JP2023511062A - 遺伝子療法ベクターの形質導入を増加又は増強するための及び免疫グロブリンを除去又は低減するための組成物及び方法 - Google Patents

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Abstract

本明細書には、抗ＦｃＲｎ抗体など、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）と新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）との相互作用を、遮断、阻害、又は低減させる作用剤を投与して、ＩｇＧリサイクリングを低減させ、ｉｎ ｖｉｖｏでのＩｇＧクリアランスを増強することにより、既存遺伝子療法中和抗体を発生させる可能性があるか又は既に有している可能性がある患者を治療するための方法が開示されている。また、それを必要とする患者の疾患を遺伝子療法治療するために、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤を使用するための方法が開示されている。【選択図】 図１１

Description

［関連出願］
[0001]本出願は、２０２０年１月２２日に出願された米国特許仮出願第６２／９６４，５６５号に対する優先権を主張する。すべての本文、表、配列表、及び図面を含む上記出願の内容は全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
［緒言］
[0002]アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）及び他のウイルスベクター、並びに脂質ベース、ポリマーベース、及びタンパク質ベースのナノ粒子遺伝子療法アプローチは、適応免疫系により標的とされ、有効性の鈍化、及び患者が療法介入に対して完全に難治性となる可能性に結び付く場合がある。適応免疫系は、標的分子の阻害又はクリアランスに結び付く抗原特異的免疫グロブリン（例えば、ＩｇＧ）抗体の発生に依存する。
[0003]新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）は、Ｇ型の免疫グロブリン（ＩｇＧ）がリソソーム経路から離れて原形質膜及び細胞外へと戻りリサイクリングされる際に中心的な役割を果たし、したがってＩｇＧ血清半減期を延長する（Ｓｏｃｋｏｌｏｓｋｙら、２０１５年、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．、９１巻：１０９～１２４頁を参照）。ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤は、ＩｇＧリサイクリングを減少させ、ＩｇＧの分解／異化作用を増強し、ＩｇＧ血清半減期を減少させる。ヒト臨床治験では、抗ＦｃＲｎ抗体の複数の週１回用量は、約８５％の平均血清ＩｇＧ低減をもたらし、≧７５％の血清ＩｇＧ低減が最大で２４日間持続した（Ｌｉｎｇら、２０１９年、Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．、１０５巻：１０３１～１０３９頁）。
[0004]ＩｄｅＳは、幾つかの他の種に加えて、ヒトＩｇＧに見出されるその標的配列に対して特異性を呈する病原性細菌ストレプトコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）により発現される天然に存在するシステインプロテアーゼ、具体的にはエンドペプチダーゼである。ＩｄｅＳは、ヒンジ領域下でＩｇＧを切断することが可能であり、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｃ／２断片の生成に結び付く。ＩｄｅＳは、ヒト血漿中でＩｇＧを切断することが可能であり、投与後４時間～７日間、ヒトの全ＩｇＧレベルを低減することができる。
[0005]ＥｎｄｏＳは、ヒトＩｇＧからグリカンを特異的に加水分解し、Ｆｃ受容体結合を含む抗体エフェクター機能を変更する、Ｓ．ピオゲネス（Ｓ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ）に由来する天然に存在するグリコシダーゼ、具体的にはエンドグリコシダーゼである。
[0006]ＡＡＶカプシドに対する中和抗体は、遺伝子療法ベクターにとって大きな障害であり、ある特定の患者は、潜在的に命を救う療法を受けられず取り残されている。本明細書には、なかでも、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤を投与し、それによりＩｇＧリサイクリングを低減させ、ＩｇＧのクリアランス、分解、及び異化作用を増強し、循環中ＩｇＧ又はＩｇＧ ｉｎ ｖｉｖｏ半減期を減少させることにより、遺伝子療法ベクターに対する既存中和抗体を発生させる可能性があるか又は既に有している可能性のある患者を治療する方法が記載されている。また、本明細書には、なかでも、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤を投与し、それによりＩｇＧリサイクリングを低減させ、ＩｇＧのクリアランス、分解、及び異化作用を増強し、循環中ＩｇＧ又はＩｇＧ ｉｎ ｖｉｖｏ半減期を減少させることにより、異種性ポリヌクレオチド、又は遺伝子療法ベクターによりカプシド被包された異種性ポリヌクレオチドによりコードされているタンパク質若しくはペプチドに結合する既存抗体を発生させる可能性があるか又は既に有している可能性がある患者を治療するための方法が記載されている。
［概要］
[0007]本明細書には、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）と新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）との相互作用及びＦｃＲｎ媒介性ＩｇＧリサイクリングを低減させて、抗体（例えば、対象（例えば、ヒト患者）のＩｇＧ）の循環レベル又は力価を低減させる作用剤を使用して、対象における遺伝子療法を向上又は増強させるための方法が開示されている。本発明による方法は、なかでも、遺伝子療法ベクターに対する既存中和抗体を有する患者を治療するために、及び遺伝子療法ベクターで以前に治療された患者に再投薬するために使用することができる。
[0008]ある特定の実施形態では、対象の遺伝子療法治療の有効性を増強するための方法であって、（ａ）ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤を対象に投与するステップ、及び（ｂ）療法用異種性ポリヌクレオチドを含む組換えウイルスベクターを対象に投与するステップを含む方法。
[0009]ある特定の実施形態では、対象は、タンパク質の機能若しくは活性の喪失により引き起こされる疾患の治療を必要としており、療法用異種性ポリヌクレオチドは、タンパク質の機能若しくは活性を提供若しくは補完するポリペプチド若しくはペプチドをコードしているか、又は対象は、タンパク質の機能、活性、又は発現の獲得により引き起こされる疾患の治療を必要としており、異種性ポリヌクレオチドは、タンパク質の機能、活性、若しくは発現の獲得の発現を阻害、減少、若しくは低減する核酸へと転写される。
[0010]ある特定の実施形態では、ＦｃＲｎ媒介性ＩｇＧリサイクリングが対象において低減される。
[0011]ある特定の実施形態では、ＩｇＧクリアランスが対象において増強される。
[0012]ある特定の実施形態では、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤は、抗ＦｃＲｎ抗体、ＦｃＲｎ結合性アフィボディ、ＩｇＧ分解を増強する抗体（ＡＢＤＥＧ）、ＦｃＲｎ結合性ペプチド（ＦｃＢＰ）、及び小分子ＦｃＲｎアンタゴニストからなる群から選択される。
[0013]ある特定の実施形態では、対象を治療するための方法において、ステップ（ａ）は、ステップ（ｂ）が実施される前に実施される。
[0014]ある特定の実施形態では、対象を治療するための方法において、ステップ（ｂ）は、ステップ（ａ）が実施される前に実施される。
[0015]ある特定の実施形態では、対象を治療するための方法において、ステップ（ａ）及びステップ（ｂ）は、ほぼ同時に実施される。
[0016]ある特定の実施形態では、対象を治療するための方法において、ステップ（ａ）は、ステップ（ｂ）が実施される前又は後で２回又はそれよりも多く実施される。
[0017]ある特定の実施形態では、対象を治療するための方法において、ステップ（ｂ）は、ステップ（ａ）が実施される前又は後の約９０日以内に実施される。ある特定の実施形態では、ステップ（ｂ）は、ステップ（ａ）が実施される前又は後の約６０日以内に実施される。ある特定の実施形態では、ステップ（ｂ）は、ステップ（ａ）が実施される前又は後の約４５日以内に実施される。ある特定の実施形態では、ステップ（ｂ）は、ステップ（ａ）が実施される前又は後の約３０日以内に実施される。ある特定の実施形態では、ステップ（ｂ）は、ステップ（ａ）が実施される前又は後の約２１日以内に実施される。ある特定の実施形態では、ステップ（ｂ）は、ステップ（ａ）が実施される前又は後の約１４日以内に実施される。ある特定の実施形態では、ステップ（ｂ）は、ステップ（ａ）が実施される前又は後の約７日以内に実施される。ある特定の実施形態では、ステップ（ｂ）は、ステップ（ａ）が実施される前又は後の約７２時間以内に実施される。ある特定の実施形態では、ステップ（ｂ）は、ステップ（ａ）が実施される前又は後の約４８時間以内に実施される。ある特定の実施形態では、ステップ（ｂ）は、ステップ（ａ）が実施される前又は後の約２４時間以内に実施される。ある特定の実施形態では、ステップ（ｂ）は、ステップ（ａ）が実施される前又は後の約１２時間以内に実施される。ある特定の実施形態では、ステップ（ｂ）は、ステップ（ａ）が実施される前又は後の約６時間以内に実施される。
[0018]ある特定の実施形態では、組換えウイルスベクター、及び／又は異種性ポリヌクレオチドによりコードされているポリペプチド若しくはペプチド、及び／又は異種性ポリヌクレオチドに結合する抗体を分解若しくは消化し及び／又はそうした抗体のエフェクター機能を阻害若しくは低減させるのに有効な量のプロテアーゼ又はグリコシダーゼを対象に投与するステップをさらに含む方法。
[0019]ある特定の実施形態では、プロテアーゼ又はグリコシダーゼは、ステップ（ａ）の前、後、又はほぼ同時に投与される。ある特定の実施形態では、プロテアーゼ又はグリコシダーゼは、ステップ（ｂ）の前、後、又はほぼ同時に投与される。ある特定の実施形態では、プロテアーゼ又はグリコシダーゼは、ステップ（ａ）の前、後、又はほぼ同時に２回又はそれよりも多く投与される。ある特定の実施形態では、プロテアーゼ又はグリコシダーゼは、ステップ（ｂ）の前、後、又はほぼ同時に２回又はそれよりも多く投与される。ある特定の実施形態では、プロテアーゼ又はグリコシダーゼは、ステップ（ａ）又はステップ（ｂ）の前又は後の約９０日以内に投与される。ある特定の実施形態では、プロテアーゼ又はグリコシダーゼは、ステップ（ａ）又はステップ（ｂ）の前又は後の約６０日以内に投与される。ある特定の実施形態では、プロテアーゼ又はグリコシダーゼは、ステップ（ａ）又はステップ（ｂ）の前又は後の約４５日以内に投与される。ある特定の実施形態では、プロテアーゼ又はグリコシダーゼは、ステップ（ａ）又はステップ（ｂ）の前又は後の約３０日以内に投与される。ある特定の実施形態では、プロテアーゼ又はグリコシダーゼは、ステップ（ａ）又はステップ（ｂ）の前又は後の約２１日以内に投与される。ある特定の実施形態では、プロテアーゼ又はグリコシダーゼは、ステップ（ａ）又はステップ（ｂ）の前又は後の約１４日以内に投与される。ある特定の実施形態では、プロテアーゼ又はグリコシダーゼは、ステップ（ａ）又はステップ（ｂ）の前又は後の約７日以内に投与される。ある特定の実施形態では、プロテアーゼ又はグリコシダーゼは、ステップ（ａ）又はステップ（ｂ）の前又は後の約７２時間以内に投与される。ある特定の実施形態では、プロテアーゼ又はグリコシダーゼは、ステップ（ａ）又はステップ（ｂ）の前又は後の約４８時間以内に投与される。ある特定の実施形態では、プロテアーゼ又はグリコシダーゼは、ステップ（ａ）又はステップ（ｂ）の前又は後の約２４時間以内に投与される。ある特定の実施形態では、プロテアーゼ又はグリコシダーゼは、ステップ（ａ）又はステップ（ｂ）の前又は後の約１２時間以内に投与される。ある特定の実施形態では、プロテアーゼ又はグリコシダーゼは、ステップ（ａ）又はステップ（ｂ）の前又は後の約６時間以内に投与される。
[0020]ある特定の実施形態では、プロテアーゼは、システインプロテアーゼ又はチオールプロテアーゼを含む。
[0021]ある特定の実施形態では、プロテアーゼは、ストレプトコッカス・ピオゲネス、ストレプトコッカス・エクイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ）、又はマイコプラズマ・カニス（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃａｎｉｓ）に由来するプロテアーゼを含む。
[0022]ある特定の実施形態では、プロテアーゼは、配列番号３～１８、２３、又は４８のいずれかに示されているＩｄｅＳ又はその修飾バリアントを含む。
[0023]ある特定の実施形態では、グリコシダーゼは、エンドグリコシダーゼを含む。
[0024]ある特定の実施形態では、エンドグリコシダーゼは、配列番号４４～４７のいずれかに示されている配列を含む。
[0025]ある特定の実施形態では、プロテアーゼ又はグリコシダーゼは、ヒト抗体を分解若しくは消化し及び／又はヒト抗体のエフェクター機能を阻害若しくは低減する。
[0026]ある特定の実施形態では、ウイルスベクターは、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、又はアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む。
[0027]ある特定の実施形態では、レンチウイルスベクターは、抗体又はＩｇＧが結合するエンベロープタンパク質を含む。
[0028]ある特定の実施形態では、ＡＡＶベクターは、抗体又はＩｇＧが結合するカプシドタンパク質を含む。
[0029]ある特定の実施形態では、ＡＡＶベクターは、抗体又はＩｇＧが結合するＶＰ１、ＶＰ２、及び／又はＶＰ３カプシドタンパク質を含む。
[0030]ある特定の実施形態では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ－２ｉ８、Ｒｈ１０、Ｒｈ７４、配列番号１、及び配列番号２のＶＰ１、ＶＰ２、及び／又はＶＰ３カプシドタンパク質からなる群から選択されるＶＰ１、ＶＰ２、及び／又はＶＰ３カプシドタンパク質と６０％又はそれよりも高い配列同一性を有するＶＰ１、ＶＰ２、及び／又はＶＰ３カプシドタンパク質を含む。
[0031]ある特定の実施形態では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ－２ｉ８、Ｒｈ１０、Ｒｈ７４、配列番号１、及び配列番号２のＶＰ１、ＶＰ２、及び／又はＶＰ３カプシドタンパク質からなる群から選択されるＶＰ１、ＶＰ２、及び／又はＶＰ３カプシドタンパク質と１００％配列同一性を有するＶＰ１、ＶＰ２、及び／又はＶＰ３カプシドタンパク質を含む。
[0032]ある特定の実施形態では、対象は、ウイルスベクターに結合する抗体又はＩｇＧを有する。
[0033]ある特定の実施形態では、ウイルスベクターに結合する抗体又はＩｇＧは、対象に存在しない。
[0034]ある特定の実施形態では、対象は、異種性ポリヌクレオチドによりコードされているポリペプチド又はペプチドに結合する抗体又はＩｇＧを有する。
[0035]ある特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及び／又はＩｇＥを含む。
[0036]ある特定の実施形態では、方法は、ステップ（ａ）を実施する前に、ステップ（ａ）を実施した後であるがステップ（ｂ）を実施する前に、並びに／又はステップ（ａ）及び（ｂ）を実施した後で、対象に存在するウイルスベクター結合性抗体又はＩｇＧの存在を決定し、それらの量又はエフェクター機能を定量化するステップを含む。
[0037]ある特定の実施形態では、方法は、ステップ（ａ）を実施する前に、ステップ（ａ）を実施した後であるがステップ（ｂ）を実施する前に、並びに／又はステップ（ａ）及び（ｂ）を実施した後で、対象に由来する生物学的試料を、試料に存在するウイルスベクター結合性抗体又はＩｇＧの存在、量、又はエフェクター機能について分析するステップを含む。
[0038]ある特定の実施形態では、決定ステップ及び／又は分析ステップは、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を減少させる作用剤又はプロテアーゼ若しくはグリコシダーゼを投与する前に及び／又は後で行われる。
[0039]ある特定の実施形態では、対象に由来する生物学的試料は、血液産物（ｂｌｏｏｄ ｐｒｏｄｕｃｔ）である。
[0040]ある特定の実施形態では、この方法は、ウイルスベクター結合性抗体又はＩｇＧの２０～５０％、５０～７５％、７５～９０％、９０～９５％、又は９５％、又はそれよりも大きな低減に結び付く。
[0041]ある特定の実施形態では、対象に由来する生物学的試料又は血液産物中に存在するウイルスベクター結合性抗体又はＩｇＧは、約１：１００，０００未満であり、１００，０００部の緩衝液で希釈された１部の生物学的試料又は血液産物は、５０％ウイルスベクター中和をもたらす。
[0042]ある特定の実施形態では、対象に由来する生物学的試料又は血液産物中に存在するウイルスベクター結合性抗体又はＩｇＧは、約１：５０，０００未満であり、５０，０００部の緩衝液で希釈された１部の生物学的試料又は血液産物は、５０％ウイルスベクター中和をもたらす。
[0043]ある特定の実施形態では、対象に由来する生物学的試料又は血液産物中に存在するウイルスベクター結合性抗体又はＩｇＧは、約１：１０，０００未満であり、１０，０００部の緩衝液で希釈された１部の生物学的試料又は血液産物は、５０％ウイルスベクター中和をもたらす。
[0044]ある特定の実施形態では、対象に由来する生物学的試料又は血液産物中に存在するウイルスベクター結合性抗体又はＩｇＧは、約１：１，０００未満であり、１，０００部の緩衝液で希釈された１部の生物学的試料又は血液産物は、５０％ウイルスベクター中和をもたらす。
[0045]ある特定の実施形態では、対象に由来する生物学的試料又は血液産物中に存在するウイルスベクター結合性抗体又はＩｇＧは、約１：１００未満であり、１００部の緩衝液で希釈された１部の生物学的試料又は血液産物は、５０％ウイルスベクター中和をもたらす。
[0046]ある特定の実施形態では、対象に由来する生物学的試料又は血液産物中に存在するウイルスベクター結合性抗体又はＩｇＧは、約１：１０未満であり、１０部の緩衝液で希釈された１部の生物学的試料又は血液産物は、５０％ウイルスベクター中和をもたらす。
[0047]ある特定の実施形態では、対象に由来する生物学的試料又は血液産物中に存在するウイルスベクター結合性抗体又はＩｇＧは、約１：５未満であり、５部の緩衝液で希釈された１部の生物学的試料又は血液産物は、５０％ウイルスベクター中和をもたらす。
[0048]ある特定の実施形態では、対象に由来する生物学的試料又は血液産物中に存在するウイルスベクター結合性抗体又はＩｇＧは、約１：４未満であり、４部の緩衝液で希釈された１部の生物学的試料又は血液産物は、５０％ウイルスベクター中和をもたらす。
[0049]ある特定の実施形態では、対象に由来する生物学的試料又は血液産物中に存在するウイルスベクター結合性抗体又はＩｇＧは、約１：３未満であり、３部の緩衝液で希釈された１部の生物学的試料又は血液産物は、５０％ウイルスベクター中和をもたらす。
[0050]ある特定の実施形態では、対象に由来する生物学的試料又は血液産物中に存在するウイルスベクター結合性抗体又はＩｇＧは、約１：２未満であり、２部の緩衝液で希釈された１部の生物学的試料又は血液産物は、５０％ウイルスベクター中和をもたらす。
[0051]ある特定の実施形態では、対象に由来する生物学的試料又は血液産物中に存在するウイルスベクター結合性抗体又はＩｇＧは、約１：１未満であり、１部の緩衝液で希釈された１部の生物学的試料又は血液産物は、５０％ウイルスベクター中和をもたらす。
[0052]ある特定の実施形態では、この方法は、ステップ（ａ）を実施した後だがステップ（ｂ）を実施する前に、並びに／又はステップ（ａ）及び（ｂ）を実施した後で、異種性ポリヌクレオチドによりコードされているポリペプチド若しくはペプチドに結合する抗体若しくはＩｇＧの存在を決定するか、又はそれらの量を定量化するステップをさらに含む。
[0053]ある特定の実施形態では、この方法は、ステップ（ａ）を実施した後だがステップ（ｂ）を実施する前に、並びに／又はステップ（ａ）及び（ｂ）を実施した後で、異種性ポリヌクレオチド若しくは核酸に結合する抗体若しくはＩｇＧの存在を決定するか、又はそれらの量を定量化するステップをさらに含む。
[0054]また、本発明による方法は、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤と組み合わせた、抗体を分解若しくは消化し及び／又は抗体のエフェクター機能を阻害若しくは低減するのに有効なプロテアーゼ又はグリコシダーゼの使用を含んでいてもよい。
[0055]ある特定の実施形態では、対象は、肺疾患（例えば、嚢胞性線維症）、出血障害（例えば、阻害因子を有する又は有していない血友病Ａ又は血友病Ｂ）、サラセミア、血液障害（例えば、貧血）、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、てんかん、リソソーム蓄積症（例えば、アスパルチルグルコサミン尿症、バッテン病、遅発型乳児性神経セロイドリポフスチン症２型（ＣＬＮ２）、シスチン症、ファブリ病、ゴーシェ病Ｉ、ＩＩ、及びＩＩＩ型、糖原病ＩＩ（ポンペ病）、ＧＭ２ガングリオシドーシスＩ型（テイサックス病）、ＧＭ２ガングリオシドーシスＩＩ型（サンドホフ病）、ムコリピドーシスＩ型（シアリドーシスＩ及びＩＩ型）、ＩＩ型（Ｉ細胞疾患）、ＩＩＩ型（擬性ハーラー病）、及びＩＶ型、ムコ多糖蓄積症（ハーラー病及び変異型、ハンター病、サンフィリポ症Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ型、モルキオ症Ａ及びＢ型、マロトー－ラミー症、並びにスライ病）、ニーマン－ピック病Ａ／Ｂ、Ｃ１、及びＣ２型、並びにシントラー病Ｉ型及びＩＩ型）、遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）、銅又は鉄蓄積障害（例えば、ウィルソン病又はメンケス病）、リソソーム酸リパーゼ欠損症、神経障害又は神経変性障害、がん、１型又は２型糖尿病、アデノシンデアミナーゼ欠損症、代謝欠陥（例えば、糖原病）、実質臓器（例えば、脳、肝臓、腎臓、心臓）の疾患、又は感染性ウイルス性（例えば、Ｂ型及びＣ型肝炎、ＨＩＶなど）、細菌性、若しくは真菌性疾患を有する。ある特定の実施形態では、対象は、血液凝固障害を有する。ある特定の実施形態では、対象は、血友病Ａ、阻害性抗体を有する血友病Ａ、血友病Ｂ、阻害性抗体を有する血友病Ｂ、いずれかの凝固因子：ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、ＩＸ、Ｘ、ＸＩ、Ｖ、ＸＩＩ、ＩＩ、フォンビルブランド因子の欠損、若しくは混合ＦＶ／ＦＶＩＩＩ欠損症、サラセミア、ビタミンＫエポキシド還元酵素Ｃ１欠損症、又はガンマ－カルボキシラーゼ欠損症を有する。
[0056]ある特定の実施形態では、対象は、貧血、外傷に伴う出血、傷害、血栓症、血小板減少症、脳卒中、凝血異常、播種性血管内凝固（ＤＩＣ）；ヘパリン、低分子量ヘパリン、五糖、ワルファリン、小分子抗血栓剤（つまり、ＦＸａ阻害剤）に関連付けられる過剰抗凝血、又はベルナルド・スーリエ症候群、グランツマン血栓症、若しくは貯蔵プール欠損症などの血小板障害を有する。
[0057]ある特定の実施形態では、対象は、中枢神経系（ＣＮＳ）に影響を及ぼすか又はそれを起源とする疾患を有する。ある特定の実施形態では、疾患は神経変性疾患である。ある特定の実施形態では、ＣＮＳ又は神経変性疾患は、アルツハイマー病、ハンチントン病、ＡＬＳ、遺伝性痙性片麻痺、原発性側索硬化症、脊髄性筋萎縮症、ケネディ病、ポリグルタミンリピート病（ｐｏｌｙｇｌｕｔａｍｉｎｅ ｒｅｐｅａｔ ｄｉｓｅａｓｅ）、又はパーキンソン病である。ある特定の実施形態では、ＣＮＳ又は神経変性疾患は、ポリグルタミンリピート病である。ある特定の実施形態では、ポリグルタミンリピート病は、脊髄小脳失調症（ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＳＣＡ３、ＳＣＡ６、ＳＣＡ７、又はＳＣＡ１７）である。
[0058]ある特定の実施形態では、異種性ポリヌクレオチドは、インスリン、グルカゴン、成長ホルモン（ＧＨ）、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、成長ホルモン放出因子（ＧＲＦ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、アンジオポエチン、アンジオスタチン、顆粒球コロニー刺激因子（ＧＣＳＦ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、酸性線維芽細胞増殖因子（ａＦＧＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、トランスフォーミング増殖因子α（ＴＧＦα）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、インスリン増殖因子Ｉ及びＩＩ（ＩＧＦ－Ｉ及びＩＧＦ－ＩＩ）、ＴＧＦβ、アクチビン、インヒビン、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロフィンＮＴ－３及びＮＴ４／５、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、ニュールツリン、アグリン、ネトリン－１及びネトリン－２、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、エフリン、ノギン、ソニックヘッジホッグ、並びにチロシンヒドロキシラーゼからなる群から選択されるタンパク質をコードする。
[0059]ある特定の実施形態では、異種性ポリヌクレオチドは、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、インターロイキン（ＩＬ１～ＩＬ－３６）、単球走化性タンパク質、白血病抑制因子、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子、Ｆａｓリガンド、腫瘍壊死因子α及びβ、インターフェロンα、β、及びγ、幹細胞因子、ｆｌｋ－２／ｆｌｔ３リガンド、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥ、キメラ免疫グロブリン、ヒト化抗体、単鎖抗体、Ｔ細胞受容体、キメラＴ細胞受容体、単鎖Ｔ細胞受容体、クラスＩ及びクラスＩＩ ＭＨＣ分子からなる群から選択されるタンパク質をコードする。
[0060]ある特定の実施形態では、異種性ポリヌクレオチドは、ＣＦＴＲ（嚢胞性線維症膜貫通型調節因子タンパク質）、血液凝固（凝固）因子（第ＸＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第ＶＩＩＩ因子、第Ｘ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩａ因子、プロテインＣなど）、機能獲得型血液凝固因子、抗体、網膜色素上皮特異的６５ｋＤａタンパク質（ＲＰＥ６５）、エリスロポエチン、ＬＤＬ受容体、リポタンパク質リパーゼ、オルニチントランスカルバミラーゼ、β－グロビン、α－グロビン、スペクトリン、α－アンチトリプシン、アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）、金属輸送体（ＡＴＰ７Ａ又はＡＴＰ７）、スルファミダーゼ、リソソーム蓄積症に関与する酵素（ＡＲＳＡ）、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ、β－２５グルコセレブロシダーゼ、スフィンゴミエリナーゼ、リソソームヘキソサミニダーゼ、分岐鎖ケト酸デヒドロゲナーゼ、ホルモン、成長因子、インスリン様増殖因子１又は２、血小板由来増殖因子、上皮増殖因子、神経成長因子、神経栄養因子－３及び－４、脳由来神経栄養因子、グリア由来増殖因子、トランスフォーミング増殖因子α及びβ、サイトカイン、α－インターフェロン、β－インターフェロン、インターフェロン－γ、インターロイキン－２、インターロイキン－４、インターロイキン１２、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子、リンホトキシン、自殺遺伝子産物、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ、シトシンデアミナーゼ、ジフテリア毒素、シトクロムＰ４５０、デオキシシチジンキナーゼ、腫瘍壊死因子、薬剤耐性タンパク質、腫瘍抑制タンパク質（例えば、ｐ５３、Ｒｂ、Ｗｔ－１、ＮＦ１、フォンヒッペル－リンダウ（ＶＨＬ）、腺腫性結腸ポリポーシス（ＡＰＣ））、免疫調節特性を有するペプチド、免疫寛容原性又は免疫原性ペプチド又はタンパク質Ｔレジトープ（Ｔｒｅｇｉｔｏｐｅ）又はｈＣＤＲ１、インスリン、グルコキナーゼ、グアニル酸シクラーゼ２Ｄ（ＬＣＡ－ＧＵＣＹ２Ｄ）、Ｒａｂエスコートタンパク質１（コロイデレミア）、ＬＣＡ５（ＬＣＡ－レーバーシリン（Ｌｅｂｅｒｃｉｌｉｎ））、オルニチンケト酸アミノトランスフェラーゼ（脳回転状萎縮症）、レチノスキシン１（Ｘ連鎖網膜分離症）、ＵＳＨ１Ｃ（アッシャー症候群１Ｃ）、Ｘ連鎖網膜色素変性症ＧＴＰａｓｅ（ＸＬＲＰ）、ＭＥＲＴＫ（ＲＰのＡＲ形態：網膜色素変性症）、ＤＦＮＢ１（コネキシン２６ 難聴）、ＡＣＨＭ２、３、及び４（色覚異常）、ＰＫＤ－１又はＰＫＤ－２（多発性嚢胞腎）、ＴＰＰ１、ＣＬＮ２、スルファターゼ、Ｎ－アセチルグルコサミン－１－リン酸トランスフェラーゼ、カテプシンＡ、ＧＭ２－ＡＰ、ＮＰＣ１、ＶＰＣ２、スフィンゴ脂質活性化タンパク質、ゲノム編集のための１つ又は複数のジンクフィンガーヌクレアーゼ、並びにゲノム編集の修復鋳型として使用される１つ又は複数のドナー配列をコードする。
[0061]ある特定の実施形態では、異種性ポリヌクレオチドは、阻害性核酸をコードする。ある特定の実施形態では、阻害性核酸は、ｓｉＲＮＡ、アンチセンス分子、ｍｉＲＮＡ、ＲＮＡｉ、リボザイム、及びｓｈＲＮＡからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、阻害性核酸は、ハンチンチン（ＨＴＴ）遺伝子、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症に関連付けられる遺伝子（アトロフィン１、ＡＴＮ１）、球脊髄性筋萎縮症におけるＸ染色体のアンドロゲン受容体、ヒトアタキシン－１、－２、－３、及び－７、Ｃａｖ２．１Ｐ／Ｑ電位依存性カルシウムチャネル（ＣＡＣＮＡ１Ａ）、ＴＡＴＡ－結合タンパク質、アタキシン８逆鎖（ＡＴＸＮ８ＯＳ）、脊髄小脳性運動失調症におけるセリン／スレオニン－タンパク質ホスファターゼ２Ａ ５５ｋＤａ調節サブユニットＢベータアイソフォーム（１、２、３、６、７、８、１２ １７型）、脆弱Ｘ症候群におけるＦＭＲ１（脆弱Ｘ精神遅滞１）、脆弱Ｘ関連振戦／運動失調症候群におけるＦＭＲ１（脆弱Ｘ精神遅滞１）、ＦＭＲ１（脆弱Ｘ精神遅滞２）、若しくは脆弱ＸＥ精神遅滞におけるＡＦ４／ＦＭＲ２ファミリーメンバー２；筋強直性ジストロフィーにおけるミオトニン－プロテインキナーゼ（ＭＴ－ＰＫ）；フリードライヒ運動失調症におけるフラタキシン；筋萎縮性側索硬化症におけるスーパーオキシドジスムターゼ１（ＳＯＤ１）遺伝子の変異体；パーキンソン病及び／又はアルツハイマー病の病因に関与する遺伝子；アポリポタンパク質Ｂ（ＡＰＯＢ）及びプロタンパク質転換酵素スブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）、高コレステロール血症；ＨＩＶ感染におけるＨＩＶ Ｔａｔ、ヒト免疫不全ウイルス転写遺伝子トランス活性化因子；ＨＩＶ感染におけるＨＩＶ ＴＡＲ、ＨＩＶ ＴＡＲ、ヒト免疫不全ウイルストランス活性化因子応答エレメント遺伝子；ＨＩＶ感染におけるＣ－Ｃケモカイン受容体（ＣＣＲ５）；ＲＳＶ感染におけるラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）ヌクレオカプシドタンパク質、Ｃ型肝炎ウイルス感染における肝臓特異的マイクロＲＮＡ（ｍｉＲ－１２２）；ｐ５３、急性腎傷害、又は腎移植移植片機能遅延、又は腎傷害急性腎不全；進行性再発性又は転移性固形悪性腫瘍におけるプロテインキナーゼＮ３（ＰＫＮ３）；ＬＭＰ２、プロテアソームサブユニットベータ９型（ＰＳＭＢ９）としても知られているＬＭＰ２、転移性黒色腫；プロテアソームサブユニットベータ８型（ＰＳＭＢ８）としても知られているＬＭＰ７、転移性黒色腫；プロテアソームサブユニットベータ１０型（ＰＳＭＢ１０）としても知られているＭＥＣＬ１、転移性黒色腫；固形腫瘍における血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）；固形腫瘍におけるキネシン紡錘体タンパク質、慢性骨髄性白血病におけるアポトーシス抑制因子Ｂ細胞ＣＬＬ／リンパ腫（ＢＣＬ－２）；固形腫瘍におけるリボヌクレオチドレダクターゼＭ２（ＲＲＭ２）；固形腫瘍におけるフューリン；肝腫瘍におけるポロ様キナーゼ１（ＰＬＫ１）、Ｃ型肝炎感染におけるジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ１（ＤＧＡＴ１）、家族性腺腫性ポリポーシスにおけるβ－カテニン；ベータ２アドレナリン受容体、緑内障；糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）又は加齢黄斑変性症における、ＤＮＡ損傷誘導性転写物４タンパク質としても知られているＲＴＰ８０１／Ｒｅｄｄ１；加齢黄斑変性症又は脈絡膜血管新生における血管内皮増殖因子受容体Ｉ（ＶＥＧＦＲ１）、非動脈炎性虚血性視神経症におけるカスパーゼ２；先天性爪肥厚症におけるケラチン６Ａ Ｎ１７Ｋ変異体タンパク質；インフルエンザ感染におけるインフルエンザＡウイルスゲノム／遺伝子配列；ＳＡＲＳ感染における重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）コロナウイルスゲノム／遺伝子配列；呼吸器合胞体ウイルス感染における呼吸器合胞体ウイルスゲノム／遺伝子配列；エボラ感染におけるエボラフィロウイルスゲノム／遺伝子配列；Ｂ型及びＣ型肝炎感染におけるＢ型及びＣ型肝炎ウイルスゲノム／遺伝子配列；ＨＳＶ感染における単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ゲノム／遺伝子配列、コクサッキーウイルスＢ３感染におけるコクサッキーウイルスＢ３ゲノム／遺伝子配列；原発性ジストニアにおけるトルシンＡ（ＴＯＲ１Ａ）のような遺伝子の病原性対立遺伝子のサイレンシング（対立遺伝子特異的サイレンシング）、移植に特異的な汎クラスＩ及びＨＬＡ対立遺伝子；及び常染色体優性遺伝性網膜色素変性症（ａｄＲＰ）における変異体ロドプシン遺伝子（ＲＨＯ）からなる群から選択されるポリヌクレオチドリピート病（ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｒｅｐｅａｔ ｄｉｓｅａｓｅ）に関連付けられる遺伝子、遺伝子の転写物、又は遺伝子の転写物に結合する。
[0062]ある特定の実施形態では、異種性ポリヌクレオチドによりコードされているタンパク質は、遺伝子編集ヌクレアーゼを含む。ある特定の実施形態では、遺伝子編集ヌクレアーゼは、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）又は転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）を含む。ある特定の実施形態では、遺伝子編集ヌクレアーゼは、機能的ＩＩ型ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９を含む。
[0063]ある特定の実施形態では、本発明の方法のステップ（ａ）及び／又はステップ（ｂ）は、２回又はそれよりも多く実施される。
[0064]ある特定の実施形態では、対象は、哺乳動物である。ある特定の実施形態では、対象は、ヒトである。
[0065]また、本明細書には、本発明による方法を実施するために使用することができる成分を有する組成物、例えば限定ではないがパッケージ及びキットが開示されている。
[0066]ある特定の実施形態では、パッケージ又はキットには、（ａ）タンパク質又はペプチドをコードする異種性ポリヌクレオチドを含む組換えウイルスベクター；（ｂ）ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤；（ｃ）任意選択で、抗体を分解又は消化するプロテアーゼ又はグリコシダーゼ；及び（ｄ）本明細書に開示の通りの方法を実施するための使用説明書を有するラベルが配置されている。ある特定の実施形態では、（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）は、別々の容器又は同じ容器に存在する。
[0067]ある特定の実施形態では、パッケージ又はキットには、（ａ）タンパク質の発現を阻害、減少、又は低減させる核酸へと転写される異種性ポリヌクレオチドを含む組換えウイルスベクター；（ｂ）ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤；（ｃ）任意選択で、抗体を分解又は消化するプロテアーゼ又はグリコシダーゼ；（ｄ）本明細書に開示の通りの方法を実施するための使用説明書を有するラベルが配置されている。ある特定の実施形態では、（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）は、別々の容器又は同じ容器に存在する。
[0068]
