JP2023525555A - 新規なｉｌ１０アゴニストおよびその使用方法 - Google Patents

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Abstract

本開示は、改善された抗腫瘍治療効力を有するＩＬ１０アゴニストに関する。

Description

本発明は、新規なＩＬ１０アゴニストおよびその使用方法に関する。
サイトカインであるインターロイキン－１０（ＩＬ－１０またはＩＬ１０）は、ヒトサイトカイン合成阻害因子（ＣＳＩＦ）としても知られ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、および抗原提示細胞（ＡＰＣ）に対する作用を通して複数の免疫応答を調節する多面的なサイトカインである。ＩＬ１０は主としてマクロファージで発現されるが、活性化されたＴ細胞、Ｂ細胞、マスト細胞、および単球でも発現が検出されている。ＩＬ１０は、その抗原提示抑制（主要組織適合複合体ＩＩ型（ＭＨＣ－ＩＩ）および共刺激リガンドＣＤ８０／ＣＤ８６の発現を低下させることによる）、骨髄細胞による炎症性サイトカイン放出の抑制、Ｔ細胞プライミングの阻害（ＣＤ２８シグナル伝達の抑制を介する）に起因して、免疫応答を阻害するものとして最初に報告された。しかし、より近年の研究では、Ｂ細胞の共刺激、ＮＫ細胞の細胞溶解活性の増強、ならびに細胞溶解性Ｔ細胞の増殖、サイトカイン放出および細胞溶解活性の増強を通してのＩＬ１０の免疫刺激の役割も記載されている（非特許文献１による総説がある）。
ヒトＩＬ１０は非共有結合性に連結されたホモ二量体であり、その受容体は、２つのＩＬ１０Ｒα（ＩＬ１０Ｒ１とも称される）分子および２つのＩＬ１０Ｒβ（ＩＬ１０Ｒ２とも称される）分子で構成されるヘテロ四量体複合体である。ＩＬ１０ＲαはすべてのＩＬ１０応答性細胞上で発現され、一方、ＩＬ１０Ｒβはほとんどの細胞型で恒常的に発現される。ＩＬ１０ＲαはＩＬ１０に結合するとＩＬ１０Ｒβのコンフォメーション変化を誘導し、ＩＬ１０ＲβもＩＬ１０に結合することを可能にする。ひとたびＩＬ１０／ＩＬ１０Ｒα／ＩＬ１０Ｒβ複合体が構築されると、チロシンキナーゼＪａｋ１およびＴｙｋ２が活性化されて、ＩＬ１０Ｒαの細胞内ドメインの特定のチロシン残基をリン酸化し、ＩＬ１０の下流のシグナル伝達を媒介するシグナル伝達性転写因子３（ＳＴＡＴ３）の動員を招く。ＩＬ１０に固有であるＩＬ１０Ｒαとは異なり、ＩＬ１０Ｒβサブユニットは、ＩＬ２２、ＩＬ２６、ＩＮＦλを含む他のＩＩ型サイトカインの受容体にも共有されている（非特許文献２による総説がある）。
ＩＬ１０は、その多面的な活性の結果として、炎症状態、免疫関連障害、線維性障害、がんを含む、幅広い疾患、障害および状態と関連付けられている。
ＩＬ－１０、特にあらゆる形態の組換えＩＬ－１０を治療法に使用する際の欠点の１つは、血清半減期が短いことである。ｉｎ ｖｉｖｏでのＩＬ１０活性の消失は、腎クリアランスおよびタンパク質分解を含むいくつかの要因によると考えられる。
モッサー（Ｍｏｓｓｅｒ）およびチャン（Ｚｈａｎｇ），２００８，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ．２２６：２０５－１８ ショウヴァル（Ｓｈｏｕｖａｌ）ら，２０１４，Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２２：１７７－２１０
ＩＬ１０の循環血中寿命を増強すること（クリアランスの遅延）、その溶解性および安定性を増強することによって、治療中の全身曝露に耐え得るＩＬ１０アゴニストを有することは、有利であると考えられる。本開示は、当技術分野におけるこの需要および他の関連する需要に対処する。
本開示は、ｉｎ ｖｉｖｏでの治療効力、特に抗腫瘍活性が驚くほど改善しているＩＬ１０アゴニストの発見に端を発する。
本開示のＩＬ１０アゴニストに使用し得るＩＬ１０部分は、セクション６．３に記載されている。
本開示のＩＬ１０アゴニストに使用し得るＦｃドメインは、セクション６．４に記載されている。
本開示のＩＬ１０アゴニストに使用し得る標的化部分は、セクション６．５に記載されている。
本開示のＩＬ１０アゴニストに使用し得る安定化部分は、セクション６．６に記載されている。
本開示のＩＬ１０アゴニストの様々な例示的構成は、下記の具体的な実施形態６０～７７に記載されている。
本開示のＩＬ１０アゴニストの複数の異なる構成要素を接続するために使用し得るリンカーは、セクション６．７に記載されている。
本開示はさらに、本開示のＩＬ１０アゴニストをコードする核酸を提供する。ＩＬ１０アゴニストをコードする核酸は、単一の核酸（例えば、ＩＬ１０アゴニストのすべてのポリペプチド鎖をコードするベクター）であってもよく、または複数の核酸（例えば、ＩＬ１０アゴニストの複数の異なるポリペプチド鎖をコードする２つ以上のベクター）であってもよい。本開示はさらに、本開示の核酸およびＩＬ１０アゴニストを発現するように操作された宿主細胞および細胞株を提供する。本開示はさらに、本開示のＩＬ１０アゴニストを生産する方法を提供する。例示的な核酸、宿主細胞、細胞株、およびＩＬ１０アゴニストの生産方法は、下記のセクション６．８および具体的な実施形態１９９～２０４に記載されている。
本開示はさらに、本開示のＩＬ１０アゴニストを含む医薬組成物を提供する。例示的な医薬組成物は、以下のセクション６．８．３および具体的な実施形態２１１～２２３に記載されている。
本願明細書ではさらに、例えば、がんおよび免疫障害を治療するために、本開示のＩＬ１０アゴニストおよび医薬組成物を使用する方法が提供される。例示的な方法はセクション６．１０に記載されている。本開示のＩＬ１０アゴニストは、例えば、ＣＡＲＴ療法の補助剤として、併用療法に有用である。例示的な併用療法の方法は、６．１１に開示されている。本開示の治療方法の具体的な実施形態は、以下の具体的な実施形態２２４～３０４に記載されている。
ＣＤ８ Ｔ細胞のプライミング機能およびエフェクター機能に対するＩＬ１０の効果の差異を示す図。 同上。 本開示のＩＬ１０アゴニストを示す図。図２ＡはＩＬ１０アゴニストの一般的な形式を示し、図２Ｂは本開示のＩＬ１０アゴニストの具体的な実施形態を示している。これらの説明図は、ＩＬ１０アゴニストに含まれるドメインのＮ末端からＣ末端への順を描写することを意図しており、縮尺または三次元構成を伝えることは意図していない。ＩＬ１０Ｍ１１（図示されていない）はＩＬ１０Ｍ３に類似しているが、ＩＬ１０Ｍ３のヒトＩＬ１０部分の代わりにマウスＩＬ１０部分を有する。 ＳＴＡＴ３媒介ルシフェラーゼレポーター活性に対するＩＬ１０ムテインの活性を示す図。組換えＩＬ１０およびＩＬ１０ムテインは、操作されたＲａｍｏｓ／ＳＴＡＴ３－Ｌｕｃ（図３Ａ～図３Ｃ）およびＴＦ－１／ＳＴＡＴ３－Ｌｕｃ（図３Ｄ～図３Ｆ）レポーター細胞において、ＳＴＡＴ３応答エレメントにより推進されるルシフェラーゼ活性を増加させる。グラフは使用したＩＬ１０アゴニスト別に分かれており、黒の丸印は、ＩＬ１０Ｍ１（図３Ａ、図３Ｄ）、ＩＬ１０Ｍ２（図３Ｂ、図３Ｅ）、またはＩＬ１０Ｍ３（図３Ｃ、図３Ｆ）を表し、白抜きの四角印はアイソタイプ対照（図３Ａ、図３Ｂ、図３Ｄ、図３ＥについてはヒトＩｇＧ４ステルス、図３Ｃおよび図３ＦについてはマウスＩｇＧ１）を表し、三角印は市販のヒトＩＬ１０（ペプロテック（Ｐｅｐｔｒｏｔｅｃｈ）社から購入）を表す。 同上。 ＩＬ１０ムテインが、ドナー５５００Ｙ由来の初代ヒトＴ細胞からのサイトカイン放出を、組換えヒトＩＬ１０と同程度のレベルに抑制することを示す図。マイトマイシンＣで処理した同種ＰＢＭＣおよびＩＬ１０Ｍ１（図４Ａ～図４Ｃ）、ＩＬ１０Ｍ２（図４Ｄ～図４Ｆ）またはＩＬ１０Ｍ３（図４Ｇ～図４Ｉ）と共培養したドナー５５００Ｙ由来のＴ細胞からの、ＩＬ２（図４Ａ、図４Ｄ、図４Ｇ）、ＴＮＦα（図４Ｂ、図４Ｅ、図４Ｈ）およびＩＦＮγ（図４Ｃ、図４Ｆ、図４Ｉ）の放出。グラフは、使用したＩＬ１０ムテイン別に分かれており、黒の丸印はＩＬ１０ムテインを表し、白抜きの四角印はアイソタイプ対照（ＩＬ１０Ｍ１およびＩＬ１０Ｍ２についてはｈＩｇＧ４ｓ、ＩＬ１０Ｍ３についてはｍＩｇＧ１）を表し、グレーの三角印は組換えヒトＩＬ１０を表す。 同上。 同上。 ＩＬ１０ムテインが、ドナー６９００Ｍ由来の初代ヒトＴ細胞からのサイトカイン放出を、組換えヒトＩＬ１０と同程度のレベルに抑制することを示す図。マイトマイシンＣで処理した同種ＰＢＭＣおよびＩＬ１０Ｍ１（図５Ａ～図５Ｃ）、ＩＬ１０Ｍ２（図５Ｄ～図５Ｆ）またはＩＬ１０Ｍ３（図５Ｇ～図５Ｉ）と共培養したドナー６９００Ｍ由来のＴ細胞からの、ＩＬ２（図５Ａ、図５Ｄ、図５Ｇ）、ＴＮＦα（図５Ｂ、図５Ｅ、図５Ｈ）およびＩＦＮγ（図５Ｃ、図５Ｆ、図５Ｉ）の放出。グラフは、使用したＩＬ１０ムテイン別に分かれており、黒の丸印はＩＬ１０ムテインを表し、白抜きの四角印はアイソタイプ対照（ＩＬ１０Ｍ１およびＩＬ１０Ｍ２についてはｈＩｇＧ４ｓ、ＩＬ１０Ｍ３についてはｍＩｇＧ１）を表し、グレーの三角印は組換えヒトＩＬ１０を表す。 同上。 同上。 同系マウスモデルにおけるアイソタイプ対照と比較したＩＬ１０ムテインの抗腫瘍活性を示す図。第１１日（図６Ａ）および第３２日（図６Ｂ）の腫瘍体積が示されている。 ＳＴＡＴ３ルシフェラーゼ分析における種々のＩＬ１０ムテインの活性を示す図。 同上。 同上。 ＩＬ１０Ｍ１１の抗腫瘍活性を示す図。ＩＬ１０Ｍ１１は、予防的または治療的な投与の後に種々の腫瘍細胞株に対して抗腫瘍活性を有する（図８Ａ～図８Ｅ）。ＩＬ１０Ｍ１１の投与は、ＴＮＦαおよびＩＦＮγを産生するＣＤ４およびＣＤ８ Ｔ細胞（それぞれ図８Ｆおよび図８Ｇ）の頻度を増加させる。ＩＬ１０Ｍ１１は、長期記憶、および二次的腫瘍負荷に対する拒絶を誘導する（それぞれ図８Ｈ、図８Ｉ）。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 ＰＤ－１アンタゴニストおよびＣＤ４０アゴニストと組み合わせたＩＬ１０Ｍ１１の投与の結果を示す図。これらの結果は、これらの経路を調節することにより、ＩＬ１０Ｍ１１によって誘発される持続的な一次抗腫瘍応答および記憶性抗腫瘍応答が増強されることを示している。 同上。 Ａ２０、Ｃｏｌｏｎ２５、ＭＣ３８、およびＢ１６Ｆ１０腫瘍におけるＣＤ４５＋免疫細胞全体および分析した免疫細胞サブセットの密度を示す図。これらの結果は、ＣＤ４５＋免疫細胞全体の密度はＢ１６Ｆ１０腫瘍におけるよりもＡ２０、Ｃｏｌｏｎ２６、およびＭＣ３８細胞ではるかに高かったこと、ならびにＢ１６Ｆ１０腫瘍ではＫｉ６７増殖性ＣＤ４およびＣＤ８ Ｔ細胞ならびにメモリー表現型が少なかったことを示している。 同上。 同上。 脾臓、流入領域リンパ節（ｄＬＮ）、および腫瘍における種々の骨髄細胞のＰＤ－１およびＩＬ１０Ｒ１の発現を示す図。Ｔ細胞、特にＣＤ８ Ｔ細胞上でのＩＬ１０Ｒ１の発現は、腫瘍浸潤性ＣＤ８ Ｔ細胞に非常に限定されており、二次リンパ組織、例えば、脾臓ならびにＭＣ３８－ｃＯＶＡおよびＣｏｌｏｎ２６の流入領域ＬＮのＴ細胞上での発現はほとんど見られなかった。ほとんど全てのＩＬ１０Ｒ１＋ＣＤ８ Ｔ細胞はＰＤ１分子を発現した。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 ４つの異なる種類の腫瘍（Ａ２０、Ｃｏｌｏｎ２６、ＭＣ３８、およびＢ１６Ｆ１０）におけるＰＤ－Ｌ１の発現を示している。これらの結果は、腫瘍の種類によってＰＤ－Ｌ１の発現に差があったことを示している。 同上。 同上。 Ａ２０腫瘍モデル試験の実験デザイン（図１３Ａ）および対照、ＩＬ１０Ｍ１１またはＰＤ－１アンタゴニスト抗体による処置の結果を示す図（図１３Ｂおよび図１３Ｃ）。１５０ｍｍ３のＡ２０ Ｂ細胞リンパ腫はＰＤ－１Ａｂ処置に反応し、腫瘍増殖の有意な遅延および約５０％の無腫瘍生存率を示した。ＩＬ１０Ｍ１１はＡ２０に対してさらに高度で広範な免疫応答を誘発し、無腫瘍生存率は約８５％であった。 同上。 Ｃｏｌｏｎ２６腫瘍モデル試験の実験デザイン（図１４Ａ）および対照、ＩＬ１０Ｍ１１またはＰＤ－１アンタゴニスト抗体による処置の結果（図１４Ｂおよび図１４Ｃ）を示す図。１００ｍｍ３の腫瘍はＰＤ１Ａｂ処置に完全に抵抗性であった。ＩＬ１０Ｍ１１による処置は、約８５％の無腫瘍生存率をもたらした。 同上。 Ｂ１６Ｆ１０腫瘍モデル試験の実験デザイン（図１５Ａ）および対照、ＩＬ１０Ｍ１１またはＰＤ－１アンタゴニスト抗体による処置の結果（図１５Ｂおよび図１４５）を示す図。１００ｍｍ３のＢ１６Ｆ１０腫瘍はＰＤ１Ａｂにほとんど反応しなかった。ＩＬ１０Ｍ１１は腫瘍の増殖を有意に遅延させ、腫瘍の大部分を反応性にした。 同上。 ＭＣ３８腫瘍モデル試験の実験デザイン（図１６Ａ）および対照、ＩＬ１０Ｍ１１、ＰＤ－１アンタゴニスト抗体、またはＩＬ１０Ｍ１１とＰＤ－１アンタゴニスト抗体との組合せによる処置の結果（図１６Ｂおよび図１６Ｃ）を示す図。ＰＤ１ ＡｂおよびＩＬ１０－Ｆｃはいずれも単剤と同程度の抗腫瘍効果を有した。ＰＤ１ ＡｂとＩＬ１０－Ｆｃの組合せは、腫瘍増殖を遅延させ、無腫瘍生存の頻度を高めることによって、抗腫瘍応答を劇的に増加させた。 同上。 治療法の後の腫瘍微小環境の免疫プロファイリングによる結果を示す図。示されているように、ＩＬ１０治療は免疫原性ＭＣ３８腫瘍モデル（図１７Ａ）および免疫原性の低い４Ｔ１腫瘍モデル（図１７Ｂ）の両方でＣＤ８ Ｔ細胞密度を有意に増加させ、その増加はいずれの場合にも予後の改善と相関した。 同上。 同上。 同上。 ＭＣ３８腫瘍（図１８Ａ）および４Ｔ１腫瘍（図１８Ｂ）におけるＰＤ１＋ＣＤ８ Ｔ細胞の密度を示す図。 同上。 ナイーブ非腫瘍担持マウスのＩＬ１０Ｍ１１による治療後の様々なサイトカインの血清レベルを示す図。 同上。 Ｂ１６Ｆ１０腫瘍担持マウスのＩＬ１０Ｍ１１ ＩＬ１２、ＩＬ１ｂ、ＩＬ２、ＩＬ４、およびＩＬ５による治療後の様々なサイトカインの血清レベルを示す図。血清レベルはＩＬ１０によってアップレギュレートされたが、ＰＤ１抗体によってはアップレギュレートされなかった。 同上。 アイソタイプ対照処置マウスにおける平均値に対して正規化したＩＬ１２（図２１Ａ）およびＩＬ４（図２１Ｂ）の血清レベルを示す図。ＩＬ１２およびＩＬ４のアップレギュレーションは、Ａ２０、ＭＣ３８、ＭＣ３８－ｃＯＶＡ、Ｂ１６Ｆ１０、Ｃｏｌｏｎ２６腫瘍モデルの全体にわたって示されている。 ＭＣ３８腫瘍モデル試験の実験デザイン（図２２Ａ）および対照、ＩＬ１０Ｍ１１、ＰＤ－１アンタゴニスト抗体、ＩＬ１０Ｍ１１とＰＤ－１アンタゴニスト抗体との組合せ、またはＰＤ－１結合ドメインと連結したＩＬ１０（ｍＰＤ１－ｍＩＬ１０）による治療の結果（図２２Ｂおよび２２Ｃ）を示す図。ＰＤ１ ＡｂおよびＩＬ１０－Ｆｃはいずれも単剤として抗腫瘍効果を示した（ＰＤ１ Ａｂについてはわずかな効果、ＩＬ１０－Ｆｃについては中程度の効果）。ＩＬ１０－ＦｃとＰＤ－１Ａｂの組合せは効力を有意に改善した。ＰＤ１－ＩＬ１０－Ｆｃは対照Ａｂ－ＩＬ１０およびＩＬ１０－Ｆｃと効力の点で差を示さなかった。
６．１．定義
関連する：ＩＬ１０アゴニストまたはその構成要素（例えば、抗体などの標的化部分）の文脈における「関連する」という用語は、２つ以上のポリペプチド鎖間の機能的関係を指す。特に、「関連する（ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ）」という用語は、２つ以上のポリペプチドが相互に、例えば、分子相互作用を介して非共有結合性に、または１つ以上のジスルフィド架橋もしくは化学的架橋を介して共有結合性に関連して、機能的なＩＬ１０アゴニストを生成していることを意味する。本開示のＩＬ１０アゴニストに存在する可能性のある関連の例としては、Ｆｃ領域におけるホモ二量体またはヘテロ二量体Ｆｃドメイン間の関連、ＦａｂまたはｓｃＦｖにおけるＶＨ領域とＶＬ領域との間の関連、ＦａｂにおけるＣＨ１とＣＬとの間の関連、およびドメイン置換ＦａｂにおけるＣＨ３とＣＨ３との間の関連が挙げられる（ただし、これらに限定されない）。
がん：「がん」という用語は、異常な細胞の制御されない（しばしば急速な）増殖によって特徴付けられる疾患を指す。がん細胞は局所的に広がることもあれば、または血流およびリンパ系を介して身体の他の部分に広がることもある。様々ながんの例が本願明細書に記載されており、これには、乳がん、前立腺がん、卵巣がん、子宮頸がん、皮膚がん、膵臓がん、結腸直腸がん、腎臓がん、肝臓がん、脳悪性腫瘍、副腎がん、自律神経節がん、胆道がん、骨がん、子宮内膜がん、眼のがん、卵管がん、生殖器がん、大腸がん、髄膜がん、食道がん、腹膜がん、下垂体がん、陰茎がん、胎盤がん、胸膜がん、唾液腺がん、小腸がん、胃がん、精巣がん、胸腺がん、甲状腺がん、上気道消化器がん、尿路がん、膣がん、外陰部がん、リンパ腫、白血病、肺がんなどが含まれるが、これらに限定されない。
相補性決定領域またはＣＤＲ：「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」という用語は、本願明細書で使用される場合、抗原特異性および結合親和性を付与する抗体可変領域内のアミノ酸の配列を指す。一般に、各重鎖可変領域には３つのＣＤＲがあり（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＨＣＤＲ－Ｈ３）、各軽鎖可変領域には３つのＣＤＲがある（ＣＤＲ１－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３）。ＣＤＲの境界を特定するために使用し得る例示的な慣習の例としては、例えば、Ｋａｂａｔの定義、Ｃｈｏｔｈｉａの定義、ＡＢＭの定義、ＩＭＧＴの定義が挙げられる。例えば、カバット（Ｋａｂａｔ），１９９１，「免疫学的に関心が持たれるタンパク質の配列（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ）」，米国国立衛生研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ）［米国メリーランド州ベセスダ（Ｂｅｔｈｅｓｄａ）所在］（Ｋａｂａｔの番号付けスキーム）；アル－ラジカニ（Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ）ら，１９９７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７－９４８（Ｃｈｏｔｈｉａの番号付けスキーム）；マーティン（Ｍａｒｔｉｎ）ら，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：９２６８－９２７２（ＡＢＭの番号付けスキーム）；およびレフランク（Ｌｅｆｒａｎｃ）ら，２００３，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：５５－７７（ＩＭＧＴの番号付けスキーム）を参照のこと。公的データベースも、抗体内部のＣＤＲ配列を同定するためにも利用することができる。
ＥＣ５０：「ＥＣ５０」という用語は、指定された曝露時間の後にベースラインと最大値の中間の応答を誘導する分子（例えば、ＩＬ１０アゴニスト）の最大半量有効濃度を指す。ＥＣ５０は本質的には、その最大効果の５０％が観察される抗体またはＩＬ１０アゴニストの濃度を表す。ある特定の実施形態では、ＥＣ５０値は、セクション７．１．２に記載されるように、アッセイにおいてＳＴＡＴ３の最大半量（ｈａｌｆ－ｍａｘｉｍａｌ）の活性化をもたらすＩＬ１０アゴニストの濃度に等しい。
エピトープ：エピトープまたは抗原決定基は、本願明細書に記載されるような抗体または他の抗原結合部分によって認識される抗原（例えば、標的分子）の一部である。エピトープは直鎖状または立体構造性である。
Ｆａｂ：本開示の標的化部分の文脈における「Ｆａｂ」という用語は、第１のポリペプチド鎖が、第１の定常ドメイン（本願明細書ではＣ１と称する）の抗体Ｎ末端側にある重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、第２のポリペプチド鎖が、第１の定常ドメインと対を形成し得る第２の定常ドメイン（本願明細書ではＣ２と称する）の抗体Ｎ末端側にある軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む、一対のポリペプチド鎖を指す。ネイティブ抗体では、ＶＨは重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）のＮ末端側にあり、ＶＬは軽鎖の定常ドメイン（ＣＬ）のＮ末端側にある。本開示のＦａｂは、ネイティブな向きに従って配置することもでき、または正しいＶＨとＶＬの対形成を容易にするドメイン置換もしくはスワップを含むこともできる。例えば、ＦａｂにおけるＣＨ１ドメインとＣＬドメインの対をＣＨ３ドメインの対に置き換えることで、ヘテロ二量体分子の改変されたＦａｂ鎖の正しい対形成を容易にすることができる。また、ＣＨ１とＣＬを逆にして、ＣＨ１をＶＬに、ＣＬをＶＨに結び付けることも可能であり、この構成は一般にクロスマブ（Ｃｒｏｓｓｍａｂ）として知られる。
ＦｃドメインおよびＦｃ領域：「Ｆｃドメイン」という用語は、別の重鎖の対応する部分と対を形成する重鎖の部分を指す。「Ｆｃ領域」という用語は、２つの重鎖Ｆｃドメインの会合によって形成される抗体ベースの結合分子の領域を指す。Ｆｃ領域内の２つのＦｃドメインは、互いに同じであっても異なっていてもよい。ネイティブ抗体では、Ｆｃドメインは典型的には同一であるが、一方または両方のＦｃドメインを、例えば、ノブ・イン・ホール（ｋｎｏｂ－ｉｎ－ｈｏｌｅ）相互作用を介した、ヘテロ二量体化が可能になるように有利なように改変してもよい。さらに、Ｆｃドメインが、複数の免疫グロブリンアイソタイプ由来のキメラ配列を含むこともできる。
宿主細胞：本願明細書で使用する「宿主細胞」という用語は、本開示の核酸が導入された細胞を指す。「宿主細胞」および「組換え宿主細胞」という用語は、本願明細書では互換的に使用される。そのような用語は、特定の対象細胞およびそのような細胞の子孫もしくは潜在的な子孫を指すと理解される。変異または環境影響のいずれかによって、ある特定の変更が後続の世代で発生する可能性があるため、そのような子孫は実際には親細胞と同一ではない可能性があるが、それでもなお、本願明細書で使用される場合、この用語の範囲内に含まれる。典型的な宿主細胞は、真核生物宿主細胞、例えば、哺乳動物宿主細胞である。例示的な真核生物宿主細胞には、酵母細胞および哺乳動物細胞、例えば、マウス、ラット、サルまたはヒトの細胞株などの脊椎動物細胞、例えば、ＨＫＢ１１細胞、ＰＥＲ．Ｃ６細胞、ＨＥＫ細胞またはＣＨＯ細胞が含まれる。
ＩＬ１０ムテイン：ＩＬ１０活性を有するバリアントＩＬ１０分子である。このバリアントは、ＩＬ１０融合タンパク質（例えば、ＩＬ－２Ｒαに融合したＩＬ１０）および／または変異型ＩＬ１０、例えば、野生型ＩＬ１０と比較して１つ以上のアミノ酸置換を有するものであり得る。ＩＬ１０ムテインは、野生型ＩＬ１０と比較して、機能の変化（例えば、受容体結合、親和性、サイトカイン活性）および／または薬物動態の変化を有し得る。本開示のＩＬ１０アゴニストの文脈において、「ＩＬ１０ムテイン」という用語は、ＩＬ１０分子（および付随するリンカー部分）の非標的化性構成要素を指すことがあり、文脈において別様に指示されない限り、「ＩＬ１０ムテイン」という用語は、標的化部分の有無および多量体化部分の有無にかかわらず、ＩＬ１０分子を範囲に含むと理解されるべきである。
主要組織適合性複合体およびＭＨＣ：これらの用語は、天然に存在するＭＨＣ分子、ＭＨＣ分子の個々の鎖（例：ＭＨＣクラスＩα（重鎖）、β２ミクログロブリン、ＭＨＣクラスＩＩα鎖、およびＭＨＣクラスＩＩβ鎖）、ＭＨＣ分子のそのような鎖の個々のサブユニット（例えば、ＭＨＣクラスＩα鎖のα１、α２、および／またはα３サブユニット、ＭＨＣクラスＩＩα鎖のα１～α２サブユニット、ＭＨＣクラスＩＩβ鎖のβ１～β２サブユニット）のほか、それらの部分（例えば、ペプチド結合部分、例えば、ペプチド結合溝）、変異体および様々な誘導体（融合タンパク質を含む）を指し、そのような部分、変異体および誘導体は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、例えば、抗原特異的ＴＣＲによる認識のために抗原ペプチドを提示する能力を保持している。ＭＨＣクラスＩ分子は、８～１０アミノ酸前後のペプチドを収容し得る、重鎖のα１およびα２ドメインによって形成されるペプチド結合溝を含む。いずれのクラスのＭＨＣもペプチド内の９アミノ酸前後（例えば、５～１７アミノ酸）のコアに結合するという事実にもかかわらず、ＭＨＣクラスＩＩペプチド結合溝（クラスＩＩ ＭＨＣβポリペプチドのβ１ドメインと会合したクラスＩＩ ＭＨＣポリペプチドのα１ドメイン）の拡張可能な性質により、より広い範囲のペプチド長も可能である。ＭＨＣクラスＩＩに結合するペプチドは通常１３から１７アミノ酸の間の長さであるが、それよりも短いまたは長い長さも稀ではない。その結果、ペプチドはＭＨＣクラスＩＩペプチド結合溝内で移動して、どの９量体が溝内に直接位置するかが任意の時点で変化する可能性がある。本願明細書では、特定のＭＨＣバリアントの従来通りの同定を使用する。これらの用語は、「ヒト白血球抗原」または「ＨＬＡ」を範囲に含む。
作動可能に連結されている：本願明細書で使用される「作動可能に連結された（ｏｐｅｒａｂｌｙ ｌｉｎｋｅｄ）」という用語は、２つ以上の領域が連結されて機能的なポリペプチドを生成する、ポリペプチド鎖の２つ以上の領域の間の機能的関係、または２つ以上の核酸配列が連結されて、例えば、２つのポリペプチド構成要素のフレーム内融合物を生成する、もしくは調節配列がコード配列に連結される機能的関係を指す。
単鎖ＦｖまたはｓｃＦｖ：本願明細書で使用される「単鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」という用語は、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含むポリペプチド鎖であって、これらのドメインが単一のポリペプチド鎖に存在するものを指す。
特異的（または選択的）に結合する：本願明細書で使用される「特異的（または選択的）に結合する」という用語は、標的化部分、例えば、抗体、またはその抗原結合ドメイン（「ＡＢＤ」）が、生理的条件下で比較的安定な標的分子と複合体を形成することを意味する。特異的結合は、ＫＤが約５×１０－２Ｍ以下であることによって特徴づけることができる（例えば、５×１０－２Ｍ未満、１０－２Ｍ未満、５×１０－３Ｍ未満、１０－３Ｍ未満、５×１０－４Ｍ未満、１０－４Ｍ未満、５×１０－５Ｍ未満、１０－５Ｍ未満、５×１０－６Ｍ未満、１０－６Ｍ未満、５×１０－７Ｍ未満、１０－７Ｍ未満、５×１０－８Ｍ未満、１０－８Ｍ未満、５×１０－９Ｍ未満、１０－９Ｍ未満、または１０－１０Ｍ未満）。抗体または抗体断片、例えば、ＩＬ１０アゴニストまたは構成要素標的化部分の、標的分子への結合親和性を決定する方法は当技術分野で公知であり、例えば、平衡透析、表面プラズモン共鳴（例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）アッセイ）、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）結合アッセイなどが含まれる。しかしながら、１つの種由来の標的分子に特異的に結合する標的化部分またはそのＡＢＤを含む本開示のＩＬ１０アゴニストは、１つ以上の他の種由来の標的分子に対して交差反応性を有し得る。
対象：「対象」には、ヒトおよび非ヒト動物が含まれる。非ヒト動物には、すべての脊椎動物、例えば、哺乳動物および非哺乳動物、例えば、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両生類、および爬虫類が含まれる。注記がない限り、「患者」または「対象」という用語は本願明細書で互換的に使用される。
標的分子：本願明細書で使用される場合、「標的分子」という用語は、細胞表面上または細胞外マトリックス中に発現され、本開示のＩＬ１０アゴニスト中の標的化部分によって特異的に結合され得る任意の生体分子（例えば、タンパク質、炭水化物、脂質またはそれらの組合せ）を指す。
標的化部分：本願明細書で使用される「標的化部分（ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｍｏｉｅｔｙ）」という用語は、本開示のＩＬ１０アゴニストを局在させようとする部位、例えば、腫瘍細胞上または腫瘍微小環境内のリンパ球上で、細胞表面または細胞外マトリックス分子に結合することができる任意の分子またはその結合部分（例えば、免疫グロブリンまたは抗原結合断片）を指す。標的化部分は、ＩＬ１０アゴニストを特定の部位に局在させることに加えて、機能的活性を有することもできる。例えば、抗ＰＤ１抗体またはその抗原結合部分である標的化部分は、ＰＤ１シグナル伝達を阻害することによって、抗腫瘍活性を示すこと、またはＩＬ１０ムテインによる抗腫瘍活性を増強することもできる。
治療する、治療、治療すること：本願明細書で使用される場合、「治療する」、「治療」および「治療すること」は、本開示の１つ以上のＩＬ１０アゴニストの投与によって起こる、増殖性障害の進行、重症度および／もしくは持続期間の軽減もしくは改善、または増殖性障害の１つ以上の症状（好ましくは、１つ以上の識別可能な症状）の改善を指す。特定の実施形態では、「治療する」、「治療する」および「治療すること」という用語は、必ずしも患者によって識別可能ではない、増殖性障害の少なくとも１つの測定可能な物理的パラメーター、例えば、腫瘍の増殖を指す。他の実施形態では、「治療する」、「治療」および「治療すること」という用語は、物理的に、例えば、識別可能な症状の安定化によって、生理的に、例えば、物理的パラメーターの安定化によって、またはその両方によって、増殖性障害の進行を阻害することを指す。他の実施形態では、「治療する」、「治療」および「治療すること」という用語は、腫瘍サイズまたはがん細胞数の減少または安定化を指す。
腫瘍：「腫瘍」という用語は、本願明細書では「がん」という用語と互換的に使用され、例えば、どちらの用語も、固体および液性、例えば、びまん性または循環性の腫瘍を範囲に含む。本願明細書で使用される場合、「がん」または「腫瘍」という用語には、悪性のがんおよび腫瘍のほかに、前がん性のものも含まれる。
腫瘍関連抗原：「腫瘍関連抗原」または「ＴＡＡ」という用語は、がん細胞の表面に、全体または断片（例えば、ＭＨＣ／ペプチド）として発現され、薬理作用物質のがん細胞への選好的な標的化のために有用な分子（典型的には、タンパク質、炭水化物、脂質またはそれらの何らかの組合せ）を指す。一部の実施形態では、ＴＡＡは、正常細胞およびがん細胞の両方によって発現されるマーカー、例えば、系統マーカー、例えば、Ｂ細胞上のＣＤ１９である。一部の実施形態では、ＴＡＡは、正常細胞と比較してがん細胞において過剰発現される細胞表面分子であり、例えば、正常細胞と比較して１倍上回る過剰発現、２倍上回る過剰発現、３倍上回る過剰発現またはそれ以上である。一部の実施形態では、ＴＡＡは、がん細胞において不適切に合成される細胞表面分子、例えば、正常細胞上に発現される分子と比較して欠失、付加または変異を含有する分子である。一部の実施形態では、ＴＡＡは、がん細胞の細胞表面上でのみ、全体または断片（例えば、ＭＨＣ／ペプチド）として発現され、正常細胞では合成されないか、またはその表面に発現されない。したがって、「ＴＡＡ」という用語は、腫瘍特異的抗原（「ＴＳＡ」）として当技術分野で知られることもある、がん細胞に特異的な抗原を範囲に含む。
普遍的軽鎖：標的化部分の文脈において本願明細書で使用される「普遍的軽鎖」という用語は、標的化部分の重鎖領域と対形成することができ、他の重鎖領域とも対形成することができる軽鎖ポリペプチドを指す。普遍的軽鎖は、「共通軽鎖」としても知られる。
ＶＨ：「ＶＨ」という用語は、ｓｃＦｖまたはＦａｂの重鎖を含む、抗体の免疫グロブリン重鎖の可変領域を指す。
ＶＬ：「ＶＬ」という用語は、ｓｃＦｖまたはＦａｂの軽鎖を含む、免疫グロブリン軽鎖の可変領域を指す。
６．２．ＩＬ１０アゴニスト
本開示は、ＩＬ１０部分と、任意選択的な多量体化部分と、任意選択的な標的化部分とを含むＩＬ１０アゴニストを提供する。
ＩＬ１０は、ヒトサイトカイン合成阻害因子（ＣＳＩＦ）としても知られ、ＩＬ１９、ＩＬ２０、ＩＬ２２、ＩＬ２４（Ｍｄａ－７）およびＩＬ２６、インターフェロン（例えば、ＩＦＮγ、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ）、ならびにインターフェロン様分子（例えば、リミチン、ＩＬ－２８Ａ、ＩＬ－２８Ｂ）を含む１組のサイトカインである、タイプ（クラス）－２サイトカインに分類される。
ＩＬ１０は、免疫調節および炎症において多面的な効果を有するサイトカインである。これはマスト細胞によって産生され、これらの細胞がアレルギー反応の部位で及ぼす炎症効果を打ち消す。ＩＬ－１０は、ＩＦＮγ、ＩＬ２、ＩＬ３、ＴＮＦα、ＧＭ－ＣＳＦなどの炎症誘発性サイトカインの合成を阻害することができる一方で、ある特定のＴ細胞およびマスト細胞に対しても刺激性であり、Ｂ細胞の成熟、増殖および抗体産生を刺激する。ＩＬ１０はＮＦκＢ活性を遮断することができ、ＪＡＫ－ＳＴＡＴシグナル伝達経路の調節に関与する。これはまた、ＣＤ８＋ Ｔ細胞の細胞傷害活性およびＢ細胞による抗体産生を誘導し、マクロファージの活性や腫瘍促進性の炎症を抑制する。ＣＤ８＋ Ｔ細胞の調節は用量依存的であり、高用量ではより強い細胞傷害性反応が誘導される。
ヒトＩＬ１０はホモ二量体である。各単量体は１７８アミノ酸の未熟分子として産生され、アミノ酸の最初の１８個はシグナルペプチドであり、分泌時に切断されて１６０アミノ酸を含有する成熟ＩＬ１０が生成される。二量体の内部のＩＬ１０単量体は非共有結合性に会合しているが、各サブユニットは残基１２と１０８との間、および残基６２と１１４との間に２つの鎖内ジスルフィド結合を含有する。単量体は非共有結合性に二量体化してＶ字型構造を形成し、それぞれの各半分は６つのαヘリックスからなり、そのうち４つは一方のサブユニットに、２つは他方に由来する。本開示のＩＬ１０アゴニストは、単量体または多量体の形態、例えば、二量体（ホモ二量体またはヘテロ二量体）または高次複合体であり得る。便宜上、ホモ二量体（または同じポリペプチドの高次多量体）であるＩＬ１０アゴニストは、構成成分の単量体によって記載される；しかしながら、好適な細胞株で構成成分の単量体を組換え発現させると、ホモ二量体（または高次多量体）分子を産生することができる。
本開示のＩＬ１０アゴニストにおける使用のために好適な例示的なＩＬ１０部分は、セクション６．２に記載されている。
ＩＬ１０アゴニストは、それぞれがＩＬ１０部分、Ｆｃ部分（例えば、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインからなるＦｃドメイン）、任意選択的なヒンジ部分、任意選択的なリンカー部分、および任意選択的な標的化部分を含む単量体または２つのポリペプチド鎖のホモ二量体であり得る。
したがって、ＩＬ１０アゴニストは単量体でもよく、または２つのポリペプチド単量体のホモ二量体またはヘテロ二量体でもよい。単量体、または二量体における各単量体は、アミノ末端からカルボキシ末端へと、以下のものを含み得る：
ｉ）任意選択的な標的化部分
ｉｉ）任意選択的なヒンジドメイン
ｉｉｉ）Ｆｃドメイン、例えば、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインからなるＦｃドメイン；
ｉｖ）リンカー部分；ならびに
ｖ）ＩＬ１０部分。
ＩＬ１０アゴニストの二量体化は、２つの単量体のヒンジドメイン間のジスルフィド結合、２つの単量体のＦｃドメイン間のジスルフィド結合、２つの単量体のＩＬ１０部分間の非共有結合、または上記の２つもしくは３つすべての組合せを介して起こり得る。単量体形態のＩＬ１０アゴニストが望まれる場合には、ＩＬ１０部分についてはセクション６．３に、Ｆｃドメインについてはセクション６．４に記載されたように、単量体が二量体化する能力を、ＩＬ１０部分およびＦｃドメインを改変することによってそれらの二量体化能力を低下させる。
例示的なＦｃ部分はセクション６．４に記載されており、これにはＩＬ１０アゴニストに二量体化能力を付与するＦｃドメインが含まれる。活性型ＩＬ１０は二量体分子であり、ｉｎ ｖｉｖｏでのＩＬ１０の薬物動態は非常に不良であるが、その一部は血流中での単量化が原因である。理論には拘束されるものではないが、Ｆｃドメインおよび任意選択的なヒンジドメインを含めることは、とりわけＩＬ１０の二量体構造を安定化することによって、ＩＬ１０アゴニストの血清中の安定性および薬物動態プロファイルを改善すると考えられている。
便宜的に、ＩＬ１０部分およびＦｃドメイン部分ならびにそれらの間の任意選択的なリンカーは、本願明細書でＩＬ１０ムテインと称されることもあるが、「ムテイン」という用語は、標的化部分を有する分子も範囲に含む。例示的な標的化部分はセクション６．５に記載されており、これには、腫瘍関連抗原に結合するか、腫瘍微小環境抗原に結合するか、腫瘍リンパ球に結合するか、またはＭＨＣペプチド複合体に結合する抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖまたはＦａｂ）が含まれる。
ＩＬ１０部分がＦｃドメインのＮ末端に位置する場合には、結果的に得られる組換えＩＬ１０アゴニストはＮ末端および／またはＣ末端で短縮されることが見出された。例えば、Ｎ末端ＩＬ１０部分の場合には、結果的に得られる組換えＩＬ１０アゴニストはＣ末端リジンを欠くか、またはＮ末端およびＣ末端の両方で短縮されており、４０３アミノ酸の完全長構築物の残基３～４０２のみを有していた。これは、ＦｃドメインのＣ末端にＩＬ１０部分を有するＩＬ１０アゴニストでは観察されなかった。したがって、一部の実施形態では、ＩＬ１０部分はＦｃドメインのＣ末端に位置する。
様々な実施形態では、ＩＬ１０アゴニストは、（ａ）安定化部分、例えば、ポリエチレングリコールおよび／またはアルブミン、（ｂ）抗体可変領域（例えば、フィブロネクチンおよびテネイシン－Ｃのスプライス型アイソフォームに向けられたＬ１９、Ｆ１６、Ｇ１１もしくはＦ８の可変領域；または抗ＣＤ８６抗体の可変領域）；（ｃ）非標的化性抗体可変領域；（ｄ）非結合性抗体可変領域；（ｅ）抗体ＣＤＲ；（ｆ）抗体ＣＨ１ドメイン；（ｇ）抗体ＣＬドメイン；（ｈ）別のサイトカイン（例えば、ＩＬ４）、（ｉ）ＩＬ１０部分のＣ末端側にあるＦｃドメイン；または（ｊ）上記の２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つもしくはすべての組合せを含まない。ＩＬ１０アゴニストは、例えば、分子の様々な構成要素、例えば、融合タンパク質に存在する複数の異なるドメインを接続する１つ以上のリンカー配列を含み得る。例示的なリンカーの例は、セクション６．７に記載されている。
他の実施形態では、ＩＬ１０アゴニストは、（ａ）安定化部分、例えば、親水性ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール）、アルブミン、ＸＴＥＮ、ＰＡＳ、炭水化物コンジュゲート（例えば、ヒドロキシエチルデンプン）、グリカン（例えば、Ｎ－およびＯ－結合型グリカン）、ポリシアル酸、および／または脂肪酸、（ｂ）抗体可変領域（例えば、フィブロネクチンおよびテネイシン－Ｃのスプライス型アイソフォームに向けられたＬ１９、Ｆ１６、Ｇ１１もしくはＦ８の可変領域；抗ＣＤ８６抗体の可変領域；または抗ＰＤ－１抗体の可変領域）；（ｃ）非標的化性抗体可変領域；（ｄ）非結合性抗体可変領域；（ｅ）抗体ＣＤＲ；（ｆ）抗体ＣＨ１ドメイン；（ｇ）抗体ＣＬドメイン；（ｈ）別のサイトカイン（例えば、ＩＬ４）；（ｉ）ＩＬ１０部分のＣ末端側にあるＦｃドメイン；（ｊ）ヒト血清アルブミン結合剤もしくは結合ドメイン；または（ｋ）上記の２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、またはすべての組合せを含まない。
ある特定の態様では、本開示のＩＬ１０アゴニストは、対象（例えば、がん患者または腫瘍担持マウス）への投与の後に、腫瘍におけるＣＤ８＋ Ｔ細胞のＴｒｅｇ細胞に対する比を増加させる。一部の実施形態では、本開示のＩＬ１０アゴニストによる治療は、腫瘍におけるＣＤ８ Ｔ細胞密度の増加を引き起こす。この増加は、例えば、腫瘍におけるＣＤ８ Ｔ細胞密度の少なくとも２倍の増加、少なくとも３倍の増加、または少なくとも４倍の増加であり得る。
ある特定の態様では、本開示のＩＬ１０アゴニストによる治療は、腫瘍におけるＣＤ４５＋免疫細胞浸潤の増加を引き起こす。腫瘍におけるＣＤ４５＋免疫細胞浸潤の増加は、例えば、少なくとも１０％の増加であり得る。ＣＤ４５＋免疫細胞の例としては、例えば、ＣＤ４ Ｔ細胞および骨髄系細胞（例えば、ＣＤ４５＋白血球）が挙げられる。
一部の態様では、本開示のＩＬ１０アゴニストによる治療は、ＩＬ１０アゴニストもしくはＩＬ１０アゴニストを含む医薬組成物による治療を受けていない好適な対照に比して、またはＩＬ１０アゴニストもしくは医薬組成物による治療の前の対象自身の血清ＩＬ１２レベルに比して、血清ＩＬ１２レベルをアップレギュレートさせる。好適な対照または治療の前の対象自身の血清ＩＬ－１２値に比して、本開示のＩＬ１０アゴニストは、血清ＩＬ－１２値を、例えば、少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも２５倍、または少なくとも３０倍にアップレギュレートさせることができる。
