JP2023524136A - マイクロ流体混合デバイス及び使用方法 - Google Patents

マイクロ流体混合デバイス及び使用方法 Download PDF

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Abstract

混合チャンバ;第1の流体のための該混合チャンバ(102)への1つの入口チャネル(104)と、第2の流体のための該混合チャンバへの2つの入口チャネル(103a, 103b)(前記入口チャネルは、該混合チャンバの近位端(108)に実質的に対称的に配置される);該混合チャンバの遠位端における混合材料のための少なくとも1つの出口(105)、を備えるマイクロ流体混合デバイス(101)であって、該混合チャンバが1つ以上のバッフルを備えることを特徴とする、マイクロ流体混合デバイス(101)。【選択図】図１０

Description

本発明は、リポソームアジュバントの製造における使用のマイクロ流体デバイス、このようなマイクロ流体デバイスを用いるアジュバントの製造方法、及び関連する態様に関する。
アジュバントは、特に免疫原性の低いサブユニットワクチンの場合、体液性及び細胞性免疫応答を改善するためのワクチンに含まれる。病原体による自然感染と同様に、アジュバントは自然免疫系の活性化に依存し、長期に持続する適応免疫を促進する。複数の先天性免疫経路の同時活性化は自然感染の特徴であるため、アジュバントは、ワクチン接種に対する適応免疫応答を促進するために、複数の免疫刺激剤を組み合わせることができる。
アジュバント系01(AS01)は、2つの免疫刺激剤である3-O-デスアシル-4'-モノホスホリルリピドA(3D-MPL)及びQS-21(Garcon and Van Mechelen、2011年; Didierlaurentら、2017年)を含むリポソームベースのアジュバントである。TLR4アゴニストである3D-MPLは、サルモネラミネソタ(Salmonella minnesota)由来のリポ多糖の非毒性誘導体である。QS-21は、南米の木であるシャボンノキ(Quillaja saponaria Molina)の樹皮から抽出した天然サポニン画分である(Kensilら、1991年; Ragupathiら、2011年)。AS01は、最近開発されたマラリアワクチンRTS,S(Mosquirix(商標))及び帯状疱疹HZ/suワクチン(Shingrix(商標)、並びに病原体、例えばヒト免疫不全ウイルス及び結核菌に対する開発中の多剤候補ワクチンに含まれる。これらの候補ワクチンの前臨床及び臨床評価中に、抗原特異的抗体とCD4+T細胞免疫の両方が一貫して観察された。AS01がワクチン接種に対する細胞性免疫応答を一貫して生成する能力は、典型的には主にワクチン接種に対する体液性応答を促進する他のアジュバントとは異なる(Blackら、2015年; Garcon and Van Mechelen、2011年)。同時に、AS01-アジュバントワクチンは、厄介な集団、例えば、乳児(RTS,S)及び高齢者(HZ/su)においてワクチン接種に対する免疫原性を促進するのに効果的であった。
3D-MPL及びQS-21は、免疫応答の誘導において相乗的に作用することが示されている。さらに、両方の免疫刺激剤が提供される様式は、誘導された応答の質に影響を及ぼす重要な因子であることが示されており、AS01におけるリポソーム提示は、水中油型エマルジョンベースのAS02よりも高い効力を提供する(Dendougaら、2012年)。
マイクロ流体デバイスは、少量の流体を混合するために使用することができ、それによって貴重な材料を節約することができる。しかしながら、これらは、一般的に、少量の生産物を調製するために研究環境で使用されてきた。産業的生産設定における有用性を見出すために、製造プロセスを単純化し、容易にする低コストのマイクロ流体デバイスが必要とされている。さらに、薬学的目的のために、このようなデバイスは、制御されたサイズ及び多分散性を維持しながら、ハイスループットでナノ粒子を確実に生成することができる必要がある。
国際特許出願第WO2018219521号は、リポソームアジュバントを含有するサポニンの製造のためのデバイス及び方法に関する。
国際特許出願第WO2020109365号(出願番号第PCT/EP2019/082689号)は、マイクロ流体力学を使用したアジュバントを含有するTLR4アゴニストの製造に関する。
国際特許出願第WO2020115178号(出願番号第PCT/EP2019/083758号)は、マイクロ流体デバイス、例えばアジュバントの製造に使用されるデバイスに関する。
Wongら、2003年は、計算流体力学を用いた静的混合要素(SME)を備えた十字型マイクロミキサにおける混合の研究を記載する。
国際特許出願第WO2015148764号は、分析物の定量に使用することを意図したマイクロ流体デバイスを記載する。
欧州特許出願第EP1810746号は、周期的に変化する断面積を介して非相溶性流体の合体時の液滴形成を促進することを意図したマイクロ流体デバイスを記載する。
従来技術の製造アプローチから生じる免疫学的性能を維持しながら、商業的に実行可能なスケールで物質、例えばリポソームアジュバントの安全であり、便利であり、及びコスト効率の良い生産を可能にする新しい製造アプローチの必要性が依然として存在する。
本発明は、混合チャンバ；第1の流体のための該混合チャンバへの1つの入口チャネルと、第2の流体のための該混合チャンバへの2つの入口チャネル(上記入口チャネルは、該混合チャンバの近位端に実質的に対称的に配置される)；該混合チャンバの遠位端における混合材料のための少なくとも1つの出口、を備えるマイクロ流体混合デバイスであって、該混合チャンバが1つ以上のバッフルを備えることを特徴とする、マイクロ流体混合デバイスを提供する。
さらに、マイクロ流体デバイスを用いてリポソームアジュバントを製造する方法であって、
(a)デバイス内で、溶媒と脂質を含む第1の溶液、及び水を含む第2の溶液を混合する工程；並びに
(b)溶媒を除去する工程
を含む方法が提供される。
本発明はまた、マイクロ流体デバイスを用いてリポソームアジュバントを調製する際の使用のリポソーム濃縮物を製造する方法であって、デバイス内で、溶媒と脂質を含む第1の溶液、及び水を含む第2の溶液を混合する工程を含む方法を提供する。
さらに、本明細書に記載される方法から得られるリポソームアジュバント及びリポソーム濃縮物、例えば該方法から得られたリポソームアジュバント及びリポソーム濃縮物が提供される。
一般的なマイクロ流体デバイス構成を示す図である。 WO2018219521の従来技術のマイクロ流体デバイス(本明細書において「設計1」と称する)からの概略図を示す。寸法はmmである。 流体流に対する中央チャネル構成の影響の計算流体力学(CFD)シミュレーションを示す図である。 図３－１の続き。 同一の総流速（総流量）及び流速比(合計16ml/分、4:1の外部/内部チャネル)を用いた、実施例2の各設計に対する計算流体力学シミュレーションの結果を示す図である。 実施例2の各設計に対する混合性能の比較を示す図である(設計1及び2の行が正確にオーバーレイしていることに留意されたい)。x軸は全チャンバ長の割合として混合チャンバの長さに沿った位置に対応し、y軸は混合係数(アルファ(Alpha)/アルファ(Alfa))であり、混合係数の高い値は良好な混合を示す。 実施例3の19の設計の各々について決定される最終混合係数(アルファ(Alpha)/アルファ(Alfa))を示す図である。混合チャンバ(MC)の幅は1mm、2mm又は3mmのいずれかであり、内部チャネル(CapInt)の幅は0.1mm、0.2mm又は0.3mmのいずれかであり、外部チャネル(CapExt)の幅は0.1mm、0.2mm又は0.3mmのいずれかであった。 実施例4対設計1(WO2018219521由来)からの修飾された幾何学の混合プロファイルの比較を示す図である。 4つの異なる深さ:0.4mm、0.5mm、0.6mm及び0.675mmを使用したチャネル深さの衝撃に関する実施例5の結果を示す図である。x軸は全チャンバ長の割合として混合チャンバの長さに沿った位置に対応し、y軸は混合係数(アルファ(Alpha)/アルファ(Alfa))であり、混合係数の高い値は良好な混合を示す。 実施例6からの各設計について得られたリポソームアジュバントサイズ(A)及びPDI(B)の概要を示す図である。 バッフルを組み込む一般的なマイクロ流体デバイス構成(A)、及びバッフルを組み込む混合チャンバの幅を減少させるマイクロ流体デバイス構成(B)を示す図である。 設計の詳細(ケース1～10)及び実施例7からの種々のバッフル配置の影響の計算流体力学シミュレーションを示す図である。(A)パラメータの表、(B)CFDシミュレーション。 設計の詳細(ケース1～10)及び実施例7からの種々のバッフル配置の影響の計算流体力学シミュレーションを示す図である。(A)パラメータの表、(B)CFDシミュレーション。 図１１Ｂ－１の続き。 図１１Ｂ－１の続き。 図１１Ｂ－１の続き。 実施例7からのケース1～10の混合プロファイルの比較を示す図である。 設計の詳細(ケース11～15)及び実施例7からの種々のバッフル配置の影響の計算流体力学シミュレーションを示す図である。(A)パラメータの表、(B)CFDシミュレーション。 設計の詳細(ケース11～15)及び実施例7からの種々のバッフル配置の影響の計算流体力学シミュレーションを示す図である。(A)パラメータの表、(B)CFDシミュレーション。 実施例7からのケース11～15の混合プロファイルの比較を示す図である。 設計の詳細(ケース16～21)及び実施例7からの種々のバッフル配置の影響の計算流体力学シミュレーションを示す図である。(A)パラメータの表、(B)CFDシミュレーション。 設計の詳細(ケース16～21)及び実施例7からの種々のバッフル配置の影響の計算流体力学シミュレーションを示す図である。(A)パラメータの表、(B)CFDシミュレーション。 実施例7からのケース16～21の混合プロファイルの比較を示す図である。 設計の詳細(ケース19b、19c、21b及び21c)及び実施例7からの種々のバッフル配置の衝撃の計算流体力学シミュレーションを示す図である。(A)パラメータの表、(B)CFDシミュレーション。 設計の詳細(ケース19b、19c、21b及び21c)及び実施例7からの種々のバッフル配置の衝撃の計算流体力学シミュレーションを示す図である。(A)パラメータの表、(B)CFDシミュレーション。 図１７Ｂ－１の続き。 実施例7からのケース19～21並びに19b、19c、21b及び21cの混合プロファイルの比較を示す図である。 設計4-1についての一般的なマイクロ流体デバイス構成(A)、設計4-1についての計算流体力学シミュレーション(B)、並びに設計4及び設計4-1についての混合プロファイルの実施例7からの比較(C)を示す図である。 設計4-1についての一般的なマイクロ流体デバイス構成(A)、設計4-1についての計算流体力学シミュレーション(B)、並びに設計4及び設計4-1についての混合プロファイルの実施例7からの比較(C)を示す図である。 設計4-1についての一般的なマイクロ流体デバイス構成(A)、設計4-1についての計算流体力学シミュレーション(B)、並びに設計4及び設計4-1についての混合プロファイルの実施例7からの比較(C)を示す図である。 実施例8からの異なるバッフル形状を組み込んだ一般的なマイクロ流体デバイス構成(A)及びバッフル形状の影響の計算流体力学シミュレーション(B)を示す図である。 実施例8からの異なるバッフル形状を組み込んだ一般的なマイクロ流体デバイス構成(A)及びバッフル形状の影響の計算流体力学シミュレーション(B)を示す図である。 実施例8からの異なるバッフル形状についての混合プロファイルの比較を示す図である。 設計4-1の模式図である。寸法はmmである。 図２２－１の続き。 設計6-4-3-1の模式図である。寸法はmmである。 図２３－１の続き。 設計6-4の模式図である。寸法はmmである。 図２４－１の続き。 設計6-5の模式図である。寸法はmmである。 図２５－１の続き。 実施例9からの設計4-1、6-4-3-1、6-4及び6-5対設計1(WO2018219521由来)から得られたリポソームアジュバントのサイズ(A)及びPDI(B)の概要を示す図である。 実施例9からの異なる総流速及び温度での設計4-1及び6-5について得られたリポソームアジュバントのサイズ及びPDIを示す図である。 実施例9からの異なる総流速及び温度での設計6-5について得られたリポソームアジュバントのサイズ及びPDIを示す図である。 実施例9からの異なる総流速及び温度での設計6-5について得られた総流速、温度及びサイズ設計空間を示す図である。 マイクロ流体デバイスの入口領域の6つの異なる実施(A～F)を示す概略図である。実施C及びEでは、2つの外側チャネルの各々の第1の端部は、互いに連続しており、共通の入口を共有している。 外部分配及び回収マニホールドを備えた2つの8個の混合チャンバチップの動作配置を示す図である。 リポソームアジュバントの製造のための商業的スケールのマルチチャンバプロセスの概略図である。 実施例10で使用されるように、一体化された入口及び出口分配マニホールドと、第1の流体、第2の流体及び混合材料のための単一接続とを備えた多層16混合チャンバチップ(設計6-5に基づく)のイメージを示す図である。 設計16Aの概略図-実施例10で使用されるように、一体化された入口分布(層2及び3)及び出口回収(層1)マニホールドを有する多層16混合チャンバチップ(層1)を示す図である。出口マニホールドは、層2に配置されたチャネルを介して混合チャンバの端部に接続される。 設計16Cの概略図-実施例10で使用されるように、一体化された入口分布(層2及び3)及び出口回収(層1)マニホールドを有する多層16混合チャンバチップ(層1)を示す図である。出口マニホールドは、混合チャンバの端部に直接接続される。
本発明は、混合チャンバ；第1の流体のための該混合チャンバへの1つの入口チャネルと、第2の流体のための該混合チャンバへの2つの入口チャネル(上記入口チャネルは、該混合チャンバの近位端に実質的に対称的に配置される)；該混合チャンバの遠位端における混合材料のための少なくとも1つの出口、を備えるマイクロ流体混合デバイスであって、該混合チャンバが1つ以上のバッフルを備えることを特徴とする、マイクロ流体混合デバイスを提供する。
マイクロ流体デバイス
用語「マイクロ流体デバイス」とは、流体試料を操作する(例えば、流動する、混合するなど)ためのミクロンスケール寸法(すなわち、1mm未満の寸法)を有する少なくとも1つのチャネルを備えるデバイスを指す。本発明のマイクロ流体デバイスは、受動デバイスであり、可動部品を含まず、デバイスを通る流体の流れを駆動するために使用される圧力以外に、エネルギー入力に対する必要性を有さない。
用語「チップ」は、マイクロ流体デバイスが配置される構造を指し、典型的には、デバイスは、材料、例えばガラス、シリコン又はポリマー、例えばポリジメチルシロキサンにエッチング又は成形される。チップは、複数のマイクロ流体デバイスを含有することができ、また、分配及び/又は回収マニホールドを一体化して、チップ内に含有される複数のマイクロ流体デバイスへの流体の分配及び回収を支援することができる。製造の便宜上、チップは、複数の層から形成することができる。
図1は、本発明のマイクロ流体デバイス(101)のいくつかの一般的な特徴の平面図を提供する。デバイスは、入口領域(106)を含む近位端(108)と出口領域(105)を含む遠位端(107)の間に延在し、入口領域は、第1の流体を輸送するための内側入口チャネル(104)と、第2の流体を輸送するための2つの外側入口チャネル(103a、103b)とを含み、上記外側入口チャネル(103a、103b)はそれぞれ第1の外壁(109a)及び第2の外壁(109b)によって部分的に画定され、内側入口チャネルは、2つの外側チャネルの間に配置され、内側入口チャネル(104)及び外側入口チャネル(103a、103b)は、近位端(108)から、入口領域(106)の遠位端から出口領域(105)の近位端まで延在する混合チャンバ(102)まで延在し、混合チャンバ(102)は、内側及び外側入口チャネル(103a、103b、104)と流体連通し、内側及び外側入口チャネル(103a、103b、104)から第1及び第2の流体を受け取り、混合チャンバ(102)は幅(W)を有し、幅(W)は場合により混合チャンバ(102)の長さ(L)に沿って変化することができ、又は、例えば、幅(W)は、2つの外側チャネル(103a、103b)の外壁(109a、109b)の間の幅(W1)と等しくてもよい。特に、混合チャンバ(102)は、2つの外側入口チャネル(103a、103b)のそれぞれの外壁(109a、109b)と連続している、第1の外壁(109c)及び第2の外壁(109d)によって部分的に画定される。より具体的には、外部入口チャネルの外壁(109a、109b)及び混合チャンバの外壁(109c、109d)は、近位端(106)と遠位端(107)の間のデバイス(101)の実質的に全長にわたって延在する第1の壁(109a、109c)及び第2の壁(109b、109d)によって提供され得る。流れの一般的な方向が示される(F)。
WO2018219521は、特に、適切なサイズ及び多分散性制御を維持しながら、大量のリポソームアジュバントの製造のための、図2に示されるマイクロ流体デバイスの使用を記載する。本発明者らは驚くべきことに、このようなマイクロ流体デバイス内の混合が、混合チャンバへのバッフルの導入によってさらに改善され得ることを見出した。改良された混合は、次に、改善された多分散性を提供し得る。
混合チャンバの断面は、実質的に対称、例えば対称であるが、任意の形状であり得る。断面は、実質的に矩形(例えば正方形)であり得る。断面は、本質的に短径（細長い）であってもよく、より大きい寸法は、垂直寸法の少なくとも2倍であり、例えば、少なくとも3倍又は少なくとも4倍である。より大きな寸法は、垂直寸法の10倍以下であり得、例えば、8倍以下又は6倍以下であり得る。より大きな寸法は、通常、垂直寸法の1～10倍、例えば2～8倍、とりわけ3～5倍、特に3～4倍である。より大きな寸法は、垂直寸法の1.5～4倍であり得る。
混合チャンバは、液体が出口領域に到達するまでに混合が実質的に完了するのに十分な長さであるべきである。結果として、混合チャンバの最適な長さは、入口の正確な構成及び作動（運転）条件に依存し得る。過度に長い混合チャンバはスペースが無駄であり、したがって、混合チャンバが十分であるが、過度に長くないことが有益である。
適切には、混合チャンバの長さは、少なくとも15mm、例えば少なくとも17.5mm、とりわけ少なくとも20mm、特に少なくとも22mmである。適切には、混合チャンバの長さは100mm以下、例えば75mm以下、とりわけ50mm以下、特に40mm以下である。混合チャンバの長さは、15～100mm、例えば17.5～75mm、とりわけ20mm～50mm、特に約25mm、例えば25mmであり得る。
適切には、混合チャンバは、断面は実質的に矩形であり、例えば矩形である。
適切には、混合チャンバの最大幅は0.8～2.2mm、例えば1～2mm、とりわけ1.2～2mmである。望ましくは、混合チャンバの最大幅は1.4～1.8mm、特に約1.6mm、例えば1.6mmである。
混合チャンバの最大幅は0.8～1.2mm、特に約1mm、例えば1mmであり得る。
適切には、混合チャンバの最小幅は0.8～2.2mm、例えば1～2mm、とりわけ1.2～2mmである。望ましくは、混合チャンバの最小幅は1.4～1.8mm、特に約1.6mm、例えば1.6mmである。
混合チャンバの最小幅は0.8～1.2mm、特に約1mm、例えば1mmであり得る。
混合チャンバの最小幅は、0.4～1.2mm、例えば0.6～0.9mm、とりわけ約0.75mm、例えば0.75mmであり得る。
適切には、混合チャンバの最大幅及び混合チャンバの最小幅は、実質的に同じであり(すなわち、混合チャンバは、混合チャンバの長さに沿って実質的に等距離である側面を有する)、例えば同じである。あるいは、混合チャンバは、その長さに沿って幅を減少させ、例えば幅を最大50%まで減少させる。
幅の減少は、混合チャンバの長さに沿って連続的又は不連続的であり得る。混合チャンバの長さに沿った幅の連続的な減少は、直線的又は非直線的であり得る。
適切には、混合チャンバは、少なくとも0.05mmの深さ、例えば少なくとも0.1mmの深さ、とりわけ少なくとも0.2mmの深さ、特に少なくとも0.3mmの深さである。望ましくは、混合チャンバは、少なくとも0.4mmの深さである。適切には、混合チャンバは、10mm以下の深さ、例えば5mm以下の深さ、とりわけ2mm以下の深さ、特に1mm以下の深さである。望ましくは、混合チャンバは0.8mm以下の深さである。混合チャンバは、0.1～2mmの深さ、例えば0.3～0.8mmの深さ、とりわけ0.4～0.6mmの深さ、特に約0.5mmの深さ、例えば0.5mmの深さであり得る。
適切には、混合チャンバは、その長さに沿った実質的に一貫した深さ(すなわち、混合チャンバは、混合チャンバの長さに沿って実質的に等距離である上部及び下部を有する)、例えば一貫した深さを有する。あるいは、混合チャンバは、その長さに沿って深さを減少させ、例えば深さを50%まで減少させる。
深さの減少は、混合チャンバの長さに沿って連続的又は不連続的であり得る。混合チャンバの長さに沿った深さの連続的な減少は、直線的又は非直線的であり得る。
適切には、任意の点における混合チャンバの幅は、混合チャンバの深さの1～5倍である。
適切には、混合チャンバは、0.1～2.2mm2の断面積、例えば0.2～1.8mm2、とりわけ0.4～1.6mm2、特に0.6～1.0mm2、例えば約0.8mm2、例えば0.8mm2を有する。混合チャンバの断面積は0.4～1.0mm2であり得る。
混合チャンバは、0.2～0.8mm2の断面積、例えば0.3～0.7mm2、とりわけ0.4～0.6mm2、例えば約0.5mm2、例えば0.5mm2を有することができる。混合チャンバの断面積は、0.25～0.6mm2であり得る。
マイクロ流体デバイスは、第1の流体、例えば第1の溶液の送達のために混合チャンバへの1つの入口を有する。入口の断面は、実質的に対称であり、例えば対称であるが、任意の形状であり得る。断面は矩形(例えば正方形)であり得る。第1の流体のための入口チャネルは、典型的には、断面において実質的に矩形である。
適切には、第1の流体のための入口チャネルは、0.1～0.7mmの幅、例えば0.15～0.5mmの幅、とりわけ0.15～0.5mmの幅、特に0.2～0.35mmの幅である。望ましくは、第1の流体のための入口チャネルは、0.25～0.3mmの幅、例えば0.27mmの幅である。
適切には、第1の流体のための入口チャネルは、少なくとも0.05mmの深さ、例えば少なくとも0.1mmの深さ、とりわけ少なくとも0.2mmの深さ、特に少なくとも0.3mmの深さである。望ましくは、第1の流体のための入口チャネルは、少なくとも0.4mmの深さである。適切には、第1の流体のための入口チャネルは、10mm以下の深さ、例えば5mm以下の深さ、とりわけ2mm以下の深さ、特に1mm以下の深さである。望ましくは、第1の流体のための入口チャネルは、0.8mm以下の深さである。第1の流体のための入口チャネルは、0.1～2mmの深さ、例えば0.3～0.8mmの深さ、とりわけ0.4～0.6mmの深さ、特に約0.5mmの深さ、例えば0.5mmの深さであり得る。
適切には、第1の流体のための入口チャネルは、0.01～4mm2の断面積、例えば0.05～1mm2、とりわけ0.08～0.4mm2を有する。望ましくは、第1の流体のための入口チャネルは、0.1～0.2mm2の断面積、特に約0.135mm2、例えば0.135mm2を有する。
適切には、第1の流体のための入口チャネルの深さは、混合チャンバの深さと実質的に同じであり、例えば同じ深さである。
適切には、第1の流体のための入口チャネルから混合チャンバへの流れの方向は、混合チャンバ内の流れの一般的な方向に対して実質的に平行である(例えば、15度以内、例えば10度以内、特に5度以内)。
適切には、第1の流体のための入口チャネルは、実質的に直線状であり、例えば直線状であり、混合チャンバに適合する点に対して少なくとも3mm、例えば少なくとも5mm、とりわけ少なくとも7mmである。
マイクロ流体デバイスは、第2の流体、例えば第2の溶液の送達のために混合チャンバへの2つの入口を有する。入口の断面は、実質的に対称であり、例えば対称であるが、任意の形状であり得る。断面は矩形(例えば正方形)であり得る。第2の流体のための入口チャネルは、典型的には、断面において実質的に矩形であろう。
適切には、第2の流体のための入口チャネルは、0.025～0.3mmの幅、例えば0.05～0.25mmの幅である。望ましくは、第2の流体のための入口チャネルは、0.08～0.12mmの幅、例えば0.1mmの幅である。