漸増量のＩｄｅＳと共にインキュベートした、ヒト患者血清（図１Ａ）、非ヒト霊長類（アカゲザル（ｒｈｅｓｕｓ ｍａｃａｑｕｅ））血漿（図１Ｂ）、及びハムスター血漿（図１Ｃ）の試料における、ＩｄｅＳによるＩｇＧ切断のＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析を示す図である。試料を、ＩｄｅＳを用いずに又は漸増濃度のＩｄｅＳを用いて３７℃で１時間インキュベートした。試料緩衝液を添加することにより反応を停止させた。試料を、非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及びクーマシー染色により分析した。 漸増量のＩｄｅＳと共にインキュベートした、ヒト患者血清（図１Ａ）、非ヒト霊長類（アカゲザル（ｒｈｅｓｕｓ ｍａｃａｑｕｅ））血漿（図１Ｂ）、及びハムスター血漿（図１Ｃ）の試料における、ＩｄｅＳによるＩｇＧ切断のＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析を示す図である。試料を、ＩｄｅＳを用いずに又は漸増濃度のＩｄｅＳを用いて３７℃で１時間インキュベートした。試料緩衝液を添加することにより反応を停止させた。試料を、非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及びクーマシー染色により分析した。 漸増量のＩｄｅＳと共にインキュベートした、ヒト患者血清（図１Ａ）、非ヒト霊長類（アカゲザル（ｒｈｅｓｕｓ ｍａｃａｑｕｅ））血漿（図１Ｂ）、及びハムスター血漿（図１Ｃ）の試料における、ＩｄｅＳによるＩｇＧ切断のＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析を示す図である。試料を、ＩｄｅＳを用いずに又は漸増濃度のＩｄｅＳを用いて３７℃で１時間インキュベートした。試料緩衝液を添加することにより反応を停止させた。試料を、非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及びクーマシー染色により分析した。 ＩｄｅＺを用いて又は用いずに前処理した様々な量のＩＶＩｇで免疫した動物における、ＡＡＶ－Ｓｐｋ１－ＧＡＡベクター注入後のマウス血漿中のＧＡＡ活性レベルを示すグラフである。ＡＡＶ－Ｓｐｋ１－ＧＡＡベクターを、ＩＶＩｇ免疫処置の１日後に注入した。導入遺伝子活性を、ベクター投与の２週間後にＧＡＡ活性アッセイにより評価した。ＧＡＡ活性は、各群の各マウスについてｎｍｏｌ／時／ｍＬでプロットされている。対照マウスには、ＩＶＩｇの非存在下でベクターのみを投与した。 ＩｄｅＳ注入前及び注入後のマウス血漿中の抗Ｓｐｋ１中和抗体（ＮＡｂ）力価レベルを示す図である。この研究における相対ＮＡｂ力価レベルは、低力価（＜１：１、１：１～１：２．５）（太字）、中程度の力価（１：２．５～１：５）（太字斜体）、及び高力価（＞１：５～１：１０）（斜体）として帰属されている。 ＩｄｅＳ注入前及び注入後のマウス血漿中の抗Ｓｐｋ１ ＩｇＧ ＮＡｂレベル（ｎｇ／ｍＬ）を示す図である。陰性対照動物は、ＩＶＩｇでもＩｄｅＳでも処理しなかった。低ＩｄｅＳは、この研究で使用した０．４ｍｇ／ｋｇのＩｄｅＳを指し、高ＩｄｅＳは、４ｍｇ／ｋｇのＩｄｅＳを指す。 ＩＶＩｇで免疫し、次いでＩｄｅＳで処置した動物にＡＡＶ－Ｓｐｋ１－ＧＡＡベクターを注入した後のマウス血漿におけるＧＡＡ活性レベル（ｎｍｏｌ／時／ｍＬ）を示す図である。動物はすべて、２×１０１２ｖｇ／ｋｇのＡＡＶ－Ｓｐｋ１－ＧＡＡベクターを受け取った。ＩＶＩｇで免疫したマウスに由来する血漿試料中の導入遺伝子活性を測定し、次いでＩｄｅＳを用いて又は用いずに処置し、最後にベクターを投与した。導入遺伝子活性を、ベクター投与の１週間後にＧＡＡ活性アッセイにより評価した。ＧＡＡ活性は、各群の各マウスについてｎｍｏｌ／時／ｍＬでプロットされている。 ＩＶＩｇ（０、３００、８００、又は１６００ｍｇ／ｋｇ）を以前に注入し、ＩｄｅＳ（０、０．４、１．０、又は２．０ｍｇ／ｋｇ）で処置した動物に、ＡＡＶ－Ｓｐｋ１－ＧＡＡベクター（２×１０１２ｖｇ／ｋｇ）を注入した２週間後のＧＡＡ活性レベル（ｎｍｏｌ／時／ｍＬ）を示す図である。ＧＡＡ活性は、各群の各マウスについてｎｍｏｌ／時／ｍＬでプロットされている。対応する抗Ｓｐｋ１ ＮＡｂ力価を発生させなかった（つまり、ＩｄｅＳ処置前にＮＡｂ力価＜１：１又は１：１～１：２．５を有する）ＩＶＩｇ投与群のマウスを除外した。 ＩｄｅＳの異なる調製物（ロット＃１及びロット＃２）による注入前及び注入後に測定した、ヒト抗カプシド中和ＩｇＧの人工的力価を有するＣ５７ＢＬ／６マウスの血漿における抗Ｓｐｋ１ ＮＡｂ力価レベルを示す図である。 ＡＡＶ－Ｓｐｋ１－ｈＦＶＩＩＩによる投薬前並びに投薬１週間後及び２週間後の、ヒト抗カプシド中和ＩｇＧの人工的力価を有するＣ５７ＢＬ／６マウス由来に由来する血漿におけるヒト第ＶＩＩＩ因子のレベルを示すグラフである。 ＩｄｅＳ注入前及び注入後のマウス血漿中の抗Ｓｐｋ１カプシドＩｇＧレベル（ｎｇ／ｍＬ）を示すグラフである。Ｃ５７ＢＬ／６マウスにＩＶＩｇを投与して、ヒト抗カプシド中和ＩｇＧの人工的力価を誘導した。陰性対照動物は、ＩＶＩｇでもＩｄｅＳでも処置しなかった。低ＩＶＩｇは、この研究で使用した３００ｍｇ／ｋｇのＩＶＩｇを指し、中ＩＶＩｇは８００ｍｇ／ｋｇを指し、高ＩＶＩｇは１６００ｍｇ／ｋｇを指す。各ＩＶＩｇ群内の動物を、漸増用量のＩｄｅＳ（０、０．４、１．０、２．０ｍｇ／ｋｇ ＩｄｅＳ）で処置した。ＩＶＩｇで処置したが抗カプシドＩｇＧ応答を示さなかった動物は、グラフから除外した。 実施例１３に記載されている研究の５群のＴｇ３２マウスの各々について、０日目（Ｄ０）及び２日目（Ｄ２）にマウス血漿中で評価したＮＡｂ力価のグラフである。上部及び下部の点線は、それぞれ検出上限（ＵＬＯＤ）及び検出下限（ＬＬＯＤ）を示す。統計的有意性は、ウィルコキシン（Ｗｉｌｃｏｘｉｎ）ノンパラメトリック対応ｔ検定によるｐ＜０．０２３４＝＊、ｐ＜０．００３９＝＊＊、及びマン－ホイットニーノンパラメトリック非対応ｔ検定によるｐ＜０．５と規定する。 実施例１３に記載されている研究の５群のＴｇ３２マウスの各々について、０日目（Ｄ０）及び２日目（Ｄ２）のマウス血漿でのＥＬＩＳＡにより決定した抗Ｓｐｋ１ ＩｇＧ濃度のグラフである。抗Ｓｐｋ１ ＩｇＧ ＥＬＩＳＡ。統計的有意性は、Ｗｉｌｃｏｘｉｎノンパラメトリック対応ｔ検定によるｐ＜０．０３１３＝＊＊、及びマン－ホイットニーノンパラメトリック非対応ｔ検定によるｐ＜０．０１５２＝＊、ｐ＜０．００２２＝＊＊と規定する。 対象の高力価中和抗体（ＮＡｂ）を排除してＡＡＶ形質導入を可能にするために、抗ＦｃＲｎ剤及びＩｄｅＳの投与を組み合わせるという概念のグラフによる表現を示す図である。 ニュージーランドホワイトウサギにおける再投薬研究を模式的に示す図である。 カニクイザルにおける抗ＦｃＲｎ研究を模式的に示す図である。
［詳細な説明］
[0082]本明細書では、遺伝子療法の利益又は有効性を向上させるための方法であって、ＩｇＧと新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）との相互作用を阻害又は低減させる作用剤を投与するステップを含む方法が提供されている。また、本明細書では、組換えウイルスベクターなどのウイルスベクターに結合するか、或いは組換えウイルスベクターによりカプシド被包された療法用異種性ポリヌクレオチドによりコードされている核酸又はポリペプチド若しくはタンパク質若しくはペプチドに結合するか、或いは療法用異種性ポリヌクレオチドに結合する循環中抗体を減少させるための方法が提供されている。また、本明細書では、遺伝子療法ベクターに結合及び／又は中和する抗体を有する対象に、遺伝子療法ベクターを投与するための方法が提供されている。また、本明細書では、遺伝子治療ベクターが以前に投与されていた対象に遺伝子療法ベクターを再投薬又は再投与するための方法であって、対象が、遺伝子療法ベクターに結合及び／又は中和する抗体を発生させている、方法が提供されている。
[0083]ある特定の実施形態では、方法は、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させるために有効な量の作用剤を対象に投与するステップを含む。ＦｃＲｎは、ＩｇＧリサイクリングと呼ばれるプロセスにより、ＩｇＧ型免疫グロブリンの血清半減期の延長に関与する。ＦｃＲｎは、多数の細胞タイプのエンドソーム区画に存在している。エンドサイトーシスされたＩｇＧがエンドソーム経路に沿って移動する際、ＩｇＧのＦｃ部分は、酸性初期エンドソームにおいてＦｃＲｎと結合して、ＦｃＲｎ－ＩｇＧ複合体を形成する。ＦｃＲｎ－ＩｇＧ複合体は、リソソーム経路（通常はＩｇＧを分解又は異化することになる）から離れて、原形質膜及び細胞表面へと戻るように輸送される。細胞外ｐＨは高いため、複合体が解離し、ＩｇＧが細胞外へと放出されて循環中に戻り、したがってＩｇＧの血清半減期が延長される。ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減又は阻害することにより、ＩｇＧリサイクリングが減少し、ＩｇＧのクリアランス、分解、及び異化作用が増加又は増強され、循環中ＩｇＧ量の低下（力価の減少）がもたらされることになる（血液、血清、又は血漿中で測定可能）。循環中ＩｇＧの力価がより低いということは、遺伝子療法ベクターに結合及び／又は中和する循環中抗体の力価がより低いことを意味する。ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を阻害又は低減することができる作用剤の投与は、ＩｇＧリサイクリングを減少させ、ＩｇＧのクリアランス、分解、及び異化作用を増加又は増強することになり、循環中のＩｇＧ量の低下（力価の低減）及び遺伝子療法治療の有効性の向上又は増強をもたらすことになる。
[0084]本明細書で使用される場合、「ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる（ｒｅｄｕｃｅ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ＩｇＧ ｗｉｔｈ ＦｃＲｎ）」及び「ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる（ｒｅｄｕｃｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ＩｇＧ ｗｉｔｈ ＦｃＲｎ）」は、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用又はＩｇＧ－ＦｃＲｎ結合のあらゆる減少又は阻害を含む。ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させ、本発明で使用することができる作用剤は、Ｌｏｗら、２００９年、ＡＡＰＳ Ｊ．、１１巻：４３２～４３４頁；Ｓｏｃｋｏｌｏｓｋｙら、２０１５年、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．、９１巻：１０９～１２４頁、Ｚｕｅｒｃｈｅｒら、２０１９年、Ａｕｔｏｉｍｍ．Ｒｅｖ．、ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ａｕｔｒｅｖ．２０１９．１０２３６６、及びＰｙｚｉｋら、２０１９年、Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ．、ｄｏｉ：１０３３８９／ｆｉｍｍｕ．２０１９．０１５４０において総説されている。ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用の低減、減少、又は阻害は、１つ若しくは複数のシグナル伝達活性、又はＩｇＧの血清レベル若しくは血漿レベルを含む、ＦｃＲｎ活性の下流読出しを検出又は測定することにより評価することができる。ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤は、本明細書では「抗ＦｃＲｎ剤」又は「ＦｃＲｎアンタゴニスト」とも呼ばれる。
[0085]本発明で使用することができる、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤の例としては、例えば、限定ではないが、ＦｃＲｎに結合する抗体、ＡＢＤＥＧ（ＩｇＧ分解を増強する抗体）、ＦｃＲｎ結合性ペプチド（ＧＨＦＧＧＸＹコンセンサスモチーフを有するものであって、配列中Ｘが疎水性アミノ酸であり、モチーフがジスルフィドループにより囲まれている、もの）、ＦｃＲｎ結合性アフィボディ、及び小分子ＦｃＲｎアンタゴニストが挙げられる。
[0086]本発明で使用することができる抗ＦｃＲｎ抗体の例は、ＦｃＲｎ媒介性リサイクリングを阻害し、病原性ＩｇＧを減少させるが、ＩｇＧ産生を保存する完全ヒト抗ＦｃＲｎ抗体であるＭ２８１（ニポカリマブ）である（Ｌｉｎｇら、２０１９年を参照）。本発明で使用することができる他の抗ＦｃＲｎ抗体としては、例えば、限定ではないが、国際公開第２０１８０２３１３６号、国際公開第２０１９１１８７９１号、及び国際公開第２０２００１８９１０号に記載の抗体が挙げられる。これら文献の各々は、すべての本文、表、配列表、及び図面を含め、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
[0087]ある特定の実施形態では、抗ＦｃＲｎ抗体は、軽鎖及び重鎖を含み、軽鎖は、配列番号４９の配列と、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％同一性を有する配列を含み、重鎖は、配列番号５０の配列と、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％同一性を有する配列を含む。
[0088]ある特定の実施形態では、抗ＦｃＲｎ抗体は、軽鎖及び／又は重鎖を含み、軽鎖は、配列番号４９の配列と、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％同一性を有する配列を含み、重鎖は、配列番号５０の配列と、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％同一性を有する配列を含む。
[0089]ある特定の実施形態では、抗ＦｃＲｎ抗体は、軽鎖及び／又は重鎖を含み、軽鎖は、配列番号５１、配列番号５２、及び配列番号５３からなる群から選択される少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を含み、重鎖は、配列番号５４、配列番号５５、及び配列番号５６からなる群から選択される少なくとも１つのＣＤＲ配列を含む。
[0090]ある特定の実施形態では、抗ＦｃＲｎ抗体は、軽鎖及び／又は重鎖を含み、軽鎖は、配列番号５１、配列番号５２、及び配列番号５３の相補性決定領域（ＣＤＲ）配列を含み、重鎖は、配列番号５４、配列番号５５、及び配列番号５６のＣＤＲ配列を含む。
[0091]ある特定の実施形態では、抗ＦｃＲｎ抗体は、配列番号４９の配列と、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％同一性を有する配列を含む軽鎖を含む。
[0092]ある特定の実施形態では、抗ＦｃＲｎ抗体は、配列番号４９の配列を含む軽鎖を含む。
[0093]ある特定の実施形態では、抗ＦｃＲｎ抗体は、配列番号５０の配列と、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％同一性を有する配列を含む重鎖を含む。
[0094]ある特定の実施形態では、抗ＦｃＲｎ抗体は、配列番号５０の配列を含む重鎖を含む。
[0095]本発明で使用することができるＦｃＲｎ結合性ペプチドの例は、ＦｃＲｎに結合し、全体的血清ＩｇＧレベルを減少させるＳＹＮ１４３６である（Ｍｅｚｏら、２００８年、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、１６巻：６３９４～６４０５頁）。
[0096]アフィボディ分子は、５８アミノ酸長の、折り畳まれた逆平行３ヘリックスバンドル構造を有する親和性タンパク質ドメインである。本発明で使用することができる抗ＦｃＲｎアフィボディとしては、例えば、限定ではないが、Ｓｅｉｊｓｅｎｇら、２０１８年、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ、８巻：５１４１頁、ｄｏｉ：１０．１０３８／ｓ４１５９８－０１８－２３４８１－５に記載のＺＦｃＲｎなどが挙げられる。
[0097]ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を減少させ、本発明で使用することができる小分子ＦｃＲｎアンタゴニストの例は、Ｗａｎｇら、２０１３年、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔ．、２３巻：１２５３～１２５６頁に記載されている。
[0098]ＡＢＤＥＧは、Ｆｃ部分が、生理学的ｐＨ及びエンドソームｐＨの両方でＦｃＲｎに高親和性で結合するように遺伝子操作されている、ＩｇＧ分子である。
[0099]増加した親和性でＦｃＲｎに結合し、本発明で使用することができるバリアントＦｃ領域を有するＦｃＲｎアンタゴニスト組成物の例は、国際公開第２０１５／１００２９９号に記載されている。
[0100]エフガルチギモド（Ｅｆｇａｒｔｉｇｉｍｏｄ）は、ＦｃＲｎに高親和性で結合し、ＦｃＲｎが循環中ＩｇＧと相互作用しＩｇＧをリサイクリングすることを防止する（ＡＢＤＥＧ技術による）修飾ヒトＩｇＧ１由来Ｆｃ断片である（Ｕｌｒｉｃｈｔｓら、２０１８年、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．、１２８巻：４３７２～４３８６）。
[0101]ロザノリキシズマブ（Ｒｏｚａｎｏｌｉｘｉｚｕｍａｂ）は、７ｍｇ／ｋｇの用量で投与すると、ヒトのＩｇＧレベルを約４５％低減させるＩｇＧ４Ｐアイソタイプ抗ＦｃＲｎモノクローナル抗体である（Ｋｉｅｓｓｌｉｎｇら、２０１７年、Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．、９：ａａｎ１２０８．ｄｏｉ：１０．１１２６／ｓｃｉｔｒａｎｓｌｍｅｄ．ａａｎ１２０８）。
[0102]ＳＹＮＴ００１は、ヒトにおいてすべての循環中ＩｇＧサブタイプ及びＩｇＧ免疫複合体を減少させるＦｃＲｎ遮断モノクローナル抗体である（Ｂｌｕｍｂｅｒｇら、２０１９年、Ｓｃｉ．Ａｄｖ．、５：ｅａａｘ９５８６）。
[0103]ある特定の実施形態では、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤は、ＦｃＲｎとＩｇＧとの相互作用により媒介されるシグナル伝達を阻害する。
[0104]ある特定の実施形態では、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤は、ペプチド、タンパク質、小分子、核酸、アプタマー、オリゴヌクレオチド、アフィボディ、抗体、又はそれらの組合せである。
[0105]ある特定の実施形態では、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤は、エフガルチギモド、Ｍ２８１、ロザノリキシズマブ、ＳＹＮＴ００１、及びＩＭＶＴ－１４０１から選択される。
[0106]ある特定の実施形態では、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低下させる作用剤は、モノクローナル抗体又はその断片、ポリクローナル抗体又はその断片、キメラ抗体、ヒト化抗体、及び単鎖抗体からなる群から選択される抗体である。
[0107]ある特定の実施形態では、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤は、ＩｇＧ及びＦｃＲｎに対する結合部位を含む二重特異性作用剤である。
[0108]ある特定の実施形態では、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤は、ＩｇＧの組換えＦｃ部分又はその生物学的に活性な部分若しくはそのプロテオミメティックである。
[0109]ある特定の実施形態では、循環中ＩｇＧは、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、又は１００％低減される。
[0110]本明細書では、例えば、（ａ）タンパク質又はペプチド又は核酸をコードする異種性ポリヌクレオチドを含む組換えウイルスベクター、（ｂ）ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤、（ｃ）任意選択で、抗体を分解又は消化するプロテアーゼ又はグリコシダーゼ、及び（ｄ）本明細書に記載の方法を実施するための使用説明書を有するラベルを有するパッケージ又はキットであって、（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）が別々の容器又は同じ容器（複数可）に提供されている、パッケージ又はキットとして提供される組成物がさらに提供されている。
[0111]ある特定の実施形態では、方法は、組換えウイルスベクター並びに／或いは異種性ポリヌクレオチドによりコードされている核酸及び／又はタンパク質若しくはペプチドに結合する抗体のエフェクター機能を阻害又は低減するのに有効な量のグリコシダーゼを、対象に投与するステップをさらに含む。ある特定の実施形態では、方法は、抗体を分解又は消化するのに有効な量のエンドペプチダーゼ、或いは組換えウイルスベクター並びに／或いは異種性ポリヌクレオチドによりコードされている核酸及び／又はタンパク質若しくはペプチドに結合する抗体のエフェクター機能を阻害又は低減するのに有効な量のエンドグリコシダーゼを、対象に投与するステップをさらに含む。
[0112]ある特定の実施形態では、方法は、組換えウイルスベクター並びに／或いは異種性ポリヌクレオチドによりコードされている核酸及び／又はタンパク質若しくはペプチドに結合する抗体のＦｃ受容体結合を低減するのに有効な量のグリコシダーゼを、対象に投与するステップをさらに含む。ある特定の実施形態では、方法は、組換えウイルスベクター並びに／或いは異種性ポリヌクレオチドによりコードされている核酸及び／又はタンパク質若しくはペプチドに結合する抗体のＦｃ受容体結合を低減するのに有効な量のエンドグリコシダーゼを、対象に投与するステップをさらに含む。
[0113]本発明の方法は、遺伝子療法治療の増強に幅広く応用可能である。例えば、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤を投与することによりＡＡＶカプシド又は他の様式の遺伝子療法送達物に対するＮＡｂを克服することは、既存のＡＡＶ中和抗体力価を有する患者の治療を可能にし、並びにＡＡＶ遺伝子療法製品が以前に投与されており、時間がたったため若しくは他の交絡問題のため、有効レベルが達成されていないか又は失われているかのいずれかである患者への反復投薬を可能にする能力を有する。例えば、ＩｄｅＳの投与と組み合わせて、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤を投与することにより、既存ＮＡｂを有する患者の遺伝子療法治療の有効性をさらに増強することができる。加えて、本明細書の方法は、発生中の肝細胞拡大増殖及び導入遺伝子発現の喪失可能性のため遺伝子療法が困難であると見なされてきた小児集団への肝遺伝子導入を可能にする。さらなる例では、本発明の方法における、任意選択でプロテアーゼ（例えば、ＩｄｅＳ）又はグリコシダーゼ（例えば、ＥｎｄｏＳ）の投与と組み合わせた、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤の投与は、ＡＡＶカプシドに対する中和抗体を低減又はクリアランスすることになり、遺伝子療法に適さないと以前は見なされていた患者又はＡＡＶ遺伝子療法後にＡＡＶ抗体を発生させる患者の治療を可能にする。
[0114]ある特定の実施形態では、本発明で使用することができるウイルスベクターとしては、例えば、限定ではないが、ＡＡＶ粒子が挙げられる。ある特定の実施形態では、本発明で使用することができるウイルスベクターとしては、例えば、限定ではないが、レトロウイルス、アデノウイルス、ヘルパー依存性アデノウイルス、ハイブリッドアデノウイルス、単純ヘルペスウイルス、レンチウイルス、ポックスウイルス、エプスタイン－バーウイルス、ワクシニアウイルス、及びヒトサイトメガロウイルスベクター、並びにそれらの組換え型が挙げられる。
[0115]組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ベクターなどのウイルスベクターの修飾語としての、並びに組換えポリヌクレオチド及びポリペプチドなどの配列の修飾語としての「組換え」という用語は、組成物が、自然界では一般に生じないようなものへと操作されている（つまり、遺伝子操作されている）ことを意味する。組換えＡＡＶベクターの特定の例は、通常は野生型ＡＡＶゲノムに存在しない核酸（異種性ポリヌクレオチド）がウイルスゲノム内に挿入されている場合であろう。その例は、療法用タンパク質又はポリヌクレオチド配列をコードする核酸（例えば、遺伝子）がベクターにクローニングされており、通常はその遺伝子に付随する５’領域、３’領域、及び／又はイントロン領域をＡＡＶゲノム内に有するか又は有していない場合であろう。本明細書では、「組換え」という用語が必ずしもＡＡＶベクター並びにポリヌクレオチドなどの配列に使用されているわけではないが、あらゆるそのような省略にも関わらず、ＡＡＶベクター、ポリヌクレオチドなどを含む組換え形態が明示的に含まれる。
[0116]例えば、「ｒＡＡＶベクター」は、分子的方法を使用して野生型ＡＡＶゲノムのすべて又は一部を除去して、療法用タンパク質又はポリヌクレオチド配列をコードしている核酸などの非天然（異種性）核酸に置き換えることにより、ＡＡＶの野生型ゲノムから導出される。典型的には、ｒＡＡＶベクターでは、ＡＡＶゲノムの一方の又は両方の逆位末端反復（ＩＴＲ）配列が保持されている。ｒＡＡＶは、ＡＡＶゲノムのすべて又は一部が、療法用タンパク質又はポリヌクレオチド配列をコードする異種性核酸など、ＡＡＶゲノム核酸に対して非天然である配列で置き換えられているため、ＡＡＶゲノムとは区別される。したがって、ＡＡＶは、非天然（異種性）配列が組み込まれていることにより、「組換え」ＡＡＶベクターであると規定され、「ｒＡＡＶベクター」と呼ぶことができる。
[0117]組換えＡＡＶベクター配列は、パッケージングされていてもよく、本明細書では、ｅｘ ｖｉｖｏ、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、又はｉｎ ｖｉｖｏで細胞を後に感染させる（形質導入）のための「粒子」と呼ばれる場合がある。組換えベクター配列がＡＡＶ粒子にカプシド被包又はパッケージングされている場合、粒子は、「ｒＡＡＶ」、「ｒＡＡＶ粒子」、及び／又は「ｒＡＡＶビリオン」とも呼ぶこともできる。そのようなｒＡＡＶ、ｒＡＡＶ粒子、及びｒＡＡＶビリオンは、ベクターゲノムをカプシド被包又はパッケージングするタンパク質を含む。特定の例としては、ＡＡＶの場合、カプシドタンパク質が挙げられる。
[0118]「ベクターゲノム」は、「ｖｇ」と略記される場合があり、最終的にパッケージング又はカプシド被包されてｒＡＡＶ粒子を形成する組換えプラスミド配列の部分を指す。組換えプラスミドを使用して組換えＡＡＶベクターを構築又は製造する場合、ＡＡＶベクターゲノムは、組換えプラスミドのベクターゲノム配列に対応しない「プラスミド」の部分を含まない。組換えプラスミドのこの非ベクターゲノム部分は、「プラスミド骨格」と呼ばれ、プラスミドのクローニング及び増幅、伝播及び組換えＡＡＶベクター産生に必要なプロセスにとって重要であるが、それ自体はｒＡＡＶ粒子にパッケージングもカプシド被包もされない。したがって、「ベクターゲノム」は、ｒＡＡＶによりパッケージング又はカプシド被包される核酸を指す。
[0119]本明細書で使用される場合、ＡＡＶベクターに関する「血清型」という用語は、他のＡＡＶ血清型とは血清学的に異なるカプシドを意味する。血清学的識別性は、別のＡＡＶと比較した、あるＡＡＶに対する抗体間の交差反応性の欠如に基づいて決定される。交差反応性の違いは、通常は、カプシドタンパク質配列／抗原決定基の違いによる（例えば、ＡＡＶ血清型のＶＰ１、ＶＰ２、及び／又はＶＰ３配列が異なることによる）。あるＡＡＶに対する抗体は、カプシドタンパク質配列の相同性により、１つ又は複数の他のＡＡＶ血清型と交差反応する可能性がある。
[0120]従来の定義では、血清型とは、目的のウイルスの中和活性を、既存の特徴付けられているすべての血清型に特異的な血清に対して試験しても、目的のウイルスを中和する抗体が見出されないことを意味する。より多くの天然に存在するウイルス分離株が発見されており、及び／又はカプシド変異体が生成されているため、現在存在する血清型のいずれかとの血清学的な違いが存在する場合もあり又は存在しない場合もある。したがって、新しいウイルス（例えば、ＡＡＶ）が血清学的な違いを有していない場合、この新しいウイルス（例えば、ＡＡＶ）は、対応する血清型のサブグループ又はバリアントであろう。多くの場合、カプシド配列修飾を有する変異体ウイルスに対しては、従来の血清型定義に従って別の血清型であるか否かを決定するための、中和活性に関する血清学的試験はまだ実施されていない。したがって、便宜上及び繰返しを避けるために、「血清型」という用語は、血清学的に異なるウイルス（例えば、ＡＡＶ）並びに血清学的には異なっていないものの所与の血清型のサブグループ又はバリアント内に入る可能性のあるウイルス（例えば、ＡＡＶ）の両方を幅広く指す。
[0121]ｒＡＡＶベクターとしては、任意のウイルス株又は血清型が挙げられる。例えば、限定ではないが、ｒＡＡＶベクターゲノム又は粒子（ＶＰ１、ＶＰ２、及び／又はＶＰ３などのカプシド）は、例えば、ＡＡＶ－１、－２、－３、－４、－５、－６、－７、－８、－９、－１０、－１１、－１２、－ｒｈ７４、－ｒｈ１０、ＡＡＶ３Ｂ、又はＡＡＶ－２ｉ８など、任意のＡＡＶ血清型に基づいていてもよい。そのようなベクターは、同じ株又は血清型（又はサブグループ若しくはバリアント）に基づいていてもよく、又は互いに異なっていてもよい。例えば、限定ではないが、１つの血清型ゲノムに基づくｒＡＡＶプラスミド又はベクターゲノム又は粒子（カプシド）は、ベクターをパッケージングするカプシドタンパク質の１つ又は複数と同一であってもよい。加えて、ｒＡＡＶプラスミド又はベクターゲノムは、ベクターゲノムをパッケージングするカプシドタンパク質の１つ又は複数とは異なるＡＡＶ血清型ゲノムに基づいていてもよく、その場合は、例えば、３つのカプシドタンパク質のうちの少なくとも１つは、異なるＡＡＶ血清型、例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、－ｒｈ７４、－ｒｈ１０、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ－２ｉ８、ＳＰＫ１（配列番号１）、ＳＰＫ２（配列番号２）、又はそれらのバリアントであってもよい。より詳細には、ｒＡＡＶ２ベクターゲノムは、ＡＡＶ２ ＩＴＲを含んでいてもよいが、カプシドは、例えば、ＡＡＶ１、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、－ｒｈ７４、－ｒｈ１０、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ－２ｉ８、ＳＰＫ１（配列番号１）、ＳＰＫ２（配列番号２）、又はそれらのバリアントなどの異なる血清型に由来してもよい。したがって、ｒＡＡＶベクターは、特定の血清型に特徴的な遺伝子／タンパク質配列と同一の遺伝子／タンパク質配列、並びに「偽型」と呼ばれる場合もある「混合」血清型を含む。
[0122]ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶプラスミド又はベクターゲノム又は粒子は、ヘビ及びトカゲパルボウイルス（Ｐｅｎｚｅｓら、２０１５年、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．、９６巻：２７６９～２７７９頁）又は昆虫及びエビパルボウイルス（Ｒｏｅｋｒｉｎｇら、２００２年、Ｖｉｒｕｓ Ｒｅｓ．、８７巻：７９～８７頁）などの、爬虫類又は無脊椎動物ＡＡＶバリアントに基づく。
[0123]ある特定の実施形態では、組換えプラスミド又はベクターゲノム又は粒子は、ボカウイルスバリアントに基づく。ヒトボカウイルスバリアントは、例えば、Ｇｕｉｄｏら、２０１６年、Ｗｏｒｌｄ Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．、２２巻：８６８４～８６９７頁に記載されている。
[0124]ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、１つ又は複数のＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、－ｒｈ７４、－ｒｈ１０、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ－２ｉ８、ＳＰＫ１（配列番号１）、ＳＰＫ２（配列番号２）カプシドタンパク質（ＶＰ１、ＶＰ２、及び／又はＶＰ３配列）と、少なくとも７０％又はそれよりも高い（例えば、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％など）同一性を有するカプシド配列を含むか又はからなる。ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶベクターは、１つ又は複数のＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、－ｒｈ７４、－ｒｈ１０、又はＡＡＶ３Ｂ、ＩＴＲと、少なくとも７０％又はそれよりも高い（例えば、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％など）同一性を有する配列を含むか又はからなる。
[0125]ある特定の実施形態では、ｒＡＡＶベクターとしては、例えば、国際公開第２０１３／１５８８７９号（国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０３７１７０号）、国際公開第２０１５／０１３３１３号（国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０４７６７０号）、及び米国特許出願公開第２０１３／００５９７３２号（米国特許出願第１３／５９４，７７３号）に示されているものなど、それらのＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、ＡＡＶ３Ｂ、Ｒｈ１０、Ｒｈ７４、及びＡＡＶ－２ｉ８バリアント（例えば、アミノ酸の挿入、付加、置換、及び欠失などの、ＩＴＲ及びカプシドバリアント）が挙げられる。
[0126]ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ１２、－ｒｈ７４、－ｒｈ１０、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ－２ｉ８、ＳＰＫ１（配列番号１）、ＳＰＫ２（配列番号２）、並びにバリアント、ハイブリッド、及びキメラ配列などのｒＡＡＶは、当業者に公知の組換え技法を使用して、１つ又は複数の機能的ＡＡＶ ＩＴＲ配列でフランキングされている１つ又は複数の異種性ポリヌクレオチド配列（導入遺伝子）を含むように構築することができる。そのようなＡＡＶベクターは、典型的には、組換えベクターのレスキュー、複製、及びｒＡＡＶベクター粒子へのパッケージングに必要な、少なくとも１つの機能的フランキングＩＴＲ配列を保持する。したがって、ｒＡＡＶベクターゲノムは、複製及びパッケージングのためにシス位置に必要とされる配列（例えば、機能的ＩＴＲ配列）を含むことになる。
[0127]ある特定の実施形態では、本発明で使用されるレンチウイルスは、ヒト免疫不全－１（ＨＩＶ－１）、ヒト免疫不全－２（ＨＩＶ－２）、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）、ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）、ジェンブラナ病（Ｊｅｍｂｒａｎａ Ｄｉｓｅａｓｅ）ウイルス（ＪＤＶ）、ウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）、又はヤギ関節炎脳炎ウイルス（ＣＡＥＶ）であってもよい。レンチウイルスベクターは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏの両方における非分裂細胞への異種性ポリヌクレオチド配列の効率的な送達、組込み、及び長期発現を提供することが可能である。様々なレンチウイルスベクターが当技術分野で公知である。Ｎａｌｄｉｎｉら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９３巻：１１３８２～１１３８８頁（１９９６年）；Ｓｃｉｅｎｃｅ、２７２巻：２６３～２６７頁（１９９６年））、Ｚｕｆｆｅｒｅｙら（Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、１５巻：８７１～８７５頁、１９９７年）、Ｄｕｌｌら（Ｊ Ｖｉｒｏｌ．１９９８年１１月；７２巻（１１号）：８４６３～７１頁、１９９８年）、米国特許第６，０１３，５１６号及び第５，９９４，１３６号を参照されたい。これらはいずれも、本発明で使用するための好適なウイルスベクターであり得る。
[0128]野生型ウイルスに曝露された対象では、野生型ウイルスに対する体液性免疫などの免疫応答が発生する可能性がある。そのような曝露は、ウイルスベクターが使用される遺伝子療法方法による治療の前であっても、野生型ウイルスに基づくウイルスベクターに結合する抗体が対象に既に存在することに結び付く可能性がある。
[0129]体液性免疫などの免疫応答は、組換えウイルスベクター、及び／又は異種性ポリヌクレオチド、又はウイルスベクターによりカプシド被包された異種性ポリヌクレオチドによりコードされているタンパク質若しくはペプチドに対しても発生し、ウイルスベクター細胞形質導入、異種性ポリヌクレオチドの発現若しくは機能、又はウイルスベクターが投与されている対象における、異種性ポリヌクレオチドによりコードされているタンパク質若しくはペプチドの機能若しくは活性の阻害若しくは低減をもたらす可能性がある。
[0130]組換えウイルスベクターなど本発明で使用されるウイルスベクターに結合する抗体は、「中和」抗体と呼ばれる場合があり、遺伝子療法に有用なウイルスベクターの細胞形質導入を低減又は阻害することができる。結果として、理論に縛られるわけではないが、細胞形質導入が低減又は阻害され、それによりウイルスにパッケージングされた異種性ポリヌクレオチドの細胞への導入及びその後の発現及び必要に応じてタンパク質又はペプチドへのその後の翻訳が低減される。加えて、ウイルスベクターによりカプシド被包された異種性ポリヌクレオチドによりコードされている異種性ポリヌクレオチド又はタンパク質又はペプチドに結合する抗体は、異種性ポリヌクレオチドの発現、異種性ポリヌクレオチドの機能若しくは活性、又は異種性ポリヌクレオチドによりコードされているタンパク質若しくはペプチドの機能若しくは活性を阻害することができる。
[0131]したがって、対象には、組換えウイルスベクター（例えば、ＡＡＶ）に結合する抗体が存在する可能性があり、及び／又は異種性ポリヌクレオチドによりコードされているタンパク質又はペプチドに結合する抗体が存在する可能性がある。加えて、組換えウイルスベクターによりカプシド被包された異種性ポリヌクレオチドに結合する抗体が存在する可能性がある。
[0132]対象における、組換えウイルスベクター（例えば、ＡＡＶ）に結合するか又は異種性ポリヌクレオチドによりコードされているタンパク質若しくはペプチドに結合するＩｇＧ抗体は、産生されたとしても、本明細書に示されている通り、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤を使用することにより低減させることができる。ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用の低減は、ＩｇＧリサイクリングの低減をもたらし（ＩｇＧクリアランスの増強とも呼ばれる）、したがって循環中ＩｇＧの力価低減（血液中、血漿中、又は血清中のＩｇＧレベルの低減）をもたらす。これは、当技術分野で公知の標準的アッセイにより測定することができる。
[0133]組換えウイルスベクター（例えば、ＡＡＶ）に結合する抗体、又は異種性ポリヌクレオチドによりコードされているタンパク質若しくはペプチドに結合する抗体は、産生されたとしても、本明細書に示されている通り、プロテアーゼによりさらに分解又は消化することができる。また、組換えウイルスベクター（例えば、ＡＡＶ）に結合する抗体、又は異種性ポリヌクレオチドによりコードされているタンパク質若しくはペプチドに結合する抗体は、産生されたとしても、本明細書に示されている通り、それらのエフェクター機能を低減又は阻害することができる。
[0134]本明細書で使用される場合、抗体に関する「エフェクター機能」は、抗体の正常な機能的属性を意味する。抗体の機能的属性の非限定的な例としては、例えば、抗原に結合すること；補体カスケードを活性化すること（補体依存性細胞傷害と呼ばれる）；マクロファージ、単球、ナチュラルキラー細胞、及び好酸球などのエフェクター細胞上にあるＦｃ受容体に結合して、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に関与すること；食細胞及び樹状細胞などの免疫細胞により、結合した抗原／病原体を摂取するシグナルを伝達することが挙げられる。したがって、抗体エフェクター機能の低減又は阻害は、上述の非限定的な機能的属性のうちのいずれか１つ又は複数を指すことができる。エフェクター機能アッセイは、当技術分野で公知であると共に、例えば、国際公開第２０１６０１２２８５号に記載されている。
[0135]「Ｆｃ受容体」は、任意のＦｃ受容体を指す。新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に加えて、Ｆｃ受容体の非限定的な例としては、細胞上に存在するＦｃガンマ免疫グロブリン受容体（ＦｃγＲ）が挙げられる。ヒトでは、ＦｃγＲは、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）、及びＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）を含むＦｃ受容体ファミリーのうちの１つ、一部、又はすべてを指す。ＦｃγＲは、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）、及びＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）の天然に存在する多型を含む。
