JP2023504195A - 状態および疾患の処置のためのアンチセンスオリゴマー - Google Patents
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Abstract
SCN1A遺伝子における選択的スプライシング事象は、非生産的mRNA転写物につながる場合があり、順に、異常なタンパク質発現につながる場合があり、SCN1A遺伝子における選択的スプライシング事象を標的とできる治療剤は、ドラベ症候群患者において機能的タンパク質の発現レベルをモジュレートする、および/または異常なタンパク質発現を阻害することができる。このような治療剤は、SCN1A、SCN8AまたはSCN5Aタンパク質欠乏症によって引き起こされる状態を処置するために使用することができる。【選択図】図1C
Description
相互参照
[0001]本出願は、各々、その全体で参照により本明細書に組み込まれる、2019年12月6日に出願された米国特許仮出願第62/945,048号のおよび2020年3月24日に出願された米国特許仮出願第62/993,971号の利益を主張する。
[0001]本出願は、各々、その全体で参照により本明細書に組み込まれる、2019年12月6日に出願された米国特許仮出願第62/945,048号のおよび2020年3月24日に出願された米国特許仮出願第62/993,971号の利益を主張する。
[0002]神経系障害は、ニューロン興奮性、ニューロン相互作用および全体としての脳機能を媒介するイオンチャンネルの機能障害を特徴とするチャネル病と関連することが多い。ニューロン電位依存性ナトリウムチャネルのアルファ-孔形成サブユニットをコードするSCN1A-SCN2A-SCN3A遺伝子群の一部であるSCN1A遺伝子における突然変異は、野生型NaV1.1タンパク質と比較して機能が低減したNaV1.1タンパク質(「NaV1.1」とも呼ばれる)の発現、NaV1.1の発現の低減または両方をもたらし得る。SCN1A遺伝子中の突然変異は、ドラベ症候群(DS)などの疾患および状態の疾患の発症数と関連している(Millerら、1993~2015年、GeneReviews Pagon RAら編、 Seattle (WA):University of Washington、Seattle、Bookshelf ID: NBK1318およびMulleyら、2005年、Hum.Mutat.25巻:535~542頁)。
[0003]SCN1A遺伝子における選択的スプライシング事象は、非生産的mRNA転写物につながる場合があり、順に、異常なタンパク質発現につながる場合があり、SCN1A遺伝子における選択的スプライシング事象を標的とできる治療剤は、ドラベ症候群患者において機能的タンパク質の発現レベルをモジュレートする、および/または異常なタンパク質発現を阻害することができる。このような治療剤は、SCN1A、SCN8AまたはSCN5Aタンパク質欠乏症によって引き起こされる状態を処置するために使用することができる。
[0004]薬物の正しい用量、製剤、投薬レジメンおよび患者集団を選択することは、医薬品の開発において重大なステップである。例えば、投薬量に関する適切な情報なしに、医師が薬物を患者に処方することは不可能である。例えば、安全で、予測可能な投与を可能にする用量または用量範囲を同定できない場合には、薬物は医学的に有用な、または商業的に実行可能な医薬品にはなり得ない。したがって、正確な薬物投薬量を決定することは、臨床診察において対処される必要がある重要な問題である。薬物の治療上有効な投薬量および投薬量レジメンの発見は、薬物の患者コンプライアンス、治療的有効性および副作用のバランスをとることを必要とし、これは相当なスキルを必要とする。例えば、適した投薬量および投薬量レジメンは、承認プロセスの一部を形成し、種々の当事者の知的および財政的資源の実質的な投入を必要とし、医師の日常的なものの範囲内に入らない臨床試験によって発見される場合がある。例えば、患者コンプライアンスは、種々の状態の最適処置のために重大であり得る。必要な用量がより多いほど、または処置計画がより困難であるほど、患者が従う可能性が低く、医学的薬剤は患者の生活の質(QOL)を増強する能力を有するが、それらは正しく使用される場合にそうすることができる。したがって、薬物の正しい用量、製剤、投薬レジメンおよび患者集団を選ぶことは、複雑であり、予測不可能であるということは明確である。構造的に類似した化合物は、その溶解度、毒性、活性、安定性および薬理学的特性が大幅に異なる。また、動物モデルとヒト対象の間には、大きな生理学的相違がある。したがって、前臨床情報を臨床的に有効な療法に変換することは、予測不可能であり、困難な作業である。
[0005]NaV1.1タンパク質の発現または機能の低減を特徴とする疾患または状態の処置またはそれを発症する可能性の低減を必要とするヒト対象において、該疾患または状態を処置するまたはそれを発症する可能性を低減するための適した投薬量、製剤、投薬レジメンおよび患者集団が、本明細書で提供される。
[0006]一部の態様では、NaV1.1タンパク質の発現または機能の低減を特徴とする疾患または状態の処置またはそれを発症する可能性の低減を必要とするヒト対象において、該疾患または状態を処置するまたはそれを発症する可能性を低減する方法が、本明細書で提供され、方法は、ヒト対象に、約0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22.5、25、27.5、30、32.5、35、37.5、40、42.5、45、47.5、50、52.5、55、57.5、60、62.5、65、67.5、70、72.5、75、77.5、80、82.5、85、87.5、90、92.5、95、97.5、100、102.5、105、107.5、110、112.5、115、117.5、120、122.5、125、127.5、130、132.5、135、137.5、140、142.5、145、147.5、150、152.5、155、157.5、160、162.5、165、167.5、170、172.5、175、177.5、180、182.5、185、187.5、190、192.5、195、197.5、200、202.5、205、207.5、210、212.5、215、217.5、220、222.5、225、227.5、230、232.5、235、237.5、240、242.5、245、247.5または250mgの第1の用量でアンチセンスオリゴマー(ASO)を含む医薬組成物を投与するステップを含み、ASOは、配列番号21~67、210~256または304~1099のうちいずれか1つに対して少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含み、それによって、ヒト対象において該疾患または状態を処置するまたはそれを発症する可能性を低減する。
[0007]一部の態様では、NaV1.1タンパク質の発現または機能の低減を特徴とする疾患または状態の処置または予防を必要とするヒト対象において、該疾患または状態を処置または予防するための医薬の製造のためのアンチセンスオリゴマー(ASO)の使用が、本明細書で提供され、医薬は、約0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22.5、25、27.5、30、32.5、35、37.5、40、42.5、45、47.5、50、52.5、55、57.5、60、62.5、65、67.5、70、72.5、75、77.5、80、82.5、85、87.5、90、92.5、95、97.5、100、102.5、105、107.5、110、112.5、115、117.5、120、122.5、125、127.5、130、132.5、135、137.5、140、142.5、145、147.5、150、152.5、155、157.5、160、162.5、165、167.5、170、172.5、175、177.5、180、182.5、185、187.5、190、192.5、195、197.5、200、202.5、205、207.5、210、212.5、215、217.5、220、222.5、225、227.5、230、232.5、235、237.5、240、242.5、245、247.5または250mgの第1の用量で投与され、ASOは、配列番号21~67、210~256または304~1099のうちいずれか1つに対して少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む。
[0008]一部の態様では、NaV1.1タンパク質の発現または機能の低減を特徴とする疾患または状態の処置または予防を必要とするヒト対象において、該疾患または状態を処置または予防するための医薬の製造のためのアンチセンスオリゴマー(ASO)の使用が本明細書で提供され、医薬は、約0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22.5、25、27.5、30、32.5、35、37.5、40、42.5、45、47.5、50、52.5、55、57.5、60、62.5、65、67.5、70、72.5、75、77.5、80、82.5、85、87.5、90、92.5、95、97.5、100、102.5、105、107.5、110、112.5、115、117.5、120、122.5、125、127.5、130、132.5、135、137.5、140、142.5、145、147.5、150、152.5、155、157.5、160、162.5、165、167.5、170、172.5、175、177.5、180、182.5、185、187.5、190、192.5、195、197.5、200、202.5、205、207.5、210、212.5、215、217.5、220、222.5、225、227.5、230、232.5、235、237.5、240、242.5、245、247.5または250mgの第1の用量で投与されるように調製され、ASOは、配列番号21~67、210~256または304~1099のうちいずれか1つに対して少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む。
[0009]一部の態様では、NaV1.1タンパク質の発現または機能の低減を特徴とする疾患または状態の処置またはそれを発症する可能性の低減を必要とするヒト対象において、該疾患または状態を処置するまたはそれを発症する可能性を低減する方法が、本明細書で提供され、方法は、ヒト対象に、アンチセンスオリゴマー(ASO)の第1の用量を含む医薬組成物を投与するステップを含み、ASOは、配列番号21~67、210~256または304~1099のうちいずれか1つに対して少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含み、それによって、ヒト対象において該疾患または状態を処置しまたはそれを発症する可能性を低減し、ヒト対象は、第1の用量時に最高で18歳である。
[0010]一部の態様では、NaV1.1タンパク質の発現または機能の低減を特徴とする疾患または状態の処置またはそれを発症する可能性の低減を必要とするヒト対象において、該疾患または状態を処置するまたはそれを発症する可能性を低減する方法が、本明細書で提供され、方法は、ヒト対象に、アンチセンスオリゴマー(ASO)の複数回の用量を含む医薬組成物を投与するステップを含み、ASOは、配列番号21~67、210~256または304~1099のうちいずれか1つに対して少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含み、それによって、ヒト対象において該疾患または状態を処置するまたはそれを発症する可能性を低減する。
[0011]一部の実施形態では、第1の用量は、複数回の用量の最初である。
[0012]一部の実施形態では、ヒト対象は、第1の用量時に最高で18歳である。
[0013]一部の実施形態では、方法は、ヒト対象に約0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22.5、25、27.5、30、32.5、35、37.5、40、42.5、45、47.5、50、52.5、55、57.5、60、62.5、65、67.5、70、72.5、75、77.5、80、82.5、85、87.5、90、92.5、95、97.5、100、102.5、105、107.5、110、112.5、115、117.5、120、122.5、125、127.5、130、132.5、135、137.5、140、142.5、145、147.5、150、152.5、155、157.5、160、162.5、165、167.5、170、172.5、175、177.5、180、182.5、185、187.5、190、192.5、195、197.5、200、202.5、205、207.5、210、212.5、215、217.5、220、222.5、225、227.5、230、232.5、235、237.5、240、242.5、245、247.5または250mgの第1の用量でASOを含む医薬組成物を投与するステップを含む。
[0012]一部の実施形態では、ヒト対象は、第1の用量時に最高で18歳である。
[0013]一部の実施形態では、方法は、ヒト対象に約0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22.5、25、27.5、30、32.5、35、37.5、40、42.5、45、47.5、50、52.5、55、57.5、60、62.5、65、67.5、70、72.5、75、77.5、80、82.5、85、87.5、90、92.5、95、97.5、100、102.5、105、107.5、110、112.5、115、117.5、120、122.5、125、127.5、130、132.5、135、137.5、140、142.5、145、147.5、150、152.5、155、157.5、160、162.5、165、167.5、170、172.5、175、177.5、180、182.5、185、187.5、190、192.5、195、197.5、200、202.5、205、207.5、210、212.5、215、217.5、220、222.5、225、227.5、230、232.5、235、237.5、240、242.5、245、247.5または250mgの第1の用量でASOを含む医薬組成物を投与するステップを含む。
[0014]一部の実施形態では、疾患または状態は、ドラベ症候群である。
[0015]一部の実施形態では、対象は、(i)しばしば長期化し、高熱によって引き起こされる、再発性焦点性運動性または片側けいれん性または全身性強直間代性発作を伴う、12ヶ月齢より前の発作開始、(ii)原因となる磁気共鳴画像法病変の過去の病歴なし、(iii)ドラベ症候群を除いて任意の疾患または状態の他の既知病因なし、(iv)発作開始時の正常な発達、(v)SCN1A遺伝子における病原性バリアントまたは重要性の不確かなバリアント、(vi)いずれかが適切な発作管理を欠いていた、てんかんのための少なくとも2つの以前の処置、(vii)投与前28日の間の4回以上のけいれん発作であって、片側間代性、運動性徴候を伴う焦点性、焦点性から両側性強直間代性けいれん、全身性強直間代性けいれん、強直性、強直性または無緊張性(転倒発作)および間代性から選択されるいずれか1つであるけいれん発作、(viii)ケトン食療法、迷走神経刺激剤もしくはカンナビノイドもしくはマリファナ由来製品である、てんかんのための現在の介入、または少なくとも4週間安定であった用量で少なくとも1つの抗てんかん薬を用いる投薬、あるいは(ix)(i)~(viii)の任意の組合せを有することを特徴とする。
[0015]一部の実施形態では、対象は、(i)しばしば長期化し、高熱によって引き起こされる、再発性焦点性運動性または片側けいれん性または全身性強直間代性発作を伴う、12ヶ月齢より前の発作開始、(ii)原因となる磁気共鳴画像法病変の過去の病歴なし、(iii)ドラベ症候群を除いて任意の疾患または状態の他の既知病因なし、(iv)発作開始時の正常な発達、(v)SCN1A遺伝子における病原性バリアントまたは重要性の不確かなバリアント、(vi)いずれかが適切な発作管理を欠いていた、てんかんのための少なくとも2つの以前の処置、(vii)投与前28日の間の4回以上のけいれん発作であって、片側間代性、運動性徴候を伴う焦点性、焦点性から両側性強直間代性けいれん、全身性強直間代性けいれん、強直性、強直性または無緊張性(転倒発作)および間代性から選択されるいずれか1つであるけいれん発作、(viii)ケトン食療法、迷走神経刺激剤もしくはカンナビノイドもしくはマリファナ由来製品である、てんかんのための現在の介入、または少なくとも4週間安定であった用量で少なくとも1つの抗てんかん薬を用いる投薬、あるいは(ix)(i)~(viii)の任意の組合せを有することを特徴とする。
[0016]一部の実施形態では、対象はさらに、以下:(a)SCN1A遺伝子における以下の突然変異:Thr226Met、Leu263Val、Val422Leu、Thr1174Ser、Trp1204Arg、Pro1345Ser、Gln1489Lys、Phe1499Leu、Arg1575Cys、Val1611Phe、Leu1624Pro、Arg1648Cys、Leu1649Gln、Leu1670Trp、Gly1674ArgおよびAsp1866Tyrのうち1つ、(b)既知の劣性遺伝病の場合にはホモ接合性である、てんかんを引き起こす別の遺伝子における既知の病原性突然変異、(c)維持処置としてのナトリウムチャネル遮断薬および抗凝固剤を用いて現在処置されており、ナトリウムチャネル遮断薬は、フェニトイン、カルバマゼピン、オキシカルバゼピン、ラモトリジン、ラコサミドまたはルフィナミドであり、抗凝固剤は、アスピリンではないこと、(d)てんかん以外の臨床的に著しく不安定な医学的状態、(e)てんかん以外の、投与前4週間における臨床的に関連する症状または臨床的に重大な疾病、(f)てんかん、ドラベ症候群以外の脳もしくは脊髄の疾患の病歴または細菌性髄膜炎もしくは脳奇形の病歴、(g)脊柱変形、または脳脊髄液(CSF)の自由な流れを変更するもしくはCSFドレナージシャントが埋め込まれている他の状態、(h)投与前の臨床的に重大な異常な臨床検査値、(i)正常の上限の>2.5倍アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼまたはアラニンアミノトランスフェラーゼ、正常の上限より多い血清クレアチニンまたは正常の下限より少ない血小板数、(j)投与前に測定された12誘導心電図(ECG)における臨床的に関連する異常、(k)精神障害または行動障害、(l)現在または過去4週間における、アスピリンではない抗凝固剤の投薬、あるいは(m)(a)~(l)の任意の組合せのうち1つまたは複数を有しないことを特徴とする。
[0017]一部の実施形態では、ヒト対象は、1~18、2~18、3~18、4~18、5~18、6~18、7~18、8~18、9~18、10~18、11~18、12~18、13~18、14~18、15~18、16~18または17~18歳である。
[0018]一部の実施形態では、ヒト対象は、1~17、1~16、1~15、1~14、1~13、1~12、1~11、1~10、1~9、1~8、1~7、1~6、1~5、1~4、1~3または1~2歳のヒトである。
[0019]一部の実施形態では、ヒト対象は、1歳未満または1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17または18歳である。
[0020]一部の実施形態では、医薬組成物は、ヒト対象のくも膜下腔内空間中に投与される。
[0020]一部の実施形態では、医薬組成物は、ヒト対象のくも膜下腔内空間中に投与される。
[0021]一部の実施形態では、医薬組成物は、ヒト対象の脳脊髄液中に投与される。
[0022]一部の実施形態では、医薬組成物は、ヒト対象の脳中に投与される。
[0023]一部の実施形態では、医薬組成物は、ヒト対象の脳中の脳脊髄液中に投与される。
[0022]一部の実施形態では、医薬組成物は、ヒト対象の脳中に投与される。
[0023]一部の実施形態では、医薬組成物は、ヒト対象の脳中の脳脊髄液中に投与される。
[0024]一部の実施形態では、医薬組成物は、ボーラス注射として投与される。
[0025]一部の実施形態では、医薬組成物は、送達ポンプを用いる注入によって投与される。
[0025]一部の実施形態では、医薬組成物は、送達ポンプを用いる注入によって投与される。
[0026]一部の実施形態では、医薬組成物は、脳室内注射によって投与される。
[0027]一部の実施形態では、医薬組成物は、くも膜下腔内注射によって投与される。
[0028]一部の実施形態では、方法は、ヒト対象においてドラベ症候群の少なくとも1つの症状を低減または改善する。
[0027]一部の実施形態では、医薬組成物は、くも膜下腔内注射によって投与される。
[0028]一部の実施形態では、方法は、ヒト対象においてドラベ症候群の少なくとも1つの症状を低減または改善する。
[0029]一部の実施形態では、ドラベ症候群の症状は、発作である。
[0030]一部の実施形態では、投与は、発作頻度、発作強度または発作持続期間を低減または改善する。
[0030]一部の実施形態では、投与は、発作頻度、発作強度または発作持続期間を低減または改善する。
[0031]一部の実施形態では、ASOは、配列番号21~67、210~256または304~1099のうちいずれか1つに対して少なくとも83%、88%、94%または100%の配列同一性を有する配列を含む。
[0032]一部の実施形態では、ASOは、配列番号21~67、210~256または304~1099のうちいずれか1つに対して少なくとも83%、88%、94%または100%の配列同一性を有する配列からなる。
[0033]一部の実施形態では、ASOは、少なくとも1つの修飾糖部分を含む。
[0034]一部の実施形態では、ASOは、T-メトキシエチル糖部分を含む。
[0035]一部の実施形態では、T-メトキシエチル糖部分は、T-2’-メトキシエチル糖部分である。
[0034]一部の実施形態では、ASOは、T-メトキシエチル糖部分を含む。
[0035]一部の実施形態では、T-メトキシエチル糖部分は、T-2’-メトキシエチル糖部分である。
[0036]一部の実施形態では、ASOは、2’-O-メトキシエチル部分を含む。
[0037]一部の実施形態では、ASOは、2’-O-メトキシエチル部分を含むチミジンを含む。
[0037]一部の実施形態では、ASOは、2’-O-メトキシエチル部分を含むチミジンを含む。
[0038]一部の実施形態では、ASOの各核酸塩基は、2’-O-メトキシエチル部分を含む。
[0039]一部の実施形態では、ASOは、8~50個の核酸塩基からなる。
[0039]一部の実施形態では、ASOは、8~50個の核酸塩基からなる。
[0040]一部の実施形態では、ASOは、16~20個の核酸塩基からなる。
[0041]一部の実施形態では、ASOは、12~20個の核酸塩基からなる。
[0042]一部の実施形態では、ASOは、8~20個の核酸塩基からなる。
[0041]一部の実施形態では、ASOは、12~20個の核酸塩基からなる。
[0042]一部の実施形態では、ASOは、8~20個の核酸塩基からなる。
[0043]一部の実施形態では、ASOは、5’-メチルシトシン(5’-MeC)を含む。
[0044]一部の実施形態では、ASOの各シトシンは、5’-メチルシトシン(5’-MeC)である。
[0044]一部の実施形態では、ASOの各シトシンは、5’-メチルシトシン(5’-MeC)である。
[0045]一部の実施形態では、ASOは、ホスホロチオエート結合を含む。
[0046]一部の実施形態では、ASOの各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である。
[0046]一部の実施形態では、ASOの各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である。
[0047]一部の実施形態では、ASOは、ロックド核酸(LNA)を含む。
[0048]一部の実施形態では、方法は、医薬組成物の耐容性または有効性を評価するステップをさらに含む。
[0048]一部の実施形態では、方法は、医薬組成物の耐容性または有効性を評価するステップをさらに含む。
[0049]一部の実施形態では、方法は、ヒト対象に0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22.5、25、27.5、30、32.5、35、37.5、40、42.5、45、47.5、50、52.5、55、57.5、60、62.5、65、67.5、70、72.5、75、77.5、80、82.5、85、87.5、90、92.5、95、97.5、100、102.5、105、107.5、110、112.5、115、117.5、120、122.5、125、127.5、130、132.5、135、137.5、140、142.5、145、147.5、150、152.5、155、157.5、160、162.5、165、167.5、170、172.5、175、177.5、180、182.5、185、187.5、190、192.5、195、197.5、200、202.5、205、207.5、210、212.5、215、217.5、220、222.5、225、227.5、230、232.5、235、237.5、240、242.5、245、247.5または250mgの後続の用量でASOを含む医薬組成物を投与するステップをさらに含む。
[0050]一部の実施形態では、以前の用量の投与に耐容性がないことが示された後、後続の用量が以前の用量よりも低い。
[0051]一部の実施形態では、以前の用量の投与に耐容性があることが示された後、後続の用量が以前の用量と同じである。
[0051]一部の実施形態では、以前の用量の投与に耐容性があることが示された後、後続の用量が以前の用量と同じである。
[0052]一部の実施形態では、以前の用量の投与に耐容性があることが示された後、後続の用量が以前の用量より高い。
[0053]一部の実施形態では、以前の用量の投与が有効であることが示された後、後続の用量が以前の用量と同じである。
[0053]一部の実施形態では、以前の用量の投与が有効であることが示された後、後続の用量が以前の用量と同じである。
[0054]一部の実施形態では、以前の用量の投与が有効であることが示された後、後続の用量が以前の用量より低い。
[0055]一部の実施形態では、以前の用量の投与が有効ではないことが示された後、後続の用量が以前の用量より高い。
[0055]一部の実施形態では、以前の用量の投与が有効ではないことが示された後、後続の用量が以前の用量より高い。
[0056]一部の実施形態では、後続の用量は、以前の用量の投与の少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11または12ヶ月後に投与される。
[0057]一部の実施形態では、以前の用量が有効であることが示された後、投薬頻度が維持または低減される。
[0057]一部の実施形態では、以前の用量が有効であることが示された後、投薬頻度が維持または低減される。
[0058]一部の実施形態では、以前の用量が有効ではないことが示された後、投薬頻度が増大される。
[0059]一部の実施形態では、方法は、少なくとも1つの追加の治療剤または療法を投与するステップをさらに含む。
[0059]一部の実施形態では、方法は、少なくとも1つの追加の治療剤または療法を投与するステップをさらに含む。
[0060]一部の実施形態では、少なくとも1つの追加の治療剤または療法は、用量と同時に投与される。
[0061]一部の実施形態では、少なくとも1つの追加の治療剤または療法は、用量の投与の前に投与される。
[0061]一部の実施形態では、少なくとも1つの追加の治療剤または療法は、用量の投与の前に投与される。
[0062]一部の実施形態では、少なくとも1つの追加の治療剤または療法は、用量の投与後に投与される。
[0063]一部の実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容される賦形剤、担体または希釈剤を含む。
[0063]一部の実施形態では、医薬組成物は、薬学的に許容される賦形剤、担体または希釈剤を含む。
[0064]一部の実施形態では、医薬組成物は、液体組成物である。
[0065]一部の実施形態では、医薬組成物は、0.1mL~50mLの希釈剤を含み、ASOは、希釈剤中に可溶化または希釈される。
[0065]一部の実施形態では、医薬組成物は、0.1mL~50mLの希釈剤を含み、ASOは、希釈剤中に可溶化または希釈される。
[0066]一部の実施形態では、医薬組成物は、約0.1、0.5、1、2、2.5、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45または50mLの希釈剤を含む。
