JP2023509870A - Ｈｂｖの処置のためのｈｂｖを標的とする治療用オリゴヌクレオチドとｔｌｒ７アゴニストとの医薬組合せ - Google Patents

Ｈｂｖの処置のためのｈｂｖを標的とする治療用オリゴヌクレオチドとｔｌｒ７アゴニストとの医薬組合せ Download PDF

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Abstract

本発明は、Ｂ型肝炎ウイルス感染症を処置するための組成物及び方法に関する。特に、本発明は、慢性Ｂ型肝炎患者の処置に使用するための、ＨＢＶを標的とする治療用オリゴヌクレオチドとＴＬＲ７アゴニストとを投与することを含む併用療法に関する。

Description

発明の分野
本発明は、Ｂ型肝炎ウイルス感染症を処置するための組成物及び方法に関する。特に、本発明は、慢性Ｂ型肝炎患者の処置に使用するための、ＨＢＶを標的とする治療用オリゴヌクレオチドとＴＬＲ７アゴニストとを投与することを含む併用療法に関する。
背景
ＨＢＶ感染は、推定３億５０００万人の慢性キャリアに関する世界的に大きな健康問題のままである。キャリアのおおよそ２５％は、慢性肝炎、肝硬変、又は肝臓癌で死亡すると予測することができる。Ｂ型肝炎ウイルスは、タバコに次いで２番目に重要な発癌物質であり、全原発性肝臓癌の６０％～８０％を引き起こす。
ＨＢＶの外側エンベロープタンパク質は、Ｂ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）として集合的に知られている。ＨＢｓＡｇは、重複するオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）によってコードされるＳ、Ｍ、及びＬと呼ばれる３つの関連するポリペプチドからなる。最小のエンベロープタンパク質は、Ｓ－ＯＲＦと呼ばれる２２６アミノ酸のＳである。Ｍ及びＬは上流の翻訳開始部位から産生され、それぞれ５５及び１０８アミノ酸をＳに付加する。ＨＢＶのＳ、Ｍ、及びＬの糖タンパク質は、Ｄａｎｅ粒子と呼ばれる無傷の感染性ＨＢＶビリオンのウイルスエンベロープに見られ、３つ全てが非常に過剰に産生及び分泌されて、慢性ＨＢＶ患者の血液に見られる非感染性の亜ウイルス球状及び糸状粒子（両方ともデコイ粒子と呼ばれる）を形成する。デコイ粒子の表面上のＨＢｓＡｇの存在量は、慢性ＨＢＶ感染（ＣＨＢ）患者の体液性免疫及び自発的クリアランスを阻害すると考えられている。
慢性ＨＢＶ感染の現在の標準治療は、ＨＢＶ ＤＮＡ合成を阻害することによってＨＢＶ複製の抑制を提供するが、ＨＢｓＡｇなどのウイルス抗原には直接作用しない、エンテカビル又はテノホビルなどの経口ヌクレオシ（チ）ド類似体による処置である。ヌクレオシ（チ）ド類似体は、長期間の治療であっても、低レベルのＨＢｓＡｇクリアランスしか示さない。この点において、慢性Ｂ型肝炎患者は、非常に弱いＨＢＶ Ｔ細胞応答を示し、抗ＨＢｓ抗体を欠いており、これが、これらの患者がウイルスを除去することができない理由の１つであると考えられる。
臨床的に重要な目標は、ＨＢｓＡｇセロコンバージョン及び血清ＨＢＶ－ＤＮＡ除去として定義される慢性ＨＢＶ感染の機能的治癒を達成することである。これにより、持続的な応答がもたらされ、それによって肝硬変及び肝臓癌の発症が予防され、生存期間が延長されると予想される。現在、慢性ＨＢＶ感染は、感染肝細胞の核内の共有結合的に閉じた環状ＤＮＡ（ｃｃｃＤＮＡ）としてのウイルスゲノムの長期又は永続性のために完全に根絶することはできない。慢性ＨＢＶ感染からの完全な治癒は、ａａ感染肝細胞からのこのｃｃｃＤＮＡの除去を必要とするであろう。
総説論文Ｓｏｒｉａｎｏ ｅｔ ａｌ ２０１７ Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｏｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ Ｄｒｕｇｓ Ｖｏｌ．２６，ｐｐ ８４３は、ＨＢＶの機能的治癒又は完全治癒のいずれかを達成することを目的とした薬物開発の現状を記載している。この論文は、ＨＢＶ療法において現在試験されている３０を超える薬物のいくつかを強調しており、治癒をもたらす任意の有効な処置がおそらくウイルス標的化療法と免疫療法の組合せを必要とすることにも言及している。
ｔｏｌｌ様受容体ＴＬＲ７は、ウイルス感染に対する自然免疫応答の成分であり、主に形質細胞様細胞及びＢ細胞上に発現される。そのような免疫細胞の変化した応答性は、慢性ウイルス感染中の自然免疫応答の減少に寄与し得る。したがって、ＴＬＲ７のアゴニスト誘発活性化は、免疫療法を用いた慢性ウイルス感染症の処置のための可能なアプローチを表す。ＧＳ－９６２０を含むいくつかのＴＬＲアゴニストが臨床試験で試験されている。代替的なＴＬＲ７アゴニストは、国際公開第２００６／０６６０８０号、国際公開第２０１６／０５５５５３号及び国際公開第２０１６／９１６９８号に記載されている。
アンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的核酸にハイブリダイズすることによって標的遺伝子の発現を調節することができる本質的に一本鎖オリゴヌクレオチドである。標的調節は、ＲＮアーゼＨ媒介分解又は転写の遮断による下方制御であり得る。アンチセンスオリゴヌクレオチドはまた、例えばスプライススイッチング又はマイクロＲＮＡ抑制を介して標的を上方制御することができる。肝臓における標的について、ＧａｌＮＡｃコンジュゲーションは、アンチセンスオリゴヌクレオチドを送達するために非常に有効であることが証明されている。国際公開第２０１４／１７９６２７号及び国際公開第２０１５／１７３２０８号は、ＧａｌＮＡｃコンジュゲーションと組み合わせて一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドを使用する肝細胞におけるＨＢＶ ｍＲＮＡの分解によるＨＢＶ処置を記載している。ＴＬＲ７アゴニストＧＳ－９６２０を含む様々な併用療法が国際公開第２０１５／１７３２０８号に簡単に言及されている。
国際公開第２０１６／０７７３２１号は、センス鎖上のＧａｌＮＡｃコンジュゲーションと組み合わせて二本鎖ｓｉＲＮＡを使用する肝細胞におけるＨＢＶ ｍＲＮＡの分解によるＨＢＶ処置を記載している。ＴＬＲ７アゴニストを含む様々な併用療法が簡単に言及される。
本発明者らの知る限りでは、治療用オリゴヌクレオチドとＴＬＲ７アゴニストとの特定の組合せは、インビトロ又はインビボで試験されていない。
発明の目的
本発明は、ＨＢＶを標的とする治療用オリゴヌクレオチド及びＴＬＲ７アゴニストの新規な組合せを特定し、これらは、長期の血清ＨＢＶ－ＤＮＡ減少及びＨＢｓＡｇにおける遅延したリバウンドに関して一化合物処置を超える利点を提供する。さらに、単独処置で使用される薬物濃度と比較して、併用処置を使用する場合、３～５倍低い用量で有意に改善された効果を達成することができ、高用量での同じ組合せと比較した場合、３～５倍低い用量の併用処置で本質的に同じ効果を達成することができるので、併用処置で治療域の増加を達成することができる。
発明の概要
本発明の一態様は、治療用オリゴヌクレオチドである第１の医療用化合物と、以下に定義される式（Ｉ）又は（ＩＩ）のＴＬＲ７アゴニストである第２の医療用化合物とを含むか、又はこれらからなる医薬組合せである。本発明の好ましい実施形態は、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドである第１の医療用化合物（好ましくはＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡの発現を減少させるためのオリゴヌクレオチドであり、該オリゴヌクレオチドは、１９～３０ヌクレオチド長のアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、ＡＣＡＡＮＡＡＵＣＣＵＣＡＣＡＡＵＡ（配列番号３３）に示すＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡの配列に対して相補性の領域を含む）と、以下に定義される式（Ｉ）又は（ＩＩ）のＴＬＲ７アゴニストである第２の医療用化合物とを含むか、又はそれからなる医薬組合せである。本発明の別の実施形態は、アンチセンスオリゴヌクレオチド、好ましくは、配列番号１の１５３０～１６０２位の連続配列に１００％相補的な少なくとも１２ヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列を有する１３～２２ヌクレオチド長のＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチドである第１の医療用化合物と、以下に定義される式（Ｉ）又は（ＩＩ）のＴＬＲ７アゴニストである第２の医療用化合物とを含むか、又はそれらからなる医薬組合せである。
式（Ｉ）及び（ＩＩ）：
Figure 2023509870000001
 式中、ＸはＣＨ２又はＳであり、
式（Ｉ）について、Ｒ１は－ＯＨ又は－Ｈであり、Ｒ２は１－ヒドロキシプロピル又はヒドロキシメチルであり、
式（ＩＩ）について、Ｒ１は－ＯＨ又は－Ｈ又はアセトキシであり、Ｒ２は１－アセトキシプロピル又は１－ヒドロキシプロピル又は１－ヒドロキシメチル又はアセトキシ（シクロプロピル）メチル又はアセトキシ（プロピン－１－イル）メチルである、
又はその薬学的に許容され得る塩、エナンチオマー若しくはジアステレオマー。
本発明の更なる態様は、ＨＢＶ感染個体、特に慢性ＨＢＶを有する個体の処置に使用するための医薬組合せに関する。
本発明の更なる態様は、Ｂ型肝炎ウイルス感染症を処置するための第１の医薬の製造における治療用オリゴヌクレオチドの使用であり、第１の医薬は、本出願に記載の治療用オリゴヌクレオチドであり、第１の医薬は、第２の医薬と組み合わせて投与され、第２の医薬は、本出願に記載のＴＬＲ７アゴニストである。
一実施形態では、治療用オリゴヌクレオチド化合物（第１の医薬又は第１の医療用化合物）は皮下注射用に製剤化され、ＴＬＲ７アゴニスト化合物（第２の医薬又は第２の医療用化合物）は経口投与用に製剤化される。医療用化合物は２つの異なる投与経路を介して投与されるので、それらは異なる投与計画に従うことができる。最適な組合せ効果のために、第１及び第２の医療用化合物は、１ヶ月未満の間隔、例えば１週間未満の間隔、例えば２日の間隔、例えば同日に投与される。
本発明の更なる態様は、第１の医療用化合物（第１の医薬）と、ＨＢＶの処置における第２の医療用化合物（第２の医薬）の投与のための説明がある添付文書とを含むキットオブパーツである。一実施形態では、キットオブパーツは、第１及び第２の医療用化合物の両方を含む。
本発明の更なる態様は、慢性感染個体などのＢ型肝炎ウイルスに感染した対象に、本出願に記載の治療有効量のＴＬＲ７アゴニスト（第２の医薬）と組み合わせて、本出願に記載の治療有効量の治療用オリゴヌクレオチド（第１の医薬）を投与することを含む、Ｂ型肝炎ウイルス感染症を処置するための方法である。
非常に好ましい実施形態では、本出願で言及される治療用オリゴヌクレオチドは、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、好ましくは低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、好ましくはＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡの発現を減少させるためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチド又はｓｉＲＮＡである。異なる実施形態では、治療用オリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチド、好ましくはＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチド、好ましくはＨＢＶを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチド又はＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチドである。
様々な立体異性体を示す例示的なアンチセンスオリゴヌクレオチドのコンジュゲートを図示する。オリゴヌクレオチドは波線（Ａ～Ｄ）又は「オリゴヌクレオチド」（Ｅ～Ｈ及びＫ）又はＴ２（Ｉ～Ｊ）のいずれかとして表され、アシアロ糖タンパク質受容体標的化コンジュゲート部分は三価Ｎ－アセチルガラクトサミン部分である。化合物Ａ～Ｄは、ジリジンブランチャー（ｂｒａｎｃｈｅｒ）分子、ＰＥＧ３スペーサー、及び３つの末端ＧａｌＮＡｃ炭水化物部分を含む。化合物Ａ及びＢにおいて、オリゴヌクレオチドは、リンカーなしでアシアロ糖タンパク質受容体標的化コンジュゲート部分に直接結合される。化合物Ｃ及びＤにおいて、オリゴヌクレオチドは、Ｃ６リンカーを介してアシアロ糖タンパク質受容体標的化コンジュゲート部分に結合される。化合物Ｅ～Ｊは、種々の長さ及び構造の市販のトレブラー（ｔｒｅｂｌｅｒ）ブランチャー分子及びスペーサー、並びに３つの末端ＧａｌＮＡｃ炭水化物部分を含む。化合物Ｋは、合成の一部として依然として固体支持体上にある間にオリゴヌクレオチドに添加された単量体ＧａｌＮＡｃホスホラミダイトから構成され、Ｘ＝Ｓ又はＯであり、ｎ＝１～３である（国際公開第２０１７／１７８６５６号参照）。図１Ｂと図１Ｄは、本明細書ではＧａｌＮＡｃ２又はＧＮ２とも呼ばれ、それぞれ、Ｃ６リンカーを有さないものと、有するものである。 様々な立体異性体を示す例示的なアンチセンスオリゴヌクレオチドのコンジュゲートを図示する。オリゴヌクレオチドは波線（Ａ～Ｄ）又は「オリゴヌクレオチド」（Ｅ～Ｈ及びＫ）又はＴ２（Ｉ～Ｊ）のいずれかとして表され、アシアロ糖タンパク質受容体標的化コンジュゲート部分は三価Ｎ－アセチルガラクトサミン部分である。化合物Ａ～Ｄは、ジリジンブランチャー（ｂｒａｎｃｈｅｒ）分子、ＰＥＧ３スペーサー、及び３つの末端ＧａｌＮＡｃ炭水化物部分を含む。化合物Ａ及びＢにおいて、オリゴヌクレオチドは、リンカーなしでアシアロ糖タンパク質受容体標的化コンジュゲート部分に直接結合される。化合物Ｃ及びＤにおいて、オリゴヌクレオチドは、Ｃ６リンカーを介してアシアロ糖タンパク質受容体標的化コンジュゲート部分に結合される。化合物Ｅ～Ｊは、種々の長さ及び構造の市販のトレブラー（ｔｒｅｂｌｅｒ）ブランチャー分子及びスペーサー、並びに３つの末端ＧａｌＮＡｃ炭水化物部分を含む。化合物Ｋは、合成の一部として依然として固体支持体上にある間にオリゴヌクレオチドに添加された単量体ＧａｌＮＡｃホスホラミダイトから構成され、Ｘ＝Ｓ又はＯであり、ｎ＝１～３である（国際公開第２０１７／１７８６５６号参照）。図１Ｂと図１Ｄは、本明細書ではＧａｌＮＡｃ２又はＧＮ２とも呼ばれ、それぞれ、Ｃ６リンカーを有さないものと、有するものである。 様々な立体異性体を示す例示的なアンチセンスオリゴヌクレオチドのコンジュゲートを図示する。オリゴヌクレオチドは波線（Ａ～Ｄ）又は「オリゴヌクレオチド」（Ｅ～Ｈ及びＫ）又はＴ２（Ｉ～Ｊ）のいずれかとして表され、アシアロ糖タンパク質受容体標的化コンジュゲート部分は三価Ｎ－アセチルガラクトサミン部分である。化合物Ａ～Ｄは、ジリジンブランチャー（ｂｒａｎｃｈｅｒ）分子、ＰＥＧ３スペーサー、及び３つの末端ＧａｌＮＡｃ炭水化物部分を含む。化合物Ａ及びＢにおいて、オリゴヌクレオチドは、リンカーなしでアシアロ糖タンパク質受容体標的化コンジュゲート部分に直接結合される。化合物Ｃ及びＤにおいて、オリゴヌクレオチドは、Ｃ６リンカーを介してアシアロ糖タンパク質受容体標的化コンジュゲート部分に結合される。化合物Ｅ～Ｊは、種々の長さ及び構造の市販のトレブラー（ｔｒｅｂｌｅｒ）ブランチャー分子及びスペーサー、並びに３つの末端ＧａｌＮＡｃ炭水化物部分を含む。化合物Ｋは、合成の一部として依然として固体支持体上にある間にオリゴヌクレオチドに添加された単量体ＧａｌＮＡｃホスホラミダイトから構成され、Ｘ＝Ｓ又はＯであり、ｎ＝１～３である（国際公開第２０１７／１７８６５６号参照）。図１Ｂと図１Ｄは、本明細書ではＧａｌＮＡｃ２又はＧＮ２とも呼ばれ、それぞれ、Ｃ６リンカーを有さないものと、有するものである。 様々な立体異性体を示す例示的なアンチセンスオリゴヌクレオチドのコンジュゲートを図示する。オリゴヌクレオチドは波線（Ａ～Ｄ）又は「オリゴヌクレオチド」（Ｅ～Ｈ及びＫ）又はＴ２（Ｉ～Ｊ）のいずれかとして表され、アシアロ糖タンパク質受容体標的化コンジュゲート部分は三価Ｎ－アセチルガラクトサミン部分である。化合物Ａ～Ｄは、ジリジンブランチャー（ｂｒａｎｃｈｅｒ）分子、ＰＥＧ３スペーサー、及び３つの末端ＧａｌＮＡｃ炭水化物部分を含む。化合物Ａ及びＢにおいて、オリゴヌクレオチドは、リンカーなしでアシアロ糖タンパク質受容体標的化コンジュゲート部分に直接結合される。化合物Ｃ及びＤにおいて、オリゴヌクレオチドは、Ｃ６リンカーを介してアシアロ糖タンパク質受容体標的化コンジュゲート部分に結合される。化合物Ｅ～Ｊは、種々の長さ及び構造の市販のトレブラー（ｔｒｅｂｌｅｒ）ブランチャー分子及びスペーサー、並びに３つの末端ＧａｌＮＡｃ炭水化物部分を含む。化合物Ｋは、合成の一部として依然として固体支持体上にある間にオリゴヌクレオチドに添加された単量体ＧａｌＮＡｃホスホラミダイトから構成され、Ｘ＝Ｓ又はＯであり、ｎ＝１～３である（国際公開第２０１７／１７８６５６号参照）。図１Ｂと図１Ｄは、本明細書ではＧａｌＮＡｃ２又はＧＮ２とも呼ばれ、それぞれ、Ｃ６リンカーを有さないものと、有するものである。 様々な立体異性体を示す例示的なアンチセンスオリゴヌクレオチドのコンジュゲートを図示する。オリゴヌクレオチドは波線（Ａ～Ｄ）又は「オリゴヌクレオチド」（Ｅ～Ｈ及びＫ）又はＴ２（Ｉ～Ｊ）のいずれかとして表され、アシアロ糖タンパク質受容体標的化コンジュゲート部分は三価Ｎ－アセチルガラクトサミン部分である。化合物Ａ～Ｄは、ジリジンブランチャー（ｂｒａｎｃｈｅｒ）分子、ＰＥＧ３スペーサー、及び３つの末端ＧａｌＮＡｃ炭水化物部分を含む。化合物Ａ及びＢにおいて、オリゴヌクレオチドは、リンカーなしでアシアロ糖タンパク質受容体標的化コンジュゲート部分に直接結合される。化合物Ｃ及びＤにおいて、オリゴヌクレオチドは、Ｃ６リンカーを介してアシアロ糖タンパク質受容体標的化コンジュゲート部分に結合される。化合物Ｅ～Ｊは、種々の長さ及び構造の市販のトレブラー（ｔｒｅｂｌｅｒ）ブランチャー分子及びスペーサー、並びに３つの末端ＧａｌＮＡｃ炭水化物部分を含む。化合物Ｋは、合成の一部として依然として固体支持体上にある間にオリゴヌクレオチドに添加された単量体ＧａｌＮＡｃホスホラミダイトから構成され、Ｘ＝Ｓ又はＯであり、ｎ＝１～３である（国際公開第２０１７／１７８６５６号参照）。図１Ｂと図１Ｄは、本明細書ではＧａｌＮＡｃ２又はＧＮ２とも呼ばれ、それぞれ、Ｃ６リンカーを有さないものと、有するものである。 様々な立体異性体を示す例示的なアンチセンスオリゴヌクレオチドのコンジュゲートを図示する。オリゴヌクレオチドは波線（Ａ～Ｄ）又は「オリゴヌクレオチド」（Ｅ～Ｈ及びＫ）又はＴ２（Ｉ～Ｊ）のいずれかとして表され、アシアロ糖タンパク質受容体標的化コンジュゲート部分は三価Ｎ－アセチルガラクトサミン部分である。化合物Ａ～Ｄは、ジリジンブランチャー（ｂｒａｎｃｈｅｒ）分子、ＰＥＧ３スペーサー、及び３つの末端ＧａｌＮＡｃ炭水化物部分を含む。化合物Ａ及びＢにおいて、オリゴヌクレオチドは、リンカーなしでアシアロ糖タンパク質受容体標的化コンジュゲート部分に直接結合される。化合物Ｃ及びＤにおいて、オリゴヌクレオチドは、Ｃ６リンカーを介してアシアロ糖タンパク質受容体標的化コンジュゲート部分に結合される。化合物Ｅ～Ｊは、種々の長さ及び構造の市販のトレブラー（ｔｒｅｂｌｅｒ）ブランチャー分子及びスペーサー、並びに３つの末端ＧａｌＮＡｃ炭水化物部分を含む。化合物Ｋは、合成の一部として依然として固体支持体上にある間にオリゴヌクレオチドに添加された単量体ＧａｌＮＡｃホスホラミダイトから構成され、Ｘ＝Ｓ又はＯであり、ｎ＝１～３である（国際公開第２０１７／１７８６５６号参照）。図１Ｂと図１Ｄは、本明細書ではＧａｌＮＡｃ２又はＧＮ２とも呼ばれ、それぞれ、Ｃ６リンカーを有さないものと、有するものである。 様々な立体異性体を示す例示的なアンチセンスオリゴヌクレオチドのコンジュゲートを図示する。オリゴヌクレオチドは波線（Ａ～Ｄ）又は「オリゴヌクレオチド」（Ｅ～Ｈ及びＫ）又はＴ２（Ｉ～Ｊ）のいずれかとして表され、アシアロ糖タンパク質受容体標的化コンジュゲート部分は三価Ｎ－アセチルガラクトサミン部分である。化合物Ａ～Ｄは、ジリジンブランチャー（ｂｒａｎｃｈｅｒ）分子、ＰＥＧ３スペーサー、及び３つの末端ＧａｌＮＡｃ炭水化物部分を含む。化合物Ａ及びＢにおいて、オリゴヌクレオチドは、リンカーなしでアシアロ糖タンパク質受容体標的化コンジュゲート部分に直接結合される。化合物Ｃ及びＤにおいて、オリゴヌクレオチドは、Ｃ６リンカーを介してアシアロ糖タンパク質受容体標的化コンジュゲート部分に結合される。化合物Ｅ～Ｊは、種々の長さ及び構造の市販のトレブラー（ｔｒｅｂｌｅｒ）ブランチャー分子及びスペーサー、並びに３つの末端ＧａｌＮＡｃ炭水化物部分を含む。化合物Ｋは、合成の一部として依然として固体支持体上にある間にオリゴヌクレオチドに添加された単量体ＧａｌＮＡｃホスホラミダイトから構成され、Ｘ＝Ｓ又はＯであり、ｎ＝１～３である（国際公開第２０１７／１７８６５６号参照）。図１Ｂと図１Ｄは、本明細書ではＧａｌＮＡｃ２又はＧＮ２とも呼ばれ、それぞれ、Ｃ６リンカーを有さないものと、有するものである。 様々な立体異性体を示す例示的なアンチセンスオリゴヌクレオチドのコンジュゲートを図示する。オリゴヌクレオチドは波線（Ａ～Ｄ）又は「オリゴヌクレオチド」（Ｅ～Ｈ及びＫ）又はＴ２（Ｉ～Ｊ）のいずれかとして表され、アシアロ糖タンパク質受容体標的化コンジュゲート部分は三価Ｎ－アセチルガラクトサミン部分である。化合物Ａ～Ｄは、ジリジンブランチャー（ｂｒａｎｃｈｅｒ）分子、ＰＥＧ３スペーサー、及び３つの末端ＧａｌＮＡｃ炭水化物部分を含む。化合物Ａ及びＢにおいて、オリゴヌクレオチドは、リンカーなしでアシアロ糖タンパク質受容体標的化コンジュゲート部分に直接結合される。化合物Ｃ及びＤにおいて、オリゴヌクレオチドは、Ｃ６リンカーを介してアシアロ糖タンパク質受容体標的化コンジュゲート部分に結合される。化合物Ｅ～Ｊは、種々の長さ及び構造の市販のトレブラー（ｔｒｅｂｌｅｒ）ブランチャー分子及びスペーサー、並びに３つの末端ＧａｌＮＡｃ炭水化物部分を含む。化合物Ｋは、合成の一部として依然として固体支持体上にある間にオリゴヌクレオチドに添加された単量体ＧａｌＮＡｃホスホラミダイトから構成され、Ｘ＝Ｓ又はＯであり、ｎ＝１～３である（国際公開第２０１７／１７８６５６号参照）。図１Ｂと図１Ｄは、本明細書ではＧａｌＮＡｃ２又はＧＮ２とも呼ばれ、それぞれ、Ｃ６リンカーを有さないものと、有するものである。 様々な立体異性体を示す例示的なアンチセンスオリゴヌクレオチドのコンジュゲートを図示する。オリゴヌクレオチドは波線（Ａ～Ｄ）又は「オリゴヌクレオチド」（Ｅ～Ｈ及びＫ）又はＴ２（Ｉ～Ｊ）のいずれかとして表され、アシアロ糖タンパク質受容体標的化コンジュゲート部分は三価Ｎ－アセチルガラクトサミン部分である。化合物Ａ～Ｄは、ジリジンブランチャー（ｂｒａｎｃｈｅｒ）分子、ＰＥＧ３スペーサー、及び３つの末端ＧａｌＮＡｃ炭水化物部分を含む。化合物Ａ及びＢにおいて、オリゴヌクレオチドは、リンカーなしでアシアロ糖タンパク質受容体標的化コンジュゲート部分に直接結合される。化合物Ｃ及びＤにおいて、オリゴヌクレオチドは、Ｃ６リンカーを介してアシアロ糖タンパク質受容体標的化コンジュゲート部分に結合される。化合物Ｅ～Ｊは、種々の長さ及び構造の市販のトレブラー（ｔｒｅｂｌｅｒ）ブランチャー分子及びスペーサー、並びに３つの末端ＧａｌＮＡｃ炭水化物部分を含む。化合物Ｋは、合成の一部として依然として固体支持体上にある間にオリゴヌクレオチドに添加された単量体ＧａｌＮＡｃホスホラミダイトから構成され、Ｘ＝Ｓ又はＯであり、ｎ＝１～３である（国際公開第２０１７／１７８６５６号参照）。図１Ｂと図１Ｄは、本明細書ではＧａｌＮＡｃ２又はＧＮ２とも呼ばれ、それぞれ、Ｃ６リンカーを有さないものと、有するものである。 ＣＭＰ番号２９＿１の構造式。その薬学的塩は、一価又は二価カチオン、例えばＮａ＋、Ｋ＋及びＣａ２＋、又は化合物と関連したこれらの混合物を含む。 ＣＭＰ番号２３＿１の構造式。その薬学的塩は、一価又は二価カチオン、例えばＮａ＋、Ｋ＋及びＣａ２＋、又は化合物と関連したこれらの混合物を含む。 ＣＭＰ番号１６＿１の構造式。その薬学的塩は、一価又は二価カチオン、例えばＮａ＋、Ｋ＋及びＣａ２＋、又は化合物と関連したこれらの混合物を含む。 ＣＭＰ番号１５＿１の構造式。その薬学的塩は、一価又は二価カチオン、例えばＮａ＋、Ｋ＋及びＣａ２＋、又は化合物と関連したこれらの混合物を含む。 ＣＭＰ番号１５＿２の構造式。その薬学的塩は、一価又は二価カチオン、例えばＮａ＋、Ｋ＋及びＣａ２＋、又は化合物と関連したこれらの混合物を含む。 ＣＭＰ番号２６＿１の構造式。その薬学的塩は、一価又は二価カチオン、例えばＮａ＋、Ｋ＋及びＣａ２＋、又は化合物と関連したこれらの混合物を含む。 ＣＭＰ番号２０＿１の構造式。その薬学的塩は、一価又は二価カチオン、例えばＮａ＋、Ｋ＋及びＣａ２＋、又は化合物と関連したこれらの混合物を含む。 ＡＡＶ／ＨＢＶマウス由来の血清中のＨＢＶ－ＤＮＡに対する様々な単独及び組合せ処置の効果を示す。パネルＡ 生理食塩水（ビヒクル、破線及び円）；１００ｍｇ／ｋｇを１日おきに投与（ＱＯＤ）したＣＭＰ番号ＶＩ（ＴＬＲ７アゴニスト）（破線；長方形）；１．５ｍｇ／ｋｇで投与したＣＭＰ番号１５＿１（抗ＨＢＶ ＡＳＯ）（破線；三角形）；又は両方の組合せ（実線及び正方形）での処置後。パネルＢ 生理食塩水（ビヒクル、破線及び円）；１００ｍｇ／ｋｇを毎週投与（ＱＷ）したＣＭＰ番号ＶＩ（ＴＬＲ７アゴニスト）（破線；長方形）；１．５ｍｇ／ｋｇで投与したＣＭＰ番号１５＿１（抗ＨＢＶ ＡＳＯ）（破線；三角形）；又は両方の組合せ（実線及び正方形）での処置後。パネルＣ 生理食塩水（ビヒクル、破線及び円）；１００ｍｇ／ｋｇを１日おきに投与（ＱＯＤ）したＣＭＰ番号ＶＩ（ＴＬＲ７アゴニスト）（破線；長方形）；７．５ｍｇ／ｋｇで投与したＣＭＰ番号１５＿１（抗ＨＢＶ ＡＳＯ）（破線；三角形）；又は両方の組合せ（実線及び正方形）での処置後。パネルＤ 生理食塩水（ビヒクル、破線及び円）；１００ｍｇ／ｋｇを毎週投与（ＱＷ）したＣＭＰ番号ＶＩ（ＴＬＲ７アゴニスト）（破線；長方形）；７．５ｍｇ／ｋｇで投与したＣＭＰ番号１５＿１（抗ＨＢＶ ＡＳＯ）（破線；三角形）；又は両方の組合せ（実線及び正方形）での処置後。 ＡＡＶ／ＨＢＶマウス由来の血清中のＨＢＶ－ＤＮＡに対する様々な単独及び組合せ処置の効果を示す。パネルＡ 生理食塩水（ビヒクル、破線及び円）；１００ｍｇ／ｋｇを１日おきに投与（ＱＯＤ）したＣＭＰ番号ＶＩ（ＴＬＲ７アゴニスト）（破線；長方形）；１．５ｍｇ／ｋｇで投与したＣＭＰ番号１５＿１（抗ＨＢＶ ＡＳＯ）（破線；三角形）；又は両方の組合せ（実線及び正方形）での処置後。パネルＢ 生理食塩水（ビヒクル、破線及び円）；１００ｍｇ／ｋｇを毎週投与（ＱＷ）したＣＭＰ番号ＶＩ（ＴＬＲ７アゴニスト）（破線；長方形）；１．５ｍｇ／ｋｇで投与したＣＭＰ番号１５＿１（抗ＨＢＶ ＡＳＯ）（破線；三角形）；又は両方の組合せ（実線及び正方形）での処置後。パネルＣ 生理食塩水（ビヒクル、破線及び円）；１００ｍｇ／ｋｇを１日おきに投与（ＱＯＤ）したＣＭＰ番号ＶＩ（ＴＬＲ７アゴニスト）（破線；長方形）；７．５ｍｇ／ｋｇで投与したＣＭＰ番号１５＿１（抗ＨＢＶ ＡＳＯ）（破線；三角形）；又は両方の組合せ（実線及び正方形）での処置後。パネルＤ 生理食塩水（ビヒクル、破線及び円）；１００ｍｇ／ｋｇを毎週投与（ＱＷ）したＣＭＰ番号ＶＩ（ＴＬＲ７アゴニスト）（破線；長方形）；７．５ｍｇ／ｋｇで投与したＣＭＰ番号１５＿１（抗ＨＢＶ ＡＳＯ）（破線；三角形）；又は両方の組合せ（実線及び正方形）での処置後。 ＡＡＶ／ＨＢＶマウス由来の血清中のＨＢＶ－ＤＮＡに対する様々な単独及び組合せ処置の効果を示す。パネルＡ 生理食塩水（ビヒクル、破線及び円）；１００ｍｇ／ｋｇを１日おきに投与（ＱＯＤ）したＣＭＰ番号ＶＩ（ＴＬＲ７アゴニスト）（破線；長方形）；１．５ｍｇ／ｋｇで投与したＣＭＰ番号１５＿１（抗ＨＢＶ ＡＳＯ）（破線；三角形）；又は両方の組合せ（実線及び正方形）での処置後。パネルＢ 生理食塩水（ビヒクル、破線及び円）；１００ｍｇ／ｋｇを毎週投与（ＱＷ）したＣＭＰ番号ＶＩ（ＴＬＲ７アゴニスト）（破線；長方形）；１．５ｍｇ／ｋｇで投与したＣＭＰ番号１５＿１（抗ＨＢＶ ＡＳＯ）（破線；三角形）；又は両方の組合せ（実線及び正方形）での処置後。パネルＣ 生理食塩水（ビヒクル、破線及び円）；１００ｍｇ／ｋｇを１日おきに投与（ＱＯＤ）したＣＭＰ番号ＶＩ（ＴＬＲ７アゴニスト）（破線；長方形）；７．５ｍｇ／ｋｇで投与したＣＭＰ番号１５＿１（抗ＨＢＶ ＡＳＯ）（破線；三角形）；又は両方の組合せ（実線及び正方形）での処置後。パネルＤ 生理食塩水（ビヒクル、破線及び円）；１００ｍｇ／ｋｇを毎週投与（ＱＷ）したＣＭＰ番号ＶＩ（ＴＬＲ７アゴニスト）（破線；長方形）；７．５ｍｇ／ｋｇで投与したＣＭＰ番号１５＿１（抗ＨＢＶ ＡＳＯ）（破線；三角形）；又は両方の組合せ（実線及び正方形）での処置後。 ＡＡＶ／ＨＢＶマウス由来の血清中のＨＢＶ－ＤＮＡに対する様々な単独及び組合せ処置の効果を示す。パネルＡ 生理食塩水（ビヒクル、破線及び円）；１００ｍｇ／ｋｇを１日おきに投与（ＱＯＤ）したＣＭＰ番号ＶＩ（ＴＬＲ７アゴニスト）（破線；長方形）；１．５ｍｇ／ｋｇで投与したＣＭＰ番号１５＿１（抗ＨＢＶ ＡＳＯ）（破線；三角形）；又は両方の組合せ（実線及び正方形）での処置後。パネルＢ 生理食塩水（ビヒクル、破線及び円）；１００ｍｇ／ｋｇを毎週投与（ＱＷ）したＣＭＰ番号ＶＩ（ＴＬＲ７アゴニスト）（破線；長方形）；１．５ｍｇ／ｋｇで投与したＣＭＰ番号１５＿１（抗ＨＢＶ ＡＳＯ）（破線；三角形）；又は両方の組合せ（実線及び正方形）での処置後。パネルＣ 生理食塩水（ビヒクル、破線及び円）；１００ｍｇ／ｋｇを１日おきに投与（ＱＯＤ）したＣＭＰ番号ＶＩ（ＴＬＲ７アゴニスト）（破線；長方形）；７．５ｍｇ／ｋｇで投与したＣＭＰ番号１５＿１（抗ＨＢＶ ＡＳＯ）（破線；三角形）；又は両方の組合せ（実線及び正方形）での処置後。パネルＤ 生理食塩水（ビヒクル、破線及び円）；１００ｍｇ／ｋｇを毎週投与（ＱＷ）したＣＭＰ番号ＶＩ（ＴＬＲ７アゴニスト）（破線；長方形）；７．５ｍｇ／ｋｇで投与したＣＭＰ番号１５＿１（抗ＨＢＶ ＡＳＯ）（破線；三角形）；又は両方の組合せ（実線及び正方形）での処置後。 ＡＡＶ／ＨＢＶマウス由来の血清中のＨＢｓＡｇに対する様々な単独及び組合せ処置の効果を示す。パネルＡ 生理食塩水（ビヒクル、破線及び円）；１００ｍｇ／ｋｇを１日おきに投与（ＱＯＤ）したＣＭＰ番号ＶＩ（ＴＬＲ７アゴニスト）（破線；長方形）；１．５ｍｇ／ｋｇで投与したＣＭＰ番号１５＿１（抗ＨＢＶ ＡＳＯ）（破線；三角形）；又は両方の組合せ（実線及び正方形）での処置後。パネルＢ 生理食塩水（ビヒクル、破線及び円）；１００ｍｇ／ｋｇを毎週投与（ＱＷ）したＣＭＰ番号ＶＩ（ＴＬＲ７アゴニスト）（破線；長方形）；１．５ｍｇ／ｋｇで投与したＣＭＰ番号１５＿１（抗ＨＢＶ ＡＳＯ）（破線；三角形）；又は両方の組合せ（実線及び正方形）での処置後のマウス。パネルＣ 生理食塩水（ビヒクル、破線及び円）；１００ｍｇ／ｋｇを１日おきに投与（ＱＯＤ）したＣＭＰ番号ＶＩ（ＴＬＲ７アゴニスト）（破線；長方形）；７．５ｍｇ／ｋｇで投与したＣＭＰ番号１５＿１（抗ＨＢＶ ＡＳＯ）（破線；三角形）；又は両方の組合せ（実線及び正方形）での処置後。パネルＤ 生理食塩水（ビヒクル、破線及び円）；１００ｍｇ／ｋｇを毎週投与（ＱＷ）したＣＭＰ番号ＶＩ（ＴＬＲ７アゴニスト）（破線；長方形）；７．５ｍｇ／ｋｇで投与したＣＭＰ番号１５＿１（抗ＨＢＶ ＡＳＯ）（破線；三角形）；又は両方の組合せ（実線及び正方形）での処置後。 ＡＡＶ／ＨＢＶマウス由来の血清中のＨＢｓＡｇに対する様々な単独及び組合せ処置の効果を示す。パネルＡ 生理食塩水（ビヒクル、破線及び円）；１００ｍｇ／ｋｇを１日おきに投与（ＱＯＤ）したＣＭＰ番号ＶＩ（ＴＬＲ７アゴニスト）（破線；長方形）；１．５ｍｇ／ｋｇで投与したＣＭＰ番号１５＿１（抗ＨＢＶ ＡＳＯ）（破線；三角形）；又は両方の組合せ（実線及び正方形）での処置後。パネルＢ 生理食塩水（ビヒクル、破線及び円）；１００ｍｇ／ｋｇを毎週投与（ＱＷ）したＣＭＰ番号ＶＩ（ＴＬＲ７アゴニスト）（破線；長方形）；１．５ｍｇ／ｋｇで投与したＣＭＰ番号１５＿１（抗ＨＢＶ ＡＳＯ）（破線；三角形）；又は両方の組合せ（実線及び正方形）での処置後のマウス。パネルＣ 生理食塩水（ビヒクル、破線及び円）；１００ｍｇ／ｋｇを１日おきに投与（ＱＯＤ）したＣＭＰ番号ＶＩ（ＴＬＲ７アゴニスト）（破線；長方形）；７．５ｍｇ／ｋｇで投与したＣＭＰ番号１５＿１（抗ＨＢＶ ＡＳＯ）（破線；三角形）；又は両方の組合せ（実線及び正方形）での処置後。パネルＤ 生理食塩水（ビヒクル、破線及び円）；１００ｍｇ／ｋｇを毎週投与（ＱＷ）したＣＭＰ番号ＶＩ（ＴＬＲ７アゴニスト）（破線；長方形）；７．５ｍｇ／ｋｇで投与したＣＭＰ番号１５＿１（抗ＨＢＶ ＡＳＯ）（破線；三角形）；又は両方の組合せ（実線及び正方形）での処置後。 ＡＡＶ／ＨＢＶマウス由来の血清中のＨＢｓＡｇに対する様々な単独及び組合せ処置の効果を示す。パネルＡ 生理食塩水（ビヒクル、破線及び円）；１００ｍｇ／ｋｇを１日おきに投与（ＱＯＤ）したＣＭＰ番号ＶＩ（ＴＬＲ７アゴニスト）（破線；長方形）；１．５ｍｇ／ｋｇで投与したＣＭＰ番号１５＿１（抗ＨＢＶ ＡＳＯ）（破線；三角形）；又は両方の組合せ（実線及び正方形）での処置後。パネルＢ 生理食塩水（ビヒクル、破線及び円）；１００ｍｇ／ｋｇを毎週投与（ＱＷ）したＣＭＰ番号ＶＩ（ＴＬＲ７アゴニスト）（破線；長方形）；１．５ｍｇ／ｋｇで投与したＣＭＰ番号１５＿１（抗ＨＢＶ ＡＳＯ）（破線；三角形）；又は両方の組合せ（実線及び正方形）での処置後のマウス。パネルＣ 生理食塩水（ビヒクル、破線及び円）；１００ｍｇ／ｋｇを１日おきに投与（ＱＯＤ）したＣＭＰ番号ＶＩ（ＴＬＲ７アゴニスト）（破線；長方形）；７．５ｍｇ／ｋｇで投与したＣＭＰ番号１５＿１（抗ＨＢＶ ＡＳＯ）（破線；三角形）；又は両方の組合せ（実線及び正方形）での処置後。パネルＤ 生理食塩水（ビヒクル、破線及び円）；１００ｍｇ／ｋｇを毎週投与（ＱＷ）したＣＭＰ番号ＶＩ（ＴＬＲ７アゴニスト）（破線；長方形）；７．５ｍｇ／ｋｇで投与したＣＭＰ番号１５＿１（抗ＨＢＶ ＡＳＯ）（破線；三角形）；又は両方の組合せ（実線及び正方形）での処置後。 ＡＡＶ／ＨＢＶマウス由来の血清中のＨＢｓＡｇに対する様々な単独及び組合せ処置の効果を示す。パネルＡ 生理食塩水（ビヒクル、破線及び円）；１００ｍｇ／ｋｇを１日おきに投与（ＱＯＤ）したＣＭＰ番号ＶＩ（ＴＬＲ７アゴニスト）（破線；長方形）；１．５ｍｇ／ｋｇで投与したＣＭＰ番号１５＿１（抗ＨＢＶ ＡＳＯ）（破線；三角形）；又は両方の組合せ（実線及び正方形）での処置後。パネルＢ 生理食塩水（ビヒクル、破線及び円）；１００ｍｇ／ｋｇを毎週投与（ＱＷ）したＣＭＰ番号ＶＩ（ＴＬＲ７アゴニスト）（破線；長方形）；１．５ｍｇ／ｋｇで投与したＣＭＰ番号１５＿１（抗ＨＢＶ ＡＳＯ）（破線；三角形）；又は両方の組合せ（実線及び正方形）での処置後のマウス。パネルＣ 生理食塩水（ビヒクル、破線及び円）；１００ｍｇ／ｋｇを１日おきに投与（ＱＯＤ）したＣＭＰ番号ＶＩ（ＴＬＲ７アゴニスト）（破線；長方形）；７．５ｍｇ／ｋｇで投与したＣＭＰ番号１５＿１（抗ＨＢＶ ＡＳＯ）（破線；三角形）；又は両方の組合せ（実線及び正方形）での処置後。パネルＤ 生理食塩水（ビヒクル、破線及び円）；１００ｍｇ／ｋｇを毎週投与（ＱＷ）したＣＭＰ番号ＶＩ（ＴＬＲ７アゴニスト）（破線；長方形）；７．５ｍｇ／ｋｇで投与したＣＭＰ番号１５＿１（抗ＨＢＶ ＡＳＯ）（破線；三角形）；又は両方の組合せ（実線及び正方形）での処置後。 ＨＢＶゲノムの構成の概略図上のＲＮＡｉ標的部位の例を示す。 ＨＤＩマウスにおけるＨＢｓＡｇ発現を減少させるためのオリゴヌクレオチドの単回用量評価を示す。 ＨＢｓＡｇ標的化オリゴヌクレオチドを用いた特定の投与レジメン中の経時的な血漿ＨＢｓＡｇレベルのグラフ表示を示す。この実施例に示されるように、オリゴヌクレオチドは前臨床効力を示し、投与期間を超えて十分に低下したレベルを維持した。 レポーターアッセイを使用したＨｅＬａ細胞におけるＨＢｓＡｇマッピングの結果を示すグラフを示す。ＨＢＶゲノムの２５４位を標的とする非修飾ｓｉＲＮＡを、特定の濃度で陽性対照として使用した。Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒから市販されているサイレンサーｓｉＲＮＡをこれらの実験の陰性対照として用いた。エラーバーは、ＳＥＭを表す。 ＨＢｓＡｇ標的化オリゴヌクレオチドＨＢＶ－２１９の設計されたミスマッチがＨＢＶ遺伝子型全体のカバレッジを増加させることを示す遺伝子型保存比較を示す。 ＨＢＶ遺伝子型Ａをプロトタイプ配列として使用するｐｓｉＣＨＥＣＫ２レポーターアッセイ用に設計されたベクターを示す。 ミスマッチを導入する効果を評価するために設計されたオリゴヌクレオチドのいくつかの例を示す。親鎖及びミスマッチ鎖のオリゴヌクレオチド配列は、整列され、ミスマッチ位置はボックスで示されている。ｐｓｉＣＨＥＣＫ２レポーターアッセイで使用される対応するレポーター配列をさらに示す。 ガイド鎖のミスマッチがインビボで許容されることを実証する、ミスマッチ試験で評価されたオリゴヌクレオチドの単回用量滴定プロットを示す。 ＨＢｓＡｇ標的化オリゴヌクレオチドへのミスマッチの組み込みがインビボ効力に悪影響を及ぼさないことを実証するインビボ用量滴定プロットを示す。 化学修飾を有しており二重鎖形態のＨＢｓＡｇ標的化オリゴヌクレオチド（ＨＢＶ（ｓ）－２１９）の例を示す。より濃い陰影は、２’－Ｏ－メチルリボヌクレオチドを表す。より明るい陰影は、２’－フルオロデオキシリボヌクレオチドを表す。 肝細胞におけるＨＢＶコア抗原（ＨＢｃＡｇ）の細胞内分布を検出する免疫組織化学的染色結果を示す。 検出されたＲＮＡ転写物配列をＨＢＶ ｐｇＲＮＡに対してマッピングしたＲＮＡ配列決定結果を示す。 ＨＢＶの流体力学的注射（ＨＤＩ）モデルにおける、ビヒクル対照と比較したＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡを標的とするＨＢＶ（ｓ）－２１９オリゴヌクレオチド前駆体ＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２及びＨＢＶ Ｘ抗原（ＨＢｘＡｇ）ｍＲＮＡを標的とするＲＮＡｉオリゴヌクレオチドでの処置後のＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡ発現の時間経過を示す。 ＡＡＶ－ＨＢＶモデルにおける、ビヒクル対照と比較したＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡを標的とするＨＢＶ（ｓ）－２１９オリゴヌクレオチド前駆体ＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２及びＨＢｘＡｇ ｍＲＮＡを標的とするＲＮＡｉオリゴヌクレオチドでの処置後のＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡ発現の時間経過を示す。 ビヒクル対照及びＨＢｘＡｇ ｍＲＮＡを標的とするＲＮＡｉオリゴヌクレオチド（ＧａｌＸＣ－ＨＢＶＸ）と比較したＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡを標的とするＨＢＶ（ｓ）－２１９オリゴヌクレオチドでの処置後のＡＡＶ－ＨＢＶモデル及びＨＢＶのＨＤＩモデルから得られた肝細胞におけるＨＢｃＡｇの細胞内分布を示す免疫組織化学染色結果を示す。 ＰＸＢ－ＨＢＶモデルにおけるＨＢＶ（ｓ）－２１９前駆体１（ＨＢＶ（ｓ）－２１９ Ｐ１）の抗ウイルス活性を示す。９匹のマウスのコホートに、ＰＢＳ中の０又は３ｍｇ／ｋｇのＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ１のいずれかの３回の毎週の用量を皮下投与した。各コホートからの６匹のマウスを、血清ＨＢｓＡｇ及び血清ＨＢＶ ＤＮＡについて、示される各時点（図２４Ａ及び図２４Ｂ）で非末端下顎頬出血によって分析した。ＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ１の初回用量から開始して２８日目に、残りの全てのマウスを安楽死させ、ＲＴ－ｑＰＣＲによる肝臓ＨＢＶ ＤＮＡ（図２４Ｃ）及び肝臓ｃｃｃＤＮＡ（図２４Ｄ）のために肝臓生検を収集した。 ＰＸＢ－ＨＢＶモデルにおけるＨＢＶ（ｓ）－２１９前駆体１（ＨＢＶ（ｓ）－２１９ Ｐ１）の抗ウイルス活性を示す。９匹のマウスのコホートに、ＰＢＳ中の０又は３ｍｇ／ｋｇのＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ１のいずれかの３回の毎週の用量を皮下投与した。各コホートからの６匹のマウスを、血清ＨＢｓＡｇ及び血清ＨＢＶ ＤＮＡについて、示される各時点（図２４Ａ及び図２４Ｂ）で非末端下顎頬出血によって分析した。ＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ１の初回用量から開始して２８日目に、残りの全てのマウスを安楽死させ、ＲＴ－ｑＰＣＲによる肝臓ＨＢＶ ＤＮＡ（図２４Ｃ）及び肝臓ｃｃｃＤＮＡ（図２４Ｄ）のために肝臓生検を収集した。 ＰＸＢ－ＨＢＶモデルにおけるＨＢＶ（ｓ）－２１９前駆体１（ＨＢＶ（ｓ）－２１９ Ｐ１）の抗ウイルス活性を示す。９匹のマウスのコホートに、ＰＢＳ中の０又は３ｍｇ／ｋｇのＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ１のいずれかの３回の毎週の用量を皮下投与した。各コホートからの６匹のマウスを、血清ＨＢｓＡｇ及び血清ＨＢＶ ＤＮＡについて、示される各時点（図２４Ａ及び図２４Ｂ）で非末端下顎頬出血によって分析した。ＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ１の初回用量から開始して２８日目に、残りの全てのマウスを安楽死させ、ＲＴ－ｑＰＣＲによる肝臓ＨＢＶ ＤＮＡ（図２４Ｃ）及び肝臓ｃｃｃＤＮＡ（図２４Ｄ）のために肝臓生検を収集した。 ＰＸＢ－ＨＢＶモデルにおけるＨＢＶ（ｓ）－２１９前駆体１（ＨＢＶ（ｓ）－２１９ Ｐ１）の抗ウイルス活性を示す。９匹のマウスのコホートに、ＰＢＳ中の０又は３ｍｇ／ｋｇのＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ１のいずれかの３回の毎週の用量を皮下投与した。各コホートからの６匹のマウスを、血清ＨＢｓＡｇ及び血清ＨＢＶ ＤＮＡについて、示される各時点（図２４Ａ及び図２４Ｂ）で非末端下顎頬出血によって分析した。ＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ１の初回用量から開始して２８日目に、残りの全てのマウスを安楽死させ、ＲＴ－ｑＰＣＲによる肝臓ＨＢＶ ＤＮＡ（図２４Ｃ）及び肝臓ｃｃｃＤＮＡ（図２４Ｄ）のために肝臓生検を収集した。 ＨＢＶ（ｓ）－２１９前駆体２（ＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２）が、エンテカビルの抗ウイルス活性を増強することを示す。ＨＢＶマウス流体力学的注射（ＨＤＩ）モデルにおいて、１日目に単回用量のＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２をマウスの皮下に投与し、続いて５００ｎｇ／ｋｇのエンテカビル（ＥＴＶ）を１４日間毎日経口投与した。循環ウイルス量（ＨＢＶ ＤＮＡ）をｑＰＣＲによって測定した（図２５Ａ）。血漿ＨＢｓＡｇレベルをＥＬＩＳＡによって測定した（図２５Ｂ）。肝臓ＨＢＶ ｍＲＮＡ及びｐｇＲＮＡレベルをｑＰＣＲによって測定した（図２５Ｃ）。結果は、併用療法による明らかな相加効果を示す。ＥＴＶ療法単独では、循環ＨＢｓＡｇ又は肝臓ウイルスＲＮＡに対する有効性は示されない。ＨＢｓＡｇ又はＨＢＶ ＲＮＡによって測定されるＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２の抗ウイルス活性は、ＥＴＶの同時投与によって影響されない。「ＢＬＯＤ」は「検出限界未満」を意味する。 ＨＢＶ（ｓ）－２１９前駆体２（ＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２）が、エンテカビルの抗ウイルス活性を増強することを示す。ＨＢＶマウス流体力学的注射（ＨＤＩ）モデルにおいて、１日目に単回用量のＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２をマウスの皮下に投与し、続いて５００ｎｇ／ｋｇのエンテカビル（ＥＴＶ）を１４日間毎日経口投与した。循環ウイルス量（ＨＢＶ ＤＮＡ）をｑＰＣＲによって測定した（図２５Ａ）。血漿ＨＢｓＡｇレベルをＥＬＩＳＡによって測定した（図２５Ｂ）。肝臓ＨＢＶ ｍＲＮＡ及びｐｇＲＮＡレベルをｑＰＣＲによって測定した（図２５Ｃ）。結果は、併用療法による明らかな相加効果を示す。ＥＴＶ療法単独では、循環ＨＢｓＡｇ又は肝臓ウイルスＲＮＡに対する有効性は示されない。ＨＢｓＡｇ又はＨＢＶ ＲＮＡによって測定されるＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２の抗ウイルス活性は、ＥＴＶの同時投与によって影響されない。「ＢＬＯＤ」は「検出限界未満」を意味する。 ＨＢＶ（ｓ）－２１９前駆体２（ＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２）が、エンテカビルの抗ウイルス活性を増強することを示す。ＨＢＶマウス流体力学的注射（ＨＤＩ）モデルにおいて、１日目に単回用量のＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２をマウスの皮下に投与し、続いて５００ｎｇ／ｋｇのエンテカビル（ＥＴＶ）を１４日間毎日経口投与した。循環ウイルス量（ＨＢＶ ＤＮＡ）をｑＰＣＲによって測定した（図２５Ａ）。血漿ＨＢｓＡｇレベルをＥＬＩＳＡによって測定した（図２５Ｂ）。肝臓ＨＢＶ ｍＲＮＡ及びｐｇＲＮＡレベルをｑＰＣＲによって測定した（図２５Ｃ）。結果は、併用療法による明らかな相加効果を示す。ＥＴＶ療法単独では、循環ＨＢｓＡｇ又は肝臓ウイルスＲＮＡに対する有効性は示されない。ＨＢｓＡｇ又はＨＢＶ ＲＮＡによって測定されるＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２の抗ウイルス活性は、ＥＴＶの同時投与によって影響されない。「ＢＬＯＤ」は「検出限界未満」を意味する。 Ｓ抗原（ＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２）又はＸ抗原（ＧａｌＸＣ－ＨＢＶＸと命名）を標的とするＧａｌＮａｃコンジュゲートオリゴヌクレオチドのＨＢｓＡｇ抑制活性の比較を示す。結果は、ＨＢＶＳ－２１９Ｐ２が、ＧａｌＸＣ－ＨＢＶＸ又は両方のＲＮＡｉ剤の等モルの組合せよりも長い期間にわたってＨＢｓＡｇを抑制することを示す。図２６Ａは、ＨＢＶゲノムにおけるＲＮＡｉ標的部位の位置が、ＨＢＶ発現マウスにおけるＨＢｓＡｇ回復動態に影響を及ぼすことを示す。図２６Ｂは、投与後２週間（左パネル）及び投与後９週間（右パネル）の血漿ＨＢｓＡｇレベルを示し、単独又はＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２と組み合わせてＨＢＶＸコード領域を標的化すると、活性期間が短くなることを示す。個々の動物データを示した。いくつかのデータ点（最も明るい灰色の円）は検出限界未満であった。 Ｓ抗原（ＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２）又はＸ抗原（ＧａｌＸＣ－ＨＢＶＸと命名）を標的とするＧａｌＮａｃコンジュゲートオリゴヌクレオチドのＨＢｓＡｇ抑制活性の比較を示す。結果は、ＨＢＶＳ－２１９Ｐ２が、ＧａｌＸＣ－ＨＢＶＸ又は両方のＲＮＡｉ剤の等モルの組合せよりも長い期間にわたってＨＢｓＡｇを抑制することを示す。図２６Ａは、ＨＢＶゲノムにおけるＲＮＡｉ標的部位の位置が、ＨＢＶ発現マウスにおけるＨＢｓＡｇ回復動態に影響を及ぼすことを示す。図２６Ｂは、投与後２週間（左パネル）及び投与後９週間（右パネル）の血漿ＨＢｓＡｇレベルを示し、単独又はＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２と組み合わせてＨＢＶＸコード領域を標的化すると、活性期間が短くなることを示す。個々の動物データを示した。いくつかのデータ点（最も明るい灰色の円）は検出限界未満であった。 ＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２、ＧａｌＸＣ－ＨＢＶＸ、又は１：１の組合せで処置したＨＢＶ発現マウスにおけるＨＢＶコア抗原（ＨＢｃＡｇ）の細胞内位置を示す。図２７Ａは、投与後１、２、６、９及び１３週目に得られ、ＨＢｃＡｇについて染色された肝臓切片中の代表的な肝細胞を示す。図２７Ｂは、各動物（ｎ＝３／群、動物あたり５０個の細胞を計数、投与後２週間）における核染色を有するＨＢｃＡｇ陽性細胞のパーセンテージを示す。Ｘ及びＳオープンリーディングフレーム内を標的とする代替配列を設計及び試験した。図２７Ｃは、Ｓ抗原又はＸ抗原のいずれかを標的とする代替的なＲＮＡｉオリゴの投与後２、３及び９週目に得られた肝細胞におけるＨＢｃＡｇの細胞内分布を示す。 ＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２、ＧａｌＸＣ－ＨＢＶＸ、又は１：１の組合せで処置したＨＢＶ発現マウスにおけるＨＢＶコア抗原（ＨＢｃＡｇ）の細胞内位置を示す。図２７Ａは、投与後１、２、６、９及び１３週目に得られ、ＨＢｃＡｇについて染色された肝臓切片中の代表的な肝細胞を示す。図２７Ｂは、各動物（ｎ＝３／群、動物あたり５０個の細胞を計数、投与後２週間）における核染色を有するＨＢｃＡｇ陽性細胞のパーセンテージを示す。Ｘ及びＳオープンリーディングフレーム内を標的とする代替配列を設計及び試験した。図２７Ｃは、Ｓ抗原又はＸ抗原のいずれかを標的とする代替的なＲＮＡｉオリゴの投与後２、３及び９週目に得られた肝細胞におけるＨＢｃＡｇの細胞内分布を示す。 ＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２、ＧａｌＸＣ－ＨＢＶＸ、又は１：１の組合せで処置したＨＢＶ発現マウスにおけるＨＢＶコア抗原（ＨＢｃＡｇ）の細胞内位置を示す。図２７Ａは、投与後１、２、６、９及び１３週目に得られ、ＨＢｃＡｇについて染色された肝臓切片中の代表的な肝細胞を示す。図２７Ｂは、各動物（ｎ＝３／群、動物あたり５０個の細胞を計数、投与後２週間）における核染色を有するＨＢｃＡｇ陽性細胞のパーセンテージを示す。Ｘ及びＳオープンリーディングフレーム内を標的とする代替配列を設計及び試験した。図２７Ｃは、Ｓ抗原又はＸ抗原のいずれかを標的とする代替的なＲＮＡｉオリゴの投与後２、３及び９週目に得られた肝細胞におけるＨＢｃＡｇの細胞内分布を示す。 健康な患者におけるＨＢＶ（ｓ）－２１９の安全性及び忍容性、並びにＨＢＶ患者におけるＨＢＶ（ｓ）－２１９の治療有効性を評価するように設計された研究のコホート情報による用量を示す。 ＨＢＶ（ｓ）－２１９及びＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２の化学構造を示す。（図２９Ａ）ＨＢＶ（ｓ）－２１９の化学構造。（図２９Ｂ）ＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２の化学構造。 ＨＢＶ（ｓ）－２１９及びＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２の化学構造を示す。（図２９Ａ）ＨＢＶ（ｓ）－２１９の化学構造。（図２９Ｂ）ＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２の化学構造。 ＨＢＶ（ｓ）－２１９及びＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２の化学構造を示す。（図２９Ａ）ＨＢＶ（ｓ）－２１９の化学構造。（図２９Ｂ）ＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２の化学構造。 ＨＢＶ（ｓ）－２１９及びＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２の化学構造を示す。（図２９Ａ）ＨＢＶ（ｓ）－２１９の化学構造。（図２９Ｂ）ＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２の化学構造。 ＨＢＶ（ｓ）－２１９及びＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２の化学構造を示す。（図２９Ａ）ＨＢＶ（ｓ）－２１９の化学構造。（図２９Ｂ）ＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２の化学構造。 ＨＢＶ（ｓ）－２１９及びＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２の化学構造を示す。（図２９Ａ）ＨＢＶ（ｓ）－２１９の化学構造。（図２９Ｂ）ＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２の化学構造。 ＨＢＶ（ｓ）－２１９及びＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２の化学構造を示す。（図２９Ａ）ＨＢＶ（ｓ）－２１９の化学構造。（図２９Ｂ）ＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２の化学構造。 ＨＢＶ（ｓ）－２１９及びＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２の化学構造を示す。（図２９Ａ）ＨＢＶ（ｓ）－２１９の化学構造。（図２９Ｂ）ＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２の化学構造。 経時的なＨＢｓＡｇ力価の低下に対するＨＢＶ－ＬＮＡ（ＣＭＰ番号１５＿１、本発明によるアンチセンスオリゴヌクレオチド）及びＤＣＲ－Ｓ２１９（本発明によるＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、具体的にはｓｉＲＮＡ）の効果を示す。「ＤＣＲ－ＡＵＤ１」（ＨＢＶ以外の配列を標的とする対照ｓｉＲＮＡ）及び「ビヒクル」（滅菌水）は陰性対照である。図３０のＨＢＶ－ＬＮＡの用量は６．６ｍｇ／ｋｇであり、ＤＣＲ－Ｓ２１９の用量は９ｍｇ／ｋｇであるが、ＨＢＶ－ＬＮＡのモル用量はＤＣＲ－Ｓ２１９のモル用量の約３倍である。
定義
オリゴヌクレオチド
本明細書で用いられる「オリゴヌクレオチド」という用語は、２つ以上の共有結合したヌクレオシドを含む分子として当業者に一般に理解されるように定義される。このような共有結合したヌクレオシドはまた、核酸分子又はオリゴマーとも称されうる。オリゴヌクレオチドは、通常、固相化学合成と、その後の精製及び単離によって研究室内で作製される。オリゴヌクレオチドの配列に言及する場合には、共有結合したヌクレオチド又はヌクレオシドの核酸塩基部分の配列又は順序、若しくはその修飾が言及される。本発明のオリゴヌクレオチドは、人工のものであり、化学的に合成され、通常は精製又は単離される。本発明のオリゴヌクレオチドは、例えば２’糖修飾ヌクレオシド等の１種以上の修飾ヌクレオシド又はヌクレオチドを含んでもよい。
さらに、オリゴヌクレオチドは、例えば、１００ヌクレオチド長未満の短い核酸である。オリゴヌクレオチドは、一本鎖又は二本鎖であってよい。オリゴヌクレオチドは、二重鎖領域を有していても有していなくてもよい。一連の非限定的な例として、オリゴヌクレオチドは、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、短鎖ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、ダイサー基質干渉ＲＮＡ（ｄｓｉＲＮＡ）、アンチセンスオリゴヌクレオチド、短鎖ｓｉＲＮＡ、又は一本鎖ｓｉＲＮＡであり得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、二本鎖オリゴヌクレオチドは、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドである。
合成
本明細書で使用される場合、「合成」という用語は、人工的に合成された（例えば、機械（例えば、固体核酸合成装置）を使用する）か、そうでなければ、分子を通常産生する天然源（例えば、細胞又は生物）に由来しない核酸又は他の分子を指す。
二本鎖オリゴヌクレオチド
本明細書で使用される場合、「二本鎖オリゴヌクレオチド」という用語は、実質的に二重鎖形態のオリゴヌクレオチドを指す。いくつかの実施形態において、二本鎖オリゴヌクレオチドの二重鎖領域の相補的な塩基対合は、共有結合的に分離した核酸鎖のヌクレオチドの逆平行配列の間に形成される。いくつかの実施形態において、二本鎖オリゴヌクレオチドの二重鎖領域の相補的な塩基対合は、共有結合している核酸鎖のヌクレオチドの逆平行配列の間に形成される。いくつかの実施形態において、二本鎖オリゴヌクレオチドの二重鎖領域の相補的な塩基対合は、一緒に塩基対合するヌクレオチドの相補的な逆平行配列を提供するために（例えば、ヘアピンを介して）折り畳まれる一本鎖核酸から形成される。いくつかの実施形態において、二本鎖オリゴヌクレオチドは、互いと完全に二重鎖化された２本の共有結合的に分離した核酸鎖を含む。しかしながら、いくつかの実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、部分的に二重鎖化されている、例えば一端又は両端にオーバーハングを有する２本の共有結合的に分離した核酸鎖を含む。いくつかの実施形態では、二本鎖オリゴヌクレオチドは、部分的に相補的なヌクレオチドの逆平行配列を含み、したがって、内部ミスマッチ又は末端ミスマッチを含み得る１つ又は複数のミスマッチを有し得る。
鎖
本明細書で使用される「鎖」という用語は、ヌクレオチド間結合（例えば、ホスホジエステル結合、ホスホロチオエート結合）を介して互いに連結されたヌクレオチドの単一の連続した配列を指す。いくつかの実施形態において、鎖は、２つの自由端、例えば、５’末端及び３’末端を有する。
二重鎖
本明細書で使用される場合、核酸（例えば、オリゴヌクレオチド）に関して「二重鎖」という用語は、２つの逆平行配列のヌクレオチドの相補的塩基対合によって形成される構造を指す。
オーバーハング
本明細書で使用される「オーバーハング」という用語は、一方の鎖又は領域が二重鎖を形成する相補鎖の末端を越えて延びる一方の鎖又は領域から生じる末端非塩基対合ヌクレオチド（複数可）を指す。いくつかの実施形態では、オーバーハングは、二本鎖オリゴヌクレオチドの５’末端又は３’末端の二重鎖領域から延びる１つ又は複数の不対ヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、オーバーハングは、二本鎖オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖又はセンス鎖上の３’又は５’オーバーハングである。
ループ
本明細書で使用される用語「ループ」は、適切なハイブリダイゼーション条件下（例えば、リン酸緩衝液中、細胞中）で、不対合領域に隣接する２つの逆平行領域がハイブリダイズして二重鎖（「ステム」と呼ばれる）を形成するように互いに十分相補的な核酸の２つの逆平行領域に隣接する核酸（例えば、オリゴヌクレオチド）の不対合領域を指す。
ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド
本明細書で使用される「ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド」という用語は、（ａ）センス鎖（パッセンジャー）及びアンチセンス鎖（ガイド）を有する二本鎖オリゴヌクレオチドであって、アンチセンス鎖又はその一部が、標的ｍＲＮＡの切断においてアルゴノート２（Ａｇｏ２）エンドヌクレアーゼによって使用される、二本鎖オリゴヌクレオチド、又は（ｂ）一本鎖アンチセンス鎖を有する一本鎖オリゴヌクレオチドであって、そのアンチセンス鎖（又はその一部）が、標的ｍＲＮＡの切断においてＡｇｏ２エンドヌクレアーゼによって使用される、一本鎖オリゴヌクレオチドのいずれかを指す。
ＲＮＡｉ剤
本明細書で同じ意味で用いられる、用語「ｉＲＮＡ」、「ＲＮＡｉ剤」、「ｉＲＮＡ剤」、及び「ＲＮＡ干渉剤」は、本明細書におけるＲＮＡヌクレオシドを含有し、ＲＮＡが誘導するサイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）経路により、ＲＮＡ転写産物の標的開裂を媒介する、作用物質、例えばＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを意味する。ｉＲＮＡは、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）として知られるプロセスを通して、ｍＲＮＡの配列特異的分解を指令する。ｉＲＮＡは、細胞、例えば、哺乳動物対象などの対象内の細胞における、標的核酸発現を調節する、例えば阻害する。ＲＮＡｉ剤は、一本鎖ＲＮＡｉ剤及び二本鎖ｓｉＲＮＡ、並びに短鎖ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）を含む。本発明のオリゴヌクレオチド、又はその連続ヌクレオチド配列は、ＲＮＡｉ剤の形態であることができる、又は、ｓｉＲＮＡ若しくはｓｈＲＮＡなどのＲＮＡｉ剤の一部を形成することができる。本発明のいくつかの実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチド、又はその連続ヌクレオチド配列は、ｓｉＲＮＡなどのＲＮＡｉ剤である。
ｓｉＲＮＡ
用語「ｓｉＲＮＡ」は、小型の干渉性リボ核酸ＲＮＡｉ剤を意味し、二本鎖ＲＮＡ分子の一種であり、当該技術分野においては、短鎖干渉ＲＮＡ又はサイレンシングＲＮＡとしても知られている。ｓｉＲＮＡは典型的には、（パッセンジャー鎖とも呼ばれる）センス鎖、及び（ガイド鎖とも呼ばれる）アンチセンス鎖を含み、各鎖は１７～３０ヌクレオチド長、典型的には１９～２５ヌクレオシド長であり、アンチセンス鎖は、標的核酸（好適には成熟ｍＲＮＡ配列）に、完全に相補性であるといった、相補性であり、センス鎖はアンチセンス鎖に相補性であるために、センス鎖とアンチセンス鎖は二重鎖又は二重鎖領域を形成する。ｓｉＲＮＡ鎖は、平滑末端二重鎖を形成することができ、又は有利には、センス鎖及びアンチセンス鎖の３’末端は、例えば１、２、又は３個のヌクレオシドの３’オーバーハングを形成することができる。いくつかの実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖の両方は、２ｎｔ３’オーバーハングを有する。したがって、二重鎖領域は、例えば１７～２５ヌクレオチド長、例えば２１～２３ヌクレオチド長であり得る。