[0136]ある特定の実施形態では、ウイルスベクターに対する抗体結合は、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤、プロテアーゼ、又はグリコシダーゼにより低減又は阻害される。
[0137]ある特定の実施形態では、マクロファージ、単球、ナチュラルキラー細胞、又は好酸球などの、エフェクター細胞上にあるＦｃ受容体に対する抗体結合は、グリコシダーゼにより低減又は阻害される。ある特定の実施形態では、エンドグリコシダーゼは、抗体のＦｃ相互作用ドメイン上にあるグリカン構造を加水分解する。ある特定の実施形態では、エンドグリコシダーゼは、Ａｓｎ２９７位（カバット付番）のＮ結合二分岐グリカンなど、ＩｇＧのＦｃ相互作用ドメイン上にあるグリカン構造を加水分解する。
[0138]ある特定の実施形態では、補体カスケードの抗体活性化は、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤、プロテアーゼ、又はグリコシダーゼにより低減又は阻害される。
[0139]ある特定の実施形態では、食細胞若しくは樹状細胞などの免疫細胞による摂取の抗体刺激又は低減は、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤、プロテアーゼ、又はグリコシダーゼにより低減又は阻害される。
[0140]ある特定の実施形態では、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤は、組換えウイルス（例えば、ＡＡＶ）ベクターを投与する前に対象に投与される。ある特定の実施形態では、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤は、組換えウイルス（例えば、ＡＡＶ）ベクターを投与した後で対象に投与される。ある特定の実施形態では、組換えウイルス（例えば、ＡＡＶ）ベクター及びＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤は、実質的に同時に又はほぼ同時に投与される。
[0141]ある特定の実施形態では、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤に加えて、プロテアーゼ及び／又はグリコシダーゼが、組換えウイルス（例えば、ＡＡＶ）ベクターを投与する前に対象に投与される。ある特定の実施形態では、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤は、プロテアーゼ及び／若しくはグリコシダーゼを投与した後で、並びに／又は組換えウイルス（例えば、ＡＡＶ）ベクターを投与した後で、対象に投与される。ある特定の実施形態では、組換えウイルス（例えば、ＡＡＶ）ベクター及びＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤は、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤の投与と実質的に同時に又はほぼ同時に投与される。
[0142]ある特定の実施形態では、例えば限定ではないが抗ＦｃＲｎ抗体などの、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤は、限定ではないがＩｄｅＳなどのエンドペプチダーゼを対象に投与する前に対象に投与され、続いて組換えウイルス（例えば、ＡＡＶ）ベクターが対象に投与される。ある特定の実施形態では、例えば限定ではないが抗ＦｃＲｎ抗体などの、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤は、限定ではないがＩｄｅＳなどのエンドペプチダーゼを投与する前に、１回より多く対象に投与されるある特定の実施形態では、例えば限定ではないが抗ＦｃＲｎ抗体などの、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤は、限定ではないがＩｄｅＳなどのエンドペプチダーゼを投与する前に、少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回、又は少なくとも５回、対象に投与される。
[0143]ある特定の実施形態では、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤は、プロテアーゼ及び／又はグリコシダーゼを投与する前に、１、２、３、４、５、６週間、又はそれよりも長期間にわたって対象に投与され、プロテアーゼ及び／又はグリコシダーゼを投与した後で、組換えウイルス（例えば、ＡＡＶ）ベクターが対象に投与される。
[0144]ある特定の実施形態では、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤は、プロテアーゼ及び／又はグリコシダーゼを対象に投与する約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１５時間、約２０時間、約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、又は約１週間前に対象に投与され、プロテアーゼ及び／又はグリコシダーゼを投与した後で、組換えウイルス（例えば、ＡＡＶ）ベクターが対象に投与される。
[0145]ある特定の実施形態では、例えば限定ではないが抗ＦｃＲｎ抗体などの、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる薬剤は、限定ではないがＩｄｅＳなどのエンドペプチダーゼを対象に投与する前に１、２、３、４、５、６週間、又はそれよりも長期間にわたって対象に投与され、エンドペプチダーゼを投与した後で、組換えウイルス（例えば、ＡＡＶ）ベクターが対象に投与される。
[0146]ある特定の実施形態では、例えば限定ではないが抗ＦｃＲｎ抗体などの、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤は、限定ではないがＩｄｅＳなどのエンドペプチダーゼを対象に投与する約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１５時間、約２０時間、約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、又は約１週間前に対象に投与され、エンドペプチダーゼを投与した後で、組換えウイルス（例えば、ＡＡＶ）ベクターが対象に投与される。
[0147]抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及び／又はＩｇＥのうちのいずれかを含む。したがって、ある特定の実施形態では、本発明は、なかでも、こうした５つのクラスの抗体のうちのいずれか１つ、こうした５つのクラスの抗体のうちのいずれか２つ、こうした５つのクラスの抗体のうちのいずれか３つ、こうした５つのクラスの抗体のうちのいずれか４つ、又はこうした５つのクラスの抗体のすべてを消化、分解、又はそうした抗体のエフェクター機能を低減若しくは阻害することに関する。
[0148]対象における抗体のレベルは、組換えウイルスベクターの投与前及び／又は投与後に、分析、測定、又は決定することができる。また、対象における抗体のレベルは、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤又はプロテアーゼ若しくはグリコシダーゼの投与前及び／又は投与後に、分析、測定、又は決定することができる。また、対象における抗体のレベルは、組換えウイルスベクターの投与前及び／又は投与後、並びにＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤又はプロテアーゼ若しくはグリコシダーゼの投与前及び／又は投与後に、複数回分析又は測定することができる。
[0149]対象における抗体のエフェクター機能は、組換えウイルスベクターの投与前及び／又は投与後に、分析、測定、又は決定することができる。また、対象における抗体のエフェクター機能は、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤又はプロテアーゼ若しくはグリコシダーゼの投与前及び／又は投与後に、分析、測定、又は決定することができる。また、対象における抗体のエフェクター機能は、組換えウイルスベクターの投与前及び／又は投与後、並びにＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤又はプロテアーゼ若しくはグリコシダーゼの投与前及び／又は投与後に、複数回分析又は測定することができる。
[0150]平衡結合定数の増加は、ＩｇＧとＦｃ受容体との結合の減少に対応する。したがって、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤の活性又はプロテアーゼ若しくはグリコシダーゼ活性の帰結としての、抗体とＦｃ受容体との結合の低減は、ＩｇＧ：ＦｃＲ相互作用の平衡結合定数の増加をもたらすことができる。抗体とのＦｃ受容体結合の低減は、少なくとも１倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、又は少なくとも４倍、又は少なくとも５倍、又は少なくとも６倍、又は少なくとも７倍、又は少なくとも８倍の、ＩｇＧ：ＦｃＲ相互作用の平衡結合定数の増加をもたらすることができる。
[0151]ある特定の実施形態では、野生型ウイルスへの曝露により引き起こされる対象の免疫応答（例えば、体液性免疫応答）は、組換えウイルスベクターを対象に投与する前に、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤、並びに野生型ウイルスに基づく組換えウイルスベクターに結合する抗体を分解又は消化するのに有効な量のプロテアーゼ及び／又はグリコシダーゼを投与することにより処置される。
[0152]ある特定の実施形態では、ＡＡＶなどの組換えウイルスベクターの投与により引き起こされる免疫応答（例えば、体液性免疫応答）は、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤、並びに組換えウイルスベクターに結合する抗体或いは異種性ポリヌクレオチド又はウイルスベクターによりカプシド被包された異種性ポリヌクレオチドによりコードされているタンパク質若しくはペプチドに結合する抗体を分解又は消化するのに有効な量のプロテアーゼ及び／又はグリコシダーゼを投与することにより処置される。
[0153]ある特定の実施形態では、組換えウイルスベクターを対象に投与する前に、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤並びにプロテアーゼ及び／又はグリコシダーゼを投与して、組換えウイルスベクター又は異種性ポリヌクレオチド又はウイルスベクターによりカプシド被包された異種性ポリヌクレオチドによりコードされているタンパク質若しくはペプチドに結合する抗体に対する免疫応答（例えば、体液性免疫応答）を阻害又は防止する。
[0154]ある特定の実施形態では、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤並びにプロテアーゼ及び／又はグリコシダーゼは、中和抗体が発生する前、或いは異種性ポリヌクレオチド又はウイルスベクターによりカプシド被包された異種性ポリヌクレオチドによりコードされているタンパク質若しくはペプチドに結合する抗体が発生する前など、免疫応答（例えば、体液性免疫応答）の前に対象に投与される。
[0155]遺伝子治療ベクターの有効性を増加又は増強するための、及び対象における遺伝子療法治療を増加又は増強するための方法におけるプロテアーゼ及び／又はグリコシダーゼの使用は公知である。例えば、国際公開第２０２００１６３１８号、国際公開第２０２０１０２７４０号、及びＬｅｂｏｒｇｎｅら、２０２０年、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．、２６巻：１０９６～１１０１頁（２０２０年）を参照されたい。これら文献の各々は、すべての本文、表、配列表、及び図面を含め、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
[0156]プロテアーゼは、タンパク質を分解又は消化する酵素である。本明細書で使用される場合、プロテアーゼは、ペプチダーゼ、プロテイナーゼ、ペプチドヒドロラーゼ、又はタンパク質分解酵素とも呼ばれる。
[0157]本発明で使用することができるプロテアーゼは、それらの基質特異性に基づき２つの大まかなグループに分類することができる。プロテアーゼは、Ｎ末端又はＣ末端に向かって位置するペプチド結合を加水分解するエキソ型のもの（エキソプロテアーゼ又はエキソペプチダーゼ）であってもよい。エキソプロテアーゼ又はエキソペプチダーゼの例としては、例えば、限定ではないが、フラボザイム（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ）、プロテアＡＸ（Ａｍａｎｏ）、及びブタ膵臓由来のパンクレアチンが挙げられる。
[0158]本発明で使用することができるプロテアーゼは、ポリペプチド鎖の内部でペプチド結合を加水分解するエンド型のもの（エンドプロテアーゼ又はエンドペプチダーゼ）であってもよい。エンドプロテアーゼの例としては、例えば、限定ではないが、ＩｄｅＳ、ＩｄｅＺ、ＩｇｄＥ、ＩｄｅＭＣ、トリプシン、キモトリプシン、パパイン、及びペプシンが挙げられる。
[0159]本発明で使用することができるプロテアーゼの例としては、例えば、限定ではないが、ストレプトコッカス・ピオゲネス、ストレプトコッカス・エクイ、マイコプラズマ・カニス、Ｓ．アガラクチア（Ｓ．ａｇａｌａｃｔｉａｅ）、又はＳ．プソイドポルシヌス（Ｓ．ｐｓｅｕｄｏｐｏｒｃｉｎｕｓ）由来のシステインプロテアーゼが挙げられる。ある特定の実施形態では、プロテアーゼは、ストレプトコッカス・ピオゲネス由来のエンドペプチダーゼＩｄｅＳ又は配列番号３～１８のいずれかに示されているその修飾バリアントを含む。ある特定の実施形態では、プロテアーゼは、配列番号１９若しくは配列番号２０に示されているプロテアーゼ、又はその修飾バリアントを含む。ある特定の実施形態では、プロテアーゼは、ストレプトコッカス・エクイ由来のエンドペプチダーゼＩｄｅＺ、又は配列番号２１～４３のいずれかに示されているその修飾バリアントを含む。
[0160]本発明で使用することができる他のプロテアーゼとしては、例えば、限定ではないが、国際公開第２０１７／１３４２７４号に記載の、Ｓ．スイス（Ｓ．ｓｕｉｓ）、Ｓ．ポルシヌス（Ｓ．ｐｏｒｃｉｎｕｓ）、Ｓ．エクイに由来するＩｇｄＥ酵素が挙げられる。本発明で使用することができる他のプロテアーゼとしては、例えば、限定ではないが、国際公開第２０１８／０９３８６８号に記載のＩｄｅＭＣ及びホモログが挙げられる。本発明で使用することができる他のエンドペプチダーゼとしては、例えば、限定ではないが、国際公開第２０１６／１２８５５９号に記載の、Ｎ末端メチオニン及びシグナルペプチドを有するか又は有しないＩｄｅＺ並びにＩｄｅＳ／ＩｄｅＺハイブリッドタンパク質が挙げられる。例えば、本発明で使用することができる他のプロテアーゼとしては、例えば、限定ではないが、Ｊｏｒｄａｎら（２０１７年、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、３７７巻：４４２～４５３頁）、Ｌａｎｎｅｒｇａｒｄ及びＧｕｓｓ（２００６年、ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｌｅｔｔ．、２６２巻：２３０～２３５頁）、及びＨｕｌｔｉｎｇら（２００９年、ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｌｅｔｔ．、２９８巻：４４～５０頁）に記載のプロテアーゼが挙げられる。
[0161]グリコシダーゼは、複合糖類のグリコシド結合を加水分解する酵素である。一般に２つの大まかなグループ、すなわちエキソグリコシダーゼ及びエンドグリコシダーゼが存在する。グリコシダーゼは、切断を行って、それにより抗体などの糖タンパク質からグリカン／オリゴ糖を放出する。
[0162]本発明で使用することができるエキソグリコシダーゼとしては、例えば、限定ではないが、Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼ、フコシダーゼ、ガラクトシダーゼ、グルコシダーゼ、マンノシダーゼ、ノイラミニダーゼ、及びキシロシダーゼが挙げられる。本発明で使用することができるエンドグリコシダーゼとしては、例えば、限定ではないが、ＥｎｄｏＳ、ＥｎｄｏＤ、エンドグリコシダーゼ－Ｈ、ＥｎｄｏＦ１、ＥｎｄｏＦ２、及びＥｎｄｏＦ３が挙げられる。
[0163]したがって、ある特定の実施形態では、グリコシダーゼは、エンドグリコシダーゼを含む。ある特定の実施形態では、グリコシダーゼは、エキソグリコシダーゼを含む。
[0164]エンドグリコシダーゼの例としては、例えば、限定ではないが、ＥｎｄｏＳが挙げられる。ある特定の実施形態では、エンドグリコシダーゼは、配列番号４４～４７のいずれかに示されている配列、又はその修飾バリアントを含む。
[0165]ある特定の実施形態では、ＥｎｄｏＳポリペプチドは、ＥｎｄｏＳポリペプチド、ＥｎｄｏＳポリペプチドの断片、ＥｎｄｏＳポリペプチドのバリアント、又はＥｎｄｏＳポリペプチドの断片のバリアントを含み、但し上記ポリペプチド、断片、バリアント、又は断片のバリアントは、免疫グロブリン（Ｉｇ）エンドグリコシダーゼ活性を有する。
[0166]ある特定の実施形態では、ＥｎｄｏＳポリペプチドは、Ｓ．ピオゲネスＥｎｄｏＳである。ＥｎｄｏＳポリペプチドのバリアントは、別の細菌などの別の生物に由来するＥｎｄｏＳポリペプチドであってもよい。ある特定の実施形態では、細菌は、ストレプトコッカス・エクイ、ストレプトコッカス・ズーエピデミクス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓ）、又はストレプトコッカス・ピオゲネスなどのストレプトコッカス属である。或いは、バリアントは、ヒツジ偽結核菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）に由来し、例えばＣＰ４０タンパク質であってもよく、エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）に由来し、例えばＥｎｄｏＥタンパク質であってもよく、又はエリザベトキンギア・メニンゴセプティカ（Ｅｌｉｚａｂｅｔｈｋｉｎｇｉａ ｍｅｎｉｎｇｏｓｅｐｔｉｃａ）（旧称フラボバクテリウム・メニンゴセプチカム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｍｅｎｉｎｇｏｓｅｐｔｉｃｕｍ））に由来し、例えばＥｎｄｏＦ２タンパク質であってもよい。
[0167]ＥｎｄｏＳポリペプチドは、（ａ）配列番号４４～４７のいずれかのアミノ酸配列；（ｂ）Ｉｇエンドグリコシダーゼ活性を有する（ａ）の断片；（ｃ）配列番号４４～４７のいずれかのアミノ酸配列と少なくとも５０％同一性を有し、Ｉｇエンドグリコシダーゼ活性を有する（ａ）のバリアント；又は（ｄ）配列番号４４～４７のいずれかのアミノ酸配列の対応する部分と少なくとも５０％同一性を有し、Ｉｇエンドグリコシダーゼ活性を有する（ｂ）のバリアントを含んでいてもよく又はからなっていてもよい。
[0168]ある特定の実施形態では、バリアントポリペプチドは、配列番号４４～４７のいずれかのアミノ酸配列又はＩｇエンドグリコシダーゼ活性を有するその断片に対して少なくとも約６０％又はそれよりも高い同一性（例えば、６０～７０％、７０～８０％、又は８０～９０％同一性）を有する。ある特定の実施形態では、バリアントポリペプチドは、配列番号４４～４７のいずれかの又はＩｇエンドグリコシダーゼ活性を有するその断片のアミノ酸配列と９０～１００％同一性を有する。
[0169]プロテアーゼは、（ａ）配列番号３～４３又は４８のいずれかのアミノ酸配列；又は（ｂ）プロテアーゼ活性を有する（ａ）の断片；又は（ｃ）配列番号３～４３若しくは４８のいずれかのアミノ酸配列と少なくとも５０％同一性を有し、プロテアーゼ活性を有する（ａ）のバリアント；又は（ｄ）配列番号３～４３若しくは４８のいずれかのアミノ酸配列の対応する部分と少なくとも５０％同一性を有し、プロテアーゼ活性を有する（ｂ）のバリアントを含んでいてもよく又はからなっていてもよい。ある特定の実施形態では、バリアントポリペプチドは、配列番号３～４３若しくは４８のいずれかのアミノ酸配列又はプロテアーゼ活性を有するその断片と、少なくとも約６０％又はそれよりも高い同一性（例えば、６０～７０％、７０～８０％、又は８０～９０％同一性）を有する。ある特定の実施形態では、バリアントポリペプチドは、配列番号３～４３若しくは４８のいずれかのアミノ酸配列又はプロテアーゼ活性を有するその断片と９０～１００％同一性を有する。
[0170]ある特定の実施形態では、プロテアーゼ又はグリコシダーゼは、Ｓ．ピオゲネスのＩｄｅＳの成熟形態である配列番号４８など、その天然シグナル配列を欠いており、Ｎ末端メチオニンが付加されている（シグナル配列を有しないが、付加されたＮ末端メチオニンを有する）。本発明の方法に従って使用される任意のプロテアーゼ又はグリコシダーゼは、天然シグナル配列の代わりに、付加されたＮ末端メチオニンを含んでいてもよい。
[0171]プロテアーゼ又はグリコシダーゼは、任意の好適な用量で対象に投与することができる。例えば、好適な投薬量は、対象の体重１ｋｇ当たり約０．０５ｍｇ～約５ｍｇ、又は対象の体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ～約４ｍｇであってもよい。
[0172]ある特定の実施形態では、ＩｄｅＺは、対象の体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ～約１０ｍｇの投薬量で投与される。例えば、好適な投薬量は、対象の体重１ｋｇ当たり約０．０５ｍｇ～約５ｍｇ、又は対象の体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ～約４ｍｇであってもよい。
[0173]ある特定の実施形態では、ＩｄｅＳは、対象の体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ～約１０ｍｇの投薬量で投与される。例えば、好適な投薬量は、対象の体重１ｋｇ当たり約０．０５ｍｇ～約５ｍｇ、又は対象の体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ～約４ｍｇであってもよい。
[0174]ある特定の実施形態では、ＥｎｄｏＳは、対象の体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ～約１０ｍｇの投薬量で投与される。例えば、好適な投薬量は、対象の体重１ｋｇ当たり約０．０５ｍｇ～約５ｍｇ、又は対象の体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ～約４ｍｇであってもよい。
[0175]本発明による方法は、本明細書に別段の指示がない限り、任意の好適な順序で実施することができる。ある特定の実施形態では、方法は、まず（ａ）中和抗体力価を低減させるのに有効な量の、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤を対象に投与するステップ；及び次いで（ｂ）組換えウイルスベクターを対象に投与するステップを含んでいてもよい。ある特定の実施形態では、（ｂ）組換えウイルスベクターを対象に投与するステップは、（ａ）ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤を対象に投与した約１分～約９０日後に実施される。ある特定の実施形態では、（ａ）ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤を対象に投与するステップ、及び（ｂ）組換えウイルスベクターを対象に投与するステップは、ほぼ同時に実施される。
[0176]ある特定の実施形態では、方法は、まず（ａ）異種性ポリヌクレオチドを有する組換えウイルスベクターを対象に投与するステップ、及び次いで（ｂ）組換えウイルスベクター及び／又は異種性ポリヌクレオチド又は異種性ポリヌクレオチドによりコードされているタンパク質若しくはペプチドに結合する抗体の循環レベルを低減させるのに有効な量の、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤を対象に投与するステップを含んでいてもよい。ある特定の実施形態では、（ｂ）組換えウイルスベクター及び／又は異種性ポリヌクレオチド又は異種性ポリヌクレオチドによりコードされているタンパク質若しくはペプチドに結合する抗体の循環レベルを低減させるのに有効な量の、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤を対象に投与するステップは、（ａ）異種性ポリヌクレオチドを有する組換えウイルスベクターを対象に投与するステップの約１分～約９０日後に実施される。ある特定の実施形態では、（ａ）異種性ポリヌクレオチドを有する組換えウイルスベクターを対象に投与するステップ、及び（ｂ）組換えウイルスベクター及び／又は異種性ポリヌクレオチド又は異種性ポリヌクレオチドによりコードされているタンパク質若しくはペプチドに結合する抗体の循環レベルを低減させるのに有効な量の、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤を対象に投与するステップは、ほぼ同時に実施される。
[0177]本発明による方法は、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤の投与又は組換えウイルスベクターの投与の前、後、又はほぼ同時に、プロテアーゼ及び／又はグリコシダーゼを対象に投与するステップを任意選択で含んでいてもよい。
[0178]ある特定の実施形態では、方法は、まず（ａ）ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤を対象に投与するステップ、及び次いで（ｂ）中和抗体を分解又は消化するのに有効なプロテアーゼ及び／又はグリコシダーゼを対象に投与するステップ、及び次いで（ｃ）組換えウイルスベクターを対象に投与するステップを含んでいてもよい。
[0179]ある特定の実施形態では、方法は、まず（ａ）ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤を対象に投与するステップ、及び次いで（ｂ）中和抗体を分解又は消化するのに有効なエンドペプチダーゼを対象に投与するステップ、及び次いで（ｃ）組換えウイルスベクターを対象に投与するステップを含んでいてもよい。
[0180]ある特定の実施形態では、方法は、まず（ａ）抗ＦｃＲｎ抗体を対象に投与するステップ、及び次いで（ｂ）中和抗体を分解又は消化するのに有効なＩｄｅＳを対象に投与するステップ、及び次いで（ｃ）組換えウイルスベクターを対象に投与するステップを含んでいてもよい。
[0181]中和抗体などの抗体は、ウイルスベクターの投与前であっても、組換えウイルスベクター細胞形質導入を阻害又は低減させるレベルで、対象に既存である可能性があり、存在する可能性がある。或いは、抗体は、組換えウイルスベクターがそれに基づくウイルスに曝露された後の対象に発生する可能性がある。またさらに、中和抗体などの抗体、或いは異種性ポリヌクレオチド又はウイルスベクターによりカプシド被包された異種ポリヌクレオチドによりコードされているタンパク質若しくはペプチドに結合する抗体は、組換えウイルスベクターを投与した後の対象に発生する可能性がある。
[0182]したがって、本明細書の方法は、既存抗体を有する対象及び既存抗体を有しない対象に応用可能である。本明細書に示されている通り、そのような対象としては、野生型ウイルスに曝露されており、野生型ウイルスに基づくウイルスベクターに対する既存抗体を発生させた対象、並びにウイルスベクター遺伝子療法治療を受けたことがあり、抗体を発生させ、その後、同じウイルスベクター遺伝子療法の１つ又は複数の追加用量で治療されていてもよく（再投薬と呼ばれる）、又は遺伝子療法治療を送達するために同じウイルスベクターを使用した異なる遺伝子療法治療（例えば、異なる異種性ポリヌクレオチド）で治療されていてもよい対象が挙げられる。
[0183]ウイルスベクターの投与前に、及び／又はＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤、プロテアーゼ、若しくはグリコシダーゼの投与前に、対象の抗体を試験してもよい。試験する抗体の非限定的な例としては、中和抗体、本明細書に示されているＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤又はプロテアーゼ若しくはグリコシダーゼに結合する抗体、異種ポリヌクレオチドに結合する抗体、及び異種性ポリヌクレオチドによりコードされているタンパク質又はペプチドに結合する抗体が挙げられる。したがって、中和抗体、本明細書に示されているＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤又はプロテアーゼ若しくはグリコシダーゼに結合する抗体、異種ポリヌクレオチドに結合する抗体、及び異種性ポリヌクレオチドによりコードされているタンパク質又はペプチドに結合する抗体について、組換えウイルスベクターの投与前に、及び／或いはＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤又はプロテアーゼ若しくはグリコシダーゼの投与前に、対象をスクリーニングしてもよい。
[0184]本明細書に示されているＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤又はプロテアーゼ若しくはグリコシダーゼに結合する既存抗体（例えば、ＩｇＧ）を有する対象は、任意選択で、本発明の方法に従った方法による初期治療から除外してもよい。しかしながら、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤又はプロテアーゼ若しくはグリコシダーゼに結合する抗体を有するか又は発生させる対象をすべて、本発明の方法に従った方法による治療から除外する必要はない。例えば、１リットル当たり１５ｍｇ未満の力価を有する検出可能な抗ＩｄｅＳ ＩｇＧを有する対象は、依然として、本発明による方法を使用して治療することができる。ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤の投与による循環中ＩｇＧの低減は、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤又はＩｄｅＳに結合することができる抗体の低減をもたらすことも予想される。
[0185]また、中和抗体、異種性ポリヌクレオチドに結合する抗体、又は異種ポリヌクレオチドによりコードされているタンパク質若しくはペプチドに結合する抗体について、組換えウイルスベクターの投与後に、対象をスクリーニングしてもよい。既存抗体が検出されていない対象において、そのような抗体が発生するか若しくは発生が防止されるかを決定するために、又は既存抗体を有する対象の場合は、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤並びにプロテアーゼ及び／若しくはグリコシダーゼがそのような既存抗体を減少若しくは排除するか否かを決定するために、組換えウイルスベクター投与後の任意の期間にわたって、そのような対象を任意選択でモニターしてもよい。
[0186]ある特定の実施形態では、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤は、中和抗体、本明細書に示されているＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤に結合する抗体、異種性ポリヌクレオチドに結合する抗体、又は異種性ポリヌクレオチドによりコードされているタンパク質若しくはペプチドに結合する抗体の存在に対して試験陽性になった後で対象に投与される。ある特定の実施形態では、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤は、中和抗体、本明細書に示されているＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤に結合する抗体、異種性ポリヌクレオチドに結合する抗体、又は異種性ポリヌクレオチドによりコードされているタンパク質若しくはペプチドに結合する抗体の存在に対して試験陽性になる前に対象に投与される。
[0187]ある特定の実施形態では、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤並びにプロテアーゼ及び／又はグリコシダーゼは、中和抗体、本明細書に示されているＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤又はプロテアーゼ若しくはグリコシダーゼに結合する抗体、異種性ポリヌクレオチドに結合する抗体、或いは異種性ポリヌクレオチドによりコードされているタンパク質又はペプチドに結合する抗体の存在に対して試験陽性になった後で対象に投与される。ある特定の実施形態では、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤並びにプロテアーゼ及び／又はグリコシダーゼは、中和抗体、本明細書に示されているＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤、プロテアーゼ、若しくはグリコシダーゼに結合する抗体、異種性ポリヌクレオチドに結合する抗体、又は異種性ポリヌクレオチドによりコードされているタンパク質若しくはペプチドに結合する抗体の存在に対して試験陽性になる前に対象に投与される。
[0188]ある特定の実施形態では、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤の投与前若しくは投与後に、又はＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤並びにプロテアーゼ及び／若しくはグリコシダーゼの投与前又は投与後に、対象の抗体を試験しない。したがって、中和抗体、本明細書に示されているＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤又はプロテアーゼ若しくはグリコシダーゼに結合する抗体、異種ポリヌクレオチドに結合する抗体、或いは異種性ポリヌクレオチドによりコードされているタンパク質又はペプチドに結合する抗体を、プロテアーゼ及び／若しくはグリコシダーゼの投与後に又は組換えウイルスベクターの投与後に試験することは、本発明による治療方法では任意選択である。
[0189]ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤は、任意の回数で対象に投与することができる。例えば、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤は、２～５回、２～１０回、２～１５回、対象に投与することができる。
[0190]ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤は、連日若しくは隔日など定期的に又は不定期的に任意の期間にわたって対象に投与することができる。ある特定の実施形態では、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤は、組換えウイルスベクターの投与前又は投与後、約１～１２週間、又は約１～１０週間、又は約１～８週間、又は約１～６週間、又は約１～４週間、又は約１～３週間、又は約１～２週間、又は約２週間投与される。
[0191]プロテアーゼ又はグリコシダーゼは、任意の回数で対象に投与することができる。例えば、プロテアーゼ及び／又はグリコシダーゼは、２～５回、２～１０回、２～１５回、対象に投与することができる。
[0192]プロテアーゼ又はグリコシダーゼは、連日若しくは隔日など定期的に又は不定期的に任意の期間にわたって対象に投与することができる。ある特定の実施形態では、プロテアーゼ及び／又はグリコシダーゼは、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤の投与前若しくは投与後、又は組換えウイルスベクターの投与前若しくは投与後、約１～１２週間、又は約１～１０週間、又は約１～８週間、又は約１～６週間、又は約１～４週間、又は約１～３週間、又は約１～２週間、又は約２週間投与される。
[0193]ある特定の実施形態では、組換えウイルスベクターは、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤の前若しくは後に、又はプロテアーゼ若しくはグリコシダーゼを対象に投与する前若しくは後に投与される。ある特定の実施形態では、組換えウイルスベクターは、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤又はプロテアーゼ若しくはグリコシダーゼを対象に投与した後、例えば、１～１２時間、１２～２４時間、若しくは２４～４８時間、又は２～４日間、４～６日間、６～８日間、８～１０日間、１０～１４日間、１４～２０日間、２０～２５日間、２５～３０日間、３０～５０日間、若しくは５０日間よりも長期間、対象に投与される。ある特定の実施形態では、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤又はプロテアーゼ若しくはグリコシダーゼは、組換えウイルスベクターを対象に投与した後、例えば、１～１２時間、１２～２４時間、若しくは２４～４８時間、又は２～４日間、４～６日間、６～８日間、８～１０日間、１０～１４日間、１４～２０日間、２０～２５日間、２５～３０日間、３０～５０日間、若しくは５０日間よりも長期間、対象に投与される。
[0194]組換えウイルスベクター、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤、プロテアーゼ及び／又はグリコシダーゼは、単独で又は組合せで投与することができる。ある特定の実施形態では、組換えウイルスベクターは、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤並びに／又はプロテアーゼ及び／若しくはグリコシダーゼとは別々に対象に投与される。ある特定の実施形態では、組換えウイルスベクターは、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤並びに／又はプロテアーゼ及び／若しくはグリコシダーゼと組み合わせて対象に投与される。
[0195]ある特定の実施形態では、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤並びにプロテアーゼ及び／又はグリコシダーゼの混合物が、対象に１回又は複数回投与される。ある特定の実施形態では、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる２つ又はそれよりも多くの作用剤並びに２つ又はそれよりも多くのプロテアーゼ及び／又はグリコシダーゼが、対象に１回又は複数回投与される。
[0196]ある特定の実施形態では、少なくとも１つの免疫抑制剤が、組換えウイルスベクター、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤、プロテアーゼ又はグリコシダーゼを対象に投与する前、投与と実質的に同時に、又は投与後に対象に投与される。ある特定の実施形態では、免疫抑制剤は、ステロイドなどの抗炎症剤である。ある特定の実施形態では、免疫抑制剤は、プレドニゾン、シクロスポリン（例えば、シクロスポリンＡ）、ミコフェノール酸、リツキシマブ、ラパマイシン、又はそれらの誘導体である。