一部の態様では、本開示のＩＬ１０アゴニストによる治療は、ＩＬ１０アゴニストもしくはＩＬ１０アゴニストを含む医薬組成物による治療を受けていない好適な対照に比して、またはＩＬ１０アゴニストもしくは医薬組成物による治療の前の対象自身の血清ＩＬ４レベルに比して、血清ＩＬ１２レベルをアップレギュレートさせる。好適な対照または治療の前の対象自身の血清ＩＬ４値に比して、本開示のＩＬ１０アゴニストは、血清ＩＬ４値を、例えば、少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも２５倍、または少なくとも３０倍にアップレギュレートさせることができる。
本開示のＩＬ１０アゴニストにおいて、標的化部分が抗体の抗原結合ドメイン（「ＡＢＤ」）である場合、二量体ＩＬ１０アゴニストの一方または両方の単量体は、ＡＢＤを、例えば、ＦａｂまたはｓｃＦｖの形態で担持することができる。
Ｆｃドメインは、例えば、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４のＦｃドメインであってもよく、セクション６．４．１およびそのサブセクションに記載されているように、グリコシル化および／またはエフェクター機能を低下させる置換を有しても有しなくてもよい。
ある特定の態様では、ＩＬ１０アゴニストは、ＩＬ１０Ｍ１、ＩＬ１０Ｍ２、ＩＬ１０Ｍ３、ＩＬ１０Ｍ４、ＩＬ１０Ｍ５、ＩＬ１０Ｍ６、ＩＬ１０Ｍ７、ＩＬ１０Ｍ８、ＩＬ１０Ｍ９、またはＩＬ１０Ｍ１０のアミノ酸配列、またはそれらと少なくとも９０％もしくは少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＩＬ１０ムテインであって、任意選択的な標的化部分を有するものを含む。
本開示のＩＬ１０アゴニストの構成要素のさらなる詳細について以下に提示する。
６．３．ＩＬ１０部分
本開示のＩＬ１０アンタゴニストのＩＬ１０部分は、野生型またはバリアントＩＬ１０ドメインを含む。
ＩＬ１０部分は、そのホモログ、バリアント、および断片を含む、成熟ヒトおよび非ヒト（例えば、マウス、ラット、ブタ、非ヒト霊長類）ＩＬ１０ポリペプチド、さらには、例えば、リーダー配列（例えば、シグナルペプチド）を有するＩＬ１０ポリペプチド、ならびに上記のものの改変型を範囲に含む。
真核細胞において、ヒトＩＬ１０は１７８アミノ酸の前駆体ポリペプチドとして合成され、そこから１８アミノ酸が除去されて、成熟した分泌型ＩＬ１０が生成される。
したがって、一部の実施形態では、本開示のＩＬ１０部分には、１７８アミノ酸の前駆体配列のＳ１９～Ｎ１７８位置に対応する成熟ヒトＩＬ１０、例えば、以下のアミノ酸配列またはセクション７．１．１に示されるアミノ酸配列を有する成熟ヒトＩＬ１０が含まれる。
Figure 2023525555000002
成熟したマウス、ブタ、およびラットＩＬ１０の配列は、ズダノフ（Ｚｄａｎｏｖ）ら、１９９５、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ３（６）：５９１－６０１の図５に開示されており、これはその全体が本願明細書に援用される。
それ故に、「ＩＬ１０部分」は、成熟した野生型ヒト、マウス、ブタまたはラットＩＬ１０と実質的に類似した配列を有するタンパク質を範囲に含み、より好ましくは、成熟した野生型ヒトＩＬ１０と実質的に類似した配列を持つタンパク質を含む。様々な実施形態では、ＩＬ１０部分は、ヒト、マウス、ブタまたはラットＩＬ１０、例えば、ヒトＩＩＬ１０前駆体のアミノ酸残基Ｓ１９～Ｎ１７８を含む成熟ヒトＩＩＬ１０配列、と少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態では、本開示のＩＬ１０アゴニストは、野生型ＩＬ１０と比較して、ＩＬ１０部分に１つ以上のアミノ酸改変、例えば、置換、欠失または挿入を有する。１つ以上のアミノ酸改変は、ＩＬ１０の１つ以上の特性、例えば、その安定性を変更するために導入することができる。Ｎ１１６とＫ１１７の間（すなわち、ＩＬ１０のヘリカルドメインＤとＥとの間）にヒンジとして機能するリンカー配列が挿入された、単量体形態での安定性が向上している特定の改変ヒトＩＬ１０分子が、ジョセフソン（Ｊｏｓｅｐｈｓｏｎ）ら、２０００、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ、２７５：１３５５２－１３５５７に記載されている。一実施形態では、Ｎ１１６とＫ１１７（または非ヒト種のＩＬ１０における同等の位置）の間に挿入される配列は６アミノ酸であり、および／または配列ＧＧＧＳＧＧ（配列番号２）を含む。一実施形態では、ＩＬ１０部分はＮ１１６とＫ１１７との間（すなわち、ＩＬ１０のヘリカルドメインＤとＥの間）にリンカー配列の挿入を備えていない。一部の実施形態では、ＩＬ１０部分は、野生型ＩＬ１０と比較して、ＩＬ１０部分にいかなるアミノ酸改変も、例えば、置換、欠失または挿入も備えていない。
ヒトＩＬ１０は、分子の表面に位置するＮ１１６に潜在的なＮ結合型グリコシル化部位を含有し、これは非ヒト種において保存されている。ズダノフ（Ｚｄａｎｏｖ）ら、１９９５、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ３（６）：５９１－６０１。したがって、本開示は、Ｎ１１６または他の種のＩＬ１０における同等の位置にＮ結合型グリカンを有するかまたは有しないＩＬ１０分子を含む。この潜在的なＮ結合型グリコシル化部位は、ラット、マウス、およびブタのＩＬ１０で保存されている。マウスおよびラットのＩＬ１０は、Ｎ末端付近に第２の潜在的なＮ結合型グリコシル化部位（ｍＩＬ１０ではＮ８、ラットＩＬ１０ではＮ１）を含有する。本開示は、マウスまたはラットＩＬ１０部分であって、この追加のＮ結合型グリカンを有するもの、および有しないものを範囲に含む。
６．４．Ｆｃドメイン
本開示のＩＬ１０アゴニストは、任意の好適な種に由来するＦｃ領域を含むことができる。一実施形態では、Ｆｃ領域は、ヒトのＦｃドメインに由来する。好ましい実施形態では、ＩＬ１０ドメインはＩｇＧ Ｆｃ領域（例えば、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４Ｆｃ領域）に融合される。
ＩＬ１０ドメインは、ＩｇＧ Ｆｃ領域のＮ末端またはＣ末端に融合され得る。実施例に示されているように、ＩｇＧ Ｆｃ領域のＣ末端への融合は、ＩｇＧ ＦｃのＮ末端に融合した場合よりも、ＩＬ１０ドメインの活性をより多くの程度維持する。
本開示の一実施形態は、ＩＬ１０ドメインを抗体のＦｃ領域と融合させることによって作成された２つのＦｃ融合ポリペプチドを含む二量体を対象とする。この二量体は、例えば、融合タンパク質をコードする遺伝子融合物を適切な発現ベクター中に挿入し、組換え発現ベクターによって形質転換された宿主細胞において遺伝子融合物を発現させ、発現された融合タンパク質を抗体分子と同じように集合させて、Ｆｃ部分の間に鎖間結合が形成されて二量体を生じることによって、作製され得る。
Ｆｃドメインは、ＩｇＡ（サブクラスＩｇＡ１およびＩｇＡ２を含む）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ（サブクラスｌｇＧ１、ｌｇＧ２、ｌｇＧ３およびｌｇＧ４を含む）、およびＩｇＭを含む、任意の好適なクラスの抗体に由来し得る。一実施形態では、ＦｃドメインはＩｇＧに由来する。一実施形態では、ＦｃドメインはｌｇＧ１、ｌｇＧ２、ｌｇＧ３またはｌｇＧ４に由来する。一実施形態では、ＦｃドメインはｌｇＧ１に由来する。一実施形態では、ＦｃドメインはｌｇＧ４に由来する。
Ｆｃ領域内の２つのＦｃドメインは、互いに同じでも異なっていてもよい。ネイティブ抗体では、Ｆｃドメインは典型的には同一であるが、例えば、本開示のＩＬ１０アゴニストのような多重特異性結合分子を生産する目的では、以下のセクション６．４．１に記載されているように、ヘテロ二量体化を可能にするためにＦｃドメインが異なることが有利である可能性がある。
ネイティブ抗体では、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＧの重鎖Ｆｃドメインは２つの重鎖定常ドメイン（ＣＨ２およびＣＨ３）から構成され、ＩｇＥおよびＩｇＭの重鎖Ｆｃドメインは３つの重鎖定常ドメイン（ＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４）から構成される。これらは二量体化してＦｃ領域を作成する。
本開示のＩＬ１０アゴニストにおいて、Ｆｃ領域および／またはその中のＦｃドメインは、複数の免疫グロブリンアイソタイプに由来する配列を組み合わせたキメラであってもよい。したがって、Ｆｃ領域、および／またはその中のＦｃドメインは、１つ以上の異なるクラスの抗体、例えば、１つ、２つまたは３つの異なるクラスの重鎖定常ドメインを含み得る。
一実施形態では、Ｆｃ領域は、ｌｇＧ１に由来するＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。
一実施形態では、Ｆｃ領域は、ｌｇＧ２に由来するＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。
一実施形態では、Ｆｃ領域は、ｌｇＧ３に由来するＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。
一実施形態では、Ｆｃ領域は、ｌｇＧ４に由来するＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。
一実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＭ由来のＣＨ４ドメインを含む。ＩｇＭ ＣＨ４ドメインは、典型的にはＣＨ３ドメインのＣ末端に位置する。
一実施形態では、Ｆｃ領域は、ＩｇＧに由来するＣＨ２およびＣＨ３ドメイン、ならびにＩｇＭに由来するＣＨ４ドメインから構成される。
さらなる一実施形態では、キメラ性Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２またはヒトＩｇＧ４のＣＨ２領域に由来するＣＨ２配列の一部または全体、およびヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２またはヒトＩｇＧ４に由来するＣＨ３配列の一部または全体を含み得る。セクション６．７．１．１に記載されているように、キメラ性Ｆｃドメインはキメラ性ヒンジ領域を含有することもできる。例えば、キメラ性ヒンジは、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２またはヒトＩｇＧ４のヒンジ領域に由来する「上部ヒンジ」配列が、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２またはヒトＩｇＧ４のヒンジ領域に由来する「下部ヒンジ」配列と組み合わされたものを含むことができる。本願明細書に示されるＩＬ１０ムテインのいずれかに含めることができるキメラ性Ｆｃドメインの特定の例は、Ｎ末端からＣ末端へと、以下を含む：［ＩｇＧ４ ＣＨ１］－［ＩｇＧ４上部ヒンジ］－［ＩｇＧ２下部ヒンジ］－［ＩｇＧ４ ＣＨ２］－［ＩｇＧ４ ＣＨ３］。本願明細書に示される抗原結合分子のいずれかに含めることができるキメラ性Ｆｃドメインの別の例は、Ｎ末端からＣ末端へと、以下を含む：［ＩｇＧ１ ＣＨ１］－［ＩｇＧ１上部ヒンジ］－［ＩｇＧ２下部ヒンジ］－［ＩｇＧ４ ＣＨ２］－［ＩｇＧ１ ＣＨ３］。本発明の抗原結合分子のいずれかに含めることができるキメラ性Ｆｃドメインのこれらおよび他の例は、ＷＯ ２０１４／１２１０８７に記載されている。これらの一般的な構造配置を有するキメラ性Ｆｃ領域およびそのバリアントは、Ｆｃ受容体結合の変化を有することができ、それはひいてはＦｃエフェクター機能に影響を与える。
本開示のＩＬ１０アゴニストのためのＦｃ領域を作製するのに使用するための重鎖定常ドメインには、天然に存在する定常ドメインのバリアントが含まれ得ることが理解されるであろう。そのようなバリアントは、野生型の定常ドメインと比較して、１つ以上のアミノ酸の変更（ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ）を含んでもよい。１つの例では、本開示のＦｃ領域は、野生型定常ドメインとは配列の異なる少なくとも１つの定常ドメインを含む。バリアント定常ドメインは、野生型の定常ドメインよりも長い場合も短い場合もあることが理解されるであろう。好ましくは、バリアント定常ドメインは、野生型定常ドメインと少なくとも６０％の同一性または類似性を有する。別の例では、バリアント定常ドメインは少なくとも７０％の同一性または類似性を有する。別の例では、バリアント定常ドメインは少なくとも８０％の同一性または類似性を有する。別の例では、バリアント定常ドメインは少なくとも９０％の同一性または類似性を有する。別の例では、バリアント定常ドメインは少なくとも９５％の同一性または類似性を有する。
ＩｇＭおよびＩｇＡは、ヒトでは一般的なＨ２Ｌ２抗体単位の共有結合性多量体として天然に存在する。ＩｇＭは、Ｊ鎖を組み込んでいる場合は五量体として、Ｊ鎖を欠く場合は六量体として存在する。ＩｇＡは単量体および二量体の形態で存在する。ＩｇＭおよびＩｇＡの重鎖は、テイルピースとして知られるＣ末端定常ドメインまでの１８アミノ酸伸長を有する。このテイルピースは、重合体中の重鎖間にジスルフィド結合を形成するシステイン残基を含み、重合において重要な役割を果たすと考えられている。テイルピースはグリコシル化部位も含有する。ある特定の実施形態では、本開示のＩＬ１０アゴニストはテイルピースを含まない。
本開示のＩＬ１０アゴニストに組み込まれるＦｃドメインは、タンパク質の機能的特性を変化させる１つ以上の改変、例えば、ＦｃＲｎまたは白血球受容体などのＦｃ受容体への結合、補体への結合、ジスルフィド結合構造の改変、またはグリコシル化パターンの変化を含むことができる。エフェクター機能を変化させる例示的なＦｃ改変については、セクション６．４．１に記載される。
また、Ｆｃドメインを、例えば、同一のＦｃドメインを上回る非同一なＦｃドメインの選好的な対形成であるヘテロ二量体化を可能にすることによって、非対称ＩＬ１０アゴニストの製造性を改善する改変を含むように変更することもできる。ヘテロ二量体化により、異なるポリペプチド構成要素が、配列の異なるＦｃドメインを含有するＦｃ領域によって互いに接続されているＩＬ１０アゴニストの生産が可能になる。ヘテロ二量体化戦略の例は、セクション６．４．１．１に例示されている。
あるいは、Ｆｃドメインは、自己会合する能力が低下した可溶性単量体Ｆｃドメインであってもよい。例えば、ヘルム（Ｈｅｌｍ）ら、１９９６、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７１：７４９４－７５００およびイン（Ｙｉｎｇ）ら、２０１２、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．、２８７（２３）：１９３９９－１９４０８を参照。ＩＬ１０アゴニストはさらに、ＩＬ１０部分を介して二量体化することができる。可溶性単量体Ｆｃドメインの１例は、米国特許出願公開第２０１９／０３６７６１１号明細書に記載されているように、ＣＨ３におけるＴ３６６および／またはＹ４０７に対応する位置のアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、ＩＬ１０アゴニストは、ＣＨ３におけるＴ３６６および／またはＹ４０７に対応する位置で置換されていない。単量体Ｆｃドメインは、任意のＩｇサブタイプのものであってよく、セクション６．４．１に記載されているように、エフェクター機能を低下させる追加の置換を含むことができる。
本願明細書で使用される場合、「Ｆｃ領域」という用語は、ヒンジ配列の有無にかかわらずＦｃドメインを含むことができる。Ｆｃ領域がヒンジドメインを含む重鎖定常領域を含む様々な実施形態では、ヒンジドメイン内の位置２３３～２３６は、Ｇ、Ｇ、Ｇおよび非占有；Ｇ、Ｇ、非占有および非占有；Ｇ、非占有、非占有および非占有；またはすべてが非占有であってよく、位置にはＥＵ番号付けによって番号が付けられている。任意選択で、重鎖定常領域は、Ｎ末端からＣ末端へと、ヒンジドメイン、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインを含む。任意選択で、重鎖定常領域は、Ｎ末端からＣ末端へと、ＣＨ１ドメイン、ヒンジドメイン、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインを含む。任意選択で、存在する場合のＣＨ１領域、あるならばヒンジ領域の残りの部分、ＣＨ２領域およびＣＨ３領域は、同じヒトアイソタイプである。任意選択で、存在する場合のＣＨ１領域、あるならばヒンジ領域の残り、ＣＨ２領域およびＣＨ３領域は、ヒトＩｇＧ１である。任意選択で、存在する場合のＣＨ１領域、あるならばヒンジ領域の残り、ＣＨ２領域およびＣＨ３領域は、ヒトＩｇＧ２である。任意選択で、存在する場合のＣＨ１領域、あるならばヒンジ領域の残り、ＣＨ２領域およびＣＨ３領域は、ヒトＩｇＧ４である。
任意選択で、定常領域は、プロテインＡへの結合が低下するように改変されたＣＨ３ドメインを有する。
本開示のＩＬ１０バリアントのいずれかに含めることができるＦｃ領域のこれらおよび他の例は、国際公開第ＷＯ２０１６／１６１０１０号に記載されている。例示的なヒンジ配列は、セクション６．７．１およびそのサブセクションに示されている。
上述の改変のいずれも、所望の機能的特性を達成するために任意の好適な様式で組み合わせることができ、および／またはＩＬ１０アゴニストの特性を変更するために他の改変と組み合わせることができることは理解されるであろう。
６．４．１．エフェクター機能の変化を有するＦｃドメイン
一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体への結合および／またはエフェクター機能を低下させる１つ以上のアミノ酸置換を含む。
特定の一実施形態では、Ｆｃ受容体はＦｃγ受容体である。一実施形態では、Ｆｃ受容体はヒトＦｃ受容体である。一実施形態では、Ｆｃ受容体は活性化Ｆｃ受容体である。特定の一実施形態では、Ｆｃ受容体は活性化ヒトＦｃγ受容体、より詳細にはヒトＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩまたはＦｃγＲｌｌａ、最も詳細にはヒトＦｃγＲｌｌｌａである。一実施形態では、エフェクター機能は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）、およびサイトカイン分泌からなる群より選択される１つ以上である。特定の一実施形態では、エフェクター機能はＡＤＣＣである。
一実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｎ２９７、Ｐ３３１およびＰ３２９（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）からなる群より選択される位置にアミノ酸置換を含む。より詳細な一実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｌ２３４、Ｌ２３５およびＰ３２９（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）からなる群より選択される位置にアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、アミノ酸置換Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）を含む。そのような一実施形態では、Ｆｃ領域はＩｇｄ Ｆｃ領域であり、特にヒトＩｇｄ Ｆｃ領域である。一実施形態では、Ｆｃ領域は位置Ｐ３２９にアミノ酸置換を含む。より詳細な一実施形態では、アミノ酸置換はＰ３２９またはＰ３２９Ｇ、特にＰ３２９Ｇ（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）である。一実施形態では、Ｆｃ領域は、位置Ｐ３２９でのアミノ酸置換と、Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｎ２９７およびＰ３３１（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）から選択される位置でのさらなるアミノ酸置換を含む。より詳細な一実施形態では、さらなるアミノ酸置換は、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７ＤまたはＰ３３１Ｓである。特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、位置Ｐ３２９、Ｌ２３４およびＬ２３５（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）にアミノ酸置換を含む。より特定の実施形態では、Ｆｃ領域はアミノ酸変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ（「Ｐ３２９Ｇ ＬＡＬＡ」、「ＰＧＬＡＬＡ」または「ＬＡＬＡＰＧ」）を含む。
典型的には、同一の１つ以上のアミノ酸置換が、Ｆｃ領域の２つのＦｃドメインのそれぞれに存在する。したがって、特定の一実施形態では、Ｆｃ領域の各Ｆｃドメインはアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックス番号付け）を含み、すなわち、Ｆｃ領域の第１および第２のＦｃドメインのそれぞれにおいて、位置２３４のロイシン残基はアラニン残基に置き換えられ（Ｌ２３４Ａ）、位置２３５のロイシン残基はアラニン残基に置き換えられ（Ｌ２３５Ａ）、位置３２９のプロリン残基はグリシン残基に置き換えられている（Ｐ３２９Ｇ）（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
一実施形態では、ＦｃドメインはＩｇＧ１Ｆｃドメインであり、特にヒトＩｇＧ１Ｆｃである。
別の実施形態では、Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体への結合性が低下したＩｇＧ４Ｆｃドメインである。Ｆｃ受容体への結合性が低下している例示的なＩｇＧ４Ｆｃドメインは、以下の表１から選択されるアミノ酸配列を含むことができる。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、以下に示される配列の太字部分のみを含む。
Figure 2023525555000003
Figure 2023525555000004
Figure 2023525555000005
Figure 2023525555000006
特定の一実施形態では、エフェクター機能が低下したＩｇＧ４は、上記に転載された国際公開第ＷＯ２０１４／１２１０８７号の配列番号３１のアミノ酸配列の太字部分（配列番号６のアミノ酸９９から３２６、または配列番号３１；前記太字配列は本願明細書でＩｇＧ４と称することもある）、またはそれと少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、エフェクター機能が低下したＩｇＧ４は、国際公開第ＷＯ２０１４／１２１０８７号の配列番号３１（配列番号６）と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
ヘテロ二量体である本開示のＩＬ１０アゴニストについては、国際公開第ＷＯ２０１４／１２１０８７号のそれぞれの場合において、上記に示されたバリアントＩｇＧ４ Ｆｃ配列の組合せ、例えば、配列番号３０（またはその太字部分）と配列番号３７（またはその太字部分）の組合せを含むＦｃ領域、あるいは配列番号３１（またはその太字部分）と配列番号３８（またはその太字部分）の組合せを含むＦｃ領域を組み込むことができる。
特定の一実施形態では、Ｆｃドメインは、セクション７．１．１でｈＩｇＧ４ｓ（配列番号３１）と指定されているアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
別の特定の一実施形態では、Ｆｃドメインは、セクション７．１．１でｈＩｇＧ１（配列番号３２）と指定されているアミノ酸配列、またはそれと少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、もしくは１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。ｈＩｇＧ１（配列番号３２）は、エフェクター機能を低下させるためのＤ２６５Ａ、Ｎ２９７Ａ変異（ＥＵ番号付け）を含む、バリアントＩｇＧ１を基にしたＦｃ配列である。
６．４．１．１．Ｆｃヘテロ二量体化バリアント
ある特定のＩＬ１０アゴニストは、ネイティブ免疫グロブリンとは異なり、例えば、一方のＦｃドメインがＦａｂに接続され、他方のＦｃドメインがＩＬ１０部分に接続されるというように、非同一なＮ末端領域に作動可能に連結された２つのＦｃドメイン間の二量体化を必要とする。Ｆｃドメインを形成するための２つのＦｃ領域の不適切なヘテロ二量体化は、所望のヘテロ二量体分子の収率を高めるための障害となる可能性があり、精製のための課題となっている。当技術分野で利用可能な種々のアプローチを、例えば、欧州特許出願公開第１８７０４５９Ａ１号明細書；米国特許第５，５８２，９９６号明細書；米国特許第５，７３１，１６８号明細書；米国特許第５，９１０，５７３号明細書；米国特許第５，９３２，４４８号明細書；米国特許第６，８３３，４４１号明細書；米国特許第７，１８３，０７６号明細書；米国特許出願公開第２００６２０４４９３Ａ１号明細書；国際出願第ＷＯ２００９／０８９００４Ａ１号に開示されているように、本開示のＩＬ１０アゴニストに存在する可能性のあるＦｃドメインの二量体化を増強するために使用することができる。
本開示は、Ｆｃヘテロ二量体、すなわち、異種性で非同一なＦｃドメインを含むＦｃ領域を含むＩＬ１０アゴニストを提供する。典型的には、Ｆｃヘテロ二量体における各Ｆｃドメインは、抗体のＣＨ３ドメインを含む。ＣＨ３ドメインは、前のセクションに記載されているように、任意のアイソタイプ、クラスまたはサブクラス、好ましくはＩｇＧ（ｌｇＧ１、ｌｇＧ２、ｌｇＧ３およびｌｇＧ４）クラスの抗体の定常領域に由来する。
ＣＨ３ドメインでの２つの異なる重鎖のヘテロ二量体化は、所望のＩＬ１０アゴニストを生じさせるが、一方、同一の重鎖のホモ二量体化は、所望のＩＬ１０アゴニストの収率を低下させる。したがって、好ましい一実施形態では、会合して本開示のＩＬ１０アゴニストを形成するポリペプチドは、非改変Ｆｃドメインに比してヘテロ二量体会合に有利な改変を有するＣＨ３ドメインを含有すると考えられる。
特定の一実施形態では、Ｆｃヘテロ二量体の形成を促進する前記改変は、Ｆｃドメインの１つにおける「ノブ」改変および他のＦｃドメインにおける「ホール」改変を含む、いわゆる「ノブ・イントゥ・ホール（ｋｎｏｂ－ｉｎｔｏ－ｈｏｌｅ）」または「ノブ・イン・ホール（ｋｎｏｂ－ｉｎ－ｈｏｌｅ）」改変である。ノブ・イン・ホール技術は、例えば、米国特許第５，７３１，１６８号明細書、米国特許第７，６９５，９３６号明細書；リッジウェイ（Ｒｉｄｇｗａｙ）ら、１９９６、Ｐｒｏｔ Ｅｎｇ、９：６１７－６２１、およびカーター（Ｃａｒｔｅｒ）、２００１、Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈ、２４８：７－１５に記載されている。一般に、この方法は、突出部（「ノブ」）を空洞（「ホール」）の中に配置させてヘテロ二量体形成を促進し、ホモ二量体形成を妨害することができるように、第１のポリペプチドの境界面に突出部および第２のポリペプチドの境界面に対応する空洞を導入することを伴う。突出部は、第１のポリペプチドの境界面に由来する小さなアミノ酸側鎖を大きな側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）と置き換えることによって構築される。大きなアミノ酸側鎖を小さなアミノ酸側鎖（例えば、アラニンまたはトレオニン）と置き換えることによって、突出部と同一または類似のサイズの代償性の空洞が、第２のポリペプチドの境界面に作成される。
したがって、一部の実施形態では、Ｆｃドメインの第１のサブユニットのＣＨ３ドメイン内のアミノ酸残基をより大きい側鎖体積を有するアミノ酸残基に置き換え、それによって、第２のサブユニットのＣＨ３ドメイン内の空洞に配置可能な突出部が第１のサブユニットのＣＨ３ドメイン内に生じ、Ｆｃドメインの第２のサブユニットのＣＨ３ドメイン内のアミノ酸残基をより小さい側鎖体積を有するアミノ酸残基に置き換え、それによって、第１のサブユニットのＣＨ３ドメイン内の突出部を配置可能な空洞が、第２のサブユニットのＣＨ３ドメイン内に生じる。好ましくは、より大きい側鎖体積を有する前記アミノ酸残基は、アルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）からなる群から選択される。好ましくは、より小さい側鎖体積を有する前記アミノ酸残基は、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）からなる群から選択される。突出部および空洞は、ポリペプチドをコードする核酸を変更することによって、例えば、部位特異的変異誘発によって、またはペプチド合成によって作ることができる。例示的な置換はＹ４７０Ｔである。
そのような詳細な一実施形態では、第１のＦｃドメインにおいて位置３６６のトレオニン残基がトリプトファン残基に置き換えられ（Ｔ３６６Ｗ）、Ｆｃドメインにおいて位置４０７のチロシン残基がバリン残基に置き換えられ（Ｙ４０７Ｖ）、および任意選択で、位置３６６のトレオニン残基がセリン残基に置き換えられ（Ｔ３６６Ｓ）、位置３６８のロイシン残基がアラニン残基に置き換えられる（Ｌ３６８Ａ）（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。さらなる一実施形態では、第１のＦｃドメインにおいて、さらに位置３５４のセリン残基がシステイン残基に置き換えられ（Ｓ３５４Ｃ）、位置３５６のグルタミン酸残基がシステイン残基に置き換えられ（Ｅ３５６Ｃ）（特に位置３５４のセリン残基がシステイン残基に置き換えられる）、第２のＦｃドメインにおいて、さらに位置３４９のチロシン残基がシステイン残基に置き換えられる（Ｙ３４９Ｃ）（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。特定の一実施形態では、第１のＦｃドメインはアミノ酸置換３５４ＣおよびＴ３６６Ｗを含み、第２のＦｃドメインはアミノ酸置換Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖを含む（Ｋａｂａｔ ＥＵインデックスによる番号付け）。
一部の実施形態では、静電ステアリング（例えば、グナセカラン（Ｇｕｎａｓｅｋａｒａｎ）ら、２０１０、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ、２８５（２５）：１９６３７－４６に記載されている）を使用して、Ｆｃ領域の第１および第２のＦｃドメインの会合を促進することができる。
ヘテロ二量体化を促進するように改変されたＦｃドメインを使用する代わりに、またはそれに追加して、Ｆｃドメインを改変して、Ｆｃヘテロ二量体の選択を可能にする精製戦略を可能にすることができる。そのような一実施形態では、１つのポリペプチドは、プロテインＡへのその結合を抑止する改変Ｆｃドメインを含み、そうすることでヘテロ二量体タンパク質が生じる精製方法を可能にする。例えば、米国特許第８，５８６，７１３号明細書を参照。そのため、ＩＬ１０アゴニストは、第１のＣＨ３ドメインおよび第２のＩｇ ＣＨ３ドメインを含み、第１および第２のＩｇ ＣＨ３ドメインは少なくとも１つのアミノ酸が互いに異なり、アミノ酸の違いがない対応するＩＬ１０アゴニストと比較して、少なくとも１つのアミノ酸の違いにより、ＩＬ１０アゴニストのプロテインＡへの結合性が低下する。一実施形態では、第１のＣＨ３ドメインはプロテインＡに結合し、第２のＣＨ３ドメインは、プロテインＡ結合を低下させるかまたは抑止する、Ｈ９５Ｒ改変などの変異／改変を含む（ＩＭＧＴエクソン番号付けによる；Ｈ４３５ＲはＥＵ番号付けによる）。第２のＣＨ３は、Ｙ９６Ｆ改変をさらに含むことができる（ＩＭＧＴによる；Ｙ４３６ＦはＥＵによる）。このクラスの改変を、本願明細書では「星型（ｓｔａｒ）」変異と称する。
６．５．標的化部分
本開示のＩＬ１０アゴニストへの標的化部分の組込みにより、腫瘍微小環境内または腫瘍反応性リンパ球、特にＣＤ８＋ Ｔリンパ球への高濃度のＩＬ１０の送達が可能となり、そこでそれらに局所的効果を発揮させることができる。
好適な標的化部分の形式は、セクション６．５．２に記載されている。標的化部分は、好ましくは、抗原結合部分、例えば、抗体または抗体の抗原結合部分、例えば、セクション６．５．２．１に記載されているｓｃＦｖ、またはセクション６．５．２．２に記載されているＦａｂである。
抗体および抗原結合部分は、一般に特異的な抗原決定基に結合し、ＩＬ１０アゴニストを標的部位、例えば、その抗原決定基を担持する種類の腫瘍細胞または腫瘍間質へと導くことができる。本開示の標的化部分によって認識される例示的な標的分子は、セクション６．５．１に記載されている。
６．５．１．標的分子
本開示のＩＬ１０アゴニストの標的化部分によって認識される標的分子は、一般に、例えば、活性化Ｔ細胞の表面上、腫瘍細胞の表面上、ウイルス感染細胞の表面上、他の罹患細胞の表面上に、血清中に遊離して、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）中に、または標的化部分に存在する免疫細胞、例えば、腫瘍反応性リンパ球に、またはペプチド－ＭＨＣ複合体中のペプチドに見出される。免疫細胞（例えば、キメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）を発現するＴ細胞）が外因性に投与される場合、標的化部分はＣＡＲ Ｔ細胞の表面に見出されるキメラ抗原受容体または別の分子を認識することができる。
例示的な標的分子には、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、テネイシン－ＣのＡ１ドメイン（ＴＮＣ Ａ１）、テネイシン－ＣのＡ２ドメイン（ＴＮＣ Ａ２）、フィブロネクチンのエキストラドメインＢ（ＥＤＢ）、黒色腫関連コンドロイチン硫酸プロテオグリカン（ＭＣＳＰ）、ＭＡＲＴ－１／メランＡ、ｇｐ１００、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）、アデノシンデアミナーゼ結合タンパク質（ＡＤＡｂｐ）、シクロフィリンｂ、結腸直腸関連抗原（ＣＲＣ）－Ｃ０１７－１Ａ／ＧＡ７３３、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）ならびにその免疫原性エピトープＣＡＰ－１およびＣＡＰ－２、ｅｔｖ６、ａｍｌ１、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）ならびにその免疫原性エピトープＰＳＡ－１、ＰＳＡ－２およびＰＳＡ－３、前立腺特異膜抗原（ＰＳＭＡ）、Ｔ細胞受容体／ＣＤ３ζ鎖、ＭＡＧＥファミリーの腫瘍抗原（例えば、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－Ａ５、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＧＥ－Ａ７、ＭＡＧＥ－Ａ８、ＭＡＧＥ－Ａ９、ＭＡＧＥ－Ａ１０、ＭＡＧＥ－Ａ１１、ＭＡＧＥ－Ａ１２、ＭＡＧＥ－Ｘｐ２（ＭＡＧＥ－Ｂ２）、ＭＡＧＥ－Ｘｐ３（ＭＡＧＥ－Ｂ３）、ＭＡＧＥ－Ｘｐ４（ＭＡＧＥ－Ｂ４）、ＭＡＧＥ－Ｃ１、ＭＡＧＥ－Ｃ２、ＭＡＧＥ－Ｃ３、ＭＡＧＥ－Ｃ４、ＭＡＧＥ－Ｃ５）、ＧＡＧＥファミリーの腫瘍抗原（例えば、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＧＡＧＥ－３、ＧＡＧＥ－４、ＧＡＧＥ－５、ＧＡＧＥ－６、ＧＡＧＥ－７、ＧＡＧＥ－８、ＧＡＧＥ－９）、ＢＡＧＥ、ＲＡＧＥ、ＬＡＧＥ－１、ＮＡＧ、ＧｎＴ－Ｖ、ＭＵＭ－１、ＣＤＫ４、チロシナーゼ、ｐ５３、ＭＵＣファミリー、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ｐ２１ｒａｓ、ＲＣＡＳ１、α－フェトプロテイン、Ｅ－カドヘリン、α－カテニン、β－カテニンおよびγ－カテニン、ｐ１２０ｃｔｎ、ｇｐ１００ Ｐｍｅｌ１１７、ＰＲＡＭＥ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ｃｄｃ２７、腺腫性大腸ポリポーシスタンパク質（ＡＰＣ）、フォドリン、コネキシン３７、Ｉｇ－イディオタイプ、ｐ１５、ｇｐ７５、ＧＭ２およびＧＤ２ガングリオシド、ウイルス産物、例えば、ヒト乳頭腫ウイルスタンパク質、Ｓｍａｄファミリーの腫瘍抗原、Ｉｍｐ－１、Ｐ１Ａ、ＥＢＶによりコードされる核抗原（ＥＢＮＡ）－１、脳グリコーゲンホスホリラーゼ、ＳＳＸ－１、ＳＳＸ－２（ＨＯＭ－ＭＥＬ－４０）、ＳＳＸ－１、ＳＳＸ－４、ＳＳＸ－５、ＳＣＰ－１およびＣＴ－７、ｃ－ｅｒｂＢ－２、Ｈｅｒ２、ＥＧＦＲ、ＩＧＦ－１Ｒ、ＣＤ２（Ｔ細胞表面抗原）、ＣＤ３（ＴＣＲに関連するヘテロ多量体）、ＣＤ２２（Ｂ細胞受容体）、ＣＤ２３（低親和性ＩｇＥ受容体）、ＣＤ３０（サイトカイン受容体）、ＣＤ３３（骨髄細胞表面抗原）、ＣＤ４０（腫瘍壊死因子受容体）、ＩＬ－６Ｒ－（ＩＬ－６受容体）、ＣＤ２０、ＭＣＳＰ、ＰＤＧＦβＲ（β血小板由来増殖因子受容体）、ＥｒｂＢ２上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）、ＥＧＦＲバリアントＩＩＩ（ＥＧＦＲ ｖＩＩＩ）、ＣＤ１９、ジシアロガングリオシドＧＤ２、導管上皮ムチン（ｍｕｃｉｎｅ）、ｇｐ３６、ＴＡＧ－７２、神経膠腫関連抗原、β－ヒト絨毛性ゴナドトロピン、αフェトプロテイン（ＡＦＰ）、レクチン反応性ＡＦＰ、サイログロブリン、ＭＮ－ＣＡ ＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２（ＡＳ）、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、Ｍ－ＣＳＦ、プロスターゼ、プロスターゼ特異抗原（ＰＳＡ）、ＰＡＰ、ＬＡＧＡ－１、ｐ５３、プロステイン、ＰＳＭＡ、サバイビン（ｓｕｒｖｉｖｉｎｇ）およびテロメラーゼ、前立腺がん腫瘍抗原－１（ＰＣＴＡ－１）、ＥＬＦ２Ｍ、好中球エラスターゼ、エフリンＢ２、インスリン増殖因子（ＩＧＦ－１）－Ｉ、ＩＧＦ－ＩＩ、ＩＧＦＩ受容体、５Ｔ４、ＲＯＲ１、Ｎｋｐ３０、ＮＫＧ２Ｄ、腫瘍間質抗原、フィブロネクチンのエキストラドメインＡ（ＥＤＡ）およびエキストラドメインＢ（ＥＤＢ）、ならびにテネイシン－ＣのＡ１ドメイン（ＴｎＣ Ａ１）がある。
一部の実施形態では、標的化部分はＭＨＣペプチド複合体またはＭＨＣペプチド複合体中のペプチド、例えば、腫瘍ネオ抗原に結合する。一部の腫瘍ネオ抗原はウイルス抗原である。
ウイルス抗原の非限定的な例としては、ＥＢＶ抗原（例えば、エプスタイン・バー（Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ）ウイルスＬＭＰ－１）、Ｃ型肝炎ウイルス抗原（例えば、Ｃ型肝炎ウイルスＥ２糖タンパク質）、ＨＩＶ抗原（例えば、ＨＩＶ ｇｐ１６０、ＨＩＶ ｇｐ１２０）；ＣＭＶ抗原；ＨＰＶ特異抗原、またはインフルエンザウイルス抗原（例えば、インフルエンザウイルス赤血球凝集素）が挙げられる。本開示の標的化部分によって結合され得る腫瘍ネオ抗原の特定の実施形態は、ＬＣＭＶ由来ペプチドｇｐ３３－４１、ＡＰＦ（１２６～１３４）、ＢＡＬＦ（２７６－２８４）、ＣＥＡ（５７１－５７９）、ＣＭＶ ｐｐ６５（４９５－５０３）、ＦＬＵ－Ｍ１（５８－６６）、ｇｐ１００（１５４－１６２）、ｇｐ１００（２０９－２１７）、ＨＢＶコア（１８－２７）、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ（３６９－３７７；Ｖ２ｖ９）；ＨＰＶ Ｅ７（１１－２０）、ＫＬＫ４（１１－１９）、ＬＭＰ１（１２５－１３３）、ＭＡＧ－Ａ３（１１２－１２０）、ＮＹＥＳＯ１（１５７－１６５、Ｃ１６５Ａ）、ＮＹＥＳＯ１（１５７－１６５、Ｃ１６５Ｖ）、ｐ５４ＷＴ（２６４－２７２）、ＰＡＰ－３（１３６－１４３）、ＰＳＭＡ（４－１２）、ＰＳＭＡ（１３５－１４５）、サバイビン（９６－０１４）、チロシナーゼ（３６９－３７７、３７１Ｄ）、ＷＴ１（１２６－１３４）である。
ＥＣＭ抗原の非限定的な例としては、シンデカン、ヘパラナーゼ、インテグリン、オステオポンチン、リンク、カドヘリン、ラミニン、ラミニンＥＧＦ型、レクチン、フィブロネクチン、ノッチ、テネイシン、コラーゲン、およびマトリキシンが挙げられる。