一旦細胞内に入ると、アンチセンス鎖は、標的核酸の標的分解又は標的阻害を媒介するＲＩＳＣ複合体に組み込まれる。ｓｉＲＮＡは、典型的には、ＲＮＡヌクレオシドに加えて修飾ヌクレオシドを含むか、又はいくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡ鎖のヌクレオチドの全てが修飾され得る（ＬＮＡ（例えば、国際公開第２００４０８３４３０号、国際公開第２００７０８５４８５号を参照）、２’－フルオロ、２’－Ｏ－メチル又は２’－Ｏ－メトキシエチルなどのセンス２’糖修飾ヌクレオシドがｓｉＲＮＡに組み込まれてもよい）。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡのパッセンジャー鎖は不連続であることができる（例えば、国際公開第２００７１０７１６２号を参照のこと）。ｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖のシード領域にて生じる、熱不安定化ヌクレオチドの組み込みが、ｓｉＲＮＡのオフターゲット活性の低減に有用であると、報告されている（例えば、国際公開第１８０９８３２８号を参照）。
いくつかの実施形態では、本発明のｓｉＲＮＡなどの、ｄｓＲＮＡ剤は、少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、センス鎖のヌクレオチドの実質的に全てが修飾を含む；アンチセンス鎖のヌクレオチドの実質的に全てが修飾を含む、又は、センス鎖のヌクレオチドの実質的に全て、及び、アンチセンス鎖のヌクレオチドの実質的に全てが修飾を含む。さらに別の実施形態では、センス鎖のヌクレオチドの全てが修飾を含む；アンチセンス鎖のヌクレオチドの全てが修飾を含む；又は、センス鎖のヌクレオチドの全て、及び、アンチセンス鎖のヌクレオチドの全てが修飾を含む。
いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、デオキシ－ヌクレオチド、３’末端デオキシ－チミン（ｄＴ）ヌクレオチド、２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、２’－デオキシ修飾ヌクレオチド、ロックド・ヌクレオチド、アンロックド・ヌクレオチド、配座制限ヌクレオチド、拘束（ｃｏｎｓｔｒａｉｎｅｄ）エチルヌクレオチド、無塩基ヌクレオチド、２’－アミノ修飾ヌクレオチド、２’－Ｏ－アリル修飾ヌクレオチド、２’－Ｃ－アルキル修飾ヌクレオチド、２’－ヒドロキシル修飾ヌクレオチド、２’－メトキシエチル修飾ヌクレオチド、２’－Ｏ－アルキル修飾ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、
ホスホロアミデート、非天然塩基含有ヌクレオチド、非結合ヌクレオチド、テトラヒドロピラン修飾ヌクレオチド、１，５－無水ヘキシトール修飾ヌクレオチド、シクロヘキセニル修飾ヌクレオチド、ホスホロチオエート基含有ヌクレオチド、メチルホスホネート基含有ヌクレオチド、５’－ホスホネート含有ヌクレオチド、５’－ホスフェート模倣物含有ヌクレオチド、グリコール変性ヌクレオチド、及び２－Ｏ－（Ｎ－メチルアセトアミド）修飾ヌクレオチド、並びにこれらの組合せからなる群から独立して選択されることができる。好適には、ｓｉＲＮＡは、アンチセンス鎖の５’末端に５’リン酸基又は５’リン酸模倣物を含む。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の５’末端は、ＲＮＡヌクレオシドである。
一実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤は、少なくとも１つのホスホロチオエート又はメチルホスホネートヌクレオチド間結合をさらに含む。ホスホロチオエート若しくはメチルホスホネートのヌクレオチド間結合は一方若しくは両方の鎖の３’末端にあり得る（例えば、アンチセンス鎖又はセンス鎖）か、又はホスホロチオエート若しくはメチルホスホネートのヌクレオシド間結合は一方若しくは両方の鎖の５’末端にあり得る（例えば、アンチセンス鎖又はセンス鎖）か、又はホスホロチオエート若しくはメチルホスホネートのヌクレオシド間結合は一方又は両方の鎖の５’末端及び３’末端の両方にあり得る（例えば、アンチセンス鎖又はセンス鎖）。いくつかの実施形態では、残りのヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル結合である。
ｄｓＲＮＡ剤はリガンドをさらに含むことができる。いくつかの実施形態では、リガンドは、センス鎖の３’末端に結合する。生物学的分布については、ｓｉＲＮＡを標的リガンドに結合させるか、及び／又は例えば、脂質ナノ粒子に製剤化することができる。
本発明の他の態様は、治療的使用に適したｓｉＲＮＡ分子といったこれらのｄｓＲＮＡを含む医薬組成物と、例えば本明細書に開示されている種々の疾患状態の処置のために、本発明のｓｉＲＮＡといったｄｓＲＮＡ分子を投与することによって標的遺伝子の発現を阻害する方法と、に関する。
テトラループ
本明細書で使用される場合、「テトラループ」という用語は、ヌクレオチドの隣接配列のハイブリダイゼーションによって形成される隣接二重鎖の安定性を増加させるループを指す。安定性の増加は、ランダムに選択されたヌクレオチドの配列からなる同等の長さのループのセットから平均して予想される隣接ステム二重鎖のＴｍよりも高い隣接ステム二重鎖の融解温度（Ｔｍ）の増加として検出可能である。例えば、テトラループは、１０ｍＭのＮａＨＰＯ４中、少なくとも５０℃、少なくとも５５℃、少なくとも５６℃、少なくとも５８℃、少なくとも６０℃、少なくとも６５℃又は少なくとも７５℃の融解温度を、長さが少なくとも２塩基対の二重鎖を含むヘアピンに与えることができる。いくつかの実施形態では、テトラループは、スタッキング相互作用によって隣接するステム二重鎖の塩基対を安定化し得る。さらに、テトラループ中のヌクレオチド間の相互作用には、非ワトソン・クリック塩基対合、スタッキング相互作用、水素結合及び接触相互作用（Ｃｈｅｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ １９９０ Ａｕｇ．１６；３４６（６２８５）：６８０－２；Ｈｅｕｓ ａｎｄ Ｐａｒｄｉ，Ｓｃｉｅｎｃｅ １９９１ Ｊｕｌ．１２；２５３（５０１６）：１９１－４）が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、テトラループは４～５個のヌクレオチドを含む。ある特定の実施形態では、テトラループは、修飾されていてもされていなくてもよい（例えば、標的化部分にコンジュゲートされていてもされていなくてもよい）、３、４、５、又は６個のヌクレオチドを含むか、又はそれらからなる。一実施形態では、テトラループは４つのヌクレオチドからなる。任意のヌクレオチドをテトラループに使用してもよく、Ｃｏｒｎｉｓｈ－Ｂｏｗｄｅｎ（１９８５）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１３：３０２１－３０３０に記載されるように、そのようなヌクレオチドの標準ＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ記号を使用してもよい。例えば、文字「Ｎ」は、任意の塩基がその位置にあり得ることを示すために使用され得、文字「Ｒ」は、Ａ（アデニン）又はＧ（グアニン）がその位置にあり得ることを示すために使用され得、「Ｂ」は、Ｃ（シトシン）、Ｇ（グアニン）又はＴ（チミン）がその位置にあり得ることを示すために使用され得る。テトラループの例には、テトラループのＵＮＣＧファミリー（例えば、ＵＵＣＧ）、テトラループのＧＮＲＡファミリー（例えば、ＧＡＡＡ）、及びＣＵＵＧテトラループ（Ｗｏｅｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．１９９０ Ｎｏｖｅｍｂｅｒ；８７（２１）：８４６７－７１；Ａｎｔａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９９１ Ｎｏｖ．１１；１９（２１）：５９０１－５）が含まれる。ＤＮＡテトラループの例には、テトラループのｄ（ＧＮＮＡ）ファミリー（例えば、ｄ（ＧＴＴＡ））、テトラループのｄ（ＧＮＲＡ）ファミリー、テトラループのｄ（ＧＮＡＢ）ファミリー、テトラループのｄ（ＣＮＮＧ）ファミリー、及びテトラループのｄ（ＴＮＣＧ）ファミリー（例えば、ｄ（ＴＴＣＧ））が含まれる。例えば、Ｎａｋａｎｏ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４１（４８），１４２８１－１４２９２，２００２．ＳＨＩＮＪＩ ｅｔ ａｌ．Ｎｉｐｐｏｎ Ｋａｇａｋｋａｉ Ｋｏｅｎ Ｙｏｋｏｓｈｕ ＶＯＬ．７８ｔｈ；ＮＯ．２；ＰＡＧＥ．７３１（２０００）を参照のこと。これらの文献は関連する開示に関して本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、テトラループは、ニックが入ったテトラループ構造内に含まれる。
ニックが入ったテトラループ構造
「ニックが入ったテトラループ構造」は、別個のセンス（パッセンジャー）鎖及びアンチセンス（ガイド）鎖の存在を特徴とするＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの構造であり、センス鎖はアンチセンス鎖と相補性の領域を有し、鎖の少なくとも１つ、一般にセンス鎖は、少なくとも１つの鎖内に形成された隣接するステム領域を安定化するように構成されたテトラループを有する。
アンチセンスオリゴヌクレオチド
本明細書で用いられる「アンチセンスオリゴヌクレオチド」という用語は、標的核酸、特に標的核酸上の連続配列にハイブリダイズすることによって標的遺伝子の発現を調節することができるオリゴヌクレオチドとして定義される。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、本質的に二本鎖ではなく、したがってｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡではない。好ましくは、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは一本鎖である。本発明の単鎖オリゴヌクレオチドは、自己内又は自己間の相補性の程度がオリゴヌクレオチドの全長にわたって５０％未満である限り、ヘアピン又は分子間二重構造（同じオリゴヌクレオチドの２つの分子間の二重鎖）を形成することができるものと理解される。
有利には、本発明の一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヌクレアーゼ耐性を低下させるためＲＮＡヌクレオシドを含まない。
有利には、本発明のオリゴヌクレオチドは、例えば２’糖修飾ヌクレオシドなどの１つ以上の修飾ヌクレオシド又はヌクレオチドを含む。さらに、修飾されていないヌクレオシドがＤＮＡヌクレオシドであることは有利である。
連続ヌクレオチド配列
「連続ヌクレオチド配列」という用語は、標的核酸に相補的なオリゴヌクレオチドの領域を指す。この用語は、本明細書で「連続核酸塩基配列」という用語及び「オリゴヌクレオチドモチーフ配列」という用語と互換的に用いられる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの全てのヌクレオチドが連続ヌクレオチド配列を構成する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、連続ヌクレオチド配列、例えばＦ－Ｇ－Ｆ’ギャップマー領域を含み、任意に、更なるヌクレオチド（複数可）、例えば、官能基を連続ヌクレオチド配列に結合するのに使用され得るヌクレオチドリンカー領域を含んでもよい。ヌクレオチドリンカー領域は、標的核酸に相補的であっても相補的でなくてもよい。オリゴヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列は、それ自体としてオリゴヌクレオチドより長くなることはできないことと、オリゴヌクレオチドは連続ヌクレオチド配列より短くなることはできないことと、が理解される。
ヌクレオチド
ヌクレオチドは、オリゴヌクレオチド及びポリヌクレオチドの構成要素であり、本発明の目的では、天然に存在するヌクレオチド及び天然に存在しないヌクレオチドの両方を含む。本来、ＤＮＡヌクレオチド及びＲＮＡヌクレオチドなどのヌクレオチドは、リボース糖部分、核酸塩基部分、及び１つ以上のリン酸基（ヌクレオシドには存在しない）を含む。ヌクレオシド及びヌクレオチドはまた、互換的に「単位」又は「モノマー」と呼ぶことができる。
デオキシリボヌクレオチド
本明細書で使用される「デオキシリボヌクレオチド」という用語は、リボヌクレオチドと比較して、そのペントース糖の２’位にヒドロキシルの代わりに水素を有するヌクレオチドを指す。修飾デオキシリボヌクレオチドは、糖、リン酸基又は塩基の修飾又は置換を含む、２’位以外の原子の１つ又は複数の修飾又は置換を有するデオキシリボヌクレオチドである。
リボヌクレオチド
本明細書中で使用される用語「リボヌクレオチド」は、そのペントース糖としてリボースを有し、その２’位にヒドロキシル基を含有するヌクレオチドのことを指す。修飾リボヌクレオチドは、リボース、リン酸基又は塩基の修飾又は置換を含む、２’位以外の原子の１つ又は複数の修飾又は置換を有するリボヌクレオチドである。
修飾ヌクレオシド
本明細書で用いられる「修飾ヌクレオシド」又は「ヌクレオシド修飾」という用語は、糖部分又は（核酸）塩基部分の１つ以上の修飾の導入によって、同等のＤＮＡ又はＲＮＡヌクレオシドと比較して修飾されたヌクレオシドを指す。好ましい実施形態では、修飾ヌクレオシドは、修飾された糖部分を含む。修飾ヌクレオシドという用語はまた、「ヌクレオシド類似体」又は修飾「ユニット」又は修飾「モノマー」という用語と互換的に使用されてもよい。非修飾ＤＮＡ又はＲＮＡ糖部分を有するヌクレオシドは、本明細書ではＤＮＡ又はＲＮＡヌクレオシドと称される。ＤＮＡ又はＲＮＡヌクレオシドの塩基領域に修飾を有するヌクレオシドは、それらがワトソン・クリック塩基対合可能な場合には、依然として一般的にＤＮＡ又はＲＮＡと称される。
修飾ヌクレオチド
本明細書で使用される「修飾ヌクレオチド」という用語は、アデニンリボヌクレオチド、グアニンリボヌクレオチド、シトシンリボヌクレオチド、ウラシルリボヌクレオチド、アデニンデオキシリボヌクレオチド、グアニンデオキシリボヌクレオチド、シトシンデオキシリボヌクレオチド及びチミジンデオキシリボヌクレオチドから選択される対応する参照ヌクレオチドと比較して１つ又は複数の化学修飾を有するヌクレオチドを指す。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、天然に存在しないヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、その糖、核酸塩基及び／又はリン酸基に１つ又は複数の化学修飾を有する。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオチドは、対応する参照ヌクレオチドにコンジュゲートされた１つ又は複数の化学部分を有する。典型的には、修飾ヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドが存在する核酸に１つ又は複数の望ましい特性を付与する。例えば、修飾ヌクレオチドは、熱安定性、分解に対する耐性、ヌクレアーゼ耐性、溶解性、バイオアベイラビリティ、生物活性、免疫原性の低下などを改善し得る。
修飾ヌクレオシド間結合
「修飾ヌクレオシド間結合」という用語は、２つのヌクレオシドを共に共有結合する、ホスホジエステル（ＰＯ）結合以外の結合として当業者に一般的に理解されるように定義される。したがって、本発明のオリゴヌクレオチドは、修飾ヌクレオシド間結合を含み得る。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル結合と比較して、オリゴヌクレオチドのヌクレアーゼ耐性を増大させる。天然に存在するオリゴヌクレオチドでは、ヌクレオシド間結合は、隣接するヌクレオシド間のホスホジエステル結合を生成するリン酸基を含む修飾ヌクレオシド間結合は、インビボ使用のためのオリゴヌクレオチドの安定化に特に有用であり、本発明のオリゴヌクレオチドのＤＮＡ又はＲＮＡヌクレオシドの領域、例えばギャップマーオリゴヌクレオチドのギャップ領域Ｇ内、並びに領域Ｆ及びＦ’などの修飾ヌクレオシドの領域におけるヌクレアーゼ切断から保護する役割を果たし得る。
一実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１つ以上の修飾ヌクレオシド間結合が、例えばヌクレアーゼ攻撃に対してより耐性であるように、天然のホスホジエステルから修飾された１つ以上のヌクレオシド間結合を含む。ヌクレアーゼ耐性は、オリゴヌクレオチドを血清中でインキュベートすることによって、又はヌクレアーゼ耐性アッセイ（例えば、ヘビ毒ホスホジエステラーゼ（ＳＶＰＤ））を使用することによって決定することができ、これらの両方は当該技術分野でよく知られている。オリゴヌクレオチドのヌクレアーゼ耐性を増強することができるヌクレオシド間結合は、ヌクレアーゼ耐性ヌクレオシド間結合と呼ばれる。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド又はその連続ヌクレオチド配列の少なくとも５０％のヌクレオシド間結合が修飾されており、例えばオリゴヌクレオチド又はその連続ヌクレオチド配列の、少なくとも６０％、例えば少なくとも７０％、例えば少なくとも７５％、例えば少なくとも８０％、又は例えば少なくとも９０％のヌクレオシド間結合が、修飾されている。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド又はその連続ヌクレオチド配列のヌクレオシド間結合の全てが修飾されている。いくつかの実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチドを非ヌクレオチド官能基、例えばコンジュゲートに結合するヌクレオシドは、ホスホジエステルであり得ることが認識されるであろう。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド又はその連続ヌクレオチド配列のヌクレオシド間結合は全て、ヌクレアーゼ耐性ヌクレオシド間結合である。
本発明のオリゴヌクレオチドでは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合を用いることが有利である。
ホスホロチオエートヌクレオシド間結合は、ヌクレアーゼ耐性、有益な薬物動態、及び製造の容易さに起因して、特に有用である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド又はその連続ヌクレオチド配列の少なくとも５０％のヌクレオシド間結合がホスホロチオエートであり、オリゴヌクレオチド又はその連続ヌクレオチド配列の少なくとも６０％、例えば少なくとも７０％、例えば少なくとも７５％、例えば少なくとも８０％又は例えば少なくとも９０％のヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエートである。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド又はその連続ヌクレオチド配列のヌクレオシド間結合の全てが、ホスホロチオアートである。
いくつかの実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチドは、ホスホロジチオエート結合（複数可）に加えて、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合と、２、３、又は４ホスホジエステル結合などの少なくとも１つのホスホジエステル結合との両方を含む。ギャップマーオリゴヌクレオチドでは、ホスホジエステル結合は、存在する場合には、ギャップ領域Ｇ内の連続ＤＮＡヌクレオシド間に適切に位置していない。
ホスホロチオエート結合などのヌクレアーゼ耐性結合は、標的核酸と二重鎖を形成するときにヌクレアーゼを動員することができるオリゴヌクレオチド領域、例えばギャップマーの領域Ｇにおいて特に有用である。しかしながら、ホスホロチオエート結合は、非ヌクレアーゼ動員領域及び／又は親和性増強領域、例えばギャップマーの領域Ｆ及びＦ’においても有用でありうる。ギャップマーオリゴヌクレオチドは、いくつかの実施形態では、領域Ｆ若しくはＦ’、又は領域Ｆ及びＦ’の両方に１つ以上のホスホジエステル結合を含んでもよく、領域Ｇのヌクレオシド間結合の全てはホスホロチオエートであり得る。
有利には、オリゴヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列の全てのヌクレオシド間結合がホスホロチオエートであるか、又はオリゴヌクレオチドの全てのヌクレオシド間結合がホスホロチオエート結合である。特に、アンチセンスオリゴヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列の全てのヌクレオシド間結合がホスホロチオエートであるか、又はアンチセンスオリゴヌクレオチドの全てのヌクレオシド間結合がホスホロチオエート結合である。
欧州特許第２７４２１３５号に開示されているように、治療用オリゴヌクレオチドは、他のヌクレオシド間結合（ホスホジエステル及びホスホロチオエート以外の）、例えばアルキルホスホネート／メチルホスホネートヌクレオシド間結合を含んでもよいことが認識され、これは欧州特許第２７４２１３５号によれば、例えば別のＤＮＡホスホロチオエートのギャップ領域内で耐性であり得る。
核酸塩基
核酸塩基という用語は、ヌクレオシド及びヌクレオチドに存在するプリン（例えばアデニン及びグアニン）及びピリミジン（例えばウラシル、チミン及びシトシン）部分を含み、これらは核酸ハイブリダイゼーションにおいて水素結合を形成する。本発明の文脈において、核酸塩基という用語はまた、天然に存在する核酸塩基とは異なっていてもよいが、核酸ハイブリダイゼーション中に機能する修飾核酸塩基も包含する。この文脈において、「核酸塩基」とは、アデニン、グアニン、シトシン、チミジン、ウラシル、キサンチン、及びヒポキサンチンなどの天然に存在する核酸塩基と、天然に存在しないバリアントとの両方を指す。このようなバリアントは、例えば、Ｈｉｒａｏ ｅｔ ａｌ（２０１２）Ａｃｃｏｕｎｔｓ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｖｏｌ ４５ ｐａｇｅ ２０５５及びＢｅｒｇｓｔｒｏｍ（２００９）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｓｕｐｐｌ．３７ １．４．１に記載されている。
いくつかの実施形態では、核酸塩基部分は、プリン又はピリミジンを修飾プリン又はピリミジン、例えば置換プリン又は置換ピリミジン、例えばイソシトシン、シュードイソシトシン、５－メチルシトシン、５－チオゾロ－シトシン、５－プロピニル－シトシン、５－プロピニル－ウラシル、５－ブロモウラシル５－チアゾロ－ウラシル、２－チオ－ウラシル、２’－チオ－チミン、イノシン、ジアミノプリン、６－アミノプリン、２－アミノプリン、２，６－ジアミノプリン及び２－クロロ－６－アミノプリンから選択される核酸塩基に変えることにより修飾される。
核酸塩基部分は、対応する各核酸塩基についての文字コード、例えば、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ又はＵにより示されてもよく、ここで、各文字は、任意に等価機能の改変された核酸塩基を含んでもよい。例えば、例示したオリゴヌクレオチドにおいて、核酸塩基部分は、Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ、及び５－メチルシトシンから選択される。任意に、ＬＮＡギャップマーについて、５－メチルシトシンＬＮＡヌクレオシドが使用され得る。
修飾オリゴヌクレオチド
修飾オリゴヌクレオチドという用語は、１つ以上の糖修飾ヌクレオシド及び／又は修飾ヌクレオシド間結合を含むオリゴヌクレオチドを表す。「キメラ」オリゴヌクレオチドという用語は、修飾ヌクレオシドを有するオリゴヌクレオチドを説明するために、文献で用いられている用語である。
相補性
本明細書で使用される「相補的」は、（例えば、２つの対向する核酸上又は１本の核酸鎖の対向する領域上にある）２つのヌクレオチド間、又はヌクレオチドの２つの配列間の構造的関係であって、２つのヌクレオチド又はヌクレオチドの２つの配列が互いに塩基対を形成することを可能にする構造的関係を指す。例えば、対向する核酸のピリミジンヌクレオチドに相補的な１つの核酸のプリンヌクレオチドは、互いに水素結合を形成することによって塩基対を形成し得る。いくつかの実施形態において、相補的なヌクレオチドは、ワトソン－クリック様式で、又は安定な二重鎖の形成を可能にする任意の他の様式で塩基対合することができる。ワトソン・クリック塩基対は、グアニン（Ｇ）－シトシン（Ｃ）及びアデニン（Ａ）－チミン（Ｔ）／ウラシル（Ｕ）である。オリゴヌクレオチドは修飾核酸塩基を有するヌクレオシドを含んでいてもよく、例えば５－メチルシトシンは、しばしばシトシンの代わりに用いられ、したがって、相補性という用語は、非修飾核酸塩基と修飾核酸塩基との間のワトソン・クリック塩基対合を包含することが理解されよう（例えば、Ｈｉｒａｏ ｅｔ ａｌ（２０１２）Ａｃｃｏｕｎｔｓ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｖｏｌ ４５ ｐａｇｅ ２０５５ ａｎｄ Ｂｅｒｇｓｔｒｏｍ（２００９）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｓｕｐｐｌ．３７ １．４．１を参照されたい）。
用語「％相補的」とは、本明細書で使用される場合、連続ヌクレオチド配列にわたって参照配列（例えば、標的配列又は配列モチーフ）に相補的である、核酸分子（例えば、オリゴヌクレオチド）の連続ヌクレオチド配列のヌクレオチドの割合（パーセント）を指す。したがって、相補性のパーセンテージは、２つの配列間（標的配列５’－３’と３’－５’からのオリゴヌクレオチド配列とを整列させた場合）で（例えばワトソン・クリック塩基対から）相補的である整列した核酸塩基の数を数え、その数をオリゴヌクレオチド中のヌクレオチドの総数で割り、１００を掛けることによって計算される。このような比較において、整列（例えば塩基対を形成）しない核酸塩基／ヌクレオチドは、ミスマッチと称される。挿入及び欠失は、連続ヌクレオチド配列の％相補性の計算において許容されない。相補性の決定において、核酸塩基の化学的修飾は、核酸塩基が、例えばワトソン・クリック塩基対合を形成する機能的能力が保持される限り、無視されることが理解されるであろう（例えば、５－メチルシトシンは、％同一性の計算の目的のために、シトシンと同一であると見なされる）。
「完全に相補的な」という用語は、１００％の相補性を指す。
以下は、ＨＢＶ転写物の領域に完全に相補的な連続ヌクレオチド配列の例である。
以下は、ＨＢＶ標的の領域（配列番号２８）に完全に相補的な連続ヌクレオチド配列（配列番号６）の例である。
Figure 2023509870000002
いくつかの実施形態では、２つの核酸は、本明細書に記載されるように、相補性の領域を形成するように互いに相補的な複数のヌクレオチドの領域を有し得る。
相補性の領域
本明細書で使用される「相補性の領域」という用語は、適切なハイブリダイゼーション条件下、例えば、リン酸緩衝液中、細胞中などでヌクレオチドの２つの配列間のハイブリダイゼーションを可能にする、ヌクレオチドの逆平行配列に十分に相補的な核酸（例えば、二本鎖オリゴヌクレオチド）のヌクレオチドの配列を指す。
同一性
本明細書で使用される「同一性」という用語は、連続ヌクレオチド配列にわたって参照配列（例えば、配列モチーフ）と同一である、核酸分子（例えば、オリゴヌクレオチド）内の連続ヌクレオチド配列のヌクレオチドの割合（パーセントで表される）を指す。したがって、同一性のパーセンテージは、２つの配列（本発明の化合物の連続ヌクレオチド配列及び参照配列における）の間で同一の（一致する）整列された核酸塩基の数を数え、その数をオリゴヌクレオチドのヌクレオチドの総数で割り、１００を掛けることにより計算される。したがって、同一性の百分率＝（一致数×１００）／整列領域（例えば、連続ヌクレオチド配列）の長さ。挿入及び欠失は、連続ヌクレオチド配列の同一性の百分率の計算において許容されない。同一性の決定において、核酸塩基の化学的修飾は、核酸塩基がＷａｔｓｏｎ Ｃｒｉｃｋ塩基対を形成する機能的能力が保持される限り、無視されることが理解されよう（例えば、５－メチルシトシンは、同一性％の計算の目的のために、シトシンと同一であると見なされる）。
ハイブリダイゼーション
本明細書で用いられる「ハイブリダイズ」又は「ハイブリダイズする」という用語は、２つの核酸鎖（例えば、オリゴヌクレオチド及び標的核酸）が対向する鎖上の塩基対間に水素結合を形成することにより二重鎖を形成することと理解されるべきである。２つの核酸鎖の間の結合の親和性は、ハイブリダイゼーションの強度である。これは、オリゴヌクレオチドの半分が標的核酸と二重鎖を形成する温度として定義される、融解温度（Ｔｍ）によって説明されることが多い。生理学的条件では、Ｔｍは親和性に厳密に比例しない（Ｍｅｒｇｎｙ及びＬａｃｒｏｉｘ（２００３年）「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ」第１３巻第５１５～５３７頁）。標準状態ギブス自由エネルギーΔＧ°は、結合親和性をより正確に表し、ΔＧ°＝－ＲＴｌｎ（Ｋｄ）によって反応の解離定数（Ｋｄ）に関連付けられ、式中、Ｒは気体定数であり、Ｔは絶対温度である。したがって、オリゴヌクレオチドと標的核酸との間の反応の非常に低いΔＧ°は、オリゴヌクレオチドと標的核酸との間の強いハイブリダイゼーションを反映している。ΔＧ°は、水性濃度が１Ｍ、ｐＨが７、温度が３７℃の反応に関連したエネルギーである。標的核酸へのオリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションは、自発反応であり、自発反応の場合、ΔＧ°はゼロ未満である。ΔＧ°は、例えば、Ｈａｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９６５，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍ．３６－３８ ａｎｄ Ｈｏｌｄｇａｔｅ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ．に記載されているように、例えば等温滴定熱量測定（ＩＴＣ）法を使用することによって、実験的に測定することができる。当業者は、ΔＧ°測定のために市販の装置が入手可能であることを知るであろう。ΔＧ°は、ＳａｎｔａＬｕｃｉａ，１９９８，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．９５：１４６０－１４６５ に記載の最近接モデル（ｎｅａｒｅｓｔ ｎｅｉｇｈｂｏｒ ｍｏｄｅｌ）を用いて、Ｓｕｇｉｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３４：１１２１１－１１２１６ ａｎｄ ＭｃＴｉｇｕｅ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４３：５３８８－５４０５に記載される適切に得られる熱力学的パラメータを使用し、数値的に推定し得る。その意図した核酸標的をハイブリダイゼーションによって調節する可能性を確保するために、本発明のオリゴヌクレオチドは、１０～３０ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドに対して－１０ｋｃａｌ未満の概算ΔＧ°値で標的核酸にハイブリダイズする。いくつかの実施形態では、ハイブリダイゼーションの程度又は強度は、標準状態ギブス自由エネルギーΔＧ°により測定される。オリゴヌクレオチドは、８～３０ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドに対して－１０ｋｃａｌの範囲未満、例えば－１５ｋｃａｌ未満、例えば－２０ｋｃａｌ未満、及び例えば－２５ｋｃａｌ未満の概算ΔＧ°値で標的核酸にハイブリダイズし得る。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、－１０から－６０ｋｃａｌ、例えば－１２から－４０、例えば－１５から－３０ｋｃａｌ、又は－１６から－２７ｋｃａｌ、例えば－１８から－２５ｋｃａｌの推定ΔＧ°値で、標的核酸にハイブリダイズする。
標的核酸
本発明によれば、標的核酸は、Ｂ型肝炎ウイルスをコードする核酸であり、例えば遺伝子、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ウイルスｍＲＮＡ、又はｃＤＮＡ配列であり得る。標的核酸は、配列番号１及びその天然に存在するバリアントによって表される。
インビボ又はインビトロ用途に関して、本発明のオリゴヌクレオチドは、典型的には、ＨＢＶ標的核酸を発現する細胞内で、ＨＢＶ標的核酸の発現を阻害することが可能である。本発明のオリゴヌクレオチドの核酸塩基の連続配列は、典型的には、オリゴヌクレオチドの長さにわたって測定され、任意に１つ又は２つのミスマッチを除いて、また任意に、オリゴヌクレオチドをコンジュゲートなどの任意の官能基に結合し得るヌクレオチドベースのリンカー領域、又は他の非相補的末端ヌクレオチド（例えば、Ｄ’又はＤ’’）を除いて、ＨＢＶ標的核酸に相補的である。
標的配列
本明細書で使用される用語「標的配列」は、本発明のオリゴヌクレオチドに相補的な核酸塩基配列を含む、標的核酸中に存在するヌクレオチドの配列を指す。いくつかの実施形態では、標的配列は、本発明のオリゴヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列に相補的な核酸塩基配列を有する標的核酸上の領域からなる。標的核酸のこの領域は、互換的に標的ヌクレオチド配列、標的配列、又は標的領域と称され得る。いくつかの実施形態では、標的配列は、単一オリゴヌクレオチドの相補的配列よりも長く、例えば本発明のいくつかのオリゴヌクレオチドによって標的化され得る標的核酸の好ましい領域を表すことができる。
配列番号１又は配列番号２８の１５３０～１６０２位の配列によって表される治療用オリゴヌクレオチドのＨＢＶ ｍＲＮＡ標的領域が本明細書に記載される。この標的領域は、より小さい標的配列に分割され得、配列番号１の１５３０～１６０２；１５３０～１５９８；１５３０～１５４３；１５３０～１５４４；１５３１～１５４３；１５５１～１５６５；１５５１～１５６６；１５７７～１５８９；１５７７～１５９１；１５７７～１５９２；１５７８～１５９０；１５７８～１５９２；１５８３～１５９８；１５８４～１５９８；１５８５～１５９８又は１５８３～１６０２位からなる群から選択され得る。
一実施形態では、本発明の治療用オリゴヌクレオチドは、配列番号１又は配列番号２８の１５３０～１６０２位の標的配列に相補的であるか又はそれにハイブリダイズする連続ヌクレオチド配列を含む。特に、１５３０～１５４４；１５３１～１５４３；１５８５～１５９８及び１５８３～１６０２からなる群から選択される標的解列に対する。
アンチセンスオリゴヌクレオチドが相補的又はハイブリダイズする標的配列は、一般に、少なくとも１０ヌクレオチドの連続核酸塩基配列を含む。標的領域の連続ヌクレオチド配列は、１０～５０ヌクレオチド、例えば１２～３０、例えば１４～２０、例えば１５～１８連続ヌクレオチドである。
標的細胞
本明細書で使用される用語「標的細胞」は、標的核酸を発現している細胞を指す。いくつかの実施形態では、標的細胞は、インビボ又はインビトロであり得る。いくつかの実施形態では、標的細胞は、マウス細胞又はヒト細胞などのげっ歯類細胞、特にＨＢＶ感染肝細胞などの、ＨＢＶ感染哺乳動物細胞である。
好ましい実施形態では、標的細胞はＨＢＶ ｍＲＮＡを発現し、ＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇを分泌する。
肝細胞
本明細書で使用される「肝細胞」（単数又は複数）という用語は、肝臓の実質組織の細胞を指す。これらの細胞は、肝臓の質量のおおよそ７０～８５％を構成し、血清アルブミン、フィブリノーゲン、及び凝固因子のプロトロンビン群（因子３及び４を除く）を産生する。肝細胞系統細胞のマーカーとしては、トランスサイレチン（Ｔｔｒ）、グルタミンシンセターゼ（Ｇｌｕｌ）、肝細胞核因子１ａ（Ｈｎｆ１ａ）及び肝細胞核因子４ａ（Ｈｎｆ４ａ）が挙げられ得るが、これらに限定されない。成熟肝細胞のマーカーとしては、シトクロムＰ４５０（Ｃｙｐ３ａ１１）、フマリルアセト酢酸ヒドロラーゼ（Ｆａｈ）、グルコース６－リン酸（Ｇ６ｐ）、アルブミン（Ａｌｂ）及びＯＣ２－２Ｆ８が挙げられ得るが、これらに限定されない。例えば、Ｈｕｃｈ ｅｔ ａｌ．，（２０１３）、Ｎａｔｕｒｅ，４９４（７４３６）：２４７－２５０を参照のこと（その内容は参照により本明細書に組み込まれる）。
低下した発現
本明細書で使用される、遺伝子の「低下した発現」という用語は、適切な参照細胞又は対象と比較して、細胞又は対象における遺伝子によってコードされるＲＮＡ転写物又はタンパク質の量の減少及び／又は遺伝子の活性の量の減少を指す。例えば、医薬組合せ又は二本鎖オリゴヌクレオチド（例えば、ＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡ配列に相補的なアンチセンス鎖を有するもの）で細胞を処理する行為は、それぞれ医薬組合せ又は二本鎖オリゴヌクレオチドで処理されていない細胞と比較して、ＲＮＡ転写物、タンパク質及び／又は酵素活性（例えば、ＨＢＶゲノムのＳ遺伝子によってコードされる）の量の減少をもたらし得る。同様に、本明細書で使用される「発現を減少させる」とは、遺伝子（例えば、ＨＢＶゲノムのＳ遺伝子）の発現の低下をもたらす行為を指す。
「その天然に存在するバリアント」という用語は、ＨＢＶ遺伝子型Ａ～Ｈなどの定義された分類群内に天然に存在する標的核酸のバリアントを指す。典型的には、ポリヌクレオチドの「天然に存在するバリアント」に言及する場合、この用語は、染色体転座又は重複によって見出されるゲノムＤＮＡ、及びそれに由来するＲＮＡ、例えばｍＲＮＡをコードする標的配列の任意の対立遺伝子バリアントも包含し得る。「天然に存在するバリアント」には、標的配列ｍＲＮＡの選択的スプライシングに由来するバリアントも含まれ得る。例えば特定のポリペプチド配列に言及される場合、この用語は、例えばシグナルペプチド切断、タンパク質分解切断、グリコシル化などの同時又は翻訳後修飾によってプロセシングされ得る天然に存在する形態のタンパク質も含む。
高親和性修飾ヌクレオシド
高親和性修飾ヌクレオシドは、修飾ヌクレオチドであり、これは、オリゴヌクレオチドに組み込まれる場合、例えば融解温度（Ｔｍ）によって測定されるように、その相補的標的に対するオリゴヌクレオチドの親和性を高める。本発明の高親和性修飾ヌクレオシドは、好ましくは、修飾ヌクレオシドあたり＋０．５～＋１２ｏＣ、より好ましくは＋１．５～＋１０ｏＣ、最も好ましくは＋３～＋８ｏＣの融解温度の上昇をもたらす。数多くの高親和性修飾ヌクレオシドが当該技術分野において知られており、例えば、多くの２’置換ヌクレオシド及びロックド核酸（ＬＮＡ）が挙げられる（例えば、Ｆｒｅｉｅｒ＆Ａｌｔｍａｎｎ；Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．，１９９７，２５，４４２９－４４４３及びＵｈｌｍａｎｎ；Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２０００，３（２），２９３－２１３を参照されたい）。
糖修飾
本発明のオリゴマーは、修飾された糖部分、すなわち、ＤＮＡ及びＲＮＡに見られるリボース糖部分と比較して、糖部分が修飾された１つ以上のヌクレオシドを含み得る。
リボース糖部分の修飾を有する数多くのヌクレオシドは、親和性及び／又はヌクレアーゼ耐性などのオリゴヌクレオチドのある特定の性質を改善することを主な目的として作製されてきた。
そのような修飾には、例えばヘキソース環（ＨＮＡ）又は二環式環（典型的には、リボース環（ＬＮＡ）のＣ２とＣ４炭素の間にバイラジカル架橋を有する）、又は典型的にはＣ２とＣ３炭素の間の結合を欠く非結合リボース環（例えば、ＵＮＡ）で置き換えることにより、リボース環構造が修飾されているものが含まれる。他の糖修飾ヌクレオシドには、例えばビシクロヘキソース核酸（国際公開第２０１１／０１７５２１号）又は三環式核酸（国際公開第２０１３／１５４７９８号）が含まれる。修飾ヌクレオシドにはまた、糖部分が例えばペプチド核酸（ＰＮＡ）又はモルホリノ核酸の場合には非糖部分で置き換えられているヌクレオシドが含まれる。
糖修飾にはまた、リボース環上の置換基を、水素以外の基、又はＤＮＡ及びＲＮＡヌクレオシド中に天然に存在する２’－ＯＨ基に変更することによってなされる修飾も含まれる。置換基は、例えば２’、３’、４’、又は５’位で導入され得る。
２’糖修飾ヌクレオシド
２’糖修飾ヌクレオシドは、２’位にＨ若しくは－ＯＨ以外の置換基を有するヌクレオシド（２’置換ヌクレオシド）、又はリボース環の２’炭素と第２の炭素との間に架橋を形成できる２’結合バイラジカルを含むヌクレオシド、例えばＬＮＡ（２’－４’バイラジカル架橋）ヌクレオシドである。
実際、２’糖置換ヌクレオシドの開発には多くの注目が集まっており、数多くの２’置換ヌクレオシドが、オリゴヌクレオチドに組み込まれた際に有益な特性を有することが見出されている。例えば、２’修飾糖は、高められた結合親和性及び／又は増大されたヌクレアーゼ耐性をオリゴヌクレオチドにもたらすことができる。２’置換修飾ヌクレオシドの例は、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メチル－ＲＮＡ、２’－アルコキシ－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メトキシエチル－ＲＮＡ（ＭＯＥ）、２’－アミノ－ＤＮＡ、２’－フルオロ－ＲＮＡ及び２’－Ｆ－ＡＮＡヌクレオシドである。更なる例については、例えばＦｒｅｉｅｒ＆Ａｌｔｍａｎｎ；Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．，１９９７，２５，４４２９－４４４３及びＵｈｌｍａｎｎ；Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２０００，３（２），２９３－２１３、及びＤｅｌｅａｖｅｙ ａｎｄ Ｄａｍｈａ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２０１２，１９，９３７を参照されたい。以下は、幾つかの２’置換修飾ヌクレオシドの例示である。
Figure 2023509870000003
本発明に関して、２’置換糖修飾ヌクレオシドは、ＬＮＡのような２’架橋ヌクレオシドを含まない。
ロックド核酸ヌクレオシド（ＬＮＡヌクレオシド）
「ＬＮＡヌクレオシド」は、上記ヌクレオシドのリボース糖環のＣ２’とＣ４’とを結合するバイラジカル（「２’－４’架橋」とも称される）を含む２’修飾ヌクレオシドであり、これはリボース環のコンホメーションを制限又は固定する。これらのヌクレオシドはまた、文献において、架橋核酸又は二環式核酸（ＢＮＡ）とも称されている。リボースの立体配座の固定は、ＬＮＡが相補的ＲＮＡ又はＤＮＡ分子のオリゴヌクレオチドに組み込まれる場合、ハイブリダイゼーションの親和性の向上（二重鎖の安定化）に関連している。これは、オリゴヌクレオチド／相補二重鎖の融解温度を測定することによって、日常的に決定されうる。
非限定的な、例示的なＬＮＡヌクレオシドは、国際公開第９９／０１４２２６号、国際公開第００／６６６０４号、国際公開第９８／０３９３５２号、国際公開第２００４／０４６１６０号、国際公開第００／０４７５９９号、国際公開第２００７／１３４１８１号、国際公開第２０１０／０７７５７８号、国際公開第２０１０／０３６６９８号、国際公開第２００７／０９００７１号、国際公開第２００９／００６４７８号、国際公開第２０１１／１５６２０２号、国際公開第２００８／１５４４０１号、国際公開第２００９／０６７６４７号、国際公開第２００８／１５０７２９号、Ｍｏｒｉｔａ ｅｔ ａｌ．、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１２，７３－７６，Ｓｅｔｈ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２０１０，Ｖｏｌ ７５（５）ｐｐ．１５６９－８１、及びＭｉｔｓｕｏｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００９，３７（４），１２２５－１２３８、及びＷａｎ ａｎｄ Ｓｅｔｈ，Ｊ．Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２０１６，５９，９６４５－９６６７に開示されている。
更なる非限定的な例示的ＬＮＡヌクレオシドを、スキーム１に開示する。
Figure 2023509870000004
特定のＬＮＡヌクレオシドは、ベータ－Ｄ－オキシ－ＬＮＡ、６’－メチル－ベータ－Ｄ－オキシＬＮＡ、例えば（Ｓ）－６’－メチル－ベータ－Ｄ－オキシ－ＬＮＡ（ＳｃＥＴ）及びＥＮＡである。特定の有利なＬＮＡは、ベータ－Ｄ－オキシ－ＬＮＡである。
リン酸類似体
本明細書で使用される「リン酸類似体」という用語は、リン酸基の静電特性及び／又は立体特性を模倣する化学部分を指す。いくつかの実施形態において、リン酸類似体は、酵素的除去を受けやすいことが多い５’－リン酸の代わりに、オリゴヌクレオチドの５’末端ヌクレオチドに配置される。いくつかの実施形態において、５’リン酸類似体は、ホスファターゼ耐性連結を含有する。リン酸類似体の例としては、５’メチレンホスホネート（５’－ＭＰ）及び５’－（Ｅ）－ビニルホスホネート（５’－ＶＰ）などの５’ホスホネートが挙げられる。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、５’末端ヌクレオチドに、糖の４’－炭素位置にリン酸類似体（「４’－リン酸類似体」と呼ばれる）を有する。４’－リン酸類似体の例は、オキシメチル基の酸素原子が糖部分（例えばその４’－炭素）に結合しているオキシメチルホスホネート又はその類似体である。例えば、２０１６年９月２日に出願された米国仮特許出願第６２／３８３，２０７号及び２０１６年９月１２日に出願された米国仮特許出願第６２／３９３，４０１号を参照されたい。これらのリン酸類似体に関するそれぞれの内容は、参照により本明細書に組み込まれる。オリゴヌクレオチドの５’末端に対する他の修飾が開発されている（例えば、国際公開第２０１１／１３３８７１号；米国特許第８，９２７，５１３号明細書；及びＰｒａｋａｓｈ ｅｔ ａｌ．（２０１５），Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，４３（６）：２９９３－３０１１を参照されたい。リン酸類似体に関するそれぞれの内容は参照により本明細書に組み込まれる）。
ヌクレアーゼ媒介分解
ヌクレアーゼ媒介分解は、相補的なヌクレオチド配列と二重鎖を形成するときに、そのような配列の分解を媒介することができるオリゴヌクレオチドを指す。
いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的核酸のヌクレアーゼ媒介分解を介して機能し得、本発明のオリゴヌクレオチドは、ヌクレアーゼ、特にエンドヌクレアーゼ、好ましくはＲＮａｓｅ Ｈなどのエンドリボヌクレアーゼ（ＲＮａｓｅ）を動員することができる。ヌクレアーゼ媒介機構を介して機能するオリゴヌクレオチド設計の例は、少なくとも５又は６の連続ＤＮＡヌクレオシドの領域を通常含み、親和性増強ヌクレオシド、例えばギャップマー、ヘッドマー及びテイルマーが片側又は両側に隣接するオリゴヌクレオチドである。
ＲＮａｓｅ Ｈの活性及び動員
一実施形態では、治療用オリゴヌクレオチドは、ＲＮａｓｅ Ｈを動員することができるアンチセンスオリゴヌクレオチドである。アンチセンスオリゴヌクレオチドのＲＮａｓｅ Ｈ活性とは、相補的ＲＮＡ分子との二重鎖にある場合にＲＮａｓｅ Ｈを動員する能力を指す。国際公開第０１／２３６１３号は、ＲＮａｓｅ Ｈを動員する能力を決定するために使用され得る、ＲＮａｓｅ Ｈ活性を決定するためのインビトロ方法を提供する。典型的には、オリゴヌクレオチドが、相補的標的核酸配列が提供された場合に、試験されている修飾オリゴヌクレオチドと同じ塩基配列を有するが、オリゴヌクレオチド中の全てのモノマー間にホスホロチオアート結合を有するＤＮＡモノマーのみを含有するオリゴヌクレオチドを使用し、国際公開第０１／２３６１３号（参照により本明細書に組み込まれる）の実施例９１～９５により提供される方法論を使用したときに決定された初期速度の少なくとも５％、例えば、少なくとも１０％又は２０％超のｐｍｏｌ／ｌ／分で測定された初期速度を有する場合に、このオリゴヌクレオチドはＲＮａｓｅ Ｈを動員し得ると見なされる。ＲＮａｓｅ Ｈ活性の決定に使用するために、組換えヒトＲＮａｓｅ Ｈ１が、Ｌｕｂｉｏ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＧｍｂＨ、Ｌｕｃｅｒｎｅ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄから入手可能である。
ギャップマー
本発明の治療用オリゴヌクレオチドがアンチセンスオリゴヌクレオチドであるいくつかの実施形態において、本発明の核酸分子又はその連続ヌクレオチド配列は、ギャップマーアンチセンスオリゴヌクレオチドである。アンチセンスギャップマーは、通常、ＲＮａｓｅ Ｈ媒介分解を介した標的核酸の阻害に用いられる。本発明の一実施形態では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＲＮａｓｅ Ｈを動員することが可能である。
ギャップマーアンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも３つの区別される構造領域、５’－フランク、ギャップ、及び３’－フランク、Ｆ－Ｇ－Ｆ’を、５’－＞３’配向で含む。「ギャップ」領域（Ｇ）は、オリゴヌクレオチドがＲＮａｓｅ Ｈを動員することを可能にする連続ＤＮＡヌクレオチドのストレッチを含む。ギャップ領域は、１つ以上の糖修飾ヌクレオシド、有利には高親和性糖修飾ヌクレオシドを含む５’隣接領域（Ｆ）と、１つ以上の糖修飾ヌクレオシド、有利には高親和性糖修飾ヌクレオシドを含む３’隣接領域（Ｆ’）が隣接する。領域Ｆ及びＦ’の１種以上の糖修飾ヌクレオシドは、標的核酸に対するオリゴヌクレオチドの親和性を向上させる（すなわち、これは親和性向上糖修飾ヌクレオシドである）。いくつかの実施形態では、領域Ｆ及びＦ’の１つ又は複数の糖修飾ヌクレオシドは、例えばＬＮＡ及び２’－ＭＯＥから独立して選択される、高親和性２’糖修飾などの２’糖修飾ヌクレオシドである。
ギャップマー設計において、ギャップ領域の最も５’及び３’のヌクレオシドはＤＮＡヌクレオシドであり、それぞれ、５’（Ｆ）又は３’（Ｆ’）領域の糖修飾ヌクレオシドに隣接して配置されている。フランクはさらに、ギャップ領域から最も遠い端、即ち５’フランクの５’末端及び３’フランクの３’末端に少なくとも１つの糖修飾ヌクレオシドを有することによって定義されてもよい。
領域Ｆ－Ｇ－Ｆ’は、連続ヌクレオチド配列を形成する。本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド又はその連続ヌクレオチド配列は、式Ｆ－Ｇ－Ｆ’のギャップマー領域を含み得る。
ギャップマー設計Ｆ－Ｇ－Ｆ’の全長は、例えば１２から３０ヌクレオシド、例えば１３から２４、例えば１４から２２ヌクレオシド、例えば１３から１７、例えば１４から１６ヌクレオシドでありうる。
例として、本発明のギャップマーオリゴヌクレオチドは、以下の式によって表すことができる：
Ｆ１－６－Ｇ６－１６－Ｆ’１－６、例えば
Ｆ１－４－Ｇ７－１０－Ｆ’２－４
ただし、ギャップマー領域Ｆ－Ｇ－Ｆ’の全長は、少なくとも１２、例えば少なくとも１３ヌクレオチド長であることを条件とする。
本発明の一態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチド又はその連続ヌクレオチド配列は、式５’－Ｆ－Ｇ－Ｆ’－３’のギャップマーからなるか又はそれを含み、式中、領域Ｆ及びＦ’が独立して１～８個のヌクレオシドを含むか又はそれらからなり、そのうち１～４個が２’糖修飾され、Ｆ及びＦ’領域の５’及び３’末端を規定し、ＧがＲＮａｓｅ Ｈを動員することができる６～１６個のヌクレオシドの領域である。
本発明の一実施形態では、連続ヌクレオチド配列は、式５’－Ｆ－Ｇ－Ｆ’－３’のギャップマーであり、領域Ｆ及びＦ’は、独立して、２～４個の２’糖修飾ヌクレオチドからなり、Ｆ及びＦ’領域の５’及び３’末端を規定し、Ｇは、ＲＮアーゼＨを動員することができる６～１０個のＤＮＡヌクレオシド領域である。
いくつかの実施形態では、ギャップ領域Ｇは、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５又は１６個の連続するホスホロチオエート結合ＤＮＡヌクレオシドからなっていてもよい。いくつかの実施形態では、ギャップ領域Ｇは、７個～１０個のＤＮＡヌクレオシドからなる。いくつかの実施形態では、ギャップ内の全てのヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエート結合である。
いくつかの実施形態では、領域Ｆ及びＦ’は、独立して、糖修飾ヌクレオシドの連続する配列からなるか、又はそれを含む。いくつかの実施形態では、領域Ｆの糖修飾ヌクレオシドは、独立して、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ単位、２’－Ｏ－メチル－ＲＮＡ、２’－アミノ－ＤＮＡ単位、２’－フルオロ－ＤＮＡ単位、２’－アルコキシ－ＲＮＡ、ＭＯＥ単位、ＬＮＡ単位、アラビノ核酸（ＡＮＡ）単位及び２’－フルオロ－ＡＮＡ単位から選択されてもよい。
いくつかの実施形態では、領域Ｆ若しくはＦ’、又はＦ及びＦ’の全ヌクレオシドは、例えばベータ－Ｄ－オキシＬＮＡ、ＥＮＡ又はＳｃＥＴヌクレオシドから独立して選択されるような、ＬＮＡヌクレオシドである。いくつかの実施形態では、領域Ｆは、１～５つ、例えば２～４つ、例えば３～４つ、例えば１、２、３、４又は５つの連続するＬＮＡヌクレオシドからなる。いくつかの実施形態では、領域Ｆ及びＦ’の全ヌクレオシドは、ベータ－Ｄ－オキシＬＮＡヌクレオシドである。
いくつかの実施形態では、領域Ｆ若しくはＦ’、又はＦ及びＦ’の全ヌクレシドは、２’置換ヌクレオシド、例えばＯＭｅ又はＭＯＥヌクレオシドである。いくつかの実施形態では、領域Ｆは、１、２、３、４、５、６、７又は８つの連続するＯＭｅ又はＭＯＥヌクレオシドからなる。いくつかの実施形態では、フランキング領域の一方のみが、２’置換ヌクレオシド、例えばＯＭｅ又はＭＯＥヌクレオシドからなり得る。いくつかの実施形態では、２’置換ヌクレオシド、例えばＯＭｅ又はＭＯＥヌクレオシドからなるのは５’（Ｆ）フランキング領域であり、一方、３’（Ｆ’）フランキング領域は、少なくとも１つのＬＮＡヌクレオシド、例えばベータ－Ｄ－オキシＬＮＡヌクレオシド又はｃＥＴヌクレオシドを含む。いくつかの実施形態では、２’置換ヌクレオシド、例えばＯＭｅ又はＭＯＥヌクレオシドからなるのは３’（Ｆ’）フランキング領域であり、一方、５’（Ｆ）フランキング領域は、少なくとも１つのＬＮＡヌクレオシド、例えばベータ－Ｄ－オキシＬＮＡヌクレオシド又はｃＥＴヌクレオシドを含む。
更なるギャップマー設計は、参照することによって本明細書に組み込まれる、国際公開第２００４／０４６１６０号、国際公開第２００７／１４６５１１号、及び国際公開第２００８／１１３８３２号に開示されている。
ＬＮＡギャップマー
ＬＮＡギャップマーは、領域Ｆ及びＦ’の一方又は両方に、ＬＮＡヌクレオシドを含むか、若しくはそれからなるギャップマーである。ベータ－Ｄ－オキシギャップマーは、領域Ｆ及びＦ’の一方又は両方に、ベータ－Ｄ－オキシＬＮＡヌクレオシドを含むか、若しくはそれからなるギャップマーである。
いくつかの実施形態では、ＬＮＡギャップマーは、式：［ＬＮＡ］１－５－［領域Ｇ］６－１０－［ＬＮＡ］１－５であり、領域Ｇはギャップマー領域Ｇの定義で定義したとおりである。
ＭＯＥギャップマー
ＭＯＥギャップマーは、領域Ｆ及びＦ’がＭＯＥヌクレオシドからなるギャップマーである。いくつかの実施形態では、ＭＯＥギャップマーは、設計［ＭＯＥ］１－８－［領域Ｇ］５－１６－［ＭＯＥ］１－８、例えば［ＭＯＥ］２－７－［領域Ｇ］６－１４－［ＭＯＥ］２－７、例えば［ＭＯＥ］３－６－［領域Ｇ］８－１２－［ＭＯＥ］３－６のものであり、ここで、領域Ｇはギャップマーの定義に規定したとおりである。５－１０－５設計（ＭＯＥ－ＤＮＡ－ＭＯＥ）を有するＭＯＥギャップマーは、当技術分野で広く使用されている。
混合ウイングギャップマー
混合ウイングギャップマーは、領域Ｆ及びＦ’の一方又は両方が、２’置換ヌクレオシド、例えば２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ単位、２’－Ｏ－メチル－ＲＮＡ、２’－アミノ－ＤＮＡ単位、２’－フルオロ－ＤＮＡ単位、２’－アルコキシ－ＲＮＡ、ＭＯＥ単位、アラビノ核酸（ＡＮＡ）単位、及び２’－フルオロ－ＡＮＡ単位からなる群から独立して選択される２’置換ヌクレオシド、例えばＭＯＥヌクレオシドを含むＬＮＡギャップマーである。領域Ｆ及びＦ’の少なくとも一方、又は領域Ｆ及びＦ’の両方が少なくとも１つのＬＮＡヌクレオシドを含むいくつかの実施形態では、領域Ｆ及びＦ’の残りのヌクレオシドは、ＭＯＥ及びＬＮＡからなる群から独立して選択される。領域Ｆ及びＦ’の少なくとも一方、又は領域Ｆ及びＦ’の両方が少なくとも２つのＬＮＡヌクレオシドを含むいくつかの実施形態では、領域Ｆ及びＦ’の残りのヌクレオシドは、ＭＯＥ及びＬＮＡからなる群から独立して選択される。いくつかの混合ウイング実施形態では、領域Ｆ及びＦ’の一方又は両方が、１つ又は複数のＤＮＡヌクレオシドをさらに含んでもよい。
混合ウイングギャップマー設計は、国際公開第２００８／０４９０８５号及び国際公開第２０１２／１０９３９５号（これらのいずれもが参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている。
オリゴヌクレオチド内の領域Ｄ’又はＤ’’
本発明のオリゴヌクレオチドは、いくつかの実施形態では、標的核酸に相補的なオリゴヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列、例えばギャップマーＦ－Ｇ－Ｆ’、並びにさらに５’及び／又は３’ヌクレオシドを含むか、又はそれからなり得る。更なる５’及び／又は３’ヌクレオシドは、標的核酸に完全に相補的であっても、完全に相補的でなくてもよい。このような更なる５’及び／又は３’ヌクレオシドは、本明細書では領域Ｄ’及びＤ’’と称され得る。
領域Ｄ’又はＤ’’の付加は、連続ヌクレオチド配列、例えばギャップマーをコンジュゲート部分又は別の官能基に連結する目的のために使用され得る。連続ヌクレオチド配列をコンジュゲート部分と連結するために使用される場合、それは生体切断可能なリンカーとして働くことができる。あるいは、それはエキソヌクレアーゼ保護を提供するために、又は合成若しくは製造を容易にするために使用され得る。
領域Ｄ’及びＤ’’は、それぞれ、領域Ｆの５’末端又は領域Ｆ’の３’末端に結合して、以下の式Ｄ’－Ｆ－Ｇ－Ｆ’、Ｆ－Ｇ－Ｆ’－Ｄ’’又は
Ｄ’－Ｆ－Ｇ－Ｆ’－Ｄ’’の設計を生成することができる。この場合、Ｆ－Ｇ－Ｆ’はオリゴヌクレオチドのギャップマー部分であり、領域Ｄ’又はＤ’’は、オリゴヌクレオチドの別個の部分を構成する。領域Ｄ’とＦ領域との間及び領域Ｆ’とＤ’’領域との間の移行は、Ｄ’又はＤ’’領域に向かうホスホジエステル結合及びＦ又はＦ’領域に向かうホスホロチオエート結合を有するヌクレオシドによって特徴付けられ、ヌクレオシドはギャップマー（標的核酸に相補的な連続ヌクレオチド配列）の一部であると考えられる。
領域Ｄ’又はＤ’’は、独立して、１、２、３、４又は５個の追加のヌクレオチドを含むか、又はそれからなり、標的核酸に相補的であっても、相補的でなくてもよい。Ｆ又はＦ’領域に隣接するヌクレオチドは、ＤＮＡ又はＲＮＡなどの糖修飾ヌクレオチドではなく、若しくはこれらの塩基修飾バージョンでもない。Ｄ’又はＤ’’領域は、ヌクレアーゼ感受性の生体切断可能なリンカーとしての役割を果たしうる（リンカーの定義を参照されたい）。いくつかの実施形態では、追加の５’及び／又は３’末端ヌクレオチドは、ホスホジエステル結合で結合されており、ＤＮＡ又はＲＮＡである。領域Ｄ’又はＤ’’としての使用に好適なヌクレオチドベースの生体切断性リンカーは、国際公開第２０１４／０７６１９５号に開示されており、これには例としてホスホジエステル結合ＤＮＡジヌクレオチドが含まれる。いくつかの実施形態では、領域Ｄ’又はＤ’’は、標的核酸に対して相補的ではないか、又は少なくとも５０％のミスマッチを含む。
いくつかの実施形態では、領域Ｄ’又はＤ’’は、配列ＡＡ、ＡＴ、ＡＣ、ＡＧ、ＴＡ、ＴＴ、ＴＣ、ＴＧ、ＣＡ、ＣＴ、ＣＣ、ＣＧ、ＧＡ、ＧＴ、ＧＣ、又はＧＧのジヌクレオチドを含むか又はそれからなり、Ｃは５－メチルシトシンであってよく、及び／又はＴはＵで置き換えられてよい。ジヌクレオチド中のヌクレオシド間結合はホスホジエステル結合である。いくつかの実施形態では、領域Ｄ’又はＤ’’は、配列ＡＡＡ、ＡＡＴ、ＡＡＣ、ＡＡＧ、ＡＴＡ、ＡＴＴ、ＡＴＣ、ＡＴＧ、ＡＣＡ、ＡＣＴ、ＡＣＣ、ＡＣＧ、ＡＧＡ、ＡＧＴ、ＡＧＣ、ＡＧＧ、ＴＡＡ、ＴＡＴ、ＴＡＣ、ＴＡＧ、ＴＴＡ、ＴＴＴ、ＴＴＣ、ＴＡＧ、ＴＣＡ、ＴＣＴ、ＴＣＣ、ＴＣＧ、ＴＧＡ、ＴＧＴ、ＴＧＣ、ＴＧＧ、ＣＡＡ、ＣＡＴ、ＣＡＣ、ＣＡＧ、ＣＴＡ、ＣＴＧ、ＣＴＣ、ＣＴＴ、ＣＣＡ、ＣＣＴ、ＣＣＣ、ＣＣＧ、ＣＧＡ、ＣＧＴ、ＣＧＣ、ＣＧＧ、ＧＡＡ、ＧＡＴ、ＧＡＣ、ＣＡＧ、ＧＴＡ、ＧＴＴ、ＧＴＣ、ＧＴＧ、ＧＣＡ、ＧＣＴ、ＧＣＣ、ＧＣＧ、ＧＧＡ、ＧＧＴ、ＧＧＣ、及びＧＧＧのトリヌクレオチドからなるか、又はそれからなり、Ｃは５－メチルシトシンであってよく、及び／又は、Ｔは、Ｕで置き換えられてよい。ヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル結合である。（天然に存在する）核酸塩基Ａ（アデニン、Ｔ（チミン）、Ｕ（ウラシル）、Ｇ（グアニン）、Ｃ（シトシン）に言及する場合、これらは、同等の天然核酸塩基（例えば、相補的ヌクレオシドとの塩基対）として機能する核酸塩基類似体で置換され得ることが理解されるであろう。
一実施形態では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ギャップマーを構成する連続ヌクレオチド配列に加えて、領域Ｄ’及び／又はＤ’’を含む。
いくつかの実施形態において、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下の式によって表すことができる：
