JP2002502025A

JP2002502025A - レーザ捕捉顕微分析のための機械的処理システム

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Publication number: JP2002502025A
Application number: JP2000529587A
Authority: JP
Inventors: セスアール．ゴールドステイン，; ロバートエフ．ボナー，; ポールディー．スミス，; ジョンピーターソン，; トーマスポヒダ，
Original assignee: US Department of Health and Human Services
Current assignee: US Department of Health and Human Services
Priority date: 1998-02-03
Filing date: 1999-01-29
Publication date: 2002-01-22
Anticipated expiration: 2019-01-29
Also published as: CA2319589C; AU2485099A; EP1053461A1; WO1999039176A1; JP4344474B2; AU749378B2; CA2319589A1

Abstract

(57)【要約】輸送基板上の指定された位置に対する、組織サンプル上のランダムな位置から、同定された細胞材料をＬＣＭにより集める方法および装置により、簡便なさらなる処理が可能になる。輸送基板は、同定された細胞材料を受容するための同定されたマッピングされた位置を有する。選択的に活性化されたコーティングの少なくとも１つのセグメントが、マッピングされた位置で、組織サンプルと並列した輸送基板の片側に配置される。輸送基板およびサンプルは、相対的に動かされて選択的に活性化されたコーティングを、抽出されるべき組織サンプルの同定された細胞材料に並列してマッピングされた位置に配置される。その後、選択的に活性化可能なコーティングは活性化されかつ押し付けられるか、または押し付けられかつ活性化されて、輸送基板上に同定された細胞材料に対する接着のための接着性領域を形成する。輸送基板の組織サンプルからの取り出しの際に、同定された細胞材料は、マッピングされた位置で輸送基板に接着する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は、移動表面において組織サンプルからの細胞材料の直接抽出を行うレ
ーザ捕獲顕微分析（ＬＣＭ）に関する。本明細書における開示は、引き続いて行
われる分析のために単離されたサンプルセグメントを簡単に収集できるフォーマ
ットで、選択された組織サンプルをフィルムマトリクスへと単離することに関す
る。

【０００２】本出願は、１９９６年１０月９日に出願された、ＬａｎｃｅＡ．Ｌｉｏｔ
ｔａらの、「ＩｓｏｌａｔｉｏｎｏｆＣｅｌｌｕｌａｒＭａｔｅｒｉａｌ
ＵｎｄｅｒＭｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃＶｉｓｕａｌｉｚａｔｉｏｎ」という
タイトルのＰＣＴ／ＵＳ９６／１６５１７を基礎として優先権を主張する。本
出願はまた、１９９７年２月７日に出願された、「Ｉｓｏｌａｔｉｏｎｏｆ
ＣｅｌｌｕｌａｒＭａｔｅｒｉａｌＵｎｄｅｒＭｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ
Ｖｉｓｕａｌｉｚａｔｉｏｎ」（出願人の１５５２８０−３１４）というタイト
ルの米国特許仮出願番号第６０／０３６，９２７号を基礎として優先権を主張す
る。これら両出願を、完全に記載されているかのように本明細書において参考と
して援用する。

【０００３】（発明の背景）レーザ捕獲顕微分析（ＬＣＭ）は、「Ｓｃｉｅｎｃｅｍａｇａｚｉｎｅ」（
１９９６年１１月８日および１９９７年１１月２１日）に記載されている。要約
すると、ＬＣＭは、通常、組織サンプル上の同定された細胞材料に接着するため
の活性化可能なコーティングを有する輸送基板を配置することを含む。例えば、
透明で、熱的に活性化可能な接着フィルム（例えば、ＥＶＡポリマー）の大きな
（数ｃｍ²）片を、ガラス製の顕微鏡用スライド上に設けられた、標準的な（乾燥された）組織病理学的切片（厚さ５〜１５μｍ）の上部組織表面の近傍に並置
する。

【０００４】通常、顕微鏡下での検査によって、マイクロディセクションのために組織サン
プルの同定された細胞材料が一旦選択されると、その後、基板が活性化される（
通常、レーザビームでパルスされる）。光エネルギーがプラスチックフィルムに
よって吸収され、小さな領域においてこのフィルムが溶解する。その後、活性化
可能なコーティングが微視的な組織成分上およびその周囲に流れて、冷却中のフ
ィルムが、組織サンプルの同定された細胞材料にしっかりと接着される。同じス
ライド上の他の標的領域が、同様に処理され得る。

【０００５】引き続いて、フィルムがスライドから持ち上げられると、選択された組織が、
一連のスポットにおいてフィルムに接着して持ち上げられ、他の組織はスライド
上に残る。残念ながら、同定された細胞材料をスライド上に分散して配置すると
、同定された細胞材料は、輸送基板上に分散して分布される。

【０００６】その後、通常の場合、フィルムを適切な試薬（例えば、組織の構造タンパク質
を消化するプロテイナーゼＫ）に浸すことにより、選択された一連のスポットを
フィルムから取り出す（これは、引き続いて分析されるＤＮＡまたはＲＮＡの分
子を放出する（例えば、ＰＣＲおよびゲル電気泳動を使用する））。１つの標的
を所定の試薬溶液（すなわち、特異的な「分子抽出緩衝液」）へと特定的に移動
させるために、移動された組織スポットおよびその下に付着したフィルムを、メ
スまたはハサミを用いて手で切除するか、または、精密なパンチ／ダイスを用い
て打ち抜いてキュベットに直接移動させることができる。

【０００７】この技術の発展と共に、改良への要求が起こっている。従って、本明細書の以
下の部分において、本発明者らは、ＬＣＭの要件を特定し、その後これらの要件
に対する解決方法を提案する。レーザ捕獲顕微分析についての要件を記載するに
あたって、本発明者らが本発明を特許請求することを理解されたい。言うまでも
ないが、解決すべき問題の認識、ならびに、問題が一旦認識された後に得られた
この問題に対する解決方法が、本発明の一部を構成し得る。

【０００８】ＬＣＭにおいて、潜在的には、次第により小さなスポットサイズ（例えば２５
ミクロン以下）へと移行する、研究上の大きな必要性（最終的には臨床上の必要
性）が存在する。このことは、病理学的標本または細胞学的標本内で特定の細胞
の分子修飾を研究するための、選択された単一の細胞または細胞小器官の移動に
つながる。このことは、２つの技術上の問題を提起する：１）正確な標的化、および、顕微鏡観察に基づく特定の細胞へのフィルムの
接着、ならびに、２）分子抽出緩衝液に移動されたフィルムの隣接する領域を最小化すること
による、移動の特異性の維持。

【０００９】ＬＣＭにおいて、フィルム内のスポットは、試料上の位置に対応する位置に、
大まかに、不規則に配置される。より小さなスポットサイズの試料を抽出する場
合に起こる問題は、取り出されたフィルム片または移動表面上にそれらの小さな
試料を見つけることである。試料の抽出された部分を正確に切除し得るように、
正確な位置が要求される。正確な切除を行うことで、低密度の非特異的な組織付
着により、フィルムの周辺領域からの汚染を最小にしつつ、標的組織が完全に回
収される。

【００１０】ＬＣＭを開示された技術に限定すると、格納位置の正確なコンピュータ制御お
よび座標の格納が現実的であり得る。しかし、このコンピュータ制御は、移動プ
ロセスの視覚的観察の信頼性を失い得、複雑且つ高価であり得る。さらに、コン
ピュータ位置は、テープをスライドから持ち上げた際にテープが歪曲する場合等
の、多くの場合に正確さを欠き得る。

