JP2023523620A - キメラ抗原受容体を発現するウイルス特異的免疫細胞 - Google Patents

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Abstract

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＣＡＲをコードする核酸を含むウイルス特異的免疫細胞であって、ＣＡＲは、（ｉ）ＣＤ３０に特異的に結合する抗原結合ドメイン、（ｉｉ）膜貫通ドメイン、及び（ｉｉｉ）シグナル伝達ドメインを含み、シグナル伝達ドメインは、（ａ）ＣＤ２８の細胞内ドメインに由来するアミノ酸配列、及び（ｂ）免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含むアミノ酸配列を含む、ウイルス特異的免疫細胞が開示される。また、そのような細胞を産生するための方法及びそれを含む組成物も開示される。【選択図】図１

Description

本出願は、２０２０年４月２７日に出願された米国特許出願第６３／０１５，７６９号の優先権を主張し、その内容及び要素は、あらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる。
（技術分野）
本発明は分子生物学及び細胞生物学に関し、また、医学的治療及び予防の方法に関する。
血液悪性腫瘍における自己キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞の成功にもかかわらず、この潜在的に治癒的な治療のより広範な使用に対する障壁が存在する。製造不全、注入前の疾患進行、及び法外な費用は、多くの人にとって法外なものである。直ちに利用可能なＣＡＲ Ｔ細胞の選択肢が緊急に必要とされている。
迅速に投与することができる健康なドナーに由来する「既製の」Ｔ細胞産物はアクセシビリティを改善し、養子細胞免疫療法のコストを低減する。しかしながら、「既製の」ＣＡＲ Ｔ細胞療法の開発は、２つの主要な落とし穴によって妨げられている：非血縁ドナー由来のポリクローナル活性化ＣＡＲ Ｔ細胞が移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を引き起こす可能性、及びレシピエント同種反応性Ｔ細胞による同種ＣＡＲ Ｔ細胞の拒絶。
第１の態様では本開示がキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＣＡＲをコードする核酸を含むウイルス特異的免疫細胞を提供し、ＣＡＲは（ｉ）ＣＤ３０に特異的に結合する抗原結合ドメイン、（ｉｉ）膜貫通ドメイン、及び（ｉｉｉ）シグナル伝達ドメインを含み、シグナル伝達ドメインは（ａ）ＣＤ２８の細胞内ドメインに由来するアミノ酸配列、及び（ｂ）免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含むアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、シグナル伝達ドメインは、配列ＩＤ番号２６に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８の膜貫通ドメインに由来する。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列ＩＤ番号２０と少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、配列ＩＤ番号１４に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、及び配列ＩＤ番号１５に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、配列ＩＤ番号１８と少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインは、（ａ）ＣＤ３ζの細胞内ドメインに由来するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、シグナル伝達ドメインは、配列ＩＤ番号２５に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、抗原結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に提供されるヒンジ領域をさらに含む。
いくつかの実施形態において、ヒンジ領域は、配列ＩＤ番号３３に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列ＩＤ番号３５又は３６に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、ウイルス特異的免疫細胞は、ＣＤ３０以外の標的抗原に特異的に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲ、又はＣＤ３０以外の標的抗原に特異的に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲをコードする核酸を含む。
本開示はまた、ＣＡＲをコードするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又は核酸を含むウイルス特異的免疫細胞を提供し、ＣＡＲは、（ｉ）ＣＤ３０に特異的に結合する抗原結合ドメイン、（ｉｉ）膜貫通ドメイン、及び（ｉｉｉ）免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含むシグナル伝達ドメインを含む；
ここで、ウイルス特異的免疫細胞は、ＣＤ３０以外の標的抗原に特異的に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲ、又はＣＤ３０以外の標的抗原に特異的に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲをコードする核酸を含む。
いくつかの実施形態では、ウイルス特異的免疫細胞は、１つ以上の非同一のＣＡＲ、又は１つ以上の非同一のＣＡＲをコードする核酸を含む。
いくつかの実施形態において、ＣＤ３０以外の標的抗原は、癌細胞抗原である。
いくつかの実施形態において、ＣＤ３０以外の標的抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＲＯＲ１Ｒ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ３８、ＢＣＭＡ、メソテリン、ＥＧＦＲ、ＧＰＣ３、ＭＵＣ１、ＨＥＲ２、ＧＤ２、ＣＥＡ、ＥｐＣＡＭ、ＬｅＹ及びＰＳＣＡから選択される。
いくつかの実施形態において、ＣＤ３０以外の標的抗原はＣＤ１９である。
いくつかの実施形態において、ウイルス特異的免疫細胞は、ウイルス特異的Ｔ細胞である。
いくつかの実施形態では、ウイルス特異的免疫細胞は、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）に特異的である。
本開示はまた、ウイルス特異的免疫細胞を産生するための方法であって：
ウイルス特異的免疫細胞を、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＣＡＲをコードする核酸を含むように改変する工程であって、ＣＡＲは、（ｉ）ＣＤ３０に特異的に結合する抗原結合ドメイン、（ｉｉ）膜貫通ドメイン、及び（ｉｉｉ）シグナル伝達ドメインを含み、シグナル伝達ドメインは、（ａ）ＣＤ２８の細胞内ドメインに由来するアミノ酸配列、及び（ｂ）免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含むアミノ酸配列を含む、工程を含む、方法。
いくつかの実施形態において、シグナル伝達ドメインは、配列ＩＤ番号２６に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８の膜貫通ドメインに由来する。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、配列ＩＤ番号２０と少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、配列ＩＤ番号１４に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、及び配列ＩＤ番号１５に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、配列ＩＤ番号１８と少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインは、（ａ）ＣＤ３ζの細胞内ドメインに由来するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、シグナル伝達ドメインは、配列ＩＤ番号２５に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、抗原結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に提供されるヒンジ領域をさらに含む。
いくつかの実施形態において、ヒンジ領域は、配列ＩＤ番号３３に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、配列ＩＤ番号３５又は３６に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、ウイルス特異的免疫細胞は、ＣＤ３０以外の標的抗原に特異的に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲ、又はＣＤ３０以外の標的抗原に特異的に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲをコードする核酸を含む。
本発明はまた、式（Ｉ）の化合物を、それを必要とする対象に投与することを含む、ウイルス特異的免疫細胞を産生する方法を提供する：
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＣＡＲをコードする核酸を含むようにウイルス特異的免疫細胞を修飾する工程であって、ＣＡＲは、（ｉ）ＣＤ３０に特異的に結合する抗原結合ドメイン、（ｉｉ）膜貫通ドメイン、及び（ｉｉｉ）免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含むシグナル伝達ドメインを含む、工程；
ここで、ウイルス特異的免疫細胞は、ＣＤ３０以外の標的抗原に特異的に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲ、又はＣＤ３０以外の標的抗原に特異的に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲをコードする核酸を含む。
いくつかの実施形態では、本方法は：
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＣＡＲをコードする核酸を含むようにウイルス特異的免疫細胞を改変する工程であって、前記ＣＡＲは、ＣＤ３０以外の標的抗原に特異的に結合する抗原結合ドメインを含む、方法。
いくつかの実施形態では、ウイルス特異的免疫細胞は、１つ以上の非同一のＣＡＲ、又は１つ以上の非同一のＣＡＲをコードする核酸を含む。
いくつかの実施形態において、ＣＤ３０以外の標的抗原は、癌細胞抗原である。
いくつかの実施形態において、ＣＤ３０以外の標的抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＲＯＲ１Ｒ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ３８、ＢＣＭＡ、メソテリン、ＥＧＦＲ、ＧＰＣ３、ＭＵＣ１、ＨＥＲ２、ＧＤ２、ＣＥＡ、ＥｐＣＡＭ、ＬｅＹ及びＰＳＣＡから選択される。
いくつかの実施形態において、ＣＤ３０以外の標的抗原はＣＤ１９である。
いくつかの実施形態において、ウイルス特異的免疫細胞は、ウイルス特異的Ｔ細胞である。
いくつかの実施形態では、ウイルス特異的免疫細胞は、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）に特異的である。
本開示はまた、本開示による方法によって得られるか、又は得ることができるウイルス特異的免疫細胞を提供する。
本開示はまた、本開示によるウイルス特異的免疫細胞と、薬学的に許容される担体、アジュバント、賦形剤又は希釈剤とを含む薬学的組成物を提供する。
本開示はまた、治療又は予防の方法において使用するための、本開示によるウイルス特異的免疫細胞又は薬学的組成物を提供する。
本開示はまた、癌を治療又は予防する方法において使用するための、本開示によるウイルス特異的免疫細胞又は薬学的組成物を提供する。
本開示はまた、癌を治療又は予防するための医薬の製造における、本開示によるウイルス特異的免疫細胞又は医薬組成物の使用を提供する。
本開示はまた、本開示によるウイルス特異的免疫細胞又は薬学的組成物の治療有効量又は予防有効量を対象に投与することを含む、癌を治療又は予防する方法を提供する。
いくつかの実施形態で、癌は、ＣＤ３０陽性癌、ＥＢＶ関連癌、血液癌、骨髄性血液悪性腫瘍、造血器悪性腫瘍、リンパ芽球性血液悪性腫瘍、骨髄異形成症候群、白血病、Ｔ細胞白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞性非ホジキンリンパ腫、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、ＥＢＶ関連リンパ腫、ＥＢＶ陽性Ｂ細胞リンパ腫、ＥＢＶ陽性びまん性大Ｂ細胞リンパ腫、Ｘリンク性リンパ増殖性障害に伴うＥＢＶ陽性リンパ腫。ＨＩＶ感染症／ＡＩＤＳに伴うＥＢＶ陽性リンパ腫、口腔毛髪性白斑症、バーキットリンパ腫、移植後リンパ増殖性疾患、中枢神経系リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ＡＬＫ陽性未分化Ｔ細胞リンパ腫、ＡＬＫ陰性未分化Ｔ細胞リンパ腫、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫、節外性ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫、胸腺腫、多発性骨髄腫、固形癌、上皮細胞癌、胃癌、胃腺癌、胃腸腺癌、消化器癌肝臓癌、肝細胞癌、胆管癌、頭頸部癌、頭頸部扁平上皮癌、口腔癌、中咽頭癌、口腔癌、喉頭癌、鼻咽頭癌、食道癌、大腸癌、大腸癌、結腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、肺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、膀胱癌、尿路上皮癌、皮膚癌、メラノーマ。進行性黒色腫、腎細胞癌、腎細胞癌、卵巣癌、卵巣癌、中皮腫、乳癌、脳腫瘍、グリオブラストーマ、前立腺癌、膵臓癌、肥満細胞症、進行性全身性肥満細胞症、胚細胞腫瘍、又は、精巣胚性癌からなる群から選ばれる。
本開示はまた、アロ反応性免疫応答によって特徴付けられる疾患又は状態を治療又は予防する方法において使用するための、本開示によるウイルス特異的免疫細胞又は薬学的組成物を提供する。
本開示はまた、アロ反応性免疫応答を特徴とする疾患又は状態を治療又は予防するための医薬の製造における、本開示によるウイルス特異的免疫細胞又は医薬組成物の使用を提供する。
本開示はまた、アロ反応性免疫応答を特徴とする疾患又は状態を治療又は予防する方法であって、対象に治療的又は予防的に有効な量のウイルス特異的免疫細胞又は本開示による医薬組成物を投与することを含む方法を提供する。
いくつかの実施形態では、同種反応性免疫応答を特徴とする疾患又は状態は、同種移植に関連する疾患又は状態である。
いくつかの実施形態において、疾患又は状態は、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）である。
いくつかの実施形態において、疾患又は状態は、移植片拒絶である。
いくつかの実施形態では、方法は、同種移植片を採取する前に、同種移植片のドナー対象に治療的又は予防的に有効な量のウイルス特異的免疫細胞又は医薬組成物を投与することを含む。
いくつかの実施形態では、方法は、治療上又は予防上有効な量のウイルス特異的免疫細胞又は医薬組成物を、同種移植のためにレシピエント対象に投与することを含む。
いくつかの実施形態では、方法は、同種移植片を、治療上又は予防上有効な量のウイルス特異的免疫細胞又は組成物と接触させることを含む。
本開示はまた、同種移植によって疾患又は状態を治療又は予防する方法において使用するための、本開示によるウイルス特異的免疫細胞又は薬学的組成物を提供する。
本開示はまた、同種移植による疾患又は状態を治療又は予防するための医薬の製造における、本開示によるウイルス特異的免疫細胞又は医薬組成物の使用を提供する。
本開示はまた、治療上又は予防上有効な量のウイルス特異的免疫細胞又は本開示による医薬組成物を対象に投与することを含む、同種移植によって疾患又は状態を治療又は予防する方法を提供する。
いくつかの実施形態では、方法は、同種移植片を採取する前に、同種移植片のドナー対象に治療的又は予防的に有効な量のウイルス特異的免疫細胞又は医薬組成物を投与することを含む。
いくつかの実施形態では、方法は、治療上又は予防上有効な量のウイルス特異的免疫細胞又は医薬組成物を、同種移植のためにレシピエント対象に投与することを含む。
いくつかの実施形態では、方法は、同種移植片を、治療上又は予防上有効な量のウイルス特異的免疫細胞又は組成物と接触させることを含む。
いくつかの実施形態では、同種移植は、同種異系免疫細胞の養子移入を含む。
いくつかの実施形態では、疾患又は状態は、Ｔ細胞機能不全障害、癌又は感染性疾患である。
本開示はまた、アロ反応性免疫細胞を、本開示によるウイルス特異的免疫細胞又は薬学的組成物と接触させることを含む、アロ反応性免疫細胞を死滅させる方法を提供する。
本発明の原理を示す実施形態及び実験を、添付の図面を参照して以下に説明する。
図１。ＨＬＡ－Ａ２及びＣＤ３の細胞を７日間培養した後に得られる細胞によるＨＬＡ－Ａ２及びＣＤ３のＥＶＳＴの表現を示す散布図：ＨＬＡ－Ａ２プラスの主体（左上段）又はＨＬＡ－Ａ２プラスの主体から得られるＣＤ３０－ＣＡＲ構築型ＥＢＳＴ；又はＨＬＡ－Ａ２プラスの主体（左下段）から得られるＨＬＡ－Ａ２ネガティブ主体及び非トランスデュース型ＥＢＳＴから得られるＨＬＡ－Ａ２マイナス主体及び非トランスデュースＥＢＳＴに由来するアロレアＴ細胞の７日間の共文化後（右下段）、又はＨＬＡ－Ａ２プラス主体から得られるＣＤ３０－ＣＡＲ構築型ＥＢＳＴ（右下段）。
図２Ａ及び２Ｂ。７日後の（２Ａ）ＥＢＶＳＴ（すなわち、ＣＤ３＋、ＨＬＡ－Ａ２陽性）及び（２Ｂ）同種反応性Ｔ細胞（すなわち、ＣＤ３＋、ＨＬＡ－Ａ２陰性）細胞の細胞数を示す棒グラフ。
図３。ＨＬＡ－Ａ２陽性ＰＢＭＣ及び非形質導入（ＮＴ；左上パネル）、ＣＤ３０－ＣＡＲ構築物形質導入（ＣＤ３０．ＣＡＲ；右上パネル）、ＣＤ１９－ＣＡＲ構築物形質導入（ＣＤ１９．ＣＡＲ；左下パネル）、又はＨＬＡ－Ａ２陰性対象に由来するＣＤ３０－ＣＡＲ及びＣＤ１９－ＣＡＲ構築物形質導入（ＣＤ３０＋ＣＤ１９．ＣＡＲ；右下パネル）ＥＢＶＳＴを含む共培養において７日後に得られた細胞におけるＨＬＡ－Ａ２及びＣＤ７１の発現を示す散布図。
図４。４人の代表的なドナーから採取した血液サンプルから調製したＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの増殖を示すグラフ。グラフは、培養物中で増殖した細胞の累積倍率拡大を示す。
図５Ａ及び５Ｂ。（５Ａ）ＣＤ３０陰性ＢＪＡＢバーキットリンパ腫細胞及び（５Ｂ）ＣＤ３０陽性ＨＤＬＭ２ホジキンリンパ腫細胞に対するＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの細胞毒性を、ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴ（エフェクター）と５１Ｃｒ標識標的細胞（標的）との共培養後の５１Ｃｒ放出試験により測定したグラフ。
図６Ａ及び６Ｂ。４名の代表的ドナーから採取した血液試料から調製したＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴのＥＢＶ抗原に対する反応性をＥＬＩＳｐｏｔ分析により測定したグラフ。細胞を、ＥＢＶ潜在性抗原（潜在性）のペプチド、ＥＢＶ溶解性抗原（Ｌｙｔｉｃ）のペプチドで刺激し、又は抗原で刺激しなかった（陰性）、５×１０４細胞あたりのスポット形成単位の個数を決定した。（６Ａ）は、ＣＤ３０．ＣＡＲをコードするレトロウイルスで形質導入されていないＥＢＶＳＴの反応性を示す。（６Ｂ）は、ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴ（ＣＤ３０．ＣＡＲをコードするレトロウイルスで形質導入された）の反応性を示す。
図７。ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの注入前、及び注入後６週間に実施された患者＃１のＰＥＴスキャンの結果を示す代表的な画像。
図８。ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの注入前、及び注入後６週間に実施された患者＃２のＰＥＴ及びＣＴスキャンの結果を示す代表的な画像。
図９。表は、ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの注入前（注入前）及び注入後の示された期間に得られた血液試料中の、ｑＲＴ－ＰＣＲによって決定された末梢血細胞中のベクターコピー数を示す。
図１０。ＥＬＩＳｐｏｔ分析によって決定されるように、リンパ球枯渇前（ＬＤ前）、及びＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴ注入後の示された期間における、患者＃１の末梢血内の異なる抗原に対する細胞の特異性の分析の結果を示す棒グラフ。示された時点で血液試料から単離されたＰＢＭＣを、ＥＢＶ潜在性抗原（潜在性）のペプチド、ＥＢＶ溶解性抗原（Ｌｙｔｉｃ）のペプチド、他のウイルス（他のウイルス）の抗原のペプチド、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）抗原のペプチドで刺激し、又は刺激されなかった抗原（ペプミックス（ｐｅｐｍｉｘ）なし）で刺激し、３×１０５細胞あたりのスポット形成単位の個数を決定した。
本発明者らはＧＶＨＤを引き起こすことなく血液悪性腫瘍を排除し、同種拒絶反応を回避するためのＣＡＲ改変ウイルス特異的Ｔ細胞（ＣＡＲ－ＶＳＴ）アプローチを開発した。
本開示は移植片拒絶から既製の細胞療法を含む同種組織を保護するために、又はＧＶＨＤを治療するために、同種反応性Ｔ細胞を排除するための戦略を提供する。
ＣＤ３０は、同種反応性Ｔ細胞のマーカーとして同定されており、したがって、本発明者らはＣＤ３０（ＣＤ３０．ＣＡＲ）に対するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように治療用Ｔ細胞を操作することによってそれらを標的とした。ＣＤ３０．ＣＡＲ発現ＶＳＴは、レシピエント対象における同種反応性免疫応答を低減するために、同種反応性治療を行う方法において使用することができる。
同種Ｔ細胞をＨＬＡミスマッチレシピエントに投与することは、Ｔ細胞の一部が本質的に同種反応性を有するので、ＧＶＨＤなどの同種反応性免疫応答のリスクを有する。本発明者らはＣＤ３０．ＣＡＲを発現するためのプラットフォーム細胞としてウイルス特異的Ｔ細胞（ＶＳＴ）を使用したが、これは同種異系レシピエントにおいてＧＶＨＤをまれに引き起こすことが示されているためであり、これはおそらく、それらの制限されたＴＣＲレパートリーの結果である。特に、エプスタイン－バーウイルス特異的Ｔ細胞（ＥＢＶＳＴ）は、ＧＶＨＤの証拠なしに３００人を超える同種レシピエントに投与されている。
さらに、ＣＤ３０．ＣＡＲ発現ＶＳＴはそれ自体、レシピエントにおける同種反応性Ｔ細胞による拒絶から保護され、したがって、例えば、ＣＤ３０＋癌の治療のための既製の療法として直接使用することができる。
したがって、ＣＤ３０．ＣＡＲ ＶＳＴは（ｉ）同種異系宿主において誘発する同種反応性Ｔ細胞を排除し、（ｉｉ）ＧＶＨＤを引き起こすことなく、ＣＤ３０陽性癌を排除するために必要な活性を伴って十分な時間持続する。
ＣＤ３０．ＣＡＲ発現ＶＳＴはまた、例えば、ＣＤ３０以外のさらなる標的抗原に特異的なＣＡＲを発現するように操作することによって、さらなる標的抗原を標的とするように操作することができる。そのような細胞は標的抗原を発現する細胞を死滅させることができ、ＣＤ３０発現同種Ｔ細胞を排除することもできるので、関連する標的抗原を発現する癌などの治療のための既製の治療法として有用である。
ウイルス特異的免疫細胞
本開示は、ウイルス特異的免疫細胞、特にエプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）特異的免疫細胞に関する。細胞は、本明細書において単数形（すなわち、「ａ／細胞」）で言及される場合、そのような細胞の複数／集団も企図されることが理解されよう。
本明細書で用いられる「ウイルス特異的免疫細胞」は、ウイルスに特異的な免疫細胞を指す。ウイルス特異的免疫細胞はウイルスの抗原のペプチドを認識することができる受容体（好ましくはＴ細胞受容体）を発現／含む（例えば、ＭＨＣ分子によって提示される場合）。ウイルス特異的免疫細胞は、そのような抗原受容体をコードする内因性核酸の発現の結果として、又はそのような受容体を発現するように操作された結果として、そのような受容体を発現／含むことができる。ウイルス特異的免疫細胞は、好ましくはウイルスの抗原のペプチドに特異的なＴＣＲを発現／含む。
免疫細胞は造血起源の細胞、例えば、好中球、好酸球、好塩基球、樹状細胞、リンパ球、又は単球であり得る。リンパ球は例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、もしくは先天性リンパ系細胞（ＩＬＣ）、又はそれらの前駆体であり得る。免疫細胞は例えば、ＣＤ３ポリペプチド（例えば、ＣＤ３γ ＣＤ３ε ＣＤ３ζ又はＣＤ３δ）、ＴＣＲポリペプチド（ＴＣＲα又はＴＣＲβ）、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４又はＣＤ８を発現し得る。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、例えば、ＣＤ３＋ Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋ Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋ Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、Ｔヘルパー細胞（ＴＨ細胞）である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は細胞傷害性Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ））である。
ウイルス特異的Ｔ細胞は、Ｔ細胞は、特異的であるウイルス抗原に応答して、又はウイルス／抗原を含む／発現する細胞に応答して、Ｔ細胞の特定の機能的特性を示し得る。いくつかの実施形態では、特性は、エフェクターＴ細胞、例えば、細胞傷害性Ｔ細胞に関連する機能特性である。
いくつかの実施形態において、ウイルス固有のＴセルは以下の特性のうちの１つ以上を表示することができる。Ｔセルは、固有であるウイルス／ウイルス抗原を含む／表現するセルに対するサイトアティックス；拡散、ＩＦＮγの表現、ＣＤ１０７ａの表現、ＩＬ－２の表現、ＴＮＦαの表現、パーフォリンの表現、グランザイムの表現、グラニュリジンの表現、及び／又はＦＡＳのリガンド（ＦＡＳＬ）の表示これはＴセルは、固有であるウイルス／ウイルス抗原との刺激に反応する場合、又はＴセルは、固有であるウイルス／ウイルス抗原を含む／表現するセルに対するエクスポージャーに対応する場合である。
ウイルス特異的Ｔ細胞は、適切なＭＨＣ分子によって提示された場合に、Ｔ細胞は、特異的であるウイルス抗原のペプチドを認識することができるＴＣＲを発現／含む。ウイルス特異的Ｔ細胞は、ＣＤ４＋ Ｔ細胞及び／又はＣＤ８＋ Ｔ細胞であり得る。
ウイルス特異的免疫細胞は、特異的であるウイルスは、任意のウイルスであり得る。例えば、ウイルスは、ｄｓＤＮＡウイルス（例えば、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス）、ｓｓＲＮＡウイルス（例えば、パルボウイルス）、ｄｓＲＮＡウイルス（例えば、レオウイルス）、（＋）ｓｓＲＮＡウイルス（例えば、ピコルナウイルス、トガウイルス）、（－）ｓｓＲＮＡウイルス（例えば、オルトミクソウイルス、ラブドウイルス）、ｓｓＲＮＡ－ＲＴウイルス（例えば、レトロウイルス）又はｄｓＤＮＡ－ＲＴウイルス（例えば、ヘパドナウイルス）であり得る。特に、本開示は、アデノウイルス科、ヘルペスウイルス科、パピローマウイルス科、ポリオマウイルス科、ポックスウイルス科、ヘパドナウイルス科、パルボウイルス科、アストロウイルス科、カリシウイルス科、ピコルナウイルス科、コロナウイルス科、コロナウイルス科、フラビウイルス科、トガウイルス科、ヘペウイルス科、レトロウイルス科、オルトミクソウイルス科、アレナウイルス科、ブニヤウイルス科、フィロウイルス科、パラミクソウイルス科、ラブドウイルス科及びレオウイルス科のウイルスを企図する。いくつかの実施形態では、ウイルスは、エプスタインバーウイルス、アデノウイルス、単純ヘルペス１型ウイルス、単純ヘルペス２型ウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、ヒトサイトメガロウイルス、ヒトヘルペスウイルス８型、ヒトパピローマウイルス、ＢＫウイルス、ＪＣウイルス、天然痘、Ｂ型肝炎ウイルス、パルボウイルスＢ１９、 ヒトアストロウイルス、ノーウォークウイルス、コクサッキーウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、ポリオウイルス、ライノウイルス、重症急性呼吸器症候群ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、黄熱ウイルス、デングウイルス、西ナイルウイルス、ＴＢＥウイルス、風疹ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、インフルエンザウイルス、ラッサウイルス、クリミア－コンゴ出血熱ウイルス、ハンタンウイルス、エボラウイルス、マールブルグウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、パラインフルエンザウイルス、ピコルナウイルス、呼吸同期ウイルス、狂犬病ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルス、ロタウイルス、オービウイルス、コルチウイルス、及び、バンナウイルスから選択される。
いくつかの実施形態では、ウイルスは、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、アデノウイルス、サイトメガロビウス（ＣＭＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、又は単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）から選択される。
いくつかの実施形態では、ウイルス特異的免疫細胞は、例えば、エプスタイン－バーウイルス（ＥＢＶ）、アデノウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、又は単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）から選択されるウイルスのペプチド／ポリペプチドに特異的であり得る。
ウイルスの抗原に特異的なＴ細胞は、本明細書においてウイルス特異的Ｔ細胞（ＶＳＴ）と称され得る。特定のウイルスの抗原に特異的なＴ細胞は関連するウイルスに特異的であると記載され得る；例えば、ＥＢＶの抗原に特異的なＴ細胞は、ＥＢＶ特異的Ｔ細胞、又は「ＥＢＶＳＴ」と称され得る。
したがって、いくつかの実施形態では、ウイルス特異的免疫細胞は、エプスタイン・バーウイルス特異的Ｔ細胞（ＥＢＶＳＴ）、アデノウイルス特異的Ｔ細胞（ＡｄＶＳＴ）、サイトメガロウイルス特異的Ｔ細胞（ＣＭＶＳＴ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶＳＴ）、インフルエンザウイルス特異的Ｔ細胞、麻疹ウイルス特異的Ｔ細胞、Ｂ型肝炎ウイルス特異的Ｔ細胞（ＨＢＶＳＴ）、Ｃ型肝炎ウイルス特異的Ｔ細胞（ＨＣＶＳＴ）、ヒト免疫不全ウイルス特異的Ｔ細胞（ＨＩＶＳＴ）、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス特異的Ｔ細胞（ＬＣＭＶＳＴ）、又は単純ヘルペスウイルス特異的Ｔ細胞（ＨＳＶＳＴ）である。
いくつかの好ましい実施形態では、ウイルス特異的免疫細胞は、ＥＢＶ抗原のペプチド／ポリペプチドに特異的である。好ましい実施形態では、ウイルス特異的免疫細胞は、エプスタイン・バーウイルス特異的Ｔ細胞（ＥＢＶＳＴ）である。
ＥＢＶウイルスについては、例えば、Ｓｔａｎｆｉｅｌｄ ａｎｄ Ｌｕｆｔｉｑ、Ｆ１０００Ｒｅｓに記載されている。（２０１７）６：３８６及びＯｄｕｍａｄｅら、Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｒｅｖ（２０１１） ２４（１）：１９３－２０９を参照されたい。
ＥＢＶは、ウイルスタンパク質ＢＭＦＲ２のβ１インテグリンへの結合、及びウイルスタンパク質ｇＨ／ｇＬのインテグリンａｖβ６及びａｖβ８との結合を介して上皮細胞に感染する。ＥＢＶは、ウイルス糖タンパク質ｇｐ３５０とＣＤ２１及び／又はＣＤ３５との相互作用、続いてウイルスｇｐ４２とＭＨＣクラスＩＩとの相互作用を介してＢ細胞に感染する。これらの相互作用はウイルスエンベロープと細胞膜との融合を誘発し、ウイルスが細胞に入ることを可能にする。いったん内部に入ると、ウイルスカプシドは溶解し、ウイルスゲノムは核に輸送される。
ＥＢＶは、潜伏性及び溶解性の２つの複製様式を有する。潜伏サイクルは、ビリオンの産生をもたらさず、Ｂ細胞及び上皮細胞において起こり得る。ＥＢＶゲノム環状ＤＮＡはエピソームとして細胞核内に存在し、宿主細胞のＤＮＡポリメラーゼによってコピーされる。潜伏期では、ＥＢＶ遺伝子の一部のみが発現され、潜伏期プログラムとして知られる３つの異なるパターンのうちの１つで、ウイルスタンパク質及びＲＮＡの別個のセットを産生する。潜伏サイクルは例えば、Ａｍｏｎ ａｎｄ Ｆａｒｒｅｌｌ，Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（２００４）１５（３）：１４９－５６に記載されており、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
ＥＢＮＡ１タンパク質及び非コードＲＮＡ ＥＢＥＲは、潜伏プログラムＩ～ＩＩＩの各々において発現される。潜伏プログラムＩＩ及びＩＩＩはＥＢＮＡＬＰ、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２Ａ及びＬＭＰ２Ｂタンパク質の発現をさらに含み、潜伏プログラムＩＩＩは、ＥＢＮＡ２、ＥＢＮＡ３Ａ、ＥＢＮＡ３Ｂ及びＥＢＮＡ３Ｃの発現をさらに含む。
ＥＢＮＡ１は多機能性であり、ウイルスプロモーターの正及び負の調節を介して、遺伝子調節、染色体外複製、及びＥＢＶエピソームゲノムの維持において役割を有する（Ｄｕｅｌｌｍａｎら，Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．（２００９）；９０（Ｐｔ９）：２２５１－２２５９）。ＥＢＮＡ２は潜在的ウイルス転写の調節に関与し、ＥＢＶに感染した細胞の不死化に寄与する（Ｋｅｍｐｋｅｓ ａｎｄ Ｌｉｎｇ、Ｃｕｒｒ Ｔｏｐ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１５）３９１：３５－５９）。ＥＢＮＡ－ＬＰは天然Ｂ細胞の形質転換に必要であり、ウイルス複製のための転写因子を動員する（Ｓｚｙｍｕｌａら，ＰＬｏＳ Ｐａｔｈｏｇ．（２０１８）；１４（２）：ｅ１００６８９０）。ＥＢＮＡ３Ａ，３Ｂ及び３Ｃは、ＲＢＰＪと相互作用して遺伝子発現に影響を与え、感染細胞の生存及び増殖に寄与する（Ｗａｎｇら，Ｊ Ｖｉｒｏｌ．（２０１６）９０（６）：２９０６－２９１９）。ＬＭＰ１は、Ｂ細胞活性化に関与する遺伝子の発現を調節する（Ｃｈａｎｇら，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｓｃｉ．（２００３） １０（５）：４９０－５０４）。ＬＭＰ２Ａ及びＬＭＰ２Ｂは、活性化されたＢ細胞受容体を模倣することによって正常なＢ細胞シグナル伝達を阻害する（Ｐｏｒｔｉｓ ａｎｄ Ｌｏｎｇｎｅｃｋｅｒ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ（２００４）２３（５３）：８６１９－８６２８）。ＥＢＥＲは宿主細胞タンパク質とリボ核タンパク質複合体を形成し、細胞形質転換において役割を有することが提案されている。
潜伏サイクルは、Ｂ細胞における潜伏プログラムＩ～ＩＩＩのいずれかに従って進行することができ、通常、ＩＩＩ～ＩＩ～Ｉに進行する。休止状態のナイーブＢ細胞に感染すると、ＥＢＶは、潜伏プログラムＩＩＩに入る。潜伏期ＩＩＩ遺伝子の発現はＢ細胞を活性化し、Ｂ細胞は増殖性芽球となる。次いで、ＥＢＶは、典型的には発現を、記憶Ｂ細胞への芽球の分化を引き起こす遺伝子のサブセットに制限することによって、潜伏期ＩＩに進行する。遺伝子発現をさらに制限すると、ＥＢＶは潜伏期Ｉに入る。ＥＢＮＡ１発現は、記憶Ｂ細胞が分裂するときにＥＢＶが複製することを可能にする。上皮細胞では、潜伏期ＩＩのみが起こる。
一次感染では、ＥＢＶは口腔咽頭上皮細胞において複製し、Ｂリンパ球において潜伏期ＩＩＩ、ＩＩ、及びＩ感染を確立する。Ｂリンパ球のＥＢＶ潜伏感染は、ウイルスの存続、上皮細胞におけるその後の複製、及び唾液中への感染性ウイルスの放出に必要である。Ｂリンパ球のＥＢＶ潜伏期ＩＩＩ及びＩＩ感染、口腔上皮細胞の潜伏期ＩＩ感染、ならびにＮＫ細胞又はＴ細胞の潜伏期ＩＩ感染は、均一なＥＢＶゲノム存在及び遺伝子発現によって特徴付けられる悪性腫瘍をもたらし得る。
Ｂ細胞中の潜伏性ＥＢＶは、再活性化されて、溶解性複製に切り替えることができる。溶菌サイクルは感染性ビリオンの産生をもたらし、Ｂ細胞及び上皮細胞において起こり得、例えば、Ｋｅｎｎｅｙ、Ａｒｖｉｎら，Ｈｕｍａｎ Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓｅｓ：Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ；Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ（２００７）の第２５章に概説されており、これはその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
溶解性複製は、ＥＢＶゲノムが線状であることを必要とする。潜在的ＥＢＶゲノムはエピソームであり、したがって、溶解性再活性化のために線状化されなければならない。Ｂ細胞では、溶菌性複製は通常、潜伏期からの再活性化後にのみ起こる。
ＢＺＦＬ１及びＢＲＬＦ１などの即初期溶菌遺伝子産物は、トランスアクチベーターとして作用し、それら自体の発現及び後期溶菌サイクル遺伝子の発現を増強する。
初期溶菌遺伝子産物は、ウイルス複製（例えば、ＥＢＶ ＤＮＡポリメラーゼ触媒成分ＢＡＬＦ５；ＤＮＡポリメラーゼプロセッシビティー因子ＢＭＲＦ１、ＤＮＡ結合タンパク質ＢＡＬＦ２、ヘリカーゼＢＢＬＦ４、プライマーゼＢＳＬＦ１、及びプライマーゼ関連タンパク質ＢＢＬＦ２／３）及びデオキシヌクレオチド代謝（例えば、チミジンキナーゼＢＸＬＦ１、ｄＵＴＰアーゼＢＯＲＦ２）において役割を有する。他の初期溶菌遺伝子産物は転写因子（例えば、ＢＭＲＦ１、ＢＲＲＦ１）に作用し、ＲＮＡ安定性及びプロセシング（例えば、ＢＭＬＦ１）において役割を有するか、又は免疫回避（例えば、アポトーシスを阻害するＢＨＲＦ１）に関与する。
