JP2023514423A

JP2023514423A - Ｋｒａｓエピトープおよび抗体

Info

Publication number: JP2023514423A
Application number: JP2022550709A
Authority: JP
Inventors: カロリーナトルクリア，; マックスデビッドソン，; オーヴェオーヴァル，
Original assignee: オブリークセラピューティクスアーベー
Priority date: 2020-02-24
Filing date: 2021-02-24
Publication date: 2023-04-05
Also published as: KR20220157400A; AU2021227406A1; CN115443153A; IL295788A; WO2021170684A1; EP4110388A1; BR112022016643A2; MX2022010306A; US20230109318A1; CA3171833A1

Abstract

本発明は、ＫＲＡＳの特定の発癌性変異型に結合する抗体に関する。本発明は、ＫＲＡＳの発癌性変異型の特定のエピトープにも関する。本発明は、こうした抗体を含むイムノコンジュゲートおよび組成物にも関する。本発明は、こうした抗体を産生する方法も提供する。本発明は、たとえば癌の処置などの治療目的でのこうした抗体の使用をさらに提供する。

Description

本発明は一般的にエピトープおよび抗体の技術分野に関し、特に、発癌性ＫＲＡＳ変異タンパク質のエピトープと、発癌性ＫＲＡＳ変異タンパク質に結合する抗体とに関する。加えて本発明は、たとえば癌の処置などにおけるこうした抗体の治療的使用に関する。本発明の抗体ベースの組成物および方法および使用は、コンジュゲートおよびその他の治療的組み合わせの使用、キット、ならびに方法にも拡張される。

ＫＲＡＳ（Ｋ－Ｒａｓまたはカーステンラット肉腫ウイルス癌遺伝子相同体（Ｋｉｒｓｔｅｎｒａｔｓａｒｃｏｍａｖｉｒａｌｏｎｃｏｇｅｎｅｈｏｍｏｌｏｇ）としても公知である）は、オン／オフスイッチとして作用する小さいＧＴＰアーゼ（グアノシントリホスファターゼ（ｇｕａｎｏｓｉｎｅｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ））であり、細胞の分化、増殖、および生存の調節における主要な構成要素である。ＫＲＡＳは最も頻繁に変異する癌遺伝子である。すべての癌の２２％に変異型が見出されており、たとえば多くの結腸直腸癌、膵臓癌、および肺癌などに変異発癌遺伝子型が見出されている。残基Ｇ１２、Ｇ１３、およびＱ６１におけるＫＲＡＳ変異は、ヒトの癌における顕性（優性）発癌性変異である。ＫＲＡＳの残基Ｇ１２およびＧ１３における一般的な発癌性変異は、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ａ、Ｇ１２Ｓ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ｄ、およびＧ１３Ｃを含む。これらの残基における置換の結果として、内因性のＧＴＰ加水分解の減少によるＫＲＡＳ－ＧＴＰ結合の構成的なレベル上昇がもたらされる。ＫＲＡＳは癌研究における聖杯とみなされているが、これまでに直接の阻害剤が臨床に到達したことはなく、ＫＲＡＳはしばしば「アンドラッガブル」な標的と記述される。この不成功の裏にある主要な理由の１つは、小さい分子に対する好適な結合ポケットがないことであった。

ＫＲＡＳの発癌性変異型のターゲティングおよび機能阻害に成功することによって、癌治療の技術分野において長く探し求められている解決策が提供され得る。

本発明者らは、位置Ｇ１２またはＧ１３における変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型の特定のエピトープ（または領域）を同定することによってこの要求に取り組んでおり、前記エピトープは抗体にアクセス可能であるとともに、たとえば抗体などによってＫＲＡＳのこうした発癌性変異型に結合してＫＲＡＳのこうした発癌性変異型の活性を阻害するためのターゲティングを行うために特に有用である。本発明者らは、こうしたエピトープに対応する（または本質的に対応する）単離ペプチドを同定および生成した。加えて本発明者らは、こうした単離ペプチドを用いて、ＫＲＡＳのこうした発癌性変異型に結合してそれを阻害する抗体を生成した。

よって、１つの態様において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１７またはそれと実質的に相同の配列、およびＳＥＱＩＤＮＯ：１８またはそれと実質的に相同の配列からなる（またはそれを含む）群より選択されるアミノ酸配列を含む単離ペプチドを提供する。

本明細書の他の場所に考察されるとおり、こうした単離ペプチドを抗原ペプチドとして用いて、位置Ｇ１２またはＧ１３における変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型に結合してその活性を阻害する抗体を生成してもよい。

文脈から別様が明らかでない限り、本発明の「単離ペプチド」または「ペプチド」に対する言及は、代替的に「単離エピトープ」または「単離抗原エピトープ」に対する言及とみなされてもよい。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１７およびＳＥＱＩＤＮＯ：１８からなる（またはそれを含む）群より選択されるアミノ酸配列を含む単離ペプチドを提供する。

ＳＥＱＩＤＮＯ：１７またはＳＥＱＩＤＮＯ：１８の「Ｘ」残基がＤ（アスパラギン酸）残基である実施形態は、特に好ましい。

よっていくつかの実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１またはそれと実質的に相同の配列、およびＳＥＱＩＤＮＯ：２またはそれと実質的に相同の配列からなる（またはそれを含む）群より選択されるアミノ酸配列を含む単離ペプチドを提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１およびＳＥＱＩＤＮＯ：２からなる（またはそれを含む）群より選択されるアミノ酸配列を含む単離ペプチドを提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１のアミノ酸配列を含む単離ペプチドを提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：２のアミノ酸配列を含む単離ペプチドを提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１７またはそれと実質的に相同の配列、およびＳＥＱＩＤＮＯ：１８またはそれと実質的に相同の配列からなる（またはそれを含む）群より選択されるアミノ酸配列からなる単離ペプチドを提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１７およびＳＥＱＩＤＮＯ：１８からなる（またはそれを含む）群より選択されるアミノ酸配列からなる単離ペプチドを提供する。

単離ペプチドがＳＥＱＩＤＮＯ：１７のアミノ酸配列（またはそれと実質的に相同の配列）を含む（またはそれからなる）いくつかの実施形態において、好ましくは「Ｘ」残基はＤ、Ｖ、Ｃ、Ａ、またはＲからなる群より選択される。よって、ＳＥＱＩＤＮＯ：１７のアミノ酸配列（またはそれと実質的に相同の配列）に関連するものとして本明細書に記載される実施形態は、いくつかの好ましい実施形態において、ＳＥＱＩＤ：１９のアミノ酸配列（またはそれと実質的に相同の配列）に準用されて関連してもよい。

単離ペプチドがＳＥＱＩＤＮＯ：１７のアミノ酸配列（またはそれと実質的に相同の配列）を含むいくつかの実施形態において、好ましくは「Ｘ」残基はＤ、Ｃ、Ａ、Ｓ、またはＲからなる群より選択される。よって、ＳＥＱＩＤＮＯ：１７のアミノ酸配列（またはそれと実質的に相同の配列）に関連するものとして本明細書に記載される実施形態は、いくつかの好ましい実施形態において、ＳＥＱＩＤ：２０のアミノ酸配列（またはそれと実質的に相同の配列）に準用されて関連してもよい。

単離ペプチドがＳＥＱＩＤＮＯ：１７のアミノ酸配列（またはそれと実質的に相同の配列）を含むいくつかの実施形態において、好ましくは「Ｘ」残基はＤ、Ｃ、Ａ、またはＲからなる群より選択される。よって、ＳＥＱＩＤＮＯ：１７のアミノ酸配列（またはそれと実質的に相同の配列）に関連するものとして本明細書に記載される実施形態は、いくつかの好ましい実施形態において、ＳＥＱＩＤ：２１のアミノ酸配列（またはそれと実質的に相同の配列）に準用されて関連してもよい。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１またはそれと実質的に相同の配列、およびＳＥＱＩＤＮＯ：２またはそれと実質的に相同の配列からなる（またはそれを含む）群より選択されるアミノ酸配列からなる単離ペプチドを提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１およびＳＥＱＩＤＮＯ：２からなる（またはそれを含む）群より選択されるアミノ酸配列からなる単離ペプチドを提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１のアミノ酸配列からなる単離ペプチドを提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：２のアミノ酸配列からなる単離ペプチドを提供する。

いくつかの実施形態において、単離ペプチドは、Ｎ末端および／またはＣ末端に１つ以上の追加のアミノ酸を（すなわち、記述されたＳＥＱＩＤＮＯのアミノ酸配列に加えて）含んでもよい。いくつかの好ましい実施形態において、単離ペプチドは、Ｎ末端に１つ以上の追加のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの好ましい実施形態において、単離ペプチドは、Ｃ末端に１つ以上の追加のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの好ましい実施形態において、単離ペプチドは、Ｎ末端およびＣ末端に１つ以上の追加のアミノ酸を含んでもよい。いくつかの好ましい実施形態において、単離ペプチドは、Ｎ末端および／またはＣ末端におけるシステイン（Ｃ）残基（または、Ｎ末端および／もしくはＣ末端における追加のシステイン（Ｃ）残基）を含んでもよい。いくつかの実施形態において、単離ペプチドは、Ｎ末端にシステイン（Ｃ）残基を含んでもよい。いくつかの実施形態において、単離ペプチドは、Ｃ末端にシステイン（Ｃ）残基を含んでもよい。単離ペプチドの末端にシステイン残基を提供することによって、たとえば本明細書の他の場所に考察されるとおりに、ペプチド担体への簡便な付着を可能にできる。

いくつかの実施形態において、単離ペプチドは、Ｎ末端および／またはＣ末端における１つ以上の追加の修飾を含んでもよい。たとえば、いくつかの実施形態において単離ペプチドはＣ末端がアミド化されてもよい。いくつかの実施形態において、単離ペプチドはＮ末端がアセチル化されてもよい。ペプチドをアミド化およびアセチル化する方法は、当該技術分野において周知である。いくつかの実施形態において、単離ペプチドは、ペプチドをペプチド担体に付着させる（またはつなぐまたは接続する）ために用いられ得る修飾（化学基またはリンカー）を有してもよい。ペプチドをペプチド担体に付着させる（またはつなぐまたは接続する）ために用いられ得る修飾（化学基またはリンカー）は、Ｎ末端および／またはＣ末端にあってもよい。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：３またはそれと実質的に相同の配列、ＳＥＱＩＤＮＯ：４またはそれと実質的に相同の配列、ＳＥＱＩＤＮＯ：５またはそれと実質的に相同の配列、およびＳＥＱＩＤＮＯ：６またはそれと実質的に相同の配列からなる（またはそれを含む）群より選択されるアミノ酸配列を含む単離ペプチドを提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：３またはそれと実質的に相同の配列、およびＳＥＱＩＤＮＯ：４またはそれと実質的に相同の配列からなる（またはそれを含む）群より選択されるアミノ酸配列を含む単離ペプチドを提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：５またはそれと実質的に相同の配列、およびＳＥＱＩＤＮＯ：６またはそれと実質的に相同の配列からなる（またはそれを含む）群より選択されるアミノ酸配列を含む単離ペプチドを提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：３またはそれと実質的に相同の配列、およびＳＥＱＩＤＮＯ：５またはそれと実質的に相同の配列からなる（またはそれを含む）群より選択されるアミノ酸配列を含む単離ペプチドを提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：３、ＳＥＱＩＤＮＯ：４、ＳＥＱＩＤＮＯ：５、およびＳＥＱＩＤＮＯ：６からなる（またはそれを含む）群より選択されるアミノ酸配列を含む単離ペプチドを提供する。

ＳＥＱＩＤＮＯ：３の単離ペプチドは、本明細書の他の場所に記載されるＧ１２ＤＡｂ１と名付けられた抗体を生成するために使用された。ＳＥＱＩＤＮＯ：４の単離ペプチドは、本明細書の他の場所に記載されるＧ１２ＤＡｂ２と名付けられた抗体を生成するために使用された。ＳＥＱＩＤＮＯ：５の単離ペプチドは、本明細書の他の場所に記載されるＧ１３ＤＡｂ１と名付けられた抗体を生成するために使用された。ＳＥＱＩＤＮＯ：６の単離ペプチドは、本明細書の他の場所に記載されるＧ１３ＤＡｂ２と名付けられた抗体を生成するために使用された。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：３およびＳＥＱＩＤＮＯ：４からなる（またはそれを含む）群より選択されるアミノ酸配列を含む単離ペプチドを提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：５およびＳＥＱＩＤＮＯ：６からなる（またはそれを含む）群より選択されるアミノ酸配列を含む単離ペプチドを提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：３およびＳＥＱＩＤＮＯ：５からなる（またはそれを含む）群より選択されるアミノ酸配列を含む単離ペプチドを提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：３のアミノ酸配列を含む単離ペプチドを提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：４のアミノ酸配列を含む単離ペプチドを提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：５のアミノ酸配列を含む単離ペプチドを提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：６のアミノ酸配列を含む単離ペプチドを提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：３またはそれと実質的に相同の配列、ＳＥＱＩＤＮＯ：４またはそれと実質的に相同の配列、ＳＥＱＩＤＮＯ：５またはそれと実質的に相同の配列、およびＳＥＱＩＤＮＯ：６またはそれと実質的に相同の配列からなる（またはそれを含む）群より選択されるアミノ酸配列からなる単離ペプチドを提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：３またはそれと実質的に相同の配列、およびＳＥＱＩＤＮＯ：４またはそれと実質的に相同の配列からなる（またはそれを含む）群より選択されるアミノ酸配列からなる単離ペプチドを提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：５またはそれと実質的に相同の配列、およびＳＥＱＩＤＮＯ：６またはそれと実質的に相同の配列からなる（またはそれを含む）群より選択されるアミノ酸配列からなる単離ペプチドを提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：３またはそれと実質的に相同の配列、およびＳＥＱＩＤＮＯ：５またはそれと実質的に相同の配列からなる（またはそれを含む）群より選択されるアミノ酸配列からなる単離ペプチドを提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：３、ＳＥＱＩＤＮＯ：４、ＳＥＱＩＤＮＯ：５、およびＳＥＱＩＤＮＯ：６からなる（またはそれを含む）群より選択されるアミノ酸配列からなる単離ペプチドを提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：３およびＳＥＱＩＤＮＯ：４からなる（またはそれを含む）群より選択されるアミノ酸配列からなる単離ペプチドを提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：５およびＳＥＱＩＤＮＯ：６からなる（またはそれを含む）群より選択されるアミノ酸配列からなる単離ペプチドを提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：３およびＳＥＱＩＤＮＯ：５からなる（またはそれを含む）群より選択されるアミノ酸配列からなる単離ペプチドを提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：３のアミノ酸配列からなる単離ペプチドを提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：４のアミノ酸配列からなる単離ペプチドを提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：５のアミノ酸配列からなる単離ペプチドを提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：６のアミノ酸配列からなる単離ペプチドを提供する。

本発明の単離ペプチド配列の状況において、所与のアミノ酸配列と「実質的に相同の」配列とは、所与のアミノ酸配列と比較して１、２、または３（例、１または２）のアミノ酸の置換または欠失または付加を含む配列か、または所与のアミノ酸配列に対する少なくとも７０％の配列同一性を有する配列か、または所与のアミノ酸配列の少なくとも６つの連続するアミノ酸を有する配列であってもよい。「実質的に相同の」配列の他の例は、単離ペプチドと「実質的に相同の」アミノ酸配列に関連して本明細書の他の場所に記載されており、「実質的に相同の」配列のこれらの例は、上述の特定のペプチド配列にも適用可能である。

本発明による「実質的に相同の」単離ペプチド配列において、発癌性変異（置換）アミノ酸残基は変更されていない。よって、ＳＥＱＩＤＮＯ：１と「実質的に相同の」アミノ酸配列を含む（またはそれからなる）単離ペプチドにおいて、ＳＥＱＩＤＮＯ：１の位置３における（または対応する）Ｄ残基は変更されていない（すなわち、Ｄ残基は維持されるかまたは存在する）。ＳＥＱＩＤＮＯ：２と「実質的に相同の」アミノ酸配列を含む（またはそれからなる）単離ペプチドにおいて、ＳＥＱＩＤＮＯ：２の位置４における（または対応する）Ｄ残基は変更されていない（すなわち、Ｄ残基は維持されるかまたは存在する）。ＳＥＱＩＤＮＯ：３と「実質的に相同の」アミノ酸配列を含む（またはそれからなる）単離ペプチドにおいて、ＳＥＱＩＤＮＯ：３の位置３における（または対応する）Ｄ残基は変更されていない（すなわち、Ｄ残基は維持されるかまたは存在する）。ＳＥＱＩＤＮＯ：４と「実質的に相同の」アミノ酸配列を含む（またはそれからなる）単離ペプチドにおいて、ＳＥＱＩＤＮＯ：４の位置４における（または対応する）Ｄ残基は変更されていない（すなわち、Ｄ残基は維持されるかまたは存在する）。ＳＥＱＩＤＮＯ：５と「実質的に相同の」アミノ酸配列を含む（またはそれからなる）単離ペプチドにおいて、ＳＥＱＩＤＮＯ：５の位置５における（または対応する）Ｄ残基は変更されていない（すなわち、Ｄ残基は維持されるかまたは存在する）。ＳＥＱＩＤＮＯ：６と「実質的に相同の」アミノ酸配列を含む（またはそれからなる）単離ペプチドにおいて、ＳＥＱＩＤＮＯ：６の位置４における（または対応する）Ｄ残基は変更されていない（すなわち、Ｄ残基は維持されるかまたは存在する）。ＳＥＱＩＤＮＯ：１７と「実質的に相同の」アミノ酸配列を含む（またはそれからなる）単離ペプチドにおいて、ＳＥＱＩＤＮＯ：１７の位置３における（または対応する）Ｘ残基は変更されていない（すなわち、Ｘ残基は維持されるかまたは存在する）。ＳＥＱＩＤＮＯ：１８と「実質的に相同の」アミノ酸配列を含む（またはそれからなる）単離ペプチドにおいて、ＳＥＱＩＤＮＯ：１８の位置４における（または対応する）Ｘ残基は変更されていない（すなわち、Ｘ残基は維持されるかまたは存在する）。ＳＥＱＩＤＮＯ：１９またはＳＥＱＩＤＮＯ：２０またはＳＥＱＩＤＮＯ：２１と「実質的に相同の」アミノ酸配列を含む（またはそれからなる）単離ペプチドにおいて、ＳＥＱＩＤＮＯ：１９またはＳＥＱＩＤＮＯ：２０またはＳＥＱＩＤＮＯ：２１の位置３における（または対応する）Ｘ残基は変更されていない（すなわち、Ｘ残基は維持されるかまたは存在する）。

いくつかの好ましい実施形態において、単離ペプチドと「実質的に相同の」アミノ酸配列とは、所与の単離ペプチドのアミノ酸配列と比較して、１、２、または３アミノ酸の置換または付加または欠失（好ましくは１または２、より好ましくは１）を有する配列を有する配列か、またはその配列を含む配列である。

単離ペプチドと「実質的に相同の」アミノ酸配列は、単離ペプチドの少なくとも５または少なくとも６の連続するアミノ酸を含む（またはそれからなる）（または単離ペプチドの少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、または少なくとも１１の連続するアミノ酸を含むかまたはそれからなる）配列を含む。６アミノ酸は、抗体が認識または結合するペプチド／タンパク質配列の典型的な長さである。

単離ペプチドと「実質的に相同の」アミノ酸配列は、所与の単離ペプチド配列に対する少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を有する配列か、またはその配列を含む（もしくはそれからなる）配列を含む。少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の配列同一性が好ましい。

アミノ酸配列の変更は、保存的アミノ酸または非保存的アミノ酸によるものであり得る。好ましくは、前記変更は保存的アミノ酸置換である。

本明細書において用いられる「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基が類似の側鎖を有する別のアミノ酸残基で置換されるものである。当該技術分野において、類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーが定義されており、それは塩基性側鎖（例、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例、アスパラギン酸、グルタミン酸）、無電荷極性側鎖（例、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例、グリシン、システイン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分岐側鎖（例、スレオニン、バリン、イソロイシン）、および芳香族側鎖（例、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を含む。

「実質的に相同の」という用語は、本発明のタンパク質と実質的に同じ機能を実質的に同じやり方で行う、本発明のアミノ酸配列の改変物または化学的等価物も含む。たとえば、任意の実質的に相同の単離ペプチドは典型的に、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型に結合する抗抗体を自身に対して（または対抗して）生成（または産生）させ得るペプチドまたはエピトープとして作用する能力を保持するべきである。

（例、「実質的に相同の」配列を生成するための）上述のアミノ酸の操作を行う方法は、当業者にとって周知である。

いくつかの実施形態において、単離ペプチドは任意の内部システイン残基を含有しない。「内部」残基とは、Ｎ末端および／またはＣ末端残基以外の位置の残基を意味する。よっていくつかの実施形態において、所与のアミノ酸配列と「実質的に相同の」配列は、置換または追加のアミノ酸としてシステイン（Ｃ：ｃｙｓｔｅｉｎｅ）残基を有さない。

相同性（例、配列同一性）は、任意の簡便な方法で評価されてもよい。しかし、配列間の相同性（例、同一性）の程度を決定するためには、配列の複数のアライメントを行うコンピュータプログラム、たとえばＣｌｕｓｔａｌＷ（トンプソン（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ）、ヒギンス（Ｈｉｇｇｉｎｓ）、ギブソン（Ｇｉｂｓｏｎ）、ヌクレイック・アシッズ・リサーチ（ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．）、２２：４６７３－４６８０、１９９４）などが有用である。所望であれば、ＣｌｕｓｔａｌＷのアルゴリズムを、ＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックス（ヘニコフ（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ）およびヘニコフ（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ）、米国科学アカデミー紀要（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ）、８９：１０９１５－１０９１９、１９９２）と、ギャップ開始ペナルティ１０およびギャップ伸長ペナルティ０．１と一緒に使用することによって、２つの配列間の最高オーダの一致を得ることができ、ここでは一方の配列の合計の長さの少なくとも５０％がアライメントに含まれる。配列を整列させるために用いられ得る他の方法は、ニードルマン（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ）およびブンシュ（Ｗｕｎｓｃｈ）のアライメント法（ニードルマンおよびブンシュ、ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．）、４８：４４３、１９７０）をスミス（Ｓｍｉｔｈ）およびウォーターマン（Ｗａｔｅｒｍａｎ）（スミスおよびウォーターマン、アドバンシズ・イン・アプライド・マセマティックス（Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．）、２：４８２、１９８１）が修正して、２つの配列間の最高オーダの一致が得られ、および２つの配列間の同一アミノ酸の数が決定されるようにしたものである。２つのアミノ酸配列間の同一性パーセンテージを計算するための他の方法は、一般的に認識される技術であり、たとえばカリーリョ（Ｃａｒｉｌｌｏ）およびリプトン（Ｌｉｐｔｏｎ）によって記載されるもの（カリーリョおよびリプトン、ＳＩＡＭジャーナル・オブ・アプライド・マセマティックス（Ｊ．ＡｐｐｌｉｅｄＭａｔｈ．）、４８：１０７３、１９８８）、ならびに「計算分子生物学（ＣｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ）」、レスク（Ｌｅｓｋ）編、オックスフォード大学出版局（ＯｘｆｏｒｄＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＰｒｅｓｓ）、ニューヨーク（ＮｅｗＹｏｒｋ）、１９８８、「バイオコンピューティング：情報科学およびゲノミクスプロジェクト（Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：ＩｎｆｏｒｍａｔｉｃｓａｎｄＧｅｎｏｍｉｃｓＰｒｏｊｅｃｔｓ）」に記載されるものなどを含む。

一般的に、こうした計算のためにコンピュータプログラムが使用されるだろう。配列対の比較および整列を行うプログラム、たとえばＡＬＩＧＮ（マイヤーズ（Ｍｙｅｒｓ）およびミラー（Ｍｉｌｌｅｒ）、ＣＡＢＩＯＳ、４：１１－１７、１９８８）、ＦＡＳＴＡ（ピアソン（Ｐｅａｒｓｏｎ）およびリップマン（Ｌｉｐｍａｎ）、米国科学アカデミー紀要（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ）、８５：２４４４－２４４８、１９８８；ピアソン、メソッズ・イン・エンザイモロジー（ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ）、１８３：６３－９８、１９９０）、およびギャップＢＬＡＳＴ（アルチュル（Ａｌｔｓｃｈｕｌ）ら、ヌクレイック・アシッズ・リサーチ（ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．）、２５：３３８９－３４０２、１９９７）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、またはＧＣＧ（デブリュー（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ）、ヘベルリ（Ｈａｅｂｅｒｌｉ）、スミティーズ（Ｓｍｉｔｈｉｅｓ）、ヌクレイック・アシッズ・リサーチ（ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．）、１２：３８７、１９８４）などもこの目的のために有用である。さらに、欧州バイオインフォマティクス研究所（ＥｕｒｏｐｅａｎＢｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）のＤａｌｉサーバは、タンパク質配列の構造ベースのアライメントを提供する（ホルム（Ｈｏｌｍ）、トレンズ・イン・バイオケミカル・サイエンシズ（ＴｒｅｎｄｓｉｎＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ）、２０：４７８－４８０、１９９５；ホルム、ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．）、２３３：１２３－３８、１９９３；ホルム、ヌクレイック・アシッズ・リサーチ（ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．）、２６：３１６－９、１９９８）。

基準点を提供するために、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の相同性、配列同一性などを有する本発明による配列は、（たとえばインターネット上のＧＥＮＥＳＴＲＥＡＭネットワークサーバ、ＩＧＨ、モンペリエ（Ｍｏｎｔｐｅｌｌｉｅｒ）、フランス（Ｆｒａｎｃｅ）などにおいて入手可能な）デフォルトのパラメータを伴うＡＬＩＧＮプログラムを用いて決定されてもよい。

いくつかの実施形態において、本発明は、本明細書に開示される単離ペプチド配列（またはそれと実質的に相同の配列）の伸長版またはトランケート版または環状版を含む（またはそれからなる）単離ペプチドを提供する。ペプチドの伸長版、トランケート版、および環状版については本明細書の他の場所に考察している。

本発明の単離ペプチドは、本明細書に開示される単離ペプチド配列の伸長版か、または本明細書に開示される単離ペプチド配列と実質的に相同のアミノ酸配列の伸長版を含んで（またはそれからなって）もよい。たとえば、１つ以上の追加のアミノ酸（例、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８または９、少なくとも１０、少なくとも１５、または少なくとも２０のアミノ酸、または１～５または１～１０または１～２０のアミノ酸）が、単離ペプチド配列（またはそれと実質的に相同の配列）の一方の端部または両方の端部に存在してもよい。

本発明の単離ペプチドは、本明細書に開示される単離ペプチド配列のトランケート版か、または本明細書に開示される単離ペプチド配列のトランケート版を含んで（またはそれからなって）もよい。たとえば、１つ以上のアミノ酸（例、少なくとも２または少なくとも３、例、１～３または１～２または１）が、単離ペプチド配列（またはそれと実質的に相同の配列）の一方の端部または両方の端部に存在しなくてもよい。

いくつかの実施形態において、単離ペプチドは、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０アミノ酸、少なくとも１１アミノ酸、または少なくとも１２アミノ酸の長さであってもよく、たとえば６～１０、６～１２、６～１５、６～２０、６～２５、６～３０、６～４０、６～５０、６～６０、または６～７５アミノ酸の長さであってもよい。単離ペプチドは、たとえば５～７、５～８、５～９、５～１０、５～１１、５～１２、５～１３、５～１４、５～１５、５～２０、５～２５、５～３０、５～４０、５～５０、５～６０、５～７０、５～７５アミノ酸の長さであってもよい。単離ペプチドは、たとえば１２～１５、１２～２０、１２～２５、１２～３０、１２～４０、１２～５０、１２～６０、１２～７０、１２～７５アミノ酸の長さであってもよい。

いくつかの実施形態において、単離ペプチドは≦５０アミノ酸の長さであってもよく、たとえば≦４５、≦４０、≦３５、≦３０、≦２５、≦２０、≦１５、または≦１０アミノ酸の長さなど（例、５～１０、５～１５、５～２０、５～２５、５～３０、５～３５、５～４０、５～４５、５～５０、６～１０、６～１５、６～２０、６～２５、６～３０、６～３５、６～４０、６～４５、６～５０、８～１０、８～１５、８～２０、８～２５、８～３０、８～３５、８～４０、８～４５、８～５０、１０～１５、１０～２０、１０～２５、１０～３０、１０～３５、１０～４０、１０～４５、１０～５０、１５～２０、１５～２５、１５～３０、１５～３５、１５～４０、１５～４５、１５～５０、２０～２５、２０～３０、２０～３５、２５～３０、２５～３５または２５～４０、２５～４５、２５～５０、３０～３５、３０～４０、３０～４５、３０～５０、３５～４０、３５～４５、３５～５０、４０～４５、４０～５０、または４５～５０アミノ酸の長さ）であってもよい。

いくつかの実施形態において、単離ペプチドは≦２０アミノ酸の長さであってもよく、たとえば≦１５、≦１４、≦１３、≦１２、≦１１、≦１０アミノ酸の長さなど（例、５～１０、５～１５、５～２０、６～１０、６～１５、６～２０、８～１０、８～１５、８～２０、１０～１５、１０～２０、または１５～２０アミノ酸の長さ）であってもよい。いくつかの実施形態において、単離ペプチドは５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０アミノ酸の長さであってもよい。）いくつかの実施形態において、単離ペプチドは５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０アミノ酸の長さであってもよい。

いくつかの実施形態において、単離ペプチドは１２アミノ酸の長さであってもよい。いくつかの実施形態において、単離ペプチドは１３アミノ酸の長さであってもよい。

典型的に、および好ましくは、単離ペプチドは直鎖ペプチド（または直鎖エピトープ）である。

ペプチドを合成するための方法は、当該技術分野において周知である。（例、免疫化および抗体生成に用いるための）直鎖ペプチドを調製するために用いられる一般的な技術は、ＦｍｏｃＳＰＰＳ（固相ペプチド合成（ＳｏｌｉｄＰｈａｓｅＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ））である。ＳＰＰＳにおいて、小さい多孔性ビーズを機能性リンカーで処理し、洗浄－カップリング－洗浄のサイクルの繰り返しを用いて、この機能性リンカーの上にペプチド鎖を構築できる。次いで、化学的切断を用いて、合成されたペプチドをビーズから解放する。環状ペプチドの合成のための一般的な方法は、ジスルフィド架橋の形成（この架橋はペプチドの、たとえば１つがＮ末端、１つがＣ末端にある２つのシステインによって形成された架橋である）か、または典型的なペプチド結合からなる架橋である「ヘッドトゥーテール」架橋の形成による環化を使用する。環状ペプチドは、固体支持体の上に形成され得る。

ペプチドを合成するためのその他の方法は、他の化学合成手順の使用、インビトロ翻訳、または細胞に好適な発現ベクターを導入することによるものを含む。

本発明による単離ペプチドはもちろん、本発明によるＫＲＡＳの全長発癌性変異型も、ＫＲＡＳファミリーの任意のその他の全長（例、野生型または天然）タンパク質も、任意のその他の全長（野生型）タンパク質も含まない。よって本発明による単離ペプチドは、全長のＳＥＱＩＤＮＯ：７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６を含まない。

本発明の単離ペプチドは、（例、本明細書の他の場所に記載されるとおり）本発明によるＫＲＡＳの全長発癌性変異型の領域（またはエピトープ）に対応する（または本質的に対応する）ものであるが、それら自体は自然発生しない（すなわち、本発明の単離ペプチドは自然発生する対応物を有さず、自然に単独で発生することもない）。よって、本発明の単離ペプチドは人工ペプチド、または合成ペプチド、または人為的ペプチド、または非天然ペプチドであるとみなされ得る。

本発明のさらなる態様は、コンジュゲートを提供する。典型的に、このコンジュゲートは抗体の産生に用いられるように構成される。コンジュゲートは、ペプチド担体と結合した（すなわちつながれた、または接続した、または接合した）か、またはそれと混合された、少なくとも１つの上記で定義された単離ペプチドを含んでもよい。

よって１つの態様において、本発明は、本発明の単離ペプチドを含むコンジュゲートを提供する。コンジュゲートは典型的に、本発明の単離ペプチドと、ペプチド担体とを含み、前記単離ペプチドは前記ペプチド担体と結合または混合される。ペプチド担体は典型的に免疫原性を高める。いくつかの場合には、抗原エピトープを提供する（または提示する、またはそれに対応する）短いペプチドは、それ自体は小さすぎて免疫応答を誘導できないことがあるため、免疫原性を高めることは有用であってもよい。

ペプチド担体は典型的に、たとえばタンパク質、多糖、またはポリマーアミノ酸などの大きな高分子である。いくつかの実施形態において、ペプチド担体は、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ：ｋｅｙｈｏｌｅｌｉｍｐｅｔｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ）、卵白アルブミン（ＯＶＡ：ｏｖａｌｂｕｍｉｎ）、血清アルブミン、およびポリリジンなどからなる群より選択される。通常はＫＬＨが好ましい。

本発明の単離ペプチドとペプチド担体との結合は、たとえば共有結合またはジスルフィド架橋などであり得る。いくつかの実施形態において、（例、本明細書の他の場所に記載されるとおり）本発明の単離ペプチドには自身のＮ末端またはＣ末端に（追加の）システイン残基が提供されてもよい。こうしたシステイン残基は典型的に、ペプチド担体（例、ＫＬＨ）に対する単離ペプチドの結合を促進する。いくつかの実施形態において、単離ペプチドは、ペプチド担体に対する単離ペプチドの結合を可能にする修飾（例、プロパルギル基などの化学基）を有してもよい。いくつかの実施形態において、単離ペプチドは、標準的な架橋剤（例、グルタルアルデヒド）を介してペプチド担体に結合される。単離ペプチドをペプチド担体とつなぐ方法は、当該技術分野において周知である。

いくつかの実施形態において、本発明による単離ペプチド（またはコンジュゲート）は、溶液中または懸濁物中に存在してもよい。よって１つの態様において、本発明は、本発明の単離ペプチドと、任意選択の許容される（例、薬学的に許容される）希釈剤、緩衝液、保存剤、および／または賦形剤とを含む組成物を提供する。

いくつかの実施形態において、単離ペプチド（またはコンジュゲート）は、固体支持体（例、ビーズまたはミクロビーズまたはプレートまたはマイクロタイタープレート）の上に存在して（すなわち、それに付着または結合して）もよい。よって１つの態様において、本発明は、本発明の単離ペプチドまたはコンジュゲートが付着された（直接的または間接的に付着された）固体支持体を提供する。

本発明の単離ペプチド（およびコンジュゲート）は典型的に、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型に結合する抗体の同定（または生成または産生）に使用するのに好適である。たとえば、本発明の単離ペプチドは典型的に、抗体の同定（または生成または産生）のための抗原エピトープとして使用するのに好適である。本発明の単離ペプチドを用いた抗体の同定（または生成または産生）は、任意の好適な手段によって行われてもよく、当業者は（例、本明細書の他の場所に考察される）好適な技術を熟知している。たとえば、本発明の単離ペプチド（およびコンジュゲート）は典型的に、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型に結合するポリクローナル抗体（例、本発明の単離ペプチド（またはコンジュゲート）によって免疫化されたたとえばウサギなどの動物において産生されたポリクローナル抗体）の同定（または生成または産生）か、または標準的なハイブリドーマ技術またはファージディスプレイを用いたモノクローナル抗体の同定（または生成または産生）に使用するのに好適である。言い換えると、本発明の単離ペプチド（およびコンジュゲート）は典型的に、本発明による抗ＫＲＡＳ抗体によってターゲティングするための本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型の有用なエピトープを提示する（またはそれに対応する、またはそれに本質的に対応する）。

典型的に、本発明の単離ペプチド（およびコンジュゲート）は、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型に結合してその活性を阻害する抗体の同定（または生成または産生）に使用するのに好適である。

本発明の単離ペプチド（およびコンジュゲート）は、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型のエピトープ（または領域または部分）に対応し（または本質的に対応し）、それはＫＲＡＳのこうした発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：８、９、１１、１２、１３、１４、１５、または１６）のアミノ酸残基１０からアミノ酸残基２１の領域に配置される（または位置する）。

本明細書において定義される本発明の単離ペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む（またはそれからなる）核酸分子、またはそれと実質的に相同の核酸分子は、本発明のなおもさらなる態様を形成する。

核酸配列に関連して本明細書において用いられる「実質的に相同の」という用語は、出発核酸配列に対して少なくとも６５％、７０％、または７５％、好ましくは少なくとも８０％、さらにより好ましくは少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する配列を含む。

本明細書において用いられる「核酸配列」または「核酸分子」という用語は、自然発生する塩基、糖、および糖間（骨格）結合で構成されるヌクレオシドまたはヌクレオチドモノマーの配列を示す。この用語は、自然発生しないモノマーまたはその一部分を含む改変または置換された配列も含む。本発明の核酸配列は、デオキシリボ核酸配列（ＤＮＡ：ｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｓ）またはリボ核酸配列（ＲＮＡ：ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｓｅｑｕｅｎｃｅｓ）であってもよく、アデニン、グアニン、シトシン、チミジン、およびウラシルを含む自然発生する塩基を含んでもよい。これらの配列は、修飾塩基も含んでもよい。こうした修飾塩基の例は、アザおよびデアザアデニン、グアニン、シトシン、チミジン、およびウラシル；ならびにキサンチンおよびヒポキサンチンを含む。核酸分子は、二本鎖または一本鎖であってもよい。核酸分子は、全体的または部分的に合成または組み換え体であってもよい。

別の態様において、本発明は、本発明の単離ペプチド（またはコンジュゲート）を含む組成物を提供する。こうした組成物は、好適な希釈剤、担体、賦形剤、および／または保存剤（例、薬学的に許容される希釈剤、担体、賦形剤、および／または保存剤）をさらに含んで（例、それとの混合物であって）もよい。

上記に示したとおり、本発明の単離ペプチド（およびコンジュゲート）は典型的に、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型に結合し結合してその活性を阻害する抗体の同定（または生成または産生）に使用するのに好適である。

よって１つの態様において、本発明は、ＫＲＡＳの発癌性変異型に結合する（またはそれを特異的に認識する、またはそれに特異的に結合する）、たとえば単離抗体などの抗体を提供し、前記ＫＲＡＳの発癌性変異型は、野生型ＫＲＡＳの位置Ｇ１２またはＧ１３に対応する位置にアミノ酸置換を含み、前記抗体は、野生型ＫＲＡＳのアミノ酸残基１０～２１に対応するアミノ酸残基によって定義される前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の領域内にあるエピトープに結合し、前記抗体は前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の活性を阻害する。

好ましい実施形態において、ＫＲＡＳ（またはＫ－Ｒａｓ）の発癌性変異型は、ヒトのＫＲＡＳ（またはＫ－Ｒａｓ）の発癌性変異型である（すなわち、ヒトタンパク質である）。

ヒトＫＲＡＳには２つのアイソフォームが存在する。それらはＫＲＡＳアイソフォーム２ＡおよびＫＲＡＳアイソフォーム２Ｂである。本発明に関連して言及される野生型ＫＲＡＳは、ＫＲＡＳアイソフォーム２ＡまたはＫＲＡＳアイソフォーム２Ｂであってもよい。野生型ＫＲＡＳアイソフォーム２Ａのアミノ酸配列は、本明細書においてＳＥＱＩＤＮＯ：７として示される。野生型ＫＲＡＳアイソフォーム２Ｂのアミノ酸配列は、本明細書においてＳＥＱＩＤＮＯ：１０として示される。よっていくつかの実施形態において、本発明に関連して言及される野生型ＫＲＡＳは、ＳＥＱＩＤＮＯ：７のアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、本発明に関連して言及される野生型ＫＲＡＳは、ＳＥＱＩＤＮＯ：１０のアミノ酸配列を有する。野生型ＫＲＡＳアイソフォーム２Ａおよび野生型ＫＲＡＳアイソフォーム２Ｂは、アミノ残基１０～２１に同一の配列を有する（実際には、ＳＥＱＩＤＮＯ：７およびＳＥＱＩＤＮＯ：１０は残基１～１５０にわたって同一である）。

本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型は、本発明によるＫＲＡＳアイソフォーム２Ａの発癌性変異型またはＫＲＡＳアイソフォーム２Ｂの発癌性変異型であってもよい。

よっていくつかの実施形態において、ＫＲＡＳの発癌性変異型は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３、１４、１５、または１６のアミノ酸配列を有する。

いくつかの実施形態において、ＫＲＡＳの発癌性変異型は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３またはＳＥＱＩＤＮＯ：１４のアミノ酸配列を有する。

いくつかの実施形態において、ＫＲＡＳの発癌性変異型は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５またはＳＥＱＩＤＮＯ：１６のアミノ酸配列を有する。

いくつかの実施形態において、ＫＲＡＳの発癌性変異型は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３またはＳＥＱＩＤＮＯ：１５のアミノ酸配列を有する。

いくつかの実施形態において、ＫＲＡＳの発癌性変異型は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４またはＳＥＱＩＤＮＯ：１６のアミノ酸配列を有する。

ＫＲＡＳの発癌性変異型がＳＥＱＩＤＮＯ：１３またはＳＥＱＩＤＮＯ：１５のアミノ酸配列を有するいくつかの実施形態において、好ましくは「Ｘ」残基はＤ、Ｖ、Ｃ、Ａ、またはＲからなる群より選択される。よって、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３のアミノ酸配列に関連するものとして本明細書に記載される実施形態は、いくつかの好ましい実施形態において、ＳＥＱＩＤ：２２のアミノ酸配列に準用されて関連してもよい。ＳＥＱＩＤＮＯ：１５のアミノ酸配列に関連するものとして本明細書に記載される実施形態は、いくつかの好ましい実施形態において、ＳＥＱＩＤ：２３のアミノ酸配列に準用されて関連してもよい。

ＫＲＡＳの発癌性変異型がＳＥＱＩＤＮＯ：１３またはＳＥＱＩＤＮＯ：１５のアミノ酸配列を有するいくつかの実施形態において、好ましくは「Ｘ」残基はＤ、Ｃ、Ａ、Ｓ、またはＲからなる群より選択される。よって、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３のアミノ酸配列に関連するものとして本明細書に記載される実施形態は、いくつかの好ましい実施形態において、ＳＥＱＩＤ：２４のアミノ酸配列に準用されて関連してもよい。ＳＥＱＩＤＮＯ：１５のアミノ酸配列に関連するものとして本明細書に記載される実施形態は、いくつかの好ましい実施形態において、ＳＥＱＩＤ：２５のアミノ酸配列に準用されて関連してもよい。

ＫＲＡＳの発癌性変異型がＳＥＱＩＤＮＯ：１３またはＳＥＱＩＤＮＯ：１５のアミノ酸配列を有するいくつかの実施形態において、好ましくは「Ｘ」残基はＤ、Ｃ、Ａ、またはＲからなる群より選択される。よって、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３のアミノ酸配列に関連するものとして本明細書に記載される実施形態は、いくつかの好ましい実施形態において、ＳＥＱＩＤ：２６のアミノ酸配列に準用されて関連してもよい。ＳＥＱＩＤＮＯ：１５のアミノ酸配列に関連するものとして本明細書に記載される実施形態は、いくつかの好ましい実施形態において、ＳＥＱＩＤ：２７のアミノ酸配列に準用されて関連してもよい。

好ましい実施形態において、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５、またはＳＥＱＩＤＮＯ：１６におけるＸ残基はＤ残基である。

よって好ましい実施形態において、野生型ＫＲＡＳの位置Ｇ１２に対応する位置におけるＫＲＡＳの発癌性変異型のアミノ酸置換（または変異残基）は、Ｇ１２Ｄ置換である（すなわち、Ｄは好ましくは変異残基である）。好ましい実施形態において、野生型ＫＲＡＳの位置Ｇ１３に対応する位置におけるＫＲＡＳの発癌性変異型のアミノ酸置換（または変異残基）は、Ｇ１３Ｄ変異である（すなわち、Ｄは好ましくは変異残基である）。

いくつかの好ましい実施形態において、ＫＲＡＳの発癌性変異型は、ＳＥＱＩＤＮＯ：８、９、１１、または１２のアミノ酸配列を有する。

いくつかの実施形態において、ＫＲＡＳの発癌性変異型は、ＳＥＱＩＤＮＯ：８またはＳＥＱＩＤＮＯ：９のアミノ酸配列を有する。

いくつかの実施形態において、ＫＲＡＳの発癌性変異型は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１またはＳＥＱＩＤＮＯ：１２のアミノ酸配列を有する。

いくつかの実施形態において、ＫＲＡＳの発癌性変異型は、ＳＥＱＩＤＮＯ：８またはＳＥＱＩＤＮＯ：１１のアミノ酸配列を有する。

いくつかの実施形態において、ＫＲＡＳの発癌性変異型は、ＳＥＱＩＤＮＯ：９またはＳＥＱＩＤＮＯ：１２のアミノ酸配列を有する。

いくつかの実施形態において、ＫＲＡＳの発癌性変異型は、ＳＥＱＩＤＮＯ：８（アイソフォーム２Ａ、Ｇ１２Ｄ変異）のアミノ酸配列を有する。

いくつかの実施形態において、ＫＲＡＳの発癌性変異型は、ＳＥＱＩＤＮＯ：９（アイソフォーム２Ａ、Ｇ１３Ｄ変異）のアミノ酸配列を有する。

いくつかの実施形態において、ＫＲＡＳの発癌性変異型は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１（アイソフォーム２Ｂ、Ｇ１２Ｄ変異）のアミノ酸配列を有する。

