JP2023522079A

JP2023522079A - ヒアルロン酸組成物の制御放出

Info

Publication number: JP2023522079A
Application number: JP2022563191A
Authority: JP
Inventors: ブレンダンパトリックパーセル
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2020-04-17
Filing date: 2021-04-19
Publication date: 2023-05-26
Also published as: WO2021212097A1; US20230172968A1; EP4135772A4; EP4135772A1

Abstract

本開示は、制御された速度でヒアルロン酸を放出する高分子量ヒアルロン酸組成物に関する。組成物は、体内でのヒアルロン酸の改善された保持および持続時間を達成することができ、全身にわたる組織を治療する方法に使用することができる。組成物、治療方法、および作製方法が記載される。【選択図】図１

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年４月１７日に出願され、ＨＹＡＬＵＲＯＮＩＣＡＣＩＤＰＡＲＴＩＣＬＥＣＯＭＰＯＳＩＴＩＯＮＳＴＯＭＯＤＵＬＡＴＥＶＩＣＯＥＬＡＳＴＩＣＰＲＯＰＥＲＴＩＥＳという発明の名称の米国仮出願第６３／０１１，９９６号、および２０２１年１月１２日に出願され、ＳＵＳＴＡＩＮＥＤＲＥＬＥＡＳＥＨＹＡＬＵＲＯＮＩＣＡＣＩＤＣＯＭＰＯＳＩＴＩＯＮＳという発明の名称の米国仮出願第６３／１３６，５０８号の利益を主張し、それらの両方は、完全に記載されているかのように、参照により組み込まれる。

分野
本開示は、身体への局所投与のためのヒアルロン酸から構成される粒子に関する。

ヒアルロン酸（ＨＡ）は、Ｄ－グルクロン酸およびＮ－アセチル－Ｄ－グルコサミン二糖の反復から構成される直鎖グリコサミノグリカンである。それは、親水性の、水で膨潤するポリマーであり、全身にわたる組織の細胞外マトリクスに豊富に存在する。ＨＡは、組織の水和および機構、組織形成、創傷治癒、ならびに炎症の調節において重要な機械的および生物学的役割を果たす。ＨＡポリマーは、５，０００ダルトン（Ｄａ）～２０，０００，０００Ｄａの範囲の分子量で体内に見出され得る。水性緩衝液中に溶解したＨＡは、ＨＡ濃度および分子量に正比例する粘弾性特性を有するずり減粘（ｓｈｅａｒ－ｔｈｉｎｎｉｎｇ）溶液を形成する［１］。ＨＡは、清澄粘性液を生成するために約２００万Ｄａおよび２～４ｍｇ／ｍＬの濃度で関節の正常な滑液中に存在する［２～４］。老化した関節および疾患の関節では、より高分子量のＨＡの濃度が低くなる［５］。これは、滑液の機械的特性および潤滑特性、ならびに関節内の持続する炎症および滑膜炎をもたらす生物学的プロセスの異常調節に関係する［６］。同様に、眼の硝子体内のＨＡ含有量は年齢とともに減少し、最終的に眼の機能を損なうと考えられている硝子体の粘弾性特性を変化させることが示されており［７］、ＨＡ分解断片は、椎間板変性の際に炎症を引き起こすことが示されている［８］。研究により、５００ｋＤａ～４ＭＤａの範囲のＨＡ分子量は、炎症を軽減し、内因性ＨＡの産生を刺激する最大の能力を表すことが示されている［９、１０］。

滑液は、線維状コラーゲンおよび滑膜組織細胞から構成される弾性組織である滑膜に含まれている。滑膜間質は微孔質であり、ＨＡを含む巨大分子を滑液から血漿に輸送する［１１］。滑液中のＨＡの代謝回転は、アルブミンなどの他の小さな分子よりも遅いが、それでも２４時間未満である［１２］。１００ｋＤａから６ＭＤａまでの外因性ＨＡの分子量の増加は、半減期を１０時間から１３時間に増加させるだけである［１２］。したがって、治療に関連する時間の間、滑液の粘弾性特性を維持するために、ＩＡ注射後に滑液に外因性ＨＡを持続することは困難である。

表１は、ヒト滑液およびＨＡ関節内補充薬のＨＡ分子量、濃度および粘弾性特性を示す。データは公開された文献［２～５、１３～１５］から編集した。

全身にわたる組織のＨＡ含有量および分子量の減少を認識すると、ＨＡの外因性溶液が、組織または関節内の失われたまたは分解されたＨＡを補うために、局所注射手順によって定期的に投与される。未架橋の高分子量ＨＡの外因性投与が、ＨＡの粘弾性および生物学的機能を維持するために利用されているが（Ｈｙａｌｇａｎ、Ｏｒｔｈｏｖｉｓｃ）、未架橋のＨＡの保持および持続時間は比較的短い（２４時間未満の半減期）［１２］。外部から投与されたＨＡの保持および持続時間を向上させるために、ＨＡの化学的架橋が利用されている。ＨＡは、最も一般的には、高温および塩基性ｐＨでの縮合反応により、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）と架橋される。ＨＡのヒドロキシル基とＢＤＤＥのエポキシド基との間に安定したエーテル結合が形成される。ＢＤＤＥ架橋の程度を制御することにより、粘性のＨＡ溶液およびヒドロゲルを様々な物理的特性で製造することができる。例えば、異なる膨潤特性、剛性特性および組織分布特性を有する様々なＢＤＤＥ架橋ＨＡ皮膚充填剤製剤が開発されている［１６］。さらに、残留タンパク質を含有する雄鶏のとさか由来のＨＡが、体内での様々な物理的特性および持続時間に関して、異なる程度でグルタルアルデヒドと架橋されている［１７、１８］。

架橋は、水中で可溶性のままであるＨＡの分子量を効果的に増加させるために直鎖ＨＡポリマー間に低い架橋程度（典型的に、数パーセントの反復ＨＡ二糖）で、または不溶性の、水で膨潤するヒドロゲルである接続されたネットワークを形成するために高い架橋程度（典型的に、５パーセントまたはそれ以上）で導入され得る。

ＨＡ安定性を改善するために、１つより多いＨＡ架橋密度を有するＨＡ製剤が開発された。例えば、Ｓｙｎｖｉｓｃ（ＳａｎｏｆｉＧｅｎｚｙｍｅ）は、ｈｙｌａｎＡ（分子量を増加させるために架橋したＨＡ）の溶液内で膨潤するｈｙｌａｎＢ粒子（高ジビニルスルホン（ＤＶＳ）架橋密度）から構成される（特許文献１）。ｈｙｌａｎＢは、ｈｙｌａｎＡと比較して長い滑膜半減期（ｓｙｎｏｖｉａｌｈａｌｆ－ｌｉｆｅ）を有し［１７］、ｈｙｌａｎＢ粒子は、関節内注射の２８日後にヤギの滑液から回収されたが［１８］、ＢＤＤＥ架橋粒子は、食細胞を示す免疫細胞で覆われた固体ゲルのままであるため、架橋ＨＡ粒子が滑液中にどのような活性を有するかは不明である。同様に、ＵｔｏｐｙＨＡ（Ｌｕｍｉｎｅｒａ）は、製剤安定性を向上させるために相分離または境界が検出されない均質な製剤を形成するために架橋ＨＡおよび未架橋ＨＡと混合された高度に架橋されたＨＡ粒子を含む（特許文献２）。

架橋ＨＡ製剤の分解は、酵素活性またはグリコシド結合の酸化的切断によるＨＡポリマー鎖の分解、および架橋剤における結合の分解の両方によって調節される［１９］。ＨＡのＢＤＤＥおよびＤＶＳ架橋の間に形成されるエーテル結合、ならびにＢＤＤＥの主鎖に沿ったエーテル結合は、水中で比較的安定しており、室温で最長２年間の水で膨潤した製剤の貯蔵安定性、および１年以上の間の真皮での持続性を可能にする［１９］。したがって、体内でのＢＤＤＥ架橋ＨＡ製品の分解は、架橋ではなくＨＡ主鎖の分解によるものであり、最小限のＨＡが放出される。

異化作用のヒアルロニダーゼ酵素は、関節炎の関節を含む炎症を起こした組織において上方制御され、ＨＡの代謝回転の増加をもたらす。ヘパリンなどの硫酸化多糖類を含む、いくつかの分子が、ヒアルロニダーゼ活性を直接阻害することが示されている［２０、２１］。さらに、硫酸基の導入を含むＨＡの化学的な修飾は、修飾されたＨＡのヒアルロニダーゼ分解を防ぐことが示されている［２２］。

市販のＨＡ関節内補充薬製品の大部分は、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル（ＢＤＤＥ）による架橋に依存しているが、材料特性の制御を強化するために、様々な化学的に修飾されたＨＡが開発されている［２３］。ＨＡは、ＨＡ主鎖に沿ったヒドロキシル基またはカルボン酸基との化学的な結合（ｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ）によって反応基で修飾され得る。開始剤の化学物質または相補的な反応基を有する架橋剤と混合すると、ＨＡの液体溶液は、水で膨潤した固体ヒドロゲルに変換され得る。架橋は、共有結合の形成、または静電、水素結合、疎水性、およびファンデルワールス力などの非共有相互作用によるもののいずれかであり得る。比較的低分子量（２００ｋＤａ未満）のＨＡが、物理的特性が制御されたヒドロゲルの形成のために開始剤および架橋剤を均一に混合できるように、低粘度での前駆体溶液を生成するために一般的に使用される。

分解可能な架橋化学物質は、分解が制御されたゲルの製造に向けてＨＡヒドロゲルに組み込まれている。例えば、特許文献３は、乳酸およびヒドロキシエチルメタクリレート誘導体の化学的な結合を介して、反応性メタクリレートとＨＡ主鎖との間に配置された加水分解を受けやすいエステル基を記載している。さらに、特許文献４は、プロテアーゼ活性の存在下でヒドロゲル分解を制御するために、反応性架橋基とＨＡ主鎖との間に配置されるプロテアーゼ分解性ペプチドを記載している。

米国特許第５，１４３，７２４号国際公開第２０２０１９４２９４Ａ１号米国出願公開第２０１２０１１４６１５Ａ１号米国特許第９，６９４，０８１号

一態様では、本発明は、ヒアルロン酸の第１の画分と、ヒアルロン酸の第２の画分とを含む組成物に関する。水性媒体中に存在する場合、第１の画分および第２の画分は不溶性であり、組成物は、第２の画分とは異なる速度で第１の画分から水性媒体にヒアルロン酸を放出する。

一態様では、本発明は、ヒアルロン酸の第１の画分と、ヒアルロン酸の第２の画分とを含む組成物に関する。第２の画分は第１の画分中に封入されている。水性媒体中に存在する場合、第１の画分および第２の画分は不溶性であり、組成物は、第２の画分とは異なる速度で第１の画分から水性媒体にヒアルロン酸を放出する。

一態様では、本発明は治療方法に関する。この方法は、組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む。組成物は、ヒアルロン酸の第１の画分と、ヒアルロン酸の第２の画分とを含む。第２の画分は第１の画分中に封入されている。水性媒体中に存在する場合、第１の画分および第２の画分は不溶性であり、組成物は、第２の画分とは異なる速度で第１の画分から水性媒体にヒアルロン酸を放出する。

一態様では、本発明は、組成物を作製する方法に関する。この方法は、ヒアルロン酸の第１の画分中に第２の画分を封入することを含む。第１の画分は、第２の画分の膨潤を制限し、したがって第２の画分の放出を制限する。

一態様では、本発明は、ヒアルロン酸を投与する方法に関する。この方法は、注射器またはカテーテルを介して体内に異なる速度でヒアルロン酸を放出するヒアルロン酸の２つの不溶性画分を含む組成物を注射することを含む。

本発明の好ましい実施形態の以下の詳細な説明は、添付の図面と併せて読むと、より良く理解されるであろう。本発明を例示する目的のために、現在好ましい実施形態が図面に示されている。しかしながら、本発明は、示された正確な構成および手段に限定されないことが理解される。

図１は、滑液中の２つのＨＡ粒子画分を含む組成物からのＨＡ放出の提案された粘弾性効果を示す。現在のＨＡ製剤は、ＨＡが除去されるので滑液中に短時間だけ存在する増強された粘弾性効果を有する。異なる速度で不溶性画分からＨＡを放出することによって、粘弾性が増加した複数の相が、持続的な粘弾性効果のために組み合わされ得る。図２Ａおよび２Ｂは、ＨＡの２つの画分を含むＨＡヒドロゲルの概略図を示す。１０．４ｍＭの架橋密度で加水分解により分解可能な化学物質で架橋されたＨＡヒドロゲル内に封入された未架橋ＨＡ粒子（ＨＡＸＭＥＤ）（Ａ）。ヒドロゲルを生理的緩衝液中でインキュベートし、周囲の液体を回収して毎日交換し、ＨＡ含有量をカルバゾールアッセイにより定量した（Ｂ、群当たりｎ＝３のゲル、平均＋／－標準偏差）。ＨＡ含有量は、開始ヒドロゲル１ミリリットル当たりで示される。図３Ａおよび３Ｂは、ＨＡの３つの画分を含むＨＡヒドロゲルの概略図を示す。未架橋ＨＡ粒子（ＨＡＰ）および微粒子に断片化され、脱水され、２２ｍＭの架橋密度を有するＨＡヒドロゲル（ＨＡＸＨＩ）に封入される前の６．７ｍＭの架橋密度を有する架橋ＨＡ粒子（ＨＡＸＬＯ）（Ａ）。両方の架橋相の架橋は加水分解により分解可能である。ヒドロゲルを生理的緩衝液中でインキュベートし、周囲の液体を回収して毎日交換し、ＨＡ含有量をカルバゾールアッセイにより定量した（Ｂ、群当たりｎ＝３のゲル、平均＋／－標準偏差）。ＨＡ含有量は、開始ヒドロゲル１ミリリットル当たりで示される。ＨＡＸＬＯヒドロゲル（２０ｍｇ／ｍＬのＨＡ濃度）を、生理的緩衝液中でインキュベートし、封入されたＨＡＸＬＯ粒子と比較するためにＨＡ放出を定量した（挿入図、群当たりｎ＝３のゲル、平均＋／－標準偏差）。図４は、封入された架橋画分および未架橋画分を有するＨＡヒドロゲルの膨潤比を示す（群当たりｎ＝３のゲル、平均±標準偏差）。図５Ａおよび５Ｂは、ＨＡの３つの画分を含むＨＡヒドロゲルの概略図を示す。未架橋ＨＡ粒子（ＨＡＰ）および脱水され、１１ｍＭの架橋密度を有する第２のＨＡヒドロゲル（ＭＡＸＭＥＤ）に封入される前に２２ｍＭの架橋密度で架橋されたＨＡヒドロゲル（ＭＡＸＨＩ）（図５Ａ）。両方の架橋相の架橋は加水分解により分解可能である。ヒドロゲルを生理的緩衝液中でインキュベートし、周囲の液体を回収して毎日交換し、ＨＡ含有量をカルバゾールアッセイにより定量した（図５Ｂ、群当たりｎ＝３のゲル、平均＋／－標準偏差）。ＨＡ含有量は、開始ヒドロゲル１ミリリットル当たりで示される。図６Ａおよび６Ｂは、３つの画分のヒドロゲル微粒子におけるＨＡの異なる画分に対応するＨＡ放出の異なる相の概略図を示す（Ａ）。第Ｉ相では、未架橋ＨＡが周囲液体の粘度を増加させるために高濃度で放出される。第ＩＩ相では、架橋ＨＡが放出され、粒子が粘弾性特性を増加させるために膨潤する。第ＩＩＩ相では、架橋ＨＡ粒子が部分的に分解され、架橋ＨＡの膨潤および放出が生じる。３つの画分の微粒子の粘弾性特性は、異なるインキュベーション時間（３７℃、毎分６０回転、ＰＢＳ、上清緩衝液を毎日変更した）の後に測定した。第Ｉ相は２日目に対応し、第ＩＩ相は１５日目に対応し、第ＩＩＩ相は３０日目に対応する。損失および貯蔵弾性率は、０．５％のひずみおよび２．５Ｈｚで測定した。粘度値は、１Ｅ－３から１Ｅ３１／ｓのせん断速度に対して測定した。２０ｍｍのプレート形状（ＴＡＨＲ２０レオメーター）を用いた２２℃での全ての測定。^＊ＰＢＳ対照と比較してｐ＜０．０５、ステューデントｔ検定。図７Ａおよび７Ｂは、３７℃、８０ｒｐｍでリン酸緩衝生理食塩水中に３つの画分のＨＡ微粒子から放出されたＨＡの質量分率を示す。画分は、後で微粒子に処理される５ｗｔ％のＨＡヒドロゲル（２３ｍＭの架橋密度）中に封入された、４ｗｔ％の未架橋ＨＡ粒子および１１ｗｔ％の架橋ＨＡ粒子（６．１ｍＭの架橋密度）であった。ＨＡポリマー間の全ての架橋は、加水分解により分解可能なエステル基を含有した。示したデータは、平均＋／－標準偏差、ｎ＝３の試料である。図８Ａおよび８Ｂは、３７℃、８０ｒｐｍでリン酸緩衝生理食塩水中に３つの画分のＨＡ微粒子から放出されたＨＡの質量分率を示す。画分は、後で微粒子に処理される６ｗｔ％のＨＡヒドロゲル（２７ｍＭの架橋密度）中に封入された、８．５ｗｔ％の架橋ＨＡ粒子（２．７ｍＭの架橋密度）および５．５ｗｔ％の架橋ＨＡ粒子（７．９ｍＭの架橋密度）であった。ＨＡポリマー間の全ての架橋は、加水分解により分解可能なエステル基を含有した。示したデータは、平均＋／－標準偏差、ｎ＝３の試料である。図９Ａおよび９Ｂは、３７℃、８０ｒｐｍでリン酸緩衝生理食塩水中に３つの画分のＨＡ微粒子から放出されたＨＡの質量分率を示す。画分は、後で微粒子に処理される５ｗｔ％のＨＡヒドロゲル（１６ｍＭの架橋密度）中に封入された、５ｗｔ％の未架橋ＨＡ粒子および１０ｗｔ％の架橋ＨＡ粒子（４．１ｍＭの架橋密度）であった。ＨＡポリマー間の全ての架橋は、加水分解により分解可能なエステル基を含有した。示したデータは、平均＋／－標準偏差、ｎ＝３の試料である。図１０Ａおよび１０Ｂは、３７℃、８０ｒｐｍでリン酸緩衝生理食塩水中に４つの画分のＨＡ微粒子から放出されたＨＡの質量分率を示す。画分は、後で微粒子に処理される５ｗｔ％のＨＡヒドロゲル（２８ｍＭの架橋密度）中に封入された、４ｗｔ％の未架橋ＨＡ粒子、４ｗｔ％の架橋ＨＡ粒子（３．３ｍＭの架橋密度）および７ｗｔ％の架橋ＨＡ粒子（９．９ｍＭの架橋密度）であった。ＨＡポリマー間の全ての架橋は、加水分解により分解可能なエステル基を含有した。示したデータは、平均＋／－標準偏差、ｎ＝３の試料である。