[0197]体液性免疫を低減させる追加の戦略としては、抗体を、除去、枯渇、捕捉、及び／又は不活化する方法が挙げられ、これらは一般に、アフェレーシス、より詳細には血液産物が関与する場合はプラズマフェレーシスと呼ばれる。アフェレーシス又はプラズマフェレーシスは、ヒト対象の血漿を、患者に戻す前に成分の追加、除去、及び／又は置換により血漿を改変するデバイスに通して、ｅｘ ｖｉｖｏ（体外）で循環させるプロセスである。プラズマフェレーシスは、血液産物（例えば、血漿）からヒト免疫グロブリン（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＤ）を除去するために使用することができる。この手順は、組換えウイルスベクターに結合する、異種性ポリヌクレオチドに結合する、異種性ポリヌクレオチドによりコードされているタンパク質若しくはペプチドに結合する、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減する作用剤に結合する、プロテアーゼに結合する、及び／又はグリコシダーゼに結合する免疫グロブリン（抗体）を枯渇、捕捉、不活化、低減、又は除去し、それにより、例えばウイルスベクター中和に寄与することができる、治療対象の抗体の力価を低減させる。その例は、ＡＡＶカプシド親和性マトリックスカラムで構成されるデバイスである。血液産物（例えば、血漿）をそのようなＡＡＶカプシド親和性マトリックスに通すことにより、ＡＡＶ抗体のみ及びすべてのアイソタイプ（ＩｇＧ、ＩｇＭなどを含む）の結合がもたらされることになる。免疫吸着（米国特許出願公開第２０１８／０１６９２７３号）を使用して、免疫グロブリン、より詳細には抗ＡＡＶ抗体を枯渇させることもできる。親和性リガンド（国際公開第２０１８／１５８３９７号）を使用して、免疫グロブリン、より詳細には抗ＡＡＶ抗体を枯渇させることもできる。上述の戦略はいずれも、組換えウイルスベクター、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤、プロテアーゼ又はグリコシダーゼを対象に投与する前、投与と実質的に同時に、又は投与後に使用することができる。
[0198]ある特定の実施形態では、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤を対象に投与する前又は後に、及び／又は組換えウイルスベクターを対象に投与する前又は後に、本発明の方法の追加の１つ又は複数のステップとして、対象の血液産物（例えば、血漿）に対してプラズマフェレーシスが実施される。
[0199]ある特定の実施形態では、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤の投与前又は投与後に、対象の血液産物（例えば、血漿）に対してプラズマフェレーシスが実施され、次いで組換えウイルスベクターが対象に投与される。
[0200]ある特定の実施形態では、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤の投与前又は投与後に、対象の血液産物（例えば、血漿）に対してプラズマフェレーシスが実施され、次いでプロテアーゼ又はグリコシダーゼが対象に投与され、次いで組換えウイルスベクターが対象に投与される。
[0201]ある特定の実施形態では、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤の投与後に、対象の血液産物（例えば、血漿）に対してプラズマフェレーシスが実施され、次いでＩｄｅＳ又はＥｎｄｏＳが対象に投与され、次いで組換えウイルスベクターが対象に投与される。
[0202]ある特定の実施形態では、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤の投与後に、対象の血液産物（例えば、血漿）に対してプラズマフェレーシスが実施され、次いでＩｄｅＳが対象に投与され、次いで組換えウイルスベクターが対象に投与される。
[0203]本発明の方法において、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤の投与及びプロテアーゼ（例えば、ＩｄｅＳ）又はグリコシダーゼ（例えば、ＥｎｄｏＳ）の投与に加えて、プラズマフェレーシスを使用することは、対象の循環中和抗体の力価が高い可能性がある場合、遺伝子治療再投薬治療に特に有益であり得る。
[0204]全身性遺伝子導入の際にＡＡＶに対する体液性免疫を低減（克服）又は回避するための追加の戦略としては、抗ＡＡＶ抗体を吸着させるデコイとしてのＡＡＶ空カプシド粒子及び／又はカプシドタンパク質を使用すること、ＡＡＶに対する体液性免疫応答を減少、低減、阻害、防止、又は根絶するための免疫抑制薬を投与すること、ＡＡＶカプシド血清型を変更するか又はＡＡＶカプシドを遺伝子操作して中和抗体（ＮＡｂ）の影響を受け難くすること、血漿交換サイクルを使用して、抗ＡＡＶ免疫グロブリンを吸着させ、それにより抗ＡＡＶ抗体力価を低減させること、並びにバルーンカテーテルなどの送達技法を使用し、続いて生理食塩水で洗い流すことが挙げられる。またさらなる戦略は、Ｍｉｎｇｏｚｚｉら、２０１３年、Ｂｌｏｏｄ、１２２巻：２３～３６頁に記載されている。追加の戦略としては、Ｂｅｒｔｉｎら、２０２０年、Ｓｃｉ．Ｒｅｐ．１０巻：８６４頁に記載の通り、ＡＡＶ特異的プラズマフェレーシスカラムを使用して、血漿から全免疫グロブリンプールを枯渇させることなく、抗ＡＡＶ抗体を選択的に枯渇させることが挙げられる。対象のＡＡＶ抗体を除去、枯渇、捕捉、及び／又は不活化するためのアフェレーシス戦略は、国際公開第２０１９０１８４３９号に記載されている。
[0205]本発明によると、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤は、リポソーム、ナノ粒子、脂質ナノ粒子、ポリマー、マイクロ粒子、マイクロカプセル、ミセル、又は細胞外小胞で、被包又は複合体化されていてもよい。
[0206]また、本発明によると、ウイルス粒子は、リポソーム、ナノ粒子、脂質ナノ粒子、ポリマー、マイクロ粒子、マイクロカプセル、ミセル、又は細胞外小胞で、被包又は複合体化されていてもよい。
[0207]また、本発明によると、プロテアーゼ及び／又はグリコシダーゼは、リポソーム、ナノ粒子、脂質ナノ粒子、ポリマー、マイクロ粒子、マイクロカプセル、ミセル、又は細胞外小胞で、被包又は複合体化されていてもよい。
[0208]「脂質ナノ粒子」又は「ＬＮＰ」は、組換えウイルスベクター並びに／又はプロテアーゼ及び／若しくはグリコシダーゼの送達に有用であり、ナノスケール、つまり約１０ｎｍ～約１０００ｎｍ、又は約５０～約５００ｎｍ、又は約７５～約１２７ｎｍの寸法を有する脂質ベース小胞を指す。理論に縛られるものではないが、ＬＮＰは、プロテアーゼ、グリコシダーゼ、又は組換えウイルスベクターに、免疫系からの部分的又は完全な遮蔽を提供すると考えられる。遮蔽は、プロテアーゼ、グリコシダーゼ、又は組換えウイルスベクターに対する実質的な免疫応答のｉｎ ｖｉｖｏでの誘導を回避しつつ、プロテアーゼ、グリコシダーゼ、又は組換えウイルスベクターの組織又は細胞への送達を可能にする。また、遮蔽は、プロテアーゼ、グリコシダーゼ、又は組換えウイルスベクターに対する実質的な免疫応答をｉｎ ｖｉｖｏで誘導することなく（例えば、ヒトなどの対象において）、反復投与を可能にすることができる。また遮蔽は、ｉｎ ｖｉｖｏでの送達効率、療法効果の持続時間、及び／又は療法有効性を向上又は増加させることができる。
[0209]ＡＡＶのｐＩ（等電点）は、約６～約６．５の範囲である。したがって、ＡＡＶ表面はわずかに負電荷を帯びている。したがって、ＬＮＰは、例えばアミノ脂質などのカチオン性脂質を含むことが有益であり得る。例示的なアミノ脂質は、以下の文献に記載されている：米国特許第９，３５２，０４２号、米国特許第９，２２０，６８３号、米国特許第９，１８６，３２５号、米国特許第９，１３９，５５４号、米国特許第９，１２６，９６６号、米国特許第９，０１８，１８７号、米国特許第８，９９９，３５１号、米国特許第８，７２２，０８２号、米国特許第８，６４２，０７６号、米国特許第８，５６９，２５６号、米国特許第８，４６６，１２２号、及び米国特許第７，７４５，６５１号、並びに米国特許出願公開第２０１６／０２１３７８５号、米国特許出願公開第２０１６／０１９９４８５号、米国特許出願公開第２０１５／０２６５７０８号、米国特許出願公開第２０１４／０２８８１４６号、米国特許出願公開第２０１３／０１２３３３８号、米国特許出願公開第２０１３／０１１６３０７号、米国特許出願公開第２０１３／００６４８９４号、米国特許出願公開第２０１２／０１７２４１１号、及び米国特許出願公開第２０１０／０１１７１２５号。
[0210]「カチオン性脂質」及び「アミノ脂質」という用語は、本明細書では同義的に使用され、１つ、２つ、３つ、又はそれよりも多くの脂肪酸又は脂肪アルキル鎖及びｐＨ滴定可能なアミノ基（例えば、アルキルアミノ基又はジアルキルアミノ基）を有する脂質及びそれらの塩を含む。カチオン性脂質は、典型的には、カチオン性脂質のｐＫａ未満のｐＨでプロトン化され（つまり、正荷電され）、ｐＫａを上まわるｐＨでは実質的に中性である。また、カチオン性脂質は、滴定可能なカチオン性脂質であってもよい。ある特定の実施形態では、カチオン性脂質は、プロトン化可能な第三級アミン（例えば、ｐＨ滴定可能な）基；各アルキル鎖が独立して０～３つ（例えば、０、１、２、又は３つ）の二重結合を有するＣ１８アルキル鎖；及び頭部基とアルキル鎖との間のエーテル連結、エステル連結、又はケタール連結を含む。
[0211]カチオン性脂質としては、限定ではないが、１，２－ジリノレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＤＭＡ）、１，２－ジリノレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｅｎＤＭＡ）、１，２－ジ－γ－リノレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノプロパン（γ－ＤＬｅｎＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－４－（２－ジメチルアミノエチル）－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－Ｃ２Ｋ－ＤＭＡ、ＸＴＣ２、及びＣ２Ｋとしても知られている、ＤＬｉｎ－Ｋ－Ｃ２－ＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－４－ジメチルアミノメチル－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－Ｋ－ＤＭＡ）、ジリノレイルメチル－３－ジメチルアミノプロピオネート（ＭＣ２としても知られている、ＤＬｉｎ－Ｍ－Ｃ２－ＤＭＡ）、（６Ｚ，９Ｚ，２８Ｚ，３１Ｚ）－ヘプタトリアコンタ－６，９，２８，３１－テトラエン－１９－イル４－（ジメチルアミノ）ブタノエート（ＭＣ３としても知られている、ＤＬｉｎ－Ｍ－Ｃ３－ＤＭＡ）、それらの塩、及びそれらの混合物を挙げることができる。また、他のカチオン性脂質としては、これらに限定されないが、１，２－ジステアリルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－アミノプロパン（ＤＳＤＭＡ）、１，２－ジオレイルオキシ－Ｎ，Ｎ－ジメチル－３－アミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－４－（３－ジメチルアミノプロピル）－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－Ｋ－Ｃ３－ＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－４－（３－ジメチルアミノブチル）－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－Ｋ－Ｃ４－ＤＭＡ）、ＤＬｅｎ－Ｃ２Ｋ－ＤＭＡ、γ－ＤＬｅｎ－Ｃ２Ｋ－ＤＭＡ、及び（ＤＬｉｎ－ＭＰ－ＤＭＡ）（１－Ｂ１１としても知られている）が挙げられる。
[0212]またさらなるカチオン性脂質としては、限定ではないが、以下のものを挙げることができる：２，２－ジリノレイル－５－ジメチルアミノメチル－［１，３］－ジオキサン（ＤＬｉｎ－Ｋ６－ＤＭＡ）、２，２－ジリノレイル－４－Ｎ－メチルメチルペピアジノ（ｍｅｔｈｙｌｐｅｐｉａｚｉｎｏ）－［１，３］－ジオキソラン（ＤＬｉｎ－Ｋ－ＭＰＺ）、１，２－ジリノレイルカルバモイルオキシ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ－Ｃ－ＤＡＰ）、１，２－ジリノレイオキシ（ｄｉｌｉｎｏｌｅｙｏｘｙ）－３－（ジメチルアミノ）アセトキシプロパン（ＤＬｉｎ－ＤＡＣ）、１，２－ジリノレイオキシ－３－モルホリノプロパン（ＤＬｉｎ－ＭＡ）、１，２－ジリノレオイル－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎＤＡＰ）、１，２－ジリノレイルチオ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ－Ｓ－ＤＭＡ）、１－リノレオイル－２－リノレイルオキシ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎ－２－ＤＭＡＰ）、１，２－ジリノレイルオキシ－３－トリメチルアミノプロパン塩化物塩（ＤＬｉｎ－ＴＭＡ．Ｃｌ）、１，２－ジリノレオイル－３－トリメチルアミノプロパン塩化物塩（ＤＬｉｎ－ＴＡＰ．Ｃｌ）、１，２－ジリノレイルオキシ－３－（Ｎ－メチルピペラジノ）プロパン（ＤＬｉｎ－ＭＰＺ）、３－（Ｎ，Ｎ－ジリノレイルアミノ）－１，２－プロパンジオール（ＤＬｉｎＡＰ）、３－（Ｎ，Ｎ－ジオレイルアミノ）－１，２－プロパンジオ（ｐｒｏｐａｎｅｄｉｏ）（ＤＯＡＰ）、１，２－ジリノレイルオキソ－３－（２－Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノ）エトキシプロパン（ＤＬｉｎ－ＥＧ－ＤＭＡ）、Ｎ，Ｎ－ジオレイル－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニウム塩化物（ＤＯＤＡＣ）、Ｎ－（１－（２，３－ジオレイルオキシ）プロピル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチルアンモニウム塩化物（ＤＯＴＭＡ）、Ｎ，Ｎ－ジステアリル－Ｎ，Ｎ－ジメチルアンモニウム臭化物（ＤＤＡＢ）、Ｎ－（１－（２，３－ジオレオイルオキシ）プロピル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ－トリメチルアンモニウム塩化物（ＤＯＴＡＰ）、３－（Ｎ－（Ｎ’，Ｎ’－ジメチルアミノエタン）－カルバモイル）コレステロール（ＤＣ－Ｃｈｏｌ）、Ｎ－（１，２－ジミリスチルオキシプロパ－３－イル）－Ｎ，Ｎ－ジメチル－Ｎ－ヒドロキシエチルアンモニウム臭化物（ＤＭＲＩＥ）、２，３－ジオレイルオキシ－Ｎ－［２（スペルミン－カルボキサミド）エチル］－Ｎ，Ｎ－ジメチル－１－プロパンアミニウムトリフルオロアセテート（ＤＯＳＰＡ）、ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン（ＤＯＧＳ）、３－ジメチルアミノ－２－（コレスタ－５－エン－３－ベータ－オキシブタン－４－オキシ）－１－（ｃｉｓ，ｃｉｓ－９，１２－オクタデカジエノキシ）プロパン（ＣＬｉｎＤＭＡ）、２－［５’－（コレスタ－５－エン－３－ベータ－オキシ）－３’－オキサペントキシ）－３－ジメチル－１－（ｃｉｓ，ｃｉｓ－９’、１－２’－オクタデカジエノキシ）プロパン（ＣｐＬｉｎＤＭＡ）、Ｎ，Ｎ－ジメチル－３，４－ジオレイルオキシベンジルアミン（ＤＭＯＢＡ）、１，２－Ｎ，Ｎ’－ジリノレイルカルバミル－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＯｃａｒｂＤＡＰ）、１，２－Ｎ，Ｎ’－ジリノレイルカルバミル－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＬｉｎｃａｒｂＤＡＰ）、デキサメタゾン－スペリミン（ｓｐｅｒｉｍｉｎｅ）（ＤＳ）、及び二置換スペルミン（Ｄ２Ｓ）、又はそれらの混合物。
[0213]リポフェクチン（ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ）（登録商標）（ＤＯＴＭＡ及びＤＯＰＥを含む。ＧＩＢＣＯ／ＢＲＬから入手可能）、及びリポフェクタミン（ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ）（登録商標）（ＤＯＳＰＡ及びＤＯＰＥを含む。ＧＩＢＣＯ／ＢＲＬから入手可能）など、少なからぬ市販のカチオン性脂質の調製物を使用することができる。
[0214]ある特定の実施形態では、カチオン性脂質は、ＬＮＰの約１０重量％～脂質ナノ粒子の約８５重量％、又はＬＮＰの約５０重量％～ＬＮＰの約７５重量％の量で存在してもよい。
[0215]ステロールは、ＬＮＰに流動性を付与することができる。本明細書で使用される場合、「ステロール」は、植物（植物ステロール）又は動物（動物ステロール）由来の任意の天然に存在するステロール、並びに天然に存在しない合成ステロールを指し、それらはすべて、ステロイドＡ環の３位にヒドロキシル基が存在することにより特徴付けられる。ステロールは、リポソーム、脂質小胞、又は脂質粒子調製物の分野で従来から使用されている任意のステロールであってもよく、最も一般的にはコレステロールである。植物ステロールとしては、カンペステロール、シトステロール、及びスティグマステロールを挙げることができる。また、ステロールとしては、米国特許出願公開第２０１１／０１７７１５６号に記載のものなどのステロール修飾脂質が挙げられる。ある特定の実施形態では、ステロールは、ＬＮＰの約５重量％～脂質ナノ粒子の約５０重量％、又はＬＮＰの約１０重量％～ＬＮＰの約２５重量％の量で存在してもよい。
[0216]ＬＮＰは、中性脂質を含んでいてもよい。中性脂質は、生理的ｐＨで非荷電又は中性のいずれかの双性イオン形態で存在する任意の脂質種を含んでいてもよい。そのような脂質としては、限定ではないが、ジアシルホスファチジルコリン、ジアシルホスファチジルエタノールアミン、セラミド、スフィンゴミエリン、ジヒドロスフィンゴミエリン、セファリン、及びセレブロシドが挙げられる。中性脂質の選択は、一般に、なかでも粒子サイズ及び必要な安定性を考慮することにより導き出される。ある特定の実施形態では、中性脂質成分は、２つのアシル基を有する脂質（例えば、ジアシルホスファチジルコリン及びジアシルホスファチジルエタノールアミン）であってもよい。
[0217]様々な鎖長及び飽和度の様々なアシル鎖基を有する脂質が入手可能であるか、又は周知の技法により単離若しくは合成することができる。ある特定の実施形態では、Ｃ１４～Ｃ２２の範囲の炭素鎖長を有する飽和脂肪酸を含む脂質を使用することができる。ある特定の実施形態では、Ｃ１４～Ｃ２２の範囲の炭素鎖長を有する一又は二不飽和脂肪酸を含む脂質が使用される。加えて、飽和及び不飽和脂肪酸鎖の混合物を有する脂質を使用することができる。例示的な中性脂質としては、限定ではないが、１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジル－エタノールアミン（ＤＯＰＥ）、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、又は任意の関連ホスファチジルコリンが挙げられる。また、中性脂質は、スフィンゴミエリン、ジヒドロスフィンゴミエリン、又はセリン及びイノシトールなどの他の頭部基を有するリン脂質で構成されていてもよい。
[0218]ある特定の実施形態では、中性脂質は、脂質ナノ粒子の約０．１重量％～ＬＮＰの約７５重量％、又はＬＮＰの約５重量％～ＬＮＰの約１５重量％の量で存在してもよい。
[0219]ＬＮＰ被包プロテアーゼ、グリコシダーゼ、又は組換えウイルスベクターは、医薬組成物に、例えば、薬学的に許容される担体又は賦形剤に組み込むことができる。そのような医薬組成物は、数あるなかでも、ＬＮＰ被包プロテアーゼ、グリコシダーゼ、又は組換えウイルスベクターの対象へのｉｎ ｖｉｖｏ又はｅｘ ｖｉｖｏでの投与及び送達に有用である。
[0220]ＬＮＰの調製物は、例えば限定ではないがポリエチレングリコール（ＰＥＧ）及びステロールを含んでいてもよい追加の成分と組み合わせることができる。
[0221]「ＰＥＧ」という用語は、２つの末端ヒドロキシル基を有するエチレンＰＥＧ反復単位の線状水溶性ポリマーであるポリエチレングリコールを指す。ＰＥＧは分子量により分類される。例えば、ＰＥＧ２０００は、約２，０００ダルトンの平均分子量を有し、ＰＥＧ５０００は、約５，０００ダルトンの平均分子量を有する。ＰＥＧは、Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．及び他の会社から市販されており、例えば、以下の官能性ＰＥＧが挙げられる：モノメトキシポリエチレングリコール（ＭｅＰＥＧ－ＯＨ）、モノメトキシポリエチレングリコール－スクシネート（ＭｅＰＥＧ－Ｓ）、モノメトキシポリエチレングリコール－スクシンイミジルスクシネート（ＭｅＰＥＧ－Ｓ－ＮＨＳ）、モノメトキシポリエチレングリコール－アミン（ＭｅＰＥＧ－ＮＨ２）、モノメトキシポリエチレングリコール－トレシレート（ＭｅＰＥＧ－ＴＲＥＳ）、及びモノメトキシポリエチレングリコール－イミダゾリル－カルボニル（ＭｅＰＥＧ－ＩＭ）。
[0222]ある特定の実施形態では、ＰＥＧは、約５５０～約１０，０００ダルトンの平均分子量を有するポリエチレングリコールであってもよく、アルキル、アルコキシ、アシル、又はアリールにより任意選択で置換されている。ある特定の実施形態では、ＰＥＧは、末端ヒドロキシル位置がメチルで置換されていてもよい。ある特定の実施形態では、ＰＥＧは、約７５０～約５，０００ダルトン、又は約１，０００～約５，０００ダルトン、又は約１，５００～約３，０００ダルトン、又は約２，０００ダルトンから、又は約７５０ダルトンの平均分子量を有していてもよい。ＰＥＧは、アルキル、アルコキシ、アシル、又はアリールで任意選択で置換されていてもよい。ある特定の実施形態では、末端ヒドロキシル基は、メトキシ基又はメチル基で置換されていてもよい。
[0223]ＰＥＧ修飾脂質としては、米国特許第８，９３６，９４２号及び米国特許第７，８０３，３９７号に記載のＰＥＧ－ジアルキルオキシプロピルコンジュゲート（ＰＥＧ－ＤＡＡ）が挙げられる。有用なＰＥＧ修飾脂質（又は脂質－ポリオキシエチレンコンジュゲート）は、脂質小胞の表面にＰＥＧ部分を固定するための様々な「係留」脂質部分を有することができる。好適なＰＥＧ修飾脂質の例としては、ＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン及びホスファチジン酸、米国特許第５，８２０，８７３号に記載のＰＥＧ－セラミドコンジュゲート（例えば、ＰＥＧ－ＣｅｒＣ１４又はＰＥＧ－ＣｅｒＣ２０）、ＰＥＧ修飾ジアルキルアミン、及びＰＥＧ修飾１，２－ジアシルオキシプロパン－３－アミンが挙げられる。ある特定の実施形態では、ＰＥＧ修飾脂質は、ＰＥＧ修飾ジアシルグリセロール及びジアルキルグリセロールであってもよい。ある特定の実施形態では、ＰＥＧは、ＬＮＰの約０．５重量％～ＬＮＰの約２０重量％、又はＬＮＰの約５重量％～ＬＮＰの約１５重量％の量であってもよい。
[0224]さらに、ＬＮＰは、ＰＥＧ修飾及びステロール修飾ＬＮＰであってもよい。追加の成分と組み合わせるＬＮＰは、同じＬＮＰであってもよく又は別々のＬＮＰであってもよい。換言すれば、同じＬＮＰが、ＰＥＧ修飾及びステロール修飾されていてもよく、又はその代わりに、第１のＬＮＰはＰＥＧ修飾されていてもよく、第２のＬＮＰはステロール修飾されていてもよい。任意選択で、第１及び第２の修飾ＬＮＰを組み合わせてもよい。
[0225]ある特定の実施形態では、被包前のＬＮＰは、約１０ｎｍ～５００ｎｍ、又は約５０ｎｍ～約２００ｎｍ、又は７５ｎｍ～約１２５ｎｍの範囲のサイズを有してもよい。ある特定の実施形態では、ＬＮＰ被包されたプロテアーゼ、グリコシダーゼ、又は組換えウイルスベクターは、約１０ｎｍ～５００ｎｍの範囲のサイズを有してもよい。
[0226]「核酸」及び「ポリヌクレオチド」という用語は、本明細書では同義的に使用され、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）及びリボ核酸（ＲＮＡ）を含む、核酸、オリゴヌクレオチドのすべての形態を指す。核酸としては、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、及びアンチセンスＤＮＡ、並びにスプライシングされた又はスプライシングされていないｍＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ、並びに阻害性ＤＮＡ又はＲＮＡ（ＲＮＡｉ、例えば、低分子又は短鎖ヘアピン（ｓｈ）ＲＮＡ、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、低分子又は短鎖干渉（ｓｉ）ＲＮＡ、トランス－スプライシングＲＮＡ、又はアンチセンスＲＮＡ）が挙げられる。
[0227]核酸としては、天然に存在する、合成の、及び意図的に修飾又は変更されたポリヌクレオチドが挙げられる。核酸は、一重鎖、二重鎖、又は三重鎖、線状又は環状であってもよく、任意の長さであってもよい。核酸の考察では、特定のポリヌクレオチドの配列又は構造は、本明細書では、５’から３’方向に配列を提供する慣例に従って記載されていてもよい。
[0228]「異種性」ポリヌクレオチド又は核酸配列は、ポリヌクレオチドを細胞内へとベクター媒介性移送／送達する目的でプラスミド又はベクターに挿入されるポリヌクレオチドを指す。異種性核酸配列は、ウイルス核酸とは異なっており、つまりウイルス核酸に対して非天然である。細胞内へと移送／送達されたら、ベクター内に含まれている異種性核酸配列を発現（例えば、転写及び適切な場合は翻訳）させることができる。或いは、細胞内へと移送／送達された、ベクター内に含まれている異種性ポリヌクレオチドは、発現される必要はない。「異種性」という用語は、本明細書では必ずしも核酸配列及びポリヌクレオチドに関して使用されるわけではないが、核酸配列又はポリヌクレオチドへの言及は、修飾語「異種性」が存在しない場合であっても、省略されているにも関わらず異種性核酸配列及びポリヌクレオチドを含むことが意図されている。
[0229]「導入遺伝子」は、本明細書では、細胞又は生物に導入することが意図されているか又は導入されている核酸を便宜的に指すために使用される。導入遺伝子としては、タンパク質又はペプチドをコードする異種性ポリヌクレオチド配列又は異種性核酸などの任意の核酸が挙げられる。導入遺伝子及び異種性核酸／ポリヌクレオチド配列という用語は、本明細書では同義的に使用される。
[0230]ある特定の実施形態では、異種性ポリヌクレオチドは、ポンペ病を治療するためのＧＡＡ（酸性アルファ－グルコシダーゼ）；ウィルソン病を治療するためのＡＴＰ７Ｂ（銅輸送ＡＴＰａｓｅ２）；ファブリ病を治療するためのアルファガラクトシダーゼ；シトルリン血症１型を治療するためのＡＳＳ１（アルギノコハク酸シンターゼ）；ゴーシェ病１型を治療するためのベータ－グルコセレブロシダーゼ；テイサックス病を治療するためのベータ－ヘキソサミニダーゼＡ；Ｃ１阻害因子欠損症Ｉ型及びＩＩ型としても知られる遺伝性血管性浮腫（ＨＡＥ）を治療するためのＳＥＲＰＩＮＧ１（Ｃ１プロテアーゼ阻害剤又はＣ１エステラーゼ阻害剤）；並びに糖原病Ｉ型（ＧＳＤＩ）を治療するためのグルコース６－ホスファターゼからなる群から選択されるタンパク質をコードする。
[0231]ある特定の実施形態では、異種性ポリヌクレオチドは、インスリン、グルカゴン、成長ホルモン（ＧＨ）、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、成長ホルモン放出因子（ＧＲＦ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、アンジオポエチン、アンジオスタチン、顆粒球コロニー刺激因子（ＧＣＳＦ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、酸性線維芽細胞増殖因子（ａＦＧＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、トランスフォーミング増殖因子α（ＴＧＦα）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、インスリン増殖因子Ｉ及びＩＩ（ＩＧＦ－Ｉ及びＩＧＦ－ＩＩ）、ＴＧＦβ、アクチビン、インヒビン、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロフィンＮＴ－３及びＮＴ４／５、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、ニュールツリン、アグリン、ネトリン－１及びネトリン－２、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、エフリン、ノギン、ソニックヘッジホッグ、並びにチロシンヒドロキシラーゼなる群から選択されるタンパク質をコードする。
[0232]ある特定の実施形態では、異種性ポリヌクレオチドは、酸性α－グルコシダーゼ（ＧＡＡ）をコードする。ＧＡＡをコードする異種性ポリヌクレオチドを含む組換えウイルスベクターを、ポンペ病又は別の糖原病を有する対象に投与することにより、ＧＡＡタンパク質の発現をもたらすことができる。患者におけるＧＡＡタンパク質の発現は、グリコーゲンの蓄積を抑制、阻害、若しくは低減させるか、グリコーゲンの蓄積を防止するか、又はグリコーゲンを分解する役目を果たすことができ、それにより引いては、ポンペ病又は別の糖原病の１つ又は複数の有害効果を低減又は減少させることができる。
[0233]ある特定の実施形態では、異種性ポリヌクレオチドは、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、インターロイキン（ＩＬ－１～ＩＬ－３６など）、単球走化性タンパク質、白血病抑制因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、Ｆａｓリガンド、腫瘍壊死因子α及びβ、インターフェロンα、β、及びγ、幹細胞因子、ｆｌｋ－２／ｆｌｔ３リガンド、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥ、キメラ免疫グロブリン、ヒト化抗体、単鎖抗体、Ｔ細胞受容体、キメラＴ細胞受容体、単鎖Ｔ細胞受容体、クラスＩ及びクラスＩＩ ＭＨＣ分子からなる群から選択されるタンパク質をコードする。
[0234]ある特定の実施形態では、異種性ポリヌクレオチドは、ＣＦＴＲ（嚢胞性線維症膜貫通型調節因子タンパク質）、血液凝固（凝固）因子（第ＸＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第ＶＩＩＩ因子、第Ｘ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩａ因子、プロテインＣなど）、機能獲得型血液凝固因子、抗体、網膜色素上皮特異的６５ｋＤａタンパク質（ＲＰＥ６５）、エリスロポエチン、ＬＤＬ受容体、リポタンパク質リパーゼ、オルニチントランスカルバミラーゼ、β－グロビン、α－グロビン、スペクトリン、α－アンチトリプシン、アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）、金属輸送体（ＡＴＰ７Ａ又はＡＴＰ７）、スルファミダーゼ、リソソーム蓄積症に関与する酵素（ＡＲＳＡ）、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ、β－２５グルコセレブロシダーゼ、スフィンゴミエリナーゼ、リソソームヘキソサミニダーゼ、分岐鎖ケト酸デヒドロゲナーゼ、ホルモン、成長因子、インスリン様増殖因子１又は２、血小板由来増殖因子、上皮増殖因子、神経成長因子、神経栄養因子－３及び－４、脳由来神経栄養因子、グリア由来増殖因子、トランスフォーミング増殖因子α及びβ、サイトカイン、α－インターフェロン、β－インターフェロン、インターフェロン－γ、インターロイキン－２、インターロイキン－４、インターロイキン１２、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、リンホトキシン、自殺遺伝子産物、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ、シトシンデアミナーゼ、ジフテリア毒素、シトクロムＰ４５０、デオキシシチジンキナーゼ、腫瘍壊死因子、薬剤耐性タンパク質、腫瘍抑制タンパク質（例えば、ｐ５３、Ｒｂ、Ｗｔ－１、ＮＦ１、フォンヒッペル－リンダウ（ＶＨＬ）、腺腫性結腸ポリポーシス（ＡＰＣ））、免疫調節特性を有するペプチド、免疫寛容原性又は免疫原性ペプチド又はタンパク質Ｔレジトープ又はｈＣＤＲ１、インスリン、グルコキナーゼ、グアニル酸シクラーゼ２Ｄ（ＬＣＡ－ＧＵＣＹ２Ｄ）、Ｒａｂエスコートタンパク質１（コロイデレミア）、ＬＣＡ５（ＬＣＡ－レーバーシリン）、オルニチンケト酸アミノトランスフェラーゼ（脳回転状萎縮症）、レチノスキシン１（Ｘ連鎖網膜分離症）、ＵＳＨ１Ｃ（アッシャー症候群１Ｃ）、Ｘ連鎖網膜色素変性症ＧＴＰａｓｅ（ＸＬＲＰ）、ＭＥＲＴＫ（ＲＰのＡＲ形態：網膜色素変性症）、ＤＦＮＢ１（コネキシン２６ 難聴）、ＡＣＨＭ２、３、及び４（色覚異常）、ＰＫＤ－１又はＰＫＤ－２（多発性嚢胞腎）、ＴＰＰ１、ＣＬＮ２、スルファターゼ、Ｎ－アセチルグルコサミン－１－リン酸トランスフェラーゼ、カテプシンＡ、ＧＭ２－ＡＰ、ＮＰＣ１、ＶＰＣ２、スフィンゴ脂質活性化タンパク質、ゲノム編集のための１つ若しくは複数のジンクフィンガーヌクレアーゼ、又はゲノム編集の修復鋳型として使用される１つ若しくは複数のドナー配列をコードする。
[0235]ある特定の実施形態では、異種性ポリヌクレオチドは、貧血を治療するためのエリスロポエチン（ＥＰＯ）；種々の免疫障害、ウイルス感染症、及びがんを治療するためのインターフェロン－アルファ、インターフェロン－ベータ、及びインターフェロン－ガンマ；種々の炎症性疾患又は免疫不全を治療するための、ＩＬ－１～ＩＬ－３６のうちのいずれか１つ及び対応する受容体を含むインターロイキン（ＩＬ）；免疫障害を治療するための、ケモカイン（Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフ）リガンド５（ＣＸＣＬ５）を含むケモカイン；クローン病などの免疫障害を治療するための顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）；種々のヒト炎症性疾患を治療するための顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）；種々のヒト炎症性疾患を治療するためのマクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）；上皮組織損傷を治療するためのケラチノサイト増殖因子（ＫＧＦ）；再発性流産、ＨＩＶ関連合併症、及びインスリン抵抗性を治療するための、単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ－１）などのケモカイン；種々の免疫障害を治療するための腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）及び受容体；肺気腫又は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を治療するためのアルファ１－アンチトリプシン；ムコ多糖症Ｉ（ＭＰＳ Ｉ）を治療するためのアルファ－Ｌ－イズロニダーゼ；ＯＴＣ欠損症を治療するためのオルニチントランスカルバモイラーゼ（ＯＴＣ）；フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）を治療するためのフェニルアラニンヒドロキシラーゼ（ＰＡＨ）又はフェニルアラニンアンモニアリアーゼ（ＰＡＬ）；リポタンパク質リパーゼ欠損症を治療するためのリポタンパク質リパーゼ；アポリポタンパク質（Ａｐｏ）Ａ－Ｉ欠損症を治療するためのアポリポタンパク質；家族性高コレステロール血症（ＦＨ）を治療するための低密度リポタンパク質受容体（ＬＤＬ－Ｒ）；低アルブミン血症を治療するためのアルブミン；レシチンコレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＬＣＡＴ）；カルバモイルシンセターゼＩ；アルギニノコハク酸シンセターゼ；アルギニノコハク酸リアーゼ；アルギナーゼ；フマリルアセト酢酸ヒドロラーゼ；ポルフォビリノーゲンデアミナーゼ；ホモシスチン尿症を治療するためのシスタチオニンベータシンターゼ；分岐鎖ケト酸デカルボキシラーゼ；イソバレリル－ＣｏＡデヒドロゲナーゼ；プロピオニルＣｏＡカルボキシラーゼ；メチルマロニル－ＣｏＡムターゼ；グルタリルＣｏＡデヒドロゲナーゼ；インスリン；ピルビン酸カルボキシラーゼ；肝ホスホリラーゼ；ホスホリラーゼキナーゼ；グリシンデカルボキシラーゼ；Ｈタンパク質；Ｔタンパク質；嚢胞性線維症膜貫通調節因子（ＣＦＴＲ）；シュタルガルト病を治療するためのＡＴＰ結合カセット、サブファミリーＡ（ＡＢＣ１）、メンバー４（ＡＢＣＡ４）；又はジストロフィンをコードする。
[0236]「ポリペプチド」、「タンパク質」、及び「ペプチド」という用語は、本明細書では同義的に使用される。「ポリヌクレオチド配列」によりコードされる「ポリペプチド」、「タンパク質」、及び「ペプチド」としては、天然に存在するタンパク質のような完全長天然配列、並びに部分配列、修飾形態、又はバリアントが天然完全長タンパク質の機能をある程度保持する限り、部分配列、修飾形態、又は配列バリアントが挙げられる。本発明では、ポリヌクレオチド配列によりコードされるそのようなポリペプチド、タンパク質、及びペプチドは、治療される哺乳動物において欠陥があるか、又はその発現が不十分であるか、又は欠乏している内因性タンパク質と同一であってもよいが、必ずしも同一である必要はない。
[0237]ある特定の実施形態では、異種性ポリヌクレオチドは、ｓｉＲＮＡ、アンチセンス分子、ｍｉＲＮＡ、ＲＮＡｉ、リボザイム、及びｓｈＲＮＡからなる群から選択される阻害性核酸をコードする。
[0238]ある特定の実施形態では、阻害性核酸は、ハンチンチン（ＨＴＴ）遺伝子、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症に関連付けられる遺伝子（アトロフィン１、ＡＴＮ１）、球脊髄性筋萎縮症におけるＸ染色体のアンドロゲン受容体、ヒトアタキシン－１、－２、－３、及び－７、Ｃａｖ２．１Ｐ／Ｑ電位依存性カルシウムチャネル（ＣＡＣＮＡ１Ａ）、ＴＡＴＡ－結合タンパク質、アタキシン８逆鎖（ＡＴＸＮ８ＯＳ）、脊髄小脳性運動失調症におけるセリン／スレオニン－タンパク質ホスファターゼ２Ａ ５５ｋＤａ調節サブユニットＢベータアイソフォーム（１、２、３、６、７、８、１２ １７型）、脆弱Ｘ症候群におけるＦＭＲ１（脆弱Ｘ精神遅滞１）、脆弱Ｘ関連振戦／運動失調症候群におけるＦＭＲ１（脆弱Ｘ精神遅滞１）、ＦＭＲ１（脆弱Ｘ精神遅滞２）、若しくは脆弱ＸＥ精神遅滞におけるＡＦ４／ＦＭＲ２ファミリーメンバー２；筋強直性ジストロフィーにおけるミオトニン－プロテインキナーゼ（ＭＴ－ＰＫ）；フリードライヒ運動失調症におけるフラタキシン；筋萎縮性側索硬化症におけるスーパーオキシドジスムターゼ１（ＳＯＤ１）遺伝子の変異体；パーキンソン病及び／又はアルツハイマー病の病因に関与する遺伝子；アポリポタンパク質Ｂ（ＡＰＯＢ）及びプロタンパク質転換酵素スブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）、高コレステロール血症；ＨＩＶ感染におけるＨＩＶ Ｔａｔ、ヒト免疫不全ウイルス転写遺伝子トランス活性化因子；ＨＩＶ感染におけるＨＩＶ ＴＡＲ、ＨＩＶ ＴＡＲ、ヒト免疫不全ウイルストランス活性化因子応答エレメント遺伝子；ＨＩＶ感染におけるＣ－Ｃケモカイン受容体（ＣＣＲ５）；ＲＳＶ感染におけるラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）ヌクレオカプシドタンパク質、Ｃ型肝炎ウイルス感染における肝臓特異的マイクロＲＮＡ（ｍｉＲ－１２２）；ｐ５３、急性腎傷害、又は腎移植移植片機能遅延、又は腎傷害急性腎不全；進行性再発性又は転移性固形悪性腫瘍におけるプロテインキナーゼＮ３（ＰＫＮ３）；ＬＭＰ２、プロテアソームサブユニットベータ９型（ＰＳＭＢ９）としても知られているＬＭＰ２、転移性黒色腫；プロテアソームサブユニットベータ８型（ＰＳＭＢ８）としても知られているＬＭＰ７、転移性黒色腫；プロテアソームサブユニットベータ１０型（ＰＳＭＢ１０）としても知られているＭＥＣＬ１、転移性黒色腫；固形腫瘍における血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）；固形腫瘍におけるキネシン紡錘体タンパク質、慢性骨髄性白血病におけるアポトーシス抑制因子Ｂ細胞ＣＬＬ／リンパ腫（ＢＣＬ－２）；固形腫瘍におけるリボヌクレオチドレダクターゼＭ２（ＲＲＭ２）；固形腫瘍におけるフューリン；肝腫瘍におけるポロ様キナーゼ１（ＰＬＫ１）、Ｃ型肝炎感染におけるジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ１（ＤＧＡＴ１）、家族性腺腫性ポリポーシスにおけるβ－カテニン；ベータ２アドレナリン受容体、緑内障；糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）又は加齢黄斑変性症における、ＤＮＡ損傷誘導性転写物４タンパク質としても知られているＲＴＰ８０１／Ｒｅｄｄ１；加齢黄斑変性症又は脈絡膜血管新生における血管内皮増殖因子受容体Ｉ（ＶＥＧＦＲ１）、非動脈炎性虚血性視神経症におけるカスパーゼ２；先天性爪肥厚症におけるケラチン６Ａ Ｎ１７Ｋ変異体タンパク質；インフルエンザ感染におけるインフルエンザＡウイルスゲノム／遺伝子配列；ＳＡＲＳ感染における重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）コロナウイルスゲノム／遺伝子配列；呼吸器合胞体ウイルス感染における呼吸器合胞体ウイルスゲノム／遺伝子配列；エボラ感染におけるエボラフィロウイルスゲノム／遺伝子配列；Ｂ型及びＣ型肝炎感染におけるＢ型及びＣ型肝炎ウイルスゲノム／遺伝子配列；ＨＳＶ感染における単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ゲノム／遺伝子配列、コクサッキーウイルスＢ３感染におけるコクサッキーウイルスＢ３ゲノム／遺伝子配列；原発性ジストニアにおけるトルシンＡ（ＴＯＲ１Ａ）のような遺伝子の病原性対立遺伝子のサイレンシング（対立遺伝子特異的サイレンシング）、移植に特異的な汎クラスＩ及びＨＬＡ対立遺伝子；及び常染色体優性遺伝性網膜色素変性症（ａｄＲＰ）における変異体ロドプシン遺伝子（ＲＨＯ）からなる群から選択されるポリヌクレオチドリピート病に関連付けられる遺伝子、遺伝子の転写物、又は遺伝子の転写物に結合する。