[0067]一部の実施形態では、医薬組成物は、1mL~20mLの希釈剤、2mL~10mLの希釈剤または1mL~5mLの希釈剤を含む。
[0068]一部の実施形態では、希釈剤は、対象由来の脳脊髄液(CSF)試料または人工脳脊髄液(aCSF)溶液を含む。
[0068]一部の実施形態では、希釈剤は、対象由来の脳脊髄液(CSF)試料または人工脳脊髄液(aCSF)溶液を含む。
[0069]一部の実施形態では、方法は、対象から脳脊髄液試料を得るステップを含む。
[0070]一部の実施形態では、方法は、ASOを、対象由来のCSF試料中に可溶化または希釈するステップを含む。
[0070]一部の実施形態では、方法は、ASOを、対象由来のCSF試料中に可溶化または希釈するステップを含む。
[0071]一部の実施形態では、方法は、医薬組成物をボーラス注射として投与するステップを含む。
[0072]一部の実施形態では、方法は、医薬組成物をボーラス注射として1~60分、1~50分、1~40分、1~30分、1~20分、1~10分、1~5分または1~3分かけて投与するステップを含む。
[0072]一部の実施形態では、方法は、医薬組成物をボーラス注射として1~60分、1~50分、1~40分、1~30分、1~20分、1~10分、1~5分または1~3分かけて投与するステップを含む。
[0073]一部の実施形態では、方法は、医薬組成物を、脊髄麻酔針を使用してボーラス注射として投与するステップを含む。
[0074]一部の実施形態では、ASOは、人工脳脊髄液(aCSF)溶液中に可溶化または希釈される。
[0074]一部の実施形態では、ASOは、人工脳脊髄液(aCSF)溶液中に可溶化または希釈される。
[0075]一部の実施形態では、溶液は、対象由来の脳脊髄液(CSF)試料を含む。
[0076]一部の実施形態では、ASOは、等張液中に可溶化または希釈される。
[0077]一部の実施形態では、ASOは、少なくともpH5.8を有するリン酸緩衝溶液中に可溶化または希釈される。
[0076]一部の実施形態では、ASOは、等張液中に可溶化または希釈される。
[0077]一部の実施形態では、ASOは、少なくともpH5.8を有するリン酸緩衝溶液中に可溶化または希釈される。
[0078]一部の実施形態では、ASOは、リン酸緩衝(pH6.6~7.6)溶液中に可溶化または希釈される。
[0079]一部の実施形態では、ASOは、25~250mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0079]一部の実施形態では、ASOは、25~250mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0080]一部の実施形態では、ASOは、0.1~20mMのKClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0081]一部の実施形態では、ASOは、0.1~50mMのNa2HPO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0081]一部の実施形態では、ASOは、0.1~50mMのNa2HPO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0082]一部の実施形態では、ASOは、0.1~50mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0083]一部の実施形態では、ASOは、0.1~50mMのCaCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0083]一部の実施形態では、ASOは、0.1~50mMのCaCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0084]一部の実施形態では、ASOは、0.1~50mMのMgCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0085]一部の実施形態では、ASOは、25~250mMのNaCl、0.1~20mMのKCl、0.1~50mMのNa2HPO4、0.1~50mMのNaH2PO4、0.1~50mMのCaCl2および0.1~50mMのMgCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0085]一部の実施形態では、ASOは、25~250mMのNaCl、0.1~20mMのKCl、0.1~50mMのNa2HPO4、0.1~50mMのNaH2PO4、0.1~50mMのCaCl2および0.1~50mMのMgCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0086]一部の実施形態では、ASOは、150mMのNaCl、3.0mMのKCl、0.7mMのNa2HPO4、0.3mMのNaH2PO4、0.79mMのMgCl2および1.4mMのCaCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0087]一部の実施形態では、ASOは、炭水化物をさらに含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、炭水化物は、D-グルコースを含む。一部の実施形態では、ASOは、1~100mMのD-グルコースをさらに含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0088]一部の実施形態では、ASOは、1~100mMのNaHCO3、1~100mMのKHCO3またはそれらの組合せをさらに含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0089]一部の実施形態では、ASOは、抗酸化剤をさらに含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、抗酸化剤は、t-ブチルヒドロキシキノリン(TBHQ)、ブチル化ヒドロキシトルエン(buylated hydroxytolune)(BHT)、ブチル化ヒドロキシアニソール(BHA)、ビタミンEまたはそれらの任意の組合せである。
[0089]一部の実施形態では、ASOは、抗酸化剤をさらに含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、抗酸化剤は、t-ブチルヒドロキシキノリン(TBHQ)、ブチル化ヒドロキシトルエン(buylated hydroxytolune)(BHT)、ブチル化ヒドロキシアニソール(BHA)、ビタミンEまたはそれらの任意の組合せである。
[0090]一部の実施形態では、医薬製剤は、保存料を含まない。
[0091]一部の実施形態では、ASOは、0.1mg/mL~250mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する。
[0091]一部の実施形態では、ASOは、0.1mg/mL~250mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する。
[0092]一部の実施形態では、ASOは、約0.1mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL、2.5mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL、6mg/mL、7mg/mL、8mg/mL、9mg/mL、10mg/mL、11mg/mL、12mg/mL、13mg/mL、14mg/mL、15mg/mL、16mg/mL、17mg/mL、18mg/mL、19mg/mLまたは20mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する。一部の実施形態では、ASOは、約30mg/mL、40mg/mL、50mg/mL、60mg/mL、70mg/mL、80mg/mL、90mg/mL、100mg/mL、110mg/mL、120mg/mL、130mg/mL、140mg/mL、150mg/mL、160mg/mL、170mg/mL、180mg/mL、190mg/mLまたは200mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する。一部の実施形態では、ASOは、約22.5mg/mL、25mg/mL、27.5mg/mL、30mg/mL、32.5mg/mL、35mg/mL、37.5mg/mL、40mg/mL、42.5mg/mL、45mg/mL、47.5mg/mL、50mg/mL、52.5mg/mL、55mg/mL、57.5mg/mL、60mg/mL、62.5mg/mL、65mg/mL、67.5mg/mL、70mg/mL、72.5mg/mL、75mg/mL、77.5mg/mL、80mg/mL、82.5mg/mL、85mg/mL、87.5mg/mL、90mg/mL、92.5mg/mL、95mg/mL、97.5mg/mL、100mg/mL、102.5mg/mL、105mg/mL、107.5mg/mL、110mg/mL、112.5mg/mL、115mg/mL、117.5mg/mL、120mg/mL、122.5mg/mL、125mg/mL、127.5mg/mL、130mg/mL、132.5mg/mL、135mg/mL、137.5mg/mL、140mg/mL、142.5mg/mL、145mg/mL、147.5mg/mL、150mg/mL、152.5mg/mL、155mg/mL、157.5mg/mL、160mg/mL、162.5mg/mL、165mg/mL、167.5mg/mL、170mg/mL、172.5mg/mL、175mg/mL、177.5mg/mL、180mg/mL、182.5mg/mL、185mg/mL、187.5mg/mL、190mg/mL、192.5mg/mL、195mg/mL、197.5mg/mL、200mg/mL、202.5mg/mL、205mg/mL、207.5mg/mL、210mg/mL、212.5mg/mL、215mg/mL、217.5mg/mL、220mg/mL、222.5mg/mL、225mg/mL、227.5mg/mL、230mg/mL、232.5mg/mL、235mg/mL、237.5mg/mL、240mg/mL、242.5mg/mL、245mg/mL、247.5mg/mLまたは250mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する。一部の実施形態では、ASOは、11mg/mL、22mg/mL、33mg/mL、44mg/mL、55mg/mL、66mg/mL、77mg/mL、88mg/mL、99mg/mLまたは100mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する。
[0093]一部の実施形態では、NaV1.1タンパク質の発現または機能の低減は、NaV1.1タンパク質をコードし、NMDエクソンを含有するプレmRNAにおけるナンセンス変異依存RNA崩壊誘導性エクソン(NMDエクソン)のスプライシングの変化と関連している。
[0094]一部の実施形態では、ASOは、プレmRNAからのNMDエクソンの排除を促進する。
[0095]一部の実施形態では、ASOは、ナンセンス変異依存RNA崩壊誘導性エクソン(NMDエクソン)を含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAの標的化される部分に結合する。
[0095]一部の実施形態では、ASOは、ナンセンス変異依存RNA崩壊誘導性エクソン(NMDエクソン)を含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAの標的化される部分に結合する。
[0096]一部の実施形態では、ASOは、NMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAからのNMDエクソンの排除を促進する。
[0097]一部の実施形態では、ASOが細胞中に導入されると、ASOは、NaV1.1タンパク質をコードするプロセシングされたmRNAのレベルを増大させる。
[0097]一部の実施形態では、ASOが細胞中に導入されると、ASOは、NaV1.1タンパク質をコードするプロセシングされたmRNAのレベルを増大させる。
[0098]一部の実施形態では、ASOが細胞中に導入されると、ASOは、NaV1.1タンパク質のレベルを増大させる。
[0099]一部の実施形態では、標的化される部分は、NMDエクソンに隣接するイントロン配列内にある。
[0099]一部の実施形態では、標的化される部分は、NMDエクソンに隣接するイントロン配列内にある。
[0100]一部の実施形態では、標的化される部分は、NMDエクソンの少なくとも1つのヌクレオチドを含む。
[0101]一部の実施形態では、標的化される部分は、NMDエクソン内にある。
[0101]一部の実施形態では、標的化される部分は、NMDエクソン内にある。
[0102]一部の実施形態では、方法は、疾患または状態を処置する。
[0103]一部の態様では、(a)配列番号21~67、210~256または304~1099のうちいずれか1つに対して少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含むアンチセンスオリゴマー(ASO)および(b)薬学的に許容される希釈剤を含み、ASOが、0.1~200mg/mLの濃度で溶液中に溶解または懸濁されている医薬製剤が、本明細書で提供される。
[0103]一部の態様では、(a)配列番号21~67、210~256または304~1099のうちいずれか1つに対して少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含むアンチセンスオリゴマー(ASO)および(b)薬学的に許容される希釈剤を含み、ASOが、0.1~200mg/mLの濃度で溶液中に溶解または懸濁されている医薬製剤が、本明細書で提供される。
[0104]一部の実施形態では、薬学的に許容される希釈剤は、人工脳脊髄液(aCSF)溶液を含む。
[0105]一部の実施形態では、溶液は、対象由来の脳脊髄液(CSF)試料を含む。
[0105]一部の実施形態では、溶液は、対象由来の脳脊髄液(CSF)試料を含む。
[0106]一部の実施形態では、ASOは、約0.1mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL、2.5mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL、6mg/mL、7mg/mL、8mg/mL、9mg/mL、10mg/mL、11mg/mL、12mg/mL、13mg/mL、14mg/mL、15mg/mL、16mg/mL、17mg/mL、18mg/mL、19mg/mLまたは20mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する。一部の実施形態では、ASOは、約22.5mg/mL、25mg/mL、27.5mg/mL、30mg/mL、32.5mg/mL、35mg/mL、37.5mg/mL、40mg/mL、42.5mg/mL、45mg/mL、47.5mg/mL、50mg/mL、52.5mg/mL、55mg/mL、57.5mg/mL、60mg/mL、62.5mg/mL、65mg/mL、67.5mg/mL、70mg/mL、72.5mg/mL、75mg/mL、77.5mg/mL、80mg/mL、82.5mg/mL、85mg/mL、87.5mg/mL、90mg/mL、92.5mg/mL、95mg/mL、97.5mg/mL、100mg/mL、102.5mg/mL、105mg/mL、107.5mg/mL、110mg/mL、112.5mg/mL、115mg/mL、117.5mg/mL、120mg/mL、122.5mg/mL、125mg/mL、127.5mg/mL、130mg/mL、132.5mg/mL、135mg/mL、137.5mg/mL、140mg/mL、142.5mg/mL、145mg/mL、147.5mg/mL、150mg/mL、152.5mg/mL、155mg/mL、157.5mg/mL、160mg/mL、162.5mg/mL、165mg/mL、167.5mg/mL、170mg/mL、172.5mg/mL、175mg/mL、177.5mg/mL、180mg/mL、182.5mg/mL、185mg/mL、187.5mg/mL、190mg/mL、192.5mg/mL、195mg/mL、197.5mg/mL、200mg/mL、202.5mg/mL、205mg/mL、207.5mg/mL、210mg/mL、212.5mg/mL、215mg/mL、217.5mg/mL、220mg/mL、222.5mg/mL、225mg/mL、227.5mg/mL、230mg/mL、232.5mg/mL、235mg/mL、237.5mg/mL、240mg/mL、242.5mg/mL、245mg/mL、247.5mg/mLまたは250mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する。
[0107]一部の実施形態では、ASOは、11mg/mL、22mg/mL、33mg/mL、44mg/mL、55mg/mL、66mg/mL、77mg/mL、88mg/mL、99mg/mLまたは100mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する。
[0108]一部の実施形態では、ASOは、等張液中に可溶化または希釈される。
[0109]一部の実施形態では、ASOは、少なくともpH5.8を有するリン酸緩衝溶液中に可溶化または希釈される。
[0109]一部の実施形態では、ASOは、少なくともpH5.8を有するリン酸緩衝溶液中に可溶化または希釈される。
[0110]一部の実施形態では、ASOは、リン酸緩衝(pH6.6~7.6)溶液中に可溶化または希釈される。
[0111]一部の実施形態では、ASOは、25~250mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0111]一部の実施形態では、ASOは、25~250mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0112]一部の実施形態では、ASOは、0.1~20mMのKClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0113]一部の実施形態では、ASOは、0.1~50mMのNa2HPO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0113]一部の実施形態では、ASOは、0.1~50mMのNa2HPO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0114]一部の実施形態では、ASOは、0.1~50mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0115]一部の実施形態では、ASOは、0.1~50mMのCaCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0115]一部の実施形態では、ASOは、0.1~50mMのCaCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0116]一部の実施形態では、ASOは、0.1~50mMのMgCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0117]一部の実施形態では、ASOは、25~250mMのNaCl、0.1~20mMのKCl、0.1~50mMのNa2HPO4、0.1~50mMのNaH2PO4、0.1~50mMのCaCl2および0.1~50mMのMgCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0117]一部の実施形態では、ASOは、25~250mMのNaCl、0.1~20mMのKCl、0.1~50mMのNa2HPO4、0.1~50mMのNaH2PO4、0.1~50mMのCaCl2および0.1~50mMのMgCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0118]一部の実施形態では、ASOは、150mMのNaCl、3.0mMのKCl、0.7mMのNa2HPO4、0.3mMのNaH2PO4、0.79mMのMgCl2および1.4mMのCaCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0119]一部の実施形態では、ASOは、炭水化物をさらに含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、炭水化物は、D-グルコースを含む。一部の実施形態では、ASOは、1~100mMのD-グルコースをさらに含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0120]一部の実施形態では、ASOは、1~100mMのNaHCO3、1~100mMのKHCO3またはそれらの組合せをさらに含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0121]一部の実施形態では、ASOは、抗酸化剤をさらに含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、抗酸化剤は、t-ブチルヒドロキシキノリン(TBHQ)、ブチル化ヒドロキシトルエン(BHT)、ブチル化ヒドロキシアニソール(BHA)、ビタミンEまたはそれらの任意の組合せである。
[0121]一部の実施形態では、ASOは、抗酸化剤をさらに含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、抗酸化剤は、t-ブチルヒドロキシキノリン(TBHQ)、ブチル化ヒドロキシトルエン(BHT)、ブチル化ヒドロキシアニソール(BHA)、ビタミンEまたはそれらの任意の組合せである。
[0122]一部の実施形態では、医薬製剤は、保存料を含まない。
[0123]一部の実施形態では、医薬製剤は、脳室内またはくも膜下腔内注射に適している。
[0123]一部の実施形態では、医薬製剤は、脳室内またはくも膜下腔内注射に適している。
[0124]一部の実施形態では、医薬製剤は、単回使用バイアルにパッケージングされている。
[0125]一部の態様では、(i)アンチセンスオリゴマー(ASO)を含む濃縮物であって、ASOが、配列番号21~67、210~256または304~1099のうちいずれか1つに対して少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む、濃縮物、および(ii)希釈剤であって、濃縮物が該希釈剤と混和性である、希釈剤、および(iii)ASOを希釈剤中に希釈または可溶化するための使用説明書を含む、キットが、本明細書で提供される。
[0125]一部の態様では、(i)アンチセンスオリゴマー(ASO)を含む濃縮物であって、ASOが、配列番号21~67、210~256または304~1099のうちいずれか1つに対して少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む、濃縮物、および(ii)希釈剤であって、濃縮物が該希釈剤と混和性である、希釈剤、および(iii)ASOを希釈剤中に希釈または可溶化するための使用説明書を含む、キットが、本明細書で提供される。
[0126]一部の実施形態では、希釈剤は、人工脳脊髄液(aCSF)溶液である。
[0127]一部の実施形態では、希釈剤は、等張液を含む。
[0128]一部の実施形態では、希釈剤は、少なくともpH5.8を有するリン酸緩衝溶液を含む。
[0127]一部の実施形態では、希釈剤は、等張液を含む。
[0128]一部の実施形態では、希釈剤は、少なくともpH5.8を有するリン酸緩衝溶液を含む。
[0129]一部の実施形態では、希釈剤は、リン酸緩衝(pH6.6~7.6)溶液を含む。
[0130]一部の実施形態では、希釈剤は、25~250mMのNaClを含む。
[0130]一部の実施形態では、希釈剤は、25~250mMのNaClを含む。
[0131]一部の実施形態では、希釈剤は、0.1~20mMのKClを含む。
[0132]一部の実施形態では、希釈剤は、0.1~50mMのNa2HPO4を含む。
[0133]一部の実施形態では、希釈剤は、0.1~50mMのNaH2PO4を含む。
[0132]一部の実施形態では、希釈剤は、0.1~50mMのNa2HPO4を含む。
[0133]一部の実施形態では、希釈剤は、0.1~50mMのNaH2PO4を含む。
[0134]一部の実施形態では、希釈剤は、0.1~50mMのCaCl2を含む。
[0135]一部の実施形態では、希釈剤は、0.1~50mMのMgCl2を含む。
[0136]一部の実施形態では、希釈剤は、25~250mMのNaCl、0.1~20mMのKCl、0.1~50mMのNa2HPO4、0.1~50mMのNaH2PO4、0.1~50mMのCaCl2および0.1~50mMのMgCl2を含む。
[0135]一部の実施形態では、希釈剤は、0.1~50mMのMgCl2を含む。
[0136]一部の実施形態では、希釈剤は、25~250mMのNaCl、0.1~20mMのKCl、0.1~50mMのNa2HPO4、0.1~50mMのNaH2PO4、0.1~50mMのCaCl2および0.1~50mMのMgCl2を含む。
[0137]一部の実施形態では、希釈剤は、150mMのNaCl、3.0mMのKCl、0.7mMのNa2HPO4、0.3mMのNaH2PO4、0.79mMのMgCl2および1.4mMのCaCl2を含む。
[0138]一部の実施形態では、希釈剤は、炭水化物をさらに含む。一部の実施形態では、炭水化物は、D-グルコースを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、1~100mMのD-グルコースをさらに含む。
[0139]一部の実施形態では、希釈剤は、1~100mMのNaHCO3、1~100mMのKHCO3またはそれらの組合せをさらに含む。
[0140]一部の実施形態では、希釈剤は、抗酸化剤をさらに含む。一部の実施形態では、抗酸化剤は、t-ブチルヒドロキシキノリン(TBHQ)、ブチル化ヒドロキシトルエン(BHT)、ブチル化ヒドロキシアニソール(BHA)、ビタミンEまたはそれらの組合せである。
[0140]一部の実施形態では、希釈剤は、抗酸化剤をさらに含む。一部の実施形態では、抗酸化剤は、t-ブチルヒドロキシキノリン(TBHQ)、ブチル化ヒドロキシトルエン(BHT)、ブチル化ヒドロキシアニソール(BHA)、ビタミンEまたはそれらの組合せである。
[0141]一部の実施形態では、希釈剤は、保存料を含まない。
[0142]一部の実施形態では、ASOを希釈剤中に希釈または可溶化するための使用説明書は、ASOを希釈剤中に0.1mg/mL~250mg/mLの濃度に希釈または可溶化するための使用説明書を含む。
[0142]一部の実施形態では、ASOを希釈剤中に希釈または可溶化するための使用説明書は、ASOを希釈剤中に0.1mg/mL~250mg/mLの濃度に希釈または可溶化するための使用説明書を含む。
[0143]一部の実施形態では、ASOを希釈剤中に希釈または可溶化するための使用説明書は、ASOを希釈剤中に約0.1mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL、2.5mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL、6mg/mL、7mg/mL、8mg/mL、9mg/mL、10mg/mL、11mg/mL、12mg/mL、13mg/mL、14mg/mL、15mg/mL、16mg/mL、17mg/mL、18mg/mL、19mg/mLまたは20mg/mLの濃度に希釈または可溶化するための使用説明書を含む。