特定の用語が、便宜上のみのために以下の説明に使用され、限定ではない。「右」、「左」、「上」、および「下」という言葉は、参照される図面における方向を示す。

「ヒドロゲル」は、貯蔵弾性率（Ｇ’）が損失弾性率（Ｇ’’）よりも大きい、架橋された親水性ポリマーの任意のネットワークである。ヒドロゲルは不溶性と見なされ、１０～９９．９％ｗ／ｗの水分含有量を有し得る。

「架橋」とは、ポリマー間に形成される共有結合または非共有結合を指す。

「架橋剤」とは、ポリマー間に結合を形成する分子を指す。架橋剤は、ポリマーと反応して架橋結合を形成することができ、または他のポリマーに架橋する前にポリマーに化学的に修飾され得る。

「加水分解により分解可能」とは、水中のエーテル結合の解離よりも速い速度で水分子の求核攻撃により解離する共有結合を含有する架橋を指す。

「画分」は、分子量、化学的架橋の程度もしくは種類、化学的な修飾の程度もしくは種類、または架橋密度の差によって識別され得るＨＡポリマーのサブセットである。これらのサブセットは、これらの特性の周囲に分布を有し得るが、それらの分布の平均の差がゼロではないことから識別され得る。これらのサブセットは、異なる化学合成または製剤プロセスのステップを通じて別々に生成される。

「化学的な修飾の程度」とは、新しい化学基で修飾されたＨＡポリマー上の反復二糖のパーセントを指す。ＨＡの場合、反復単位は、β－（１→４）およびβ－（１→３）グリコシド結合を交互に介して連結された、Ｄ－グルクロン酸およびＮ－アセチル－Ｄ－グルコサミンから構成される二糖である。

「化学的架橋の程度」とは、共有相互作用または非共有相互作用を介して別のＨＡポリマーまたはリンカー分子に結合しているＨＡポリマー上の反復二糖のパーセントを指す。ＨＡの場合、反復単位は、β－（１→４）およびβ－（１→３）グリコシド結合を交互に介して連結している、Ｄ－グルクロン酸およびＮ－アセチル－Ｄ－グルコサミンから構成される二糖である。

「架橋密度」とは、単位体積当たりの架橋剤とポリマーとの間の結合の濃度を指す。架橋密度は、化学的な修飾または架橋の程度に加えて、ポリマー濃度の変化によって変更され得る。架橋ＨＡネットワークを説明するために使用される場合、それは、単位体積当たりのＨＡへの結合の濃度である。

「薬物」は、生物に投与された場合に生物学的効果を生じる、既知の構造の任意の化学物質である。

「医薬」は、医療に使用される任意の化学物質である。

「分子量」は、ポリマーのサイズの尺度である。本明細書で使用される場合、「分子量」という用語は、水性緩衝液中のゲル浸透クロマトグラフィーによって決定されるポリマーの数平均分子量を指す。

「官能性」とは、別の分子に架橋することができる分子当たりの化学基の数を指す。

「貯蔵弾性率」または（Ｇ’）は、力が加えられた状態で貯蔵されたエネルギーの尺度であり、粘弾性材料の複素弾性率（ｃｏｍｐｌｅｘｍｏｄｕｌｕｓ）の弾性部分を表す。Ｇ’は、振動レオロジーによって決定され得る。

「損失弾性率」または（Ｇ’’）は、力が加えられた状態でのエネルギー散逸の尺度であり、粘弾性材料の複素弾性率の粘性部分を表す。Ｇ’’は、振動レオロジーによって決定され得る。

「ゼロせん断粘度」は、ゼロに近づくせん断速度で測定された粘度であり、実験データを数学的モデルに当てはめることによって決定される。

「液体」とは、貯蔵弾性率（Ｇ’）が損失弾性率（Ｇ’’）以下である水溶液を指す。

「放出」とは、不溶性ＨＡから可溶性ＨＡを分離することを指す。

「ポリマー質量分率」は、組成物中の全ポリマーのパーセントである。これは、特定の時間にわたって組成物から放出されるポリマーの割合を指す場合がある。

「封入された」とは、不溶性の架橋画分によって、およびその中に部分的または完全に囲まれていることを指す。封入された画分は、封入している画分の架橋またはポリマー鎖を壊さずに物理的に分離することはできない。封入された画分および封入された薬物は、封入している画分から拡散し得る。

「ｗｔ％」は、組成物の製造中に緩衝液１ミリリットル当たりに添加された乾燥材料粉末のグラム単位の質量を表すために使用される。例えば、１ミリリットルの緩衝液に０．１グラムの粉末を加えると、１０ｗｔ％になる。

「不溶性」とは、緩衝液中に入れたときに室温で２４時間以内に均一な溶液に溶解しない構造的完全性を有することを指す。

「可溶性」とは、緩衝液中に入れたときに室温で２４時間以内に均一な溶液に溶解することを指す。

「生理的条件」とは、ｐＨ７．４および３７℃を指す。

本明細書で使用される用語は、特定の態様のみを説明するためのものであり、限定することを意図していないことも理解されたい。本明細書および特許請求の範囲で使用される場合、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語はオープンエンド型であり、他の要素の追加を制限するものではない。しかし、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、米国で解釈される「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇｏｆ）」および「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙｏｆ）」の実施形態を包含する。別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。

本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「一つの（ａ）」、「一つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、文脈が明確に他を指示しない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「架橋ポリマー」への言及は、２つ以上の架橋ポリマーの混合物を含む。さらに、「薬学的担体」への言及は、２つ以上のそのような担体の混合物などを含む。

範囲は、本明細書では、ある値（第１の値）から別の値（第２の値）までとして表され得る。そのような範囲が表される場合、その範囲は、いくつかの態様において、第１の値および第２の値の一方または両方を含む。同様に、先行詞「約」を使用して、値が近似値として表される場合、特定の値が別の態様を形成することが理解されるであろう。範囲の各々の終点は、他方の終点に関連して、および他方の終点とは独立しての両方で有意であることがさらに理解されるであろう。本明細書に開示される多くの値が存在すること、および各値はまた、値自体に加えてその特定の「約」値として本明細書に開示されることも理解されたい。例えば、「１０」という値が開示されている場合、「約１０」も開示されている。２つの特定のユニット間の各ユニットも開示されることも理解されたい。例えば、１０および１５が開示されている場合、１１、１２、１３、および１４も開示されている。本明細書の全ての範囲は、部分範囲に分割することができる。部分範囲は、範囲の最も高い値より低い任意の値から選択されるより低い終点を有し得る。より低い終点は、範囲の最も低い終点を選択するか、または範囲の最高値を除いて、元の範囲で表される最も低い小数位で「１」だけ増加する任意の増分値を選択することによって選択され得る。部分範囲は、範囲の最も低い値より高い任意の値から選択されるより高い終点を有し得る。高い終点は、範囲の最低値を除いて、元の範囲で表される最も低い小数位で「１」だけ増加する、範囲の任意の増分値を選択することによって選択され得る。

本明細書で使用される場合、「約」および「～で、またはおよそ～」という用語は、問題の量または値が、指定された値、ほぼ指定された値、または指定された値とほぼ同じであり得ることを意味する。本明細書で使用される場合、別段の指示または推測がない限り、それは、±１０％の変動を示す公称値であることが一般に理解される。この用語は、同様の値が請求項に記載されている同等の結果または効果を促進することを伝えることを意図する。すなわち、量、サイズ、処方、パラメーター、ならびに他の量および特徴は正確ではなく、また正確である必要もないが、公差、換算係数、四捨五入、測定誤差など、および当業者に公知の他の因子を反映して、必要に応じて近似および／またはより大きくもしくはより小さくすることができることを理解されたい。一般に、量、サイズ、処方、パラメーター、または他の分量もしくは特性は、そのように明示的に述べられているか否かにかかわらず、「約」または「概算」である。定量値の前に「約」が使用される場合、別段の記載がない限り、パラメーターは特定の定量値自体も含むことを理解されたい。本明細書における任意の特定の数は、本明細書における追加の実施形態を形成するために「正確な」または「正確に」という用語で修飾され得る。

本明細書で使用される場合、「必要に応じた」または「必要に応じて」という用語は、後に記載される事象または状況が、発生する場合もあれば、発生しない場合もあり、その記載が、前記事象または状況が発生する場合、およびそれが発生しない場合を含むことを意味する。例えば、「必要に応じて置換されているアルキル」という語句は、アルキル基が置換されていても、されていなくてもよく、その記載が、置換および非置換のアルキル基の両方を含むことを意味する。

「Ａ、Ｂ、またはＣ」などの２つ以上の項目のリストが後に続く「少なくとも１つ」という語句は、Ａ、Ｂ、またはＣのうちのいずれかの個々の１つ、およびそれらのいずれかの組み合わせを意味する。

本開示の組成物を調製するために使用される成分、ならびに本明細書に開示される方法内で使用される組成物自体が開示される。これらおよび他の材料は本明細書に開示されており、これらの材料の組み合わせ、サブセット、相互作用、群などが開示される場合、これらの化合物の様々な個々のおよび集合的な組み合わせ、ならびに並べ替えの各々の特定の参照は、明示的に開示されていない場合があるが、各々が本明細書に具体的に企図され、説明されていることを理解されたい。例えば、特定の化合物が開示され、議論され、その化合物を含む多くの分子に対して行うことができる多くの修飾が議論されている場合、具体的に企図されるのは、具体的に反対に示されていない限り、可能性のある化合物および修飾のありとあらゆる組み合わせおよび並べ替えである。

本明細書に開示される材料の各々は、市販されているか、および／またはその製造方法が当業者に知られている。

一実施形態は、ヒアルロン酸の第１の画分およびヒアルロン酸の第２の画分を含む組成物を含む。第１の画分のヒアルロン酸は、第１の分子間架橋を含み得る。第２の画分のヒアルロン酸は、第２の分子間架橋を含み得る。組成物は、１つまたは複数の追加の画分を含んでもよい。追加の画分は、存在する場合、「第３の」、「第４の」などの画分と称される場合があり、「第３の分子間架橋」、「第４の分子間架橋」などを有する。

第１の画分は、第２の画分中に封入され得る。第２の画分は、第１の画分中に封入され得る。追加の画分を含む組成物に関して、１つの画分が、１つまたは複数の他の画分を封入し得る。封入する画分は、封入される画分よりも高い架橋密度を有してもよい。封入する画分は、封入される画分よりも低い架橋密度を有してもよい。水性媒体中に置かれる場合、第１の画分および／または第２の画分は、不溶性粒子の形態であり得る。追加の画分を含む組成物に関して、追加の画分は、水性媒体中の不溶性粒子の形態であり得る。

水性媒体中に配置される場合、組成物は、第２の画分とは異なる速度でヒアルロン酸を第１の画分から周囲の水性媒体中に放出し得る。追加の画分を含む組成物に関して、組成物は、第１および／または第２の画分とは異なる速度でヒアルロン酸を追加の画分から放出し得る。

第１の分子間架橋および第２の分子間架橋の一方または両方は、共有結合架橋を含んでもよい。第１の分子間架橋および第２の分子間架橋の一方または両方の共有結合架橋のうちの少なくとも一部または全ては、加水分解的に不安定であり得る。追加の画分を含む組成物に関して、１つまたは複数の追加の画分の分子間架橋の共有結合架橋のうちの少なくとも一部または全ては、加水分解的に不安定であり得る。加水分解的に不安定な架橋は、エステル結合であり得る。

第１の分子間架橋は、第１の架橋密度であり得、第２の分子間架橋は、第２の架橋密度であり得る。追加の画分を含む組成物に関して、それぞれの各画分は、それぞれの架橋密度を有し得る。架橋密度は、単位体積当たりのＨＡポリマーへの結合の濃度である（例えば、１リットル当たりの架橋結合のモル。あるＨＡポリマーから別のＨＡポリマーへの結合は、２つの架橋結合を含む）。各画分についての架橋密度の選択は、他の画分と独立していてもよく、他の画分と同じまたは異なっていてもよい。架橋密度は、０．１ｍＭ、１ｍＭ、１０ｍＭ、１００ｍＭ、１Ｍもしくは１０Ｍ、０．１ｍＭ、１ｍＭ、１０ｍＭ、１００ｍＭ、１Ｍもしくは１０Ｍのうちのいずれか１つ未満、０．１ｍＭ、１ｍＭ、１０ｍＭ、１００ｍＭ、１Ｍもしくは１０Ｍのうちの１つより大きい、または０．１ｍＭ、１ｍＭ、１０ｍＭ、１００ｍＭ、１Ｍもしくは１０Ｍのうちのいずれか２つの間でありその２つを含む範囲から選択され得る。第１および第２の密度が、異なる密度群にあるように選択を行うことができる。第１の架橋密度および第２の架橋密度は、０．１ｍＭ、１ｍＭ、１０ｍＭ、１００ｍＭ、１Ｍもしくは１０Ｍ、０．１ｍＭ、１ｍＭ、１０ｍＭ、１００ｍＭ、１Ｍもしくは１０Ｍのうちのいずれか１つ未満、０．１ｍＭ、１ｍＭ、１０ｍＭ、１００ｍＭ、１Ｍもしくは１０Ｍのうちの１つより大きい、または０．１ｍＭ、１ｍＭ、１０ｍＭ、１００ｍＭ、１Ｍもしくは１０Ｍのうちのいずれか２つの間でありその２つを含む範囲から独立して選択され得る。第３またはそれより大きいオーダーの架橋密度は、同じ範囲および値から選択され得る。

