JP2023506413A - 血液由来試料中の免疫調節細胞を生成するための方法 - Google Patents

Abstract

本発明は、チェックポイント阻害剤療法を受け、かつ免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）の症状を発症する疑いがあるか、または発症した、対象の血液試料に由来する試料の提供のステップと、試料に光増感剤を添加するステップと、試料を照射に供するステップと、を含み、好ましくは、上記試料中に免疫調節ＮＫ細胞を生成する、方法に関する。実施形態では、光増感剤は、８－メトキシプソラレンであり、かつ／または照射はＵＶＡ照射である。別の態様において、本発明は、対象の単離された血液試料に由来する試料の提供のステップと、試料に光増感剤を添加するステップと、試料を照射に供するステップと、を含む方法から得られた免疫調節ＮＫ細胞に関する。さらに、本発明は、チェックポイント阻害剤療法を受けた対象におけるｉｒＡＥの治療および／または予防における使用のための免疫調節ＮＫ細胞を包含する。

Description

本発明は、チェックポイント阻害剤療法を受け、かつ免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）の症状を発症する疑いがあるか、または発症した、対象の血液試料に由来する試料の提供のステップと、試料に光増感剤を添加するステップと、試料を照射に供するステップと、を含み、好ましくは、上記試料中に免疫調節ＮＫ細胞を生成する、方法に関する。実施形態では、光増感剤は８－メトキシプソラレンであり、かつ／または照射はＵＶＡ照射である。別の態様において、本発明は、対象の単離された血液試料に由来する試料の提供のステップと、試料に光増感剤を添加するステップと、試料を照射に供するステップと、を含む方法から得られた免疫調節ＮＫ細胞に関する。さらに、本発明は、チェックポイント阻害剤療法を受けた対象におけるｉｒＡＥの治療および／または予防における使用のための免疫調節ＮＫ細胞を包含する。

免疫チェックポイントは、免疫系の調節分子であり、免疫恒常性および自己寛容性の維持において重要な役割を果たす。同定された最初の免疫チェックポイントとしては、細胞傷害性Ｔリンパ球タンパク質－４（ＣＴＬＡ－４）およびプログラム細胞死タンパク質－１（ＰＤ－１）が挙げられる。ＣＴＬＡ－４は、Ｔ細胞の表面上で発現され、抗原提示細胞上のＢ７－１（ＣＤ８０）またはＢ７－２（ＣＤ８６）分子に結合し、Ｔ細胞の負の調節因子として機能する。ＰＤ－１はまた、プログラムされたデスリガンド－１（ＰＤ－Ｌ１）およびプログラムされたデスリガンド－２（ＰＤ－Ｌ２）を含む、そのリガンドとの相互作用を通じてＴ細胞活性に悪影響を及ぼす。ＣＴＬＡ－４とは異なり、ＰＤ－１はＴ細胞上で見出されるだけでなく、Ｂ細胞およびナチュラルキラー細胞を含む多くの免疫細胞上で広く発現される。健常個体では、ＣＴＬＡ－４とＰＤ－１の両方の表面発現が緊密かつ動的に調節される。

がんの発症中、悪性細胞は、免疫チェックポイントを活性化することによって免疫応答を阻害する。以前の研究では、ＰＤ－Ｌ１が広範囲のがんにおいて発現していることが示されている。腫瘍微小環境において、がん性細胞によって発現されたＰＤ－Ｌ１は、Ｔ細胞の表面上でＰＤ－１と相互作用して、Ｔ細胞のエフェクター機能を阻害する。さらに、いくつかの研究は、ＰＤ－Ｌ１の高い腫瘍発現は、がんの予後不良と著しく相関していることを示している。これらの研究は、がんにおけるＰＤ－１シグナル伝達経路遮断の治療効果があることを示唆する。

最近の臨床試験により、いくつかの抗ＰＤ－１および抗ＰＤ－Ｌ１免疫チェックポイント阻害剤（ＩＣＩ）が、黒色腫、非小細胞肺がん、腎細胞がん、および頭頸部がんなどの様々ながんに有効であることが明らかになった。ＩＣＩの効能を拡大するための追加の臨床試験が、現在進行中である。これまでに、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）は、ニボルマブ、ペンブロリズマブ、およびセミプリマブという３つの抗ＰＤ－１抗体、ならびにアテゾリズマブ、アベルマブ、およびデュルバルマブという３つの抗ＰＤ－Ｌ１阻害剤を、異なるタイプのがんの治療のために承認している。

ＩＣＩの使用が増加するにつれて、このクラスの薬物に関連する有害事象は、重要な問題となっている。ＩＣＩは、従来の細胞傷害性化学療法とは異なる毒性プロファイルを有する。免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）として知られるＩＣＩによる免疫系の活性の増加と関連する副作用は、皮膚、消化管、内分泌系、肝臓、肺、神経系、および筋骨格系を含む体の複数の臓器に影響を及ぼし得る。

例えば、抗ＣＴＬＡ４抗体および抗ＰＤ－１抗体との免疫チェックポイント阻害剤療法の組み合わせは、悪性黒色腫の効率的な第一選択治療である。しかしながら、患者の約５０％は、重篤な免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）を発症する^１，２。自己免疫大腸炎は、２０％の症例で発生し、コルチコステロイド難治性となる可能性がある^３。

要約すると、チェックポイント阻害剤療法、特に抗ＣＴＬＡ４および抗ＰＤ－１抗体による療法は、複数の形態のがん、特に悪性黒色腫に対する有効な治療であるが、治療は、チェックポイント阻害剤療法に起因する免疫系の活性化に起因し得る実質的な副作用と関連し得る。そのような副作用は、自己免疫反応をもたらし、異なる臨床症状に現れる可能性があり、ｉｒＡＥとして要約され得る。顕著なｉｒＡＥは、自己免疫大腸炎である。自己免疫反応、特に自己免疫大腸炎などの治療の副作用は、チェックポイント阻害剤治療を停止した後も持続する場合がある。

したがって、チェックポイント阻害剤療法を受けた患者における自己免疫反応、特に自己免疫大腸炎などの免疫関連有害事象を治療するための代替的または改善された手段の必要性が、当該技術分野において存在する。

従来技術を踏まえると、本発明の基礎となる技術的課題は、チェックポイント阻害剤療法を受けた患者における自己免疫反応、特に自己免疫大腸炎などの免疫関連有害事象の治療および／または予防のための改善されたまたは代替的手段を提供することである。

この課題は、独立請求項の特徴によって解決される。本発明の好ましい実施形態は、従属請求項によって提供される。

第１の態様において、本発明は、
－チェックポイント阻害剤療法を受け、かつ免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）の症状を発症する疑いがあるか、または発症した、対象の血液試料に由来する試料の提供のステップと、
－試料に光増感剤を添加するステップと、
－試料を照射に供するステップと、を含む、方法に関する。

本発明は、例えばがん性疾患によりチェックポイント阻害剤療法を受け、特に自己免疫大腸炎などのｉｒＡＥをもたらした患者が、ＥＣＰを適用することによって効果的に治療することができるという完全に驚くべき知見に基づく。実施例で使用されたＥＣＰは、基本的に、ｉｒＡＥ患者の血液由来試料に光増感剤を添加し、試料を照射に供する方法に対応する。驚くべきことに、この方法を血液試料、特に単核細胞（ＭＮＣ）を含む血液試料などの上で予め形成することは、上記試料中の免疫調節ＮＫ細胞の生成につながることが見出された。この関連において、免疫調節ＮＫ細胞「の生成」は、試料中のかかる細胞の形成を誘導または誘導するものとして理解される。言い換えると、試料中に含まれる細胞は、免疫調節ＮＫ細胞に分化またはその表現型を採用する。

本発明の方法から生じる試料、特に試料によって含まれる誘導された免疫調節ＮＫ細胞は、ｉｒＡＥ患者の治療に有用であることが見出された。チェックポイント阻害剤療法を受けた対象に、本発明の方法を受けたそのような試料中に含まれるそのような試料または細胞を投与することは、ｉｒＡＥの発生を予防するのに有効であり、対象において既に確立されているｉｒＡＥの治療においても有効であることが驚くべきことに示され得る。重要なことに、本発明の方法は、チェックポイント阻害剤療法を受けた同じ対象の試料に対して実施することができる。したがって、本発明の方法から生じる細胞または試料は、血液ドナーとして機能した同じ対象に投与することができ、したがって、得られる試料は、自己由来細胞療法を表すことができる。

本明細書で使用される場合、「チェックポイント阻害剤療法を受けた対象」という用語は、現在進行中のチェックポイント阻害剤療法を受けている対象、または、例えばｉｒＡＥ症状が発生した後に中止されたチェックポイント阻害剤療法を受けた対象を含む。

本発明の方法から生じる試料または細胞を使用するこのような細胞療法は、ステロイドまたは抗ＴＮＦ抗体などの他の免疫抑制療法に難治性であり、チェックポイント阻害剤治療が中止された後もｉｒＡＥの症状を示し続ける、または依然として罹患し続けるｉｒＡＥ患者にさえ有効であることは、全く予想外であった。

実施例に示すように、本発明の方法を受けた試料の投与の正の効果および有効性は、試料に含まれるＮＫ細胞のＮＫ細胞機能の調節に少なくとも部分的に起因する可能性があり、上記調節は、光増感剤の存在下での照射の結果である。したがって、本発明はまた、チェックポイント阻害剤療法を受けた対象における免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）の治療および／または予防における使用のための免疫調節性ＮＫ細胞を包含する。好ましくは、免疫調節性ＮＫ細胞は、個人、好ましくはチェックポイント阻害剤療法を受け、かつｉｒＡＥを発症する疑いがあるか、または発症した対象からの血液またはＭＮＣもしくはＮＫ細胞を本発明の方法に供することによって生成され、その後、チェックポイント阻害剤療法を受け、かつｉｒＡＥを発症する疑いがあるか、または発症した、対象、好ましくはドナーである対象、を治療するために使用される。

さらなる態様において、本発明は、
－対象の単離された血液試料に由来する試料の提供のステップと、
－試料に光増感剤を添加するステップと、
－試料を照射に供するステップと、を含む方法から得られた、免疫調節ＮＫ細胞に関する。

本発明のこの態様は、光増感剤を添加した後に照射を受けた血液由来の試料中にＮＫ細胞が含まれているという観察に基づき、ｉｒＡＥの治療および／または予防において得られた細胞を使用する際に有利な免疫調節表現型を採用する。このような有利かつ有益な特性は、この文脈において、いかなる他のＮＫ細胞についてもこれまで観察されていない。

好ましくは、本発明の対象は、ヒトである。好ましくは、本発明の血液試料および細胞は、ヒトである。

好ましい実施形態では、本発明の免疫調節ＮＫ細胞を生成するために使用される血液試料は、チェックポイント阻害剤療法を受け、かつ免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）の症状を発症する疑いがあるか、または発症した、対象に由来する。この実施形態は、細胞が上記患者に対して自己由来であり、異種細胞の移植時に生じ得る有害事象が存在しないため、特に有利である。

本発明のさらなる態様は、チェックポイント阻害剤療法を受けた対象における免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）の治療および／または予防における使用のための免疫調節ＮＫ細胞を対象とする。これは、現在進行中のチェックポイント阻害剤を受けている対象、または、例えば、ｉｒＡＥ症状が発生した後に中止されたチェックポイント阻害剤療法を受けた対象を含む。

好ましくは、このような治療または予防における使用のための免疫調節ＮＫ細胞は、ヒト対象の血液試料に由来する試料に光増感剤を添加し、試料を照射に供することによって生成されている。

血液由来試料に光増感剤を添加し、試料を照射に供することは、上記試料中の免疫調節ＮＫ細胞を生成するか、または（その形成を）誘導する。

実施形態では、光増感剤は、８－メトキシプソラレンである。さらに、実施形態では、照射は、ＵＶＡ照射である。好ましい実施形態では、光増感剤は８－メトキシプソラレンであり、かつ照射はＵＶＡ照射である。

本発明の文脈において、照射は、好ましくは、体外循環式光化学療法（ＥＣＰ）システムによって予め形成される。血液試料の照射は、当業者に既知の任意の好適なシステムまたは照射デバイスを使用して行うことができる。

実施形態では、本発明の方法は、インビトロまたはエクスビボで行われる。本明細書で使用される場合、インビボおよびエクスビボという用語は、同義的に使用される。本発明の文脈において、用語は、ヒトの体から取り出した血液由来の試料に対して行われる方法に関し、本発明の方法は、ヒトの体外の血液由来の試料に対して行われる。このために、ドナー対象の血液を体外に取り出し、これは生理学的循環系の血液を取り出すことを意味する。本明細書で使用される場合、「単離された血液試料」は、ドナーの循環系から人の体外の位置に取り出された血液（ある特定の量の血液を意味する）の試料である。

そのような単離された血液試料を、本発明の方法の少なくとも特定のステップを実行するための体外循環式光化学療法（ＥＣＰ）システムまたはアフェレーシスシステムに供給または導入することができる。その中で、そのようなシステムは、対象の血液循環系と流体接続しているオンラインシステムであり得る。代替の実施形態では、方法は、オフラインで実行することができ、照射に供される血液由来試料は、ドナー対象の循環系から切断される。

したがって、実施形態では、本発明の方法は、インビトロ方法である。本発明の方法の実施形態では、血液試料は、単離された血液試料である。実施形態では、方法はインビトロ方法であり、血液試料は単離された血液試料である。

本明細書で使用される場合、「血液試料」という用語は、血液から生成されるＭＮＣ試料などの血液細胞試料を含む、あらゆる種類の血液由来試料を含む。

本発明の実施形態では、対象（血液ドナーおよび／または細胞のレシピエント）は、ｉｒＡＥの症状を示すか、またはｉｒＡＥに罹患している。さらなる実施形態では、対象はチェックポイント阻害剤療法を受けてきたが、チェックポイント阻害剤療法は、上記対象において症状および／またはｉｒＡＥの徴候が生じた後に中止された。実施形態では、ｉｒＡＥの症状および／または徴候は、チェックポイント阻害剤療法が中止された後に対象において生じた。実施形態では、ｉｒＡＥの症状および／または徴候は、チェックポイント阻害剤療法が中止された後に維持された。

本発明の実施形態では、チェックポイント阻害剤療法を受け、かつｉｒＡＥの症状を発症する疑いがあるか、または発症した、対象が、血液ドナーとして機能する場合、血液試料の提供および／または単離は、上記実施形態に記載される時点のいずれかで行われ得る。例えば、試料単離は、ｉｒＡＥ症状の発症の前または後に生じ得る。さらに、試料単離は、チェックポイント阻害剤療法中に、または上記療法の中止後に生じ得る。

本発明の好ましい実施形態では、本発明の方法から生じる試料または本発明に従う使用のためのＮＫ細胞は、チェックポイント阻害剤療法が進行している間に対象に投与される。

好ましい実施形態では、試料単離は、ｉｒＡＥ症状の発生の前後のいずれかで、チェックポイント阻害剤療法の進行中に生じる。実施例の方法から生じる試料または細胞は、進行中のチェックポイント阻害剤療法中に対象に試料／細胞を投与することによって、予防的または治療的に使用することができる。したがって、本発明の好ましい実施形態では、チェックポイント阻害剤療法を受けた対象は、免疫調節ＮＫ細胞を受容することができ、免疫調節ＮＫ細胞は、好ましくは自己由来であり、本明細書に記載の方法に従って血液由来試料に照射することによって生成されている一方で、チェックポイント阻害剤療法が進行している。抗がんチェックポイント阻害剤療法などのチェックポイント阻害剤療法が維持され得る一方で、患者は、本発明の細胞および／または本発明の方法から生じる細胞を受容するので、そのような実施形態は特に有利である。