【００１１】同定された細胞材料の周辺の領域における、標的化されなかった組織のフィル
ムへの非特定的な移動が、別の問題として存在する。標的化された組織のスポッ
トサイズが減少するにつれ、この非特定的な移動が、次第に重要になっている。
理想的には、レーザによって照射されて標的化された領域の外側の組織は、スラ
イドから取り出す際にフィルムに接着させるべきではない。任意の所望されない
組織の接着は、所望される組織との、試料の汚染を生じる。使用される標的スポ
ットがより小さくなるにしたがって、混入組織（ｓｔｒａｙｔｉｓｓｕｅ）の
許容可能量が比例的に小さくなる。

【００１２】極めて小さなサンプルとの接触領域を達成し得ると推定すると、移動表面の処
理方法について問題が起こる。具体的には、標的部位における組織上で、活性化
可能な移動表面の小さなスポットを位置決めすること、小さな活性化された移動
表面を組織から取り出すこと、ならびに、単離され、標的化された細胞をキュベ
ット内へ配置すること、または、標的化されなかった組織エレメントによって汚
染されることなく特異的に同定可能な様態でそれらを格納することが、問題とな
る。

【００１３】要件を記載したが、ここで本発明者らは解決方法に注目する。

【００１４】（発明の要旨）組織サンプル上のランダムな位置からのＬＣＭ同定された細胞材料を、輸送基
板上の指定された位置へと集めるための方法および装置が、都合に応じてさらな
る処理を可能にする。輸送基板は、同定された細胞材料を受け取るための、同定
されたマッピング位置を有している。少なくとも１つの選択的に活性化可能なコ
ーティングのセグメントが、輸送基板の組織サンプルに並ぶ面上のマッピング位
置に配置される。輸送基板およびサンプルが相対的に移動されることにより、マ
ッピング位置にある選択的に活性化されるコーティングを、抽出したい組織サン
プルの同定された細胞材料に対して並ぶように配置させる。その後、選択的に活
性化するコーティングを活性化して押し付けるか、あるいは押し付けてから活性
化することにより、同定された細胞材料に接着するための接着性領域を輸送基板
上に形成する。輸送基板を組織サンプルから除去する際、同定された細胞材料は
マッピング位置において輸送基板に接着する。

【００１５】第１の実施形態において、選択的に活性化される材料の個々の小片またはコー
ティングが、輸送膜上に配置される。例えば、選択的に活性化可能なコーティン
グが、膜の個別片の中心に配置され、サンプルに対して曝露される。膜の各異な
る片を、そのコーティングされた中心部においてレーザにより個別に活性化する
。レーザ作動中または作動後における組織への位置並べは、加圧プレートを用い
ることによって行われる。

【００１６】別の実施形態において、膜を保持するために、例えば選択的に活性化可能なコ
ーティング片が等間隔で中心に位置された連続的なリール状テープなどの、透明
な基板を含む連続的なストリップを用いる。その後、透明基板の連続的なストリ
ップを漸進的に進めることにより、活性化可能なコーティングの中心が顕微鏡視
野の中心にくるようにする。並んで設けられたバーコードまたはその他の光学的
に符号化された識別子が、個々の輸送されるサンプルを同定する役割を果たし得
る。

【００１７】サンプル回収は、レーザ加熱の前または後において、輸送基板を顕微鏡視野の
中心で組織と接触するように保持するように作動される、加圧プレートを包含し
得る。レーザ加熱およびサンプルからの選択された物質への付着後に、加圧プレ
ートは持ち上げられ、局所的に活性化されたコーティングを有する輸送基板が、
接着した組織とともに組織サンプルから分離される。このプロセスが順に繰り返
されることにより、輸送基板が再び進められ、次の輸送基板片（清浄な）が視野
の中心に置かれ、組織表面に押圧され、レーザで活性化される。この繰り返しは
輸送基板を進めるだけでなく、ターゲットとする（接着した）組織を、再現性よ
く標本スライドから離して持ち上げるための力をも加える。輸送基板が次の清浄
な（未使用の）スポットまで進められた後、かつ膜が標本表面上に押圧される以
前において、顕微鏡のステージおよび輸送基板が平行移動（ｘおよびｙ方向に）
されることにより、次の組織ターゲットが顕微鏡視野の中心にくるようにする。

【００１８】輸送基板を選択的にコーティングされたスポットとともに用いる場合、基板は
、活性化コーティングの局所領域をパンチングまたは切り出しあるいは剥離する
ことにより、残りの基板テープから局所的に除去され得る。これにより、接着し
た同定された細胞材料が、輸送基板の小片に局所化された状態にされる。これら
の輸送基板の小片は、さらなる処理および分子分析のために特定のチャンバまた
は容器内に配置される。

【００１９】別の実施形態において、選択的に活性化可能なコーティングの個々の片は、中
央の共通支持部に取り付けられここから突出した、屈曲可能な支柱アレイの端部
に設けられる（例えば車輪または櫛状構造など）。選択的に活性化可能なコーテ
ィングを端部に有する各支柱は、輸送基板として機能し、顕微鏡視野の中心を通
って順にインデックス送りする。支柱の端部は加圧プレートとして機能し、支柱
の端部の活性化可能なコーティングにて組織に接触する。選択的に活性化可能な
コートは、支柱が屈曲されたときに（例えばソレノイドなどにより）作動させら
れる（ディジーホィールプリンタと同様に、１度に１スポーク）。活性化後、支
柱上にかかる力が取り除かれることにより、同定された細胞材料が接着された状
態のスライドを支柱が持ち上げることを可能にする。その後、支柱アレイは膜片
が定位置にくるように次の支柱をインデックス送りし、ステージは次の組織ター
ゲットに移動され、次の支柱が新しいターゲットと接触するように配置される。

【００２０】このアプローチの別の変形例は、櫛形状のアレイを用いることである（すなわ
ちターゲット膜スポットが、「ディジーホィール」の半径方向のスポークによっ
てではなく、アレイ軸に対して垂直な平行スポークによって線形キャリッジに取
り付けられた線形アレイ状である）。小さなスポット状の膜が各櫛の歯の端部に
配置される。小さなソレノイドが歯を屈曲させることにより、その端部（加圧プ
レートとして作用する）が視野の中央で組織と接触するようにする。レーザ加熱
後、ソレノイド力を取り除き、歯がその非屈曲位置に戻る（膜に組織が接着され
た状態でスライドを持ち上げる）そして、櫛を線形にインデックス送りすること
により、膜の異なる歯／片が視野の中央に来て異なる組織ターゲットが定位置に
移動されるようにする。櫛の基部上の標識によってサンプルを同定し得る。この
技術により、非常に小さくかつ精密なサンプル抽出が可能になる。

【００２１】接着性膜が屈曲可能支柱の形態である加圧プレートに接合される場合は、同定
された細胞材料が付着したところの支柱を折り取り、この折り取った部分を回収
およびさらなる処理用のためにカプセルに入れる。

【００２２】上述の回収技術のすべてにおいて、接着性スポットを基板から取り外すための
他の手段も存在する（例えばプルタブおよび剥離、基板と接着性スポットとの間
の接合用の特定の溶媒など）。これらの改良はすべて、精密に間隔をあけられた
（線形状または角度的な分離）小さなサイズのターゲット膜スポットを取り除く
ための手段を提供する。このような小さなサイズのターゲット膜スポットは、顕
微鏡観察下において既にこの位置に平行移動された標本のターゲット部位におい
て、光学的視野の中央に容易に正確に配置され得る。サンプルには隣接する基板
上の同定用の標識が提供されることができるので、サンプルは、一連の被移送物
中からセルタイプに応じて個別に分離されあるいは分類されその基板から取り除
かれるまでの間、シーケンシャルな被移送物のアレイとして（ディジーホィール
、櫛、またはテープ基板のストリップ）としてコンパクトに格納できる。