第１の分子間架橋は、第１の架橋の程度であり得、第２の分子間架橋は、第２の架橋の程度であり得る。追加の画分を含む組成物に関して、それぞれの各画分は、それぞれの架橋の程度を有し得る。架橋の程度は、共有結合相互作用または非共有結合相互作用を介して別のポリマーまたはリンカー分子に結合しているポリマー上の反復単位のパーセントである。各画分についての架橋の程度の選択は、他の画分と独立していてもよく、他の画分と同じまたは異なっていてもよい。架橋の程度は、０．１、１、２、５、１０、２０、５０、もしくは１００％、０．１、１、２、５、１０、２０、５０、もしくは１００％のうちのいずれか１つ未満、０．１、１、２、５、１０、２０、５０、もしくは９９％のうちのいずれか１つより大きい、または０．１、１、２、５、１０、２０、５０、もしくは１００％のうちのいずれか２つの間でありその２つを含む範囲から選択され得る。第１の架橋の程度は、第２の第１の架橋の程度とは異なり得る。第１の架橋の程度は、第２の第１の架橋の程度より大きくてもよい。第１の架橋の程度は、第２の第１の架橋の程度より小さくてもよい。第１の架橋の程度および第２の架橋の程度は、０．１、１、２、５、１０、２０、５０、もしくは１００％、０．１、１、２、５、１０、２０、５０、もしくは１００％のうちのいずれか１つ未満、０．１、１、２、５、１０、２０、５０、もしくは９９％のうちのいずれか１つより大きい、または０．１、１、２、５、１０、２０、５０、もしくは１００％のうちのいずれか２つの間でありその２つを含む範囲から独立して選択され得る。第３または追加の画分の架橋の程度は、同じ範囲および値から選択され得る。

記載されるように、本明細書の組成物は、ヒアルロン酸の１つまたは複数の追加の画分を含み得る。ヒアルロン酸の１つまたは複数の追加の画分は、ヒアルロン酸の第３の画分を含み得る。第３の画分のヒアルロン酸は、第３の分子間架橋を含み得る。第３の画分は、第１の画分および／または第２の画分中に封入され得る。封入する画分は、封入される画分よりも高い架橋密度を有してもよい。封入する画分は、封入される画分よりも低い架橋密度を有してもよい。第３の分子間架橋は、共有結合架橋であり得る。第３の分子間架橋における共有結合架橋は、加水分解的に不安定であり得る。加水分解的に不安定な架橋は、エステル結合であり得る。

第３の分子間架橋は、第３の架橋密度であり得る。第３の架橋密度は、第１または第２の架橋密度と比較して独立して選択され得る。第３の架橋密度は、０．１ｍＭ、１ｍＭ、１０ｍＭ、１００ｍＭ、１Ｍもしくは１０Ｍのうちの１つ、０．１ｍＭ、１ｍＭ、１０ｍＭ、１００ｍＭ、１Ｍもしくは１０Ｍのうちの１つ未満、０．１ｍＭ、１ｍＭ、１０ｍＭ、１００ｍＭ、１Ｍもしくは１０Ｍのうちの１つより大きい、または０．１ｍＭ、１ｍＭ、１０ｍＭ、１００ｍＭ、１Ｍもしくは１０Ｍのうちのいずれか２つの間でありその２つを含む範囲であり得る。

第３の分子間架橋は、０．１、１、２、５、１０、２０、５０、もしくは１００％、０．１、１、２、５、１０、２０、５０、もしくは１００％のうちの１つ未満、０．１、１、２、５、１０、２０、５０、もしくは９９％のうちの１つより大きい、または０．１、１、２、５、１０、２０、５０、もしくは１００％のうちのいずれか２つの間でありその２つを含む範囲から選択される架橋の程度であり得る。

第１の分子間架橋、第２の分子間架橋、および／または第３の架橋を含む、分子間架橋は、アルデヒド、ヒドラジド、チオール、アクリレート、メタクリレート、ヒドロキシエチルメタクリレート、ノルボルネン、アジド、アルキン、グリシジルメタクリレート、ハロアセテート、ベンジルエステル、チラミド、グリシジルエーテル、エポキシド、シクロデキストリン、アダマンタン、およびイオン帯電基によって形成される結合であり得る。第１の分子間架橋、第２の分子間架橋、第３の架橋、および／または１つもしくは複数の追加の画分の分子間架橋を含む、分子間架橋は、加水分解により分解可能であり得る。加水分解により分解可能な部分は、乳酸、ポリ－Ｌ－乳酸、カプロラクトン、ポリカプロラクトン、グリコール酸、ポリグリコール酸、ヒドロキシエチルメタクリレート、および無水物からなる群から独立して選択され得る。第１の分子間架橋、第２の分子間架橋、第３の分子間架橋、および／または任意の追加の画分の分子間架橋を含む、分子間架橋は、酵素的触媒によって分解可能であり得る。酵素は、プロテアーゼまたは炭水化物加水分解酵素であり得る。

一実施形態では、ＨＡは、非共有結合、疎水性、静電気、共有結合、フリーラジカル、マイケル付加、チオール－エン、縮合などを含むが、これらに限定されない当該技術分野において公知の機構で架橋される。一実施形態では、開始剤が、架橋を開始するためにＨＡに添加される。一実施形態では、混合時に反応する相補的で化学的な修飾を有する２つ以上の化学的に修飾されたＨＡポリマーが利用され得る。一実施形態では、混合時に相互作用する相補的で化学的な修飾を有する２つ以上の化学的に修飾されたＨＡポリマーが利用され得る。

架橋分子は、架橋ＨＡを形成するために利用され得る。任意の適切な架橋分子が利用され得る。適切な架橋分子の文脈において、適切とは、それが、ヒドロゲルを形成するために２つ以上のＨＡポリマーと相互作用または反応することを意味する。一実施形態では、分子は、ペプチド、ポリペプチド、ゼラチン、ヒアルロン酸、デキストラン、アルギネート、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、多糖類、ポリカプロラクトン、ポリビニルアルコール、またはポリエチレングリコールのうちの少なくとも１つを含む。実施形態は、ポリ乳酸、ポリ－Ｌ－乳酸、ポリグリコール酸、および他の加水分解性化学物質などのポリエステルを含むが、これらに限定されない加水分解により分解可能な分子を含む。架橋分子は、２に等しい官能価を有することができる。架橋分子は、３から５０，０００の間、または２から５０，０００の間の官能価を有することができる。架橋分子の官能基は、アルデヒド、ヒドラジド、チオール、アクリレート、メタクリレート、ヒドロキシエチルメタクリレート、ノルボルネン、アジド、アルキン、グリシジルメタクリレート、ハロアセテート、ベンジルエステル、チラミド、グリシジルエーテル、エポキシド、シクロデキストリン、アダマンタンなどのうちの少なくとも１つを含むが、これらに限定されない当該技術分野において公知のもののいずれかを含むか、それらから本質的になるか、またはそれらからなることができる。架橋分子は薬物であってもよい。

本明細書の組成物は、検出可能な相分離または境界を有する不均一な複合体の形態であってもよい。検出可能な相分離または境界は、異なる画分の間、例えば、第１の画分と第２の画分との間、または第１の画分と第２の画分と第３の画分との間にあってもよい。

１つ以上の画分の成分は、直鎖ヒアルロン酸であり得る。１つまたは複数の画分は、第１、第２、第３、または任意の他の画分であり得る。直鎖ヒアルロン酸は、各画分について独立して選択される分子量であり、８０ＫＤａ、２００ＫＤａ、５００ＫＤａ、７００ＫＤａ、１０００ＫＤａ、２０００ＫＤａ、３０００ＫＤａ、もしくは４０００ＫＤａより大きい、２００ＫＤａ、５００ＫＤａ、７００ＫＤａ、１０００ＫＤａ、２０００ＫＤａ、３０００ＫＤａ、４０００ＫＤａのうちのいずれか２つの間でありその２つを含む範囲、または８０ＫＤａ、２００ＫＤａ、５００ＫＤａ、７００ＫＤａ、１０００ＫＤａ、２０００ＫＤａ、３０００ＫＤａ、もしくは４０００ＫＤａのうちの１つの分子量を有し得る。

画分中のヒアルロン酸は化学的に修飾され得る。化学的な修飾は、アルデヒド、ヒドラジド、チオール、アクリレート、メタクリレート、ヒドロキシエチルメタクリレート、ノルボルネン、アジド、アルキン、グリシジルメタクリレート、ハロアセテート、ベンジルエステル、チラミド、グリシジルエーテル、エポキシド、シクロデキストリン、アダマンタン、または加水分解により分解可能な部分のうちの少なくとも１つを含み得る。加水分解により分解可能な部分は、乳酸、ポリ－Ｌ－乳酸、カプロラクトン、ポリカプロラクトン、グリコール酸、ポリグリコール酸、ヒドロキシエチルメタクリレート、および無水物のうちの１つまたは複数から選択され得る。化学的な修飾は、画分ごとに同じであっても異なっていてもよい。

本明細書の組成物は、水または水性緩衝液を含んでもよい。水または水性緩衝液は、ヒアルロン酸画分を取り囲んでもよい。水または水性緩衝液は、組成物がヒドロゲルの形態となるように画分内の架橋ヒアルロン酸ネットワークと会合することができる。ヒドロゲル中のヒアルロン酸の濃度は、５、１０、２０、９０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、もしくは９００ｍｇ／ｍｌより大きい、５、１０、２０、９０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、もしくは９００ｍｇ／ｍｌ未満、５、１０、２０、９０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、もしくは９００ｍｇ／ｍｌのうちのいずれか２つの間でありその２つを含む範囲、または５、１０、２０、９０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、もしくは９００ｍｇ／ｍｌのうちの１つであり得る。ＨＡヒドロゲルの画分は、１Ｈｚで１０Ｐａより大きい貯蔵弾性率を有し得る。ＨＡヒドロゲルの画分は、１Ｈｚで１００Ｐａより大きい貯蔵弾性率を有し得る。貯蔵弾性率は、１Ｈｚで２００、１０００、１００００および５００００Ｐａの間であり得る。ＨＡヒドロゲルの画分は、１００Ｐａより大きい圧縮弾性率を有し得る。ＨＡヒドロゲルの画分は、１Ｈｚで２００Ｐａより大きい圧縮弾性率を有し得る。圧縮弾性率は、２００、１０００、１００００、５００００および１０００００Ｐａの間であり得る。

各画分のヒアルロン酸は、粒子形態であってもよい。各画分の粒径は、１、１０、１００、もしくは１０，０００ミクロン（μｍ）、または１、１０、１００、もしくは１０，０００ミクロン（μｍ）のうちのいずれか２つの間の範囲、または１～１０，０００ミクロン（μｍ）から選択されるいずれか２つの整数の間の範囲から独立して選択され得る。

本明細書の組成物は、乾燥粉末の形態であってもよい。乾燥粉末は、組成物を沈殿させることによって調製され得る。乾燥粉末は、組成物を凍結乾燥することによって調製され得る。組成物は、１つまたは複数の賦形剤を含み得る。賦形剤は、乾燥中にヒアルロンの画分を安定させることができる。

本明細書の組成物は、ポリエチレンオキシド、ポリエチレングリコール、およびプロピレングリコールを含むが、これらに限定されない溶媒を含んでもよい。組成物は、無水溶媒を含んでもよい。組成物のヒアルロン酸は、溶媒中または無水溶媒中にあってもよい。

本明細書の組成物は、薬物を含んでもよい。薬物は、小分子、ペプチド、サイトカイン、タンパク質、多糖類、合成ポリマー、粒子、ＤＮＡプラスミド、ｍＲＮＡ、細胞、細胞エクソソーム、および他の細胞成分から選択され得る。薬物は、非ステロイド性抗炎症薬であってもよい。非ステロイド性抗炎症薬は、イブプロフェン、ナプロキセン、ジクロフェナク、セレコキシブ、オキサプロジン、アスピリン、インドメタシン、メロキシカム、テノキシカム、ロルノキシカム、ピロキシカム、ケトロラク、スリンダク、トルメチン、エトドラク、ジフルニサル、フェノプロフェン、フルルビプロフェン、ケトプロフェン、メクロフェナメート、ナブメトン（ｎａｂｕｍｅｔｎｏｎｅ）、アセクロフェナク、およびパレコキシブからなる群から選択される。薬物は、画分の１つまたは複数に封入され得る。薬物は、複数の薬物を含んでもよい。複数の薬物の各薬物は、画分の１つまたは複数に封入され得る。複数の薬物のサブコンビネーションまたは複数の薬物の各薬物は、異なる画分に封入され得る。薬物は、画分から分離されていてもよく、および／または画分に封入されていてもよい。

本明細書の組成物は、少なくとも１つのヒアルロニダーゼ阻害剤を含んでもよい。ヒアルロニダーゼ阻害剤は、ＨＡ画分の１つまたは複数のヒアルロニダーゼ媒介性分解を阻止することができる。少なくとも１つのヒアルロニダーゼ阻害剤は、画分の１つまたは複数から分離されていてもよく、またはその中に埋め込まれていてもよい。ヒアルロニダーゼ阻害剤は、硫酸化多糖類から選択され得る。硫酸化多糖類は、ヘパリン、ヘパラン硫酸、コンドロイチン硫酸、および合成的に誘導された分子であってもよいが、これらに限定されない。合成的に誘導された分子は、硫酸化ヒアルロン酸、デキストラン硫酸、およびペントサンポリサルフェートであってもよいが、これらに限定されない。硫酸化多糖類は、部分的または完全に硫酸化されていてもよい。本明細書に記載される部分的または完全に硫酸化された多糖は、その薬学的に許容される塩またはエステルであってもよい。

本明細書の組成物は、１つまたは複数の酸化防止剤を含み得る。酸化防止剤は、レチノール、アルファトコフェロール、アスコルビン酸、またはアスコルビン酸誘導体であってパルミチン酸アスコルビン酸、Ｌ－アスコルビン酸２－グルコシド、リン酸アスコルビル３－アミノプロピル、およびアスコルビルリン酸ナトリウムを含むがこれらに限定されないアスコルビン酸誘導体から選択され得る。

本明細書の組成物は、追加の非ヒアルロン酸微粒子またはナノ粒子を含んでもよい。追加の粒子は、ポリ－Ｌ－乳酸、ポリグリコール酸、ポリ（ラクチド－ｃｏ－グリコリド）、脂質、界面活性剤、油、カルシウムヒドロキシアパタイトなどを含むがこれらに限定されない、当該技術分野で公知のもののいずれかを含むか、それらから本質的になるか、またはそれらからなることができる。一実施形態では、追加の粒子はＨＡ画分と混合される。一実施形態では、追加の粒子はＨＡ画分中に封入される。実施形態は、０．１、１、１０、９０％ｗ／ｗの間の組成物中の粒子含量を含む。

本明細書の組成物は、薬学的に許容される担体を含むことができる。実施形態は、水性緩衝液中の未架橋または架橋ＨＡ溶液の担体を含む。一実施形態では、ＨＡ担体濃度は１ｍｇ／ｍＬより大きい。実施形態は、１０、２０、４０および８０ｍｇ／ｍＬの間のＨＡ担体濃度を含む。

実施形態は、対象を治療する方法を含む。この方法は、本明細書の任意の１つまたは複数の組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む。この方法は、投与前に１つまたは複数の組成物を再構成または混合することを含み得る。投与することは、注射することであってもよい。投与することは、カテーテルを介して行うことができる。投与することは、注射器で行うことができる。投与することは、対象の体液または組織に組成物を導入することであり得る。投与することは、対象の関節の滑液内、対象の眼の硝子体内、対象の脊椎椎間板内、対象の膣管、対象の皮膚、対象の真皮、対象の表皮、対象の真皮の下の皮下領域、または対象の心膜腔のうちの１つまたは複数であり得る。投与することは、水分補給のために皮膚に局所的に行うことができる。投与することは、組織間に、または組織と異物との間に非接着性バリアを生じさせるためのものであってもよい。

本明細書の任意の１つまたは複数の組成物は、炎症を治療する方法で使用され得る。本明細書の任意の１つまたは複数の組成物は、変形性関節症を治療する方法で使用され得る。本明細書の任意の１つまたは複数の組成物は、眼疾患を治療する方法で使用され得る。本明細書の任意の１つまたは複数の組成物は、心血管疾患を治療する方法で使用され得る。本明細書の任意の１つまたは複数の組成物は、椎間板変性を治療する方法で使用され得る。本明細書の任意の１つまたは複数の組成物は、糖尿病性潰瘍を治療する方法で使用され得る。本明細書の任意の１つまたは複数の組成物は、疼痛を治療する方法で使用され得る。本明細書の任意の１つまたは複数の組成物は、手術後の炎症を低減させる方法で使用され得る。本明細書の任意の１つまたは複数の組成物は、手術または外傷後の組織治癒を改善する方法で使用され得る。本明細書の任意の１つまたは複数の組成物は、組織の乾燥を治療する方法で使用され得る。本明細書の任意の１つまたは複数の組成物は、しわの充填並びに組織の水和および弾性の増加を含むが、これらに限定されない、皮膚の美的外観を変化させる方法で使用され得る。本明細書の任意の１つまたは複数の組成物は、コラーゲン産生を刺激するための方法で使用され得る。これらの使用は、１つまたは複数の組成物を対象に投与することを含む、対象を治療する方法で達成され得る。投与することは、１つまたは複数の組成物をそれぞれの部位に注射することを含み得る。