したがって、そのような実施形態では、照射された細胞の投与は、ｉｒＡＥの発生を防止するか、またはチェックポイント阻害剤療法を継続することができるように、ｉｒＡＥを寛解するかのいずれかであるため、チェックポイント阻害剤療法は、より長い期間対象に投与することができる。本発明の方法、特に本発明の免疫調節性ＮＫ細胞から生じるかかる細胞の投与が、チェックポイント阻害剤療法の対象の抗がん応答を妨げないことが驚くべきことに示され得る。これは、ｉｒＡＥの既知の治療／予防措置、特にコルチコステロイドなどの免疫抑制薬の投与と比較して、重要な利点を表す。驚くべきことに、ＥＣＰを行うことは、チェックポイント阻害剤療法の抗がん効果を顕著に変えることはなく、一方、グルココルチコイド（特定のクラスのコルチコステロイド）、特にプレドニゾロンの並行投与は、チェックポイント阻害剤治療の有効性の低下を示す、より悪い転帰をもたらした。

さらに、試料に光増感剤を添加し、試料を照射に供する方法を受けた（ヒト）血液由来の試料が、チェックポイント阻害剤療法を受けた対象におけるｉｒＡＥの治療および／または予防に使用される実施形態では、血液由来の試料（自己由来または異種）の供給源にかかわらず、そのような方法から生じる試料または細胞の投与は、例えば、ｉｒＡＥ症状の発症の前もしくは後、および／またはチェックポイント阻害剤療法の間、もしくはチェックポイント阻害剤療法の中止後に生じ得る。

本発明の実施形態では、ｉｒＡＥ（血液ドナーおよび／または細胞のレシピエント）は、自己免疫疾患の症状を含み、および／または自己免疫反応によって引き起こされる。好ましい実施形態では、ｉｒＡＥは、自己免疫大腸炎を含むか、または自己免疫大腸炎である。

実施形態では、ｉｒＡＥは、自己免疫大腸炎、自己免疫肝炎、自己免疫甲状腺炎および自己免疫皮膚炎を含む群から選択される少なくとも１つのｉｒＡＥを含む。

実施形態では、ｉｒＡＥは、免疫チェックポイント阻害剤関連大腸炎、免疫チェックポイント阻害剤関連肝炎、免疫チェックポイント阻害剤関連甲状腺炎、および免疫チェックポイント阻害剤関連皮膚炎を含む群から選択される少なくとも１つのｉｒＡＥを含む。

実施形態では、対象（血液ドナーおよび／または細胞のレシピエント）は、悪性黒色腫またはチェックポイント阻害剤療法によって治療可能な別のがんなどのがんに罹患している。

実施形態では、対象は、ステロイド、コルチコステロイド、シクロスポリン、および／もしくは抗ＴＮＦ抗体（例えば、インフリキシマブ）などの免疫抑制薬を受けている、かつ／または免疫抑制薬に対して難治性である。

免疫調節ＮＫ細胞などの本明細書に記載の方法から生じた細胞の投与が、ｉｒＡＥ症状を治療するために投与されている免疫抑制薬に対して難治性であるｉｒＡＥ患者に対する治療効果を有することは、まったく驚くべきことであった。かかる患者について、ｉｒＡＥの症状を寛解するために利用可能な有効な治療はなく、したがって、本発明は、これらの患者におけるｉｒＡＥの治療の全く予期しない可能性を表す。

実施形態では、チェックポイント阻害剤療法は、抗ＣＴＬＡ４抗体および抗ＰＤ－１抗体のうちの少なくとも１つの投与を含む。

実施形態では、チェックポイント阻害剤療法を受けた対象におけるｉｒＡＥの治療および／または予防における使用のための免疫調節ＮＫ細胞は、上記対象に対して自己由来である。代替的な実施形態では、ＮＫ細胞は、上記対象に対して異種であり得る。

実施形態では、本発明による使用のための免疫調節ＮＫ細胞は、ｉｒＡＥ症状の発生時に投与される。実施形態では、細胞は、ｉｒＡＥ症状の発生後１、２、３、４、５、６もしくは７日または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３５、４０、４５もしくは５０週間投与される。実施形態では、免疫調節ＮＫ細胞は、チェックポイント阻害剤療法が進行する間、またはチェックポイント阻害剤療法が中止された後に投与される。

実施形態では、免疫調節ＮＫ細胞は、対象に少なくとも１回、好ましくは少なくとも２回、好ましくは連日で投与される。したがって、対象は、１回用量を超えるＮＫ細胞の投与を受けることができるが、好ましくは、１日当たり１回用量を超えない投与が行われる。さらなる実施形態では、対象は、少なくとも２、３、４、または５回投与量の本発明のＮＫ細胞を受ける。実施形態では、本発明の免疫調節ＮＫ細胞は、少なくとも８週間ごと、好ましくは２～４週間ごとに対象に投与される。

本発明の一態様の文脈において開示または記載される本発明の各任意選択的または好ましい特徴は、本明細書に記載される本発明の他の態様の文脈においても本明細書に開示される。

さらに、本発明はまた、以下の実施形態に関する。

１．チェックポイント阻害剤療法を受けた対象における免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）の治療および／または予防における使用のための体外循環式光化学療法（ＥＣＰ）システムであって、ＥＣＰが、好ましくは８－メトキシプソラレンの投与と共に実施される、体外循環式光化学療法（ＥＣＰ）システム。

本発明は、例えばがん性疾患によりチェックポイント阻害剤療法を受け、特に自己免疫大腸炎などのｉｒＡＥをもたらした患者が、ＥＣＰを適用することによって効果的に治療することができるという完全に驚くべき知見に基づく。これは、ステロイドまたは抗ＴＮＦ抗体などの他の免疫抑制療法に対して難治性であり、チェックポイント阻害剤治療が中止された後もｉｒＡＥの症状を示し続ける、または依然として罹患する患者においても当てはまる。

驚くべきことに、ＥＣＰ治療の正の効果および有効性は、特に、ＥＣＰ後のＮＫ細胞機能の調節から生じたことが分かった。したがって、本発明はまた、特に、チェックポイント阻害剤療法を受けた対象における免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）の治療および／または予防における使用のための免疫調節性ＮＫ細胞に関し、免疫調節性ＮＫ細胞は、個人、好ましくは本発明の対象からの血液またはＭＮＣもしくはＮＫ細胞をＥＣＰ治療に供することによって生成された。

２．本発明に従う使用のためのＥＣＰシステムであって、ＥＣＰシステムがオンラインＥＣＰシステムである、ＥＣＰシステム。

３．本発明に従う使用のためのＥＣＰシステムであって、ＥＣＰシステムがオフラインＥＣＰシステムである、ＥＣＰシステム。

４．本発明に従う使用のためのＥＣＰシステムであって、対象が、ｉｒＡＥの症状を示すか、またはｉｒＡＥに罹患している、ＥＣＰシステム。

５．本発明に従う使用のためのＥＣＰシステムであって、チェックポイント阻害剤療法は、上記対象においてｉｒＡＥの症状および／または徴候が発生した後、中止された、ＥＣＰシステム。

６．本発明に従う使用のためのＥＣＰシステムであって、ｉｒＡＥの症状および／または徴候は、チェックポイント阻害剤療法が中止された後に生じた、ＥＣＰシステム。

７．本発明に従う使用のためのＥＣＰシステムであって、ｉｒＡＥの症状および／または徴候は、チェックポイント阻害剤療法が中止された後に維持された、ＥＣＰシステム。

８．いずれかの本発明に従う使用のためのＥＣＰシステムであって、ＥＣＰ治療が、ｉｒＡＥ症状の発生時に開始される、ＥＣＰシステム。

９．本発明に従う使用のためのＥＣＰシステムであって、ＥＣＰ治療が、ｉｒＡＥ症状の発生から１、２、３、４、５、６、もしくは７日後、または１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３５、４０、４５、もしくは５０週間後に開始される、ＥＣＰシステム。

１０．いずれかの本発明に従う使用のためのＥＣＰシステムであって、ＥＣＰ治療が、チェックポイント阻害剤療法が進行中の間、またはチェックポイント阻害剤療法が中止された後に開始される、ＥＣＰシステム。

１１．本発明に従う使用のためのＥＣＰシステムであって、ＥＣＰ治療が、少なくとも１、好ましくは少なくとも２サイクルのＥＣＰを、好ましくは連日で含む、ＥＣＰシステム。

１２．本発明に従う使用のためのＥＣＰシステムであって、ＥＣＰ治療が、少なくとも２、３、４、または５回行われる、ＥＣＰシステム。

１３．本発明に従う使用のためのＥＣＰシステムであって、ＥＣＰ治療が、少なくとも８週間ごと、好ましくは２～４週間ごとに行われる、ＥＣＰシステム。

１４．本発明に従う使用のためのＥＣＰシステムであって、ｉｒＡＥが、自己免疫疾患の症状を含む、ＥＣＰシステム。

１５．本発明に従う使用のためのＥＣＰシステムであって、ｉｒＡＥが、自己免疫反応によって引き起こされる、ＥＣＰシステム。

１６．本発明に従う使用のためのＥＣＰシステムであって、ｉｒＡＥが、自己免疫大腸炎、自己免疫性肝炎、自己免疫性甲状腺炎および自己免疫性皮膚炎を含む群から選択される少なくとも１つのｉｒＡＥを含む、ＥＣＰシステム。

１７．本発明に従う使用のためのＥＣＰシステムであって、ｉｒＡＥが、免疫チェックポイント阻害剤関連大腸炎、免疫チェックポイント阻害剤関連肝炎、免疫チェックポイント阻害剤関連甲状腺炎、および免疫チェックポイント阻害剤関連皮膚炎を含む群から選択される少なくとも１つのｉｒＡＥを含む、ＥＣＰシステム。

１８．本発明に従う使用のためのＥＣＰシステムであって、ｉｒＡＥが、自己免疫大腸炎を含む、ＥＣＰシステム。

１９．本発明に従う使用のためのＥＣＰシステムであって、ＩｒＡＥが、自己免疫大腸炎である、ＥＣＰシステム。

２０．本発明に従う使用のためのＥＣＰシステムであって、対象が、ヒトである、ＥＣＰシステム。

２１．本発明に従う使用のためのＥＣＰシステムであって、対象が、悪性黒色腫またはチェックポイント阻害剤療法によって治療可能な別のがんなどのがんに罹患している、ＥＣＰシステム。

２２．本発明に従う使用のためのＥＣＰシステムであって、対象が、ステロイド、コルチコステロイド、シクロスポリン、および／もしくは抗ＴＮＦ抗体（例えば、インフリキシマブ）などの免疫抑制薬を受けている、かつ／または免疫抑制薬に対して難治性である、ＥＣＰシステム。

２３．本発明に従う使用のためのＥＣＰシステムであって、対象が、ステロイド、コルチコステロイド、シクロスポリンおよび／または抗ＴＮＦ抗体（例えばインフリキシマブ）などの免疫抑制薬に対して難治性である、ＥＣＰシステム。

２４．本発明に従う使用のためのＥＣＰシステムであって、チェックポイント阻害剤療法が、抗ＣＴＬＡ４抗体および抗ＰＤ－１抗体のうちの少なくとも１つの投与を含む、ＥＣＰシステム。

２５．本発明に従う使用のためのＥＣＰシステムであって、ＥＣＰシステムが、血液照射療法を行うために使用される、ＥＣＰシステム。

２６．本発明に従う使用のためのＥＣＰシステムであって、ＥＣＰシステムが、免疫調節分子、好ましくは、ＥＣＰシステムの膜に結合された免疫調節分子性を含み、免疫調節性分子が、対象の免疫細胞と接触する、ＥＣＰシステム。

２７．インビトロ方法であって、
－チェックポイント阻害剤療法を受け、かつ免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）の症状を発症する疑いがあるか、または発症した、対象の単離された血液試料に由来する試料の提供のステップと、
－上記試料を体外循環式光化学療法に供するステップと、を含む、インビトロ方法。

２８．チェックポイント阻害剤療法を受け、かつ免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）の症状を発症する疑いがあるか、または発症した、対象を治療する方法であって、上記対象を、ＥＣＰシステムによる血液照射療法などの体外循環式光化学療法（ＥＣＰ）療法（ＥＣＰ）に供することを含む、方法。

２９．チェックポイント阻害剤療法を受けた対象における免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）の治療および／または予防における使用のための免疫調節ＮＫ細胞。

３０．本発明に従う使用のための免疫調節ＮＫ細胞であって、免疫調節ＮＫ細胞が、ヒト血液試料またはヒト血液試料中に含まれる細胞を体外循環式光化学療法に供することによって生成されている、免疫調節ＮＫ細胞。

３１．本発明に従う使用のための免疫調節ＮＫ細胞であって、ＮＫ細胞が、上記対象に対して自己由来または異種である、免疫調節ＮＫ細胞。

３２．本発明に従う使用のための免疫調節ＮＫ細胞であって、上記対象にＮＫ細胞を静脈内投与する、免疫調節ＮＫ細胞。

３３．本発明に従う使用のための免疫調節ＮＫ細胞であって、ＮＫ細胞が、体外循環式光化学療法へ供する前または後に、ヒト血液試料から単離される、免疫調節ＮＫ細胞。

本発明のチェックポイント阻害剤療法を受けた対象における免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）の治療および／または予防における使用のためのＥＣＰシステムの文脈において開示されるすべての特徴はまた、本発明のインビトロ法、本発明の治療方法および本発明のチェックポイント阻害剤療法を受けた対象における免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）の治療および／または予防における使用のためのＮＫ細胞、ならびにその逆の文脈においてもまた本明細書において開示される。
（発明を実施するための形態）

特許文献および非特許文献のすべての引用文献は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。

本明細書に開示されるのは、対象、好ましくは、チェックポイント阻害剤療法を受け、かつ免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）の症状を発症する疑いがあるか、または発症した、対象の血液試料に由来する試料の提供のステップと、試料に光増感剤を添加するステップと、試料を照射に供するステップと、を含む、方法である。血液試料の照射は、当業者に既知の任意の好適なシステムまたは照射デバイスを使用して行うことができる。好ましくは、照射は、体外循環式光化学療法（ＥＣＰ）システムによって行われる。

本発明はまた、チェックポイント阻害剤療法を受けた対象における免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）の治療および／または予防における使用のための体外循環式光化学療法（ＥＣＰ）システムに関し、ＥＣＰは、好ましくは８－メトキシプソラレンの投与と共に行われる。

照射および体外循環式光化学療法（ＥＣＰ）
光化学療法、または体外循環式光化学療法（ＥＣＰ）は、血液を光増感剤で処理し、その後特定の波長の光を照射して効果を達成するアフェレーシスおよび光線力学療法の一形態である。例えば、バフィーコート（ＷＢＣ＋血小板）は、全血から分離し、８－メトキシプソラレンで化学的に処理し（収集バッグに滴下するか、または予め数回投与する）、紫外線（ＵＶＡ）に曝露し、患者に戻すことができる。活性化された８－メトキシプソラレンは、曝露細胞内でＤＮＡを架橋し、最終的には有核細胞のアポトーシスをもたらす。患者に戻された光化学的に損傷したＴ細胞は、Ｔ細胞の形成に細胞傷害効果を誘導するように見える。

８－メトキシプソラレンを伴うフォトフェレーシス光化学療法は、１９８７年のＮｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎの出版物（Ｅｄｅｌｓｏｎ，Ｒ，ｅｔ ａｌ．（１９８７）「Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｃｕｔａｎｅｏｕｓ Ｔ－ｃｅｌｌ ｌｙｍｐｈｏｍａ ｂｙ ｅｘｔｒａｃｏｒｐｏｒｅａｌ ｐｈｏｔｏｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｒｅｓｕｌｔｓ」Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．３１６（６）：２９７－３０３．）で初めて記載された。光化学療法は、現在、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）によって皮膚Ｔ細胞リンパ腫に対して承認されている標準療法である。この治療は、移植片対宿主病の治療に有効である可能性があることが示唆されている。光化学療法はまた、他のすべての治療が無効であった場合の表皮溶解性水疱症の治療にも成功している。

本明細書で使用されるＥＣＰは、血液照射療法を含む。実施形態では、本発明のＥＣＰおよびＥＣＰシステムは、血液照射療法および血液照射療法のためのシステムに関する。本発明の実施形態では、ＥＣＰは、血液照射療法を除くＥＣＰに関する。