【００２３】さらに別の実施形態において、連続的であり中央に細長く存在する選択的に活
性化可能なコーティングを有する、連続的な輸送基板片が提供される。この連続
膜片が、狭い選択的に活性化可能なコーティング部分において、細長い（膜移動
の方向の）加圧プレートにより組織と接触状態におかれることにより、（小さい
）接触面積を規定する。この技術により、接着剤の別個のスポットを、膜の移動
方向において視野の中央に対して位置合わせする問題を回避することができる。
テープの細長い接着性の部分が視野を通過し、かつ静止している加圧プレートが
視野に対して整列しているかぎり−−どちらも穏当な要件である−−位置合わせ
は満足される。このアプローチは、ａ）膜およびターゲット領域の取り扱いおよ
び位置合わせに起因する複雑さや、ｂ）膜の基本的な接着性質を越えた開発を必
要としたり、ｃ）専用のテープカセット（例えば加圧プレートなどがビルトイン
された）の開発を必要とすることなく、接着性膜の組織上における小さな接触領
域を可能にするという利点を有する。（好適な実施形態の説明）図１を参照して、フィルム片レーザー捕捉顕微解剖装置Ａを説明する。ステッ
パモーター１４は、供給リール１６を駆動して、コーティングされたテープ１８
を送出する。コーティングされたテープ１８は、第１のガイドバー２０、第２の
ガイドバー２２を通り、テープストップ機構２４へと移動する。テープストップ
機構２４は、下側（サンプルＳが最終的に回収される側）からコーティングされ
たテープ１８に当接するストップバー２６と、ソレノイド駆動されるテープスト
ッププランジャー２８とを含む。テープ切断ナイフ３０によって、サンプルＳを
含有したテープをさらなる処理のために小片に切断することができる。

【００２４】スライド３２はサンプルＳを含有する。このサンプルは、サンプルＳの組織３
６と不規則に混合された所望のサンプルセクション３４を含む。サンプルＳから
所望のサンプルセクション３４を正確に単離することが、本開示の目的である。

【００２５】このような単離を行うためには、サンプルＳを可視化しなければならない。こ
こに示されるように、スライド３２の下側から見上げる方向の逆向き光路を有す
る顕微鏡Ｍを目Ｅで模式的に示す。従来同様、スライド３２は、Ｘ方向３８およ
びＹ方向４０に輸送可能なステージに搭載される。

【００２６】最後に、所望のサンプルセクション３４にあるサンプルＳを視野内でセンタリ
ングした後、サンプルＳの所望のサンプルセクション３４をコーティングされた
テープ１８上に収集する必要がある。この収集において、コーティングされたテ
ープ１８は、レーザー光源４２によって活性化される。この活性化後または活性
化中、コーティングされたテープ１８上の活性化されたコーティングは、所望の
サンプルセクション３４にあるサンプルＳに接触させられる。このコーティング
されたテープ１８と所望のサンプルセクション３４との接触または隣接は、プレ
ッシャプレートＰによって行われる。プレッシャプレートＰは、コーティングさ
れたテープ１８の非コーティング側１７に当接し、これにより、テープを動かし
て所望のサンプルセクション３４にあるサンプルＳに並置させる。所望のサンプ
ルセクション３４の接着は、コーティングされたテープ１８のコーティング側に
対して起こる。

【００２７】送出されるコーティングされたテープ１８上の供給リール１６間において一定
の張力を保つことが所望され得る。従って、テープ引張り装置４４が提供される
。この装置が任意に省略可能であることが理解される。

【００２８】コーティングされたテープ１８が所望のサンプルセクション３４に接着した後
、テープを移動させる。通常の状況下では、テープは、テープは所望のサンプル
セクション３４に対して、サンプルＳの組織の残りの部分からサンプルセクショ
ンを切断するのに十分な接着性を有する。

【００２９】図２Ａ〜図２Ｆを参照して、本装置を示す一連の模式図が示されている。図２
Ａにおいて、図示された供給リール１６は、コーティング側１９がスライド３２
上のサンプルＳに接触した状態のコーティングされたテープ１８を有する。予め
活性化されているので、コーティングされたテープ１８は、この時点で、サンプ
ルＳの所望のサンプルセクション３４に接着する。図２Ａおよび図２Ｆを見ると
、プレッシャプレートＰが退避されていることが分かる。

【００３０】図２Ｂを参照して、ガイド２２の周りでテープ１８を引っ張っている力４８に
よって、サンプルセクション３４はスライドから持ち上げられるとともに、テー
プの非コーティング側１７によってプランジャー２８を変位させて、これにより
、サンプル３４がＰの下側から動かされる際に、テープ１８のコーティング側お
よびサンプル３４がストップバー２６に接触しないようにし、テープが供給リー
ル１６から遠ざかる方向に引っ張られる。ステッパモーター１４によって、測定
された量のコーティングされたテープ１８が供給リール１６から引き出される。
この測定量の限界に達したとき、ステッパモーター１４はフリーズし、コーティ
ングされたテープ１８をテープ切断ナイフ３０によって切断する準備状態となる
。当然、ステッパモーター１４がコーティングされたテープ１８の送出を正確に
制御するので、テープ切断ナイフ３０によって切断される全長に対して所望のサ
ンプルセクション３４が位置決めされる。

【００３１】従って、輸送基板が、同定された細胞性物質を受け取る同定されたマッピング
された位置を有することが理解される。

【００３２】図２Ｃにおいて、テープセグメント５０が切断され除去されている。さらに、
テープ停止メカニズム２４が作動している。その結果、コーティングされたテー
プ１８の端部の、Ｐからの位置は固定されており、上記端部は、圧力プレートＰ
がスライド方向にテープを反らせたときに次の視覚化されたサンプルを収集する
ように配置される。

【００３３】図２Ｄを参照すると、スライド３２および従ってサンプルＳが新しい位置に移
動していることが理解される。この新しい位置において、別の所望のサンプル部
３４が、ｘ方向３８およびｙ方向４０へのスライド３２の移動によりピックアッ
プされるように中央に位置づけられている。

【００３４】最後に、図２Ｅを参照すると、圧力プレートＰが、コーティングされたテープ
１８のコーティング面１９を近接させる。ステッピングモータ１４は、もはや停
止しておらず、スライド３２方向にテープを反らせるために必要な弛緩量を提供
する。再び、レーザ光焦点レンズ４６を介した、レーザ光源４２によるコーティ
ング面１９の活性化が起こる。

【００３５】図２Ｆを参照すると、説明したサイクルが反復する準備ができている。図２Ａ
を参照して上記で見られたものと同一のサイクル状態を図２Ｆに示す。

【００３６】図２Ａ〜図２Ｅの動作を考慮すると、選択された活性化コーティングの少なく
ともセグメントが、組織サンプルに並置した状態で輸送基板側に配置され、これ
がマッピングされた位置となる。さらに、そして所望のサンプルセクション３４
を収集する間に、輸送基板とサンプルとが相対的に移動して、選択的に活性化さ
れたコーティングを、抽出されるべき組織サンプルの同定された細胞材料に対し
て並置的に、マッピングされた位置に配置する。その後、選択的に活性化される
コーティングが活性化されて押し付けられるか、または押し付けられて活性化さ
れて、同定された細胞材料に付着する接着性領域を、輸送基板上に形成する。輸
送基板が組織サンプルから除去されると、同定された細胞材料が、マッピングさ
れた位置において、輸送基板に付着する。

