JP2023514232A

JP2023514232A - Ｃｄ２活性化を伴うキメラ抗原受容体

Info

Publication number: JP2023514232A
Application number: JP2022548920A
Authority: JP
Inventors: ロビージー．マズナー，; クリスタルエル．マッコール，; エイダントゥースリー，; ミシェルモンジェ－ダイセロス，; ルアイラバニエ，; クリストファーマウント，
Original assignee: Leland Stanford Junior University
Current assignee: Leland Stanford Junior University
Priority date: 2020-02-14
Filing date: 2021-02-12
Publication date: 2023-04-05
Also published as: BR112022014722A2; CN115698285A; MX2022009827A; AU2021218441A1; IL295421A; GB202213361D0; WO2021163616A1; EP4103596A1; CA3167572A1; GB2608729A; KR20220143057A; US20230183312A1

Abstract

ＣＤ５８－およびＣＤ５８ｌｏｗ腫瘍細胞に対する機能を保持するＣＤ２共刺激ドメインと、ＣＤ５８－およびＣＤ５８ｌｏｗ腫瘍細胞に対するＣＡＲ機能を促進するＣＤ２共刺激受容体とを含む、キメラ抗原受容体が開示される。本開示の１つの態様は、Ｎ末端からＣ末端までの順に：第１の抗原結合性ドメイン；スペーサードメイン；膜貫通ドメイン；および細胞質シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であり、ここで、細胞質シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２シグナル伝達ドメイン、共刺激シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζ活性化ドメインを含み、共刺激シグナル伝達ドメインはＣＤ２８シグナル伝達ドメインではない。

Description

連邦政府による資金提供を受けた研究開発の下でなされた発明の権利に関する記載
本発明は、国立衛生研究所（ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ）によって付与された契約ＣＡ０４９６０５の下で政府の支援を受けてなされた。政府は本発明に関して一定の権利を有する。

関連出願との相互参照
本出願は、あらゆる図を含め、それらの開示全体が参照により本明細書に組み込まれる、２０２０年２月１４日出願の米国仮特許出願第６２／９７６，９９７号および２０２０年１１月４日出願の同第６３／１０９，８３１号の優先権を主張するものである。

配列表の組込み
本出願は、これによりその全体が参照により本明細書に組み込まれる配列表を含有する。「０７８４３０＿５１４００１ＷＯ＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５」という名称の添付の配列表テキストファイルは２０２１年２月１２日に作成され、４２３ＫＢである。

本開示の背景
従来の化学療法レジメンを受けた後に再燃した患者を含め、Ｂ細胞リンパ腫を有する患者に対して、免疫療法手法の極めて大きな臨床的有効性が示されている。治療抵抗性Ｂ細胞リンパ腫を有する患者１１１名に対する最近の第ＩＩ相試験では、うち１０１名がＣＤ１９を標的とするＣＡＲ－Ｔ細胞（キメラ抗原受容体Ｔ細胞）治療の投与を受け、患者の４０％が処置の１５カ月後に疾患の完全寛解を示した（S.S. Neelapu et al., N Engl J Med (2017) 377: 2531-44）。別の試験でも同様の結果が観察され、それぞれびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫および濾胞性リンパ腫を有する患者の４３％および７１％に完全寛解が認められた（S.J. Schuster et al., N Engl J Med (2017) 377: 2545-54）。アキシカブタゲンシロロイセル（Ａｘｉ－ｃｅｌ）を受けた患者のおよそ半分で完全奏効が実現され、患者のかなりの部分が疾患増悪を経験した（F.L. Locke et al., Lancet Oncol (2019) 20 (1): 31-42）。Ｔ細胞受容体（ＣＤ３）と、非自己抗原を提示するＭＨＣ（主要組織適合性抗原）タンパク質との結合によってＴ細胞が刺激される。Ｔ細胞応答は、４－１ＢＢおよびＣＤ２８などの共刺激因子に起因して共刺激が生じた場合に大幅に改善される。しかし、Ａｘｉ－ｃｅｌおよびチサゲンレクルユーセルはそれぞれ、ＣＡＲに組み込まれる共刺激ドメイン（それぞれＣＤ２８および４－１ＢＢ）を有するが、それでもなお再燃および疾患増悪が起こり続ける。

疾患増悪の原因を同定する、および既存のＣＡＲ－Ｔ療法を使用して寛解を得ることができない患者を処置するという緊急の医学的必要性が存在する。

本開示で言及される全ての刊行物および特許出願は、個々の刊行物または特許出願が具体的にかつ個別に参照により組み込まれることが示されたものと同じく参照により本明細書に組み込まれる。本明細書において引用されているいかなる参考文献も先行技術を構成するものであるとは容認されない。参考文献の考察は、それらの著者らによる主張事項を記載するものであり、本発明者らは引用された文書の正確度および妥当性に異議を申し立てる権利を有する。多数の情報源（科学的学術論文、特許文書、および教本を含む）が本明細書で言及されるが、この参照文献は、これらの文書のいずれかが当技術分野における共通の一般的知見の一部を形成することの容認を構成するものではないことが理解されよう。

本開示の概要
ＣＡＲ－Ｔ処置では再燃するまたはＣＡＲ－Ｔ処置に応答することができない患者のかなりの割合で、腫瘍組織における機能的ＣＤ５８の低減または変更された発現が示される。これらの患者では、腫瘍細胞のＣＤ５８発現が低減しているかもしくは存在しない、または、ＣＤ５８が、ＣＤ２に結合する能力が低下しているかもしくは存在しない変異形態で発現される。予想外に、既存のＣＡＲ－Ｔ剤は、それらの共刺激の一部を腫瘍細胞によるＣＤ５８の発現に依拠する。ＣＡＲ－Ｔの、腫瘍により発現されるＣＤ５８への依存を克服し、ＣＡＲ－Ｔ療法に対して活性および有効性を取り戻す保護方法および試薬が本発明で提供される。本開示の操作されたＣＡＲ－Ｔ細胞を使用して、対象におけるがん性細胞を、標的とされる細胞がＣＤ５８を正常なレベルで発現するのかそれとも低下したレベルで発現するのか、または変異形態もしくは不活性形態のＣＤ５８を発現するのか、またはいかなる形態のＣＤ５８も発現しないのか、にかかわらず、処置することができる。本開示の操作された細胞は、多くの場合、ＣＡＲ構築物中にＣＤ２共刺激ドメインを欠く他のＣＡＲ－Ｔ細胞よりも大きな活性を示す。

本開示の１つの態様は、Ｎ末端からＣ末端までの順に：第１の抗原結合性ドメイン；スペーサードメイン；膜貫通ドメイン；および細胞質シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であり、ここで、細胞質シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２シグナル伝達ドメイン、共刺激シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζ活性化ドメインを含み、共刺激シグナル伝達ドメインはＣＤ２８シグナル伝達ドメインではない。一部の実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢシグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７シグナル伝達ドメイン、またはＯＸ４０シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢシグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、第２の抗原結合性ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、第１の抗原結合性ドメインと第２の抗原結合性ドメインは、異なる抗原に対して特異的である。一部の実施形態では、第１の抗原結合性ドメインと第２の抗原結合性ドメインは、同じ抗原の異なるエピトープに対して特異的である。

一部の実施形態では、スペーサードメインは、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ２８ヒンジドメイン、ＣＴＬＡ－４ヒンジドメイン、ＩｇＧ１ヒンジドメイン、およびＩｇＧ４ヒンジドメインからなる群より選択される。一部の実施形態では、スペーサードメインは、ＣＤ２８ヒンジドメインを含む。一部の実施形態では、スペーサードメインは、約１０アミノ酸から約５０アミノ酸までを有する合成ポリペプチドスペーサーである。一部の実施形態では、合成ポリペプチドスペーサーは、（ＧＧＳ）_ｎ、（ＳＧＧ）_ｎ、（ＧＧＧＳ）_ｎ、（ＳＧＧＧ）_ｎ、または（ＧＧＧＧＳ）_ｎであり、ｎは約１～約１５である（配列番号８７～９１）。

一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ３ゼータ鎖（ＣＤ３ζ）、ＣＤ２、ＣＤ８α、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＴＬＡ４、ＯＸ４０、ＰＤ－１、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＦｃＥＲＩγ、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＩＬＲＢ（ＣＤ１２２）、ＣＴＬＡ－４、およびＰＤ－１、およびＩＬ－２ＲＧ（ＣＤ１３２）の膜貫通ドメインの全部または一部からなる群より選択される。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８α膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ３ζ膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、配列番号１２～１９のうちの１つの配列と少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を有する。

一部の実施形態では、第１の抗原結合性ドメインは、腫瘍特異的抗原または腫瘍関連抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、第１の抗原結合性ドメインは、神経膠腫関連抗原、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ベータ－ヒト絨毛性ゴナドトロピン、アルファ－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、レクチン反応性ＡＦＰ、サイログロブリン、ＲＡＧＥ－１、ＭＮ－ＣＡＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２（ＡＳ）、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔＨＳＰ７０－２、Ｍ－ＣＳＦ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＰＡＰ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ｐ５３、プロステイン（prostein）、ＰＳＭＡ、ＨＥＲ２、サバイビンおよびテロメラーゼ、前立腺癌腫瘍抗原－１（ＰＣＴＡ－１）、ＭＡＧＥ、ＥＬＦ２Ｍ、好中球エラスターゼ、エフリンＢ２、インスリン増殖因子（ＩＧＦ）－Ｉ、ＩＧＦ－ＩＩ、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｂ７－Ｈ３、ＧＰＣ２、Ｌ１ＣＡＭ、ＥＧＦＲ、メソテリン、ＭＡＲＴ－１、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ１７）、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ｐ１５、ＣＥＡ、ｐ５３、Ｒａｓ、ＨＥＲ－２、ＢＣＲ－ＡＢＬ、Ｅ２Ａ－ＰＲＬ、Ｈ４－ＲＥＴ、ＩＧＨ－ＩＧＫ、ＭＹＬ－ＲＡＲ、ＥＢＶＡ、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原Ｅ６およびＥ７、ＴＳＰ－１８０、ＭＡＧＥ－４、ＭＡＧＥ－５、ＭＡＧＥ－６、ＲＡＧＥ、ｐ１８５ｅｒｂＢ２、ｐ１８０ｅｒｂＢ－３、ｃ－ｍｅｔ、ｎｍ－２３Ｈ１、ＰＳＡ、ＴＡＧ－７２、ＣＡ１９－９、ＣＡ７２－４、ＣＡＭ１７．１、ＮｕＭａ、Ｋ－ｒａｓ、β－カテニン、ＣＤＫ４、Ｍｕｍ－１、ｐ１５、ｐ１６、４３－９Ｆ、５Ｔ４、７９１Ｔｇｐ７２、α－フェトプロテイン、β－ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＡ１２５、ＢＣＡＡ、ＣＡ１９５、ＣＡ２４２、ＣＡ－５０、ＣＡＭ４３、ＣＤ６８／Ｐ１、ＣＯ－０２９、ＦＧＦ－５、Ｇ２５０、Ｇａ７３３／ＥｐＣＡＭ、ＨＴｇｐ－１７５、Ｍ３４４、ＭＡ－５０、ＭＧ７－Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ／７０Ｋ、ＮＹ－ＣＯ－１、ＲＣＡＳ１、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ－９０、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ、ＴＰＳＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＲＯＲ１、ならびにＧＤ２の群からの抗原に特異的に結合する。

本開示の別の態様は、ＣＡＲおよび／またはＴＣＲなどの免疫受容体を共刺激するためのキメラポリペプチドであって、ここで、ＣＡＲは、第１の抗原に対して特異的な第１の抗原結合性ドメインを有し、ＴＣＲは、第２の抗原結合性ドメインを有し、キメラポリペプチドは、第３の抗原結合性ドメインを有し、ここで、キメラポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端までの順に：第１の抗原に対して特異的な第１の抗原結合性ドメイン、第２の抗原に対して特異的な第２の抗原結合性ドメイン、および第３の抗原に対して特異的な第３の抗原結合性ドメイン；スペーサードメイン；膜貫通ドメイン；および細胞質シグナル伝達ドメインを含み、ここで、細胞質シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２シグナル伝達ドメインを含み、ＣＤ３ζ活性化ドメインを含まず、また、第２の抗原は、ＣＤ５８ではない。一部の実施形態では、第１の抗原、第２の抗原、および第３の抗原は、互いに異なる。一部の実施形態では、第１の抗原、第２の抗原、および第３の抗原のうちの少なくとも２つが同じである。

一部の実施形態では、第２の抗原は、腫瘍特異的抗原または腫瘍関連抗原である。一部の実施形態では、第２の抗原は、神経膠腫関連抗原、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ベータ－ヒト絨毛性ゴナドトロピン、アルファ－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、レクチン反応性ＡＦＰ、サイログロブリン、ＲＡＧＥ－１、ＭＮ－ＣＡＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２（ＡＳ）、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔＨＳＰ７０－２、Ｍ－ＣＳＦ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＰＡＰ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ｐ５３、プロステイン、ＰＳＭＡ、ＨＥＲ２、サバイビンおよびテロメラーゼ、前立腺癌腫瘍抗原－１（ＰＣＴＡ－１）、ＭＡＧＥ、ＥＬＦ２Ｍ、好中球エラスターゼ、エフリンＢ２、インスリン増殖因子（ＩＧＦ）－Ｉ、ＩＧＦ－ＩＩ、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｂ７－Ｈ３、ＧＰＣ２、Ｌ１ＣＡＭ、ＥＧＦＲ、メソテリン、ＭＡＲＴ－１、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ１７）、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ｐ１５、ｐ５３、Ｒａｓ、ＨＥＲ－２、ＢＣＲ－ＡＢＬ、Ｅ２Ａ－ＰＲＬ、Ｈ４－ＲＥＴ、ＩＧＨ－ＩＧＫ、ＭＹＬ－ＲＡＲ、ＥＢＶＡ、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原Ｅ６およびＥ７、ＴＳＰ－１８０、ＭＡＧＥ－４、ＭＡＧＥ－５、ＭＡＧＥ－６、ＲＡＧＥ、ｐ１８５ｅｒｂＢ２、ｐ１８０ｅｒｂＢ－３、ｃ－ｍｅｔ、ｎｍ－２３Ｈ１、ＰＳＡ、ＴＡＧ－７２、ＣＡ１９－９、ＣＡ７２－４、ＣＡＭ１７．１、ＮｕＭａ、Ｋ－ｒａｓ、β－カテニン、ＣＤＫ４、Ｍｕｍ－１、ｐ１５、ｐ１６、４３－９Ｆ、５Ｔ４、７９１Ｔｇｐ７２、α－フェトプロテイン、β－ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＡ１２５、ＢＣＡＡ、ＣＡ１９５、ＣＡ２４２、ＣＡ－５０、ＣＡＭ４３、ＣＤ６８／Ｐ１、ＣＯ－０２９、ＦＧＦ－５、Ｇ２５０、Ｇａ７３３／ＥｐＣＡＭ、ＨＴｇｐ－１７５、Ｍ３４４、ＭＡ－５０、ＭＧ７－Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ／７０Ｋ、ＮＹ－ＣＯ－１、ＲＣＡＳ１、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ－９０、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ、ＴＰＳＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＲＯＲ１、ならびにＧＤ２からなる群より選択される。一部の実施形態では、第２の抗原は、Ｂ７Ｈ３、ＢＡＦＦ－Ｒ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＰＣ２、ＩＬ１３Ｒα２、およびＲＯＲ１からなる群より選択される。

一部の実施形態では、第３の抗原は、腫瘍特異的抗原または腫瘍関連抗原である。一部の実施形態では、第３の抗原は、神経膠腫関連抗原、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ベータ－ヒト絨毛性ゴナドトロピン、アルファ－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、レクチン反応性ＡＦＰ、サイログロブリン、ＲＡＧＥ－１、ＭＮ－ＣＡＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２（ＡＳ）、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔＨＳＰ７０－２、Ｍ－ＣＳＦ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＰＡＰ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ｐ５３、プロステイン、ＰＳＭＡ、ＨＥＲ２、サバイビンおよびテロメラーゼ、前立腺癌腫瘍抗原－１（ＰＣＴＡ－１）、ＭＡＧＥ、ＥＬＦ２Ｍ、好中球エラスターゼ、エフリンＢ２、インスリン増殖因子（ＩＧＦ）－Ｉ、ＩＧＦ－ＩＩ、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｂ７－Ｈ３、ＧＰＣ２、Ｌ１ＣＡＭ、ＥＧＦＲ、メソテリン、ＭＡＲＴ－１、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ１７）、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ｐ１５、ｐ５３、Ｒａｓ、ＨＥＲ－２、ＢＣＲ－ＡＢＬ、Ｅ２Ａ－ＰＲＬ、Ｈ４－ＲＥＴ、ＩＧＨ－ＩＧＫ、ＭＹＬ－ＲＡＲ、ＥＢＶＡ、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原Ｅ６およびＥ７、ＴＳＰ－１８０、ＭＡＧＥ－４、ＭＡＧＥ－５、ＭＡＧＥ－６、ＲＡＧＥ、ｐ１８５ｅｒｂＢ２、ｐ１８０ｅｒｂＢ－３、ｃ－ｍｅｔ、ｎｍ－２３Ｈ１、ＰＳＡ、ＴＡＧ－７２、ＣＡ１９－９、ＣＡ７２－４、ＣＡＭ１７．１、ＮｕＭａ、Ｋ－ｒａｓ、β－カテニン、ＣＤＫ４、Ｍｕｍ－１、ｐ１５、ｐ１６、４３－９Ｆ、５Ｔ４、７９１Ｔｇｐ７２、α－フェトプロテイン、β－ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＡ１２５、ＢＣＡＡ、ＣＡ１９５、ＣＡ２４２、ＣＡ－５０、ＣＡＭ４３、ＣＤ６８／Ｐ１、ＣＯ－０２９、ＦＧＦ－５、Ｇ２５０、Ｇａ７３３／ＥｐＣＡＭ、ＨＴｇｐ－１７５、Ｍ３４４、ＭＡ－５０、ＭＧ７－Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ／７０Ｋ、ＮＹ－ＣＯ－１、ＲＣＡＳ１、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ－９０、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ、ＴＰＳＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＲＯＲ１、ならびにＧＤ２からなる群より選択される。一部の実施形態では、第２の抗原は、Ｂ７Ｈ３、ＢＡＦＦ－Ｒ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＰＣ２、ＩＬ１３Ｒα２、およびＲＯＲ１からなる群より選択される。

一部の実施形態では、ＣＤ２シグナル伝達は、トランスジェニックＴ細胞受容体（ＴＣＲ）で増強される。一部の実施形態では、トランスジェニックＴＣＲは、第２の抗原に対して特異的な第２の抗原結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、トランスジェニックＴＣＲは、膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ３ゼータ鎖（ＣＤ３ζ）、ＣＤ２、ＣＤ８α、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＴＬＡ４、ＯＸ４０、ＰＤ－１、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＦｃＥＲＩγ、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＩＬＲＢ（ＣＤ１２２）、ＣＴＬＡ－４、およびＰＤ－１、およびＩＬ－２ＲＧ（ＣＤ１３２）の膜貫通ドメインの全部または一部からなる群より選択される。一部の実施形態では、トランスジェニックＴＣＲは、細胞質シグナル伝達ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、トランスジェニックＴＣＲの第２の抗原は、ＭＨＣクラスＩまたはＭＨＣクラスＩＩによって提示される腫瘍特異的抗原または腫瘍関連抗原である。

一部の実施形態では、キメラポリペプチドは、細胞質シグナル伝達ドメインを有し、追加の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、追加の共刺激シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢシグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、またはＯＸ４０シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、追加の共刺激シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢシグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７シグナル伝達ドメイン、またはＯＸ４０シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、追加の共刺激シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢシグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、追加の共刺激シグナル伝達ドメインは、ｔｏｌｌ様受容体シグナル伝達ドメインを含む。

一部の実施形態では、キメラポリペプチドは、配列番号２０～２９および９２～１１２のうちの１つの配列と少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を有する。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８α、ＣＤ２、またはＣＤ２８に由来するものである。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８膜貫通ドメインである。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ８α膜貫通ドメインである。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２膜貫通ドメインである。

本開示の別の態様は、ＣＡＲ、上記のキメラポリペプチド、および／またはＴＣＲをコードする核酸である。一部の実施形態では、核酸は、配列番号４１～５８のうちの１つの配列と少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、または約１００％同一の配列を有するポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、核酸は、キメラポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号４９～５８のうちの１つの配列と少なくとも約７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、または約１００％同一の配列を有するポリペプチドをコードする。

一部の実施形態では、核酸は、キメラポリペプチド、ＣＡＲおよび／またはＴＣＲをコードする。一部の実施形態では、核酸は、配列番号７２、７４、７６、７８、８２、８４、または８６のうちの１つの配列と少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、または約１００％同一の配列を有するポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、ＣＡＲの抗原結合性ドメインとキメラポリペプチドの抗原結合性ドメインは、異なる抗原に対して特異的である。一部の実施形態では、ＣＡＲの抗原結合性ドメインとキメラポリペプチドの抗原結合性ドメインは、同じ抗原に対して特異的である。一部の実施形態では、第１の結合性ドメインと第２の結合性ドメインは、同じ抗原の異なるエピトープに対して特異的である。一部の実施形態では、キメラポリペプチドをコードする核酸とＣＡＲをコードする核酸は、個々のプロモーターを有する。一部の実施形態では、キメラポリペプチドをコードする核酸とＣＡＲをコードする核酸は、リボソーム再進入部位（ｒｉｂｏｓｏｍａｌｒｅ－ｅｎｔｒｙｓｉｔｅ）によって隔てられている。一部の実施形態では、キメラポリペプチドとＣＡＲは単一のポリペプチドとしてコードされ、その場合、キメラポリペプチドとＣＡＲは自己切断性ペプチドによって隔てられている。一部の実施形態では、自己切断性ペプチドは２Ａペプチドである。一部の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインとキメラポリペプチドの膜貫通ドメインは異なる。一部の実施形態では、核酸はＤＮＡを含む。一部の実施形態では、核酸はＲＮＡを含む。

本開示の別の態様は、プロモーターと作動可能に連結した上記の核酸のいずれかを含むベクターである。一部の実施形態では、ベクターはレンチウイルスベクターである。

本開示の別の態様は、本明細書に記載のＣＡＲ、キメラポリペプチド、および／もしくはＴＣＲ、核酸、ならびに／またはベクターを含む、操作された細胞である。一部の実施形態では、細胞は、本明細書に記載のＣＤ２共刺激ドメインを有するＣＡＲを発現する。一部の実施形態では、細胞は、本明細書に記載のキメラポリペプチドを発現する。一部の実施形態では、細胞は、本明細書に記載のトランスジェニックＴＣＲを発現する。

一部の実施形態では、細胞は、第１の抗原に対して特異的なＣＡＲ、および第２の抗原に対して特異的なキメラポリペプチド、および第３の抗原に対して特異的なＴＣＲを発現する。一部の実施形態では、第１の抗原と第２の抗原は互いに異なる。一部の実施形態では、第１の抗原と第２の抗原は同じである。一部の実施形態では、第１の結合性ドメインと第２の結合性ドメインは、同じ抗原の異なるエピトープに対して特異的である。一部の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、キメラポリペプチドの膜貫通ドメインとは異なる。一部の実施形態では、第１の抗原、第２の抗原、および第３の抗原は、互いに異なる。一部の実施形態では、第１の抗原、第２の抗原、および第３の抗原のうちの少なくとも２つが同じである。

本開示の別の態様は、免疫細胞を提供するステップ、および免疫細胞に上記のキメラポリペプチドをコードする核酸を形質導入するステップにより、操作された細胞を作出するための方法である。一部の実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）、またはマクロファージである。一部の実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）、またはマクロファージの前駆細胞である。一部の実施形態では、免疫細胞にＣＡＲをコードする核酸をさらに形質導入する。

本開示の別の態様は、免疫細胞を提供するステップ、ならびに、免疫細胞に、ＣＡＲをコードする核酸ならびにキメラポリペプチドおよび／またはＴＣＲをコードする核酸を形質導入して、第１の抗原を有する標的細胞に対して特異的なＣＡＲを有し、キメラポリペプチドをさらに含むＣＡＲ－Ｔ細胞を作製するステップにより、改善された機能的特徴を有するＣＡＲ－Ｔ細胞を作出するための方法であり、ここで、機能的特徴は、（ｉ）ＣＤ５８の発現をダウンレギュレートするかまたはＣＤ５８を実質的に発現しない標的細胞に対する有効性；（ｉｉ）選択された抗原をダウンレギュレートするかまたは選択された抗原の変異形態を発現する標的細胞に対する有効性；（ｉｉｉ）標的細胞に対する選択性の改善；または（ｉｖ）ＣＡＲ標的抗原の喪失のレスキューである。一部の実施形態では、キメラポリペプチドは、標的細胞によって発現される抗原に対して特異的な抗原結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、トランスジェニックＴＣＲは、標的細胞によって発現される抗原に対して特異的な抗原結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、喪失したＣＡＲ標的抗原は、ＣＤ１９である。

本開示の別の態様は、ＣＤ２共刺激ドメインおよび少なくとも１つの追加の共刺激ドメインを有するＣＡＲを発現する、またはＣＡＲ、キメラポリペプチド、および／もしくはＴＣＲを発現する操作された細胞を提供するステップ、ならびに、治療有効数の操作された細胞を投与するステップであって、操作された細胞により、対象の処置が補助される、ステップにより、少なくとも第１の抗原を有する標的細胞の増殖を特徴とする過剰増殖性障害を有する対象の処置を補助するための方法である。一部の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２共刺激ドメインに加えて少なくとも２つの共刺激ドメインを有する、または、ＣＡＲは、少なくとも２つの共刺激ドメインを有し、キメラポリペプチドと共に発現される。一部の実施形態では、方法は、標的細胞による機能的なＣＤ５８発現の程度を決定するステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、操作された細胞を投与する前に標的細胞によるＣＤ５８発現の決定を提供するステップ、ならびにＣＤ５８発現の決定により、標的細胞が変異ＣＤ５８を発現するかまたはＣＤ５８を閾値レベルを下回るレベルで発現することが示された場合、治療有効数の操作された細胞を投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、閾値レベルは、標的細胞当たり約５０，０００、４５，０００、４０，０００、３５，０００、３０，０００、２５，０００、２０，０００、１５，０００、１４，０００、１３，０００、１２，０００、１１，０００、１０，０００、９，０００、８，０００、７，０００、６，０００、５，０００、４，０００、３，０００、２，０００、１，０００、または５００のＣＤ５８分子である。一部の実施形態では、方法において、抗体またはその抗原結合性断片をさらに提供する。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、標的細胞の微小環境におけるＣＤ２シグナル伝達を刺激することが可能なものである。一部の実施形態では、抗体は、多重特異性抗体である。一部の実施形態では、多重特異性抗体は、抗腫瘍抗原、ＣＤ２、および／またはＣＤ３に対して特異的である。一部の実施形態では、抗体結合性断片は、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ）_２、（Ｆａｂ’）_２、ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｙ）、およびｄＡｂからなる群より選択される。一部の実施形態では、抗体結合性断片は、抗腫瘍抗原、ＣＤ２、および／またはＣＤ３に対して特異的である。一部の実施形態では、方法において、標的細胞の微小環境において発現される腫瘍特異的抗原に応答してネイティブＣＤ２と架橋結合することが可能な治療剤をさらに提供する。一部の実施形態では、治療剤は、分泌されるかまたは細胞表面に発現される。一部の実施形態では、治療剤は、抗ＣＤ２ｓｃＦｖ、抗体、Ｆａｂ、ＤＡＲＰＩＮ、リガンド、または抗原結合性ドメインである。

本開示の別の態様は、少なくとも第１の抗原を有する標的細胞の増殖を特徴とする過剰増殖性障害を有する対象の処置を補助するためのシステムであり、ここで、システムは、第１の抗原に対して特異的なＣＡＲ、およびＣＤ５８に対して特異的な標識された結合性作用物質を有する本開示の操作された細胞を含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、細胞質シグナル伝達ドメインを含み、ここで、細胞質シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢシグナル伝達ドメイン、ＣＤ２シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζ活性化ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、細胞質シグナル伝達ドメインを含み、ここで、細胞質シグナル伝達ドメインは、共シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ζ活性化ドメインを含み、また、操作された細胞は、本開示のキメラポリペプチドをさらに含む。一部の実施形態では、標識された結合性作用物質は、抗ＣＤ５８抗体または抗体誘導体を含む。一部の実施形態では、操作された細胞は、本明細書に記載のトランスジェニックＴＣＲをさらに含む。

本開示の別の態様は、少なくとも第１の抗原を有する標的細胞の増殖を特徴とする過剰増殖性障害を有する対象の処置を補助するための方法であり、ここで、標的細胞は、低下したレベルのＣＤ５８を発現し、かつ／またはＣＤ２を活性化する能力が低下した形態のＣＤ５８を発現し、方法は、操作された細胞を提供するステップであって、操作された細胞が、第１の抗原に特異的に結合することが可能な第１の抗原結合性ドメイン、スペーサードメイン、膜貫通ドメイン、および細胞質シグナル伝達ドメインであって、ＣＤ２シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ζ活性化ドメインを含む、細胞質シグナル伝達ドメイン、を含むＣＡＲを発現する、ステップ；対象から得られた試料における機能的ＣＤ５８の発現レベルを決定するステップであって、試料が、腫瘍細胞を含有する、ステップ；ならびに、機能的ＣＤ５８の発現レベルが、所定の閾値レベルよりも低い場合、治療有効数の操作された細胞を投与するステップ、によるものである。一部の実施形態では、細胞質シグナル伝達ドメインは、追加の共刺激ドメインを含む。一部の実施形態では、追加の共刺激ドメインは、４－１ＢＢシグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、またはＯＸ４０シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、追加のシグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢシグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７シグナル伝達ドメイン、またはＯＸ４０シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、追加の共刺激ドメインは、４－１ＢＢシグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、閾値レベルは、標的細胞当たり約５０，０００、４５，０００、４０，０００、３５，０００、３０，０００、２５，０００、２０，０００、１５，０００、１４，０００、１３，０００、１２，０００、１１，０００、１０，０００、９，０００、８，０００、７，０００、６，０００、５，０００、４，０００、３，０００、２，０００、１，０００、または５００の機能的ＣＤ５８分子である。

本開示の別の態様は、本開示の核酸、本開示のベクター、および／または本開示の操作された細胞；ならびに薬学的に許容される担体を含む治療用組成物である。

本開示の別の態様は、ヒトにおける疾患を処置するための、ＣＤ２共刺激シグナル伝達ドメインを有するＣＡＲ、本開示のキメラポリペプチド、本開示のトランスジェニックＴＣＲ、本開示の核酸、本開示のベクター、本開示の操作された細胞、および／または本開示の医薬組成物の使用である。一部の実施形態では、疾患は、過剰増殖性障害である。一部の実施形態では、疾患は、がんである。

本開示の別の態様は、疾患を処置するための医薬の製造のための、ＣＤ２共刺激シグナル伝達ドメインを有するＣＡＲ、本開示のキメラポリペプチド、本開示の核酸、本開示のベクター、本開示の操作された細胞、および／または本開示の医薬組成物の使用である。

本開示の別の態様は、（ｉ）ＣＤ２シグナル伝達ドメインを含むがＣＤ３－ゼータドメインを含まない細胞質シグナル伝達ドメインと、（ｉｉ）抗原結合性ドメインまたは（ｉｉｉ）膜貫通ドメインのうちの少なくとも１つとを含むキメラシグナル伝達分子をコードするポリヌクレオチドを含む核酸である。一部の実施形態では、細胞質シグナル伝達ドメインは、共刺激ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、共刺激ドメインは、４－１ＢＢシグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７シグナル伝達ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７８シグナル伝達ドメイン、ＣＤ４０シグナル伝達ドメイン、ＣＤ４０Ｌシグナル伝達ドメイン、ｔｏｌｌ様受容体シグナル伝達ドメイン、またはこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含む。一部の実施形態では、細胞質シグナル伝達ドメインは、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも８０％相同なアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、細胞質ドメインは、配列番号８からなる。一部の実施形態では、キメラシグナル伝達分子は、配列番号２０～２９および９２～１１２からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％相同なアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、核酸は、キメラシグナル伝達分子をコードするポリヌクレオチドを含み得、ここで、キメラシグナル伝達分子は、（ｉｉ）抗原結合性ドメインを含む。一部の実施形態では、抗原結合性ドメインは、抗体またはその抗原結合性断片を含む。一部の実施形態では、抗原結合性ドメインは、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ、Ｆａｂ、二重特異性抗体またはその抗原結合性断片、三重特異性抗体またはその抗原結合性断片、二重特異性ダイアボディ、三重特異性トリアボディ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、ミニボディ、ＶｈＨドメイン、ｈｃＩｇＧドメイン、Ｖ－ＮＡＲドメイン、またはこれらの任意の組合せを含む。一部の実施形態では、抗原結合性ドメインは、Ｂ細胞表面抗原に対して特異的である。一部の実施形態では、Ｂ細胞表面抗原は、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ２０、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ５２、ＣＤ８１、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ１３８、ＣＳＩ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＢＡＦＦ受容体、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、およびＴＡＣＩからなる群より選択される。一部の実施形態では、抗原結合性ドメインは、腫瘍関連抗原に対して特異的である。一部の実施形態では、腫瘍関連抗原は、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ２０、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ５２、ＣＤ８１、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ１３８、ＣＳＩ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＢＡＦＦ受容体、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＴＡＣＩ、神経膠腫関連抗原、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ベータ－ヒト絨毛性ゴナドトロピン、アルファ－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、レクチン反応性ＡＦＰ、サイログロブリン、ＲＡＧＥ－１、ＭＮ－ＣＡＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２（ＡＳ）、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔＨＳＰ７０－２、Ｍ－ＣＳＦ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＰＡＰ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ｐ５３、プロステイン、ＰＳＭＡ、ＨＥＲ２、サバイビンおよびテロメラーゼ、前立腺癌腫瘍抗原－１（ＰＣＴＡ－１）、ＭＡＧＥ、ＥＬＦ２Ｍ、好中球エラスターゼ、エフリンＢ２、インスリン増殖因子（ＩＧＦ）－Ｉ、ＩＧＦ－ＩＩ、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｂ７－Ｈ３、ＧＰＣ２、Ｌ１ＣＡＭ、ＥＧＦＲ、メソテリン、ＭＡＲＴ－１、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ１７）、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ｐ１５、ｐ５３、Ｒａｓ、ＨＥＲ－２、ＢＣＲ－ＡＢＬ、Ｅ２Ａ－ＰＲＬ、Ｈ４－ＲＥＴ、ＩＧＨ－ＩＧＫ、ＭＹＬ－ＲＡＲ、ＥＢＶＡ、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原Ｅ６およびＥ７、ＴＳＰ－１８０、ＭＡＧＥ－４、ＭＡＧＥ－５、ＭＡＧＥ－６、ＲＡＧＥ、ｐ１８５ｅｒｂＢ２、ｐ１８０ｅｒｂＢ－３、ｃ－ｍｅｔ、ｎｍ－２３Ｈ１、ＰＳＡ、ＴＡＧ－７２、ＣＡ１９－９、ＣＡ７２－４、ＣＡＭ１７．１、ＮｕＭａ、Ｋ－ｒａｓ、β－カテニン、ＣＤＫ４、Ｍｕｍ－１、ｐ１５、ｐ１６、４３－９Ｆ、５Ｔ４、７９１Ｔｇｐ７２、α－フェトプロテイン、β－ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＡ１２５、ＢＣＡＡ、ＣＡ１９５、ＣＡ２４２、ＣＡ－５０、ＣＡＭ４３、ＣＤ６８／Ｐ１、ＣＯ－０２９、ＦＧＦ－５、Ｇ２５０、Ｇａ７３３／ＥｐＣＡＭ、ＨＴｇｐ－１７５、Ｍ３４４、ＭＡ－５０、ＭＧ７－Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ／７０Ｋ、ＮＹ－ＣＯ－１、ＲＣＡＳ１、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ－９０、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ、ＴＰＳＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＲＯＲ１、ならびにＧＤ２からなる群より選択される。一部の実施形態では、核酸は、キメラシグナル伝達分子をコードするポリヌクレオチドを含み、ここで、キメラシグナル伝達分子は、（ｉｉｉ）膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ３ζ、ＣＤ２、ＣＤ８α、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＴＬＡ４、ＯＸ４０、ＰＤ－１、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＦｃＥＲＩγ、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＩＬＲＢ（ＣＤ１２２）、および」ＩＬ－２ＲＧ（ＣＤ１３２）の膜貫通ドメインの全てまたはこれらのうちの一部からなる群より選択される。

