剥離層リールに巻き取られる。剥離層リールの回転により、カバーガラステープを前進又は駆動することができる。
実施形態5。試料をスライド上に配置し、試料を被覆する前に標本から溶媒を除去することを更に含む、実施形態1~4のいずれかに記載の方法。
実施形態6。スライド上に配置した後に試料を部分的に又は完全に脱水することを更に含む、実施形態1~5のいずれかに記載の方法。例えば、標本は、0%~20%、好ましくは15%未満の含水量まで部分的に脱水することができる。
実施形態7。試料は、溶媒交換によって部分的に又は完全に脱水される、実施形態6に記載の方法。
実施形態8。交換溶媒が、噴霧によって試料に適用される、実施形態7に記載の方法。
実施形態9。試料上にガスのラインを吹き付けて(例えば、エアナイフを用いて空気を吹き付けて)溶媒を蒸発させることを更に含む、実施形態8に記載の方法。
実施形態10。交換溶媒が、試料を横切ってキャピラリ間隙を通って流れることによって、試料に適用される、実施形態7に記載の方法。例えば、スライドは、キャピラリ間隙に対して移動して、より大きな表面積を処理する。
実施形態11。圧電変換器が、スライドに適用され、高周波圧力波を誘導して溶媒交換を加速する、実施形態7に記載の方法。
実施形態12。スライドをスライドキャリアから取り出し、スライドをスライドテーブル上に配置することを更に含む、実施形態1~11のいずれかに記載の方法。一部の実施形態では、スライドテーブルは、スライドを保持し、スライドによる運動を防止するように構成されたスライドテーブル表面を有する。スライドテーブル表面は、実質的に水平であってもよいし、角度を有していてもよい。
実施形態13。感圧接着剤は、試料の孔に浸透する、実施形態1~12のいずれかに記載の方法。
実施形態14。カバーガラステープ上でローラを転がすことによって、例えば60psiの圧力でカバーガラステープに圧力が印加される、実施形態1~13のいずれかに記載の方法。ローラは、テープ上を一方向に移動することができ、又は第1の方向に移動した後に第2の方向に移動する(例えば、テープに沿って前後に移動する)ことができる。ローラはテープ上を1回以上転がることができ、印加される圧力は毎回同じであっても異なっていてもよい。
実施形態15。カバーガラス装着モジュールであって、スライドのための表面を有するスライドマウントテーブルであって、スライドマウントテーブル上のスライドの移動を防止又は低減するための1つ以上のスライドストップを備えるスライドマウントテーブルと、スライドマウントテーブルをスライドテーブル上のスライドの長軸方向に移動させるリニアアクチュエータと、スライドマウントテーブルの上方にあり、供給端及び押出端を有するカバーガラステープディスペンサであって、カバーガラステープディスペンサは、供給端でカバーガラステープを受け取り、スライドマウントテーブル上のスライドに対して角度を有して押出端からカバーガラステープを押し出すように構成されているカバーガラステープディスペンサと、テープディスペンサの押出端部の後に位置決めされ、スライド上のカバーガラステープを転がしてカバーガラステープに圧力を印加するように構成されたローラとを備える、カバーガラス装着モジュール。
実施形態16。カバーガラステープディスペンサから剥離ライナを受け取る剥離ライナリールを更に備える、実施形態15に記載の装置。カバーガラステープディスペンサの供給端によってリールを位置決めすることができる。
実施形態17。テープディスペンサは、剥離ライナをカバーガラステープから分離するために、ウェッジ又はローラ等の剥離ライナセパレータを備える、実施形態15又は16に記載の装置。
実施形態18。スライド上の試料の溶媒交換モジュールであって、溶媒交換モジュールは、スライドのための支持体と、支持体の上方にあり、支持体上のスライド上にガスのラインを吹き付けるように構成されたガス供給装置とを備え、支持体及びガス供給装置の一方又は両方は直線運動するように構成されている、溶媒交換モジュール。
実施形態19。支持体は、コンベヤである、実施形態18に記載のモジュール。
実施形態20。支持体は、ヒータ(支持体に埋め込まれた抵抗ヒータ等)を備える、実施形態18に記載のモジュール。
実施形態21。被覆標本スライドを作製する装置であって、溶媒交換モジュールと、カバーガラス装着モジュールとを備える装置。
