JP2023526551A - グルカゴン誘導体の持続型結合体の液状製剤 - Google Patents

Abstract

本発明は、グルカゴン誘導体の持続型結合体の液状製剤及びその製造方法に関する。

Description

本発明は、グルカゴン誘導体の持続型結合体の液状製剤及びその製造方法に関する。

最近経済的発展と食習慣などの変化により肥満、高脂血症、高血圧、動脈硬化、高インスリン血症、糖尿病又は肝疾患など多様な疾患を含むメタボリックシンドローム関連疾患の発病が急増している状況である。このような疾患はそれぞれ発生することもあるが、一般には互いに密接な関連を結んでいながら種々の症状を伴って発生する場合が大部分である。

特に、国際保健機構（Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｓａｔｉｏｎ、ＷＨＯ）によると、全世界的に１０億人以上の成人が過体重であり、そのうち少なくとも３００万人以上が臨床的に肥満で、特にヨーロッパで毎年２５０，０００人、全世界的には毎年２５０万人以上が過体重と関連して死亡した。

肥満は全世界的な疾病として各種疾患の原因にもなる深刻な疾病であるが、個人の自救的な努力により克服できると信じられる傾向がある。しかし、肥満は意外と治療が容易ではないが、その理由は、肥満が食欲調節及びエネルギー代謝の作用機序に関連した複雑な疾患のためである。したがって、肥満を治療するためには、患者自身の努力だけでなく食欲調節及びエネルギー代謝と関連した非正常な作用機序を治療する方法が同時に行われなければならないため、前記非正常な作用機序を治療できる医薬を開発しようとする努力が続いている。

上述した努力の結果として、リモナバント（Ｒｉｍｏｎａｂａｎｔ、Ｓａｎｏｆｉ－Ａｖｅｎｔｉｓ）、シブトラミン（Ｓｉｂｕｔｒａｍｉｎ、Ａｂｂｏｔｔ）、コントレイブ（Ｃｏｎｔｒａｖｅ、Ｔａｋｅｄａ）、オルリスタット（Ｏｒｌｉｓｔａｔ、Ｒｏｃｈｅ）などの肥満治療剤が開発されたが、これらは致命的な副作用を示したり肥満治療の効果が不備であるという短所があった。このように、従来の肥満治療剤の問題を解消できる新たな医薬品を開発しようとする研究が活発に進められており、最近はグルカゴン誘導体に関心が集中している。

グルカゴンは、薬物治療又は疾病、ホルモンや酵素欠乏などの原因により血糖が落ち始めれば膵臓で生産される。グルカゴンは、肝臓でグリコーゲンを分解してグルコースを放出するように信号し、血糖水準を正常水準まで高める役割をする。また、グルカゴンは、低血糖症を治療するのに効果的であることが伝えられた。グルカゴンの低血糖治療の効果は、肝グリコーゲンのグルコースへの分解（グリコーゲン分解）を刺激したり、肝臓から増加したグルコース流出をもたらすアミノ酸前駆体から誘導されたグルコース生成（グルコース生合成）を増加させた結果である。

それだけでなく、グルカゴンは、血糖上昇効果以外に食欲抑制及び脂肪細胞のホルモン敏感性リパーゼ（ｈｏｒｍｏｎｅ－ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｌｉｐａｓｅ）を活性化させて脂肪分解を促進し、抗肥満効果を奏することが報告された。しかし、グルカゴンは低い溶解度と中性ｐＨにおける沈殿により治療剤としてその使用が制限されてきた。

従って、物性が改善されたグルカゴンは、深刻な低血糖の治療や脂肪分解と肝臓におけるベータ酸化（β－ｏｘｙｄａｔｉｏｎ）の増加など、グルカゴン単独で非アルコール性脂肪肝（ＮＡＳＨ）あるいは脂質異常症（ｄｙｓｌｉｐｉｄｅｍｉａ）などの治療に有用である。

低血糖の治療のための薬物としては、ジアゾキシド（ｄｉａｚｏｘｉｄｅ）、オクトレオチド（ｏｃｔｒｅｏｔｉｄｅ）、グルカゴンなどが用いられる。このうちグルカゴンは低い溶解度と中性ｐＨにおける沈殿により現在は凍結剤形として用いられ、使用前に溶媒に溶かして用いなければならない煩わしさがあり、さらに短い半減期により長期治療が必要な先天性高インスリン症治療剤として使用時に頻繁な投与によりその使用が制限されてきた。

このような技術的背景の下で本発明者らは、グルカゴンの物性を改善して低血糖と肥満に対する治療効果を増進させるためにグルカゴンのアミノ酸配列が一部変形された誘導体を開発した（国際公開特許ＷＯ２０１６／１０８５８６及び国際公開特許ＷＯ２０１７／００３１９１）。Ｉｎ ｖｉｔｒｏ活性測定を通じて開発されたグルカゴン誘導体がグルカゴン受容体を活性化させることを確認した。また、体内半減期を増加させる前記グルカゴン誘導体の持続型結合体を開発し、前記持続型結合体が天然グルカゴンとは異なる変化したｐＩにより中性ｐＨで改善された溶解度及び高い安定性を示すことを確認した（国際公開特許ＷＯ２０１７／００３１９１）。

国際公開特許ＷＯ２０１６／１０８５８６ 国際公開特許ＷＯ２０１７／００３１９１ 国際特許公開第ＷＯ９７／３４６３１号 国際特許公開第９６／３２４７８号 国際公開特許ＷＯ２００７／０２１１２９

H.Neurath, R.L.Hill, The Proteins, Academic Press, New York, 1979

グルカゴン誘導体の持続型結合体をウイルス汚染のおそれなしに長時間保管できる安定した液状製剤の開発が依然として求められる。

本発明の一つの目的は、グルカゴン誘導体の持続型結合体の液状製剤を提供することにある。

本発明の他の目的は、前記液状製剤を製造する方法を提供することにある。

本発明による液状製剤は、簡単な剤形で分子量が大きい本発明の結合体に保存安定性を提供し、経済的な提供が可能な利点がある。

緩衝物質の種類に応じたグルカゴン誘導体の持続型結合体の安定性を確認した結果である。具体的には、実施例２の表３のような組成（表３の＃１番、＃３番、及び＃５番の組成）をそれぞれグルカゴン誘導体の持続型結合体の液状製剤として用いて２５℃で７週間保管後に安定性の結果を示したものである。結果中、緩衝物質として酢酸ナトリウムとヒスチジン製剤が２５℃で７週間最高の安定性を示した。

本発明を具現する一つの様態は、グルカゴン誘導体の持続型結合体の液状製剤である。前記持続型結合体は、グルカゴン誘導体に対して活性を有するペプチドが免疫グロブリンＦｃ切片にリンカーにより共有結合されている物質を意味する。

一つの具体例として、本発明は、グルカゴン誘導体ペプチド及び免疫グロブリンＦｃ切片が互いに連結された、グルカゴン誘導体ペプチドの持続型結合体を薬理学的有効量として含み、ｉ）緩衝物質及びｉｉ）糖アルコール、糖又はそれらの組み合わせを含むアルブミン非含有安定化剤を含む、グルカゴン誘導体ペプチドの持続型結合体の液状製剤に関する。前記持続型結合体は、グルカゴン誘導体ペプチドが免疫グロブリンＦｃ切片に共有結合されている物質を意味する。

一つの具体例として、前記液状製剤は、下記化学式（１）の持続型結合体；緩衝物質；及び糖アルコール、糖、又はそれらの組み合わせを含む持続型結合体の液状製剤であることを特徴とする：

Ｘ － Ｌａ － Ｆ

前記化学式（１）において、Ｘは、グルカゴン誘導体ペプチドであり、
Ｌはリンカーであり、
ａは、０又は自然数であり、ただし、ａが２以上である時、それぞれのＬは互いに独立しており；
Ｆは、免疫グロブリンＦｃ切片であり、
－は、共有結合を示す：

[一般式１]
Ｙ－Ｘ２－ＱＧＴＦ－Ｘ７－ＳＤ－Ｘ１０－Ｓ－Ｘ１２－Ｘ１３－Ｘ１４－Ｘ１５－Ｘ１６－Ｘ１７－Ｘ１８－Ｘ１９－Ｘ２０－Ｘ２１－Ｆ－Ｘ２３－Ｘ２４－Ｗ－Ｌ－Ｘ２７－Ｘ２８－Ｔ－Ｘ３０（一般式１、配列番号４６）

前記一般式１において、
Ｘ２はα－メチルグルタミン酸（α－ｍｅｔｈｙｌ－ｇｌｕｔａｍｉｃ ａｃｉｄ）、Ａｉｂ（ａｍｉｎｏｉｓｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）、Ｄ－アラニン、グリシン（Ｇ）、Ｓａｒ（Ｎ－ｍｅｔｈｙｌｇｌｙｃｉｎｅ）、セリン（Ｓ）又はＤ－セリンであり、
Ｘ７はトレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１０はチロシン（Ｙ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１２はリシン（Ｋ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１３はチロシン（Ｙ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１４はロイシン（Ｌ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１５はアスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１６はグルタミン酸（Ｅ）、アスパラギン酸（Ｄ）、セリン（Ｓ）、α－メチルグルタミン酸、又はシステイン（Ｃ）であるか、存在せず；
Ｘ１７はアスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン（Ｑ）、グルタミン酸（Ｅ）、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、システイン（Ｃ）、又はバリン（Ｖ）であるか、存在せず；
Ｘ１８はアラニン（Ａ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン（Ｑ）、グルタミン酸（Ｅ）、アルギニン（Ｒ）、バリン（Ｖ）、又はシステイン（Ｃ）であるか、存在せず；
Ｘ１９はアラニン（Ａ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、バリン（Ｖ）、又はシステイン（Ｃ）であるか、存在せず；
Ｘ２０はリシン（Ｋ）、ヒスチジン（Ｈ）、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アルギニン（Ｒ）、α－メチルグルタミン酸、又はシステイン（Ｃ）であるか、存在せず；
Ｘ２１はアスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、又はシステイン（Ｃ）であるか、存在せず；
Ｘ２３はイソロイシン（Ｉ）、バリン（Ｖ）、又はアルギニン（Ｒ）であるか、存在せず；
Ｘ２４はバリン（Ｖ）、アルギニン（Ｒ）、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、グルタミン酸（Ｅ）、リシン（Ｋ）、グルタミン（Ｑ）、α－メチル－グルタミン酸、又はロイシン（Ｌ）であるか、存在せず；
Ｘ２７はイソロイシン（Ｉ）、バリン（Ｖ）、アラニン（Ａ）、リシン（Ｋ）、メチオニン（Ｍ）、グルタミン（Ｑ）、又はアルギニン（Ｒ）であるか、存在せず；
Ｘ２８はグルタミン（Ｑ）、リシン（Ｋ）、アスパラギン（Ｎ）、又はアルギニン（Ｒ）であるか、存在せず；
Ｘ３０はシステイン（Ｃ）であるか、又は存在しなくてもよい（ただし、前記一般式１のアミノ酸配列が配列番号：１及び配列番号１２と同一の場合は、除く）。

前記Ａｉｂはアミノイソ酪酸（ａｍｉｎｏｉｓｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）を意味する。本明細書において「Ａｉｂ」は「２－アミノイソ酪酸（２－ａｍｉｎｏｉｓｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）」又は「アミノイソ酪酸（ａｍｉｎｏｉｓｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）」で混用され得る。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記グルカゴン誘導体ペプチドの持続型結合体において前記グルカゴン誘導体ペプチドは、下記一般式２のアミノ酸配列を含むことを特徴とする：

Ｙ－Ａｉｂ－ＱＧＴＦ－Ｘ７－ＳＤ－Ｘ１０－Ｓ－Ｘ１２－Ｙ－Ｌ－Ｘ１５－Ｘ１６－Ｘ１７－Ｒ－Ａ－Ｘ２０－Ｘ２１－Ｆ－Ｖ－Ｘ２４－Ｗ－Ｌ－Ｍ－Ｎ－Ｔ－Ｘ３０（一般式２、配列番号：４７）

前記一般式２において、
Ｘ７はトレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１０はチロシン（Ｙ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１２はリシン（Ｋ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１５はアスパラギン酸（Ｄ）、又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１６はグルタミン酸（Ｅ）又はセリン（Ｓ）であり、
Ｘ１７はリシン（Ｋ）又はアルギニン（Ｒ）であり、
Ｘ２０はグルタミン（Ｑ）又はリシン（Ｋ）であり、
Ｘ２１はアスパラギン酸（Ｄ）、又はグルタミン酸（Ｅ）であり、
Ｘ２４はバリン（Ｖ）又はグルタミン（Ｑ）であり、
Ｘ３０はシステイン（Ｃ）であるか、又は存在しない
（ただし、前記一般式２のアミノ酸配列が配列番号１及び配列番号１２と同一の場合は除く）。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記液状製剤は１８～９３６ｎｍｏｌ／ｍＬの前記化学式（１）の持続型結合体；前記液状製剤のｐＨを４．８～６．５の範囲で維持するための分量の緩衝物質；及び１．０～２０％（ｗ／ｖ）の糖アルコール、糖、又はそれらの組み合わせ；を含む持続型結合体の液状製剤であることを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記液状製剤は糖又は糖アルコール、非イオン性界面活性剤及びアミノ酸からなる群から選択される一つ以上の成分をさらに含むことを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記液状製剤は糖又は糖アルコール、アミノ酸、又はこれら両方をさらに含む、グルカゴン誘導体ペプチドの持続型結合体の液状製剤であることを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記液状製剤は緩衝物質、糖又は糖アルコール、及びアミノ酸を含むことを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記液状製剤は緩衝物質、糖又は糖アルコール、非イオン性界面活性剤、及びアミノ酸を含むことを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記液状製剤は、非イオン性界面活性剤、アミノ酸、又はこれら両方をさらに含むことを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記液状製剤はｉ）糖又は糖アルコール、ｉｉ）非イオン性界面活性剤、又はそれらの組み合わせを含むことを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記グルカゴン誘導体ペプチドは配列番号２～１１及び１３～４５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むことを特徴とする。

前記ペプチドは配列番号２～１１、１３～４５のアミノ酸配列を含むもの、配列番号２～１１、１３～４５からなる群から選択されたアミノ酸配列で（必須で）構成されたものであってもよいが、これに限定されるものではない。

このようなペプチドの例として、配列番号１３、１５及び３６～４４からなる群から選択されたアミノ酸配列を含むか、これで（必須で）構成されたペプチドを挙げることができるが、特にこれに限定されるものではない。もう一つの例として、前記ペプチドは配列番号３７からなる群から選択されたアミノ酸配列を含むか、これで（必須で）構成されたペプチドであってもよいが、特にこれに限定されるものではない。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記Ｌはポリエチレングリコールであることを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記Ｌ内のエチレングリコール繰り返し単位部位の化学式量は１～１００ｋＤａの範囲にあることを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記化学式（１）の構造は下記化学式（２）の構造であることを特徴とする：

・・・（２）

ここで、Ｘ及びＦは化学式（１）で定義した通りである。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記エチレングリコール繰り返し単位は［ＯＣＨ₂ＣＨ₂］ｎであり、ｎは自然数で、前記ペプチド結合体内の［ＯＣＨ₂ＣＨ₂］ｎ部位の平均分子量、例えば、数平均分子量が１～１００ｋＤａになるように定められることを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記ｎの値は、前記ペプチド結合体内の［ＯＣＨ₂ＣＨ₂］ｎ部位の平均分子量、例えば、数平均分子量が１０ｋＤａになるように定められることを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記Ｘは、そのＣ末端がアミド化したことを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記Ｘは、ペプチド内のシステインの硫黄原子を通じて連結されたことを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記免疫グロブリンＦｃ切片はＩｇＧ４由来であることを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記Ｆは、２個のポリペプチド鎖がジスルフィド結合で連結されている構造であり、前記二鎖中の一鎖の窒素原子を通じてのみ連結されたことを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記Ｆは、配列番号５１のアミノ酸配列である単量体を含むことを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記Ｆは、配列番号５１のアミノ酸配列の単量体のホモ二量体であることを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記Ｆは、そのＮ－末端プロリンの窒素原子を通じて連結されたことを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記免疫グロブリンＦｃ切片であるＦとＸがグリコシル化されていないことを特徴とする。

前述の具体例による液状製剤であって、前記液状製剤は、非イオン性界面活性剤、及びアミノ酸からなる群から選択される一つ以上の成分をさらに含まないことを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記緩衝物質は、クエン酸とその塩、酢酸とその塩、ヒスチジンとその塩、リン酸とその塩及びそれらの組み合わせからなる群から選択されることを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記緩衝物質は、酢酸とその塩であることを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記液状製剤のｐＨは４．８～６．５であることを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記液状製剤のｐＨは４．８～６．０であることを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記液状製剤のｐＨは４．８～５．５であることを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記緩衝物質の濃度は液状製剤のｐＨを４．８～６．５の範囲で維持するための５～１００ｍＭであることを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記糖又は糖アルコールはスクロース、マンニトール及びソルビトールで構成される群から選択される一つ以上であることを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記糖又は糖アルコールは液状製剤内に１～２０％（ｗ／ｖ）の濃度で存在することを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記持続型結合体は製剤内に１８～２８０７ｎｍｏｌ／ｍＬ、１８～９３６ｎｍｏｌ／ｍＬ、９０～５６２ｎｍｏｌ／ｍＬ、１８７～５６２ｎｍｏｌ／ｍＬ、１８７～２８０７ｎｍｏｌ／ｍＬ、又は９３～９３６ｎｍｏｌ／ｍＬの濃度で存在することを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記糖はグルコース、フルクトース、ガラクトース、ラクトース、マルトース、スクロース、又はそれらの組み合わせであることを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記糖はスクロースであることを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記糖は３～１５％（ｗ／ｖ）の濃度で存在することを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記糖アルコールはマンニトール及びソルビトールで構成される群から選択される一つ以上であることを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記液状製剤は、非イオン性界面活性剤及びアミノ酸からなる群から選択される一つ以上の成分をさらに含むことを特徴とする。