他の標的分子には、腫瘍またはウイルス性リンパ球の細胞表面分子、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、およびＢ７－Ｈ３などのＴ細胞共刺激タンパク質がある。
特定の実施形態では、標的分子はチェックポイント阻害剤、例えば、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＣＤ１６０、ＣＧＥＮ－１５０４９、ＣＨＫ１、ＣＨＫ２である。
一部の実施形態では、ＩＬ１０アゴニストは、標的化部分、例えば、限定はされないが、腫瘍関連抗原に結合する、腫瘍微小環境抗原に結合する、腫瘍反応性リンパ球の細胞表面分子に結合する、またはチェックポイント阻害剤に結合する標的化部分を含まない。
様々な実施形態では、ＩＬ１０アゴニストは、ＰＤ１結合性標的化ドメインを含まない。
６．５．２．標的化部位の形式
ある特定の態様では、標的化部分は、抗原決定基への特異的結合を保持する任意の種類の抗体またはその断片であり得る。一実施形態では、抗原結合部分は完全長抗体である。一実施形態では、抗原結合部分は免疫グロブリン分子、特にＩｇＧクラス免疫グロブリン分子、より特定的にはＩｇＧ１またはＩｇＧ４免疫グロブリン分子である。抗体断片には、ＶＨ（またはＶＨ）断片、ＶＬ（またはＶＬ）断片、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ｓｃＦｖ断片、Ｆｖ断片、ミニボディ、ダイアボディ、トライアボディ、およびテトラボディが含まれるが、これらに限定されない。抗体断片は、本開示のＩＬ１０アゴニストにおいて、ＦｃドメインのＮ末端側に組み込まれることが有利であり得る。
６．５．２．１．ｓｃＦｖ
単鎖Ｆｖまたは「ｓｃＦｖ」抗体断片は、単一のポリペプチド鎖の中に抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含み、単鎖ポリペプチドとして発現されることが可能であり、それらの由来となったインタクト抗体の特異性を保持している。一般に、ｓｃＦｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、これにより、ｓｃＦｖが標的結合のための望ましい構造を形成することが可能になる。ｓｃＦｖのＶＨ鎖とＶＬ鎖を接続するために好適なリンカーの例は、セクション６．７で特定されているリンカーである。
特に指定のない限り、本願明細書で使用される場合、ｓｃＦｖはＶＬおよびＶＨ可変領域を、例えば、ポリペプチドのＮ末端とＣ末端に対していずれの順序で有してもよく、ｓｃＦｖはＶＬ－リンカー－ＶＨを含んでもよく、またはＶＨ－リンカー－ＶＬを含んでもよい。
ｓｃＦｖは、任意の好適な種に由来するＶＨおよびＶＬ配列、例えば、マウス、ヒトまたはヒト化ＶＨおよびＶＬ配列を含むことができる。
ｓｃＦｖをコードする核酸を作成するために、ＶＨおよびＶＬをコードするＤＮＡ断片は、リンカーをコードする、例えば、セクション６．７に記載されているリンカーのいずれかをコードする別の断片に作動可能に連結される（典型的には、ＶＨおよびＶＬ配列が連続した単鎖タンパク質として発現され、ＶＬおよびＶＨ領域が可動性リンカーによって接合されるような、アミノ酸グリシンおよびセリンを含む配列、例えば、アミノ酸配列（Ｇｌｙ４～Ｓｅｒ）３（配列番号５３）の反復）（例えば、バード（Ｂｉｒｄ）ら、１９８８、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４２：４２３－４２６；ヒューストン（Ｈｕｓｔｏｎ）ら、１９８８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８５：５８７９－５８８３；マッカファティ（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ）ら、１９９０、Ｎａｔｕｒｅ、３４８：５５２－５５４を参照）。
６．５．２．２．Ｆａｂ
Ｆａｂドメインは伝統的に、パパインなどの酵素を使用する免疫グロブリン分子のタンパク質分解切断によって生産されてきた。本開示のＩＬ１０アゴニストにおいて、Ｆａｂドメインは、典型的には、ＩＬ１０アゴニストの一部として組換え発現される。
Ｆａｂドメインは、任意の好適な種に由来する定常ドメインおよび可変領域配列を含むことができ、それ故に、マウス、キメラ、ヒトのもの、またはヒト化されたものであり得る。
Ｆａｂドメインは典型的には、ＶＨドメインに結び付いたＣＨ１ドメインを含み、これはＶＬドメインに結び付いたＣＬドメインと対を形成する。野生型免疫グロブリンでは、ＶＨドメインはＶＬドメインと対を形成してＦｖ領域を構成し、ＣＨ１ドメインはＣＬドメインと対を形成して結合モジュールをさらに安定化する。２つの定常ドメイン間のジスルフィド結合は、Ｆａｂドメインをさらに安定化させることができる。
本開示のＩＬ１０アゴニストについては、特にＩＬ１０が２つの異なるＦａｂドメインを含有し、軽鎖が共通軽鎖または普遍的軽鎖でない場合、同じＦａｂに属するＦａｂドメインの正しい会合を可能にし、異なるＦａｂに属するＦａｂドメインの異常な対形成を最小限に抑えるために、Ｆａｂヘテロ二量体化戦略を使用することが有利である。例えば、以下の表２に示すＦａｂヘテロ二量体化戦略を使用することができる。
Figure 2023525555000007
したがって、特定の一実施形態では、例えば、国際公開第ＷＯ２００９／０８０２５１号に記載されているように、ＦａｂのＶＬドメインとＶＨドメインを互いに交換すること、またはＣＨ１ドメインとＣＬドメインを互いに交換することによって、Ｆａｂの２つのポリペプチド間の正しい会合が促進される。
また、１つ以上のアミノ酸改変をＦａｂのＣＨ１ドメインに導入し、１つ以上のアミノ酸改変をＣＬドメインに導入すること、ならびに／または１つ以上のアミノ酸改変をＶＨドメインに導入し、１つ以上のアミノ酸改変をＶＬドメインに導入することによって、正しいＦａｂ対形成を促進することもできる。改変されるアミノ酸は、典型的には、Ｆａｂの構成要素が他のＦａｂの構成要素よりも互いに選好的に対形成するように、ＶＨ：ＶＬおよびＣＨ１：ＣＬ境界面の一部である。
一実施形態では、１つ以上のアミノ酸改変は、残基のＫａｂａｔ番号付けによって示されるような、可変（ＶＨ、ＶＬ）および定常（ＣＨ１、ＣＬ）ドメインの保存されたフレームワーク残基に限定される。アルマグロ（Ａｌｍａｇｒｏ）、２００８、Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ Ｉｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、１３：１６１９－１６３３は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、およびＩＭＧＴの番号付けスキームに基づくフレームワーク残基の定義を提供している。
一実施形態では、ＶＨおよびＣＨ１ならびに／またはＶＬおよびＣＬドメインに導入される改変は、互いに相補的である。重鎖と軽鎖の境界面での相補性は、立体性および疎水性接触、静電／電荷相互作用、または種々の相互作用の組合せに基づいて達成することができる。タンパク質表面間の相補性は、鍵と鍵穴の適合（ｌｏｃｋ ａｎｄ ｋｅｙ ｆｉｔ）、ノブ・イントゥ・ホール、突出部および空洞、供与体および受容体などの観点から広く文献に記載されており、これらはすべて、相互作用する２つの表面間の構造的および化学的な適合の性質を意味している。
一実施形態では、導入される１つ以上の改変により、Ｆａｂ構成要素の境界面にわたって新たな水素結合が導入される。一実施形態では、導入される１つ以上の改変により、Ｆａｂコンポーネントの境界面にわたって新たな塩橋が導入される。例示的な置換は、国際公開第ＷＯ２０１４／１５０９７３号および国際公開第ＷＯ２０１４／０８２１７９号に記載されており、その内容は本願明細書に援用される。
一部の実施形態では、ＦａｂドメインはＣＨ１ドメインにおける１９２Ｅ置換およびＣＬドメインにおける１１４Ａおよび１３７Ｋ置換を含み、これはＣＨ１ドメインとＣＬドメインの間に塩橋を導入する（例えば、ゴレイ（Ｇｏｌａｙ）ら、２０１６、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９６：３１９９－２１１を参照）。
一部の実施形態では、Ｆａｂドメインは、ＣＨ１ドメインにおける１４３Ｑおよび１８８Ｖの置換ならびにＣＬドメインにおける１１３Ｔおよび１７６Ｖの置換を含み、これはＣＨ１ドメインとＣＬドメインの間で疎水領域と極性領域の接触を交換する役割を果たす（例えば、ゴレイ（Ｇｏｌａｙ）ら、２０１６、 Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９６：３１９９－２１１を参照）。
一部の実施形態では、Ｆａｂドメインは、Ｆａｂドメインの正しい集合を促進するオルソゴナルＦａｂ境界面を導入するために、ＶＨ、ＣＨ１、ＶＬ、ＣＬドメインの一部または全体における改変を含むことができる（ルイス（Ｌｅｗｉｓ）ら、２０１４、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、３２：１９１－１９８）。一実施形態では、３９Ｋ、６２Ｅ改変をＶＨドメインに導入し、Ｈ１７２Ａ、Ｆ１７４Ｇ改変をＣＨ１ドメインに導入し、１ Ｒ、３８Ｄ、（３６Ｆ）改変をＶＬドメインに導入し、Ｌ１３５Ｙ、Ｓ１７６Ｗ改変をＣＬドメインに導入する。別の実施形態では、３９Ｙ改変をＶＨドメインに導入し、３８Ｒ改変をＶＬドメインに導入する。
また、Ｆａｂドメインを、ネイティブＣＨ１：ＣＬジスルフィド結合を操作されたジスルフィド結合に置き換え、それによってＦａｂ構成要素の対形成の効率を高めるように変更することもできる。例えば、１２６ＣをＣＨ１ドメインに、１２１ＣをＣＬドメインに導入することによって、操作されたジスルフィド結合を導入することができる（例えば、マッツォ（Ｍａｚｏｒ）ら、２０１５、ＭＡｂｓ、７：３７７－８９を参照）。
また、ＣＨ１ドメインおよびＣＬドメインを、正しい集合を促進する代替ドメインに置き換えることによってＦａｂドメインを改変することもできる。例えば、ウー（Ｗｕ）ら、２０１５、ＭＡｂｓ、７：３６４－７６は、ＣＨ１ドメインをＴ細胞受容体の定常ドメインで置換し、ＣＬドメインをＴ細胞受容体のｂドメインで置換して、これらのドメイン置換を、３８Ｄ改変をＶＬドメインに導入し、３９Ｋ改変をＶＨドメインに導入することによるＶＬドメインとＶＨドメインの間の追加の電荷－電荷相互作用と対にすることを記載している。
正しいＶＨ－ＶＬ対形成を促進するためのＦａｂヘテロ二量体化戦略の使用の代わりに、またはそれに加えて、本開示のＩＬ１０アゴニストの各Ｆａｂ ＶＬ領域について共通軽鎖（普遍的軽鎖とも称される）のＶＬを使用することができる。様々な実施形態では、本願明細書に記載されるような共通軽鎖を採用することにより、元のコグネイトＶＬを採用することと比較して、ＩＬ１０アゴニストの不適切な種の数が減少する。様々な実施形態では、ＩＬ１０アゴニストのＶＬドメインは、共通軽鎖を含む単一特異性抗体から同定される。様々な実施形態では、ＩＬ１０アゴニストのＶＨ領域は、限定されたヒト軽鎖レパートリーまたは単一のヒト軽鎖を発現するように事前に操作されたマウスＢ細胞内でｉｎ ｖｉｖｏで再編成されたヒト重鎖可変遺伝子セグメントを含み、ヒト重鎖とコグネイトであり、目的の抗原への曝露に応答して、可能性のある１つのヒトＶＬまたは２つのうち１つとコグネイトである複数のヒトＶＨを含有する抗体レパートリーを生じ、この抗体レパートリーは目的の抗原に対して特異的である。一般的な軽鎖は、再編成されたヒトＶκ１－３９Ｊκ５配列または再編成されたヒトＶκ３－２０Ｊκ１配列に由来するものであり、体細胞変異した（例えば、親和力が成熟した）型を含む。例えば、米国特許第１０，４１２，９４０号明細書を参照。
６．６．安定化部分
本開示のＩＬ１０アゴニストは、ｉｎ ｖｉｖｏで分子の血清半減期を延長することができる安定化部分を含み得る。血清中半減期はしばしばα相とβ相に分けられる。いずれかまたは両方の相は、適切な安定化部分の付加によって大幅に改善される可能性がある。例えば、安定化部分は、安定化部分を含有しない対応するＩＬ１０アゴニストに比して、ＩＬ－１０アゴニストの血清中半減期を、５、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１５０、２００、４００、６００、８００、１０００％またはそれ以上延長することができる。本開示の目的において、血清中半減期は、ヒトまたは他の哺乳動物（例えば、マウスまたは非ヒト霊長類）における半減期を指す。さらに、ＩＬ１０アゴニストにＦｃドメインを含めることにより、ＩＬ１０部分の半減期が延長することが認識されている；本開示の文脈において、「安定化部分」という用語は、Ｆｃドメイン／Ｆｃ領域以外の部分を指す。
野生型ＩＬ１０の血清中半減期は３０分未満である。本開示のＩＬ１０アゴニストは、好ましくは、ヒトおよび／またはマウスにおいて、少なくとも約２時間、少なくとも約４時間、少なくとも約６時間、または少なくとも約８時間の血清中半減期を有する。一部の実施形態では、本開示のＩＬ１０アゴニストは、少なくとも１０時間、少なくとも１２時間、少なくとも１５時間、少なくとも１８時間、少なくとも２４時間、少なくとも３６時間、少なくとも４８時間、少なくとも６０時間、または少なくとも７２時間の血清中半減期を有する。
安定化部分には、ポリオキシアルキレン部分（例えば、ポリエチレングリコール）、糖（例えば、シアル酸）、および忍容性の高いタンパク質部分（例えば、Ｆｃならびにその断片およびバリアント、トランスフェリン、または血清アルブミン）が含まれる。
本開示のＩＬ１０アゴニストに使用し得る他の安定化部分には、コンターマン（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ）ら、２０１１、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２２：８６８－７６に記載されているものが含まれる。そのような安定化部分には、ヒト血清アルブミン融合体、ヒト血清アルブミンコンジュゲート、ヒト血清アルブミン結合剤（例えば、アドネクチンＰＫＥ、ＡｌｂｕｄＡｂ、ＡＢＤ）、ＸＴＥＮ融合体、ＰＡＳ融合体（すなわち、プロリン、アラニン、セリンの３つのアミノ酸に基づく組換えＰＥＧ模倣体）、炭水化物コンジュゲート（例えば、ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ））、グリコシル化、ポリシアル酸コンジュゲート、脂肪酸コンジュゲートが含まれるが、これらに限定されない。
したがって、一部の実施形態では、本開示は、高分子糖である安定化部分を含むＩＬ１０アゴニストを提供する。
また、血清アルブミンを、アルブミンと非共有結合性に相互作用する能力を有するモジュールを介して半減期延長に関与させることもできる。したがって、本開示のＩＬ１０アゴニストは、安定化部分としてアルブミン結合タンパク質を含むことができる。アルブミン結合タンパク質は、本開示のＩＬ１０アゴニストの１つ以上の他の構成要素にコンジュゲートさせるか、または遺伝的に融合させることができる。アルブミン結合活性を有するタンパク質は、ある特定の細菌由来のものが知られている。例えば、連鎖球菌のプロテインＧは、およそ５０アミノ酸残基（６ｋＤａ）で構成されるいくつかの小さなアルブミン結合ドメインを含有する。血清アルブミン結合タンパク質のそのほかの例、例えば、米国特許出願公開第２００７／０１７８０８２号明細書および同２００７／０２６９４２２号明細書に記載されているもの。アルブミン結合ドメインとタンパク質との融合により、半減期が大きく延長される（コンターマン（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ）ら、２０１１、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２２：８６８－７６を参照）。
他の実施形態では、安定化部分はヒト血清アルブミンである。他の実施形態では、安定化部分はトランスフェリンである。
さらに他の実施形態では、安定化部分は、以下のセクション６．６．１に記載されているように、ポリエチレングリコール部分または別のポリマーである。
安定化部分は、例えば、以下のセクション６．７に記載されているように、リンカーを介して、本開示のＩＬ１０アゴニストの１つ以上の他の構成要素に接続することができる。
ある特定の実施形態では、ＩＬ１０アゴニストは、ポリエチレングリコール、他の親水性ポリマー、アルブミン、ヒト血清アルブミン結合剤、ＸＴＥＮ、ＰＡＳ、ポリシアル酸、および／またはヒドロキシエチルデンプンにコンジュゲートされていない。一部の実施形態では、ＩＬ１０アゴニストは、Ｎ結合型グリカンおよび／またはＯ結合グリカンを含まない。特定の一実施形態では、ＩＬ１０アゴニストは安定化部分を欠いている。
６．６．１．ポリエチレングリコール
一部の実施形態では、ＩＬ１０アゴニストは、安定化部分としてポリエチレングリコール（ＰＥＧ）または別の親水性ポリマー、例えば、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミン酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、デキストランまたはポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコール（ｐｒｏｐｒｏｐｙｌｅｎｅ）ホモポリマー、プロプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、およびそれらの混合物を含む。ポリマーは任意の分子量であってよく、分枝状であっても非分枝状であってもよい。
ＰＥＧはよく知られた水溶性ポリマーであり、市販されているか、または当技術分野で公知の方法（サンドラー（Ｓａｎｄｌｅｒ）およびカロ（Ｋａｒｏ）、Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｖｏｌ．３、１３８－１６１）に従ってエチレングリコールの開環重合によって調製することができる。「ＰＥＧ」という用語は、サイズまたはＰＥＧ末端の改変にかかわらず、あらゆるポリエチレングリコール分子を範囲に含むために広く使用され、式：Ｘ－Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ－１ＣＨ２ＣＨ２ＯＨによって表すことができ、式中、ｎは２０から２３００であり、ＸはＨまたは末端改変、例えば、Ｃ１－４アルキルである。ＰＥＧは結合反応のために必要な化学基をさらに含有することができ、それは分子の化学合成によって生じるか；または分子の部分の最適な距離のためのスペーサーとして機能する。さらに、そのようなＰＥＧは、互いに連結された１つ以上のＰＥＧ側鎖からなっていてよい。複数のＰＥＧ鎖を有するＰＥＧはマルチアームＰＥＧまたは分枝状ＰＥＧと呼ばれる。分枝状ＰＥＧは、例えば、欧州特許出願公開第４７３０８４Ａ号明細書および米国特許第５，９３２，４６２号明細書に記載されている。
１つ以上のＰＥＧ分子をＩＬ１０アゴニストの異なる位置に結び付けることができ、そのような結合は、アミン、チオールまたは他の好適な反応性基との反応によって達成される。アミン部分は、例えば、ＩＬ１０アゴニスト（またはその構成要素）のＮ末端に見られる第１級アミンであってもよく、またはアミノ酸に存在するアミン基、例えば、リジンもしくはアルギニンであってもよい。
ＰＥＧ化は、好適な反応基をタンパク質に導入して、ＰＥＧ化が選好的に起こる部位を作成する部位特異的ＰＥＧ化によって達成することができる。一部の実施形態では、ＩＬ１０アゴニストは、所望の位置にシステイン残基を導入するように改変されて、システインでの部位特異的ＰＥＧ化が可能になる。変異を本開示のＩＬ１０アゴニストのコード配列に導入して、システイン残基を生じさせることができる。これは例えば、１つ以上のアミノ酸残基をシステインに変異させることによって達成され得る。システイン残基に変異させるために好ましいアミノ酸には、セリン、トレオニン、アラニンおよび他の親水性残基が含まれる。システインに変異させる残基は、表面に露出した残基であることが好ましい。一次配列または三次元構造に基づいて残基の表面接近可能性を予測するためのアルゴリズムが、当技術分野で周知である。ＩＬ１０の三次元構造は、例えば、ワン（Ｗａｎｇ）ら、２００５、Ｓｃｉｅｎｃｅ、３１０（５７５１）：１１５９－６３に記載されており、システインに変異させることのできる表面に露出した残基を同定するために使用することができる。変異は、ＩＬ１０と１つ以上の受容体との相互作用を妨害しないように選択することができる。システイン残基のＰＥＧ化は、例えば、ＰＥＧ－マレイミド、ＰＥＧ－ビニルスルホン、ＰＥＧ－ヨードアセトアミド、またはＰＥＧ－オルトピリジルジスルフィドを使用して行うことができる。
ＰＥＧは典型的には、ポリペプチド上の所望の部位へのカップリングのために好適な活性化基によって活性化される。ＰＥＧ化の方法は当技術分野で公知であり、さらに、ザリプスキー（Ｚａｌｉｐｓｋｙ）ら、「ポリペプチドの改変のための官能化ポリ（エチレングリコール）の使用（Ｕｓｅ ｏｆ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄ Ｐｏｌｙ（Ｅｔｈｙｌｅｎｅ Ｇｌｙｃｏｌｓ） ｆｏｒ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ）」、「ポリエチレングリコール化学：バイオ技術および生物医学への応用（Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ Ｇｌｙｃｏｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）」、Ｊ．Ｍ．ハリス（Ｊ．Ｍ．Ｈａｒｒｉｓ）、Ｐｌｅｎｕｓ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９２）、およびザリプスキー（Ｚａｌｉｐｓｋｙ）、１９９５、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｒｅｖｉｅｗｓ、１６：１５７－１８２に記載されている。
ＰＥＧ部分は分子量に大きな違いがあり、分枝状のことも直鎖状のこともある。典型的には、ＰＥＧの重量平均分子量は約１００ダルトンから約１５０，０００ダルトンである。ＰＥＧの例示的な重量平均分子量としては、約２０，０００ダルトン、約４０，０００ダルトン、約６０，０００ダルトン、約８０，０００ダルトンが挙げられる。ある特定の実施形態では、ＰＥＧの分子量は４０，０００ダルトンである。上記のいずれかの総分子量を有する分枝状ＰＥＧを使用することもできる。一部の実施形態では、ＰＥＧは２つの分枝を有する。他の実施形態では、ＰＥＧは４つの分枝を有する。別の実施形態では、ＰＥＧは、２つのＩＬ１０含有ポリペプチド鎖がコンジュゲートされたビス－ＰＥＧ（ＮＯＦ社（ＮＯＦ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、ＤＥ－２００ＭＡ）である。
当技術分野で公知の従来の分離精製手法、例えば、サイズ排除（例えば、ゲル濾過）およびイオン交換クロマトグラフィーを使用して、ＰＥＧ化ＩＬ１０アゴニストを精製することができる。産物をＳＤＳ－ＰＡＧＥを使用して分離することもできる。分離し得る産物には、遊離ＰＥＧのほかに、モノ－、ジ－、トリ－、ポリ－、および非ＰＥＧ化ＩＬ１０アゴニストがある。モノＰＥＧコンジュゲートの比率は、組成中のモノＰＥＧの比率を高めるために溶出ピーク前後のより広い画分をプールすることによって制御し得る。約９０％のモノＰＥＧコンジュゲートは収率と活性のバランスが良い。
一部の実施形態では、ＰＥＧ化ＩＬ１０アゴニストは、非改変ＩＬ１０アゴニストに関連する生物活性の少なくとも約２５％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％または１００％を保持することが好ましい。一部の実施形態では、生物活性は、ＫＤ、ｋｏｎ、またはｋｏｆｆによって評価される、それがＩＬ１０Ｒ１に結合する能力を指す。
６．７．リンカー
ある特定の態様では、本開示は、ＩＬ１０アゴニストの２つ以上の構成要素がペプチドリンカーによって互いに接続されたＩＬ１０アゴニストを提供する。限定ではなく一例ではあるが、リンカーを使用して、（ａ）ＩＬ１０部分とＦｃドメイン；（ｂ）ＩＬ１０部分と標的化部分；（ｃ）Ｆｃドメインと標的化部分（例えば、ＦａｂドメインまたはｓｃＦｖ）；（ｄ）標的化部分内部の複数の異なるドメイン（例えば、ｓｃＦｖ内のＶＨドメインとＶＬドメイン）を連結することができる。
ペプチドリンカーは、２アミノ酸から６０アミノ酸以上までの範囲であってよく、ある特定の態様では、ペプチドリンカーは、３アミノ酸から５０アミノ酸、４アミノ酸から３０アミノ酸、５アミノ酸から２５アミノ酸、１０アミノ酸から２５アミノ酸、１０アミノ酸から６０アミノ酸、１２アミノ酸から２０アミノ酸、２０アミノ酸から５０アミノ酸、または２５アミノ酸から３５アミノ酸までの範囲の長さである。
荷電性（例えば、荷電親水性リンカー）および／または可動性リンカーが特に好ましい。
本開示のＩＬ１０アゴニストに使用し得る可動性リンカーの例には、チェン（Ｃｈｅｎ）ら、２０１３、Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ、Ｒｅｖ．６５（１０）：１３５７－１３６９およびクライン（Ｋｌｅｉｎ）ら、２０１４、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、Ｄｅｓｉｇｎ ＆ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ、２７（１０）：３２５－３３０によって開示されたものが含まれる。特に有用な可動性リンカーは、グリシンおよびセリンの反復、例えば、ＧｎＳ（配列番号９）またはＳＧｎ（配列番号１０）の単量体または多量体であり、ここでｎは１から１０までの整数、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０である。一実施形態では、リンカーはＧ４Ｓ（配列番号５１）、例えば（ＧＧＧＧＳ）ｎ（配列番号１１）の反復の単量体または多量体である。
６．７．１．ヒンジ配列
他の実施形態では、本開示のＩＬ１０アゴニストは、ヒンジ領域であるリンカーを含む。特に、ＩＬ１０アゴニストが免疫グロブリンに基づく標的化部分を含有する場合、ヒンジを使用して、標的化部分、例えば、Ｆａｂドメインを、多量体化ドメイン、例えば、Ｆｃドメインに接続することができる。標的化部分がない場合でも、ヒンジ配列を利用してＩＬ１０アゴニスト二量体を安定化することができる。
ヒンジ領域は、ネイティブ性または改変されたヒンジ領域であり得る。ヒンジ領域は、典型的にはＦｃ領域のＮ末端に見られる。
ネイティブ性ヒンジ領域は、天然に存在する抗体中のＦａｂドメインとＦｃドメインの間に通常見出されると考えられるヒンジ領域である。改変されたヒンジ領域は、ネイティブ性ヒンジ領域と長さおよび／または組成が異なる任意のヒンジである。そのようなヒンジには、他の種、例えば、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、サメ、ブタ、ハムスター、ラクダ、ラマ、ヤギに由来するヒンジ領域が含まれ得る。他の改変されたヒンジ領域には、重鎖Ｆｃ領域のものとは異なるクラスまたはサブクラスの抗体に由来する完全なヒンジ領域が含まれ得る。あるいは、改変されたヒンジ領域は、天然のヒンジの一部、または反復における各単位が天然のヒンジ領域に由来する反復単位を含んでもよい。さらなる代替として、１つ以上のシステインまたは他の残基をセリンもしくはアラニンなどの中性残基に変換すること、または好適に配置された残基をシステイン残基に変換することによって、天然のヒンジ領域を変更することができる。そのような手段により、ヒンジ領域内のシステイン残基の数を増減することができる。他の改変されたヒンジ領域は、完全に合成性であってもよく、所望の特性、例えば、長さ、システイン組成および可動性を有するように設計されていてよい。
いくつかの改変されたヒンジ領域が、例えば、米国特許第５，６７７，４２５号明細書、国際公開第ＷＯ９９／１５５４９号、国際公開第ＷＯ２００５／００３１７０号、国際公開第ＷＯ２００５／００３１６９号、国際公開第ＷＯ２００５／００３１７０号、国際公開第ＷＯ９８／２５９７１号および国際公開第ＷＯ２００５／００３１７１号に既に記載されており、これらは本願明細書に援用される。
様々な実施形態では、ヒンジドメイン内の位置２３３～２３６は、Ｇ、Ｇ、Ｇおよび非占有；Ｇ、Ｇ、非占有および非占有；Ｇ、非占有、非占有および非占有；またはすべて非占有であってよく、位置にはＥＵ番号付けによって番号が付けられている。
一部の実施形態では、本開示のＩＬ１０ムテインは、同じアイソタイプ（例えば、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４）の野生型ヒンジドメインに比して、Ｆｃγ受容体に対する結合親和性を低下させる、改変されたヒンジドメインを含む。
一実施形態では、本開示の二量体ＩＬ１０アゴニストの一方または両方の鎖のＦｃ領域は、そのＮ末端にインタクトの（ｉｎｔａｃｔ）ヒンジ領域を有する。
一実施形態では、本開示の二量体ＩＬ１０アゴニストの一方または両方の鎖のＦｃ領域およびヒンジ領域はｌｇＧ４に由来し、ヒンジ領域は改変配列ＣＰＰＣを含む。ヒトｌｇＧ４のコアヒンジ領域は、ｌｇＧ１が配列ＣＰＰＣを含有するのに対して、配列ＣＰＳＣを含む。ｌｇＧ４配列に存在するセリン残基は、この領域の可動性の増加を招き、それ故に、分子の一定割合は、ＩｇＧ分子内の他の重鎖に架橋して鎖間ジスルフィドを形成するのではなく、同じタンパク質鎖内でジスルフィド結合（鎖内ジスルフィド）を形成する（エンジェル（Ａｎｇｅｌ）ら、１９９３、Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ、３０（１）：１０５－１０８）。セリン残基をプロリンに変化させてｌｇＧ１と同じコア配列を得ることにより、ｌｇＧ４ヒンジ領域内での鎖間ジスルフィドの完全な形成が可能になり、精製産物の不均一性が減少する。この変更されたアイソタイプはｌｇＧ４Ｐと呼ばれる。
６．７．１．１．キメラ性ヒンジ配列
ヒンジ領域は、キメラ性ヒンジ領域であり得る。
例えば、キメラ性ヒンジは、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２またはヒトＩｇＧ４のヒンジ領域に由来する「上部ヒンジ」配列が、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２またはヒトＩｇＧ４のヒンジ領域に由来する「下部ヒンジ」配列と組み合わされたものを含むことができる。
特定の実施形態では、キメラ性ヒンジ領域は、アミノ酸配列ＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＰＡＰＰＶＡ（配列番号１２）（国際公開第ＷＯ２０１４／１２１０８７号（その全体が本願明細書において援用される）の配列番号８）またはＥＳＫＹＧＰＰＣＰＣＰＣＰＰＡＰＰＶＡ（配列番号１３）（国際公開第ＷＯ２０１４／１２１０８７号の配列番号９）を含む。そのようなキメラ性ヒンジ配列は、ＩｇＧ４ ＣＨ２領域に好適に連結させることができる（例えば、ヒトまたはマウスのＦｃドメインをＩｇＧ４ Ｆｃドメインに組み込むことによって、例えば、セクション６．４．１に記載されているように、これをＣＨ２および／またはＣＨ３ドメインにおいてさらに改変して、エフェクター機能を低下させることができる）。
６．７．１．２．エフェクター機能が低下したヒンジ配列
さらなる実施形態では、例えば、国際公開第ＷＯ２０１６１６１０１０Ａ２号（その全体が本願明細書において援用される）に記載されているように、ヒンジ領域を改変してエフェクター機能を低下させることができる。様々な実施形態では、改変されたヒンジ領域の位置２３３～２３６は、Ｇ、Ｇ、Ｇ、および非占有；Ｇ、Ｇ、非占有および非占有；Ｇ、非占有、非占有および非占有；またはすべて非占有であり、位置にはＥＵ番号付けによって番号が付けられている（国際公開第ＷＯ２０１６１６１０１０Ａ２号の図１に示されるように）。これらのセグメントは、ＧＧＧ－、ＧＧ－－、Ｇ－－－または－－－－として表すことができ、「－」は非占有位置を表す。
位置２３６は、標準的なヒトＩｇＧ２では非占有であるが、他の標準的なヒトＩｇＧアイソタイプでは占有されている。位置２３３～２３５は、ヒトの４つのアイソタイプのすべてでＧ以外の残基によって占有されている（国際公開第ＷＯ２０１６１６１０１０Ａ２号の図１に示されるように）。
位置２３３～２３６内のヒンジ改変を、Ｐによって占有された位置２２８と組み合わせることができる。位置２２８は、ヒトＩｇＧ１およびＩｇＧ２では天然にはＰによって占有されるが、ヒトＩｇＧ４ではＳによって、ヒトＩｇＧ３ではＲによって占有される。ＩｇＧ４抗体におけるＳ２２８Ｐ変異は、ＩｇＧ４抗体を安定化するため、および外因性抗体と内因性抗体の間の重鎖軽鎖対の交換を減少させるために有利である。好ましくは、位置２２６～２２９はそれぞれＣ、Ｐ、ＰおよびＣによって占有される。
例示的なヒンジ領域は、残基２２６～２３６を有し、これは中間（またはコア）ヒンジおよび下部ヒンジと呼ばれることもあり、ＧＧＧ－（２３３～２３６）、ＧＧ－－（２３３～２３６）、Ｇ－－－（２３３～２３６）およびＧなし（２３３～２３６）として指定される改変ヒンジ配列によって占有される。任意選択で、ヒンジドメインのアミノ酸配列は、ＣＰＰＣＰＡＰＧＧＧ－ＧＰＳＶＦ（配列番号１４）（国際公開第ＷＯ２０１６１６１０１０Ａ２号の配列番号１）、ＣＰＰＣＰＡＰＧＧ－－ＧＰＳＶＦ（配列番号１５）（国際公開第ＷＯ２０１６１６１０１０Ａ２号の配列番号２）、ＣＰＰＣＰＡＰＧ－－－ＧＰＳＶＦ（配列番号１６）（国際公開第ＷＯ２０１６１６１０１０Ａ２号の配列番号３）、またはＣＰＰＣＰＡＰ－－－－ＧＰＳＶＦ（配列番号１７）（国際公開第ＷＯ２０１６１６１０１０Ａ２号の配列番号４）を含む。
上記の改変されたヒンジ領域を、典型的にはＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含み、指定された領域に隣接して追加のヒンジセグメント（例えば、上部ヒンジ）を有してもよい重鎖定常領域に組み込むことができる。存在するそのような追加の定常領域セグメントは、典型的には同じアイソタイプ、好ましくはヒトアイソタイプのものであるが、複数の異なるアイソタイプのハイブリッドであってもよい。そのような追加のヒト定常領域セグメントのアイソタイプは、ヒトＩｇＧ４であることが好ましいが、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２もしくはＩｇＧ３、またはドメインが異なるアイソタイプのものであるハイブリッドであることもできる。ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４の例示的な配列は、国際公開第ＷＯ２０１６１６１０１０Ａ２号の図２～４に示されている。
詳細な実施形態では、改変されたヒンジ配列を、ＩｇＧ４ ＣＨ２領域に連結させることができる（例えば、ヒトまたはマウスのＦｃドメインをＩｇＧ４ Ｆｃドメインに組み込むことによって。例えば、セクション６．４．１に記載されているように、これをＣＨ２および／またはＣＨ３ドメインにおいてさらに改変して、エフェクター機能を低下させることができる）。
６．８．核酸および宿主細胞
別の態様では、本開示は、本開示のＩＬ１０アゴニストをコードする核酸を提供する。一部の実施形態では、ＩＬ１０アゴニストは単一の核酸によってコードされる。他の実施形態では、例えば、ヘテロ二量体分子または複数のポリペプチド鎖から構成される標的化部分を含む分子の場合には、ＩＬ１０アゴニストは複数（例えば、２つ、３つ、４つまたはそれ以上）の核酸によってコードされ得る。
単一の核酸が、単一のポリペプチド鎖を含むＩＬ１０アゴニスト、２つ以上のポリペプチド鎖を含むＩＬ１０アゴニスト、または２つを上回るポリペプチド鎖を含むＩＬ１０アゴニストの一部をコードすることができる（例えば、単一の核酸が、３つ、４つもしくはそれ以上のポリペプチド鎖を含むＩＬ１０アゴニストの２つのポリペプチド鎖、または４つ以上のポリペプチド鎖を含むＩＬ１０アゴニストの３つのポリペプチド鎖をコードすることができる）。発現を別々に制御するために、２つ以上のポリペプチド鎖をコードするオープンリーディングフレームを別々の転写調節エレメント（例えば、プロモーターおよび／またはエンハンサー）の制御下に置く。また、２つ以上のポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを、同一の転写調節エレメントによって制御することもでき、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離することで、別々のポリペプチドへの翻訳が可能になる。
一部の実施形態では、２つ以上のポリペプチド鎖を含むＩＬ１０アゴニストは、２つ以上の核酸によってコードされる。ＩＬ１０アゴニストをコードする核酸の数は、ＩＬ１０アゴニストにおけるポリペプチド鎖の数と等しいか、またはそれ未満である（例えば、複数のポリペプチド鎖が単一の核酸によってコードされる場合）。
本開示の核酸は、ＤＮＡまたはＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）であり得る。
別の態様では、本開示は、本開示の核酸を含有する宿主細胞およびベクターを提供する。これらの核酸は、以下にさらに詳細に記載されるように、同一の宿主細胞または別々の宿主細胞内に存在する単一のベクターまたは別々のベクター中に存在することができる。
６．８．１．ベクター
本開示は、本願明細書に記載されるＩＬ１０アゴニストまたはＩＬ１０アゴニスト構成要素をコードするヌクレオチド配列、例えば、二量体ＩＬ１０アゴニストのポリペプチド鎖のうちの１つまたは２つを含むベクターを提供する。ベクターには、ウイルス、プラスミド、コスミド、λファージ、または酵母人工染色体（ＹＡＣ）が含まれるが、これらに限定されない。
数多くのベクター系を採用することができる。例えば、あるクラスのベクターは、動物ウイルス、例えば、ウシ乳頭腫ウイルス、ポリオーマウイルス、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、バキュロウイルス、レトロウイルス（ラウス肉腫ウイルス、ＭＭＴＶまたはＭＯＭＬＶ）またはＳＶ４０ウイルスに由来するＤＮＡエレメントを利用する。別のクラスのベクターは、ＲＮＡウイルス、例えば、セムリキ森林ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、フラビウイルスに由来するＲＮＡエレメントを利用する。
さらに、トランスフェクトされた宿主細胞の選択を可能にする１つ以上のマーカーを導入することによって、ＤＮＡが染色体に安定に組み込まれた細胞を選択することができる。マーカーは、例えば、栄養要求性宿主に対する原栄養性（ｐｒｏｔｏｔｒｏｐｙ）、殺生物剤耐性（例えば、抗生物質）、または銅などの重金属に対する耐性を与えることができる。選択マーカー遺伝子は、発現させようとするＤＮＡ配列に直接連結されてもよく、または同時形質転換によって同じ細胞に導入されてもよい。ｍＲＮＡの最適な合成のために、追加のエレメントが必要にあることもある。これらのエレメントには、スプライスシグナルのほか、転写プロモーター、エンハンサー、および終結シグナルが含まれ得る。
構築物を含有する発現ベクターまたはＤＮＡ配列が発現のために調製されれば、その発現ベクターを適切な宿主細胞にトランスフェクトするかまたは導入することができる。これを達成するために、例えば、プロトプラスト融合、リン酸カルシウム沈殿、エレクトロポレーション、レトロウイルス導入、ウイルストランスフェクション、遺伝子銃、脂質ベースのトランスフェクションまたは他の従来の手法などの様々な手法を採用することができる。結果的に得られたトランスフェクト細胞を培養するため、および発現されたポリペプチドを回収するための方法および条件は当業者に公知であり、本記載に基づき、採用される具体的な発現ベクターおよび哺乳動物宿主細胞に応じて変更すること、または最適化することができる。
６．８．２．細胞
本開示は、本開示の核酸を含む宿主細胞も提供する。
一実施形態では、宿主細胞は、本願明細書に記載される１つ以上の核酸を含むように遺伝子操作される。
一実施形態では、宿主細胞は、発現カセットを使用することによって遺伝子操作される。「発現カセット」という語句は、ヌクレオチド配列であって、そのような配列に適合する宿主における遺伝子の発現に影響を及ぼすことができるものを指す。そのようなカセットは、プロモーター、イントロンを有するかまたは有しないオープンリーディングフレーム、および終結シグナルを含み得る。発現に影響を及ぼすために必要であるかまたは役立つ追加の因子、例えば、誘導性プロモーターを使用することもできる。