実施形態22。スライドハンドラモジュールを更に備える、実施形態21に記載の装置。
実施形態23。実質的にキシレンを含まないカバーガラス装着試料スライドであって、表面上に試料を有するスライドと、試料に付着したカバーガラステープであって、試料の実質的に全てが、カバーガラステープによって被覆されている、カバーガラステープと、カバーガラステープとスライドとの間で試料と接触しているマウント剤であって、マウント剤はキシレンではない、マウント剤とを備えるカバーガラス装着試料スライド。
実施形態24。マウント剤は、1つ以上のC1-4アルコール又はC1-4グリコールを含む、実施形態23に記載のスライド。
実施形態25。試料は、1つ以上の蛍光染料等の色素を含む、実施形態23又は24に記載のスライド。
実施形態26。色素を含む試料は、少なくとも10年間安定である、実施形態23~25のいずれかに記載のスライド。
実施形態27。カバーガラステープの接着面をスライド上の試料に適用するように構成されたカバーガラステープディスペンサを備えるカバーガラス装着装置。
実施形態28。スライド上の試料の溶媒交換モジュールであって、溶媒交換モジュールは、スライドのための支持体と、交換液を分配し排出液を除去する溶媒交換ヘッドであって、溶媒交換ヘッドは、スライドから距離を置いて位置決めすることができ、支持体及び溶媒交換の一方又は両方は、直線運動するように構成されている溶媒交換ヘッドとを備える、溶媒交換モジュール。
実施形態29。溶媒交換ヘッドは、スライドに面する交換面を備え、交換面は、排出孔を取り囲む隆起部分を備える、実施形態28に記載の溶媒交換モジュール。
実施形態30。交換面は、長さ及び幅を有し、幅は、スライド幅と実質的に同じである、実施形態28又は29に記載の溶媒交換モジュール。
実施形態31。交換液を収容するリザーバと、リザーバと溶媒交換ヘッドとを接続する1つ以上の分配ラインと、リザーバと溶媒交換ヘッドとを接続する1つ以上の戻りラインとを更に備える、実施形態28~30のいずれかに記載の溶媒交換モジュール。
実施形態32。交換ヘッドとスライドとの間の距離により、キャピラリ間隙が形成される、実施形態31に記載の溶媒交換モジュール。また、溶媒交換モジュールは、スライドを横切って移動して、溶媒交換ヘッドよりも大きい面積を処理することができる。
実施形態33。高周波圧力波を誘導してスライド上での溶媒交換を加速するように構成された圧電変換器を更に備える、実施形態28~32のいずれかに記載の溶媒交換モジュール。
実施形態34。分配ラインに流体接続された分配ポンプと、1つ以上の戻りラインに接続された少なくとも1つの戻りポンプとを更に備える、実施形態28から33のいずれかに記載の溶媒交換モジュール。
実施形態35。分析のための試料スライドを作製する方法であって、スライド上に試料を提供することとを含み、ここで、試料は、第1の溶媒を含むことと、スライド上の試料(例えば、組織切片)と溶媒交換ヘッドとの間にキャピラリ間隙を形成することと、溶媒交換ヘッド内の分配孔から第2の溶媒を含む交換液を分配することと、キャピラリ間隙から排出液を除去することとを含む方法。
実施形態36。第1の溶媒は、水を含み、第2の溶媒は、アルコール(例えば、エタノール)を含む、実施形態35に記載の方法。
実施形態37。排出液は、第1の溶媒及び第2の溶媒の混合物を含む、実施形態35又は36に記載の方法。
実施形態38。排出液をリザーバに通すことを更に含み、リザーバは、第2の溶媒を含む交換液を収容する、実施形態35~37のいずれかに記載の方法。
実施形態39。交換液は、分配ステップ及び除去ステップの間、交換ヘッドの下に保持される、実施形態35~38のいずれかに記載の方法。
実施形態40。溶媒交換ヘッドは、溶媒交換ヘッドの中間部分の分配孔を通して第2の溶媒を分配する、実施形態35~39のいずれかに記載の方法。
実施形態41。スライド上に配置した後に試料から第1の溶媒を部分的に又は完全に除去することを更に含む、実施形態35~40のいずれかに記載の方法。例えば、試料は、第1の溶媒として水を含む場合、試料は、0%~20%、好ましくは15%未満の含水量まで部分的に脱水することができる。
実施形態42。試料は、溶媒交換によって部分的に又は完全に脱水される、実施形態41に記載の方法。