前述の具体例による液状製剤であって、前記液状製剤は等張化剤を含まないことを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記非イオン性界面活性剤は、ポロキサマー、ポリソルベート、又はそれらの組み合わせであることを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記非イオン性界面活性剤は、ポロキサマー１８８、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０、及びそれらの組み合わせからなる群から選択されることを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記非イオン性界面活性剤は、製剤内に０．００１～０．５％（ｗ／ｖ）の濃度で存在することを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記アミノ酸は、メチオニン、アルギニン、ヒスチジン、グリシン、システイン、リシン及びそれらの組み合わせからなる群から選択されることを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記アミノ酸は製剤内に０．０１～１ｍｇ／ｍＬの濃度で存在することを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記液状製剤は９０～５６２ｎｍｏｌ／ｍＬの化学式（１）のペプチド結合体；前記液状製剤のｐＨが４．８～６．５になるようにクエン酸とその塩、酢酸とその塩、ヒスチジンとその塩、リン酸とその塩及びそれらの組み合わせから選択する５～２５ｍＭの緩衝物質；１～２０％（ｗ／ｖ）の糖アルコール、糖、又はそれらの組み合わせ；及びポロキサマー、ポリソルベート又はそれらの組み合わせから選択する０．０１～０．１％（ｗ／ｖ）の非イオン性界面活性剤；とメチオニン、アルギニン、ヒスチジン、グリシン、システイン、リシン及びそれらの組み合わせからなる群から選択する０．０１～１ｍｇ／ｍＬの安定化剤を含有することを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記液状製剤は９０～５６２ｎｍｏｌ／ｍＬの化学式（１）のペプチド結合体；前記液状製剤のｐＨが４．８～６．５になるようにクエン酸とその塩、酢酸とその塩、ヒスチジンとその塩、リン酸とその塩及びそれらの組み合わせから選択する５～２５ｍＭの緩衝物質；４～１０％（ｗ／ｖ）の糖アルコール、糖、又はそれらの組み合わせ；及びポロキサマー、ポリソルベート又はそれらの組み合わせから選択する０．０１～０．１％（ｗ／ｖ）の非イオン性界面活性剤；とメチオニン、アルギニン、ヒスチジン、グリシン、システイン、リシン及びそれらの組み合わせからなる群から選択する０．０１～１ｍｇ／ｍＬの安定化剤を含有することを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記液状製剤は９０～５６２ｎｍｏｌ／ｍＬの化学式（１）のペプチド結合体；前記液状製剤のｐＨが４．８～６．０になるようにクエン酸とその塩、酢酸とその塩、ヒスチジンとその塩、リン酸とその塩及びそれらの組み合わせから選択する５～２５ｍＭの緩衝物質；４～１０％（ｗ／ｖ）の糖アルコール、糖、又はそれらの組み合わせ；及びポロキサマー、ポリソルベート又はそれらの組み合わせから選択する０．０１～０．１％（ｗ／ｖ）の非イオン性界面活性剤；とメチオニン、アルギニン、ヒスチジン、グリシン、システイン、リシン及びそれらの組み合わせからなる群から選択する０．０１～１ｍｇ／ｍＬの安定化剤を含有することを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記液状製剤は９０～５６２ｎｍｏｌ／ｍＬの化学式（１）のペプチド結合体；前記液状製剤のｐＨが４．８～５．５になるようにクエン酸とその塩、酢酸とその塩、ヒスチジンとその塩、リン酸とその塩及びそれらの組み合わせから選択する５～２５ｍＭの緩衝物質；４～１０％（ｗ／ｖ）の糖アルコール、糖、又はそれらの組み合わせ；及びポロキサマー、ポリソルベート又はそれらの組み合わせから選択する０．０１～０．１％（ｗ／ｖ）の非イオン性界面活性剤；とメチオニン、アルギニン、ヒスチジン、グリシン、システイン、リシン及びそれらの組み合わせからなる群から選択する０．０１～１ｍｇ／ｍＬの安定化剤を含有することを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記製剤はｐＨ４．８～６．５の範囲である緩衝物質；スクロース、マンニトール、ソルビトール及びそれらの組み合わせからなる群から選択される糖又は糖アルコール；メチオニン、アルギニン、ヒスチジン、グリシン、システイン、リシン及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるアミノ酸；及び非イオン性界面活性剤としてポリソルベートを含むことを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記グルカゴン誘導体ペプチドの持続型結合体において前記グルカゴン誘導体ペプチドは下記一般式１のアミノ酸配列を含むことを特徴とする：

Ｙ－Ｘ２－ＱＧＴＦ－Ｘ７－ＳＤ－Ｘ１０－Ｓ－Ｘ１２－Ｘ１３－Ｘ１４－Ｘ１５－Ｘ１６－Ｘ１７－Ｘ１８－Ｘ１９－Ｘ２０－Ｘ２１－Ｆ－Ｘ２３－Ｘ２４－Ｗ－Ｌ－Ｘ２７－Ｘ２８－Ｔ－Ｘ３０（一般式１、配列番号：４６）

前記一般式１において、
Ｘ２はα－メチルグルタミン酸（α－ｍｅｔｈｙｌ－ｇｌｕｔａｍｉｃ ａｃｉｄ）、Ａｉｂ（ａｍｉｎｏｉｓｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）、Ｄ－アラニン、グリシン（Ｇ）、Ｓａｒ（Ｎ－ｍｅｔｈｙｌｇｌｙｃｉｎｅ）、セリン（Ｓ）又はＤ－セリンであり、
Ｘ７はトレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１０はチロシン（Ｙ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１２はリシン（Ｋ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１３はチロシン（Ｙ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１４はロイシン（Ｌ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１５はアスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１６はグルタミン酸（Ｅ）、アスパラギン酸（Ｄ）、セリン（Ｓ）、α－メチルグルタミン酸、又はシステイン（Ｃ）であるか、存在せず；
Ｘ１７はアスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン（Ｑ）、グルタミン酸（Ｅ）、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、システイン（Ｃ）、又はバリン（Ｖ）であるか、存在せず；
Ｘ１８はアラニン（Ａ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン（Ｑ）、グルタミン酸（Ｅ）、アルギニン（Ｒ）、バリン（Ｖ）、又はシステイン（Ｃ）であるか、存在せず；
Ｘ１９はアラニン（Ａ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、バリン（Ｖ）、又はシステイン（Ｃ）であるか、存在せず；
Ｘ２０はリシン（Ｋ）、ヒスチジン（Ｈ）、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アルギニン（Ｒ）、α－メチル－グルタミン酸、又はシステイン（Ｃ）であるか、存在せず；
Ｘ２１はアスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、又はシステイン（Ｃ）であるか、存在せず；
Ｘ２３はイソロイシン（Ｉ）、バリン（Ｖ）、又はアルギニン（Ｒ）であるか、存在せず；
Ｘ２４はバリン（Ｖ）、アルギニン（Ｒ）、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、グルタミン酸（Ｅ）、リシン（Ｋ）、グルタミン（Ｑ）、α－メチル－グルタミン酸、又はロイシン（Ｌ）であるか、存在せず；
Ｘ２７はイソロイシン（Ｉ）、バリン（Ｖ）、アラニン（Ａ）、リシン（Ｋ）、メチオニン（Ｍ）、グルタミン（Ｑ）、又はアルギニン（Ｒ）であるか、存在せず；
Ｘ２８はグルタミン（Ｑ）、リシン（Ｋ）、アスパラギン（Ｎ）、又はアルギニン（Ｒ）であるか、存在せず；
Ｘ３０はシステイン（Ｃ）であるか、又は存在しない
（ただし、前記一般式１のアミノ酸配列が配列番号１及び配列番号１２と同一の場合は除く）。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記一般式１において
Ｘ２がセリン（Ｓ）又はＡｉｂ（ａｍｉｎｏｉｓｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）であり；
Ｘ７はトレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１０はチロシン（Ｙ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１２はリシン（Ｋ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１３はチロシン（Ｙ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１４はロイシン（Ｌ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１５はアスパラギン酸（Ｄ）、又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１６はグルタミン酸（Ｅ）、セリン（Ｓ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１７はアスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、システイン（Ｃ）、又はバリン（Ｖ）であり、
Ｘ１８はアスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、アルギニン（Ｒ）、又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１９はアラニン（Ａ）、又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ２０はグルタミン（Ｑ）、アスパラギン酸（Ｄ）、リシン（Ｋ）、又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ２１はアスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ２３はイソロイシン（Ｉ）、バリン（Ｖ）又はアルギニン（Ｒ）であり、
Ｘ２４はバリン（Ｖ）、アルギニン（Ｒ）、アラニン（Ａ）、グルタミン酸（Ｅ）、リシン（Ｋ）、グルタミン（Ｑ）、又はロイシン（Ｌ）であり、
Ｘ２７はイソロイシン（Ｉ）、バリン（Ｖ）、アラニン（Ａ）、メチオニン（Ｍ）、グルタミン（Ｑ）又はアルギニン（Ｒ）であり、
Ｘ２８はグルタミン（Ｑ）、リシン（Ｋ）、アスパラギン（Ｎ）又はアルギニン（Ｒ）であり、
Ｘ３０はシステイン（Ｃ）であるか、又は存在しないことを特徴とする（ただし、前記一般式１のアミノ酸配列が配列番号１及び配列番号１２と同一の場合は除く）。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、
前記一般式１において
Ｘ２がセリン（Ｓ）又はＡｉｂ（ａｍｉｎｏｉｓｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）であり；
Ｘ７はシステイン（Ｃ）、トレオニン（Ｔ）、又はバリン（Ｖ）であり、
Ｘ１０はチロシン（Ｙ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１２はリシン（Ｋ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１３はチロシン（Ｙ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１４はロイシン（Ｌ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１５はアスパラギン酸（Ｄ）、又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１６はグルタミン酸（Ｅ）、セリン（Ｓ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１７はグルタミン酸（Ｅ）、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、システイン（Ｃ）、又はバリン（Ｖ）であり、
Ｘ１８はアルギニン（Ｒ）、又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１９はアラニン（Ａ）、又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ２０はグルタミン（Ｑ）又はリシン（Ｋ）であり、
Ｘ２１はアスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、バリン（Ｖ）、又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ２３はバリン（Ｖ）であり、
Ｘ２４はバリン（Ｖ）又はグルタミン（Ｑ）であり、
Ｘ２７はメチオニン（Ｍ）であり、
Ｘ２８はアスパラギン（Ｎ）又はアルギニン（Ｒ）であり、
Ｘ３０はシステイン（Ｃ）であるか、存在しないことを特徴とする（ただし、前記一般式１のアミノ酸配列が配列番号１及び配列番号１２と同一の場合は除く）。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、
前記一般式１において
Ｘ２がＡｉｂ（ａｍｉｎｏｉｓｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）であり；
Ｘ７はシステイン（Ｃ）、トレオニン（Ｔ）、又はバリン（Ｖ）であり、
Ｘ１０はチロシン（Ｙ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１２はリシン（Ｋ）であり、
Ｘ１３はチロシン（Ｙ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１４はロイシン（Ｌ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１５はアスパラギン酸（Ｄ）、又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１６はグルタミン酸（Ｅ）、セリン（Ｓ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１７はリシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、システイン（Ｃ）、又はバリン（Ｖ）であり、
Ｘ１８はアルギニン（Ｒ）、又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１９はアラニン（Ａ）、又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ２０はグルタミン（Ｑ）又はリシン（Ｋ）であり、
Ｘ２１はアスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ２３はバリン（Ｖ）であり、
Ｘ２４はグルタミン（Ｑ）であり、
Ｘ２７はメチオニン（Ｍ）であり、
Ｘ２８はアスパラギン（Ｎ）又はアルギニン（Ｒ）であり、
Ｘ３０はシステイン（Ｃ）であるか、又は存在しないことを特徴とする（ただし、前記一般式１のアミノ酸配列が配列番号１及び配列番号１２と同一の場合は除く）。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、
前記一般式１において
Ｘ２がセリン（Ｓ）又はＡｉｂ（ａｍｉｎｏｉｓｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）であり；
Ｘ７はトレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１０はチロシン（Ｙ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１２はリシン（Ｋ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１３はチロシン（Ｙ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１４はロイシン（Ｌ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１５はアスパラギン酸（Ｄ）、又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１６はグルタミン酸（Ｅ）、セリン（Ｓ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１７はアスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、システイン（Ｃ）、又はバリン（Ｖ）であり、
Ｘ１８はアスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、アルギニン（Ｒ）、又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１９はアラニン（Ａ）、又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ２０はグルタミン（Ｑ）、アスパラギン酸（Ｄ）、又はリシン（Ｋ）であり、
Ｘ２１はアスパラギン酸（Ｄ）、又はグルタミン酸（Ｅ）であり、
Ｘ２３はバリン（Ｖ）であり、
Ｘ２４はバリン（Ｖ）又はグルタミン（Ｑ）であり、
Ｘ２７はイソロイシン（Ｉ）又はメチオニン（Ｍ）であり、
Ｘ２８はアスパラギン（Ｎ）又はアルギニン（Ｒ）であり、
Ｘ３０はシステイン（Ｃ）であるか、又は存在しないことを特徴とする（ただし、前記一般式１のアミノ酸配列が配列番号１及び配列番号１２と同一の場合は除く）。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、
前記一般式１において
Ｘ２がＡｉｂ（ａｍｉｎｏｉｓｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）であり；
Ｘ７はトレオニン（Ｔ）であり、
Ｘ１０はチロシン（Ｙ）であり、
Ｘ１２はリシン（Ｋ）であり、
Ｘ１３はチロシン（Ｙ）であり、
Ｘ１４はロイシン（Ｌ）であり、
Ｘ１５はアスパラギン酸（Ｄ）、又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１６はグルタミン酸（Ｅ）、セリン（Ｓ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１７はリシン（Ｋ）又はアルギニン（Ｒ）であり、
Ｘ１８はアルギニン（Ｒ）であり、
Ｘ１９はアラニン（Ａ）であり、
Ｘ２０はグルタミン（Ｑ）、システイン（Ｃ）、又はリシン（Ｋ）であり、
Ｘ２１はアスパラギン酸（Ｄ）、システイン（Ｃ）、バリン（Ｖ）又はグルタミン酸（Ｅ）であり、
Ｘ２３はバリン（Ｖ）又はアルギニン（Ｒ）であり、
Ｘ２４はグルタミン（Ｑ）又はロイシン（Ｌ）であり、
Ｘ２７はメチオニン（Ｍ）であり、
Ｘ２８はアスパラギン（Ｎ）又はアルギニン（Ｒ）であり、
Ｘ３０は存在しないことを特徴とする。（ただし、前記一般式１のアミノ酸配列が配列番号１及び配列番号１２と同一の場合は除く）。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記グルカゴン誘導体ペプチドの持続型結合体において前記グルカゴン誘導体ペプチドは、下記一般式２のアミノ酸配列を含むことを特徴とする：

Ｙ－Ａｉｂ－ＱＧＴＦ－Ｘ７－ＳＤ－Ｘ１０－Ｓ－Ｘ１２－Ｙ－Ｌ－Ｘ１５－Ｘ１６－Ｘ１７－Ｒ－Ａ－Ｘ２０－Ｘ２１－Ｆ－Ｖ－Ｘ２４－Ｗ－Ｌ－Ｍ－Ｎ－Ｔ－Ｘ３０（一般式２、配列番号：４７）

前記一般式２において、
Ｘ７はトレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１０はチロシン（Ｙ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１２はリシン（Ｋ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１５はアスパラギン酸（Ｄ）、又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１６はグルタミン酸（Ｅ）又はセリン（Ｓ）であり、
Ｘ１７はリシン（Ｋ）又はアルギニン（Ｒ）であり、
Ｘ２０はグルタミン（Ｑ）又はリシン（Ｋ）であり、
Ｘ２１はアスパラギン酸（Ｄ）、又はグルタミン酸（Ｅ）であり、
Ｘ２４はバリン（Ｖ）又はグルタミン（Ｑ）であり、
Ｘ３０はシステイン（Ｃ）であるか、又は存在しない
（ただし、前記一般式２のアミノ酸配列が配列番号１及び配列番号１２と同一の場合は除く）。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記グルカゴン誘導体ペプチドは配列番号：２～４５からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むことを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記グルカゴン誘導体ペプチドは配列番号：１３、１５及び３６～４４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むことを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記グルカゴン誘導体ペプチドは配列番号：３７のアミノ酸配列を含むことを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記グルカゴン誘導体ペプチドは、天然型グルカゴンのｐＩである６．８とは異なるｐＩ、例えば、ｐＩ ６．５以下又はｐＩ ７．０以上であることを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記グルカゴン誘導体ペプチドは、そのＣ末端がカルボキシ基（ＣＯＯＨ）を有することを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記グルカゴン誘導体ペプチドは、グルカゴン受容体を活性化させる天然型グルカゴンの誘導体であることを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記グルカゴン誘導体ペプチドの持続型結合体において前記グルカゴン誘導体ペプチドのｐＩは６～７であり、天然型グルカゴン比相対的ｉｎ ｖｉｔｒｏ活性が２００％以上であることを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記一般式１又は２のＸ１０とＸ１４、Ｘ１２とＸ１６、Ｘ１６とＸ２０、Ｘ１７とＸ２１、Ｘ２０とＸ２４及びＸ２４とＸ２８のアミノ酸対の少なくとも一つのアミノ酸対のアミノ酸のそれぞれが環を形成できるグルタミン酸又はリシンで置換されたことを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記一般式１又は２のＸ１２とＸ１６のアミノ酸対、Ｘ１６とＸ２０のアミノ酸対、又はＸ１７とＸ２１のアミノ酸対のアミノ酸のそれぞれが環を形成できるグルタミン酸又はリシンで置換されたことを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記一般式１又は２において、Ｘ１０とＸ１４、Ｘ１２とＸ１６、Ｘ１６とＸ２０、Ｘ１７とＸ２１、Ｘ２０とＸ２４及びＸ２４とＸ２８のアミノ酸対の少なくとも一つのアミノ酸対において、それぞれのアミノ酸間に環を形成することを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記環はラクタム環であることを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記一般式１又は２において、Ｘ１６がグルタミン酸であり、Ｘ２０はリシンであり、Ｘ１６とＸ２０の側鎖がラクタム環を形成していることを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記免疫グロブリンＦｃ切片はＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ又はＩｇＭに由来するＦｃ切片であることを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記免疫グロブリンＦｃ切片は（ａ）ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン及びＣＨ４ドメイン；（ｂ）ＣＨ１ドメイン及びＣＨ２ドメイン；（ｃ）ＣＨ１ドメイン及びＣＨ３ドメイン；（ｄ）ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメイン；（ｅ）ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン及びＣＨ４ドメイン中の一個又は二個以上のドメインと免疫グロブリンヒンジ領域又はヒンジ領域の一部との組み合わせ；及び（ｆ）重鎖定常領域の各ドメインと軽鎖定常領域の二量体で構成された群から選択されることを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記免疫グロブリンＦｃ切片のそれぞれのドメインは、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、及びＩｇＭからなる群から選択される免疫グロブリンに由来した相違する起源を有するドメインのハイブリッドであることを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記免疫グロブリンＦｃ切片は同一の起源のドメインからなる単鎖免疫グロブリンで構成された、二量体又は多量体の形態であることを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記免疫グロブリンＦｃ切片がＩｇＧ４ Ｆｃ切片であることを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記免疫グロブリンＦｃ切片がヒト非グリコシル化ＩｇＧ４ Ｆｃ切片であることを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記免疫グロブリンＦｃ切片はジスルフィド結合を形成できる部位が除去される変形、天然型ＦｃからＮ末端の一部のアミノ酸が除去される変形、天然型ＦｃのＮ末端にメチオニン残基が付加される変形、補体結合部位が除去される変形、又はＡＤＣＣ（ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ） 部位が除去される変形を含むか、又は前記変形の組み合わせを含む、天然型Ｆｃの誘導体であることを特徴とする。

本発明を具現するもう一つの様態は、前記液状製剤を製造する方法である。

一つの具体例として、本発明は（ｉ）グルカゴン誘導体ペプチド及び免疫グロブリンＦｃ切片が互いに連結された、グルカゴン誘導体ペプチドの持続型結合体と（ｉｉ）（ａ）緩衝物質及び（ｂ）糖アルコール、糖又はそれらの組み合わせを混合する段階を含む液状製剤の製造方法である。

前述の具体例による方法であって、前記安定化剤は糖又は糖アルコール、非イオン性界面活性剤、及びアミノ酸からなる群から選択される一つ以上の成分をさらに含むことを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる方法であって、前記液状製剤は糖又は糖アルコール、アミノ酸、又はこれら両方をさらに含む、グルカゴン誘導体ペプチドの持続型結合体の液状製剤であることを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる方法であって、前記液状製剤は緩衝物質、糖又は糖アルコール、及びアミノ酸を含むことを特徴とする。

前述の具体例のいずれか一つによる方法であって、前記液状製剤は緩衝物質、糖又は糖アルコール、非イオン界面活性剤及びアミノ酸を含むことを特徴とする。

本発明を実施するための具体的な内容を説明すれば、次の通りである。

なお、本願で開示される各説明及び実施形態はそれぞれ他の説明及び実施形態にも適用される。すなわち、本願で開示される様々な要素のあらゆる組み合わせが本発明に含まれる。また、以下の具体的な記述に本発明が限定されるものではない。

また、当該技術分野の通常の知識を有する者は、通常の実験のみを用いて本出願に記載された本発明の特定様態に対する多数の等価物を認知したり確認することができる。また、このような等価物は本発明に含まれることが意図される。

本明細書全体を通して、天然に存在するアミノ酸に対する通常の１文字及び３文字コードが用いられるだけでなく、Ａｉｂ（α－アミノイソブチル酸、２－ａｍｉｎｏｉｓｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）、Ｓａｒ（Ｎ－ｍｅｔｈｙｌｇｌｙｃｉｎｅ）、α－メチルグルタミン酸（α－ｍｅｔｈｙｌ－ｇｌｕｔａｍｉｃ ａｃｉｄ）などのような他のアミノ酸について一般的に許容される３文字コードが用いられる。また、本明細書で略語として言及されたアミノ酸はＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ命名法により記載された。