本開示はまた、本願明細書に記載されるベクターを含む宿主細胞も提供する。
また、哺乳動物細胞における組換え細胞発現の産物であるＩＬ１０アゴニストも提供される。
細胞は、真核細胞、細菌細胞、昆虫細胞、またはヒト細胞であってよいが、これらに限定されない。好適な真核細胞には、ベロ（Ｖｅｒｏ）細胞、ヒーラ（ＨｅＬａ）細胞、ＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＢＨＫ細胞およびＭＤＣＫＩＩ細胞が含まれるが、これらに限定されない。好適な昆虫細胞には、Ｓｆ９細胞が含まれるが、これに限定されない。
６．８．３．生産方法
本開示はまた、本開示のＩＬ１０アゴニストを生産する方法も提供する。
一部の実施形態では、ＩＬ１０アゴニストは、セクション６．８．２に記載された宿主細胞を培養して、宿主細胞によって発現されたＩＬ１０を回収することによって生産される。ある特定の実施形態では、この方法は、ａ）回収されたＩＬ１０アゴニストを、ＩＬ１０アゴニストを捕捉するように構成されたアフィニティーカラムと接触させる工程、ｂ）アフィニティーカラムから溶出させて溶出物を生じさせる工程、ｃ）溶出物に対してサイズ排除クロマトグラフィーを実行する工程も含む。
アフィニティーカラムは、ＩＬ１０アゴニストを捕捉するように構成された任意のアフィニティーカラムであってよい。例えば、アフィニティーカラムには、ＩＬ１０アゴニストのＦｃドメインまたはＩＬ１０部分に特異的に結合する結合分子（例えば、抗体またはアフィニティーリガンド）を含めることができる。一実施形態では、アフィニティーカラムはプロテインＡアフィニティーカラムである。プロテインＡは、ＩｇＧのＦｃ領域に結合する５つの領域を含むアフィニティーリガンドである。これらの領域は、しばしばセファロース（登録商標）とカップリングされており、自由にＩｇＧ Ｆｃと結合することができ、カップリングされたプロテインＡの１分子が、ＩｇＧの少なくとも２分子と結合することができる。別の実施形態では、アフィニティーカラムは、ＩＬ１０アゴニストのＩＬ１０部分に特異的および可逆的に結合し得るＩＬ１０抗体を含む。
ひとたびアフィニティーカラムに結合すると、捕捉されたＩＬ１０アゴニストは溶出緩衝液で溶出されて、ＩＬ１０アゴニストを含む溶出液が生じる。多くの溶出緩衝液が当技術分野で公知であり、適切な緩衝液を当業者が選択することができる。一部の実施形態では、溶出緩衝液は、Ｐｉｅｒｃｅ（商標）Ｇｅｎｔｌｅ溶出緩衝液（ｐＨ６．６）である。
次いで、ＩＬ１０アゴニストを含む溶出液をサイズ排除クロマトグラフィーに供して、凝集物を形成しないＩＬ１０アゴニストを単離して精製する。多くのサイズ排除クロマトグラフィー法およびカラムが当技術分野で公知である。当業者は、適切なサイズ排除クロマトグラフィー法および／またはカラムを選択することができる。一部の実施形態では、サイズ排除超高性能液体クロマトグラフィーが使用される。特定の一実施形態では、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ（登録商標）２００、２６／６００ｐｇカラム（ミリポアシグマ社（ＭｉｌｌｉｐｏｒｅＳｉｇｍａ）［米国ミズーリ州セントルイス（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ）所在］）が使用される。
一部の実施形態では、アフィニティークロマトグラフィー後のＩＬ１０を含む溶出緩衝液を、溶出したＩＬ１０アゴニストをサイズ排除クロマトグラフィーに通す前に、別の緩衝液と交換する。これは、当技術分野で公知の方法、例えば、透析によって達成することができる。サイズ排除クロマトグラフィーのカラムが特定の緩衝液の使用を必要とする場合、緩衝液の交換が必要となることがある。一実施形態では、サイズ排除クロマトグラフィーを実行する前に、溶出緩衝液（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ（商標）Ｇｅｎｔｌｅ）をＰＢＳ＋５％グリセロールに交換する。
本開示の恩恵により、当業者は、ある定位（すなわち、ＩＬ１０部分がＮ末端にあるかＣ末端にあるか）、リンカー長、および精製方法を有するＩＬ１０アゴニスト構築物を選択することで、所望のＩＬ１０アゴニストを実現することができる。一部の実施形態では、所望のＩＬ１０アゴニストは凝集が最小限であり、構築物のＮ末端および／またはＣ末端で短縮されていない。ある特定の実施形態では、ＩＬ１０アゴニストは、ＦｃドメインのＣ末端にあるＩＬ１０部分、Ｇ４Ｓ（配列番号５１）の１回、２回または３回の反復であるリンカーを含み、サイズ排除クロマトグラフィーを含む工程を使用して精製される。
生産の後に、本開示のＩＬ１０アゴニストは、例えば、セクション６．９に記載されているように、医薬組成物として製剤化することができる。
６．９．医薬組成物
６．９．１．ＩＬ１０アゴニストポリペプチドを含む医薬組成物
本開示のＩＬ１０アゴニスト、例えば、セクション６．８．３に記載されている方法によって生産されたＩＬ１０アゴニストは、ＩＬ１０アゴニストと１つ以上の担体、賦形剤および／または希釈剤とを含む組成物の形態で提供することができる。これらの組成物は、特定の用途、例えば、獣医学的用途またはヒトにおける医薬用途のために製剤化することができる。組成物の形態（例えば、乾燥粉末、液体製剤など）ならびに使用される賦形剤、希釈剤および／または担体は、ＩＬ１０アゴニストの意図する用途、および治療用途の場合は投与方法に応じて決まると考えられる。
治療用途のためには、組成物は、薬学的に許容される担体を含む無菌の医薬組成物の一部として供給されてもよい。この組成物は、（それが患者に投与される所望の方法に応じて）任意の好適な形態であり得る。医薬組成物は、経口、経皮、皮下、鼻腔内、静脈内、筋肉内、腫瘍内、髄腔内、局所または局部などの様々な経路で患者に投与することができる。いかなる場合にも、投与の最も好適な経路は、特定の抗体、対象、疾患の性質および重症度、対象の身体状態に依存すると考えられる。典型的には、医薬組成物は静脈内または皮下に投与されると考えられる。
医薬組成物は、１回の投与あたりの本開示のＩＬ１０アゴニストの所定の量を含有する単位剤形で提示されることが好都合であり得る。単位用量に含まれるＩＬ１０アゴニストの量は、治療される疾患のほか、当技術分野で公知の他の要因に依存すると考えられる。そのような単位用量は、単回投与に好適な量のＩＬ１０アゴニストを含有する凍結乾燥粉末の形態であってもよく、または液体の形態にあってもよい。乾燥粉末単位剤形は、シリンジ、適量の希釈剤および／または投与に有用な他の成分とともにキットにパッケージ化されてもよい。液体の形態にある単位投与量は、単回投与に好適な量のＩＬ１０アゴニストをあらかじめ充填したシリンジの形態で好都合に供給することができる。
一部の実施形態では、本開示の医薬組成物は、少なくとも５ｍｇ、少なくとも１０ｍｇ、少なくとも２０ｍｇ、または少なくとも５０ｍｇのＩＬ１０アゴニストを含む。
特定の実施形態では、本開示の医薬組成物は、完全長ＩＬ１０アゴニストのみ、またはほとんど完全長ＩＬ１０アゴニストのみを含む。例えば、一部の実施形態では、医薬組成物は、検出可能な量のＩＬ１０アゴニストのＣ末端短縮バリアントおよび／または検出可能な量のＩＬ１０アゴニストのＮ末端短縮バリアントを含まない。本願明細書に規定されるように、ＩＬ１０部分をＦｃドメインのＮ末端に配置すると、組換え発現されたＩＬ１０アゴニストのＮ末端および／またはＣ末端の短縮がもたらされるおそれがある。
一部の実施形態では、本開示の医薬組成物は、ＩＬ１０アゴニスト凝集物を最小限しか、または全く含まない。本願明細書に規定されるように、サイズ排除クロマトグラフィーを使用して、非凝集性のＩＬ１０アゴニストを生産することができる。一部の実施形態では、医薬組成物は、サイズ排除超高性能液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＵＰＬＣ）による決定で、凝集物の形態で存在するＩＬ１０アゴニストを３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、または５％未満しか含まない。一部の実施形態では、医薬組成物は、サイズ排除超高性能液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＵＰＬＣ）による決定で、検出可能な量のＩＬ１０アゴニストの凝集物を含まない。
また、複数回の投与に好適な量のＩＬ１０アゴニストを含有する医薬組成物を一括して供給することもできる。
医薬組成物は、所望の純度を有するＩＬ１０アゴニストを、当技術分野で典型的に使用される任意選択的な薬学的に許容される担体、賦形剤または安定化剤（これらはすべて、本願明細書では「担体」と称される）、すなわち、緩衝剤、安定化剤、保存剤、等張化剤、非イオン性界面活性剤、抗酸化剤、および他の様々な添加剤と混合することによって、凍結乾燥製剤または水溶液として貯蔵用に調製することができる。レミントン薬学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、第１６版（オソル（Ｏｓｏｌ）編、１９８０）を参照。そのような添加剤は、使用される用量および濃度でレシピエントに対して無毒性であるべきである。
緩衝剤は、ｐＨを生理的条件に近い範囲に維持するのに役立つ。それらは多種多様な濃度で存在し得るが、典型的には約２ｍＭから約５０ｍＭの範囲の濃度で存在する。本開示とともに使用するのに好適な緩衝剤には、有機酸および無機酸の両方とそれらの塩、例えば、クエン酸緩衝液（例えば、クエン酸一ナトリウム－クエン酸二ナトリウム混合物、クエン酸－クエン酸三ナトリウム混合物、クエン酸－クエン酸一ナトリウム混合物など）、コハク酸緩衝液（例えば、コハク酸－コハク酸一ナトリウム混合物、コハク酸－水酸化ナトリウム混合物、コハク酸－コハク酸二ナトリウム混合物など）、酒石酸緩衝液（例えば、酒石酸－酒石酸ナトリウム混合物、酒石酸－酒石酸カリウム混合物、酒石酸－水酸化ナトリウム混合物など）、フマル酸緩衝液（例えば、フマル酸－フマル酸一ナトリウム混合物、フマル酸－フマル酸二ナトリウム混合物、フマル酸一ナトリウム－フマル酸二ナトリウム混合物など）、グルコン酸緩衝液（例えば、グルコン酸－グリコン酸ナトリウム混合物、グルコン酸－水酸化ナトリウム混合物、グルコン酸－グルコン酸カリウム混合物など）、シュウ酸緩衝液（例えば、シュウ酸－シュウ酸ナトリウム混合物、シュウ酸－水酸化ナトリウム混合物、シュウ酸－シュウ酸カリウム混合物など）、乳酸緩衝液（例えば、乳酸－乳酸ナトリウム混合物、乳酸－水酸化ナトリウム混合物、乳酸－乳酸カリウム混合物など）、酢酸緩衝液（例えば、酢酸－酢酸ナトリウム混合物、酢酸－水酸化ナトリウム混合物など）が含まれる。さらに、リン酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、およびトリメチルアミン塩、例えば、トリス（Ｔｒｉｓ）も使用し得る。
微生物の増殖を遅らせるために保存剤を添加してもよく、約０．２％～１％（ｗ／ｖ）の範囲で添加することができる。本開示とともに使用するのに好適な保存剤には、フェノール、ベンジルアルコール、メタクレゾール、メチルパラベン、プロピルパラベン、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム塩化物、ベンザルコニウムハライド（例えば、塩化物、臭化物、ヨウ化物など）、ヘキサメトニウム塩化物、およびアルキルパラベン、例えば、メチルまたはプロピルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、ならびに３－ペンタノールが含まれる。「安定化剤」として知られることもある等張化剤は、本開示の液体組成物の等張性を確保するために加えることができ、これには多価糖アルコール、例えば、グリセリン、エリスリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトールおよびマンニトールなどの３価以上の糖アルコールが含まれる。安定化剤は、増量剤から、治療薬を可溶化する添加剤、または変性もしくは容器壁への付着を防ぐのに役立つ添加剤まで、機能の点で様々であり得る賦形剤の幅広いカテゴリーを指す。典型的な安定化剤は、多価糖アルコール（上記に列挙されている）；アミノ酸、例えば、アルギニン、リジン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アラニン、オルニチン、Ｌ－ロイシン、２－フェニルアラニン、グルタミン酸、トレオニンなど；有機糖または糖アルコール、例えば、ラクトース、トレハロース、スタキオース、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、リビトール、ｍｙｏ－イニシトール、ガラクチトール、グリセロールなど。イノシトールなどのシクリトールも含まれる；ポリエチレングリコール；アミノ酸ポリマー；硫黄含有還元剤、例えば、尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、α－モノチオグリセロールおよび硫酸チオ硫酸ナトリウム；低分子量ポリペプチド（例えば、１０残基以下のペプチド）；タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン、キシロース、マンノース、フルクトース、グルコースなどの単糖類、ラクトース、マルトース、スクロースおよびトレハロースなどの二糖類、ラフィノースなどの三糖類；ならびに多糖類、例えば、デキストランであってもよい。安定化剤は、ＩＬ１０アゴニストの重量あたり０．５～１０％重量の範囲にわたる量で存在してよい。
非イオン性表面活性物質または界面活性剤（「湿潤剤」としても知られる）を添加して、治療剤の可溶化を助けるとともに、撹拌により誘発される凝集から糖タンパク質を保護することができ、これにより、タンパク質の変性を引き起こすことなく、応力が加えられた剪断表面に製剤を曝露させることができる。好適な非イオン性表面活性物質としては、ポリソルベート（２０、８０など）、ポリオキサマー（１８４、１８８など）、およびプルロニック（登録商標）ポリオールが挙げられる。非イオン性表面活性物質は、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約１．０ｍｇ／ｍＬの範囲で、または約０．０７ｍｇ／ｍＬ～約０．２ｍｇ／ｍＬの範囲で存在することができる。
そのほかの各種の賦形剤としては、増量剤（例えば、デンプン）、キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）、酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸、メチオニン、ビタミンＥ）、および共溶媒が挙げられる。
６．９．２．ＩＬ１０アゴニストをコードする核酸の送達のための医薬組成物
本開示のＩＬ１０アゴニストは、遺伝子治療のために有用な任意の方法によって、例えば、ｍＲＮＡとして、または好適なプロモーターの制御下でＩＬ１０アゴニストをコードするウイルスベクターを介して送達することができる。
例示的な遺伝子治療ベクターとしては、アデノウイルスまたはＡＡＶを基にした治療薬が含まれる。本願明細書における方法、使用または組成物に使用するための、アデノウイルスを基にした、またはＡＡＶを基にした治療薬の非限定的な例としては、例えば、以下のものが挙げられる：ｒＡｄ－ｐ５３、これは野生型ヒト腫瘍抑制タンパク質ｐ５３をコードする組換えアデノウイルスベクターであり、例えば、がんの治療に使用される（Ｇｅｎｄｉｃｉｎｅ（登録商標）、Ｇｅｎｋａｘｉｎ（登録商標）としても知られる。キ（Ｑｉ）ら、２００６、Ｍｏｄｅｒｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、１４：１２９５－１２９７）；Ａｄ５＿ｄ１１５２０、これは宿主ｐ５３を不活性化するＥ１Ｂ遺伝子を欠くアデノウイルスである（Ｈ１０１またはＯＮＹＸ－０１５とも称される；例えば、ラッセル（Ｒｕｓｓｅｌｌ）ら、２０１２、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、３０：６５８－６７０を参照）；ＡＤ５－Ｄ２４－ＧＭ－ＣＳＦ、これはサイトカインＧＭ－ＣＳＦを含むアデノウイルスであり、がんの治療に使用される（セルロー（Ｃｅｒｕｌｌｏ）ら、２０１０、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、７０：４２９７）；ｒＡｄ－ＨＳＶｔｋ、これはＨＳＶチミジンキナーゼ遺伝子を有する複製欠損アデノウイルスであり、例えば、がんの治療用である（Ｃｅｒｅｐｒｏ（登録商標）として開発、アーク・セラピューティクス社（Ａｒｋ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）。例えば、米国特許第６，５７９，８５５号明細書を参照；アドバンタジーン社（Ａｄｖａｎｔａｇｅｎｅ）によりＰｒｏｓｔＡｔａｋ（商標）として開発；国際公開第ＷＯ２００５／０４９０９４号）；ｒＡｄ－ＴＮＦα、これは化学放射線誘導性ＥＧＲ－１プロモーターの制御下でヒト腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）を発現する複製欠損アデノウイルスベクターであり、例えば、がん治療用である（ＴＮＦｅｒａｄｅ（商標）、ジェンベク社（ＧｅｎＶｅｃ）；ラスムッセン（Ｒａｓｍｕｓｓｅｎ）ら、２００２、Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．、９：９５１－７；Ａｄ－ＩＦＮβ、これはサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の前初期プロモーターの指令下でヒトインターフェロンβ遺伝子を発現する、Ｅ１およびＥ３遺伝子が欠失したアデノウイルス血清型５ベクターであり、例えば、がん治療用である（ＢＧ００００１およびＨ５．１１０ＣＭＶｈＩＦＮ－β、バイオジェン社（Ｂｉｏｇｅｎ）；ステルマン（Ｓｔｅｒｍａｎ）ら、２０１０、Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．、１８：８５２－８６０）。
核酸分子（例えば、ｍＲＮＡ）またはウイルスは、医薬組成物の唯一の医薬活性成分として製剤化することも、または治療される特定の障害のための他の活性薬剤と組み合わせることもできる。任意選択で、他の薬剤、医薬品、担体、アジュバント、希釈剤を、本願明細書に提供される組成物に含めることができる。例えば、湿潤剤、乳化剤および潤滑剤、例えば、ラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウム、ならびに着色剤、放出剤、コーティング剤、甘味料、香味料および芳香剤、保存剤、酸化防止剤、キレート剤ならびに不活性ガスのうちのいずれか１つ以上を組成物中に含めることができる。組成物に含めることができる例示的な他の薬剤および賦形剤としては、例えば、水溶性酸化防止剤、例えば、アスコルビン酸、塩酸システイン、硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム；油溶性酸化防止剤、例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、α－トコフェロール；金属キレート剤、例えば、クエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸が挙げられる。
養子細胞移植療法、例えば、セクション６．１１．１に記載されているＣＡＲ発現細胞療法に対するアジュバント療法として使用される場合、細胞療法、例えば、ＣＡＲ発現細胞を、本開示のＩＬ１０アゴニストを発現するように操作することができる。ＩＬ１０アゴニストを、特定のゲノム座位、例えば、内因性ＩＬ１０座位、または活性化性もしくは機能不全のリンパ球で活性である別の座位、例えば、ＰＤ－１座位、または非特異的なゲノム座位に挿入された別の座位に標的化することができる。特定のゲノム座位への標的化は、例えば、ジンクフィンガータンパク質、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９システムなどを使用する遺伝子編集によって達成することができる。
６．１０．治療適応および治療方法
本開示のＩＬ１０アゴニストは、ＩＬ１０によって治療可能な状態、例えば、炎症関連および免疫関連障害、線維性障害、がんおよびがん関連障害、または心血管障害（例えば、アテローム性動脈硬化症）の治療に有用である。
特定の実施形態では、本開示のＩＬ１０アゴニストによって治療される状態は、自己免疫、移植拒絶反応、外傷後免疫応答、感染症、または移植片対宿主病である。特定の実施形態では、これらの状態は、自己免疫疾患、臓器または骨髄移植の拒絶反応、移植片対宿主病、寄生虫感染、肉芽腫、クローン病、大腸炎、膵炎、炎症性肺、アレルギー状態、喘息、アトピー性皮膚炎、または鼻炎である。
他の実施形態では、治療しようとする疾患は、増殖性障害、好ましくはがん、例えば、固形腫瘍である。がんの非限定的な例としては、膀胱がん、脳悪性腫瘍、頭頸部がん、膵臓がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、子宮体がん、子宮頸がん、子宮内膜がん、食道がん、結腸がん、結腸直腸がん、直腸がん、胃がん、前立腺がん、血液がん、皮膚がん、扁平上皮がん、骨がん、および腎臓がんが挙げられる。本開示のＩＬ１０アゴニストを使用して治療できる他の細胞増殖性障害には、腹部、骨、乳房、消化器系、肝臓、膵臓、腹膜、内分泌腺（副腎、副甲状腺、下垂体、精巣、卵巣、胸腺、甲状腺）、眼、頭頸部、神経系（中枢および末梢）、リンパ系、骨盤、皮膚、軟部組織、脾臓、胸部領域、および尿生殖器系に位置する腫瘍が含まれるが、これらに限定されない。前がん状態または病変、およびがん転移も含まれる。ある特定の実施形態では、がんは、腎細胞がん、皮膚がん、肺がん、大腸がん、乳がん、脳悪性腫瘍、頭頸部がんからなる群から選択される。同様に、他の細胞増殖性障害を本開示のＩＬ１０アゴニストによって治療することもできる。そのような細胞増殖性障害の例としては、高ガンマグロブリン血症、リンパ増殖性障害、パラプロテイン血症、紫斑病、サルコイドーシス、セザリー症候群、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症（Ｗａｌｄｅｎｓｔｒｏｎ’ｓ ｍａｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎｅｍｉａ）、ゴーシェ病、組織球症、および上記に挙げた臓器系に位置する腫瘍のほかのあらゆる細胞増殖性障害が挙げられるが、これらに限定されない。
一部の実施形態では、治療しようとする疾患は、抗ＰＤ１抗体による治療に抵抗性である。一部の実施形態では、治療しようとする疾患は、抗ＰＤ１抗体による単剤療法による治療に抵抗性である。ＰＤ１／ＰＤ－Ｌ１チェックポイントの遮断は、いくつかの悪性腫瘍の有効な治療法であることが証明されているが、患者のかなりの割合では有効でなく、一部の初期反応者では抵抗性が生じ、疾患の再発を伴う（ノヴィッキ（Ｎｏｗｉｃｋｉ）ら、２０１８、Ｃａｎｃｅｒ Ｊ．、２４（１）：４７－５３）。抗ＰＤ１抗体による治療に対する抵抗性は、原発性または獲得性であり得る。ＰＤ１阻害に対する原発性抵抗性および獲得性抵抗性を招く機序はいずれも当技術分野で公知であり、ＰＤ１阻害に抵抗性である悪性腫瘍を同定する方法についても同様である。例えば、上記のノヴィッキ（Ｎｏｗｉｃｋｉ）ら；シャーゴールド（Ｓｈｅｒｇｏｌｄ）ら、２０１９、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１４５：２０４２５８；およびファレス（Ｆａｒｅｓ）ら、２０１９、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎａｌ Ｂｏｏｋ、３９：１４７－１６４を参照。
本開示のＩＬ１０アゴニストは、一般に、意図した目的を達成するために有効な量で使用されると考えられる。疾病状態を治療または予防するために使用される場合、本開示のＩＬ１０アゴニスト、またはその医薬組成物は、治療有効量で投与または適用される。治療有効量の決定は、特に本願明細書に提供される詳細な開示に照らせば、十分に当業者の能力の範囲内にある。多くの場合に、ＩＬ１０アゴニストによる治療が、治癒をもたらすわけではなく、部分的な利益を与えるに過ぎないと考えられることを、当業者は容易に認識し得る。一部の実施形態では、何らかの利益を有する生理的変化も、治療的に有益であると見なされる。したがって、「有効量」または「治療有効量」という用語は、部分的な利益を与える投与量または投薬レジメンを範囲に含む。
一部の実施形態では、本開示のＩＬ１０アゴニスト、またはその医薬組成物は、好適な対照に比して、固形腫瘍のＣＤ８ Ｔ細胞の密度を増加させるのに十分な量で投与または適用される（セクション７．７および図１８Ａ～図１８Ｂを参照）。本開示のＩＬ１０アゴニスト、またはその医薬組成物は、固形腫瘍におけるＣＤ４５＋免疫細胞浸潤を増加させる量で投与または適用することができる。ＣＤ４５＋免疫細胞には、例えば、ＣＤ４ Ｔ細胞および骨髄系細胞が含まれる。さらに、本開示のＩＬ１０アゴニスト、またはその医薬組成物は、好適な対照に比して、血清ＩＬ１２および／またはＩＬ４の発現をアップレギュレートさせるのに十分な量で投与または適用することができる（セクション７．７および図２１Ａ～図２１Ｂを参照）。ある特定の態様では、本開示のＩＬ１０アゴニスト、またはその医薬組成物は、対照に比して、ＩＬ－１２血清レベルを少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも２５倍、または少なくとも３０倍にアップレギュレートさせることができる（図２１Ａ）。さらなる態様では、本開示のＩＬ１０アゴニスト、またはその医薬組成物は、対照に比して、ＩＬ－４血清レベルを少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、または少なくとも２０倍にアップレギュレートさせることができる（図２１Ａ）。
ＩＬ１２および／またはＩＬ４の基準値またはベースライン値の決定のための好適な対照試料は、本開示のＩＬ１０アゴニストまたはその医薬組成物によって治療される個体と同じ疾病状態を有する個人に由来し得る。対照試料は、本開示のＩＬ１０アゴニストまたはその医薬組成物による治療を受けている対象と一致する年齢であり得る。基準値またはベースライン値は、好適な個体または好適な個体の集団から得て、複数の分析のための一般的な基準値として使用することができる。あるいは、対照試料はＩＬ１０アゴニスト療法の開始前の対象自身の値に基づくこともできる。好適な対照を同定および選択することは、当業者の通常の技能の範囲内である。
治療を必要とする対象、患者、または個体は、典型的には哺乳動物、より詳細にはヒトである。疾患の予防または治療のための、本開示のＩＬ１０アゴニストの適切な用量（単独で、または１つ以上の他の追加の治療薬と組み合わせて使用される場合）は、治療しようとする疾患の種類、投与経路、患者の体重、特定のＩＬ１０アゴニスト、疾患の重症度および経過、抗体が予防目的で投与されるかまたは治療目的で投与されるか、以前または同時の治療介入、患者の病歴およびＩＬ１０アゴニストに対する応答、ならびに主治医の裁量に依存すると考えられる。投与を担当する医師は、いかなる場合でも、組成物中の活性成分の濃度および個々の対象に適切な用量を決定すると考えられる。単回投与または様々な時点にわたる複数回の投与、ボーラス投与、およびパルス注入を含むがこれらに限定されない、様々な投薬スケジュールを、本願明細書では想定している。
非コンジュゲート型ＩＬ１０の単回投与は、約５０，０００ ＩＵ／ｋｇから約１，０００，０００ＩＵ／ｋｇまたはそれ以上、より典型的には約６００，０００ ＩＵ／ｋｇまでのＩＬ１０の範囲にわたり得る。これを１日に数回（例えば、２～３回）、数日間（例えば、連続約３～５日間）繰り返した後、休息期間（例えば、約７～１４日間）の後に、１回以上繰り返してもよい。したがって、治療有効量は、単回投与のみの場合もあれば、一定期間にわたる多数の投与で構成される場合もある（例えば、約６００，０００ ＩＵ／ｋｇのＩＬ１０の約１０～２０日の期間にわたる約２０～３０回の個々の投与）。
同様に、ＩＬ１０アゴニストは、患者に一度に、または一連の治療にわたって好適に投与される。疾患の種類および重症度に応じて、例えば、１回以上の別々の投与によるか、または持続注入によるかにかかわらず、約１μｇ／ｋｇ～１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ）のＩＬ１０アゴニストが、患者への投与の初期候補用量となり得る。１つの典型的な１日投与量は、上記に言及した要因に応じて、約１μｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上の範囲にわたり得る。数日以上にわたる反復投与については、状態に応じて、治療は一般に、疾患症状の所望の抑制が得られるまで継続されると考えられる。ＩＬ１０アゴニストの１つの例示的な投与量は、約０．００５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であると考えられる。他の非限定的な例では、１回の用量は、約１μｇ／ｋｇ／体重、約５μｇ／ｋｇ／体重、約１０μｇ／ｋｇ／体重、約５０μｇ／ｋｇ／体重、約１００μｇ／ｋｇ／体重、約２００μｇ／ｋｇ／体重、約３５０μｇ／ｋｇ／体重、約５００μｇ／ｋｇ／体重、約１ｍｇ／ｋｇ／体重、約５ｍｇ／ｋｇ／体重、約１０ｍｇ／ｋｇ／体重、約５０ｍｇ／ｋｇ／体重、約１００ｍｇ／ｋｇ／体重、約２００ｍｇ／ｋｇ／体重、約３５０ｍｇ／ｋｇ／体重、約５００ｍｇ／ｋｇ／体重から、約１０００ｍｇ／ｋｇ／体重またはそれ以上まで、およびその中に導き出せる任意の範囲で構成されると考えられる。本願明細書に挙げた数値から導き出せる範囲の非限定的な例では、上記の数値に基づき、約５ｍｇ／ｋｇ／体重～約１００ｍｇ／ｋｇ／体重、約５μｇ／ｋｇ／体重～約５００ｍｇ／ｋｇ／体重などの範囲を投与することができる。したがって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ（またはそれらの任意の組合せ）の１回以上の用量を患者に投与することができる。そのような用量は、例えば、１週間ごとまたは３週間ごとに間欠的に投与することができる（例えば、患者は約２回から約２０回、または例えば、約６回のＩＬ－１０アゴニストの用量を受ける）。初期の高負荷用量の後に、１回以上のより低用量が投与され得る。しかし、他の投薬レジメンも有用であり得る。この治療法の進行は、従来技術およびアッセイによって容易にモニターされる。
全身投与の場合、治療有効量は、細胞培養アッセイなどのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイから最初に推定することができる。次いで、動物モデルにおいて、細胞培養で決定されたＥＣ５０を含む循環濃度範囲を達成するための用量を設定することができる。そのような情報を使用することで、ヒトにおける有用な用量をより正確に決定することができる。
初期投与量を、当技術分野で公知の技術を使用して、ｉｎ ｖｉｖｏデータ、例えば、動物モデルから推定することもできる。当業者は、動物データに基づいてヒトへの投与を容易に最適化し得ると考えられる。
投与量および投与間隔は、治療効果を維持するのに十分なＩＬ１０アゴニストの血漿中濃度を得るために、個別に調整され得る。注射による投与のための通常の患者への投与量は、約０．１から５０ｍｇ／ｋｇ／日、典型的には約０．５から１ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。治療上有効な血漿レベルは、複数用量を毎日投与することによって達成され得る。血漿中のレベルは、例えば、ＥＬＩＳＡ ＨＰＬＣによって測定することができる。
局所投与または選択的取込みの場合、ＩＬ１０アゴニストの有効な局所濃度は血漿中濃度と関連しない場合がある。当業者は、過度の実験を行うことなく、治療上有効な局所投与量を最適化し得ると考えられる。
本願明細書に記載されるＩＬ１０アゴニストの治療有効用量は一般に、実質的な毒性を引き起こすことなく治療上の利益を提供すると考えられる。ＩＬ１０アゴニストの毒性および治療効力は、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的手順によって決定することができる（例えば、実施例８および実施例９を参照）。細胞培養アッセイおよび動物試験を使用して、ＬＤ５０（集団の５０％で致死性である用量）およびＥＤ５０（集団の５０％で治療上有効である用量）を決定することができる。毒性作用と治療効果との間の用量比は治療指数であり、これは比ＬＤ５０／ＥＤ５０として表すことができる。高い治療指数を示すＩＬ１０アゴニストが好ましい。一実施形態では、本開示によるＩＬ１０アゴニストは高い治療指数を示す。細胞培養アッセイおよび動物試験から得られたデータを、ヒトにおける使用に好適な投与量の範囲の設定に使用することができる。投与量は、毒性がほとんどまたは全くないＥＤ５０を含む循環濃度の範囲内であることが好ましい。投与量は、様々な要因、例えば、採用される剤形、利用される投与経路、対象の状態などに応じて、この範囲内で変わり得る。正確な製剤、投与経路および投与量は、患者の状態を考慮して個々の医師によって選択され得る。（例えば、フィングル（Ｆｉｎｇｌ）ら、１９７５、「治療薬の薬理学的基盤（Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）」中、第１章、ｐ．１を参照。これはその全体が本願明細書に援用される）。
本開示のＩＬ１０アゴニストによって治療される患者の主治医は、毒性、臓器機能不全などの場合に、投与をどのようにおよびいつ終了、中断、または調整すべきかを知っているであろう。逆に、主治医はまた、臨床反応が十分でない場合に（毒性を除く）、治療をより高レベルに調整することも知っているであろう。目的の障害の管理における投与量の程度は、治療しようとする状態の重症度および投与経路などによって異なると考えられる。状態の重症度は、例えば、標準的な予後評価法によって一部には評価され得る。さらに、用量およびおそらくは投与頻度は、個々の患者の年齢、体重および反応によっても様々であると考えられる。
６．１１．併用療法
本開示によるＩＬ１０アゴニストを、治療法において１つ以上の他の追加薬剤と組み合わせて投与してもよい。例えば、本開示のＩＬ１０アゴニストを、少なくとも１つの追加の治療薬と同時投与することができる。「治療薬」という用語は、そのような治療を必要とする対象の症状または疾患を治療するために投与される任意の薬剤を範囲に含む。そのような追加の治療薬は、治療される特定の適応症に好適な任意の有効成分、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない補完的な活性を有するものを含み得る。
がんの治療の場合、本開示のＩＬ１０アゴニストは、１つ以上の抗悪性腫瘍薬（例えば、化学療法剤）または抗悪性腫瘍治療様式（ｍｏｄａｌｉｔｉｅｓ）（例えば、放射線照射）と組み合わせて投与することができる。追加の薬剤の実体は、治療される基礎的状態の性質（例えば、膀胱がんの治療には、シスプラチンなどのアルキル化剤の追加が適切な場合がある）に大きく依存する。ＩＬ１０アゴニストと併せて投与される１つ以上の追加の薬剤（例えば、化学療法剤）は、意図した目的に有効な量で投与される。そのような追加の薬剤の有効量は、使用されるＩＬ１０アゴニストの量、障害または治療の種類、および上記に考察した他の要因に応じて決まる。
本ＩＬ１０アゴニストは一般に、本願明細書に記載されるものと同じ投与量および投与経路で、または本願明細書に記載される投与料の約１から９９％で、または経験的／臨床的に適切であると判断された任意の投与量および任意の経路で使用される。
本開示のＩＬ１０アゴニストと組み合わせて使用される化学療法剤の例としては、アルキル化剤、例えば、チオテパおよびシクロホスファミド；アルキルスルホン酸塩、例えば、ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファン；アジリジン、例えば、ベンゾドーパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）、およびウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ）；エチレンイミンおよびメチラメラミン、例えば、アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミドおよびトリメチロールメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｍｅ）；ナイトロジェンマスタード、例えば、クロラムブシル（ｃｈｉｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、塩酸メクロレタミンオキシド、メルファラン、ノベンビシン、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン、トロフォスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソウレア（ｎｉｔｒｏｓｕｒｅａｓ）、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチンおよびラニムスチン；抗生物質、例えば、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリケアミシン、カラビシン、カミノマイシン（ｃａｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、クエラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；抗代謝産物、例えば、メトトレキサートおよび５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）；葉酸類似体、例えば、デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート；プリン類似体、例えば、フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジン類似体、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、５－ＦＵ；アンドロゲン、例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗副腎剤、例えば、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補充物リプレニッシャー、例えば、フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキサート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルチン；ジアジコン；エルフォミチン（ｅｌｆｏｒｍｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダミン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ポドフィリン酸；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ラゾキサン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２”－トリクロロトリエチルアミン；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセルおよびドセタキセル；クロラムブシル；ゲムシタビン；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金および白金配位錯体、例えば、シスプラチンおよびカルボプラチン；ビンブラスチン；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；マイトマイシンＣ；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン；ノバントロン（ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ）；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；ＣＰＴ１１；トポイソメラーゼ阻害剤；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸；エスペラミシン；カペシタビン；ならびに上述のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。また、「化学療法剤」という用語としては、例えば、タモキシフェン、ラロキシフェン、４（５）－イミダゾールを阻害するアロマターゼ、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、オナプリストン、およびトレミフェンを含む、抗エストロゲン剤などの腫瘍に対するホルモン作用を調節または阻害する作用を有する抗ホルモン剤；および抗アンドロゲン剤、例えば、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、およびゴセレリン；ならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体も挙げられる。一部の実施形態では、追加の薬剤は、ＩＬ１２、ＩＮＦαなどのサイトカインもしくはサイトカインアンタゴニスト、または抗上皮増殖因子受容体、放射線療法、腫瘍抗原に対する抗体、モノクローナル抗体と毒素の複合体、Ｔ細胞アジュバント、骨髄移植、または抗原提示細胞（例えば、樹状細胞療法）、抗腫瘍ワクチン、複製可能ウイルス、および例えば、セクション６．１１．１に記載されているＣＡＲＴ細胞を含むが、これらに限定されない、腫瘍性疾患の治療に有用であると当技術分野で特定されている１つ以上の化学的または生物学的薬剤であってもよい。