実施形態は、ヒアルロン酸を体内または体表の組織または液体（ｔｉｓｓｕｅｓｏｒｆｌｕｉｄｓ）に放出する組成物を含む。ＨＡの放出は、１、２、４、１０、３０、９０、もしくは２００日を超える間、１、２、４、１０、３０、９０、もしくは２００日のうちのいずれか２つの間でありその２つを含む範囲の間、又は１、２、４、１０、３０、９０、もしくは２００日のうちのいずれか１つの間、起こり得る。２４時間当たりに放出されるヒアルロン酸の質量分率は、０．００１、０．００５、０．０１、０．０１５、０．０２、０．０３３、０．０５、０．１、０．１４、０．２５、もしくは０．５超であり得るか、０．００１、０．００５、０．０１、０．０１５、０．０２、０．０３３、０．０５、０．１、０．１４、０．２５、０．５、もしくは０．９のうちのいずれか２つの間でありその２つを含む範囲であり得るか、または０．００１、０．００５、０．０１、０．０１５、０．０２、０．０３３、０．０５、０．１、０．１４、０．２５、０．５、もしくは０．９のうちのいずれか１つであり得る。

実施形態は、ヒアルロン酸を放出し、体内または体表の組織および液体の粘弾性特性を増加させる組成物を含む。非限定的な例については、図１を参照されたい。治療方法を含む実施形態では、治療により、周囲の液体の粘弾性特性は、１．５倍以上増加し得る。周囲の液体の粘弾性特性は、２倍以上増加し得る。周囲の液体の粘弾性特性は、２．５倍以上増加し得る。粘弾性特性には、粘度、ゼロせん断粘度、複素粘度、貯蔵弾性率、弾性係数、損失弾性率、粘性弾性率などを含む当該技術分野で公知のものが含まれるが、これらに限定されない。

治療方法を含む実施形態では、治療により、周囲の液体の粘弾性特性は、投与から１時間後に増加し得る。周囲の液体の粘弾性特性は、投与から２４時間後に増加し得る。周囲の液体の粘弾性特性は、投与から２日後に増加し得る。周囲の液体の粘弾性特性は、投与から２～７日の間に増加し得る。実施形態は、本明細書の組成物の投与後、少なくとも２、７、３０もしくは９０日、またはそれらのうちのいずれか２つの日の間の粘弾性特性の増加を含み得る。実施形態は、本明細書の組成物の投与後、少なくとも２、７、３０、９０、もしくは１８０日、またはそれらのうちのいずれか２つの日の間の粘弾性特性の増加を含み得る。

治療方法を含む実施形態では、治療により、組織または液体の貯蔵弾性率は、１Ｐａ、２Ｐａ、５Ｐａまで増加し得るか、５Ｐａの間まで増加し得るか、または１０、５０、１００、２００、５００、および１０００Ｐａのうちのいずれか２つの間まで増加し得る。

治療方法を含む実施形態では、治療により、組織または液体の損失弾性率は、１Ｐａ、２Ｐａ、５Ｐａまで増加し得るか、５Ｐａから２００ｐａの間まで増加し得るか、または１０、５０、１００、２００、５００、および１０００Ｐａのうちのいずれか２つの間まで増加し得る。

治療方法を含む実施形態では、治療により、組織または液体の粘度が、１Ｐａ、２Ｐａ、５Ｐａまで増加し得るか、５Ｐａから２００Ｐａの間まで増加し得るか、１０、５０、１００、２００、５００、および１０００Ｐａのうちのいずれか２つの間まで増加し得る。粘度値は、数学的モデルで計算されたゼロせん断粘度値（ｚｅｒｏｓｈｅａｒｖｉｓｃｏｓｉｔｙｖａｌｕｅｓ）を含む、０から２５０（１／ｓ）の間のせん断速度で決定され得る。

実施形態は、ヒアルロン酸を放出して炎症を軽減する組成物を含む。実施形態は、８０ＫＤａ、２００ＫＤａ、５００ＫＤａ、７００ＫＤａ、１０００ＫＤａ、２０００ＫＤａ、３０００ＫＤａ、もしくは４０００ＫＤａより大きい分子量、８０ＫＤａ、２００ＫＤａ、５００ＫＤａ、７００ＫＤａ、１０００ＫＤａ、２０００ＫＤａ、３０００ＫＤａ、もしくは４０００ＫＤａ未満の分子量、２００ＫＤａ、５００ＫＤａ、７００ＫＤａ、１０００ＫＤａ、２０００ＫＤａ、３０００ＫＤａ、もしくは４０００ＫＤａのうちのいずれか２つの間でありその２つを含む範囲であるか、または８０ＫＤａ、２００ＫＤａ、５００ＫＤａ、７００ＫＤａ、１０００ＫＤａ、２０００ＫＤａ、３０００ＫＤａ、もしくは４０００ＫＤａのうちの１つの分子量を有するＨＡの放出を含む。実施形態は、１００、５０、２５、１５、１０、５、２、１、もしくは０．５％未満、１００、５０、２５、１５、１０、５、２、１、もしくは０．５％のうちのいずれか２つの間でありその２つを含む範囲、または１００、５０、２５、１５、１０、５、２、１、もしくは０．５％のうちの１つの化学的な修飾または架橋の程度を有するＨＡの放出を含む。

実施形態は、２４時間当たり０．０１、０．１、０．２、０．５、１、２、５、１０、２０、５０、１００、もしくは２００ミリグラムより大きいＨＡ、２４時間当たり０．０１、０．１、０．２、０．５、１、２、５、１０、２０、５０、１００、もしくは２００ミリグラム未満のＨＡ、２４時間当たり０．０１、０．１、０．２、０．５、１、２、５、１０、２０、５０、１００、もしくは２００ミリグラムのうちのいずれか２つの間でありその２つを含む範囲のＨＡ、または２４時間当たり０．０１、０．１、０．２、０．５、１、２、５、１０、２０、５０、１００、もしくは２００ミリグラムのうちの１つのＨＡを放出する組成物を含む。

本明細書の治療方法は、本明細書の組成物を対象に投与することを含み得る。ＨＡは粒子の形態であってもよい。粒子は、水性緩衝液中で５ｍｇ／ｍＬより大きい濃度であり得る。粒子は、１０ｍｇ／ｍＬより大きい濃度であってもよい。ＨＡ粒子は、１０ｍｇ／ｍＬから１００ｍｇ／ｍＬの間の濃度で投与され得る。実施形態は、２０、４０、６０、８０、１００および５００ｍｇ／ｍＬのうちのいずれか２つの間、または２０、４０、６０、８０、１００もしくは５００ｍｇ／ｍＬのうちの１つのＨＡ粒子濃度を含む。実施形態は、本明細書の任意の組成物の剤形を含む。剤形は、２０、４０、６０、８０、１００および５００ｍｇ／ｍＬのうちのいずれか２つの間、または２０、４０、６０、８０、１００もしくは５００ｍｇ／ｍＬのうちの１つのＨＡ濃度を有し得る。この方法の実施形態は、０．０５、０．１、０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０ｍＬの組成物を投与することを含み得る。

一実施形態は、組成物を作製する方法を含む。この方法は、未架橋のＨＡの第１の乾燥粉末画分をＨＡの第２の架橋画分中に封入することを含み得る。実施形態は、均一な粒径分布の微粒子に処理される未架橋のＨＡ粉末を含む。実施形態は、未架橋のＨＡ画分を、マグネシウムまたはカルシウムなどの二価カチオンを含む塩で安定化することを含む。実施形態は、未架橋のＨＡ画分を、ポリマー、脂質および界面活性剤のコーティングで安定化することを含む。実施形態は、ＨＡ粒子の外層を架橋することによって未架橋のＨＡ画分を安定化することを含む。実施形態は、架橋ＨＡの層を導入することによって未架橋のＨＡ画分を安定化することを含む。実施形態は、未架橋のＨＡ画分を第２の画分の前駆体溶液に高濃度で混合して、未架橋のＨＡの溶解を制限することを含む。実施形態は、１、２、１０、２０、５０、または８０ｗｔ％の未架橋のＨＡ画分濃度を含む。実施形態は、第２の画分のＨＡ前駆体溶液を高濃度で溶解して粘度を増加させ、それによって第１の画分の溶解を制限することを含む。実施形態は、１、２、５、１０、２０または５０ｗｔ％のＨＡ前駆体溶液濃度を含む。実施形態は、第２の画分を架橋して、封入された未架橋ＨＡの溶解度および放出を制限することを含む。実施形態は、封入された第１の画分を有する架橋された第２の画分を、第１の画分の微粒子の直径よりも大きい直径を有する微粒子に処理することを含む。実施形態は、架橋前に第２の画分を脱水して、組成物のＨＡ密度および架橋密度をさらに増加させることを含む。

本明細書の作製方法は、第１の架橋されたＨＡ画分を第２の架橋されたＨＡ画分中に封入することを含み得る。実施形態は、第２の画分中に封入する前に、第１の画分を微粒子に処理することを含む。実施形態は、第１の架橋されたＨＡ画分を第２の画分の前駆体溶液に高濃度で混合して、第１の架橋された画分の膨潤を制限することを含む。実施形態は、１、２、１０、２０、５０、または８０ｗｔ％の架橋されたＨＡ画分濃度を含む。実施形態は、第２の画分のＨＡ前駆体溶液を高濃度で溶解して粘度を増加させ、それによって第１の画分の膨潤を制限することを含む。実施形態は、１、２、５、１０、２０または５０ｗｔ％のＨＡ前駆体溶液濃度を含む。実施形態は、第２の画分を架橋して、封入された架橋ＨＡの膨潤、架橋分解、および放出を制限することを含む。実施形態は、封入された第１の画分を有する架橋された第２の画分を、第１の画分の微粒子の直径よりも大きい直径を有する微粒子に処理することを含む。実施形態は、架橋前に第２の画分を脱水して、組成物のＨＡ密度および架橋密度をさらに増加させることを含む。

本明細書の作製方法は、未架橋画分および架橋画分の両方を第３の架橋画分中に封入することを含み得る。この方法は、２つの架橋画分を第３の画分中に封入することを含み得る。この方法は、２つの未架橋画分を第３の画分中に封入することを含み得る。実施形態は、第３の画分中への封入の前に、封入された画分を微粒子に処理することを含む。実施形態は、第１の画分および第２の画分を、第３の画分の前駆体溶液に高濃度で混合して、封入された画分の膨潤および溶解を制限することを含む。実施形態は、１、２、１０、２０、５０、または８０％ｗ／ｖの封入されたＨＡ画分の濃度を含む。実施形態は、第３の画分のＨＡ前駆体溶液を高濃度で溶解して粘度を増加させ、それによって封入された画分の溶解および膨潤を制限することを含む。実施形態は、１、２、５、１０、２０または５０％ｗ／ｖのＨＡ前駆体溶液濃度を含む。実施形態は、第３の画分を架橋して、封入されたＨＡ画分の膨潤、架橋分解、および放出を制限することを含む。実施形態は、封入された画分を有する架橋された第３の画分を、封入された画分の微粒子の直径より大きい直径を有する微粒子に処理することを含む。実施形態は、架橋前に第３の画分を脱水して、組成物のＨＡ密度および架橋密度をさらに増加させることを含む。

本明細書の作製方法は、１つまたは複数の追加の画分を有する組成物を作製することを含み得る。１つまたは複数の追加の画分は、第１の画分、第２の画分、または第３の画分を含む作製方法について上記で確立された指針に従って作製され得る。

実施形態はまた、以下を含む。本明細書に開示される任意の組成物。本明細書の組成物を作製する任意の方法。本明細書の任意の組成物は注射に使用することができる。本明細書の任意の１つまたは複数の組成物を対象に投与することを含む治療方法。対象は哺乳動物であってもよい。哺乳動物は、ヒト、ウマ、およびイヌから選択されるものであり得るが、これらに限定されない。

実施形態リスト
特定の実施形態の以下の項目は、本明細書に別様で表された実施形態を制限するか、または排除する。

１．ヒアルロン酸の第１の画分と、ヒアルロン酸の第２の画分とを含む、組成物であって、水性媒体中に存在する場合、第１の画分および第２の画分が不溶性であり、組成物が、第２の画分とは異なる速度で第１の画分から水性媒体にヒアルロン酸を放出する、組成物。第２の画分は、第１の画分中に封入され得る。

２．水性媒体中に存在する場合、不溶性の第１の画分および第２の画分が、２４時間当たりヒアルロン酸の０．００５、０．０１、０．０５、０．１もしくは０．３の質量分率より大きい平均速度、２４時間当たりヒアルロン酸の０．００５、０．０１、０．０５、０．１もしくは０．３の質量分率のうちのいずれか２つの間でありその２つを含む範囲の平均速度、または２４時間当たりヒアルロン酸の０．００５、０．０１、０．０５、０．１もしくは０．３の質量分率のうちのいずれか１つの平均速度でヒアルロン酸を放出し、必要に応じて水性媒体が３７℃であり、ｐＨが７．４である、実施形態１に記載の組成物。

３．第１の画分のヒアルロン酸が第１の分子間架橋を含み、および／または第２の画分のヒアルロン酸が第２の分子間架橋を含む、実施形態１または２に記載の組成物。

４．第１の分子間架橋および第２の分子間架橋の一方または両方が、共有結合架橋を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる、実施形態３に記載の組成物。

５．第１の分子間架橋または第２の分子間架橋の一方または両方の共有結合架橋の少なくとも一部または全てが、加水分解的に不安定である、実施形態４に記載の組成物。

６．加水分解的に不安定な架橋が、エステル結合を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる、実施形態５に記載の組成物。

７．第１の分子間架橋が第１の架橋密度であり、第２の分子間架橋が第２の架橋密度であり、架橋密度がヒアルロン酸への結合の濃度であり、必要に応じて第１の密度が第２の密度と等しくない、実施形態３～６のいずれか１つまたは複数に記載の組成物。

８．第１の架橋密度および第２の架橋密度が、０．１ｍＭ、１ｍＭ、１０ｍＭ、１００ｍＭ、１Ｍもしくは１０Ｍから独立して選択されるか、または
０．１ｍＭ、１ｍＭ、１０ｍＭ、１００ｍＭ、１Ｍもしくは１０Ｍ超から独立して選択されるか、または
０．１ｍＭ、１ｍＭ、１０ｍＭ、１００ｍＭ、１Ｍもしくは１０Ｍ未満から独立して選択されるか、または
独立して０．１ｍＭ、１ｍＭ、１０ｍＭ、１００ｍＭ、１Ｍもしくは１０Ｍのうちのいずれか２つの間でありその２つを含む範囲である、実施形態７に記載の組成物。

９．水をさらに含み、組成物がヒドロゲルの形態である、実施形態１～８のいずれか１つまたは複数に記載の組成物。

１０．ヒドロゲルにおけるヒアルロン酸の濃度が、５、１０、２０、９０、２００、３００、４００、もしくは５００ｍｇ／ｍｌより大きいか、５、１０、２０、９０、２００、３００、４００、もしくは５００ｍｇ／ｍｌのうちのいずれか２つの間でありその２つを含む範囲であるか、または５、１０、２０、９０、２００、３００、４００、もしくは５００ｍｇ／ｍｌのうちの１つである、実施形態９に記載の組成物。

１１．第１の分子間架橋および第２の分子間架橋が、乳酸、ポリ－Ｌ－乳酸、カプロラクトン、ポリカプロラクトン、グリコール酸、ポリグリコール酸、ヒドロキシエチルメタクリレート、および無水物からなる群から独立して選択される、加水分解により分解可能な部分を含む、実施形態３～１０のいずれか１つまたは複数に記載の組成物。

１２．第１の分子間架橋および第２の分子間架橋の一方または両方が、酵素的触媒により、好ましくはプロテアーゼまたは炭水化物加水分解酵素により分解可能である、実施形態３～１１のいずれか１つまたは複数に記載の組成物。

１３．第１の画分および第２の画分が、第１の画分と第２の画分との間に検出可能な相分離または境界を有する不均一な複合体を形成する、実施形態１～１２のいずれか１つまたは複数に記載の組成物。

１４．第１の画分および第２の画分のヒアルロン酸の各々が、各画分について独立して選択され、８０ＫＤａ、２００ＫＤａ、５００ＫＤａ、７００ＫＤａ、１０００ＫＤａ、２０００ＫＤａ、３０００ＫＤａ、もしくは４０００ＫＤａより大きいか、２００ＫＤａ、５００ＫＤａ、７００ＫＤａ、１０００ＫＤａ、２０００ＫＤａ、３０００ＫＤａ、もしくは４０００ＫＤａのうちのいずれか２つの間でありその２つを含む範囲であるか、または８０ＫＤａ、２００ＫＤａ、５００ＫＤａ、７００ＫＤａ、１０００ＫＤａ、２０００ＫＤａ、３０００ＫＤａ、もしくは４０００ＫＤａのうちの１つである分子量を有する直鎖ヒアルロン酸である、実施形態１～１３のいずれか１つまたは複数に記載の組成物。