アラニン Ａｌａ、Ａ アルギニン Ａｒｇ、Ｒ
アスパラギン Ａｓｎ、Ｎ アスパラギン酸 Ａｓｐ、Ｄ
システインＣｙｓ、Ｃ グルタミン酸 Ｇｌｕ、Ｅ
グルタミン Ｇｌｎ、Ｑ グリシンＧｌｙ、Ｇ
ヒスチジン Ｈｉｓ、Ｈ イソロイシン Ｉｌｅ、Ｉ
ロイシン Ｌｅｕ、Ｌ リシン Ｌｙｓ、Ｋ
メチオニン Ｍｅｔ、Ｍ フェニルアラニン Ｐｈｅ、Ｆ
プロリン Ｐｒｏ、Ｐ セリン Ｓｅｒ、Ｓ
トレオニン Ｔｈｒ、Ｔ トリプトファン Ｔｒｐ、Ｗ
チロシン Ｔｙｒ、Ｙ バリン Ｖａｌ、Ｖ

本発明を具現する一つの様態は、グルカゴン誘導体の持続型結合体の液状製剤を提供する。

具体的には、本発明はグルカゴン誘導体ペプチド及び免疫グロブリンＦｃ切片が互いに連結された、グルカゴン誘導体ペプチドの持続型結合体を薬理学的有効量として含み、緩衝物質及び糖アルコール、糖、又はそれらの組み合わせを含む、グルカゴン誘導体ペプチドの持続型結合体の液状製剤に関する。

具体的には、本発明は下記化学式（１）の持続型結合体；緩衝物質；及び糖アルコール、糖、又はそれらの組み合わせ；を含む液状製剤を提供する：

Ｘ － Ｌａ － Ｆ・・・（１）

前記化学式（１）において、Ｘは、グルカゴン誘導体ペプチドであり、
Ｌはリンカーであり、
ａは、０又は自然数であり、ただし、ａが２以上である時、それぞれのＬは互いに独立しており；
Ｆは、免疫グロブリンＦｃ切片であり、
－は、共有結合を示す：

[一般式１]
Ｙ－Ｘ２－ＱＧＴＦ－Ｘ７－ＳＤ－Ｘ１０－Ｓ－Ｘ１２－Ｘ１３－Ｘ１４－Ｘ１５－Ｘ１６－Ｘ１７－Ｘ１８－Ｘ１９－Ｘ２０－Ｘ２１－Ｆ－Ｘ２３－Ｘ２４－Ｗ－Ｌ－Ｘ２７－Ｘ２８－Ｔ－Ｘ３０（一般式１、配列番号４６）

前記一般式１において、
Ｘ２はα－メチルグルタミン酸（α－ｍｅｔｈｙｌ－ｇｌｕｔａｍｉｃ ａｃｉｄ）、Ａｉｂ（ａｍｉｎｏｉｓｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）、Ｄ－アラニン、グリシン（Ｇ）、Ｓａｒ（Ｎ－ｍｅｔｈｙｌｇｌｙｃｉｎｅ）、セリン（Ｓ）又はＤ－セリンであり、
Ｘ７はトレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１０はチロシン（Ｙ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１２はリシン（Ｋ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１３はチロシン（Ｙ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１４はロイシン（Ｌ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１５はアスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１６はグルタミン酸（Ｅ）、アスパラギン酸（Ｄ）、セリン（Ｓ）、α－メチルグルタミン酸、又はシステイン（Ｃ）であるか、存在せず；
Ｘ１７はアスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン（Ｑ）、グルタミン酸（Ｅ）、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、システイン（Ｃ）、又はバリン（Ｖ）であるか、存在せず；
Ｘ１８はアラニン（Ａ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン（Ｑ）、グルタミン酸（Ｅ）、アルギニン（Ｒ）、バリン（Ｖ）、又はシステイン（Ｃ）であるか、存在せず；
Ｘ１９はアラニン（Ａ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、バリン（Ｖ）、又はシステイン（Ｃ）であるか、存在せず；
Ｘ２０はリシン（Ｋ）、ヒスチジン（Ｈ）、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アルギニン（Ｒ）、α－メチルグルタミン酸、又はシステイン（Ｃ）であるか、存在せず；
Ｘ２１はアスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、又はシステイン（Ｃ）であるか、存在せず；
Ｘ２３はイソロイシン（Ｉ）、バリン（Ｖ）、又はアルギニン（Ｒ）であるか、存在せず；
Ｘ２４はバリン（Ｖ）、アルギニン（Ｒ）、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、グルタミン酸（Ｅ）、リシン（Ｋ）、グルタミン（Ｑ）、α－メチル－グルタミン酸、又はロイシン（Ｌ）であるか、存在せず；
Ｘ２７はイソロイシン（Ｉ）、バリン（Ｖ）、アラニン（Ａ）、リシン（Ｋ）、メチオニン（Ｍ）、グルタミン（Ｑ）、又はアルギニン（Ｒ）であるか、存在せず；
Ｘ２８はグルタミン（Ｑ）、リシン（Ｋ）、アスパラギン（Ｎ）、又はアルギニン（Ｒ）であるか、存在せず；
Ｘ３０はシステイン（Ｃ）であるか、又は存在しない（ただし、前記一般式１のアミノ酸配列が配列番号１及び配列番号１２と同一の場合は除く）。

本発明において用語「液状製剤」は医薬品の形態を液状に製剤化した薬物を意味し、これは液状の内用製剤及び外用製剤をいずれも含む。

本発明の液状製剤は、薬理効果を奏する化学式（１）の持続型結合体及び前記薬理効果を奏する物質が液状に製剤化される時、これを一定期間安定に維持及び／又は保存させる物質を含む。前記液状製剤の薬理効果を奏する化学式（１）の持続型結合体以外に含まれる成分は安定化剤と混用されてもよい。

本発明の化学式（１）の持続型結合体の液状製剤において、保存安定性は正確な投与量を保障するために重要である。

本発明は、薬理効果を奏する物質である化学式（１）の持続型結合体の特定濃度；ｐＨを４．８～６．５の範囲で維持するための分量の緩衝物質；及び１．０～２０％（ｗ／ｖ）の糖アルコール、糖又はそれらの組み合わせ；を含む場合、化学式（１）の持続型結合体の長期間保管時においても安定することを確認し、本発明の新たな剤形を提供するようになった。
本発明の液状製剤に含まれる前記グルカゴン誘導体ペプチドの持続型結合体の濃度は、約１８～約２８１０ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約２８０７ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約２６２３ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約２４３６ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約２２４８ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約２０６１ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約１８７４ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約１６８６ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約１４９９ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約１３１２ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約１１２４ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約９４０ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約９３６ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約８４３ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約７５０ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約６５６ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約５７０ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約５６２ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約４６９ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約３７５ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約２８１ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約１８８ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約９４ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８７ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８８ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８７．０９ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８７．１ｎｍｏｌ／ｍＬ、約９３～約１８８ｎｍｏｌ／ｍＬ、約９３～約２８１ｎｍｏｌ／ｍＬ、約９３～約３７５ｎｍｏｌ／ｍＬ、約９３～約４６９ｎｍｏｌ／ｍＬ、約９３～約５６２ｎｍｏｌ／ｍＬ、約９３～約６５６ｎｍｏｌ／ｍＬ、約９３～約７５０ｎｍｏｌ／ｍＬ、約９３～約８４３ｎｍｏｌ／ｍＬ、約９３～約９４０ｎｍｏｌ／ｍＬ、約９３～約９３６ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８７～約２８１ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８７～約３７５ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８７～約４６９ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８７～約５７０ｎｍｏｌ／ｍＬ又は約１８７～約５６２ｎｍｏｌ／ｍＬであってもよいが、これに限定されない。一つの具体例として、前記持続型結合体の濃度は１８～９３６ｎｍｏｌ／ｍＬであってもよいが、これに限定されない。

本発明において用語、「安定化剤」とは、製剤において有効成分などの構成成分を一定期間安定に維持させる物質をいう。

本発明の前記安定化剤はアルブミンを含有しないことが好ましい。タンパク質の安定化剤として用いられるヒト血清アルブミンは、人体の血液から製造され、ヒト由来の病原性ウイルスによる汚染の可能性が存在し、ゼラチンやウシ血清アルブミンは疾患を引き起こしたり、一部の患者にアレルギー反応を誘発する可能性がある。本発明のアルブミン非含有安定化剤は、ヒトや動物由来の血清アルブミン又は精製されたゼラチンなどの異種タンパク質を含有しないためウイルス感染のおそれが少ない。

本発明において前記安定化剤は、特にグルカゴン誘導体の持続型結合体が安定に保存され得るようにする物質を意味する。グルカゴン誘導体の持続型結合体において、保存安定性は正確な投与量を保障するためだけでなく、グルカゴン誘導体に対する抗原性物質の潜在的な生成を抑制するために重要である。

本発明の液状製剤に含まれる一構成要素である緩衝物質は、化学式（１）の持続型結合体が安定になるように液状製剤のｐＨが急激に変化しないように溶液のｐＨを維持させることができる。前記緩衝物質は、緩衝系（ｂｕｆｆｅｒ ｓｙｓｔｅｍ）とも呼ばれ、前記緩衝物質又は緩衝系は液状製剤のｐＨを維持させる役割をする。目的とする安定化対象物質である化学式（１）の持続型結合体を安定化させることができるｐＨを維持させる緩衝物質は制限なく用いられてもよい。

前記緩衝物質は、リン酸とその共役塩基であるアルカリ塩（例えば、リン酸塩：リン酸ナトリウム、リン酸カリウム又はこれらの水素又は二水素塩）、クエン酸とその塩（例えば、クエン酸ナトリウム）、酢酸とその塩（例えば、酢酸ナトリウム）、ヒスチジンとその塩をはじめとするｐＨ緩衝物質であってもよく、これら緩衝物質の混合物も用いられるが、これに限定されない。

本発明の液状製剤は前記緩衝物質を含む緩衝溶液を液状製剤の溶媒として含み、具体的には、前記緩衝溶液は、クエン酸緩衝溶液（例えば、クエン酸ナトリウム緩衝溶液）、酢酸緩衝溶液（例えば、酢酸ナトリウム緩衝溶液）、リン酸緩衝溶液（例えば、リン酸ナトリウム緩衝溶液）、ヒスチジン緩衝溶液、及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるものであってもよく、前記緩衝溶液又は液状製剤内の緩衝物質（クエン酸とその塩、酢酸とその塩、ヒスチジンとその塩、リン酸とその塩、又はそれらの組み合わせ）は目標とする液状製剤のｐＨを維持するのに十分な分量の濃度で含まれてもよい。

前記液状製剤のｐＨは、約４．６～ｐＨ約６．５、例えば、ｐＨ約４．８～ｐＨ約６．５、ｐＨ約４．８～約６．４、ｐＨ約４．８～約６．３、ｐＨ約４．８～ｐＨ約６．２、ｐＨ約４．８～約６．１、ｐＨ約４．８～約６．０、ｐＨ約４．８～約５．９、ｐＨ約４．８～約５．８、ｐＨ約４．８～５．７、ｐＨ約４．８～約５．６、ｐＨ約４．８～５．５、ｐＨ約４．８～約５．４、ｐＨ約４．８～約５．３、ｐＨ約４．８～約５．２、ｐＨ約４．８～約５．１、ｐＨ約４．９～ｐＨ約６．５、ｐＨ約４．９～約６．４、ｐＨ約４．９～約６．３、ｐＨ約４．９～ｐＨ約６．２、ｐＨ約４．９～約６．１、ｐＨ約４．９～約６．０、ｐＨ約４．９～約５．９、ｐＨ約４．９～約５．８、ｐＨ約４．９～５．７、ｐＨ約４．９～約５．６、ｐＨ約４．９～５．５、ｐＨ約４．９～約５．４、ｐＨ約４．９～約５．３、ｐＨ約４．９～約５．２、ｐＨ約４．９～約５．１、又はｐＨ約５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、又は６．５であってもよいが、特にこれに限定されない。

前記目標とするｐＨになり得るようにする液状製剤の濃度は、約１ｍＭ～約２００ｍＭであってもよく、より具体的には、約５ｍＭ～約１００ｍＭ、約５ｍＭ～約８０ｍＭ、約５ｍＭ～約４０ｍＭ、約８ｍＭ～約４０ｍＭ、約５ｍＭ～約３０ｍＭ、又は約５ｍＭ～約２５ｍＭ、約１０ｍＭ～約２５ｍＭ、約１５ｍＭ～約２５ｍＭ、約１８ｍＭ～約２４ｍＭ、約１８ｍＭ～約２２ｍＭ、又は約２０ｍＭであってもよいが、特にこれに限定されるものではない。

一つの具体例として、前記緩衝物質は、酢酸とその塩であってもよいが、これに限定されない。

もう一つの具体例として、前記緩衝溶液は酢酸緩衝溶液（例えば、酢酸ナトリウム緩衝溶液）又はクエン酸緩衝溶液（例えば、クエン酸ナトリウム緩衝溶液）であってもよいが、特にこれに限定されるものではない。

一方、製剤の製造において、成分を水（例えば、ＷＦＩ）に溶かし、ＨＣｌ及び／又はＮａＯＨなどを用いて緩衝溶液又は製剤のｐＨを目的とするｐＨに調整することができ、これは当業界に既に通常用いられる方法である。従って、請求項にｐＨ調節子に関する別途の言及がなくても、このような方法を通じて製剤が調整されたｐＨを有することができるということは、当業者が理解することができる。

本発明の安定化剤に含まれる一構成要素である糖アルコールは多数の水酸基を含む物質をいい、糖のアルデヒド基及び／又はケトン基などがアルコール基で置換された物質を含み、多重水酸基を含む糖類なども含む。前記糖又は糖アルコールはグルカゴン誘導体の持続型結合体の安定性を増大させることができる。例えば、前記糖アルコールは、マンニトール及びソルビトールからなる群から選択される一つ以上であってもよいが、これに制限されない。

本発明の液状製剤に含まれる一構成要素である糖（ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）は、単糖類、二糖類、多糖類、オリゴ糖類などをいい、グルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体、及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチドの持続型結合体の安定性を増大させることができる。具体的な例としては、マンノース、グルコース、フルクトース、ガラクトース、フコース及びキシロースなどの単糖類；ラクトース、マルトース、スクロースなどの二糖類；ラフィノース及びデキストランなどの多糖類などを挙げることができるが、これに制限されない。

一つの具体例として、前記糖はグルコース、フルクトース、ガラクトース、ラクトース、マルトース、スクロース、又はそれらの組み合わせであってもよいが、これに制限されない。

例えば、前記糖はスクロースであってもよいが、特にこれに制限されない。

前記糖アルコール、糖、又はそれらの組み合わせは、液状製剤の全体溶液比約０．５～約２０％（ｗ／ｖ）、約０．５～約１５％（ｗ／ｖ）、約０．５～約１０％（ｗ／ｖ）、約０．５～約８ ％（ｗ／ｖ）、約１～約２０％（ｗ／ｖ）、約１～１５％（ｗ／ｖ）、約１～１０％（ｗ／ｖ）、約１～８％（ｗ／ｖ）、約２～約１５％（ｗ／ｖ）、約２～約１２％（ｗ／ｖ）、約２～約１２％（ｗ／ｖ）、約３～約１０％（ｗ／ｖ）、約４～約１０％（ｗ／ｖ）、約４～約８ ％（ｗ／ｖ）、約４～約６％（ｗ／ｖ）、約５～約１０％（ｗ／ｖ）、約６～約１０％（ｗ／ｖ）、約７～約１０％（ｗ／ｖ）、約７～約９％（ｗ／ｖ）、約８～約９％（ｗ／ｖ）、又は約１．０ ％（ｗ／ｖ）、約３．０ ％（ｗ／ｖ）、約５．０ ％（ｗ／ｖ）、又は約８．０ ％（ｗ／ｖ）の濃度で存在してもよいが、特にこれに限定されない。また、特にこれに制限されないが、前記液状製剤は、非イオン性界面活性剤、及びアミノ酸からなる群から選択される一つ以上の成分をさらに含んでもよい。

従って、前記液状製剤の安定化剤は、ｉ）緩衝物質及びｉｉ）糖又は糖アルコールとして必須で構成されてもよいが、ｉ）緩衝物質、ｉｉ）糖又は糖アルコール、及びｉｉｉ）非イオン性界面活性剤；ｉ）緩衝物質、ｉｉ）糖又は糖アルコール、ｉｉｉ）アミノ酸；及びｉｖ）非イオン性界面活性剤；ｉ）緩衝物質、ｉｉ）糖又は糖アルコール、及びｉｉｉ）アミノ酸；ｉ）緩衝物質、ｉｉ）糖又は糖アルコール、ｉｉｉ）非イオン性界面活性剤、及びｉｖ）アミノ酸で必須で構成されるものであってもよいが、特にこれに限定されるものではない。ここで、安定化剤を構成する各成分の種類及び濃度あるいはｐＨについては、前記あるいは下記の内容に全て適用されることは明確である。

特にこれに制限されないが、前記液状製剤に含まれる一構成要素である非イオン性界面活性剤は、タンパク質溶液の表面張力を下げて疎水性表面にタンパク質が吸着又は凝集することを防止することができる。

本発明に用いられる非イオン性界面活性剤の具体的な例としては、ポリソルベート類（例えば、ポリソルベート２０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート）、ポリソルベート４０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノパルミテート）、ポリソルベート６０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート）、ポリソルベート８０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレート）；前記ポリオキシエチレンの後の数値（２０）は、オキシエチレン基（－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）－）の総数を意味する）、ポロキサマー（ＰＥＯ－ＰＰＯ－ＰＥＯ共重合体；ＰＥＯ：ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｏｘｉｄｅ）、ＰＰＯ：ｐｏｌｙ（ｐｒｏｐｙｌｅｎｅ ｏｘｉｄｅ））、ポリエチレン－ポリプロピレングリコール、ポリオキシエチレン化合物（例えば、ポリオキシエチレン－ステアレート、ポリオキシエチレンアルキルエーテル（アルキル：Ｃ１－Ｃ３０）、ポリオキシエチレンモノアリルエーテル、アルキルフェニルポリオキシエチレンコポリマー（アルキル：Ｃ１－Ｃ３０）など）、ソジウムドデシルサルフェート（ｓｏｄｉｕｍ ｄｏｄｅｃｙｌ ｓｕｌｐｈａｔｅ、ＳＤＳ）などであってもよく、又はポリソルベート又はポロキサマーを挙げることができ、これらが一つ又は二つ以上の組み合わせの形態でも用いられる。

具体的には、前記非イオン性界面活性剤は、ポリソルベート８０、ポリソルベート６０、ポリソルベート４０、ポリソルベート２０、又はポロキサマー１８８であってもよく、これらが組み合わせられて用いられてもよいが、特にこれに限定されるものではない。

本発明において前記非イオン性界面活性剤は高濃度で含まれないことが好ましく、具体的には、本発明の製剤に約０．２％（ｗ／ｖ）以下の濃度、例えば、約０．００１～約０．２％（ｗ／ｖ）、約０．００１～約０．１％（ｗ／ｖ）、約０．００１～約０．０５％（ｗ／ｖ）、約０．００５～約０．０８％（ｗ／ｖ）、約０．００２～約０．０５％（ｗ／ｖ）、約０．００５～約０．０５％（ｗ／ｖ）、約０．０１～約０．０５％（ｗ／ｖ）、約０．０１～約０．０４％（ｗ／ｖ）、約０．０１～約０．０３％（ｗ／ｖ）、約０．０１～約０．１％（ｗ／ｖ）、又は約０．０２％（ｗ／ｖ）で含まれてもよいが、特にこれに限定されない。

前記液状製剤に追加され得る選択的構成要素としての安定化剤の一種であるアミノ酸は、メチオニン、アルギニン、ヒスチジン、グリシン、システイン、リシン又はそれらの組み合わせであってもよいが、これに限定されない。