免疫性および炎症性状態の治療のために、本開示のＩＬ１０アゴニストを、免疫抑制療法または免疫調節療法と組み合わせて使用することができる。免疫抑制療法の非限定的な例としては、免疫抑制性化合物、例えば、シクロスポリンＡ、シクロホスファミド、ＦＫ５０６、タクロリムス、コルチコステロイド、アザチオプリン、ミコフェノール酸モフェチル、シロリムス、ラパマイシン、ラパマイシン類似体、デオキシスパガリン、プレドニゾンが挙げられる。
一部の実施形態では、本開示のＩＬ１０アゴニストを、抗ＰＤ１抗体と組み合わせて使用することができる。本開示のＩＬ１０アゴニストと組み合わせて使用するための抗ＰＤ－１抗体の例としては、ＭＤＸ－１１０６（ニボルマブ）、ＭＫ－３４７５（ペムブロリズマブ）、ＭＥＤＩ－０６８０（ＡＭＰ－５１４）、ＰＤＲ００１、ＲＥＧＮ２８１０、またはＢＧＢ－１０８が挙げられるが、これらに限定されない。
上記のそのような併用療法は、併用投与（２つ以上の治療剤が同一または別々の組成物に含まれる場合）、および別々の投与を範囲に含み、後者の場合、本開示のＩＬ１０アゴニストの投与は、追加の治療剤および／またはアジュバントの投与の前、同時、および／または後に行うことができる。
６．１１．１．ＩＬ１０アゴニスト療法および免疫療法を使用する併用療法
本開示のＩＬ１０アゴニストを、がんまたは自己免疫疾患の治療において、キメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）発現細胞、例えば、ＣＡＲ発現Ｔ（「ＣＡＲ－Ｔ」）細胞、例えば、ＣＡＲ－Ｔと組み合わせて、有利に使用することができる。
前処置（ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ）またはリンパ球枯渇療法（ｌｙｍｐｈｏｄｅｐｌｅｔｉｏｎ ｔｈｅｒａｐｙ）、例えば、シクロホスファミドおよびフルダラビンのレジメンは、ＣＡＲおよびＩＬ１０アゴニスト療法を受けている対象にも投与することができる。そのような治療は通常、ＣＡＲ発現細胞の対象への投与の数日前に行われる。例えば、シクロホスファミドを、ＣＡＲ発現細胞の注入前に２日間、例えば、第－８日および第－７日に投与することができ（注入日をゼロとする）、フルダラビンは第－６日から第－２日まで５日間連続して投与することができる。一実施形態では、６０ｍｇ／ｋｇのシクロホスファミドが対象に投与される。一実施形態では、２５ｍｇ／ｍ２のフルダラビンが対象に投与される。一実施形態では、ＣＡＲ発現細胞が対象に注入される直前の日である第－１日に無治療の日がある。
ＣＡＲ発現細胞は、１０４から１０９個／ｋｇ体重、好ましくは１０５から１０６個／ｋｇ体重の範囲にわたり、そのような範囲内のすべての整数値を含む量で投与することができる。Ｔ細胞組成物を、これらの投与量で複数回投与することもできる。一部の実施形態では、ＣＡＲ発現細胞は、１×１０６から１×１０１１個または１×１０７から１×１０８個の用量で投与される。
ヒト対象への投与の前に、ＣＡＲ発現細胞を、ＩＬ１０の増大と協調して抗ＣＤ３および／または抗ＣＤ２８抗体によって活性化することができる。
ＣＡＲ発現細胞、例えば、Ｔ細胞は、対象に対して自己由来であることが好ましいが、同種由来であってもよい。
一実施形態では、ＩＬ１０アゴニストは、ＣＡＲ発現細胞の集団の投与日から４日間連続してボーラス注入によってヒト対象に投与される。
一実施形態では、ＩＬ１０アゴニストは、ＣＡＲ発現細胞の集団の投与日から少なくとも５日間連続してボーラスによってヒト対象に投与される。
ＩＬ１０アゴニストを、より長期間、例えば、１週間、２週間、１か月間またはそれ以上にわたって投与することができる。投薬頻度は、例えば、ＣＡＲ発現細胞の消耗後に減らすことができる。例えば、ＩＬ１０アゴニストを最初は毎日投与し、その後に投薬頻度を週１回に減らすことができる。
ＩＬ１０療法の開始は、ＣＡＲ発現細胞の投与と同じ日であることもでき、または投与の１、２、３、４、５、６日後もしくは１週後に開始することもできる。
一実施形態では、細胞の集団は、ＣＡＲを組換え発現するように操作された対象から得られたＴ細胞を含む。
一実施形態では、ＩＬ１０アゴニストの血漿レベルは、対象への細胞集団の投与後、１週間から２週間にわたって維持される。
一実施形態では、ＩＬ１０アゴニストの血漿レベルは、対象への細胞集団の投与後、１か月間にわたって維持される。
６．１１．１．１．ＣＡＲの構成要素
典型的なＣＡＲは、抗原結合ドメイン、例えば、抗体の抗原結合ドメインを含む細胞外領域が、抗原結合後にＴ細胞の活性化を誘導するＣＤ３シグナル伝達ドメイン（例えば、Ｔ細胞受容体のＣＤ３ζシグナル伝達領域）を含む細胞内シグナル伝達ブロックと連結されたものを含む。抗原結合ドメインは、セクション６．５．２．１に記載されているように、ｓｃＦｖの形態であり得る。
抗原結合ドメインは、典型的には、リンカー（例えば、セクション６．７に記載されているリンカー）、任意選択的なスペーサー（例えば、セクションに６．１１．１．１．１に記載されている通り）、任意選択的なヒンジ（例えば、６．１１．１．１．２セクションに記載されている通り）、膜貫通ドメイン（例えば、６．１１．１．１．３に記載されている通り）、および細胞内シグナル伝達ブロック（例えば、セクション６．１１．１．１．４に記載されている通り）である。
６．１１．１．１．１．スペーサードメイン
特定の実施形態では、ＣＡＲの抗原結合ドメイン（任意選択的なリンカーが後に続く）の後には、１つ以上の「スペーサードメイン」が続き、これは抗原結合ドメインをエフェクター細胞表面から離れるように移動させて、適切な細胞／細胞接触、抗原結合および活性化を可能にする領域を指す（パテル（Ｐａｔｅｌ）ら、１９９９、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ６：４１２－４１９）。スペーサードメインは、天然、合成、半合成、または組換え供給源のいずれかに由来してよい。ある特定の実施形態では、スペーサードメインは免疫グロブリンの一部分であり、これには１つ以上の重鎖定常領域、例えば、ＣＨ２およびＣＨ３が含まれるが、これらに限定されない。スペーサードメインは、天然に存在する免疫グロブリンヒンジ領域または変更された免疫グロブリンヒンジ領域のアミノ酸配列を含むことができる。
一実施形態では、スペーサードメインは、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４のＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。
６．１１．１．１．２．ヒンジドメイン
ＣＡＲの抗原結合ドメインの後には、一般に、１つ以上の「ヒンジドメイン」が続き（任意選択的なリンカーおよび／またはスペーサーの下流）、これは抗原結合ドメインをエフェクター細胞表面から遠ざけて配置して、適切な細胞／細胞接触、抗原結合および活性化を可能にする役割を果たす。ＣＡＲは一般に、結合ドメインと膜貫通ドメイン（ＴＭ）との間に１つ以上のヒンジドメインを含む。ヒンジドメインは、天然、合成、半合成、または組換え供給源のいずれかに由来してよい。ヒンジドメインは、天然に存在する免疫グロブリンヒンジ領域または変更された免疫グロブリンヒンジ領域のアミノ酸配列を含むことができる。
「変更されたヒンジ領域」は、（ａ）最大３０％のアミノ酸変化（例えば、最大２５％、２０％、１５％、１０％、または５％のアミノ酸置換または欠失）を伴う天然に存在するヒンジ領域、（ｂ）最大３０％のアミノ酸変化（例えば、最大２５％、２０％、１５％、１０％、または５％のアミノ酸置換または欠失）を伴う、長さが少なくとも１０アミノ酸（例えば、少なくとも１２、１３、１４または１５アミノ酸）である天然に存在するヒンジ領域の一部分、または（ｃ）コアヒンジ領域を含む天然に存在するヒンジ領域の一部分（長さが４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４もしくは１５アミノ酸であってよく、または少なくとも４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４もしくは１５アミノ酸であってよい）を指す。ある特定の実施形態では、天然に存在する免疫グロブリンヒンジ領域における１つ以上のシステイン残基が、１つ以上の他のアミノ酸残基（例えば、１つ以上のセリン残基）によって置換されていてもよい。変更された免疫グロブリンヒンジ領域は、代替的または追加的に、別のアミノ酸残基（例えば、セリン残基）によって置換された野生型免疫グロブリンヒンジ領域のプロリン残基を有してもよい。
本願明細書に記載されるＣＡＲにおける使用に好適な他の例示的なヒンジドメインは、１型膜タンパク質、例えば、ＣＤ８α、ＣＤ４、ＣＤ２８およびＣＤ７の細胞外領域に由来するヒンジ領域を含み、それはこれらの分子由来の野生型ヒンジ領域であってもよく、または変更されていてもよい。別の実施形態では、ヒンジドメインはＣＤ８αヒンジ領域を含む。
６．１１．１．１．３．膜貫通（ＴＭ）ドメイン
「膜貫通ドメイン」は、細胞外結合部分と細胞内シグナル伝達ドメインを融合し、ＣＡＲを免疫エフェクター細胞の原形質膜に固定するＣＡＲの部分である。本願明細書で使用される場合、「膜貫通ドメイン」という用語は、細胞膜、好ましくは真核生物の細胞膜（例えば、哺乳動物の細胞膜）において熱力学的に安定である任意のポリペプチド構造を指す。
ＴＭドメインは、天然、合成、半合成、または組換え供給源のいずれかに由来してよい。ＴＭドメインは、Ｔ細胞受容体のα、βまたはζ鎖、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、またはＰＤ１に由来し得る（例えば、少なくともこれらの膜貫通領域を含む）。特定の一実施形態では、ＴＭドメインは合成性であり、主としてロイシンおよびバリンなどの疎水性残基から構成される。
ある特定の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ３ζ膜貫通ドメイン（例えば、ＬＣＹＬＬＤＧＩＬＦＩＹＧＶＩＬＴＡＬＦＬ（配列番号１８）またはＬＤＰＫＬＣＹＬＬＤＧＩＬＦＩＹＧＶＩＬＴＡＬＦＬＲＶＫ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含む膜貫通ドメイン）、ＣＤ２８膜貫通ドメイン（例えば、アミノ酸配列ＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶ（配列番号２０）を含む膜貫通ドメイン）またはＣＤ８α膜貫通ドメイン（例えば、アミノ酸配列ＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡ（配列番号２１）を含む膜貫通ドメイン）を含む。
ＴＭの後には、ＣＡＲのＴＭドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとを連結する、好ましくは長さが１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０アミノ酸である短いリンカーが続くことができる。グリシン－セリンを基にしたリンカー（例えば、セクション６．７によるリンカー）は、特に好適なリンカーとなる。
６．１１．１．１．４．細胞内シグナル伝達ドメイン
ＣＡＲは典型的には、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。「細胞内シグナル伝達ドメイン」は、免疫エフェクター細胞の内部に有効な抗原結合のメッセージを伝達して、エフェクター細胞機能、例えば、ＣＡＲが結合した標的細胞への細胞傷害性因子の放出を含む活性化、サイトカイン産生、増殖および細胞傷害活性、または細胞外ＣＡＲドメインへの抗原結合によって誘発される他の細胞応答を誘発することに関与する、ＣＡＲの一部を指す。
「エフェクター機能」という用語は、免疫エフェクター細胞の特化した機能を指す。Ｔ細胞のエフェクター機能は、例えば、細胞溶解活性、またはサイトカインの分泌を含む援助もしくは活性である。したがって、「細胞内シグナル伝達ドメイン」という用語は、エフェクター機能シグナルを伝達し、細胞に特化した機能を実行するように指示するタンパク質の部分を指す。通常は細胞内シグナル伝達ドメイン全体を採用することができるが、多くの場合、ドメイン全体を使用する必要はない。細胞内シグナル伝達ドメインの短縮された部分が使用される範囲において、そのような短縮された部分を、それがエフェクター機能シグナルを伝達する限り、ドメイン全体の代わりに使用してもよい。細胞内シグナル伝達ドメインという用語は、エフェクター機能シグナルを伝達するのに十分な、細胞内シグナル伝達ドメインの任意の短縮された部分を含むことを意味する。
ＴＣＲ単独を介して生成されるシグナルだけでは、Ｔ細胞の完全な活性化には不十分であり、二次シグナルまたは共刺激シグナルも必要であることが知られている。したがって、Ｔ細胞活性化は、細胞内シグナル伝達ドメインの以下の２つの異なるクラスである、ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体）を介して抗原依存的な一次活性化を惹起する一次シグナル伝達ドメインと、抗原非依存的に作用して二次シグナルまたは共刺激シグナルを与える共刺激シグナル伝達ドメインと、によって媒介されると言うことができる。好ましい実施形態では、本願明細書で想定されるＣＡＲは、１つ以上の「共刺激シグナル伝達ドメイン」および「一次シグナル伝達ドメイン」を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
一次シグナル伝達ドメインは、ＴＣＲ複合体の一次活性化を、刺激するように、または抑制するように調節する。刺激様式で作用する一次シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシン系活性化モチーフまたはＩＴＡＭとして知られるシグナル伝達モチーフを含有していてもよい。
本開示の方法において特に使用される一次シグナル伝達ドメインを含有するＩＴＡＭの具体例としては、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄに由来するものが挙げられる。特定の好ましい実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインおよび１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。細胞内の一次シグナル伝達ドメインおよび共刺激シグナル伝達ドメインは、膜貫通ドメインのカルボキシル末端に任意の順で一列に連結されていてもよい。
本願明細書で想定されるＣＡＲは、ＣＡＲ受容体を発現するＴ細胞の効力および増大を増強するための１つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。本願明細書で使用される場合、「共刺激シグナル伝達ドメイン」または「共刺激ドメイン」という用語は、共刺激分子の細胞内シグナル伝達ドメインを指す。共刺激分子は、抗原受容体またはＦｃ受容体以外の細胞表面分子であり、抗原と結合した際にＴリンパ球の効率的な活性化および機能のために必要な第２のシグナルを提供する。そのような共刺激分子の具体例としては、ＣＡＲＤ１１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７３（ＰＤ－Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＬＡＴ、ＮＫＤ２Ｃ ＳＬＰ７６、ＴＲＩＭ、およびＺＡＰ７０が挙げられる。
一部の実施形態では、ＣＤ３シグナル伝達領域は、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７としても知られる）、ＣＤ７０、もしくはＯＸ４０（ＣＤ１３４としても知られる）の共刺激性エンドドメイン、またはそれらの組合せに連結されているか、または一列になったＣＤ３ζの２つのシグナル伝達ドメインを有する。これらのエンドドメインは、抗原提示細胞（ＡＰＣ）によるＴＣＲ認識時に強固なＴ細胞活性化を可能にし、ＣＡＲ－Ｔ細胞のサイトカイン産生および増殖を改善する。
別の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２８およびＣＤ１３７共刺激シグナル伝達ドメイン、ならびにＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。
さらに別の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２８およびＣＤ１３４共刺激シグナル伝達ドメイン、ならびにＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。
一実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ１３７およびＣＤ１３４共刺激シグナル伝達ドメイン、ならびにＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。
例示的なＣＤ３ζシグナル伝達領域は、以下のアミノ酸配列のうちのいずれかを含むことができる：
Figure 2023525555000008
例示的なＣＤ２８シグナル伝達領域は、以下のアミノ酸配列のうちのいずれかを含むことができる：
Figure 2023525555000009
例示的なＣＤ１３７（４１ＢＢ）シグナル伝達領域は、以下のアミノ酸配列を含むことができる：
Figure 2023525555000010
６．１１．１．１．５．タグ
一部の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＡＲの同定に使用されるタグを含み、例えば、Ｖ５エピトープタグは、パラミクソウイルスであるシミアンウイルス５（ＳＶ５）のＰおよびＶタンパク質上に存在する小さなエピトープ（Ｐｋ）に由来する。Ｖ５タグは通常、１４アミノ酸のすべて（ＧＫＰＩＰＮＰＬＬＧＬＤＳＴ（配列番号２８））とともに使用されるが、より短い９アミノ酸の配列（ＩＰＮＰＬＬＧＬＤ（配列番号２９））とともに使用されることもある。
６．１１．１．１．６．シグナルペプチド
一部の実施形態では、ＣＡＲはシグナルペプチドを含む。シグナルペプチドは、細胞表面でのＣＡＲの発現を促進する。本願明細書に記載されるＣＡＲにおける使用に適合する、天然に存在するタンパク質のシグナルペプチドまたは合成性の非天然のシグナルペプチドを含むシグナルペプチドは、当業者には明らかであると考えられる。一部の実施形態では、シグナルペプチドは、ＣＡＲの抗原結合部分のＮ末端に配置される。Ｔ細胞などの細胞内でＣＡＲが発現およびプロセシングを受けると、シグナルペプチドは切断されるため、これは典型的には成熟分子には存在しない。
６．１１．１．２．ＣＡＲＴ細胞の調製
ｅｘ ｖｉｖｏでＣＡＲＴ細胞を作製するためには、例えば、ウイルス導入によって、細胞内にＣＡＲをコードする核酸を導入する前および／または後に、ＰＢＭＣ、末梢血リンパ球、またはそこから濃縮されたＴ細胞を増大させる（ｅｘｐａｎｄｅｄ）ことができる。
ＣＡＲＴ細胞を作製するために有用なＴ細胞は、例えば、ＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配を介した遠心分離によって、または向流遠心溶出法によって、赤血球を溶解させて単球を枯渇させることによって、末梢血リンパ球から単離することができる。Ｔ細胞の特定の部分集団、例えば、ＣＤ３＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、およびＣＤ４５ＲＯ＋ Ｔ細胞を、陽性または陰性選択手法によってさらに分離することができる。例えば、一実施形態では、Ｔ細胞は、所望のＴ細胞の陽性選択に十分な時間にわたる、抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８（例えば、３ｘ２８）がコンジュゲートされたビーズ、例えば、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ－４５０ ＣＤ３／ＣＤ２８ Ｔとのインキュベーションによって単離される。一実施形態では、その期間は約３０分間である。さらなる一実施形態では、その期間は３０分間から３６時間またはそれ以上までの範囲、およびその間のすべての整数値である。さらなる一実施形態では、その期間は少なくとも１、２、３、４、５、または６時間である。さらに別の好ましい実施形態では、その期間は１０時間から２４時間である。好ましい一実施形態では、インキュベーション期間は２４時間である。白血病患者からのＴ細胞の単離のためには、比較的長いインキュベーション時間、例えば２４時間を使用することにより、細胞の収量を増加させることができる。腫瘍組織または免疫不全個体から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を単離する場合のように、他の細胞型と比較してＴ細胞がわずかしかないあらゆる状況では、Ｔ細胞を単離するために、より長いインキュベーション時間を使用することができる。さらに、より長いインキュベーション時間を使用することにより、ＣＤ８＋ Ｔ細胞の捕捉効率を高めることができる。したがって、Ｔ細胞をＣＤ３／ＣＤ２８ビーズに結合させる時間を単に短くすることもしくは長くすることによって、および／またはＴ細胞に対するビーズの比率を増加もしくは減少させることによって、培養開始時またはプロセス中の他の時点で、Ｔ細胞の部分集団を選好的に選択することまたは除外することができる。加えて、ビーズまたは他の表面に対する抗ＣＤ３および／または抗ＣＤ２８抗体の比率を増加または減少させることによって、培養開始時または他の所望の時点で、Ｔ細胞の部分集団を選好的に選択することまたは除外することができる。当業者は、本開示の文脈において複数回（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｒｏｕｎｄｓ）の選択を使用し得ることを認識しているであろう。ある特定の実施形態では、選択手順を実行し、活性化および増大のプロセスで「選択されていない」細胞を使用することが望ましいことがある。「選択されていない」細胞をさらなる回数の選択に供することもできる。
陰性選択によるＴ細胞集団の濃縮は、陰性選択された細胞に固有の表面マーカーに向けられた抗体の組合せによって達成することができる。１つの方法は、陰性選択された細胞上に存在する細胞表面マーカーに向けられたモノクローナル抗体のカクテルを使用する負性磁気免疫接着またはフローサイトメトリーを介した細胞の選別および／または選択である。例えば、陰性選択によってＣＤ４＋細胞を濃縮するためには、モノクローナル抗体カクテルは、典型的にはＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ－ＤＲおよびＣＤ８に対する抗体を含む。Ｔ ｒｅｇ細胞を、抗Ｃ２５がコンジュゲートされたビーズまたは他の類似の選択方法によって枯渇させることもできる。
ある特定の実施形態では、例えば、セクション６．１１．１．４に記載されている自己免疫疾患の治療に関連する用途の場合、典型的にはＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＧＩＴＲ＋、およびＦｏｘＰ３＋を発現する制御性Ｔ細胞を濃縮するかまたは陽性選択することが好ましい場合がある。Ｔ ｒｅｇを、ＦｏｘＰ３の組換え発現によって誘導することもできる。
所望のＣＡＲを発現させるためのＴ細胞の遺伝子改変の前であれ後であれ、Ｔ細胞を、当技術分野で公知の方法を使用して、例えば、米国特許第７，１４４，５７５号明細書；同第７，０６７，３１８号明細書；同第７，１７２，８６９号明細書；同第７，２３２，５６６号明細書；または同第７，１７５，８４３号明細書に記載されているように、活性化して増大させることができる。
一般に、本開示の方法において有用なＴ細胞は、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体関連シグナルを刺激する薬剤と、Ｔ細胞の表面上の共刺激分子を刺激するリガンドとを付着させた表面との接触によって増大される。特に、Ｔ細胞集団は、表面上に固定化された抗ＣＤ３抗体もしくはその抗原結合断片もしくは抗ＣＤ２抗体と接触させることによって、またはカルシウムイオノフォアとともにプロテインキナーゼＣ活性化剤（例えば、ブリオスタチン）と接触させることによって刺激することができる。Ｔ細胞表面のアクセサリー分子の共刺激には、アクセサリー分子に結合するリガンドが使用される。例えば、Ｔ細胞の増殖を刺激するのに適切な条件下で、Ｔ細胞の集団を、例えば、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８ビーズ上で、抗ＣＤ３抗体および任意選択で抗ＣＤ２８抗体と接触させることができる。
ヒト対象への投与の前に、ＣＡＲ発現細胞を、ＩＬ１２によって前処置することもできる（例えば、本願明細書に援用される、エムタージ（Ｅｍｔａｇｅ）ら、２００３、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、１６（２）：９７－１０６を参照）。
６．１１．１．３．がん免疫療法
したがって、本開示は、がんの治療を必要とするヒト対象におけるがんを治療する方法であって、本開示のＩＬ１０アゴニストの有効量を対象に投与する工程、およびＣＡＲ発現細胞、例えば、ＣＡＲ発現Ｔ細胞（または「ＣＡＲＴ細胞」）を投与する工程を含む方法を提供する。がんの治療のために特に有用なＴ細胞サブタイプは、強固なＣＡＲ媒介細胞傷害性を有するＴ細胞、例えば、ＣＤ３＋ＣＤ８＋ Ｔ細胞であり、これは上記の６．１１．１．２に記載されているように調製することができる。
がんの治療のために、ＣＡＲの細胞外ドメインを、例えば、セクション６．５．１に記載されているように、腫瘍関連抗原に標的化させることができる。ある特定の実施形態では、腫瘍関連抗原は、ＣＤ２０、ＥＧＦＲ、ＦＩＴＣ、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＰＳＭＡ、ＧＤ２、ＥＧＦＲバリアント、ＲＯＲ１、ｃ－Ｍｅｔ、ＨＥＲ２、ＣＥＡ、メソテリン、ＧＭ２、ＣＤ７、ＣＤ１０、ＣＤ３０、ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ４１、ＣＤ４４、ＣＤ７４、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１７１、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ１、ＣＳ１（ＣＤ３１９）、ＩＬ－１３Ｒａ２、ＢＣＭＡ、Ｌｅｗｉｓ Ｙ、ＩｇＧκ鎖、葉酸受容体α、ＰＳＣＡ、またはＥｐＣＡＭである。特定の実施形態では：
・ＣＡＲは、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫を治療するためにＣＤ２２を標的とするように設計される。
・ＣＡＲは、中皮腫、膵がん、卵巣がんなどを治療するためにメソテリンを標的とするように設計される。
・ＣＡＲは、急性骨髄性白血病などを治療するためにＣＤ３３／ＩＬ３Ｒａを標的とするように設計される。
・ＣＡＲは、トリプルネガティブ乳がん、非小細胞肺がんなどを治療するためにｃ－Ｍｅｔを標的とするように設計される。
・ＣＡＲは、前立腺がんなどを治療するためにＰＳＭＡを標的とするように設計される。
・ＣＡＲは、前立腺がんなどを治療するために糖脂質Ｆ７７を標的とするように設計される。
・ＣＡＲは、膠芽腫などを治療するためにＥＧＦＲｖＩＩＩを標的とするように設計される。
・ＣＡＲは、神経芽腫、黒色腫などを治療するためにＧＤ－２を標的とするように設計される。
・ＣＡＲは、骨髄腫、肉腫、黒色腫などを治療するためにＮＹ－ＥＳＯ－１ ＴＣＲを標的とするように設計される。
・ＣＡＲは、骨髄腫、肉腫、黒色腫などを治療するためにＭＡＧＥ Ａ３ ＴＣＲを標的として設計される。
ＣＡＲ－ＩＬ１０アゴニスト併用療法のために特に有用なのは、ＣＡＲを発現するリンパ球細胞の表面に存在する細胞表面抗原を認識する標的化部分を含むＩＬ１０アゴニストである。
６．１１．１．４．自己免疫疾患の免疫療法
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞は、血液がんの強力な治療選択肢となっている。罹患細胞を効率的に標的とするようにＴ細胞を改変するという同じアイデアを使用することにより、科学者らは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードするウイルスベクターのトランスフェクションを介して、所定の抗原特異性を有するＴ細胞を効率的に作り出した。ＭＨＣ非拘束的な様式で操作されたＣＡＲ改変Ｔ細胞には、特に移植および自己免疫に広く応用し得るという利点がある。
自己免疫疾患の治療に使用する場合、ＣＡＲの細胞外ドメインは、自己免疫応答に関連する標的抗原またはリガンドに特異的であることが好ましい。そのような改変により、再方向付けされたＴｒｅｇの炎症部位での活性化が引き起こされ、炎症性エフェクター型免疫応答が抑制される。ＣＡＲ Ｔｒｅｇ療法の標的となる自己免疫疾患の例としては、多発性硬化症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、クローン病、乾癬、Ｉ型糖尿病、シェーグレン病、重症筋無力症（ＭＧ）、橋本甲状腺炎；バセドウ病、およびぶどう膜炎が挙げられる。
特定の実施形態では、ＣＡＲＴ細胞は、以下のものに特異的な抗原もしくはリガンドを標的とするＣＡＲを発現するように操作される：
・炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、ここで抗原もしくはリガンドは、罹患した結腸もしくは回腸で発現されるものである；
・関節リウマチ、ここで抗原もしくはリガンドは、コラーゲンのエピトープもしくは関節に存在する抗原である；
・Ｉ型糖尿病もしくは自己免疫性膵島炎、ここで抗原もしくはリガンドは膵β細胞抗原である；
・多発性硬化症、ここで抗原もしくはリガンドは、例えば、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）抗原、もしくはＭＯＧ－１もしくはＭＯＧ２－２、もしくは神経抗原である；
・自己免疫性甲状腺炎、ここで抗原もしくはリガンドは甲状腺抗原である；
・自己免疫性胃炎、ここで抗原もしくはリガンドは胃抗原である；
・自己免疫性ぶどう膜炎もしくはぶどう膜網膜炎、ここで抗原もしくはリガンドは、Ｓ－抗原もしくは別のブドウ膜抗原もしくは網膜抗原である；
・自己免疫性精巣炎、ここで抗原もしくはリガンドは精巣抗原である；
・自己免疫性卵巣炎、ここで抗原もしくはリガンドは卵巣抗原である；
・乾癬、ここで抗原もしくはリガンドは、ケラチノサイト抗原もしくは真皮もしくは表皮に存在する別の抗原である；
・白斑、ここで抗原もしくはリガンドは、メラニンもしくはチロシナーゼなどのメラノサイト抗原である；
・自己免疫性前立腺炎、ここで抗原もしくはリガンドは前立腺抗原である；
・望ましくないあらゆる免疫応答、ここで抗原もしくはリガンドは、望ましくない応答の部位に存在するＴエフェクター細胞上に発現される活性化抗原もしくは他の抗原である；
・組織拒絶反応、ここで抗原もしくはリガンドは、移植組織に特異的なＭＨＣである；または
・炎症性状態、ここで抗原もしくはリガンドは、炎症に関与する造血系列の非リンパ系細胞上で発現されるものである。
一実施形態では、自己免疫疾患の原因となるＢ細胞を特異的に排除するために、キメラ自己抗原受容体（ＣＡＡＲ）Ｔ細胞を発現するようにＴ細胞を改変することができる。したがって、文脈によって別に指示されない限り、ＣＡＲ発現Ｔ細胞への言及はＣＡＡＲ発現への言及を含む。
７．実施例
７．１．材料および方法
７．１．１．ＩＬ１０アゴニストの生産
以下の表３に列挙したＩＬ１０およびＩＬ１０ムテイン（ＩＬ１０Ｍ＿によって同定される）をコードする構築物、ならびにＦｃ対照を作製した。ＩＬ１０ムテイン構築物には、種々の構成のマウスまたはヒトＩＬ１０、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４ Ｆｃドメイン、およびＧ４Ｓ（配列番号５１）の種々の反復による種々の長さのリンカーが含まれた。
Figure 2023525555000011
Figure 2023525555000012
Figure 2023525555000013
Figure 2023525555000014
Figure 2023525555000015
Figure 2023525555000016
これらの構築物を哺乳動物細胞株において組換え発現させて、精製した。
Figure 2023525555000017
Figure 2023525555000018
Figure 2023525555000019
Figure 2023525555000020
Figure 2023525555000021
Figure 2023525555000022
７．１．２．ＳＴＡＴ３レポーターアッセイ
ＩＬ１０受容体を発現することが以前に報告されている２つの細胞株であるＴＦ－１およびＲａｍｏｓにおいて（タン（Ｔａｎ）ら、１９９３、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．、２６８（２８）：２１０５３－９）、ＩＬ１０およびＩＬ１０ムテインがＳＴＡＴ３を介した転写を活性化する能力を評価するために、ＳＴＡＴ３駆動型のルシフェラーゼに基づくレポーターアッセイを開発した。
７．１．２．１．レポーターＴＦ－１細胞の操作
ＴＦ－１細胞（ＡＴＣＣ，＃ ＣＲＬ－２００３）に対して、ＳＴＡＴ３ルシフェラーゼレポーター構築物（Ｃｉｇｎａｌ ＳＴＡＴ３－Ｌｕｃレンチレポーター、ＳＡバイオサイエンシズ社（ＳＡ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＣＬＳ－６０２８Ｌ－８）を保有するレンチウイルス粒子による形質導入を、５μｇ／ｍＬポリブレンの存在下で行った。ピューロマイシン耐性細胞（ＴＦ－１／ＳＴＡＴ３－Ｌｕｃ）を選択し、ＲＰＭＩ＋１０％ ＦＢＳ＋Ｐ／Ｓ／Ｇ＋２ｎｇ／ｍＬ ＧＭ－ＣＳＦ＋１μｇ／ｍＬピューロマイシン中にて維持した。
７．１．２．２．レポーターＲａｍｏｓ細胞の操作
Ｒａｍｏｓ．２Ｇ６．４Ｃ１０細胞（ＡＴＣＣ，＃ ＣＲＬ－１９２３（ＡＴＣＣ，＃ ＣＲＬ－１９２３））に対して、ＳＴＡＴ３ルシフェラーゼレポーター構築物（Ｃｉｇｎａｌ ＳＴＡＴ３－Ｌｕｃレンチレポーター、ＳＡバイオサイエンシズ社（ＳＡ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＣＬＳ－６０２８Ｌ－８）を保有するレンチウイルス粒子による形質導入を、５μｇ／ｍＬポリブレンの存在下で行った。ピューロマイシン耐性細胞（Ｒａｍｏｓ／ＳＴＡＴ３－Ｌｕｃ）を選択し、ＲＰＭＩ＋１０％ ＦＢＳ＋Ｐ／Ｓ／Ｇ＋１μｇ／ｍＬのピューロマイシン中で維持した。
７．１．２．３．レポーター細胞のＩＬ１０刺激
この実験では、操作されたレポーター細胞を、組換えＩＬ１０またはＩＬ１０ムテインのいずれかを介して刺激する。このサイトカインは、ＩＬ１０受容体サブユニットα（ＩＬ１０Ｒａ）への結合を介してβサブユニット（ＩＬ１０Ｒｂ）を動員し、シグナル伝達複合体の集合を可能にし、ＳＴＡＴ３リン酸化を誘導する（ユーン（Ｙｏｏｎ）ら、２００６、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．、２８１（４６）：３５０８８－９６）。ＳＴＡＴ３のリン酸化はＳＴＡＴ３応答エレメントの転写活性の増強を招き、レポーター遺伝子であるルシフェラーゼの産生を駆動する。
７．１．２．４．ルシフェラーゼアッセイの設定
１０％ ＦＢＳおよびＰ／Ｓ／Ｇを添加したＲＰＭＩ１６４０を、細胞懸濁液および抗体希釈液を調製するためのアッセイ用培地として使用した。
スクリーニングの１日前に、操作されたレポーター細胞を１：３に希釈した。アッセイ当日に細胞を遠心沈殿させ、アッセイ培地中に１×１０６個／ｍＬとして再懸濁させた。ＩＬ１０、ＩＬ１０ムテインおよび対照を１：５に希釈した上で、１００ｎＭから１０ｆＭの範囲で１１段階に希釈し、段階１２は組換えタンパク質を含有しないものとした。５×１０４個のレポーター細胞を９６ウェルの白色平底プレートに添加し、連続希釈したＩＬ１０、ＩＬ１０ムテイン、または対照タンパク質とともにインキュベートした。プレートを３７℃／５％ＣＯ２下で５時間３０分間インキュベートした後、１００μＬのＯＮＥ－Ｇｌｏ（商標）（プロメガ社（Ｐｒｏｍｅｇａ））試薬を添加して細胞を溶解させ、ルシフェラーゼ活性を検出した。放射光をマルチラベルプレートリーダーＥｎｖｉｓｉｏｎ（登録商標）（パーキンエルマー社（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ））で相対光単位（ＲＬＵ）として取得した。連続希釈物はすべて２回ずつ試験した。
ＥＣ５０値の決定について、タンパク質の濃度が最大シグナルより高い場合に用量依存的にシグナルが減少するフック効果を招く箇所は除外した。抗体のＥＣ５０値は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（商標）ソフトウェアを使用して、１２番目の希釈段階が組換えタンパク質を含有しない１２段階用量反応曲線に対する４パラメーターのロジスティック方程式から決定した。誘導倍数（Ｆｏｌｄ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ）は、以下の式を使用して計算した：
Figure 2023525555000023
７．１．３．初代ヒト免疫細胞を使用する細胞ベースアッセイにおけるヒトＩＬ１０ムテインの特性決定
Ｔ細胞活性化の際のＩＬ２、ＴＮＦαおよびＩＦＮγの放出に対するＩＬ１０刺激の影響を評価するために、初代混合型Ｔ細胞／同種ＰＢＭＣの機能アッセイを開発した。
７．１．３．１．ヒト初代ＰＢＭＣの単離
健康ドナーのロイコパック（ドナー１２３）から、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を単離した。ＰＢＭＣの単離は、製造元の推奨プロトコールに従い、５０ｍＬのＳｅｐＭａｔｅ（商標）チューブを使用した密度勾配遠心によって達成した。手短に述べると、ロイコパックをＤ－ＰＢＳで１：２に希釈した上で、その３０ｍｌの層を、５０ｍＬのＳｅｐＭａｔｅ（商標）チューブに添加した１５ｍＬのＦｉｃｏｌｌ（登録商標）の上に重ねた。その後の手順は、ＳｅｐＭａｔｅ（商標）の製造元のプロトコールに従って行った。単離されたＰＢＭＣは、１０％ＤＭＳＯを添加したＦＢＳ中で凍結させた。
７．１．３．２．ヒト初代Ｔ細胞の単離
２人の健康ドナーのロイコパック（ドナー５５００Ｙおよび６９００Ｍ）からＴ細胞を単離した。Ｔ細胞の単離は、ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ（登録商標）ヒトＴ細胞濃縮用カクテル（ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ Ｈｕｍａｎ Ｔ ｃｅｌｌ ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ ｃｏｃｋｔａｉｌ）（ステムセル社（ＳｔｅｍＣｅｌｌ））を、製造元のプロトコールを順守して使用して達成した。Ｔ細胞は、５０ｍＬのＳｅｐＭａｔｅ（商標）チューブを、製造元の推奨プロトコールに従って使用する密度勾配遠心単離によって単離した。単離されたＴ細胞は、１０％ＤＭＳＯを添加したＦＢＳ中に入れた。
７．１．３．３．ＩＬ１０および同種ＰＢＭＣと共培養した初代Ｔ細胞からのサイトカイン放出