１５．第１の画分または第２の画分のうちの少なくとも１つにおけるヒアルロン酸が化学的に修飾され、好ましくは、化学的な修飾が、アルデヒド、ヒドラジド、チオール、アクリレート、メタクリレート、ヒドロキシエチルメタクリレート、ノルボルネン、アジド、アルキン、グリシジルメタクリレート、ハロアセテート、ベンジルエステル、チラミド、グリシジルエーテル、エポキシド、シクロデキストリン、アダマンタン、または加水分解により分解可能な部分のうちの少なくとも１つを含み、好ましくは、加水分解により分解可能な部分が、乳酸、ポリ－Ｌ－乳酸、カプロラクトン、ポリカプロラクトン、グリコール酸、ポリグリコール酸、ヒドロキシエチルメタクリレート、および無水物のうちの１つまたは複数から選択される、実施形態１～１４のいずれか１つまたは複数に記載の組成物。

１６．ヒアルロン酸の１つまたは複数の追加の画分をさらに含む、実施形態１～１５のいずれか１つまたは複数に記載の組成物。

１７．ヒアルロン酸の１つまたは複数の追加の画分がヒアルロン酸の第３の画分を含み、第３の画分のヒアルロン酸が第３の分子間架橋を含み、第３の画分が第１の画分中に封入されている、実施形態１６に記載の組成物。

１８．第３の画分が第２の画分中に封入されている、実施形態１７に記載の組成物。

１９．第１の分子間架橋、第２の分子間架橋、または第３の分子間架橋のうちの１つ、２つ、または３つ全てが、共有結合架橋を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる、実施形態１７に記載の組成物。

２０．第１の分子間架橋、第２の分子間架橋、または第３の分子間架橋のうちの１つ、２つ、または３つ全ての共有結合架橋のうちの少なくとも一部または全てが、加水分解的に不安定である、実施形態１９に記載の組成物。

２１．加水分解的に不安定な架橋が、エステル結合を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる、実施形態２０に記載の組成物。

２２．第１の分子間架橋が第１の架橋密度であり、第２の分子間架橋が第２の架橋密度であり、第３の分子間架橋が第３の架橋密度であり、架橋密度がヒアルロン酸への結合の濃度であり、必要に応じて第１の密度が第２の密度と等しくなく、第１の密度と第２の密度のどちらも第３の密度と等しくない、実施形態１７～２１のいずれか１つまたは複数に記載の組成物。

２３．第１の架橋密度、第２の架橋密度、および第３の架橋密度が、
０．１ｍＭ、１ｍＭ、１０ｍＭ、１００ｍＭ、１Ｍもしくは１０Ｍから独立して選択されるか、または
０．１ｍＭ、１ｍＭ、１０ｍＭ、１００ｍＭ、１Ｍもしくは１０Ｍ超から独立して選択されるか、または
０．１ｍＭ、１ｍＭ、１０ｍＭ、１００ｍＭ、１Ｍもしくは１０Ｍ未満から独立して選択されるか、または
独立して０．１ｍＭ、１ｍＭ、１０ｍＭ、１００ｍＭ、１Ｍもしくは１０Ｍのうちのいずれか２つの間でありその２つを含む範囲である、実施形態１７～２２のいずれか１つまたは複数に記載の組成物。

２４．水をさらに含み、組成物がヒドロゲルの形態である、実施形態１７～２３のいずれか１つまたは複数に記載の組成物。

２５．ヒドロゲルにおけるヒアルロン酸の濃度が、５、１０、２０、９０、２００、３００、４００、もしくは５００ｍｇ／ｍｌより大きいか、５、１０、２０、９０、２００、３００、４００、もしくは５００ｍｇ／ｍｌのうちのいずれか２つの間でありその２つを含む範囲であるか、または５、１０、２０、９０、２００、３００、４００、もしくは５００ｍｇ／ｍｌのうちの１つである、実施形態２４に記載の組成物。

２６．第１の分子間架橋、第２の分子間架橋、および第３の分子間架橋が、乳酸、ポリ－Ｌ－乳酸、カプロラクトン、ポリカプロラクトン、グリコール酸、ポリグリコール酸、ヒドロキシエチルメタクリレート、および無水物からなる群から独立して選択される加水分解により分解可能な部分を含む、実施形態１７～２５のいずれか１つまたは複数に記載の組成物。

２７．第１の分子間架橋、第２の分子間架橋、および第３の分子間架橋のうちの１つ、２つ、または３つ全てが、酵素的触媒により、好ましくはプロテアーゼまたは炭水化物加水分解酵素により分解可能である、実施形態１７～２６のいずれか１つまたは複数に記載の組成物。

２８．第１の画分、第２の画分、および第３の画分が、不均一な複合体を形成し、第１の画分、第２の画分、および第３の画分のうちの少なくとも２つが、それぞれの前記画分の間に検出可能な相分離または境界を含む、実施形態１７～２７のいずれか１つまたは複数に記載の組成物。

２９．第１の画分、第２の画分、および第３の画分の１つまたは複数のヒアルロン酸が、各画分について独立して選択され、８０ＫＤａ、２００ＫＤａ、５００ＫＤａ、７００ＫＤａ、１０００ＫＤａ、２０００ＫＤａ、３０００ＫＤａ、もしくは４０００ＫＤａより大きいか、２００ＫＤａ、５００ＫＤａ、７００ＫＤａ、１０００ＫＤａ、２０００ＫＤａ、３０００ＫＤａ、もしくは４０００ＫＤａのうちのいずれか２つの間でありその２つを含む範囲であるか、または８０ＫＤａ、２００ＫＤａ、５００ＫＤａ、７００ＫＤａ、１０００ＫＤａ、２０００ＫＤａ、３０００ＫＤａ、もしくは４０００ＫＤａのうちの１つである分子量を有する直鎖ヒアルロン酸である、実施形態１７～２５のいずれか１つまたは複数に記載の組成物。

３０．第１の画分、第２の画分、または第３の画分のうちの少なくとも１つにおけるヒアルロン酸が化学的に修飾され、好ましくは、化学的な修飾が、アルデヒド、ヒドラジド、チオール、アクリレート、メタクリレート、ヒドロキシエチルメタクリレート、ノルボルネン、アジド、アルキン、グリシジルメタクリレート、ハロアセテート、ベンジルエステル、チラミド、グリシジルエーテル、エポキシド、シクロデキストリン、アダマンタン、または加水分解により分解可能な部分のうちの少なくとも１つを含み、好ましくは、加水分解により分解可能な部分が、乳酸、ポリ－Ｌ－乳酸、カプロラクトン、ポリカプロラクトン、グリコール酸、ポリグリコール酸、ヒドロキシエチルメタクリレート、および無水物のうちの１つまたは複数から選択される、実施形態１７～２９のいずれか１つまたは複数に記載の組成物。

３１．１つまたは複数の画分のヒアルロン酸が、各画分について、１、１０、１００、もしくは１０，０００ミクロン（μｍ）から独立して選択されるか、または１、１０、１００、もしくは１０，０００ミクロン（μｍ）のうちのいずれか２つの間の範囲であるか、または１～１０，０００ミクロン（μｍ）から選択されるいずれか２つの整数の間の範囲である粒径を有する粒子形態である、実施形態１～３０のいずれか１つまたは複数に記載の組成物。

３２．組成物が乾燥粉末である、実施形態１～８、１１～２３、および２６～３１のいずれか１つまたは複数に記載の組成物。

３３．少なくとも１つの薬物をさらに含む、実施形態１～３２のいずれか１つまたは複数に記載の組成物。

３４．少なくとも１つの薬物が、小分子、ペプチド、サイトカイン、タンパク質、多糖、合成ポリマー、粒子、ＤＮＡプラスミド、ｍＲＮＡ、細胞、細胞エクソソームおよび他の細胞成分から選択される、実施形態３３に記載の組成物。

３５．少なくとも１つの薬物が、非ステロイド性抗炎症薬を含む、実施形態３３または３４に記載の組成物。

３６．非ステロイド性抗炎症薬が、イブプロフェン、ナプロキセン、ジクロフェナク、セレコキシブ、オキサプロジン、アスピリン、インドメタシン、メロキシカム、テノキシカム、ロルノキシカム、ピロキシカム、ケトロラク、スリンダク、トルメチン、エトドラク、ジフルニサル、フェノプロフェン、フルルビプロフェン、ケトプロフェン、メクロフェナメート、ナブメトン、アセクロフェナク、およびパレコキシブからなる群から選択される、実施形態３５に記載の組成物。

３７．少なくとも１つの薬物が、画分の１つまたは複数に封入されている、実施形態３３～３６のいずれか１つまたは複数に記載の組成物。

３８．少なくとも１つのヒアルロニダーゼ阻害剤をさらに含む、実施形態１～３７のいずれか１つまたは複数に記載の組成物。

３９．少なくとも１つのヒアルロニダーゼ阻害剤が、硫酸化多糖、ヘパリン、ヘパラン硫酸、コンドロイチン硫酸、硫酸化ヒアルロン酸、デキストラン硫酸およびペントサンポリサルフェートから選択される、実施形態３８に記載の組成物。

４０．少なくとも１つの酸化防止剤をさらに含み、好ましくは、少なくとも１つの酸化防止剤が、レチノール、アルファトコフェロール、アスコルビン酸およびアスコルビン酸誘導体からなる群から選択され、アスコルビン酸誘導体が、アスコルビン酸パルミテート、Ｌ－アスコルビン酸２－グルコシド、アスコルビル３－アミノプロピルホスフェート、およびアスコルビルリン酸ナトリウムからなる群から選択される、実施形態１～３９のいずれか１つまたは複数に記載の組成物。

４１．薬学的に許容される担体をさらに含む、実施形態１～４０のいずれか１つまたは複数に記載の組成物。

４２．実施形態１～４１のいずれか１つまたは複数に記載の組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、治療方法。

４３．投与することが、注射することである、実施形態４２に記載の治療方法。

４４．投与することが、組成物を、対象の体液または組織に導入することである、実施形態４２または４３に記載の治療方法。

４５．投与することが、対象の関節の滑液内、対象の眼の硝子体内、対象の脊椎椎間板内、対象の皮膚、対象の真皮、対象の表皮、対象の真皮の下の皮下領域、対象の膣管内、または対象の心膜腔に対する、実施形態４２～４４のいずれか１つまたは複数に記載の治療方法。

４６．ヒアルロン酸の第１の画分中に第２の画分を封入することを含み、第１の画分が、第２の画分の膨潤を制限し、それによって第２の画分の放出を制限し、必要に応じて組成物が実施形態１～４０のいずれか１つに記載の組成物である、組成物を作製する方法。

４７．ヒアルロン酸の第１の画分中に第２の画分および第３の画分を封入することをさらに含み、第１の画分が、第２の画分および第３の画分の膨潤を制限し、それによって第２の画分および第３の画分の放出を制限する、実施形態４６に記載の方法。

４８．封入された画分が、微粉化され、脱水され、第１の画分の前駆体溶液と混合される前に、第１の画分より低い架橋密度で架橋され、続いて第１の画分が架橋され、封入された微粒子より大きい微粒子に組成物を処理する、実施形態４６または４７に記載の方法。

５０．注射器またはカテーテルを介して体内に異なる速度でヒアルロン酸を放出するヒアルロン酸の２つの不溶性画分を含む組成物を注射することを含む、ヒアルロン酸を投与する方法であって、必要に応じて組成物が実施形態１～４０のいずれか１つに記載の組成物である、方法。体は対象の体であってもよい。体はヒト、ウマ、またはイヌの体であってもよい。

５１．ヒアルロン酸の不溶性画分が、２４時間当たりヒアルロン酸の０．００５、０．０１、０．０５、０．１もしくは０．３の質量分率より大きい平均速度、２４時間当たりヒアルロン酸の０．００５、０．０１、０．０５、０．１もしくは０．３の質量分率のうちのいずれか２つの間でありその２つを含む範囲の平均速度、または２４時間当たりヒアルロン酸の０．００５、０．０１、０．０５、０．１もしくは０．３の質量分率のうちのいずれか１つの平均速度でヒアルロン酸を放出し、必要に応じて放出が３７℃であり、７．４のｐＨである、実施形態５０に記載の方法。

５２．放出されたヒアルロン酸の分子量が、８０ＫＤａ、２００ＫＤａ、５００ＫＤａ、７００ＫＤａ、１０００ＫＤａ、２０００ＫＤａ、３０００ＫＤａ、もしくは４０００ＫＤａより大きいか、２００ＫＤａ、５００ＫＤａ、７００ＫＤａ、１０００ＫＤａ、２０００ＫＤａ、３０００ＫＤａ、もしくは４０００ＫＤａのうちのいずれか２つの間でありその２つを含む範囲であるか、または８０ＫＤａ、２００ＫＤａ、５００ＫＤａ、７００ＫＤａ、１０００ＫＤａ、２０００ＫＤａ、３０００ＫＤａ、もしくは４０００ＫＤａのうちの１つである、実施形態５０または５１に記載の方法。

５３．第２の画分が、第１の画分中に封入される、実施形態１～４１のいずれか１つまたは複数に記載の組成物。

５４．実施形態５３に記載の組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、治療方法。

５５．投与することが、注射することである、実施形態５４に記載の治療方法。

５６．投与することが、対象の体液に組成物を導入することである、実施形態５４または５５に記載の治療方法。

５７．投与することが、対象の関節の滑液内、対象の眼の硝子体内、対象の脊椎椎間板、対象の皮膚、対象の真皮、対象の表皮、対象の真皮の下の皮下領域、対象の膣管内、または対象の心膜腔に対する、実施形態５４～５６のいずれか１つまたは複数に記載の治療方法。

以下の実施例は、特定の非限定的な実施形態を表す。本明細書の任意の実施形態は、本明細書の実施例からの１つまたは複数の詳細で補足され得る。

実施例１
ヒアルロン酸ナトリウム（１．５ＭＤａ、ＬｉｆｅＣｏｒｅＢｉｏｍｅｄｉｃａｌ）をエタノール中で沈殿させ、乾燥させ、粉砕し、ふるいにかけて、直径２５～５３ミクロン（ＨＡＰ）を有する粒子を得た。ヒアルロン酸ナトリウム（７００ｋＤａ、ＬｉｆｅＣｏｒｅＢｉｏｍｅｄｉｃａｌ）を、エステル化反応によってヒドロキシエチルメタクリレート基で化学的に修飾し、精製し、１ＨＮＭＲで特徴付けて、修飾の程度が１１％であることを決定した。修飾したＨＡを、ｐＨ８．５の水性緩衝液中に４０ｍｇ／ｍＬ（１０．４ｍＭのメタクリレート基）で溶解し、ＨＡ粒子を、０、３５、または７０ｍｇ／ｍＬで前駆体溶液に添加し、ジチオスレイトールを１：１のチオール：メタクリレート比で添加し、３７℃で一晩インキュベートして、１つまたは２つの画分を含むＨＡヒドロゲルを形成した（図２Ａ）。２相のＨＡヒドロゲルを３７℃、および毎分６０回転でＰＢＳ中でインキュベートした。緩衝液を毎日回収し、新鮮な緩衝液と交換し、緩衝液中のＨＡ含有量を、カルバゾールベースのウロン酸アッセイにより定量した。開始ヒドロゲル１ミリリットル当たりの累積ＨＡ放出を図２Ｂに示す。