後期溶解遺伝子産物は、伝統的に、ウイルス複製の開始後に発現されるものとして分類される。それらは、一般に、ヌクレオカプシドタンパク質などのビリオンの構造成分、ならびにＥＢＶ結合及び融合を媒介する糖タンパク質（例えば、ｇｐ３５０／２２０、ｇｐ８５、ｇｐ４２、ｇｐ２５）をコードする。他の後期溶解遺伝子産物は免疫回避において役割を有する；ＢＣＬＦ１は、ＩＬ－１０のウイルス相同体をコードし、ＢＡＬＦ１は、抗アポトーシスタンパク質Ｂｃｌ２と相同性を有するタンパク質をコードする。
本明細書で用いられる「ＥＢＶ特異的免疫細胞」は、エプスタイン－バーウイルス（ＥＢＶ）に特異的な免疫細胞を指す。ＥＢＶ特異的免疫細胞はＥＢＶの抗原のペプチドを認識することができる受容体（好ましくはＴ細胞受容体）を発現／含む（例えば、ＭＨＣ分子によって提示される場合）。ＥＢＶ特異的免疫細胞は、好ましくはＭＨＣクラスＩによって提示されるＥＢＶ抗原のペプチドに特異的なＴＣＲを発現／含む。
いくつかの実施形態において、ＥＢＶ特異的免疫細胞はＴ細胞、例えば、ＣＤ３＋ Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋ Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋ Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は、Ｔヘルパー細胞（ＴＨ細胞）である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞は細胞傷害性Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ））である。
ＥＢＶ特異的Ｔ細胞は、Ｔ細胞が特異的であるＥＢＶ抗原に応答して、又はＥＢＶを含む／発現する細胞（例えば、ＥＢＶに感染した細胞）もしくは関連するＥＢＶ抗原に応答して、Ｔ細胞の特定の機能的特性を示し得る。いくつかの実施形態では、特性は、エフェクターＴ細胞、例えば、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）に関連する機能的特性である。
いくつかの実施形態において、ＥＢＶ特殊なＴセルはＴセルが固有であるＥＢＶ／ＥＢＶ抗原を含む／表現するセルに対するサイトアティックスを表示する可能性がある；拡散、ＩＦＮγの表現、ＣＤ１０７ａの表現、ＩＬ－２の表現、ＴＮＦαの表現、ｐｅｒｆｏｒｉｎの表現、グランザイムの表現、グラニュリジンの表現、及び／又はＦＡＳのリガンド（ＦＡＳＬ）の表現；Ｔセルが固有であるＥＢＶ／ＥＢＶ抗原との刺激に反応する、又はＴセルが固有であるＥＢＶ／ＥＢＶ抗原を含む／表現するセルに対する暴露に応じて、ＥＢＶ特殊なＴセルは１つ以上の特性を表示する可能性がある。
ＥＢＶ特異的Ｔ細胞は、好ましくは適切なＭＨＣ分子によって提示された場合に、Ｔ細胞が特異的であるＥＢＶ抗原のペプチドを認識することができるＴＣＲを発現／含む。ＥＢＶ特異的Ｔ細胞は、ＣＤ４＋ Ｔ細胞及び／又はＣＤ８＋ Ｔ細胞であり得る。
ＥＢＶに特異的な免疫細胞は、任意のＥＢＶ抗原、例えば、本明細書に記載のＥＢＶ抗原に特異的であり得る。ＥＢＶに特異的な免疫細胞の集団、又はＥＢＶに特異的な複数の免疫細胞を含む組成物は、１つ又は複数のＥＢＶ抗原に特異的な免疫細胞を含み得る。
いくつかの実施形態では、ＥＢＶ抗原は、ＥＢＶ潜伏抗原、例えば、ＩＩＩ型潜伏抗原（例えば、ＥＢＮＡ１、ＥＢＮＡ－ＬＰ、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２Ａ、ＬＭＰ２Ｂ、ＢＡＲＦ１、ＥＢＮＡ２、ＥＢＮＡ３Ａ、ＥＢＮＡ３Ｂ又はＥＢＮＡ３Ｃ）、ＩＩ型潜伏抗原（例えば、ＥＢＮＡ１、ＥＢＮＡ－ＬＰ、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２Ａ、ＬＭＰ２Ｂ又はＢＡＲＦ１）、又はＩ型潜伏抗原（例えば、ＥＢＮＡ１又はＢＡＲＦ１）である。いくつかの実施形態において、ＥＢＶ抗原は、ＥＢＶ溶解抗原、例えば、即時早期溶解抗原（例えば、ＢＺＬＦ１、ＢＲＬＦ１又はＢＭＲＦ１）、早期溶解抗原（例えば、ＢＭＬＦ１、ＢＭＲＦ１、ＢＸＬＦ１、ＢＡＬＦ１、ＢＡＬＦ２、ＢＡＲＦ１、ＢＧＬＦ５、ＢＨＲＦ１、ＢＮＬＦ２Ａ、ＢＮＬＦ２Ａ、ＢＮＬＦ２Ｂ、ＢＨＬＦ１、ＢＬＬＦ２、ＢＫＲＦ４、ＢＭＲＦ２、ＦＵ又はＥＢＮＡ１－ＦＵＫ）、又は後期溶解抗原（例えば、ＢＡＬＦ４、ＢＩＬＦ１、ＢＩＬＦ２、ＢＮＦＲ１、ＢＶＲＦ２、ＢＡＬＦ３、ＢＡＬＦ５、ＢＤＬＦ３又はｇｐ３５０）である。
キメラ抗原受容体
本開示は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む／発現するウイルス特異的免疫細胞に関する。
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、抗原結合機能及びＴ細胞活性化機能の両方を提供する組換え受容体分子である。ＣＡＲ構造及び工学は例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＤｏｔｔｉら，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ（２０１４）２５７（１）に概説されている。
ＣＡＲは、膜貫通ドメインを介してシグナル伝達ドメインに連結された抗原結合ドメインを含む。任意のヒンジ又はスペーサードメインは、抗原結合ドメインと膜貫通ドメインとの間の分離を提供することができ、柔軟なリンカーとして作用することができる。細胞によって発現される場合、抗原結合ドメインは細胞外空間に提供され、シグナル伝達ドメインは細胞内にある。
抗原結合ドメインは、ＣＡＲは、特異的である標的抗原への結合を媒介する。ＣＡＲの抗原結合ドメインは、ＣＡＲは、標的とする抗原に特異的である抗体の抗原結合領域に基づき得る。例えば、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、標的抗原に特異的に結合する抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を含み得る。ＣＡＲの抗原結合ドメインは、標的抗原に特異的に結合する抗体の軽鎖及び重鎖可変領域アミノ酸配列を含むか、又はそれからなり得る。抗原結合ドメインは、抗体の軽鎖及び重鎖可変領域アミノ酸配列の配列を含む単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）として提供され得る。ＣＡＲの抗原結合ドメインはリガンド：受容体結合などの他のタンパク質：タンパク質相互作用に基づいて抗原を標的とすることができ、例えば、ＩＬ－１３Ｒα２標的ＣＡＲはＩＬ－１３に基づく抗原結合ドメインを使用して開発されている（例えば、Ｋａｈｌｏｎら ２００４ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６４（２４）：９１６０－９１６６を参照されたい）。
膜貫通ドメインは、抗原結合ドメインとＣＡＲのシグナル伝達ドメインとの間に提供される。膜貫通ドメインはＣＡＲを発現する細胞の細胞膜にＣＡＲを固定し、抗原結合ドメインを細胞外空間に、シグナル伝達ドメインを細胞内に提供する。ＣＡＲの膜貫通ドメインは細胞膜結合タンパク質（例えば、ＣＤ２８、ＣＤ８など）の膜貫通領域配列に由来し得る。
本明細書を通して、参照ポリペプチド／ドメイン／アミノ酸配列「由来する」ポリペプチド、ドメイン及びアミノ酸配列は、参照ポリペプチド／ドメイン／アミノ酸配列のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、好ましくは７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有する。参照ポリペプチド／ドメイン／アミノ酸配列「由来する」ポリペプチド、ドメイン及びアミノ酸配列は、好ましくは参照ポリペプチド／ドメイン／アミノ酸配列の機能的及び／又は構造的特性を保持する。
例として、ＣＤ２８の細胞内ドメインに由来するアミノ酸配列は例えば、配列ＩＤ番号２６に示されるように、ＣＤ２８の細胞内ドメインに対して６０％、好ましくは７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。さらに、ＣＤ２８の細胞内ドメインに由来するアミノ酸配列は好ましくは配列ＩＤ番号２６のアミノ酸配列の機能的特性、すなわち、ＣＤ２８媒介性シグナル伝達を活性化する能力を保持する。
所与のポリペプチド又はそのドメインのアミノ酸配列は、当業者に公知のデータベースから検索され得るか、又は検索された核酸配列から決定され得る。そのようなデータベースには、ＧｅｎＢａｎｋ、ＥＭＢＬ、及びＵｎｉＰｒｏｔが含まれる。
シグナル伝達ドメインは、免疫細胞機能の活性化に必要なアミノ酸配列を含む。ＣＡＲシグナル伝達ドメインは、ＣＡＲ発現細胞のリン酸化及び活性化のための免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を提供する、ＣＤ３－ζの細胞内ドメインのアミノ酸配列を含み得る。他のＩＴＡＭ含有タンパク質の配列を含むシグナル伝達ドメイン、例えば、ＦｃγＲＩのＩＴＡＭ含有領域を含むドメインも、ＣＡＲにおいて使用されている（Ｈａｙｎｅｓら，２００１ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６６（１）：１８２－１８７）。ＣＤ３－ζの細胞内ドメインに由来するシグナル伝達ドメインを含むＣＡＲは、第１世代ＣＡＲと呼ばれることが多い。
ＣＡＲのシグナル伝達ドメインは典型的には免疫細胞活性化及びエフェクター機能を増強するために必要な共刺激シグナルを提供するための共刺激タンパク質（例えば、ＣＤ２８、４－１ＢＢなど）のシグナル伝達ドメインも含む。追加の共刺激配列を含むシグナル伝達ドメインを有するＣＡＲは、第２世代ＣＡＲと呼ばれることが多い。いくつかの場合において、ＣＡＲは、異なる細胞内シグナル伝達経路の共刺激を提供するように操作される。例えば、ＣＤ２８共刺激はホスファチジルイノシトール３－キナーゼ（Ｐ１３Ｋ）経路を優先的に活性化するが、４－１ＢＢ共刺激はＴＮＦ受容体関連因子（ＴＲＡＦ）アダプタータンパク質を介するシグナル伝達を誘発する。したがって、ＣＡＲのシグナル伝達ドメインは、時には１つ以上の共刺激分子のシグナル伝達ドメインに由来する共刺激配列を含有する。複数の共刺激配列を有するシグナル伝達ドメインを含むＣＡＲは、第３世代ＣＡＲと呼ばれることが多い。
任意のヒンジ又はスペーサー領域は、抗原結合ドメインと膜貫通ドメインとの間の分離を提供することができ、柔軟なリンカーとして作用することができる。そのような領域は、例えば、ＩｇＧのＣＨ１－ＣＨ２ヒンジ領域に由来し得る、結合部分が異なる方向に配向することを可能にする可撓性ドメインであり得るか、又はそれを含み得る。
特定の標的抗原に特異的なＣＡＲを発現するように操作することによって、免疫細胞（典型的にはＴ細胞だけでなく、ＮＫ細胞などの他の免疫細胞）は標的抗原を発現する細胞を死滅させるように向けることができる。ＣＡＲ発現Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）の、それが特異的である標的抗原への結合は、細胞内シグナル伝達、及びその結果としてのＴ細胞の活性化を誘発する。活性化されたＣＡＲ－Ｔ細胞は分裂し、因子を産生するように刺激され、標的抗原を発現する細胞の死滅をもたらす。
抗原結合ドメイン
「抗原結合ドメイン」は、標的抗原に結合することができるドメインを指す。標的抗原は例えば、ペプチド／ポリペプチド、糖タンパク質、リポタンパク質、グリカン、糖脂質、脂質、又はそれらの断片であってもよい。本開示による抗原結合ドメインは標的抗原又は別の標的抗原結合分子（例えば、標的抗原結合ペプチド又は核酸アプタマー、リガンド又は他の分子）に対する抗体／抗体断片（例えば、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、単鎖Ｆａｂ（ｓｃＦａｂ）、単一ドメイン抗体（例えば、ＶｈＨ）など）に由来し得る。
いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、標的抗原に特異的に結合することができる抗体の抗体重鎖可変領域（ＶＨ）及び抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態において、標的抗原に結合することができるドメインは抗原結合ペプチド／ポリペプチド、例えば、ペプチドアプタマー、チオレドキシン、モノボディ、アンチカリン、クニツドメイン、アビマー、ノッチン、フィノマー、アトリマー、ＤＡＲピン、アフィボディ、ナノボディ（すなわち、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ））、アフィリン、アファジロ反復タンパク質（ＡｒｍＲＰ）、ＯＢｏｄｙ、又はフィブロネクチン－レビュー済み、例えば、Ｒｅｖｅｒｄａｔｔｏら、Ｃｕｒｒ Ｔｏｐ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ．２０１５；１５（１２）：１０８２－１１０１に含まれ、その全体が参照により本明細書に組み込まれている（例えば、Ｂｏｅｒｓｍａら、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ（２０１１）２８６：４１２７３－８５及びＥｍａｎｕｅｌら、Ｍａｂｓ（２０１１）３：３８－４８も参照のこと）。
本開示の抗原結合ドメインは、一般に、標的抗原に特異的に結合することができる抗体のＶＨ及びＶＬを含む。抗体は一般に、６つの相補性決定領域ＣＤＲ；重鎖可変領域（ＶＨ）に３つ：ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２及びＨＣ－ＣＤＲ３、ならびに軽鎖可変領域（ＶＬ）に３つ：ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む。６つのＣＤＲは一緒になって、標的抗原に結合する抗体の一部である抗体のパラトープを規定する。ＶＨ領域及びＶＬ領域は各ＣＤＲの両側にフレームワーク領域（ＦＲ）を含み、これはＣＤＲの足場を提供する。Ｎ末端からＣ末端までのＶＨは以下の構造を含む：Ｎ期－［ＨＣ－ＦＲ１］－［ＨＣ－ＣＤＲ１］－［ＨＣ－ＦＲ２］－［ＨＣ－ＣＤＲ２］－［ＨＣ－ＦＲ３］－［ＨＣ－ＣＤＲ３］－［ＨＣ－ＦＲ４］－Ｃ；及びＶＬは次の構造を含む：Ｎ期－［ＬＣ－ＦＲ１］－［ＬＣ－ＣＤＲ１］－［ＬＣ－ＦＲ２］－［ＬＣ－ＣＤＲ２］－［ＬＣ－ＦＲ３］－［ＬＣ－ＣＤＲ３］－［ＬＣ－ＦＲ４］－Ｃ。
ＶＨ及びＶＬ配列は、抗原結合ドメインがＣＡＲの他のドメインに連結され得るという条件で、任意の適切なフォーマットで提供され得る。本開示の抗原結合ドメインに関連して企図されるフォーマットには、Ｃａｒｔｅｒ，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．。Ｉｍｍｕｎｏｌ （２００６），６：３４３－３５７、例えば、ｓｃＦｖ、ｄｓＦＶ、（ｓｃＦｖ）２ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、Ｆａｂ、ミニボディ、及びＦ（ａｂ）２フォーマット。
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、標的抗原に結合することができる抗体／抗体断片のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、標的抗原に結合することができる抗体／抗体断片のＶＨ領域及びＶＬ領域を含む。抗体のＶＨ及びＶＬから構成される部分はまた、本明細書において可変断片（Ｆｖ）と称され得る。ＶＨ及びＶＬは同じポリペプチド鎖上に提供され、リンカー配列を介して連結され得る；そのような部分は単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）と呼ばれる。ｓｃＦｖの調製に適したリンカー配列は当業者に公知であり、セリン残基及びグリシン残基を含み得る。
いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、標的抗原に結合することができるＦｖを含むか、又はそれからなる。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、標的抗原に結合することができるｓｃＦｖを含むか、又はそれからなる。
抗原結合ドメイン（したがってＣＡＲ）は、特異的である標的抗原が任意の標的抗原であり得る。いくつかの実施形態では、標的抗原がその発現／活性、又はその上方制御された発現／活性が疾患又は障害（例えば、癌、感染症又は自己免疫疾患）と正に関連する抗原である。標的抗原は、好ましくは標的抗原を発現する細胞の細胞表面で発現される。ＣＡＲは、ＣＡＲが特異的抗原結合ドメインを含む標的抗原を発現する細胞／組織に対する、ＣＡＲを発現する細胞のエフェクター活性を指向することが理解されるのであろう。
いくつかの実施形態では、標的抗原は癌細胞抗原であり得る。癌細胞抗原は、癌細胞によって発現又は過剰発現される抗原である。癌細胞抗原は、任意のペプチド／ポリペプチド、糖タンパク質、リポタンパク質、グリカン、糖脂質、脂質、又はそれらの断片であり得る。癌細胞抗原の発現は癌と関連し得る。癌細胞抗原は癌細胞によって異常に発現され得る（例えば、癌細胞抗原は、異常な局在化を伴って発現され得る）か、又は癌細胞によって異常な構造を伴って発現され得る。癌細胞抗原は、免疫応答を誘発することが可能であり得る。いくつかの実施形態において、抗原は癌細胞の細胞表面で発現される（すなわち、癌細胞抗原は、癌細胞表面抗原である）。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗原結合分子によって結合される抗原の一部は癌細胞の外表面上に提示される（すなわち、細胞外である）。癌細胞抗原は、癌関連抗原であり得る。いくつかの実施形態において、癌細胞抗原は、その発現は、癌の症状の開発、進行又は重症度に関連する抗原である。癌関連抗原は、癌の原因又は病理に関連し得るか、又は癌の結果として異常に発現され得る。いくつかの実施形態では、癌細胞抗原は、例えば、同等の非癌性細胞（例えば、同じ組織／細胞型に由来する非癌性細胞）による発現のレベルと比較して、癌の細胞によって発現が上方制御される（例えば、ＲＮＡ及び／又はタンパク質レベルで）抗原である。いくつかの実施形態では、癌関連抗原は、癌性細胞によって優先的に発現され得、比較可能な非癌性細胞（例えば、同じ組織／細胞型に由来する非癌性細胞）によって発現されない。いくつかの実施形態では、癌関連抗原は、変異型癌遺伝子又は変異型腫瘍抑制遺伝子の産物であってもよい。いくつかの実施形態では、癌関連抗原は、過剰発現細胞タンパク質、発癌性ウイルスによって産生される癌抗原、癌胎児性抗原、又は細胞表面糖脂質もしくは糖タンパク質の産物であり得る。
癌細胞抗原は、Ｚａｒｏｕｒ ＨＭ，ＤｅＬｅｏ Ａ，Ｆｉｎｎ ＯＪ，ら 腫瘍抗原のカテゴリー。Ｉｎ：Ｋｕｆｅ ＤＷ，Ｐｏｌｌｏｃｋ ＲＥ，Ｗｅｉｃｈｓｅｌｂａｕｍ ＲＲ，ら，ｅｄｉｔｏｒｓ．ホランドフレイがん医学。第６版。Ｈａｍｉｌｔｏｎ（ＯＮ）：ＢＣ Ｄｅｃｋｅｒ；２００３．。癌細胞抗原は、癌胎児性抗原：ＣＥＡ、未成熟ラミニン受容体、ＴＡＧ－７２；過剰発現タンパク質：ＢＩＮＧ－４、カルシウム活性化クロライドチャネル２、サイクリン－Ｂ１、９Ｄ７、ＥｐｈＡ３、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、テロメラーゼ、ＳＡＰ－１、サバイビン；癌精巣抗原：ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ、ＭＡＧＥ、ＳＡＧＥ、ＸＡＧＥ、ＣＴ９、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＲＡＭＥ、ＳＳＸ－２；系統制限抗原：ＭＡＲＴ１、Ｇｐ１００、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１／２、ＭＣ１Ｒ、前立腺特異的抗原；変異抗原：β－カテニン、ＢＲＣＡ１／２、ＣＤＫ４、ＣＭＬ６６、フィブロネクチン、ＭＡＲＴ－２、ｐ５３、翻訳が変化した抗原：ＭＵＣ１、イディオタイプ抗原： Ｉｇ、ＴＣＲ。他の癌細胞抗原としては、熱ショックタンパク質７０（ＨＳＰ７０）、熱ショックタンパク質９０（ＨＳＰ９０）、グルコース調節タンパク質７８（ＧＲＰ７８）、ビメンチン、ヌクレオリン、フェト－腺房膵臓タンパク質（ＦＡＰＰ）、アルカリホスファターゼ胎盤様２（ＡＬＰＰＬ－２）、シグレック－５、ストレス誘導リンパタンパク質１（ＳＴＩＰ１）、タンパク質チロシンキナーゼ７（ＰＴＫ７）、及びシクロフィリンＢが挙げられる。
いくつかの実施形態において、癌細胞抗原は、Ｚｈａｏ及びＣａｏ、Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌに記載される癌細胞抗原である。（２０１９）１０：２２５０（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。いくつかの実施形態では、癌細胞抗原は、ＣＤ３０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＲＯＲ１Ｒ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ３８、ＢＣＭＡ、メソテリン、ＥＧＦＲ、ＧＰＣ３、ＭＵＣ１、ＨＥＲ２、ＧＤ２、ＣＥＡ、ＥｐＣＡＭ、ＬｅＹ及びＰＳＣＡから選択される。
いくつかの実施形態では、癌細胞抗原は、血液悪性腫瘍の細胞によって発現される抗原である。いくつかの実施形態では、癌細胞抗原は、ＣＤ３０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＲＯＲ１Ｒ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ３８及びＢＣＭＡから選択される。
いくつかの実施形態では、癌細胞抗原は、固形腫瘍の細胞によって発現される抗原である。いくつかの実施形態では、癌細胞抗原は、メソテリン、ＥＧＦＲ、ＧＰＣ３、ＭＵＣ１、ＨＥＲ２、ＧＤ２、ＣＥＡ、ＥｐＣＡＭ、ＬｅＹ及びＰＳＣＡから選択される。
いくつかの実施形態では、癌細胞抗原は、ＣＤ１９である。ＣＤ１９はＢ細胞のマーカーであり、例えば、Ｂ細胞リンパ腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、及び慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）の治療のための有用な標的である（例えば、Ｗａｎｇら、Ｅｘｐ Ｈｅｍａｔｏｌ Ｏｎｃｏｌ．（２０１２）１：３６）。
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメイン（したがってＣＡＲ）は多重特異性である。「多重特異性」とは、抗原結合ドメインが１つ以上の標的への特異的結合を示すことを意味する。いくつかの実施形態において、抗原結合ドメインは、二重特異性抗原結合ドメインである。いくつかの実施形態では、抗原結合分子は、少なくとも２つの異なる抗原結合部分（すなわち、少なくとも２つの抗原結合部分、例えば、非同一のＶＨ及びＶＬを含む）を含む。多重特異性抗原結合ドメインの個々の抗原結合部分は、例えば、リンカー配列を介して連結され得る。
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、少なくとも２つの非同一の標的抗原に結合し、したがって少なくとも二重特異性である。「二重特異性」という用語は、抗原結合ドメインが少なくとも２つの異なる抗原決定基に特異的に結合することができることを意味する。いくつかの実施形態では、多重特異性抗原結合ドメイン／ＣＡＲの標的抗原の少なくとも１つはＣＤ３０である。
標的抗原の各々は、独立して、本明細書に記載の標的抗原であってもよい。いくつかの実施形態では、各標的抗原が独立して、本明細書に記載の癌細胞抗原である。
本開示による抗原結合ドメイン（例えば、多重特異性抗原結合ドメイン）は、抗原結合ドメインが特異的である標的に結合することができる抗原結合部分を含むことが理解されるのであろう。例えば、ＣＤ３０及びＣＤ３０以外の抗原に結合することができる抗原結合ドメインは、（ｉ）ＣＤ３０に結合することができる抗原結合部分、及び（ｉｉ）ＣＤ３０以外の標的抗原に結合することができる抗原結合部分を含み得る。
本開示の態様及び実施形態において、標的抗原はＣＤ３０である。したがって、本開示のいくつかの態様及び実施形態では、抗原結合ドメインはＣＤ３０結合ドメインである。
ＣＤ３０（ＴＮＦＲＳＦ８としても知られる）は、ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ２８９０８によって同定されるタンパク質である。ＣＤ３０は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーの１回通過Ｉ型膜貫通糖タンパク質である。ＣＤ３０の構造及び機能は例えば、ｖａｎ ｄｅｒ Ｗｅｙｄｅｎら，Ｂｌｏｏｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｊｏｕｒｎａｌ（２０１７）７：ｅ６０３及びＭｕｔａ ａｎｄ Ｐｏｄａｃｋ Ｉｍｍｕｎｏｌ．研究。（２０１３）５７（１－３）：１５１－８を参照されたい。
ヒトＴＮＦＲＳＦ８遺伝子によりコードされるｍＲＮＡの選択的スプライシングは、アイソフォーム１（「長」アイソフォーム；ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ２８９０８－１、ｖ１；配列ＩＤ番号：１）、アイソフォーム２（「細胞質」、「短」又は「Ｃ３０Ｖ」アイソフォーム、ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ２８９０８－２；配列ＩＤ番号：２）、及び配列ＩＤ番号：１の１～４６３位に対応するアミノ酸配列が欠損しているアイソフォーム３（ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ２８９０８－３；配列ＩＤ番号：３）の３つのアイソフォームを生じる。このアイソフォームは配列ＩＤ番号：１の１～１１１位及び４４６位に対応するアミノ酸配列が欠損している。配列ＩＤ番号１のＮ末端１８アミノ酸はシグナルペプチド（配列ＩＤ番号４）を形成し、それに続いて、３６７アミノ酸の細胞外ドメイン（配列ＩＤ番号１の位置１９～３８５、配列ＩＤ番号５に示される）、２１アミノ酸の膜貫通ドメイン（配列ＩＤ番号１の位置３８６～４０６、配列ＩＤ番号６に示される）、及び１８９アミノ酸の細胞質ドメイン（配列ＩＤ番号１の位置４０７～５９５、配列ＩＤ番号７に示される）が形成する。
本明細書において、「ＣＤ３０」は、任意の種由来のＣＤ３０を指し、任意の種由来のＣＤ３０アイソフォーム、断片、変異体又は相同体を含む。本明細書で用いられる場合、参照タンパク質の「断片」、「変異体」又は「相同体」は参照タンパク質（例えば、参照アイソフォーム）のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、好ましくは７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するものとして、場合により特徴付けられ得る。いくつかの実施形態では参照タンパク質の断片、変異体、アイソフォーム及びホモログは参照タンパク質によって実施される機能を実施する能力によって特徴付けられ得る。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３０は、哺乳動物（例えば、霊長類（アカゲザル、カニクイザル、又はヒト）及び／又はげっ歯類（例えば、ラット又はマウス）ＣＤ３０）由来である。好ましい実施形態では、ＣＤ３０は、ヒトＣＤ３０である。アイソフォーム、断片、変異体又はホモログは、任意選択で、所与の種、例えば、ヒト由来の未成熟又は成熟ＣＤ３０アイソフォームのアミノ酸配列に対して、少なくとも７０％、好ましくは８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するものとして特徴付けられ得る。ＣＤ３０の断片は、１０、２０、３０、４０、５０、１００、２００、３００、４００、５００又は５９０アミノ酸のうちの１つの最小長を有し得、１０、２０、３０、４０、５０、１００、２００、３００、４００、５００又は５９５アミノ酸のうちの１つの最大長を有し得る。
いくつかの実施形態において、ＣＤ３０は、配列ＩＤ番号１、２又は３に対して少なくとも７０％、好ましくは８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、ＣＤ３０は、配列ＩＤ番号５に対して少なくとも７０％、好ましくは８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３０の断片が配列ＩＤ番号５又は１９と少なくとも７０％、好ましくは８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。
本開示のＣＡＲのＣＤ３０結合ドメインは、好ましくはＣＤ３０又はその断片への特異的結合を示す。本開示のＣＡＲのＣＤ３０結合ドメインは、好ましくはＣＤ３０の細胞外ドメインへの特異的結合を示す。ＣＤ３０結合ドメインは抗ＣＤ３０抗体又は他のＣＤ３０結合剤、例えば、ＣＤ３０結合ペプチド又はＣＤ３０結合小分子に由来し得る。
ＣＤ３０結合ドメインは、抗ＣＤ３０抗体の抗原結合部分に由来し得る。
抗ＣＤ３０抗体には、ＨＲＳ３及びＨＲＳ４（例えば、Ｈｏｍｂａｃｈら、Ｓｃａｎｄ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９９８）４８（５）：４９７－５０１）、Ｓｃｈｌａｐｓｃｈｙら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ（２００４）１７（１２）：８４７－８６０、ＢｅｒＨ２（ＭＢＬ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｔ＃ Ｋ１４５－３、ＲＲＩＤ：ＡＢ＿５９０９７５）、ＳＧＮ－３０（例えば、Ｆｏｒｅｒｏ－Ｔｏｒｒｅｓら、Ｂｒ Ｊ Ｈａｅｍａｔｏｌ（２００９）１４６：１７１－９に記載されている）、ＭＤＸ－０６０（例えば、Ａｎｓｅｌｌら、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ（２００７）２５：２７６４－９に記載されている；５Ｆ１１、ｉｒａｔｕｍｕｍａｂとしても知られている）、ＭＤＸ－１４０１（例えば、Ｃａｒｄａｒｅｌｌｉら、Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． （２００９）１５（１０）：３３７６－８３に記載されている）及び、ＣＤ３０抗体（ＷＯ２０２０／０６８７６４Ａ１、ＷＯ２００３／０５９２８２Ａ２、ＷＯ２００６／０８９２３２Ａ２、ＷＯ２００７／０８４６７２Ａ２、ＷＯ２００７／０４６１６Ａ２、ＷＯ２００５／００１０３８Ａ２、ＵＳ２００７／１６６３０９Ａ１、ＵＳ２００７／２５８９８７Ａ１、ＷＯ ２００４／０１０９５７Ａ２及びＵＳ２００５／００９７６９Ａ１に記載されている。）が含まれる。
いくつかの実施形態では、本開示によるＣＤ３０結合ドメインが抗ＣＤ３０抗体のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本開示によるＣＤ３０結合ドメインが抗ＣＤ３０抗体のＶＨ及びＶＬ領域を含む。いくつかの実施形態では、本開示によるＣＤ３０結合ドメインが抗ＣＤ３０抗体のＶＨ領域及びＶＬ領域を含むｓｃＦｖを含む。
抗体ＣＤＲ及びＦＲを定義するためのいくつかの異なる慣例、例えば、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ （１９９１），Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）、及びＶＢＡＳＥ２は、Ｒｅｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ．、Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．（２００５）３３（ｓｕｐｐｌ １）Ｄ６７１－Ｄ６７４に記載されている。本明細書に記載される抗体のＶＨ領域及びＶＬ領域のＣＤＲ及びＦＲは、ＶＢＡＳＥ２に従って定義される。
いくつかの実施形態では、本開示の抗原結合ドメインは、以下を含む：
以下のＣＤＲを組み込んだＶＨ：
配列ＩＤ番号８のアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ１
配列ＩＤ番号９のアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２
配列ＩＤ番号１０のアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３、又はＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、もしくはＨＣ－ＣＤＲ３の１つもしくは複数における１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸で置換されているその変異体；
及び
以下のＣＤＲを組み込んだＶＬ：
配列ＩＤ番号１１のアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ１
配列ＩＤ番号１２のアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２
配列ＩＤ番号１３のアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３、又はＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、もしくはＬＣ－ＣＤＲ３の１つもしくは複数における１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸で置換されているその変異体。
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、以下を含む：
配列ＩＤ番号１４のアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなるＶＨ；
及び
配列ＩＤ番号１５のアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなるＶＬ。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３０結合ドメインが本明細書に記載のＶＨ配列及びＶＬ配列を含む単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含むか、又はそれからなり得る。ＶＨ配列及びＶＬ配列は、共有結合され得る。いくつかの実施形態では、ＶＨ及びＶＬ配列が可撓性リンカー配列、例えば、本明細書に記載の可撓性リンカー配列によって連結される。柔軟なリンカー配列は、ＶＨ配列及びＶＬ配列の末端に連結され得、それによって、ＶＨ配列及びＶＬ配列を連結する。いくつかの実施形態において、ＶＨ及びＶＬは、配列ＩＤ番号１６又は１７のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなるリンカー配列を介して連結される。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３０結合ドメインが配列ＩＤ番号１８のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。
いくつかの実施形態において、ＣＤ３０結合ドメインは、例えば、ＣＤ３０の細胞外ドメインにおいて、ＣＤ３０に結合することができる。いくつかの実施形態では、ＣＤ３０結合ドメインが抗体ＨＲＳ３によって結合されるＣＤ３０のエピトープに、例えば、配列ＩＤ番号１９に示される配列ＩＤ番号１に従って番号付けられたヒトＣＤ３０のアミノ酸位置１８５～３３５の領域内で結合することができる（Ｓｃｈｌａｐｓｃｈｙら，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ（２００４） １７（１２）：８４７－８６０、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。
いくつかの実施形態において、標的抗原はＣＤ１９である。したがって、本開示のいくつかの態様及び実施形態では、抗原結合ドメインはＣＤ１９結合ドメインである。
ＣＤ１９は、ＵｎｉＰｒｏｔ Ｐ１５３９１－１、ｖ６によって同定されるタンパク質である。本明細書において、「ＣＤ１９」は任意の種由来のＣＤ１９を指し、任意の種由来のＣＤ１９アイソフォーム（例えば、Ｐ１５３９１－２）、断片、変異体（変異体を含む）又は相同体を含む。
ＣＤ１９結合ドメインは、抗ＣＤ１９抗体の抗原結合部分に由来し得る。抗ＣＤ１９抗体には、例えば、Ｚｏｌａら，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９９１）６９：４１１－４２２に記載されているＦＭＣ６３が含まれる。
いくつかの実施形態では、本開示によるＣＤ１９結合ドメインは、抗ＣＤ１９抗体のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、本開示によるＣＤ１９結合ドメインは、抗ＣＤ１９抗体のＶＨ及びＶＬ領域を含む。いくつかの実施形態では、本開示によるＣＤ１９結合ドメインが抗ＣＤ１９抗体のＶＨ領域及びＶＬ領域を含むｓｃＦｖを含む。
いくつかの実施形態では、本開示の抗原結合ドメインは、以下を含む：
以下のＣＤＲを組み込んだＶＨ：
配列ＩＤ番号３７のアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ１
配列ＩＤ番号３８のアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２
配列ＩＤ番号３９のアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３、又はＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、もしくはＨＣ－ＣＤＲ３の１つもしくは複数における１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸で置換されているその変異体；
及び
以下のＣＤＲを組み込んだＶＬ：
配列ＩＤ番号４０のアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ１
配列ＩＤ番号４１のアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２
配列ＩＤ番号４２のアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３、又はＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、もしくはＬＣ－ＣＤＲ３の１つもしくは複数における１つもしくは２つもしくは３つのアミノ酸が別のアミノ酸で置換されているその変異体。
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、以下を含む：
配列ＩＤ番号４３のアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなるＶＨ；
及び