本開示の別の態様は、配列番号２０～２９および９２～１１２からなる群より選択される配列と少なくとも約８０％相同な配列を含むキメラシグナル伝達分子をコードするポリヌクレオチドを含む核酸である。

本開示の別の態様は、請求項１から１４までのいずれか一項に記載のキメラシグナル伝達分子をコードするポリヌクレオチドを含む核酸を含み、追加のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む核酸をさらに含む核酸組成物である。一部の実施形態では、追加のポリペプチドは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、またはＴＣＲ－ＣＡＲを含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、第１世代ＣＡＲ、第２世代ＣＡＲ、または第３世代ＣＡＲを含む。一部の実施形態では、追加のポリペプチドは、ＣＤ３－ゼータドメインを含むＣＡＲを含む。一部の実施形態では、追加のポリペプチドは、抗原結合性ドメインを含むＣＡＲを含む。一部の実施形態では、抗原結合性ドメインは、抗体またはその抗原結合性断片を含む。一部の実施形態では、抗原結合性ドメインは、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ、Ｆａｂ、二重特異性抗体またはその抗原結合性断片、三重特異性抗体またはその抗原結合性断片、二重特異性ダイアボディ、三重特異性トリアボディ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、ミニボディ、ＶｈＨドメイン、ｈｃＩｇＧドメイン、Ｖ－ＮＡＲドメイン、またはこれらの任意の組合せを含む。一部の実施形態では、抗原結合性ドメインは、Ｂ細胞表面抗原に対して特異的である。一部の実施形態では、Ｂ細胞表面抗原は、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ２０、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ５２、ＣＤ８１、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ１３８、ＣＳＩ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＢＡＦＦ受容体、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、およびＴＡＣＩからなる群より選択される。一部の実施形態では、抗原結合性ドメインは、腫瘍関連抗原に対して特異的である。一部の実施形態では、腫瘍関連抗原は、神経膠腫関連抗原、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ベータ－ヒト絨毛性ゴナドトロピン、アルファ－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、レクチン反応性ＡＦＰ、サイログロブリン、ＲＡＧＥ－１、ＭＮ－ＣＡＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２（ＡＳ）、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔＨＳＰ７０－２、Ｍ－ＣＳＦ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＰＡＰ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ｐ５３、プロステイン、ＰＳＭＡ、ＨＥＲ２、サバイビンおよびテロメラーゼ、前立腺癌腫瘍抗原－１（ＰＣＴＡ－１）、ＭＡＧＥ、ＥＬＦ２Ｍ、好中球エラスターゼ、エフリンＢ２、インスリン増殖因子（ＩＧＦ）－Ｉ、ＩＧＦ－ＩＩ、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｂ７－Ｈ３、ＧＰＣ２、Ｌ１ＣＡＭ、ＥＧＦＲ、メソテリン、ＭＡＲＴ－１、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ１７）、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ｐ１５、ｐ５３、Ｒａｓ、ＨＥＲ－２、ＢＣＲ－ＡＢＬ、Ｅ２Ａ－ＰＲＬ、Ｈ４－ＲＥＴ、ＩＧＨ－ＩＧＫ、ＭＹＬ－ＲＡＲ、ＥＢＶＡ、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原Ｅ６およびＥ７、ＴＳＰ－１８０、ＭＡＧＥ－４、ＭＡＧＥ－５、ＭＡＧＥ－６、ＲＡＧＥ、ｐ１８５ｅｒｂＢ２、ｐ１８０ｅｒｂＢ－３、ｃ－ｍｅｔ、ｎｍ－２３Ｈ１、ＰＳＡ、ＴＡＧ－７２、ＣＡ１９－９、ＣＡ７２－４、ＣＡＭ１７．１、ＮｕＭａ、Ｋ－ｒａｓ、β－カテニン、ＣＤＫ４、Ｍｕｍ－１、ｐ１５、ｐ１６、４３－９Ｆ、５Ｔ４、７９１Ｔｇｐ７２、α－フェトプロテイン、β－ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＡ１２５、ＢＣＡＡ、ＣＡ１９５、ＣＡ２４２、ＣＡ－５０、ＣＡＭ４３、ＣＤ６８／Ｐ１、ＣＯ－０２９、ＦＧＦ－５、Ｇ２５０、Ｇａ７３３／ＥｐＣＡＭ、ＨＴｇｐ－１７５、Ｍ３４４、ＭＡ－５０、ＭＧ７－Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ／７０Ｋ、ＮＹ－ＣＯ－１、ＲＣＡＳ１、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ－９０、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ、ＴＰＳＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＲＯＲ１、ならびにＧＤ２からなる群より選択される。一部の実施形態では、追加のポリペプチドは、共刺激ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、共刺激ドメインは、４－１ＢＢシグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７シグナル伝達ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７８シグナル伝達ドメイン、ＣＤ４０シグナル伝達ドメイン、ＣＤ４０Ｌシグナル伝達ドメイン、ｔｏｌｌ様受容体シグナル伝達ドメイン、またはこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含む。一部の実施形態では、追加のポリペプチドは、膜貫通ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ３ζ、ＣＤ２、ＣＤ８α、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＴＬＡ４、ＯＸ４０、ＰＤ－１、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＦｃＥＲＩγ、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＩＬＲＢ（ＣＤ１２２）、およびＩＬ－２ＲＧ（ＣＤ１３２）の膜貫通ドメインの全部または一部からなる群より選択される。

本開示の別の態様は、本明細書に提示される核酸または本明細書に提示される核酸組成物を含むベクターである。

本開示の別の態様は、本明細書に提示されるベクターを含む細胞である。一部の実施形態では、細胞は、免疫細胞、幹細胞、哺乳動物細胞、霊長類細胞、またはヒト細胞である。一部の実施形態では、細胞は、自己または同種のものである。一部の実施形態では、細胞は、Ｔ細胞、ＣＤ８陽性Ｔ細胞、ＣＤ４陽性Ｔ細胞、調節性Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、または腫瘍浸潤性リンパ球である。

本開示の別の態様は、過剰増殖性障害を有する対象を処置する方法であって、対象に本明細書に記載の細胞を治療有効数で含む組成物を投与するステップを含む、方法である。本開示の別の態様は、（ｉ）ＣＤ５８の発現を欠く；（ｉｉ）低下したレベルのＣＤ５８を発現する；または（ｉｉｉ）ＣＤ２を活性化する能力が低下した形態のＣＤ５８を発現する標的細胞の増殖を特徴とする過剰増殖性障害を有する対象を処置する方法であって、対象に本明細書に記載の細胞を治療有効数で含む組成物を投与するステップを含む、方法である。

本開示の別の態様は、ｉ）抗原結合性ドメイン；ｉｉ）膜貫通ドメイン；ｉｉｉ）ＣＤ２シグナル伝達ドメインおよび共刺激ドメインを含む細胞質シグナル伝達ドメインを含むキメラポリペプチドであり、ここで、抗原結合性ドメインは、配列番号１、２、３、および４からなる群より選択される配列と少なくとも約８０％相同なアミノ酸配列を含み、膜貫通ドメインは、配列番号５、６、および７からなる群より選択される配列と少なくとも約８０％相同なアミノ酸配列を含み、ＣＤ２シグナル伝達ドメインは、配列番号８の配列と少なくとも約８０％相同なアミノ酸配列を含み、共刺激ドメインは、配列番号１０および１１からなる群より選択される配列と少なくとも約８０％相同なアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、細胞質シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３－ゼータ活性化ドメインを含まない。一部の実施形態では、細胞質シグナル伝達ドメインは、活性化ドメインを含み、ここで、活性化ドメインは、配列番号９の配列と少なくとも約８０％相同なアミノ酸配列を含む。

図１は、Ｎａｌｍ６標的細胞におけるＣＤ５８発現をノックアウトすることの影響を示す。実施例１に記載の通り、ＣＤ５８発現をノックアウトすることにより、対照標的を用いると測定可能な量を産生したＣＡＲＴ細胞におけるＩＦＮγおよびＩＬ－２の産生が有意に減少した。各パネルにおいて、３対の棒は、左から右に、ＣＡＲＣＤ１９－２８ｚ、ＣＤ１９－ＢＢｚ、およびＣＤ２２－ＢＢｚを表す。

図２は、実施例２に記載の通り、ＣＤ２２ＣＡＲによる標的細胞死滅によって測定した、Ｎａｌｍ６標的細胞におけるＣＤ５８発現をノックアウトすることの影響を示す。標的細胞はＣＤ５８^＋またはＣＤ５８^－のいずれかである。

図３は、実施例３に記載の通り、ＣＤ１９ＣＡＲによる標的細胞死滅によって測定した、Ｎａｌｍ６標的細胞におけるＣＤ５８発現をノックアウトすることの影響を示す。標的細胞はＣＤ５８^＋またはＣＤ５８^－のいずれかである。

図４は、実施例３に記載の通り、ＣＤ１９ＣＡＲによる標的細胞死滅によって測定した、Ｎａｌｍ６標的細胞におけるＣＤ５８発現をノックアウトすることの影響を示す。標的細胞はＣＤ５８^＋またはＣＤ５８^－のいずれかであり、標的抗原（ＣＤ１９）発現を細胞当たり４５，０００コピーから約細胞当たり約６，１９６コピーまで低減させる。

図５は、実施例３に記載の通り、ＣＤ１９ＣＡＲによる標的細胞死滅によって測定した、Ｎａｌｍ６標的細胞におけるＣＤ５８発現をノックアウトすることの影響を示す。標的細胞はＣＤ５８^＋またはＣＤ５８^－のいずれかであり、ＣＤ１９発現を細胞当たり約９６３コピーまでさらに低減させる。

図６は、実施例４に記載の通り、ＣＤ２２－ＢＢｚＣＡＲＴ細胞により、ｉｎｖｉｖｏにおいてＣＤ５８^＋Ｎａｌｍ６細胞の成長を制御することができるが、ＣＤ５８^－Ｎａｌｍ６細胞に対しては一過性の応答を超えるものを実現することができないことを示す。

図７は、実施例５に記載の通り、ＣＤ１９－２８ｚＣＡＲＴ細胞により、ｉｎｖｉｖｏにおいてＣＤ５８^＋細胞の腫瘍成長を制御することができたが、ＣＤ５８^－細胞に対しては一過性の応答のみが実現されたことを示す。

図８は、実施例５に記載の通り、ＣＤ１９－ＢＢｚＣＡＲＴ細胞により、ｉｎｖｉｖｏにおいてＣＤ５８^＋細胞の腫瘍成長を制御することができたが、ＣＤ５８^－細胞に対しては一過性の応答のみが実現されたことを示す。

図９は、実施例６に記載の通り、ＣＤ２含有ＣＡＲ（ｍ９７１－ＢＢ－ｚ－ＣＤ２以外）が、ＣＤ５８^＋細胞およびＣＤ５８^－細胞のどちらに対しても、細胞傷害に関してｍ９７１－ＢＢｚよりも優れた性能を示したことを示す。

図１０は、実施例６に記載の通り、ＣＤ２含有ＣＡＲ（ｍ９７１－ＢＢ－ｚ－ＣＤ２以外）が、ＣＤ５８^－細胞に対して、サイトカイン放出に関してｍ９７１－ＢＢｚよりも優れた性能を示したことを示す。各パネルにおいて、腫瘍標的細胞の非存在下でサイトカイン放出は観察されなかった。各パネルにおいて、棒の中央のクラスターは、ＣＤ５８^＋Ｎａｌｍ６標的細胞の存在下でのサイトカイン発現を示し、一方、右側の棒のクラスターは、ＣＤ５８^－Ｎａｌｍ６標的細胞（「Ｎ６ＣＤ５８ＫＯ」）の存在下での発現を示す。棒の中央のクラスターにおいて、ＣＡＲは、左から右に、ｍ９７１－ＢＢｚ、ｍ９７１－ＣＤ２－ＢＢｚ、ｍ９７１－ＣＤ２ｚ、およびｍ９７１－ＢＢ－ＣＤ２ｚである。ｍ９７１－ＢＢｚ－ＣＤ２、またはモック形質導入Ｔ細胞については発現が観察されなかった。各パネルの右側の棒のクラスターにおいて、ＣＡＲは、左から右に、ｍ９７１－ＣＤ２－ＢＢｚ、ｍ９７１－ＣＤ２ｚ、およびｍ９７１－ＢＢ－ＣＤ２ｚである。ｍ９７１－ＢＢｚ、ｍ９７１－ＢＢｚ－ＣＤ２、またはモック形質導入Ｔ細胞については発現が観察されなかった。

図１１は、実施例７に記載の通り、ｍ９７１－ＣＤ２－ＢＢｚＣＡＲ－Ｔ細胞により、ＣＤ５８－腫瘍細胞を接種したマウスに投与した場合に、ｍ９７１－ＢＢｚと比較して腫瘍制御の増強および生存の増強が実証されたことを示す。左側のパネルは、マウス内のルシフェラーゼを発現する腫瘍細胞からのフラックス値を示す。上のトレースはモック形質導入Ｔ細胞で処置したマウスを示し、中央のトレースはｍ９７１－ＢＢｚＣＡＲＴ細胞で処置したマウスを示し、下のトレースはｍ９７１－ＣＤ２－ＢＢｚＣＡＲＴ細胞で処置したマウスを示す。右側のパネルにはパーセント生存が示されており、モック形質導入Ｔ細胞で処置したマウスに２０日目まで生存した個体はいなかったことが示される；ｍ９７１－ＢＢｚＣＡＲＴ細胞で処置したマウスは全てが２０日目を超えて生存したが、２５日目まで生存した個体はいなかった；また、ｍ９７１－ＣＤ２－ＢＢｚＣＡＲＴ細胞で処置したマウスは全てが３０日目を超えて生存し、一部は４５日目まで長く生存した。

図１２は、実施例７に記載の通り、ＣＤ２共刺激ドメインを有するＣＤ１９ＣＡＲ－Ｔ細胞またはＣＤ２共刺激ドメインを有さないＣＤ１９ＣＡＲ－Ｔ細胞が、ＣＤ５８^＋細胞およびＣＤ５８^－細胞のどちらに対しても、標的細胞が細胞当たり約４５，０００個のＣＤ１９分子を発現する場合、細胞傷害に関して同程度の性能を示したことを示す。

図１３は、実施例７に記載の通り、ＣＤ１９ＣＤ２ＣＡＲ－Ｔが、ＣＤ５８^－細胞に対する細胞傷害に関して、標的細胞が細胞当たり約６，１９６個のＣＤ１９分子を発現する場合、ＣＤ１９－ＢＢｚＣＡＲ－Ｔよりも優れた性能を示したことを示す。このＣＤ１９発現の程度では、リンパ腫において見いだされるＣＤ１９発現レベルにより近づいたものになる。

図１４は、実施例７に記載の通り、ＣＤ１９ＣＤ２ＣＡＲが、サイトカイン放出に関しても、ＣＤ５８^＋細胞およびＣＤ５８^－細胞のどちらに対しても、２４時間インキュベートした場合に、ＣＤ１９－ＢＢｚ細胞よりも優れた性能を示したことを示す。各パネルにおいて、腫瘍標的細胞の非存在下でサイトカイン放出は観察されなかった。各パネルにおいて、棒の中央のクラスターは、ＣＤ５８^＋Ｎａｌｍ６標的細胞の存在下でのサイトカイン発現を示し、一方、右側の棒のクラスターは、ＣＤ５８^－Ｎａｌｍ６標的細胞（「Ｎ６ＣＤ５８ＫＯ」）の存在下での発現を示す。棒の中央のクラスターにおいて、ＣＡＲは、左から右に、ＣＤ１９－ＢＢｚ、ＣＤ１９－ＣＤ２ｚ、およびＣＤ１９－ＢＢ－ＣＤ２ｚである。モック形質導入Ｔ細胞については発現が観察されなかった。各パネルの右側の棒のクラスターにおいて、ＣＡＲは、左から右に、ＣＤ１９－ＢＢｚ、ＣＤ１９－ＣＤ２ｚ、およびＣＤ１９－ＢＢ－ＣＤ２ｚである。ＣＤ５８^－細胞の存在下でのＣＤ１９－ＢＢｚにおけるＩＬ－２発現はわずかに検出可能であった。再度、モック形質導入Ｔ細胞については発現が観察されなかった。

図１５は、実施例８に記載の通り、ＣＤ２共刺激ドメインをＣＤ２８共刺激ドメインに追加することにより、ＩＬ－２およびＩＦＮγ放出が有意に減少したことを示す。各パネルにおいて、腫瘍標的細胞の非存在下でサイトカイン放出は観察されなかった。各パネルにおいて、棒の中央のクラスターは、ＣＤ５８^＋Ｎａｌｍ６標的細胞の存在下でのサイトカイン発現を示し、一方、右側の棒のクラスターは、ＣＤ５８^－Ｎａｌｍ６標的細胞（「Ｎ６ＣＤ５８ＫＯ」）の存在下での発現を示す。棒の中央のクラスターにおいて、ＣＡＲは、左から右に、ｍ９７１－２８ｚおよびｍ９７１－ＣＤ２－２８ｚである。モック形質導入Ｔ細胞については発現が観察されなかった。ＣＤ５８^－Ｎａｌｍ６標的細胞の存在下で、いずれの受容体についてもＩＬ－２発現は検出されず、また、ｍ９７１－ＣＤ２－２８ｚについてはＩＦＮγ発現も検出されなかった。

図１６は、実施例８に記載の通り、ｍ９７１－２８ｚが細胞傷害に関してｍ９７１－ＣＤ２－２８ｚよりも良好な性能を示したことを示す。

図１７は、実施例８に記載の通り、ＣＤ２共刺激ドメインを４－１ＢＢ共刺激ドメインに追加することにより、ＣＤ５８ＫＯ細胞に対するＣＡＲによるサイトカイン放出が改善され、また、ＣＤ１９ＣＡＲについては、ＣＤ２の追加により、ＣＤ５８^＋細胞に対するサイトカイン放出も改善されたことを示す。各パネルにおいて、棒の中央のクラスターは、ＣＤ５８^＋Ｎａｌｍ６標的細胞の存在下でのサイトカイン発現を示し、一方、右側の棒のクラスターは、ＣＤ５８^－Ｎａｌｍ６標的細胞（「Ｎ６ＣＤ５８ＫＯ」）の存在下での発現を示す。左側のパネルの棒の中央のクラスターにおいて、ＣＡＲは、左から右に、ｍ９７１－ＢＢｚ、およびｍ９７１－ＢＢ－ＣＤ２ｚである。左側のパネルは、ＣＤ５８^＋細胞の非存在下ではｍ９７１－ＢＢｚＣＡＲ－Ｔ細胞によるＩＬ－２発現が観察されなかったことを示す。右側のパネルにおいて、ＣＡＲは、左から右に、ＣＤ１９－ＢＢｚ、およびＣＤ１９－ＢＢ－ＣＤ２ｚである。このパネルは、ＣＤ１９－ＢＢｚについてＣＤ５８^＋細胞の非存在下ではＩＬ－２発現が観察されなかったことを示す。

図１８は、実施例８に記載の通り、ＣＤ１９－ＣＤ２－ＢＢｚが、特にＣＤ５８ＫＯ細胞に対する細胞傷害に関して、ＣＤ１９－ＢＢｚよりも良好な性能を示したことを示す。

図１９は、例示的なＣＡＲとＣＤ２－トランスキメラポリペプチドの差異を概略的に例示する。左側のパネルは、ＣＤ３ζ活性化ドメインに加えてＣＤ２シグナル伝達ドメインおよび共刺激ドメインを有するＣＤ２ＣＡＲの概略構造を示す。右側のパネルは、共刺激ドメインを有する第２世代ＣＡＲと、抗原結合性ドメインおよびＣＤ２シグナル伝達ドメインを有するキメラポリペプチドとを示す。キメラポリペプチドはＣＤ３ζ活性化ドメインを欠き、したがって、トランスにのみ作用してＣＡＲを共刺激することに留意されたい。

図２０は、実施例９に記載の通り、ＣＡＲに加えてキメラポリペプチドを有するＣＡＲ－Ｔ細胞が、ＣＤ５８ＫＯ細胞に対する細胞傷害に関して、キメラポリペプチドを有さないＣＡＲ－Ｔ細胞よりも優れた性能を示したことを示す。

図２１は、実施例９に記載の通り、ＣＡＲに加えてキメラポリペプチドを有するＣＡＲ－Ｔ細胞が、ＣＤ５８ＫＯ細胞に対するサイトカイン放出に関して、キメラポリペプチドを有さないＣＡＲ－Ｔ細胞よりも優れた性能を示したことを示す。各パネルにおいて、棒の中央のクラスターは、ＣＤ５８^＋Ｎａｌｍ６標的細胞の存在下でのサイトカイン発現を示し、一方、右側の棒のクラスターは、ＣＤ５８^－Ｎａｌｍ６標的細胞（「Ｎ６ＣＤ５８ＫＯ」）の存在下での発現を示す。左側のパネルの棒の中央のクラスターにおいて、ＣＡＲは、左から右に、ｍ９７１－ＢＢｚ＋ＣＤ１９－２８ｔｍ－ＣＤ２（「トランス受容体」、構築物ｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ＣＤ１９－２８ｔｍ－ＣＤ２）およびｍ９７１－ＢＢｚである。左側のパネルは、ＣＤ５８^＋細胞の非存在下ではｍ９７１－ＢＢｚＣＡＲ－Ｔ細胞によるＩＬ－２発現が観察されなかったことを示す；ｍ９７１－ＢＢｚ＋ＣＤ１９－２８ｔｍ－ＣＤ２による発現のみが観察された。右側のパネルにおいて（ＩＦＮγ発現）、ＣＡＲ（ＣＤ５８を伴う、およびＣＤ５８を伴わない）は、左から右に、ｍ９７１－ＢＢｚ＋ＣＤ１９－２８ｔｍ－ＣＤ２（構築物ｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ＣＤ１９－２ｔｍ－ＣＤ２由来）、ｍ９７１－ＢＢｚ＋ＣＤ１９－８ｔｍ－ＣＤ２（構築物ｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ＣＤ１９－８ｔｍ－ＣＤ２由来）、ｍ９７１－ＢＢｚ＋ＣＤ１９－２ｔｍ－ＣＤ２（構築物ｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ＣＤ１９－２ｔｍ－ＣＤ２由来）、ｍ９７１－ＢＢｚ＋ＣＤ１９－２８ｍ（対照、構築物ｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ＣＤ１９－２８ｍ－ＳＴＯＰ＊由来）、およびｍ９７１－ＢＢｚ（対照、構築物ｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ＳＴＯＰ＊由来）である。

図２２は、実施例１０に記載の通り、トランス構築物（ｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ＣＤ１９－２８ｔｍ－ＣＤ２）が細胞傷害に関して２つのシス構築物よりも良好な性能を示したことを示す。

図２３は、実施例１０に記載の通り、トランス構築物（ｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ＣＤ１９－２８ｔｍ－ＣＤ２）がサイトカイン放出に関して２つのシス構築物よりも良好な性能を示したことを示す。各パネルにおいて、ＣＡＲは、左から右に、ｍ９７１－ＣＤ２ｚ、ｍ９７１－ＢＢ－ＣＤ２ｚ、およびｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ＣＤ１９－２８ｔｍ－ＣＤ２である。標的腫瘍細胞の非存在下でサイトカイン放出は観察されず、また、ＣＤ５８の非存在下でｍ９７１－ＢＢ－ＣＤ２ｚによって測定可能なＩＬ－２は放出されなかった。

図２４は、実施例１１に記載の通り、ＣＡＲとキメラポリペプチドが同じ抗原の異なるエピトープを標的とするＣＡＲ－Ｔ細胞が全て、細胞傷害に関して、キメラポリペプチドを欠くＣＡＲ－Ｔ細胞よりも良好な性能を示すことを示す。

図２５は、実施例１１に記載の通り、トランス構築物ｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ＨＡ２２－２８ｔｍ－ＣＤ２が、サイトカイン放出に関して、そのシス類似体ｍ９７１－ＢＢ－ＣＤ２ｚよりも良好な性能を示したことを示す。それぞれの場合において、ＣＡＲ構築物は、左から右に、ｍ９７１－ＢＢ－ＣＤ２ｚおよびｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ＨＡ２２－２８ｔｍ－ＣＤ２である。

図２６は、ＣＤ１９を認識するＣＤ２シグナル伝達ＣＡＲとともに発現されるｍ９７１－ＢＢｚＣＡＲ（ＣＤ２２－４－１ＢＢｚ＋ＣＤ１９－ＣＤ２）を含むトランスＣＤ２ＣＡＲＴ細胞により、いかなるシグナル伝達ドメインも有さない、ＣＤ１９を認識する対照分子とともに発現される従来のｍ９７１－ＢＢｚＣＡＲ（ＣＤ２２－４－１ＢＢｚ＋ＣＤ１９－ＴＭ）と比較して、ＣＤ５８ＫＯＮａｌｍ６に対する強力な抗腫瘍活性が実証されたことを示す。

図２７は、ＣＤ２０を認識するＣＤ２含有受容体（ｍ９７１－ＢＢｚ＋ＣＤ２０－２８ｔｍ－ＣＤ２およびｍ９７１－ＢＢｚ＋ＣＤ２０－８ｔｍ－ＣＤ２）を同時発現するトランスＣＤ２２ＣＡＲＴ細胞が、ＣＤ５８ＫＯ細胞に対するＣＡＲＴ機能をレスキューすることができたことを示す。

図２８は、ＣＤ２０を認識するＣＤ２含有受容体を同時発現させたトランスＣＤ１９ＣＡＲＴ細胞（ＣＤ１９－ＢＢｚ＋ＣＤ２０－２８ｈｔｍ－ＣＤ２）が、ＣＤ５８ＫＯ細胞に対するＣＡＲＴ細胞機能をレスキューすることができたことを示す。

図２９は、トランスＣＤ１９－２８ｚおよびｍ９７１－８ｔｍ－ＣＤ２－ｚが、ＣＤ５８ＫＯ細胞に対するＣＡＲＴ機能をレスキューし得、ＣＤ１９またはＣＤ２２抗原のいずれかが喪失した細胞に対する活性を維持したことを示す。

図３０は、トランスＣＤ１９－ＢＢｚおよびＣＤ２０－２８ｈｔｍ－ＣＤ２－ｚが、ＣＤ５８ＫＯ細胞に対するＣＡＲＴ細胞機能をレスキューし得、ＣＤ１９などの標的抗原が喪失した細胞に対する活性を維持したことを示す。

図３１は、ＣＤ２シグナル伝達がトランスに組み込まれたＣＤ１９またはＣＤ２２ＣＡＲ細胞が、ＣＤ５８喪失を克服し、標的抗原であるＣＤ１９が喪失した細胞に対する活性を維持したことを示す。

図３２は、ＣＤ２シグナル伝達が組み込まれた、ＣＤ２０を標的とするＣＡＲが、どちらもＣＡＲＴ細胞療法からの免疫エスケープの一般機構である、ＣＤ５８の喪失およびＣＤ１９の喪失の両方を克服することができたことを示す。

本開示の詳細な説明
ＣＤ５８（ＬＦＡ－３）は、リンパ芽球様細胞（F. Sanchez-Madrid et al., Proc Natl Acad Sci USA (1982) 79: 7489-93）、Ｂ細胞、Ｔ細胞、単球、顆粒球、血小板、血管内皮、血管平滑筋、赤血球、および線維芽細胞（A.M. Krensky et al., J Immunol (1983) 131 (2): 611-16）などの抗原提示細胞に主に見いだされる細胞接着タンパク質である。ＣＤ５８の喪失または変異はＤＬＢＣＬにおける好ましくない予後因子であることが示唆されている（T. Menter et al., Front Oncol (2018) 8: 54）。

ＣＤ２（ＬＦＡ－２）は、Ｔ細胞およびナチュラルキラー細胞に見いだされる細胞接着タンパク質である。ＣＤ２は、ＣＤ５８がライゲーションすると、Ｔ細胞における共刺激物質として作用し（P. Selvaraj et al., Nature (1987) 326: 400-03; T.A. Springer, Nature (1990) 346: 425-34）、それにより、サイトカイン産生が増大し（B.E. Bierer et al., J Exp Med (1988) 168: 1145-56）、またアネルギーを逆転させる（V.A. Boussiotis et al., J Exp Med (1994) 180: 1665-73）。

本明細書に記載の通り、本開示は、ＤＬＢＣＬなどのリンパ腫および他のＢ細胞過剰増殖性障害の処置においてＣＡＲ－Ｔ療法が失敗する場合の理由の１つが、腫瘍細胞上のＣＤ５８の喪失、低減、または変異であることを示す。予想外に、そのような療法に使用される現行のＣＡＲ－Ｔ細胞は、患者由来のＣＡＲ－Ｔ細胞上に存在する内在性ＣＤ２を活性化するために腫瘍細胞のＣＤ５８発現に一部依拠する。ＣＤ５８－ＣＤ２シグナル伝達の非存在下では、ＣＡＲ－Ｔ細胞により産生されるＩＬ－２およびＩＦＮγの分量が減少し、その結果、同時に活性および有効性が低下する。

本開示は、一般に、ＣＡＲ－Ｔの、腫瘍により発現されるＣＤ５８への依存を低減または排除するための方法；ＣＤ２シグナル伝達を有効に組み入れるＣＡＲ；トランス－ＣＤ２シグナル伝達キメラタンパク質によるＣＡＲの共刺激；およびそのためのシステムに関する。

Ａ．定義
単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、文脈によりそうでないことが明確に規定されない限り、複数の参照対象を含む。例えば、「１つの細胞（ａｃｅｌｌ）」という用語は、１つまたは複数の細胞を包含し、それらの混合物も包含される。「Ａおよび／またはＢ」は、本明細書では、以下の選択肢：「Ａ」、「Ｂ」、「ＡまたはＢ」、ならびに「ＡおよびＢ」が包含されるように使用される。

値の範囲が提示されている場合、文脈により明確に別段の規定がなされない限り、下限の単位の１０分の１までの間に入る値のそれぞれ、その範囲の上限と下限の間、および任意の他の明記されたまたはその明記された範囲の間に入る値が本開示に包含されることが理解される。これらのより小さな範囲の上限と下限は、そのより小さな範囲に独立に含まれ、また、明記された範囲のあらゆる具体的に除外された限度に従って本開示にも包含される。明記された範囲が限度の一方または両方を含む場合、それらの含まれる限界のいずれか、またはその両方を除く範囲も本開示に包含される。

「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」または「相同性」は、本明細書において識別される核酸またはアミノ酸配列に関しては、あらゆる保存的置換を配列同一性の一部として考慮に入れて配列をアラインメントした後に、比較されるポリペプチド内のアミノ酸残基と同一である、候補配列内の核酸またはアミノ酸残基のパーセンテージと定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定するためのアラインメントは、公的に入手可能な配列比較用コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ－２を使用して実現することができる。ＡＬＩＧＮ－２配列比較用コンピュータプログラムのソースコードは、Ｕ．Ｓ．ＣｏｐｙｒｉｇｈｔＯｆｆｉｃｅ、ＷａｓｈｉｎｇｔｏｎＤ．Ｃ．、２０５５９に米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７の下で登録されているユーザー文書で入手可能である。ＡＬＩＧＮ－２プログラムを、デジタルＵＮＩＸ（登録商標）Ｖ４．０ＤなどのＵＮＩＸ（登録商標）オペレーティングシステムでの使用のためにコンパイルすることができる。配列比較パラメータは全てＡＬＩＧＮ－２プログラムによって設定され、変動しない。

「パーセント（％）同一性」は、本明細書において識別される核酸またはアミノ酸配列に関しては、あらゆる保存的置換を配列同一性の一部として考慮に入れて配列をアラインメントした後に、比較されるポリペプチド内のアミノ酸残基と同一である、候補配列内の核酸またはアミノ酸残基のパーセンテージと定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定するためのアラインメントは、公的に入手可能な配列比較用コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ－２を使用して実現することができる。ＡＬＩＧＮ－２配列比較用コンピュータプログラムのソースコードは、Ｕ．Ｓ．ＣｏｐｙｒｉｇｈｔＯｆｆｉｃｅ、ＷａｓｈｉｎｇｔｏｎＤ．Ｃ．、２０５５９にＵ．Ｓ．ＣｏｐｙｒｉｇｈｔＲｅｇｉｓｔｒａｔｉｏｎＮｏ．ＴＸＵ５１００８７の下で登録されているユーザー文書で入手可能である。ＡＬＩＧＮ－２プログラムを、デジタルＵＮＩＸ（登録商標）Ｖ４．０ＤなどのＵＮＩＸ（登録商標）オペレーティングシステムでの使用のためにコンパイルすることができる。配列比較パラメータは全てＡＬＩＧＮ－２プログラムによって設定され、変動しない。