【００３７】コーティングされたテープ１８がいくつかの異なる構造を有し得ることが理解
される。図４を参照すると、コーティングされたテープ１８Ａが、例えば、Ｍｙ
ｌａｒ（登録商標）などのポリエステルフィルムから構成されていることが示さ
れている。コーティングされたテープ１８Ａは、テープのコーティング面１９上
に配置された、離散して間隔のあいたコーティングスポット５２を有する。さら
に、スプロケット５６と組合わされてテープを精密に位置づけるスプロケット孔
５４が示されている。互いに異なる、離散して間隔のあいたコーティングスポッ
ト５２の各々は、コーティング中心においてレーザにより別々に活性化される。
レーザ作動中またはレーザ作動後の組織に対する並置は、圧力プレートを用いて
行われる。

【００３８】図５を参照すると、透明基板を含む連続ストリップが、フィルムを保持するた
めに用いられている。透明基板の連続ストリップ、またはコーティングされたテ
ープ１８Ｂは、活性化可能コーティングの中央ストリップ５８を有する。隣接す
るバーコード６０または他の光符号化識別子が、輸送された個々のサンプルを同
定するように作用する。これらのサンプルは、活性化可能コーティングの連続中
央ストリップ５８沿いのいずれかの位置にあり得、または均等に間隔をあけられ
得る。

【００３９】図１１を参照すると、コーティングされたテープ１８が利用されている場合、
選択的にコーティングされたスポットまたは離散して間隔のあいたコーティング
スポット５２を有する輸送基板が同様に用いられ得る。基板は、活性化されたコ
ーティングの局部領域をパンチングまたはカットオフすることにより、基板テー
プの残りの部分から局部的に除去され得る。

【００４０】図１１を参照すると、パンチングされたフィルム部分６４上の所望のサンプル
部分３４を分離するパンチ６２が示されている。このことは、取り付けられた同
定された細胞材料または所望のサンプル部分３４を、パンチングされたフィルム
部分６４上の、輸送基板の小片に局部化されたままにする。輸送基板のこれらの
小片は、さらなる処理および分子分析のために、特定のチャンバまたは試験管６
６などの容器に入れられ得る。

【００４１】図６を参照すると、さらなる実施形態が示されている。この場合、活性化可能
コーティング６８が、コーティングされたテープ１８Ｃ上の引張りタブ７０に取
り付けられている。明らかなように、引張りタブ７０の除去により、活性化コー
ティング６８に集まったサンプルもまた同様に除去される。

【００４２】サンプルを収集し、その後テープに連結したサンプルを保管する必要性があり
得ることが理解されるべきである。従って、図７を参照すると、コーティングさ
れたテープ１８Ｄが巻取りロール７２に集まっている状態が示されている。同時
に、カバーテープ７４が残りのサンプルを覆い、テープの間に挟まった状態で残
りのサンプルの保存を補助する。収集されたサンプルはこのように保存され得る
。

【００４３】図８を参照すると、本発明の別の実施形態が示される。選択的に活性可能なコ
ーティング７６の個々の片が、スポークアレイ７８（これらは、中心の共通の支
持体（例えば、中心ハブ８０）に結合しかつそこから突出する）の末端で取り付
けられる。スポークアクチュエーター８２は、スポークアレイ７８の各スポーク
７９を選択的に押し下げる。図８を参照すると、各末端でその選択的に活性可能
なコーティングを有する各スポークは、輸送基板として機能し、そして中心ハブ
８０から顕微鏡の視野の中心を介して連続的に指標を付けられる。スポークの末
端は、圧力プレートとして役立ち、これはスポークの末端で、組織と、活性可能
なコーティングとを接触する。選択的に活性可能なコートは、例えばソレノイド
によって、スポークが歪められた場合に作動され得る（１回で１個のスポーク、
デイジーホイールプリンターと類似）。活性後、スポーク上の力は除去され、そ
してこのスポークは指標を付けられ、このスポークが、スポークに接着された同
定された細胞材料と共にスライドから離昇することが可能となる。その後、スポ
ークアレイは、次の片のフィルムを所定の位置へ指標を付け、そしてステージは
次の組織標的へと移動され得る。

【００４４】図８において、中心ハブ８０が使用される。コームのような構造と同様に、す
なわち可撓性の裏打ち（ｂａｃｋｉｎｇ）が基板支持体のために使用され得る。

【００４５】図９を参照すると、このアプローチの好ましい変異体は、コーム状アレイ８０
を使用することである（すなわち、標的フィルムスポットは、線形アレイ形態で
あって、これは、「デイジーホイール」の放射状スポークよりも、アレイ軸に垂
直である平行スポークによって線形カートリッジに結合されている）。活性可能
なコーティング８８の小さなスポットは、各コームフィンガー８４の末端の底面
に配置される。小さなソレノイド８６はこのフィンガーを歪ませ、従って、その
末端（これは圧力プレートとして機能する）は、視野の中心のサンプルＳにおけ
る組織に接触する。

【００４６】レーザー加熱後、このソレノイドの力が除去され、フィンガーはその歪められ
ていない状態へ回復し（スライドを離昇し、組織はフィルムに接着される）、こ
のコームは、線形的に指標を付けられ、従って、フィルムの異なるフィンガー／
片は視野の中心にあり、そして、異なる組織標的は所定の位置へ移動され得る。
コーム基部上の光学式マーク９０は、サンプルを同定し得た。この技術は、非常
に小さなそして正確なサンプル抽出を可能にする。

【００４７】図１０および１２（ここで接着性フィルムは、スポークの形態で圧力プレート
に結合されている）を参照すると、同定された細胞材料を有するスポーク７９は
分解され得、そしてこの分解されたスポーク部品９２は、回収およびさらなる処
理のために、容器（例えば試験管６６）カプセルへ配置される。分解する工程は
、その長さに沿って、好都合な位置で、破砕機ソレノイド９４によってなされ得
る。

【００４８】本発明および公知の技術を用いて、視覚化および不可欠なレーザー捕獲顕微分
析（ｔｈｅｒｅｑｕｉｓｉｔｅｌａｓｅｒｃａｐｔｕｒｅｍｉｃｒｏ
ｄｉｓｓｅｃｔｉｏｎ）を分離することが、可能である。図１３Ａを参照すると
、スライド３２が示され、これは、顕微鏡Ｍによって見られるサンプルＳを有す
る。スライド３２は、ｘ−移動矢印９８およびｙ−移動矢印９９によって指標を
付けられたステージ９６上に取り付けられる。

【００４９】図１３Ｂを参照すると、典型的なサンプルＳは、ｘ₁，ｙ₁〜ｘ₄，ｙ₄のように
、多数のサンプル配置を含むことが理解され得る。これらのステージ配置は、観
察で示される場合、一般的にこのようなステージを提供される従来のコンピュー
タメモリに配置される。

【００５０】図１３Ｃを参照すると、レーザー捕獲顕微分析が次いで遠く離れていることが
分かる。詳細には、図２の装置（フィルムストリップレーザー捕獲顕微分析装置
Ａによって概略的に示される）が、ｘ₁，ｙ₁〜ｘ₄，ｙ₄でのサンプル（図１３Ｂ
を参照）を連続的に集めるプロセスで示される。

【００５１】現代の生物科学のさらなる進歩と共を用いて、回収サンプルは、より小さなサ
ンプルまで及ぶことが理解される。例えば、レーザー捕獲顕微分析の技術を使用
して、１個の細胞のサイズ（約５ミクロンから１ミクロンまで）までのサンプル
または非細胞性標的を回収することが可能である。このような小さなサンプルと
共に、対応して縮小された分析体積が要求される。さらに、いくつかの分析のた
めの試薬は、非常に高価であり；サンプルおよび使用される試薬が少なくなるほ
ど、より経済的な試験となる。レーザー捕獲顕微分析は、非常にこのような状況
に適用可能である。

【００５２】元来、レーザー活性化は、最適な回析限界（すなわち、約１ミクロン）に低下
する、複合組織スライド上のエレメントの標的化を可能にする。さらに、フィル
ムおよび基板の各々の移動後の正確な位置により、複数の小さい組織エレメント
は正確に濃縮され得、その結果、これらは、以降の正確なプロセシング（例えば
、分子分析）を可能にするのに十分に均質な物質を含む。