血液照射療法は、治療上の理由により血液が低レベルの赤色光（多くの場合レーザー光）に曝露される手順である。血液照射療法は、３つの方式で投与することができる。体外で、血液を引き出し、特殊なキュベットにおいて、それに照射する。この方法は、ＵＶランプによる紫外線（ＵＶ）血液照射（ＵＶＢＩ）のために使用される。レーザー光は、単色であり、すなわち、光を光ファイバに取り込み、静脈内のカテーテルを介して静脈内照射を行うことができるような波長を有する。この方法は、よりシンプルで有効性がある。血液照射療法は、大血管の突起上の皮膚を介して外部にも投与される。

静脈内または血管内レーザー血液照射（ＩＬＢＩ）は、任意の治療効果が循環系を通じて循環するであろうとの仮定の下、６３２．８ｎｍの波長で１～３ｍＷのヘリウム－ネオンレーザーによって生成された低レベルのレーザー光を血管チャネル、通常は前腕の静脈に送り込むことによって、血液のインビボ照明を伴う。ほとんどの場合、３６５、４０５、５２５、６３５ｎｍの波長と２．３ｍＷの電力が使用される。この手法は、現在、ロシアでは広く使われているが、アジアではあまり使われておらず、世界の他の地域では広く使われていない。ＩＬＢＩは、血流およびその輸送活性を改善することが示され、したがって、組織栄養性は、免疫系および細胞代謝に好影響を及ぼす。この問題は、懐疑の対象となる。このトピックの研究を増やすためのいくつかの需要があった。経皮療法は、多数の血管（前腕など）がある領域の壊れていない皮膚にレーザー光を適用する。皮膚は血液への障壁として作用し、低レベルのレーザーエネルギーを吸収するため、レーザーの力は、しばしば補償するために増強される。課題は、パルス化されたマトリックスレーザー光源を使用することによって解決することができる。体外照射は、静脈を介して血液を引き出し、体外に照射することに関与する紫外線血液照射にのみ使用される。がんの治療として推進されたが、１９５２年のＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎのレビューおよび１９７０年のＡｍｅｒｉｃａｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｏｃｉｅｔｙの別のレビューでは、この治療は効果がないと結論づけられた。

体外循環式光化学療法（ＥＣＰ）は、体外光免疫療法または光化学療法としても知られており、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）の患者に最初に使用された白血球アフェレーシスに基づく療法である。具体的には、白血病変異型であるセザリー症候群に罹患している難治性ＣＴＣＬ患者の治療について、ＥＣＰは、１９８８年にＦＤＡ（米国食品医薬品局）の承認を受けた。ＥＣＰ中、患者の全血は、血漿および非核細胞から白血球を分離するために、肘静脈または永久に埋め込まれたカテーテルを介して収集される。この手順のために特別に構築されたデバイスでは、収集された白血球、いわゆるバフィーコートは、患者への再注入の前に、８－メトキシプソラレンという光増感剤の存在下で紫外線Ａ（ＵＶＡ）照射に曝露される。

ＥＣＰ手順を実行するための２つの基本的に異なる方法が記載されており、本発明によって含まれる。これらは、白血球収集およびＵＶＡ照射のために使用されるデバイスで異なる：「クローズドシステム」およびいわゆる「オープンシステム」。クローズドシステムは、Ｅｄｅｌｓｏｎと同僚によるオリジナルの設計に基づき、ＦＤＡが承認した唯一のシステムである。オープンシステムは、様々な分離器具を組み込んだシステムであり、ほとんどがアメリカ合衆国外で使用されている。ＥＣＰは、３０年以来有効な治療法であり、２００万回を超える治療が実施されているが、否定的な細胞遺伝学的影響に関する報告はない。

ＥＣＰを開始するための適応症は、その導入以来継続的に延長された。ＥＣＰ治療は、一般に患者によって良好な寛容性を有し、著しく望ましくない副作用はほとんどない。総合すると、ＥＣＰは優れた安全性プロファイルと有効性を組み合わせる。

体外循環式光化学療法（体外光化学療法とも称されることがある）は、以下を含むプロセスである：（１）患者由来の単核細胞（ＭＮＣ）の収集、（２）収集されたＭＮＣ細胞の光活性化処理、および（３）処理された細胞（ＭＮＣ）の患者への再注入。より具体的には、ＥＣＰは、８－メトキシプソラレンまたは「８－ＭＯＰ」などの光活性化合物と組み合わせた末梢血単核細胞の体外曝露を伴い、その後、紫外線によって光活性化され、続いて処理された単核細胞の再注入を伴う。８－ＭＯＰおよびＵＶ放射線の組み合わせは、ＥＣＰで治療されたＴ細胞のアポトーシスまたはプログラムされた細胞死を引き起こすと考えられている。

ＥＣＰ治療における（異なる疾患状態における）正確な作用機構は、完全には知られていないが、初期の理論によれば、光活性化は、８－ＭＯＰをＴ細胞核に含まれるＤＮＡ鎖に不可逆的に共有結合させると考えられた。光化学的に損傷したＴ細胞が再注入されると、細胞傷害効果が誘発される。例えば、細胞傷害性Ｔ細胞または「ＣＤ８＋細胞」は、感染または損傷した細胞に曝露したときに細胞毒を放出するか、あるいはそうでなければその表面上に特定の外来分子または異常分子を担持する細胞を攻撃する。細胞毒は、損傷した細胞の膜を標的とし、標的細胞に入り、最終的には、標的細胞のアポトーシスまたはプログラムされた細胞死につながる。つまり、処理された単核細胞が体内に戻された後、免疫系は瀕死の異常な細胞を認識し、それらの細胞に対抗するために健康なリンパ球（Ｔ細胞）を生成し始める。

上記に加えて、体外循環式光化学療法はまた、単球（単核細胞の一種）を誘導して、アポトーシスＴ細胞抗原を食作用させ処理することができる樹状細胞に分化させることも理論化されている。これらの活性化された樹状細胞を全身循環に再注入すると、上記のような処理されたアポトーシスＴ細胞抗原に対する全身細胞傷害性ＣＤ８＋Ｔリンパ球媒介性免疫応答を引き起こし得る。他の可能な作用機構は、単核細胞のＥＣＰ治療から観察されている利益、およびＥＣＰベースの療法を受けている患者に対するその後の利益の達成に関与し得ることが理解されるであろう。

最近では、ＥＣＰは、患者において免疫寛容応答をもたらす可能性があると仮定されている。例えば、移植片対宿主病の場合、アポトーシス細胞の注入は、調節Ｔ細胞の生成を刺激し、炎症性サイトカイン産生を阻害し、有効なＴ細胞の欠失を引き起こし、他の応答をもたらし得る。Ｐｅｒｉｔｔ，“Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ Ｐｈｏｔｏｐｈｅｒｅｓｉｓ ｉｎ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，”Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｂｌｏｏｄ ａｎｄ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ １２：７－１２（２００６）を参照されたい。現在、免疫寛容応答の理論は、主要な説明の中にあるように思われるが、移植片対宿主病、ならびに他の疾患状態に対するＥＣＰの作用機構については、他の理論が存在する。

ＥＣＰを実施するためのシステムとしては、例えば、Ｔｈｅｒａｋｏｓ，Ｉｎｃ．，ｏｆ Ｅｘｔｏｎ，Ｐａ．から入手可能なＵＶＡＲ ＸＴＳ Ｐｈｏｔｏｐｈｅｒｅｓｉｓ ＳｙｓｔｅｍおよびＣｅｌｌＥｘ Ｐｈｏｔｏｐｈｅｒｅｓｉｓ Ｓｙｓｔｅｍが挙げられる。ＴｈｅｒａｋｏｓシステムでＥＣＰを実行するさらなる詳細は、例えば、米国特許第５，９８４，８８７号に見出すことができる。

現在、光化学療法－オンラインおよびオフラインのシステムおよび方法を実行するために一般的に使用される２つの方法がある。

オンライン方法では、上記のＴｈｅｒａｋｏｓデバイスなどの専用光化学療法デバイスを使用して、処理されたＭＮＣの再注入を含む治療全体を実施する。かかるデバイスは、光化学療法を実行するためにのみ設計された「専用の」光化学療法デバイスであり、例えば、血小板、血漿、ＲＢＣ、節細胞の収集および／または血漿／ＲＢＣ交換プロトコルを実行するための多機能アフェレーシスプロトコルを含む、病院または血液処理設定で必要とされる他の収集プロトコルを実行することができない。

オフライン光化学療法の方法では、単核細胞を収集するために多機能性アフェレーシスデバイスを使用してもよい。典型的に１つ以上の収集容器に含まれる収集されたＭＮＣは、収集中に使用されるチューブセットから切り離されるか、またはそうでなければ分離され、それらは後に別個の照射またはＵＶＡ光デバイスで処理され、続いて処理された細胞が患者に手動で再注入される。しかしながら、このようなオフライン方法の間、細胞がアフェレーシスデバイスから照射デバイス（デバイスは別の部屋または実験室に配置され得る）に移されるとき、ドナーとの通信は切断されなければならず、したがって、細胞はドナーから切り離されなければならない。したがって、処理されたＭＮＣ生成物が最終的に正しいドナーに再注入されることを確実にするために、追加のトレーサビリティ手順が必要である。

デバイスおよびデバイス内の酵素の固定化：
本発明の実施形態では、ＥＣＰシステムは、固定化された免疫調節性分子または酵素などの他の生体分子を有するマトリックスを含むデバイスを含み得る。好ましくは、結合した分子を有するマトリックスは、本発明の文脈において血液またはＭＮＣに曝露される。

したがって、本明細書で使用される「マトリックス」は、血液または血漿が通過する内部材料または表面を提供する血液処理デバイスの内部の材料を指す。本発明の文脈において使用されるマトリックスは、好ましくは、固定化された免疫調節性分子または他の生体分子が結合している支持体を含む。したがって、支持体は、他の機能を果たし得るにもかかわらず、固定化された免疫調節性分子または他の生体分子の担体として機能する。

本明細書で使用される「支持体」は、本発明による固定化された免疫調節性分子または他の生体分子が結合した「基質」または「支持体材料」として機能するマトリックスの一部分を指す。このような支持体または支持体材料は、「吸着カラム」または「カラム」または「吸着カートリッジ」で使用される場合、「吸着材料」または「吸着剤」とも称されることがある。本発明による好適な支持体は、使用中の酵素の浸出がない、または無視できる程度の温度で、関連するｐＨ範囲および温度にわたって均一、親水性、機械的および化学的に安定であり、全血および／または血漿のための良好な流動特性を有するべきであり、かつ酵素結合のための大きい表面積を提供する。

支持体は、例えば、樹脂、膜、または不織布材料であり得る。「不織布」材料は、広義には、繊維またはフィラメントを巻き付けることによって（およびフィルムを穿孔することによって）、機械的に、熱的に、または化学的に、しかし織りまたは編み物によってではなく、一緒に接合されたシート、布地またはウェブ構造として定義される材料を指す。「樹脂」は、ゲルもしくはゲルビーズもしくは微孔性ビーズ、またはスポンジの形態をとることができる不溶性材料を指す。かかる樹脂は、天然または生体ポリマー、合成ポリマーおよび無機材料であり得る。アガロース、デキストロースおよびセルロースビーズは、一般的に用いられる天然支持体である。合成高分子または有機支持体は、主にアクリルアミド、ポリスチレンおよびポリメタクリレート誘導体に基づくが、多孔質シリカおよびガラスは、いくつかの頻繁に使用される無機支持体である。

本発明の一実施形態によれば、樹脂は、アルギン酸塩、キトサン、キチン、コラーゲン、カラギーナン、ゼラチン、セルロース、デンプン、ペクチンおよびセファロースからなる群から選択されるポリマー、ゼオライト、セラミック、セライト、シリカ、ガラス、活性炭および炭素からなる群から選択される無機材料、またはポリエチレン（ＰＥ）、ポリオキシメチレン（ＰＯＭ）、ポリプロピレン（ＰＰ）、ポリ塩化ビニル（ＰＶＣ）、ポリ酢酸ビニル（ＰＶＡ）、ポリ塩化ビニリデン（ＰＶＤＣ）、ポリスチレン（ＰＳ）、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）、ポリアクリレート（ＰＡＡ）、ポリメチルメタクリレート（ＰＭＭＡ）、ポリアクリルアミド、ポリグリシジルメタクリレート（ＰＧＭＡ）、アクリロニトリルブタジエンスチレン（ＡＢＳ）、ポリアクリロニトリル（ＰＡＮ）、ポリエステル、ポリカーボネート、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリアミド、ポリアラミド、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリスルホン（ＰＳ）、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）、ポリアリールエーテルスルホン（ＰＥＡＳ）、エチレン酢酸ビニル（ＥＶＡ）、エチレンビニルアルコール（ＥＶＯＨ）、ポリアミドイミド、ポリアリールエーテルケトン（ＰＡＥＫ）、ポリブタジエン（ＰＢＤ）、ポリブチレン（ＰＢ）、ポリブチレンテレフタレート（ＰＢＴ）、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）、ポリヒドロキシアルカノエート、ポリエーテルエーテルケトン（ＰＥＥＫ）、ポリエーテルケトンケトン（ＰＥＫＫ）、ポリエーテルイミド（ＰＥＩ）、ポリイミド、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリメチルペンテン（ＰＭＰ）、ポリ（ｐ－フェニレンエーテル）（ＰＰＥ）、ポリウレタン（ＰＵ）、スチレンアクリロニトリル（ＳＡＮ）、ポリブテン酸、ポリ（４－アリル－安息香酸）、ポリ（アクリル酸グリシジル）、メタクリル酸ポリグリシジル（ＰＧＭＡ）、アクリロニトリルブタジエンスチレン（ＡＢＳ）、ポリジビニルベンゼン（ＰＤＶＢ）、ポリ（アリルグリシジルエーテル）、ポリ（ビニルグリシジルエーテル）、ポリ（ビニルグリシジルウレタン）、ポリアリルアミン、ポリビニルアミン、上記ポリマーのコポリマー、および官能基の導入によって修飾されたこれらのポリマーのいずれかからなる群から選択される合成ポリマーから構成される。

固定化された免疫調節性分子または他の生体分子を本発明に従って支持体および／またはマトリックスに固定化するために、様々な既知の方法を使用することができる。このような固定化は、好ましくは、酵素を固定化するという点で特異的または選択的であるが、一方で、血液もしくは血漿またはその試料中に存在する他のタンパク質および成分（インビトロ）は、かなりの程度まで固定化されない。

固定化された免疫調節性分子または他の生体分子の、本発明に従うデバイスで使用され得るマトリックスを提供するための支持体への「固定化」は、２つの分子を一緒に保持する非共有結合または共有結合相互作用を指す。本発明の一実施形態によれば、発現は、共有結合相互作用、すなわち、共有結合された固定化された免疫調節性分子または他の生体分子を指す。非共有結合相互作用には、水素結合、荷電基間のイオン相互作用、ファンデルワールス相互作用、および非極性基間の疎水性相互作用が含まれるが、これらに限定されない。これらの相互作用のうちの１つ以上が、２つの分子の互いに結合を媒介することができる。結合は、それ以外の場合、特異的であっても、選択的であっても、または非特異的であってもよい。

一実施形態によれば、固定化された免疫調節性分子または他の生体分子は、それを支持体上に固定化するための親和性タグを含む。親和性タグは、生成中にタンパク質を精製するため、および／または本発明のマトリックスの支持体上にそれらを固定化するために使用することができる。親和性タグは、短いポリペプチド配列または酵素と融合パートナーとして共発現される全タンパク質であり得る。異なるタイプの親和性タグが当該技術分野で周知であり、ポリヒスチジンまたはＨｉｓ_６タグ、Ｃ－ｍｙｃタグ、およびＦＬＡＧタグが特によく記載されており、本発明に従う酵素を支持体材料に結合させるためのオプションである。ビオチンのストレパビジンまたはアビジンへの非共有結合もまた、固定化された免疫調節性分子または他の生体分子を支持体に固定化するために使用することができる。