本明細書に開示される範囲は全て、ありとあらゆる可能性のある部分範囲およびその部分範囲の組合せも包含する。列挙された範囲はいずれも、同じ範囲が少なくとも等しい半分、３分の１、４分の１、５分の１、１０分の１などに分解されることを十分に記載し、可能にするものと理解され得る。非限定的な例として、本明細書で考察される各範囲を下位３分の１、中位３分の１および上位３分の１などに容易に分解することができる。同じく当業者には理解される通り、例えば「最大で（ｕｐｔｏ）」、「少なくとも（ａｔｌｅａｓｔ）」、「超える（ｇｒｅａｔｅｒｔｈａｎ）」、「未満（ｌｅｓｓｔｈａｎ）」などの言葉は全て、記載されている数を含み、続けて上記の通り部分範囲に分解することができる範囲を指す。最後に、当業者には理解される通り、範囲は、個々のメンバーそれぞれを含む。したがって、例えば、１つ～３つの事項を有する群は、１つ、２つ、または３つの事項の群を指す。同様に、１つ～５つの事項を有する群は、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの事項を有する群を指す、などである。

明確にするために別々の実施形態に関して記載されている本開示のある特定の特色を組み合わせて単一の実施形態として提供することもできることが理解される。逆に、簡潔にするために単一の実施形態に関して記載されている本開示の種々の特色を別々にまたは任意の適切な副次的組合せで提供することもできる。本開示に関する実施形態の組合せの全てが、１つ１つの組合せが個別にかつ明確に開示されたものと全く同じように本開示に具体的に包含され、本明細書に開示される。さらに、種々の実施形態およびその要素の副次的組合せの全てもまた、そのような副次的組合せの１つ１つが個別にかつ明確に本明細書に開示されたものと全く同じように本開示に具体的に包含され、本明細書に開示される。

本明細書で使用される場合、薬剤の「治療有効量」または「治療有効数」は、疾患もしくは障害の処置もしくは管理において治療的利益をもたらすため、または疾患もしくは障害に付随する１つもしくは複数の症状を遅延させるもしくは最小限にするために十分な量または数である。薬剤の治療有効量とは、単独の、または他の治療剤と組み合わせた治療剤の、がんの処置または管理において治療的利益をもたらす量を意味する。「治療有効量」という用語は、全体的な治療を改善する、疾患もしくは障害の症状もしくは原因を低減もしくは回避する、または別の治療剤の治療有効性を増強する量を包含し得る。「有効量」の例は、疾患の１つの症状もしくは複数の症状の処置、予防、または低減に寄与するために十分な量であり、これは、「治療有効量」と称することもできる。症状の「低減」とは、症状（複数可）の重症度もしくは発生頻度を低下させること、または症状（複数可）を排除することを意味する。「治療有効量」を含む組成物の厳密な量は、処置の目的に依存し、当業者が公知の技法を使用して確かめることが可能である（例えば、Lieberman, Pharmaceutical Dosage Forms（vols. 1-3, 2010）；Lloyd, The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding (2016)；Pickar, Dosage Calculations (2012)；およびRemington: The Science and Practice of Pharmacy, 22nd Edition, 2012, Gennaro, Ed., Lippincott, Williams & Wilkinsを参照されたい）。

過剰増殖性障害には、細胞の調節されない過成長を特徴とするがんおよび過形成が含まれる。過剰増殖性障害では、遺伝学的な調節機構の喪失が頻繁に示され、ネイティブタンパク質が不適切に発現され得る（他の細胞型からのまたは発生段階でのタンパク質の発現、変異したタンパク質の発現、およびタンパク質の正常よりも高いまたは低いレベルでの発現を含む）。ＣＤ５８^－過剰増殖性障害は、正常なＣＤ５８発現が低減しているもしくは存在しない、またはＣＤ５８が変異形態で発現される、過剰増殖性障害である。

Ｂ細胞過剰増殖性障害としては、Ｂ細胞白血病およびリンパ腫、例えば、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ性白血病、前駆Ｂリンパ芽球性白血病、ヘアリー細胞白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、および、Ｂ系統細胞の過成長を特徴とする他の障害が挙げられる。

キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）およびＴ細胞受容体（ＴＣＲ）などの免疫受容体は、一般に、細胞外抗原結合性ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＴ細胞の細胞傷害性反応を活性化する細胞質シグナル伝達ドメインを含む。ＣＡＲは、抗原結合性ドメインと膜貫通ドメインの間にスペーサードメインも有する頻度が高く、スペーサードメインは、多くの場合、ヒンジドメインを含む。細胞質シグナル伝達ドメインは、本明細書に記載の通り、１つまたは複数の共刺激領域をさらに含み得る。

ＣＡＲ構造は、多くの場合、簡略化されて、標的抗原（または抗原結合性ドメインもしくは薬剤）；必要に応じてスペーサードメイン；必要に応じて膜貫通ドメイン；ならびに細胞質シグナル伝達ドメインの共刺激および刺激ドメインが列挙される。例えば、抗ＣＤ１９ｓｃＦｖ抗原結合性ドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン（細胞外ヒンジ領域を含み得る）、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、およびＣＤ３ζ活性化ドメインを有するＣＡＲはＣＤ１９－８ｔｍ－４１ＢＢｚと示され得る。ドメインが一般に使用されているものである場合、さらにもっと簡略化されることも多く、したがって、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、４－１ＢＢドメイン、およびＣＤ３ζ活性化ドメインを有するＣＡＲは、ＣＤ１９－２８ｔｍ－２８ＢＢｚと省略され得る。例えばＣＤ１９－２８ＢＢｚのように、膜貫通ドメインの名称を省略することによってさらに簡略化されることも多い。その特異性だけではなく特定の抗原結合性ドメインを示すこと、例えば、ＣＤ２２ではなくｍ９７１と示し、それにより抗原結合性ドメインがｍ９７１ｓｃＦｖであることを示すことも一般的である。

Ｂ．ＣＤ２ＣＡＲ
本開示のＣＤ２ＣＡＲは、抗原結合性ドメイン、スペーサードメイン、膜貫通ドメイン、および細胞質シグナル伝達ドメインを含む。細胞質シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２シグナル伝達（共刺激）ドメイン、第２の共刺激ドメイン（ＣＤ２８以外）、およびＣＤ３ζ活性化ドメインなどの活性化ドメインを含む。本開示のＣＤ２ＣＡＲは、ＣＡＲ－Ｔ細胞に、単独で、または他のＣＡＲと組み合わせてのいずれかで使用することができる。一部の実施形態では、本開示のＣＤ２ＣＡＲをキメラポリペプチドおよび／またはトランスジェニックＴ細胞受容体（ＴＣＲ）と組み合わせて使用することができる。一部の実施形態では、トランスジェニックＴＣＲによってＣＤ２シグナル伝達が増強される。一部の実施形態では、本開示のＣＤ２ＣＡＲを、腫瘍微小環境において腫瘍特異的抗原に応答してネイティブＣＤ２と架橋結合し得る１つまたは複数の追加の治療剤、例えば、抗体またはその抗原結合性断片、または分子（投与されるか、分泌されるか、または表面に発現される）などと組み合わせて使用することができる。本明細書に記載の通り、本開示のＣＤ２ＣＡＲにより、ＣＡＲ－Ｔ細胞の標的細胞によるＣＤ５８発現への依存が低減し、ＣＡＲ－Ｔ細胞の治療的活性をさらに増大させることができる。

一部の実施形態では、ＣＡＲは、第１世代ＣＡＲである。一部の実施形態では、ＣＡＲは、第２世代ＣＡＲである。一部の実施形態では、ＣＡＲは、第３世代ＣＡＲである。第１世代ＣＡＲは、一般に、Ｔ細胞活性化シグナルを生じさせるために、ＣＤ３ｚ、ＦｃｙＲＩ、または他のＩＴＡＭを含有する活性化ドメインの細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを有する。第２世代ＣＡＲは、共刺激シグナル伝達ドメイン（例えば、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、またはＩＣＯＳなどの、内在性Ｔ細胞共刺激受容体由来の共刺激シグナル伝達ドメイン）をさらに含む。第３世代ＣＡＲは、ＥＧＡＭを含有する活性化ドメイン、第１の共刺激シグナル伝達ドメインおよび第２の共刺激シグナル伝達ドメインを含み得る。

１．抗原結合性ドメイン
抗原結合性ドメインは、選択された抗原に十分な親和性および特異性で結合する任意の分子であり得、多くの場合、抗体または抗体誘導体、例えば、ｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、Ｆａｂ’断片、（Ｆａｂ’）_２断片、ナノボディ、ダイアボディなどである。あるいは、抗原結合性ドメインは、標的抗原に特異的に結合する受容体または受容体断片であり得る。抗原結合性ドメインは、下記の通り、受容体の残りの部分と直接（共有結合により）または間接的に（例えば、２つまたはそれよりも多くの結合パートナーの非共有結合性の結合を通じて）付着し得る。

第１の抗原結合性ドメインは、標的抗原との特異的結合のために選択される。一般に、標的抗原は、腫瘍細胞などの標的細胞の特徴であり、他の（健康な）細胞の特徴ではないことから選択される。腫瘍抗原は、免疫応答、特にＴ細胞媒介性免疫応答を引き出す、腫瘍細胞によって産生されるタンパク質である。したがって、抗原結合性部分は、処置される特定の型のがんに基づいて選択することができる。腫瘍抗原としては、例えば、これだけに限定することなく、神経膠腫関連抗原、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ベータ－ヒト絨毛性ゴナドトロピン、アルファ－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、レクチン反応性ＡＦＰ、サイログロブリン、ＲＡＧＥ－１、ＭＮ－ＣＡＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２（ＡＳ）、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔＨＳＰ７０－２、Ｍ－ＣＳＦ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＰＡＰ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ｐ５３、プロステイン、ＰＳＭＡ、ＨＥＲ２、サバイビンおよびテロメラーゼ、前立腺癌腫瘍抗原－１（ＰＣＴＡ－１）、ＭＡＧＥ、ＥＬＦ２Ｍ、好中球エラスターゼ、エフリンＢ２、ＣＤ２２、インスリン増殖因子（ＩＧＦ）－Ｉ、ＩＧＦ－ＩＩ、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｂ７－Ｈ３、ＧＰＣ２、Ｌ１ＣＡＭ、ＥＧＦＲ、およびメソテリンが挙げられる。

腫瘍抗原はまた、腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）または腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）であり得る。ＴＳＡは、腫瘍細胞に独特のものであり、体内の他の細胞には存在しない。ＴＡＡは腫瘍細胞に独特のものではなく、抗原に対する免疫寛容の状態を誘導することができない条件下でいくつかの正常な細胞にも発現される。腫瘍における抗原の発現は、免疫系が抗原に応答することが可能になる条件下で起こり得る。ＴＡＡは、免疫系が未成熟であり応答することができない胎児発生の間には正常な細胞にも発現される抗原であり得る、または、通常正常な細胞にも低レベルで存在するが腫瘍細胞でははるかに高いレベルで発現される抗原であり得る。

ＴＳＡおよびＴＡＡの例としては、限定することなく、分化抗原、例えば、ＭＡＲＴ－１／ＭｅｌａｎＡ（ＭＡＲＴ－１）、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ１７）、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２および腫瘍特異的多系統抗原、例えば、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ｐ１５；過剰発現される胎児性抗原、例えば、ＣＥＡ；過剰発現される癌遺伝子および変異した腫瘍抑制因子遺伝子、例えば、ｐ５３、Ｒａｓ、ＨＥＲ－２；染色体転座にから生じた独特の腫瘍抗原；例えば、ＢＣＲ－ＡＢＬ、Ｅ２Ａ－ＰＲＬ、Ｈ４－ＲＥＴ、ＩＧＨ－ＩＧＫ、ＭＹＬ－ＲＡＲ；ならびにウイルス抗原、例えば、エプスタイン・バーウイルス抗原ＥＢＶＡおよびヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原Ｅ６およびＥ７が挙げられる。他の大きなタンパク質に基づく抗原としては、ＴＳＰ－１８０、ＭＡＧＥ－４、ＭＡＧＥ－５、ＭＡＧＥ－６、ＲＡＧＥ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ｐ１８５ｅｒｂＢ２、ｐ１８０ｅｒｂＢ－３、ｃ－ｍｅｔ、ｎｍ－２３Ｈ１、ＰＳＡ、ＴＡＧ－７２、ＣＡ１９－９、ＣＡ７２－４、ＣＡＭ１７．１、ＮｕＭａ、Ｋ－ｒａｓ、ベータ－カテニン、ＣＤＫ４、Ｍｕｍ－１、ｐ１５、ｐ１６、４３－９Ｆ、５Ｔ４、７９１Ｔｇｐ７２、アルファ－フェトプロテイン、ベータ－ｈＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＡ１２５、ＢＣＡＡ、ＣＡ１９５、ＣＡ２４２、ＣＡ－５０、ＣＡＭ４３、ＣＤ６８／Ｐ１、ＣＯ－０２９、ＦＧＦ－５、Ｇ２５０、Ｇａ７３３／ＥｐＣＡＭ、ＨＴｇｐ－１７５、Ｍ３４４、ＭＡ－５０、ＭＧ７－Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ／７０Ｋ、ＮＹ－ＣＯ－１、ＲＣＡＳ１、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ－９０、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ、およびＴＰＳが挙げられる。一部の実施形態では、標的抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＲＯＲ１、またはＧＤ２である。一部の実施形態では、標的抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、またはＣＤ２２である。ある実施形態では、標的抗原は、ＣＤ１９である。ある実施形態では、標的抗原は、ＣＤ２２である。

抗体誘導体は、リガンド結合の機構が抗体と似ている分子であり、それらとして、例えば、ナノボディ、デュオボディ（ｄｕｏｂｏｄｙ）、ダイアボディ、トリアボディ、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆａｂ断片、単鎖可変性断片（ＳｃＦｖ）、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、およびそれらの機能性断片が挙げられる。例えば、D.L. Porter et al., N Engl J Med (2011) 365 (8): 725-33（ｓｃＦｖ）；E.L. Smith et al., Mol Ther (2018) 26 (6): 1447-56（ｓｃＦｖ）；S.R. Banihashemi et al., Iran J Basic Med Sci (2018) 21 (5): 455-64（ＣＤ１９ナノボディ）；F. Rahbarizadeh et al., Adv Drug Deliv Rev (2019) 141: 41-46（ｓｄＡｂ）；S.M. Kipriyanov et al., Int J Cancer (1998) 77 (5): 763-72（ダイアボディ）；F. Le Gall et al., FEBS Lett (1999) 453 (1-2): 164-68（トリアボディ）；M.A. Ghetie et al., Blood (1994) 83 (5): 1329-36（Ｆ（ａｂ’）_２）；ならびにM.A. Ghetie et al., Clin Cancer Res (1999) 5 (12): 3920-27（Ｆ（ａｂ’）_２およびＦａｂ’）を参照されたい。抗体誘導体は、例えば、これだけに限定することなく、ナノボディ、デュオボディ、ダイアボディ、トリアボディ、ミニボディ、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆａｂ断片、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を治療用抗体に基づいて調製することにより、治療用抗体から調製することもできる。ファージディスプレイ技法を使用して抗体誘導体を設計することもできる（例えば、E. Romao et al., Curr Pharm Des (2016) 22 (43): 6500-18を参照されたい）。

抗原結合性ドメインは、同じであっても異なってもよい複数の抗原に対する結合性ドメインを含み得る。例えば、抗原結合性ドメインは、２つの抗原に対して、または同じ抗原上の２つのエピトープに対して特異的な二重特異性（Ｆａｂ’）_２を含み得る。多重特異性抗原結合性ドメインにより、例えば、ＣＡＲが複数の抗原を認識し、それらと反応することが可能になることによって、ＣＡＲの感受性が増大し得る。

あるいは、抗原結合性ドメインをＣＡＲの残りの部分とは独立に発現させ、非共有結合性の相互作用を通じて結合させることができる。例えば、ＣＡＲの細胞外部分は、独立した抗原結合性ドメインと結合する（抗原結合性ドメインによる抗原結合に干渉することなく）、特定の結合対の一方のメンバーを含み得る。例えば、ＣＡＲ細胞外ドメインはストレプトアビジンを含み得、一方、独立した抗原結合性ドメインはビオチン化されている。あるいは、ＣＡＲ細胞外ドメインは、独立した抗原結合性ドメインに対して特異的な抗体または抗体誘導体を含み得る。この独立した抗原結合性ドメインとＣＡＲへの分割により、新しい受容体を形質導入せずに受容体の抗原特異性を変化させることが可能になる。例えば、N.G. Minutolo et al, Front Oncol (2019) 9: 176を参照されたい。

２．膜貫通ドメイン
膜貫通ドメインは、受容体の細胞外ドメイン（抗原結合性ドメインおよびスペーサードメイン）と細胞質ドメインを連結する働きをする。一般に、ＣＡＲにおいて機能することが可能な任意の膜貫通ドメインを本開示の受容体および方法に使用することができる。膜貫通ドメインとしては、例えば、これだけに限定することなく、ＣＤ３ゼータ鎖（ＣＤ３ζ）、ＣＤ２８、ＣＤ２、ＣＤ４、ＯＸ４０、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＦｃＥＲＩγ、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＩＬＲＢ（ＣＤ１２２）、ＩＬ－２ＲＧ（ＣＤ１３２）、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、もしくはＣＤ４０の膜貫通ドメインの全部または一部、またはそのような膜貫通ドメインに由来する配列を挙げることができる。細胞質シグナル伝達ドメインは、一般に、Ｔ細胞を活性化する細胞内シグナルにリガンド結合の事象を伝達するドメインを含む。ＣＤ３ζ細胞内ドメイン／活性化ドメインが使用される頻度が高いが、他のもの、例えば、ＭｙＤ８８を使用することもできる。ある実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ３ζ、ＣＤ２、ＣＤ８、またはＣＤ２８由来の膜貫通ドメインである。ある実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２またはＣＤ２８由来の膜貫通ドメインに由来するものである。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、ＣＤ２、ＣＤ４、ＯＸ４０、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＦｃＥＲＩγ、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＩＬＲＢ（ＣＤ１２２）、ＩＬ－２ＲＧ（ＣＤ１３２）、またはＣＤ４０膜貫通ドメインに対して約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または約１００％の配列同一性を有する。

３．スペーサードメイン
一部の実施形態では、ＣＡＲは、細胞外スペーサードメインをさらに含み、細胞外スペーサードメインはヒンジドメインを含み得る。ヒンジドメインは、一般に、標的化部分と膜貫通ドメインの間に配置された柔軟なポリペプチドコネクター領域を含む。ヒンジドメイン配列は、多くの場合、ＩｇＧサブクラス（例えば、ＩｇＧ１およびＩｇＧ４など）、ＩｇＤ、ＣＤ２８、およびＣＤ８ドメインに由来する。一部の実施形態では、ヒンジドメインにより、隣接するポリペプチド領域に構造的な柔軟性がもたらされる。ヒンジドメインは、天然または合成ポリペプチドからなり得る。ヒンジドメインにより、抗原結合性部分によって認識される抗原の部分に対する抗原結合性部分の最適な位置付けを促進することによってＣＡＲの機能を改善することができることが当業者には理解されよう。一部の実施形態では、ヒンジドメインは、最適なＣＡＲ活性に必要なものではない場合がある。一部の実施形態では、アミノ酸の短い配列を含むヒンジドメインにより、例えば、そうでなければ抗体結合カイネティクスを変更させる可能性がある立体的制約が軽減することによって抗原結合が容易になることによりＣＡＲ活性が促進される。一部の実施形態では、ヒンジドメインを抗原結合性部分の下流かつ膜貫通ドメイン連結の上流に連結する。

適切なヒンジドメインの非限定的な例としては、ＣＤ８α、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ４、ＣＤ４、ＰＤ１、ＩｇＧ１、ＰＧＫ、またはＩｇＧ４に由来するものが挙げられる。一部の実施形態では、ヒンジドメインは、ヒトＣＤ８α（ＣＤ８ａとしても公知）分子、ＣＤ２８分子、および隣接する領域に柔軟性をもたらすことに関して同様の機能をもたらす任意の他の受容体に由来する領域を含み得る。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＣＡＲは、ＣＤ８αヒンジドメインに由来するヒンジドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＣＡＲは、ＣＤ２８またはＣＤ２ヒンジドメインに由来するヒンジドメインを含む。一部の実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ８α、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ４、ＣＤ４、ＰＤ１、ＩｇＧ１、ＰＧＫ、またはＩｇＧ４ヒンジドメインに対して約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または約１００％の配列同一性を有する。

一部の実施形態では、スペーサードメインは、抗原結合性ドメインと細胞外ヒンジドメインの間に位置付けられた１つまたは複数の介在アミノ酸残基を含むリンカーをさらに含む。一部の実施形態では、リンカーは、抗原結合性ドメインの下流かつヒンジドメインの上流に位置付けられる。原理上は、リンカーの長さおよび／またはアミノ酸組成は特に限定されない。一部の実施形態では、約１～約３００個のアミノ酸残基（例えば、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、またはそれよりも多くのアミノ酸残基）を含む任意の単鎖ペプチドのいずれも、リンカーとして使用することができる。一部の実施形態では、リンカーは、少なくとも約５個、約６個、約７個、約８個、約９個、約１０個、約１１個、約１２個、約１５個、約２０個、約２５個、約３０個、約３５個、約４０個、約４５個、または約５０個のアミノ酸を含む。一部の実施形態では、リンカーは、約３００個以下、約２５０個以下、約２００個以下、約１５０個以下、約１４０個以下、約１３０個以下、約１２０個以下、約１１０個以下、約１００個以下、約９０個以下、約８５個以下、約８０個以下、約７５個以下、約７０個以下、約６５個以下、約６０個以下、約５５個以下、約５０個以下、約４５個以下、約４０個以下、約３５個以下、または約３０個以下のアミノ酸残基を含む。一部の実施形態では、細胞外スペーサーの長さおよびアミノ酸組成は、ＣＡＲの所望の活性が実現されるために、抗原結合性ドメインおよび細胞外ヒンジドメインの互いに対する配向および／または近接を変動させるように最適化することができる。一部の実施形態では、抗原結合性ドメインおよび細胞外ヒンジドメインの互いに対する配向および／または近接を、ＣＡＲの有効性を増強または低減させるための「調整」ツールまたは効果として変動させるおよび／または最適化することができる。一部の実施形態では、抗原結合性ドメインおよびヒンジドメインの互いに対する配向および／または近接を、部分的に機能的なバージョンのＣＡＲが創出されるように変動させるおよび／または最適化することができる。一部の実施形態では、細胞外スペーサードメインは、ＩｇＧ４ヒンジドメインおよびＩｇＧ４ＣＨ２－ＣＨ３ドメインに対応するアミノ酸配列を含む。

あるいは、スペーサードメインは、ランダムな配列、（ｇｌｙ－ｇｌｙ－ｓｅｒ）_ｎ（「ＧＧＳｎ」）配列、またはそれらの変形形態、例えば、（ＳＧＧ）_ｎ、（ＧＧＧＳ）_ｎ、（ＳＧＧＧ）_ｎ、（ＧＳＧＧＧ）_ｎなど（配列中、ｎは約１から約１５までにわたり得る（配列番号８７～９１））を有するスペーサーなどの合成ポリペプチドスペーサーであり得る。合成ポリペプチドスペーサードメインは、ＣＤ８α、ＩｇＧなどに由来するヒンジドメインなどの天然に存在する配列も含み得る。

４．細胞質シグナル伝達ドメイン
細胞質シグナル伝達ドメインは、一般に、リン酸化されると抗原に対するＴ細胞反応を活性化する免疫受容活性化チロシンモチーフ（ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒｔｙｒｏｓｉｎｅ－ｂａｓｅｄａｃｔｉｖａｔｉｏｎｍｏｔｉｆ）（ＩＴＡＭ）を有する活性化ドメインを含む。リン酸化は抗原結合の結果として起こる。活性化ドメインは、ＣＤ３ζに由来するものであることが多い。

本開示のＣＡＲは、ＣＤ３ζ活性化ドメイン、ＣＤ２共刺激ドメイン、ならびに、サイトカイン産生もしくは感受性を増大させるため、アネルギーを低減もしくは予防するため、ならびに／または増殖および細胞傷害活性を増大させるための１つまたは複数の追加の共刺激ドメインを含む。これらの追加の共刺激ドメインは、Ｂ７－１（ＣＤ８０）、Ｂ７－２（ＣＤ８６）、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＣＤ２７８、ＣＤ１２２、ＣＤ１３２、Ｂ７－Ｈ２、Ｂ７－Ｈ３、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、Ｂ７－Ｈ４、ＰＤＣＤ６、ＢＴＬＡ、４１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＦｃＥＲＩγ、ＣＤ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦ、ＧＩＴＲ－Ｌ、ＢＡＦＦ－Ｒ、ＨＶＥＭ、ＣＤ２７、ＬＩＧＨＴ、ＣＤ２７Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、ＴＡＣ１、ＣＤ４０、ＣＤ２４４、ＣＤ８４、ＢＬＡＭＥ、ＣＤ２２９、ＣＲＡＣＣ、ＣＤ２Ｆ－１０、ＮＴＢ－Ａ、ＣＤ４８、ＳＬＡＭ（ＣＤ１５０）、ＣＤ５８、イカロス、ＣＤ５３、インテグリンα４、ＣＤ８２、インテグリンα４β１、ＣＤ９０、インテグリンα４β７、ＣＤ９６、ＬＡＧ－３、ＣＤ１６０、ＬＭＩＲ、ＣＲＴＡＭ、ＴＣＬ１Ａ、ＤＡＰ１２；ＴＩＭ－１、デクチン－１、ＴＩＭ－４、ＴＳＬＰ、ＥｐｈＢ６、ＴＳＬＰ－Ｒ、およびＨＬＡ－ＤＲなどの共刺激タンパク質に由来するものであり得る。本開示のある実施形態では、細胞質シグナル伝達ドメインはＣＤ３ζ活性化ドメインを含む。一部の実施形態では、１つの共刺激ドメインはＣＤ２共刺激ドメインである。別の実施形態では、細胞質シグナル伝達ドメインはＣＤ２共刺激ドメインおよび第２の共刺激ドメインを含み、第２の共刺激ドメインはＣＤ２８共刺激ドメインを含まない。ある実施形態では、第２の共刺激ドメインは４１ＢＢ共刺激ドメインを含む。ＣＤ２８共刺激ドメインは本明細書に記載の方法の実施においては有効ではなく、ＣＤ５８の非存在下では活性化をもたらすことができない。一部の実施形態では、共刺激ドメインは、４－１ＢＢシグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７シグナル伝達ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７８シグナル伝達ドメイン、ＣＤ４０シグナル伝達ドメイン、ＣＤ４０Ｌシグナル伝達ドメイン、ｔｏｌｌ様受容体シグナル伝達ドメイン、またはこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含む（Weinkove R. et al., Clin Transl Immunology. 2019; 8 (5): e1049）。

５．例示的な構築物
本開示の例示的なＣＡＲとしては、これだけに限定されないが、以下のうちの任意の１つが挙げられる：ＣＤ１９－ＣＤ２－ｚ（配列番号１２、４１）、ＣＤ１９－ＣＤ２－ＢＢｚ（配列番号１３、４２）、ＣＤ１９－ＢＢ－ＣＤ２ｚ（配列番号１４、４３）、ＣＤ１９－ＣＤ２－２８ｚ（配列番号１５、４４）、ｍ９７１－ＣＤ２ｚ（配列番号１６、４５）、ｍ９７１－ＣＤ２－ＢＢｚ（配列番号１７、４６）、ｍ９７１－ＣＤ２－ＢＢ－ＣＤ２ｚ（配列番号１８、４７）、ｍ９７１－ＣＤ２－２８ｚ（配列番号１９、４８）、ＣＤ１９－２８ｔｍ－ＣＤ２（配列番号２０、４９）、ＣＤ１９－８ｔｍ－ＣＤ２（配列番号２１、５０）、ＣＤ１９－２ｔｍ－ＣＤ２（配列番号２２、５１）、ｍ９７１－２８ｔｍ－ＣＤ２（配列番号２３、５２）、ｍ９７１－８ｔｍ－ＣＤ２（配列番号２４、５３）、ＨＡ２２－２８ｔｍ－ＣＤ２（配列番号２５、５４）、ＨＡ２２－８ｔｍ－ＣＤ２（配列番号２６、５５）、ＨＡ２２－２ｔｍ－ＣＤ２（配列番号２７、５６）、ＣＤ２０－２８ｔｍ－ＣＤ２（配列番号２８、５７）、ＣＤ２０－８ｔｍ－ＣＤ２（配列番号２９、５８）、ｍ９７１－ＢＢｚ（配列番号５９、６０）、ｍ９７１－２８ｚ（配列番号６１、６２）、ＣＤ１９－２８ｚ（配列番号６３、６４）、ＣＤ１９－ＢＢｚ（配列番号６５、６６）、ｍ９７１－ＢＢｚ－ＣＤ２（配列番号６７、６８）、ｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ＣＤ１９－ＣＤ２８ｔｍ－ＣＤ２（配列番号７１、７２）、ｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ＣＤ１９－ＣＤ８ｔｍ－ＣＤ２（配列番号７３、７４）、ｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ＣＤ１９－ＣＤ２ｔｍ－ＣＤ２（配列番号７５、７６）、ｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ＨＡ２２－ＣＤ２８ｔｍ－ＣＤ２（配列番号８１、８２）、ｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ＨＡ２２－ＣＤ８ｔｍ－ＣＤ２（配列番号８３、８４）、ｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ＨＡ２２－２ｔｍ－ＣＤ２（配列番号８５、８６）、ＣＤ１９－８ｈｔｍ－ＣＤ２－ｚ（配列番号９２、１１４）、ＣＤ１９－８ｈｔｍ－ＣＤ２－ＢＢ－ｚ（配列番号９３、１１５）、ＣＤ１９－８ｈｔｍ－ＢＢ－ＣＤ２－ｚ（配列番号９４、１１６）、ＣＤ１９－８ｈｔｍ－ＣＤ２－２８－ｚ（配列番号９５、１１７）、ＣＤ１９－２８ｈｔｍ－ＣＤ２－ｚ（配列番号９６、１１８）、ｍ９７１－８ｈｔｍ－ＣＤ２－ｚ（配列番号９７、１１９）、ｍ９７１－８ｈｔｍ－ＣＤ２－ＢＢ－ｚ（配列番号９８、１２０）、ｍ９７１－８ｈｔｍ－ＢＢ－ＣＤ２－ｚ（配列番号９９、１２１）、ｍ９７１－８ｈｔｍ－ＣＤ２－２８－ｚ（配列番号１００、１２２）、ＣＤ１９－２８ｈｔｍ－ＣＤ２（配列番号１０１、１２３）、ＣＤ１９－８ｈｔｍ－ＣＤ２（配列番号１０２、１２４）、ＣＤ１９－２ｈｔｍ－ＣＤ２（配列番号１０３、１２５）、ｍ９７１－２８ｈｔｍ－ＣＤ２（配列番号１０４、１２６）、ｍ９７１－８ｈｔｍ－ＣＤ２（配列番号１０５、１２７）、ＨＡ２２－２８ｈｔｍ－ＣＤ２（配列番号１０６、１２８）、ＨＡ２２－８ｈｔｍ－ＣＤ２（配列番号１０７、１２９）、ＨＡ２２－２ｈｔｍ－ＣＤ２（配列番号１０８、１３０）、ＣＤ２０－ＩｇＧ１ｌｏｎｇ－２８ｈｔｍ－ＣＤ２（配列番号１０９、１３１）、ＣＤ２０－ＩｇＧ１ｌｏｎｇ－８ｈｔｍ－ＣＤ２（配列番号１１０、１３２）、ＣＤ２０－ＩｇＧ１ｌｏｎｇ－２８ｈｔｍ－ＣＤ２－ｚ（配列番号１１１、１３３）、またはＣＤ２０－ＩｇＧ１ｌｏｎｇ－８ｈｔｍ－ＣＤ２－ｚ（配列番号１１２、１３４）。

一部の実施形態では、本開示のＣＡＲは、以下からなる群より選択される配列と少なくとも約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％同一であるアミノ酸配列またはヌクレオチド配列を含み得る：ＣＤ１９－ＣＤ２－ｚ（配列番号１２、４１）、ＣＤ１９－ＣＤ２－ＢＢｚ（配列番号１３、４２）、ＣＤ１９－ＢＢ－ＣＤ２ｚ（配列番号１４、４３）、ＣＤ１９－ＣＤ２－２８ｚ（配列番号１５、４４）、ｍ９７１－ＣＤ２ｚ（配列番号１６、４５）、ｍ９７１－ＣＤ２－ＢＢｚ（配列番号１７、４６）、ｍ９７１－ＣＤ２－ＢＢ－ＣＤ２ｚ（配列番号１８、４７）、ｍ９７１－ＣＤ２－２８ｚ（配列番号１９、４８）、ＣＤ１９－２８ｔｍ－ＣＤ２（配列番号２０、４９）、ＣＤ１９－８ｔｍ－ＣＤ２（配列番号２１、５０）、ＣＤ１９－２ｔｍ－ＣＤ２（配列番号２２、５１）、ｍ９７１－２８ｔｍ－ＣＤ２（配列番号２３、５２）、ｍ９７１－８ｔｍ－ＣＤ２（配列番号２４、５３）、ＨＡ２２－２８ｔｍ－ＣＤ２（配列番号２５、５４）、ＨＡ２２－８ｔｍ－ＣＤ２（配列番号２６、５５）、ＨＡ２２－２ｔｍ－ＣＤ２（配列番号２７、５６）、ＣＤ２０－２８ｔｍ－ＣＤ２（配列番号２８、５７）、ＣＤ２０－８ｔｍ－ＣＤ２（配列番号２９、５８）、ｍ９７１－ＢＢｚ（配列番号５９、６０）、ｍ９７１－２８ｚ（配列番号６１、６２）、ＣＤ１９－２８ｚ（配列番号６３、６４）、ＣＤ１９－ＢＢｚ（配列番号６５、６６）、ｍ９７１－ＢＢｚ－ＣＤ２（配列番号６７、６８）、ｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ＣＤ１９－ＣＤ２８ｔｍ－ＣＤ２（配列番号７１、７２）、ｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ＣＤ１９－ＣＤ８ｔｍ－ＣＤ２（配列番号７３、７４）、ｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ＣＤ１９－ＣＤ２ｔｍ－ＣＤ２（配列番号７５、７６）、ｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ＨＡ２２－ＣＤ２８ｔｍ－ＣＤ２（配列番号８１、８２）、ｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ＨＡ２２－ＣＤ８ｔｍ－ＣＤ２（配列番号８３、８４）、ｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ＨＡ２２－２ｔｍ－ＣＤ２（配列番号８５、８６）、ＣＤ１９－８ｈｔｍ－ＣＤ２－ｚ（配列番号９２、１１４）、ＣＤ１９－８ｈｔｍ－ＣＤ２－ＢＢ－ｚ（配列番号９３、１１５）、ＣＤ１９－８ｈｔｍ－ＢＢ－ＣＤ２－ｚ（配列番号９４、１１６）、ＣＤ１９－８ｈｔｍ－ＣＤ２－２８－ｚ（配列番号９５、１１７）、ＣＤ１９－２８ｈｔｍ－ＣＤ２－ｚ（配列番号９６、１１８）、ｍ９７１－８ｈｔｍ－ＣＤ２－ｚ（配列番号９７、１１９）、ｍ９７１－８ｈｔｍ－ＣＤ２－ＢＢ－ｚ（配列番号９８、１２０）、ｍ９７１－８ｈｔｍ－ＢＢ－ＣＤ２－ｚ（配列番号９９、１２１）、ｍ９７１－８ｈｔｍ－ＣＤ２－２８－ｚ（配列番号１００、１２２）、ＣＤ１９－２８ｈｔｍ－ＣＤ２（配列番号１０１、１２３）、ＣＤ１９－８ｈｔｍ－ＣＤ２（配列番号１０２、１２４）、ＣＤ１９－２ｈｔｍ－ＣＤ２（配列番号１０３、１２５）、ｍ９７１－２８ｈｔｍ－ＣＤ２（配列番号１０４、１２６）、ｍ９７１－８ｈｔｍ－ＣＤ２（配列番号１０５、１２７）、ＨＡ２２－２８ｈｔｍ－ＣＤ２（配列番号１０６、１２８）、ＨＡ２２－８ｈｔｍ－ＣＤ２（配列番号１０７、１２９）、ＨＡ２２－２ｈｔｍ－ＣＤ２（配列番号１０８、１３０）、ＣＤ２０－ＩｇＧ１ｌｏｎｇ－２８ｈｔｍ－ＣＤ２（配列番号１０９、１３１）、ＣＤ２０－ＩｇＧ１ｌｏｎｇ－８ｈｔｍ－ＣＤ２（配列番号１１０、１３２）、ＣＤ２０－ＩｇＧ１ｌｏｎｇ－２８ｈｔｍ－ＣＤ２－ｚ（配列番号１１１、１３３）、またはＣＤ２０－ＩｇＧ１ｌｏｎｇ－８ｈｔｍ－ＣＤ２－ｚ（配列番号１１２、１３４）。