【００５３】読者は、濃縮が、サンプルとテープとの間の接触が活性化前に生じない場合に
最良に行なわれることに留意する。先に蓄積された物質の正確かつ精密な追跡が
行なわれることを推定して、先にテープに収集されたサンプルは、現在収集され
るサンプルにより物理的に影響を与えられない。同時に、後に収集されたこのサ
ンプルは、先に収集されたサンプルと近接する。基板の近接部分に、この収集を
繰り返すことにより、分析されるべき特定の細胞の濃縮が、このような細胞がた
とえ、インサイチュで自然に濃縮されない場合でも、生じ得る。

【００５４】これをより理解するために、選択された細胞領域は重ならないことが好ましい
。重なりが生じる場合、サンプルは損失され得る。さらに、不正確な収集により
、利用されるギャップが変化して、収集パラメーターの予測可能性に影響を及ぼ
し得る。例えば、レーザー照射の線量測定が、変化し得る。

【００５５】レーザー捕獲顕微分析の概念が発達するにつれ、さらに小さいサンプルの正確
な標的化が必要されている。驚くことに、サンプルＳから幾分短い距離（約５ミ
クロン以下）で間隔を開けられたコーティングされたテープ１８上に、レーザー
エネルギーを指向することにより、非常に正確なサンプル収集が生じ得る。

【００５６】この捕獲についての２つの所見が成された。第一に、活性化可能なコーティン
グの厚さが、１００ミクロンの好ましい範囲である場合、テープとサンプルとの
間の間隔は、２〜２０ミクロンの広い範囲で、５〜１５ミクロンの中程度の範囲
で、そして好ましくは約１０ミクロンであり得る。２０〜２００ミクロンの範囲
の活性化可能なフィルムの厚さが、使用され得る。実施限界として、厚さは、コ
ーティングが活性化された場合に、所望の接着性の効果を有するのに十分である
べきである。実施限界として、現在、コーティングは１０ミクロンを超えるべき
であると考えられている。

【００５７】図１４Ａについて言及すると、スライド３２は、サンプルＳと共に示される。
選択された細胞材料Ｃは、先に可視化されている。スライド３２およびサンプル
Ｓに覆い被さり、そのサンプルに対するよう、下方に位置付けされたコーティン
グされた側面１９を含むコーティングされたテープ１８が示される。

【００５８】さらに、コーティングされたテープ１８の、コーティングされた側面１９での
小さくかつ正確に焦点を合わせられたレーザー活性化は、スライド３２およびサ
ンプルＳを通って、コーティングされた側面１９上へ生じる。従って、図１４Ｂ
について言及すると、レーザー光源Ｌは、スライド３２、サンプルＳを通って、
コーティングされた側面１９上へ通過することが示される。図１４Ｂの破線に概
略的に示されるように、レーザー光源Ｌは、反対方向から入射し得ることが理解
される。

【００５９】コーティングされた側面１９は、局所的に活性化され、そして寸法が膨張する
。活性化領域１１２は、拡張されたカラム１１４で、およびサンプルを曝露され
た部位１１６で、下方に拡張し、選択された細胞材料Ｃを固定する。

【００６０】レーザー光源Ｌが消された後に、活性化された表面および標的化された組織が
、非標的化領域からテープにより取り出される時に、拡張されたカラム１１４は
縮小し、続いて、コーティングされた側面１９の元来のプロフィールに戻る。こ
の時、選択された細胞材料Ｃを有する拡張されたカラム１１４を収縮することに
より、サンプルＳから分離される（図１４Ｃを参照のこと）。

【００６１】図１４Ｄについて言及すると、この系のいくつかのさらなる利点が示される。
第一に、コーティングされたテープ１８が輸送され得、その結果、コーティング
されたテープの新しいセグメントがスライド３２上のサンプルＳの標的化部分を
覆う。第二に、新しいスライド３２Ａが導入され得；従って、異なるスライドか
らのいくつかの異なるサンプルＳが、選択された細胞材料Ｃの収集および濃縮に
利用され得る。従って、そして図１４Ｅについて言及すると、２つのスライド３
２および３２Ａからの組織は、結果的にコーティングされたテープ１８上に並ん
で存在する。

【００６２】最終的に、本明細書に説明された収集は、元来のサンプルには見出されない物
質の濃縮という結果になる。

【００６３】これは、選択後に探索された細胞材料が、元来インサイチュで散乱されるか、
または均質に分散されるが、しかし意義深く分析されるために特定の閾値量で濃
縮される必要がある場合に、特に重要である。

【００６４】本発明者らは、先の特許請求の範囲において、用語「並んで（ａｐｐｏｓｉｔ
ｉｏｎ）」を使用する。この用語は、サンプルの選択された部分への輸送基板の
接触または非接触の両方を包含するために使用される。詳細に、そして「並んで
」が使用される場合、基板は、活性化時に選択された細胞材料が形成され得るよ
うに、サンプルに十分近接することが理解される。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、供給リール、レーザ活性化システム、活性化したコーティングを押し
出すためのプレッシャープレート、および別個のフィルムセクションを生成する
ための切断機構と、そのフィルム上に含まれる試料の選択された部分とを含むＬ
ＣＭを実現する機構の透視図である。

【図２Ａ】図２Ａ〜２Ｅは、スライドに載せられた試料から選択されたサンプルを連続的
に取り出す動作の一連の側面図であり、図２Ａは、プレッシャープレートがスラ
イドとの接触から引き出され、コーティングがスライドで選択された試料に付着
する、輸送フィルムを示す。

【図２Ｂ】図２Ａ〜２Ｅは、スライドに載せられた試料から選択されたサンプルを連続的
に取り出す動作の一連の側面図であり、図２Ｂは、サンプルの選択された部分を
スライドから引き出すようにテープが進められる、図２Ａの装置を示す。

【図２Ｃ】図２Ａ〜２Ｅは、スライドに載せられた試料から選択されたサンプルを連続的
に取り出す動作の一連の側面図であり、図２Ｃは、次の連続するサンプルを受け
取るように、テープが完全に進められた状態を示す。

【図２Ｄ】図２Ａ〜２Ｅは、スライドに載せられた試料から選択されたサンプルを連続的
に取り出す動作の一連の側面図であり、図２Ｄは、次のサンプル断片の回収の前
に、進められたテープが把持された状態を示す。

【図２Ｅ】図２Ａ〜２Ｅは、スライドに載せられた試料から選択されたサンプルを連続的
に取り出す動作の一連の側面図であり、図２Ｅは、活性化可能なコーティングを
、サンプルの次の連続して選択された部分に押し出すプレッシャープレートを示
す。

【図３】図３は、下側の長手軸に対して平行に配置されたテープと、装置のサンプル回
収ポイントのＸおよびＹ方向移動を可能にする、スライドに関する横断方向の移
動を有するプレッシャープレートとを示す模式図である。

【図４】図４は、供給リールからのフィルムが、サンプルの回収用の、選択的に活性化
可能なコーティングの、別々で別個であり、等間隔に間隔をあけられたスポット
を含む、本発明による輸送テープの第１の実施形態の平面図である。

【図５】図５は、サンプルへの押し付けのための選択的に活性化可能なコーティングの
別々の中央ストリップを用いる輸送テープの第２の実施形態の平面図である。

【図６】図６は、剥離可能なセクションと、剥離可能なセクション上に活性化可能なコ
ーティングとを有するテープの平面図である。

【図７】図７は、カバーリング層を有するテープを示し、且つ、テープの回収のための
輸送基板またはカバーリング層のいずれかの上のマーカーコーディングの位置を
示す、側面透視図である。