[0144]一部の実施形態では、ASOを希釈剤中に希釈または可溶化するための使用説明書は、ASOを希釈剤中に約22.5mg/mL、25mg/mL、27.5mg/mL、30mg/mL、32.5mg/mL、35mg/mL、37.5mg/mL、40mg/mL、42.5mg/mL、45mg/mL、47.5mg/mL、50mg/mL、52.5mg/mL、55mg/mL、57.5mg/mL、60mg/mL、62.5mg/mL、65mg/mL、67.5mg/mL、70mg/mL、72.5mg/mL、75mg/mL、77.5mg/mL、80mg/mL、82.5mg/mL、85mg/mL、87.5mg/mL、90mg/mL、92.5mg/mL、95mg/mL、97.5mg/mL、100mg/mL、102.5mg/mL、105mg/mL、107.5mg/mL、110mg/mL、112.5mg/mL、115mg/mL、117.5mg/mL、120mg/mL、122.5mg/mL、125mg/mL、127.5mg/mL、130mg/mL、132.5mg/mL、135mg/mL、137.5mg/mL、140mg/mL、142.5mg/mL、145mg/mL、147.5mg/mL、150mg/mL、152.5mg/mL、155mg/mL、157.5mg/mL、160mg/mL、162.5mg/mL、165mg/mL、167.5mg/mL、170mg/mL、172.5mg/mL、175mg/mL、177.5mg/mL、180mg/mL、182.5mg/mL、185mg/mL、187.5mg/mL、190mg/mL、192.5mg/mL、195mg/mL、197.5mg/mL、200mg/mL、202.5mg/mL、205mg/mL、207.5mg/mL、210mg/mL、212.5mg/mL、215mg/mL、217.5mg/mL、220mg/mL、222.5mg/mL、225mg/mL、227.5mg/mL、230mg/mL、232.5mg/mL、235mg/mL、237.5mg/mL、240mg/mL、242.5mg/mL、245mg/mL、247.5mg/mLまたは250mg/mLの濃度に希釈または可溶化するための使用説明書を含む。
[0145]一部の実施形態では、ASOを希釈剤中に希釈または可溶化するための使用説明書は、ASOを希釈剤中に約11mg/mL、22mg/mL、33mg/mL、44mg/mL、55mg/mL、66mg/mL、77mg/mL、88mg/mL、99mg/mLまたは100mg/mLの濃度に希釈または可溶化するための使用説明書を含む。
[0146]一部の実施形態では、ASOを希釈剤中に希釈または可溶化するための使用説明書は、約0.5ミリグラム~約500ミリグラムのASOを希釈剤中に希釈または可溶化するための使用説明書を含む。
[0147]一部の実施形態では、ASOを希釈剤中に希釈または可溶化するための使用説明書は、約0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22.5、25、27.5、30、32.5、35、37.5、40、42.5、45、47.5、50、52.5、55、57.5、60、62.5、65、67.5、70、72.5、75、77.5、80、82.5、85、87.5、90、92.5、95、97.5、100、102.5、105、107.5、110、112.5、115、117.5、120、122.5、125、127.5、130、132.5、135、137.5、140、142.5、145、147.5、150、152.5、155、157.5、160、162.5、165、167.5、170、172.5、175、177.5、180、182.5、185、187.5、190、192.5、195、197.5、200、202.5、205、207.5、210、212.5、215、217.5、220、222.5、225、227.5、230、232.5、235、237.5、240、242.5、245、247.5または250mgのASOを希釈剤中に希釈または可溶化するための使用説明書を含む。
[0148]一部の態様では、NaV1.1タンパク質の発現または機能の低減を特徴とする疾患または状態の処置または予防を必要とするヒト対象において、該疾患または状態を処置または予防するための医薬の製造のためのアンチセンスオリゴマー(ASO)の使用であって、医薬が、約0.5ミリグラム~約500ミリグラムの第1の用量で投与され、ASOが、配列番号21~67、210~256または304~1099のうちいずれか1つに対して少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む、使用が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、医薬は、約0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22.5、25、27.5、30、32.5、35、37.5、40、42.5、45、47.5、50、52.5、55、57.5、60、62.5、65、67.5、70、72.5、75、77.5、80、82.5、85、87.5、90、92.5、95、97.5、100、102.5、105、107.5、110、112.5、115、117.5、120、122.5、125、127.5、130、132.5、135、137.5、140、142.5、145、147.5、150、152.5、155、157.5、160、162.5、165、167.5、170、172.5、175、177.5、180、182.5、185、187.5、190、192.5、195、197.5、200、202.5、205、207.5、210、212.5、215、217.5、220、222.5、225、227.5、230、232.5、235、237.5、240、242.5、245、247.5または250mgの第1の用量で投与される。
参考文献の組み込み
[0149]本明細書で記載される全ての刊行物、特許および特許出願は、各個々の刊行物、特許または特許出願が参照により組み込まれるように具体的に、個別に示されるのと同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。
参考文献の組み込み
[0149]本明細書で記載される全ての刊行物、特許および特許出願は、各個々の刊行物、特許または特許出願が参照により組み込まれるように具体的に、個別に示されるのと同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。
[0150]本開示の特徴は、添付の特許請求の範囲に詳細に示されている。本開示の特徴および利点のより良好な理解は、本開示の原理が利用される例示的実施形態を示す以下の詳細な説明およびその添付の図面を参照して得られるであろう。
[0181]種々の実施形態の完全な理解を提供するために、この説明のある特定の具体的な詳細が示されている。しかし、当業者ならば、本開示は、これらの詳細なしに実行できるということは理解するであろう。他の場合には、実施形態の説明を不必要に不明瞭にすることを避けるために、周知の構造は、詳細に示されておらず、説明されてもいない。
[0182]別に定義されない限り、本明細書において使用される全ての技術用語および科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同一の意味を有する。本明細書において記載されたものと同様または同等の方法および材料を本開示の実施または試験において使用できるが、適した方法および材料は以下に記載される。
定義
[0183]本明細書および添付の特許請求の範囲において使用される場合、単数形「1つの(a)」、「1つの(an)」および「その(the)」は、内容が別に明確に示さない限り、複数の指示対象を含む。
[0183]本明細書および添付の特許請求の範囲において使用される場合、単数形「1つの(a)」、「1つの(an)」および「その(the)」は、内容が別に明確に示さない限り、複数の指示対象を含む。
[0184]「または」という用語は、内容が別に明確に示さない限り、一般に「および/または」を含む意味で使用されるということは注目すべきである。「および/または」および「それらの任意の組合せ」という用語およびその文法上の等価物は、本明細書で使用される場合、同義的に使用され得る。これらの用語は、任意の組合せが、具体的に企図されることを伝えることができる。単に例示目的で、以下の語句「A、B、および/またはC」または「A、B、C、またはそれらの任意の組合せ」は、「個別にA、個別にB、個別にC、AおよびB、BおよびC、AおよびCならびにA、BおよびC」を意味する場合がある。「または」という用語は、内容が離接的使用を具体的に指さない限り、接続的または離接的に使用され得る。
[0185]「約」または「およそ」という用語は、当業者によって決定されるような特定の値の許容可能な誤差範囲内を意味する場合があり、幾分かは、値が測定または決定される方法、すなわち、測定システムの限界に応じて変わり得る。例えば、「約」は、当技術分野における実行あたり、1以内または1より多い標準偏差を意味する場合がある。あるいは、「約」は、所与の値の最大20%、最大10%、最大5%または最大1%の範囲を意味する場合がある。あるいは、特に生物システムまたはプロセスに関して、この用語は、値の1桁規模内、5倍以内、より好ましくは、2倍以内を意味する場合がある。本出願および特許請求の範囲において特定の値が記載される場合には、別に明記されない限り、「約」という用語は特定の値の許容可能な誤差範囲内を意味すると想定されるべきである。
[0186]本明細書および特許請求の範囲において使用される場合、単語「含んでいる(comprising)」(および含んでいるの任意の形態、例えば、「含む(comprise)」および「含む(comprises))、「有している(having)」(および有しているの任意の形態、例えば、「有する(have)」および有する(has))、「含んでいる(including)」(および含んでいるの任意の形態、例えば、「含む(includes)」および「含む(include)」)または「含有している(containing)」(および含有しているの任意の形態、例えば、「含有する(contains)」および「含有する(contain)」)は、包括的または制約のないものであり、さらなる列挙されない要素または方法ステップを排除しない。本明細書において論じられる任意の実施形態を、本開示の任意の方法または組成物に関して実行でき、逆もまた同様であるということが企図される。さらに、本開示の組成物を使用して、本開示の方法を達成できる。
[0187]本明細書における「実施形態」、「一部の実施形態」、「実施形態」、「一実施形態」、「ある特定の実施形態」または「他の実施形態」への言及は、実施形態に関連して記載される特定の特性、構造または特徴が、本開示の少なくとも一部の実施形態であるが、必ずしも全てではない実施形態に含まれることを意味する。本開示の理解を容易にするために、いくつかの用語および語句が以下に定義される。
[0188]「オリゴヌクレオチド配列」、「核酸配列」、「ポリ核酸配列」、「ヌクレオチド配列」および「ヌクレオチド酸配列」という用語は、その最も広い意味で本明細書において同義的に使用され、本明細書において同一の意味を有し、好ましくは、DNAまたはRNAを指す。核酸配列は、糖/リン酸骨格のホスホジエステル結合によって互いに共有結合したヌクレオチドモノマーを含むまたはからなるポリマーである。「核酸配列」という用語はまた、修飾核酸配列、例えば、塩基修飾された、糖修飾された、または骨格修飾されたなどの、DNAまたはRNAを包含する。
[0189]本明細書において同一の意味を有する「断片」または「配列の断片」という用語は、例えば、DNAもしくはRNAのような核酸分子またはタンパク質の全長配列のより短い部分である。したがって、断片は、通常、全長配列内の対応するストレッチに対して同一である配列からなる。本発明の状況における配列の好ましい断片は、断片が由来する分子中の実体の連続ストレッチに対応する実体、例えば、ヌクレオチドまたはアミノ酸の連続ストレッチからなり、これは、断片が由来する全体(すなわち、全長)分子の少なくとも1%、少なくとも2%、少なくとも3%、少なくとも4%、少なくとも5%、少なくとも6%、少なくとも7%、少なくとも8%、少なくとも9%、少なくとも10%、少なくとも15%、少なくとも20%、少なくとも25%、少なくとも30%、少なくとも35%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、少なくとも99.5%またはさらには100%に相当する。例えば、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの「断片」または「機能性断片」は、全長の未熟または成熟ヌクレオチドまたはポリペプチドよりも短いポリヌクレオチドまたはポリペプチドの断片であり、全長の成熟参照ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの活性の少なくとも1%、少なくとも2%、少なくとも3%、少なくとも4%、少なくとも5%、少なくとも6%、少なくとも7%、少なくとも8%、少なくとも9%、少なくとも10%、少なくとも15%、少なくとも20%、少なくとも25%、少なくとも30%、少なくとも35%、少なくとも40%、少なくとも45%、少なくとも50%、少なくとも55%、少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、少なくとも99.5%またはさらには100%もしくはそれより多くを有する。目的の断片は、組換え、合成または消化法によって作製され得る。
[0190]「組換え」という用語は、例えば、細胞、核酸、タンパク質またはベクターに関して使用される場合、細胞、核酸、タンパク質またはベクターが実験室の方法によって修飾されている、またはその結果であることを示す。したがって、例えば、「組換えポリヌクレオチド」という用語は、天然に存在しない、in vitroで合成または操作されているポリヌクレオチド、例えば、実験室の方法によって生成されたポリヌクレオチドを指す場合がある。組換えポリヌクレオチドは、実験室において合成され得る、ならびに/またはDNAの酵素修飾、例えば、酵素的制限酵素消化、ライゲーションおよびクローニングを使用することによって組換えDNA技術を使用することによって調製され得る。組換えポリペプチドは、組換えDNAのin vitro転写と、それに続く、生成されたメッセンジャーRNA(mRNA)のin vitro翻訳によって調製され得る。あるいは、適した条件下で、組換えポリ核酸またはRNAを細胞中に組み込むことができ、細胞内で組換えポリペプチドを発現させることができる。組換えタンパク質は、タンパク質の天然(非組換え)形態内では見られないアミノ酸残基を含む場合がある、または修飾、例えば、標識されているアミノ酸残基を含む場合がある。
[0191]「単離された」という用語は、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、タンパク質またはその断片が天然では普通関連している細胞性および他の成分から分離されることを意味する。例えば、ポリヌクレオチドに関して、単離されたポリヌクレオチドとは、天然に存在する配列において普通関連している5’および3’末端から分離されているものである。当業者には明らかであろうが、天然に存在しないポリヌクレオチド、ポリペプチド、タンパク質またはその断片は、その天然に存在する対応物から識別するために「単離」を必要としない。さらに、「濃縮された」、「分離された」または「希釈された」ポリヌクレオチド、ポリペプチド、タンパク質またはその断片は、濃度または体積あたりの分子の数が、その天然に存在する対応物のものよりも、「濃縮された」よりも多い、または「分離された」もしくは「希釈された」よりも少ないという点でその天然に存在する対応物から識別可能である。
[0192]2つ以上の核酸またはポリペプチド配列の文脈において「同一の」または「同一性」パーセントという用語は、比較ウィンドウにわたって最大一致を求めて比較され、アラインされた場合に、同一である、もしくは同一であるヌクレオチドもしくはアミノ酸残基の指定のパーセンテージ(すなわち、例えば、本発明の全ポリペプチド配列または本発明のポリペプチドの個々のドメインの指定の領域にわたって、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%、99%、99.5%、99.8%、99.9%または100%の同一性)を有する2つ以上の配列または部分配列、または配列比較アルゴリズムを使用して、もしくは手作業でのアラインメントおよび目視によって測定されるような指定された領域を指す。少なくとも約80%同一であるこのような配列は、「実質的に同一である」と言われる。一部の実施形態では、2つの配列は、100%同一である。一部の実施形態では、2つの配列は、配列の一方(例えば、配列が異なる長さである場合には2つの配列のうち短い方)の全長にわたって100%同一である。種々の実施形態では、同一性は、試験配列の相補体を指す場合がある。
[0193]一部の実施形態では、同一性は、少なくとも約2~約400のアミノ酸またはヌクレオチドの長さである領域にわたって存在する。一部の実施形態では、同一性は、少なくとも約2~約390、少なくとも約2~約380、少なくとも約2~約370、少なくとも約2~約360、少なくとも約2~約350、少なくとも約2~約340、少なくとも約2~約330、少なくとも約2~約320、少なくとも約2~約310、少なくとも約2~約300、少なくとも約2~約290、少なくとも約2~約280、少なくとも約2~約270、少なくとも約2~約260、少なくとも約2~約250、少なくとも約2~約200、少なくとも約2~約150、少なくとも約2~約100のアミノ酸またはヌクレオチドの長さである領域にわたって存在する。一部の実施形態では、同一性は、少なくとも約2~約90、少なくとも約2~約85、少なくとも約2~約80、少なくとも約2~約75、少なくとも約2~約70、少なくとも約2~約65、少なくとも約2~約60、少なくとも約2~約55、少なくとも約2~約50、少なくとも約2~約45、少なくとも約2~約40、少なくとも約2~約35、少なくとも約2~約30、少なくとも約2~約25、少なくとも約2~約20、少なくとも約2~約10、少なくとも約2~約5のアミノ酸またはヌクレオチドの長さである領域にわたって存在する。
[0194]一部の実施形態では、同一性は、少なくとも約3~約400、約4~約400、約5~約400、約6~約400、約7~約400、約8~約400、約9~約400、約10~約400、約11~約400、約12~約400、約13~約400、約14~約400、約15~約400、約16~約400、約17~約400、約18~約400、約19~約400、約20~約400、約21~約400、約22~約400、約23~約400、約24~約400、約25~約400、約26~約400、約27~約400、約28~約400、約29~約400、約30~約400、約31~約400、約32~約400、約33~約400、約34~約400、約35~約400のアミノ酸またはヌクレオチドの長さである領域にわたって存在する。一部の実施形態では、同一性は、少なくとも約40~約400、約45~約400、約50~約400、約55~約400、約60~約400、約61~約400、約62~約400、約63~約400、約64~約400、約65~約400、約66~約400、約67~約400、約68~約400、約69~約400、約70~約400、約71~約400、約72~約400、約73~約400、約74~約400、約75~約400、約80~約400、約85~約400、約90~約400、約100~約400、約150~約400、約200~約400、約250~約400、約300~約400、約350~約400のアミノ酸またはヌクレオチドの長さである領域にわたって存在する。
[0195]一部の実施形態では、同一性は、少なくとも約2~約343、約3~約343、約4~約343、約7~約343、約9~約343、約11~約343、約15~約343、約16~約343、約20~約343、約25~約343、約62~約343、約2~約317、約3~約317、約4~約317、約7~約317、約9~約317、約11~約317、約15~約317、約16~約317、約20~約317、約25~約317、約62~約317、約2~約300、約3~約300、約4~約300、約7~約300、約9~約300、約11~約300、約15~約300、約16~約300、約20~約300、約25~約300、約62~約300、約2~約62、約3~約62、約4~約62、約7~約62、約9~約62、約11~約62、約15~約62、約16~約62、約20~約62、約25~約62のアミノ酸またはヌクレオチドの長さである領域にわたって存在する。
[0196]「遺伝子修飾された」という用語は、順に、細胞またはその後代の遺伝子型または表現型を修飾する外来遺伝子または核酸配列を含有することおよび/または発現することを意味する。言い換えれば、細胞の内因性ヌクレオチドの任意の付加、欠失または破壊を指す。
[0197]「作動可能に連結された」という用語は、2つ以上の核酸配列間の機能的関係、例えば、転写調節またはシグナル配列の転写される配列との機能的関係を指す場合がある。例えば、標的モチーフまたは標的モチーフをコードする核酸は、コード配列によってコードされるポリペプチドの、細胞膜、細胞内または細胞外コンパートメントへの標的化に関与する前タンパク質として発現される場合に、コード配列に作動可能に連結されている。例えば、シグナルペプチドまたはシグナルペプチドをコードする核酸は、コード配列によってコードされるポリペプチドの分泌に関与する前タンパク質として発現される場合に、コード配列に作動可能に連結されている。例えば、プロモーターは、コード配列の転写を刺激するまたはモジュレートする場合に作動可能に連結されている。
[0198]「対象」または「患者」という用語は、脊椎動物または哺乳動物を包含する。哺乳動物の例には、それだけには限らないが、哺乳動物クラスの任意のメンバー:ヒト、非ヒト霊長類、例えば、チンパンジーおよび他の類人猿およびサル種、家畜、例えば、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、飼育動物、例えば、ウサギ、イヌおよびネコ、げっ歯類、例えば、ラット、マウスおよびモルモットを含む実験動物などが含まれる。一態様では、哺乳動物は、ヒトである。「動物」という用語は、本明細書で使用される場合、ヒトおよび非ヒト動物を含む。一実施形態では、「非ヒト動物」は、哺乳動物、例えば、げっ歯類、例えば、ラットまたはマウスである。一実施形態では、非ヒト動物は、マウスである。
[0199]「対照」は、比較目的で実験において使用される代替対象または試料である。対照は、「陽性」または「陰性」であり得る。
処置方法
[0200]一部の態様では、NaV1.1タンパク質の発現または機能の低減を特徴とする疾患または状態の処置または予防を必要とするヒト対象において、該疾患または状態を処置または予防する方法であって、ヒト対象に、約0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195または200mgの第1の用量でアンチセンスオリゴマー(ASO)を含む医薬組成物を投与するステップを含み、ASOは、配列番号21~67、210~256または304~1099のうちいずれか1つに対して少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含み、それによって、ヒト対象において該疾患または状態を処置または予防する、方法が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、ASOは、表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8aおよび8bに列挙される配列のうちいずれか1つに対して少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含み、それによって、ヒト対象において疾患または状態を処置または予防する。
処置方法
[0200]一部の態様では、NaV1.1タンパク質の発現または機能の低減を特徴とする疾患または状態の処置または予防を必要とするヒト対象において、該疾患または状態を処置または予防する方法であって、ヒト対象に、約0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195または200mgの第1の用量でアンチセンスオリゴマー(ASO)を含む医薬組成物を投与するステップを含み、ASOは、配列番号21~67、210~256または304~1099のうちいずれか1つに対して少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含み、それによって、ヒト対象において該疾患または状態を処置または予防する、方法が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、ASOは、表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8aおよび8bに列挙される配列のうちいずれか1つに対して少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含み、それによって、ヒト対象において疾患または状態を処置または予防する。
[0201]一部の態様では、NaV1.1タンパク質の発現または機能の低減を特徴とする疾患または状態の処置または予防を必要とするヒト対象において、該疾患または状態を処置または予防する方法であって、ヒト対象に、アンチセンスオリゴマー(ASO)の第1の用量を含む医薬組成物を投与するステップを含み、ASOは、配列番号21~67、210~256または304~1099のうちいずれか1つに対して少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含み、それによって、ヒト対象において該疾患または状態を処置または予防し、ヒト対象は、最高で18歳である、方法が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、ASOは、表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8aおよび8bに列挙される配列のうちいずれか1つに対して少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含み、それによって、ヒト対象において疾患または状態を処置または予防し、ヒト対象は、最高で18歳である。
[0202]一部の態様では、NaV1.1タンパク質の発現または機能の低減を特徴とする疾患または状態の処置または予防を必要とするヒト対象において、該疾患または状態を処置または予防する方法であって、ヒト対象に、アンチセンスオリゴマー(ASO)の単回用量を含む医薬組成物を投与するステップを含み、ASOは、配列番号21~67、210~256または304~1099のうちいずれか1つに対して少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含み、それによって、ヒト対象において該疾患または状態を処置または予防する、方法が、本明細書で提供される。一部の実施形態では、ASOは、表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8aおよび8bに列挙される配列のうちいずれか1つに対して少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含み、それによって、ヒト対象において該疾患または状態を処置または予防する。
[0203]一部の実施形態では、医薬組成物は、ヒト対象のくも膜下腔内空間中に投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は、ヒト対象の脳脊髄液中に投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は、ヒト対象の脳中に投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は、ヒト対象の脳中の脳脊髄液中に投与される。
[0204]一部の実施形態では、医薬組成物は、ボーラス注射として投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は、送達ポンプを用いる注入によって投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は、脳室内注射によって投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は、くも膜下腔内注射によって投与される。
治療用量
[0205]一部の実施形態では、第1の用量は、単回用量である。一部の実施形態では、方法は、医薬組成物の耐容性または有効性を評価するステップをさらに含む。
[0205]一部の実施形態では、第1の用量は、単回用量である。一部の実施形態では、方法は、医薬組成物の耐容性または有効性を評価するステップをさらに含む。
[0206]一部の実施形態では、本明細書に記載される方法は、ヒト対象に、約0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195または200mgの第1の用量で本明細書に記載されるASOを含む医薬組成物を投与するステップを含む。