適切には、第2の流体のための入口チャネルは、少なくとも0.05mmの深さ、例えば少なくとも0.1mmの深さ、とりわけ少なくとも0.2mmの深さ、特に少なくとも0.3mmの深さである。望ましくは、第2の流体のための入口チャネルは、少なくとも0.4mmの深さである。適切には、第2の流体のための入口チャネルは、10mm以下の深さ、例えば5mm以下の深さ、とりわけ2mm以下の深さ、特に1mm以下の深さである。望ましくは、第2の流体のための入口チャネルは、0.8mm以下の深さである。第2の流体のための入口チャネルは、0.1～2mmの深さ、例えば0.3～0.8mmの深さ、とりわけ0.4～0.6mmの深さ、特に約0.5mmの深さ、例えば0.5mmの深さであり得る。
適切には、第2の流体のための入口チャネルの各々は、0.005～3mm2の断面積、例えば0.01～0.5mm2を有する。望ましくは、第2の流体のための入口チャネルの各々は、0.02～0.1mm2の断面積、特に約0.05mm2、例えば0.05mm2を有する。
適切には、第2の流体のための入口チャネルの深さは、混合チャンバの深さと実質的に同じであり、例えば同じ深さである。
適切には、第2の流体のための入口チャネルから混合チャンバへの流れの方向は、混合チャンバ内の流れの一般的な方向に対して実質的に平行である(例えば15度以内、例えば10度以内、特に5度以内)。
適切には、第2の流体のための入口チャネルは、実質的に直線状であり、例えば直線状であり、それらが混合チャンバと適合する点に対して少なくとも3mm、例えば少なくとも5mm、とりわけ少なくとも7mm、特に少なくとも10mmである。
適切には、第2の流体のための入口チャネルは、形状が実質的に同一である。適切には、第2の流体のための入口チャネルは、サイズが実質的に同一である。望ましくは、第2の流体のための入口チャネルは、実質的に同一であり、例えば同一である。
全ての入口の全断面積は、適切には、混合チャンバの断面積の70%未満、例えば60%未満、とりわけ50%未満である。全ての入口の全断面積は、混合チャンバの断面積の15%以上、例えば20%以上、とりわけ25%以上であり得る。全ての入口の全断面積は、適切には、混合チャンバの断面積の20～60%、例えば25～50%であり得る。
用語「上記入口チャネルが混合チャンバの近位端に実質的に対称に配置される」とは、全ての入口が混合チャンバの近位端に実質的に対称に配置されていることを意味する。
図30は、多数の可能な入口実施を示す。
マイクロ流体デバイスは、混合材料の回収のために混合チャンバから少なくとも1つの出口を有する。デバイスは、混合材料を回収するために、混合チャンバからの複数の出口、例えば2つ又は3つの出口を有することができ、これらは後に組み合わされる。適切には、このデバイスは、混合材料を回収するために混合チャンバから単一の出口を有する。出口(複数可)は混合チャンバの遠位端に配置される。
出口の断面は、典型的には対称であるが、任意の形状であり得る。断面は、典型的には0.1～1mm2の面積、例えば0.2～0.8mm2、例えば0.4～0.6mm2を有する矩形(例えば正方形)であり得る。矩形の出口は、デバイスの上部に配置され得るか、又は適切には、混合チャンバの端壁に配置される。
他の実施例では、出口は、円形断面(例えば直径0.4～1.2mm、例えば0.6～1mm、例えば約0.8mm、例えば0.8mmを有する)であり得る。円形出口は、適切にはデバイスの上部に配置することができる。
全ての出口の全断面積は、適切には、混合チャンバの断面積の90%未満、例えば80%未満、とりわけ70%未満である。全ての出口の全断面積は、混合チャンバの断面積の20%以上、例えば30%以上、とりわけ40%以上であり得る。全ての入口の全断面積は、適切には、混合チャンバの断面積の20～120%、例えば25～110%、特に約100%又は約62.5%、例えば混合チャンバの断面積の100%又は62.5%であり得る。
適切には、外側入口の外壁は、混合チャンバの側面と実質的に連続であり、例えば連続的である。
マイクロ流体デバイスは、単一のチップ上に複数のデバイスを都合よく配置することができるように、小さな領域を包含することが有利である。望ましくは、入口及び出口の接続を含むデバイスは、長さが100mm未満、例えば80mm未満、とりわけ60mm未満、及び特に45mm未満である。望ましくは、入口及び出口のための接続を含む各デバイスは、幅が20mm未満、例えば10mm未満、とりわけ7mm未満、特に5mm未満である。
マイクロ流体デバイスは、任意の適切な材料、すなわち、第1の流体(例えば溶液)及び第2の流体(例えば溶液)において使用され、製造しやすい成分に耐性である材料から形成され得る。適切な材料には、シリコン及びガラスが含まれる。ステンレス鋼は、別の適切な材料である。デバイスは、エッチングによってこのような材料から調製することができ、例えば、シリコンデバイスは、ディープ反応性イオンエッチング(DRIE又はプラズマエッチング)によって調製することができ、ガラスデバイスは、ウェットエッチング(HFエッチング)によって調製することができる。選択された材料は、表面の特性を改善するために表面処理に供され得る。
管理可能な期間(例えば、240分以下、とりわけ120分以下)であるバッチ実行期間を達成するためには、システムが十分なレベルの生産性を達成することが必要である。さらに、スタートアップ作用及びシャットダウン作用の影響を減少させることによりバッチ間の一貫性を助けるために、実行時間が適切な長さ(例えば、少なくとも30分、とりわけ少なくとも60分)であることが必要である。
スケールアップ
産業スケール(例えば、少なくとも0.5gの脂質/分、例えば少なくとも1g/分、特に少なくとも2g/分及びとりわけ少なくとも4g/分のスケール、例えば少なくとも0.5gのホスファチジルコリン脂質(例えばDOPC)/分、例えば少なくとも1gのホスファチジルコリン脂質(例えばDOPC)/分、特に少なくとも2gのホスファチジルコリン脂質(例えばDOPC)/分及びとりわけ少なくとも4gのホスファチジルコリン脂質(例えばDOPC)/分のスケール)でのリポソームアジュバントの製造を容易にするために、より大きな混合チャンバを使用することができるか、又は複数の混合チャンバ(すなわち、少なくとも2個)を並行して作動（運転）することができる。例えば、3個以上の混合チャンバ、特に4個以上、とりわけ8個以上、例えば16個以上(例えば、16個)である。並行して作動（運転）する複数の混合チャンバは、128個以下、例えば64個以下、特に32個以下であり得る。したがって、一部の実施形態では、複数の混合チャンバは、2～128個であり、例えば4～64個、例えば8～32個である。特に興味深いのは、12～20個の混合チャンバ、例えば約16個、例えば16個の混合チャンバである。
状況によっては、複数の混合チャンバからの各混合チャンバは、独立したポンプ(すなわち、各ポンプは、他のいずれの混合チャンバにも溶液を同時に提供しない)によって、第1の流体(例えば溶液)及び第2の流体(例えば溶液)を混合チャンバに提供することによって、独立して作動（運転）することができる。第1の流体(例えば溶液)及び/若しくは第2の流体(例えば溶液)は、独立した容器(すなわち第1の溶液及び/若しくは第2の溶液を、1を超える混合チャンバに同時に提供しない容器)に貯蔵することができ、又は第1の流体(例えば溶液)及び/若しくは第2の流体(例えば溶液)は、1を超える混合チャンバ(例えば、全ての混合チャンバ)に使用するための容器に貯蔵することができる。各混合チャンバからの混合材料は、個々に回収され、貯蔵/処理され、場合により後の段階で組み合わされるか、又はさらなる処理及び/若しくは貯蔵の前に(例えば、全ての混合チャンバから)組み合わされることができる。
好都合には、複数の混合チャンバ内のいくつかの(例えば全ての)混合チャンバは、同じポンプによって供給される。好都合には、いくつかの(例えば全ての)混合チャンバからの混合材料は、さらなる処理及び/又は貯蔵の前に回収される。
適切には、複数の全ての混合チャンバは、実質的に同じであり、及び/又は、適切には、全ての混合チャンバ内の流体の流れは実質的に同じであり、そのため、各混合チャンバから得られる材料は実質的に同じである。望ましくは、作動（運転）中に、複数の各混合チャンバで測定された流速（流量、flow rate）は、所望の流速から5%未満変化する。
最適には、混合チャンバ、入口及び出口、第1の流体(例えば溶液)、第2の流体(例えば溶液)の供給、及び複数の混合チャンバの混合材料の回収は、作動（運転）においてそれらが実質的に同一に機能するように構成される。
図31は、各々が入口マニホールドを介して16の流れに分割される、第1及び第2の流体(画像の左側)の各々に対して単一の接続を有する配置を示す。第1の流体流のうちの8つ及び第2の流体流のうちの8つは、次に、2つの8個の混合チャンバチップに接続される。次に、2つの8個の混合チャンバチップの各々から8個ずつの16個の混合チャンバからの出口は、回収マニホールド内で単一の出口接続部(画像の右側)に組み合わされる。図32は、このような16個の混合チャンバ配置が商業規模の作動（運転）においてどのように使用され得るかを示す(4:1の流速比を示す)。
複数の混合チャンバからの各混合チャンバは、個々のチップとして構成することができるか、又は便宜上、多数の混合チャンバを単一のチップ(例えば、最大20個の混合チャンバ、例えば4～20個、例えば約8個又は約16個の混合チャンバ、例えば8個又は16個の混合チャンバ)に組み合わせることができる。多数のこのようなチップを並行して使用し、複数のチャンバ(例えば、並行して作動（運転）させる、合計が約16個の混合チャンバ、例えば16個の混合チャンバを提供するための、約8個の混合チャンバ、例えば8個の混合チャンバを各々が含有する2つのチップ)を提供することができる。
適切には、第1及び第2の流体又は回収マニホールド(複数可)のための分配マニホールドは、多重混合チャンバチップに組み込まれ、そのため、各チップは、複数の混合チャンバを備えるが、第1の流体、第2の流体又は混合材料のための単一の接続点を有し、適切には、このような一体化されたチップは、第1及び第2の流体の各々に対する単一の接続点と、混合材料の回収のための単一の接続点とを有する。このような一体化されたチップは、4～32個の混合チャンバ、例えば6～20個の混合チャンバを有することができる。特に興味深いのは、12～20個の混合チャンバ、例えば約16個、例えば16個の混合チャンバを有する一体化されたチップである。このような一体化されたチップの例を図33～図35に示す。
適切には、複数の混合チャンバは、総流速50～2000ml/分、例えば100～1000ml/分、特に200～500ml/分で混合材料を生産することができる。
バッフル
本発明のデバイスは、特に、混合チャンバが1つ以上のバッフルを備えることを特徴とする。バッフルという用語は、混合チャンバの表面上の突起を意味する。バッフルは、混合チャンバの上部、下部又は側面に配置することができる。望ましくは、バッフルは、混合チャンバの側面、例えば、一方の側面又は両方の側面に配置される。典型的には、バッフルは、混合チャンバの上部又は下部に存在しない。
一連のバッフルの配置、例えば混合チャンバの一方の側面上の配置は、変化させることができ、それらは、例えば、実質的に均等に間隔を置くことができる(すなわち、バッフルの重心間の距離は、混合チャンバの一方の側面に沿った隣接する対の間で実質的に一貫している)。バッフルは、混合チャンバの両方の側面に実質的に均等に間隔を置くことができる。
混合チャンバの少なくとも一方の側面(例えば、一方の側面)上のバッフルは、実質的に不均一に間隔を置くことができる(すなわち、バッフルの重心間の距離は、混合チャンバに沿った隣接する対の間で実質的に不均一である)。混合チャンバの両方の側面のバッフルは、実質的に不均一に間隔を置くことができる(すなわち、バッフルの重心間の距離は、混合チャンバの一方の側面に沿った隣接する対の間で実質的に不均一である)。
バッフルが混合チャンバの両方の側面に存在する場合、これらは、互いに実質的に反対に配置され得る。あるいは、混合チャンバの異なる側面のバッフルは、互いに、例えば0.5～5mmだけ、例えば1～2.5mmだけオフセットして配置させることができる。オフセットの特定の例は、約1.75mm、例えば1.732mm、約1.26mm、例えば1.258mm、約1mm、例えば1mm、及び約0.728mm、例えば0.728mmである。
バッフルがオフセット（offset）される場合、バッフルの前後のオフセットは、実質的に同じであり得(すなわち、一方の側面のバッフルは、反対側の2つのバッフルの間に実質的に等距離に位置する)、又はバッフルの前後のオフセットは、実質的に異なることができる。特定のデバイスでは、バッフルは、バッフル間のスペースの20～80%、とりわけ30～70%オフセットされる。
混合チャンバは、典型的には、複数のバッフル、例えば少なくとも4個のバッフル、例えば少なくとも6個のバッフル、とりわけ少なくとも8個のバッフル、特に少なくとも10個のバッフルを備える。混合チャンバは、100個以下のバッフル、例えば60個以下のバッフル、とりわけ40個以下のバッフル、特に25個以下のバッフルを備え得る。バッフルの数の特定の例は、約12又は約19、例えば12又は19を含む。
バッフルは、任意の適切な形状、例えば矩形(例えば、正方形)、波形、ベル形又は台形の形状、特に台形であり得る。複数のバッフルは、同じか又は異なる形状であり得、典型的には、全てのバッフルは同じ形状である。
バッフルは、任意の適切なサイズであり得る。複数のバッフルは、実質的に同じ幅(例えば、同じ幅)であり得るか、又は変化した幅であり得、典型的には、全てのバッフルは、実質的に同じ幅(例えば、同じ幅)である。幅という用語は、混合チャンバの幅を減少させるように作用する混合チャンバの表面からバッフルが突出する最大距離を定義するために使用される。
混合チャンバは、0.1～1mmの幅、例えば0.2～0.8mmの幅、とりわけ0.4～0.7mmの幅、特に約0.5mmの幅、例えば0.5mmの幅のバッフルを備えることができる。
混合チャンバは、0.2～0.5mmの幅のバッフル、例えば0.3～0.4mmの幅、特に約0.35mmの幅、例えば0.35mmの幅のバッフルを備えることができる。
バッフルにおける混合チャンバの幅は、少なくとも10%、例えば少なくとも20%、とりわけ少なくとも25%、特に少なくとも30%減少させることができる。バッフルにおける混合チャンバの幅は、80%以下、例えば60%以下、とりわけ50%以下、特に40%以下減少させることができる。バッフルにおける混合チャンバの幅は、10～80%、例えば20～60%、とりわけ30～50%(例えば、35～50%)、特に30～40%減少させることができる。
適切には、バッフルにおける混合チャンバの幅は、0.5～2mm、例えば0.7～1.5mm、とりわけ0.9～1.3mm、特に約1.1mm、例えば1.1mmである。
バッフルにおける混合チャンバの幅は、0.4～0.9mm、例えば0.5～0.8mm、特に約0.65mm、例えば0.65mmであり得る。
適切には、混合チャンバは、1～10mm、例えば2～5mm、特に約3.5mm、例えば3.464mm離れた、バッフルを一方の側面に備える。望ましくは、混合チャンバの一方の側面の各バッフルは、1～10mm、例えば2～5mm、特に約3.5mm、例えば3.464mm離れている。
適切には、混合チャンバは、1～10mm、例えば2～5mm、特に約3.5mm、例えば3.464mm離れた、2つの側面にバッフルを備える。望ましくは、混合チャンバの各側面の各バッフルは、1～10mm、例えば2～5mm、特に約3.5mm、例えば3.464mm離れている。
混合チャンバは、約2.5mm、例えば2.516mm離れた、2つの側面にバッフルを備えることができる。望ましくは、混合チャンバの各側面の各バッフルは、約2.5mm、例えば2.516mm離れている。
混合チャンバは、約2mm、例えば2mm離れた、2つの側面にバッフルを備えることができる。望ましくは、混合チャンバの各側面の各バッフルは、約2mm、例えば2mm離れている。
バッフルは、混合チャンバに沿った任意の適切な位置に配置することができる。例えば、第1のバッフルは、混合チャンバの近位端から0.2～20mm(正方形プロファイルバッフルの場合、図10においてL1で示される)、例えば0.4～10mm、とりわけ0.6～8mm、特に約0.8mm、約4.4mm又は約5.3mm、例えば、0.8、4.4又は5.3mmに位置することができる。
適切には、混合チャンバは、最大長0.1～5mm、例えば0.2～2mm、とりわけ0.2～1mm、特に0.25～0.7mm、例えば約0.33mm又は約0.55mm、例えば、0.33mm又は0.55mmを有するバッフルを備える。用語「長さ」は、バッフルが近位端で突き出始める点から遠位端で突き出なくなる点までの距離を定義するために使用される(正方形プロファイルバッフルの場合、図10においてlで示される)。
適切には、台形バッフルは、最小長3mm以下、例えば1mm以下、とりわけ0.5mm以下、特に0.3mm以下、例えば約0.15mm又は約0.25mm、例えば0.15mm又は0.25mmを有する。
適切には、バッフルにおける混合チャンバの最大幅は、0.4～2mm、例えば0.5～1.6mm、とりわけ0.6mm～1.4mm、特に約0.65mm又は約1.1mm、例えば0.65mm又は1.1mmである。
適切には、バッフルにおける混合チャンバの最小幅は、0.4～2mm、例えば0.5～1.6mm、とりわけ0.6mm～1.4mm、特に約0.65mm又は約1.1mm、例えば0.65mm又は1.1mmである。
バッフルにおける混合チャンバの最大幅及び混合チャンバの最小幅は、同じであってもよい(例えば、混合チャンバの幅及びバッフルの幅が一定である場合、又は代替的に、混合チャンバの幅が変化するが、バッフルの幅もまた補正するように変化する場合)。
図10は、バッフルを備えるマイクロ流体デバイスのいくつかの一般的特徴を示す。
特定の実施形態
本発明は、
-長さが約25mmである混合チャンバであり、実質的に矩形の断面、約1.6mmの間隔を置いた実質的に平行な側面、並びに約0.5mmの深さを提供するように間隔を置いた実質的に平行な上部壁及び下部壁を有する混合チャンバ；
-第1の流体のための混合チャンバへの1つの入口チャネルであり、実質的に矩形の断面、約0.27mmの幅、及び約0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端に実質的に中央に位置される入口チャネル；
-第2の流体のための混合チャンバへの2つの入口チャネルであり、実質的に同一であり、実質的に矩形の断面、約0.1mmの幅及び約0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端の外壁の各々に実質的に位置される入口チャネル；
-混合チャンバの近位端に実質的に対称に配置される上記入口チャネルであり、入口チャネルから混合チャンバへの流れの方向は、混合チャンバ内の流れの一般的な方向に実質的に平行である入口チャネル；
-混合チャンバの遠位端における混合材料のための1つの出口
を備えるマイクロ流体混合デバイスにおいて、混合チャンバは約19個のバッフルを備え、第1のバッフルは混合チャンバの近位端から約0.8mmに位置し、バッフルは約0.73mmの第1及び第2の側面の間のオフセットを伴って約2.6mmだけ離され、バッフルは最大長約0.55mm、最小長約0.25mm及び約0.5mmの幅を有する形状で実質的に台形であることを特徴とする、マイクロ流体混合デバイスを提供する。
本発明は、
-長さが22.5～27.5mmの混合チャンバであり、実質的に矩形の断面、1.44～1.76mmの間隔を置いた実質的に平行な側面、並びに0.45～0.55mmの深さを提供するように間隔を置いた実質的に平行な上部壁及び下部壁を有する混合チャンバ；
-第1の流体のための混合チャンバへの1つの入口チャネルであり、実質的に矩形の断面、0.243～0.297mmの幅、及び0.45～0.55mmの深さを有し、混合チャンバの近位端に実質的に中央に位置される入口チャネル；
-第2の流体のための混合チャンバへの2つの入口チャネルであり、実質的に同一であり、実質的に矩形の断面、0.09～0.11mmの幅及び0.45～0.55mmの深さを有し、混合チャンバの近位端の外壁の各々に実質的に位置される入口チャネル；
-混合チャンバの近位端に実質的に対称に配置される上記入口チャネルであり、入口チャネルから混合チャンバへの流れの方向は、混合チャンバ内の流れの一般的な方向に実質的に平行である入口チャネル；
-混合チャンバの遠位端における混合材料のための1つの出口
を備えるマイクロ流体混合デバイスにおいて、混合チャンバは17～21個のバッフルを備え、第1のバッフルは混合チャンバの近位端から0.72～0.88mmに位置し、バッフルは0.656～0.8mmの第1及び第2の側面の間のオフセットを伴って2.26～2.77mmだけ離され、バッフルは最大長0.495～0.605mm、最小長0.225～0.275mm及び0.45～0.55mmの幅を有する形状で実質的に台形であることを特徴とする、マイクロ流体混合デバイスを提供する。
例えば、
-長さが25mmである混合チャンバであり、矩形の断面、1.6mmの間隔を置いた平行な側面、並びに0.5mmの深さを提供するように間隔を置いた平行な上部壁及び下部壁を有する混合チャンバ；
-第1の流体のための混合チャンバへの1つの入口チャネルであり、矩形の断面、0.27mmの幅、及び0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端に中央に位置される入口チャネル；
-第2の流体のための混合チャンバへの2つの入口チャネルであり、同一であり、矩形の断面、0.1mmの幅及び0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端の外壁の各々に位置される入口チャネル；
-混合チャンバの近位端に対称に配置される上記入口チャネルであり、入口チャネルから混合チャンバへの流れの方向は、混合チャンバ内の流れの一般的な方向に平行である入口チャネル；
-混合チャンバの遠位端における混合材料のための1つの出口
を備えるマイクロ流体混合デバイスにおいて、混合チャンバは19個のバッフルを備え、第1のバッフルは混合チャンバの近位端から0.8mmに位置し、バッフルは0.728mmの第1及び第2の側面の間のオフセットを伴って約2.516mmだけ離され、バッフルは最大長0.55mm、最小長0.25mm及び0.5mmの幅を有する形状で台形であることを特徴とする、マイクロ流体混合デバイス。
本発明はまた、
-長さが約25mmである混合チャンバであり、実質的に矩形の断面、約1.6mmの間隔を置いた実質的に平行な側面、並びに約0.5mmの深さを提供するように間隔を置いた実質的に平行な上部壁及び下部壁を有する混合チャンバ；
-第1の流体のための混合チャンバへの1つの入口チャネルであり、実質的に矩形の断面、約0.27mmの幅、及び約0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端に実質的に中央に位置される入口チャネル；
-第2の流体のための混合チャンバへの2つの入口チャネルであり、実質的に同一であり、実質的に矩形の断面、約0.1mmの幅及び約0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端の外壁の各々に実質的に位置される入口チャネル；
-混合チャンバの近位端に実質的に対称に配置される上記入口チャネルであり、入口チャネルから混合チャンバへの流れの方向は、混合チャンバ内の流れの一般的な方向に実質的に平行である入口チャネル；
-混合チャンバの遠位端における混合材料のための1つの出口
を備えるマイクロ流体混合デバイスにおいて、混合チャンバは約19個のバッフルを備え、第1のバッフルは混合チャンバの近位端から約0.8mmに位置し、バッフルは約1.3mmの第1及び第2の側面の間のオフセットを伴って約2.6mmだけ離され、バッフルは最大長約0.55mm、最小長約0.25mm及び約0.5mmの幅を有する形状で実質的に台形であることを特徴とする、マイクロ流体混合デバイスを提供する。
本発明はまた、
-長さが22.5～27.5mmの混合チャンバであり、実質的に矩形の断面、1.44～1.76mmの間隔を置いた実質的に平行な側面、並びに0.45～0.55mmの深さを提供するように間隔を置いた実質的に平行な上部壁及び下部壁を有する混合チャンバ；
-第1の流体のための混合チャンバへの1つの入口チャネルであり、実質的に矩形の断面、0.243～0.297mmの幅、及び0.45～0.55mmの深さを有し、混合チャンバの近位端に実質的に中央に位置される入口チャネル；