実施形態43。1つ以上の分配ラインが、スライドに交換液を提供し、1つ以上の戻りラインが、スライドから排出液を除去する、実施形態42に記載の方法。
実施形態44。分配ラインから戻りラインへの経路が、溶媒が移動するためのキャピラリ間隙を形成する、実施形態43に記載の方法。
実施形態45。圧電変換器が、スライドに適用され、高周波圧力波を誘導して溶媒交換を加速する、実施形態35~44のいずれかに記載の方法。
実施形態46。交換液は、溶媒交換のために60秒以下の間、試料に適用される、実施形態35~45のいずれかに記載の方法。
実施形態47。交換液は、約5秒以下の間、試料に適用される、実施形態35~46のいずれかに記載の方法。
実施形態48。スライド上の試料をカバーガラスで被覆することを更に含み、カバーガラスは、第1の主表面及び第2の主表面を有し、試料に面する第1の主表面上に感圧接着剤を備える、実施形態35~47のいずれかに記載の方法。
実施形態49。試料をカバーガラスで被覆するプロセスが、約5秒以下を要する、実施形態35~48のいずれかに記載の方法。
実施形態50。スライドは、試料がカバーガラスで被覆された後に、スライドキャリア内に配置される、実施形態49に記載の方法。
実施形態51。スライドキャリア内にスライドを配置するプロセスが、約5秒以下を要する、実施形態50に記載の方法。
本明細書において使用される用語が、特定の実施形態を説明するためのものであり、制限的であることを意図されないことが理解される。規定される用語は、規定される用語の技術的及び科学的意味に加えて、本教示の技術分野において一般に理解され受け入れられているものである。
[引用文献]
国際公開第1999/053357号
国際公開第2002/012857号
国際公開第2014071959号
国際公開第0212857号
米国特許第6589650号
英国出願公開第2482726号
国際公開第9953357号
米国特許第4203797号
米国特許第4853262号
米国特許出願公開第2010081579号
米国特許出願公開第2002037269号
米国特許出願公開第2007166197号
米国特許第5569527号
国際公開第2005085799号
欧州出願公開第1438585号
欧州出願公開第1309847号
米国特許出願公開第2010069259号
国際公開第1999/053357号
国際公開第2002/012857号
国際公開第2014071959号
国際公開第0212857号
米国特許第6589650号
英国出願公開第2482726号
国際公開第9953357号
米国特許第4203797号
米国特許第4853262号
米国特許出願公開第2010081579号
米国特許出願公開第2002037269号
米国特許出願公開第2007166197号
米国特許第5569527号
国際公開第2005085799号
欧州出願公開第1438585号
欧州出願公開第1309847号
米国特許出願公開第2010069259号
本開示を考慮して、方法及び装置を、本教示を踏まえて実装することができることが留意される。さらに、種々の構成要素、材料、構造、及びパラメータは、単に例証及び例として含まれ、制限的な意味で含まれない。本開示を考慮して、本教示を、他の用途で実装することができ、これらの用途を実施する構成要素、材料、構造、及び機器を、添付の特許請求項の範囲内に留まりながら、決定することができる。
Claims (53)
- スライドのための表面を有するスライドマウントテーブルであって、該スライドマウントテーブル上の前記スライドの移動を防止又は低減するための1つ以上のスライドストップを備えるスライドマウントテーブルと、
前記スライドマウントテーブルを前記スライドテーブル上のスライドの長軸方向に移動させるリニアアクチュエータと、
前記スライドマウントテーブルの上方にあり、供給端及び押出端を有するカバーガラステープディスペンサであって、該カバーガラステープディスペンサは、前記供給端でカバーガラステープを受け取り、前記スライドマウントテーブル上の前記スライドに対して角度を有して前記押出端から前記カバーガラステープを押し出すように構成されているカバーガラステープディスペンサと、
前記テープディスペンサの前記押出端の後に位置決めされ、ロールして、前記スライド上の前記カバーガラステープに圧力を印加するように構成されたローラと