この実験では、ＰＢＭＣの増殖を停止させるためにマイトマイシンＣ処理した同種ＰＢＭＣとの３日間の共培養を介して初代Ｔ細胞を刺激する。共培養中にＩＬ１０またはＩＬ１０ムテインのタイトレーション（ｔｉｔｒａｔｉｏｎ）を添加し、それらがＴ細胞活性に及ぼす影響を、均質なノーウォッシュ（ｎｏ ｗａｓｈ）ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）キット（パーキンエルマー社（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）、ＡＬ２０８Ｆ ＡＬ２１７Ｓ ＡＬ２２１Ｆ）を使用して、細胞培養上清中のＩＬ２、ＴＮＦαおよびＩＦＮγの放出を測定することによって決定した。
ドナー５５００Ｙおよび６９００Ｍから以前に単離して凍結させたヒトＴ細胞を、分析当日に、５０ Ｕ／ｍＬのベンゾナーゼヌクレアーゼを含有する刺激培地（１０％ ＦＢＳ、ＨＥＰＥＳ、ＮａＰｙｒ、ＮＥＡＡ、０．０１ｍＭ ＢＭＥを添加したＸ－ＶＩＶＯ（商標）１５細胞培地）中で解凍させた。細胞を１２００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、刺激培地に再懸濁させて、１×１０５個／ウェルの濃度で９６ウェル丸底プレートにプレーティングした。ドナー１２３から以前に単離して凍結させたヒトＰＢＭＣは、分析当日に、５０ Ｕ／ｍＬのベンゾナーゼヌクレアーゼを含有する刺激培地中で解凍させた。細胞を１２００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、５０μｇ／ｍＬのマイトマイシンＣを含有する刺激培地中に１×１０７個／ｍＬの濃度で再懸濁させた。３７℃での１時間のインキュベーションの後に、ＰＢＭＣを２％ ＦＢＳを含有するＤ－ＰＢＳで３回洗浄し、刺激培地中に再懸濁させて、Ｔ細胞をウェルあたり１．５×１０５個の最終濃度で含有するウェルに添加した。その後に、ＩＬ１０、ＩＬ１０ムテインおよび対照を１：５に希釈した上で９段階に希釈し、ＩＬ１０については５００ｎＭから１．２８ｐＭまで、ＩＬ１０ムテインまたは対照抗体については１００ｎＭから０．２５６ｐＭまでの範囲とし、段階１０の希釈物は組換えタンパク質を含有しないものとした。連続希釈したタンパク質をウェルに添加し、プレートを３７℃／５％ＣＯ２下で７２時間インキュベートした。次いで、プレートを遠心分離して細胞をペレット化し、上清５０μＬを収集した。ここから５μＬの上清を採取し、ヒトＩＬ－２、ＴＮＦαおよびＩＦＮγのＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）アッセイを製造業者のプロトコールに従って使用して試験した。測定値はマルチラベルプレートリーダーＥｎｖｉｓｉｏｎ（登録商標）で取得した。アッセイウェル中に放出された各サイトカインのｐｇ／ｍＬを外挿するために、既知の濃度のＩＬ－２、ＴＮＦαおよびＩＦＮγの標準曲線を作成した。連続希釈物はすべて２回ずつ試験した。
サイトカインのＩＣ５０値は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（商標）ソフトウェアを使用して、１０番目の希釈段階が組換えタンパク質を含有しない１０段階用量反応曲線に対する４パラメーターのロジスティック方程式から決定した。阻害率は以下の式を使用して計算した。
Figure 2023525555000024
７．１．４．同系腫瘍同種移植モデルにおけるＩＬ１０ムテインの活性
７．１．４．１．腫瘍の移植および投与群の割り付け
雌性ＢＡＬＢ／ｃマウス（ジャクソン・ラボラトリー社（ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）［米国メイン州バーハーバー（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ）所在］）の皮下に腫瘍細胞を移植した。６週齢から８週齢の雌性ＢＡＬＢ／ｃマウス（ジャクソン・ラボラトリー社（ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）［米国メイン州バーハーバー（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ）所在］）の右脇腹に１×１０６個の腫瘍細胞を皮下移植した。
治療的介入またはアイソタイプ対照の投与を腹腔内に３週間行った。マウスに試験物質を週２回、３週間にわたり腹腔内注射し、腫瘍体積および体重を試験期間を通じて週２回モニタリングした。
７．１．４．２．腫瘍サイズおよび増殖阻害の計算
各群について、平均腫瘍サイズおよび腫瘍サイズの中央値、ならびに対照処置群と比較した腫瘍増殖阻害率を算出した。腫瘍の長さおよび幅をキャリパーで週２回測定し、腫瘍体積を式（長さ×幅２）／２を使用して算出した。測定は、対照群の平均腫瘍サイズが４０００ｍｍ３に達するまで、またはいずれかの群のマウスが潰瘍または２０％を超える体重減少のために安楽死を必要とするまで行った。腫瘍増殖阻害は、以下の式に従って計算した：［１－（Ｔｆｉｎａｌ－Ｔｉｎｉｔｉａｌ）／（Ｃｆｉｎａｌ－Ｃｉｎｉｔｉａｌ）］＊１００、式中、Ｔ（処置群）およびＣ（対照群）は、すべてのマウスが生存していた日の平均腫瘍量（ｔｕｍｏｒ ｍａｓｓ）を表す。観察は第５４日（最終投与の３週間後）まで延長し、無腫瘍マウスの頻度を決定した。
７．２．実施例１：ＳＴＡＴ３レポーターアッセイにおけるＩＬ１０ムテインの活性
組換えＩＬ１０ムテインがＩＬ１０受容体を刺激する能力を、セクション７．１．２に記載されているＳＴＡＴ３レポーター細胞に基づくバイオアッセイで評価した。
組換えヒトＩＬ１０、ＩＬ１０ムテイン、ヒトＩｇＧ４ｓアイソタイプ対照またはマウスＩｇＧ１アイソタイプ対照とインキュベートした、操作されたレポーター細胞、Ｒａｍｏｓ／ＳＴＡＴ３－ＬｕｃまたはＴＦ－１／ＳＴＡＴ３－Ｌｕｃ細胞について、活性化曲線を図３に示し、ＥＣ５０および誘導倍数（ｆｏｌｄ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ）の値を表４にまとめている。
レポーター細胞を対照タンパク質で処理した場合、ルシフェラーゼ活性の増加は検出されなかった。対照的に、レポーター細胞Ｒａｍｏｓ／ＳＴＡＴ３－ＬｕｃおよびＴＦ－１／ＳＴＡＴ３－ＬｕｃとヒトＩＬ１０とのインキュベーションにより、ルシフェラーゼ活性が誘導された（それぞれ４．５倍および５．９倍）。また、Ｒａｍｏｓ／ＳＴＡＴ３－ＬｕｃおよびＴＦ－１／ＳＴＡＴ３－ＬｕｃとＩＬ１０ムテインとのインキュベーションによっても、ルシフェラーゼ活性が誘導され（Ｒａｍｏｓ／ＳＴＡＴ３：ＩＬ１０Ｍ１：３．７倍、ＩＬ１０Ｍ２：３．６倍、ＩＬ１０Ｍ３：３．２倍；ＴＦ－１／ＳＴＡＴ３－Ｌｕｃ、ＩＬ１０Ｍ１：４．８倍、ＩＬ１０Ｍ２：４．１倍、ＩＬ１０Ｍ３：３．４倍）、表４および図３に示されているようにＥＣ５０値はナノモル以下であった。
Figure 2023525555000025
７．３．実施例２：初代ヒトＴ細胞におけるサイトカイン放出に対するＩＬ１０ムテインの活性
ＩＬ１０がＴ細胞刺激を阻害する能力を、ＩＬ２、ＴＮＦαおよびＩＦＮγサイトカイン産生を測定する機能的な初代Ｔ細胞アッセイで評価した。
Ｈ４ｓＨ１０１５４Ｐ３（ヒトＩｇＧ４ステルス性アイソタイプ対照）、ｍＩｇＧ１（マウスＩｇＧ１アイソタイプ対照）、ヒトＩＬ１０またはＩＬ１０ムテインのいずれかのタイトレーション（ｔｉｔｒａｔｉｏｎ）とともに、マイトマイシンＣ処理した同種ＰＢＭＣとコインキュベートしたＴ細胞について、サイトカイン放出に関するデータを図４および図５（それぞれドナー５５００Ｙおよび６９００Ｍについて）に示し、ＩＣ５０および阻害率の値を表５および表６（それぞれドナー５５００Ｙおよびドナー６９００Ｍについて）にまとめた。
２人のドナー（図４：ドナー５５００Ｙおよび図５：ドナー６９００Ｍ）由来のＴ細胞と、マイトマイシンＣ処理した同種ＰＢＭＣのコインキュベーションは、測定可能なＩＬ２（Ａ）ＴＮＦα（Ｂ）およびＩＦＮγ放出（Ｃ）をもたらした。Ｔ細胞／ＰＢＭＣのコインキュベーション中のヒトＩＬ１０またはＩＬ１０ Ｆｃムテインのタイトレーションの添加により、ＩＬ２、ＴＮＦα、およびＩＦＮγの放出が用量依存的な様式で減少した（ドナー５５００Ｙ：表５および図４；ドナー６９００Ｍ：表６および図５）。
Figure 2023525555000026
Figure 2023525555000027
７．４．実施例３：ＩＬ１０ムテインの抗腫瘍活性
同系腫瘍同種移植モデルにおけるＩＬ１０ムテインの活性を評価した。セクション７．１．４に記載されているように、Ｃｏｌｏｎ ２６腫瘍細胞をＢＡＬＢ－Ｃマウスに移植した。第１１日に腫瘍が平均体積１１０ｍｍ３（８０ｍｍ３から１４０ｍｍ３の範囲）に達した時点で、マウスを各群（ｎ＝７匹／群）にランダム化し、ｈＩｇＧ４ｓアイソタイプ対照、ＩＬ１０Ｍ１またはＩＬ１０Ｍ２のいずれかを、等モル量のアイソタイプ対照（０．１６７ｍｇ／ｋｇ）またはＩＬ１０ムテイン（０．１ｍｇ／ｋｇ）にて、投与した。
結果を表７にまとめ、図６に示している。
Figure 2023525555000028
すべてのマウスが生存していた第３２日の時点で、ＩＬ１０Ｍ１の６回の投与は約９０％の腫瘍増殖阻害をもたらしたが、ＩＬ１０Ｍ２の投与は、アイソタイプ対照処置群と比較して、わずかな効果（約７％の腫瘍増殖阻害）であった。観察を延長したところ、ＩＬ１０Ｍ１処置群では７匹中４匹が無腫瘍になったのに対し、ＩＬ１０Ｍ２処置群では７匹中２匹のみが無腫瘍となり、対照群では無腫瘍マウスはいなかった。これらのデータは、Ｃｏｌｏｎ２６ ｉｎ ｖｉｖｏ腫瘍モデルにおいて、ｈＩｇＧ４ｓ－ＦｃのＣ末端に融合させたＩＬ１０（ＩＬ１０Ｍ１）が、Ｎ末端のＦｃ－ＩＬ－１０融合タンパク質（ＩＬ１０Ｍ２）と比較して優れた効力を示すという結論を裏付けるものである。
７．５．実施例４：ＩＬ１０ムテイン活性に対するリンカー長の影響
異なるリンカー長を有するＩＬ１０ムテイン（ＩＬ１０Ｍ１とＩＬ１０Ｍ２のそれぞれの２つの異なるロットを含み、それぞれロット１およびロット２またはＬ１およびＬ２と称する）の活性を、セクション７．１．２に記載されているように、Ｒａｍｏｓ／ＳＴＡＴ３－ＬｕｃおよびＴＦ－１／ＳＴＡＴ３－Ｌｕｃアッセイで評価した。細胞を収集し、遠心分離して、アッセイ培地（Ｊｕｒｋａｔ培地）中に再懸濁させた上で、底面／側面が白色の平底培養皿に、５０μｌ容量で５×１０５個／ウェルをプレーティングし、次いで、ＩＬ１０またはＩＬ１０ムテインのタイトレーションを含有する５０μｌの培地を添加した。
細胞を５．５時間インキュベートし、その後に１００μＬのＯＮＥ－Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼ剤（プロメガ社（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）［米国ウィスコンシン州マディソン（Ｍａｄｉｓｏｎ）所在］）を添加した。このプレートをＯＮＥ－Ｇｌｏ（商標）の存在下で３分間インキュベートし、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（商標）蛍光プレートリーダー（パーキンエルマー社（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）［米国マサチューセッツ州ウォルサム（Ｗａｌｔｈａｍ）所在］）で活性を読み取った。
誘導倍数およびＥＣ５０は、セクション７．１．２．４に記載されているように決定した。結果を表８－１および表８－２にまとめ、図７Ａ～図７Ｆに示している。
Figure 2023525555000029
これらの結果は、ＩＬ１０部分がＦｃ部分のＣ末端側にあるＩＬ１０ムテインは、ＩＬ１０部分がＦｃ部分のＮ末端側にあるＩＬ１０ムテインよりも活性が高く、ＥＣ５０が低値であることを示している。さらに、Ｇ４Ｓ（配列番号５１）リンカー長が誘導倍数およびＥＣ５０に与える影響はわずかに過ぎないものの、ＩＬ１０部分がＦｃ部分のＣ末端側にあるＩＬ１０ムテインからリンカーが完全に失われると、活性のより大きな低下がもたらされる。
７．６．実施例５：ＩＬ１０抗腫瘍活性の作用機序
同系腫瘍同種移植モデルを使用して、マウスＦｃ（ＩＬ１０Ｍ１１）に融合させたマウスＩＬ１０のｉｎ ｖｉｖｏでの抗腫瘍効力を、予防的または治療的な設定のいずれかで評価した。
手短に述べると、雌性マウス（ジャクソン・ラボラトリー社（ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）［米国メイン州バーハーバー（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ）所在］）に対して、系統を一致させた腫瘍細胞（Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｒｅ，リジェネロン・ファーマシューティカルズ社（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．））：Ｃ５７ＢＬ／６同系腫瘍細胞ＭＣ３８－ｃＯＶＡ（ニワトリ卵白アルブミンを過剰発現するように操作されたＭＣ３８結腸がん細胞）；ＢＡＬＢ／ｃ同系腫瘍細胞Ｃｏｌｏｎ２６（結腸がん）、Ａ２０（Ｂ細胞リンパ腫）、４Ｔ１（乳がん）、またはＲＥＮＣＡ（腎細胞がん）を皮下移植した。
予防的な設定では、ＭＣ３８－ｃＯＶＡ腫瘍移植の２日前に処置を開始し、週２回で継続した。治療的な設定では、平均腫瘍体積（典型的には６０～１２０ｍｍ３）に基づいてマウスを処置群（ｎ＝７～９匹）にランダムに割り付けた。処置は腫瘍のランダム化の後に開始し、週２回で継続した。
ＩＬ１０Ｍ１１またはアイソタイプ対照を、同じモル用量で腹腔内投与した（マウスあたり６～９回の投与）。ＩＬ１０Ｍ１１の用量設定試験（ｔｉｔｒａｔｉｏｎ ｓｔｕｄｉｅｓ）では、アイソタイプ対照の用量はＩＬ１０Ｍ１１の最大のモル用量に等しかった。
腫瘍サイズおよびマウスの体重を週２回測定した。ＩＬ１０の抗腫瘍活性の作用機序を検討するために、ＩＬ１０Ｍ１１を腫瘍同種移植モデルで予防的および治療的に評価した。セクション７．１．４に記載されているように、ＢＡＬＢ－ＣまたはＣ５７ＢＬ／６マウスに腫瘍細胞を移植し、マウスにＩＬ１０Ｍ１１を予防的（腫瘍移植前）または治療的（腫瘍移植後の７日間）に投与した。結果は図８Ａ～図８Ｄに示している。
７．６．１．材料および方法
腫瘍の移植および投与群の割り当て：ＭＣ３８－ｃＯＶＡ、Ｃｏｌｏｎ２６およびＲＥＮＣＡ同系腫瘍モデルについては、６～８週齢の雌Ｃ５７ＢＬ／６またはＢＡＬＢ／ｃマウス（ジャクソン・ラボラトリー社（ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）［米国メイン州バーハーバー（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ）所在］）の右脇腹に１×１０６個の腫瘍細胞（Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｒｅ，リジェネロン・ファーマシューティカルズ社（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．））をそれぞれ皮下移植した。Ａ２０および４Ｔ１同系腫瘍モデルについては、１×１０７個または１×１０５個の腫瘍細胞（Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｒｅ，リジェネロン・ファーマシューティカルズ社（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）を、６～８週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（ジャクソン・ラボラトリー社（ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）［米国メイン州バーハーバー（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ）所在］）の右脇腹にそれぞれ皮下移植した。腫瘍が平均体積６０～１２０ｍｍ３（それぞれの固有の腫瘍モデルによる）に達した時点で、マウスを各群（ｎ＝７～９匹／群）にランダム化し、ＩＬ１０Ｍ１１、ＣＤ４０、ＰＤ－１、対照試薬、または場合によってはそれらの組合せを投与した。マウスに試験物質を週２回、６～９回にわたり腹腔内注射し、試験期間を通じて腫瘍体積および体重を週２回モニタリングした。抗腫瘍記憶応答を試験したところ、一次的なＣｏｌｏｎ２６腫瘍負荷を拒絶したマウスには５×１０６個のＣｏｌｏｎ２６腫瘍細胞の投与を受けられたのに対し、ナイーブマウスは１×１０６個のＣｏｌｏｎ２６腫瘍細胞の投与しか受けられなかった。
腫瘍サイズおよび増殖阻害の計算：各群について、腫瘍サイズの平均および中央値、ならびに対照処置群に比しての腫瘍増殖阻害率を計算した。腫瘍の長さおよび幅はキャリパーで週２回測定し、腫瘍体積は式（長さ×幅２）／２を使用して算出した。測定は、対照群の平均腫瘍サイズが４０００ｍｍ３に達するまで、またはいずれかの群のマウスが潰瘍または２０％を超える体重減少のために安楽死を必要とするまで行った。腫瘍増殖阻害率は、以下の式：［１－（Ｔｆｉｎａｌ－Ｔｉｎｉｔｉａｌ）／（Ｃｆｉｎａｌ－Ｃｉｎｉｔｉａｌ）］＊１００％に従って計算し、式中、Ｔ（処置群）およびＣ（対照群）は、すべてのマウスが生存していた日の平均腫瘍量（ｍｅａｎ ｔｕｍｏｒ ｍａｓｓ）を表す。
７．６．２．結果
最大試験用量のＩＬ１０Ｍ１１（０．１ｍｇ／ｋｇ）によるＭＣ３８－ｃＯＶＡ腫瘍の予防的処置は、腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）が約３０％であり、無腫瘍マウスが８匹中１匹であった（図８Ａ）というわずかな抗腫瘍効果を示した。低用量（０．００５または０．０００３ｍｇ／ｋｇ）では抗腫瘍効果はなかった。対照的に、確立されたＭＣ３８－ｃＯＶＡ腫瘍のＩＬ１０Ｍ１１（０．１ｍｇ／ｋｇ）による治療では、ＴＧＩは約６５％であり、無腫瘍マウスは７匹中４匹であった（図８Ｂ）。
ＩＬ１０Ｍ１１の治療効果を、Ｃｏｌｏｎ２６、Ａ２０および４Ｔ１腫瘍モデルでさらに試験した。この治療により、Ｃｏｌｏｎ２６モデルおよびＡ２０モデルの両方で１００％の全奏効率（ＯＲＲ）、１００％のＴＧＩ、ほぼ１００％の無腫瘍生存率が得られた（図８Ｃおよび図８Ｄ）。４Ｔ１の腫瘍モデルでも有意なＴＧＩが認められ、これには１００ｍｍ３を超える大きな確立腫瘍（ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｔｕｍｏｒｓ）の増殖抑止が含まれる；しかしながら、無腫瘍生存は達成されなかった（図８Ｅ）。
試験終了時に採取した４Ｔ１腫瘍を解離させ、免疫細胞の組成および機能のフローサイトメトリー分析に供した。ＩＬ１０Ｍ１１処置マウス由来の腫瘍浸潤リンパ球の分析により、ＩＦＮγ／ＴＮＦαを産生するＣＤ４およびＣＤ８ Ｔ細胞（図８Ｆおよび図８Ｇ）の頻度、密度、および平均蛍光強度（ＭＦＩ）の増加が明らかになった。
一次的なＣｏｌｏｎ２６またはＡ２０腫瘍負荷で生存したマウスに対して、Ｃｏｌｏｎ２６とＲＥＮＣＡ（図８Ｈ）、またはＡ２０とＣｏｌｏｎ２６（図８Ｉ）の腫瘍のいずれかの対のそれぞれの両側移植による再負荷試験を行った。陽性対照であるＣｏｌｏｎ２６とＲＥＮＣＡ、またはＡ２０とＣｏｌｏｎ２６の両側性腫瘍はいずれも、ナイーブマウスに移植すると激しく増殖した。しかしながら、ＩＬ１０Ｍ１１療法で一次腫瘍を完全に拒絶したマウスでは、長期の抗腫瘍記憶反応が誘発され、同じものによる二次負荷を拒絶したが、無関係な種類の腫瘍（図８Ｈおよび８Ｉ）は拒絶しなかった。
最後に、ＩＬ１０Ｍ１１と、ＣＤ４０アゴニストＡｂまたはＰＤ－１アンタゴニストＡｂとの組合せの抗腫瘍効果を決定した。Ｌ１０Ｍ１１、ＣＤ４０Ａｂ、およびＰＤ－１Ａｂはそれぞれ単剤で抗腫瘍応答を示した（図９Ａ）。いずれか２つの治療様式の組合せは、その抗腫瘍効力をさらに高め（図９Ａ）、無腫瘍生存率を上昇させた（図９Ｂ）。
７．７．実施例６：抗ＰＤ－１抗体感受性および応答性の腫瘍におけるＩＬ１０の抗腫瘍活性
複数の同系腫瘍同種移植モデルを使用して、治療前の腫瘍微小環境における免疫浸潤をベースラインとして評価し、また、これを使用して、マウスＩｇＧ１に融合させたマウスＩＬ－１０（ＩＬ１０Ｍ１１）と抗ＰＤ－１アンタゴニストＡｂ（マウスＩｇＧ１）の治療的な設定におけるｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍効力についても比較した。
手短に述べると、雌性マウス（ジャクソン・ラボラトリー社（ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）［米国メイン州バーハーバー（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ）所在］）に、系統を一致させた腫瘍細胞を皮下移植した：ＭＣ３８結腸がん細胞およびＢ１６Ｆ１０黒色腫細胞を有するＣ５７ＢＬ／６マウス、またはＣｏｌｏｎ２６結腸がん細胞およびＡ２０ Ｂ細胞リンパ腫細胞を有するＢＡＬＢ／ｃマウス（細胞はすべて、リジェネロン・ファーマシューティカルズ社（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）のＴｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｒｅによる）。腫瘍サイズが約１００ｍｍ３に達した時点で腫瘍を取り出し、ＣＤ４５＋免疫細胞およびＣＤ４５ゲート内のリスト化されたサブセットの免疫プロファイリングのための標準プロトコールに供した。一部の例では、腫瘍とともに、脾臓および流入領域リンパ節を、免疫細胞／腫瘍細胞上のＩＬ１０Ｒ１、ＰＤ１またはＰＤ－Ｌ１の表面発現の分析に供した。治療的な設定では、治療は腫瘍移植の数日後、典型的には腫瘍サイズが平均体積７５～１５０ｍｍ３（腫瘍の種類による）に達した時点で行い、マウスを複数の異なる処置群（ｎ＝７～８匹／群）にランダムに割り付けた。マウスに対して、ｍＩｇＧ１アイソタイプ対照、ＩＬ１０Ｍ１１、または抗マウスＰＤ１抗体を投与した。治療ならびに腫瘍サイズおよび体重の測定は週２回行った。
７．７．１．材料および方法
腫瘍の移植および投与群の割り付け：Ｂ１６Ｆ１０、ＭＣ３８、ＭＣ３８－ｃＯＶＡ、Ｃｏｌｏｎ２６、およびＡ２０の同系腫瘍（ｓｙｎｇｅｎｅｉｃ ｔｕｍｏｒ）モデルについては、０．５～１０×１０６個の腫瘍細胞（リジェネロン・ファーマシューティカルズ社（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．）のＴｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｒｅ）を、６週齢から８週齢の雌Ｃ５７ＢＬ／６またはＢＡＬＢ／ｃマウス（ジャクソン・ラボラトリー社（ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）［米国メイン州バーハーバー（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ）所在］）の右脇腹にそれぞれ皮下移植した。腫瘍が平均体積７５～１５０ｍｍ３（それぞれの固有の腫瘍モデルによる）に達した時点で、マウスを各群（ｎ＝７～８匹／群）にランダム化し、ＩＬ１０Ｍ１１、ＰＤ１ Ａｂ、ＰＤ１－ＩＬ１０、対照試薬、または場合によってはそれらの組合せを投与した。マウスに試験物質を週２回、６～９回にわたり腹腔内注射し、試験期間を通じて腫瘍体積および体重を週２回モニタリングした。
腫瘍サイズおよび増殖阻害の計算：各群について、腫瘍サイズの平均および中央値、ならびに対照処置群に比しての腫瘍増殖阻害率を計算した。腫瘍の長さおよび幅は週２回キャリパーで測定し、腫瘍体積は式（長さ×幅２）／２を使用して算出した。測定は、対照群の平均腫瘍サイズが４０００ｍｍ３に達するまで、またはいずれかの群のマウスが潰瘍または２０％を超える体重減少のために安楽死を必要とするまで行った。腫瘍増殖阻害は、以下の式：［１－（Ｔｆｉｎａｌ－Ｔｉｎｉｔｉａｌ）／（Ｃｆｉｎａｌ－Ｃｉｎｉｔｉａｌ）］＊１００に従って計算した（式中、Ｔ（投与群）およびＣ（対照群）は、すべてのマウスが生存していた日の平均腫瘍量を表す）。第５４日（最終処置の３週間後）まで観察を延長し、無腫瘍マウスの頻度を決定した。
血清中のサイトカインのＭＳＤ多重化は、ＭＳＤ（メソ・スケール・ダイアグノスティクス社（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）［米国メリーランド州ロックビル（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ）所在］）の標準プロトコールに従って行った。
７．７．２．結果
図１０Ａ～図１０Ｅに示されているように、ＣＤ４５＋免疫細胞全体、ならびにＡ２０、Ｃｏｌｏｎ２６、およびＭＣ３８腫瘍において分析されたすべての免疫細胞サブセットの密度は、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍における対応物よりもはるかに高かった。さらなる解析により、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍は、Ｋｉ６７増殖性ＣＤ４およびＣＤ８ Ｔ細胞がより少なく、メモリー表現型であることも示された。
予想された通り、ＩＬ１０Ｒ１は脾臓および腫瘍の両方で、多種多様な骨髄細胞によって恒常的および広範に発現されていた。驚いたことに、Ｔ細胞、特にＣＤ８ Ｔ細胞上でのＩＬ１０Ｒ１の発現は、腫瘍浸潤性ＣＤ８ Ｔ細胞に非常に限定されており、二次リンパ組織のＴ細胞上、例えば、ＭＣ３８－ｃＯＶＡおよびＣｏｌｏｎ２６の脾臓および流入領域ＬＮではほとんど発現が見られなかった（図１１Ａ～図１１Ｉ参照）。本試験により、ＩＬ１０Ｒ１＋ ＣＤ８ Ｔ細胞のほぼすべてがＰＤ１分子を発現することがさらに明らかになった。このデータから、以下のことが示唆された：１）これらのＩＬ１０Ｒ１＋ＰＤ１＋ ＣＤ８ Ｔ細胞が腫瘍抗原特異的である可能性が考えられること；２）腫瘍におけるＴ細胞のサブセット上でのＩＬ１０Ｒ１の高度に限定された発現パターンは、マウスにおけるＩＬ１０Ｍ１１の良好な安全性プロファイルの背後にある生物学的理由を表している可能性があること；および３）ＩＬ１０－ＦｃとＰＤ－１アンタゴニストＡｂとの組合せは、抗腫瘍応答を強化するために想定し得る戦略であること。
ＰＤ－Ｌ１の発現には、試験した４種類の腫瘍の間で違いがあった（図１２Ａ～図１２Ｇ）。次に、ＰＤ１アンタゴニストＡｂとＩＬ１０Ｍ１１とを比較して、治療に対する各種類の腫瘍の応答を決定した。図１３Ａ～図１３Ｃに示されているように、１５０ｍｍ３のＡ２０ Ｂ細胞リンパ腫はＰＤ－１Ａｂ治療に非常によく反応し、腫瘍増殖の有意な遅延および約５０％の無腫瘍生存率が示された。しかしながら、ＩＬ１０Ｍ１１はＡ２０に対してさらに高度で広範な免疫応答を誘発し、無腫瘍生存率は約８５％であった。Ｃｏｌｏｎ２６腫瘍モデルにおいて（図１４Ａ～図１４Ｃ）、１００ｍｍ３の腫瘍はＰＤ１ Ａｂ治療に対して完全に抵抗性であった。対照的に、ＩＬ１０Ｍ１１は再び約８５％の無腫瘍生存率を示した。Ｂ１６Ｆ１０は免疫原性が低く、免疫細胞の浸潤がはるかに少ないことが知られており、このことは本発明者らの研究で確認された（図１０Ａ～図１０Ｅ）。１００ｍｍ３のＢ１６Ｆ１０腫瘍はＰＤ１ Ａｂにほとんど反応しなかった。しかしながら、ＩＬ１０Ｍ１１は腫瘍の増殖を有意に遅延させ、腫瘍の大部分を反応性にした（図１５Ａ～図１５Ｃ）。９０～１００ｍｍ３のＭＣ３８腫瘍はＰＤ１ Ａｂ（図２２Ａ～図２２Ｂ参照）にほとんど反応しないという観察結果を得た上で、７５ｍｍ３のＭＣ３８結腸がんについて試験した。この試験では、ＰＤ１ ＡｂおよびＩＬ１０－Ｆｃの両方が単剤で同程度の抗腫瘍効果を示したのに対し、両者を併用すると、腫瘍の増殖が遅延し、無腫瘍生存率（図１６Ａ～図１６Ｃ）が高くなることによって、抗腫瘍応答が劇的に増加した。
ＩＬ１０－Ｆｃ（例えば、ＩＬ１０Ｍ１１）による関連する作用機序を解明するために、治療法の後の腫瘍微小環境の免疫プロファイリングを行った。ＩＬ１０治療は、免疫原性ＭＣ３８腫瘍モデル（図１７Ａ）および免疫原性の低い４Ｔ１腫瘍モデル（図１７Ｂ）の両方でＣＤ８ Ｔ細胞密度を有意に増加させ、いずれの場合にもより良好な予後と相関していた。さらなる試験により、ＩＬ１０がＰＤ１＋ ＣＤ８ Ｔ細胞の密度を増加させることが示され、これらのＣＤ８ Ｔ細胞はいったん活性化された腫瘍特異的ＣＤ８ Ｔ細胞（図１８Ａ～図１８Ｂ）である可能性が高いことが示唆された。ＩＬ１０Ｍ１１は、４Ｔ１腫瘍モデルにおけるＣＤ８ Ｔ細胞に加えて、ＣＤ４ Ｔ細胞および骨髄系細胞を含むＣＤ４５免疫浸潤全体を増加させる傾向があり（図１７Ａ～図１７Ｂおよび図１８Ａ～図１８Ｂ）、このことは、ＩＬ１０が４Ｔ１およびＢ１６Ｆ１０などの免疫原性の低い腫瘍モデルで機能した理由の妥当な説明になる。
ＩＬ１０－Ｆｃの薬力学（ＰＤ）マーカーである可能性のあるものを同定するために、市販のマルチプレックスＭＳＤプラットフォームを使用して、様々なサイトカインの血清レベルを分析した。ナイーブ非腫瘍担持マウス（図１９）およびＢ１６Ｆ１０腫瘍担持マウス（図２０）の両方で、サイトカインのシグネチャーパネル（ＩＬ１２、ＩＬ１ｂ、ＩＬ２、ＩＬ４、およびＩＬ５）はＩＬ１０によって特有の形でアップレギュレートされたが、ＰＤ１ Ａｂによってはアップレギュレートされなかった。アイソタイプ対照処置マウスの平均値に対して正規化したところ、ＩＬ１２およびＩＬ４が複数倍にアップレギュレートされるという非常に明確な傾向が、Ａ２０、ＭＣ３８、ＭＣ３８－ｃＯＶＡ、Ｂ１６Ｆ１０およびＣｏｌｏｎ２６などの複数の腫瘍モデルにわたって観察された（図２１Ａ～図２１Ｂ）。一部の試料は、異なる時点（ＭＣ３８およびＣｏｌｏｎ２６）で同じ腫瘍モデルから収集したが、依然として一貫した傾向を示した。
ＰＤ１とＩＬ１０Ｒ１の共発現、およびＩＬ１０－ＦｃとＰＤ－１アンタゴニストＡｂの組合せによる抗腫瘍効力の増強というこれまでの知見に基づき、ＰＤ１に標的化されたＩＬ１０の治療薬としての可能性を調べた。臨床試験において、高用量のパギロデカキン（ＰＥＧ化ＩＬ１０）にある程度の毒性が認められたという報告がある。ＰＤ１モル量ではなく、ＩＬ１０のモル量を、異なる治療様式（ＩＬ１０－Ｆｃ、対照Ａｂ－ＩＬ１０、ＰＤ１－ＩＬ１０、およびＰＤ１ Ａｂ）の間で正規化するのが妥当である。図２２Ａ～図２２Ｂに示されているように、ＰＤ１ ＡｂおよびＩＬ１０－Ｆｃはそれぞれ、期待される抗腫瘍効果を単剤で示した（ＰＤ１ Ａｂでは非常にわずかな効果であり、ＩＬ１０－Ｆｃでは中程度の効果）。ＩＬ１０－ＦｃとＰＤ－１Ａｂの組合せは効力を有意に改善したが、ＰＤ１－ＩＬ１０－Ｆｃは対照Ａｂ－ＩＬ１０またはＩＬ１０－Ｆｃと効力の点で差を示さなかった。
７．８．実施例８：ＩＬ１０アゴニストの精製
ＩＬ１０アゴニストの複数の後続物（ｉｔｅｒａｔｉｏｎｓ）（すなわち、ＩＬ１０Ｍ１～ＩＬ１０Ｍ１１）について、それらが組換え発現されて回収される能力を決定するために評価した。ＦｃドメインのＮ末端またはＣ末端に位置するＩＬ１０部分を有するＩＬ１０アゴニストは回収可能であったが、いずれの構成もかなりの量の凝集性ＩＬ１０アゴニストをもたらした。非凝集性ＩＬ１０アゴニストを生産するために精製法を開発した。
７．８．１．材料および方法
セクション７．１に記載されているように、ＩＬ１０ムテインをコードする構築物を作製し、哺乳動物細胞株において組換え発現させて精製した。細胞を溶解させ、ＰＢＳ緩衝液中にある細胞溶解液を、ＰｒｉｓｍＡ（商標）プロテインＡアフィニティーカラムに０．４ｍｌ／分の流速でかけた。ｐＨ ６．６のＰｉｅｒｃｅ（商標）Ｇｅｎｔｌｅ溶出緩衝液により、アフィニティーカラムから溶出させた。次いで、１×ＴＢＳ＋５％グリセロール、次に２ｘＰＢＳ＋５％グリセロールに対する透析によって緩衝液を交換した。次いで、交換された緩衝溶出液を、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ（登録商標）２００、２６／６００ｐｇカラム（ミリポアシグマ社（ＭｉｌｌｉｐｏｒｅＳｉｇｍａ）［米国ミズーリ州セントルイス（Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ）所在］）を使用するサイズ排除クロマトグラフィーに供した。非凝集性ＩＬ１０アゴニストを含む画分を収集した。
７．８．２．結果
ＩＬ１０アゴニストは、ＦｃドメインのＣ末端にＩＬ１０部分を有することから、この精製プロトコールにより、サイズ排除超高性能液体クロマトグラフィーで観察される異常なピークを有しないインタクトな非凝集性ＩＬ１０アゴニストが生産された。ＦｃドメインのＮ末端にＩＬ１０部分を有するＩＬ１０アゴニストも回収されたが、これはインタクトではなく、Ｃ末端リジンを欠いているか、または完全長構築物が残基１～４０３を有するのに対して、アミノ酸３～４０２を有する断片として回収された。
精製された非凝集性ＩＬ１０アゴニストは、賦形剤とともに医薬組成物として製剤化することができ、製剤化された医薬組成物はＩＬ１０アゴニストの凝集物を最小限にしか有していない。
８．具体的な実施形態、参考文献の引用
様々な具体的な実施形態を説明し、記載してきたが、本開示の趣旨および範囲から逸脱することなく、様々な変更を加え得ることは理解されるであろう。本開示は、以下に示す番号付きの実施形態によって例示される。
下記の番号付きの実施形態およびそれに続く特許請求の範囲の好ましい態様において、ＩＬ１０ドメイン、Ｆｃドメイン、およびそれらのバリアントは、好ましくは、ヒトＩＬ１０、ヒトＦｃドメイン、およびそれらのバリアントの、例えば、そのようなヒト配列と少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または１００％の配列同一性を有するバリアントのアミノ酸配列を含む。
１．（ａ）Ｆｃドメイン；
（ｂ）リンカー；および
（ｃ）ＩＬ１０部分
を含む、ＩＬ１０アゴニスト。
２．前記ＦｃドメインのＮ末端側にヒンジドメインをさらに含む、実施形態１に記載のＩＬ１０アゴニスト。
３．前記ＦｃドメインがＩｇＧ Ｆｃドメインである、実施形態１または実施形態２に記載のＩＬ１０アゴニスト。
４．前記Ｆｃドメインが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４ Ｆｃドメインである、実施形態１～３のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
５．前記Ｆｃドメインが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、またはそれらの組合せ由来のＣＨ２およびＣｈ３ドメインを含む、実施形態１～４のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
６．前記ＦｃドメインがＩｇＧ１である、実施形態１～５のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
７．前記ＩｇＧ１がヒトＩｇＧ１である、実施形態１～６のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
８．前記ＩｇＧ１がマウスＩｇＧ１である、実施形態１～６のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
９．前記ＦｃドメインがＩｇＧ４である、実施形態１～５のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１０．前記ＩｇＧ１がヒトＩｇＧ４である、実施形態９に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１１．前記ＩｇＧ１がマウスＩｇＧ４である、実施形態９に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１２．前記Ｆｃドメインが、配列番号３１と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１～４および９のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１３．前記Ｆｃドメインが、配列番号３１と少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１～４、９および１２のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１４．前記Ｆｃドメインが、配列番号３１と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１～４、９、１２および１３のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１５．前記Ｆｃドメインが、配列番号３１と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１～４、９および１２～１４のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１６．前記Ｆｃドメインが、配列番号３１と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１～４、９および１２～１５のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１７．前記Ｆｃドメインが、配列番号３１のアミノ酸配列を含む、実施形態１～４、９および１２～１６のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１８．前記Ｆｃドメインが、配列番号３３と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１～７のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１９．前記Ｆｃドメインが、配列番号３３と少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１～７および１８のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
２０．前記Ｆｃドメインが、配列番号３３と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１～７、１８および１９のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
２１．前記Ｆｃドメインが、配列番号３３と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１～７および１８～２０のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
２２．前記Ｆｃドメインが、配列番号３３と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１～７および１８～２１のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
２３．前記Ｆｃドメインが、配列番号３３のアミノ酸配列を含む、実施形態１～７および１８～２２のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
２４．前記Ｆｃドメインのエフェクター機能が低下している、実施形態１～１７のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
２５．前記ヒンジドメインが、ＣＨ２および／またはＣＨ３ドメインと同じＩｇＧに由来する、実施形態５～２４のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
２６．前記ヒンジドメインが、ＣＨ２および／またはＣＨ３ドメインとは異なるＩｇＧに由来する、実施形態５～２４のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
２７．前記ヒンジドメインがキメラ性ヒンジ配列を含む、実施形態２～２６のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
２８．前記ヒンジドメインが配列番号１２のアミノ酸配列を含む、実施形態２～２７のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
２９．前記ヒンジドメインが配列番号１３のアミノ酸配列を含む、実施形態２～２７のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
３０．前記リンカーが１０アミノ酸から６０アミノ酸残基の長さである、実施形態１～１８のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
３１．前記リンカーが１５アミノ酸から２５アミノ酸残基の長さである、実施形態１～１８のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