配列ＩＤ番号４４のアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％）を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなるＶＬ。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合ドメインが本明細書に記載のＶＨ配列及びＶＬ配列を含む単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含むか、又はそれからなり得る。ＶＨ配列及びＶＬ配列は、共有結合され得る。いくつかの実施形態では、ＶＨ及びＶＬ配列が可撓性リンカー配列、例えば、本明細書に記載の可撓性リンカー配列によって連結される。柔軟なリンカー配列は、ＶＨ配列及びＶＬ配列の末端に連結され得、それによって、ＶＨ配列及びＶＬ配列を連結する。いくつかの実施形態において、ＶＨ及びＶＬは、配列ＩＤ番号１６又は４５のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなるリンカー配列を介して連結される。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合ドメインが配列ＩＤ番号４６のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合ドメインが例えば、ＣＤ１９の細胞外ドメインにおいて、ＣＤ１９に結合することができる。いくつかの実施形態において、ＣＤ１９結合ドメインは、抗体ＦＭＣ６３によって結合されるＣＤ１９のエピトープに結合することができる。
膜貫通ドメイン
本開示のＣＡＲは、膜貫通ドメインを含む。膜貫通ドメインは、生体膜、例えば、細胞膜において熱力学的に安定であるアミノ酸の配列によって形成される任意の三次元構造を指す。本開示に関連して、膜貫通ドメインは、ＣＡＲを発現する細胞の細胞膜に及ぶアミノ酸配列であってもよい。
膜貫通ドメインは、疎水性アルファヘリックス又はベータバレルを形成するアミノ酸の配列を含むか、又はそれからなり得る。本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインのアミノ酸配列は、膜貫通ドメインを含むタンパク質の膜貫通ドメインのアミノ酸配列であってもよく、又はそれに由来してもよい。膜貫通ドメインはＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ、Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ、ＴｒＥＭＢＬ、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄａｔａ Ｂａｎｋ、Ｅｎｓｅｍｂｌ、及びＩｎｔｅｒＰｒｏなどのデータベースに記録され、及び／又は例えば、ＴＭＨＭＭなどのアミノ酸配列分析ツールを使用して同定／予測することができる（Ｋｒｏｇｈら、２００１ Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３０５：５６７－５８０）。
いくつかの実施形態では、本開示のＣＡＲの膜貫通ドメインのアミノ酸配列が細胞表面で発現されるタンパク質の膜貫通ドメインのアミノ酸配列であってもよく、又はそれに由来してもよい。いくつかの実施形態では、細胞表面で発現されるタンパク質は、受容体又はリガンド、例えば、免疫受容体又はリガンドである。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインのアミノ酸配列は、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳＬ、ＣＤ８６、ＣＴＬＡ－４、ＣＤ８０、ＭＨＣクラスＩα、ＭＨＣクラスＩＩ α、ＭＨＣクラスＩＩ β、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３ζ、ＴＣＲα ＴＣＲβ、ＣＤ４、ＣＤ８α、ＣＤ８β、ＣＤ４０Ｌ、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、４－１ＢＢ、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＴＩＭ－３、ガレクチン９、ＬＡＧ３、ＣＤ２７、ＣＤ７０、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ－４、ＴＩＭ－１、ＩＣＡＭ１、ＬＦＡ－３、ＣＤ２、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＬＩＬＲＢ２、ＶＴＣＮ１、ＣＤ２、ＣＤ４８、２Ｂ４、ＳＬＡＭ、ＣＤ３０Ｌ、ＤＲ３、ＴＬ１Ａ、ＣＤ２２６、ＣＤ１１２及びＣＤ２７６の１つの膜貫通ドメインのアミノ酸配列であってもよく、又はそれに由来してもよい。いくつかの実施形態において、膜貫通は、ＣＤ２８、ＣＤ３－ζ、ＣＤ８α、ＣＤ８β又はＣＤ４の膜貫通ドメインのアミノ酸配列であるか、又はそれに由来する。いくつかの実施形態において、膜貫通は、ＣＤ２８の膜貫通ドメインのアミノ酸配列であるか、又はそれに由来する。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインが配列ＩＤ番号２０又は４８のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインが配列ＩＤ番号２１のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインが配列ＩＤ番号２２のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。
シグナル伝達ドメイン
本開示のキメラ抗原受容体は、シグナル伝達ドメインを含む。シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲを発現する細胞において細胞内シグナル伝達を開始するための配列を提供する。
ＩＴＡＭ含有配列
シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ含有配列を含む。ＩＴＡＭ含有配列は、１つ以上の免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。ＩＴＡＭはアミノ酸配列ＹＸＸＬ／Ｉ（配列ＩＤ番号２３）を含み、「Ｘ」は任意のアミノ酸を示す。ＩＴＡＭ含有蛋白質において、配列ＩＤ番号２３による配列は、多くの場合、６～８個のアミノ酸； ＹＸＸＬ／Ｉ（Ｘ）６－８ ＹＸＸＬ／Ｉ（配列ＩＤ番号２４）によって分離される。チロシンキナーゼによってＩＴＡＭのチロシン残基にリン酸基が付加されると、シグナル伝達カスケードが細胞内で開始される。
いくつかの実施形態において、シグナル伝達ドメインは、配列ＩＤ番号２３又は配列ＩＤ番号２４によるアミノ酸配列の１つ又は複数のコピーを含む。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインが配列ＩＤ番号２３によるアミノ酸配列の少なくとも１、２、３、４、５又は６コピーを含む。いくつかの実施形態において、シグナル伝達ドメインは、配列ＩＤ番号２４によるアミノ酸配列の少なくとも１、２、又は３コピーを含む。
いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインがＩＴＡＭ含有アミノ酸配列を有するタンパク質のＩＴＡＭ含有配列のアミノ酸配列であるか、又はそれに由来するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３－ζ、ＦｃγＲＩ、ＣＤ３ε、ＣＤ３δ、ＣＤ３γ、ＣＤ７９α、ＣＤ７９β、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＣ、ＦｃγＲＩＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＩＡ、ＦｃγＲＩＶ又はＤＡＰ１２の１つの細胞内ドメインのアミノ酸配列であるか、又はそれに由来するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３－ζの細胞内ドメインであるか又はそれに由来するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインが配列ＩＤ番号２５のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなるアミノ酸配列を含む。
共刺激配列
シグナル伝達ドメインは、１つ以上の共刺激配列をさらに含み得る。共刺激配列は、本開示のＣＡＲを発現する細胞の共刺激を提供するアミノ酸配列である。共刺激は標的抗原への結合時にＣＡＲ発現細胞の増殖及び生存を促進し、また、ＣＡＲ発現細胞によるサイトカイン産生、分化、細胞傷害性機能及び記憶形成を促進し得る。Ｔ細胞共刺激の分子機構は、Ｃｈｅｎ ａｎｄ Ｆｌｉｅｓ，（２０１３）Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ １３（４）：２２７－２４２に概説されている。
共刺激配列は、共刺激タンパク質のアミノ酸配列であってもよく、又はそれに由来してもよい。いくつかの実施形態では、共刺激配列が共刺激タンパク質の細胞内ドメインのアミノ酸配列であるか、又はそれに由来するアミノ酸配列である。
ＣＡＲが標的抗原に結合すると、同時刺激配列は、同種リガンドによるライゲーションの際に同時刺激配列が由来する同時刺激タンパク質によって提供される種類のＣＡＲを発現する細胞に同時刺激を提供する。例として、ＣＤ２８に由来する共刺激配列を含むシグナル伝達ドメインを含むＣＡＲの場合、標的抗原への結合は、ＣＤ８０及び／又はＣＤ８６のＣＤ２８への結合によって誘発される種類のＣＡＲを発現する細胞におけるシグナル伝達を誘発する。したがって、共刺激配列は、共刺激配列が由来する共刺激タンパク質の共刺激シグナルを送達することができる。
いくつかの実施形態では、共刺激タンパク質がＢ７－ＣＤ２８スーパーファミリーのメンバー（例えば、ＣＤ２８、ＩＣＯＳ）、又はＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバー（例えば、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＤＲ３、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＨＶＥＭ）であり得る。いくつかの実施形態では、共刺激配列がＣＤ２８、４～１ＢＢ、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７、ＯＸ４０、ＨＶＥＭ、ＣＤ２、ＳＬＡＭ、ＴＩＭ－１、ＣＤ３０、ＧＩＴＲ、ＤＲ３、ＣＤ２２６及び光のうちの１つの細胞内ドメインであるか、又はそれに由来する。いくつかの実施形態では、共刺激配列がＣＤ２８の細胞内ドメインであるか、又はそれに由来する。
いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインが１つ以上の重複しない共刺激配列を含む。いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインが１、２、３、４、５又は６つの共刺激配列を含む。複数の共刺激配列が、直列に提供されてもよい。
所与のアミノ酸配列が所与の共刺激タンパク質によって媒介されるシグナル伝達を開始することができるかどうかは、例えば、共刺激タンパク質によって媒介されるシグナル伝達の相関（例えば、その発現／活性が共刺激タンパク質によって媒介されるシグナル伝達の結果として上方制御又は下方制御される因子の発現／活性）を分析することによって調査することができる。
共刺激タンパク質は、いくつかの形質導入経路を介して、細胞増殖、エフェクター機能及び生存を促進する遺伝子の発現を上方制御する。例えば、ＣＤ２８及びＩＣＯＳはホスファチジルイノシトール３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）及びＡＫＴを介してシグナル伝達し、ＮＦ－κＢ、ｍＴＯＲ、ＮＦＡＴ及びＡＰ１／２を介して、細胞増殖、エフェクター機能及び生存を促進する遺伝子の発現を上方制御する。ＣＤ２８はまた、ＲＡＳを介してＣＤＣ４２／ＲＡＣ１及びＥＲＫ１／２を介してＡＰ１／２を活性化し、ＩＣＯＳはＣ－ＭＡＦを活性化する。４－１ＢＢ、ＯＸ４０、及びＣＤ２７は、ＭＡＰＫ経路を介して、ならびにＰＩ３Ｋを介して、ＴＮＦ受容体関連因子（ＴＲＡＦ）及びシグナルを動員する。
いくつかの実施形態において、シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８であるか又はそれに由来する共刺激配列を含む。
いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインは、配列ＩＤ番号２６のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる共刺激配列を含む。
Ｋｏｆｌｅｒら。ＭＯＬ．ＴＨＥＲ．（２０１１）１９：７６０～７６７は、ＣＡＲ－Ｔ細胞活性の調節性Ｔ細胞媒介性抑制を最小限にするために、ＣＡＲライゲーションにおけるＩＬ－２産生の誘導を減少させるために、ｌｃｋキナーゼ結合部位が変異している変異体ＣＤ２８細胞内ドメインを記載している。変異体ＣＤ２８細胞内ドメインのアミノ酸配列を配列ＩＤ番号２７に示す。
いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインが配列ＩＤ番号２７のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる共刺激配列を含む。
いくつかの実施形態において、シグナル伝達ドメインは、配列ＩＤ番号２８のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。
いくつかの実施形態において、シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢであるか又はそれに由来する共刺激配列を含む。
いくつかの実施形態では、シグナル伝達ドメインが配列ＩＤ番号４９のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる共刺激配列を含む。
いくつかの実施形態において、シグナル伝達ドメインは、配列ＩＤ番号５０のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。
ヒンジ領域
ＣＡＲは、ヒンジ領域をさらに含んでもよい。ヒンジ領域は、抗原結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に提供され得る。ヒンジ領域は、スペーサ領域と呼ばれることもある。ヒンジ領域は、ＣＡＲの抗原結合ドメイン及び膜貫通ドメインの柔軟な連結を提供するアミノ酸配列である。
ヒンジ領域の存在、非存在及び長さは、ＣＡＲ機能に影響を及ぼすことが示されている（例えば、Ｄｏｔｔｉら、Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ（２０１４） ２５７（１）ｓｕｐｒａ．）。
いくつかの実施形態において、ＣＡＲは、ヒトＩｇＧ１のＣＨ１－ＣＨ２ヒンジ領域、例えば、ＷＯ２０１２／０３１７４４Ａ１に記載されるようなＣＤ８αに由来するヒンジ領域、又は例えば、ＷＯ２０１１／０４１０９３Ａ１に記載されるようなＣＤ２８に由来するヒンジ領域であるか、又はそれに由来するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなるヒンジ領域を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲがヒトＩｇＧ１のＣＨ１－ＣＨ２ヒンジ領域に由来するヒンジ領域を含む。
いくつかの実施形態では、ヒンジ領域が配列ＩＤ番号２９又は３０のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲがヒトＩｇＧ４のＣＨ１－ＣＨ２ヒンジ領域に由来するヒンジ領域を含む。
いくつかの実施形態において、ヒンジ領域は、配列ＩＤ番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。
いくつかの実施形態において、ＣＡＲはヒトＩｇＧ１のＣＨ２－ＣＨ３領域（すなわち、Ｆｃ領域）であるか又はそれに由来するアミノ酸配列を含むか又はそれからなるヒンジ領域を含む。
いくつかの実施形態において、ヒンジ領域は、配列ＩＤ番号３１のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。
Ｈｏｍｂａｃｈら，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ（２０１０）１７：１２０６－１２１３は、単球及びＮＫ細胞などのＦｃγＲ発現細胞の活性化を低下させるための変異体ＣＨ２－ＣＨ３領域を記載している。変異体ＣＨ２－ＣＨ３領域のアミノ酸配列を配列ＩＤ番号３２に示す。
いくつかの実施形態において、ヒンジ領域は、配列ＩＤ番号３２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。
いくつかの実施形態において、ヒンジ領域は、ヒトＩｇＧ１のＣＨ１－ＣＨ２ヒンジ領域であるか又はそれに由来するアミノ酸配列、及びヒトＩｇＧ１のＣＨ２－ＣＨ３領域（すなわちＦｃ領域）であるか又はそれに由来するアミノ酸配列を含むか又はそれからなる。
いくつかの実施形態では、ヒンジ領域が配列ＩＤ番号３３のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。
追加の配列
シグナルペプチド
ＣＡＲは、シグナルペプチド（リーダー配列又はシグナル配列としても知られる）をさらに含んでもよい。シグナルペプチドは、通常、単一のアルファヘリックスを形成する５～３０個の疎水性アミノ酸の配列からなる。分泌タンパク質及び細胞表面で発現されるタンパク質は、しばしばシグナルペプチドを含む。シグナルペプチドは多くのタンパク質について公知であり、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ及びＥｎｓｅｍｂｌなどのデータベースに記録され、及び／又は、例えば、ＳｉｇｎａｌＰ（Ｐｅｔｅｒｓｅｎら、２０１１ Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ ８：７８５－７８６）又はＳｉｇｎａｌ－ＢＬＡＳＴ（Ｆｒａｎｋ ａｎｄ Ｓｉｐｐｌ，２００８ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ２４：２１７２－２１７６）などのアミノ酸配列分析ツールを使用して同定／予測することができる。
シグナルペプチドは、ＣＡＲのＮ末端に存在してもよく、新たに合成されたＣＡＲに存在してもよい。シグナルペプチドは、細胞表面へのＣＡＲの効率的な輸送を提供する。シグナルペプチドは、切断によって除去され、したがって、細胞表面によって発現される成熟ＣＡＲに含まれない。
いくつかの実施形態において、シグナルペプチドは、配列番号３４のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を含むか、又はそれからなる。いくつかの実施形態において、シグナルペプチドは、配列番号５１のアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。
リンカー配列及びさらなる機能的配列
いくつかの実施形態において、ＣＡＲは異なるドメイン（すなわち、抗原結合ドメイン、ヒンジ領域、膜貫通ドメイン、シグナル伝達ドメイン）の間に１つ又は複数のリンカー配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＡＲはドメインの部分配列間（例えば、抗原結合ドメインのＶＨとＶＬとの間）に１つ又は複数のリンカー配列を含む。
リンカー配列は当業者に公知であり、例えば、Ｃｈｅｎら，Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ（２０１３）６５（１０）：１３５７－１３６９（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。いくつかの実施形態において、リンカー配列は、柔軟なリンカー配列であってもよい。柔軟なリンカー配列は、リンカー配列によって連結されるアミノ酸配列の相対移動を可能にする。柔軟なリンカーは当業者に公知であり、いくつかはＣｈｅｎら，Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ（２０１３）６５（１０）：１３５７－１３６９に同定されている。柔軟なリンカー配列はしばしば、高い割合のグリシン及び／又はセリン残基を含む。いくつかの実施形態では、リンカー配列が少なくとも１つのグリシン残基及び／又は少なくとも１つのセリン残基を含む。いくつかの実施形態では、リンカー配列がグリシン及びセリン残基からなる。いくつかの実施形態では、リンカー配列が１～２、１～３、１～４、１～５、１～１０、１～２０、１～３０、１～４０又は１～５０アミノ酸の長さを有する。
いくつかの実施形態において、リンカー配列は、配列ＩＤ番号：１６又は４５に示されるアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。いくつかの実施形態において、リンカー配列は、配列ＩＤ番号：１６又は４５に示されるアミノ酸配列の１、２、３、４又は５個のタンデムコピーを含むか、又はそれらからなる。
ＣＡＲは、さらなるアミノ酸又はアミノ酸の配列をさらに含んでもよい。例えば、抗原結合分子及びポリペプチドは、発現、フォールディング、輸送、プロセシング、精製又は検出を容易にするためのアミノ酸配列を含み得る。例えば、ＣＡＲは、Ｈｉｓ（例えば、６ＸＨｉｓ）、Ｍｙｃ、ＧＳＴ、ＭＢＰ、ＦＬＡＧ、ＨＡ、Ｅ、又はビオチンタグをコードする配列を、場合によりＮ末端又はＣ末端に含み得る。いくつかの実施形態では、ＣＡＲが検出可能な部分、例えば、蛍光標識、発光標識、免疫検出可能標識、放射標識、化学標識、核酸標識、又は酵素標識を含む。
特定の例示的なＣＡＲ
本開示のいくつかの実施形態では、ＣＡＲは：
配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか又はそれからなる抗原結合ドメイン；
配列番号３３のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか又はそれからなるヒンジ領域；
配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる膜貫通ドメイン；及び、
配列番号２８のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸
を含むか、又はそれらからなる。
本開示のいくつかの実施形態では、ＣＡＲが配列番号３５又は３６のアミノ酸配列と少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、以下の実施形態から選択される；Ｈｏｍｂａｃｈら．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（１９９８）５８（６）：１１１６－９，Ｈｏｍｂａｃｈら．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ（２０００）７：１０６７－１０７５，Ｈｏｍｂａｃｈら．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．（１９９９）２２（６）：４７３－８０，Ｈｏｍｂａｃｈら．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（２００１）６１：１９７６－１９８２，Ｈｏｍｂａｃｈら．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ（２００１）１６７：６１２３－６１３１，Ｓａｖｏｌｄｏら．Ｂｌｏｏｄ（２００７）１１０（７）：２６２０－３０，Ｋｏｅｈｌｅｒら．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（２００７）６７（５）：２２６５－２２７３，Ｄｉ Ｓｔａｓｉら．Ｂｌｏｏｄ（２００９）１１３（２５）：６３９２－４０２，Ｈｏｍｂａｃｈら．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ（２０１０）１７：１２０６－１２１３，Ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉら．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ（２０１１）１８：６２－７２，Ｋｏｆｌｅｒら．Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．（２０１１）１９（４）：７６０－７６７，Ｇｉｌｈａｍ，Ａｂｋｅｎ ａｎｄ Ｐｕｌｅ．Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．（２０１２）１８（７）：３７７－３８４，Ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉら．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ（２０１３）２０：１７７－１８６，Ｈｏｍｂａｃｈら．Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．（２０１６）２４（８）：１４２３－１４３４，Ｒａｍｏｓら．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．（２０１７）１２７（９）：３４６２－３４７１、ＷＯ２０１５／０２８４４４Ａ１、又は、ＷＯ ２０１６／００８９７３Ａ１（これらは全て、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
本開示のいくつかの実施形態では、ＣＡＲは：
配列番号４６のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか又はそれからなる抗原結合ドメイン；
配列番号４７のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか又はそれからなるヒンジ領域；
配列番号４８のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる膜貫通ドメイン、及び
配列番号５０のアミノ酸配列に対して少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸を含むか、又はそれからなる。
本開示のいくつかの実施形態では、ＣＡＲが配列番号５２又は５３のアミノ酸配列と少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。
ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞
本開示は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む／発現するウイルス特異的免疫細胞に関する。
ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞は、本開示によるＣＡＲを発現又は含むことができる。ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞は、本開示によるＣＡＲをコードする核酸を含んでもよく、又は発現してもよい。ＣＡＲ発現細胞は、それが発現するＣＡＲを含むことが理解されるのであろう。ＣＡＲをコードする核酸を発現する細胞は核酸によってコードされるＣＡＲも発現し、それを含むことも理解されるのであろう。
本開示によるＣＡＲをコードするＣＡＲ／核酸を含むウイルス特異的免疫細胞は、細胞の機能的特性への言及によって特徴付けられ得る。
いくつかの実施形態では、本開示によるＣＡＲをコードするＣＡＲ／核酸を含むウイルス特異的免疫細胞が以下の特性の１つ又は複数を示す：
（ａ）ＩＦＮγ、グラヌザイム、パーフォリン、グラニシン、ＣＤ１０７ａ、ＴＮＦα、ＦＡＳＬなどの１つ以上の細胞毒性／エフェクター因子（例えば、ＩＦＮγ、グラニシン、ペルフォリン、ＣＤ１０７ａ、ＴＮＦα、ＦＡＳＬ）、拡散／集団拡大、及び／又は成長因子（例えば、ＩＬ－２）発現の、ＣＡＲが特異的である標的抗原を発現する細胞に応じた発現、及び／又は、免疫細胞特異的細胞が特異的で及び／又は免疫細胞が特異的である免疫細胞の抗原を呈示する細胞に応じた発現；
（ｂ）ＣＡＲが特異的である標的抗原を発現する細胞、ウイルス特異的免疫細胞が特異的であるウイルスに感染した細胞、及び／又はウイルス特異的免疫細胞が特異的であるウイルスの抗原のペプチドを提示する細胞に対する細胞傷害性；
（ｃ）ＣＡＲが特異的である標的抗原を発現しない細胞、ウイルス特異的免疫細胞が特異的であるウイルスに感染していない細胞、及び／又はウイルス特異的免疫細胞が特異的であるウイルスの抗原のペプチドを提示しない細胞に対する細胞傷害性がない（すなわち、ベースラインを上回る）；
（ｄ）ＣＡＲが特異的である標的抗原を発現する細胞を含む癌、ウイルス特異的免疫細胞が特異的であるウイルスに感染した細胞を含む癌、及び／又はウイルス特異的免疫細胞が特異的であるウイルスの抗原のペプチドを提示する細胞を含む癌に対する抗癌活性（例えば、癌細胞に対する細胞毒性、腫瘍増殖阻害、転移の減少など）；及び
（ｅ）同種反応性免疫細胞、例えば、ＣＡＲが特異的である標的抗原を発現する同種反応性免疫細胞に対する細胞傷害性。
細胞増殖／集団増殖は、ある期間にわたる細胞分裂又は細胞数を分析することによって調べることができる。細胞分裂は例えば、３Ｈ－チミジンの取り込みのインビトロ分析によって、又はＣＦＳＥ希釈アッセイによって、例えば、その全体が参考として本明細書に援用される、フルチャー及びウォング、イムノールセルバイオル（１９９９）７７（６）：５５９－５６４に記載されるように分析することができる。増殖細胞は例えば、Ｂｕｃｋら，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓに記載されているように、適切なアッセイによる５－エチニル－２’－デオキシウリジン（ＥｄＵ）の取り込みの分析によって同定することもできる。２００８ Ｊｕｎ；４４（７）：９２７－９、及びＳａｌｉａｎｄ Ｍｉｔｃｈｉｓｏｎ，ＰＮＡＳ ＵＳＡ ２００８ Ｆｅｂ １９；１０５（７）：２４１５－２４２０を参照されたい。
本明細書で用いられる場合、「発現」は、遺伝子又はタンパク質発現であり得る。遺伝子発現はＤＮＡのＲＮＡへの転写を包含し、当業者に公知の様々な手段によって、例えば、定量的リアルタイムＰＣＲ（ｑＲＴ－ＰＣＲ）によって、又はレポーターベースの方法によって、ｍＲＮＡのレベルを測定することによって測定することができる。同様に、タンパク質発現は当技術分野で周知の様々な方法によって、例えば、抗体ベースの方法によって、例えば、ウェスタンブロット、免疫組織化学、免疫細胞化学、フローサイトメトリー、ＥＬＩＳＡ、ＥＬＩＳＰＯＴ、又はレポーターベースの方法によって測定することができる。
細胞毒性及び細胞死滅は、例えば、Ｚａｒｉｔｓｋａｙａら，Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｖａｃｃｉｎｅｓ（２０１１），９（６）：６０１－６１６（その全体が参照により本明細書に組み入れられる）に概説されている方法のいずれかを用いて調査することができる。細胞傷害性／細胞死滅アッセイのインビトロアッセイとしては、例えば、５１クロム放出アッセイ、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）放出アッセイ、３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）放出アッセイ、及びカルセイン－アセトキシメチル（カルセイン－ＡＭ）放出アッセイなどの放出アッセイが挙げられる。これらのアッセイは、溶解細胞から放出された因子の検出に基づいて、細胞死滅を測定する。所与の細胞型による細胞死滅は例えば、試験細胞を所与の細胞型と共培養し、適切な期間後に生存／死滅試験細胞の数／割合を測定することによって分析することができる。
細胞は、癌の適切なインビトロアッセイ又はインビボモデルにおける分析によって、抗癌活性について評価され得る。
いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ３０特異的ＣＡＲ発現ＥＢＶ特異的免疫細胞は、以下の特性の１つ以上を示す：
（ａ）ＣＤ３０を表現する細胞に対するＩＦＮγ、グランザイム、ペフリン、グラヌリジン、ＣＤ１０７ａ、ＴＮＦα、ＦＡＳＬなどの１つ以上のサイトメキシコ因子の表現、ＥＢＶに感染した細胞に対する反応、及び／又はＥＢＶ抗原のペプチドを提示する細胞に対する反応；
（ｂ）ＣＤ３０を発現する細胞、ＥＢＶに感染した細胞、及び／又はＥＢＶ抗原のペプチドを提示する細胞に対する細胞傷害性；
（ｃ）ＣＤ３０を発現しない細胞、ＥＢＶに感染していない細胞、及び／又はＥＢＶ抗原のペプチドを提示しない細胞に対する細胞傷害性がない（すなわち、ベースラインを上回る）；
（ｄ）ＣＤ３０を発現する細胞を含む癌、ＥＢＶに感染した細胞を含む癌、及び／又はＥＢＶ抗原のペプチドを提示する細胞を含む癌に対する抗癌活性（例えば、癌細胞に対する細胞毒性、腫瘍増殖阻害、転移の減少など）；ならびに
（ｅ）同種反応性免疫細胞、例えば、ＣＤ３０を発現する同種反応性免疫細胞に対する細胞傷害性。
本開示の様々な態様によるいくつかの実施形態では、ウイルス特異的免疫細胞が１つ以上（例えば、２、３、４など）のＣＡＲを含み得る／発現し得る。
いくつかの実施形態では、ウイルス特異的免疫細胞が１つ以上の非同一のＣＡＲを含む／発現し得る。１つ以上の非同一のＣＡＲを含む／発現するウイルス特異的免疫細胞は、非同一の標的抗原に特異的なＣＡＲを含む／発現し得る。例えば、本明細書の実施例４は、ＣＤ３０特異的ＣＡＲ及びＣＤ１９特異的ＣＡＲを含む／発現するウイルス特異的免疫細胞を記載する。非同一の標的抗原の各々は、独立して、本明細書に記載されるような標的抗原であり得る。いくつかの実施形態では、各非同一標的抗原が独立して、本明細書に記載される癌細胞抗原である。
いくつかの実施形態では、非同一の標的抗原の１つはＣＤ３０である。いくつかの実施形態では、１つ以上の非同一ＣＡＲを含む／発現するウイルス特異的免疫細胞がＣＤ３０特異的ＣＡＲ、及びＣＤ３０以外の標的抗原に特異的なＣＡＲを含む。
ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞の産生
インビトロ／エクスビボでウイルス特異的免疫細胞の集団を生成／拡大するための方法は、当業者に周知である。典型的な培養条件（すなわち、細胞培養培地、添加剤、温度、気体雰囲気）、細胞数、培養期間などは、例えば、Ｎｇｏら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．（２０１４）３７（４）：１９３－２０３を参照することにより決定することができ、これはその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
好都合には、本発明による細胞の培養物が５％のＣＯ２を含む加湿された大気中で３７℃に維持され得る。細胞培養物の細胞は当業者によって容易に決定され得るように、任意の適切な密度で確立及び／又は維持され得る。例えば、培養物は培養物１ｍｌ当たり約０．５×１０６細胞～約５×１０６細胞（例えば、約１×１０６細胞／ｍｌ）の初密度で確立され得る。
培養は例えば、細胞培養プレート、細胞培養フラスコ、バイオリアクターなどのウェル中で、培養の体積に適した任意の容器中で行うことができる。いくつかの実施形態では細胞がバイオリアクター、例えば、Ｓｏｍｅｒｖｉｌｌｅ ａｎｄ Ｄｕｄｌｅｙ，Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２０１２）１（８）：１４３５－１４３７に記載されているバイオリアクター中で培養され、これはその全体が参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態において、細胞はＧＲｅｘ細胞培養容器、例えば、ＧＲｅｘフラスコ又はＧＲｅｘ １００バイオリアクター中で培養される。
この方法は一般に、ウイルス抗原ペプチド：ＭＨＣ複合体を提示する抗原提示細胞（ＡＰＣ）の存在下で、抗原特異的受容体を有する細胞を含む免疫細胞の集団（例えば、免疫細胞の異種集団、例えば、末梢血単核細胞；ＰＢＭＣ）を、活性化及び増殖を引き起こすために適切な共刺激及びシグナル増幅を提供する条件下で培養することを含む。ＡＰＣは、ウイルス抗原／ペプチド（複数可）をコードするウイルスに感染してもよく、又はそれを含み／発現してもよく、ＭＨＣ分子の文脈においてウイルス抗原ペプチドを提示してもよい。刺激はＴ細胞活性化を引き起こし、細胞分裂（増殖）を促進し、ウイルス抗原に特異的なＴ細胞の集団の生成及び／又は拡大をもたらす。Ｔ細胞活性化のプロセスは当業者に周知であり、例えば、Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ Ｅｄｎ．Ｊａｎｅｗａｙ ＣＡ Ｊｒ，Ｔｒａｖｅｒｓ Ｐ，Ｗａｌｐｏｒｔ Ｍら、ＮｅｗＹｏｒｋ：Ｇａｒｌａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ（２００１），Ｃｈａｐｔｅｒ８（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。
刺激後に得られた細胞の集団は、刺激前の集団と比較して、ウイルスに特異的なＴ細胞について濃縮される（すなわち、ウイルス特異的Ｔ細胞は、刺激後の集団において増加した頻度で存在する）。このようにして、ウイルスに特異的なＴ細胞の集団は、異なる特異性を有するＴ細胞の異種集団から増殖／生成される。ウイルスに特異的なＴ細胞の集団は、刺激及びその後の細胞分裂によって単一のＴ細胞から生成され得る。ウイルスに特異的なＴ細胞の既存の集団は、ウイルス特異的Ｔ細胞の集団の細胞の刺激及びその結果としての細胞分裂によって拡大され得る。
本開示の態様及び実施形態は、特にＥＢＶ特異的免疫細胞に関する。したがって、いくつかの実施形態では、ウイルスはＥＢＶであり得、ウイルス抗原はＥＢＶ抗原であり得る。ＥＢＶ特異的免疫細胞の集団を生成／拡大するための方法は、例えば、ＷＯ２０１３／０８８１１４Ａ１，Ｌａｐｔｅｖａ ａｎｄ Ｖｅｒａ，Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ Ｉｎｔ．（２０１１）：４３４３９２，Ｓｔｒａａｔｈｏｆら，Ｂｌｏｏｄ（２００５）１０５（５）：１８９８－１９０４，ＷＯ２０１７／２０２４７８Ａ１、ＷＯ２０１８／０５２９４７Ａ１、及びＷＯ２０２０／２１４４７９Ａ１（これらは全て、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
この方法は、ＥＢＶ抗原ペプチド：ＭＨＣ複合体に特異的なＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含むＴ細胞がＴＣＲが特異的であるＥＢＶ抗原ペプチド：ＭＨＣ複合体を提示するＡＰＣによって刺激されるステップを含む。ＡＰＣはＥＢＶ抗原／ペプチドをコードする、又はそれを含む／発現するウイルスに感染し、ＭＨＣ分子との関連でＥＢＶ抗原ペプチドを提示する。刺激はＴ細胞活性化を引き起こし、細胞分裂（増殖）を促進し、ＥＢＶ抗原に特異的なＴ細胞の集団の生成及び／又は拡大をもたらす。
本方法は、典型的には免疫細胞の集団を、ウイルス抗原に対応するＥＢＶ抗原又はＡＰＣ提示ペプチドに対応するペプチドと接触させることによって、ウイルス／ウイルス抗原に特異的な免疫細胞を刺激することを含む。そのような方法ステップは、本明細書では「刺激」又は「刺激ステップ」と呼ばれることがある。そのような方法の工程は典型的にはインビトロ／エクスビボでの培養物中の細胞の維持を含み、「刺激培養物」と称され得る。
いくつかの実施形態では、方法が１つ又は複数の追加の刺激ステップを含む。すなわち、いくつかの実施形態では、方法が刺激ステップによって得られた細胞を再刺激する１つ又は複数のさらなるステップを含む。そのようなさらなる刺激ステップは、本明細書では「再刺激」又は「再刺激ステップ」と呼ばれることがある。そのような方法の工程は典型的にはインビトロ／エクスビボでの培養物中の細胞の維持を含み、「再刺激培養物」と称され得る。