D’-F-G-F’、特に、D’1-3-F1-4-G6-10-F’2-4
F-G-F’-D’’、特に、F1-4-G6-10-F’2-4-D’’1-3
D’-F-G-F’-D’’、特に、D’1-3-F1-4-G6-10-F’2-4-D’’1-3
いくつかの実施形態では、領域Ｄ’と領域Ｆとの間に位置するヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル結合である。いくつかの実施形態では、領域Ｆ’と領域Ｄ’’との間に位置するヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル結合である。
コンジュゲート
本明細書で使用されるコンジュゲートという用語は、治療用オリゴヌクレオチドに共有結合することができるＧａｌＮＡｃクラスターなどの非ヌクレオチド部分（コンジュゲート）を指す。コンジュゲート及びクラスター又はコンジュゲート部分という用語は、互換的に使用され得る。いくつかの例において、コンジュゲートされた治療用オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドコンジュゲートとも称され得る。一実施形態では、コンジュゲートは標的化リガンドである。
標的化リガンド
本明細書で使用される「標的化リガンド」という用語は、目的の組織又は細胞の同族分子（例えば、受容体）に選択的に結合する分子であって、目的の組織又は細胞に他の物質を標的化する目的で他の物質にコンジュゲート可能な分子（例えば、炭水化物、アミノ糖、コレステロール、ポリペプチド又は脂質）を指す。例えば、いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、オリゴヌクレオチドを目的の特定の組織又は細胞に標的化する目的でオリゴヌクレオチドにコンジュゲートされ得る。いくつかの実施形態において、標的化リガンドは細胞表面受容体に選択的に結合する。したがって、いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、オリゴヌクレオチドにコンジュゲートされた場合、細胞の表面に発現される受容体への選択的結合、並びに、オリゴヌクレオチド、標的化リガンド及び受容体を含む複合体の細胞によるエンドソーム内部移行によって、特定の細胞へのオリゴヌクレオチドの送達を容易にする。いくつかの実施形態において、標的化リガンドは、オリゴヌクレオチドが細胞内の標的化リガンドから放出されるように、細胞の内在化の後又は細胞の内在化の間に切断されるリンカーを介してオリゴヌクレオチドにコンジュゲートされる。
オリゴヌクレオチドリンカー
結合又はリンカーは、１つ以上の共有結合を介して目的の１つの化学基又はセグメントを目的の別の化学基又はセグメントに連結する、２つの原子間の接続である。コンジュゲート基は、直接又は連結部分（例えば、リンカー又はテザー）を介してオリゴヌクレオチドに結合させることができる。リンカーは、コンジュゲート基を、標的核酸に相補的なオリゴヌクレオチド又は連続ヌクレオチド配列に共有結合的にコンジュゲートするのに役立つ。
本発明のいくつかの実施形態では、治療用オリゴヌクレオチドは、任意に、標的核酸に相補的なオリゴヌクレオチド又は連続ヌクレオチド配列とコンジュゲートとの間に位置するリンカー領域を含む。
そのようなリンカーは、哺乳動物の体内で通常遭遇する又は遭遇するものに類似した条件下で切断可能である生理学的に不安定な結合を含むか、又はそれからなる生体切断可能なリンカーであり得る。一実施形態では、生体切断可能なリンカーは、Ｓ１ヌクレアーゼ切断の影響を受けやすい。
コンジュゲートと治療用オリゴヌクレオチドとの間に配置された生体切断可能なリンカーについては、標的組織（例えば、筋肉、肝臓、腎臓又は腫瘍）に見られる切断速度が血清に見られるものよりも大きいことが好ましい。血清に対する標的組織における切断又はＳ１ヌクレアーゼによる切断のレベル（％）を決定するための適切な方法は、「材料及び方法」のセクションに記載されている。いくつかの実施形態では、生体切断可能なリンカーは、標準と比較した場合、少なくとも約２０％切断され、例えば少なくとも約３０％切断され、例えば少なくとも約４０％切断され、例えば少なくとも約５０％切断され、例えば少なくとも約６０％切断され、例えば少なくとも約７０％切断され、例えば少なくとも約７５％切断される。
好ましい実施形態では、ヌクレアーゼ感受性リンカーは、少なくとも２つの連続したホスホジエステル結合、例えば、少なくとも３つ又は４つ又は５つの連続したホスホジエステル結合を含む、１から１０の間のヌクレオシド、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０のヌクレオシド、より好ましくは２から６の間のヌクレオシド、最も好ましくは２から４の間の結合したヌクレオシドを含む。好ましくは、ヌクレオシドは、ＤＮＡ又はＲＮＡである。ホスホジエステルを含む生体切断可能なリンカー（ＰＯリンカー）は、国際公開第２０１４／０７６１９５号（参照することによって本明細書に組み込まれる）により詳細に記載されている。
必ずしも生体切断可能ではないが、主にコンジュゲートをオリゴヌクレオチドに共有結合的に連結するのに役立つ追加の又は代替のリンカーも、単独で又はＰＯリンカーと組み合わせて使用され得る。切断不可能なリンカーは、エチレングリコール、アミノ酸単位、又はアミノアルキル基などの繰り返し単位の鎖構造又はオリゴマーを含みうる。いくつかの実施形態では、切断不可能なリンカーは、例えばＣ６～Ｃ１２アミノアルキル基を含むＣ２～Ｃ３６アミノアルキル基などのアミノアルキルである。好ましい実施形態では、リンカーは、Ｃ６アミノアルキル基である。
Ｂ型肝炎ウイルス
本明細書で使用される「Ｂ型肝炎ウイルス」又は「ＨＢＶ」は、おおよそ３，２００塩基対の小さな二本鎖ＤＮＡゲノム及び肝細胞に対する親和性を有するヘパドナウイルス科のメンバーを指す。「ＨＢＶ」には、様々な哺乳動物（例えば、ヒト、非ヒト霊長類など）及び鳥類（アヒル等）の宿主のいずれかに感染するＢ型肝炎ウイルスが含まれる。「ＨＢＶ」は、任意の既知のＨＢＶ遺伝子型、例えば血清型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、及びＧ；任意のＨＢＶ血清型又はＨＢＶサブタイプ；任意のＨＢＶ分離物；ＨＢＶバリアント、例えばＨＢｅＡｇ陰性バリアント、薬剤耐性ＨＢＶバリアント（例えば、ラミブジン耐性バリアント；アデホビル耐性突然変異体；テノホウイルス耐性突然変異体；エンテカビル耐性突然変異体等）；などを含む。
「ＨＢＶ」は、オルトヘパドナウイルス属のタイプ種に分類される、ヘパドナウイルス科に属する小ＤＮＡウイルスである。ＨＢＶウイルス粒子（ビリオン）は、外側脂質エンベロープと、タンパク質で構成された正二十面体ヌクレオカプシドコアとを含む。ヌクレオカプシドは、一般に、ウイルスＤＮＡ及びレトロウイルスと同様の逆転写酵素活性を有するＤＮＡポリメラーゼを封入する。ＨＢＶ外側エンベロープは、感受性細胞のウイルス結合及びその中への侵入に関与する埋め込みタンパク質を含む。肝臓を攻撃するＨＢＶは、配列に基づいて少なくとも１０の遺伝子型（Ａ～Ｊ）に従って分類されている。一般に、ゲノムによってコードされる４つの遺伝子があり、これらの遺伝子はＣ、Ｐ、Ｓ及びＸと呼ばれる。コアタンパク質は、遺伝子Ｃ（ＨＢｃＡｇ）によってコードされ、その開始コドンの前には上流のインフレームＡＵＧ開始コドンがあり、そこからプレコアタンパク質が産生される。ＨＢｅＡｇは、プレコアタンパク質のタンパク質分解プロセシングによって産生される。ＤＮＡポリメラーゼは遺伝子Ｐによってコードされる。遺伝子Ｓは表面抗原（ＨＢｓＡｇ）をコードする。ＨＢｓＡｇ遺伝子は１つの長いオープンリーディングフレームであるが、遺伝子を３つの部分、すなわちプレＳ１、プレＳ２、及びＳに分ける３つのインフレーム「開始」（ＡＴＧ）コドンを含む。複数の開始コドンのために、大、中、及び小（プレＳ１＋プレＳ２＋Ｓ、プレＳ２＋Ｓ、又はＳ）と呼ばれる３つの異なるサイズのポリペプチドが産生される。これらは、１：１：４の比を有し得る（Ｈｅｅｒｍａｎｎら、１９８４年）。
Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）タンパク質は、いくつかのカテゴリ及び機能に編成することができる。ポリメラーゼは、逆転写酵素（ＲＴ）として機能してプレゲノムＲＮＡ（ｐｇＲＮＡ）からウイルスＤＮＡを作製し、またＤＮＡ依存性ポリメラーゼとして機能してウイルスＤＮＡから共有結合閉環状ＤＮＡ（ｃｃｃＤＮＡ）を作製する。それらは、マイナス鎖の５’末端に共有結合している。コアタンパク質は、ウイルスキャプシド及び分泌されたＥ抗原を作製する。表面抗原は、肝細胞内在化リガンドであり、またウイルス球状粒子及び糸状粒子の主成分でもある。Ａｖｉｒａｌ粒子は、Ｄａｎｅ粒子（感染性ビリオン）の１０００倍よりも多く産生され、免疫デコイとして作用し得る。
Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原
本明細書で使用される「Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原」又は「ＨＢｓＡｇ」という用語は、ＨＢＶゲノムの遺伝子Ｓ（例えば、ＯＲＦ Ｓ）によってコードされるＳドメインタンパク質を指す。Ｂ型肝炎ウイルス粒子は、大きな表面タンパク質、中間の表面タンパク質及び主要な表面タンパク質である、遺伝子Ｓによってコードされる３つのタンパク質によって包まれたコア粒子内にウイルス核酸を保有する。これらのタンパク質のうち、主要な表面タンパク質は、一般に約２２６アミノ酸であり、Ｓドメインのみを含む。
感染
本明細書で使用される「感染」という用語は、対象におけるウイルスなどの微生物の病原性の侵入及び／又は増殖を指す。感染は溶原性であり得、例えば、ウイルスＤＮＡが細胞内に休眠している。あるいは、感染は溶解性であり得、例えば、ウイルスが活発に増殖し、感染細胞の破壊を引き起こす。感染は、臨床的に明らかな症状を引き起こしても、引き起こさなくてもよい。感染は、局所的なままであってもよく、又は、例えば、対象の血液又はリンパ系を介して伝播してもよい。例えば、ＨＢＶ感染を有する個体は、ウイルス量、表面抗原（ＨＢｓＡｇ）、ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）、及び当技術分野で公知のＨＢＶ感染を検出するための様々な他のアッセイの１つ又は複数を検出することによって識別することができる。ＨＢＶ感染を検出するためのアッセイは、ＨＢｓＡｇ及び／又はＨＢｅＡｇの存在について血清又は血液試料を試験すること、並びに任意に、ＨＢＶ抗原が検出不能なレベルであり得る任意の期間を補うために１つ又は複数のウイルス抗体（例えば、ＩｇＭ及び／又はＩｇＧ）の存在についてさらにスクリーニングすることを含み得る。
ＨＢＶ感染
用語「Ｂ型肝炎ウイルス感染症」又は「ＨＢＶ感染」とは、当該技術分野では一般的に知られており、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）によって引き起こされ、かつ肝臓に影響を及ぼす感染性疾患を指す。ＨＢＶ感染は急性感染又は慢性感染であり得る。感染者の中には、初期感染中に症状がなく、嘔吐、黄色がかった皮膚、疲労、暗色尿及び腹痛を伴う病気を急速に発症する者もいる（「Ｂ型肝炎ファクトシート２０４番」。ｗｈｏ．ｉｎｔ．２０１４年７月。２０１４年１１月４日検索）。多くの場合、これらの症状は数週間続き、死に至る可能性がある。症状が始まるのに３０～１８０日かかることがある。出生時の頃に感染した人の９０％が慢性Ｂ型肝炎感染を発症し、５歳以降に感染した人の１０％未満が発症する（２０１１年１１月２９日に検索された米国疾病管理予防センター（ＣＤＣ）の「公衆伝染に関するＢ型肝炎のＦＡＱｓ」）。慢性疾患を有する人の大部分は症状を有しないが、肝硬変及び肝臓癌が最終的に発症し得る（Ｃｈａｎｇ，２００７，Ｓｅｍｉｎ Ｆｅｔａｌ Ｎｅｏｎａｔａｌ Ｍｅｄ，１２：１６０－１６７）。これらの合併症は、慢性疾患を有する者の１５～２５％の死亡をもたらす（「Ｂ型肝炎ファクトシート２０４番」。ｗｈｏ．ｉｎｔ．２０１４年７月。２０１４年１１月４日検索）。本明細書において、「ＨＢＶ感染」という用語は、急性及び慢性Ｂ型肝炎感染を含む。「ＨＢＶ感染」という用語はまた、ＨＢＶ感染の初期感染の無症候性段階、症候性段階、並びに無症候性慢性段階を含む。
肝臓炎症
本明細書で使用される「肝臓炎症」又は「肝炎」という用語は、特に肝毒性薬への曝露によって引き起こされ得る損傷又は感染の結果として、肝臓が腫脹、機能不全及び／又は有痛性になる身体状態を指す。症状としては、黄疸（皮膚又は眼の黄変）、疲労、脱力感、吐き気、嘔吐、食欲不振、及び体重減少が挙げられ得る。肝臓炎症は、処置せずに放置すると、線維症、肝硬変、肝不全、又は肝臓癌に進行する可能性がある。
肝線維症
本明細書で使用される「肝線維症」又は「肝臓の線維症」という用語は、炎症及び肝細胞死に起因するコラーゲン（Ｉ、ＩＩＩ、及びＩＶ）、フィブロネクチン、ウンドリン（ｕｎｄｕｌｉｎ）、エラスチン、ラミニン、ヒアルロナン、及びプロテオグリカンを含み得る細胞外マトリックスタンパク質の肝臓への過剰な蓄積を指す。肝線維症は、処置せずに放置すると、肝硬変、肝不全、又は肝臓癌に進行し得る。
ＴＬＲ７
本明細書で使用される「ＴＬＲ７」は、任意の起源種（例えば、ヒト、マウス、ウッドチャックなど）のＴｏｌｌ様受容体７を指す。
ＴＬＲ７アゴニスト
本明細書中で使用される「ＴＬＲ７アゴニスト」とは、ＴＬＲ７のアゴニストとして作用する化合物のことを指す。別段示されない限り、ＴＬＲ７アゴニストは、任意の異性体（例えば、ジアステレオマー又はエナンチオマー）、塩、溶媒和物、多形などを含む任意の薬学的に許容され得る形態の化合物を含むことができる。特定の化合物に対するＴＬＲアゴニズムは、任意の適切な様式で決定され得る。例えば、試験化合物のＴＬＲアゴニズムを検出するためのアッセイは、例えば、２００２年１２月１１日に出願された米国仮特許出願第６０／４３２，６５０号に記載されており、そのようなアッセイに使用するのに適した組換え細胞株は、例えば、２００２年１２月１１日に出願された米国仮特許出願第６０／４３２，６５１号に記載されている。ＴＬＲ７アゴニストを評価するための更なるアッセイは、国際公開第２０１６／０９１６９８号の実施例４３に記載されるＨＥＫ２９３－Ｂｌｕｅ－ｈＴＬＲ－７細胞アッセイである（このアッセイは参照により本明細書に組み込まれる）。
ジアステレオマージアステレオマー
本明細書において用いられる用語「ジアステレオマー」とは、２つ以上のキラル中心を有し、その分子が互いに鏡像ではない立体異性体を意味する。ジアステレオマーは、例えば、融点、沸点、スペクトル特性、活性及び反応性等の異なる物理特性を有する。
１個又は数個のキラル中心を含む一般式（Ｉ）～（Ｖ）の化合物は、ラセミ体、ジアステレオマー混合物、又は光学活性単一異性体のいずれかとして存在することができる。ラセミ体は、既知の方法に従ってエナンチオマーに分離することができる。特に、結晶化によって分離することができるジアステレオマー塩は、例えば、Ｄ－若しくはＬ－酒石酸、マンデル酸、リンゴ酸、乳酸又はカンファースルホン酸などの光学活性酸との反応によって、ラセミ混合物から形成される。
薬学的に許容され得る塩
本発明による化合物は、その薬学的に許容され得る塩の形態で存在し得る。
用語「薬学的に許容され得る塩」は、生物学的に又はそれ以外の点で望ましくないものではない、遊離塩基又は遊離酸の生物学的な有効性及び特性を保持する塩を指す。塩は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸、特に塩酸、並びに、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸、サリチル酸、Ｎ－アセチルシステインなどの有機酸と共に形成される。
あるいは、これらの塩は、無機塩基又は有機塩基を遊離酸に加えることによって調製することができる。無機塩基から誘導される塩には、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウムの塩が含まれるがこれらに限定されない。有機塩基から誘導される塩には、第一級、第二級、及び第三級アミン、天然に存在する置換アミンを含む置換アミン、環式アミン及び塩基性イオン交換樹脂、例えばイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、リジン、アルギニン、Ｎ－エチルピペリジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂の塩が含まれるが、これらに限定されない。式（Ｉ）の化合物は、双性イオンの形態で存在することもできる。特に好ましくは、式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容され得る塩は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、及びメタンスルホン酸の塩である。
医薬化合物の塩への化学修飾は、化合物の物理的及び化学的安定性、吸湿性、流動性並びに溶解性を改善するために、医薬系化学者に周知の技法である。これは例えば、Ｂａｓｔｉｎ，Ｏｒｇａｎｉｃ Ｐｒｏｃｅｓｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ＆Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ２０００，４，４２７－４３５ ｏｒ ｉｎ Ａｎｓｅｌ，Ｉｎ：Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，６ｔｈ ｅｄ．（１９９５），ｐｐ．１９６ ａｎｄ １４５６－１４５７に記載されている。例えば、本明細書で提供される化合物の薬学的に許容され得る塩は、ナトリウム塩であり得る。
医薬組合せ
本明細書で使用される医薬組合せは、疾患を処置するための少なくとも２つの異なる活性化合物又はプロドラッグ（医療用化合物又は医薬）の組合せとして理解される。医薬組合せは、物理的、化学的、又は他の方法で組み合わせられる化合物（例えば、同じバイアル内）；一緒にパッケージ化される化合物（例えば、同時投与又は別々の投与のいずれかのための同じパッケージ（キットオブパーツ）内の２つの別々の物体として）；又は別々に提供されているが一緒に使用されることが意図されている化合物（例えば、組合せが化合物ラベル又は添付文書に明示的に記載されている）を含み得る。一実施形態では、医薬組合せは、経口投与用に製剤化された医療用化合物及び皮下注射用に製剤化された医療用化合物からなる。
おおよそ
本明細書で使用する場合、「おおよそ」又は「約」という用語は、関心対象の１つ以上の値に適用される場合、記載された参照値と同様の値を指す。ある特定の実施形態では、「おおよそ」又は「約」という用語は、特に記載がない限り、又は文脈から特に明白でない限り、記載された参照値のいずれかの方向（より大きいか又はより小さい）において、２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％又はそれより低い範囲内に収まる値の範囲を指す（このような数が、可能な値の１００％を超過するであろう場合を除く）。
投与
本明細書で使用される「投与する」又は「投与」という用語は、薬理学的に有用な様式（例えば、対象における症状を処置するため）で対象に物質（例えば、医薬組合せ又はオリゴヌクレオチド）を提供することを意味する。
アシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）
本明細書で使用される「アシアロ糖タンパク質受容体」又は「ＡＳＧＰＲ」という用語は、主要な４８ｋＤａのサブユニット（ＡＳＧＰＲ－１）と副次的な４０ｋＤａのサブユニット（ＡＳＧＰＲ－２）によって形成される二成分Ｃ型レクチンを指す。ＡＳＧＰＲは、主に肝細胞細胞の類洞表面に発現され、末端ガラクトース残基又はＮ－アセチルガラクトサミン残基（アシアロ糖タンパク質）を含有する循環糖タンパク質の結合、内在化、及びその後のクリアランスにおいて主要な役割を果たす。
プロドラッグ
本明細書で使用される「プロドラッグ」という用語は、所望の薬理学的効果をもたらすために、生体内で、例えば生物学的流体又は酵素によって、投与後に対象によって化合物の薬理学的に活性な形態に代謝される化合物の形態又は誘導体を指す。プロドラッグは、例えば、Ｒｉｃｈａｒｄ Ｂ．ＳｉｌｖｅｒｍａｎによるＯｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｃｔｉｏｎ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，２００４，Ｃｈａｐｔｅｒ ８ Ｐｒｏｄｒｕｇｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ｐｐ．４９７－５５８に記載されている。
対象
本明細書で使用される「対象」という用語は、マウス、ウサギ、及びヒトを含む任意の哺乳動物を意味する。一実施形態では、対象は、ヒト又は非ヒト霊長類である。「個体」又は「患者」という用語は、「対象」と互換的に使用され得る。
処置
本明細書で使用される「処置」、「処置すること」、「処置する」などの用語は、一般に、所望の薬理学的及び／又は生理学的効果を得ることを意味する。この効果は、疾患及び／又は疾患に起因する有害作用を部分的又は完全に治癒するという点で治療的である。効果は、既存の状態（例えば、既存のＨＢＶ感染）に関して対象の健康及び／又は幸福を改善する目的で、又は、状態の発生の可能性を予防又は減少させる目的（例えば、肝線維症、肝炎、肝臓癌又はＨＢＶ感染に関連する他の状態を予防すること）で、治療剤（例えば、医薬組合せ又はオリゴヌクレオチド）を対象に投与することによって提供される。本明細書で使用される「処置」という用語は、対象におけるＨＢＶ感染の任意の処置を包含し、以下を含む：（ａ）疾患を阻害すること、すなわち、ＨＢｓＡｇ及び／又はＨＢｅＡｇの増加を阻害することのように、その発症を停止させること；又は、（ｂ）疾患を改善すること（すなわち、緩和）、すなわち、ＨＢｓＡｇ及び／又はＨＢｅＡｇ産生の抑制のように、疾患の退縮を引き起こすこと。したがって、ＨＢＶ感染を改善及び／又は阻害する化合物又は化合物の組合せは、ＨＢＶ感染を処置する化合物又は化合物の組合せである。好ましくは、本明細書で使用される「処置」という用語は、既に定義され顕在化したＨＢＶ感染、特に慢性ＨＢＶ感染の処置のような、既に顕在化した障害の医学的介入に関する。
いくつかの実施形態では、処置は、対象が経験する状態（例えば、ＨＢＶ感染又は関連する状態）の少なくとも１つの徴候、症状又は寄与因子の頻度又は重症度を低下させることを含む。ＨＢＶ感染の間、対象は、皮膚及び眼の黄変（黄疸）、暗色尿、極度の疲労、悪心、嘔吐及び腹痛などの症状を示し得る。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される処置、例えば医薬組合せは、そのような症状の１つ又は複数の頻度又は重症度の低下をもたらし得る。しかしながら、ＨＢＶ感染は、肝硬変、肝線維症、肝臓炎症又は肝臓癌などの１つ又は複数の肝臓症状に発展し得る。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される処置、例えば医薬組合せは、そのような状態の１つ又は複数の、頻度若しくは重症度の低下、又は予防若しくは軽減をもたらし得る。
治療有効量
「治療有効量」という用語は、対象へ投与されると、（ｉ）特定の疾患、容態若しくは障害を処置する若しくは予防する、（ｉｉ）特定の疾患、容態若しくは障害のうちの１つ以上の症状を減弱させる、寛解させる、若しくは除去する、又は（ｉｉｉ）本明細書に説明する特定の疾患、容態若しくは障害のうちの１つ以上の症状の発症を予防する若しくは遅延させる、本発明の化合物又は医薬組合せの量を表す。治療有効量は、化合物、処置される疾患の状態、処置される疾患の重症度、対象の齢及び相対的な健康状態、投与の経路及び形式、担当の医師又は獣医の判断、並びに他の因子によって変わることになる。
賦形剤
本明細書で使用される「賦形剤」という用語は、例えば、所望の稠度又は安定化効果を提供又は寄与するために、医薬組合せの一部である医薬を含む組成物の１つ又は複数に含まれ得る非治療薬を指す。
発明の詳細な説明
本発明は、ｉ）治療用オリゴヌクレオチド及びｉｉ）ＴＬＲ７アゴニストの２つのカテゴリの化合物をそれぞれ薬学的に許容され得る担体中に含む医薬組合せに関する。医薬組合せは、Ｂ型肝炎ウイルス感染症の処置、特に慢性ＨＢＶを有する患者の処置に使用するためのものである。
組合せ中の化合物の各カテゴリの下には別々に記載されるが、各カテゴリからの少なくとも１つの化合物が医薬組合せ中に存在することが理解されるべきである。化合物は、同時に又は別々に投与することができる。ＨＢＶを標的とする治療用オリゴヌクレオチドのカテゴリの化合物は、非経口的に（例えば、静脈内、皮下、又は筋肉内）投与され得る。ＴＬＲ７アゴニストは、経腸的に（例えば、経口的に又は消化管を通して）投与され得る。
第１の実施形態では、ＨＢＶを標的とする治療用オリゴヌクレオチドは、ＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡの発現を減少させるためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、好ましくはＲＮＡｉオリゴヌクレオチドである。第２の実施形態では、ＨＢＶを標的とする治療用オリゴヌクレオチドは、ＨＢＶを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチド、好ましくはＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチドである。
１．本発明のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド
いくつかの実施形態では、本発明の医薬組合せにおける第１の医薬は、治療上の利益を達成するために使用することができるＨＢＶ表面抗原発現のオリゴヌクレオチドに基づく阻害剤である。ＨＢＶ表面抗原ｍＲＮＡの検査及び異なるオリゴヌクレオチドの試験を通して、ＨＢＶ感染を処置するためにＨＢＶ表面抗原（ＨＢｓＡｇ）の発現を減少させるための強力なオリゴヌクレオチドが開発された。本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドは、いくつかの実施形態では、全ての既知の遺伝子型にわたって既知のＨＢＶゲノムの＞９５％をカバーするＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡ配列を標的とするように設計される。いくつかの実施形態では、そのようなオリゴヌクレオチドは、肝臓においてＨＢＶプレゲノムＲＮＡ（ｐｇＲＮＡ）及びＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡの９０％を超える減少をもたらす。いくつかの実施形態では、ＨＢｓＡｇ発現の減少は、単回用量又は処置レジメン後に長期間持続する。
したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、細胞内の転写物を標的化し、その発現を阻害する目的で、ＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡに対して相補性の領域を有するように設計される。相補性の領域は、一般に、オリゴヌクレオチド（又はその鎖）をＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡに、その発現を阻害する目的でアニーリングすることを可能にするのに適した長さ及び塩基含有量である。いくつかの実施形態において、相補性の領域は、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９又は少なくとも２０ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、１２～３０（例えば、１２～３０、１２～２２、１５～２５、１７～２１、１８～２７、１９～２７、又は１５～３０）ヌクレオチド長の範囲にあるＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡと相補性の領域を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９又は３０ヌクレオチド長である、ＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡと相補性の領域を有する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、ＨＢｓＡｇをコードするｍＲＮＡ配列を標的とするように設計される。例えば、いくつかの実施形態では、以下に示される配列に対して相補性の領域を有するアンチセンス鎖を有するオリゴヌクレオチドが提供される：ＡＣＡＡＮＡＡＵＣＣＵＣＡＣＡＡＵＡ（配列番号３３）、Ｎは任意のヌクレオチド（Ａ、Ｇ、Ｔ、又はＣ）を指す。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、アンチセンス鎖と二重鎖領域を形成するセンス鎖をさらに含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は、以下に記載の配列に対して相補性の領域を有する：ＵＵＮＵＵＧＵＧＡＧＧＡＵＵＮ（配列番号３４）。いくつかの実施形態では、センス鎖は、以下に記載の配列（５’から３’に示される）に対して相補性の領域を含む：ＵＵＡＵＵＧＵＧＡＧＧＡＵＵＮＵＵＧＵＣ（配列番号３５）。
いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、以下に記載の配列を含むか、又はそれからなる：ＵＵＡＵＵＧＵＧＡＧＧＡＵＵＮＵＵＧＵＣＧＧ（配列番号３６）。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、以下に記載の配列を含むか、又はそれからなる：ＵＵＡＵＵＧＵＧＡＧＧＡＵＵＣＵＵＧＵＣＧＧ（配列番号３７）。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、以下に記載の配列を含むか、又はそれからなる：ＵＵＡＵＵＧＵＧＡＧＧＡＵＵＵＵＵＧＵＣＧＧ（配列番号３８）。いくつかの実施形態では、センス鎖は、以下に記載の配列を含むか、又はそれからなる：ＡＣＡＡＮＡＡＵＣＣＵＣＡＣＡＡＵＡＡ（配列番号３９）。いくつかの実施形態では、センス鎖は、以下に記載の配列を含むか、又はそれからなる：ＧＡＣＡＡＮＡＡＵＣＣＵＣＡＣＡＡＵＡＡＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ（配列番号４０）。いくつかの実施形態では、センス鎖は、以下に記載の配列を含むか、又はそれからなる：ＧＡＣＡＡＡＡＡＵＣＣＵＣＡＣＡＡＵＡＡＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ（配列番号４１）。いくつかの実施形態では、センス鎖は、以下に記載の配列を含むか、又はそれからなる：ＧＡＣＡＡＧＡＡＵＣＣＵＣＡＣＡＡＵＡＡＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ（配列番号４２）。
いくつかの実施形態では、ＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡの発現を減少させるためのオリゴヌクレオチドは、アンチセンス鎖と二重鎖領域を形成するセンス鎖を含み、該センス鎖は、配列番号３９～４２のいずれか１つに記載の配列を含み、該アンチセンス鎖は、配列番号３６～３８のいずれか１つに記載の配列を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は、２’－フルオロ及び２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド並びに少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、２’－フルオロ及び２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド並びに少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’－炭素は、リン酸類似体を含む。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖及びセンス鎖の各々は、２’－フルオロ及び２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド並びに少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含み、アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’－炭素は、リン酸類似体を含み、センス鎖は、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分にコンジュゲートされている。
いくつかの実施形態では、配列番号４０～４２のいずれか１つに記載の配列を含むセンス鎖は、３位、８～１０位、１２位、１３位及び１７位の位置に２’－フルオロ修飾ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は、１位、２位、４～７位、１１位、１４～１６位、１８～２６位及び３１～３６位に２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は、１つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は、１位と２位のヌクレオチド間にホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖は、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分にコンジュゲートされる。
いくつかの実施形態では、配列番号３６～３８のいずれか１つに記載の配列を含むアンチセンス鎖は、２、３、５、７、８、１０、１２、１４、１６及び１９位に２’－フルオロ修飾ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、１、４、６、９、１１、１３、１５、１７、１８及び２０～２２位に２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、３つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、１と２位のヌクレオチド間、２と３位のヌクレオチド間、３と４位のヌクレオチド間、２０と２１位のヌクレオチド間、及び、２１と２２位のヌクレオチド間のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’－炭素は、リン酸類似体を含む。
Ｉ．ＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡを標的化するための二本鎖オリゴヌクレオチド
ＲＮＡｉ、アンチセンス、ｍｉＲＮＡなどを含む、本開示の医薬組合せにおけるＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡ発現を標的化するのに有用なオリゴヌクレオチドの様々な構造が存在する。本明細書又は他の場所に記載される構造のいずれも、本明細書に記載の配列を組み込む又は標的とするためのフレームワークとして使用され得る。ＨＢＶ抗原発現を（例えば、ＲＮＡｉ経路を介して）標的とするための二本鎖オリゴヌクレオチドは、一般に、互いに二重鎖を形成するセンス鎖及びアンチセンス鎖を有する。いくつかの実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は共有結合していない。しかしながら、いくつかの実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は共有結合している。
本発明のいくつかの実施形態では、ＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡ発現の発現を減少させるための二本鎖オリゴヌクレオチドは、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）に関与する。例えば、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、１～５ヌクレオチドの少なくとも１つの３’オーバーハングを有する１９～２５ヌクレオチドのサイズを有する各鎖を用いて開発されている（例えば、米国特許第８，３７２，９６８号を参照されたい）。Ｄｉｃｅｒによって処理されて活性ＲＮＡｉ産物を生成する、より長いオリゴヌクレオチドも開発されている（例えば、米国特許第８，８８３，９９６号を参照されたい）。更なる研究により、鎖の１つが熱力学的に安定化するテトラループ構造を含む構造を含む、少なくとも１つの鎖の少なくとも１つの末端が二重鎖標的化領域を超えて伸長された伸長二本鎖オリゴヌクレオチドが生成された（例えば、米国特許第８，５１３，２０７号及び第８，９２７，７０５号、並びに国際公開第２０１００３３２２５号を参照されたい。これらのオリゴヌクレオチドの開示について、参照により本明細書に組み込まれる）。そのような構造は、一本鎖伸長（分子の片側又は両側）並びに二本鎖伸長を含み得る。
いくつかの実施形態では、本明細書において提供されるオリゴヌクレオチドは、Ｄｉｃｅｒ酵素によって切断可能である。そのようなオリゴヌクレオチドは、センス鎖の３’末端にオーバーハング（例えば、１、２又は３ヌクレオチド長）を有し得る。そのようなオリゴヌクレオチド（例えば、ｓｉＲＮＡ）は、標的ＲＮＡ及び相補的なパッセンジャー鎖に対してアンチセンスである２１ヌクレオチドガイド鎖を含み得、両鎖はアニールして１９ｂｐの二重鎖及び３’末端のいずれか又は両方に２つのヌクレオチドオーバーハングを形成する。２３ヌクレオチドのガイド鎖及び２１ヌクレオチドのパッセンジャー鎖を有するオリゴヌクレオチドを含むより長いオリゴヌクレオチド設計も利用可能であり、分子の右側（パッセンジャー鎖の３’末端／ガイド鎖の５’末端）に平滑末端があり、分子の左側（パッセンジャー鎖の５’末端／ガイド鎖の３’末端）に２ヌクレオチドの３’ガイド鎖オーバーハングがある。そのような分子には、２１塩基対の二重鎖領域が存在する。例えば、米国特許第９０１２１３８号、米国特許第９０１２６２１号、及び米国特許第９１９３７５３号を参照されたい。これらの各々は、それらの関連する開示について本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、両方とも１７～２６（例えば、１７～２６、２０～２５、１９～２１又は２１～２３）ヌクレオチド長の範囲にあるセンス鎖及びアンチセンス鎖を含み得る。いくつかの実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は、等しい長さである。いくつかの実施形態では、両方とも２１～２３ヌクレオチド長の範囲にあるセンス鎖及びアンチセンス鎖を有するオリゴヌクレオチドの場合、センス鎖、アンチセンス鎖、又はセンス鎖及びアンチセンス鎖の両方の３’オーバーハングは、１又は２ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、２３ヌクレオチドのガイド鎖及び２１ヌクレオチドのパッセンジャー鎖を有し、分子の右側（パッセンジャー鎖の３’末端／ガイド鎖の５’末端）に平滑末端があり、分子の左側（パッセンジャー鎖の５’末端／ガイド鎖の３’末端）に２ヌクレオチドの３’ガイド鎖オーバーハングがある。そのような分子には、２１塩基対の二重鎖領域が存在する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、ｄｉｃｅｒ酵素によって作用されると、成熟ＲＩＳＣに組み込まれるアンチセンス鎖をもたらす２５ヌクレオチドのセンス鎖及び２７ヌクレオチドのアンチセンス鎖を含む。
本明細書に開示される組成物及び方法で使用するための他のオリゴヌクレオチド設計には、１６量体ｓｉＲＮＡ（例えば、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ ｉｎ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ．Ｂｌａｃｋｂｕｒｎ（ｅｄ．），Ｒｏｙａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００６を参照）、ｓｈＲＮＡ（例えば、１９ｂｐ又はそれより短いステムを有する；例えば、Ｍｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０１０；６２９：１４１－１５８）を参照）、ブラントｓｉＲＮＡ（例えば、長さ１９ｂｐｓ；例えば、Ｋｒａｙｎａｃｋ ａｎｄ Ｂａｋｅｒ，ＲＮＡ Ｖｏｌ．１２，ｐ１６３－１７６（２００６）を参照）、非対称ｓｉＲＮＡ（ａｉＲＮＡ；例えば、Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２６，１３７９－１３８２（２００８）を参照）、非対称短鎖二重鎖ｓｉＲＮＡ（例えば、Ｃｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２００９ Ａｐｒ；１７（４）：７２５－３２を参照）、フォークｓｉＲＮＡ（例えば、Ｈｏｈｊｏｈ，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ，Ｖｏｌ ５５７，ｉｓｓｕｅｓ １－３；Ｊａｎ ２００４，ｐ １９３－１９８を参照）、一本鎖ｓｉＲＮＡ（Ｅｌｓｎｅｒ；Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３０，１０６３（２０１２））、ダンベル形状環状ｓｉＲＮＡ（例えば、Ａｂｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ １２９：１５１０８－１５１０９（２００７）を参照）、及び、低分子内部セグメント化干渉ＲＮＡ（ｓｉｓｉＲＮＡ；例えば、Ｂｒａｍｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２００７ Ｓｅｐ；３５（１７）：５８８６－５８９７を参照）が含まれる。前述の参考文献の各々は、その中の関連する開示についてその全体が参照により組み込まれる。ＨＢｓＡｇの発現を低減又は阻害するためにいくつかの実施形態において医薬組合せで使用され得るオリゴヌクレオチド構造のさらなる非限定的な例は、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、短ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、及び短ｓｉＲＮＡである（例えば、Ｈａｍｉｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｅｍｂｏ Ｊ．，２００２，２１（１７）：４６７１－４６７９を参照；米国特許出願第２００９００９９１１５号も参照）。
ａ．アンチセンス鎖
いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖は、「ガイド鎖」と呼ばれる場合がある。例えば、アンチセンス鎖がＲＮＡ誘導性サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）と係合してアルゴノートタンパク質に結合することができるか、又は１つ若しくは複数の同様の因子と係合若しくは結合し、標的遺伝子の直接サイレンシングを行うことができる場合、それはガイド鎖と呼ばれ得る。いくつかの実施形態において、ガイドストランドと相補的なセンス鎖は、「パッセンジャー鎖」と呼ばれ得る。
いくつかの実施形態において、本明細書中に提供されるオリゴヌクレオチドは、最大５０ヌクレオチド長（例えば、最大３０、最大２７、最大２５、最大２１、又は最大１９ヌクレオチド長）のアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態において、本明細書中に提供されるオリゴヌクレオチドは、少なくとも１２ヌクレオチド長（例えば、少なくとも１２、少なくとも１５、少なくとも１９、少なくとも２１、少なくとも２５、又は少なくとも２７ヌクレオチド長）であるアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態において、本明細書中に開示されるオリゴヌクレオチドのアンチセンス鎖は、１２～５０又は１２～３０（例えば、１２～３０、１１～２７、１１～２５、１５～２１、１５～２７、１７～２１、１７～２５、１９～２７、又は１９～３０）ヌクレオチド長の範囲内である。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドのいずれか１つのアンチセンス鎖は、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、又は５０ヌクレオチド長である。
いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、ＡＡＴＣＣＴＣＡＣＡ（配列番号４３）に記載の配列（５’から３’に示される）に対して相補性の領域を含む：いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、ＵＧＵＧＡＧＧＡＵＵ（配列番号４４）に記載の配列（５’から３’に示される）を含む。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、ＴＧＴＧＡＧＧＡＴＴ（配列番号４５）に記載の配列（５’から３’に示される）を含む。
いくつかの実施形態では、ＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡの発現を減少させるためのオリゴヌクレオチドは、配列番号４３に記載の配列と相補性の領域を有するアンチセンス鎖と、その３’末端に１つ又は２つの非相補的ヌクレオチドとを含むことができる。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、配列番号３６～３８のいずれか１つに記載のヌクレオチド配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡの発現を減少させるためのオリゴヌクレオチドは、配列番号４３に記載の配列と相補性の領域を有するアンチセンス鎖を含むことができ、アンチセンス鎖は、以下のいずれか１つに記載の配列を有さない（５’から３’に記載の）：ＴＡＴＴＧＴＧＡＧＧＡＴＴＣＴＴＧＴＣＡ（配列番号４６）；ＣＧＧＴＡＴＴＧＴＧＡＧＧＡＴＴＣＴＴＧ（配列番号４７）；ＴＧＴＧＡＧＧＡＴＴＣＴＴＧＴＣＡＡＣＡ（配列番号４８）；ＵＡＵＵＧＵＧＡＧＧＡＵＵＵＵＵＧＵＣＡＡ（配列番号４９）；ＵＧＣＧＧＵＡＵＵＧＵＧＡＧＧＡＵＵＣＴＴ（配列番号５０）；ＡＣＡＧＣＡＴＴＧＴＧＡＧＧＡＴＴＣＴＴＧＴＣ（配列番号５１）；ＵＡＵＵＧＵＧＡＧＧＡＵＵＵＵＵＧＵＣＡＡＣＡ（配列番号５２）；ＡＵＵＧＵＧＡＧＧＡＵＵＵＵＵＧＵＣＡＡＣＡＡ（配列番号５３）；及びＵＵＧＵＧＡＧＧＡＵＵＵＵＵＧＵＣＡＡＣＡＡＧ（配列番号５４）。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、配列番号３６、３７、又は３８に示されるヌクレオチド配列と３ヌクレオチド以下だけ異なる。
ｂ．センス鎖
いくつかの実施形態において、二本鎖オリゴヌクレオチドは、最大４０ヌクレオチド長（例えば、最大４０、最大３５、最大３０、最大２７、最大２５、最大２１、最大１９、最大１７、又は最大１２ヌクレオチド長）のセンス鎖を有し得る。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１２ヌクレオチド長（例えば、少なくとも１２、少なくとも１５、少なくとも１９、少なくとも２１、少なくとも２５、少なくとも２７、少なくとも３０、少なくとも３５、又は少なくとも３８ヌクレオチド長）のセンス鎖を有し得る。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、１２～５０（例えば、１２～４０、１２～３６、１２～３２、１２～２８、１５～４０、１５～３６、１５～３２、１５～２８、１７～２１、１７～２５、１９～２７、１９～３０、２０～４０、２２～４０、２５～４０、又は３２～４０）ヌクレオチド長の範囲のセンス鎖を有し得る。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、２９、３９、又は４０ヌクレオチド長のセンス鎖を有し得る。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドのセンス鎖は、２７ヌクレオチドよりも長い（例えば、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９又は４０ヌクレオチド）。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドのセンス鎖は、２５ヌクレオチドよりも長い（例えば、２６、２７、２８、２９又は３０ヌクレオチド）。
いくつかの実施形態において、センス鎖は、その３’末端にステムループを含む。いくつかの実施形態において、センス鎖は、その５’末端にステムループを含む。いくつかの実施形態において、ステムループを含む鎖は、２～６６ヌクレオチド長（例えば、２～６６、１０～５２、１４～４０、２～３０、４～２６、８～２２、１２～１８、１０～２２、１４～２６、ｏｒ １４～３０ヌクレオチド長）の範囲である。いくつかの実施形態において、ステムループを含む鎖は、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９又は３０ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態において、ステムは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３又は１４ヌクレオチド長の二重鎖を含む。いくつかの実施形態において、ステムループは、分解（例えば、酵素分解）に対する分子のより良好な保護を提供し、標的細胞への送達のための標的化特性を容易にする。例えば、いくつかの実施形態では、ループは、オリゴヌクレオチドの遺伝子発現阻害活性に実質的に影響を与えることなく修飾を行うことができる付加ヌクレオチドを提供する。ある特定の実施形態において、ここで、センス鎖が以下に記載されるステムループを（例えばその３’末端に）含むオリゴヌクレオチドが本明細書中に提供される：Ｓ１－Ｌ－Ｓ２であって、式中、Ｓ１はＳ２と相補的であり、ＬはＳ１とＳ２との間に最大１０ヌクレオチド長（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０ヌクレオチド長）のループを形成する。
いくつかの実施形態において、ステムループのループ（Ｌ）は、テトラループ（例えば、ニックが入ったテトラループ構造内）である。テトラループは、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、修飾ヌクレオチド、及びそれらの組合せを含み得る。典型的には、テトラループは４～５ヌクレオチドを有する。
ｃ．二重鎖の長さ
いくつかの実施形態において、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二重鎖は、少なくとも１２（例えば、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、又は少なくとも２１）ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態において、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二重鎖は、１２～３０ヌクレオチド長（例えば、１２～３０、１２～２７、１２～２２、１５～２５、１８～３０、１８～２２、１８～２５、１８～２７、１８～３０、１９～３０又は２１～３０ヌクレオチド長）の範囲である。いくつかの実施形態において、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二重鎖は、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９又は３０ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態において、センス鎖とアンチセンス鎖との間に形成される二重鎖は、センス鎖及び／又はアンチセンス鎖の全長に及んでいない。いくつかの実施形態において、センス鎖とアンチセンス鎖との間の二重鎖は、センス鎖又はアンチセンス鎖のいずれかの全長に及ぶ。ある特定の実施形態において、センス鎖とアンチセンス鎖との間の二重鎖は、センス鎖とアンチセンス鎖の両方の全長に及ぶ。
ｄ．オリゴヌクレオチド末端
いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、センス鎖及びアンチセンス鎖を含み、それにより、センス鎖若しくはアンチセンス鎖のいずれか、又はセンス鎖及びアンチセンス鎖の両方に３’－オーバーハングが存在する。いくつかの実施形態において、本明細書において提供されるオリゴヌクレオチドは、他の５’末端と比較して熱力学的に安定でない１つの５’末端を有する。いくつかの実施形態において、センス鎖の３’末端に平滑末端を含み、アンチセンス鎖の３’末端にオーバーハングを含む非対称オリゴヌクレオチドが提供される。いくつかの実施形態において、アンチセンス鎖上の３’オーバーハングは１～８ヌクレオチド長（例えば、１、２、３、４、５、６、７又は８ヌクレオチド長）である。
典型的には、ＲＮＡｉのオリゴヌクレオチドは、アンチセンス（ガイド）鎖の３’末端に２つのヌクレオチドオーバーハングを有する。しかしながら、他のオーバーハングも可能である。いくつかの実施形態において、オーバーハングは、１～６ヌクレオチド、任意に、１～５、１～４、１～３、１～２、２～６、２～５、２～４、２～３、３～６、３～５、３～４、４～６、４～５、５～６ヌクレオチド又は１、２、３、４、５又は６ヌクレオチドの長さを含む３’オーバーハングである。しかしながら、いくつかの実施形態では、オーバーハングは、１～６ヌクレオチド、任意に、１～５、１～４、１～３、１～２、２～６、２～５、２～４、２～３、３～６、３～５、３～４、４～６、４～５、５～６ヌクレオチド、又は１、２、３、４、５又は６ヌクレオチドの長さを含む５’オーバーハングである。
いくつかの実施形態において、センス鎖及び／又はアンチセンス鎖の３’末端又は５’末端の１つ又は複数（例えば、２、３、４個）の末端ヌクレオチドが修飾される。例えば、いくつかの実施形態において、アンチセンス鎖の３’末端の１つ又は２つの末端ヌクレオチドが修飾される。いくつかの実施形態において、アンチセンス鎖の３’末端の最後のヌクレオチドは、修飾されており、例えば、２’－修飾、例えば、２’－Ｏ－メトキシエチルを含む。いくつかの実施形態において、アンチセンス鎖の３’末端における最後の１つ又は２つの末端ヌクレオチドは標的と相補的である。いくつかの実施形態において、アンチセンス鎖の３’末端における最後の１つ又は２つのヌクレオチドは標的と相補的ではない。
いくつかの実施形態において、ニックが入ったテトラループ構造を３’末端センス鎖に有し、そのアンチセンス鎖の３’末端に２つの末端オーバーハングヌクレオチドを有する二本鎖オリゴヌクレオチドが提供される。いくつかの実施形態において、２つの末端オーバーハングヌクレオチドはＧＧである。典型的には、アンチセンス鎖の２つの末端ＧＧヌクレオチドの一方又は両方は、標的と相補的であるか、又は相補的ではない。
いくつかの実施形態において、センス鎖又はアンチセンス鎖の５’末端及び／又は３’末端は逆キャップヌクレオチドを有する。
いくつかの実施形態において、１つ又は複数（例えば、２、３、４、５、６個）の修飾ヌクレオチド間結合が、センス鎖及び／又はアンチセンス鎖の３’末端又は５’末端の末端ヌクレオチドの間に提供される。いくつかの実施形態において、修飾ヌクレオチド間結合が、センス鎖及び／又はアンチセンス鎖の３’末端又は５’末端におけるオーバーハングヌクレオチドの間に提供される。
ｅ．ミスマッチ
いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、センス鎖とアンチセンス鎖との間に１つ又は複数（例えば、１、２、３、４、５個）のミスマッチを有し得る。センス鎖とアンチセンス鎖との間に２つ以上のミスマッチがある場合、それらは連続的に（例えば、連続して２、３又はそれを超えて）配置され得るか、又は相補性の領域全体に散在し得る。いくつかの実施形態において、センス鎖の３’末端は、１つ又は複数のミスマッチを含有する。一実施形態において、２つのミスマッチがセンス鎖の３’末端に組み込まれる。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドのセンス鎖の３’末端におけるセグメントの塩基ミスマッチ又は不安定化は、おそらくＤｉｃｅｒによるプロセシングを促進することによって、ＲＮＡｉにおける合成二重鎖の効力を改善した。
いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、対応する転写物配列と比較して１つ又は複数のミスマッチを含むＨＢｓＡｇ転写物に対して相補性の領域を有し得る。オリゴヌクレオチド上の相補性の領域は、適切なハイブリダイゼーション条件下で転写物と相補的塩基対を形成する能力を維持する限り、最大１、最大２、最大３、最大４、最大５などのミスマッチを有し得る。あるいは、オリゴヌクレオチドの相補性の領域は、適切なハイブリダイゼーション条件下でＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡと相補的塩基対を形成する能力を維持する限り、１個以下、２個以下、３個以下、４個以下又は５個以下のミスマッチを有し得る。いくつかの実施形態では、相補性の領域に２つ以上のミスマッチがある場合、オリゴヌクレオチドが適切なハイブリダイゼーション条件下でＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡと相補的塩基対を形成する能力を維持する限り、それらは連続的に（例えば、連続して２、３、４、又はそれ以上）配置されるか、又は相補性の領域全体に散在し得る。
ＩＩ．一本鎖オリゴヌクレオチド
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＨＢｓＡｇ発現を減少させるためのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、ＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡと相補性を有する一本鎖オリゴヌクレオチドである。そのような構造には、一本鎖ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが含まれ得るが、これらに限定されない。最近の試みにより、一本鎖ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの活性が実証されている（例えば、Ｍａｔｓｕｉ ｅｔ ａｌ．（Ｍａｙ ２０１６），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｖｏｌ．２４（５），９４６－９５５を参照されたい）。
そのような一本鎖ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、技術的にはアンチセンスオリゴヌクレオチドと見なされ得るが、依然としてＲＮＡ干渉の機構を介して機能することができ、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドについて本明細書に記載されるような特徴を有する。
２．本発明の特定のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド
参照を容易にし、不必要な繰り返しを避けるために、本明細書に記載の本発明のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドのいくつかの定義は、以下の「ＲＮＡｉ番号」によっても参照される。
一実施形態では、本発明の医薬組合せ中のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、ＨＢＶを標的とするオリゴヌクレオチドである。このＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、本明細書ではＲＮＡｉ番号１とも呼ばれる。
一実施形態では、本発明の医薬組合せ中のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、ＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡを標的とするオリゴヌクレオチドである。このＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、本明細書ではＲＮＡｉ番号２とも呼ばれる。
一実施形態では、本発明の医薬組合せ中のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、ＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡの発現を減少させるオリゴヌクレオチドである。このＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、本明細書ではＲＮＡｉ番号３とも呼ばれる。
一実施形態では、本発明の医薬組合せにおけるＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、１９～３０ヌクレオチド長のアンチセンス鎖を含むオリゴヌクレオチドであり、アンチセンス鎖は、ＡＣＡＡＮＡＡＵＣＣＵＣＡＣＡＡＵＡ（配列番号３３に記載のＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡの配列に対して相補性の領域を含む。このＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、本明細書ではＲＮＡｉ番号４とも呼ばれる。
一実施形態では、本発明の医薬組合せにおけるＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、ＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡの発現を減少させるためのオリゴヌクレオチドであり、該オリゴヌクレオチドは、１９～３０ヌクレオチド長のアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、ＡＣＡＡＮＡＡＵＣＣＵＣＡＣＡＡＵＡ（配列番号３３に記載のＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡの配列に対して相補性の領域を含む。このＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、本明細書ではＲＮＡｉ番号５とも呼ばれる。