[0239]組換えウイルスベクター用量は、任意の適切な用量で投与することができる。一般に、用量は、療法効果を達成するためには、対象の体重１キログラム当たり、少なくとも１×１０８又はそれよりも多くの、例えば、１×１０９、１×１０１０、１×１０１１、１×１０１２、１×１０１３、又は１×１０１４、又はそれよりも多くのベクターゲノム（ｖｇ／ｋｇ）の範囲であろう。マウスでは１×１０１０～１×１０１１ｖｇ／ｋｇの、イヌでは１×１０１２～１×１０１３ｖｇ／ｋｇの範囲のＡＡＶ用量が有効である。より詳細には、約１×１０１１ｖｇ／ｋｇ以上～約５×１０１４ｖｇ／ｋｇ以下、又は約５×１０１１ｖｇ／ｋｇ以上～約１×１０１４ｖｇ／ｋｇ以下、又は約５×１０１１ｖｇ／ｋｇ以上～約５×１０１３ｖｇ／ｋｇ以下、又は約５×１０１１ｖｇ／ｋｇ以上～約１×１０１３ｖｇ／ｋｇ以下、又は約５×１０１１ｖｇ／ｋｇ以上若しくは約５×１０１２ｖｇ／ｋｇ、又は約５×１０１１ｖｇ／ｋｇ以上～約１×１０１２ｖｇ／ｋｇ以下の用量。用量は、例えば、約２×１０１１以上～約２×１０１４ｖｇ／ｋｇ以下の用量など、約５×１０１４ｖｇ／ｋｇ又は約５×１０１４ｖｇ／ｋｇ未満、特に例えば、約２×１０１２ｖｇ／ｋｇ、約６×１０１２ｖｇ／ｋｇ、又は約２×１０１３ｖｇ／ｋｇであってもよい。
[0240]ある特定の実施形態では、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤を対象に投与することにより、対象の遺伝子療法治療に有効であるために必要とされる、療法用異種性ポリヌクレオチドを含む組換えウイルスベクターの用量が低減される。ある特定の実施形態では、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤を対象に投与することにより、療法用異種性ポリヌクレオチドを含む組換えウイルスベクターの増加用量の投与が可能になる。
[0241]ある特定の実施形態では、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤を対象に投与することに加えて、プロテアーゼ及び／又はグリコシダーゼを対象に投与することにより、対象の治療に有効であるために必要とされる、療法用異種性ポリヌクレオチドを含む組換えウイルスベクターの用量が低減される。ある特定の実施形態では、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤を対象に投与することに加えて、プロテアーゼ及び／又はグリコシダーゼを対象に投与することにより、療法用異種性ポリヌクレオチドを含む組換えウイルスベクターの増加用量の投与が可能になる。
[0242]用量は、様々であってもよく、治療の対象とされている疾患のタイプ、発症、進行、重症度、頻度、期間、又は蓋然性、所望の臨床エンドポイント、以前の又は同時の治療、対象の全体的な健康状態、年齢、性別、人種、又は免疫学的能力、及び当業者が理解することになる他の要因に依存してもよい。投与量、回数、頻度、又は期間は、治療又は療法の任意の有害副作用、合併症、又は他の危険要因、及び対象の状態により示されるものと比例して増加又は低減させることができる。当業者であれば、療法利益又は予防利益を提供するのに十分な量を提供するために必要な投薬量及びタイミングに影響を及ぼす可能性がある要因を理解するであろう。
[0243]療法効果を達成するための用量、例えば、体重１ｋｇ当たりのベクターゲノム（ｖｇ／ｋｇ）での用量は、これらに限定されないが、投与経路、治療効果を達成するために必要な異種性ポリヌクレオチド発現のレベル、治療される特定の疾患、組換えウイルスベクターに対する任意の宿主免疫応答、異種性ポリヌクレオチド又は発現産物（タンパク質又はペプチド又は転写された核酸）に対する宿主免疫応答、及び発現されたタンパク質若しくはペプチド又は転写された核酸の安定性を含む幾つかの要因に基づき様々であろう。当業者であれば、上述の要因並びに他の要因に基づき、特定の疾患又は障害を有する患者を治療するための組換えウイルスベクターゲノム用量範囲を決定することができる。
[0244]「有効量」又は「十分な量」は、単一又は複数の用量で、単独で又は１つ若しくは複数の他の組成物、治療、プロトコール、若しくは療法レジメン作用剤と組み合わせて、任意の期間にわたる検出可能な応答（長期又は短期）、あらゆる測定可能な若しくは検出可能な度合いの又は任意の期間の（例えば、分、時間、日、月、年、又は治癒するまでの）対象における予想される若しくは所望の転帰又は利益を提供する量を指す。治療のための（例えば、改善するための、又は療法利益若しくは向上を提供するための）「有効量」又は「十分な量」の用量は、疾患の１つの、複数の、又はすべての有害症状、帰結、又は合併症に対する応答、例えば疾患により引き起こされるか又は関連付けられる１つ又は複数の有害症状、障害、病気、病理、又は合併症に対する応答を測定可能な程度まで提供するのに典型的には有効であるが、疾患の進行又は悪化を減少、低減、阻害、抑制、限定、又は制御することは、満足のいく転帰である。
[0245]有効量又は十分な量は、単回投与で提供することができるが、そうである必要はなく、複数回投与が必要とされる可能性があり、単独で、又は別の組成物（例えば、作用剤）、治療、プロトコール、若しくは療法レジメンと組み合わせて投与することができるが、そうである必要はない。例えば、量は、対象の必要性、治療する疾患のタイプ、状態、及び重症度、又は治療の副作用（該当する場合）により示されるものと比例して増加させることができる。加えて、有効量又は十分な量は、第２の組成物（例えば、別の薬物又は作用剤）、治療、プロトコール、又は治療レジメンを用いずに、単一又は複数の用量で投与される場合、有効であることも十分であることも必要ではない。なぜならば、所与の対象において有効であるか又は十分であると見なされるために、そのような用量を上まわる及び超える追加の用量、量、及び期間、又は追加の組成物（例えば、薬物又は作用剤）、治療、プロトコール、若しくは治療レジメンを含めることができるからである。また、有効であると見なされる量としては、リソソーム蓄積症（例えば、ポンペ病）を治療するための組換えＧＡＡの投与、又は凝固障害（例えば、血友病Ａ（ＨｅｍＡ）又は血友病Ｂ（ＨｅｍＢ））を治療するための組換え凝固因子タンパク質（例えば、ＦＶＩＩＩ又はＦＩＸ）の投与など、別の治療、療法レジメン、又はプロトコールの使用の低減をもたらす量が挙げられる。
[0246]ポンペ病の場合、有効量は、グリコーゲン産生若しくは蓄積を阻害若しくは低減させるか、グリコーゲン分解若しくは除去を増強若しくは増加させるか、対象の身体の組織におけるリソソーム変更を低減させるか、又は対象の筋緊張及び／若しくは筋力及び／若しくは呼吸機能を向上させるＧＡＡの量であろう。有効量は、例えば、筋芽細胞による血漿からのＧＡＡ取込みの動力学を確認することにより決定することができる。筋芽細胞ＧＡＡ取込み速度（Ｋ取込み）は、約１４１～１４７ｎＭが有効であると考えることができる（例えば、Ｍａｇａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２０１２年を参照）。動物モデルでは、約１，０００ｎｍｏｌ／時／ｍＬよりも大きな血漿中ＧＡＡ活性レベル、例えば、約１，０００～約２，０００ｎｍｏｌ／時／ｍＬが、療法上有効であることが観察されている。
[0247]ＨｅｍＡ及びＨｅｍＢの場合、一般的に言えば、療法効果を得るためには、正常個体に見出される因子濃度の１％よりも大きな血液凝固因子濃度が、重度疾患表現型を中等度へと変化させるために必要であると考えられている。重度表現型は、関節損傷及び生命を脅かす出血により特徴付けられる。中等度疾患表現型を軽度表現型へと変換するには、正常の５％よりも大きな血液凝固因子濃度が必要であると考えられている。
[0248]正常ヒトにおけるＦＶＩＩＩ及びＦＩＸレベルは、約１５０～２００ｎｇ／ｍＬ血漿であるが、それ未満であってもよく（例えば、約１００～１５０ｎｇ／ｍＬの範囲）又はそれよりも大きくてもよく（例えば、約２００～３００ｎｇ／ｍＬの範囲）、こうしたレベルも、例えば、活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）１段階凝固アッセイにより決定すると凝固が機能的であるため、依然として正常であると考えることができる。したがって、対象／ヒトにおけるＦＶＩＩＩ又はＦＩＸの総量が、正常な対象／ヒトに存在するＦＶＩＩＩ又はＦＩＸの１％、例えば１００～３００ｎｇ／ｍＬの１％よりも大きくなるように、療法効果を達成することができる。
[0249]組成物は、併用組成物として対象に投与してもよく、又は異種性ポリヌクレオチドを含む組換えウイルスベクターの送達又は投与と同時に又は連続して又は順次（前に又は後で）など、別々に投与してもよい。本発明は、本発明の方法又は使用を、本明細書に示されているか又は当業者に公知である任意の化合物、作用剤、薬物、療法レジメン、治療プロトコール、プロセス、救済手段、又は組成物と組み合わせた組合せを提供する。化合物、作用剤、薬物、療法レジメン、治療プロトコール、プロセス、救済手段、又は組成物は、異種性ポリヌクレオチドを含む組換えウイルスベクターを投与する前、投与と実質的に同時、又は投与後に、対象に投与又は実施することができる。
[0250]したがって、本発明は、なかでも、別の化合物、作用剤、薬物、療法レジメン、治療プロトコール、プロセス、又は救済手段の必要性又は使用の低減をもたらす方法及び使用を含む。例えば、血液凝固疾患の場合、本発明による治療方法は、所与の対象において、対象の欠乏又は欠陥（異常型又は変異体）内因性凝固因子を補完するために組換え凝固因子タンパク質を投与する頻度が少なくなるか又は投与する用量が低減されるか又は投与が排除される場合、療法利益を有する。別の例では、ポンペ病などのリソソーム蓄積症の場合、本発明による治療方法は、ＧＡＡを含む組換えウイルスベクターが低頻度又は低減用量で対象に以前に投与されたことがあるか又は投与が継続している場合でさえ、療法利益を示す。したがって、本発明は、別の治療又は療法の必要性又は使用を低減することを含む。
[0251]有効量又は十分な量は、ありとあらゆる治療対象に有効である必要も、所与の群又は集団の治療対象の大部分に有効である必要もない。有効量又は十分な量は、群又は一般集団ではなく、特定の対象における有効性又は十分性を意味する。そのような方法に典型的であるように、一部の対象は、所与の治療方法又は使用に対して、より大きな応答を呈するか又はより少ない応答を呈するか又は応答を呈しないだろう。
[0252]「改善する」という用語は、対象の疾患若しくはその症状又は根底にある細胞応答の検出可能な又は測定可能な向上を意味する。検出可能又は測定可能な向上としては、疾患の発症、頻度、重症度、進行、若しくは期間、又は疾患により引き起こされるか若しくは関連付けられる合併症、又は疾患の症状若しくは根底にある原因若しくは帰結の向上、又は疾患の逆転の主観的又は客観的な減少、低減、阻害、抑制、限定、又は制御が挙げられる。ポンペ病の場合、有効量は、例えば、グリコーゲン産生若しくは蓄積を阻害若しくは低減させるか、グリコーゲン分解若しくは除去を増強若しくは増加させるか、又は筋緊張及び／若しくは筋力及び／若しくは呼吸機能を向上させる量であろう。ＨｅｍＡ又はＨｅｍＢの場合、有効量は、例えば、対象における急性出血エピソードの頻度若しくは重症度を低減させる量、又は例えば、凝固アッセイにより測定される凝固時間を低減させる量であろう。
[0253]したがって、本発明の医薬組成物としては、意図されている療法目的を達成するのに有効な量の活性成分が含まれている組成物が挙げられる。療法有効用量の決定は、当技術分野で公知の技法及び指針を使用し、本明細書で提供されている教示を使用すれば、十分に当業者の能力の範囲内にある。
[0254]療法用量は、他の要因のなかでも、対象の年齢及び全身状態、異常表現型の重症度、並びに発現レベルを調節する制御配列の強度に依存するだろう。したがって、ヒトにおける療法有効量は、ベクターベース治療に対する個々の患者の応答に基づき医師が決定することのできる比較的幅広い範囲に入るだろう。そのような用量は、単独であってもよく又は免疫抑制剤若しくは薬物との組合せであってもよい。
[0255]医薬組成物などの組成物を対象に送達して、導入遺伝子発現及び任意選択でコードタンパク質の産生を可能にすることができる。ある特定の実施形態では、対象が療法有効量の血液凝固因子を産生させて対象の止血を向上させることを可能にするのに十分な遺伝物質を含む医薬組成物。ある特定の実施形態では、対象が療法有効量のＧＡＡを産生させることを可能にするのに十分な異種性ポリヌクレオチドを含む医薬組成物。
[0256]ある特定の実施形態では、対象における療法効果は、一定期間、例えば、２～４、４～６、６～８、８～１０、１０～１４、１４～２０、２０～２５、２５～３０、又は３０～５０日間、又はそれよりも長期間、例えば、５０～７５、７５～１００、１００～１５０、１５０～２００日間、又はそれよりも長期間持続する。したがって、ある特定の実施形態では、組換えウイルスベクターは、療法効果を提供する。
[0257]ある特定の実施形態では、組換えウイルスベクターは、免疫抑制剤を用いずに療法効果を提供する。ある特定の実施形態では、少なくとも１つの免疫抑制剤が、組換えウイルスベクターを対象に投与する前に、投与と実質的に同時に、又は投与後に対象に投与される。
[0258]ある特定の実施形態では、免疫抑制剤は、抗炎症剤である。ある特定の実施形態では、免疫抑制剤は、ステロイドである。ある特定の実施形態では、免疫抑制剤は、プレドニゾン、プレドニゾロン、カルシニューリン阻害剤、シクロスポリン（例えば、シクロスポリンＡ）、タクロリムス、ミコフェノール酸、ＣＤ５２阻害剤（例えば、アレムツズマブ）、ＣＴＬＡ４－Ｉｇ（例えば、アバタセプト、ベラタセプト）、抗ＣＤ３ｍＡｂ、抗ＬＦＡ－１ｍＡｂ（例えば、エファリズマブ）、抗ＣＤ４０ｍＡｂ（例えば、ＡＳＫＰ１２４０）、抗ＣＤ２２ｍＡｂ（例えば、エプラツズマブ）、抗ＣＤ２０ｍＡｂ（例えば、リツキシマブ、オレリズマブ、オファツムマブ、ベルツズマブ）、ラパマイシン、又はそれらの誘導体である。追加の特定の作用剤としては、安定化化合物が挙げられる。本発明による方法で使用することができる他の免疫抑制剤としては、例えば、限定ではないが、以下のものが挙げられる：ＴＡＣＩ－Ｉｇ（例えば、アタシセプト）、抗Ｃ５ｍＡｂ（例えば、エクリズマブ）、ミコフェノール酸、アザチオプリン、シロリムス、エベロリムス、ＴＮＦＲ－Ｉｇ（例えば、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））、抗ＴＮＦｍＡｂ（例えば、アダリムマブ（（ヒュミラ）Ｈｕｍｉｒａ）（登録商標））、インフリキシマブ（レミケード（Ｒｅｍｉｃａｄｅ）（登録商標）；Ａｖｓｏｌａ（登録商標）））、トファシチニブ、抗ＩＬ－２Ｒ（例えば、バシリキシマブ）、抗ＩＬ－１７ｍＡｂ（例えば、セクキヌマブ）、抗ＩＬ－６ｍＡｂ（例えば、抗ＩＬ－６抗体シルクマブ、抗ＩＬ－６受容体抗体トシリズマブ（アクテムラ（Ａｃｔｅｍｒａ）（登録商標））、ＩＬ－１０阻害剤、ＴＧＦ－ベータ阻害剤、Ｂ細胞標的指向性抗体（例えば、リツキシマブ）、プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ）、ラパマイシンの哺乳動物標的（ｍＴＯＲ）阻害剤（例えば、ラパマイシン）、合成ワクチン粒子（ＳＶＰ（商標））－ラパマイシン（生分解性ナノ粒子に被包されたラパマイシン）、静脈内ガンマグロブリン（ＩＶＩＧ）、オマリズマブ、メトトレキサート、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、イブルチニブ）、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）の阻害剤（例えば、抗ＢＡＦＦ ｍＡｂ、例えば、ベリムマブ）、増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）の阻害剤、抗ＩＬ－１ｂ ｍＡｂ（例えば、カナキヌマブ（ハリス（Ｈａｒｉｓ）（登録商標）））、Ｃ３ａ阻害剤、Ｔレジト－プ（例えば、米国特許第１０，２１３，４９６号を参照）、又はそれらの組合せ及び／若しくは誘導体。
[0259]組成物は、これらに限定されないが、生理食塩水、緩衝生理食塩水、デキストロース、及び水を含む、任意の無菌生体適合性医薬担体で投与することができる。組成物は、単独で、又は投薬量、投与頻度、及び／若しくは療法効果に影響を及ぼす他の作用剤と組み合わせて投与することができる。
[0260]本発明の方法及び使用としては、全身的に、領域的に、又は局所的に、又は任意の経路で、例えば、注射又は注入により送達及び投与することが挙げられる。ｉｎ ｖｉｖｏでの医薬組成物の送達は、一般に、従来型注射器を使用した注射により達成することができるが、対流増強送達などの他の送達方法が起想される（例えば、米国特許第５，７２０，７２０号を参照）。例えば、組成物は、皮下、表皮、皮内、髄腔内、眼窩内、粘膜内、腹腔内、静脈内、胸膜内、動脈内、経口、肝臓内、経門脈、又は筋肉内送達することができる。他の投与様式としては、経口投与及び経肺投与、坐剤、並びに経皮塗布が挙げられる。血液凝固障害を有する患者の治療を専門とする臨床医は、これらに限定されないが患者の状態及び治療目的を含む少なからぬ基準（例えば、ＧＡＡの増加、血液凝固の増強など）に基づき、アデノウイルス随伴ベクター（ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｖｅｃｔｏｒ）の最適な投与経路を決定することができる。
[0261]本発明による治療方法は、所望の療法的な、有益な、相加的な、相乗的な、又は補完的な活性又は効果を有する任意の化合物、作用剤、薬物、治療、又は他の療法レジメン若しくはプロトコールの追加の使用を含む併用療法を含む。例示的な併用組成物及び併用治療としては、生物製剤（タンパク質）、作用剤（例えば、免疫抑制剤）及び薬物などの第２の活性物質が挙げられる。そのような生物製剤（タンパク質）、作用剤、薬物、治療、及び療法は、本発明による任意の他の治療方法、例えば、ポンペなどのリソソーム蓄積症について対象を治療するための療法方法又はＨｅｍＡ若しくはＨｅｍＢなどの血液凝固疾患について対象を治療するための療法方法の前に、実質的に同時に、又は後で、投与又は実施することができる。
[0262]化合物、作用剤、薬物、治療、又は他の療法レジメン若しくはプロトコールは、併用組成物として投与してもよく、又は核酸、ベクター、組換えベクター（例えば、組換えウイルスベクター）、若しくは組換えウイルス粒子の同時又は連続又は順次（前に又は後の）送達又は投与など、別々に投与してもよい。したがって、本発明は、本発明による治療方法を、本明細書に示されているか又は当業者に公知である任意の化合物、作用剤、薬物、療法レジメン、治療プロトコール、プロセス、救済手段、又は組成物と組み合わせた組合せを提供する。化合物、作用剤、薬物、療法レジメン、治療プロトコール、プロセス、救済手段、又は組成物は、核酸、ベクター、組換えベクター（例えば、組換えウイルスベクター）、又は組換えウイルス粒子を、本発明に従って患者又は対象に投与する前に、投与と実質的に同時に、又は投与の後で投与することができる。
[0263]ある特定の実施形態では、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤の対象への投与は、中和抗体、異種性ポリヌクレオチドに結合する抗体、及び／又は異種性ポリヌクレオチドによりコードされているタンパク質若しくはペプチドに結合する抗体の発生の防止をもたらすことができる。本明細書に示されている通り、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤のそのような対象への投与は、ウイルスベクターの投与前であってもよく、ウイルスベクターの投与と実質的に同時であってもよく、又はウイルスベクターを対象に投与した後であってもよい。
[0264]ある特定の実施形態では、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤の、既存抗体を有する対象への投与は、中和抗体、異種性ポリヌクレオチドに結合する抗体、及び／又は異種性ポリヌクレオチドによりコードされているタンパク質若しくはペプチドに結合する抗体の低減に結び付く。ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤を投与した後、そのような対象に、本明細書の方法に従って組換えウイルスベクターを投与することができる。組換えウイルスベクターを投与した後、そのような対象を、残存する既存抗体の存在について任意選択で評価してもよい。或いは、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤が、対象における任意のそのような既存抗体をその間に低減又は排除する所定の時間が経過した後、そのような対象に組換えウイルスベクターを投与してもよい。
[0265]ある特定の実施形態では、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤の対象への投与は、組換えウイルスベクターを投与した対象から得られる生物学的試料中のそのような抗体の測定により反映されるような、中和抗体、異種性ポリヌクレオチドに結合する抗体、及び／又は異種性ポリヌクレオチドによりコードされているタンパク質若しくはペプチドに結合する抗体の少なくとも２０％～５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の低減、分解、又は消化をもたらすことができる。ある特定の実施形態では、本発明による方法は、中和抗体、及び／又は異種性ポリヌクレオチドに結合する抗体、及び／又は異種性ポリヌクレオチドによりコードされているタンパク質若しくはペプチドに結合する抗体の少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％を低減、分解、又は消化する。
[0266]分析することができる対象由来の生物学的試料の非限定的な例としては、全血、血清、血漿など、及びそれらの組合せが挙げられる。生物学的試料は、細胞を欠いていてもよく、又は細胞（例えば、赤血球、血小板、及び／又はリンパ球）を含んでいてもよい。
[0267]ある特定の実施形態では、対象の生物学的試料中に存在する中和抗体を、約１：２５未満に低減、分解、又は消化することができ、約１：２５では、２５部の緩衝液で希釈した１部の生物学的試料は５０％組換えウイルスベクター中和をもたらす。ある特定の実施形態では、対象の生物学的試料中に存在する中和抗体を、約１：２０未満、約１：１５未満、約１：１０未満、約１：５未満、約１：４未満、約１：３未満、約１：２未満、又は約１：１未満に減少、分解、又は消化することができ、こうした場合では、それぞれ２０、１５、１０、５、４、３、２、又は１部の緩衝液で希釈した１部の生物学的試料は５０％組換えウイルスベクター中和をもたらす。
[0268]生物学的試料中のＡＡＶ中和抗体の例示的な分析及び測定は、本明細書に開示されており、米国特許出願公開第２０１６／０１２３９９０号にも記載されている。抗体とＦｃ受容体との結合は、平衡結合定数を決定することにより測定することができる。抗体とＦｃ受容体との結合の低減は、ＩｇＧ：ＦｃＲ相互作用の平衡結合定数の増加により決定される。
[0269]本発明による方法は、機能喪失型遺伝子欠陥及び機能獲得型遺伝子欠陥の両方に応用可能である。遺伝子欠陥に関する「機能喪失」という用語は、本明細書で使用される場合、その遺伝子によりコードされているタンパク質（つまり、変異体タンパク質）が、通常は野生型タンパク質に関連付けられる機能の部分的な喪失又は完全な喪失のいずれかを呈する、遺伝子における任意の変異を指す。遺伝子欠陥に関する「機能獲得」という用語は、本明細書で使用される場合、その遺伝子によりコードされているタンパク質（つまり、変異型タンパク質）が、通常はそのタンパク質（つまり、野生型タンパク質）に関連付けられない機能を獲得し、疾患又は障害を引き起こすか又は寄与する、遺伝子における任意の変異を指す。機能獲得型変異は、コードタンパク質の機能の変化を生じさせる、遺伝子の１つ又は複数のヌクレオチドの欠失、付加、又は置換であってもよい。ある特定の実施形態では、機能獲得型変異は、変異体タンパク質の機能を変化させるか、又は他のタンパク質との相互作用を引き起こす。ある特定の実施形態では、機能獲得型変異は、例えば、変更された変異体タンパク質と正常な野生型タンパク質との相互作用により、正常な野生型タンパク質の減少又は除去を引き起こす。
[0270]本発明による方法で治療することができる疾患及び障害としては、例えば、限定ではないが、以下のものが挙げられる：肺疾患（例えば、嚢胞性線維症）、出血障害（例えば、阻害因子を有する又は有していない血友病Ａ又は血友病Ｂ）、サラセミア、血液障害（例えば、貧血）、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、てんかん、リソソーム蓄積症（例えば、アスパルチルグルコサミン尿症、バッテン病、遅発型乳児性神経セロイドリポフスチン症２型（ＣＬＮ２）、シスチン症、ファブリ病、ゴーシェ病Ｉ、ＩＩ、及びＩＩＩ型、糖原病ＩＩ（ポンペ病）、ＧＭ２ガングリオシドーシスＩ型（テイサックス病）、ＧＭ２ガングリオシドーシスＩＩ型（サンドホフ病）、ムコリピドーシスＩ型（シアリドーシスＩ及びＩＩ型）、ＩＩ型（Ｉ細胞疾患）、ＩＩＩ型（擬性ハーラー病）、及びＩＶ型、ムコ多糖蓄積症（ハーラー病及び変異型、ハンター病、サンフィリポ症Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ型、モルキオ症Ａ及びＢ型、マロトー－ラミー症、並びにスライ病）、ニーマン－ピック病Ａ／Ｂ、Ｃ１、及びＣ２型、並びにシントラー病Ｉ及びＩＩ型）、遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）、銅又は鉄蓄積障害（例えば、ウィルソン病又はメンケス病）、リソソーム酸リパーゼ欠損症、神経障害又は神経変性障害、がん、１型又は２型糖尿病、アデノシンデアミナーゼ欠損症、代謝欠陥（例えば、糖原病）、実質臓器（例えば、脳、肝臓、腎臓、心臓）の疾患、又は感染性ウイルス性（例えば、Ｂ型及びＣ型肝炎、ＨＩＶなど）、細菌性、若しくは真菌性疾患。
[0271]糖原病ＩＩ型は、ポンペ病とも呼ばれ、本発明による方法で治療することができる。ポンペ病は、グリコーゲンの分解を触媒するリソソーム酵素である酸性α－グルコシダーゼ（ＧＡＡ）をコードする遺伝子の変異により引き起こされる常染色体劣性障害である。結果として生じる酵素欠損は、身体のすべての組織においてグリコーゲンの病的蓄積及びリソソーム変更に結び付き、心臓、呼吸、及び骨格筋の機能不全をもたらす（ｖａｎ ｄｅｒ Ｐｌｏｅｇら、２００８年、Ｌａｎｃｅｔ、３７２巻：１３４２～１３５３頁）。
[0272]本発明による方法で治療することができる血液凝固障害としては、例えば、限定ではないが、血友病Ａ、阻害性抗体を有する血友病Ａ、血友病Ｂ、阻害性抗体を有する血友病Ｂ、いずれかの凝固因子：ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、ＩＸ、Ｘ、ＸＩ、Ｖ、ＸＩＩ、ＩＩ、フォンビルブランド因子の欠損、又は複合ＦＶ／ＦＶＩＩＩ欠損症、サラセミア、ビタミンＫエポキシド還元酵素Ｃ１欠損症、又はガンマカルボキシラーゼ欠損症が挙げられる。
[0273]本発明による方法で治療することができる他の疾患及び障害としては、例えば、限定ではないが、貧血、外傷に伴う出血、傷害、血栓症、血小板減少症、脳卒中、凝血異常、播種性血管内凝固（ＤＩＣ）；ヘパリン、低分子量ヘパリン、五糖、ワルファリン、小分子抗血栓剤（つまり、ＦＸａ阻害剤）に関連付けられる過剰抗凝血、又はベルナルド・スーリエ症候群、グランツマン血栓症、若しくは貯蔵プール欠損症などの血小板障害が挙げられる。
[0274]ある特定の実施形態では、対象は、中枢神経系（ＣＮＳ）に影響を及ぼすか若しくはそれに起因する疾患、又は例えば限定ではないが、アルツハイマー病、ハンチントン病、ＡＬＳ、遺伝性痙性片麻痺、原発性側索硬化症、脊髄性筋萎縮症、ケネディ病、ポリグルタミンリピート病、若しくはパーキンソン病などの神経変性疾患を有する。ある特定の実施形態では、ＣＮＳ又は神経変性疾患は、例えば、限定ではないが、脊髄小脳失調症（ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＳＣＡ３、ＳＣＡ６、ＳＣＡ７、又はＳＣＡ１７）などのポリグルタミンリピート病である。
[0275]本発明は、ヒト適用及び獣医学適用に使用することができる。したがって、好適な対象としては、ヒトなどの哺乳動物、並びに非ヒト哺乳動物が挙げられる。「対象」という用語は、動物、典型的には、ヒト、非ヒト霊長類（類人猿、テナガザル、ゴリラ、チンパンジー、オランウータン、マカク）、家畜動物（イヌ及びネコ）、農場動物（ニワトリ及びアヒル、ウマ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、ブタなど家禽）、及び実験動物（マウス、ラット、ウサギ、モルモット）などの哺乳動物を指す。ヒト対象としては、胎児、新生児、幼児、若年、及び成人対象が挙げられる。また、対象としては、ポンペ病（ＧＡＡの喪失）及び糖原病（ＧＳＤ）などのタンパク質／酵素欠損症並びに当業者に公知の他のものの動物疾患モデル、例えばマウス及び他の動物モデルが挙げられる。
[0276]本発明は、包装材料及び１つ又は複数の成分を含むキットなどの組成物を提供する。キットは、典型的には、成分の説明、又は成分をｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｉｎ ｖｉｖｏ、又はｅｘ ｖｉｖｏで使用するための使用説明書を含むラベル又は添付文書を含む。キットは、そのような成分のコレクション、例えば、核酸、組換えベクター、ウイルス（例えば、ＡＡＶ、レンチウイルス）ベクター、又はウイルス粒子、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤（例えば、抗ＦｃＲｎ抗体、ＦｃＲｎ結合性ペプチド、ＦｃＲｎ結合性アフィボディ、小分子ＦｃＲｎアンタゴニスト）、並びに任意選択で抗体を分解又は消化するプロテアーゼ及び／又はグリコシダーゼを含んでいてもよい。
[0277]キットは、キットの１つ又は複数の成分を収容する物理的構造を指す。包装材料は、成分を無菌に維持することができ、そのような目的のために一般的に使用される材料（例えば、紙、段ボール、ガラス、プラスチック、ホイル、アンプル、バイアル、チューブなど）で製作されていてもよい。
[0278]ラベル又は添付文書は、１つ又は複数の成分の識別情報、投与量、作用機序、薬物動態、及び薬力学を含む有効成分（複数可）の臨床薬理学的特徴を含んでいてもよい。ラベル又は添付文書は、製造元、ロット番号、製造場所及び日付、有効期限を識別する情報を含んでいてもよい。ラベル又は添付文書は、製造元情報、ロット番号、製造元所在地、及び日付を識別する情報を含んでいてもよい。ラベル又は添付文書は、キット成分を使用することができる疾患に関する情報を含んでいてもよい。ラベル又は添付文書は、方法、使用、又は治療プロトコール、又は療法レジメンにおいてキット成分の１つ又は複数を使用するための、臨床医用又は対象用の使用説明書を含んでいてもよい。使用説明書は、投薬量、頻度、又は期間、及び本明細書に記載の方法、使用、治療プロトコール、又は予防若しくは療法レジメンのいずれかを実施するための使用説明書を含んでいてもよい。
[0279]ラベル又は添付文書は、予防利益又は療法利益など、成分が提供することのできるあらゆる利益に関する情報を含んでいてもよい。ラベル又は添付文書は、特定の組成物を使用することが適切でないと考えられる状況に関する対象又は臨床医への警告など、潜在的な有害な副作用、合併症、又は反応に関する情報を含んでいてもよい。有害な副作用又は合併症は、対象が、組成物と適合しない可能性のある１つ若しくは複数の他の薬剤を服用したことがあるか、服用する予定であるか、若しくは現在服用している場合、又は対象が、組成物と適合しない可能性のある別の治療プロトコール又は療法レジメンを受けたことがあるか、受ける予定であるか、又は現在受けている場合に生じる可能性があり、したがって使用説明書は、このような不適合性に関する情報を含んでいてもよい。
[0280]ラベル又は添付文書としては、成分、キット、又は包装材料（例えば、箱）と別々であるか若しくは貼付されているか、又はキット成分を含むアンプル、チューブ、若しくはバイアルに付着された「印刷物」、例えば紙又は厚紙が挙げられる。
[0281]別段の定義がない限り、本明細書で使用されている技術用語及び科学用語はすべて、本発明が属する技術分野の当業者により一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本発明の実施又は試験には、本明細書に記載のものと類似の又は等価な方法及び材料を使用することができるが、好適な方法及び材料が本明細書に記載されている。
[0282]本明細書で引用した特許、特許出願、刊行物、及び他の参考文献、ＧｅｎＢａｎｋ引用、及びＡＴＣＣ引用はすべて、参照によりそれらの全体が組み込まれる。矛盾する場合、定義を含む本明細書が優先されることになる。
[0283]本明細書に開示されている特徴はすべて、任意の組合せで組み合わせることができる。本明細書に開示されている各特徴は、同じ、等価な、又は類似の目的を果たす代替的特徴により置き換えることができる。したがって、別様に明示的に述べられていない限り、開示されている特徴は、等価な又は類似の特徴の部類の例である。
[0284]本明細書で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎｄ」、及び「ｔｈｅ」は、状況が明確に別様の指示をしない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「核酸」への言及は、複数のそのような核酸を含み、「ベクター」への言及は、複数のそのようなベクターを含み、「ウイルス」又は「粒子」への言及は、複数のそのようなウイルス／粒子を含む。
[0285]「約」という用語は、本明細書で使用される場合、根底にあるパラメータの１０％以内（つまり、プラス又はマイナス１０％）の値を指す。例えば、「約１：１０」は、１．１：１０．１又は０．９：９．９を意味し、約５時間は、４．５時間又は５．５時間などを意味する。列挙されている値の先頭にある「約」という用語は、各値を１０％変更する。
[0286]すべての数値又は数値範囲は、状況が明確に別様の指示をしない限り、そのような範囲内の整数、及び範囲内の値又は整数の端数を含む。したがって、例示すると、９５％又はそれよりも大きな低減への言及は、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、１００％など、並びに９５．１％、９５．２％、９５．３％、９５．４％、９５．５％など、９６．１％、９６．２％、９６．３％、９６．４％、及び９６．５％などを含む。したがって、また例示すると、「１～４」などの数値範囲への言及は、２、３、並びに１．１、１．２、１．３、及び１．４などを含む。例えば、「１～４週間」は、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、又は２８日間を含む。
[0287]さらに、「０．０１～１０」などの数値範囲への言及は、０．０１１、０．０１２、０．０１３など、並びに９．５、９．６、９．７、９．８、及び９．９などを含む。例えば、対象の体重１Ｋｇ当たり約「０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ」の投薬量は、０．０１１ｍｇ／ｋｇ、０．０１２ｍｇ／ｋｇ、０．０１３ｍｇ／ｋｇ、０．０１４ｍｇ／ｋｇ、０．０１５ｍｇ／ｋｇなど、並びに９．５ｍｇ／ｋｇ、９．６ｍｇ／ｋｇ、９．７ｍｇ／ｋｇ、９．８ｍｇ／ｋｇ、及び９．９ｍｇ／ｋｇなどを含む。
[0288]より高い（より大きな）又はより小さな整数への参照は、それぞれ、参照されている数よりも大きな又は小さな任意の数を含む。したがって、例えば、「２よりも大きな」に対する言及は、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、及び１５などを含む。例えば、組換えウイルスベクター、プロテアーゼ、及び／又はグリコシダーゼの「２回又はそれよりも多く」の投与は、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１１回、１２回、１３回、１４回、１５回、又はそれよりも多くの回数を含む。
[0289]さらに、「１～９０」などの数値範囲への言及は、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５など、並びに８１、８２、８３、８４、及び８５などを含む。例えば、「約１分～約９０日」は、１．１分、１．２分、１．３分、１．４分、１．５分など、並びに１日、２日、３日、４日、５日．．．．８１日、８２日、８３日、８４日、及び８５日などを含む。
[0290]本発明は、本明細書では一般に、本発明の多数の実施形態を説明するために肯定的な言葉を使用して開示されている。また、本発明は、物質若しくは材料、方法ステップ、及び条件、プロトコール、又は手順など特定の主題が完全に又は部分的に除外される実施形態を特に含む。例えば、本発明のある特定の実施形態では、材料及び／又は方法ステップが除外される。したがって、本発明は、本発明が含んでいないものに関しては本明細書には一般に表現されていないが、それにも関わらず、本発明で明示的に除外されていない態様は、本明細書に開示されている。
[0291]本発明の少なからぬ実施形態が説明されている。それにも関わらず、当業者であれば、本発明の趣旨及び範囲から逸脱することなく、本発明に種々の変更及び改変をなして、本発明を種々の用途及び条件に適合させることができる。したがって、以下の実施例は説明を意図するものであり、いかなる点でも、特許請求されている本発明の範囲を限定しない。
［実施例］
実施例１
抗ＦｃＲｎ抗体及びエンドペプチダーゼの併用処置
[0292]ＡＡＶカプシドタンパク質に特異的なＩｇＧ（抗カプシドＩｇＧ）の存在及び発生は、抗カプシドＩｇＧが細胞及び組織のＡＡＶ形質導入を阻害又は中和する可能性があるため、ＡＡＶ遺伝子療法にとって重大な課題である。遺伝子療法を向上させる努力においては、天然ＡＡＶ曝露のため又は以前のｒＡＡＶ投薬のため、既存ＡＡＶ中和抗体（ＮＡｂ）を有する患者へのｒＡＡＶ投薬を可能にするために、循環中ＩｇＧを低減及び／又は除去することが望ましい。
[0293]ＮＡｂを克服するための二重手法では、ＦｃＲｎに結合し、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を阻害する抗体（抗ＦｃＲｎ抗体）の初期処置レジメンを対象に投与し、続いてＩｄｅＳなどのＩｇＧ特異的エンドペプチダーゼのレジメンを投与する。ＦｃＲｎ媒介性ＩｇＧリサイクリングを阻害する抗ＦｃＲｎ抗体（Ｍ２８１）のヒトに対する３回の週１回用量は、血漿中ＩｇＧの最大８０％低減をもたらすことができることが以前に示されている（Ｌｉｎｇら、２０１９年）。抗ＦｃＲｎ抗体によるＩｇＧの事前枯渇とＩｄｅＳ投与によるＩｇＧ切断との組合せは、いずれかの処置レジメン単独よりも、有意により高い開始ＮＡｂ力価を克服することができる可能性がある。