前記アミノ酸はタンパク質の酸化反応などにより起こり得る不純物の生成を抑制させることができるが、特にこれに限定されるものではない。

前記アミノ酸は製剤内に約０．０１～約１ｍｇ／ｍＬの濃度、約０．０１～約０．８ｍｇ／ｍＬ、約０．０１～約０．５ｍｇ／ｍＬ、約０．０２～約０．５ｍｇ／ｍＬ、又は約０．０２～約０．４ｍｇ／ｍＬ、又は約０．１ｍｇ／ｍＬで存在してもよいが、特にこれに限定されるものではない。

一つの具体例として、緩衝物質及び糖又は糖アルコールを含む前記液状製剤は、等張化剤を含まないか、非イオン性界面活性剤、及びアミノ酸からなる群から選択される一つ以上の成分を追加で含まなくてもよいが、これに限定されない。

一方、本発明の液状製剤には、前記の液状製剤の必須の構成要素である糖アルコール、糖、又はそれらの組み合わせ；及び緩衝物質以外に選択的構成要素である非イオン性界面活性剤及びアミノ酸以外に本発明の効果を損傷させない範囲内で当業界に公知となっているその他の成分乃至物質が選択的にさらに含まれてもよいが、これに制限されない。

一方、前記製剤はさらに多価アルコールを含んでもよいが、特にこれに限定されない。

例えば、ｉ）緩衝物質及びｉｉ）糖又は糖アルコールだけでなく、多価アルコール、を含むことができ、ｉ）緩衝物質、ｉｉ）糖又は糖アルコール、及びｉｉｉ）非イオン性界面活性剤；ｉ）緩衝物質、ｉｉ）糖又は糖アルコール、ｉｉｉ）アミノ酸；及びｉｖ）非イオン性界面活性剤；ｉ）緩衝物質、ｉｉ）糖又は糖アルコール、及びｉｉｉ）アミノ酸；ｉ）緩衝物質、ｉｉ）糖又は糖アルコール、ｉｉｉ）非イオン性界面活性剤、及びｉｖ）アミノ酸で必須で構成される安定化剤に多価アルコールをさらに含んでもよいが、特にこれに限定されるものではない。

本発明の製剤にさらに含まれてもよい多価アルコールの例としては、プロピレングリコール及び低分子量のポリエチレングリコール、グリセロール、低分子量のポリプロピレングリコールなどを挙げることができ、これらの一つ又は二つ以上の組み合わせの形態で用いられるが、これに限定されない。

本発明において化学式（１）の持続型結合体は、本発明の液状製剤に含まれる有効成分であり、薬理学的有効量で製剤に含まれてもよい。その例として前記持続型結合体の濃度は、製剤内に約１８～約２８１０ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約２８０７ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約２６２３ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約２４３６ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約２２４８ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約２０６１ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約１８７４ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約１６８６ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約１４９９ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約１３１２ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約１１２４ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約９４０ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約９３６ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約８４３ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約７５０ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約６５６ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約５７０ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約５６２ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約４６９ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約３７５ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約２８１ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約１８８ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８～約９４ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８７ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８８ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８７．０９ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８７．１ｎｍｏｌ／ｍＬ、約９３～約１８８ｎｍｏｌ／ｍＬ、約９３～約２８１ｎｍｏｌ／ｍＬ、約９３～約３７５ｎｍｏｌ／ｍＬ、約９３～約４６９ｎｍｏｌ／ｍＬ、約９３～約５６２ｎｍｏｌ／ｍＬ、約９３～約６５６ｎｍｏｌ／ｍＬ、約９３～約７５０ｎｍｏｌ／ｍＬ、約９３～約８４３ｎｍｏｌ／ｍＬ、約９３～約９４０ｎｍｏｌ／ｍＬ、約９３～約９３６ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８７～約２８１ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８７～約３７５ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８７～約４６９ｎｍｏｌ／ｍＬ、約１８７～約５７０ｎｍｏｌ／ｍＬ又は約１８７～約５６２ｎｍｏｌ／ｍＬであってもよいが、特にこれに限定されるものではない。

本発明において用語、「約」は±０．５、±０．４、±０．３、±０．２、±０．１、±０．０１などを全て含む範囲であり、約という用語の後に出る数値と同等又は類似の範囲の数値を全て含むが、これに限定されない。

前記液状製剤は、一つの具体例として、化学式（１）のペプチド結合体；前記液状製剤のｐＨが４．８～６．５になるようにクエン酸とその塩、酢酸とその塩、ヒスチジンとその塩、リン酸とその塩及びそれらの組み合わせから選択する緩衝物質；糖；及びポロキサマー、ポリソルベート又はそれらの組み合わせから選択する非イオン性界面活性剤；とメチオニン、アルギニン、ヒスチジン、グリシン、システイン、リシン及びそれらの組み合わせからなる群から選択する安定化剤を含有する液状製剤であってもよい。

前記液状製剤は、一つの具体例として、９０～５６２ｎｍｏｌ／ｍＬの化学式（１）のペプチド結合体；前記液状製剤のｐＨが４．８～５．５になるようにクエン酸とその塩、酢酸とその塩、ヒスチジンとその塩、リン酸とその塩及びそれらの組み合わせから選択する５～２５ｍＭの緩衝物質；１～２０％（ｗ／ｖ）の糖アルコール、糖、又はそれらの組み合わせ；及びポロキサマー、ポリソルベート又はそれらの組み合わせから選択する０．０１～０．１％（ｗ／ｖ）の非イオン性界面活性剤；とメチオニン、アルギニン、ヒスチジン、グリシン、システイン、リシン及びそれらの組み合わせからなる群から選択する０．０１～１ｍｇ／ｍＬの安定化剤を含有する液状製剤であってもよい。

前記液状製剤は、一つの具体例として、９０～５６２ｎｍｏｌ／ｍＬの化学式（１）のペプチド結合体；前記液状製剤のｐＨが４．８～５．５になるようにクエン酸とその塩、酢酸とその塩、ヒスチジンとその塩、リン酸とその塩及びそれらの組み合わせから選択する５～２５ｍＭの緩衝物質；４～１０％（ｗ／ｖ）の糖；及びポロキサマー、ポリソルベート又はそれらの組み合わせから選択する０．０１～０．１％（ｗ／ｖ）の非イオン性界面活性剤；とメチオニン、アルギニン、ヒスチジン、グリシン、システイン、リシン及びそれらの組み合わせからなる群から選択する０．０１～１ｍｇ／ｍＬの安定化剤を含有する液状製剤であってもよい。

一方、下記では本発明の液状製剤に含まれる有効成分であるグルカゴン誘導体ペプチドの持続型結合体についてより具体的に説明する。

本発明において用語、「グルカゴン誘導体の持続型結合体」又は「グルカゴン誘導体ペプチドの持続型結合体」とは、グルカゴン誘導体に免疫グロブリンＦｃ切片が互いに連結された形態を指す。具体的には、前記結合体はグルカゴン誘導体に免疫グロブリンＦｃ切片がリンカーを通じて共有結合的に連結されたものであってもよいが、特にこれに限定されない。

前記結合体は、免疫グロブリンＦｃ切片が結合していない前記ペプチドに比べて増加した効力の持続性を示すことができ、本発明では前記一般式１のペプチドの化学式（１）による結合体は「持続型結合体」とし、「ペプチド結合体」又は「化学式（１）の持続型結合体」と混用されてもよい。

一つの具体例として、前記免疫グロブリンＦｃ切片とＸはグリコシル化されていなくてもよいが、これに限定されない。

一方、このような結合体は、非自然発生の（ｎｏｎ－ｎａｔｕｒａｌｌｙ ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ）ものであってもよい。

本願の持続型結合体は、グルカゴン誘導体ペプチドと免疫グロブリンＦｃ切片が互いに連結された形態であってもよく、その連結方法は特に制限されないが、リンカーを通じて前記ペプチドと免疫グロブリンＦｃ切片が互いに連結されたものであってもよい。

一つの具体例として、本発明の持続型結合体は下記化学式（１）の構造を有する。

Ｘ － Ｌａ － Ｆ

前記化学式（１）において、Ｘは、下記一般式１のペプチドであり、
Ｌは、エチレングリコール繰り返し単位を含有するリンカーであり；
ａは、０又は自然数であり、ただし、ａが２以上である時、それぞれのＬは互いに独立しており；
Ｆはヒト免疫グロブリンＦｃ切片であり、
－は、共有結合を示す。

前記化学式（１）の持続型結合体のＸは、グルカゴン誘導体に対して活性を有するペプチドであってもよい。「グルカゴン誘導体に対して活性を有するペプチド」はグルカゴン誘導体に対して有意な水準の活性を有する多様な物質、例えば、多様なペプチドを含む。

より具体的には、前記グルカゴン誘導体に対して活性を有するペプチドは下記一般式１の配列を含む、グルカゴン誘導体に対して活性を有するペプチドである：

[一般式１]
Ｙ－Ｘ２－ＱＧＴＦ－Ｘ７－ＳＤ－Ｘ１０－Ｓ－Ｘ１２－Ｘ１３－Ｘ１４－Ｘ１５－Ｘ１６－Ｘ１７－Ｘ１８－Ｘ１９－Ｘ２０－Ｘ２１－Ｆ－Ｘ２３－Ｘ２４－Ｗ－Ｌ－Ｘ２７－Ｘ２８－Ｔ－Ｘ３０（一般式１、配列番号４６）

前記一般式１において、
Ｘ２はα－メチルグルタミン酸（α－ｍｅｔｈｙｌ－ｇｌｕｔａｍｉｃ ａｃｉｄ）、Ａｉｂ（ａｍｉｎｏｉｓｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）、Ｄ－アラニン、グリシン（Ｇ）、Ｓａｒ（Ｎ－ｍｅｔｈｙｌｇｌｙｃｉｎｅ）、セリン（Ｓ）又はＤ－セリンであり、
Ｘ７はトレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１０はチロシン（Ｙ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１２はリシン（Ｋ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１３はチロシン（Ｙ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１４はロイシン（Ｌ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１５はアスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１６はグルタミン酸（Ｅ）、アスパラギン酸（Ｄ）、セリン（Ｓ）、α－メチルグルタミン酸、又はシステイン（Ｃ）であるか、存在せず；
Ｘ１７はアスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン（Ｑ）、グルタミン酸（Ｅ）、リシン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、システイン（Ｃ）、又はバリン（Ｖ）であるか、存在せず；
Ｘ１８はアラニン（Ａ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン（Ｑ）、グルタミン酸（Ｅ）、アルギニン（Ｒ）、バリン（Ｖ）、又はシステイン（Ｃ）であるか、存在せず；
Ｘ１９はアラニン（Ａ）、アルギニン（Ｒ）、セリン（Ｓ）、バリン（Ｖ）、又はシステイン（Ｃ）であるか、存在せず；
Ｘ２０はリシン（Ｋ）、ヒスチジン（Ｈ）、グルタミン酸（Ｅ）、グルタミン（Ｑ）、アスパラギン酸（Ｄ）、アルギニン（Ｒ）、α－メチルグルタミン酸、又はシステイン（Ｃ）であるか、存在せず；
Ｘ２１はアスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、又はシステイン（Ｃ）であるか、存在せず；
Ｘ２３はイソロイシン（Ｉ）、バリン（Ｖ）、又はアルギニン（Ｒ）であるか、存在せず；
Ｘ２４はバリン（Ｖ）、アルギニン（Ｒ）、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、グルタミン酸（Ｅ）、リシン（Ｋ）、グルタミン（Ｑ）、α－メチルグルタミン酸、又はロイシン（Ｌ）であるか、存在せず；
Ｘ２７はイソロイシン（Ｉ）、バリン（Ｖ）、アラニン（Ａ）、リシン（Ｋ）、メチオニン（Ｍ）、グルタミン（Ｑ）、又はアルギニン（Ｒ）であるか、存在せず；
Ｘ２８はグルタミン（Ｑ）、リシン（Ｋ）、アスパラギン（Ｎ）、又はアルギニン（Ｒ）であるか、存在せず；
Ｘ３０はシステイン（Ｃ）であるか、又は存在しなくてもよい（ただし、前記一般式１のアミノ酸配列が配列番号１及び配列番号１２と同一の場合は除く）。

前述の具体例のいずれか一つによる液状製剤であって、前記グルカゴン誘導体ペプチドの持続型結合体において前記グルカゴン誘導体ペプチドは、下記一般式２のアミノ酸配列を含むことを特徴とする：

Ｙ－Ａｉｂ－ＱＧＴＦ－Ｘ７－ＳＤ－Ｘ１０－Ｓ－Ｘ１２－Ｙ－Ｌ－Ｘ１５－Ｘ１６－Ｘ１７－Ｒ－Ａ－Ｘ２０－Ｘ２１－Ｆ－Ｖ－Ｘ２４－Ｗ－Ｌ－Ｍ－Ｎ－Ｔ－Ｘ３０（一般式２、配列番号：４７）

前記一般式２において、
Ｘ７はトレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１０はチロシン（Ｙ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１２はリシン（Ｋ）又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１５はアスパラギン酸（Ｄ）、又はシステイン（Ｃ）であり、
Ｘ１６はグルタミン酸（Ｅ）又はセリン（Ｓ）であり、
Ｘ１７はリシン（Ｋ）又はアルギニン（Ｒ）であり、
Ｘ２０はグルタミン（Ｑ）又はリシン（Ｋ）であり、
Ｘ２１はアスパラギン酸（Ｄ）、又はグルタミン酸（Ｅ）であり、
Ｘ２４はバリン（Ｖ）又はグルタミン（Ｑ）であり、
Ｘ３０はシステイン（Ｃ）であるか、又は存在しない
（ただし、前記一般式１のアミノ酸配列が配列番号１及び配列番号１２と同一の場合は除く）。

前記ペプチドは配列番号２～１１、１３～４５のアミノ酸配列を含むこと、配列番号２～１１、１３～４５からなる群から選択されたアミノ酸配列で（必須で）構成されたものであってもよいが、これに限定されるものではない。

このようなペプチドの例として、配列番号１３、１５及び３６～４４からなる群から選択されたアミノ酸配列を含むか、これで（必須で）構成されたペプチドを挙げることができるが、特にこれに限定されるものではない。もう一つの例として、前記ペプチドは配列番号３７からなる群から選択されたアミノ酸配列を含むか、これで（必須で）構成されたペプチドであってもよいが、特にこれに限定されるものではない。

また、前記グルカゴン誘導体は分子内架橋（ｉｎｔｒａｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｒｉｄｇｅ）を含むことを特徴とする。例えば、共有結合的架橋又は非共有結合的架橋であってもよく、具体的には、環を含む形態であってもよい。前記一般式１の下線を引いたアミノ酸残基である１６番目のアミノ酸であるグルタミン酸と２０番目のアミノ酸であるリシン間に環を形成するものであってもよいが、特にこれに制限されない。前記環の非制限的な例としてラクタム架橋（又はラクタム環）を含んでもよい。

また、本発明によるペプチドはペプチドそのもの、その塩（例えば、前記ペプチドの薬学的に許容可能な塩）、又はその溶媒和物の形態をいずれも含む。また、ペプチドは薬学的に許容される任意の形態であってもよい。

前記塩の種類は特に制限されない。ただし、個体、例えば、哺乳類に安全で効果的な形態であることが好ましいが、特にこれに制限されるものではない。

前記用語、「薬学的に許容される」とは、医薬学的判断の範囲内で、過度な毒性、刺激、又はアレルギー反応などを誘発することなく所望の用途に効果的に使用可能な物質を意味する。

本発明において用語、「薬学的に許容される塩」とは、薬学的に許容される無機酸、有機酸、又は塩基から誘導された塩を含む。適した酸の例としては、塩酸、臭素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン－ｐ－スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン－２－スルホン酸、ベンゼンスルホン酸などを挙げることができる。適した塩基から誘導された塩は、ナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属、マグネシウムなどのアルカリ土類金属、及びアンモニウムなどを含んでもよい。

また、本発明で用いられた用語「溶媒和物」は、本発明によるペプチド又はこの塩が溶媒分子と複合体を形成したものをいう。

また、本願において「特定配列番号で構成されるペプチド」と記載されているとしても、当該配列番号のアミノ酸配列からなるペプチドと同一又は相当する活性を有する場合であれば、当該配列番号のアミノ酸配列の前後の無意味な配列付加又は自然に発生し得る突然変異、あるいはこのサイレント突然変異（ｓｉｌｅｎｔ ｍｕｔａｔｉｏｎ）を除くものではなく、このような配列の付加あるいは突然変異を有する場合にも、本願の範囲内に属することが自明である。

一方、このようなペプチドは非自然発生の（ｎｏｎ－ｎａｔｕｒａｌｌｙ ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ）ものであってもよい。

前記ペプチドのＣ末端はアミド化されるか、又は自由カルボキシル基（－ＣＯＯＨ）を有するペプチドであるか、又はＣ－末端が変形されていないペプチドを含むものであってもよいが、これに限定されない。

一つの具体例として、前記Ｘは、Ｃ末端がアミド化しているものであってもよいが、これに限定されない。

一つの具体例として、前記Ｘは、非糖鎖化されたものであってもよいが、これに限定されない。

前記一般式１のペプチドはＳｏｌｉｄ ｐｈａｓｅ合成法を通じて合成されることができ、組換え方法でも生産可能であり、商業的に依頼して製造できるが、これに限定されない。
本発明において用語「化学式（１）の持続型結合体」は、本発明の液状製剤に含まれる有効成分であり、薬理学的有効量で液状製剤に含まれてもよい。具体的には、前記グルカゴン誘導体に対して活性を有するペプチド及び免疫グロブリンＦｃ領域が互いにリンカーで連結された形態であり、前記結合体は免疫グロブリンＦｃ領域が結合していないグルカゴン誘導体に対して活性を有するペプチドに比べて増加した効力の持続性を示すことができる。

また、化学式（１）の持続型結合体においてグルカゴン誘導体に対して活性を有するペプチドであるＸと免疫グロブリンＦｃ切片の連結は、物理又は化学結合であるか、非共有又は共有結合であってもよく、具体的には共有結合であってもよいが、これに限定されない。

また、化学式（１）のペプチド結合体はグルカゴン誘導体に対して活性を有するペプチドであるＸと免疫グロブリンＦｃ切片の連結方法は特に制限されないが、リンカーを通じてグルカゴン受容体、ＧＬＰ－１受容体及びＧＩＰ受容体に対して活性を有するペプチドと免疫グロブリンＦｃ切片が互いに連結されたものであってもよい。

具体的には、本願の液状製剤に含まれる持続型結合体は前記化学式（１）で表されるものであってもよい。

前記化学式（１）において共有結合によりＬを通じてＸとＦが互いに結合されてもよい。

より具体的には、ＸとＬ、及びＬとＦは共有結合により互いに連結されてもよく、そのとき、前記結合体は化学式（１）の順に、Ｘ、Ｌ、及びＦが共有結合を通じてそれぞれ連結された結合体であってもよい。

また、前記Ｘは、Ｆが直接的に連結されたり（即ち、前記化学式（１）においてａが０であるか）、又はリンカー（Ｌ）を通じて連結されたものであってもよい。

一つの具体例として、前記化学式（１）の持続型結合体の一構成要素であるＬａはエチレングリコール繰り返し単位を含有するリンカーであり、例えば、ポリエチレングリコールであってもよく、また、当該分野に既に知られているこれらの誘導体及び当該分野の技術水準で容易に製造できる誘導体も本発明の範囲に含まれる。

前記エチレングリコール繰り返し単位を含むリンカーであるＬは、結合体で構成される以前は結合体の製造に用いられる作用基を末端に含むものであってもよい。本発明による持続型結合体は前記作用基を通じてＸとＦが連結された形態であってもよいが、これに制限されない。本発明において、前記エチレングリコール繰り返し単位を含有するリンカーは２個、又は３個以上の作用基を含めてもよく、各作用基は同一又は相異してもよいが、これに限定されない。