いくつかの実施形態において、ＫＲＡＳの発癌性変異型は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１２（アイソフォーム２Ｂ、Ｇ１３Ｄ変異）のアミノ酸配列を有する。

ＫＲＡＳアイソフォーム２Ａ（ＳＥＱＩＤＮＯ：８）およびＫＲＡＳアイソフォーム２Ｂ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１１）のＧ１２Ｄ発癌性変異型は、アミノ残基１０～２１に同一の配列を有する。ＫＲＡＳアイソフォーム２Ａ（ＳＥＱＩＤＮＯ：９）およびＫＲＡＳアイソフォーム２Ｂ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１２）のＧ１３Ｄ発癌性変異型は、アミノ残基１０～２１に同一の配列を有する。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、野生型ＫＲＡＳの位置Ｇ１２に対応する位置にアミノ酸置換を含むＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：８、１１、１３、または１５）に結合してもよい。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、野生型ＫＲＡＳの位置Ｇ１３に対応する位置にアミノ酸置換を含むＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：９、１２、１４、または１６）に結合してもよい。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、野生型ＫＲＡＳの位置Ｇ１２に対応する位置にアミノ酸置換を含むＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：８、１１、１３、または１５）に結合し、および野生型ＫＲＡＳの位置Ｇ１３に対応する位置にアミノ酸置換を含むＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：９、１２、１４、または１６）に結合してもよい。

ＳＥＱＩＤＮＯ：８、９、１１、１２、１３、１４、１５、および１６に示されるＫＲＡＳの発癌性変異型の各々のアミノ酸１０～２１は、もちろん位置１２または位置１３における関連発癌性変異アミノ酸残基（アミノ酸置換）を除いて、対応する野生型配列（ＳＥＱＩＤＮＯ：７またはＳＥＱＩＤＮＯ：１０）のアミノ酸領域１０～２１に対応する。

よって、ＫＲＡＳの発癌性変異型がＳＥＱＩＤＮＯ：８、９、１１、１２、１３、１４、１５、または１６のアミノ酸配列を有する実施形態において、本発明の抗体は、前記配列のうち１つ以上のアミノ酸残基１０～２１によって定義される領域において、前記ＫＲＡＳの発癌性変異型のうち１つ以上のエピトープに結合する。

好ましいＫＲＡＳの発癌性変異型も本明細書の他の場所に考察されている。

本明細書の他の場所に考察されるとおり、本発明の抗体は典型的に、野生型ＫＲＡＳのアミノ酸残基１０～２１に対応するアミノ酸残基によって定義される前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の領域内にある、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型のエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、結合されるエピトープ全体が本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型のこの領域内に存在する。いくつかの実施形態において、結合されるエピトープの少なくとも１つのアミノ酸が本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型のこの領域内に存在する。

好ましい実施形態において、本発明の抗体は、本発明の単離ペプチドまたはコンジュゲートに結合する（または結合できる）。好ましい単離ペプチドおよびコンジュゲート、ならびに単離ペプチドおよびコンジュゲートの好ましいグループは、本明細書の他の場所に定義されている。好ましい実施形態において、本発明の抗体は、本明細書の他の場所に記載される好ましい単離ペプチドまたはコンジュゲートに結合する。抗体が単離ペプチドに結合する能力は、任意の適切な手段によって評価でき、当業者は好適な方法を熟知している（例、ＥＬＩＳＡアッセイ、たとえば所与の単離ペプチドの抗体結合が本発明によるＫＲＡＳの全長発癌性変異型と競合し得るか否かを評価するためのＥＬＩＳＡアッセイなど）。

抗体が単離ペプチド（またはコンジュゲート）に結合する能力を評価するための好適なＥＬＩＳＡアッセイは、本明細書の実施例のセクションに記載されている。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１７、ＳＥＱＩＤＮＯ：１８、ＳＥＱＩＤＮＯ：１、およびＳＥＱＩＤＮＯ：２からなる（またはそれを含む）群より選択されるアミノ酸配列を含む（またはそれからなる）単離ペプチドに結合する（または結合できる）か、またはこうした単離ペプチドを含むコンジュゲートに結合する（または結合できる）。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１およびＳＥＱＩＤＮＯ：２からなる（またはそれを含む）群より選択されるアミノ酸配列を含む（またはそれからなる）単離ペプチドに結合する（または結合できる）か、またはこうした単離ペプチドを含むコンジュゲートに結合する（または結合できる）。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：３、ＳＥＱＩＤＮＯ：４、ＳＥＱＩＤＮＯ：５、およびＳＥＱＩＤＮＯ：６からなる（またはそれを含む）群より選択されるアミノ酸配列を含む（またはそれからなる）単離ペプチドに結合する（または結合できる）か、またはこうした単離ペプチドを含むコンジュゲートに結合する（または結合できる）。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１７のアミノ酸配列を含む少なくとも１つの本発明の単離ペプチドと、ＳＥＱＩＤＮＯ：１８のアミノ酸配列を含む少なくとも１つの本発明の単離ペプチドとに結合してもよい。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１のアミノ酸配列を含む少なくとも１つの本発明の単離ペプチドと、ＳＥＱＩＤＮＯ：２のアミノ酸配列を含む少なくとも１つの本発明の単離ペプチドとに結合してもよい。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：３またはＳＥＱＩＤＮＯ：４（好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：３）のアミノ酸配列からなる少なくとも１つの本発明の単離ペプチドと、ＳＥＱＩＤＮＯ：５またはＳＥＱＩＤＮＯ：６（好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：５）のアミノ酸配列を含む少なくとも１つの本発明の単離ペプチドとに結合してもよい。

本発明の好ましい抗体は、本発明の単離ペプチドまたはコンジュゲートに結合する（または結合できる）が、それらの抗体はもちろん典型的に、本発明によるＫＲＡＳの全長（または天然）の発癌性変異型（好ましくは本発明によるＫＲＡＳのヒト発癌性変異型、たとえばＳＥＱＩＤＮＯ８、９、１１、１２、１３、１４、１５、または１６、好ましくは８、９、１１、または１２に示されるものなど）にも結合する。

いくつかの実施形態において、本発明によるＫＲＡＳの全長（または天然）の発癌性変異型（好ましくは本発明によるＫＲＡＳのヒト発癌性変異型）は、細胞、好ましくは哺乳動物細胞、より好ましくはヒト細胞にて発現されるＫＲＡＳの発癌性変異型である。よって好ましい実施形態において、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型は、細胞内の（または細胞で発現された）ＫＲＡＳの発癌性変異型である。好ましい実施形態において、前記細胞は癌細胞または癌細胞株である。こうした癌細胞または細胞株は、乳癌細胞もしくは乳癌細胞株（例、細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）、肺癌細胞もしくは肺癌細胞株（例、細胞株ＳＫ－ＬＵ１）、結腸癌細胞もしくは結腸癌細胞株（例、細胞株ＨＣＴ１１６または細胞株ＬＳ１７４Ｔ）、または膵臓癌細胞もしくは膵臓癌細胞株（例、ＭＩＡ－ＰＡ－ＣＡ－２）を含んでもよいが、それに限定されない。乳癌細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１は、ＫＲＡＳにおけるＧ１３Ｄ変異を有するヒト細胞株である。肺癌細胞株ＳＫ－ＬＵ１は、ＫＲＡＳにおけるＧ１２Ｄ変異を有するヒト細胞株である。結腸癌細胞株ＨＣＴ１１６は、ＫＲＡＳにおけるＧ１３Ｄ変異を有するヒト細胞株である。結腸癌細胞株ＬＳ１７４Ｔは、ＫＲＡＳにおけるＧ１２Ｄ変異を有するヒト細胞株である。結腸癌細胞株ＳＷ６２０は、ＫＲＡＳにおけるＧ１３Ｖ変異を有するヒト結腸直腸腺癌細胞株である。膵臓癌細胞株ＭＩＡ－ＰＡ－ＣＡ－２は、ＫＲＡＳにおけるＧ１２Ｃ変異を有するヒト細胞株である。本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型に対する本発明の抗体の結合は、任意の好適な手段によって評価されてもよく、当業者は好適な方法を熟知するだろう（例、ＥＬＩＳＡアッセイ、または免疫組織染色、またはたとえば本明細書の他の場所に記載されるものなどの機能アッセイの使用）。

本発明の単離ペプチドは、本発明によるＫＲＡＳの全長発癌性変異型（好ましくは、たとえばＳＥＱＩＤＮＯ８、９、１１、１２、１３、１４、１５、または１６に示されるものなどの、本発明によるＫＲＡＳのヒト発癌性変異型）の特定の領域またはエピトープに対応するか、または本質的に対応する。

ＳＥＱＩＤＮＯ：１７の単離ペプチドは、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３またはＳＥＱＩＤＮＯ：１５に示される本発明によるＫＲＡＳのヒト発癌性変異型の残基１０～２１に対応する。

ＳＥＱＩＤＮＯ：１８の単離ペプチドは、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４またはＳＥＱＩＤＮＯ：１６に示される本発明によるＫＲＡＳのヒト発癌性変異型の残基１０～２１に対応する。

ＳＥＱＩＤＮＯ：１の単離ペプチドは、ＳＥＱＩＤＮＯ：８またはＳＥＱＩＤＮＯ：１１に示される本発明によるＫＲＡＳのヒト発癌性変異型の残基１０～２１に対応する。

ＳＥＱＩＤＮＯ：２の単離ペプチドは、ＳＥＱＩＤＮＯ：９またはＳＥＱＩＤＮＯ：１２に示される本発明によるＫＲＡＳのヒト発癌性変異型の残基１０～２１に対応する。

ＳＥＱＩＤＮＯ：３およびＳＥＱＩＤＮＯ：４の単離ペプチドは、ＳＥＱＩＤＮＯ：８またはＳＥＱＩＤＮＯ：１１に示される本発明によるＫＲＡＳのヒト発癌性変異型の残基１０～２１に本質的に対応する。

ＳＥＱＩＤＮＯ：５およびＳＥＱＩＤＮＯ：６の単離ペプチドは、ＳＥＱＩＤＮＯ：９またはＳＥＱＩＤＮＯ：１２に示される本発明によるＫＲＡＳのヒト発癌性変異型の残基１０～２１に本質的に対応する。

単離ペプチド配列の文脈での「対応する」とは、単離ペプチドのアミノ配列（ＳＥＱＩＤＮＯ：）が、本発明によるＫＲＡＳのヒト発癌性変異型の記述される領域またはエピトープのアミノ酸配列と一致することを意味する。「本質的に対応する」とは、単離ペプチドのアミノ配列（ＳＥＱＩＤＮＯ：）が、本発明によるＫＲＡＳのヒト発癌性変異型の記述される領域またはエピトープの配列に基づく（またはそれに由来する、またはその改変形である）ものとして識別可能であることを意味する。たとえば、本発明によるＫＲＡＳのヒト発癌性変異型の記述される領域またはエピトープに「本質的に対応する」配列を有する単離ペプチドは典型的に、本発明によるＫＲＡＳのヒト発癌性変異型の記述される領域またはエピトープの配列に対応する（すなわち正確に対応する）単離ペプチドと比較して、１つ以上（例、１、２、または３）のアミノ酸の置換、付加、または欠失を有する。よって、本発明によるＫＲＡＳのヒト発癌性変異型の記述される領域またはエピトープに「本質的に対応する」配列を有する単離ペプチドは、本明細書の他の場所に定義される「実質的に相同の」単離ペプチド配列とみなされてもよい。

上記に示したとおり、本発明の抗体は、本発明によるＫＲＡＳの少なくとも１つの発癌性変異型に結合する。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３、１４、１５、または１６のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型に結合する。いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３または１５のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの少なくとも１つの発癌性変異型と、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４または１６のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの少なくとも１つの発癌性変異型とに結合する。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：８、９、１１、または１２のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型に結合する。いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：８または１１のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの少なくとも１つの発癌性変異型と、ＳＥＱＩＤＮＯ：９または１２のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの少なくとも１つの発癌性変異型とに結合する。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、位置１２における所与の発癌性変異残基（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３またはＳＥＱＩＤＮＯ：１５に示される可能な位置１２残基のうちの１つ、すなわちＤまたはＶまたはＣまたはＡまたはＳまたはＲ）を有するＫＲＡＳの発癌性変異型に結合し（および好ましくはその活性を阻害し）、加えて位置１２の代わりに位置１３における前記所与の（すなわち同じ）発癌性変異残基を有するＫＲＡＳの発癌性変異型にも結合する（すなわち、付加的に結合する、または付加的に結合し得る）。

たとえばいくつかの実施形態において、本発明の抗体は、位置１２にＤ（アスパラギン酸）残基を有するＫＲＡＳの発癌性変異型に結合し（および好ましくはその活性を阻害し）、加えて位置１２の代わりに位置１３にＤ（アスパラギン酸）残基を有するＫＲＡＳの発癌性変異型にも結合する（すなわち、付加的に結合する、または付加的に結合し得る）。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、位置１３における所与の発癌性変異残基（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４またはＳＥＱＩＤＮＯ：１６に示される可能な位置１３残基のうちの１つ、すなわちＤまたはＣ）を有するＫＲＡＳの発癌性変異型に結合し（および好ましくはその活性を阻害し）、加えて位置１３の代わりに位置１２における前記所与の（すなわち同じ）発癌性変異残基を有するＫＲＡＳの発癌性変異型にも結合する（すなわち、付加的に結合する、または付加的に結合し得る）。

理論に結び付けられることは望まないが、少なくともいくつかの場合には、位置１２および１３の間の距離の小さな差が与えられるときに、発癌性変異残基の性質（すなわち同一性）は、その正確な位置（すなわち、位置１２対１３）と同様に（またはそれよりも）重要であり得ると考えられる。よっていくつかの実施形態において、位置１２に所与の変異残基を有するＫＲＡＳの発癌性変異型に結合する（および好ましくはそれを阻害する）抗体は、位置１２の代わりに位置１３に同じ所与の変異残基を有するＫＲＡＳの１つ以上の他の発癌性変異型にも結合してもよい。同様にいくつかの実施形態において、位置１３に所与の変異残基を有するＫＲＡＳの発癌性変異型に結合する（および好ましくはそれを阻害する）抗体は、位置１３の代わりに位置１２に同じ所与の変異残基を有するＫＲＡＳの１つ以上の他の発癌性変異型にも結合してもよい。Ｇ１２ＤおよびＧ１３Ｄ変異ＫＲＡＳの場合、本発明の特定の抗体は負に帯電したアスパラギン酸（Ｄ）残基に結合するが、特定の抗体は、距離の差が小さいために位置１２または１３のいずれのＤ残基にも適合できると考えられる。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＫＲＡＳの発癌性変異型に結合し、および３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含む、たとえば単離抗体などの抗体を提供し、前記重鎖可変領域は、
（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１４８もしくは好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：１４９のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有する可変重鎖（ＶＨ：ｖａｒｉａｂｌｅｈｅａｖｙ）ＣＤＲ１と、
（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１５０もしくは好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：１５１のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ２と、
（ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３４もしくは５４もしくは７４のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ３とを含み；および／または（好ましくは「および」）
前記軽鎖可変領域は、
（ｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１５２もしくは好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：１５３のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有する可変軽鎖（ＶＬ：ｖａｒｉａｂｌｅｌｉｇｈｔ）ＣＤＲ１と、
（ｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１５４もしくは好ましくは１５５のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ２と、
（ｆ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３７、ＳＥＱＩＤＮＯ：５７、もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：７７のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ３とを含む。実質的に相同の配列については、本明細書の他の場所に記載されている。好ましくは、前記実質的に相同の配列は、所与のＣＤＲ配列と比較して１、２、または３のアミノ酸置換を含有する配列であるか、または前記実質的に相同の配列は、所与のＣＤＲ配列の保存的アミノ酸置換を含有する配列である。

本発明のいくつかの実施形態において、ＶＨＣＤＲ１は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４８（Ｘ₁ＹＸ₃ＭＨ）のアミノ酸配列を有するかまたは含む。これらの実施形態において、Ｘ₁またはＸ₃は任意のアミノ酸であり得る。好ましくはＸ₁残基はＤまたはＲである。よって、好ましいＶＨＣＤＲ１はＳＥＱＩＤＮＯ：１４９のアミノ酸配列を有するかまたは含む。たとえば、この実施形態の好ましいＶＨＣＤＲ１配列は、ＳＥＱＩＤＮＯ：３２、５２、または７２を有するかまたは含む。

本発明のいくつかの実施形態において、ＶＨＣＤＲ２は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５０（Ｘ₁ＩＸ₃ＰＮＸ₆ＧＧＸ₉Ｘ₁₀Ｘ₁₁ＮＸ₁₃Ｘ₁₄ＦＫＸ₁₇）のアミノ酸配列を有するかまたは含む。これらの実施形態において、Ｘ₁、Ｘ₃、Ｘ₆、Ｘ₉、Ｘ₁₀、Ｘ₁₁、Ｘ₁₃、Ｘ₁₄、およびＸ₁₇は任意のアミノ酸であり得る。これらのＸ残基のうちの好ましくは１つ以上、最も好ましくはすべてが以下の群より選択される。Ｘ₁はＹまたはＲ（好ましくはＹ）；Ｘ₃はＮまたはＤ（好ましくはＮ）；Ｘ₆はＮまたはＳ（好ましくはＮ）；Ｘ₉はＡまたはＴ；Ｘ₁₀はＳまたはＹまたはＴ；Ｘ₁₁はＹまたはＦ（好ましくはＹ）；Ｘ₁₃はＱまたはＥ（好ましくはＱ）；Ｘ₁₄はＫまたはＲ；Ｘ₁₇はＧまたはＳ（好ましくはＧ）。よって、好ましいＶＨＣＤＲ２はＳＥＱＩＤＮＯ：１５１のアミノ酸配列を有するかまたは含む。たとえば、この実施形態の好ましいＶＨＣＤＲ２配列は、ＳＥＱＩＤＮＯ：３３、５３、または７３を有するかまたは含む。

本発明のいくつかの実施形態において、ＶＬＣＤＲ１は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５２（ＳＡＸ₃ＳＳＶＸ₇ＹＭＨ）のアミノ酸配列を有するかまたは含む。これらの実施形態において、Ｘ₃およびＸ₇は任意のアミノ酸であり得る。好ましくは、これらのＸ残基の一方または両方が以下の群より選択される。Ｘ₃はＳまたはＧ；Ｘ₇はＳまたはＤ。よって、好ましいＶＬＣＤＲ１はＳＥＱＩＤＮＯ：１５３のアミノ酸配列を有するかまたは含む。たとえば、この実施形態の好ましいＶＬＣＤＲ１配列は、ＳＥＱＩＤＮＯ：３５、５５、または７５を有するかまたは含む。

本発明のいくつかの実施形態において、ＶＬＣＤＲ２は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５４（ＤＴＳＫＸ₅ＡＳ）のアミノ酸配列を有するかまたは含む。これらの実施形態において、Ｘ₅は任意のアミノ酸であり得る。好ましくは、Ｘ₅はＶまたはＬである。よって、好ましいＶＬＣＤＲ１はＳＥＱＩＤＮＯ：１５５のアミノ酸配列を有するかまたは含む。たとえば、この実施形態の好ましいＶＬＣＤＲ１配列は、ＳＥＱＩＤＮＯ：３６、５６、または７６を有するかまたは含む。

ＶＨＣＤＲ配列とＶＬＣＤＲ配列との特定の好ましい組み合わせを、以下の表Ｈの１～１５の番号の付いた行の各々に示している。

表Ｈに示される本発明の実施形態において、好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：１４８として示される共通配列は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４９として示される配列である。表Ｈに示される本発明の実施形態において、好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：１５０として示される共通配列は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５１として示される配列である。表Ｈに示される本発明の実施形態において、好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：１５２として示される共通配列は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５３として示される配列である。表Ｈに示される本発明の実施形態において、好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：１５４として示される共通配列は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５５として示される配列である。いくつかの実施形態において、表Ｈに述べられている特定の配列と実質的に相同の配列が、その特定の配列自身の代わりに使用されてもよい。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４８または好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：１４９のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５０または好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：１５１のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ２とを含み、および／または（好ましくは「および」）前記軽鎖可変領域は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５２または好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：１５３のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５４または好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：１５５のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ２とを含む。

いくつかのこうした実施形態において、好ましくは軽鎖可変領域はＳＥＱＩＤＮＯ：３４のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ３と、ＳＥＱＩＤＮＯ：３７のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ３とを含むか、または軽鎖可変領域はＳＥＱＩＤＮＯ：５４のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ３と、ＳＥＱＩＤＮＯ：５７のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ３とを含むか、または軽鎖可変領域はＳＥＱＩＤＮＯ：７４のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ３と、ＳＥＱＩＤＮＯ：７７のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、この段落に述べられている特定の配列と実質的に相同の配列が、その特定の配列自身の代わりに使用されてもよい。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＫＲＡＳの発癌性変異型に結合し、および３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含む、たとえば単離抗体などの抗体を提供し、前記重鎖可変領域は、
（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３２もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：５２のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１と、
（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３３もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：５３のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ２と、
（ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３４のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ３とを含み；および／または（好ましくは「および」）
前記軽鎖可変領域は、
（ｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３５もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：５５のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ１と、
（ｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３６もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：５６のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ２と、
（ｆ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３７もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：５７のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ３とを含む。実質的に相同の配列については、本明細書の他の場所に記載されている。好ましくは、前記実質的に相同の配列は、所与のＣＤＲ配列と比較して１、２、または３のアミノ酸置換を含有する配列であるか、または前記実質的に相同の配列は、所与のＣＤＲ配列の保存的アミノ酸置換を含有する配列である。

ＶＨＣＤＲ配列とＶＬＣＤＲ配列との特定の好ましい組み合わせを、以下の表Ｉの１～２の番号の付いた行の各々に示している。

いくつかの実施形態において、表Ｉに述べられている特定の配列と実質的に相同の配列が、その特定の配列自身の代わりに使用されてもよい。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含み、前記軽鎖可変領域は、ＳＥＱＩＤＮＯ：３４のアミノ酸配列（またはそれと実質的に相同の配列）を有するＶＨＣＤＲ３を含む。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＫＲＡＳの発癌性変異型に結合し、および３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含む、たとえば単離抗体などの抗体を提供し、前記重鎖可変領域は、
（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３２もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：７２のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１と、
（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３３もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：７３のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ２と、
（ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３４もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：７４のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ３とを含み；および／または（好ましくは「および」）
前記軽鎖可変領域は、
（ｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３５もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：７５のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ１と、
（ｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３６のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ２と、
（ｆ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３７もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：７７のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ３とを含む。実質的に相同の配列については、本明細書の他の場所に記載されている。好ましくは、前記実質的に相同の配列は、所与のＣＤＲ配列と比較して１、２、または３のアミノ酸置換を含有する配列であるか、または前記実質的に相同の配列は、所与のＣＤＲ配列の保存的アミノ酸置換を含有する配列である。

ＶＨＣＤＲ配列とＶＬＣＤＲ配列との特定の好ましい組み合わせを、以下の表Ｊの１～２の番号の付いた行の各々に示している。

いくつかの実施形態において、表Ｊに述べられている特定の配列と実質的に相同の配列が、その特定の配列自身の代わりに使用されてもよい。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含み、前記軽鎖可変領域は、ＳＥＱＩＤＮＯ：３６のアミノ酸配列（またはそれと実質的に相同の配列）を有するＶＬＣＤＲ２を含む。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＫＲＡＳの発癌性変異型に結合し、および３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含む、たとえば単離抗体などの抗体を提供し、前記重鎖可変領域は、
（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３２、ＳＥＱＩＤＮＯ：５２、もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：７２のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１と、
（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３３、ＳＥＱＩＤＮＯ：５３、もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：７３のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ２と、
（ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３４、ＳＥＱＩＤＮＯ：５４、もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：７４のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ３とを含み；および／または（好ましくは「および」）
前記軽鎖可変領域は、
（ｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３５、ＳＥＱＩＤＮＯ：５５、もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：７５のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ１と、
（ｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３６、ＳＥＱＩＤＮＯ：５６、もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：７６のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ２と、
（ｆ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３７のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ３とを含む。実質的に相同の配列については、本明細書の他の場所に記載されている。好ましくは、前記実質的に相同の配列は、所与のＣＤＲ配列と比較して１、２、または３のアミノ酸置換を含有する配列であるか、または前記実質的に相同の配列は、所与のＣＤＲ配列の保存的アミノ酸置換を含有する配列である。

ＶＨＣＤＲ配列とＶＬＣＤＲ配列との特定の好ましい組み合わせを、以下の表Ｋの１～３の番号の付いた行の各々に示している。

いくつかの実施形態において、表Ｋに述べられている特定の配列と実質的に相同の配列が、その特定の配列自身の代わりに使用されてもよい。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含み、前記軽鎖可変領域は、ＳＥＱＩＤＮＯ：３７のアミノ酸配列（またはそれと実質的に相同の配列）を有するＶＬＣＤＲ３を含む。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４８（または好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：１４９）のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ１を含む。いくつかのこうした実施形態において、好ましくはＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、ＶＬＣＤＲ３、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３（例、それらの組み合わせ）は、本明細書の他の場所に定義されるアミノ酸配列を有する。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５０（または好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：１５１）のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ２を含む。いくつかのこうした実施形態において、好ましくはＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、ＶＬＣＤＲ３、ＶＨＣＤＲ１、およびＶＨＣＤＲ３（例、それらの組み合わせ）は、本明細書の他の場所に定義されるアミノ酸配列を有する。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含み、前記軽鎖可変領域は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５２（または好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：１５３）のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ１を含む。いくつかのこうした実施形態において、好ましくはＶＬＣＤＲ２、ＶＬＣＤＲ３、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３（例、それらの組み合わせ）は、本明細書の他の場所に定義されるアミノ酸配列を有する。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含み、前記軽鎖可変領域は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５４（または好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：１５５）のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ２を含む。いくつかのこうした実施形態において、好ましくはＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ３、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３（例、それらの組み合わせ）は、本明細書の他の場所に定義されるアミノ酸配列を有する。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含み、前記軽鎖可変領域は、ＳＥＱＩＤＮＯ：３７（またはＳＥＱＩＤＮＯ：５７またはＳＥＱＩＤＮＯ：７７）のアミノ酸配列（またはそれと実質的に相同の配列）を有するＶＬＣＤＲ３を含む。いくつかのこうした実施形態において、好ましくはＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、ＶＨＣＤＲ１、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３（例、それらの組み合わせ）は、本明細書の他の場所に定義されるアミノ酸配列を有する。

いくつかの実施形態において、抗体は、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４８、好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：１４９のアミノ酸配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１、および／またはＳＥＱＩＤＮＯ：１５０、好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：１５１のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ２を含み、および／または前記軽鎖可変領域は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５２、好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：１５３のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ１、および／またはＳＥＱＩＤＮＯ：１５４、好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：１５５のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ２を含む。いくつかのこうした実施形態において、抗体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：３７のアミノ酸配列（またはそれと実質的に相同の配列）を有するＶＬＣＤＲ３をさらに含み、および／またはＳＥＱＩＤＮＯ：３４もしくは７４のアミノ酸配列（またはそれと実質的に相同の配列）を有するＶＨＣＤＲ３をさらに含む。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＫＲＡＳの発癌性変異型に結合し、および３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含む、たとえば単離抗体などの抗体を提供し、前記重鎖可変領域は、
（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１５６もしくは好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：１５７のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１と、
（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１５８もしくは好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：１５９のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ２と、
（ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ：９４もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：１１４もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：１３４のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ３とを含み；および／または（好ましくは「および」）
前記軽鎖可変領域は、
（ｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ：９５もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：１１５もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：１３５のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有する可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１と、
（ｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ：９６もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：１１６もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：１３６のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ２と、
（ｆ）ＳＥＱＩＤＮＯ：９７、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１７、もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：１３７のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ３とを含む。実質的に相同の配列については、本明細書の他の場所に記載されている。好ましくは、前記実質的に相同の配列は、所与のＣＤＲ配列と比較して１、２、または３のアミノ酸置換を含有する配列であるか、または前記実質的に相同の配列は、所与のＣＤＲ配列の保存的アミノ酸置換を含有する配列である。

本発明のいくつかの実施形態において、ＶＨＣＤＲ１は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５６（ＴＦＧＸ₄ＧＶＸ₇）のアミノ酸配列を有するかまたは含む。これらの実施形態において、Ｘ₄またはＸ₇は任意のアミノ酸であり得る。好ましくはＸ₄残基はＶまたはＭである。好ましくはＸ₇残基はＡまたはＧである。よって、好ましいＶＨＣＤＲ１はＳＥＱＩＤＮＯ：１５７のアミノ酸配列を有するかまたは含む。たとえば、この実施形態の好ましいＶＨＣＤＲ１配列は、ＳＥＱＩＤＮＯ：９２、１１２、または１３２を有するかまたは含む。

本発明のいくつかの実施形態において、ＶＨＣＤＲ２は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５８（ＨＩＷＷＤＤＤＫＮＹＸ₁₁ＰＡＬＫＳ）のアミノ酸配列を有するかまたは含む。これらの実施形態において、Ｘ₁₁は任意のアミノ酸であり得る。好ましくは、Ｘ₁₁はＤまたはＦである。よって、好ましいＶＨＣＤＲ２はＳＥＱＩＤＮＯ：１５９のアミノ酸配列を有するかまたは含む。たとえば、この実施形態の好ましいＶＨＣＤＲ２配列は、ＳＥＱＩＤＮＯ：９３、１１３、または１３３を有するかまたは含む。

ＶＨＣＤＲ配列とＶＬＣＤＲ配列との特定の好ましい組み合わせを、以下の表Ｍの１～９の番号の付いた行の各々に示している。

表Ｍに示される本発明の実施形態において、好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：１５６として示される共通配列は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５７として示される配列である。表Ｍに示される本発明の実施形態において、好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：１５８として示される共通配列は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５９として示される配列である。いくつかの実施形態において、表Ｍに述べられている特定の配列と実質的に相同の配列が、その特定の配列自身の代わりに使用されてもよい。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５６または好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：１５７のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５８または好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：１５９のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ２とを含む。いくつかのこうした実施形態において、好ましくは重鎖可変領域はＳＥＱＩＤＮＯ：９４のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ３を含み、および／または（好ましくは「および」）軽鎖可変領域はＳＥＱＩＤＮＯ：９５のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：９６のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：９６のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ３とを含むか；または重鎖可変領域はＳＥＱＩＤＮＯ：１１４のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ３を含み、および／または（好ましくは「および」）軽鎖可変領域はＳＥＱＩＤＮＯ：１１５のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１６のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１７のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ３とを含むか；または重鎖可変領域はＳＥＱＩＤＮＯ：１３４のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ３を含み、および／または（好ましくは「および」）軽鎖可変領域はＳＥＱＩＤＮＯ：１３５のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３６のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３７のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ３とを含む。いくつかの実施形態において、この段落に述べられている特定の配列と実質的に相同の配列が、その特定の配列自身の代わりに使用されてもよい。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＫＲＡＳの発癌性変異型に結合し、および３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含む、たとえば単離抗体などの抗体を提供し、前記重鎖可変領域は、
（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１１２のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１と、
（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１１３のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ２と、
（ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１１４のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ３とを含み；および／または（好ましくは「および」）
前記軽鎖可変領域は、
（ｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１１５もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：１３５のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ１と、
（ｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１１６もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：１３６のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ２と、
（ｆ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１１７もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：１３７のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ３とを含む。実質的に相同の配列については、本明細書の他の場所に記載されている。好ましくは、前記実質的に相同の配列は、所与のＣＤＲ配列と比較して１、２、または３のアミノ酸置換を含有する配列であるか、または前記実質的に相同の配列は、所与のＣＤＲ配列の保存的アミノ酸置換を含有する配列である。

ＶＨＣＤＲ配列とＶＬＣＤＲ配列との特定の好ましい組み合わせを、以下の表Ｎの１～２の番号の付いた行の各々に示している。

いくつかの実施形態において、表Ｎに述べられている特定の配列と実質的に相同の配列が、その特定の配列自身の代わりに使用されてもよい。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１２のアミノ酸配列（またはそれと実質的に相同の配列）を有するＶＨＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１３のアミノ酸配列（またはそれと実質的に相同の配列）を有するＶＨＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１４のアミノ酸配列（またはそれと実質的に相同の配列）を有するＶＨＣＤＲ３とを含む。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＫＲＡＳの発癌性変異型に結合し、および３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含む、たとえば単離抗体などの抗体を提供し、前記重鎖可変領域は、
（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ：９２もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：１１２のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１と、
（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ：９３もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：１１３のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ２と、
（ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ：９４もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：１１４のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ３とを含み；および／または（好ましくは「および」）
前記軽鎖可変領域は、
（ｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ：９５もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：１１５のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ１と、
（ｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ：９６のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ２と、
（ｆ）ＳＥＱＩＤＮＯ：９７もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：１１７のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ３とを含む。実質的に相同の配列については、本明細書の他の場所に記載されている。好ましくは、前記実質的に相同の配列は、所与のＣＤＲ配列と比較して１、２、または３のアミノ酸置換を含有する配列であるか、または前記実質的に相同の配列は、所与のＣＤＲ配列の保存的アミノ酸置換を含有する配列である。

ＶＨＣＤＲ配列とＶＬＣＤＲ配列との特定の好ましい組み合わせを、以下の表Ｏの１～２の番号の付いた行の各々に示している。

いくつかの実施形態において、表Ｏに述べられている特定の配列と実質的に相同の配列が、その特定の配列自身の代わりに使用されてもよい。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含み、前記軽鎖可変領域は、ＳＥＱＩＤＮＯ：９６のアミノ酸配列（またはそれと実質的に相同の配列）を有するＶＬＣＤＲ２を含む。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５６（または好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：１５７）のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ１を含む。いくつかのこうした実施形態において、好ましくはＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、ＶＬＣＤＲ３、ＶＨＣＤＲ２、およびＶＨＣＤＲ３（例、それらの組み合わせ）は、本明細書の他の場所に定義されるアミノ酸配列を有する。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５８（または好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：１５９）のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ２を含む。いくつかのこうした実施形態において、好ましくはＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、ＶＬＣＤＲ３、ＶＨＣＤＲ１、およびＶＨＣＤＲ３（例、それらの組み合わせ）は、本明細書の他の場所に定義されるアミノ酸配列を有する。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５６（好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：１５７）のアミノ酸配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１、および／またはＳＥＱＩＤＮＯ：１５８（好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：１５９）のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ２を含む。いくつかのこうした実施形態において、好ましくはＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、ＶＬＣＤＲ３、およびＶＨＣＤＲ３（例、それらの組み合わせ）は、本明細書の他の場所に定義されるアミノ酸配列を有する。たとえば、いくつかのこうした実施形態において、ＶＬＣＤＲ２はＳＥＱＩＤＮＯ：９６のアミノ酸配列（またはそれと実質的に相同の配列）を有してもよい。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＫＲＡＳの発癌性変異型に結合し、および３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含む、たとえば単離抗体などの抗体を提供し、前記重鎖可変領域は、
（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３２のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１と、
（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３３のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ２と、
（ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３４のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ３とを含み；および／または（好ましくは「および」）
前記軽鎖可変領域は、
（ｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３５のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有する可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１と、
（ｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３６のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ２と、
（ｆ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３７のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ３とを含む。実質的に相同の配列については、本明細書の他の場所に記載されている。好ましくは、前記実質的に相同の配列は、所与のＣＤＲ配列と比較して１、２、または３のアミノ酸置換を含有する配列であるか、または前記実質的に相同の配列は、所与のＣＤＲ配列の保存的アミノ酸置換を含有する配列である。

いくつかの実施形態において、抗体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：３２のＶＨＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：３３のＶＨＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：３４のＶＨＣＤＲ３とを含む少なくとも１つの重鎖可変領域、および／または（好ましくは「および」）ＳＥＱＩＤＮＯ：３５のＶＬＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：３６のＶＬＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：３７のＶＬＣＤＲ３とを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域を含む。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＫＲＡＳの発癌性変異型に結合し、および３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含む、たとえば単離抗体などの抗体を提供し、前記重鎖可変領域は、
（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ：５２のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１と、
（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ：５３のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ２と、
（ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ：５４のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ３とを含み；および／または（好ましくは「および」）
前記軽鎖可変領域は、
（ｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ：５５のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有する可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１と、
（ｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ：５６のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ２と、
（ｆ）ＳＥＱＩＤＮＯ：５７のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ３とを含む。実質的に相同の配列については、本明細書の他の場所に記載されている。好ましくは、前記実質的に相同の配列は、所与のＣＤＲ配列と比較して１、２、または３のアミノ酸置換を含有する配列であるか、または前記実質的に相同の配列は、所与のＣＤＲ配列の保存的アミノ酸置換を含有する配列である。

いくつかの実施形態において、抗体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：５２のＶＨＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：５３のＶＨＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：５４のＶＨＣＤＲ３とを含む少なくとも１つの重鎖可変領域、および／または（好ましくは「および」）ＳＥＱＩＤＮＯ：５５のＶＬＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：５６のＶＬＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：５７のＶＬＣＤＲ３とを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域を含む。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＫＲＡＳの発癌性変異型に結合し、および３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含む、たとえば単離抗体などの抗体を提供し、前記重鎖可変領域は、
（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ：７２のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１と、
（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ：７３のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ２と、
（ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ：７４のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ３とを含み；および／または（好ましくは「および」）
前記軽鎖可変領域は、
（ｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ：７５のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有する可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１と、
（ｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ：７６のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ２と、
（ｆ）ＳＥＱＩＤＮＯ：７７のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ３とを含む。実質的に相同の配列については、本明細書の他の場所に記載されている。好ましくは、前記実質的に相同の配列は、所与のＣＤＲ配列と比較して１、２、または３のアミノ酸置換を含有する配列であるか、または前記実質的に相同の配列は、所与のＣＤＲ配列の保存的アミノ酸置換を含有する配列である。

いくつかの実施形態において、抗体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：７２のＶＨＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：７３のＶＨＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：７４のＶＨＣＤＲ３とを含む少なくとも１つの重鎖可変領域、および／または（好ましくは「および」）ＳＥＱＩＤＮＯ：７５のＶＬＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：７６のＶＬＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：７７のＶＬＣＤＲ３とを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域を含む。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＫＲＡＳの発癌性変異型に結合し、および３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含む、たとえば単離抗体などの抗体を提供し、前記重鎖可変領域は、
（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ：９２のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１と、
（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ：９３のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ２と、
（ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ：９４のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ３とを含み；および／または（好ましくは「および」）
前記軽鎖可変領域は、
（ｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ：９５のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有する可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１と、
（ｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ：９６のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ２と、
（ｆ）ＳＥＱＩＤＮＯ：９７のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ３とを含む。実質的に相同の配列については、本明細書の他の場所に記載されている。好ましくは、前記実質的に相同の配列は、所与のＣＤＲ配列と比較して１、２、または３のアミノ酸置換を含有する配列であるか、または前記実質的に相同の配列は、所与のＣＤＲ配列の保存的アミノ酸置換を含有する配列である。

いくつかの実施形態において、抗体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：９２のＶＨＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：９３のＶＨＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：９４のＶＨＣＤＲ３とを含む少なくとも１つの重鎖可変領域、および／または（好ましくは「および」）ＳＥＱＩＤＮＯ：９５のＶＬＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：９６のＶＬＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：９７のＶＬＣＤＲ３とを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域を含む。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＫＲＡＳの発癌性変異型に結合し、および３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含む、たとえば単離抗体などの抗体を提供し、前記重鎖可変領域は、
（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１１２のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１と、
（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１１３のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ２と、
（ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１１４のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ３とを含み；および／または（好ましくは「および」）
前記軽鎖可変領域は、
（ｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１１５のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有する可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１と、
（ｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１１６のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ２と、
（ｆ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１１７のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ３とを含む。実質的に相同の配列については、本明細書の他の場所に記載されている。好ましくは、前記実質的に相同の配列は、所与のＣＤＲ配列と比較して１、２、または３のアミノ酸置換を含有する配列であるか、または前記実質的に相同の配列は、所与のＣＤＲ配列の保存的アミノ酸置換を含有する配列である。

いくつかの実施形態において、抗体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１２のＶＨＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１３のＶＨＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１４のＶＨＣＤＲ３とを含む少なくとも１つの重鎖可変領域、および／または（好ましくは「および」）ＳＥＱＩＤＮＯ：１１５のＶＬＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１６のＶＬＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１７のＶＬＣＤＲ３とを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域を含む。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＫＲＡＳの発癌性変異型に結合し、および３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含む、たとえば単離抗体などの抗体を提供し、前記重鎖可変領域は、
（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１３２のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１と、
（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１３３のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ２と、
（ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１３４のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ３とを含み；および／または（好ましくは「および」）
前記軽鎖可変領域は、
（ｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１３５のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有する可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１と、
（ｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１３６のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ２と、
（ｆ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１３７のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ３とを含む。実質的に相同の配列については、本明細書の他の場所に記載されている。好ましくは、前記実質的に相同の配列は、所与のＣＤＲ配列と比較して１、２、または３のアミノ酸置換を含有する配列であるか、または前記実質的に相同の配列は、所与のＣＤＲ配列の保存的アミノ酸置換を含有する配列である。

いくつかの実施形態において、抗体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３２のＶＨＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３３のＶＨＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３４のＶＨＣＤＲ３とを含む少なくとも１つの重鎖可変領域、および／または（好ましくは「および」）ＳＥＱＩＤＮＯ：１３５のＶＬＣＤＲ１と、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３６のＶＬＣＤＲ２と、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３７のＶＬＣＤＲ３とを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域を含む。

一実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：３０のアミノ酸配列またはそれと実質的に相同の配列（例、それに対する少なくとも８０％の配列同一性、たとえばそれに対する少なくとも８５％、９０％、９５％、または９８％の配列同一性を有する配列）を有するＶＨドメイン、および／または（好ましくは「および」）ＳＥＱＩＤＮＯ：３１のアミノ酸配列またはそれと実質的に相同の配列（例、それに対する少なくとも８０％の配列同一性、たとえばそれに対する少なくとも８５％、９０％、９５％、または９８％の配列同一性を有する配列）を有するＶＬドメインを含む抗体を提供する。好ましい実施形態において、本発明は抗体を提供し、ここで軽鎖可変領域はＳＥＱＩＤＮＯ：３１のアミノ酸配列を有し、および／または（好ましくは「および」）重鎖可変領域はＳＥＱＩＤＮＯ：３０のアミノ酸配列を有する。

一実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：５０のアミノ酸配列またはそれと実質的に相同の配列（例、それに対する少なくとも８０％の配列同一性、たとえばそれに対する少なくとも８５％、９０％、９５％、または９８％の配列同一性を有する配列）を有するＶＨドメイン、および／または（好ましくは「および」）ＳＥＱＩＤＮＯ：５１のアミノ酸配列またはそれと実質的に相同の配列（例、それに対する少なくとも８０％の配列同一性、たとえばそれに対する少なくとも８５％、９０％、９５％、または９８％の配列同一性を有する配列）を有するＶＬドメインを含む抗体を提供する。好ましい実施形態において、本発明は抗体を提供し、ここで軽鎖可変領域はＳＥＱＩＤＮＯ：５１のアミノ酸配列を有し、および／または（好ましくは「および」）重鎖可変領域はＳＥＱＩＤＮＯ：５０のアミノ酸配列を有する。

一実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：７０のアミノ酸配列またはそれと実質的に相同の配列（例、それに対する少なくとも８０％の配列同一性、たとえばそれに対する少なくとも８５％、９０％、９５％、または９８％の配列同一性を有する配列）を有するＶＨドメイン、および／または（好ましくは「および」）ＳＥＱＩＤＮＯ：７１のアミノ酸配列またはそれと実質的に相同の配列（例、それに対する少なくとも８０％の配列同一性、たとえばそれに対する少なくとも８５％、９０％、９５％、または９８％の配列同一性を有する配列）を有するＶＬドメインを含む抗体を提供する。好ましい実施形態において、本発明は抗体を提供し、ここで軽鎖可変領域はＳＥＱＩＤＮＯ：７１のアミノ酸配列を有し、および／または（好ましくは「および」）重鎖可変領域はＳＥＱＩＤＮＯ：７０のアミノ酸配列を有する。

一実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：９０のアミノ酸配列またはそれと実質的に相同の配列（例、それに対する少なくとも８０％の配列同一性、たとえばそれに対する少なくとも８５％、９０％、９５％、または９８％の配列同一性を有する配列）を有するＶＨドメイン、および／または（好ましくは「および」）ＳＥＱＩＤＮＯ：９１のアミノ酸配列またはそれと実質的に相同の配列（例、それに対する少なくとも８０％の配列同一性、たとえばそれに対する少なくとも８５％、９０％、９５％、または９８％の配列同一性を有する配列）を有するＶＬドメインを含む抗体を提供する。好ましい実施形態において、本発明は抗体を提供し、ここで軽鎖可変領域はＳＥＱＩＤＮＯ：９１のアミノ酸配列を有し、および／または（好ましくは「および」）重鎖可変領域はＳＥＱＩＤＮＯ：９０のアミノ酸配列を有する。

一実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１０のアミノ酸配列またはそれと実質的に相同の配列（例、それに対する少なくとも８０％の配列同一性、たとえばそれに対する少なくとも８５％、９０％、９５％、または９８％の配列同一性を有する配列）を有するＶＨドメイン、および／または（好ましくは「および」）ＳＥＱＩＤＮＯ：１１１のアミノ酸配列またはそれと実質的に相同の配列（例、それに対する少なくとも８０％の配列同一性、たとえばそれに対する少なくとも８５％、９０％、９５％、または９８％の配列同一性を有する配列）を有するＶＬドメインを含む抗体を提供する。好ましい実施形態において、本発明は抗体を提供し、ここで軽鎖可変領域はＳＥＱＩＤＮＯ：１１１のアミノ酸配列を有し、および／または（好ましくは「および」）重鎖可変領域はＳＥＱＩＤＮＯ：１１０のアミノ酸配列を有する。