[0207]一部の実施形態では、本明細書に記載される方法は、ヒト対象に、約0.1~約1000mg、約0.2~約1000mg、約0.3~約1000mg、約0.4~約1000mg、約0.5~約1000mg、約0.6~約1000mg、約0.7~約1000mg、約0.8~約1000mg、約0.9~約1000mg、1~約1000mg、約2~約1000mg、約3~約1000mg、約4~約1000mg、約5~約1000mg、約6~約1000mg、約7~約1000mg、約8~約1000mg、約9~約1000mg、約10~約1000mg、約15~約1000mg、約20~約1000mg、約25~約1000mg、約30~約1000mg、約35~約1000mg、約40~約1000mg、約45~約1000mg、約50~約1000mg、約55~約1000mg、約60~約1000mg、約65~約1000mg、約70~約1000mg、約75~約1000mg、約80~約1000mg、約85~約1000mg、約90~約1000mg、約95~約1000mg、約100~約1000mg、約150~約1000mg、約200~約1000mg、約250~約1000mg、約300~約1000mg、約350~約1000mg、約400~約1000mg、約450~約1000mg、約500~約1000mg、約550~約1000mg、約600~約1000mg、約650~約1000mg、約700~約1000mg、約750~約1000mg、約800~約1000mg、約850~約1000mg、約900~約1000mgまたは約950~約1000mgの第1の用量で本明細書に記載されるASOを含む医薬組成物を投与するステップを含む。
[0208]一部の実施形態では、本明細書に記載される方法は、ヒト対象に、0.1~1000mg、0.2~1000mg、0.3~1000mg、0.4~1000mg、0.5~1000mg、0.6~1000mg、0.7~1000mg、0.8~1000mg、0.9~1000mg、1~1000mg、2~1000mg、3~1000mg、4~1000mg、5~1000mg、6~1000mg、7~1000mg、8~1000mg、9~1000mg、10~1000mg、15~1000mg、20~1000mg、25~1000mg、30~1000mg、35~1000mg、40~1000mg、45~1000mg、50~1000mg、55~1000mg、60~1000mg、65~1000mg、70~1000mg、75~1000mg、80~1000mg、85~1000mg、90~1000mg、95~1000mg、100~1000mg、150~1000mg、200~1000mg、250~1000mg、300~1000mg、350~1000mg、400~1000mg、450~1000mg、500~1000mg、550~1000mg、600~1000mg、650~1000mg、700~1000mg、750~1000mg、800~1000mg、850~1000mg、900~1000mgまたは950~1000mgの第1の用量で本明細書に記載されるASOを含む医薬組成物を投与するステップを含む。
[0209]一部の実施形態では、本明細書に記載される方法は、ヒト対象に、約0.1~約950mg、約0.1~約900mg、約0.1~約850mg、約0.1~約800mg、約0.1~約750mg、約0.1~約700mg、約0.1~約650mg、約0.1~約600mg、約0.1~約550mg、約0.1~約500mg、約0.1~約450mg、約0.1~約400mg、約0.1~約350mg、約0.1~約300mg、約0.1~約250mg、約0.1~約200mg、約0.1~約150mg、約0.1~約100mg、約0.1~約95mg、約0.1~約90mg、約0.1~約85mg、約0.1~約80mg、約0.1~約75mg、約0.1~約70mg、約0.1~約65mg、約0.1~約60mg、約0.1~約55mg、約0.1~約50mg、約0.1~約45mg、約0.1~約40mg、約0.1~約35mg、約0.1~約30mg、約0.1~約mg、約0.1~約25mg、約0.1~約20mg、約0.1~約10mg、約0.1~約9mg、約0.1~約8mg、約0.1~約7mg、約0.1~約6mg、約0.1~約5mg、約0.1~約4mg、約0.1~約3、約0.1~約2mg、約0.1~約1mg、約0.1~約0.9mg、約0.1~約0.8mg、約0.1~約0.7mg、約0.1~約0.6mg、約0.1~約0.5mg、約0.1~約0.4mg、約0.1~約0.3または約0.1~約0.2mgの第1の用量で本明細書に記載されるASOを含む医薬組成物を投与するステップを含む。
[0210]一部の実施形態では、本明細書に記載される方法は、ヒト対象に、0.1~950mg、0.1~900mg、0.1~850mg、0.1~800mg、0.1~750mg、0.1~700mg、0.1~650mg、0.1~600mg、0.1~550mg、0.1~500mg、0.1~450mg、0.1~400mg、0.1~350mg、0.1~300mg、0.1~250mg、0.1~200mg、0.1~150mg、0.1~100mg、0.1~95mg、0.1~90mg、0.1~85mg、0.1~80mg、0.1~75mg、0.1~70mg、0.1~65mg、0.1~60mg、0.1~55mg、0.1~50mg、0.1~45mg、0.1~40mg、0.1~35mg、0.1~30mg、0.1~ mg、0.1~25mg、0.1~20mg、0.1~10mg、0.1~9mg、0.1~8mg、0.1~7mg、0.1~6mg、0.1~5mg、0.1~4mg、0.1~3、0.1~2mg、0.1~1mg、0.1~0.9mg、0.1~0.8mg、0.1~0.7mg、0.1~0.6mg、0.1~0.5mg、0.1~0.4mg、0.1~0.3または0.1~0.2mgの第1の用量で本明細書に記載されるASOを含む医薬組成物を投与するステップを含む。
[0211]一部の実施形態では、本明細書に記載される方法は、ヒト対象に、約1~約400mg、約2~約400mg、約3~約400mg、約4~約400mg、約5~約400mg、約6~約400mg、約7~約400mg、約8~約400mg、約9~約400mg、約10~約400mg、約20~約400mg、約30~約400mg、約40~約400mg、約50~約400mg、約60~約400mg、約70~約400mg、約80~約400mg、約90~約400mg、約100~約400mg、約110~約400mg、約120~約400mg、約130~約400mg、約140~約400mg、約150~約400mg、約160~約400mg、約170~約400mg、約180~約400mg、約190~約400mg、約200~約400mg、約210~約400mg、約220~約400mg、約230~約400mg、約240~約400mg、約250~約400mg、約260~約400mg、約270~約400mg、約280~約400mg、約290~約400mg、約300~約400mg、約310~約400mg、約320~約400mg、約330~約400mg、約340~約400mg、約350~約400mg、約360~約400mg、約370~約400mg、約380~約400mgまたは約390~約400mgの第1の用量で本明細書に記載されるASOを含む医薬組成物を投与するステップを含む。
[0212]一部の実施形態では、本明細書に記載される方法は、ヒト対象に、1~400mg、2~400mg、3~400mg、4~400mg、5~400mg、6~400mg、7~400mg、8~400mg、9~400mg、10~400mg、20~400mg、30~400mg、40~400mg、50~400mg、60~400mg、70~400mg、80~400mg、90~400mg、100~400mg、110~400mg、120~400mg、130~400mg、約140~400mg、150~400mg、約160~400mg、170~400mg、180~400mg、190~400mg、200~400mg、210~400mg、220~400mg、230~400mg、240~400mg、250~400mg、260~400mg、270~400mg、280~400mg、290~400mg、300~400mg、310~400mg、320~400mg、330~400mg、340~400mg、350~400mg、360~400mg、370~400mg、380~400mgまたは390~400mgの第1の用量で本明細書に記載されるASOを含む医薬組成物を投与するステップを含む。
[0213]一部の実施形態では、本明細書に記載される方法は、ヒト対象に、約10~約390mg、約10~約380mg、約10~約370mg、約10~約360mg、約10~約350mg、約10~約340mg、約10~約330mg、約10~約320mg、約10~約310mg、約10~約300mg、約10~約290mg、約10~約280mg、約10~約270mg、約10~約260mg、約10~約250mg、約10~約240mg、約10~約230mg、約10~約220mg、約10~約210mg、約10~約200mg、約10~約190mg、約10~約180mg、約10~約170mg、約10~約160mg、約10~約150mg、約10~約140mg、約10~約130mg、約10~約120mg、約10~約110mg、約10~約90mg、約10~約80mg、約10~約70mg、約10~約60mg、約10~約50mg、約10~約40mg、約10~約30mgまたは約10~約20mgの第1の用量で本明細書に記載されるASOを含む医薬組成物を投与するステップを含む。
[0214]一部の実施形態では、本明細書に記載される方法は、ヒト対象に、10~390mg、10~380mg、10~370mg、10~360mg、10~350mg、10~340mg、10~330mg、10~320mg、10~310mg、10~300mg、10~290mg、10~280mg、10~270mg、10~260mg、10~250mg、10~240mg、10~230mg、10~220mg、10~210mg、10~200mg、10~190mg、10~180mg、10~170mg、10~160mg、10~150mg、10~140mg、10~130mg、10~120mg、10~110mg、10~90mg、10~80mg、10~70mg、10~60mg、10~50mg、10~40mg、10~30mgまたは10~20mgの第1の用量で本明細書に記載されるASOを含む医薬組成物を投与するステップを含む。
[0215]一部の実施形態では、本明細書に記載される方法は、ヒト対象に、約1mg、約2mg、約3mg、約4mg、約5mg、約6mg、約7mg、約8mg、約9mg、約10mg、約11mg、約12mg、約13mg、約14mg、約15mg、約16mg、約17mg、約18mg、約19mg、約20mg、約21mg、約22mg、約23mg、約24mg、約25mg、約26mg、約27mg、約28mg、約29mg、約30mg、約31mg、約32mg、約33mg、約34mg、約35mg、約36mg、約37mg、約38mg、約39mg、約40mg、約41mg、約42mg、約43mg、約44mg、約45mg、約46mg、約47mg、約48mg、約49mg、約50mg、約51mg、約52mg、約53mg、約54mg、約55mg、約56mg、約57mg、約58mg、約59mg、約60mg、約61mg、約62mg、約63mg、約64mg、約65mg、約66mg、約67mg、約68mg、約69mg、約70mg、約71mg、約72mg、約73mg、約74mg、約75mg、約76mg、約77mg、約78mg、約79mg、約80mg、約81mg、約82mg、約83mg、約84mg、約85mg、約86mg、約87mg、約88mg、約89mg、約90mg、約91mg、約92mg、約93mg、約94mg、約95mg、約96mg、約97mg、約98mg、約99mg、約100mg、約101mg、約102mg、約103mg、約104mg、約105mg、約106mg、約107mg、約108mg、約109mg、約110mg、約111mg、約112mg、約113mg、約114mg、約115mg、約116mg、約117mg、約118mg、約119mg、約120mg、約121mg、約122mg、約123mg、約124mg、約125mg、約126mg、約127mg、約128mg、約129mg、約130mg、約131mg、約132mg、約133mg、約134mg、約135mg、約136mg、約137mg、約138mg、約139mg、約140mg、約141mg、約142mg、約143mg、約144mg、約145mg、約146mg、約147mg、約148mg、約149mg、約150mg、約151mg、約152mg、約153mg、約154mg、約155mg、約156mg、約157mg、約158mg、約159mg、約160mg、約161mg、約162mg、約163mg、約164mg、約165mg、約166mg、約167mg、約168mg、約169mg、約170mg、約171mg、約172mg、約173mg、約174mg、約175mg、約176mg、約177mg、約178mg、約179mg、約180mg、約181mg、約182mg、約183mg、約184mg、約185mg、約186mg、約187mg、約188mg、約189mg、約190mg、約191mg、約192mg、約193mg、約194mg、約195mg、約196mg、約197mg、約198mg、約199mg、約200mg、約201mg、約202mg、約203mg、約204mg、約205mg、約206mg、約207mg、約208mg、約209mg、約210mg、約211mg、約212mg、約213mg、約214mg、約215mg、約216mg、約217mg、約218mg、約219mg、約220mg、約221mg、約222mg、約223mg、約224mg、約225mg、約226mg、約227mg、約228mg、約229mg、約230mg、約231mg、約232mg、約233mg、約234mg、約235mg、約236mg、約237mg、約238mg、約239mg、約240mg、約241mg、約242mg、約243mg、約244mg、約245mg、約246mg、約247mg、約248mg、約249mg、約250mg、約251mg、約252mg、約253mg、約254mg、約255mg、約256mg、約257mg、約258mg、約259mg、約260mg、約261mg、約262mg、約263mg、約264mg、約265mg、約266mg、約267mg、約268mg、約269mg、約270mg、約271mg、約272mg、約273mg、約274mg、約275mg、約276mg、約277mg、約278mg、約279mg、約280mg、約281mg、約282mg、約283mg、約284mg、約285mg、約286mg、約287mg、約288mg、約289mg、約290mg、約291mg、約292mg、約293mg、約294mg、約295mg、約296mg、約297mg、約298mg、約299mg、約300mg、約301mg、約302mg、約303mg、約304mg、約305mg、約306mg、約307mg、約308mg、約309mg、約310mg、約311mg、約312mg、約313mg、約314mg、約315mg、約316mg、約317mg、約318mg、約319mg、約320mg、約321mg、約322mg、約323mg、約324mg、約325mg、約326mg、約327mg、約328mg、約329mg、約330mg、約331mg、約332mg、約333mg、約334mg、約335mg、約336mg、約337mg、約338mg、約339mg、約340mg、約341mg、約342mg、約343mg、約344mg、約345mg、約346mg、約347mg、約348mg、約349mg、約350mg、約351mg、約352mg、約353mg、約354mg、約355mg、約356mg、約357mg、約358mg、約359mg、約360mg、約361mg、約362mg、約363mg、約364mg、約365mg、約366mg、約367mg、約368mg、約369mg、約370mg、約371mg、約372mg、約373mg、約374mg、約375mg、約376mg、約377mg、約378mg、約379mg、約380mg、約381mg、約382mg、約383mg、約384mg、約385mg、約386mg、約387mg、約388mg、約389mg、約390mg、約391mg、約392mg、約393mg、約394mg、約395mg、約396mg、約397mg、約398mg、約399mgまたは400mgの第1の用量で本明細書に記載されるASOを含む医薬組成物を投与するステップを含む。
[0216]一部の実施形態では、本明細書に記載される方法は、ヒト対象に、1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、6mg、7mg、8mg、9mg、10mg、11mg、12mg、13mg、14mg、15mg、16mg、17mg、18mg、19mg、20mg、21mg、22mg、23mg、24mg、25mg、26mg、27mg、28mg、29mg、30mg、31mg、32mg、33mg、34mg、35mg、36mg、37mg、38mg、39mg、40mg、41mg、42mg、43mg、44mg、45mg、46mg、47mg、48mg、49mg、50mg、51mg、52mg、53mg、54mg、55mg、56mg、57mg、58mg、59mg、60mg、61mg、62mg、63mg、64mg、65mg、66mg、67mg、68mg、69mg、70mg、71mg、72mg、73mg、74mg、75mg、76mg、77mg、78mg、79mg、80mg、81mg、82mg、83mg、84mg、85mg、86mg、87mg、88mg、89mg、90mg、91mg、92mg、93mg、94mg、95mg、96mg、97mg、98mg、99mg、100mg、101mg、102mg、103mg、104mg、105mg、106mg、107mg、108mg、109mg、110mg、111mg、112mg、113mg、114mg、115mg、116mg、117mg、118mg、119mg、120mg、121mg、122mg、123mg、124mg、125mg、126mg、127mg、128mg、129mg、130mg、131mg、132mg、133mg、134mg、135mg、136mg、137mg、138mg、139mg、140mg、141mg、142mg、143mg、144mg、145mg、146mg、147mg、148mg、149mg、150mg、151mg、152mg、153mg、154mg、155mg、156mg、157mg、158mg、159mg、160mg、161mg、162mg、163mg、164mg、165mg、166mg、167mg、168mg、169mg、170mg、171mg、172mg、173mg、174mg、175mg、176mg、177mg、178mg、179mg、180mg、181mg、182mg、183mg、184mg、185mg、186mg、187mg、188mg、189mg、190mg、191mg、192mg、193mg、194mg、195mg、196mg、197mg、198mg、199mg、200mg、201mg、202mg、203mg、204mg、205mg、206mg、207mg、208mg、209mg、210mg、211mg、212mg、213mg、214mg、215mg、216mg、217mg、218mg、219mg、220mg、221mg、222mg、223mg、224mg、225mg、226mg、227mg、228mg、229mg、230mg、231mg、232mg、233mg、234mg、235mg、236mg、237mg、238mg、239mg、240mg、241mg、242mg、243mg、244mg、245mg、246mg、247mg、248mg、249mg、250mg、251mg、252mg、253mg、254mg、255mg、256mg、257mg、258mg、259mg、260mg、261mg、262mg、263mg、264mg、265mg、266mg、267mg、268mg、269mg、270mg、271mg、272mg、273mg、274mg、275mg、276mg、277mg、278mg、279mg、280mg、281mg、282mg、283mg、284mg、285mg、286mg、287mg、288mg、289mg、290mg、291mg、292mg、293mg、294mg、295mg、296mg、297mg、298mg、299mg、300mg、301mg、302mg、303mg、304mg、305mg、306mg、307mg、308mg、309mg、310mg、311mg、312mg、313mg、314mg、315mg、316mg、317mg、318mg、319mg、320mg、321mg、322mg、323mg、324mg、325mg、326mg、327mg、328mg、329mg、330mg、331mg、332mg、333mg、334mg、335mg、336mg、337mg、338mg、339mg、340mg、341mg、342mg、343mg、344mg、345mg、346mg、347mg、348mg、349mg、350mg、351mg、352mg、353mg、354mg、355mg、356mg、357mg、358mg、359mg、360mg、361mg、362mg、363mg、364mg、365mg、366mg、367mg、368mg、369mg、370mg、371mg、372mg、373mg、374mg、375mg、376mg、377mg、378mg、379mg、380mg、381mg、382mg、383mg、384mg、385mg、386mg、387mg、388mg、389mg、390mg、391mg、392mg、393mg、394mg、395mg、396mg、397mg、398mg、399mgまたは400mgの第1の用量で本明細書に記載されるASOを含む医薬組成物を投与するステップを含む。
治療標的集団
[0217]一部の実施形態では、ヒト対象は、最高で18歳である。一部の実施形態では、ヒト対象は、1~18、2~18、3~18、4~18、5~18、6~18、7~18、8~18、9~18、10~18、11~18、12~18、13~18、14~18、15~18、16~18または17~18歳である。一部の実施形態では、ヒト対象は、1~17、1~16、1~15、1~14、1~13、1~12、1~11、1~10、1~9、1~8、1~7、1~6、1~5、1~4、1~3または1~2歳のヒトである。一部の実施形態では、ヒト対象は、1歳未満または1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17または18歳である。
[0217]一部の実施形態では、ヒト対象は、最高で18歳である。一部の実施形態では、ヒト対象は、1~18、2~18、3~18、4~18、5~18、6~18、7~18、8~18、9~18、10~18、11~18、12~18、13~18、14~18、15~18、16~18または17~18歳である。一部の実施形態では、ヒト対象は、1~17、1~16、1~15、1~14、1~13、1~12、1~11、1~10、1~9、1~8、1~7、1~6、1~5、1~4、1~3または1~2歳のヒトである。一部の実施形態では、ヒト対象は、1歳未満または1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17または18歳である。
[0218]一部の実施形態では、ヒト対象は、最高で35歳、30歳、29歳、28歳、27歳、26歳、25歳、24歳、23歳、22歳、21歳、20歳、19歳、18歳、17歳、16歳、15歳、14歳、13歳、12歳、11歳、10歳、9歳、8歳、7歳、6歳、5歳、4歳、3歳、2歳または1歳である。
[0219]一部の実施形態では、ヒト対象は、1歳未満または1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34または35歳である。
[0220]一部の実施形態では、ヒト対象は、1~35、2~35、3~35、4~35、5~35、6~35、7~35、8~35、9~35、10~35、11~35、12~35、13~35、14~35、15~35、16~35、17~35、18~35、19~35、20~35、21~35、22~35、23~35、24~35、25~35、26~35、27~35、28~35、29~35、30~35、31~35、32~35、33~35または34~35歳である。
[0221]一部の実施形態では、ヒト対象は、1~35、1~34、1~33、1~32、1~31、1~30、1~29、1~28、1~27、1~26、1~25、1~24、1~23、1~22、1~21、1~20、1~19、1~18、1~17、1~16、1~15、1~14、1~13、1~12、1~11、1~10、1~9、1~8、1~7、1~6、1~5、1~4、1~3または1~2歳のヒトである。
[0222]一部の実施形態では、ヒト対象は、2~35、2~34、2~33、2~32、2~31、2~30、2~29、2~28、2~27、2~26、2~25、2~24、2~23、2~22、2~21、2~20、2~19、2~18、2x~17、2~16、2~15、2~14、2~13、2~12、2~11、2~10、2~9、2~8、2~7、2~6、2~5、2~4または2~3歳のヒトである。一部の実施形態では、ヒト対象は、3~35、3~34、3~33、3~32、3~31、3~30、3~29、3~28、3~27、3~26、3~25、3~24、3~23、3~22、3~21、3~20、3~19、3~18、3~17、3~16、3~15、3~14、3~13、3~12、3~11、3~10、3~9、3~8、3~7、3~6、3~5または3~4歳のヒトである。
[0223]一部の実施形態では、ヒト対象は、4~35、4~34、4~33、4~32、4~31、4~30、4~29、4~28、4~27、4~26、4~25、4~24、4~23、4~22、4~21、4~20、4~19、4~18、4~17、4~16、4~15、4~14、4~13、4~12、4~11、4~10、4~9、4~8、4~7、4~6または4~5歳のヒトである。
[0224]一部の実施形態では、ヒト対象は、5~35、5~34、5~33、5~32、5~31、5~30、5~29、5~28、5~27、5~26、5~25、5~24、5~23、5~22、5~21、5~20、5~19、5~18、5~17、5~16、5~15、5~14、5~13、5~12、5~11、5~10、5~9、5~8、5~7または5~6歳のヒトである。
[0225]一部の実施形態では、ヒト対象は、6~35、6~34、6~33、6~32、6~31、6~30、6~29、6~28、6~27、6~26、6~25、6~24、6~23、6~22、6~21、6~20、6~19、6~18、6~17、6~16、6~15、6~14、6~13、6~12、6~11、6~10、6~9、6~8または6~7歳のヒトである。
[0226]一部の実施形態では、ヒト対象は、7~35、7~34、7~33、7~32、7~31、7~30、7~29、7~28、7~27、7~26、7~25、7~24、7~23、7~22、7~21、7~20、7~19、7~18、7~17、7~16、7~15、7~14、7~13、7~12、7~11、7~10、7~9、7~8歳のヒトである。
[0227]一部の実施形態では、ヒト対象は、8~35、8~34、8~33、8~32、8~31、8~30、8~29、8~28、8~27、8~26、8~25、8~24、8~23、8~22、8~21、8~20、8~19、8~18、8~17、8~16、8~15、8~14、8~13、8~12、8~11、8~10または8~9歳のヒトである。
[0228]一部の実施形態では、対象は、(i)しばしば長期化し、高熱によって引き起こされる、再発性焦点性運動性または片側けいれん性または全身性強直間代性発作を伴う、12ヶ月齢より前の発作開始、(ii)原因となる磁気共鳴画像法病変の過去の病歴なし、(iii)ドラベ症候群を除く任意の疾患または状態の他の既知の病因なし、(iv)発作開始時の正常な発達、(v)SCN1A遺伝子における病原性バリアントまたは重要性の不確かなバリアント、(vi)いずれかが適切な発作管理を欠いていた、てんかんのための少なくとも2つの以前の処置、(vii)投与前28日の間の4回以上のけいれん発作であって、片側間代性、運動性徴候を伴う焦点性、焦点性から両側性強直間代性けいれん、全身性強直間代性けいれん、強直性、強直性または無緊張性(転倒発作)および間代性から選択されるいずれか1つであるけいれん発作、(viii)ケトン食療法、迷走神経刺激剤もしくはカンナビノイドもしくはマリファナ由来製品である、てんかんのための現在の介入、または少なくとも4週間安定であった用量で少なくとも1つの抗てんかん薬を用いる投薬、あるいは(ix)(i)~(viii)の任意の組合せを有することを特徴とする。