実施例２
ヒアルロン酸ナトリウム（１．５ＭＤａ、ＬｉｆｅＣｏｒｅＢｉｏｍｅｄｉｃａｌ）をエタノール中で沈殿させ、乾燥させ、粉砕し、ふるいにかけて、直径２５～５３ミクロン（ＨＡＰ）を有する粒子を得た。ヒアルロン酸ナトリウム（７００ｋＤａ、ＬｉｆｅＣｏｒｅＢｉｏｍｅｄｉｃａｌ）を、エステル化反応によってヒドロキシエチルメタクリレート基で化学的に修飾し、精製し、１ＨＮＭＲで特徴付けて、修飾の程度が７％であることを決定した。修飾したＨＡを、ｐＨ８．５の水性緩衝液中に４０ｍｇ／ｍＬ（６．７ｍＭのメタクリレート基、ＨＡＸＬＯ）で溶解し、ジチオスレイトールを、１：１のチオール：メタクリレート比で添加し、３７℃で一晩インキュベートし、微粒子に断片化し、エタノール中で脱水し、乾燥させて粉末を形成した。ヒアルロン酸ナトリウム（７００ｋＤａ、ＬｉｆｅＣｏｒｅＢｉｏｍｅｄｉｃａｌ）を、エステル化反応によってヒドロキシエチルメタクリレート基で化学的に修飾し、精製し、１ＨＮＭＲで特徴付けて、修飾の程度が１６％であることを決定した。修飾したＨＡを、ｐＨ８．５の水性緩衝液中に７０ｍｇ／ｍＬ（２２ｍＭのメタクリレート基、ＨＡＸＨＩ）で溶解し、ＨＡＰおよびＨＡＸＬＯ粒子を、０、７０または８０ｍｇ／ｍＬで前駆体溶液に添加し、ジチオスレイトールを、１：１のチオール：メタクリレート比で添加し、３７℃で一晩インキュベートして、２つおよび３つの画分のヒドロゲルを形成した（図３Ａ）。ＨＡヒドロゲルを、３７℃、および毎分６０回転でＰＢＳ中でインキュベートした。緩衝液を毎日回収し、新鮮な緩衝液と交換し、緩衝液中のＨＡ含有量をカルバゾールベースのウロン酸アッセイにより定量した。開始ヒドロゲル１ミリリットル当たりの累積ＨＡ放出を（図３Ｂ）に示す。ヒドロゲルの質量は、２４時間、４８時間、７日、１４日、２１日、および２８日後に測定した。膨潤比は、膨潤前の質量からのヒドロゲル質量の増加を計算し、膨潤前の質量で割ることによって決定した（図４）。

実施例３
ヒアルロン酸ナトリウム（１．５ＭＤａ、ＬｉｆｅＣｏｒｅＢｉｏｍｅｄｉｃａｌ）をエタノール中で沈殿させ、乾燥させ、粉砕し、ふるいにかけて、直径２５～５３ミクロン（ＨＡＰ）を有する粒子を得た。ヒアルロン酸ナトリウム（７００ｋＤａ、ＬｉｆｅＣｏｒｅＢｉｏｍｅｄｉｃａｌ）を、エステル化反応によってヒドロキシエチルメタクリレート基で化学的に修飾し、精製し、１ＨＮＭＲで特徴付けて、修飾の程度が１６％であることを決定した。修飾したＨＡを、ｐＨ８．５の水性緩衝液中に７０ｍｇ／ｍＬ（２２ｍＭのメタクリレート基、ＨＡＸＨＩ）で溶解し、ジチオスレイトールを、１：１のチオール：メタクリレート比で添加し、３７℃で一晩インキュベートし、エタノール中で脱水し、乾燥させた。ヒアルロン酸ナトリウム（７００ｋＤａ、ＬｉｆｅＣｏｒｅＢｉｏｍｅｄｉｃａｌ）を、エステル化反応によってヒドロキシエチルメタクリレート基で化学的に修飾し、精製し、１ＨＮＭＲで特徴付けて、修飾の程度が１１％であることを決定した。修飾したＨＡを、ｐＨ８．５の水性緩衝液中に４０ｍｇ／ｍＬ（１１ｍＭのメタクリレート基、ＨＡＸＭＥＤ）で溶解し、ＨＡＰおよび脱水ＨＡＸＨＩゲルを、０または７０ｍｇ／ｍＬで前駆体溶液に添加し、ジチオスレイトールを、１：１のチオール：メタクリレート比で添加し、３７℃で一晩インキュベートして、２つまたは３つの相のヒドロゲルを形成した（図５Ａ）。ＨＡヒドロゲルを、３７℃、および毎分６０回転でＰＢＳ中でインキュベートした。緩衝液を毎日回収し、新鮮な緩衝液と交換し、緩衝液中のＨＡ含有量を、カルバゾールベースのウロン酸アッセイで定量した。ＨＡヒドロゲルがもはや溶液から分離できなくなるまで、試料を回収した。開始ヒドロゲル１ミリリットル当たりの累積ＨＡ放出を（図５Ｂ）に示す。

実施例４
ＨＡヒドロゲルを、実施例２のように３つの画分で製造した：７ｗｔ％のＨＡＸＨＩ、８ｗｔ％のＨＡＸＬＯ、７ｗｔ％のＨＡＰ。これらのゲルを、１２０ミクロンの開口部から押し出すことによって微粒子に断片化し、５０マイクロリットルのゲルから３００マイクロリットルの緩衝液の濃度でＰＢＳ中でインキュベートし、３７℃、および毎分６０回転でインキュベートした。上清緩衝液を毎日回収し、新鮮な緩衝液と交換した。材料の粘弾性特性を、ＴＡＨＲ２０レオメーターで２０ｍｍプレート形状を使用したレオロジーにより、２、１５、および３０日後に測定した（図６）。貯蔵弾性率および損失弾性率を、０．５％のひずみおよび２．５Ｈｚで測定した。粘度値を、１Ｅ－３～１Ｅ３１／ｓのせん断速度で測定した。全ての測定は２２℃で実施した。

実施例５
ヒアルロン酸ナトリウム（１．５ＭＤａ、ＬｉｆｅＣｏｒｅＢｉｏｍｅｄｉｃａｌ）をエタノール中で沈殿させ、乾燥させ、粉砕し、ふるいにかけて、直径２５～５３ミクロンを有する粒子を得た。ヒアルロン酸ナトリウム（７００ｋＤａ、ＬｉｆｅＣｏｒｅＢｉｏｍｅｄｉｃａｌ）を、エステル化反応によってヒドロキシエチルメタクリレート基で化学的に修飾し、精製し、１ＨＮＭＲで特徴付けて、修飾の程度が８．５％であることを決定した。修飾したＨＡを、ｐＨ８．５の水性緩衝液（６．１ｍＭのメタクリレート基）中に３０ｍｇ／ｍＬで溶解し、ジチオスレイトールを、１：１のチオール：メタクリレート比で添加し、３７℃で一晩インキュベートし、５８ミクロンのメッシュを通して微粒子に断片化し、水で１時間洗浄し、エタノール中で脱水し、乾燥させて、粉末を形成した。ヒアルロン酸ナトリウム（７００ｋＤａ、ＬｉｆｅＣｏｒｅＢｉｏｍｅｄｉｃａｌ）を、エステル化反応によってヒドロキシエチルメタクリレート基で化学的に修飾し、精製し、特徴付けて、修飾の程度が２０％であることを決定した。修飾したＨＡを、ｐＨ８．５の水性緩衝液中に５０ｍｇ／ｍＬ（２３ｍＭのメタクリレート基）で溶解し、未架橋および架橋ＨＡ粒子を、それぞれ４０ｍｇ／ｍＬおよび１１０ｍｇ／ｍＬで前駆体溶液に添加し、ジチオスレイトールを、１：１のチオール：メタクリレート比で添加し、３７℃で一晩インキュベートした。ヒドロゲルを、１８０ミクロンのメッシュを通して微粒子に断片化し、水で１時間洗浄し、エタノール中で脱水し、粉末に乾燥させた。８ｍｇの粉末を、１．５ｍＬのリン酸緩衝生理食塩水中でインキュベートし、３７℃、および毎分８０回転でＰＢＳ中でインキュベートした。８ミクロンのポリカーボネートのメッシュを使用して粒子を上清から分離し、上清緩衝液を毎日回収し、新鮮な緩衝液と交換し、緩衝液中のＨＡ含有量を、カルバゾールベースのウロン酸アッセイで定量し、総ＨＡの質量分率として示した（図７Ａおよび７Ｂ）。

実施例６
ヒアルロン酸ナトリウム（７００ｋＤａ、ＬｉｆｅＣｏｒｅＢｉｏｍｅｄｉｃａｌ）を、エステル化反応によってヒドロキシエチルメタクリレート基で化学的に修飾し、精製し、１ＨＮＭＲで特徴付けて、修飾の程度が５．６％であることを決定した。修飾したＨＡを、ｐＨ８．５の水性緩衝液中に２０ｍｇ／ｍＬ（２．７ｍＭのメタクリレート基）で溶解し、ジチオスレイトールを、１：１のチオール：メタクリレート比で添加し、３７℃で一晩インキュベートし、５８ミクロンのスクリーンを通して微粒子に断片化し、水で１時間洗浄し、エタノール中で脱水し、乾燥させて、粉末を形成した。ヒアルロン酸ナトリウム（７００ｋＤａ、ＬｉｆｅＣｏｒｅＢｉｏｍｅｄｉｃａｌ）を、エステル化反応によってヒドロキシエチルメタクリレート基で化学的に修飾し、精製し、１ＨＮＭＲで特徴付けて、修飾の程度が１１．２％であることを決定した。修飾したＨＡを、ｐＨ８．５の水性緩衝液中に３０ｍｇ／ｍＬ（７．９ｍＭのメタクリレート基）で溶解し、ジチオスレイトールを、１：１のチオール：メタクリレート比で添加し、３７℃で一晩インキュベートし、５８ミクロンのスクリーンを通して微粒子に断片化し、水で１時間洗浄し、エタノール中で脱水し、乾燥させて、粉末を形成した。ヒアルロン酸ナトリウム（７００ｋＤａ、ＬｉｆｅＣｏｒｅＢｉｏｍｅｄｉｃａｌ）を、エステル化反応によってヒドロキシエチルメタクリレート基で化学的に修飾し、精製し、１ＨＮＭＲで特徴付けて、修飾の程度が２０％であることを決定した。修飾したＨＡを、ｐＨ８．５の水性緩衝液中に６０ｍｇ／ｍＬ（２７ｍＭのメタクリレート基）で溶解し、架橋ＨＡ粒子を８５ｍｇ／ｍＬおよび５５ｍｇ／ｍＬで前駆体溶液に添加し、ジチオスレイトールを、１：１のチオール：メタクリレート比で添加し、３７℃で一晩インキュベートした。ヒドロゲルを、１８０ミクロンのスクリーンを通して微粒子に断片化し、水で１時間洗浄し、エタノール中で脱水し、粉末に乾燥させた。８ｍｇの粉末を、１．５ｍＬのリン酸緩衝生理食塩水中でインキュベートし、３７℃、および毎分８０回転でＰＢＳ中でインキュベートした。８ミクロンのポリカーボネートのメッシュを使用して粒子を上清から分離し、上清緩衝液を毎日回収し、新鮮な緩衝液と交換し、緩衝液中のＨＡ含有量を、カルバゾールベースのウロン酸アッセイで定量し、総ＨＡの質量分率として示した（図８Ａおよび８Ｂ）。

実施例７
ヒアルロン酸ナトリウム（１．５ＭＤａ、ＬｉｆｅＣｏｒｅＢｉｏｍｅｄｉｃａｌ）を、エタノール中で沈殿させ、乾燥させ、粉砕し、ふるいにかけて、直径２５～５３ミクロンを有する粒子を得た。ヒアルロン酸ナトリウム（７００ｋＤａ、ＬｉｆｅＣｏｒｅＢｉｏｍｅｄｉｃａｌ）を、エステル化反応によってヒドロキシエチルメタクリレート基で化学的に修飾し、精製し、１ＨＮＭＲで特徴付けて、修飾の程度が５．６％であることを決定した。修飾したＨＡを、ｐＨ８．５の水性緩衝液中に３０ｍｇ／ｍＬ（４．１ｍＭのメタクリレート基）で溶解し、ジチオスレイトールを、１：１のチオール：メタクリレート比で添加し、３７℃で一晩インキュベートし、５８ミクロンのスクリーンを通して微粒子に断片化し、水で１時間洗浄し、エタノール中で脱水し、乾燥させて、粉末を形成した。ヒアルロン酸ナトリウム（７００ｋＤａ、ＬｉｆｅＣｏｒｅＢｉｏｍｅｄｉｃａｌ）を、エステル化反応によってヒドロキシエチルメタクリレート基で化学的に修飾し、精製し、１ＨＮＭＲで特徴付けて、修飾の程度が１３．７％であることを決定した。修飾したＨＡを、水性緩衝液中に５０ｍｇ／ｍＬ（１６ｍＭのメタクリレート基）で溶解し、未架橋および架橋ＨＡ粒子を、それぞれ５０ｍｇ／ｍＬおよび１００ｍｇ／ｍＬで前駆体溶液に添加し、ジチオスレイトールを、１：１のチオール：メタクリレート比で添加し、３７℃で一晩インキュベートした。ヒドロゲルを、１８０ミクロンのスクリーンを通して微粒子に断片化し、水で１時間洗浄し、エタノール中で脱水し、粉末に乾燥させた。８ｍｇの粉末を、１．５ｍＬのリン酸緩衝生理食塩水中でインキュベートし、３７℃、および毎分８０回転でＰＢＳ中でインキュベートした。８ミクロンのポリカーボネートのメッシュを使用して粒子を上清から分離し、上清緩衝液を毎日回収し、新鮮な緩衝液と交換し、緩衝液中のＨＡ含有量を、カルバゾールベースのウロン酸アッセイで定量し、総ＨＡの質量分率として示した（図９Ａおよび９Ｂ）。

実施例８
ヒアルロン酸ナトリウム（１．５ＭＤａ、ＬｉｆｅＣｏｒｅＢｉｏｍｅｄｉｃａｌ）を、エタノール中で沈殿させ、乾燥させ、粉砕し、ふるいにかけて、直径２５～５３ミクロンを有する粒子を得た。ヒアルロン酸ナトリウム（７００ｋＤａ、ＬｉｆｅＣｏｒｅＢｉｏｍｅｄｉｃａｌ）を、エステル化反応によってヒドロキシエチルメタクリレート基で化学的に修飾し、精製し、１ＨＮＭＲで特徴付けて、修飾の程度が６．９％であることを決定した。修飾したＨＡを、ｐＨ８．５の水性緩衝液中に２０ｍｇ／ｍＬ（３．３ｍＭのメタクリレート基）で溶解し、ジチオスレイトールを、１：１のチオール：メタクリレート比で添加し、３７℃で一晩インキュベートし、５８ミクロンのスクリーンを通して微粒子に断片化し、水で１時間洗浄し、エタノール中で脱水し、乾燥させて、粉末を形成した。ヒアルロン酸ナトリウム（７００ｋＤａ、ＬｉｆｅＣｏｒｅＢｉｏｍｅｄｉｃａｌ）を、エステル化反応によってヒドロキシエチルメタクリレート基で化学的に修飾し、精製し、１ＨＮＭＲで特徴付けて、修飾の程度が２２％であることを決定した。修飾したＨＡを、ｐＨ８．５の水性緩衝液中に２０ｍｇ／ｍＬ（９．９ｍＭのメタクリレート基）で溶解し、ジチオスレイトールを、１：１のチオール：メタクリレート比で添加し、３７℃で一晩インキュベートし、５８ミクロンのスクリーンを通して微粒子に断片化し、水で１時間洗浄し、エタノール中で脱水し、乾燥させて、粉末を形成した。ヒアルロン酸ナトリウム（７００ｋＤａ、ＬｉｆｅＣｏｒｅＢｉｏｍｅｄｉｃａｌ）を、エステル化反応によってヒドロキシエチルメタクリレート基で化学的に修飾し、精製し、１ＨＮＭＲで特徴付けて、修飾の程度が２６％であることを決定した。修飾したＨＡを、ｐＨ８．５の水性緩衝液中に５０ｍｇ／ｍＬ（２８ｍＭのメタクリレート基）で溶解し、未架橋、架橋、およびより高度に架橋されたＨＡ粒子を、それぞれ４０ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ、および７０ｍｇで前駆体溶液に添加し、ジチオスレイトールを、１：１のチオール：メタクリレート比で添加し、３７℃で一晩インキュベートした。ヒドロゲルを、１８０ミクロンのスクリーンを通して微粒子に断片化し、水で１時間洗浄し、エタノール中で脱水し、粉末に乾燥させた。８ｍｇの粉末を、１．５ｍＬのリン酸緩衝生理食塩水中でインキュベートし、３７℃、および毎分８０回転でＰＢＳ中でインキュベートした。８ミクロンのポリカーボネートのメッシュを使用して粒子を上清から分離し、上清緩衝液を毎日回収し、新鮮な緩衝液と交換し、緩衝液中のＨＡ含有量を、カルバゾールベースのウロン酸アッセイで定量し、総ＨＡの質量分率として示した（図１０Ａおよび１０Ｂ）。