一実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３０のアミノ酸配列またはそれと実質的に相同の配列（例、それに対する少なくとも８０％の配列同一性、たとえばそれに対する少なくとも８５％、９０％、９５％、または９８％の配列同一性を有する配列）を有するＶＨドメイン、および／または（好ましくは「および」）ＳＥＱＩＤＮＯ：１３１のアミノ酸配列またはそれと実質的に相同の配列（例、それに対する少なくとも８０％の配列同一性、たとえばそれに対する少なくとも８５％、９０％、９５％、または９８％の配列同一性を有する配列）を有するＶＬドメインを含む抗体を提供する。好ましい実施形態において、本発明は抗体を提供し、ここで軽鎖可変領域はＳＥＱＩＤＮＯ：１３１のアミノ酸配列を有し、および／または（好ましくは「および」）重鎖可変領域はＳＥＱＩＤＮＯ：１３０のアミノ酸配列を有する。

他の好ましい実施形態は、本明細書に記載される抗体のＩｇ（例、ＩｇＧ）形態、たとえば１１Ｄ６－１、４Ｂ８－１、７Ｄ１１－１、７Ｇ２－１、６Ｂ２－１－１または６Ｂ２－１－２抗体（またはそれに基づく抗体、たとえば実質的に相同の抗体など）のＩｇＧ形態など、好ましくは全長ＩｇＧ形態である。いくつかの実施形態において、ＩｇＧはＩｇＧ₁またはＩｇＧ₂である。よっていくつかの実施形態において、抗体は、本明細書に記載されるＣＤＲ配列および／または重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域を含むＩｇ抗体である。全ＩｇＧ抗体は典型的に、２つの実質的に同一の重鎖および２つの実質的に同一の軽鎖を含むこととなる。しかし、本明細書の他の場所に記載されるとおり、場合によっては抗体（例、全ＩｇＧ抗体）が２つの実質的に同一の重鎖と、２つの非同一の（すなわち、２つの異なる軽鎖とを含むことがある。

いくつかの実施形態において、本明細書の表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、およびＦに示される１１Ｄ６－１、４Ｂ８－１、７Ｄ１１－１、７Ｇ２－１、６Ｂ２－１－１、または６Ｂ２－１－２抗体配列に基づく抗体が好ましい。

本発明の抗体のいくつかの例は、モノクローナル抗体１１Ｄ６－１、４Ｂ８－１、７Ｄ１１－１、７Ｇ２－１、６Ｂ２－１－１、または６Ｂ２－１－２であり、その配列は本明細書の表Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、およびＦに示されている。モノクローナル抗体１１Ｄ６－１、４Ｂ８－１、７Ｄ１１－１、７Ｇ２－１、６Ｂ２－１－１、または６Ｂ２－１－２は、ＳＥＱＩＤＮＯ：５のペプチドを免疫原ペプチドとして、ハイブリドーマ技術を用いて同定された。ＣＤＲドメイン、ＶＨおよびＶＬドメインは、本明細書の表Ａ～Ｆに示されている。これらのＣＤＲドメインまたはＶＨおよびＶＬドメイン（またはそれと実質的に相同の配列）を含む抗体は、本発明の好ましい態様である。

好ましい実施形態において、１１Ｄ６－１、４Ｂ８－１、７Ｄ１１－１、７Ｇ２－１、６Ｂ２－１－１、または６Ｂ２－１－２抗体に基づく抗体（例、本明細書の表Ａ～Ｆに示されるこれらの抗体のＣＤＲドメインもしくはＶＨおよびＶＬドメイン、またはそれらと実質的に相同のＣＤＲドメインもしくはＶＨおよびＶＬドメインを含む抗体）は、ＳＥＱＩＤＮＯ：５のアミノ酸配列を含む（またはそれからなる）ペプチド（例、単離ペプチド）（またはこうしたペプチドを含むコンジュゲート）に結合する（または結合できる）。

好ましい実施形態において、１１Ｄ６－１、４Ｂ８－１、７Ｄ１１－１、７Ｇ２－１、６Ｂ２－１－１、または６Ｂ２－１－２抗体に基づく抗体（例、本明細書の表Ａ～Ｆに示されるこれらの抗体のＣＤＲドメインもしくはＶＨおよびＶＬドメイン、またはそれらと実質的に相同のＣＤＲドメインもしくはＶＨおよびＶＬドメインを含む抗体）は、Ｇ１３Ｄ変異を含むＫＲＡＳの発癌性変異型、たとえばＳＥＱＩＤＮＯ：９またはＳＥＱＩＤＮＯ：１２のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型などに結合し（または結合でき）、それを好ましくは阻害する（または好ましくは阻害できる）。

実質的に相同の配列の特定の例は、開示されるアミノ酸配列に対する少なくとも６５％の同一性を有する配列である。特定の実施形態において、本発明の抗体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：３１、５１、７１、９１、１１１、もしくは１３１のアミノ酸配列に対する少なくとも約６５％、７０％、もしくは７５％、より好ましくは少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約８５％、より好ましくは少なくとも約９０％もしくは９５％、および最も好ましくは少なくとも約９７％、９８％、もしくは９９％のアミノ酸配列同一性のアミノ酸配列領域を含む少なくとも１つの軽鎖可変領域；ならびに／またはＳＥＱＩＤＮＯ：３０、５０、７０、９０、１１０、もしくは１３０のアミノ酸配列に対する少なくとも約６５％、７０％、もしくは７５％、より好ましくは少なくとも約８０％、より好ましくは少なくとも約８５％、より好ましくは少なくとも約９０％もしくは９５％、および最も好ましくは少なくとも約９７％、９８％、もしくは９９％のアミノ酸配列同一性のアミノ酸配列領域を含む少なくとも１つの重鎖可変領域を含む。

実質的に相同の配列の他の好ましい例は、開示されるアミノ酸配列の保存的アミノ酸置換を含有する配列である。

実質的に相同の配列の他の好ましい例は、開示されるＣＤＲ領域の１つ以上に１、２、または３、好ましくは１または２（より好ましくは１）の変更されたアミノ酸を含有する配列である。こうした変更は、保存的もしくは非保存的アミノ酸置換、またはその混合であってもよい。

いくつかのこうした実施形態において、好ましい変更は保存的アミノ酸置換である。

すべての実施形態において、実質的に相同の配列を含む抗体は、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型に結合する能力を保持する。好ましくは、実質的に相同の配列を含む抗体は、１１Ｄ６－１、４Ｂ８－１、７Ｄ１１－１、７Ｇ２－１、６Ｂ２－１－１、または６Ｂ２－１－２抗体の（例、それに関連して記載される）特性の１つ以上（好ましくはすべて）を保持する。

好ましくは、抗体１１Ｄ６－１、４Ｂ８－１、７Ｄ１１－１、７Ｇ２－１、６Ｂ２－１－１、もしくは６Ｂ２－１－２、またはそれに基づく抗体は、ＫＲＡＳのＧ１３Ｄおよび／またはＧ１２Ｄ発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：８、９、１１、または１２に示されるＫＲＡＳの発癌性変異型の１つ以上）に結合する（および好ましくはその活性を阻害する）。結合および／または阻害は、本明細書の他の場所に記載されるとおりであってもよい（例、好ましい阻害活性および／または好ましい阻害のレベル（もしくは量もしくは程度）など）。

典型的に、および好ましくは、１１Ｄ６－１、４Ｂ８－１、７Ｄ１１－１、７Ｇ２－１、６Ｂ２－１－１、もしくは６Ｂ２－１－２抗体（またはそれに基づく抗体）は、ＳＥＱＩＤＮＯ：５および／またはＳＥＱＩＤＮＯ：２の単離ペプチドに結合する。こうした結合は、任意の好適な方法（例、ＥＬＩＳＡ）によって評価されてもよい。

本発明による実質的に相同のアミノ酸配列のさらなる例は、本発明の他の場所に記載されている。

本発明の抗体のＣＤＲは、好ましくは、たとえば自然発生する抗体および／または有効な組み換え抗体に見出されるものなどの適切なフレームワーク領域によって分離される。よって、本発明のＶ_H、Ｖ_Lおよび個々のＣＤＲ配列は、好ましくは抗原結合を可能にするための適切なフレームワークもしくはスキャフォールド内に提供されるか、またはそれに組み込まれる。こうしたフレームワーク配列または領域は、適切なスキャフォールドを形成するために、自然発生するフレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、および／またはＦＲ４に適切に対応してもよいし、たとえばさまざまな自然発生するフレームワーク領域を比較することによって同定された共通フレームワーク領域に対応してもよい。代替的に、たとえばＴ細胞受容体フレームワークなどの非抗体スキャフォールドまたはフレームワークが用いられ得る。

フレームワーク領域に用いられ得る適切な配列は、当該技術分野において周知であり、および十分に文書で立証されており、これらのうちのいずれが使用されてもよい。フレームワーク領域に対する好ましい配列は、本発明のＶ_Hおよび／またはＶ_Lドメインを構成するフレームワーク領域のうちの１つ以上、すなわち本明細書の表Ａ～Ｆに開示される１１Ｄ６－１、４Ｂ８－１、７Ｄ１１－１、７Ｇ２－１、６Ｂ２－１－１、または６Ｂ２－１－２抗体のフレームワーク領域、またはそれと実質的に相同のフレームワーク領域、特に抗原特異性の維持を可能にするフレームワーク領域、たとえば実質的に同じ抗体もしくは同じ３Ｄ構造の抗体をもたらすフレームワーク領域などのうちの１つ以上である。

特定の好ましい実施形態において、可変軽鎖（ＳＥＱＩＤＮＯ：４２、４３、４４、および４５）ならびに／もしくは可変重鎖（ＳＥＱＩＤＮＯ：３８、３９、４０、および４１）のフレームワーク領域（ＦＲ）の４つすべてが適切に、またはそれと実質的に相同のＦＲ領域が本発明の抗体に見出される。

他の好ましい実施形態において、可変軽鎖（ＳＥＱＩＤＮＯ：６２、６３、６４、および６５）ならびに／もしくは可変重鎖（ＳＥＱＩＤＮＯ：５８、５９、６０、および６１）のフレームワーク領域（ＦＲ）の４つすべてが適切に、またはそれと実質的に相同のＦＲ領域が本発明の抗体に見出される。

他の好ましい実施形態において、可変軽鎖（ＳＥＱＩＤＮＯ：８２、８３、８４、および８５）ならびに／もしくは可変重鎖（ＳＥＱＩＤＮＯ：７８、７９、８０、および８１）のフレームワーク領域（ＦＲ）の４つすべてが適切に、またはそれと実質的に相同のＦＲ領域が本発明の抗体に見出される。

他の好ましい実施形態において、可変軽鎖（ＳＥＱＩＤＮＯ：１０２、１０３、１０４、および１０５）ならびに／もしくは可変重鎖（ＳＥＱＩＤＮＯ：９８、９９、１００、および１０１）のフレームワーク領域（ＦＲ）の４つすべてが適切に、またはそれと実質的に相同のＦＲ領域が本発明の抗体に見出される。

他の好ましい実施形態において、可変軽鎖（ＳＥＱＩＤＮＯ：１２２、１２３、１２４、および１２５）ならびに／もしくは可変重鎖（ＳＥＱＩＤＮＯ：１１８、１１９、１２０、および１２１）のフレームワーク領域（ＦＲ）の４つすべてが適切に、またはそれと実質的に相同のＦＲ領域が本発明の抗体に見出される。

他の好ましい実施形態において、可変軽鎖（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４２、１４３、１４４、および１４５）ならびに／もしくは可変重鎖（ＳＥＱＩＤＮＯ：１３８、１３９、１４０、および１４１）のフレームワーク領域（ＦＲ）の４つすべてが適切に、またはそれと実質的に相同のＦＲ領域が本発明の抗体に見出される。

いくつかの実施形態において、本発明のＶＨドメインおよび／またはＶＬドメインは、付加的に自身のＮ末端部に（例、そのＶＨまたはＶＬドメインに関してすぐＮ末端に位置する）シグナルペプチドを含んでもよい。しかし、こうしたシグナルペプチドは典型的に切断除去されるため、典型的に抗体自体には存在しない（例、成熟した抗体または単離抗体産物には存在しない）。

いくつかの実施形態において、ＳＥＱＩＤＮＯ：３０（またはそれと実質的に相同の配列）を含むＶＨドメインは、自身のＮ末端部にＳＥＱＩＤＮＯ：４６のシグナルペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態において、ＳＥＱＩＤＮＯ：３１（またはそれと実質的に相同の配列）を含むＶＬドメインは、自身のＮ末端部にＳＥＱＩＤＮＯ：４７のシグナルペプチドをさらに含む。

いくつかの実施形態において、ＳＥＱＩＤＮＯ：５０（またはそれと実質的に相同の配列）を含むＶＨドメインは、自身のＮ末端部にＳＥＱＩＤＮＯ：６６のシグナルペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態において、ＳＥＱＩＤＮＯ：５１（またはそれと実質的に相同の配列）を含むＶＬドメインは、自身のＮ末端部にＳＥＱＩＤＮＯ：６７のシグナルペプチドをさらに含む。

いくつかの実施形態において、ＳＥＱＩＤＮＯ：７０（またはそれと実質的に相同の配列）を含むＶＨドメインは、自身のＮ末端部にＳＥＱＩＤＮＯ：８６のシグナルペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態において、ＳＥＱＩＤＮＯ：７１（またはそれと実質的に相同の配列）を含むＶＬドメインは、自身のＮ末端部にＳＥＱＩＤＮＯ：８７のシグナルペプチドをさらに含む。

いくつかの実施形態において、ＳＥＱＩＤＮＯ：９０（またはそれと実質的に相同の配列）を含むＶＨドメインは、自身のＮ末端部にＳＥＱＩＤＮＯ：１０６のシグナルペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態において、ＳＥＱＩＤＮＯ：９１（またはそれと実質的に相同の配列）を含むＶＬドメインは、自身のＮ末端部にＳＥＱＩＤＮＯ：１０７のシグナルペプチドをさらに含む。

いくつかの実施形態において、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１０（またはそれと実質的に相同の配列）を含むＶＨドメインは、自身のＮ末端部にＳＥＱＩＤＮＯ：１２６のシグナルペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態において、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１１（またはそれと実質的に相同の配列）を含むＶＬドメインは、自身のＮ末端部にＳＥＱＩＤＮＯ：１２７のシグナルペプチドをさらに含む。

いくつかの実施形態において、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３０（またはそれと実質的に相同の配列）を含むＶＨドメインは、自身のＮ末端部にＳＥＱＩＤＮＯ：１４６のシグナルペプチドをさらに含む。いくつかの実施形態において、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３１（またはそれと実質的に相同の配列）を含むＶＬドメインは、自身のＮ末端部にＳＥＱＩＤＮＯ：１４７のシグナルペプチドをさらに含む。

本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型に対する本発明の抗体の結合は、任意の好適な手段によって評価されてもよく、当業者は好適な方法を熟知するだろう（例、ＥＬＩＳＡアッセイ、またはたとえば本明細書の他の場所に記載されるとおりの、たとえばＧＴＰアーゼアッセイもしくはホスホ－ＥＲＫ阻害アッセイもしくはアポトーシスアッセイもしくはネクローシスアッセイなどの機能アッセイの使用）。

上記に示したとおり、本発明の抗体は典型的に、本発明によるＫＲＡＳの少なくとも１つの発癌性変異型の活性を阻害する。

上記の抗体結合の文脈で考察される、本発明によるＫＲＡＳの好ましい発癌性変異型（およびその好ましいグループ）は、本発明によるＫＲＡＳ阻害の文脈における、本発明によるＫＲＡＳの好ましい発癌性変異型（およびその好ましいグループ）も表してもよい。

本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型の活性の阻害（機能活性の阻害）は、任意の好適な手段によって決定されたものであってもよく、当業者は好適なアッセイおよび方法を熟知している。たとえば、活性の阻害は、たとえば本明細書の他の場所に記載されるとおりの、ＧＴＰアーゼアッセイまたはホスホ－ＥＲＫ阻害アッセイまたはアポトーシスアッセイまたはネクローシスアッセイにおいて決定されたものであってもよい。

いくつかの実施形態において、活性の阻害は、任意の測定可能な阻害または顕著な阻害であり、より好ましくは（例、たとえば抗体なしの対照などの対照と比較して（例、「溶媒」対照と比較して、またはＫＲＡＳと結合しない抗体を有する対照と比較して、または「抗体なし」対照と比較して、またはアイソタイプ対照と比較して））統計的に有意な阻害である。

いくつかの実施形態において、対照（例、「溶媒」対照またはＫＲＡＳと結合しない対照抗体または「抗体なし」対照またはアイソタイプ対照）によって観察された（またはもたらされた、または誘発された）活性の阻害レベル（または阻害量）は、０阻害レベル（または０阻害値または０％阻害レベルまたは０％阻害値）を表す（またはそれとして設定される）。よっていくつかの実施形態において、本明細書の他の場所に考察される活性の％阻害は、「溶媒」対照（または「溶媒のみ」対照）または対照抗体（例、ＫＲＡＳに結合しない対照抗体）または「抗体なし」対照またはアイソタイプ対照によって観察された（またはもたらされた、または誘発された）阻害との比較によるもの（またはそれに対するもの）である。

いくつかの実施形態において、活性の阻害は、少なくとも２％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、好ましくは少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％の阻害である。

いくつかの実施形態において、活性の阻害は、最大５％、最大１０％、最大１５％、最大２０％、最大２５％、最大３０％、最大３５％、最大４０％、最大４５％、最大５０％、最大５５％、最大６０％、最大６５％、最大７０％、最大７５％、最大８０％、最大８５％、最大９０％、最大９５％、または最大１００％の阻害である。

よっていくつかの実施形態において、活性の阻害は、２％～１００％、５％～１００％、１０％～１００％、１５％～１００％、２０％～１００％、２５％～１００％、３０％～１００％、３５％～１００％、４０％～１００％、４５％～１００％、５０％～１００％、５５％～１００％、６０％～１００％、６５％～１００％、７０％～１００％、７５％～１００％、８０％～１００％、８５％～１００％、９０％～１００％、または９５％～１００％の阻害である。

いくつかの実施形態において、活性の阻害は、２％～７５％、５％～７５％、１０％～７５％、１５％～７５％、２０％～７５％、２５％～７５％、３０％～７５％、３５％～７５％、４０％～７５％、４５％～７５％、５０％～７５％、５５％～７５％、６０％～７５％、６５％～７５％、または７０％～７５％の阻害である。

いくつかの実施形態において、活性の阻害は、２％～７５％、５％～５０％、１０％～５０％、１５％～５０％、２０％～５０％、２５％～５０％、３０％～５０％、３５％～５０％、４０％～５０％、または４５％～５０％の阻害である。

いくつかの実施形態において、活性の阻害は、２％～７５％、５％～２５％、１０％～２５％、１５％～２５％、または２０％～２５％の阻害である。

いくつかの好ましい実施形態において、活性の阻害は、少なくとも２０％、または少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または１００％の阻害である。

上記に示したとおり、本発明の抗体は典型的に、本発明によるＫＲＡＳの少なくとも１つ（ｏｎｃｅ）の発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：８、９、１１、１２、１３、１４、１５、または１６、好ましくは８、９、１１、または１２のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの少なくとも１つ（ｏｎｃｅ）の発癌性変異型）の活性を阻害する（または活性を阻害できる）。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３または１５のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの少なくとも１つの発癌性変異型と、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４または１６のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの少なくとも１つの発癌性変異型との活性を阻害する（または活性を阻害できる）。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：８または１１のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの少なくとも１つの発癌性変異型と、ＳＥＱＩＤＮＯ：９または１２のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの少なくとも１つの発癌性変異型との活性を阻害する（または活性を阻害できる）。

いくつかの実施形態において、本明細書で考察される阻害（例、％阻害）は、抗体をマイクロモル濃度（μＭ）またはナノモル濃度（ｎＭ）の範囲、好ましくはナノモル濃度（ｎＭ）の範囲の濃度で使用したときに決定されたものである。よっていくつかの実施形態において、上記の阻害は、抗体を≦１０μＭ、≦５μＭ、≦１μＭ、≦９００ｎＭ、≦８００ｎＭ、≦７００ｎＭ、≦６００ｎＭ、≦５００ｎＭ、≦４００ｎＭ、≦３００ｎＭ、≦２００ｎＭ、≦１００ｎＭ、≦７５ｎＭ、≦５０ｎＭ、≦２５ｎＭ、≦１０ｎＭ、または≦５ｎＭの濃度で使用したときに決定されたものである。よっていくつかの実施形態において、阻害（例、％阻害）は、抗体を１ｎＭ～≦１０μＭ、たとえば１ｎＭ～１μＭ、１ｎＭ～５００ｎＭ、１ｎＭ～２００ｎＭ、１ｎＭ～１００ｎＭ、１ｎＭ～５０ｎＭなどの濃度で使用したときに決定されたものである。いくつかの実施形態において、阻害（例、％阻害）は、抗体を２０ｎＭ～≦１０μＭ、たとえば２０ｎＭ～１μＭ、２０ｎＭ～５００ｎＭ、２０ｎＭ～２００ｎＭ、２０ｎＭ～１００ｎＭ、２０ｎＭ～５０ｎＭなどの濃度で使用したときに決定されたものである。いくつかの実施形態において、阻害（例、％阻害）は、抗体を１００ｎＭ～≦１０μＭ、たとえば１００ｎＭ～１μＭ、１００ｎＭ～５００ｎＭ、１００ｎＭ～２００ｎＭ、または１００ｎＭ～２５０ｎＭなどの濃度で使用したときに決定されたものである。

いくつかの実施形態において、本明細書で考察される阻害（例、％阻害）は、抗体を≦１００μｇ／ｍｌ、≦５０μｇ／ｍｌ、≦２５μｇ／ｍｌ、≦２０μｇ／ｍｌ、≦１５μｇ／ｍｌ、≦１０μｇ／ｍｌ、≦５μｇ／ｍｌ、≦４μｇ／ｍｌ、≦３μｇ／ｍｌ、≦２μｇ／ｍｌ、または≦１μｇ／ｍｌの濃度で使用したときに決定されたものである。いくつかの実施形態において、阻害（例、％阻害）は、抗体を１μｇ／ｍｌ～１００μｇ／ｍｌ、５μｇ／ｍｌ～１００μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ～１００μｇ／ｍｌ、２０μｇ／ｍｌ～１００μｇ／ｍｌ、２５μｇ／ｍｌ～１００μｇ／ｍｌ、５０μｇ／ｍｌ～１００μｇ／ｍｌの濃度で使用したときに決定されたものである。いくつかの実施形態において、阻害（例、％阻害）は、抗体を１μｇ／ｍｌ～２５μｇ／ｍｌ、５μｇ／ｍｌ～２５μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ～２５μｇ／ｍｌ、または１５μｇ／ｍｌ～２５μｇ／ｍｌの濃度で使用したときに決定されたものである。いくつかの実施形態において、阻害（例、％阻害）は、抗体を４μｇ／ｍｌ～２５μｇ／ｍｌ（例、４μｇ／ｍｌまたは１０μｇ／ｍｌまたは２５μｇ／ｍｌ）の濃度で使用したときに決定されたものである。

いくつかの実施形態において、この阻害（例、％阻害）および濃度は、抗体がポリクローナル抗体（例、ウサギポリクローナル抗体）であるときに適用される。いくつかの実施形態において、この阻害（例、％阻害）および濃度は、抗体がモノクローナル抗体であるときに適用される。

いくつかの実施形態において、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型の活性の阻害は、ＧＴＰアーゼ活性の阻害（すなわち、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型がＧＴＰをＧＤＰに転換する（または加水分解する）能力の阻害）である。よっていくつかの実施形態において、本発明の抗体は、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型のＧＴＰアーゼ活性を阻害する（または阻害できる）。よって、本発明の抗体による活性の阻害は、たとえば本明細書の他の場所に記載されるものなどのＧＴＰアーゼアッセイにおいて決定された（または評価された）ものであってもよい。

ＫＲＡＳは小さなＧＴＰアーゼである。野生型ＫＲＡＳは典型的に、活性（ＧＴＰ結合）形および不活性（ＧＤＰ結合）形に交互になる分子スイッチとして作用する。野生型ＫＲＡＳはＧＴＰに結合し、それをＧＤＰに加水分解して、活性形および不活性形に切り換わる。本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型（ＫＲＡＳのＧ１２またはＧ１３変異型）は典型的に、不活性形に循環する能力が損なわれているため、構成的な「活性」または「オン」状態に固定される。理論に結び付けられることは望まないが、このことによって、腫瘍発生、癌細胞の生存および増殖を促進するＫＲＡＳ－エフェクターシグナル伝達経路（例、ＭＡＰＫ経路）におけるエフェクタータンパク質との持続的なタンパク質－タンパク質相互作用がもたらされる。

本発明の抗体によって、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型のＧＴＰアーゼ活性を阻害することによって、下流のエフェクターシグナル伝達経路（例、ＭＡＰＫ経路）が典型的に阻害される（例、シグナル伝達が低減する）。上記の考察から明らかになるとおり、ＫＲＡＳの発癌性変異型のＧＴＰアーゼ活性の低減（または阻害）は、癌処置の状況において利益（例、治療的利益）となるだろう。

上記で考察したとおり、本発明の抗体は、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型のＧＴＰアーゼ活性を（例、たとえば「溶媒のみ」対照、またはたとえば「抗体なし」対照、またはたとえばＫＲＡＳと結合しない対照抗体などの対照と比較して）阻害して（または阻害できて）もよい。よって、本発明によって阻害される前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の活性は、ＧＴＰアーゼ活性であってもよい。

いくつかの実施形態において、ＧＴＰアーゼ活性は（例、たとえば「溶媒のみ」対照、またはたとえば「抗体なし」対照、またはたとえばＫＲＡＳと結合しない対照抗体、またはたとえばアイソタイプ対照などの対照と比較して）少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％、または１００％阻害されてもよい。

ＧＴＰアーゼ活性（およびＧＴＰアーゼ活性の阻害）は、任意の適切な方法またはアッセイによって評価されても（または評価されたものであっても）よく、当業者は好適な方法およびアッセイを熟知するだろう。ＧＴＰアーゼアッセイは当該技術分野において周知であり、本明細書にも記載される。

たとえば、関連ＫＲＡＳタンパク質のＧＴＰアーゼ活性（およびＧＴＰアーゼ活性の阻害）はアッセイによって評価されても（または評価されたものであっても）よく、このアッセイでは関連ＫＲＡＳタンパク質（例、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型）が、リン酸センサ（リン酸センサは当該技術分野において周知である）、ＧＴＰ、および調査中の抗体と接触され（またはともにインキュベートされ）、ＧＴＰからＧＤＰへの転換が評価される（またはモニタされる）。

いくつかの実施形態において、ＧＴＰアーゼアッセイにおけるＫＲＡＳタンパク質は組み換えタンパク質（例、細菌で発現されて精製された組み換えＫＲＡＳタンパク質）である。典型的に、リン酸センサは、フルオロフォアによって修飾された（またはそれを含む、または有する）リン酸結合分子（例、リン酸結合タンパク質）である。典型的に、リン酸センサが遊離無機リン酸（例、ＧＴＰ（グアノシン三リン酸（ｇｕａｎｏｓｉｎｅｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ））からＧＤＰ（グアノシン二リン酸（ｇｕａｎｏｓｉｎｅｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ））への転換によって放出されるもの）に結合するときに、その蛍光（または蛍光強度）が増加する。よって、リン酸センサの蛍光はＧＴＰアーゼ活性（またはその阻害）の報告を提供できる。例示的なリン酸センサは、サーモ・フィッシャー・サイエンティフィック（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）のリン酸センサ、ＣａｔＮｏ．＃ＰＶ４４０７である。

典型的に、ＫＲＡＳタンパク質、ＧＴＰ、リン酸センサ、および調査中の抗体（または関連の対照）は、マイクロタイタープレート（例、３８４ウェルプレート）のウェルの中でともにインキュベートされてもよく、所与の期間（例、４時間）の後、またはその期間にわたって（もしくはその間）マイクロタイタープレートリーダー（例、励起：４３０ｎｍ；発光：４５０ｎｍ）において蛍光が測定されてもよい。

好ましいＧＴＰアーゼアッセイにおいて、調査中の抗体は、マイクロタイタープレートのウェルの中で、適切な緩衝液（例、５０ｍＭトリス（Ｔｒｉｓ）、１００ｍＭＮａＣｌ、１０ｍＭＭｇＣｌ₂、１ｍＭＥＤＴＡ、０．０１％トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）Ｘ－１００、および１ｍＭＤＴＴの組成を有する緩衝液）中で、１ｇ／ｌの細菌で発現され精製されたＫＲＡＳタンパク質と、１μＭのリン酸センサ（好ましくはサーモ・フィッシャー・サイエンティフィックのリン酸センサ、ＣａｔＮｏ．＃ＰＶ４４０７）と、６μＭＧＴＰとともにインキュベートされ（またはそれらと接触され、または混合され）、４時間後、または４時間にわたって（もしくはその間）マイクロタイタープレートリーダー（例、励起：４３０ｎｍ；発光：４５０ｎｍ）において蛍光（およびすなわちＫＲＡＳ活性）が測定される。

本明細書の実施例のセクションに、特に好ましいＧＴＰアーゼアッセイが記載されている。

たとえば対照（たとえば「溶媒のみ」対照、またはたとえば「抗体なし」対照、またはたとえばＫＲＡＳに結合しない対照抗体、またはたとえばアイソタイプ対照など）と比較したときの、本発明の抗体によるＫＲＡＳＧＴＰアーゼ活性の低減（または阻害または低下）は典型的に、その抗体が関連ＫＲＡＳタンパク質のＧＴＰアーゼ活性を阻害することを示す。

いくつかの実施形態において、活性の阻害は、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞（または細胞株）におけるＥＲＫ（細胞外シグナル制御キナーゼ（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｓｉｇｎａｌ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄｋｉｎａｓｅ））リン酸化の阻害によって特徴付けられる（またはそれをもたらす、またはそれを引き起こす、またはそれを証拠とする、またはそれによって報告される、またはそれによって決定されたものである）。代替的に見ると、本発明の抗体によってもたらされる、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞（または細胞株）におけるＥＲＫリン酸化の低減は、典型的に前記抗体が本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型を阻害する（その活性を阻害する）ことを示す。よっていくつかの実施形態において、本発明の抗体は、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞におけるＥＲＫリン酸化を阻害または低減する（または阻害または低減できる）。よって、本発明の抗体による活性の阻害は、たとえば本明細書の他の場所に記載されるものなどのホスホ－ＥＲＫアッセイにおいて決定された（または評価された）ものであってもよい。

ＭＡＰＫ（ＭＡＰキナーゼ（ｋｉｎａｓｅ））経路は、細胞増殖を制御する主要なシグナル伝達カスケードである。ＭＡＰＫ経路の活性は、しばしば癌においてアップレギュレートされる。正常な生理機能の下では、ＭＡＰＫ経路の活性化は、増殖因子が自身の同族受容体に結合することと、たとえばＫＲＡＳなどの小さいＲａｓＧＴＰアーゼの補充とに続いて起こり、それによって、次いでセリンスレオニンキナーゼＲＡＦが補充される。これによって、次にＭＥＫが活性化され、ＭＥＫは経路の主要なエフェクターキナーゼであるＥＲＫをリン酸化する。次いでＥＲＫは、複数の細胞質基質および転写因子をリン酸化および活性化する。癌において活性化されるとき、ＭＡＰＫ経路を通じたシグナル伝達は腫瘍増殖に寄与する。たとえば、癌において活性化されるとき、ＭＡＰＫ経路は、（細胞増殖を増加させる）活性化サイクリンＤ１／ＣＤＫ４複合体の維持、（細胞生存を増加させる）たとえばＢＩＭなどのアポトーシス促進性分子の抑制、ならびに（浸潤および転移に寄与する）細胞骨格の直接制御によって腫瘍増殖に寄与する。

本発明の抗体によって、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型の活性を阻害することによって、下流のＥＲＫのリン酸化が典型的に阻害される（すなわち、ＥＲＫリン酸化すなわちホスホ－ＥＲＫのレベルまたは量が低減されてもよい）。上記の考察から明らかになるとおり、ＥＲＫリン酸化の低減（ホスホ－ＥＲＫ（ｐｈｏｓｐｈｏｒ－ＥＲＫ）の低減）は、癌処置の状況において利益（例、治療的利益）となるだろう。

よっていくつかの実施形態において、本発明の抗体は、本発明によるＧ１２変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３またはＳＥＱＩＤＮＯ：１５のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する癌細胞または癌細胞株におけるＥＲＫリン酸化を阻害または低減し（または阻害または低減でき）てもよく、または本発明によるＧ１３変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４またはＳＥＱＩＤＮＯ：１６のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する癌細胞または癌細胞株におけるＥＲＫリン酸化を阻害または低減し（または阻害または低減でき）てもよい。いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体は、本発明によるＧ１３変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４またはＳＥＱＩＤＮＯ：１６のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する癌細胞または癌細胞株におけるＥＲＫリン酸化を阻害または低減し（または阻害または低減でき）てもよい。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、本発明によるＧ１３変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４またはＳＥＱＩＤＮＯ：１６のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する癌細胞または癌細胞株と、本発明によるＧ１２変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３またはＳＥＱＩＤＮＯ：１５のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する癌細胞または癌細胞株とにおけるＥＲＫリン酸化を阻害または低減し（または阻害または低減でき）てもよい。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、本発明によるＧ１２Ｄ変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：８またはＳＥＱＩＤＮＯ：１１のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する癌細胞または癌細胞株におけるＥＲＫリン酸化を阻害または低減し（または阻害または低減でき）てもよく、または本発明によるＧ１３Ｄ変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：９またはＳＥＱＩＤＮＯ：１２のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する癌細胞または癌細胞株におけるＥＲＫリン酸化を阻害または低減し（または阻害または低減でき）てもよい。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体は、本発明によるＧ１３Ｄ変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：９またはＳＥＱＩＤＮＯ：１２のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する癌細胞または癌細胞株におけるＥＲＫリン酸化を阻害または低減し（または阻害または低減でき）てもよい。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、本発明によるＧ１２Ｄ変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：８またはＳＥＱＩＤＮＯ：１１のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する癌細胞または癌細胞株におけるＥＲＫリン酸化を阻害または低減し（または阻害または低減でき）、および本発明によるＧ１３Ｄ変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：９またはＳＥＱＩＤＮＯ：１２のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する癌細胞または癌細胞株におけるＥＲＫリン酸化を阻害または低減し（または阻害または低減でき）てもよい。

いくつかの実施形態において、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞（例、癌細胞または癌細胞株）におけるＥＲＫリン酸化の阻害（または低減）は、任意の測定可能な阻害（または低減または減少）であってもよく、好ましくは（例、たとえば「溶媒のみ」対照、またはたとえば「抗体なし」対照、またはたとえばＫＲＡＳと結合しない対照抗体もしくはアイソタイプ対照などの対照と比較して（例、陰性対照によってもたらされるか、または陰性対照が存在するときのＥＲＫリン酸化のレベルと比較して））顕著な阻害または統計的に有意な阻害であってもよい。いくつかの実施形態において、好ましい対照はアイソタイプ対照である（例、本発明の抗体がウサギポリクローナル抗体である実施形態において、アイソタイプ対照はウサギＩｇＧであり得る）。当業者は適切な対照（例、アイソタイプ対照）を熟知していると考えられ、任意の適切な対照が使用され得る。

いくつかの実施形態において、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞（例、癌細胞または癌細胞株）におけるＥＲＫリン酸化の阻害（または低減または減少）は、（例、たとえば「溶媒のみ」対照、またはたとえば「抗体なし」対照、またはたとえばＫＲＡＳと結合しない対照抗体もしくはアイソタイプ対照などの対照と比較して（例、対照によってもたらされるか、または対照が存在するときのＥＲＫリン酸化の阻害のレベルまたは量と比較して））少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、好ましくは少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、または少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または１００％の阻害（または低減または減少）であってもよい。典型的にはアイソタイプ対照が好ましい。

いくつかの実施形態において、ＥＲＫリン酸化の％阻害は、最大２０％、または最大２５％、または最大３０％、または最大４０％、または最大５０％、または最大６０％、または最大７０％、または最大８０％、または最大９０％、または最大１００％の阻害であってもよい。いくつかの実施形態において、ＥＲＫリン酸化の％阻害は、５％～１００％、５％～９０％、５％～８０％、５％～７０％、５％～６０％、５％～５０％、５％～４０％、５％～３０％、５％～２０％、１０％～１００％、１０％～９０％、１０％～８０％、１０％～７０％、１０％～６０％、１０％～５０％、１０％～４０％、１０％～３０％、１０％～２０％、３０％～１００％、３０％～９０％、３０％～８０％、３０％～７０％、３０％～６０％、３０％～５０％、３０％～４０％、４０％～１００％、４０％～９０％、４０％～８０％、４０％～７０％、４０％～６０％、４０％～５０％、５０％～１００％、５０％～９０％、５０％～８０％、５０％～７０％、または５０％～６０％の阻害であってもよい。

いくつかの実施形態において、ＥＲＫリン酸化の上述の％阻害は、前記抗体（例、たとえばウサギポリクローナル抗体などのポリクローナル抗体）を１０ｎＭ～５００ｎＭ、たとえば１０ｎＭ～２００ｎＭまたは２０ｎＭ～１７５ｎＭ、たとえば１６７ｎＭまたは６７ｎＭまたは２７ｎＭの濃度で使用したときに決定されたものである。

いくつかの実施形態において、ＥＲＫリン酸化の上述の％阻害は、アイソタイプ対照によってもたらされた（または誘発された、または観察された）ＥＲＫリン酸化の阻害と比較したときのものである。

よっていくつかの実施形態において、陰性対照（例、アイソタイプ対照）によって観察された（またはそれに対して測定された、もしくは決定された）ＥＲＫリン酸化の量（またはレベル）は、ＥＲＫリン酸化のレベル（または量または値）の０％阻害を表して（または０％阻害とみなされて、もしくは設定されて）もよい。よって、本明細書で考察される本発明の抗体によってもたらされるＥＲＫリン酸化の％阻害は、こうした０％阻害（またはＥＲＫリン酸化の対照レベル）に対する％阻害と考えられてもよい。

上記に示したとおり、ＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する癌細胞または癌細胞株におけるＥＲＫリン酸化の阻害は、本発明によるＧ１３変異（例、Ｇ１３Ｄ変異）を有するＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する癌細胞または癌細胞株におけるＥＲＫリン酸化の阻害、および／または本発明によるＧ１２変異（例、Ｇ１２Ｄ変異）を有するＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する癌細胞または癌細胞株におけるＥＲＫリン酸化の阻害である。当業者はこうした細胞株を熟知している。いくつかの実施形態において、ＥＲＫリン酸化の阻害は、癌細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（ＫＲＡＳのＧ１３Ｄ発癌性変異型を発現する乳癌細胞株）におけるＥＲＫリン酸化の阻害、癌細胞株ＳＫ－ＬＵ－１（ＫＲＡＳのＧ１２Ｄ発癌性変異型を発現するもの）におけるＥＲＫリン酸化の阻害、細胞株ＨＣＴ１１６（ＫＲＡＳのＧ１３Ｄ発癌性変異型を発現するもの）におけるＥＲＫリン酸化の阻害、および／または癌細胞株ＬＳ１７４Ｔ（ＫＲＡＳのＧ１２Ｄ発癌性変異型を発現するもの）におけるＥＲＫリン酸化の阻害である。いくつかの好ましい実施形態において、ＥＲＫリン酸化の阻害は、癌細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１におけるＥＲＫリン酸化の阻害である。

ＥＲＫリン酸化およびＥＲＫリン酸化の阻害は、任意の適切な方法またはアッセイによって評価されても（または評価されたものであっても）よく、当業者は好適な方法およびアッセイを熟知するだろう。ＥＲＫリン酸化（ホスホ－ＥＲＫ）のアッセイおよび方法は当該技術分野において周知であり、本明細書にも記載される。

いくつかの実施形態において、ＥＲＫリン酸化の阻害を決定する（または測定する）ためのアッセイは、ＥＲＫ１／２の残基Ｔｈｒ２０２および／またはＴｙｒ２０４におけるリン酸化（またはリン酸化状態）を決定することを伴う。

いくつかの実施形態において、ＥＲＫリン酸化またはＥＲＫリン酸化の阻害を決定する（または測定する）ためのアッセイは、培地中で本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する癌細胞または癌細胞株を培養することと、培養した細胞を、調査中の抗体（例、本発明の抗体）または関連の対照（例、アイソタイプ対照）で処理する（またはそれに接触させる）ことと、抗体（または対照）で処理した細胞を血清添加培地中で（例、１４～１６時間）インキュベートすることと、調査中の抗体（例、本発明の抗体）または関連の対照（例、アイソタイプ対照）を含有する無血清培地で培地を置換して細胞を（例、４時間）培養することと、ＥＧＦ（上皮増殖因子（ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ）、例、１０．９ｎｇ／ｍｌ、例、１０分間）で細胞を処理する（または細胞をそれに接触させる）ことと、（例、溶解緩衝液をたとえば１０分間適用することによって）細胞を溶解することと、リン酸化ＥＲＫに結合する試薬（例、抗体または抗体ベースの試薬）を用いて、細胞可溶化物中のリン酸化ＥＲＫ（ホスホ－ＥＲＫ１／２；Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４においてリン酸化される）の量（またはレベル）を検出する（典型的に定量的に検出または測定する）こととを含む。ＥＧＦはＥＲＫリン酸化を刺激する。こうしたアッセイにおいて、総ＥＲＫレベルも決定されてもよい。たとえば陰性対照（例、アイソタイプ対照）による処理による（またはそれを伴う、またはその後の）ものと比較したときの、本発明の抗体による処理による（またはそれを伴う、またはその後の）リン酸化ＥＲＫの量（またはレベル）が減少する（または低減する）ことは、典型的に本発明の抗体がＥＲＫリン酸化を阻害することを示し、よって典型的にその抗体が本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型を阻害することを示す。

いくつかの実施形態において、ＥＲＫリン酸化またはＥＲＫリン酸化の阻害を決定する（または測定する）ためのアッセイは、以下を含む。
（ｉ）本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する癌細胞または癌細胞株の細胞（例、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞または本明細書に記載される他の細胞株の細胞）を３８４ウェルプレートに１０，０００細胞／ウェルの密度で蒔き、３７℃／５％ＣＯ₂にて一晩インキュベートすること；
（ｉｉ）（ｉ）のインキュベート細胞を調査中の抗体（例、本発明の抗体）（例、２７ｎＭ、６７ｎＭ、または１６７ｎＭの抗体）または関連の対照（例、アイソタイプ対照、例、１６７ｎＭ）で処理し（またはそれに接触させ）、その抗体（または対照）処理細胞を血清添加培地中で３７℃／５％ＣＯ₂にて１４～１６時間インキュベートすること；
（ｉｉｉ）（ｉｉ）の培地を、調査中の抗体（例、本発明の抗体）（例、２７ｎＭ、６７ｎＭ、または１６７ｎＭの抗体）または関連の対照（例、アイソタイプ対照、例、１６７ｎＭ）を含有する無血清培地で置換し、細胞を４時間培養すること；
（ｉｖ）１０．９ｎｇ／ｍｌのＥＧＦで１０分間（ｉｉｉ）の細胞を処理する（またはそれに細胞を接触させる）こと；
（ｖ）（ｉｖ）細胞の処理細胞を、溶解緩衝液（例、パーキン・エルマー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）のＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（登録商標）ＳｕｒｅＦｉｒｅ（登録商標））ｐ－ＥＲＫ１／２（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）アッセイキット、ＣａｔＮｏ．ＴＧＲＥＳＢ５００によって提供される溶解緩衝液）で１０分間溶解すること；
（ｖｉ）リン酸化ＥＲＫに結合する試薬（例、抗体または抗体ベースの試薬）を用いてリン酸化ＥＲＫ（ホスホ－ＥＲＫ１／２；Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４においてリン酸化される）の量（またはレベル）を定量的に検出する（または測定する）こと。こうしたアッセイにおいて、総ＥＲＫレベルも決定されてもよい（および、リン酸化ＥＲＫが総ＥＲＫレベルの割合として定量化されてもよい）。いくつかの好ましい実施形態において、リン酸化ＥＲＫは、パーキン・エルマーのＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（登録商標）ＳｕｒｅＦｉｒｅ（登録商標））ｐ－ＥＲＫ１／２（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）アッセイキット、ＣａｔＮｏ．ＴＧＲＥＳＢ５００を使用して、製造者の指示に従って定量的に検出される。プレートリーダーを使用してリン酸化ＥＲＫを定量的に検出してもよい。

陰性対照（例、アイソタイプ対照）による処理による（またはそれを伴う、またはその後の）ものと比較したときの、本発明の抗体による処理による（またはそれを伴う、またはその後の）リン酸化ＥＲＫの量（またはレベル）が減少する（または低減する）ことは、典型的に本発明の抗体がＥＲＫリン酸化を阻害することを示し、よって典型的にその抗体が本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型を阻害することを示す。

ＥＲＫリン酸化を決定する（または測定する）ためのキットおよび試薬は当該技術分野において周知であり、および商業的に入手可能である。上記に示したとおり、例示的な好ましいキットは、パーキン・エルマーの「ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（登録商標）ＳｕｒｅＦｉｒｅ（登録商標））ｐ－ＥＲＫ１／２（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）アッセイキット」、ＣａｔＮｏ．ＴＧＲＥＳＢ５００である。好ましくは、このキットは製造者の指示に従って使用される。