具体的には、前記リンカーは下記化学式（３）で表されるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）であってもよいが、これに限定されるものではない：

・・・（３）

ここで、ｎ＝１０～２４００、ｎ＝１０～４８０、又はｎ＝５０～２５０であるが、これに限定されない。
前記持続型結合体においてＰＥＧの一部は、－（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）_n－構造だけでなく、連結要素と、この－（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）_n－の間に介在する酸素原子も含めてもよいが、これに制限されるものではない。

前記ポリエチレングリコールは、エチレングリコール同種重合体、ＰＥＧ共重合体、又はモノメチル置換されたＰＥＧ重合体（ｍＰＥＧ）の形態をいずれも包括する用語であるが、特にこれに限定されるものではない。

一つの具体例として前記エチレングリコール繰り返し単位は、その例として、［ＯＣＨ₂ＣＨ₂］ｎで表されることができ、ｎ値は自然数で前記ペプチド結合体内の［ＯＣＨ₂ＣＨ₂］ｎ部位の平均分子量、例えば、数平均分子量が０超～約１００ｋＤａになるように定められてもよいが、これに限定されない。もう一つの例として、前記ｎ値は自然数で前記ペプチド結合体内の［ＯＣＨ₂ＣＨ₂］ｎ部位の平均分子量、例えば、数平均分子量が約１～約１００ｋＤａ、約１～約８０ｋＤａ、約１～約５０ｋＤａ、約１～約３０ｋＤａ、約１～約２５ｋＤａ、約１～約２０ｋＤａ、約１～約１５ｋＤａ、約１～約１３ｋＤａ、約１～約１１ｋＤａ、約１～約１０ｋＤａ、約１～約８ｋＤａ、約１～約５ｋＤａ、約１～約３．４ｋＤａ、約３～約３０ｋＤａ、約３～約２７ｋＤａ、約３～約２５ｋＤａ、約３～約２２ｋＤａ、約３～約２０ｋＤａ、約３～約１８ｋＤａ、約３～約１６ｋＤａ、約３～約１５ｋＤａ、約３～約１３ｋＤａ、約３～約１１ｋＤａ、約３～約１０ｋＤａ、約３～約８ｋＤａ、約３～約５ｋＤａ、約３～約３．４ｋＤａ、約８～約３０ｋＤａ、約８～約２７ｋＤａ、約８～約２５ｋＤａ、約８～約２２ｋＤａ、約８～約２０ｋＤａ、約８～約１８ｋＤａ、約８～約１６ｋＤａ、約８～約１５ｋＤａ、約８～約１３ｋＤａ、約８～約１１ｋＤａ、約８～約１０ｋＤａ、約９～約１５ｋＤａ、約９～約１４ｋＤａ、約９～約１３ｋＤａ、約９～約１２ｋＤａ、約９～約１１ｋＤａ、約９．５～約１０．５ｋＤａ、又は約１０ｋＤａであってもよいが、これに限定されない。

一つの具体例として、前記リンカーの両末端は免疫グロブリンＦｃ切片のチオール基、アミノ基、ヒドロキシル基及び一般式１のペプチドのチオール基、アミノ基、アジド基、ヒドロキシル基に結合してもよいが、これに限定されない。

具体的には、前記リンカーは両末端にそれぞれ免疫グロブリンＦｃ及び一般式１のペプチド結合され得る反応基、具体的には、免疫グロブリンＦｃ切片のシステインのチオール基；Ｎ末端、リシン、アルギニン、グルタミン及び／又はヒスチジンに位置したアミノ基；及び／又はＣ末端に位置したヒドロキシル基と結合し、一般式１のペプチドのシステインのチオール基；リシン、アルギニン、グルタミン及び／又はヒスチジンのアミノ基；アジドリシンのアジド基；及び／又はヒドロキシル基結合され得る反応基を含んでもよいが、これに限定されない。

より具体的には、前記リンカーの反応基は、アルデヒドグループ、マレイミドグループ及びスクシニミド誘導体からなる群から選択される一つ以上であってもよいが、これに限定されない。

前記において、アルデヒドグループとしてプロピオンアルデヒドグループ又はブチルアルデヒドグループを例として挙げることができるが、これに限定されない。

前記において、スクシンイミド誘導体としては、スクシンイミジルカルボキシメチル、スクシンイミジル吉草酸、スクシンイミジルメチルブタン酸、スクシンイミジルメチルプロピオン酸、スクシンイミジルブタン酸、スクシンイミジルプロピオン酸、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド、ヒドロキシスクシンイミジル又はスクシンイミジルカーボネートが用いられてもよいが、これに限定されない。

前記リンカーは、前記のような反応基を通じて免疫グロブリンＦｃ切片であるＦ及び一般式１のペプチドであるＸに連結され、リンカー連結部に転換されてもよい。
また、アルデヒド結合による還元性アルキル化で生成された最終産物は、アミド結合で連結されたものより遥かに安定している。アルデヒド反応基は、低いｐＨでＮ－末端に選択的に反応し、高いｐＨ、例えば、ｐＨ９．０の条件ではリシン残基と共有結合を形成できるが、これに制限されない。

本発明のリンカーの末端反応基は互いに同一又は異なってもよい。前記リンカーは、末端にアルデヒドグループ反応基を有するものであってもよく、また、前記リンカーは、末端にそれぞれアルデヒドグループ及びマレイミド反応基を有してもよく、又は末端にそれぞれアルデヒドグループ及びスクシンイミド反応基を有してもよいが、これに制限されない。

例えば、一方の末端にはマレイミドグループを、他方の末端にはアルデヒドグループ、プロピオンアルデヒドグループ又はブチルアルデヒドグループを有することができる。また、一つの例として、一方の末端にはスクシンイミジルグループを、他方の末端にはプロピオンアルデヒドグループ又はブチルアルデヒドグループを有することができる。

プロピオン側の末端にヒドロキシ反応基を有するポリエチレングリコールをリンカーとして用いる場合には、公知の化学反応により前記ヒドロキシ基を前記多様な反応基で活性化したり、商業的に入手可能な変形された反応基を有するポリエチレングリコールを用いて本発明の結合体を製造できる。

一つの具体的な実施形態において前記リンカーの反応基が一般式１のペプチドのシステイン残基、より具体的には、システインの－ＳＨ基に連結されるものであってもよいが、これに限定されない。

もし、マレイミド－ＰＥＧ－アルデヒドを用いる場合、マレイミド基は一般式１のペプチドの－ＳＨ基とチオエーテル（ｔｈｉｏｅｔｈｅｒ）結合で連結し、アルデヒド基は免疫グロブリンＦｃの－ＮＨ₂基と還元的アルキル化反応を通じて連結できるが、これに制限されず、これは一例に該当する。

このような還元的アルキル化を通じてＰＥＧの一方の末端に位置した酸素原子に免疫グロブリンＦｃ切片のＮ末端アミノ基が－ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂－の構造を有するリンカー作用基を通じて互いに連結され、－ＰＥＧ－Ｏ－ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＮＨ－免疫グロブリンＦｃのような構造を形成でき、チオエーテル結合を通じてＰＥＧの一方の末端が一般式１のペプチドのシステインに位置した硫黄原子に連結された構造を形成できる。上述したチオエーテル結合は

の構造を含んでもよい。

しかし、上述した例に特に制限されるものではなく、これは一例に該当する。

また、前記結合体において、リンカーの反応基が免疫グロブリンＦｃ切片のＮ末端に位置した－ＮＨ₂と連結されたものであってもよいが、これは一例に該当する。

また、前記結合体において、一般式１のペプチドは反応基を有するリンカーとＣ末端を通じて連結されてもよいが、これは一例に該当する。

本発明において「Ｃ末端」は、ペプチドのカルボキシ末端を意味することであり、本発明の目的上、リンカーと結合できる位置をいう。その例として、これに制限されないが、Ｃ末端の最末端のアミノ酸残基だけでなく、Ｃ末端周囲のアミノ酸残基をいずれも含んでもよく、具体的には最末端から１番目～２０番目のアミノ酸残基を含んでもよいが、これに限定されない。

一つの具体例として、前記化学式（１）の結合体は下記化学式（２）の構造を有することができる。

・・・（２）

前記化学式（２）において、Ｘは前記で説明した一般式１のペプチドであり、
Ｆはヒト免疫グロブリンＦｃ切片であり、
ｎは自然数であってもよい。その時、ｎに関する説明は、前述の通りである。

一つの具体例として、前記化学式（２）の持続型結合体は、配列番号４６の一般式１のペプチドＸとヒト免疫グロブリンＦｃ切片Ｆがエチレングリコール繰り返し部を介在して共有結合により連結された構造であり、それぞれＸは化学式（２）のスクシンイミド環に、Ｆは化学式（２）のオキシプロピレン基に連結される形態であってもよい。

前記化学式（２）において、前記ｎの値は、前記ペプチド結合体内の［ＯＣＨ₂ＣＨ₂］ｎ部位の平均分子量、例えば、数平均分子量が１～１００ｋＤａ、又は１～２０ｋＤａ又は１０ｋＤａになるように定められるものであってもよいが、これに限定されない。

前記ペプチド結合体のＸはグルカゴン誘導体に対して活性を有するペプチドであってもよい。

一実施形態において、化学式（２）のスクシンイミド環にＸが連結される部位はＸのＣ－末端システインの硫黄原子であってもよい。

Ｆはヒト免疫グロブリンＦｃ切片であり、本明細書においてヒト免疫グロブリンＦｃ切片といえば、免疫グロブリンのパパインの消化から得る天然型配列だけでなく、その誘導体、置換体、例えば、天然配列中の一つ以上のアミノ酸残基が欠失、挿入、非保存的又は保存的置換又はこれらの組み合わせにより変換され、天然型と相異なった配列など、変形体まで網羅して含まれる。前記誘導体、置換体、変形体はＦｃＲｎに結合する能力を保有することを前提とする。

Ｆ内で前記オキシプロピレン基に連結される部位は特に限定されない。本発明の一実施形態において前記オキシプロピレン基に連結されるＦの部位はＮ末端窒素又はＦ内部残基の窒素原子（例えば、リシンのイプシロン窒素）であってもよい。本発明の一具体的な実施形態において、Ｆが化学式（１）のオキシプロピレン基に連結される部位はＦのＮ末端プロリンであってもよいが、これに制限されない。

前記Ｆは、２個のポリペプチド鎖がジスルフィド結合で連結されている構造であり、前記二鎖中の一鎖の窒素原子を通じてのみ連結されている構造であってもよいが、これに限定されない。前記窒素原子を通じての連結はリシンのイプシロンアミノ原子やＮ末端アミノ基に還元的アミノ化を通じて連結されてもよいが、これに制限されない。

還元的アミノ化反応とは、反応物のアミン基又はアミノ基が他の反応物のアルデヒド（即ち、還元的アミノ化が可能な作用基）と反応してアミンを生成した後、還元反応によりアミン結合を形成させる反応を意味し、当該技術分野に広く知られている有機合成反応である。

一つの具体例として、前記Ｆは、そのＮ末端プロリンの窒素原子を通じて連結されたものであってもよいが、これに限定されない。

前記グルカゴン誘導体ペプチドの種類として、国際公開特許ＷＯ２０１６／１０８５８６及び国際公開特許ＷＯ２０１７／００３１９１に記載された種類を挙げることができ、前記国際公開特許の明細書全体は、本願に参考資料としていずれも含まれる。また、前記グルカゴン誘導体ペプチドの持続型結合体の製造方法はＷＯ２０１７／００３１９１に記載されており、前記国際公開特許の明細書全体も本願に参考資料として含まれることは明確である。

このようなグルカゴン誘導体は、天然型グルカゴンに対して変化したｐＩを有し、改善された物性を示すものであってもよい。また、前記グルカゴン誘導体は、グルカゴン受容体を活性化させる活性を有しながら溶解度が改善されたものであってもよいが、これに限定されない。

また、前記グルカゴン誘導体は、天然的に存在しない（ｎｏｎ－ｎａｔｕｒａｌｌｙ ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ）ものであってもよい。

一方、天然型グルカゴンは次のアミノ酸配列を有することができる：

Ｈｉｓ－Ｓｅｒ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｔｙｒ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｌａ－Ｇｌｎ－Ａｓｐ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｇｌｎ－Ｔｒｐ－Ｌｅｕ－Ｍｅｔ－Ａｓｎ－Ｔｈｒ（配列番号：１）

本発明において用語「等電点（ｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃ ｐｏｉｎｔ）」又は「ｐＩ」とは、あるポリペプチドあるいはペプチドのような分子においてその全体純荷電（ｎｅｔ ｃｈａｒｇｅ）がなくなる（０）ｐＨ値を意味する。多様な荷電された作用基が存在するポリペプチドの場合、ｐＩにおいてこれら荷電の和はゼロである。ｐＩより高いｐＨでポリペプチドの全体純荷電は陰性になるはずであり、ｐＩより低いｐＨ値でポリペプチドの全体純荷電は陽性になるはずである。

ｐＩは、ポリアクリルアミド、澱粉又はアガロースで構成される固定されたｐＨ勾配ゲル状で等電点電気泳動により、又は、例えば、ＥｘＰＡＳｙサーバでｐＩ／ＭＷツール（ｈｔｔｐ：／／ｅｘｐａｓｙ．ｏｒｇ／ｔｏｏｌｓ／ｐｉ＿ｔｏｏｌ．ｈｔｍｌ；Ｇａｓｔｅｉｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， ２００３）を用いてアミノ酸配列からｐＩを推算することにより決定され得る。

本発明において用語「変化したｐＩ」とは、天然グルカゴンのアミノ酸配列で一部の配列が負電荷及び正電荷を帯びたアミノ酸残基で置換され、天然グルカゴンのｐＩとは異なる、即ち、これより減少したり増加したｐＩを有することを意味する。このように変化したＰＩを有するペプチドは、グルカゴン誘導体として中性ｐＨで改善された溶解度及び／又は高い安定性を示すことができる。しかし、特にこれに限定されるものではない。

より具体的には、前記グルカゴン誘導体は、天然型グルカゴンのｐＩ値（６．８）ではなく変化したｐＩ値を有するものであってもよく、より具体的には６．８未満、具体的には６．７以下、さらに具体的には６．５以下であるｐＩ値、また、具体的には６．８超、７以上、さらに具体的には７．５以上であってもよいが、これに制限されず、天然型グルカゴンと相違するｐＩ値を有すれば、本発明の範疇に含まれる。特に、天然型グルカゴンと相違するｐＩ値を有することにより、天然型グルカゴンに比べて中性ｐＨで改善された溶解度を示すことにより凝集（ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ）される程度が低ければ、本発明の範疇に特に含まれる。

さらに具体的には、４～６．５及び／又は７～９．５、さらに具体的には７．５～９．５、より一層具体的には８．０～９．３のｐＩ値を有するものであってもよいが、これに制限されない。この場合、天然型グルカゴンに比べて高かったり低いｐＩを有するため、中性ｐＨで天然型グルカゴンに比べて改善された溶解度及び高い安定性を示すことができる。しかし、これに制限されるものではない。

具体的には、天然型グルカゴンの誘導体は、天然型グルカゴンにおいて一部のアミノ酸が置換（ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）、追加（ａｄｄｉｔｉｏｎ）、除去（ｄｅｌｅｔｉｏｎ）及び修飾（ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）のいずれか一つの方法又はこのような方法の組合せを通じて変形させることができる。前記アミノ酸の置換は、一般に、残基の極性、電荷、溶解度、疎水性、親水性及び／又は両親媒性（ａｍｐｈｉｐａｔｈｉｃ ｎａｔｕｒｅ） における類似性に基づいて発生し、このような類似の性質を有するアミノ酸への保存的置換は、同一又は類似の活性を示すものと期待することができる。

このような方法の組み合わせで製造されるグルカゴンの誘導体の例として、天然型グルカゴンとアミノ酸配列が一つ以上異なり、Ｎ末端のアミノ酸残基に脱アミノ化（ｄｅａｍｉｎａｔｉｏｎ）された、グルカゴン受容体に対する活性化機能を保有しているペプチドなどがあるが、これに制限されず、誘導体の製造のための種々の方法の組み合わせにより本発明に適用される天然型グルカゴンの誘導体を製造できる。

また、天然グルカゴンの誘導体の作製のためのこのような変形には、Ｌ型もしくはＤ型アミノ酸及び／又は非天然アミノ酸を用いた変形、並びに／又は天然配列の修飾、例えば、側鎖官能基の変形、分子内の共有結合、例えば、側鎖間の環形成、メチル化、アシル化、ユビキチン化、リン酸化、アミノヘキサン化、ビオチン化などの改質による変形が全て含まれる。また、前記変形は非天然型化合物への置換をいずれも含む。

さらに、前記天然グルカゴンの誘導体は、天然グルカゴンのアミノ及び／又はカルボキシ末端に少なくとも一つのアミノ酸が付加されたものが全て含まれる。

前記置換又は付加されるアミノ酸としては、ヒトタンパク質において通常観察される２０種のアミノ酸だけでなく、異常又は非自然発生のアミノ酸を用いることができる。異常アミノ酸の市販元には、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、ＣｈｅｍＰｅｐ、Ｇｅｎｚｙｍｅ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓが含まれる。これらのアミノ酸が含まれるペプチドと定型的なペプチド配列は、民間のペプチド合成会社、例えば、米国のＡｍｅｒｉｃａｎ ｐｅｐｔｉｄｅ ｃｏｍｐａｎｙやＢａｃｈｅｍ、又は韓国のＡｎｙｇｅｎにおいて合成及び購入することができる。

アミノ酸誘導体も同じ方式で入手することができ、一例として４－イミダゾ酢酸（４－ｉｍｉｄａｚｏａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）などが挙げられる。

グルカゴンは、約７のｐＩを有しており、生理学的ｐＨ（ｐＨ４－８）の溶液中で不溶性であり、中性ｐＨでは沈殿する傾向がある。ｐＨ３以下の水溶液中で、グルカゴンは初期には溶解するが、１時間以内にゲル形成により沈殿する。ゲル化されたグルカゴンは、主にβ－シートフィブリルからなり、このように沈殿したグルカゴンは、ゲルが注射針や、静脈で投与される場合、血管を塞ぐようにするため、注射剤として用いるのに適さない。沈殿過程を遅延させるために、酸性（ｐＨ２－４）の剤形を用いることが通常であるが、これを通じて短時間に相対的に無凝集状態でグルカゴンを維持できる。しかし、グルカゴンのフィブリル形成が、低いｐＨで非常に速やかに行われるため、このような酸性の剤形は、調剤後に直ちに注射されなければならない。

これに対し、本発明では天然グルカゴンのｐＩを負電荷及び正電荷を帯びたアミノ酸残基の置換により変化させて延びた作用プロファイルを有するグルカゴン誘導体を開発した。本発明のグルカゴン誘導体は、天然グルカゴンに比べて変化したｐＩを有することにより中性ｐＨで改善された溶解度及び／又は高い安定性を示すことができることを特徴とする。