Ｃ．キメラポリペプチド
本開示の１つの態様は、ＣＡＲ－Ｔ療法においてＣＡＲと共におよび／またはトランスジェニックＴＣＲと組み合わせて使用するためのキメラポリペプチドである。本開示のキメラポリペプチドは、Ｎ末端からＣ末端まで、抗原結合性ドメイン、必要に応じたスペーサードメイン、膜貫通ドメイン、および細胞質シグナル伝達ドメインを含み、ここで、細胞質シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２シグナル伝達（共刺激）ドメインを含み、ＣＤ３ζ活性化ドメインを含まない。これらのキメラポリペプチドは、トランス－ＣＤ２シグナル伝達受容体として機能し、ＣＤ３ζ活性化ドメインまたは等価物などの活性化ドメインを欠くという点でＣＡＲとは異なる。したがって、これらのキメラポリペプチドは、Ｔ細胞を直接活性化するのではなく、ＣＡＲに対する補助受容体として作用する。

抗原結合性ドメインは、上記の抗原結合性ドメインのセット、上記の標的抗原、または任意の他の適切な標的から選択することができる。適切な標的は標的細胞に見いだされる抗原であり、キメラポリペプチドは、ＣＡＲまたはＴ細胞受容体活性化の非存在下では免疫細胞活性化を誘発しないので、腫瘍特異的または腫瘍関連抗原である必要はない。しかし、腫瘍特異的または腫瘍関連抗原をキメラポリペプチド標的として使用することにより、特にＣＡＲとキメラポリペプチドが異なる標的抗原を有する場合に、操作された細胞の標的細胞に対する特異性を増大させることができる。

ＣＡＲおよびキメラポリペプチドの抗原結合性ドメイン（それぞれ第１の抗原結合性ドメインおよび第２の抗原結合性ドメイン）は、同じ抗原、異なる抗原、または同じ抗原の異なるエピトープを標的とし得る。ある実施形態では、第１の抗原結合性ドメインと第２の抗原結合性ドメインは異なる抗原を標的とする。ある実施形態では、第１の抗原結合性ドメインと第２の抗原結合性ドメインは異なる抗原を標的とする。ある実施形態では、第１の抗原結合性ドメインと第２の抗原結合性ドメインは同じ抗原の異なるエピトープを標的とする。ある実施形態では、第１の抗原結合性ドメインはＣＤ１９またはＣＤ２２に対して特異的である。ある実施形態では、第２の抗原結合性ドメインはＣＤ２２またはＣＤ１９に対して特異的である。

上記の通り、キメラポリペプチドの抗原結合性ドメインは多重特異性であり得、キメラポリペプチドおよびＣＡＲは複数の異なるまたは部分的に重複する抗原を標的とし得る。

キメラポリペプチドの膜貫通ドメインは、これだけに限定することなく、ＣＤ３ゼータ鎖（ＣＤ３ζ）、ＣＤ２、ＣＤ２８、ＯＸ４０、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＦｃＥＲＩγ、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＩＬＲＢ（ＣＤ１２２）、ＩＬ－２ＲＧ（ＣＤ１３２）、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、またはＣＤ４０の膜貫通ドメインの全部または一部を含めた上記の膜貫通ドメインのいずれかを含み得る。時には、２つの異なる受容体が同一の膜貫通ドメインを有し、その結果、活性が干渉されるまたは低下することが観察される。したがって、ＣＡＲおよびキメラポリペプチドに対して異なる膜貫通ドメインを選択することができる。ある実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ３ζ、ＣＤ２、ＣＤ８、またはＣＤ２８由来の膜貫通ドメインである。ある実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２またはＣＤ２８由来の膜貫通ドメインである。ある実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８由来の膜貫通ドメインである。一部の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインとキメラポリペプチドの膜貫通ドメインは異なる。

キメラポリペプチドは、上記の通り、スペーサードメインおよび／またはヒンジドメインをさらに含み得る。ある実施形態では、キメラポリペプチドは、ＣＤ８αヒンジドメインまたはＣＤ２８ヒンジドメインまたはＣＤ２ヒンジドメインを含む。ある実施形態では、キメラポリペプチドは、ＣＤ２８ヒンジドメインを含む。

キメラポリペプチドの細胞質シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ活性化ドメインを含まないが、少なくともＣＤ２シグナル伝達ドメインを含む。細胞質シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン以外の追加の共刺激シグナル伝達ドメインをさらに含み得る。ある実施形態では、キメラポリペプチドの細胞質シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２を含む。ある実施形態では、キメラポリペプチドの細胞質シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２および４－１ＢＢを含む。ある実施形態では、キメラポリペプチドの細胞質シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２およびＯＸ４０を含む。一部の実施形態では、共刺激ドメインは、４－１ＢＢシグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７シグナル伝達ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７８シグナル伝達ドメイン、ＣＤ４０シグナル伝達ドメイン、ＣＤ４０Ｌシグナル伝達ドメイン、ｔｏｌｌ様受容体シグナル伝達ドメイン、またはこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含む（Weinkove R. et al., Clin Transl Immunology. 2019; 8 (5): e1049）。

一部の実施形態では、抗原結合性ドメインは、配列番号１、２、３、および４からなる群より選択される配列と少なくとも約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％相同なアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗原結合性ドメインは、配列番号１、２、３、および４からなる群より選択される配列と少なくとも約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号５、６、および７からなる群より選択される配列と少なくとも約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％相同なアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、配列番号５、６、および７からなる群より選択される配列と少なくとも約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態では、ＣＤ２シグナル伝達ドメインは、配列番号８の配列と少なくとも約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％相同なアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＤ２シグナル伝達ドメインは、配列番号８の配列と少なくとも約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号１０および１１からなる群より選択される配列と少なくとも約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％相同なアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、配列番号１０および１１からなる群より選択される配列と少なくとも約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態では、活性化ドメインは、配列番号９の配列と少なくとも約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％相同なアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、活性化ドメインは、配列番号９の配列と少なくとも約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を含む。

Ｄ．Ｔ細胞受容体
本開示の１つの態様は、ＣＡＲ－Ｔ療法においてＣＡＲと共に使用するためのトランスジェニックＴ細胞受容体である。ＴＣＲは、細胞の表面上にまたは可溶性の形態で見いだすことができる。一般に、ＴＣＲは、Ｔ細胞（またはＴリンパ球）の表面上に見いだされ、そこで、一般に、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子と結合した抗原の認識を担う。

Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）は、抗原の結合に応答してＴ細胞の活性化に関与する免疫グロブリンスーパーファミリーのヘテロ二量体細胞表面タンパク質である。ＴＣＲ複合体は、ＴＣＲα／β鎖およびＣＤ３γ／δ／ε／ζサブユニットからなり得、これらは疎水性相互作用を通じて会合し得る。体細胞ＶＤＪ組換えにより別個のＴＣＲα鎖およびＴＣＲβ鎖の生成が可能になり、また、ＴＣＲαβヘテロ二量体は、一般に、ペプチド－ＭＨＣ複合体に結合することによって抗原認識を担う。ＣＤ３は、ＴＣＲにより誘発されたシグナルをその細胞質尾部にある免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を通じて伝達し得るが、一般に、抗原認識には直接関与しない。ＩＴＡＭは、チロシン含有配列（ＹＸＸＬ／Ｉ）の縦列重複であり、ＣＤ３γ／δ／ε鎖はそれぞれ１つのＩＴＡＭを含有し、一方、ＣＤ３ζ鎖は３つのＩＴＡＭを含有する。ＴＣＲ係合の結果として、タンパク質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）によってＩＴＡＭリン酸化が誘導され得、これにより、他のエフェクター分子がＴＣＲ複合体と相互作用することが可能になる。

一部の実施形態では、ＴＣＲは、αβ形態またはγδ形態のＴＣＲを含むインタクトなまたは全長ＴＣＲであり得る。一部の実施形態では、ＴＣＲは二量体ＴＣＲ（ｄＴＣＲ）である。一部の実施形態では、ＴＣＲは単鎖ＴＣＲ（ｓｃＴＣＲ）である。一部の実施形態では、ＴＣＲは、全長ＴＣＲより短いが、ＭＨＣ分子に結合した特定のペプチドと結合する、例えば、ＭＨＣ－ペプチド複合体に結合する抗原結合性部分である。一部の場合では、ＴＣＲの抗原結合性部分または断片は、全長またはインタクトなＴＣＲの構造的ドメインの一部のみを含み得るが、それでもなお、全長ＴＣＲが結合するＭＨＣ－ペプチド複合体などのペプチドエピトープに結合することができる。一部の場合では、抗原結合性部分は、特定のＭＨＣ－ペプチド複合体に結合するための結合性部位の形成に十分であるＴＣＲの可変ドメイン、例えば、ＴＣＲの可変α鎖および可変β鎖を含有する。一般に、ＴＣＲの可変鎖は、ペプチド、ＭＨＣおよび／またはＭＨＣ－ペプチド複合体の認識に関与する相補性決定領域を含有する。

一部の実施形態では、ＴＣＲは、定常ドメイン、膜貫通ドメインおよび／または短い細胞質尾部を含有し得る。一部の実施形態では、ＴＣＲの各鎖は、１つのＮ末端免疫グロブリン可変ドメイン、１つの免疫グロブリン定常ドメイン、膜貫通領域、および、Ｃ末端の短い細胞質尾部を有し得る。一部の実施形態では、ＴＣＲは、シグナルトランスダクションの媒介に関与するＣＤ３複合体のインバリアントタンパク質と会合する。

一部の実施形態では、ＴＣＲは、１つまたは複数の定常ドメインを含有する。例えば、所与のＴＣＲ鎖（例えば、α鎖またはβ鎖）の細胞外部分は、２つの免疫グロブリン様ドメイン、例えば、可変ドメイン（例えば、ＶαまたはＶβ）、および、細胞膜に隣接する定常ドメイン（例えば、ＣαまたはＣβ）を含有し得る。例えば、一部の場合では、２本の鎖によって形成されるＴＣＲの細胞外部分は、２つの、膜の近位にある定常ドメイン、および、２つの、膜の遠位にある可変ドメインを含有し、可変ドメインはそれぞれＣＤＲを含有する。ＴＣＲの定常ドメインは、システイン残基がジスルフィド結合を形成し、それにより、ＴＣＲの２本の鎖を連結する、短い接続配列を含有し得る。一部の実施形態では、ＴＣＲは、α鎖およびβ鎖のそれぞれに追加のシステイン残基を有し得、したがって、ＴＣＲは定常ドメイン内に２つのジスルフィド結合を含有する。

一部の実施形態では、ＴＣＲは二量体ＴＣＲ（ｄＴＣＲ）である。一部の実施形態では、ｄＴＣＲは、ＴＣＲα鎖可変領域配列に対応する配列がＴＣＲα鎖定常領域細胞外配列に対応する配列のＮ末端と融合した第１のポリペプチド、および、ＴＣＲβ鎖可変領域配列に対応する配列がＴＣＲβ鎖定常領域細胞外配列に対応するＮ末端配列と融合した第２のポリペプチドを含有し得、ここで、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドはジスルフィド結合によって連結している。一部の実施形態では、結合は、ネイティブ二量体ＴＣＲαβ形態で存在するネイティブ鎖間ジスルフィド結合に対応し得る。一部の実施形態では、ネイティブＴＣＲ内に鎖間ジスルフィド結合は存在しない。例えば、一部の実施形態では、ｄＴＣＲポリペプチド対の定常領域細胞外配列に１つまたは複数のシステインを組み入れることができる。一部の実施形態では、ｄＴＣＲは、ネイティブジスルフィド結合および１つまたは複数の非ネイティブジスルフィド結合の両方を有し得る。一部の実施形態では、ｄＴＣＲは、膜への係留のための膜貫通配列を含有し得る。一部の実施形態では、ｄＴＣＲは、可変αドメイン、定常αドメイン、および定常αドメインのＣ末端に付着した第１の二量体形成モチーフを含有するＴＣＲα鎖、ならびに可変βドメイン、定常βドメイン、および定常βドメインのＣ末端に付着した第１の二量体形成モチーフを含むＴＣＲβ鎖を含有し得、ここで、第１の二量体形成モチーフと第２の二量体形成モチーフは容易に相互作用して、ＴＣＲα鎖とＴＣＲβ鎖を連結する第１の二量体形成モチーフ内のアミノ酸と第２の二量体形成モチーフ内のアミノ酸の間の共有結合を形成する。

一部の実施形態では、ＴＣＲは単鎖ＴＣＲ（ｓｃＴＣＲ）である。一部の実施形態では、ｓｃＴＣＲは、ＴＣＲ鎖の会合を容易にするための非ネイティブジスルフィド鎖間結合を含有し得る。一部の実施形態では、ｓｃＴＣＲは、鎖の会合を容易にする異種ロイシンジッパーがＣ末端に融合した、非ジスルフィド連結した短縮型ＴＣＲである。一部の実施形態では、ｓｃＴＣＲは、リンカーを介して共有結合により連結したＴＣＲα可変ドメインとＴＣＲβ可変ドメインを含有する。一部の実施形態では、リンカーは、単一のポリペプチド鎖を形成すると同時に、ＴＣＲ結合特異性を保持することが可能である任意のリンカーであり得る。一部の実施形態では、ｓｃＴＣＲは、α鎖の定常ドメインの免疫グロブリン領域の残基とβ鎖の定常ドメインの免疫グロブリン領域の残基を連結する共有結合性ジスルフィド結合を含有し得る。一部の実施形態では、ネイティブＴＣＲに鎖間ジスルフィド結合は存在しない。例えば、一部の実施形態では、ｓｃＴＣＲポリペプチドの第１のセグメントおよび第２のセグメントの定常領域細胞外配列に１つまたは複数のシステインを組み入れることができる。一部の実施形態では、ｓｃＴＣＲは、ネイティブジスルフィド結合および非ネイティブジスルフィド結合の両方を含有し得る。

一部の実施形態では、ＴＣＲまたはその抗原結合性部分は、改変されたまたは操作されたものである。一部の実施形態では、ＴＣＲの抗原結合性ドメインは、多重特異性であり得る。一部の実施形態では、ＴＣＲまたはその抗原結合性部分は、結合特徴などの１つまたは複数の特性が変更された、組換えによって産生された天然のタンパク質またはその変異形態であり得る。一部の実施形態では、定向進化法を使用して、変更された特性を有する、例えば、特定のＭＨＣ－ペプチド複合体に対してより高い親和性を有する、ＴＣＲを生成する。一部の実施形態では、定向進化は、これだけに限定されないが、酵母ディスプレイを含めたディスプレイ法によって実現される。一部の実施形態では、ディスプレイ手法は、既知の親または参照ＴＣＲを操作することまたは改変することを伴い得る。例えば、一部の場合では、ＣＤＲの１つまたは複数の残基が変異した変異誘発されたＴＣＲを作製するための鋳型として野生型ＴＣＲを使用することができ、所望の変更された特性、例えば、所望の標的抗原に対するより高い親和性などを有する変異体を選択することができる。一部の実施形態では、ＴＣＲまたは抗原結合性部分の生成における使用に適したペプチドを、目的の標的ポリペプチド内のＨＬＡ制限モチーフの存在に基づいて決定することができる。一部の実施形態では、当業者に公知のコンピュータ予測モデルを使用してペプチドを同定する。

一部の実施形態では、ＴＣＲを、実質的に全長のコード配列が容易に入手可能である既知のＴＣＲ配列、例えばＶα鎖および／またはＶβ鎖の配列などから生成することができる。Ｖ鎖配列を含む全長ＴＣＲ配列を細胞供給源から得るための方法は周知である。一部の実施形態では、ＴＣＲをコードする核酸を、種々の供給源から、例えば、所与の細胞（複数可）内のもしくはそれから単離されたＴＣＲコード核酸のポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）増幅、または公的に入手可能なＴＣＲＤＮＡ配列の合成によって、得ることができる。

一部の実施形態では、ＴＣＲを、例えば、Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞）、Ｔ細胞ハイブリドーマまたは他の公的に入手可能な供給源からなど、生物学的供給源から得る。一部の実施形態では、Ｔ細胞を、例えばヒト対象からｉｎｖｉｖｏで単離された細胞から得ることができる。一部の実施形態では、ＴＣＲは、胸腺で選択されたＴＣＲである。一部の実施形態では、ＴＣＲは、ネオエピトープ制限ＴＣＲである。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、培養されたＴ細胞ハイブリドーマまたはクローンであり得る。一部の実施形態では、ＴＣＲまたはその抗原結合性部分は、ＴＣＲの配列に関する知見から合成的に生成されたものであり得る。

一部の実施形態では、ＴＣＲを、標的ポリペプチド抗原、またはその標的Ｔ細胞エピトープに対する候補ＴＣＲのライブラリーのスクリーニングによって同定または選択されたＴＣＲから生成する。ＴＣＲライブラリーは、ＰＢＭＣ、脾臓または他のリンパ器官に存在する細胞を含めた、対象から単離されたＴ細胞からＶαおよびＶβのレパートリーを増幅することによって生成することができる。一部の場合では、Ｔ細胞を腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）から増幅することができる。一部の実施形態では、ＴＣＲライブラリーを、ＣＤ４＋細胞またはＣＤ８＋細胞から生成することができる。一部の実施形態では、ＴＣＲを健康な対象の正常なＴ細胞供給源、すなわち、正常なＴＣＲライブラリーから増幅することができる。一部の実施形態では、ＴＣＲを病的対象のＴ細胞供給源、すなわち、病的ＴＣＲライブラリーから増幅することができる。一部の実施形態では、縮重プライマーを使用して、ヒトから得たＴ細胞などの試料において、例えばＲＴ－ＰＣＲによってＶαおよびＶαの遺伝子レパートリーを増幅する。一部の実施形態では、ｓｃＴｖライブラリーをナイーブＶαおよびＶβライブラリーからアセンブルすることができ、その場合、増幅産物が、リンカーによって隔てられるようにクローニングまたはアセンブルされる。対象および細胞の供給源に応じて、ライブラリーは、ＨＬＡ対立遺伝子特異的であり得る。あるいは、一部の実施形態では、ＴＣＲライブラリーを、親または足場ＴＣＲ分子の変異誘発または多様化によって生成することができる。一部の態様では、ＴＣＲを、例えば、α鎖またはβ鎖の変異誘発によるものなどの定向進化に供する。一部の実施形態では、ＴＣＲのＣＤＲ内の特定の残基を変更することができる。一部の実施形態では、選択されたＴＣＲを親和性成熟によって改変することができる。一部の実施形態では、抗原特異的Ｔ細胞を、例えばスクリーニングして、ペプチドに対するＣＴＬ活性を評価することによって選択し得る。一部の態様では、例えば抗原特異的Ｔ細胞上に存在するＴＣＲを、例えば、結合活性、例えば抗原に対する特定の親和性または結合力によって選択することができる。

一部の実施形態では、本開示のＴＣＲは、腫瘍特異的抗原または腫瘍関連抗原に結合する。一部の実施形態では、腫瘍特異的抗原または腫瘍関連抗原は、神経膠腫関連抗原、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ベータ－ヒト絨毛性ゴナドトロピン、アルファ－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、レクチン反応性ＡＦＰ、サイログロブリン、ＲＡＧＥ－１、ＭＮ－ＣＡＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２（ＡＳ）、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔＨＳＰ７０－２、Ｍ－ＣＳＦ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＰＡＰ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ｐ５３、プロステイン、ＰＳＭＡ、ＨＥＲ２、サバイビンおよびテロメラーゼ、前立腺癌腫瘍抗原－１（ＰＣＴＡ－１）、ＭＡＧＥ、ＥＬＦ２Ｍ、好中球エラスターゼ、エフリンＢ２、ＣＤ２２、インスリン増殖因子（ＩＧＦ）－Ｉ、ＩＧＦ－ＩＩ、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｂ７－Ｈ３、ＧＰＣ２、Ｌ１ＣＡＭ、ＥＧＦＲ、メソテリン、ＭＡＲＴ－１、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ１７）、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ｐ１５、ｐ５３、Ｒａｓ、ＨＥＲ－２、ＢＣＲ－ＡＢＬ、Ｅ２Ａ－ＰＲＬ、Ｈ４－ＲＥＴ、ＩＧＨ－ＩＧＫ、ＭＹＬ－ＲＡＲ、ＥＢＶＡ、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原Ｅ６およびＥ７、ＴＳＰ－１８０、ＭＡＧＥ－４、ＭＡＧＥ－５、ＭＡＧＥ－６、ＲＡＧＥ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ｐ１８５ｅｒｂＢ２、ｐ１８０ｅｒｂＢ－３、ｃ－ｍｅｔ、ｎｍ－２３Ｈ１、ＰＳＡ、ＴＡＧ－７２、ＣＡ１９－９、ＣＡ７２－４、ＣＡＭ１７．１、ＮｕＭａ、Ｋ－ｒａｓ、β－カテニン、ＣＤＫ４、Ｍｕｍ－１、ｐ１５、ｐ１６、４３－９Ｆ、５Ｔ４、７９１Ｔｇｐ７２、α－フェトプロテイン、β－ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＡ１２５、ＢＣＡＡ、ＣＡ１９５、ＣＡ２４２、ＣＡ－５０、ＣＡＭ４３、ＣＤ６８／Ｐ１、ＣＯ－０２９、ＦＧＦ－５、Ｇ２５０、Ｇａ７３３／ＥｐＣＡＭ、ＨＴｇｐ－１７５、Ｍ３４４、ＭＡ－５０、ＭＧ７－Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ／７０Ｋ、ＮＹ－ＣＯ－１、ＲＣＡＳ１、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ－９０、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ、ＴＰＳＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＲＯＲ１、ならびにＧＤ２からなる群より選択される。

一部の実施形態では、本開示のＴＣＲでは、ＣＤ２細胞内ドメインとＣＤ３ｚのＣ末端を融合することができる。一部の実施形態では、ＣＤ２細胞内ドメインをＣＤ３－イプシロンのＣ末端と融合することができる、またはＣＤ２の細胞内部分でＣＤ３－イプシロンの細胞内部分の全部または一部を置き換えることができる、ＣＤ３－イプシロンを作製することができる。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、抗ＣＤ３ｓｃＦｖおよび抗ＣＤ２ｓｃＦｖを含有する、膜結合バージョンの二重特異性抗体を分泌または有し得、それにより、Ｔ細胞のネイティブＣＤ２がＴＣＲの近傍に位置し、したがって、ＴＣＲが係合／活性化すると細胞のネイティブＣＤ２も活性化される。

一部の実施形態では、トランスジェニックＴＣＲを発現するＴ細胞、またはｅｘｖｉｖｏで成長させたバルク腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）におけるＣＤ２シグナル伝達をいくつかの方法によって増強することができる。次いで、ＴＩＬを患者に戻すことができる。例えば、Ｔ細胞に、ＣＤ２シグナル伝達を増強する補助受容体を形質導入することができる（トランスジェニックＴＣＲを発現させることに加えて）。細胞外リガンド結合性ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＣＤ２シグナル伝達ドメインを含む補助受容体をウイルスベクターまたは他のベクターで転写させることができ、標的腫瘍細胞が少ないＣＤ５８を発現する、ＣＤ５８を発現しない、または変異ＣＤ５８を発現する場合であってもＣＤ２シグナル伝達をトランスでもたらすことができる。補助受容体の細胞外部分は、腫瘍細胞によって発現される抗原を認識するｓｃＦｖまたは目的の標的腫瘍細胞上に発現される共通の受容体のリガンドを含み得る。ＣＡＲＴ細胞、トランスジェニックＴＣＲＴ細胞、またはバルクＴＩＬにおけるＣＤ２シグナル伝達を増強するための別のやり方は、Ｔ細胞に対して、１つまたは複数の抗ＣＤ２ｓｃＦｖ、抗体、Ｆａｂ、ＤＡＲＰＩＮ、リガンド、または他の結合物質／抗原結合性ドメインを使用することによって細胞のネイティブＣＤ２と架橋結合することが可能な分泌型分子を構成的に発現するように形質導入を行うことを含み得る。あるいは、分泌型分子を活性化スイッチ（activation switch）の下で発現させることができる。分泌型分子は、膜結合型であり得、リンカーによって接続された２つのｓｃＦｖからなり得る：一方は、Ｔ細胞上のＣＤ２に結合するｓｃＦｖ（ネイティブＣＤ２シグナル伝達を活性化する）であり、他方は、腫瘍細胞上に発現されるタンパク質または標的を認識するｓｃＦｖまたはリガンドであり、したがって、Ｔ細胞が腫瘍細胞と遭遇するとＣＤ２が架橋結合し、活性化される。

Ｅ．核酸
本開示の１つの態様は、本開示のＣＤ２ＣＡＲ、トランスジェニックＴＣＲ、および／またはキメラポリペプチドをコードする核酸である。

「核酸」および「ポリヌクレオチド」という用語は、本明細書では互換的に使用され、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、および／または合成ＤＮＡを含む核酸分子を含むＲＮＡ分子およびＤＮＡ分子の両方、ならびに核酸類似体を含有するＤＮＡ分子またはＲＮＡ分子を指す。核酸は、ＤＮＡまたはＲＮＡに天然には存在しない１つまたは複数の塩基および／または連結、例えば、ホスホルアミダイト連結、２’修飾リボースまたはデオキシリボース、モルホリノホスホルアミダイト、ペプチド核酸連結、ロックド核酸連結、キサンチン、７－メチルグアニン、イノシン、ジヒドロウラシル、５－メチルシトシン、５－ヒドロキシメチルシトシン、およびその他を含み得る。例えば、参照により本明細書に組み込まれるC. I. E Smith et al., Ann Rev Pharmacol Toxicol (2019) 59: 605-30を参照されたい。核酸は、二本鎖または一本鎖（例えば、センス鎖またはアンチセンス鎖）であり得る。核酸は、通常とは異なるまたは修飾されたヌクレオチドを含有し得る。「ポリヌクレオチド配列」および「核酸配列」という用語は、本明細書で使用される場合、互換的に、核酸分子の配列を指す。本明細書では米国特許規則第１．８２２条に記載されているヌクレオチド塩基に対する命名法が使用される。

本開示の核酸は、ＣＤ２ＣＡＲ、トランスジェニックＴＣＲ、および／またはキメラポリペプチドをコードし得る。一部の実施形態では、本開示の核酸は、キメラポリペプチドとＣＡＲ（ＣＤ２ＣＡＲまたは先行技術のＣＡＲであり得る）の両方をコードし得る。一部の実施形態では、本開示の核酸は、キメラポリペプチドおよびトランスジェニックＴＣＲの両方をコードし得る。一部の実施形態では、本開示の核酸は、ＣＡＲおよびトランスジェニックＴＣＲの両方をコードし得る。実施例９～１１に示されている通り、キメラポリペプチド、ＣＡＲ、および／またはトランスジェニックＴＣＲをいずれもコードする核酸は、バイシストロニックまたはトリシストロニック核酸であり得、その場合、２つまたは３つのコード配列がＩＲＥＳ（配列内リボソーム進入部位）または２Ａなどの自己切断性ポリペプチド配列をコードする配列によって隔てられており、これにより、各タンパク質の発現が別々にもたらされるか、または発現時に２つの別々のタンパク質への即時切断がもたらされる。２Ａ配列の例としては、Ｔ２Ａ、Ｐ２Ａ、Ｅ２Ａ、およびＦ２Ａが挙げられる。ある実施形態では、核酸はＣＤ２ＣＡＲをコードする。一部の実施形態では、実施例１２～１５に示されている通り、ＣＡＲおよび／またはＴＣＲ、およびキメラポリペプチドの別々の構築物を同時形質導入する。ある実施形態では、核酸は、キメラポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、核酸は、トランスジェニックＴＣＲをコードする。ある実施形態では、核酸は、ＣＡＲおよびキメラポリペプチドをコードするバイシストロニック核酸である。ある実施形態では、ＣＡＲおよびキメラポリペプチドをコードする配列は、２Ａ配列によって隔てられている。ある実施形態では、２Ａ配列は、Ｐ２Ａ配列である。ある実施形態では、核酸は、ＣＡＲおよびキメラポリペプチドをコードする。ある実施形態では、核酸は、ＣＤ２ＣＡＲおよびキメラポリペプチドをコードする。

一部の実施形態では、組換え核酸は、例えば、目的のタンパク質または調節配列（例えば、プロモーター配列）をコードする構造遺伝子などの異種核酸配列と作動可能に連結している。一部の実施形態では、組換え核酸は、発現カセットまたはベクターとさらに定義される。一部の実施形態では、ベクターは、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、またはレトロウイルスベクターである。

本明細書に開示される一部の実施形態は、本明細書に開示される組換え核酸分子を含むベクターまたは発現カセットに関する。発現カセットは、コード配列、ならびにレシピエント細胞、ｉｎｖｉｖｏおよび／またはｅｘｖｉｖｏにおけるコード配列の適当な転写および／または翻訳を方向付けるための十分な調節情報を含有する遺伝子材料の構築物である。所望の宿主細胞を標的とするために発現カセットをベクターに挿入することができる。したがって、発現カセットという用語は「発現構築物」という用語と互換的に使用され得る。

本明細書に開示されるＣＡＲおよびキメラポリペプチドのいずれかをコードする核酸分子の１つまたは複数を含有するベクター、プラスミドまたはウイルスも本明細書に提示される。上記の核酸分子は、例えば、ベクターを用いて形質導入された細胞におけるそれらの発現を方向付けることが可能なベクターに含有させることができる。真核細胞における使用に適したベクターは、当技術分野で公知であり、市販されている、あるいは、当業者によって容易に調製される。追加のベクターを、例えば、Ausubel, F. M., et al., Current Protocols in Molecular Biology, (Current Protocol, 1994)およびSambrook et al., "Molecular Cloning: A Laboratory Manual," 2nd Ed. (1989)においても見いだすことができる。

したがって、一部の実施形態では、本開示のＣＡＲ、ＴＣＲ、および／またはキメラポリペプチドを、ベクター、一般に、発現ベクターから発現させることができる。ベクターは、宿主細胞における自律複製に有用なものであるか、または、宿主細胞に導入されると宿主細胞のゲノムに組み込まれ得、それにより、宿主ゲノムと一緒に複製されるものである（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）。発現ベクターは、それらが作動可能に連結したコード配列の発現を方向付けることが可能である。一般に、組換えＤＮＡ技法において有用な発現ベクターは、多くの場合、プラスミド（ベクター）の形態である。しかし、他の形態の発現ベクター、例えば、ウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ随伴ウイルス）なども包含される。

ＤＮＡベクターは、従来の形質転換またはトランスフェクション技法によって真核細胞に導入することができる。宿主細胞を形質転換またはトランスフェクトするための適切な方法は、Sambrook et al. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Plainview, N.Y.)および他の標準の分子生物学実験マニュアルに見いだすことができる。

使用に適したベクターとして、哺乳動物細胞における使用のためのｐＭＳＸＮＤ発現ベクターが挙げられる。一部の実施形態では、そのようなベクターにおいて、主題のＣＡＲおよび／またはＴＣＲをコードする核酸挿入物を、例えば、発現を実現させようとしている細胞型に基づいて選択されるプロモーターと作動可能に連結することができる。本開示において使用することができるウイルスベクターとしては、例えば、レトロウイルスの、アデノウイルスの、およびアデノ随伴ベクター、ヘルペスウイルス、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）、およびウシパピローマウイルスベクターが挙げられる（例えば、Gluzman (Ed.), Eukaryotic Viral Vectors, CSH Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.を参照されたい）。

一部の実施形態では、発現ベクターは、ウイルスベクターであり得る。「ウイルスベクター」という用語は、一般には、細胞のゲノム内への核酸分子の移入、もしくは組込みを容易にするウイルス由来の核酸エレメントを含む核酸分子、または、核酸移入を媒介するウイルス粒子のいずれかを指すために広く使用されている。ウイルス粒子は、一般には、核酸に加えて、ウイルス成分を含み、時には宿主細胞成分も含む。本明細書で使用されるレトロウイルスベクターは、レトロウイルスに主に由来する構造的および機能的遺伝子エレメントまたはその一部を含有する。レトロウイルスレンチウイルスベクターは、レンチウイルス（レトロウイルスのサブタイプ）に主に由来するＬＴＲを含めた構造的および機能的遺伝子エレメントまたはその一部を含有する。

本開示において使用することができるウイルスベクターとしては、例えば、レトロウイルスベクター（レンチウイルスベクターを含む）、アデノウイルスベクター、およびアデノ随伴ウイルスベクター、ヘルペスウイルス、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）、およびウシパピローマウイルスベクターが挙げられる（例えば、Gluzman (Ed.), Eukaryotic Viral Vectors, CSH Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.を参照されたい）。