ＥＲＫリン酸化（およびその阻害）を決定するために特に好ましいアッセイは、本明細書の実施例のセクションに記載されている。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体によるＥＲＫリン酸化、またはＥＲＫリン酸化の阻害を決定する（または測定する）ためのアッセイは、陽性対照（ＫＲＡＳ活性を阻害することが公知である陽性対照化合物）も含んでもよい。いくつかの実施形態において、陽性対照化合物はＳＡＨ－ＳＯＳ１（サンオブセブンレス１の安定化アルファヘリックス（ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄａｌｐｈａｈｅｌｉｃｅｓｏｆｓｏｎｏｆｓｅｖｅｎｌｅｓｓ１）、たとえば５μＭの濃度）である。ＳＡＨ－ＳＯＳ１は、公知のＫＲＡＳ阻害剤であるポリペプチドである。いくつかの実施形態において、本発明の抗体によるＥＲＫリン酸化の阻害のレベル（または量）は、ＳＡＨ－ＳＯＳ１によってもたらされる（または与えられる）ＥＲＫリン酸化の阻害のレベル（または量）の少なくとも２０％、好ましくは少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも１００％以上、たとえば少なくとも１２５％または少なくとも１５０％などであってもよい。

いくつかの実施形態において、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型の活性の阻害は、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞（または細胞株）におけるアポトーシスの増加または誘導によって特徴付けられる（またはそれをもたらす、またはそれを引き起こす、またはそれを証拠とする、またはそれによって報告される、またはそれによって決定されたものである）。代替的に見ると、本発明の抗体によってもたらされる、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞（または細胞株）におけるアポトーシスの増加または誘導は、典型的に前記抗体が本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型を阻害する（その活性を阻害する）ことを示す。よっていくつかの実施形態において、本発明の抗体は、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞（または細胞株）におけるアポトーシスを（こうした細胞が本発明の抗体と接触するときに）誘導または増加（または促進または上昇）させる。よって、本発明の抗体によるＫＲＡＳ活性の阻害は、たとえば本明細書の他の場所に記載されるものなどのアポトーシスアッセイにおいて決定された（または評価された）ものであってもよい。

上記に示したとおり、癌において、ＫＲＡＳの発癌性変異型（例、本発明によるＫＲＡＳのＧ１２またはＧ１３変異型）によるＭＡＰＫ経路の活性化は、たとえば（細胞生存を増加させる）ＢＩＭなどのアポトーシス促進性分子の抑制に寄与する。よって、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型を阻害することによって、ＭＡＰＫ経路の活性化を低減または阻害でき、それはアポトーシス促進性分子の抑制の軽減（または低減）をもたらすことができ、これはアポトーシスが上昇する（または増加する）ことを意味する。上記の考察から明らかになるとおり、ＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する癌細胞のアポトーシスを増加させることは、癌処置の状況において利益（例、治療的利益）となるだろう。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞（例、癌細胞または癌細胞株）におけるアポトーシスを誘導または増加させる（または誘導または増加させ得る）。典型的に、こうしたアポトーシスの誘導または増加は、たとえば「溶媒のみ」対照、またはたとえば「抗体なし」対照、またはたとえばＫＲＡＳと結合しない対照抗体もしくはアイソタイプ対照などの対照と比較したものとなる。

よっていくつかの実施形態において、本発明の抗体は、本発明によるＧ１２変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３またはＳＥＱＩＤＮＯ：１５のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する癌細胞または癌細胞株におけるアポトーシスを増加または誘導し（または増加または誘導でき）てもよく、または本発明によるＧ１３変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４またはＳＥＱＩＤＮＯ：１６のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する癌細胞または癌細胞株におけるアポトーシスを増加または誘導し（または増加または誘導でき）てもよい。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体は、本発明によるＧ１２変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３またはＳＥＱＩＤＮＯ：１５のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する癌細胞または癌細胞株におけるアポトーシスを増加または誘導し（または増加または誘導でき）、および本発明によるＧ１３変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４またはＳＥＱＩＤＮＯ：１６のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する癌細胞または癌細胞株におけるアポトーシスを増加または誘導する（または増加または誘導できる）。

よっていくつかの実施形態において、本発明の抗体は、本発明によるＧ１２Ｄ変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：８またはＳＥＱＩＤＮＯ：１１のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する癌細胞または癌細胞株におけるアポトーシスを増加または誘導し（または増加または誘導でき）てもよく、または本発明によるＧ１３Ｄ変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：９またはＳＥＱＩＤＮＯ：１２のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する癌細胞または癌細胞株におけるアポトーシスを増加または誘導し（または増加または誘導でき）てもよい。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体は、本発明によるＧ１２Ｄ変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：８またはＳＥＱＩＤＮＯ：１１のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する癌細胞または癌細胞株におけるアポトーシスを増加または誘導し（または増加または誘導でき）、および本発明によるＧ１３Ｄ変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：９またはＳＥＱＩＤＮＯ：１２のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する癌細胞または癌細胞株におけるアポトーシスを増加または誘導する（または増加または誘導できる）。

いくつかの実施形態において、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞（例、癌細胞または癌細胞株）におけるアポトーシスの増加は、任意の測定可能な増加であってもよく、好ましくは（例、たとえば「溶媒のみ」対照、またはたとえば「抗体なし」対照、またはたとえばＫＲＡＳと結合しない対照抗体もしくはアイソタイプ対照などの対照と比較して（例、対照によってもたらされるか、または対照が存在するときのアポトーシスのレベルまたは量と比較して））顕著な増加または統計的に有意な増加であってもよい。当業者は適切な対照を熟知していると考えられ、任意の適切な対照が使用され得る。

いくつかの実施形態において、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞（例、癌細胞または癌細胞株）におけるアポトーシスの増加は、（例、たとえば「溶媒のみ」対照、またはたとえば「抗体なし」対照、またはたとえばＫＲＡＳと結合しない対照抗体もしくはアイソタイプ対照などの対照と比較して（例、対照によってもたらされるか、または対照が存在するときのアポトーシスのレベルまたは量と比較して））少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、好ましくは少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１２５％、少なくとも１５０％、少なくとも１７５％、または少なくとも２００％の増加であってもよい。いくつかの実施形態において、アポトーシスの％増加は、最大２０％、または最大５０％、または最大１００％、または最大２００％、または最大５００％の増加であってもよい。いくつかの実施形態において、アポトーシスの％増加は、５％～５００％、５％～２５０％、５％～２００％、５％～１００％、５％～５０％、５％～３０％、５％～２０％、１０％～５００％、１０％～２５０％、１０％～２００％、１０％～１００％、１０％～５０％、１０％～３０％、１０％～２０％、２０％～５００％、２０％～２５０％、２０％～２００％、２０％～１００％、２０％～５０％、２０％～３０％、３０％～５００％、３０％～２５０％、３０％～２００％、３０％～１００％、３０％～５０％、５０％～５００％、５０％～２５０％、５０％～２００％、または５０％～１００％の増加であってもよい。

いくつかの実施形態において、アポトーシスの上述の％増加は、前記抗体（例、たとえばウサギポリクローナル抗体などのポリクローナル抗体）を５０ｎＭ～５００ｎＭ、たとえば１００ｎＭ～３００ｎＭ、または約２００ｎＭ（例、２２０ｎＭ）の濃度で使用したときに決定されたものである。

いくつかの実施形態において、アポトーシスの上述の％増加は、アイソタイプ対照によってもたらされた（または観察された）アポトーシスと比較したときのものである。いくつかの実施形態において、アポトーシスの上述の％増加は、「溶媒のみ」対照によってもたらされた（または観察された）アポトーシスと比較したときのものである。

上記に示したとおり、アポトーシスは、本発明によるＧ１２変異（例、Ｇ１２Ｄ変異）を有するＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する癌細胞または癌細胞株のアポトーシス、および／または本発明によるＧ１３変異（例、Ｇ１３Ｄ変異）を有するＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する癌細胞または癌細胞株のアポトーシスである。当業者はこうした細胞株を熟知している。いくつかの実施形態において、アポトーシスは、癌細胞株ＳＫ－ＬＵ－１（ＫＲＡＳのＧ１２Ｄ発癌性変異型を発現するもの）のアポトーシス、細胞株ＨＣＴ１１６（ＫＲＡＳのＧ１３Ｄ発癌性変異型を発現するもの）のアポトーシス、および／または細胞株ＬＳ１７４Ｔ（ＫＲＡＳのＧ１２Ｄ発癌性変異型を発現するもの）のアポトーシスである。いくつかの実施形態において、アポトーシスは、癌細胞株ＳＫ－ＬＵ－１のアポトーシス、または細胞株ＨＣＴ１１６のアポトーシスである。いくつかの実施形態において、アポトーシスは、癌細胞株ＳＫ－ＬＵ－１のアポトーシス、および細胞株ＨＣＴ１１６のアポトーシスである。

アポトーシス（およびアポトーシスの増加または誘導）は、任意の適切な方法またはアッセイによって評価されても（または評価されたものであっても）よく、当業者は好適な方法およびアッセイを熟知するだろう。アポトーシスアッセイは当該技術分野において周知であり、本明細書にも記載される。

たとえばいくつかの実施形態において、アポトーシスアッセイは、細胞を調査中の抗体（例、本発明の抗体）と接触させた（またはそれで処理した）後、または細胞と調査中の抗体（例、本発明の抗体）との接触（またはそれによる処理）中に、細胞膜の外葉へのホスファチジルセリン（ＰＳ：ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｓｅｒｉｎｅ）の露出を決定することを含む。ＰＳは細胞膜に不可欠な成分であり、正常な細胞においては能動的に膜内葉に制限されているが、アポトーシスの際にＰＳは細胞膜の外葉に移行し、そこで測定され得る。移行したＰＳは、アネキシン（Ａｎｎｅｘｉｎ）Ｖベースの分子（例、蛍光標識されたアネキシンＶコンジュゲート）によって測定されてもよい。アネキシンＶベースの分子は、高いカルシウム依存性の親和性および脂質に対する選択性を有するため、典型的に外葉へのＰＳの露出を検出する（または決定または測定する）ための好ましいプローブである。

よっていくつかの実施形態において、抗体によってもたらされるアポトーシスは、細胞膜の外葉へのホスファチジルセリン（ＰＳ）の露出（または移行）を決定する（または測定する）方法によって決定されてもよく（または決定されたものであり）、この方法は典型的に、アネキシンＶベースの試薬（例、蛍光標識されたアネキシンＶコンジュゲート）を使用して、露出または移行されたＰＳを検出する（または測定する）ことによって行われる。

いくつかの実施形態において、アポトーシス（またはアポトーシスのレベルもしくは量）は、調査中の抗体との接触（またはそれによる処理またはそれへの曝露）において設定された期間（例、１０時間、２４時間、４８時間、５２時間、７２時間）にわたって（またはその間に）起こるアポトーシスである。いくつかの実施形態において、アポトーシス（またはアポトーシスのレベルもしくは量）は、５２時間の期間にわたって（またはその間に）起こるアポトーシスである。いくつかの実施形態において、アポトーシス（またはアポトーシスのレベルもしくは量）は、調査中の抗体との接触（またはそれによる処理またはそれへの曝露）において２４時間または４８時間にわたって（またはその間に）起こるアポトーシスである。

（例、アネキシンＶ試薬を用いて決定または測定された）本発明の抗体によってもたらされる露出（または移行）ＰＳの量（またはレベル）の増加は、典型的にその抗体がアポトーシスをもたらす（または誘導する、または増加させる）ことを示し、よって典型的にその抗体が本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型を阻害することを示す。

いくつかの実施形態において、アポトーシスアッセイはマイクロタイタープレート中で行われ、アポトーシスはマイクロプレートリーダーにおいて（例、露出ＰＳに対する蛍光標識アネキシンＶコンジュゲートの結合に基づいて）決定される。こうしたアッセイはリアルタイムアッセイであってもよい。

いくつかの他の実施形態において、アポトーシスアッセイはフローサイトメトリー（例、ＦＡＣＳ）ベースのアッセイであり、ここで培地中の細胞は調査中の抗体（例、３ｎｇ／ｍｌ）で（例、２４時間、４８時間、または７２時間）処理され（またはそれと接触され、またはそれに曝露され）、洗浄され、蛍光標識アネキシンＶ分子（例、アネックスＶパシフィックブルー（ＡｎｎｅｘＶＰａｃｉｆｉｃＢｌｕｅ）、サーモ・フィッシャー（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）Ｃａｔ．Ｎｏ．Ａ３５１２２）で染色され、フローサイトメトリー（例、ＦＡＣＳ）を用いて細胞関連の蛍光が定量化される。（例、たとえば「溶媒のみ」対照、またはたとえば「抗体なし」対照、またはたとえばＫＲＡＳと結合しない対照抗体もしくはアイソタイプ対照などの対照と比較して（例、対照によってもたらされる、または対照の存在下の細胞関連蛍光と比較して））本発明の抗体によってもたらされる（またはそれによる処理後の）細胞関連蛍光の量が増加することは、典型的にその抗体がアポトーシスをもたらす（または誘導する、または増加させる）ことを示し、よって典型的にその抗体が本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型を阻害することを示す。

いくつかの実施形態において、アポトーシスアッセイはリアルタイムアッセイであってもよい。

アポトーシスを決定する（または測定する）ためのキットおよび試薬は当該技術分野において周知であり、および商業的に入手可能である。例示的な好ましいキットは、「ＲｅａｌＴｉｍｅ－Ｇｌｏ（商標）アネキシンＶアポトーシスおよびネクローシスキット（ＡｎｎｅｘｉｎＶＡｐｏｐｔｏｓｉｓａｎｄＮｅｃｒｏｓｉｓＫｉｔ）」（プロメガ（Ｐｒｏｍｅｇａ）、Ｃａｔ．Ｎｏ．ＪＡ１０１１）である。好ましくは、このキットは製造者の指示に従って使用される。

本明細書の実施例のセクションに、特に好ましいアポトーシスアッセイが記載されている。

いくつかの実施形態において、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型の活性の阻害は、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞（または細胞株）におけるネクローシスの増加または誘導によって特徴付けられる（またはそれをもたらす、またはそれを引き起こす、またはそれを証拠とする、またはそれによって報告される、またはそれによって決定されたものである）。代替的に見ると、本発明の抗体によってもたらされる、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞（または細胞株）におけるネクローシスの増加または誘導は、典型的に前記抗体が本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型を阻害する（その活性を阻害する）ことを示す。よっていくつかの実施形態において、本発明の抗体は、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞（または細胞株）におけるネクローシスを（こうした細胞が本発明の抗体と接触するときに）誘導または増加（または促進または上昇）させる。よって、本発明の抗体によるＫＲＡＳ活性の阻害は、たとえば本明細書の他の場所に記載されるものなどのネクローシスアッセイにおいて決定された（または評価された）ものであってもよい。

ＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する癌細胞のネクローシスを増加させることは、癌処置の状況において利益（例、治療的利益）となり得ることが明らかである。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞（例、癌細胞または癌細胞株）におけるネクローシスを増加または誘導する（または増加または誘導できる）。典型的に、こうしたネクローシスの増加または誘導は、たとえば「溶媒のみ」対照、またはたとえば「抗体なし」対照、またはたとえばＫＲＡＳと結合しない対照抗体もしくはアイソタイプ対照などの対照と比較したものとなる。

よっていくつかの実施形態において、本発明の抗体は、本発明によるＧ１２変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３またはＳＥＱＩＤＮＯ：１５のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する癌細胞または癌細胞株におけるネクローシスを増加または誘導し（または増加または誘導でき）てもよく、または本発明によるＧ１３変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４またはＳＥＱＩＤＮＯ：１６のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する癌細胞または癌細胞株におけるネクローシスを増加または誘導し（または増加または誘導でき）てもよい。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体は、本発明によるＧ１２変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３またはＳＥＱＩＤＮＯ：１５のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する癌細胞または癌細胞株におけるネクローシスを増加または誘導し（または増加または誘導でき）、および本発明によるＧ１３変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４またはＳＥＱＩＤＮＯ：１６のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する癌細胞または癌細胞株におけるネクローシスを増加または誘導する（または増加または誘導できる）。

よっていくつかの実施形態において、本発明の抗体は、本発明によるＧ１２Ｄ変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：８またはＳＥＱＩＤＮＯ：１１のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する癌細胞または癌細胞株におけるネクローシスを増加または誘導し（または増加または誘導でき）てもよく、または本発明によるＧ１３Ｄ変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：９またはＳＥＱＩＤＮＯ：１２のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する癌細胞または癌細胞株におけるネクローシスを増加または誘導し（または増加または誘導でき）てもよい。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体は、本発明によるＧ１２Ｄ変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：８またはＳＥＱＩＤＮＯ：１１のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する癌細胞または癌細胞株におけるネクローシスを増加または誘導し（または増加または誘導でき）、および本発明によるＧ１３Ｄ変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：９またはＳＥＱＩＤＮＯ：１２のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する癌細胞または癌細胞株におけるネクローシスを増加または誘導する（または増加または誘導できる）。

いくつかの実施形態において、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞（例、癌細胞または癌細胞株）におけるネクローシスの増加は、任意の測定可能な増加であってもよく、好ましくは（例、たとえば「溶媒のみ」対照、またはたとえば「抗体なし」対照、またはたとえばＫＲＡＳと結合しない対照抗体もしくはアイソタイプ対照などの対照と比較して（例、対照によってもたらされるか、または対照が存在するときのネクローシスのレベルもしくは量と比較して））顕著な増加または統計的に有意な増加であってもよい。当業者は適切な対照を熟知していると考えられ、任意の適切な対照が使用され得る。

いくつかの実施形態において、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞（例、癌細胞または癌細胞株）におけるネクローシスの増加は、（例、たとえば「溶媒のみ」対照、またはたとえば「抗体なし」対照、またはたとえばＫＲＡＳと結合しない対照抗体もしくはアイソタイプ対照などの対照と比較して（例、対照によってもたらされるか、または対照が存在するときのネクローシスのレベルもしくは量と比較して））少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、好ましくは少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１２５％、少なくとも１５０％、少なくとも１７５％、または少なくとも２００％の増加であってもよい。いくつかの実施形態において、ネクローシスの％増加は、最大２０％、または最大５０％、または最大１００％、または最大２００％、または最大５００％の増加であってもよい。いくつかの実施形態において、ネクローシスの％増加は、５％～５００％、５％～２５０％、５％～２００％、５％～１００％、５％～５０％、５％～３０％、５％～２０％、１０％～５００％、１０％～２５０％、１０％～２００％、１０％～１００％、１０％～５０％、１０％～３０％、１０％～２０％、２０％～５００％、２０％～２５０％、２０％～２００％、２０％～１００％、２０％～５０％、２０％～３０％、３０％～５００％、３０％～２５０％、３０％～２００％、３０％～１００％、３０％～５０％、５０％～５００％、５０％～２５０％、５０％～２００％、または５０％～１００％の増加であってもよい。

いくつかの実施形態において、ネクローシスの上述の％増加は、前記抗体（例、たとえばウサギポリクローナル抗体などのポリクローナル抗体）を５０ｎＭ～５００ｎＭ、たとえば１００ｎＭ～３００ｎＭ、または約２００ｎＭ（例、２２０ｎＭ）の濃度で使用したときに決定されたものである。

いくつかの実施形態において、ネクローシスの上述の％増加は、「溶媒のみ」対照によってもたらされた（または観察された）ネクローシスと比較したときのものである。

上記に示したとおり、ネクローシスは、本発明によるＧ１２変異（例、Ｇ１２Ｄ変異）を有するＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する癌細胞または癌細胞株のネクローシス、および／または本発明によるＧ１３変異（例、Ｇ１３Ｄ変異）を有するＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する癌細胞または癌細胞株のネクローシスである。当業者はこうした細胞株を熟知している。いくつかの実施形態において、ネクローシスは、癌細胞株ＳＫ－ＬＵ－１（ＫＲＡＳのＧ１２Ｄ発癌性変異型を発現するもの）のネクローシス、または細胞株ＨＣＴ１１６（ＫＲＡＳのＧ１３Ｄ発癌性変異型を発現するもの）のネクローシスである。いくつかの実施形態において、ネクローシスは、癌細胞株ＳＫ－ＬＵ－１のネクローシス、および細胞株ＨＣＴ１１６のネクローシスである。

ネクローシス（およびネクローシスの増加）は、任意の適切な方法またはアッセイによって評価されても（または評価されたものであっても）よく、当業者は好適な方法およびアッセイを熟知するだろう。ネクローシスアッセイは当該技術分野において周知であり、本明細書にも記載される。

たとえばいくつかの実施形態において、抗体によってもたらされるネクローシスは、細胞不透過のプロ蛍光染料が細胞に入る能力を決定する（または測定する）方法によって決定されて（または決定されたものであって）もよい。ネクローシスの際には細胞膜が崩壊するため、こうした細胞不透過のプロ蛍光染料が細胞に入ることができる。

いくつかの実施形態において、ネクローシス（またはネクローシスのレベルもしくは量）は、調査中の抗体との接触（またはそれによる処理またはそれへの曝露）において設定された期間（例、２４時間、４８時間、５２時間、７２時間）にわたって（またはその間に）起こるネクローシスである。いくつかの実施形態において、ネクローシス（またはアポトーシスのレベルもしくは量）は、５２時間の期間にわたって（またはその間に）起こるネクローシスである。

本発明の抗体によってもたらされる、細胞に入る細胞不透過のプロ蛍光染料の量の増加は、典型的にその抗体がネクローシスをもたらす（または誘導する、または増加させる）ことを示し、よって典型的にその抗体が本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型を阻害することを示す。

いくつかの実施形態において、ネクローシスアッセイはマイクロタイタープレート中で行われ、ネクローシスはマイクロプレートリーダーにおいて（例、細胞内への細胞不透過のプロ蛍光染料の進入に基づいて）決定される。こうしたアッセイはリアルタイムアッセイであってもよい。

いくつかの実施形態において、ネクローシスアッセイはリアルタイムアッセイであってもよい。

ネクローシスを決定する（または測定する）ためのキットおよび試薬は当該技術分野において周知であり、および商業的に入手可能である。例示的な好ましいキットは、「ＲｅａｌＴｉｍｅ－Ｇｌｏ（商標）アネキシンＶアポトーシスおよびネクローシスキット」（プロメガ、Ｃａｔ．Ｎｏ．ＪＡ１０１１）である。好ましくは、このキットは製造者の指示に従って使用される。

本明細書の実施例のセクションに、特に好ましいネクローシスアッセイが記載されている。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、野生型ＫＲＡＳ（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：７またはＳＥＱＩＤＮＯ：１０のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳ）に付加的に結合してもよい。他の実施形態において、本発明の抗体は、野生型ＫＲＡＳに付加的に結合しない（または野生型ＫＲＡＳに顕著に結合しない）。

いくつかの実施形態において、抗体は、野生型ＫＲＡＳと比較して本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型に優先的に結合する。言い換えると、いくつかの実施形態において、抗体は、野生型ＫＲＡＳと比較して本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型に選択的に結合する。たとえばいくつかの実施形態において、抗体は、野生型ＫＲＡＳ（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：７またはＳＥＱＩＤＮＯ：１０に示されるアミノ酸配列を有する野生型ＫＲＡＳ）と比較して（またはそれと対照的に）、Ｇ１３Ｄ変異を含むＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：９またはＳＥＱＩＤＮＯ：１２に示されるアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）に優先的に結合して（または選択的に結合して）もよい。たとえばいくつかの実施形態において、１１Ｄ６－１、４Ｂ８－１、または７Ｄ１１－１抗体に基づく抗体（例、これらの抗体のＣＤＲ配列、ＶＨドメイン配列、またはＶＬドメイン配列を含むか、または実質的に相同の配列を有する抗体）は、野生型ＫＲＡＳ（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：７またはＳＥＱＩＤＮＯ：１０に示されるアミノ酸配列を有する野生型ＫＲＡＳ）と比較して（またはそれと対照的に）、Ｇ１３Ｄ変異を含むＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：９またはＳＥＱＩＤＮＯ：１２に示されるアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）に優先的に結合して（または選択的に結合して）もよい。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体は、野生型ＫＲＡＳと比較して、本発明によるＫＲＡＳの少なくとも１つの発癌性変異型の活性を優先的に阻害する。いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体は、野生型ＫＲＡＳと比較して、本発明によるＫＲＡＳの少なくとも１つの発癌性変異型の活性を選択的に阻害する。たとえばいくつかの実施形態において、抗体は、野生型ＫＲＡＳ（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：７またはＳＥＱＩＤＮＯ：１０に示されるアミノ酸配列を有する野生型ＫＲＡＳ）と比較して（またはそれと対照的に）、Ｇ１３Ｄ変異を含むＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：９またはＳＥＱＩＤＮＯ：１２に示されるアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を優先的に阻害して（または選択的に阻害して）もよい。いくつかの実施形態において、１１Ｄ６－１、４Ｂ８－１、７Ｄ１１－１、６Ｂ２－１－１、６Ｂ２－１－２、または７Ｇ２－１（好ましくは１１Ｄ６－１、４Ｂ８－１、または７Ｄ１１－１）抗体に基づく抗体（例、これらの抗体のＣＤＲ配列、ＶＨドメイン配列、またはＶＬドメイン配列を含むか、または実質的に相同の配列を有する抗体）は、野生型ＫＲＡＳ（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：７またはＳＥＱＩＤＮＯ：１０に示されるアミノ酸配列を有する野生型ＫＲＡＳ）と比較して（またはそれと対照的に）、Ｇ１３Ｄ変異を含むＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：９またはＳＥＱＩＤＮＯ：１２に示されるアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を優先的に阻害して（または選択的に阻害して）もよい。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、野生型ＫＲＡＳの活性を阻害しない（または顕著に阻害しない）。

活性は、本明細書の他の場所に記載される活性（例、ＧＴＰアーゼ活性、アポトーシス誘導活性、ネクローシス誘導活性、またはＥＲＫリン酸化（ｐｈｏｓｐｈｏｒｌｙａｔｉｏｎ）阻害活性）であってもよい。よってこうした活性は、本明細書の他の場所に記載されるとおりに（例、ＧＴＰアーゼアッセイ、アポトーシスアッセイ、ネクローシスアッセイ、および／またはホスホ－ＥＲＫ阻害アッセイにおいて）決定されて（または決定されたものであって）もよい。

よって好ましい実施形態において、本発明の抗体は、野生型ＫＲＡＳの活性よりも、本発明によるＫＲＡＳの１つ以上の発癌性変異型の活性を優先的に阻害する。言い換えると、いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体は、野生型ＫＲＡＳ活性を阻害する程度よりも高い程度まで、本発明によるＫＲＡＳの１つ以上の発癌性変異型の活性を阻害する（または阻害できる）。よってたとえば、いくつかの実施形態において、所与の抗体が本発明によるＫＲＡＳの１つ以上の発癌性変異型の活性をＸ％阻害するとき、その抗体は野生型ＫＲＡＳ活性を＜Ｘ％阻害するだろう。

いくつかの実施形態において、ＫＲＡＳの１つ以上の発癌性変異型の％阻害は、野生型ＫＲＡＳの％阻害よりも少なくとも５％高く、しかし典型的には少なくとも１０％高く、好ましくは少なくとも２０％高く、少なくとも３０％高く、少なくとも４０％高く、少なくとも５０％高く、少なくとも６０％高く、少なくとも７０％高く、少なくとも８０％高く、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、または少なくとも２００％高い。

例として、いくつかの実施形態において、本発明の抗体がもたらす（または誘発する）、本発明によるＧ１２変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３またはＳＥＱＩＤＮＯ：１５のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する細胞（例、癌細胞または癌細胞株）または本発明によるＧ１３変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４またはＳＥＱＩＤＮＯ：１６のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する細胞（例、癌細胞または癌細胞株）のアポトーシスおよび／または（好ましくは「および」）ネクローシス（本明細書の他の場所に考察されるとおり、これはＫＲＡＳ阻害を示す）のレベル（または量）は、野生型ＫＲＡＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７またはＳＥＱＩＤＮＯ：１０）を発現する細胞において前記抗体がもたらす（または誘発する）アポトーシスおよび／または（好ましくは「および」）ネクローシスのレベル（または量）よりも高い（好ましくは有意に高い）。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体がもたらす（または誘発する）、本発明によるＧ１２変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３またはＳＥＱＩＤＮＯ：１５のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する細胞（例、癌細胞または癌細胞株）および本発明によるＧ１３変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４またはＳＥＱＩＤＮＯ：１６のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する細胞（例、癌細胞または癌細胞株）のアポトーシスおよび／または（好ましくは「および」）ネクローシスのレベル（または量）は、野生型ＫＲＡＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７またはＳＥＱＩＤＮＯ：１０）を発現する細胞において前記抗体がもたらす（または誘発する）アポトーシスおよび／または（好ましくは「および」）ネクローシスのレベル（または量）よりも高い（好ましくは有意に高い）。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体がもたらす（または誘発する）、本発明によるＧ１２Ｄ変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：８またはＳＥＱＩＤＮＯ：１１のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する細胞（例、癌細胞または癌細胞株）または本発明によるＧ１３Ｄ変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：９またはＳＥＱＩＤＮＯ：１２のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する細胞（例、癌細胞または癌細胞株）のアポトーシスおよび／または（好ましくは「および」）ネクローシスのレベル（または量）は、野生型ＫＲＡＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７またはＳＥＱＩＤＮＯ：１０）を発現する細胞において前記抗体がもたらす（または誘発する）アポトーシスおよび／または（好ましくは「および」）ネクローシスのレベル（または量）よりも高い（好ましくは有意に高い）。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体がもたらす（または誘発する）、本発明によるＧ１３Ｄ変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：９またはＳＥＱＩＤＮＯ：１２のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する細胞（例、癌細胞または癌細胞株）のアポトーシスおよび／または（好ましくは「および」）ネクローシスのレベル（または量）は、野生型ＫＲＡＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７またはＳＥＱＩＤＮＯ：１０）を発現する細胞において前記抗体がもたらす（または誘発する）アポトーシスおよび／または（好ましくは「および」）ネクローシスのレベル（または量）よりも高い（好ましくは有意に高い）。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体がもたらす（または誘発する）、本発明によるＧ１２Ｄ変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：８またはＳＥＱＩＤＮＯ：１１のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する細胞（例、癌細胞または癌細胞株）および本発明によるＧ１３Ｄ変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：９またはＳＥＱＩＤＮＯ：１２のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する細胞（例、癌細胞または癌細胞株）のアポトーシスおよび／または（好ましくは「および」）ネクローシスのレベル（または量）は、野生型ＫＲＡＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７またはＳＥＱＩＤＮＯ：１０）を発現する細胞において前記抗体がもたらす（または誘発する）アポトーシスおよび／または（好ましくは「および」）ネクローシスのレベル（または量）よりも高い（好ましくは有意に高い）。

いくつかの実施形態において、ＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞においてもたらされるアポトーシスおよび／またはネクローシスのより高いレベルとは、野生型ＫＲＡＳを発現する細胞においてもたらされるアポトーシスおよび／またはネクローシスのレベルよりも少なくとも５％高い、しかし典型的には少なくとも１０％高い、好ましくは少なくとも２０％高い、少なくとも３０％高い、少なくとも４０％高い、少なくとも５０％高い、少なくとも６０％高い、少なくとも７０％高い、少なくとも８０％高い、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、または少なくとも２００％高いレベルである。いくつかの実施形態において、ＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞におけるアポトーシスおよび／またはネクローシスのより高いレベルとは、野生型ＫＲＡＳを発現する細胞におけるアポトーシスおよび／またはネクローシスのレベルよりも最大５００％高い、最大４００％高い、最大３００％高い、最大２００％高い、最大１００％高い、または最大５０％高いレベルである。いくつかの実施形態において、ＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞におけるアポトーシスおよび／またはネクローシスのより高いレベルとは、野生型ＫＲＡＳを発現する細胞におけるアポトーシスおよび／またはネクローシスのレベルよりも最大５～５００％高い、５～４００％高い、５～３００％高い、５～２００％高い、５～１００％高い、５～５０％高い、５～２０％高い、１０～５００％高い、１０～４００％高い、１０～３００％高い、１０～２００％高い、１０～１００％高い、１０～５０％高い、１０～２０％高い、２０～５００％高い、２０～４００％高い、２０～３００％高い、２０～２００％高い、２０～１００％高い、２０～５０％高い、５０～５００％高い、５０～４００％高い、５０～３００％高い、５０～２００％高い、または５０～１００％高いレベルである。

本明細書の他の場所に考察されるとおり、いくつかの実施形態において、ＫＲＡＳの発癌性Ｇ１２変異型を発現する癌細胞株は、（ＫＲＡＳのＧ１２Ｄ発癌性変異型を発現する）癌細胞株ＳＫ－ＬＵ－１であってもよい。いくつかの実施形態において、ＫＲＡＳの発癌性Ｇ１３変異型を発現する癌細胞株は、（ＫＲＡＳのＧ１３Ｄ発癌性変異型を発現する）癌細胞株ＨＣＴ１１６であってもよい。いくつかの実施形態において、野生型ＫＲＡＳを発現する細胞は、たとえば細胞株ＣＲＬ－１８３１（非悪性結腸上皮細胞）などの非悪性細胞である。いくつかの実施形態において、野生型ＫＲＡＳを発現する細胞は、たとえば細胞株ＮＣＩ－Ｈ１９７５（肺腺癌細胞）などの、野生型ＫＲＡＳを発現する癌細胞（または癌細胞株）である。

いくつかの実施形態において、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞（または細胞株）においてもたらされるアポトーシスおよび／またはネクローシスのより高いレベルは、野生型ＫＲＡＳを発現する同じ組織または器官（または組織型または器官型）の（またはそれに由来する）細胞（または細胞株）においてもたらされるアポトーシスおよび／またはネクローシスのレベルよりも高い（またはそれに比べて高い）。

いくつかの実施形態において、抗体は、ＫＲＡＳの所与の位置（位置１２または１３）に所与の発癌性変異残基（例、本明細書の他の場所に記載される所与の変異残基）を有する、本発明によるＫＲＡＳの所与の発癌性変異型に対して、ＫＲＡＳの対応位置（位置１２または１３）に異なる発癌性変異残基（例、本明細書の他の場所に記載される異なる変異アミノ酸残基）を有する、ＫＲＡＳの異なる（すなわち別の）発癌性変異型よりも優先的に（または選択的に）結合する。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、１２または１３にＤ（アスパラギン酸）残基を有するＫＲＡＳの発癌性変異型に対して、ＫＲＡＳの対応位置（位置１２または１３）に異なる発癌性変異残基を有するＫＲＡＳの発癌性変異型よりも優先的に（または選択的に）結合してもよい。たとえばいくつかの実施形態において、本発明の抗体は、１２にＤ（アスパラギン酸）残基を有するＫＲＡＳの発癌性変異型に対して、ＫＲＡＳの対応位置（位置１２）にＶ（バリン）残基またはＣ（システイン）残基を有するＫＲＡＳの発癌性変異型よりも優先的に結合してもよい。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、本発明による所与のＧ１２変異（位置１２における変異）を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３またはＳＥＱＩＤＮＯ：１５のアミノ酸配列に示される可能な変異残基のうちの１つを有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する細胞（例、癌細胞または癌細胞株）の上（または中）のＫＲＡＳに対して、Ｇ１２に異なる発癌性変異残基（位置１２における変異）を有する（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３またはＳＥＱＩＤＮＯ：１５のアミノ酸配列に示される可能な変異残基のうちの異なる１つを有する）ＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞よりも優先的に（または選択的に）結合してもよい。たとえば、本発明の抗体は、Ｇ１２Ｄ変異（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：８またはＳＥＱＩＤＮＯ：１１）を有するＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞（例、癌細胞または癌細胞株）の上（または中）のＫＲＡＳに対して、Ｇ１２における異なる発癌性変異残基を有する（位置１２における異なる、すなわち非Ｄの変異（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３またはＳＥＱＩＤＮＯ：１５のアミノ酸配列に示される可能な変異残基のうちの異なる、すなわち非Ｄの１つを有する）ＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞よりも優先的に（または選択的に）結合してもよい。たとえば、本発明の抗体は、Ｇ１２Ｄ変異（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：８またはＳＥＱＩＤＮＯ：１１）を有するＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞（例、癌細胞または癌細胞株）の上（または中）のＫＲＡＳに対して、Ｇ１２ＶまたはＧ１２Ｃ変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞の上（または中）のＫＲＡＳとは対照的に結合してもよい。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、本発明による所与のＧ１３変異（位置１３における変異）を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４またはＳＥＱＩＤＮＯ：１６のアミノ酸配列に示される可能な変異残基のうちの１つを有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する細胞（例、癌細胞または癌細胞株）の上（または中）のＫＲＡＳに対して、Ｇ１３に異なる発癌性変異残基（位置１３における変異）を有するＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞よりも優先的に（または選択的に）結合してもよい。たとえば、本発明の抗体は、Ｇ１３Ｄ変異（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：９またはＳＥＱＩＤＮＯ：１２）を有するＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞（例、癌細胞または癌細胞株）の上（または中）のＫＲＡＳに対して、Ｇ１３における異なる発癌性変異残基（位置１３における異なる、すなわち非Ｄの変異）を有するＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞よりも優先的に（または選択的に）結合してもよい。たとえば、本発明の抗体は、Ｇ１３Ｄ変異（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：９またはＳＥＱＩＤＮＯ：１２）を有するＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞（例、癌細胞または癌細胞株）の上（または中）のＫＲＡＳに対して、Ｇ１３Ｃ変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞の上のＫＲＡＳとは対照的に結合してもよい。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、本発明による所与のＧ１２変異（位置１２における変異）を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３またはＳＥＱＩＤＮＯ：１５のアミノ酸配列に示される可能な変異残基のうちの１つを有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する細胞（例、癌細胞または癌細胞株）の上（または中）のＫＲＡＳに対して、Ｇ１３に異なる発癌性変異残基（位置１３における変異）を有するＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞よりも優先的に（または選択的に）結合してもよい。たとえば、本発明の抗体は、Ｇ１２Ｄ変異（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：８またはＳＥＱＩＤＮＯ：１１）を有するＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞（例、癌細胞または癌細胞株）の上（または中）のＫＲＡＳに対して、Ｇ１３における異なる（すなわち非Ｄの）発癌性変異残基（位置１３における異なる、すなわち非Ｄの変異）を有するＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞よりも優先的に（または選択的に）結合してもよい。たとえば、本発明の抗体は、Ｇ１２Ｄ変異（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：８またはＳＥＱＩＤＮＯ：１１）を有するＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞（例、癌細胞または癌細胞株）の上（または中）のＫＲＡＳに対して、Ｇ１３Ｘ変異（ここでＸはＤ以外の発癌性変異残基であり、たとえばＸはＣである）を有するＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞の上（または中）のＫＲＡＳよりも優先的に結合してもよい。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、本発明による所与のＧ１３変異（位置１３における変異）を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４またはＳＥＱＩＤＮＯ：１６のアミノ酸配列に示される可能な変異残基のうちの１つを有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する細胞（例、癌細胞または癌細胞株）の上（または中）のＫＲＡＳに対して、Ｇ１２に異なる発癌性変異残基（位置１２における変異）を有するＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞よりも優先的に（または選択的に）結合してもよい。たとえば、本発明の抗体は、Ｇ１３Ｄ変異（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：９またはＳＥＱＩＤＮＯ：１２）を有するＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞（例、癌細胞または癌細胞株）の上（または中）のＫＲＡＳに対して、Ｇ１２における異なる（すなわち非Ｄの）発癌性変異残基（位置１２における異なる、すなわち非Ｄの変異）を有するＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞よりも優先的に（または選択的に）結合してもよい。たとえば、本発明の抗体は、Ｇ１３Ｄ変異（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：９またはＳＥＱＩＤＮＯ：１２）を有するＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞（例、癌細胞または癌細胞株）の上（または中）のＫＲＡＳに対して、Ｇ１２Ｘ変異（ここでＸはＤ以外の発癌性変異残基であり、たとえばＸはＶまたはＣまたはＡまたはＳまたはＲである）を有するＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞の上（または中）のＫＲＡＳよりも優先的に結合してもよい。

結合は、（例、本明細書の他の場所に記載される）任意の適切な手段によって定められたものであってもよい。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、ＫＲＡＳの所与の位置（位置１２または１３）に所与の発癌性変異残基（例、本明細書の他の場所に記載される変異残基）を有する、本発明によるＫＲＡＳの所与の発癌性変異型の活性を、ＫＲＡＳの対応位置（位置１２または１３）に異なる発癌性変異残基（例、本明細書の他の場所に記載される異なる変異アミノ酸残基）を有する、ＫＲＡＳの異なる（すなわち別の）発癌性変異型の活性よりも優先的に阻害する。例として、いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、１２または１３にＤ（アスパラギン酸）残基を有するＫＲＡＳの発癌性変異型の活性を、ＫＲＡＳの対応位置（位置１２または１３）に異なる発癌性変異残基を有するＫＲＡＳの発癌性変異型の活性よりも優先的に阻害する。たとえばいくつかの実施形態において、本発明の抗体は、１２にＤ（アスパラギン酸）残基を有するＫＲＡＳの発癌性変異型の活性を、ＫＲＡＳの対応位置（位置１２）にＶ（バリン）残基またはＣ（システイン）残基を有するＫＲＡＳの発癌性変異型の活性よりも優先的に阻害する。

言い換えると、いくつかの好ましい実施形態において、本発明の抗体は、ＫＲＡＳの所与の位置（位置１２または１３）に所与の発癌性変異残基（例、本明細書の他の場所に記載される変異残基）を有する発癌性変異型の活性を、ＫＲＡＳの対応位置（位置１２または１３）に異なる発癌性変異残基（例、本明細書の他の場所に記載される異なる変異アミノ酸残基）を有する、ＫＲＡＳの異なる（すなわち別の）発癌性変異型を阻害する程度よりも高い程度まで阻害する（または阻害できる）。よって、たとえばいくつかの実施形態において、所与の抗体が、ＫＲＡＳの所与の位置（位置１２または１３）に所与の発癌性変異残基（例、本明細書の他の場所に記載される変異残基）を有する本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型の活性をＸ％阻害するとき、その抗体は、対応位置（位置１２または１３）に異なる発癌性変異残基（例、本明細書の他の場所に記載される異なる変異アミノ酸残基）を有する、ＫＲＡＳの異なる（すなわち別の）発癌性変異型の活性を＜Ｘ％阻害してもよい。

いくつかの実施形態において、％阻害は、対応位置（位置１２または１３）に異なる発癌性変異残基（例、本明細書の他の場所に記載される異なる変異アミノ酸残基）を有する、ＫＲＡＳの異なる（すなわち別の）発癌性変異型の％阻害よりも少なくとも５％高く、しかし典型的には少なくとも１０％高く、好ましくは少なくとも２０％高く、少なくとも３０％高く、少なくとも４０％高く、少なくとも５０％高く、少なくとも６０％高く、少なくとも７０％高く、少なくとも８０％高く、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、または少なくとも２００％高くてもよい。

活性の阻害は、本明細書の他の場所に記載されるとおりであってもよい（例、アポトーシスをもたらすこと、または誘導すること、または増加させることを特徴としてもよく、これは本明細書の他の場所に記載されるとおりに決定されてもよい）。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、ＫＲＡＳの位置１２に所与の発癌性変異残基（例、本明細書の他の場所に記載される変異残基）を有する、本発明によるＫＲＡＳの所与の発癌性変異型の活性を、ＫＲＡＳの位置１３に異なる発癌性変異残基（例、本明細書の他の場所に記載される異なる変異アミノ酸残基）を有する、ＫＲＡＳの異なる（すなわち別の）発癌性変異型の活性よりも優先的に阻害してもよい。例として、いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、１２にＤ（アスパラギン酸）残基を有するＫＲＡＳの発癌性変異型の活性を、ＫＲＡＳの位置１３に異なる（すなわち、非Ｄの）発癌性変異残基（例、Ｃ）を有するＫＲＡＳの発癌性変異型の活性よりも優先的に阻害してもよい。優先的な阻害は、少なくとも５％高い、しかし典型的には少なくとも１０％高い、好ましくは少なくとも２０％高い、少なくとも３０％高い、少なくとも４０％高い、少なくとも５０％高い、少なくとも６０％高い、少なくとも７０％高い、少なくとも８０％高い、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、または少なくとも２００％高いレベル（または量）の阻害であってもよい。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、ＫＲＡＳの位置１３に所与の発癌性変異残基（例、本明細書の他の場所に記載される変異残基）を有する、本発明によるＫＲＡＳの所与の発癌性変異型の活性を、ＫＲＡＳの位置１２に異なる発癌性変異残基（例、本明細書の他の場所に記載される異なる変異アミノ酸残基）を有する、ＫＲＡＳの異なる（すなわち別の）発癌性変異型の活性よりも優先的に阻害してもよい。例として、いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、１３にＤ（アスパラギン酸）残基を有するＫＲＡＳの発癌性変異型の活性を、ＫＲＡＳの位置１２に異なる（すなわち、非Ｄの）発癌性変異残基（例、ＶまたはＣまたはＡまたはＳまたはＲ、好ましくはＶまたはＣ）を有するＫＲＡＳの発癌性変異型の活性よりも優先的に阻害してもよい。優先的な阻害は、少なくとも５％高い、しかし典型的には少なくとも１０％高い、好ましくは少なくとも２０％高い、少なくとも３０％高い、少なくとも４０％高い、少なくとも５０％高い、少なくとも６０％高い、少なくとも７０％高い、少なくとも８０％高い、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、または少なくとも２００％高いレベル（または量）の阻害であってもよい。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体がもたらす（または誘発する）、本発明による所与のＧ１２変異（位置１２における変異）を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３またはＳＥＱＩＤＮＯ：１５のアミノ酸配列に示される可能な変異残基のうちの１つを有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する細胞（例、癌細胞または癌細胞株）のアポトーシス（本明細書の他の場所に考察されるとおり、これはＫＲＡＳ阻害を示す）のレベル（または量）は、Ｇ１２変異に異なる発癌性変異残基（位置１２における変異）を有する（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３またはＳＥＱＩＤＮＯ：１５のアミノ酸配列に示される可能な変異残基のうちの異なる１つを有する）ＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞において前記抗体がもたらす（または誘発する）アポトーシスのレベル（または量）よりも高い（例、有意に高い）。たとえば、本発明の抗体がもたらす（または誘発する）Ｇ１２Ｄ変異（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：８またはＳＥＱＩＤＮＯ：１１）を有するＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞（例、癌細胞または癌細胞株）のアポトーシスのレベル（または量）は、Ｇ１２における異なる発癌性変異残基を有する（位置１２における異なる、すなわち非Ｄの変異（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３またはＳＥＱＩＤＮＯ：１５のアミノ酸配列に示される可能な変異残基のうちの異なる、すなわち非Ｄの１つを有する）ＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞において前記抗体がもたらす（または誘発する）アポトーシスのレベル（または量）よりも高く（例、有意に高く）てもよい。たとえば、本発明の抗体がもたらす（または誘発する）Ｇ１２Ｄ変異（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：８またはＳＥＱＩＤＮＯ：１１）を有するＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞（例、癌細胞または癌細胞株）のアポトーシスのレベル（または量）は、Ｇ１２ＶまたはＧ１２Ｃ変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞において前記抗体がもたらす（または誘発する）アポトーシスのレベル（または量）よりも高く（例、有意に高く）てもよい。