本明細書に記載の刺激ステップ（再刺激のため）によって得られたＰＢＭＣ（刺激のため）又は細胞集団をウイルス抗原に対応するペプチドと「接触させる」ことは、一般に、ＰＢＭＣ／細胞集団を、ペプチドを含む細胞培養培地中でインビトロ／エクスビボで培養することを含むことが理解されよう。同様に、ＰＢＭＣ／細胞集団を、ウイルス抗原に対応するＡＰＣ提示ペプチドと「接触させる」ことは、一般に、ＡＰＣ及びＰＢＭＣ／細胞集団をインビトロ／エクスビボで細胞培養培地中で共培養することを含むことが理解されよう。
いくつかの実施形態では、方法がＰＢＭＣを、ウイルス抗原（例えば、ＥＢＶ抗原）に対応するペプチド（複数可）と接触させることを含む。そのような実施形態では、ＰＢＭＣの集団内のＡＰＣ（例えば、樹状細胞、マクロファージ及びＢ細胞）は（例えば、食作用、飲作用によって）内在化し、ＭＨＣクラスＩ分子（交差提示）及び／又はＭＨＣクラスＩＩ分子上の抗原を処理及び提示し、その後、ＰＢＭＣの集団内のＣＤ８＋及び／又はＣＤ４＋ Ｔ細胞を活性化する。
参照抗原の「に対応する」ペプチドは、参照抗原のアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。例えば、ＥＢＶのＥＢＮＡ１「に対応する」ペプチドはＥＢＮＡ１のアミノ酸配列内に見出されるアミノ酸配列（すなわち、ＥＢＮＡ１のアミノ酸配列の部分配列である）を含むか、又はそれからなる。本明細書で用いられるペプチドは典型的には５～３０アミノ酸の長さ、例えば、５～２５アミノ酸、１０～２０アミノ酸、又は１２～１８アミノ酸のうちの１つを有する。いくつかの実施形態では、ペプチドが５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０アミノ酸のうちの１つの長さを有する。いくつかの実施形態では、ペプチドが約１５アミノ酸の長さを有する。本明細書で用いられる「ペプチド」は、非同一のペプチドを含む集団を指し得る。
いくつかの実施形態では、方法が１つ以上の抗原に対応するペプチドを使用する。このような実施形態では、抗原のそれぞれに対応する少なくとも１つのペプチドが存在する。例えば、方法がＥＢＮＡ１及びＬＭＰ１に対応するペプチドを用いる場合、ペプチドは、ＥＢＮＡ１に対応する少なくとも１つのペプチド、及びＬＭＰ１に対応する少なくとも１つのペプチドを含む。
いくつかの実施形態において、方法は、参照抗原の全部又は一部に対応するペプチドを用いる。所与の抗原の全てに対応するペプチドは、抗原のアミノ酸配列の全長をカバーする。すなわち、一緒になって、ペプチドは、所与の抗原のアミノ酸配列のアミノ酸の全てを含有する。所与の抗原の一部に対応するペプチドは、抗原のアミノ酸配列の一部を覆う。ペプチドが抗原のアミノ酸配列の一部をカバーするいくつかの実施形態では、ペプチドは一緒に、例えば、抗原のアミノ酸配列の１０％超、例えば、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％又は９５％超をカバーし得る。
いくつかの実施形態では、方法が重複ペプチドを使用する。「重複」ペプチドは、アミノ酸、より典型的にはアミノ酸の配列を共通に有する。例示として、第１のペプチドはＥＢＮＡ１のアミノ酸配列の１～１５位に対応するアミノ酸配列からなり、第２のペプチドは、ＥＢＮＡ１のアミノ酸配列の５～２０位に対応するアミノ酸配列からなる。第１及び第２のペプチドはＥＢＮＡ１に対応する重複ペプチドであり、１１個のアミノ酸が重複している。いくつかの実施形態では、重複ペプチドが１～２０、５～２０、８～１５又は１０～１２個のアミノ酸のうちの１つによって重複する。いくつかの実施形態では、重複ペプチドが１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個のアミノ酸のうちの１つによって重複する。いくつかの実施形態では、重複ペプチドが１１個のアミノ酸が重複する。
いくつかの実施形態では、本方法が所与の参照抗原の全部又は一部に対応する、１～２０アミノ酸が重複する５～３０アミノ酸の長さを有するペプチドを用いる。
いくつかの実施形態では、本方法が所与の参照抗原のすべてに対応する、１１アミノ酸が重複する１５アミノ酸の長さを有するペプチドを用いる。そのようなペプチドの混合物は、本明細書において、所与の抗原について「ペプミックス（ｐｅｐｍｉｘ）ペプチドプール」又は「ペプミックス（ｐｅｐｍｉｘ）」と称され得る。例えば、本明細書の実施例１で使用される「ＥＢＮＡ１ ペプミックス（ｐｅｐｍｉｘ）」は、ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ０３２１１－１、ｖ１に示されるＥＢＮＡ１のアミノ酸配列の全長に及ぶ、１１アミノ酸が重複する１５８、１５ｍｅｒペプチドのプールを指す。
本開示の様々な態様によるいくつかの実施形態では、所定のウイルス抗原に「対応するペプチド」は、抗原のためのペプミックス（ｐｅｐｍｉｘ）であってもよい。
特定の実施形態では、本方法が１つ又は複数のＥＢＶ抗原に対応するペプチドを使用する。特定の実施形態では、本方法が１つ又は複数のＥＢＶ抗原のためにペプミックスを使用する。いくつかの実施形態では、１つ又は複数のＥＢＶ抗原がＥＢＶ潜伏抗原、例えば、ＩＩＩ型潜伏抗原（例えばＥＢＮＡ１、ＥＢＮＡ－ＬＰ、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２Ａ、ＬＭＰ２Ｂ、ＢＡＲＦ１、ＥＢＮＡ２、ＥＢＮＡ３Ａ、ＥＢＮＡ３ＢまたはＥＢＮＡ３Ｃ）、ＩＩ型潜伏抗原（例えばＥＢＮＡ１、ＥＢＮＡ－ＬＰ、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２Ａ、ＬＭＰ２ＢまたはＢＡＲＦ１）、又はＩ型潜伏抗原、（例えばＥＢＮＡ１またはＢＡＲＦ１）、ＥＢＶ溶解抗原、例えば、即時－早期溶解抗原（例えばＢＺＬＦ１、ＢＲＬＦ１またはＢＭＲＦ１）、早期溶解性抗原（例えば、ＢＭＬＦ１、ＢＭＲＦ１、ＢＸＬＦ１、ＢＡＬＦ１、ＢＡＬＦ２、ＢＡＲＦ１、ＢＧＬＦ５、ＢＨＲＦ１、ＢＮＬＦ２Ａ、ＢＮＬＦ２Ｂ、ＢＨＬＦ１、ＢＬＬＦ２、ＢＫＲＦ４、ＢＭＲＦ２、ＦＵまたはＥＢＮＡ１－ＦＵＫ）、及び、後期溶血性抗原（例えば、ＢＡＬＦ４、ＢＩＬＦ１、ＢＩＬＦ２、ＢＮＦＲ１、ＢＶＲＦ２、ＢＡＬＦ３、ＢＡＬＦ５、ＢＤＬＦ３またはｇｐ３５０）から選択される。
本開示の様々な態様によるいくつかの実施形態では、１つ又は複数のＥＢＶ抗原がＢＺＬＦ１、ＢＲＬＦ１、ＢＭＬＦ１、ＢＭＲＦ１、ＢＸＬＦ１、ＢＡＬＦ１、ＢＡＬＦ２、ＢＧＬＦ５、ＢＨＲＦ１、ＢＮＬＦ２Ａ、ＢＮＬＦ２Ａ、ＢＮＬＦ２Ｂ、ＢＨＬＦ１、ＢＬＬＦ２、ＢＫＲＦ４、ＢＭＲＦ２、ＢＡＬＦ４、ＢＩＬＦ１、ＢＩＬＦ２、ＢＮＦＲ１、ＢＶＲＦ２、ＢＡＬＦ３、ＢＡＬＦ５、及びＢＤＬＦ３から選択されるＥＢＶ溶解抗原であるか、又はそれを含む。いくつかの実施形態において、１つ又は複数のＥＢＶ抗原は、ＢＺＬＦ１、ＢＲＬＦ１、ＢＭＬＦ１、ＢＭＲＦ１、ＢＡＬＦ２、ＢＮＬＦ２Ａ、ＢＮＬＦ２Ｂ、ＢＭＲＦ２及びＢＤＬＦ３から選択されるＥＢＶ溶解抗原であるか、又はそれを含む。
いくつかの実施形態において、１つ又は複数のＥＢＶ抗原は、ＥＢＮＡ１、ＥＢＮＡ－ＬＰ、ＥＢＮＡ２、ＥＢＮＡ３Ａ、ＥＢＮＡ３Ｂ、ＥＢＮＡ３Ｃ、ＢＡＲＦ１、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２Ａ及びＬＭＰ２Ｂから選択されるＥＢＶ潜在抗原であるか、又はそれを含む。いくつかの実施形態において、１つ又は複数のＥＢＶ抗原は、ＥＢＮＡ１、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２Ａ及びＬＭＰ２Ｂから選択されるＥＢＶ潜在抗原であるか、又はそれを含む。
いくつかの実施形態では、１つ又は複数のＥＢＶ抗原がＥＢＮＡ１、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２、ＢＡＲＦ１、ＢＺＬＦ１、ＢＲＬＦ１、ＢＭＬＦ１、ＢＭＲＦ１、ＢＭＲＦ２、ＢＡＬＦ２、ＢＮＬＦ２Ａ及びＢＮＬＦ２Ｂから選択される。
いくつかの実施形態において、方法は、ＥＢＮＡ１、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２、ＢＡＲＦ１、ＢＺＬＦ１、ＢＲＬＦ１、ＢＭＬＦ１、ＢＭＲＦ１、ＢＭＲＦ２、ＢＡＬＦ２、ＢＮＬＦ２Ａ及びＢＮＬＦ２Ｂに対応するペプチドを用いる。いくつかの実施形態において、方法は、ＥＢＮＡ１、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２、ＢＡＲＦ１、ＢＺＬＦ１、ＢＲＬＦ１、ＢＭＬＦ１、ＢＭＲＦ１、ＢＭＲＦ２、ＢＡＬＦ２、ＢＮＬＦ２Ａ及びＢＮＬＦ２Ｂのためのペプミックスを用いる。
いくつかの実施形態において、方法はＰＢＭＣ（例えば、ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞を枯渇させたＰＢＭＣ）を、ＥＢＮＡ１、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２、ＢＡＲＦ１、ＢＺＬＦ１、ＢＲＬＦ１、ＢＭＬＦ１、ＢＭＲＦ１、ＢＭＲＦ２、ＢＡＬＦ２、ＢＮＬＦ２Ａ及びＢＮＬＦ２Ｂに対応するペプチドと接触させる工程を含む。いくつかの実施形態において、方法はＰＢＭＣ（例えば、ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞を枯渇させたＰＢＭＣ）を、ＥＢＮＡ１、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２、ＢＡＲＦ１、ＢＺＬＦ１、ＢＲＬＦ１、ＢＭＬＦ１、ＢＭＲＦ１、ＢＭＲＦ２、ＢＡＬＦ２、ＢＮＬＦ２Ａ及びＢＮＬＦ２Ｂのためのペプミックスと接触させる工程を含む。
いくつかの実施形態では、本方法が本明細書に記載の刺激ステップによって得られた細胞集団を、ウイルス抗原に対応するペプチドと接触させることを含む。そのような実施形態では、細胞集団（例えば、樹状細胞、マクロファージ及びＢ細胞）内のＡＰＣは（例えば、食作用、飲作用によって）内部移行し、ＭＨＣクラスＩ分子（交差提示）及び／又はＭＨＣクラスＩＩ分子上の抗原を処理及び提示し、その後、細胞集団内のＣＤ８＋及び／又はＣＤ４＋ Ｔ細胞を再刺激する。
いくつかの実施形態では、方法がＰＢＭＣを、ウイルス抗原に対応するペプチドを提示するＡＰＣと接触させることを含む。いくつかの実施形態では、本方法が本明細書に記載の刺激ステップによって得られた細胞集団を、ウイルス抗原に対応するＡＰＣ提示ペプチドと接触させることを含む。
いくつかの実施形態では、方法がＰＢＭＣをＥＢＶ－ＬＣＬと接触させることを含む。ＰＢＭＣをＥＢＶ－ＬＣＬで刺激することによるＥＢＶ特異的免疫細胞の産生は例えば、Ｓｔｒａａｔｈｏｆら，Ｂｌｏｏｄ（２００５）１０５（５）：１８９８－１９０４に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。
ＥＢＶ－ＬＣＬは例えば、Ｈｕｉ－Ｙｕｅｎら，Ｊ Ｖｉｓ Ｅｘｐ（２０１１）５７：３３２１、及びＨｕｓｓａｉｎ ａｎｄ Ｍｕｌｈｅｒｋａｒ，Ｉｎｔ Ｊ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｍｅｄ（２０１２）１（２）：７５－８７（両方ともその全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているように、ＰＢＭＣをＥＢＶで感染させ。ＥＢＶ特異的Ｔ細胞は、健常ドナーからの血液試料から単離されたＰＢＭＣと、自己ガンマ線照射ＥＢＶ－ＬＣＬとの共培養によって調製することができる。
刺激及び再刺激におけるＴ細胞及びＡＰＣの共培養は、細胞培養培地中で行われる。細胞培養培地は、本開示によるＴ細胞及びＡＰＣがインビトロ／エクスビボで培養物中に維持され得る任意の細胞培養培地であり得る。リンパ球の培養における使用に適した培養培地は当業者に周知であり、例えば、ＲＰＭＩ－１６４０培地、ＡＩＭ－Ｖ培地、Ｉｓｃｏｖｅｓ培地などを含む。
いくつかの実施形態では、細胞培養培地がＲＰＭＩ－１６４０培地（例えば、Ａｄｖａｎｃｅｄ ＲＰＭＩ－１６４０培地）及び／又はクリック培地（イーグルハムアミノ酸（ＥＨＡＡ）培地としても知られる）を含み得る。これらの培地の組成物は、当業者に周知である。ＲＰＭＩ－１６４０培地の製剤は例えば、Ｍｏｏｒｅら，ＪＡＭＡ（１９６７）１９９：５１９－５２４に記載されており、Ｃｌｉｃｋ’ｓ培地の製剤は、Ｃｌｉｃｋら，Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９７２）３：２６４－２７６に記載されている。ＲＰＭＩ－１６４０培地は例えば、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから得ることができ、クリック培地は例えば、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（カタログ番号Ｃ５５７２）から得ることができる。Ａｄｖａｎｃｅｄ ＲＰＭＩ－１６４０培地は例えば、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（カタログ番号１２６３３０１２）から得ることができる。
いくつかの実施形態では、方法がＲＰＭＩ－１６４０培地及びクリック培地を含む細胞培養培地中で、ウイルス抗原に対応するペプチド（複数可）（例えば、ＥＢＶ抗原）と接触させたＰＢＭＣ、又はウイルス抗原に対応するＡＰＣ提示ペプチド（複数可）の存在下で、ＰＢＭＣを培養することを含む。いくつかの実施形態では、方法がＲＰＭＩ－１６４０培地及びクリック培地を含む細胞培養培地中で、ウイルス抗原に対応するペプチドと接触させた本明細書に記載の刺激ステップによって得られた細胞集団を培養することを含む。
いくつかの実施形態では、細胞培養培地が（容量で）２５～６５％のＲＰＭＩ－１６４０培地、及び２５～６５％のクリック培地を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地が３０～６０％のＲＰＭＩ－１６４０培地、及び３０～６０％のクリック培地を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地が３５～５５％のＲＰＭＩ－１６４０培地、及び３５～５５％のクリック培地を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地が４０～５０％のＲＰＭＩ－１６４０培地、及び４０～５０％のクリック培地を含む。いくつかの実施形態において、細胞培養培地は、４５％のＲＰＭＩ－１６４０培地、及び４５％のクリック培地を含む。特定の実施形態では、細胞培養培地が４７．５％のＲＰＭＩ－１６４０培地、及び４７．５％のクリック培地を含む。
いくつかの実施形態では、細胞培養培地が１つ以上の細胞培養培地添加剤を含んでもよい。細胞培養培地添加剤は当業者に周知であり、抗生物質（例えば、ペニシリン、ストレプトマイシン）、血清（例えば、ヒト血清、ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ））、Ｌ－グルタミン、サイトカイン／増殖因子などの増殖因子に富む添加剤を含む。
いくつかの実施形態では、細胞培養培地が（体積で）２．５～２０％（例えば、５％）の増殖因子に富む添加剤、例えば、５～２０％のＦＢＳ、例えば、７．５～１５％のＦＢＳ、又は１０％のＦＢＳを含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地が０．５～５％のＧｌｕｔａＭａｘ、例えば、１％のＧｌｕｔａＭａｘを含む。いくつかの実施形態において、細胞培養培地は０．５～５％のＰｅｎ／Ｓｔｒｅｐ、例えば、１％のＰｅｎ／Ｓｔｒｅｐを含む。
特定の実施形態では、細胞培養培地がヒト血小板溶解物を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地が（体積で）１～２０％（例えば、５％）のヒト血小板溶解物、例えば、２．５～２０％のヒト血小板溶解物、例えば、２．５～１５％、２．５～１０％、又は５％のヒト血小板溶解物を含む。ヒト血小板溶解物は例えば、Ｓｅｘｔｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから得ることができる。
特定の実施形態では、細胞培養培地はＬ－グルタミンを含む。特定の実施形態では、細胞培養培地が０．５～１０ｍＭのＬ－グルタミン、例えば、１～５ｍＭのＬ－グルタミン、例えば、２ｍＭのＬ－グルタミンを含む。
本開示によるＡＰＣは、プロフェッショナルＡＰＣであり得る。プロフェッショナルＡＰＣはＴ細胞に抗原を提示するために特殊化されており、それらは、細胞表面でＭＨＣ－ペプチド複合体をプロセシング及び提示するのに効率的であり、高レベルの共刺激分子を発現する。プロフェッショナルＡＰＣには、樹状細胞（ＤＣ）、マクロファージ、及びＢ細胞が含まれる。非専門的ＡＰＣはＭＨＣ－ペプチド複合体をＴ細胞に、特にＭＨＣクラスＩ－ペプチド複合体をＣＤ８＋ Ｔ細胞に提示することができる他の細胞である。
いくつかの実施形態では、ＡＰＣがＡＰＣによって内部移行される（例えば、エンドサイトーシス／食作用によって取り込まれる）抗原のＭＨＣクラスＩ上で交差提示することができるＡＰＣである。ＣＤ８＋ Ｔ細胞への内在化抗原のＭＨＣクラスＩ上での交差提示は例えば、Ａｌｌｏａｔｔｉら，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ（２０１６），２７２（１）：９７－１０８に記載されており、これは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。交差提示が可能なＡＰＣには、例えば、樹状細胞（ＤＣ）、マクロファージ、Ｂ細胞及び類洞内皮細胞が含まれる。
本明細書に説明されるように、いくつかの実施形態では、ウイルス抗原に特異的な免疫細胞を刺激するためのＡＰＣがウイルス抗原に特異的な免疫細胞を含む細胞集団（例えば、ＰＢＭＣ）内に含まれ、そこからウイルス抗原に特異的な細胞集団が拡大される。そのような実施形態では、ＡＰＣが例えば、樹状細胞、マクロファージ、Ｂ細胞、又はウイルス抗原に特異的な免疫細胞に抗原を提示することができる細胞集団内の任意の他の細胞型であってもよい。
いくつかの実施形態では、方法がウイルス抗原／そのペプチドを発現／含むように修飾されたＡＰＣを使用する。いくつかの実施形態では、ＡＰＣがペプチドと接触させられ、それらを内部移行させた結果として、ウイルス抗原に対応するペプチドを提示し得る。いくつかの実施形態では、ＡＰＣが一般に、ＡＰＣがペプチドを内部移行するのに十分な期間、ペプチドの存在下でインビトロでＡＰＣを培養することを含む、ペプチドで「パルス」されていてもよい。
いくつかの実施形態では、ＡＰＣが細胞内の抗原をコードする核酸の発現の結果として、ウイルス抗原に対応するペプチドを提示し得る。ＡＰＣはウイルスに感染した結果（例えば、ＥＢＶ感染Ｂ細胞の場合、例えば、ＬＣＬ）、ウイルス抗原をコードする核酸を含んでもよい。ＡＰＣは例えば、トランスフェクション、形質導入、エレクトロポレーションなどを介して、細胞に導入された抗原をコードする核酸の結果として、ウイルス抗原をコードする核酸を含み得る。ウイルス抗原をコードする核酸は、プラスミド／ベクター中に提供され得る。
いくつかの実施形態において、ＡＰＣは活性化Ｔ細胞（ＡＴＣ）、樹状細胞、Ｂ細胞（例えば、ＬＣＬを含む）、及び人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）、例えば、Ｎｅａｌら，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ Ｔｈｅｒ（２０１７）２（１）：６８－７９及びＴｕｒｔｌｅ ａｎｄ Ｒｉｄｄｅｌｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｊ．（２０１０）１６（４）：３７４－３８１に記載されているものから選択される。
いくつかの実施形態では、ＡＰＣがウイルス抗原に特異的な免疫細胞を含む免疫細胞の集団の生成／拡大のために共培養される細胞の集団に関して自己由来である。すなわち、いくつかの実施形態では、ＡＰＣが共培養される細胞の集団が得られた対象と同じ対象に由来する（又はそれから得られた細胞に由来する）。
ＡＰＣとしてのポリクローナル活性化Ｔ細胞（ＡＴＣ）の使用及びＡＴＣを調製するための方法は、例えば、Ｎｇｏら，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．（２０１４）３７（４）：１９３－２０３に記載されており、参照により本明細書に組み込まれる。簡潔に述べると、ＡＴＣは、ＩＬ－２の存在下で、アゴニスト抗ＣＤ３抗体及びアゴニスト抗ＣＤ２８抗体でＰＢＭＣを刺激することによって、インビトロでＴ細胞を非特異的に活性化することによって生成することができる。
樹状細胞は例えば、Ｎｇｏら，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．（２０１４）３７（４）：１９３－２０３に記載されているように、当技術分野で周知の方法に従って作製することができる。樹状細胞は、ＰＢＭＣからのＣＤ１４選択によって得ることができる単球から調製することができる。単球は、例えば、ＩＬ－４及びＧＭ－ＣＳＦを含み得る未成熟樹状細胞への分化を引き起こす細胞培養培地中で培養され得る。未成熟樹状細胞は、ＩＬ－６、ＩＬ－１β、ＴＮＦα、ＰＧＥ２、ＧＭ－ＣＳＦ及びＩＬ－４の存在下での培養によって成熟させることができる。
ＬＣＬは、例えば、Ｈｕｉ－Ｙｕｅｎら，Ｊ Ｖｉｓ Ｅｘｐ（２０１１）５７：３３２１、及びＨｕｓｓａｉｎ ａｎｄ Ｍｕｌｈｅｒｋａｒ，Ｉｎｔ Ｊ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｍｅｄ（２０１２）１（２）：７５－８７に記載されているように、当技術分野で周知の方法に従って生成することができ、両方ともその全体が参照により本明細書に組み込まれる。簡潔には、ＬＣＬがシクロスポリンＡの存在下で、ＥＢＶを産生する細胞、例えば、Ｂ９５－８細胞の濃縮細胞培養上清とＰＢＭＣをインキュベートすることによって産生することができる。
細胞を呈示する人工抗原（ａＡＰＣ）には、例えば、コスト推定分子ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ８３及び４－１ＢＢＬを表現するようにエンジニアリングされたＫ５６２ｃｓセル（例えば、Ｓｕｈｏｓｋｉら，Ｍｏｌ．（２００７）Ｔｈｅｒ．（１５）５：９８１－８に記載）が含まれる。
いくつかの実施形態では、刺激ステップがＰＢＭＣをウイルス抗原に対応するペプチドと接触させることを含む。いくつかの実施形態では、再刺激ステップがウイルス抗原に特異的な免疫細胞を、ウイルス抗原に対応するＡＰＣ提示ペプチドと接触させることを含む。いくつかの実施形態では、再刺激ステップがウイルス抗原に特異的な免疫細胞を、ウイルス抗原に対応するＡＴＣ提示ペプチドと接触させることを含む。
いくつかの実施形態では、本方法が刺激及び／又は再刺激における共刺激を増強するための薬剤をさらに使用する。そのようなエージェントには、例えば、コスト推定分子を表現するセル（例えば、ＬＣＬ又はＫ５６２ｃｓセルのような、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ８３及び／又は４－１ＢＢＬ）が含まれる。いくつかの実施形態では、共刺激分子を発現する細胞が「ユニバーサルＬＣＬ」又は「ｕＬＣＬ」とも呼ばれるＨＬＡ陰性ＥＢＶ複製不能ＬＣＬである。ｕＬＣＬが例えば、ＵＳ２０１８／０２５０３７９Ａ１に記載されている。
共刺激を増強するための薬剤の他の例としては、例えば、Ｔ細胞によって発現される共刺激受容体に特異的なアゴニスト抗体（例えば、４－１ＢＢ、ＣＤ２８、ＯＸ４０、ＩＣＯＳなど）、及びＴ細胞によって発現される共刺激受容体を活性化することができる共刺激分子（例えば、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ８３、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＩＣＯＳＬなど）が挙げられる。そのような薬剤は例えば、ビーズ上に固定されて提供され得る。
いくつかの実施形態では、本開示による刺激及び／又は再刺激がｕＬＣＬを用いる。ＵＬＣＬはＥＢＶ抗原を発現し、他の共刺激分子と共にＣＤ３０も発現する。したがって、ｕＬＣＬは、ＥＢＶ抗原刺激、ＣＤ３０を介したＣＡＲを介したＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの刺激、及びＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴのインビトロ／エクスビボ拡大のための共刺激を提供するのに有用である。
いくつかの実施形態では、ｕＬＣＬが抗原刺激（例えば、ＥＢＶ及び／又はＣＤ３０刺激）を提供する細胞として使用される。いくつかの実施形態では、ｕＬＣＬが共刺激を提供する細胞として使用される。いくつかの実施形態において、ｕＬＣＬは、抗原刺激及び共刺激を提供する細胞として使用される。いくつかの実施形態において、ｕＬＣＬは照射される（例えば、１００グレイで）。いくつかの実施形態では、ウイルス抗原に対応するＡＰＣ提示ペプチドはｕＬＣＬである。
特定の実施形態では、本開示の方法がｕＬＣＬの存在下でウイルス抗原に特異的な免疫細胞を培養することを含む。特定の実施形態では、本開示の方法がｕＬＣＬの存在下でウイルス抗原に特異的な免疫細胞を培養することを含む再刺激ステップを含む。いくつかの実施形態では、ｕＬＣＬ（例えば、照射されたｕＬＣＬ）はウイルス抗原に特異的な免疫細胞との共培養において、１：１～１：１０の間のｕＬＣＬ使用され得、例えば、１：１．５、１：２、１：２．５、１：３、１：３．５、１：４、１：４．５、１：５、１：５．５、１：６、１：６．５、１：７、１：７．５又は１：８のうちの１であり得る。いくつかの実施形態では、ｕＬＣＬ（例えば、照射されたｕＬＣＬ）はウイルス抗原に特異的な免疫細胞のｕＬＣＬに対する比が１：２～１：５、例えば、１：２、１：２．５、１：３、１：３．５、１：４、１：４．５又は１：５のうちの１つでウイルス抗原に特異的な免疫細胞との共培養において使用され得る。いくつかの実施形態では、ｕＬＣＬに対するウイルス抗原に特異的な免疫細胞の比が～１：３である。
特定の実施形態では、本開示の方法が本明細書に記載のＣＡＲを含む／発現する（又はそのようなＣＡＲをコードする核酸を含む／発現する）ウイルス特異的免疫細胞をｕＬＣＬの存在下で培養することを含む。特定の実施形態では、本開示の方法が本明細書に記載のＣＡＲを含む／発現する（又はそのようなＣＡＲをコードする核酸を含む／発現する）ウイルス特異的免疫細胞をｕＬＣＬの存在下で培養することを含む再刺激ステップを含む。いくつかの実施形態では、ｕＬＣＬ（例えば、照射されたｕＬＣＬ）は本明細書に記載されるＣＡＲを含む／発現するウイルス特異的免疫細胞（又は本明細書に記載されるＣＡＲを含む／発現するウイルス特異的免疫細胞）と、ｕＬＣＬに対して１：１～１：１０、例えば、１：１．５、１：２、１：２．５、１：３、１：３．５、１：４、１：４．５、１：５、１：５．５、１：６、１：６．５、１：７、１：７．５又は１：８のうちの１つを含む／含む（又はそのようなＣＡＲをコードする核酸を含む／発現する）ウイルス特異的免疫細胞。いくつかの実施形態において、ｕＬＣＬ（例えば、照射されたｕＬＣＬ）は本明細書に記載されるＣＡＲを含む／発現するウイルス特異的免疫細胞（又はそのようなＣＡＲをコードする核酸を含む／発現する）と、ｕＬＣＬに対する１：２～１：５の間、例えば、１：２、１：２．５、１：３、１：３．５、１：４、１：４．５又は１：５のうちの１つを含む／発現するウイルス特異的免疫細胞の比率で、本明細書に記載されるＣＡＲを含む／発現するウイルス特異的免疫細胞との共培養において使用され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲを含む／発現する（又はそのようなＣＡＲをコードする核酸を含む／発現する）ウイルス特異的免疫細胞とｕＬＣＬとの比が～１：３である。
いくつかの実施形態では、再刺激ステップがｕＬＣＬの存在下で、ウイルス抗原に特異的な免疫細胞を、ウイルス抗原に対応するＡＴＣ提示ペプチドと接触させることを含む。
免疫細胞の集団を、ウイルス抗原に対応するペプチド、又はウイルス抗原に対応するＡＰＣ提示ペプチドと接触させることは、Ｔ細胞の活性化及び増殖を促進するために、１つ又は複数のサイトカインの存在下で行うことができる。いくつかの実施形態において、刺激は、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－４、ＩＬ－２及び／又はＩＬ－２１の１つ以上の存在下で行われる。サイトカインは、培養物に外因的に加えられ、培養物中の細胞によって産生されるサイトカインに加えられることが理解されるのであろう。いくつかの実施形態では、添加されたサイトカインが組換えにより生成されたサイトカインである。
したがって、いくつかの実施形態では、方法がＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－４、ＩＬ－２及び／又はＩＬ－２１の１つ以上の存在下で、ウイルス抗原に対応するペプチドと接触させたＰＢＭＣ、又はウイルス抗原に対応するペプチドを提示するＡＰＣの存在下で。
いくつかの実施形態では、培養物がＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、ＩＬ－４、ＩＬ－２及び／又はＩＬ－２１の存在下である。いくつかの実施形態では、培養物は、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－６及び／又はＩＬ－１２の存在下である。いくつかの実施形態では、培養物がＩＬ－７及び／又はＩＬ－１５の存在下である。
いくつかの実施形態において、培養物中のＩＬ－７の最終濃度は、１～１００ｎｇ／ｍｌ、例えば、２～５０ｎｇ／ｍｌ、５～２０ｎｇ／ｍｌ又は７．５～１５ｎｇ／ｍｌのうちの１つである。いくつかの実施形態において、培養物中のＩＬ－７の最終濃度は、約１０ｎｇ／ｍｌである。
いくつかの実施形態において、培養物中のＩＬ－１５の最終濃度は、１～１００ｎｇ／ｍｌ、例えば、２～５０ｎｇ／ｍｌ、５～２０ｎｇ／ｍｌ又は７．５～１５ｎｇ／ｍｌのうちの１つである。いくつかの実施形態において、培養物中のＩＬ－１５の最終濃度は、約１０ｎｇ／ｍｌである。いくつかの実施形態では、培養物中のＩＬ－１５の最終濃度が１０～１０００ｎｇ／ｍｌ、例えば、２０～５００ｎｇ／ｍｌ、５０～２００ｎｇ／ｍｌ又は７５～１５０ｎｇ／ｍｌのうちの１つである。いくつかの実施形態において、培養物中のＩＬ－１５の最終濃度は、約１００ｎｇ／ｍｌである。
いくつかの実施形態では、培養物中のＩＬ－６の最終濃度は、１０～１０００ｎｇ／ｍｌ、例えば、２０～５００ｎｇ／ｍｌ、５０～２００ｎｇ／ｍｌ又は７５～１５０ｎｇ／ｍｌのうちの１つである。いくつかの実施形態において、培養物中のＩＬ－６の最終濃度は、約１００ｎｇ／ｍｌである。
いくつかの実施形態において、培養物中のＩＬ－１２の最終濃度は、１～１００ｎｇ／ｍｌ、例えば、２～５０ｎｇ／ｍｌ、５～２０ｎｇ／ｍｌ又は７．５～１５ｎｇ／ｍｌのうちの１つである。いくつかの実施形態では、培養物中のＩＬ－１２の最終濃度は１０ｎｇ／ｍｌである。
いくつかの実施形態において、ＩＬ－７の最終濃度は、１～１００ｎｇ／ｍｌ（例えば、２～５０ｎｇ／ｍｌ、５～２０ｎｇ／ｍｌ又は７．５～１５ｎｇ／ｍｌのうちの１つ、例えば、１０ｎｇ／ｍｌ）であり、ＩＬ－１５の最終濃度は１～１００ｎｇ／ｍｌ（例えば、２～５０ｎｇ／ｍｌ、５～２０ｎｇ／ｍｌ又は７．５～１５ｎｇ／ｍｌのうちの１つ、例えば、約１０ｎｇ／ｍｌ）である。
いくつかの実施形態において、ＩＬ－７の最終濃度は、１～１００ｎｇ／ｍｌ（例えば、２～５０ｎｇ／ｍｌ、５～２０ｎｇ／ｍｌ又は７．５～１５ｎｇ／ｍｌのうちの１つ、例えば、１０ｎｇ／ｍｌ）であり、ＩＬ－１５の最終濃度は１０～１０００ｎｇ／ｍｌ（例えば、２０～５００ｎｇ／ｍｌ、５０～２００ｎｇ／ｍｌ又は７５～１５０ｎｇ／ｍｌのうちの１つ、例えば、約１００ｎｇ／ｍｌ）である。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－７の最終濃度は、１～１００ｎｇ／ｍｌ（例えば、２～５０ｎｇ／ｍｌ、５～２０ｎｇ／ｍｌ又は７．５～１５ｎｇ／ｍｌのうちの１つ、例えば、１０ｎｇ／ｍｌ）であり、ＩＬ－６の最終濃度は１０～１０００ｎｇ／ｍｌ（例えば、２０～５００ｎｇ／ｍｌ、５０～２００ｎｇ／ｍｌ又は７５～１５０ｎｇ／ｍｌのうちの１つ、例えば、約１００ｎｇ／ｍｌ）であり、ＩＬ－１２の最終濃度は１～１００ｎｇ／ｍｌ（例えば、２～５０ｎｇ／ｍｌ、５～２０ｎｇ／ｍｌ又は７．５～１５ｎｇ／ｍｌのうちの１つ、例えば、１０ｎｇ／ｍｌ）であり、ＩＬ－１５の最終濃度は１～１００ｎｇ／ｍｌ（例えば、２～５０ｎｇ／７．５～１５ｎｇ／ｍｌ、例えば、１０ｎｇ／ｍｌ）。
いくつかの実施形態において、刺激培養物中のＩＬ－７の最終濃度は、１～１００ｎｇ／ｍｌ（例えば、２～５０ｎｇ／ｍｌ、５～２０ｎｇ／ｍｌ又は７．５～１５ｎｇ／ｍｌのうちの１つ、例えば、１０ｎｇ／ｍｌ）であり、刺激培養物中のＩＬ－１５の最終濃度は１０～１０００ｎｇ／ｍｌ（例えば、２０～５００ｎｇ／ｍｌ、５０～２００ｎｇ／ｍｌ又は７５～１５０ｎｇ／ｍｌのうちの１つ、例えば、約１００ｎｇ／ｍｌ）である。
いくつかの実施形態において、刺激培養物中のＩＬ－７の最終濃度は、１～１００ｎｇ／ｍｌ（例えば、２～５０ｎｇ／ｍｌ、５～２０ｎｇ／ｍｌ又は７．５～１５ｎｇ／ｍｌ、例えば、１０ｎｇ／ｍｌの１つ）であり、刺激培養物中のＩＬ－６の最終濃度は１０～１０００ｎｇ／ｍｌ（例えば、２０～５００ｎｇ／ｍｌ、５０～２００ｎｇ／ｍｌ又は７５～１５０ｎｇ／ｍｌの１つ、例えば、約１００ｎｇ／ｍｌ）であり、刺激培養物中のＩＬ－１２の最終濃度は１～１００ｎｇ／ｍｌ（例えば、２～５０ｎｇ／ｍｌ、５～２０ｎｇ／ｍｌ又は７．５～１５ｎｇ／ｍｌの１つ、例えば、１０ｎｇ／ｍｌ）であり、刺激培養物中のＩＬ－１５の最終濃度は、１～１００ｎｇ／ｍｌ ２～５０ｎｇ／ｍｌ、５～２０ｎｇ／ｍｌ又は７．５～１５ｎｇ／ｍｌのうちの１つ、例えば、１０ｎｇ／ｍｌ）。
いくつかの実施形態では、再刺激培養物中のＩＬ－７の最終濃度は、１～１００ｎｇ／ｍｌ（例えば、２～５０ｎｇ／ｍｌ、５～２０ｎｇ／ｍｌ又は７．５～１５ｎｇ／ｍｌのうちの１つ、例えば、１０ｎｇ／ｍｌ）であり、再刺激培養物中のＩＬ－１５の最終濃度は１０～１０００ｎｇ／ｍｌ（例えば、２０～５００ｎｇ／ｍｌ、５０～２００ｎｇ／ｍｌ又は７５～１５０ｎｇ／ｍｌのうちの１つ、例えば、約１００ｎｇ／ｍｌ）である。
本開示による刺激及び再刺激は、典型的にはＡＰＣがＴ細胞を刺激するのに十分な期間、及びＴ細胞が細胞分裂を受けるのに十分な期間、Ｔ細胞及びＡＰＣの共培養を伴う。
いくつかの実施形態では、方法は、ウイルス抗原に対応するペプチドと接触させたＰＢＭＣを、又はウイルス抗原に対応するＡＰＣ提示ペプチドの存在下で、少なくとも１時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、４日、５日、６日、又は少なくとも７日の期間培養することを含む。いくつかの実施形態では、培養が２４時間～２０日間、例えば、４８時間～１４日間、３日～１２日間、４～１１日間、又は６～１０日間、又は７～９日間の期間である。
いくつかの実施形態では、本方法は、ウイルス抗原に対応するペプチドと接触させた本明細書に記載の刺激ステップによって得られた細胞の集団を、ウイルス抗原に対応するＡＰＣ提示ペプチドの存在下で、少なくとも１時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間、４日、５日、６日、又は少なくとも７日の期間培養することを含む。いくつかの実施形態では、培養が２４時間～２０日間、例えば、４８時間～１４日間、３日～１２日間、４～１１日間、又は６～１０日間、又は７～９日間の期間である。
刺激及び再刺激は培養物中の細胞を、それらが培養された培地から分離することによって、又は、例えば、細胞培養培地の添加によって、培養物を希釈することによって終了し得る。いくつかの実施形態では、方法が刺激又は再刺激培養の終わりに細胞を収集するステップを含む。いくつかの実施形態では、再刺激ステップが再刺激ステップのための細胞培養培地、馴化培地（及び任意の添加剤）の所望のパーセンテージ／濃度を達成するのに適切な量で、細胞培養培地（及び本明細書に記載される任意の他の添加剤）を添加することによって確立され得る。
所与の刺激又は再刺激工程の培養期間の終わりに、細胞を回収し、細胞培養上清から分離することができる。細胞は、遠心分離によって収集されてもよく、細胞培養上清は細胞ペレットから分離されてもよい。次いで、細胞ペレットは例えば、再刺激工程のために、細胞培養培地中に再懸濁され得る。いくつかの実施形態では、細胞が収集後に洗浄ステップを受けてもよい。洗浄工程はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）などの等張緩衝液中に細胞ペレットを再懸濁し、遠心分離によって細胞を回収し、上清を廃棄することを含んでもよい。
ウイルス抗原（複数可）に特異的な免疫細胞の集団を生成及び／又は拡大するための方法は、典型的には単一より多い刺激ステップを含む。実行され得る刺激ステップの数に上限はない。いくつかの実施形態では、方法は、２、３、４、又は５を超える刺激ステップを含む。いくつかの実施形態では、方法は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５の刺激ステップのうちの１つを含む。方法における刺激ステップは、互いに異なっていてもよい。
いくつかの実施形態では、本方法で使用されるＰＢＭＣは、ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞が枯渇している。すなわち、いくつかの実施形態において、ＰＢＭＣは、「ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞枯渇ＰＢＭＣ」であるか、又は「ＣＤ４５ＲＡ陰性ＰＢＭＣ」である。ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞の枯渇は、生成／増殖された細胞集団におけるＮＫ細胞及び／又は制御性Ｔ細胞の数を減少させることを意図する。
いくつかの実施形態では、方法は、例えば、刺激ステップの前に、ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞のＰＢＭＣを枯渇させるステップを含む。いくつかの実施形態では、方法は、例えば、再刺激ステップの前に、ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞の本開示による刺激ステップによって得られた細胞を枯渇させるステップを含む。ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞の枯渇は、例えば、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ（登録商標）Ｂｉｏｔｅｃカラム及び磁気抗ＣＤ４５ＲＡ抗体被覆ビーズを使用する磁気活性化細胞選別（ＭＡＣＳ）などの任意の適切な方法によって達成することができる。
いくつかの実施形態では、本方法で使用されるＡＰＣを誘導するために使用される細胞の集団がＣＤ４５ＲＡ陽性細胞が枯渇している。すなわち、いくつかの実施形態において、ＡＰＣを誘導するために使用される細胞の集団は、「ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞枯渇」又は「ＣＤ４５ＲＡ陰性」集団である。例えば、ＡＴＣがＡＰＣとして使用される実施形態では、ＡＴＣは、ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞枯渇ＰＢＭＣの集団、又はＣＤ４５ＲＡ陰性ＰＢＭＣの集団に由来し得る。
いくつかの実施形態において、方法は、細胞におけるＩＬ－７媒介性シグナル伝達を増加させるための、ウイルス抗原に特異的な免疫細胞の修飾をさらに含む。ＩＬ－７媒介シグナル伝達は腫瘍特異的Ｔ細胞の生存及び抗腫瘍活性を増加させることが示されている（例えば、Ｓｈｕｍら，Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ．（２０１７）７（１１）：１２３８－１２４７、及びＷＯ２０１８／０３８９４５Ａ１を参照されたい。