一部の実施形態では、核酸分子を当技術分野で公知のウイルスまたは非ウイルス送達ビヒクルによって送達する。例えば、核酸分子を宿主ゲノム内に安定に組み込むことができる、または、エピソーム複製させることができる、もしくは安定なもしくは一過性発現のために組換え宿主細胞内にミニサークル発現ベクターとして存在させることができる。したがって、本明細書に開示される一部の実施形態では、核酸分子を組換え宿主細胞内でエピソーム単位として維持させ、複製させる。一部の実施形態では、核酸分子を組換え細胞のゲノム内に安定に組み込む。安定な組込みは、古典的なランダムゲノム組換え技法を使用して、またはより精密なゲノム編集技法を用いて、例えば、ガイドＲＮＡにより方向付けられるＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９、ＤＮＡによりガイドされるエンドヌクレアーゼゲノム編集ＮｇＡｇｏ（Natronobacterium gregoryiアルゴノート（Argonaute））、もしくはＴＡＬＥＮゲノム編集（転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ）を使用して実現することもできる。一部の実施形態では、核酸分子を安定なまたは一過性発現のために組換え宿主細胞内にミニサークル発現ベクターとして存在させる。

核酸分子をウイルスカプシドまたは脂質ナノ粒子に封入することができる。あるいは、エンドヌクレアーゼポリペプチド（複数可）を当技術分野で公知のウイルスまたは非ウイルス送達ビヒクル、例えば、電気穿孔または脂質ナノ粒子などによって送達することができる。例えば、細胞への核酸の導入は、ウイルスによる形質導入法を使用して実現することができる。非限定的な例では、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）は、ウイルスによる形質導入によって核酸を標的細胞に送達するために操作することができる、エンベロープを有さないウイルスである。いくつかのＡＡＶ血清型が記載されており、公知の血清型は全て、多数の多様な組織型由来の細胞に感染し得る。ＡＡＶは、広範囲の種および組織へのｉｎｖｉｖｏにおける形質導入が可能であり、毒性のエビデンスは認められておらず、また、ＡＡＶにより生じる自然免疫および適応免疫応答は比較的軽度である。

レンチウイルス系もウイルスによる形質導入を介した核酸送達および遺伝子治療に有用である。レンチウイルスベクターは、以下を含めたいくつかの遺伝子送達ビヒクルとして魅力的な特性をもたらすものである：（ｉ）宿主細胞のゲノム内への安定なベクター組込みによる持続的な遺伝子送達；（ｉｉ）分裂細胞および非分裂細胞のどちらにも感染できること；（ｉｉｉ）重要な遺伝子治療および細胞治療の標的細胞型を含む広範な組織向性；（ｉｖ）ベクター形質導入後にウイルスタンパク質が発現されないこと；（ｖ）ポリシストロニックまたはイントロン含有配列などの複雑な遺伝子エレメントを送達することができること；（ｖｉ）潜在的により安全な組込み部位プロファイル（例えば、腫瘍形成の潜在性がわずかであるか全くない部位を組込みの標的とすることによって）；および（ｖｉｉ）ベクター操作および作製のための比較的容易な系。

Ｆ．操作された細胞
ＣＤ２ＣＡＲ、トランスジェニックＴＣＲおよび／またはキメラポリペプチドをコードする核酸を含有し、それを発現する、操作された細胞もまた本開示の１つの態様である。本開示の操作された細胞は、形質導入された細胞、すなわち、核酸分子、例えば、ＣＡＲおよび／またはトランスジェニックＴＣＲをコードする核酸分子が組換えＤＮＡ技法によって導入された細胞である。そのような細胞の後代も本開示の範囲内に入るとみなされる。本開示の操作された細胞は、がんなどの過剰増殖性疾患および障害の処置を補助するために有用である。

本開示の操作された細胞は、本開示の特色を欠くＣＡＲ－Ｔ細胞と比較して、機能特性の改善を示し得る。例えば、ＣＤ２シグナル伝達ドメイン、トランスジェニックＴＣＲ、および／またはキメラポリペプチドを含むＣＡＲを有する本開示の操作された細胞は、ＣＤ５８の発現をダウンレギュレートするかもしくはＣＤ５８を実質的に発現しない標的細胞に対する有効性の改善を示し得る；選択された抗原をダウンレギュレートするかもしくは変異形態の選択された抗原を発現する標的細胞に対する有効性の改善を示し得る；かつ／または標的細胞に対する選択性の改善を示す。ある実施形態では、操作された細胞は、腫瘍微小環境において腫瘍特異的抗原に応答してネイティブＣＤ２と架橋結合し得る分子（分泌されるかまたは表面に発現される）を発現し得る。ＣＤ５８の発現をダウンレギュレートするかまたはＣＤ５８を実質的に発現しない標的細胞に対する有効性の改善は、低下したレベルのＣＤ５８または非機能的な変異形態のＣＤ５８を発現する標的細胞を使用して本開示の操作された細胞を従来のＣＡＲ－Ｔ細胞と比較する、実験室での実験によって決定することができ、ここで、有効性の改善は、標的細胞を死滅させるまたは阻害する能力が優れていることの任意の実証であり得る。同様の実験により、選択された標的抗原の発現がダウンレギュレートされている標的細胞に対する有効性の改善を決定することができる。選択性の改善は、ｉｎｖｉｖｏにおいてまたは適切なｉｎｖｉｔｒｏモデルにおいてオンターゲットオフ腫瘍（ｏｎ－ｔａｒｇｅｔｏｆｆ－ｔｕｍｏｒ）活性の低下を測定することによって実証することができる。

一部の実施形態では、宿主細胞に対して、例えば、例えばウイルスベクターもしくは宿主細胞のゲノムの一部と相同な核酸配列を含む相同組換え用ベクターであり得る、または目的のポリペプチドを発現させるための発現ベクターであり得る本開示のベクター構築物を用いて、遺伝子操作（例えば、形質導入、形質転換、またはトランスフェクト）を行うことができる。宿主細胞は、形質転換されていない細胞または少なくとも１つの核酸分子を用いてすでにトランスフェクトされている細胞のいずれであってもよい。一部の実施形態では、宿主細胞は、免疫細胞、幹細胞、哺乳動物細胞、霊長類細胞、またはヒト細胞である。一部の実施形態では、宿主細胞は、自己または同種のものである。一部の実施形態では、宿主細胞は、Ｔ細胞、ＣＤ８陽性Ｔ細胞、ＣＤ４陽性Ｔ細胞、調節性Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、または腫瘍浸潤性リンパ球である。

宿主細胞に、ＣＤ２ＣＡＲおよび／もしくはトランスジェニックＴＣＲをコードする核酸、またはＣＡＲおよび／もしくはトランスジェニックＴＣＲとそれに加えてキメラポリペプチドをコードする１つもしくは複数の核酸を形質導入することができる。例えば、これだけに限定することなく、宿主細胞に、ＣＡＲおよび／またはトランスジェニックＴＣＲをコードする核酸、および追加のキメラポリペプチドをコードする核酸を形質導入することができる。ある実施形態では、宿主細胞に、ＣＡＲおよびキメラポリペプチドをコードするバイシストロニック核酸を形質導入する。ある実施形態では、宿主細胞に、ＣＡＲおよびトランスジェニックＴＣＲをコードするバイシストロニック核酸を形質導入する。ある実施形態では、宿主細胞に、ＣＡＲ、トランスジェニックＴＣＲおよび／またはキメラポリペプチドをコードするトリシストロニック核酸を形質導入する。一部の実施形態では、宿主細胞に、例えば、これだけに限定されないが、抗体、その抗体断片、またはＣＤ２を刺激することが可能なタンパク質治療薬などの１つまたは複数の追加の治療剤をコードする追加の核酸をさらに形質導入する。一部の実施形態では、ワクチン、腫瘍溶解性ウイルス、チェックポイント阻害剤、Ｔ細胞アゴニスト抗体、化学療法、および／または二重特異性抗体をＣＡＲＴ細胞または他の養子移入されるＴ細胞と組み合わせることができる。

一部の実施形態では、組換え細胞は、動物細胞である。一部の実施形態では、動物細胞は、哺乳動物細胞である。一部の実施形態では、動物細胞は、マウス細胞である。一部の実施形態では、動物細胞は、ヒト細胞である。一部の実施形態では、組換え細胞は、免疫系細胞、例えば、リンパ球（例えば、これだけに限定することなく、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞もしくはＮＫ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞もしくはＮＫＴ細胞、Ｂ細胞、形質細胞、腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ））、単球もしくはマクロファージ、または樹状細胞である。一部の実施形態では、免疫系細胞は、Ｂ細胞、Ｔ細胞、単球、樹状細胞、および上皮細胞からなる群より選択される。一部の実施形態では、免疫系細胞は、Ｔリンパ球である。免疫細胞はまた、前駆細胞、すなわち、免疫細胞に分化することが可能な細胞であってもよい。

多種多様な上記の宿主細胞および種を形質転換するための技法は、当技術分野で公知であり、技術および科学文献に記載されている。一部の実施形態では、形質導入手順、電気穿孔手順、または微粒子銃手順によって核酸分子を宿主細胞に導入する。したがって、本明細書に開示される少なくとも１つの組換え細胞を含む細胞培養物も本出願の範囲内に入る。細胞培養物を生成し、維持するための適切な方法およびシステムは当技術分野で公知である。本開示の１つの態様は、細胞に、本開示のＣＤ２ＣＡＲおよび／またはキメラポリペプチドをコードする核酸を、その核酸が発現されるような様式で形質導入することにより、操作された細胞を作出するための方法である。

関連する態様では、本開示の一部の実施形態は、本明細書に開示される少なくとも１つの組換え細胞を含む細胞培養物、および培養培地に関する。一般に、培養培地は、本明細書に記載の細胞培養のための適切な培養培地のいずれか１つであり得る。一部の実施形態では、組換え細胞は、本明細書に記載のＣＡＲおよび／またはキメラポリペプチドを発現する。

Ｇ．抗体
本開示の１つの態様は、ＣＡＲ－Ｔ療法においてＣＡＲおよび／またはトランスジェニックＴＣＲと共に使用するための抗体またはその抗原結合性断片である。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、多重特異性である。一部の実施形態では、多重特異性抗体は、二重特異性である。ある実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、二重特異性（例えば、腫瘍特異的抗原または腫瘍関連抗原およびＣＤ２）である。一部の実施形態では、多重特異性抗体は、三重特異性である。ある実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、三重特異性（例えば、腫瘍特異的抗原または腫瘍関連抗原、ＣＤ２、およびＣＤ３）である。一部の実施形態では、腫瘍特異的抗原または腫瘍関連抗原は、神経膠腫関連抗原、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ベータ－ヒト絨毛性ゴナドトロピン、アルファ－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、レクチン反応性ＡＦＰ、サイログロブリン、ＲＡＧＥ－１、ＭＮ－ＣＡＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２（ＡＳ）、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔＨＳＰ７０－２、Ｍ－ＣＳＦ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＰＡＰ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ｐ５３、プロステイン、ＰＳＭＡ、ＨＥＲ２、サバイビンおよびテロメラーゼ、前立腺癌腫瘍抗原－１（ＰＣＴＡ－１）、ＭＡＧＥ、ＥＬＦ２Ｍ、好中球エラスターゼ、エフリンＢ２、ＣＤ２２、インスリン増殖因子（ＩＧＦ）－Ｉ、ＩＧＦ－ＩＩ、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｂ７－Ｈ３、ＧＰＣ２、Ｌ１ＣＡＭ、ＥＧＦＲ、メソテリン、ＭＡＲＴ－１、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ１７）、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ｐ１５、ｐ５３、Ｒａｓ、ＨＥＲ－２、ＢＣＲ－ＡＢＬ、Ｅ２Ａ－ＰＲＬ、Ｈ４－ＲＥＴ、ＩＧＨ－ＩＧＫ、ＭＹＬ－ＲＡＲ、ＥＢＶＡ、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原Ｅ６およびＥ７、ＴＳＰ－１８０、ＭＡＧＥ－４、ＭＡＧＥ－５、ＭＡＧＥ－６、ＲＡＧＥ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ｐ１８５ｅｒｂＢ２、ｐ１８０ｅｒｂＢ－３、ｃ－ｍｅｔ、ｎｍ－２３Ｈ１、ＰＳＡ、ＴＡＧ－７２、ＣＡ１９－９、ＣＡ７２－４、ＣＡＭ１７．１、ＮｕＭａ、Ｋ－ｒａｓ、β－カテニン、ＣＤＫ４、Ｍｕｍ－１、ｐ１５、ｐ１６、４３－９Ｆ、５Ｔ４、７９１Ｔｇｐ７２、α－フェトプロテイン、β－ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＡ１２５、ＢＣＡＡ、ＣＡ１９５、ＣＡ２４２、ＣＡ－５０、ＣＡＭ４３、ＣＤ６８／Ｐ１、ＣＯ－０２９、ＦＧＦ－５、Ｇ２５０、Ｇａ７３３／ＥｐＣＡＭ、ＨＴｇｐ－１７５、Ｍ３４４、ＭＡ－５０、ＭＧ７－Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ／７０Ｋ、ＮＹ－ＣＯ－１、ＲＣＡＳ１、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ－９０、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ、ＴＰＳＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＲＯＲ１、およびＧＤ２からなる群より選択される。

ネイティブ抗体およびネイティブ免疫グロブリン（Ｉｇ）は、２本の同一の軽鎖および２本の同一の重鎖で構成される約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質であり得る。抗体は、四量体ではない可能性があるラクダ科動物（camelid）抗体をさらに指す。各軽鎖は、一般には重鎖と１つの共有結合性ジスルフィド結合によって連結され得るが、一方でジスルフィド連結の数は異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖の間で変動し得る。各重鎖および軽鎖は、規則的に間隔が空いた鎖内ジスルフィド架橋を有し得る。各重鎖は、一方の末端に可変ドメイン（「Ｖ_Ｈ」）、続いて多数の定常ドメイン（「Ｃ_Ｈ」）を有し得る。各軽鎖は、一方の末端に可変ドメイン（「Ｖ_Ｌ」）、および他方の末端に定常ドメイン（「Ｃ_Ｌ」）を有し得る；軽鎖の定常ドメインは、重鎖の第１の定常ドメインと整列され得、軽鎖可変ドメインは、重鎖の可変ドメインと整列され得る。特定のアミノ酸残基が軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインの境界面を形成し得る。

一部の場合では、抗体またはその抗原結合性断片は、単離された抗体もしくはその抗原結合性断片、精製された抗体もしくはその抗原結合性断片、組換え抗体もしくはその抗原結合性断片、改変された抗体もしくはその抗原結合性断片、または合成抗体もしくはその抗原結合性断片を含む。本明細書の抗体および抗原結合性断片は、部分的にまたは完全に合成的に作製することができる。抗体または抗原結合性断片は、抗原結合性ドメインであり得るまたは抗原結合性ドメインと相同であり得る結合性ドメインを有する、ポリペプチドまたはタンパク質であり得る。一部の場合では、抗体またはその抗原結合性断片を適当なｉｎｖｉｖｏ動物モデルにおいて産生させ、次いで、単離および／または精製することができる。

本開示において有用な抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、二重特異性抗体、多重特異性抗体、ヘテロコンジュゲート抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、脱免疫化抗体、それらの変異体、それらの融合物、それらの免疫コンジュゲート、それらの抗原結合性断片、ならびに／または、抗体のグリコシル化バリアント、抗体のアミノ酸配列バリアント、および共有結合により修飾された抗体を含めた、必要な特異性の抗原認識部位を含む任意の他の修飾された構成の免疫グロブリン分子を包含し得る。

本明細書の抗体はいずれも多重特異性であり得る。ある実施形態では、多重特異性抗体は、三重特異性（例えば、抗腫瘍抗原、ＣＤ２、およびＣＤ３）であり得る。別の実施形態では、多重特異性抗体は、二重特異性（例えば、抗腫瘍抗原およびＣＤ２）であり得る。二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる抗原に対する結合特異性を有し、本明細書に開示される抗体を使用して調製することができる抗体であり得る。二重特異性抗体を作出するための典型的な方法は記載されている（例えば、Suresh et al., 1986, Methods in Enzymology 121: 210を参照されたい）。二重特異性抗体の組換えによる産生は、２本の重鎖が異なる特異性を有する、２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖対の同時発現に基づき得る（Millstein and Cuello, 1983, Nature, 305, 537-539）。二重特異性抗体は、一方の腕の第１の結合特異性を有するハイブリッド免疫グロブリン重鎖および他方の腕のハイブリッド免疫グロブリン重鎖－軽鎖対（第２の結合特異性をもたらす）で構成され得る。二重特異性分子の片方だけに免疫グロブリン軽鎖を有するこの非対称的な構造により、所望の二重特異性化合物の望ましくない免疫グロブリン鎖の組合せからの分離が容易になり得る。

本明細書の抗体のいずれかの機能性断片も意図されている。「抗体の抗原結合性部分」、「抗原結合性断片」、「抗原結合性ドメイン」、「抗体断片」または「抗体の機能性断片」という用語は、抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つまたは複数の断片を指し得る。代表的な抗原結合性断片としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、可変重鎖ドメイン、可変軽鎖ドメイン、可変ＮＡＲドメイン、二重特異性ｓｃＦｖ、二重特異性Ｆａｂ_２、三重特異性Ｆａｂ_３、ＡＶＩＭＥＲ（登録商標）、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、マキシボディ（ｍａｘｉｂｏｄｙ）、ラクダ科動物抗体、ＶＨＨ、ミニボディ、イントラボディ（intrabody）、抗体部分（例えば、ドメイン抗体）を含む融合タンパク質、および単鎖結合ポリペプチドが挙げられる。

「Ｆ（ａｂ’）_２」および「Ｆａｂ’」部分は、Ｉｇをペプシンおよびパパインなどのプロテアーゼで処理することによって作製することができるものであり、免疫グロブリンを２本の重鎖のそれぞれのヒンジ領域の間に存在するジスルフィド結合付近で消化することによって生成される抗体断片が含まれる。例えば、パパインにより、ＩｇＧを２本の重鎖のそれぞれのヒンジ領域間に存在するジスルフィド結合の上流で切断して、Ｖ_ＬおよびＣ_Ｌ（軽鎖定常領域）で構成される軽鎖とＶ_Ｈおよび重鎖の定常領域内のＣ_Ｈγ１（γ１）領域）で構成される重鎖断片がそれらのＣ末端領域でジスルフィド結合によって接続した、２つの相同な抗体断片を生成することができる。これらの２つの相同な抗体断片それぞれをＦａｂ’と称することができる。ペプシンによりＩｇＧを２本の重鎖のそれぞれのヒンジ領域間に存在するジスルフィド結合の下流で切断して、２つの上記のＦａｂ’がヒンジ領域で接続した断片よりもわずかに大きい抗体断片を生成することもできる。この抗体断片をＦ（ａｂ’）_２と称することができる。

Ｆａｂ断片は、同様に軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第１の定常ドメイン（Ｃ_Ｈ１）を含み得る。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域由来の１つまたは複数のシステインを含む少数の残基が重鎖Ｃ_Ｈ１ドメインのカルボキシル末端に付加されていることにより、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離のチオール基を有するＦａｂ’であり得る。Ｆ（ａｂ’）_２抗体断片は、例えば、間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として作製することができる。抗体断片の他の化学的カップリングも使用することができる。

「Ｆｖ」は、本明細書で使用される場合、完全な抗原認識および抗原結合性部位を含有する抗体断片を指し得る。この領域は、密接な非共有結合性または共有結合性の会合での１つの重鎖可変ドメインと１つの軽鎖可変ドメインの二量体からなり得る（ジスルフィド連結したＦｖが記載されている。例えば、Reiter et al. (1996) Nature Biotechnology 14: 1239-1245を参照されたい）。この構成では、各可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用してＶ_Ｈ－Ｖ_Ｌ二量体の表面上の抗原結合性部位を規定し得る。集合的に、Ｖ_Ｈ鎖およびＶ_Ｌ鎖のそれぞれに由来し得るＣＤＲの１つまたは複数の組合せにより、抗体に抗原結合特異性が付与される。例えば、ＣＤＲＨ３とＣＤＲＬ３は、レシピエント抗体のＶ_Ｈ鎖およびＶ_Ｌ鎖またはその抗原結合性断片に移入した場合に抗体に抗原結合特異性を付与するために十分であり得、このＣＤＲの組合せを、結合、特異性、親和性などについて、例えば、本明細書に記載の技法を使用して試験することができる。一部の場合では、単一の可変ドメイン（または抗原に対して特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）であっても、抗原を認識し、それに結合する能力を有し得るが、第２の可変ドメインと組み合わせた場合よりも特異性または親和性が低い可能性がある。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン（Ｖ_ＬおよびＶ_Ｈ）は別々の遺伝子によってコードされ得るが、これらを、組換え方法を使用し、例えば、Ｖ_ＬおよびＶ_Ｈ領域対が一価の分子を形成した単一のタンパク質鎖にすることが可能な合成リンカーによって接合することができる（単鎖Fv(scFv)として公知；Bird et al. (1988) Science 242: 423-426；Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 5879-5883；およびOsbourn et al. (1998) Nat. Biotechnol. 16: 778）。そのようなｓｃＦｖは、抗体の「抗原結合性部分」という用語に包含され得る。完全なＩｇ（例えば、ＩｇＧ）分子または他のアイソタイプをコードする発現ベクターを生成するために、特定のｓｃＦｖの任意のＶ_Ｈ配列およびＶ_Ｌ配列をＦｃ領域ｃＤＮＡまたはゲノム配列と連結することができる。Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌを、タンパク質化学または組換えＤＮＡ技術を使用したＦａｂ、Ｆｖ、またはＩｇの他の断片の生成に使用することもできる。

「単鎖Ｆｖ」または「ｓＦｖ」抗体断片は、抗体のＶ_ＨドメインおよびＶ_Ｌドメインを含み得、ここで、これらのドメインは、単一のポリペプチド鎖内に存在し得る。一部の実施形態では、Ｆｖポリペプチドは、Ｖ_ＨドメインとＶ_Ｌドメインの間に、ｓＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にするポリペプチドリンカーをさらに含み得る。ｓＦｖの概説については、例えば、Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, Vol. 113, Rosenburg and Moore eds. Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)を参照されたい。

本明細書で使用される場合、「ｄｓＦｖ」は、例えば、重鎖可変領域および軽鎖可変領域のそれぞれの適切な部位にＣｙｓ残基を導入し、次いで、重鎖可変領域および軽鎖可変領域をジスルフィド結合によって安定化することによって得られるＦｖ断片であり得る。各鎖内の、Ｃｙｓ残基を導入することができる部位は、分子モデリングによって予測されるコンフォメーションに基づいて決定することができる。本開示では、例えば、上記の抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列からコンフォメーションを予測することができ、次いで、そのような予測に基づいて、変異が導入された、重鎖可変領域および軽鎖可変領域のそれぞれをコードするＤＮＡを構築することができる。次いで、ＤＮＡ構築物を適切なベクターに組み入れ、上述のベクターで形質転換することによって得られた形質転換体から調製することができる。

ダイアボディは、単鎖抗体であり得る。ダイアボディは、ＶＨドメインおよびＶＬドメインが単一のポリペプチド鎖上に発現し得るが、同じ鎖上の２つのドメイン間の対合を可能にするには短すぎるリンカーを使用し、それにより、これらのドメインが強制的に別の鎖の相補的なドメインと対合し、２つの抗原結合性部位が創出されるようにした、二価の二重特異性抗体であり得る（例えば、Holliger, P. , et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA,90: 6444-6448 (1993)；およびPoljak, R. J. , et al., Structure, 2: 1121-1123 (1994)を参照されたい）。

Ｈ．処置方法
本開示の操作された細胞を、過剰増殖性障害、例えば、がんの治療を補助するために使用する。操作された細胞（または操作された細胞をｉｎｓｉｔｕで生成するための核酸）を、単独で、または他の作用物質（例えば、腫瘍微小環境において腫瘍特異的抗原に応答してネイティブＣＤ２と架橋結合し得る抗体もしくはその抗原結合性断片、もしくは分子（投与されるか、分泌されるか、もしくは表面に発現される））と組み合わせて投与することにより、対象が経験する症状の数および／または重症度が低減すること、全生存または長期生存が増大すること、腫瘍細胞または他の過剰増殖細胞などの病理学的細胞が死滅すること、腫瘍量が減少すること、腫瘍細胞または他の過剰増殖細胞の成長が阻害されること、腫瘍細胞または他の過剰増殖細胞の拡散または増殖が阻害されることなどによって、処置または治療が補助される。一部の実施形態では、ワクチン、腫瘍溶解性ウイルス、チェックポイント阻害剤、Ｔ細胞アゴニスト抗体、化学療法、および／または二重特異性抗体をＣＡＲＴ細胞または他の養子移入されるＴ細胞と組み合わせることができる。

治療のために免疫細胞を投与するための方法が公知であり、提供される方法および組成物と併せて使用することができる。例えば、養子Ｔ細胞療法の方法がＵＳ２００３／０１７０２３８；ＵＳ４６９０９１５；S.A. Rosenberg, Nat Rev Clin Oncol (2011) 8 (10): 577-85に記載されている。M. Themeli et al., Nat Biotechnol (2013) 31 (10): 928-33；およびT. Tsukahara et al., Biochem Biophys Res Commun (2013) 438 (1): 84-89も参照されたい。本開示のある態様では、方法は、本開示のＣＡＲ－Ｔ細胞を投与することを含む。

一部の実施形態では、本明細書に記載の治療剤、例えば、キメラポリペプチドおよび／またはトランスジェニックＴＣＲを伴う操作されたＣＡＲ－ＴおよびＣＡＲ－Ｔ細胞を、がんを有する、がんを有する疑いがある、またはがんが発生するリスクが高い個体を処置する方法に使用することができる。一部の実施形態では、がんは、ＣＤ５８を過少発現する、またはもはやＣＤ２とライゲーションすることができない変異形態のＣＤ５８を発現する。一部の実施形態では、がんは、白血病である。これらの場合には、白血病は、一般に、白血病の任意の型のものであり得る。一部の実施形態では、がんは、リンパ腫である。一部の実施形態では、がんは、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ性白血病、前駆Ｂリンパ芽球性白血病、ヘアリー細胞白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、またはＢ系統細胞の過成長を特徴とする別の障害である。

他の実施形態では、腫瘍は、固形腫瘍がんである。一部の実施形態では、固形腫瘍細胞は、肺がん、肝がん、膵がん、胃がん、結腸がん、腎がん、脳がん、頭頸部がん、乳がん、皮膚がん、直腸がん、子宮がん、子宮頸がん(cervical cancer)、卵巣がん、精巣がん、皮膚がん、または食道がんである。一部の実施形態では、がんは、肉腫細胞、ラブドイドがん細胞、神経芽細胞腫細胞、網膜芽細胞腫細胞、または髄芽腫細胞を含む。一部の実施形態では、がんは、子宮癌肉腫（ＵＣＳ）、脳の低グレード神経膠腫（ＬＧＧ）、胸腺腫（ＴＨＹＭ）、精巣胚細胞腫瘍（ＴＧＣＴ）、多形神経膠芽腫（ＧＢＭ）および皮膚黒色腫（ＳＫＣＭ）、肝細胞癌（ＬＩＨＣ）、ぶどう膜黒色腫（ＵＶＭ）、嫌色素性腎細胞癌（ｋｉｄｎｅｙｃｈｒｏｍｏｐｈｏｂｅ）（ＫＩＣＨ）、甲状腺がん（ＴＨＣＡ）、腎明細胞癌（ＫＩＲＣ）、乳頭状腎細胞癌（ＫＩＲＰ）、胃腺癌（ＳＴＡＤ）、胆管癌（ＣＨＯＬ）、腺様嚢胞癌（ＡＣＣ）、前立腺腺癌（ＰＲＡＤ）、褐色細胞腫および傍神経節腫（ＰＣＰＧ）、ＤＬＢＣ、肺腺癌（ＬＵＡＤ）、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣ）、膵臓腺癌（ＰＡＡＤ）、乳がん（ＢＲＣＡ）、中皮腫（ＭＥＳＯ）、結腸直腸腺癌（ＣＯＡＤ）、直腸腺癌（ＲＥＡＤ）、食道癌（ＥＳＣＡ）、卵巣がん（ＯＶ）、肺扁平上皮癌（ＬＵＳＣ）、膀胱尿路上皮癌（ＢＬＣＡ）、肉腫（ＳＡＲＣ）、または子宮体部内膜癌（uterine corpus endometrial carcinoma）（ＵＣＥＣ）を含む。一部の実施形態では、投与された第１の治療剤により、対象におけるがんの腫瘍成長または転移が阻害される。一部の実施形態では、がんは、転移性がん細胞、多剤耐性がん細胞、または再発性がん細胞を含む。一部の実施形態では、投与された第１の治療剤により、対象におけるインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）および／またはインターロイキン２（ＩＬ－２）の産生の増加が付与される。一部の実施形態では、がんは、ＣＤ５８の発現の低減を有する。一部の実施形態では、がんは、子宮癌肉腫（ＵＣＳ）、脳の低グレード神経膠腫（ＬＧＧ）、胸腺腫（ＴＨＹＭ）、精巣胚細胞腫瘍（ＴＧＣＴ）、多形神経膠芽腫（ＧＢＭ）、または皮膚黒色腫（ＳＫＣＭ）である。

本明細書に記載の操作された細胞の有効量は、意図された目標、例えば、腫瘍退縮に基づいて決定される。例えば、既存のがんが処置される場合、投与される、本明細書に開示される治療剤の量は、がんを予防するために治療剤を投与する場合よりも多くなり得る。当業者は、本開示を考慮して、投与される治療剤の量および投与の頻度を決定することができる。処置の数および用量の両方に従って投与される数量はまた、処置を受ける個体、個体の状態、および所望の保護にも依存する。治療剤の厳密な量はまた、実施者の判断にも依存し、各個体に独特のものになり得る。投与の頻度は、実施者の判断に応じて１～２日間から、２～６時間まで、６～１０時間まで、１～２週間まで、またはそれより長くまでにわたり得る。

本開示のある特定の実施形態では、治療剤は、本明細書に記載の操作された細胞を含む水性組成物である。本開示の水性組成物は、薬学的に許容される担体または水性媒体中に有効量の本明細書に開示される治療剤を含有する。したがって、本開示の「医薬調製物」または「医薬組成物」は、ありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張性剤ならびに吸収遅延剤などを含み得る。医薬活性物質のためのそのような媒体および作用剤の使用は当技術分野において周知である。従来の媒体または作用剤はいずれも、本明細書に開示される組換え細胞と適合しないものを除く限りでは、医薬組成物の製造におけるその使用が意図されている。補足的な活性成分を組成物に組み入れることもできる。ヒト投与に関しては、調製物は、ＦＤＡＣｅｎｔｅｒｆｏｒＢｉｏｌｏｇｉｃｓによって求められる無菌性、発熱性、一般的安全性、および純度の基準を満たすべきである。

本明細書に記載の操作された細胞を使用して、定着腫瘍を治癒すること、処置を受けた対象におけるがんの腫瘍成長または転移を、本明細書に開示される治療用組成物の１つの投与を受けていない対象における腫瘍成長または転移と比べて阻害することができる。一部の実施形態では、操作された細胞を使用して、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）および／またはインターロイキン２（ＩＬ－２）、ならびに他の炎症促進性サイトカインの産生を誘導することによって腫瘍に対する免疫応答を刺激することができる。インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）および／またはインターロイキン２（ＩＬ－２）の産生を刺激して、本明細書に開示される治療用組成物の１つの投与を受けていない対象におけるインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）および／またはインターロイキン２（ＩＬ－２）の産生と比較して約２０倍まで、例えば、約２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１１倍、１２倍、１３倍、１４倍、１５倍、１６倍、１７倍、１８倍、１９倍、または２０倍またはそれよりも大きい倍率のいずれかで産生させることができる。

本明細書で考察されている通り、操作された細胞を、例えば、化学療法薬もしくは抗がん剤もしくは抗がん治療、抗体もしくはその抗原結合性断片、または腫瘍微小環境において腫瘍特異的抗原に応答してネイティブＣＤ２と架橋結合し得る分子（投与されるか、分泌されるか、または表面に発現される）などの１つまたは複数の追加の治療剤と組み合わせて投与することができる。１つまたは複数の追加の治療剤「と組み合わせて」投与することは、任意の順序での同時（並行）および連続的な投与を含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の治療剤、化学療法薬、抗がん剤、または抗がん治療は、化学療法、照射療法、免疫療法、ホルモン療法、毒素療法、および外科手術からなる群より選択される。「化学療法」と「抗がん剤」は本明細書では互換的に使用される。種々のクラスの抗がん剤を使用することができる。非限定的な例として、アルキル化剤、代謝拮抗薬、アントラサイクリン、植物アルカロイド、トポイソメラーゼ阻害剤、ポドフィロトキシン、抗体（例えば、モノクローナルまたはポリクローナル）、チェックポイント阻害剤、免疫調節物質、サイトカイン、ナノ粒子、放射線療法、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、メシル酸イマチニブ）、ホルモン処置、可溶性受容体および他の抗腫瘍薬が挙げられる。一部の実施形態では、治療剤は、腫瘍微小環境において発現される腫瘍特異的抗原に応答して細胞のネイティブＣＤ２と架橋結合することができる、分泌されるか、表面に発現されるか、または投与される分子である。一部の実施形態では、Ｔ細胞に、１つまたは複数の抗ＣＤ２ｓｃＦｖ、抗体、Ｆａｂ、ＤＡＲＰＩＮ、リガンド、または他の結合物質／抗原結合性ドメインを使用することによって細胞のネイティブＣＤ２と架橋結合することが可能な分泌型分子を構成的に発現するように形質導入することができる。あるいは、分泌型分子を活性化スイッチの下で発現させることができる。分泌型分子は、膜結合型であり得、リンカーによって接続された２つのｓｃＦｖからなり得る：一方は、Ｔ細胞上のＣＤ２に結合するｓｃＦｖ（ネイティブＣＤ２シグナル伝達を活性化する）であり、他方は、腫瘍細胞上に発現されるタンパク質または標的を認識するｓｃＦｖまたはリガンドであり、したがって、Ｔ細胞が腫瘍細胞と遭遇するとＣＤ２が架橋結合し、活性化される。

トポイソメラーゼ阻害剤は、同様に本発明において使用することができる別のクラスの抗がん剤である。トポイソメラーゼは、ＤＮＡのトポロジーを維持する必須酵素である。Ｉ型またはＩＩ型トポイソメラーゼの阻害により、適当なＤＮＡ高次コイルを混乱させることによってＤＮＡの転写および複製の両方が妨害される。Ｉ型トポイソメラーゼ阻害剤のいくつかとして、カンプトテシン：イリノテカンおよびトポテカンが挙げられる。ＩＩ型阻害剤の例としては、アムサクリン、エトポシド、リン酸エトポシド、およびテニポシドが挙げられる。これらは、ポドフィルム（ＡｍｅｒｉｃａｎＭａｙａｐｐｌｅ）（Ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｕｍｐｅｌｔａｔｕｍ）の根に天然に存在するアルカロイドであるエピポドフィロトキシンの半合成誘導体である。

抗腫瘍薬としては、免疫抑制剤ダクチノマイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ブレオマイシン、メクロレタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、イホスファミドが挙げられる。抗腫瘍化合物は、一般に、細胞のＤＮＡを化学修飾することによって働く。