一実施形態において、本発明の医薬組合せにおけるＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓＡｇ）ｍＲＮＡの発現を減少させるためのオリゴヌクレオチドであり、該オリゴヌクレオチドは、アンチセンス鎖と二重鎖領域を形成するセンス鎖を含み、
センス鎖が、ＧＡＣＡＡＡＡＡＵＣＣＵＣＡＣＡＡＵＡＡＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ（配列番号４１）に記載の配列であって、３、８～１０、１２、１３及び１７位の２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、１、２、４～７、１１、１４～１６、１８～２６及び３１～３６位の２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、並びに１と２位のヌクレオチド間のホスホロチオエート結合を含む、配列からなり、センス鎖上の－ＧＡＡＡ－配列の各ヌクレオチドは、一価ＧａｌＮａｃ部分にコンジュゲートされており、
アンチセンス鎖は、ＵＵＡＵＵＧＵＧＡＧＧＡＵＵＵＵＵＧＵＣＧＧ（配列番号３８）に記載の配列であって、２、３、５、７、８、１０、１２、１４、１６及び１９位の２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、１、４、６、９、１１、１３、１５、１７、１８及び２０～２２位の２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、並びに、１と２位のヌクレオチド間、２と３位のヌクレオチド間、３と４位のヌクレオチド間、２０と２１位のヌクレオチド間、及び２１と２２位のヌクレオチド間のホスホロチオエート結合を含む配列からなり、
アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’－炭素は、メトキシホスホネート（ＭＯＰ）を含む。このＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、本明細書ではＲＮＡｉ番号６とも呼ばれる。
一実施形態において、本発明の医薬組合せにおけるＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、アンチセンス鎖と二重鎖領域を形成するセンス鎖を含むオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が、ＧＡＣＡＡＡＡＡＵＣＣＵＣＡＣＡＡＵＡＡＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ（配列番号４１）に記載の配列であって、３、８～１０、１２、１３及び１７位の２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、１、２、４～７、１１、１４～１６、１８～２６及び３１～３６位の２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、並びに１と２位のヌクレオチド間の１つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む、配列を含み、センス鎖上の－ＧＡＡＡ－配列の各ヌクレオチドは、一価ＧａｌＮａｃ部分にコンジュゲートされており、－ＧＡＡＡ－配列は、以下の構造：
Figure 2023509870000005
 を含み、
アンチセンス鎖は、ＵＵＡＵＵＧＵＧＡＧＧＡＵＵＵＵＵＧＵＣＧＧ（配列番号３８）に記載の配列であって、２、３、５、７、８、１０、１２、１４、１６及び１９位の２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、１、４、６、９、１１、１３、１５、１７、１８及び２０－２２位の２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、並びに、ヌクレオチド１と２、２と３、３と４、２０と２１、及び２１と２２の間に５つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む配列を含み、アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’－炭素は以下の構造：
Figure 2023509870000006
 を有する。
このＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、本明細書ではＲＮＡｉ番号７とも呼ばれる。一実施形態では、ＲＮＡｉ番号７は、ＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡの発現を減少させるためのオリゴヌクレオチドである。一実施形態において、ＲＮＡｉ番号７のセンス鎖若しくはアンチセンス鎖、又はアンチセンス鎖とセンス鎖の両方は、ＲＮＡｉ番号７におけるこれらの鎖について上述したそれぞれの配列からなる。ＲＮＡｉ番号７における一実施形態では、配列番号４１は５’－ＧＡＣＡＡＡＡＡＵＣＣＵＣＡＣＡＡＵＡＡＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ－３’であり、及び／又は配列番号３８は５’－ＵＵＡＵＵＧＵＧＡＧＧＡＵＵＵＵＵＧＵＣＧＧ－３’である。
一実施形態において、本発明の医薬組合せにおけるＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、図２９Ａに示される構造を有する。このＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、本明細書ではＲＮＡｉ番号８とも呼ばれる。
一実施形態において、本発明の医薬組合せにおけるＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドＨＢＶ（ｓ）－２１９である。このＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、本明細書ではＲＮＡｉ番号９とも呼ばれる。
３．本発明のＲＮＡｉ剤のオリゴヌクレオチド修飾
このセクションで論じられる修飾は、本発明のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドでの実施に特に好ましい。
オリゴヌクレオチドは、特異性、安定性、送達、バイオアベイラビリティ、ヌクレアーゼ分解からの耐性、免疫原性、塩基対形成特性、ＲＮＡ分布及び細胞取り込み、並びに治療的又は研究的使用に関連する他の特徴を改善又は制御するために様々な方法で修飾され得る。例えば、Ｂｒａｍｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２００９，３７，２８６７－２８８１；Ｂｒａｍｓｅｎ ａｎｄ Ｋｊｅｍｓ（Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，３（２０１２）：１－２２）を参照のこと。したがって、いくつかの実施形態において、本開示の治療用オリゴヌクレオチドは、１つ又は複数の適切な修飾を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、修飾ヌクレオチドは、その塩基（又は核酸塩基）、糖（例えば、リボース、デオキシリボース）又はリン酸基において修飾を有する。
オリゴヌクレオチド上の修飾の数及びそれらのヌクレオチド修飾の位置は、オリゴヌクレオチドの特性に影響を及ぼし得る。例えば、オリゴヌクレオチドは、それらを脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）又は同様の担体にコンジュゲートさせるか又は包含することによって、インビボで送達され得る。しかしながら、オリゴヌクレオチドがＬＮＰ又は同様の担体によって保護されていない場合、そのヌクレオチドの少なくともいくつかが修飾されることが有利であり得る。したがって、本明細書中に提供される治療用オリゴヌクレオチドのいずれかの特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドのヌクレオチドの全て又は実質的に全てが修飾される。ある特定の実施形態では、ヌクレオチドの半分よりも多くが修飾される。特定の実施形態では、ヌクレオチドの半分未満が修飾される。典型的には、裸の送達では、全ての糖が２’位で修飾される。これらの修飾は可逆的又は不可逆的であり得る。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドは、所望の特徴（例えば、酵素分解からの保護、インビボ投与後に所望の細胞を標的化する能力、及び／又は熱力学的安定性）を引き起こすのに十分な数及び種類の修飾ヌクレオチドを有する。
Ｉ．糖修飾
いくつかの実施形態では、修飾された糖（本明細書では糖類似体とも呼ばれる）は、修飾されたデオキシリボース又はリボース部分を含み、例えば、１つ又は複数の修飾が糖の２’、３’、４’及び／又は５’炭素位置で起こる。いくつかの実施形態では、修飾された糖はまた、非天然の代替炭素構造、例えば、ロックド核酸（「ＬＮＡ」）（例えばＫｏｓｈｋｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９９８），Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ５４，３６０７－３６３０を参照）、アンロックド核酸（「ＵＮＡ」）（例えば、Ｓｎｅａｄ ｅｔ ａｌ．（２０１３），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ－Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ，２，ｅ１０３を参照）、及び架橋核酸（「ＢＮＡ」）（例えば、Ｉｍａｎｉｓｈｉ ａｎｄ Ｏｂｉｋａ（２００２），Ｔｈｅ Ｒｏｙａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１６５３－１６５９を参照）に存在するものを含み得る。Ｋｏｓｈｋｉｎ ｅｔ ａｌ．、Ｓｎｅａｄ ｅｔ ａｌ．、及び、Ｉｍａｎｉｓｈｉ ａｎｄ Ｏｂｉｋａは、糖修飾に関するそれらの開示について参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態において、糖におけるヌクレオチド修飾は、２’修飾を含む。２’修飾は、２’－アミノエチル、２’－フルオロ、２’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－メトキシエチル、及び２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸であり得る。典型的には、修飾は、２’－フルオロ、２’－Ｏ－メチル又は２’－Ｏ－メトキシエチルである。いくつかの実施形態では、糖の修飾は、糖環の修飾を含み、これは糖環の１つ又は複数の炭素の修飾を含み得る。例えば、ヌクレオチドの糖の修飾は、糖の２’－酸素が糖の１’－炭素又は４’－炭素に結合しているか、又は２’－酸素がエチレン又はメチレン架橋を介して１’－炭素又は４’－炭素に結合していることを含み得る。いくつかの実施形態において、修飾ヌクレオチドは、２’－炭素－３’－炭素結合を欠く非環式糖を有する。いくつかの実施形態において、修飾ヌクレオチドは、例えば糖の４’位にチオール基を有する。
いくつかの実施形態において、末端３’－末端基（例えば、３’－ヒドロキシル）は、リン酸基又は他の基であり、例えば、リンカー、アダプター若しくは標識を付着させるために、又はオリゴヌクレオチドを別の核酸に直接ライゲーションするために使用することができる。
ＩＩ．５’末端リン酸
いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドの５’末端リン酸基は、アルゴノート２との相互作用を増強する。しかしながら、５’－リン酸基を含むオリゴヌクレオチドは、ホスファターゼ又は他の酵素を介して分解されやすく、インビボでのそれらのバイオアベイラビリティを制限する可能性がある。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、そのような分解に耐性の５’リン酸の類似体を含む。いくつかの実施形態では、リン酸類似体は、オキシメチルホスホネート、ビニルホスホネート、又はマロニルホスホネートであり得る。ある特定の実施形態では、オリゴヌクレオチド鎖の５’末端は、天然の５’リン酸基（「リン酸模倣物」）の静電特性及び立体特性を模倣する化学部分に結合している（例えば、Ｐｒａｋａｓｈ ｅｔ ａｌ．（２０１５），Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０１５ Ｍａｒ ３１；４３（６）：２９９３－３０１１を参照のこと。リン酸類似体に関するその内容は参照により本明細書に組み込まれる）。５’末端に結合することができる多くのリン酸模倣物が開発されている（例えば、米国特許第８，９２７，５１３号を参照されたい。リン酸類似体に関するその内容が参照により本明細書に組み込まれる）。オリゴヌクレオチドの５’末端に対する他の修飾が開発されている（例えば、国際公開第２０１１／１３３８７１号を参照されたい。リン酸類似体に関するその内容は参照により本明細書に組み込まれる）。ある特定の実施形態において、ヒドロキシル基は、オリゴヌクレオチドの５’末端に結合している。
いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、糖の４’－炭素位置にリン酸類似体（「４’－リン酸類似体」と呼ばれる）を有する。例えば、２０１６年９月２日に出願され４’－Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ Ａｎａｌｏｇｓ ａｎｄ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ Ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ ｔｈｅ Ｓａｍｅと題された米国仮特許出願第６２／３８３，２０７号、及び、２０１６年９月１２日に出願され４’－Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ Ａｎａｌｏｇｓ ａｎｄ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ Ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ ｔｈｅ Ｓａｍｅと題された米国仮特許出願第６２／３９３，４０１号を参照されたい。これらの各々のリン酸類似体に関する内容は、参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態において、本明細書において提供されるオリゴヌクレオチドは、５’末端ヌクレオチドに４’－リン酸類似体を含む。いくつかの実施形態では、リン酸類似体は、オキシメチル基の酸素原子が糖部分（例えばその４’－炭素）に結合しているオキシメチルホスホネート又はその類似体である。他の実施形態では、４’リン酸類似体は、チオメチルホスホネート又はアミノメチルホスホネート（チオメチル基の硫黄原子又はアミノメチル基の窒素原子が糖部分の４’－炭素に結合している）又はその類似体である。ある特定の実施形態において、４’リン酸類似体は、オキシメチルホスホネートである。いくつかの実施形態では、オキシメチルホスホネートは、式－Ｏ－ＣＨ２－ＰＯ（ＯＨ）２又は－Ｏ－ＣＨ２－ＰＯ（ＯＲ）２で表され、式中、Ｒは、Ｈ、ＣＨ３アルキル基、ＣＨ２ＣＨ２ＣＮ、ＣＨ２ＯＣＯＣ（ＣＨ３）３、ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２Ｓｉ（ＣＨ３）３、又は保護基から独立して選択される。ある特定の実施形態において、アルキル基は、ＣＨ２ＣＨ３である。より典型的には、Ｒは、Ｈ、ＣＨ３又はＣＨ２ＣＨ３から独立して選択される。
ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドに結合したリン酸類似体は、メトキシホスホネート（ＭＯＰ）である。ある特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドに結合したリン酸類似体は、５’モノメチル保護ＭＯＰである。いくつかの実施形態では、リン酸類似体を含む以下のウリジンヌクレオチドが、例えば、ガイド（アンチセンス）鎖の１位で使用され得る。
Figure 2023509870000007
この修飾ヌクレオチドは、［Ｍｅホスホン酸－４Ｏ－ｍＵ］又は５’－メトキシ、ホスホン酸－４’オキシ－２’－Ｏ－メチルウリジンと呼ばれる。
ＩＩＩ．修飾ヌクレオシド間結合
いくつかの実施形態において、リン酸修飾又は置換は、少なくとも１つ（例えば、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ又は少なくとも５つ）の修飾ヌクレオチド間結合を含むオリゴヌクレオチドをもたらし得る。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドのいずれか１つは、１～１０個（例えば、１～１０、２～８、４～６、３～１０、５～１０、１～５、１～３、又は１～２個）の修飾ヌクレオチド間結合を含む。いくつかの実施形態において、本明細書中に開示されるオリゴヌクレオチドのいずれか１つは、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０個の修飾ヌクレオチド間結合を含む。
修飾ヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート結合、ホスホロチオエート結合、ホスホトリエステル結合、チオノアルキルホスホネート結合、チオノアルキルホスホトリエステル結合、ホスホラミダイト結合、ホスホネート結合又はボラノホスフェート結合であり得る。いくつかの実施形態において、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドのいずれか１つの少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート結合である。
ＩＶ．塩基修飾
いくつかの実施形態において、本明細書において提供されるオリゴヌクレオチドは、１つ又は複数の修飾核酸塩基を有する。いくつかの実施形態において、修飾核酸塩基（本明細書では塩基類似体とも呼ばれる）は、ヌクレオチド糖部分の１’位に連結されている。ある特定の実施形態では、修飾核酸塩基は窒素塩基である。ある特定の実施形態では、修飾核酸塩基は窒素原子を含まない。例えば、米国特許出願公開第２００８０２７４４６２号を参照されたい。いくつかの実施形態において、修飾ヌクレオチドは、ユニバーサル塩基を含む。しかしながら、ある特定の実施形態では、修飾ヌクレオチドは核酸塩基を含有しない（脱塩基性）。
いくつかの実施形態では、ユニバーサル塩基は、修飾ヌクレオチド中のヌクレオチド糖部分の１’位に位置する複素環部分、又は二重鎖中に存在する場合に二重鎖の構造を実質的に変化させることなく２種類以上の塩基の反対側に位置することができるヌクレオチド糖部分置換の等価な位置である。いくつかの実施形態では、標的核酸に完全に相補的な参照一本鎖核酸（例えば、オリゴヌクレオチド）と比較して、ユニバーサル塩基を含有する一本鎖核酸は、相補的核酸で形成された二重鎖よりも低いＴｍを有する標的核酸との二重鎖を形成する。しかし、いくつかの実施形態では、ユニバーサル塩基が塩基で置換されて単一のミスマッチが生じる参照一本鎖核酸と比較して、ユニバーサル塩基を含む一本鎖核酸は、ミスマッチ塩基を含む核酸で形成された二重鎖よりも高いＴｍを有する標的核酸との二重鎖を形成する。
ユニバーサル結合ヌクレオチドの非限定的な例としては、イノシン、１－β－Ｄ－リボフラノシル－５－ニトロインドール、及び／又は１－β－Ｄ－リボフラノシル－３－ニトロピロールが挙げられる（Ｑｕａｙらによる米国特許出願公開米国特許第２００７０２５４３６２号明細書；Ｖａｎ Ａｅｒｓｃｈｏｔ ｅｔ ａｌ．，Ａｎ ａｃｙｃｌｉｃ ５－ｎｉｔｒｏｉｎｄａｚｏｌｅ ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ ａｎａｌｏｇｕｅ ａｓ ａｍｂｉｇｕｏｕｓ ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９９５ Ｎｏｖ １１；２３（２１）：４３６３－７０；Ｌｏａｋｅｓ ｅｔ ａｌ．，３－Ｎｉｔｒｏｐｙｒｒｏｌｅ ａｎｄ ５－ｎｉｔｒｏｉｎｄｏｌｅ ａｓ ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ｂａｓｅｓ ｉｎ ｐｒｉｍｅｒｓ ｆｏｒ ＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ａｎｄ ＰＣＲ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９９５ Ｊｕｌ １１；２３（１３）：２３６１－６；Ｌｏａｋｅｓ ａｎｄ Ｂｒｏｗｎ，５－Ｎｉｔｒｏｉｎｄｏｌｅ ａｓ ａｎ ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ｂａｓｅ ａｎａｌｏｇｕｅ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９９４ Ｏｃｔ １１；２２（２０）：４０３９－４３。上記の各々は、塩基修飾に関連するそれらの開示について参照により本明細書に組み込まれる）。
Ｖ．可逆的修飾
標的細胞に到達する前にオリゴヌクレオチドをインビボ環境から保護するための特定の修飾を行うことができるが、それにより、一旦標的細胞の細胞質ゾルに到達するとオリゴヌクレオチドの効力又は活性を低下し得る。可逆的修飾は、分子が細胞の外側で望ましい特性を保持するように行うことができ、その後、細胞の細胞質ゾル環境に入ると除去される。可逆的修飾は、例えば、細胞内酵素の作用又は細胞内の化学的条件によって（例えば、細胞内グルタチオンによる還元を介して）除去することができる。
いくつかの実施形態では、可逆的に修飾ヌクレオチドは、グルタチオン感受性部分を含む。典型的には、核酸分子は、環状ジスルフィド部分で化学的に修飾されて、ヌクレオチド間二リン酸結合によって生成される負電荷をマスクし、細胞取り込み及びヌクレアーゼ耐性を改善する。Ｔｒａｖｅｒｓａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．に最初に譲渡された米国特許出願公開第２０１１／０２９４８６９号（「Ｔｒａｖｅｒｓａ」）、Ｓｏｌｓｔｉｃｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，Ｌｔｄ．のＰＣＴ公開番号ＷＯ ２０１５／１８８１９７（「Ｓｏｌｓｔｉｃｅ」）、Ｍｅａｄｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１４，３２：１２５６－１２６３（「Ｍｅａｄｅ」）、Ｍｅｒｃｋ Ｓｈａｒｐ＆Ｄｏｈｍｅ ＣｏｒｐのＰＣＴ公開番号ＷＯ ２０１４／０８８９２０を参照。これらの各々は、そのような修正の開示について参照により組み込まれる。ヌクレオチド間二リン酸結合のこの可逆的修飾は、細胞質ゾルの還元環境（例えば、グルタチオン）によって細胞内で切断されるように設計されている。以前の例には、細胞内で切断可能であると報告された中和ホスホトリエステル修飾が含まれる（Ｄｅｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００３，１２５：９４０－９５０）。
いくつかの実施形態において、そのような可逆的修飾は、オリゴヌクレオチドがヌクレアーゼ及び他の過酷な環境条件（例えば、ｐＨ）に曝露されるインビボ投与（例えば、血液及び／又は細胞のリソソーム／エンドソーム区画を通過する）中の保護を可能にする。グルタチオンレベルが細胞外空間と比較して高い細胞の細胞質ゾルに放出されると、修飾が逆転し、切断されたオリゴヌクレオチドが得られる。可逆的グルタチオン感受性部分を使用すると、不可逆的な化学修飾を使用して利用可能な選択肢と比較して、目的のオリゴヌクレオチドに立体的により大きな化学基を導入することが可能である。これは、これらのより大きな化学基が細胞質ゾルで除去され、したがって、細胞の細胞質ゾル内のオリゴヌクレオチドの生物学的活性を妨げないからである。結果として、これらのより大きな化学基は、ヌクレアーゼ耐性、親油性、電荷、熱安定性、特異性、及び免疫原性の低下などの様々な利点をヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドに与えるように操作することができる。いくつかの実施形態では、グルタチオン感受性部分の構造を、その放出の動態を改変するように操作することができる。
いくつかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は、ヌクレオチドの糖に結合している。いくつかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は、修飾ヌクレオチドの糖の２’－炭素に結合している。いくつかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は、特に修飾ヌクレオチドがオリゴヌクレオチドの５’末端ヌクレオチドである場合、糖の５’炭素に位置する。いくつかの実施形態では、グルタチオン感受性部分は、特に修飾ヌクレオチドがオリゴヌクレオチドの３’末端ヌクレオチドである場合、糖の３’炭素に位置する。いくつかの実施形態では、グルタチオン感受性部分はスルホニル基を含む。例えば、２０１６年８月２３日に出願されＣｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ Ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ Ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｙ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｕｓｅｓ Ｔｈｅｒｅｏｆと題された米国特許仮出願第６２／３７８，６３５号を参照されたい。その内容は、その関連する開示について参照により本明細書に組み込まれる。
ＩＶ．標的化リガンド
いくつかの実施形態において、本開示のオリゴヌクレオチドを１つ若しくは複数の細胞又は１つ若しくは複数の器官に標的化することが望ましい場合がある。そのような戦略は、他の器官における望ましくない影響を回避するのに役立ち得るか、又はオリゴヌクレオチドにとって利益にならない細胞、組織若しくは器官へのオリゴヌクレオチドの過度の喪失を回避し得る。したがって、いくつかの実施形態において、本明細書中に開示されるオリゴヌクレオチドは、特定の組織、細胞又は器官の標的化を容易にするために、例えば、肝臓へのオリゴヌクレオチドの送達を容易にするために修飾され得る。ある特定の実施形態において、本明細書中に開示されるオリゴヌクレオチドは、肝臓の肝細胞へのオリゴヌクレオチドの送達を容易にするために修飾され得る。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、１つ又は複数の標的化リガンドにコンジュゲートさせたヌクレオチドを含む。
標的化リガンドは、炭水化物、アミノ糖、コレステロール、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、又は、タンパク質（例えば、抗体又は抗体フラグメント）若しくは脂質の一部を含み得る。いくつかの実施形態において、標的化リガンドはアプタマーである。例えば、標的化リガンドは、腫瘍脈管構造又は神経膠腫細胞を標的化するために使用されるＲＧＤペプチド、腫瘍脈管構造又はストーマを標的化するためのＣＲＥＫＡペプチド、トランスフェリン、ラクトフェリン、又はＣＮＳ脈管構造上に発現されるトランスフェリン受容体を標的化するためのアプタマー、又は神経膠腫細胞上のＥＧＦＲを標的化するための抗ＥＧＦＲ抗体であり得る。ある特定の実施形態において、標的化リガンドは、１つ又は複数のＧａｌＮＡｃ部分である。
いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドの１つ又は複数（例えば、１、２、３、４、５又は６個）のヌクレオチドは、それぞれ、別個の標的化リガンドにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドの２～４個のヌクレオチドは、それぞれ、別個の標的化リガンドにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態において、標的化リガンドは、標的化リガンドが歯ブラシの剛毛に類似し、オリゴヌクレオチドが歯ブラシに類似するように、センス鎖又はアンチセンス鎖のいずれかの末端において２～４個のヌクレオチドにコンジュゲートされる（例えば、リガンドは、センス鎖又はアンチセンス鎖の５’末端又は３’末端上の２～４個のヌクレオチドのオーバーハング又は伸長にコンジュゲート化される）。例えば、オリゴヌクレオチドは、センス鎖の５’末端又は３’末端のいずれかにステムループを含み得、ステムのループの１、２、３又は４個のヌクレオチドは、標的化リガンドに個々にコンジュゲートされ得る。
いくつかの実施形態では、ＨＢＶ抗原の発現を減少させるオリゴヌクレオチドを対象の肝臓の肝細胞に標的化することが望ましい。この目的のために、任意の適切な肝細胞標的化部分を使用してもよい。
ＧａｌＮＡｃは、アシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）に対する高親和性リガンドであり、主に肝細胞細胞の類洞表面に発現され、末端ガラクトース残基又はＮ－アセチルガラクトサミン残基（アシアロ糖タンパク質）を含有する循環糖タンパク質の結合、内在化、及びその後のクリアランスにおいて主要な役割を果たす。ＧａｌＮＡｃ部分の本開示のオリゴヌクレオチドへの（間接的又は直接的な）コンジュゲーションを使用して、これらのオリゴヌクレオチドをこれらの肝細胞細胞上に発現されるＡＳＧＰＲに標的化することができる。
いくつかの実施形態において、本開示のオリゴヌクレオチドは、一価ＧａｌＮＡｃに直接的又は間接的にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、２つ以上の一価ＧａｌＮＡｃに直接的又は間接的にコンジュゲートされる（すなわち、２、３又は４個の一価のＧａｌＮＡｃ部分にコンジュゲートされ、典型的には、３又は４個の一価のＧａｌＮＡｃ部分にコンジュゲートされる）。いくつかの実施形態において、本開示のオリゴヌクレオチドは、１つ又は複数の二価ＧａｌＮＡｃ、三価ＧａｌＮＡｃ又は四価ＧａｌＮＡｃ部分にコンジュゲートされている。
いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドの１つ又は複数（例えば、１、２、３、４、５又は６個）のヌクレオチドは、それぞれ、ＧａｌＮＡｃ部分にコンジュゲートされる。いくつかの実施形態において、ステムループのループ（Ｌ）の２～４個のヌクレオチドはそれぞれ、別個のＧａｌＮＡｃにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態において、標的化リガンドは、ＧａｌＮＡｃ部分が歯ブラシの剛毛に類似し、オリゴヌクレオチドが歯ブラシに類似するように、センス鎖又はアンチセンス鎖のいずれかの末端において２～４個のヌクレオチドにコンジュゲートされる（例えば、リガンドは、センス鎖又はアンチセンス鎖の５’末端又は３’末端上の２～４個のヌクレオチドのオーバーハング又は伸長にコンジュゲート化される）。例えば、オリゴヌクレオチドは、センス鎖の５’末端又は３’末端のいずれかにステムループを含み得、ステムのループの１、２、３又は４個のヌクレオチドは、ＧａｌＮＡｃ部分に個々にコンジュゲートされ得る。いくつかの実施形態において、ＧａｌＮＡｃ部分は、センス鎖のヌクレオチドにコンジュゲートされる。例えば、４つのＧａｌＮＡｃ部分をセンス鎖のテトラループ中のヌクレオチドにコンジュゲートさせることができ、各ＧａｌＮＡｃ部分は１つのヌクレオチドにコンジュゲートされる。
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、以下に示すように、［ａｄｅｍＧ－ＧａｌＮＡｃ］又は２’－アミノジエトキシメタノール－グアニジン－ＧａｌＮＡｃと呼ばれるグアニジンヌクレオチドに結合した一価ＧａｌＮＡｃを含む。
Figure 2023509870000008
いくつかの実施形態では、本明細書のオリゴヌクレオチドは、以下に示すように、［ａｄｅｍＡ－ＧａｌＮＡｃ］又は２’－アミノジエトキシメタノール－アデニン－ＧａｌＮＡｃと呼ばれるアデニンヌクレオチドに結合した一価ＧａｌＮＡｃを含む。
Figure 2023509870000009
そのようなコンジュゲーションの例を、５’から３’にヌクレオチド配列ＧＡＡＡを含むループについて以下に示す（Ｌ＝リンカー、Ｘ＝ヘテロ原子）。ステム結合点が示される。そのようなループは、例えば、図２０に示す分子の２７～３０位に存在し得る。化学式中、
Figure 2023509870000010
 はオリゴヌクレオチド鎖への結合点である。
Figure 2023509870000011
適切な方法又は化学（例えば、クリックケミストリー）を使用して、標的化リガンドをヌクレオチドに連結することができる。いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、クリックリンカーを使用してヌクレオチドにコンジュゲートされる。いくつかの実施形態では、アセタール系リンカーは、標的化リガンドを本明細書中に記載されるオリゴヌクレオチドのいずれか１つのヌクレオチドにコンジュゲート化するために使用される。アセタール系リンカーは、例えば、２０１６年６月２３日に公開された国際特許出願公開番号ＷＯ２０１６１００４０１ Ａ１に開示されており、そのようなリンカーに関する内容は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、リンカーは不安定なリンカーである。しかしながら、他の実施形態では、リンカーはかなり安定である。
ＧａｌＮＡｃ部分がアセタールリンカーを使用してループのヌクレオチドに結合している、５’から３’にヌクレオチドＧＡＡＡを含むループの例を以下に示す。
そのようなループは、例えば、図２０に示す分子の２７～３０位に存在し得る。化学式中、
Figure 2023509870000012
 はオリゴヌクレオチド鎖への結合点である。
Figure 2023509870000013
４．ＨＢＶを標的とする更なるＧａｌＮＡｃコンジュゲート治療用オリゴヌクレオチド
一実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチドは、ＨＢＶ ｍＲＮＡを標的とし、二価、三価又は四価のＧａｌＮＡｃクラスターなどのアシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）標的化コンジュゲートへのコンジュゲーションによって肝臓、特に肝細胞への送達が改善された治療用オリゴヌクレオチドである（図１の例示的な例）。国際公開第２０１５／１７３２０８号は、ＨＢＶ ｍＲＮＡ）を標的とするそのようなＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチド（配列番号１及びそれらの製造を記載している。
本発明の医薬組合せにおけるＧａｌＮＡｃコンジュゲート治療用オリゴヌクレオチドは、ＨＢＶ ｍＲＮＡ（標的核酸）からの発現、特に、Ｂ型肝炎ウイルスのＨＢｓＡｇ及びＨＢｘ（両方とも配列番号１によってコードされる）の発現を減少させることができる。さらに、本発明のＧａｌＮＡｃコンジュゲート治療用オリゴヌクレオチドは、好ましくは、染色体に組み込まれたＨＢＶ断片からのＨＢｓＡｇ発現を減少させることができる。
いくつかの実施形態において、本発明のＧａｌＮＡｃコンジュゲート治療用オリゴヌクレオチドは、標的核酸に結合し、正常発現レベルと比較して少なくとも１０％又は２０％、より好ましくは、正常発現レベル（例えば、ＧａｌＮＡｃコンジュゲート治療用オリゴヌクレオチドの非存在下における発現レベル）と比較して少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は９５％発現を減少させる。
一実施形態において、本発明のＧａｌＮＡｃコンジュゲート治療用オリゴヌクレオチドは、ＨＢｘ又はＨＢｓＡｇ遺伝子の発現を下方制御（例えば、阻害、低減、又は除去）することができる。そのような下方制御は、典型的には、標的細胞、例えば哺乳動物細胞、例えばヒト細胞、例えば肝臓細胞、例えば肝細胞、特にＨＢＶ感染肝細胞で起こり得る。いくつかの実施形態において、本発明のＧａｌＮＡｃコンジュゲート治療用オリゴヌクレオチドは、標的核酸に結合し、正常発現レベルと比較して少なくとも５０％の発現阻害、より好ましくは、正常発現レベル（例えば、ＧａｌＮＡｃコンジュゲート治療用オリゴヌクレオチドの非存在下における発現レベル）と比較して少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％又は９５％の阻害に影響を及ぼす。ＨＢＶ ｍＲＮＡ及びＨＢｓＡｇ及びＨＢＶ ＤＮＡの発現レベルの調節は、材料及び方法のセクションに記載されている方法を使用して決定することができる。
本発明の一態様は、配列番号１の１５３０～１６０２位に対して少なくとも９０％の相補性を有する１２～３０ヌクレオチド長の連続ヌクレオチド配列を含む治療用オリゴヌクレオチドに関する。
本発明の一実施形態では、治療用オリゴヌクレオチドは、配列番号１の１５３０～１６０２；１５３０～１５９８；１５３０～１５４３；１５３０～１５４４；１５３１～１５４３；１５５１～１５６５；１５５１～１５６６；１５７７～１５８９；１５７７～１５９１；１５７７～１５９２；１５７８～１５９０；１５７８～１５９２；１５８３～１５９８；１５８４～１５９８；１５８５～１５９８、及び１５８３～１６０２位から選択される配列に相補的である。特に、１５３０～１５４４位、１５３１～１５４３位、１５８３～１６０２位、及び１５８３～１５９８位の標的配列に対して１００％の相補性を有する治療用オリゴヌクレオチドが有利である。
いくつかの実施形態では、治療用オリゴヌクレオチドは、１２～３０ヌクレオチド長の連続配列を含み、これは、標的核酸又は標的配列の領域と、少なくとも９１％相補的、例えば少なくとも９２％、例えば少なくとも９３％、例えば少なくとも９４％、例えば少なくとも９５％、例えば少なくとも９６％、例えば少なくとも９７％、例えば少なくとも９８％、９９％又は１００％相補的である。
連続ヌクレオチド配列が、配列番号１の１５３０～１６０２；１５３０～１５９８；１５３０～１５４３；１５３０～１５４４；１５３１～１５４３；１５５１～１５６５；１５５１～１５６６；１５７７～１５８９；１５７７～１５９１；１５７７～１５９２；１５７８～１５９０；１５７８～１５９２；１５８３～１５９８；１５８４～１５９８；１５８５～１５９８、又は１５８３～１６０２位からなる群から選択される標的配列中の連続する配列と完全に相補的（１００％相補的）であることが有利であり、又は、いくつかの実施形態では、治療用オリゴヌクレオチドと標的配列との間に１つ又は２つのミスマッチを含み得る。
本発明の一実施形態において、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号１又は配列番号２８の１５３０～１６０２位の連続配列に１００％相補的な少なくとも１２ヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列を有する１３から２０ヌクレオチド長である。この化合物は、ＴＬＲ７アゴニストに関する項に記載されるように、ＴＬＲ７アゴニストと組み合わせられることが理解される。
いくつかの実施形態では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、１３～２４ヌクレオチド長、例えば１３～２２、例えば１４～２０連続ヌクレオチド長を含むか、又はそれらからなる。好ましい実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１３～１８、例えば１５～１８ヌクレオチド長を含むか、又はそれらからなる。
いくつかの実施形態では、その連続ヌクレオチド配列は、１２～２０ヌクレオチド長、例えば１２～１８、例えば１３～１７、例えば１３～１５、例えば１３、１４、１５、１６又は１７ヌクレオチド長を含むか、又はそれらからなる。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、例えば、連続ヌクレオチド配列とコンジュゲートとの間の生体切断可能なリンカーとして働く更なるヌクレオシドを含み得るので、連続ヌクレオチド配列は常にアンチセンスオリゴヌクレオチドの全長と等しいか又はそれより短いことを理解されたい。また、本明細書で提供されるいずれの範囲も、範囲の終点を含むことを理解するべきである。したがって、アンチセンスオリゴヌクレオチドが１２～３０ヌクレオチドを含むと記される場合、１２ヌクレオチド及び３０ヌクレオチドの両方が含まれる。
いくつかの実施形態では、連続ヌクレオチド配列は、以下からなる群から選択されるから選択される配列を含むか、又はそれからなる。
ｇｃｇｔａａａｇａｇａｇｇ（配列番号２）；
ｇｃｇｔａａａｇａｇａｇｇｔ（配列番号３）；
ｃｇｃｇｔａａａｇａｇａｇｇｔ（配列番号４）；
ａｇａａｇｇｃａｃａｇａｃｇｇ（配列番号５）；
ｇａｇａａｇｇｃａｃａｇａｃｇｇ（配列番号６）；
ａｇｃｇａａｇｔｇｃａｃａｃｇｇ（配列番号７）；
ｇａａｇｔｇｃａｃａｃｇｇ（配列番号８）；
ｇｃｇａａｇｔｇｃａｃａｃｇｇ（配列番号９）；
ａｇｃｇａａｇｔｇｃａｃａｃｇ（配列番号１０）；
ｃｇａａｇｔｇｃａｃａｃｇ（配列番号１１）；
ａｇｇｔｇａａｇｃｇａａｇｔｇｃ（配列番号１２）；
ａｇｇｔｇａａｇｃｇａａｇｔｇ（配列番号１３）；
ａｇｇｔｇａａｇｃｇａａｇｔ（配列番号１４）；及び
ｇｃａｇａｇｇｔｇａａｇｃｇａａｇｔｇｃ（配列番号２９）。
いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％の同一性、好ましくは１００％の同一性を有する少なくとも１２ヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列を有する１２～２２ヌクレオチド長を含むか、又はそれからなる。
ｇｃｇｔａａａｇａｇａｇｇ（配列番号２）；
ｇｃｇｔａａａｇａｇａｇｇｔ（配列番号３）；及び
ｃｇｃｇｔａａａｇａｇａｇｇｔ（配列番号４）。
いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下から選択される配列に対して少なくとも９０％の同一性、好ましくは１００％の同一性を有する少なくとも１２ヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列を有する１２～２２ヌクレオチド長を含むか、又はそれからなる。
ａｇａａｇｇｃａｃａｇａｃｇｇ（配列番号５）；又は
ｇａｇａａｇｇｃａｃａｇａｃｇｇ（配列番号６）。
いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％の同一性、好ましくは１００％の同一性を有する少なくとも１２ヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列を有する１２～２２ヌクレオチド長を含むか、又はそれからなる。
ａｇｃｇａａｇｔｇｃａｃａｃｇｇ（配列番号７）；
ｇａａｇｔｇｃａｃａｃｇｇ（配列番号８）；
ｇｃｇａａｇｔｇｃａｃａｃｇｇ（配列番号９）；
ａｇｃｇａａｇｔｇｃａｃａｃｇ（配列番号１０）；
ｃｇａａｇｔｇｃａｃａｃｇ（配列番号１１）；
ａｇｇｔｇａａｇｃｇａａｇｔｇｃ（配列番号１２）
ａｇｇｔｇａａｇｃｇａａｇｔｇ（配列番号１３）；
ａｇｇｔｇａａｇｃｇａａｇｔ（配列番号１４）；及び
ｇｃａｇａｇｇｔｇａａｇｃｇａａｇｔｇｃ（配列番号２９）。
いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％の同一性、好ましくは１００％の同一性を有する少なくとも１２ヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列を有する１２～２２ヌクレオチド長を含むか、又はそれからなる。
ａｇｇｔｇａａｇｃｇａａｇｔｇｃ（配列番号１２）
ａｇｇｔｇａａｇｃｇａａｇｔｇ（配列番号１３）；
ａｇｇｔｇａａｇｃｇａａｇｔ（配列番号１４）；及び
ｇｃａｇａｇｇｔｇａａｇｃｇａａｇｔｇｃ（配列番号２９）。
５．本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドのオリゴヌクレオチド修飾
このセクションで論じられる修飾は、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドでの実施に特に好ましい。
連続核酸塩基配列（モチーフ配列）は、例えばヌクレアーゼ耐性及び／又は標的核酸に対する結合親和性を増大させるために修飾され得ることが理解される。
一実施形態において、オリゴヌクレオチドの連続する核酸塩基配列は、少なくとも１つの修飾されたヌクレオシド間結合を含む。好適なヌクレオシド間修飾は、「修飾ヌクレオシド間結合」の「定義」セクションに記載されている。連続ヌクレオチド配列内のヌクレオシド間結合の、少なくとも７５％、例えば全てがヌクレオシド間結合である場合、有利である。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドの連続する配列中の全てのヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート結合である。
本発明のオリゴヌクレオチドは、修飾ヌクレオシド及びＤＮＡヌクレオシドを用いて設計される。高親和性修飾ヌクレオシドを用いることが有利である。
一実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも３つの修飾ヌクレオシド、例えば少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、又は少なくとも１６個の修飾ヌクレオシドを含む。一実施形態では、オリゴヌクレオチドは、３～８個の修飾ヌクレオシド、例えば４～６個の修飾ヌクレオシド、例えば４、５又は６個のヌクレオシド、例えば５又は６個の修飾ヌクレオシドを含む。好適な修飾は、「修飾ヌクレオシド」、「高親和性修飾ヌクレオシド」、「糖修飾」、「２’糖修飾」、及びロックド核酸（ＬＮＡ）の「定義」セクションに記載されている。
一実施形態では、オリゴヌクレオチドは、１つ以上の糖修飾ヌクレオシド、例えば２’糖修飾ヌクレオシドを含む。好ましくは、本発明のオリゴヌクレオチドは、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メチル－ＲＮＡ、２’－アルコキシ－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メトキシエチル－ＲＮＡ、２’－アミノ－ＤＮＡ、２’－フルオロ－ＤＮＡ、アラビノ核酸（ＡＮＡ）、２’－フルオロ－ＡＮＡ、及びＬＮＡヌクレオシドからなる群から独立して選択される１つ以上の２’糖修飾ヌクレオシドを含む。修飾ヌクレオシド（複数可）の１つ又は複数又は全てがロックド核酸（ＬＮＡ）である場合、有利である。
いくつかの実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチド、例えば連続ヌクレオチド配列は、少なくとも１つのＬＮＡヌクレオシド、例えば１、２、３、４、５、６、７又は８個のＬＮＡヌクレオシド、例えば２～６個のＬＮＡヌクレオシド、例えば３～６個のＬＮＡヌクレオシド、４～６個のＬＮＡヌクレオシド、又は４、５若しくは６個のＬＮＡヌクレオシドを含む。
いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの修飾ヌクレオシドの少なくとも７５％、例えば修飾ヌクレオシドの少なくとも８０％、例えば少なくとも８５％、例えば少なくとも９０％がＬＮＡヌクレオシドである。なおさらなる実施形態では、オリゴヌクレオチドの修飾ヌクレオシドの全ては、ＬＮＡヌクレオシドである。更なる実施形態では、ＬＮＡヌクレオシドは、ベータ－Ｄ－オキシＬＮＡ、チオＬＮＡ、アミノＬＮＡ、オキシＬＮＡ、ＳｃＥＴ及び／又はＥＮＡから、ベータ－Ｄ若しくはアルファ－Ｌ配置又はそれらの組合せで選択される。更なる実施形態では、全てのＬＮＡヌクレオシドはベータ－Ｄ－オキシＬＮＡである。更なる実施形態では、シトシン単位は、５－メチル－シトシンである。オリゴヌクレオチド又は連続ヌクレオチド配列のヌクレアーゼ安定性にとって、ヌクレオチド配列の５’末端に少なくとも１つのＬＮＡヌクレオシドと３’末端に少なくとも２つのＬＮＡヌクレオシドとを有することが有利である。
６．ＲＮアーゼＨ動員のためのアンチセンスオリゴヌクレオチド設計
治療用オリゴヌクレオチドがアンチセンスオリゴヌクレオチドである本発明の実施形態では、本発明のオリゴヌクレオチドは、標的核酸にハイブリダイズしたときにＲＮａｓｅ Ｈを動員することができる。
修飾ヌクレオシド（高親和性修飾ヌクレオシドなど）がオリゴヌクレオチド配列に組み込まれるパターンは、一般にオリゴヌクレオチド設計と称される。
治療用オリゴヌクレオチドがアンチセンスオリゴヌクレオチドである本発明の一実施形態では、有利な構造設計は、例えば、「ギャップマー」、「ＬＮＡギャップマー」、「ＭＯＥギャップマー」、及び「混合ウイングギャップマー」の「定義」セクションに記載されているギャップマー設計である。ギャップマー設計には、均一なフランク及び混合ウイング・フランクを有するギャップマーが含まれる。本発明では、本発明の連続ヌクレオチド配列がＦ－Ｇ－Ｆ’設計のギャップマーである場合が有利である。いくつかの実施形態では、ギャップマーは、それに続く均一なフランク設計３－７－３、３－８－２、３－８－３、２－９－４、３－９－３、３－１０－３又は５－１０－５を有するＬＮＡ又はＭＯＥギャップマーである。
いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下からなる群から選択される連続ヌクレオチド配列を有する１２～２２ヌクレオチド長を含むか、又はそれからなる：
ＧＣＧｔａａａｇａｇａＧＧ（配列番号２）；
ＧＣＧｔａａａｇａｇＡＧＧ（配列番号２）；
ＧＣＧｔａａａｇａｇａＧＧＴ（配列番号３）；
ＣＧＣｇｔａａａｇａｇａＧＧＴ（配列番号４）；
ＡＧＡａｇｇｃａｃａｇａＣＧＧ（配列番号５）；
ＧＡＧａａｇｇｃａｃａｇａＣＧＧ（配列番号６）；
ＡＧＣｇａａｇｔｇｃａｃａＣＧＧ（配列番号７）；
ＧＡＡｇｔｇｃａｃａｃＧＧ（配列番号８）；
ＧＡＡｇｔｇｃａｃａＣＧＧ（配列番号８）；
ＧＣＧａａｇｔｇｃａｃａＣＧＧ（配列番号９）；
ＡＧＣｇａａｇｔｇｃａｃＡＣＧ（配列番号１０）；
ＣＧＡａｇｔｇｃａｃａＣＧ（配列番号１１）；
ＡＧＧｔｇａａｇｃｇａａｇＴＧＣ（配列番号１２）；
ＡＧＧｔｇａａｇｃｇａａＧＴＧ（配列番号１３）
ＡＧｇｔｇａａｇｃｇａＡＧＴＧ（配列番号１３）；及び
ＡＧＧｔｇａａｇｃｇａＡＧＴ（配列番号１４）；
大文字はベータ－Ｄ－オキシＬＮＡなどのＬＮＡヌクレオシドを示し、小文字はＤＮＡヌクレオシドを示す。
いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下からなる群から選択される連続ヌクレオチド配列を有する１２～２２ヌクレオチド長を含むか、又はそれからなる：
ＧＣＧｔａａａｇａｇａＧＧ（配列番号２）；
ＧＣＧｔａａａｇａｇＡＧＧ（配列番号２）；
ＧＣＧｔａａａｇａｇａＧＧＴ（配列番号３）；及び
ＣＧＣｇｔａａａｇａｇａＧＧＴ（配列番号４）；
大文字はベータ－Ｄ－オキシＬＮＡなどのＬＮＡヌクレオシドを示し、小文字はＤＮＡヌクレオシドを示す。
いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下からなる連続ヌクレオチド配列を有する１２～２２ヌクレオチド長を含むか、又はそれからなる。
ＡＧＡａｇｇｃａｃａｇａＣＧＧ（配列番号５）；又は
ＧＡＧａａｇｇｃａｃａｇａＣＧＧ（配列番号６）；
大文字はベータ－Ｄ－オキシＬＮＡなどのＬＮＡヌクレオシドを示し、小文字はＤＮＡヌクレオシドを示す。
いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下からなる群から選択される連続ヌクレオチド配列を有する１２～２２ヌクレオチド長を含むか、又はそれからなる：
ＡＧＣｇａａｇｔｇｃａｃａＣＧＧ（配列番号７）；
ＧＡＡｇｔｇｃａｃａｃＧＧ（配列番号８）；
ＧＡＡｇｔｇｃａｃａＣＧＧ（配列番号８）；
ＧＣＧａａｇｔｇｃａｃａＣＧＧ（配列番号９）；
ＡＧＣｇａａｇｔｇｃａｃＡＣＧ（配列番号１０）；
ＣＧＡａｇｔｇｃａｃａＣＧ（配列番号１１）；
ＡＧＧｔｇａａｇｃｇａａｇＴＧＣ（配列番号１２）；
ＡＧＧｔｇａａｇｃｇａａＧＴＧ（配列番号１３）
ＡＧｇｔｇａａｇｃｇａＡＧＴＧ（配列番号１３）；及び
ＡＧＧｔｇａａｇｃｇａＡＧＴ（配列番号１４）；
大文字はベータ－Ｄ－オキシＬＮＡなどのＬＮＡヌクレオシドを示し、小文字はＤＮＡヌクレオシドを示す。
いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下からなる群から選択される連続ヌクレオチド配列を有する１２～２２ヌクレオチド長を含むか、又はそれからなる：
ＡＧＧｔｇａａｇｃｇａａｇＴＧＣ（配列番号１２）；
ＡＧＧｔｇａａｇｃｇａａＧＴＧ（配列番号１３）
ＡＧｇｔｇａａｇｃｇａＡＧＴＧ（配列番号１３）；及び
ＡＧＧｔｇａａｇｃｇａＡＧＴ（配列番号１４）；
大文字はベータ－Ｄ－オキシＬＮＡなどのＬＮＡヌクレオシドを示し、小文字はＤＮＡヌクレオシドを示す。
いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下の連続ヌクレオチド配列を有する２０～２４ヌクレオチド長を含むか、又はそれからなる。
ＧＣＡＧＡｇｇｔｇａａｇｃｇａＡＧＴＧＣ（配列番号２９）
大文字の下線付き文字はＭＯＥヌクレオシドを示し、小文字はＤＮＡヌクレオシドを示す。
以下の表１は、配列番号１の１５３０～１６０２位を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列のモチーフ配列、並びに本発明の使用を意図したこれらのギャップマー設計の概要である。
Figure 2023509870000014
表１の設計欄において、大文字は２’－糖修飾ヌクレオシド、特にベータ－Ｄ－オキシ－ＬＮＡなどのＬＮＡヌクレオシド、又はＭＯＥヌクレオシドを表し、小文字はＤＮＡヌクレオシドを表す。ヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル又はホスホロチオエートであり得る。いくつかの実施形態において、全てのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートである。
全ての場合において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、「オリゴヌクレオチド内の領域Ｄ’又はＤ’’」の「定義」セクションに記載されているように、Ｆ－Ｇ－Ｆ’設計の５’又は３’末端に領域Ｄ’及び／又はＤ’’をさらに含み得る。いくつかの実施形態では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ギャップマー領域の５’末端又は３’末端に、１～５個、例えば、１、２、又は３個のホスホジエステル結合ヌクレオシド単位、例えばＤＮＡ単位を有する。ＤＮＡヌクレオシドは一般に、プリン（例えば、アデニン及びグアニン）及びピリミジン（例えば、ウラシル、チミン及びシトシン）から選択される核酸塩基を有する天然に存在するＤＮＡヌクレオシドなど、核酸塩基の定義において定義される核酸塩基を有する。いくつかの実施形態では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、２つの５’ホスホジエステル結合ＤＮＡヌクレオシドと、続いて「定義」セクションで定義したＦ－Ｇ－Ｆ’ギャップマー領域と、からなる。５’末端又は３’末端にホスホジエステル結合されたＤＮＡ単位を含むオリゴヌクレオチドは、コンジュゲーションに好適であり、本明細書に記載されるようなコンジュゲート部分をさらに含み得る。肝臓への送達では、ＡＳＧＰＲ標的化部分は、コンジュゲート部分として特に有利である。
いくつかの実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下からなる群から選択される配列を含むか、又はそれからなる：
ｃａｇｃｇｔａａａｇａｇａｇｇ（配列番号１５）
ｃａｇｃｇｔａａａｇａｇａｇｇｔ（配列番号１６）
ｃａｃｇｃｇｔａａａｇａｇａｇｇｔ（配列番号１７）
ｃａａｇａａｇｇｃａｃａｇａｃｇｇ（配列番号１８）
ｃａｇａｇａａｇｇｃａｃａｇａｃｇｇ（配列番号１９）
ｃａａｇｃｇａａｇｔｇｃａｃａｃｇｇ（配列番号２０）
ｃａｇａａｇｔｇｃａｃａｃｇｇ（配列番号２１）
ｃａｇｃｇａａｇｔｇｃａｃａｃｇｇ（配列番号２２）
ｃａａｇｃｇａａｇｔｇｃａｃａｃｇ（配列番号２３）
ｃａｃｇａａｇｔｇｃａｃａｃｇ（配列番号２４）
ｃａａｇｇｔｇａａｇｃｇａａｇｔｇｃ（配列番号２５）
ｃａａｇｇｔｇａａｇｃｇａａｇｔｇ（配列番号２６）
ｃａａｇｇｔｇａａｇｃｇａａｇｔ（配列番号２７）
（５’末端から出発して）１～３位のヌクレオシド間のヌクレオシド間結合はホスホジエステル結合であり、３位と４位のヌクレオシド間結合はホスホロチオエート結合である（３位のヌクレオシドは連続ヌクレオチド配列の５’末端である）。オリゴヌクレオチドの４位から３’末端の後の全てのヌクレオシド間結合がホスホロチオエート結合であると有利である。一実施形態では、連続ヌクレオチド配列は、表１の対応する配列の設計を有する。
７．アシアロ糖タンパク質に結合するコンジュゲート
アシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）に結合できるコンジュゲートは、肝臓の肝細胞を標的とするのに特に有用である。ガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ－ホルミル－ガラクトサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミン、Ｎ－プロピオニル－ガラクトサミン、Ｎ－ｎ－ブタノイル－ガラクトサミン及びＮ－イソブタノイルガラクトサミンからなる群から選択される少なくとも２つの炭水化物部分を含むコンジュゲートは、一般に、ＡＳＧＰＲに結合することができる。Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分は、ＡＳＧＰＲを標的化するのに有利であることが示されているが、上記のリストからの代替物、例えばガラクトースも使用することができる。一実施形態では、コンジュゲートは、ブランチャー分子に各ＧａｌＮＡｃ部分を連結し、それによって治療用オリゴヌクレオチドに結合され得るクラスターを形成するスペーサーに結合された２～４個の末端ＧａｌＮＡｃ部分からなる。
ＧａｌＮＡｃクラスターは、例えば、ＧａｌＮＡｃ部分をそのＣ－ｌ炭素を介してスペーサーに連結することによって生成され得る。好ましいスペーサーは、柔軟な親水性スペーサーである（米国特許第５８８５９６８号；Ｂｉｅｓｓｅｎら Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９５、３９巻、１５３８～１５４６頁）。好ましい柔軟な親水性スペーサーは、ＰＥＧスペーサーである。好ましいＰＥＧスペーサーは、ＰＥＧ３スペーサーである。分岐点は、２～３つのＧａｌＮＡｃ部分（又は他のアシアロ糖タンパク質受容体標的化部分）の付着を可能にし、さらにオリゴヌクレオチドへの分岐点の付着を可能にする任意の小分子であり得、そのような構築物は、ＧａｌＮＡｃクラスター又はＧａｌＮＡｃコンジュゲートと呼ばれる。例示的な分岐点群は、ジリジンである。ジリジン分子は、３つのＧａｌＮＡｃ部分又は他のアシアロ糖タンパク質受容体標的化部分が結合され得る３つのアミン基、及びジリジンがオリゴマーに結合され得るカルボキシル反応性基を含む。Ｋｈｏｒｅｖ、ｅｔ ａｌ ２００８ Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｖｏｌ １６、ｐｐ．５２１６は、適切な三価分岐剤の合成についても説明している。他の市販のブランチャーは、１，３－ビス－［５－（４，４’－ジメトキシトリチルオキシ）ペンチルアミド］プロピル－２－［（２－シアノエチル）－（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピル）］ホスホラミダイト（Ｇｌｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈカタログ番号１０－１９２０－ｘｘ）；トリス－２，２，２－［３－（４，４’－ジメトキシトリチルオキシ）プロピルオキシメチル］エチル－［（２－シアノエチル）－（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピル）］－フォスフォルミダイト（Ｇｌｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈカタログ番号１０－１９２２－ｘｘ）；及び
トリス－２，２，２－［３－（４，４’－ジメトキシトリチルオキシ）プロピルオキシメチル］メチレンオキシプロピル－［（２－シアノエチル）－（Ｎ、Ｎ－ジイソプロピル）］－ホスホルアミダイト、及び１－［５－（４，４’－ジメトキシ－トリチルオキシ）ペンチルアミド］－３－［５－フルオレノメトキシ－カルボニル－オキシ－ペンチルアミド］－プロピル－２－［（２－シアノエチル）－（Ｎ、Ｎ－ジイソプロピル）］－ホスホロアミダイト（Ｇｌｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ カタログ番号：１０－１９２５－ｘｘ）である。他のＧａｌＮＡｃクラスターは、Ｔｙｒ－Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－（アミノヘキシルＧａｌＮＡｃ）３（ＹＥＥ（ａｈＧａｌＮＡｃ）３などのＧａｌＮＡｃ部分が結合した小さなペプチド；肝細胞上のアシアロ糖タンパク質受容体に結合するグリコトリペプチド、例えば、Ｄｕｆｆ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ，２０００，３１３，２９７；ｌｙｓｉｎｅ－ｂａｓｅｄ ｇａｌａｃｔｏｓｅ ｃｌｕｓｔｅｒｓ（ｅ．ｇ．，Ｌ３Ｇ４；Ｂｉｅｓｓｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｒｄｏｖａｓｃ．Ｍｅｄ．，１９９９，２１４）を参照；リシン系ガラクトースクラスター（例えば、Ｌ３Ｇ４；Ｂｉｅｓｓｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｒｄｏｖａｓｃ．Ｍｅｄ．，１９９９，２１４）；及びコラン系ガラクトースクラスター（例えば、アシアロ糖タンパク質受容体に対する炭水化物認識モチーフ）であり得る。