[0294]１：１６０のＮＡｂ力価を有する対象を、４つの試験群：１）未処置；２）抗ＦｃＲｎ抗体処置のみ；３）ＩｄｅＳ処置のみ；並びに４）抗ＦｃＲｎ抗体及びＩｄｅＳ併用処置に分けた。抗ＦｃＲｎ抗体を、０、０．３、３、１０、３０、及び６０ｍｇ／ｋｇ（及びそれよりも高い用量）の単一又は複数の漸増用量で、静脈内、皮下、腹腔内、又は他の投与経路で注入する。抗ＦｃＲｎ抗体の用量を、週１回（例えば）で、１、２、３、又は４週間（又はそれよりも長期間）投与し、続いてＩｄｅｓを、０、０．５、１、及び２ｍｇ／ｋｇ（及びより高い用量）の単一又は複数の漸増用量で、静脈内、皮下、腹腔内、又は他の投与経路で注入する。ＮＡｂ力価を、各処置の前及び後で評価する。
実施例２
ＡＡＶ再投薬のウサギモデル
[0295]ウサギに、目的の導入遺伝子を運搬するｒＡＡＶベクター粒子を注入して、抗ＡＡＶ ＮＡｂを誘導する。ウサギが抗ＡＡＶ ＮＡｂ力価を発生させた後、ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を阻害する抗ＦｃＲｎ抗体をウサギに投与する。抗ＦｃＲｎ抗体の投薬を、例えば、０、０．３、３、１０、３０、及び６０ｍｇ／ｋｇ（及びより高い用量）の単一又は複数の漸増用量で、２、３、４週間、又はそれよりも長期間にわたって実施する。抗ＦｃＲｎ抗体投薬が経過した後、ＩｄｅＳを、０、０．５、１、及び２ｍｇ／ｋｇ（及びより高い用量）の単一又は複数の漸増用量で投与する。ＩｄｅＳ投与の２４～４８時間後、ウサギに、異なる導入遺伝子を運搬する追加のｒＡＡＶ粒子を注入する。このモデルは、抗ＦｃＲｎ及びＩｄｅＳ処置の前及び後並びにｒＡＡＶによる再投薬の前及び後を含む様々な段階での形質導入有効性の分析を可能にする。
実施例３
方法
[0296]ｉｎ ｖｉｔｒｏでのエンドペプチダーゼによる免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）切断：Ｓｐｋ２カプシドに対する中和抗体（ＮＡｂ）を有する又は有しないヒト血清又は非ヒト霊長類（ＮＨＰ）血漿試料を、漸増用量のストレプトコッカス・ピオゲネス由来の免疫グロブリン分解酵素（ＩｄｅＳ；Ｐｒｏｍｅｇａ）と共に３７℃で１時間インキュベートした。Ｐｒｏｍｅｇａ社の使用説明書によると、１単位は、３７℃で３０分間に１μｇの組換えモノクローナルＩｇＧの≧９５％を切断すると定義されている。反応容積をＰＢＳで調整した。全ＩｇＧの切断は、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及びクーマシー染色により評価した。
[0297]切断されたＩｇＧのＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析：切断された試料を、ＮｕＰＡＧＥ（登録商標）ＬＤＳ試料緩衝液（４×）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ用に調製し、７０℃で１０分間加熱した。次いで試料を、ＮｕＰＡＧＥ（登録商標）Ｎｏｖｅｘ ４～１２％Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓゲルにより、ＭＯＰＳ ＳＤＳランニング緩衝液を使用して分析した。ゲルをクーマシーブルーで染色した。
[0298]抗ＡＡＶカプシド中和抗体（ＮＡｂ）力価：ＡＡＶ－Ｓｐｋ１又はＡＡＶ－Ｓｐｋ２カプシドに対する中和抗体を、細胞ベースのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ、及びウミシイタケルシフェラーゼ導入遺伝子をカプシド被包するレポーターベクターであるＡＡＶ－Ｓｐｋ１又はＡＡＶ－Ｓｐｋ２のいずれかをそれぞれ使用して定量化した。手短に言えば、初期継代（２６代未満の継代）の２９３Ｅ４細胞を解凍し、平底白色９６ウェルプレートに２×１０４細胞／２００μＬ／ウェルで接種した。ヘルパーウイルスタンパク質であるヒトアデノウイルスＥ４の発現を誘導するために、ポナステロンＡ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；カタログ番号Ｈ１０１－０１）を最終濃度１μｇ／ｍＬで各ウェルに添加した。次いで、細胞を３７℃／５％ＣＯ２インキュベーターで一晩培養した。次の日に、試料を５６℃で３０分間熱不活化し、次いで希釈剤としてウシ胎児血清（ＦＢＳ）を使用して４点希釈物（１：１～１：５）を調製した。ファクターアッセイコントロールプラズマ（Ｆａｃｔｏｒ Ａｓｓａｙ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｐｌａｓｍａ）（ＦＡＣＴ；Ｋｉｎｇ Ｇｅｏｒｇｅ Ｂｉｏ－Ｍｅｄｉｃａｌ，Ｉｎｃ．）を３．１６倍（半ｌｏｇ）系列希釈で調製し、アッセイ性能を評価した。ＡＡＶ－ルシフェラーゼベクターを、ＤＭＥＭで７．５×１０７ｖｇ／ｍＬに希釈し、次いでＦＡＣＴ対照及び試料に添加した。ベクター及び対照／試料を、３７℃で６０分間インキュベートした。「中和」対照／試料の１ウェル当たり７．５μＬの容積を、細胞を播種したプレートの各ウェルに移し、細胞をインキュベーターに戻して一晩インキュベートした。翌日、細胞をＰＢＳで１回洗浄し、ウミシイタケアッセイ溶解緩衝液で溶解し、ウミシイタケルシフェラーゼアッセイ系（Ｐｒｏｍｅｇａ）でルシフェラーゼ活性を測定し、スペクトラマックス（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ）（登録商標）Ｌマイクロプレートリーダーで読み取った。
[0299]ＩＶＩｇを使用した人工免疫マウスモデル：雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて人工的ＮＡｂ力価を作出するために、ヒト血液から精製した１０％免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）を含む静脈内免疫グロブリン（ＩＶＩｇ；Ｇａｍｕｎｅｘ）を、静脈内（ＩＶ）ベクター投与の１日前に腹腔内（ＩＰ）注射した。ＩｄｅＳによる、又はＩｄｅＳと比較してマウスＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ３に対する活性が向上されている、ストレプトコッカス・エクイに由来する類似のエンドペプチダーゼであるＩｄｅＺによるＩｇＧのｉｎ ｖｉｔｒｏ切断が、ｉｎ ｖｉｖｏで形質導入効率をレスキューすることができるか否かを決定するために、ＩＶＩｇを、３７℃にて一晩１２５単位のＩｄｅＺ（Ｐｒｏｍｅｇａ）で処理してから、ＩＰ投与した。全ＩｇＧの切断を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及びクーマシー染色で評価した。ＩＶＩｇ用量の１日後、ベクター（ＡＡＶ－Ｓｐｋ１－ＧＡＡ）を２×１０１２ｖｇ／ｋｇで投薬した。マウス血漿試料を週１回収集し、試料を導入遺伝子（ＧＡＡ酵素）の活性について分析した。ＩｄｅＳによるＩｇＧのｉｎ ｖｉｖｏ切断が、ｉｎ ｖｉｖｏで形質導入効率をレスキューすることができるか否か決定するために、３００ｍｇ／ｋｇ ＩＶＩｇをＩＰ投薬により注入した。２４時間後、０．４又は４ｍｇ／ｋｇのいずれかのＩｄｅＳをＩＶ投薬により注入した。次いで、ＩｄｅＳ注入の２４時間後に、ベクター（ＡＡＶ－Ｓｐｋ１－ＧＡＡ）を２×１０１２ｖｇ／ｋｇで投与した。
[0300]ＧＡＡ活性アッセイ：ｐＨ４での基質４－メチル－ウンベリフェリル－α－Ｄ－グルコシドの切断を測定することにより、ＧＡＡ活性を評価した（Ｇａｌｊａａｒｄら、Ｃｌｉｎ Ｃｈｉｍ Ａｃｔａ １９７３年；４９巻（３号）：３６１～７５頁）。手短に言えば、ＭｉｌｌｉＱ水で１：２５０に希釈した１０μＬ血漿試料に２０μＬ基質を添加することにより反応を開始させた。反応混合物を３７℃で１時間インキュベートし、次いでｐＨ１０．５の炭酸塩緩衝液で反応停止させた。その後、４－メチル－ウンベリフェリル－α－Ｄ－グルコシドから放出された青色蛍光色素であり、３７０ｎｍで励起すると４４０ｎｍで蛍光発光を発する４－メチルウンベリフェロンで標準曲線をプロットした。
[0301]抗ＡＡＶカプシドＩｇＧ抗体：抗ＡＡＶカプシド全ＩｇＧ形成を捕捉アッセイで測定した。ＥＬＩＳＡプレートウェルを、１μｇ／ｍＬのＡＡＶ－Ｓｐｋ１カプシド粒子を含む５０μＬの溶液でコーティングした。全ヒトＩｇＧ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、０１５０－０１）を希釈して、１０，０００ｎｇ／ｍＬ～０．５ｎｇ／ｍＬの範囲の１０点標準曲線を作成し、プレートに添加した。アッセイの定量限界は、逆算した結果４６０ｎｇ／ｍＬだった。アッセイ性能を評価するために、３レベルの品質管理試料を調製し、各プレートに含めた。カプシド粒子、標準物質、及び品質管理試料（ＱＣ）を４℃で一晩インキュベートした。洗浄後、ウェルを、ＰＢＳ中２％のＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０で２時間室温にてブロッキングした。次いで、ブロッキング緩衝液による試料の系列希釈物をプレートに負荷し、室温で２時間インキュベートした。ブロッキング緩衝液で１：５０００に希釈した西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）コンジュゲートヒツジ抗ヒトＩｇＧ抗体（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号ＮＡ９３３Ｖ）を検出抗体として使用し、プレートで１時間室温にてインキュベートした。洗浄後、３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン基質（ＴＭＢ）と共に室温で１０分間インキュベーションして、ペルオキシダーゼ活性を顕色させた。反応を１Ｍ硫酸で停止させ、次いでプレートを４５０ｎｍの光学密度（ＯＤ）について吸光プレートリーダーで読み取った。精製ヒト全ＩｇＧの系列希釈で作成した標準曲線でＩｇＧ濃度を決定した。
実施例４
ＩｄｅＳは、ヒト試料、ＮＨＰ試料、及びハムスター試料のＩｇＧをｉｎ ｖｉｔｒｏで切断する。
[0302]ストレプトコッカス・ピオゲネス由来の免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）分解酵素（ＩｄｅＳ）は、ＩｇＧの４つすべてのヒトサブクラスを高い特異性で切断するシステインプロテアーゼである。ＩｄｅＳは、ＩｇＧ重鎖の下部ヒンジ領域のＧｌｙ２３６でヒトＩｇＧを加水分解する。
[0303]血清中でＩｇＧを切断するＩｄｅＳの能力を分析するために、抗Ｓｐｋ２ ＮＡｂ力価を有する又は有しないヒト血清試料及びＮＨＰ（アカゲザル（ｒｈｅｓｕｓ ｍａｃａｑｕｅ））血漿試料に漸増用量のＩｄｅＳ（０～１００単位、Ｐｒｏｍｅｇａ）を添加した。ナイーブであったか（＜１：１）又は相対的に中間の範囲のＮＡｂ力価を有していたか（１：５～１：１０）又は相対的に高いＮＡｂ力価を有していた（１：２０～１：４０）ヒト試料では、最も低い用量のＩｄｅＳは、全ＩｇＧ（約１５０ｋＤ）をすべて切断して、Ｆｃ断片（約２５ｋＤ）を放出した（図１Ａ）。ＮＨＰ試料では、すべてのＮＡｂ力価群でＩｇＧが同様に切断された（＜１：１、１：５０～１：１００、＞１：１００、図１Ｂ）。
[0304]ハムスターは、ＡＡＶ再投薬のためのＩｄｅＳ処置を調査するために、マウスよりも良好なモデルを提供することが予想される。漸増量のＩｄｅＳ（０～５０単位；Ｐｒｏｍｅｇａ）を、プールしたハムスター血漿（及び陽性対照としてプールしたヒト血漿）と共にインキュベートすることにより、ＩｄｅＳがハムスターＩｇＧを切断する能力を試験した。試料は、非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及びクーマシー染色により分析した。ＩｄｅＳは、プールしたハムスター血漿及びプールしたヒト血漿中のＩｇＧをｉｎ ｖｉｔｒｏで効果的に切断した（図１Ｃ）。
[0305]こうした結果は、ＩｄｅＳが、ヒトＩｇＧ、アカゲザルＩｇＧ、及びハムスターＩｇＧの非常に効率的で特異的なプロテアーゼであることを示す。
実施例５
ＩｄｅＳによるＩｇＧの切断は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＮＡｂ力価の低減をもたらす。
[0306]ＩｄｅＳによるＩｇＧの切断が中和の低減に十分か否かを分析するために、ＡＡＶベクター形質導入効率をｉｎ ｖｉｔｒｏでアッセイした。このアッセイでは、ウミシイタケルシフェラーゼをコードするＡＡＶベクターを血漿又は血清と共にプレインキュベートし、培養中のヒト細胞をこうした混合物で形質導入し、その後ルシフェラーゼ活性のレベルを評価することにより、ＡＡＶカプシドに対する中和抗体の存在を評価することができる。
[0307]ナイーブだったか（＜１：１）又は高い抗Ｓｐｋ２ ＮＡｂ力価を有していた（１：１０～１：２０）ヒト患者血清試料を、過剰なＩｄｅＳ（５０単位）を用いて又は用いずに前処理し、次いでＮＡｂ力価を評価した。興味深いことに、以前に報告された１：１０～１：２０のＮＡｂ力価を有する患者試料は、１つの研究では、ＩｄｅＳ前処理により１：５～１：１０ＮＡｂ力価へと少なくとも２倍の減少を示した（表１）。こうした結果は、ＩｇＧ抗体をＩｄｅＳで切断すると、ＡＡＶベクター形質導入が増加することを示す。
Figure 2023511062000002
ＩｄｅＳエンドペプチダーゼによる処理後の抗Ｓｐｋ２ ＮＡｂ力価分析。ヒト患者試料（Ｓｐａｒｋ ＩＤにより指定されている）を、ＩｄｅＳを用いて及び用いずに前処理した。ＮＡｂ力価は、後にｉｎ ｖｉｔｒｏベクター形質導入アッセイにより評価した。
実施例６
ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＩｄｅＺによるＩＶＩｇの分解は、ベクターの形質導入効率をｉｎ ｖｉｖｏで増加させる。
[0308]細胞傷害及び補体結合など、ＩｇＧ抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ部分により媒介される。中和は、抗原に対する特異性を重鎖及び軽鎖の可変領域に依存する。Ｆ（ａｂ’）２断片は、インタクト抗原結合領域を依然として含んでいるが、データは、ＩｄｅＳ又はストレプトコッカス・エクイの類似エンドペプチダーゼであり、マウスＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ３に対して活性の向上を示すＩｄｅＺによるＦ（ａｂ’）２断片の放出が、Ｆｃ部分を有していないため安定性の低減を引き起こし、したがってＦ（ａｂ’）２断片の循環からのクリアランスがインタクトＩｇＧよりも速くなる。このアッセイでは、ＩｄｅＳ又はＩｄｅＺにより事前に切断された中和抗体の投与が、ｉｎ ｖｉｖｏ設定においてＡＡＶに対する中和活性の低減をもたらすはずであるか否かを試験した。
[0309]マウスを、０．１ｍｇ／ｋｇ ＩｄｅＺを用いて又は用いずに前処置した抗ＡＡＶカプシド中和抗体を含むヒトＩｇＧのプールであるＩＶＩｇで免疫した。次いで、マウスに、２×１０１２ｖｇ／ｋｇのＡＡＶ－Ｓｐｋ１－ＧＡＡを投与した。１．０ｍｇ又は５．０ｍｇのＩＶＩｇで処置したマウスでは、対照マウス（３３，５５１±１３，６３５ｎｍｏｌ／時／ｍＬ）と比較して、血漿中のＧＡＡ活性レベルの低減をもたらした（それぞれ、１０，９５１±１，５５４ｎｍｏｌ／時／ｍＬ及び１，０４１±５５３ｎｍｏｌ／時／ｍＬ）。これは、ＩＶＩｇによるベクター中和が、用量依存性であることを示す（図２）。
[0310]ＩｄｅＺによる４０ｍｇ／ｋｇ ＩＶＩｇの前処置は、形質導入効率をレスキューし、対照と同等のＧＡＡ活性レベル（３７，７０７±１１，４４９ｎｍｏｌ／時／ｍＬ）をもたらした。ＩｄｅＺによる２００ｍｇ／ｋｇ ＩＶＩｇの前処置は、ベクター中和を部分的に軽減し（１３，４４０ｎｍｏｌ／時／ｍＬ±１５，５４３）、１匹の動物の活性が完全に回復した（４１，０２５ｎｍｏｌ／時／ｍＬ）。注目すべきには、ＩｄｅＺ自体は、ＡＡＶベクター形質導入効率に干渉しなかった。ＩＶＩｇ用量保持を、クーマシー染色によるＳＤＳ－ＰＡＧＥで分析して、ＩｇＧの切断を確認した。こうした結果は、ＩｄｅＳ／ＩｄｅＺによる、ＡＡＶカプシドに対する中和抗体のｉｎ ｖｉｔｒｏ切断は、ＡＡＶベクター形質導入及び導入遺伝子発現をｉｎ ｖｉｖｏでレスキューすることができることを示す。
実施例７
ｉｎ ｖｉｖｏでのＩｄｅＳによるＩＶＩｇの分解は、ｉｎ ｖｉｖｏでのベクターの形質導入効率を増加させる。
[0311]ｉｎ ｖｉｖｏでのＩｇＧの切断が、血漿中でのベクター形質導入及び導入遺伝子発現／活性に影響を及ぼすことができるか否かを分析するため、まず、マウスにインタクトＩＶＩｇを注入して、ヒト抗カプシド中和ＩｇＧの人工的力価を作出した。２４時間後、マウスに、２つの濃度（０．４ｍｇ／ｋｇ又は４ｍｇ／ｋｇ）のＩｄｅＳを注入し、次いでＩｄｅＳを注入した２４時間後に、すべてのマウスに、２×１０１２ｖｇ／ｋｇのＡＡＶ－Ｓｐｋ１－ＧＡＡを投与した。抗Ｓｐｋ１ ＮＡｂ力価及びＩｇＧレベルの両方を、ＩｄｅＳ注入前及びＩｄｅＳ注入後（ベクター投与の直前）に分析した。
[0312]ＩｄｅＳ注入は、ＮＡｂレベル（図３）及びＩｇＧレベル（図４）の両方の用量依存的減少を誘導した。最も高い用量のＩｄｅＳ（４ｍｇ／ｋｇ）は、ＮＡｂ力価を少なくとも１：４０から＜１：１まで低減させることが可能だった。
[0313]ベクター注入の１週間後にＧＡＡ活性を測定したところ、ベクターのみを投与した対照マウスは、４９，３８７±７，３４５ｎｍｏｌ／時／ｍＬのＧＡＡ活性レベルを示した（図５）。３００ｍｇ／ｋｇのＩＶＩｇを注射したマウスは、形質導入のほとんど完全な阻害と一致する血漿中ＧＡＡ導入遺伝子活性レベル（１，７０２±３３６ｎｍｏｌ／時／ｍＬ）を示した。ＩｄｅＳは、導入遺伝子活性レベルの用量依存的レスキューを示した。０．４ｍｇ／ｋｇのＩｄｅＳは、ＧＡＡ活性の７０％レスキューをもたらし（３４，４０８±１０，５６２ｎｍｏｌ／時／ｍＬ）、４ｍｇ／ｋｇのＩｄｅＳは、９９％ＧＡＡ活性をレスキューした（４８，９４８±５，３２２ｎｍｏｌ／時／ｍＬ）。こうした結果は、ｉｎ ｖｉｖｏでのＩｄｅＳ処置が中和抗体力価を低減させ、治療に抵抗性である動物におけるＡＡＶベクターの投薬及び形質導入を可能にすることを示す。
実施例８
ｉｎ ｖｉｖｏでのＩｄｅＳによるＩＶＩｇの分解は、ｉｎ ｖｉｖｏでのベクターの形質導入効率を増加させる。
[0314]ＩｄｅＳが、より高い力価の抗カプシドＩｇＧをｉｎ ｖｉｖｏで切断する能力、及び高度なＡＡＶベクター中和の状況でＡＡＶ形質導入をレスキューする能力を評価した。マウス（雄Ｃ５７ＢＬ／６）に、様々な用量のインタクトヒトＩＶＩｇ（３００ｍｇ／ｋｇ（低）、８００ｍｇ／ｋｇ（中）、又は１６００ｍｇ／ｋｇ（高））を注入して、ヒト抗カプシド中和ＩｇＧの人工的力価を作出した。２４時間後、マウスに、３つの濃度（０．４ｍｇ／ｋｇ（低）、１ｍｇ／ｋｇ（中）、又は２ｍｇ／ｋｇ（高））のＩｄｅＳを注入した。ＩｄｅＳ注入の２４時間後、マウスに、ＡＡＶ－Ｓｐｋ１－ＧＡＡを２×１０１２ｖｇ／ｋｇで投与した。抗Ｓｐｋ１ ＮＡｂ力価を、実施例１に記載の抗ＡＡＶカプシドＮＡｂ力価アッセイを使用して、ＩｄｅＳ注入前及びＩｄｅＳ注入後（ベクター投与の直前）の両方で決定した。ＡＡＶ形質導入を、ベクター投与の２週間後、実施例１に記載の通りのＧＡＡ活性アッセイを使用して血漿中の導入遺伝子産物（ＧＡＡ）を測定することにより評価した。
[0315]すべての用量のＩＶＩｇで、ＩｄｅＳによる前処置は、ＡＡＶ ＮＡｂ力価の用量依存的減少をもたらした（表２）。表２には、各群の各動物のＩｄｅＳ注入前及び注入後の中和抗Ｓｐｋ１抗体（ＮＡｂ）力価が示されている。ＡＡＶ ＮＡｂ力価は、低（＜１：１、１：１～１：２．５）、低～中範囲（１：２．５～１：５）、中～高範囲（１：５～１：１０）、及び高（＞１：１０～１：２０）と指定した。最も高い用量のＩｄｅＳ（２ｍｇ／ｋｇ）は、＞１：１６０のＮＡｂ力価（１６００ｍｇ／ｋｇ ＩＶＩｇで生成された）を１：１～１：２．５まで低減させることが可能だった。
Figure 2023511062000003
[0316]ベクター注入２週間後に測定したＧＡＡ活性の結果は図６に示されている。陰性対照マウス（ベクターのみを投与した）の血漿は、２６，６８９±１２，４２０ｎｍｏｌ／時／ｍＬのＧＡＡ活性レベルを示した。３００ｍｇ／ｋｇ（及びより高い）のＩＶＩｇを注射したがＩｄｅＳを投与しなかったマウスは、わずか４３６±４１ｎｍｏｌ／時／ｍＬの血漿ＧＡＡ活性レベルを呈した。これは、ＡＡＶベクター形質導入がＮＡｂにより阻害されたことに一致する。以前の実施例の結果と一致して、ＩｄｅＳ前処置は、血漿中のＧＡＡ活性レベルにより測定したところ、ＡＡＶベクター形質導入の用量依存的レスキューをもたらした。０．４ｍｇ／ｋｇのＩｄｅＳは、７，７０２±４，７１０ｎｍｏｌ／時／ｍＬをもたらし、１ｍｇ／ｋｇのＩｄｅＳは、１５，４４４±４，２２６ｎｍｏｌ／時／ｍＬのＧＡＡ活性レベルをもたらし、２ｍｇ／ｋｇのＩｄｅＳは、１４，３７５±２，５７２ｎｍｏｌ／時／ｍＬのＧＡＡ活性レベルをもたらした。
[0317]より高い用量のＩＶＩｇ（８００又は１６００ｍｇ／ｋｇ ＩＶＩｇ）を投与した群は、ＩｄｅＳの増加に伴ってＧＡＡ活性レベルが用量依存的に増加するという同様の傾向を示した。８００ｍｇ／ｋｇのＩＶＩｇの場合、０．４ｍｇ／ｋｇのＩｄｅＳは、４，１８８±２，５４９ｎｍｏｌ／時／ｍＬのＧＡＡ活性レベルをもたらし、１ｍｇ／ｋｇのＩｄｅＳは、１７，８１３±１１，２８３ｎｍｏｌ／時／ｍＬのＧＡＡ活性レベルをもたらし、２ｍｇ／ｋｇのＩｄｅＳは、２６，８４６±７，３５４ｎｍｏｌ／時／ｍＬのＧＡＡ活性レベルをもたらした。１６００ｍｇ／ｋｇのＩＶＩｇの場合、０．４ｍｇ／ｋｇのＩｄｅＳは、５８０±２１７ｎｍｏｌ／時／ｍＬのＧＡＡ活性レベルをもたらし、１ｍｇ／ｋｇのＩｄｅＳは、１２，５１１±１，６０２ｎｍｏｌ／時／ｍＬのＧＡＡ活性レベルをもたらし、２ｍｇ／ｋｇのＩｄｅＳは、１１，５７３±１，３１３ｎｍｏｌ／時／ｍＬのＧＡＡ活性レベルをもたらした。最も高い用量のＩＶＩｇ（１６００ｍｇ／ｋｇ）では、最も低い用量のＩｄｅＳ（０．４ｍｇ／ｋｇ）は、ベクター形質導入をレスキューすることができなかった。しかしながら、１６００ｍｇ／ｋｇ用量のＩＶＩｇでは、超生理学的レベルの全ＩｇＧが循環中に存在した。これは、その基質の量が増加するため０．４ｍｇ／ｋｇ用量でのＩｄｅＳの有効性を低減させた可能性がある。
[0318]こうした結果は、ｉｎ ｖｉｖｏでのＩｄｅＳ処置が中和抗体力価を低減させ、ウイルスベクター遺伝子療法治療法に抵抗性である動物におけるウイルスベクターの投薬及び形質導入を可能にすることを示す。
実施例９
ＡＡＶ再投薬のハムスターモデル
[0319]ハムスターに、目的の導入遺伝子を運搬するｒＡＡＶベクター粒子を注入し、抗ＡＡＶ ＮＡｂの発生後（例えば、４週間後）にＩｄｅＳを投薬し、別の導入遺伝子を運搬する追加のｒＡＡＶ粒子を注入する。このモデルは、ＩｄｅＳ処置の前及び後並びにｒＡＡＶによる再投薬の前及び後を含む種々の段階における形質導入有効性の分析を可能にする。
[0320]ＡＡＶカプシドに対する中和抗体を分解又はそれらの効果を低減させるＩｄｅＳの能力を評価するために、そのＩｇＧがエンドペプチダーゼＩｄｅＳにより効率的に切断される種であるシリアンゴールデン（Ｓｙｒｉａｎ Ｇｏｌｄｅｎ）ハムスターにおいて研究を実施する。ハムスターに、まず、２×１０１２ｖｇ／ｋｇのＳｐｋ１－ＦＶＩＩＩ、Ｓｐｋ１－ＦＩＸ、又は他のＳｐｋ１カプシド被包ベクターを注入する。動物を、抗Ｓｐｋ１ ＩｇＧ ＥＬＩＳＡ又は細胞ベース中和抗体アッセイによりＳｐｋ１カプシドに対するＮＡｂの発生を測定することに加えて、血漿中の導入遺伝子産物（つまり、ＦＶＩＩＩ、ＦＩＸなど）の発現についてモニターした。ＮＡｂ力価が発生した後、ベクター注入の３～５週間以内に、静脈内、皮下、腹腔内、又は他の投与経路により、０、０．５、１、及び２ｍｇ／ｋｇ（及びより高い用量）のＩｄｅＳの単一又は複数の漸増用量を動物に注入する。ＩｄｅＳ投与後、続いて、動物を、抗Ｓｐｋ１カプシドＩｇＧ及び／又はＳｐｋ１に対するＮＡｂについて測定する。動物がＮＡｂレベルの十分な減少を示したら、動物に２×１０１２ｖｇ／ｋｇのＳｐｋ１－ＧＡＡを注入する。形質導入後、ＧＡＡ活性アッセイ及び／又はＧＡＡ抗原レベル測定により血漿中のＧＡＡ発現を測定して、達成された形質導入のレベルを決定する。
[0321]こうした研究は、ＩｄｅＳが、再投薬を可能にするのに十分に低いレベルまでＡＡＶカプシド特異的ＮＡｂをｉｎ ｖｉｖｏで低減させるか否かを示す。抗ＦＶＩＩＩ ＩｇＧの測定は（ｉｎ ｖｉｖｏで発生した場合）、導入遺伝子産物標的指向性ＮＡｂの低減におけるＩｄｅＳの有効性、及び有効性喪失前に許容されるＩｄｅＳ再投薬のラウンド数に関する情報を提供する。
実施例１０
ＡＡＶ再投薬のカニクイザルモデル
[0322]ＡＡＶカプシドに対するＮＡｂを分解又はそれらの効果を低減させるＩｄｅＳの能力を大型動物モデルにおいて評価するために、カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）において研究を実施する。まず、サルを、Ｓｐｋ１カプシドに対する既存ＮＡｂについてスクリーニングする。ＮＡｂ陽性動物は、野生又は集団飼育において天然に存在するＡＡＶへの曝露に起因する可能性がある。陰性ＮＡｂ力価又は陽性ＮＡｂ力価に基づき、陽性の場合は、既存ＮＡｂ力価がどのくらい高いかに基づいていて、動物を群に振り分ける。
[0323]試験の再投薬集団では、動物に、２×１０１２ｖｇ／ｋｇのＳｐｋ１－ＦＩＸ又は他のＳｐｋ１カプシド被包ベクターを投与する。動物を、抗Ｓｐｋ１ ＩｇＧ ＥＬＩＳＡ又は細胞ベースＮＡｂアッセイによりＳｐｋ１カプシドに対するＮＡｂの発生を測定することに加えて、血漿中の導入遺伝子産物（つまり、ＦＩＸなど）の発現についてモニターした。ＮＡｂ力価が発生した後、ベクター注入の３～５週間以内に、静脈内、皮下、腹腔内、又は他の投与経路により、０、０．５、１、及び２ｍｇ／ｋｇ、及びより高い用量のＩｄｅＳの単一又は複数の漸増用量を動物に注入する。ＩｄｅＳ投与後、続いて、動物を、抗Ｓｐｋ１カプシドＩｇＧ及び／又はＳｐｋ１に対するＮＡｂについて測定する。動物がＮＡｂレベルの十分な減少を示したら、動物に２×１０１２ｖｇ／ｋｇのＳｐｋ１－ＧＡＡを注入する。形質導入後、ＧＡＡ活性アッセイ及び／又はＧＡＡ抗原レベル評価により血漿中のＧＡＡ発現を測定して、達成された形質導入のレベルを決定する。
[0324]この研究の別の集団では、既存ＮＡｂ力価を克服するＩｄｅＳの能力を評価する。異なるＮＡｂ力価レベルを示す動物を力価に基づいて群に分け、静脈内、皮下、腹腔内、又は他の投与経路により、０、０．５、１、及び２ｍｇ／ｋｇ（及びより高い用量）のＩｄｅＳの単一又は複数の漸増用量を注入する。ＩｄｅＳ投与後、続いて、動物を、抗Ｓｐｋ１カプシドＩｇＧ及び／又はＳｐｋ１に対するＮＡｂについて測定する。動物がＮＡｂレベルの十分な減少を示したら、動物に２×１０１２ｖｇ／ｋｇのＳｐｋ１－ＧＡＡを注入する。形質導入後、ＧＡＡ活性アッセイ及び／又はＧＡＡ抗原レベル測定により血漿中のＧＡＡ発現を測定して、達成された形質導入のレベルを決定する。
[0325]こうした研究は、ＩｄｅＳが、ヒトＡＡＶ投与の優れたモデルである種のカニクイザルでの再投薬を可能にするのに十分に低いレベルまで、ＡＡＶカプシド特異的ＮＡｂをｉｎ ｖｉｖｏで低減させるか否かを示す。また、こうした研究は、ＩｄｅＳ投与により克服することができる最も大きな既存ＮＡｂ力価を示す。抗ＦＩＸ ＩｇＧの測定は（ｉｎ ｖｉｖｏで発生した場合）、導入遺伝子産物標的指向性ＮＡｂの低減におけるＩｄｅＳの有効性、及び有効性喪失前に許容されるＩｄｅＳ再投薬のラウンド数に関する情報を提供する。
実施例１１
ＩｄｅＳ及びＡＡＶ－Ｓｐｋ１－ｈＦＶＩＩＩによるマウス研究
[0326]ＩｄｅＳの２つの異なる調製物（ロット１及びロット２）を、ヒト抗カプシド中和ＩｇＧの人工的力価を有するマウスで試験した。－２日目に、３００ｍｇ／ｋｇのＩＶＩｇをＣ５７ＢＬ／６マウスに注射し、続いて－１日目（ＡＡＶの投与前）に１ｍｇ／ｋｇのＩｄｅＳを注射し、最後に０日目（投与後）に、ヒト第ＶＩＩＩ因子をコードするＡＡＶ－Ｓｐｋ１ベクター（ＡＡＶ－Ｓｐｋ１－ｈＦＶＩＩＩ）の５×１０１０ベクターゲノムを注射した。陰性対照動物は、ＩＶＩｇ処置もＩｄｅＳ処置も受けず、「ＩｄｅＳ無し」群は、ＩＶＩｇ及びＡＡＶ－Ｓｐｋ１－ｈＦＶＩＩＩベクターのみを受けた。血漿中の中和抗体力価を、ＩｄｅＳ投与前及び投与後に、実施例３に記載のものと同様の抗ＡＡＶカプシド中和アッセイを使用し、試料に対して８点力価（１：１～１：１６０）を使用して決定した。発光は、ＧｌｏＭａｘ（登録商標）ディスカバーマイクロプレートリーダー（Ｄｉｓｃｏｖｅｒ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ）（Ｐｒｏｍｅｇａ）で読み取った。力価は、発光が＞５０％阻害された最も高い希釈又は範囲として決定した。ＩｄｅＳ処置前及び処置後のＮＡｂ力価は、両ロットのＩｄｅＳが、マウスにおいてＮＡｂ力価の減少に有効であることを示す（図７）。
[0327]ヒトＦＶＩＩＩ抗原レベルを、ベクター注入前並びにベクター注入の１週間後及び２週間後にＥＬＩＳＡで測定した（図８）。ｉｎ ｖｉｖｏにおける両ロットのＩｄｅＳ処置は、中和抗体力価を低減させ、ＡＡＶベクターによる投薬及び導入遺伝子の発現を可能にした。
実施例１２
抗ＡＡＶ－Ｓｐｋ１ ＩｇＧを用いたマウス研究
[0328]Ｃ５７ＢＬ／６マウスにＩＶＩｇを投与して、ヒト抗カプシド中和ＩｇＧの人工的力価を誘導した。ＩＶＩｇの３つの濃度（３００ｍｇ／ｋｇ（低）、８００ｍｇ／ｋｇ（中）、及び１６００ｍｇ／ｋｇ（高））を使用し、各ＩＶＩｇ群内の動物を、漸増用量のＩｄｅＳ（０、０．４、１．０、２．０ｍｇ／ｋｇ）で処置した。抗Ｓｐｋ１カプシドＩｇＧレベルをＥＬＩＳＡで評価した。手短に言えば、９６ウェルプレートをＳｐｋ１空カプシドでコーティングし、次いでＢＳＡでブロッキングし、洗浄し、１：１００に希釈した血漿と共に２時間インキュベートした。インキュベーション後、プレートを洗浄し、ＨＲＰにコンジュゲートされた二次抗体と共に１時間インキュベートした。その後、プレートを再度洗浄し、ＴＭＢ基質を使用して顕色させた。プレートの４５０ｎｍにおける光学密度（ＯＤ）を、吸光プレートリーダーで読み取った。発光を、ヒトＩｇＧの標準曲線と比較して抗体濃度を決定した。ＩｄｅＳの３つの濃度（０．４、１．０、２．０ｍｇ／ｋｇ）はすべて、ＩＶＩｇの３つの濃度（低、中、高）のすべてにおいて、抗Ｓｐｋ１カプシドＩｇＧの血清レベルを排除又は有意に低減させた（図９）。
実施例１３
抗ＦｃＲｎ抗体及びエンドペプチダーゼによるマウス研究
[0329]雄Ｔｇ３２マウスで研究を実施して、抗ＦｃＲｎモノクローナルＭ２８１及びＩｇＧ切断性エンドペプチダーゼＩｄｅＳがＡＡＶに対する中和抗体を低減させる能力を、単独で及び組合せで評価した。
[0330]Ｔｇ３２マウス系統（ｈＦｃＲｎ Ｔｇ３２又はＦｃＲｎ－／－ｈＦｃＲｎ系３２Ｔｇとも呼ばれる）は、ヒトＩｇＧ及びＦｃドメインに基づく療法薬の薬物動態及び薬力学を評価するための標準動物であり、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊバックグラウンド（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ；ストック番号０１４５６５）に、マウスＦｃｇｒｔ（Ｆｃ受容体、ＩｇＧ、アルファ鎖トランスポーター）遺伝子のノックアウト変異、及びそれ自体の天然プロモーター（ｈＴｇ３２）の制御下でヒトＦＣＧＲＴ遺伝子を発現する導入遺伝子を有する。
[0331]１群当たり１１匹の雄Ｔｇ３２マウスに、ＩＶＩｇ（中和抗体を導入するため）又はダルベッコＰＢＳ（ＤＰＢＳ）を腹腔内注射で事前免疫した（－１日目）。２４時間後（０日目）にＭ２８１又はＰＢＳを、１日目にＩｄｅＳ（Ｐｒｏｍｅｇａ）又はＰＢＳを、２日目にＳｐｋ１－ＦＩＸ（Ｓｐｋ１カプシド被包肝特異的プロモーターＦＩＸ発現カセット）ＡＡＶ粒子をマウスに注射した（表３）。ＮＡｂ及び抗Ｓｐｋ１ ＩｇＧを分析するため、ＩＶＩｇ又はＰＢＳ注射の０日後及び２日後にマウスを出血させて血漿を収集した。研究の詳細な投薬及び収集タイムラインについては、表４を参照されたい。
[0332]
Figure 2023511062000004
[0333]
Figure 2023511062000005
方法
[0334]
血液試料採取：０、２、９、及び１６日目：約２００μＬの全血を顎下静脈から収集し、氷上に収集した。血液の最初の一滴を破棄し、血液を９８００ｇで１０分間４℃にて遠心分離し、上清をきれいなチューブに分注することにより、１００μＬの血漿試料を得た。血漿試料を、分析まで－８０℃で保管した。
[0335]ｉｎ ｖｉｔｒｏ中和抗体分析：ＡＡＶ－Ｓｐｋ１カプシドに対する中和抗体力価をｉｎ ｖｉｔｒｏで決定した。手短に言えば、ＨＥＫ－２９３－Ｅ４細胞を、９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、カタログ番号３５９５）に１ウェル当たり２０，０００細胞で播種した。１μｇ／ｍＬポナステロンＡ（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号Ｈ１０１０１）で補完された増殖培地（ＤＭＥＭ、１０％ＦＢＳ、２ｍＭ Ｌ－グルタミン、１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ）を使用して、５％ＣＯ２の加湿雰囲気下の３７℃インキュベーター内で一晩培養して、ヒトアデノウイルスタンパク質Ｅ４の発現を誘導した。次の日に、すべての血漿試料を、５６℃で３０分間水浴を使用して熱不活化した。試料を、２倍系列希釈で熱不活化ＦＢＳに希釈し、試験して、１：２．５～１：１６０希釈にわたって阻害活性を評価した。ファクターアッセイコントロールプラズマ（Ｆａｃｔｏｒ Ａｓｓａｙ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｐｌａｓｍａ）（ＦＡＣＴ）を使用して、実行間のアッセイ性能を評価した。希釈した血漿試料を、１．５×１０９ｖｇ／ｍＬ濃度のＳｐｋ１－ウミシイタケルシフェラーゼＡＡＶレポーターウイルスと事前に混合し、３７℃で１時間インキュベートした（総容積８０μＬ）。インキュベーション後、事前に混合した血漿／ＡＡＶ溶液７．５μＬを、ＨＥＫ－２９３－Ｅ４細胞の三重重複ウェルに添加し、３７℃／５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。次の日、４０μＬのウミシイタケルシフェラーゼ溶解緩衝液を各ウェルの細胞に添加し、ＧｌｏＭａｘ（登録商標）ルミノメーターを使用して発光をアッセイした。中和抗体力価を、ナイーブ血清（ＦＢＳのみ）と比較して５０％よりも大きな発光低減をもたらした最も低い血漿希釈として報告した。
[0336]抗ＳＰＫ１カプシドＩｇＧ ＥＬＩＳＡ分析：マウス血漿中の抗カプシドＩｇＧの存在を、ヒト抗ＡＡＶ Ｓｐｋ１カプシドＩｇＧ捕捉アッセイを使用して評価した。手短に言えば、ＥＬＩＳＡプレートウェルを、ヒトＩｇＧ標準物質、品質管理（ＱＣ）試料、又はＳｐｋ１カプシド（血漿試料ウェル）と共に、４℃で一晩コーティングした。標準曲線は、１０μｇ／ｍＬ～４．５７ｎｇ／ｍＬの範囲の１０点３倍希釈系列で構成されており、上部２点及び下部２点はアンカーポイントとしての役目を果たした。高品質管理（ＨＱＣ）試料、中品質管理（ＭＱＣ）試料、及び低品質管理（ＬＱＣ）試料は、８００ｎｇ／ｍＬ、５００ｎｇ／ｍＬ、及び１２ｎｇ／ｍＬのヒトＩｇＧで構成されていた。一晩のコーティングステップ後、プレート洗浄器を使用してプレートを３回洗浄し、続いて希釈緩衝液で２時間室温にてブロッキングした。プレートを上記の通りに洗浄し、希釈した血漿試料（１：１００）を適切なウェルに添加した（標準物質ウェル及びＱＣウェルには希釈緩衝液のみを添加した）。プレートを室温で２時間インキュベートし、以前と同様に洗浄した。西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）コンジュゲートヒツジ抗ヒトＩｇＧ抗体を、プレートウェルに添加し、室温で１時間インキュベートした。インキュベーション後、プレートを以前と同様に洗浄した。室温に平衡化したＴＭＢをプレートに添加して、検出のためのシグナルを顕色させた。暗所にて１０分間室温でインキュベートした後、１Ｍ硫酸を添加することによりシグナル顕色を停止させた。スペクトラマックス（登録商標）プレートリーダーを使用して４５０ｎｍの吸光度を測定することにより、シグナルを検出した。アッセイ合格基準は、標準物質及びＱＣ試料の結果に基づいていた。血漿試料中の抗カプシドＩｇＧレベルは、標準曲線と比較することにより内挿した。測定値が＜４５７ｎｇ／ｍＬの試料は、定量限界（ＢＱＬ）未満であると規定した。検出可能な吸光度範囲を下回る試料には、検出下限（ＬＯＤ）である１５２ｎｇ／ｍＬの値を割り当てた。
中和抗体力価の分析
[0337]
ＮＡｂアッセイの結果は、図１０及び表５に示されている。ＰＢＳ群（群１）の数匹のマウスは、ＮＡｂ力価が増加した。「Ｍ２８１のみ」群（群２）は、２日後にＮＡｂ力価の有意な低減を示したが、「ＩｄｅＳのみ」群（群３）は、ＮＡｂ力価の有意な低減を示さなかった。ＮＡｂビンは、レポーターの発現を可能にする、血漿が希釈されているレベルを反映し、アッセイにおいて阻害とされる値をある特定の値間に入れることができるため、ＮＡｂ力価を分類する方法である。したがって、ＮＡｂ力価は、こうした「ビン」又はレベル内にあると記述される。
[0338]Ｍ２８１及びＩｄｅＳは両方とも中和抗体力価を低減させ、併用療法は、すべてのマウスを検出下限未満のビンへと低減させた。Ｍ２８１単独は、ＩｄｅＳよりも効率的にＮＡｂを低減させることができた。
[0339]
Figure 2023511062000006
抗Ｓｐｋ１カプシドＩｇＧの分析
[0340]
抗Ｓｐｋ１ ＩｇＧ ＥＬＩＳＡレベルは、０日目～２日目の「ＰＢＳのみ」群及び「ＩＶＩｇ無し」群では変化しなかった（図１１）。抗Ｓｐｋ１ ＩｇＧレベルは、平均して、Ｍ２８１のみを投与したマウス（群２）では、５．２１×１０３ｎｇ／ｍＬ（０日目）から３．９５×１０３ｎｇ／ｍＬ（２日目）へと低下し、ＩｄｅＳのみを投与したマウス（群３）では、４．２１×１０３ｎｇ／ｍＬ（０日目）から６．８８×１０２ｎｇ／ｍＬ（２日目）へと低下した（表６）。Ｍ２８１及びＩｄｅＳを両方とも受け取ったマウス（群４）はすべて、抗Ｓｐｋ１ ＩｇＧレベルがアッセイの検出限界を下回り、１５２ｎｇ／ｍＬの値が割り当てられた（図１１）。抗Ｓｐｋ１ ＩｇＧレベルは、０日目から２日目まで、群２（Ｍ２８１）及び群４（Ｍ２８１＋ＩｄｅＳ）では有意に低減されたが、群３（ＩｄｅＳ）では低減されなかった。Ｍ２８１とＩｄｅＳとの組合せを受け取ったマウスは、２日目には、Ｍ２８１又はＩｄｅＳ単独と比較して、有意により低い抗Ｓｐｋ１ ＩｇＧレベルを示した。
[0341]
Figure 2023511062000007
結論
[0342]
したがって、Ｍ２８１とＩｄｅＳとの組合せは、中和抗体レベルを最も低い力価ビンへと低減させ、抗Ｓｐｋ１カプシドＩｇＧレベルを検出限界未満に低減させることができる。こうした結果は、ＡＡＶ遺伝子療法を向上させるために、高ＮＡｂ力価を有する患者の中和抗体レベルを低減させるための、抗ＦｃＲｎ剤（抗ＦｃＲｎ抗体など）及びＩｄｅＳの併用戦略を強力に裏付けている。
[0343]こうした結果は、抗ＦｃＲｎモノクローナル抗体（Ｍ２８１）及びＩｄｅＳが、前臨床マウスモデルにおいて抗カプシドＩｇＧレベルを低減させる効力に関して同等であることを示す。さらに、Ｍ２８１をＩｄｅＳと共に併用療法として使用して、抗カプシドＩｇＧレベルを検出不可能なレベルへと低減させることができることが実証された。抗ＦｃＲｎモノクローナル抗体Ｍ２８１などの抗ＦｃＲｎ剤とＩｄｅＳとの併用処置戦略は、抗カプシドＩｇＧレベルが高すぎてＩｄｅＳ処置のみで効果的に低減させることができない可能性がある対象又は患者へのＡＡＶ導入遺伝子の送達に有用であり得る。
実施例１４
より高い用量のＡＡＶベクターを用いたマウス研究
[0344]実施例１３の研究を、表７に示される通り、マウス１匹当たりより高い用量のＡＡＶベクターゲノムで実施する。
[0345]
Figure 2023511062000008
[0346]追加の分析は、肝臓におけるベクターゲノムの定量化、肝臓におけるＦＩＸ導入遺伝子のｍＲＮＡ発現の定量化、及び血漿中のＦＩＸ抗原の定量化を含む。
実施例１５
ＮＡｂをクリアランスし、ＡＡＶベース遺伝子療法を可能にするための、抗ＦｃＲｎ剤の使用