一つの具体的な様態として、前記グルカゴン誘導体は、下記一般式１のアミノ酸配列を含むペプチドであってもよい。

Ｙ－Ｘ２－ＱＧＴＦ－Ｘ７－ＳＤ－Ｘ１０－Ｓ－Ｘ１２－Ｘ１３－Ｘ１４－Ｘ１５－Ｘ１６－Ｘ１７－Ｘ１８－Ｘ１９－Ｘ２０－Ｘ２１－Ｆ－Ｘ２３－Ｘ２４－Ｗ－Ｌ－Ｘ２７－Ｘ２８－Ｔ－Ｘ３０（一般式１、配列番号：４６）

前記式において、
Ｘ２はα－メチルグルタミン酸（α－ｍｅｔｈｙｌ－ｇｌｕｔａｍｉｃ ａｃｉｄ）、Ａｉｂ（ａｍｉｎｏｉｓｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）、Ｄ－アラニン、グリシン、Ｓａｒ（Ｎ－ｍｅｔｈｙｌｇｌｙｃｉｎｅ）、セリン又はＤ－セリンであり、
Ｘ７はトレオニン、バリン又はシステインであり、
Ｘ１０はチロシン又はシステインであり、
Ｘ１２はリシン又はシステインであり、
Ｘ１３はチロシン又はシステインであり、
Ｘ１４はロイシン又はシステインであり、
Ｘ１５はアスパラギン酸、グルタミン酸又はシステインであり、
Ｘ１６はグルタミン酸、アスパラギン酸、セリン、α－メチルグルタミン酸、又はシステインであるか、存在せず；
Ｘ１７はアスパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、リシン、アルギニン、セリン、システイン、又はバリンであるか、存在せず；
Ｘ１８はアラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グルタミン、アルギニン、バリン、又はシステインであるか、存在せず；
Ｘ１９はアラニン、アルギニン、セリン、バリン、又はシステインであるか、存在せず；
Ｘ２０はリシン、ヒスチジン、グルタミン酸、グルタミン、アスパラギン酸、アルギニン、α－メチルグルタミン酸、又はシステインであるか、存在せず；
Ｘ２１はアスパラギン酸、グルタミン酸、ロイシン、バリン、又はシステインであるか、存在せず；
Ｘ２３はイソロイシン、バリン、又はアルギニンであるか、存在せず；
Ｘ２４はバリン、アルギニン、アラニン、システイン、グルタミン酸、リシン、グルタミン、α－メチル－グルタミン酸、又はロイシンであるか、存在せず；
Ｘ２７はイソロイシン、バリン、アラニン、リシン、メチオニン、グルタミン、又はアルギニンであるか、存在せず；
Ｘ２８はグルタミン、リシン、アスパラギン、又はアルギニンであるか、存在せず；
Ｘ３０はシステインであるか、又は存在しなくてもよい
（ただし、前記一般式１のアミノ酸配列が配列番号１及び配列番号１２と同一の場合は除く）。

より具体的には、
前記一般式１において、
Ｘ２がセリン又はＡｉｂ（ａｍｉｎｏｉｓｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）であり；
Ｘ７はトレオニン、バリン又はシステインであり、
Ｘ１０はチロシン又はシステインであり、
Ｘ１２はリシン又はシステインであり、
Ｘ１３はチロシン又はシステインであり、
Ｘ１４はロイシン又はシステインであり、
Ｘ１５はアスパラギン酸、又はシステインであり、
Ｘ１６はグルタミン酸、セリン又はシステインであり、
Ｘ１７はアスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、アルギニン、セリン、システイン、又はバリンであり、
Ｘ１８はアスパラギン酸、グルタミン酸、アルギニン、又はシステインであり、
Ｘ１９はアラニン、又はシステインであり、
Ｘ２０はグルタミン、アスパラギン酸、リシン、又はシステインであり、
Ｘ２１はアスパラギン酸、グルタミン酸、ロイシン、バリン、又はシステインであり、
Ｘ２３はイソロイシン、バリン又はアルギニンであり、
Ｘ２４はバリン、アルギニン、アラニン、グルタミン酸、リシン、グルタミン、又はロイシンであり、
Ｘ２７はイソロイシン、バリン、アラニン、メチオニン、グルタミン又はアルギニンであり、
Ｘ２８はグルタミン、リシン、アスパラギン又はアルギニンであり、
Ｘ３０はシステインであるか、又は存在しなくてもよい。（一般式１のアミノ酸配列が配列番号１及び配列番号１２と同一の場合は、除く）。

その例として、前記グルカゴン誘導体ペプチドは配列番号：２～４５からなる群から選択されたアミノ酸配列を含むもの、具体的には、配列番号：２～４５からなる群から選択されたアミノ酸配列で（必須で）構成されたものであってもよいが、これに限定されない。

また、本願において「特定配列番号で構成されるペプチド」と記載されているとしても、当該配列番号のアミノ酸配列からなるペプチドと同一又は相当する活性を有する場合であれば、当該配列番号のアミノ酸配列の前後の無意味な配列の付加又は自然に発生し得る突然変異、あるいはこのサイレント突然変異（ｓｉｌｅｎｔ ｍｕｔａｔｉｏｎ）を除くものではなく、このような配列の付加あるいは突然変異を有する場合にも、本願の範囲内に属することが自明である。

以上の内容は、本発明の他の具体例あるいは他の様態にも適用され得るが、これに限定されるものではない。

具体的には、前記一般式１において、
Ｘ２がセリン又はＡｉｂ（ａｍｉｎｏｉｓｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）であり；
Ｘ７はシステイン、トレオニン、又はバリンであり、
Ｘ１０はチロシン又はシステインであり、
Ｘ１２はリシン又はシステインであり、
Ｘ１３はチロシン又はシステインであり、
Ｘ１４はロイシン又はシステインであり、
Ｘ１５はアスパラギン酸、又はシステインであり、
Ｘ１６はグルタミン酸、セリン又はシステインであり、
Ｘ１７はグルタミン酸、リシン、アルギニン、システイン、又はバリンであり、
Ｘ１８はアルギニン、又はシステインであり、
Ｘ１９はアラニン、又はシステインであり、
Ｘ２０はグルタミン又はリシンであり、
Ｘ２１はアスパラギン酸、グルタミン酸、バリン、又はシステインであり、
Ｘ２３はバリンであり、
Ｘ２４はバリン又はグルタミンであり、
Ｘ２７はメチオニンであり、
Ｘ２８はアスパラギン又はアルギニンであり、
Ｘ３０はシステインであるか、又は存在しなくてもよい（ただし、前記一般式１のアミノ酸配列が配列番号１及び配列番号１２と同一の場合は除く）。

その例として、前記グルカゴン誘導体ペプチドは、配列番号：３、１１～１７、１９～２７、２９、３１、３３、３５～４４からなる群から選択されたアミノ酸配列を含むもの、具体的には、配列番号：３、１１～１７、１９～２７、２９、３１、３３、３５～４４からなる群から選択されたアミノ酸配列で（必須で）構成されたものであってもよいが、これに限定されない。

具体的には、前記一般式１において
Ｘ２がＡｉｂ（ａｍｉｎｏｉｓｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）であり；
Ｘ７はシステイン、トレオニン、又はバリンであり、
Ｘ１０はチロシン又はシステインであり、
Ｘ１２はリシンであり、
Ｘ１３はチロシン又はシステインであり、
Ｘ１４はロイシン又はシステインであり、
Ｘ１５はアスパラギン酸、又はシステインであり、
Ｘ１６はグルタミン酸、セリン又はシステインであり、
Ｘ１７はリシン、アルギニン、システイン、又はバリンであり、
Ｘ１８はアルギニン、又はシステインであり、
Ｘ１９はアラニン、又はシステインであり、
Ｘ２０はグルタミン又はリシンであり、
Ｘ２１はアスパラギン酸、グルタミン酸、又はシステインであり、
Ｘ２３はバリンであり、
Ｘ２４はグルタミンであり、
Ｘ２７はメチオニンであり、
Ｘ２８はアスパラギン又はアルギニンであり、
Ｘ３０はシステインであるか、又は存在しなくてもよい（一般式１のアミノ酸配列が配列番号１及び配列番号１２と同一の場合は、除く）。

その例として、前記グルカゴン誘導体ペプチドは、配列番号：１４、１７、１９～２５、２７、２９、３３、３５～３８、４０～４２、及び４４からなる群から選択されたアミノ酸配列を含むもの、具体的には、配列番号：１４、１７、１９～２５、２７、２９、３３、３５～３８、及び４０～４２、４４からなる群から選択されたアミノ酸配列で（必須で）構成されたものであってもよいが、これに限定されない。

具体的には、前記一般式１において
Ｘ２がセリン又はＡｉｂ（ａｍｉｎｏｉｓｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）であり；
Ｘ７はトレオニン、バリン又はシステインであり、
Ｘ１０はチロシン又はシステインであり、
Ｘ１２はリシン又はシステインであり、
Ｘ１３はチロシン又はシステインであり、
Ｘ１４はロイシン又はシステインであり、
Ｘ１５はアスパラギン酸、又はシステインであり、
Ｘ１６はグルタミン酸、セリン又はシステインであり、
Ｘ１７はアスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、アルギニン、セリン、システイン、又はバリンであり、
Ｘ１８はアスパラギン酸、グルタミン酸、アルギニン、又はシステインであり、
Ｘ１９はアラニン、又はシステインであり、
Ｘ２０はグルタミン、アスパラギン酸、又はリシンであり、
Ｘ２１はアスパラギン酸、又はグルタミン酸であり、
Ｘ２３はバリンであり、
Ｘ２４はバリン又はグルタミンであり、
Ｘ２７はイソロイシン又はメチオニンであり、
Ｘ２８はアスパラギン又はアルギニンであり、
Ｘ２９はトレオニンであり、
Ｘ３０はシステインであるか、又は存在しなくてもよい（一般式１のアミノ酸配列が配列番号１及び配列番号１２と同一の場合は、除く）。

その例として、前記グルカゴン誘導体ペプチドは配列番号２～１３、１５、１７、２０～２４、２６～３０、及び３２～４４からなる群から選択されたアミノ酸配列を含むもの、具体的には、配列番号２～１３、１５、１７、２０～２４、２６～３０、及び３２～４４からなる群から選択されたアミノ酸配列で（必須で）構成されたものであってもよいが、これに限定されない。

具体的には、前記一般式１において
Ｘ２がＡｉｂ（ａｍｉｎｏｉｓｏｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ）であり；
Ｘ７はトレオニンであり、
Ｘ１０はチロシンであり、
Ｘ１２はリシンであり、
Ｘ１３はチロシンであり、
Ｘ１４はロイシンであり、
Ｘ１５はアスパラギン酸、又はシステインであり、
Ｘ１６はグルタミン酸、セリン又はシステインであり、
Ｘ１７はリシン又はアルギニンであり；
Ｘ１８はアルギニンであり、
Ｘ１９はアラニンであり、
Ｘ２０はグルタミン、システイン、又はリシンであり、
Ｘ２１はアスパラギン酸、システイン、バリン又はグルタミン酸であり、
Ｘ２３はバリン又はアルギニンであり、
Ｘ２４はグルタミン又はロイシンであり、
Ｘ２７はメチオニンであり、
Ｘ２８はアスパラギン又はアルギニンであり、
Ｘ２９はトレオニンであり、
Ｘ３０は存在しなくてもよい（ただし、前記一般式１のアミノ酸配列が配列番号１及び配列番号１２と同一の場合は除く）。

その例として、前記グルカゴン誘導体ペプチドは配列番号：１４、１６、１８、１９、２５、及び３１からなる群から選択されたアミノ酸配列を含むもの、具体的には、配列番号：１４、１６、１８、１９、２５、及び３１からなる群から選択されたアミノ酸配列で（必須で）構成されたものであってもよいが、これに限定されない。

さらに具体的には、前記グルカゴン誘導体ペプチドは、下記一般式２のアミノ酸配列を含むペプチドであってもよい：

Ｙ－Ａｉｂ－ＱＧＴＦ－Ｘ７－ＳＤ－Ｘ１０－Ｓ－Ｘ１２－Ｙ－Ｌ－Ｘ１５－Ｘ１６－Ｘ１７－Ｒ－Ａ－Ｘ２０－Ｘ２１－Ｆ－Ｖ－Ｘ２４－Ｗ－Ｌ－Ｍ－Ｎ－Ｔ－Ｘ３０（一般式２、配列番号：４７）

前記一般式２において
Ｘ７はトレオニン、バリン又はシステインであり、
Ｘ１０はチロシン又はシステインであり、
Ｘ１２はリシン又はシステインであり、
Ｘ１５はアスパラギン酸、又はシステインであり、
Ｘ１６はグルタミン酸又はセリンであり、
Ｘ１７はリシン又はアルギニンであり；
Ｘ２０はグルタミン又はリシンであり、
Ｘ２１はアスパラギン酸、又はグルタミン酸であり、
Ｘ２４はバリン又はグルタミンであり、
Ｘ３０はシステインであるか、又は存在しなくてもよい（ただし、前記一般式２のアミノ酸配列が配列番号１及び配列番号１２と同一の場合は除く）。

その例として、前記グルカゴン誘導体ペプチドは配列番号：１３、１５及び３６～４４からなる群から選択されたアミノ酸配列を含むもの、具体的には、配列番号：１３、１５及び３６～４４からなる群から選択されたアミノ酸配列で（必須で）構成されたものであってもよいが、これに限定されない。より具体的には、前記ペプチドは配列番号：２０、あるいは３７のアミノ酸配列を含むか、当該アミノ酸配列で（必須で）構成されることを特徴とする。しかし、これに限定されるものではない。

具体的には、前記一般式２において
Ｘ７はトレオニン、バリン又はシステインであり、
Ｘ１０はチロシン又はシステインであり、
Ｘ１２はリシンであり、
Ｘ１５はアスパラギン酸であり、
Ｘ１６はグルタミン酸又はセリンであり、
Ｘ１７はリシン又はアルギニンであり；
Ｘ２０はグルタミン又はリシンであり、
Ｘ２１はアスパラギン酸又はグルタミン酸であり、
Ｘ２４はグルタミンであり、
Ｘ３０はシステインであるか、又は存在しなくてもよいが（ただし、前記一般式２のアミノ酸配列が配列番号１及び配列番号１２と同一の場合は除く。）、特にこれに限定されるものではない。

その例として、前記ペプチドは配列番号：３６～３８、４０～４２、及び４４からなる群から選択されたアミノ酸配列を含むもの、具体的には、配列番号：３６～３８、４０～４２、及び４４からなる群から選択されたアミノ酸配列で（必須で）構成されたものであってもよいが、これに限定されない。

上述したグルカゴン誘導体は、分子内架橋（ｉｎｔｒａｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｒｉｄｇｅ）を含めてもよく（例えば、共有結合的架橋又は非共有結合的架橋）、具体的には、環を含む形態であってもよい。例えば、グルカゴン誘導体の１６番目及び２０番目のアミノ酸間に環が形成された形態であってもよいが、特にこれに制限されるものではない。

前記環の非制限的な例としてラクタム架橋（又はラクタム環）を含んでもよい。

また、前記グルカゴン誘導体は環を含むように、目的とする位置に環を形成できるアミノ酸を含むように変形されたものをいずれも含む。

このような環は、前記グルカゴン誘導体内のアミノ酸の側鎖間に形成されてもよく、その例として、リシンの側鎖とグルタミン酸の側鎖間にラクタム環が形成される形態であってもよいが、特にこれに制限されるものではない。

例えば、前記一般式１あるいは一般式２のアミノ酸配列を含むペプチドは、一般式１あるいは一般式２のＸ１０とＸ１４、Ｘ１２とＸ１６、Ｘ１６とＸ２０、Ｘ１７とＸ２１、Ｘ２０とＸ２４、及びＸ２４とＸ２８のアミノ酸対において、各アミノ酸対のアミノ酸がそれぞれグルタミン酸又はリシンで置換されたものであってもよいが、これに限定されない。前記、Ｘｎ（ｎは自然数）においてｎは提示されたアミノ酸配列のＮ末端からのアミノ酸の位置を示す。

また、前記一般式１あるいは一般式２のアミノ酸配列を含むペプチドは、Ｘ１２とＸ１６のアミノ酸対、Ｘ１６とＸ２０のアミノ酸対、又はＸ１７とＸ２１のアミノ酸対のアミノ酸のそれぞれが環を形成できるグルタミン酸又はリシンで置換されたものであってもよいが、これに限定されない。

また、前記一般式１あるいは２において、Ｘ１０とＸ１４、Ｘ１２とＸ１６、Ｘ１６とＸ２０、Ｘ１７とＸ２１、Ｘ２０とＸ２４、及びＸ２４とＸ２８のアミノ酸対の少なくとも一つのアミノ酸対において各アミノ酸対のそれぞれのアミノ酸間に環（例えば、ラクタム環）を形成したものあってもよいが、これに限定されない。

また、前記一般式１又は２において、Ｘ１６がグルタミン酸であり、Ｘ２０はリシンであり、Ｘ１６とＸ２０の側鎖がラクタム環を形成しているものであってもよいが、これに限定されない。

また、本発明によるグルカゴン誘導体ペプチドは、Ｎ末端及び／又はＣ末端が変形されていないものであってもよいが、生体内のタンパク質切断酵素から保護し、安定性を増加させるために、そのＮ末端及び／又はＣ末端などが化学的に修飾されたり有機基で保護されたり、又はペプチド末端などにアミノ酸が追加されて変形された形態も本発明によるペプチドの範疇に含まれる。Ｃ末端が変形されていない場合、本発明によるペプチドの末端はカルボキシル基を有するが、特にこれに制限されるものではない。

特に、化学的に合成したペプチドの場合、Ｎ及びＣ末端が電荷を帯びているため、このような電荷を除去するために、Ｎ末端をアセチル化（ａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ）及び／又はＣ末端のアミド化（ａｍｉｄａｔｉｏｎ）を行ってもよいが、特にこれらに限定されるものではない。

本明細書において別途に指すところがなければ、本発明による「グルカゴン誘導体ペプチド」又はこのようなペプチドが免疫グロブリンＦｃ切片に共有結合で連結された「結合体」に関する明細書の詳細な説明や請求の範囲の記述は、当該ペプチド又は結合体はもちろん、当該ペプチド又は結合体の塩（例えば、前記ペプチドの薬学的に許容可能な塩）、又はこの溶媒和物の形態をいずれも含む範疇にも適用される。従って、明細書に「ペプチド」又は「結合体」とだけ記載されているとしても、当該記載内容は、その特定塩、その特定溶媒和物、その特定塩の特定溶媒和物にも同様に適用される。このような塩の形態は、例えば、薬学的に許容される任意の塩を用いた形態であってもよい。前記塩の種類は特に制限されない。ただし、個体、例えば、哺乳類に安全で効果的な形態であることが好ましいが、特にこれに限定されるものではない。

本発明において「免疫グロブリンＦｃ切片」は、免疫グロブリンの重鎖と軽鎖可変領域を除いた、重鎖定常領域を意味する。具体的には、前記免疫グロブリンＦｃ切片は重鎖定常領域２（ＣＨ２）及び／又は重鎖定常領域３（ＣＨ３）の部分を含むものであってもよく、よりも具体的には、ヒンジ領域（ヒンジ領域全体又は一部を意味する。）をさらに含むものであってもよい。

前記免疫グロブリンＦｃ切片は本発明の化学式（１）のペプチド結合体の一部をなす一構成であり、具体的には、前記化学式（１）においてＦに該当することができる。このような免疫グロブリンＦｃ切片は重鎖定常領域にヒンジ（ｈｉｎｇｅ）部分を含んでもよいが、これに限定されるものではない。

本発明において、免疫グロブリンＦｃ切片はＮ末端に特定のヒンジ配列を含んでもよい。

本発明の用語、「ヒンジ配列」とは、重鎖に位置してジスルフィド結合（ｉｎｔｅｒ ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ ｂｏｎｄ）を通じて免疫グロブリンＦｃ切片の二量体を形成する部位を意味する。

本発明において、前記ヒンジ配列は、下記アミノ酸配列を有するヒンジ配列中の一部が欠失して一つのシステイン残基のみを有するように変異されたものであってもよいが、これに制限されない：

Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ（配列番号４８）。

前記ヒンジ配列は、配列番号４８のヒンジ配列中の８番目又は１１番目のシステイン残基が欠失して一つのシステイン残基のみを含むものであってもよい。本発明のヒンジ配列は一つのシステイン残基のみを含む、３～１２個のアミノ酸で構成されたものであってもよいが、これに限定されない。より具体的には、本発明のヒンジ配列は、次のような配列を有することができる：Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ（配列番号５２）、Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｐｒｏ（配列番号５３）、Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ（配列番号５４）、Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ（配列番号５５）、Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ（配列番号５６）、Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ（配列番号５７）、Ｇｌｕ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ（配列番号５８）、Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ（配列番号５９）、Ｇｌｕ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ（配列番号６０）、Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ（配列番号６１）、Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ（配列番号６２）、Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ（配列番号６３）、Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ（配列番号６４）、Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ（配列番号６５）、Ｌｙｓ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ（配列番号６６）、Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｌｙｓ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ（配列番号６７）、Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ（配列番号６８）、Ｇｌｕ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ（配列番号６９）。配列番号４９（Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ）又は配列番号５０（Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ）、さらに具体的には、前記ヒンジ配列は配列番号４９（Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ）又は配列番号５０（Ｐｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ）のアミノ酸配列を含むものであってもよいが、これに限定されない。