【図８】図８は、パッドと、試料から選択されたサンプルの回収のための選択的に活性
化可能なコーティングとを有する円状スポーク装置の透視図である。

【図９】図９は、指示したサンプルを回収するように、連続する櫛のタイン（ｔｉｎｅ
）を個別的に動作させることによって、サンプルを回収する、一般的な櫛形の構
成を有するタインの直線状スポークアレイの透視図である。

【図１０】図１０は、活性化可能なコーティングを組織サンプルに押し付けるように輸送
基板を通じて動くスポークと、スポークの端部に位置付けられた活性化可能なコ
ーティングとを示すスポークの詳細図である。

【図１１】図１１は、テープから回収バイアルへと抽出されたサンプルを示す。

【図１２】図１２は、回収バイアルにテープから回収されたサンプルを示す。

【図１３Ａ】図１３Ａは、メモリに位置付けられる可視化の結果で、サンプルが可視化され
る装置を示す。

【図１３Ｂ】図１３Ｂは、図１３Ａのスライドを示し、選択された細胞材料の位置を模式的
に示す。

【図１３Ｃ】図１３Ｃは、図１３Ａの装置によって準備されたメモリを用いるレーザ捕獲顕
微分析を遠隔管理するように活性化された装置に送られる図１３Ａのスライドを
示す。

【図１４Ａ】図１４Ａ〜１４Ｅは、非接着レーザ捕獲顕微分析におけるコーティングの活性
化を示し、図１４Ａは、ギャップ分だけ標的組織から後退している輸送基板の１
つの側面上の、選択的に活性化されたコーティングを示す。

【図１４Ｂ】図１４Ａ〜１４Ｅは、非接着レーザ捕獲顕微分析におけるコーティングの活性
化を示し、図１４Ｂは、コーティングを活性化し、活性化されたコーティングが
、同定された細胞材料の試料に向かって下方に拡張するように、レーザーエネル
ギーが組織サンプルを通じて選択的に活性化されたコーティングへと方向付けら
れた状態を示す模式図である。

【図１４Ｃ】図１４Ａ〜１４Ｅは、非接着レーザ捕獲顕微分析におけるコーティングの活性
化を示し、図１４Ｃは、輸送基板への細胞材料の接着および選択的に活性化され
たコーティングの収縮後の輸送基板ならびに選択的に活性化されたコーティング
を示す。

【図１４Ｄ】図１４Ａ〜１４Ｅは、非接着レーザ捕獲顕微分析におけるコーティングの活性
化を示し、図１４Ｄは、図１４Ｃの輸送基板と、基板の下に位置付けられた新し
い異なるスライドおよび組織サンプルとを示す。

【図１４Ｅ】図１４Ａ〜１４Ｅは、非接着レーザ捕獲顕微分析におけるコーティングの活性
化を示し、図１４Ｅは、２つの異なるスライドからのサンプルを有する輸送基板
を示し、ここに示す回収は、選択された材料が２つの別々のサンプルに含まれて
いるにも関わらず、選択された細胞材料の効果的な集中を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者ボナー，ロバートエフ．アメリカ合衆国メリーランド 20892，ベセスダ，ルーム３エヌ17，ビルディング 13，ナショナルインスティチュートオブヘルス内 (72)発明者スミス，ポールディー．アメリカ合衆国メリーランド 20892，ベセスダ，ルーム３エヌ17，ビルディング 13，ナショナルインスティチュートオブヘルス内 (72)発明者ピーターソン，ジョンアメリカ合衆国メリーランド 20892，ベセスダ，ルーム３ダブリュー12，ビルディング 13，ナショナルインスティチュートオブヘルス内 (72)発明者ポヒダ，トーマスアメリカ合衆国メリーランド 20892，ベセスダ，ルーム 2033，ビルディング 12エイ，ナショナルインスティチュートオブヘルス内Ｆターム(参考） 2H052 AE07 AF19