アルキル化剤は、多くの求核性官能基を細胞内に存在する条件下でアルキル化することができる。シスプラチンおよびカルボプラチン、ならびにオキサリプラチンはアルキル化剤である。これらは、生物学的に重要な分子のアミノ基、カルボキシル基、スルフヒドリル基、およびリン酸基と共有結合を形成することによって細胞機能を損なわせる。

ビンカアルカロイドは、チューブリンの特定の部位に結合し、チューブリンの微小管へのアセンブリを阻害する（細胞周期のＭ期）。ビンカアルカロイドとしては、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、およびビンデシンが挙げられる。

代謝拮抗薬は、プリン（アザチオプリン、メルカプトプリン）またはピリミジンに似ており、これらの物質が細胞周期の「Ｓ」期の間にＤＮＡに組み入れられるのを妨げ、正常な発生および分裂を停止させる。代謝拮抗薬はまた、ＲＮＡ合成にも影響を及ぼす。

植物アルカロイドおよびテルペノイドは植物から得られ、微小管機能を妨げることによって細胞分裂を遮断する。微小管は細胞分裂のために極めて重要であるので、微小管がないと細胞分裂が起こり得ない。主要な例は、ビンカアルカロイドおよびタキサンである。タキサンは、パクリタキセルおよびドセタキセルを含む一群である。パクリタキセルは、元々はタキソールとして知られていた天然物であり、タイヘイヨウイチイ（ＰａｃｉｆｉｃＹｅｗ）木の樹皮から最初に引き出された。ドセタキセルは、パクリタキセルの半合成類似体である。タキサンは、微小管の安定性を増強し、後期の染色体の分離を妨げる。

ポドフィロトキシンは、植物由来の化合物であり、消化を助けることが報告されているだけでなく、２種の他の細胞増殖抑制薬、エトポシドおよびテニポシドを生成するために使用されている。これらは細胞がＧ１期（ＤＮＡ複製の開始）およびＤＮＡの複製（Ｓ期）に入るのを妨げる。

一部の実施形態では、抗がん剤は、レミケード、ドセタキセル、セレコキシブ、メルファラン、デキサメタゾン（Ｄｅｃａｄｒｏｎ（登録商標））、ステロイド、ゲムシタビン、シスプラチン、テモゾロミド、エトポシド、シクロホスファミド、テモダール、カルボプラチン、プロカルバジン、ギリアデル、タモキシフェン、トポテカン、メトトレキサート、ゲフィチニブ（Ｉｒｅｓｓａ（登録商標））、タキソール、タキソテール、フルオロウラシル、ロイコボリン、イリノテカン、ゼローダ、ＣＰＴ－１１、インターフェロンアルファ、ペグ化インターフェロンアルファ（例えば、ＰＥＧＩＮＴＲＯＮ－Ａ）、カペシタビン、シスプラチン、チオテパ、フルダラビン、カルボプラチン、リポソームダウノルビシン、シタラビン、ドキセタキソール、パクリタキセル、ビンブラスチン、ＩＬ－２、ＧＭ－ＣＳＦ、ダカルバジン、ビノレルビン、ゾレドロン酸、パルミトロネート（ｐａｌｍｉｔｒｏｎａｔｅ）、ビアキシン（ｂｉａｘｉｎ）、ブスルファン、プレドニゾン、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））、ビスホスホネート、三酸化ヒ素、ビンクリスチン、ドキソルビシン（Ｄｏｘｉｌ（登録商標））、パクリタキセル、ガンシクロビル、アドリアマイシン、リン酸エストラムスチンナトリウム（Ｅｍｃｙｔ（登録商標））、スリンダク、エトポシド、およびこれらの任意の組合せから選択することができる。

他の実施形態では、抗がん剤は、ボルテゾミブ、シクロホスファミド、デキサメタゾン、ドキソルビシン、インターフェロン－アルファ、レナリドマイド、メルファラン、ペグ化インターフェロン－α、プレドニゾン、サリドマイド、またはビンクリスチンから選択することができる。

一部の実施形態では、本明細書に記載の処置方法は、１つまたは複数の免疫チェックポイント分子を阻害する化合物の投与をさらに含む。一部の実施形態では、１つまたは複数の免疫チェックポイント分子には、ＣＴＬＡ４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、Ａ２ＡＲ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＴＩＭ３、およびこれらの任意の組合せの１つまたは複数が含まれる。一部の実施形態では、１つまたは複数の免疫チェックポイント分子を阻害する化合物には、アンタゴニスト抗体が含まれる。一部の実施形態では、アンタゴニスト抗体は、イピリムマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、トレメリムマブ、またはアベルマブである。

一部の態様では、１つまたは複数の抗がん治療は、放射線療法である。一部の実施形態では、放射線療法は、がん性細胞を死滅させるための放射線の投与を含む。放射線は、ＤＮＡなどの細胞内の分子と相互作用して、細胞死を誘導する。放射線はまた、細胞膜および核膜ならびに他の細胞小器官に損傷を与え得る。放射線の型に応じて、ＤＮＡ損傷の機構は、相対的な生物学的有効性と同様に変動し得る。例えば、重い粒子（プロトンおよび中性子）はＤＮＡに直接損傷を与え、相対的な生物学的有効性が大きい。電磁放射線では、主に細胞内の水のイオン化によって生じる短寿命のヒドロキシルフリーラジカルを通じて作用する間接的なイオン化がもたらされる。放射線の臨床的適用は、外照射（外部供給源からの）および近接照射療法（患者に埋め込まれたまたは挿入された線源を使用する）からなる。外照射は、Ｘ線および／またはガンマ線からなり、一方、近接照射療法では、崩壊し、アルファ粒子、またはベータ粒子と一緒にガンマ線を放出する放射性核が使用される。放射線は、例えば、放射性同位元素のがん細胞への指向性送達を含むことも本明細書において意図されている。マイクロ波およびＵＶ照射などの他の形態の、ＤＮＡに損傷を与える因子も本明細書において意図されている。

放射線は、単回線量でまたは一連の小線量を線量分割スケジュールでもたらすことができる。本明細書において意図されている放射線量は、例えば、約５～約８０、約１０～約５０Ｇｙ、または約１０Ｇｙを含む、約１から約１００Ｇｙまでにわたる。総線量を分割レジメンで適用することができる。例えば、レジメンは、２Ｇｙの分割された個々の線量を含み得る。放射性同位元素の投与量範囲は広範に変動し、同位元素の半減期ならび放出される放射線の強度および型に依存する。放射線が放射性同位元素の使用を含む場合、同位元素を、作用物質を標的組織（例えば、腫瘍組織）に運ぶ、治療用抗体などの標的化剤とコンジュゲートすることができる。

本明細書に記載の外科手術は、がん性組織の全部または一部を物理的に除去する、切り取る、および／または破壊する、切除術を含む。腫瘍の切除は、腫瘍の少なくとも一部の物理的な除去を指す。腫瘍の切除に加えて、外科手術による処置は、レーザー手術、冷凍外科、電気外科、および顕微鏡下手術（モース術）を含む。前癌組織または正常組織の除去も本発明で意図されている。

したがって、一部の実施形態では、本開示の方法は、個体に第２の治療剤、例えば、抗がん剤、化学療法薬、または抗がん治療などを投与することをさらに含む。一部の実施形態では、第２の抗がん剤または抗がん治療は、化学療法、照射療法、免疫療法、ホルモン療法、毒素療法、および外科手術からなる群より選択される。一部の実施形態では、第１の治療剤と第２の抗がん剤または治療を同時に投与する。一部の実施形態では、第１の治療剤と第２の抗がん剤または治療を逐次的に投与する。一部の実施形態では、第１の治療剤を、第２の抗がん剤または治療を投与する前に投与する。一部の実施形態では、第１の治療剤または治療を、第２の抗がん剤または治療の前および／またはその後に投与する。一部の実施形態では、第１の治療剤と第２の抗がん剤または治療を交代で投与する。一部の実施形態では、第１の治療剤を第２の抗がん剤または治療と同時に投与する。一部の実施形態では、第１の治療剤および第２の抗がん剤または治療を単一の製剤として一緒に投与する。

一部の実施形態では、本開示の操作された細胞を投与する前に、標的細胞（例えば、腫瘍細胞）による機能的ＣＤ５８の発現を決定する。本開示の操作された細胞は、機能的ＣＤ５８の低発現を有する標的細胞（例えば、ＣＤ５８を少量発現するもしくは全く発現しない、または、変異しており、もはやＣＤ２と有効にライゲーションしないＣＤ５８を発現する、標的細胞）に対して機能できることから、標的細胞がそのような特徴を示す場合に選択される治療になる。ある実施形態では、標的細胞（複数可）における機能的ＣＤ５８発現レベルの決定を、操作された細胞を投与する前に提供する。決定は第３者によって提供され得る。ある実施形態では、機能的ＣＤ５８発現レベルが閾値を下回る場合にのみ、操作された細胞を投与する。ある実施形態では、閾値は、標的細胞当たり約５０，０００、４５，０００、４０，０００、３５，０００、３０，０００、２５，０００、２０，０００、１５，０００、１４，０００、１３，０００、１２，０００、１１，０００、１０，０００、９，０００、８，０００、７，０００、６，０００、５，０００、４，０００、３，０００、２，０００、１，０００、または５００の機能的ＣＤ５８分子（ＣＤ２とライゲーションすることができるもの）である。機能的ＣＤ５８の発現レベルは、標準の方法、例えば、フローサイトメトリーまたはマスサイトメトリーにより、ＣＤ５８の機能的エピトープに対して特異的な抗体を使用して決定することができる（例えば、T.J. Dengler et al., Eur J Immunol (1992) 22 (11): 2809-17を参照されたい）。発現レベルは、Ｔ細胞活性化アッセイを使用して、例えば、ＣＡＲ標的抗原を発現する標的細胞との接触に応答してＣＡＲ－Ｔ細胞によって産生されるＩＬ－２および／またはＩＦＮγの量を測定することによって決定することもできる（例えば、以下の実施例６を参照されたい）：これらの結果を、ＣＤ５８を種々の既知レベルで発現する（例えば、フローサイトメトリーによって決定される）モデル標的細胞（例えば、ｎａｌｍ６細胞）に対して較正することができる。この手法は、標的細胞が、ＣＤ２結合能が損なわれた変異形態のＣＤ５８を発現する場合に発現レベルを決定するために、完全に機能的なＣＤ５８の発現レベルと同等に、有用である。例えば、標的細胞により、細胞当たり１１，０００分子のＣＤ５８を発現するモデル細胞によって誘導される活性化とほぼ同様の程度のＣＡＲ－Ｔ細胞活性化が誘導される場合、標的細胞によって発現されるＣＤ５８分子の実数値（変異に起因して、より多くまたはより少なくＣＤ２を活性化することができる）にかかわらず、１１，０００が、閾値発現を決定するための機能的ＣＤ５８発現レベルになる。一部の実施形態では、ＣＡＲＴ処置において、ＣＤ５８の喪失により、ＩＦＮγおよびＩＬ－２産生が有意に減少し、その結果、ＣＡＲＴ細胞の有効性が低下する可能性がある。一部の実施形態では、本発明で提供されるＣＡＲはＣＤ５８の喪失の影響を受けないか、またはＣＤ５８喪失の影響がレスキューされる。一部の実施形態では、本発明で提供されるＣＡＲは、ＣＤ２を含み、ＣＤ５８の状態にかかわらず、ＣＤ２を伴わない従来のＣＡＲよりも優れ得る。一部の実施形態では、本発明で提供されるＣＡＲでは、ＣＤ２を伴わない従来のＣＡＲと比較して腫瘍制御および生存が増強される。一部の実施形態では、本発明で提供されるＣＡＲは、細胞傷害に関して同程度の性能を示す。一部の実施形態では、ＣＤ２共刺激ドメインを４－１ＢＢ共刺激ドメインに追加することにより、ＣＤ５８喪失に対するサイトカイン放出が改善される。一部の実施形態では、トランスＣＡＲおよびＣＤ２構築物は、シスＣＡＲおよびＣＤ２構築物よりも良好な性能を示す。一部の実施形態では、ＣＤ２０を認識するＣＤ２含有受容体と同時発現させたトランスＣＡＲは、ＣＤ５８喪失に対するＣＡＲＴ細胞機能をレスキューし得る。一部の実施形態では、ＣＤ２０を認識するＣＤ２含有受容体を同時発現させたトランスＣＡＲは、ＣＤ５８喪失に対してＣＡＲＴ細胞機能をレスキューし得、標的抗原（例えば、ＣＤ１９）を喪失した細胞に対して活性を維持し得る。

Ｉ．システム
本開示の別の態様は、本開示の操作された細胞を投与することによってそれを必要とする対象の処置を補助するためのシステムである。対象は、一般に、少なくとも第１の抗原を有する標的細胞の増殖を特徴とする過剰増殖性障害を有するまたはそれを有するリスクがあると診断されている。操作された細胞は、第１の抗原に対して特異的な、ＣＤ２ＣＡＲ、またはＣＡＲとトランスジェニックＴＣＲおよび／もしくはキメラポリペプチドの組合せを発現する。一部の実施形態では、標的細胞は、ＣＤ５８の発現の低減もしくは非存在を示す、または、もはやＣＤ２と有効にライゲーションしない変異体ＣＤ５８を発現する。システムは、標的細胞上に存在するＣＤ５８の状態を決定するための、標識された結合性作用物質をさらに含む。これにより、本開示の操作された細胞の使用が別の薬剤の使用よりも好ましい場合を実施者が決定することが可能になる。本開示の操作された細胞が機能し、そして野生型ＣＤ５８をわずかに発現するかまたは全く発現しない標的細胞を死滅させることができるので、特に、標的細胞が野生型ＣＤ５８をわずかに発現するかまたは全く発現しないことが決定された場合にその必要性が示される。

ある実施形態では、標識された結合性作用物質は、ＣＤ５８に特異的に結合する標識された抗体もしくは抗体誘導体、または化合物を含む。ある実施形態では、ＣＤ５８に対して特異的な標識された結合性作用物質は、標識された抗体を含む。ある実施形態では、標識された結合性作用物質は、可溶性ＣＤ２タンパク質である。ある実施形態では、標識は、Ｘ線撮影によってイメージングすることができる放射性原子を含む。ある実施形態では、標識は、蛍光分子を含む。ある実施形態では、標識は、発光分子を含む。ある実施形態では、標識は、比色定量分子（colorimetric molecule）を含む。ある実施形態では、標識は、別の検出可能な分子（例えば、放射性標識されたアビジンなど）と結合することが可能なビオチン、アビジン、またはストレプトアビジンなどの結合性作用物質を含む。本開示の標識された結合性作用物質をｉｎｖｉｖｏまたはｅｘｖｉｖｏで使用することができる。

本開示の実施には、別段の指定のない限り、当業者に周知の分子生物学、微生物学、細胞生物学、生化学、核酸化学、および免疫学の従来の技法を使用する。そのような技法は、本明細書において引用されている文献において十分に説明されている。

さらなる実施形態を、実例として提示され、どのようにも本開示の範囲または特許請求の範囲を限定するものではない以下の実施例においてさらに詳細に開示する。

材料および方法
以下の方法および材料を下記の実施例において使用した。

１．キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）およびキメラポリペプチドの合成
ｓｃＦｖをコードする遺伝子を遺伝子断片（ｇＢｌｏｃｋ、ＩＤＴＤＮＡ）、またはＧｅｎｅＡｒｔ（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）により合成された、遺伝子をコードするプラスミドのいずれかとして合成し、次いで、制限クローニング（Ｒｏｃｈｅ）またはＩｎ－ｆｕｓｉｏｎクローニング（Ｔａｋａｒａ）を使用してＭＳＧＶ１レトロウイルス発現ベクターにクローニングした。ＣＤ１９－ＢＢｚまたはＣＤ２２－ＢＢｚを有するＣＡＲを、ＣＤ８αヒンジドメインおよびＣＤ８α膜貫通ドメインを有するように構築した。ＣＤ１９－２８ｚを有するＣＡＲを、ＣＤ２８ヒンジおよび膜貫通ドメインを有するように構築した。ＣＤ２シグナル伝達ドメインを有するＣＡＲを、ＣＤ８αヒンジおよび膜貫通ドメインを有するように構築した。

２．レトロウイルスベクターの作製およびＴ細胞形質導入
以前に記載されている通り、２９３ＧＰパッケージング細胞株の一過性トランスフェクションによってレトロウイルス上清を作製した。簡単に述べると、７０％コンフルエントの細胞を、１５０ｍｍのポリ－Ｄ－リシン培養皿中、ＣＡＲおよびＲＤ１１４エンベロープタンパク質をコードするプラスミドを用い、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）２０００（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）によって同時トランスフェクトした。トランスフェクションの２４時間後および４８時間後に培地を交換した。トランスフェクションの４８時間および７２時間後にウイルス上清を回収し、遠心分離して細胞片を除去し、使用するまで－８０℃で保管した。

初代ヒトＴ細胞を健康なドナーからＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐＨｕｍａｎＴｃｅｌｌＥｎｒｉｃｈｍｅｎｔｋｉｔ（ＳｔｅｍＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用し、ＳｔａｎｆｏｒｄＢｌｏｏｄＣｅｎｔｅｒから入手したバフィーコートを使用して単離し、製造者のプロトコールに従い、Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ（登録商標）密度勾配培地およびＳｅｐＭａｔｅ－５０管を使用して処理した。単離されたＴ細胞をＣｒｙｏＳｔｏｒＣＳ１０凍結保存培地（ＳｔｅｍＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で凍結保存した。凍結保存したＴ細胞を、解凍し、５％ＦＢＳ、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、２ｍＭのＬ－グルタミン、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、および１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ）を補充し、１００ＩＵ／ｍｌの組換えＩＬ－２（Ｐｒｅｐｒｏｔｅｃｈ）を伴うＡＩＭ－Ｖ培地中、ＨｕｍａｎＴ－ＥｘｐａｎｄｅｒＣＤ３／ＣＤ２８Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（Ｇｉｂｃｏ）をビーズ：細胞の比３：１で用いて、活性化した。活性化後２日目および３日目に、Ｔ細胞にレトロウイルスベクターを用いて形質導入を行い、５日目に抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを除去した。ＣａｒＴ細胞を、ＩＬ－２を伴うＴ細胞培地中、１ｍＬ当たり細胞０．３～１×１０^６個に維持した。Ｄｙｌｉｇｈｔ６５０で標識した可溶性、組換え、ヒトＣＤ１９またはＣＤ２２と共にインキュベートした後、ＣＡＲ発現をフローサイトメトリーによって評価した。活性化後１０日目にＣＡＲ－Ｔ細胞をｉｎｖｉｔｒｏアッセイに使用したかまたはマウスに移入した。

３．ＥＬＩＳＡ
ＣＡＲ＋Ｔ細胞１×１０^５個と腫瘍細胞１×１０^５個を完全ＲＰＭＩ－１６４０中、３連で共インキュベートすることによってサイトカイン放出をアッセイした。２４時間の時点で、培養培地を収集し、ＩＦＮγおよびＩＬ－２ＭＡｂ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）を使用してサイトカインを測定した。

４．ＩｎｃｕＣｙｔｅ（登録商標）死滅アッセイ
ＩｎｃｕＣｙｔｅ（登録商標）インキュベーター死滅アッセイのために、ＧＰＦ陽性腫瘍細胞５×１０^４個を、９６ウェル平底プレートに３連でプレーティングし、ＣＡＲ陽性Ｔ細胞または等価数の対照ＣＡＲＴ細胞と、エフェクター対標的比１：１でＲＰＭＩ－１６４０２００μｌ中で共インキュベートした。２～３時間毎にＩｎｃｕＣｙｔｅ（登録商標）ＺＯＯＭＬｉｖｅ－Ｃｅｌｌａｎａｌｙｓｉｓｓｙｓｔｅｍ（ＥｓｓｅｎＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を使用してプレートのイメージングを行い、各時点で１０×ズームの画像をウェル当たり４枚収集した。ウェル当たりの総ＧＦＰ積分強度を生存可能なＧＦＰ陽性腫瘍細胞の定量的尺度として評価した。値を出発測定値に対して正規化し、経時的にプロットした。

（実施例１）
ＣＤ５８欠失によるＣＡＲ－Ｔサイトカイン放出の障害
この実験は、ＣＤ５８が存在しないことのＣＡＲ－Ｔサイトカイン放出に対する影響を決定するために実施した。

標準の技法を使用して３種のＣＡＲ：ＣＤ１９－２８ｚ（配列番号６３、６４）、ＣＤ１９－ＢＢｚ（配列番号６５、６６）、およびＣＤ２２－ＢＢｚ（ｍ９７１－ＢＢｚ；配列番号５９、６０）を構築し、初代ヒトＴ細胞に形質導入して、ＣＡＲＴ細胞を提供した。ＣＲＩＳＰＲＣａｓ９を発現するＮａｌｍ６細胞（Ｂ細胞白血病株）を、ＣＤ５８に対して特異的なガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）を伴ってまたは伴わずに使用して、Ｎａｌｍ６の１つの群においてＣＤ５８発現をノックアウトした（Ｎａｌｍ６ＣＤ５８ＫＯ）、または対照Ｎａｌｍ６群（Ｎａｌｍ６Ｃａｓ９）を提供した。

各ＣＡＲ群を標的Ｎａｌｍ６細胞１００，０００個と１：１の比で２４時間共培養し、次いで、培養上清中のＩＦＮγおよびＩＬ－２をＥＬＩＳＡによって測定した。図１に示されている通り、ＣＤ５８の欠失により、３種全てのＣＡＲＴ構築物におけるＩＦＮγ産生が有意に減少し、また、ＣＤ１９－２８ｚおよびＣＤ１９－ＢＢｚＣＡＲＴにおけるＩＬ－２産生が有意に減少した（ＣＤ２２－ＢＢｚは、ＣＤ５８を伴っても伴わなくても有意な量のＩＬ－２を産生しなかった）。

（実施例２）
ＣＤ５８欠失によるＣＤ２２ＣＡＲ－Ｔ細胞傷害の障害
この実験は、ＣＤ５８が存在しないことのＣＤ２２ＣＡＲ－Ｔ活性に対する影響を決定するために実施した。

２種のＣＡＲ：ｍ９７１－ＢＢｚ（配列番号５９、６０）およびｍ９７１－２８ｚ（配列番号６１、６２）のいずれかを用い、それぞれｍ９７１抗ＣＤ２２ｓｃＦｖ（配列番号２）を使用して、ＣＤ２２ＣＡＲＴ細胞を調製した。ＣＤ５８発現を有するＮａｌｍ６標的細胞およびＣＤ５８発現を有さないＮａｌｍ６標的細胞を、ＧＦＰを発現するように操作し、それにより、ＧＦＰ蛍光による腫瘍細胞死滅の定量化を可能にした。

各ＣＡＲＴ群を、標的細胞５０，０００個と共に、１：１の比で７２時間インキュベートした。蛍光を経時的にＩｎｃｕＣｙｔｅ（登録商標）ＺｏｏｍＬｉｖｅ－ＣｅｌｌＡｎａｌｙｓｉｓＳｙｓｔｅｍで測定した。図２に示されている通り、どちらのＣＡＲＴもＣＤ５８ノックアウト（ＣＤ５８ＫＯ）細胞に対する有効性が低下した。

（実施例３）
ＣＤ５８欠失によるＣＤ１９ＣＡＲ－Ｔ細胞傷害の障害
この実験は、ＣＤ５８が存在しないことのＣＤ１９ＣＡＲ－Ｔ活性に対する影響を決定するために、種々のレベルのＣＤ１９発現下で実施した。ｉｎｖｉｔｒｏでＣＡＲ－Ｔ細胞を刺激するために標的として使用した細胞株は、多くの場合、ＣＤ１９などの抗原を高レベルで発現する。腫瘍細胞では標的抗原の発現がダウンレギュレートされる（および／または標的抗原発現に対する選択圧力を受ける）可能性があるので、このＣＤ１９発現のレベルは、多くの場合にリンパ腫を有する対象において見いだされるＣＤ１９の発現を必ずしも反映するものではない。このダウンレギュレーションの結果、従来のＣＡＲ－Ｔ構成ではＣＡＲ－Ｔ活性が低下する。したがって、この実施例では、臨床的な状況によりよく類似した条件下で本開示のＣＡＲ－Ｔ細胞を試験するために、Ｎａｌｍ６細胞株を、ＣＤ１９を２つの低下した発現レベルで発現するように改変した。

２種のＣＡＲ：ＣＤ１９－ＢＢｚ（配列番号６５、６６）およびＣＤ１９－２８ｚ（配列番号６３、６４）のいずれかを用い、それぞれ抗ＣＤ１９ｓｃＦｖ（配列番号１）を使用して、ＣＤ１９ＣＡＲＴ細胞を調製した。ＣＤ５８発現を有するＮａｌｍ６標的細胞およびＣＤ５８発現を有さないＮａｌｍ６標的細胞を、ＧＦＰを発現するように操作し、それにより、ＧＦＰ蛍光による腫瘍細胞死滅の定量化を可能にした。野生型Ｎａｌｍ６標的細胞は、細胞当たり推定４５，０００コピーのＣＤ１９を発現し、さらなる改変は行わなかった。追加の標的細胞を、細胞当たり６，１９６コピーのＣＤ１９のみ（平均）または細胞当たり９６３コピー（平均）を発現するように操作した。

各ＣＡＲＴ群を、各標的群からの標的細胞５０，０００個と共に、１：１の比で７２時間インキュベートした。蛍光を経時的にＩｎｃｕＣｙｔｅ（登録商標）ＺｏｏｍＬｉｖｅ－ＣｅｌｌＡｎａｌｙｓｉｓＳｙｓｔｅｍで測定した。図３に示されている通り、どちらのＣＡＲ－Ｔも４５，０００個のＣＤ１９／細胞ではＣＤ５８ＫＯによる影響を受けなかったが、より低レベルのＣＤ１９発現ではどちらもＣＤ５８ノックアウト（ＣＤ５８ＫＯ）細胞に対する有効性が低下した。図４および５は、ＣＡＲの有効性はＣＤ１９発現がそれぞれ細胞当たり６，１９６個および９６３個のＣＤ１９分子に低減すると低下すること、ＣＤ５８が存在しないことの影響が大きいことを示す。

（実施例４）
ｉｎｖｉｖｏにおけるＣＤ２２ＣＡＲ－Ｔ細胞傷害の障害
この実験は、ＣＤ５８発現の非存在下での従来のＣＤ２２ＣＡＲ－Ｔ細胞による処置からの腫瘍エスケープを実証するために実施した。

Ｎａｌｍ６細胞を、ルシフェラーゼを発現するように操作し、１つの群におけるＣＤ５８発現をノックアウトした。マウス（群当たりＮ＝１０）に、Ｎａｌｍ６Ｃａｓ９（ｇＲＮＡを伴わずにＣａｓ９を電気穿孔した、ＣＤ５８^＋）、またはＮａｌｍ６－ＣＤ５８ＫＯ（Ｃａｓ９をＣＤ５８特異的ｇＲＮＡと共に電気穿孔した、ＣＤ５８^－）のいずれかの細胞１００万個を接種した。３日後、各群の半数がＣＤ２２－４１ＢＢｚ（配列番号５９、６０）ＣＡＲＴ細胞３，０００，０００個、またはモック（形質導入されていない）Ｔ細胞３，０００，０００個を受けた。総発光フラックス（腫瘍ＢＬＩ）を１週間当たり１～２回測定した。

図６に示されている通り、モック形質導入Ｔ細胞（Ｃａｓ９ＭｏｃｋおよびＣＤ５８ＫＯＭｏｃｋ）を受けた全てのマウスにおいて腫瘍が急速に成長した。従来のｍ９７１－ＢＢｚＣＡＲＴ細胞は、ＣＤ５８^＋細胞（Ｃａｓ９３ＭＣＤ２２）の腫瘍成長を制御することができたが、ＣＤ５８^－細胞（ＣＤ５８ＫＯ３ＭＣＤ２２）については一過性の応答のみが実現された。

（実施例５）
ｉｎｖｉｖｏにおけるＣＤ１９ＣＡＲ－Ｔ細胞傷害の障害
この実験は、ＣＤ５８発現の非存在下での従来のＣＤ１９ＣＡＲ－Ｔ細胞による処置からの腫瘍エスケープを実証するために実施した。

Ｎａｌｍ６細胞を、ルシフェラーゼを発現するように操作し、１つの群におけるＣＤ５８発現をノックアウトした。マウス（群当たりＮ＝１０）に、Ｎａｌｍ６Ｃａｓ９（ｇＲＮＡを伴わずにＣａｓ９を発現する、ＣＤ５８^＋）、またはＮａｌｍ６－ＣＤ５８ＫＯ（ＣＤ５８^－）のいずれかの細胞１００万個を接種した。３日後、各群の半数がＣＤ１９－２８ｚ（配列番号６３、６４）ＣＡＲＴ細胞３，０００，０００個、またはモック（形質導入されていない）Ｔ細胞３，０００，０００個のいずれかを受けた。総発光フラックス（腫瘍ＢＬＩ）を１週間当たり１～２回測定した。

図７に示されている通り、モック形質導入Ｔ細胞を受けた全てのマウスにおいて腫瘍が急速に成長した。従来のＣＤ１９－２８ｚＣＡＲＴ細胞は、ＣＤ５８^＋細胞の腫瘍成長を制御することができた（ＣＤ１９－２８ｚ対Ｎ６ＣＤ５８^＋）が、ＣＤ５８^－細胞については一過性の応答のみが実現された（ＣＤ１９－２８ｚ対Ｎ６ＣＤ５８ＫＯ）。

この実験を従来のＣＤ１９－ＢＢｚ（配列番号６５、６６）ＣＡＲ－Ｔ細胞を用いて繰り返し、図８に示されている通り、結果は同様であった。

（実施例６）
ＣＤ２２ＣＤ２ＣＡＲ
この実験は、ＣＤ２ドメインを有するＣＤ２２ＣＡＲおよびＣＤ２ドメインを有さないＣＤ２２ＣＡＲを、４－１ＢＢドメインを有するＣＡＲおよび４－１ＢＢドメインを有さないＣＡＲと比較するために行った。

抗ＣＤ２２ｓｃＦｖｍ９７１（配列番号２、３１）およびＣＤ８α膜貫通ドメイン（配列番号５、３４）を使用して以下のＣＡＲを構築した：ｍ９７１－ＢＢｚ（配列番号５９、６０）、ｍ９７１－ＣＤ２－ＢＢｚ（配列番号１７、４６）、ｍ９７１－ＣＤ２－ｚ（配列番号１６、４５）、ｍ９７１－ＢＢ－ＣＤ２ｚ（配列番号１８、４７）、およびｍ９７１－ＢＢｚ－ＣＤ２（配列番号６７、６８）。これらのＣＡＲを上記の通りＴ細胞に形質導入した。

ＣＡＲ－Ｔのそれぞれ（細胞５０，０００個）を、Ｎａｌｍ６腫瘍細胞（ＧＦＰ^＋、ＣＤ５８^＋かまたはＣＤ５８^－のいずれか）５０，０００個と一緒にＩｎｃｕＣｙｔｅ（登録商標）インキュベーター中、７２時間インキュベートした。図９に示されている通り、ｍ９７１－ＢＢｚ－ＣＤ２は効果がなかったが、他のＣＤ２含有ＣＡＲ（ｍ９７１－ＣＤ２－ＢＢｚ；ｍ９７１－ＣＤ２－ｚ；およびｍ９７１－ＢＢ－ＣＤ２－ｚ）は全て、ＣＤ５８^＋細胞およびＣＤ５８^－細胞のどちらに対しても従来のｍ９７１－ＢＢｚＣＡＲよりも優れた性能を示した。

同様に、ＣＡＲ－Ｔ細胞１００，０００個をＮａｌｍ６ＣＤ５８^＋またはＮａｌｍ６ＣＤ５８^－細胞と一緒に２４時間インキュベートし、培養上清をＩＬ－２およびＩＦＮγ放出についてＥＬＩＳＡによって試験した。図１０に示されている通り、ｍ９７１－ＢＢｚ－ＣＤ２は効果がなかったが、他のＣＤ２含有ＣＡＲ（ｍ９７１－ＣＤ２－ＢＢｚ；ｍ９７１－ＣＤ２－ｚ；およびｍ９７１－ＢＢ－ＣＤ２－ｚ）は全て、ＣＤ５８^－細胞に対して従来のｍ９７１－ＢＢｚＣＡＲよりも優れた性能を示した。

マウス（群当たりＮ＝５）に、ルシフェラーゼを発現するＮａｌｍ６ＣＤ５８ＫＯ細胞１００万個を接種した。３日後、マウスを、モック（形質導入されていない）Ｔ細胞、ｍ９７１－ＢＢｚＴ細胞、またはｍ９７１－ＣＤ２－ＢＢｚＴ細胞３００万個で処置した。図１１に示されている通り、ｍ９７１－ＣＤ２－ＢＢｚＣＡＲ－Ｔ細胞により、従来のｍ９７１－ＢＢｚＣＡＲと比較して腫瘍制御の増強および生存の増強が実証された。

（実施例７）
ＣＤ１９ＣＤ２ＣＡＲの構築
この実験は、ＣＤ２ドメインを有するＣＤ１９ＣＡＲおよびＣＤ２ドメインを有さないＣＤ１９ＣＡＲを４－１ＢＢドメインを有するＣＡＲおよび４－１ＢＢドメインを有さないＣＡＲと比較するために行った。

抗ＣＤ１９ｓｃＦｖおよびＣＤ８α膜貫通ドメインを使用して以下のＣＡＲを構築した：ＣＤ１９－ＢＢｚ（配列番号６５、６６）、ＣＤ１９－ＣＤ２－ＢＢｚ（配列番号１３、４２）、ＣＤ１９－ＣＤ２ｚ（配列番号１２、４１）、およびＣＤ１９－ＢＢ－ＣＤ２ｚ（配列番号１４、４３）。これらのＣＡＲを記載の通りＴ細胞に形質導入した。

ＣＡＲ－Ｔのそれぞれ（細胞５０，０００個）を、Ｎａｌｍ６腫瘍細胞（ＧＦＰ^＋、ＣＤ５８^＋かまたはＣＤ５８^－のいずれか）５０，０００個と一緒にＩｎｃｕＣｙｔｅ（登録商標）インキュベーター中、７２時間インキュベートした。図１２に示されている通り、これらのＣＡＲ－Ｔ細胞は全て、ＣＤ５８^＋細胞およびＣＤ５８^－細胞のどちらに対しても、細胞傷害に関して同程度の性能を示した。