-第2の流体のための混合チャンバへの2つの入口チャネルであり、実質的に同一であり、実質的に矩形の断面、0.09～0.11mmの幅及び0.45～0.55mmの深さを有し、混合チャンバの近位端の外壁の各々に実質的に位置される入口チャネル；
-混合チャンバの近位端に実質的に対称に配置される上記入口チャネルであり、入口チャネルから混合チャンバへの流れの方向は、混合チャンバ内の流れの一般的な方向に実質的に平行である入口チャネル；
-混合チャンバの遠位端における混合材料のための1つの出口
を備えるマイクロ流体混合デバイスにおいて、混合チャンバは17～21個のバッフルを備え、第1のバッフルは混合チャンバの近位端から0.72～0.88mmに位置し、バッフルは1.13～1.38mmの第1及び第2の側面の間のオフセットを伴って2.26～2.77mmだけ離され、バッフルは最大長0.495～0.605mm、最小長0.225～0.275mm及び0.45～0.55mmの幅を有する形状で実質的に台形であることを特徴とする、マイクロ流体混合デバイスを提供する。
例えば、
-長さが25mmである混合チャンバであり、矩形の断面、1.6mmの間隔を置いた平行な側面、並びに0.5mmの深さを提供するように間隔を置いた平行な上部壁及び下部壁を有する混合チャンバ；
-第1の流体のための混合チャンバへの1つの入口チャネルであり、矩形の断面、0.27mmの幅、及び0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端に中央に位置される入口チャネル；
-第2の流体のための混合チャンバへの2つの入口チャネルであり、同一であり、矩形の断面、0.1mmの幅及び0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端の外壁の各々に位置される入口チャネル；
-混合チャンバの近位端に対称に配置される上記入口チャネルであり、入口チャネルから混合チャンバへの流れの方向は、混合チャンバ内の流れの一般的な方向に平行である入口チャネル；
-混合チャンバの遠位端における混合材料のための1つの出口
を備えるマイクロ流体混合デバイスにおいて、混合チャンバは19個のバッフルを備え、第1のバッフルは混合チャンバの近位端から0.8mmに位置し、バッフルは1.258mmの第1及び第2の側面の間のオフセットを伴って2.516mmだけ離され、バッフルは最大長0.55mm、最小長0.25mm及び0.5mmの幅を有する形状で台形であることを特徴とする、マイクロ流体混合デバイス。
また、
-長さが約25mmである混合チャンバであり、実質的に矩形の断面、約1.6mmの間隔を置いた実質的に平行な側面、並びに約0.5mmの深さを提供するように間隔を置いた実質的に平行な上部壁及び下部壁を有する混合チャンバ；
-第1の流体のための混合チャンバへの1つの入口チャネルであり、実質的に矩形の断面、約0.27mmの幅、及び約0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端に実質的に中央に位置される入口チャネル；
-第2の流体のための混合チャンバへの2つの入口チャネルであり、実質的に同一であり、実質的に矩形の断面、約0.1mmの幅及び約0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端の外壁の各々に実質的に位置される入口チャネル；
-混合チャンバの近位端に実質的に対称に配置される上記入口チャネルであり、入口チャネルから混合チャンバへの流れの方向は、混合チャンバ内の流れの一般的な方向に実質的に平行である入口チャネル；
-混合チャンバの遠位端における混合材料のための1つの出口
を備えるマイクロ流体混合デバイスにおいて、混合チャンバは約12個のバッフルを備え、第1のバッフルは混合チャンバの近位端から約4.4mmに位置し、バッフルは約1.7mmの第1及び第2の側面の間のオフセットを伴って約3.5mmだけ離され、バッフルは最大長約0.55mm、最小長約0.25mm及び約0.5mmの幅を有する形状で実質的に台形であることを特徴とする、マイクロ流体混合デバイスが提供される。
また、
-長さが22.5～27.5mmの混合チャンバであり、実質的に矩形の断面、1.44～1.76mmの間隔を置いた実質的に平行な側面、並びに0.45～0.55mmの深さを提供するように間隔を置いた実質的に平行な上部壁及び下部壁を有する混合チャンバ；
-第1の流体のための混合チャンバへの1つの入口チャネルであり、実質的に矩形の断面、0.243～0.297mmの幅、及び0.45～0.55mmの深さを有し、混合チャンバの近位端に実質的に中央に位置される入口チャネル；
-第2の流体のための混合チャンバへの2つの入口チャネルであり、実質的に同一であり、実質的に矩形の断面、0.09～0.11mmの幅及び0.45～0.55mmの深さを有し、混合チャンバの近位端の外壁の各々に実質的に位置される入口チャネル；
-混合チャンバの近位端に実質的に対称に配置される上記入口チャネルであり、入口チャネルから混合チャンバへの流れの方向は、混合チャンバ内の流れの一般的な方向に実質的に平行である入口チャネル；
-混合チャンバの遠位端における混合材料のための1つの出口
を備えるマイクロ流体混合デバイスにおいて、混合チャンバは10～14個のバッフルを備え、第1のバッフルは混合チャンバの近位端から3.96～4.84mmに位置し、バッフルは1.56～1.91mmの第1及び第2の側面の間のオフセットを伴って3.12～3.81mmだけ離され、バッフルは最大長0.495～0.605mm、最小長0.225～0.275mm及び0.45～0.55mmの幅を有する形状で実質的に台形であることを特徴とする、マイクロ流体混合デバイスが提供される。
例えば、
-長さが25mmである混合チャンバであり、矩形の断面、1.6mmの間隔を置いた平行な側面、並びに0.5mmの深さを提供するように間隔を置いた平行な上部壁及び下部壁を有する混合チャンバ；
-第1の流体のための混合チャンバへの1つの入口チャネルであり、矩形の断面、0.27mmの幅、及び0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端に中央に位置される入口チャネル；
-第2の流体のための混合チャンバへの2つの入口チャネルであり、同一であり、矩形の断面、0.1mmの幅及び0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端の外壁の各々に位置される入口チャネル；
-混合チャンバの近位端に対称に配置される上記入口チャネルであり、入口チャネルから混合チャンバへの流れの方向は、混合チャンバ内の流れの一般的な方向に平行である入口チャネル；
-混合チャンバの遠位端における混合材料のための1つの出口
を備えるマイクロ流体混合において、混合チャンバは12個のバッフルを備え、第1のバッフルは混合チャンバの近位端から4.4mmに位置し、バッフルは1.732mmの第1及び第2の側面の間のオフセットを伴って3.464mmだけ離され、バッフルは最大長0.55mm、最小長0.25mm及び0.5mmの幅を有する形状で台形であることを特徴とする、マイクロ流体混合。
さらに、
-長さが約25mmである混合チャンバであり、実質的に矩形の断面、約1mmの間隔を置いた実質的に平行な側面、並びに約0.5mmの深さを提供するように間隔を置いた実質的に平行な上部壁及び下部壁を有する混合チャンバ；
-第1の流体のための混合チャンバへの1つの入口チャネルであり、実質的に矩形の断面、約0.27mmの幅、及び約0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端に実質的に中央に位置される入口チャネル；
-第2の流体のための混合チャンバへの2つの入口チャネルであり、実質的に同一であり、実質的に矩形の断面、約0.1mmの幅及び約0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端の外壁の各々に実質的に位置される入口チャネル；
-混合チャンバの近位端に実質的に対称に配置される上記入口チャネルであり、入口チャネルから混合チャンバへの流れの方向は、混合チャンバ内の流れの一般的な方向に実質的に平行である入口チャネル；
-混合チャンバの遠位端における混合材料のための1つの出口
を備える、マイクロ流体混合デバイスにおいて、混合チャンバは約19個のバッフルを備え、第1のバッフルは混合チャンバの近位端から約5.3mmに位置し、バッフルは約1mmの第1及び第2の側面の間のオフセットを伴って約2mmだけ離され、バッフルは最大長約0.33mm、最小長約0.15mm及び約0.35mmの幅を有する形状で実質的に台形であることを特徴とする、先行する請求項のいずれかに記載のマイクロ流体混合デバイスが提供される。
さらに、
-長さが22.5～27.5mmの混合チャンバであり、実質的に矩形の断面、0.9～1.1mmの間隔を置いた実質的に平行な側面、並びに0.45～0.55mmの深さを提供するように間隔を置いた実質的に平行な上部壁及び下部壁を有する混合チャンバ；
-第1の流体のための混合チャンバへの1つの入口チャネルであり、実質的に矩形の断面、0.243～0.297mmの幅、及び0.45～0.55mmの深さを有し、混合チャンバの近位端に実質的に中央に位置される入口チャネル；
-第2の流体のための混合チャンバへの2つの入口チャネルであり、実質的に同一であり、実質的に矩形の断面、0.09～0.11mmの幅及び0.45～0.55mmの深さを有し、混合チャンバの近位端の外壁の各々に実質的に位置される入口チャネル；
-混合チャンバの近位端に実質的に対称に配置される上記入口チャネルであり、入口チャネルから混合チャンバへの流れの方向は、混合チャンバ内の流れの一般的な方向に実質的に平行である入口チャネル；
-混合チャンバの遠位端における混合材料のための1つの出口
を備えるマイクロ流体混合デバイスにおいて、混合チャンバは17～21個のバッフルを備え、第1のバッフルは混合チャンバの近位端から4.77～5.83mmに位置し、バッフルは0.9～1.1mmの第1及び第2の側面の間のオフセットを伴って1.8～2.2mmだけ離され、バッフルは最大長0.297～0.363mm、最小長0.135～0.165mm及び0.315～0.385mmの幅を有する形状で実質的に台形であることを特徴とする、先行する請求項のいずれかに記載のマイクロ流体混合デバイスを提供する。
例えば、
-長さが25mmである混合チャンバであり、矩形の断面、1mmの間隔を置いた平行な側面、並びに0.5mmの深さを提供するように間隔を置いた平行な上部壁及び下部壁を有する混合チャンバ；
-第1の流体のための混合チャンバへの1つの入口チャネルであり、矩形の断面、0.27mmの幅、及び0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端に中央に位置される入口チャネル；
-第2の流体のための混合チャンバへの2つの入口チャネルであり、同一であり、矩形の断面、0.1mmの幅及び0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端の外壁の各々に位置される入口チャネル；
-混合チャンバの近位端に対称に配置される上記入口チャネルであり、入口チャネルから混合チャンバへの流れの方向は、混合チャンバ内の流れの一般的な方向に平行である入口チャネル；
-混合チャンバの遠位端における混合材料のための1つの出口
を備えるマイクロ流体混合デバイスにおいて、混合チャンバは19個のバッフルを備え、第1のバッフルは混合チャンバの近位端から5.3mmに位置し、バッフルは1mmの第1及び第2の側面の間のオフセットを伴って2mmだけ離され、バッフルは最大長0.33mm、最小長0.15mm及び0.35mmの幅を有する形状で台形であることを特徴とする、マイクロ流体混合デバイス。
また、複数のマイクロ流体混合デバイス(例えば、4～20個、とりわけ16個)を含むチップが提供され、各デバイスは:
-長さが約25mmである混合チャンバであり、実質的に矩形の断面、約1.6mmの間隔を置いた実質的に平行な側面、並びに約0.5mmの深さを提供するように間隔を置いた実質的に平行な上部壁及び下部壁を有する混合チャンバ；
-第1の流体のための混合チャンバへの1つの入口チャネルであり、実質的に矩形の断面、約0.27mmの幅、及び約0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端に実質的に中央に位置される入口チャネル；
-第2の流体のための混合チャンバへの2つの入口チャネルであり、実質的に同一であり、実質的に矩形の断面、約0.1mmの幅及び約0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端の外壁の各々に実質的に位置される入口チャネル；
-混合チャンバの近位端に実質的に対称に配置される上記入口チャネルであり、入口チャネルから混合チャンバへの流れの方向は、混合チャンバ内の流れの一般的な方向に実質的に平行である入口チャネル；
-混合チャンバの遠位端における混合材料のための1つの出口
を備えるデバイスにおいて、混合チャンバは約12個のバッフルを備え、第1のバッフルは混合チャンバの近位端から約4.4mmに位置し、バッフルは約1.7mmの第1及び第2の側面の間のオフセットを伴って約3.5mmだけ離され、バッフルは最大長約0.55mm、最小長約0.25mm及び約0.5mmの幅を有する形状で実質的に台形であることを特徴とする。
また、複数のマイクロ流体混合デバイス(例えば、4～20個、とりわけ16個)を備えるチップが提供され、各デバイスは:
-長さが22.5～27.5mmの混合チャンバであり、実質的に矩形の断面、1.44～1.76mmの間隔を置いた実質的に平行な側面、並びに0.45～0.55mmの深さを提供するように間隔を置いた実質的に平行な上部壁及び下部壁を有する混合チャンバ；
-第1の流体のための混合チャンバへの1つの入口チャネルであり、実質的に矩形の断面、0.243～0.297mmの幅、及び0.45～0.55mmの深さを有し、混合チャンバの近位端に実質的に中央に位置される入口チャネル；
-第2の流体のための混合チャンバへの2つの入口チャネルであり、実質的に同一であり、実質的に矩形の断面、0.09～0.11mmの幅及び0.45～0.55mmの深さを有し、混合チャンバの近位端の外壁の各々に実質的に位置される入口チャネル；
-混合チャンバの近位端に実質的に対称に配置される上記入口チャネルであり、入口チャネルから混合チャンバへの流れの方向は、混合チャンバ内の流れの一般的な方向に実質的に平行である入口チャネル；
-混合チャンバの遠位端における混合材料のための1つの出口
を備えるデバイスにおいて、混合チャンバは10～14個のバッフルを備え、第1のバッフルは混合チャンバの近位端から3.96～4.84mmに位置し、バッフルは1.56～1.91mmの第1及び第2の側面の間のオフセットを伴って3.12～3.81mmだけ離され、バッフルは最大長0.495～0.605mm、最小長0.225～0.275mm及び0.45～0.55mmの幅を有する形状で実質的に台形であることを特徴とする。
例えば、複数のマイクロ流体混合デバイス(例えば、4～20個、とりわけ16個)を備えるチップであり、各デバイスは:
-長さが25mmである混合チャンバであり、矩形の断面、1.6mmの間隔を置いた平行な側面、並びに0.5mmの深さを提供するように間隔を置いた平行な上部壁及び下部壁を有する混合チャンバ；
-第1の流体のための混合チャンバへの1つの入口チャネルであり、矩形の断面、0.27mmの幅、及び0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端に中央に位置される入口チャネル；
-第2の流体のための混合チャンバへの2つの入口チャネルであって、同一であり、矩形の断面、0.1mmの幅及び0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端の外壁の各々に位置される入口チャネル；
-混合チャンバの近位端に対称に配置される上記入口チャネルであり、入口チャネルから混合チャンバへの流れの方向は、混合チャンバ内の流れの一般的な方向に平行である入口チャネル；
-混合チャンバの遠位端における混合材料のための1つの出口
を備えるデバイスにおいて、混合チャンバは12個のバッフルを備え、第1のバッフルは混合チャンバの近位端から4.4mmに位置し、バッフルは1.732mmの第1及び第2の側面の間のオフセットを伴って3.464mmだけ離され、バッフルは最大長0.55mm、最小長0.25mm及び0.5mmの幅を有する形状で台形であることを特徴とする。
また、複数のマイクロ流体混合デバイス(例えば、4～20個、とりわけ6～18個、特に16個)を備える一体化されたチップが提供され、該一体化されたチップは、第1の流体及び第2の流体の各々に対する単一の接続点、並びに混合材料の回収のための単一の接続点を有し、各デバイスは、
-長さが約25mmである混合チャンバであり、実質的に矩形の断面、約1.6mmの間隔を置いた実質的に平行な側面、並びに約0.5mmの深さを提供するように間隔を置いた実質的に平行な上部壁及び下部壁を有する混合チャンバ；
-第1の流体のための混合チャンバへの1つの入口チャネルであり、実質的に矩形の断面、約0.27mmの幅、及び約0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端に実質的に中央に位置される入口チャネル；
-第2の流体のための混合チャンバへの2つの入口チャネルであり、実質的に同一であり、実質的に矩形の断面、約0.1mmの幅及び約0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端の外壁の各々に実質的に位置される入口チャネル；
-混合チャンバの近位端に実質的に対称に配置される上記入口チャネルであり、入口チャネルから混合チャンバへの流れの方向は、混合チャンバ内の流れの一般的な方向に実質的に平行である入口チャネル；
-混合チャンバの遠位端における混合材料のための1つの出口
を備えるデバイスにおいて、混合チャンバは約12個のバッフルを備え、第1のバッフルは混合チャンバの近位端から約4.4mmに位置し、バッフルは約1.7mmの第1及び第2の側面の間のオフセットを伴って約3.5mmだけ離され、バッフルは最大長約0.55mm、最小長約0.25mm及び約0.5mmの幅を有する形状で実質的に台形であることを特徴とする。
また、複数のマイクロ流体混合デバイス(例えば、4～20個、とりわけ6～18個、特に16個)を備える一体化されたチップが提供され、該一体化されたチップは、第1の流体及び第2の流体の各々に対する単一の接続点、並びに混合材料の回収のための単一の接続点を有し、各デバイスは、
-長さが22.5～27.5mmである混合チャンバであり、実質的に矩形の断面、1.44～1.76mmの間隔を置いた実質的に平行な側面、並びに0.45～0.55mmの深さを提供するように間隔を置いた実質的に平行な上部壁及び下部壁を有する混合チャンバ；
-第1の流体のための混合チャンバへの1つの入口チャネルであり、実質的に矩形の断面、0.243～0.297mmの幅、及び0.45～0.55mmの深さを有し、混合チャンバの近位端に実質的に中央に位置される入口チャネル；
-第2の流体のための混合チャンバへの2つの入口チャネルであり、実質的に同一であり、実質的に矩形の断面、0.09～0.11mmの幅及び0.45～0.55mmの深さを有し、混合チャンバの近位端の外壁の各々に実質的に位置される入口チャネル；
-混合チャンバの近位端に実質的に対称に配置される上記入口チャネルであり、入口チャネルから混合チャンバへの流れの方向は、混合チャンバ内の流れの一般的な方向に実質的に平行である入口チャネル；
-混合チャンバの遠位端における混合材料のための1つの出口
を備えるデバイスにおいて、混合チャンバは10～14個のバッフルを備え、第1のバッフルは混合チャンバの近位端から3.96～4.84mmに位置し、バッフルは1.56～1.91mmの第1及び第2の側面の間のオフセットを伴って3.12～3.81mmだけ離され、バッフルは最大長0.495～0.605mm、最小長0.225～0.275mm及び0.45～0.55mmの幅を有する形状で実質的に台形であることを特徴とする。
例えば、複数のマイクロ流体混合デバイス(例えば、4～20個、とりわけ6～18個、特に16個)を備える一体化されたチップであり、該一体化されたチップは、第1の流体及び第2の流体の各々に対する単一の接続点、並びに混合材料の回収のための単一の接続点を有し、各デバイスが、
-長さが25mmである混合チャンバであり、矩形の断面、1.6mmの間隔を置いた平行な側面、並びに0.5mmの深さを提供するように間隔を置いた平行な上部壁及び下部壁を有する混合チャンバ；
-第1の流体のための混合チャンバへの1つの入口チャネルであり、矩形の断面、0.27mmの幅、及び0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端に中央に位置される入口チャネル；
-第2の流体のための混合チャンバへの2つの入口チャネルであり、同一であり、矩形の断面、0.1mmの幅及び0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端の外壁の各々に位置される入口チャネル；
-混合チャンバの近位端に対称に配置される上記入口チャネルであり、入口チャネルから混合チャンバへの流れの方向は、混合チャンバ内の流れの一般的な方向に平行である入口チャネル；
-混合チャンバの遠位端における混合材料のための1つの出口
を備えるデバイスにおいて、混合チャンバは12個のバッフルを備え、第1のバッフルは混合チャンバの近位端から4.4mmに位置し、バッフルは1.732mmの第1及び第2の側面の間のオフセットを伴って3.464mmだけ離され、バッフルは最大長0.55mm、最小長0.25mm及び0.5mmの幅を有する形状で台形であることを特徴とする。
方法
デバイスは、幅広い目的のために使用することができる。特に興味深いのは、リポソームアジュバントの製造におけるデバイスの使用である。結果として、本明細書に記載されるマイクロ流体デバイスを用いてリポソームアジュバントを製造する方法であって、以下の工程:
(a)デバイス内で、溶媒と脂質を含む第1の溶液、及び水を含む第2の溶液を混合する工程；並びに
(b)溶媒を除去する工程
を含む方法が提供される。
また、リポソームアジュバントを製造する方法であって、以下の工程:
(a)デバイス内で、溶媒と脂質を含む第1の溶液、及び水を含む第2の溶液を混合する工程；
(b)サポニンを添加する工程；並びに
(c)溶媒を除去する工程
を含む方法が提供される。
さらに、リポソームアジュバントを製造する方法であって、以下の工程:
(a)デバイス内で、溶媒と脂質を含む第1の溶液、及び水を含む第2の溶液を混合する工程；
(b)溶媒を除去する工程；並びに
(c)サポニンを添加する工程
を含む方法が提供される。
さらに、リポソームアジュバントを製造する方法であって、以下の工程:
(a)デバイス内で、溶媒と脂質を含む第1の溶液、及び水を含む第2の溶液を混合する工程；
(b)TLR4アゴニストを添加する工程；並びに
(c)溶媒を除去する工程
を含む方法が提供される。
また、リポソームアジュバントを製造する方法であって、以下の工程:
(a)デバイス内で、溶媒と脂質を含む第1の溶液、及び水を含む第2の溶液を混合する工程；
(b)溶媒を除去する工程；並びに
(c)TLR4アゴニストを添加する工程
を含む方法も提供される。
本発明は、マイクロ流体デバイスを用いてリポソームアジュバントを調製する際の使用のリポソーム濃縮物を製造する方法であって、デバイス内で、溶媒と脂質を含む第1の溶液、及び水を含む第2の溶液を混合する工程を含む方法を提供する。
また、マイクロ流体デバイスを用いたリポソームアジュバントの調製における使用のリポソーム濃縮物を製造する方法が提供され、以下の工程:
(a)デバイス内で、溶媒と脂質を含む第1の溶液、及び水を含む第2の溶液を混合する工程；並びに
(b)TLR4アゴニストを添加する工程
を含む。
加えて、マイクロ流体デバイスを用いたリポソームアジュバントの調製における使用のリポソーム濃縮物を製造する方法が提供され、以下の工程:
(a)デバイス内で、溶媒と脂質を含む第1の溶液、及び水を含む第2の溶液を混合する工程；並びに
(b)サポニンを添加する工程
を含む。
さらに、マイクロ流体デバイスを用いたリポソームアジュバントの調製における使用のリポソーム濃縮物を製造する方法が提供され、以下の工程:
(a)デバイス内で、溶媒と脂質を含む第1の溶液、及び水を含む第2の溶液を混合する工程；
(b)サポニンを添加する工程:並びに
(c)TLR4アゴニストを添加する工程
を含み、工程(b)及び(c)は、いずれかの順序であってもよく、又は単一の工程で行われ得る。