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】組織サンプルから輸送基板上に集められた、選択されそして
同定された細胞材料の位置を指定する方法において、以下の工程：輸送基板を提供する工程；該輸送基板においてマッピングされた位置を提供する工程；該輸送基板上でマッピングされた位置において該輸送基板の一方の側に、少な
くとも１つの選択的に活性化されたコーティングのセグメントを提供する工程で
あって、該選択的に活性化されたコーティングのセグメントは、活性化の際に該
組織サンプルに対して接着性となる、工程；該輸送基板を移動させて、該選択的に活性化されたコーティングを、抽出され
るべき該組織サンプルの同定された細胞材料に並列にマッピングされた位置に配
置する工程；該輸送基板を該組織サンプルに向けて押し付けて、該選択的に活性化されたコ
ーティングを、該組織サンプルの該同定された細胞材料と接触させる工程；該選択的に活性化されたコーティングを選択的に活性化させて、該同定された
細胞材料に接着させるために該輸送基板上に接着領域を形成させる工程；および該接着領域に接着している該組織サンプルの該同定された細胞材料とともに該
輸送基板を取り出す工程であって、ここで、該組織サンプル由来の該同定された
細胞材料が該輸送基板上のマッピングされた位置に存在する、工程、を包含する、方法。
【請求項２】前記輸送基板を提供する工程がテープを提供する工程、を包
含する、請求項１に記載の選択されそして同定された細胞材料の位置を指定する
方法。
【請求項３】前記輸送基板を提供する工程が支柱アレイを提供する工程、
を包含する、請求項１に記載の選択されそして同定された細胞材料の位置を指定
する方法。
【請求項４】前記輸送基板を提供する工程が直鎖状のスポークアレイを提
供する工程、を包含する、請求項３に記載の選択されそして同定された細胞材料
の位置を指定する方法。
【請求項５】前記輸送基板を提供する工程が円形支柱アレイを提供する工
程、を包含する、請求項１に記載の選択されそして同定された細胞材料の位置を
指定する方法。
【請求項６】前記押し付ける工程が以下：プレートを提供する工程；および該プレートを通じて該輸送基板に圧力を印加して前記同定された細胞材料へと
前記選択的に活性化されたコーティングを押し付ける工程、を包含する、請求項１に記載の選択されそして同定された細胞材料の位置を指定
する方法。
【請求項７】前記押し付ける工程が、さらに以下：前記プレートを通じて前記輸送基板へ圧力を印加した後に前記選択的に活性化
されたコーティングを選択的に活性化して、該輸送基板上の前記接着領域を前記
同定された細胞材料へと接着させる工程、を包含する、請求項６に記載の選択されそして同定された細胞材料の位置を指定
する方法。
【請求項８】前記押し付ける工程が、以下：支柱付きのホイールを提供する工程；および個々選択された支柱を通じて前記輸送基板上に圧力を印加して、前記同定され
た細胞材料上に前記選択的に活性化されたコーティングを押し付ける工程、を包含する、請求項１に記載の選択されそして同定された細胞材料の位置を指定
する方法。
【請求項９】前記押し付ける工程が、以下：直鎖状に整列された複数の支柱を提供する工程；および選択された個々の支柱を通じて前記輸送基板上に圧力を印加して前記選択的に
活性化されたコーティングを前記同定された細胞材料に押し付ける工程、を包含する、請求項１に記載の選択されそして同定された細胞材料の位置を指定
する方法。
【請求項１０】さらに以下の工程：前記サンプルから前記輸送基板を取り出す際に該輸送基板を別個のユニットへ
と分離する工程、を包含する、請求項１に記載の選択されそして同定された細胞材料の位置を指定
する方法。
【請求項１１】前記サンプルから既知の位置における前記輸送基板を分離
する前に、該輸送基板を張力の下に配置する工程、を包含する、請求項６に記載の選択されそして同定された細胞材料の位置を指定
する方法。
【請求項１２】前記提供された輸送基板が前記活性化可能な材料の離脱可
能な層を含む、請求項１に記載の選択されそして同定された細胞材料の位置を指
定する方法。
【請求項１３】前記輸送基板の一方の側に、少なくとも１つの選択的に活
性化されたコーティングのセグメントを配置する工程が以下：選択的に活性化されたコーティングの一連の小さな別個のスポットを既知の位
置における該輸送基板の一方の側に配置する工程、を包含する、請求項１に記載の選択されそして同定された細胞材料の位置を指定
する方法。
【請求項１４】前記輸送基板の一方の側に、少なくとも１つの選択的に活
性化されたコーティングのセグメントを配置する工程が以下：選択的に活性化されたコーティングの狭い連続的なストリップを、該輸送基板
の一方の側に配置する工程、を包含する、請求項１に記載の選択されそして同定された細胞材料の位置を指定
する方法。
【請求項１５】前記輸送基板に関してマッピングされた位置を提供する工
程が以下：前記選択的に活性化されたコーティングの接触に関して、該輸送基板を、前記
同定された細胞材料を用いて標識する工程、を包含する、請求項１に記載の選択されそして同定された細胞材料の位置を指定
する方法。
【請求項１６】前記輸送基板に関してマッピングされた位置を提供する工
程が以下：該輸送基板上に配置された前記同定された細胞材料を同定するために、該輸送
基板上の印を同定することを提供する工程、を包含する、請求項１に記載の選択されそして同定された細胞材料の位置を指定
する方法。
【請求項１７】組織サンプルから輸送基板上に集められた、選択されそし
て同定された細胞材料の位置を指定する方法において、以下の工程：組織サンプルを顕微鏡で観察して、該組織サンプルから解剖のために顕微鏡視
野に関して同定された細胞材料を正確に配置する工程；輸送基板を提供する工程；該輸送基板においてマッピングされた位置を提供する工程；該輸送基板上でマッピングされた位置において該輸送基板の一方の側に、少な
くとも１つの選択的に活性化されたコーティングのセグメントを提供する工程で
あって、該選択的に活性化されたコーティングのセグメントは、活性化の際に該
組織サンプルに対する接着性領域を形成する、工程；該輸送基板上の該選択的に活性化されたコーティングを抽出されるべきである
該組織サンプルの同定された細胞材料と並列な位置であるが、該輸送基板と組織
との間に小さな空間分離を伴って輸送する工程；該選択的に活性化されたコーティングを選択的に活性化させて、該選択的に活
性化されたコーティングの活性化された位置を、該小さな空間分離を横切って拡
張させ、そして該組織サンプルの該同定された細胞材料と接触させて、該同定さ
れた細胞材料と接触する該輸送基板上の接着性領域を形成する工程；および該輸送基板を該接着性領域に付着する該組織サンプルの該同定された細胞材料
とともに取り出す工程であって、ここで、該同定された細胞材料は、該マッピン
グされた位置において該輸送基板に付着している、工程、を包含する、方法。
【請求項１８】請求項１７に記載の、組織サンプルからの輸送基板上に集
められた、選択および同定された細胞材料の位置を指定する方法において：前記選択的に活性化されたコーティングと該同定された細胞材料との間に少な
くとも１つのスペーサーを配置し、小空間分離でそれらの並置を維持する工程を
さらに包含する、方法。
【請求項１９】組織サンプルからの同定された細胞材料を収集するための
装置であって：輸送基板；該輸送基板上のマッピングされた位置；該輸送基板上のマッピングされた位置における、該輸送基板の１つの側面上の
選択的に活性化されたコーティングの少なくともセグメントであって、活性化に
際し、組織サンプルに接着性になる、選択的に活性化されたコーティングのセグ
メント；該輸送基板を移動させて、抽出されるべき組織サンプルの同定された細胞材料
と並置されるマッピングされた位置に、該選択的に活性化されたコーティングを
配置する手段；該輸送基板を該組織サンプルに向かって押し、該選択的に活性化されたコーテ
ィングを、該組織サンプルの同定された細胞材料と接触させる手段；該選択的に活性化されたコーティングを活性化して、該同定された細胞材料に
接着させるために該輸送基板上に接着領域を形成する手段；および該輸送基板を、該接着領域に付着する組織サンプルの同定された細胞材料とと
もに移動させ、それによって該組織サンプルからの同定された細胞材料が、該輸
送基板上のマッピングされた位置にするための手段、を備える装置。
【請求項２０】前記輸送基板がテープである、請求項１９に記載の組織サ
ンプルから同定された細胞材料を収集する装置。
【請求項２１】前記輸送基板がスポークアレイである、請求項１９に記載
の組織サンプルから同定された細胞材料を収集する装置。
【請求項２２】前記輸送基板が直線状スポークアレイである、請求項１９
に記載の組織サンプルから同定された細胞材料を収集する装置。
【請求項２３】前記輸送基板が環状スポークアレイである、請求項１９に
記載の組織サンプルから同定された細胞材料を収集する装置。
【請求項２４】前記押し付ける手段が：プレート；および前記輸送基板上に、該プレートを通じて圧力を付与し、前記同定された細胞材
料上に前記選択的に活性化されたコーティングを押し付ける手段を備える、請求
項１９に記載の組織サンプルから同定された細胞材料を収集する装置。
【請求項２５】前記押し付ける手段が：スポークを備えたホイール；および前記輸送基板上に、個々の選択されたスポークの各々を通じて圧力を付与し、
前記同定された細胞材料上に前記選択的に活性化されたコーティングを押し付け
る手段を備える、請求項１９に記載の組織サンプルから同定された細胞材料を収
集する装置。