本発明の別の実施形態によれば、固定化された免疫調節性分子または他の生体分子は、以下にさらに詳細に記載されるように、および／または従来技術に記載されるように、支持体に共有結合される。共有結合は、一般に、タンパク質の共有結合非部位指向性結合またはタンパク質の部位指向性結合のいずれかを含む。マトリックスの生成の基礎を形成する支持体は、化学的活性化を提供するか、または促進しなければならず、したがって、固定化された免疫調節性分子または他の生体分子の化学的カップリングを可能にする。固定化された免疫調節性分子または他の生体分子を固定化するための多くのカップリング方法は、当該技術分野で周知である。

例えば、活性化化学は、酵素の無視できるほどの浸出をもたらす幅広いｐＨ、緩衝条件、および温度にわたって安定であるべきである。カップリング方法は、固定化された免疫調節性分子または他の生体分子の不適切な配向、多部位結合、または立体障害を避けるべきである。マトリックスの体積当たりの酵素密度は、標的のアクセス可能性および反応を促進するように最適化することができる。

共有結合は、アミン、アルコール、カルボン酸、アルデヒド、およびエポキシ基を含む、共通の官能基を介して実行することができる。カルボジイミド化合物を使用して、タンパク質のカルボキシル基を活性化して、アミド結合を介して支持体表面の一級アミンへの直接のコンジュゲーションのために使用することができる。最も一般的に使用されるカルボジイミドは、水性架橋用の水溶性ＥＤＣ（１－エチル－３－（－３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド）および非水有機合成方法用の水不溶性ＤＣＣ（Ｎ’，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミド）である。

代替的に、支持体は、リンカーおよび／またはそれに酵素を結合するための特定の官能基を担持し得る。例えば、官能基化された樹脂は、市販されており、当業者に知られている。一級アミン、スルフヒドリル、アルデヒド、ヒドロキシル、およびカルボン酸を含む広範囲のカップリング化学物質は、上記商業的支持体において入手可能である。市販の活性化樹脂の例としては、ＣａｒｂｏＬｉｎｋカップリング樹脂、Ｐｒｏｆｉｎｉｔｙ（商標）エポキシド樹脂、Ａｆｆｉ－Ｇｅｌ １０および１５、エポキシ活性化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（商標）６Ｂ、塩化トレシル活性化アガロース、ならびにＥｐｏｘｙ基で官能基化されたＰｕｒｏｌｉｔｅ（登録商標）Ｌｉｆｅｔｅｃｈ（商標）メタクリル酸塩ポリマーが挙げられる。

本発明の一実施形態によれば、支持体材料は、多孔質でなければならず、孔径は１０～２００ｎｍの範囲である。本発明の別の実施形態によれば、支持体は、ビーズの形態をとる。さらに別の実施形態によれば、本発明による支持体は、磁気ビーズを含む。磁気ビーズは、本発明に従う酵素が固定化されているアガロースまたは他の高分子材料内に磁鉄鉱を封入することによって調製される。

本発明の別の実施形態によれば、支持体は、膜である。親和性マトリックスの構成要素としての膜は、それらの単純さ、取り扱いの容易さ、表面積の減少、ならびにゲル、樹脂およびビーズと比較して低い拡散制限により、タンパク質精製に使用されている。膜は、中空繊維の物理的形態をとることもでき、代替的に、平板膜の物理的形態をとることもできる。一実施形態によれば、支持体は、血液透析中空繊維膜透析器を含み、フィルタは、血液透析器である。

本発明に従うデバイスにおける支持体としての使用のための中空繊維または平板膜は、セルロース、セルロースエステル（酢酸セルロースおよび三酢酸セルロース）、ポリ（メチルメタクリレート）（ＰＭＭＡ）、ポリアミド（ＰＡ）、他の窒素含有ポリマー（ポリベンズイミダゾール、ポリアクリロニトリル（ＰＡＮ）、ポリグリシジルメタクリレート（ＰＧＭＡ）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリスルホン（ＰＳ）、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）またはポリアリールエーテルスルホン（ＰＡＥＳ）から構成され得る。本発明に従うデバイスを提供するために有利に利用することができる中空繊維膜は、好ましくは、１００～５００μｍの範囲の内径を有する。本発明の別の実施形態によれば、具体的には、膜支持体が上述のように血液透析膜である場合、中空繊維膜は、繊維の管腔側で本発明に従う酵素によって追加的または代替的に官能基化され、それらは、中空繊維膜の管腔を灌流する血液または血漿中の標的代謝産物と直接相互作用することができる。酵素はまた、代替的に膜の外側に固定化されてもよい。

体外血液治療のための方法：
本発明は、患者の血液が通過する体外血液回路に位置されるように構成され、患者の血管系から血液を規定の流量で血液治療デバイスに輸送し、次に治療された血液を患者に戻すための手段を含み、さらに、血液中のＡＤＭＡおよび／またはＭＭＡのレベルを低下させるように構成されるデバイスを含む。さらに、本発明はまた、体外の血液または血液細胞治療に使用できるデバイスを含み、そのデバイスは、体外の血液回路から分離もしくは切り離されるか、または分離可能／取り外し可能であり得る。

本発明によれば、「体外血液浄化」という表現は、好ましくは、患者の体の外で（体外）の迂回回路において血液を流すことから、それらのクリアランスを通じて体液から物質を除去するプロセスを指す。上記物質は、内因性毒素（すなわち、尿毒性毒素）、外因性毒素（すなわち、エチレングリコールまたは真菌毒素）、投与される薬物、ウイルス、細菌、抗体、代謝産物およびタンパク質（すなわち、ＩＭＨＡ、重症筋無力症）、異常細胞（すなわち、白血病）、および過剰な水を含み得る。治療手順には、間欠的血液透析（ＨＤ、ＨＤＦ、ＨＦ）および連続腎補充療法（ＣＲＲＴ）を含む血液透析、血液灌流、血漿交換および治療的アフェレーシスが含まれる。かかる方法は、当業者に知られており、本発明のデバイスは、それに応じて組み込むことができる。

本明細書で使用される「血液」という表現は、血漿中に懸濁された赤血球、白血球、および血小板を含む、生物の血液のすべての成分を含有する全血を指す。「血漿」という表現は、約９２％の水、アルブミン、ガンマグロブリン、フィブリノーゲン、補体因子、凝固因子などの７％のタンパク質、ならびに全血の一部を形成するが、もはや赤血球、白血球、血小板を含まなくなる１％のミネラル塩、糖、脂肪、電解質、ホルモン、およびビタミンからなる流体を指す。本発明の文脈において、「血漿（ｂｌｏｏｄ ｐｌａｓｍａ）」または「血漿（ｐｌａｓｍａ）」という表現は、例えば、血清などのその標準的な意味における上記定義の血漿の特定の画分を指す。

一態様によれば、体外血液浄化回路における血流量は、２０ｍｌ～７００ｍｌ／分である。本発明に従う血液治療デバイスに加えて、または血液透析器がＡＤＭＡおよび／またはＭＭＡを代謝するように構成されている場合のいずれかで、腎不全を治療するための血液透析器を含む体外回路における典型的な透析液流量は、０，５ｌ／時間～８００ｍｌ／分の範囲である。

治療用アフェレーシスでは、全血を治療することができ、または、血液は例えば遠心分離によって、または形質膜もしくはフィルタによって、その成分の画分に分割され、除去されるべき溶質を含有する画分は、患者に戻る前に具体的に治療される。

本発明は、全血または血漿（標的タンパク質を含む）が患者の流動血液から除去され、本発明に従うデバイスまたはマトリックスと接触した後、患者に戻されるアフェレーシス治療を提供する。血液処理デバイスが全血または血漿で灌流される体外回路における典型的な血液または血漿の流量は、それぞれ３０ｍｌ／分～２００ｍｌ／分、または７ｍｌ／分～５０ｍｌ／分の範囲である。

一態様によれば、本発明に従う体外血液回路は、血液透析を行うように構成される。この場合、本発明によるデバイスは、例えば、本発明による標的タンパク質を固定化するように追加的に構成された血液透析器である。回路は、血液透析、血液透析濾過、血液濾過モードなど、医療ニーズに応じて異なる治療モードで操作することができる。

免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）
本明細書で使用される場合、「免疫関連有害事象」（ｉｒＡＥ）という用語は、免疫チェックポイント阻害剤治療の関連で、例えばがん療法の文脈で特異的に生じる任意の副作用に関する。ＩｒＡＥは固有であり、従来のがん治療の関連で生じる有害事象とは異なり、典型的には、遅延発症および長期間持続を有する。ＩｒＡＥは、任意の臓器または系を伴う場合がある。これらの効果は、頻繁に低グレードであり、治療可能かつ可逆的である。しかしながら、いくつかの副作用は、重篤であり、永続的な障害につながる可能性がある。管理は主にコルチコステロイドおよびその他の免疫調節剤に基づいており、短期および長期の合併症の可能性を減らすために慎重に処方されるべきである。

具体的には、この用語は、（自己免疫）大腸炎、（自己免疫）肝炎、（自己免疫）甲状腺炎および（自己免疫）皮膚炎などの、自己免疫疾患および自己免疫疾患の症状を含む。

本発明におけるチェックポイント阻害剤療法の投与によるｉｒＡＥは、特に限定されない。ＩｒＡＥは、免疫関連であると推定される有害事象として理解されるべきである：ｉｒＡＥ（例えば、２０１６年４月に改訂されたＯＰＤＩＶＯ（登録商標）静脈内注入２０ｍｇ－１００ｍｇの薬物インタビューフォーム（バージョン９）、日本皮膚科学会の悪性黒色腫のための新薬の安全性委員会によって発行された２０１５年８月２４日付の抗ＣＴＬＡ－４抗体、イピリムマブ（ＹＥＲＶＯＹ（登録商標）の有害事象の特性および取り扱い、を参照されたい）。

本発明のｉｒＡＥの具体的な実施形態は、間質性肺疾患、重症筋無力症、筋炎、大腸炎、１型糖尿病、肝機能障害（肝障害）、肝炎などの肺障害（例えば、自己免疫肺炎）、下垂体機能低下症または下垂体炎などの下垂体機能低下症、甲状腺機能低下症、神経障害、腎症、脳炎、副腎機能低下症などの副腎障害、重度の皮膚障害、静脈血栓塞栓症、輸液反応、乾癬、乾癬様発疹、下痢（例えば、重度の下痢）、関節リウマチ、ブドウ膜炎、上皮炎、滑液包炎、放射性角膜炎の悪化、慢性炎症性脱髄性多発性硬化症（以下、脱髄性多発性硬化症とも称する）、腸管障害、または腎炎が挙げられ、下垂体機能低下症が好ましい。

免疫関連有害事象（ＩｒＡＥ）は、例えば、投与後８週間または８～１２週間後に生じることが知られている。免疫関連有害事象は、「グレード」または「ＩｒＡＥ評価」によって評価することができる。ここで、「ｉｒＡＥ評価」は、疾患の重症度を表す指標であり、１～３で表される。ｉｒＡＥ評価において、１は、「ｉｒＡＥによる追加の治療的介入を必要としない」状態を表し、２は、「ｉｒＡＥによる薬物介入などを必要とするが、入院治療を必要としないか、または治療の中断を必要としない」状態を表し、３は、「ｉｒＡＥによる入院を伴い、治療の中断を必要とする」状態を表す。「ｉｒＡＥ評価」と「グレード」との対応関係は、各疾患によって異なる。

免疫チェックポイント分子およびチェックポイント調節物質
本発明の文脈において、免疫チェックポイント阻害剤は、免疫チェックポイント分子を調節することによって免疫細胞を活性化する薬物である。

免疫チェックポイント分子は、免疫エフェクター細胞に提供されるシグナル（共刺激分子）を上げるか、またはシグナルを下げるかのいずれかである、免疫系内の分子である。したがって、免疫チェックポイント分子は、共刺激チェックポイント分子または共阻害チェックポイント分子に細分することができる。共刺激性チェックポイント分子には、リンパ球表面受容体であり、リンパ球エフェクター機能の活性化または刺激をもたらすことができる共刺激性リンパ球受容体が含まれる。共阻害チェックポイント分子には、リンパ球表面受容体であり、リンパ球エフェクター機能の阻害をもたらすことができる共阻害リンパ球受容体が含まれる。

共刺激チェックポイント分子は、ＨＶＥＭ、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２８、およびＩＣＯＳを含むが、これらに限定されない。

本発明の好ましい実施形態では、共刺激リンパ球受容体という用語は、ＣＤ１２２を指さない。

ＨＶＥＭ（ヘルペスウイルス侵入メディエーター、ＣＤ２７０）は、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１４（ＴＮＦＲＳＦ１４）としても知られており、ＢＴＬＡに結合することができるＴＮＦ受容体スーパーファミリーの受容体である。

ＣＤ２７は、ナイーブＴ細胞の抗原特異的増殖を支持し、Ｔ細胞記憶の生成に不可欠であり、Ｂ細胞のメモリーマーカーでもある。ＣＤ２７の活性は、そのリガンドであるＣＤ７０がリンパ球および樹状細胞上で一過性に利用可能であることによって支配される。ＣＤ２７共刺激は、Ｔｈ１７エフェクター細胞機能を抑制することが知られている。ＣＤ２７に対するアゴニストモノクローナル抗体ＣＤＸ－１１２７／Ｖａｒｌｉｌｕｍａｂは、動物モデルにおけるＴ細胞受容体刺激の文脈において有効であることが示されている。

ＣＤ２８は、ほぼすべてのヒトＣＤ４＋Ｔ細胞上、およびすべてのＣＤ８ Ｔ細胞の約半分上で構成的に発現される。例えば、樹状細胞上で発現される、その２つのリガンドＣＤ８０およびＣＤ８６のうちの１つの結合は、Ｔ細胞増殖を促す。

ＣＤ４０は、抗原提示細胞を含む様々な免疫系細胞上で発現される。ＣＤ４０のリガンドは、ＣＤ１５４としても知られるＣＤ４０Ｌと称され、そのリガンドとして活性化されたＣＤ４＋Ｔ細胞の表面上で一過性に発現される。ＣＤ４０シグナル伝達は、樹状細胞が成熟することを「ライセンス」し、それによってＴ細胞活性化および分化を引き起こすことが知られている。

４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）は、ＣＤ１３７リガンドによって結合され、Ｔ細胞増殖をもたらす。ＣＤ１３７媒介性シグナル伝達は、Ｔ細胞、特にＣＤ８＋Ｔ細胞を活性化誘発性細胞死から保護することも知られている。完全ヒトＩｇＧ２アゴニストモノクローナル抗体Ｕｔｏｍｉｌｕｍａｂ（ＰＦ－０５０８２５６６）は、４－１ＢＢを標的にして、がんに対するより強力な免疫系攻撃を刺激する。

ＯＸ４０（ＣＤ１３４）は、ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）をそのリガンドとする。ＯＸ４０は、エフェクターＴ細胞およびメモリーＴ細胞の増殖を促進し、Ｔ調節細胞の分化および活性を抑制する能力でも知られている。ＯＸ４０は、Ｔ細胞受容体結合後に一過性に発現されており、それが炎症性病変内の最近の抗原活性化されたＴ細胞に対してのみ上方制御される理由であり、これは、ＯＸ４０が貴重な薬物標的である理由である。アゴニスト抗ＯＸ４０モノクローナル抗体は、進行がんにおいて臨床的有用性を有することが示されている。製薬会社のＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａは、ＯＸ４０を標的化した３つの薬剤：ＭＥＤＩ０５６２は、ヒト化ＯＸ４０アゴニストであり、ＭＥＤＩ６４６９は、マウスＯＸ４０アゴニストであり、ＭＥＤＩ６３８３は、ＯＸ４０アゴニストを開発している。