実施例９
実施例７において製造された３つの画分の微粒子を、乾燥粉末としてのポリ－Ｌ－乳酸微粒子と混合した。次いで微粒子粉末を、２％ｗ／ｖの３つの画分のＨＡ微粒子および１％ｗ／ｖのＰＬＡ微粒子の最終濃度で、０．５％ｗ／ｖの１．５ＭＤａのヒアルロン酸ナトリウムの溶液で再構成した。組成物のレオロジー特性は、Ｇ’＠０．５Ｈｚ＝８５１Ｐａ、Ｇ’’＠０．５Ｈｚ＝２８９Ｐａ、Ｇ’＠２．５Ｈｚ＝１１２８、Ｇ’’＠２．５Ｈｚ＝２７６Ｐａ、ゼロせん断粘度＝８４３８Ｐａ、粘度＠１００／ｓせん断速度＝３．３Ｐａであった。１００マイクロリットルの組成物をラットに皮下注射し、少なくとも７日間残存した表面の特徴が残った。比較のために、１００マイクロリットルのＳｃｕｌｐｔｒａ（カルボキシメチルセルロース担体を含むポリ－Ｌ－乳酸）を皮下注射し、注射の２４時間後に消失した表面の特徴が残った。

当業者は、本明細書の組成物が、乾燥粉末として開始する場合、同様に再構成され得、および／または表面の特徴の形を変えるために皮下注射され得ることを容易に理解するであろう。より長いまたはより短い放出速度を有する組成物を利用して、表面の特徴のより長いまたはより短い持続性を達成することができる。コラーゲン刺激材料と組み合わせた場合、ＨＡが放出されると、表面の特徴がコラーゲンと置き換わり得る。実施形態は、コラーゲンをさらに含む本明細書の組成物を含む。実施形態は、コラーゲンをさらに含む本明細書の組成物を投与することを含む、治療方法を含む。

実施例１０
実施例７において製造された３つの画分の微粒子は、２％ｗ／ｖの３つの画分のＨＡ微粒子の最終濃度で、０．５％ｗ／ｖの１．５ＭＤａのヒアルロン酸ナトリウムで再水和することができた。次いで、得られた粘性ゲル３ｍＬを、使い捨てアプリケーター注射器に充填し、膣管内に注射して膣の乾燥を治療することができた。

当業者は、乾燥材料として開始する場合、本明細書の組成物を同様に再水和することができ、および／または膣管内に注射するための使い捨てアプリケーター注射器に充填して、膣の乾燥を治療することができることを理解するであろう。

本明細書の１つまたは複数の実施形態を、本明細書の１つまたは複数の他の実施形態と組み合わせて、追加の実施形態を作製することができる。本明細書に開示される実施形態は、その用語によって他の実施形態の要素を除外しない限り、本明細書の１つまたは複数の他の実施形態との組み合わせを排除しない。

本出願を通じて引用された参考文献は、各参考文献が完全に記載されているかのように、本明細書および参考文献自体に明白な全ての目的のために組み込まれている。提示のために、これらの参考文献の特定のものは、本明細書の特定の場所で引用されている。特定の場所での参考文献の引用は、その参考文献の教示が組み込まれている様式を示している。しかしながら、特定の場所での参考文献の引用は、引用された参考文献の教示の全てがあらゆる目的のために組み込まれている様式を制限するものではない。

参考文献：
［１］Ｓｎｅｔｋｏｖ，Ｐ．，ｅｔａｌ．，ＨｙａｌｕｒｏｎｉｃＡｃｉｄ：ＴｈｅＩｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＷｅｉｇｈｔｏｎＳｔｒｕｃｔｕｒａｌ，Ｐｈｙｓｉｃａｌ，Ｐｈｙｓｉｃｏ－Ｃｈｅｍｉｃａｌ，ａｎｄＤｅｇｒａｄａｂｌｅＰｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆＢｉｏｐｏｌｙｍｅｒ．Ｐｏｌｙｍｅｒｓ（Ｂａｓｅｌ），２０２０．１２（８）．
［２］Ｂａｌａｚｓ，Ｅ．Ａ．，ＴｈｅＰｈｙｓｉｃａｌＰｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｔｈｅＳｙｎｏｖｉａｌＦｌｕｉｄａｎｄｔｈｅＳｐｅｃｉａｌＲｏｌｅｏｆＨｙａｌｕｒｏｎｉｃＡｃｉｄ，ｉｎＤｉｓｏｒｄｅｒｓｏｆｔｈｅＫｎｅｅ，Ａ．Ｈｅｌｆｅｔ，Ｅｄｉｔｏｒ．１９７４，Ｔ．Ｂ．ＬｉｐｐｉｎｃｏｔｔＣｏｍｐａｎｙ：Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ．ｐ．６３－７５．
［３］Ｍａｚｚｕｃｃｏ，Ｄ．，Ｒ．Ｓｃｏｔｔ，ａｎｄＭ．Ｓｐｅｃｔｏｒ，Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆｊｏｉｎｔｆｌｕｉｄｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｕｎｄｅｒｇｏｉｎｇｔｏｔａｌｋｎｅｅｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔａｎｄｒｅｖｉｓｉｏｎａｒｔｈｒｏｐｌａｓｔｙ：ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｗｉｔｈｆｌｏｗｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ．Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ，２００４．２５（１８）：ｐ．４４３３－４５．
［４］Ｆａｍ，Ｈ．，Ｊ．Ｔ．Ｂｒｙａｎｔ，ａｎｄＭ．Ｋｏｎｔｏｐｏｕｌｏｕ，Ｒｈｅｏｌｏｇｉｃａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｓｙｎｏｖｉａｌｆｌｕｉｄｓ．Ｂｉｏｒｈｅｏｌｏｇｙ，２００７．４４（２）：ｐ．５９－７４．
［５］Ｂｈｕａｎａｎｔａｎｏｎｄｈ，Ｐ．，ＲｈｅｏｌｏｇｉｃａｌＳｔｕｄｙｏｆＶｉｓｃｏｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓａｎｄＳｙｎｏｖｉａｌＦｌｕｉｄｉｎＰａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＯｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｅｄｉｃａｌａｎｄＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，２０１２．３２：ｐ．１２－１６．
［６］Ｐｅｔｒｅｙ，Ａ．Ｃ．ａｎｄＣ．Ａ．ｄｅｌａＭｏｔｔｅ，Ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ，ａｃｒｕｃｉａｌｒｅｇｕｌａｔｏｒｏｆｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．ＦｒｏｎｔＩｍｍｕｎｏｌ，２０１４．５：ｐ．１０１．
［７］Ｔｒａｍ，Ｎ．Ｋ．ａｎｄＫ．Ｅ．Ｓｗｉｎｄｌｅ－Ｒｅｉｌｌｙ，ＲｈｅｏｌｏｇｉｃａｌＰｒｏｐｅｒｔｉｅｓａｎｄＡｇｅ－ＲｅｌａｔｅｄＣｈａｎｇｅｓｏｆｔｈｅＨｕｍａｎＶｉｔｒｅｏｕｓＨｕｍｏｒ．ＦｒｏｎｔＢｉｏｅｎｇＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２０１８．６：ｐ．１９９．
［８］Ｑｕｅｒｏ，Ｌ．，ｅｔａｌ．，Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃａｃｉｄｆｒａｇｍｅｎｔｓｅｎｈａｎｃｅｔｈｅｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙａｎｄｃａｔａｂｏｌｉｃｒｅｓｐｏｎｓｅｉｎｈｕｍａｎｉｎｔｅｒｖｅｒｔｅｂｒａｌｄｉｓｃｃｅｌｌｓｔｈｒｏｕｇｈｍｏｄｕｌａｔｉｏｎｏｆｔｏｌｌ－ｌｉｋｅｒｅｃｅｐｔｏｒ２ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｓ．ＡｒｔｈｒｉｔｉｓＲｅｓＴｈｅｒ，２０１３．１５（４）：ｐ．Ｒ９４．
［９］Ｓｍｉｔｈ，Ｍ．Ｍ．ａｎｄＰ．Ｇｈｏｓｈ，Ｔｈｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｈｙａｌｕｒｏｎｉｃａｃｉｄｂｙｈｕｍａｎｓｙｎｏｖｉａｌｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓｉｓｉｎｆｌｕｅｎｃｅｄｂｙｔｈｅｎａｔｕｒｅｏｆｔｈｅｈｙａｌｕｒｏｎａｔｅｉｎｔｈｅｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ．ＲｈｅｕｍａｔｏｌＩｎｔ，１９８７．７（３）：ｐ．１１３－２２．
［１０］Ｍａｎｅｉｒｏ，Ｅ．，ｅｔａｌ．，Ｔｈｅｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｏｎｏｆｈｙａｌｕｒｏｎａｎｏｎｈｕｍａｎｏｓｔｅｏａｒｔｒｉｔｉｃａｒｔｉｃｕｌａｒｃｈｏｎｄｒｏｃｙｔｅｓ：ｔｈｅｉｍｐｏｒｔａｎｃｅｏｆｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔ．ＣｌｉｎＥｘｐＲｈｅｕｍａｔｏｌ，２００４．２２（３）：ｐ．３０７－１２．
［１１］Ｌｅｖｉｃｋ，Ｊ．Ｒ．ａｎｄＪ．Ｎ．ＭｃＤｏｎａｌｄ，Ｆｌｕｉｄｍｏｖｅｍｅｎｔａｃｒｏｓｓｓｙｎｏｖｉｕｍｉｎｈｅａｌｔｈｙｊｏｉｎｔｓ：ｒｏｌｅｏｆｓｙｎｏｖｉａｌｆｌｕｉｄｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．ＡｎｎＲｈｅｕｍＤｉｓ，１９９５．５４（５）：ｐ．４１７－２３．
［１２］Ｂｒｏｗｎ，Ｔ．Ｊ．，Ｕ．Ｂ．Ｌａｕｒｅｎｔ，ａｎｄＪ．Ｒ．Ｆｒａｓｅｒ，Ｔｕｒｎｏｖｅｒｏｆｈｙａｌｕｒｏｎａｎｉｎｓｙｎｏｖｉａｌｊｏｉｎｔｓ：ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｌａｂｅｌｌｅｄｈｙａｌｕｒｏｎａｎｆｒｏｍｔｈｅｋｎｅｅｊｏｉｎｔｏｆｔｈｅｒａｂｂｉｔ．ＥｘｐＰｈｙｓｉｏｌ，１９９１．７６（１）：ｐ．１２５－３４．
［１３］Ｗｏｂｉｇ，Ｍ．，ｅｔａｌ．，Ｔｈｅｒｏｌｅｏｆｅｌａｓｔｏｖｉｓｃｏｓｉｔｙｉｎｔｈｅｅｆｆｉｃａｃｙｏｆｖｉｓｃｏｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎｆｏｒｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓｏｆｔｈｅｋｎｅｅ：ａｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｈｙｌａｎＧ－Ｆ２０ａｎｄａｌｏｗｅｒ－ｍｏｌｅｃｕｌａｒ－ｗｅｉｇｈｔｈｙａｌｕｒｏｎａｎ．ＣｌｉｎＴｈｅｒ，１９９９．２１（９）：ｐ．１５４９－６２．
［１４］Ａｇｅｒｕｐ，Ｂ．，Ｐ．Ｂｅｒｇ，ａｎｄＣ．Ａｋｅｒｍａｒｋ，Ｎｏｎ－ａｎｉｍａｌｓｔａｂｉｌｉｚｅｄｈｙａｌｕｒｏｎｉｃａｃｉｄ：ａｎｅｗｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ．ＢｉｏＤｒｕｇｓ，２００５．１９（１）：ｐ．２３－３０．
［１５］Ｎｉｃｈｏｌｌｓ，Ｍ．，ｅｔａｌ．，ＲｈｅｏｌｏｇｉｃａｌＰｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆＣｏｍｍｅｒｃｉａｌｌｙＡｖａｉｌａｂｌｅＨｙａｌｕｒｏｎｉｃＡｃｉｄＰｒｏｄｕｃｔｓｉｎｔｈｅＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓｆｏｒｔｈｅＴｒｅａｔｍｅｎｔｏｆＯｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓＫｎｅｅＰａｉｎ．ＣｌｉｎＭｅｄＩｎｓｉｇｈｔｓＡｒｔｈｒｉｔｉｓＭｕｓｃｕｌｏｓｋｅｌｅｔＤｉｓｏｒｄ，２０１８．１１：ｐ．１１７９５４４１１７７５１６２２．
［１６］ＬａＧａｔｔａ，Ａ．，ｅｔａｌ．，Ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ－ｂａｓｅｄｈｙｄｒｏｇｅｌｓａｓｄｅｒｍａｌｆｉｌｌｅｒｓ：Ｔｈｅｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｔｈａｔｔｒａｎｓｌａｔｅｉｎｔｏａ “ｖｏｌｕｍｅｔｒｉｃ” ｅｆｆｅｃｔ．ＰＬｏＳＯｎｅ，２０１９．１４（６）：ｐ．ｅ０２１８２８７．
［１７］Ｌａｒｓｅｎ，Ｎ．Ｅ．，ｅｔａｌ．，Ｃｌｅａｒａｎｃｅｋｉｎｅｔｉｃｓｏｆａｈｙｌａｎ－ｂａｓｅｄｖｉｓｃｏｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｆｔｅｒｉｎｔｒａ－ａｒｔｉｃｕｌａｒａｎｄｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｉｎａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｓ．ＪＢｉｏｍｅｄＭａｔｅｒＲｅｓＢＡｐｐｌＢｉｏｍａｔｅｒ，２０１２．１００（２）：ｐ．４５７－６２．
［１８］Ｊａｃｋｓｏｎ，Ｄ．Ｗ．ａｎｄＴ．Ｍ．Ｓｉｍｏｎ，Ｉｎｔｒａ－ａｒｔｉｃｕｌａｒｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎａｎｄｒｅｓｉｄｅｎｃｅｔｉｍｅｏｆＨｙｌａｎＡａｎｄＢ：ａｓｔｕｄｙｉｎｔｈｅｇｏａｔｋｎｅｅ．ＯｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓＣａｒｔｉｌａｇｅ，２００６．１４（１２）：ｐ．１２４８－５７．
［１９］ＤｅＢｏｕｌｌｅ，Ｋ．，ｅｔａｌ．，Ａｒｅｖｉｅｗｏｆｔｈｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｏｆ１，４－ｂｕｔａｎｅｄｉｏｌｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌｅｔｈｅｒ－ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｅｄｈｙａｌｕｒｏｎｉｃａｃｉｄｄｅｒｍａｌｆｉｌｌｅｒｓ．ＤｅｒｍａｔｏｌＳｕｒｇ，２０１３．３９（１２）：ｐ．１７５８－６６．
［２０］Ｍｅｙｅｒ，Ｋ．，Ｔｈｅｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｏｆｈｙａｌｕｒｏｎｉｃａｃｉｄａｎｄｈｙａｌｕｒｏｎｉｄａｓｅ．ＰｈｙｓｉｏｌＲｅｖ，１９４７．２７（３）：ｐ．３３５－５９．
［２１］Ｍａｔｈｅｗｓ，Ｍ．Ｂ．ａｎｄＡ．Ｄｏｒｆｍａｎ，Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｈｙａｌｕｒｏｎｉｄａｓｅ．ＰｈｙｓｉｏｌＲｅｖ，１９５５．３５（２）：ｐ．３８１－４０２．
［２２］Ｆｅｎｇ，Ｑ．，ｅｔａｌ．，ＳｕｌｆａｔｅｄｈｙａｌｕｒｏｎｉｃａｃｉｄｈｙｄｒｏｇｅｌｓｗｉｔｈｒｅｔａｒｄｅｄｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎａｎｄｅｎｈａｎｃｅｄｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｔｅｎｔｉｏｎｐｒｏｍｏｔｅｈＭＳＣｃｈｏｎｄｒｏｇｅｎｅｓｉｓａｎｄａｒｔｉｃｕｌａｒｃａｒｔｉｌａｇｅｉｎｔｅｇｒｉｔｙｗｉｔｈｒｅｄｕｃｅｄｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙ．ＡｃｔａＢｉｏｍａｔｅｒ，２０１７．５３：ｐ．３２９－３４２．
［２３］Ｂｕｒｄｉｃｋ，Ｊ．Ａ．ａｎｄＧ．Ｄ．Ｐｒｅｓｔｗｉｃｈ，Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃａｃｉｄｈｙｄｒｏｇｅｌｓｆｏｒｂｉｏｍｅｄｉｃａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．ＡｄｖＭａｔｅｒ，２０１１．２３（１２）：ｐ．Ｈ４１－５６．

したがって、本発明は開示される特定の実施形態に限定されず、添付の特許請求の範囲、上記の説明に定義され、および／または添付の図面に示される本発明の趣旨および範囲内にある全ての変更を包含することが意図されていることが理解される。