本発明の一実施形態において、本発明の治療用オリゴヌクレオチドは、例えば、細胞分布、特にオリゴヌクレオチドの肝細胞における細胞取り込みに影響を及ぼすことによって、オリゴヌクレオチドの薬理学を改善するためにＧａｌＮＡｃクラスターにコンジュゲートされる。
適切なＧａｌＮＡｃコンジュゲートは、アシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰＲ）に結合することができるもの、例えば二価、三価又は四価のＧａｌＮＡｃクラスターである。特に、三価Ｎ－アセチルガラクトサミンのコンジュゲートは、ＡＳＧＰＲへの結合に適しており、例えば、ＷＯ２０１４／０７６１９６，ＷＯ２０１４／２０７２３２，ＷＯ２０１４／１７９６２０，ＷＯ２０１６／０５５６０１及びＷＯ２０１７／１７８６５６（参照することによって本明細書に組み込まれる）を参照されたい。図１は、少なくともインビトロ試験に供された好適なＧａｌＮＡｃコンジュゲートの図である。しかしながら、代替的なＧａｌＮＡｃコンジュゲートは、アシアロ糖タンパク質受容体に結合することができる場合にも好適であり得る。このようなコンジュゲートは、肝臓へのオリゴヌクレオチドの取り込みを促進する一方で、腎臓におけるその存在を減少させるのに役立ち、それによって、同じオリゴヌクレオチドの非コンジュゲートバージョンと比較して、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートオリゴヌクレオチドの肝臓／腎臓比を増加させる。
ＧａｌＮＡｃクラスターは、当該分野で公知の方法を使用してオリゴヌクレオチドの３’末端又は５’末端に結合され得る。一実施形態では、ＧａｌＮＡｃクラスターは、オリゴヌクレオチドの５’末端に結合する。
コンジュゲート（コンジュゲート部分のブランチャー部分など）とオリゴヌクレオチドとの間に１つ又は複数のリンカーを挿入することができる。任意にＣ６リンカーなどの切断不可能なリンカーと組み合わせて、コンジュゲート部分と治療用オリゴヌクレオチドとの間に生体切断可能なリンカーを有することが有利である。リンカー（複数可）は、「リンカー」の「定義」セクションに記載されているリンカーから選択することができ、特に、生体切断可能な領域Ｄ’又はＤ’’のリンカーが有利である。ＧａｌＮＡｃクラスター及び生体切断可能なＰＯリンカーは、細胞内に入るとギャップマー又は連続ヌクレオチド配列から除去されるので、コンジュゲートとギャップマー又は連続ヌクレオチド配列との間に生体切断可能なリンカーを有するＧａｌＮＡｃコンジュゲートオリゴヌクレオチドは、効果的なプロドラッグである。
一実施形態では、コンジュゲート部分は、図１に示すような三価のＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）である。
一実施形態において、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下からなる群から選択される：
Figure 2023509870000015
 大文字の太字はベータ－Ｄ－オキシＬＮＡ単位を表し、小文字はＤＮＡ単位を表し、下付き文字「ｏ」はホスホジエステル結合を表し、下付き文字「ｓ」はホスホロチオエート結合を表し、上付き文字ｍは５－メチルシトシン塩基を含有するＤＮＡ又はベータ－Ｄ－オキシＬＮＡ単位を表し、ＧＮ２－Ｃ６は、Ｃ６リンカーを有するＧａｌＮＡｃ ２コンジュゲートを表す。
一実施形態において、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下からなる群から選択される：
Figure 2023509870000016
 大文字の太字はベータ－Ｄ－オキシＬＮＡ単位を表し、小文字はＤＮＡ単位を表し、下付き文字「ｏ」はホスホジエステル結合を表し、下付き文字「ｓ」はホスホロチオエート結合を表し、上付き文字ｍは５－メチルシトシン塩基を含有するＤＮＡ又はベータ－Ｄ－オキシＬＮＡ単位を表し、ＧＮ２－Ｃ６は、Ｃ６リンカーを有するＧａｌＮＡｃ ２コンジュゲートを表す。
一実施形態において、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチドは以下である：
Figure 2023509870000017
 大文字の太字はベータ－Ｄ－オキシＬＮＡ単位を表し、小文字はＤＮＡ単位を表し、下付き文字「ｏ」はホスホジエステル結合を表し、下付き文字「ｓ」はホスホロチオエート結合を表し、上付き文字ｍは５－メチルシトシン塩基を含有するＤＮＡ又はベータ－Ｄ－オキシＬＮＡ単位を表し、ＧＮ２－Ｃ６は、Ｃ６リンカーを有するＧａｌＮＡｃ ２コンジュゲートを表す。
一実施形態において、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下からなる群から選択される：
Figure 2023509870000018
 大文字の太字はベータ－Ｄ－オキシＬＮＡ単位を表し、小文字はＤＮＡ単位を表し、下付き文字「ｏ」はホスホジエステル結合を表し、下付き文字「ｓ」はホスホロチオエート結合を表し、上付き文字ｍは５－メチルシトシン塩基を含有するＤＮＡ又はベータ－Ｄ－オキシＬＮＡ単位を表し、ＧＮ２－Ｃ６は、Ｃ６リンカーを有するＧａｌＮＡｃ ２コンジュゲートを表す。
一実施形態において、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下からなる群から選択される：
Figure 2023509870000019
 大文字の太字はベータ－Ｄ－オキシＬＮＡ単位を表し、小文字はＤＮＡ単位を表し、下付き文字「ｏ」はホスホジエステル結合を表し、下付き文字「ｓ」はホスホロチオエート結合を表し、上付き文字ｍは５－メチルシトシン塩基を含有するＤＮＡ又はベータ－Ｄ－オキシＬＮＡ単位を表し、ＧＮ２－Ｃ６は、Ｃ６リンカーを有するＧａｌＮＡｃ ２コンジュゲートを表す。
一実施形態において、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下からなる群から選択される：
Figure 2023509870000020
 大文字の太字はベータ－Ｄ－オキシＬＮＡ単位を表し、小文字はＤＮＡ単位を表し、下付き文字「ｏ」はホスホジエステル結合を表し、下付き文字「ｓ」はホスホロチオエート結合を表し、上付き文字ｍは５－メチルシトシン塩基を含有するＤＮＡ又はベータ－Ｄ－オキシＬＮＡ単位を表し、ＧＮ２－Ｃ６は、Ｃ６リンカーを有するＧａｌＮＡｃ ２コンジュゲートを表す。
以下の表２に、５末端に生体切断可能なＣＡリンカー（存在する場合）を有するアンチセンスオリゴヌクレオチド配列を示し、配列番号１の１５３０～１６０２位を標的とするＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチドを示す。
Figure 2023509870000021
 ュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチド。
大文字の太字はベータ－Ｄ－オキシＬＮＡ単位を表し、大文字の下線文字はＭＯＥを表し、小文字はＤＮＡ単位を表し、下付き文字「ｏ」はホスホジエステル結合を表し、下付き文字「ｓ」はホスホロチオエート結合を表し、上付き文字ｍは５－メチルシトシン塩基を含有するＤＮＡ又はベータ－Ｄ－オキシＬＮＡ単位を表し、ＧＮ２－Ｃ６は、Ｃ６リンカーを有するＧａｌＮＡｃ ２コンジュゲート（図１Ｄ）を表す。化合物１５＿～２７＿１は全て国際公開第２０１５／１７３２０８号に記載されており、化合物２９＿１は国際公開第２０１４／１７９６２７号に記載されており、化合物のいくつかは表２に示す図にも示されている。
８．ＴＬＲ７アゴニスト
本発明のＴＬＲ７アゴニストは、Ｔｏｌｌ様受容体アゴニズム活性を有する３－置換５－アミノ－６Ｈ－チアゾロ［４，５－ｄ］ピリミジン－２，７－ジオン化合物並びにそのプロドラッグである。国際公開第２００６／０６６０８０号、国際公開第２０１６／０５５５５３号及び国際公開第２０１６／０９１６９８号には、そのようなＴＬＲ７アゴニスト及びそれらのプロドラッグ並びにそれらの製造が記載されている（参照により本明細書に組み込まれる）。
本発明の一態様では、本発明の医薬組合せにおけるＴＬＲ７アゴニストは、式（Ｉ）：
Figure 2023509870000022
 式中、ＸはＣＨ２又はＳであり、
Ｒ１は－ＯＨ又は－Ｈであり、
Ｒ２は、１－ヒドロキシプロピル又はヒドロキシメチルである
によって表されるか、
又は式（ＩＩ）：
Figure 2023509870000023
 式中、ＸはＣＨ２又はＳであり、
Ｒ１は、－ＯＨ又は－Ｈ又はアセトキシであり、
Ｒ２は、１－アセトキシプロピル又は１－ヒドロキシプロピル又は１－ヒドロキシメチル又はアセトキシ（シクロプロピル）メチル又はアセトキシ（プロピン－１－イル）メチルである
によって表されるか、又はその薬学的に許容され得る塩、エナンチオマー若しくはジアステレオマーである。
式（Ｉ）の化合物は、活性ＴＬＲ７アゴニストである。
本発明の一実施形態では、式（Ｉ）の活性ＴＬＲ７アゴニストのサブセットは、式（Ｖ）：
Figure 2023509870000024
 式中、Ｒ１は－ＯＨであり、Ｒ２は１－ヒドロキシプロピル又はヒドロキシメチルである
によって表されるか、又はその薬学的に許容され得る塩、エナンチオマー若しくはジアステレオマーである。
本発明の一実施形態では、式（Ｉ）又は（Ｖ）のＲ２の置換基は、
Figure 2023509870000025
 から選択される。
式（ＩＩ）の化合物は、ＴＬＲ７アゴニストプロドラッグである。一実施形態では、プロドラッグは、Ｒ２に以下
Figure 2023509870000026
 から選択される置換基を有する単一のプロドラッグである。
別の実施形態では、プロドラッグは、Ｒ２に以下
Figure 2023509870000027
 から選択される置換基を有する二重プロドラッグである。
式（ＩＩ）のＴＬＲ７アゴニストプロドラッグのサブセットは、式（ＩＩＩ）：
Figure 2023509870000028
 式中、Ｒ１は－ＯＨ又はアセトキシであり、Ｒ２は１－アセトキシプロピル又は１－ヒドロキシプロピル又は１－ヒドロキシメチル又は
Figure 2023509870000029
 である
によって表されるか、又はその薬学的に許容され得る塩、エナンチオマー若しくはジアステレオマー；又は
式（ＩＶ）：
Figure 2023509870000030
 式中、Ｒ１は、アセトキシ（シクロプロピル）メチル又はアセトキシ（プロピン－１－イル）メチルであるか、若しくは
Figure 2023509870000031
 である
によって表されるか、又はその薬学的に許容され得る塩、エナンチオマー若しくはジアステレオマーである。
式（ＩＶ）の化合物は、Ｒ１がＯＨであり、Ｒ２が１－アセトキシプロピルである、式（ＩＩＩ）の化合物と同様に二重プロドラッグである。Ｒ１がアセトキシであり、Ｒ２が三重プロドラッグである式（ＩＩＩ）の化合物。
投与後、式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）又は式（ＩＶ）の化合物は、有用なＴＬＲ７アゴニストであるそれらの活性形態に代謝される。
一実施形態では、本発明の医薬組合せに使用されるＴＬＲ７アゴニストは、
［（１Ｓ）－１－［（２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（５－アミノ－２－オキソ－チアゾロ［４，５－ｄ］ピリミジン－３－イル）－４－ヒドロキシ－テトラヒドロフラン－２－イル］プロピル］アセテート（ＣＭＰ番号ＶＩ）；
５－アミノ－３－［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）－３－ヒドロキシ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシプロピル］テトラヒドロフラン－２－イル］－６Ｈ－チアゾロ［４，５－ｄ］ピリミジン－２，７－ジオン（ＣＭＰ番号ＶＩＩ）；
５－アミノ－３－［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）－３－ヒドロキシ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシプロピル］テトラヒドロフラン－２－イル］チアゾロ［４，５－ｄ］ピリミジン－２－オン（ＣＭＰ番号ＶＩＩＩ）；
５－アミノ－３－（３’－デオキシ－β－Ｄ－リボフラノシル）－３Ｈ－チアゾロ［４，５－ｄ］ピリミジン－２－オン（ＣＭＰ番号ＩＸ）；
５－アミノ－３－（２’－Ｏ－アセチル－３’－デオキシ－β－Ｄ－リボフラノシル）－３Ｈ－チアゾロ［４，５－ｄ］ピリミジン－２－オン（ＣＭＰ番号Ｘ）；
５－アミノ－３－（３’－デオキシ－β－Ｄ－リボフラノシル）－３Ｈ，６Ｈ－チアゾロ［４，５－ｄ］ピリミジン－２，７－ジオン（ＣＭＰ番号ＸＩ）；
［（Ｓ）－［（２Ｓ，５Ｒ）－５－（５－アミノ－２－オキソ－チアゾロ［４，５－ｄ］ピリミジン－３－イル）－１，３－オキサチオラン－２－イル］－シクロプロピル－メチル］アセテート（ＣＭＰ番号ＸＩＩ）；及び
（１Ｓ）－１－［（２Ｓ，５Ｒ）－５－（５－アミノ－２－オキソ－チアゾロ［４，５－ｄ］ピリミジン－３－イル）－１，３－オキサチオラン－２－イル］ブタ－２－イニル］アセテート（ＣＭＰ番号ＸＩＩＩ）及びそれらの薬学的に許容され得る塩、エナンチオマー又はジアステレオマー
からなる群から選択される。
表３は、本発明におけるＴＬＲ７アゴニストを、その製造を記載する文書の参照を含めて列挙する。
Figure 2023509870000032
Figure 2023509870000033
特に好ましい実施形態では、ＴＬＲ７アゴニストがＣＭＰ番号ＶＩである。
９．医薬組成物
更なる態様では、本発明は、前述の治療用オリゴヌクレオチド又はＴＬＲ７アゴニスト又はその塩のいずれかと、薬学的に許容され得る希釈剤、担体、塩及び／又はアジュバントとを含む医薬組成物を提供する。一実施形態では、本発明の医薬組合せにおける治療用オリゴヌクレオチド及びＴＬＲ７アゴニストは、別々の組成物で投与される。一実施形態では、治療用オリゴヌクレオチドは皮下投与用のリン酸緩衝生理食塩水に製剤化され、ＴＬＲ７アゴニストは経口投与用の錠剤として製剤化される。
本発明の医薬組合せにおける治療用オリゴヌクレオチドは、医薬組成物又は製剤の調製のために、薬学的に許容され得る活性又は不活性物質と混合することができる。医薬組成物の調製のための組成物及び方法は、限定されるものではないが、投与経路、疾患の程度、又は投与される用量を含む多くの基準に依存する。治療用オリゴヌクレオチドの薬学的に許容され得る希釈剤には、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が含まれ、薬学的に許容され得る塩には、限定するものではないが、ナトリウム塩及びカリウム塩が含まれる。いくつかの実施形態において、治療用オリゴヌクレオチドの薬学的に許容され得る希釈剤は、無菌リン酸緩衝生理食塩水である。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、薬学的に許容され得る希釈剤中５０～１５０ｍｇ／ｍｌ溶液の濃度で使用される。治療用オリゴヌクレオチド又は治療用オリゴヌクレオチドを含む医薬組成物は、静脈内、動脈内、皮下又は筋肉内の注射又は注入を含む非経口経路によって投与される。一実施形態では、オリゴヌクレオチドコンジュゲートは、静脈内投与される。治療用オリゴヌクレオチドの場合、皮下投与することが有利である。いくつかの実施形態において、本発明のオリゴヌクレオチドコンジュゲート又は医薬組成物は、０．５～６．０ｍｇ／ｋｇ、例えば０．７５～５．０ｍｇ／ｋｇ、例えば１．０～４ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。投与は、１週間に１回、２週間に１回（隔週）、３週間に１回、１ヶ月に１回、又はより長い間隔で行うことができる。
本発明の医薬組合せにおけるＴＬＲ７アゴニストの場合、薬学的有効量の本発明の化合物は、経腸的に（例えば、経口的に又は胃腸管を通して）投与される。本発明におけるＴＬＲ７アゴニスト化合物は、任意の便利な投与形態、例えば錠剤、粉末、カプセル、溶液、分散液、懸濁液、シロップ剤、スプレー、座薬、ゲル、エマルションの単位用量で投与され得る。特に、錠剤及びカプセルなどの経口単位剤形を使用することができる。一例では、本発明のＴＬＲ７アゴニスト化合物の薬学的有効量は、約７５～２５０ｍｇ、例えば１００～２００ｍｇ、例えば１５０～１７０ｍｇ ｐｒ．用量の範囲である。投与は、毎日、１日おき（ＱＯＤ）又は毎週（ＱＷ）であり得る。
好適な担体及び賦形剤は当業者に周知であり、例えば、Ａｎｓｅｌ，Ｈｏｗａｒｄ Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｓｅｌ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００４；Ｇｅｎｎａｒｏ，Ａｌｆｏｎｓｏ Ｒ．，ｅｔ ａｌ．Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，２０００；及び、Ｒｏｗｅ，Ｒａｙｍｏｎｄ Ｃ．Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ．Ｃｈｉｃａｇｏ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，２００５に詳細に記載されている。
これらの組成物は、従来の滅菌技術によって滅菌されても、又は滅菌フィルタにかけられてもよい。得られた水溶液は、そのまま使用するために包装するか、又は凍結乾燥することができ、凍結乾燥された調製物は、投与前に滅菌水性担体と組み合わされる。調製物のｐＨは、典型的には３～１１、より好ましくは５～９又は６～８、最も好ましくは７～８、例えば７～７．５であろう。得られた固体形態の組成物は、錠剤又はカプセルの密封パッケージなどのように、各々が上記の薬剤又は薬剤群の固定量を含む複数の単回用量単位で包装することができる。
１０．治療用オリゴヌクレオチドの製剤
治療的オリゴヌクレオチドの使用を容易にするために様々な製剤が開発されており、これは本発明の医薬組合せに使用される治療用オリゴヌクレオチドに適用可能であり得る。例えば、オリゴヌクレオチドは、分解を最小限に抑え、送達及び／又は取り込みを容易にし、又は製剤中のオリゴヌクレオチドに別の有益な特性を提供する製剤を使用して、対象又は細胞環境に送達され得る。いくつかの実施形態では、ＨＢＶ抗原（例えば、ＨＢｓＡｇ）の発現を減少させるためのオリゴヌクレオチド（例えば、一本鎖又は二本鎖オリゴヌクレオチド）を含む組成物である第１の医薬を含む医薬組合せが本明細書で提供される。そのような組成物は、標的細胞の直接環境又は全身のいずれかで対象に投与された場合、オリゴヌクレオチドの十分な部分が細胞に入り、ＨＢＶ抗原発現を減少させるように適切に製剤化することができる。本明細書に開示されるＨＢＶ抗原の減少のためのオリゴヌクレオチドを送達するために、様々な適切なオリゴヌクレオチド製剤のいずれかを使用することができる。いくつかの実施形態では、本発明の医薬組合せのオリゴヌクレオチドは、リン酸緩衝生理食塩水などの緩衝液、リポソーム、ミセル構造及びキャプシド中に製剤化される。
カチオン性脂質を有するオリゴヌクレオチドの製剤を使用して、細胞へのオリゴヌクレオチドのトランスフェクションを容易にすることができる。例えば、カチオン性脂質、例えば、リポフェクチン、カチオン性グリセロール誘導体及びポリカチオン性分子（例えば、ポリリジン）を使用することができる。適切な脂質には、オリゴフェクトアミン、リポフェクトアミン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、ＮＣ３８８（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｏｕｌｄｅｒ，Ｃｏｌｏ．）、又はＦｕＧｅｎｅ ６（Ｒｏｃｈｅ）が含まれ、これらは全て製造業者の指示に従って使用することができる。
したがって、いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチド製剤は、脂質ナノ粒子を含む。いくつかの実施形態では、賦形剤は、リポソーム、脂質、脂質複合体、ミクロスフェア、微粒子、ナノスフェア若しくはナノ粒子を含むか、又はそれを必要とする対象の細胞、組織、器官若しくは身体への投与のために他の方法で製剤化され得る（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ，２０１３を参照のこと）。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される製剤は賦形剤を含む。いくつかの実施形態では、賦形剤は、活性成分の改善された安定性、改善された吸収、改善された溶解度及び／又は治療強化を組成物に与える。いくつかの実施形態では、賦形剤は緩衝剤（例えば、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、トリス塩基、又は水酸化ナトリウム）又はビヒクル（例えば、緩衝溶液、ワセリン、ジメチルスルホキシド、又は鉱油）である。いくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドは、その貯蔵寿命を延ばすために凍結乾燥され、次いで、使用（例えば、対象への投与）前に溶液にされる。したがって、本明細書に記載のオリゴヌクレオチドのいずれか１つを含む組成物中の賦形剤は、凍結保護剤（例えば、マンニトール、ラクトース、ポリエチレングリコール、又はポリビニルピロリドン）又は崩壊温度調整剤（例えば、デキストラン、フィコール又はゼラチン）であり得る。
本発明の医薬組合せのいくつかの実施形態において、オリゴヌクレオチドを含む組成物は、その意図される投与経路と適合するように製剤化される。投与経路の例としては、非経口、例えば、静脈内、皮内、皮下、経口（例えば、吸入）、経皮（局所）、経粘膜及び直腸投与が挙げられる。皮下用製剤は、本発明の医薬組合せ中のオリゴヌクレオチドがＲＮＡｉオリゴヌクレオチドである場合に特に有利である。
注射用途に適した医薬組成物には、滅菌水溶液（水溶性の場合）又は分散液、及び滅菌注射液又は分散液の即時調製のための滅菌粉末が含まれる。適切な担体としては、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ．ＴＭ．（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，Ｎ．Ｊ．）又はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。担体は、水又は溶媒又は分散媒であり得る。溶媒又は分散媒は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール等）及びそれらの適切な混合物を含んでよい。多くの場合、等張剤、例えば、糖、多価アルコール、例えば、マンニトール、ソルビトール、及び塩化ナトリウムを組成物に含むことが好ましい。滅菌注射溶液は、必要に応じて、上に列挙した成分の１つ又は組合せを含む選択された溶媒中に必要量のオリゴヌクレオチドを組み込み、続いて濾過滅菌することによって調製することができる。
本発明の医薬組合せのいくつかの実施形態では、組合せ中の組成物は、少なくとも約０．１％以上の治療薬（例えば、ＨＢＶ抗原発現を減少させるためのオリゴヌクレオチド）を含有し得るが、活性成分（複数可）のパーセンテージは、全組成物の重量又は体積の約１％～約８０％以上であり得る。溶解度、バイオアベイラビリティ、生物学的半減期、投与経路、製品貯蔵寿命、並びに他の薬理学的考慮事項などの要因は、そのような医薬製剤を調製する当業者によって企図され、したがって、様々な投与量及び処置レジメンが望ましい場合がある。
いくつかの実施形態は、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドのいずれかの肝臓標的化送達を対象としているが、他の組織の標的化も企図される。
１１．医薬組合せ及びキットオブパーツ
本発明の一態様は、それぞれが薬学的に許容され得る担体中に製剤化された、本明細書に記載のＨＢＶを標的とする治療用オリゴヌクレオチドとＴＬＲ７アゴニストとの医薬組合せに関する。
本発明の医薬組合せは、含まれる治療用オリゴヌクレオチド又はＴＬＲ７アゴニスト単独よりも効果的にＨＢＶ感染を処置するために使用することができる。一実施形態では、本発明の医薬組合せを使用して、含まれる治療用オリゴヌクレオチド又はＴＬＲ７アゴニスト単独よりも迅速にＨＢＶを阻害し、持続時間を延長してＨＢＶを阻害し、及び／又はより大きな効果でＨＢＶを阻害することができる。これらの効果は、ＨＢｓＡｇ滴定の減少によって測定することができる。一実施形態では、本発明の医薬組合せは、含まれる治療用オリゴヌクレオチド又はＴＬＲ７アゴニスト単独よりも迅速にＨＢｓＡｇ力価の低下を生じさせる。一実施形態では、本発明の医薬組合せは、含まれる治療用オリゴヌクレオチド又はＴＬＲ７アゴニスト単独よりも長いＨＢｓＡｇ力価の低下を生じさせる。一実施形態では、本発明の医薬組合せは、含まれる治療用オリゴヌクレオチド又はＴＬＲ７アゴニスト単独よりも大きなＨＢｓＡｇ力価の低下を生じさせる。
本発明の好ましい実施形態では、医薬組合せは、本明細書に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド及びＴＬＲ７アゴニストを含むか、又はこれからなる。
本発明の一実施形態では、医薬組合せは、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド及び式（Ｉ）又は（ＩＩ）のＴＬＲ７アゴニストを含むか、又はこれからなる：
Figure 2023509870000034
 式中、ＸはＣＨ２又はＳであり、
式（Ｉ）について、Ｒ１は－ＯＨ又は－Ｈであり、Ｒ２は１－ヒドロキシプロピル又はヒドロキシメチルであり、
式（ＩＩ）について、Ｒ１は－ＯＨ又は－Ｈ又はアセトキシであり、Ｒ２は１－アセトキシプロピル又は１－ヒドロキシプロピル又は１－ヒドロキシメチル又はアセトキシ（シクロプロピル）メチル又はアセトキシ（プロピン－１－イル）メチルである、
又はその薬学的に許容され得る塩、エナンチオマー若しくはジアステレオマーである。
本発明のＲＮＡｉオリゴヌクレオチド及びＴＬＲ７アゴニストは、上記、例えば上記のセクション１～３及び８に個別に記載されている。
本発明の一実施形態では、医薬組合せは、表４の縦の列の化合物及び横の列の化合物から選択することができる。それぞれの可能な組合せは、「ｘ」で示される。
Figure 2023509870000035
以下の表５及び６は、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド（縦）及びＴＬＲ７アゴニスト（横）の選択された組合せを示す。
Figure 2023509870000036
Figure 2023509870000037
本発明の一実施形態では、医薬組合せは、以下からなる群から選択される：
ＲＮＡｉ番号１とＣＭＰ番号ＶＩ；ＲＮＡｉ番号２とＣＭＰ番号ＶＩ；ＲＮＡｉ番号３とＣＭＰ番号ＶＩ；ＲＮＡｉ番号４とＣＭＰ番号ＶＩ；ＲＮＡｉ番号５とＣＭＰ番号ＶＩ；ＲＮＡｉ番号６とＣＭＰ番号ＶＩ；ＲＮＡｉ番号７とＣＭＰ番号ＶＩ；ＲＮＡｉ番号８とＣＭＰ番号ＶＩ；ＲＮＡｉ番号９とＣＭＰ番号ＶＩ；
ＲＮＡｉ番号１とＣＭＰ番号ＶＩＩ；ＲＮＡｉ番号２とＣＭＰ番号ＶＩＩ；ＲＮＡｉ番号３とＣＭＰ番号ＶＩＩ；ＲＮＡｉ番号４とＣＭＰ番号ＶＩＩ；ＲＮＡｉ番号５とＣＭＰ番号ＶＩＩ；ＲＮＡｉ番号６とＣＭＰ番号ＶＩＩ；ＲＮＡｉ番号７とＣＭＰ番号ＶＩＩ；ＲＮＡｉ番号８とＣＭＰ番号ＶＩＩ；ＲＮＡｉ番号９とＣＭＰ番号ＶＩＩ；
ＲＮＡｉ番号１とＣＭＰ番号ＶＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号２とＣＭＰ番号ＶＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号３とＣＭＰ番号ＶＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号４とＣＭＰ番号ＶＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号５とＣＭＰ番号ＶＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号６とＣＭＰ番号ＶＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号７とＣＭＰ番号ＶＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号８とＣＭＰ番号ＶＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号９とＣＭＰ番号ＶＩＩＩ；
ＲＮＡｉ番号１とＣＭＰ番号ＸＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号２とＣＭＰ番号ＸＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号３とＣＭＰ番号ＸＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号４とＣＭＰ番号ＸＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号５とＣＭＰ番号ＸＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号６とＣＭＰ番号ＸＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号７とＣＭＰ番号ＸＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号８とＣＭＰ番号ＸＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号９とＣＭＰ番号ＸＩＩＩ；
又はその薬学的に許容され得る塩、エナンチオマー若しくはジアステレオマー。
一実施形態では、本発明の医薬組合せの治療用オリゴヌクレオチドは、ＲＮＡｉ番号７であるＲＮＡｉオリゴヌクレオチドからなる：
Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓＡｇ）ｍＲＮＡの発現を減少させるためのオリゴヌクレオチドであり、該オリゴヌクレオチドが、アンチセンス鎖と二重鎖領域を形成するセンス鎖を含み、
センス鎖が、ＧＡＣＡＡＡＡＡＵＣＣＵＣＡＣＡＡＵＡＡＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ（配列番号４１）に記載の配列であって、３、８～１０、１２、１３及び１７位の２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、１、２、４～７、１１、１４～１６、１８～２６及び３１～３６位の２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、並びに１と２位のヌクレオチド間の１つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む、配列を含み、センス鎖上の－ＧＡＡＡ－配列の各ヌクレオチドは、一価ＧａｌＮａｃ部分にコンジュゲートされており、－ＧＡＡＡ－配列は、以下の構造：
Figure 2023509870000038
 を含み、
アンチセンス鎖は、ＵＵＡＵＵＧＵＧＡＧＧＡＵＵＵＵＵＧＵＣＧＧ（配列番号３８）に記載の配列であって、２、３、５、７、８、１０、１２、１４、１６及び１９位の２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、１、４、６、９、１１、１３、１５、１７、１８及び２０～２２位の２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、並びに、ヌクレオチド１と２、２と３、３と４、２０と２１、及び２１と２２の間に５つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む配列を含み、アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’－炭素は以下の構造：
Figure 2023509870000039
 を有し、
ＴＬＲ７アゴニストはＣＭＰ番号ＶＩ：
Figure 2023509870000040
 である、又はその薬学的に許容され得る塩、エナンチオマー若しくはジアステレオマーである。
ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドとＴＬＲ７アゴニストとを含む医薬組合せの特に好ましい実施形態では、ＴＬＲ７アゴニストがＣＭＰ番号ＶＩである。
一実施形態では、本発明のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドとＴＬＲ７アゴニストとを含む医薬組合せは、ＣｐＡＭ（コアタンパク質アロステリックモジュレータ）をさらに含む。
好ましい実施形態では、ＣｐＡＭは化合物（ＣｐＡＭ１）によるものである。化合物（ＣｐＡＭ１）は、国際公開第２０１５１３２２７６号に開示された、ＨＢＶカプシドを標的とすることによるヒトにおけるＨＢＶの処置及び／又は予防のためのＣｐＡＭである。化合物（ＣｐＡＭ１）の構造を以下に示す：
Figure 2023509870000041
 式中、
Ｒ１は、水素、ハロゲン又はＣ１－６アルキルであり、
Ｒ２は、水素又はハロゲンであり、
Ｒ３は、水素又はハロゲンであり、
Ｒ４はＣ１－６アルキルであり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシＣ１－６アルキル、アミノカルボニル、Ｃ１－６アルコキシカルボニル又はカルボキシであり、
Ｒ６は、水素、Ｃ１－６アルコキシカルボニル又はカルボキシ－ＣｍＨ２ｍ－であり、
Ｘは、カルボニル又はスルホニルであり、
Ｙは、－ＣＨ２－、－Ｏ－又は－Ｎ（Ｒ７）－であり、
式中、Ｒ７は、水素、Ｃ１－６アルキル、ハロＣ１－６アルキル、Ｃ３－７シクロアルキル－ＣｍＨ２ｍ－、Ｃ１－６アルコキシカルボニル－ＣｍＨ２ｍ－、－ＣｔＨ２ｔ－ＣＯＯＨ、－ハロＣ１－６アルキル－ＣＯＯＨ、－（Ｃ１－６アルコキシ）Ｃ１－６アルキル－ＣＯＯＨ、－Ｃ１－６アルキル－Ｏ－Ｃ１－６アルキル－ＣＯＯＨ、－Ｃ３－７シクロアルキル－ＣｍＨ２ｍ－ＣＯＯＨ、－ＣｍＨ２ｍ－Ｃ３－７シクロアルキル－ＣＯＯＨ、ヒドロキシ－ＣｔＨ２ｔ－、カルボキシスピロ［３．３］ヘプチル又はカルボキシフェニル－ＣｍＨ２ｍ－、カルボキシピリジニル－ＣｍＨ２ｍ－であり、
Ｗは、－ＣＨ２－、－Ｃ（Ｃ１－６アルキル）２－、－Ｏ－又はカルボニルであり、
ｎは、０又は１であり、
ｍは０～７であり、
ｔは１～７である、
又はその薬学的に許容され得る塩、若しくはエナンチオマー、若しくはジアステレオマー。
さらに好ましい実施形態では、ＣｐＡＭは、化合物（ＣｐＡＭ ２）又はその薬学的に許容され得る塩、エナンチオマー若しくはジアステレオマーによるものである。化合物（ＣｐＡＭ２）は、ＨＢＶカプシドを標的とすることによるヒトにおけるＨＢＶの処置及び／又は予防のためのＣｐＡＭであり、これは国際公開第２０１５１３２２７６号の実施例７６に開示されており、それに応じて調製することができる。化合物（ＣｐＡＭ２）の構造を以下に示す：
Figure 2023509870000042
さらに好ましい実施形態では、ＣｐＡＭは、３－［（８ａＳ）－７－［［（４Ｓ）－５－エトキシカルボニル－４－（３－フルオロ－２－メチル－フェニル）－２－チアゾール－２－イル－１，４－ジヒドロピリミジン－６－イル］メチル］－３－オキソ－５，６，８，８ａ－テトラヒドロ－１Ｈ－イミダゾ［１，５－ａ］ピラジン－２－イル］－２，２－ジメチル－プロパン酸であり、これは国際公開第２０１５１３２２７６号の実施例７６に開示されており、それに応じて調製することができる。
本発明の別の実施形態では、医薬組合せは、配列番号１の１５３０～１６０２位までの連続配列に１００％相補的な少なくとも１２ヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列を有する１３～２２ヌクレオチド長のＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチド、及び式（Ｉ）又は（ＩＩ）のＴＬＲ７アゴニストを含むか、又はこれからなる：
Figure 2023509870000043
 式中、ＸはＣＨ２又はＳであり、
式（Ｉ）について、Ｒ１は－ＯＨ又は－Ｈであり、Ｒ２は１－ヒドロキシプロピル又はヒドロキシメチルであり、
式（ＩＩ）について、Ｒ１は－ＯＨ又は－Ｈ又はアセトキシであり、Ｒ２は１－アセトキシプロピル又は１－ヒドロキシプロピル又は１－ヒドロキシメチル又はアセトキシ（シクロプロピル）メチル又はアセトキシ（プロピン－１－イル）メチルである
又はその薬学的に許容され得る塩、エナンチオマー若しくはジアステレオマーである。
本発明の、ＨＢＶを標的とするＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチド及びＴＬＲ７アゴニストは、例えば上記のセクション４～６及び８に個別に記載されている。
本発明の一実施形態では、医薬組合せは、表７の縦の列の化合物及び横の列の化合物から選択することができる。それぞれの可能な組合せは、「ｘ」で示される。
Figure 2023509870000044
以下の表８及び９は、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチド（縦）及びＴＬＲ７アゴニスト（横）の選択された組合せを示す。
Figure 2023509870000045
Figure 2023509870000046
本発明の一実施形態では、医薬組合せは、以下からなる群から選択される：
ＣＭＰ番号１５＿１とＶＩ、ＣＭＰ番号１５＿２とＶＩ；ＣＭＰ番号１６＿１とＶＩ；ＣＭＰ番号２０＿１とＶＩ；ＣＭＰ番号２３＿１とＶＩ；ＣＭＰ番号２６＿１とＶＩ；ＣＭＰ番号２９＿１とＶＩ；
ＣＭＰ番号１５＿１とＶＩＩ、ＣＭＰ番号１５＿２とＶＩＩ；ＣＭＰ番号１６＿１とＶＩＩ；ＣＭＰ番号２０＿１とＶＩＩ；ＣＭＰ番号２３＿１，ＶＩＩ；ＣＭＰ番号２６＿１とＶＩＩ；ＣＭＰ番号２９＿１とＶＩＩ；
ＣＭＰ番号１５＿１とＶＩＩＩ、ＣＭＰ番号１５＿２とＶＩＩＩ；ＣＭＰ番号１６＿１とＶＩＩＩ；ＣＭＰ番号２０＿１とＶＩＩＩ；ＣＭＰ番号２３＿１とＶＩＩ；ＣＭＰ番号２６＿１とＶＩＩＩ；ＣＭＰ番号２９＿１とＶＩＩＩ；及び
ＣＭＰ番号１５＿１とＸＩＩＩ、ＣＭＰ番号１５＿２とＸＩＩＩ；ＣＭＰ番号１６＿１とＸＩＩＩ；ＣＭＰ番号２０＿１とＸＩＩＩ；ＣＭＰ番号２３＿１とＸＩＩＩ；ＣＭＰ番号２６＿１とＸＩＩＩとＣＭＰ番号２９＿１とＸＩＩＩ；
又はその薬学的に許容され得る塩、エナンチオマー若しくはジアステレオマー。
一実施形態において、医薬組合せは、図５に示されるＣＭＰ番号１５＿１のＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチドからなり、ＴＬＲ７アゴニストはＣＭＰ番号ＶＩ：
Figure 2023509870000047
 であるか、又はその薬学的に許容され得る塩、エナンチオマー若しくはジアステレオマーである。
アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む医薬組合せの特に好ましい実施形態では、ＴＬＲ７アゴニストがＣＭＰ番号ＶＩである。
「キット」又は「キットオブパーツ」という用語は、ＨＢＶ感染個体の処置を実施する際に使用される材料のアセンブリを指し、処置をどのように行うかの説明を含む。
本発明の一態様は、１つ、２つ又は複数の治療有効成分（例えば、医療成分又は医薬）を含有するキットオブパーツであり、そのうちの２つは、本明細書中に記載の治療用オリゴヌクレオチド及び本明細書中に記載のＴＬＲ７アゴニストから選択される。
本発明の一実施形態は、本明細書に記載の治療用オリゴヌクレオチド及び本明細書に記載のＴＬＲ７アゴニストを医療成分として含むキットオブパーツである。
一実施形態では、本発明のキットは、皮下注射用に製剤化された本明細書に記載の治療用オリゴヌクレオチドである第１の医薬と、経口投与用に製剤化された本明細書に記載のＴＬＲ７アゴニストである第２の医薬とを含む。治療用オリゴヌクレオチドは、１回又は複数回の用量を含むバイアル中、又は１つの薬学的に有効な用量を含むプレフィルドシリンジ中の、液体として製剤化することができる。あるいは、治療用オリゴヌクレオチドは凍結乾燥粉末の形態であり得、キットは注射用の治療用オリゴヌクレオチドを調製するための溶媒和剤を含む。注射用の全ての医薬は無菌であることが理解される。キット中のＴＬＲ７アゴニストは、単一の薬学的有効用量ｐｒ．錠剤を有する錠剤形態（又はカプセル及びゲルなどの経口投与のための代替の単位用量形態）であり得、キットは複数の錠剤を含むことができる。
更なる実施形態において、本発明のキットオブパーツは、Ｂ型肝炎ウイルス感染症を処置するための、ＴＬＲ７アゴニストと組み合わせた治療用オリゴヌクレオチドの投与を指示する添付文書をさらに含む。特に、添付文書には、慢性Ｂ型肝炎ウイルス感染症の処置が記載されている。
キットは、医療成分の１つのみと、他の医療成分との併用を指示する添付文書とを含んでいてもよい。１つの実施形態において、本発明のキットオブパーツは、本明細書中に記載される治療用オリゴヌクレオチドである第１の医薬と、別個に購入されるが第２の医薬として本明細書中に記載されるＴＬＲ７アゴニストとの組合せでのその使用を指示する添付文書とを含むか又は含有する。別の実施形態において、本発明のキットオブパーツは、本明細書中に記載されるＴＬＲ７アゴニストである第１の医薬と、別個に購入されるが第２の医薬として本明細書中に記載される治療用オリゴヌクレオチドとの組合せでのその使用を指示する添付文書とを含むか又は含有する。
いくつかの実施形態において、本発明の医薬組合せは、第３の治療剤又は更なる治療剤（複数可）と組み合わせて使用され得、これらは、キットオブパーツに含まれ得るか、又は別々に供給され得る。更なる治療薬は、例えば、ＨＢＶ感染症、特に慢性ＨＢＶ感染症の処置のための標準的なケアであり得る。
１２．用途
本発明の医薬組合せは、Ｂ型肝炎ウイルス感染症の処置、特に慢性ＨＢＶを有する患者の処置に使用するためのものである。
本発明の医薬組合せは、治療薬として及び予防に利用することができる。
本発明の医薬組合せは、Ｂ型肝炎ウイルス標的化療法と免疫療法の併用として使用することができる。特に、本発明の医薬組合せは、感染細胞におけるＨＢＶの処置に使用される場合、ｉ）細胞ＨＢＶ ｍＲＮＡを減少させる、ｉｉ）血清中のＨＢＶ ＤＮＡを減少させる、及び／又はｉｉｉ）ＨＢｓＡｇ及びＨＢｅＡｇなどのＨＢＶウイルス抗原を減少させる、ＨＢＶ感染パラメータの１つ又は複数に影響を及ぼすことができる。本発明の一実施形態では、これらのパラメータの１つ又は複数に対する効果は、医薬組合せの個々の医療成分で処置を実施するときに達成される効果と比較して改善される。
ＨＢＶ感染に対する効果は、ＨＢＶ感染初代ヒト肝細胞又はＨＢＶ感染ＨｅｐａＲＧ細胞又はＡＳＧＰＲ－ＨｅｐａＲＧ細胞を使用してインビトロで測定することができる（例えば、ＰＣＴ／ＥＰ２０１８／０７８１３６を参照）。ＨＢＶ感染に対する効果はまた、ＨＢＶゲノムを保有する組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）に感染したマウスのＡＡＶ／ＨＢＶマウスモデル（ＡＡＶ／ＨＢＶ）（Ｄａｎ Ｙａｎｇ，ｅｔ ａｌ．２０１４ Ｃｅｌｌｕｌａｒ＆Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １１，７１－７８）又はＨＢＶミニサークルマウス（Ｃｏｖａｎｃｅ Ｓｈａｎｇｈａｉで入手可能、Ｇｕｏ ｅｔ ａｌ ２０１６ Ｓｃｉ Ｒｅｐ ６：２５５２及びＹａｎ ｅｔ ａｌ ２０１７ Ｊ Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ６６（６）：１１４９－１１５７も参照）又はヒト化肝細胞ＰＸＢマウスモデル（ＰｈｏｅｎｉｘＢｉｏで入手可能であり、Ｋａｋｕｎｉ ｅｔ ａｌ ２０１４ Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｓｃｉ．１５：５８－７４も参照）を使用してインビボで測定することもできる。ＨＢｓＡｇ及び／又はＨＢｅＡｇの分泌阻害は、製造業者の指示に従って、例えばＣＬＩＡ ＥＬＩＳＡキット（Ａｕｔｏｂｉｏ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ）を用いてＥＬＩＳＡにより測定することができる。ＨＢＶ ｍＲＮＡ及びｐｇＲＮＡの減少は、例えば、材料及び方法のセクションに記載されるように、ｑＰＣＲによって測定することができる。試験化合物がＨＢＶ感染を阻害するかどうかを評価するための更なる方法は、例えば国際公開第２０１５／１７３２０８号に記載されているとおりｑＰＣＲにより、又はノーザンブロット、インサイチュハイブリダイゼーション、又は免疫蛍光を用いて、ＨＢＶ ＤＮＡの分泌を測定することである。
本発明の一実施形態では、本明細書に記載のＨＢＶ ｍＲＮＡを標的とする治療用オリゴヌクレオチドと本明細書に記載のＴＬＲ７アゴニストとの医薬組合せは、単一化合物処置（治療用オリゴヌクレオチド単独又はＴＬＲ７アゴニスト単独）を超える利点を提供する。利点は、例えば、ｉ）単剤療法と比較して長期の血清ＨＢＶ－ＤＮＡ減少；ｉｉ）単剤療法と比較したＨＢｓＡｇのリバウンドの遅延、及び／又はｉｉｉ）治療域の増加であり得る。薬物に関する「治療域」又は「薬学域」という用語は、毒性作用を有することなく疾患を効果的に処置することができる薬物投与量の範囲である。本発明の一実施形態では、単剤療法と比較して、併用処置によって治療域の増加を達成することができる。
本出願の研究では、併用処置を使用する場合、単剤療法を使用する場合に必要とされる投与量と比較して、３～５倍低い投与量で有意に改善された効果を達成することができ、より高い投与量での同じ組合せと比較した場合に３～５倍低い投与量の併用処置で本質的に同じ効果を達成することができることが観察された。例えば、単剤療法ではＨＢｓＡｇの効率的な減少を達成するために高用量（７．５ｍｇ／ｋｇの抗ＨＢＶアンチセンスオリゴヌクレオチド又は２日に１回（ＱＯＤ）の１００ｍｇのＴＬＲ７アゴニスト）が必要であり、低用量（毎週（ＱＷ）１．５ｍｇ／ｋｇ及び１００ｍｇ）のＨＢｓＡｇを併用する場合は、ＨＢｓＡｇが検出限界未満に減少し、リバウンドする時間が高用量の単剤療法と比較して有意に延長されることが示されている。さらに、１日おきではなく週に１回投与されるＴＬＲ７アゴニスト（用量の４倍の減少に対応する）と組み合わせて、５倍低い用量（１．５ｍｇ／ｋｇ対７．５ｍｇ／ｋｇ）の抗ＨＢＶ治療用オリゴヌクレオチドの医薬組合せを使用する場合、ウイルスパラメータＨＢｓＡｇのリバウンドを同じ程度まで遅らせることができる。ＨＢＶ－ＤＮＡ減少についても同様の結果が観察される。
本発明は、ＨＢＶ感染を処置又は予防するための方法であって、治療的又は予防的有効量の本発明の医薬組合せを、ＨＢＶ感染を患う、又はそれに罹り易い対象に投与することを含む、方法を提供する。
本発明の更なる態様は、慢性ＨＢＶ感染の発症を阻害又は処置するための本発明の医薬組合せの使用に関する。
本発明の一態様は、ＨＢＶに感染した個体（慢性ＨＢＶ感染を有する個体など）を処置する方法であって、薬学的有効量の本明細書で定義される治療用オリゴヌクレオチド、及び、薬学的有効量の式（Ｉ）又は（ＩＩ）のＴＬＲ７アゴニスト
Figure 2023509870000048
 式中、ＸはＣＨ２又はＳであり、
式（Ｉ）について、Ｒ１は－ＯＨ又は－Ｈであり、Ｒ２は１－ヒドロキシプロピル又はヒドロキシメチルであり、
式（ＩＩ）について、ＨＢＶ感染個体に対して、Ｒ１は－ＯＨ又は－Ｈ又はアセトキシであり、Ｒ２は１－アセトキシプロピル又は１－ヒドロキシプロピル又は１－ヒドロキシメチル又はアセトキシ（シクロプロピル）メチル又はアセトキシ（プロピン－１－イル）メチルである
を投与することを含む方法である。
本発明はまた、併用処置において医薬として使用するための、本出願に記載の治療用オリゴヌクレオチドに関する。本発明はまた、併用処置において医薬として使用するための、本出願に記載のＴＬＲ７アゴニストに関する。
特に、本明細書で定義される治療用オリゴヌクレオチド、及び式（Ｉ）又は（ＩＩ）のＴＬＲ７アゴニスト：
Figure 2023509870000049
 式中、ＸはＣＨ２又はＳであり、
式（Ｉ）について、Ｒ１は－ＯＨ又は－Ｈであり、Ｒ２は１－ヒドロキシプロピル又はヒドロキシメチルであり、
式（ＩＩ）について、Ｒ１は－ＯＨ又は－Ｈ又はアセトキシであり、Ｒ２は１－アセトキシプロピル又は１－ヒドロキシプロピル又は１－ヒドロキシメチル又はアセトキシ（シクロプロピル）メチル又はアセトキシ（プロピン－１－イル）メチルである
は、Ｂ型肝炎ウイルス感染症の処置に使用するためのものである。
本発明の一実施形態は、慢性ＨＢＶウイルス感染などのＢ型肝炎ウイルス感染症を処置するための第１の医薬の製造における治療用オリゴヌクレオチドの使用であり、第１の医薬は、本出願に記載の治療用オリゴヌクレオチドであり、第１の医薬は、第２の医薬と組み合わせて投与され、第２の医薬は、本出願に記載のＴＬＲ７アゴニストである。
本発明の一実施形態では、治療用オリゴヌクレオチドを含有する医療用組成物は、皮下用量として投与される。本発明の更なる実施形態では、ＴＬＲ７アゴニストは、経口用量として投与されるべきである。医療用組成物は２つの異なる投与経路を介して投与されるので、それらは異なる投与計画に従うことができる。
本発明による医薬組合せは、典型的には有効量で投与される。
一実施形態では、本出願に記載される治療用オリゴヌクレオチドを、１ｍｇ／ｋｇ～４ｍｇ／ｋｇの用量範囲で、２４間～７２週間、例えば３６～６０週間、例えば４８週間、毎週又は毎月投与して皮下投与し、本出願に記載されるＴＬＲ７アゴニストを、８～２６週間、例えば１０～２４週間、例えば１２又は１３週間、１日おき（ＱＯＤ）に１５０～１７０ｍｇの範囲の単位用量として経口投与し、続いて２４～４８週間、例えば３０～４０週間、例えば３５週間、毎週投与（ＱＷ）する。隔日投与の期間中、１０週間～１４週間、例えば１２週間の処置休止期間があり得る。ＴＬＲ７アゴニストの投与される用量数は、処置期間を通して６０～１００用量、例えば７５～９０用量、例えば８１、８２、８３又は８４用量である。治療用オリゴヌクレオチドの投与される用量数は、６～７２用量、例えば９～１５用量、例えば１２又は４８用量である。
最適な組合せ効果のために、治療用オリゴヌクレオチド及びＴＬＲ７アゴニストは、１ヶ月未満の間隔、例えば１週間未満の間隔、例えば２日の間隔、例えば同日に投与される。
１３．使用方法
Ｉ．ＨＢｓＡｇ発現の減少
いくつかの実施形態では、ＨＢｓＡｇの発現を減少させる目的で、本明細書に開示されるオリゴヌクレオチド、特に本明細書に開示されるＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを含む有効量の本発明の医薬組合せのいずれか１つを細胞に送達する方法が提供される。本明細書で提供される方法は、任意の適切な細胞型において有用である。いくつかの実施形態では、細胞は、ＨＢＶ抗原を発現する任意の細胞（例えば、肝細胞、マクロファージ、単球由来細胞、前立腺癌細胞、脳の細胞、内分泌組織、骨髄、リンパ節、肺、胆嚢、肝臓、十二指腸、小腸、膵臓、腎臓、消化管、膀胱、脂肪及び軟部組織並びに皮膚）である。いくつかの実施形態では、細胞は、対象から得られた初代細胞であり、限定された数の継代を受けていてもよく、その結果、細胞はその天然の表現型特性を実質的に維持する。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドが送達される細胞は、エクスビボ又はインビトロである（すなわち、培養中の細胞又は細胞が存在する生物に送達することができる）。ある特定の実施形態では、肝細胞のみにおけるＨＢｓＡｇの発現を減少させる目的で、有効量の本明細書に開示されるオリゴヌクレオチド、特に本明細書に開示されるＲＮＡｉオリゴヌクレオチドのいずれか１つを含む医薬組合せを細胞に送達する方法が提供される。
いくつかの実施形態では、本明細書中に開示される医薬組合せにおけるオリゴヌクレオチドは、適切な核酸送達方法を使用して導入することができ、この方法には、オリゴヌクレオチドを含有する溶液の注入、オリゴヌクレオチドによって覆われた粒子による衝撃、オリゴヌクレオチドを含有する溶液に細胞又は生物を曝露すること、又はオリゴヌクレオチドの存在下での細胞膜のエレクトロポレーションが含まれる。細胞にオリゴヌクレオチドを送達するための他の適切な方法、例えば脂質媒介キャリア輸送、化学媒介輸送、及びカチオン性リポソームトランスフェクション、例えばリン酸カルシウムなどを使用してもよい。
阻害の結果は、細胞又は対象の１つ又は複数の特性を評価するための適切なアッセイによって、又はＨＢＶ抗原発現を示す分子（例えば、ＲＮＡ、タンパク質）を評価する生化学的技術によって確認することができる。いくつかの実施形態では、本明細書において提供される医薬組合せのオリゴヌクレオチドがＨＢＶ抗原の発現レベルを低下させる程度は、ＨＢＶ抗原の発現レベル（例えば、ｍＲＮＡ又はタンパク質レベル）を適切な対照（例えば、医薬組合せが送達されていないか、又は陰性対照が送達されている細胞又は細胞集団におけるＨＢＶ抗原発現のレベル）と比較することによって評価される。いくつかの実施形態では、ＨＢＶ抗原発現の適切な制御レベルは、制御レベルが毎回測定される必要がないように、所定のレベル又は値であり得る。所定のレベル又は値は、様々な形態をとることができる。いくつかの実施形態では、所定のレベル又は値は、中央値又は平均値などの単一のカットオフ値であり得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のオリゴヌクレオチド、特に本明細書に記載のＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを含む医薬組合せの投与は、細胞におけるＨＢＶ抗原（例えば、ＨＢｓＡｇ）発現レベルの低下をもたらす。いくつかの実施形態では、ＨＢＶ抗原発現レベルの低下は、ＨＢＶ抗原の適切な対照レベルと比較して、１％以下、５％以下、１０％以下、１５％以下、２０％以下、２５％以下、３０％以下、３５％以下、４０％以下、４５％以下、５０％以下、５５％以下、６０％以下、７０％以下、８０％以下、又は９０％以下への低下であり得る。適切な対照レベルは、本明細書に記載のオリゴヌクレオチド、特にＲＮＡｉオリゴヌクレオチドを含む医薬組合せと接触していない細胞又は細胞集団におけるＨＢＶ抗原発現のレベルであり得る。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法による細胞への本発明の医薬組合せのオリゴヌクレオチドの送達の効果は、有限期間後に評価される。例えば、ＨＢＶ抗原のレベルは、オリゴヌクレオチドを細胞に導入してから、少なくとも８時間、１２時間、１８時間、２４時間、又は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、１４、２１、２８、３５、４２、４９、５６、６３、７０、７７、８４、９１、９８、１０５、１１２、１１９、１２６、１３３、１４０、若しくは１４７日後に、細胞内で分析することができる。
いくつかの実施形態では、ＨＢＶ抗原（例えば、ＨＢｓＡｇ）発現レベルの低下は、投与後長期間持続する。いくつかの実施形態において、ＨＢｓＡｇ発現の検出可能な減少は、特にオリゴヌクレオチドがアンチセンスオリゴヌクレオチドである場合、本発明の医薬組合せのオリゴヌクレオチドの投与後７～７０日の期間内で持続する。例えば、いくつかの実施形態において、検出可能な減少は、オリゴヌクレオチドの投与後１０～７０、１０～６０、１０～５０、１０～４０、１０～３０、又は１０～２０日の期間内で持続する。いくつかの実施形態において、検出可能な減少は、特にオリゴヌクレオチドがアンチセンスオリゴヌクレオチドである場合、本発明の医薬組合せのオリゴヌクレオチドの投与後２０～７０、２０～６０、２０～５０、２０～４０又は２０～３０日の期間内で持続する。いくつかの実施形態において、検出可能な減少は、特にオリゴヌクレオチドがアンチセンスオリゴヌクレオチドである場合、本発明の医薬組合せのオリゴヌクレオチドの投与後３０～７０、３０～６０、３０～５０又は３０～４０日の期間内で持続する。いくつかの実施形態において、検出可能な減少は、特にオリゴヌクレオチドがアンチセンスオリゴヌクレオチドである場合、本発明の医薬組合せのオリゴヌクレオチドの投与後４０～７０、４０～６０、４０～５０、５０～７０、５０～６０又は６０～７０日の期間内で持続する。
いくつかの実施形態において、ＨＢｓＡｇ発現の検出可能な減少は、特にオリゴヌクレオチドがアンチセンスオリゴヌクレオチドである場合、本発明の医薬組合せのオリゴヌクレオチドの投与後２週間～２１週間の期間内で持続する。例えば、いくつかの実施形態において、検出可能な減少は、特にオリゴヌクレオチドがアンチセンスオリゴヌクレオチドである場合、本発明の医薬組合せのオリゴヌクレオチドの投与後２～２０、４～２０、６～２０、８～２０、１０～２０、１２～２０、１４～２０、１６～２０又は１８～２０週間の期間内で持続する。いくつかの実施形態において、検出可能な減少は、特にオリゴヌクレオチドがアンチセンスオリゴヌクレオチドである場合、本発明の医薬組合せのオリゴヌクレオチドの投与後２～１６、４～１６、６～１６、８～１６、１０～１６、１２～１６又は１４～１６週間の期間内で持続する。いくつかの実施形態において、検出可能な減少は、特にオリゴヌクレオチドがアンチセンスオリゴヌクレオチドである場合、本発明の医薬組合せのオリゴヌクレオチドの投与後２～１２、４～１２、６～１２、８～１２又は１０～１２週間の期間内で持続する。いくつかの実施形態において、検出可能な減少は、特にオリゴヌクレオチドがアンチセンスオリゴヌクレオチドである場合、本発明の医薬組合せのオリゴヌクレオチドの投与後２～１０、４～１０、６～１０又は８～１０週間の期間内で持続する。
いくつかの実施形態において、本発明の医薬組合せのオリゴヌクレオチドは、特にオリゴヌクレオチドがアンチセンスオリゴヌクレオチドである場合、細胞内でオリゴヌクレオチド（例えば、そのセンス鎖及びアンチセンス鎖）を発現するように操作された導入遺伝子の形態で送達される。いくつかの実施形態において、本発明の医薬組合せのオリゴヌクレオチドは、特にオリゴヌクレオチドがアンチセンスオリゴヌクレオチドである場合、本明細書中に開示される任意のオリゴヌクレオチを発現するように操作された導入遺伝子を使用して送達される。導入遺伝子は、ウイルスベクター（例えば、アデノウイルス、レトロウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス、アデノ随伴ウイルス又は単純ヘルペスウイルス）又は非ウイルスベクター（例えば、プラスミド又は合成ｍＲＮＡ）を使用して送達され得る。いくつかの実施形態では、本発明の医薬組合せの導入遺伝子を対象に直接注射することができる。
ＩＩ．処置方法
本開示の態様は、対象におけるＨＢＶ感染の処置のためのＨＢｓＡｇ発現を減少させる（例えば、ＨＢｓＡｇ発現を減少させる）方法に関する。いくつかの実施形態において、本方法は、有効量の本明細書に開示されるオリゴヌクレオチドのいずれか１つを含む医薬組合せを、それを必要とする対象に投与することを含み得る。本開示は、ＨＢＶ感染のリスクがある（又は感受性がある）対象及び／又はＨＢＶ感染に関連する疾患若しくは障害を処置する予防的及び治療的方法の両方を提供する。
ある特定の態様では、本開示は、対象に治療剤（例えば、治療的組合せ、オリゴヌクレオチド若しくはベクター、又はそれをコードする導入遺伝子）を投与することによって、対象において本明細書に記載の疾患又は障害を予防する方法を提供する。いくつかの実施形態では、特に治療的組合せのオリゴヌクレオチドがＲＮＡｉオリゴヌクレオチドである場合、処置される対象は、例えば肝臓におけるＨＢｓＡｇタンパク質の量の減少から治療上利益を得る対象である。疾患又は障害のリスクがある対象は、例えば、当技術分野で公知の診断アッセイ又は予後アッセイ（例えば、肝硬変及び／又は肝臓炎症の同定）の１つ又は組合せによって同定することができる。予防剤の投与は、疾患又は障害が予防されるか、あるいはその進行が遅延されるように、疾患又は障害に特徴的な症状の検出又は発現の前に行うことができる。
本明細書に記載の方法は、典型的には、有効量の治療的組合せ、すなわち、望ましい治療結果をもたらすことができる量を対象に投与することを含む。治療上許容され得る量は、疾患又は障害を処置することができる量であり得る。任意の１人の対象の適切な投与量は、対象の大きさ、体表面積、年齢、投与される特定の組成物、組成物中の活性成分（複数可）、投与の時間及び経路、全身の健康状態、並びに同時に投与される他の薬物を含む特定の因子に依存する。例えば、投与量は、０．１ｍｇ／ｋｇ～１２ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。投与量はまた、０．５～１０ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。あるいは、投与量は、１．０～６．０ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。投与量はまた、３．０～５．０ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。
いくつかの実施形態では、対象は、本明細書に開示される治療的組合せの組成物のいずれか１つを、経腸（例えば、経口、胃栄養チューブ、十二指腸栄養チューブ、胃瘻造設術又は直腸によって）、非経口（例えば、皮下注射、静脈内注射又は注入、動脈内注射又は注入、骨内注入、筋肉内注射、脳内注射、脳室内注射、髄腔内）、局所（例えば、皮膚上、吸入、点眼剤を介して、又は粘膜を介して）、又は標的器官（例えば、対象の肝臓）への直接注射のいずれかによって投与される。典型的には、本明細書に開示される治療的組合せのオリゴヌクレオチドは、静脈内又は皮下に投与される。
非限定的な一組の例として、本開示の治療的組合せのオリゴヌクレオチドは、典型的には、年４回（３ヶ月に１回）、２ヶ月毎（２ヶ月に１回）、毎月、又は毎週投与される。例えば、オリゴヌクレオチドは、１、２又は３週間ごとに投与され得る。オリゴヌクレオチドは毎日投与され得る。