【請求項２６】前記押し付ける手段が：直線上に配置された複数のフィンガー；および前記輸送基板上に、個々の選択されたフィンガーの各々を通じて圧力を付与し
、前記同定された細胞材料上に前記選択的に活性化されたコーティングを押し付
ける手段を備える、請求項１９に記載の組織サンプルから同定された細胞材料を
収集する装置。
【請求項２７】前記組織サンプルの同定された細胞材料からの前記輸送基
板の取り出しに際し、該輸送基板を別のユニットに分離する手段を備える、請求
項１９に記載の組織サンプルから同定された細胞材料を収集する装置。
【請求項２８】前記組織サンプルから既知の距離に前記輸送基板を分離す
る手段を備える、請求項１９に記載の組織サンプルから同定された細胞材料を収
集する装置。
【請求項２９】前記輸送基板が、前記選択的に活性化されたコーティング
の離脱可能な層を含む、請求項１９に記載の組織サンプルから同定された細胞材
料を収集する装置。
【請求項３０】前記輸送基板の１つの側面上の選択的に活性化されたコー
ティングのセグメントが：既知の位置にある該輸送基板の１つの側面上の選択的に活性化されたコーティ
ングのスポットの個別のセットを含む、請求項１９に記載の組織サンプルから同
定された細胞材料を収集する装置。
【請求項３１】選択および同定された細胞材料を、組織サンプルからの輸
送基板上に配置するための装置であって：該組織サンプルからの解剖のために、同定された細胞材料を顕微鏡視野に対し
て正確に配置する手段；輸送基板；該輸送基板上のマッピングされた位置；該マッピングされた位置における、該輸送基板の１つの側面上の選択的に活性
化されたコーティングの少なくともセグメントであって、活性化に際し、該組織
サンプルに対する接着領域を有する、選択的に活性化されたコーティングのセグ
メント；該輸送基板上選択的に活性化されたコーティングを、抽出されるべき組織サン
プルの同定された細胞材料との並置に輸送する手段；該輸送基板を、該選択的に活性化されるコーティングにおいて、該同定された
細胞材料から小空間分離で保持するための手段；該選択的に活性化されたコーティングを活性化して、該選択的に活性化された
コーティングの活性化された部分を、該小空間分離を横切って伸ばし、そして該
組織サンプルの同定された細胞材料と接触させて、該同定された細胞材料と接触
する輸送基板上の接着領域を形成する手段；および該輸送基板を、該接着領域に付着する組織サンプルの同定された細胞材料とと
もに取りだし、それによって該同定された細胞材料が、該マッピングされた位置
において該輸送基板に付着する手段、を備える装置。
【請求項３２】前記選択的に活性化されたコーティングと前記細胞材料と
の間に少なくと１つのスペーサーを配置し、前記小空間分離との並置を維持する
手段をさらに備える、請求項３１に記載の、輸送基板上に、組織サンプルからの
選択および同定された細胞材料を配置するための装置。
【請求項３３】組織サンプルから同定された細胞材料を収集するための輸
送基板であって：輸送基板；該輸送基板上のマッピングされた位置における該輸送基板の１つの側面上にあ
る選択的に活性化されたコーティングの少なくともセグメント；を備え、該輸送基板および選択的に活性化されたコーティングが可視光中で透明であり
；該選択的に活性化されたコーティングのセグメントが、照射による活性化に際
し該組織サンプルに接着性になり；そして該選択的に活性化されたコーティングのセグメントが、活性化なしでは該組織
サンプルに接着性ではない、輸送基板。
【請求項３４】組織サンプル由来の、同定された細胞材料を収集するため
の請求項３３に記載の輸送基板であり、かつ、ここで該基板は、前記選択的に活
性化されたコーティングに隣接する輸送基板によって支持される染料を備え、該染料は可視光の下で透明であり、そして、該染料は可視光以外の照射に対して共役する、輸送基板。
【請求項３５】組織サンプル由来の、同定された細胞材料を収集するため
の請求項３４に記載の輸送基板であり、かつさらに前記染料が赤外線吸収である
、基板。
【請求項３６】組織サンプル由来の、同定された細胞材料を収集するため
の請求項３３に記載の輸送基板であり、かつさらに該輸送基板はテープである、
輸送基板。
【請求項３７】組織サンプル由来の、同定された細胞材料を収集するため
の請求項３３に記載の輸送基板であり、かつさらに該輸送基板がスポークアレイ
である、輸送基板。
【請求項３８】組織サンプル由来の、同定された細胞材料を収集するため
の請求項３３に記載の輸送基板であり、かつさらに該輸送基板が直線状スポーク
アレイである、輸送基板。
【請求項３９】組織サンプル由来の、同定された細胞材料を収集するため
の請求項３３に記載の輸送基板であって、かつさらに該輸送基板が環状スポーク
アレイである、輸送基板。
【請求項４０】組織サンプル由来の、同定された細胞材料を収集するため
の請求項３３に記載の輸送基板であり、かつさらに前記活性化されたコーティン
グが該組織サンプルと化学結合を形成しない、輸送基板。
【請求項４１】組織サンプル由来の、輸送基板上の選択されかつ同定され
た細胞材料を集める方法であって、該方法は以下の工程を包含する：細胞材料を有する組織サンプルを提供する工程；該組織サンプルを支持基板上に配置する工程；輸送基板を提供する工程；該輸送基板上のマッピングされた位置を提供する工程；該輸送基板上の該マッピングされた位置で該輸送基板の片側に、選択的に活性
化されたコーティングの少なくとも１つのセグメントを配置する工程であって、
該選択的に活性化されたコーティングのセグメントは活性化の際に該組織サンプ
ルに接着性になる、工程；該輸送基板を動かして、抽出されるべきである該組織サンプルの同定された細
胞材料に対して並列している該マッピングされた位置に、該選択的に活性化され
たコーティングを配置する工程；該同定された細胞材料に対する接着のために、選択的に活性化されたコーティ
ングを選択的に活性化して、該輸送基板上に接着性領域を形成する工程；ならび
に、該接着性領域に付着される、該組織サンプルの該同定された細胞材料を有する
該輸送基板を取り出し、それによって該組織サンプル由来の該同定された細胞材
料が該輸送基板上の該マッピングされた位置に存在する工程、を包含する方法。
【請求項４２】請求項４１に記載の選択されかつ同定された細胞材料を集
める方法であって、かつ前記輸送基板を前記組織サンプルの方に押しつけて、該
組織サンプルの同定された細胞材料と接触する選択的に活性化されたコーティン
グをもたらす工程を包含する、方法。
【請求項４３】請求項４１に記載の選択されかつ同定された細胞材料を集
める方法であって、かつさらに前記組織サンプルを支持基板上に配置する工程で
あって、該工程は透明スライド上に前記組織サンプルを配置する工程を包含する
、方法。
【請求項４４】輸送基板上の不均一に分散した選択された細胞材料を間隔
を開けたインサイチュ位置から集中した、並んだ配置へ集中させる方法であって
、該方法は以下の工程を包含する：少なくとも１つのサンプルを提供する工程であって、前記サンプルはインサイ
チュでの位置から間隔の開いた、不均一に分散した選択された細胞材料を有する
、工程；輸送基盤を提供する工程；該輸送基板の片側に選択的に活性化されたコーティングを配置する工程であっ
て、該選択的に活性化されたコーティングのセグメントは活性化の際に該組織サ
ンプルに対して接着性になる工程；該輸送基板上の第１のマッピングされた位置を提供する工程；該輸送基板を動かして、抽出されるべきである該組織サンプルの第１の同定さ
れた細胞材料に対して並列している該第１のマッピングされた位置に、該選択的
に活性化されたコーティングを配置する工程；該同定された細胞材料に対する接着のために、該選択的に活性化されたコーテ
ィングを選択的に活性化して、該輸送基板上に接着性領域を形成する工程；該接着性領域に付着される、該組織サンプルの該第１の同定された細胞材料を
有する該選択的に活性化されたコーティングを取り出し、それによって該組織サ
ンプル由来の該第１の同定された細胞材料が該輸送基板上の該第１のマッピング
された位置に存在する工程；該輸送基板上の該第１のマッピングされた位置にすぐ隣接する該輸送基板上の
第２のマッピングされた位置を提供する工程；該輸送基板を動かして、抽出されるべきである該サンプルの第２の同定された
細胞材料に対して並列している該第２のマッピングされた位置に、該選択的に活
性化されたコーティングを配置する工程；該同定された細胞材料に対する接着のために、選択的に活性化されたコーティ
ングを選択的に活性化して、該輸送基板上に接着性領域を形成する工程；該接着性領域に付着される、該組織サンプルの該第２の同定された細胞材料を
有する該輸送基板を取り出し、それによって該組織サンプル由来の該第２の同定
された細胞材料が、該輸送基板上の該第２のマッピングされた位置に該第１のマ
ッピングされた位置に並んで存在して該不均一に分散した選択された細胞材料を
集中させる工程。
【請求項４５】不均一に分散した選択された細胞材料を間隔を開けられた
インサイチュ位置から集中させて並んだ配置へと集中させる、請求項４４に記載
の方法であって、ここで：前記少なくとも１つのサンプル工程を提供する工程が２つ以上のサンプルを提
供する工程を包含する、方法。
【請求項４６】不均一に分散した選択された細胞材料を間隔を開けられた
インサイチュ位置から集中させて並んだ配置へと集中させる、請求項４４に記載
の方法であって、ここで：該輸送基板を動かして、抽出されるべきである該サンプルの同定された細胞材
料に対して並列している前記マッピングされた位置に、該選択的に活性化された
コーティングを配置する工程であって、該工程は活性化の前には該選択された細
胞材料を輸送基板と接触させない工程を包含する。