ＧＩＴＲ（グルココルチコイド誘導ＴＮＦＲファミリー関連遺伝子）は、Ｔ細胞増殖を促す。ＧＩＴＲ（ＧＩＴＲＬ）のためのリガンドは、主に抗原提示細胞で発現される。ＧＩＴＲに対する抗体は、Ｔｒｅｇ系統安定性の喪失を通じて抗腫瘍応答を促進することが示されている。

ＩＣＯＳ（誘導性Ｔ細胞共刺激剤、ＣＤ２７８とも称される）は、活性化されたＴ細胞上で発現される。そのリガンドは、主にＢ細胞および樹状細胞上に発現するＩＣＯＳＬである。この分子は、Ｔ細胞エフェクター機能において重要であると思われる。

共阻害チェックポイント分子は、Ａ２ＡＲ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ－４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ－１、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴおよびＶＩＳＴＡを含むが、これらに限定されない。

Ａ２ＡＲ（アデノシンＡ２Ａ受容体）は、Ａ２ａ受容体の活性化につながる免疫微小環境におけるアデノシンが負の免疫フィードバックループであり、腫瘍微小環境が比較的高い濃度のアデノシンを有するため、がん療法における重要なチェックポイントとみなされる。

ＣＤ２７６とも称されるＢ７－Ｈ３は、当初は共刺激分子であると理解されたが、現在では共阻害分子とみなされている。ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓは、Ｂ７－Ｈ３を標的とするＦｃ最適化モノクローナル抗体であるＭＧＡ２７１（Ｅｎｏｂｌｉｔｕｚｕｍａｂ）について研究している。

Ｂ７－Ｈ４（またはＶＴＣＮ１）は、腫瘍細胞および腫瘍関連マクロファージによって発現され、腫瘍回避において役割を果たす。

ＢＴＬＡ（ＢおよびＴリンパ球減衰器、ＣＤ２７２とも称される）は、ＨＶＥＭ（Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ Ｅｎｔｒｙ Ｍｅｄｉａｔｏｒ）をそのリガンドとする共阻害受容体である。ＢＴＬＡの表面発現は、ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞のナイーブからエフェクター細胞表現型への分化の間に徐々に下方調節されるが、しかしながら、腫瘍特異的ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞は、高レベルのＢＴＬＡを発現する。

ＣＴＬＡ－４（細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４、ＣＤ１５２とも称される）は、Ｔｒｅｇ細胞上で発現され、Ｔ細胞増殖を制御する役割を果たす。ＣＴＬＡ－４（ＣＤ１５２）は、免疫チェックポイントとして機能するタンパク質受容体であり、活性化されたＴ細胞によって発現され、Ｔ細胞に阻害シグナルを伝達する。ＣＴＬＡ４は、Ｔ細胞共刺激タンパク質ＣＤ２８と相同であり、両方の分子は、抗原提示細胞上でＣＤ８０およびＣＤ８６（それぞれＢ７－１およびＢ７－２）に結合する。ＣＴＬＡ－４は、ＣＤ２８よりもＣＤ８０およびＣＤ８６に対する親和性および結合活性が高い。ＣＴＬＡ４は、阻害シグナルをＴ細胞に伝達する。ＣＴＬＡ４に対するアンタゴニスト抗体としては、イピリムマブおよびトレメリムマブが挙げられる。

ＩＤＯ（インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ）は、免疫抑制特性を有するトリプトファン異化酵素である。もう一つの重要な分子は、ＴＤＯ、トリプトファン２，３－ジオキシゲナーゼである。ＩＤＯは、Ｔ細胞およびＮＫ細胞を抑制し、Ｔｒｅｇおよび骨髄由来抑制細胞を生成および活性化し、腫瘍血管新生を促進することが知られている。

ＫＩＲ（キラー細胞免疫グロブリン様受容体）は、ナチュラルキラー細胞上のＭＨＣクラスＩ分子の受容体である。Ｌｉｒｉｌｕｍａｂは、ＫＩＲに対するモノクローナル抗体である。

ＬＡＧ－３（リンパ球活性化遺伝子－３）は、Ｔｒｅｇに対する作用およびＣＤ８＋Ｔ細胞に対する直接的効果によって免疫応答を抑制するように働く。

ＰＤ－１（プログラム死１、またはＣＤ２７９）は、免疫系の下方調節およびＴ細胞の炎症活性の抑制による自己耐性の促進において重要な役割を果たす細胞表面受容体である。ＰＤ－１は、２つのリガンド、ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２を有する。ＰＤ－１を標的化する利点は、腫瘍微小環境において免疫機能を回復することができることである。ＰＤ１のリガンドであるＰＤ－Ｌ１は、いくつかのがんにおいて高度に発現され、Ｔ細胞による抗がん免疫応答の阻害をもたらす可能性がある。ＰＤ－１受容体を標的とするいくつかのがん免疫療法剤が開発されており、アンタゴニスト抗体のニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ－Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ、ＭＫ－３４７５、Ｍｅｒｃｋ）、ピディリズマブ（ＣＴ－０１１、Ｃｕｒｅ Ｔｅｃｈ）、およびＢＭＳ－９３６５５９（Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）が挙げられる。アテゾリズマブ（ＭＰＤＬ３２８０Ａ、Ｒｏｃｈｅ）およびアベルマブ（Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ＆Ｐｆｉｚｅｒ）の両方は、ＰＤ－１のリガンドであるＰＤ－Ｌ１に対して指向されるモノクローナル抗体である。

ＴＩＭ－３（Ｔ細胞免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン３）は、活性化ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞上で発現し、Ｔｈ１およびＴｈ１７サイトカインを調節する。ＴＩＭ－３は、そのリガンドであるガレクチン－９との相互作用時に細胞死を引き起こすことによって、Ｔｈ１／Ｔｈ１７機能の負の調節因子として機能する。

ＶＩＳＴＡ（Ｔ細胞活性化のＶ－ドメインＩｇ抑制剤）は、腫瘍内の白血球上でのＶＩＳＴＡの一貫した発現が、ＶＩＳＴＡの遮断が広範囲の固形腫瘍にわたって有効であることを可能にし得るように、造血細胞上で主に発現されるタンパク質である。

ＴＩＧＩＴ（ＩｇおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体、別名ＷＵＣＡＭおよびＶｓｔｍ３）は、いくつかのＴ細胞およびナチュラルキラー細胞に存在する免疫受容体であり、Ｔ細胞媒介性免疫を調節する。ＴＩＧＩＴは、高い親和性でＤＣおよびマクロファージ上でＣＤ１５５と結合し、より低い親和性でＣＤ１１２と結合し得る。

本発明の共阻害性リンパ球受容体は、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＭ－３、ＬＡＧ－３、ＴＩＧＩＴ、ＢＴＬＡまたはＶＩＳＴＡを含む。本発明の共刺激性リンパ球受容体は、ＯＸ４０、４－１ＢＢ、ＧＩＴＲ、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＣＤ２８、またはＣＤ４０を含む。

受容体の阻害剤は、それぞれの受容体によるシグナルの生成を防止する。したがって、共阻害性リンパ球受容体の阻害剤は、それぞれの受容体の活性化を防止し、それによって阻害性シグナルの生成を防止する分子である。逆に、受容体の活性化剤は、それぞれの受容体によるシグナルの生成を誘導し、共刺激リンパ球受容体の活性化剤は、刺激シグナルの生成をもたらす。

チェックポイント調節物質は、免疫チェックポイント分子の活性を刺激または阻害することによって、免疫チェックポイント分子の活性を妨げる分子である。

可溶性チェックポイント調節物質は、自由に拡散することができ、例えば、細胞膜に結合されないか、または細胞内に留まらない分子である。

本発明の意味でのチェックポイント阻害剤は、リンパ球刺激チェックポイント調節物質を含み、これは、共刺激チェックポイント分子の活性化を通じて、または共阻害チェックポイント分子の阻害を通じてのいずれかのリンパ球、好ましくはエフェクターＴ細胞の活性化をもたらす分子である。さらに、可溶性リンパ球刺激チェックポイント調節物質には、膜結合免疫チェックポイント分子の活性化を妨げる分子、例えば、それぞれの免疫チェックポイント分子の可溶性形態が含まれる。

チェックポイント調節物質は、免疫チェックポイント分子の活性を妨害または調節するそれぞれの機能を有する天然に生じる分子または操作された分子であり得る。チェックポイント調節物質として、例えば、アゴニストまたはアンタゴニストを有する免疫チェックポイント分子に対する抗体または抗体断片活性、および免疫チェックポイント分子のリガンドまたは修飾リガンドが挙げられる。

免疫細胞：
本明細書に記載される免疫細胞は、対象における免疫応答に関与する生体細胞に関する。免疫細胞は、好ましくは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、顆粒球、先天性リンパ球（ＩＬＣ）、巨核球、単球／マクロファージ、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、血小板、赤血球（ＲＢＣ）および／または胸腺細胞から選択される。

「免疫細胞」という用語は、血液中に含まれるＭＮＣを含み、これは、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）とも称され得る。ＰＢＭＣは、丸い核を有する任意の末梢血細胞を含み、主にリンパ球（Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞）および単球からなるが、赤血球および血小板は、核を有さず、顆粒球（好中球、好塩基球、および好酸球）は多葉核を有する。ヒトでは、リンパ球は、ＰＢＭＣ集団の大部分を占め、次いで単球であり、樹状細胞の割合はわずかである。これらの細胞は、血液の層を分離する親水性多糖であるフィコール、および血漿の上層、続いてＰＢＭＣの層、ならびに多形核細胞（好中球および好酸球など）および赤血球の底部画分を分離する勾配遠心分離を使用して全血から抽出することができる。多形核細胞は、赤血球を溶解することによってさらに単離することができる。好塩基球は、より密度の高い画分およびＰＢＭＣ画分の両方において見出されることがある。

Ｔ細胞またはＴリンパ球は、細胞媒介性免疫において中心的な役割を果たすリンパ球（白血球のサブタイプ）の一種である。これらは、細胞表面上のＴ細胞受容体の存在によって、Ｂ細胞およびナチュラルキラー細胞などの他のリンパ球と区別することができる。Ｔ細胞のいくつかのサブセットは、各々異なる機能を有する。Ｔ細胞サブタイプとしては、Ｔヘルパー１型（Ｔｈ１）細胞、Ｔヘルパー２型（Ｔｈ２）細胞、Ｔヘルパー９型（Ｔｈ９）細胞、Ｔヘルパー１７型（Ｔｈ１７）細胞、Ｔヘルパー２２型（Ｔｈ２２）細胞、濾胞ヘルパーＴ（Ｔｆｈ）細胞、調節Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ガンマデルタＴ細胞、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）が挙げられるが、これらに限定されない。Ｔ細胞のさらなる非限定的な実施形態としては、胸腺細胞、未成熟Ｔリンパ球、成熟Ｔリンパ球、静止Ｔリンパ球、サイトカイン誘導キラー細胞（ＣＩＫ細胞）、または活性化Ｔリンパ球が挙げられる。サイトカイン誘導キラー（ＣＩＫ）細胞は、典型的には、ＣＤ３－およびＣＤ５６－陽性の非大規模組織適合複合体（ＭＨＣ）制限付きナチュラルキラー（ＮＫ）様Ｔリンパ球である。Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ、ＣＤ８＋Ｔ細胞）、ＣＤ４＋ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４ＣＤ８ Ｔ細胞、またはＴ細胞の任意の他のサブセットであり得る。

本発明は、特に、チェックポイント阻害剤療法、好ましくは細胞療法を受けた対象における免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）の治療および／または予防における使用のための免疫調節ＮＫ細胞（免疫調節ＮＫ細胞とも称され得る）に関する。

免疫調節性ＮＫ細胞は、先天性リンパ球細胞（ＩＬＣ）の特定の形態である。ＩＬＣは、リンパ系統（リンパ球）に属するが、Ｂ細胞またはＴ細胞受容体を欠くため、抗原特異的な方法では応答しない先天性免疫細胞の群である。この比較的新しく記載された細胞群は、異なる生理機能を有し、そのいくつかはヘルパーＴ細胞に類似しているが、細胞傷害性ＮＫ細胞も含む。それによれば、これらは、保護免疫ならびに恒常性および炎症の調節において重要な役割を果たす。ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、適応免疫系の細胞傷害性Ｔ細胞に類似する細胞傷害性自然エフェクター細胞である。それらは、血液、臓器、リンパ組織全体に分布し、末梢血リンパ球の約１５％を占める。ＮＫ細胞は、腫瘍監視およびウイルス感染細胞の迅速な排除において役割を果たす。それらは、ＭＨＣクラスＩの欠損した「自己」シグナルを必要とせず、抗体の非存在下でストレス細胞を認識することができ、適応免疫系よりもはるかに迅速に反応することを可能にする。ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、がんに対する宿主免疫において重要な役割を果たす。これに応答して、がんは、ＮＫ細胞攻撃を逃れるか、または欠陥ＮＫ細胞を誘導する機構を発達させる（Ｃｈｅｎｇ Ｍ ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１３ Ｍａｙ；１０（３）：２３０－５２．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｃｍｉ．２０１３．１０．Ｅｐｕｂ ２０１３ Ａｐｒ ２２）。

本発明の免疫調節ＮＫ細胞は、好ましくは、低発現（または下方調節発現）またはＣＤ１６、特にＣＤ５６^ｄｉｍ ＮＫ細胞上で特徴付けられる。ＣＤ１６は、ＦｃＲγＩＩＩ、
強力なサイトカイン産生を誘導することができる活性化ＮＫ細胞受容体である。ＣＤ１６の脱落／下方調節は、自己免疫を防止するためのＮＫ細胞の免疫調節機構であり得る。ＣＤ１６下方調節は、ＮＫ細胞応答を調節し、抗体およびＴ細胞依存性経路の両方の免疫恒常性の維持に寄与する。さらに、本発明の免疫調節ＮＫ細胞は、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦおよび／またはＩＬ－２の低発現を示すことができる。

実施形態では、試料中の免疫調節ＮＫ細胞の生成または誘導は、例えば、フローサイトメトリー、遺伝子発現、および／またはタンパク質存在量の質量分析によって、本発明の方法を実施する前後の試料中のＮＫ細胞の表現型および集団分布を比較することによって測定することができる。例えば、照射後のＣＤ１６高ＮＫ細胞からＣＤ１６低ＮＫ細胞への移行は、免疫調節表現型の誘導を示す。さらに、ＮＫ細胞集団におけるＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦおよび／またはＩＬ－２発現における減少は、免疫調節ＮＫ細胞の誘導も示すであろう。当業者は、試料中の異なるＮＫ細胞集団を同定するための好適な方法およびプロトコルを認識している。例えば、血液由来の試料において、総ＮＫ細胞集団は、好ましくは、フローサイトメトリーによって、ＣＤ４５－陽性、ＣＤ１４－陰性、ＣＤ３－陰性、ＣＤ１９－陰性およびＣＤ５６－陽性細胞集団として定義および識別され得る。この集団内では、例えばＣＤ１６、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦおよび／またはＩＬ－２発現を決定することによって、免疫調節ＮＫ細胞のさらなる同定および定量化を行うことができる。免疫調節ＮＫ細胞は、好ましくはＣＤ５６に対して陽性であるが、ＣＤ５６の比較的低い発現レベル（「ｄｉｍ」発現）を示す。

免疫調節ＮＫ細胞のさらなる特徴および定義は、当該技術分野で十分に確立されており、当業者に既知であるか、または当業者によって識別され得る複数の研究およびレビュー記事の対象である。

「免疫調節性機能」という用語は、免疫系の任意の構成要素の機能、作用もしくは状態の変化もしくは調節を誘発する分子もしくは細胞の機能または特性に関する。

細胞療法は、典型的には、患者の血液から単離された免疫細胞の投与を伴う。このように使用可能な細胞型は、ナチュラルキラー細胞、リンホカイン活性化キラー細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、単球、マクロファージ、顆粒球、および樹状細胞であるが、これらに限定されない。樹状細胞療法は、樹状細胞に腫瘍抗原を提示させることによって抗腫瘍応答を誘発する。樹状細胞は、リンパ球に抗原を提示し、リンパ球は抗原を活性化し、抗原を提示する他の細胞を殺すようにプライミングする。