また、本明細書に記載される方法から得られるリポソームアジュバント及びリポソーム濃縮物、例えば該方法から得られたリポソームアジュバント及びリポソーム濃縮物が提供される。
特定の方法では、溶媒除去の前に、回収された混合材料にTLR4アゴニストを添加してもよい。他の方法では、TLR4アゴニストは、溶媒除去の後に添加してもよい（そのような状況では、TLR4の量は、典型的には、先に添加した場合に使用される量と同等であろう）。
第1の溶液
第1の溶液(「有機」相)は、典型的には溶媒及び脂質を含む。好適には、脂質は、ホスファチジルコリンである。第1の溶液はステロールを含むことが望ましい。第1の溶液は溶媒、DOPC及びステロールを含むのが適切である。
溶媒は、脂質、例えばホスファチジルコリン(例えばDOPC)、及び存在する他のあらゆる成分(例えばステロール)を可溶化して、第1の溶液を単一の相として提供するべきである。また、溶媒は水性溶液と混和性であって、第1の溶液及び第2の溶液の混合の結果リポソームの懸濁物を含む単一の液体相（liquid phase）が得られるべきである。
溶媒は、有機溶媒又は少なくとも1種の有機溶媒を含む単一相混合物である。
溶媒は、短鎖の有機アルコール、例えばエタノール及び/又はイソプロパノールを含み得る。
適切には、溶媒はエタノールを、例えば70～90％v/vの間、より適切には75～85％v/vの間、又は78～82％v/vの間の濃度で含む。
適切には、溶媒はイソプロパノールを、例えば10～30％v/vの間、より適切には15～25％v/vの間、又は18～22％v/vの間の濃度で含む。
溶媒は、70～90％v/vの間の濃度のエタノール及び10～30％v/vの間の濃度のイソプロパノール、例えば75～85％v/vの間の濃度のエタノール及び15～25％v/vの間の濃度のイソプロパノール、とりわけ78～82％v/vの間の濃度のエタノール及び18～22％v/vの間の濃度のイソプロパノール、特に80％v/vの濃度のエタノール及び20％v/vの濃度のイソプロパノールから本質的になるのが適切である。より高いエタノール濃度、例えば90％v/v超のエタノールでは、溶媒の可溶化能力が制限される(最終的には系の能力を束縛する)。より低いエタノール濃度、例えば70％v/v未満のエタノールでは、方法が作動（運転）パラメーター、例えば温度に対してより敏感になり得る。
本発明で役に立つ脂質は、典型的には膜形成性脂質である。膜形成性脂質はリン脂質(例えばホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール及びホスファチジルセリン)、セラミド及びスフィンゴミエリンを含めて多様な範囲の構造を含む。膜形成性脂質は、典型的には極性の頭部基(膜内で水性相に向いて整列する)及び1つ以上(例えば2つ)の疎水性の尾部基(膜内で会合して疎水性のコアを形成する)を有する。疎水性の尾部基は、典型的にはアシルエステルの形態であり、これはその長さ(例えば8～26個の炭素原子)及びその不飽和度(例えば1つ、2つ又は3つの二重結合)の両方が変化し得る。
本発明で役に立つ脂質は天然起源でも合成起源でもよく、単一の純粋な成分(例えば重量基準で90％純粋、とりわけ95％純粋、適切には99％純粋)、単一のクラスの脂質成分(例えばホスファチジルコリンの混合物、又は代わりに、保存されたアシル鎖型の脂質の混合物)でよく、又は多くの異なる脂質型の混合物でもよい。
本発明の1つの実施形態において、脂質は単一の純粋な成分である。
純粋な脂質は一般に合成又は半合成起源である。本発明で役に立つ純粋な脂質の例としては、ホスファチジルコリン(例えば、DLPC、DMPC、DPPC、DSPC及びDOPC、特にDLPC、DMPC、DPPC及びDOPC、とりわけDOPC)及びホスファチジルグリセロール(例えばDPPG)、適切にはホスファチジルコリンがある。純粋な脂質の使用は、その明確な組成のために望ましいが、一般により高価である。
本発明の1つの実施形態において、脂質は成分の混合物である。
本発明で役に立つ脂質の混合物は、当業者に公知の手段による抽出及び精製によって得られる天然の起源のものでよい。天然起源の脂質混合物は一般に純粋な合成脂質よりかなり安価である。天然由来の脂質としては卵又は大豆からの脂質抽出物があり、これらの抽出物は一般にアシル鎖長、不飽和度及び頭部基型の混合物を有する脂質を含有する。植物起源の脂質抽出物は、典型的には動物起源のものより高い不飽和レベルを示すと期待され得る。起源の変動のため、脂質抽出物の組成はバッチ間で変動し得ることに注意されたい。
本発明の1つの実施形態において、脂質は単一の頭部基型のリン脂質(例えばホスファチジルコリン)を重量で少なくとも50％、とりわけ少なくとも75％、適切には少なくとも90％含有する脂質抽出物である。本発明の第2の実施形態において、特定の脂質抽出物は、それらの比較的安価なコストのために好ましいことがある。本発明の第3の実施形態において、脂質は保存されたアシル鎖長(例えば重量で少なくとも50％、とりわけ少なくとも75％、適切には少なくとも90％)、例えば長さが12個(例えばラウリル)、14個(例えばミリスチル)、16個(例えばパルミチル)又は18個(例えばステアリル又はオレオイル)の炭素原子を有する脂質混合物である。
本発明で役に立つ脂質抽出物は、重量で少なくとも50％のリン脂質(例えば、ホスファチジルコリン及びホスファチジルエタノールアミン)、とりわけ重量で少なくとも55％のリン脂質、特に重量で少なくとも60％(例えば75％又は90％)のリン脂質を含むのが適切である。
脂質混合物はまた、純粋な脂質の組合せ、又は1つの脂質抽出物と他の脂質抽出物若しくは純粋な脂質との組合せによって調製することもできる。
対象の特定の脂質としては、DOTAP（1,2-ジオレオイル-3-トリメチルアンモニウム-プロパン）及びDDA（ジメチルジオクタデシルアンモニウム）などが挙げられる。DMPCとDOTAPの組み合わせが対象となる。
既に述べたように、第1の溶液は、ホスファチジルコリンを含むことが望ましいだろう。ホスファチジルコリンは12～20個の炭素原子を有し、場合により1つの二重結合を有する非分岐アシル鎖を含有し、14～18個の炭素原子を有し、場合により1つの二重結合を有するアシル鎖を有するものが特に重要である。典型的には、脂質分子中の2つのアシル鎖は各々同じである。興味のある特定のホスファチジルコリン脂質としては、飽和ホスファチジルコリン脂質、ジラウロイルホスファチジルコリン(DLPC)、ジミリストイルホスファチジルコリン(DMPC)、ジパルミトイルホスファチジルコリン(DPPC)、ジステアロイルホスファチジルコリン(DSPC)及びジアラキドイルホスファチジルコリン(DAPC)、並びに不飽和ホスファチジルコリン脂質、ジパルミトレオイルホスファチジルコリン及びジオレオイルホスファチジルコリン(DOPC)、並びにこれらの混合物がある。ホスファチジルコリン脂質は他の脂質から実質的に精製されているのが適切である。典型的にはホスファチジルコリン脂質は少なくとも80重量％純粋、例えば少なくとも90重量％純粋、とりわけ少なくとも95重量％純粋、特に98重量％純粋、例えば少なくとも99重量％又は更には少なくとも99.8重量％純粋である。
本発明では、溶媒及び100～170mg/mlの脂質を含む第1の溶液を特に使用し、溶媒は70～90％v/vのエタノール及び10～30％v/vのイソプロピルアルコールを含む。脂質はホスファチジルコリンであるのが適切である。
既に述べたように、第1の溶液はDOPC(ジオレオイルホスファチジルコリン)を含むのが適切である。DOPCは他の脂質から、他のアシル鎖の型であれ他の頭部基の型であれ、実質的に精製されているのが適切である。典型的には、DOPCは少なくとも90重量％純粋、例えば少なくとも95重量％純粋、とりわけ少なくとも98重量％純粋、特に99重量％純粋、例えば少なくとも99.8重量％純粋である。
第1の溶液は100～170mg/mlのDOPC、例えば100～160mg/mlのDOPC、とりわけ120～160mg/mlを含むのが適切である。第1の溶液は120～150mg/mlのDOPC、例えば120～140mg/mlのDOPCを含み得る。特に、第1の溶液はおよそ130mg/mlのDOPC(例えば125～135mg/mlのDOPC、とりわけ130mg/mlのDOPC)を含み得る。
ステロールは、典型的にはコレステロールである。コレステロールはMerck Index、第13版、381頁に獣脂中に見られる天然に存在するステロールとして開示されている。コレステロールは式(C27H46O)を有し、(3β)-コレスタ-5-エン-3-オールとしても知られる。
第1の溶液は20～50mg/ml、例えば25～40mg/ml、とりわけおよそ32.5mg/ml(例えば30～35mg/ml、特に32.5mg/ml)のステロール(例えばコレステロール)を含むのが適切である。
第1の溶液の乾燥重量は100～250mg/ml、例えば140～220mg/ml、とりわけ150～220mg/mlであるのが適切である。
本発明は、したがって、溶媒及び100～170mg/mlの脂質を含む第1の溶液を利用し、溶媒は70～90％v/vのエタノール及び10～30％v/vのイソプロピルアルコールを含む。脂質はDOPCであるのが適切である。
脂質(例えばホスファチジルコリン、例としてDOPC)とステロールとの比率は通常3:1～5:1w/w、例えば3.5:1～4.5:1w/wである。
幾つかの実施形態において、第1の溶液は溶媒及び100～160mg/mlの脂質及び30～40mg/mlのコレステロールから本質的になり、溶媒は70～90％v/vのエタノール及び10～30％v/vのイソプロピルアルコールを含む。脂質はホスファチジルコリンであるのが望ましい。脂質はDOPCであるのが適切である。
TLR4アゴニストを含むリポソームアジュバントを調製するために、TLR4アゴニスト、特にリポ多糖、例えばモノホスホリルリピドA、例えば3D-MPLは、場合により第1の溶液に含ませてもよい。第1の溶液は1～25mg/ml、例えば2～16mg/ml、とりわけ3～12mg/ml、特に4～10mg/ml(例えばおよそ6.5mg/ml、例えば5.5～7.5mg/ml、とりわけ6.5mg/ml)のTLR4アゴニストを含有し得る。
この方法の他の特徴は第1の溶液に関して記載した通りであり得、例えば溶液は100～160mg/mlの脂質及び30～40mg/mlのコレステロールを含み、溶媒は70～90％v/vのエタノール及び10～30％v/vのイソプロピルアルコールを含む。脂質はホスファチジルコリンであるのが望ましい。脂質はDOPCであるのが適切である。溶液は4～10mg/mlのTLR4アゴニスト、特にリポ多糖、例えばモノホスホリルリピドA、例えば3D-MPLを含むのが適切である。
本発明は、100～160mg/mlの脂質及び30～40mg/mlのコレステロールから本質的になる溶液を提供するのが適切であり、溶媒は70～90％v/vのエタノール及び10～30％v/vのイソプロピルアルコールを含む。脂質はホスファチジルコリンが望ましく、脂質はDOPCであるとより適切である。溶液は4～10mg/mlのTLR4アゴニスト、特にリポ多糖、例えばモノホスホリルリピドA、例えば3D-MPLを含むのが適切である。
第2の溶液
第2の溶液(「水性」相)は、典型的には水を含み、幾つかの方法においてはサポニンも含んでもよい。第2の溶液は、水からなってもよい。
第2の溶液は逆溶媒(counter solvent)として働き、第1の溶液と混合するとリポソームを形成する。第1の溶液からの成分の沈殿が速ければ速いほど、典型的には得られるリポソームはより小さくなる。
第2の溶液は実質的に水性であり、少なくとも90％v/vの水、例えば少なくとも95％の水、とりわけ少なくとも98％の水、特に少なくとも99％の水、例えば100％の水を含む。
第2の溶液中に存在する場合、サポニンは0.05～25mg/ml、例えば0.2～10mg/ml、とりわけ0.5～5mg/ml、特に0.8～3mg/mlの濃度で存在するのが適切である。サポニンは、約1.625mg/ml、例えば1.2～2mg/ml、とりわけ1.625mg/mlの濃度で存在することができ、特に、第1及び第2の溶液の流速（流量）の比について、1：4の範囲、例えば1：4である。あるいは、サポニンは、約2.167mg/ml、例えば1.6～2.6mg/ml、とりわけ2.167mg/mlなどの濃度で存在することができ、特に第1及び第2の溶液の流速（流量）の比が1：3の範囲、例えば1：3である。
第2の溶液中にサポニンが存在しない場合、第2の溶液は水から本質的になる(例えば水からなる)のが適切である。
サポニンが第2の溶液中に存在する場合、第2の溶液は水及びサポニンから本質的になる(例えば水及びサポニンからなる)のが適切であり、例えば第2の溶液は注射用水中のサポニン(例えばQS-21)でよい。
第2の溶液のイオン強度は150nM以下、例えば100nM以下、特に80nM以下、とりわけ60nM以下、例えば40nM以下であるのが適切である。
導電率は水性溶液のイオン強度の都合のよい代用物であり得る。第2の溶液の導電率は12mS/cm以下、例えば10mS/cm以下、8mS/cm以下、6mS/cm以下、又は4mS/cm以下であるのが適切である。
第2の溶液は水性サポニンから本質的になるのが適切である。
マイクロ流体の作動（運転）
最適作動条件はデバイスの正確な構成及び生成物の所望の特性に依存する。
混合チャンバ内への総流速（総流量）は、混合チャンバ横断面の8ml/分/mm2より大きく、例えば12～40ml/分/mm2であるのが適切である。混合チャンバ内への総流速は、16～28ml/分/mm2、とりわけ17.5～25ml/分/mm2、特に19～21(例えば20)ml/分/mm2であり得る。混合チャンバ内への総流速は、26～38ml/分/mm2、とりわけ28～36ml/分/mm2、特に30～34(例えば32)ml/分/mm2であり得る。混合チャンバ内への総流速は、10～25ml/分/mm2、とりわけ12.5～22.5ml/分/mm2、特に15～20(例えば17.5)ml/分/mm2であり得る。
第1と第2の溶液との流速の比率は、1:2～1:6、例えば1:3～1:5、とりわけ1:3.5～1:4.5の範囲、特に1:4であるのが適切である。第1と第2の溶液との流速の比率は1:2.5～1:3.5、例えば1:3である。混合材料中の溶媒の高いレベルはリポソームの安定性に影響を及ぼし得るので高い溶媒濃度をもたらす流速の比率は回避するのが望ましく、溶媒濃度50％は1:1の比率の結果であり、1:2では33％、1:3の比率では25％、1:4の比率では20％、1:5の比率では16.6％となる。第1の溶液の低い流速では系の生産性が低下する。比較的大きい容積の混合材料を生じる流速の比率は、一定の閾値(例えば50L)を超える溶媒を含有する組成物の取扱い及び使用に関する安全プロトコールのためあまり望ましくない。
混合チャンバ中への第1の溶液の流速（流量）は、混合チャンバ横断面の2～10ml/分/mm2の範囲が適切である。混合チャンバ中への第1の溶液の流速は、2～6ml/分/mm2、とりわけ3.5～5.5ml/分/mm2、特に3～5(例えば4)ml/分/mm2であり得る。混合チャンバ中への第1の溶液の流速は、4.35ml/分/mm2であり得る。あるいは、混合チャンバ中への第1の溶液の流速は、4.4～8.4ml/分/mm2、とりわけ4.9～6.9ml/分/mm2、特に5.4～7.4(例えば6.4)ml/分/mm2であり得る。
混合チャンバ中への第2の溶液の流速（流量）は、混合チャンバ横断面の11～35ml/分/mm2の範囲が適切である。混合チャンバ中への第2の溶液の流速は、12～20ml/分/mm2、とりわけ14～18ml/分/mm2、特に15～17(例えば16)ml/分/mm2であり得る。混合チャンバ中への第2の溶液の流速は、10～16ml/分/mm2、とりわけ11～15ml/分/mm2、特に12～14(例えば13.125)ml/分/mm2であり得る。あるいは、混合チャンバ中への第2の溶液の流速は、21.6～29.6ml/分/mm2、とりわけ23.6～27.6ml/分/mm2、特に24.6～26.6 (例えば25.6)ml/分/mm2であり得る。
第1の溶液及び第2の溶液は、典型的には10～30℃、例えば15～25℃、特に18～22℃、とりわけ20℃の領域の温度で供給され、同じ又は異なる温度であってよく、適切には同じ温度、とりわけ20℃でよい。
混合チャンバは10～30℃、例えば15～25℃、特に18～22℃、とりわけ20℃の領域の温度に維持することができる。デバイスの設計及び環境条件に応じて、第1の溶液及び第2の溶液の温度を積極的に制御することが必要なだけで、混合チャンバ温度を積極的に制御する必要はないことがある。第1の溶液及び第2の溶液の混合は少々発熱性であり得る。より低い作動温度はより小さいリポソームを形成することになる。
マイクロ流体デバイスは、例えば温度が10～30℃、例えば15～25℃の範囲、特に約20℃(例えば18～22℃、特に20℃)に維持される制御された温度環境内で作動（運転）させることができる。
系の作動圧力は制御する必要がない。
混合チャンバ内の最大のレイノルズ数は2100、特に1800、例えば1500、とりわけ1000、例えば600が適切である。混合チャンバ内の最大のレイノルズ数は、適切には25～1500の範囲内、より適切には50～1000、特に100～600、とりわけ150～500の間である。レイノルズ数を計算する方法は当業者に公知であり、本明細書中実施例に例示されている。
リポソーム
第1の溶液及び第2の溶液を混合するとリポソームが形成される。
用語「リポソーム」は当技術分野で周知であり、水性の空間を取り囲む1つ以上の脂質二重層を含む小胞の一般的カテゴリーを規定する。それ故、リポソームは1つ以上の脂質及び/又はリン脂質二重層からなり、その構造中に他の分子、例えばタンパク質又は炭水化物を含有することができる。脂質及び水性相が両方とも存在するので、リポソームは水溶性の物質、脂溶性の物質、及び/又は両親媒性の化合物を封入又は封じ込めることができる。
リポソームのサイズはリン脂質の組成及びその調製に使用した方法に応じて30nmから数umまで変化し得る。
本発明のリポソームは、ホスファチジルコリン脂質を含有するか、又は、ホスファチジルコリン脂質から本質的になる(該当する場合はサポニン、TLR4アゴニスト及びステロールアゴニストを含む)。
本発明のリポソームはDOPCを含有するか、又は、DOPC及びステロールから本質的になる(該当する場合はサポニン及びTLR4アゴニストを含む)のが適切である。
本発明において、リポソームのサイズは50nm～200nm、とりわけ60nm～180nm、例えば70～165nmの範囲である。最適には、リポソームは安定であっておよそ100nmの直径を有していてろ過による便利な滅菌が可能であるべきである。
リポソームの構造完全性は、リポソームのサイズ(Z平均直径、Zav)及び多分散性を測定する動的光散乱(DLS)のような方法により、又は、リポソームの構造解析のための電子顕微鏡法により評価することができる。適切には、平均粒径は95～120nmの間であり、及び/又は、多分散性(PdI)指数は0.35以下、特に0.3以下、例えば0.25以下である。1つの実施形態において、平均粒径は95～120nmの間であり、及び/又は、多分散性(PdI)指数は0.2以下である。
平均粒径は90～120nmであることができ、及び／又は、多分散性（PdI）指数は0.35以下、特に0.3以下、例えば0.25以下である。一実施形態では、平均粒径は90～120nmであり、及び／又は、多分散性（PdI）指数は0.2以下である。
幾つかの状況において、溶媒及びある種の追加の成分の存在はリポソームのサイズに影響を及ぼす可能性がある。それ故、リポソームのサイズは溶媒除去及び追加の成分の組み込み後に適切に測定される。
溶媒を除去する
回収された混合材料は水及び溶媒中にリポソームを含む。そのような材料はリポソームアジュバントの調製における使用のリポソーム濃縮物であり、前記リポソーム濃縮物は水、溶媒、及び脂質を含み、場合によりサポニン、TLR4アゴニスト及びステロール（例えばコレステロール)と共に含み、例えば水、溶媒、DOPC、サポニン、TLR4アゴニスト及びコレステロールを含む。回収された材料は後に使用するために貯蔵してもよいし、又は溶媒の一部若しくは全てを除去するために更に処理してもよい。
アジュバント中のリポソームの使用を容易にするために、実質的に全ての有機溶媒を除去する(例えば少なくとも98％w/wの水、例えば少なくとも99％の水、とりわけ少なくとも99.5％の水、特に少なくとも99.9％の水、例えば少なくとも99.99％を残す)のが望ましい。
残留する有機溶媒はヒト用量当たり150ug未満、例えばヒト用量当たり100ug未満、例えばヒト用量当たり50ug未満、とりわけヒト用量当たり20ug未満(例えばヒト用量当たり10ug以下)と一致するレベルが適切である。残留する有機溶媒はInternational Council For Harmonisation Of Technical Requirements For Pharmaceuticals For Human Use Guideline For Residual Solvents Q3C(R6)に適合するレベルであるのが望ましい。
溶媒除去は、個別に、又は組み合わせて使用できるいろいろな方法で行うことができる。適切な方法としては、限外ろ過及び透析、とりわけ透析ろ過（diafiltration）がある。
溶媒の少なくとも一部分、例えば溶媒の実質的に全部の除去は透析により行うことができる。透析は選択的に透過性の半透過性の封じ込め容器を使用するが、その結果、回収された材料が半透過性の封じ込め容器に導入される場合、溶媒が容器の半透過性の部分を通過し、リポソーム(存在するならばサポニン及びTLR4アゴニストも)が保持される。例えば、使用する半透過性の封じ込め容器は単一の半透膜を含むことができ、溶媒除去は回収された材料を含む半透過性の封じ込め容器を交換媒体内に浸し、膜により分離される液体を拡散により平衡に到達させることによって達成することができる。透析はバッチ又は連続モードの作動で行われ得る。例えば、透析は、交換媒体のバッチ交換を伴って複数回繰り返して所望のレベルの溶媒除去を達成することができる。透析はまた、回収された材料及び/又は交換媒体を連続的に交換する連続的プロセスであることもできる。本方法で役に立ち得る代表的な透析膜には7kDa膜がある。
溶媒の少なくとも一部分、例えば溶媒の実質的に全部の除去は限外ろ過により行うことができる。限外ろ過は、半透膜で分離された第1の区画及び第2の区画を含む封じ込め容器を使用する。回収された材料は封じ込め容器の第1の区画に入れることができ、次いでこれを第2の区画に対して正圧にすることができ、その結果液体が封じ込め容器の半透過性の部分を通過する。透析ろ過は限外ろ過の一形態であり、交換媒体を容器の第1の区画に加えることにより残りの液体の少なくとも一部分を交換媒体と交換することができる。その結果、限外ろ過が進行するにつれて、残りの液体は交換媒体の組成になる傾向がある。透析ろ過はいろいろな方法で行うことができ、連続法(定容積ともいわれる)では、交換媒体を膜上での液体ろ過に匹敵する速度で加え、不連続法では残りの液体の容積が変化し、交換媒体を不連続的に加える(例えば、初期の希釈と、その後の元の容積への濃縮又は初期の濃縮と、その後の元の容積への希釈など)。最適な作動モードは、1)初期の試料容積、濃度及び粘度、2)所要の最終試料濃度、3)様々な濃度での試料の安定性、4)透析ろ過に必要とされる緩衝剤の容積、5)合計処理時間、6)利用可能なリザーバーサイズ、7)経済を始めとする多くの要因に依存し得る。代表的な透析ろ過膜にはHydrosart 30kDがある。
溶媒除去の間に使用される交換媒体は最終のリポソームアジュバントの媒体に対応する必要はないが、便宜上交換媒体は所望の最終のリポソームアジュバント媒体又はその濃縮物、例えばリン酸緩衝生理食塩水又は別の所望の緩衝組成物であるのが適切である。
幾つかの方法において、サポニンは溶媒の除去の前に回収された混合材料に加えてもよい。他の方法において、サポニンは溶媒の除去後に加えてもよい。
サポニン
本発明で使用するのに適切なサポニンはQuil A及びその誘導体である。Quil Aは南米の木キラヤ・サポナリア・モリナから単離されたサポニン調製物であり、1974年Dalsgaardらによりアジュバント活性を有すると最初に記載された("Saponin adjuvants"、Archiv. fur die gesamte Virusforschung、44巻、Springer Verlag、Berlin、243～254頁)。アジュバント活性を保持し、Quil Aに関連する毒性をもたないQuil Aの精製画分がHPLCにより単離されている(例えば、欧州特許第0362278号参照)。一般的に興味がある画分としてはQS7、QS17、QS18及びQS-21、例えばQS7及びQS-21(QA7及びQA21ともいわれる)がある。QS-21は特に重要なサポニン画分である。