本発明の免疫グロブリンＦｃ切片はヒンジ配列の存在により免疫グロブリンＦｃ鎖の２分子が二量体を形成した形態であってもよく、また、本発明の化学式（１）の持続型結合体はリンカーの一方の末端が二量体の免疫グロブリンＦｃ切片の一鎖に連結された形態であってもよいが、これに限定されるものではない。

本発明の用語、「Ｎ末端」とは、タンパク質又はポリペプチドのアミノ末端を意味するものであり、アミノ末端の最末端、又は最末端から１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、又は１０個以上のアミノ酸まで含むものであってもよい。本発明の免疫グロブリンＦｃ切片はヒンジ配列をＮ末端にんでてもよいが、これに限定されない。

また、本発明の免疫グロブリンＦｃ切片は、天然型と実質的に同等又は向上した効果を奏する限り、免疫グロブリンの重鎖と軽鎖可変領域のみを除いて、一部又は全体の重鎖定常領域１（ＣＨ１）及び／又は軽鎖定常領域１（ＣＬ１）を含む拡張したＦｃ領域であってもよい。また、ＣＨ２及び／又はＣＨ３に該当する相当長い一部のアミノ酸配列が除去された領域であってもよい。

例えば、本発明の免疫グロブリンＦｃ切片は、１）ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン及びＣＨ４ドメイン、２）ＣＨ１ドメイン及びＣＨ２ドメイン、３）ＣＨ１ドメイン及びＣＨ３ドメイン、４）ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメイン、５）ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン及びＣＨ４ドメイン中の一個又は２個以上のドメインと免疫グロブリンヒンジ領域（又はヒンジ領域の一部）との組み合わせ、６）重鎖定常領域の各ドメインと軽鎖定常領域の二量体であってもよい。しかし、これに限定されるものではない。

また、一つの具体例として、前記免疫グロブリンＦｃ切片は二量体形態（ｄｉｍｅｒｉｃ ｆｏｒｍ）であってもよく、二量体形態の一つのＦｃ領域に一般式１のペプチドの一分子が共有結合的に連結されてもよく、その時、前記免疫グロブリンＦｃと一般式１のペプチドはエチレングリコール繰り返し単位を含有するリンカーにより互いに連結されてもよい。一方、二量体形態の一つのＦｃ領域に一般式１のペプチドの二分子が対称的に結合することも可能である。その時、前記免疫グロブリンＦｃと一般式１のペプチドはエチレングリコール繰り返し単位を含有するリンカーにより互いに連結されてもよい。しかし、前記例に制限されるものではない。

また、本発明の免疫グロブリンＦｃ切片は天然型アミノ酸配列だけでなく、その配列誘導体を含む。アミノ酸配列誘導体とは、天然アミノ酸配列中の一つ以上のアミノ酸残基が欠失、挿入、非保存的又は保存的置換又はこれらの組み合わせにより相違する配列を有することを意味する。

例えば、ＩｇＧ Ｆｃの場合、結合に重要であることが知られている２１４～２３８、２９７～２９９、３１８～３２２又は３２７～３３１番のアミノ酸残基が変形のために適当な部位として用いられ得る。

また、ジスルフィド結合を形成できる部位が除去されたり、天然型ＦｃからＮ末端のいくつかのアミノ酸が除去されたり、又は天然型ＦｃのＮ末端にメチオニン残基が付加されることもできるなど、多様な種類の誘導体が可能である。また、エフェクタ機能をなくすために補体結合部位、例えば、Ｃ１ｑ結合部位が除去されてもよく、ＡＤＣＣ（ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）部位が除去されてもよい。このような免疫グロブリンＦｃ切片の配列誘導体を製造する技術は、国際特許公開第ＷＯ９７／３４６３１号、国際特許公開第９６／３２４７８号などに開示されている。

分子の活性を全体的に変更させないタンパク質及びペプチドにおけるアミノ酸交換は当該分野において公知となっている（Ｈ．Ｎｅｕｒａｔｈ、Ｒ．Ｌ．Ｈｉｌｌ、Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９７９）。最も通常生じる交換はアミノ酸残基Ａｌａ／Ｓｅｒ、Ｖａｌ／Ｉｌｅ、Ａｓｐ／Ｇｌｕ、Ｔｈｒ／Ｓｅｒ、Ａｌａ／Ｇｌｙ、Ａｌａ／Ｔｈｒ、Ｓｅｒ／Ａｓｎ、Ａｌａ／Ｖａｌ、Ｓｅｒ／Ｇｌｙ、Ｔｈｙ／Ｐｈｅ、Ａｌａ／Ｐｒｏ、Ｌｙｓ／Ａｒｇ、Ａｓｐ／Ａｓｎ、Ｌｅｕ／Ｉｌｅ、Ｌｅｕ／Ｖａｌ、Ａｌａ／Ｇｌｕ、Ａｓｐ／Ｇｌｙ間の交換である。場合によっては、リン酸化（ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ）、硫酸化（ｓｕｌｆａｔｉｏｎ）、アクリル化（ａｃｒｙｌａｔｉｏｎ）、グリコシル化（ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）、メチル化（ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ）、ファルネシル化（ｆａｒｎｅｓｙｌａｔｉｏｎ）、アセチル化（ａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ）及びアミド化（ａｍｉｄａｔｉｏｎ）などで修飾（ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）されてもよい。

前記Ｆｃ誘導体は本発明のＦｃ切片と同等の生物学的活性を示し、Ｆｃ領域の熱、ｐＨなどに対する構造的安定性を増大させたものであってもよい。

また、このようなＦｃ切片はヒト、ウシ、ヤギ、ブタ、マウス、ラビット、ハムスター、ラット又はモルモットなどの動物の生体内から分離した天然型から得られてもよく、形質転換された動物細胞又は微生物から得られた組換え型又はその誘導体であってもよい。ここで、天然型から獲得する方法は全体免疫グロブリンをヒト又は動物の生体から分離した後、タンパク質分解酵素を処理して獲得する方法であってもよい。パパインを処理する場合には、Ｆａｂ及びＦｃに切断され、ペプシンを処理する場合には、ｐＦ’ｃ及びＦ（ａｂ）２に切断される。これをサイズ排除クロマトグラフィ（ｓｉｚｅ－ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）などを用いてＦｃ又はｐＦ’ｃを分離できる。さらに具体的な実施形態においてはヒト由来のＦｃ切片を微生物から得た組換え型免疫グロブリンＦｃ切片である。

また、免疫グロブリンＦｃ切片は天然型糖鎖、天然型に比べて増加した糖鎖、天然型に比べて減少した糖鎖又は糖鎖が除去された形態であってもよい。このような免疫グロブリンＦｃ糖鎖の増減又は除去には化学的方法、酵素学的方法及び微生物を用いた遺伝工学的方法のような常法が用いられ得る。ここで、Ｆｃから糖鎖が除去された免疫グロブリンＦｃ切片は補体（ｃ１ｑ）との結合力が顕著に低下し、抗体依存性細胞傷害又は補体依存性細胞傷害が減少又は除去されるため、生体内において不要な免疫反応を誘発しない。このような点で薬物のキャリアとしての本来の目的に、より符合する形態は糖鎖が除去されたり非グリコシル化された免疫グロブリンＦｃ切片であるといえる。

本発明において「糖鎖の除去（Ｄｅｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）」とは、酵素で糖を除去したＦｃ切片をいい、非グリコシル化（Ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）とは、原核動物、さらに具体的な実施形態では大腸菌で生産してグリコシル化されていないＦｃ切片を意味する。

一方、免疫グロブリンＦｃ切片はヒト又はウシ、ヤギ、ブタ、マウス、ラビット、ハムスター、ラット、モルモットなどの動物起源であってもよく、さらに具体的な実施形態においてはヒト起源である。

また、免疫グロブリンＦｃ切片はＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭ由来又はそれらの組み合わせ（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）又はこれらの混成（ｈｙｂｒｉｄ）によるＦｃ切片であってもよい。さらに具体的な実施形態では、ヒト血液に最も豊富なＩｇＧ又はＩｇＭ由来であり、よりも具体的な実施形態ではリガンド結合タンパク質の半減期を向上させることが公知となったＩｇＧ由来である。より一層具体的な実施形態において前記免疫グロブリンＦｃ切片はＩｇＧ４ Ｆｃ切片であり、最も具体的な実施形態において前記免疫グロブリンＦｃ切片はヒトＩｇＧ４由来の非グリコシル化されたＦｃ切片であるが、これに限定されるものではない。

また、一つの具体的な実施形態において、免疫グロブリンＦｃ切片はヒトＩｇＧ４ Ｆｃの断片であり、各単量体（ｍｏｎｏｍｅｒ）の３番目のアミノ酸であるシステイン間のジスルフィド結合（ｉｎｔｅｒ－ｃｈａｉｎ 形態）を通じて２個の単量体が連結されたホモ二量体（ｈｏｍｏｄｉｍｅｒ）の形態であってもよく、その時、ホモ二量体の各単量体は独立に３５番及び９５番のシステイン間の内部のジスルフィド結合及び１４１番及び１９９番のシステイン間の内部のジスルフィド結合、即ち、２個の内部のジスルフィド結合（ｉｎｔｒａ－ｃｈａｉｎ形態）を有したり／有することができる。各単量体のアミノ酸の数は２２１個のアミノ酸で構成されてもよく、ホモ二量体を形成するアミノ酸は計４４２個のアミノ酸からなってもよいが、これに限定されない。具体的には、免疫グロブリンＦｃ切片は配列番号５１のアミノ酸配列（２２１個のアミノ酸で構成される）を有する単量体２個が各単量体の３番目のアミノ酸であるシステイン間にジスルフィド結合を通じてホモ二量体を形成し、前記ホモ二量体の単量体は、それぞれ独立に３５番及び９５番のシステイン間の内部のジスルフィド結合及び１４１番及び１９９番のシステイン間の内部のジスルフィド結合を形成するものであってもよいが、これに限定されない。

前記化学式（１）のＦは配列番号５１のアミノ酸配列である単量体を含むものであってもよく、前記Ｆは、配列番号５１のアミノ酸配列の単量体のホモ二量体であってもよいが、これに限定されない。

前記化学式（１）のＦは配列番号５１のアミノ酸配列である単量体を含むものであってもよく、前記Ｆは、配列番号５１のアミノ酸配列の単量体のホモ二量体であってもよいが、これに限定されない。

一つの例として、免疫グロブリンＦｃ切片は配列番号７０のアミノ酸配列（４４２個のアミノ酸で構成される）を含むホモ二量体であってもよいが、これに限定されない。

一方、本発明において「組み合わせ（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）」とは、二量体又は多量体を形成する時、同一起源の単鎖免疫グロブリンＦｃ切片をコードするポリペプチドが相違する起源の単鎖ポリペプチドと結合を形成することを意味する。即ち、ＩｇＧ Ｆｃ、ＩｇＡ Ｆｃ、ＩｇＭ Ｆｃ、ＩｇＤ Ｆｃ及びＩｇＥのＦｃ断片からなるグループから選択された２個以上の断片から二量体又は多量体の製造が可能である。

本発明において「ハイブリッド（ｈｙｂｒｉｄ）」とは、単鎖の免疫グロブリン定常領域内に２個以上の相違する起源の免疫グロブリンＦｃ断片に該当する配列が存在することを意味する用語である。本発明の場合、種々の形態のハイブリッドが可能である。即ち、ＩｇＧ Ｆｃ、ＩｇＭ Ｆｃ、ＩｇＡ Ｆｃ、ＩｇＥ Ｆｃ及びＩｇＤ ＦｃのＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３及びＣＨ４からなるグループから１個～４個のドメインからなるドメインのハイブリッドが可能であり、ヒンジを含めてもよい。

一方、ＩｇＧもＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４のサブクラスに分けることができ、本発明ではそれらの組み合わせ又はこれらのハイブリダイゼーションも可能である。具体的には、ＩｇＧ２及びＩｇＧ４サブクラスであり、最も具体的には補体依存的傷害（ＣＤＣ、Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）のようなエフェクタ機能（ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎ）がほとんどないＩｇＧ４のＦｃ切片である。

前記液状製剤は先天性高インスリン症、低血糖、又はメタボリックシンドロームの予防又は治療に用いられる。

本発明において用語「予防」とは、前記グルカゴン誘導体、これを含む結合体、又は組成物の投与により目的とする疾患、例えば、先天性高インスリン症、低血糖、又はメタボリックシンドロームの発病を抑制又は遅延させる全ての行為を意味し、「治療」とは、前記グルカゴン誘導体、これを含む結合体、又は組成物の投与により目的とする疾患、例えば、先天性高インスリン症、低血糖、又はメタボリックシンドロームの症状が好転したり有益になる全ての行為を意味する。

本発明において用語「投与」とは、任意の適切な方法で患者に所定の物質を導入することを意味し、前記組成物の投与経路は、特にこれに制限されないが、前記組成物が生体内の標的に到達できる任意の一般的な経路を通じて投与されてもよく、例えば腹腔内投与、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、皮内投与、経口投与、局所投与、鼻内投与、肺内投与、直腸内投与などが挙げられる。

本発明において用語「低血糖」とは、血中糖量が正常人より低い状態をいう。通常、血糖が５０ｍｇ／ｄｌ以下の時をいうが、特にこれに制限されるものではない。低血糖症が生じるよくある原因は、経口用血糖降下剤やインスリンを用いる者が、普段より飲食摂取量が少ないか、活動量や運動量が過度な場合である。それ以外にも飲酒や一部血糖を低下させる薬物の使用、重症の身体的疾患、副腎皮質ホルモンやグルカゴンなどのホルモンの欠乏、インスリン生成膵臓腫瘍、インスリンに対する自己免疫疾患がある場合、胃切除術患者、遺伝性炭水化物代謝酵素異常疾患などによっても低血糖が発生し得る。

本発明において前記低血糖は急性低血糖及び慢性低血糖をいずれも含む。

低血糖の症状は元気がなく体のふるえがあり、蒼白、冷や汗、めまい、興奮、不安感、動悸、空腹感、頭痛、疲労感などを含む。低血糖が長く続くと痙攣や発作が起こることがあり、ショック状態がもたらされて意識を失うこともある。

より具体的には、前記低血糖は遺伝的欠陥による持続性高インスリン症により誘発され得る。遺伝的欠陥による高インスリン症の原因としては、１１ｐ１５．１染色体にあるＳＵＲ又はＫｉｒ６．２遺伝子の突然変異、７ｐ１５－ｐ１３染色体にあるＧＫ（ｇｌｕｃｏｋｉｎａｓｅ）遺伝子突然変異によりＧＫ活性度が増加し、ＧＤＨ（Ｇｌｕｔａｍａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ）遺伝子突然変異によりＧＤＨが活性化され、これによりベータ膵島細胞内のＡＴＰが増加することなどが知られている。

一方、先天性高インスリン症は、新生児と小児で発生する深刻で持続的な低血糖を引き起こす原因疾患の一つである。低体重出生児あるいは糖尿産婦の出生児で一時的なインスリン分泌増加、遺伝子突然変異による膵臓細胞の異常機能などにより誘発され得る。このような先天性高インスリン症の治療にグルカゴンが用いられることは知られている。

また、本発明のグルカゴン誘導体あるいはこれを含む結合体は、体重増加を予防したり、体重減少を促進したり、過体重を減少させたり、病的肥満を含む肥満（例えば、食欲、摂食、食品摂取、カロリー摂取及び／又はエネルギー消費の調節により）、それだけでなく、肥満関連の炎症、肥満関連の胆嚢疾患及び肥満誘導された睡眠時無呼吸を含むが、これに限定されない関連疾患及び健康状態を治療するための薬剤として用いられる。本発明のグルカゴン誘導体あるいはこれを含む結合体はまた、肥満以外のメタボリックシンドローム、即ち、耐糖症障害、高コレステロール血症、脂質異常症、肥満、高血圧、非アルコール脂肪性肝炎（ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ、ＮＡＳＨ）、脂質異常症による動脈硬化、粥状動脈硬化症、動脈硬化症、冠状動脈心疾患（冠動脈性心臓病）、又は脳卒中などのような関連疾患の治療に用いられる。しかし、これら病態において本発明によるグルカゴン誘導体又はその結合体の効果は、前述した体重関連の効果を通じて全体的に又は部分的に媒介されたり、これとは独立的であってもよい。

本発明を具現する更に他の一つの様態は前記液状製剤の製造方法を提供する。

液状製剤及びこれを構成する要素については、前述の通りである。

具体的には、前記製造方法は、ｉ）グルカゴン誘導体ペプチド及び免疫グロブリンＦｃ切片が互いに連結された、グルカゴン誘導体ペプチドの持続型結合体と（ｉｉ）（ａ）緩衝物質及び（ｂ）糖アルコール、糖又はそれらの組み合わせを含む安定化剤を互いに混合する段階を含んでもよい。

前記安定化剤は、糖又は糖アルコール、非イオン性界面活性剤、及びアミノ酸からなる群から選択される一つ以上の成分をさらに含んでもよく、より具体的には、糖又は糖アルコール、アミノ酸、又はこれら両方をさらに含んでもよい。例えば、前記安定化剤は、緩衝物質、糖又は糖アルコール、及びアミノ酸を含んでもよい。しかし、これに限定されるものではない。

前記持続型結合体、緩衝物質、糖、糖アルコール又はそれらの組み合わせ、非イオン性界面活性剤、アミノ酸、及びアルブミン非含有安定化剤については、前述の通りである。

本発明を具現するもう一つの様態は、先天性高インスリン症、低血糖、又はメタボリックシンドロームの予防又は治療用薬剤の製造において、前記液状製剤の用途を提供する。

本発明を具現するもう一つの様態は、先天性高インスリン症、低血糖、又はメタボリックシンドロームの予防又は治療に用いるための前記液状製剤の用途を提供する。
本発明を具現するもう一つの様態は前記液状製剤を、これを必要とする個体に投与する段階を含む、先天性高インスリン症、低血糖、又はメタボリックシンドロームの予防又は治療方法を提供する。

前記液状製剤、先天性高インスリン症、低血糖、及びメタボリックシンドロームについては、前述の通りである。

前記個体は、本発明の製剤の投与が必要な個体であり、本発明の液状製剤で治療可能な個体は制限なく含み、具体的には、ヒト又はラット、家畜などを含む哺乳動物を含む。

本発明の治療方法は、液状製剤を薬学的有効量で投与することを含んでもよい。適した総１日使用量は正しい医学的判断の範囲内で処置医により決定され、１回又は数回に分けて投与できる。しかし、本発明の目的上、特定患者に対する具体的な治療的有効量は、達成しようとする反応の種類と程度、場合によって他の製剤が用いられるかどうかをはじめとする具体的な組成物、患者の年齢、体重、一般健康状態、性別及び食事、投与時間、投与経路及び組成物の分泌率、治療期間、具体的な組成物と共に用いられたり同時に用いられる薬物をはじめとする多様な因子と医薬分野によく知られている類似因子により異なって適用することが好ましい。

以下、本発明を下記実施例により本発明をより詳細に説明する。ただし、下記実施例は、本発明を例示するためのものに過ぎず、本発明の範囲がこれらに限定されるものではない。