好ましい実施形態では、本発明のＲＮＡｉ化合物は、ＨＢＶを標的とするｓｉＲＮＡであり、０．１ｍｇ／ｋｇ～７ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．５ｍｇ／ｋｇ～６．５ｍｇ／ｋｇ、最も好ましくは１ｍｇ／ｋｇ～６ｍｇ／ｋｇの用量で皮下投与される。一実施形態では、用量は、２週間に１回、４週間に１回、又は６週間に１回投与される。好ましい実施形態では、用量は月に１回投与される。特に好ましい実施形態では、１ｍｇ／ｋｇ～６ｍｇ／ｋｇの用量を月１回投与する。１ヶ月に１回は、ほぼ１暦月の長さである間隔で連続用量が投与されることを意味すると理解される。
いくつかの実施形態では、処置される対象は、ヒト若しくは非ヒト霊長類又は他の哺乳動物対象である。他の例示的な対象としては、イヌ及びネコなどの家畜；ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ニワトリ等の家畜；マウス、ラット、モルモット、ハムスターなどの動物が挙げられる。
実施形態
本発明の以下の実施形態は、本明細書に記載される任意の他の実施形態と組み合わせて使用することができる。
１．治療用オリゴヌクレオチド、及び式（Ｉ）又は（ＩＩ）：
Figure 2023509870000050
 のＴＬＲ７アゴニストを含む、又はそれらからなる医薬組合せであって
式中、ＸはＣＨ２又はＳであり、
式（Ｉ）について、Ｒ１は－ＯＨ又は－Ｈであり、Ｒ２は１－ヒドロキシプロピル又はヒドロキシメチルであり、
式（ＩＩ）について、Ｒ１は－ＯＨ又は－Ｈ又はアセトキシであり、Ｒ２は１－アセトキシプロピル又は１－ヒドロキシプロピル又は１－ヒドロキシメチル又はアセトキシ（シクロプロピル）メチル又はアセトキシ（プロピン－１－イル）メチルである、
又はその薬学的に許容され得る塩、エナンチオマー若しくはジアステレオマー。
２．治療用オリゴヌクレオチドがＲＮＡｉオリゴヌクレオチドである、実施形態１に記載の医薬組合せ。
３．ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが、ＨＢＶ（ＲＮＡｉ番号１）を標的とするオリゴヌクレオチドである、実施形態２に記載の医薬組合せ。
４．ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが、ＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡ（ＲＮＡｉ番号２）を標的とするオリゴヌクレオチドである、実施形態２又は３に記載の医薬組合せ。
５．ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが、ＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡ（ＲＮＡｉ番号３）の発現を減少させるオリゴヌクレオチドである、実施形態２～４のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
６．ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが、１９～３０ヌクレオチド長のアンチセンス鎖を含むオリゴヌクレオチドであり、アンチセンス鎖が、ＡＣＡＡＮＡＡＵＣＣＵＣＡＣＡＡＵＡ（配列番号３３）に記載のＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡ（ＲＮＡｉ番号４）の配列に対して相補性の領域を含む、実施形態２～５のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
７．ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが、Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓＡｇ）ｍＲＮＡの発現を減少させるためのオリゴヌクレオチドであり、オリゴヌクレオチドが、１９～３０ヌクレオチド長のアンチセンス鎖を含むオリゴヌクレオチドであり、アンチセンス鎖が、ＡＣＡＡＮＡＡＵＣＣＵＣＡＣＡＡＵＡ（配列番号３３）に記載のＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡ（ＲＮＡｉ番号５）の配列に対して相補性の領域を含む、実施形態２～５のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
８．ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが、１９～５０ヌクレオチド長のセンス鎖をさらに含み、センス鎖が、アンチセンス鎖と二重鎖領域を形成する、実施形態６又は７に記載の医薬組合せ。
９．センス鎖が、ＵＵＮＵＵＧＵＧＡＧＧＡＵＵＮ（配列番号３４）に記載の配列と相補性の領域を含む、実施形態８に記載の医薬組合せ。
１０．センス鎖が、５’－ＵＵＡＵＵＧＵＧＡＧＧＡＵＵＮＵＵＧＵＣ（配列番号３５）に記載の配列と相補性の領域を含む、実施形態８又は９に記載の医薬組合せ。
１１．アンチセンス鎖が、ＵＵＡＵＵＧＵＧＡＧＧＡＵＵＮＵＵＧＵＣＧＧ（配列番号３６）に記載の配列を含む、実施形態９に記載の医薬組合せ。
１２．アンチセンス鎖が、ＵＵＡＵＵＧＵＧＡＧＧＡＵＵＣＵＵＧＵＣＧＧ（配列番号３７）に記載の配列からなる、実施形態９に記載の医薬組合せ。
１３．アンチセンス鎖が、ＵＵＡＵＵＧＵＧＡＧＧＡＵＵＵＵＵＧＵＣＧＧ（配列番号３８）に記載の配列からなる、実施形態９に記載の医薬組合せ。
１４．センス鎖が、ＡＣＡＡＮＡＡＵＣＣＵＣＡＣＡＡＵＡＡ（配列番号３９）に記載の配列を含む、実施形態８から１２のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
１５．センス鎖が、ＧＡＣＡＡＮＡＡＵＣＣＵＣＡＣＡＡＵＡＡＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ（配列番号４０）に記載の配列を含む、実施形態８～１４のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
１６．センス鎖が、ＧＡＣＡＡＡＡＡＵＣＣＵＣＡＣＡＡＵＡＡＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ（配列番号４１）に記載の配列からなる、実施形態８～１４のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
１７．センス鎖が、ＧＡＣＡＡＧＡＡＵＣＣＵＣＡＣＡＡＵＡＡＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ（配列番号４２）に記載の配列からなる、実施形態８～１４のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
１８．ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが、Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓＡｇ）ｍＲＮＡの発現を減少させるためのオリゴヌクレオチドであり、オリゴヌクレオチドが、アンチセンス鎖と二重鎖領域を形成するセンス鎖を含み、センス鎖がＧＡＣＡＡＡＡＡＵＣＣＵＣＡＣＡＡＵＡＡＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ（配列番号４１）に記載の配列を含み、アンチセンス鎖が、ＵＵＡＵＵＧＵＧＡＧＧＡＵＵＵＵＵＧＵＣＧＧ（配列番号３８）に記載の配列を含み、
アンチセンス鎖及びセンス鎖の各々が、１つ又は複数の２’－フルオロ及び２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド並びに少なくとも１つのホスホロチオエート結合を含み、アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’－炭素がリン酸類似体を含み、センス鎖が１つ又は複数のＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分にコンジュゲートされている、実施形態２～５のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
１９．ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが、Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓＡｇ）ｍＲＮＡの発現を減少させるためのオリゴヌクレオチドであり、オリゴヌクレオチドが、アンチセンス鎖と二重鎖領域を形成するセンス鎖を含み、
センス鎖が、ＧＡＣＡＡＡＡＡＵＣＣＵＣＡＣＡＡＵＡＡＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ（配列番号４１）に記載の配列であって、３、８～１０、１２、１３及び１７位の２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、１、２、４～７、１１、１４～１６、１８～２６及び３１～３６位の２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、並びに少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む配列を含み、センス鎖は、１つ又は複数のＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分にコンジュゲートされており、
アンチセンス鎖は、ＵＵＡＵＵＧＵＧＡＧＧＡＵＵＵＵＵＧＵＣＧＧ（配列番号３８）に記載の配列であって、２、３、５、７、８、１０、１２、１４、１６及び１９位の２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、１、４、６、９、１１、１３、１５、１７、１８及び２０～２２位の２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、並びに少なくとも３つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む配列を含み、アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’－炭素はリン酸類似体を含む、実施形態２～５のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
２０．センス鎖が、１位及び２位のヌクレオチド間にホスホロチオエート結合を含む、実施形態１９に記載の医薬組合せ。
２１．アンチセンス鎖が、ヌクレオチド１と２、２と３、３と４、２０と２１、及び２１と２２の間に５個のホスホロチオエート結合を含む、実施形態１９又は２０に記載の医薬組合せ。
２２．アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドが以下の構造：
Figure 2023509870000051
 を有する、実施形態１９から２１のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
２３．センス鎖上の－ＧＡＡＡ－配列のヌクレオチドのうちの１つ又は複数が一価ＧａｌＮＡｃ部分にコンジュゲートされている、実施形態１９～２２のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
２４．センス鎖上の－ＧＡＡＡ－配列のヌクレオチドの各々が一価ＧａｌＮＡｃ部分にコンジュゲートされている、実施形態２３に記載の医薬組合せ。
２５．－ＧＡＡＡ－モチーフが、以下の構造：
Figure 2023509870000052
 を含み、
式中、
Ｌは、置換及び非置換アルキレン、置換及び非置換アルケニレン、置換及び非置換アルキニレン、置換及び非置換ヘテロアルキレン、置換及び非置換ヘテロアルケニレン、置換及び非置換ヘテロアルキニレン、及びそれらの組合せからなる群から選択される、結合、クリックケミストリーハンドル、又は長さが１個以上２０個以下の連続する共有結合原子のリンカーを表し、
Ｘは、Ｏ、Ｓ又はＮである、実施形態２４に記載の医薬組合せ。
２６．Ｌがアセタールリンカーである、実施形態２５に記載の医薬組合せ。
２７．ＸがＯである、実施形態２５又は２６に記載の医薬組合せ。
２８．－ＧＡＡＡ－配列が以下の構造：
Figure 2023509870000053
 を含む、実施形態２０に記載の医薬組合せ。
２９．センス鎖が、その３’末端に、以下に記載のステムループ：Ｓ１－Ｌ－Ｓ２を含み、式中、Ｓ１はＳ２に相補的であり、ＬはＳ１とＳ２との間に最大６ヌクレオチド長のループを形成する、実施形態８に記載の医薬組合せ。
３０．Ｌがテトラループである、実施形態２９に記載の医薬組合せ。
３１．Ｌが、Ｓ１とＳ２との間に４ヌクレオチド長のループを形成する、実施形態２９又は３０に記載の医薬組合せ。
３２．ＬがＧＡＡＡとして示される配列を含む、実施形態２９～３１のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
３３．ステムループの最大４ヌクレオチドのＬがそれぞれ別個のＧａｌＮＡｃにコンジュゲートされる、実施形態２９～３２のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
３４．ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含む、実施形態６～１６のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
３５．修飾ヌクレオチドが２’－修飾を含む、実施形態３４に記載の医薬組合せ。
３６．２’－修飾が、２’－アミノエチル、２’－フルオロ、２’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－メトキシエチル、及び２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸から選択される、実施形態３５に記載の医薬組合せで。
３７．ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドのヌクレオチドの全てが修飾ヌクレオチドである、実施形態６～１６のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
３８．ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間結合を含む、実施形態６～１６のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
３９．少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間結合がホスホロチオエート結合である、実施形態３８に記載の医薬組合せ。
４０．アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’－炭素がリン酸類似体を含む、実施形態６～１６のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
４１．オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオチドが標的化リガンドにコンジュゲートされる、実施形態６～１６のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
４２．標的化リガンドがＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分である、実施形態４１に記載の医薬組合せ。
４３．ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが、Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓＡｇ）ｍＲＮＡの発現を減少させるためのオリゴヌクレオチドであり、オリゴヌクレオチドが、アンチセンス鎖と二重鎖領域を形成するセンス鎖を含み、
センス鎖が、ＧＡＣＡＡＡＡＡＵＣＣＵＣＡＣＡＡＵＡＡＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ（配列番号４１）に記載の配列であって、３、８～１０、１２、１３及び１７位の２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、１、２、４～７、１１、１４～１６、１８～２６及び３１～３６位の２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、並びに１と２位のヌクレオチド間のホスホロチオエート結合を含む、配列からなり、センス鎖上の－ＧＡＡＡ－配列の各ヌクレオチドは、一価ＧａｌＮＡｃ部分にコンジュゲートされており、
アンチセンス鎖は、ＵＵＡＵＵＧＵＧＡＧＧＡＵＵＵＵＵＧＵＣＧＧ（配列番号３８）に記載の配列であって、２、３、５、７、８、１０、１２、１４、１６及び１９位の２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、１、４、６、９、１１、１３、１５、１７、１８及び２０～２２位の２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、並びに、１と２位のヌクレオチド間、２と３位のヌクレオチド間、３と４位のヌクレオチド間、２０と２１位のヌクレオチド間、及び２１と２２位のヌクレオチド間のホスホロチオエート結合を含む配列からなり、
アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’－炭素がメトキシホスホネート（ＭＯＰ）（ＲＮＡｉ番号６）を含む、実施形態２～５のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
４４．ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが、Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓＡｇ）ｍＲＮＡの発現を減少させるためのオリゴヌクレオチドであり、オリゴヌクレオチドが、アンチセンス鎖と二重鎖領域を形成するセンス鎖を含み、
センス鎖が、ＧＡＣＡＡＡＡＡＵＣＣＵＣＡＣＡＡＵＡＡＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ（配列番号４１）に記載の配列であって、３、８～１０、１２、１３及び１７位の２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、１、２、４～７、１１、１４～１６、１８～２６及び３１～３６位の２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、並びに１と２位のヌクレオチド間の１つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む、配列を含み、センス鎖上の－ＧＡＡＡ－配列の各ヌクレオチドは、一価ＧａｌＮＡｃ部分にコンジュゲートされており、－ＧＡＡＡ－配列は、以下の構造：
Figure 2023509870000054
 を含み
アンチセンス鎖は、ＵＵＡＵＵＧＵＧＡＧＧＡＵＵＵＵＵＧＵＣＧＧ（配列番号３８）に記載の配列であって、２、３、５、７、８、１０、１２、１４、１６及び１９位の２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、１、４、６、９、１１、１３、１５、１７、１８及び２０～２２位の２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、並びに、ヌクレオチド１と２、２と３、３と４、２０と２１、及び２１と２２の間に５つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む配列を含み、アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’－炭素は以下の構造：
Figure 2023509870000055
 を有する、実施形態２～５のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
４５．ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが図２９Ａに示される構造（ＲＮＡｉ番号８）を有する、実施形態２～５のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
４６．ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドがオリゴヌクレオチドＨＢＶ（ｓ）－２１９（ＲＮＡｉ番号９）である、実施形態２～５のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
４７．治療用オリゴヌクレオチドが、配列番号１の１５３０位から１６０２位までの連続配列に１００％相補的な少なくとも１２ヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列を有する１３～２２ヌクレオチド長のＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチドである、実施形態１に記載の医薬組合せ。
４８．連続ヌクレオチド配列が、配列番号１の１５３０～１５９８；１５３０～１５４３；１５３０～１５４４；１５３１～１５４３；１５５１～１５６５；１５５１～１５６６；１５７７～１５８９；１５７７～１５９１；１５７７～１５９２；１５７８～１５９０；１５７８～１５９２；１５８３～１５９８；１５８４～１５９８；１５８５～１５９８及び１５８３～１６０２位からなる群から選択される標的配列に１００％相補的である、実施形態４７に記載の医薬組合せ。
４９．連続ヌクレオチド配列が１２～１６ヌクレオチド長である、実施形態４７又は４８に記載の医薬組合せ。
５０．ＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列が、以下：
ｇｃｇｔａａａｇａｇａｇｇ（配列番号２）；
ｇｃｇｔａａａｇａｇａｇｇｔ（配列番号３）；
ｃｇｃｇｔａａａｇａｇａｇｇｔ（配列番号４）；
ａｇａａｇｇｃａｃａｇａｃｇｇ（配列番号５）；
ｇａｇａａｇｇｃａｃａｇａｃｇｇ（配列番号６）；
ａｇｃｇａａｇｔｇｃａｃａｃｇｇ（配列番号７）；
ｇａａｇｔｇｃａｃａｃｇｇ（配列番号８）；
ｇｃｇａａｇｔｇｃａｃａｃｇｇ（配列番号９）；
ａｇｃｇａａｇｔｇｃａｃａｃｇ（配列番号１０）；
ｃｇａａｇｔｇｃａｃａｃｇ（配列番号１１）；
ａｇｇｔｇａａｇｃｇａａｇｔｇｃ（配列番号１２）
ａｇｇｔｇａａｇｃｇａａｇｔｇ（配列番号１３）；
ａｇｇｔｇａａｇｃｇａａｇｔ（配列番号１４）；及び
ｇｃａｇａｇｇｔｇａａｇｃｇａａｇｔｇｃ（配列番号２９）
からなる群から選択される、又はその薬学的に許容され得る塩である、実施形態４７～４９のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
５１．ＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列が、式５’－Ｆ－Ｇ－Ｆ’－３’のギャップマーであり、領域Ｆ及びＦ’は、独立して、２～５個の２’糖修飾ヌクレオチドからなり、Ｆ及びＦ’領域の５’及び３’末端を規定し、Ｇは、ＲＮアーゼＨを動員することができる６～１０個のＤＮＡヌクレオシド領域である、実施形態４７～５０のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
５２．２’糖修飾ヌクレオシドが、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メチル－ＲＮＡ、２’－アルコキシ－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メトキシエチル－ＲＮＡ、２’－アミノ－ＤＮＡ、２’－フルオロ－ＤＮＡ、２’－フルオロ－ＡＮＡ及びＬＮＡヌクレオシドからなる群から独立して選択される、実施形態５１に記載の医薬組合せ。
５３．１つ又は複数の２’糖修飾ヌクレオシドがＭＯＥヌクレオシドである、実施形態５１又は５２に記載の医薬組合せ。
５４．１つ又は複数の２’糖修飾ヌクレオシドがＬＮＡヌクレオシドである、実施形態５１又は５２に記載の医薬組合せ。
５５．修飾ＬＮＡヌクレオシドが、オキシＬＮＡ、アミノＬＮＡ、チオＬＮＡ、ｃＥＴ及びＥＮＡから選択される、実施形態５４に記載の医薬組合せ。
５６．修飾ＬＮＡヌクレオシドが、それに続く２’－４’架橋－Ｏ－ＣＨ２－を有するオキシＬＮＡである、実施形態５４又は５５に記載の医薬組合せ。
５７．オキシＬＮＡがベータ－Ｄ－オキシＬＮＡである、実施形態５６に記載の医薬組合せ。
５８．修飾ＬＮＡヌクレオシドが、それに続く２’－４’架橋－Ｏ－ＣＨ（ＣＨ３）－を有するｃＥＴである、実施形態５４又は５５に記載の医薬組合せ。
５９．ｃＥＴが（Ｓ）ｃＥＴ、すなわち６’（Ｓ）メチル－ベータ－Ｄ－オキシＬＮＡである、実施形態５８に記載の医薬組合せ。
６０．ＬＮＡがＥＮＡであり、それに続く２’－４’架橋－Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２－を有する、実施形態５４又は５５に記載の医薬組合せ。
６１．ＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列が、
ＧＣＧｔａａａｇａｇａＧＧ（配列番号２）；
ＧＣＧｔａａａｇａｇＡＧＧ（配列番号２）；
ＧＣＧｔａａａｇａｇａＧＧＴ（配列番号３）；
ＣＧＣｇｔａａａｇａｇａＧＧＴ（配列番号４）；
ＡＧＡａｇｇｃａｃａｇａＣＧＧ（配列番号５）；
ＧＡＧａａｇｇｃａｃａｇａＣＧＧ（配列番号６）；
ＡＧＣｇａａｇｔｇｃａｃａＣＧＧ（配列番号７）；
ＧＡＡｇｔｇｃａｃａｃＧＧ（配列番号８）；
ＧＡＡｇｔｇｃａｃａＣＧＧ（配列番号８）；
ＧＣＧａａｇｔｇｃａｃａＣＧＧ（配列番号９）；
ＡＧＣｇａａｇｔｇｃａｃＡＣＧ（配列番号１０）；
ＣＧＡａｇｔｇｃａｃａＣＧ（配列番号１１）；
ＡＧＧｔｇａａｇｃｇａａｇＴＧＣ（配列番号１２）；
ＡＧＧｔｇａａｇｃｇａａＧＴＧ（配列番号１３）
ＡＧｇｔｇａａｇｃｇａＡＧＴＧ（配列番号１３）；
ＡＧＧｔｇａａｇｃｇａＡＧＴ（配列番号１４）；及び
ＧＣＡＧＡＧｇｔｇａａｇｃｇａＡＧＴＧＣ（配列番号２９）
からなる群から選択され、大文字はＬＮＡ又はＭＯＥヌクレオシドを示し、小文字はＤＮＡヌクレオシドを示す、実施形態４７～６０のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
６２．連続ヌクレオチド配列内のヌクレオシド間結合の少なくとも５０％がホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、実施形態４７～６１のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
６３．ＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列内の全てのヌクレオシド間結合がホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、実施形態４７～６２のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
６４．ＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチドのＧａｌＮＡｃコンジュゲートが、二価、三価又は四価のＧａｌＮＡｃクラスターである、実施形態４７～６３のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
６５．ＧａｌＮＡｃコンジュゲートが、図１Ｂ、図１Ｄ又は図１Ｊから選択される、実施形態６４に記載の医薬組合せ。
６６．ＧａｌＮＡｃコンジュゲート及びＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列が、２、３、４又は５個のホスホジエステル結合ＤＮＡヌクレオシドを含むＰＯリンカーによって共有結合している、実施形態４７～６５のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
６７．ＰＯリンカーが、アンチセンスオリゴヌクレオチドの一部であり、一方がＣとＡとの間にあり他方がＧａｌＮＡｃクラスターに対するものである少なくとも２つのホスホジエステル結合を有するシトシン及びアデニン（ＣＡ）のジヌクレオチド配列からなる、実施形態６６に記載の医薬組合せ。
６８．ＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチドが１２～１８ヌクレオチド長である、実施形態４７～６７のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
６９．ＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチドが、
Figure 2023509870000056
 からなる群から選択され、大文字の太字はベータ－Ｄ－オキシＬＮＡ単位を表し、小文字はＤＮＡ単位を表し、下付き文字「ｏ」はホスホジエステル結合を表し、下付き文字「ｓ」はホスホロチオエート結合を表し、上付き文字ｍは５－メチルシトシン塩基を含有するＤＮＡ又はベータ－Ｄ－オキシＬＮＡ単位を表し、ＧＮ２－Ｃ６は、Ｃ６リンカーを有するＧａｌＮＡｃ ２コンジュゲートを表す、又はその薬学的に許容され得る塩である、実施形態４７～６８のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
７０．ＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチドが５’－図１Ｊ－ｏ ＧｓＣｓＡｓＧｓＡｓｇｓｇｓｔｓｇｓａｓａｓｇｓｃｓｇｓａｓＡｓＧｓＴｓＧｓＣ－３’（図２）であり、式中、下線付き大文字下線付き文字はＭＯＥ単位を表し、小文字はＤＮＡ単位を表し、下付き文字「ｏ」は、ホスホジエステル結合を表し、下付き文字「ｓ」は、ホスホロチオエート結合を表す、実施形態４７～６９のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
７１．ＴＬＲ７アゴニストが式（ＩＩＩ）：
Figure 2023509870000057
 であり、
式中、Ｒ１は－ＯＨ又はアセトキシであり、Ｒ２は１－アセトキシプロピル又は１－ヒドロキシプロピル又は１－ヒドロキシメチルである、又はその薬学的に許容され得る塩、エナンチオマー若しくはジアステレオマーである、実施形態１～７０のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
７２．ＴＬＲ７アゴニストが式（ＩＶ）：
Figure 2023509870000058
 であり、
式中、Ｒ１は、アセトキシ（シクロプロピル）メチル又はアセトキシ（プロピン－１－イル）メチルである、実施形態１～７０のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
７３．ＴＬＲ７アゴニストが式（Ｖ）：
Figure 2023509870000059
 であり、
式中、Ｒ１は－ＯＨであり、Ｒ２は１－ヒドロキシプロピル又はヒドロキシメチルである、又はその薬学的に許容され得る塩、エナンチオマー若しくはジアステレオマーである、実施形態１～７０のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
７４．ＴＬＲ７アゴニストが、
［（１Ｓ）－１－［（２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（５－アミノ－２－オキソ－チアゾロ［４，５－ｄ］ピリミジン－３－イル）－４－ヒドロキシ－テトラヒドロフラン－２－イル］プロピル］アセテート（ＣＭＰ番号ＶＩ）；
５－アミノ－３－［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）－３－ヒドロキシ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシプロピル］テトラヒドロフラン－２－イル］－６Ｈ－チアゾロ［４，５－ｄ］ピリミジン－２，７－ジオン（ＣＭＰ番号ＶＩＩ）；
５－アミノ－３－［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）－３－ヒドロキシ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシプロピル］テトラヒドロフラン－２－イル］チアゾロ［４，５－ｄ］ピリミジン－２－オン（ＣＭＰ番号ＶＩＩＩ）；
５－アミノ－３－（３’－デオキシ－β－Ｄ－リボフラノシル）－３Ｈ－チアゾロ［４，５－ｄ］ピリミジン－２－オン（ＣＭＰ番号ＩＸ）；
５－アミノ－３－（２’－Ｏ－アセチル－３’－デオキシ－β－Ｄ－リボフラノシル）－３Ｈ－チアゾロ［４，５－ｄ］ピリミジン－２－オン（ＣＭＰ番号Ｘ）；
５－アミノ－３－（３’－デオキシ－β－Ｄ－リボフラノシル）－３Ｈ，６Ｈ－チアゾロ［４，５－ｄ］ピリミジン－２，７－ジオン（ＣＭＰ番号ＸＩ）；
［（Ｓ）－［（２Ｓ，５Ｒ）－５－（５－アミノ－２－オキソ－チアゾロ［４，５－ｄ］ピリミジン－３－イル）－１，３－オキサチオラン－２－イル］－シクロプロピル－メチル］アセテート（ＣＭＰ番号ＸＩＩ）；及び
（１Ｓ）－１－［（２Ｓ，５Ｒ）－５－（５－アミノ－２－オキソ－チアゾロ［４，５－ｄ］ピリミジン－３－イル）－１，３－オキサチオラン－２－イル］ブタ－２－イニル］アセテート（ＣＭＰ番号ＸＩＩＩ）；
からなる群から選択される、又はその薬学的に許容され得る塩、エナンチオマー若しくはジアステレオマーである、実施形態１～７３のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
７５．ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドとＴＬＲ７アゴニストとを含む組合せが、以下の組合せ：
ＲＮＡｉ番号１とＣＭＰ番号ＶＩ；ＲＮＡｉ番号２とＣＭＰ番号ＶＩ；ＲＮＡｉ番号３とＣＭＰ番号ＶＩ；ＲＮＡｉ番号４とＣＭＰ番号ＶＩ；ＲＮＡｉ番号５とＣＭＰ番号ＶＩ；ＲＮＡｉ番号６とＣＭＰ番号ＶＩ；ＲＮＡｉ番号７とＣＭＰ番号ＶＩ；ＲＮＡｉ番号８とＣＭＰ番号ＶＩ；ＲＮＡｉ番号９とＣＭＰ番号ＶＩ；
ＲＮＡｉ番号１とＣＭＰ番号ＶＩＩ；ＲＮＡｉ番号２とＣＭＰ番号ＶＩＩ；ＲＮＡｉ番号３とＣＭＰ番号ＶＩＩ；ＲＮＡｉ番号４とＣＭＰ番号ＶＩＩ；ＲＮＡｉ番号５とＣＭＰ番号ＶＩＩ；ＲＮＡｉ番号６とＣＭＰ番号ＶＩＩ；ＲＮＡｉ番号７とＣＭＰ番号ＶＩＩ；ＲＮＡｉ番号８とＣＭＰ番号ＶＩＩ；ＲＮＡｉ番号９とＣＭＰ番号ＶＩＩ；
ＲＮＡｉ番号１とＣＭＰ番号ＶＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号２とＣＭＰ番号ＶＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号３とＣＭＰ番号ＶＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号４とＣＭＰ番号ＶＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号５とＣＭＰ番号ＶＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号６とＣＭＰ番号ＶＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号７とＣＭＰ番号ＶＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号８とＣＭＰ番号ＶＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号９とＣＭＰ番号ＶＩＩＩ；
ＲＮＡｉ番号１とＣＭＰ番号ＸＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号２とＣＭＰ番号ＸＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号３とＣＭＰ番号ＸＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号４とＣＭＰ番号ＸＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号５とＣＭＰ番号ＸＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号６とＣＭＰ番号ＸＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号７とＣＭＰ番号ＸＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号８とＣＭＰ番号ＸＩＩＩ、又はＲＮＡｉ番号９とＣＭＰ番号ＸＩＩＩ；
からなる群から選択される、又はその薬学的に許容され得る塩、エナンチオマー若しくはジアステレオマーである、実施形態２～４６及び７１～７４のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
７６．ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドがＲＮＡｉ番号７であり、
アンチセンス鎖と二重鎖領域を形成するセンス鎖を含むオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が、ＧＡＣＡＡＡＡＡＵＣＣＵＣＡＣＡＡＵＡＡＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ（配列番号４１）に記載の配列であって、３、８～１０、１２、１３及び１７位の２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、１、２、４～７、１１、１４～１６、１８～２６及び３１～３６位の２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、並びに１と２位のヌクレオチド間の１つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む、配列を含み、センス鎖上の－ＧＡＡＡ－配列の各ヌクレオチドは、一価ＧａｌＮａｃ部分にコンジュゲートされており、－ＧＡＡＡ－配列は、以下の構造：
Figure 2023509870000060
 を含み、
アンチセンス鎖は、ＵＵＡＵＵＧＵＧＡＧＧＡＵＵＵＵＵＧＵＣＧＧ（配列番号３８）に記載の配列であって、２、３、５、７、８、１０、１２、１４、１６及び１９位の２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、１、４、６、９、１１、１３、１５、１７、１８及び２０～２２位の２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、並びに、ヌクレオチド１と２、２と３、３と４、２０と２１、及び２１と２２の間に５つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む配列を含み、アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’－炭素は以下の構造：
Figure 2023509870000061
 を有しており、
ＴＬＲ７アゴニストはＣＭＰ番号ＶＩ：
Figure 2023509870000062
 である、又はその薬学的に許容され得る塩、エナンチオマー若しくはジアステレオマーである、実施形態２～４６及び７１～７４のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
７７．ＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチドとＴＬＲ７アゴニストとを含む組合せが、以下の組合せ：ＣＭＰ番号１５＿１とＶＩ、ＣＭＰ番号１５＿２とＶＩ；ＣＭＰ番号１６＿１とＶＩ；ＣＭＰ番号２０＿１とＶＩ；ＣＭＰ番号２３＿１とＶＩ；ＣＭＰ番号２６＿１とＶＩ；ＣＭＰ番号２９＿１とＶＩ；ＣＭＰ番号１５＿１とＶＩＩ，ＣＭＰ番号１５＿２とＶＩＩ；ＣＭＰ番号１６＿１とＶＩＩ；ＣＭＰ番号２０＿１とＶＩＩ；ＣＭＰ番号２３＿１とＶＩＩ；ＣＭＰ番号２６＿１とＶＩＩ；ＣＭＰ番号２９＿１とＶＩＩ；ＣＭＰ番号１５＿１とＶＩＩＩ、ＣＭＰ番号１５＿２とＶＩＩＩ；ＣＭＰ番号１６＿１とＶＩＩＩ；ＣＭＰ番号２０＿１とＶＩＩＩ；ＣＭＰ番号２３＿１とＶＩＩ；ＣＭＰ番号２６＿１とＶＩＩＩ；ＣＭＰ番号２９＿１とＶＩＩＩ；ＣＭＰ番号１５＿１とＸＩＩＩ、ＣＭＰ番号１５＿２とＸＩＩＩ；ＣＭＰ番号１６＿１とＸＩＩＩ；ＣＭＰ番号２０＿１とＸＩＩＩ；ＣＭＰ番号２３＿１とＸＩＩＩ；ＣＭＰ番号２６＿１とＸＩＩＩ；及びＣＭＰ番号２９＿１とＸＩＩＩからなる群から選択される、又はその薬学的に許容され得る塩、エナンチオマー若しくはジアステレオマーである、実施形態４７～７４のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
７８．ＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチドが、図５に示されるＣＭＰ番号１５＿１であり、ＴＬＲ７アゴニストが、ＣＭＰ番号ＶＩ：
Figure 2023509870000063
 である、又はその薬学的に許容され得る塩、エナンチオマー若しくはジアステレオマーである、実施形態４７～７４のいずれか一つに記載の医薬組合せ、医薬組合せ。
７９．治療用オリゴヌクレオチドが薬学的に許容され得る塩と共に製剤化される、実施形態１～７８のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
８０．薬学的に許容され得る塩が金属カチオンイオンであり、好ましくは、薬学的に許容され得る塩がＮａ＋又はＫ＋である、実施形態７９に記載の医薬組合せ。
８１．実施形態１～８０のいずれか一つに記載の治療用オリゴヌクレオチド及びＴＬＲ７アゴニストが、薬学的に許容され得る担体と共に製剤化される、実施形態１～８０のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
８２．薬学的に許容され得る担体が水である、実施形態８１に記載の医薬組合せ。
８３．治療用オリゴヌクレオチドがリン酸緩衝生理食塩水において製剤化される、実施形態１～８２のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
８４．治療用オリゴヌクレオチドが皮下注射用に製剤化され、ＴＬＲ７アゴニストが経口投与用に製剤化される、実施形態１～８３のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
８５．治療用オリゴヌクレオチドが静脈内注射用に製剤化され、ＴＬＲ７アゴニストが経口投与用に製剤化される、実施形態１～８３のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
８６．治療用オリゴヌクレオチドが皮下注射用に製剤化されたｓｉＲＮＡであり、ＴＬＲ７アゴニストが経口投与用に製剤化される、実施形態２～４６、７５、７６及び７９～８３のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
８７．ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドとＴＬＲ７アゴニストとを含み、ＣｐＡＭ（コアタンパク質アロステリックモジュレータ）をさらに含む、実施形態１～８６のいずれか一つに記載の医薬組合せ。
８８．ＣｐＡＭが以下に示される化合物（ＣｐＡＭ１）：
Figure 2023509870000064
 による式を有し、
式中、
Ｒ１は、水素、ハロゲン又はＣ１－６アルキルであり、
Ｒ２は、水素又はハロゲンであり、
Ｒ３は、水素又はハロゲンであり、
Ｒ４はＣ１－６アルキルであり、
Ｒ５は、水素、ヒドロキシＣ１－６アルキル、アミノカルボニル、Ｃ１－６アルコキシカルボニル又はカルボキシであり、
Ｒ６は、水素、Ｃ１－６アルコキシカルボニル又はカルボキシ－ＣｍＨ２ｍ－であり、
Ｘは、カルボニル又はスルホニルであり、
Ｙは、－ＣＨ２－、－Ｏ－又は－Ｎ（Ｒ７）－であり、
式中、Ｒ７は、水素、Ｃ１－６アルキル、ハロＣ１－６アルキル、Ｃ３－７シクロアルキル－ＣｍＨ２ｍ－、Ｃ１－６アルコキシカルボニル－ＣｍＨ２ｍ－、－ＣｔＨ２ｔ－ＣＯＯＨ、－ハロＣ１－６アルキル－ＣＯＯＨ、－（Ｃ１－６アルコキシ）Ｃ１－６アルキル－ＣＯＯＨ、－Ｃ１－６アルキル－Ｏ－Ｃ１－６アルキル－ＣＯＯＨ、－Ｃ３－７シクロアルキル－ＣｍＨ２ｍ－ＣＯＯＨ、－ＣｍＨ２ｍ－Ｃ３－７シクロアルキル－ＣＯＯＨ、ヒドロキシ－ＣｔＨ２ｔ－、カルボキシスピロ［３．３］ヘプチル又はカルボキシフェニル－ＣｍＨ２ｍ－、カルボキシピリジニル－ＣｍＨ２ｍ－であり、
Ｗは、－ＣＨ２－、－Ｃ（Ｃ１－６アルキル）２－、－Ｏ－又はカルボニルであり、
ｎは０又は１であり、
ｍは０～７であり、
ｔは１～７である、
又はその薬学的に許容され得る塩、若しくはエナンチオマー、若しくはジアステレオマーである、実施形態８７に記載の医薬組合せ。
８９．ＣｐＡＭが化合物（ＣｐＡＭ２）
Figure 2023509870000065
 である、又はその薬学的に許容され得る塩、エナンチオマー若しくはジアステレオマーである、実施形態８７又は８８に記載の医薬組合せ。
９０．ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、ＴＬＲ７アゴニスト及びＣｐＡＭを含む医薬組合せであって、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドがＲＮＡｉ番号７：
アンチセンス鎖と二重鎖領域を形成するセンス鎖を含むオリゴヌクレオチドであり、
センス鎖が、ＧＡＣＡＡＡＡＡＵＣＣＵＣＡＣＡＡＵＡＡＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ（配列番号４１）に記載の配列であって、３、８～１０、１２、１３及び１７位の２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、１、２、４～７、１１、１４～１６、１８～２６及び３１～３６位の２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、並びに１と２位のヌクレオチド間の１つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む、配列を含み、センス鎖上の－ＧＡＡＡ－配列の各ヌクレオチドは、一価ＧａｌＮＡｃ部分にコンジュゲートされており、－ＧＡＡＡ－配列は、以下の構造：
Figure 2023509870000066
 を含み、
アンチセンス鎖は、ＵＵＡＵＵＧＵＧＡＧＧＡＵＵＵＵＵＧＵＣＧＧ（配列番号３８）に記載の配列であって、２、３、５、７、８、１０、１２、１４、１６及び１９位の２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、１、４、６、９、１１、１３、１５、１７、１８及び２０～２２位の２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、並びに、ヌクレオチド１と２、２と３、３と４、２０と２１、及び２１と２２の間に５つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む配列を含み、アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’－炭素は以下の構造：
Figure 2023509870000067
 を有しており、
ＴＬＲ７アゴニストはＣＭＰ番号ＶＩ：
Figure 2023509870000068
 である、又はその薬学的に許容され得る塩、エナンチオマー若しくはジアステレオマーであり；
ＣｐＡＭは、化合物（ＣｐＡＭ２）：
Figure 2023509870000069
 又はその薬学的に許容され得る塩、エナンチオマー若しくはジアステレオマーである、医薬組合せ、。
９１．実施形態１～９０のいずれか一つに記載の医薬組合せを含む医薬組成物。
９２．実施形態１～９０のいずれか一つに記載の治療用オリゴヌクレオチドと、Ｂ型肝炎ウイルス感染症を処置するためのＴＬＲ７アゴニストとの投与のための説明がある添付文書とを含むキットオブパーツ。
９３．添付文書に記載のＴＬＲ７アゴニストが、実施形態１～９０のいずれか一つに記載のＴＬＲ７アゴニストである、実施形態９２に記載のキットオブパーツ。
９４．実施形態１～９０のいずれか一つに記載の治療用オリゴヌクレオチドと、実施形態１～９０のいずれか一つに記載のＴＬＲ７アゴニストとを含む、実施形態９２又は９３に記載のキットオブパーツ。
９５．治療用オリゴヌクレオチドが皮下注射用に製剤化され、ＴＬＲ７アゴニストが経口投与用に製剤化される、実施形態９２～９４のいずれか一つに記載のキットオブパーツ。
９６．添付文書に慢性Ｂ型肝炎ウイルス感染症の処置が記載されている、実施形態９２～９５のいずれか一つに記載のキットオブパーツ。
９７．治療用オリゴヌクレオチドが、細胞内でオリゴヌクレオチドを発現するように操作された導入遺伝子の形態である、実施形態１～９６のいずれか一つに記載の医薬組合せ、組成物、又はキット。
９８．Ｂ型肝炎ウイルス感染症を処置するための、実施形態１～９７のいずれか一つに記載の医薬組合せ、組成物、又はキットの使用。
９９．処置されるＢ型肝炎ウイルス感染症が慢性Ｂ型肝炎ウイルス感染症である、実施形態９８に記載の使用。
１００．治療用オリゴヌクレオチド及びＴＬＲ７アゴニストが薬学的有効量で投与される、実施形態９８又は９９に記載の使用。
１０１．治療用オリゴヌクレオチドを毎週投与し、ＴＬＲ７アゴニストを１日おきに投与する、実施形態９８～１００のいずれか一つに記載の使用。
１０２．治療用オリゴヌクレオチドを投与前１～４ｍｇ／ｋｇで投与し、ＴＬＲ７アゴニストを投与前１５０～１７０ｍｇで投与する、実施形態９８～１０１のいずれか一つに記載の使用。
１０３．治療用オリゴヌクレオチドを４８週間投与し、８４用量のＴＬＲ７アゴニストを投与する、実施形態９８～１０２のいずれか一つに記載の使用。
１０４．治療用オリゴヌクレオチド及びＴＬＲ７アゴニストの投与が同じ週に開始される、実施形態９８～１０３のいずれか一つに記載の使用。
１０５．治療用オリゴヌクレオチドが皮下投与用の剤形であり、ＴＬＲ７アゴニストが経口投与用の剤形である、実施形態９８～１０４のいずれか一つに記載の使用。
１０６．治療用オリゴヌクレオチドの用量が１００～１５０ｍｇ／ｍｌであり、ＴＬＲ７アゴニストの用量が１５０～１７０ｍｇである、実施形態９８～１０５のいずれか一つに記載の使用。
１０７．治療用オリゴヌクレオチドが、ＨＢＶ ｍＲＮＡ転写物をコードする非表面抗原を標的とするＲＮＡｉオリゴヌクレオチドによる処置の非存在下で投与される、実施形態９８～１０６のいずれか一つに記載の使用。
１０８．対象に、ＨＢｘＡｇ ｍＲＮＡ転写物を選択的に標的化するＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが投与されない、実施形態９８～１０７のいずれか一つに記載の使用。
１０９．対象に有効量のエンテカビルを投与することをさらに含む、実施形態９８～１０８のいずれか一つに記載の使用。
１１０．治療用オリゴヌクレオチドが、細胞内でオリゴヌクレオチドを発現するように操作された導入遺伝子の形態で送達される、実施形態９８～１０９のいずれか一つに記載の使用。
１１１．医薬に使用するための、実施形態１～９７のいずれか一つに記載の医薬組合せ、組成物、又はキット。
１１２．Ｂ型肝炎ウイルス感染症の処置での使用のための、実施形態１～９７のいずれか一つに記載の医薬組合せ、組成物、又はキット。
１１３．処置されるＢ型肝炎ウイルス感染症が慢性Ｂ型肝炎ウイルス感染症である、実施形態１１１又は１１２に記載の使用のための医薬組合せ、組成物、又はキット。
１１４．治療用オリゴヌクレオチド及びＴＬＲ７アゴニストが薬学的有効量で投与される、実施形態１１１～１１３のいずれか一つに記載の使用のための医薬組合せ、組成物、又はキット。
１１５．治療用オリゴヌクレオチドを毎週投与し、ＴＬＲ７アゴニストを１日おきに投与する、実施形態１１１～１１４のいずれか一つに記載の使用のための医薬組合せ、組成物、又はキット。
１１６．治療用オリゴヌクレオチドを投与前１～４ｍｇ／ｋｇで投与し、ＴＬＲ７アゴニストを投与前１５０～１７０ｍｇで投与する、実施形態１１１～１１５のいずれか一つに記載の使用のための医薬組合せ、組成物、又はキット。
１１７．治療用オリゴヌクレオチドを４８週間投与し、８４用量のＴＬＲ７アゴニストを投与する、実施形態１１１～１１６のいずれか一つに記載の使用のための医薬組合せ、組成物、又はキット。
１１８．治療用オリゴヌクレオチド及びＴＬＲ７アゴニストの投与が同じ週に開始される、実施形態１１１～１１７のいずれか一つに記載の使用のための医薬組合せ、組成物、又はキット。
１１９．治療用オリゴヌクレオチドが皮下投与用の剤形であり、ＴＬＲ７アゴニストが経口投与用の剤形である、実施形態１１１～１１８のいずれか一つに記載の使用のための医薬組合せ、組成物、又はキット。
１２０．治療用オリゴヌクレオチドの用量が１００～１５０ｍｇ／ｍｌであり、ＴＬＲ７アゴニストの用量が１５０～１７０ｍｇである、実施形態１１１～１１９のいずれか一つに記載の使用のための医薬組合せ、組成物、又はキット。
１２１．治療用オリゴヌクレオチドが、ＨＢＶ ｍＲＮＡ転写物をコードする非表面抗原を標的とするＲＮＡｉオリゴヌクレオチドによる処置の非存在下で投与される、実施形態１１１～１２０のいずれか一つに記載の使用のための医薬組合せ、組成物、又はキット。
１２２．対象に、ＨＢｘＡｇ ｍＲＮＡ転写物を選択的に標的化するＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが投与されない、実施形態１１１～１２１のいずれか一つに記載の使用のための医薬組合せ、組成物、又はキット。
１２３．対象に有効量のエンテカビルを投与することをさらに含む、実施形態１１１～１２２のいずれか一つに記載の使用のための医薬組合せ、組成物、又はキット。
１２４．治療用オリゴヌクレオチドが、細胞内でオリゴヌクレオチドを発現するように操作された導入遺伝子の形態で送達される、実施形態１１１～１２３のいずれか一つに記載の使用のための医薬組合せ、組成物、又はキット。
１２５．Ｂ型肝炎ウイルス感染症を処置するための第１の医薬の製造における治療用オリゴヌクレオチドの使用であって、第１の医薬が、実施形態１～９７のいずれか一つに記載の治療用オリゴヌクレオチドであり、第１の医薬が、第２の医薬と組み合わせて投与されるものであり、第２の医薬が、実施形態１～９７のいずれか一つに記載のＴＬＲ７アゴニストである、使用。
１２６．医薬の製造における、実施形態１～９７のいずれか一つに記載の医薬組合せ、組成物、又はキットの使用。
１２７．Ｂ型肝炎ウイルス感染症を処置するための医薬の製造における、実施形態１～９７のいずれか一つに記載の医薬組合せ、組成物、又はキットの使用。
１２８．処置されるＢ型肝炎ウイルス感染症が慢性Ｂ型肝炎ウイルス感染症である、実施形態１２５～１２７のいずれか一つに記載の使用。
１２９．治療用オリゴヌクレオチド及びＴＬＲ７アゴニストが薬学的有効量で投与される、実施形態１２５～１２８のいずれか一つに記載の使用。
１３０．治療用オリゴヌクレオチドを毎週投与し、ＴＬＲ７アゴニストを１日おきに投与する、実施形態１２５～１２９のいずれか一つに記載の使用。
１３１．治療用オリゴヌクレオチドを投与前１～４ｍｇ／ｋｇで投与し、ＴＬＲ７アゴニストを投与前１５０～１７０ｍｇで投与する、実施形態１２５～１３０のいずれか一つに記載の使用。
１３２．治療用オリゴヌクレオチドを４８週間投与し、８４用量のＴＬＲ７アゴニストを投与する、実施形態１２５～１３１のいずれか一つに記載の使用。
１３３．治療用オリゴヌクレオチド及びＴＬＲ７アゴニストの投与が同じ週に開始される、実施形態１２５～１３２のいずれか一つに記載の使用。
１３４．治療用オリゴヌクレオチドが皮下投与用の剤形であり、ＴＬＲ７アゴニストが経口投与用の剤形である、実施形態１２５～１３３のいずれか一つに記載の使用。
１３５．治療用オリゴヌクレオチドの用量が１００～１５０ｍｇ／ｍｌであり、ＴＬＲ７アゴニストの用量が１５０～１７０ｍｇである、実施形態１２５～１３４のいずれか一つに記載の使用。
１３６．治療用オリゴヌクレオチドが、ＨＢＶ ｍＲＮＡ転写物をコードする非表面抗原を標的とするＲＮＡｉオリゴヌクレオチドによる処置の非存在下で投与される、実施形態１２５～１３５のいずれか一つに記載の使用。
１３７．対象に、ＨＢｘＡｇ ｍＲＮＡ転写物を選択的に標的化するＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが投与されない、実施形態１２５～１３６のいずれか一つに記載の使用。
１３８．対象に有効量のエンテカビルを投与することをさらに含む、実施形態１２５～１３７のいずれか一つに記載の使用。
１３９．治療用オリゴヌクレオチドが、細胞内でオリゴヌクレオチドを発現するように操作された導入遺伝子の形態で送達される、実施形態１２５～１３８のいずれか一つに記載の使用。
１４０．Ｂ型肝炎ウイルス感染症を処置するための方法であって、治療有効量の実施形態１～９７のいずれか一つに記載の治療用オリゴヌクレオチドを、治療有効量の実施形態１～９１又は９４～９７のいずれか一つに記載のＴＬＲ７アゴニストと組み合わせて、Ｂ型肝炎ウイルス感染症に感染した対象に投与するステップを含む方法。
１４１．Ｂ型肝炎ウイルス感染症を処置するための方法であって、治療有効量の実施形態１～９７のいずれか一つに記載の医薬組合せ、組成物、又はキットを、Ｂ型肝炎ウイルス感染症に感染した対象に投与するステップを含む方法。
１４２．処置されるＢ型肝炎ウイルス感染症が慢性Ｂ型肝炎ウイルス感染症である、実施形態１４０又は１４１に記載の方法。
１４３．治療用オリゴヌクレオチド及びＴＬＲ７アゴニストが薬学的有効量で投与される、実施形態１４０～１４２のいずれか一つに記載の方法。
１４４．治療用オリゴヌクレオチドを毎週投与し、ＴＬＲ７アゴニストを１日おきに投与する、実施形態１４０～１４３のいずれか一つに記載の方法。
１４５．治療用オリゴヌクレオチドを投与前１～４ｍｇ／ｋｇで投与し、ＴＬＲ７アゴニストを投与前１５０～１７０ｍｇで投与する、実施形態１４０～１４４のいずれか一つに記載の方法。
１４６．治療用オリゴヌクレオチドを４８週間投与し、８４用量のＴＬＲ７アゴニストを投与する、実施形態１４０～１４５のいずれか一つに記載の方法。
１４７．治療用オリゴヌクレオチド及びＴＬＲ７アゴニストの投与が同じ週に開始される、実施形態１４０～１４６のいずれか一つに記載の方法。
１４８．治療用オリゴヌクレオチドが皮下投与用の剤形であり、ＴＬＲ７アゴニストが経口投与用の剤形である、実施形態１４０～１４７のいずれか一つに記載の方法。
１４９．治療用オリゴヌクレオチドの用量が１００～１５０ｍｇ／ｍｌであり、ＴＬＲ７アゴニストの用量が１５０～１７０ｍｇである、実施形態１４０～１４８のいずれか一つに記載の方法。
１５０．治療用オリゴヌクレオチドが、ＨＢＶ ｍＲＮＡ転写物をコードする非表面抗原を標的とするＲＮＡｉオリゴヌクレオチドによる処置の非存在下で投与される、実施形態１４０～１４９のいずれか一つに記載の方法。
１５１．対象に、ＨＢｘＡｇ ｍＲＮＡ転写物を選択的に標的化するＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが投与されない、実施形態１４０～１５０のいずれか一つに記載の方法。
１５２．対象に有効量のエンテカビルを投与することをさらに含む、実施形態１４０～１５１のいずれか一つに記載の方法。
１５３．治療用オリゴヌクレオチドが、細胞内でオリゴヌクレオチドを発現するように操作された導入遺伝子の形態で送達される、実施形態１４０～１５２のいずれか一つに記載の方法。
１５４．細胞におけるＢ型肝炎ウイルス表面抗原の発現を減少させる方法であって、実施形態１～９１のいずれか一つに記載の医薬組合せ又は組成物を細胞に送達することを含む方法。
１５５．細胞が肝細胞である、実施形態１５４に記載の方法。
１５６．細胞がインビボである、実施形態１５４又は１５５に記載の方法。
１５７．細胞がインビトロである、実施形態１５４又は１５５に記載の方法。
１５８．治療用オリゴヌクレオチドが、細胞内でオリゴヌクレオチドを発現するように操作された導入遺伝子の形態で送達される、実施形態１５４～１５７のいずれか一つに記載の方法。
１５９．本明細書中において添付の図面を参照して実質的に記載される医薬組合せ、組成物、キット、使用、又は方法。
パートＡ：ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの効果
実施例Ａ１．ＨＢｓＡｇ発現の強力なオリゴヌクレオチド阻害剤の開発
ＨＢＶ表面抗原は、ＨＢＶ感染を処置するためのＲＮＡｉベースの治療の標的として同定された。図２０に示すＨＢＶゲノム構成に示すように、ＨＢｓＡｇは、単一のＯＲＦから転写された３つのＲＮＡ分子によってコードされる。オリゴヌクレオチドは、ＨＢｓＡｇアセンブリに寄与する１つ又は複数のＲＮＡ転写物をサイレンシングする目的で設計された（ＲＮＡｉ標的部位の例を図２０において「Ｘ」で示す）。ＨＢｓＡｇ標的化オリゴヌクレオチド、ＨＢＶ－２５４を設計し、インビトロ及びインビボで評価した。ＨＢＶ－２５４は、４つのＨＢＶ ＲＮＡ種についてｍＲＮＡ転写物を直接標的化する能力に基づいて選択及び設計された。実験に使用したＨＢＶ－２５４二重鎖オリゴヌクレオチドは、以下に示す配列のセンス鎖（５’から３’に示す）：ＧＵＧＧＵＧＧＡＣＵＵＣＵＣＵＣＡＡＵＡＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ（配列番号５５）；及び以下に示す配列のアンチセンス鎖（５’から３’に示す）：ＵＡＵＵＧＡＧＡＧＡＡＧＵＣＣＡＣＣＡＣＧＧ（配列番号５６）を含んでいた。
ＨＤＩマウスにおけるオリゴヌクレオチドＨＢＶ－２５４の単回用量評価を行い、ＨＢｓＡｇウイルス転写物を皮下標的化する能力を実証した（図２０）。示されるように、ＨＢＶ－２５４は、投与量の増加と共にマウスにおいてＨＢｓＡｇレベルを体系的に低下させた。前臨床効力を、ＨＢＶ－２５４を３ ｍｇ／ｋｇで皮下投与したＱＷ×３投薬レジメン後のマウスにおいてさらに評価した（図２３）。投与点は、図中に矢印で示されている。ＨＢｓＡｇレベルを、１４７日間にわたる期間、オリゴヌクレオチド処置マウス及び未処置対照マウスの両方でモニターした。減少したＨＢｓＡｇレベルは、試験全体を通して処置マウスで持続し、発現レベル（対照と比較して）は、初回投与後おおよそ２ヶ月で低下したベースラインで安定するように見えた。