本発明の幾つかの実施形態において、サポニンはキラヤ・サポナリア・モリナquil Aの誘導体、適切にはQuil Aの免疫学的に活性な画分、例えばQS7、QS17、QS18又はQS-21、特にQS-21である。本発明において使用され得るサポニン画分を定義する目的で参照により本明細書に組み込まれるWO2019106192は、特に対象となるQS-21画分を記載している。
典型的には、サポニン、例えばQuil A、特にQS-21は、少なくとも90％ w/w純粋、例えば少なくとも95％ w/w純粋、とりわけ少なくとも98％ w/w純粋、特に99 w/w ％純粋である。
QS-21は複数の成分を含み、その主成分は典型的には以下の通りである：
－「QS-21 1988 A成分」、これはKite 2004でピーク88として同定され、Nyberg 2000及びNyberg 2003で特徴付けられたA異性体キシロース化学型構造S4（アピオース異性体）及びS6（キシロース異性体）に相当する。QS-21 1988 A成分は、QS-21 1988 A V1（すなわちアピオース異性体）：
Figure 2023524136000002
 及びQS-21 1988 A V2（すなわちキシロース異性体）：
Figure 2023524136000003
 から構成され得る。
－「QS-21 1856 A成分」、これはKite 2004ではピーク86として同定され、Nyberg 2000及びNyberg 2003で特徴付けられたA異性体キシロース化学型構造S2に相当する。QS-21 1856 A成分は、以下から構成され得る：
Figure 2023524136000004
－「QS-21 2002 A成分」、これはKite 2004ではピーク85として同定され、Nyberg 2000及びNyberg 2003で特徴付けられた構造S3及びS5のA異性体ラムノース化学型に相当する。QS-21 2002 A成分は、QS-21 2002 A V1（すなわち、アピオース異性体）：
Figure 2023524136000005
 及びQS-21 2002 A V2（すなわち、キシロース異性体）：
Figure 2023524136000006
 から構成され得る。
その結果、サポニンは、望ましくは少なくとも40％、例えば少なくとも50％、好適には少なくとも60％、特に少なくとも70％、望ましくは少なくとも80％、例えば少なくとも90％（214nmにおけるUV吸光度及び相対イオン存在量により決定）のQS-21 1988 A成分、QS-21 1856 A成分及び／又はQS-21 2002 A成分を含む。
幾つかの実施形態において、サポニンは、214nmでのUV吸光度及び相対イオン存在量により決定される少なくとも40％、例えば少なくとも50％、特に少なくとも60％、とりわけ少なくとも65％、例えば少なくとも70％のQS-21 1988 A成分を含有する。幾つかの実施形態において、サポニン抽出物は、214nmでのUV吸光度により及び相対イオン存在量により決定される90％以下、例えば85％以下、又は80％以下のQS-21 1988 A成分を含有する。幾つかの実施形態において、サポニン抽出物は、214nmでのUV吸光度により及び相対イオン存在量により決定される40％～90％のQS-21 1988 A成分、例えば50％～85％のQS-21 1988 A成分、とりわけ70％～80％のQS-21 1988 A成分を含有する。
幾つかの実施形態において、サポニン抽出物は、214nmでのUV吸光度により及び相対イオン存在量により決定される30％以下、例えば25％以下のQS-21 1856 A成分を含有する。幾つかの実施形態において、サポニン抽出物は、214nmでのUV吸光度により及び相対イオン存在量により少なくとも5％、例えば少なくとも10％のQS-21 1856 A成分を含有する。幾つかの実施形態において、サポニン抽出物は、214nmでのUV吸光度により及び相対イオン存在量により決定される5％～30％のQS-21 1856 A、例えば10％～25％のQS-21 1856 Aを含有する。
幾つかの実施形態において、サポニン抽出物は、214nmでのUV吸光度により及び相対イオン存在量により40％以下、例えば30％以下、特に20％以下、とりわけ10％以下のQS-21 2002 A成分を含有する。幾つかの実施形態において、サポニン抽出物は、214nmでのUV吸光度により及び相対イオン存在量により少なくとも0.5％、例えば少なくとも1％のQS-21 2002 A成分を含有する。幾つかの実施形態において、サポニン抽出物は、214nmでのUV吸光度により及び相対イオン存在量により決定される0.5％～40％のQS-21 2002 A成分、例えば1％～10％のQS-21 2002 A成分を含有する。
用語「214nmでのUV吸光度及び相対イオン存在量」は、共流出する化学種に対する所与のm/zの割合に対する推定値を意味する。(所与のUVピークに対する面積百分率)×(所与のピーク中の興味があるm/zに対する相対イオン存在量)/(所与のピークに対する全相対イオン存在量の合計)=所与のUVピーク中の興味があるm/zの割合は、全ての共流出する化学種に対して含まれる相対イオン存在量を仮定している。
QS-21 1988 A成分、QS-21 1856 A成分及び／又はQS-21 2002 A成分は、キラヤ（Quillaja）種からの抽出によって得られてもよいし、合成的に（半合成的になど）調製されてもよい。
本発明の有益な特徴は、サポニンが外因性のステロール、例えばコレステロールを用いてクエンチされる反応原性の(reactogenic)より少ない組成物として提示されることである。
サポニンが第1及び第2の溶液の混合後に加えられる方法において、サポニンの量は、典型的には、より早く加えるならば使用されるはずの量と同等である。
TLR4アゴニスト
TLR4アゴニストの適切な例はリポ多糖、適切にはリピドAの非毒性誘導体、特にモノホスホリルリピドA、より特定的には3-デ-O-アシル化モノホスホリルリピドA(3D-MPL)である。
3D-MPLはGlaxoSmithKline Biologicals N.A.により「MPL」という名称で販売されており、文書を通じて3D-MPLと称されている。例えば、米国特許第4,436,727号、同第4,877,611号、同第4,866,034号及び同第4,912,094号参照。3D-MPLは英国特許出願公開第2 220 211号に記載されている方法に従って製造することができる。化学的にはそれは、4、5又は6つのアシル化された鎖を有する3-脱アシル化されたモノホスホリルリピドAの混合物である。本発明において、小さい粒子の3D-MPLは水性のアジュバント組成物を調製するのに使用できる。小さい粒子の3D-MPLは、0.22umのフィルターを通して滅菌ろ過できるような粒径を有する。そのような調製物は国際公開第94/21292号に記載されている。本発明で役に立つ水性のアジュバント組成物を調製するには粉末化された3D-MPLを使用するのが適切である。
使用することができる他のTLR4アゴニストは、アミノアルキルグルコサミニドホスフェート(AGP)、例えば国際公開第98/50399号又は米国特許第6,303,347号(AGPの調製方法も記載されている)に記載されているものである。幾つかのAGPはTLR4アゴニストであり、幾つかはTLR4アンタゴニストである。特に対象となるAGPは、以下のように示されるものである：
Figure 2023524136000007
本発明で役に立ち得る他のTLR4アゴニストとしては、例えば国際公開第2008/153541号若しくは国際公開第2009/143457号又は文献論文Coler RNら、(2011)、Development and Characterization of Synthetic Glucopyranosyl Lipid Adjuvant System as a Vaccine Adjuvant.、PLoS ONE、6(1): e16333.、doi:10.1371/journal.pone.0016333及びArias MAら、(2012)、Glucopyranosyl Lipid Adjuvant (GLA), a Synthetic TLR4 Agonist, Promotes Potent Systemic and Mucosal Responses to Intranasal Immunization with HIVgp140.、PLoS ONE、7(7): e41144.、doi:10.1371/journal.pone.0041144に記載されているグルコピラノシル脂質アジュバント(GLA)がある。国際公開第2008/153541号又は国際公開第2009/143457号は、本発明で役に立ち得るTLR4アゴニストを規定する目的で参照により本明細書に組み込まれる。
興味深いTLR4アゴニストとして、以下が挙げられる：
Figure 2023524136000008
興味深い別のTLR4アゴニストは、以下である：
Figure 2023524136000009
興味深いTLRアゴニストは、以下のdLOS(Han, 2014に記載の通り)である：
Figure 2023524136000010
典型的には、TLR4アゴニスト、例えばリポ多糖、例としてモノホスホリルリピドA、特に3D-MPLは少なくとも90％ w/w純粋、例えば少なくとも95％ w/w純粋、とりわけ少なくとも98 w/w ％純粋、特に99％ w/w純粋である。
用語「単一の工程で行う（行われる）」とは、本明細書で使用される場合、同時期又は同時が意図されている。
本明細書に記載されているいずれかの方法に従って第1の溶液及び第2の溶液を混合することにより得ることができる(例えば得られた)リポソーム含有溶液は本発明の更なる態様を形成する。
興味のある特定のアジュバントは、DOPC及びコレステロールを含み、TLR4アゴニスト及びサポニン、特に3D-MPL及びQS-21を有するリポソームを特徴としている。
興味のある別のアジュバントは、DOTAP及びDMPCを含み、TLR4アゴニスト及びサポニン、特にdLOS及びQS-21を有するリポソームを特徴としている。
更なる添加物(賦形剤)
本発明の方法で生じるリポソームアジュバントは更に改変することができる。例えば、後の使用に望まれる成分及び/又は加えられた追加の成分の特定の濃度を達成するために希釈してもよい。そのような工程は方法の幾つかの段階で、即ち溶媒除去の前、溶媒除去の間(例えば交換媒体によって)又は溶媒除去の後に行うことができる。
更なる実施形態において、緩衝剤が組成物に加えられる。液体調製物のpHは、組成物の成分及び対象への投与に対する必要な適合性を考慮して調整される。液体混合物のpHは少なくとも4、少なくとも5、少なくとも5.5、少なくとも5.8、少なくとも6であるのが適切である。液体混合物のpHは9未満、8未満、7.5未満又は7未満でよい。他の実施形態において、液体混合物のpHは4～9の間、5～8の間、例えば5.5～8の間である。それ故、pHは6～9の間、例えば6.5～8.5であるのが適切である。特に好ましい実施形態において、pHは5.8～6.4の間である。
適当な緩衝剤は酢酸塩、クエン酸塩、ヒスチジン、マレイン酸塩、リン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩及びTRISから選択し得る。1つの実施形態において、緩衝剤はリン酸緩衝液、例えばNa/Na2PO4、Na/K2PO4又はK/K2PO4である。
緩衝剤は少なくとも6mM、少なくとも10mM又は少なくとも40mMの量で液体混合物中に存在することができる。緩衝剤は100mM未満、60mM未満又は40mM未満の量で液体混合物中に存在することができる。
周知のように、非経口投与用の溶液は細胞の過剰な変形又は溶解を回避するために薬学的に許容できるオスモル濃度を有するべきである。薬学的に許容できるオスモル濃度とは、一般に、溶液がおおよそ等張又はやや高張のオスモル濃度を有することを意味する。本発明の組成物は再構成された場合250～750mOsm/kgの範囲のオスモル濃度を有するのが適切であり、例えばオスモル濃度は250～550mOsm/kgの範囲、例えば280～500mOsm/kgの範囲でよい。特に好ましい実施形態において、オスモル濃度は280～310mOsm/kgの範囲でよい。
オスモル濃度は当技術分野で公知の技術に従って、例えば商業的に入手可能な浸透圧計、例えばAdvanced Instruments Inc.(USA)から入手可能なAdvanced(商標)Model 2020を使用して測定することができる。
「等張剤」は、生理学的に容認され、製剤と接触する細胞膜を横切る正味の水の流れを防ぐのに適した張度を製剤に付与する化合物である。幾つかの実施形態において、組成物に使用される等張剤は塩(又は塩の混合物)であり、塩は塩化ナトリウムであるのが便利であり、およそ150nMの濃度が適切である。しかし、他の実施形態において、組成物は非イオン性の等張剤を含み、組成物中の塩化ナトリウムの濃度は100mM未満、例えば80mM未満、例えば50mM未満、例えば40mM未満、30mM未満、とりわけ20mM未満である。組成物中のイオン強度は100mM未満、例えば80mM未満、例えば50mM未満、例えば40mM未満又は30mM未満であり得る。
特定の実施形態において、非イオン性の等張剤はポリオール、例えばショ糖（スクロース）及び/又はソルビトールである。ソルビトールの濃度は、例えば約3％～約15％(w/v)の間、例えば約4％～約10％(w/v)の間であり得る。免疫学的に活性なサポニン画分及びTLR4アゴニストを含み、等張剤が塩又はポリオールであるアジュバントは国際公開第2012/080369号に記載されている。
0.05ml～1mlの間、例えば0.1～0.5mlの間のヒト用量容積、特に約0.5ml、又は0.7mlの用量容積が適切である。使用される組成物の容積は送達経路及び位置に依存し得、皮内経路ではより小さい用量が使われる。単位用量容器は、単位用量の投与中の物質の的確な操作を可能にするために過多量を含有することがある。
サポニン、例えばQS-21は、ヒト用量当たり1～100ugの間の量で使用することができる。QS-21は約50ugのレベルで使用できる。適切な範囲の例は40～60ug、適切には45～55ug又は49～51ug、例えば50ugである。更なる実施形態において、ヒト用量は約25ugのレベルでQS-21を含む。より低い範囲の例として20～30ug、適切には22～28ug又は24～26ug、例えば25ugがある。小児向けに意図されたヒト用量は成人向けに意図されたものと比較して低減し得る(例えば50％低減)。
TLR4アゴニスト、例えばリポ多糖、例としてモノホスホリルリピドA、例えば3D-MPLはヒト用量当たり1～100ugの間の量で使用することができる。3D-MPLは約50ugのレベルで使用できる。適切な範囲の例は40～60ug、適切には45～55ug又は49～51ug、例えば50ugである。更なる実施形態において、ヒト用量は約25ugのレベルで3D-MPLを含む。より低い範囲の例として20～30ug、適切には22～28ug又は24～26ug、例えば25ugがある。小児向けに意図されたヒト用量は成人向けに意図されたものと比較して低減できる(例えば50％低減)。
TLR4アゴニスト及びサポニンの両方がアジュバント中に存在する場合、TLR4アゴニストとサポニンとの重量比は適切には1:5～5:1の間、適切には1:1である。例えば、3D-MPLが50ug又は25ugの量で存在する場合、適切にはQS-21もヒト用量当たり50ug又は25ugの量で存在し得る。
サポニン：脂質の比率は、典型的には、1：50～1：10(w/w)の程度、好適には1：25～1：15(w/w)の間、好ましくは1：22～1：18(w/w)、例えば1：2(w/w)である。
サポニン:DOPCの比率は、典型的には1:50～1:10(w/w)の程度、適切には1:25～1:15(w/w)の間、好ましくは1:22～1:18(w/w)、例えば1:20(w/w)である。
DOPC：コレステロールなどのステロールの比率は、典型的には10：1～1：1(w/w)の程度、好適には8：1～2：1(w/w)の間、好ましくは6：1～2.6：1(w/w)、例えば約4：1(w/w)である。
使用される成分のいくつかは塩を形成することがあり、したがって、塩、特に薬学的に許容される塩として存在することができる。
抗原
本発明の方法に従って調製されるリポソームアジュバントは免疫原又は抗原と併せて利用することができる。幾つかの実施形態において、免疫原又は抗原をコードするポリヌクレオチドが提供される。
リポソームアジュバントは免疫原若しくは抗原とは別に投与してもよいし、又は製造中若しくはその場で併用投与のための免疫原性組成物として免疫原若しくは抗原と組み合わせてもよい。
それ故、免疫原若しくは抗原、又は免疫原若しくは抗原をコードするポリヌクレオチドを含む免疫原性組成物の製造方法が提供され、前記方法は、
(i)本明細書に記載されている方法に従ってリポソームアジュバントを製造する工程、
(ii)リポソームアジュバントを、免疫原若しくは抗原、又は免疫原若しくは抗原をコードするポリヌクレオチドと混合する工程
を含む。
また、本明細書に記載されている方法に従って製造されるリポソームアジュバントの医薬の製造における使用も提供される。医薬は、免疫原若しくは抗原、又は免疫原若しくは抗原をコードするポリヌクレオチドを含むのが適切である。
更に、医薬として使用される本明細書に記載されている方法に従って製造されるリポソームアジュバントが提供される。医薬は、免疫原若しくは抗原、又は免疫原若しくは抗原をコードするポリヌクレオチドを含むのが適切である。
用語免疫原とは、免疫反応を引き起こすことができるポリペプチドを意味する。免疫原は、少なくとも1つのB又はT細胞エピトープを含む抗原であるのが適切である。引き起こされる免疫反応は、中和抗体を生成する抗原特異的なB細胞反応であってもよい。引き起こされる免疫反応は、全身性及び/又は局所反応であり得る抗原特異的なT細胞反応であってもよい。抗原特異的なT細胞反応は、CD4+ T細胞反応、例えば複数のサイトカイン、例えばIFNガンマ、TNFアルファ及び/又はIL2を発現するCD4+ T細胞が関与する反応を含み得る。代わりに、又は加えて、抗原特異的なT細胞反応はCD8+ T細胞反応、例えば複数のサイトカイン、例えばIFNガンマ、TNFアルファ及び/又はIL2を発現するCD8+ T細胞が関与する反応を含む。
抗原は、ヒト若しくは非ヒト病原体、例えば、ヒト及び非ヒト脊椎動物に感染する細菌、真菌、寄生性微生物若しくは多細胞寄生生物、又はがん細胞若しくは腫瘍細胞に由来し得る(例えばそれらから得ることができる)。
1つの実施形態において、抗原は組換えタンパク質、例えば組換え原核生物タンパク質である。
抗原はヒト用量当たり0.1～100ugの量で提供され得る。
リポソームアジュバントは免疫原若しくは抗原と別に投与してもよいし、又は製造中若しくはその場で免疫原若しくは抗原と併用投与用の免疫原性組成物として組み合わせてもよい。
殺菌(滅菌)
特に非経口投与の場合、組成物は無菌でなければならない。殺菌は様々な方法で行うことができるが、無菌グレードフィルターを通すろ過によって行うのが便利である。殺菌はアジュバント又は免疫原性組成物の調製中何度行ってもよいが、典型的には少なくとも製造終了時に行う。
「無菌グレードフィルター」とは、有効ろ過面積1cm2当たり1×107以上の負荷レベルでの微生物による負荷後無菌の流出液を生成するフィルターを意味する。無菌グレードフィルターは本発明の目的で本発明の当技術分野の当業者に周知であり、無菌グレードフィルターは0.15～0.25umの間、適切には0.18～0.22um、例えば0.2又は0.22umの細孔径を有する。
無菌グレードフィルターの膜は当業者に公知のいずれかの適切な材料、例えば限定されることはないが酢酸セルロース、ポリエーテルスルホン(PES)、ポリフッ化ビニリデン(PVDF)、ポリテトラフルオロエチレン(PTFE)から作製することができる。本発明の特定の実施形態において、本発明の1つ以上又は全てのフィルター膜はポリエーテルスルホン(PES)、特に親水性のポリエーテルスルホンを含む。本発明の特定の実施形態において、本明細書に記載されている方法で使用されるフィルターは二重層フィルター、特にエンドフィルターの細孔径より大きい細孔径を有するビルドインプレフィルターを有する無菌フィルターである。1つの実施形態において、滅菌フィルターは、プレフィルター膜層が0.3～0.5nmの間、例えば0.35又は0.45nmの細孔径を有する二重層フィルターである。更なる実施形態によると、フィルターは非対称のフィルター膜、例えば非対称の親水性PESフィルター膜を含む。代わりに、滅菌フィルター層は、例えば非対称の親水性PESプレフィルター膜層と組み合わせてPVDFで作製してもよい。
意図される医療用途を考慮して、材料は医薬品級(例えば非経口グレード)であるべきである。
整数について用語「実質的」とは、機能上同等であり、その整数の本質的性質が変化しなければ偏差が容認され得ることを意味する。実質的は、本明細書では、対称／対称的、中心、外壁に位置、短形（長方形）、同一(the same)、平行、直線、均等、整合、不整合、反対、等距離、相違、同じ(identical)、台形などの用語に関して使用する。
数値に関して、「実質的に」又は「約（おおよそ）」という用語は、慣用的に、記載値のプラス又はマイナス10％以内、特に記載値のプラス又はマイナス5％以内、特に記載値を意味する。
実質的に平行とは、典型的には、15度以内、例えば10度以内、特に5度以内、例えば平行を意味する。
用語「um」は、本明細書では、マイクロメートルを意味するために使用される。
本出願中の特許出願及び許可された特許を含めて全ての文献の教示は、あたかも完全に記載されているかのように、それぞれ個々の刊行物が具体的かつ個別的に示したものとして、参照により完全に本明細書に組み込まれる。
本明細書及びそれに続く特許請求の範囲を通じて、文脈上他の意味に解すべき場合を除き、「含む」という言葉及びその変化形、例えば「含み」などは述べられている整数、工程、整数の群又は工程の群が含まれているが、その他の整数、工程、整数の群又は工程の群が排除されるものではないと理解される。ある種の要素を「含む」として定義されている組成物又は方法若しくはプロセスは(それぞれ)その要素からなる組成物、方法又はプロセスを包含すると理解される。本明細書で使用される場合、「から本質的になる」とは、追加の成分が存在してもよいことを意味するが、それらが全体としての性質又は機能を変えないことを条件とする。
以下の項（clause）を参照して本発明を更に記載する。
第1項 混合チャンバ;第1の流体のための該混合チャンバへの1つの入口チャネルと、第2の流体のための該混合チャンバへの2つの入口チャネル(前記入口チャネルは、該混合チャンバの近位端に実質的に対称的に配置される);該混合チャンバの遠位端における混合材料のための少なくとも1つの出口、を備えるマイクロ流体混合デバイスであって、該混合チャンバが1つ以上のバッフルを備えることを特徴とする、マイクロ流体混合デバイス。
第2項 第1の流体のための入口チャネルが、断面において実質的に短形である、第1項に記載のデバイス。
第3項 第1の流体のための入口チャネルが、0.1～0.7mmの幅、例えば0.15～0.5mmの幅、とりわけ0.15～0.5mmの幅、特に0.2～0.35mmの幅である第2項に記載のデバイス。
第4項 第1の流体のための入口チャネルが、0.25～0.3mmの幅、例えば、0.27mmの幅である、第3項に記載のデバイス。
第5項 第1の流体のための入口チャネルが、少なくとも0.05mmの深さ、例えば少なくとも0.1mmの深さ、とりわけ少なくとも0.2mmの深さ、特に少なくとも0.3mmの深さである、第2～4項のいずれか1つに記載のデバイス。
第6項 第1の流体のための入口チャネルが、少なくとも0.4mmの深さである、第5項に記載のデバイス。
第7項 第1の流体のための入口チャネルが、10mm以下の深さ、例えば5mm以下の深さ、とりわけ2mm以下の深さ、特に1mm以下の深さである、第2～6項のいずれか1つに記載のデバイス。
第8項 第1の流体のための入口チャネルが、0.8mm以下の深さである、第7項に記載のデバイス。
第9項 第1の流体のための入口チャネルが、0.1～2mmの深さ、例えば0.3～0.8mmの深さ、とりわけ0.4～0.6mmの深さ、特に約0.5mmの深さ、例えば0.5mmの深さである、第2～8項のいずれか1つに記載のデバイス。
第10項 第1の流体のための入口チャネルが、0.01～4mm2、例えば0.05～1mm2、とりわけ0.08～0.4mm2の断面積を有する、第1～9項のいずれか1つに記載のデバイス。