を備えるカバーガラス装着モジュール。 - 前記カバーガラステープディスペンサから剥離ライナを受け取る剥離ライナリールを更に備える、請求項1に記載の装置。
- 前記テープディスペンサは、前記カバーガラステープから前記剥離ライナを分離する剥離ライナセパレータを備える、請求項1又は2に記載の装置。
- スライドのための支持体と、
前記支持体の上方にあり、前記支持体上のスライド上にガスのラインを吹き付けるように構成されたガス供給装置であって、前記支持体及び前記ガス供給装置の一方又は両方は、直線運動するように構成されているガス供給装置と
を備える、スライド上の試料の溶媒交換モジュール。 - 前記支持体はコンベヤである、請求項4に記載のモジュール。
- 前記支持体はヒータを備える、請求項4に記載のモジュール。
- スライド上の試料をキシレンを含有しない封入剤と接触させることと、
前記スライド上の前記試料をカバーガラスで被覆することであって、前記カバーガラスは、第1の主表面及び第2の主表面を有し、前記試料に面する前記第1の主表面上に感圧接着剤を備える被覆することと、
前記カバーガラスに好適な圧力を印加し、それによって前記カバーガラスを前記スライドに付着させることと
を含む、光学分析のための被覆試料スライドを作製する方法。 - 前記カバーガラスはカバーガラステープを備える、請求項7に記載の方法。
- 清浄なカバーガラステープがテープリールに巻き付けられており、前記方法は、
前記清浄なカバーガラステープの切片を巻き出し、前記巻き出された切片を前記スライドに適用すること
を更に含む、請求項8に記載の方法。 - 前記清浄なカバーガラステープは剥離層上にあり、前記方法は、前記カバーガラステープを前記剥離層から分離することを含む、請求項8又は9に記載の方法。
- 前記試料を前記スライド上に配置し、前記試料を被覆する前に前記標本から溶媒を除去することを更に含む、請求項7~10のいずれか一項に記載の方法。
- 前記スライド上に配置した後に前記試料を部分的に又は完全に脱水することを更に含む、請求項7~11のいずれか一項に記載の方法。
- 前記試料は溶媒交換によって部分的に又は完全に脱水される、請求項12に記載の方法。
- 交換溶媒が噴霧によって前記試料に適用される、請求項13に記載の方法。
- 前記試料上にガスのラインを吹き付けて溶媒を蒸発させることを更に含む、請求項14に記載の方法。
- 交換溶媒が前記試料を横切ってキャピラリ間隙を通って流れることによって、前記試料に適用される、請求項12に記載の方法。
- 前記スライドは前記キャピラリ間隙に対して移動して、より大きな表面積を処理する、請求項16に記載の方法。
- 圧電変換器が前記スライドに適用され、高周波圧力波を誘導して前記溶媒交換を加速する、請求項13に記載の方法。
- 前記スライドをスライドキャリアから取り出し、前記スライドをスライドテーブル上に配置することを更に含む、請求項7~18のいずれか一項に記載の方法。
- 前記感圧接着剤は前記試料の孔に浸透する、請求項7~19のいずれか一項に記載の方法。
- 前記圧力は、前記カバーガラステープ上でローラをロールさせることによって、前記カバーガラステープに印加される、請求項7~20のいずれか一項に記載の方法。
- 溶媒交換モジュールと、
カバーガラス装着モジュールと
を備える、被覆標本スライドを作製する装置。 - スライドキャリアモジュールを更に備える、請求項22に記載の装置。
- 表面上に試料を有するスライドと、
前記試料に付着したカバーガラステープであって、前記試料の実質的に全てが、前記カバーガラステープによって被覆されている、カバーガラステープと、
前記カバーガラステープと前記スライドとの間で前記試料と接触しているキシレンではないマウント剤と
を備える実質的にキシレンを含まないカバーガラス装着試料スライド。 - 前記マウント剤は1つ以上のC1-4アルコール又はC1-4グリコールを含む、請求項24に記載のスライド。
- 前記試料は1つ以上の色素を含む、請求項24又は25に記載のスライド。
- 前記色素を含む試料は少なくとも10年間安定である、請求項24~26のいずれか一項に記載のスライド。
- カバーガラステープの接着面をスライド上の試料に適用するように構成されたカバーガラステープディスペンサを備える、カバーガラス装着装置。
- スライドのための支持体と、