別の例として、いくつかの実施形態において、本発明の抗体がもたらす（または誘発する）、本発明による所与のＧ１３変異（位置１３における変異）を有するＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４またはＳＥＱＩＤＮＯ：１６のアミノ酸配列に示される可能な変異残基のうちの１つを有するＫＲＡＳの発癌性変異型）を発現する細胞（例、癌細胞または癌細胞株）のアポトーシス（本明細書の他の場所に考察されるとおり、これはＫＲＡＳ阻害を示す）のレベル（または量）は、Ｇ１３に異なる発癌性変異残基（位置１３における変異）を有する（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４またはＳＥＱＩＤＮＯ：１６のアミノ酸配列に示される可能な変異残基のうちの異なる１つを有する）ＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞において前記抗体がもたらす（または誘発する）アポトーシスのレベル（または量）よりも高い（例、有意に高い）。たとえば、本発明の抗体がもたらす（または誘発する）Ｇ１３Ｄ変異（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：９またはＳＥＱＩＤＮＯ：１２）を有するＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞（例、癌細胞または癌細胞株）のアポトーシスのレベル（または量）は、Ｇ１３変異に異なる発癌性変異残基（位置１３における異なる、すなわち非Ｄの変異）を有するＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞において前記抗体がもたらす（または誘発する）アポトーシスのレベル（または量）よりも高く（例、有意に高く）てもよい。たとえば、本発明の抗体がもたらす（または誘発する）Ｇ１３Ｄ変異（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：９またはＳＥＱＩＤＮＯ：１２）を有するＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞（例、癌細胞または癌細胞株）のアポトーシスのレベル（または量）は、Ｇ１３Ｃ変異を有するＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞において前記抗体がもたらす（または誘発する）アポトーシスのレベル（または量）よりも高く（例、有意に高く）てもよい。

いくつかのこうした実施形態において、細胞にもたらされるアポトーシスのより高いレベルとは、少なくとも５％高い、しかし典型的には少なくとも１０％高い、好ましくは少なくとも２０％高い、少なくとも３０％高い、少なくとも４０％高い、少なくとも５０％高い、少なくとも６０％高い、少なくとも７０％高い、少なくとも８０％高い、少なくとも９０％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、または少なくとも２００％高いレベルである。いくつかの実施形態において、アポトーシスのより高いレベルとは、最大５００％高い、最大４００％高い、最大３００％高い、最大２００％高い、最大１００％高い、または最大５０％高いレベルである。いくつかの実施形態において、細胞にもたらされるアポトーシスのより高いレベルとは、最大５～５００％高い、５～４００％高い、５～３００％高い、５～２００％高い、５～１００％高い、５～５０％高い、５～２０％高い、１０～５００％高い、１０～４００％高い、１０～３００％高い、１０～２００％高い、１０～１００％高い、１０～５０％高い、１０～２０％高い、２０～５００％高い、２０～４００％高い、２０～３００％高い、２０～２００％高い、２０～１００％高い、２０～５０％高い、５０～５００％高い、５０～４００％高い、５０～３００％高い、５０～２００％高い、または５０～１００％高いレベルである。

本明細書の他の場所に考察されるとおり、いくつかの実施形態において、ＫＲＡＳの発癌性Ｇ１２変異型を発現する癌細胞株は、（ＫＲＡＳのＧ１２Ｄ発癌性変異型を発現する）癌細胞株ＳＫ－ＬＵ－１であってもよい。いくつかの実施形態において、ＫＲＡＳの発癌性Ｇ１３変異型を発現する癌細胞株は、（ＫＲＡＳのＧ１３Ｄ発癌性変異型を発現する）癌細胞株ＨＣＴ１１６であってもよい。いくつかの実施形態において、ＫＲＡＳの発癌性Ｇ１２変異型を発現する癌細胞株は、（ＫＲＡＳのＧ１２Ｖ発癌性変異型を発現する）癌細胞株ＳＷ６２０であってもよい。いくつかの実施形態において、ＫＲＡＳの発癌性Ｇ１２変異型を発現する癌細胞株は、（ＫＲＡＳのＧ１２Ｃ発癌性変異型を発現する）癌細胞株ＭＩＡ－ＰＡ－ＣＡ－２であってもよい。

理論に結び付けられることは望まないが、本発明の抗体は、マクロピノサイトーシスのプロセスによって細胞に内部移行された後に、細胞内で本発明によるＫＲＡＳの１つ以上の発癌性変異型の活性を阻害できると考えられる。代替的に見ると、理論に結び付けられることは望まないが、本発明の抗体は、マクロピノサイトーシスのプロセスによって、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞に内部移行され得ると考えられる。

別の態様において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３、１４、１５、１６、８、９、１１、および１２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型に結合する、たとえば単離抗体などの抗体を提供し、前記抗体は、１３、１４、１５、１６、８、９、１１、または１２のアミノ酸残基１０～２１によって定義される前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の領域におけるエピトープに結合し、前記抗体は前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の活性を阻害する。本発明の他の態様の抗体のさまざまな特徴および好ましい実施形態の考察は、本発明のこの態様に準用されて適用される。

別の態様において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：８、９、１１、および１２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型に結合する、たとえば単離抗体などの抗体を提供し、前記抗体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：８、９、１１、または１２のアミノ酸残基１０～２１によって定義される前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の領域におけるエピトープに結合し、前記抗体は前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の活性を阻害する。本発明の他の態様の抗体のさまざまな特徴および好ましい実施形態の考察は、本発明のこの態様に準用されて適用される。

別の態様において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：８およびＳＥＱＩＤＮＯ：１１からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型に結合する、たとえば単離抗体などの抗体を提供し、前記抗体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：８またはＳＥＱＩＤＮＯ：１１のアミノ酸残基１０～２１によって定義される前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の領域におけるエピトープに結合し、前記抗体は前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の活性を阻害する。本発明の他の態様の抗体のさまざまな特徴および好ましい実施形態の考察は、本発明のこの態様に準用されて適用される。

別の態様において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：９およびＳＥＱＩＤＮＯ：１２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型に結合する、たとえば単離抗体などの抗体を提供し、前記抗体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：９またはＳＥＱＩＤＮＯ：１２のアミノ酸残基１０～２１によって定義される前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の領域におけるエピトープに結合し、前記抗体は前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の活性を阻害する。本発明の他の態様の抗体のさまざまな特徴および好ましい実施形態の考察は、本発明のこの態様に準用されて適用される。

別の態様において、本発明はＫＲＡＳの発癌性変異型に結合する抗体を提供し、前記ＫＲＡＳの発癌性変異型は、野生型ＫＲＡＳ（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：７またはＳＥＱＩＤＮＯ：１０）の位置Ｇ１２またはＧ１３に対応する位置にアミノ酸置換を含み、前記抗体は、野生型ＫＲＡＳ（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：７またはＳＥＱＩＤＮＯ：１０）のアミノ酸残基１０～２１に対応するアミノ酸残基によって定義される前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の領域内にあるエピトープに結合する。本発明の他の態様の抗体のさまざまな特徴および好ましい実施形態の考察は、本発明のこの態様に準用されて適用される。

別の態様において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１７、１８、１、および２からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＫＲＡＳの発癌性変異型に結合する抗体を提供し、前記抗体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１７、１８、１、または２のアミノ酸配列によって定義される領域において前記ＫＲＡＳの発癌性変異型のエピトープに結合し、前記抗体は前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の活性を阻害する。本発明の他の態様の抗体のさまざまな特徴および好ましい実施形態の考察は、本発明のこの態様に準用されて適用される。

別の態様において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１および２からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＫＲＡＳの発癌性変異型に結合する抗体を提供し、前記抗体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１または２のアミノ酸配列によって定義される領域において前記ＫＲＡＳの発癌性変異型のエピトープに結合し、前記抗体は前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の活性を阻害する。本発明の他の態様の抗体のさまざまな特徴および好ましい実施形態の考察は、本発明のこの態様に準用されて適用される。

別の態様において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３、１４、１５、１６、８、９、１１、および１２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型に結合する、たとえば単離抗体などの抗体を提供し、前記抗体は、１３、１４、１５、１６、８、９、１１、または１２のアミノ酸残基１０～２１によって定義される前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の領域において結合し、前記抗体は前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の活性を阻害する。本発明の他の態様の抗体のさまざまな特徴および好ましい実施形態の考察は、本発明のこの態様に準用されて適用される。

別の態様において、本発明は、野生型ＫＲＡＳの位置Ｇ１２またはＧ１３に対応する位置にアミノ酸置換（好ましくはＧ１２ＤまたはＧ１３Ｄ置換）を含むエピトープにおいてＫＲＡＳの発癌性変異型（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３、１４、１５、１６、８、９、１１、および１２）に結合する、たとえば単離抗体などの抗体を提供する。好ましくは、前記抗体は前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の活性を阻害する。本発明の他の態様の抗体のさまざまな特徴および好ましい実施形態の考察は、本発明のこの態様に準用されて適用される。

別の態様において、本発明は、ＫＲＡＳの発癌性変異型に結合する抗体を提供し、前記ＫＲＡＳの発癌性変異型は、野生型ＫＲＡＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）の位置Ｇ１２またはＧ１３に対応する位置にアミノ酸置換を含み、前記抗体は、野生型ＫＲＡＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）のアミノ酸残基１０～２１に対応するアミノ酸残基によって定義される前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の領域内にあるエピトープに結合し、前記抗体は前記ＫＲＡＳの発癌性変異型のＧＴＰアーゼ活性を阻害する（または阻害できる）。本発明の他の態様の抗体のさまざまな特徴および好ましい実施形態の考察は、本発明のこの態様に準用されて適用される。

別の態様において、本発明は、ＫＲＡＳの発癌性変異型に結合する抗体を提供し、前記ＫＲＡＳの発癌性変異型は、野生型ＫＲＡＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）の位置Ｇ１２またはＧ１３に対応する位置にアミノ酸置換を含み、前記抗体は、野生型ＫＲＡＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）のアミノ酸残基１０～２１に対応するアミノ酸残基によって定義される前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の領域内にあるエピトープに結合し、前記抗体は前記ＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞におけるＥＲＫリン酸化を阻害する（または阻害できる）。本発明の他の態様の抗体のさまざまな特徴および好ましい実施形態の考察は、本発明のこの態様に準用されて適用される。

別の態様において、本発明は、ＫＲＡＳの発癌性変異型に結合する抗体を提供し、前記ＫＲＡＳの発癌性変異型は、野生型ＫＲＡＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）の位置Ｇ１２またはＧ１３に対応する位置にアミノ酸置換を含み、前記抗体は、野生型ＫＲＡＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）のアミノ酸残基１０～２１に対応するアミノ酸残基によって定義される前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の領域内にあるエピトープに結合し、前記抗体は前記ＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞におけるアポトーシスを誘導または増加させる（または誘導または増加させ得る）。本発明の他の態様の抗体のさまざまな特徴および好ましい実施形態の考察は、本発明のこの態様に準用されて適用される。

別の態様において、本発明は、ＫＲＡＳの発癌性変異型に結合する抗体を提供し、前記ＫＲＡＳの発癌性変異型は、野生型ＫＲＡＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）の位置Ｇ１２またはＧ１３に対応する位置にアミノ酸置換を含み、前記抗体は、野生型ＫＲＡＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）のアミノ酸残基１０～２１に対応するアミノ酸残基によって定義される前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の領域内にあるエピトープに結合し、前記抗体は前記ＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞におけるネクローシスを誘導または増加させる（または誘導または増加させ得る）。本発明の他の態様の抗体のさまざまな特徴および好ましい実施形態の考察は、本発明のこの態様に準用されて適用される。

別の態様において、本発明は、野生型ＫＲＡＳと比較してＫＲＡＳの発癌性変異型に優先的に（または選択的に）結合する抗体を提供し、前記ＫＲＡＳの発癌性変異型は、野生型ＫＲＡＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）の位置Ｇ１２またはＧ１３に対応する位置にアミノ酸置換を含み、前記抗体は、野生型ＫＲＡＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）のアミノ酸残基１０～２１に対応するアミノ酸残基によって定義される前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の領域内にあるエピトープに結合し、前記抗体は前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の活性を阻害する。本発明の他の態様の抗体のさまざまな特徴および好ましい実施形態の考察は、本発明のこの態様に準用されて適用される。

別の態様において、本発明は、野生型ＫＲＡＳと比較してＫＲＡＳの発癌性変異型に優先的に（または選択的に）結合する抗体を提供し、前記ＫＲＡＳの発癌性変異型は、ＳＥＱＩＤＮＯ：９またはＳＥＱＩＤＮＯ：１２のアミノ酸配列を有し、前記抗体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：９またはＳＥＱＩＤＮＯ：１２のアミノ酸残基１０～２１によって定義される前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の領域内にあるエピトープに結合し、前記抗体は前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の活性を阻害する。本発明の他の態様の抗体のさまざまな特徴および好ましい実施形態の考察は、本発明のこの態様に準用されて適用される。

別の態様において、本発明は、ＫＲＡＳの発癌性変異型に結合する抗体を提供し、前記ＫＲＡＳの発癌性変異型は、野生型ＫＲＡＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）の位置Ｇ１２またはＧ１３に対応する位置にアミノ酸置換を含み、前記抗体は、野生型ＫＲＡＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）のアミノ酸残基１０～２１に対応するアミノ酸残基によって定義される前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の領域内にあるエピトープに結合し、前記抗体は野生型ＫＲＡＳと比較して前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の活性を優先的に（または選択的に）阻害する。本発明の他の態様の抗体のさまざまな特徴および好ましい実施形態の考察は、本発明のこの態様に準用されて適用される。

別の態様において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：９またはＳＥＱＩＤＮＯ：１２のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型に結合する抗体を提供し、前記抗体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：９またはＳＥＱＩＤＮＯ：１２のアミノ酸残基１０～２１によって定義される前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の領域内にあるエピトープに結合し、前記抗体は野生型ＫＲＡＳと比較して前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の活性を優先的に（または選択的に）阻害する。本発明の他の態様の抗体のさまざまな特徴および好ましい実施形態の考察は、本発明のこの態様に準用されて適用される。

別の態様において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：９およびＳＥＱＩＤＮＯ：１２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型に結合する（または結合できる）たとえば単離抗体などの抗体（例、モノクローナル抗体）を提供し、前記抗体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：９またはＳＥＱＩＤＮＯ：１２のアミノ酸残基１０～２１によって定義される前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の領域内のエピトープに結合し、前記抗体は、本発明の他の態様に関連して本明細書の他の場所に記載されるとおりのＣＤＲドメインアミノ酸配列（またはその組み合わせ）、および／または少なくとも１つのＶＨドメインアミノ酸配列、および／または少なくとも１つのＶＬドメインアミノ酸配列（またはＶＨおよびＶＬドメイン配列の組み合わせ）を有する。たとえば、いくつかのこうした実施形態において、抗体は、１１Ｄ６－１、４Ｂ８－１、７Ｄ１１－１、７Ｇ２－１、６Ｂ２－１－１、または６Ｂ２－１－２抗体（またはそれと実質的に相同の配列、または１１Ｄ６－１、４Ｂ８－１、７Ｄ１１－１、７Ｇ２－１、６Ｂ２－１－１、または６Ｂ２－１－２抗体の配列に基づく配列）に関連して本明細書の他の場所に記載されるとおりのＣＤＲドメインアミノ酸配列（またはその組み合わせ）、および／または少なくとも１つのＶＨドメインアミノ酸配列、および／または少なくとも１つのＶＬドメインアミノ酸配列（またはＶＨおよびＶＬドメイン配列の組み合わせ）を有してもよい。いくつかの実施形態において、抗体は好ましくは前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の活性（例、本明細書の他の場所に記載の１つ以上の活性）を阻害する。いくつかの実施形態において、抗体は（例、本明細書の他の場所に記載されるとおり）前記ＫＲＡＳの発癌性変異型に優先的に（または選択的に）結合し、および／または（例、本明細書の他の場所に記載されるとおり）前記ＫＲＡＳの発癌性変異型を優先的に（または選択的に）阻害する。いくつかの実施形態において、抗体は野生型ＫＲＡＳと比較して前記ＫＲＡＳの発癌性変異型に優先的に（または選択的に）結合し、および／または野生型ＫＲＡＳと比較して前記ＫＲＡＳの発癌性変異型を優先的に（または選択的に）阻害する。本発明の他の態様の抗体のさまざまな特徴および好ましい実施形態の考察は、本発明のこの態様に準用されて適用される。

別の態様において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：５のアミノ酸配列を有する単離ペプチドに結合する（または結合できる）たとえば単離抗体などの抗体（例、モノクローナル抗体）を提供し、前記抗体は、本発明の他の態様に関連して本明細書の他の場所に記載されるとおりのＣＤＲドメインアミノ酸配列（またはその組み合わせ）、および／または少なくとも１つのＶＨドメインアミノ酸配列、および／または少なくとも１つのＶＬドメインアミノ酸配列（またはＶＨおよびＶＬドメイン配列の組み合わせ）を有する。たとえば、いくつかのこうした実施形態において、抗体は、１１Ｄ６－１、４Ｂ８－１、７Ｄ１１－１、７Ｇ２－１、６Ｂ２－１－１、または６Ｂ２－１－２抗体（またはそれと実質的に相同の配列、または１１Ｄ６－１、４Ｂ８－１、７Ｄ１１－１、７Ｇ２－１、６Ｂ２－１－１、または６Ｂ２－１－２抗体の配列に基づく配列）に関連して本明細書の他の場所に記載されるとおりのＣＤＲドメインアミノ酸配列（またはその組み合わせ）、および／または少なくとも１つのＶＨドメインアミノ酸配列、および／または少なくとも１つのＶＬドメインアミノ酸配列（またはＶＨおよびＶＬドメイン配列の組み合わせ）を有してもよい。いくつかの実施形態において、抗体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１６０の単離ペプチドと比較して、ＳＥＱＩＤＮＯ：５の単離ペプチドに優先的に（または選択的に）結合する。本発明のこの態様の好ましい実施形態において、抗体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：９およびＳＥＱＩＤＮＯ：１２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの発癌性変異型に結合し（または結合でき）、前記抗体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：９またはＳＥＱＩＤＮＯ：１２のアミノ酸残基１０～２１によって定義される前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の領域におけるエピトープに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は好ましくは前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の活性（例、本明細書の他の場所に記載の１つ以上の活性）を阻害する。いくつかの実施形態において、抗体は（例、本明細書の他の場所に記載されるとおり）前記ＫＲＡＳの発癌性変異型に優先的に（または選択的に）結合し、および／または（例、本明細書の他の場所に記載されるとおり）前記ＫＲＡＳの発癌性変異型を優先的に（または選択的に）阻害する。いくつかの実施形態において、抗体は野生型ＫＲＡＳと比較して前記ＫＲＡＳの発癌性変異型に優先的に（または選択的に）結合し、および／または野生型ＫＲＡＳと比較して前記ＫＲＡＳの発癌性変異型を優先的に（または選択的に）阻害する。本発明の他の態様の抗体のさまざまな特徴および好ましい実施形態の考察は、本発明のこの態様に準用されて適用される。

本出願書全体にわたって使用される「ａ」および「ａｎ」という用語は、その後に上限が具体的に述べられる場合を除いて、それらが「少なくとも１つの」、「少なくとも第１の」、「１つ以上の」、または「複数の」言及される構成要素またはステップを意味することを意図して使用されている。したがって、本明細書において用いられる「抗体（ａｎａｎｔｉｂｏｄｙ）」は、「少なくとも第１の抗体」を意味する。任意の単一の薬剤の量と同様に、組み合わせの動作可能な限度およびパラメータは、当業者が本開示に照らして知ることとなるだろう。

加えて、本明細書において「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「有する（ｈａｓ）」、もしくは「有する（ｈａｖｉｎｇ）」という用語、またはその他の同等の用語が用いられるとき、いくつかのより具体的な実施形態において、これらの用語は「からなる」もしくは「から本質的になる」という用語、またはその他の同等の用語を含む。

本明細書において定義される本発明の抗体をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子、またはその一部もしくはフラグメント、またはそれと実質的に相同の核酸分子は、本発明のなおもさらなる態様を形成する。

好ましい核酸分子は、本発明の抗体のＶＨ領域をコードするもの（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：３０または５０または７０または９０または１１０または１３０をコードするもの、たとえばそれぞれＳＥＱＩＤＮＯ：２８または４８または６８または８８または１０８または１２８など）である。他の好ましい核酸分子は、本発明の抗体のＶＬ領域をコードするもの（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：３１または５１または７１または９１または１１１または１３１をコードするもの、たとえばそれぞれＳＥＱＩＤＮＯ：２９または４９または６９または８９または１０９または１２９など）である。

よって、好ましい核酸分子は、（好ましくはそれぞれ２８または４８または６８または８８または１０８または１２８によってコードされる）ＳＥＱＩＤＮＯ：３０または５０または７０または９０または１１０または１３０のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）をコードする配列を含み、および／または（好ましくはそれぞれＳＥＱＩＤＮＯ：２９または４９または６９または８９または１０９または１２９によってコードされる）ＳＥＱＩＤＮＯ：３１または５１または７１または９１または１１１または１３１のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）をコードする配列を含む。

以下の組み合わせをコードする核酸も好ましい。ＳＥＱＩＤＮＯ：３０および３１；またはＳＥＱＩＤＮＯ：５０および５１；またはＳＥＱＩＤＮＯ７０および７１；またはＳＥＱＩＤＮＯ：９０および９１；またはＳＥＱＩＤＮＯ：１１０および１１１；またはＳＥＱＩＤＮＯ：１３０および１３１。以下の組み合わせを含む核酸分子も好ましい。ＳＥＱＩＤＮＯ：２８および２９；またはＳＥＱＩＤＮＯ：４８および４９；またはＳＥＱＩＤＮＯ：６８および６９；またはＳＥＱＩＤＮＯ：８８および８９；またはＳＥＱＩＤＮＯ：１０８および１０９；またはＳＥＱＩＤＮＯ：１２８および１２９。

他の好ましい核酸分子は、本発明の抗体のＩｇＧ形態をコードする配列を含む。

別の態様において、本発明は、各々がヌクレオチド配列を含む核酸分子のセット（または複数物）を提供し、前記核酸分子のセットは一緒に（または集合的に）本発明による抗体をコードする。こうした核酸分子のセットは、（例、宿主細胞内で）このセットが発現される（すなわち、一緒に発現される）ときに、本発明の抗体全体が発現されて、好ましくはアセンブルされることを特徴としてもよい。

上述の配列と実質的に相同の核酸配列も使用されてもよい。

アミノ酸または核酸配列に関連して本明細書において用いられる「実質的に相同の」という用語は、開示されるアミノ酸または核酸配列に対して少なくとも６５％、７０％、または７５％、好ましくは少なくとも８０％、さらにより好ましくは少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する配列を含む。よって、本発明の実質的に相同の配列は、本発明の配列に対する単一または複数の塩基またはアミノ酸の変更（付加、置換、挿入、または欠失）を含む。アミノ酸レベルでは、好ましい実質的に相同の配列は、本発明の配列を構成するフレームワーク領域の１つ以上および／またはＣＤＲの１つ以上の中に、最大で５、たとえば１、２、３、４、または５のみ、好ましくは１、２、または３、より好ましくは１または２の変更されたアミノ酸を含有する。前記変更は、保存的アミノ酸または非保存的アミノ酸によるものであり得る。好ましくは、前記変更は保存的アミノ酸置換である。

特定の実施形態において、所与の出発配列が比較的短いとき（例、５アミノ酸の長さ）、それと実質的に相同の配列中には、もっと長い出発配列と実質的に相同の配列において任意選択で行われ得るアミノ酸置換の数と比較して、より少ないアミノ酸置換が存在してもよい。たとえば、特定の実施形態において、たとえばいくつかの実施形態において５アミノ酸残基の長さであり得る出発ＶＨＣＤＲ１配列などの、本発明による出発ＶＨＣＤＲ１配列に対する実質的に相同の配列は、好ましくは出発配列と比較して１または２（より好ましくは１）の変更アミノ酸を有する。したがって、いくつかの実施形態において、実質的に相同の配列（例、実質的に相同のＣＤＲ配列）中の変更アミノ酸の数は、所与の出発ＣＤＲ配列の長さに対して調整され得る。たとえば、ＣＤＲにおいてたとえば少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の配列同一性などの特定の％配列同一性を達成することなどのために、所与の出発ＣＤＲ配列の長さに依存して、異なる数の変更アミノ酸が存在し得る。

ＣＤＲのどのアミノ酸残基が抗原結合に寄与しないか、または顕著に寄与しないか、すなわち実質的に相同の配列を伴う本発明の実施形態における変更または置換の良い候補であるかを決定するために、たとえばアラニンスキャニング変異誘発および／または抗原－抗体複合体の結晶構造の解析などの当該技術分野におけるルーチンの方法を使用できる。

「実質的に相同の」という用語は、本発明のタンパク質または核酸分子と実質的に同じ機能を実質的に同じやり方で行う、本発明のアミノ酸およびヌクレオチド配列の改変物または化学的等価物も含む。たとえば、任意の実質的に相同の抗体は、（例、本明細書の他の場所に記載される）本発明によるＫＲＡＳの所与の発癌性変異型に結合する能力を保持するべきである。好ましくは、任意の実質的に相同の抗体は、出発抗体の機能的能力の１つ以上（またはすべて）を保持するべきである。

本発明の抗体の実質的に相同の配列は、限定なしに、たとえば抗体のＶＨ、ＶＬ、またはＣＤＲドメインに影響を与えない変更など、たとえば抗原の結合に寄与しないタグ配列もしくはその他の構成要素が付加された抗体、または１つのタイプもしくは形式の抗体分子もしくはフラグメントを別のタイプもしくは形式の抗体分子もしくはフラグメントに転換するための変更（例、ＦａｂからｓｃＦｖまたは全抗体またはその逆の転換）、または抗体分子を特定のクラスもしくはサブクラスの抗体分子に転換すること（例、抗体分子をＩｇＧまたはそのサブクラスのたとえばＩｇＧ₂もしくはＩｇＧ₄などに転換すること）なども含む。

好ましくは、任意の実質的に相同の抗体は、ＫＲＡＳの所与の発癌性変異型の、問題の抗体が認識するのと同じ（または実質的に同じ）エピトープ、たとえば本明細書に記載される本発明のＣＤＲドメインまたは本発明のＶＨおよびＶＬドメインが認識するのと同じエピトープなどに結合する（または特異的に結合する）能力を保持するべきである。よって好ましくは、任意の実質的に相同の抗体は、ＫＲＡＳの所与の発癌性変異型への結合について、本発明のさまざまな抗体のうちの１つ以上（例、記載されるポリクローナル抗体の１つ以上、または記載されるモノクローナル抗体１１Ｄ６－１、４Ｂ８－１、７Ｄ１１－１、７Ｇ２－１、６Ｂ２－１－１、もしくは６Ｂ２－１－２の１つ以上）と競合する能力を保持するべきである。同じエピトープ／抗原への結合は、たとえば競合アッセイなどの結合アッセイなどを用いて、当該技術分野において周知であり十分に説明されている方法によって容易に試験できる。他の機能的特性の保持についても、当該技術分野において周知であり十分に説明されているか、または本明細書に記載される方法によって容易に試験できる。

よって、「実質的に相同の」抗体が本発明の抗体および抗体フラグメントと同じ結合特異性を有するかどうかを試験するために結合アッセイを使用でき、それはたとえば本明細書の他の場所に記載される競合アッセイまたはＥＬＩＳＡアッセイなどの結合アッセイなどであることを当業者は認識するだろう。「実質的に相同の」抗体がＫＲＡＳの所与の発癌性変異型に結合できるかどうかを確証するために、ビアコア（ＢＩＡｃｏｒｅ）アッセイも容易に使用され得る。当業者はその他の好適な方法および変形を認識するだろう。

以下に概説するとおり、競合結合アッセイを用いて、「実質的に相同の」抗体が、本発明の抗体（例、抗体１１Ｄ６－１、４Ｂ８－１、７Ｄ１１－１、７Ｇ２－１、６Ｂ２－１－１、もしくは６Ｂ２－１－２、またはこれらの抗体に基づく抗体）に認識されるＫＲＡＳの発癌性変異型の実質的に同じエピトープ（または同じエピトープ）に結合する（または特異的に結合する）能力を保持するかどうか、または本発明のさまざまな抗体（例、抗体１１Ｄ６－１、４Ｂ８－１、７Ｄ１１－１、７Ｇ２－１、６Ｂ２－１－１、もしくは６Ｂ２－１－２、またはこれらの抗体に基づく抗体）のうちの１つ以上と競合する能力を有するかどうかを試験できる。以下に記載される方法は、好適な競合アッセイの単なる一例である。当業者はその他の好適な方法および変形を認識するだろう。

例示的な競合アッセイは、変動する濃度の試験抗体（例、実質的に相同の抗体）の存在下で、ＫＲＡＳの所与の発癌性変異型に対するさまざまな有効濃度の本発明の抗体の結合を評価することを伴う。次いで、試験抗体によって誘導された結合阻害の量を評価できる。試験抗体が濃度の増加によって本発明の抗体との競合の増加を示す（すなわち、試験抗体の濃度を増加させることによって、ＫＲＡＳの発癌性変異型に対する本発明の抗体の結合量が相応に低減する）ことは、実質的に同じエピトープに結合する証拠である。好ましくは、試験抗体は、ＫＲＡＳの発癌性変異型に結合する本発明の抗体の量を有意に低減させる。好ましくは、試験抗体は、ＫＲＡＳの発癌性変異型に結合する本発明の抗体の量を少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％低減させる。こうした競合アッセイにおける結合阻害を評価するためにＥＬＩＳＡアッセイが用いられてもよいが、その他の好適な技術も当業者に周知であろう。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体（例、抗体１１Ｄ６－１、４Ｂ８－１、７Ｄ１１－１、７Ｇ２－１、６Ｂ２－１－１、もしくは６Ｂ２－１－２、またはこれらの抗体に基づく抗体）に認識されるＫＲＡＳの所与の発癌遺伝子型の実質的に同じ（または同じ）エピトープに結合する（または特異的に結合する）能力を保持するか、または本発明のさまざまな抗体（例、抗体１１Ｄ６－１、４Ｂ８－１、７Ｄ１１－１、７Ｇ２－１、６Ｂ２－１－１、もしくは６Ｂ２－１－２、またはこれらの抗体に基づく抗体）のうちの１つ以上と競合する能力を有する、「実質的に相同の」抗体が好ましい。

本明細書において用いられる「競合する抗体」という用語は、「参照抗体」とほぼ同じ、実質的に同じ、または本質的に同じ、またはまさに同じエピトープに結合する抗体を示す。「競合する抗体」は、重複するエピトープ特異性を有する抗体を含む。よって競合する抗体は、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型への結合について、参照抗体と効果的に競合できる。好ましくは、競合する抗体は、参照抗体と同じエピトープに結合できる。代替的に見ると、競合する抗体は、好ましくは参照抗体と同じエピトープ特異性を有する。

本明細書において用いられる「参照抗体」は、本発明の単離ペプチドか、または本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型のエピトープに結合する抗体（例、本明細書に記載されるポリクローナルウサギ抗体またはモノクローナル抗体）を含む。加えて「参照抗体」は、好ましくは本明細書において定義されるＶＨおよびＶＬドメインを有する抗体を含み、より好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：３０のＶＨドメインおよびＳＥＱＩＤＮＯ：３１のＶＬドメイン、またはＳＥＱＩＤＮＯ：５０のＶＨドメインおよびＳＥＱＩＤＮＯ：５１のＶＬドメイン、ＳＥＱＩＤＮＯ：７０のＶＨドメインおよびＳＥＱＩＤＮＯ：７１のＶＬドメイン、ＳＥＱＩＤＮＯ：９０のＶＨドメインおよびＳＥＱＩＤＮＯ：９１のＶＬドメイン、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１０のＶＨドメインおよびＳＥＱＩＤＮＯ：１１１のＶＬドメイン、またはＳＥＱＩＤＮＯ：１３０のＶＨドメインおよびＳＥＱＩＤＮＯ：１３１のＶＬドメインを有する抗体を含む。特定の好ましい参照抗体は、抗体１１Ｄ６－１、４Ｂ８－１、７Ｄ１１－１、７Ｇ２－１、６Ｂ２－１－１、もしくは６Ｂ２－１－２、またはこれらの抗体に基づく抗体から選択される。

競合する抗体の識別は参照抗体と比較して決定されるため、競合する抗体を識別するために、いずれかまたは両方の抗体が結合するエピトープを実際に決定することは決して必要とされないことが理解されるだろう。しかし、もし所望であれば、標準的な技術を用いてエピトープマッピングが行われ得る。

本発明による組成物、イムノコンジュゲート、医薬品、組み合わせ、カクテル、キット、第１および第２の医学的使用、ならびにすべての方法の以下の説明において、「抗体」および「イムノコンジュゲート」という用語、またはその抗原結合領域もしくはフラグメントは、別様に特定的に記述されるか、または科学用語によって明らかにされない限り、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型に結合するさまざまな抗体および本明細書の実施例のセクションに記載される特定の抗体を示す。

本明細書において用いられる「抗体」および「免疫グロブリン」という用語は、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体を含む、抗原結合ドメインを含む任意の免疫学的結合剤を広く示す。

よって「抗体」という用語は、抗体から得られるか、または抗体に由来する（または抗体の抗原結合ドメインに基づく）抗原結合ドメイン、たとえばＩｇ（例、ＩｇＧ）抗体から得られるか、またはそれに由来する（またはＩｇ（例、ＩｇＧ）抗体の抗原結合ドメインに基づく）抗原結合ドメインなどを含む免疫学的結合剤を含む。

いくつかの実施形態において、本発明の単離ペプチドまたはコンジュゲート（好ましくはコンジュゲート）で免疫化されたポリクローナル抗体が好ましい（例、動物（例、たとえば特定病原体除去（ＳＰＦ：ｓｐｅｃｉｆｉｃｐａｔｈｏｇｅｎｆｒｅｅ）ウサギなどのウサギ）において生成された（またはそこで産生された、またはそこから単離された）ポリクローナル抗体）。好ましい単離ペプチドおよびコンジュゲートは、本明細書の他の場所に記載される。

いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体が好ましい（例、マウスモノクローナル抗体またはヒトモノクローナル抗体またはヒト化モノクローナル抗体またはウサギモノクローナル抗体）。

重鎖における定常ドメインのタイプに依存して、全抗体は５つの主要なクラスＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭのうちの１つに割り当てられ、本発明の抗体はこれらのクラスの任意の１つであってもよい。これらのクラスのいくつかは、サブクラスまたはアイソタイプ、たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４などにさらに分けられる。異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、およびμと呼ばれる。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造および三次元構成は周知である。

一般的に、本発明において抗原結合領域ではなく全抗体が使用されるときは、ＩｇＧ（例、ＩｇＧ₂またはＩｇＧ₄）および／またはＩｇＭが好ましい。なぜなら、それらは生理学的状況において最も一般的な抗体であり、およびそれらは実験室の設定で最も容易に作製されるからである。

哺乳動物の抗体の「軽鎖」は、その定常ドメインのアミノ酸配列と、可変ドメインのフレームワーク領域内のいくつかのアミノ酸とに基づいて、カッパ（κ）およびラムダ（λ）の２つの明確に異なるタイプのうちの一方に割り当てられる。

当業者に理解されることとなるとおり、「抗体」という用語に包含される免疫学的結合試薬は、すべての抗体およびその抗原結合フラグメントを含むかまたはそれに拡張され、そこには全抗体、二量体、三量体、および多量体の抗体；二重特異性抗体；キメラ抗体；リコンビナントおよび組み換え抗体、ならびにそのフラグメントが含まれる。

よって「抗体」という用語は、抗原結合領域を有する任意の抗体様分子を示すために使用され、この用語は抗原結合ドメインを含む抗体フラグメントを含み、それはたとえばＦａｂ’、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）₂、単一ドメイン抗体（ＤＡＢ：ｄｏｍａｉｎａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）、ＴａｎｄＡｂ二量体、Ｆｖ、ｓｃＦｖ（単鎖（ｓｉｎｇｌｅｃｈａｉｎ）Ｆｖ）、ｄｓＦｖ、ｄｓ－ｓｃＦｖ、Ｆｄ、直鎖状抗体、ミニボディ、二特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｉｅｓ）、二重特異性（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）抗体フラグメント、バイボディ、トリボディ（ｓｃＦｖ－Ｆａｂ融合物、それぞれ二重特異性または三重特異性）；ｓｃ－二特異性抗体；カッパ（ラムダ（ｌａｍｄａ））ボディ（ｓｃＦｖ－ＣＬ融合物）；ＢｉＴＥ（二重特異性Ｔ細胞誘導抗体（ＢｉｓｐｅｃｉｆｉｃＴ－ｃｅｌｌＥｎｇａｇｅｒ）、Ｔ細胞を誘引するためのｓｃＦｖ－ｓｃＦｖタンデム）；ＤＶＤ－Ｉｇ（二重可変ドメイン抗体（ｄｕａｌｖａｒｉａｂｌｅｄｏｍａｉｎａｎｔｉｂｏｄｙ）、二重特異性形式）；ＳＩＰ（小免疫タンパク質（ｓｍａｌｌｉｍｍｕｎｏｐｒｏｔｅｉｎ）、ミニボディの一種）；ＳＭＩＰ（「小モジュラー免疫医薬品（ｓｍａｌｌｍｏｄｕｌａｒｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）」ｓｃＦｖ－Ｆｃ二量体；ＤＡＲＴ（ｄｓ安定化二特異性抗体「二重親和性再ターゲティング（ＤｕａｌＡｆｆｉｎｉｔｙＲｅＴａｒｇｅｔｉｎｇ）」）；および１つ以上のＣＤＲを含む小さい抗体模倣物などである。

さまざまな抗体ベースのコンストラクトおよびフラグメントを調製および使用するための技術は、当該技術分野において周知である。二特異性抗体は特に欧州特許第４０４０９７号および国際公開第９３／１１１６１号にさらに記載されており、一方で直鎖状抗体は当該技術分野においてさらに説明されている。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は非ヒト抗体（例、ウサギまたはラットまたはマウス抗体）である。いくつかの実施形態において、本発明の抗体はウサギ抗体である。いくつかの実施形態において、抗体はマウス抗体である。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体はヒト抗体であり、より好ましくは完全にヒトの抗体である。これに関して、一般的にヒト抗体は、ヒトの治療に用いることに対して少なくとも２つの利点を有し得る。第１に、ヒトの免疫系はこの抗体を異物と認識しないはずである。第２に、ヒトの循環における半減期は自然発生するヒト抗体と同様となり、より小さく頻度の低い用量を与えることが可能になる。

本明細書において抗体分子および結合タンパク質に関連して用いられる「ヒト」という用語は、第１に、ヒトレパートリーから単離されるか、もしくはそれに由来するか、またはたとえばヒト生殖系列もしくは体細胞などのヒトもしくはヒトレパートリーにおいて見出される配列に由来もしくは対応する、可変領域（例、Ｖ_H、Ｖ_L、ＣＤＲ、またはＦＲ領域）と、任意選択での定常抗体領域とを有する抗体および結合タンパク質を示す。

「ヒト」抗体および結合タンパク質は、ヒトの配列によってコードされていないアミノ酸残基、たとえばインビトロでランダムまたは部位特異的変異誘発によって導入された変異など、たとえばインビトロクローニングまたはＰＣＲによって導入された変異などをさらに含む。こうした変異の特定の例は、保存的置換を伴う変異、または抗体もしくは結合タンパク質の少数の残基におけるその他の変異、たとえば抗体もしくは結合タンパク質の最大で５、４、３、２、もしくは１の残基における変異、好ましくはたとえば抗体もしくは結合タンパク質の１つ以上のＣＤＲを構成する残基のうちの最大で５、４、３、２、もしくは１における変異などである。こうした「ヒト」抗体の特定の例は、免疫原性の可能性のある部位の量を減らすための標準的な改変技術を受けた抗体および可変領域を含む。

よって「ヒト」抗体は、ヒトに見出される配列に由来する配列およびそれに関連する配列を含むが、その配列はインビボでヒト抗体生殖系列レパートリー内に天然に存在しなくてもよい。加えて、ヒト抗体および結合タンパク質は、ヒト配列から同定されたヒト共通配列またはヒト配列と実質的に相同の配列を含むタンパク質を含む。

加えて、ヒト抗体および結合タンパク質は、ヒト抗体分子内でそれら自体が見出される組み合わせのＶ_H、Ｖ_L、ＣＤＲ、またはＦＲ領域の組み合わせに限定されない。よってヒト抗体および結合タンパク質は、必ずしもヒトに天然に存在しないこうした領域の組み合わせを含むか、またはそれに対応し（例、自然発生しない抗体であり）得る。

いくつかの実施形態において、ヒト抗体は完全にヒトの抗体である。本明細書において用いられる「完全にヒトの」抗体とは、実質的な非ヒト抗体配列または任意の非ヒト抗体配列を有さない、「ヒト」可変領域ドメインおよび／またはＣＤＲを含む抗体である。たとえば、「実質的な非ヒト抗体配列を有さない」ヒト可変領域ドメインおよび／またはＣＤＲを含む抗体は、ヒト抗体配列によってコードされていないアミノ酸を最大で５、４、３、２、または１アミノ酸しか含まない抗体、ドメイン、および／またはＣＤＲである。よって、「完全にヒトの」抗体は「ヒト化」抗体とは区別され、「ヒト化」抗体は実質的に非ヒト可変領域ドメイン、たとえばマウス可変領域ドメインなどに基づくものであり、ここではヒト抗体に典型的に存在するアミノ酸により良好に対応するように特定のアミノ酸が変更されている。

本発明の「完全にヒトの」抗体は、たとえば単鎖抗体など、任意のその他の実質的な抗体配列を有さないヒト可変領域ドメインおよび／またはＣＤＲであってもよい。代替的に、本発明の「完全にヒトの」抗体は、１つ以上のヒト抗体定常領域と一体化するか、またはそれに動作的に付着したヒト可変領域ドメインおよび／もしくはＣＤＲであってもよい。特定の好ましい完全にヒトの抗体は、ＩｇＧ定常領域の完全な補体を有するＩｇＧ抗体である。

他の実施形態において、本発明の「ヒト」抗体は、部分的にヒトのキメラ抗体である。本明細書において用いられる「部分的にヒトのキメラ」抗体とは、たとえばラットまたはマウスなどの非ヒト種の定常領域に動作的に付着またはグラフトされた「ヒト」可変領域ドメインおよび／またはＣＤＲを含む抗体である。こうした部分的にヒトのキメラ抗体は、たとえば前臨床研究などにおいて使用されてもよく、ここでの定常領域は、好ましくは前臨床試験で用いられるのと同種の動物のものとなる。これらの部分的にヒトのキメラ抗体は、たとえばエクスビボ診断などにおいても用いられてもよく、ここで非ヒト種の定常領域は、抗体検出のための付加的な選択肢を提供してもよい。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体はヒト化抗体である。実質的に非ヒト可変領域ドメインに基づく「ヒト化」抗体とは、ヒト抗体に典型的に存在するアミノ酸により良好に対応するように特定のアミノ酸が変更された抗体である。ヒト化抗体を生成するための方法は、当該技術分野において周知である。たとえば、ヒト抗体「スキャフォールド」に適切なＣＤＲ（例、マウスＣＤＲ）を挿入することによって、ヒト化抗体を達成できる。場合によっては、ヒト抗体に典型的に存在するアミノ酸により良好に対応するように１つ以上のＣＤＲ残基が変更されてもよい。