いくつかの実施形態では、本方法がＷＯ２０１８／０３８９４５Ａ１（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載の実施形態による核酸を、ウイルス抗原に特異的なＰＢＭＣ又は免疫細胞に導入することをさらに含む。いくつかの実施形態では方法は、ウイルス抗原に特異的なＰＢＭＣ又は免疫細胞に核酸を導入することを含み、核酸は、細胞内のＳＴＡＴ５媒介性シグナル伝達を増加させるためのポリペプチドをコードする。
いくつかの実施形態において、核酸は、（ｉ）ポリペプチドのホモ二量体化を促進するドメイン、及び（ｉｉ）ＩＬ－７Ｒαの細胞内ドメインを含むポリペプチドをコードする。
いくつかの実施形態において、ポリペプチドのホモ二量化を促進するドメインは、ポリペプチドのモノマー間のジスルフィド結合の形成を提供するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなる。いくつかの実施形態において、ポリペプチドのホモ二量体化を促進するドメインはＷＯ２０１８／０３８９４５Ａ１の配列ＩＤ番号：１～２４の１つに従うアミノ酸配列を含むか又はそれからなる（例えば、ＷＯ２０１８／０３８９４５Ａ１の段落［００７４］～［００７６］を参照されたい）。
ＩＬ－７Ｒαの細胞内ドメインは、ＵｎｉＰｒｏｔ：Ｐ１６８７１－１、ｖ１の２６５～４５９位に対応するアミノ酸配列を含むか、又はそれからなり得る。
核酸は、形質導入、トランスフェクション、エレクトロポレーションなどの当技術分野で周知の方法によって細胞に導入することができる。いくつかの実施形態では、核酸が核酸を含むウイルスベクター（例えば、レトロウイルスベクター）を用いた形質導入によって細胞に導入される。
いくつかの実施形態では、方法は、（ｉ）ポリペプチドのホモ二量体化を促進するドメイン、及び（ｉｉ）ＩＬ－７Ｒαの細胞内ドメインを含むポリペプチドをコードする核酸を含むウイルスベクターを用いて、ＥＢＶ抗原に特異的なＰＢＭＣ又は免疫細胞に形質導入することを含む。
本明細書に記載の方法の態様及び実施形態は、本明細書に記載のＣＡＲを発現／含むように、本明細書に記載の免疫細胞（例えば、本明細書に記載のウイルス特異的免疫細胞）を改変することを含む。
本明細書に記載の方法の態様及び実施形態は、本明細書に記載のＣＡＲをコードする核酸を発現／含むように、本明細書に記載の免疫細胞（例えば、本明細書に記載のウイルス特異的免疫細胞）を改変することを含む。
そのような方法は、典型的にはＣＡＲをコードする核酸を免疫細胞に導入することを含む。
免疫細胞（例えば、ウイルス特異的免疫細胞）は、当業者に周知の方法に従って、本明細書に記載されるＣＡＲ又はＣＡＲをコードする核酸を含む／発現するように改変され得る。本方法は一般に、移入された核酸の永続的（安定）又は一過性発現のための核酸移入を含む。
任意の適切な遺伝子工学プラットフォームを使用して、本開示による細胞を改変することができる。細胞を修飾するための適切な方法には、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＭａｕｓら，Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ（２０１４）３２：１８９－２２５に記載されているような、ガンマレトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ＤＮＡトランスフェクション、トランスポゾンベースの遺伝子送達及びＲＮＡトランスフェクションなどの遺伝子操作プラットフォームの使用が含まれる。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ又はＣＡＲをコードする核酸を含むように細胞を改変することはＣＡＲをコードする核酸を含むウイルスベクターで細胞を形質導入することを含む。
いくつかの実施形態では、本開示の方法が本明細書に記載のＣＡＲをコードするレトロウイルスを使用する。
方法はまた、例えば、Ｗａｎｇ ａｎｄ Ｒｉｖｉｅｒｅ Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ Ｏｎｃｏｌｙｔｉｃｓに記載のものを含む。（２０１６）３：１６０１５を参照されたい。
本方法は、一般に、核酸／そのような核酸を含むベクター／複数のベクターをコードする複数の核酸を細胞に導入することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、細胞による核酸又はベクターの発現に適した条件下で細胞を培養することをさらに含む。いくつかの実施形態では、方法は、インビトロで実施される。核酸／ベクターを細胞に導入するための適切な方法には、形質導入、トランスフェクション及びエレクトロポレーションが含まれる。
いくつかの実施形態では、細胞への核酸／ベクターの導入が形質導入、例えば、レトロウイルス形質導入を含む。したがって、いくつかの実施形態において、核酸は、ウイルスベクターに含まれるか、又はベクターはウイルスベクターである。ウイルスベクターによる免疫細胞の形質導入は例えば、Ｓｉｍｍｏｎｓ ａｎｄ Ａｌｂｅｒｏｌａ－Ｉｌａ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．（２０１６）１３２３：９９－１０８を参照されたい。
薬剤は形質導入の効率を高めるために、本開示の方法において使用され得る。臭化ヘキサジメトリン（ポリブレン）は、ビリオンと細胞表面上に発現されるシアル酸残基との間の電荷反発を中和することにより、形質導入を改善するために一般に使用されるカチオン性ポリマーである。形質導入を増強するために一般に使用される他の薬剤には、例えば、ＬｅｎｔｉＢＯＯＳＴ（Ｓｉｒｉｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、Ｒｅｔｒｏｎｅｃｔｉｎ（Ｔａｋａｒａ）、Ｖｅｃｔｏｆｕｓｉｎ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、ならびにＳｕｒｅＥＮＴＲＹ（Ｑｉａｇｅｎ）及びＶｉｒａＤｕｃｔｉｎ（Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌａｂｓ）などのポロキサマー系薬剤が含まれる。
特定の実施形態では、本開示の方法は、本明細書に記載のＣＡＲをコードするベクター／核酸を用いた細胞の形質導入において、ベクターフューシン－１（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃカタログ番号１７０－０７６－１６５）を用いる。いくつかの実施形態において、方法は、本明細書に記載のＣＡＲをコードするレトロウイルスをベクターフシン－１と接触させる工程、及びレトロウイルスで形質導入される細胞を、レトロウイルス及びベクターフシン－１を含む混合物と接触させる工程を含む。
いくつかの実施形態では、方法がＣＡＲをコードする核酸を導入することが望まれる細胞を、核酸を含むウイルスベクターを含む細胞培養培地の存在下で遠心分離することを含む（当技術分野では「スピフェクション」と呼ばれる）。
いくつかの実施形態では、本方法が例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＫｏｈら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ－Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ（２０１３）２，ｅ１１４に記載されるように、エレクトロポレーションによって本開示による核酸又はベクターを導入することを含む。
いくつかの実施形態では、方法がＣＡＲ発現及び／又はウイルス特異的免疫細胞を、例えば、他の細胞（例えば、ウイルスに特異的でない細胞、及び／又はＣＡＲを発現しない細胞）から精製／単離することをさらに含む。細胞の異種集団から免疫細胞を精製／単離するための方法は当技術分野において周知であり、例えば、免疫細胞のマーカーの発現に基づいて細胞の集団を選別するためのＦＡＣＳ又はＭＡＣＳに基づく方法を使用し得る。いくつかの実施形態において、方法は特定のタイプの細胞、例えば、ウイルス特異的Ｔ細胞（例えば、ウイルス特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞、ウイルス特異的ＣＴＬ）、又はＣＡＲ発現ウイルス特異的Ｔ細胞（例えば、ＣＡＲ発現ウイルス特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞、ＣＡＲ発現ウイルス特異的ＣＴＬ）を精製／単離するためのものである。
本開示はまた、本明細書に記載の方法によって得られた、又は得ることができる細胞、及びその集団を提供する。
組成物
本開示は本開示によるＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞の１つ以上（例えば、集団）を含む組成物をさらに提供する。
本明細書に記載の細胞は臨床使用のための医薬組成物又は医薬として製剤化することができ、薬学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤又はアジュバントを含むことができる。組成物は、局所、非経口、全身、腔内、静脈内、動脈内、筋肉内、くも膜下腔内、眼内、結膜内、腫瘍内、皮下、皮内、くも膜下腔内、経口、又は注入を含み得る経皮投与経路のために製剤化され得る。
適切な製剤は、無菌又は等張培地中に細胞を含むことができる。薬剤及び医薬組成物は、ゲルを含む流体の形態で製剤化され得る。流体製剤はヒト又は動物の体の選択された領域への注射又は注入（例えば、カテーテルを介して）による投与のために製剤化され得る。
いくつかの実施形態では、組成物が例えば、血管又は腫瘍への注射又は注入のために製剤化される。
本開示はまた、薬学的に有用な組成物の生成のための方法を提供し、そのような生成の方法は、本明細書に記載の細胞を生成する工程；本明細書に記載の細胞を単離する工程；及び／又は本明細書に記載の細胞を薬学的に許容される担体、アジュバント、賦形剤もしくは希釈剤と混合する工程から選択される１つ以上の工程を含み得る。
例えば、さらなる態様において、本開示は疾患／状態（例えば、癌）の治療に使用するための医薬又は医薬組成物を製剤化又は製造する方法に関し、この方法は、本明細書に記載の細胞を、薬学的に許容される担体、アジュバント、賦形剤又は希釈剤と混合することによって、医薬組成物又は医薬を製剤化することを含む。
ＭＨＣ変異とマッチング
ＭＨＣクラスＩ分子は、α（α）鎖及びβ（β）２－ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）の非共有ヘテロ二量体である。α鎖は、α１、α２及びα３と称される３つのドメインを有する。α１及びα２ドメインは、一緒になって、ＭＨＣクラスＩ分子によって提示されるペプチドが結合する溝を形成し、ペプチド：ＭＨＣ複合体を形成する。ヒトにおいて、ＭＨＣクラスＩα鎖は、ヒト白血球抗原（ＨＬＡ）遺伝子によってコードされる。３つの主要なＨＬＡ遺伝子座（ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ及びＨＬＡ－Ｃ）及び３つの副遺伝子座（ＨＬＡ－Ｅ、ＨＬＡ－Ｆ及びＨＬＡ－Ｇ）が存在する。
ＭＨＣクラスＩα鎖は多型であり、異なるα鎖は異なるペプチドに結合し、提示することができる。ＭＨＣクラスＩαポリペプチドをコードする遺伝子は非常に多様であり、異なる対象由来の細胞がしばしば異なるＭＨＣクラスＩ分子を発現する結果となる。
この変動性は、臓器移植及び個体間の細胞の養子移入に関与する。移植又は養子移入された細胞のレシピエントの免疫系は非自己ＭＨＣ分子を外来性として認識し、移植又は養子移入された細胞に対する免疫応答を誘発し、これは移植片拒絶をもたらし得る。あるいは、移植される細胞／組織／器官の集団の中の細胞がレシピエントのＭＨＣ分子を外来性として認識する免疫細胞を含み得、レシピエント組織に対する免疫応答を誘発し、これは移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）をもたらし得る。
アロ反応性Ｔ細胞は、非自己ＭＨＣ分子（すなわち、同種ＭＨＣ）を認識し、それに対する免疫応答を開始することができるＴＣＲを含む。アレア機能性Ｔ細胞は、非自己ＭＨＣ分子を表現するセルに対応して、細胞拡散、成長因子（例：ＩＬ－２）表現、サイトメキシコ／エフェクター因子（例：ＩＦＮγ、グランザイム、ペフリン、グラヌリジン、ＣＤ１０７ａ、ＴＮＦα、ＦＡＳＬ）表現及び／又はサイトメキシコ活性）の１つ以上の性質を表示することができる。
本明細書で用いられる「同種反応性」及び「同種反応性免疫応答」は、エフェクター免疫細胞と遺伝的に同一でない細胞／組織／器官に対する免疫応答を指す。エフェクター免疫細胞は非自己ＭＨＣ／ＨＬＡ分子（すなわち、エフェクター免疫細胞によってコードされるＭＨＣ／ＨＬＡ分子と同一ではないＭＨＣ／ＨＬＡ分子）を発現する、細胞－又は細胞を含む組織／器官－に対する同種反応性又は同種反応性免疫応答を示し得る。
本明細書において言及される「ＭＨＣミスマッチ」及び「ＨＬＡミスマッチ」被験者は、非同一ＭＨＣ／ＨＬＡ分子をコードするＭＨＣ／ＨＬＡ遺伝子を有する被験者である。いくつかの実施形態において、ＭＨＣミスマッチ又はＨＬＡミスマッチ対象は、非同一ＭＨＣクラスＩα及び／又はＭＨＣクラスＩＩ分子をコードするＭＨＣ／ＨＬＡ遺伝子を有する。本明細書において言及される「ＭＨＣ適合」及び「ＨＬＡ適合」対象は、同一のＭＨＣ／ＨＬＡ分子をコードするＭＨＣ／ＨＬＡ遺伝子を有する対象である。いくつかの実施形態において、ＭＨＣ適合又はＨＬＡ適合対象は、同一のＭＨＣクラスＩα及び／又はＭＨＣクラスＩＩ分子をコードするＭＨＣ／ＨＬＡ遺伝子を有する。
細胞／組織／器官が参照対象／処置に関して同種異系であると本明細書で言及される場合、細胞／組織／器官は、参照対象以外の対象の細胞／組織／器官から得られる／由来する。いくつかの実施形態において、同種異系材料は参照対象のＭＨＣ／ＨＬＡ遺伝子によってコードされるＭＨＣ／ＨＬＡ分子（例えば、ＭＨＣクラスＩα及び／又はＭＨＣクラスＩＩ分子）と同一ではないＭＨＣ／ＨＬＡ分子（例えば、ＭＨＣクラスＩα及び／又はＭＨＣクラスＩＩ分子）をコードするＭＨＣ／ＨＬＡ遺伝子を含む。
細胞／組織／器官が治療に関して同種異系であると本明細書で言及される場合、細胞／組織／器官は、治療される対象以外の対象の細胞／組織／器官から得られる／由来する。いくつかの実施形態では、同種異系材料が治療される被験体のＭＨＣ／ＨＬＡ遺伝子によってコードされるＭＨＣ／ＨＬＡ分子（例えば、ＭＨＣクラスＩα及び／又はＭＨＣクラスＩＩ分子）と同一ではないＭＨＣ／ＨＬＡ分子（例えば、ＭＨＣクラスＩα及び／又はＭＨＣクラスＩＩ分子）をコードするＭＨＣ／ＨＬＡ遺伝子を含む。
細胞／組織／臓器が本明細書において、参照対象に関して自己であると称される場合、細胞／組織／臓器は、参照対象の細胞／組織／臓器から得られる／由来する。細胞／組織／器官が参照対象に関して自己遺伝的であると本明細書で言及される場合、細胞／組織／器官は、参照対象と遺伝的に同一であるか、又は遺伝的に同一の対象に由来する／から得られる。細胞／組織／臓器が本明細書において、対象の処置（例えば、自己細胞の対象への投与による処置）の文脈において自己であると称される場合、細胞／組織／臓器は、処置される対象の細胞／組織／臓器から得られる／由来する。細胞／組織／器官が本明細書において、被験体の処置の文脈において自己遺伝性であると称される場合、細胞／組織／器官は、処置される被験体と遺伝的に同一であるか、又は遺伝的に同一の被験体に由来する／から得られる。自家及び自家細胞／組織／臓器は参照対象のＭＨＣ／ＨＬＡ遺伝子によってコードされるＭＨＣ／ＨＬＡ分子（例えば、ＭＨＣクラスＩα及び／又はＭＨＣクラスＩＩ分子）と同一であるＭＨＣ／ＨＬＡ分子（例えば、ＭＨＣクラスＩα及び／又はＭＨＣクラスＩＩ分子）をコードするＭＨＣ／ＨＬＡ遺伝子を含む。
細胞／組織／器官が参照対象に関して同種異系であると本明細書で言及される場合、細胞／組織／器官は、参照対象と遺伝的に同一でないか、又は遺伝的に同一でない対象に由来する／から得られる。細胞／組織／器官が本明細書において、被験体の治療の文脈において同種異系であると称される場合、細胞／組織／器官は、治療される被験体と遺伝的に同一ではないか、又は遺伝的に同一でない被験体に由来する／から得られる。同種異系の細胞／組織／器官は参照対象のＭＨＣ／ＨＬＡ遺伝子によってコードされるＭＨＣ／ＨＬＡ分子（例えば、ＭＨＣクラスＩα及び／又はＭＨＣクラスＩＩ分子）と同一ではないＭＨＣ／ＨＬＡ分子（例えば、ＭＨＣクラスＩα及び／又はＭＨＣクラスＩＩ分子）をコードするＭＨＣ／ＨＬＡ遺伝子を含み得る。
いくつかの実施形態では、本開示の方法に従って対象に投与される、本明細書に記載のＣＡＲを発現する／含む（又はそのようなＣＡＲをコードする核酸を発現する／含む）ウイルスに特異的な免疫細胞は治療される対象のＨＬＡ／ＭＨＣプロファイルに基づいて選択される。
いくつかの実施形態では、対象に投与される細胞が対象に対して適合したＨＬＡ／ＭＨＣであることに基づいて選択される。いくつかの実施形態では、対象に投与される細胞が対象に対するほぼ又は完全なＨＬＡ／ＭＨＣ一致であることに基づいて選択される。
本明細書で用いられる場合、ＨＬＡ／ＭＨＣ対立遺伝子は、それらが同じアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする場合、「一致」すると決定され得る。すなわち、「一致」は、ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列における同義的差異及び／又は非コード領域における差異の存在の可能性にかかわらず、タンパク質レベルで決定される。
参照対象に関して「ＨＬＡ適合」である細胞は、（ｉ）ＨＬＡ－Ａ、－Ｂ、－Ｃ、及び－ＤＲＢ１にわたる８／８一致；又は（ｉｉ）ＨＬＡ－Ａ、－Ｂ、－Ｃ、－ＤＲＢ１、及び－ＤＱＢ１にわたる１０／１０一致；又は（ｉｉｉ）ＨＬＡ－Ａ、－Ｂ、－Ｃ、－ＤＲＢ１、－ＤＱＢ１、及び－ＤＰＢ１にわたる１２／１２一致であり得る。参照対象に関して「ほぼ完全なＨＬＡ一致」である細胞は、（ｉ）ＨＬＡ－Ａ、－Ｂ、－Ｃ、及び－ＤＲＢ１にわたる≧４／８（すなわち、４／８、５／８、６／８、７／８、又は８／８）一致、又は（ｉｉ）ＨＬＡ－Ａ、－Ｂ、－Ｃ、－ＤＲＢ１、及び－ＤＱＢ１にわたる≧５／１０（すなわち、５／１０、６／１０、７／１０、８／１０、９／１０又は１０／１０）一致、又は、（ｉｉｉ）ＨＬＡ－Ａ、－Ｂ、－Ｃ、－ＤＲＢ１、－ＤＱＢ１および－ＤＰＢ１にまたがる≧６／１２（すなわち６／１２、７／１２、８／１２、９／１２、１０／１２、１１／１２、又は１２／１２）一致であり得る。
（同種起源であるかどうかにかかわらず）ほぼ又は完全なＨＬＡ一致である対象への細胞の投与は、特に、免疫細胞が特異的であるウイルスによって引き起こされる、又はそれに関連する疾患／状態の処置のための、本明細書に記載されるＣＡＲを発現する／含む（又はそのようなＣＡＲをコードする核酸を発現する／含む）ウイルスに特異的な免疫細胞の投与の文脈において有利であり得る。そのような場合、投与された細胞への宿主の細胞によるウイルス抗原の提示（それらの天然ＴＣＲを介する）は、インビボでのそれらの活性化、増殖及び生存を増加させ、その結果、それらの治療有効性を改善することが期待される。
ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞を使用する方法
本明細書に記載されるＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞（例えば、本明細書に記載されるＣＤ３０特異的ＣＡＲ発現ＥＢＶ特異的Ｔ細胞（ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴ））は、治療的及び／又は予防的方法における使用を見出す。
本開示によるＣＡＲを発現するウイルス特異的免疫細胞を対象に投与することを含む、対象における疾患／状態を治療／予防するための方法が提供される。
医療処置／予防の方法において使用するための、本開示によるＣＡＲを発現するウイルス特異的免疫細胞も提供される。疾患／状況を治療／予防するための方法において使用するための、本開示によるＣＡＲを発現するウイルス特異的免疫細胞も提供される。疾患／状態を治療／予防するための方法において使用するための医薬の製造における、本開示によるＣＡＲを発現するウイルス特異的免疫細胞の使用も提供される。
本方法は、一般に、本開示によるＣＡＲを発現するウイルス特異的免疫細胞の集団を対象に投与することを含むことが理解されるのであろう。いくつかの実施形態では、本開示によるＣＡＲを発現するウイルス特異的免疫細胞がそのような細胞を含む医薬組成物の形態で投与され得る。
特に、養子細胞移入（ＡＣＴ）によって疾患／状態を治療／予防する方法における、本開示によるＣＡＲを発現するウイルス特異的免疫細胞の使用が企図される。
本開示によるＣＡＲを発現するウイルス特異的免疫細胞は、同種移植によって疾患／状態を治療するための方法において特に有用である。
本明細書で用いられる場合、「同種移植」は、レシピエント対象と遺伝的に同一でない細胞、組織又は器官のレシピエント対象への移植を指す。細胞、組織、又は器官は、レシピエント対象と遺伝的に同一でないドナー対象の細胞、組織、又は器官に由来してもよく、又はそれに由来してもよい。同種移植は自己移植とは異なり、これは、レシピエント対象と遺伝的に同一のドナー対象に由来する／由来する細胞、組織又は器官の移植を指す。
同種異系免疫細胞の養子移入は、同種移植の一形態であることが理解されよう。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞が同種移植による疾患／状態を治療／予防するための方法において、治療剤／予防剤として使用される。
本開示のＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞及び組成物の投与は、好ましくは「治療的有効」又は「予防的有効」量であり、これは、対象に治療的又は予防的利益を示すのに十分である。投与される実際の量、ならびに投与の速度及び時間経過は、疾患／状態及び投与される特定の物品の性質及び重症度に依存する。治療の処方、例えば、投薬量などの決定は一般開業医及び他の医師の責任の範囲内であり、典型的には、治療される疾患／障害、個々の対象の状態、送達部位、投与方法、及び開業医に知られている他の因子を考慮する。上述の技術及びプロトコルの例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，２０００，ｐｕｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ。
複数回用量が提供されてもよい。複数用量は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３時間以上、又は１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、又は３１日、又は１、２、３、４、５、又は６ヶ月のうちの１つで。例として、用量は、７、１４、２１又は２８日（±３、２又は１日）毎に１回与えられ得る。
いくつかの実施形態では、処置が他の治療的又は予防的介入、例えば、化学療法、免疫療法、放射線療法、手術、ワクチン接種及び／又はホルモン療法をさらに含み得る。このような他の治療的又は予防的介入は本開示に包含される治療の前、最中及び／又は後に起こり得、他の治療的又は予防的介入の送達は本開示の治療として異なる投与経路を介して起こり得る。
投与は治療される状態に応じて、単独で、又は他の治療と組み合わせて、同時に、又は連続してのいずれかであり得る。本明細書に記載されるＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞及び組成物は、別の治療的介入と同時に又は連続して投与され得る。
同時投与とは、２つ以上の治療的介入を一緒に、例えば、両方の活性剤を含有する（すなわち、組み合わせた調製物中に）医薬組成物として、又は互いに直後に、及び場合により同じ投与経路を介して、例えば、同じ動脈、静脈又は他の血管に投与することを指す。
連続投与は、１つ以上のさらなる治療的介入の別々の投与によって、所定の時間隔の後に続く１つの治療的介入の投与を指す。いくつかの実施形態ではそうが、療法が同じ経路によって投与されることは必要とされない。時間隔は、任意の時間隔であってもよい。
養子細胞移入は一般に、細胞（例えば、免疫細胞）が対象から得られるプロセスを指し、典型的には、細胞が単離される血液試料を採取することによって得られる。次いで、細胞は、典型的には改変及び／又は増殖され、次いで、同じ対象（自家／自家細胞の養子移入の場合）又は異なる対象（同種細胞の養子移入の場合）のいずれかに投与される。治療は、典型的にはある所望の特徴を有する細胞集団を対象に提供すること、又はそのような特徴を有するそのような細胞の頻度を対象において増加させることを目的とする。養子移入は、対象に細胞又は細胞集団を導入すること、及び／又は対象における細胞又は細胞集団の頻度を増加させることを目的として実施され得る。
免疫細胞の養子移入は、例えば、Ｋａｌｏｓ ａｎｄ Ｊｕｎｅ（２０１３），Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ３９（１）：４９－６０，ａｎｄ Ｄａｖｉｓら（２０１５），Ｃａｎｃｅｒ Ｊ．２１（６）： ４８６－４９１に記載されており、これらはいずれも参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。当業者は例えば、例によりその全体が組み込まれるＤａｉら，２０１６ Ｊ Ｎａｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ １０８（７）：ｄｊｖ４３９を例することにより、本開示による細胞の養子移入のための適切な試薬及び手順を決定することができる。
本開示は、本開示によるＣＡＲを含む／発現するウイルス特異的免疫細胞、又は本開示によるＣＡＲをコードする核酸を含む／発現するウイルス特異的免疫細胞を対象に投与することを含む方法を提供する。
いくつかの実施形態では、方法がウイルスに特異的な免疫細胞を生成すること、又はウイルスに特異的な免疫細胞の集団を生成／拡大することを含む。いくつかの実施形態では、方法がウイルスに特異的な免疫細胞を、本開示によるＣＡＲを含む／発現するように改変することを含む。いくつかの実施形態では、方法がウイルスに特異的な免疫細胞を、本開示によるＣＡＲをコードする核酸を含む／発現するように改変することを含む。
いくつかの実施形態では、本方法が本開示によるＣＡＲを発現する／含むように改変された（又はそのようなＣＡＲをコードする核酸を発現する／含むように改変された）ウイルスに特異的な免疫細胞を対象に投与することを含む。
いくつかの実施形態では、方法は、以下を含む：
（ａ）本開示によるＣＡＲを発現又は含むウイルスに特異的な免疫細胞を改変すること、又は本開示によるＣＡＲをコードする核酸を発現又は含むこと、及び
（ｂ）本開示によるＣＡＲを発現するように改変された、又は本開示によるＣＡＲを含む、又は本開示によるＣＡＲをコードする核酸を発現するように改変された、又は含むウイルスに特異的な免疫細胞を対象に投与すること。
いくつかの実施形態では、方法は、以下を含む：
（ａ）ウイルスに特異的な免疫細胞の単離又は取得；
（ｂ）本開示によるＣＡＲを発現又は含むウイルスに特異的な免疫細胞を改変すること、又は本開示によるＣＡＲをコードする核酸を発現又は含むこと、及び
（ｃ）本開示によるＣＡＲを発現するように改変された、又は本開示によるＣＡＲを含む、又は本開示によるＣＡＲをコードする核酸を発現するように改変された、又は含むウイルスに特異的な免疫細胞を対象に投与すること。
いくつかの実施形態では、方法は、以下を含む：
（ａ）対象からの免疫細胞（例えば、ＰＢＭＣ）の単離；
（ｂ）ウイルスに特異的な免疫細胞の集団の生成／拡大；
（ｃ）本開示によるＣＡＲを発現又は含むウイルスに特異的な免疫細胞を改変すること、又は本開示によるＣＡＲをコードする核酸を発現又は含むこと、及び
（ｄ）本開示によるＣＡＲを発現するように改変された、又は本開示によるＣＡＲを含む、又は本開示によるＣＡＲをコードする核酸を発現するように改変された、又は含むウイルスに特異的な免疫細胞を対象に投与すること。
いくつかの実施形態では、本方法は、本開示によるＣＤ３０特異的ＣＡＲを発現するように改変されたＥＢＶ特異的免疫細胞、又は本開示によるＣＤ３０特異的ＣＡＲをコードする核酸を発現又は構成するように改変された免疫細胞を対象に投与することを含んでいる。
いくつかの実施形態では、方法は、以下を含む：
ａ）本開示によるＣＤ３０特異的ＣＡＲを発現又は含むように、又は本開示によるＣＤ３０特異的ＣＡＲをコードする核酸を発現又は含むように、ＥＢＶ特異的免疫細胞を改変すること、及び
（ｂ）本開示によるＣＤ３０特異的ＣＡＲを発現するように改変された、又は本開示によるＣＤ３０特異的ＣＡＲを含む、又は本開示によるＣＤ３０特異的ＣＡＲをコードする核酸を発現するように改変された、又は含むＥＢＶ特異的免疫細胞を対象に投与すること。
いくつかの実施形態では、方法は、以下を含む：
（ａ）ＥＢＶ特異的免疫細胞の単離又は獲得；
（ｂ）本開示によるＣＤ３０特異的ＣＡＲを発現又は含むように、又は本開示によるＣＤ３０特異的ＣＡＲをコードする核酸を発現又は含むように、ＥＢＶ特異的免疫細胞を改変すること、及び
（ｃ）本開示によるＣＤ３０特異的ＣＡＲを発現するように改変された、又は本開示によるＣＤ３０特異的ＣＡＲを含む、又は本開示によるＣＤ３０特異的ＣＡＲをコードする核酸を発現するように改変された、又は含むＥＢＶ特異的免疫細胞を対象に投与すること。
いくつかの実施形態では、方法は、以下を含む：
（ａ）対象からの免疫細胞（例えば、ＰＢＭＣ）の単離；
（ｂ）ＥＢＶ特異的免疫細胞集団の生成／拡大；
（ｃ）本開示によるＣＤ３０特異的ＣＡＲを発現又は含むように、又は本開示によるＣＤ３０特異的ＣＡＲをコードする核酸を発現又は含むように、ＥＢＶ特異的免疫細胞を改変すること、及び
（ｄ）本開示によるＣＤ３０特異的ＣＡＲを発現するように改変された、又は本開示によるＣＤ３０特異的ＣＡＲを含む、又は本開示によるＣＤ３０特異的ＣＡＲをコードする核酸を発現するように改変された、又は含むＥＢＶ特異的免疫細胞を対象に投与すること。
いくつかの実施形態では免疫細胞（例えば、ＰＢＭＣ）が単離される対象は細胞が投与される同じ対象である（すなわち、養子移入は自家／自家細胞のものであり得る）。いくつかの実施形態では、免疫細胞（例えば、ＰＢＭＣ）が単離される対象は細胞が投与される対象とは異なる対象である（すなわち、養子移入は同種細胞のものであってもよい）。
いくつかの実施形態では、方法は、以下を含む：
被験体からの血液サンプルの取得；
被験体から得られた血液試料からの免疫細胞（例えば、ＰＢＭＣ）の単離；
（例えば、ウイルスの抗原／ペプチドを含む／発現する細胞（例えば、ＡＰＣ）の存在下でＰＢＭＣを培養することによって、又はウイルスに感染した細胞（例えば、ＡＰＣ）の存在下でＰＢＭＣを培養することによって）ウイルスに特異的な免疫細胞の集団を生成／拡大すること；
ウイルスに特異的な免疫細胞のインビトロ又はエクスビボ細胞培養；
本開示によるＣＡＲを発現する又は含むウイルスに特異的な免疫細胞を改変すること、又は本開示によるＣＡＲをコードする核酸を発現する又は含むこと（例えば、そのようなＣＡＲをコードするウイルスベクター、又はそのような核酸を含むウイルスベクターを用いた形質導入による）；
本開示によるＣＡＲを発現する／含むウイルスに特異的な免疫細胞を培養すること、又はインビトロ又はエクスビボ細胞培養において本開示によるＣＡＲをコードする核酸を発現する／含むこと；
本開示によるＣＡＲを発現する／含む、又は本開示によるＣＡＲをコードする核酸を発現する／含むウイルスに特異的な免疫細胞の収集／単離；
本開示によるＣＡＲを発現する／それを含むウイルスに特異的な免疫細胞を製剤化すること、又は、例えば、細胞を薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤、もしくは担体と混合することによって、本開示によるＣＡＲをコードする核酸を薬学的組成物に製剤化すること；
本開示によるＣＡＲを発現する／含むウイルスに特異的な免疫細胞、又は本開示によるＣＡＲをコードする核酸を発現する／含む免疫細胞、又はそのような細胞を含む医薬組成物を対象に投与すること。
いくつかの実施形態では、方法が細胞又は被験体を処置して、ＣＡＲの発現を誘導／増強すること、及び／又はＣＡＲを含む／発現するウイルス特異的免疫細胞の増殖又は生存を誘導／増強することをさらに含み得る。
治療及び／又は予防方法は、疾患／状態の発症／進行を低減する、疾患／状態の症状を軽減する、又は疾患／状態の病態を低減するのに有効であり得る。本方法は疾患／状態の進行を予防するため、例えば、疾患／状態の悪化を予防するため、又は疾患／状態の発症速度を遅くするために有効であり得る。いくつかの実施形態では、方法が疾患／状態の改善、例えば、疾患／状態の症状の重症度の低減、又は疾患／状態の重症度／活性のいくつかの他の相関の低減をもたらし得る。いくつかの実施形態では、方法が疾患／状態の発症を後期（例えば、慢性期又は転移）まで予防することができる。
本開示によるＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞の治療的及び予防的有用性は、ＣＡＲの標的抗原を発現／過剰発現する細胞の数／活性、及び／又はウイルスに感染した細胞の数／活性の減少から治療的又は予防的利益を得るのであろう任意の疾患／状態の治療／予防にまで及ぶことが理解されるのであろう。
いくつかの実施形態では、本開示に従って治療／予防される疾患／状態が免疫細胞が特異的であるウイルスが病理学的に関与する疾患／状態である。すなわち、いくつかの実施形態では、疾患／状態がウイルスによる感染によって引き起こされるか又は悪化する疾患／状態、ウイルスによる感染が危険因子である疾患／状態、及び／又はウイルスによる感染が疾患／状態の発症、発症、進行、及び／又は重症度と正に関連する疾患／状態である。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲの標的抗原が病理学的に関与する、本開示に従って治療／予防される疾患／状態。すなわち、いくつかの実施形態では、疾患／状態が標的抗原の発現／過剰発現によって引き起こされるか又は悪化する疾患／状態、標的抗原の発現／過剰発現が危険因子である疾患／状態、及び／又は標的抗原の発現／過剰発現が疾患／状態の発症、発症、進行、重症度と正に関連する疾患／状態である。
疾患／状態はＣＤ３０又はＣＤ３０を発現する／過剰発現する細胞が病理学的に関与する疾患／状態、例えば、ＣＤ３０を発現する／過剰発現する細胞が疾患／状態の発症、発症もしくは進行、及び／又は疾患／状態の１つもしくは複数の症状の重症度と正に関連する疾患／状態、又はＣＤ３０発現／過剰発現が疾患／状態の発症、発症もしくは進行の危険因子である疾患／状態であり得る。
本開示に従って治療／予防される疾患／状態は、ＥＢＶ感染を特徴とする疾患／状態であり得る。例えば、疾患／状態はＥＢＶ又はＥＢＶに感染した細胞が病理学的に関与する疾患／状態、例えば、ＥＢＶ感染が疾患／状態の発症、発症もしくは進行と正に関連する疾患／状態、及び／又は疾患／状態の１つもしくは複数の症状の重症度、又はＥＢＶ感染が疾患／状態の発症、発症もしくは進行の危険因子である疾患／状態であり得る。
治療は、以下のうちの１つ以上を目的とすることができる：ウイルス量を減らすこと、ウイルス陽性細胞（例えばＥＢＶ陽性細胞）の数／割合を減らすこと、ＣＡＲの標的抗原を発現／過剰発現している細胞（例えば、ＣＤ３０発現細胞）の数／割合を減少させること、ウイルス陽性細胞（例えばＥＢＶ陽性細胞）の活性を低下させること、ＣＡＲの標的抗原を発現／過剰発現している細胞（例えばＣＤ３０発現細胞）の活性を低下させること、疾患／状態の症状の発症／進行を遅延させる／防止すること、疾患／状態の症状の重症度を低下させること、ウイルス陽性細胞（例えばＥＢＶ陽性細胞）の生存／増殖を減少させること、ＣＡＲの標的抗原を発現／過剰発現している細胞（例えば、ＣＤ３０発現細胞）の生存／増殖を減少させること、又は、被験者の生存を増加させること。
いくつかの実施形態において、対象は、例えば、末梢において、又は疾患／状態によって影響を受ける器官／組織（例えば器官／組織）において、例えば、ウイルス（例えば、ＥＢＶ）、ウイルス（例えば、ＥＢＶ）に感染した細胞、又はＣＡＲの標的抗原（例えば、ＣＤ３０）を発現／過剰発現している細胞の検出、又は、ウイルス陽性癌細胞（例えば、ＥＢＶ陽性癌細胞）の検出によるもの 又は、ＣＡＲの標的抗原（例えば、ＣＤ３０）を発現／過剰発現している癌細胞の検出に基づいて、本明細書に記載の治療に対して選択され得る。疾患／状態は、任意の組織又は器官又は器官系に影響を及ぼし得る。いくつかの実施形態では、疾患／状態がいくつかの組織／器官／器官系に影響を及ぼし得る。
いくつかの実施形態では、対象がＥＢＶに感染しているか、又はＥＢＶに感染した細胞を含むという決定に基づいて、本開示による治療／予防のために選択され得る。いくつかの実施形態では、対象がＣＤ３０を発現／過剰発現する細胞、例えば、ＣＤ３０を発現／過剰発現する癌細胞を含むという決定に基づいて、本開示による治療／予防のために選択され得る。
いくつかの実施形態では、被験体が本明細書に記載されるＣＡＲを発現する／含む（又はそのようなＣＡＲをコードする核酸を発現する／含む）ウイルスに特異的な免疫細胞の投与の前に、リンパ球除去化学療法を投与される。
すなわち、いくつかの実施形態では、本開示による疾患／状態を治療／予防する方法は、（ｉ）リンパ球除去化学療法を対象に投与すること、及び（ｉｉ）続いて、本開示によるＣＡＲを発現する／含む、又は本開示によるＣＡＲをコードする核酸を発現する／含むウイルスに特異的な免疫細胞を投与することを含む。
本明細書で用いられる場合、「リンパ球除去化学療法」は、治療が施される対象内のリンパ球（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、もしくは自然リンパ球（ＩＬＣ）、又はそれらの前駆体）の枯渇をもたらす化学療法剤による治療を指す。「リンパ球枯渇化学療法剤」は、リンパ球の枯渇をもたらす化学療法剤を指す。
リンパ球除去化学療法及び養子細胞移入による治療方法におけるその使用は例えば、Ｋｌｅｂａｎｏｆｆら，Ｔｒｅｎｄｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００５）２６（２）：１１１－７及びＭｕｒａｎｓｋｉら，Ｎａｔ Ｃｌｉｎ Ｐｒａｃｔ Ｏｎｃｏｌ．（２００６）（１２）６６８－８１を参照されたい（これらは、その全体が参照により本明細書に組み入れられる）。リンパ球枯渇化学療法の目的は、レシピエント対象の内因性リンパ球集団を枯渇させることである。
免疫細胞の養子移入による疾患の治療の文脈において、リンパ球枯渇化学療法は、典型的には養子移入の前に投与され、養子移入された細胞を受容するようにレシピエント被験体をコンディショニングする。リンパ球除去化学療法は例えば、免疫抑制性サイトカインを発現する細胞を排除し、養子移入リンパ球の増殖及び活性に必要な「リンパ球空間」を作り出すことによって、許容環境を作り出すことによって、養子移入細胞の持続性及び活性を促進すると考えられる。
リンパ球除去化学療法において一般的に使用される化学療法剤には、例えば、フルダラビン、シクロホスファミド、ベダムスチン及びペントスタチンが含まれる。
本開示の態様及び実施形態は、特に、フルダラビン及び／又はシクロホスファミドの投与を含むリンパ球枯渇化学療法に関する。特定の実施形態では、本開示によるリンパ球除去化学療法がフルダラビン及びシクロホスファミドの投与を含む。
フルダラビンは、リボヌクレオチドレダクターゼ及びＤＮＡポリメラーゼを妨害することによってＤＮＡ合成を阻害するプリン類似体である。それは、白血病（特に、慢性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病）及びリンパ腫（特に、非ホジキンリンパ腫）の処置のための化学療法剤としてしばしば用いられる。フルダラビンは、静脈内又は経口投与することができる。