製造例：グルカゴン誘導体ペプチドの持続型結合体の製造
前記グルカゴン誘導体ペプチドの持続型結合体は、次のような方法で製造された。
両末端の水素がそれぞれ３－（３－マレイミドプロピオンアミド）プロピル基及び３－オキソプロピル基（プロピオンアルデヒド基）で置換された分子量１０ｋＤａの線状改質ポリエチレングリコールであるマレイミド－ＰＥＧ－アルデヒド（日本ＮＯＦ社）を前述のグルカゴン誘導体ペプチド中のシステインを有する誘導体に反応させ、このグルカゴン誘導体ペプチドのシステイン残基をマレイミド－ＰＥＧ－アルデヒドのマレイミド側の末端にペギル化させた。具体的には、配列番号３７のグルカゴン誘導体ペプチドとマレイミド－ＰＥＧ－アルデヒドのモル比を１：１～５、タンパク質の濃度を３～１０ｍｇ／ｍｌにして低温で１～３時間反応させた。その時、反応は５０ｍＭ Ｔｒｉｓ緩衝液（ｐＨ７．５）に２０～６０％のイソプロパノールが添加された環境下で行われた。反応が終了した後、前記反応液をＳＰ ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＨＰ（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、米国）に適用してシステインにモノペギル化されたグルカゴン誘導体を精製した。

免疫グロブリンＦｃ切片は、Ｎ末端にＰｒｏ－Ｓｅｒ－Ｃｙｓ－Ｐｒｏ配列のヒンジ領域を有する免疫グロブリンＦｃ切片（４９．８ｋＤａ、配列番号５１の二鎖がジスルフィド結合で連結されたホモ二量体）を用いて国際公開特許ＷＯ２００７／０２１１２９に記載された方法で製造した。

次に、前記精製されたモノペギル化されたグルカゴン誘導体ペプチドと免疫グロブリンＦｃ切片をモル比が１：２～１０、タンパク質の濃度を１０～５０ｍｇ／ｍＬにして４～８℃で１２～１８時間反応させた。反応液は、１００ｍＭのリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．０）に還元剤である１０～５０ｍＭのシアノ水素化ホウ素ナトリウムと１０～２０％のイソプロパノールが添加された環境下で行われた。反応が終了した後、前記反応液をＢｕｔｙｌ ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ精製カラム（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、米国）とＳｏｕｒｃｅ ＩＳＯ精製カラム（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、米国）に適用し、前記モノペギル化されたグルカゴン誘導体ペプチドのアルデヒド側のポリエチレングリコール末端が免疫グロブリンＦｃホモ二量体の二鎖中の一鎖のＮ末端プロリン窒素に連結されたグルカゴン誘導体ペプチドの持続型結合体を精製した。

製造後に逆相クロマトグラフィ、サイズ排除クロマトグラフィ及びイオン交換クロマトグラフィで分析した純度は９５％以上であった。

ここで、グルカゴン誘導体ペプチド及び免疫グロブリンＦｃ切片がＰＥＧを通じて連結された結合体を、「グルカゴン誘導体ペプチドの持続型結合体」と命名した。

実施例１：ｐＨ及び糖又は糖アルコールの種類によるグルカゴン誘導体ペプチドの持続型結合体の安定性評価
緩衝物質、界面活性剤としてポリソルベート２０、糖又は糖アルコール、そしてメチオニンからなる液状製剤に基づいて多様なｐＨ及び安定化剤の下でグルカゴン誘導体ペプチド（以下、「グルカゴン誘導体」と命名）の持続型結合体の安定性を比較した。比較例として、ｐＨ４．５の製剤を用いた。

前記製造例で得たグルカゴン誘導体ペプチドの持続型結合体を下記表１のような組成（持続型結合体の濃度は１８７．０９ｎｍｏｌ／ｍＬ）の液状製剤に製造して２５℃で６週間保管した後、イオン交換クロマトグラフィ法（Ｉｏｎ Ｅｘｃｈａｎｇｅ Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、ＩＥ－ＨＰＬＣ）、及び逆相クロマトグラフィ法（Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｐｈａｓｅ－Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、ＲＰ－ＨＰＬＣ）を用いて安定性を分析した。

表２のＩＥ－ＨＰＬＣ（％）、及びＲＰ－ＨＰＬＣ（％）は、測定時点における面積百分率値を保存試験初期面積百分率値で除した比（Ａｒｅａ％／Ｓｔａｒｔ Ａｒｅａ％）の百分率数値であり、グルカゴン誘導体の持続型結合体の初期濃度（１８７．０９ｎｍｏｌ／ｍＬ濃度）からの残存率を示す。

前記結果から見られるように、クエン酸ナトリウム、ｐＨ５．０の組成を有する製剤（＃１、＃４、＃７）が安定性を示すことを確認した。

また、クエン酸ナトリウム、ｐＨ５．０の組成を有する製剤の保存安定性を増大させるために含まれる糖又は糖アルコールであるマンニトール、ソルビトール、そしてスクロースをそれぞれ５％、５％及び８％で含む場合、類似の安定性を示した。比較例１、２、３であるｐＨ４．５の組成の場合には、６週で沈殿が起こったことを確認することができた。

実施例２：緩衝物質の種類、ｐＨ及び糖又は糖アルコール種類に応じたグルカゴン誘導体の持続型結合体の安定性評価
前記液状製剤の組成（クエン酸ナトリウム、ポリソルベート２０及びメチオニン）に基づいて緩衝物質の種類及びｐＨによるグルカゴン誘導体の持続型結合体の安定性を比較した。そのうち、前記実施例１で確認されたマンニトール、ソルビトール、そしてスクロースの追加によるグルカゴン誘導体の持続型結合体の安定性を比較した。そのとき、マンニトール、スクロース及びソルビトールの濃度は市販中の剤形及び許可機関で勧める最大許容範囲を考慮した。

前記製造例で得たグルカゴン誘導体ペプチドの持続型結合体を下記表３のような組成（持続型結合体の濃度は１８７．０９ｎｍｏｌ／ｍＬ）の液状製剤に製造して２５℃で７週間保管した後、イオン交換クロマトグラフィ法と逆相クロマトグラフィ法を用いて分析した。
表４のＩＥ－ＨＰＬＣ（％）、及びＲＰ－ＨＰＬＣ（％）は、測定時点における面積百分率値を保存試験初期面積百分率値で除した比（Ａｒｅａ％／Ｓｔａｒｔ Ａｒｅａ％）の百分率数値であり、グルカゴン誘導体の持続型結合体の初期濃度（１８７．０９ｎｍｏｌ／ｍＬ濃度）からの残存率を示す。

前記結果から見られるように、酢酸ナトリウム、ｐＨ５．０の組成を有する製剤（＃３、＃９、＃１５）とヒスチジン、ｐＨ ５．５の組成を有する製剤（＃５、＃１１、＃１７）であるとき、２５℃で７週間高い安定性を示した。しかし、ｐＨ４．５の組成を有する製剤（＃２、＃８、＃１４）の場合には７週で沈殿が起こったことを確認することができた。

グルカゴン誘導体の持続型結合体の保存安定性を増大させるために含まれる糖又は糖アルコールであるマンニトール、ソルビトール、そしてスクロースをそれぞれ５％、５％及び８％で含む場合、類似の安定性を示した。

実施例３：非イオン性界面活性剤の種類によるグルカゴン誘導体の持続型結合体の安定性評価
前記実施例１又は実施例２で確認された液状製剤の組成（酢酸ナトリウム、スクロース及びメチオニン）に基づいて非イオン性界面活性剤種類によるグルカゴン誘導体の持続型結合体の安定性を比較した。そのとき、非イオン性界面活性剤としてポリソルベート２０、ポリソルベート８０及びポロキサマー１８８の濃度は市販中の剤形を考慮した。

前記製造例で得たグルカゴン誘導体ペプチドの持続型結合体を下記表５のような組成（持続型結合体の濃度は１８７．０９ｎｍｏｌ／ｍＬ）の液状製剤に製造して２５℃で４週間保管した後、イオン交換クロマトグラフィ法と逆相クロマトグラフィ法を用いて分析した。
表６のＩＥ－ＨＰＬＣ（％）、及びＲＰ－ＨＰＬＣ（％）は、測定時点における面積百分率値を保存試験初期面積百分率値で除した比（Ａｒｅａ％／Ｓｔａｒｔ Ａｒｅａ％）の百分率数値であり、グルカゴン誘導体の持続型結合体の初期濃度（１８７．０９ｎｍｏｌ／ｍＬ濃度）からの残存率を示す。

前記結果から見られるように、非イオン性界面活性剤としてポリソルベート２０、ポリソルベート８０及びポロキサマー１８８をそれぞれ含む製剤の場合に安定性を示すことを確認した。

実施例４：非イオン性界面活性剤及びアミノ酸を含むか否かによるグルカゴン誘導体の持続型結合体の安定性評価
液状製剤が非イオン性界面活性剤又はアミノ酸安定化剤を含む又は含まないとき、グルカゴン誘導体の持続型結合体の安定性を比較した。

前記製造例で得たグルカゴン誘導体ペプチドの持続型結合体を下記表７のような組成（持続型結合体の濃度は１８７．０９ｎｍｏｌ／ｍＬ）の液状製剤に製造して２５℃で４週間保管した後、イオン交換クロマトグラフィ法と逆相クロマトグラフィ法を用いて分析した。

表８のＩＥ－ＨＰＬＣ（％）、及びＲＰ－ＨＰＬＣ（％）は、測定時点における面積百分率値を保存試験初期面積百分率値で除した比（Ａｒｅａ％／Ｓｔａｒｔ Ａｒｅａ％）の百分率数値であり、グルカゴン誘導体の持続型結合体の初期濃度（１８７．０９ｎｍｏｌ／ｍＬ濃度）からの残存率を示す。

前記結果から見られるように、アミノ酸を含む製剤（＃１、＃２）が安定性を示すことを確認した。また、非イオン性界面活性剤を含む製剤とこれを含まない製剤は互いに類似の安定性を示すことを確認した。

実施例５：ｐＨ、糖濃度及びアミノ酸の種類によるグルカゴン誘導体の持続型結合体の安定性評価
前記実施例１～実施例４で確認された液状製剤の組成（酢酸ナトリウム、スクロース、ポリソルベート２０及びメチオニン）に基づいてタンパク異物又は沈殿が発生しないｐＨ範囲、糖としてスクロースの濃度及びメチオニンではない他のアミノ酸の種類によるグルカゴン誘導体の持続型結合体の安定性を評価した。

前記製造例で得たグルカゴン誘導体ペプチドの持続型結合体を下記表９のような組成（持続型結合体の濃度は１８７．０９ｎｍｏｌ／ｍＬ）の液状製剤に製造して２５℃で７週間保管した後、イオン交換クロマトグラフィ法と逆相クロマトグラフィ法を用いて分析した。

表１０のＩＥ－ＨＰＬＣ（％）、及びＲＰ－ＨＰＬＣ（％）は、測定時点における面積百分率値を保存試験初期面積百分率値で除した比（Ａｒｅａ％／Ｓｔａｒｔ Ａｒｅａ％）の百分率数値であり、グルカゴン誘導体の持続型結合体の初期濃度（１８７．０９ｎｍｏｌ／ｍＬ濃度）からの残存率を示す。

前記結果から見られるように、緩衝溶液として酢酸ナトリウム組成を有する製剤のｐＨ範囲がｐＨ４．６～ｐＨ５．０であるとき、ｐＨ５．０の組成を有する製剤（＃３）が他のｐＨ組成より優れた安定性を示した。また、ｐＨ４．６の組成を有する製剤（＃１）であるとき、２５℃で２週間保管時に小さい粒子が生成され、５週間保管時に小さい粒子の数が増加した。スクロースの濃度によるグルカゴン誘導体の持続型結合体の安定性を確認した結果、スクロースを０％（＃４）～１５％（＃８）として含む場合、スクロースの濃度が高いほど安定性が高くなる傾向を示した。

また、アミノ酸の種類によるグルカゴン誘導体の持続型結合体の安定性を確認した結果、アルギニン（＃９）、ヒスチジン（＃１０）及びリシン（＃１１）を含む製剤で安定性を確認した。

即ち、このような結果は、多様なｐＨ範囲、糖濃度及びアミノ酸の種類によりグルカゴン誘導体の持続型結合体が本発明の液状製剤の組成で安定性を有していることを示唆するものである。

以上の説明から、本発明が属する技術分野の当業者であれば、本発明がその技術的思想や必須の特徴を変更することなく、他の具体的な形態で実施されうることが理解できるだろう。これに関連し、以上で記述した実施例はあくまで例示的なものであり、限定的なものでないことを理解すべきである。本発明の範囲は前記詳細な説明よりは、後述する特許請求の範囲の意味及び範囲、そしてその等価概念から導かれるあらゆる変更又は変形された形態が本発明の範囲に含まれるものと解釈すべきである。

Claims (31)

1. 持続型結合体の液状製剤であって、前記液状製剤は
   １８～９３６ｎｍｏｌ／ｍＬの下記化学式（１）の持続型結合体；
   前記液状製剤のｐＨを４．８～６．５の範囲で維持するための分量の緩衝物質；と
   １．０～２０％（ｗ／ｖ）の糖アルコール、糖、又はそれらの組み合わせ；を含む液状製剤：
   

   

   前記化学式（１）において、Ｘは、グルカゴン誘導体ペプチドであり、
   Ｌはリンカーであり、
   ａは、０又は自然数であり、ただし、ａが２以上である時、それぞれのＬは互いに独立しており；
   Ｆは、免疫グロブリンＦｃ切片であり、
   －は、共有結合を示す：
   [一般式２]
   Ｙ－Ａｉｂ－ＱＧＴＦ－Ｘ７－ＳＤ－Ｘ１０－Ｓ－Ｘ１２－Ｙ－Ｌ－Ｘ１５－Ｘ１６－Ｘ１７－Ｒ－Ａ－Ｘ２０－Ｘ２１－Ｆ－Ｖ－Ｘ２４－Ｗ－Ｌ－Ｍ－Ｎ－Ｔ－Ｘ３０（一般式２、配列番号：４７）
   前記一般式２において、
   Ｘ７はトレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）又はシステイン（Ｃ）であり、
   Ｘ１０はチロシン（Ｙ）又はシステイン（Ｃ）であり、
   Ｘ１２はリシン（Ｋ）又はシステイン（Ｃ）であり、
   Ｘ１５はアスパラギン酸（Ｄ）、又はシステイン（Ｃ）であり、
   Ｘ１６はグルタミン酸（Ｅ）又はセリン（Ｓ）であり、
   Ｘ１７はリシン（Ｋ）又はアルギニン（Ｒ）であり、
   Ｘ２０はグルタミン（Ｑ）又はリシン（Ｋ）であり、
   Ｘ２１はアスパラギン酸（Ｄ）、又はグルタミン酸（Ｅ）であり、
   Ｘ２４はバリン（Ｖ）又はグルタミン（Ｑ）であり、
   Ｘ３０はシステイン（Ｃ）であるか、又は存在しない
   （ただし、前記一般式２のアミノ酸配列が配列番号１及び配列番号１２と同一の場合は除く）。
2. 前記ペプチドは配列番号２～１１、及び１３～４５から選択されたいずれか一つのアミノ酸配列である、請求項１に記載の液状製剤。
3. 前記ペプチドは配列番号１３、１５及び３６～４４から選択されたいずれか一つのアミノ酸配列である、請求項１に記載の液状製剤。
4. 前記ペプチドは配列番号３７である、請求項１に記載の液状製剤。
5. ＸはそのＣ末端がアミド化している、請求項１に記載の液状製剤。
6. Ｘはシステインの硫黄原子を通じて連結されている、請求項１に記載の液状製剤。
7. 前記免疫グロブリンＦｃ切片はＩｇＧ４由来である、請求項１に記載の液状製剤。
8. Ｆは２個のポリペプチド鎖がジスルフィド結合で連結されている構造であり、前記二鎖中の一鎖の窒素原子を通じてのみ連結されている、請求項１に記載の液状製剤。
9. Ｆは配列番号５１のアミノ酸配列の単量体のホモ二量体である、請求項１～８のいずれか一項に記載の液状製剤。
10. ＦはそのＮ末端プロリンの窒素原子を通じて連結されている、請求項８に記載の液状製剤。
11. 前記免疫グロブリンＦｃ切片とＸがグリコシル化されていない、請求項１に記載の液状製剤。
12. 前記Ｌはポリエチレングリコールである、請求項１に記載の液状製剤。
13. 前記Ｌ内のエチレングリコール繰り返し単位部位の化学式量は１～１００ｋＤａの範囲にある、請求項１に記載の液状製剤。
14. 前記緩衝物質は、クエン酸とその塩、酢酸とその塩、ヒスチジンとその塩、リン酸とその塩及びそれらの組み合わせからなる群から選択する、請求項１に記載の液状製剤。
15. 前記緩衝物質は、酢酸とその塩である、請求項１４に記載の液状製剤。
16. 前記液状製剤のｐＨは４．８～６．５である、請求項１に記載の液状製剤。
17. 前記液状製剤のｐＨは４．８～６．０である、請求項１に記載の液状製剤。
18. 前記液状製剤のｐＨは４．８～５．５である、請求項１７に記載の液状製剤。
19. 前記緩衝物質の濃度は液状製剤のｐＨを４．８～６．５の範囲で維持するための５～１００ｍＭである、請求項１に記載の液状製剤。
20. 前記糖はグルコース、フルクトース、ガラクトース、ラクトース、マルトース、スクロース、又はそれらの組み合わせである、請求項１に記載の液状製剤。
21. 前記糖はスクロースである、請求項２０に記載の液状製剤。
22. 前記糖は３～１５％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する、請求項２０に記載の液状製剤。
23. 前記糖アルコールはマンニトール及びソルビトールで構成される群から選択される一つ以上である、請求項１に記載の液状製剤。
24. 前記液状製剤は、非イオン性界面活性剤及びアミノ酸からなる群から選択される一つ以上の成分をさらに含む、請求項１に記載の液状製剤。
25. 前記非イオン性界面活性剤は、液状製剤内に０．０１～０．１％（ｗ／ｖ）の濃度である、請求項２４に記載の液状製剤。
26. 前記非イオン性界面活性剤は、ポロキサマー、ポリソルベート、又はそれらの組み合わせである、請求項２４に記載の液状製剤。
27. 前記非イオン性界面活性剤は、ポロキサマー１８８、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０及びそれらの組み合わせからなる群から選択する、請求項２６に記載の液状製剤。
28. 前記アミノ酸は、メチオニン、アルギニン、ヒスチジン、グリシン、システイン、リシン及びそれらの組み合わせからなる群から選択する安定化剤をさらに含む、請求項２４に記載の液状製剤。
29. 前記液状製剤は等張化剤を含まない、請求項１に記載の液状製剤。
30. 前記液状製剤は
    ９０～５６２ｎｍｏｌ／ｍＬの化学式（１）のペプチド結合体；
    前記液状製剤のｐＨが４．８～５．５になるようにクエン酸とその塩、酢酸とその塩、ヒスチジンとその塩、リン酸とその塩及びそれらの組み合わせから選択する５～２５ｍＭの緩衝物質；
    １～２０％（ｗ／ｖ）の糖アルコール、糖、又はそれらの組み合わせ；及び
    ポロキサマー、ポリソルベート又はそれらの組み合わせから選択する０．０１～０．１％（ｗ／ｖ）の非イオン性界面活性剤；と
    メチオニン、アルギニン、ヒスチジン、グリシン、システイン、リシン及びそれらの組み合わせからなる群から選択する０．０１～１ｍｇ／ｍＬの安定化剤を含有する、請求項１～２９のいずれか一項に記載の液状製剤。
31. 前記液状製剤は
    ９０～５６２ｎｍｏｌ／ｍＬの化学式（１）のペプチド結合体；
    前記液状製剤のｐＨが４．８～５．５になるようにクエン酸とその塩、酢酸とその塩、ヒスチジンとその塩、リン酸とその塩及びそれらの組み合わせから選択する５～２５ｍＭの緩衝物質；
    ４～１０％（ｗ／ｖ）の糖；及び
    ポロキサマー、ポリソルベート又はそれらの組み合わせから選択する０．０１～０．１％（ｗ／ｖ）の非イオン性界面活性剤；と
    メチオニン、アルギニン、ヒスチジン、グリシン、システイン、リシン及びそれらの組み合わせからなる群から選択する０．０１～１ｍｇ／ｍＬの安定化剤を含有する、請求項１～３０のいずれか一項に記載の液状製剤。

Images