３２．前記リンカーが１５から２０アミノ酸残基の長さである、実施形態１～１８のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
３３．前記リンカーが、ＧｎＳまたはＳＧｎの単量体または多量体を含み、任意選択で、ｎが１から７までの整数である、実施形態１～３２のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
３４．前記リンカーが、Ｇ４Ｓの単量体または多量体を含む、実施形態３３に記載のＩＬ１０アゴニスト。
３５．前記リンカーが、Ｇ４Ｓの１回から６回の反復を含む、実施形態３４に記載のＩＬ１０アゴニスト。
３６．前記リンカーが（Ｇ４Ｓ）１を含む、実施形態３５に記載のＩＬ１０アゴニスト。
３７．前記リンカーが（Ｇ４Ｓ）２を含む、実施形態３５に記載のＩＬ１０アゴニスト。
３８．前記リンカーが（Ｇ４Ｓ）３を含む、実施形態３５に記載のＩＬ１０アゴニスト。
３９．前記リンカーが（Ｇ４Ｓ）４を含む、実施形態３５に記載のＩＬ１０アゴニスト。
４０．前記リンカーが（Ｇ４Ｓ）５を含む、実施形態３５に記載のＩＬ１０アゴニスト。
４１．前記リンカーが（Ｇ４Ｓ）６を含む、実施形態３５に記載のＩＬ１０アゴニスト。
４２．前記リンカーがＦｃドメインと前記ＩＬ１０部分とを接続する、実施形態１～４１のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
４３．前記ＩＬ１０部分が、前記ＦｃドメインのＣ末端側にある、実施形態１～４１のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
４４．前記ＩＬ１０部分が、前記ＦｃドメインのＮ末端側にある、実施形態１～４１のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
４５．前記ＩＬ１０部分が、成熟ヒトＩＬ１０（例えば、配列番号１のアミノ酸配列を有するＩＬ１０）の配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１～４１のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
４６．前記ＩＬ１０部分が、成熟ヒトＩＬ１０（例えば、配列番号１のアミノ酸配列を有するＩＬ１０）の配列と少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１～４２のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
４７．前記ＩＬ１０部分が、成熟ヒトＩＬ１０（例えば、配列番号１のアミノ酸配列を有するＩＬ１０）の配列と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１～４３のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
４８．前記ＩＬ１０部分が、成熟ヒトＩＬ１０（例えば、配列番号１のアミノ酸配列を有するＩＬ１０）の配列と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１～４４のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
４９．前記ＩＬ１０部分が、成熟ヒトＩＬ１０（例えば、配列番号１のアミノ酸配列を有するＩＬ１０）の配列と少なくとも９９％の配列を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１～４５のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
５０．前記ＩＬ１０部分が、成熟ヒトＩＬ１０（例えば、配列番号１のアミノ酸配列を有するＩＬ１０）のアミノ酸配列を含む、実施形態１～４９のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
５１．前記ＩＬ１０部分が、成熟マウスＩＬ１０（例えば、配列番号３０のアミノ酸配列を有するＩＬ１０）の配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１～４１のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
５２．前記ＩＬ１０部分が、成熟マウスＩＬ１０（例えば、配列番号３０のアミノ酸配列を有するＩＬ１０）の配列と少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１～４１および５１のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
５３．前記ＩＬ１０部分が、成熟マウスＩＬ１０（例えば、配列番号３０のアミノ酸配列を有するＩＬ１０）の配列と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１～４１、５１および５２のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
５４．前記ＩＬ１０部分が、成熟マウスＩＬ１０（例えば、配列番号３０のアミノ酸配列を有するＩＬ１０）の配列と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１～４１および５１～５３のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
５５．前記ＩＬ１０部分が、成熟マウスＩＬ１０（例えば、配列番号３０のアミノ酸配列を有するＩＬ１０）の配列と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１～４１および５１～５４のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
５６．前記ＩＬ１０部分が、成熟マウスＩＬ１０（例えば、配列番号３０のアミノ酸配列を有するＩＬ１０）のアミノ酸配列を含む、実施形態１～４１および５１～５５のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
５７．単量体であり、任意選択で、該単量体が、前記ＩＬ１０部分のＮ１１６とＫ１１７との間にリンカー配列の挿入を有し、ならびに／または前記Ｆｃが自己会合する能力が、例えば、ＣＨ３におけるＴ３６６および／もしくはＹ４０７に対応する位置での１つまたは複数の置換のために低下している、実施形態１～５６のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
５８．単量体であり、該単量体が前記ＩＬ１０部分のＮ１１６とＫ１１７との間にリンカー配列の挿入を欠く、実施形態１～５６のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
５９．単量体であり、該単量体がＣＨ３におけるＴ３６６および／またはＹ４０７に対応する位置で置換されていない、実施形態１～５６および５８のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
６０．ホモ二量体である、実施形態１～５６のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
６１．２つの前記Ｆｃドメインを含む、実施形態５８に記載のＩＬ１０アゴニスト。
６２．前記Ｆｃドメインを介して二量体化している、実施形態６１に記載のＩＬ１０アゴニスト。
６３．前記Ｆｃドメインが、ｈＩｇＧ４－Ｆｃ（例えば、配列番号３１のアミノ酸１８～２２８のアミノ酸配列を有するＦｃ）と名付けられるアミノ酸配列を含む、実施形態６２に記載のＩＬ１０アゴニスト。
６４．前記Ｆｃドメインが、ｈＩｇＧ４ｓ－Ｆｃ（例えば、配列番号３１のアミノ酸配列を有するＦｃ）と名付けられるアミノ酸配列を含む、実施形態６２に記載のＩＬ１０アゴニスト。
６５．前記Ｆｃドメインが、ｍＩｇＧ１－Ｆｃ（例えば、配列番号３３のアミノ酸配列を有するＦｃ）と名付けられるアミノ酸配列を含む、実施形態６２に記載のＩＬ１０アゴニスト。
６６．前記Ｆｃドメインが非二量体化性である、実施形態６１に記載のＩＬ１０アゴニスト。
６７．２つのＩＬ１０部分を含む、実施形態５８～６７のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
６８．前記ＩＬ１０部分を介して二量体化している、実施形態６７に記載のＩＬ１０アゴニスト。
６９．前記ＩＬ１０部分が非二量体化性である、実施形態６７に記載のＩＬ１０アゴニスト。
７０．ヘテロ二量体である、実施形態１～５６のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
７１．２つの前記Ｆｃドメインを含む、実施形態７０に記載のＩＬ１０アゴニスト。
７２．前記Ｆｃドメインを介して二量体化している、実施形態７１に記載のＩＬ１０アゴニスト。
７３．前記Ｆｃドメインが非二量体化性である、実施形態７１に記載のＩＬ１０アゴニスト。
７４．２つのＩＬ１０部分を含む、実施形態７０～７３のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
７５．前記ＩＬ１０部分を介して二量体化している、実施形態７４に記載のＩＬ１０アゴニスト。
７６．前記ＩＬ１０部分が非二量体化性である、実施形態７４に記載のＩＬ１０アゴニスト。
７７．単一のＩＬ１０部分を含む、実施形態７０～７３のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
７８．ＩＬ１０Ｍ１（すなわち、配列番号３４のアミノ酸配列を有するＩＬ１０アゴニスト）のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＩＬ１０アゴニスト。
７９．ＩＬ１０Ｍ１のアミノ酸配列と少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態７８に記載のＩＬ１０アゴニスト。
８０．ＩＬ１０Ｍ１のアミノ酸配列と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態７８または実施形態７９に記載のＩＬ１０アゴニスト。
８１．ＩＬ１０Ｍ１のアミノ酸配列と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態７８～８０のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
８２．ＩＬ１０Ｍ１のアミノ酸配列と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態７８～８１のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
８３．ＩＬ１０Ｍ１のアミノ酸配列を含む、実施形態７８～８２のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
８４．ＩＬ１０Ｍ２（すなわち、配列番号３５のアミノ酸配列を有するＩＬ１０アゴニスト）のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＩＬ１０アゴニスト。
８５．ＩＬ１０Ｍ２のアミノ酸配列と少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態８４に記載のＩＬ１０アゴニスト。
８６．ＩＬ１０Ｍ２のアミノ酸配列と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態８４または実施形態８５に記載のＩＬ１０アゴニスト。
８７．ＩＬ１０Ｍ２のアミノ酸配列と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態８４～８６のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
８８．ＩＬ１０Ｍ２のアミノ酸配列と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態８４～８７のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
８９．ＩＬ１０Ｍ２のアミノ酸配列を含む、実施形態８４～８８のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
９０．ＩＬ１０Ｍ３（すなわち、配列番号３６のアミノ酸配列を有するＩＬ１０アゴニスト）のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＩＬ１０アゴニスト。
９１．ＩＬ１０Ｍ３のアミノ酸配列と少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態９０に記載のＩＬ１０アゴニスト。
９２．ＩＬ１０Ｍ３のアミノ酸配列と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態９０または実施形態９１に記載のＩＬ１０アゴニスト。
９３．ＩＬ１０Ｍ３のアミノ酸配列と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態９０～９２のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
９４．ＩＬ１０Ｍ３のアミノ酸配列と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態９０～９３のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
９５．ＩＬ１０Ｍ３のアミノ酸配列を含む、実施形態９０～９４のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
９６．ＩＬ１０Ｍ４（すなわち、配列番号３７のアミノ酸配列を有するＩＬ１０アゴニスト）のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＩＬ１０アゴニスト。
９７．ＩＬ１０Ｍ４のアミノ酸配列と少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態９６に記載のＩＬ１０アゴニスト。
９８．ＩＬ１０Ｍ４のアミノ酸配列と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態９６または実施形態９７に記載のＩＬ１０アゴニスト。
９９．ＩＬ１０Ｍ４のアミノ酸配列と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態９６～９８のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１００．ＩＬ１０Ｍ４のアミノ酸配列と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態９６～９９のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１０１．ＩＬ１０Ｍ４のアミノ酸配列を含む、実施形態９６～１００のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１０２．ＩＬ１０Ｍ５（すなわち、配列番号３８のアミノ酸配列を有するＩＬ１０アゴニスト）のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＩＬ１０アゴニスト。
１０３．ＩＬ１０Ｍ５のアミノ酸配列と少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１０２に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１０４．ＩＬ１０Ｍ５のアミノ酸配列と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１０２または実施形態１０３に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１０５．ＩＬ１０Ｍ５のアミノ酸配列と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１０２～１０４のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１０６．ＩＬ１０Ｍ５のアミノ酸配列と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１０２～１０５のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１０７．ＩＬ１０Ｍ５のアミノ酸配列を含む、実施形態１０２～１０６のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１０８．ＩＬ１０Ｍ６（すなわち、配列番号３９のアミノ酸配列を有するＩＬ１０アゴニスト）のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＩＬ１０アゴニスト。
１０９．ＩＬ１０Ｍ６のアミノ酸配列と少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１０８に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１１０．ＩＬ１０Ｍ６のアミノ酸配列と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１０８または実施形態１０９に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１１１．ＩＬ１０Ｍ６のアミノ酸配列と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１０８～１１０のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１１２．ＩＬ１０Ｍ６のアミノ酸配列と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１０８～１１１のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１１３．ＩＬ１０Ｍ６のアミノ酸配列を含む、実施形態１０８～１１２のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１１４．ＩＬ１０Ｍ７（すなわち、配列番号４０のアミノ酸配列を有するＩＬ１０アゴニスト）のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＩＬ１０アゴニスト。
１１５．ＩＬ１０Ｍ７のアミノ酸配列と少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１１４に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１１６．ＩＬ１０Ｍ７のアミノ酸配列と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１１４または実施形態１１５に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１１７．ＩＬ１０Ｍ７のアミノ酸配列と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１１４～１１６のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１１８．ＩＬ１０Ｍ７のアミノ酸配列と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１１４～１１７のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１１９．ＩＬ１０Ｍ７のアミノ酸配列を含む、実施形態１１４～１１８のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１２０．ＩＬ１０Ｍ８（すなわち、配列番号４１のアミノ酸配列を有するＩＬ１０アゴニスト）のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＩＬアゴニスト。
１２１．ＩＬ１０Ｍ８のアミノ酸配列と少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１２０に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１２２．ＩＬ１０Ｍ８のアミノ酸配列と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１２０または実施形態１２１に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１２３．ＩＬ１０Ｍ８のアミノ酸配列と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１２０～１２２のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１２４．ＩＬ１０Ｍ８のアミノ酸配列と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１２０～１２３のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１２５．ＩＬ１０Ｍ８のアミノ酸配列を含む、実施形態１２０～１２４のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１２６．ＩＬ１０Ｍ９（すなわち、配列番号４２のアミノ酸配列を有するＩＬ１０アゴニスト）のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＩＬ１０アゴニスト。
１２７．ＩＬ１０Ｍ９のアミノ酸配列と少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１２６に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１２８．ＩＬ１０Ｍ９のアミノ酸配列と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１２６または実施形態１２７に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１２９．ＩＬ１０Ｍ９のアミノ酸配列と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１２６～１２８のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１３０．ＩＬ１０Ｍ９のアミノ酸配列と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１２６～１２９のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１３１．ＩＬ１０Ｍ９のアミノ酸配列を含む、実施形態１２６～１３０のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１３２．ＩＬ１０Ｍ１０（すなわち、配列番号４３のアミノ酸配列を有するＩＬ１０アゴニスト）のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＩＬ１０アゴニスト。
１３３．ＩＬ１０Ｍ１０のアミノ酸配列と少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１３２に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１３４．ＩＬ１０Ｍ１０のアミノ酸配列と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１３２または実施形態１３３に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１３５．ＩＬ１０Ｍ１０のアミノ酸配列と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１３２～１３４のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１３６．ＩＬ１０Ｍ１０のアミノ酸配列と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１３２～１３５のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１３７．ＩＬ１０Ｍ１０のアミノ酸配列を含む、実施形態１３２～１３６のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１３８．ＩＬ１０Ｍ１１（すなわち、配列番号４４のアミノ酸配列を有するＩＬ１０アゴニスト）のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＩＬ１０アゴニスト。
１３９．ＩＬ１０Ｍ１１のアミノ酸配列と少なくとも９６％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１３８に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１４０．ＩＬ１０Ｍ１１のアミノ酸配列と少なくとも９７％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１３８または実施形態１３９に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１４１．ＩＬ１０Ｍ１１のアミノ酸配列と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１３８～１４０のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１４２．ＩＬ１０Ｍ１１のアミノ酸配列と少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態１３８～１４１のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１４３．ＩＬ１０Ｍ１１のアミノ酸配列を含む、実施形態１３８～１４２のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１４４．標的化部分をさらに含む、実施形態１～１４３のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１４５．前記標的化部分がＦｃドメインのＮ末端側にあり、ヒンジドメインが存在するならば、該ヒンジドメインのＮ末端側にある、実施形態１４４に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１４６．前記標的化部分が、
（ａ）腫瘍関連抗原に結合し；
（ｂ）腫瘍微小環境抗原に結合し；
（ｃ）腫瘍反応性リンパ球の細胞表面分子に結合し；または
（ｄ）チェックポイント阻害剤に結合する、
実施形態１４４または実施形態１４５に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１４７．前記標的化部分が腫瘍関連抗原に結合する、実施形態１４６に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１４８．前記腫瘍関連抗原が、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、テネイシン－ＣのＡ１ドメイン（ＴＮＣ Ａ１）、テネイシン－ＣのＡ２ドメイン（ＴＮＣ Ａ２）、フィブロネクチンのエキストラドメインＢ（ＥＤＢ）、黒色腫関連コンドロイチン硫酸プロテオグリカン（ＭＣＳＰ）、ＭＡＲＴ－１／メランＡ、ｇｐ１００、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）、アデノシンデアミナーゼ結合タンパク質（ＡＤＡｂｐ）、シクロフィリンｂ、結腸直腸関連抗原（ＣＲＣ）－Ｃ０１７－１Ａ／ＧＡ７３３、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）ならびにその免疫原性エピトープＣＡＰ－１およびＣＡＰ－２、ｅｔｖ６、ａｍｌ１、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）もしくはその免疫原性エピトープＰＳＡ－１、ＰＳＡ－２およびＰＳＡ－３、前立腺特異膜抗原（ＰＳＭＡ）、Ｔ細胞受容体／ＣＤ３ζ鎖、ＭＡＧＥファミリーの腫瘍抗原（例えば、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－Ａ５、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＧＥ－Ａ７、ＭＡＧＥ－Ａ８、ＭＡＧＥ－Ａ９、ＭＡＧＥ－Ａ１０、ＭＡＧＥ－Ａ１１、ＭＡＧＥ－Ａ１２、ＭＡＧＥ－Ｘｐ２（ＭＡＧＥ－Ｂ２）、ＭＡＧＥ－Ｘｐ３（ＭＡＧＥ－Ｂ３）、ＭＡＧＥ－Ｘｐ４（ＭＡＧＥ－Ｂ４）、ＭＡＧＥ－Ｃ１、ＭＡＧＥ－Ｃ２、ＭＡＧＥ－Ｃ３、ＭＡＧＥ－Ｃ４、ＭＡＧＥ－Ｃ５）、ＧＡＧＥファミリーの腫瘍抗原（例えば、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＧＡＧＥ－３、ＧＡＧＥ－４、ＧＡＧＥ－５、ＧＡＧＥ－６、ＧＡＧＥ－７、ＧＡＧＥ－８、ＧＡＧＥ－９）、ＢＡＧＥ、ＲＡＧＥ、ＬＡＧＥ－１、ＮＡＧ、ＧｎＴ－Ｖ、ＭＵＭ－１、ＣＤＫ４、チロシナーゼ、ｐ５３、ＭＵＣファミリー、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ｐ２１ｒａｓ、ＲＣＡＳ１、α－フェトプロテイン、Ｅ－カドヘリン、α－カテニン、β－カテニンおよびγ－カテニン、ｐ１２０ｃｔｎ、ｇｐ１００ Ｐｍｅｌ１１７、ＰＲＡＭＥ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ｃｄｃ２７、大腸腺腫性ポリポーシスタンパク質（ＡＰＣ）、フォドリン、コネキシン３７、Ｉｇイディオタイプ、ｐ１５、ｇｐ７５、ＧＭ２およびＧＤ２ガングリオシド、ウイルス産物、例えば、ヒト乳頭腫ウイルスタンパク質、Ｓｍａｄファミリーの腫瘍抗原、Ｉｍｐ－１、Ｐ１Ａ、ＥＢＶによりコードされる核抗原（ＥＢＮＡ）－１、脳グリコーゲンホスホリラーゼ、ＳＳＸ－１、ＳＳＸ－２（ＨＯＭ－ＭＥＬ－４０）、ＳＳＸ－１、ＳＳＸ－４、ＳＳＸ－５、ＳＣＰ－１およびＣＴ－７、ｃ－ｅｒｂＢ－２、Ｈｅｒ２、ＥＧＦＲ、ＩＧＦ－１Ｒ、ＣＤ２（Ｔ細胞表面抗原）、ＣＤ３（ＴＣＲに関連するヘテロ多量体）、ＣＤ２２（Ｂ細胞受容体）、ＣＤ２３（低結合親和性ＩｇＥ受容体）、ＣＤ３０（サイトカイン受容体）、ＣＤ３３（骨髄系細胞表面抗原）、ＣＤ４０（腫瘍壊死因子受容体）、ＩＬ－６Ｒ（ＩＬ６受容体）、ＣＤ２０、ＭＣＳＰ、ＰＤＧＦβＲ（β－血小板由来増殖因子受容体）、ＥｒｂＢ２上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）、ＥＧＦＲバリアントＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、ＣＤ１９、ジシアロガングリオシドＧＤ２、導管上皮ムチン、ｇｐ３６、ＴＡＧ－７２、神経膠腫関連抗原、β－ヒト絨毛性ゴナドトロピン、αフェトプロテイン（ＡＦＰ）、レクチン反応性ＡＦＰ、サイログロブリン、ＭＮ－ＣＡ ＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２（ＡＳ）、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔ ｈｓｐ７０－２、Ｍ－ＣＳＦ、プロスターゼ（ｐｒｏｓｔａｓｅ）、プロスターゼ特異抗原（ｐｒｏｓｔａｓｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ）（ＰＳＡ）、ＰＡＰ、ＬＡＧＡ－１ａ、ｐ５３、プロステイン（ｐｒｏｓｔｅｉｎ）、ＰＳＭＡ、サバイビンおよびテロメラーゼ、前立腺がん腫瘍抗原－１（ＰＣＴＡ－１）、ＥＬＦ２Ｍ、好中球エラスターゼ、エフリンＢ２、インスリン増殖因子（ＩＧＦ１）－Ｉ、ＩＧＦ－ＩＩ、ＩＧＦＩ受容体、５Ｔ４、ＲＯＲ１、Ｎｋｐ３０、ＮＫＧ２Ｄ、腫瘍間質抗原、フィブロネクチンのエキストラドメインＡ（ＥＤＡ）もしくはエキストラドメインＢ（ＥＤＢ）、またはテネイシン－ＣのＡ１ドメイン（ＴｎＣ Ａ１）である、実施形態１４７に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１４９．前記腫瘍関連抗原がウイルス抗原である、実施形態１４７に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１５０．前記ウイルス抗原が、エプスタイン・バー（Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ）ウイルスＬＭＰ－１、Ｃ型肝炎ウイルスＥ２糖タンパク質、ＨＩＶ ｇｐ１６０、もしくはＨＩＶ ｇｐ１２０、ＨＰＶ Ｅ６ｍ、ＨＰＶ Ｅ７、ＣＭＶ初期膜抗原（ＥＭＡ）またはＣＭＶ後期膜抗原（ＬＭＡ）である、実施形態１４９に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１５１．前記標的化部分が腫瘍微小環境抗原に結合する、実施形態１４６に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１５２．前記腫瘍微小環境抗原が細胞外マトリックスタンパク質である、実施形態１５１に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１５３．前記細胞外マトリックスタンパク質が、シンデカン、ヘパラナーゼ、インテグリン、オステオポンチン、リンク（ｌｉｎｋ）、カドヘリン、ラミニン、ラミニンＥＧＦ型、レクチン、フィブロネクチン、ノッチ、テネイシン、コラーゲン、またはマトリキシンである、実施形態１５２に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１５４．前記標的化部分が腫瘍反応性リンパ球の細胞表面分子に結合する、実施形態１４６に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１５５．前記細胞表面分子が、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、またはＢ７－Ｈ３である、実施形態１５４に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１５６．前記標的化部分がチェックポイント阻害剤に結合する、実施形態１４６に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１５７．前記チェックポイント阻害剤が、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＰＤ１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＣＤ１６０、ＣＧＥＮ－１５０４９、ＣＨＫ１、ＶＩＳＴＡ、ＰＳＧＬ１、またはＣＨＫ２である、実施形態１５６に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１５８．前記チェックポイント阻害剤がＰＤ１である、実施形態１５７に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１５９．前記標的化部分がＭＨＣ－ペプチド複合体に結合する、実施形態１４４または実施形態１４５に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１６０．前記ペプチド－ＭＨＣ複合体におけるペプチドが腫瘍ネオ抗原を含む、実施形態１５９に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１６１．前記腫瘍ネオ抗原が、ＬＣＭＶ由来ペプチドｇｐ３３－４１、ＡＰＦ（１２６－１３４）、ＢＡＬＦ（２７６－２８４）、ＣＥＡ（５７１－５７９）、ＣＭＶ ｐｐ６５（４９５－５０３）、ＦＬＵ－Ｍ１（５８－６６）、ｇｐ１００（１５４－１６２）、ｇｐ１００（２０９－２１７）、ＨＢＶ Ｃｏｒｅ（１８－２７）、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ（３６９－３７７；Ｖ２ｖ９）；ＨＰＶ Ｅ７（１１－２０）、ＫＬＫ４（１１－１９）、ＬＭＰ１（１２５－１３３）、ＭＡＧ－Ａ３（１１２－１２０）、ＮＹＥＳＯ１（１５７－１６５、Ｃ１６５Ａ）、ＮＹＥＳＯ１（１５７－１６５、Ｃ１６５Ｖ）、ｐ５４ ＷＴ（２６４－２７２）、ＰＡＰ－３（１３６－１４３）、ＰＳＭＡ（４－１２）、ＰＳＭＡ（１３５－１４５）、サバイビン（９６－０１４）、チロシナーゼ（３６９－３７７、３７１Ｄ）、またはＷＴ１（１２６－１３４）である、実施形態１６０に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１６２．前記標的化部分が抗体またはその抗原結合断片である、実施形態１４４～１６１のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１６３．前記標的化部分がＦａｂである、実施形態１６２に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１６４．前記標的化部分がｓｃＦｖである、実施形態１６２に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１６５．前記標的化部分がチェックポイント阻害剤に結合せず、任意選択で、該チェックポイント阻害剤がＰＤ１である、実施形態１４４～１６４のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１６６．チェックポイント阻害剤に結合する標的化ドメインを欠き、任意選択で、該チェックポイント阻害剤がＰＤ１である、実施形態１～１６４のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１６７．標的化部分を欠く、実施形態１～１３９のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１６８．標的化部分、例えば、限定はされないが、
（ａ）腫瘍関連抗原に結合する；
（ｂ）腫瘍微小環境抗原に結合する；
（ｃ）腫瘍反応性リンパ球の細胞表面分子に結合する；または
（ｄ）チェックポイント阻害剤に結合する
標的化部分を欠く、実施形態１～９９および１６７のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１６９．ＰＤ１に結合する標的化部分を欠く、実施形態１６８に記載のＩＬアゴニスト。