シクロホスファミドは、ＤＮＡ塩基間の不可逆的な鎖内及び鎖間架橋を引き起こすアルキル化剤である。それはしばしば、リンパ腫、白血病及び多発性骨髄腫を含む癌の治療のための化学療法剤として使用される。シクロホスファミドは、静脈内又は経口投与することができる。
本開示によるリンパ球枯渇化学療法のコースは、１つ又は複数の化学療法剤の複数回投与を含み得る。リンパ球枯渇化学療法のコースは、本明細書に記載される用量で、本明細書に記載される数日間、フルダラビン及びシクロホスファミドを投与することを含み得る。例示として、リンパ球除去化学療法の過程は、フルダラビンを３０ｍｇ／ｍ２／日の用量で３日間連続して投与すること、及びシクロホスファミドを５００ｍｇ／ｍ２／日の用量で３日間連続して投与することを含み得る。
リンパ球枯渇化学療法の過程に従った化学療法剤の最終用量の投与の日は、リンパ球枯渇化学療法の過程の完了の日であると考えられ得る。
いくつかの実施形態において、フルダラビンは５～１００ｍｇ／ｍ２／日の用量、例えば、１５～９０ｍｇ／ｍ２／日、１５～８０ｍｇ／ｍ２／日、１５～７０ｍｇ／ｍ２／日、１５～６０ｍｇ／ｍ２／日、１５～５０ｍｇ／ｍ２／日、１０～４０ｍｇ／ｍ２／日、５～６０ｍｇ／ｍ２／日、１０～６０ｍｇ／ｍ２／日、１５～６０ｍｇ／ｍ２／日、２０～６０ｍｇ／ｍ２／日又は２５～６０ｍｇ／ｍ２／日で投与される。いくつかの実施形態では、フルダラビンは、２０～４０ｍｇ／ｍ２／日、例えば、２５～３５ｍｇ／ｍ２／日、例えば、約３０ｍｇ／ｍ２／日で投与される。
いくつかの実施形態では、フルダラビンは、が１日より長く１４日より短い連続日間、前段落による用量で投与される。いくつかの実施形態では、フルダラビンは、２～１４日間、例えば、２～１３日間、２～１２日間、２～１１日間、２～１０日間、２～９日間、２～８日間、２～７日間、２～６日間、２～５日間、又は２～４日間連続して、前の段落による用量で投与される。いくつかの実施形態では、フルダラビンは、２～６連続日間、例えば、２～４連続日間、例えば、３連続日間、前段落による用量で投与される。
いくつかの実施形態では、フルダラビンは、１５～６０ｍｇ／ｍ２／日の用量で、２～６連続日間、例えば、３０ｍｇ／ｍ２／日の用量で、３連続日間投与される。
いくつかの実施形態において、シクロホスファミドは、５０～１０００ｍｇ／ｍ２／日の、例えば、１００～９００ｍｇ／ｍ２／日の、１５０～８５０ｍｇ／ｍ２／日の、２００～８００ｍｇ／ｍ２／日の、２５０～７５０ｍｇ／ｍ２／日の、３００～７００ｍｇ／ｍ２／日の、３５０～６５０ｍｇ／ｍ２／日の、４００～６００ｍｇ／ｍ２／日の、又は４５０～５５０ｍｇ／ｍ２／日の投与量で投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、４００～６００ｍｇ／ｍ２／日、例えば、４５０～５５０ｍｇ／ｍ２／日、例えば、約５００ｍｇ／ｍ２／日の投与量で投与される。
いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、１日以上１４日未満連続して、前段落による用量で投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、２～１４日間、例えば、２～１３日間、２～１２日間、２～１１日間、２～１０日間、２～９日間、２～８日間、２～７日間、２～６日間、２～５日間、又は２～４日間連続して、前の段落による用量で投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、２～６連続日間、例えば、２～４連続日間、例えば、３連続日間、前段落による用量で投与される。
いくつかの実施形態において、シクロホスファミドは、４００～６００ｍｇ／ｍ２／日の用量で、２～６連続日間、例えば、５００ｍｇ／ｍ２／日の用量で、３連続日間投与される。
いくつかの実施形態において、フルダラビン及びシクロホスファミドは、同時に又は連続して投与され得る。同時投与とは、例えば、両方の薬剤を含有する（すなわち、組み合わせた調製物中に）、又は互いに直後に、及び場合により同じ投与経路を介して、例えば、同じ動脈、静脈又は他の血管に、一緒に投与することを指す。連続投与とは、一方の薬剤の投与に続いて、所定の時間隔の後に他方の薬剤を別々に投与することを指す。いくつかの実施形態ではそうが、薬剤が同じ経路によって投与されることは必要とされない。
本開示による一連のリンパ球除去化学療法のいくつかの実施形態では、フルダラビン及びシクロホスファミドは、同日又は同日に投与される。例証として、リンパ球除去化学療法の過程において、フルダラビンを３０ｍｇ／ｍ２／日の用量で３日間連続して投与すること、及びシクロホスファミドを５００ｍｇ／ｍ２／日の用量で３日間連続して投与することを含む、フルダラビン及びシクロホスファミドは、同じ３日間連続して投与され得る。そのような例において、リンパ球除去化学療法の過程は、フルダラビン及びシクロホスファミドが対象に投与される３連続日の最終日に完了したと言うことができる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲを発現する／含む（又はそのようなＣＡＲをコードする核酸を発現する／含む）ウイルスに特異的な免疫細胞がリンパ球除去化学療法の過程の完了後の特定の期間内に対象に投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲを発現する／含む（又はそのようなＣＡＲをコードする核酸を発現する／含む）ウイルスに特異的な免疫細胞が本明細書に記載のリンパ球除去化学療法のコースの完了の１～２８日以内、例えば、１～２１日、１～１４日、１～７日、２～７日、２～５日、又は３～５日以内に対象に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲを発現する／含む（又はそのようなＣＡＲをコードする核酸を発現する／含む）ウイルスに特異的な免疫細胞が本明細書に記載されるリンパ球除去化学療法の過程の完了の２～１４日以内（例えば、３～５日以内）に対象に投与される。
いくつかの実施形態では、１×１０７個の細胞／ｍ２～１×１０９個の細胞／ｍ２、例えば、２×１０７個の細胞／ｍ２～１×１０９個の細胞／ｍ２、２．５×１０７個の細胞／ｍ２～８×１０８個の細胞／ｍ２、３×１０２個の細胞／ｍ２～６×１０８個の細胞／ｍ２、又は４×１０７個の細胞／ｍ２～４×１０８個／ｍ２で投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲを発現する／含む（又はそのようなＣＡＲをコードする核酸を発現する／含む）ウイルスに特異的な免疫細胞が４×１０７個の細胞／ｍ２、１×１０８個の細胞／ｍ２、又は４×１０８個の細胞／ｍ２で投与される。
本明細書に記載のＣＡＲを発現する／含む（又はそのようなＣＡＲをコードする核酸を発現する／含む）ウイルスに特異的な免疫細胞の投与は、静脈内注入によって投与することができる。投与は、１～５０ｍｌの間の体積であってもよく、１～１０分の期間にわたって行われてもよい。
いくつかの実施形態では、本開示に従って治療／予防される疾患が癌である。
癌は、任意の望ましくない細胞増殖（又は望ましくない細胞増殖によって現れる任意の疾患）、新生物又は腫瘍を指し得る。癌は、良性又は悪性であり得、原発性又は続発性（転移性）であり得る。新生物又は腫瘍は、細胞の任意の異常な成長又は増殖であり得、任意の組織に位置し得る。癌は、例えば、副腎、肛門、虫垂、膀胱、血液、骨、骨髄、脳、乳房、盲腸、中枢神経系（脳を含む又は除く）小脳、子宮頸部、結腸、十二指腸、子宮内膜、上皮細胞（腎臓上皮など）、胆嚢、食道、グリア細胞、心臓、回腸、空腸、腎臓、涙腺、喉頭、肝臓、肺、リンパ、リンパ節、リンパ芽細胞、上顎、縦隔、腸間膜、子宮筋層、鼻咽頭、大網、口腔、卵巣、膵臓、耳下腺、末梢神経系、腹膜、胸膜、前立腺、唾液腺、Ｓ状結腸、皮膚、小腸、軟部組織、脾臓、胃、精巣、胸腺、甲状腺、舌、扁桃、気管、子宮、外陰部、及び／又は白血球に由来する組織／細胞であってもよい。
腫瘍は、神経系腫瘍又は非神経系腫瘍であり得る。神経系腫瘍は中枢又は末梢神経系、例えば、神経膠腫、髄芽腫、髄膜腫、神経線維腫、上衣腫、神経鞘腫、神経線維肉腫、星状細胞腫及び乏突起膠腫のいずれかに由来し得る。非神経系癌／腫瘍は任意の他の非神経組織に由来することができ、例えば、黒色腫、中皮腫、リンパ腫、骨髄腫、白血病、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、肝癌、類表皮癌、前立腺癌、乳癌、肺癌、結腸癌、卵巣癌、膵癌、胸腺癌、ＮＳＣＬＣ、血液癌及び肉腫が挙げられる。
いくつかの実施形態では、癌は、以下からなる群から選択される：固形癌、血液癌、胃癌（例えば、胃癌、胃腺癌、消化管腺癌）、肝癌（肝細胞癌、胆管癌）、頭頸部癌（例えば、頭頸部扁平上皮癌）、口腔癌（例えば、口腔咽頭癌）、口腔癌、喉頭癌、上咽頭癌、食道癌）、大腸癌（例、大腸癌）、結腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、肺癌（例えば、ＮＳＣＬＣ、小細胞肺癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌）、膀胱癌、尿路上皮癌、皮膚癌（例えば、メラノーマ、進行性メラノーマ）、腎細胞癌（例えば、腎臓癌）、卵巣癌（例えば、卵巣癌）、中皮腫、乳癌、脳腫瘍（例えば、膠芽腫）、前立腺癌、膵臓癌、骨髄性血液悪性腫瘍、リンパ芽球性血液悪性腫瘍、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、リンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、胸腺腫、又は多発性骨髄腫（ＭＭ）。
いくつかの実施形態では、癌は、免疫細胞が特異的であるウイルスが病理学的に関与する癌である。すなわち、いくつかの実施形態では、癌は、ウイルスによる感染によって引き起こされるか又は悪化する癌、ウイルスによる感染が危険因子である癌、及び／又はウイルスによる感染が癌の発症、発症、進行、重症度又は転移と正に関連する癌である。
ＥＢＶ感染は例えば、Ｊｈａら、Ｆｒｏｎｔ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌでレビューされているように、いくつかの癌に関与している。（２０１６）７：１６０２を参照されたい。
いくつかの実施形態では、治療／予防される癌は、ＥＢＶ関連癌である。いくつかの実施形態では、癌は、ＥＢＶによる感染によって引き起こされるか又は悪化する癌、ＥＢＶによる感染が危険因子である癌、及び／又はＥＢＶによる感染が癌の発症、発症、進行、重症度又は転移と正に関連する癌である。癌は、ＥＢＶ感染によって特徴付けられ得、例えば、癌は、ＥＢＶに感染した細胞を含み得る。このような癌は、ＥＢＶ陽性癌と称され得る。
本開示に従って治療／予防され得るＥＢＶ関連癌は、バーキットリンパ腫などのＢ細胞関連がん、移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、中枢神経系リンパ腫（ＣＮＳリンパ腫）、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、及び免疫不全に伴うＥＢＶ関連リンパ腫（例えば、以下のものを含む。Ｘ連鎖性リンパ増殖性障害に伴うＥＢＶ陽性リンパ腫、ＨＩＶ感染／ＡＩＤＳに伴うＥＢＶ陽性リンパ腫、口腔毛髪状白斑症）及び上咽頭癌（ＮＰＣ）、胃癌（ＧＣ）を含む。
いくつかの実施形態では、癌は、リンパ腫（例えば、ＥＢＶ陽性リンパ腫）、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ；例えば、ＥＢＶ陽性ＨＮＳＣＣ）、鼻咽頭癌（ＮＰＣ；例えば、ＥＢＶ陽性ＮＰＣ）、及び胃癌（ＧＣ；例えば、ＥＢＶ陽性ＧＣ）から選択される。
いくつかの実施形態では、癌は、ＣＡＲの標的抗原が病理学的に関与する癌である。すなわち、いくつかの実施形態では、癌は、標的抗原の発現によって引き起こされるか又は悪化する癌、標的抗原の発現が危険因子である癌、及び／又は標的抗原の発現が癌の発症、発生、進行、重症度又は転移と正に関連する癌である。癌は標的抗原の発現によって特徴付けられ得、例えば、癌は、標的抗原を発現する細胞を含み得る。そのような癌は、標的抗原に対して陽性であると称され得る。
標的抗原に対して「陽性」である癌は、標的抗原を（例えば、細胞表面に）発現する細胞を含む癌であり得る。標的抗原に対して「陽性」である癌は、標的抗原を過剰発現し得る。標的抗原の過剰発現は同等の非癌性細胞／非腫瘍組織による発現レベルよりも高い、標的抗原の遺伝子又はタンパク質発現レベルの検出によって決定され得る。
いくつかの実施形態では、標的抗原は、本明細書に記載の癌細胞抗原である。いくつかの実施形態において、標的抗原は、ＣＤ３０である。
いくつかの実施形態では、癌は、ＣＤ３０が病理学的に関与する癌である。すなわち、いくつかの実施形態では、癌は、ＣＤ３０発現が引き起こされるか又は増悪される癌、ＣＤ３０の発現が危険因子である癌、及び／又はＣＤ３０の発現が癌の発症、発症、進行、重症度又は転移と正に関連する癌である。癌はＣＤ３０発現によって特徴付けられ得、例えば、癌は、ＣＤ３０を発現する細胞を含み得る。このような癌は、ＣＤ３０陽性癌と称され得る。
ＣＤ３０陽性癌は、ＣＤ３０を発現する細胞（例えば、細胞表面でＣＤ３０タンパク質を発現する細胞）を含む癌であり得る。ＣＤ３０陽性癌は、ＣＤ３０を過剰発現し得る。ＣＤ３０の過剰発現は同等の非癌性細胞／非腫瘍組織による発現レベルよりも高い、ＣＤ３０の遺伝子又はタンパク質発現レベルの検出によって決定することができる。
ＣＤ３０－陽性癌は、例えば、ｖａｎ ｄｅｒ Ｗｅｙｄｅｎら，Ｂｌｏｏｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｊｏｕｒｎａｌ（２０１７）７：ｅ６０３及びＭｕｔａ ａｎｄ Ｐｏｄａｃｋ，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ（２０１３），５７（１－３）：１５１－８に記載されており、これらの両方は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。ＣＤ３０は、活性化Ｔ及びＢリンパ球の小サブセット上で、ならびに古典的ホジキンリンパ腫及び未分化大細胞リンパ腫を含む様々なリンパ系新生物によって発現される。ＣＤ３０の可変発現はまた、末梢Ｔ細胞リンパ腫、他に特定されない（ＰＴＣＬ－ＮＯＳ）、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、節外ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫、様々なＢ細胞非ホジキンリンパ腫（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、特にＥＢＶ陽性びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫を含む）、及び進行性全身性肥満細胞症についても示されている。ＣＤ３０発現はまた、胚細胞腫瘍及び精巣胚性癌腫を含むいくつかの非造血性悪性腫瘍においても観察されている。
膜貫通糖タンパク質ＣＤ３０は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーのメンバーである（Ｆａｌｉｎｉら，Ｂｌｏｏｄ（１９９５）８５（１）：１－１４）。ＴＮＦ／ＴＮＦ受容体（ＴＮＦ－Ｒ）スーパーファミリーのメンバーは複数のレベルで免疫応答を調整し、ＣＤ３０は、正常なリンパ系細胞の機能又は増殖を調節する役割を果たす。ＣＤ３０は元々、モノクローナル抗体Ｋｉ－１によって認識される抗原として記載され、これはマウスをＨＬ由来細胞株Ｌ４２８で免疫することによって生じた（Ｍｕｔａ ａｎｄ Ｐｏｄａｃｋ，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ（２０１３）５７：１５１－１５８）。ＣＤ３０抗原発現は、ホジキン病におけるＡＬＣＬ及びリード－スターンベルグ細胞を同定するために使用されている（Ｆａｌｉｎｉら，Ｂｌｏｏｄ（１９９５）８５（１）：１－１４）。したがって、リンパ腫悪性細胞における広範な発現により、ＣＤ３０は、抗体ベースの免疫療法及び細胞療法の両方を開発するための潜在的な標的である。重要なことに、ＣＤ３０は、典型的には生理学的条件下で正常組織上で発現されず、したがって、休止成熟又は前駆Ｂ又はＴ細胞上に特に存在しない（Ｙｏｕｎｅｓ ａｎｄ Ａｎｓｅｌｌ，Ｓｅｍｉｎ Ｈｅｍａｔｏｌ（２０１６）５３：１８６－１８９）。ＣＤ３０を標的とする抗体－薬物コンジュゲートであるブレンツキシマブベドチンは、ＣＤ３０陽性ＨＬの治療のために最初に承認された（Ａｄｃｅｔｒｉｓ（登録商標）ＵＳパッケージインサート２０１８）。ブレンツキシマブのベドチン試験から得られた資料はＣＤ３０陽性リンパ腫の治療標的としてのＣＤ３０を支持しているが、その使用に伴う有害性は懸念される。
ホジキンリンパ腫（ＨＬ）は、リンパ節及びリンパ系を含むまれな悪性腫瘍である。ＨＬの発生率は二峰性であり、大部分の患者は１５～３０歳の間で診断され、５５歳以上の成人で別のピークが続く。２０１９年には、米国では８，１１０人の新規症例（女性で３，５４０人、男性で４５７０人）、及び、この疾患による１，０００人の死亡（女性で４１０人、男性で５９０人）があると推定されている（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｏｃｉｅｔｙ ２０１９）。米国国立がん研究所のＳＥＥＲデータベースにおける２０１２～２０１６年の症例に基づくと、米国における小児ＨＬ患者のＨＬ発生率は以下の通りである：年齢１～４：０．１；年齢５～９：０．３；年齢１０～１４：１．３；年齢１５～１９：１００，０００歳あたり３．３（ＳＥＥＲ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ Ｒｅｖｉｅｗ，１９７５～２０１６年］。世界保健機関（ＷＨＯ）分類は、ＨＬを２つの主要なタイプ：古典的ホジキンリンパ腫（ｃＨＬ）及び結節性リンパ球優位型ホジキンリンパ腫（ＮＬＰＨＬ）に分ける。西洋諸国では、ｃＨＬが９５％を占め、ＮＬＰＨＬが全ＨＬの５％を占める（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｎｅｔｗｏｒｋ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ２０１９）。
進行した疾患を有するｃＨＬ患者のための第一選択の化学療法は、７０％～７５％の治癒率と関連する（Ｋａｒａｎｔａｎｏｓら，Ｂｌｏｏｄ Ｌｙｍｐｈａｔ Ｃａｎｃｅｒ（２０１７）７：３７－５２）。サルベージ化学療法とその後の自家幹細胞移植（ＡＳＣＴ）は、初回治療後に再発した患者に一般的に使用される。残念ながら、ｃＨＬ患者の５０人％までがＡＳＣＴ後に疾患再発を経験する。ＡＳＣＴ後に再発した患者の全生存期間中央値は、約２年である（Ａｌｉｎａｒｉ Ｂｌｏｏｄ（２０１６）１２７：２８７－２９５）。積極的な多剤併用化学療法にもかかわらず、患者の１０人％～４０％は救助化学療法に対する反応を達成せず、非反応者におけるＡＳＣＴを支持する無作為化臨床試験データはない。救援化学療法に反応しない患者、ＡＳＣＴ後の再発、又はこのアプローチの候補でない患者については、予後は重大であり続け、新しい治療アプローチが緊急に必要とされている（Ｋｅｕｄｅｌｌ Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ（２０１９）１８４：１０５－１１２）。
小児集団の大部分（小児、青年、及び若年成人）は現在利用可能な治療で治癒するが、少数の患者は難治性又は再発性疾患を有し得、改善された有効性利益を伴う許容される安全性プロファイルを有する新規の治療を必要とし得る（Ｆｌｅｒｌａｇｅら，Ｂｌｏｏｄ（２０１８）１３２：３７６－３８４；Ｋｅｌｌｙ，Ｂｌｏｏｄ（２０１５） １２６：２４５２－２４５８；ＭｃＣｌａｉｎ ａｎｄ Ｋａｍｄａｒ，ｉｎ ＵｐＴｏＤａｔｅ ２０１９；Ｍｏｓｋｏｗｉｔｚ，ＡＳＣＯ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎａｌ Ｂｏｏｋ（２０１９）４７７－４８６）。小児期に高用量化学療法で治療されたＨＬ患者は一般に、心臓、肺、性腺、及び内分泌毒性ならびに二次悪性新生物などの治療に関連する長期後遺症を経験する（Ｃａｓｔｅｌｌｉｎｏら，Ｂｌｏｏｄ（２０１１）１１７（６）：１８０６－１８１６）。
いくつかの実施形態において、ＣＤ３０陽性癌は、固形癌、血液癌、造血器悪性腫瘍、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、ＡＬＫ陽性未分化Ｔ細胞リンパ腫、ＡＬＫ陰性未分化Ｔ細胞リンパ腫、末梢Ｔ細胞リンパ腫（例えば、ＰＴＣＬ－ＮＯＳ）、Ｔ細胞白血病、Ｔ細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫（例えば、節外ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、びまん性大型Ｂ細胞リンパ腫（例えば、びまん性大型Ｂ細胞リンパ腫－ＮＯＳ）、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、ＥＢＶ陽性Ｂ細胞リンパ腫、ＥＢＶ陽性びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、進行性全身性肥満細胞症、胚細胞腫瘍及び精巣胚性癌から選択され得る。
いくつかの実施形態では、癌は、ＣＤ３０陽性癌、ＥＢＶ関連癌、血液癌、骨髄性血液悪性腫瘍、造血器悪性腫瘍、リンパ芽球性血液悪性腫瘍、骨髄異形成症候群、白血病、Ｔ細胞白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞性非ホジキンリンパ腫、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、ＥＢＶ関連リンパ腫、ＥＢＶ陽性Ｂ細胞リンパ腫、ＥＢＶ陽性びまん性大Ｂ細胞リンパ腫、Ｘリンク性リンパ増殖性障害に伴うＥＢＶ陽性リンパ腫、ＨＩＶ感染症に伴うＥＢＶ陽性リンパ腫、口腔毛髪性白斑症、バーキットリンパ腫、移植後リンパ増殖性疾患、中枢神経系リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ＡＬＫ陽性未分化Ｔ細胞リンパ腫、ＡＬＫ陰性未分化Ｔ細胞リンパ腫。末梢性Ｔ細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫、節外性ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫、胸腺腫、多発性骨髄腫、固形癌、上皮細胞癌、胃癌、胃癌、胃腸腺癌、消化管腺癌、肝癌、肝細胞癌、胆管癌、頭頸部癌、頭頸部扁平上皮癌、口腔癌、中咽頭癌、口腔癌、喉頭癌、上咽頭癌、食道癌、大腸癌、結腸直腸癌、大腸癌、大腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、肺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、膀胱癌、尿路上皮癌、皮膚癌、メラノーマ、進行性メラノーマ。腎細胞癌、腎癌、卵巣癌、卵巣癌、中皮腫、乳癌、脳腫瘍、グリオブラストーマ、前立腺癌、膵臓癌、肥満細胞症、進行性全身性肥満細胞症、胚細胞腫瘍又は精巣胚性癌から選択される。
いくつかの実施形態では、癌は、再発癌であり得る。本明細書で用いられる場合、「再発した」癌は治療（例えば、癌のための第一選択療法）に応答したが、その後、例えば、寛解期間後に再出現／進行した癌を指す。例えば、再発癌は、その成長／進行が治療（例えば、癌のための第一選択療法）によって阻害され、その後成長／進行した癌であり得る。
いくつかの実施形態では、癌は、難治性癌であり得る。本明細書で用いられる場合、「難治性」癌は治療（例えば、癌のための第一選択療法）に応答していない癌を指す。例えば、難治性癌は、その成長／進行が治療（例えば、癌のための第一選択療法）によって阻害されなかった癌であり得る。いくつかの実施形態では、難治性癌が癌の治療を受けている対象が治療に対して部分的又は完全な応答を示さなかった癌であってもよい。
がんが未分化大細胞リンパ腫である実施形態では、癌は化学療法、ブレンツキシマブベドチン、又はクリゾチニブによる治療に関して再発性又は難治性であり得る。癌が末梢Ｔ細胞リンパ腫である実施形態では、癌は、化学療法又はブレンツキシマブベドチンによる治療に関して再発性又は難治性であり得る。癌が節外性ＮＫ－Ｔ細胞リンパ腫である実施形態では、癌は、化学療法（アスパラギナーゼを伴う又は伴わない）又はブレンツキシマブベドチンによる治療に関して再発性又は難治性であり得る。癌がびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である実施形態では、癌は、化学療法（リツキシマブを伴う又は伴わない）又はＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ療法による治療に関して再発性又は難治性であり得る。癌が原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫である実施形態では、癌は、化学療法、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＰＤ－１阻害剤）又はＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ療法による治療に関して、再発性又は難治性であり得る。
本開示の方法による癌の治療は、以下の治療効果の１つ又は複数を達成する：対象における癌細胞の数を減少させる、対象における癌性腫瘍／病変のサイズを減少させる、対象における癌細胞の増殖を阻害する（例えば、予防又は遅延させる）、対象における癌性腫瘍／病変の増殖を阻害する（例えば、予防又は遅延させる）、癌の発症／進行を阻害する（例えば、予防又は遅延させる）、対象における癌の症状の重症度を減少させる、対象の生存を増加させる（例えば、無進行生存又は全生存）、対象における癌細胞の数又は活性の相関を減少させる、及び／又は対象における癌負荷を減少させる。
被験体は治療に対するそれらの応答を決定するために、Ｒｅｖｉｓｅｄ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ：Ｔｈｅ Ｌｕｇａｎｏ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ（例えば、Ｃｈｅｓｏｎら，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ（２０１４）３２：３０５９－３０６８に記載されている）に従って評価され得る。いくつかの実施形態では、本開示の方法による対象の治療は、以下のうちの１つを達成する：完全奏効、部分奏効、又は安定疾患。
いくつかの実施形態では、癌の治療は、化学療法及び／又は放射線療法をさらに含む。
化学療法及び放射線療法は、それぞれ、薬物又は電離放射線（例えば、Ｘ線又はγ線を使用する放射線療法）による癌の治療を指す。薬物は、化学物質、例えば、小分子医薬品、抗生物質、ＤＮＡインターカレーター、タンパク質阻害剤（例えば、キナーゼ阻害剤）、又は生物学的薬剤、例えば、抗体、抗体断片、アプタマー、核酸（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ）、ペプチド、ポリペプチド、もしくはタンパク質であり得る。薬物は、医薬組成物又は医薬として製剤化され得る。製剤は１つ以上の薬学的に許容される希釈剤、賦形剤又は担体と共に、１つ以上の薬物（例えば、１つ以上の活性剤）を含み得る。
化学療法は、１つ以上の薬物の投与を含み得る。薬物は、治療される状態に応じて、単独で、又は他の治療と組み合わせて、同時に、又は連続的に投与され得る。
化学療法は、１つ又は複数の投与経路、例えば、非経口、静脈内注射、経口、皮下、皮内又は腫瘍内によって投与され得る。
化学療法は、治療計画に従って投与することができる。治療レジメンは、医師又は医師によって調製され得、治療を必要とする患者に適合するように調整され得る、化学療法投与の予め決定されたスケジュール、計画、スキーム又はスケジュールであり得る。治療レジメンは、患者に投与する化学療法のタイプ、各薬物又は放射線の用量、投与間の時間隔、各治療の長さ、もしあれば、治療休日の数及び性質などのうちの１つ又は複数を示し得る。併用療法については、各薬物がどのように投与されるべきかを示す単一の治療レジメンが提供され得る。
化学療法薬は、アベマシクリブ、アビラテロンアセテート、アビトレキサート（メトトレキサート）、アブラキサン（パクリタキセルアルブミン安定化ナノ粒子製剤）、ＡＢＶＤ、ＡＢＶＥ、ＡＢＶＥ－ＰＣ、ＡＣ、アカラブルチニブ、ＡＣ－Ｔ、アドセトリス（ブレンツキシマブ・ベドチン）、ＡＤＥ、アド・トラスツズマブ・エムタンシン、アドリアマイシン（ドキソルビシン塩酸塩）、アファチニブジマレイン酸塩、アフィニトール（エベロリムス）」、アキンゼオ（ネツピタント及びパロノセトロン塩酸塩）、アルダラ（イミキモド）、アルデスロイキン、アレクセンサ（アレクチニブ）、アレクチニブ、アレムツズマブ、アリムタ（ペメトレキセド二ナトリウム）、アリコパ（コパンリシブ塩酸塩）、アルケラン注射用（メルファラン塩酸塩）、アルケラン錠（メルファラン）、アロキシ（パロノセトロン塩酸塩）、アルンブリック（ブリガチニブ）、アンボクリン（クロラムブシル）、アミフォスチン、アミノレブリン酸、アナストロゾール、アプレピタント、アレディア（パミドロネート二ナトリウム）、アリミデックス（アナストロゾール）、アロマシン（エクセメスタン）、アラノン（ネララビン）、三酸化ヒ素、アルゼラ（オファツマブ）、アスパラキナーゼ エルウィニア・クリサンセミ、アテゾリズマブ、アバスチン（ベバシズマブ）、アベルマブ、アクシカバタゲンシロロイセル、アキシチニブ、アザシチジン、バベンチオ（アベルマブ）、ＢＥＡＣＯＰＰ、ベセナム（カルムスチン）、ベレオダク（ベリノスタット）、ベリノスタット、ベンダムスチン塩酸塩、ＥＰ、ベスポンサ（イノツズマブ オゾガマイシン）、ベバシズマブ、ベキサロテン、ベクサー（トシツモマブとヨウ素Ｉ１３１トシツモマブ）、ビカルタミド、ＢｉＣＮＵ（カルムスチン）、ブレオマイシ、ブリナツモマブ、Ｂｌｉｎｃｙｔｏ（ブリナツモマブ）、ボルテゾミブ、ボスリフ（ボスチニブ）、ボスチニブ、ブレンツキシマブ・ベドチン、ブリガチニブ、ブメル、ブスルファン、ブスルフェクス（ブスルファン）、カバジタキセル、カバメチックス（カボザンチニブ・スマレート）、カボザンチニブ－Ｓ－マレイト、ＣＡＦ、カルケンス（アカラブルチニブ）、キャンパス（アレムツズマブ）、カンプトサー（イリノテカン塩酸塩）、カペシタビン、ＣＡＰＯＸ、Ｃａｒａｃ（フルオロウラシル－－Ｔｏｐｉｃａｌ）、カルボプラチン、カルボプラチン－タキソール、カーフィルゾミブ、カームブリス（カームスチン）、カルムスチン（カルムスチン）、カルムスチン・インプラント、カソデックス（ビカルタミド）、ＣＥＭ、セリチニブ、セルビジン（ダウノルビシン塩酸塩）、サーバリックス（組換えＨＰＶ二価ワクチン）、セツキシマブ、ＣＥＶ、クロラムブシル、クロラムブシル－プレドニゾン、ＣＨＯＰ、シスプラチン、クラドリビン、クラフェン（シクロホスファミド）、クロファラビン、クロファレックス（クロファラビン）、クロラー（クロファラビン）、ＣＭＦ、コビメチニブ コメトリク（カボザンチニブ－Ｓ－マレート）、コパンリシブ塩酸塩、ＣＯＰＤＡＣ、ＣＯＰＰ、ＣＯＰＰ－ＡＢＶ、コスメゲン（ダクチノマイシン）、コテリック（コビメチニブ）、クリゾチニブ、ＣＶＰ、シクロホスファミド、サイフォス（イホスファミド）、サイラムザ（ラムシルマブ）、シタラビン、シタラビンリポソーム、シトサーＵ（シタラビン）、シトキサン（シクロホスファミド）、ダブラフェニブ、ダカルバジン、ダコゲン（デシタビン）、ダクチノマイシン、ダルツマブ、ダーザレックス（ダルツマブ）、ダサチニブ、塩酸ドーノルビシン、ダウノルビシン塩酸塩及びシタラビンリポソーム、デシタビン、デフィブロチドナトリウム、デフィテリオ（デフィブロチドナトリウム）、デガレリックス、デニリューキンディフィトックス、デノスマブ、デポサイト（シタラビン・リポソーム）。デキサメタゾン、デクスラゾキサン塩酸塩、ディヌツキシマブ、ドセタキセル、ドキシル（ドキソルビシン塩酸塩リポソーム）、ドキソルビシン塩酸塩、ドキソルビシン塩酸塩リポソーム、Ｄｏｘ－ＳＬ（ドキソルビシン塩酸リポソーム）、ＤＴＩＣ－Ｄｏｍｅ（ダカルバジン）、デュルバルマブ、エフデックス（フルオロウラシル－－局所）、エリートック（ラズベリーケース）、エランス（エピルビシン塩酸塩）、エロツズマブ、エロキサチン（オキサリプラチン）、エルトロンボパグ オラミン、エメンド（アプレピタント）、エンプリシティ（エロツズマブ）、エナシデニブ メシレート、エンザルタミド、エピルビシン塩酸塩、ＥＰＯＣＨ、アービタックス（セツキシマブ）、エリブリンメシレート、エリベッジ（ビスモデジブ）、エルロチニブ塩酸塩、エルヴィナイズ（アスパラギナーゼ エルヴィニア ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｉ）、エチオール（アミフォスチン）、エトポフォス（エトポシドリン酸塩）があります。エトポシド、エトポシドリン酸塩、エバセット（ドキソルビシン塩酸塩リポソーム）、エベロリムス、エビスタ（ラロキシフェン塩酸塩）、エボメラ（メルファラン塩酸塩）、エクセメスタン、５－ＦＵ（フルオロウラシル注射液）、５－ＦＵ（フルオロウラシル－－外用剤）、ファレストン（トレミフェン）、ファリダック（パノビノスタット）、ファスロデックス（フルベストラント）、ＦＥＣ、フェマーラ（レトロゾール）、フィルグラスチム、フルダラ（フルダラビンリン酸塩）、フルダラビンリン酸塩、フルオロプレックス（フルオロウラシル－－外用）、フルオロウラシル注射液、フルオロウラシル－－外用、フルタミド、フォレックス（メトトレキサート）、フォレックスＰＦＳ（メトトレキサート）、フォルフィリ、フォルフィリ・ベバシズマブ、フォルフィリセツキシマブ、フォルフィリノックス、フォルフォックス、フォロチン（プララトレキサート）、ＦＵ－ＬＶ、フルベストラント、ガーダシル（遺伝子組換えＨＰＶ４価ワクチン）、ガーダシル（遺伝子組換えＨＰＶ４価ワクチン）、ガーダシル９（組換えＨＰＶ５価ワクチン）、ガジーバ（オビヌツズマブ）、ゲフィチニブ、ゲムシタビン塩酸塩、ゲムシタビン－シスプラチン、ゲムシタビン－オキサリプラチン、ゲムツズマブ オゾガマイシン）、ジェムザール（塩酸ゲムシタビン）、ギロトリフ（アファチニブジマレイン酸塩）、グリベック（イマチニブメシル酸塩）、グリアデル（カルムスチンインプラント）、グリアデルウェハ（カルムスチンインプラント）、グルカルピダーゼ、ゴセレリンアセテート、ハラヴェン（エリブリンメシル酸塩）、ヘマンジオール（プロプラノロール塩酸塩）、ハーセプチン（トラスツズマブ）、ＨＰＶ二価ワクチン、組換え、ＨＰＶ一価ワクチン、組換え、ＨＰＶ四価ワクチン、組換え、ヒカムチン（塩酸トポテカン）、ハイドレア（ヒドロキシウレア）、ヒドロキシウレア、ハイパーＣＶＡＤ、イブランス（パルボシクリブ）、イブリチュマブ チクセタン、イブルチニブ、ＩＣＥ、Ｉｃｌｕｓｉｇ（ポナチニブ塩酸塩）、イダマイシン（イダルビシン塩酸塩）、イダルビシン塩酸塩、イデラリシブ、イジファ（エナシデニブメシレート）、イフェックス（イフォスファミド）、イフォスファミド（イフォスファミド）、ＩＬ－２（アルデスロイキン）、イマチニブメシレート、イムブルビカ（イブルチニブ）、インフィンジ（デュルバルマブ）、イミキモド、イムリック（タリモジェン・ラヘルパレプベック）、インライタ（アキシチニブ）、イノツズマブ オゾガマイシン、インターフェロン アルファ－２ｂ．遺伝子組換え、インターフェロン－２（アルデスロイキン）、イントロンＡ（遺伝子組換えインターフェロン アルファ－２ｂ、リコンビナント、インターロイキン－２（アルデスロイキン）、イントロンＡ（リコンビナント・インターフェロン・アルファ－２ｂ）、ヨードＩ１３１トシツモマブ及びトシツモマブ、イピリムマブ、イレッサ（ゲフィチニブ）、塩酸イリノテカン、塩酸イリノテカンリポソーム、イストダックス（ロミデプシン）、イクサベピロン、クエン酸イクサゾミブ、イクセンプラ（イクサベピロン）、ジャカフィ（ルキソリチニブリン酸）、ＪＥＢ、ジェフタナ（カバジタキセル）、カドシーラ（アド－トラスツズマブ エムタンシン）、ケオキシフェン（ラロキシフェン塩酸塩）、ケピバンス（パリフェルミン）、キートルーダ（ペムブロリズマブ）、キスカリ（リボシクリブ）、キームリア（ティサゲンレクロイセル）、カイプロリス（カーフィルゾミブ）、ランレオチド酢酸塩、ラパチニブジトシル酸塩、ラートルーボ（オララツマブ）、レナリドマイド、レンバチニブメシル酸塩、レンビマ（レンバチニブメシル酸塩）、レトロゾール、ロイコボリンカルシウム、ロイケラン（クロラムブシル）、ロイプロリドアセテート、ロイスタチン（クラドリビン）、レブラン（アミノレブリン酸）、リンフォリジン（クロラムブシル）、リポドックス（塩酸ドキソルビシンリポソーム）、ロムスチン、ロンサーフ（トリフルリジン・塩酸チピラシル）、ルプロ（酢酸リウプロリド）、ルプロデポ（酢酸リウプロリド）、ルプロン・デポ・ペッド（酢酸リュープロリド）、リンパーザ（オラパリブ）、マルキボ（硫酸ビンクリスチンリポソーム）、マチュラン（塩酸プロカルバジン）、メクロレタミン塩酸塩、メゲストロール酢酸塩、メキニスト（トラメチニブ）、メルファラン、メルファラン塩酸塩、メルカプトプリン、メソナ、メソックス（メソナ）、メタゾラストーン（テモゾロミド）。メトトレキサート、メトトレキサートＬＰＦ（メトトレキサート）、メチルナルトレキソン臭化物、メクサート（メトトレキサート）、メクサートＡＱ（メトトレキサート）、ミドスタウリン、ミトマイシンＣ。ミトキサントロン塩酸塩、ミトジトレックス（ミトマイシンＣ）、ＭＯＰＰ、モゾビル（プレリキサフォー）、ムスターゲン（メクロレタミン塩酸塩）、ムタマイシン（ミトマイシンＣ）、マイラーン（ブスルファン）、マイロサール（アザシチジン）、マイロターグ（ゲムツズマブ・オゾガマイシン）、ナノ粒子パクリタキセル（パクリタキセル・アルブミン安定化ナノ粒子製剤）、ナベルビン（酒石酸ビノレルビン）、ネシツムマブ、ネララビン、ネオサー（シクロホスファミド）、ネラチニブマレイン酸塩、ネリンクス（ネラチニブマレイン酸塩）、ネツピタント及びパロノセトロン塩酸塩、ノイラスタ（ペグフィルグラスチム）、ノイポゲン（フィルグラスチム）、ネクサバール（ソラフェニブトシレート）、ニランドロン（ニルータミド）、ニロチニブ、ニルータミド ニンラーロ（イキサゾミブクエン酸塩）、ニラパリブトシル酸塩水和物、ニボルマブ、ノルバデックス（クエン酸タモキシフェン）、Ｎプレート（ロミプロスチム）、オビヌツズマブ、オドモ（ソニデギブ）、ＯＥＰＡ、オファツマブ、ＯＦＦ、オラパリブ、オララツマブ、オマセタキシン・メペサシネート、オンカスパー（ペガスカル）、オンダンセトロン塩酸塩、オニバイデ（塩酸イリノテカン・リポソーム）、オンタク（デニールキン・ディフティトックス）、オプジーボ（ニボルマブ）、ＯＰＰＡ、オシメルチニブ、オキサリプラチン、パクリタキセル、パクリタキセルアルブミン安定化ナノ粒子製剤、ＰＡＤ、パルボシクリブ、パリフェルミン、塩酸パロノセトロン、塩酸パロノセトロン・ネットピタント、パミドロネート二ナトリウム、パニツムマブ パノビノスタット、パラプラット（カルボプラチン）、パラプラット（カルボプラチン）、パゾパニブ塩酸塩、ＰＣＶ、ＰＥＢ、ペガスパガーゼ、ペグフィルグラスチム、ペグインターフェロンアルファ－２ｂ、ＰＥＧイントロン（ペグインターフェロンアルファ－２ｂ）、ペムブロリズマブ ペメトレキセド二ナトリウム、ペルジェタ（ペルツズマブ）、ペルツズマブ、プラチノール（シスプラチン）、プラチノールＡＱ（シスプラチン）、プレリキサフォー、ポマリドミド、ポマリスト（ポマリドミド）、ポナチニブ塩酸、ポルトラッツァ（ネシツムマブ）、など。プララトレキサート、プレドニゾン、塩酸プロカルバジン、プロロイキン（アルデスロイキン）、プロリア（デノスマブ）、プロマクタ（エルトロンボパグオラミン）、プロプラノロール塩酸塩、プロベンジ（シプレウセルＴ）、プリネトール（メル