[0229]一部の実施形態では、対象は、(i)しばしば長期化し、高熱によって引き起こされる、再発性焦点性運動性または片側けいれん性または全身性強直間代性発作を伴う、12ヶ月齢より前の発作開始、(ii)原因となる磁気共鳴画像法病変の過去の病歴なし、(iii)ドラベ症候群を除く任意の疾患または状態の他の既知の病因なし、(iv)発作開始時の正常な発達、(v)SCN1A遺伝子における病原性バリアントまたは重要性の不確かなバリアント、(vi)いずれかが適切な発作管理を欠いていた、てんかんのための少なくとも2つの以前の処置、(vii)投与前28日の間の4回以上のけいれん発作であって、片側間代性、運動性徴候を伴う焦点性、焦点性から両側性強直間代性けいれん、全身性強直間代性けいれん、強直性、強直性または無緊張性(転倒発作)および間代性から選択されるいずれか1つであるけいれん発作、(viii)ケトン食療法、迷走神経刺激剤もしくはカンナビノイドもしくはマリファナ由来製品である、てんかんのための現在の介入、または少なくとも4週間安定であった用量で少なくとも1つの抗てんかん薬を用いる投薬のうち少なくとも1つまたは複数を有することを特徴とする。一部の実施形態では、対象は、(i)しばしば長期化し、高熱によって引き起こされる、再発性焦点性運動性または片側けいれん性または全身性強直間代性発作を伴う、12ヶ月齢より前の発作開始、(ii)原因となる磁気共鳴画像法病変の過去の病歴なし、(iii)ドラベ症候群を除く任意の疾患または状態の他の既知の病因なし、(iv)発作開始時の正常な発達、(v)SCN1A遺伝子における病原性バリアントまたは重要性の不確かなバリアント、(vi)いずれかが適切な発作管理を欠いていた、てんかんのための少なくとも2つの以前の処置、(vii)投与前28日の間の4回以上のけいれん発作であって、片側間代性、運動性徴候を伴う焦点性、焦点性から両側性強直間代性けいれん、全身性強直間代性けいれん、強直性、強直性または無緊張性(転倒発作)および間代性から選択されるいずれか1つであるけいれん発作、(viii)ケトン食療法、迷走神経刺激剤もしくはカンナビノイドもしくはマリファナ由来製品である、てんかんのための現在の介入、または少なくとも4週間安定であった用量で少なくとも1つの抗てんかん薬を用いる投薬のうち少なくとも2つまたは複数を有することを特徴とする。一部の実施形態では、対象は、(i)しばしば長期化し、高熱によって引き起こされる、再発性焦点性運動性または片側けいれん性または全身性強直間代性発作を伴う、12ヶ月齢より前の発作開始、(ii)原因となる磁気共鳴画像法病変の過去の病歴なし、(iii)ドラベ症候群を除く任意の疾患または状態の他の既知の病因なし、(iv)発作開始時の正常な発達、(v)SCN1A遺伝子における病原性バリアントまたは重要性の不確かなバリアント、(vi)いずれかが適切な発作管理を欠いていた、てんかんのための少なくとも2つの以前の処置、(vii)投与前28日の間の4回以上のけいれん発作であって、片側間代性、運動性徴候を伴う焦点性、焦点性から両側性強直間代性けいれん、全身性強直間代性けいれん、強直性、強直性または無緊張性(転倒発作)および間代性から選択されるいずれか1つであるけいれん発作、(viii)ケトン食療法、迷走神経刺激剤もしくはカンナビノイドもしくはマリファナ由来製品である、てんかんのための現在の介入、または少なくとも4週間安定であった用量で少なくとも1つの抗てんかん薬を用いる投薬のうち少なくとも3つまたは複数を有することを特徴とする。一部の実施形態では、対象は、(i)しばしば長期化し、高熱によって引き起こされる、再発性焦点性運動性または片側けいれん性または全身性強直間代性発作を伴う、12ヶ月齢より前の発作開始、(ii)原因となる磁気共鳴画像法病変の過去の病歴なし、(iii)ドラベ症候群を除く任意の疾患または状態の他の既知の病因なし、(iv)発作開始時の正常な発達、(v)SCN1A遺伝子における病原性バリアントまたは重要性の不確かなバリアント、(vi)いずれかが適切な発作管理を欠いていた、てんかんのための少なくとも2つの以前の処置、(vii)投与前28日の間の4回以上のけいれん発作であって、片側間代性、運動性徴候を伴う焦点性、焦点性から両側性強直間代性けいれん、全身性強直間代性けいれん、強直性、強直性または無緊張性(転倒発作)および間代性から選択されるいずれか1つであるけいれん発作、(viii)ケトン食療法、迷走神経刺激剤もしくはカンナビノイドもしくはマリファナ由来製品である、てんかんのための現在の介入、または少なくとも4週間安定であった用量で少なくとも1つの抗てんかん薬を用いる投薬のうち少なくとも4つまたは複数を有することを特徴とする。一部の実施形態では、対象は、(i)しばしば長期化し、高熱によって引き起こされる、再発性焦点性運動性または片側けいれん性または全身性強直間代性発作を伴う、12ヶ月齢より前の発作開始、(ii)原因となる磁気共鳴画像法病変の過去の病歴なし、(iii)ドラベ症候群を除く任意の疾患または状態の他の既知の病因なし、(iv)発作開始時の正常な発達、(v)SCN1A遺伝子における病原性バリアントまたは重要性の不確かなバリアント、(vi)いずれかが適切な発作管理を欠いていた、てんかんのための少なくとも2つの以前の処置、(vii)投与前28日の間の4回以上のけいれん発作であって、片側間代性、運動性徴候を伴う焦点性、焦点性から両側性強直間代性けいれん、全身性強直間代性けいれん、強直性、強直性または無緊張性(転倒発作)および間代性から選択されるいずれか1つであるけいれん発作、(viii)ケトン食療法、迷走神経刺激剤もしくはカンナビノイドもしくはマリファナ由来製品である、てんかんのための現在の介入、または少なくとも4週間安定であった用量で少なくとも1つの抗てんかん薬を用いる投薬のうち少なくとも5つまたは複数を有することを特徴とする。一部の実施形態では、対象は、(i)しばしば長期化し、高熱によって引き起こされる、再発性焦点性運動性または片側けいれん性または全身性強直間代性発作を伴う、12ヶ月齢より前の発作開始、(ii)原因となる磁気共鳴画像法病変の過去の病歴なし、(iii)ドラベ症候群を除く任意の疾患または状態の他の既知の病因なし、(iv)発作開始時の正常な発達、(v)SCN1A遺伝子における病原性バリアントまたは重要性の不確かなバリアント、(vi)いずれかが適切な発作管理を欠いていた、てんかんのための少なくとも2つの以前の処置、(vii)投与前28日の間の4回以上のけいれん発作であって、片側間代性、運動性徴候を伴う焦点性、焦点性から両側性強直間代性けいれん、全身性強直間代性けいれん、強直性、強直性または無緊張性(転倒発作)および間代性から選択されるいずれか1つであるけいれん発作、(viii)ケトン食療法、迷走神経刺激剤もしくはカンナビノイドもしくはマリファナ由来製品である、てんかんのための現在の介入、または少なくとも4週間安定であった用量で少なくとも1つの抗てんかん薬を用いる投薬のうち少なくとも6つまたは複数を有することを特徴とする。一部の実施形態では、対象は、(i)しばしば長期化し、高熱によって引き起こされる、再発性焦点性運動性または片側けいれん性または全身性強直間代性発作を伴う、12ヶ月齢より前の発作開始、(ii)原因となる磁気共鳴画像法病変の過去の病歴なし、(iii)ドラベ症候群を除く任意の疾患または状態の他の既知の病因なし、(iv)発作開始時の正常な発達、(v)SCN1A遺伝子における病原性バリアントまたは重要性の不確かなバリアント、(vi)いずれかが適切な発作管理を欠いていた、てんかんのための少なくとも2つの以前の処置、(vii)投与前28日の間の4回以上のけいれん発作であって、片側間代性、運動性徴候を伴う焦点性、焦点性から両側性強直間代性けいれん、全身性強直間代性けいれん、強直性、強直性または無緊張性(転倒発作)および間代性から選択されるいずれか1つであるけいれん発作、(viii)ケトン食療法、迷走神経刺激剤もしくはカンナビノイドもしくはマリファナ由来製品である、てんかんのための現在の介入、または少なくとも4週間安定であった用量で少なくとも1つの抗てんかん薬を用いる投薬のうち少なくとも7つまたは複数を有することを特徴とする。一部の実施形態では、対象は、(i)しばしば長期化し、高熱によって引き起こされる、再発性焦点性運動性または片側けいれん性または全身性強直間代性発作を伴う、12ヶ月齢より前の発作開始、(ii)原因となる磁気共鳴画像法病変の過去の病歴なし、(iii)ドラベ症候群を除いて任意の疾患または状態の他の既知の病因なし、(iv)発作開始時の正常な発達、(v)SCN1A遺伝子における病原性バリアントまたは重要性の不確かなバリアント、(vi)いずれかが適切な発作管理を欠いていた、てんかんのための少なくとも2つの以前の処置、(vii)投与前28日の間の4回以上のけいれん発作であって、片側間代性、運動性徴候を伴う焦点性、焦点性から両側性強直間代性けいれん、全身性強直間代性けいれん、強直性、強直性または無緊張性(転倒発作)および間代性から選択されるいずれか1つであるけいれん発作、ならびに(viii)ケトン食療法、迷走神経刺激剤もしくはカンナビノイドもしくはマリファナ由来製品である、てんかんのための現在の介入、または少なくとも4週間安定であった用量で少なくとも1つの抗てんかん薬を用いる投薬のうち8つ全てを有することを特徴とする。
[0230]一部の実施形態では、対象はさらに、以下:(a)SCN1A遺伝子における以下の突然変異:Thr226Met、Leu263Val、Val422Leu、Thr1174Ser、Trp1204Arg、Pro1345Ser、Gln1489Lys、Phe1499Leu、Arg1575Cys、Val1611Phe、Leu1624Pro、Arg1648Cys、Leu1649Gln、Leu1670Trp、Gly1674ArgおよびAsp1866Tyrのうち1つ、(b)既知の劣性遺伝病の場合にはホモ接合性である、てんかんを引き起こす別の遺伝子における既知の病原性突然変異、(c)維持処置としてのナトリウムチャネル遮断薬および抗凝固剤を用いて現在処置されており、ナトリウムチャネル遮断薬は、フェニトイン、カルバマゼピン、オキシカルバゼピン、ラモトリジン、ラコサミドまたはルフィナミドであり、抗凝固剤は、アスピリンではないこと、(d)てんかん以外の臨床的に著しく不安定な医学的状態、(e)てんかん以外の、投与前4週間における臨床的に関連する症状または臨床的に重大な疾病、(f)てんかん、ドラベ症候群以外の脳もしくは脊髄の疾患の病歴または細菌性髄膜炎もしくは脳奇形の病歴、(g)脊柱変形、または脳脊髄液(CSF)の自由な流れを変更するもしくはCSFドレナージシャントが埋め込まれている他の状態、(h)投与前の臨床的に重大な異常な臨床検査値、(i)正常の上限の2.5倍を超えるアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼもしくはアラニンアミノトランスフェラーゼ、正常の上限を超える血清クレアチニンまたは正常の下限未満の血小板数、(j)投与前に測定された12誘導心電図(ECG)における臨床的に関連する異常、(k)精神障害または行動障害、(l)現在または過去4週間における、アスピリンではない抗凝固剤の投薬、あるいは(m)(a)~(l)の任意の組合せのうち1つまたは複数を有しないことを特徴とする。一部の実施形態では、対象は、以下:(a)SCN1A遺伝子における以下の突然変異:Thr226Met、Leu263Val、Val422Leu、Thr1174Ser、Trp1204Arg、Pro1345Ser、Gln1489Lys、Phe1499Leu、Arg1575Cys、Val1611Phe、Leu1624Pro、Arg1648Cys、Leu1649Gln、Leu1670Trp、Gly1674ArgおよびAsp1866Tyrのうち1つ、(b)既知の劣性遺伝病の場合にはホモ接合性である、てんかんを引き起こす別の遺伝子における既知の病原性突然変異、(c)維持処置としてのナトリウムチャネル遮断薬および抗凝固剤を用いて現在処置されており、ナトリウムチャネル遮断薬は、フェニトイン、カルバマゼピン、オキシカルバゼピン、ラモトリジン、ラコサミドまたはルフィナミドであり、抗凝固剤は、アスピリンではないこと、(d)てんかん以外の臨床的に著しく不安定な医学的状態、(e)てんかん以外の、投与前4週間における臨床的に関連する症状または臨床的に重大な疾病、(f)てんかん、ドラベ症候群以外の脳もしくは脊髄の疾患の病歴または細菌性髄膜炎もしくは脳奇形の病歴、(g)脊柱変形、または脳脊髄液(CSF)の自由な流れを変更するもしくはCSFドレナージシャントが埋め込まれている他の状態、(h)投与前の臨床的に重大な異常な臨床検査値、(i)正常の上限の2.5倍を超えるアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼもしくはアラニンアミノトランスフェラーゼ、正常の上限を超える血清クレアチニンまたは正常の下限未満の血小板数、(j)投与前に測定された12誘導心電図(ECG)における臨床的に関連する異常、(k)精神障害または行動障害、ならびに(l)現在または過去4週間における、アスピリンではない抗凝固剤の投薬のうち1つまたは複数を有しないことを特徴とする。一部の実施形態では、対象はさらに、以下:(a)SCN1A遺伝子における以下の突然変異:Thr226Met、Leu263Val、Val422Leu、Thr1174Ser、Trp1204Arg、Pro1345Ser、Gln1489Lys、Phe1499Leu、Arg1575Cys、Val1611Phe、Leu1624Pro、Arg1648Cys、Leu1649Gln、Leu1670Trp、Gly1674ArgおよびAsp1866Tyrのうち1つ、(b)既知の劣性遺伝病の場合にはホモ接合性である、てんかんを引き起こす別の遺伝子における既知の病原性突然変異、(c)維持処置としてのナトリウムチャネル遮断薬および抗凝固剤を用いて現在処置されており、ナトリウムチャネル遮断薬は、フェニトイン、カルバマゼピン、オキシカルバゼピン、ラモトリジン、ラコサミドまたはルフィナミドであり、抗凝固剤は、アスピリンではないこと、(d)てんかん以外の臨床的に著しく不安定な医学的状態、(e)てんかん以外の、投与前4週間における臨床的に関連する症状または臨床的に重大な疾病、(f)てんかん、ドラベ症候群以外の脳もしくは脊髄の疾患の病歴または細菌性髄膜炎もしくは脳奇形の病歴、(g)脊柱変形、または脳脊髄液(CSF)の自由な流れを変更するもしくはCSFドレナージシャントが埋め込まれている他の状態、(h)投与前の臨床的に重大な異常な臨床検査値、(i)正常の上限を超える2.5倍のアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼもしくはアラニンアミノトランスフェラーゼ、正常の上限を超える血清クレアチニンまたは正常の下限未満の血小板数、(j)投与前に測定された12誘導心電図(ECG)における臨床的に関連する異常、(k)精神障害または行動障害、ならびに(l)現在または過去4週間における、アスピリンではない抗凝固剤の投薬のうち2つ以上を有しないことを特徴とする。一部の実施形態では、対象はさらに、以下:(a)SCN1A遺伝子における以下の突然変異:Thr226Met、Leu263Val、Val422Leu、Thr1174Ser、Trp1204Arg、Pro1345Ser、Gln1489Lys、Phe1499Leu、Arg1575Cys、Val1611Phe、Leu1624Pro、Arg1648Cys、Leu1649Gln、Leu1670Trp、Gly1674ArgおよびAsp1866Tyrのうち1つ、(b)既知の劣性遺伝病の場合にはホモ接合性である、てんかんを引き起こす別の遺伝子における既知の病原性突然変異、(c)維持処置としてのナトリウムチャネル遮断薬および抗凝固剤を用いて現在処置されており、ナトリウムチャネル遮断薬は、フェニトイン、カルバマゼピン、オキシカルバゼピン、ラモトリジン、ラコサミドまたはルフィナミドであり、抗凝固剤は、アスピリンではないこと、(d)てんかん以外の臨床的に著しく不安定な医学的状態、(e)てんかん以外の、投与前4週間における臨床的に関連する症状または臨床的に重大な疾病、(f)てんかん、ドラベ症候群以外の脳もしくは脊髄の疾患の病歴または細菌性髄膜炎もしくは脳奇形の病歴、(g)脊柱変形、または脳脊髄液(CSF)の自由な流れを変更するもしくはCSFドレナージシャントが埋め込まれている他の状態、(h)投与前の臨床的に重大な異常な臨床検査値、(i)正常の上限の2.5倍を超えるアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼもしくはアラニンアミノトランスフェラーゼ、正常の上限を超える血清クレアチニンまたは正常の下限未満の血小板数、(j)投与前に測定された12誘導心電図(ECG)における臨床的に関連する異常、(k)精神障害または行動障害、ならびに(l)現在または過去4週間における、アスピリンではない抗凝固剤の投薬のうち3つ以上を有しないことを特徴とする。一部の実施形態では、対象はさらに、以下:(a)SCN1A遺伝子における以下の突然変異:Thr226Met、Leu263Val、Val422Leu、Thr1174Ser、Trp1204Arg、Pro1345Ser、Gln1489Lys、Phe1499Leu、Arg1575Cys、Val1611Phe、Leu1624Pro、Arg1648Cys、Leu1649Gln、Leu1670Trp、Gly1674ArgおよびAsp1866Tyrのうち1つ、(b)既知の劣性遺伝病の場合にはホモ接合性である、てんかんを引き起こす別の遺伝子における既知の病原性突然変異、(c)維持処置としてのナトリウムチャネル遮断薬および抗凝固剤を用いて現在処置されており、ナトリウムチャネル遮断薬は、フェニトイン、カルバマゼピン、オキシカルバゼピン、ラモトリジン、ラコサミドまたはルフィナミドであり、抗凝固剤は、アスピリンではないこと、(d)てんかん以外の臨床的に著しく不安定な医学的状態、(e)てんかん以外の、投与前4週間における臨床的に関連する症状または臨床的に重大な疾病、(f)てんかん、ドラベ症候群以外の脳もしくは脊髄の疾患の病歴または細菌性髄膜炎もしくは脳奇形の病歴、(g)脊柱変形、または脳脊髄液(CSF)の自由な流れを変更するもしくはCSFドレナージシャントが埋め込まれている他の状態、(h)投与前の臨床的に重大な異常な臨床検査値、(i)正常の上限を超える2.5倍のアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼもしくはアラニンアミノトランスフェラーゼ、正常の上限を超える血清クレアチニンまたは正常の下限未満の血小板数、(j)投与前に測定された12誘導心電図(ECG)における臨床的に関連する異常、(k)精神障害または行動障害、ならびに(l)現在または過去4週間における、アスピリンではない抗凝固剤の投薬のうち4つ以上を有しないことを特徴とする。一部の実施形態では、対象はさらに、以下:(a)SCN1A遺伝子における以下の突然変異:Thr226Met、Leu263Val、Val422Leu、Thr1174Ser、Trp1204Arg、Pro1345Ser、Gln1489Lys、Phe1499Leu、Arg1575Cys、Val1611Phe、Leu1624Pro、Arg1648Cys、Leu1649Gln、Leu1670Trp、Gly1674ArgおよびAsp1866Tyrのうち1つ、(b)既知の劣性遺伝病の場合にはホモ接合性である、てんかんを引き起こす別の遺伝子における既知の病原性突然変異、(c)維持処置としてのナトリウムチャネル遮断薬および抗凝固剤を用いて現在処置されており、ナトリウムチャネル遮断薬は、フェニトイン、カルバマゼピン、オキシカルバゼピン、ラモトリジン、ラコサミドまたはルフィナミドであり、抗凝固剤は、アスピリンではないこと、(d)てんかん以外の臨床的に著しく不安定な医学的状態、(e)てんかん以外の、投与前4週間における臨床的に関連する症状または臨床的に重大な疾病、(f)てんかん、ドラベ症候群以外の脳もしくは脊髄の疾患の病歴または細菌性髄膜炎もしくは脳奇形の病歴、(g)脊柱変形、または脳脊髄液(CSF)の自由な流れを変更するもしくはCSFドレナージシャントが埋め込まれている他の状態、(h)投与前の臨床的に重大な異常な臨床検査値、(i)正常の上限を超える2.5倍のアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼもしくはアラニンアミノトランスフェラーゼ、正常の上限を超える血清クレアチニンまたは正常の下限未満の血小板数、(j)投与前に測定された12誘導心電図(ECG)における臨床的に関連する異常、(k)精神障害または行動障害、ならびに(l)現在または過去4週間における、アスピリンではない抗凝固剤の投薬のうち5つ以上を有しないことを特徴とする。一部の実施形態では、対象はさらに、以下:(a)SCN1A遺伝子における以下の突然変異:Thr226Met、Leu263Val、Val422Leu、Thr1174Ser、Trp1204Arg、Pro1345Ser、Gln1489Lys、Phe1499Leu、Arg1575Cys、Val1611Phe、Leu1624Pro、Arg1648Cys、Leu1649Gln、Leu1670Trp、Gly1674ArgおよびAsp1866Tyrのうち1つ、(
b)既知の劣性遺伝病の場合にはホモ接合性である、てんかんを引き起こす別の遺伝子における既知の病原性突然変異、(c)維持処置としてのナトリウムチャネル遮断薬および抗凝固剤を用いて現在処置されており、ナトリウムチャネル遮断薬は、フェニトイン、カルバマゼピン、オキシカルバゼピン、ラモトリジン、ラコサミドまたはルフィナミドであり、抗凝固剤は、アスピリンではないこと、(d)てんかん以外の臨床的に著しく不安定な医学的状態、(e)てんかん以外の、投与前4週間における臨床的に関連する症状または臨床的に重大な疾病、(f)てんかん、ドラベ症候群以外の脳もしくは脊髄の疾患の病歴または細菌性髄膜炎もしくは脳奇形の病歴、(g)脊柱変形、または脳脊髄液(CSF)の自由な流れを変更するもしくはCSFドレナージシャントが埋め込まれている他の状態、(h)投与前の臨床的に重大な異常な臨床検査値、(i)正常の上限の2.5倍を超えるアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼもしくはアラニンアミノトランスフェラーゼ、正常の上限を超える血清クレアチニンまたは正常の下限未満の血小板数、(j)投与前に測定された12誘導心電図(ECG)における臨床的に関連する異常、(k)精神障害または行動障害、ならびに(l)現在または過去4週間における、アスピリンではない抗凝固剤の投薬のうち6つ以上を有しないことを特徴とする。一部の実施形態では、対象はさらに、以下:(a)SCN1A遺伝子における以下の突然変異:Thr226Met、Leu263Val、Val422Leu、Thr1174Ser、Trp1204Arg、Pro1345Ser、Gln1489Lys、Phe1499Leu、Arg1575Cys、Val1611Phe、Leu1624Pro、Arg1648Cys、Leu1649Gln、Leu1670Trp、Gly1674ArgおよびAsp1866Tyrのうち1つ、(b)既知の劣性遺伝病の場合にはホモ接合性である、てんかんを引き起こす別の遺伝子における既知の病原性突然変異、(c)維持処置としてのナトリウムチャネル遮断薬および抗凝固剤を用いて現在処置されており、ナトリウムチャネル遮断薬は、フェニトイン、カルバマゼピン、オキシカルバゼピン、ラモトリジン、ラコサミドまたはルフィナミドであり、抗凝固剤は、アスピリンではないこと、(d)てんかん以外の臨床的に著しく不安定な医学的状態、(e)てんかん以外の、投与前4週間における臨床的に関連する症状または臨床的に重大な疾病、(f)てんかん、ドラベ症候群以外の脳もしくは脊髄の疾患の病歴または細菌性髄膜炎もしくは脳奇形の病歴、(g)脊柱変形、または脳脊髄液(CSF)の自由な流れを変更するもしくはCSFドレナージシャントが埋め込まれている他の状態、(h)投与前の臨床的に重大な異常な臨床検査値、(i)正常の上限の2.5倍を超えるアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼもしくはアラニンアミノトランスフェラーゼ、正常の上限を超える血清クレアチニンまたは正常の下限未満の血小板数、(j)投与前に測定された12誘導心電図(ECG)における臨床的に関連する異常、(k)精神障害または行動障害、ならびに(l)現在または過去4週間における、アスピリンではない抗凝固剤の投薬のうち7つ以上を有しないことを特徴とする。一部の実施形態では、対象はさらに、以下:(a)SCN1A遺伝子における以下の突然変異:Thr226Met、Leu263Val、Val422Leu、Thr1174Ser、Trp1204Arg、Pro1345Ser、Gln1489Lys、Phe1499Leu、Arg1575Cys、Val1611Phe、Leu1624Pro、Arg1648Cys、Leu1649Gln、Leu1670Trp、Gly1674ArgおよびAsp1866Tyrのうち1つ、(b)既知の劣性遺伝病の場合にはホモ接合性である、てんかんを引き起こす別の遺伝子における既知の病原性突然変異、(c)維持処置としてのナトリウムチャネル遮断薬および抗凝固剤を用いて現在処置されており、ナトリウムチャネル遮断薬は、フェニトイン、カルバマゼピン、オキシカルバゼピン、ラモトリジン、ラコサミドまたはルフィナミドであり、抗凝固剤は、アスピリンではないこと、(d)てんかん以外の臨床的に著しく不安定な医学的状態、(e)てんかん以外の、投与前4週間における臨床的に関連する症状または臨床的に重大な疾病、(f)てんかん、ドラベ症候群以外の脳もしくは脊髄の疾患の病歴または細菌性髄膜炎もしくは脳奇形の病歴、(g)脊柱変形、または脳脊髄液(CSF)の自由な流れを変更するもしくはCSFドレナージシャントが埋め込まれている他の状態、(h)投与前の臨床的に重大な異常な臨床検査値、(i)正常の上限の2.5倍を超えるアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼもしくはアラニンアミノトランスフェラーゼ、正常の上限を超える血清クレアチニンまたは正常の下限未満の血小板数、(j)投与前に測定された12誘導心電図(ECG)における臨床的に関連する異常、(k)精神障害または行動障害、ならびに(l)現在または過去4週間における、アスピリンではない抗凝固剤の投薬のうち8つ以上を有しないことを特徴とする。一部の実施形態では、対象はさらに、以下:(a)SCN1A遺伝子における以下の突然変異:Thr226Met、Leu263Val、Val422Leu、Thr1174Ser、Trp1204Arg、Pro1345Ser、Gln1489Lys、Phe1499Leu、Arg1575Cys、Val1611Phe、Leu1624Pro、Arg1648Cys、Leu1649Gln、Leu1670Trp、Gly1674ArgおよびAsp1866Tyrのうち1つ、(b)既知の劣性遺伝病の場合にはホモ接合性である、てんかんを引き起こす別の遺伝子における既知の病原性突然変異、(c)維持処置としてのナトリウムチャネル遮断薬および抗凝固剤を用いて現在処置されており、ナトリウムチャネル遮断薬は、フェニトイン、カルバマゼピン、オキシカルバゼピン、ラモトリジン、ラコサミドまたはルフィナミドであり、抗凝固剤は、アスピリンではないこと、(d)てんかん以外の臨床的に著しく不安定な医学的状態、(e)てんかん以外の、投与前4週間における臨床的に関連する症状または臨床的に重大な疾病、(f)てんかん、ドラベ症候群以外の脳もしくは脊髄の疾患の病歴または細菌性髄膜炎もしくは脳奇形の病歴、(g)脊柱変形、または脳脊髄液(CSF)の自由な流れを変更するもしくはCSFドレナージシャントが埋め込まれている他の状態、(h)投与前の臨床的に重大な異常な臨床検査値、(i)正常の上限を超える2.5倍のアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼもしくはアラニンアミノトランスフェラーゼ、正常の上限を超える血清クレアチニンまたは正常の下限未満の血小板数、(j)投与前に測定された12誘導心電図(ECG)における臨床的に関連する異常、(k)精神障害または行動障害、ならびに(l)現在または過去4週間における、アスピリンではない抗凝固剤の投薬のうち9つ以上を有しないことを特徴とする。