さらなる強力なＨＢｓＡｇ標的化オリゴヌクレオチドを、未修飾テトラループ形態のオリゴヌクレオチドを用いたｐｓｉＣＨＥＣＫレポーターアッセイを用いたインビトロスクリーニングによって同定した。３つの異なるプレートからの結果を図１４に示す。ＨＢＶ－２５４を含む各オリゴヌクレオチドを、蛍光ベースのレポーターアッセイを使用してＨｅＬａ細胞において３つの濃度（１、１０、及び１００ｐＭ）で評価した。各プレートについて報告した結果を、陽性対照（８、４０、及び２００ｐＭ）、陰性対照（１ｎＭ）及び擬似トランスフェクションと比較してさらに示す。ボックスで強調して示したオリゴヌクレオチドをインビボ試験のためにスケールアップしたところ、ＨＢＶ－２１９及びＨＢＶ－２５８は、ＨＢＶ－２５４及びスクリーニングから同定されたオリゴヌクレオチドの中で最も強力なオリゴヌクレオチドであることが分かった。ＨＢＶ－２１９は、ＨＢＶ－２５４を超える効力の多重対数の改善を示し、さらなる評価のために選択された。
実施例Ａ２．全体的な治療有用性を高めるための配列保存分析及び工学的ミスマッチ
実施例Ａ１で評価した最も強力なオリゴヌクレオチドのいくつかを、ＨＢＶ遺伝子型Ａ－Ｉのゲノム配列と比較した。初期保存分析の結果を表１０に列挙する。示されるように、ＨＢＶ－２１９は、これらのゲノムにわたって比較的低い保存率を有する。しかしながら、ミスマッチ（ＭＭ）がガイド鎖の１５位に導入される場合、保存パーセントは有意に増加する（６６％から９６％）。参照により本明細書に組み込まれるＧｅｎＢａｎｋ公共データベースからの遺伝子型決定Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）配列データを、バイオインフォマティクスのキュレーション及びアラインメントに使用した。
Figure 2023509870000070
表１０からのオリゴヌクレオチドのいくつかに焦点を合わせ、より広い探索パラメータを伴うその後の保存解析を行った。例えば、最初の解析は完全長ゲノム配列のみを含んでいたのに対して、集中的な解析は完全長及び部分的（標的部位に対して８０％を超える同一性）配列を含んでいた。さらに、試験されたゲノムの数は、最初の解析での５，６２８から、集中的な解析では１７，０００を超えるゲノムに増加した。集中的な解析の結果は、最初の解析で観察された傾向と概ね一致した（表１１）。示され、さらに図１５に示されるように、ＨＢＶ－２１９は、ガイド鎖の１５位でのミスマッチが許容されない限り、ＨＢＶ遺伝子型Ｂ、Ｅ、Ｆ、Ｈ、及びＩに対して不活性であると予測された。
Figure 2023509870000071
Figure 2023509870000072
ｐｓｉＣＨＥＣＫ－２二重ルシフェラーゼレポーターシステムを利用して、ＨＢＶ－２１７、ＨＢＶ－２１９、ＨＢＶ－２５４、ＨＢＶ－２５５、及びＨＢＶ－２５８のそれぞれの選択された位置におけるミスマッチの影響を評価した。ｐｓｉＣＨＥＣＫベクターは、レポーター遺伝子に融合された標的遺伝子の発現の変化のモニタリングを可能にし、活性ＲＮＡｉが融合構築物を分解して、レポーターシグナルの対応する減少をもたらす。図１６の図は、これらのアッセイで利用されるベクターを一般的に示す。親部分レポーター配列は、Ｓ ＯＲＦ中の目的の標的部位の周りに遺伝子型Ａ（ＧｅｎＢａｎｋ：ＡＭ ２８２９８６．１）由来の１２０塩基対断片を含有していた。親オリゴヌクレオチド二重鎖配列は、図１６に示される対応する部位でレポータープラスミドと１００％の相同性を有するが、ミスマッチオリゴヌクレオチド二重鎖配列はレポータープラスミドとの単一ミスマッチを有する。試験したオリゴヌクレオチドの親配列及びミスマッチ配列を、対応する親部分レポーター配列に対してアラインメントして図１７に示す。
ミスマッチアッセイの例では、試験したオリゴヌクレオチドは同じ修飾パターンを含んでいた。図１７の各オリゴヌクレオチドについて示される番号付けスキームによれば、修飾は以下のとおりであった：１位の５’－メトキシ、ホスホネート－４’－オキシ－２’－Ｏ－メチルウリジン；２、３、５、７、８、１０、１２、１４、１６及び１９位の２’－フルオロ修飾ヌクレオチド；１、４、６、９、１１、１３、１５、１７、１８及び２０－２２位の２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド；並びに、１と２、２と３、３と４、２０と２１、及び２１と２２位におけるヌクレオチド間のホスホロチオエートヌクレオチド間結合。ミスマッチ位置は、親及びミスマッチ組ごとに異なり、図１７のボックスに示されている。
各オリゴヌクレオチドを用いたｐｓｉＣＨＥＣＫ２レポーターアッセイを、ＨｅＬａ細胞にトランスフェクトした１ｎＭで開始する６点、５倍の段階希釈を用いて３日間にわたって行った。１日目に、１０，０００個のＨｅＬａ細胞／ウェル（９６ウェル）を黒色壁の透明底プレートに播種した（８０～９０％コンフルエント）。２日目に、ベクターＤＮＡ及びＲＮＡｉ分子を、血清を含まない適切な量のＯｐｔｉ－ＭＥＭ（登録商標）Ｉ培地で希釈し、穏やかに混合した。リポフェクタミ（登録商標）２０００を穏やかに混合した後、各反応について、０．２μＬを血清を含まない２５μＬのＯｐｔｉ－ＭＥＭ（登録商標）Ｉ培地に希釈した。希釈物を穏やかに混合し、室温で５分間インキュベートした。５分間のインキュベーション後、等量の希釈したＤＮＡ及びＲＮＡｉ分子を希釈したリポフェクタミン（登録商標）２０００と合わせた。合わせた混合物を穏やかに混合し、室温で２０分間インキュベートして複合体形成を生じさせた。この後、ＤＮＡ－ＲＮＡｉ分子－リポフェクタミン（登録商標）２０００複合体を、細胞及び培地を含有する各ウェルに添加し、プレートを前後に揺動させることによって穏やかに混合した。次いで、細胞を回収して標的遺伝子をアッセイする準備ができるまで、細胞をＣＯ２インキュベーター中３７℃でインキュベートした。３日目に、１００μＬのＤｕａｌ－Ｇｌｏ Ｒｅａｇｅｎｔを各ウェルに添加し、混合し、１０分間インキュベートした後、発光を読み取った。さらに１００μＬのＤｕａｌ－Ｇｌｏ Ｓｔｏｐ＆Ｇｌｏを各ウェルに添加し、混合し、１０分間インキュベートした後、発光を読み取った。各親オリゴヌクレオチド及びミスマッチオリゴヌクレオチドについて用量応答曲線を作成して、活性に対するミスマッチの影響を評価した。各オリゴヌクレオチドについて決定されたＥＣ５０値を、追加の仕様と共に表１２に示す。
Figure 2023509870000073
Figure 2023509870000074
相対的なＥＣ５０値によって実証されるように、ＨＢＶ－２１９二重鎖についてのインビトロ用量応答曲線は、ガイド鎖の１５位に単一ミスマッチによる活性の喪失を示さなかった。ＨＢＶ－２１９親（本明細書ではＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ１と呼ばれる）とミスマッチオリゴヌクレオチド（本明細書ではＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２と呼ばれる）とを比較するその後のインビボ分析により、ミスマッチの導入が活性の損失をもたらさないことが確認された（図１８）。図１９に示す単回用量滴定プロットに示すように、ＨＢＶ－２１９ミスマッチオリゴヌクレオチド二重鎖（ＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２）は、投与後７０日間にわたってインビボで許容された。
図２０は、ミスマッチが組み込まれたＨＢＶ－２１９（本明細書ではＨＢＶ（ｓ）－２１９と呼ばれる）のための修正二重鎖構造の例を示す。図１７の各オリゴヌクレオチドについて示されるナンバリングスキームによれば、センス鎖はヌクレオチド１から３６に及んでおり、アンチセンス鎖はオリゴヌクレオチド１から２２に及んでおり、後者の鎖は右から左に向かってナンバリングされて示されている。二重鎖形態は、センス鎖の３６位とアンチセンス鎖の１位のヌクレオチド間に切れ目がある状態で示されている。センス鎖における修飾は以下のとおりであった：３、８～１０、１２、１３及び１７位の２’－フルオロ修飾ヌクレオチド；１、２、４～７、１１、１４～１６、１８～２６及び３１～３６位の２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド；１と２位のヌクレオチド間のホスホロチオエートヌクレオチド間結合；２７～３０位の２’－ＯＨヌクレオチド；２７位の２’－アミノジエトキシメタノール－グアニジン－ＧａｌＮＡｃ；並びに、２８、２９、及び３０位のそれぞれに２’－アミノジエトキシメタノール－アデニン－ＧａｌＮＡｃを含む。アンチセンス鎖における修飾は以下のとおりであった：１位の５’－メトキシ、ホスホネート－４’－オキシ－２’－Ｏ－メチルウリジンホスホロチオエート；２、３、５、７、８、１０、１２、１４、１６及び１９位の２’－フルオロ修飾ヌクレオチド；１、４、６、９、１１、１３、１５、１７、１８及び２０－２２位の２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド；並びに、１と２、２と３、３と４、２０と２１、及び２１と２２位におけるヌクレオチド間のホスホロチオエートヌクレオチド間結合。アンチセンス鎖は、１５位に組み込まれたミスマッチを含んでいた。また、示されるように、二重鎖のアンチセンス鎖は、２１～２２位にわたる「ＧＧ」オーバーハングを含んでいた。
ＨＢＶ（ｓ）－２１９及び上記の２つの前駆体（ＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ１及びＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２）に関する詳細を表１３に示す。
Figure 2023509870000075
実施例Ａ３：ＨＢＶ（ｓ）－２１９前駆体の抗ウイルス活性
ＨＢＶコア抗原（ＨＢｃＡｇ）の細胞内局在化に対するＨＢＶ（ｓ）－２１９前駆体による処置の効果を評価した。ＮＯＤｓｃｉｄマウスを、ＨＢＶゲノムの頭尾二量体の流体力学的注射（ＨＤＩ）に供した。オリゴヌクレオチドによる処置をＨＤＩの２週間後に開始した。処置後にマウスから単離した肝細胞の免疫組織化学染色は、ＨＢＶコア抗原（ＨＢｃＡｇ）発現の急激な減少を示した。
ＨＢＶウイルス転写物の全体的な発現に対するＨＢｓＡｇノックダウンの効果を調べるために、ＲＮＡ配列決定を行った。３回の週１回のそれぞれ３ｍｇ／ｋｇの投与の４日後に、肝細胞をＨＤＩマウスから単離した。肝細胞から全ＲＮＡを抽出し、ＨｉＳｅｑ Ｐｌａｔｆｏｒｍを用いてＩｌｌｕｍｉｎａシーケンシングを行った。図２１Ｂは、検出されたＲＮＡ転写物配列をＨＢＶ ＲＮＡに対してマッピングしたＲＮＡ配列決定結果を示す。ＨＢＶ（ｓ）－２１９及びその前駆体の標的部位も示されており、オリゴヌクレオチドがｐｇＲＮＡ（３．５ｋｂ）、Ｓ１（２．４ｋｂ）、及びＳ２（２．１ｋｂ）転写物を標的とすることを示している。結果は、ビヒクル対照と比較して、ＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ１による処置が、全てのＨＢＶウイルス転写物の９０％を超えるサイレンシングをもたらしたことを示している。
ＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ１オリゴヌクレオチドの持続時間効果を、ＨＢＶの２つの異なるマウスモデル、すなわちｃｃｃＤＮＡ依存性であるＨＤＩモデル及びｃｃｃＤＮＡ非依存性であるＡＡＶモデルで試験した。ＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡ発現の時間経過（１２週間）分析を、ＨＢＶのＨＤＩモデルにおいて、ビヒクル対照及びＨＢｘＡｇ ｍＲＮＡを標的とするＲＮＡｉオリゴヌクレオチドと比較して、ＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡを標的とするＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ１オリゴヌクレオチドを用いた３回の週１回の用量３ｍｇ／ｋｇを含む処置に関連して行った（図２２Ａ）。ＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ１オリゴヌクレオチドは、３．９ｌｏｇ以上の減少をもたらし、比較的長い活性持続期間が７週間を超えて持続した。一方、比較すると、ＨＢＶ（ｘ）標的化オリゴヌクレオチドは、約３．０ｌｏｇの減少をもたらし、より短い持続時間で持続した。
ＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡ発現のさらなる時間経過（１２週間）分析を、ＡＡＶ－ＨＢＶモデルにおいて、ビヒクル対照及びＨＢｘＡｇ ｍＲＮＡを標的とするＲＮＡｉオリゴヌクレオチドと比較して、ＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡを標的とするＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２オリゴヌクレオチドを用いた３回の週１回の用量３ｍｇ／ｋｇを含む処置に関連して行った（図２２Ｂ）。このモデルでは、ＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２オリゴヌクレオチドは、ＨＢＶ（ｘ）標的化オリゴヌクレオチドと同等の対数減少及び持続時間をもたらした。図２２Ａ及び図２２Ｂで使用されるＨＢｘＡｇ ｍＲＮＡを標的とするＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、ＵＧＣＡＣＵＵＣＧＣＧＵＣＡＣＣＵＣＵＡＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣのセンス鎖配列及びＵＡＧＡＧＧＵＧＡＣＧＣＧＡＡＧＵＧＣＡＧＧのアンチセンス鎖配列を有する。ＨＢｘＡｇを標的とするこのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、本明細書ではＧａｌＸＣ－ＨＢＶＸと呼ばれる。
上述のように、ビヒクル対照及びＨＢｘＡｇ ｍＲＮＡを標的とするＲＮＡｉオリゴヌクレオチドと比較して、ＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡを標的とする上記のＨＢＶ（ｓ）－２１９前駆体オリゴヌクレオチドでの処置後のＡＡＶ－ＨＢＶモデル及びＨＢＶのＨＤＩモデルから得られた肝細胞におけるＨＢｃＡｇの細胞内分布を調べるために、免疫組織化学染色を行なった。（図２３）処置後の残留コアタンパク質（ＨＢｃＡｇ）は、ＨＤＩモデルでは２つのＲＮＡｉオリゴヌクレオチド間の細胞内局在に顕著な差を示したが、ＡＡＶモデルでは示さなかった。
実施例Ａ４：ＰＸＢ－ＨＢＶキメラヒト肝臓モデル遺伝子型ＣにおけるＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ１の評価
ＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ１の抗ウイルス活性を、ＨＢＶ文献においてキメラヒト肝臓モデルとしても知られているＰＸＢ－ＨＢＶモデルにおいて評価した。この技術は、重度の免疫無防備状態のマウスにヒト肝細胞を移植し、次いで、宿主マウス肝細胞を毒する遺伝的機構を使用することに基づく（Ｔａｔｅｎｏ ｅｔ ａｌ．，２０１５）。このプロセスは、野生型マウスとは異なりＨＢＶに感染し得る、７０％よりも多くがヒト組織に由来する肝臓を含むマウスをもたらす（Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，２０１４）。ＰＸＢ－ＨＢＶモデルは、ＨＢＶ（ｓ）－２１９の薬理学に関連していくつかの目的を果たす。（１）オリゴヌクレオチドがインビボでヒトＲＮＡｉ機構（ＲＩＳＣ）と係合し得ることを確認すること、（２）ＧａｌＮＡｃ標的化リガンド構成がインビボでヒトＡＳＧＲを介して肝細胞に内在化し得ることを確認すること、及び（３）ＨＢＶ感染の真のモデル（ＨＢＶ発現の操作されたモデルとは対照的に）における有効性を確認すること。移植ヒト肝細胞が不規則なキメラ肝臓生理学をもたらすという制限にもかかわらず（Ｔａｔｅｎｏ ｅｔ ａｌ．，２０１５）、このモデルでは有意な抗ウイルス効果が観察され得る。
ＨＢＶ遺伝子型Ｃによるマウスの最初の感染のおおよそ８週間後、ベースラインＨＢｓＡｇ測定値として機能するように各マウスの血漿を収集する。次いで、各９匹のマウスのコホート（ＰＫについてはｎ＝３、ＰＤについてはｎ＝６）に、０（ＰＢＳ）又は３ｍｇ／ｋｇのＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ１の３回の毎週のＳＣ注射を行った。投与の最初の日を０日目と考える。非終末採血を毎週実施して、各マウスの血清ＨＢｓＡｇ及び循環ＨＢＶ ＤＮＡレベルを決定した（図２４Ａ～２４Ｄ）。マウスを２８日目に最終組織エンドポイントのために安楽死させた。２８日目に、肝臓試料を肝臓内ＨＢＶ ＤＮＡ及びｃｃｃＤＮＡレベルについて分析した。ＨＢｓＡｇの８０％超の減少、並びに循環ＨＢＶ ＤＮＡ、肝内ＨＢＶ ＤＮＡ、及びｃｃｃＤＮＡの有意な減少を含む、ＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ１で処置したマウスについて分析した全てのエンドポイントで有意な抗ウイルス活性が観察された（図２４Ａ～２４Ｄ）。これらのデータは、ＨＢＶ（ｓ）－２１９処置が全身投与後に感染ヒト肝細胞において抗ウイルス活性をもたらすことを実証している。
実施例Ａ５：ＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２はエンテカビルの抗ウイルス活性を増強する
現在の標準治療であるヌクレオ（シ）チド類似体（例えば、エンテカビル）は、循環ＨＢＶゲノムＤＮＡを減少させるのに有効であるが、循環ＨＢｓＡｇを減少させない。これは、そのような処置中にウイルス血症の制御をもたらすが、生涯にわたる処置が必要であり、機能的治癒はほとんど達成されない。Ｓ抗原を標的とするＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、ウイルスポリメラーゼとＨＢｓＡｇタンパク質の両方に影響を及ぼす。この研究では、単剤療法及びエンテカビルとの併用処置としてのＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２の併用効果を、抗ウイルス活性についてＨＢＶ発現マウス（ＨＤＩモデル）で調査した。
マウスには、５００ｎｇ／ｋｇのエンテカビル（ＥＴＶ）を１４日間にわたって毎日経口投与した。ＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２の単回皮下投与を行った。循環ウイルス量（ＨＢＶ ＤＮＡ）をｑＰＣＲによって測定し（図２５Ａ）、血漿ＨＢｓＡｇレベルをＥＬＩＳＡによって測定し（図２５Ｂ）、肝臓ＨＢＶ ｍＲＮＡ及びｐｇＲＮＡレベルをｑＰＣＲによって測定した。ＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２及びＥＴＶを用いた併用療法では、明らかな相加効果が観察された。結果は、ＥＴＶ療法単独では循環ＨＢｓＡｇ又は肝臓ウイルスＲＮＡに対する有効性は示されないことを示している。さらに、ＨＢｓＡｇ又はＨＢＶ ＲＮＡによって測定されるＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２の抗ウイルス活性は、ＥＴＶの同時投与によって影響されない（図２５Ｂ～２５Ｃ）。
図２５Ａ～図２５Ｃに示すように、５００ｎｇ／ｋｇ ＰＯで１４日間毎日投与したエンテカビルの単剤療法は、ＰＢＳ処置マウスと比較して、血漿中で検出されたＨＢＶ ＤＮＡの平均約１．６ｌｏｇ減少をもたらした（ｎ＝６）。循環ＨＢｓＡｇ又は肝臓ウイルスＲＮＡのいずれにおいても有意な減少は観察されなかった。０日目のＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２の単回の１ｍｇ／ｋｇ又は３ｍｇ／ｋｇのＳＣ用量の単剤療法は、それぞれ、ＰＢＳと比較して、ＨＢＶ ＤＮＡの平均約０．８ｌｏｇ又は約１．８ｌｏｇの減少が血漿中で検出された（ｎ＝７）。０日目のＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２の単回の６ｍｇ／ｋｇのＳＣ用量の単独療法は、血漿中のＨＢＶ ＤＮＡの平均約２．５ｌｏｇ減少をもたらし、２匹のマウスのレベルは検出限界未満に低下した（ｎ＝７）。０日目のＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２の単回のＳＣ用量の単剤療法は、循環ＨＢｓＡｇ並びに肝ウイルスＲＮＡの両方の用量依存的減少をもたらした。５００ｎｇ／ｋｇ ＰＯで１４日間毎日投与するエンテカビルと、０日目の単回の１ｍｇ／ｋｇのＳＣ用量のＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２との併用療法は、血漿中に検出されるＨＢＶ ＤＮＡの平均約２．３ｌｏｇの付加性の減少をもたらした。単回の１ｍｇ／ｋｇのＳＣ用量のＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２の単剤療法で観察される血漿ＨＢｓＡｇ及び肝臓ウイルス転写物のレベルの同様の減少は、血漿ＨＢＶ ＤＮＡの減少における付加性を示すが、循環ＨＢｓＡｇ又は肝臓ウイルス転写物では示さない。
実施例Ａ６．ＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２及びＧａｌＸＣ－ＨＢＶＸの抗ウイルス活性の比較
この試験では、ＨＢＶ発現マウス（ＨＤＩモデル）にＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２、ＧａｌＸＣ－ＨＢＶＸ（図２２Ａ及び２２Ｂで使用したＧａｌＸＣ－ＨＢＶＸと同じ配列）、又は２つのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの組合せを投与し、投与の２週間後又は９週間後に血漿ＨＢｓＡｇレベルをモニタリングした。図２６Ｂに示すように、ＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２、ＧａｌＸＣ－ＨＢＶＸ、又は両方の組合せのいずれかの単一飽和９ｍｇ／ｋｇ ＳＣ用量による処置の２週間後に、同様のレベルのＨＢｓＡｇ抑制が観察された。ＨＢｓＡｇの長期抑制は、Ｓ標的化ＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２処置で処置したマウスで観察されたが、ＧａｌＸＣ－ＨＢＶＸ、又は両方の組合せで処置したマウスは、処置９週間後にＨＢｓＡｇの有意な回復を示した（ｎ＝３）。
ＨＢＶ発現マウスにおけるＨＢＶコア抗原（ＨＢｃＡｇ）の細胞内局在化も、ＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２、ＧａｌＸＣ－ＨＢＶＸ、又は２つのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの組合せを投与したマウスで評価した。ＨＢＶ発現マウス（ＨＤＩモデル）を、単回飽和用量（９ｍｇ／ｋｇ、皮下）のＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２、ＧａｌＸＣ－ＨＢＶＸ、又は１：１の組合せで処置した。図２７Ａに示す時点で、肝臓切片をＨＢｃＡｇについて染色した。代表的な肝細胞を示す。単独療法として又はＧａｌＸＣ－ＨＢＶＸと組み合わせてＨＢＶ（ｓ）－２１９Ｐ２で処置されたコホートは、核ＨＢｃＡｇを特徴とする。ＧａｌＸＣ－ＨＢＶＳのみで処置したコホートは、ＨＢｃＡｇのサイトゾル局在化のみを示し、処置応答の好ましい予後指標として報告されている（Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．２０１８）。各動物における核染色を有するＨＢｃＡｇ陽性細胞のパーセンテージを図２７Ｂに示す（ｎ＝３／群、動物あたり５０個の細胞を計数、投与後２週間）。ＨＢｃＡｇ細胞内局在化に対する効果がＨＢＶトランスクリプトームの領域によるものであり、ＲＮＡｉ配列の未知の特性によるものではないことを確認するために、Ｘ及びＳオープンリーディングフレーム内を標的とする代替配列を設計及び試験した（図２７ Ｃを参照）。ＨＢＶ－２５４を図２７Ｃで使用した。ＨＢＶ－２５４の配列は、実施例Ａ１に記載されている。図２７Ｃで使用されるＨＢｘＡｇを標的とする代替オリゴヌクレオチドは、ＧＣＡＣＣＵＣＵＣＵＵＵＡＣＧＣＧＧＡＡＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣのセンス鎖配列及びＵＵＣＣＧＣＧＵＡＡＡＧＡＧＡＧＧＵＧＣＧＧのアンチセンス配列を有する。２つの代替ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドは、図２６Ｂで使用されるＲＮＡｉオリゴヌクレオチドとは異なるＲＮＡｉ標的配列をＳ抗原又はＸ抗原に有する。しかしながら、それらは血漿レベルＨＢｃＡｇに対して同じ差次的効果を示し、この効果はＳ抗原自体を標的とすることに特異的であるが、使用されるオリゴヌクレオチドには特異的ではないことを示している。
実施例Ａ７ 健康なヒト対象における安全性、耐容性及びＨＢＶ患者におけるＨＢＶ（ｓ）－２１９の有効性の評価
この研究は、健康な対象（グループＡ）における安全性及び忍容性並びにＨＢＶ患者（グループＢ）におけるＨＢＶ（ｓ）－２１９の有効性を評価するように設計されている。コホート情報による用量を図２８に示す。ＨＢＶ（ｓ）－２１９の分子構造を図２０、図２９Ａに示し、以下にも示す。
Figure 2023509870000076
患者選択基準を以下に示す。
グループＡ－健常者
選択基準：
１．インフォームドコンセントへの署名時の年齢は１８歳（又は法定同意年齢のうち年が上の方）以上６５歳以下である。
２．病歴、身体検査、検査を含む医学的評価によって決定されるスクリーニング時の明らかに健康
ａ．進行中の病気の症状なし
ｂ．体温、脈拍数、呼吸数、血圧に臨床的に有意な異常なし
ｃ．臨床的に重要な心血管疾患又は肺疾患、及び薬理学的投薬を必要とする心血管疾患又は肺疾患はない。
３．１２誘導心電図（ＥＣＧ）が正常範囲内であるか、治験責任医師の意見でスクリーニング時及び－１日目に臨床的に有意な異常がない
４．スクリーニング来院１回目及び入院時（－１日目）のアルコール又は乱用薬物に対する陰性スクリーニング
５．スクリーニング来院１回目の前の少なくとも５年間の非喫煙者であり、スクリーニング来院１回目に尿コチニン濃度が陰性
６．ボディーマス指数（ＢＭＩ）が１８．０以上３２．０ｋｇ／ｍ２以下の範囲。
７．男性又は女性：
ａ．男性参加者：
男性参加者は、処置期間中及び試験介入投与後少なくとも２週間は避妊を使用することに同意し、この期間中は精子を提供しないことに同意しなければならない。
ｂ．女性参加者：
女性参加者は、妊娠しておらず、母乳を与えておらず、かつ、以下の条件の少なくとも１つが適用される場合に参加する資格がある。妊娠可能な女性（ＷＯＣＢＰ）ではないか、又は地域によってはＷＯＣＢＰであり、試験登録時のスクリーニング後から、処置期間中及び試験介入投与後少なくとも１２週間、避妊の指導に従うことに同意する者。
８．要件及び制限の遵守を含む署名付きインフォームドコンセント１を与えることができる。
除外基準、グループＡ
１．試験薬の吸収、分布若しくは排出、又は本試験における臨床評価及び検査評価を妨害し得る医学的状態の病歴（これらに限定されない）；慢性若しくは再発性腎疾患、機能性腸障害（例えば、頻繁な下痢又は便秘）、消化管疾患、膵炎、発作性障害、皮膚粘膜若しくは筋骨格障害、自殺企図若しくは自殺念慮の病歴、又は臨床的に有意なうつ病若しくは薬理学的介入を必要とする他の精神神経障害
２．制御不良又は不安定な高血圧；又はスクリーニング時に１５０ｍｍＨｇを超える持続性収縮期ＢＰ又は９５ｍｍＨｇを超える拡張期ＢＰ
３．インスリン又は血糖降下薬で処置された真性糖尿病の病歴
４．過去１２ヶ月以内に入院を必要とする喘息の病歴
５．中央研究室でのスクリーニング結果によって決定されるＧ－６－ＰＤ欠損の証拠
６．薬理学的に処置中の甲状腺疾患は除き、甲状腺疾患（甲状腺機能亢進症／甲状腺機能低下症など）を除く現在制御不良の内分泌疾患。
７．参加者の悪性腫瘍が化学療法から完全に寛解しており、過去３年間に追加の医学的又は外科的介入がない場合、悪性腫瘍の病歴が許容される。
８．多剤アレルギーの病歴又はオリゴヌクレオチド若しくはＧａｌＮＡｃに対するアレルギー反応の病歴
９．試験介入投与又は局所忍容性の評価を潜在的に妨げる可能性があるＳＣ注射に対する不耐性の病歴又は著しい腹部瘢痕
１０．臨床的に関連する手術歴
１１．過去３年以内の持続的エタノール乱用（＞４０ｇｍエタノール／日）又は違法薬物使用歴。
１２．試験介入投与前７日以内の臨床的に有意な疾患
１３．試験介入投与前２ヶ月以内の５００ｍＬを超える血液の提供又はスクリーニング前７日以内の血漿提供
１４．スクリーニング時に進行中の重大な感染又は既知の炎症プロセス（治験責任医師の意見による）
１５．慢性若しくは再発性尿路感染（ＵＴＩ）又はスクリーニング前１ヶ月以内のＵＴＩの病歴
１６．本研究の実施中の選択的外科処置の予定
１７．試験介入投与前４週間以内の処方薬の使用
１８．治験責任医師及び治験依頼者によって臨床的に関連がないと合意された場合を除き、初回投与から７日以内の市販薬（ＯＴＣ）の医薬品又はハーブサプリメント（日常的なビタミンを除く）の使用。
１９．投与前３ヶ月以内に治験薬を投与されたことがあるか、又は試験登録前に別の臨床試験のフォローアップ中である。
２０．スクリーニング時にＨＢＶ、ＨＩＶ、ＨＣＶ、又はＨＤＶのいずれかについて抗体陽性（スクリーニング前３ヶ月以内に行われた場合は、過去の試験を使用してもよい）
２１．スクリーニング来院時又は入院時（－１日目）に、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、γ－グルタミルトランスフェラーゼ（ＧＧＴ）、総ビリルビン、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）又はアルブミンが基準範囲外である
２２．治験責任医師が臨床的に関連があり許容できないと考えられる完全な血球カウント試験の異常；ヘモグロビン＜１２．０ｇ／ｄＬ（１２０ｇ／Ｌ相当）；正常範囲外の血小板。
２３．ヘモグロビンＡ１Ｃ（ＨｂＡ１Ｃ）＞７％
２４．治験責任医師が臨床的に有意で許容できないと考えられるその他の安全性検査結果
２５．臨床研究センターに入る４８時間前から試験終了までの運動レベルの有意な変化があったか、又はそのような予定がある。
２６．治験責任医師の意見において、参加者を登録に適さないものにする、又は試験への参加若しくは試験の完了を妨げる可能性がある任意の条件。
グループＢ Ｂ型肝炎を有する成人
選択基準、グループＢ
１．インフォームドコンセントへの署名時の年齢は１８歳（又は法定同意年齢のうち年が上の方）以上６５歳以下である。
２．以下によって文書化される慢性Ｂ型肝炎感染：
ａ．適合する臨床情報、並びにＨＢｓＡｇ及び潜在的に他のＨＢＶ血清学的マーカー（ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶ ＤＮＡ）についての以前の血清陽性に基づく、ＣＨＢに適合する病歴
ｂ．ＨＢｅＡｇ陽性患者についてはスクリーニング時の血清ＨＢｓＡｇ＞１０００ＩＵ／ｍＬ、又は、ＨＢｅＡｇ陰性患者についてはスクリーニング時の血清ＨＢｓＡｇ＞５００ＩＵ／ｍＬ
ｃ．中央研究室でのＴａｑＭａｎ（商標）ＨＢＶ ＤＮＡ ｖ２．０アッセイによって決定される、処置未経験患者のスクリーニング時の血清ＨＢＶ ＤＮＡ＞２０，０００ＩＵ／ｍＬ
ｄ．血清ＩｇＭ抗ＨＢｃ陰性
３．代償性肝疾患に適合する病歴、肝硬変の証拠なし：
ａ．食道又は胃腸静脈瘤からの出血の病歴なし
ｂ．腹水の病歴なし
ｃ．慢性肝疾患に起因する黄疸の病歴なし
ｄ．肝性脳症の病歴なし
ｅ．門脈圧亢進症の物理的徴候なし－クモ状血管腫など
ｆ．肝硬変を示す以前の肝生検、肝臓の画像検査、又はエラストグラフィ結果なし
４．Ｂ型肝炎未処置：Ｂ型肝炎に対する以前の抗ウイルス療法なし（以前のＨＢＶヌクレオシ［チ］ド又はインターフェロン含有処置なし）、又は、スクリーニング来院前の少なくとも１２週間にわたってヌクレオシ（チ）ド療法（エンテカビル又はテノホビル）を継続的に行い、十分な耐性及びコンプライアンスを有する
５．血清ＡＬＴ＞６０Ｕ／Ｌ（男性）又は＞３８Ｕ／Ｌ（女性）（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｓｔｕｄｙ ｏｆ Ｌｉｖｅｒ Ｄｉｓｅａｓｅｓ（ＡＡＳＬＤ）ＨＢＶガイダンス基準による２×ＵＬＮ、Ｔｅｒｒａｕｌｔ ｅｔ ａｌ．，２０１６）
６．１２ＥＣＧがスクリーニング時及び－１日目に臨床的に有意な異常がない（治験責任医師の意見）
７．肝疾患の他の公知の原因がない
８．十分に管理された高血圧及び高コレステロール血症のスタチン管理以外に、持続的な医学的管理又は慢性的若しくは反復的な薬理学的介入を必要とする他の医学的状態がない
９．ＢＭＩが１８．０以上３２．０ｋｇ／ｍ２以下の範囲
１０．男性又は女性
ａ．男性参加者：
男性参加者は、処置期間中及び試験介入の最終投与後１２週間は避妊を使用することに同意し、この期間中は精子を提供しないことに同意しなければならない。
ｂ．女性参加者：
女性参加者は、妊娠しておらず、母乳を与えておらず、かつ、以下の条件の少なくとも１つが適用される場合に参加する資格がある。ＷＯＣＢＰではないか、又は地域によってはＷＯＣＢＰであり、処置期間中及び試験介入投与後少なくとも１２週間、避妊の指導に従うことに同意する者。
１１．要件及び制限の遵守を含む署名付きインフォームドコンセントを与えることができる。
除外基準、グループＢ
１．試験薬の吸収、分布若しくは排出、又は本試験における臨床評価及び検査評価を妨害し得る医学的状態の病歴（これらに限定されない）；慢性若しくは再発性腎疾患、機能性腸障害（例えば、頻繁な下痢又は便秘）、消化管疾患、膵炎、発作性障害、皮膚粘膜若しくは筋骨格障害、自殺企図若しくは自殺念慮の病歴、又は臨床的に有意なうつ病若しくは薬理学的介入を必要とする他の精神神経障害
２．制御不良又は不安定な高血圧
３．インスリン又は血糖降下薬で処置された真性糖尿病の病歴
４．過去１２ヶ月以内に入院を必要とする喘息の病歴
５．中央研究室でのスクリーニング結果によって決定されるＧ－６－ＰＤ欠損の証拠
６．薬理学的に処置中の甲状腺疾患は除き、甲状腺疾患（例えば、甲状腺機能亢進症／甲状腺機能低下症など）を除く現在制御不良の内分泌疾患。
７．慢性若しくは再発性ＵＴＩ又はスクリーニング前１ヶ月以内のＵＴＩの病歴
８．ＨＣＣの病歴
９．患者の悪性腫瘍が化学療法から完全に寛解しており、過去３年間に追加の医学的又は外科的介入がない場合、ＨＣＣ以外の悪性腫瘍の病歴が許容され得る。
１０．過去３年以内の持続的エタノール乱用（＞４０ ｇｍエタノール／日）又は違法薬物使用歴。
１１．試験介入投与又は局所忍容性の評価を潜在的に妨げる可能性があるＳＣ注射に対する不耐性の病歴又は著しい腹部瘢痕。
１２．治療前の最後の６週間における輸血の受領、又は試験後フォローアップによる予想される輸血。
１３．スクリーニング前２ヶ月以内に５００ｍＬ超の血液の提供若しくは喪失、又はスクリーニング前７日間以内の血漿提供
１４．スクリーニングから３ヶ月以内の抗ウイルス療法（エンテカビル又はテノホビル以外）又は過去３年間のインターフェロンによる処置
１５．抗凝固剤、全身投与されたコルチコステロイド、全身投与された免疫調節剤、又は全身投与された免疫抑制剤の最近６ヶ月以内の使用（又は予想される必要性）
１６．ＰＩ又は試験依頼人の意見では試験実施を妨げるであろう試験介入の投与前１４日以内の処方薬の使用。全身吸収のない局所製品、スタチン（ロスバスタチンを除く）、高血圧薬、ＯＴＣ及び処方薬の鎮痛薬又はホルモン避妊薬（女性）は許容され得る。
１７．注入可能／埋め込み可能な受胎制御を除いて、試験介入投与前３ヶ月以内の任意の薬物のデポー注射又はインプラント。
１８．ハーブサプリメント又は全身性の市販薬の持続使用；参加者は、試験期間中に停止する意思がなければならない
１９．投与前３ヶ月以内に治験薬を投与されたことがあるか、又は試験登録前に別の臨床試験のフォローアップ中である。
２０．スクリーニング時の肝臓エラストグラフィ（すなわち、ＦｉｂｒｏＳｃａｎ（登録商標））ｋＰａ＞１０．５
２１．スクリーニング時の１０分間の仰臥位後の収縮期血圧＞１５０ ｍｍＨｇ及び拡張期血圧＞９５ｍｍＨｇ。
２２．スクリーニング時に７×ＵＬＮ超が確認された肝トランスアミナーゼ（ＡＬＴ又はＡＳＴ）
２３．既知のギルバート病又はデュビン・ジョンソン症候群でない限り、持続性又は再発性の高ビリルビン血症の病歴
２４．ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）又はＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）又はデルタ肝炎ウイルス（ＨＤＶ）に対する抗体に対して血清陽性である
２５．Ｈｇｂ＜１２ｇ／ｄＬ（男性）又は＜１１ｇ／ｄＬ（女性）
２６．スクリーニング時の血清アルブミン＜３．５ｇ／ｄＬ。
２７．スクリーニング時の総ＷＢＣ数＜４，０００細胞／μＬ又は絶対好中球数（ＡＮＣ）＜１８００細胞／μＬ。
２８．スクリーニング時の血小板数≦１００，０００／μＬ。
２９．スクリーニング時の正常基準範囲の上限（局所検査室基準範囲による）を超える国際標準化比（ＩＮＲ）又はプロトロンビン時間（ＰＴ）。
３０．血清ＢＵＮ又はクレアチニン＞ＵＬＮ
３１．血清アミラーゼ又はリパーゼ＞１．２５×ＵＬＮ
３２．血清ＨｂＡ１ｃ＞７．０％
３３．血清アルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）値＞１００ｎｇ／ｍＬ。スクリーニング時のＡＦＰが＞ＵＬＮであるが＜１００ｎｇ／ｍＬである場合、肝画像検査でＨＣＣの可能性が疑われる病変が示されない場合、患者は適格である
３４．治験責任医師が臨床的に有意で許容できないと考えられるその他の安全性検査結果
３５．臨床研究センターに入る４８時間前から試験終了までの運動レベルの有意な変化があったか、又はそのような予定がある。
３６．治験責任医師の意見において、参加者を登録に適さないものにする、又は試験への参加若しくは試験の完了を妨げる可能性がある任意の条件。
パートＢ：ＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチドの効果
材料及び方法
ＡＡＶ／ＨＢＶマウスモデル
ＡＡＶ－ＨＢＶマウスモデルは、複製可能なＨＢＶゲノムを有する組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ－ＨＢＶ）をＣ５７ＢＬ／６マウスに注射することによって生成される。ｒＡＡＶ８－１．３ ＨＢＶ ａｙｗウイルスストックは、Ｂｅｉｊｉｎｇ ＦｉｖｅＰｌｕｓ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（中国、北京）から購入した。動物（雄、到着時４～５週齢）をＳＬＡＣ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃｏ．Ｌｔｄ（中国、上海）から購入し、動物施設で５～７日間馴化させ、次いで、尾静脈を通して１×１０１１ベクターゲノムのＡＡＶ－ＨＢＶ（２００μＬのＰＢＳで希釈）を注射した。ＨＢＶゲノムの持続的発現は、３週間後に確立することができ、マウス血清中のＨＢＶ ＤＮＡ、ＨＢｓＡｇ、及びＨＢｅＡｇを含む高レベルのＨＢＶウイルスマーカーを有する。Ｃ５７ＢＬ／６マウスの安定なＨＢＶウイルス血症及びコンピテント免疫系を用いて、ＡＡＶ－ＨＢＶマウスモデルを使用して、化合物のインビボ抗ＨＢＶ有効性を評価した。ＡＡＶ－ＨＢＶ研究の生存中の部分は、Ｃｏｖａｎｃｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ（Ｓｈａｎｇｈａｉ）Ｃｏ．Ｌｔｄ．（Ｃｏｖａｎｃｅ Ｓｈａｎｇｈａｉ）の契約サービスを通して実施し、血清を使用する寿命後の分析は、Ｒｏｃｈｅ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ Ｓｈａｎｇｈａｉ（ＲＩＣＳ）の内部で実施した。
化合物処置の７日前に、血清調製のために血液試料を採取し（約１５μＬ）、ＨＢＶ ＤＮＡ、血清中のＨＢｓＡｇレベル及び体重に基づいて、ＡＡＶ－ＨＢＶ感染動物を異なる処置群に層別化した。
生理食塩水（群０１）及び１．５又は７．５ｍｇ／ｋｇのＣＭＰ番号１５＿１の抗ＨＢＶ ＡＳＯを、０～４９日目の間、０、７、１４、２１、２８、３５、４２及び４９日目に、週に１回皮下投与した。ＣＭＰ番号ＶＩのＴＬＲ７アゴニスト（１００ｍｇ／ｋｇ）を、０～５５日目の間、１日おきに１回（ＱＯＤ）、又は０～４９日目の間、０、７、１４、２１、２８、３５、４２及び４９日目に週１回（ＱＷ）、経口胃管栄養法によって投与した。動物は、研究全体を通してサンプル採取のために眼窩後洞を介して毎週採血した。
オリゴヌクレオチド合成
オリゴヌクレオチド合成は、当技術分野で一般に知られている。以下は、適用できるプロトコルである。本発明のオリゴヌクレオチドは、使用される装置、支持体、及び濃度に関してわずかに異なる方法によって、生成されている場合がある。
オリゴヌクレオチドは、Ｏｌｉｇｏｍａｋｅｒ ４８のホスホロアミダイトアプローチを１μｍｏｌスケールで用いて、ウリジンユニバーサル支持体上で合成される。合成の最後に、水性アンモニアを使用して６０℃で５～１６時間、オリゴヌクレオチドを固相支持体から切断する。オリゴヌクレオチドは逆相ＨＰＬＣ（ＲＰ－ＨＰＬＣ）又は固相抽出によって精製され、ＵＰＬＣによって特徴付けられ、分子量はさらにＥＳＩ－ＭＳによって確認される。
オリゴヌクレオチドの伸長：
β－シアノエチル－ホスホロアミダイトのカップリング（ＤＮＡ－Ａ（Ｂｚ）、ＤＮＡ－Ｇ（ｉｂｕ）、ＤＮＡ－Ｃ（Ｂｚ）、ＤＮＡ－Ｔ、ＬＮＡ－５－メチル－Ｃ（Ｂｚ）、ＬＮＡ－Ａ（Ｂｚ）、ＬＮＡ－Ｇ（ｄｍｆ）、又はＬＮＡ－Ｔ）は、アセトニトリル中の０．１Ｍの５’－Ｏ－ＤＭＴ保護アミダイト及びアセトニトリル（０．２５Ｍ）中のＤＣＩ（４，５－ジシアノイミダゾール）の溶液を活性剤として用いて行われる。最終サイクルでは、所望の修飾を有するホスホロアミダイト、例えばコンジュゲート基を結合するためのＣ６リンカ、又はそのようなコンジュゲート基を使用できる。ホスホロチオエート結合を導入するためのチオール化は、水素化キサンタン（アセトニトリル／ピリジン９：１中０．０１Ｍ）を使用することにより行われる。ホスホジエステル結合は、ＴＨＦ／ピリジン／水７：２：１中の０．０２Ｍヨウ素を用いて導入できる。残りの試薬は、オリゴヌクレオチド合成に通常使用される試薬である。
固相合成後のコンジュゲーションでは、固相合成の最後のサイクルで市販のＣ６アミノリンカーホスホラミダイトを使用でき、脱保護及び固相支持体からの切断後、アミノ結合脱保護オリゴヌクレオチドが分離される。コンジュゲートは、標準的な合成方法を使用した官能基の活性化によって導入される。
ＲＰ－ＨＰＬＣによる精製：
粗化合物は、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｊｕｐｉｔｅｒ Ｃ１８ １０μ １５０×１０ｍｍカラムでの分取ＲＰ－ＨＰＬＣにより精製される。０．１Ｍ酢酸アンモニウムｐＨ８及びアセトニトリルを５ｍＬ／分の流速で緩衝液として使用する。収集された画分を凍結乾燥して、精製された化合物を典型的には白色固体として得る。
略語：
ＤＣＩ：４，５－ジシアノイミダゾール
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ＤＭＴ：４，４’－ジメトキシトリチル
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
Ｂｚ：ベンゾイル
Ｉｂｕ：イソブチリル
ＲＰ－ＨＰＬＣ：逆相高速液体クロマトグラフィ
Ｔｍアッセイ：
オリゴヌクレオチドとＲＮＡ標的（リン酸結合、ＰＯ）二重鎖は、５００ｍｌのＲＮａｓｅフリー水で３ｍＭに希釈され、５００ｍｌの２ｘＴｍバッファー（２００ｍＭ ＮａＣｌ、０．２ｍＭ ＥＤＴＡ、２０ｍＭリン酸、ｐＨ７．０）と混合される。この溶液を９５℃で３分間加熱し、次いで、室温で３０分間アニールする。二重鎖の融解温度（Ｔｍ）は、ＰＥ Ｔｅｍｐｌａｂソフトウェア（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて、ペルチェ温度プログラマＰＴＰ６を備えたＬａｍｂｄａ ４０ ＵＶ／ＶＩＳ分光光度計で測定する。温度を２０℃から９５℃に上昇させ、次いで２５℃に低下させ、２６０ｎｍで吸収を記録する。一次導関数と、融解及びアニーリングの両方の極大値とを使用して、二重鎖Ｔｍを評価する。
組織特異的インビトロリンカー切断アッセイ
試験する生体切断可能なリンカー（例えば、ＤＮＡホスホジエステルリンカー（ＰＯリンカー））を有するＦＡＭ標識オリゴヌクレオチドを、関連する組織（例えば、肝臓又は腎臓）及び血清のホモジネートを使用してインビトロ切断に供する。
組織及び血清試料を適切な動物（例えば、マウス、サル、ブタ又はラット）から収集し、ホモジナイゼーションバッファー（０．５％ Ｉｇｅｐａｌ ＣＡ－６３０、２５ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ８．０、１００ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ８．０（１Ｎ ＮａＯＨで調整））中でホモジナイズする。組織ホモジネート及び血清にオリゴヌクレオチドを添加して、２００μｇ／ｇ組織の濃度にする。試料を３７ｏＣで２４時間インキュベートし、その後、試料をフェノール－クロロホルムで抽出する。Ｄｉｏｎｅｘ ＤＮＡｐａｃ ｐ－１００カラム及びｐＨ ７．５で１０ ｍＭ～１Ｍ過塩素酸ナトリウムの範囲の勾配を使用して、Ｄｉｏｎｅｘ Ｕｌｔｉｍａｔｅ ３０００で溶液をＡＩＥ ＨＰＬＣ分析に供する。切断されたオリゴヌクレオチド及び切断されていないオリゴヌクレオチドの含有量を、６１５ｎｍの蛍光検出器及び２６０ｎｍのＵＶ検出器の両方を使用して標準に対して決定する。
Ｓ１ヌクレアーゼ切断アッセイ
Ｓ１ヌクレアーゼ感受性リンカー（例えば、ＤＮＡホスホジエステルリンカー（ＰＯリンカー））を有するＦＡＭ標識オリゴヌクレオチドを、Ｓ１ヌクレアーゼ抽出物又は血清においてインビトロ切断に供する。
１００μＭのオリゴヌクレオチドを、ヌクレアーゼ緩衝液（６０Ｕｐｒ．１００μＬ）中のＳ１ヌクレアーゼによるインビトロ切断に２０分間及び１２０分間供する。緩衝液にＥＤＴＡを添加することによって酵素活性を停止する。Ｄｉｏｎｅｘ ＤＮＡｐａｃ ｐ－１００カラム及びｐＨ ７．５で１０ ｍＭ～１Ｍ過塩素酸ナトリウムの範囲の勾配を使用して、Ｄｉｏｎｅｘ Ｕｌｔｉｍａｔｅ ３０００で溶液をＡＩＥ ＨＰＬＣ分析に供する。切断されたオリゴヌクレオチド及び切断されていないオリゴヌクレオチドの含有量を、６１５ｎｍの蛍光検出器及び２６０ｎｍのＵＶ検出器の両方を使用して標準に対して決定する。
ＨＢｓＡｇ抗原測定
製造業者のプロトコルに従って、ＨＢｓＡｇ化学発光免疫アッセイ（ＣＬＩＡ）（Ａｕｔｏｂｉｏ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｃｏ．Ｌｔｄ．，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ，Ｃｈｉｎａ，カタログ番号ＣＬ０３１０－２）を使用して、感染ＡＡＶ－ＨＢＶマウスの血清中の血清ＨＢｓＡｇレベルを決定した。簡単に説明すると、５０μｌの血清を抗体コーティングマイクロタイタープレートに移し、５０μｌの酵素コンジュゲート試薬を添加した。プレートを振盪機上で室温にて６０分間インキュベートした後、自動洗浄機を用いて洗浄緩衝液により全ウェルを６回洗浄した。２５μｌの基質Ａ、次いで２５μｌの基質Ｂを各ウェルに添加した。プレートを室温にて１０分間インキュベートした後、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ発光リーダ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて発光を測定した。ＨＢｓＡｇは単位ＩＵ／ｍｌで与えられる；式中、１ｎｇのＨＢｓＡｇ＝１．１４ＩＵである。
ＨＢｅＡｇレベルは、製造業者のプロトコル及びＨＢｓＡｇについて上記に記載された簡単な説明に従って、ＣＬＩＡ ＥＬＩＳＡキット（Ａｕｔｏｂｉｏ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ＃ＣＬ０３１０－２）を使用して同様に測定することができる。
ＨＢＶ感染細胞からの細胞内ＨＢＶｍＲＮＡのリアルタイムＰＣＲ
ＨＢＶ ｍＲＮＡは、ＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ １２Ｋ Ｆｌｅｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）、ＴａｑＭａｎ ＲＮＡ－ｔｏ－ＣＴ １－Ｓｔｅｐ Ｋｉｔ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、＃４３９２９３８）、Ｈｕｍａｎ ＡＣＴＢ内因性対照（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、＃４３１０８８１Ｅ）を使用してｑＰＣＲによって技術的に二重で定量することができる。Ｔａｑｍａｎ試薬を以下の市販のＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃプライマー（ＨＢＶ Ｐａ０３４５３４０６＿ｓ１，ＡＣＴＢ ４３１０８８１Ｅ）と共に使用する。ｍＲＮＡ発現は、参照遺伝子ＡＣＴＢ及びＰＢＳ処置細胞に対して正規化した比較サイクル閾値２－ΔΔＣｔ法を用いて分析する。
ＨＢＶ ＤＮＡ抽出及びｑＰＣＲ
最初に、マウス血清をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で１０倍（１：１０）に希釈した。ＭａｇＮＡ Ｐｕｒｅ ９６（Ｒｏｃｈｅ）ロボットを用いてＤＮＡを抽出した。５０μｌの希釈血清を、２００ｕｌのＭａｇＮＡ Ｐｕｒｅ ９６外部溶解緩衝液（Ｒｏｃｈｅ、カタログ番号番号０６３７４９１３００１）を含む処理カートリッジ中で混合し、１０分間インキュベートした。次いで、「ＭａｇＮＡ Ｐｕｒｅ ９６ ＤＮＡ ａｎｄ Ｖｉｒａｌ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｓｍａｌｌ Ｖｏｌｕｍｅ Ｋｉｔ」（Ｒｏｃｈｅ、カタログ番号０６５４３５８８００１）及び「Ｖｉｒａｌ ＮＡ Ｐｌａｓｍａ ＳＶ ｅｘｔｅｒｎａｌ ｌｙｓｉｓ ２．０」プロトコルを使用してＤＮＡを抽出した。ＤＮＡ溶出体積は５０μｌであった。
抽出されたＨＢＶ ＤＮＡの定量を、Ｔａｑｍａｎ ｑＰＣＲ装置（ＶｉｉＡ７，ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓを使用して行った。各ＤＮＡ試料をＰＣＲで２連で試験した。５μｌのＤＮＡ試料を、３８４ウェルプレート中の１０μｌのＴａｑＭａｎ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号４３６９０１６）、０．５μｌのＰｒｉｍｅＴｉｍｅ ＸＬ ｑＰＣＲ Ｐｒｉｍｅｒ／Ｐｒｏｂｅ（ＩＤＴ）及び４．５μｌの蒸留水を含有する１５μｌのＰＣＲマスターミックスに加え、ＰＣＲを、以下の設定を使用して行った：ＵＤＧインキュベーション（２分、５０℃）、酵素活性化（１０分、９５℃）及びＰＣＲ（変性のために１５秒、９５°、アニーリング及び伸長のために１分、６０℃の４０サイクル）。ＤＮＡコピー数は、ＶｉｉＡ７ソフトウェアによるＨＢＶプラスミドＤＮＡ標準曲線に基づくＣｔ値から計算した。
ＴａｑＭａｎプライマーの配列を表１４に示す。
Figure 2023509870000077
ＺＥＮは内部クエンチャである。
実施例Ｂ１
この研究は、ＨＢＶを標的とするＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチド（抗ＨＢＶ ＡＳＯ）とＴＬＲ７アゴニストとの組合せが、ＨＢＶインビボ有効性マウスモデルを使用して有益な抗ウイルス効果を有するという証拠を提供することを目的とする。
ＨＢＶを標的とするＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチド（抗ＨＢＶ ＡＳＯ）などの直接作用型抗ウイルス薬と、ｔｏｌｌ様受容体７のアゴニスト（ＴＬＲ７アゴニスト）などの免疫調節薬との組合せは、慢性ＨＢＶ処置において、各個々の化合物単独の単剤療法の活性から予測できない方法で複合効果に影響を及ぼす可能性がある。
インビボ系における抗ＨＢＶ ＡＳＯとＴＬＲ７アゴニストの組合せを評価するために、慢性ＨＢＶ感染のマウスモデルを使用した。材料及び方法に記載されているＡＡＶ／ＨＢＶマウスモデルでは、持続的なＨＢＶ感染が確立され、血漿中で検出可能なウイルスマーカー（ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶ ＤＮＡ）の発現をもたらす。１．５ｍｇ／ｋｇ又は７．５ｍｇ／ｋｇで投与されたＣＭＰ番号１５＿１（表２及び図４）の抗ＨＢＶ ＡＳＯ及び１００ｍｇを１日おき（ＱＯＤ）又は週に１回（ＱＷ）で投与されたＣＭＰ番号ＶＩ（表３）のＴＬＲ７アゴニストによる処置時のこれらのウイルスマーカーに対する効果を、単独療法又は組合せて評価した。
表１５～表１８は、異なる投与量での処置後の血清ＡＡＶ／ＨＢＶマウスにおけるＨＢＶ－ＤＮＡレベルを示す。データは、図９Ａ～図９Ｄにも表されている。
Figure 2023509870000078
Figure 2023509870000079
Figure 2023509870000080
Figure 2023509870000081
Figure 2023509870000082
表１５～表１８及び図９Ａ～図９Ｄは、ＣＭＰ番号１５＿１及びＣＭＰ番号ＶＩの投与の示された組合せについて、研究の期間にわたるウイルスマーカーＨＢＶ－ＤＮＡの変化を示す。アッセイのより低い定量レベル（ＬＬＯＱ）未満へのＨＢＶ－ＤＮＡの急速な減少は、１．５ｍｇ／ｋｇ及び７．５ｍｇ／ｋｇの両方でのＣＭＰ番号１５＿１（抗ＨＢＶ ＡＳＯ）単独療法について（図９Ａ及びＣ）、並びに任意の濃度の抗ＨＢＶ ＡＳＯを含有する任意の組合せについて（図９Ａ～図９Ｄ、実線）見られた。対照的に、ＴＬＲ７アゴニスト（ＣＭ番号ＶＩ）単独で処置した場合、１日おきに投与した場合（ＱＯＤ）にのみＨＢＶ－ＤＮＡの減少がＬＬＯＱに達した（図９Ａ及びＣ）。ＱＷ投与では（図９Ｂ及び図９Ｄ）、ＴＬＲ７アゴニスト単剤療法で約１．５－ｌｏｇの最大減少が達成された。
投与終了後、ＨＢＶ－ＤＮＡレベルは全ての処置群で部分的にリバウンドし、１．５ｍｇ／ｋｇ用量の単剤療法で抗ＨＢＶ ＡＳＯについて最大の絶対リバウンドが見られた（図９Ａ及び図９Ｂ）。この群のＨＢＶ ＤＮＡ血漿レベルは、対照群の１／２ｌｏｇ以内に戻った。同様に、ＴＬＲ７アゴニスト処置動物のリバウンドは、ＱＯＤ又はＱＷ投与の単独療法であるかにかかわらず、フォローアップ期間中に対照群の１ｌｏｇ以内に戻った。このリバウンドは、抗ＨＢＶ ＡＳＯの場合と同じ大きさではないが、抗ＨＢＶ ＡＳＯ処置群からも処置終了後に早く起こった。
抗ＨＢＶ ＡＳＯとＴＬＲ７アゴニストとの組合せで処置した群でＨＢＶ ＤＮＡによって測定されるリバウンドは、各単一化合物での処置と比較して常に遅延した。注目すべきことに、高用量抗ＨＢＶ－ＡＳＯの開始遅延及びリバウンド動態は、ＴＬＲ７アゴニストの頻繁な投与とあまり頻繁でない投与との組合せの間で同様であり、リバウンドは、それぞれ９１日目及び８４日目に始まった。興味深いことに、最も低い併用用量（図８Ｂ）では、リバウンドは、高ＴＬＲ７アゴニスト低抗ＨＢＶ ＡＳＯ用量（図８Ａ）の場合より遅い８４日目に始まるようであり、７７日目にリバウンドが観察される。したがって、抗ＨＢＶ ＡＳＯ及びＴＬＲ７アゴニストを組み合わせると、ＴＬＲ７の治療域は増加するようであり、これは、ＴＬＲ７アゴニスト単剤処置で観察されるものと比較して、用量の３倍の減少はリバウンドが観察される時間に悪影響を及ぼさないためである。
表１９～表２２は、異なる投与量での処置後の血清ＡＡＶ／ＨＢＶマウスにおけるＨＢｓＡｇレベルを示す。データは、図１０Ａ～図１０Ｄにも表されている。
Figure 2023509870000083
Figure 2023509870000084
Figure 2023509870000085
Figure 2023509870000086
Figure 2023509870000087
ＨＢｅＡｇレベルも測定したが、単剤処置と併用処置との間に市場差（ｍａｒｋｅｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ）は観察されなかった。
表１９～表２２及び図１０Ａ～図１０Ｄは、ＨＢｓＡｇに対する効果が一般にＨＢＶ－ＤＮＡに対する効果と同様であったことを示す。ＨＢＶ ＤＮＡとは異なり、１．５ｍｇ／ｋｇの抗ＨＢＶ ＡＳＯ（ＣＭＰ番号１５）による処置は、ＨＢｓＡｇを検出限界未満のレベルまで抑制することができず（図１０Ａ及び図１０Ｂ）、ＴＬＲ７アゴニスト（ＣＭＰ番号ＶＩ）も、いずれの用量においても抑制できなかった（図１０Ａ～図１０Ｄ）。一方、抗ＨＢＶ ＡＳＯとＴＬＲ７アゴニストの組合せは、全ての用量でＨＢｓＡｇを検出限界未満に低下させることができ、単剤処置と比較してリバウンドを遅延させた。ＨＢＶ ＤＮＡの場合と同様に、少なくともＴＬＲ７アゴニストの治療域の増加もＨＢｓＡｇの減少に関連して観察され、ＨＢｓＡｇの場合、最低用量での組合せ（図１０Ｂ）は、ＨＢｓＡｇ減少及びリバウンド遅延の両方の点で、最高用量での組合せ（図１０Ｃ）と本質的に同程度に有効であるため、さらに顕著であり、抗ＨＢＶ ＡＳＯの治療域の増大もあり得ることを示している。
研究の結論
本研究のデータは、慢性ＨＢＶ感染症のインビボモデルにおける抗ＨＢＶ ＡＳＯとＴＬＲ７アゴニストとの組合せの利点を示す。これらの利益は、ＨＢＶ ＤＮＡ及びＨＢｓＡｇの両方によって測定されるように、処置終了後のリバウンド遅延として最も明確に見ることができる。組合せがこれらの化合物のリスク・プロファイルを変化させることは示唆されておらず、臨床現場における各活性成分のより低い用量は、より高い用量での組合せと同じ抗ウイルス効果を達成することができる。組合せの治療域のこの正の増加は、患者にとって明らかな利益である。
パートＣ：ＲＮＡｉ及びアンチセンスオリゴヌクレオチドの効果の比較
実施例Ｃ１：
この研究の目的は、ＡＡＶ－ＨＢＶマウスモデルにおける特定の化合物のインビボ薬理学及び有効性を評価することであった。
試験した化合物：陰性対照ｓｉＲＮＡ（ＤＣＲ－ＡＵＤ１、ＨＢＶゲノムを標的としないｓｉＲＮＡ）；ＨＢＶ（ｓ）－２１９（抗ＨＢＶ ｓｉＲＮＡ）；ＣＭＰ番号１５＿１（抗ＨＢＶ ＡＳＯ）。
Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）ゲノムｒＡＡＶ８－１．３ＨＢＶ ａｙｗ（ロット番号：２０１９０３２７０３）を保有する組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を、Ｂｅｉｊｉｎｇ ＦｉｖｅＰｌｕｓ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅから購入し、使用前に－７０℃で保存した。
１１５匹の雄Ｃ５７ＢＬ／６マウスを得た。投与前０日目に、全ての動物に、モデル誘導のために１×１０１１ベクターゲノムのＡＡＶ－ＨＢＶを尾静脈を通して注射した。ベースライン血清ウイルスマーカー及び投与前２４日目の体重に基づいて、８０匹の適格ＨＢＶ感染マウスを選択した。
８０匹の選択したマウスを、化合物処置のために４つの群に無作為に分けた。滅菌水、ＤＣＲ－ＡＵＤ１、ＤＣＲ－Ｓ２１９（９ｍｇ／ｋｇ）及びＣＭＰ番号１５＿１（６．６ｍｇ／ｋｇ）を０日目に５ｍＬ／ｋｇで１回皮下注射した。投与量は２ｍＬであった。
体重を０～２１日目に週に１回測定した。試験期間中、試験群間で体重増加の有意差は観察されなかった。
全血を回収して、０～２１日目に週に２回、血清（マウスあたり１５μＬ）を調製した。２１日目に、マウスを安楽死させた。ウイルスマーカーアッセイのための血清試料に加えて、追加の血清試料（マウスあたり１２０μＬ）を調製し、－７０℃で保存した。肝臓全体を回収し、半分に切断し、急速凍結し、－７０℃で保存した。残りの投与製剤並びに最終血清及び組織試料を、それぞれ２０１９年１１月１６日及び２０日に廃棄した。
ＨＢｓＡｇのベースライン血清レベルをＡＲＣＨＩＴＥＣＴ ｉ ２０００（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｌａｋｅ Ｂｌｕｆｆ，ＩＬ，ＵＳＡ）及び支持試薬によって決定した。ベースライン血清ＨＢＶＤＮＡレベルを、ＡＢＩ ７５００（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ，ＵＳＡ）及び検出キット（Ｓａｎｓｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｉｎｃ．，Ｃｈａｎｇｓｈａ，Ｈｕｎａｎ，Ｃｈｉｎａ）を使用することによって測定した。
結果を図３０に示す。抗ＨＢＶ ＡＳＯ（ＨＢＶ－ＬＮＡ）は、ＨＢｓＡｇレベルの急速な減少をもたらし、これは約１０日まで維持され、その後、ＨＢｓＡｇレベルはリバウンドした。ＨＢＶを標的とするｓｉＲＮＡ化合物（ＤＣＲ－Ｓ２１９）は、ＨＢｓＡｇレベルの初期低下速度がやや遅いが、それでも非常に速い速度であった。さらに、ｓｉＲＮＡ化合物では、驚くべきレベルの減少が実験の２１日間にわたって維持され、リバウンドの徴候はなかった。ＬＮＡ化合物よりもはるかに低いモル投与量で優れた結果が達成されるという点で、ｓｉＲＮＡ化合物についてさらなる利点が図３０に見られる。図３０は、９ｍｇ／ｋｇのｓｉＲＮＡ及び６．６ｍｇ／ｋｇのＬＮＡを投与されたマウスによる結果を示すが、これらの化合物間の分子量の差により、ｓｉＲＮＡのモル用量はＬＮＡのモル用量の約０．３倍にすぎない（ＤＣＲ－Ｓ２１９のＭｗは２２２６２Ｄａであり、ＣＭＰ番号１５＿１のＭｗは６６３８Ｄａである）。したがって、アンチセンスオリゴヌクレオチドよりもはるかに低いモル投与量の本発明のｓｉＲＮＡで優れた結果を達成することができる。
データは、抗ＨＢＶ ＡＳＯ及びＴＬＲ７アゴニストに関するデータと組み合わせると、例えば実施例Ｂ及び図９に示すように、ＨＢＶを標的とするｓｉＲＮＡなどのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドとＴＬＲ７アゴニストを組み合わせる利点を示す。
図１０Ａに示すように、ＴＬＲ７アゴニスト単独でＨＢｓＡｇの減少をもたらしたが、ＨＢｓＡｇの減少の初期速度は遅かった（最も低いＨＢｓＡｇは４２日目に見られた）。したがって、実施例Ｃ／図３０のＨＢＶを標的化するｓｉＲＮＡが迅速で（すなわち１０日までに）効果的なＨＢｓＡｇノックダウンを達成したので、ＨＢＶを標的化するｓｉＲＮＡなどのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドをＴＬＲ７アゴニストとともに使用するための相乗効果がある。さらに、図３０に示すように、ＨＢＶを標的とするｓｉＲＮＡは、抗ＨＢＶ ＡＳＯよりも優れた非常に効果的な長期ノックダウンを提供した。