１７０．ＣＨ１ドメインを欠く、実施形態１～１３９および１６５のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１７１．ＣＬドメインを欠く、実施形態１～１３９、１６５および１６８のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１７２．抗体可変領域を欠く、実施形態１～１３９および１６５～１７１のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１７３．親水性ポリマーをさらに含む、実施形態１～１７２のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１７４．前記親水性ポリマーがポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）である、実施形態１７３に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１７５．前記ＰＥＧが、約７．５ｋＤａから約８０ｋＤａまでの範囲の分子量を有する、実施形態１７４に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１７６．前記ＰＥＧが、約３０ｋＤａから約６０ｋＤａまでの範囲の分子量を有し、任意選択で、前記分子量が約５０ｋＤａである、実施形態１７５に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１７７．安定化部分を含む、実施形態１～１７２のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１７８．前記安定化部分が、アルブミン、ヒト血清アルブミン結合剤、ＸＴＥＮ、ＰＡＳ、親水性ポリマー、ポリシアル酸または脂肪酸である、実施形態１７７に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１７９．ポリエチレングリコールとコンジュゲートしていない、実施形態１～１７２のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１８０．アルブミンとコンジュゲートしていない、実施形態１～１７２および１７９のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１８１．ヒト血清アルブミン結合剤とコンジュゲートしていない、実施形態１～１７２、１７９および１８０のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１８２．ＸＴＥＮとコンジュゲートしていない、実施形態１～１７２および１７９～１８１のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１８３．ＰＡＳとコンジュゲートしていない、実施形態１～１７２および１７９～１８２のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１８４．親水性ポリマーとコンジュゲートしていない、実施形態１～１７２および１７９～１８３のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１８５．ポリシアル酸とコンジュゲートしていない、実施形態１～１７２および１７９～１８４のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１８６．ヒドロキシエチルデンプンとコンジュゲートしていない、実施形態１～１７２および１７９～１８５のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１８７．脂肪酸とコンジュゲートしていない、実施形態１～１７２および１７９～１８６のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１８８．Ｎ連結グリカンを含まない、実施形態１～１７２および１７９～１８７のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１８９．Ｏ連結グリカンを含まない、実施形態１～１７２および１７９～１８７のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１９０．安定化部分を欠く、実施形態１～１７２および１７９～１８９のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１９１．ＩＬ４を含有しない、実施形態１～１８０のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１９２．ＩＬ１０以外のいかなるサイトカインも含有しない、実施形態１～１９１のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１９３．ＩＬ１０部分のＣ末端側にＦｃドメインを含有しない、実施形態１～１９２のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１９４．哺乳動物細胞における組換え細胞発現の産物である、実施形態１～１９３のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト。
１９５．前記哺乳動物細胞がマウス細胞株のものである、実施形態１９４に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１９６．前記哺乳動物細胞がラット細胞株のものである、実施形態１９４に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１９７．前記哺乳動物細胞がサル細胞株のものである、実施形態１９４に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１９８．前記哺乳動物細胞がヒト細胞株のものである、実施形態１９４に記載のＩＬ１０アゴニスト。
１９９．実施形態１～１９８のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニストをコードする、１つの核酸または複数の核酸。
２００．実施形態１～１９８のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニストまたは実施形態１９４に記載の核酸を発現するように操作された宿主細胞。
２０１．前記宿主細胞がマウス細胞株のものである、実施形態２００に記載の宿主細胞。
２０２．前記哺乳動物細胞がラット細胞株のものである、実施形態２００に記載のＩＬ１０アゴニスト。
２０３．前記哺乳動物細胞がサル細胞株のものである、実施形態２００に記載のＩＬ１０アゴニスト。
２０４．前記哺乳動物細胞がヒト細胞株のものである、実施形態２００に記載のＩＬ１０アゴニスト。
２０５．実施形態２００～２０４のいずれか１つに記載の宿主細胞を培養する工程およびそれによって発現された前記ＩＬ１０アゴニストを回収する工程を含む、実施形態１～１９８のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニストを生産する方法。
２０６．（ａ）前記回収されたＩＬ１０アゴニストを、前記ＩＬ１０アゴニストを捕捉するように構成されたアフィニティーカラムと接触させる工程；
（ｂ）前記アフィニティーカラムから溶出させて溶出液を生じさせる工程；および
（ｃ）前記溶出液に対してサイズ排除クロマトグラフィーを実行する工程
をさらに含む、実施形態２０５に記載の方法。
２０７．前記アフィニティーカラムがプロテインＡアフィニティーカラムである、実施形態２０６に記載の方法。
２０８．（ａ）実施形態２００～２０４のいずれか１つに記載の宿主細胞を培養する工程；および
（ｂ）それによって発現されたＩＬ１０アゴニストを回収する工程
を含む方法によって生産されるＩＬ１０アゴニスト。
２０９．前記方法が、
（ａ）前記回収されたＩＬ１０アゴニストを、前記ＩＬ１０アゴニストを捕捉するように構成されたアフィニティーカラムと接触させる工程；
（ｂ）前記アフィニティーカラムから溶出させて溶出液を生じさせる工程；および
（ｃ）前記溶出液に対してサイズ排除クロマトグラフィーを実行する工程
をさらに含む、実施形態２０８に記載のＩＬ１０アゴニスト。
２１０．実施形態２０５～２０７のいずれか１つの方法によって調製されたＩＬ１０アゴニストを、賦形剤とともに製剤化する工程を含む、医薬組成物を調製する方法。
２１一実施形態１～１９８のいずれか１つのＩＬ１０アゴニストと賦形剤とを含む医薬組成物。
２１２．実施形態２１０に記載の方法によって得られる医薬組成物。
２１３．少なくとも１０ｍｇの前記ＩＬ１０アゴニストを含む、実施形態２１０または実施形態２１１に記載の医薬組成物。
２１４．少なくとも２０ｍｇの前記ＩＬ１０アゴニストを含む、実施形態２１０または実施形態２１１に記載の医薬組成物。
２１５．少なくとも５０ｍｇの前記ＩＬ１０アゴニストを含む、実施形態２１０または実施形態２１１に記載の医薬組成物。
２１６．サイズ排除超高性能液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＵＰＬＣ）による決定で、前記ＩＬ１０アゴニストの３０％未満が凝集体形態で存在する、実施形態２１１～２１５のいずれか１つに記載の医薬組成物。
２１７．サイズ排除超高性能液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＵＰＬＣ）による決定で、前記ＩＬ１０アゴニストの２５％未満が凝集体形態で存在する、実施形態２１１～２１６のいずれか１つに記載の医薬組成物。
２１８．サイズ排除超高性能液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＵＰＬＣ）による決定で、前記ＩＬ１０アゴニストの２０％未満が凝集体形態で存在する、実施形態２１１～２１７のいずれか１つに記載の医薬組成物。
２１９．サイズ排除超高性能液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＵＰＬＣ）による決定で、前記ＩＬ１０アゴニストの１５％未満が凝集体形態で存在する、実施形態２１１～２１８のいずれか１つに記載の医薬組成物。
２２０．サイズ排除超高性能液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＵＰＬＣ）による決定で、前記ＩＬ１０アゴニストの１０％未満が凝集体形態で存在する、実施形態２１１～２１９のいずれか１つに記載の医薬組成物。
２２１．サイズ排除超高性能液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＵＰＬＣ）による決定で、前記ＩＬ１０アゴニストの５％未満が凝集体形態で存在する、実施形態２１１～２２０のいずれか１つに記載の医薬組成物。
２２２．サイズ排除超高性能液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＵＰＬＣ）による決定で、検出可能な量の前記ＩＬ１０アゴニストの凝集物を含有しない、実施形態２１１～２１５のいずれか１つに記載の医薬組成物。
２２３．検出可能な量の前記ＩＬ１０アゴニストのＣ末端短縮バリアントを含有しない、実施形態２１１～２２２のいずれか１つに記載の医薬組成物。
２２４．炎症状態、免疫関連障害、線維性障害またはがんを治療する方法であって、それを必要とする対象に、実施形態１～１９８のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニストまたは実施形態２１１～２２３のいずれか１つに記載の医薬組成物を投与する工程を含む方法。
２２５．がんを治療する方法であり、該がんが固形腫瘍である、実施形態２２４に記載の方法。
２２６．前記固形腫瘍が結腸がんである、実施形態２２５に記載の方法。
２２７．前記固形腫瘍が黒色腫である、実施形態２２５に記載の方法。
２２８．前記固形腫瘍が扁平上皮がんである、実施形態２２５に記載の方法。
２２９．前記固形腫瘍がリンパ腫である、実施形態２２５に記載の方法。
２３０．前記固形腫瘍が膵臓の腫瘍である、実施形態２２５に記載の方法。
２３１．前記固形腫瘍が肺の腫瘍である、実施形態２２５に記載の方法。
２３２．前記ＩＬ１０アゴニストまたは医薬組成物が、５－フルオロウラシル、フォリン酸、および白金配位錯体と組み合わせて投与される、実施形態２２４～２３１のいずれか１つに記載の方法。
２３３．前記ＩＬ１０アゴニストまたは医薬組成物が皮下投与される、実施形態２２４～２３１のいずれか１つに記載の方法。
２３４．前記ＩＬ１０アゴニストまたは医薬組成物が静脈内投与される、実施形態２２４～２３１のいずれか１つに記載の方法。
２３５．前記固形腫瘍が、抗ＰＤ１抗体による治療に抵抗性である、実施形態２２４～２３４のいずれか１つに記載の方法。
２３６．前記固形腫瘍が、抗ＰＤ１抗体単剤療法による治療に抵抗性である、実施形態２２４～２３５のいずれか１つに記載の方法。
２３７．抗ＰＤ１抗体を対象に投与する工程をさらに含む、実施形態２２４～２３６のいずれか１つに記載の方法。
２３８．前記抗ＰＤ１抗体が、ＭＤＸ－１１０６（ニボルマブ）、ＭＫ－３４７５（ペムブロリズマブ）、ＭＥＤＩ－０６８０（ＡＭＰ－５１４）、ＰＤＲ００１、ＲＥＧＮ２８１０、またはＢＧＢ－１０８である、実施形態２３５～２３７のいずれか１つに記載の方法。
２３９．前記固形腫瘍におけるＣＤ８ Ｔ細胞密度の増加をもたらす、実施形態２２５～２３８のいずれか１つに記載の方法。
２４０．前記固形腫瘍におけるＣＤ８ Ｔ細胞密度の前記増加が、少なくとも２倍の増加である、実施形態２３９に記載の方法。
２４１．前記固形腫瘍におけるＣＤ８ Ｔ細胞密度の前記増加が、少なくとも３倍の増加である、実施形態２３９に記載の方法。
２４２．前記固形腫瘍におけるＣＤ８ Ｔ細胞密度の前記増加が、少なくとも４倍の増加である、実施形態２３９に記載の方法。
２４３．前記固形腫瘍におけるＣＤ４５＋免疫細胞浸潤の増加をもたらす、実施形態２２５～２４２のいずれか１つに記載の方法。
２４４．前記固形腫瘍におけるＣＤ４５＋免疫細胞浸潤の前記増加が５％の増加である、実施形態２４３に記載の方法。
２４５．前記固形腫瘍におけるＣＤ４５＋免疫細胞浸潤の前記増加が１０％の増加である、実施形態２４３に記載の方法。
２４６．前記固形腫瘍におけるＣＤ４５＋免疫細胞浸潤の前記増加が１５％の増加である、実施形態２４３に記載の方法。
２４７．前記固形腫瘍におけるＣＤ４５＋免疫細胞浸潤の前記増加が２０％の増加である、実施形態２４３に記載の方法。
２４８．前記ＣＤ４５＋免疫細胞が、ＣＤ４ Ｔ細胞、骨髄系細胞、またはＣＤ４ Ｔ細胞と骨髄系細胞の両方を含む、実施形態２４３～２４７のいずれか１つに記載の方法。
２４９．前記方法が、前記ＩＬ１０アゴニストもしくは医薬組成物による治療を受けていない好適な対照に比して、または前記ＩＬ１０アゴニストもしくは医薬組成物による治療の前の前記対象自身の血清ＩＬ１２レベルに比して、血清ＩＬ１２をアップレギュレートさせる、実施形態２２５～２４８のいずれか１つに記載の方法。
２５０．前記方法が、前記対照に比して、または前記ＩＬ１０アゴニストもしくは医薬組成物による治療の前の前記対象自身の血清ＩＬ１２レベルに比して、血清ＩＬ１２レベルを少なくとも２倍にアップレギュレートさせる、実施形態２４９に記載の方法。
２５１．前記方法が、前記対照に比して、または前記ＩＬ１０アゴニストもしくは医薬組成物による治療の前の前記対象自身の血清ＩＬ１２レベルに比して、血清ＩＬ１２レベルを少なくとも５倍にアップレギュレートさせる、実施形態２４９に記載の方法。
２５２．前記方法が、前記対照に比して、または前記ＩＬ１０アゴニストもしくは医薬組成物による治療の前の前記対象自身の血清ＩＬ１２レベルに比して、血清ＩＬ１２レベルを少なくとも１０倍にアップレギュレートさせる、実施形態２４９に記載の方法。
２５３．前記方法が、前記対照に比して、または前記ＩＬ１０アゴニストもしくは医薬組成物による治療の前の前記対象自身の血清ＩＬ１２レベルに比して、血清ＩＬ１２レベルを少なくとも１５倍にアップレギュレートさせる、実施形態２４９に記載の方法。
２５４．前記方法が、前記対照に比して、または前記ＩＬ１０アゴニストもしくは医薬組成物による治療の前の前記対象自身の血清ＩＬ１２レベルに比して、血清ＩＬ１２レベルを少なくとも２０倍にアップレギュレートさせる、実施形態２４９に記載の方法。
２５５．前記方法が、前記対照に比して、または前記ＩＬ１０アゴニストもしくは医薬組成物による治療の前の前記対象自身の血清ＩＬ１２レベルに比して、血清ＩＬ１２レベルを少なくとも２５倍にアップレギュレートさせる、実施形態２４９に記載の方法。
２５６．前記方法が、前記対照に比して、または前記ＩＬ１０アゴニストもしくは医薬組成物による治療の前の前記対象自身の血清ＩＬ１２レベルに比して、血清ＩＬ１２レベルを少なくとも３０倍にアップレギュレートさせる、実施形態２４９に記載の方法。
２５７．前記方法が、前記ＩＬ１０アゴニストもしくは医薬組成物による治療を受けていない好適な対照に比して、または前記ＩＬ１０アゴニストもしくは医薬組成物による治療の前の前記対象自身の血清ＩＬ４レベルに比して、血清ＩＬ４レベルをアップレギュレートさせる、実施形態２２５～２５６のいずれか１つに記載の方法。
２５８．前記方法が、前記対照に比して、または前記ＩＬ１０アゴニストもしくは医薬組成物による治療の前の対象自身の血清ＩＬ４レベルに比して、血清ＩＬ４レベルを少なくとも２倍にアップレギュレートさせる、実施形態２５７に記載の方法。
２５９．前記方法が、前記対照に比して、または前記ＩＬ１０アゴニストもしくは医薬組成物による治療の前の対象自身の血清ＩＬ４レベルに比して、血清ＩＬ４レベルを少なくとも５倍にアップレギュレートさせる、実施形態２５７に記載の方法。
２６０．前記方法が、前記対照に比して、または前記ＩＬ１０アゴニストもしくは医薬組成物による治療の前の対象自身の血清ＩＬ４レベルに比して、血清ＩＬ４レベルを少なくとも１０倍にアップレギュレートさせる、実施形態２５７に記載の方法。
２６１．前記方法が、前記対照に比して、または前記ＩＬ１０アゴニストもしくは医薬組成物による治療の前の対象自身の血清ＩＬ４レベルに比して、血清ＩＬ４レベルを少なくとも１５倍にアップレギュレートさせる、実施形態２５７に記載の方法。
２６２．前記方法が、前記対照に比して、または前記ＩＬ１０アゴニストもしくは医薬組成物による治療の前の対象自身の血清ＩＬ４レベルに比して、血清ＩＬ４レベルを少なくとも２０倍にアップレギュレートさせる、実施形態２５７に記載の方法。
２６３．がんの治療を必要とする対象に対して：
（ａ）キメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）を発現するＣＤ８＋ Ｔ細胞（「ＣＡＲＴ細胞」）；および
（ｂ）実施形態１～１９８のいずれか１つに記載のＩＬ１０アゴニスト、
を投与する工程を含む、がんを治療する方法。
２６４．前記ＩＬ１０アゴニストが、前記ＣＡＲＴ細胞の投与から１週間以内に前記対象に投与される、実施形態２６３に記載の方法。
２６５．前記ＩＬ１０アゴニストが、前記ＣＡＲＴ細胞の投与と同じ日に前記対象に投与される、実施形態２６４に記載の方法。
２６６．少なくとも２週間の期間にわたって前記対象に前記ＩＬ１０アゴニストによる投薬を行う工程を含む、実施形態２６３～２６５のいずれか１つに記載の方法。
２６７．前記ＩＬ１０アゴニストが連続注入によって投薬される、実施形態２６６に記載の方法。
２６８．前記ＩＬ１０アゴニストが、前記少なくとも２週間の期間の少なくとも一部分については毎日の投与によって投薬される、実施形態２６６に記載の方法。
２６９．前記ＩＬ１０アゴニストが、
（ａ）前記ＩＬ１０アゴニストを、前記少なくとも２週間の期間の最初の部分では第１の投薬頻度で投与する工程；および
（ｂ）前記ＩＬ１０アゴニストを、前記少なくとも２週間の期間の後続の部分では第２の投薬頻度で投与する工程
を含む分割投薬レジメンに従って投薬される、実施形態２６６に記載の方法。
２７０．前記第１の投薬頻度が毎日である、実施形態２６９に記載の方法。
２７１．前記第２の投薬頻度が第１の投薬頻度よりも低い、実施形態２６９または実施形態２７０に記載の方法。
２７２．前記第２の投薬頻度が毎週である、実施形態２７１に記載の方法。
２７３．前記ＣＡＲＴ細胞の枯渇と同時またはその後に、前記対象が第１の投薬頻度から第２の投薬頻度に移行する、実施形態２６９～２７２のいずれか１つに記載の方法。
２７４．前記がんが抗ＰＤ１抗体による治療に抵抗性である、実施形態２６３～２７３のいずれか１つに記載の方法。
２７５．前記がんが抗ＰＤ１抗体単剤療法による治療に抵抗性である、実施形態２６３～２７４のいずれか１つに記載の方法。
２７６．抗ＰＤ１抗体を対象に投与する工程をさらに含む、実施形態２６３～２７５のいずれか１つに記載の方法。
２７７．前記抗ＰＤ１抗体が、ＭＤＸ－１１０６（ニボルマブ）、ＭＫ－３４７５（ペムブロリズマブ）、ＭＥＤＩ－０６８０（ＡＭＰ－５１４）、ＰＤＲ００１、ＲＥＧＮ２８１０、またはＢＧＢ－１０８である、実施形態２７４～２７６のいずれか１つに記載の方法。
２７８．前記ＣＡＲが、５Ｔ４、αフェトプロテイン、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＣＡ－１２５、がん胎児性抗原、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ５６、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ｃ－Ｍｅｔ、ＣＳＰＧ４、Ｃ型レクチン様分子１（ＣＬＬ－１）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、上皮腫瘍抗原、ＥＲＢＢ２、ＦＬＴ３、葉酸結合タンパク質、ＧＤ２、ＧＤ３、ＨＥＲ１－ＨＥＲ２の組合せ、ＨＥＲ２－ＨＥＲ３の組合せ、ＨＥＲ２／Ｎｅｕ、ＨＥＲＶ－Ｋ、ＨＩＶ－１エンベロープ糖タンパク質ｇｐ４１、ＨＩＶ－１エンベロープ糖タンパク質ｇｐ１２０、ＩＬ－ＩＩＲα、κ鎖、λ鎖、黒色腫関連抗原、メソテリン、ＭＵＣ－１、変異型ｐ５３、変異型ｒａｓ、前立腺特異抗原、ＲＯＲ１、もしくはＶＥＧＦＲ２、またはそれらの組合せを標的とするように設計されている、実施形態２６３～２７７のいずれか１つに記載の方法。
２７９．前記ＣＡＲが、セクション６．１１．１およびそのサブセクションに従って構成される、実施形態２６３～２７８のいずれか１つに記載の方法。
２８０．前記ＩＬ１０アゴニストが、実施形態２１１～２２３のいずれか１つに記載の医薬組成物の形態にある、実施形態２６３～２７９のいずれか１つに記載の方法。
２８１．前記固形腫瘍におけるＣＤ８ Ｔ細胞密度の増加をもたらす、実施形態２６３～２８０のいずれか１つに記載の方法。
２８２．前記固形腫瘍におけるＣＤ８ Ｔ細胞密度の前記増加が、少なくとも２倍の増加である、実施形態２８１に記載の方法。
２８３．前記固形腫瘍におけるＣＤ８ Ｔ細胞密度の前記増加が、少なくとも３倍の増加である、実施形態２８１に記載の方法。
２８４．前記固形腫瘍におけるＣＤ８ Ｔ細胞密度の前記増加が、少なくとも４倍の増加である、実施形態２８１に記載の方法。
２８５．前記固形腫瘍におけるＣＤ４５＋免疫細胞浸潤の増加をもたらし、任意選択で、該増加が少なくとも１０％の増加である、実施形態２６３～２８１のいずれか１つに記載の方法。
２８６．前記固形腫瘍におけるＣＤ４５＋免疫細胞浸潤の前記増加が５％の増加である、実施形態２８５に記載の方法。
２８７．前記固形腫瘍におけるＣＤ４５＋免疫細胞浸潤の前記増加が１０％の増加である、実施形態２８５に記載の方法。
２８８．前記固形腫瘍におけるＣＤ４５＋免疫細胞浸潤の前記増加が１５％の増加である、実施形態２８５に記載の方法。
２８９．前記固形腫瘍におけるＣＤ４５＋免疫細胞浸潤の前記増加が２０％の増加である、実施形態２８５に記載の方法。
２９０．前記ＣＤ４５＋免疫細胞がＣＤ４ Ｔ細胞および骨髄系細胞を含む、実施形態２８５～２８９のいずれか１つに記載の方法。
２９１．前記方法が、前記ＩＬ１０または医薬組成物による治療を受けていない好適な対照に比して、血清ＩＬ１２レベルをアップレギュレートさせる、実施形態２６３～２８６のいずれか１つに記載の方法。
２９２．前記方法が、前記対照に比して、または前記ＩＬ１０アゴニストもしくは医薬組成物による治療の前の前記対象自身の血清ＩＬ１２レベルに比して、血清ＩＬ１２レベルを少なくとも２倍にアップレギュレートさせる、実施形態２９１に記載の方法。
２９３．前記方法が、前記対照に比して、または前記ＩＬ１０アゴニストもしくは医薬組成物による治療の前の前記対象自身の血清ＩＬ１２レベルに比して、血清ＩＬ１２レベルを少なくとも５倍にアップレギュレートさせる、実施形態２９１に記載の方法。
２９４．前記方法が、前記対照に比して、または前記ＩＬ１０アゴニストもしくは医薬組成物による治療の前の前記対象自身の血清ＩＬ１２レベルに比して、血清ＩＬ１２レベルを少なくとも１０倍にアップレギュレートさせる、実施形態２９１に記載の方法。
２９５．前記方法が、前記対照に比して、または前記ＩＬ１０アゴニストもしくは医薬組成物による治療の前の前記対象自身の血清ＩＬ１２レベルに比して、血清ＩＬ１２レベルを少なくとも１５倍にアップレギュレートさせる、実施形態２９１に記載の方法。
２９６．前記方法が、前記対照に比して、または前記ＩＬ１０アゴニストもしくは医薬組成物による治療の前の前記対象自身の血清ＩＬ１２レベルに比して、血清ＩＬ１２レベルを少なくとも２０倍にアップレギュレートさせる、実施形態２９１に記載の方法。
２９７．前記方法が、前記対照に比して、または前記ＩＬ１０アゴニストもしくは医薬組成物による治療の前の前記対象自身の血清ＩＬ１２レベルに比して、血清ＩＬ１２レベルを少なくとも２５倍にアップレギュレートさせる、実施形態２９１に記載の方法。
２９８．前記方法が、前記対照に比して、または前記ＩＬ１０アゴニストもしくは医薬組成物による治療の前の前記対象自身の血清ＩＬ１２レベルに比して、血清ＩＬ１２レベルを少なくとも３０倍にアップレギュレートさせる、実施形態２９１に記載の方法。
２９９．前記方法が、前記ＩＬ１０または医薬組成物による治療を受けていない好適な対照に比して、血清ＩＬ４レベルをアップレギュレートさせる、実施形態２６３～２９８のいずれか１つに記載の方法。
３００．前記方法が、前記対照に比して、または前記ＩＬ１０アゴニストもしくは医薬組成物による治療の前の対象自身の血清ＩＬ４レベルに比して、血清ＩＬ４レベルを少なくとも２倍にアップレギュレートさせる、実施形態２９９に記載の方法。
３０１．前記方法が、前記対照に比して、または前記ＩＬ１０アゴニストもしくは医薬組成物による治療の前の対象自身の血清ＩＬ４レベルに比して、血清ＩＬ４レベルを少なくとも５倍にアップレギュレートさせる、実施形態２９９に記載の方法。
３０２．前記方法が、前記対照に比して、または前記ＩＬ１０アゴニストもしくは医薬組成物による治療の前の対象自身の血清ＩＬ４レベルに比して、血清ＩＬ４レベルを少なくとも１０倍にアップレギュレートさせる、実施形態２９９に記載の方法。
３０３．前記方法が、前記対照に比して、または前記ＩＬ１０アゴニストもしくは医薬組成物による治療の前の対象自身の血清ＩＬ４レベルに比して、血清ＩＬ４レベルを少なくとも１５倍にアップレギュレートさせる、実施形態２９９に記載の方法。
３０４．前記方法が、前記対照に比して、または前記ＩＬ１０アゴニストもしくは医薬組成物による治療の前の対象自身の血清ＩＬ４レベルに比して、血清ＩＬ４レベルを少なくとも２０倍にアップレギュレートさせる、実施形態２９９に記載の方法。
本出願に引用されるすべての刊行物、特許、特許出願および他の文書は、それぞれ個々の刊行物、特許、特許出願または他の文書があらゆる目的のために参照により援用されるように個々に指示されているのと同じ程度に、あらゆる目的のためにそれらの全体が参照により本願明細書に援用される。本願明細書に援用される１つ以上の参考文献の教示と本開示との間に矛盾がある場合には、本願明細書の教示が意図される。

Claims (64)

  1. アミノ末端からカルボキシ末端へと、
    （ａ）ＩｇＧ Ｆｃドメイン；
    （ｂ）リンカー部分；および
    （ｃ）ＩＬ１０部分
    を含む、ＩＬ１０アゴニスト。
  2. 前記ＩｇＧ Ｆｃドメインが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはそれらの組合せ由来のＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む、請求項１に記載のＩＬ１０アゴニスト。
  3. 前記ＣＨ２およびＣＨ３ドメインがＩｇＧ１由来である、請求項１または請求項２に記載のＩＬ１０アゴニスト。
  4. 前記Ｆｃドメインが、配列番号３２と、または配列番号３３と、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、請求項３に記載のＩＬ１０アゴニスト。
  5. 前記ＣＨ２およびＣＨ３ドメインがＩｇＧ４由来である、請求項１または請求項２に記載のＩＬ１０アゴニスト。
  6. 前記Ｆｃドメインが、配列番号３１と、または配列番号３１のアミノ酸１８から２２８までと少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、請求項５に記載のＩＬ１０アゴニスト。
  7. 前記Ｆｃドメインのエフェクター機能が低下している、請求項１～６のいずれか１項に記載のＩＬ１０アゴニスト。
  8. 前記ＦｃドメインのＮ末端にヒンジドメインを含む、請求項１～７のいずれか１項に記載のＩＬ１０アゴニスト。
  9. 前記ヒンジドメインが、ＣＨ２および／またはＣＨ３ドメインと同じＩｇＧに由来する、請求項８に記載のＩＬ１０アゴニスト。
  10. 前記ヒンジドメインが、ＣＨ２および／またはＣＨ３ドメインとは異なるＩｇＧに由来する、請求項８に記載のＩＬ１０アゴニスト。
  11. 前記ヒンジドメインがキメラ性ヒンジ配列を含み、任意選択で、該キメラ性ヒンジ配列が配列番号１２または配列番号１３のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、請求項８～１０のいずれか１項に記載のＩＬ１０アゴニスト。
  12. 前記リンカー部分が、ＧｎＳまたはＳＧｎの単量体または多量体を含むかまたはそれからなり、ｎが１から７までの整数である、請求項１～１１のいずれか１項に記載のＩＬ１０アゴニスト。
  13. 前記リンカーが、アミノ酸配列Ｇ４Ｓ（配列番号５１）の単量体または多量体を含む、請求項１～１２のいずれか１項に記載のＩＬ１０アゴニスト。
  14. 前記リンカーが、アミノ酸配列Ｇ４Ｓ（配列番号５１）の１回、２回または３回の反復を含む、請求項１～１３のいずれか１項に記載のＩＬ１０アゴニスト。
  15. 前記リンカーが前記Ｆｃドメインと前記ＩＬ１０部分とを接続する、請求項１～１４のいずれか１項に記載のＩＬ１０アゴニスト。
  16. 前記ＩＬ１０部分が、成熟ヒトＩＬ１０（配列番号１）と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、請求項１～１５のいずれか１項に記載のＩＬ１０アゴニスト。
  17. 前記ＩＬ１０部分が、成熟マウスＩＬ１０（配列番号３０）と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、請求項１～１５のいずれか１項に記載のＩＬ１０アゴニスト。
  18. ホモ二量体である、請求項１から１７のいずれか１項に記載のＩＬ１０アゴニスト。
  19. ヘテロ二量体である、請求項１～１７のいずれか１項に記載のＩＬ１０アゴニスト。
  20. ２つのＦｃドメインを含み、任意選択で、前記ＩＬ１０アゴニストは該Ｆｃドメインを介して二量体化している、請求項１８または請求項１９に記載のＩＬ１０アゴニスト。
  21. 前記ＩＬ１０部分が、ＩＬ１０部分ドメイン間領域のヘリックスＤとヘリックスＥとの間に配置されたアミノ酸スペーサーを欠く、請求項１～２０のいずれか１項に記載のＩＬ１０アゴニスト。
  22. ポリエチレングリコールとコンジュゲートしていない、請求項１～２１のいずれか１項に記載のＩＬ１０アゴニスト。
  23. アルブミンとコンジュゲートしていない、請求項１～２２のいずれか１項に記載のＩＬ１０アゴニスト。
  24. ヒト血清アルブミン結合剤とコンジュゲートしていない、請求項１～２３のいずれか１項に記載のＩＬ１０アゴニスト。
  25. ＸＴＥＮ、ＰＡＳ、親水性ポリマー、ポリシアル酸、脂肪酸、またはヒドロキシエチルデンプンとコンジュゲートしていない、請求項１～２４のいずれか１項に記載のＩＬ１０アゴニスト。
  26. いかなる安定化部分ともコンジュゲートしていない、請求項１～２５のいずれか１項に記載のＩＬ１０アゴニスト。
  27. 前記ＩＬ１０部分が、Ｎ連結グリカン、Ｏ連結グリカン、またはＮ連結グリカンとＯ連結グリカンのいずれも含まない、請求項１～２６のいずれか１項に記載のＩＬ１０アゴニスト。
  28. 前記ＩＬ１０アゴニストは：
    （ａ）腫瘍関連抗原に結合する；
    （ｂ）腫瘍微小環境抗原に結合する；
    （ｃ）腫瘍反応性リンパ球の細胞表面分子に結合する；または
    （ｄ）チェックポイント阻害剤に結合する
    標的化部分を欠く、請求項１～２７のいずれか１項に記載のＩＬ１０アゴニスト。
  29. 前記ＩＬ１０アゴニストは、ＰＤ－１に結合する標的化部分を欠く、請求項１～２８のいずれか１項に記載のＩＬ１０アゴニスト。
  30. ＩＬ１０以外のいかなるサイトカインも含有しない、請求項１～２９のいずれか１項に記載のＩＬ１０アゴニスト。
  31. ＩＬ１０Ｍ１（配列番号３４）の配列と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＩＬ１０アゴニスト。
  32. ＩＬ１０Ｍ１のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、請求項３１に記載のＩＬ１０アゴニスト。
  33. ＩＬ１０Ｍ４（配列番号３７）の配列と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＩＬ１０アゴニスト。
  34. ＩＬ１０Ｍ４のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、請求項３３に記載のＩＬ１０アゴニスト。
  35. ＩＬ１０Ｍ５（配列番号３８）の配列と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＩＬ１０アゴニスト。
  36. ＩＬ１０Ｍ５のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、請求項３５に記載のＩＬ１０アゴニスト。
  37. ＩＬ１０Ｍ１１（配列番号４４）の配列と少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むかまたはそれからなるＩＬ１０アゴニスト。
  38. ＩＬ１０Ｍ１１のアミノ酸配列を含むかまたはそれからなる、請求項３７に記載のＩＬ１０アゴニスト。
  39. 哺乳動物細胞における組換え発現の産物である、請求項１～３７のいずれか１項に記載のＩＬ１０アゴニスト。
  40. 請求項１～３９のいずれか１項に記載のＩＬ１０アゴニストをコードする１つの核酸または複数の核酸。
  41. 請求項１～３８のいずれか１項に記載のＩＬ１０アゴニストまたは請求項４０に記載の１つの核酸もしくは複数の核酸を発現するように操作された宿主細胞。
  42. 哺乳動物細胞である、請求項４１に記載の宿主細胞。
  43. 請求項４１または請求項４２に記載の宿主細胞を培養する工程およびそれによって発現された前記ＩＬ１０アゴニストを回収する工程を含む、請求項１～３８のいずれか１項に記載のＩＬ１０アゴニストを生産する方法。
  44. （ａ）前記回収されたＩＬ１０アゴニストを、前記ＩＬ１０アゴニストを捕捉するように構成されたアフィニティーカラムと接触させる工程であって、任意選択で、該アフィニティーカラムがプロテインＡアフィニティーカラムである、工程；
    （ｂ）該アフィニティーカラムから溶出させて溶出液を生じさせる工程；および
    （ｃ）該溶出液に対してサイズ排除クロマトグラフィーを実行する工程
    をさらに含む、請求項４２に記載の方法。
  45. （ａ）請求項４１または請求項４２に記載の宿主細胞を培養する工程、および（ｂ）それによって発現された前記ＩＬ１０アゴニストを回収する工程を含む方法によって生産されたＩＬ１０アゴニスト。
  46. 前記方法が、
    （ａ）前記回収されたＩＬ１０アゴニストを、前記ＩＬ１０アゴニストを捕捉するように構成されたアフィニティーカラムと接触させる工程；
    （ｂ）該アフィニティーカラムから溶出させて溶出液を生じさせる工程；および
    （ｃ）該溶出液に対してサイズ排除クロマトグラフィーを実行する工程
    をさらに含む、請求項４５に記載のＩＬ１０アゴニスト。
  47. （ａ）請求項４３もしくは請求項４４に記載の方法によって調製されたＩＬ１０アゴニスト、または（ｂ）請求項４５もしくは請求項４６に記載のＩＬ１０アゴニストを、賦形剤とともに製剤化する工程を含む、医薬組成物を調製する方法。
  48. （ａ）請求項１～３９、４５および４６のいずれか１項に記載のＩＬ１０アゴニスト、ならびに賦形剤、（ｂ）請求項４３もしくは請求項４４に記載の方法によって得られたＩＬ１０アゴニスト、または（ｃ）請求項４７に記載の方法によって得られたＩＬ１０アゴニストを含む、医薬組成物。
  49. 少なくとも１０ｍｇ、少なくとも２０ｍｇまたは少なくとも５０ｍｇの前記ＩＬ１０アゴニストを含む、請求項４８に記載の医薬組成物。
  50. サイズ排除超高性能液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＵＰＬＣ）による決定で、前記ＩＬ１０アゴニストの３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、または５％未満が凝集体形態で存在する、請求項４８または請求項４９に記載の医薬組成物。
  51. サイズ排除超高性能液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＵＰＬＣ）による決定で、検出可能な量の前記ＩＬ１０アゴニストの凝集物を含有しない、請求項４８または請求項４９に記載の医薬組成物。
  52. （ａ）検出可能な量の前記ＩＬ１０アゴニストのＣ末端短縮バリアントおよび／または（ｂ）検出可能な量の前記ＩＬ１０アゴニストのＮ末端短縮バリアントを含有しない、請求項４８～５１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  53. 請求項１～３９、４５もしくは４６のいずれか１項に記載のＩＬ１０アゴニストまたは請求項４８～５２のいずれか１項に記載の医薬組成物を、それを必要とする対象に投与する工程を含む、がんを治療する方法に使用するための請求項１～３９、４５もしくは４６のいずれか１項に記載のＩＬ１０アゴニストまたは請求項４８～５２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  54. がんが固形腫瘍である、請求項５３に記載のＩＬ１０アゴニストまたは医薬組成物。
  55. 前記固形腫瘍が、結腸がん、黒色腫、扁平上皮がん、リンパ腫、膵臓の腫瘍、または肺の腫瘍である、請求項５４に記載のＩＬ１０アゴニストまたは医薬組成物。
  56. 前記固形腫瘍が、抗ＰＤ１抗体による治療に抵抗性である、請求項５４または請求項５５に記載のＩＬ１０アゴニストまたは医薬組成物。
  57. 前記固形腫瘍が、抗ＰＤ１抗体単剤療法による治療に抵抗性である、請求項５４～５６のいずれか１項に記載のＩＬ１０アゴニストまたは医薬組成物。
  58. 抗ＰＤ１抗体を前記対象に投与する工程をさらに含む、請求項５３～５７のいずれか１項に記載のＩＬ１０アゴニストまたは医薬組成物。
  59. 前記抗ＰＤ１抗体が、ＭＤＸ－１１０６（ニボルマブ）、ＭＫ－３４７５（ペムブロリズマブ）、ＭＥＤＩ－０６８０（ＡＭＰ－５１４）、ＰＤＲ００１、ＲＥＧＮ２８１０、またはＢＧＢ－１０８である、請求項５３～５８のいずれか１項に記載のＩＬ１０アゴニストまたは医薬組成物。
  60. 前記固形腫瘍におけるＣＤ８ Ｔ細胞密度の増加をもたらし、任意選択で、該増加が少なくとも２倍の増加、少なくとも３倍の増加、または少なくとも４倍の増加である、請求項５４～５９のいずれか１項に記載のＩＬ１０アゴニストまたは医薬組成物。
  61. 前記固形腫瘍におけるＣＤ４５＋免疫細胞浸潤の増加をもたらし、任意選択で、前記増加が少なくとも１０％の増加である、請求項５４～６０のいずれか１項に記載のＩＬ１０アゴニストまたは医薬組成物。
  62. 前記ＣＤ４５＋免疫細胞が、ＣＤ４ Ｔ細胞、骨髄系細胞、またはＣＤ４ Ｔ細胞と骨髄系細胞の両方である、請求項６１に記載のＩＬ１０アゴニストまたは医薬組成物。
  63. 前記方法が、前記ＩＬ１０アゴニストもしくは医薬組成物による治療を受けていない好適な対照に比して、または前記ＩＬ１０アゴニストもしくは医薬組成物による治療の前の前記対象自身の血清ＩＬ１２レベルに比して、血清ＩＬ１２をアップレギュレートさせ、任意選択で、前記方法が、血清ＩＬ１２を、前記好適な対照に比して、またはＩＬ１０アゴニストもしくは医薬組成物による治療の前の前記対象自身の血清ＩＬ１２レベルに比して少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも２５倍、または少なくとも３０倍にアップレギュレートさせる、請求項５４～６２のいずれか１項に記載のＩＬ１０アゴニストまたは医薬組成物。
  64. 前記方法が、前記ＩＬ１０アゴニストもしくは医薬組成物による治療を受けていない好適な対照に比して、またはＩＬ１０アゴニストもしくは医薬組成物による治療の前の対象自身の血清ＩＬ４レベルに比して、血清ＩＬ４をアップレギュレートさせ、任意選択で、前記方法が、血清ＩＬ４を、前記好適な対照に比して、または前記ＩＬ１０アゴニストもしくは医薬組成物による治療の前の対象自身の血清ＩＬ４レベルに比して少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、または少なくとも２０倍にアップレギュレートさせる、請求項５４～６３のいずれか１項に記載のＩＬ１０アゴニストまたは医薬組成物。
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