一部の実施形態では、対象はさらに、以下:(a)SCN1A遺伝子における以下の突然変異:Thr226Met、Leu263Val、Val422Leu、Thr1174Ser、Trp1204Arg、Pro1345Ser、Gln1489Lys、Phe1499Leu、Arg1575Cys、Val1611Phe、Leu1624Pro、Arg1648Cys、Leu1649Gln、Leu1670Trp、Gly1674ArgおよびAsp1866Tyrのうち1つ、(b)既知の劣性遺伝病の場合にはホモ接合性である、てんかんを引き起こす別の遺伝子における既知の病原性突然変異、(c)維持処置としてのナトリウムチャネル遮断薬および抗凝固剤を用いて現在処置されており、ナトリウムチャネル遮断薬は、フェニトイン、カルバマゼピン、オキシカルバゼピン、ラモトリジン、ラコサミドまたはルフィナミドであり、抗凝固剤は、アスピリンではないこと、(d)てんかん以外の臨床的に著しく不安定な医学的状態、(e)てんかん以外の、投与前4週間における臨床的に関連する症状または臨床的に重大な疾病、(f)てんかん、ドラベ症候群以外の脳もしくは脊髄の疾患の病歴または細菌性髄膜炎もしくは脳奇形の病歴、(g)脊柱変形、または脳脊髄液(CSF)の自由な流れを変更するもしくはCSFドレナージシャントが埋め込まれている他の状態、(h)投与前の臨床的に重大な異常な臨床検査値、(i)正常の上限を超える2.5倍のアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼもしくはアラニンアミノトランスフェラーゼ、正常の上限を超える血清クレアチニンまたは正常の下限未満の血小板数、(j)投与前に測定された12誘導心電図(ECG)における臨床的に関連する異常、(k)精神障害または行動障害、ならびに(l)現在または過去4週間における、アスピリンではない抗凝固剤の投薬のうち10以上を有しないことを特徴とする。一部の実施形態では、対象はさらに、以下:(a)SCN1A遺伝子における以下の突然変異:Thr226Met、Leu263Val、Val422Leu、Thr1174Ser、Trp1204Arg、Pro1345Ser、Gln1489Lys、Phe1499Leu、Arg1575Cys、Val1611Phe、Leu1624Pro、Arg1648Cys、Leu1649Gln、Leu1670Trp、Gly1674ArgおよびAsp1866Tyrのうち1つ、(b)既知の劣性遺伝病の場合にはホモ接合性である、てんかんを引き起こす別の遺伝子における既知の病原性突然変異、(c)維持処置としてのナトリウムチャネル遮断薬および抗凝固剤を用いて現在処置されており、ナトリウムチャネル遮断薬は、フェニトイン、カルバマゼピン、オキシカルバゼピン、ラモトリジン、ラコサミドまたはルフィナミドであり、抗凝固剤は、アスピリンではないこと、(d)てんかん以外の臨床的に著しく不安定な医学的状態、(e)てんかん以外の、投与前4週間における臨床的に関連する症状または臨床的に重大な疾病、(f)てんかん、ドラベ症候群以外の脳もしくは脊髄の疾患の病歴または細菌性髄膜炎もしくは脳奇形の病歴、(g)脊柱変形、または脳脊髄液(CSF)の自由な流れを変更するもしくはCSFドレナージシャントが埋め込まれている他の状態、(h)投与前の臨床的に重大な異常な臨床検査値、(i)正常の上限を超える2.5倍のアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼもしくはアラニンアミノトランスフェラーゼ、正常の上限を超える血清クレアチニンまたは正常の下限未満の血小板数、(j)投与前に測定された12誘導心電図(ECG)における臨床的に関連する異常、(k)精神障害または行動障害、ならびに(l)現在または過去4週間における、アスピリンではない抗凝固剤の投薬のうち11以上を有しないことを特徴とする。一部の実施形態では、対象はさらに、以下:(a)SCN1A遺伝子における以下の突然変異:Thr226Met、Leu263Val、Val422Leu、Thr1174Ser、Trp1204Arg、Pro1345Ser、Gln1489Lys、Phe1499Leu、Arg1575Cys、Val1611Phe、Leu1624Pro、Arg1648Cys、Leu1649Gln、Leu1670Trp、Gly1674ArgおよびAsp1866Tyrのうち1つ、(b)既知の劣性遺伝病の場合にはホモ接合性である、てんかんを引き起こす別の遺伝子における既知の病原性突然変異、(c)維持処置としてのナトリウムチャネル遮断薬および抗凝固剤を用いて現在処置されており、ナトリウムチャネル遮断薬は、フェニトイン、カルバマゼピン、オキシカルバゼピン、ラモトリジン、ラコサミドまたはルフィナミドであり、抗凝固剤は、アスピリンではないこと、(d)てんかん以外の臨床的に著しく不安定な医学的状態、(e)てんかん以外の、投与前4週間における臨床的に関連する症状または臨床的に重大な疾
病、(f)てんかん、ドラベ症候群以外の脳もしくは脊髄の疾患の病歴または細菌性髄膜炎もしくは脳奇形の病歴、(g)脊柱変形、または脳脊髄液(CSF)の自由な流れを変更するもしくはCSFドレナージシャントが埋め込まれている他の状態、(h)投与前の臨床的に重大な異常な臨床検査値、(i)正常の上限の2.5倍を超えるアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼもしくはアラニンアミノトランスフェラーゼ、正常の上限を超える血清クレアチニンまたは正常の下限未満の血小板数、(j)投与前に測定された12誘導心電図(ECG)における臨床的に関連する異常、(k)精神障害または行動障害、ならびに(l)現在または過去4週間における、アスピリンではない抗凝固剤の投薬のうち全てを有しないことを特徴とする。
b)既知の劣性遺伝病の場合にはホモ接合性である、てんかんを引き起こす別の遺伝子における既知の病原性突然変異、(c)維持処置としてのナトリウムチャネル遮断薬および抗凝固剤を用いて現在処置されており、ナトリウムチャネル遮断薬は、フェニトイン、カルバマゼピン、オキシカルバゼピン、ラモトリジン、ラコサミドまたはルフィナミドであり、抗凝固剤は、アスピリンではないこと、(d)てんかん以外の臨床的に著しく不安定な医学的状態、(e)てんかん以外の、投与前4週間における臨床的に関連する症状または臨床的に重大な疾病、(f)てんかん、ドラベ症候群以外の脳もしくは脊髄の疾患の病歴または細菌性髄膜炎もしくは脳奇形の病歴、(g)脊柱変形、または脳脊髄液(CSF)の自由な流れを変更するもしくはCSFドレナージシャントが埋め込まれている他の状態、(h)投与前の臨床的に重大な異常な臨床検査値、(i)正常の上限の2.5倍を超えるアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼもしくはアラニンアミノトランスフェラーゼ、正常の上限を超える血清クレアチニンまたは正常の下限未満の血小板数、(j)投与前に測定された12誘導心電図(ECG)における臨床的に関連する異常、(k)精神障害または行動障害、ならびに(l)現在または過去4週間における、アスピリンではない抗凝固剤の投薬のうち6つ以上を有しないことを特徴とする。一部の実施形態では、対象はさらに、以下:(a)SCN1A遺伝子における以下の突然変異:Thr226Met、Leu263Val、Val422Leu、Thr1174Ser、Trp1204Arg、Pro1345Ser、Gln1489Lys、Phe1499Leu、Arg1575Cys、Val1611Phe、Leu1624Pro、Arg1648Cys、Leu1649Gln、Leu1670Trp、Gly1674ArgおよびAsp1866Tyrのうち1つ、(b)既知の劣性遺伝病の場合にはホモ接合性である、てんかんを引き起こす別の遺伝子における既知の病原性突然変異、(c)維持処置としてのナトリウムチャネル遮断薬および抗凝固剤を用いて現在処置されており、ナトリウムチャネル遮断薬は、フェニトイン、カルバマゼピン、オキシカルバゼピン、ラモトリジン、ラコサミドまたはルフィナミドであり、抗凝固剤は、アスピリンではないこと、(d)てんかん以外の臨床的に著しく不安定な医学的状態、(e)てんかん以外の、投与前4週間における臨床的に関連する症状または臨床的に重大な疾病、(f)てんかん、ドラベ症候群以外の脳もしくは脊髄の疾患の病歴または細菌性髄膜炎もしくは脳奇形の病歴、(g)脊柱変形、または脳脊髄液(CSF)の自由な流れを変更するもしくはCSFドレナージシャントが埋め込まれている他の状態、(h)投与前の臨床的に重大な異常な臨床検査値、(i)正常の上限の2.5倍を超えるアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼもしくはアラニンアミノトランスフェラーゼ、正常の上限を超える血清クレアチニンまたは正常の下限未満の血小板数、(j)投与前に測定された12誘導心電図(ECG)における臨床的に関連する異常、(k)精神障害または行動障害、ならびに(l)現在または過去4週間における、アスピリンではない抗凝固剤の投薬のうち7つ以上を有しないことを特徴とする。一部の実施形態では、対象はさらに、以下:(a)SCN1A遺伝子における以下の突然変異:Thr226Met、Leu263Val、Val422Leu、Thr1174Ser、Trp1204Arg、Pro1345Ser、Gln1489Lys、Phe1499Leu、Arg1575Cys、Val1611Phe、Leu1624Pro、Arg1648Cys、Leu1649Gln、Leu1670Trp、Gly1674ArgおよびAsp1866Tyrのうち1つ、(b)既知の劣性遺伝病の場合にはホモ接合性である、てんかんを引き起こす別の遺伝子における既知の病原性突然変異、(c)維持処置としてのナトリウムチャネル遮断薬および抗凝固剤を用いて現在処置されており、ナトリウムチャネル遮断薬は、フェニトイン、カルバマゼピン、オキシカルバゼピン、ラモトリジン、ラコサミドまたはルフィナミドであり、抗凝固剤は、アスピリンではないこと、(d)てんかん以外の臨床的に著しく不安定な医学的状態、(e)てんかん以外の、投与前4週間における臨床的に関連する症状または臨床的に重大な疾病、(f)てんかん、ドラベ症候群以外の脳もしくは脊髄の疾患の病歴または細菌性髄膜炎もしくは脳奇形の病歴、(g)脊柱変形、または脳脊髄液(CSF)の自由な流れを変更するもしくはCSFドレナージシャントが埋め込まれている他の状態、(h)投与前の臨床的に重大な異常な臨床検査値、(i)正常の上限の2.5倍を超えるアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼもしくはアラニンアミノトランスフェラーゼ、正常の上限を超える血清クレアチニンまたは正常の下限未満の血小板数、(j)投与前に測定された12誘導心電図(ECG)における臨床的に関連する異常、(k)精神障害または行動障害、ならびに(l)現在または過去4週間における、アスピリンではない抗凝固剤の投薬のうち8つ以上を有しないことを特徴とする。一部の実施形態では、対象はさらに、以下:(a)SCN1A遺伝子における以下の突然変異:Thr226Met、Leu263Val、Val422Leu、Thr1174Ser、Trp1204Arg、Pro1345Ser、Gln1489Lys、Phe1499Leu、Arg1575Cys、Val1611Phe、Leu1624Pro、Arg1648Cys、Leu1649Gln、Leu1670Trp、Gly1674ArgおよびAsp1866Tyrのうち1つ、(b)既知の劣性遺伝病の場合にはホモ接合性である、てんかんを引き起こす別の遺伝子における既知の病原性突然変異、(c)維持処置としてのナトリウムチャネル遮断薬および抗凝固剤を用いて現在処置されており、ナトリウムチャネル遮断薬は、フェニトイン、カルバマゼピン、オキシカルバゼピン、ラモトリジン、ラコサミドまたはルフィナミドであり、抗凝固剤は、アスピリンではないこと、(d)てんかん以外の臨床的に著しく不安定な医学的状態、(e)てんかん以外の、投与前4週間における臨床的に関連する症状または臨床的に重大な疾病、(f)てんかん、ドラベ症候群以外の脳もしくは脊髄の疾患の病歴または細菌性髄膜炎もしくは脳奇形の病歴、(g)脊柱変形、または脳脊髄液(CSF)の自由な流れを変更するもしくはCSFドレナージシャントが埋め込まれている他の状態、(h)投与前の臨床的に重大な異常な臨床検査値、(i)正常の上限を超える2.5倍のアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼもしくはアラニンアミノトランスフェラーゼ、正常の上限を超える血清クレアチニンまたは正常の下限未満の血小板数、(j)投与前に測定された12誘導心電図(ECG)における臨床的に関連する異常、(k)精神障害または行動障害、ならびに(l)現在または過去4週間における、アスピリンではない抗凝固剤の投薬のうち9つ以上を有しないことを特徴とする。一部の実施形態では、対象はさらに、以下:(a)SCN1A遺伝子における以下の突然変異:Thr226Met、Leu263Val、Val422Leu、Thr1174Ser、Trp1204Arg、Pro1345Ser、Gln1489Lys、Phe1499Leu、Arg1575Cys、Val1611Phe、Leu1624Pro、Arg1648Cys、Leu1649Gln、Leu1670Trp、Gly1674ArgおよびAsp1866Tyrのうち1つ、(b)既知の劣性遺伝病の場合にはホモ接合性である、てんかんを引き起こす別の遺伝子における既知の病原性突然変異、(c)維持処置としてのナトリウムチャネル遮断薬および抗凝固剤を用いて現在処置されており、ナトリウムチャネル遮断薬は、フェニトイン、カルバマゼピン、オキシカルバゼピン、ラモトリジン、ラコサミドまたはルフィナミドであり、抗凝固剤は、アスピリンではないこと、(d)てんかん以外の臨床的に著しく不安定な医学的状態、(e)てんかん以外の、投与前4週間における臨床的に関連する症状または臨床的に重大な疾病、(f)てんかん、ドラベ症候群以外の脳もしくは脊髄の疾患の病歴または細菌性髄膜炎もしくは脳奇形の病歴、(g)脊柱変形、または脳脊髄液(CSF)の自由な流れを変更するもしくはCSFドレナージシャントが埋め込まれている他の状態、(h)投与前の臨床的に重大な異常な臨床検査値、(i)正常の上限を超える2.5倍のアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼもしくはアラニンアミノトランスフェラーゼ、正常の上限を超える血清クレアチニンまたは正常の下限未満の血小板数、(j)投与前に測定された12誘導心電図(ECG)における臨床的に関連する異常、(k)精神障害または行動障害、ならびに(l)現在または過去4週間における、アスピリンではない抗凝固剤の投薬のうち10以上を有しないことを特徴とする。一部の実施形態では、対象はさらに、以下:(a)SCN1A遺伝子における以下の突然変異:Thr226Met、Leu263Val、Val422Leu、Thr1174Ser、Trp1204Arg、Pro1345Ser、Gln1489Lys、Phe1499Leu、Arg1575Cys、Val1611Phe、Leu1624Pro、Arg1648Cys、Leu1649Gln、Leu1670Trp、Gly1674ArgおよびAsp1866Tyrのうち1つ、(b)既知の劣性遺伝病の場合にはホモ接合性である、てんかんを引き起こす別の遺伝子における既知の病原性突然変異、(c)維持処置としてのナトリウムチャネル遮断薬および抗凝固剤を用いて現在処置されており、ナトリウムチャネル遮断薬は、フェニトイン、カルバマゼピン、オキシカルバゼピン、ラモトリジン、ラコサミドまたはルフィナミドであり、抗凝固剤は、アスピリンではないこと、(d)てんかん以外の臨床的に著しく不安定な医学的状態、(e)てんかん以外の、投与前4週間における臨床的に関連する症状または臨床的に重大な疾病、(f)てんかん、ドラベ症候群以外の脳もしくは脊髄の疾患の病歴または細菌性髄膜炎もしくは脳奇形の病歴、(g)脊柱変形、または脳脊髄液(CSF)の自由な流れを変更するもしくはCSFドレナージシャントが埋め込まれている他の状態、(h)投与前の臨床的に重大な異常な臨床検査値、(i)正常の上限を超える2.5倍のアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼもしくはアラニンアミノトランスフェラーゼ、正常の上限を超える血清クレアチニンまたは正常の下限未満の血小板数、(j)投与前に測定された12誘導心電図(ECG)における臨床的に関連する異常、(k)精神障害または行動障害、ならびに(l)現在または過去4週間における、アスピリンではない抗凝固剤の投薬のうち11以上を有しないことを特徴とする。一部の実施形態では、対象はさらに、以下:(a)SCN1A遺伝子における以下の突然変異:Thr226Met、Leu263Val、Val422Leu、Thr1174Ser、Trp1204Arg、Pro1345Ser、Gln1489Lys、Phe1499Leu、Arg1575Cys、Val1611Phe、Leu1624Pro、Arg1648Cys、Leu1649Gln、Leu1670Trp、Gly1674ArgおよびAsp1866Tyrのうち1つ、(b)既知の劣性遺伝病の場合にはホモ接合性である、てんかんを引き起こす別の遺伝子における既知の病原性突然変異、(c)維持処置としてのナトリウムチャネル遮断薬および抗凝固剤を用いて現在処置されており、ナトリウムチャネル遮断薬は、フェニトイン、カルバマゼピン、オキシカルバゼピン、ラモトリジン、ラコサミドまたはルフィナミドであり、抗凝固剤は、アスピリンではないこと、(d)てんかん以外の臨床的に著しく不安定な医学的状態、(e)てんかん以外の、投与前4週間における臨床的に関連する症状または臨床的に重大な疾
病、(f)てんかん、ドラベ症候群以外の脳もしくは脊髄の疾患の病歴または細菌性髄膜炎もしくは脳奇形の病歴、(g)脊柱変形、または脳脊髄液(CSF)の自由な流れを変更するもしくはCSFドレナージシャントが埋め込まれている他の状態、(h)投与前の臨床的に重大な異常な臨床検査値、(i)正常の上限の2.5倍を超えるアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼもしくはアラニンアミノトランスフェラーゼ、正常の上限を超える血清クレアチニンまたは正常の下限未満の血小板数、(j)投与前に測定された12誘導心電図(ECG)における臨床的に関連する異常、(k)精神障害または行動障害、ならびに(l)現在または過去4週間における、アスピリンではない抗凝固剤の投薬のうち全てを有しないことを特徴とする。
[0231]一部の実施形態では、対象はさらに、てんかんを引き起こす別の遺伝子における既知病原性突然変異を有しないことを特徴とする。一部の実施形態では、対象はさらに、てんかん以外の、過去4週間における臨床的に関連する症状または臨床的に重大な疾病を有していないことを特徴とする。一部の実施形態では、対象はさらに、機能獲得を引き起こすと実証されたSCN1A遺伝子の特定の(pecific)突然変異を有しないことを特徴とする。一部の実施形態では、対象はさらに、主にナトリウムチャネル遮断薬として作用する抗てんかん薬を用いて現在処置されていないことを特徴とする。一部の実施形態では、対象は、てんかん以外の臨床的に著しく不安定な医学的状態(複数可)を有しないことを特徴とする。
[0232]一部の実施形態では、対象は、小児てんかん、てんかん性脳症、難治性ミオクローヌス性てんかんまたは乳児期における重症ミオクローヌス性てんかんを有する。一部の実施形態では、対象は、ミオクローヌス性てんかん、全身性てんかん、てんかん、脳疾患、中枢神経系疾患、神経系疾患またはてんかん症候群を有する。一部の実施形態では、本明細書に記載される処置方法は、疾患または状態を処置するまたはそれを発症する可能性を低減する方法を含み、疾患または状態は、小児てんかん、てんかん性脳症、難治性ミオクローヌス性てんかんまたは乳児期における重症ミオクローヌス性てんかんである。一部の実施形態では、本明細書に記載される処置方法は、疾患または状態を処置するまたはそれを発症する可能性を低減する方法を含み、疾患または状態は、ミオクローヌス性てんかん、全身性てんかん、てんかん、脳疾患、中枢神経系疾患、神経系疾患またはてんかん症候群である。一部の実施形態では、対象は、現在の抗てんかん薬(AED)レジメンによって管理されない発作を有する。一部の実施形態では、AEDレジメンは、クロバザム、カンナビジオール、レベチラセタム、スチリペントールまたはバルプロ酸/バルプロエートを含む。
[0233]「磁気共鳴画像法病変」という用語は、本明細書で使用される場合、磁気共鳴画像法によって引き起こされる、生物の組織における任意の損傷または異常な変化を指す。「磁気共鳴画像法」という用語は、本明細書で使用される場合、強力磁場中に置かれた場合の高周波数電波に対する身体組織の原子核の応答を測定し、内臓の画像を生成する医用画像法の形態を指す。
[0234]「ケトン食療法」という用語は、本明細書で使用される場合、例えば、小児において難治性てんかんを処置するために薬において使用される、高脂肪、適切なタンパク質、低炭水化物の食事療法を指す。この食事療法は、身体に炭水化物ではなく脂肪を燃焼させる。
[0235]「迷走神経刺激剤」または「迷走神経刺激(VNS)」という用語は、本明細書で使用される場合、迷走神経に電気インパルスを送達するステップを含む医学的処置を指す。例えば、難治性てんかんおよび治療抵抗性鬱病のある特定の種類のための付加型の処置として使用される。
[0236]「カンナビノイド」という用語は、本明細書で使用される場合、大麻において見られる化学物質を指す。例示的カンナビノイドとして、それだけには限らないが、フィトカンナビノイドテトラヒドロカンナビノール(THC)(Delta9-THCまたはDelta8-THC)およびカンナビジオール(CBD)が挙げられる。カンナビノイドは、本明細書で使用される場合、天然物質である場合も、合成化学物質であり場合もある。
[0237]「マリファナ」または「大麻」という用語は、本明細書で使用される場合、医学的または娯楽的目的のために主に使用される大麻植物に由来する向精神薬を指す。大麻の例示的な主向精神成分は、テトラヒドロカンナビノール(THC)である。
[0238]「ナトリウムチャネル遮断薬」という用語は、本明細書で使用される場合、ナトリウムチャネルを通るナトリウムイオン(Na+)の伝導を損なう薬物を指す。ナトリウムチャネル遮断薬の例として、それだけには限らないが、アルカロイド(例えば、サキシトキシン、ネオサキシトキシン、テトロドトキシン)、局所麻酔薬(例えば、リドカイン)、抗けいれん薬(例えば、フェニトイン、オキシカルバゼピン(カルバマゼピンの誘導体))、およびクラスIa(例えば、キニジン、プロカインアミドおよびジソピラミド)、クラスIb(例えば、リドカイン、メキシレチン、トカイニドおよびフェニトイン)およびクラスIc(例えば、エンカイニド、フレカイニド、モリシジンおよびプロパフェノン)抗不整脈剤が挙げられる。
[0239]「脳脊髄液(CSF)」という用語は、本明細書で使用される場合、脳および脊髄において見られる透明な、無色の体液を指す。CSFは、例えば、頭蓋の内側の脳に基本的な機械的および免疫学的保護を提供するクッションまたは緩衝液として作用し、脳血流の脳の自己調節において重要な機能を果たす。「人工脳脊髄液(aCSF)」という用語は、本明細書で使用される場合、中枢神経系(CNS)への薬剤の投与のためのビヒクル溶液としてよく使用される生物学的緩衝溶液を指す。aCSFは、例えば、内因性CSFの電解質濃度および生理学的適合性と厳密に一致し、ホメオスタシス、浸透圧およびpHを生理学的レベルで維持することによって神経組織の生命維持環境を可能にする。
[0240]「CSFドレナージシャント」という用語は、本明細書で使用される場合、循環プロセスの一部として、過剰の流体を脳から流体が吸収される身体の別の部分へ排出するシステムを指す。CSFシャントは、例えば、水頭症を処置するために使用される。
[0241]「心電図(EKGまたはECG)」という用語は、本明細書で使用される場合、心拍の電気的活動を測定する、例えば、電圧対心臓の電気的活動の時間のグラフを生成する試験を指す。各拍動ごとに、電気インパルス(または「波」)が心臓を伝わる。
[0242]「アスパラギン酸トランスアミナーゼ(AST)」は、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ、AspAT/ASAT/AATまたは(血清)グルタミン酸オキサロ酢酸トランスアミナーゼ(GOT、SGOT)としても知られ、本明細書で使用される場合、ピリドキサールリン酸(PLP)依存性トランスアミナーゼ酵素(EC 2.6.1.1)を指す。ASTは、AST活性(例えば、ASTと比較して少なくとも50%、80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%以内の活性)を維持する、ASTタンパク質またはそのバリアントまたは相同体の組換えまたは天然に存在する形態のいずれをも含む。例示的AST活性には、それだけには限らないが、例えば、アスパラギン酸とグルタミン酸の間でα-アミノ基の可逆的転移を触媒することによって、およびそれ自体としてアミノ酸代謝において役割を果たすことが含まれる。一部の態様では、バリアントまたは相同体は、天然に存在するASTタンパク質と比較して、配列全体または配列の部分(例えば、50、100、150または200個の連続アミノ酸部分)にわたって少なくとも80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%のアミノ酸配列同一性を有する。一部の実施形態では、ASTタンパク質は、UniProt参照番号P17174によって同定されるタンパク質またはそれに対して実質的な同一性を有するバリアントまたは相同体に対して実質的に同一である。一部の実施形態では、ASTタンパク質は、UniProt参照番号P00505によって同定されるタンパク質またはそれに対して実質的な同一性を有するバリアントまたは相同体に対して実質的に同一である。
[0243]「アラニントランスアミナーゼ(ALT)」は、アラニンアミノトランスフェラーゼ(ALAT)、血清グルタミン酸-ピルビン酸トランスアミナーゼ(SGPT)または血清グルタミン酸-ピルビン酸トランスアミナーゼ(SGPT)としても知られ、本明細書で使用される場合、トランスアミナーゼ酵素(EC 2.6.1.2)を指す。ALTは、ALT活性(例えば、ALTと比較して少なくとも50%、80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%以内の活性)を維持する、ALTタンパク質またはそのバリアントまたは相同体の組換えまたは天然に存在する形態のいずれをも含む。例示的ALT活性には、それだけには限らないが、アラニンサイクルの2つの部分を触媒することが含まれる。一部の態様では、バリアントまたは相同体は、天然に存在するALTタンパク質と比較して、配列全体または配列の部分(例えば、50、100、150または200個の連続アミノ酸部分)にわたって少なくとも80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%のアミノ酸配列同一性を有する。一部の実施形態では、ALTタンパク質は、UniProt参照番号P24298によって同定されるタンパク質またはそれに対して実質的な同一性を有するバリアントまたは相同体に対して実質的に同一である。
[0244]一部の実施形態では、血清ASTレベル、血清ALTレベルおよびそれらの比(AST/ALT比)は、肝臓の健康のバイオマーカーとして臨床的に測定される。
[0245]「臨床検査値(laboratory vale)」という用語は、本明細書で使用される場合、臨床検査または測定によって得られた値を指す。例示的な、限定されない臨床検査または測定は、血液学、血液凝固、臨床化学、血漿、尿検査、血清、血清または尿妊娠、尿または脳脊髄液と関連する場合がある。
[0245]「臨床検査値(laboratory vale)」という用語は、本明細書で使用される場合、臨床検査または測定によって得られた値を指す。例示的な、限定されない臨床検査または測定は、血液学、血液凝固、臨床化学、血漿、尿検査、血清、血清または尿妊娠、尿または脳脊髄液と関連する場合がある。
治療スケジュール
[0246]一部の実施形態では、第1の用量は、単回用量である。一部の実施形態では、第1の用量は、複数回の用量の最初である。一部の実施形態では、方法は、医薬組成物の耐容性または有効性を評価するステップをさらに含む。
[0246]一部の実施形態では、第1の用量は、単回用量である。一部の実施形態では、第1の用量は、複数回の用量の最初である。一部の実施形態では、方法は、医薬組成物の耐容性または有効性を評価するステップをさらに含む。
[0247]一部の実施形態では、本明細書に記載される方法は、ヒト対象に、0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195または200mgの後続の用量で本明細書に記載されるASOを含む医薬組成物を投与するステップをさらに含む。