本明細書において用いられる「重鎖相補性決定領域（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｒｅｇｉｏｎ）」（「重鎖ＣＤＲ」）という用語は、抗体分子の重鎖可変領域（Ｖ_Hドメイン）内の高頻度可変性の領域を示す。重鎖可変領域は、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、および重鎖ＣＤＲ３と名付けられた３つのＣＤＲを有する。加えて、重鎖可変領域は４つのフレームワーク領域（アミノ末端からカルボキシ末端に向かってＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４）を有する。これらのフレームワーク領域はＣＤＲを分離している。

本明細書において用いられる「重鎖可変領域」（Ｖ_Hドメイン）という用語は、抗体分子の重鎖の可変領域を示す。

本明細書において用いられる「軽鎖相補性決定領域」（「軽鎖ＣＤＲ」）という用語は、抗体分子の軽鎖可変領域（Ｖ_Lドメイン）内の高頻度可変性の領域を示す。軽鎖可変領域は、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、および軽鎖ＣＤＲ３と名付けられた３つのＣＤＲを有する。加えて、軽鎖可変領域は４つのフレームワーク領域（アミノ末端からカルボキシ末端に向かってＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４）を有する。これらのフレームワーク領域はＣＤＲを分離している。

本明細書において用いられる「軽鎖可変領域」（Ｖ_Lドメイン）という用語は、抗体分子の軽鎖の可変領域を示す。

本発明の抗体のＣＤＲは、好ましくは、たとえば自然発生する抗体および／または有効な組み換え抗体に見出されるものなどの適切なフレームワーク領域によって分離される。よって、Ｖ_H、Ｖ_Lおよび個々のＣＤＲ配列は、好ましくは抗原結合を可能にするための適切なフレームワークもしくはスキャフォールド内に提供されるか、またはそれに組み込まれる。こうしたフレームワーク配列または領域は、適切なスキャフォールドを形成するために、自然発生するフレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、および／またはＦＲ４に適切に対応してもよいし、たとえばさまざまな自然発生するフレームワーク領域を比較することによって同定された共通フレームワーク領域に対応してもよい。代替的に、たとえばＴ細胞受容体フレームワークなどの非抗体スキャフォールドまたはフレームワークが用いられ得る。フレームワーク領域に用いられ得る適切な配列は、当該技術分野において周知であり、および十分に文書で立証されており、これらのうちのいずれが使用されてもよい。特に、抗原特異性の維持を可能にするフレームワーク領域、たとえば抗体と実質的に同じ３Ｄ構造または同じ３Ｄ構造をもたらすフレームワーク領域などである。

本発明の特定の抗体のＣＤＲ配列を本明細書における表Ａ～Ｆに示している。いくつかの他の実施形態において、本発明の抗体のＣＤＲ配列は、任意の好適な方法（またはツール）を用いて同定された本発明の抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメインにおけるＣＤＲ配列であってもよく、たとえばカバット（Ｋａｂａｔ）（例、カバットら、「免疫学的関心のあるタンパク質の配列（ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ）」、第５版、米国公衆衛生局（ＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＳｅｒｖｉｃｅ）、国立衛生研究所（ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ）、ベセスダ（Ｂｅｔｈｅｓｄａ）、ＭＤ、６４７－６６９、１９９１）、またはチョーシア（Ｃｈｏｔｈｉａ）（例、チョーシアＣら（１９８９）、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、３４２：８７７－８８３、またはアル－ラジカニ（Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ）ら、（１９９７）ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（ＪＭＢ）２７３、９２７－９４８）の周知の方法などに従って同定されたものであってもよい。

抗体は、従来の技術を用いてフラグメント化され得る。たとえば、抗体をペプシンで処理することによって、Ｆ（ａｂ’）₂フラグメントを生成できる。得られたＦ（ａｂ’）₂フラグメントを処理して、ジスルフィド架橋を低減させてＦａｂ’フラグメントを生成できる。パパイン消化によって、Ｆａｂフラグメントの形成をもたらすことができる。Ｆａｂ、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ’）₂、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、Ｆｄ、ｄＡｂ、ＴａｎｄＡｂ、ｄｓ－ｓｃＦｖ、二量体、ミニボディ、二特異性抗体、二重特異性抗体フラグメント、およびその他のフラグメントも、組み換え技術によって合成できるか、または化学的に合成できる。抗体フラグメントを生成するための技術は、当該技術分野において周知であり十分に説明されている。

特定の実施形態において、本発明の抗体または抗体フラグメントは、たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＥ、ＩｇＭ、またはＩｇＤ定常領域などの重鎖定常領域のすべてまたは一部分を含む。好ましくは、重鎖定常領域はＩｇＧ重鎖定常領域であり、たとえばＩｇＧ２もしくはＩｇＧ４重鎖定常領域、またはその一部分などである。さらに、抗体または抗体フラグメントは、カッパ軽鎖定常領域もしくはラムダ軽鎖定常領域のすべてもしくはその一部分、またはその一部分を含み得る。こうした定常領域のすべてまたは一部は天然に生成されてもよいし、全体的または部分的に合成されてもよい。こうした定常領域に対する適切な配列は、当該技術分野において周知であり、および十分に文書で立証されている。本発明の抗体に重鎖および軽鎖からの定常領域の全補体が含まれるとき、こうした抗体は本明細書において典型的に「全長（ｆｕｌｌｌｅｎｇｔｈ）」抗体または「全（ｗｈｏｌｅ）」抗体と呼ばれる。よっていくつかの実施形態において、本発明の抗体はＩｇ（例、ＩｇＧ）抗体である。

好ましくは、いくつかの実施形態において、本発明の抗体（例、Ｉｇ抗体）は、２つの同一のＶＨドメインおよび２つの同一のＶＬドメインを含む。よって、たとえばＩｇ（例、ＩｇＧ）抗体の場合、Ｉｇ抗体は典型的に２つの同一の重鎖および２つの同一の軽鎖を含み（またはそれらからなり）、それらが一緒にＩｇ抗体を形成する。しかし、いくつかの実施形態において、本発明の抗体（例、ＩｇＧ抗体）は、２つの同一のＶＨドメインおよび２つの非同一のＶＬドメイン（すなわち、２つの異なるＶＬドメイン）を含んでもよい。よっていくつかの実施形態において、各抗体（例、ＩｇＧ）分子は、２つの同一のＶＨドメインおよび２つの非同一のＶＬドメイン（すなわち、各々が異なる異なるアミノ酸配列を有する２つの異なるＶＬドメイン）を含んでもよい。たとえば、Ｉｇ（例、ＩｇＧ）抗体は、２つの同一の重鎖および２つの軽鎖を含んでも（またはそれらからなっても）よく、ここで２つの軽鎖は互いに配列が同一でない（すなわち、それらは異なる）。

例として、いくつかの実施形態において、抗体は、６Ｂ２－１－１（または６Ｂ２－１－２）抗体の３つのＶＨＣＤＲのアミノ酸配列（またはそれと実質的に相同のＣＤＲ配列）を含む少なくとも１つ（好ましくは２つ）の重鎖可変領域（ＶＨドメイン）と、６Ｂ２－１－１抗体の３つのＶＬＣＤＲのアミノ酸配列（またはそれと実質的に相同のＣＤＲ配列）を含む少なくとも１つ（好ましくは１つ）の軽鎖可変領域（ＶＬドメイン）と、６Ｂ２－１－２抗体の３つのＶＬＣＤＲのアミノ酸配列、それと実質的に相同のＣＤＲ配列を含む少なくとも１つ（好ましくは１つ）の軽鎖可変領域（ＶＬドメイン）とを含んでもよい。よっていくつかの実施形態において、抗体は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１０のアミノ酸配列（またはそれと実質的に相同の配列）を含む少なくとも１つ（好ましくは２つ）の重鎖可変領域（ＶＨドメイン）と、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１１のアミノ酸配列（またはそれと実質的に相同の配列）を含む少なくとも１つ（好ましくは１つ）の軽鎖可変領域（ＶＬドメイン）と、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３１のアミノ酸配列（またはそれと実質的に相同の配列）を含む少なくとも１つ（好ましくは１つ）の軽鎖可変領域（ＶＬドメイン）とを含んでもよい。いくつかの実施形態において、こうした抗体はＩｇ（例、ＩｇＧ）抗体であってもよい。

抗体または抗体フラグメントは天然に産生でき、または全体的もしくは部分的に合成して産生できる。よって抗体は、たとえば組み換えソースなどの任意の適切なソースに由来してもよく、および／またはトランスジェニック動物もしくはトランスジェニック植物において産生されても、ＩｇＹ技術を用いて卵において産生されてもよい。よって、抗体分子はインビトロまたはインビボで産生され得る。

好ましくは、抗体または抗体フラグメントは、３つのＣＤＲドメインを含む抗体軽鎖可変領域（Ｖ_L）と、３つのＣＤＲドメインを含む抗体重鎖可変領域（Ｖ_H）とを含む。前記ＶＬおよびＶＨは、一般的に抗原結合部位を形成する。

「Ｆｖ」フラグメントは、完全な抗原認識および結合部位を含む最小限の抗体フラグメントである。この領域は、堅固な非共有性会合をした１つの重鎖可変ドメインおよび１つの軽鎖可変ドメインの二量体を有する。この構成において、各可変ドメインの３つの高頻度可変領域（ＣＤＲ）が相互作用して、Ｖ_H－Ｖ_L二量体の表面上の抗原結合部位を定める。集合的に、６つの高頻度可変領域（ＣＤＲ）が抗体に抗原結合特異性を与える。

しかし、抗体の軽鎖可変ドメインからの３つのＣＤＲおよび重鎖可変ドメインからの３つのＣＤＲの存在が抗原結合に常に必要ではないことが、当該技術分野において十分に文書で立証されている。よって、上記の従来の抗体フラグメントよりも小さなコンストラクトが有効であることが公知である。

たとえば、ラクダ抗体は広範な抗原結合レパートリーを有するが、軽鎖を欠いている。加えて、ＶＨドメイン単独またはＶＬドメイン単独を含む単一ドメイン抗体による結果は、これらのドメインが許容できる高親和性を伴って抗原に結合できることを示す。よって、３つのＣＤＲは効果的に抗原に結合できる。

よって、本発明の好ましい抗体は６つのＣＤＲ領域（軽鎖からの３つおよび重鎖からの３つ）を含むかもしれないが、６より少ないＣＤＲ領域（例、３ＣＤＲ領域）を有する抗体が本発明に包含される。重鎖または軽鎖のみに由来するＣＤＲを有する抗体も予期される。

本発明のなおもさらなる態様は抗体、好ましくは単離抗体を提供し、この抗体は本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型に結合し、および前記ＫＲＡＳの発癌性変異型への結合について本発明の抗体と競合する（すなわち、同じまたは実質的に同じエピトープに結合する）能力を有する。たとえば、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型への結合について、本発明の単離ペプチド（またはコンジュゲート）に対して生成された抗体（例、たとえば本明細書の実施例のセクションに記載されるものなどのポリクローナル抗体）と競合できる抗体は、本発明のさらなる態様を表す。本発明の他の態様のその他の特徴および特性が、本発明のこの態様に準用されて適用される。

同じエピトープ／抗原への結合は、たとえば競合アッセイなどの結合アッセイなどを用いて、当該技術分野において周知であり十分に説明されている方法によって容易に試験できる。

例示的な競合アッセイは、変動する濃度の試験抗体（例、実質的に相同の抗体）の存在下で、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型に対するさまざまな有効濃度の本発明の抗体（例、本発明の本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型の単離ペプチドまたはエピトープに結合するウサギポリクローナル抗体）の結合を評価することを伴う。次いで、試験抗体によって誘導された結合阻害の量を評価できる。試験抗体が濃度の増加によって本発明の抗体との競合の増加を示す（すなわち、試験抗体の濃度を増加させることによって、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型に対する本発明の抗体の結合量が相応に低減する）ことは、実質的に同じエピトープに結合する証拠である。好ましくは、試験抗体は、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型に結合する本発明の抗体の量を有意に低減させる。好ましくは、試験抗体は、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型に結合する本発明の抗体の量を少なくとも約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、または９５％低減させる。こうした競合アッセイにおける結合阻害を評価するために、たとえばＥＬＩＳＡなどが用いられてもよいが、その他の好適な技術も当業者に周知であろう。

本明細書において用いられる「参照抗体」は、本発明による単離ペプチドまたはＫＲＡＳの発癌性変異型のエピトープに結合する抗体（例、本明細書に記載されるポリクローナルウサギ抗体）である。

好ましくは、上述の能力および特性は測定可能なレベルまたは顕著なレベルで観察され、より好ましくは適切な対照レベルと比較したときに統計的に有意なレベルで観察される。適切な有意水準は、本明細書の他の場所で考察される。より好ましくは、上述の能力および特性の１つ以上は、先行技術の抗体について観察された能力と比較したときに、明らかにより良好なレベルで、またはより好ましくは有意により良好なレベルで観察される。

本明細書で言及される任意の統計的分析において、好ましくは関連の対照またはその他の比較物もしくは測定に対する統計的に有意な差は、＜０．１、好ましくは＜０．０５または＜０．０１または＜０．００１または＜０．０００１の確率値を有する。統計的有意性を決定する適切な方法は、当該技術分野において周知であり、および十分に文書で立証されており、これらのうちのいずれが使用されてもよい。

別の態様において、本発明は、ＫＲＡＳの発癌性変異型に結合し、および３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含む、たとえば単離抗体などの抗体を提供し、前記重鎖可変領域は、
（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３２のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１と、
（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３３のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ２と、
（ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３４のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ３とを含み；および／または（好ましくは「および」）
前記軽鎖可変領域は、
（ｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３５のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有する可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１と、
（ｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３６のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ２と、
（ｆ）ＳＥＱＩＤＮＯ：３７のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ３とを含み、
前記実質的に相同の配列は、所与のＣＤＲ配列と比較して１、２、または３のアミノ酸置換を含有する配列であるか、または前記実質的に相同の配列は、所与のＣＤＲ配列の保存的アミノ酸置換を含有する配列である。

本発明のこの態様の好ましい実施形態は、本発明の他の態様に関連して本明細書の他の場所に記載される抗体配列（例、ＣＤＲ配列および／またはＶＨドメイン配列および／またはＶＬドメイン配列）の１つ以上を含む抗体を含む。よって、本発明の他の態様の抗体のさまざまな特徴および好ましい実施形態の考察は、本発明のこの態様に準用されて適用される。本発明のこの態様のいくつかの好ましい実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：３０のアミノ酸配列もしくはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨドメイン、および／または（好ましくは「および」）ＳＥＱＩＤＮＯ：３１のアミノ酸配列もしくはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬドメインを含む抗体を提供する。

別の態様において、本発明は、ＫＲＡＳの発癌性変異型に結合し、および３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含む、たとえば単離抗体などの抗体を提供し、前記重鎖可変領域は、
（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ：５２のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１と、
（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ：５３のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ２と、
（ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ：５４のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ３とを含み；および／または（好ましくは「および」）
前記軽鎖可変領域は、
（ｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ：５５のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有する可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１と、
（ｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ：５６のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ２と、
（ｆ）ＳＥＱＩＤＮＯ：５７のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ３とを含み、
前記実質的に相同の配列は、所与のＣＤＲ配列と比較して１、２、または３のアミノ酸置換を含有する配列であるか、または前記実質的に相同の配列は、所与のＣＤＲ配列の保存的アミノ酸置換を含有する配列である。

本発明のこの態様の好ましい実施形態は、本発明の他の態様に関連して本明細書の他の場所に記載される抗体配列（例、ＣＤＲ配列および／またはＶＨドメイン配列および／またはＶＬドメイン配列）の１つ以上を含む抗体を含む。よって、本発明の他の態様の抗体のさまざまな特徴および好ましい実施形態の考察は、本発明のこの態様に準用されて適用される。本発明のこの態様のいくつかの好ましい実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：５０のアミノ酸配列もしくはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨドメイン、および／または（好ましくは「および」）ＳＥＱＩＤＮＯ：５１のアミノ酸配列もしくはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬドメインを含む抗体を提供する。

別の態様において、本発明は、ＫＲＡＳの発癌性変異型に結合し、および３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含む、たとえば単離抗体などの抗体を提供し、前記重鎖可変領域は、
（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ：７２のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１と、
（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ：７３のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ２と、
（ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ：７４のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ３とを含み；および／または（好ましくは「および」）
前記軽鎖可変領域は、
（ｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ：７５のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有する可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１と、
（ｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ：７６のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ２と、
（ｆ）ＳＥＱＩＤＮＯ：７７のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ３とを含み、
前記実質的に相同の配列は、所与のＣＤＲ配列と比較して１、２、または３のアミノ酸置換を含有する配列であるか、または前記実質的に相同の配列は、所与のＣＤＲ配列の保存的アミノ酸置換を含有する配列である。

本発明のこの態様の好ましい実施形態は、本発明の他の態様に関連して本明細書の他の場所に記載される抗体配列（例、ＣＤＲ配列および／またはＶＨドメイン配列および／またはＶＬドメイン配列）の１つ以上を含む抗体を含む。よって、本発明の他の態様の抗体のさまざまな特徴および好ましい実施形態の考察は、本発明のこの態様に準用されて適用される。本発明のこの態様のいくつかの好ましい実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：７０のアミノ酸配列もしくはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨドメイン、および／または（好ましくは「および」）ＳＥＱＩＤＮＯ：７１のアミノ酸配列もしくはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬドメインを含む抗体を提供する。

別の態様において、本発明は、ＫＲＡＳの発癌性変異型に結合し、および３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含む、たとえば単離抗体などの抗体を提供し、前記重鎖可変領域は、
（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ：９２のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１と、
（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ：９３のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ２と、
（ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ：９４のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ３とを含み；および／または（好ましくは「および」）
前記軽鎖可変領域は、
（ｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ：９５のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有する可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１と、
（ｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ：９６のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ２と、
（ｆ）ＳＥＱＩＤＮＯ：９７のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ３とを含み、
前記実質的に相同の配列は、所与のＣＤＲ配列と比較して１、２、または３のアミノ酸置換を含有する配列であるか、または前記実質的に相同の配列は、所与のＣＤＲ配列の保存的アミノ酸置換を含有する配列である。

本発明のこの態様の好ましい実施形態は、本発明の他の態様に関連して本明細書の他の場所に記載される抗体配列（例、ＣＤＲ配列および／またはＶＨドメイン配列および／またはＶＬドメイン配列）の１つ以上を含む抗体を含む。よって、本発明の他の態様の抗体のさまざまな特徴および好ましい実施形態の考察は、本発明のこの態様に準用されて適用される。本発明のこの態様のいくつかの好ましい実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：９０のアミノ酸配列もしくはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨドメイン、および／または（好ましくは「および」）ＳＥＱＩＤＮＯ：９１のアミノ酸配列もしくはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬドメインを含む抗体を提供する。

別の態様において、本発明は、ＫＲＡＳの発癌性変異型に結合し、および３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含む、たとえば単離抗体などの抗体を提供し、前記重鎖可変領域は、
（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１１２のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１と、
（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１１３のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ２と、
（ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１１４のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ３とを含み；および／または（好ましくは「および」）
前記軽鎖可変領域は、
（ｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１１５のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有する可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１と、
（ｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１１６のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ２と、
（ｆ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１１７のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ３とを含み、
前記実質的に相同の配列は、所与のＣＤＲ配列と比較して１、２、または３のアミノ酸置換を含有する配列であるか、または前記実質的に相同の配列は、所与のＣＤＲ配列の保存的アミノ酸置換を含有する配列である。

本発明のこの態様の好ましい実施形態は、本発明の他の態様に関連して本明細書の他の場所に記載される抗体配列（例、ＣＤＲ配列および／またはＶＨドメイン配列および／またはＶＬドメイン配列）の１つ以上を含む抗体を含む。よって、本発明の他の態様の抗体のさまざまな特徴および好ましい実施形態の考察は、本発明のこの態様に準用されて適用される。本発明のこの態様のいくつかの好ましい実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１０のアミノ酸配列もしくはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨドメイン、および／または（好ましくは「および」）ＳＥＱＩＤＮＯ：１１１のアミノ酸配列もしくはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬドメインを含む抗体を提供する。

別の態様において、本発明は、ＫＲＡＳの発癌性変異型に結合し、および３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含む、たとえば単離抗体などの抗体を提供し、前記重鎖可変領域は、
（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１３２のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１と、
（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１３３のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ２と、
（ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１３４のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ３とを含み；および／または（好ましくは「および」）
前記軽鎖可変領域は、
（ｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１３５のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有する可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１と、
（ｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１３６のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ２と、
（ｆ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１３７のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ３とを含み、
前記実質的に相同の配列は、所与のＣＤＲ配列と比較して１、２、または３のアミノ酸置換を含有する配列であるか、または前記実質的に相同の配列は、所与のＣＤＲ配列の保存的アミノ酸置換を含有する配列である。

本発明のこの態様の好ましい実施形態は、本発明の他の態様に関連して本明細書の他の場所に記載される抗体配列（例、ＣＤＲ配列および／またはＶＨドメイン配列および／またはＶＬドメイン配列）の１つ以上を含む抗体を含む。よって、本発明の他の態様の抗体のさまざまな特徴および好ましい実施形態の考察は、本発明のこの態様に準用されて適用される。本発明のこの態様のいくつかの好ましい実施形態において、本発明は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３０のアミノ酸配列もしくはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨドメイン、および／または（好ましくは「および」）ＳＥＱＩＤＮＯ：１３１のアミノ酸配列もしくはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬドメインを含む抗体を提供する。

本発明の抗体、ペプチド、結合タンパク質、および核酸分子は一般的に、それらがヒトもしくは動物の体内か、またはヒトもしくは動物の身体に由来する組織サンプル内にインサイツで存在し得る任意のこうした構成要素と区別される限りにおいて、「単離された」または「精製された」分子である。しかしそれらの配列は、ヒトまたは動物の体内で見出される配列に対応するか、またはそれと実質的に相同である。よって、本明細書において核酸分子または配列およびタンパク質、ペプチド、またはポリペプチド、たとえば抗体などを参照して用いられる「単離された」または「精製された」という用語は、自身の天然の環境から単離されたか、精製されたか、またはそれを実質的に含まないとき、たとえば（それらが実際に自然発生するときは）ヒトまたは動物の身体から単離または精製されたときのこうした分子を示すか、または技術的プロセスによって生成されたとき、すなわち組み換えおよび合成的に生成された分子を含むときのこうした分子を示す。

よって、たとえば単離ペプチド、軽鎖ＣＤＲ１、２、および３、重鎖ＣＤＲ１、２、および３、軽鎖可変領域、重鎖可変領域、ならびに全長抗体を含む本発明の抗体または結合タンパク質などのタンパク質またはポリペプチド分子に関連して使用されるとき、「単離された」または「精製された」という用語は典型的に、自身の由来するソースからの細胞物質またはその他のタンパク質を実質的に含まないタンパク質を示す。いくつかの実施形態において、特にそのタンパク質をヒトまたは動物に投与しようとする場合、こうした単離または精製タンパク質は、組み換え技術によって生成されるときには培地を実質的に含まず、化学的に合成されるときには化学的前駆物質またはその他の化学物質を実質的に含まない。

本明細書において用いられる「フラグメント」という用語は、生物学的関連性のあるフラグメント、たとえば抗原結合部位の一部を形成するなどして抗原結合に寄与するフラグメント、および／または本発明によるＫＲＡＳ抗体の機能的特性に寄与するフラグメントなどを示す。特定の好ましいフラグメントは、本発明の抗体の重鎖可変領域（Ｖ_Hドメイン）および／または軽鎖可変領域（Ｖ_Lドメイン）を含む。

本発明の抗体、抗体フラグメント、およびイムノコンジュゲートは、当該技術分野において周知であり十分に説明されているいくつかのやり方のいずれによって調製されてもよいことを当業者は認識するだろう。たとえばポリクローナル抗体は、本発明の単離ペプチドまたはコンジュゲートによって動物（非ヒト動物、たとえばウサギなど）を免疫化することと、その動物によって生成された単離ペプチドまたはコンジュゲートに対する抗体を単離すること（および任意選択で精製すること）とによって調製されてもよい。他の実施形態において、本発明の抗体、抗体フラグメント、およびイムノコンジュゲートは、組み換え法によって調製されてもよい。

本発明の抗体の軽鎖および重鎖可変領域をコードする核酸フラグメントは、たとえばクローニングまたは合成などの任意の適切な方法によって得られるか、または生成され得る。

本発明の抗体の軽鎖および重鎖可変領域をコードする核酸フラグメントが得られたとき、標準的な組み換えＤＮＡ技術によってこれらのフラグメントをさらに操作して、たとえば可変領域フラグメントを適切な定常領域ドメインとともに全長抗体分子にすること、または本明細書の他の場所で考察されるたとえばＦａｂフラグメント、ｓｃＦｖフラグメントなどの特定の形式の抗体フラグメントにすることなどができる。典型的に、またはこのさらなる操作手順の一部として、本発明の抗体分子をコードする核酸フラグメントは一般的に、本発明の抗体の産生を促進するために１つ以上の適切な発現ベクターに組み込まれる。

可能な発現ベクターはコスミド、プラスミド、または改変されたウイルス（例、複製欠損のレトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ随伴ウイルス）を含むが、ベクターが使用される宿主細胞に適合する限り、これらに限定されない。発現ベクターは「宿主細胞の形質転換に好適」であり、これは発現ベクターが本発明の核酸分子と、その核酸分子に動作的につながれた、発現に使用される宿主細胞に基づいて選択された制御配列とを含むことを意味する。動作的につながれるとは、核酸がその核酸の発現を可能にする方式で制御配列につながれていることを意味することが意図される。

したがって本発明は、本発明の核酸分子またはそのフラグメントと、本発明の核酸分子がコードするタンパク質配列の転写および翻訳のために必要な制御配列とを含む組み換え発現ベクターを予期する。

好適な制御配列は、細菌、真菌、ウイルス、哺乳動物、または昆虫の遺伝子を含むさまざまなソースに由来してもよく、それらは当該技術分野において周知である。適切な制御配列の選択は、以下に考察されるとおりに選択される宿主細胞によって決まり、当業者はそれを容易に達成してもよい。こうした制御配列の例は、転写プロモーターおよびエンハンサー、またはＲＮＡポリメラーゼ結合配列、リボソーム結合配列を含み、翻訳開始シグナルも含まれる。加えて、選択された宿主細胞および使用されるベクターに依存して、たとえば複製開始点、追加のＤＮＡ制限部位、エンハンサー、および転写誘導能を与える配列などのその他の配列が発現ベクターに組み込まれてもよい。

本発明の組み換え発現ベクターは、本発明の組み換え分子で形質転換またはトランスフェクトされた宿主細胞の選択を容易にする選択可能マーカー遺伝子も含んでもよい。

組み換え発現ベクターは、組み換えタンパク質の発現の増加と、組み換えタンパク質の溶解性の増加と、アフィニティ精製におけるリガンドとして作用することによって標的の組み換えタンパク質の精製を助けることとを提供する融合部分をコードする遺伝子も含んでもよい（たとえば、精製および／または同定を可能にする適切な「タグ」、たとえばＨｉｓタグまたはｍｙｃタグなどが存在してもよい）。

組み換え発現ベクターが宿主細胞に導入されて、形質転換宿主細胞が生成され得る。「で形質転換される」、「でトランスフェクトされる」、「形質転換」、および「トランスフェクション」という用語は、当該技術分野において公知である多くの可能な技術の１つによって、細胞に核酸（例、ベクター）を導入することを包含することが意図される。宿主細胞を形質転換およびトランスフェクトするための好適な方法は、サンブルック（Ｓａｍｂｒｏｏｋ）ら、１９８９（サンブルック、フリッチュ（Ｆｒｉｔｓｃｈ）、およびマニアティス（Ｍａｎｉａｔｉｓ）、「分子クローニング：実験マニュアル（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ）」、第２版、コールド・スプリング・ハーバー・プレス（ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｒｅｓｓ）、コールド・スプリング・ハーバー（ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ）、ＮＹ、１９８９）およびその他の実験教科書に見出され得る。

好適な宿主細胞は、多様な真核宿主細胞および原核細胞を含む。たとえば、本発明のタンパク質（例、抗体）は、酵母細胞または哺乳動物細胞において発現されてもよい。加えて、本発明のタンパク質は、たとえば大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）などの原核細胞において発現されてもよい。

本明細書において提供される教示が与えられたとき、適切なタイプの発現ベクターを植物、トリ、および昆虫の細胞に導入するためのプロモーター、ターミネーター、および方法も容易に達成されてもよい。

代替的に、本発明のタンパク質（例、抗体）は、たとえばラット、ウサギ、ヒツジ、およびブタなどの非ヒトトランスジェニック動物においても発現されてもよい。

加えて、本発明のタンパク質は、たとえば固相合成などのタンパク質化学において周知の技術を用いた化学合成によって調製されてもよい。

たとえばタンパク質などの他の分子にコンジュゲートされた本発明の抗体およびタンパク質（例、単離ペプチド）を含むＮ末端またはＣ末端融合タンパク質は、組み換え技術による融合によって調製されてもよい。結果として得られる融合タンパク質は、選択されたタンパク質もしくはマーカータンパク質、または本明細書に記載されるタグタンパク質に融合された本発明の抗体またはタンパク質を含む。加えて本発明の抗体およびタンパク質は、公知の技術によって他のタンパク質にコンジュゲートされてもよい。たとえば、国際公開第９０／１０４５７号に記載されるヘテロ二官能性チオール含有リンカー、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ－プロピオン酸（ｐｒｏｐｒｉｏｎａｔｅ））またはＮ－スクシンイミジル－５チオアセテートを用いてタンパク質が結合されてもよい。

なおもさらなる態様は、本発明の核酸フラグメントまたはセグメントまたは分子の１つ以上を含む、発現コンストラクトまたは発現ベクターを提供する。好ましくは、この発現コンストラクトまたはベクターは組み換え体である。加えて、一緒に（集合的に）本発明の抗体をコードする発現ベクターのセット（または発現コンストラクトのセット）が提供される。こうした発現ベクターのセットは、（例、宿主細胞内で）このセットが発現される（すなわち、一緒に発現される）ときに、本発明の抗体（抗体全体）が発現されて、好ましくはアセンブルされることを特徴としてもよい。

好ましくは、前記コンストラクトまたはベクターは、本発明の核酸分子がコードするタンパク質配列の転写および翻訳のために必要な制御配列をさらに含む。

なおもさらなる態様は、１つ以上の本発明の発現コンストラクトまたは発現ベクターを含む宿主細胞またはウイルスを提供する。加えて、本発明の核酸分子の１つ以上を含む宿主細胞またはウイルスが提供される。本発明の抗体を発現する宿主細胞（例、哺乳動物宿主細胞）またはウイルスは、なおもさらなる態様を形成する。

本発明のなおもさらなる態様は、本発明の抗体を産生する（または製造または単離または同定または生成する）方法を提供し、前記方法は本発明の単離ペプチドまたはコンジュゲートを使用する。代替的に見ると、本発明は、本発明の抗体の同定（または単離または生成または産生）のための、本発明の単離ペプチドまたはコンジュゲートの使用を提供する。

本発明のなおもさらなる態様は、本発明の単離ペプチド（またはコンジュゲート）によって動物（非ヒト動物、たとえばウサギなど）を免疫化するステップを含む、本発明の抗体を産生する（または製造または単離または同定または生成する）方法を提供する。好ましい方法は、本発明の単離ペプチド（またはコンジュゲート）に対して生成された（または産生された）抗体を前記動物から得るステップを含み、および任意選択で、抗体産物を精製するステップ、および／または抗体もしくは産物を調合してたとえば薬学的に許容される担体もしくは賦形剤などの少なくとも１つの追加の構成要素を含む組成物にするステップを含む。

本発明のなおもさらなる態様は、ハイブリドーマ技術（例、従来のハイブリドーマ技術）において本発明の単離ペプチドまたはコンジュゲートを使用することによって、本発明の抗体を産生する（または製造または単離または同定または生成する）方法を提供する。代替的に見ると、本発明は、ハイブリドーマ技術を用いた本発明の抗体の同定（または単離または生成または産生）のための、本発明の単離ペプチドまたはコンジュゲートの使用を提供する。いくつかの実施形態において、本発明の単離ペプチドまたはコンジュゲートによって非ヒト動物（例、マウス）が免疫化され、前記免疫化された動物（例、マウス）から脾臓細胞が単離されて、ＨＧＰＲＴ発現を欠く骨髄腫細胞（例、マウス骨髄腫細胞）（こうした骨髄腫細胞はＨＡＴ含有培地において生育できない）と融合され、ヒポキサンチン、アミノプテリン、およびチミン（ＨＡＴ：ｈｙｐｏｘａｎｔｈｉｎｅ，ａｍｉｎｏｐｔｅｒｉｎａｎｄｔｈｙｍｉｎｅ）含有培地を用いてハイブリッド（すなわち、融合またはハイブリドーマ）細胞が選択される。融合細胞のみがＨＡＴ含有培地において生育する。

本発明のなおもさらなる態様は、（ファージディスプレイ抗体ライブラリによる）ファージディスプレイ技術を使用した、本発明の抗体を同定する（または単離または生成する）方法を提供する。代替的に見ると、本発明は、（ファージディスプレイ抗体ライブラリによる）ファージディスプレイ技術を用いた本発明の抗体の同定（または単離または生成または産生）のための、本発明の単離ペプチドまたはコンジュゲートの使用を提供する。いくつかの実施形態において、本発明の単離ペプチドまたはコンジュゲート（典型的に、たとえばビーズまたはミクロビーズまたはプレートまたはマイクロタイタープレートなどの固体支持体上に固定される）を、ファージ表面上にたとえばｓｃＦｖまたはＦａｂフラグメントなどの抗体または抗体フラグメントのライブラリを表示する（または提示または発現する）ファージライブラリ（バクテリオファージライブラリ、典型的には糸状バクテリオファージライブラリ、たとえばｆｄファージライブラリのＭ１３など）と接触させる。任意の好適なファージディスプレイ抗体ライブラリが使用されてもよく、当業者はこれらのファージディスプレイ抗体ライブラリを熟知している（および、たとえば商業的に入手可能なファージディスプレイ抗体ライブラリが存在する）。結合されたファージは次いで溶出され、そのファージの核酸（または少なくとも提示された抗体をコードする核酸の部分）を単離および配列決定することによって、提示された抗体の同一性が容易に決定されてもよい。いくつかの実施形態において、結合されたファージの溶出後に、結合されたファージの提示抗体を同定する前に、接触および溶出の１つ以上（例、１、２、３、４、または５以上）の追加ラウンドが行われる。こうした追加ラウンドは、典型的にライブラリをさらに強化する。いくつかの典型的な実施形態において、本発明のペプチドまたはコンジュゲートが固体支持体上に固定されているとき、その固体支持体は典型的に接触ステップの後（および溶出ステップの前）に洗浄され、固定された単離ペプチドまたはコンジュゲートに結合した抗体または抗体フラグメントを提示するファージは結合したままとなる（その他のものは洗い流される）。

本発明のなおもさらなる態様は、本発明の宿主細胞を培養するステップを含む、本発明の抗体を産生する（または製造する）方法を提供する。好ましい方法は、（ｉ）本発明の組み換え発現ベクター（または発現ベクターのセット）の１つ以上か、または核酸配列もしくは分子（または核酸分子のセット）の１つ以上を含む宿主細胞を、コードされた抗体の発現に好適な条件下で培養するステップと、任意選択で（ｉｉ）宿主細胞または増殖培地／上清から抗体を単離または取得するステップとを含む。

実施形態において、本発明の抗体またはタンパク質が２つ以上のポリペプチド鎖（例、たとえばＦａｂフラグメントなどの特定のフラグメントまたは全抗体）で構成されているとき、好ましくは宿主細胞中ですべてのポリペプチドが同じ発現ベクターまたは異なる発現ベクターから発現されることによって、たとえば本発明の抗体タンパク質などの完全なタンパク質が宿主細胞内でアセンブルされて、そこから単離または精製され得る。

いくつかの実施形態において、本発明による抗体を産生する（または製造または単離または同定または生成する）方法は、抗体もしくはタンパク質産物を精製するステップ、および／または抗体もしくは産物を調合してたとえば薬学的に許容される担体もしくは賦形剤などの少なくとも１つの追加の構成要素を含む組成物にするステップも含んでもよい。

別の態様において、本発明は、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型を含む組成物を、本発明の抗体またはそのイムノコンジュゲートに接触させることを含む、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型を結合する方法を提供する。

なおも別の態様において、本発明は、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型を含むと考えられる組成物を、ＫＲＡＳ／抗体複合体の形成を可能にするために有効な条件下で本発明の抗体またはそのイムノコンジュゲートに接触させることと、こうして形成された複合体を検出することとを含む、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型を検出する方法を提供する。

１つ以上の抗体がＫＲＡＳの発癌性変異型に結合する能力の試験は、当該技術分野において周知であり十分に説明されている任意の適切な方法によって行われ得る。好適な方法は、実施例のセクションにも記載されている。

加えて本発明は、本発明による抗ＫＲＡＳ抗体が少なくとも１つの他の治療薬に動作的に付着された、さまざまなコンジュゲート抗体およびそのフラグメントを提供する。「イムノコンジュゲート」という用語は、抗体と別の有効な薬剤（例、治療薬）との動作的関連を定めるために広く用いられ、任意のタイプの動作的関連のみを示すことは意図されておらず、特に化学的な「共役（コンジュゲーション）」に限定されない。組み換え融合タンパク質は特に予期される。送達またはターゲティング剤が標的に結合でき、および送達の際に治療薬または診断薬が十分に機能的であれば、その付着様式は好適となる。

いくつかの実施形態において、本発明の抗体は「ネイキッド」のコンジュゲートされない形態で使用される（例、治療に使用される）。

本発明の少なくとも第１の抗体またはそのイムノコンジュゲートを含む組成物は、本発明のさらなる態様を構成する。好適な希釈剤、担体、または賦形剤との混合物中に１つ以上の本発明の抗体を含む調合物（組成物）は、本発明の好ましい実施形態を構成する。こうした調合物は医薬品に使用されてもよく、よって本発明の組成物は好ましくは薬学的に許容される。好適な希釈剤、賦形剤、および担体は当業者に公知である。

いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、本発明の２つ以上の異なる抗体（例、２または３以上）を含んでもよい。たとえばいくつかの実施形態において、組成物は本明細書に記載されるモノクローナル抗体を２つ以上含んでもよい。

本発明による組成物は、たとえば経口、経鼻、非経口、腹腔内、静脈内（ｉｎｔｒａｖｅｎａｌ）、局所、または直腸投与などに好適な形態で提供されてもよい。いくつかの実施形態において、静脈内（ｉｎｔｒａｖｅｎａｌ）投与に好適な形態が好ましい。

本明細書において定義される活性化合物は、従来の薬理学的投与形態、たとえば錠剤、被覆錠剤、点鼻薬、溶液、エマルション、リポソーム、粉末、カプセル、または徐放形態などで提供されてもよい。これらの形態を調製するために、従来の医薬品賦形剤および通常の製造方法が使用されてもよい。

注入溶液は、たとえば従来の方式で生成されてもよく、たとえばｐ－ヒドロキシ安息香酸などの保存剤、またはたとえばＥＤＴＡなどの安定剤の添加などによって生成されてもよい。次いで、この溶液が注入バイアルまたはアンプルに充填されてもよい。

点鼻薬は水溶液として同様に調合されて噴霧容器に詰められてもよく、噴霧容器はエアロゾル噴霧剤を伴っていてもよいし、手動圧縮のための手段が設けられていてもよい。

本発明の医薬組成物（調合物）は、好ましくは非経口投与される。いくつかの実施形態においては、静脈内投与が好ましい。非経口投与は、シリンジによる皮下、筋肉内、または静脈内注射によって行われてもよい。代替的に、非経口投与は注入ポンプによって行われ得る。さらなる選択肢は、点鼻薬または肺噴霧剤の形態で抗体を投与するための粉末または液体であってもよい組成物である。なおもさらなる選択肢として、本発明の抗体は、たとえばパッチ、任意選択でイオン泳動パッチなどから経皮的に投与されるか、または経粘膜的に、たとえば口腔（ｂｕｃａｌｌｙ）などからも投与され得る。

好適な用量単位は、当業者によって決定され得る。

医薬組成物は、同時投与レジメンまたは併用レジメンの状況において、さらなる活性成分を追加で含んでもよい。

本発明のさらなる態様は、治療に使用するための本発明の抗体を提供する。

特に、本発明は、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型の発現に関連する（またはそれによってもたらされる、または特徴付けられる）疾患または状態の治療に使用するための本発明の抗体を提供する。

好ましい実施形態において、本発明は、特に癌治療に使用するための本発明の抗体を提供する。

典型的に、本発明に従って処置される（または予防される）べき癌は、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型の発現に関連する（またはそれによってもたらされる、または特徴付けられる）癌である。

いくつかの実施形態において、癌は固形腫瘍である。いくつかの実施形態において、癌は細胞腫である。

本発明に従って処置されるべき癌のタイプは、結腸直腸癌（ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒ）（例、結腸直腸癌（ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ））、肺癌（例、非小細胞肺癌）、および膵臓癌（例、膵管腺癌）を含むが、それに限定されない。

「治療」は処置および予防を含み、すなわち処置的使用および予防的使用の両方を含む。よって「癌治療」は、癌の処置および癌の予防を含む。

よっていくつかの実施形態において、本発明は、癌の処置に使用するための本発明の抗体を提供する。いくつかの実施形態において、本発明は、癌の予防に使用するための本発明の抗ＫＲＡＳ抗体を提供する。

本発明のさらなる態様は、（例、対象において）本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型の活性の阻害に使用するための本発明の抗体を提供する。活性は、本明細書の他の場所に記載されるとおりであってもよい。

別の態様において、本発明は、治療に使用するため、特に癌の処置に使用するための本発明のイムノコンジュゲートを提供する。

本明細書に記載されるインビボの方法および使用は、一般的に哺乳動物において行われる。たとえばヒトおよび任意の家畜、飼育動物、または実験動物などの任意の哺乳動物が処置されてもよい。特定の例はマウス、ラット、ブタ、ネコ、イヌ、ヒツジ、ウサギ、ウシ、およびサルを含む。しかし、好ましくは哺乳動物はヒトである。

よって、本明細書において用いられる「動物」または「患者」という用語は、たとえばヒトおよび任意の家畜、飼育動物、または実験動物などの任意の哺乳動物を含む。特定の例はマウス、ラット、ブタ、ネコ、イヌ、ヒツジ、ウサギ、ウシ、およびサルを含む。しかし、好ましくは動物または患者はヒトの対象である。よって、本発明によって処置される対象または患者は、好ましくはヒトとなる。

いくつかの実施形態において、対象または患者とは癌を有するもの、または癌を有するかもしくは発生させるリスクがあるもの、または癌を有する疑いがあるものとなる。

代替的に見ると、本発明は癌を処置する方法を提供し、この方法は、本明細書において定義される本発明の抗体の治療的に有効な量を、必要な患者に投与することを含む。本明細書に記載される本発明の治療的使用の実施形態は、本発明のこの態様に準用されて適用される。

加えて本発明は、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型の発現に関連する（またはそれによってもたらされる、または特徴付けられる）疾患または状態（例、癌）を処置する方法を提供し、この方法は、本明細書において定義される本発明の抗体の治療的に有効な量を、必要な患者に投与することを含む。本明細書に記載される本発明の治療的使用の実施形態は、本発明のこの態様に準用されて適用される。

治療的に有効な量は、臨床アセスメントに基づいて決定されることとなり、および容易にモニタされ得る。

さらに代替的に見ると、本発明は、治療に使用するための薬物の製造における、本明細書において定義される本発明の抗体の使用を提供する。好ましい治療は、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型の発現に関連する（またはそれによってもたらされる、または特徴付けられる）状態の処置である。特に好ましい治療は、癌治療（典型的に、本発明によるＫＲＡＳの発癌性変異型の発現に関連する（またはそれによってもたらされる、または特徴付けられる）癌）である。本明細書に記載される本発明の治療的使用の実施形態は、本発明のこの態様に準用されて適用される。

本発明の抗体および組成物および方法および使用は、他の治療および診断と組み合わせて用いられてもよい。本発明の抗体と「組み合わせて」使用するための生物学的薬剤、好ましくは診断薬または治療薬に関して、「組み合わせて（ｉｎｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）」という用語は、さまざまな実施形態をカバーするように簡潔に使用される。「組み合わせて」という用語は、別様に特定的に記述されるか、または科学用語によって明らかにされない限り、さまざまな形式の組み合わされた組成物、医薬品、カクテル、キット、方法、ならびに第１および第２の医学的使用に適用される。

よって本発明の「組み合わされた（ｃｏｍｂｉｎｅｄ）」実施形態は、たとえば本発明の抗体がネイキッド抗体であって、それに動作的に付着されていない薬剤または治療薬と組み合わせて使用される場合などを含む。本発明の他の「組み合わされた」実施形態において、本発明の抗体はイムノコンジュゲートであり、ここでは抗体自体が薬剤または治療薬と動作的に関連付けられるか、または組み合わされている。動作的な付着は、本明細書に記載され、当該技術分野において公知のすべての形態の直接的および間接的付着を含む。

特に本発明の抗ＫＲＡＳ抗体と治療薬との組み合わせに関する「組み合わされた」使用は、治療薬がプロドラッグの形態であるときの、組み合わされた組成物、医薬品、カクテル、キット、方法、ならびに第１および第２の医学的使用も含む。こうした実施形態において、プロドラッグを機能的形態の薬物に転換できる活性化成分が、本発明の抗ＫＲＡＳ抗体に再び動作的に関連付けられてもよい。