本明細書に開示されるデータから、１）ＨＢＶを標的とするｓｉＲＮＡなどのＲＮＡｉオリゴヌクレオチドと、２）ＴＬＲ７アゴニストとを含む組合せの効果は、したがって、長期間続く効果的なＨＢｓＡｇノックダウンが迅速に誘導され、長期間にわたって効果的な抗ウイルス制御を示すと判断され得る。したがって、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドとＴＬＲ７アゴニストとを含む組合せが、本発明の最も好ましい組合せである。
そのような有益な効果は、本明細書に開示される実施例のパートＡ、Ｂ及びＣの発見以前には予想され得なかった。

Claims (159)

  1. 治療用オリゴヌクレオチド、及び式（Ｉ）又は（ＩＩ）：
    Figure 2023509870000088
     又はその薬学的に許容され得る塩、エナンチオマー若しくはジアステレオマーのＴＬＲ７アゴニストを含む、又はそれらからなる医薬組合せであって、
    式中、ＸはＣＨ２又はＳであり、
    式（Ｉ）について、Ｒ１は－ＯＨ又は－Ｈであり、Ｒ２は１－ヒドロキシプロピル又はヒドロキシメチルであり、
    式（ＩＩ）について、Ｒ１は－ＯＨ又は－Ｈ又はアセトキシであり、Ｒ２は１－アセトキシプロピル又は１－ヒドロキシプロピル又は１－ヒドロキシメチル又はアセトキシ（シクロプロピル）メチル又はアセトキシ（プロピン－１－イル）メチルである。
  2. 前記治療用オリゴヌクレオチドがＲＮＡｉオリゴヌクレオチドである、請求項１に記載の医薬組合せ。
  3. 前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが、ＨＢＶ（ＲＮＡｉ番号１）を標的とするオリゴヌクレオチドである、請求項２に記載の医薬組合せ。
  4. 前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが、ＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡ（ＲＮＡｉ番号２）を標的とするオリゴヌクレオチドである、請求項２又は３に記載の医薬組合せ。
  5. 前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが、ＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡ（ＲＮＡｉ番号３）の発現を減少させるオリゴヌクレオチドである、請求項２～４のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  6. 前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが、１９～３０ヌクレオチド長のアンチセンス鎖を含むオリゴヌクレオチドであり、前記アンチセンス鎖が、ＡＣＡＡＮＡＡＵＣＣＵＣＡＣＡＡＵＡ（配列番号３３）に記載のＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡ（ＲＮＡｉ番号４）の配列に対して相補性の領域を含む、請求項２～５のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  7. 前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが、Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓＡｇ）ｍＲＮＡの発現を減少させるためのオリゴヌクレオチドであり、前記オリゴヌクレオチドが、１９～３０ヌクレオチド長のアンチセンス鎖を含むオリゴヌクレオチドであり、前記アンチセンス鎖が、ＡＣＡＡＮＡＡＵＣＣＵＣＡＣＡＡＵＡ（配列番号３３）に記載のＨＢｓＡｇ ｍＲＮＡ（ＲＮＡｉ番号５）の配列に対して相補性の領域を含む、請求項２～５のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  8. 前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが、１９～５０ヌクレオチド長のセンス鎖をさらに含み、前記センス鎖が、前記アンチセンス鎖と二重鎖領域を形成する、請求項６又は７に記載の医薬組合せ。
  9. 前記センス鎖が、ＵＵＮＵＵＧＵＧＡＧＧＡＵＵＮ（配列番号３４）に記載の配列と相補性の領域を含む、請求項８に記載の医薬組合せ。
  10. 前記センス鎖が、５’－ＵＵＡＵＵＧＵＧＡＧＧＡＵＵＮＵＵＧＵＣ（配列番号３５）に記載の配列と相補性の領域を含む、請求項８又は９に記載の医薬組合せ。
  11. 前記アンチセンス鎖が、ＵＵＡＵＵＧＵＧＡＧＧＡＵＵＮＵＵＧＵＣＧＧ（配列番号３６）に記載の配列を含む、請求項９に記載の医薬組合せ。
  12. 前記アンチセンス鎖が、ＵＵＡＵＵＧＵＧＡＧＧＡＵＵＣＵＵＧＵＣＧＧ（配列番号３７）に記載の配列からなる、請求項９に記載の医薬組合せ。
  13. 前記アンチセンス鎖が、ＵＵＡＵＵＧＵＧＡＧＧＡＵＵＵＵＵＧＵＣＧＧ（配列番号３８）に記載の配列からなる、請求項９に記載の医薬組合せ。
  14. 前記センス鎖が、ＡＣＡＡＮＡＡＵＣＣＵＣＡＣＡＡＵＡＡ（配列番号３９）に記載の配列を含む、請求項８から１２のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  15. 前記センス鎖が、ＧＡＣＡＡＮＡＡＵＣＣＵＣＡＣＡＡＵＡＡＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ（配列番号４０）に記載の配列を含む、請求項８～１４のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  16. 前記センス鎖が、ＧＡＣＡＡＡＡＡＵＣＣＵＣＡＣＡＡＵＡＡＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ（配列番号４１）に記載の配列からなる、請求項８～１４のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  17. 前記センス鎖が、ＧＡＣＡＡＧＡＡＵＣＣＵＣＡＣＡＡＵＡＡＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ（配列番号４２）に記載の配列からなる、請求項８～１４のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  18. 前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが、Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓＡｇ）ｍＲＮＡの発現を減少させるためのオリゴヌクレオチドであり、前記オリゴヌクレオチドが、アンチセンス鎖と二重鎖領域を形成するセンス鎖を含み、前記センス鎖がＧＡＣＡＡＡＡＡＵＣＣＵＣＡＣＡＡＵＡＡＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ（配列番号４１）に記載の配列を含み、前記アンチセンス鎖が、ＵＵＡＵＵＧＵＧＡＧＧＡＵＵＵＵＵＧＵＣＧＧ（配列番号３８）に記載の配列を含み、
    前記アンチセンス鎖及び前記センス鎖の各々が、１つ又は複数の２’－フルオロ及び２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド並びに少なくとも１つのホスホロチオエート結合を含み、前記アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’－炭素がリン酸類似体を含み、前記センス鎖が１つ又は複数のＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分にコンジュゲートされている、請求項２～５のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  19. 前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが、Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓＡｇ）ｍＲＮＡの発現を減少させるためのオリゴヌクレオチドであり、前記オリゴヌクレオチドが、アンチセンス鎖と二重鎖領域を形成するセンス鎖を含み、
    前記センス鎖が、ＧＡＣＡＡＡＡＡＵＣＣＵＣＡＣＡＡＵＡＡＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ（配列番号４１）に記載の配列であって、３位、８～１０位、１２位、１３位及び１７位の２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、１位、２位、４～７位、１１位、１４～１６位、１８～２６位及び３１～３６位の２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、並びに少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む、配列を含み、前記センス鎖は、１つ又は複数のＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分にコンジュゲートされており、
    前記アンチセンス鎖が、ＵＵＡＵＵＧＵＧＡＧＧＡＵＵＵＵＵＧＵＣＧＧ（配列番号３８）に記載の配列であって、２位、３位、５位、７位、８位、１０位、１２位、１４位、１６位及び１９位の２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、１位、４位、６位、９位、１１位、１３位、１５位、１７位、１８位及び２０～２２位の２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、並びに少なくとも３つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む、配列を含み、前記アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’－炭素はリン酸類似体を含む、請求項２～５のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  20. 前記センス鎖が、１位及び２位のヌクレオチド間にホスホロチオエート結合を含む、請求項１９に記載の医薬組合せ。
  21. 前記アンチセンス鎖が、ヌクレオチド１と２、２と３、３と４、２０と２１、及び２１と２２の間に５個のホスホロチオエート結合を含む、請求項１９又は２０に記載の医薬組合せ。
  22. 前記アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドが以下の構造：
    Figure 2023509870000089
     を有する、請求項１９から２１のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  23. 前記センス鎖上の－ＧＡＡＡ－配列のヌクレオチドのうちの１つ又は複数が一価ＧａｌＮＡｃ部分にコンジュゲートされている、請求項１９～２２のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  24. 前記センス鎖上の前記－ＧＡＡＡ－配列のヌクレオチドの各々が一価ＧａｌＮＡｃ部分にコンジュゲートされている、請求項２３に記載の医薬組合せ。
  25. 前記－ＧＡＡＡ－モチーフが、以下の構造：
    Figure 2023509870000090
     を含み、
    式中、
    Ｌは、置換及び非置換アルキレン、置換及び非置換アルケニレン、置換及び非置換アルキニレン、置換及び非置換ヘテロアルキレン、置換及び非置換ヘテロアルケニレン、置換及び非置換ヘテロアルキニレン、及びそれらの組合せからなる群から選択される、結合、クリックケミストリーハンドル、又は長さが１個以上２０個以下の連続する共有結合原子のリンカーを表し、
    Ｘは、Ｏ、Ｓ又はＮである、請求項２４に記載の医薬組合せ。
  26. Ｌがアセタールリンカーである、請求項２５に記載の医薬組合せ。
  27. ＸがＯである、請求項２５又は２６に記載の医薬組合せ。
  28. －ＧＡＡＡ－配列が以下の構造：
    Figure 2023509870000091
     を含む、請求項２０に記載の医薬組合せ。
  29. 前記センス鎖が、その３’末端に、ステムループ：Ｓ１－Ｌ－Ｓ２を含み、式中、Ｓ１はＳ２に相補的であり、ＬはＳ１とＳ２との間に最大６ヌクレオチド長のループを形成する、請求項８に記載の医薬組合せ。
  30. Ｌがテトラループである、請求項２９に記載の医薬組合せ。
  31. Ｌが、Ｓ１とＳ２との間に４ヌクレオチド長のループを形成する、請求項２９又は３０に記載の医薬組合せ。
  32. ＬがＧＡＡＡとして記載の配列を含む、請求項２９～３１のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  33. 前記ステムループの最大４ヌクレオチドのＬがそれぞれ別個のＧａｌＮＡｃにコンジュゲートされる、請求項２９～３２のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  34. 前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが少なくとも１つの修飾ヌクレオチドを含む、請求項６～１６のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  35. 前記修飾ヌクレオチドが２’－修飾を含む、請求項３４に記載の医薬組合せ。
  36. 前記２’－修飾が、２’－アミノエチル、２’－フルオロ、２’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－メトキシエチル、及び２’－デオキシ－２’－フルオロ－β－ｄ－アラビノ核酸から選択される、請求項３５に記載の医薬組合せ。
  37. 前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドのヌクレオチドの全てが修飾ヌクレオチドである、請求項６～１６のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  38. 前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間結合を含む、請求項６～１６のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  39. 前記少なくとも１つの修飾ヌクレオチド間結合がホスホロチオエート結合である、請求項３８に記載の医薬組合せ。
  40. 前記アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’－炭素がリン酸類似体を含む、請求項６～１６のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  41. 前記オリゴヌクレオチドの少なくとも１つのヌクレオチドが標的化リガンドにコンジュゲートされている、請求項６～１６のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  42. 前記標的化リガンドがＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）部分である、請求項４１に記載の医薬組合せ。
  43. 前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが、Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓＡｇ）ｍＲＮＡの発現を減少させるためのオリゴヌクレオチドであり、前記オリゴヌクレオチドが、アンチセンス鎖と二重鎖領域を形成するセンス鎖を含み、
    前記センス鎖が、ＧＡＣＡＡＡＡＡＵＣＣＵＣＡＣＡＡＵＡＡＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ（配列番号４１）に記載の配列であって、３位、８～１０位、１２位、１３位及び１７位の２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、１位、２位、４～７位、１１位、１４～１６位、１８～２６位及び３１～３６位の２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、並びに１位と２位のヌクレオチド間のホスホロチオエート結合を含む、配列からなり、前記センス鎖上の－ＧＡＡＡ－配列の各ヌクレオチドは、一価ＧａｌＮａｃ部分にコンジュゲートされており、
    前記アンチセンス鎖が、ＵＵＡＵＵＧＵＧＡＧＧＡＵＵＵＵＵＧＵＣＧＧ（配列番号３８）に記載の配列であって、２位、３位、５位、７位、８位、１０位、１２位、１４位、１６位及び１９位の２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、１位、４位、６位、９位、１１位、１３位、１５位、１７位、１８位及び２０～２２位の２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、並びに１位と２位のヌクレオチド間、２位と３位のヌクレオチド間、３位と４位のヌクレオチド間、２０位と２１位のヌクレオチド間、及び２１位と２２位のヌクレオチド間のホスホロチオエート結合を含む、配列からなり、
    前記アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’－炭素がメトキシホスホネート（ＭＯＰ）（ＲＮＡｉ番号６）を含む、請求項２～５のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  44. 前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが、Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓＡｇ）ｍＲＮＡの発現を減少させるためのオリゴヌクレオチドであり、前記オリゴヌクレオチドが、アンチセンス鎖と二重鎖領域を形成するセンス鎖を含み、
    前記センス鎖が、ＧＡＣＡＡＡＡＡＵＣＣＵＣＡＣＡＡＵＡＡＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ（配列番号４１）に記載の配列であって、３位、８～１０位、１２位、１３位及び１７位の２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、１位、２位、４～７位、１１位、１４～１６位、１８～２６位及び３１～３６位の２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、並びに１位と２位のヌクレオチド間の１つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む、配列を含み、前記センス鎖上の－ＧＡＡＡ－配列の各ヌクレオチドは、一価ＧａｌＮＡｃ部分にコンジュゲートされており、前記－ＧＡＡＡ－配列は、以下の構造：
    Figure 2023509870000092
     を含み、
    前記アンチセンス鎖が、ＵＵＡＵＵＧＵＧＡＧＧＡＵＵＵＵＵＧＵＣＧＧ（配列番号３８）に記載の配列であって、２位、３位、５位、７位、８位、１０位、１２位、１４位、１６位及び１９位の２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、１位、４位、６位、９位、１１位、１３位、１５位、１７位、１８位及び２０～２２位の２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、並びにヌクレオチド１と２、２と３、３と４、２０と２１、及び２１と２２の間に５つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む、配列を含み、前記アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’－炭素は以下の構造：
    Figure 2023509870000093
     を有する、請求項２～５のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  45. 前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが図２９Ａに示される構造（ＲＮＡｉ番号８）を有する、請求項２～５のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  46. 前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドがオリゴヌクレオチドＨＢＶ（ｓ）－２１９（ＲＮＡｉ番号９）である、請求項２～５のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  47. 前記治療用オリゴヌクレオチドが、配列番号１の１５３０位から１６０２位までの連続配列に１００％相補的な少なくとも１２ヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列を有する１３～２２ヌクレオチド長のＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチドである、請求項１に記載の医薬組合せ。
  48. 前記連続ヌクレオチド配列が、配列番号１の１５３０～１５９８位；１５３０～１５４３位；１５３０～１５４４位；１５３１～１５４３位；１５５１～１５６５位；１５５１～１５６６位；１５７７～１５８９位；１５７７～１５９１位；１５７７～１５９２位；１５７８～１５９０位；１５７８～１５９２位；１５８３～１５９８位；１５８４～１５９８位；１５８５～１５９８位及び１５８３～１６０２位からなる群から選択される標的配列に１００％相補的である、請求項４７に記載の医薬組合せ。
  49. 前記連続ヌクレオチド配列が１２～１６ヌクレオチド長である、請求項４７又は４８に記載の医薬組合せ。
  50. 前記ＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列が、
    ｇｃｇｔａａａｇａｇａｇｇ（配列番号２）；
    ｇｃｇｔａａａｇａｇａｇｇｔ（配列番号３）；
    ｃｇｃｇｔａａａｇａｇａｇｇｔ（配列番号４）；
    ａｇａａｇｇｃａｃａｇａｃｇｇ（配列番号５）；
    ｇａｇａａｇｇｃａｃａｇａｃｇｇ（配列番号６）；
    ａｇｃｇａａｇｔｇｃａｃａｃｇｇ（配列番号７）；
    ｇａａｇｔｇｃａｃａｃｇｇ（配列番号８）；
    ｇｃｇａａｇｔｇｃａｃａｃｇｇ（配列番号９）；
    ａｇｃｇａａｇｔｇｃａｃａｃｇ（配列番号１０）；
    ｃｇａａｇｔｇｃａｃａｃｇ（配列番号１１）；
    ａｇｇｔｇａａｇｃｇａａｇｔｇｃ（配列番号１２）
    ａｇｇｔｇａａｇｃｇａａｇｔｇ（配列番号１３）；
    ａｇｇｔｇａａｇｃｇａａｇｔ（配列番号１４）；及び
    ｇｃａｇａｇｇｔｇａａｇｃｇａａｇｔｇｃ（配列番号２９）
    からなる群から選択される、請求項４７～４９のいずれか一項に記載の医薬組合せ、又はその薬学的に許容され得る塩。
  51. 前記ＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列が、式５’－Ｆ－Ｇ－Ｆ’－３’のギャップマーであり、領域Ｆ及びＦ’は、独立して、２～５個の２’糖修飾ヌクレオチドからなり、Ｆ及びＦ’領域の５’及び３’末端を規定し、Ｇは、ＲＮアーゼＨを動員することができる６～１０個のＤＮＡヌクレオシド領域である、請求項４７～５０のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  52. 前記２’糖修飾ヌクレオシドが、２’－Ｏ－アルキル－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メチル－ＲＮＡ、２’－アルコキシ－ＲＮＡ、２’－Ｏ－メトキシエチル－ＲＮＡ、２’－アミノ－ＤＮＡ、２’－フルオロ－ＤＮＡ、２’－フルオロ－ＡＮＡ及びＬＮＡヌクレオシドからなる群から独立して選択される、請求項５１に記載の医薬組合せ。
  53. １つ又は複数の２’糖修飾ヌクレオシドがＭＯＥヌクレオシドである、請求項５１又は５２に記載の医薬組合せ。
  54. １つ又は複数の２’糖修飾ヌクレオシドがＬＮＡヌクレオシドである、請求項５１又は５２に記載の医薬組合せ。
  55. 前記修飾ＬＮＡヌクレオシドが、オキシＬＮＡ、アミノＬＮＡ、チオＬＮＡ、ｃＥＴ及びＥＮＡから選択される、請求項５４に記載の医薬組合せ。
  56. 前記修飾ＬＮＡヌクレオシドが、それに続く２’－４’架橋－Ｏ－ＣＨ２－を有するオキシＬＮＡである、請求項５４又は５５に記載の医薬組合せ。
  57. 前記オキシＬＮＡがベータ－Ｄ－オキシＬＮＡである、請求項５６に記載の医薬組合せ。
  58. 前記修飾ＬＮＡヌクレオシドが、それに続く２’－４’架橋－Ｏ－ＣＨ（ＣＨ３）－を有するｃＥＴである、請求項５４又は５５に記載の医薬組合せ。
  59. 前記ｃＥＴが（Ｓ）ｃＥＴ、すなわち６’（Ｓ）メチル－ベータ－Ｄ－オキシＬＮＡである、請求項５８に記載の医薬組合せ。
  60. 前記ＬＮＡがＥＮＡであり、それに続く２’－４’架橋－Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２－を有する、請求項５４又は５５に記載の医薬組合せ。
  61. 前記ＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチドの連続ヌクレオチド配列が、
    ＧＣＧｔａａａｇａｇａＧＧ（配列番号２）；
    ＧＣＧｔａａａｇａｇＡＧＧ（配列番号２）；
    ＧＣＧｔａａａｇａｇａＧＧＴ（配列番号３）；
    ＣＧＣｇｔａａａｇａｇａＧＧＴ（配列番号４）；
    ＡＧＡａｇｇｃａｃａｇａＣＧＧ（配列番号５）；
    ＧＡＧａａｇｇｃａｃａｇａＣＧＧ（配列番号６）；
    ＡＧＣｇａａｇｔｇｃａｃａＣＧＧ（配列番号７）；
    ＧＡＡｇｔｇｃａｃａｃＧＧ（配列番号８）；
    ＧＡＡｇｔｇｃａｃａＣＧＧ（配列番号８）；
    ＧＣＧａａｇｔｇｃａｃａＣＧＧ（配列番号９）；
    ＡＧＣｇａａｇｔｇｃａｃＡＣＧ（配列番号１０）；
    ＣＧＡａｇｔｇｃａｃａＣＧ（配列番号１１）；
    ＡＧＧｔｇａａｇｃｇａａｇＴＧＣ（配列番号１２）；
    ＡＧＧｔｇａａｇｃｇａａＧＴＧ（配列番号１３）
    ＡＧｇｔｇａａｇｃｇａＡＧＴＧ（配列番号１３）；
    ＡＧＧｔｇａａｇｃｇａＡＧＴ（配列番号１４）；及び
    ＧＣＡＧＡＧｇｔｇａａｇｃｇａＡＧＴＧＣ（配列番号２９）
    からなる群から選択され、大文字はＬＮＡ又はＭＯＥヌクレオシドを示し、小文字はＤＮＡヌクレオシドを示す、請求項４７～６０のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  62. 前記連続ヌクレオチド配列内のヌクレオシド間結合の少なくとも５０％がホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、請求項４７～６１のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  63. 前記ＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチドの前記連続ヌクレオチド配列内の全てのヌクレオシド間結合がホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、請求項４７～６２のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  64. 前記ＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチドのＧａｌＮＡｃコンジュゲートが、二価、三価又は四価のＧａｌＮＡｃクラスターである、請求項４７～６３のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  65. 前記ＧａｌＮＡｃコンジュゲートが、図１Ｂ、図１Ｄ又は図１Ｊから選択される、請求項６４に記載の医薬組合せ。
  66. 前記ＧａｌＮＡｃコンジュゲート及び前記ＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチドの前記連続ヌクレオチド配列が、２個、３個、４個又は５個のホスホジエステル結合ＤＮＡヌクレオシドを含むＰＯリンカーによって共有結合している、請求項４７～６５のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  67. 前記ＰＯリンカーが、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドの一部であり、一方がＣとＡとの間にあり他方が前記ＧａｌＮＡｃクラスターに対するものである少なくとも２つのホスホジエステル結合を有するシトシン及びアデニン（ＣＡ）のジヌクレオチド配列からなる、請求項６６に記載の医薬組合せ。
  68. 前記ＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチドが１２～１８ヌクレオチド長である、請求項４７～６７のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  69. 前記ＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチドが、
    Figure 2023509870000094
     からなる群から選択され、式中、大文字の太字はベータ－Ｄ－オキシＬＮＡ単位を表し、小文字はＤＮＡ単位を表し、下付き文字「ｏ」はホスホジエステル結合を表し、下付き文字「ｓ」はホスホロチオエート結合を表し、上付き文字ｍは５－メチルシトシン塩基を含有するＤＮＡ又はベータ－Ｄ－オキシＬＮＡ単位を表し、ＧＮ２－Ｃ６は、Ｃ６リンカーを有するＧａｌＮＡｃ２コンジュゲートを表す、
    又はその薬学的に許容され得る塩である、
    請求項４７～６８のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  70. 前記ＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチドが５’－図１Ｊ－ｏ Ｇ ｓ Ｃ ｓ Ａ ｓ Ｇ ｓ Ａ ｓｇｓｇｓｔｓｇｓａｓａｓｇｓｃｓｇｓａｓ Ａ ｓ Ｇ ｓ Ｔ ｓ Ｇ ｓ Ｃ－３’（図２）であり、式中、下線付き大文字下線付き文字はＭＯＥ単位を表し、小文字はＤＮＡ単位を表し、下付き文字「ｏ」は、ホスホジエステル結合を表し、下付き文字「ｓ」は、ホスホロチオエート結合を表す、請求項４７～６９のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  71. 前記ＴＬＲ７アゴニストが式（ＩＩＩ）：
    Figure 2023509870000095
     であり、
    式中、Ｒ１は－ＯＨ又はアセトキシであり、Ｒ２は１－アセトキシプロピル又は１－ヒドロキシプロピル又は１－ヒドロキシメチルである、
    又はその薬学的に許容され得る塩、エナンチオマー若しくはジアステレオマーである、
    請求項１～７０のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  72. 前記ＴＬＲ７アゴニストが式（ＩＶ）：
    Figure 2023509870000096
     であり、
    式中、Ｒ１は、アセトキシ（シクロプロピル）メチル又はアセトキシ（プロピン－１－イル）メチルである、請求項１～７０のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  73. 前記ＴＬＲ７アゴニストが式（Ｖ）：
    Figure 2023509870000097
     であり、
    式中、Ｒ１は－ＯＨであり、Ｒ２は１－ヒドロキシプロピル又はヒドロキシメチルである、又はその薬学的に許容され得る塩、エナンチオマー若しくはジアステレオマーである、
    請求項１～７０のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  74. 前記ＴＬＲ７アゴニストが、
    ［（１Ｓ）－１－［（２Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）－５－（５－アミノ－２－オキソ－チアゾロ［４，５－ｄ］ピリミジン－３－イル）－４－ヒドロキシ－テトラヒドロフラン－２－イル］プロピル］アセテート（ＣＭＰ番号ＶＩ）；
    ５－アミノ－３－［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）－３－ヒドロキシ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシプロピル］テトラヒドロフラン－２－イル］－６Ｈ－チアゾロ［４，５－ｄ］ピリミジン－２，７－ジオン（ＣＭＰ番号ＶＩＩ）；
    ５－アミノ－３－［（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）－３－ヒドロキシ－５－［（１Ｓ）－１－ヒドロキシプロピル］テトラヒドロフラン－２－イル］チアゾロ［４，５－ｄ］ピリミジン－２－オン（ＣＭＰ番号ＶＩＩＩ）；
    ５－アミノ－３－（３’－デオキシ－β－Ｄ－リボフラノシル）－３Ｈ－チアゾロ［４，５－ｄ］ピリミジン－２－オン（ＣＭＰ番号ＩＸ）；
    ５－アミノ－３－（２’－Ｏ－アセチル－３’－デオキシ－β－Ｄ－リボフラノシル）－３Ｈ－チアゾロ［４，５－ｄ］ピリミジン－２－オン（ＣＭＰ番号Ｘ）；
    ５－アミノ－３－（３’－デオキシ－β－Ｄ－リボフラノシル）－３Ｈ，６Ｈ－チアゾロ［４，５－ｄ］ピリミジン－２，７－ジオン（ＣＭＰ番号ＸＩ）；
    ［（Ｓ）－［（２Ｓ，５Ｒ）－５－（５－アミノ－２－オキソ－チアゾロ［４，５－ｄ］ピリミジン－３－イル）－１，３－オキサチオラン－２－イル］－シクロプロピル－メチル］アセテート（ＣＭＰ番号ＸＩＩ）；及び
    （１Ｓ）－１－［（２Ｓ，５Ｒ）－５－（５－アミノ－２－オキソ－チアゾロ［４，５－ｄ］ピリミジン－３－イル）－１，３－オキサチオラン－２－イル］ブタ－２－イニル］アセテート（ＣＭＰ番号ＸＩＩＩ）；
    からなる群から選択される、
    又はその薬学的に許容され得る塩、エナンチオマー若しくはジアステレオマーである、
    請求項１～７３のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  75. ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドとＴＬＲ７アゴニストとを含む組合せが、以下の組合せ：
    ＲＮＡｉ番号１とＣＭＰ番号ＶＩ；ＲＮＡｉ番号２とＣＭＰ番号ＶＩ；ＲＮＡｉ番号３とＣＭＰ番号ＶＩ；ＲＮＡｉ番号４とＣＭＰ番号ＶＩ；ＲＮＡｉ番号５とＣＭＰ番号ＶＩ；ＲＮＡｉ番号６とＣＭＰ番号ＶＩ；ＲＮＡｉ番号７とＣＭＰ番号ＶＩ；ＲＮＡｉ番号８とＣＭＰ番号ＶＩ；ＲＮＡｉ番号９とＣＭＰ番号ＶＩ；
    ＲＮＡｉ番号１とＣＭＰ番号ＶＩＩ；ＲＮＡｉ番号２とＣＭＰ番号ＶＩＩ；ＲＮＡｉ番号３とＣＭＰ番号ＶＩＩ；ＲＮＡｉ番号４とＣＭＰ番号ＶＩＩ；ＲＮＡｉ番号５とＣＭＰ番号ＶＩＩ；ＲＮＡｉ番号６とＣＭＰ番号ＶＩＩ；ＲＮＡｉ番号７とＣＭＰ番号ＶＩＩ；ＲＮＡｉ番号８とＣＭＰ番号ＶＩＩ；ＲＮＡｉ番号９とＣＭＰ番号ＶＩＩ；
    ＲＮＡｉ番号１とＣＭＰ番号ＶＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号２とＣＭＰ番号ＶＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号３とＣＭＰ番号ＶＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号４とＣＭＰ番号ＶＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号５とＣＭＰ番号ＶＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号６とＣＭＰ番号ＶＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号７とＣＭＰ番号ＶＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号８とＣＭＰ番号ＶＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号９とＣＭＰ番号ＶＩＩＩ；
    ＲＮＡｉ番号１とＣＭＰ番号ＸＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号２とＣＭＰ番号ＸＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号３とＣＭＰ番号ＸＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号４とＣＭＰ番号ＸＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号５とＣＭＰ番号ＸＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号６とＣＭＰ番号ＸＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号７とＣＭＰ番号ＸＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号８とＣＭＰ番号ＸＩＩＩ；ＲＮＡｉ番号９とＣＭＰ番号ＸＩＩＩ；
    からなる群から選択される、又はその薬学的に許容され得る塩、エナンチオマー若しくはジアステレオマーである、
    請求項２～４６及び７１～７４のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  76. 前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドがＲＮＡｉ番号７であり、
    アンチセンス鎖と二重鎖領域を形成するセンス鎖を含むオリゴヌクレオチドであり、
    前記センス鎖が、ＧＡＣＡＡＡＡＡＵＣＣＵＣＡＣＡＡＵＡＡＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ（配列番号４１）に記載の配列であって、３位、８～１０位、１２位、１３位及び１７位の２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、１位、２位、４～７位、１１位、１４～１６位、１８～２６位及び３１～３６位の２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、並びに１位と２位のヌクレオチド間の１つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む、配列を含み、前記センス鎖上の－ＧＡＡＡ－配列の各ヌクレオチドは、一価ＧａｌＮａｃ部分にコンジュゲートされており、前記－ＧＡＡＡ－配列は、以下の構造：
    Figure 2023509870000098
     を含み、
    前記アンチセンス鎖が、ＵＵＡＵＵＧＵＧＡＧＧＡＵＵＵＵＵＧＵＣＧＧ（配列番号３８）に記載の配列であって、２位、３位、５位、７位、８位、１０位、１２位、１４位、１６位及び１９位の２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、１位、４位、６位、９位、１１位、１３位、１５位、１７位、１８位及び２０－２２位の２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、並びにヌクレオチド１と２、２と３、３と４、２０と２１、及び２１と２２の間に５つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む、配列を含み、前記アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’－炭素は以下の構造：
    Figure 2023509870000099
     を有しており、
    ＴＬＲ７アゴニストはＣＭＰ番号ＶＩ：
    Figure 2023509870000100
     である、又はその薬学的に許容され得る塩、エナンチオマー若しくはジアステレオマーである、
    請求項２～４６及び７１～７４のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  77. ＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチドとＴＬＲ７アゴニストとを含む組合せが、以下の組合せ：ＣＭＰ番号１５＿１とＶＩ，ＣＭＰ番号１５＿２とＶＩ；ＣＭＰ番号１６＿１とＶＩ；ＣＭＰ番号２０＿１とＶＩ；ＣＭＰ番号２３＿１とＶＩ；ＣＭＰ番号２６＿１とＶＩ；ＣＭＰ番号２９＿１とＶＩ；ＣＭＰ番号１５＿１とＶＩＩ，ＣＭＰ番号１５＿２とＶＩＩ；ＣＭＰ番号１６＿１とＶＩＩ；ＣＭＰ番号２０＿１とＶＩＩ；ＣＭＰ番号２３＿１とＶＩＩ；ＣＭＰ番号２６＿１とＶＩＩ；ＣＭＰ番号２９＿１とＶＩＩ；ＣＭＰ番号１５＿１とＶＩＩＩ，ＣＭＰ番号１５＿２とＶＩＩＩ；ＣＭＰ番号１６＿１とＶＩＩＩ；ＣＭＰ番号２０＿１とＶＩＩＩ；ＣＭＰ番号２３＿１とＶＩＩ；ＣＭＰ番号２６＿１とＶＩＩＩ；ＣＭＰ番号２９＿１とＶＩＩＩ；ＣＭＰ番号１５＿１とＸＩＩＩ，ＣＭＰ番号１５＿２とＸＩＩＩ；ＣＭＰ番号１６＿１とＸＩＩＩ；ＣＭＰ番号２０＿１とＸＩＩＩ；ＣＭＰ番号２３＿１とＸＩＩＩ；ＣＭＰ番号２６＿１とＸＩＩＩ；及びＣＭＰ番号２９＿１とＸＩＩＩ
    からなる群から選択される、
    又はその薬学的に許容され得る塩、エナンチオマー若しくはジアステレオマーである、
    請求項４７～７４のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  78. 前記ＧａｌＮＡｃコンジュゲートアンチセンスオリゴヌクレオチドが、図５に示されるＣＭＰ番号１５＿１であり、前記ＴＬＲ７アゴニストが、ＣＭＰ番号ＶＩ：
    Figure 2023509870000101
     である、
    又はその薬学的に許容され得る塩、エナンチオマー若しくはジアステレオマーである、
    請求項４７～７４のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  79. 前記治療用オリゴヌクレオチドが薬学的に許容され得る塩と共に製剤化される、請求項１～７８のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  80. 前記薬学的に許容され得る塩が金属カチオンであり、好ましくは、前記薬学的に許容され得る塩がＮａ＋又はＫ＋である、請求項７９に記載の医薬組合せ。
  81. 請求項１～８０のいずれか一項に記載の治療用オリゴヌクレオチド及びＴＬＲ７アゴニストが、薬学的に許容され得る担体と共に製剤化される、請求項１～８０のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  82. 前記薬学的に許容され得る担体が水である、請求項８１に記載の医薬組合せ。
  83. 前記治療用オリゴヌクレオチドがリン酸緩衝生理食塩水において製剤化される、請求項１～８２のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  84. 前記治療用オリゴヌクレオチドが皮下注射用に製剤化され、前記ＴＬＲ７アゴニストが経口投与用に製剤化される、請求項１～８３のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  85. 前記治療用オリゴヌクレオチドが静脈内注射用に製剤化され、前記ＴＬＲ７アゴニストが経口投与用に製剤化される、請求項１～８３のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  86. 前記治療用オリゴヌクレオチドが皮下注射用に製剤化されたｓｉＲＮＡであり、前記ＴＬＲ７アゴニストが経口投与用に製剤化される、請求項２～４６、７５、７６及び７９～８３のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  87. ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドとＴＬＲ７アゴニストとを含み、ＣｐＡＭ（コアタンパク質アロステリックモジュレータ）をさらに含む、請求項１～８６のいずれか一項に記載の医薬組合せ。
  88. 前記ＣｐＡＭが以下に示される化合物（ＣｐＡＭ１）：
    Figure 2023509870000102
     による式を有し、
    式中、
    Ｒ１は、水素、ハロゲン又はＣ１－６アルキルであり、
    Ｒ２は、水素又はハロゲンであり、
    Ｒ３は、水素又はハロゲンであり、
    Ｒ４はＣ１－６アルキルであり、
    Ｒ５は、水素、ヒドロキシＣ１－６アルキル、アミノカルボニル、Ｃ１－６アルコキシカルボニル又はカルボキシであり、
    Ｒ６は、水素、Ｃ１－６アルコキシカルボニル又はカルボキシ－ＣｍＨ２ｍ－であり、
    Ｘは、カルボニル又はスルホニルであり、
    Ｙは、－ＣＨ２－、－Ｏ－又は－Ｎ（Ｒ７）－であり、
    式中、Ｒ７は、水素、Ｃ１－６アルキル、ハロＣ１－６アルキル、Ｃ３－７シクロアルキル－ＣｍＨ２ｍ－、Ｃ１－６アルコキシカルボニル－ＣｍＨ２ｍ－、－ＣｔＨ２ｔ－ＣＯＯＨ、－ハロＣ１－６アルキル－ＣＯＯＨ、－（Ｃ１－６アルコキシ）Ｃ１－６アルキル－ＣＯＯＨ、－Ｃ１－６アルキル－Ｏ－Ｃ１－６アルキル－ＣＯＯＨ、－Ｃ３－７シクロアルキル－ＣｍＨ２ｍ－ＣＯＯＨ、－ＣｍＨ２ｍ－Ｃ３－７シクロアルキル－ＣＯＯＨ、ヒドロキシ－ＣｔＨ２ｔ－、カルボキシスピロ［３．３］ヘプチル又はカルボキシフェニル－ＣｍＨ２ｍ－、カルボキシピリジニル－ＣｍＨ２ｍ－であり、
    Ｗは、－ＣＨ２－、－Ｃ（Ｃ１－６アルキル）２－、－Ｏ－又はカルボニルであり、
    ｎは０又は１であり、
    ｍは０～７であり、
    ｔは１～７である
    又はその薬学的に許容され得る塩、若しくはエナンチオマー、若しくはジアステレオマーである、
    請求項８７に記載の医薬組合せ。
  89. 前記ＣｐＡＭが化合物（ＣｐＡＭ２）
    Figure 2023509870000103
     である、又はその薬学的に許容され得る塩、エナンチオマー若しくはジアステレオマーである、
    請求項８７又は８８に記載の医薬組合せ。
  90. ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド、ＴＬＲ７アゴニスト及びＣｐＡＭを含む医薬組合せであって、前記ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドがＲＮＡｉ番号７であり、
    アンチセンス鎖と二重鎖領域を形成するセンス鎖を含むオリゴヌクレオチドであり、
    前記センス鎖が、ＧＡＣＡＡＡＡＡＵＣＣＵＣＡＣＡＡＵＡＡＧＣＡＧＣＣＧＡＡＡＧＧＣＵＧＣ（配列番号４１）に記載の配列であって、３位、８～１０位、１２位、１３位及び１７位の２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、１位、２位、４～７位、１１位、１４～１６位、１８～２６位及び３１～３６位の２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、並びに１位と２位のヌクレオチド間の１つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む、配列を含み、前記センス鎖上の－ＧＡＡＡ－配列の各ヌクレオチドは、一価ＧａｌＮａｃ部分にコンジュゲートされており、前記－ＧＡＡＡ－配列は、以下の構造：
    Figure 2023509870000104
     を含み、
    前記アンチセンス鎖が、ＵＵＡＵＵＧＵＧＡＧＧＡＵＵＵＵＵＧＵＣＧＧ（配列番号３８）に記載の配列であって、２位、３位、５位、７位、８位、１０位、１２位、１４位、１６位及び１９位の２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、１位、４位、６位、９位、１１位、１３位、１５位、１７位、１８位及び２０－２２位の２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチド、並びにヌクレオチド１と２、２と３、３と４、２０と２１、及び２１と２２の間に５つのホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含む、配列を含み、前記アンチセンス鎖の５’－ヌクレオチドの糖の４’－炭素は以下の構造：
    Figure 2023509870000105
     を有しており、
    前記ＴＬＲ７アゴニストはＣＭＰ番号ＶＩ：
    Figure 2023509870000106
     である、
    又はその薬学的に許容され得る塩、エナンチオマー若しくはジアステレオマーであり；
    前記ＣｐＡＭは、化合物（ＣｐＡＭ２）：
    Figure 2023509870000107
     である、
    又はその薬学的に許容され得る塩、エナンチオマー若しくはジアステレオマーである、
    医薬組合せ。
  91. 請求項１～９０のいずれか一項に記載の医薬組合せを含む医薬組成物。
  92. 請求項１～９０のいずれか一項に記載の治療用オリゴヌクレオチドと、Ｂ型肝炎ウイルス感染症を処置するためのＴＬＲ７アゴニストの投与のための説明がある添付文書とを含むキットオブパーツ。
  93. 前記添付文書に記載の前記ＴＬＲ７アゴニストが、請求項１～９０のいずれか一項に記載のＴＬＲ７アゴニストである、請求項９２に記載のキットオブパーツ。
  94. 請求項１～９０のいずれか一項に記載の治療用オリゴヌクレオチドと、請求項１～９０のいずれか一項に記載のＴＬＲ７アゴニストとを含む、請求項９２又は９３に記載のキットオブパーツ。
  95. 前記治療用オリゴヌクレオチドが皮下注射用に製剤化され、前記ＴＬＲ７アゴニストが経口投与用に製剤化される、請求項９１～９４のいずれか一項に記載のキットオブパーツ。
  96. 前記添付文書に慢性Ｂ型肝炎ウイルス感染症の処置が記載されている、請求項９２～９５のいずれか一項に記載のキットオブパーツ。
  97. 前記治療用オリゴヌクレオチドが、細胞内で前記オリゴヌクレオチドを発現するように操作された導入遺伝子の形態である、請求項１～９６のいずれか一項に記載の医薬組合せ、組成物、又はキット。
  98. Ｂ型肝炎ウイルス感染症を処置するための、請求項１～９７のいずれか一項に記載の医薬組合せ、組成物、又はキットの使用。
  99. 処置される前記Ｂ型肝炎ウイルス感染症が慢性Ｂ型肝炎ウイルス感染症である、請求項９８に記載の使用。
  100. 前記治療用オリゴヌクレオチド及び前記ＴＬＲ７アゴニストが薬学的有効量で投与される、請求項９８又は９９に記載の使用。
  101. 前記治療用オリゴヌクレオチドを毎週投与し、前記ＴＬＲ７アゴニストを１日おきに投与する、請求項９８～１００のいずれか一項に記載の使用。
  102. 前記治療用オリゴヌクレオチドを１～４ｍｇ／ｋｇ ｐｒ．で投与し、前記ＴＬＲ７アゴニストを１５０～１７０ｍｇ ｐｒ．で投与する、請求項９８～１０１のいずれか一項に記載の使用。
  103. 前記治療用オリゴヌクレオチドを４８週間投与し、８４用量のＴＬＲ７アゴニストを投与する、請求項９８～１０２のいずれか一項に記載の使用。
  104. 前記治療用オリゴヌクレオチド及び前記ＴＬＲ７アゴニストの投与が同じ週に開始される、請求項９８～１０３のいずれか一項に記載の使用。
  105. 前記治療用オリゴヌクレオチドが皮下投与用の剤形であり、前記ＴＬＲ７アゴニストが経口投与用の剤形である、請求項９８～１０４のいずれか一項に記載の使用。
  106. 前記治療用オリゴヌクレオチドの用量が１００～１５０ｍｇ／ｍｌであり、前記ＴＬＲ７アゴニストの用量が１５０～１７０ｍｇである、請求項９８～１０５のいずれか一項に記載の使用。
  107. 前記治療用オリゴヌクレオチドが、ＨＢＶ ｍＲＮＡ転写物をコードする非表面抗原を標的とするＲＮＡｉオリゴヌクレオチドによる処置の非存在下で投与される、請求項９８～１０６のいずれか一項に記載の使用。
  108. 対象に、ＨＢｘＡｇ ｍＲＮＡ転写物を選択的に標的化するＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが投与されない、請求項９８～１０７のいずれか一項に記載の使用。
  109. 前記対象に有効量のエンテカビルを投与することをさらに含む、請求項９８～１０８のいずれか一項に記載の使用。
  110. 前記治療用オリゴヌクレオチドが、細胞内で前記オリゴヌクレオチドを発現するように操作された導入遺伝子の形態で送達される、請求項９８～１０９のいずれか一項に記載の使用。
  111. 医薬に使用するための、請求項１～９７のいずれか一項に記載の医薬組合せ、組成物、又はキット。
  112. Ｂ型肝炎ウイルス感染症の処置での使用のための、請求項１～９７のいずれか一項に記載の医薬組合せ、組成物、又はキット。
  113. 処置される前記Ｂ型肝炎ウイルス感染症が慢性Ｂ型肝炎ウイルス感染症である、請求項１１１又は１１２に記載の使用のための医薬組合せ、組成物、又はキット。
  114. 前記治療用オリゴヌクレオチド及び前記ＴＬＲ７アゴニストが薬学的有効量で投与される、請求項１１１～１１３のいずれか一項に記載の使用のための医薬組合せ、組成物、又はキット。
  115. 前記治療用オリゴヌクレオチドを毎週投与し、前記ＴＬＲ７アゴニストを１日おきに投与する、請求項１１１～１１４のいずれか一項に記載の使用のための医薬組合せ、組成物、又はキット。
  116. 前記治療用オリゴヌクレオチドを１～４ｍｇ／ｋｇ ｐｒ．で投与し、前記ＴＬＲ７アゴニストを１５０～１７０ｍｇ ｐｒ．で投与する、請求項１１１～１１５のいずれか一項に記載の使用のための医薬組合せ、組成物、又はキット。
  117. 前記治療用オリゴヌクレオチドを４８週間投与し、８４用量のＴＬＲ７アゴニストを投与する、請求項１１１～１１６のいずれか一項に記載の使用のための医薬組合せ、組成物、又はキット。
  118. 前記治療用オリゴヌクレオチド及び前記ＴＬＲ７アゴニストの投与が同じ週に開始される、請求項１１１～１１７のいずれか一項に記載の使用のための医薬組合せ、組成物、又はキット。
  119. 前記治療用オリゴヌクレオチドが皮下投与用の剤形であり、前記ＴＬＲ７アゴニストが経口投与用の剤形である、請求項１１１～１１８のいずれか一項に記載の使用のための医薬組合せ、組成物、又はキット。
  120. 前記治療用オリゴヌクレオチドの用量が１００～１５０ｍｇ／ｍｌであり、前記ＴＬＲ７アゴニストの用量が１５０～１７０ｍｇである、請求項１０７～１１５のいずれか一項に記載の使用のための医薬組合せ、組成物、又はキット。
  121. 前記治療用オリゴヌクレオチドが、ＨＢＶ ｍＲＮＡ転写物をコードする非表面抗原を標的とするＲＮＡｉオリゴヌクレオチドによる処置の非存在下で投与される、請求項１１１～１２０のいずれか一項に記載の使用のための医薬組合せ、組成物、又はキット。
  122. 対象に、ＨＢｘＡｇ ｍＲＮＡ転写物を選択的に標的化するＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが投与されない、請求項１１１～１２１のいずれか一項に記載の使用のための医薬組合せ、組成物、又はキット。
  123. 前記対象に有効量のエンテカビルを投与することをさらに含む、請求項項１１１～１２２のいずれか一項に記載の使用のための医薬組合せ、組成物、又はキット。
  124. 前記治療用オリゴヌクレオチドが、細胞内で前記オリゴヌクレオチドを発現するように操作された導入遺伝子の形態で送達される、請求項項１１１～１２３のいずれか一項に記載の使用のための医薬組合せ、組成物、又はキット。
  125. Ｂ型肝炎ウイルス感染症を処置するための第１の医薬の製造における治療用オリゴヌクレオチドの使用であって、前記第１の医薬が、請求項１～９７のいずれか一項に記載の治療用オリゴヌクレオチドであり、前記第１の医薬が、第２の医薬と組み合わせて投与されるものであり、前記第２の医薬が、請求項１～９７のいずれか一項に記載のＴＬＲ７アゴニストである、使用。
  126. 医薬の製造における、請求項１～９７のいずれか一項に記載の医薬組合せ、組成物、又はキットの使用。
  127. Ｂ型肝炎ウイルス感染症を処置するための医薬の製造における、請求項１～９７のいずれか一項に記載の医薬組合せ、組成物、又はキットの使用。
  128. 処置される前記Ｂ型肝炎ウイルス感染症が慢性Ｂ型肝炎ウイルス感染症である、請求項１２５～１２７のいずれか一項に記載の使用。
  129. 前記治療用オリゴヌクレオチド及び前記ＴＬＲ７アゴニストが薬学的有効量で投与される、請求項１２５～１２８のいずれか一項に記載の使用。
  130. 前記治療用オリゴヌクレオチドを毎週投与し、前記ＴＬＲ７アゴニストを１日おきに投与する、請求項１２５～１２９のいずれか一項に記載の使用。
  131. 前記治療用オリゴヌクレオチドを１～４ｍｇ／ｋｇ ｐｒ．で投与し、前記ＴＬＲ７アゴニストを１５０～１７０ｍｇ ｐｒ．で投与する、請求項１２５～１３０のいずれか一項に記載の使用。
  132. 前記治療用オリゴヌクレオチドを４８週間投与し、８４用量のＴＬＲ７アゴニストを投与する、請求項１２５～１３１のいずれか一項に記載の使用。
  133. 前記治療用オリゴヌクレオチド及び前記ＴＬＲ７アゴニストの投与が同じ週に開始される、請求項１２５～１３２のいずれか一項に記載の使用。
  134. 前記治療用オリゴヌクレオチドが皮下投与用の剤形であり、前記ＴＬＲ７アゴニストが経口投与用の剤形である、請求項１２５～１３３のいずれか一項に記載の使用。
  135. 前記治療用オリゴヌクレオチドの用量が１００～１５０ｍｇ／ｍｌであり、前記ＴＬＲ７アゴニストの用量が１５０～１７０ｍｇである、請求項１２５～１３４のいずれか一項に記載の使用。
  136. 前記治療用オリゴヌクレオチドが、ＨＢＶ ｍＲＮＡ転写物をコードする非表面抗原を標的とするＲＮＡｉオリゴヌクレオチドによる処置の非存在下で投与される、請求項１２５～１３５のいずれか一項に記載の使用。
  137. 対象に、ＨＢｘＡｇ ｍＲＮＡ転写物を選択的に標的化するＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが投与されない、請求項１２５～１３６のいずれか一項に記載の使用。
  138. 前記対象に有効量のエンテカビルを投与することをさらに含む、請求項１２５～１３７のいずれか一項に記載の使用。
  139. 前記治療用オリゴヌクレオチドが、細胞内で前記オリゴヌクレオチドを発現するように操作された導入遺伝子の形態で送達される、請求項１２５～１３８のいずれか一項に記載の使用。
  140. Ｂ型肝炎ウイルス感染症を処置するための方法であって、治療有効量の請求項１～９７のいずれか一項に記載の治療用オリゴヌクレオチドを、治療有効量の請求項１～９１又は９４～９７のいずれか一項に記載のＴＬＲ７アゴニストと組み合わせて、Ｂ型肝炎ウイルス感染症に感染した対象に投与することを含む、方法。
  141. Ｂ型肝炎ウイルス感染症を処置するための方法であって、治療有効量の請求項１～９７のいずれか一項に記載の医薬組合せ、組成物、又はキットを、Ｂ型肝炎ウイルス感染症に感染した対象に投与することを含む、方法。
  142. 処置される前記Ｂ型肝炎ウイルス感染症が慢性Ｂ型肝炎ウイルス感染症である、請求項１４０又は１４１に記載の方法。
  143. 前記治療用オリゴヌクレオチド及び前記ＴＬＲ７アゴニストが薬学的有効量で投与される、請求項１４０～１４２のいずれか一項に記載の方法。
  144. 前記治療用オリゴヌクレオチドを毎週投与し、前記ＴＬＲ７アゴニストを１日おきに投与する、請求項１４０～１４３のいずれか一項に記載の方法。
  145. 前記治療用オリゴヌクレオチドを１～４ｍｇ／ｋｇ ｐｒ．で投与し、前記ＴＬＲ７アゴニストを１５０～１７０ｍｇ ｐｒ．で投与する、請求項１４０～１４４のいずれか一項に記載の方法。
  146. 前記治療用オリゴヌクレオチドを４８週間投与し、８４用量のＴＬＲ７アゴニストを投与する、請求項１４０～１４５のいずれか一項に記載の方法。
  147. 前記治療用オリゴヌクレオチド及び前記ＴＬＲ７アゴニストの投与が同じ週に開始される、請求項１４０～１４６のいずれか一項に記載の方法。
  148. 前記治療用オリゴヌクレオチドが皮下投与用の剤形であり、前記ＴＬＲ７アゴニストが経口投与用の剤形である、請求項１４０～１４７のいずれか一項に記載の方法。
  149. 前記治療用オリゴヌクレオチドの用量が１００～１５０ｍｇ／ｍｌであり、前記ＴＬＲ７アゴニストの用量が１５０～１７０ｍｇである、請求項１４０～１４８のいずれか一項に記載の方法。
  150. 前記治療用オリゴヌクレオチドが、ＨＢＶ ｍＲＮＡ転写物をコードする非表面抗原を標的とするＲＮＡｉオリゴヌクレオチドによる処置の非存在下で投与される、請求項１４０～１４９のいずれか一項に記載の方法。
  151. 対象に、ＨＢｘＡｇ ｍＲＮＡ転写物を選択的に標的化するＲＮＡｉオリゴヌクレオチドが投与されない、請求項１４０～１５０のいずれか一項に記載の方法。
  152. 前記対象に有効量のエンテカビルを投与することをさらに含む、請求項１４０～１５１のいずれか一項に記載の方法。
  153. 前記治療用オリゴヌクレオチドが、細胞内で前記オリゴヌクレオチドを発現するように操作された導入遺伝子の形態で送達される、請求項１４０～１５２のいずれか一項に記載の方法。
  154. 細胞におけるＢ型肝炎ウイルス表面抗原の発現を減少させる方法であって、請求項１～９１のいずれか一項に記載の医薬組合せ又は組成物を前記細胞に送達することを含む、方法。
  155. 前記細胞が肝細胞である、請求項１５４に記載の方法。
  156. 前記細胞がインビボである、請求項１５４又は１５５に記載の方法。
  157. 前記細胞がインビトロである、請求項１５４又は１５５に記載の方法。
  158. 前記治療用オリゴヌクレオチドが、前記細胞内で前記オリゴヌクレオチドを発現するように操作された導入遺伝子の形態で送達される、請求項１５４～１５７のいずれか一項に記載の方法。
  159. 本明細書中において添付の図面を参照して実質的に記載される医薬組合せ、組成物、キット、使用、又は方法。
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