JP2023506110A - 分離装置および分離方法 - Google Patents
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Abstract
Description
前記分離装置は、分離チップアセンブリ、真空システム、周波数変換モジュール、およびコントローラを備え、
前記分離チップアセンブリは、分離チップ、第1振動部及び第2振動部を備え、
前記分離チップは、サンプルプールと、前記サンプルプールが対向する両側に位置して且つ孔径が前記標的粒子の粒子径よりも小さい第1濾過膜および第2濾過膜と、前記第1濾過膜を介して前記サンプルプールと連通する第1チャンバ、および前記第2濾過膜を介して前記サンプルプールと連通する第2チャンバと、を備え、前記第1振動部は、第1濾過膜と第2濾過膜に固定され、前記第2振動部は、前記第1チャンバの外面と前記第2チャンバの外面に固定され、
前記周波数変換モジュールは、前記真空システムによって前記第1チャンバと前記第2チャンバにそれぞれ接続され、前記真空システムを制御して前記第1チャンバと前記第2チャンバ内に交互に負圧を発生させ、
前記コントローラは、前記真空システムが前記第1チャンバにおける負圧の発生を停止させるときに、前記第1振動部および前記第2振動部の振動を制御し、前記真空システムが前記第2チャンバの負圧の発生を停止させるときに、前記第1振動部および前記第2振動部の振動を制御し、
そのうち、前記第1振動部および前記第2振動部は、振動時にそれぞれ第1振動波及び第2振動波を発生させ、前記第1振動波の周波数は、前記第2振動波の周波数よりも大きく、前記第1振動波の振幅は、前記第2振動波の振幅よりも小さい。
前記分離方法は、
上記分離装置を提供し、
前記サンプルプールに液体サンプルを供給するステップと、
前記第1チャンバに負圧を発生させることで、前記サンプルプールにおける液体サンプルのうち、前記第1濾過膜の孔径よりも小さいサイズの成分が負圧により前記第1濾過膜に前記第1チャンバに進入させるステップと、
前記第1チャンバにおける負圧の発生を停止し、前記第1振動部および前記第2振動部の振動を制御するステップと、
前記第2チャンバに負圧を発生させることで、前記サンプルプールにおける液体サンプルのうち、前記第2濾過膜の孔径よりも小さいサイズの成分が負圧により前記第2濾過膜に前記第2チャンバに進入させるステップと、および
前記第2チャンバにおける負圧の発生を停止し、前記第1振動部および前記第2振動部の振動を制御し、前記第1振動部および前記第2振動部は、振動時にそれぞれ第1振動波及び第2振動波を発生させ、前記第1振動波の周波数は、前記第2振動波の周波数よりも大きく、前記第1振動波の振幅は、前記第2振動波の振幅よりも小さいステップと、を備える。
分離チップ10は、サンプルプール13と、サンプルプール13が対向する両側に位置する第1濾過膜14および第2濾過膜16とを備える。サンプルプール13は、液体サンプルを収容するためのものである。第1濾過膜14および第2濾過膜16の孔径は、いずれも標的粒子の粒径よりも小さい。
ステップS1は、本願の分離チップアセンブリ1を提供し、該当分離チップアセンブリ1のサンプルプール13に液体サンプルを供給する。
ここで、吸引を行う前に、第1開口152、第2開口172をそれぞれ分離装置100の真空システム50に接続する。このように、真空システム50は、第1開口152により第1チャンバ15を吸引し、第1チャンバ15内に負圧を発生させる。サンプルプール13における液体サンプル中の液体およびサイズが第1濾過膜14の孔径よりも小さい成分は、負圧によって第1濾過膜14に向かって移動し、第1濾過膜14を介して第1チャンバ15に入れてもよい。
ここで、第1振動波は、第1濾過膜14を高周波振動させるものであり、濾過膜の膜孔に吸着した標的粒子を速やかに濾過膜の膜孔から分離させ、還流される液体サンプル中に再懸濁させることができる。第2振動波は、標的粒子が凝集してしまうことを防ぐことができる。同時に、真空システム50は、第2開口172により第2チャンバ17を吸引し、第2チャンバ17内に負圧を発生させる。第1濾過膜14の表面に付着した成分は、気流及び/又は液流サンプルプール13においてサンプルプール13における液体サンプル中の液体と第2濾過膜16の孔径よりも小さい成分とが負圧により第2濾過膜16に向かって移動し、第2濾過膜16を介して第2チャンバ17に入れてもよい。
そして、ステップS2~ステップS4は、複数回循環され、液体サンプル中の濾過膜の孔径よりも小さい成分が除去され、濾過膜の孔径よりも大きい成分がサンプルプール13に閉じ込められることにより、分離精製効果をより優れたものとすることができる。
実施例および比較例1~4が経時的に得られたエクソソームの含有量を測定した結果を図5に記録した。図5に示すように、実施例は、10min以内に約30μmのエクソソームを分離でき、比較例1~4よりも分離効率がかなり大きい。さらに、実施例で得られたエクソソームについて、透過型電子顕微鏡試験(スケールラベル250nm)を行い、試験結果を図6に示す。このうち分離されたエクソソームの粒子径は50nm~200nmであり、エクソソームの理論粒子径と一致し、且つその形は円形またはカップ形であり、高い完全性を有する。