Ｎａｌｍ６細胞は、細胞当たり約４５，０００個のＣＤ１９分子を発現することが推定される。正常なＢ細胞は細胞当たりおよそ２２×１０^３個のＣＤ１９分子を発現することが報告されており、一方、白血病性Ｂ細胞による発現は有意に少ない（ＣＬＬ－細胞当たり１３×１０^３個；マントル細胞リンパ腫－細胞当たり１０×１０^３個、ＣＤ１９標的化治療を用いた処置前）（例えば、L Ginaldi et al., J Clin Pathol (1998) 51: 364-69を参照されたい）。ここで、腫瘍細胞における抗原の存在の減少の影響を試験するために、Ｎａｌｍ６細胞を操作して、ＣＤ１９発現を、患者において見いだされる生理的レベルに近づいたレベルである細胞当たり約６，１９６個または９６３個のＣＤ１９分子まで低減させた。

ＣＡＲ－Ｔのそれぞれ（細胞５０，０００個）を、Ｎａｌｍ６（６１９６）腫瘍細胞（ＧＦＰ^＋、ＣＤ５８^＋かまたはＣＤ５８^－のいずれか）５０，０００個と一緒に、ＩｎｃｕＣｙｔｅ（登録商標）インキュベーター中、７２時間インキュベートした。図１３に示されている通り、ＣＤ２ＣＡＲ－Ｔは、ＣＤ５８^－細胞に対する細胞傷害に関して従来のＣＤ１９－ＢＢｚＣＡＲ－Ｔ細胞よりも優れた性能を示した。図１４に示されている通り、これらのＣＤ２ＣＡＲはまたＣＤ５８^＋細胞およびＣＤ５８^－細胞のどちらに対しても、上記の通り２４時間インキュベートした場合に、サイトカイン放出に関しても従来のＣＤ１９－ＢＢｚＣＡＲ－Ｔ細胞よりも優れた性能を示した。

（実施例８）
ＣＤ２ＣＡＲにおける共刺激ドメインの選択
この実験は、どの共刺激ドメインがＣＤ２共刺激ドメインを含有するＣＡＲにおいて有用であるかを決定するために実施した。

ＣＡＲｍ９７１－２８ｚ（配列番号６１、６２）およびｍ９７１－ＣＤ２－２８ｚ（配列番号１９、４８）を調製し、記載の通りＴ細胞に形質導入した。ＣＡＲ－Ｔ細胞（１００，０００）を同数のＮａｌｍ６ＣＤ５８^＋またはＣＤ５８^－細胞と２４時間共培養し、培養上清をＥＬＩＳＡによってサイトカイン放出について調査した。図１５に示されている通り、ＣＤ２共刺激ドメインをＣＤ２８共刺激ドメインに追加することにより、ＩＬ－２およびＩＦＮγ放出が実際に有意に減少した。標的細胞とＩｎｃｕＣｙｔｅ（登録商標）中で７２時間共培養し、細胞傷害について調査したところ、図１６に示されている通り、従来のｍ９７１－２８ｚＣＡＲ－Ｔ細胞はｍ９７１－ＣＤ２－２８ｚＣＡＲ－Ｔ細胞よりも良好な性能を示した。

逆に、ＣＤ２を４－１ＢＢＣＡＲに追加することにより、特にＣＤ５８ＫＯ細胞に対する活性が改善された。ＣＡＲｍ９７１－ＢＢｚ（配列番号５９、６０）、ｍ９７１－ＣＤ２－ＢＢｚ（配列番号１７、４６）、ＣＤ１９－ＢＢｚ（配列番号６５、６６）、およびＣＤ１９－ＣＤ２－ＢＢｚ（配列番号１３、４２）を調製し、記載の通りＴ細胞に形質導入した。ＣＡＲ－Ｔ細胞（１００，０００）を同数のＮａｌｍ６ＣＤ５８^＋またはＣＤ５８^－細胞と２４時間共培養し、培養上清をＥＬＩＳＡによってサイトカイン放出について調査した。図１７に示されている通り、ＣＤ２共刺激ドメインを４－１ＢＢ共刺激ドメインに追加することにより、ＣＤ５８ＫＯ細胞に対するサイトカイン放出が改善され、ＣＤ１９ＣＡＲに関しては、ＣＤ２の追加は、ＣＤ５８^＋細胞に対するサイトカイン放出も改善された。図１８に示されている通り、標的細胞とＩｎｃｕＣｙｔｅ（登録商標）中で７２時間共培養し、細胞傷害について調査したところ、ｍ９７１－ＣＤ２－ＢＢｚＣＡＲ－Ｔ細胞は、特にＣＤ５８ＫＯ（ＣＤ５８^－）細胞に対して従来のｍ９７１－ＢＢｚＣＡＲ－Ｔ細胞よりも良好な性能を示した。

（実施例９）
トランスＣＤ２キメラポリペプチド
この実験は、トランス－ＣＤ２キメラポリペプチドの発現および有効性を実証するために実施した。

コードドメインが２Ａ配列で隔てられたＣＡＲｍ９７１－ＢＢｚ（ＣＤ８α膜貫通ドメインを有する）とＣＤ２キメラポリペプチドとを発現させるためのバイシストロニック構築物を作出した（配列番号６９、７０）。本実施例で使用した２Ａ配列（Ｐ２Ａ）を、フューリン切断配列（ＲＫＲＲ）ならびにＰ２Ａ配列の上流のＥｃｏＲＩ切断部位、および下流のＸｈｏＩ切断部位を含むように改変した。構築物は以下の通りであった：ｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ＣＤ１９－ＣＤ２８ｔｍ－ＣＤ２（配列番号７１、７２）、ｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ＣＤ１９－ＣＤ８ｔｍ－ＣＤ２（配列番号７３、７４）、ｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ＣＤ１９－ＣＤ２ｔｍ－ＣＤ２（配列番号７５、７６）、ｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ＣＤ１９－ＣＤ２８ｔｍ－ｓｔｏｐ（対照）（配列番号７７、７８）、およびｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ｓｔｏｐ（対照）（配列番号７９、８０）。このように構築されたＣＤ２キメラポリペプチドは異なる膜貫通（ｔｍ）ドメイン：ＣＤ２８ｔｍ、ＣＤ８ｔｍ、およびＣＤ２ｔｍも有した。図１９は、例示的なＣＡＲとＣＤ２－トランスキメラポリペプチドの差異を概略的に例示する。左側のパネルは、ＣＤ３ζ活性化ドメインに加えて４－１ＢＢおよびＣＤ２共刺激ドメインを有するＣＤ２ＣＡＲの概略構造を示す。右側のパネルは、４－１ＢＢ共刺激ドメインを有する第２世代ＣＡＲと、抗原結合性ドメインおよびＣＤ２共刺激ドメインを有するキメラポリペプチドとを示す。キメラポリペプチドはＣＤ３ζ活性化ドメインを欠き、したがって、トランスにのみ作用してＣＡＲを共刺激することに留意されたい。

ＣＡＲ－Ｔのそれぞれ（細胞５０，０００個）を、Ｎａｌｍ６腫瘍細胞（ＧＦＰ^＋、ＣＤ５８^＋かまたはＣＤ５８^－のいずれか）５０，０００個と一緒にＩｎｃｕＣｙｔｅ（登録商標）インキュベーター中、７２時間インキュベートした。図２０に示されている通り、ＣＤ５８^＋細胞に対しては全てのＣＡＲが同様の性能を示したが、一方、ＣＤ５８ＫＯ細胞に対してはｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ＣＤ１９－２８ｔｍ－ＣＤ２およびｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ＣＤ１９－２ｔｍ－ＣＤ２のみが十分な性能を示した。いかなる理論にも縛られることなく、これは、実質的に同じｔｍドメインを有する２つの受容体間の干渉に起因すると考えられる。

ＣＡＲ－Ｔ細胞（１００，０００）を同数のＮａｌｍ６ＣＤ５８^＋またはＣＤ５８^－細胞と２４時間共培養し、培養上清をＥＬＩＳＡによってサイトカイン放出について調査した。図２１に示されている通り、ＣＡＲに加えてキメラポリペプチドを有するＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＣＤ５８ＫＯ細胞に対するサイトカイン放出に関して、キメラポリペプチドを有さないＣＡＲ－Ｔ細胞よりも優れた性能を示した。

（実施例１０）
シスＣＤ２キメラポリペプチド対トランスＣＤ２キメラポリペプチド
この実験は、トランスＣＡＲ－キメラポリペプチドの組合せとＣＤ２ドメインを含有するシスＣＡＲを比較するために実施した。

ｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ＣＤ１９－２８ｔｍ－ＣＤ２（配列番号７１、７２）、ｍ９７１－ＢＢｚ－ＣＤ２ｚ（配列番号１８、４７）、またはｍ９７１－ＣＤ２ｚ（配列番号１６、４５）構築物を用いてＣＡＲ－Ｔ細胞を調製した。各群のＣＡＲ－Ｔ（細胞５０，０００個）を、Ｎａｌｍ６腫瘍細胞（ＧＦＰ^＋、ＣＤ５８^＋かまたはＣＤ５８^－のいずれか）５０，０００個と一緒にＩｎｃｕＣｙｔｅ（登録商標）インキュベーター中、７２時間インキュベートした。図２２に示されている通り、トランス構築物（ｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ＣＤ１９－２８ｔｍ－ＣＤ２）は２つのシス構築物よりも良好な性能を示した。

ＣＡＲ－Ｔ細胞（１００，０００）を同数のＮａｌｍ６ＣＤ５８^＋またはＣＤ５８^－細胞と２４時間共培養し、培養上清をＥＬＩＳＡによってサイトカイン放出について調査した。図２３に示されている通り、再度、トランス構築物（ｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ＣＤ１９－２８ｔｍ－ＣＤ２）は２つのシス構築物よりも良好な性能を示した。

（実施例１１）
パラトープキメラポリペプチド
この実験は、ＣＡＲによって標的とされるものと同じ抗原の異なるエピトープを標的とするキメラポリペプチドの影響を試験するために実施した。ｓｃＦｖｍ９７１とＨＡ２２はそれぞれ、ＣＤ２２の異なるエピトープを標的とする。本件では、ＨＡ２２をキメラポリペプチド構築物において使用し、ＣＡＲ構築物内のｍ９７１と組み合わせる。

ＣＡＲ－Ｔ細胞を、ｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ＨＡ２２－２８ｔｍ－ＣＤ２（配列番号８１、８２）、ｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ＨＡ２２－８ｔｍ－ＣＤ２（配列番号８３、８４）、ｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ＨＡ２２－２ｔｍ－ＣＤ２（配列番号８５、８６）、ｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ｓｔｏｐ（対照）（配列番号７９、８０）、およびｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ＨＡ２２－２８ｔｍ－ｓｔｏｐ（対照）（配列番号７７、７８）を用いて調製した。各群のＣＡＲ－Ｔ（細胞５０，０００個）を、Ｎａｌｍ６腫瘍細胞（ＧＦＰ^＋、ＣＤ５８^＋かまたはＣＤ５８^－のいずれか）５０，０００個と一緒にＩｎｃｕＣｙｔｅ（登録商標）インキュベーター中、７２時間インキュベートした。図２４に示されている通り、トランスＣＡＲ－キメラポリペプチドの組合せはそれぞれ、ＣＡＲ単独よりも良好な性能を示した。

ＣＡＲ－Ｔ細胞（群当たり１００，０００）を同数のＮａｌｍ６ＣＤ５８^＋またはＣＤ５８^－細胞と２４時間共培養し、培養上清をＥＬＩＳＡによってサイトカイン放出について調査した。図２５に示されている通り、ｍ９７１－ＢＢｚ－２Ａ－ＨＡ２２－２８ｔｍ－ＣＤ２は、サイトカイン放出に関してｍ９７１－ＢＢ－ＣＤ２ｚよりもいくらか良好な性能を示した。

（実施例１２）
ＣＤ２２ＣＤ２ＣＡＲの抗腫瘍活性
この実験は、ＣＤ２シグナル伝達ドメインを有するまたは有さないＣＤ２２ＣＡＲ（ｍ９７１－ＢＢｚ）のＣＤ５８ＫＯに対する抗腫瘍活性を試験するために実施した。

どちらも腫瘍を生物発光によって追跡するためのルシフェラーゼを発現する、示されている腫瘍株１００万個をＮＳＧマウスに接種した。接種の３日後、マウスを、ＣＤ１９－ＴＭまたはＣＤ１９－ＣＤ２を有するモック（形質導入されていない）またはｍ９７１－ＢＢｚトランス３００万個で処置した。腫瘍ＢＬＩを週に１～２回測定した。

図２６に示されている通り、ＣＤ１９を認識するＣＤ２シグナル伝達ＣＡＲ（配列番号１０１、１２３）と一緒に発現される（同時形質導入される）ｍ９７１－ＢＢｚＣＡＲ（配列番号５９、６０）（ＣＤ２２－４－１ＢＢｚ＋ＣＤ１９－ＣＤ２）を含むトランスＣＤ２ＣＡＲＴ細胞により、いかなるシグナル伝達ドメインも有さないＣＤ１９を認識する対照分子（配列番号１１３、１３５）と一緒に発現される（同時形質導入される）従来のｍ９７１－ＢＢｚＣＡＲ（配列番号５９、６０）（ＣＤ２２－４－１ＢＢｚ＋ＣＤ１９－ＴＭ）と比較して、ＣＤ５８ＫＯＮａｌｍ６に対する強力な抗腫瘍活性が実証された。

（実施例１３）
ＣＤ５８ＫＯのｉｎｖｉｔｒｏにおけるトランスＣＡＲおよびＣＤ２によるレスキュー
この実験は、ＣＤ５８喪失のｉｎｖｉｔｒｏにおけるトランスＣＡＲおよびＣＤ２によるレスキューを試験するために実施した。

ＣＤ２０を認識するＣＤ２含有受容体（ＣＤ８またはＣＤ２８膜貫通ドメインのいずれかを有する）（配列番号１０９または１１０）をＣＤ２２ＣＡＲ（ｍ９７１－ＢＢｚ；配列番号５９、６０）と同時発現させた。ＣＡＲＴ細胞１００，０００個を、ＲａｊｉまたはＮａｌｍ６腫瘍細胞株と１：１の比で２４時間共培養した。上清中のＩＬ－２レベルをＥＬＩＳＡによって測定した。図２７に示されている通り、ＣＤ２０を認識するＣＤ２含有受容体を同時発現させた（同時形質導入した）トランスＣＤ２２ＣＡＲＴ細胞（ｍ９７１－ＢＢｚ＋ＣＤ２０－２８ｔｍ－ＣＤ２およびｍ９７１－ＢＢｚ＋ＣＤ２０－８ｔｍ－ＣＤ２）は、ＣＤ５８ＫＯ細胞に対するＣＡＲＴ機能をレスキューすることができた。このＣＤ５８喪失に対するレスキューは、腫瘍がＣＤ２受容体の標的（この実験ではＣＤ２０）を発現した場合にのみ生じた。

ＣＤ２０を認識するＣＤ２含有受容体（ＣＤ２を有するまたは有さないＣＤ２８ヒンジ－膜貫通ドメインを有する；配列番号１１１または１１３）をＣＤ１９ＣＡＲ（ＣＤ１９－ＢＢｚ；配列番号６５、６６）と同時発現させた。ＣＡＲＴ細胞１００，０００個を、ＣＤ５８＋およびＣＤ５８－Ｒａｊｉ腫瘍細胞株と１：１の比で２４時間共培養した。上清中のＩＬ－２レベルをＥＬＩＳＡによって測定した。図２８に示されている通り、ＣＤ２０を認識するＣＤ２含有受容体を同時発現させたトランスＣＤ１９ＣＡＲＴ細胞（ＣＤ１９－ＢＢｚ＋ＣＤ２０－２８ｈｔｍ－ＣＤ２）はＣＤ５８ＫＯ細胞に対するＣＡＲＴ細胞機能をレスキューすることができた。

ＣＤ２およびＣＤ３ｚエンドドメインを含有する、ＣＤ２２を認識するＣＡＲ（ｍ９７１－８ｔｍ－ＣＤ２－ｚ；配列番号９２）をＣＤ１９－２８ｚＣＡＲ（配列番号６３、６４）とトランスに同時発現させた。ＣＡＲＴ細胞１００，０００個を、ＣＤ５８＋およびＣＤ５８－Ｎａｌｍ６腫瘍細胞株と１：１の比で２４時間共培養した。上清中のＩＬ－２レベルをＥＬＩＳＡによって測定した。図２９に示されている通り、トランスＣＤ１９－２８ｚおよびｍ９７１－８ｔｍ－ＣＤ２－ｚは、ＣＤ５８ＫＯ細胞に対するＣＡＲＴ機能をレスキューし得、ＣＤ１９またはＣＤ２２抗原のいずれかが喪失した細胞に対する活性を維持した。

ＣＤ２およびＣＤ３ｚエンドドメインを含有する、Ｃ２０を認識するＣＡＲ（ＣＤ２０－ＩｇＧ１ｌｏｎｇ－２８ｈｔｍ－ＣＤ２－ｚ；配列番号１１１、１３３）を、ＣＤ１９－ＢＢｚＣＡＲ（配列番号６５、６６）とトランスに同時発現させた（同時形質導入した）。ＣＡＲＴ細胞１００，０００個を、ＣＤ５８＋およびＣＤ５８－Ｒａｊｉ腫瘍細胞株と１：１の比で２４時間共培養した。上清中のＩＬ－２レベルをＥＬＩＳＡによって測定した。図３０に示されている通り、トランスＣＤ１９－ＢＢｚ（配列番号６５、６６）およびＣＤ２０－２８ｈｔｍ－ＣＤ２－ｚ（ＣＤ２０－ＩｇＧ１ｌｏｎｇ－２８ｈｔｍ－ＣＤ２－ｚ；配列番号１１１、１３３）はＣＤ５８ＫＯ細胞に対するＣＡＲＴ細胞機能をレスキューし得、ＣＤ１９などの標的抗原が喪失した細胞に対する活性を維持した。トランスＣＤ１９－ＢＢｚおよびＣＤ２０－２８ｈｔｍ対照受容体（配列番号１１３、１３５）は機能をレスキューすることができなかった。

（実施例１４）
ＣＤ５８ＫＯのｉｎｖｉｖｏにおけるトランスＣＡＲおよびＣＤ２によるレスキュー
この実験は、ＣＤ５８喪失のｉｎｖｉｖｏにおいてトランスＣＡＲおよびＣＤ２によるレスキューを試験するために実施した。

どちらも腫瘍を生物発光によって追跡するためのルシフェラーゼを発現する、示されている腫瘍株１００万個をＮＳＧマウスに接種した。腫瘍接種の３日後、マウスを、図３１に示されている通りＣＡＲＴ細胞３００万個で処置した。腫瘍生物発光を週に１～２回測定した。群当たりＮ＝５のマウス。図３１に示されている通り、ＣＤ２シグナル伝達がトランスに組み込まれたＣＤ１９ＣＡＲまたはＣＤ２２ＣＡＲ細胞はＣＤ５８喪失を克服した。この実験では、トランスＣＤ２を含有する受容体にはＣＤ３ゼータも組み込まれ（ＣＤ１９－２８ｔｍ－ＣＤ２－ｚ；配列番号９８、１１８）、したがって、ＣＤ５８ＫＯ細胞に対するＣＡＲＴ細胞機能をレスキューすることができ、また、ＣＤ１９などの標的抗原が喪失した細胞に対する活性も維持することができた。

（実施例１５）
ＣＤ５８およびＣＤ１９喪失のＣＤ２０ＣＤ２ＣＡＲレスキュー
この実験は、ＣＤ５８喪失およびＣＤ１９喪失におけるＣＤ２０ＣＤ２ＣＡＲの影響を比較するために実施した。

３種のＣＡＲ（ＣＤ１９－２８ｈｔｍ－ＢＢｚ；ＣＤ２０－８ｈｔｍ－ＣＤ２－ｚ；ＣＤ２０－２８ｈｔｍ－ＣＤ２－ｚ）のＣＡＲＴ細胞１００，０００個をＲａｊｉ腫瘍細胞株（ＣＤ５８＋；ＣＤ５８－；ＣＤ１９－）と１：１の比で２４時間共培養した。上清中のＩＬ－２レベルをＥＬＩＳＡによって測定した。図３２に示されている通り、ＣＤ２シグナル伝達が組み込まれた、ＣＤ２０を標的とするＣＡＲは、どちらもＣＡＲＴ細胞療法からの免疫エスケープの一般機構である、ＣＤ５８の喪失およびＣＤ１９の喪失の両方を克服することができた。

（実施例１６）
ＣＤ２シグナル伝達の増強
ｅｘｖｉｖｏで成長させたトランスジェニックＴＣＲを発現するＴ細胞またはバルク腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）におけるＣＤ２シグナル伝達をいくつかの方法によって増強することができる。次いで、ＴＩＬを患者に戻すことができる。

例えば、Ｔ細胞に、ＣＤ２シグナル伝達を増強する補助受容体を形質導入することができる（トランスジェニックＴＣＲの発現に加えて）。細胞外リガンド結合性ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＣＤ２シグナル伝達ドメインを含む補助受容体を、ウイルスベクターまたは他のベクターで転写させることができ、標的腫瘍細胞がＣＤ５８を低レベルで発現する、ＣＤ５８を発現しない、または変異ＣＤ５８を発現する場合であってもＣＤ２シグナル伝達をトランスでもたらすことができる。補助受容体の細胞外部分は、腫瘍細胞によって発現される抗原を認識するｓｃＦｖまたは目的の標的腫瘍細胞上に発現される共通の受容体のリガンドを含み得る。

ＣＡＲＴ細胞、トランスジェニックＴＣＲＴ細胞、またはバルクＴＩＬにおけるＣＤ２シグナル伝達を増強するための別のやり方は、Ｔ細胞に対して、１つまたは複数の抗ＣＤ２ｓｃＦｖ、抗体、Ｆａｂ、ＤＡＲＰＩＮ、リガンド、または他の結合物質／抗原結合性ドメインを使用することによって細胞のネイティブＣＤ２と架橋結合することが可能な分泌型分子を構成的に発現するように形質導入を行うことを含み得る。あるいは、分泌型分子を活性化スイッチの下で発現させることができる。分泌型分子は、膜結合型であり得、リンカーによって接続された２つのｓｃＦｖからなり得る：一方は、Ｔ細胞上のＣＤ２に結合するｓｃＦｖ（ネイティブＣＤ２シグナル伝達を活性化する）であり、他方は、腫瘍細胞上に発現されるタンパク質または標的を認識するｓｃＦｖまたはリガンドであり、したがって、Ｔ細胞が腫瘍細胞と遭遇するとＣＤ２が架橋結合し、活性化される。