[0248]一部の実施形態では、本明細書に記載される方法は、ヒト対象に、約0.1~約1000mg、約0.2~約1000mg、約0.3~約1000mg、約0.4~約1000mg、約0.5~約1000mg、約0.6~約1000mg、約0.7~約1000mg、約0.8~約1000mg、約0.9~約1000mg、1~約1000mg、約2~約1000mg、約3~約1000mg、約4~約1000mg、約5~約1000mg、約6~約1000mg、約7~約1000mg、約8~約1000mg、約9~約1000mg、約10~約1000mg、約15~約1000mg、約20~約1000mg、約25~約1000mg、約30~約1000mg、約35~約1000mg、約40~約1000mg、約45~約1000mg、約50~約1000mg、約55~約1000mg、約60~約1000mg、約65~約1000mg、約70~約1000mg、約75~約1000mg、約80~約1000mg、約85~約1000mg、約90~約1000mg、約95~約1000mg、約100~約1000mg、約150~約1000mg、約200~約1000mg、約250~約1000mg、約300~約1000mg、約350~約1000mg、約400~約1000mg、約450~約1000mg、約500~約1000mg、約550~約1000mg、約600~約1000mg、約650~約1000mg、約700~約1000mg、約750~約1000mg、約800~約1000mg、約850~約1000mg、約900~約1000mgまたは約950~約1000mgの後続の用量で本明細書に記載されるASOを含む医薬組成物を投与するステップをさらに含む。
[0249]一部の実施形態では、本明細書に記載される方法は、ヒト対象に、0.1~1000mg、0.2~1000mg、0.3~1000mg、0.4~1000mg、0.5~1000mg、0.6~1000mg、0.7~1000mg、0.8~1000mg、0.9~1000mg、1~1000mg、2~1000mg、3~1000mg、4~1000mg、5~1000mg、6~1000mg、7~1000mg、8~1000mg、9~1000mg、10~1000mg、15~1000mg、20~1000mg、25~1000mg、30~1000mg、35~1000mg、40~1000mg、45~1000mg、50~1000mg、55~1000mg、60~1000mg、65~1000mg、70~1000mg、75~1000mg、80~1000mg、85~1000mg、90~1000mg、95~1000mg、100~1000mg、150~1000mg、200~1000mg、250~1000mg、300~1000mg、350~1000mg、400~1000mg、450~1000mg、500~1000mg、550~1000mg、600~1000mg、650~1000mg、700~1000mg、750~1000mg、800~1000mg、850~1000mg、900~1000mgまたは950~1000mgの後続の用量で本明細書に記載されるASOを含む医薬組成物を投与するステップをさらに含む。
[0250]一部の実施形態では、本明細書に記載される方法は、ヒト対象に、約0.1~約950mg、約0.1~約900mg、約0.1~約850mg、約0.1~約800mg、約0.1~約750mg、約0.1~約700mg、約0.1~約650mg、約0.1~約600mg、約0.1~約550mg、約0.1~約500mg、約0.1~約450mg、約0.1~約400mg、約0.1~約350mg、約0.1~約300mg、約0.1~約250mg、約0.1~約200mg、約0.1~約150mg、約0.1~約100mg、約0.1~約95mg、約0.1~約90mg、約0.1~約85mg、約0.1~約80mg、約0.1~約75mg、約0.1~約70mg、約0.1~約65mg、約0.1~約60mg、約0.1~約55mg、約0.1~約50mg、約0.1~約45mg、約0.1~約40mg、約0.1~約35mg、約0.1~約30mg、約0.1~約mg、約0.1~約25mg、約0.1~約20mg、約0.1~約10mg、約0.1~約9mg、約0.1~約8mg、約0.1~約7mg、約0.1~約6mg、約0.1~約5mg、約0.1~約4mg、約0.1~約3、約0.1~約2mg、約0.1~約1mg、約0.1~約0.9mg、約0.1~約0.8mg、約0.1~約0.7mg、約0.1~約0.6mg、約0.1~約0.5mg、約0.1~約0.4mg、約0.1~約0.3または約0.1~約0.2mgの後続の用量で本明細書に記載されるASOを含む医薬組成物を投与するステップをさらに含む。
[0251]一部の実施形態では、本明細書に記載される方法は、ヒト対象に、0.1~950mg、0.1~900mg、0.1~850mg、0.1~800mg、0.1~750mg、0.1~700mg、0.1~650mg、0.1~600mg、0.1~550mg、0.1~500mg、0.1~450mg、0.1~400mg、0.1~350mg、0.1~300mg、0.1~250mg、0.1~200mg、0.1~150mg、0.1~100mg、0.1~95mg、0.1~90mg、0.1~85mg、0.1~80mg、0.1~75mg、0.1~70mg、0.1~65mg、0.1~60mg、0.1~55mg、0.1~50mg、0.1~45mg、0.1~40mg、0.1~35mg、0.1~30mg、0.1~ mg、0.1~25mg、0.1~20mg、0.1~10mg、0.1~9mg、0.1~8mg、0.1~7mg、0.1~6mg、0.1~5mg、0.1~4mg、0.1~3、0.1~2mg、0.1~1mg、0.1~0.9mg、0.1~0.8mg、0.1~0.7mg、0.1~0.6mg、0.1~0.5mg、0.1~0.4mg、0.1~0.3または0.1~0.2mgの後続の用量で本明細書に記載されるASOを含む医薬組成物を投与するステップをさらに含む。
[0252]一部の実施形態では、本明細書に記載される方法は、ヒト対象に、約1~約400mg、約2~約400mg、約3~約400mg、約4~約400mg、約5~約400mg、約6~約400mg、約7~約400mg、約8~約400mg、約9~約400mg、約10~約400mg、約20~約400mg、約30~約400mg、約40~約400mg、約50~約400mg、約60~約400mg、約70~約400mg、約80~約400mg、約90~約400mg、約100~約400mg、約110~約400mg、約120~約400mg、約130~約400mg、約140~約400mg、約150~約400mg、約160~約400mg、約170~約400mg、約180~約400mg、約190~約400mg、約200~約400mg、約210~約400mg、約220~約400mg、約230~約400mg、約240~約400mg、約250~約400mg、約260~約400mg、約270~約400mg、約280~約400mg、約290~約400mg、約300~約400mg、約310~約400mg、約320~約400mg、約330~約400mg、約340~約400mg、約350~約400mg、約360~約400mg、約370~約400mg、約380~約400mgまたは約390~約400mgの後続の用量で本明細書に記載されるASOを含む医薬組成物を投与するステップをさらに含む。
[0253]一部の実施形態では、本明細書に記載される方法は、ヒト対象に、1~400mg、2~400mg、3~400mg、4~400mg、5~400mg、6~400mg、7~400mg、8~400mg、9~400mg、10~400mg、20~400mg、30~400mg、40~400mg、50~400mg、60~400mg、70~400mg、80~400mg、90~400mg、100~400mg、110~400mg、120~400mg、130~400mg、約140~400mg、150~400mg、約160~400mg、170~400mg、180~400mg、190~400mg、200~400mg、210~400mg、220~400mg、230~400mg、240~400mg、250~400mg、260~400mg、270~400mg、280~400mg、290~400mg、300~400mg、310~400mg、320~400mg、330~400mg、340~400mg、350~400mg、360~400mg、370~400mg、380~400mgまたは390~400mgの後続の用量で本明細書に記載されるASOを含む医薬組成物を投与するステップをさらに含む。
[0254]一部の実施形態では、本明細書に記載される方法は、ヒト対象に、約10~約390mg、約10~約380mg、約10~約370mg、約10~約360mg、約10~約350mg、約10~約340mg、約10~約330mg、約10~約320mg、約10~約310mg、約10~約300mg、約10~約290mg、約10~約280mg、約10~約270mg、約10~約260mg、約10~約250mg、約10~約240mg、約10~約230mg、約10~約220mg、約10~約210mg、約10~約200mg、約10~約190mg、約10~約180mg、約10~約170mg、約10~約160mg、約10~約150mg、約10~約140mg、約10~約130mg、約10~約120mg、約10~約110mg、約10~約90mg、約10~約80mg、約10~約70mg、約10~約60mg、約10~約50mg、約10~約40mg、約10~約30mgまたは約10~約20mgの後続の用量で本明細書に記載されるASOを含む医薬組成物を投与するステップをさらに含む。
[0255]一部の実施形態では、本明細書に記載される方法は、ヒト対象に、10~390mg、10~380mg、10~370mg、10~360mg、10~350mg、10~340mg、10~330mg、10~320mg、10~310mg、10~300mg、10~290mg、10~280mg、10~270mg、10~260mg、10~250mg、10~240mg、10~230mg、10~220mg、10~210mg、10~200mg、10~190mg、10~180mg、10~170mg、10~160mg、10~150mg、10~140mg、10~130mg、10~120mg、10~110mg、10~90mg、10~80mg、10~70mg、10~60mg、10~50mg、10~40mg、10~30mgまたは10~20mgの後続の用量で本明細書に記載されるASOを含む医薬組成物を投与するステップをさらに含む。
[0256]一部の実施形態では、本明細書に記載される方法は、ヒト対象に、約1mg、約2mg、約3mg、約4mg、約5mg、約6mg、約7mg、約8mg、約9mg、約10mg、約11mg、約12mg、約13mg、約14mg、約15mg、約16mg、約17mg、約18mg、約19mg、約20mg、約21mg、約22mg、約23mg、約24mg、約25mg、約26mg、約27mg、約28mg、約29mg、約30mg、約31mg、約32mg、約33mg、約34mg、約35mg、約36mg、約37mg、約38mg、約39mg、約40mg、約41mg、約42mg、約43mg、約44mg、約45mg、約46mg、約47mg、約48mg、約49mg、約50mg、約51mg、約52mg、約53mg、約54mg、約55mg、約56mg、約57mg、約58mg、約59mg、約60mg、約61mg、約62mg、約63mg、約64mg、約65mg、約66mg、約67mg、約68mg、約69mg、約70mg、約71mg、約72mg、約73mg、約74mg、約75mg、約76mg、約77mg、約78mg、約79mg、約80mg、約81mg、約82mg、約83mg、約84mg、約85mg、約86mg、約87mg、約88mg、約89mg、約90mg、約91mg、約92mg、約93mg、約94mg、約95mg、約96mg、約97mg、約98mg、約99mg、約100mg、約101mg、約102mg、約103mg、約104mg、約105mg、約106mg、約107mg、約108mg、約109mg、約110mg、約111mg、約112mg、約113mg、約114mg、約115mg、約116mg、約117mg、約118mg、約119mg、約120mg、約121mg、約122mg、約123mg、約124mg、約125mg、約126mg、約127mg、約128mg、約129mg、約130mg、約131mg、約132mg、約133mg、約134mg、約135mg、約136mg、約137mg、約138mg、約139mg、約140mg、約141mg、約142mg、約143mg、約144mg、約145mg、約146mg、約147mg、約148mg、約149mg、約150mg、約151mg、約152mg、約153mg、約154mg、約155mg、約156mg、約157mg、約158mg、約159mg、約160mg、約161mg、約162mg、約163mg、約164mg、約165mg、約166mg、約167mg、約168mg、約169mg、約170mg、約171mg、約172mg、約173mg、約174mg、約175mg、約176mg、約177mg、約178mg、約179mg、約180mg、約181mg、約182mg、約183mg、約184mg、約185mg、約186mg、約187mg、約188mg、約189mg、約190mg、約191mg、約192mg、約193mg、約194mg、約195mg、約196mg、約197mg、約198mg、約199mg、約200mg、約201mg、約202mg、約203mg、約204mg、約205mg、約206mg、約207mg、約208mg、約209mg、約210mg、約211mg、約212mg、約213mg、約214mg、約215mg、約216mg、約217mg、約218mg、約219mg、約220mg、約221mg、約222mg、約223mg、約224mg、約225mg、約226mg、約227mg、約228mg、約229mg、約230mg、約231mg、約232mg、約233mg、約234mg、約235mg、約236mg、約237mg、約238mg、約239mg、約240mg、約241mg、約242mg、約243mg、約244mg、約245mg、約246mg、約247mg、約248mg、約249mg、約250mg、約251mg、約252mg、約253mg、約254mg、約255mg、約256mg、約257mg、約258mg、約259mg、約260mg、約261mg、約262mg、約263mg、約264mg、約265mg、約266mg、約267mg、約268mg、約269mg、約270mg、約271mg、約272mg、約273mg、約274mg、約275mg、約276mg、約277mg、約278mg、約279mg、約280mg、約281mg、約282mg、約283mg、約284mg、約285mg、約286mg、約287mg、約288mg、約289mg、約290mg、約291mg、約292mg、約293mg、約294mg、約295mg、約296mg、約297mg、約298mg、約299mg、約300mg、約301mg、約302mg、約303mg、約304mg、約305mg、約306mg、約307mg、約308mg、約309mg、約310mg、約311mg、約312mg、約313mg、約314mg、約315mg、約316mg、約317mg、約318mg、約319mg、約320mg、約321mg、約322mg、約323mg、約324mg、約325mg、約326mg、約327mg、約328mg、約329mg、約330mg、約331mg、約332mg、約333mg、約334mg、約335mg、約336mg、約337mg、約338mg、約339mg、約340mg、約341mg、約342mg、約343mg、約344mg、約345mg、約346mg、約347mg、約348mg、約349mg、約350mg、約351mg、約352mg、約353mg、約354mg、約355mg、約356mg、約357mg、約358mg、約359mg、約360mg、約361mg、約362mg、約363mg、約364mg、約365mg、約366mg、約367mg、約368mg、約369mg、約370mg、約371mg、約372mg、約373mg、約374mg、約375mg、約376mg、約377mg、約378mg、約379mg、約380mg、約381mg、約382mg、約383mg、約384mg、約385mg、約386mg、約387mg、約388mg、約389mg、約390mg、約391mg、約392mg、約393mg、約394mg、約395mg、約396mg、約397mg、約398mg、約399mgまたは400mgの後続の用量で本明細書に記載されるASOを含む医薬組成物を投与するステップをさらに含む。
[0257]一部の実施形態では、本明細書に記載される方法は、ヒト対象に、1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、6mg、7mg、8mg、9mg、10mg、11mg、12mg、13mg、14mg、15mg、16mg、17mg、18mg、19mg、20mg、21mg、22mg、23mg、24mg、25mg、26mg、27mg、28mg、29mg、30mg、31mg、32mg、33mg、34mg、35mg、36mg、37mg、38mg、39mg、40mg、41mg、42mg、43mg、44mg、45mg、46mg、47mg、48mg、49mg、50mg、51mg、52mg、53mg、54mg、55mg、56mg、57mg、58mg、59mg、60mg、61mg、62mg、63mg、64mg、65mg、66mg、67mg、68mg、69mg、70mg、71mg、72mg、73mg、74mg、75mg、76mg、77mg、78mg、79mg、80mg、81mg、82mg、83mg、84mg、85mg、86mg、87mg、88mg、89mg、90mg、91mg、92mg、93mg、94mg、95mg、96mg、97mg、98mg、99mg、100mg、101mg、102mg、103mg、104mg、105mg、106mg、107mg、108mg、109mg、110mg、111mg、112mg、113mg、114mg、115mg、116mg、117mg、118mg、119mg、120mg、121mg、122mg、123mg、124mg、125mg、126mg、127mg、128mg、129mg、130mg、131mg、132mg、133mg、134mg、135mg、136mg、137mg、138mg、139mg、140mg、141mg、142mg、143mg、144mg、145mg、146mg、147mg、148mg、149mg、150mg、151mg、152mg、153mg、154mg、155mg、156mg、157mg、158mg、159mg、160mg、161mg、162mg、163mg、164mg、165mg、166mg、167mg、168mg、169mg、170mg、171mg、172mg、173mg、174mg、175mg、176mg、177mg、178mg、179mg、180mg、181mg、182mg、183mg、184mg、185mg、186mg、187mg、188mg、189mg、190mg、191mg、192mg、193mg、194mg、195mg、196mg、197mg、198mg、199mg、200mg、201mg、202mg、203mg、204mg、205mg、206mg、207mg、208mg、209mg、210mg、211mg、212mg、213mg、214mg、215mg、216mg、217mg、218mg、219mg、220mg、221mg、222mg、223mg、224mg、225mg、226mg、227mg、228mg、229mg、230mg、231mg、232mg、233mg、234mg、235mg、236mg、237mg、238mg、239mg、240mg、241mg、242mg、243mg、244mg、245mg、246mg、247mg、248mg、249mg、250mg、251mg、252mg、253mg、254mg、255mg、256mg、257mg、258mg、259mg、260mg、261mg、262mg、263mg、264mg、265mg、266mg、267mg、268mg、269mg、270mg、271mg、272mg、273mg、274mg、275mg、276mg、277mg、278mg、279mg、280mg、281mg、282mg、283mg、284mg、285mg、286mg、287mg、288mg、289mg、290mg、291mg、292mg、293mg、294mg、295mg、296mg、297mg、298mg、299mg、300mg、301mg、302mg、303mg、304mg、305mg、306mg、307mg、308mg、309mg、310mg、311mg、312mg、313mg、314mg、315mg、316mg、317mg、318mg、319mg、320mg、321mg、322mg、323mg、324mg、325mg、326mg、327mg、328mg、329mg、330mg、331mg、332mg、333mg、334mg、335mg、336mg、337mg、338mg、339mg、340mg、341mg、342mg、343mg、344mg、345mg、346mg、347mg、348mg、349mg、350mg、351mg、352mg、353mg、354mg、355mg、356mg、357mg、358mg、359mg、360mg、361mg、362mg、363mg、364mg、365mg、366mg、367mg、368mg、369mg、370mg、371mg、372mg、373mg、374mg、375mg、376mg、377mg、378mg、379mg、380mg、381mg、382mg、383mg、384mg、385mg、386mg、387mg、388mg、389mg、390mg、391mg、392mg、393mg、394mg、395mg、396mg、397mg、398mg、399mgまたは400mgの後続の用量で本明細書に記載されるASOを含む医薬組成物を投与するステップをさらに含む。
[0258]一部の実施形態では、本明細書に記載される方法は、医薬組成物の耐容性または有効性を評価するステップをさらに含む。一部の実施形態では、以前の用量の投与に耐容性がないことが示された後、後続の用量は以前の用量よりも低い。一部の実施形態では、以前の用量の投与が有効であることが示された後、後続の用量は以前の用量と同じである。一部の実施形態では、以前の用量の投与が有効であることが示された後、後続の用量は以前の用量よりも低い。一部の実施形態では、以前の用量の投与が有効ではないことが示された後、後続の用量は以前の用量より高い。
[0259]一部の実施形態では、後続の用量は、以前の用量の投与の少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11または12ヶ月後に投与される。
[0260]一部の実施形態では、後続の用量は、以前の用量の投与の少なくとも以前の用量の投与の少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30時間後に投与される。一部の実施形態では、後続の用量は、以前の用量の投与の少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30日後に投与される。一部の実施形態では、後続の用量は、以前の用量の投与の少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35または36週間後に投与される。一部の実施形態では、後続の用量は、以前の用量の投与の少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35または36ヶ月後に投与される。一部の実施形態では、後続の用量は、以前の用量の投与の少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9または10年後に投与される。
[0260]一部の実施形態では、後続の用量は、以前の用量の投与の少なくとも以前の用量の投与の少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30時間後に投与される。一部の実施形態では、後続の用量は、以前の用量の投与の少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30日後に投与される。一部の実施形態では、後続の用量は、以前の用量の投与の少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35または36週間後に投与される。一部の実施形態では、後続の用量は、以前の用量の投与の少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35または36ヶ月後に投与される。一部の実施形態では、後続の用量は、以前の用量の投与の少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9または10年後に投与される。
[0261]一部の実施形態では、後続の用量は、同一間隔で投与される。例えば、後続の用量はどれも、以前の用量の投与の1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30時間後の間隔で投与される。一部の実施形態では、後続の用量はどれも、以前の用量の投与の1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30日後の間隔で投与される。一部の実施形態では、後続の用量はどれも、以前の用量の投与の1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35または36週間後の間隔で投与される。一部の実施形態では、後続の用量はどれも、以前の用量の投与の1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35または36ヶ月後の間隔で投与される。
[0262]一部の実施形態では、後続の用量は、異なる間隔で投与される。
[0263]一部の実施形態では、以前の用量が有効であることが示された後、投薬頻度が維持または低減される。一部の実施形態では、以前の用量が有効ではないことが示された後、投薬頻度が増大される。一部の実施形態では、方法は、少なくとも1つの追加の治療剤または療法を投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、少なくとも1つの追加の治療剤または療法が、用量と同時に投与される。一部の実施形態では、少なくとも1つの追加の治療剤または療法が、用量の投与の前に投与される。一部の実施形態では、少なくとも1つの追加の治療剤または療法が、用量の投与後に投与される。
[0263]一部の実施形態では、以前の用量が有効であることが示された後、投薬頻度が維持または低減される。一部の実施形態では、以前の用量が有効ではないことが示された後、投薬頻度が増大される。一部の実施形態では、方法は、少なくとも1つの追加の治療剤または療法を投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、少なくとも1つの追加の治療剤または療法が、用量と同時に投与される。一部の実施形態では、少なくとも1つの追加の治療剤または療法が、用量の投与の前に投与される。一部の実施形態では、少なくとも1つの追加の治療剤または療法が、用量の投与後に投与される。
ドラベ症候群および他の関連疾患
[0264]「状態」、「疾患」および「障害」という用語は、その最も広い意味で本明細書において同義的に使用され、感受性を含む。一部の実施形態では、疾患または状態は、ドラベ症候群である。一部の実施形態では、方法は、ヒト対象においてドラベ症候群の少なくとも1つの症状を低減または改善する。一部の実施形態では、ドラベ症候群の症状、発作である。一部の実施形態では、投与は、発作頻度、発作強度または発作持続期間を低減または改善する。
[0264]「状態」、「疾患」および「障害」という用語は、その最も広い意味で本明細書において同義的に使用され、感受性を含む。一部の実施形態では、疾患または状態は、ドラベ症候群である。一部の実施形態では、方法は、ヒト対象においてドラベ症候群の少なくとも1つの症状を低減または改善する。一部の実施形態では、ドラベ症候群の症状、発作である。一部の実施形態では、投与は、発作頻度、発作強度または発作持続期間を低減または改善する。