第11項 第1の流体のための入口チャネルが、0.1～0.2mm2、特に約0.135mm2、例えば0.135mm2の断面積を有する、第10項に記載のデバイス。
第12項 第1の流体のための入口チャネルの深さが、混合チャンバの深さと実質的に同じである、第1～11項のいずれか1つに記載のデバイス。
第13項 第1の流体のための入口チャネルから混合チャンバへの流れの方向が、混合チャンバ内の流れの一般的な方向に実質的に平行である、第1～12項のいずれか1つに記載のデバイス。
第14項 第1の流体のための入口チャネルが、少なくとも3mm、例えば少なくとも5mm、とりわけ少なくとも7mmで実質的に直線である、第1～13項のいずれか1つに記載のデバイス。
第15項 第2の流体のための入口チャネルが、実質的に同一の形状である、第1～14項のいずれか1つに記載のデバイス。
第16項 第2の流体のための入口チャネルが、断面において実質的に矩形である、第1～15項のいずれか1つに記載のデバイス。
第17項 第2の流体のための入口チャネルが、0.025～0.3mmの幅、例えば0.05～0.25mmの幅である、第16項に記載のデバイス。
第18項 第2の流体のための入口チャネルが、0.08～0.12mmの幅、例えば0.1mmの幅である、第17項に記載のデバイス。
第19項 第2の流体のための入口チャネルが、少なくとも0.05mmの深さ、例えば少なくとも0.1mmの深さ、とりわけ少なくとも0.2mmの深さ、特に少なくとも0.3mmの深さである、第15～18項のいずれか1つに記載のデバイス。
第20項 第2の流体のための入口チャネルが、少なくとも0.4mmの深さである、第19項に記載のデバイス。
第21項 第2の流体のための入口チャネルが、10mm以下の深さ、例えば5mm以下の深さ、とりわけ2mm以下の深さ、特に1mm以下の深さである、第15～20項のいずれか1つに記載のデバイス。
第22項 第2の流体のための入口チャネルが、0.8mm以下の深さである、第21項に記載のデバイス。
第23項 第2の流体のための入口チャネルが、0.1～2mmの深さ、例えば0.3～0.8mmの深さ、とりわけ0.4～0.6mmの深さ、特に約0.5mmの深さ、例えば0.5mmの深さである、第15～22項のいずれか1つに記載のデバイス。
第24項 第2の流体のための入口チャネルが、0.005～3mm2、例えば0.01～0.5mm2の断面積を有する、第1～23項のいずれか1つに記載のデバイス。
第25項 第2の流体のための入口チャネルが、0.02～0.1mm2、特に約0.05mm2、例えば0.05mm2の断面積を有する、第24項に記載のデバイス。
第26項 第2の流体のための入口チャネルが、混合チャンバの深さと実質的に同じである、第1～25項のいずれか1つに記載のデバイス。
第27項 第2の流体のための入口チャネルから混合チャンバへの流れの方向が、混合チャンバ内の流れの一般的な方向に実質的に平行である、第1～26項のいずれか1つに記載のデバイス。
第28項 第2の流体のための入口チャネルが、少なくとも3mm、例えば少なくとも5mm、とりわけ少なくとも7mm、特に少なくとも10mmで実質的に直線的である、第1～27項のいずれか1つに記載のデバイス。
第29項 第2の流体のための入口チャネルから混合チャンバへの流れの方向が、混合チャンバ内の第1の流体のための入口チャネルからの流れの方向と実質的に平行である、第1～28項のいずれか1つに記載のデバイス。
第30項 混合チャンバの長さが、少なくとも15mm、例えば少なくとも17.5mm、とりわけ少なくとも20mm、特に少なくとも22mmである、第1～29項のいずれか1つに記載のデバイス。
第31項 混合チャンバの長さが100mm以下、例えば75mm以下、とりわけ50mm以下、特に40mm以下である、第1～30項のいずれか1つに記載のデバイス。
第32項 混合チャンバの長さが15～100mm、例えば17.5～75mm、とりわけ20mm～50mm、特に約25mm、例えば25mmである、第1～31項のいずれか1つに記載のデバイス。
第33項 混合チャンバが、断面において実質的に矩形である、第1～32項のいずれか1つに記載のデバイス。
第34項 大きな寸法が、垂直寸法の1.5～4倍であり得る、第33項に記載のデバイス。
第35項 混合チャンバの最大幅が0.8～2.2mm、例えば1～2mm、とりわけ1.2～2mmである、第1～34項のいずれか1つに記載のデバイス。
第36項 混合チャンバの最大幅が1.4～1.8mm、特に約1.6mm、例えば1.6mmである、第35項に記載のデバイス。
第37項 混合チャンバの最大幅が0.8～1.2mm、特に約1mm、例えば1mmである、第35項に記載のデバイス。
第38項 混合チャンバの最小幅が0.8～2.2mm、例えば1～2mm、とりわけ1.2～2mmである、第1～37項のいずれか1つに記載のデバイス。
第39項 混合チャンバの最小幅が1.4～1.8mm、特に約1.6mm、例えば1.6mmである、第38項に記載のデバイス。
第40項 混合チャンバの最小幅が0.8～1.2mm、特に約1mm、例えば1mmである、第38項に記載のデバイス。
第41項 混合チャンバの最大幅及び混合チャンバの最小幅が実質的に同じであり、例えば同じである、第1～38項のいずれか1つに記載のデバイス。
第42項 混合チャンバの最小幅が0.4～1.2mm、例えば0.6～0.9mm、とりわけ約0.75mm、例えば0.75mmである、第1～37項のいずれか1つに記載のデバイス。
第43項 混合チャンバが、少なくとも0.05mmの深さ、例えば少なくとも0.1mmの深さ、とりわけ少なくとも0.2mmの深さ、特に少なくとも0.3mmの深さである、第1～42項のいずれか1つに記載のデバイス。
第44項 混合チャンバが少なくとも0.4mmの深さである、第43項に記載のデバイス。
第45項 混合チャンバが10mm以下の深さ、例えば5mm以下の深さ、とりわけ2mm以下の深さ、特に1mm以下の深さである、第1～44項のいずれか1つに記載のデバイス。
第46項 混合チャンバは0.8mm以下の深さである、第45項に記載のデバイス。
第47項 混合チャンバが0.1～2mmの深さ、例えば0.3～0.8mmの深さ、とりわけ0.4～0.6mmの深さ、特に約0.5mmの深さ、例えば0.5mmの深さである、第1～46項のいずれか1つに記載のデバイス。
第48項 混合チャンバが、その長さに沿った実質的に一貫した深さであり、例えばその長さに沿った一貫した深さである、第1～47項のいずれか1つに記載のデバイス。
第49項 混合チャンバが、その長さに沿って深さを減少させる、例えば深さを最大50%減少させる、第1～47項のいずれか1つに記載のデバイス。
第50項 混合チャンバの幅が混合チャンバの深さの1～5倍である、第1～49項のいずれか1つに記載のデバイス。
第51項 混合チャンバが、0.1～2.2mm2、例えば0.2～1.8mm2、とりわけ0.4～1.6mm2、特に0.6～1.0mm2、例えば約0.8mm2、例えば0.8mm2の断面積を有する、第1～50項のいずれか1つに記載のデバイス。
第52項 混合チャンバが、0.2～0.8mm2、例えば0.3～0.7mm2、とりわけ0.4～0.6mm2、例えば約0.5mm2、例えば0.5mm2の断面積を有する、第1～50項のいずれか1つに記載のデバイス。
第53項 混合チャンバが0.4～1.0mm2の断面積を有する、第1～50項のいずれか1つに記載のデバイス。
第54項 混合チャンバが0.25～0.6mm2の断面積を有する、第1～50項のいずれか1つに記載のデバイス。
第55項 バッフルが混合チャンバの一方の側面に存在する、第1～54項のいずれか1つに記載のデバイス。
第56項 バッフルが混合チャンバの両方の側面に存在する、第1～55項のいずれか1つに記載のデバイス。
第57項 混合チャンバの少なくとも一方の側面のバッフルが、実質的に均一に間隔を置いて配置される、第1～56項のいずれか1つに記載のデバイス。
第58項 混合チャンバの両方の側面のバッフルが、実質的に均等に間隔を置いて配置される、第57項に記載のデバイス。
第59項 混合チャンバの少なくとも一方の側面のバッフルが、実質的に不均一に間隔を置いて配置される、第1～58項のいずれか1つに記載のデバイス。
第60項 混合チャンバの両方の側面のバッフルが、実質的に不均一に間隔を置いて配置される、第59項に記載のデバイス。
第61項 混合チャンバの両方の側面に、互いに実質的に反対側に配置されたバッフルを備える、第1～60項のいずれか1つに記載のデバイス。
第62項 混合チャンバの両方の側面に、互いに、例えば0.5～5mmだけ、例えば1～2.5mmだけ、特に約1.75mmだけ、例えば1.732mmだけオフセットして配置されるバッフルを備える、第1～61項のいずれか1つに記載のデバイス。
第63項 混合チャンバの両方の側面に、約1.26mmだけ、例えば1.258mmだけ互いにオフセットして配置されるバッフルを備える、第1～62項のいずれか1つに記載のデバイス。
第64項 混合チャンバの両方の側面に、約1mm、例えば1mmだけ互いにオフセットして配置されるバッフルを備える、第1～62項のいずれか1つに記載のデバイス。
第65項 混合チャンバの両方の側面に、約0.728mmだけ、例えば0.728mmだけ互いにオフセットして配置されるバッフルを備える、第1～62項のいずれか1つに記載のデバイス。
第66項 前後のオフセットが実質的に同じである、第63～65項のいずれか1つに記載のデバイス。
第67項 前後のオフセットが実質的に異なる、第63～65項のいずれか1つに記載のデバイス。
第68項 少なくとも4個のバッフル、例えば少なくとも6個のバッフル、とりわけ少なくとも8個のバッフル、特に少なくとも10個のバッフルを備える、第1項から67項のいずれか1つに記載のデバイス。
第69項 100個以下のバッフル、例えば60個以下のバッフル、とりわけ40個以下のバッフル、特に25個以下のバッフルを備える、第1～68項のいずれか1つに記載のデバイス。
第70項 4～100個のバッフル、例えば6～60個のバッフル、とりわけ8～40個のバッフル、特に10～25個のバッフルを備える、第1～69項のいずれか1つに記載のデバイス。
第71項 12個のバッフルを備える、第70項に記載のデバイス。
第72項 19個のバッフルを備える、第70項に記載のデバイス。
第73項 波形、ベル形又は台形のバッフルを備える、第1～72項のいずれか1つに記載のデバイス。
第74項 全てのバッフルが実質的に同じ形状を有する、第1～73項のいずれか1つに記載のデバイス。
第75項 一定の幅のバッフルを備える、第1～74項のいずれか1つに記載のデバイス。
第76項 可変幅のバッフルを備える、第1～74項のいずれか1つに記載のデバイス。
第77項 0.1～1mmの幅、例えば0.2～0.8mmの幅、とりわけ0.4～0.7mmの幅、特に約0.5mmの幅、例えば0.5mmの幅のバッフルを備える、第1～76項のいずれか1つに記載のデバイス。
第78項 0.2～0.5mmの幅、例えば0.3～0.4mmの幅、特に約0.35mmの幅、例えば0.35mmの幅であるバッフルを備える、第1～76項のいずれか1つに記載のデバイス。
第79項 混合チャンバの幅が、バッフルで少なくとも10%、例えば少なくとも20%、とりわけ少なくとも25%、特に少なくとも30%減少する、第1～78項のいずれか1つに記載のデバイス。
第80項 混合チャンバの幅が、バッフルで80%以下、例えば60%以下、とりわけ50%以下、特に40%以下で減少される、第1～79項のいずれか1つに記載のデバイス。
第81項 混合チャンバの幅が、バッフルで10～80%、例えば20～60%、とりわけ35～50%、特に30～40%減少する、第1～80項のいずれか1つに記載のデバイス。
第82項 混合チャンバの幅が、バッフルで30～50%減少する、第1～78項のいずれか1つに記載のデバイス。
第83項 混合チャンバの幅が、バッフルで0.5～2mm、例えば0.7～1.5mm、とりわけ0.9～1.3mm、特に約1.1mm、例えば1.1mmである、第1～82項のいずれか1つに記載のデバイス。
第84項 混合チャンバの幅が、バッフルで0.4～0.9mm、例えば0.5～0.8mm、特に約0.65mm、例えば0.65mmである、第1～82項のいずれか1つに記載のデバイス。
第85項 混合チャンバが、1～10mm、例えば2～5mm、特に約3.5mm、例えば3.464mm離れたバッフルを一方の側面に備える、第1～84項のいずれか1つに記載のデバイス。
第86項 混合チャンバの一方の側面の各バッフルが、1～10mm、例えば2～5mm、特に約3.5mm、例えば3.464mm離れている、第85項に記載のデバイス。
第87項 混合チャンバが、1～10mm、例えば2～5mm、特に約3.5mm、例えば3.464mm離れている、2つの側面にバッフルを備える、第1～84項のいずれか1つに記載のデバイス。
第88項 混合チャンバの各側面の各バッフルが、1～10mm、例えば2～5mm、特に約3.5mm、例えば3.464mm離れている、第87項に記載のデバイス。
第89項 混合チャンバが、約2.5mm、例えば2.516mm離れた、2つの側面にバッフルを備える、第1～84項のいずれか1つに記載のデバイス。
第90項 混合チャンバが、2つの側面にバッフルを備え、混合チャンバの各側面の各バッフルが約2.5mm、例えば2.516mm離れている、第89項に記載のデバイス。
第91項 混合チャンバが、約2mm、例えば2mm離れた、2つの側面にバッフルを備える、第1～84項のいずれか1つに記載のデバイス。
第92項 混合チャンバが、2つの側面にバッフルを備え、混合チャンバの各側面の各バッフルが、約2mm、例えば2mm離れている、第91項に記載のデバイス。
第93項 第1のバッフルが、第2の流体のための入口チャネルの端部から0.2～20mm、例えば0.4～10mm、とりわけ0.6～8mm、特に約0.8mm、約4.4mm又は約5.3mm、例えば0.8、4.4又は5.3mmに位置する、第1～92項のいずれか1つに記載のデバイス。
第94項 0.1～5mm、例えば0.2～2mm、とりわけ0.2～1mm、特に0.25～0.7mm、例えば約0.33mm又は約0.55mm、例えば0.33mm又は0.55mmの最大長を有するバッフルを備える、第1～93項のいずれか1つに記載のデバイス。
第95項 3mm以下、例えば1mm以下、とりわけ0.5mm以下、特に0.3mm以下、例えば約0.15mm又は約0.25mm、例えば0.15mm又は0.25mmの最小長を有するバッフルを備える、第1～94項のいずれか1つに記載のデバイス。
第96項 バッフルでの混合チャンバの最大幅が、0.4～2mm、例えば0.5～1.6mm、とりわけ0.6mm～1.4mm、特に約0.65mm又は約1.1mm、例えば0.65mm又は1.1mmである、第1～95項のいずれか1つに記載のデバイス。
第97項 バッフルでの混合チャンバの最小幅が、0.4～2mm、例えば0.5～1.6mm、とりわけ0.6～1.4mm、特に約0.65mm又は約1.1mm、例えば0.65mm又は1.1mmである、第1～96項のいずれか1つに記載のデバイス。
第98項 混合チャンバの最大幅及びバッフルにおける混合チャンバの最小幅が同じである、第1～97項のいずれか1つに記載のデバイス。
第99項 混合チャンバの側面は実質的に平行である、第1～98項のいずれか1つに記載のデバイス。
第100項 外側入口の外壁が、混合チャンバの側面と実質的に連続している、第1～99項のいずれか1つに記載のデバイス。
第101項 混合材料を回収するための単一の出口を有する、第1～100項のいずれか1つに記載のデバイス。
第102項 混合材料を回収するための複数の出口、例えば2つの出口を有する、第1～100項のいずれか1つに記載のデバイス。
第103項 長さが100mm未満、例えば80mm未満、とりわけ60mm未満、及び特に45mm未満である、第1～102項のいずれか1つに記載のデバイス。
第104項 幅が20mm未満、例えば10mm未満、とりわけ7mm未満、及び特に5mm未満である、第1～103項のいずれか1つに記載のデバイス。
第105項
-長さが約25mmである混合チャンバであり、実質的に矩形の断面、約1.6mmの間隔を置いた実質的に平行な側面、並びに約0.5mmの深さを提供するように間隔を置いた実質的に平行な上部壁及び下部壁を有する混合チャンバ；
-第1の流体のための混合チャンバへの1つの入口チャネルであり、実質的に矩形の断面、約0.27mmの幅、及び約0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端に実質的に中央に位置される入口チャネル；
-第2の流体のための混合チャンバへの2つの入口チャネルであり、実質的に同一であり、実質的に矩形の断面、約0.1mmの幅及び約0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端の外壁の各々に実質的に位置される入口チャネル；
-混合チャンバの近位端に実質的に対称に配置される上記入口チャネルであり、入口チャネルから混合チャンバへの流れの方向は、混合チャンバ内の流れの一般的な方向に実質的に平行である入口チャネル；
-混合チャンバの遠位端における混合材料のための1つの出口
を備える、先行する項のいずれかに記載のマイクロ流体混合デバイスにおいて、混合チャンバは約19個のバッフルを備え、第1のバッフルは混合チャンバの近位端から約0.8mmに位置し、バッフルは約0.728mmの第1及び第2の側面の間のオフセットを伴って約2.6mmだけ離され、バッフルは最大長約0.55mm、最小長約0.25mm及び約0.5mmの幅を有する形状で実質的に台形であることを特徴とするマイクロ流体混合デバイス。
第106項
-長さが22.5～27.5mmの混合チャンバであり、実質的に矩形の断面、1.44～1.76mmの間隔を置いた実質的に平行な側面、並びに0.45～0.55mmの深さを提供するように間隔を置いた実質的に平行な上部壁及び下部壁を有する混合チャンバ；
-第1の流体のための混合チャンバへの1つの入口チャネルであり、実質的に矩形の断面、0.243～0.297mmの幅、及び0.45～0.55mmの深さを有し、混合チャンバの近位端に実質的に中央に位置される入口チャネル；
-第2の流体のための混合チャンバへの2つの入口チャネルであり、実質的に同一であり、実質的に矩形の断面、0.09～0.11mmの幅及び0.45～0.55mmの深さを有し、混合チャンバの近位端の外壁の各々に実質的に位置される入口チャネル；
-混合チャンバの近位端に実質的に対称に配置される上記入口チャネルであり、入口チャネルから混合チャンバへの流れの方向は、混合チャンバ内の流れの一般的な方向に実質的に平行である入口チャネル；
-混合チャンバの遠位端における混合材料のための1つの出口
を備える、先行する項のいずれかに記載のマイクロ流体混合デバイスにおいて、混合チャンバは17～21個のバッフルを備え、第1のバッフルは混合チャンバの近位端から0.72～0.88mmに位置し、バッフルは0.656～0.8mmの第1及び第2の側面の間のオフセットを伴って2.26～2.77mmだけ離され、バッフルは最大長0.495～0.605mm、最小長0.225～0.275mm及び0.45～0.55mmの幅を有する形状で実質的に台形であることを特徴とするマイクロ流体混合デバイス。
第107項
-長さが25mmである混合チャンバであり、矩形の断面、1.6mmの間隔を置いた平行な側面、並びに0.5mmの深さを提供するように間隔を置いた平行な上部壁及び下部壁を有する混合チャンバ；
-第1の流体のための混合チャンバへの1つの入口チャネルであり、矩形の断面、0.27mmの幅、及び0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端に中央に位置される入口チャネル；
-第2の流体のための混合チャンバへの2つの入口チャネルであり、同一であり、矩形の断面、0.1mmの幅及び0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端の外壁の各々に位置される入口チャネル；
-混合チャンバの近位端に対称に配置される上記入口チャネルであり、入口チャネルから混合チャンバへの流れの方向は、混合チャンバ内の流れの一般的な方向に平行である入口チャネル；
-混合チャンバの遠位端における混合材料のための1つの出口
を備えるマイクロ流体混合デバイスにおいて、混合チャンバは19個のバッフルを備え、第1のバッフルは混合チャンバの近位端から0.8mmに位置し、バッフルは0.728mmの第1及び第2の側面の間のオフセットを伴って約2.516mmだけ離され、バッフルは最大長0.55mm、最小長0.25mm及び0.5mmの幅を有する形状で台形であることを特徴とする、第105項又は第106項のいずれかに記載のマイクロ流体混合デバイス。
第108項
-長さが約25mmである混合チャンバであり、実質的に矩形の断面、約1.6mmの間隔を置いた実質的に平行な側面、並びに約0.5mmの深さを提供するように間隔を置いた実質的に平行な上部壁及び下部壁を有する混合チャンバ；
-第1の流体のための混合チャンバへの1つの入口チャネルであり、実質的に矩形の断面、約0.27mmの幅、及び約0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端に実質的に中央に位置される入口チャネル；
-第2の流体のための混合チャンバへの2つの入口チャネルであり、実質的に同一であり、実質的に矩形の断面、約0.1mmの幅及び約0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端の外壁の各々に実質的に位置される入口チャネル；
-混合チャンバの近位端に実質的に対称に配置される上記入口チャネルであり、入口チャネルから混合チャンバへの流れの方向は、混合チャンバ内の流れの一般的な方向に実質的に平行である入口チャネル；
-混合チャンバの遠位端における混合材料のための1つの出口
を備えるマイクロ流体混合デバイスにおいて、混合チャンバは約19個のバッフルを備え、第1のバッフルは混合チャンバの近位端から約0.8mmに位置し、バッフルは約1.3mmの第1及び第2の側面の間のオフセットを伴って約2.6mmだけ離され、バッフルは最大長約0.55mm、最小長約0.25mm及び約0.5mmの幅を有する形状で実質的に台形であることを特徴とする、先行する項のいずれかに記載のマイクロ流体混合デバイス。
第109項
-長さが22.5～27.5mmの混合チャンバであり、実質的に矩形の断面、1.44～1.76mmの間隔を置いた実質的に平行な側面、並びに0.45～0.55mmの深さを提供するように間隔を置いた実質的に平行な上部壁及び下部壁を有する混合チャンバ；
-第1の流体のための混合チャンバへの1つの入口チャネルであり、実質的に矩形の断面、0.243～0.297mmの幅、及び0.45～0.55mmの深さを有し、混合チャンバの近位端に実質的に中央に位置される入口チャネル；
-第2の流体のための混合チャンバへの2つの入口チャネルであり、実質的に同一であり、実質的に矩形の断面、0.09～0.11mmの幅及び0.45～0.55mmの深さを有し、混合チャンバの近位端の外壁の各々に実質的に位置される入口チャネル；
-混合チャンバの近位端に実質的に対称に配置される上記入口チャネルであり、入口チャネルから混合チャンバへの流れの方向は、混合チャンバ内の流れの一般的な方向に実質的に平行である入口チャネル；
-混合チャンバの遠位端における混合材料のための1つの出口
を備えるマイクロ流体混合デバイスにおいて、混合チャンバは17～21個のバッフルを備え、第1のバッフルは混合チャンバの近位端から0.72～0.88mmに位置し、バッフルは1.13～1.38mmの第1及び第2の側面の間のオフセットを伴って約2.26～2.77mmだけ離され、バッフルは最大長0.495～0.605mm、最小長0.225～0.275mm及び0.45～0.55mmの幅を有する形状で実質的に台形であることを特徴とする、先行する項のいずれかに記載のマイクロ流体混合デバイス。
第110項
-長さが25mmである混合チャンバであり、矩形の断面、1.6mmの間隔を置いた平行な側面、並びに0.5mmの深さを提供するように間隔を置いた平行な上部壁及び下部壁を有する混合チャンバ；
-第1の流体のための混合チャンバへの1つの入口チャネルであり、矩形の断面、0.27mmの幅、及び0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端に中央に位置される入口チャネル；
-第2の流体のための混合チャンバへの2つの入口チャネルであり、同一であり、矩形の断面、0.1mmの幅及び0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端の外壁の各々に位置される入口チャネル；
-混合チャンバの近位端に対称に配置される上記入口チャネルであり、入口チャネルから混合チャンバへの流れの方向は、混合チャンバ内の流れの一般的な方向に平行である入口チャネル；