よって、好ましくは診断薬に関して、より好ましくは治療薬に関して、組み合わされた組成物、医薬品、カクテル、キット、方法、ならびに第１および第２の医学的使用が記載されるとき、その組み合わせは、ネイキッド抗体およびイムノコンジュゲートである本発明の抗ＫＲＡＳ抗体を含み、本発明のインビボ実施形態の実施は、何らかのコンジュゲート形態またはコンジュゲートされない形態での、何らかの形態の抗体と、何らかの形態の生物学的薬剤、診断薬、または治療薬との全体的な提供が達成される限り、ネイキッド抗体またはイムノコンジュゲートと、生物学的薬剤、診断薬、または治療薬との事前投与、同時投与、または事後投与を伴う。

本発明の効果の前述およびその他の説明は、組み合わされた動作モードおよび付着された薬剤（単数または複数）のタイプなどを簡潔に説明するためになされるものである。この記述的アプローチは、本発明の抗ＫＲＡＳ抗体の有益な特性の過小評価または過度の単純化として解釈されるべきではない。したがって、こうした抗体自体が本発明による抗ＫＲＡＳ特性を有し、こうした抗体のイムノコンジュゲートはこれらの特性を維持して、付着された薬剤の特性とそれらの特性とを組み合わせることとなり、さらに抗体と任意の付着された薬剤との組み合わせ効果が増強および／または拡大されてもよいことが理解されるだろう。

したがって本発明は、任意選択で少なくとも第１の組成物または容器の中に、本発明の少なくとも第１の抗体、または本発明のこうした抗体の抗原結合フラグメントもしくはイムノコンジュゲートの生物学的に有効な量と、少なくとも第２の生物学的薬剤、構成要素、または系の生物学的に有効な量とを含む、組成物、医薬組成物、治療キット、および薬用カクテルを提供する。

「少なくとも第２の生物学的薬剤、構成要素、または系」は、治療または診断用の薬剤、構成要素、または系であることが多いだろうが、そうである必要はない。たとえば、少なくとも第２の生物学的薬剤、構成要素、または系は、抗体の修飾のため、および／または抗体に他の薬剤を付着させるための構成要素を含んでもよい。

少なくとも第２の生物学的薬剤、構成要素、または系として治療薬または診断薬が含まれるとき、こうした治療薬および／または診断薬は、典型的に上記で定義された障害の１つ以上の処置または診断に関連して使用するためのものとなる。

よって、特定の実施形態において、「少なくとも第２の治療薬」は治療キットまたはカクテルに含まれるだろう。この用語は、本発明の抗ＫＲＡＳ抗体が第１の治療薬であることを参照して選択されたものである。

本発明の特定の実施形態において、第２の治療薬は、さらなる癌治療薬または癌に関連する（もしくはそれに特徴付けられる）疾患の処置のための薬剤であってもよい。

本発明の組成物、キット、および／または薬物に関して、組み合わされた有効量の治療薬は、単一の容器または容器手段に含まれてもよいし、別個の容器または容器手段に含まれてもよい。カクテルは一般的に、組み合わせて使用するためにともに混合される。しばしば静脈内投与のために調合された薬剤が好ましいだろう。イメージング成分も含まれていてもよい。キットは、少なくとも第１の抗体と、含まれる１つ以上の他の生物学的薬剤とを使用するための指示も含んでもよい。

一般的に言って、少なくとも第２の治療薬は、たとえば単一の医薬組成物か、またはともに近接して投与される２つの医薬組成物などから、本発明の抗ＫＲＡＳ抗体と実質的に同時に動物または患者に投与されてもよい。

代替的に、少なくとも第２の治療薬は、本発明の抗ＫＲＡＳ抗体の投与と連続する時間に動物または患者に投与されてもよい。本明細書において用いられる「連続する時間」とは、本発明の抗ＫＲＡＳ抗体の投与とは異なる時間に少なくとも第２の治療薬が動物または患者に投与されるような「時間差」を意味する。一般的に２つの薬剤は、それらの２つの薬剤それぞれの治療効果を発揮させるために効果的に間隔を置いた時間に投与される。すなわち、それらの薬剤は「生物学的に有効な時間間隔で」投与される。少なくとも第２の治療薬は、本発明の抗ＫＲＡＳ抗体の前の生物学的に有効な時間か、またはその治療の後の生物学的に有効な時間に動物または患者に投与されてもよい。

なおもさらなる態様は、本明細書において定義される本発明の抗体またはその他のタンパク質の適切な量を対象またはサンプルに投与することと、対象またはサンプル中の本発明の抗体またはその他のタンパク質の存在および／または量および／または場所を検出することとを含む、対象またはサンプルのイメージングの方法である。

イメージング適用に使用するために、本発明の抗体は、たとえば放射線不透過体またはラジオアイソトープ、たとえば³Ｈ、¹⁴Ｃ、³²Ｐ、³⁵Ｓ、¹²³Ｉ、¹²⁵Ｉ、¹³¹Ｉなど；放射性エミッタ（例、α、β、またはγエミッタ）；蛍光（フルオロフォア）または化学発光（発色団）化合物、たとえばフルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、またはルシフェリンなど；酵素、たとえばアルカリホスファターゼ、ベータ－ガラクトシダーゼ、または西洋ワサビペルオキシダーゼなど；造影剤；または金属イオン；または化学的部分、たとえば標識されたアビジン／ストレプトアビジンなどの特異的同族検出可能部分に結合することによって検出され得るビオチンなどの検出可能なマーカーで標識されてもよい。たとえば抗体または抗体フラグメントなどの結合タンパク質に標識を付着させる方法は、当該技術分野において公知である。こうした検出可能マーカーは、試験サンプル中の結合タンパク質－抗原複合体の存在、量、または場所を調べることを可能にする。

加えて本発明は、直接的または間接的に検出可能シグナルを生成する標識に付着された本発明の抗体を含む造影剤を含む。適切な標識は、本明細書の他の場所に記載される。

本発明はさらに、本発明の単離ペプチド（単離エピトープ）、抗体、イムノコンジュゲート、もしくは組成物のうちの１つ以上、または本発明の抗体をコードする核酸分子の１つ以上、または本発明の核酸配列を含む１つ以上の組み換え発現ベクター、または本発明の組み換え発現ベクターもしくは核酸配列を含む１つ以上の宿主細胞もしくはウイルスを含むキットを含む。好ましくは、前記キットは、たとえば本明細書に記載される治療法などの本明細書に記載される方法および使用に用いるためのものであるか、または本明細書に記載されるインビトロアッセイもしくは方法に用いるためのものである。こうしたキットにおける抗体は「ネイキッド」抗体であってもよいし、本明細書の他の場所に記載される抗体コンジュゲートであってもよく、たとえばイムノコンジュゲートであってもよい。好ましくは、前記キットはキット構成要素を使用するための指示を含む。好ましくは、前記キットは本明細書の他の場所に記載される疾患を処置するためのものであり、任意選択でこうした疾患を処置するためにキット構成要素を使用するための指示を含む。

本明細書において定義される本発明の抗体は、インビトロまたはインビボ適用およびアッセイのための分子ツールとしても用いられてもよい。抗体は抗原結合部位を有するため、これらは特異的結合対のメンバーとして機能でき、特定の結合対メンバーが必要とされる任意のアッセイにおいてこれらの分子を使用できる。

よって、本発明のなおもさらなる態様は、本明細書において定義される本発明の抗体を含む試薬と、たとえばインビトロまたはインビボアッセイなどにおける分子ツールとしてこうした抗体を使用することとを提供する。

本明細書に開示されるアミノ酸（ａａ：ＡＭＩＮＯＡＣＩＤ）およびヌクレオチド（ｎｔ：ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）配列ならびにそれらの配列識別子（ＳＥＱＩＤＮＯ：ＳＥＱＵＥＮＣＥＩＤＥＮＴＩＦＩＥＲＳ）のリストおよび表
単離Ｇ１２ＤＡｂ１およびＧ１２ＤＡｂ２ペプチドのアミノ酸配列、抗体生成の目的で存在する追加の修飾を含まない（ＳＥＱＩＤＮＯ：１）
GADGVGKSALTI
単離Ｇ１３ＤＡｂ１およびＧ１３ＤＡｂ２ペプチドのアミノ酸配列、抗体生成の目的で存在する追加の修飾を含まない（ＳＥＱＩＤＮＯ：２）
GAGDVGKSALTI
単離Ｇ１２ＤＡｂ１ペプチドのアミノ酸配列、抗体生成の目的で存在する追加の修飾を含む（ＳＥＱＩＤＮＯ：３）
Ac-GADGVGKSALTIC-CONH₂
ＳＥＱＩＤＮＯ：１と比較すると、このペプチドはＣ末端に追加のシステイン残基を有し、Ｃ末端がアミド化（－ＣＯＮＨ₂）されており、Ｎ末端がアセチル化（Ａｃ－）されている。

単離Ｇ１２ＤＡｂ２ペプチドのアミノ酸配列、抗体生成の目的で存在する追加の修飾を含む（ＳＥＱＩＤＮＯ：４）
CGADGVGKSALTI-CONH₂
ＳＥＱＩＤＮＯ：１と比較すると、このペプチドはＮ末端に追加のシステイン残基を有し、Ｃ末端がアミド化（－ＣＯＮＨ₂）されている。

単離Ｇ１３ＤＡｂ１ペプチドのアミノ酸配列、抗体生成の目的で存在する追加の修飾を含む（ＳＥＱＩＤＮＯ：５）
CGAGDVGKSALTI-CONH₂
ＳＥＱＩＤＮＯ：２と比較すると、このペプチドはＮ末端に追加のシステイン残基を有し、Ｃ末端がアミド化（－ＣＯＮＨ₂）されている。

単離Ｇ１３ＤＡｂ２ペプチドのアミノ酸配列、抗体生成の目的で存在する追加の修飾を含む（ＳＥＱＩＤＮＯ：６）
Ac-GAGDVGKSALTIC-CONH₂
ＳＥＱＩＤＮＯ：２と比較すると、このペプチドはＣ末端に追加のシステイン残基を有し、Ｃ末端がアミド化（－ＣＯＮＨ₂）されており、Ｎ末端がアセチル化（Ａｃ－）されている。

ヒト野生型ＫＲＡＳ（アイソフォーム２Ａ）のアミノ酸配列（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）
MTEYKLVVVGAGGVGKSALTIQLIQNHFVDEYDPTIEDSYRKQVVIDGETCLLDILDTAG
QEEYSAMRDQYMRTGEGFLCVFAINNTKSFEDIHHYREQIKRVKDSEDVPMVLVGNKCDL
PSRTVDTKQAQDLARSYGIPFIETSAKTRQRVEDAFYTLVREIRQYRLKKISKEEKTPGC
VKIKKCIIM
ヒトＧ１２Ｄ変異ＫＲＡＳ（アイソフォーム２Ａ）のアミノ酸配列（ＳＥＱＩＤＮＯ：８）
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ヒトＧ１３Ｄ変異ＫＲＡＳ（アイソフォーム２Ａ）のアミノ酸配列（ＳＥＱＩＤＮＯ：９）
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VKIKKCIIM
ヒト野生型ＫＲＡＳ（アイソフォーム２Ｂ）のアミノ酸配列（ＳＥＱＩＤＮＯ：１０）
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ヒトＧ１２Ｄ変異ＫＲＡＳ（アイソフォーム２Ｂ）のアミノ酸配列（ＳＥＱＩＤＮＯ：１１）
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ヒトＧ１３Ｄ変異ＫＲＡＳ（アイソフォーム２Ｂ）のアミノ酸配列（ＳＥＱＩＤＮＯ：１２）
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ヒトＧ１２Ｘ変異ＫＲＡＳ（アイソフォーム２Ａ）のアミノ酸配列（ＳＥＱＩＤＮＯ：１３）
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ここで残基「Ｘ」はＤ、Ｖ、Ｃ、Ａ、Ｓ、またはＲである
ヒトＧ１３Ｘ変異ＫＲＡＳ（アイソフォーム２Ａ）のアミノ酸配列（ＳＥＱＩＤＮＯ：１４）
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ここで残基「Ｘ」はＤまたはＣである
ヒトＧ１２Ｘ変異ＫＲＡＳ（アイソフォーム２Ｂ）のアミノ酸配列（ＳＥＱＩＤＮＯ：１５）
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ここで残基「Ｘ」はＤ、Ｖ、Ｃ、Ａ、Ｓ、またはＲである
ヒトＧ１３Ｘ変異ＫＲＡＳ（アイソフォーム２Ｂ）のアミノ酸配列（ＳＥＱＩＤＮＯ：１６）
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ここで残基「Ｘ」はＤまたはＣである
単離Ｇ１２Ｘペプチドのアミノ酸配列（ＳＥＱＩＤＮＯ：１７）
GAXGVGKSALTI
ここで残基「Ｘ」はＤ、Ｖ、Ｃ、Ａ、Ｓ、またはＲである
単離Ｇ１３Ｘペプチドのアミノ酸配列（ＳＥＱＩＤＮＯ：１８）
GAGXVGKSALTI
ここで残基「Ｘ」はＤまたはＣである
単離Ｇ１２Ｘペプチドのアミノ酸配列（ＳＥＱＩＤＮＯ：１９）
GAXGVGKSALTI
ここで残基「Ｘ」はＤ、Ｖ、Ｃ、Ａ、またはＲである
単離Ｇ１２Ｘペプチドのアミノ酸配列（ＳＥＱＩＤＮＯ：２０）
GAXGVGKSALTI
ここで残基「Ｘ」はＤ、Ｃ、Ａ、Ｓ、またはＲである
単離Ｇ１２Ｘペプチドのアミノ酸配列（ＳＥＱＩＤＮＯ：２１）
GAXGVGKSALTI
ここで残基「Ｘ」はＤ、Ｃ、Ａ、またはＲである
ヒトＧ１２Ｘ変異ＫＲＡＳ（アイソフォーム２Ａ）のアミノ酸配列（ＳＥＱＩＤＮＯ：２２）
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ここで残基「Ｘ」はＤ、Ｖ、Ｃ、Ａ、またはＲである
ヒトＧ１２Ｘ変異ＫＲＡＳ（アイソフォーム２Ｂ）のアミノ酸配列（ＳＥＱＩＤＮＯ：２３）
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ここで残基「Ｘ」はＤ、Ｖ、Ｃ、Ａ、またはＲである
ヒトＧ１２Ｘ変異ＫＲＡＳ（アイソフォーム２Ａ）のアミノ酸配列（ＳＥＱＩＤＮＯ：２４）
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ここで残基「Ｘ」はＤ、Ｃ、Ａ、Ｓ、またはＲである
ヒトＧ１２Ｘ変異ＫＲＡＳ（アイソフォーム２Ｂ）のアミノ酸配列（ＳＥＱＩＤＮＯ：２５）
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ここで残基「Ｘ」はＤ、Ｃ、Ａ、Ｓ、またはＲである
ヒトＧ１２Ｘ変異ＫＲＡＳ（アイソフォーム２Ａ）のアミノ酸配列（ＳＥＱＩＤＮＯ：２６）
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ここで残基「Ｘ」はＤ、Ｃ、Ａ、またはＲである
ヒトＧ１２Ｘ変異ＫＲＡＳ（アイソフォーム２Ｂ）のアミノ酸配列（ＳＥＱＩＤＮＯ：２７）
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ここで残基「Ｘ」はＤ、Ｃ、Ａ、またはＲである

本発明の４Ｂ８－１、１１Ｄ６－１、および７Ｄ１１－１抗体のＶＨ（すなわち、重鎖）ＣＤＲ１およびＣＤＲ２アミノ酸配列ならびにＶＬ（軽鎖）ＣＤＲ１およびＣＤＲ２配列の各々は、上記表Ｇの共通配列の範囲内にある。

本発明の７Ｇ２－１、６Ｂ２－１－１、および６Ｂ２－１－２抗体のＶＨ（すなわち、重鎖）ＣＤＲ１およびＣＤＲ２アミノ酸配列の各々は、上記表Ｌの共通配列の範囲内にある。

ここで以下の図面を参照して、以下の非制限的な実施例において本発明をさらに説明することとする。

４つの抗ＫＲＡＳ抗体Ｇ１３ＤＡｂ１、Ｇ１３ＤＡｂ２、Ｇ１２ＤＡｂ１、およびＧ１２ＤＡｂ２によって誘導されたＭＤＡ－ＭＢ－２３１（Ｇ１３Ｄ）細胞におけるＥＲＫのリン酸化の阻害を示す図である。細胞培地に抗体を加え（１４～１６時間インキュベーション）、パーキン・エルマー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）ｐ－ＥＲＫ１／２ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎＳｕｒｅｆｉｒｅアッセイキットを用いてＥＲＫの細胞内リン酸化を定量化した。ＳＡＨ－ＳＯＳ１（サンオブセブンレス１の安定化アルファヘリックス）を陽性対照として使用し、ウサギＩｇＧを陰性対照（アイソタイプ対照）として使用した。統計的有意性を以下のとおりに示す：＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１。データを平均±ＳＥＭとして提示する。ｎ＝２であるＧ１２ＤＡｂ２２７ｎＭおよび６７ｎＭを除き、処理グループ当りｎ＝３。４つの抗ＫＲＡＳ抗体Ｇ１３ＤＡｂ１、Ｇ１３ＤＡｂ２、Ｇ１２ＤＡｂ１、およびＧ１２ＤＡｂ２によるＧ１２Ｄ変異ＳＫ－ＬＵ－１（肺腺癌）細胞におけるアポトーシスの決定を示す図である。細胞を抗体または対照で処理し、ＲｅａｌＴｉｍｅ－Ｇｌｏ（商標）アネキシンＶアポトーシスおよびネクローシスアッセイ（ＡｎｎｅｘｉｎＶＡｐｏｐｔｏｓｉｓａｎｄＮｅｃｒｏｓｉｓＡｓｓａｙ）キット（プロメガ（Ｐｒｏｍｅｇａ））を用いて、リアルタイムでアポトーシスを定量化した。アイソタイプ対照はウサギＩｇＧであった。このグラフは、細胞に抗体／対照を添加してから５２時間後のアポトーシスの状態を表す。発光はアポトーシスのレベルに比例する。単一日の間に、処理当りｎ＝４にてデータを収集した。統計的有意性を以下のとおりに示す：＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。データを平均±ＳＥＭとして提示する。Ｇ１２ＤＡｂ１によって２４、４８、および７２時間で誘導されたＧ１２Ｄ変異ＬＳ１７４Ｔ（結腸腺癌）細胞におけるアポトーシスの決定を示す図である。細胞を抗体または対照で処理し、アポトーシスのマーカーとして蛍光標識アネキシンＶを用いて、ＦＡＣＳによってアポトーシスを定量化した。データを対照の％として示しており、ここで対照は溶媒（培地）で処理した細胞からなるものであった。ｎ＝１。４つの抗ＫＲＡＳ抗体Ｇ１３ＤＡｂ１、Ｇ１３ＤＡｂ２、Ｇ１２ＤＡｂ１、およびＧ１２ＤＡｂ２によって誘導されたＧ１３Ｄ変異ＨＣＴ１１６（結腸癌）細胞におけるアポトーシスの決定を示す図である。細胞を抗体または対照で処理し、ＲｅａｌＴｉｍｅ－Ｇｌｏ（商標）アネキシンＶアポトーシスおよびネクローシスアッセイキット（プロメガ）を用いて、リアルタイムでアポトーシスを定量化した。アイソタイプ対照はウサギＩｇＧであった。このグラフは、細胞に抗体／対照を添加してから５２時間後のアポトーシスの状態を表す。発光はアポトーシスのレベルに比例する。統計的有意性を以下のとおりに示す：＊＊ｐ＜０．０１。データを平均±ＳＥＭとして提示する。ｎ＝３。（Ａ）Ｇ１３Ｄ変異ＨＣＴ１１６（結腸癌）細胞、（Ｂ）Ｇ１２Ｄ変異ＳＫ－ＬＵ－１（肺腺癌）細胞、および（Ｃ）非癌性ｗｔＫＲＡＳＣＲＬ－１８３１（結腸上皮）細胞における、抗体Ｇ１３ＤＡｂ１およびＧ１２ＤＡｂ２によって誘導されたアポトーシスの決定を示す図である。細胞を抗体または対照で処理し、ＲｅａｌＴｉｍｅ－Ｇｌｏ（商標）アネキシンＶアポトーシスおよびネクローシスアッセイキット（プロメガ）を用いて、リアルタイムでアポトーシスを定量化した。溶媒はＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎである。このグラフは、細胞に抗体／対照を添加してから５２時間後のアポトーシスの状態を表す。ＨＣＴ１１６のデータについては、１日当りｎ＝４にて３日間データを収集した。ＳＫ－ＬＵ－１のデータについては、１日当りｎ＝４にて２日間データを収集した。ＣＲＬ－１８３１については、ｎ＝４にて１日の間データを収集した。統計的有意性を以下のとおりに示す：＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。データを平均±ＳＥＭとして提示する。（Ａ）Ｇ１３Ｄ変異ＨＣＴ１１６（結腸癌）細胞、（Ｂ）Ｇ１２Ｄ変異ＳＫ－ＬＵ－１（肺腺癌）細胞、および（Ｃ）非癌性ｗｔＫＲＡＳＣＲＬ－１８３１（結腸上皮）細胞における、抗体Ｇ１３ＤＡｂ１およびＧ１２ＤＡｂ２によって誘導されたネクローシスの決定を示す図である。細胞を抗体または対照で処理し、ＲｅａｌＴｉｍｅ－Ｇｌｏ（商標）アネキシンＶアポトーシスおよびネクローシスアッセイキット（プロメガ）を用いて、リアルタイムでアポトーシスを定量化した。溶媒はＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎである。このグラフは、細胞に抗体／対照を添加してから５２時間後のネクローシスの状態を表す。ＨＣＴ１１６のデータについては、１日当りｎ＝４にて３日間データを収集した。ＳＫ－ＬＵ－１のデータについては、１日当りｎ＝４にて２日間データを収集した。ＣＲＬ－１８３１については、ｎ＝４にて１日の間データを収集した。統計的有意性を以下のとおりに示す：＊ｐ＜０．０５、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。データを平均±ＳＥＭとして提示する。蛍光標識抗体を用いたＦＡＣＳによって、癌細胞による抗体の取り込みを定量化した図である。Ｇ１２Ｄ変異ＬＳ１７４Ｔ（結腸腺癌）細胞およびＧ１３Ｄ変異ＨＣＴ１１６（結腸癌）細胞を標識抗体で２４時間処理し、細胞関連の蛍光を定量化した。ＦＩＴＣ－Ａ＝４８８ｎｍにて測定された発光による蛍光シグナル。曲線下の面積は、細胞関連の蛍光の量に比例する。非抗体処理ＬＳ１７４Ｔ細胞による蛍光シグナルを対照として使用した。ｎ＝１。４つの抗ＫＲＡＳ抗体Ｇ１３ＤＡｂ１、Ｇ１３ＤＡｂ２、Ｇ１２ＤＡｂ１、およびＧ１２ＤＡｂ２によるｗｔＫＲＡＳＮＣＩ－Ｈ１９７５（肺腺癌）細胞におけるアポトーシスの決定を示す図である。細胞を抗体または溶媒で処理した。ＲｅａｌＴｉｍｅ－Ｇｌｏ（商標）アネキシンＶアポトーシスおよびネクローシスアッセイキット（プロメガ）を用いて、リアルタイムでアポトーシス（Ａ）およびネクローシス（Ｂ）を定量化した。（Ａ）は、細胞に抗体／溶媒を添加してから１０時間後のアポトーシスの状態を表す。（Ｂ）は、細胞に抗体／溶媒を添加してから５２時間後のネクローシスの状態を表す。単一日の間に、処理当りｎ＝４にてデータを収集した。データを平均±ＳＥＭとして提示する。変異型および野生型ＫＲＡＳ細胞における抗体Ｇ１３ＤＡｂ１の取り込みを示すフローサイトメトリーを示す図である。Ｇ１３Ｄ変異ＫＲＡＳ細胞株ＨＣＴ－１１６、Ｇ１２Ｄ変異ＫＲＡＳ細胞株ＳＫ－ＬＵ－１、ならびに２つの野生型ＫＲＡＳ細胞株Ａ４３１およびＮＣＩ－Ｈ１９７５（ｎ＝４）における２２０ｎＭＡＬＥＸＡ４８８コンジュゲートＧ１３ＤＡｂ１抗体による処理後の異なる時点での抗体の内部移行を示すフローサイトメトリーデータである。一元配置ＡＮＯＶＡとダネットの（Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ）多重比較検定との組み合わせを用いて、統計的有意性を決定した。統計的有意性を以下のとおりに示す：＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。データを平均±ＳＥＭとして提示する。変異型および野生型ＫＲＡＳ細胞における抗体Ｇ１２ＤＡｂ１の取り込みを示すフローサイトメトリーを示す図である。Ｇ１３Ｄ変異ＫＲＡＳ細胞株ＨＣＴ－１１６、Ｇ１２Ｄ変異ＫＲＡＳ細胞株ＳＫ－ＬＵ－１、ならびに２つの野生型ＫＲＡＳ細胞株Ａ４３１およびＮＣＩ－Ｈ１９７５（ｎ＝４）における２２０ｎＭＡＬＥＸＡ４８８コンジュゲートＧ１２ＤＡｂ１抗体による処理後の異なる時点での抗体の内部移行を示すフローサイトメトリーデータである。一元配置ＡＮＯＶＡとダネットの多重比較検定との組み合わせを用いて、統計的有意性を決定した。統計的有意性を以下のとおりに示す：＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。データを平均±ＳＥＭとして提示する。ＫＲＡＳ変異、ｗｔＫＲＡＳ、および非癌性細胞株のパネルにおける２４時間での変異選択的なＧ１３ＤＡｂ１およびＧ１２ＤＡｂ１抗体のアポトーシス誘導能力の評価を示す図である。調査された異なる細胞株は以下を含む；Ｇ１３Ｄ変異ＨＣＴ１１６（結腸癌）細胞、Ｇ１２Ｄ変異ＳＫ－ＬＵ－１（肺腺癌）細胞、Ｇ１２Ｖ変異ＳＷ６２０（結腸直腸腺癌）細胞、Ｇ１２Ｃ変異ＭＩＡ－ＰＡ－ＣＡ－２（膵臓癌）細胞、癌性ｗｔＫＲＡＳＡ４３１（類表皮癌）細胞、癌性ｗｔＫＲＡＳＮＣＩ－Ｈ１９７５（非小細胞肺癌）細胞、および非癌性ｗｔＫＲＡＳＣＲＬ－１８３１（結腸上皮）細胞。細胞を２２０ｎＭの抗体または溶媒で処理し、ＲｅａｌＴｉｍｅ－Ｇｌｏ（商標）アネキシンＶアポトーシスおよびネクローシスアッセイキット（プロメガ）を用いて、リアルタイムでアポトーシスを定量化した。これらのグラフは、細胞培養物に抗体または溶媒を添加してから２４時間後の、溶媒に対して標準化したアポトーシスのレベルを表す。ＨＣＴ１１６細胞に対してｎ＝１０（Ｇ１３ＤＡｂ１）および１２（溶媒およびＧ１２ＤＡｂ１）。ＳＫ－ＬＵ－１細胞に対してｎ＝８。ＳＷ６２０細胞に対してｎ＝８。ＭＩＡ－ＰＡ－ＣＡ－２細胞に対してｎ＝４。Ａ４３１細胞に対してｎ＝８。ＮＣＩ－Ｈ１９７５細胞に対してｎ＝４。ＣＲＬ－１８３１細胞に対してｎ＝６（溶媒）および８（Ｇ１３ＤＡｂ１およびＧ１２ＤＡｂ１）。クラスカル－ウォリス（Ｋｒｕｓｋａｌ－Ｗａｌｌｉｓ）検定とダンの（Ｄｕｎｎ’ｓ）多重比較検定との組み合わせを用いて統計的有意性を決定したＳＫ－ＬＵ－１細胞を除いては、一元配置ＡＮＯＶＡとダネットの多重比較検定との組み合わせを用いて統計的有意性を決定した。＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。データを平均±ＳＥＭとして提示する。ＫＲＡＳ変異、ｗｔＫＲＡＳ、および非癌性細胞株のパネルにおける４８時間での変異選択的なＧ１３ＤＡｂ１およびＧ１２ＤＡｂ１抗体のアポトーシス誘導能力の評価を示す図である。調査された異なる細胞株は以下を含む；Ｇ１３Ｄ変異ＨＣＴ１１６（結腸癌）細胞、Ｇ１２Ｄ変異ＳＫ－ＬＵ－１（肺腺癌）細胞、Ｇ１２Ｖ変異ＳＷ６２０（結腸直腸腺癌）細胞、Ｇ１２Ｃ変異ＭＩＡ－ＰＡ－ＣＡ－２（膵臓癌）細胞、癌性ｗｔＫＲＡＳＡ４３１（類表皮癌）細胞、および非癌性ｗｔＫＲＡＳＣＲＬ－１８３１（結腸上皮）細胞。細胞を２２０ｎＭの抗体または溶媒で処理し、ＲｅａｌＴｉｍｅ－Ｇｌｏ（商標）アネキシンＶアポトーシスおよびネクローシスアッセイキット（プロメガ）を用いて、リアルタイムでアポトーシスを定量化した。癌性ｗｔＫＲＡＳＮＣＩ－Ｈ１９７５細胞は、アポトーシスの発生が早かったために上記のキットを用いて４８時間の評価を行えなかった。これらのグラフは、細胞培養物に抗体または溶媒を添加してから４８時間後の、溶媒に対して標準化したアポトーシスのレベルを表す。ＨＣＴ１１６細胞に対してｎ＝１０（Ｇ１３ＤＡｂ１）および１２（溶媒およびＧ１２ＤＡｂ１）。ＳＫ－ＬＵ－１細胞に対してｎ＝８。ＳＷ６２０細胞に対してｎ＝８。ＭＩＡ－ＰＡ－ＣＡ－２細胞に対してｎ＝４。Ａ４３１細胞に対してｎ＝８。ＣＲＬ－１８３１細胞に対してｎ＝６（溶媒）および８（Ｇ１３ＤＡｂ１およびＧ１２ＤＡｂ１）。クラスカル－ウォリス検定とダンの多重比較検定との組み合わせを用いて統計的有意性を決定したＣＲＬ－１８３およびＭＩＡ－ＰＡ－ＣＡ－２細胞を除いては、一元配置ＡＮＯＶＡとダネットの多重比較検定との組み合わせを用いて統計的有意性を決定した。＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。データを平均±ＳＥＭとして提示する。（Ｇ１３ＤＫＲＡＳ変異を含む）ＳＥＱＩＤＮＯ：５のアミノ酸配列を有するペプチドへの結合について、ＥＬＩＳＡを用いてハイブリドーマ単一細胞クローン上清中のモノクローナル抗体を試験したことを示す図である。ペプチドのさまざまな希釈物において、クローン１１Ｄ６－１、４Ｂ８１－１、６Ｂ２－１、７Ｄ１１－１、および７Ｇ２－１を試験した。４０５ｎｍにて吸光度を測定した。より高い吸光度はより強い結合を示す。（Ｇ１３ＤＫＲＡＳ変異を含む）ＳＥＱＩＤＮＯ：５のアミノ酸配列を有するペプチドへの結合について、ＥＬＩＳＡを用いてハイブリドーマ単一細胞クローン上清中のモノクローナル抗体を試験したことを示す図である。ペプチドのさまざまな希釈物において、クローン１１Ｄ６－１、４Ｂ８１－１、６Ｂ２－１、７Ｄ１１－１、および７Ｇ２－１を試験した。４０５ｎｍにて吸光度を測定した。より高い吸光度はより強い結合を示す。（Ｇ１３ＤＫＲＡＳ変異を含む）ＳＥＱＩＤＮＯ：５のアミノ酸配列を有するペプチドへの結合について、ＥＬＩＳＡを用いてハイブリドーマ単一細胞クローン上清中のモノクローナル抗体を試験したことを示す図である。ペプチドのさまざまな希釈物において、クローン１１Ｄ６－１、４Ｂ８１－１、６Ｂ２－１、７Ｄ１１－１、および７Ｇ２－１を試験した。４０５ｎｍにて吸光度を測定した。より高い吸光度はより強い結合を示す。

［実施例１］
抗体の開発
抗体生成のために使用した各エピトープ（直鎖ペプチド）について、付加システイン残基を含む合成ペプチドを合成して精製した。これらの合成ペプチド配列をＳＥＱＩＤＮＯ３、４、５、および６として示している。

これらのペプチド（エピトープ）は、末端システイン残基によってキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）につながれた。ＫＬＨにつながれたペプチド（エピトープ）を用いて、ＫＬＨにつながれたペプチドの注入後に特定病原体除去（ＳＰＦ）ウサギを免疫化することによってポリクローナル抗体を産生した。

キャッピングステップを伴う固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）によってペプチドを生成した。システインのＳＨ基をＫＬＨのＮＨ２基に結合することによって、直鎖ペプチドをＫＬＨとコンジュゲートした。プロテインＧカラムを用いた後にペプチドに対するアフィニティ精製を行うことによって、抗体を精製した。

抗体のアフィニティ精製を行い、ＥＬＩＳＡ試験に供した。ＥＬＩＳＡ試験は、これらの抗体が自身のそれぞれのペプチド（すなわち、関連抗体を産生するためにウサギを免疫化するために用いたそれぞれのペプチド）と結合できることを示した。加えてＥＬＩＳＡ試験は、これらの抗体が対応する全長発癌性ＫＲＡＳタンパク質（アイソフォーム２Ｂバージョン）と結合できることを示した。

合成ペプチドおよびポリクローナル抗体の生成はどちらも、インノバジェン（Ｉｎｎｏｖａｇｅｎ）ＡＢ（ルンド（Ｌｕｎｄ）、スウェーデン（Ｓｗｅｄｅｎ））によって行われた。

ＳＥＱＩＤＮＯ：３のペプチドによる免疫化によって生成されたポリクローナル抗体をＧ１２ＤＡｂ１と名付ける。

ＳＥＱＩＤＮＯ：４のペプチドによる免疫化によって生成されたポリクローナル抗体をＧ１２ＤＡｂ２と名付ける。

ＳＥＱＩＤＮＯ：５のペプチドによる免疫化によって生成されたポリクローナル抗体をＧ１３ＤＡｂ１と名付ける。

ＳＥＱＩＤＮＯ：６のペプチドによる免疫化によって生成されたポリクローナル抗体をＧ１３ＤＡｂ２と名付ける。

ＫＲＡＳ機能活性の阻害
ＫＲＡＳＧＴＰアーゼ活性の阻害
材料および方法
組み換え野生型、Ｇ１２Ｄ、およびＧ１３Ｄ形態のＫＲＡＳを細菌発現によって生成し、精製した。精製タグを除去した。５０ｍＭトリス、１００ｍＭＮａＣｌ、１０ｍＭＭｇＣｌ₂、１ｍＭＥＤＴＡ、０．０１％トリトンＸ－１００、１ｍＭＤＴＴ、ｐＨ７．５においてＫＲＡＳを保存した。ゲル濾過およびＳＤＳ－ＰＡＧＥによってバッチ純度を評価した。

マイクロプレートリーダー（Ｃｌａｒｉｏｓｔａｒ、ＢＭＧラボテック（Ｌａｂｔｅｃｈ）、励起／発光＝４３０／４５０）を用いてＫＲＡＳ活性を評価した。１ｇ／ＬＫＲＡＳ、１μＭリン酸センサ（サーモ・フィッシャー・サイエンティフィック＃ＰＶ４４０７）、６μＭＧＴＰ、および抗体を緩衝液Ｈ（５０ｍＭトリス、１００ｍＭＮａＣｌ、１０ｍＭＭｇＣｌ₂、１ｍＭＥＤＴＡ、０．０１％トリトンＸ－１００、および１ｍＭＤＴＴ）中で調製し、３８４ウェルプレートに加え、４時間にわたって蛍光を測定した。４時間後の蛍光値を処理間で比較した。

野生型ＫＲＡＳ、Ｇ１２Ｄ変異ＫＲＡＳ、およびＧ１３Ｄ変異ＫＲＡＳによるＧＴＰからＧＤＰへの転換（ＧＴＰアーゼ活性）をＧ１３ＤＡｂ２、Ｇ１２ＤＡｂ１、およびＧ１２ＤＡｂ２抗体が阻害する能力を試験した。これらの抗体は、野生型ＫＲＡＳと比較してＫＲＡＳの発癌遺伝子型（Ｇ１２ＤまたはＧ１３Ｄ）を優先的に阻害した。野生型ＫＲＡＳＧＴＰアーゼ活性の顕著な阻害は観察されなかった。

ＥＲＫリン酸化の阻害
材料および方法
ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞（アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）より）を３８４ウェルプレートに１００００細胞／ウェルの密度で蒔き、５％ＣＯ₂インキュベータ内で３７℃にて一晩インキュベートした。翌日、血清含有培地中で化合物（抗体）または対照（ウサギＩｇＧ）によって細胞を処理し、５％ＣＯ₂インキュベータ内で３７℃にて１４～１６時間インキュベートした。化合物（抗体）の最終作業濃度は２５μｇ／ｍｌ（１６７ｎＭ）、１０μｇ／ｍｌ（６７ｎＭ）、および４μｇ／ｍｌ（２７ｎＭ）であった。ウサギＩｇＧ（－ｖｅ対照）は最終濃度２５μｇ／ｍｌ（１６７ｎＭ）にて加えた。翌日、化合物または対照を含有する無血清培地で各ウェルの培地を置換した。この４時間の血清飢餓期間の間に、Ｋ－Ｒａｓ阻害剤ＳＡＨ－ＳＯＳ１（サンオブセブンレス１の安定化アルファヘリックス、＋ｖｅ対照、５μＭ）をそれぞれのウェルに加えた。血清飢餓の後、細胞を１０．９ｎｇ／ｍｌＥＧＦ（上皮増殖因子）で１０分間処理した。ＥＧＦ処理の後、細胞可溶化物中のホスホ－ＥＲＫ１／２（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４におけるリン酸化）の定量的検出のためのサンドイッチイムノアッセイのキット（ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（登録商標）ＳｕｒｅＦｉｒｅ（登録商標）ｐ－ＥＲＫ１／２（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）アッセイキット、パーキン・エルマー、ｃａｔｎｏ．ＴＧＲＥＳＢ５００）において提供されている溶解緩衝液によって、細胞を１０分間溶解した。ＥＲＫは細胞外シグナル制御キナーゼである。可溶化物を分割して、総ＥＲＫおよびリン酸化ＥＲＫの測定に使用した。ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（登録商標）ＳｕｒｅＦｉｒｅ（登録商標）キットのプロトコル（パーキン・エルマー、ｃａｔｎｏ．ＴＧＲＥＳＢ５００）に従って、リン酸化ＥＲＫを推定した。細胞可溶化物中のＥＲＫ（リン酸化および非リン酸化の両方）の定量的検出のためのサンドイッチイムノアッセイのキットのプロトコル（ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（登録商標）ＳｕｒｅＦｉｒｅ（登録商標）ＥＲＫ１／２トータルアッセイキット（ＴｏｔａｌＡｓｓａｙＫｉｔ）、パーキン・エルマー、ｃａｔ．ｎｏ．ＴＧＲＴＥＳＢ５００）に従って、総ＥＲＫを推定した。標準的なＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ設定を用いたＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダー（パーキン・エルマー）において、読取りを行った。ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎは、ビーズベースの非放射性の増幅ルミネセンス近接ホモジニアスアッセイ（ＡｍｐｌｉｆｉｅｄＬｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔＰｒｏｘｉｍｉｔｙＨｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓＡｓｓａｙ）である。統計的有意性を以下のとおりに示す：＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１。データを平均±ＳＥＭとして提示する。

結果および考察
抗体がＫＲＡＳを阻害するためには、細胞に入ってＫＲＡＳが存在するサイトゾルに提供される必要がある。ＭＡＰＫ経路におけるＥＲＫのリン酸化のレベルは、多くの癌細胞においてＫＲＡＳ活性に依存し、ここでＥＲＫはＫＲＡＳの下流にある（ＭＡＰＫ／ＥＲＫ経路）。抗ＫＲＡＳ化合物を試験するときに、ＥＲＫリン酸化はしばしばＫＲＡＳ活性の尺度として用いられ、ＥＲＫリン酸化の阻害はＫＲＡＳ阻害の結果である。我々は、４つの抗ＫＲＡＳ抗体Ｇ１３ＤＡｂ１、Ｇ１３ＤＡｂ２、Ｇ１２ＤＡｂ１、およびＧ１２ＤＡｂ２による、乳癌細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１におけるＥＲＫリン酸化の阻害を（ホスホ－ＥＲＫの％阻害として）測定した。陽性対照として我々はＫＲＡＳに結合する公知のポリペプチドＫＲＡＳ阻害剤であるＳＡＨ－ＳＯＳ１を使用し、陰性対照として我々はＫＲＡＳに結合するはずのないウサギＩｇＧを使用した。抗体は細胞の外側の培地に加えられ、理論に結び付けられることは望まないが、マクロピノサイトーシスのプロセスを介して細胞に入り得る。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞はＧ１３ＤＫＲＡＳ変異を有する。２７ｎＭという低い細胞外濃度において、我々はすでにこれらの抗体によるＥＲＫリン酸化の阻害を確認した（図１）。

アポトーシス
材料および方法
ＨＣＴ１１６細胞、ＳＫ－ＬＵ１細胞、およびＣＲＬ－１８３１細胞におけるアポトーシスを評価する実験（すなわち、図２、図４、および図５に示されるデータを生じた実験）に対する材料および方法は、以下のとおりである。
ＲｅａｌＴｉｍｅ－Ｇｌｏ（商標）アネキシンＶアポトーシスおよびネクローシスアッセイキット（プロメガ、ｃａｔｎｏ．ＪＡ１０１１）を用いて、アポトーシスおよびネクローシスをリアルタイムで測定した。これは生細胞のリアルタイム（動態）アッセイであり、細胞膜の外葉におけるホスファチジルセリン（ＰＳ）の露出によってアポトーシスを定め、ネクローシスプロセス中に細胞膜が崩壊するために細胞に入り得る細胞不透過のプロ蛍光ＤＮＡ染料によってネクローシスを定める。

以下のとおりに細胞を調製した。ＨＣＴ－１１６、ＳＫ－ＬＵ－１、およびＣＲＬ－１８３１細胞（アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションより）をＴフラスコ中で培養した。ＨＣＴ－１１６細胞は、１０％ウシ胎児血清を補充したマッコイ５ａ改変培地（ＭｃＣｏｙ’ｓ５ａＭｅｄｉｕｍＭｏｄｉｆｉｅｄ）で生育させた。ＳＫ－ＬＵ－１細胞は、１０％ウシ胎児血清を補充したイーグル最小必須培地（Ｅａｇｌｅ’ｓＭｉｎｉｍｕｍＥｓｓｅｎｔｉａｌＭｅｄｉｕｍ）で生育させた。ＣＲＬ－１８３１細胞は、１０％ウシ胎児血清、１０ｎｇ／ｍｌコレラトキシン、０．００５ｍｇ／ｍｌインスリン、０．００５ｍｇ／ｍｌトランスフェリン、１００ｎｇ／ｍｌヒドロコルチゾン、および２０ｎｇ／ｍＬヒト組み換えＥＧＦを補充したＤＭＥＭ：Ｆ１２培地で生育させた。予熱したトリプシン溶液（３７℃）を用いて細胞を収集し、１５分間インキュベートした。リーボビッツのＬ－１５培地（Ｌｅｉｂｏｖｉｔｚ’ｓＬ－１５Ｍｅｄｉｕｍ）（サーモ・フィッシャー、ｃａｔ．ｎｏ．２１０８３０２７）、１０％ウシ胎児血清、および１％ペニシリン／ストレプトマイシンからなるＬ－１５アッセイ培地に細胞を移した。細胞を計数し、Ｌ－１５アッセイ培地で２００．０００細胞／ｍＬに希釈した。９６ウェルプレートのウェル当り５０μＬの細胞溶液を加えた（ウェル当り１０．０００細胞、Ｃｏｓｔａｒ、白色および明瞭な不透明の底部、ｃａｔ．ｎｏ．３９０３）。バックグラウンドの測定のために、同じプレート上のウェルに５０μＬのＬ－１５アッセイ培地を入れた。プレートを接着フィルムで密封し、３７℃にて一晩インキュベートした。

以下のとおりに抗体を調製した。最初に抗体を合計３００μＬの０．０２％Ｔｗｅｅｎを含有するリン酸緩衝食塩水（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ｂｕｆｆｅｒｅｄｓａｌｉｎｅ）（ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ）に混合した。すべての抗体について、最終抗体濃度は０．８７μＭであった。抗体溶液をＬ－１５アッセイ培地およびキット検出試薬（２１０μＬアッセイ培地＋２１０μＬ抗体溶液＋４２０μＬ検出試薬）と混合することによって、作業溶液を調製した。検出試薬はキットの指示に従って調製した。２１０μＬ抗体溶液を２１０μＬＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎに置き換えて、１つのタイプの対照を作製した（溶媒対照）。２１０μＬ抗体溶液を２１０μＬＬ－１５アッセイ培地に置き換えて、別のタイプの対照を作製した（培地対照）。

以下のとおりにアッセイを行った。各プレートウェルから２００μＬの培地を除去して、２００μＬの作業溶液に置き換えた。プレートを光学フィルムで密封し、ＣＬＡＲＩＯｓｔａｒ（登録商標）（ＢＭＧラボテック）プレートリーダーに入れた。キットの指示に従って、アポトーシスの測定は発光シグナルを読取ることによって行い、ネクローシスの測定は蛍光シグナルを読取ることによって行った。キットの指示に従ってデータの解析および解釈を行った。