Claims

ヒアルロン酸の第１の画分と、ヒアルロン酸の第２の画分とを含む、組成物であって、水性媒体中に存在する場合、前記第１の画分および前記第２の画分が不溶性であり、前記組成物が、前記第２の画分とは異なる速度で前記第１の画分から前記水性媒体に前記ヒアルロン酸を放出し、必要に応じて前記第２の画分が前記第１の画分中に封入されている、組成物。
水性媒体中に存在する場合、前記不溶性の第１の画分および第２の画分が、２４時間当たりヒアルロン酸の０．００５、０．０１、０．０５、０．１もしくは０．３の質量分率より大きい平均速度、２４時間当たりヒアルロン酸の０．００５、０．０１、０．０５、０．１もしくは０．３の質量分率のうちのいずれか２つの間でありその２つを含む範囲の平均速度、または２４時間当たりヒアルロン酸の０．００５、０．０１、０．０５、０．１もしくは０．３の質量分率のうちのいずれか１つの平均速度でヒアルロン酸を放出し、必要に応じて前記水性媒体が、７．４のｐＨおよび３７℃の温度を有する、請求項１に記載の組成物。
前記第１の画分の前記ヒアルロン酸が第１の分子間架橋を含み、前記第２の画分の前記ヒアルロン酸が第２の分子間架橋を含む、請求項１に記載の組成物。
前記第１の分子間架橋および第２の分子間架橋の一方または両方が、共有結合架橋を含む、請求項３に記載の組成物。
前記第１の分子間架橋または第２の分子間架橋の一方または両方の前記共有結合架橋が、加水分解的に不安定である、請求項４に記載の組成物。
前記加水分解的に不安定な架橋が、エステル結合である、請求項５に記載の組成物。
前記第１の分子間架橋が第１の架橋密度であり、前記第２の分子間架橋が第２の架橋密度であり、架橋密度がヒアルロン酸への結合の濃度であり、前記第１の密度が前記第２の密度と等しくない、請求項５に記載の組成物。
前記第１の架橋密度および前記第２の架橋密度が、０．１ｍＭ、１ｍＭ、１０ｍＭ、１００ｍＭ、１Ｍもしくは１０Ｍから独立して選択されるか、または０．１ｍＭ、１ｍＭ、１０ｍＭ、１００ｍＭ、１Ｍもしくは１０Ｍのうちのいずれか２つの間でありその２つを含む範囲である、請求項７に記載の組成物。
水をさらに含み、前記組成物がヒドロゲルの形態である、請求項３に記載の組成物。
前記ヒドロゲルにおける前記ヒアルロン酸の濃度が、５、１０、２０、９０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、もしくは８００ｍｇ／ｍｌより大きいか、５、１０、２０、９０、２００、３００、４００、５００、６００、８００、もしくは９００ｍｇ／ｍｌのうちのいずれか２つの間でありその２つを含む範囲であるか、または５、１０、２０、９０、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、もしくは９００ｍｇ／ｍｌのうちのいずれか１つである、請求項９に記載の組成物。
前記第１の分子間架橋および前記第２の分子間架橋が、乳酸、ポリ－Ｌ－乳酸、カプロラクトン、ポリカプロラクトン、グリコール酸、ポリグリコール酸、ヒドロキシエチルメタクリレート、および無水物からなる群から独立して選択される、加水分解により分解可能な部分を含む、請求項５に記載の組成物。
前記第１の分子間架橋および前記第２の分子間架橋の一方または両方が、酵素的触媒により、好ましくはプロテアーゼまたは炭水化物加水分解酵素により分解可能である、請求項４に記載の組成物。
前記第１の画分および前記第２の画分が、前記第１の画分と前記第２の画分との間に検出可能な相分離または境界を有する不均一な複合体を形成する、請求項１に記載の組成物。
前記第１の画分および前記第２の画分の各々の前記ヒアルロン酸が、各画分について独立して選択され、８０ＫＤａ、２００ＫＤａ、５００ＫＤａ、７００ＫＤａ、１０００ＫＤａ、２０００ＫＤａ、３０００ＫＤａ、もしくは４０００ＫＤａより大きいか、２００ＫＤａ、５００ＫＤａ、７００ＫＤａ、１０００ＫＤａ、２０００ＫＤａ、３０００ＫＤａ、もしくは４０００ＫＤａのうちのいずれか２つの間でありその２つを含む範囲であるか、または８０ＫＤａ、２００ＫＤａ、５００ＫＤａ、７００ＫＤａ、１０００ＫＤａ、２０００ＫＤａ、３０００ＫＤａ、もしくは４０００ＫＤａのうちの１つである分子量を有する直鎖ヒアルロン酸である、請求項１に記載の組成物。
前記第１の画分または前記第２の画分のうちの少なくとも１つにおける前記ヒアルロン酸が化学的に修飾され、好ましくは、前記化学的な修飾が、アルデヒド、ヒドラジド、チオール、アクリレート、メタクリレート、ヒドロキシエチルメタクリレート、ノルボルネン、アジド、アルキン、グリシジルメタクリレート、ハロアセテート、ベンジルエステル、チラミド、グリシジルエーテル、エポキシド、シクロデキストリン、アダマンタン、または加水分解により分解可能な部分のうちの少なくとも１つを含み、好ましくは、前記加水分解により分解可能な部分が、乳酸、ポリ－Ｌ－乳酸、カプロラクトン、ポリカプロラクトン、グリコール酸、ポリグリコール酸、ヒドロキシエチルメタクリレート、および無水物のうちの１つまたは複数から選択される、請求項１に記載の組成物。
ヒアルロン酸の１つまたは複数の追加の画分をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
ヒアルロン酸の１つまたは複数の追加の画分がヒアルロン酸の第３の画分を含み、前記第３の画分の前記ヒアルロン酸が第３の分子間架橋を含み、前記第３の画分が前記第１の画分中に封入されている、請求項１６に記載の組成物。
前記第３の画分が前記第２の画分中に封入されている、請求項１７に記載の組成物。
前記第１の分子間架橋、前記第２の分子間架橋、または前記第３の分子間架橋のうちの１つ、２つ、または３つ全てが、共有結合架橋を含む、請求項１７に記載の組成物。
前記第１の分子間架橋、前記第２の分子間架橋、または前記第３の分子間架橋のうちの１つ、２つ、または３つ全ての前記共有結合架橋が、加水分解的に不安定である、請求項１９に記載の組成物。
前記加水分解的に不安定な架橋がエステル結合である、請求項２０に記載の組成物。
前記第１の分子間架橋が第１の架橋密度であり、前記第２の分子間架橋が第２の架橋密度であり、前記第３の分子間架橋が第３の架橋密度であり、架橋密度がヒアルロン酸への結合の濃度であり、前記第１の密度が前記第２の密度と等しくなく、前記第１の密度と前記第２の密度のどちらも前記第３の密度と等しくない、請求項２０に記載の組成物。
前記第１の架橋密度、前記第２の架橋密度、および前記第３の架橋密度が、０．１ｍＭ、１ｍＭ、１０ｍＭ、１００ｍＭ、１Ｍもしくは１０Ｍから独立して選択されるか、または０．１ｍＭ、１ｍＭ、１０ｍＭ、１００ｍＭ、１Ｍもしくは１０Ｍのうちのいずれか２つの間でありその２つを含む範囲である、請求項２２に記載の組成物。
水をさらに含み、前記組成物がヒドロゲルの形態である、請求項２０に記載の組成物。
前記ヒドロゲルにおける前記ヒアルロン酸の濃度が、５、１０、２０、９０、２００、３００、４００、もしくは５００ｍｇ／ｍｌより大きいか、５、１０、２０、９０、２００、３００、４００、もしくは５００ｍｇ／ｍｌのうちのいずれか２つの間でありその２つを含む範囲であるか、または５、１０、２０、９０、２００、３００、４００、もしくは５００ｍｇ／ｍｌのうちの１つである、請求項２４に記載の組成物。
前記第１の分子間架橋、前記第２の分子間架橋、および前記第３の分子間架橋が、乳酸、ポリ－Ｌ－乳酸、カプロラクトン、ポリカプロラクトン、グリコール酸、ポリグリコール酸、ヒドロキシエチルメタクリレート、および無水物からなる群から独立して選択される加水分解により分解可能な部分を含む、請求項２０に記載の組成物。
前記第１の分子間架橋、前記第２の分子間架橋、および前記第３の分子間架橋のうちの１つ、２つ、または３つ全てが、酵素的触媒により、好ましくはプロテアーゼまたは炭水化物加水分解酵素により分解可能である、請求項１９に記載の組成物。
前記第１の画分、前記第２の画分、および前記第３の画分が、不均一な複合体を形成し、前記第１の画分、前記第２の画分、および前記第３の画分のうちの少なくとも２つが、それぞれの前記画分の間に検出可能な相分離または境界を含む、請求項１７に記載の組成物。
前記第１の画分、前記第２の画分、および前記第３の画分の各々の前記ヒアルロン酸が、各画分について独立して選択され、８０ＫＤａ、２００ＫＤａ、５００ＫＤａ、７００ＫＤａ、１０００ＫＤａ、２０００ＫＤａ、３０００ＫＤａ、もしくは４０００ＫＤａより大きいか、２００ＫＤａ、５００ＫＤａ、７００ＫＤａ、１０００ＫＤａ、２０００ＫＤａ、３０００ＫＤａ、もしくは４０００ＫＤａのうちのいずれか２つの間でありその２つを含む範囲であるか、または８０ＫＤａ、２００ＫＤａ、５００ＫＤａ、７００ＫＤａ、１０００ＫＤａ、２０００ＫＤａ、３０００ＫＤａ、もしくは４０００ＫＤａのうちの１つである分子量を有する直鎖ヒアルロン酸である、請求項１７に記載の組成物。
前記第１の画分、前記第２の画分、または前記第３の画分のうちの少なくとも１つにおける前記ヒアルロン酸が化学的に修飾され、好ましくは、前記化学的な修飾が、アルデヒド、ヒドラジド、チオール、アクリレート、メタクリレート、ヒドロキシエチルメタクリレート、ノルボルネン、アジド、アルキン、グリシジルメタクリレート、ハロアセテート、ベンジルエステル、チラミド、グリシジルエーテル、エポキシド、シクロデキストリン、アダマンタン、または加水分解により分解可能な部分のうちの少なくとも１つを含み、好ましくは、前記加水分解により分解可能な部分が、乳酸、ポリ－Ｌ－乳酸、カプロラクトン、ポリカプロラクトン、グリコール酸、ポリグリコール酸、ヒドロキシエチルメタクリレート、および無水物のうちの１つまたは複数から選択される、請求項１７に記載の組成物。
各画分の前記ヒアルロン酸が、各画分について、１、１０、１００、もしくは１０，０００ミクロンから独立して選択されるか、または１、１０、１００、もしくは１０，０００ミクロンのうちのいずれか２つの間の範囲であるか、または１～１０，０００ミクロンから選択されるいずれか２つの整数の間の範囲である粒径を有する粒子形態である、請求項１～３０のいずれか一項に記載の組成物。
前記組成物が乾燥粉末である、請求項１～８、１１～２３、および２６～３１のいずれか一項に記載の組成物。
薬物をさらに含む、請求項１～３０のいずれか一項に記載の組成物。
前記薬物が、小分子、ペプチド、サイトカイン、タンパク質、多糖、合成ポリマー、粒子、ＤＮＡプラスミド、ｍＲＮＡ、細胞、細胞エクソソームおよび他の細胞成分から選択される、請求項３３に記載の組成物。
前記薬物が、非ステロイド性抗炎症薬である、請求項３３に記載の組成物。
前記非ステロイド性抗炎症薬が、イブプロフェン、ナプロキセン、ジクロフェナク、セレコキシブ、オキサプロジン、アスピリン、インドメタシン、メロキシカム、テノキシカム、ロルノキシカム、ピロキシカム、ケトロラク、スリンダク、トルメチン、エトドラク、ジフルニサル、フェノプロフェン、フルルビプロフェン、ケトプロフェン、メクロフェナメート、ナブメトン、アセクロフェナク、およびパレコキシブからなる群から選択される、請求項３５に記載の組成物。
前記薬物が、前記画分の１つまたは複数に封入されている、請求項３３に記載の組成物。
少なくとも１つのヒアルロニダーゼ阻害剤をさらに含む、請求項１～３７のいずれか一項に記載の組成物。
前記少なくとも１つのヒアルロニダーゼ阻害剤が、硫酸化多糖、ヘパリン、ヘパラン硫酸、コンドロイチン硫酸、硫酸化ヒアルロン酸、デキストラン硫酸およびペントサンポリサルフェートから選択される、請求項３８に記載の組成物。
少なくとも１つの酸化防止剤をさらに含み、好ましくは、前記少なくとも１つの酸化防止剤が、レチノール、アルファトコフェロール、アスコルビン酸およびアスコルビン酸誘導体からなる群から選択され、前記アスコルビン酸誘導体が、アスコルビン酸パルミテート、Ｌ－アスコルビン酸２－グルコシド、アスコルビル３－アミノプロピルホスフェート、およびアスコルビルリン酸ナトリウムからなる群から選択される、請求項１～３９のいずれか一項に記載の組成物。
薬学的に許容される担体をさらに含む、請求項１～４０のいずれか一項に記載の組成物。
請求項３１～４１のいずれか一項に記載の組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、治療方法。
請求項１～３０のいずれか一項に記載の組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、治療方法。
前記投与することが、注射することである、請求項４３に記載の治療方法。
前記投与することが、前記組成物を、前記対象の体液または組織に導入することである、請求項４３に記載の治療方法。
前記投与することが、前記対象の関節の滑液内、前記対象の眼の硝子体内、前記対象の脊椎椎間板、前記対象の皮膚、前記対象の真皮、前記対象の表皮、前記対象の真皮の下の皮下領域、対象の膣管内、または前記対象の心膜腔に対する、請求項４３に記載の治療方法。
ヒアルロン酸の第１の画分中に第２の画分を封入することを含み、前記第１の画分が、前記第２の画分の膨潤を制限し、したがって前記第２の画分の放出を制限する、組成物を作製する方法。
ヒアルロン酸の第１の画分中に第２の画分および第３の画分を封入することをさらに含み、前記第１の画分が、前記第２の画分および第３の画分の膨潤を制限し、したがって前記第２の画分および第３の画分の放出を制限する、請求項４７に記載の方法。
前記封入された画分が、微粉化され、脱水され、前記第１の画分の前駆体溶液と混合される前に、前記第１の画分より低い架橋密度で架橋され、続いて前記第１の画分が架橋され、封入された微粒子より大きい微粒子に前記組成物を処理する、請求項４７または４８に記載の方法。
注射器またはカテーテルを介して体内に異なる速度でヒアルロン酸を放出するヒアルロン酸の２つの不溶性画分を含む組成物を注射することを含む、ヒアルロン酸を投与する方法。
ヒアルロン酸の前記不溶性画分が、２４時間当たりヒアルロン酸の０．００５、０．０１、０．０５、０．１もしくは０．３の質量分率より大きい平均速度、２４時間当たりヒアルロン酸の０．００５、０．０１、０．０５、０．１もしくは０．３の質量分率のうちのいずれか２つの間でありその２つを含む範囲の平均速度、または２４時間当たりヒアルロン酸の０．００５、０．０１、０．０５、０．１もしくは０．３の質量分率のうちのいずれか１つの平均速度でヒアルロン酸を放出し、必要に応じて前記放出が３７℃であり、７．４のｐＨである、請求項５０に記載の方法。
前記放出されたヒアルロン酸の分子量が、８０ＫＤａ、２００ＫＤａ、５００ＫＤａ、７００ＫＤａ、１０００ＫＤａ、２０００ＫＤａ、３０００ＫＤａ、もしくは４０００ＫＤａより大きいか、２００ＫＤａ、５００ＫＤａ、７００ＫＤａ、１０００ＫＤａ、２０００ＫＤａ、３０００ＫＤａ、もしくは４０００ＫＤａのうちのいずれか２つの間でありその２つを含む範囲であるか、または８０ＫＤａ、２００ＫＤａ、５００ＫＤａ、７００ＫＤａ、１０００ＫＤａ、２０００ＫＤａ、３０００ＫＤａ、もしくは４０００ＫＤａのうちの１つである、請求項５０に記載の方法。
前記第２の画分が、前記第１の画分中に封入されている、請求項１～４１のいずれか一項に記載の組成物。
請求項５３に記載の組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む、治療方法。
前記投与することが、注射することである、請求項５４に記載の治療方法。
前記投与することが、前記対象の体液または組織に前記組成物を導入することである、請求項５４または５５に記載の治療方法。
前記投与することが、前記対象の関節の滑液内、前記対象の眼の硝子体内、前記対象の脊椎椎間板、前記対象の皮膚、前記対象の真皮、前記対象の表皮、前記対象の真皮の下の皮下領域、対象の膣管内、または前記対象の心膜腔に対する、請求項５４～５６のいずれか一項に記載の治療方法。