-混合チャンバの遠位端における混合材料のための1つの出口
を備えるマイクロ流体混合デバイスにおいて、混合チャンバは19個のバッフルを備え、第1のバッフルは混合チャンバの近位端から0.8mmに位置し、バッフルは1.258mmの第1及び第2の側面の間のオフセットを伴って2.516mmだけ離され、バッフルは最大長0.55mm、最小長0.25mm及び0.5mmの幅を有する形状で台形であることを特徴とする、第108項又は第109項のいずれかに記載のマイクロ流体混合デバイス。
第111項
-長さが約25mmである混合チャンバであり、実質的に矩形の断面、約1.6mmの間隔を置いた実質的に平行な側面、並びに約0.5mmの深さを提供するように間隔を置いた実質的に平行な上部壁及び下部壁を有する混合チャンバ；
-第1の流体のための混合チャンバへの1つの入口チャネルであり、実質的に矩形の断面、約0.27mmの幅、及び約0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端に実質的に中央に位置される入口チャネル；
-第2の流体のための混合チャンバへの2つの入口チャネルであり、実質的に同一であり、実質的に矩形の断面、約0.1mmの幅及び約0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端の外壁の各々に実質的に位置される入口チャネル；
-混合チャンバの近位端に実質的に対称に配置される上記入口チャネルであり、入口チャネルから混合チャンバへの流れの方向は、混合チャンバ内の流れの一般的な方向に実質的に平行である入口チャネル；
-混合チャンバの遠位端における混合材料のための1つの出口
を備えるマイクロ流体混合デバイスにおいて、混合チャンバは約12個のバッフルを備え、第1のバッフルは混合チャンバの近位端から約4.4mmに位置し、バッフルは約1.7mmの第1及び第2の側面の間のオフセットを伴って約3.5mmだけ離され、バッフルは最大長約0.55mm、最小長約0.25mm及び約0.5mmの幅を有する形状で実質的に台形であることを特徴とする、先行する項のいずれかに記載のマイクロ流体混合デバイス。
第112項
-長さが22.5～27.5mmの混合チャンバであり、実質的に矩形の断面、1.44～1.76mmの間隔を置いた実質的に平行な側面、並びに0.45～0.55mmの深さを提供するように間隔を置いた実質的に平行な上部壁及び下部壁を有する混合チャンバ；
-第1の流体のための混合チャンバへの1つの入口チャネルであり、実質的に矩形の断面、0.243～0.297mmの幅、及び0.45～0.55mmの深さを有し、混合チャンバの近位端に実質的に中央に位置される入口チャネル；
-第2の流体のための混合チャンバへの2つの入口チャネルであり、実質的に同一であり、実質的に矩形の断面、0.09～0.11mmの幅及び0.45～0.55mmの深さを有し、混合チャンバの近位端の外壁の各々に実質的に位置される入口チャネル；
-混合チャンバの近位端に実質的に対称に配置される上記入口チャネルであり、入口チャネルから混合チャンバへの流れの方向は、混合チャンバ内の流れの一般的な方向に実質的に平行である入口チャネル；
-混合チャンバの遠位端における混合材料のための1つの出口
を備えるマイクロ流体混合デバイスにおいて、混合チャンバは10～14個のバッフルを備え、第1のバッフルは混合チャンバの近位端から3.96～4.84mmに位置し、バッフルは1.56～1.91mmの第1及び第2の側面の間のオフセットを伴って3.12～3.81mmだけ離され、バッフルは最大長0.495～0.605mm、最小長0.225～0.275mm及び0.45～0.55mmの幅を有する形状で実質的に台形であることを特徴とする、先行する項のいずれかに記載のマイクロ流体混合デバイス。
第113項
-長さが25mmである混合チャンバであり、矩形の断面、1.6mmの間隔を置いた平行な側面、並びに0.5mmの深さを提供するように間隔を置いた平行な上部壁及び下部壁を有する混合チャンバ；
-第1の流体のための混合チャンバへの1つの入口チャネルであり、矩形の断面、0.27mmの幅、及び0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端に中央に位置される入口チャネル；
-第2の流体のための混合チャンバへの2つの入口チャネルであり、同一であり、矩形の断面、0.1mmの幅及び0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端の外壁の各々に位置される入口チャネル；
-混合チャンバの近位端に対称に配置される上記入口チャネルであり、入口チャネルから混合チャンバへの流れの方向は、混合チャンバ内の流れの一般的な方向に平行である入口チャネル；
-混合チャンバの遠位端における混合材料のための1つの出口
を備えるマイクロ流体混合デバイスにおいて、混合チャンバは12個のバッフルを備え、第1のバッフルは混合チャンバの近位端から4.4mmに位置し、バッフルは1.732mmの第1及び第2の側面の間のオフセットを伴って3.464mmだけ離され、バッフルは最大長0.55mm、最小長0.25mm及び0.5mmの幅を有する形状で台形であることを特徴とする、第111項又は第112項のいずれかに記載のマイクロ流体混合デバイス。
第114項
-長さが約25mmである混合チャンバであり、実質的に矩形の断面、約1mmの間隔を置いた実質的に平行な側面、並びに約0.5mmの深さを提供するように間隔を置いた実質的に平行な上部壁及び下部壁を有する混合チャンバ；
-第1の流体のための混合チャンバへの1つの入口チャネルであり、実質的に矩形の断面、約0.27mmの幅、及び約0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端に実質的に中央に位置される入口チャネル；
-第2の流体のための混合チャンバへの2つの入口チャネルであり、実質的に同一であり、実質的に矩形の断面、約0.1mmの幅及び約0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端の外壁の各々に実質的に位置される入口チャネル；
-混合チャンバの近位端に実質的に対称に配置される上記入口チャネルであり、入口チャネルから混合チャンバへの流れの方向は、混合チャンバ内の流れの一般的な方向に実質的に平行である入口チャネル；
-混合チャンバの遠位端における混合材料のための1つの出口
を備えるマイクロ流体混合デバイスにおいて、混合チャンバは約19個のバッフルを備え、第1のバッフルは混合チャンバの近位端から約5.3mmに位置し、バッフルは約1mmの第1及び第2の側面の間のオフセットを伴って約2mmだけ離され、バッフルは最大長約0.33mm、最小長約0.15mm及び約0.35mmの幅を有する形状で実質的に台形であることを特徴とする、先行する項のいずれかに記載のマイクロ流体混合デバイス。
第115項
-長さが22.5～27.5mmの混合チャンバであり、実質的に矩形の断面、0.9～1.1mmの間隔を置いた実質的に平行な側面、並びに0.45～0.55mmの深さを提供するように間隔を置いた実質的に平行な上部壁及び下部壁を有する混合チャンバ；
-第1の流体のための混合チャンバへの1つの入口チャネルであり、実質的に矩形の断面、0.243～0.297mmの幅、及び0.45～0.55mmの深さを有し、混合チャンバの近位端に実質的に中央に位置される入口チャネル；
-第2の流体のための混合チャンバへの2つの入口チャネルであり、実質的に同一であり、実質的に矩形の断面、0.09～0.11mmの幅及び0.45～0.55mmの深さを有し、混合チャンバの近位端の外壁の各々に実質的に位置される入口チャネル；
-混合チャンバの近位端に実質的に対称に配置される上記入口チャネルであり、入口チャネルから混合チャンバへの流れの方向は、混合チャンバ内の流れの一般的な方向に実質的に平行である入口チャネル；
-混合チャンバの遠位端における混合材料のための1つの出口
を備えるマイクロ流体混合デバイスにおいて、混合チャンバは17～21個のバッフルを備え、第1のバッフルは混合チャンバの近位端から4.77～5.83mmに位置し、バッフルは0.9～1.1mmの第1及び第2の側面の間のオフセットを伴って1.8～2.2mmだけ離され、バッフルは最大長0.297～0.363mm、最小長0.135～0.165mm及び0.315～0.385mmの幅を有する形状で実質的に台形であることを特徴とする、先行する項のいずれかに記載のマイクロ流体混合デバイス。
第116項
-長さが25mmである混合チャンバであり、矩形の断面、1mmの間隔を置いた平行な側面、並びに0.5mmの深さを提供するように間隔を置いた平行な上部壁及び下部壁を有する混合チャンバ；
-第1の流体のための混合チャンバへの1つの入口チャネルであり、実質的に矩形の断面、0.27mmの幅、及び0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端に中央に位置される入口チャネル；
-第2の流体のための混合チャンバへの2つの入口チャネルであり、同一であり、矩形の断面、0.1mmの幅及び0.5mmの深さを有し、混合チャンバの近位端の外壁の各々に位置される入口チャネル；
-混合チャンバの近位端に対称に配置される上記入口チャネルであり、入口チャネルから混合チャンバへの流れの方向は、混合チャンバ内の流れの一般的な方向に平行である入口チャネル；
-混合チャンバの遠位端における混合材料のための1つの出口
を備えるマイクロ流体混合デバイスにおいて、混合チャンバは19個のバッフルを備え、第1のバッフルは混合チャンバの近位端から5.3mmに位置し、バッフルは1mmの第1及び第2の側面の間のオフセットを伴って2mmだけ離され、バッフルは最大長0.33mm、最小長0.15mm及び0.35mmの幅を有する形状で台形であることを特徴とする、第114項又は第115項のいずれかに記載のマイクロ流体混合デバイス。
第117項 第1～116項のいずれか1つに記載の複数のマイクロ流体デバイス、例えば2～128個、とりわけ4～32個、特に6～24個、例えば約8個又は約16個、例えば8個又は16個を備えるチップ。
第118項 第1～116項のいずれか1つに記載の6～18個のマイクロ流体デバイスを備える、第117項に記載のチップ。
第119項 第1及び第2の流体のための単一接続点と、混合材料を回収するための単一接続点とを有する、第117項又は第118項のいずれかに記載のチップ。
第120項 第1項～第116項のいずれか1つに記載の複数のマイクロ流体混合デバイス又は第117項～第119項のいずれか1つに記載のチップ、第1の流体の供給のための第1のポンプ、及び第2の流体の供給のための第2のポンプを備える装置であって、マイクロ流体混合デバイスが第1及び第2のポンプを使用して並列作動（運転）するように構成される、装置。
第121項 第1項～第116項のいずれか1つに記載の4～20個のマイクロ流体混合デバイスを備える、第120項に記載の装置。
第122項 第1項～第116項のいずれか1つに記載のマイクロ流体デバイス、第117項～第119項のいずれか1つに記載のチップ、又は第120項若しくは第121項のいずれかに記載の装置を用いてリポソームアジュバントを製造する方法であって、以下の工程:
(a)デバイス内で、溶媒と脂質を含む第1の溶液、及び水を含む第2の溶液を混合する工程；並びに
(b)溶媒を除去する工程
を含む方法。
第123項 以下の工程:
(a)デバイス内で、溶媒と脂質を含む第1の溶液、及び水を含む第2の溶液を混合する工程；
(b)サポニンを添加する工程:並びに
(c)溶媒を除去する工程
を含む、第122項に記載のリポソームアジュバントを製造する方法。
第124項 以下の工程:
(a)デバイス内で、溶媒と脂質を含む第1の溶液、及び水を含む第2の溶液を混合する工程；
(b)溶媒を除去する工程；並びに
(c)サポニンを添加する工程
を含む、第122項に記載のリポソームアジュバントを製造する方法。
第125項 以下の工程:
(a)デバイス内で、溶媒と脂質を含む第1の溶液、及び水を含む第2の溶液を混合する工程；
(b)TLR4アゴニストを添加する工程；並びに
(c)溶媒を除去する工程
を含む、第122項に記載のリポソームアジュバントを製造する方法。
第126項 以下の工程:
(a)デバイス内で、溶媒と脂質を含む第1の溶液、及び水を含む第2の溶液を混合する工程；
(b)溶媒を除去する工程；並びに
(c)TLR4アゴニストを添加する工程
を含む、第122項に記載のリポソームアジュバントを製造する方法。
第127項 第1項～第116項のいずれか1つに記載のマイクロ流体デバイス、第117項若しくは第119項のいずれかに記載のチップ、又は第120項若しくは第121項のいずれかに記載の装置を用いたリポソームアジュバントの調製における使用のリポソーム濃縮物を製造する方法であって、デバイス内で、溶媒と脂質を含む第1の溶液、及び水を含む第2の溶液を混合する工程を含む方法。
第128項 以下の工程:
(a)デバイス内で、溶媒と脂質を含む第1の溶液、及び水を含む第2の溶液を混合する工程；並びに
(b)TLR4アゴニストを添加する工程
を含む、第127項に記載のマイクロ流体デバイスを用いたリポソームアジュバントの調製における使用のリポソーム濃縮物を製造する方法。
第129項 以下の工程:
(a)デバイス内で、溶媒と脂質を含む第1の溶液、及び水を含む第2の溶液を混合する工程；並びに
(b)サポニンを添加する工程
を含む、第127項に記載のマイクロ流体デバイスを用いたリポソームアジュバントの調製における使用のリポソーム濃縮物を製造する方法。
第130項 以下の工程:
(a)デバイス内で、溶媒と脂質を含む第1の溶液、及び水を含む第2の溶液を混合する工程；
(b)サポニンを添加する工程；並びに
(c)TLR4アゴニストを添加する工程
を含み、工程(b)及び(c)は、いずれかの順序であり得るか、又は単一の工程で行われ得る、第127～129項のいずれか1つに記載のマイクロ流体デバイスを用いてリポソームアジュバントを調製する際に使用するリポソーム濃縮物を製造する方法。
第131項 第1の溶液がホスファチジルコリン脂質を含む、第122～130項のいずれか1つに記載の方法。
第132項 第1の溶液がDOPCを含む、第131項に記載の方法。
第133項 第1の溶液がステロールを含む、第122～132項のいずれか1つに記載の方法。
第134項 第1の溶液がTLR4アゴニストを含む、第122～124項、又は第127項、第129項又は第131～133項のいずれか1つに記載の方法。
第135項 溶媒除去前にTLR4アゴニストを添加する、第122～124項又は第131～133項のいずれか1つに記載の方法。
第136項 溶媒除去後にTLR4アゴニストを添加する、第122～124項又は第131～133項のいずれか1つに記載の方法。
第137項 第2の溶液がサポニンを含む、第122項、第125～128項、又は第131～133項のいずれか1つに記載の方法。
第138項 混合チャンバへの総流速が、混合チャンバ断面の12～40ml/分/mm2である、第122～137項のいずれか1つに記載の方法。
第139項 混合チャンバへの総流速が、混合チャンバ断面の17.5～25ml/分/mm2、特に19～21ml/分/mm2、例えば20ml/分/mm2である、第138項に記載の方法。
第140項 混合チャンバへの総流速が、混合チャンバ断面の28～36ml/分/mm2、特に30～34ml/分/mm2、例えば32ml/分/mm2である、第138項に記載の方法。
第141項 第1及び第2の溶液の流速の比が1:2～1:6の範囲内である、第122～140項のいずれか1つに記載の方法。
第142項 第1及び第2の溶液の流速の比が1:3～1:5の範囲内である、第141項に記載の方法。
第143項 第1及び第2の溶液の流速の比が1:4である、第142項に記載の方法。
第144項 第1及び第2の溶液の流速の比が1:2.5～1:3.5である、第141項に記載の方法。
第145項 第1及び第2の溶液の流速の比が1:3である、第144項に記載の方法。
第146項 混合チャンバへの第1の溶液の流速が、混合チャンバ断面の2～10ml/分/mm2である、第122～145項のいずれか1つに記載の方法。
第147項 混合チャンバへの第1の溶液の流速が、混合チャンバ断面の2～6ml/分/mm2、とりわけ3.5～5.5ml/分/mm2、特に3～5(例えば、4)ml/分/mm2である、第146項に記載の方法。
第148項 混合チャンバへの第1の溶液の流速が4.35ml/分/mm2である、第147項に記載の方法。
第149項 混合チャンバへの第1の溶液の流速が、混合チャンバ断面の4.4～8.4ml/分/mm2、とりわけ4.9～6.9ml/分/mm2、特に5.4～7.4(例えば、6.4)ml/分/mm2である、第146項に記載の方法
第150項 混合チャンバへの第2の溶液の流速が、混合チャンバ断面の11～35ml/分/mm2である、第122～149項のいずれか1つに記載の方法。
第151項 混合チャンバへの第2の溶液の流速が、混合チャンバ断面の12～20ml/分/mm2、とりわけ14～18ml/分/mm2、特に15～17(例えば、16)ml/分/mm2である、第150項に記載の方法。
第152項 混合チャンバへの第2の溶液の流速が、混合チャンバ断面の21.6～29.6ml/分/mm2、とりわけ23.6～27.6ml/分/mm2、特に24.6～26.6(例えば、25.6)ml/分/mm2である、第150項に記載の方法。
第153項 混合チャンバへの第2の溶液の流速が、10～16ml/分/mm2、とりわけ11～15ml/分/mm2、特に12～14(例えば、13.125)ml/分/mm2である、第122～149項のいずれか1つに記載の方法。
第154項 第1の溶液が10～30℃の温度で提供される、第122～153項のいずれか1つに記載の方法。
第155項 第1の溶液の温度が15～25℃の温度で提供される、第154項に記載の方法。
第156項 第2の溶液の温度が10～30℃の温度で提供される、第122～155項のいずれか1つに記載の方法。
第157項 第2の溶液の温度が15～25℃の温度で提供される、第156項に記載の方法。
第158項 混合チャンバの温度が10～30℃である、第122～157項のいずれか1つに記載の方法。
第159項 混合チャンバの温度が15～25℃である、第158項に記載の方法。
第160項 混合チャンバ内の最大レイノルズ数が1500以下である、第122～159項のいずれか1つに記載の方法。
第161項 混合チャンバ内の最大レイノルズ数が100～600、例えば150～500である、第160項に記載の方法。
第162項 複数の混合チャンバが、50～2000ml/分、例えば200～500ml/分の速度で混合材料を製造することができる、第122～161項のいずれか1つに記載の方法。
第163項 複数の混合チャンバが、毎分少なくとも1gの脂質の速度、例えば毎分1gのホスファチジルコリン脂質の速度で混合材料を製造することができる、第122～162項のいずれか1つに記載の方法。
第164項 複数の混合チャンバが、毎分少なくとも1gのDOPCの速度で混合材料を生産することができる、第122～163項のいずれか1つに記載の方法。
第165項 溶媒が有機アルコールを含む、第122～164項のいずれか1つに記載の方法。
第166項 溶媒がエタノールを含む、第165項に記載の方法。
第167項 溶媒が70～90%v/vのエタノールを含む、第166項に記載の方法。
第168項 溶媒が75～85%v/vのエタノールを含む、第167項に記載の方法。
第169項 溶媒が80%v/vのエタノールを含む、第168項に記載の方法。
第170項 溶媒がイソプロパノールを含む、第165～169項のいずれか1つに記載の方法。
第171項 溶媒が10～30%v/vのイソプロパノールを含む、第170項に記載の方法。
第172項 溶媒が15～25%v/vのイソプロパノールを含む、第171項に記載の方法。
第173項 溶媒が20%v/vのイソプロパノールを含む、第172項に記載の方法。
第174項 第1の溶液が100～170mg/mlの脂質、例えば100～170mg/mlのホスファチジルコリン脂質を含む、第122～173項のいずれか1つに記載の方法。
第175項 第1の溶液が100～160mg/mlの脂質、例えば100～160mg/mlのホスファチジルコリン脂質を含む、第174項に記載の方法。
第176項 第1の溶液が130mg/mlの脂質、例えば130mg/mlのホスファチジルコリン脂質を含む、第175項に記載の方法。
第177項 第1の溶液が100～170mg/mlのDOPCを含む、第122～176項のいずれか1つに記載の方法。
第178項 第1の溶液が100～160mg/mlのDOPCを含む、第177項に記載の方法。
第179項 第1の溶液が130mg/mlのDOPCを含む、第178項に記載の方法。
第180項 第1の溶液が20～50mg/mlのステロールを含む、第122～179項のいずれか1つに記載の方法。
第181項 第1の溶液が30～35mg/mlのステロールを含む、第122～180項のいずれか1つに記載の方法。
第182項 ステロールがコレステロールである、第122～181項のいずれか1つに記載の方法。
第183項 第1の溶液の乾燥重量が120～250mg/mlである、第122～182項のいずれか1つに記載の方法。
第184項 第2の溶液が少なくとも90%w/wの水を含む、第122～183項のいずれか1つに記載の方法。
第185項 第2の溶液が少なくとも98%w/wの水を含む、第184項に記載の方法。
第186項 サポニンがQuil A又はその誘導体である、第122～185項のいずれか1つに記載の方法。
第187項 サポニンがQS-21である、第186項に記載の方法。
第188項 第2の溶液が0.15～15mg/mlのサポニンを含む、第122～187項のいずれか1つに記載の方法。
第189項 第2の溶液が1～4mg/mlのサポニンを含む、第188項に記載の方法。
第190項 TLR4アゴニストが、リポ多糖、例えばモノホスホリルリピドAである、第122～189項のいずれか1つに記載の方法。
第191項 リポ多糖が3D-MPLである、第190項に記載の方法。
第192項 第1の溶液が4～10mg/mlのTLR4アゴニストを含む、第122～191項に記載の方法。
第193項 平均リポソームサイズが95～120nmである、第122～192項のいずれか1つに記載の方法。
第194項 平均リポソームサイズが90～120nmである、第122～192項のいずれか1つに記載の方法。
第195項 リポソーム多分散性が0.3以下、例えば0.25以下である、第122～194項のいずれか1つに記載の方法。
第196項 リポソーム多分散性が0.2以下である、第195項に記載の方法。
第197項 溶媒が、透析濾過、限外濾過及び/又は透析、特に透析濾過によって除去される、第122～196項のいずれか1つに記載の方法。
第198項 溶媒除去が、少なくとも98%水w/wの水分含有率をもたらす、第122～197項のいずれか1つに記載の方法。
第199項 例えば所望の最終濃度になるように希釈する追加の工程を含む、第122～198項のいずれか1つに記載の方法。
第200項 pHを5～9に調整する追加の工程を含む、第122～199項のいずれか1つに記載の方法。
第201項 浸透圧を250～750mOsm/kgに調整する追加の工程を含む、第122～200項のいずれか1つに記載の方法。
第202項 免疫原若しくは抗原、又は免疫原若しくは抗原をコードするポリヌクレオチドを含む、アジュバント化免疫原性組成物を調製する方法であって、
(i)第122～201項のいずれか1つに記載の方法に従ってリポソームアジュバントを製造する工程；
(ii)リポソームアジュバントを免疫原若しくは抗原、又は免疫原若しくは抗原をコードするポリヌクレオチドと混合する工程
を含む方法。
第203項 アジュバント化免疫原性組成物を製造する方法であって、免疫原若しくは抗原、又は免疫原若しくは抗原をコードするポリヌクレオチドを、第122～201項のいずれか1つの方法に従って製造されたリポソームアジュバントと組み合わせる工程を含む方法。
第204項 濾過による滅菌の追加工程を含む、第122～203項のいずれか1つに記載の方法。
第205項 第122～201項のいずれか1つに記載の方法に従って製造される、サポニン、TLR4アゴニスト、DOPC、及びステロールを含むリポソームアジュバント。
第206項 第202～204項のいずれか1つに記載の方法に従って製造される、アジュバント化免疫原性組成物。
第207項 サポニン、例えばQS-21をヒト用量あたり1～100μgの量で含む、第205項又は第206項のいずれかに記載のアジュバント又は免疫原性組成物。