Claims

（ｉ）ＣＤ２シグナル伝達ドメインを含むがＣＤ３－ゼータドメインを含まない細胞質シグナル伝達ドメインと、（ｉｉ）抗原結合性ドメインまたは（ｉｉｉ）膜貫通ドメインのうちの少なくとも１つとを含むキメラポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む核酸。
前記細胞質シグナル伝達ドメインが、共刺激ドメインをさらに含む、請求項１に記載の核酸。
前記共刺激ドメインが、４－１ＢＢシグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７シグナル伝達ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７８シグナル伝達ドメイン、ＣＤ４０シグナル伝達ドメイン、ＣＤ４０Ｌシグナル伝達ドメイン、ｔｏｌｌ様受容体シグナル伝達ドメイン、またはこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含む、請求項２に記載の核酸。
前記細胞質シグナル伝達ドメインが、配列番号８のアミノ酸配列と少なくとも８０％相同なアミノ酸配列を含む、請求項１から３までのいずれか一項に記載の核酸。
前記細胞質ドメインが、配列番号８からなる、請求項１から３までのいずれか一項に記載の核酸。
前記キメラポリペプチドが、配列番号２０～２９および９２～１１２からなる群より選択されるアミノ酸配列と少なくとも約８０％相同なアミノ酸配列を含む、請求項１から５までのいずれか一項に記載の核酸。
前記キメラポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドを含み、前記キメラポリペプチドが、（ｉｉ）前記抗原結合性ドメインを含むものである、請求項１から６までのいずれか一項に記載の核酸。
前記抗原結合性ドメインが、抗体またはその抗原結合性断片を含む、請求項７に記載の核酸。
前記抗原結合性ドメインが、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ、Ｆａｂ、二重特異性抗体またはその抗原結合性断片、三重特異性抗体またはその抗原結合性断片、二重特異性ダイアボディ、三重特異性トリアボディ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、ミニボディ、ＶｈＨドメイン、ｈｃＩｇＧドメイン、Ｖ－ＮＡＲドメイン、またはこれらの任意の組合せを含む、請求項７に記載の核酸。
前記抗原結合性ドメインが、Ｂ細胞表面抗原に対して特異的である、請求項７から９までのいずれか一項に記載の核酸。
前記Ｂ細胞表面抗原が、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ２０、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ５２、ＣＤ８１、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ１３８、ＣＳＩ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＢＡＦＦ受容体、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、およびＴＡＣＩからなる群より選択される、請求項１０に記載の核酸。
前記抗原結合性ドメインが、腫瘍関連抗原に対して特異的である、請求項７から９までのいずれか一項に記載の核酸。
前記腫瘍関連抗原が、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ２０、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ５２、ＣＤ８１、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ１３８、ＣＳＩ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＢＡＦＦ受容体、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＴＡＣＩ、神経膠腫関連抗原、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ベータ－ヒト絨毛性ゴナドトロピン、アルファ－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、レクチン反応性ＡＦＰ、サイログロブリン、ＲＡＧＥ－１、ＭＮ－ＣＡＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２（ＡＳ）、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔＨＳＰ７０－２、Ｍ－ＣＳＦ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＰＡＰ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ｐ５３、プロステイン、ＰＳＭＡ、ＨＥＲ２、サバイビンおよびテロメラーゼ、前立腺癌腫瘍抗原－１（ＰＣＴＡ－１）、ＭＡＧＥ、ＥＬＦ２Ｍ、好中球エラスターゼ、エフリンＢ２、インスリン増殖因子（ＩＧＦ）－Ｉ、ＩＧＦ－ＩＩ、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｂ７－Ｈ３、ＧＰＣ２、Ｌ１ＣＡＭ、ＥＧＦＲ、メソテリン、ＭＡＲＴ－１、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ１７）、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ｐ１５、ｐ５３、Ｒａｓ、ＨＥＲ－２、ＢＣＲ－ＡＢＬ、Ｅ２Ａ－ＰＲＬ、Ｈ４－ＲＥＴ、ＩＧＨ－ＩＧＫ、ＭＹＬ－ＲＡＲ、ＥＢＶＡ、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原Ｅ６およびＥ７、ＴＳＰ－１８０、ＭＡＧＥ－４、ＭＡＧＥ－５、ＭＡＧＥ－６、ＲＡＧＥ、ｐ１８５ｅｒｂＢ２、ｐ１８０ｅｒｂＢ－３、ｃ－ｍｅｔ、ｎｍ－２３Ｈ１、ＰＳＡ、ＴＡＧ－７２、ＣＡ１９－９、ＣＡ７２－４、ＣＡＭ１７．１、ＮｕＭａ、Ｋ－ｒａｓ、β－カテニン、ＣＤＫ４、Ｍｕｍ－１、ｐ１５、ｐ１６、４３－９Ｆ、５Ｔ４、７９１Ｔｇｐ７２、α－フェトプロテイン、β－ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＡ１２５、ＢＣＡＡ、ＣＡ１９５、ＣＡ２４２、ＣＡ－５０、ＣＡＭ４３、ＣＤ６８／Ｐ１、ＣＯ－０２９、ＦＧＦ－５、Ｇ２５０、Ｇａ７３３／ＥｐＣＡＭ、ＨＴｇｐ－１７５、Ｍ３４４、ＭＡ－５０、ＭＧ７－Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ／７０Ｋ、ＮＹ－ＣＯ－１、ＲＣＡＳ１、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ－９０、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ、ＴＰＳＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＲＯＲ１、ならびにＧＤ２からなる群より選択される、請求項１２に記載の核酸。
前記キメラポリペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドを含み、前記キメラポリペプチドが、（ｉｉｉ）前記膜貫通ドメインを含むものである、請求項１から１３までのいずれか一項に記載の核酸。
前記膜貫通ドメインが、ＣＤ３ζ、ＣＤ２、ＣＤ８α、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＴＬＡ４、ＯＸ４０、ＰＤ－１、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＦｃＥＲＩγ、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＩＬＲＢ（ＣＤ１２２）、およびＩＬ－２ＲＧ（ＣＤ１３２）の膜貫通ドメインの全てまたはこれらのうちの一部からなる群より選択される、請求項１４に記載の核酸。
配列番号２０～２９および９２～１１２からなる群より選択される配列と少なくとも約８０％相同な配列を含むキメラポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む核酸。
請求項１から１６までのいずれか一項に記載の、キメラポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む核酸を含み、追加のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む核酸をさらに含む、核酸組成物。
前記追加のポリペプチドが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、またはＴＣＲ－ＣＡＲを含む、請求項１７に記載の核酸組成物。
前記ＣＡＲが、第１世代ＣＡＲ、第２世代ＣＡＲ、または第３世代ＣＡＲを含む、請求項１８に記載の核酸組成物。
前記追加のポリペプチドが、ＣＤ３－ゼータドメインを含むＣＡＲを含む、請求項１８または１９に記載の核酸組成物。
前記追加のポリペプチドが、抗原結合性ドメインを含むＣＡＲを含む、請求項１８から２０までのいずれか一項に記載の核酸組成物。
前記抗原結合性ドメインが、抗体またはその抗原結合性断片を含む、請求項２１に記載の核酸組成物。
前記抗原結合性ドメインが、ｓｃＦｖ、ｓｄＡｂ、Ｆａｂ、二重特異性抗体またはその抗原結合性断片、三重特異性抗体またはその抗原結合性断片、二重特異性ダイアボディ、三重特異性トリアボディ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、ミニボディ、ＶｈＨドメイン、ｈｃＩｇＧドメイン、Ｖ－ＮＡＲドメイン、またはこれらの任意の組合せを含む、請求項２１に記載の核酸組成物。
前記抗原結合性ドメインが、Ｂ細胞表面抗原に対して特異的である、請求項１７から２３までのいずれか一項に記載の核酸組成物。
前記Ｂ細胞表面抗原が、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ２０、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ５２、ＣＤ８１、ＣＤ７９Ａ、ＣＤ７９Ｂ、ＣＤ１３８、ＣＳＩ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＢＡＦＦ受容体、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、およびＴＡＣＩからなる群より選択される、請求項２４に記載の核酸組成物。
前記抗原結合性ドメインが、腫瘍関連抗原に対して特異的である、請求項２１から２３までのいずれか一項に記載の核酸組成物。
前記腫瘍関連抗原が、神経膠腫関連抗原、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ベータ－ヒト絨毛性ゴナドトロピン、アルファ－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、レクチン反応性ＡＦＰ、サイログロブリン、ＲＡＧＥ－１、ＭＮ－ＣＡＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２（ＡＳ）、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔＨＳＰ７０－２、Ｍ－ＣＳＦ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＰＡＰ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ｐ５３、プロステイン、ＰＳＭＡ、ＨＥＲ２、サバイビンおよびテロメラーゼ、前立腺癌腫瘍抗原－１（ＰＣＴＡ－１）、ＭＡＧＥ、ＥＬＦ２Ｍ、好中球エラスターゼ、エフリンＢ２、インスリン増殖因子（ＩＧＦ）－Ｉ、ＩＧＦ－ＩＩ、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｂ７－Ｈ３、ＧＰＣ２、Ｌ１ＣＡＭ、ＥＧＦＲ、メソテリン、ＭＡＲＴ－１、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ１７）、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ｐ１５、ｐ５３、Ｒａｓ、ＨＥＲ－２、ＢＣＲ－ＡＢＬ、Ｅ２Ａ－ＰＲＬ、Ｈ４－ＲＥＴ、ＩＧＨ－ＩＧＫ、ＭＹＬ－ＲＡＲ、ＥＢＶＡ、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原Ｅ６およびＥ７、ＴＳＰ－１８０、ＭＡＧＥ－４、ＭＡＧＥ－５、ＭＡＧＥ－６、ＲＡＧＥ、ｐ１８５ｅｒｂＢ２、ｐ１８０ｅｒｂＢ－３、ｃ－ｍｅｔ、ｎｍ－２３Ｈ１、ＰＳＡ、ＴＡＧ－７２、ＣＡ１９－９、ＣＡ７２－４、ＣＡＭ１７．１、ＮｕＭａ、Ｋ－ｒａｓ、β－カテニン、ＣＤＫ４、Ｍｕｍ－１、ｐ１５、ｐ１６、４３－９Ｆ、５Ｔ４、７９１Ｔｇｐ７２、α－フェトプロテイン、β－ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＡ１２５、ＢＣＡＡ、ＣＡ１９５、ＣＡ２４２、ＣＡ－５０、ＣＡＭ４３、ＣＤ６８／Ｐ１、ＣＯ－０２９、ＦＧＦ－５、Ｇ２５０、Ｇａ７３３／ＥｐＣＡＭ、ＨＴｇｐ－１７５、Ｍ３４４、ＭＡ－５０、ＭＧ７－Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ／７０Ｋ、ＮＹ－ＣＯ－１、ＲＣＡＳ１、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ－９０、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ、ＴＰＳＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＲＯＲ１、ならびにＧＤ２からなる群より選択される、請求項２４に記載の核酸組成物。
前記追加のポリペプチドが、共刺激ドメインをさらに含む、請求項１７から２７までのいずれか一項に記載の核酸組成物。
前記共刺激ドメインが、４－１ＢＢシグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７シグナル伝達ドメイン、ＯＸ４０シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７８シグナル伝達ドメイン、ＣＤ４０シグナル伝達ドメイン、ＣＤ４０Ｌシグナル伝達ドメイン、ｔｏｌｌ様受容体シグナル伝達ドメイン、またはこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含む、請求項２８に記載の核酸組成物。
前記追加のポリペプチドが、膜貫通ドメインをさらに含む、請求項１７から２９までのいずれか一項に記載の核酸組成物。
前記膜貫通ドメインが、ＣＤ３ζ、ＣＤ２、ＣＤ８α、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＴＬＡ４、ＯＸ４０、ＰＤ－１、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＦｃＥＲＩγ、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＩＬＲＢ（ＣＤ１２２）、およびＩＬ－２ＲＧ（ＣＤ１３２）の膜貫通ドメインの全てまたはこれらのうちの一部からなる群より選択される、請求項３０に記載の核酸組成物。
請求項１から１６までのいずれか一項に記載の核酸または請求項１７から３１までのいずれか一項に記載の核酸組成物を含むベクター。
請求項３２に記載のベクターを含む細胞。
免疫細胞、幹細胞、哺乳動物細胞、霊長類細胞、またはヒト細胞である、請求項３３に記載の細胞。
自己または同種のものである、請求項３３または３４に記載の細胞。
Ｔ細胞、ＣＤ８陽性Ｔ細胞、ＣＤ４陽性Ｔ細胞、調節性Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、または腫瘍浸潤性リンパ球である、請求項３３から３５までのいずれかに記載の細胞。
過剰増殖性障害を有する対象を処置する方法であって、前記対象に、請求項３３から３６までのいずれか一項に記載の細胞を治療有効数で含む組成物を投与するステップを含む、方法。
（ｉ）ＣＤ５８の発現を欠く；（ｉｉ）低下したレベルのＣＤ５８を発現する；または（ｉｉｉ）ＣＤ２を活性化する能力が低下した形態のＣＤ５８を発現する標的細胞の増殖を特徴とする過剰増殖性障害を有する対象を処置する方法であって、前記対象に、請求項３３から３６までのいずれか一項に記載の細胞を治療有効数で含む組成物を投与するステップを含む、方法。
（ｉ）抗原結合性ドメイン；（ｉｉ）膜貫通ドメイン；（ｉｉｉ）ＣＤ２シグナル伝達ドメインおよび共刺激ドメインを含む細胞質シグナル伝達ドメインを含むキメラポリペプチドであって、
（ｉ）前記抗原結合性ドメインが、配列番号１、２、３、および４からなる群より選択される配列と少なくとも約８０％相同なアミノ酸配列を含み、
（ｉｉ）前記膜貫通ドメインが、配列番号５、６、および７からなる群より選択される配列と少なくとも約８０％相同なアミノ酸配列を含み、
（ｉｉｉ）前記ＣＤ２シグナル伝達ドメインが、配列番号８の配列と少なくとも約８０％相同なアミノ酸配列を含み、前記共刺激ドメインが、配列番号１０および１１からなる群より選択される配列と少なくとも約８０％相同なアミノ酸配列を含む、
キメラポリペプチド。
前記細胞質シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３－ゼータ活性化ドメインを含まない、請求項３９に記載のキメラポリペプチド。
前記細胞質シグナル伝達ドメインが、活性化ドメインを含み、前記活性化ドメインが、配列番号９の配列と少なくとも約８０％相同なアミノ酸配列を含む、請求項３９に記載のキメラポリペプチド。
Ｎ末端からＣ末端までの順に：
選択された抗原に対して特異的な第１の抗原結合性ドメイン；
スペーサードメイン；
膜貫通ドメイン；および
細胞質シグナル伝達ドメインであって、ＣＤ２シグナル伝達ドメイン、共刺激シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ゼータ鎖（ＣＤ３ζ）活性化ドメインを含み、前記共刺激シグナル伝達ドメインがＣＤ２８シグナル伝達ドメインではない、細胞質シグナル伝達ドメイン
を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
前記共刺激シグナル伝達ドメインが、４－１ＢＢシグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７シグナル伝達ドメイン、またはＯＸ４０シグナル伝達ドメインを含む、請求項４２に記載のＣＡＲ。
前記共刺激シグナル伝達ドメインが、４－１ＢＢシグナル伝達ドメインを含む、請求項４２または４３に記載のＣＡＲ。
前記ＣＡＲが、第２の抗原結合性ドメインをさらに含む、請求項４２から４４までのいずれか一項に記載のＣＡＲ。
前記第１の抗原結合性ドメインと前記第２の抗原結合性ドメインが、異なる抗原に対して特異的である、請求項４２から４５までのいずれか一項に記載のＣＡＲ。
前記第１の抗原結合性ドメインと前記第２の抗原結合性ドメインが、同じ抗原の異なるエピトープに対して特異的である、請求項４２から４５までのいずれか一項に記載のＣＡＲ。
前記スペーサードメインが、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ２８ヒンジドメイン、ＣＴＬＡ－４ヒンジドメイン、ＩｇＧ１ヒンジドメイン、およびＩｇＧ４ヒンジドメインからなる群より選択される、請求項４２から４７までのいずれか一項に記載のＣＡＲ。
前記スペーサードメインが、ＣＤ２８ヒンジドメインを含む、請求項４８に記載のＣＡＲ。
前記スペーサードメインが、約１０アミノ酸から約５０アミノ酸までを有する合成ポリペプチドスペーサーである、請求項４２から４６までのいずれか一項に記載のＣＡＲ。
前記合成ポリペプチドスペーサーが、（ＧＧＳ）_ｎ、（ＳＧＧ）_ｎ、（ＧＧＧＳ）_ｎ、（ＳＧＧＧ）_ｎ、または（ＧＧＧＧＳ）_ｎであり、ｎが約１～約１５（配列番号８７～９１）である、請求項５０に記載のＣＡＲ。
前記膜貫通ドメインが、ＣＤ３ζ、ＣＤ２、ＣＤ８α、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＴＬＡ４、ＯＸ４０、ＰＤ－１、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＦｃＥＲＩγ、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＩＬＲＢ（ＣＤ１２２）、およびＩＬ－２ＲＧ（ＣＤ１３２）の膜貫通ドメインの全てまたはこれらのうちの一部からなる群より選択される、請求項４２から５１までのいずれか一項に記載のＣＡＲ。
前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８α膜貫通ドメインを含む、請求項５２に記載のＣＡＲ。
前記膜貫通ドメインが、ＣＤ２８膜貫通ドメインを含む、請求項５２に記載のＣＡＲ。
配列番号１２～２９、１１４～１３４のいずれか１つの配列と少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を有する、請求項４２に記載のＣＡＲ。
前記第１の抗原結合性ドメインが、腫瘍特異的抗原または腫瘍関連抗原に特異的に結合する、請求項４２から５４までのいずれか一項に記載のＣＡＲ。
前記腫瘍特異的抗原または腫瘍関連抗原が、神経膠腫関連抗原、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ベータ－ヒト絨毛性ゴナドトロピン、アルファ－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、レクチン反応性ＡＦＰ、サイログロブリン、ＲＡＧＥ－１、ＭＮ－ＣＡＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２（ＡＳ）、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔＨＳＰ７０－２、Ｍ－ＣＳＦ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＰＡＰ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ｐ５３、プロステイン、ＰＳＭＡ、ＨＥＲ２、サバイビンおよびテロメラーゼ、前立腺癌腫瘍抗原－１（ＰＣＴＡ－１）、ＭＡＧＥ、ＥＬＦ２Ｍ、好中球エラスターゼ、エフリンＢ２、インスリン増殖因子（ＩＧＦ）－Ｉ、ＩＧＦ－ＩＩ、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｂ７－Ｈ３、ＧＰＣ２、Ｌ１ＣＡＭ、ＥＧＦＲ、メソテリン、ＭＡＲＴ－１、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ１７）、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ｐ１５、ｐ５３、Ｒａｓ、ＨＥＲ－２、ＢＣＲ－ＡＢＬ、Ｅ２Ａ－ＰＲＬ、Ｈ４－ＲＥＴ、ＩＧＨ－ＩＧＫ、ＭＹＬ－ＲＡＲ、ＥＢＶＡ、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原Ｅ６およびＥ７、ＴＳＰ－１８０、ＭＡＧＥ－４、ＭＡＧＥ－５、ＭＡＧＥ－６、ＲＡＧＥ、ｐ１８５ｅｒｂＢ２、ｐ１８０ｅｒｂＢ－３、ｃ－ｍｅｔ、ｎｍ－２３Ｈ１、ＰＳＡ、ＴＡＧ－７２、ＣＡ１９－９、ＣＡ７２－４、ＣＡＭ１７．１、ＮｕＭａ、Ｋ－ｒａｓ、β－カテニン、ＣＤＫ４、Ｍｕｍ－１、ｐ１５、ｐ１６、４３－９Ｆ、５Ｔ４、７９１Ｔｇｐ７２、α－フェトプロテイン、β－ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＡ１２５、ＢＣＡＡ、ＣＡ１９５、ＣＡ２４２、ＣＡ－５０、ＣＡＭ４３、ＣＤ６８／Ｐ１、ＣＯ－０２９、ＦＧＦ－５、Ｇ２５０、Ｇａ７３３／ＥｐＣＡＭ、ＨＴｇｐ－１７５、Ｍ３４４、ＭＡ－５０、ＭＧ７－Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ／７０Ｋ、ＮＹ－ＣＯ－１、ＲＣＡＳ１、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ－９０、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ、ＴＰＳＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＲＯＲ１、またはＧＤ２の群から選択される、請求項５６に記載のＣＡＲ。
ＣＤ２シグナル伝達が、トランスジェニックＴ細胞受容体（ＴＣＲ）で増強される、請求項４２から５７までのいずれか一項に記載のＣＡＲ。
前記トランスジェニックＴＣＲが、第２の抗原に対して特異的な第２の抗原結合性ドメインを含む、請求項５８に記載のＣＡＲ。
前記トランスジェニックＴＣＲが、少なくともＴＣＲＶα鎖ＣＤＲ３および／または少なくともＴＣＲＶβ鎖ＣＤＲ３を含む、請求項５８から５９までのいずれか一項に記載のＣＡＲ。
前記トランスジェニックＴＣＲが、膜貫通ドメインをさらに含む、請求項６０に記載のＣＡＲ。
前記膜貫通ドメインが、ＣＤ３ζ、ＣＤ２、ＣＤ８α、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＴＬＡ４、ＯＸ４０、ＰＤ－１、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＦｃＥＲＩγ、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＩＬＲＢ（ＣＤ１２２）、およびＩＬ－２ＲＧ（ＣＤ１３２）からなる群より選択される、請求項６１に記載のＣＡＲ。
前記トランスジェニックＴＣＲが、細胞質シグナル伝達ドメインをさらに含む、請求項５８から６２までのいずれか一項に記載のＣＡＲ。
前記細胞質シグナル伝達ドメインが、ＣＤ２シグナル伝達ドメインである、請求項６３に記載のＣＡＲ。
前記トランスジェニックＴＣＲの前記第２の抗原が、ＭＨＣクラスＩまたはＭＨＣクラスＩＩによって提示される腫瘍特異的抗原または腫瘍関連抗原である、請求項５８から６４までのいずれか一項に記載のＣＡＲ。
前記第２の抗原が、神経膠腫関連抗原、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ベータ－ヒト絨毛性ゴナドトロピン、アルファ－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、レクチン反応性ＡＦＰ、サイログロブリン、ＲＡＧＥ－１、ＭＮ－ＣＡＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２（ＡＳ）、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔＨＳＰ７０－２、Ｍ－ＣＳＦ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＰＡＰ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ｐ５３、プロステイン、ＰＳＭＡ、ＨＥＲ２、サバイビンおよびテロメラーゼ、前立腺癌腫瘍抗原－１（ＰＣＴＡ－１）、ＭＡＧＥ、ＥＬＦ２Ｍ、好中球エラスターゼ、エフリンＢ２、インスリン増殖因子（ＩＧＦ）－Ｉ、ＩＧＦ－ＩＩ、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｂ７－Ｈ３、ＧＰＣ２、Ｌ１ＣＡＭ、ＥＧＦＲ、メソテリン、ＭＡＲＴ－１、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ１７）、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ｐ１５、ｐ５３、Ｒａｓ、ＨＥＲ－２、ＢＣＲ－ＡＢＬ、Ｅ２Ａ－ＰＲＬ、Ｈ４－ＲＥＴ、ＩＧＨ－ＩＧＫ、ＭＹＬ－ＲＡＲ、ＥＢＶＡ、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原Ｅ６およびＥ７、ＴＳＰ－１８０、ＭＡＧＥ－４、ＭＡＧＥ－５、ＭＡＧＥ－６、ＲＡＧＥ、ｐ１８５ｅｒｂＢ２、ｐ１８０ｅｒｂＢ－３、ｃ－ｍｅｔ、ｎｍ－２３Ｈ１、ＰＳＡ、ＴＡＧ－７２、ＣＡ１９－９、ＣＡ７２－４、ＣＡＭ１７．１、ＮｕＭａ、Ｋ－ｒａｓ、β－カテニン、ＣＤＫ４、Ｍｕｍ－１、ｐ１５、ｐ１６、４３－９Ｆ、５Ｔ４、７９１Ｔｇｐ７２、α－フェトプロテイン、β－ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＡ１２５、ＢＣＡＡ、ＣＡ１９５、ＣＡ２４２、ＣＡ－５０、ＣＡＭ４３、ＣＤ６８／Ｐ１、ＣＯ－０２９、ＦＧＦ－５、Ｇ２５０、Ｇａ７３３／ＥｐＣＡＭ、ＨＴｇｐ－１７５、Ｍ３４４、ＭＡ－５０、ＭＧ７－Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ／７０Ｋ、ＮＹ－ＣＯ－１、ＲＣＡＳ１、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ－９０、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ、ＴＰＳＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＲＯＲ１、ならびにＧＤ２からなる群より選択される、請求項６５に記載のＣＡＲ。
免疫受容体を共刺激するためのキメラポリペプチドであって、前記免疫受容体が、ＣＡＲおよび／またはトランスジェニックＴＣＲであり、前記ＣＡＲが第１の抗原に対して特異的な第１の抗原結合性ドメインを有し、前記トランスジェニックＴＣＲが第２の抗原結合性ドメインを有し、前記キメラポリペプチドが、Ｎ末端からＣ末端までの順に：
第３の抗原に対して特異的な第３の抗原結合性ドメイン；
膜貫通ドメイン；および
細胞質シグナル伝達ドメイン
を含み、前記細胞質シグナル伝達ドメインが、ＣＤ２シグナル伝達ドメインを含み、かつＣＤ３ζ活性化ドメインを含まず、前記第３の抗原が、ＣＤ５８ではない、
キメラポリペプチド。
前記第３の抗原が、腫瘍特異的抗原または腫瘍関連抗原である、請求項６７に記載のキメラポリペプチド。
前記第３の抗原が、神経膠腫関連抗原、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ベータ－ヒト絨毛性ゴナドトロピン、アルファ－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、レクチン反応性ＡＦＰ、サイログロブリン、ＲＡＧＥ－１、ＭＮ－ＣＡＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２（ＡＳ）、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔＨＳＰ７０－２、Ｍ－ＣＳＦ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＰＡＰ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ｐ５３、プロステイン、ＰＳＭＡ、ＨＥＲ２、サバイビンおよびテロメラーゼ、前立腺癌腫瘍抗原－１（ＰＣＴＡ－１）、ＭＡＧＥ、ＥＬＦ２Ｍ、好中球エラスターゼ、エフリンＢ２、インスリン増殖因子（ＩＧＦ）－Ｉ、ＩＧＦ－ＩＩ、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＧＤ２、ＧＤ３、Ｂ７－Ｈ３、ＧＰＣ２、Ｌ１ＣＡＭ、ＥＧＦＲ、メソテリン、ＭＡＲＴ－１、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ１７）、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ｐ１５、ｐ５３、Ｒａｓ、ＨＥＲ－２、ＢＣＲ－ＡＢＬ、Ｅ２Ａ－ＰＲＬ、Ｈ４－ＲＥＴ、ＩＧＨ－ＩＧＫ、ＭＹＬ－ＲＡＲ、ＥＢＶＡ、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原Ｅ６およびＥ７、ＴＳＰ－１８０、ＭＡＧＥ－４、ＭＡＧＥ－５、ＭＡＧＥ－６、ＲＡＧＥ、ｐ１８５ｅｒｂＢ２、ｐ１８０ｅｒｂＢ－３、ｃ－ｍｅｔ、ｎｍ－２３Ｈ１、ＰＳＡ、ＴＡＧ－７２、ＣＡ１９－９、ＣＡ７２－４、ＣＡＭ１７．１、ＮｕＭａ、Ｋ－ｒａｓ、β－カテニン、ＣＤＫ４、Ｍｕｍ－１、ｐ１５、ｐ１６、４３－９Ｆ、５Ｔ４、７９１Ｔｇｐ７２、α－フェトプロテイン、β－ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＡ１２５、ＢＣＡＡ、ＣＡ１９５、ＣＡ２４２、ＣＡ－５０、ＣＡＭ４３、ＣＤ６８／Ｐ１、ＣＯ－０２９、ＦＧＦ－５、Ｇ２５０、Ｇａ７３３／ＥｐＣＡＭ、ＨＴｇｐ－１７５、Ｍ３４４、ＭＡ－５０、ＭＧ７－Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ／７０Ｋ、ＮＹ－ＣＯ－１、ＲＣＡＳ１、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ－９０、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ、ＴＰＳＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＲＯＲ１、ならびにＧＤ２からなる群より選択される、請求項６８に記載のキメラポリペプチド。
前記第３の抗原が、Ｂ７Ｈ３、ＢＡＦＦ－Ｒ、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＰＣ２、ＩＬ１３Ｒα２、およびＲＯＲ１からなる群より選択される、請求項６９に記載のキメラポリペプチド。
前記キメラポリペプチドの前記細胞質シグナル伝達ドメインが、追加の共刺激シグナル伝達ドメインを含む、請求項６７から７０までのいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
前記追加の共刺激シグナル伝達ドメインが、４－１ＢＢシグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、またはＯＸ４０シグナル伝達ドメインを含む、請求項７１に記載のキメラポリペプチド。
前記追加の共刺激シグナル伝達ドメインが、４－１ＢＢシグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７シグナル伝達ドメイン、またはＯＸ４０シグナル伝達ドメインを含む、請求項７１または７２に記載のキメラポリペプチド。
前記ＣＡＲが、配列番号２０～２９および１１４～１３４のいずれか１つの配列と少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、または約１００％同一のアミノ酸配列を有する、請求項６７に記載のキメラポリペプチド。
前記キメラポリペプチドの前記膜貫通ドメインが、ＣＤ８α、ＣＤ２、またはＣＤ２８に由来するものである、請求項６７から７４までのいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
前記膜貫通ドメインが、ＣＤ２８に由来するものである、請求項７５に記載のキメラポリペプチド。
請求項４２から６６までのいずれか一項に記載のＣＡＲ、または請求項６７から７６までのいずれか一項に記載のキメラポリペプチド、またはその両方をコードする核酸。
請求項５８から６６までのいずれか一項に記載のトランスジェニックＴＣＲをさらにコードする、請求項７７に記載の核酸。
配列番号４１～５８および９２～１１２のいずれか１つの配列と少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、または約１００％同一の配列を有するポリペプチドをコードする、請求項７７に記載の核酸。
請求項６７から７６までのいずれか一項に記載のキメラポリペプチドをコードする、請求項７７に記載の核酸。
配列番号４９～５８および９２～１１２のいずれか１つの配列と少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、または約１００％同一の配列を有するポリペプチドをコードする、請求項８０に記載の核酸。
ＣＡＲをさらにコードする、請求項８０に記載の核酸。
配列番号７３、７５、７７、７９、８１、８３、８５、および１１４～１３４のいずれか１つの配列と少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、または約１００％同一の配列を有するポリペプチドをコードする、請求項８２に記載の核酸。
トランスジェニックＴＣＲをさらにコードする、請求項８０に記載の核酸。
前記ＣＡＲの抗原結合性ドメイン、前記トランスジェニックＴＣＲの抗原結合性ドメイン、および前記キメラポリペプチドの抗原結合性ドメインが、異なる抗原に対して特異的である、請求項８２から８４までのいずれか一項に記載の核酸。
前記ＣＡＲの抗原結合性ドメイン、前記トランスジェニックＴＣＲの抗原結合性ドメイン、および前記キメラポリペプチドの結合性ドメインが、同じ抗原に対して特異的である、請求項８２から８４までのいずれか一項に記載の核酸。
前記第１の抗原結合性ドメイン、前記第２の抗原結合性ドメイン、および前記第３の抗原結合性ドメインが、同じ抗原の異なるエピトープに対して特異的である、請求項８２から８４までのいずれか一項に記載の核酸。
前記キメラポリペプチドをコードする核酸、前記ＣＡＲをコードする核酸、および前記ＴＣＲをコードする核酸が、それぞれ個々のプロモーターを有する、請求項８２から８４までのいずれか一項に記載の核酸。
前記ＣＡＲの膜貫通ドメイン、前記トランスジェニックＴＣＲの膜貫通ドメイン、および前記キメラポリペプチドの膜貫通ドメインが、異なるものである、請求項８２から８８までのいずれか一項に記載の核酸。
前記キメラポリペプチドをコードする核酸、前記ＣＡＲをコードする核酸、および前記ＴＣＲをコードする核酸が、リボソーム再進入部位によって隔てられている、請求項８２から８９までのいずれか一項に記載の核酸。
前記キメラポリペプチドと前記ＣＡＲが、単一のポリペプチドとしてコードされており、前記キメラポリペプチドと前記ＣＡＲが、自己切断性ペプチドによって隔てられている、請求項８２に記載の核酸。
前記自己切断性ペプチドが、２Ａペプチドである、請求項９１に記載の核酸。
ＤＮＡを含む、請求項７７から９２までのいずれか一項に記載の核酸。
ＲＮＡを含む、請求項７７から９２までのいずれか一項に記載の核酸。
前記キメラポリペプチドと前記ＣＡＲが、同時形質導入するための別々のポリペプチドとしてコードされている、請求項８２に記載の核酸。
プロモーターと作動可能に連結した、請求項７７から９３および９５のいずれか一項に記載の核酸を含むベクター。
レンチウイルスベクターである、請求項９６に記載のベクター。
請求項４２から５７までのいずれか一項に記載のＣＡＲ、請求項５８から６６までのいずれか一項に記載のトランスジェニックＴＣＲ、および／または請求項６７から７６までのいずれか一項に記載のキメラポリペプチド、請求項７７から９２までのいずれか一項に記載の核酸、および／または請求項９５または９７に記載のベクターを含む、操作された細胞。
請求項４２から６６までのいずれか一項に記載のＣＡＲを発現する、請求項９８に記載の操作された細胞。
請求項６７から７６までのいずれか一項に記載のキメラポリペプチドを発現する、請求項９８または９９に記載の操作された細胞。
１つまたは複数のＣＡＲをさらに含む、請求項１００に記載の操作された細胞。
前記第１の抗原、前記第２の抗原、および前記第３の抗原が、互いに異なる、請求項１０１に記載の操作された細胞。
前記第１の抗原、前記第２の抗原、および前記第３の抗原のうちの少なくとも２つが同じである、請求項１０１に記載の操作された細胞。
前記第１の結合性ドメイン、前記第２の結合性ドメイン、および前記第３の抗原結合性ドメインが、同じ抗原の異なるエピトープに対して特異的である、請求項１０１に記載の操作された細胞。
前記ＣＡＲの膜貫通ドメインが、前記キメラポリペプチドの膜貫通ドメインとは異なる、請求項１０１から１０４までのいずれか一項に記載の操作された細胞。
請求項９８から１０５までのいずれか一項に記載の操作された細胞を作出するための方法であって、
ａ）免疫細胞を提供するステップ、および
ｂ）前記免疫細胞に、請求項７７から９５までのいずれか一項に記載の核酸を形質導入するステップ
を含む、方法。
前記免疫細胞が、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、マクロファージ、または腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）である、請求項１０６に記載の方法。
前記免疫細胞が、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、マクロファージ、または腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）の前駆細胞である、請求項１０６に記載の方法。
前記免疫細胞に免疫受容体をコードする核酸を形質導入するステップをさらに含み、前記免疫受容体が、ＣＡＲおよび／またはトランスジェニックＴＣＲである、請求項１０６から１０８までのいずれか一項に記載の方法。
前記核酸が、前記ＣＡＲおよび／または前記トランスジェニックＴＣＲをコードする、請求項１０６から１０９までのいずれか一項に記載の方法。
改善された機能的特徴を有するＣＡＲ－Ｔ細胞を作出するための方法であって、
ａ）免疫細胞を提供するステップ、ならびに
ｂ）前記免疫細胞に、ＣＡＲをコードする核酸、および請求項６７から７６までのいずれか一項に記載のキメラポリペプチドをコードする核酸を形質導入して、第１の抗原を有する標的細胞に対して特異的なＣＡＲを有するＣＡＲ－Ｔ細胞を作製するステップであって、前記ＣＡＲ－Ｔ細胞が、請求項６７から７６までのいずれか一項に記載のキメラポリペプチドおよび／または請求項５８から６６までのいずれか一項に記載のトランスジェニックＴＣＲをさらに含む、ステップ
を含み、前記機能的特徴が、
ｉ．ＣＤ５８の発現をダウンレギュレートするかまたはＣＤ５８を実質的に発現しない標的細胞に対する有効性；
ｉｉ．選択された抗原をダウンレギュレートするかまたは選択された抗原の変異形態を発現する標的細胞に対する有効性；
ｉｉｉ．前記標的細胞に対する選択性の改善；または
ｉｖ．ＣＡＲ標的抗原の喪失のレスキュー
である、方法。
前記キメラポリペプチドが、前記標的細胞によって発現される抗原に対して特異的な抗原結合性ドメインを含む、請求項１１１に記載の方法。
前記トランスジェニックＴＣＲが、前記標的細胞によって発現される抗原に対して特異的な抗原結合性ドメインを含む、請求項１１１に記載の方法。
前記ＣＡＲ標的抗原が、ＣＤ１９である、請求項１１１に記載の方法。
少なくとも第１の抗原を有する標的細胞の増殖を特徴とする過剰増殖性障害を有する対象の処置を補助するための方法であって、
ａ）
ｉ）前記第１の抗原に対して特異的なＣＡＲおよび／もしくは第２の抗原に対して特異的なトランスジェニックＴＣＲを発現する、請求項９９に記載の操作された細胞；または
ｉｉ）前記第１の抗原に対して特異的なＣＡＲおよび／もしくは前記第２の抗原に対して特異的なトランスジェニックＴＣＲを発現する、請求項１０１に記載の操作された細胞
を提供するステップ、ならびに
ｂ）治療有効数の前記操作された細胞を投与するステップであって、前記操作された細胞により、前記対象の処置が補助される、ステップ
を含む、方法。
ａ）請求項１０１に記載の操作された細胞が、少なくとも２つの共刺激ドメインを有するＣＡＲを含むか、または
ｂ）請求項９９に記載の操作された細胞が、ＣＤ２共刺激ドメインに加えて少なくとも２つの共刺激ドメインを有するＣＡＲを含む、請求項１１５に記載の方法。
前記標的細胞によるＣＤ５８発現の程度を決定するステップをさらに含む、請求項１１５または１１６に記載の方法。
前記操作された細胞を投与する前に前記標的細胞によるＣＤ５８発現の決定を提供するステップ、および前記ＣＤ５８発現の決定により、前記標的細胞が変異ＣＤ５８を発現するかまたはＣＤ５８を閾値レベルを下回るレベルで発現することが示された場合、治療有効数の前記操作された細胞を投与するステップをさらに含む、請求項１１５に記載の方法。
前記閾値レベルが、標的細胞当たり約５０，０００、４５，０００、４０，０００、３５，０００、３０，０００、２５，０００、２０，０００、１５，０００、１４，０００、１３，０００、１２，０００、１１，０００、１０，０００、９，０００、８，０００、７，０００、６，０００、５，０００、４，０００、３，０００、２，０００、１，０００、または５００のＣＤ５８分子である、請求項１１８に記載の方法。
抗体またはその抗原結合性断片をさらに提供する、請求項１１５から１１９までのいずれか一項に記載の方法。
前記抗体またはその抗原結合性断片が、前記標的細胞の微小環境におけるＣＤ２シグナル伝達を刺激することが可能なものである、請求項１２０に記載の方法。
前記抗体が、多重特異性抗体である、請求項１２０から１２１までのいずれか一項に記載の方法。
前記多重特異性抗体が、抗腫瘍抗原、ＣＤ２、およびＣＤ３に対して特異的である、請求項１２２に記載の方法。
前記抗体結合性断片が、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ）_２、（Ｆａｂ’）_２、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、およびｄＡｂからなる群より選択される、請求項１２０から１２１までのいずれか一項に記載の方法。
前記抗体結合性断片が、抗腫瘍抗原、ＣＤ２、およびＣＤ３に対して特異的である、請求項１２４に記載の方法。
前記標的細胞の微小環境において発現される腫瘍特異的抗原に応答してネイティブＣＤ２と架橋結合することが可能な治療剤をさらに提供する、請求項１１５から１１９までのいずれか一項に記載の方法。
前記治療剤が、分泌されるかまたは細胞表面に発現される、請求項１２６に記載の方法。
前記治療剤が、抗ＣＤ２ｓｃＦｖ、抗体、Ｆａｂ、ＤＡＲＰＩＮ、リガンド、または抗原結合性ドメインである、請求項１２７に記載の方法。
少なくとも第１の抗原を有する標的細胞の増殖を特徴とする過剰増殖性障害を有する対象の処置を補助するための方法であって、前記標的細胞が、低下したレベルのＣＤ５８を発現し、かつ／またはＣＤ２を活性化する能力が低下した形態のＣＤ５８を発現し、前記方法が、
ａ．操作された細胞を提供するステップであって、前記操作された細胞が、
ｉ．前記第１の抗原に特異的に結合することが可能な第１の抗原結合性ドメイン；
ｉｉ．スペーサードメイン；
ｉｉｉ．膜貫通ドメイン；および
ｉｖ．細胞質シグナル伝達ドメインであって、ＣＤ２シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ζ活性化ドメインを含む、細胞質シグナル伝達ドメイン；
を含むＣＡＲを発現する、ステップ、
ｂ．前記対象から得られた試料における機能的ＣＤ５８の発現レベルを決定するステップであって、前記試料が、腫瘍細胞を含有する、ステップ、ならびに
ｃ．機能的ＣＤ５８の発現レベルが、所定の閾値レベルよりも低い場合、治療有効数の操作された細胞を投与するステップ
を含む、方法。
前記細胞質シグナル伝達ドメインが、追加の共刺激ドメインを含む、請求項１２９に記載の方法。
前記追加のシグナル伝達ドメインが、４－１ＢＢシグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、またはＯＸ４０シグナル伝達ドメインを含む、請求項１２９または１３０に記載の方法。
前記閾値レベルが、標的細胞当たり約５０，０００、４５，０００、４０，０００、３５，０００、３０，０００、２５，０００、２０，０００、１５，０００、１４，０００、１３，０００、１２，０００、１１，０００、１０，０００、９，０００、８，０００、７，０００、６，０００、５，０００、４，０００、３，０００、２，０００、１，０００、または５００の機能的ＣＤ５８分子である、請求項１２９から１３１までのいずれか一項に記載の方法。
前記操作された細胞が、第２の抗原に対して特異的な第２の抗原結合性ドメインを含むトランスジェニックＴＣＲ、ならびに／または、第３の抗原に対して特異的な第３の抗原結合性ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞質シグナル伝達ドメインを含むキメラポリペプチドをさらに含む、請求項１２９から１３２までのいずれか一項に記載の方法。
抗体またはその抗原結合性断片をさらに提供する、請求項１２９から１３３までのいずれか一項に記載の方法。
前記抗体またはその抗原結合性断片が、前記標的細胞の微小環境におけるＣＤ２シグナル伝達を刺激することが可能なものである、請求項１３４に記載の方法。
前記抗体が、多重特異性抗体である、請求項１３４から１３５までのいずれか一項に記載の方法。
前記多重特異性抗体が、抗腫瘍抗原、ＣＤ２、およびＣＤ３に対して特異的である、請求項１３６に記載の方法。
前記抗体結合性断片が、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ）_２、（Ｆａｂ’）_２、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、およびｄＡｂからなる群より選択される、請求項１３４から１３５までのいずれか一項に記載の方法。
前記抗体結合性断片が、抗腫瘍抗原、ＣＤ２、およびＣＤ３に対して特異的である、請求項１３８に記載の方法。
前記標的細胞の微小環境において発現される腫瘍特異的抗原に応答してネイティブＣＤ２と架橋結合することが可能な治療剤をさらに提供する、請求項１２９から１３９までのいずれか一項に記載の方法。
前記治療剤が、分泌されるかまたは細胞表面に発現される、請求項１４０に記載の方法。
少なくとも第１の抗原を有する標的細胞の増殖を特徴とする過剰増殖性障害を有する対象の処置を補助するためのシステムであって、
前記第１の抗原に対して特異的なＣＡＲを発現する、請求項９８または１０１に記載の操作された細胞；および、
ＣＤ５８に対して特異的な標識された結合性作用物質
を含む、システム。
前記ＣＡＲが、細胞質シグナル伝達ドメインを含み、前記細胞質シグナル伝達ドメインが、４－１ＢＢシグナル伝達ドメイン、ＣＤ２シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζ活性化ドメインを含む、請求項１４２に記載のシステム。
前記ＣＡＲが、細胞質シグナル伝達ドメインを含み、前記細胞質シグナル伝達ドメインが、共シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３ζ活性化ドメインを含み、前記操作された細胞が、請求項６７から７６までのいずれか一項に記載のキメラポリペプチドをさらに含む、請求項１４２に記載のシステム。
前記標識された結合性作用物質が、抗ＣＤ５８抗体または抗体誘導体を含む、請求項１４２から１４４までのいずれか一項に記載のシステム。
前記操作された細胞が、第２の抗原に対して特異的な第２の抗原結合性ドメインを含むトランスジェニックＴＣＲ、ならびに／または、第３の抗原に対して特異的な第３の抗原結合性ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞質シグナル伝達ドメインを含むキメラポリペプチドをさらに含む、請求項１４２から１４５までのいずれか一項に記載のシステム。
ａ．請求項７７から９４までのいずれか一項に記載の核酸；
ｂ．請求項９５もしくは９７に記載のベクター；および／または
ｃ．請求項９８から１０４までのいずれか一項に記載の操作された細胞；ならびに
ｄ．薬学的に許容される担体
を含む治療用組成物。
対象における疾患を処置するための、
ａ．請求項４２から６６までのいずれか一項に記載のＣＡＲ；
ｂ．請求項６７から７６までのいずれか一項に記載のキメラポリペプチド；
ｃ．請求項５８から６６までのいずれか一項に記載のトランスジェニックＴＣＲ；
ｄ．請求項７７から９４までのいずれか一項に記載の核酸；
ｅ．請求項９５から９７までのいずれか一項に記載のベクター；
ｆ．請求項９８から１０４までのいずれか一項に記載の操作された細胞；
ｇ．請求項１４２から１４５までのいずれか一項に記載のシステム；および／または
ｈ．請求項１４７に記載の治療用組成物
の使用。
対象における疾患を処置するための医薬を製造するための、
ａ．請求項４２から６６までのいずれか一項に記載のＣＡＲ；
ｂ．請求項６７から７６までのいずれか一項に記載のキメラポリペプチド；
ｃ．請求項５８から６６までのいずれか一項に記載のトランスジェニックＴＣＲ；
ｄ．請求項７７から９４までのいずれか一項に記載の核酸；
ｅ．請求項９５から９７までのいずれか一項に記載のベクター；
ｆ．請求項９８から１０４までのいずれか一項に記載の操作された細胞；
ｇ．請求項１４２から１４５までのいずれか一項に記載のシステム；および／または
ｈ．請求項１４７に記載の治療用組成物
の使用。
前記対象が、ヒトである、請求項１４８または１４９に記載の使用。
ワクチン、腫瘍溶解性ウイルス、チェックポイント阻害剤、Ｔ細胞アゴニスト抗体、化学療法、および二重特異性抗体からなる群より選択される１つまたは複数と組み合わせた、請求項１４８または１４９に記載の使用。