データを平均±ＳＥＭとして提示する。一元配置ＡＮＯＶＡとダネットの多重比較検定との組み合わせを用いて統計的有意性を決定し、ここで各Ａｂ（抗体）をアイソタイプ対照（ウサギＩｇＧ）または溶媒対照と比較した。統計的有意性を以下のとおりに示す：＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。データを平均±ＳＥＭとして提示する。

ＬＳ１７４Ｔ細胞におけるアポトーシスを評価する実験（すなわち、図３に示されるデータを生じた実験）に対する材料および方法は、以下のとおりである。
１０％ウシ胎児血清および１％ペニシリン／ストレプトマイシンを補充したイーグル最小必須培地で、ＬＳ１７４Ｔ細胞を７０％コンフルエンスまで培養した。細胞を対照（抗体を有さない培地）または培地中の３ｎｇ／ｍｌ抗体で２４、４８、または７２時間処理した。次いで細胞を洗浄し、アポトーシスを起こしている細胞の外葉に露出されるホスファチジルセリン（ＰＳ）に結合する蛍光標識アネキシンＶパシフィックブルー（サーモ・フィッシャー、ｃａｔｎｏ．Ａ３５１２２）で染色した。細胞関連の蛍光の定量化のためにＦＡＣＳを使用し、抗体処理した細胞と対照細胞との間の蛍光の比率としてアポトーシスのレベル（対照の％）を算出した。

結果および考察
いくつかの実験において、プロメガのリアルタイムアポトーシス／ネクローシスキットを用いてアポトーシスを定量化し、これは細胞膜の外側におけるホスホセリン脂質（ＰＳ：ｐｈｏｓｐｈｏｓｅｒｉｎｅｌｉｐｉｄ）の量を測定するものである。ＰＳ量は、アポトーシスプロセスの間に増加する。本明細書における抗ＫＲＡＳ抗体のＧ１３ＤＡｂ１、Ｇ１３ＤＡｂ２、Ｇ１２ＤＡｂ１、およびＧ１２ＤＡｂ２は、Ｇ１２Ｄ変異ＳＫ－ＬＵ－１（肺腺癌）細胞および／またはＧ１３Ｄ変異ＨＣＴ１１６（結腸癌）細胞におけるアポトーシスを誘導すると我々は判定した（図２、図４、および図５）。細胞培地に抗体を添加することによって、細胞を抗体で処理した。図３のデータは、抗体Ｇ１２ＤＡｂ１がＬＳ１７４Ｔ（Ｇ１２Ｄ）細胞においてもアポトーシスを誘導できることを示す。

Ｇ１３ＤＡｂ１およびＧ１２ＤＡｂ１は、ＳＫ－ＬＵ－１細胞（図２）およびＨＣＴ１１６細胞（図４）の両方において、アイソタイプ抗体対照と比較して、または溶媒ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ（図５Ａ、Ｂ）と比較して高レベルのアポトーシスをもたらした。このデータは、これらの抗体が両方とも両方の変異（すなわち、ＫＲＡＳのＧ１２ＤおよびＧ１３Ｄ変異型）に対して活性であることを示す。理論に結び付けられることは望まないが、これらの抗体は負に帯電したアスパラギン酸（Ｄ）残基に結合し得るが、それらの抗体は、距離の差が小さいために位置１２または１３のいずれのＤ残基にも適合できると考えられる。野生型ＫＲＡＳを有するＣＲＬ－１８３１結腸上皮細胞においていくらかのアポトーシスが観察されたが、変異ＫＲＡＳを有する細胞と比較すると、そのアポトーシスは試験された両方の抗体についてかなり低かった（図５Ｃ）。

本研究のＫＲＡＳ抗体によって誘導されるアポトーシスは、免疫化および抗体産生に使用した合成抗原（本明細書の他の場所に記載されるＫＲＡＳの発癌性変異型のアミノ酸残基１０～２１に本質的に対応する）を使用して阻害性のＫＲＡＳ抗体を開発できることを示す。さらにこのデータは、ＫＲＡＳのＧ１２ＤおよびＧ１３Ｄ変異型の両方を阻害できる抗体を生成できることを示す。

ネクローシス
材料および方法
本明細書の他の場所に記載されるＲｅａｌＴｉｍｅ－Ｇｌｏ（商標）アネキシンＶアポトーシスおよびネクローシスアッセイキットアッセイキットを使用して、アポトーシスと並行してネクローシスを記録した。

結果および考察
本明細書においては、アポトーシスに加えて、抗ＫＲＡＳ抗体Ｇ１３ＤＡｂ１およびＧ１２ＤＡｂ１がＳＫ－ＬＵ－１細胞（図６Ａ）およびＨＣＴ１１６細胞（図６Ｂ）において顕著なネクローシスをもたらしたが、野生型ＫＲＡＳ細胞ＣＲＬ－１８３１（図６Ｃ）にはもたらさなかったことが示された。

さらなるアポトーシスおよびネクローシス実験
肺腺癌細胞株ＮＣＩ－Ｈ１９７５のアポトーシスおよびネクローシスに対する抗体Ｇ１２ＤＡｂ１、Ｇ１２ＤＡｂ２、Ｇ１３ＤＡｂ１、およびＧ１３ＤＡｂ２の影響を試験した。ＮＣＩ－Ｈ１９７５細胞株は野生型ＫＲＡＳを発現する。この実験に対する材料および方法は、本質的に上述のアポトーシスおよびネクローシスアッセイのとおりである（ＲｅａｌＴｉｍｅ－Ｇｌｏ（商標）アネキシンＶアポトーシスおよびネクローシスアッセイキット（プロメガ）を使用した）。

この実験において、抗体Ｇ１２ＤＡｂ１、Ｇ１２ＤＡｂ２、Ｇ１３ＤＡｂ１、およびＧ１３ＤＡｂ２の各々で処理したＮＣＩ－Ｈ１９７５細胞のアポトーシスおよびネクローシスのレベルは、溶媒のみの対照によって観察されるアポトーシスおよびネクローシスのレベルと類似であるか、またはそれ未満であった（図８）。

抗体の内部移行
材料および方法
１０％ウシ胎児血清および１％ペニシリン／ストレプトマイシンを補充したイーグル最小必須培地で、細胞（ＬＳ１７４Ｔ細胞またはＨＣＴ１１６細胞）を７０％コンフルエンスまで培養した。同じ培地に溶解した１６ｎｇ／ｍｌのウサギ抗ヤギＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）二次抗体、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８（サーモ・フィッシャー、ｃａｔ．ｎｏ．Ａ－１１０７８）で細胞を２４時間処理した。細胞を洗浄し、ＦＡＣＳを使用して細胞関連の蛍光を定量化した。

結果および考察
癌細胞が細胞外培地に提供された抗体を内部移行できるかどうかを評価するために、我々は蛍光タグ付きの抗体を使用して、ＦＡＣＳによって定量化された取り込みを定量化した。Ｇ１２Ｄ変異ＬＳ１７４Ｔ（結腸腺癌）細胞およびＧ１３Ｄ変異ＨＣＴ１１６（結腸癌）細胞を標識抗体によってある期間処理し、細胞の蛍光を定量化した。処理された細胞中に蓄積した蛍光（ｆｌｏｒｅｓｃｅｎｃｅ）シグナルの曲線下面積に基づき、未処理細胞のシグナルと比較して、これらの癌細胞型には抗体取り込み機構が存在すると我々は結論付けた。

［実施例２］
この実施例は、本発明の抗体が、ＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する癌細胞を含む癌細胞によって内部移行されることを示す。加えてこの実施例は、本発明の抗体がＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞においてアポトーシスをもたらすことを示すさらなるデータを含む。

材料および方法
Ｇ１３ＤＡｂ１抗体およびＧ１２ＤＡｂ１抗体取り込みのフローサイトメトリー測定
ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８タンパク質ラベリングキット（Ｃａｔ＃Ａ１０２３５、サーモ・フィッシャー・サイエンティフィック）を用いて、（実施例１の）抗体Ｇ１３ＤＡｂ１および抗体Ｇ１２ＤＡｂ１をＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８で標識した。ＨＣＴ１１６、ＳＫ－ＬＵ－１、Ａ４３１、およびＮＣＩ－Ｈ１９７５細胞を１２ウェルマイクロプレート（インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ））中で培養した。測定の前に、細胞を２２０ｎＭの標識Ｇ１３ＤＡｂ１抗体またはＧ１２ＤＡｂ１抗体で４時間または２４時間処理した。ｔ（０）時点として未染色細胞を測定した。測定の前に、細胞を洗浄して収集した。測定はＢＤ（商標）ＬＳＲＩＩフローサイトメーター（ＢＤバイオサイエンス社（ＢＤＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓｉｎｃ．））において行った。解析はＦｌｏｗＪｏｖ．１０（ＢＤバイオサイエンス）において行った。各細胞株および時点に対してｎ＝４であった。ｎは１つの測定に等しく、それは平均でＨＣＴ１１６については４０００細胞、ＳＫ－ＬＵ－１については８０００細胞、Ａ４３１については７０００細胞、およびＮＣＩ－Ｈ１９７５については４０００細胞を含む。

ＫＲＡＳ抗体（Ｇ１３ＤＡｂ１抗体およびＧ１２ＤＡｂ１抗体）の抗体誘導アポトーシス
ＲｅａｌＴｉｍｅ－Ｇｌｏ（商標）アネキシンＶアポトーシスおよびネクローシスアッセイキット（プロメガ、ｃａｔｎｏ．ＪＡ１０１１）を用いて、アポトーシスをリアルタイムで測定した。トリプシンを用いて培養細胞を収集し、リーボビッツのＬ－１５培地（サーモ・フィッシャー、ｃａｔ．ｎｏ．２１０８３０２７）、１０％ウシ胎児血清、および１％ペニシリン／ストレプトマイシンからなるＬ－１５アッセイ培地に移した。細胞を計数し、Ｌ－１５アッセイ培地で２００，０００細胞／ｍＬに希釈した。９６ウェルプレートに細胞を加え（ウェル当り１０，０００細胞、Ｃｏｓｔａｒ、白色および明瞭な不透明の底部、ｃａｔ．ｎｏ．３９０３）、一晩インキュベートした。

抗体をＬ－１５アッセイ培地および検出試薬で希釈し、最終濃度２２０ｎＭにてウェルに添加した。プレートを光学フィルムで密封し、ＣＬＡＲＩＯｓｔａｒ（登録商標）（ＢＭＧラボテック）プレートリーダーに入れた。発光シグナルを読取ることによって、アポトーシスの測定を行った。

以下の細胞株に対して、２～３回の生物学的反復を行った。ＨＣＴ１１６、ＳＫＬＵ１、ＳＷ６２０、ＣＲＬ－１８３１、およびＡ４３１。ＮＣＩ－Ｈ１９７５およびＭＩＡ－ＰＡ－ＣＡ－２細胞株は１回試験した。

結果および考察
Ｇ１３ＤＡｂ１およびＧ１２ＤＡｂ１抗体のインビトロ抗癌効力を、それらの抗体が４つの異なるＫＲＡＳ変異細胞株、すなわちＧ１２Ｄ変異ＳＫ－ＬＵ－１肺腺癌細胞、Ｇ１３Ｄ変異ＨＣＴ１１６結腸癌細胞、Ｇ１２Ｖ変異ＳＷ６２０結腸直腸腺癌細胞、Ｇ１２Ｃ変異ＭＩＡ－ＰＡ－ＣＡ膵臓癌細胞、ならびに野生型ＫＲＡＳ細胞株、すなわちＡ４３１類表皮癌細胞、およびＮＣＩ－Ｈ１９７５非小細胞肺癌細胞においてアポトーシスをもたらす能力を評価することによって決定した。アポトーシス実験における対照細胞株として、非癌性細胞株ＣＲＬ－１８３１結腸上皮細胞も含まれた。ＫＲＡＳは細胞内の標的であるが、ＫＲＡＳ変異細胞を含む多くの癌細胞株はアップレギュレートされるマクロピノサイトーシスを有するという事実を我々は利用した。この取り込み系は、タンパク質を含む巨大分子を内部移行する能力を有することが十分に文書で立証されている。我々はフローサイトメトリーおよび共焦点顕微鏡実験を用いて、Ｇ１２Ｄ変異を有する細胞株（ＳＫ－ＬＵ－１）およびＧ１３Ｄ変異を有する細胞株（ＨＣＴ１１６）ならびに２つの野生型ＫＲＡＳ細胞株Ａ４３１およびＮＣＩ－Ｈ１９７５における、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８で標識されたＧ１３ＤＡｂ１およびＧ１２ＤＡｂ１抗体の内部移行を評価した。共焦点顕微鏡画像は、調査したすべての異なる細胞株におけるＧ１３ＤＡｂ１およびＧ１２ＤＡｂ１抗体の取り込みを示した（データを示さず）。フローサイトメトリー実験でこれらの観察をさらに確認し、図９に示されるとおり、すべての試験されたＫＲＡＳ変異細胞株およびすべての試験された野生型ＫＲＡＳ細胞株において、統計的に有意な抗体取り込みが観察された。アポトーシス実験において、処理の２４時間後にＧ１３ＤＡｂ１およびＧ１２ＤＡｂ１抗体はＧ１２ＤおよびＧ１３Ｄ変異細胞株のみにおいて活性だった（図１０）。これらの抗体は、Ｇ１２ＣおよびＧ１２ＶＫＲＡＳ変異細胞、野生型ＫＲＡＳ癌細胞、ならびに非癌性結腸上皮細胞を含む、試験されたその他の細胞株のいずれにおいてもアポトーシスをもたらさなかった（図１０）。処理の４８時間後（図１１）、Ｇ１３ＤＡｂ１およびＧ１２ＤＡｂ１抗体は、Ｇ１２ＤおよびＧ１３Ｄ変異細胞株において２４時間の処理と比較して増加したレベルのアポトーシスを誘発することを我々は観察した。加えて我々は、４８時間後にＧ１２Ｖ変異細胞において小さいが統計的に（ｓｔａｓｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ）有意なアポトーシスの増加を観察した（図１１）。その他の細胞株はいずれも、抗体曝露の４８時間後にアポトーシスの増加を何ら示さなかった（図１１）。まとめると、これらのデータは、野生型ＫＲＡＳ細胞と比較したＧ１２ＤおよびＧ１３Ｄ変異細胞におけるアポトーシス誘導効果が、ＫＲＡＳ変異細胞の抗体取り込みが有利であるという量的な差の結果ではなく、Ｇ１３ＤＡｂ１およびＧ１２ＤＡｂ１抗体によるＧ１２ＤおよびＧ１３Ｄ変異ＫＲＡＳ細胞の選択的阻害の結果であることを示している。

抗体がＧ１２ＤおよびＧ１３Ｄ変異体に対して選択的効果を有するが、Ｇ１２Ｃには効果を有さず、Ｇ１２Ｖ変異体に対する効果はかなり低いことは、エピトープ領域のＧ１２およびＧ１３位置における負に帯電したアスパラギン酸残基（Ｄ）が抗体の結合に重要な役割を果たすことによって説明されるかもしれない。しかし、１２または１３のいずれかの位置におけるアレルの場所は、距離の差が小さいために、結合相互作用にとってあまり重要でないようである。

この研究は、他のＫＲＡＳ変異（Ｇ１２ＶおよびＧ１２Ｃ）および野生型ＫＲＡＳよりも高い選択性を伴ってＧ１２ＤおよびＧ１３Ｄ変異ＫＲＡＳを阻害できる２つの抗ＫＲＡＳ抗体を実証する。

［実施例３］
材料および方法
ハイブリドーマ技術を用いたモノクローナル抗体（マウスＩｇＧ）の産生
キーホールリンペットヘモシアニンにつながれたＳＥＱＩＤＮＯ：５の直鎖ペプチドによって、マウスを免疫化した（ＫＬＨにつながれたペプチドは実施例１において上述したとおりである）。ＳＥＱＩＤＮＯ：５の残基番号（位置）５における「Ｄ」残基は、発癌性変異Ｇ１３ＤＫＲＡＳタンパク質（例、ＳＥＱＩＤＮＯ：９またはＳＥＱＩＤＮＯ：１２の発癌性変異Ｇ１３ＤＫＲＡＳタンパク質）の発癌性Ｇ１３Ｄ変異に対応する。ＥＬＩＳＡによって免疫応答を評価した。免疫化プロセスの後、血清のＥＬＩＳＡスクリーニングに基づいてマウスを選択し、マウスから脾臓細胞を抽出し、骨髄腫細胞と融合させてハイブリドーマ細胞を生成した。ハイブリドーマをＥＬＩＳＡによってスクリーニングして、陽性クローン（すなわち、標的に結合する抗体を産生するもの）を得た。このスクリーニングの後、選択されたハイブリドーマのサブクローニングを行い、ＥＬＩＳＡを用いてスクリーニングのさらなるラウンドを行った。次いで、サブクローニングされたハイブリドーマを用いてモノクローナル抗体を産生させた。ＥＬＩＳＡを用いて、上清中の抗体の結合特性を試験した。５つのモノクローナル抗体（ハイブリドーマ）１１Ｄ６－１、４Ｂ８－１、６Ｂ２－１、７Ｄ１１－１、７Ｇ２－１を同定した。１１Ｄ６－１、４Ｂ８－１、６Ｂ２－１、７Ｄ１１－１、７Ｇ２－１抗体を生成するために使用されたペプチド（免疫原）はＳＥＱＩＤＮＯ：５のペプチドであり、上記のとおりこのペプチドはキーホールリンペットヘモシアニンにつながれていた。抗体名の各々における添え字「－１」は、単にこれらの抗体の各々がそれぞれの親ハイブリドーマの娘クローンであることを示すものである（親ハイブリドーマは「－１」の添え字を有さない同じ名前を有し、たとえば１１Ｄ６は１１Ｄ６－１抗体（娘クローン）の親ハイブリドーマである）。

マウスハイブリドーマＩｇＧのクローニングおよび配列決定
マウスハイブリドーマ（１１Ｄ６－１、４Ｂ８－１、６Ｂ２－１、７Ｄ１１－１、および７Ｇ２－１）からＲＮＡを調製し、そのＲＮＡからｃＤＮＡを合成した。ｃＤＮＡの可変軽鎖（ＶＬ）および可変重鎖（ＶＨ）領域を増幅して、別々に標準的なクローニングベクターにクローニングした。コロニーＰＣＲに続くゲル電気泳動によって、陽性クローンの識別を行った。陽性クローンからＶＬおよびＶＨＤＮＡならびにアミノ酸の配列を得た。

６Ｂ２－１の配列決定によって１つのＶＨ領域（ドメイン）配列が同定されたが、２つの異なるＶＬ領域（ドメイン）配列が同定された（すなわち、２つの別個のＶＬ領域配列が同定された）。このことについては以下の結果のセクションでさらに考察する。

その他の４つの抗体（すなわち１１Ｄ６－１、４Ｂ８－１、７Ｄ１１－１、および７Ｇ２－１）のＶＨおよびＶＬドメインをコードするｃＤＮＡの配列決定によって、抗体当り（すなわち、ハイブリドーマ当り）１つのＶＨ領域（ドメイン）配列および１つのＶＬ領域（ドメイン）配列が同定された。

結果および考察
ハイブリドーマクローン１１Ｄ６－１、４Ｂ８－１、６Ｂ２－１、７Ｄ１１－１、および７Ｇ２－１のハイブリドーマ上清調製物中のモノクローナル抗体をＥＬＩＳＡによって試験して、ＳＥＱＩＤＮＯ：５のアミノ酸配列を有するペプチド（１１Ｄ６－１、４Ｂ８－１、６Ｂ２－１、７Ｄ１１－１、および７Ｇ２－１抗体を生成するために用いたペプチド（免疫原））のさまざまな希釈物に対する結合を調べた。ペプチドに結合した抗体の定量は、４０５ｎｍにおける吸光度によって測定した。吸光度は結合強度に比例する。すべての上清は、ＳＥＱＩＤＮＯ：５のペプチドに結合する抗体を含有した（図１２）。クローン１１Ｄ６－１、４Ｂ８－１、および７Ｄ１１－１による抗体と、（ＳＥＱＩＤＮＯ：５と比較して）位置５の「変異」Ｄ残基の代わりにＧ残基を有する「野生型（ｗｉｌｄ－ｔｙｐｅ）」（ＷＴ）ペプチド（アミノ酸配列ＣＧＡＧＧＶＧＫＳＡＬＴＩ（ＳＥＱＩＤＮＯ：１６０）を有する）とを使用して行ったさらなるＥＬＩＳＡによって、クローン１１Ｄ６－１、４Ｂ８－１、および７Ｄ１１－１による抗体は、ＷＴペプチドよりも変異Ｇ１３Ｄペプチド（ＳＥＱＩＤＮＯ：５）に対して明らかにより強力に結合することが示された（データを示さず）。抗体がＷＴペプチドよりも変異含有ペプチドにより強力に結合するとき、これはその抗体がＫＲＡＳの変異型に対して選択的であり、変異配列に対する優先度を有することを示す。理論に結び付けられることは望まないが、こうした選択的な抗体は、ＫＲＡＳタンパク質の疾患をもたらす変異型に優先的に結合する。細胞または組織がＫＲＡＳタンパク質の変異型だけでなく野生型の形態も発現している場合に、こうした優先度が重要であり得る。

上記のとおり、６Ｂ２－１ハイブリドーマのＶＨおよびＶＬ領域（ドメイン）の配列決定によって１つのＶＨ領域（ドメイン）配列が同定されたが、２つの異なる（すなわち別個の）ＶＬ領域（ドメイン）配列が同定された。このことは、ハイブリドーマクローン６Ｂ２－１が抗体を産生する１つの重鎖遺伝子および２つの軽鎖遺伝子を有することを意味し得る。この現象（すなわち、ハイブリドーマが２つの別個のＶＬドメイン配列をコードすること）が起こることは公知であり、文献において考察されている（例、ブラッドベリ（Ｂｒａｄｂｕｒｙ）、Ａ．Ｒ．Ｍ．ら、ＭＡｂｓ１０、５３９－５４６（２０１８））。１つのＶＨ領域（ドメイン）配列が存在するが、２つの異なるＶＬ領域（ドメイン）配列が存在するという状況は、結果的に３種の異なるモノクローナル抗体（（ｉ）２つの同一の重鎖および配列Ｘの２つの同一の軽鎖を有する種；（ｉｉ）２つの同一の重鎖および配列Ｙの２つの同一の軽鎖を有する種；（ｉｉｉ）２つの同一の重鎖と、配列Ｘの１つの軽鎖と、配列Ｙの１つの軽鎖とを有する種）をもたらし得る可能性がある。このハイブリドーマ（６Ｂ２－１）由来の上清（または精製抗体）は、これらの種のタイプのうち１つ以上の混合物を含有してもよい。通常の状況では、１つの重鎖遺伝子および１つの軽鎖遺伝子のみが抗体を産生している。ハイブリドーマの生成および培養の際に、２つ以上の軽鎖を含有するハイブリドーマが生じ得る。いくつかの原因が存在し得る。たとえば、骨髄腫細胞はただ１つのＢ細胞の代わりに２つのＢ細胞を融合させることがある。この実施例において試験された６Ｂ２－１上清は、これら３つの可能な抗体種の１つ以上を含有し得る。

本明細書の他の場所において、６Ｂ２－１ハイブリドーマによる２つの可能なモノクローナル抗体（２つの可能なモノクローナル抗体種）の配列を別々に示している。これらのモノクローナル抗体は（ａ）同定されたＶＨドメイン配列および第１の同定されたＶＬドメイン配列のみを有する抗体、ならびに（ｂ）同定されたＶＨドメイン配列および第２の（または他の）同定されたＶＬドメイン配列のみを有する抗体である。これらの別個のモノクローナル抗体（別個のモノクローナル抗体種）には６Ｂ２－１－１および６Ｂ２－１－２の名称が与えられている。

抗体１１Ｄ６－１、４Ｂ８－１、７Ｄ１１－１、７Ｇ２－１、６Ｂ２－１－１、および６Ｂ２－１－２の配列は、本明細書の表Ａ～Ｆに示されている。

Claims

ＫＲＡＳの発癌性変異型に結合する抗体であって、前記ＫＲＡＳの発癌性変異型が野生型ＫＲＡＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）の位置Ｇ１３またはＧ１２に対応する位置にアミノ酸置換を含み、前記抗体が野生型ＫＲＡＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）のアミノ酸残基１０～２１に対応するアミノ酸残基によって定義される前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の領域内にあるエピトープに結合し、前記抗体が前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の活性を阻害する、抗体。
前記ＫＲＡＳの発癌性変異型がＳＥＱＩＤＮＯ：１４、１６、１３、または１５のアミノ酸配列を有し、前記抗体がＳＥＱＩＤＮＯ：１４、１６、１３、または１５のアミノ酸残基１０～２１によって定義される前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の領域内にあるエピトープに結合する、請求項１に記載の抗体。
野生型ＫＲＡＳの位置Ｇ１３またはＧ１２に対応する位置における前記アミノ酸置換がＧ１３ＤまたはＧ１２Ｄ置換である、請求項１または請求項２に記載の抗体。
前記ＫＲＡＳの発癌性変異型が野生型ＫＲＡＳ（ＳＥＱＩＤＮＯ：７）の位置Ｇ１３に対応する位置にアミノ酸置換を含み、前記アミノ酸置換がＧ１３Ｄ置換である、請求項１～３のいずれか１項に記載の抗体。
前記ＫＲＡＳの発癌性変異型がＳＥＱＩＤＮＯ：９、１２、８、または１１のアミノ酸配列を有し、前記抗体がＳＥＱＩＤＮＯ：９、１２、８、または１１のアミノ酸残基１０～２１によって定義される前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の領域内にあるエピトープに結合する、請求項１～４のいずれか１項に記載の抗体。
前記ＫＲＡＳの発癌性変異型がＳＥＱＩＤＮＯ：９またはＳＥＱＩＤＮＯ：１２のアミノ酸配列を有し、前記抗体がＳＥＱＩＤＮＯ：９またはＳＥＱＩＤＮＯ：１２のアミノ酸残基１０～２１によって定義される前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の領域内にあるエピトープに結合する、請求項１～５のいずれか１項に記載の抗体。
前記ＫＲＡＳの発癌性変異型がＳＥＱＩＤＮＯ：８またはＳＥＱＩＤＮＯ：１１のアミノ酸配列を有し、前記抗体がＳＥＱＩＤＮＯ：８またはＳＥＱＩＤＮＯ：１１のアミノ酸残基１０～２１によって定義される前記ＫＲＡＳの発癌性変異型の領域内にあるエピトープに結合する、請求項１～６のいずれか１項に記載の抗体。
前記抗体がＳＥＱＩＤＮＯ：８または１１のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの少なくとも１つの発癌性変異型と、ＳＥＱＩＤＮＯ：９または１２のアミノ酸配列を有するＫＲＡＳの少なくとも１つの発癌性変異型とに結合してそれを阻害する、請求項１～７のいずれか１項に記載の抗体。
前記抗体が単離ペプチドに結合し、前記単離ペプチドが
（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１８またはＳＥＱＩＤＮＯ：１７のアミノ酸配列、または
（ｉｉ）（ｉ）のアミノ酸配列と実質的に相同のアミノ酸配列を含み、前記実質的に相同の配列が前記アミノ酸配列と比較して１または２アミノ酸の置換または付加または欠失を有し、ＳＥＱＩＤＮＯ：１７と実質的に相同の配列においてＳＥＱＩＤＮＯ：１７の位置３に対応するＸ残基は変更されておらず、ＳＥＱＩＤＮＯ：１８と実質的に相同の配列においてＳＥＱＩＤＮＯ：１８の位置４に対応するＸ残基は変更されていない、請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体。
前記抗体が単離ペプチドに結合し、前記単離ペプチドがＳＥＱＩＤＮＯ：１８またはＳＥＱＩＤＮＯ：１７のアミノ酸配列を含む、請求項１～９のいずれか１項に記載の抗体。
前記抗体が単離ペプチドに結合し、前記単離ペプチドが
（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２またはＳＥＱＩＤＮＯ：１のアミノ酸配列、または
（ｉｉ）（ｉ）のアミノ酸配列と実質的に相同のアミノ酸配列を含み、前記実質的に相同の配列が前記アミノ酸配列と比較して１または２アミノ酸の置換または付加または欠失を有し、ＳＥＱＩＤＮＯ：１と実質的に相同の配列においてＳＥＱＩＤＮＯ：１の位置３に対応するＤ残基は変更されておらず、ＳＥＱＩＤＮＯ：２と実質的に相同の配列においてＳＥＱＩＤＮＯ：２の位置４に対応するＤ残基は変更されていない、請求項１～１０のいずれか１項に記載の抗体。
前記抗体が単離ペプチドに結合し、前記単離ペプチドがＳＥＱＩＤＮＯ：２またはＳＥＱＩＤＮＯ：１のアミノ酸配列を含む、請求項１～１１のいずれか１項に記載の抗体。
前記抗体が単離ペプチドに結合し、前記単離ペプチドが
（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：５、ＳＥＱＩＤＮＯ：３、ＳＥＱＩＤＮＯ：４、またはＳＥＱＩＤＮＯ：６のアミノ酸配列、または
（ｉｉ）（ｉ）のアミノ酸配列と実質的に相同のアミノ酸配列を含み、前記実質的に相同の配列が前記アミノ酸配列と比較して１または２アミノ酸の置換または付加または欠失を有し、ＳＥＱＩＤＮＯ：３と実質的に相同の配列においてＳＥＱＩＤＮＯ：３の位置３に対応するＤ残基は変更されておらず、ＳＥＱＩＤＮＯ：４と実質的に相同の配列においてＳＥＱＩＤＮＯ：４の位置４に対応するＤ残基は変更されておらず、ＳＥＱＩＤＮＯ：５と実質的に相同の配列においてＳＥＱＩＤＮＯ：５の位置５に対応するＤ残基は変更されておらず、ＳＥＱＩＤＮＯ：６と実質的に相同の配列においてＳＥＱＩＤＮＯ：６の位置４に対応するＤ残基は変更されていない、請求項１～１２のいずれか１項に記載の抗体。
前記抗体が単離ペプチドに結合し、前記単離ペプチドがＳＥＱＩＤＮＯ：５、ＳＥＱＩＤＮＯ：３、ＳＥＱＩＤＮＯ：４、またはＳＥＱＩＤＮＯ：６のアミノ酸配列を含む、請求項１～１３のいずれか１項に記載の抗体。
前記抗体が単離ペプチドに結合し、前記単離ペプチドがＳＥＱＩＤＮＯ：５、ＳＥＱＩＤＮＯ：３、ＳＥＱＩＤＮＯ：４、およびＳＥＱＩＤＮＯ：６からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる、請求項１～１４のいずれか１項に記載の抗体。
前記抗体が単離ペプチドに結合し、前記単離ペプチドがＳＥＱＩＤＮＯ：５およびＳＥＱＩＤＮＯ：３からなる群より選択されるアミノ酸配列からなる、請求項１～１５のいずれか１項に記載の抗体。
前記抗体が単離ペプチドに結合し、前記単離ペプチドがＳＥＱＩＤＮＯ：５のアミノ酸配列からなる、請求項１～１６のいずれか１項に記載の抗体。
前記抗体がコンジュゲートに結合し、前記コンジュゲートが請求項９～１７のいずれか１項において定義される単離ペプチドおよびペプチド担体を含み、好ましくは前記ペプチド担体がキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）である、請求項１～１７のいずれか１項に記載の抗体。
前記抗体が３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域が、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４８、好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：１４９のアミノ酸配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１、および／またはＳＥＱＩＤＮＯ：１５０、好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：１５１のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ２を含み、および／または前記軽鎖可変領域が、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５２、好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：１５３のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ１、および／またはＳＥＱＩＤＮＯ：１５４、好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：１５５のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ２を含む、請求項１～１８のいずれか１項に記載の抗体。
前記抗体が３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含み、前記軽鎖可変領域がＳＥＱＩＤＮＯ：３７のアミノ酸配列またはそれと実質的に相同の配列を有する可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ３を含み、
前記実質的に相同の配列が、所与のＣＤＲ配列と比較して１、２、または３のアミノ酸置換を含有する配列であるか、または前記実質的に相同の配列が、所与のＣＤＲ配列の保存的アミノ酸置換を含有する配列である、請求項１～１９のいずれか１項に記載の抗体。
前記抗体が３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域がＳＥＱＩＤＮＯ：３４またはＳＥＱＩＤＮＯ：７４のアミノ酸配列またはそれと実質的に相同の配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ３を含み、
前記実質的に相同の配列が、所与のＣＤＲ配列と比較して１、２、または３のアミノ酸置換を含有する配列であるか、または前記実質的に相同の配列が、所与のＣＤＲ配列の保存的アミノ酸置換を含有する配列である、請求項１～２０のいずれか１項に記載の抗体。
前記抗体が３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域が、ＳＥＱＩＤＮＯ：３２のアミノ酸配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：３３のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：３４のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ３、またはそれらと実質的に相同の配列を含み、および／または前記軽鎖可変領域が、ＳＥＱＩＤＮＯ：３５のアミノ酸配列を有する可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：３６のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：３７のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ３、またはそれらと実質的に相同の配列を含み、
前記実質的に相同の配列が、所与のＣＤＲ配列と比較して１、２、または３のアミノ酸置換を含有する配列であるか、または前記実質的に相同の配列が、所与のＣＤＲ配列の保存的アミノ酸置換を含有する配列である、請求項１～２１のいずれか１項に記載の抗体。
前記抗体が３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域が、ＳＥＱＩＤＮＯ：３２のアミノ酸配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：３３のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：３４のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ３を含み、および前記軽鎖可変領域が、ＳＥＱＩＤＮＯ：３５のアミノ酸配列を有する可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：３６のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：３７のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ３を含む、請求項１～２２のいずれか１項に記載の抗体。
前記抗体が３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域が、ＳＥＱＩＤＮＯ：５２のアミノ酸配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：５３のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：５４のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ３、またはそれらと実質的に相同の配列を含み、および／または前記軽鎖可変領域が、ＳＥＱＩＤＮＯ：５５のアミノ酸配列を有する可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：５６のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：５７のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ３、またはそれらと実質的に相同の配列を含み、
前記実質的に相同の配列が、所与のＣＤＲ配列と比較して１、２、または３のアミノ酸置換を含有する配列であるか、または前記実質的に相同の配列が、所与のＣＤＲ配列の保存的アミノ酸置換を含有する配列である、請求項１～２１のいずれか１項に記載の抗体。
前記抗体が３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域が、ＳＥＱＩＤＮＯ：５２のアミノ酸配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：５３のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：５４のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ３を含み、および前記軽鎖可変領域が、ＳＥＱＩＤＮＯ：５５のアミノ酸配列を有する可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：５６のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：５７のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ３を含む、請求項１～２１または請求項２４のいずれか１項に記載の抗体。
前記抗体が３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域が、ＳＥＱＩＤＮＯ：７２のアミノ酸配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：７３のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：７４のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ３、またはそれらと実質的に相同の配列を含み、および／または前記軽鎖可変領域が、ＳＥＱＩＤＮＯ：７５のアミノ酸配列を有する可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：７６のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：７７のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ３、またはそれらと実質的に相同の配列を含み、
前記実質的に相同の配列が、所与のＣＤＲ配列と比較して１、２、または３のアミノ酸置換を含有する配列であるか、または前記実質的に相同の配列が、所与のＣＤＲ配列の保存的アミノ酸置換を含有する配列である、請求項１～２１のいずれか１項に記載の抗体。
前記抗体が３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域が、ＳＥＱＩＤＮＯ：７２のアミノ酸配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：７３のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：７４のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ３を含み、および前記軽鎖可変領域が、ＳＥＱＩＤＮＯ：７５のアミノ酸配列を有する可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：７６のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：７７のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ３を含む、請求項１～２１または請求項２６のいずれか１項に記載の抗体。
前記抗体が３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含み、
（ｉ）前記軽鎖可変領域がＳＥＱＩＤＮＯ：３１のアミノ酸配列もしくはそれに対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を有し、および／または前記重鎖可変領域がＳＥＱＩＤＮＯ：３０のアミノ酸配列もしくはそれに対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を有し、
（ｉｉ）前記軽鎖可変領域がＳＥＱＩＤＮＯ：５１のアミノ酸配列もしくはそれに対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を有し、および／または前記重鎖可変領域がＳＥＱＩＤＮＯ：５０のアミノ酸配列もしくはそれに対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を有し、または
（ｉｉｉ）前記軽鎖可変領域がＳＥＱＩＤＮＯ：７１のアミノ酸配列もしくはそれに対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を有し、および／または前記重鎖可変領域がＳＥＱＩＤＮＯ：７０のアミノ酸配列もしくはそれに対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を有する、請求項１～２７のいずれか１項に記載の抗体。
前記抗体が３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５６、好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：１５７のアミノ酸配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１、および／またはＳＥＱＩＤＮＯ：１５８、好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：１５９のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ２を含む、請求項１～１８のいずれか１項に記載の抗体。
前記抗体が３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域が
（ａ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１５６もしくは好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：１５７のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１と、
（ｂ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１５８もしくは好ましくはＳＥＱＩＤＮＯ：１５９のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ２と、
（ｃ）ＳＥＱＩＤＮＯ：９４もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：１１４もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：１３４のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＨＣＤＲ３とを含み；および／または
前記軽鎖可変領域は、
（ｄ）ＳＥＱＩＤＮＯ：９５もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：１１５もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：１３５のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有する可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１と、
（ｅ）ＳＥＱＩＤＮＯ：９６もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：１１６もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：１３６のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ２と、
（ｆ）ＳＥＱＩＤＮＯ：９７、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１７、もしくはＳＥＱＩＤＮＯ：１３７のアミノ酸配列、またはそれと実質的に相同の配列を有するＶＬＣＤＲ３とを含み、
前記実質的に相同の配列が、所与のＣＤＲ配列と比較して１、２、または３のアミノ酸置換を含有する配列であるか、または前記実質的に相同の配列が、所与のＣＤＲ配列の保存的アミノ酸置換を含有する配列である、請求項１～１８または請求項２９のいずれか１項に記載の抗体。
前記抗体が３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含み、軽鎖可変領域がＳＥＱＩＤＮＯ：９６のアミノ酸配列またはそれと実質的に相同の配列を有する可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ２を含み、
前記実質的に相同の配列が、所与のＣＤＲ配列と比較して１、２、または３のアミノ酸置換を含有する配列であるか、または前記実質的に相同の配列が、所与のＣＤＲ配列の保存的アミノ酸置換を含有する配列である、請求項１～１８、２９、または３０のいずれか１項に記載の抗体。
前記抗体が３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域が、ＳＥＱＩＤＮＯ：９２のアミノ酸配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：９３のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：９４のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ３、またはそれらと実質的に相同の配列を含み、および／または前記軽鎖可変領域が、ＳＥＱＩＤＮＯ：９５のアミノ酸配列を有する可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：９６のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：９７のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ３、またはそれらと実質的に相同の配列を含み、
前記実質的に相同の配列が、所与のＣＤＲ配列と比較して１、２、または３のアミノ酸置換を含有する配列であるか、または前記実質的に相同の配列が、所与のＣＤＲ配列の保存的アミノ酸置換を含有する配列である、請求項１～１８、２９、３０、または３１のいずれか１項に記載の抗体。
前記抗体が３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域が、ＳＥＱＩＤＮＯ：９２のアミノ酸配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：９３のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：９４のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ３を含み、および前記軽鎖可変領域が、ＳＥＱＩＤＮＯ：９５のアミノ酸配列を有する可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：９６のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：９７のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ３を含む、請求項１～１８、２９、３０、３１、または３２のいずれか１項に記載の抗体。
前記抗体が３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域が、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１２のアミノ酸配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１３のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：１１４のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ３、またはそれらと実質的に相同の配列を含み、および／または前記軽鎖可変領域が、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１５のアミノ酸配列を有する可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１６のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：１１７のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ３、またはそれらと実質的に相同の配列を含み、
前記実質的に相同の配列が、所与のＣＤＲ配列と比較して１、２、または３のアミノ酸置換を含有する配列であるか、または前記実質的に相同の配列が、所与のＣＤＲ配列の保存的アミノ酸置換を含有する配列である、請求項１～１８、２９、３０、または３１のいずれか１項に記載の抗体。
前記抗体が３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域が、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１２のアミノ酸配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１３のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：１１４のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ３を含み、および前記軽鎖可変領域が、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１５のアミノ酸配列を有する可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１６のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：１１７のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ３を含む、請求項１～１８、２９、３０、３１、または３４のいずれか１項に記載の抗体。
前記抗体が３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域が、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３２のアミノ酸配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３３のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：１３４のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ３、またはそれらと実質的に相同の配列を含み、および／または前記軽鎖可変領域が、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３５のアミノ酸配列を有する可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３６のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：１３７のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ３、またはそれらと実質的に相同の配列を含み、
前記実質的に相同の配列が、所与のＣＤＲ配列と比較して１、２、または３のアミノ酸置換を含有する配列であるか、または前記実質的に相同の配列が、所与のＣＤＲ配列の保存的アミノ酸置換を含有する配列である、請求項１～１８、２９、または３０のいずれか１項に記載の抗体。
前記抗体が３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含み、前記重鎖可変領域が、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３２のアミノ酸配列を有する可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３３のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：１３４のアミノ酸配列を有するＶＨＣＤＲ３を含み、および前記軽鎖可変領域が、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３５のアミノ酸配列を有する可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３６のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ２、およびＳＥＱＩＤＮＯ：１３７のアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ３を含む、請求項１～１８、２９、３０、または３６のいずれか１項に記載の抗体。
前記抗体が、請求項３０または３２～３７のいずれか１項においてともに定義されるアミノ酸配列を有するＶＬＣＤＲ１、ＶＬＣＤＲ２、ＶＬＣＤＲ３、およびＶＨＣＤＲ３を含む、請求項２９に記載の抗体。
前記抗体が３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの重鎖可変領域と、３つのＣＤＲを含む少なくとも１つの軽鎖可変領域とを含み、
（ｉ）前記軽鎖可変領域がＳＥＱＩＤＮＯ：９１のアミノ酸配列もしくはそれに対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を有し、および／または前記重鎖可変領域がＳＥＱＩＤＮＯ：９０のアミノ酸配列もしくはそれに対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を有し、
（ｉｉ）前記軽鎖可変領域がＳＥＱＩＤＮＯ：１１１のアミノ酸配列もしくはそれに対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を有し、および／または前記重鎖可変領域がＳＥＱＩＤＮＯ：１１０のアミノ酸配列もしくはそれに対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を有し、または
（ｉｉｉ）前記軽鎖可変領域がＳＥＱＩＤＮＯ：１３１のアミノ酸配列もしくはそれに対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を有し、および／または前記重鎖可変領域がＳＥＱＩＤＮＯ：１３０のアミノ酸配列もしくはそれに対する少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を有する、請求項１～１８または２９～３８のいずれか１項に記載の抗体。
前記抗体がモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体である、請求項１～３９のいずれか１項に記載の抗体。
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項１～４０のいずれか１項に記載の抗体。
前記抗体が抗体定常領域を含む全抗体である、請求項１～４１のいずれか１項に記載の抗体。
前記抗体がＩｇＧ抗体である、請求項１～４２のいずれか１項に記載の抗体。
前記抗体が抗体の抗原結合フラグメントである、請求項１～４１のいずれか１項に記載の抗体。
活性の前記阻害がＧＴＰアーゼ活性の阻害であり、および／または活性の前記阻害が前記ＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞におけるＥＲＫリン酸化の前記阻害によって特徴付けられ、および／または活性の前記阻害が前記ＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞におけるアポトーシスの増加によって特徴付けられ、および／または活性の前記阻害が前記ＫＲＡＳの発癌性変異型を発現する細胞におけるネクローシスの増加によって特徴付けられる、請求項１～４４のいずれか１項に記載の抗体。
請求項１～４５のいずれか１項に記載の抗体と、希釈剤、担体、または賦形剤、好ましくは薬学的に許容される希釈剤、担体、または賦形剤とを含む、組成物。
請求項１～４５のいずれか１項に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子、または各々がヌクレオチド配列を含む核酸分子のセットであって、前記核酸分子のセットが一緒に請求項１～４５のいずれか１項に記載の抗体をコードする、核酸分子または核酸分子のセット。
請求項１～４５のいずれか１項に記載の抗体を産生する方法であって、
（ｉ）（ｉ）請求項１～４５のいずれか１項に記載の抗体をコードする１つ以上の核酸分子、または（ｉｉ）各々がヌクレオチド配列を含む核酸分子のセットであって、前記核酸分子のセットが一緒に請求項１～４５のいずれか１項に記載の抗体をコードする、核酸分子のセット、または（ｉｉｉ）前記核酸分子のうちの１つ以上を含む１つ以上の組み換え発現ベクターを含む宿主細胞を、前記コードされた抗体の発現に好適な条件下で培養するステップと、
（ｉｉ）前記宿主細胞または増殖培地／上清から前記抗体を単離または取得するステップとを含む、方法。
治療に使用するための、請求項１～４５のいずれか１項において定義される抗体。
癌の処置に使用するための、請求項１～４５のいずれか１項において定義される抗体。
癌を処置する方法であって、前記方法が、請求項１～４５のいずれか１項において定義される抗体の治療的に有効な量を必要な患者に投与することを含む、方法。
治療に使用するための薬物の製造における、請求項１～４５のいずれか１項において定義される抗体の使用。
前記治療が癌の処置である、請求項５２に記載の使用。
単離ペプチドであって、前記単離ペプチドが請求項９～１７のいずれか１項において定義されるものである、単離ペプチド。
請求項９～１７のいずれか１項において定義される単離ペプチドと、ペプチド担体とを含むコンジュゲートであって、好ましくは前記ペプチド担体がキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）である、コンジュゲート。