本発明の治療適用
本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、治療または療法のために選択されるヒトまたは非ヒト動物を意味する。治療または予防を必要とする対象または患者などの対象は、動物、脊椎動物、哺乳動物、げっ歯類（例えば、モルモット、ハムスター、ラット、マウス）、マウス（例えば、マウス）、イヌ（例えば、イヌ）、ネコ（例えば、ネコ）、ウマ（例えば、ウマ）、霊長類、サル（例えば、サルまたは類人猿）、サル（例えば、マーモセット、ヒヒ）、類人猿（例えば、ゴリラ、チンパンジー、オランウータン、テナガザル）、またはヒトであり得る。「動物」、「哺乳動物」などという用語の意味は、当該技術分野で周知であり、例えば、Ｗｅｈｎｅｒ ｕｎｄ Ｇｅｈｒｉｎｇ（１９９５；Ｔｈｉｅｍｅ Ｖｅｒｌａｇ）から推測することができる。本発明の文脈において、特に、動物は、経済的、農学的、または科学的に重要な治療を受けることが想定される。好ましくは、対象／患者は、哺乳動物である。より好ましくは、対象／患者は、ヒトである。

本発明の実施形態では、チェックポイント阻害剤療法を受けた対象は、悪性黒色腫またはチェックポイント阻害剤療法によって治療可能な別のがんなどのがんに罹患する。

本発明の文脈において、「がん」という用語は、がんが固形腫瘍の形成と関連しているかどうか、またはがん細胞が固形腫瘍を形成していないかどうかに関係なく、特定の白血病の場合と同様に、すべての種類のがんの治療に関する。

がんは、身体のあらゆる部分に影響を及ぼす可能性があり、異常な細胞増殖および増殖によって引き起こされる疾患の群を含む。これらの増殖細胞は、周囲の組織に侵入する、および／または転移を形成する身体の他の部分に広がる可能性を有する。世界では、２０１２年に１４００万人のがん新規患者と８２０万人のがん関連死がある（Ｗｏｒｌｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｐｏｒｔ ２０１４）。がんの大部分は、タバコの使用、肥満、および感染症などを伴う環境シグナルによって引き起こされるが、約５～１０％が遺伝的症例である。がんは、起源の細胞に基づいてサブカテゴリーに分類することができる。最も一般的なサブカテゴリーは、上皮細胞由来のがん、結合組織由来の肉腫およびリンパ腫、ならびに造血細胞由来の白血病である。がんは、様々な局所および全身症状と関連しており、多くの場合、治癒することはできない。新たながん患者およびがん関連死が多いことを踏まえ、新たな治療戦略が求められる。

本発明によるがんは、白血病、肉腫、黒色腫およびがんを含む、哺乳動物に見られるすべてのタイプのがんまたは新生物または悪性腫瘍を指す。固形腫瘍および／または液体腫瘍（白血病またはリンパ腫など）のいずれかが治療され得る。

黒色腫としては、例えば、尖弁黒色腫、メラニン欠乏性黒色腫、良性若年性黒色腫、Ｃｌｏｕｄｍａｎ黒色腫、Ｓ９１黒色腫、Ｈａｒｄｉｎｇ－Ｐａｓｓｅｙ黒色腫、若年性黒色腫、レンチゴ悪性黒色腫、悪性黒色腫、結節性黒色腫、外陰部黒色腫、および表面的に広がる黒色腫が挙げられるが、これらに限定されない。

白血病としては、急性非リンパ球性白血病、慢性リンパ性白血病、急性顆粒球性白血病、慢性顆粒球性白血病、急性前骨髄球性白血病、成人Ｔ細胞白血病、白血病性白血病、白血病性白血病、基底膜性白血病、芽球性白血病、ウシ白血病、慢性骨髄球性白血病、皮膚白血病、胚性白血病、好酸球性白血病、Ｇｒｏｓｓ白血病、有毛細胞白血病、血芽球性白血病、血球芽球性白血病、組織球性白血病、幹細胞性白血病、急性単球性白血病、白血球減少性白血病、リンパ性白血病、リンパ芽球性白血病、リンパ性白血病、リンパ性白血病、リンパ性白血病、リンパ肉腫細胞白血病、肥満細胞白血病、巨核芽球性白血病、微小骨髄芽球性白血病、単球性白血病、骨髄芽球性白血病、骨髄球性白血病、骨髄性顆粒球性白血病、骨髄性単球性白血病、Ｎａｅｇｅｌｉ白血病、形質細胞白血病、形質細胞性白血病、前骨髄球性白血病、リーダー細胞白血病、シリングの白血病、幹細胞白血病、亜白血病性白血病、および未分化細胞白血病が含まれるが、これらに限定されない。

肉腫としては、軟骨肉腫、線維肉腫、リンパ肉腫、黒色腫、粘液肉腫、骨肉腫、アバネシーの肉腫、脂肪肉腫、脂肪肉腫、胞巣状軟部肉腫、エナメル芽細胞肉腫、ブドウ状肉腫、クロロマ肉腫、絨毛がん、胚性肉腫、ウィルムス腫瘍肉腫、子宮内膜肉腫、間質性肉腫、ユーイング肉腫、筋膜肉腫、線維肉腫、巨細胞肉腫、顆粒球肉腫、ホジキンリンパ腫、特発性多発性色素性出血性肉腫、Ｂ細胞の免疫芽球性肉腫、リンパ腫、Ｔ細胞の免疫芽球性肉腫、ジェンセン肉腫、カポジ肉腫、クッパー細胞肉腫、血管肉腫、白質肉腫、悪性間葉肉腫、傍骨肉腫、網状肉腫、ラウス肉腫、血清嚢胞性肉腫、滑膜肉腫、および毛細血管拡張性肉腫が挙げられるが、これらに限定されない。

がんとしては、腺房がん（acinar carcinoma）、腺房がん（acinous carcinoma）、腺様嚢胞がん、腺様嚢胞がん、がん腺腫、副腎皮質のがん、肺胞がん、肺胞細胞がん、基底細胞がん（basalcell carcinoma）、基底細胞がん（carcinoma basocellulare）、類基底細胞がん、基底扁平上皮がん、細気管支肺胞がん、細気管支がん、気管支原性がん、大脳様がん、胆管細胞がん、絨毛がん、コロイドがん、コメドがん、コーパスがん、クリブリフォームがん、キュイラスがん、皮膚がん、円柱状がん、円柱状細胞がん、管がん、がん腫デュラム、胚性がん、脳様がん、類表皮がん、がん上皮アデノイド、外方増殖性がん腫、潰瘍がん、線維性がん、ゼラチン状がん、膠状がん、巨細胞がん（giantcell carcinoma）、巨細胞がん（carcinoma gigantocellulare）、腺がん、顆粒膜細胞がん、毛母細胞がん、血様細胞がん、肝細胞がん、Ｈｕｒｔｈｌｅ細胞がん、硝子がん、高腎がん、乳児胚性がん、上皮内がん、表皮内がん、上皮内がん、Ｋｒｏｍｐｅｃｈｅｒがん、Ｋｕｌｃｈｉｔｚｋｙ細胞がん、大細胞がん、レンズ状がん（lenticularcarcinoma）、レンズ状がん（carcinoma lenticulare）、脂肪腫性がん、リンパ上皮がん、髄様がん、髄様がん、メラニン性がん、軟がん腫、粘液性がん腫、粘液性がん腫、粘液細胞がん、粘表皮がん、がん腫粘液、粘液がん、がん性粘液腫、鼻咽頭がん、オート麦細胞がん、骨がん、類骨がん、乳頭がん、門脈周囲がん、前浸潤がん、棘細胞がん、髄質様がん、腎臓の腎細胞がん、予備細胞がん、がん肉腫、シュナイダーがん、硬性がん、陰嚢がん、印環細胞がん、単純がん、小細胞がん、ソラノイドがん、球状細胞がん、紡錘細胞がん、がん性海綿状がん、扁平上皮がん、扁平上皮がん、ひも状がん、がん腫性毛細血管拡張症、がん腫性毛細血管拡張症、移行上皮がん、結節性がん、塊茎がん、いぼ状がん、および絨毛がんが挙げられるが、これらに限定されない。

追加のがんとしては、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、神経芽細胞腫、乳がん、卵巣がん、肺がん、横紋筋肉腫、原発性血小板増加症、原発性マクログロブリン血症、小細胞肺腫瘍、原発性脳腫瘍、胃がん、結腸がん、悪性膵臓インスリン腫、悪性カルチノイド、膀胱がん、前がん性皮膚病変、精巣腫瘍、リンパ腫、甲状腺がん、食道がん、泌尿生殖器がん、悪性高カルシウム血症、子宮頸がん、子宮内膜がん、副腎皮質がん、および前立腺がんが挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、「腫瘍」は、限定するものではないが、前立腺腫瘍、膵臓腫瘍、扁平上皮がん、乳房腫瘍、黒色腫、基底細胞がん、肝細胞がん、胆管血管細胞がん、精巣腫瘍、神経芽細胞腫、神経膠腫または多形性神経膠芽細胞腫などの悪性星状細胞腫瘍、結腸直腸腫瘍、子宮内膜がん、肺がん、卵巣腫瘍、子宮頸部腫瘍、骨肉腫、棒状体／平滑筋肉腫、滑膜肉腫、血管肉腫、ユーイング肉腫／ＰＮＥＴ、および悪性リンパ腫を含むものとする。これらには、原発性腫瘍および転移性腫瘍（血管化および非血管化の両方）が含まれる。

本明細書で使用される場合、「治療」または「療法」は、概して、所望の薬理学的効果および／または生理学的効果を得ることを意味する。効果は、例えば、特定の疾患もしくは症状を有する対象のリスクを低減させることによって、疾患および／もしくは症状を完全にもしくは部分的に予防することを考慮して予防的であってもよく、または、疾患および／もしくは該疾患の有害作用を部分的もしくは完全に治癒させることを考慮して、治療的であり得る。本発明において、「治療」は、哺乳動物、特にヒトにおける疾患または状態の任意の治療、例えば以下の治療（ａ）～（ｃ）を含む：（ａ）患者における疾患、状態または症状の発症の予防、（ｂ）状態の症状の阻害、すなわち、症状の進行の予防、（ｃ）状態の症状の改善、すなわち、疾患または症状の退縮の誘導。

本明細書で使用される場合、「投与すること」という用語は、対象に組成物を含有する細胞もしくは液体または組成物を提供することを意味し、限定されないが、医療専門家による投与および自己投与を含む。組成物、物質、化合物、または薬剤を対象に投与することは、当業者に既知の様々な方法のうちの１つを使用して行うことができる。例えば、化合物または薬剤は、静脈内、動脈内、皮内、筋肉内、腹腔内、皮下、眼内、舌下、経口（摂取による）、鼻腔内（吸入による）、脊髄内、脳内、および経皮（吸収による、例えば、皮膚管を通じて）投与することができる。化合物または薬剤はまた、充電可能もしくは生分解可能な高分子デバイス、または化合物もしくは薬剤の持続的、遅い、もしくは制御された放出を提供する他のデバイス、例えば、パッチもしくはポンプ、もしくは製剤によって適切に導入することもできる。投与は、例えば、１回、複数回、および／または１回以上の長期間にわたって実施され得る。

本発明は、治療上有効な数の細胞、特に本発明の免疫調節性ＮＫ細胞を対象の血流に導入することによる患者の治療を包含する。本明細書で使用される場合、「対象の血流に「細胞」を導入すること」は、限定されないが、注射を介して対象の静脈または動脈の１つにそのような細胞を導入することを含むものとする。かかる投与は、例えば、１回、複数回、および／または１回以上の長期間にわたって実施され得る。単回注射が好ましいが、場合によっては経時的に繰り返し注射（例えば、毎週、毎月、毎四半期、毎半年、または毎年）が必要であり得る。このような投与は、好ましくは、ＣＤ３４－陰性細胞と薬学的に許容される担体との混合物を使用して実施される。薬学的に許容される担体は、当業者に周知であり、０．０１～０．１Ｍ、好ましくは０．０５Ｍのリン酸緩衝液または０．８％の生理食塩水、ならびに一般的に使用される独自の凍結保存培地を含むが、これらに限定されない。投与はまた、例えば、症候性臓器または組織に近接する対象の身体の領域に注射することによって局所的に行われてもよい。

さらに、かかる薬学的に許容される担体は、水溶液または非水溶液、懸濁液、および乳剤であってよく、最も好ましくは水溶液であり得る。水性担体としては、生理食塩水および緩衝媒体を含む、水、アルコール／水溶液、乳剤および懸濁液が挙げられる。非経口ビヒクルとしては、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸リンゲルおよび固定油が挙げられる。静脈内ビヒクルとしては、流体および栄養補充剤、リンガーデキストロースなどの電解質補充剤、リンガーデキストロースに基づくものなどが挙げられる。静脈内投与に一般的に使用される流体は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ Ｅｄ．，ｐ．８０８，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ Ｓ－Ｗｉｌｋｉｎｓ（２０００）で見出される。防腐剤および他の添加剤、例えば、抗菌剤、抗酸化剤、キレート剤、不活性ガスなどもまた、存在し得る。

一実施形態では、治療上有効な数の細胞が投与される。これは、組み合わせた免疫療法として、本発明のＮＫ細胞または治療用免疫細胞のいずれかに関することができる。本明細書で使用される場合、「治療上有効な細胞数」は、以下の量および量の範囲を含むが、これらに限定されない：（ｉ）約１×１０^２～約１×１０^８個の細胞／ｋｇ体重、（ｉｉ）約１×１０^３～約１×１０^７個の細胞／ｋｇ体重、（ｉｉｉ）約１×１０^４～約１×１０^６個の細胞／ｋｇ体重、（ｉｖ）約１×１０^４～約１×１０^５個の細胞／ｋｇ体重、（ｖ）約１×１０^５～約１×１０^６個の細胞／ｋｇ体重、（ｖｉ）約５×１０^４～約０．５×１０^５個の細胞／ｋｇ体重、（ｖｉｉ）約１×１０^３個の細胞／ｋｇ体重、（ｖｉｉｉ）約１×１０^４個の細胞／ｋｇ体重、（ｉｘ）約５×１０^４個の細胞／ｋｇ体重、（ｘ）約１×１０^５個の細胞／ｋｇ体重、（ｘｉ）約５×１０^５個の細胞／ｋｇ体重、（ｘｉｉ）約１×１０^６個の細胞／ｋｇ体重、および（ｘｉｉｉ）約１×１０^７個の細胞／ｋｇ体重。想定されるヒト体重としては、約５ｋｇ、１０ｋｇ、１５ｋｇ、３０ｋｇ、５０ｋｇ、約６０ｋｇ、約７０ｋｇ、約８０ｋｇ、約９０ｋｇ、約１００ｋｇ、約１２０ｋｇおよび約１５０ｋｇが挙げられるが、これらに限定されない。これらの数値は、ＣＤ３４＋造血幹細胞の移植からの前臨床動物実験およびヒト試験ならびに標準プロトコルに基づく。単核細胞（ＣＤ３４＋細胞を含む）は、通常、１：２３０００～１：３０００００のＣＤ３４－陰性細胞を含有する。これらの細胞数は、本発明のＮＫ細胞に適用され得る。

本開示はまた、本明細書に記載のＥＣＰシステムおよびその構成要素、ならびに本発明のインビトロ方法および治療方法を実施するための材料、ならびに本発明のＮＫ細胞を調製および単離するための材料のキット、パッケージ、およびマルチコンテナユニット、ならびに他の材料も含む。

図
本発明は、以下の図によってさらに説明される。これらは本発明の範囲を限定することを意図するものではないが、本明細書に記載の本発明のより大きい例示のために提供される本発明の態様の好ましい実施形態を表す。