[0347]ＩｄｅＳ処置単独では、高力価のＡＡＶ ＮＡｂを排除することができない可能性があるか、又は効果的なＡＡＶ形質導入に十分な程度にＡＡＶ ＮＡｂを排除若しくは低減することができない可能性がある。対象が組換えＡＡＶベクターを既に投薬されている場合など、対象が、ＡＡＶに対する高ＮＡｂを有する可能性がある状況では、そのような高レベルのＮＡｂは、ＩｄｅＳ単独での処置では完全に排除することができない可能性がある。抗ＦｃＲｎ剤及びＩｄｅＳの投与は、高力価ＮＡｂをより効果的にクリアランスし、有効なＡＡＶ形質導入を可能にすることができる。例えば、ＡＡＶベクターの投与前に、抗ＦｃＲｎ剤を数回投与し、続いてＩｄｅＳを投与することができる（図１２を参照）。
実施例１６
再投薬ウサギ研究
[0348]ニュージーランドホワイトウサギに、まず、タンパク質をコードしている導入遺伝子を運搬するＡＡＶベクター（例えば、Ｓｐｋ２－ｈＦＩＸ）を投薬し、同じカプシドを有するが、異なるタンパク質をコードしている導入遺伝子を運搬するＡＡＶベクター（例えば、Ｓｐｋ２－ｈＦＶＩＩＩ）を「再投薬」する（図１３）。代替手段としては、空ＡＡＶベクター又は「再投薬」ＡＡＶベクターにあるものとは異なる何らかの導入遺伝子をまず投与することが挙げられる。抗ＦｃＲｎ剤（抗ＦｃＲｎ抗体Ｍ２８１など）、ＩｄｅＳ、及び抗ＦｃＲｎ剤とＩｄｅＳとの組合せを、最初のＡＡＶ用量と２回目のＡＡＶ用量との間に投与する。
[0349]
Figure 2023511062000009
[0350]中和抗体力価、抗カプシドＩｇＧを２８、２９日目に測定する。
[0351]ｈＦＩＸ、ｈＦＶＩＩＩ抗原及びベクターゲノムを５８日目に測定する。
実施例１７
抗ＦｃＲｎ研究 － カニクイザル
[0352]この研究は、抗ＦｃＲｎとＩｄｅＳとの併用処置が、高力価ＮＡｂ陽性カニクイザルにおけるＡＡＶ肝形質導入を可能にすることができるかを決定するために設計されている。研究の概略図（図１４）には、ＩｄｅＳ投与前３週間の、抗ＦｃＲｎ抗体（Ｍ２８１）の週１回の投与、及びその後のＡＡＶベクターの投与が示されている。
[0353]
Figure 2023511062000010
[0354]エンドポイントは、Ｍ２８１及びＩｄｅＳ薬物動態（ＰＫ）及び薬力学（ＰＤ）を測定するための－２１日目～１日目の採血、補体分析のためのＡＡＶ投与後複数回の採血、臨床病理検査及び導入遺伝子発現のための週１回の採血、Ｔ細胞応答のためのＰＢＭＣ、生体内分布分析のための凍結組織、免疫学的分析のための新鮮組織、及び標準的組織病理検査のための固定組織を含む。
実施例１８
[0355]Ｓｐｋ１（配列番号１）：
MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDNGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLQAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVESPVKTAPGKKRPVEPSPQRSPDSSTGIGKKGQQPAKKRLNFGQTGDSESVPDPQPIGEPPAAPSGVGPNTMAAGGGAPMADNNEGADGVGSSSGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNGTSGGSTNDNTYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNEGTKTIANNLTSTIQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFEFSYNFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTQSTGGTAGTQQLLFSQAGPNNMSAQAKNWLPGPCYRQQRVSTTLSQNNNSNFAWTGATKYHLNGRDSLVNPGVAMATHKDDEERFFPSSGVLMFGKQGAGKDNVDYSSVMLTSEEEIKTTNPVATEQYGVVADNLQQQNAAPIVGAVNSQGALPGMVWQNRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPADPPTTFNQAKLASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSTNVDFAVNTEGTYSEPRPIGTRYLTRNL
[0356]Ｓｐｋ２（配列番号２）：
MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALQPGAPKPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVDQSPQEPDSSSGVGKSGKQPARKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPAAPTSLGSNTMASGGGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKKLSFKLFNIQVKEVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLNRTQGTTSGTTNQSRLLFSQAGPQSMSLQARNWLPGPCYRQQRLSKTANDNNNSNFPWTAASKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKFFPMHGNLIFGKEGTTASNAELDNVMITDEEEIRTTNPVATEQYGTVANNLQSSNTAPTTRTVNDQGALPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQIMIKNTPVPANPPTTFSPAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRPL
[0357]Ｎ末端メチオニン及びシグナル配列を含むＩｄｅＳの配列。（配列番号３、ＮＣＢＩ参照配列番号ＷＰ＿０１０９２２１６０．１）：
MRKRCYSTSAAVLAAVTLFVLSVDRGVIADSFSANQEIRYSEVTPYHVTSVWTKGVTPPANFTQGEDVFHAPYVANQGWYDITKTFNGKDDLLCGAATAGNMLHWWFDQNKDQIKRYLEEHPEKQKINFNGEQMFDVKEAIDTKNHQLDSKLFEYFKEKAFPYLSTKHLGVFPDHVIDMFINGYRLSLTNHGPTPVKEGSKDPRGGIFDAVFTRGDQSKLLTSRHDFKEKNLKEISDLIKKELTEGKALGLSHTYANVRINHVINLWGADFDSNGNLKAIYVTDSDSNASIGMKKYFVGVNSAGKVAISAKEIKEDNIGAQVLGLFTLSTGQDSWNQTN
[0358]Ｎ末端メチオニン及びシグナル配列を欠如するＩｄｅＳの成熟配列。（配列番号４、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＡＤＦ１３９４９．１）：
DSFSANQEIRYSEVTPYHVTSVWTKGVTPPANFTQGEDVFHAPYVANQGWYDITKTFNGKDDLLCGAATAGNMLHWWFDQNKDQIKRYLEEHPEKQKINFNGEQMFDVKEAIDTKNHQLDSKLFEYFKEKAFPYLSTKHLGVFPDHVIDMFINGYRLSLTNHGPTPVKEGSKDPRGGIFDAVFTRGDQSKLLTSRHDFKEKNLKEISDLIKKELTEGKALGLSHTYANVRINHVINLWGADFDSNGNLKAIYVTDSDSNASIGMKKYFVGVNSAGKVAISAKEIKEDNIGAQVLGLFTLSTGQDSWNQTN
[0359]配列番号５～１８は、国際公開第２０１６／１２８５５８号の表Ｃの例示的なＩｄｅＳポリペプチドの配列である。
[0360]配列番号５：
DSFSANQEIRYSEVTPYHVTSVWTKGVTPPANFTQGEDVFHAPYVANQGWYDITKTFNGKDDLLCGAATAGNMLHWWFDQNKDQIKRYLEEHPEKQKINFRGEQMFDVKEAIDTKNHQLDSKLFEYFKEKAFPYLSTKHLGVFPDHVIDMFINGYRLSLTNHGPTPVKEGSKDPRGGIFDAVFTRGDQSKLLTSRHDFKEKNLKEISDLIKKELTEGKALGLSHTYANVRINHVINLWGADFDSNGNLKAIYVTDSDSNASIGMKKYFVGVNSAGKVAISAKEIKEDNIGAQVLGLFTLSTGQDSWNQTN
[0361]配列番号６：
DSFSANQEIRYSEVTPYHVTSVWTKGVTPPANFTQGEDVFHAPYVANQGWYDITKTFNGKDDLLCGAATAGNMLHWWFDQNKDQIKRYLEEHPEKQKINFKGEQMFDVKEAIDTKNHQLDSKLFEYFKEKAFPYLSTKHLGVFPDHVIDMFINGYRLSLTNHGPTPVKRGSKDPRGGIFDAVFTRGNQSKLLTSRHDFKEKNLKEISDLIKKELTEGKALGLSHTYANVRINHVINLWGADFDSNGNLKAIYVTDSDSNASIGMKKYFVGVNSAGKVAISAKEIKEDNIGAQVLGLFTLSTGQDSWNQTN
[0362]配列番号７：
DSFSANQEIRYSEVTPYHVTSVWTKGVTPPANFTQGEDVFHAPYVANQGWYDITKTFNGKDDLLCGAATAGNMLHWWFDQNKDQIKRYLEEHPEKQKINFRGEQMFDVKEAIDTKNHQLDSKLFEYFKEKAFPYLSTKHLGVFPDHVIDMFINGYRLSLTNHGPTPVKKGSKDPRGGIFDAVFTRGNQSKLLTSRHDFKEKNLKEISDLIKKELTEGKALGLSHTYANVRINHVINLWGADFDSNGNLKAIYVTDSDSNASIGMKKYFVGVNKAGKVAISAKEIKEDNIGAQVLGLFTLSTGQDSWNQTN
[0363]配列番号８：
DSFSANQEIRYSEVTPYHVTSVWTKGVTPPANFTQGEDVFHAPYVANQGWYDITKTFNGKDDLLCGAATAGNMLHWWFDQNKDQIKRYLREHPEKQKINFNGEQMFDVKEAIDTKNHQLDSKLFEYFKEKAFPYLSTKHLGVFPDHVIDMFINGYRLSLTNHGPTPVKEGSKDPRGGIFDAVFTRGNQSKLLTSRHDFKEKNLKEISDLIKKELDEGKALGLSHTYANVRINHVINLWGADFDSNGNLKAIYVTDSDSNASIGMKKYFVGVNSAGKVAISAKEIKEDNIGAQVLGLFTLSTGQDSWNQTN
[0364]配列番号９：
DSFSANQEIRYSEVTPYHVTSVWTKGVTPPANFTQGEDVFHAPYVANQGWYDITKTFNGKDDLLCGAATAGNMLHWWFDQNKDQIKRYLKEHPEKQKINFNGEQMFDVKEAIRTKNHQLDSKLFEYFKEKAFPYLSTKHLGVFPDHVIDMFINGYRLSLTNHGPTPVKEGSKDPRGGIFDAVFTRGNQSKLLTSRHDFKEKNLKEISDLIKKELEEGKALGLSHTYANVRINHVINLWGADFDSNGNLKAIYVTDSDSNASIGMKKYFVGVNKAGKVAISAKEIKEDNIGAQVLGLFTLSTGQDSWNQTN
[0365]配列番号１０：
DSFSANQEIRYSEVTPYHVTSVWTKGVTPPANFTQGEDVFHAPYVANQGWYDITKTFNGKDDLLCGAATAGNMLHWWFDQNKDQIERYLEEHPEKQKINFNGEQMFDVKEAIDTKNHQLDSKLFEYFKEKAFPYLSTKHLGVFPDHVIDMFINGYRLSLTNHGPTPVKEGSKDPRGGIFDAVFTRGNQSKLLTSRHDFKEKNLKEISDLIKEELTKGKALGLSHTYANVRINHVINLWGADFDSNGNLKAIYVTDSDSNASIGMKKYFVGVNSAGKVAISAKEIKEKNIGAQVLGLFTLSTGQKSWNQTN
[0366]配列番号１１：
DSFSANQEIRYSEVTPYHVTSVWTKGVTPPANFTQGEDVFHAPYVANQGWYDITKTFNGKDDLLCGAATAGNMLHWWFDQNKDQIKRYLKEHPEKQKINFRGEQMFDVKEAIRTKNHQLDSKLFEYFKEKAFPYLSTKHLGVFPDHVIDMFINGYRLSLTNHGPTPVKEGSKDPRGGIFDAVFTRGNQSKLLTSRHDFKEKNLKEISDLIKSELENGKALGLSHTYANVRINHVINLWGADFDSNGNLKAIYVTDSDSNASIGMKKYFVGVNKAGKVAISAKEIKEDNIGAQVLGLFTLSTGQDSWNQTN
[0367]配列番号１２：
DSFSANQEIRYSEVTPYHVTSVWTKGVTPPANFTQGEDVFHAPYVANQGWYDITKTFNGKDDLLCGAATAGNMLHWWFDQNKDQIKRYLKEHPEKQKINFRGEQMFDVKEAIRTKNHQLDSKLFEYFKEKAFPYLSTKHLGVFPDHVIDMFINGYRLSLTNHGPTPVKKGSKDPRGGIFDAVFTRGNQSKLLTSRHDFKEKNLKEISDLIKKELEEGKALGLSHTYANVRINHVINLWGADFDSNGNLKAIYVTDSDSNASIGMKKYFVGVNSAGKVAISAKEIKEDNIGAQVLGLFTLSTGQDSWNQTN
[0368]配列番号１３：
DSFSANQEIRYSEVTPYHVTSVWTKGVTPPANFTQGEDVFHAPYVANQGWYDITKTFNGKDDLLCGAATAGNMLHWWFDQNKDQIERYLEEHPEKQKINFRGEQMFDVKEAIDTKNHQLDSKLFEYFKEKAFPYLSTKHLGVFPDHVIDMFINGYRLSLTNHGPTPVKKGSKDPRGGIFDAVFTRGNQSKLLTSRHDFKEKNLKEISDLIKEELTKGKALGLSHTYANVRINHVINLWGADFDSNGNLKAIYVTDSDSNASIGMKKYFVGVNSAGKVAISAKEIKEDNIGAQVLGLFTLSTGQKSWNQTN
[0369]配列番号１４：
DSFSANQEIRYSEVTPYHVTSVWTKGVTPPANFTQGEDVFHAPYVANQGWYDITKTFNGKDDLLCGAATAGNMLHWWFDQNKDQIKRYLEEHPEKQKINFNGEQMFDVKEAIDTKNHQLDSKLFEYFKEKAFPYLSTKHLGVFPDHVIDMFINGYRLSLTNHGPTPVKEGSKDPRGGIFDAVFTRGDQSKLLTSRHDFKEKNLKEISDLIKKELTEGKALGLSHTYANVRINHVINLWGADFDSNGNLKAIYVTDSDSNASIGMKKYFVGVNSAGKVAISAKEIKEDNIGAQVLGLFTLSTGQDSW
[0370]配列番号１５：
SVWTKGVTPPANFTQGEDVFHAPYVANQGWYDITKTFNGKDDLLCGAATAGNMLHWWFDQNKDQIKRYLEEHPEKQKINFNGEQMFDVKEAIDTKNHQLDSKLFEYFKEKAFPYLSTKHLGVFPDHVIDMFINGYRLSLTNHGPTPVKEGSKDPRGGIFDAVFTRGDQSKLLTSRHDFKEKNLKEISDLIKKELTEGKALGLSHTYANVRINHVINLWGADFDSNGNLKAIYVTDSDSNASIGMKKYFVGVNSAGKVAISAKEIKEDNIGAQVLGLFTLSTGQDSWNQTN
[0371]配列番号１６：
SVWTKGVTPPANFTQGEDVFHAPYVANQGWYDITKTFNGKDDLLCGAATAGNMLHWWFDQNKDQIKRYLEEHPEKQKINFKGEQMFDVKEAIDTKNHQLDSKLFEYFKEKAFPYLSTKHLGVFPDHVIDMFINGYRLSLTNHGPTPVKEGSKDPRGGIFDAVFTRGNQSKLLTSRHDFKEKNLKEISDLIKKELTEGKALGLSHTYANVRINHVINLWGADFDSNGNLKAIYVTDSDSNASIGMKKYFVGVNSAGKVAISAKEIKEDNIGAQVLGLFTLSTGQDSWNQTN
[0372]配列番号１７：
SVWTKGVTPPANFTQGEDVFHAPYVANQGWYDITKTFNGKDDLLCGAATAGNMLHWWFDQNKDQIERYLEEHPEKQKINFKGEQMFDVKKAIDTKNHQLDSKLFEYFKEKAFPYLSTKHLGVFPDHVIDMFINGYRLSLTNHGPTPVKEGSKDPRGGIFDAVFTRGNQSKLLTSRHDFKEKNLKEISDLIKEELTKGKALGLSHTYANVRINHVINLWGADFDSNGNLKAIYVTDSDSNASIGMKKYFVGVNSAGKVAISAKEIKEDNIGAQVLGLFTLSTGQKSWNQTN
[0373]配列番号１８：
DDYQRNATEAYAKEVPHQITSVWTKGVTPPANFTQGEDVFHAPYVANQGWYDITKTFNGKDDLLCGAATAGNMLHWWFDQNKDQIERYLEEHPEKQKINFKGEQMFDVKKAIDTKNHQLDSKLFEYFKEKAFPYLSTKHLGVFPDHVIDMFINGYRLSLTNHGPTPVKEGSKDPRGGIFDAVFTRGNQSKLLTSRHDFKEKNLKEISDLIKEELTKGKALGLSHTYANVRINHVINLWGADFDSNGNLKAIYVTDSDSNASIGMKKYFVGVNSAGKVAISAKEIKEDNIGAQVLGLFTLSTGQKSWNQTNGGGHHHHHH
[0374]ヒトＩｇＧ１に特異的なＳ．アガラクチアのＩｇｄＥ（配列番号１９、国際公開第２０１７１３４２７４号）：
NQNNIQETNLVEKNSEDKFIQELNRYKTEIPNFKGFNVWILGDKGYYKNLINLEEIKNIQATLKKERNEEYVFVKLNGKIAHDTTVFLMNKKHKLLKNIEEFKTITQKRLTERGKFPYDTVHSTFEIKDENFIMERLKSSGLSMGKPVDYMGVNGIPIYTKTLSIDNKFAFENNSKDSSYSSNINISEDKIKENDQKILDLIVKSGANNQNLTDEEKVIAFTKYIGEITNYDNEAYRARNVDTEYYRASDLFSVTERKLAMCVGYSVTAARAFNIMGIPSYVVSGKSPQGISHAAVRAYYNRSWHIIDITASTYWKNGNYKTTYSDFIKEYCIDGYDVYDPAKTNNRFKVKYMESNEAFENWIHNNGSKSMLFINESAALKDKKPKDDFVPVTEKEKNELIDKYKKLLSQIPENTQNPGEKNIRDYLKNEYEEILKKDNLFEHEHAEFKESLNLNESFYLQLKKEEKKPSDNLKKEEKPRENSVKERETPAENNDFVSVTEKNNLIDKYKELLSKIPENTQNPGEKNIRNYLEKEYEELLQKDKLFKHEYTEFTKSLNLNETFYSQLKEGEMKLSENPEKGETNTN
[0375]ヒトＩｇＧ１及びブタＩｇＧを両方とも分解するＳ．プソイドポルシヌスのＩｇｄＥ（配列番号２０、国際公開第２０１７１３４２７４号）：
RENENVRQLQSENKQMKAVNLQEFSEKLKGEIAENQQFHIFKLGLNNYYIGGVRINELSDLAKNHDFIMIDNRATHNKYGVPHIIIMNKDDVIVHNQEDYNKEMAELTFAGDKPIQSDSYLPQKKRIHALFEIGLDSNRRQLLNAAGLKTPENSVIELDTFKIYSHGLAVDNKYYDEYSHFNNNTNVNITKQRFTENDNLIHNLITTSTAKDQPTDRDKVKTFVMYVANHTIYDWNAANNAVSNISDVNYYLGSDLFSITERKKAMCVGFSTTAARAFNMLGIPAYVVEGKNAQGVDHATARVYYNGKWHTIDGTGFINGNRTRSTLYTESHFRSVGEDSYQLVGLNEDIPFDRNYMKIDKVYEEWAPKQKTADLLLVNKDKSLVGLDRVAYVEPVYVDKNRQDALTQIYKKLKETMESSSKKNPSSGGFSSLLGSASSDIAKLEGSSQLTQEEYDKIHRSMTSILTFFAQLDKDAAEAFEKGNDYKNYLATTKHAQ
[0376]ＮＣＢＩ参照配列番号ＷＰ０１４６２２７８０．１（配列番号２１）として入手可能なＩｄｅＺの全長配列。この配列は、Ｎ末端メチオニン及びそれに続く３３アミノ酸の分泌シグナル配列を含む。Ｎ末端メチオニン及びシグナル配列（Ｎ末端の合計３４個のアミノ酸）は、典型的には除去されて、成熟ＩｄｅＺ タンパク質が形成される。
MKTIAYPNKPHSLSAGLLTAIAIFSLASSNITYADDYQRNATEAYAKEVPHQITSVWTKGVTPLTPEQFRYNNEDVIHAPYLAHQGWYDITKAFDGKDNLLCGAATAGNMLHWWFDQNKTEIEAYLSKHPEKQKIIFNNQELFDLKAAIDTKDSQTNSQLFNYFRDKAFPNLSARQLGVMPDLVLDMFINGYYLNVFKTQSTDVNRPYQDKDKRGGIFDAVFTRGDQTTLLTARHDLKNKGLNDISTIIKQELTEGRALALSHTYANVSISHVINLWGADFNAEGNLEAIYVTDSDANASIGMKKYFVGINAHGHVAISAKKIEGENIGAQVLGLFTLSSGKDIWQKLS
[0377]全長配列のＮ末端から３４個のアミノ酸を除いたＩｄｅＺの配列（配列番号２２）：
DDYQRNATEAYAKEVPHQITSVWTKGVTPLTPEQFRYNNEDVIHAPYLAHQGWYDITKAFDGKDNLLCGAATAGNMLHWWFDQNKTEIEAYLSKHPEKQKIIFNNQELFDLKAAIDTKDSQTNSQLFNYFRDKAFPNLSARQLGVMPDLVLDMFINGYYLNVFKTQSTDVNRPYQDKDKRGGIFDAVFTRGDQTTLLTARHDLKNKGLNDISTIIKQELTEGRALALSHTYANVSISHVINLWGADFNAEGNLEAIYVTDSDANASIGMKKYFVGINAHGHVAISAKKIEGENIGAQVLGLFTLSSGKDIWQKLS
[0378]Ｎ末端メチオニン及びシグナル配列（Ｎ末端の合計３４個のアミノ酸）を除いたＩｄｅＺに基づくＮ末端部分を有するＩｄｅＳ／Ｚハイブリッドの配列（配列番号２３）：
DDYQRNATEAYAKEVPHQITSVWTKGVTPLTPEQFRYNNEDVFHAPYVANQGWYDITKAFDGKDNLLCGAATAGNMLHWWFDQNKDQIKRYLEEHPEKQKINFNGDNMFDVKKAIDTKNHQLDSKLFNYFKEKAFPGLSARRIGVFPDHVIDMFINGYRLSLTNHGPTPVKEGSKDPRGGIFDAVFTRGNQSKLLTSRHDFKNKNLNDISTIIKQELTKGKALGLSHTYANVSINHVINLWGADFNAEGNLEAIYVTDSDSNASIGMKKYFVGVNAHGHVAISAKKIEGENIGAQVLGLFTLSTGQDSWQKLS
[0379]配列番号２４～４３は、配列番号２２のＩｄｅＺに対して修飾を有するペプチドに対応する。
[0380]配列番号２４：
DDYQRNATEAYAKEVPHQITSVWTKGVTPLTPEQFRYNNEDVIHAPYLANQGWYDITKAFDGKDNLLCGAATAGNMLHWWFDQNKTEIEAYLSKHPEKQKIIFRNQELFDLKEAIRTKDSQTNSQLFEYFRDKAFPYLSARQLGVMPDLVLDMFINGYYLNVFKTQSTDVKRPYQDKDKRGGIFDAVFTRGNQTTLLTARHDLKNKGLNDISTIIKEELTKGRALALSHTYANVSISHVINLWGADFNAEGNLEAIYVTDSDANASIGMKKYFVGINKHGHVAISAKKIEGENIGAQVLGLFTLSSGKDIWQKLN
[0381]配列番号２５：
DDYQRNATEAYAKEVPHQITSVWTKGVTPLTPEQFRYNNEDVIHAPYLAHQGWYDITKTFNGKDNLLCGAATAGNMLHWWFDQNKTEIEAYLSKHPEKQKIIFNNEELFDLKAAIDTKDSQTNSQLFNYFKEKAFPNLSTRQLGVMPDLVLDMFINGYYLNVFKTQSTDVNRPYQDKDKRGGIFDAVFTRGNQTTLLTARHDFKEKGLKDISTIIKQELTEGRALALSHTYANVSISHVINLWGADFDAEGNLKAIYVTDSDANASIGMKKYFVGINAHGKVAISAKKIEGENIGAQVLGLFTLSSGKDIWQQLS
[0382]配列番号２６：
DSFSANQEIRYSEVTPYHVTSVWTKGVTPLTPEQFRYNNEDVIHAPYLAHQGWYDITKAFDGKDNLLCGAATAGNMLHWWFDQNKTEIEAYLSKHPEKQKIIFNNQELFDLKAAIDTKDSQTNSQLFNYFRDKAFPNLSARQLGVMPDLVLDMFINGYYLNVFKTQSTDVNRPYQDKDKRGGIFDAVFTRGDQTTLLTARHDLKNKGLNDISTIIKQELTEGRALALSHTYANVSISHVINLWGADFNAEGNLEAIYVTDSDANASIGMKKYFVGINAHGHVAISAKKIEGENIGAQVLGLFTLSSGKDIWQKLS
[0383]配列番号２７：
SVWTKGVTPLTPEQFRYNNEDVIHAPYLAHQGWYDITKAFDGKDNLLCGAATAGNMLHWWFDQNKTEIEAYLSKHPEKQKIIFNNQELFDLKAAIDTKDSQTNSQLFNYFRDKAFPNLSARQLGVMPDLVLDMFINGYYLNVFKTQSTDVNRPYQDKDKRGGIFDAVFTRGDQTTLLTARHDLKNKGLNDISTIIKQELTEGRALALSHTYANVSISHVINLWGADFNAEGNLEAIYVTDSDANASIGMKKYFVGINAHGHVAISAKKIEGENIGAQVLGLFTLSSGKDIWQKLS
[0384]配列番号２８：
DDYQRNATEAYAKEVPHQITSVWTKGVTPLTPEQFTQGEDVIHAPYLAHQGWYDITKAFDGKDNLLCGAATAGNMLHWWFDQNKTEIEAYLSKHPEKQKIIFNNQELFDLKAAIDTKDSQTNSQLFNYFRDKAFPNLSARQLGVMPDLVLDMFINGYYLNVFKTQSTDVNRPYQDKDKRGGIFDAVFTRGDQTTLLTARHDLKNKGLNDISTIIKQELTEGRALALSHTYANVSISHVINLWGADFNAEGNLEAIYVTDSDANASIGMKKYFVGINAHGHVAISAKKIEGENIGAQVLGLFTLSSGKDIWQKLS
[0385]配列番号２９：
DDYQRNATEAYAKEVPHQITSVWTKGVTPPEQFTQGEDVIHAPYLAHQGWYDITKAFDGKDNLLCGAATAGNMLHWWFDQNKTEIEAYLSKHPEKQKIIFNNQELFDLKAAIDTKDSQTNSQLFNYFRDKAFPNLSARQLGVMPDLVLDMFINGYYLNVFKTQSTDVNRPYQDKDKRGGIFDAVFTRGDQTTLLTARHDLKNKGLNDISTIIKQELTEGRALALSHTYANVSISHVINLWGADFNAEGNLEAIYVTDSDANASIGMKKYFVGINAHGHVAISAKKIEGENIGAQVLGLFTLSSGKDIWQKLS
[0386]配列番号３０：
DDYQRNATEAYAKEVPHQITSVWTKGVTPPEQFRYNNEDVIHAPYLAHQGWYDITKAFDGKDNLLCGAATAGNMLHWWFDQNKTEIEAYLSKHPEKQKIIFNNQELFDLKAAIDTKDSQTNSQLFNYFRDKAFPNLSARQLGVMPDLVLDMFINGYYLNVFKTQSTDVNRPYQDKDKRGGIFDAVFTRGDQTTLLTARHDLKNKGLNDISTIIKQELTEGRALALSHTYANVSISHVINLWGADFNAEGNLEAIYVTDSDANASIGMKKYFVGINAHGHVAISAKKIEGENIGAQVLGLFTLSSGKDIWQKLS
[0387]配列番号３１：
DDYQRNATEAYAKEVPHQITSVWTKGVTPPEQFTQGEDVIHAPYLAHQGWYDITKAFDGKDNLLCGAATAGNMLHWWFDQNKTEIEAYLSKHPEKQKIIINNQELFDLKAAIDTKDSQTNSQLFNYFRDKAFPNLSARQLGVMPDLVLDMFINGYYLNVFKTQSTDVNRPYQDKDKRGGIFDAVFTRGDQTTLLTARHDLKNKGLNDISTIIKQELTEGRALALSHTYANVSISHVINLWGADFNAEGNLEAIYVTDSDANASIGMKKYFVGINAHGHVAISAKKIEGENIGAQVLGLFTLSSGKDIWQKLS
[0388]配列番号３２：
DDYQRNATEAYAKEVPHQITSVWTKGVTPPEQFTQGEDVIHAPYLAHQGWYDITKAFDGKDNLLCGAATAGNMLHWWFDQNKTEIEAYLSKHPEKQKIIFRNQELFDLKAAIDTKDSQTNSQLFNYFRDKAFPNLSARQLGVMPDLVLDMFINGYYLNVFKTQSTDVNRPYQDKDKRGGIFDAVFTRGDQTTLLTARHDLKNKGLNDISTIIKQELTEGRALALSHTYANVSISHVINLWGADFNAEGNLEAIYVTDSDANASIGMKKYFVGINAHGHVAISAKKIEGENIGAQVLGLFTLSSGKDIWQKLS
[0389]配列番号３３：
DDYQRNATEAYAKEVPHQITSVWTKGVTPPEQFTQGEDVIHAPYLAHQGWYDITKAFDGKDNLLCGAATAGNMLHWWFDQNKTEIEAYLSKHPEKQKIIIRNQELFDLKAAIDTKDSQTNSQLFNYFRDKAFPNLSARQLGVMPDLVLDMFINGYYLNVFKTQSTDVNRPYQDKDKRGGIFDAVFTRGDQTTLLTARHDLKNKGLNDISTIIKQELTEGRALALSHTYANVSISHVINLWGADFNAEGNLEAIYVTDSDANASIGMKKYFVGINAHGHVAISAKKIEGENIGAQVLGLFTLSSGKDIWQKLS
[0390]配列番号３４：
DDYQRNATEAYAKEVPHQITSVWTKGVTPPEQFTQGEDVIHAPYLANQGWYDITKAFDGKDNLLCGAATAGNMLHWWFDQNKTEIEAYLSKHPEKQKIIFRNQELFDLKEAIRTKDSQTNSQLFEYFRDKAFPYLSARQLGVMPDLVLDMFINGYYLNVFKTQSTDVKRPYQDKDKRGGIFDAVFTRGNQTTLLTARHDLKNKGLNDISTIIKEELTKGRALALSHTYANVSISHVINLWGADFNAEGNLEAIYVTDSDANASIGMKKYFVGINKHGHVAISAKKIEGENIGAQVLGLFTLSSGKDIWQKLN
[0391]配列番号３５：
SVWTKGVTPPEQFTQGEDVIHAPYLAHQGWYDITKAFDGKDNLLCGAATAGNMLHWWFDQNKTEIEAYLSKHPEKQKIIFRNQELFDLKAAIDTKDSQTNSQLFNYFRDKAFPNLSARQLGVMPDLVLDMFINGYYLNVFKTQSTDVNRPYQDKDKRGGIFDAVFTRGNQTTLLTARHDLKNKGLNDISTIIKQELTEGRALALSHTYANVSISHVINLWGADFNAEGNLEAIYVTDSDANASIGMKKYFVGINAHGHVAISAKKIEGENIGAQVLGLFTLSSGKDIWQKLS
[0392]配列番号３６：
DDYQRNATEAYAKEVPHQITSVWTKGVTPPEQFTQGEDVIHAPYLAHQGWYDITKAFDGADNLLCGAATAGNMLHWWFDQNKTEIEAYLSKHPEKQKIIFRNQELFDLKAAIDTKDSQTNSQLFNYFRDKAFPNLSARQLGVMPDLVLDMFINGYYLNVFKTQSTDVNRPYQDKDKRGGIFDAVFTRGNQTTLLTARHDLKNKGLNDISTIIKQELTEGRALALSHTYANVSISHVINLWGADFNAEGNLEAIYVTDSDANASIGMKKYFVGINAHGHVAISAKKIEGENIGAQVLGLFTLSSGKDIWQKLS
[0393]配列番号３７：
SVWTKGVTPPEQFTQGEDVIHAPYLAHQGWYDITKAFDGADNLLCGAATAGNMLHWWFDQNKTEIEAYLSKHPEKQKIIFRNQELFDLKAAIDTKDSQTNSQLFNYFRDKAFPNLSARQLGVMPDLVLDMFINGYYLNVFKTQSTDVNRPYQDKDKRGGIFDAVFTRGNQTTLLTARHDLKNKGLNDISTIIKQELTEGRALALSHTYANVSISHVINLWGADFNAEGNLEAIYVTDSDANASIGMKKYFVGINAHGHVAISAKKIEGENIGAQVLGLFTLSSGKDIWQKLS
[0394]配列番号３８：
DDYQRNATEAYAKEVPHQITSVWTKGVTPPEQFTQGEDVIHAPYLAHQGWYDITKAFDGKDNLLCGAATAGNMLHWWFDQNKTEIEAYLSKHPEKQKIIFRNQELFDLKAAIDTKDSQTNSQLFNYFRDKAFPNLSARQLGVMPDLVLDMFINGYYLNVFKTQSTDVNRPYQDKDKRGGIFDAVFTRGNQTTLLTARHDLKNKGLNDISTIIKQELTEGRALALSHTYANVSISHVINLWGADFNAEGNLEAIYVTDSDANASIGMKKYFVGINAHGHVAISAKKIEGENIGAQVLGLFTLSSGKDIWQKLS
[0395]配列番号３９：
DDYQRNATEAYAKEVPHQITSVWTKGVTPLTPEQFTQGEDVFHAPYVANQGWYDITKAFDGKDNLLCGAATAGNMLHWWFDQNKDQIKRYLEEHPEKQKINFNGENMFDVKKAIDTKNHQLDSKLFNYFKEKAFPYLSAKHLGVFPDHVIDMFINGYRLSLTNHGPTPVKEGSKDPRGGIFDAVFTRGNQSKLLTSRHDFKNKNLNDISTIIKQELTKGKALGLSHTYANVRINHVINLWGADFNAEGNLEAIYVTDSDSNASIGMKKYFVGVNAHGHVAISAKKIEGENIGAQVLGLFTLSTGQDSWQKLS
[0396]配列番号４０：
DDYQRNATEAYAKEVPHQITSVWTKGVTPLTPEQFTQGEDVFHAPYVANQGWYDITKAFDGKDNLLCGAATAGNMLHWWFDQNKDQIKRYLEEHPEKQKINFRGENMFDVKEAIRTKNHQLDSKLFEYFKEKAFPYLSAKHLGVFPDHVIDMFINGYRLSLTNHGPTPVKKGSKDPRGGIFDAVFTRGNQSKLLTSRHDFKNKNLNDISTIIKSELTNGKALGLSHTYANVRINHVINLWGADFNAEGNLEAIYVTDSDSNASIGMKKYFVGVNKHGHVAISAKKIEGENIGAQVLGLFTLSTGQDSWQKLN
[0397]配列番号４１：
DDYQRNATEAYAKEVPHQITSVWTKGVTPLTPEQFTQGEDVFHAPYVANQGWYDITKTFNGKDDLLCGAATAGNMLHWWFDQNKDQIKRYLEEHPEKQKINFNGEQMFDVKEAIDTKNHQLDSKLFEYFKEKAFPYLSTKHLGVFPDHVIDMFINGYRLSLTNHGPTPVKEGSKDPRGGIFDAVFTRGNQSKLLTSRHDFKEKNLKEISDLIKQELTEGKALGLSHTYANVRINHVINLWGADFDAEGNLKAIYVTDSDSNASIGMKKYFVGVNAAGKVAISAKKIEGENIGAQVLGLFTLSTGQDSWNQTS
[0398]配列番号４２：
DDYQRNATEAYAKEVPHQITSVWTKGVTPLTPEQFTQGEDVFHAPYVANQGWYDITKTFNGKDDLLCGAATAGNMLHWWFDQNKDQIKRYLEEHPEKQKINFRGEQMFDVKEAIRTKNHQLDSKLFEYFKEKAFPYLSTKHLGVFPDHVIDMFINGYRLSLTNHGPTPVKKGSKDPRGGIFDAVFTRGNQSKLLTSRHDFKEKNLKEISDLIKEELTKGKALGLSHTYANVRINHVINLWGADFDAEGNLKAIYVTDSDSNASIGMKKYFVGVNKAGKVAISAKKIEGENIGAQVLGLFTLSTGQDSWNQTN
[0399]配列番号４３：
DDYQRNATEAYAKEVPHQITSVWTKGVTPPEQFTQGEDVIHAPYVANQGWYDITKAFDGKDNLLCGAATAGNMLHWWFDQNKDQIKRYLEEHPEKQKINFRGEQMFDVKKAIDTKNHQLDSKLFNYFKEKAFPGLSARRIGVFPDHVIDMFINGYRLSLTNHGPTPVKEGSKDPRGGIFDAVFTRGNQSKLLTSRHDFKNKNLNDISTIIKQELTKGKALGLSHTYANVSINHVINLWGADFNAEGNLEAIYVTDSDSNASIGMKKYFVGVNAHGHVAISAKKIEGENIGAQVLGLFTLSTGQDSWQKLS
[0400]ストレプトコッカス・ピオゲネスに由来するエンドグリコシダーゼＥｎｄｏＳ４９のタンパク質配列（配列番号４４、米国特許第９，４９３，７５２号）：
MDKHLLVKRTLGCVCAATLMGAALATHHDSLNTVKAEEKTVQTGKTDQQVGAKLVQEIREGKRGPLYAGYFRTWHDRASTGIDGKQQHPENTMAEVPKEVDILFVFHDHTASDSPFWSELKDSYVHKLHQQGTALVQTIGVNELNGRTGLSKDYPDTPEGNKALAAAIVKAFVTDRGVDGLDIDIEHEFTNKRTPEEDARALNVFKEIAQLIGKNGSDKSKLLIMDTTLSVENNPIFKGIAEDLDYLLRQYYGSQGGEAEVDTINSDWNQYQNYIDASQFMIGFSFFEESASKGNLWFDVNEYDPNNPEKGKDIEGTRAKKYAEWQPSTGGLKAGIFSYAIDRDGVAHVPSTYKNRTSTNLQRHEVDNISHTDYTVSRKLKTLMTEDKRYDVIDQKDIPDPALREQIIQQVGQYKGDLERYNKTLVLTGDKIQNLKGLEKLSKLQKLELRQLSNVKEITPELLPESMKKDAELVMVGMTGLEKLNLSGLNRQTLDGIDVNSITHLTSFDISHNSLDLSEKSEDRKLLMTLMEQVSNHQKITVKNTAFENQKPKGYYPQTYDTKEG
HYDVDNAEHDILTDFVFGTVTKRNTFIGDEEAFAIYKEGAVDGRQYVSKDYTYEAFRKDYKGYKVHLTASNLGETVTSKVTATTDETYLVDVSDGEKVVHHMKLNIGSGAIMMENLAKGAKVIGTSGDFEQAKKIFDGEKSDRFFTWGQTNWIAFDLGEINLAKEWRLFNAETNTEIKTDSSLNVAKGRLQILKDTTIDLEKMDIKNRKEYLSNDENWTDVAQMDDAKAIFNSKLSNVLSRYWRFCVDGGASSYYPQYTELQILGQRLSNDVANTLKD
[0401]Ｓ．ピオゲネスに由来する成熟エンドグリコシダーゼＳ（ＥｎｄｏＳ）のタンパク質配列。（配列番号４５、１５／３２８，８７９、米国特許第８，８８９，１２８号、及び第９，７０７，２７９号）：