カプトプリン）、プリクサン（メルカプトプリン）、ラジウム２２３二塩化物、ラロキシフェン塩酸塩、ラムシルマブ、ラスブリカーゼ、Ｒ－ＣＨＯＰ、Ｒ－ＣＶＰ、組み換えヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）二価ワクチン、組み換えヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）二価ワクチン、組換えヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）二価ワクチン、組換えヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）四価ワクチン、組換えインターフェロンα－２ｂ、レゴラフェニブ、レリストール（メチルナルトレキソン臭化物）、Ｒ－ＥＰＯＣＨ．レブリミド（レナリドミド）、リウマトレックス（メトトレキサート）、リボシクリブ、Ｒ－ＩＣＥ、リツキサン（リツキシマブ）、リツキサンハイセラ（リツキシマブ及びヒアルロニダーゼヒト）、リツキサン、リツキシマブ及びヒアルロニダーゼヒトン。ロラピタント塩酸塩、ロミデプシン、ロミプロスチム、ルビドマイシン（ダウノルビシン塩酸塩）、ルブラカ（ルカパリブ・カムシレート）、ルカパリブ・カムシレート、ルキソリチニブ・ホスファート、リダプト（ミドスタウリン）、胸膜内エアロゾル（タルク）、シルトキシマブ、シプレウセル－Ｔ、ソマチュリンデポ（ランレオチド酢酸塩）、ソニデジブ、ソラフェニブトシレート、スプリセル（ダサチニブ）、スタンフォードＶ、滅菌タルクパウダー（タルク）、ステリタルク（タルク）、スティバルガ（レゴラフェニブ）、スニチニブマレート、スーテント（スニチニブマレート）、シラトロン（ペグインターフェロンアルファ－２ｂ）、シルバント（シルトキシマブ）、シンリボ（オマセタキシン・メペサシネート）、タブロイド（チオグアニン）、ＴＡＣ、タフィンラー（ダブラフェニブ）、タグリッソ（オシメルチニブ）、タルク、タリモジーン・ラヘルパレプベック、クエン酸タモキシフェン、タラビンＰＦＳ（シタラビン）、タルセバ（エルロチニブ塩酸塩）、タルグレチン（ベキサロテン）、タシグナ（ニロチニブ）、タキソール（パクリタキセル）、タキソテール（ドセタキセル）、テセントリク（アテゾリズマブ）、テモーダル（テモゾロマイド）、テムシロリムス、サリドマイド、サロミド（サリドマイド）、チオグアニン、チオテパ、ティサゲンレクロイセル、トラク（フルオロウラシル－－外用）、トポテカン塩酸塩、トレミフェン、トリセル（テムシロリムス）、トシツモマブ及びヨードＩ１３１、トテクト（デクスラゾキサン塩酸塩）、ＴＰＦ、トラベクテジン、トラメチニブ、トラスツズマブ、トレアンダ（ベンダムスチン塩酸塩）、トリフルリジン及びティピラシル塩酸塩、トリセノックス（三酸化ヒ素）、タイケルブ（ラパチニブジトシレート）、ユニツキシン（ディヌツキシマブ）、三酢酸ウリジン、ＶＡＣ、バルビシン、バルスター（バルビシン）、バンデタニブ、ＶＡＭＰ、バルビ（塩酸ロラピタント）、Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（Ｐａｎｉｔｕｍｕｍａｂ）、ヴェイップ、Ｖｅｌｂａｎ（ビンブラスチン硫酸塩）、ベルケイド（ボルテゾミブ）、Ｖｅｌｓａｒ（ヴィンブラスチン硫酸塩）、ベムラフェニブ、ベンクレクスタ（Ｖｅｎｅｔｏｃｌａｘ）、Ｖｅｎｅｔｏｃｌａｘ（ベネトクラックス）、ベルゼニオ（アベマシクリブ）、ヴァイドル（リュープロリド酢酸塩）、ビダーザ（アザシチジン）、ビンブラスチン硫酸塩、ビンカサールＰＦＳ（ビンクリスチン硫酸塩）、ビンクリスチン硫酸塩、ビンクリスチン硫酸塩リポソーム、ビノレルビンタートレート、ＶＩＰ、ビスモデジブ、ビストガード（ウリジン三酢酸塩）、Ｖｏｒａｘａｚｅ（グルカルピダーゼ）、Ｖｏｒｉｎｏｓｔａｔ、Ｖｏｔｒｉｅｎｔ（塩酸ｐａｚｏｐａｎｉｂ）、Ｖｙｘｅｏｓ（ダウノルビシン塩酸塩およびシタラビンリポソーム）、Ｗｅｌｌｃｏｖｏｒｉｎ（ロイコボリンカルシウム）、Ｘａｌｋｏｒｉ（クリゾチニブ）、Ｘｅｌｏｄａ（カペシタビン）、ＸＥＬＩＲＩ、ＸＥＬＯＸ、Ｘｇｅｖａ（Ｄｅｎｏｓｕｍａｂ）、Ｘｏｆｉｇｏ（Ｒａｄｉｕｍ ２２３ Ｄｉｃｈｌｏｒｉｄｅ）、Ｘｔａｎｄｉ（エンザルタミド）、Ｙｅｒｖｏｙ（イピリムマブ）、Ｙｅｓｃａｒｔａ（アクシカブタジン・シロロイセル）、ヨンデリス（トラベクテジン）、Ｚａｌｔｒａｐ（Ｚｉｖ－Ａｆｌｉｂｅｒｃｅｐｔ）、Ｚａｒｘｉｏ（ｆｉｌｇｒａｓｔｉｍ）、Ｚｅｊｕｌａ（ニラパリブトシル酸塩一水和物）、Ｚｅｌｂｏｒａｆ（ベムラフェニブ）、ゼヴァリン（イブリツモマブ・チウキセタン）、ジネカード（デクスラゾキサン塩酸塩）、Ｚｉｖ－Ａｆｌｉｂｅｒｃｅｐｔ、Ｚｏｆｒａｎ（塩酸オンダンセトロン）、Ｚｏｌａｄｅｘ（酢酸ゴセレリン）、Ｚｏｌｅｄｒｏｎｉｃ Ａｃｉｄ、Ｚｏｌｉｎｚａ（Ｖｏｒｉｎｏｓｔａｔ）、Ｚｏｍｅｔａ（ゾレドロン酸）、Ｚｙｄｅｌｉｇ（Ｉｄｅｌａｌｉｓｉｂ）、Ｚｙｋａｄｉａ（Ｃｅｒｉｔｉｎｉｂ）及び Ｚｙｔｉｇａ（アビラテロン酢酸塩）から選択することができる
ＥＢＶ感染は、また、多発性硬化症及び全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ；例えば、Ａｓｃｈｅｒｉｏ及びＭｕｎｇｅｒ Ｃｕｒｒ Ｔｏｐ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１５）；３９０（Ｐｔ １）：３６５－８５を参照）、及びＥＢＶ抗原ＥＢＮＡ２などの様々な自己免疫疾患の発症／進行に関与しており、最近では、ＳＬＥ、多発性硬化症、関節リウマチ、炎症性腸疾患、１型糖尿病、若年性特発性関節炎及びセリアック病の発症の危険因子として関連することが示されている（Ｈａｒｌｅｙら、Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ．（２０１８）５０（５）：６９９－７０７）。
したがって、いくつかの実施形態では、本開示に従って治療／予防される疾患／状態が自己免疫疾患、ＳＬＥ、多発性硬化症、関節リウマチ、炎症性腸疾患、１型糖尿病、若年性特発性関節炎及びセリアック病から選択される。
本開示の態様及び実施形態は、１つを超える非同一標的抗原に特異的な１つ又は複数のＣＡＲを含むＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞に関する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３０に特異的なＣＡＲを含むウイルス特異的免疫細胞がＣＤ３０以外の抗原に特異的なＣＡＲを含む。例えば、本明細書の実施例４は、ＣＤ３０特異的ＣＡＲ及びＣＤ１９特異的ＣＡＲを含むウイルス特異的免疫細胞を記載する。
いくつかの実施形態では、本発明に従って治療／予防される癌は、１つ以上の非同一標的抗原を発現する細胞を含む癌である。いくつかの実施形態では癌は非同一の標的抗原のそれぞれの両方を発現する癌である。
アロ反応性免疫応答の治療／予防に関する用途
本開示のＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞及び組成物は同種移植を含む方法において、例えば、対象における疾患／状態を治療／予防するために使用することができる。
本開示のＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞及び組成物は、同種反応性免疫応答（特に、Ｔ細胞媒介性同種反応性免疫応答）及びその有害な結果を低減／予防する方法において有用である。
アロ反応性Ｔ細胞はＣＤ３０を発現する。Ｃｈａｎら，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ（２００２）１６９（４）：１７８４－９１は、ＣＤ３０発現Ｔ細胞を、ＣＤ３０同種免疫応答において重要な役割を有する活性化Ｔ細胞（ＣＤ２５及びＣＤ４５ＲＯも発現する）のサブセットとして同定している。ＣＤ３０発現及びＣＤ３０発現Ｔ細胞の増殖は、同種抗原に応答して増加する。Ｃｈｅｎら，Ｂｌｏｏｄ（２０１２）１２０（３）：６９１－６はＣＤ８＋ Ｔ細胞サブセット上のＣＤ３０発現をＧＶＨＤの潜在的バイオマーカーとして同定し、ＧＶＨＤの治療標的としてＣＤ３０を提案している。
さらに、ウイルス特異的Ｔ細胞はポリクローナル活性化Ｔ細胞（ＡＴＣ）よりも制限されたＴＣＲレパートリーを有し、したがって、同種異系対象への投与後にＧＶＨＤを引き起こす可能性が低い。これは、同種ＥＢＶ特異的Ｔ細胞（ＥＢＶＳＴ）の研究におけるＧＶＨＤの低い発生率によって反映される。
本開示のＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞及び組成物は、同種移植を含む方法において、及び同種移植のプロセシング／産生においても特に有用である。
特に、ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞及び組成物は、同種異系材料の投与を含む治療方法及び予防方法において使用するための「既製」材料の製造及び投与における使用が企図される。
上述のように、本開示のＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞は、養子細胞移入による疾患／状態の治療／予防に有用である。本開示のＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞は、養子移入後のレシピエントのＴ細胞媒介性の同種反応性免疫応答に対して感受性が低く、したがって、移入後のレシピエントにおける増強された増殖／生存、及び優れた治療／予防効果を示す。
本開示のＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞及び組成物は、また、本開示のＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞以外の同種異系細胞の同種移植を含む方法においても有用である。特に、本開示のＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞及び組成物は同種移植片（細胞、組織及び器官の集団）及び同種反応性免疫細胞（例えば、同種反応性Ｔ細胞）の対象を枯渇させるために有用である。
そのような方法において、ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞及び組成物は、ドナー及び／又はレシピエント対象のコンディショニング、及び／又は同種移植後の同種反応性免疫応答を低減／予防するための同種移植の処置に有用である。
同種移植される細胞、組織及び器官には、例えば、免疫細胞（例えば、養子細胞移植）、心臓、肺、腎臓、肝臓、膵臓、腸、顔、角膜、皮膚、造血幹細胞（骨髄）、血液、手、脚、陰茎、骨、子宮、胸腺、ランゲルハンス島、心臓弁及び卵巣が含まれる。同種移植される細胞、組織又は器官の集団は、「同種移植」と称され得る。
同種移植によって治療／予防される疾患／状態は、同種移植から治療的又は予防的利益を得るのであろう任意の疾患／状態であり得る。いくつかの実施形態では、同種移植によって治療／予防される疾患／状態が例えば、Ｔ細胞機能不全障害、癌、感染症又は自己免疫疾患であり得る。
Ｔ細胞機能不全障害は、正常なＴ細胞機能が病原性抗原に対する対象の免疫応答のダウンレギュレーションを引き起こす疾患／状態であり得、例えば、微生物、細菌及びウイルスなどの外因性因子による感染によって生成されるか、又はいくつかの疾患状態、例えば、いくつかの形態の癌（例えば、腫瘍関連抗原の形態）において宿主によって生成される。Ｔ細胞機能不全障害は、Ｔ細胞消耗又はＴ細胞アネルギーを含み得る。Ｔ細胞枯渇はＣＤ８＋ Ｔ細胞が増殖しないか、又は抗原刺激に応答して細胞傷害性及びサイトカイン（例えば、ＩＦＮγ）分泌などのＴ細胞エフェクター機能を発揮しない状態を含む。消耗したＴ細胞はまた、Ｔ細胞消耗の１つ以上のマーカー、例えば、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３の持続的発現によって特徴付けられ得る。Ｔ細胞機能不全障害は、感染として、又は感染に対する有効な免疫応答を開始することができないこととして現れ得る。感染は、慢性、持続性、潜伏性、又は緩慢であり得、細菌、ウイルス、真菌、又は寄生虫感染の結果であり得る。したがって、細菌、ウイルス、又は真菌感染を有する患者に治療を提供することができる。細菌感染の例としては、ヘリコバクター・ピロリによる感染が挙げられる。ウイルス感染症の例としてはＨＩＶ、Ｂ型肝炎又はＣ型肝炎による感染症が挙げられる。Ｔ細胞機能不全障害は腫瘍免疫回避などの癌に関連し得る。多くのヒト腫瘍は、Ｔ細胞によって認識され、免疫応答を誘導することができる腫瘍関連抗原を発現する。
感染症は、例えば、細菌、ウイルス、真菌、又は寄生虫感染症であり得る。いくつかの実施形態では、慢性／持続性感染症、例えば、そのような感染症がＴ細胞機能不全又はＴ細胞消耗に関連する場合、を治療することが特に望ましい場合がある。Ｔ細胞枯渇は、多くの慢性感染（ウイルス、細菌及び寄生虫を含む）ならびに癌において生じるＴ細胞機能不全の状態であることが十分に確立されている（Ｗｈｅｒｒｙ Ｎａｔｕｒｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ．１２，Ｎｏ．６，ｐ４９２－４９９，Ｊｕｎｅ ２０１１）。治療することができる細菌感染症の例としては、バチルス属、百日咳菌、クロストリジウム属、コリネバクテリウム属、ビブリオクロエラ、ブドウ球菌属、ストレプトコッカス属による感染症が挙げられる。Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｐｒｏｔｅｕｓ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ、Ｅｒｗｉｎａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｓｐ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ、マイコバクテリア（例えば、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）及びＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａをあげることができる。例えば、細菌感染は、敗血症又は結核であり得る。治療され得るウイルス感染の例としては、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、単純ヘルペスウイルス及びヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）による感染が挙げられる。治療することができる真菌感染症の例には、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｐ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐ、Ｃａｎｄｉｄａ ｓｐ及びＨｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｓｐによる感染症が含まれる。真菌感染症は、真菌性敗血症又はヒストプラスマ症であり得る。治療され得る寄生虫感染の例には、マラリア原虫種による感染（例えば、熱帯熱マラリア原虫、マラリア原虫ヨエリ、卵形マラリア原虫、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｖｉｖａｘ、又はＰｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｃｈａｂａｕｄｉ ｃｈａｂａｕｄｉ）が含まれる。寄生虫感染症は、マラリア、リーシュマニア症及びトキソプラズマ症などの疾患であり得る。
いくつかの実施形態において、疾患／状態は、自己免疫疾患である。そのような実施形態では、治療が自己免疫エフェクター細胞の数を減少させることを目的とし得る。いくつかの実施形態では、自己免疫疾患が１型糖尿病、セリアック病、グレーブス病、炎症性腸疾患、多発性硬化症、乾癬、関節リウマチ、及び全身性エリテマトーデスから選択される。
本開示のＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞及び組成物は、また、同種反応性免疫応答、及び同種反応性免疫応答を特徴とする疾患／状態の治療／予防に有用である。
同種反応性免疫応答によって特徴付けられる疾患及び状態には、同種移植に関連する同種反応性免疫応答によって引き起こされる又は悪化する疾患／状態が含まれる。そのような疾患／状態は移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）及び移植片拒絶を含み、Ｐｅｒｋｅｙ及びＭａｉｌｌａｒｄ Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｐａｔｈｏｌ．（２０１８）１３：２１９－２４５を参照されたい。
移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）は、多数のドナー免疫細胞の同種移植後に起こり得、同種レシピエント細胞／組織／器官に対するドナー由来免疫細胞の反応性を伴う。移植片拒絶は、移植後のレシピエントの免疫系による移植細胞／組織／器官の破壊を指す。移植片拒絶反応が同種移植のものである場合、それは同種移植片拒絶反応と称され得る。
本開示のＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞及び組成物は、同種移植において同種反応性Ｔ細胞を枯渇させるために使用され得、そわなければ、同種移植の際にレシピエントにおいて移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）をもたらし得る。
本開示のＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞及び組成物は同種移植のためのドナー（例えば、同種移植を採取／収集する前）において同種反応性Ｔ細胞を枯渇させるために使用され得、そわなければ、同種移植の際にレシピエントにおいてＧＶＨＤをもたらし得る。
本開示のＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞及び組成物は、他の方法では移植片拒絶を引き起こす／促進し得る、同種移植のためのレシピエントにおける同種反応性Ｔ細胞を枯渇させるために使用され得る。
本開示は同種移植のためのドナー対象に、本開示によるＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物を投与することを含む、同種移植後の移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を治療／予防する方法を提供する。本開示は、また、同種移植後の移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を治療／予防する方法であって、同種移植片を、本開示によるＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物と接触させることを含む方法を提供する。そのような方法の目的は、同種移植のためのレシピエントの細胞、組織及び／又は器官に対する同種反応性免疫応答を開始する同種移植片中の同種反応性免疫細胞の能力を低減／除去することである。
本開示は、本開示によるＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物を、同種移植のためにレシピエント対象に投与することを含む、同種移植後の移植片拒絶を治療／予防する方法を提供する。そのような方法の目的は、同種移植に対して同種反応性免疫応答を開始する受領対象の能力を低減／除去することである。ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞は、さもなければドナー細胞、組織及び／又は器官に対する同種反応性免疫応答をもたらすレシピエント中の免疫細胞を排除するために有用である。
本開示は同種反応性免疫細胞（例えば、同種反応性Ｔ細胞）の同種移植を枯渇させることを含む方法を提供し、同種移植（例えば、細胞、組織、又は移植される臓器の集団）を、本開示のＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物と接触させることを含む。本方法は、ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は本開示の組成物を、同種移植のためのドナー対象に投与することを含み得る。そのような方法の目的は、同種移植のためのレシピエントの細胞、組織及び／又は器官に対する同種反応性免疫応答を開始する同種移植片中の同種反応性免疫細胞の能力を低減／除去することである。
いくつかの実施形態では、方法は、以下を含む：
対象からの細胞、組織又は器官の集団の取得／収集；
細胞、組織又は器官の集団を、本開示によるＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物と接触させる工程；
本開示によるＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞の存在下でのインビトロ又はエクスビボでの細胞、組織又は器官の集団の培養；
同種反応性免疫細胞が枯渇した細胞、組織又は器官の集団を採取／収集すること；及び
同種反応性免疫細胞が枯渇した細胞、組織又は器官の集団を対象に移植／投与すること。
本開示はまた、本開示のＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物を対象に投与することを含む、対象の同種反応性免疫細胞（例えば、同種反応性Ｔ細胞）を枯渇させることを含む方法を提供する。対象は、同種移植のためのドナー対象であってもよく、又は同種移植のための意図されたレシピエント対象であってもよい。
いくつかの実施形態では、方法は、以下を含む：
対象における同種反応性免疫細胞を枯渇させるために、本開示によるＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物を対象に投与すること；
本開示によるＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物が投与された対象から、細胞、組織又は器官の集団を得る／収集する工程；及び
同種反応性免疫細胞が枯渇した細胞、組織又は器官の集団を対象に移植／投与すること。
いくつかの実施形態では、方法は、以下を含む：
本開示によるＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物を対象に投与して、対象における同種反応性免疫細胞を枯渇させる工程；及び
本開示によるＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物が以前に投与された対象に、細胞、組織又は器官の集団を移植／投与すること。
同種反応性免疫細胞の枯渇は、例えば、同種移植片又は対象における同種反応性免疫細胞の量の２倍、１０倍、１００倍、１０００倍、１００００倍又はそれ以上の減少をもたらし得る。
方法は、インビトロもしくはエクスビボで、又は被験体においてインビボで実施され得る。インビトロ又はエクスビボで実施される方法工程は、インビトロ又はエクスビボ細胞培養を含み得る。
本方法は、本開示によるＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞及び組成物の産生のための方法ステップをさらに含み得る。
いくつかの実施形態では、同種移植及び同種移植のための本開示によるＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物のレシピエント対象への投与が同時に（すなわち、１回、２回、３回、４回、５回、６回、８回、１２回、２４回、３６回又は４８回以内に）行われる。
いくつかの実施形態では、本開示によるＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物の、同種移植及び同種移植のためのレシピエント対象への投与は、連続的に行われる。ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物の投与と同種移植との間の時間隔は、数時間、数日、数週間、数ヶ月、又は数年を含む任意の時間隔であり得る。ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物は、同種移植の前又は後にレシピエント対象に投与することができる。ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物は、好ましくは同種移植の前にレシピエント対象に投与される。
いくつかの実施形態では、対象からの同種移植及び同種移植の収集（すなわち、細胞、組織及び／又は器官の収集）のための本開示によるＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物のドナー対象への投与は同時に（すなわち、同時に、又は例えば、１回、２回、３回、４回、５回、６回、８回、１２回、２４回、３６回又は４８回以内に）行われる。いくつかの実施形態では、本開示によるＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物の、同種移植のためのドナー対象への投与及び対象からの同種移植（すなわち、細胞、組織及び／又は器官の収集）は連続的に行われる。ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物の投与と同種移植の収集との間の時間隔は、数時間、数日、数週間、数ヶ月、又は数年を含む任意の時間隔であり得る。ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物は、同種移植の収集の前又は後にドナー対象に投与され得る。ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物は、好ましくは同種移植の収集の前にドナー対象に投与される。
いくつかの実施形態では、方法は、同種反応性免疫応答、移植片拒絶及び／又はＧＶＨＤを治療／予防するための追加の介入を含む。
いくつかの実施形態において、同種反応性、移植片拒絶及び／又はＧＶＨＤを処置／予防するための方法はコルチコステロイド（例えば、プレドニゾロン、ヒドロコルチゾン）、カルシニューリン阻害剤（例えば、シクロスポリン、タクロリムス）抗増殖剤（例えば、アザチオプリネム、ミコフェノール酸）及び／又はｍＴＯＲ阻害剤（例えば、シロリムス、エベロリムス）を用いた処置などの免疫抑制及び／又はリンパ枯渇療法の投与を含む。
いくつかの実施形態において、同種反応性及び／又は移植片拒絶反応を処置／予防するための方法は、モノクローナル抗ＩＬ－２Ｒα受容体抗体（例えば、バシリキシマブ、ダクリズマブ）、抗Ｔ細胞抗体（例えば、抗胸腺細胞グロブリン、抗リンパ球グロブリン）及び／又は抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマブ）による処置などの抗体療法を含む。
いくつかの実施形態では、同種反応性及び／又は移植片拒絶を治療／予防する方法が輸血及び／又は骨髄移植を含む。
方法が本明細書に開示される場合、本開示は、また、そのような方法で使用するための、ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞及び本開示の組成物を提供する。また、そのような方法で使用するための生成物（例えば、医薬）の製造における本開示のＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物の使用も提供される。
いくつかの実施形態では、本開示の様々な態様の方法は、免疫抑制剤（複数可）を使用する方法と比較して、非同種反応性免疫細胞の減少及び／又は増加した生存を引き起こす。例えば、本方法は、同種移植のためのレシピエント対象において、又は同種移植において、非同種反応性免疫細胞コンパートメントを保存／維持するために有用である。
同種移植を含む本開示の方法のいくつかの実施形態では、本方法が免疫抑制剤による治療を伴う方法と比較して、同種移植のためのレシピエント対象における非同種反応性免疫細胞の数／割合の増加に関連する。同種免疫細胞の養子移入を含む本開示の方法のいくつかの実施形態では、本方法が免疫抑制剤での処置を伴う方法と比較して、同種免疫細胞についてのレシピエント対象における非同種反応性免疫細胞の数／割合の増加に関連する。
同種移植を含む本開示の方法のいくつかの実施形態では、本方法が免疫抑制剤による治療を伴う方法と比較して、同種移植における非同種反応性免疫細胞の数／割合の増加に関連する。
本開示はまた、下記方法に使用するための、本開示のＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞又は組成物を提供する：
ＣＡＲが特異的である標的抗原を発現する細胞（例えば、ＣＤ３０を発現する細胞）の死滅；
ウイルス特異的免疫細胞が特異的であるウイルス（例えば、ＥＢＶに感染した細胞、又はＥＢＶ抗原のペプチドを提示する）の抗原のペプチドに感染した、又はその抗原のペプチドを提示する細胞を死滅させること；及び／又は
同種反応性免疫細胞（例えば、ＣＤ３０を発現するＴ細胞）の死滅。
本開示はまた、そのようなＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞及びそのような方法における組成物の使用、ならびにＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞及びそのような目的のための組成物を使用する方法を提供する。
被験者
本開示の態様による対象は、任意の動物又はヒトであってもよい。対象は、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトである。対象は非ヒト哺乳動物であってもよいが、より好ましくはヒトである。対象は、男性又は女性であってもよい。対象は、患者であってもよい。対象は、治療を必要とする本明細書に記載の疾患／状態と診断されていてもよく、そのような疾患／状態を有する疑いがあってもよく、又はそのような疾患／状態を発症／発症するリスクがあってもよい。
本開示による実施形態では、対象は、好ましくはヒト対象である。いくつかの実施形態では、本開示の治療又は予防方法に従って治療される対象が本明細書に記載の疾患／状態を有するか、又はそれを発症するリスクがある対象である。本発明による実施形態では、対象がそのような疾患／状態の特定のマーカーについての特徴付けに基づく方法による治療のために選択され得る。
被験体は、本開示による介入に関して同種異系被験体であってもよい。本開示に従って治療／予防される対象は、ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞が由来する対象と遺伝的に同一でなくてもよい。本開示に従って治療／予防される対象は、ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞が由来する対象に対してＨＬＡミスマッチであり得る。本開示に従って治療／予防される対象は、ＣＡＲ発現ウイルス特異的免疫細胞が由来する対象に対してＨＬＡマッチングされ得る。
本開示に従って細胞が投与される対象は、細胞が由来する／由来した供給源に関して同種／非自己であり得る。細胞が投与される対象は、投与される細胞の産生のために細胞が得られた対象とは異なる対象であってもよい。細胞が投与される対象は、投与される細胞の産生のために細胞が得られた対象と遺伝的に同一でなくてもよい。
細胞が投与される対象は、投与される細胞の産生のために細胞が得られた対象のＭＨＣ／ＨＬＡ遺伝子によってコードされるＭＨＣ／ＨＬＡ分子と同一ではないＭＨＣ／ＨＬＡ分子をコードするＭＨＣ／ＨＬＡ遺伝子を含み得る。細胞が投与される対象は、投与される細胞の産生のために細胞が得られる対象のＭＨＣ／ＨＬＡ遺伝子によってコードされるＭＨＣ／ＨＬＡ分子と同一であるＭＨＣ／ＨＬＡ分子をコードするＭＨＣ／ＨＬＡ遺伝子を含み得る。
いくつかの実施形態では、細胞が投与される対象が投与される細胞の産生のために細胞が得られた対象に対して適合したＨＬＡである。いくつかの実施形態では、細胞が投与される対象が投与される細胞の産生のために細胞が得られた対象に対して、ほぼ又は完全なＨＬＡ一致である。
いくつかの実施形態では、対象がＨＬＡ－Ａ、－Ｂ、－Ｃ、及び－ＤＲＢ１にわたる≧４／８（すなわち、４／８、５／８、６／８、７／８、又は８／８）一致である。いくつかの実施形態において、対象はＨＬＡ－Ａ、－Ｂ、－Ｃ、－ＤＲＢ１及び－ＤＱＢ１にわたって≧５／１０（すなわち、５／１０、６／１０、７／１０、８／１０、９／１０又は１０／１０）一致である。いくつかの実施形態において、対象は、ＨＬＡ－Ａ、－Ｂ、－Ｃ、－ＤＲＢ１、－ＤＱＢ１及び－ＤＰＢ１にわたる≧６／１２（すなわち、６／１２、７／１２、８／１２、９／１２、１０／１２、１１／１２又は１２／１２）一致である。いくつかの実施形態では、対象は、ＨＬＡ－Ａ、－Ｂ、－Ｃ、及び－ＤＲＢ１にわたる８／８一致である。いくつかの実施形態では、対象は、ＨＬＡ－Ａ、－Ｂ、－Ｃ、－ＤＲＢ１及び－ＤＱＢ１にわたる１０／１０の一致である。いくつかの実施形態では、対象は、ＨＬＡ－Ａ、－Ｂ、－Ｃ、－ＤＲＢ１、－ＤＱＢ１及び－ＤＰＢ１にわたる１２／１２一致である。
配列ＩＤ
２つ以上のアミノ酸又は核酸配列間のパーセント同一性を決定する目的で、当業者に公知の様々な方法で、例えば、ＣｌｕｓｔａｌＯｍｅｇａ（Ｓｏｄｉｎｇ，Ｊ．２００５，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ２１，９５１－９６０）、Ｔ－ｃｏｆｆｅｅ（Ｎｏｔｒｅｄａｍｅら ２０００，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（２０００）３０２，２０５－２１７）、Ｋａｌｉｇｎ（Ｌａｓｓｍａｎｎ ａｎｄ Ｓｏｎｎｈａｍｍｅｒ ２００５，ＢＭＣ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，６（２９８））及びＭＡＦＦＴ（Ｋａｔｏｈ ａｎｄ Ｓｔａｎｄｌｅｙ ２０１３，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ，３０（４）７７２－７８０ ｓｏｆｔｗａｒｅ）。そのようなソフトウェアを使用する場合、例えば、ギャップペナルティ及び延長ペナルティのためのデフォルトパラメータが使用されることが好ましい。
配列
Figure 2023523620000002
Figure 2023523620000003
Figure 2023523620000004
Figure 2023523620000005
Figure 2023523620000006
Figure 2023523620000007
Figure 2023523620000008
＊＊＊
本発明は、そのような組み合わせが明らかに許容されないか、又は明確に回避される場合を除いて、記載された態様及び好ましい特徴の組み合わせを含む。
本明細書で用いられる項目見出しは、構成的な目的のためでしかなく、説明される主題を限定すると解釈すべきではない。
ここで、本発明の態様及び実施形態を、添付の図面を参照して、例として説明する。さらなる態様及び実施形態は、当業者には明らかであろう。本明細書において言及される全ての文書は、参照により本明細書に組み込まれる。
以下の特許請求の範囲を含む本明細書全体を通して、文脈が別途必要としない限り、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、及び「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」及び「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変形は記載された整数又はステップ又は整数又はステップの基を含むが、任意の他の整数又はステップ又は整数又はステップの基を除外しないことを意味すると理解されるのであろう。
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用されるように、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は文脈が明らかに別段の指示をしない限り、複数の指示対象を含むことに留意されたい。範囲は本明細書では「約」１つの特定の値から、及び／又は「約」別の特定の値までとして表すことができる。そのような範囲が表される場合、別の実施形態は１つの特定の値から、及び／又は他の特定の値までを含む。同様に、先行詞「約」の使用によって値が近似値として表される場合、特定の値は別の実施形態を形成することが理解されよう。
核酸配列が本明細書に開示される場合、その逆相補体も明示的に企図される。
本明細書に記載の方法は、インビトロ又はインビボで実施することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法がインビトロで実施される。「インビトロ」という用語は培養中の細胞を用いた実験を包含することが意図され、一方、「インビボ」という用語は無傷の多細胞生物を用いた実験を包含することが意図される。
以下の実施例において、本発明者らは、ＣＤ３０．ＣＡＲ発現ＥＢＶＳＴの、癌細胞に対するそのエフェクター活性及び同種拒絶に対するその耐性を記載する。
実施例１：ＣＡＲ構築物をコードするレトロウイルスの生成
Figure 2023523620000009
ＣＤ３０．ＣＡＲ構築物をコードするレトロウイルスを、ＣＡＲをコードするｃＤＮＡをｐＳＦＧ－ＴＧＦｂＤＮＲＩＩレトロウイルス骨格（ＡＴＵＭ，Ｎｅｗａｒｋ，ＣＡ）にクローニングすることによって調製した。
ＣＤ３０．ＣＡＲ配列、ｐＳＦＧ＿ＣＤ３０ＣＡＲを有するプラスミドを、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）を用いてＨＥＫ ２９３ Ｖｅｃ－ＲＤ１１４細胞にトランスフェクトした。次いで、トランスフェクト細胞からの細胞培養上清を用いて、６ウェルプレートの５×１０５細胞／ウェルの密度でＨＥＫ ２９３Ｖｅｃ－Ｇａｌｖ細胞（カナダケベック州バイオベックファーマ）をトランスデュース（ｔｒａｎｓｄｕｃｅ）した。
２９３Ｖｅｃ－Ｇａｌｖ＿ＣＤ３０－ＣＡＲセルをトリプ化（ｔｒｙｐｓｉｎｉｚｅｄ）し、２×１０６セル／ｍｌの濃度で１５ｍｌチューブに再使用した。２シリーズの希釈を行い、１．６５ｍｌの最終細胞懸濁液を希釈し、２２０ｍｌのＤＭＥＭ ＋ １０％ＦＣＳと混合した。この懸濁液２００μｌを９６ウェルプレートのウェルに移し、プレートあたり３０細胞を得た。次いで、最良の性能を示すクローンを選択し、レトロウイルス含有上清を生成するために使用した。その後、レトロウイルス含有上清を回収し、濾過し、使用するまで－８０℃で保存した。
ＣＤ１９．ＣＡＲをコードするレトロウイルスを、ＣＤ１９．ＣＡＲをコードするＤＮＡをｐＳＦＧレトロウイルス骨格にクローニングすることによって作製した。ＣＤ１９．ＣＡＲ配列、８５ｂＣＤ１９Ｃを有するプラスミドを用いて、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）を用いてＨＥＫ ２９３ Ｖｅｃ－ＲＤ１１４細胞をトランスフェクトした。その後、レトロウイルス含有上清を回収し、濾過し、使用するまで－８０℃で保存した。
実施例２：ＣＡＲ発現ＥＢＶ特異的Ｔ細胞の生成
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、標準的なＦｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ密度勾配遠心法に従って、健常ドナー又はリンパ腫患者から得た血液試料から単離した。
ＡＴＣの生成