難治性自己免疫大腸炎は、ＥＣＰに応答し、免疫調節ＮＫ細胞の増殖につながる。（ａ）異なる治療による経時的（ｘ軸）な共通毒性基準（ｙ軸）による患者の下痢の重症度を示す。（ｂ）粘膜浮腫および潰瘍を示す免疫チェックポイント阻害剤関連大腸炎の初期診断からの大腸内視鏡画像（左パネル）およびＨ＆Ｅ染色生検切片（右パネル）。（ｃ）自己免疫大腸炎の徴候を示さない成功したＥＣＰ治療後の大腸内視鏡画像（左パネル）およびＨ＆Ｅ染色生検切片（右パネル）。結腸陰窩は、顆粒球浸潤、アポトーシスまたは陰窩損失を伴わない規則的な形態を示す。 難治性自己免疫大腸炎は、ＥＣＰに応答し、免疫調節ＮＫ細胞の増殖につながる。（ｄ）ＥＣＰの開始前および開始後８週間の患者の末梢リンパ球区画を可視化するｔＳＮＥプロット。（ｅ）ＥＣＰ治療の前後の相対的なＮＫ細胞数。 難治性自己免疫大腸炎は、ＥＣＰに応答し、免疫調節ＮＫ細胞の増殖につながる。（ｆ）ＵＭＡＰによって可視化された健常な年齢適合ドナー（ＨＤ、ｎ＝５）およびＥＣＰ開始後５３週目および７５週目の患者のＮＫ細胞（単一／生／ＣＤ４５^ｐｏｓ／ＣＤ１４^ｎｅｇ／ＣＤ３^ｎｅｇ／ＣＤ１９^ｎｅｇ／ＣＤ５６^ｐｏｓとして定義される）におけるＣＤ１６、ＣＤ５６およびＣＤ５７の発現強度。ＦｌｏｗＳＯＭクラスター化されたＮＫ細胞サブセットは、右側の２つのプロットに重ねられている。 難治性自己免疫大腸炎は、ＥＣＰに応答し、免疫調節ＮＫ細胞の増殖につながる。（ｇ）ＣＤ５６^ｄｉｍ成熟ＮＫ細胞上のＣＤ１６のＭＦＩ（マーカー発現中央値、値範囲：０～１）。ＨＤ（ｎ＝５）、ボックスプロットのひげは、ＨＤデータセットの最小値および最大値を表す。（ｈ）補足書付録に記載の抗ＰＤ１抗体誘発性ｉｒＡＥのモデルにおける、ＮＫ細胞（マウス当たり４×１０^４個または４×１０^５個のＮＫ用量）の有無にかかわらず、Ｔ細胞（Ｔｃ）を注射したマウスの生存率。＊＊ｐ＝０．００３、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。 （ａ）各時点の１０００個の確率的に選択されたＣＤ４５^＋リンパ球（ＦＳＣ／ＳＳＣによって定義されるリンパ球）を、指示されたマーカーの発現と共に表示するｔＳＮＥプロット。（ｂ）各注釈付き母集団のマーカー発現中央値（値範囲：０～１）を示すヒートマップ。 （ｃ）ＥＣＰ治療前後のＮＫ細胞の絶対数値。（ｄ）ＥＣＰ治療前後のＢ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、およびＣＤ４^－ＣＤ８^－Ｔ細胞の相対数。（ｅ）ＥＣＰ治療前後のＢ細胞、ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ＣＤ８^＋Ｔ細胞、およびＣＤ４^－ＣＤ８^－Ｔ細胞の絶対数。（ｆ）ＵＭＡＰによって可視化したＨＤ（ｎ＝５）および５３週目および７５週目の患者におけるＮＫ細胞（単一／生／ＣＤ４５^ｐｏｓ／ＣＤ１４^ｎｅｇ／ＣＤ３^ｎｅｇ／ＣＤ１９^ｎｅｇ／ＣＤ５６^ｐｏｓとして定義される）における指示されたマーカーの発現強度。 （ｇ）ＦｌｏｗＳＯＭクラスタリングによって定義される注釈付きＮＫ細胞サブセットのマーカー発現中央値（値範囲：０～１）を示すヒートマップ。（ｈ－ｊ）健康な年齢適合ドナー（ＨＤ）および患者のＣＤ５６^{ｂｒｉｇｈｔ}ＣＤ１６^ｄｉｍ成熟ＮＫ細胞、ＣＤ５６^ｄｉｍ成熟ＮＫ細胞およびＣＤ５７^ｄｉｍ末端分化ＮＫ細胞上の指示されたマーカーのＭＦＩ（マーカー発現中央値、値範囲：０－１）（ＥＣＰ開始後５３週目および７５週目）。ＨＤ（ｎ＝５）、ボックスプロットのひげは、ＨＤデータセットの最小値および最大値を表す。 （ａ）～（ｄ）健康な年齢適合ドナー（ＨＤ）および患者（ＥＣＰ開始後５３週目および７５週目）のＣＤ５６^{ｂｒｉｇｈｔ} ＮＫ細胞、ＣＤ５６^ｄｉｍ ＮＫ細胞、ＣＤ４^＋メモリーＴ細胞、ＣＤ４^＋ナイーブ細胞、およびＣＤ８^＋Ｔ細胞内のサイトカイン発現細胞の割合。ＨＤ（ｎ＝５）、ボックスプロットのひげは、ＨＤデータセットの最小値および最大値を表す。 （ａ）～（ｄ）健康な年齢適合ドナー（ＨＤ）および患者（ＥＣＰ開始後５３週目および７５週目）のＣＤ５６^{ｂｒｉｇｈｔ} ＮＫ細胞、ＣＤ５６^ｄｉｍ ＮＫ細胞、ＣＤ４^＋メモリーＴ細胞、ＣＤ４^＋ナイーブ細胞、およびＣＤ８^＋Ｔ細胞内のサイトカイン発現細胞の割合。ＨＤ（ｎ＝５）、ボックスプロットのひげは、ＨＤデータセットの最小値および最大値を表す。 （ａ）患者Ｔ細胞をＲａｇ２^－／－Ｉｌ２ｒｇ^－／－マウスに単独で、またはＮＫ細胞と共に養子移入し、抗ＰＤ－１抗体での治療による免疫チェックポイント阻害剤関連自己免疫を誘導する実験モデル。（ｂ）（ａ）に示すように、患者ＴおよびＮＫ細胞注射後１５日目のＲａｇ２^－／－Ｉｌ２ｒｇ^－／－マウスから単離した肝臓、皮膚、肺および結腸の組織病理学的好中球およびリンパ球浸潤スコア。 （ａ）患者由来細胞の注射なしで抗ＰＤ－１抗体で治療したＲａｇ２^－’－Ｉ！２ｒｇ^－’－マウスの治療スキーム（陰性対照）。（ｂ）（ａ）に示すように、治療開始後１５日目に、Ｒａｇ２^－／－Ｉｌ２ｒｇ^－／－マウスから単離した肝臓、肺、皮膚、および結腸の好中球浸潤スコア。（ｃ）（ａ）に記載したように治療したＲａｇ２^－／－Ｉｌ２ｒｇ^－／－マウスの生存。 （ａ）治療スケジュール：示されているように、ＤＳＳ（３％）、抗ＰＤ１およびＥＣＰでマウスを治療した。（ｂ）示されているように、未治療、またはＤＳＳ（３％）、単独でもしくはＥＣＰと組み合わせた抗ＰＤ１で治療したマウスの重量曲線。 （ｃ）群当たり５匹のマウスにおいて定量化した結腸長。パネルＢに示すような群。（ｄ）群当たり１匹のマウスの代表的な結腸。パネルＢに示すような群。 （ｅ）パネルＢに示す群の結腸の代表的なＨＥ染色切片。（ｆ）パネルＢに示す群の結腸の組織病理スコア。 （ａ）治療スケジュール：マウスにＢ１６黒色腫細胞を静脈内に注射し、その後、示されるように抗ＰＤ１、プレドニゾロンまたはＥＣＰで治療した。 （ｂ）Ｂ１６黒色腫細胞を静脈内に注射し、その後抗ＰＤ１、プレドニゾロンまたはＥＣＰで治療したマウスの生存。

本発明は、以下の実施例によってさらに説明される。これらは本発明の範囲を限定することを意図するものではなく、本明細書に記載の本発明のより大きな例示のために提供される本発明の態様の好ましい実施形態を表す。

ここでは、イピリムマブ／ニボルマブ誘発性大腸炎を罹患している患者で、複数の免疫抑制薬に難治性であり、免疫調節ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の増殖と同時に体外循環式光化学療法（ＥＣＰ）後に完全奏効を達成した患者を報告する。

実施例の結果
２９歳の男性患者は、転移性黒色腫をイピリムマブおよびニボルマブで治療された。２回投与後、患者は皮膚炎、甲状腺炎、肝炎、大腸炎を発症した。大腸炎は、生検で同定された肉眼的粘膜潰瘍ならびに上皮内アポトーシスおよび陰窩損失に基づいて診断された（図１ａ、ｂ）。皮膚炎、甲状腺炎、および肝炎は、イピリムマブ／ニボルマブおよびコルチコステロイド治療を中止した後に解消したが、患者は今後２０週間以内に３回の大腸炎エピソードを経験した（ＣＴＣ－ＡＥＩＩ－ＩＩＩ°）。これらを、コルチコステロイド（ＥＣＰの合計２３週間前）、インフリキシマブ（ＥＣＰの２回の単回投与１８週間前および１５週間前）、およびシクロスポリン（ＥＣＰの１４週間前、図１ａおよび表１）で治療した。

持続的な反応がなかったため、患者はＥＣＰを受けた。その後の８ヶ月間に、２～４週間ごとに２サイクルのＥＣＰを連日で受けた。ＥＣＰは、寛容性が高く、完全奏効をもたらした（図１ａ）。免疫抑制は、症状のリバウンドを伴わずに漸減した。大腸内視鏡検査により大腸炎の継続的寛解を確認した（図１ｃ）。免疫チェックポイント阻害剤治療は、ｉｒＡＥの最初の徴候時に中止され、再開されることはなかった。

ＥＣＰ治療前および治療中の複数の時点で、末梢血白血球コンパートメントを分析した。我々は、免疫調節表現型（図１ｆ、ｇ）を用いて、ＮＫ細胞（図１ｄ～ｅ、図２ａ～ｊ）の４倍の増加を観察した。また、複数の炎症促進性サイトカインは、年齢適合した健康なドナーと比較して患者において低かった（図３ａ～ｅ）。ＮＫ細胞が自己免疫を調節するという考え方を支持し、患者のＮＫ細胞の養子移入は、ヒトＴ細胞および抗ＰＤ－１抗体治療によって引き起こされたマウスｉｒＡＥモデルにおいて、用量依存的にｉｒＡＥを防止した（図１ｈおよび図４ａ、ｂ）。対照実験は、罹患率が患者由来のＴ細胞によって媒介されることを確認した（図５）。

ＥＣＰは、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）^４の治療のための確立された療法であり、ＧＶＨＤ患者のＮＫ細胞の増加につながる^５。ＩｒＡＥ治療におけるＥＣＰの安全性および有効性に関するデータは、現在のところ不足している。この症例報告は、ＥＣＰが、保護ＮＫ細胞集団の増殖を通じて、難治性チェックポイント阻害剤関連大腸炎の効率的な療法であり得ることを示唆している。

ＥＣＰは、抗黒色腫効果をブロックすることなく、免疫媒介性有害事象を減少させる
上記の結果（図１～５）に基づいて、ＥＣＰは、抗黒色腫効果をブロックすることなく、免疫媒介性有害事象を減少させ、次いで、ｉｒＡＥのインビボモデルにおいてこれを試験することを目標とした。大腸炎を誘発するために、先の報告に従って（１９）マウスを３％ＤＳＳおよび抗ＰＤ１で治療した（図６Ａ）。治療は、大腸炎の発症と一致するマウスの体重を減少させ、体重減少は、ＥＣＰ治療によって減少した（図６Ｂ）。ＥＣＰ治療はまた、抗ＰＤ１のみで治療した群と比較して、結腸長を増加させた（図６Ｃ、Ｄ）。結腸長は、免疫療法誘発性大腸炎の重症度の代理パラメータであることが報告された（１９）。減少した大腸炎重症度に一致して、我々は、抗ＰＤ１のみで治療した群と比較して、ＥＣＰで治療したマウスの結腸壁における好中球の浸潤の減少を観察した（図６Ｅ、Ｆ）。これらの所見は、ＥＣＰがマウスにおける抗ＰＤ１誘導性大腸炎を低下させることを示す。

ＥＣＰの免疫調節性効果が抗腫瘍活性の喪失に関連しているかどうかを理解するために、次に、抗ＰＤ１単独で、またはグルココルチコイドプレドニゾロンもしくはＥＣＰと組み合わせて、黒色腫を有するマウスを治療した（図７Ａ）。我々は、プレドニゾロンが、抗ＰＤ１のみで治療した群と比較して、黒色腫を有するマウスの生存を減少させることを観察した（図７Ｂ）。対照的に、抗ＰＤおよびＥＣＰで治療した群は、抗ＰＤ１のみで治療した群と同等の転帰を有した（図７Ｂ）。これらの所見は、ＥＣＰが、抗ＰＤ１治療によって誘導される抗黒色腫応答に干渉しないことを示す。

実施例の考察
メカニズムの考察：ＮＫ細胞は、抗炎症活性を含む様々な異種免疫学的機能を発揮する。ＧＶＨＤのマウスモデルでは、ＮＫ細胞の転写は、インタクトなＴＧＦ－βシグナル伝達に依存していた生存率を改善した^６。別の前臨床ＧＶＨＤ研究において、ＮＫ細胞は、パーフォリンおよびＦａｓリガンド媒介性の同種反応性Ｔ細胞増殖の減少およびＴ細胞アポトーシスの増加を誘導した^７。ｃ－Ｋｉｔ^－ＣＤ２７^－ＣＤ１１ｂ^＋集団を、移植片対白血病（ＧＶＬ）効果を妨げることなくＧＶＨＤを制御することができる特定のエフェクターＮＫ細胞サブセットとして同定した^８。ヒトでは、ＧＶＨ方向の同種異種ＨＣＴにおけるキラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）リガンドのミスマッチは、ＮＫ細胞によって媒介されたＧＶＨＤのリスクを低下させた^９。

ＥＣＰは、ＧＶＨＤに対する効率的な治療である。広範囲の慢性ＧＶＨＤに対するＥＣＰ中のＮＫ細胞の増加は、以前に観察されている^１０。急性ＧＶＨＤを有する患者は、より強力なＮＫＧ２ＤおよびＣＤ６２Ｌ発現を有するＣＤ５６^ｂｒｉ ＮＫサブセットのより高い頻度を有する^１１。同研究では、慢性ｃＧＶＨＤを有する患者において、ＣＤ５７およびＣＤ１１ｂのより高い発現を有するＣＤ５６^－ＣＤ１６^＋ＮＫ細胞が増加した。ＥＣＰは、ＮＫ細胞集団を、特化した抗ウイルスおよび抗白血病ＣＤ５７^＋ＮＫＧ２Ｃ^＋ＣＤ５６^ｄｉｍサブセットの保護を伴う、より免疫調節表現型に移行させた^１１。我々は、類似の機構が、ｉｒＡＥに対するＮＫ細胞の保護効果に関与している可能性があると仮定する。患者におけるＮＫ細胞コンパートメントを、年齢および性別に一致した健常対照のＮＫ細胞コンパートメントと比較した場合、特にＣＤ５６^ｄｉｍ ＮＫ細胞において、ＣＤ１６発現の下方調節を観察した。ＣＤ１６は、ＦｃＲγＩＩＩ、強力なサイトカイン産生を誘導することができる活性化ＮＫ細胞受容体である。以前の研究は、ＣＤ１６の脱落が、自己免疫を予防するための免疫調節機構である可能性があることを示している^１２。ＣＤ１６下方調節は、ＮＫ細胞応答を調節し、抗体およびＴ細胞依存性経路の両方の免疫恒常性の維持に寄与する^１３。この仮説を支持すると、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ、およびＩＬ－２の発現は、対照群と比較して、患者のＮＫ細胞において低かった。