EEKTVQVQKGLPSIDSLHYLSENSKKEFKEELSKAGQESQKVKEILAKAQQADKQAQELAKMKIPEKIPMKPLHGPLYGGYFRTWHDKTSDPTEKDKVNSMGELPKEVDLAFIFHDWTKDYSLFWKELATKHVPKLNKQGTRVIRTIPWRFLAGGDNSGIAEDTSKYPNTPEGNKALAKAIVDEYVYKYNLDGLDVDVEHDSIPKVDKKEDTAGVERSIQVFEEIGKLIGPKGVDKSRLFIMDSTYMADKNPLIERGAPYINLLLVQVYGSQGEKGGWEPVSNRPEKTMEERWQGYSKYIRPEQYMIGFSFYEENAQEGNLWYDINSRKDEDKANGINTDITGTRAERYARWQPKTGGVKGGIFSYAIDRDGVAHQPKKYAKQKEFKDATDNIFHSDYSVSKALKTVMLKDKSYDLIDEKDFPDKALREAVMAQVGTRKGDLERFNGTLRLDNPAIQSLEGLNKFKKLAQLDLIGLSRITKLDRSVLPANMKPGKDTLETVLETYKKDNKEEPATIPPVSLKVSGLTGLKELDLSGFDRETLAGLDAATLTSLEKVDISGNKLDLAPGTENRQIFDTMLSTISNHVGSNEQTVKFDKQKPTGHYPDTYGKTSLRLPVANEKVDLQSQLLFGTVTNQGTLINSEADYKAYQNHKIAGRSFVDSNYHYNNFKVSYENYTVKVTDSTLGTTTDKTLATDKEETYKVDFFSPADKTKAVHTAKVIVGDEKTMMVNLAEGATVIGGSADPVNARKVFDGQLGSETDNISLGWDSKQSIIFKLKEDGLIKHWRFFNDSARNPETTNKPIQEASLQIFNIKDYNLDNLLENPNKFDDEKYWITVDTYSAQGERATAFSNTLNNITSKYWRVVFDTKGDRYSSPVVPELQILGYPLPNADTIMKTVTTAKELSQQKDKFSQKMLDELKIKEMALETSLNSKIFDVTAINANAGVLKDCIEKRQLLKK
[0402]ストレプトコッカス・ピオゲネスに由来するエンドグリコシダーゼＥｎｄｏＳの分泌シグナルを含む全長配列。（配列番号４６、ＡＡＫ００８５０．１）：
MDKHLLVKRTLGCVCAATLMGAALATHHDSLNTVKAEEKTVQVQKGLPSIDSLHYLSENSKKEFKEELSKAGQESQKVKEILAKAQQADKQAQELAKMKIPEKIPMKPLHGPLYGGYFRTWHDKTSDPTEKDKVNSMGELPKEVDLAFIFHDWTKDYSLFWKELATKHVPKLNKQGTRVIRTIPWRFLAGGDNSGIAEDTSKYPNTPEGNKALAKAIVDEYVYKYNLDGLDVDVEHDSIPKVDKKEDTAGVERSIQVFEEIGKLIGPKGVDKSRLFIMDSTYMADKNPLIERGAPYINLLLVQVYGSQGEKGGWEPVSNRPEKTMEERWQGYSKYIRPEQYMIGFSFYEENAQEGNLWYDINSRKDEDKANGINTDITGTRAERYARWQPKTGGVKGGIFSYAIDRDGVAHQPKKYAKQKEFKDATDNIFHSDYSVSKALKTVMLKDKSYDLIDEKDFPDKALREAVMAQVGTRKGDLERFNGTLRLDNPAIQSLEGLNKFKKLAQLDLIGLSRITKLDRSVLPANMKPGKDTLETVLETYKKDNKEEPATIPPVSLKVSGLTGLKELDLSGFDRETLAGLDAATLTSLEKVDISGNKLDLAPGTENRQIFDTMLSTISNHVGSNEQTVKFDKQKPTGHYPDTYGKTSLRLPVANEKVDLQSQLLFGTVTNQGTLINSEADYKAYQNHKIAGRSFVDSNYHYNNFKVSYENYTVKVTDSTLGTTTDKTLATDKEETYKVDFFSPADKTKAVHTAKVIVGDEKTMMVNLAEGATVIGGSADPVNARKVFDGQLGSETDNISLGWDSKQSIIFKLKEDGLIKHWRFFNDSARNPETTNKPIQEASLQIFNIKDYNLDNLLENPNKFDDEKYWITVDTYSAQGERATAFSNTLNNITSKYWRVVFDTKGDRYSSPVVPELQILGYPLPNADTIMKTVTTAKELSQQKDKFSQKMLDELKIKEMALETSLNSKIFDVTAINANAGVLKDCIEKRQLLKK
[0403]シグナル配列を含む、Ｓ．ピオゲネスＡＰ１から単離されたＥｎｄｏＳのタンパク質配列。（配列番号４７、米国特許第８，８８９，１２８号及び第９，７０７，２７９号）：
MDKHLLVKRTLGCVCAATLMGAALATHHDSLNTVKAEEKTVQVQKGLPSIDSLHYLSENSKKEFKEELSKAGQESQKVKEILAKAQQADKQAQELAKMKIPEKIPMKPLHGPLYGGYFRTWHDKTSDPTEKDKVNSMGELPKEVDLAFIFHDWTKDYSLFWKELATKHVPKLNKQGTRVIRTIPWRFLAGGDNSGIAEDTSKYPNTPEGNKALAKAIVDEYVYKYNLDGLDVDVEHDSIPKVDKKEDTAGVERSIQVFEEIGKLIGPKGVDKSRLFIMDSTYMADKNPLIERGAPYINLLLVQVYGSQGEKGGWEPVSNRPEKTMEERWQGYSKYIRPEQYMIGFSFYEENAQEGNLWYDINSRKDEDKANGINTDITGTRAERYARWQPKTGGVKGGIFSYAIDRDGVAHQPKKYAKQKEFKDATDNIFHSDYSVSKALKTVMLKDKSYDLIDEKDFPDKALREAVMAQVGTRKGDLERFNGTLRLDNPAIQSLEGLNKFKKLAQLDLIGLSRITKLDRSVLPANMKPGKDTLETVLETYKKDNKEEPATIPPVSLKVSGLTGLKELDLSGFDRETLAGLDAATLTSLEKVDISGNKLDLAPGTENRQIFDTMLSTISNHVGSNEQTVKFDKQKPTGHYPDTYGKTSLRLPVANEKVDLQSQLLFGTVTNQGTLINSEADYKAYQNHKIAGRSFVDSNYHYNNFKVSYENYTVKVTDSTLGTTTDKTLATDKEETYKVDFFSPADKTKAVHTAKVIVGDEKTMMVNLAEGATVIGGSADPVNARKVFDGQLGSETDNISLGWDSKQSIIFKLKEDGLIKHWRFFNDSARNPETTNKPIQEASLQIFNIKDYNLDNLLENPNKFDDEKYWITVDTYSAQGERATAFSNTLNNITSKYWRVVFDTKGDRYSSPVVPELQILGYPLPNADTIMKTVTTAKELSQQKDKFSQKMLDELKIKEMALETSLNSKIFDVTAINANAGVLKDCIEKRQLLKK
[0404]Ｎ末端メチオニンが付加されたＩｄｅＳの成熟配列（配列番号４８）：
MDSFSANQEIRYSEVTPYHVTSVWTKGVTPPANFTQGEDVFHAPYVANQGWYDITKTFNGKDDLLCGAATAGNMLHWWFDQNKDQIKRYLEEHPEKQKINFNGEQMFDVKEAIDTKNHQLDSKLFEYFKEKAFPYLSTKHLGVFPDHVIDMFINGYRLSLTNHGPTPVKEGSKDPRGGIFDAVFTRGDQSKLLTSRHDFKEKNLKEISDLIKKELTEGKALGLSHTYANVRINHVINLWGADFDSNGNLKAIYVTDSDSNASIGMKKYFVGVNSAGKVAISAKEIKEDNIGAQVLGLFTLSTGQDSWNQTN
実施例１９
Figure 2023511062000011
Figure 2023511062000012

Claims (89)

  1. 対象における遺伝子療法治療の有効性を増強する方法であって、
    （ａ）免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）と新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）との相互作用を低減させる作用剤を対象に投与するステップ；及び
    （ｂ）療法用異種性ポリヌクレオチドを含む組換えウイルスベクターを前記対象に投与するステップ
    を含む方法。
  2. （ａ）前記対象が、タンパク質の機能若しくは活性の喪失により引き起こされる疾患の治療を必要としており、前記異種性ポリヌクレオチドが、前記タンパク質の機能若しくは活性を提供若しくは補完するポリペプチド若しくはペプチドをコードしているか、又は
    （ｂ）前記対象が、タンパク質の機能、活性、若しくは発現の獲得により引き起こされる疾患の治療を必要としており、前記異種性ポリヌクレオチドが、前記タンパク質の前記機能、活性、若しくは発現の獲得の発現を阻害、減少、若しくは低減する核酸へと転写される、
    請求項１に記載の方法。
  3. 前記対象において、ＦｃＲｎ媒介性ＩｇＧリサイクリングが低減される、請求項１又は２に記載の方法。
  4. 前記対象において、ＩｇＧクリアランスが増強される、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
  5. ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる前記作用剤が、抗ＦｃＲｎ抗体、ＦｃＲｎ結合性アフィボディ、ＩｇＧ分解を増強する抗体（ＡＢＤＥＧ）、ＦｃＲｎ結合性ペプチド（ＦｃＢＰ）、及びＦｃＲｎ結合性小分子からなる群から選択される、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
  6. ステップ（ａ）がステップ（ｂ）の前に実施される、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
  7. ステップ（ｂ）がステップ（ａ）の前に実施される、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
  8. ステップ（ａ）及びステップ（ｂ）がほぼ同時に実施される、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
  9. ステップ（ａ）が、ステップ（ｂ）の前又は後で２回又はそれよりも多く実施される、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
  10. ステップ（ｂ）が、ステップ（ａ）の前又は後の約９０日以内に実施される、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
  11. ステップ（ｂ）が、ステップ（ａ）の前又は後の約６０日以内に実施される、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
  12. ステップ（ｂ）が、ステップ（ａ）の前又は後の約４５日以内に実施される、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
  13. ステップ（ｂ）が、ステップ（ａ）の前又は後の約３０日以内に実施される、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
  14. ステップ（ｂ）が、ステップ（ａ）の前又は後の約２１日以内に実施される、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
  15. ステップ（ｂ）が、ステップ（ａ）の前又は後の約１４日以内に実施される、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
  16. ステップ（ｂ）が、ステップ（ａ）の前又は後の約７日以内に実施される、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
  17. ステップ（ｂ）が、ステップ（ａ）の前又は後の約７２時間以内に実施される、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
  18. ステップ（ｂ）が、ステップ（ａ）の前又は後の約４８時間以内に実施される、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
  19. ステップ（ｂ）が、ステップ（ａ）の前又は後の約２４時間以内に実施される、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
  20. ステップ（ｂ）が、ステップ（ａ）の前又は後の約１２時間以内に実施される、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
  21. ステップ（ｂ）が、ステップ（ａ）の前又は後の約６時間以内に実施される、請求項１～９のいずれか一項に記載の方法。
  22. 前記組換えウイルスベクターに結合する抗体、及び／又は前記異種性ポリヌクレオチドによりコードされる前記ポリペプチド若しくはペプチドに結合する抗体、及び／又は前記異種性ポリヌクレオチドに結合する抗体のエフェクター機能を、分解若しくは消化し及び／又は阻害若しくは低減するのに有効な量のプロテアーゼ又はグリコシダーゼを前記対象に投与するステップをさらに含む、請求項１～２１のいずれか一項に記載の方法。
  23. 前記プロテアーゼ又はグリコシダーゼが、ステップ（ａ）の前、後、又はほぼ同時に投与される、請求項２２に記載の方法。
  24. 前記プロテアーゼ又はグリコシダーゼが、ステップ（ｂ）の前、後、又はほぼ同時に投与される、請求項２２に記載の方法。
  25. 前記プロテアーゼ又はグリコシダーゼが、ステップ（ａ）の前、後、又はほぼ同時に、２回又はそれよりも多く投与される、請求項２２に記載の方法。
  26. 前記プロテアーゼ又はグリコシダーゼが、ステップ（ｂ）の前、後、又はほぼ同時に、２回又はそれよりも多く投与される、請求項２２に記載の方法。
  27. 前記プロテアーゼ又はグリコシダーゼが、ステップ（ａ）又はステップ（ｂ）の前又は後の約９０日以内に投与される、請求項２２～２６のいずれか一項に記載の方法。
  28. 前記プロテアーゼ又はグリコシダーゼが、ステップ（ａ）又はステップ（ｂ）の前又は後の約６０日以内に投与される、請求項２２～２６のいずれか一項に記載の方法。
  29. 前記プロテアーゼ又はグリコシダーゼが、ステップ（ａ）又はステップ（ｂ）の前又は後の約４５日以内に投与される、請求項２２～２６のいずれか一項に記載の方法。
  30. 前記プロテアーゼ又はグリコシダーゼが、ステップ（ａ）又はステップ（ｂ）の前又は後の約３０日以内に投与される、請求項２２～２６のいずれか一項に記載の方法。
  31. 前記プロテアーゼ又はグリコシダーゼが、ステップ（ａ）又はステップ（ｂ）の前又は後の約２１日以内に投与される、請求項２２～２６のいずれか一項に記載の方法。
  32. 前記プロテアーゼ又はグリコシダーゼが、ステップ（ａ）又はステップ（ｂ）の前又は後の約１４日以内に投与される、請求項２２～２６のいずれか一項に記載の方法。
  33. 前記プロテアーゼ又はグリコシダーゼが、ステップ（ａ）又はステップ（ｂ）の前又は後の約７日以内に投与される、請求項２２～２６のいずれか一項に記載の方法。
  34. 前記プロテアーゼ又はグリコシダーゼが、ステップ（ａ）又はステップ（ｂ）の前又は後の約７２時間以内に投与される、請求項２２～２６のいずれか一項に記載の方法。
  35. 前記プロテアーゼ又はグリコシダーゼが、ステップ（ａ）又はステップ（ｂ）の前又は後の約４８時間以内に投与される、請求項２２～２６のいずれか一項に記載の方法。
  36. 前記プロテアーゼ又はグリコシダーゼが、ステップ（ａ）又はステップ（ｂ）の前又は後の約２４時間以内に投与される、請求項２２～２６のいずれか一項に記載の方法。
  37. 前記プロテアーゼ又はグリコシダーゼが、ステップ（ａ）又はステップ（ｂ）の前又は後の約１２時間以内に投与される、請求項２２～２６のいずれか一項に記載の方法。
  38. 前記プロテアーゼ又はグリコシダーゼが、ステップ（ａ）又はステップ（ｂ）の前又は後の約６時間以内に投与される、請求項２２～２６のいずれか一項に記載の方法。
  39. 前記プロテアーゼが、システインプロテアーゼ又はチオールプロテアーゼを含む、請求項２２～３８のいずれか一項に記載の方法。
  40. 前記プロテアーゼが、ストレプトコッカス・ピオゲネス、ストレプトコッカス・エクイ、又はマイコプラズマ・カニスに由来するプロテアーゼを含む、請求項２２～３８のいずれか一項に記載の方法。
  41. 前記プロテアーゼが、配列番号３～１８、２３、又は４８のいずれかに示されているＩｄｅＳ又はその修飾バリアントを含む、請求項２２～３８のいずれか一項に記載の方法。
  42. 前記グリコシダーゼが、エンドグリコシダーゼを含む、請求項２２～３８のいずれか一項に記載の方法。
  43. 前記エンドグリコシダーゼが、配列番号４４～４７のいずれかに示されている配列を含む、請求項４２に記載の方法。
  44. 前記プロテアーゼ又はグリコシダーゼが、ヒト抗体のエフェクター機能を分解若しくは消化し及び／又は阻害若しくは低減する、請求項２２～４３のいずれか一項の方法。
  45. 前記ウイルスベクターが、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、又はアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む、請求項１～４４のいずれか一項に記載の方法。
  46. 前記レンチウイルスベクターが、前記抗体又はＩｇＧが結合するエンベロープタンパク質を含む、請求項４５に記載の方法。
  47. 前記ＡＡＶベクターが、前記抗体又はＩｇＧが結合するカプシドタンパク質を含む、請求項４５に記載の方法。
  48. 前記ＡＡＶベクターが、前記抗体又はＩｇＧが結合するＶＰ１、ＶＰ２、及び／又はＶＰ３カプシドタンパク質を含む、請求項４５に記載の方法。
  49. 前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ－２ｉ８、Ｒｈ１０、Ｒｈ７４、配列番号１、及び配列番号２のＶＰ１、ＶＰ２、及び／又はＶＰ３カプシドタンパク質からなる群から選択されるＶＰ１、ＶＰ２、及び／又はＶＰ３カプシドタンパク質と６０％又はそれよりも高い配列同一性を有するＶＰ１、ＶＰ２、及び／又はＶＰ３カプシドタンパク質を含む、請求項４５～４８のいずれか一項に記載の方法。
  50. 前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ－２ｉ８、Ｒｈ１０、Ｒｈ７４、配列番号１、及び配列番号２のＶＰ１、ＶＰ２、及び／又はＶＰ３カプシドタンパク質からなる群から選択されるＶＰ１、ＶＰ２、及び／又はＶＰ３カプシドタンパク質と１００％配列同一性を有するＶＰ１、ＶＰ２、及び／又はＶＰ３カプシドタンパク質を含む、請求項４５～４８のいずれか一項に記載の方法。
  51. 前記対象が、前記ウイルスベクターに結合する抗体又はＩｇＧを有する、請求項１～５０のいずれか一項に記載の方法。
  52. 前記ウイルスベクターに結合する抗体又はＩｇＧが、前記対象に存在しない、請求項１～５０のいずれか一項に記載の方法。
  53. 前記対象が、前記異種性ポリヌクレオチドによりコードされている前記ポリペプチド又はペプチドに結合する抗体又はＩｇＧを有する、請求項１～５２のいずれか一項に記載の方法。
  54. 前記抗体が、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及び／又はＩｇＥを含む、請求項２２～５３のいずれか一項に記載の方法。
  55. ステップ（ａ）を実施する前に、ステップ（ａ）を実施した後であるがステップ（ｂ）を実施する前に、並びに／又はステップ（ａ）及び（ｂ）を実施した後に、前記対象に存在するウイルスベクター結合性抗体又はＩｇＧの存在を決定するステップ、それらの量又はエフェクター機能を定量化するステップをさらに含む、請求項１～５４のいずれか一項に記載の方法。
  56. ステップ（ａ）を実施する前に、ステップ（ａ）を実施した後であるがステップ（ｂ）を実施する前に、並びに／又はステップ（ａ）及び（ｂ）を実施した後に、試料中に存在するウイルスベクター結合性抗体又はＩｇＧの存在、量、又はエフェクター機能について、前記対象に由来する生物学的試料を分析するステップをさらに含む、請求項１～５４のいずれか一項に記載の方法。
  57. 前記決定及び／又は分析ステップが、前記プロテアーゼ又はグリコシダーゼの投与前及び／又は投与後に行われる、請求項５５又は５６に記載の方法。
  58. 前記対象に由来する前記生物学的試料が、血液産物である、請求項５６又は５７に記載の方法。
  59. 前記ウイルスベクター結合性抗体又はＩｇＧの２０～５０％、５０～７５％、７５～９０％、９０～９５％、又は９５％、又はそれよりも大きな低減に結び付く、請求項１～５８のいずれか一項に記載の方法。
  60. 前記対象に由来する前記生物学的試料又は血液産物中に存在する前記ウイルスベクター結合性抗体又はＩｇＧが、約１：１００，０００未満であり、１００，０００部の緩衝液で希釈された１部の前記生物学的試料又は血液産物が、５０％ウイルスベクター中和をもたらす、請求項５６～５８のいずれか一項に記載の方法。
  61. 前記対象に由来する前記生物学的試料又は血液産物中に存在する前記ウイルスベクター結合性抗体又はＩｇＧが、約１：５０，０００未満であり、５０，０００部の緩衝液で希釈された１部の前記生物学的試料又は血液産物が、５０％ウイルスベクター中和をもたらす、請求項５６～５８のいずれか一項に記載の方法。
  62. 前記対象に由来する前記生物学的試料又は血液産物中に存在する前記ウイルスベクター結合性抗体又はＩｇＧが、約１：１０，０００未満であり、１０，０００部の緩衝液で希釈された１部の前記生物学的試料又は血液産物が、５０％ウイルスベクター中和をもたらす、請求項５６～５８のいずれか一項に記載の方法。
  63. 前記対象に由来する前記生物学的試料又は血液産物中に存在する前記ウイルスベクター結合性抗体又はＩｇＧが、約１：１，０００未満であり、１，０００部の緩衝液で希釈された１部の前記生物学的試料又は血液産物が、５０％ウイルスベクター中和をもたらす、請求項５６～５８のいずれか一項に記載の方法。
  64. 前記対象に由来する前記生物学的試料又は血液産物中に存在する前記ウイルスベクター結合性抗体又はＩｇＧが、約１：１００未満であり、１００部の緩衝液で希釈された１部の前記生物学的試料又は血液産物が、５０％ウイルスベクター中和をもたらす、請求項５６～５８のいずれか一項に記載の方法。
  65. 前記対象に由来する前記生物学的試料又は血液産物中に存在する前記ウイルスベクター結合性抗体又はＩｇＧが、約１：１０未満であり、１０部の緩衝液で希釈された１部の前記生物学的試料又は血液産物が、５０％ウイルスベクター中和をもたらす、請求項５６～５８のいずれか一項に記載の方法。
  66. 前記対象に由来する前記生物学的試料又は血液産物中に存在する前記ウイルスベクター結合性抗体又はＩｇＧが、約１：５未満であり、５部の緩衝液で希釈された１部の前記生物学的試料又は血液産物が、５０％ウイルスベクター中和をもたらす、請求項５６～５８のいずれか一項に記載の方法。
  67. 前記対象に由来する前記生物学的試料又は血液産物中に存在する前記ウイルスベクター結合性抗体又はＩｇＧの比が、約１：４未満であり、４部の緩衝液で希釈された１部の前記生物学的試料又は血液産物が、５０％ウイルスベクター中和をもたらす、請求項５６～５８のいずれか一項に記載の方法。
  68. 前記対象に由来する前記生物学的試料又は血液産物中に存在する前記ウイルスベクター結合性抗体又はＩｇＧの比が、約１：３未満であり、３部の緩衝液で希釈された１部の前記生物学的試料又は血液産物が、５０％ウイルスベクター中和をもたらす、請求項５６～５８のいずれか一項に記載の方法。
  69. 前記対象に由来する前記生物学的試料又は血液産物中に存在する前記ウイルスベクター結合性抗体又はＩｇＧの比が、約１：２未満であり、２部の緩衝液で希釈された１部の前記生物学的試料又は血液産物が、５０％ウイルスベクター中和をもたらす、請求項１～５８のいずれか一項に記載の方法。
  70. 前記対象に由来する前記生物学的試料又は血液産物中に存在する前記ウイルスベクター結合性抗体又はＩｇＧの比が、約１：１未満であり、１部の緩衝液で希釈された１部の前記生物学的試料又は血液産物が、５０％ウイルスベクター中和をもたらす、請求項１～５８のいずれか一項に記載の方法。
  71. ステップ（ａ）を実施した後だがステップ（ｂ）を実施する前に、並びに／又はステップ（ａ）及び（ｂ）を実施した後で、前記異種性ポリヌクレオチドによりコードされているポリペプチド若しくはペプチドに結合する抗体若しくはＩｇＧの存在を決定するか又はその量を定量化するステップをさらに含む、請求項１～７０のいずれか一項に記載の方法。
  72. ステップ（ａ）を実施した後だがステップ（ｂ）を実施する前に、並びに／又はステップ（ａ）及び（ｂ）を実施した後で、前記異種性ポリヌクレオチド若しくは核酸に結合する抗体若しくはＩｇＧの存在を決定するか又はその量を定量化するステップをさらに含む、請求項１～７０のいずれか一項に記載の方法。
  73. 前記対象が、肺疾患（例えば、嚢胞性線維症）、出血障害（例えば、阻害因子を有する又は有していない血友病Ａ又は血友病Ｂ）、サラセミア、血液障害（例えば、貧血）、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、てんかん、リソソーム蓄積症（例えば、アスパルチルグルコサミン尿症、バッテン病、遅発型乳児性神経セロイドリポフスチン症２型（ＣＬＮ２）、シスチン症、ファブリ病、ゴーシェ病Ｉ、ＩＩ、及びＩＩＩ型、糖原病ＩＩ（ポンペ病）、ＧＭ２ガングリオシドーシスＩ型（テイサックス病）、ＧＭ２ガングリオシドーシスＩＩ型（サンドホフ病）、ムコリピドーシスＩ型（シアリドーシスＩ及びＩＩ型）、ＩＩ型（Ｉ細胞疾患）、ＩＩＩ型（擬性ハーラー病）、及びＩＶ型、ムコ多糖蓄積症（ハーラー病及び変異型、ハンター病、サンフィリポ症Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ型、モルキオ症Ａ及びＢ型、マロトー－ラミー症、並びにスライ病）、ニーマン－ピック病Ａ／Ｂ型、Ｃ１型、及びＣ２型、並びにシントラー病Ｉ型及びＩＩ型）、遺伝性血管浮腫（ＨＡＥ）、銅又は鉄蓄積障害（例えば、ウィルソン病又はメンケス病）、リソソーム酸リパーゼ欠損症、神経障害又は神経変性障害、がん、１型又は２型糖尿病、アデノシンデアミナーゼ欠損症、代謝欠陥（例えば、糖原病）、実質臓器（例えば、脳、肝臓、腎臓、心臓）の疾患、又は感染性ウイルス性（例えば、Ｂ型及びＣ型肝炎、ＨＩＶなど）、細菌性、若しくは真菌性疾患を有する、請求項１～７２のいずれか一項に記載の方法。
  74. 前記対象が、血液凝固障害を有する、請求項１～７２のいずれか一項に記載の方法。
  75. 前記対象が、血友病Ａ、阻害性抗体を有する血友病Ａ、血友病Ｂ、阻害性抗体を有する血友病Ｂ、いずれかの凝固因子：ＶＩＩ、ＶＩＩＩ、ＩＸ、Ｘ、ＸＩ、Ｖ、ＸＩＩ、ＩＩ、フォンビルブランド因子の欠損、若しくは混合ＦＶ／ＦＶＩＩＩ欠損症、サラセミア、ビタミンＫエポキシド還元酵素Ｃ１欠損症、又はガンマ－カルボキシラーゼ欠損症を有する、請求項１～７２のいずれか一項に記載の方法。
  76. 前記対象が、貧血、外傷に伴う出血、傷害、血栓症、血小板減少症、脳卒中、凝血異常、播種性血管内凝固（ＤＩＣ）；ヘパリン、低分子量ヘパリン、五糖、ワルファリン、小分子抗血栓剤（つまり、ＦＸａ阻害剤）に関連付けられる過剰抗凝血、又はベルナルド－スーリエ症候群、グランツマン血栓症、若しくは貯蔵プール欠損症などの血小板障害を有する、請求項１～７２のいずれか一項に記載の方法。
  77. 前記異種性ポリヌクレオチドは、インスリン、グルカゴン、成長ホルモン（ＧＨ）、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、成長ホルモン放出因子（ＧＲＦ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、アンジオポエチン、アンジオスタチン、顆粒球コロニー刺激因子（ＧＣＳＦ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、酸性線維芽細胞増殖因子（ａＦＧＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、トランスフォーミング増殖因子α（ＴＧＦα）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、インスリン増殖因子Ｉ及びＩＩ（ＩＧＦ－Ｉ及びＩＧＦ－ＩＩ）、ＴＧＦβ、アクチビン、インヒビン、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロフィンＮＴ－３及びＮＴ４／５、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、ニュールツリン、アグリン、ネトリン－１及びネトリン－２、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、エフリン、ノギン、ソニックヘッジホッグ、並びにチロシンヒドロキシラーゼからなる群から選択されるタンパク質をコードしている、請求項１～７２のいずれか一項に記載の方法。
  78. 前記異種性ポリヌクレオチドが、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、インターロイキン（ＩＬ１～ＩＬ－３６）、単球走化性タンパク質、白血病抑制因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、Ｆａｓリガンド、腫瘍壊死因子α及びβ、インターフェロンα、β、及びγ、幹細胞因子、ｆｌｋ－２／ｆｌｔ３リガンド、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥ、キメラ免疫グロブリン、ヒト化抗体、単鎖抗体、Ｔ細胞受容体、キメラＴ細胞受容体、単鎖Ｔ細胞受容体、クラスＩ及びクラスＩＩ ＭＨＣ分子からなる群から選択されるタンパク質をコードしている、請求項１～７２のいずれか一項に記載の方法。
  79. 前記異種性ポリヌクレオチドが、ＣＦＴＲ（嚢胞性線維症膜貫通型調節因子タンパク質）、血液凝固（凝固）因子（第ＸＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第ＶＩＩＩ因子、第Ｘ因子、第ＶＩＩ因子、第ＶＩＩａ因子、プロテインＣなど）、機能獲得型血液凝固因子、抗体、網膜色素上皮特異的６５ｋＤａタンパク質（ＲＰＥ６５）、エリスロポエチン、ＬＤＬ受容体、リポタンパク質リパーゼ、オルニチントランスカルバミラーゼ、β－グロビン、α－グロビン、スペクトリン、α－アンチトリプシン、アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）、金属輸送体（ＡＴＰ７Ａ又はＡＴＰ７）、スルファミダーゼ、リソソーム蓄積症に関与する酵素（ＡＲＳＡ）、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ、β－２５グルコセレブロシダーゼ、スフィンゴミエリナーゼ、リソソームヘキソサミニダーゼ、分岐鎖ケト酸デヒドロゲナーゼ、ホルモン、成長因子、インスリン様増殖因子１又は２、血小板由来増殖因子、上皮増殖因子、神経成長因子、神経栄養因子－３及び－４、脳由来神経栄養因子、グリア由来増殖因子、トランスフォーミング増殖因子α及びβ、サイトカイン、α－インターフェロン、β－インターフェロン、インターフェロン－γ、インターロイキン－２、インターロイキン－４、インターロイキン１２、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、リンホトキシン、自殺遺伝子産物、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ、シトシンデアミナーゼ、ジフテリア毒素、シトクロムＰ４５０、デオキシシチジンキナーゼ、腫瘍壊死因子、薬剤耐性タンパク質、腫瘍抑制タンパク質（例えば、ｐ５３、Ｒｂ、Ｗｔ－１、ＮＦ１、フォンヒッペル－リンダウ（ＶＨＬ）、腺腫性結腸ポリポーシス（ＡＰＣ））、免疫調節特性を有するペプチド、免疫寛容原性又は免疫原性ペプチド又はタンパク質Ｔレジトープ又はｈＣＤＲ１、インスリン、グルコキナーゼ、グアニル酸シクラーゼ２Ｄ（ＬＣＡ－ＧＵＣＹ２Ｄ）、Ｒａｂエスコートタンパク質１（コロイデレミア）、ＬＣＡ５（ＬＣＡ－レーバーシリン）、オルニチンケト酸アミノトランスフェラーゼ（脳回転状萎縮症）、レチノスキシン１（Ｘ連鎖網膜分離症）、ＵＳＨ１Ｃ（アッシャー症候群１Ｃ）、Ｘ連鎖網膜色素変性症ＧＴＰａｓｅ（ＸＬＲＰ）、ＭＥＲＴＫ（ＲＰのＡＲ形態：網膜色素変性症）、ＤＦＮＢ１（コネキシン２６ 難聴）、ＡＣＨＭ２、３、及び４（色覚異常）、ＰＫＤ－１又はＰＫＤ－２（多発性嚢胞腎）、ＴＰＰ１、ＣＬＮ２、スルファターゼ、Ｎ－アセチルグルコサミン－１－リン酸トランスフェラーゼ、カテプシンＡ、ＧＭ２－ＡＰ、ＮＰＣ１、ＶＰＣ２、スフィンゴ脂質活性化タンパク質、ゲノム編集のための１つ又は複数のジンクフィンガーヌクレアーゼ、並びにゲノム編集の修復鋳型として使用される１つ又は複数のドナー配列をコードしている、請求項１～７２のいずれか一項に記載の方法。
  80. 前記異種性ポリヌクレオチドが、阻害性核酸をコードしている、請求項１～７２のいずれか一項に記載の方法。
  81. 前記阻害性核酸が、ｓｉＲＮＡ、アンチセンス分子、ｍｉＲＮＡ、ＲＮＡｉ、リボザイム、及びｓｈＲＮＡからなる群から選択される、請求項８０に記載の方法。
  82. 前記阻害性核酸が、ハンチンチン（ＨＴＴ）遺伝子、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症に関連付けられる遺伝子（アトロフィン１、ＡＴＮ１）、球脊髄性筋萎縮症におけるＸ染色体のアンドロゲン受容体、ヒトアタキシン－１、－２、－３、及び－７、Ｃａｖ２．１Ｐ／Ｑ電位依存性カルシウムチャネル（ＣＡＣＮＡ１Ａ）、ＴＡＴＡ－結合タンパク質、アタキシン８逆鎖（ＡＴＸＮ８ＯＳ）、脊髄小脳性運動失調症（１、２、３、６、７、８、１２ １７型）におけるセリン／スレオニン－タンパク質ホスファターゼ２Ａ ５５ｋＤａ調節サブユニットＢベータアイソフォーム、脆弱Ｘ症候群におけるＦＭＲ１（脆弱Ｘ精神遅滞１）、脆弱Ｘ関連振戦／運動失調症候群におけるＦＭＲ１（脆弱Ｘ精神遅滞１）、ＦＭＲ１（脆弱Ｘ精神遅滞２）、又は脆弱ＸＥ精神遅滞におけるＡＦ４／ＦＭＲ２ファミリーメンバー２；筋強直性ジストロフィーにおけるミオトニン－プロテインキナーゼ（ＭＴ－ＰＫ）；フリードライヒ運動失調症におけるフラタキシン；筋萎縮性側索硬化症におけるスーパーオキシドジスムターゼ１（ＳＯＤ１）遺伝子の変異体；パーキンソン病及び／又はアルツハイマー病の病因に関与する遺伝子；アポリポタンパク質Ｂ（ＡＰＯＢ）及びプロタンパク質転換酵素スブチリシン／ケキシン９型（ＰＣＳＫ９）、高コレステロール血症；ＨＩＶ感染におけるＨＩＶ Ｔａｔ、ヒト免疫不全ウイルス転写遺伝子トランス活性化因子；ＨＩＶ感染におけるＨＩＶ ＴＡＲ、ＨＩＶ ＴＡＲ、ヒト免疫不全ウイルストランス活性化因子応答エレメント遺伝子；ＨＩＶ感染におけるＣ－Ｃケモカイン受容体（ＣＣＲ５）；ＲＳＶ感染におけるラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）ヌクレオカプシドタンパク質、Ｃ型肝炎ウイルス感染における肝臓特異的マイクロＲＮＡ（ｍｉＲ－１２２）；ｐ５３、急性腎傷害、又は腎移植移植片機能遅延、又は腎傷害急性腎不全；進行性再発性又は転移性固形悪性腫瘍におけるプロテインキナーゼＮ３（ＰＫＮ３）；ＬＭＰ２、プロテアソームサブユニットベータ９型（ＰＳＭＢ９）としても知られているＬＭＰ２、転移性黒色腫；プロテアソームサブユニットベータ８型（ＰＳＭＢ８）としても知られているＬＭＰ７、転移性黒色腫；プロテアソームサブユニットベータ１０型（ＰＳＭＢ１０）としても知られているＭＥＣＬ１、転移性黒色腫；固形腫瘍における血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）；固形腫瘍におけるキネシン紡錘体タンパク質、慢性骨髄性白血病におけるアポトーシス抑制因子Ｂ細胞ＣＬＬ／リンパ腫（ＢＣＬ－２）；固形腫瘍におけるリボヌクレオチドレダクターゼＭ２（ＲＲＭ２）；固形腫瘍におけるフューリン；肝腫瘍におけるポロ様キナーゼ１（ＰＬＫ１）、Ｃ型肝炎感染におけるジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ１（ＤＧＡＴ１）、家族性腺腫性ポリポーシスにおけるβ－カテニン；ベータ２アドレナリン受容体、緑内障；糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）又は加齢黄斑変性症における、ＤＮＡ損傷誘導性転写物４タンパク質としても知られているＲＴＰ８０１／Ｒｅｄｄ１；加齢黄斑変性症又は脈絡膜血管新生における血管内皮増殖因子受容体Ｉ（ＶＥＧＦＲ１）、非動脈炎性虚血性視神経症におけるカスパーゼ２；先天性爪肥厚症におけるケラチン６Ａ Ｎ１７Ｋ変異体タンパク質；インフルエンザ感染におけるインフルエンザＡウイルスゲノム／遺伝子配列；ＳＡＲＳ感染における重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）コロナウイルスゲノム／遺伝子配列；呼吸器合胞体ウイルス感染における呼吸器合胞体ウイルスゲノム／遺伝子配列；エボラ感染におけるエボラフィロウイルスゲノム／遺伝子配列；Ｂ型及びＣ型肝炎感染におけるＢ型及びＣ型肝炎ウイルスゲノム／遺伝子配列；ＨＳＶ感染における単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ゲノム／遺伝子配列、コクサッキーウイルスＢ３感染におけるコクサッキーウイルスＢ３ゲノム／遺伝子配列；原発性ジストニアにおけるトルシンＡ（ＴＯＲ１Ａ）のような遺伝子の病原性対立遺伝子のサイレンシング（対立遺伝子特異的サイレンシング）、移植に特異的な汎クラスＩ及びＨＬＡ対立遺伝子；及び常染色体優性遺伝性網膜色素変性症（ａｄＲＰ）における変異体ロドプシン遺伝子（ＲＨＯ）からなる群から選択されるポリヌクレオチドリピート病に関連付けられる遺伝子、遺伝子の転写物、又は遺伝子の転写物に結合する、請求項８０に記載の方法。
  83. 前記異種性ポリヌクレオチドによりコードされている前記ポリペプチドが、遺伝子編集ヌクレアーゼを含む、請求項１～８２のいずれか一項に記載の方法。
  84. 前記遺伝子編集ヌクレアーゼが、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）又は転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）を含む、請求項８３に記載の方法。
  85. 前記遺伝子編集ヌクレアーゼが、機能的ＩＩ型ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９を含む、請求項８３に記載の方法。
  86. ステップ（ａ）及びステップ（ｂ）が、２回以上実施される、請求項１～８５のいずれか一項に記載の方法。
  87. 前記対象がヒトである、請求項１～８６のいずれか一項に記載の方法。
  88. （ａ）ポリペプチド又はペプチドをコードしている異種性ポリヌクレオチドを含む組換えウイルスベクター；
    （ｂ）ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤；
    （ｃ）任意選択で、抗体を分解又は消化するプロテアーゼ又はグリコシダーゼ；及び
    （ｄ）請求項１～８７のいずれか一項に記載の方法を実施するための使用説明書を有するラベル
    が中に配置されているパッケージであって、（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）が別々の容器又は同じ容器に存在する、パッケージ。
  89. （ａ）タンパク質の発現を阻害、減少、又は低減させる核酸へと転写される異種性ポリヌクレオチドを含む組換えウイルスベクター；
    （ｂ）ＩｇＧとＦｃＲｎとの相互作用を低減させる作用剤；
    （ｃ）任意選択で、抗体を分解又は消化するプロテアーゼ又はグリコシダーゼ；及び
    （ｄ）請求項１～８７のいずれか一項に記載の方法を実施するための使用説明書を有するラベル
    が中に配置されているパッケージであって、（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）が別々の容器又は同じ容器に存在する、パッケージ。
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