抗ＣＤ３（クローンＯＫＴ３）及び抗ＣＤ２８アゴニスト抗体を、１ｍｇ／ｍｌ抗体の０．５ｍｌの１：１０００希釈物を加えることによって組織培養プレートのウェル上にコーティングし、３７℃で２～４時間、又は一晩４℃でインキュベートし、１×１０６のＰＢＭＣ（ウェルあたり２ｍｌの培地中）を、細胞培養培地（４４．５％Ａｄｖａｎｃｅｄ ＲＰＭＩ培地、４４．５％Ｃｌｉｃｋ’ｓ培地、１０％ＦＢＳ及び１％ＧｌｕｔａＭａｘを含む）中で抗ＣＤ３／ＣＤ２８アゴニスト抗体コーティングプレート上での培養によって刺激した。細胞を５％ＣＯ２雰囲気中で３７℃に維持した。翌日、１ｍｌの細胞培養培地を、２０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－７及び２０ｎｇ／ｍｌのＩＬ－１５を含有する新鮮な細胞培養培地と交換した。培養中のＡＴＣを維持するために、２～４日毎に、細胞培養培地及びサイトカインを必要に応じて補充したか、又はＡＴＣを回収し、サイトカインを含む新鮮な細胞培養培地中に再播種した。ＡＴＣを採取し、７～１０日目の間にＥＢＶＳＴによる再刺激のための実験に使用した。
汎用ＬＣＬ
ＨＬＡクラスＩ及びＨＬＡクラスＩＩの表面発現を欠くＬＣＬ（すなわち、ＨＬＡ陰性ＬＣＬ）は、Ｂ細胞のＥＢＶ形質転換によって調製されたリンパ芽球様細胞株の細胞におけるＨＬＡクラスＩ及びＨＬＡクラスＩＩ分子をコードする遺伝子の標的化ノックアウトによって得られた。ＨＬＡ陰性細胞をさらに改変して、ＥＢＶ複製に必要な遺伝子をノックアウトした。本方法によって得られる結果として得られる細胞は、本明細書ではユニバーサルＬＣＬ（ｕＬＣＬ）と称される。
ＥＢＶ特異的Ｔ細胞（ＥＢＶＳＴ）の増殖及び形質導入
健康なドナー由来のＰＢＭＣを、ＣＤ４５ＲＡ ＭＡＣＳマイクロビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用する磁気細胞分離によってＣＤ４５ＲＡ発現細胞を枯渇させた。ＥＢＶ特異的Ｔ細胞は、ＥＢＮＡ１ ペプミックス（ＪＰＴ Ｃａｔ Ｎｏ．ＰＭ－ＥＢＶ－ＥＢＮＡ１）、ＬＭＰ１ ペプミックス（ＪＰＴ Ｃａｔ Ｎｏ．ＰＭ－ＥＢＶ－ＬＭＰ１）、及びＪＰＴ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社から入手したＬＭＰ２ ペプミックス（ＪＰＴ Ｃａｔ Ｎｏ．ＰＭ－ＥＢＶ－ＬＭＰ２）（１１アミノ酸重複１５マーアミノ酸ペプチドライブラリー、関連抗原の全アミノ酸配列に及ぶ）を用いて、４４．５～４７％Ａｄｖａｎｃｅｄ ＲＰＭＩ、４４．５～４７％Ｃｌｉｃｋ’ｓ培地、１０％ＦＢＳ又は５％増殖因子リッチ添加剤、及びＩＬ－７（１０ｎｇ／ｍｌ）及びＩＬ－１５（１０ｎｇ／ｍｌ）を添加した１％ＧｌｕｔａＭａｘを含む細胞培養培地中で、２ｘ１０６ ＣＤ４５ＲＡ除去ＰＢＭＣ（ウェル当たり２ｍｌの培地）を刺激することにより増殖させた。ＥＢＶＳＴは５％ＣＯ２雰囲気中で３７℃に維持した。
４～６日後、ＥＢＶＳＴに、以下のように実施例１に記載のＣＡＲをコードするレトロウイルスを形質導入した。
レトロネクチン（タカラ）でプレコートした非組織培養処理２４ウェルプレートにレトロウイルス含有上清（ウェルあたり０．５～１ｍｌ）を加えた。プレートを２０００×ｇで６０～９０分間遠心分離した後、レトロウイルス上清を除去し、細胞をウェル当たり０．２５～０．５×１０６細胞で再プレーティングした。
８～１０日間の培養後、ｕＬＣＬの存在下で、照射されたペプチドパルス自己活性化Ｔ細胞（ＡＴＣ）との共培養によって、細胞を再刺激した。簡潔に述べると、２×１０６のＡＴＣを、ペプミックス（１×１０６のＡＴＣあたり１０ｎｇのペプミックス混合物）と共に３７℃で３０分間、ＣＴＬ培地中でインキュベートし、続いて３０Ｇｙで照射し、採取した。次に、ペプチド操作ＡＴＣは、ＩＬ－７（１０ｎｇ／ｍｌ）及びＩＬ－１５（１００ｎｇ／ｍｌ）を含むＣＴＬ媒体中の培養及びｕＬＣＬ（１００Ｇｙで照射）において、回答者細胞の比率：ペプチド操作ＡＴＣ：１：１：５の照射ｕＬＣＬ）と混合した。具体的には、１×１０個の５応答細胞、１×１０個の５ペプチドパルスＡＴＣ及び０．５×１０個の６照射ｕＬＣＬを、２４ウェル組織培養プレートのウェル中の２ｍＬのＣＴＬ培地中で培養した。
ＥＢＶＳＴを培養中に維持するために、２～４日ごとに、細胞培養培地及びサイトカインを必要に応じて補充したか、又はＥＢＶＳＴを回収し、サイトカインを含む新鮮な細胞培養培地中に再播種した。ＥＢＶＳＴを回収し、１５～２０日目の混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイに使用した。
実施例３：同種反応性Ｔ細胞を排除し、同種ＶＳＴを拒絶反応から保護するＣＤ３０特異的ＣＡＲの能力の評価
本発明者らは、インビトロでの同種拒絶に抵抗するＶＳＴの能力に対するＣＤ３０．ＣＡＲ発現の効果を調べた。
プライミングされたアロ反応性Ｔ細胞の生成
１－２ｘ ＥＢＶＳＴを作製するために使用した同じ健康なドナー由来の１０６のＰＢＭＣ（ウェルあたり）を、３０グレイで照射し、ミスマッチドナー由来の１×１０６のＰＢＭＣ（ウェルあたり）（ＨＬＡ－Ａ２の様々な発現を有する）、４４．５％アドバンストＲＰＭＩ、４４．５％クリック培地、１０％血清、及びＩＬ－７（１０ｎｇ／ｍｌ）及びＩＬ－１５（１０ｎｇ／ｍｌ）を補充した１％グルタマックスを含む細胞培養培地中で共培養した。ミスマッチドナーのＰＢＭＣから増殖させたプライミングしたアロ反応性Ｔ細胞を、０．５×１０６細胞（２ｍｌの細胞培養培地中）を抗ＣＤ３／ＣＤ２８アゴニスト抗体コーティングプレート上に６～１０日目に播種することによって再刺激した。培養中の同種反応性Ｔ細胞を維持するために、２～４日毎に、細胞培養培地及びサイトカインを必要に応じて補充したか、又は同種反応性Ｔ細胞を採取し、サイトカインを含む新鮮な細胞培養培地中に再播種した。アロ反応性Ｔ細胞を採取し、１３～１７日の間にＥＢＶＳＴを用いた混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイに使用した。
アロリジェクションをインビトロで評価するために、ＨＬＡ－Ａ２陰性対象由来の０．２×１０個のＯＯＢＰＢＭＣアロ反応性Ｔ細胞を、混合リンパ球反応物（ＭＬＲ）アッセイにおいて：
（ｉ）同種反応性Ｔ細胞をプライミングするために使用されたＨＬＡ－Ａ２陽性対象のＰＢＭＣから生成された０．２ｘ１０４のＥＢＶＳＴ、又は
（ｉｉ）アロ反応性Ｔ細胞をプライミングするために使用されたＨＬＡ－Ａ２陽性対象のＰＢＭＣから生成された０．２×１０４のＥＢＶＳＴは、ＣＤ３０特異的ＣＡＲをコードする構築物をさらに形質導入された。
ヒトＩＬ－７（１０ｎｇ／ｍｌ）及びＩＬ－１５（１０ｎｇ／ｍｌ）をＭＬＲアッセイに加えた。
７日後にフローサイトメトリー分析を行い、絶対細胞数を計数ビーズを用いて決定した。異なる対象に由来するＴ細胞は、ＨＬＡ－Ａ２の発現に基づいて共培養後に得られた集団において同定することができた。Ｇａｌｌｉｏｓ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用してイベントを取得し、Ｋａｌｕｚａ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）をデータ分析及びグラフ表示に使用した。
図１に示すように、ＨＬＡ－Ａ２陽性対象由来の非形質導入（ＮＴ）ＥＢＶＳＴの数は、ＨＬＡ－Ａ２陰性対象由来の同種反応性Ｔ細胞と７日間共培養した後（左下パネル）、同種反応性Ｔ細胞の非存在下で培養した場合（左上パネル）と比較して、大幅に減少した。対照的に、ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの数は、同種反応性Ｔ細胞の非存在下で培養した場合（右上パネル）と比較して、同種反応性Ｔ細胞との７日間の共培養後（右下パネル）に増加した。
図２は、フローサイトメトリーデータの定量化を示す。非形質導入ＥＢＶＳＴ（ＮＴ）はアロ反応性Ｔ細胞の存在下でほとんど排除されたが、ＣＤ３０．ＣＡＲ発現ＥＢＶＳＴはアロ反応性Ｔ細胞による排除に対して耐性であった（図２Ａ）。加えて、同種反応性Ｔ細胞集団（ＣＤ３＋、ＨＬＡ－Ａ２陰性）の定量は、ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴが非形質導入ＥＢＶＳＴ条件と比較して同種反応性Ｔ細胞の数を減少させることを明らかにした（図２Ｂ）。
したがって、ＣＤ３０．ＣＡＲを発現するＥＢＶＳＴは同種反応性Ｔ細胞の数を減少させる能力を有し、同種拒絶反応から保護されることが示された。
実施例４：ＣＤ１９特異的ＣＡＲ及びＣＤ３０特異的ＣＡＲを発現するＥＢＶ特異的Ｔ細胞の特徴付け
本発明者らはＣＤ１９．ＣＡＲ及びＣＤ３０．ＣＡＲの両方を発現するように操作されたウイルス特異的Ｔ細胞を作製し、特性決定し、それらが混合リンパ球反応において同種反応性Ｔ細胞を排除できるかどうかを調べた。
簡潔に述べると、ＣＤ１９及びＣＤ５６発現細胞を枯渇させたＨＬＡ－Ａ２陽性対象由来の１×１０５のＰＢＭＣの集団を、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイにおいて共培養した：
（ｉ）ＨＬＡ－Ａ２陰性被験者のＰＢＭＣから生成された０．１ｘ １０ ５ ＥＢＶＳＴ、又は
（ｉｉ）（ａ）ＣＤ３０．ＣＡＲをコードする構築物でさらに形質導入された、ＨＬＡ－Ａ２陰性対象のＰＢＭＣから生成された０．１×１０５のＥＢＶＳＴ（ｂ）ＣＤ１９．ＣＡＲ、又は（ｃ）ＣＤ３０．ＣＡＲ及びＣＤ１９．ＣＡＲの両方（ＣＤ３０＋ＣＤ１９．ＣＡＲ）。
ヒトＩＬ－２をＭＬＲアッセイに２０ＩＵ／ｍｌで添加した。
図３に示すように、ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴ（右上パネル）とＣＤ３０＋ＣＤ１９．ＣＡＲの両方があるＥＢＶＳＴ（右下パネル）は、形質導入されていない（ＮＴ）ＥＢＶＳＴ（左上パネル）及びＣＤ１９．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴ（左下パネル）と比較して、７日目までにＨＬＡ－Ａ２＋同種反応性Ｔ細胞（活性化マーカーＣＤ７１によって区別される）の割合を大幅に減少させた（したがって、拒絶を回避した）。
したがって、本発明者らは、標的抗原に特異的なＣＡＲ（本実施例ではＣＤ１９）及びＣＤ３０特異的ＣＡＲの両方で形質導入されたＥＢＶＳＴを用いて、所与の標的抗原に特異的な「既製」ＣＡＲ Ｔ細胞を作製するための新規なアプローチを提供する。そのような二重ＣＡＲ－ＥＢＶＳＴがインビトロで同種反応性Ｔ細胞を排除する能力はそれらがインビボで拒絶を回避し、同種異系レシピエントにおいて長期間持続することができることを示唆する。
実施例５：ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴを用いた癌の治療
５．１健康提供者被験者から作成されたＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの作成と特性評価
ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴは、ＧＭＰ施設で製造した。インフォームド・コンセントを得た後、ヘルシンキ宣言によって確立されたガイドラインに従って、７人の健康な血液バンク承認ドナーから約２５０～４００ｍＬの血液を採取した。
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、密度勾配遠心分離によって血液から単離した。ＰＢＭＣを、磁気ビーズにコンジュゲートした臨床グレードの抗ＣＤ４５ＲＡ抗体を使用する磁気細胞分離、及びＭｉｌｔｅｎｙｉ枯渇カラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用することによって、ＣＤ４５ＲＡ発現細胞を枯渇させた。
１．５－２．５ｘ ＣＤ４５ＲＡ後細胞を枯渇させた１０７のＰＢＭＣを、４７．５％アドバンストＲＰＭＩ、４７．５％Ｃｌｉｃｋ’ｓ（ＥＨＡＡ）培地（Ｉｒｖｉｎｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、２ｍＭ Ｌ‐グルタミン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）及び５％ヒト血小板Ｌｙｓａｔｅ（ＨＰＬ；Ｓｅｘｔｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を含む３０ｍｌ培養培地に播種し、Ｇ‐Ｒｅｘ１０容器中でＩＬ‐７（１０ｎｇ／ｍｌ）及びＩＬ‐１５（１０ｎｇ／ｍｌ）を補充し、１１アミノ酸重複１５マーアミノ酸を含む重複ペプチドライブラリー（ペプミックス）による刺激により活性化し、関連抗原の全蛋白質配列に及んだ。ＥＢＮＡ１、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２、ＢＡＲＦ１、ＢＺＬＦ１、ＢＲＬＦ１、ＢＭＬＦ１、ＢＭＲＦ１、ＢＭＲＦ２、ＢＡＬＦ２、ＢＮＬＦ２ａ及びＢＮＬＦ２ｂに対応するペプミックスは、ＪＰＴ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｂｅｒｌｉｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）から入手した。刺激は刺激される１×１０６細胞あたり各抗原について５ｎｇのペプミックスを用いた（すなわち、ＣＤ４５ＲＡ陽性細胞を枯渇させた２×１０７のＰＢＭＣを用いて行った刺激については、各ペプミックス１００ｎｇを用いた）。刺激培養は、５％ＣＯ２雰囲気中、３７℃で維持した。
４～６日後、前段に記載された刺激培養物によって産生されたＥＢＶＳＴに、以下のように、実施例１に記載されたＣＡＲをコードするレトロウイルスを形質導入した。２ｍｌのレトロウイルス含有上清を２ｍｌの体積で１５０μｇのベクトフューシン－１と混合し、４ｍｌの最終体積を得て、室温で５～３０分間インキュベートした。次いで、レトロウイルス：ベクトフューシン－１混合物を、Ｔ７５容器中の８．５ｍｌ培養培地（前項に記載）中の７～１０×１０６細胞に添加した。培養物を５％ＣＯ２大気中で３７℃に維持した。
培養８～１０日目の間に、前項に記載の形質導入によって産生された１～２×１０７のＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴ ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴをＧ－Ｒｅｘ１００容器に移し、１：２～１：５（典型的には約１：３）の範囲の照射されたｕＬＣＬに対するＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの比率で、照射された（１００グレイの）ｕＬＣＬ（実施例２に記載）との共培養によって再刺激した。ＵＬＣＬはＥＢＶ抗原及びＣＤ３０、ならびに他の共刺激分子を発現し、したがって、抗原刺激及び共刺激を伴うＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴを提供し、ＥＢＶ特異性を失うことなくＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの強力な増殖を誘導する。
再刺激培養は２００ｍｌ培養培地（５．１節のパラグラフ３に記載）で確立し、必要に応じて追加の培養培地を加えた。７～１２日後、ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴを回収し、その後の注入のために凍結保存した。
４人の代表的な健康なドナー対象から調製したＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴを、インビトロで増殖する能力、インビトロでのＣＤ３０発現及びＣＤ３０陰性癌細胞株に対する細胞毒性、ならびに異なるＥＢＶ抗原に対する特異性を決定するために評価した。
ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴ増殖の分析
ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの増殖を、培養中の様々な時点（０、６、１０、１７、１８及び１９日目）で血球計数器を使用して細胞数を計数することによって決定し、累積倍率拡大を計算した。
図４は、４人の異なる健康なドナー被験体から産生されたＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴが～１７～２０日以内にＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの治療用量を達成するのに十分な、インビトロ培養において十分に増殖したことを示す。増殖した細胞は、７７％～９９％の細胞でＣＤ３０．ＣＡＲを発現した（データは示さず）。
ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴ細胞毒性の解析
ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの細胞傷害性特異性を、クロム－５１（５１クロム）放出検定を用いて測定した。簡単に述べると、ＣＤ３０陰性ＢＪＡＢバーキットリンパ腫細胞又はＣＤ３０陽性ＨＤＬＭ２ホジキンリンパ腫細胞のいずれかの標的細胞を、５１Ｃｒと共に１時間インキュベートした。非形質導入ＥＢＶＳＴ又はＣＤ３０．ＣＡＲ形質導入ＥＢＶＳＴをエフェクターとして使用し、９６ウェルプレートのウェル中、４０：１、２０：１、１０：１、５：１及び２．５：１のエフェクター対標的比で標的と共にインキュベートした。４～６時間の培養後、共培養上清を回収し、ガンマカウンターで５１のクロム放出を検出した。特異的溶解のパーセンテージは、以下の化学式：［（実験的放出－自発的放出）／（最大放出－自発的放出）］×１００を用いて、３回の平均から決定した。
図５はＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴがＣＤ３０陰性バーキットリンパ腫ＢＪＡＢ細胞株の細胞に対して実質的に非細胞傷害性であったが、ＣＤ３０陽性ホジキンリンパ腫ＨＤＬＭ２細胞株の細胞に対して高い細胞傷害性を示したことを示す。
ＥＢＶ抗原に対するＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの反応性の分析
ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳｐｏｔ解析を実施して、４人の異なる健康なドナー対象から調製したＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴのＥＢＶ抗原による刺激に対する応答を評価した。
ＥＢＶ潜伏サイクル抗原（ＥＢＮＡ１、ＬＭＰ１、ＬＭＰ２及びＢＡＲＦ１）及びＥＢＶ溶菌サイクル抗原（ＢＺＬＦ１、ＢＲＬＦ１、ＢＭＬＦ１、ＢＭＲＦ１、ＢＭＲＦ２、ＢＡＬＦ２、ＢＮＬＦ２ａ及びＢＮＬＦ２ｂ）について、ペプミックス（ＪＰＴ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙから入手）による刺激に応答して、ＩＦＮ－γ産生を測定した。簡潔に述べると、ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴを、５×１０４細胞／ウェルで、９６ウェルマルチスクリーンプレート（ミリポアシグマ）のウェル中に２連でプレーティングした。刺激は、ウェル当たり合計０．１μｇのペプチドを用いて行った。５％ＣＯ２中、３７℃で１６～２０時間インキュベートした後、ＩＦＮ－γ＋スポット用にプレートを展開し、定量化のためにゼルネットコンサルティング（ニュージャージー州フォートレ）に送付した。抗原特異的反応の頻度は、５×１０４細胞当たりのスポットフォーミングユニット（ＳＦＵ）として表される。
図６は、４人の異なる健康なドナー被験体から産生されたＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴがＥＢＶ抗原に対するそれらの特異性を保持したことを示す。
すべての４つのＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴ株は潜在性及び溶解性ＥＢＶ抗原の両方による刺激に応じて１０個の５細胞あたり１００ ＩＦＮｖを超えるスポット形成単位（ＳＦＵ）を産生し、ＣＤ３０陽性ホジキンリンパ腫細胞株ＨＤＬＭ２に対する２０％を超える特異的細胞溶解を、エフェクター対標的比率２０：１で産生するという機能的放出基準に合格した。
５．２ＣＤ３０＋リンパ腫に対する同種養子細胞療法としてのＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの投与
ＣＤ３０＋難治性又は再発性ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ＡＬＫ陽性未分化Ｔ細胞リンパ腫、ＡＬＫ陰性未分化Ｔ細胞リンパ腫、又は他の末梢Ｔ細胞リンパ腫を有する１２～７５歳の患者が、本試験の治療に適格であった。
シクロホスファミド（Ｃｙ：５００ｍｇ／ｍ２／日）をフルダラビン（Ｆｌｕ：３０ｍｇ／ｍ２／日）と併用して１日３回投与し、リンパ球減少症を誘発したが、ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴ点滴静注の４８時間前に完了したが、点滴静注の２週間前までに完了した。
試験０日目に、患者は、１～５０ｍｌの体積で、約１～１０分間にわたる静脈内注入によって、計画された同種ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの単回投与を受けた。患者には、最良のＨＬＡクラスＩ及びクラスＩＩ一致を有するＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴを投与した。
本研究では、合計５人の患者に同種ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴ細胞を投与した。３例に４×１０７のＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴ細胞の用量１（ＤＬ１）を投与した。２例に１×１０８のＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴ細胞の投与量２（ＤＬ２）を投与した。
モニタリングは、注射が医師によって行われたことを除いて、血液製剤の投与のための施設基準に従って行われた。患者を注入後少なくとも３時間モニタリングした。臨床状態及び臨床検査データの変化を含む有害事象について患者を評価した。特に、一部のＣＡＲ－Ｔ細胞免疫療法において観察されているサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）及び神経毒性の相関について患者を評価した。
血液試料を、以下の時点で患者から採取した：研究前、注入後３～４時間、０日目の細胞注入後１、２、３、４、及び６週間及び３ヶ月。ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの持続性及び有効性を評価するために試料を分析した。
いずれの患者も用量制限毒性を経験せず、任意のグレードのサイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）又は移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）は観察されなかった。
同種ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴを投与された患者における臨床反応
診断イメージングを実施して、注入前及び０日目の注入後６～８週目に、測定可能な疾患及び治療（ＰＥＴスキャン、ＣＴスキャン、ＭＲＩ及び核イメージングを介する）に対する応答を記録した。
患者＃１に左肘前窩に１１．９ｍＣｉのＦＤＧを静脈内注射した（注射時の血糖値は９９ｍｇ／ｄＬであった）。ＰＥＴ及びＣＴ画像を中頭蓋冠から近位大腿骨から得、画像を融合し、軸方向、冠状面及び矢状面における多面体再構築と三次元再構築を行った。
患者番号２に７．２９ｍＣｉのＦＤＧを静脈内注射した（注射時の血糖値は９９ｍｇ／ｄＬであった）。約６０分後、ＣＴ減衰補正技術を利用したＰＥＴ－ＣＴスキャナを用いて頭蓋底から大腿近位部までの画像を取得した。低線量法を用いてＣＴスライスを得、多平面再フォーマット画像を得た。
図７及び８は、ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴで治療された２人の患者における臨床応答を示す。患者＃１の画像は疾患のいくつかの領域の解像度を示し、患者＃２の画像は疾患の著しい減少を示し、これらの患者における同種ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴによる治療の治療有効性を示す。
投与後のＣＤ３０．ＣＡＲベクターのコピー数の分析
ＣＤ３０．ＣＡＲをコードするレトロウイルスの組み込みゲノムをリアルタイムｑＰＣＲによって定量した。ＰＢＭＣを、いくつかの時点（リンパ球枯渇前、３時間、１週目、２週目、３週目、４週目、６週目、及び３ヶ月目）で患者から採取した末梢血試料から単離した。メーカーの指示に従ってＱＩＡａｍｐ ＤＮＡ Ｂｌｏｏｄ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いてＰＢＭＣからＤＮＡを抽出した後、レトロウイルスベクター内の特定の配列に相補的なプライマー及びプローブ（アプライド・バイオシステム）を用いてＤＮＡを増幅した。導入遺伝子をコードするプラスミドの連続希釈を用いて標準曲線を確立した。増幅は製造業者の指示に従い、ＡＢＩ７９００ＨＦリアルタイムＰＣＲシステム（アプライド・バイオシステム）を用いて実施した。
図９は患者＃１及び患者＃２のＣＤ３０．ＣＡＲ導入遺伝子のベクターコピー数を示しており、ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴはｉｎ ｖｉｖｏで増殖せず、これらの患者の末梢血中で迅速に検出不能になることを示唆している。
同種ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴを投与された患者におけるエピトープ拡散の分析
エピトープ拡散を評価するために、免疫細胞を患者＃１からいくつかの時点で収集し、腫瘍関連抗原で刺激して、同種ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴの注入の前後でそれらの反応性を決定した。
ＰＢＭＣを、いくつかの時点（Ｐｒｅ－ｌｙｍｐｈｏｄｅｐｌｅｔｉｏｎ、３時間、１週目、２週目、３週目、４週目、６週目、及び３ヶ月目）で患者から採取した末梢血試料から単離し、本質的に上記の実施例５．１に記載のように実施したＥＬＩＳｐｏｔアッセイで使用したが、ただし、ＰＢＭＣをウェル当たり３×１０５で播種し、ＥＢＶ潜在性及び溶解性抗原の評価に加えて、２つのさらなる抗原群を用いてＰＢＭＣを刺激した；（１）「他のウイルス」由来の抗原のペプミックスのプール（アデノウイルスタンパク質Ｈｅｘｏｎ及びＰｅｎｔｏｎ、ならびにＣＭＶタンパク質ＰＰ６５）、ならびに（２）腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）ＭＡＧＥ－Ａ４、ＮＹ－ＥＳＯ、ＰＲＡＭＥ、ＳＳＸ２、及びサバイビンに対応するペプミックスのプール。
図１０は、患者＃１がいかなる時点においても腫瘍関連抗原に対する応答を有さなかったことを示し、患者＃１においてエピトープ拡散がなかったことを示唆する。この結果は、同種ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴによる治療が患者の免疫系をこれらの他の腫瘍抗原に対して感作しなかったことを示唆している。
５．３結論
本発明者らは、健康なドナー対象から産生されたＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴがＣＤ３０＋癌を有する患者のための既製の治療としてのそれらの使用に従って、ＥＢＶ特異性の保持及びＣＤ３０陽性腫瘍細胞を排除する能力を伴って、十分な数に拡大され、それらのＴＣＲ及びＣＤ３０．ＣＡＲの両方の機能を保存することができることを示した。
ＣＤ３０．ＣＡＲ ＥＢＶＳＴは安全であり、同種レシピエントにおいてｉｎ ｖｉｖｏでＣＤ３０陽性リンパ腫に対する治療効果を示すことが見出された。末梢血中のＣＡＲ発現細胞の持続性が限られているにもかかわらず、また他の腫瘍関連抗原に広がるエピトープの証拠がないにもかかわらず、臨床応答が観察された。

Claims (42)

  1. ウイルス特異的免疫細胞であって、
    キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＣＡＲをコードする核酸を含み、
    前記ＣＡＲは、（ｉ）ＣＤ３０に特異的に結合する抗原結合ドメイン、（ｉｉ）膜貫通ドメイン、及び（ｉｉｉ）シグナル伝達ドメインであって、
    前記シグナル伝達ドメインは、（Ａ）ＣＤ２８の細胞内ドメインに由来するアミノ酸配列、及び（ｂ）免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含むアミノ酸配列を含む、ウイルス特異的免疫細胞。
  2. 前記シグナル伝達領域は、配列ＩＤ番号２６に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１又は請求項２に記載のウイルス特異的免疫細胞。
  3. 前記膜貫通ドメインは、ＣＤ２８の膜貫通ドメインに由来する、請求項１又は２に記載のウイルス特異的免疫細胞。
  4. 前記膜貫通領域は、配列ＩＤ番号２０に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１～３のいずれか１項に記載のウイルス特異的免疫細胞。
  5. 前記抗原結合領域は、配列ＩＤ番号１４に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び配列ＩＤ番号１５に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１～４のいずれか１項に記載のウイルス特異的免疫細胞。
  6. 前記抗原結合領域は、配列ＩＤ番号１８に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１～５のいずれか１項に記載のウイルス特異的免疫細胞。
  7. 前記シグナル伝達領域は、（ａ）ＣＤ３ζの細胞内ドメインに由来するアミノ酸配列を含む、請求項１～６のいずれか１項に記載のウイルス特異的免疫細胞。
  8. 前記シグナル伝達領域は、配列ＩＤ番号２５に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１～７のいずれか１項に記載のウイルス特異的免疫細胞。
  9. 前記ＣＡＲは、前記抗原結合ドメインと前記膜貫通ドメインとの間に設けられたヒンジ領域をさらに含む、請求項１～８のいずれか１項に記載のウイルス特異的免疫細胞。
  10. 前記ヒンジ領域は、配列ＩＤ番号３３に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項９に記載のウイルス特異的免疫細胞。
  11. 配列ＩＤ番号３５又は３６に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項１～１０のいずれか１項に記載のウイルス特異的免疫細胞。
  12. 前記ウイルス特異的免疫細胞は、ＣＤ３０以外の標的抗原に特異的に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲ、又はＣＤ３０以外の標的抗原に特異的に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲをコードする核酸を含む、請求項１～１１のいずれか１項に記載のウイルス特異的免疫細胞。
  13. ウイルス特異的免疫細胞であって、
    キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）またはＣＡＲをコードする核酸を含み、
    前記ＣＡＲは、（ｉ）ＣＤ３０に特異的に結合する抗原結合ドメイン、（ｉｉ）膜貫通ドメイン、及び（ｉｉｉ）免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含むシグナル伝達ドメインを含み、
    前記ウイルス特異的免疫細胞は、ＣＤ３０以外の標的抗原に特異的に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲ、又はＣＤ３０以外の標的抗原に特異的に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲをコードする核酸を含む、ウイルス特異的免疫細胞。
  14. 前記ウイルス特異的免疫細胞は、１つ以上の非同一ＣＡＲ、又は１つ以上の非同一ＣＡＲをコードする核酸を含む、請求項１２又は請求項１３に記載のウイルス特異的免疫細胞。
  15. 前記ＣＤ３０以外の標的抗原は、癌細胞抗原である、請求項１２～１４のいずれか１項に記載のウイルス特異的免疫細胞。
  16. 前記ＣＤ３０以外の標的抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＲＯＲ１Ｒ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ３８、ＢＣＭＡ、メソテリン、ＥＧＦＲ、ＧＰＣ３、ＭＵＣ１、ＨＥＲ２、ＧＤ２、ＣＥＡ、ＥｐＣＡＭ、ＬｅＹ及びＰＳＣＡから選択される、請求項１２～１５のいずれか１項に記載のウイルス特異的免疫細胞。
  17. 前記ＣＤ３０以外の標的抗原は、ＣＤ１９である、請求項１２～１６のいずれか１項に記載のウイルス特異的免疫細胞。
  18. 前記ウイルス特異的免疫細胞は、ウイルス特異的Ｔ細胞である、請求項１～１７のいずれか１項に記載のウイルス特異的免疫細胞。
  19. 前記ウイルス特異的免疫細胞は、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）に特異的である、請求項１～１８のいずれか１項に記載のウイルス特異的免疫細胞。
  20. ウイルス特異的免疫細胞の製造方法であって、
    キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＣＡＲをコードする核酸を含むようにウイルス特異的免疫細胞を改変する工程を含む、
    前記ＣＡＲは（ｉ）ＣＤ３０に特異的に結合する抗原結合ドメイン、（ｉｉ）膜貫通ドメイン、及び（ｉｉｉ）シグナル伝達ドメインであって、
    前記シグナル伝達ドメインは、（Ａ）ＣＤ２８の細胞内ドメインに由来するアミノ酸配列、及び（ｂ）免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含むアミノ酸配列を含む、ウイルス特異的免疫細胞の製造方法。
  21. 前記シグナル伝達ドメインは、配列ＩＤ番号２６に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２０に記載の方法。
  22. 前記膜貫通ドメインは、ＣＤ２８の膜貫通ドメインに由来する、請求項２０又は請求項２１に記載の方法。
  23. 前記膜貫通領域は、配列ＩＤ番号２０に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２０～２２のいずれか１項に記載の方法。
  24. 前記抗原結合領域は、配列ＩＤ番号１４に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、及び配列ＩＤ番号１５に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２０～２３のいずれか１項に記載の方法。
  25. 前記抗原結合領域は、配列ＩＤ番号１８に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２０～２４のいずれか１項に記載の方法。
  26. 前記シグナル伝達ドメインは、（ａ）ＣＤ３ζの細胞内ドメインに由来するアミノ酸配列を含む、請求項２０～２５のいずれか１項に記載の方法。
  27. 前記シグナル伝達ドメインは、配列ＩＤ番号２５に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２０～２６のいずれか１項に記載の方法。
  28. 前記ＣＡＲは、前記抗原結合ドメインと前記膜貫通ドメインとの間に提供されるヒンジ領域をさらに含む、請求項２０～２７のいずれか１項に記載の方法。
  29. 前記ヒンジ領域は、配列ＩＤ番号３３に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２０～２８のいずれか１項に記載の方法。
  30. 配列ＩＤ番号３５又は３６に対して少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項２０～２９のいずれか１項に記載の方法。
  31. 前記ウイルス特異的免疫細胞は、ＣＤ３０以外の標的抗原に特異的に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲ、又はＣＤ３０以外の標的抗原に特異的に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲをコードする核酸を含む、請求項２０～３０のいずれか１項に記載の方法。
  32. ウイルス特異的免疫細胞の製造方法であって、
    キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＣＡＲをコードする核酸を含むようにウイルス特異的免疫細胞を改変する工程を含み、
    前記ＣＡＲは、（ｉ）ＣＤ３０に特異的に結合する抗原結合ドメイン、（ｉｉ）膜貫通ドメイン、及び（ｉｉｉ）免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含むシグナル伝達ドメインを含み、
    前記ウイルス特異的免疫細胞は、ＣＤ３０以外の標的抗原に特異的に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲ、又はＣＤ３０以外の標的抗原に特異的に結合する抗原結合ドメインを含むＣＡＲをコードする核酸を含む、ウイルス特異的免疫細胞の製造方法。
  33. 請求項２０から３２のいずれか１項に記載の方法であって、
    前記方法は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＣＡＲをコードする核酸を含むようにウイルス特異的免疫細胞を改変する工程を含み、
    前記ＣＡＲは、ＣＤ３０以外の標的抗原に特異的に結合する抗原結合ドメインを含む、方法。
  34. 前記ウイルス特異的免疫細胞は、１つ以上の非同一ＣＡＲ、又は１つ以上の非同一ＣＡＲをコードする核酸を含む、請求項３１～３３のいずれか１項に記載の方法。
  35. 前記ＣＤ３０以外の標的抗原は、癌細胞抗原である、請求項３１～３４のいずれか１項に記載の方法。
  36. 前記ＣＤ３０以外の標的抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＲＯＲ１Ｒ、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ３８、ＢＣＭＡ、メソテリン、ＥＧＦＲ、ＧＰＣ３、ＭＵＣ１、ＨＥＲ２、ＧＤ２、ＣＥＡ、ＥｐＣＡＭ、ＬｅＹ及びＰＳＣＡから選択される、請求項３１～３５のいずれか１項に記載の方法。
  37. 前記ＣＤ３０以外の標的抗原は、ＣＤ１９である、請求項３１～３６のいずれか１項に記載の方法。
  38. 前記ウイルス特異的免疫細胞は、ウイルス特異的Ｔ細胞である、請求項２０～３８のいずれか１項に記載の方法。
  39. 前記ウイルス特異的免疫細胞は、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）に特異的である、請求項２０～３９のいずれか１項に記載の方法。
  40. 請求項２０～３９のいずれか１項に記載の方法によって得られるか、又は得られる、ウイルス特異的免疫細胞。
  41. 請求項１～１９又は請求項４０のいずれか１項に記載のウイルス特異的免疫細胞と、薬学的に許容される担体、アジュバント、賦形剤又は希釈剤とを含む、医薬組成物。
  42. 医学的治療又は予防の方法において使用するための、請求項１～１９又は請求項４０のいずれか１項に記載のウイルス特異的免疫細胞、又は請求項４１に記載の医薬組成物。
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