10 分離チップ
11 第1側蓋シート
12 第2側蓋シート
13 サンプルプール
14 第1濾過膜
15 第1チャンバ
16 第2濾過膜
17 第2チャンバ
18 サンプル充填室
20 第1振動部
30 第2振動部
40 周波数変換モジュール
50 真空システム
60 コントローラ
100 分離装置
110 第1カバーシート本体
111 第1ブロックシート
112 第2ブロックシート
120 第2カバーシート本体
121 第3ブロックシート
122 第4ブロックシート
131 サンプル導入口
152 第1開口部
172 第2開口部
410 周波数変換器
420 制御弁
510 第1真空ポンプ
520 第2真空ポンプ
Claims (10)
- 液体サンプルから標的粒子を分離して精製するための分離装置であって、
前記分離装置は、分離チップアセンブリ、真空システム、周波数変換モジュール、およびコントローラを備え、
前記分離チップアセンブリは、分離チップ、第1振動部及び第2振動部を備え、
前記分離チップは、サンプルプールと、前記サンプルプールが対向する両側に位置して且つ孔径が前記標的粒子の粒子径よりも小さい第1濾過膜および第2濾過膜と、前記第1濾過膜を介して前記サンプルプールと連通する第1チャンバ、および前記第2濾過膜を介して前記サンプルプールと連通する第2チャンバと、を備え、前記第1振動部は、第1濾過膜と第2濾過膜に固定され、前記第2振動部は、前記第1チャンバの外面と前記第2チャンバの外面に固定され、
前記周波数変換モジュールは、前記真空システムによって前記第1チャンバと前記第2チャンバにそれぞれ接続され、前記真空システムを制御して前記第1チャンバと前記第2チャンバ内に交互に負圧を発生させ、
前記コントローラは、前記真空システムが前記第1チャンバにおける負圧の発生を停止させるときに、前記第1振動部および前記第2振動部の振動を制御し、前記真空システムが前記第2チャンバの負圧の発生を停止させるときに、前記第1振動部および前記第2振動部の振動を制御し、
そのうち、前記第1振動部および前記第2振動部は、振動時にそれぞれ第1振動波及び第2振動波を発生させ、前記第1振動波の周波数は、前記第2振動波の周波数よりも大きく、前記第1振動波の振幅は、前記第2振動波の振幅よりも小さいことを特徴とする分離装置。 - 前記第1振動波の周波数は、5000Hz~8000Hzであり、第2周波数の振動数は、100~500Hzであることを特徴とする請求項1に記載の分離装置。
- 前記第1振動波の振動周波数は、前記第1濾過膜または前記第2濾過膜の共振周波数と同等であることを特徴とする請求項2に記載の分離装置。
- 前記第1振動部と前記第2振動部とは、同一の水平面に位置することを特徴とする請求項1に記載の分離装置。
- 前記第1振動部は、ハーモニック発振器であり、前記第2振動部は、振動モータであることを特徴とする請求項1に記載の分離装置。
- 液体サンプルから標的粒子を分離して精製するための分離方法であって、
前記分離方法は、
請求項1に記載の分離装置を提供し、前記サンプルプールに液体サンプルを供給するステップと、
前記第1チャンバに負圧を発生させることで、前記サンプルプールにおける液体サンプルのうち、前記第1濾過膜の孔径よりも小さいサイズの成分が負圧により前記第1濾過膜に前記第1チャンバに進入させるステップと、
前記第1チャンバにおける負圧の発生を停止し、前記第1振動部および前記第2振動部の振動を制御するステップと、
前記第2チャンバに負圧を発生させることで、前記サンプルプールにおける液体サンプルのうち、前記第2濾過膜の孔径よりも小さいサイズの成分が負圧により前記第2濾過膜に前記第2チャンバに進入させるステップと、
前記第2チャンバにおける負圧の発生を停止し、前記第1振動部および前記第2振動部の振動を制御し、前記第1振動部および前記第2振動部は、振動時にそれぞれ第1振動波及び第2振動波を発生させ、前記第1振動波の周波数は、前記第2振動波の周波数よりも大きく、前記第1振動波の振幅は、前記第2振動波の振幅よりも小さいステップと、を備える分離方法。 - 前記第1振動波の周波数は、5000Hz~8000Hzであり、第2周波数の振動数は、100~500Hzであることを特徴とする請求項6に記載の分離方法。
- 前記第1振動波の振動周波数は、前記第1濾過膜または前記第2濾過膜の共振周波数と同等であることを特徴とする請求項7に記載の分離方法。
- 前記第1振動部と前記第2振動部とは、同一の水平面に位置することを特徴とする請求項6に記載の分離方法。
- 前記第1振動部は、ハーモニック発振器であり、前記第2振動部は、振動モータであることを特徴とする請求項6に記載の分離方法。
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