第208項 TLR4アゴニスト、例えば3D-MPLをヒト用量あたり1～100μgの量で含む、第205～207項のいずれか1つに記載のアジュバント又は免疫原性組成物。
第209項 溶媒を除去する前に、第122～201項又は第204項のいずれか1つに記載の方法に従って第1の溶液及び第2の溶液を混合することによって得られる、例えばそれによって得られたリポソーム含有溶液。
第210項 ホスファチジルコリン脂質が、12～20個の炭素原子を有する飽和非分岐アシル鎖、例えば14～18個の炭素原子を有するアシル鎖を含む、第122～209項のいずれか1つに記載の方法、アジュバント、組成物又は溶液。
第211項 ホスファチジルコリン脂質が、12～20個の炭素原子と1つの二重結合を有する非分岐アシル鎖、例えば14～18個の炭素原子と1つの二重結合を有するアシル鎖を含有する、第122～210項のいずれか1つに記載の方法、アジュバント、組成物又は溶液。
第212項 TLR4アゴニストがdLOSである、第122～211項のいずれか1つに記載の方法、アジュバント、組成物又は溶液。
第213項 脂質がDMPCを含む、第122～212項のいずれか1つに記載の方法、アジュバント、組成物又は溶液。
第214項 脂質がDOTAPを含む、第122～213項のいずれか1つに記載の方法、アジュバント、組成物又は溶液。
第215項 サポニン:脂質の比が1:50～1:10(w/w)、適切には1:25～1:15(w/w)、好ましくは1:22～1:18(w/w)、例えば1:20(w/w)である、第122～214項のいずれか1つに記載の方法、アジュバント、組成物又は溶液。
第216項 サポニン:DOPCの比が1:50～1:10(w/w)、適切には1:25～1:15(w/w)、好ましくは1:22～1:18(w/w)、例えば1:20(w/w)である、第122～215項のいずれか1つに記載の方法、アジュバント、組成物又は溶液。
第217項 DOPC:ステロール、例えばコレステロールの比が10:1～1:1(w/w)、適切には8:1～2:1(w/w)、好ましくは6:1～2.6:1(w/w)、例えば約4:1(w/w)である、第122～216項のいずれか1つに記載の方法、アジュバント、組成物又は溶液。
本発明は、以下の非限定的な実施例を参照することによってさらに説明される。
[実施例]
[実施例1]
WO2018219521は、蛇行中心/内部チャネルを備えるマイクロ流体デバイスを開示する。蛇行トポグラフィーの目的は、中心/内部チャネルの全長が外側/外部チャネルの全長と実質的に同じであることを確保することであった。
流体流に及ぼす中央チャネルの影響を調べ、蛇行チャネルが有益であるかどうかを決定するために、計算流体力学シミュレーションを行った。図3は、蛇行中心チャネル(下パネル)を直線中心チャネル(上パネル)に置き換えることは、流体流又は混合に重大な影響を及ぼさないことを示す。直線中央チャネルの使用は、製造に有利である。
[実施例2]
チャネルの幅と混合チャンバの幅を変更する効果を調べるために6つのマイクロ流体デバイスを調製した。設計1は、WO2018219521に示される配列に対応する。デバイスの1つ(設計6)を、円錐形の入口及び出口孔を円筒形の入口及び出口と置き換えるように変更した。
Figure 2023524136000011
図4は、同一流量（流速）及び同一比(合計16ml/分、4:1の外部/内部チャネル)を用いた各設計の計算流体力学(CFD)シミュレーションの結果を示す。
先に観察されたように、中心キャピラリーにおける蛇行の存在は、この蛇行を伴わない同じ設計と比較して、プロファイルに影響を及ぼさない(設計1及び2を比較する)。
外部チャネルの幅の増加(設計2及び4を比較する)は、長さに沿ったモデル色素の狭い分布をもたらし、混合が低いことを示した。
中央チャネルの幅の増加(設計2及び3を比較する)は、より広く、より均質になった流れプロファイルをもたらした。
入口と出口の円筒形への変更は、流動プロファイルにはほとんど影響がないように思われた(設計1及び6を比較する)。同様に、減少された混合チャンバの幅及び長さを有する設計(設計5)は、設計1及び2に類似した流れプロファイルを示した。
混合を比較するために、式1(Javid, 2018年の式5及び6に基づく)を用いて、各設計の混合性能を決定した。
Figure 2023524136000012
図5は各設計の混合性能の比較を示す(設計1及び2のラインが正確にオーバーレイしていることに留意されたい)。x軸は、異なる設計を比較することを可能にする全チャンバの長さの比率として、混合チャンバの長さに沿った位置に対応する。
これらの結果は、外部チャネルの幅の増加が混合チャンバに入る流体の混合の減少をもたらすことを示すCFDシミュレーションの結果を確認した。
[実施例3]
上記で得られた結果に基づき、さらに一連の実験を行い、混合性能に最も影響を与える幾何学の寸法を決定した。これらの実験では、混合チャンバ(MC)の幅は1mm、2mm又は3mmのいずれかであり、内部線形チャネル(CapInt)の幅は0.1mm、0.2mm又は0.3mmのいずれかであり、外部チャネル(CapExt)の幅は0.1mm、0.2mm又は0.3mmのいずれかであった。
最終混合係数(アルファ(Alpha))は、これら19種類の異なる設計の各々について決定した(図6)。アルファ(alpha)の最高値、すなわち最良の混合性能は、1mmの混合チャンバの幅、0.1mmの外部チャネルの幅、及び0.2mmの内部チャネルの幅を有するマイクロ流体デバイスを用いて得られた。
驚くべきことに、混合性能は主に外部チャネルの幅によって駆動されるようであり、混合チャンバの幅は混合に与える影響が少ないようであった。
[実施例4]
混合性能(アルファ(alpha))のための有意な項のみを用いた以下のモデルを抽出した。
Figure 2023524136000013
このモデルを用いて、段階的又はフォワード（順方向）手順を用いて最良の混合係数を与える幾何学を決定した。
以下の表は、混合のための最良の寸法をミリメートル(mm)でまとめる。
Figure 2023524136000014
図7は、変更された幾何形状と設計1の混合プロファイルの比較を示す。設計1(WO2018219521由来)と比較して、変更された幾何学的形状に対して、増加した混合指数が達成された。
[実施例5]
チャネル深さの影響を調査した(図8)。シミュレーションを(Galletti, 2012の式6、7及び8に基づいて)同じ幾何学的形状を用いるが、しかしチャネル深さを変化させて行った。
Figure 2023524136000015
チャネル深さの増加は混合効率を改善するようであった。しかしながら、チャネル深さは、基板、この場合はシリコンウエハの厚さに依存する。厚さ675μmのウエハの場合、最大深さは500μmを超えてはならない。
[実施例6]
次の寸法のマイクロ流体チップを2つの深さ(400μm及び500μm)で作製した。
Figure 2023524136000016
第1の溶液(有機相)は、本質的にWO2018219521に記載されているように調製された。エタノール/イソプロパノールの80:20を用いて、6.5mg/mlの3D-MPL、130mg/mlのDOPC及び32.5mg/mlのコレステロールを含有する最終溶液を調製した。第2の溶液(水相)は、最終濃度1.625mg/mlを達成するために、注射用水で濃縮QS-21ストック溶液を希釈することによって調製された。デバイスは、総流速16ml/分(流速比4:1の外部/内部チャネル)にて20度で運転した。
サイズは、Malvern Zeta Nanoシリーズを用いて決定した。試料を希釈して、測定のための一貫した濃度(約2mg/ml DOPC)を得たが、さらなる処理、例えば溶媒除去は行わなかった。二重実験の結果(サイズ及びPDI)を各設計に対してプロットした(図9)。設計4は、深さが500μmである場合により低いPDIを示した。
したがって、この設計は、温度及び流速(総流速15～19ml/分、温度16～22℃)の影響を評価するさらなる実験のために選択された。他のパラメータは一定であった(ストック濃度、水/有機相の比4:1)。サイズ及び多分散性を最小化する条件は、約19～20℃の温度及び16ml/分の流速であった。しかしながら、WO2018219521の設計と比較して改善が観察されたが、観察された改善は所望のものよりも少なかった(データを示さず)。
[実施例7]
混合における異なるバッフル配置の影響のモデリング
バッフルの影響を調べ、バッフル位置、サイズ及び形状に関して最適を決定するために、CFD研究を行った。
いくつかのパラメータ、例えば混合チャンバの幅(1.6mm)、混合チャンバの長さ(25mm)及び全深さ(500um)を固定した。これらの値は、以前の作業で得られた結果に従って選択され、また、圧力の問題を最小限にすると同時に、並列に16個の混合チャンバとの将来の一体化を容易にするためにも選択された(1.6mmを超える混合チャンバの幅は、所定の空間に多数のチャンバを一体化することが困難であり、選択された製造アプローチによって制限される)。
出発点として2つの幾何学的形状を選択した(すなわち、深さが500umである、実施例6からの設計3及び6)。
最も重要であると強調されているように、調査したパラメータを連続的に試験した(図10)。
1)バッフル数と開始位置の影響
2)バッフル位置(整列、2つのバッフル間の距離)の影響
3)バッフル寸法
4)バッフル形状(正方形、台形、ベル形、波形)
選択基準を設定した:
1)混合チャンバの混合効率>0.8端
2)最小圧力低下(約1バール)
3)製造性(障害物寸法、プロセス許容度対寸法)
4)デッドゾーン(物質の蓄積、気泡の閉じ込め...)なし
図11Aに記載された条件(バッフルの総数を示すNtot/頻度)を試験し、図11Bは、ケース1～10(条件1～5に基づくケース1～及び実施例6からの設計3、条件1～5に基づくケース6～10及び実施例6からの設計6)についてモデル色素の質量分率分布による結果を示す。図12は、モデル化された異なる設計のための混合効率をプロットする。
ケース2(最悪ケース)及び4(「最悪のうちの最良」)は、図13Aに記載されるようにさらに変更され、図13Bは、ケース11～15についてのモデル色素の質量分率分布による結果を示す。図14は、モデル化された異なる設計のための混合効率をプロットする。
ケース9(最良ケース)及び7(「最良のうちの最悪」)は、図15Aに記載されるようにさらに変更され、図15Bは、ケース16～21についてのモデル色素の質量分率分布による結果を示す。図16は、モデル化された異なる設計のための混合効率をプロットする。ケース19、20及び21は特に優れた性能であった。
ケース19及び21は、図17Aに記載されるようにさらに変更され、図17Bは、ケース19b、19c、21b及び21cのモデル色素の質量分率分布による結果を示す。図18は、比較のためのケース19～21とともに、モデル化された異なる設計のための混合効率をプロットする。
さらなる幾何学的形状を開始点として選択し(すなわち、深さ500μmである、実施例6からの設計4)、図19A(設計4-1と称する)に記載されるバッフルの導入によって変更された。図19Bは、設計4-1のためのモデル色素の質量分率分布による結果を示す。図19Cは、設計4と比較して混合効率をプロットする。
[実施例8]
混合における異なるバッフル形状の影響のモデリング
実施例7からのケース21は、矩形プロファイルを有するバッフルを使用した。図20Aに示されるように、矩形プロファイルバッフルを台形、ベル形又は波形プロファイルに置き換えることにより、混合に及ぼす異なるバッフル形状の影響を調べた。新規なバッフル形状の計算流体力学シミュレーションを図20Bに示す。図21は、新規な台形、ベル形又は波形プロファイルの混合プロファイルを、元の矩形プロファイルと比較したものを示す。バッフルプロファイルは混合効率に限定的な影響を有することが見出された。
[実施例9]
リポソームアジュバントの製造におけるバッフル化設計の試験
設計4-1(実施例7から)、設計6-4-3-1(実施例7からのケース21)、設計6-4(実施例7からのケース9)及び設計6-5(実施例7からのケース10)の概略図を図22～図25に示す。これらの設計を試験し、以下のパラメータを用いてWO2018219521の設計(図2に示される「設計1」)と比較した。
-総流速16ml/分
-流量（流速）比5(すなわち、4:1の水溶液対有機溶液)
-温度20℃
-6.5mg/mlの3D-MPL、130mg/mlのDOPC及び32.5mg/mlのコレステロールを含有する80:20の有機相エタノール/イソプロパノール
-QS-21を1.625mg/mlで含有する水相
製品を、粒子サイズ及び多分散性について、Malvern Zeta Nanoシリーズを用いて試験し、結果を図26に示す。結果は、全ての新規な設計のサイズが小さく、設計4-1及び6-5の場合、2日間にわたる実行で多分散性が一貫して低いことを示す。
次に、設計4-1及び6-5を、温度及び総流速(流速比一定)を変化させることによってさらに調査し、結果を図27に示す。粒子サイズの統計学的分析では、設計4-1と6-5の間に有意差は認められなかったが(p=0.16)、25度及び20ml/分の設計4-1では異常に高い値が得られた。PDIの統計学的分析では、設計4-1と設計6-5の間に有意差が認められ(p=0.036)、平均PDIは設計4-1の方が設計6-5よりも0.05高かった。
温度及び流速を変化させながら設計6-5について追加試験を行った。結果を図28に示す。これらの結果に基づき、図29に示されるように、粒子サイズ設計空間を作製した。
以下の式に基づき、設計4-1、設計6-4、設計6-4-3-1及び設計6-5についてレイノルズ数を算出した:
Figure 2023524136000017
Qは流速であり、uは流体粘度を表し、w及びhはチャネル幅及び高さを表し、pは流体密度を表し、Uは流体平均速度を表す。密度と粘度は水と同じであるとみなした。
Figure 2023524136000018
[実施例10]
スケールアップ
設計6-5(実施例7からのケース10)に従い、16個の混合チャンバを含有し、一体化された分配マニホールド及び回収マニホールドを組み込んだ2つのチップを調製した(図34及び図35を参照されたい)。重なり合うチャネル経路の必要性のために、マニホールドが複数のチップ層に組み込まれた。第1のチップ(設計16A)は、層2及び3において入口分布、並びに層2に配置されたチャネルを介して混合チャンバの端部に接続されている出口マニホールドを備えた層1において出口回収を一体化している。第2のチップ(設計16C)は、層2及び3において入口分布、並びに混合チャンバ端部に直接接続している出口マニホールドを備えた層1において出口回収を一体化している。
マルチチャネル設計を試験し、以下のパラメータを用いて単一チャネル設計6-5(図25)と比較した:
-混合チャンバあたりの総流速16ml/分
-流速比5(すなわち、4:1の水溶液対有機溶液)
-温度20℃
-6.5mg/mlの3D-MPL、130mg/mlのDOPC及び32.5mg/mlのコレステロールを含有する80:20の有機相エタノール/イソプロパノール
-QS-21を1.625mg/ml含有する水相。
粒子サイズ及び多分散性について、Malvern Zeta Nanoシリーズを用いて製品を試験した。
Figure 2023524136000019
両方のマルチチャネル構成の操作は、低多分散性の混合材料を提供した。
[実施例11]
リポソームアジュバントの製造におけるバッフル化設計の試験
設計6-5(実施例7からのケース10)は、ある範囲の作動（運転）パラメータにわたってさらに調査された:
-総流速12～16ml/分
-流速比4(すなわち、3:1の水溶液対有機溶液)
-標的からの溶液流±1.2%を調整することによって検討した流速感度
-水溶液温度17～21℃
-有機溶液温度17～21℃
-6.5mg/mlの3D-MPL、130mg/mlのDOPC及び32.5mg/mlのコレステロールを含有する80:20の有機相エタノール/イソプロパノール
-QS-21を2.167mg/ml含有する水相
粒子サイズ及び多分散性について、Malvern Zeta Nanoシリーズを用いて製品を試験した。
Figure 2023524136000020
この明細書及び特許請求の範囲が一部を形成する出願は、その後の全ての出願に関する優先権の基礎として使用することができる。このような後の出願の特許請求の範囲は、本明細書に記載される特徴の全ての特徴又は組み合わせを対象とすることができる。実施形態は、本発明のさらなる実施形態を形成するために、状況に適した場合に、互いに独立して、完全に組み合わせることができると考えられる。それらは、生産物、組成物、方法、又は使用の請求項の形態をとることができ、例として、以下の請求項を含むことができるが、これらに限定されない。
この明細書で引用した、限定されることはないが特許及び特許出願を含めて全ての刊行物は、各々個々の刊行物が参照によりその全てが記載されているように本明細書に組み込まれていると具体的且つ個別に示されているかのように、参照により本明細書に組み込まれる。
参考文献一覧
Figure 2023524136000021
Figure 2023524136000022
Figure 2023524136000023

Claims (22)

  1. 混合チャンバ；第1の流体のための該混合チャンバへの1つの入口チャネルと、第2の流体のための該混合チャンバへの2つの入口チャネル(上記入口チャネルは、該混合チャンバの近位端に実質的に対称的に配置される)；該混合チャンバの遠位端における混合材料のための少なくとも1つの出口、を備えるマイクロ流体混合デバイスであって、該混合チャンバが1つ以上のバッフルを備えることを特徴とする、マイクロ流体混合デバイス。
  2. 第1の流体のための該入口チャネルは、0.1～0.7mmの幅、例えば0.15～0.5mmの幅、とりわけ0.15～0.5mmの幅、特に0.2～0.35mmの幅、例えば0.27mmの幅である、請求項1に記載のデバイス。
  3. 第2の流体のための該入口チャネルは、0.025～0.3mmの幅、例えば、0.05～0.25mmの幅、例えば0.1mmの幅である、請求項1又は2に記載のデバイス。
  4. 第1の流体及び第2の流体のための該入口チャネルから該混合チャンバ内への流れの方向が、該混合チャンバにおける流れの一般的方向に実質的に平行である、請求項1から3のいずれか一項に記載のデバイス。
  5. 該混合チャンバの長さが、15～100mm、例えば17.5～75mm、とりわけ20mm～50mm、特に約25mm、例えば25mmである、請求項1から4のいずれか一項に記載のデバイス。
  6. 該混合チャンバの最大幅は、0.8～2.2mm、例えば1～2mm、とりわけ1.2～2mmである、請求項1から5のいずれか一項に記載のデバイス。
  7. 該混合チャンバの最小幅は、0.8～2.2mm、例えば1～2mm、とりわけ1.2～2mmである、請求項1から6のいずれか一項に記載のデバイス。
  8. 該混合チャンバは、0.1～2mmの深さ、例えば0.3～0.8mmの深さ、とりわけ0.4～0.6mmの深さ、特に約0.5mmの深さ、例えば0.5mmの深さである、請求項1から7のいずれか一項に記載のデバイス。
  9. バッフルが該混合チャンバの両方の側面に存在する、請求項1から8のいずれか一項に記載のデバイス。
  10. 4～100個のバッフル、例えば6～60個のバッフル、とりわけ8～40個のバッフル、特に10～25個のバッフルを備える、請求項1から9のいずれか一項に記載のデバイス。
  11. 0.1～1mmの幅、例えば0.2～0.8mmの幅、とりわけ0.4～0.7mmの幅、特に約0.5mmの幅、例えば0.5mmの幅のバッフルを備える、請求項1から10のいずれか一項に記載のデバイス。
  12. -長さが25mmである混合チャンバであり、矩形の断面、1.6mmの間隔を置いた平行な側面、並びに0.5mmの深さを提供するように間隔を置いた平行な上部壁及び下部壁を有する混合チャンバ；
    -第1の流体のための該混合チャンバへの1つの入口チャネルであり、矩形の断面、0.27mmの幅、及び0.5mmの深さを有し、該混合チャンバの近位端に中央に位置される入口チャネル；
    -第2の流体のための該混合チャンバへの2つの入口チャネルであり、同一であり、矩形の断面、0.1mmの幅及び0.5mmの深さを有し、該混合チャンバの該近位端の外壁の各々に位置される入口チャネル；
    -該混合チャンバの該近位端に対称に配置される前記入口チャネルであり、該入口チャネルから該混合チャンバへの流れの方向は、該混合チャンバ内の流れの一般的な方向に平行である入口チャネル；
    -該混合チャンバの遠位端における混合材料のための1つの出口
    を備えるマイクロ流体混合デバイスにおいて、該混合チャンバは12個のバッフルを備え、第1のバッフルは該混合チャンバの該近位端から4.4mmに位置し、バッフルは1.732mmの第1及び第2の側面の間のオフセットを伴って3.464mmだけ離され、該バッフルは最大長0.55mm、最小長0.25mm及び0.5mmの幅を有する形状で台形であることを特徴とする、請求項1から11のいずれか一項に記載のマイクロ流体混合デバイス。
  13. -長さが25mmである混合チャンバであり、矩形の断面、1mmの間隔を置いた平行な側面、並びに0.5mmの深さを提供するように間隔を置いた平行な上部壁及び下部壁を有する混合チャンバ；
    -第1の流体のための該混合チャンバへの1つの入口チャネルであり、矩形の断面、0.27mmの幅、及び0.5mmの深さを有し、該混合チャンバの近位端に中央に位置される入口チャネル；
    -第2の流体のための該混合チャンバへの2つの入口チャネルであり、同一であり、矩形の断面、0.1mmの幅及び0.5mmの深さを有し、該混合チャンバの該近位端の外壁の各々に位置される入口チャネル；
    -該混合チャンバの該近位端に対称に配置される前記入口チャネルであり、該入口チャネルから該混合チャンバへの流れの方向は、該混合チャンバ内の流れの一般的な方向に平行である入口チャネル；
    -該混合チャンバの遠位端における混合材料のための1つの出口
    を備えるマイクロ流体混合デバイスにおいて、該混合チャンバは19個のバッフルを備え、第1のバッフルは該混合チャンバの該近位端から5.3mmに位置し、バッフルは1mmの第1及び第2の側面の間のオフセットを伴って2mmだけ離され、バッフルは最大長0.33mm、最小長0.15mm及び0.35mmの幅を有する形状で台形であることを特徴とする、請求項1から11のいずれか一項に記載のマイクロ流体混合デバイス。
  14. 請求項1から13のいずれか1項に記載のマイクロ流体デバイスを用いてリポソームアジュバントを製造する方法であって、
    (a)該デバイス内で、溶媒と脂質を含む第1の溶液、及び水を含む第2の溶液を混合する工程；並びに
    (b)溶媒を除去する工程
    を含む方法。
  15. 請求項1から13のいずれか一項に記載のマイクロ流体デバイスを用いたリポソームアジュバントの調製における使用のリポソーム濃縮物を製造する方法であって、該デバイス内で、溶媒と脂質を含む第1の溶液、及び水を含む第2の溶液を混合する工程を含む方法。
  16. 免疫原若しくは抗原、又は免疫原若しくは抗原をコードするポリヌクレオチドを含む、アジュバント化免疫原性組成物を調製する方法であって、
    (i)請求項14に記載の方法に従ってリポソームアジュバントを製造する工程；
    (ii)リポソームアジュバントを免疫原若しくは抗原、又は免疫原若しくは抗原をコードするポリヌクレオチドと混合する工程
    を含む方法。
  17. アジュバント化免疫原性組成物を製造する方法であって、免疫原若しくは抗原、又は免疫原若しくは抗原をコードするポリヌクレオチドを、請求項14のいずれか一項に記載の方法に従って製造されたリポソームアジュバントと組み合わせる工程を含む方法。
  18. 請求項14に記載の方法に従って製造される、サポニン、TLR4アゴニスト、DOPC、及びステロールを含むリポソームアジュバント。
  19. 請求項16又は17のいずれかに記載の方法に従って製造される、アジュバント化免疫原性組成物。
  20. サポニン、例えばQS-21をヒト用量あたり1～100μgの量で含む、請求項18又は19のいずれかに記載のアジュバント又は免疫原性組成物。
  21. TLR4アゴニスト、例えば3D-MPLをヒト用量あたり1～100μgの量で含む、請求項18から20のいずれか一項に記載のアジュバント又は免疫原性組成物。
  22. 溶媒を除去する前に、請求項14又は15のいずれかに記載の方法に従って第1の溶液及び第2の溶液を混合することによって得られる、例えばそれによって得られたリポソーム含有溶液。
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