交換液を分配し、排出液を除去する溶媒交換ヘッドであって、該溶媒交換ヘッドは前記スライドから距離を置いて位置決めすることができ、前記支持体及び前記溶媒交換の一方又は両方は、直線運動するように構成されている、溶媒交換ヘッドと
を備える、スライド上の試料の溶媒交換モジュール。 - 前記溶媒交換ヘッドは前記スライドに面する交換面を備え、前記交換面は前記排出孔を取り囲む隆起部分を備える、請求項29に記載の溶媒交換モジュール。
- 前記交換面は長さ及び幅を有し、前記幅はスライド幅と実質的に同じである、請求項29又は30に記載の溶媒交換モジュール。
- 前記交換液を収容するリザーバと、前記リザーバと前記溶媒交換ヘッドとを接続する1つ以上の分配ラインと、前記リザーバと前記溶媒交換ヘッドとを接続する1つ以上の戻りラインとを更に備える、請求項29~31のいずれか一項に記載の溶媒交換モジュール。
- 前記交換ヘッドと前記スライドとの間の前記距離により、キャピラリ間隙が形成される、請求項32に記載の溶媒交換モジュール。
- 前記溶媒交換モジュールは前記スライドを横切って移動して、前記溶媒交換ヘッドよりも大きい面積を処理することができる、請求項33に記載の溶媒交換モジュール。
- 高周波圧力波を誘導して前記スライド上での前記溶媒交換を加速するように構成された圧電変換器を更に備える、請求項29~34のいずれか一項に記載の溶媒交換モジュール。
- 前記分配ラインに流体接続された分配ポンプと、前記1つ以上の戻りラインに接続された少なくとも1つの戻りポンプとを更に備える、請求項29~35のいずれか一項に記載の溶媒交換モジュール。
- スライド上に試料を提供することであって、前記試料は第1の溶媒を含む、提供することと、
前記スライド上の前記試料と溶媒交換ヘッドとの間にキャピラリ間隙を形成することと、
前記溶媒交換ヘッド内の分配孔から第2の溶媒を含む交換液を分配することと、
前記キャピラリ間隙から排出液を除去することと
を含む、分析のための試料スライドを作製する方法。 - 前記第1の溶媒は水を含み、前記第2の溶媒はアルコールを含む、請求項37に記載の方法。
- 前記排出液は前記第1の溶媒及び前記第2の溶媒の混合物を含む、請求項37又は38に記載の方法。
- 前記排出液をリザーバに通すことを更に含み、前記リザーバは前記第2の溶媒を含む交換液を収容する、請求項37~39のいずれか一項に記載の方法。
- 前記交換液は、前記分配ステップ及び前記除去ステップの間、前記交換ヘッドの下に保持される、請求項37~40のいずれか一項に記載の方法。
- 前記溶媒交換ヘッドは、前記溶媒交換ヘッドの中間部分の分配孔を通して前記第2の溶媒を分配する、請求項37~41のいずれか一項に記載の方法。
- 前記スライド上に配置した後に前記試料から前記第1の溶媒を部分的に又は完全に除去することを更に含む、請求項37~42のいずれか一項に記載の方法。
- 前記試料は溶媒交換によって部分的に又は完全に脱水される、請求項43に記載の方法。
- 1つ以上の分配ラインが前記スライドに交換液を提供し、1つ以上の戻りラインが前記スライドから排出液を除去する、請求項44に記載の方法。
- 前記分配ラインから前記戻りラインへの経路が前記溶媒が移動するためのキャピラリ間隙を形成する、請求項45に記載の方法。
- 圧電変換器が前記スライドに適用され、高周波圧力波を誘導して前記溶媒交換を加速する、請求項37~46のいずれか一項に記載の方法。
- 前記交換液は、溶媒交換のために60秒以下の間、前記試料に適用される、請求項37~47のいずれか一項に記載の方法。
- 前記交換液は、約5秒以下の間、前記試料に適用される、請求項37~48のいずれか一項に記載の方法。
- 前記スライド上の前記試料をカバーガラスで被覆することを更に含み、前記カバーガラスは第1の主表面及び第2の主表面を有し、前記試料に面する前記第1の主表面上に感圧接着剤を備える、請求項37~49のいずれか一項に記載の方法。
- 前記試料をカバーガラスで被覆するプロセスが、約5秒以下である、請求項37~50のいずれか一項に記載の方法。
- 前記スライドは、前記試料が前記カバーガラスで被覆された後に、スライドキャリア内に配置される、請求項51に記載の方法。
- 前記スライドキャリア内に前記スライドを配置するプロセスが約5秒以下である、請求項52に記載の方法。
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