実施例で使用される方法
ＥＣＰ手順：
体外循環式光化学療法を、メトキシサレン（Ｕｖａｄｅｘ（著作権））を投与して、Ｔｈｅｒａｋｏｓ ＣｅｌｌＥｘ光化学療法システム上で行った。２つの手順を連日で行い、各手順中に１５００ｍｌの血液を処理した。我々は、ドイツのフライブルクにあるＡｌｂｅｒｔ Ｌｕｄｗｉｇｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙの倫理委員会の承認（プロトコル番号３００／１６）後、ヘルシンキ宣言に従って書面によるインフォームドコンセントの後、すべてのヒト試料を収集した。

ＩｒＡＥのマウスモデル
Ｔ細胞を、製造業者の指示に従ってＰａｎ Ｔ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）で陰性選択を使用して、患者の末梢血から単離した。ＮＫ細胞を、ＮＫ細胞単離キット、ヒト（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を製造業者の指示に従って使用して、患者の末梢血から単離した。Ｒａｇ２^－／－Ｉｌ２ｒｇ^－／－マウスに、４×１０^４または４×１０^５個のＮＫ細胞の有無にかかわらず、３×１０^５個のＴ細胞を静脈内に注入した。注入後１日目～２２日目まで、マウスを週２回、８ｍｇ／ｋｇ体重抗ＰＤ－１抗体（クローンＪ４３）で、および週１回、１ｍｇ／ｋｇ体重ＬＰＳで治療し、いずれも腹腔内注入によって適用した（図４ａ）。ヒトＴ細胞注射後１５日目に収集した皮膚、肝臓、結腸および肺の切片をヘマトキシリン－エオシンで染色し、経験豊富な病理学者によりリンパ球および好中球浸潤、陰窩膿瘍、ならびにアポトーシス細胞^{１４，１５}を含むヒトｉｒＡＥの組織病理的特徴付けに基づいてスコア付けされた。すべての動物試験は、ドイツのフライブルクにあるＡｌｂｅｒｔ－Ｌｕｄｗｉｇｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙの実験動物の使用とケアに関する大学の施設レビュー委員会によって承認されていた（プロトコル承認番号：Ｇ１７－０４９、Ｘ１３－０７Ｊ、Ｘ１５－１０Ａ）。

フローサイトメトリー
ＥＣＰ療法中およびＥＣＰ療法後のリンパ球系列集団のモニタリングのために、患者の末梢血リンパ球を単離し、日常診断の一部として、ＣＤ４５、ＣＤ１９、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１６、ＣＤ５６、およびＨＬＡ－ＤＲに対する抗体の標準パネルで染色した。データをＦｌｏｗＪｏ（Ｖ１０）で補償し、リンパ球をエクスポートし、Ｒ環境を使用した^１７。ｔＳＮＥおよびＦｌｏｗＳＯＭクラスタリングを、前述のように行った^１６。

多パラメータＮＫ細胞表現型およびサイトカイン分析のために、末梢血リンパ球を、密度勾配培地（Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ、ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を製造業者の指示に従って使用して単離した。解凍した末梢血リンパ球を表Ｓ２に列挙した抗体で染色した。Ｚｏｍｂｉｅ Ａｑｕａ Ｆｉｘａｂｌｅ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙキット（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を、生／死の識別のために使用した。サイトカインの産生のために、細胞を、ＧｏｌｇｉＰｌｕｇ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）の存在下で４時間、５０ｎｇ／ｍｌのＰＭＡ（Ａｘｏｎ Ｌａｂ）および５００ｍｇ／ｍｌのイオノマイシン（Ｓｉｇｍａ）で刺激した。ＢＤ Ｃｙｔｏｆｉｘ／Ｃｙｔｏｐｅｒｍキット（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を製造業者のプロトコルに従って使用して、細胞内染色を行った。Ａｕｒｏｒａフローサイトメーター（Ｃｙｔｅｋ）上でデータを得て、ＦｌｏｗＪｏ（Ｆｌｏｗｊｏ Ｖ１０．６．１，ＬＬＣ）ソフトウェアを使用して補償した。図に指定された細胞集団をエクスポートし、Ｒ環境を使用して解析した^１７。データを、記載されるように、ＦｌｏｗＳＯＭクラスタリングのために処理した^１６。次元数縮小のために、ＵＭＡＰパッケージを使用した^１８。

統計
統計解析は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｌａｂ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｖ７．０を用いて行った。２つの群の比較は、両側の対応のないスチューデントｔ検定によって実施した。生存期間の差（カプラン・マイヤー生存期間曲線）は、マンテル・コックス（ログランク）検定を使用して評価した。別途示されない場合、データは、平均値±ＳＥＭとして提示される。Ｐ値＜０．０５は、有意であるとみなした。

実施例の表

患者は、ＥＣＰ開始の２０週間前に最初の大腸炎のエピソードを有していた。その時点で、患者は以前の免疫チェックポイント阻害剤関連肝炎、甲状腺炎、および皮膚炎のためにステロイドで３週間治療を受けていた。ステロイドの漸減中に大腸炎を発症した。したがって、ステロイド投与量を増加させ、応答が不十分であったため、インフリキシマブ５ｍｇ／ｋｇ ＢＷを１回投与した。症状は、治まった。ステロイドの漸減時に、患者は、ＥＣＰ開始の１６週間前に２回目の大腸炎のエピソードを経験した。患者は、増加した用量のメチルプレドニゾロンおよび２回目の用量のインフリキシマブで治療された。下痢はこの療法に難治性であり、その結果としてシクロスポリンＡが添加された。症状は、再び治まった。シクロスポリンＡ用量が減少するにつれて、患者は大腸炎の第３のエピソードを有した。ここで、ＥＣＰ治療を開始した。ＥＣＰ開始から２週間後、患者は正常な排便頻度を有していた。ＥＣＰ開始から８週間後にシクロスポリンＡ治療を中止して、ＥＣＰ開始から１２週間後にコルチコステロイド治療を中止したところ、何らかの症状のリバウンドはなかった。ＥＣＰを合計３２週間実施した。最後のＥＣＰから１１ヶ月のフォローアップで、患者は、ｉｒＡＥおよび黒色腫の両方の徴候に関して完全寛解を維持した。

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６．Ａｓａｉ Ｏ，Ｌｏｎｇｏ ＤＬ，Ｔｉａｎ ＺＧ，ｅｔ ａｌ．Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｇｒａｆｔ－ｖｅｒｓｕｓ－ｈｏｓｔ ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｒａｆｔ－ｖｅｒｓｕｓ－ｔｕｍｏｒ ｅｆｆｅｃｔｓ ｂｙ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌｓ ａｆｔｅｒ ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １９９８；１０１：１８３５－４２．
７．Ｏｌｓｏｎ ＪＡ，Ｌｅｖｅｓｏｎ－Ｇｏｗｅｒ ＤＢ，Ｇｉｌｌ Ｓ，Ｂａｋｅｒ Ｊ，Ｂｅｉｌｈａｃｋ Ａ，Ｎｅｇｒｉｎ ＲＳ．ＮＫ ｃｅｌｌｓ ｍｅｄｉａｔｅ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＧＶＨＤ ｂｙ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ａｃｔｉｖａｔｅｄ，ａｌｌｏｒｅａｃｔｉｖｅ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｗｈｉｌｅ ｒｅｔａｉｎｉｎｇ ＧＶＴ ｅｆｆｅｃｔｓ．Ｂｌｏｏｄ ２０１０；１１５：４２９３－３０１．
８．Ｍｅｉｎｈａｒｄｔ Ｋ，Ｋｒｏｅｇｅｒ Ｉ，Ｂａｕｅｒ Ｒ，ｅｔ ａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｍｕｒｉｎｅ ＮＫ ｃｅｌｌ ｓｕｂｓｅｔ ｓｕｐｐｏｒｔｉｎｇ ｇｒａｆｔ－ｖｅｒｓｕｓ－ｌｅｕｋｅｍｉａ－ａｎｄ ｒｅｄｕｃｉｎｇ ｇｒａｆｔ－ｖｅｒｓｕｓ－ｈｏｓｔ－ｅｆｆｅｃｔｓ．Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２０１５；４：ｅ９８１４８３．
９．Ｒｕｇｇｅｒｉ Ｌ，Ｃａｐａｎｎｉ Ｍ，Ｕｒｂａｎｉ Ｅ，ｅｔ ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ ｏｆ ｄｏｎｏｒ ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌ ａｌｌｏｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｍｉｓｍａｔｃｈｅｄ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２００２；２９５：２０９７－１００．
１０．Ａｌｃｉｎｄｏｒ Ｔ，Ｇｏｒｇｕｎ Ｇ，Ｍｉｌｌｅｒ ＫＢ，ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｏｒｐｏｒｅａｌ ｐｈｏｔｏｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ ｃｈｒｏｎｉｃ ｇｒａｆｔ－ｖｅｒｓｕｓ－ｈｏｓｔ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｂｌｏｏｄ ２００１；９８：１６２２－５．
１１．Ｎｉ Ｍ，Ｗａｎｇ Ｌ，Ｙａｎｇ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｓｈａｐｉｎｇ ｏｆ ＣＤ５６（ｂｒｉ） Ｎａｔｕｒａｌ Ｋｉｌｌｅｒ Ｃｅｌｌｓ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ Ｗｉｔｈ Ｓｔｅｒｏｉｄ－Ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ／Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ａｃｕｔｅ Ｇｒａｆｔ－ｖｓ．－Ｈｏｓｔ Ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉａ Ｅｘｔｒａｃｏｒｐｏｒｅａｌ Ｐｈｏｔｏｐｈｅｒｅｓｉｓ．Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１９；１０：５４７．
１２．Ｒｏｍｅｅ Ｒ，Ｆｏｌｅｙ Ｂ，Ｌｅｎｖｉｋ Ｔ，ｅｔ ａｌ．ＮＫ ｃｅｌｌ ＣＤ１６ ｓｕｒｆａｃｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｓ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｂｙ ａ ｄｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎ ａｎｄ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅａｓｅ－１７（ＡＤＡＭ１７）．Ｂｌｏｏｄ ２０１３；１２１：３５９９－６０８．
１３．Ｇｏｏｄｉｅｒ ＭＲ，Ｌｕｓａ Ｃ，Ｓｈｅｒｒａｔｔ Ｓ，Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ－Ｇａｌａｎ Ａ，Ｂｅｈｒｅｎｓ Ｒ，Ｒｉｌｅｙ ＥＭ．Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｏｍｐｌｅｘ－Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ＣＤ１６ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｆｔｅｒ Ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ＮＫ Ｃｅｌｌ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１６；７：３８４．
１４．Ｂｅｃｋ ＫＥ，Ｂｌａｎｓｆｉｅｌｄ ＪＡ，Ｔｒａｎ ＫＱ，ｅｔ ａｌ．Ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃａｎｃｅｒ ａｆｔｅｒ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｂｌｏｃｋａｄｅ ｏｆ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ－ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ａｎｔｉｇｅｎ ４．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２００６；２４：２２８３－９．
１５．Ｊｏｈｎｃｉｌｌａ Ｍ，Ｍｉｓｄｒａｊｉ Ｊ，Ｐｒａｔｔ ＤＳ，ｅｔ ａｌ．Ｉｐｉｌｉｍｕｍａｂ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ：
Ｃｌｉｎｉｃｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｉｎ ａ Ｓｅｒｉｅｓ ｏｆ １１ Ｃａｓｅｓ．Ａｍ Ｊ Ｓｕｒｇ Ｐａｔｈｏｌ ２０１５；３９：１０７５－８４．
１６．Ｂｒｕｍｍｅｌｍａｎ Ｊ，Ｈａｆｔｍａｎｎ Ｃ，Ｎｕｎｅｚ ＮＧ，ｅｔ ａｌ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｈｉｇｈ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐａｎｅｌｓ ｆｏｒ ｓｉｎｇｌｅ－ｃｅｌｌ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ．Ｎａｔ Ｐｒｏｔｏｃ ２０１９；１４：１９４６－６９．
１７．Ｔｅａｍ ＲＤＣ．Ａ ｌａｎｇｕａｇｅ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ｆｏｒ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ．Ｒ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ ２０１０．
１８．Ｍｃｉｎｎｅｓ Ｌ，Ｈｅａｌｙ Ｊ，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ Ｊ．ＵＭＡＰ： Ｕｎｉｆｏｒｍ Ｍａｎｉｆｏｌｄ Ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ．ａｒＸｉｖ ６，０３４２６ｖ０３４２２（２０１８）．
１９．Ｐｅｒｅｚ－Ｒｕｉｚ Ｅ，Ｍｉｎｕｔｅ Ｌ，Ｏｔａｎｏ Ｉ，Ａｌｖａｒｅｚ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ ＴＮＦ ｂｌｏｃｋａｄｅ ｕｎｃｏｕｐｌｅｓ ｅｆｆｉｃａｃｙ ａｎｄ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｉｎ ｄｕａｌ ＣＴＬＡ－４ ａｎｄ ＰＤ－１ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｎａｔｕｒｅ．２０１９ Ｍａｙ；５６９（７７５６）：４２８－４３２．

Claims (15)

1. －チェックポイント阻害剤療法を受け、かつ免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）の症状を発症する疑いがあるか、または発症した、対象の血液試料に由来する試料の提供のステップと、
   －前記試料に光増感剤を添加するステップと、
   －前記試料を照射に供するステップと、を含む、方法。
2. 前記試料に光増感剤を添加し、前記試料を照射に供することにより、前記試料中の免疫調節ＮＫ細胞を生成するか、または（その形成を）誘導する、請求項１に記載の方法。
3. 前記光増感剤が、８－メトキシプソラレンであり、かつ／または前記照射が、ＵＶＡ照射である、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
4. 前記対象が、ｉｒＡＥの症状を示すか、またはｉｒＡＥに罹患している、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
5. 前記対象においてｉｒＡＥの症状および／もしくは徴候が生じた後に、前記チェックポイント阻害剤療法が中止された、または前記チェックポイント阻害剤療法が中止された後にｉｒＡＥの症状および／もしくは徴候が生じた、かつ／または前記チェックポイント阻害剤療法が中止された後にｉｒＡＥの症状および／もしくは徴候が維持された、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
6. 前記ｉｒＡＥが、自己免疫疾患の症状を含み、かつ／または自己免疫反応によって引き起こされる、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
7. 前記ｉｒＡＥが、自己免疫大腸炎を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
8. 前記対象が、悪性黒色腫またはチェックポイント阻害剤療法によって治療可能な別のがんなどのがんに罹患している、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
9. 前記対象が、ステロイド、コルチコステロイド、シクロスポリン、および／もしくは抗ＴＮＦ抗体（例えば、インフリキシマブ）などの免疫抑制薬を受けている、かつ／または免疫抑制薬に対して難治性である、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
10. 前記チェックポイント阻害剤療法が、抗ＣＴＬＡ４抗体および抗ＰＤ－１抗体のうちの少なくとも１つの投与を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の方法。
11. －対象の単離された血液試料に由来する試料の提供のステップと、
    －光増感剤を前記試料に添加するステップと、
    －前記試料を照射に供するステップと、を含む方法から得られた、免疫調節ＮＫ細胞。
12. 前記血液試料が、チェックポイント阻害剤療法を受け、かつ免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）の症状を発症する疑いがあるか、または発症した、対象に由来する、先行請求項のいずれか一項に記載の免疫調節ＮＫ細胞。
13. チェックポイント阻害剤療法を受けた対象における免疫関連有害事象（ｉｒＡＥ）の治療および／または予防における使用のための免疫調節ＮＫ細胞。
14. 前記免疫調節ＮＫ細胞が、ヒト対象の血液試料に由来する試料に光増感剤を添加し、前記試料を照射に供することによって生成されている、先行請求項のいずれか一項に記載の使用のための免疫調節ＮＫ細胞。
15. 前記ＮＫ細胞が、前記対象に対して自己由来であり、かつ／または前記ＮＫ細胞は、チェックポイント阻害剤療法が進行中である間に、前記対象に投与される、請求項１３または１４に記載の使用のための免疫調節ＮＫ細胞。

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