[0265]ドラベ症候群(DS)、別名、乳児期の重症ミオクローヌス性てんかん(SMEI)は、生後1年以内に症状が見つかるてんかん性脳症である。ドラベ症候群は、ますます認識されているてんかん性脳症であり、臨床診断は、患者のおよそ70~80%においてナトリウムチャネル遺伝子突然変異の所見によって支持されている。DSは、高い発作頻度および重症度、知的障害およびてんかんにおける予期せぬ突然死のハイリスクを特徴とする、重症の、進行性発達性およびてんかん性の脳症である。イオンチャネル遺伝子の突然変異が、さまざまなてんかん症候群の病態形成において大きな役割を果たし、その結果、いくつかのてんかんはチャネル病と見なされる。電位依存性ナトリウムチャネル(VGSC)は、ニューロンの興奮性において必須の役割を果たし、したがって、DSと関連する多数の突然変異が、VGSCサブユニットをコードする遺伝子において同定されていることは驚くべきことではない。疾患は、例えば、Mulleyら、2005年およびOMIM番号607208(Online Mendelian Inheritance in Man、Johns Hopkins University、1966~2015年)での疾患の説明によって記載されており、両方とも参照により本明細書に組み込まれる。
[0266]70%から80%の間の患者が、ナトリウムチャネルalサブユニット遺伝子(SCN1A)異常を保持し、短縮突然変異が約40%を占め、発作開始のより早い年齢と有意な相関を有する。シーケンシング突然変異は、症例の約70%において見られ、短縮(40%)およびミスセンス突然変異(40%)を含み、残りは、スプライス部位変化であった。ほとんどの突然変異は、de novoであるが、家族性突然変異が症例の5~10%において生じ、普通、本質的にミスセンスである。残りのSCN1A突然変異は、スプライス部位およびミスセンス突然変異を含み、そのほとんどは、ナトリウムチャネルの孔形成領域中に入る。現在、500を超える突然変異がDSに関連付けられており、遺伝子に沿って無作為に分布している(Mulleyら、Neurol.2006年、67巻、1094~1095頁)。
[0267]SCN1A遺伝子は、ヒト染色体2q24上のナトリウムチャネル遺伝子のクラスター中に位置し、ニューロン電位依存性ナトリウムチャネルのNaV1.1として知られるα-孔形成サブユニットをコードする。SCN1A遺伝子は、ゲノムDNAのおよそ100kbに広がり、26のエクソンを含む。NaV1.1タンパク質は、4つのドメインからなり、各々は、6つの膜貫通セグメントを有する。エクソン11中のドメイン1と2の間の細胞質ループ中の11個のアミノ酸の有無が異なる長いおよび短いアイソフォームをもたらす、2つのスプライスバリアントが同定されている(その全開示内容が参照により本明細書に組み込まれる、Millerら、1993~2015年およびMulleyら、2005年、25巻、535~542頁)。一部の態様では、バリアントまたは相同体は、天然に存在するSCN1A遺伝子と比較して、配列全体または配列の部分(例えば、50、100、150または200個の連続ヌクレオチド部分)にわたって少なくとも80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%のヌクレオチド配列同一性を有する。一部の実施形態では、SCN1A遺伝子は、Ensembl参照番号ENSG00000144285によって同定される遺伝子またはそれに対して実質的な同一性を有するバリアントまたは相同体に対して実質的に同一である。
[0268]SCN1A遺伝子における選択的スプライシング事象は、非生産的mRNA転写物につながる場合があり、順に、異常なタンパク質発現につながる場合があり、SCN1A遺伝子における選択的スプライシング事象を標的とできる治療剤は、DS患者において機能的タンパク質の発現レベルをモジュレートできる、および/または異常なタンパク質発現を阻害できる。このような治療剤は、NaV1.1タンパク質欠乏症によって引き起こされる状態を処置するために使用することができる。
[0269]非生産的mRNA転写物につながる場合がある選択的スプライシング事象のうち1つは、ナンセンス変異依存mRNA崩壊を誘導し得る、mRNA転写物中に余分なエクソンを含めることである。本開示は、タンパク質をコードする成熟mRNA、ひいては、翻訳された機能的NaV1.1タンパク質の生成を増大させるための、SCN1Aの選択的スプライシングをモジュレートする組成物および方法を提供する。これらの組成物および方法は、SCN1A プレmRNAのエクソンスキッピングを引き起こし得る、構成的スプライシングを促進し得るアンチセンスオリゴマー(ASO)を含む。種々の実施形態では、機能的NaV1.1タンパク質を、本開示の方法を使用して増大して、NaV1.1タンパク質欠乏症によって引き起こされる状態を処置することができる。
[0270]一部の場合には、疾患または状態はSMEBである。
[0271]一部の場合には、疾患または状態はGEFS+である。
[0272]一部の場合には、疾患または状態は、熱性発作(例えば、熱性発作、家族性、3A)である。
[0271]一部の場合には、疾患または状態はGEFS+である。
[0272]一部の場合には、疾患または状態は、熱性発作(例えば、熱性発作、家族性、3A)である。
[0273]一部の場合には、疾患または状態は、自閉症(自閉症スペクトラム障害またはASDとしても知られる)である。
[0274]一部の場合には、疾患または状態は、片頭痛(例えば、片頭痛、家族性片麻痺性、3)である。
[0274]一部の場合には、疾患または状態は、片頭痛(例えば、片頭痛、家族性片麻痺性、3)である。
[0275]一部の場合には、疾患または状態はアルツハイマー病である。
[0276]一部の実施形態では、疾患または状態はSMEBである。一部の実施形態では、疾患または状態はGEFS+である。一部の実施形態では、疾患または状態は、熱性発作(例えば、熱性発作、家族性、3A)である。一部の実施形態では、疾患または状態は、自閉症(自閉症スペクトラム障害またはASDとしても知られる)である。一部の実施形態では、疾患または状態は、片頭痛(例えば、片頭痛、家族性片麻痺性、3)である。一部の実施形態では、疾患または状態はアルツハイマー病である。一部の実施形態では、疾患または状態はSCN2A脳症である。一部の実施形態では、疾患または状態はSCN8A脳症である。一部の実施形態では、疾患または状態はSCN5A不整脈である。
[0276]一部の実施形態では、疾患または状態はSMEBである。一部の実施形態では、疾患または状態はGEFS+である。一部の実施形態では、疾患または状態は、熱性発作(例えば、熱性発作、家族性、3A)である。一部の実施形態では、疾患または状態は、自閉症(自閉症スペクトラム障害またはASDとしても知られる)である。一部の実施形態では、疾患または状態は、片頭痛(例えば、片頭痛、家族性片麻痺性、3)である。一部の実施形態では、疾患または状態はアルツハイマー病である。一部の実施形態では、疾患または状態はSCN2A脳症である。一部の実施形態では、疾患または状態はSCN8A脳症である。一部の実施形態では、疾患または状態はSCN5A不整脈である。
[0277]一部の実施形態では、疾患または状態は、NaV1.1(SCN1A遺伝子によってコードされるタンパク質)中の突然変異によって誘導される。「NaV1.1」は、ナトリウムチャネル、電位依存性、I型、アルファサブユニット(SCN1A)としても知られ、本明細書で使用される場合、ヒトにおいて、SCN1A遺伝子によってコードされるタンパク質を指す。NaV1.1は、NaV1.1活性(例えば、NaV1.1と比較して少なくとも50%、80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%以内の活性)を維持する、NaV1.1タンパク質またはそのバリアントまたは相同体の組換えまたは天然に存在する形態のいずれをも含む。一部の態様では、バリアントまたは相同体は、天然に存在するNaV1.1タンパク質と比較して、配列全体または配列の部分(例えば、50、100、150または200個の連続アミノ酸部分)にわたって少なくとも80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%のアミノ酸配列同一性を有する。一部の実施形態では、NaV1.1タンパク質は、UniProt参照番号P35498によって同定されるタンパク質またはそれに対して実質的な同一性を有するバリアントまたは相同体に対して実質的に同一である。
[0278]一部の例では、突然変異は、NaV1.1中の機能喪失型突然変異である。一部の場合には、NaV1.1中の機能喪失型突然変異は、野生型NaV1.1の機能に対して、NaV1.1の機能を減少するまたは損なう(例えば、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%またはそれ以上)1つまたは複数の突然変異を含む。一部の場合には、NaV1.1中の機能喪失型突然変異は、疾患表現型をもたらす1つまたは複数の突然変異を含む。例示的機能喪失型突然変異として、それだけには限らないが、R859C、T875M、V1353L、I1656M、R1657C、A1685V、M1841TおよびR1916Gが挙げられる。
[0279]他の例では、突然変異は、NaV1.1中の機能獲得型突然変異である。このような場合には、機能獲得型突然変異は、野生型NaV1.1の機能に対して、NaV1.1の活性化を延長する(例えば、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%またはそれ以上)1つまたは複数の突然変異を含む。このような場合には、NaV1.1中の機能獲得型突然変異は、疾患表現型をもたらす1つまたは複数の突然変異を含む。例示的機能獲得型突然変異として、それだけには限らないが、D188V、W1204R、R1648HおよびD1866Yが挙げられる。
[0280]一部の実施形態では、疾患または状態は脳症である。一部の場合には、脳症は、NaV1.1中の機能喪失型突然変異によって誘導される。
[0281]一部の実施形態では、脳症は、てんかん性脳症である。例示的てんかん性脳症として、それだけには限らないが、ドラベ症候群(DS)(乳児期の重症ミオクローヌス性てんかんまたはSMEIとしても知られる)、乳児期の重症ミオクローヌス性てんかん(SMEI)-境界型(SMEB)、熱性発作(FS)、全身性の熱性発作プラスのてんかん(GEFS+)、てんかん性脳症、早期乳児、13、原因不明性全身性てんかん、原因不明性焦点性てんかん、ミオクローヌス性-失立てんかん、レノックス・ガストー症候群、ウエスト症候群、特発性れん縮、早期ミオクローヌス性脳症、進行性ミオクローヌス性てんかん、小児の交代性片麻痺、未分類てんかん性脳症、てんかんにおける予期せぬ突然死(SUDEP)、早期乳児SCN1A脳症、早期乳児てんかん性脳症(EIEE)、自閉症、遊走性焦点発作を伴う乳児てんかんまたは洞不全症候群1が挙げられる。一部の実施形態では、疾患または状態は、任意選択で、ドラベ症候群(DS)(乳児期の重症ミオクローヌス性てんかんまたはSMEIとしても知られる)、乳児期の重症ミオクローヌス性てんかん(SMEI)-境界型(SMEB)、熱性発作(FS)、全身性の熱性発作プラスのてんかん(GEFS+)、てんかん性脳症、早期乳児、13、原因不明性全身性てんかん、原因不明性焦点性てんかん、ミオクローヌス性-失立てんかん、レノックス・ガストー症候群、ウエスト症候群、特発性れん縮、早期ミオクローヌス性脳症、進行性ミオクローヌス性てんかん、小児の交代性片麻痺、未分類てんかん性脳症、てんかんにおける予期せぬ突然死(SUDEP)および洞不全症候群1から選択されるてんかん性脳症である。
[0281]一部の実施形態では、脳症は、てんかん性脳症である。例示的てんかん性脳症として、それだけには限らないが、ドラベ症候群(DS)(乳児期の重症ミオクローヌス性てんかんまたはSMEIとしても知られる)、乳児期の重症ミオクローヌス性てんかん(SMEI)-境界型(SMEB)、熱性発作(FS)、全身性の熱性発作プラスのてんかん(GEFS+)、てんかん性脳症、早期乳児、13、原因不明性全身性てんかん、原因不明性焦点性てんかん、ミオクローヌス性-失立てんかん、レノックス・ガストー症候群、ウエスト症候群、特発性れん縮、早期ミオクローヌス性脳症、進行性ミオクローヌス性てんかん、小児の交代性片麻痺、未分類てんかん性脳症、てんかんにおける予期せぬ突然死(SUDEP)、早期乳児SCN1A脳症、早期乳児てんかん性脳症(EIEE)、自閉症、遊走性焦点発作を伴う乳児てんかんまたは洞不全症候群1が挙げられる。一部の実施形態では、疾患または状態は、任意選択で、ドラベ症候群(DS)(乳児期の重症ミオクローヌス性てんかんまたはSMEIとしても知られる)、乳児期の重症ミオクローヌス性てんかん(SMEI)-境界型(SMEB)、熱性発作(FS)、全身性の熱性発作プラスのてんかん(GEFS+)、てんかん性脳症、早期乳児、13、原因不明性全身性てんかん、原因不明性焦点性てんかん、ミオクローヌス性-失立てんかん、レノックス・ガストー症候群、ウエスト症候群、特発性れん縮、早期ミオクローヌス性脳症、進行性ミオクローヌス性てんかん、小児の交代性片麻痺、未分類てんかん性脳症、てんかんにおける予期せぬ突然死(SUDEP)および洞不全症候群1から選択されるてんかん性脳症である。
[0282]一部の例では、GEFS+は、全身性の熱性発作プラスのてんかん、2型である。
[0283]一部の例では、熱性発作は、熱性発作、家族性、3Aである。
[0283]一部の例では、熱性発作は、熱性発作、家族性、3Aである。
[0284]一部の例では、SMEBは、全身性棘波を伴わないSMEB(SMEB-SW)、ミオクローヌス性発作を伴わないSMEB(SMEB-M)、SMEIの2つ以上の特徴を欠くSMEB(SMEB-O)または全身性強直間代性発作を伴う難治性小児てんかん(ICEGTC)である。
[0285]一部の実施形態では、GEFS+は、全身性の熱性発作プラスのてんかん、2型である。一部の実施形態では、熱性発作は、熱性発作、家族性、3Aである。一部の実施形態では、SMEBは、全身性棘波を伴わないSMEB(SMEB-SW)、ミオクローヌス性発作を伴わないSMEB(SMEB-M)、SMEIの2つ以上の特徴を欠くSMEB(SMEB-O)または全身性強直間代性発作を伴う難治性小児てんかん(ICEGTC)である。
[0286]一部の実施形態では、NaV1.1中の機能喪失型突然変異によって誘導される疾患または状態として、それだけには限らないが、ドラベ症候群(DS)(SMEIとしても知られる)、乳児期の重症ミオクローヌス性てんかん(SMEI)-境界型(SMEB)、熱性発作(FS)、全身性の熱性発作プラスのてんかん(GEFS+)、てんかん性脳症、早期乳児、13、原因不明性全身性てんかん、原因不明性焦点性てんかん、ミオクローヌス性-失立てんかん、レノックス・ガストー症候群、ウエスト症候群、特発性れん縮、早期ミオクローヌス性脳症、進行性ミオクローヌス性てんかん、小児の交代性片麻痺、未分類てんかん性脳症、てんかんにおける予期せぬ突然死(SUDEP)、洞不全症候群1、早期乳児SCN1A脳症、早期乳児てんかん性脳症(EIEE)、自閉症または遊走性焦点発作を伴う乳児てんかんが挙げられる。
[0287]関連する実施形態では、方法は、タンパク質または機能的RNAの発現を減少させるためにASOを使用する方法である。一部の実施形態では、ASOは、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAを含有するNMD誘導性エクソン(NIE)を有する対象の細胞においてNaV1.1タンパク質の発現を減少させるために使用される。一部の実施形態では、対象は、NaV1.1中に機能獲得型突然変異、例えば、片頭痛を有する。一部の実施形態では、ASOは、対象の細胞においてNaV1.1タンパク質の発現を減少させるために使用され、対象は、NaV1.1中に機能獲得型突然変異、例えば、片頭痛、家族性片麻痺性、3を有する。
[0288]一部の実施形態では、NaV1.1タンパク質をコードするmRNAのレベルは、対照細胞、例えば、アンチセンスオリゴマーを用いて処置されていないものまたはプレmRNAを含有するSCN1A NIEの標的化される部分に結合しないアンチセンスオリゴマーを用いて処置されたものにおいて産生されたNaV1.1タンパク質をコードするmRNAの量と比較した場合に、1.1~10倍減少する。
[0289]一部の実施形態では、疾患または状態は、NaV1.1遺伝子てんかんである。NaV1.1遺伝子てんかんは、NaV1.1中の機能喪失型突然変異を含む場合も、NaV1.1中の機能獲得型突然変異を含む場合もある。一部の場合には、NaV1.1遺伝子てんかんは、1つまたは複数の遺伝性突然変異を含む。他の場合には、NaV1.1遺伝子てんかんは、1つまたは複数のde novo突然変異を含む。一部の場合には、NaV1.1遺伝子てんかんには、ドラベ症候群(DS)(乳児期の重症ミオクローヌス性てんかんまたはSMEIとしても知られる)、乳児期の重症ミオクローヌス性てんかん(SMEI)-境界型(SMEB)、熱性発作(FS)、全身性の熱性発作プラスのてんかん(GEFS+)、てんかん性脳症、早期乳児、13、原因不明性全身性てんかん、原因不明性焦点性てんかん、ミオクローヌス性-失立てんかん、レノックス・ガストー症候群、ウエスト症候群、特発性れん縮、早期ミオクローヌス性脳症、進行性ミオクローヌス性てんかん、小児の交代性片麻痺、未分類てんかん性脳症、早期乳児SCN1A脳症、早期乳児てんかん性脳症(EIEE)、てんかんにおける予期せぬ突然死(SUDEP)または遊走性焦点発作を伴う乳児てんかんが含まれる。一部の場合には、NaV1.1中の機能喪失型突然変異と関連するNaV1.1遺伝子てんかんとして、ドラベ症候群(DS)(乳児期の重症ミオクローヌス性てんかんまたはSMEIとしても知られる)、乳児期の重症ミオクローヌス性てんかん(SMEI)-境界型(SMEB)、熱性発作(FS)、全身性の熱性発作プラスのてんかん(GEFS+)、てんかん性脳症、早期乳児、13、原因不明性全身性てんかん、原因不明性焦点性てんかん、ミオクローヌス性-失立てんかん、レノックス・ガストー症候群、ウエスト症候群、特発性れん縮、早期ミオクローヌス性脳症、進行性ミオクローヌス性てんかん、小児の交代性片麻痺、未分類てんかん性脳症、早期乳児SCN1A脳症、早期乳児てんかん性脳症(EIEE)、てんかんにおける予期せぬ突然死(SUDEP)、遊走性焦点発作を伴う乳児てんかんが挙げられる。
[0290]一部の実施形態では、疾患または状態は、SCN1A遺伝子のハプロ不全と関連する。SCN1A遺伝子のハプロ不全と関連する例示的疾患または状態として、それだけには限らないが、ドラベ症候群(DS)(SMEIとしても知られる)、乳児期の重症ミオクローヌス性てんかん(SMEI)-境界型(SMEB)、熱性発作(FS)、全身性の熱性発作プラスのてんかん(GEFS+)、てんかん性脳症、早期乳児、13、原因不明性全身性てんかん、原因不明性焦点性てんかん、ミオクローヌス性-失立てんかん、レノックス・ガストー症候群、ウエスト症候群、特発性れん縮、早期ミオクローヌス性脳症、進行性ミオクローヌス性てんかん、小児の交代性片麻痺、未分類てんかん性脳症、てんかんにおける予期せぬ突然死(SUDEP)、洞不全症候群1、早期乳児SCN1A脳症、早期乳児てんかん性脳症(EIEE)または遊走性焦点発作を伴う乳児てんかんが挙げられる。一部の場合には、疾患または状態は、ドラベ症候群(DS)(SMEIとしても知られる)、乳児期の重症ミオクローヌス性てんかん(SMEI)-境界型(SMEB)、熱性発作(FS)、全身性の熱性発作プラスのてんかん(GEFS+)、てんかん性脳症、早期乳児、13、原因不明性全身性てんかん、原因不明性焦点性てんかん、ミオクローヌス性-失立てんかん、レノックス・ガストー症候群、ウエスト症候群、特発性れん縮、早期ミオクローヌス性脳症、進行性ミオクローヌス性てんかん、小児の交代性片麻痺、未分類てんかん性脳症、てんかんにおける予期せぬ突然死(SUDEP)、洞不全症候群1、早期乳児SCN1A脳症、早期乳児てんかん性脳症(EIEE)または遊走性焦点発作を伴う乳児てんかんである。
[0291]一部の場合には、疾患または状態は、ドラベ症候群(DS)である。
[0292]「てんかん」という用語は、本明細書で使用される場合、再発性てんかん性発作を特徴とする神経疾患の群を指す。「てんかん性発作」とは、本明細書で使用される場合、短い、ほぼ検出不能な期間から長期間の激しい震えまで変動する可能性があるエピソードを指す。発作の例示的な種類として、それだけには限らないが、けいれん性、非けいれん性、焦点性および全身性発作が挙げられる。全身性発作の例示的な種類として、それだけには限らないが、強直間代性、強直性、間代性、ミオクローヌス性、欠神および無緊張性発作が挙げられる。
[0292]「てんかん」という用語は、本明細書で使用される場合、再発性てんかん性発作を特徴とする神経疾患の群を指す。「てんかん性発作」とは、本明細書で使用される場合、短い、ほぼ検出不能な期間から長期間の激しい震えまで変動する可能性があるエピソードを指す。発作の例示的な種類として、それだけには限らないが、けいれん性、非けいれん性、焦点性および全身性発作が挙げられる。全身性発作の例示的な種類として、それだけには限らないが、強直間代性、強直性、間代性、ミオクローヌス性、欠神および無緊張性発作が挙げられる。
[0293]一部の実施形態では、疾患または状態は、NaV1.1中の機能獲得型突然変異によって誘導される。NaV1.1中の機能獲得型突然変異と関連する例示的疾患または状態として、それだけには限らないが、片頭痛が挙げられる。一部の例では、NaV1.1中の機能獲得型突然変異によって誘導される疾患または状態は、片頭痛である。一部の実施形態では、片頭痛は、片頭痛、家族性片麻痺性、3である。
[0294]一部の実施形態では、方法は、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAを含有するNIEを有する対象の細胞によるNaV1.1タンパク質の発現を減少させる方法であり、対象は、NaV1.1中の機能獲得型突然変異を有する。このような実施形態では、対象は、NaV1.1タンパク質が増加した量で生成される対立遺伝子または細胞におけるNaV1.1の活性の増大を誘導する突然変異体SCN1Aをコードする対立遺伝子を有する。一部の実施形態では、NaV1.1の活性の増大は、突然変異体NaV1.1チャネルによって媒介される長期の、またはほぼ持続的なナトリウム電流、迅速な不活性化の減速、定常状態不活性化における正のシフト、反復性刺激の間のより高いチャネルの利用可能性、不活性化されていない脱分極誘導性持続的ナトリウム電流の増大、不活性化への参入の遅延、迅速な不活性化の回復の加速、および/または低温でのインキュベーションまたは相互作用性タンパク質の同時発現によるフォールディング欠陥の救出を特徴とする。これらの実施形態のいずれかでも、アンチセンスオリゴマーは、第2の対立遺伝子から転写されたプレmRNAを含有するNIEの標的化される部分に結合し、それによって、プレmRNAからの偽エクソンのエクソンスキッピングを阻害または遮断し、対象の細胞における機能的NaV1.1タンパク質をコードする成熟mRNAのレベルの低下およびNaV1.1タンパク質の発現の減少を引き起こす。
組成物
[0295]一部の実施形態では、ASOは、配列番号21~67、210~256または304~1099のうちいずれか1つに対して少なくとも83%、88%、94%または100%の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ASOは、配列番号21~67、210~256または304~1099のうちいずれか1つに対して少なくとも83%、88%、94%または100%の配列同一性を有する配列からなる。一部の実施形態では、ASOは、表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8aおよび8bに列挙される配列のうちいずれか1つに対して少なくとも83%、88%、94%または100%の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ASOは、表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8aおよび8bに列挙される配列のうちいずれか1つに対して少なくとも83%、88%、94%または100%の配列同一性を有する配列からなる。
[0295]一部の実施形態では、ASOは、配列番号21~67、210~256または304~1099のうちいずれか1つに対して少なくとも83%、88%、94%または100%の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ASOは、配列番号21~67、210~256または304~1099のうちいずれか1つに対して少なくとも83%、88%、94%または100%の配列同一性を有する配列からなる。一部の実施形態では、ASOは、表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8aおよび8bに列挙される配列のうちいずれか1つに対して少なくとも83%、88%、94%または100%の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ASOは、表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8aおよび8bに列挙される配列のうちいずれか1つに対して少なくとも83%、88%、94%または100%の配列同一性を有する配列からなる。
[0296]一部の実施形態では、ASOは、配列番号21~67、210~256または304~1099のうちいずれか1つに対して少なくとも60%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、884%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%、99.8%、99.9%または100%の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ASOは、配列番号21~67、210~256または304~1099のうちいずれか1つに対して少なくとも60%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、884%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%、99.8%、99.9%または100%の配列同一性を有する配列からなる。一部の実施形態では、ASOは、表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8aおよび8bに列挙される配列のうちいずれか1つに対して少なくとも60%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、884%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%、99.8%、99.9%または100%の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ASOは、表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8aおよび8bに列挙される配列のうちいずれか1つに対して少なくとも60%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、884%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%、99.8%、99.9%または100%の配列同一性を有する配列からなる。
[0297]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも1つの修飾糖部分を含む。
[0298]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、T-メトキシエチル糖部分を含む。一部の実施形態では、T-メトキシエチル糖部分は、T-2’-メトキシエチル糖部分である。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、2’-O-メトキシエチル部分を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、2’-O-メトキシエチル部分を含むチミジンを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOの各核酸塩基は、2’-O-メトキシエチル部分を含む。
[0298]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、T-メトキシエチル糖部分を含む。一部の実施形態では、T-メトキシエチル糖部分は、T-2’-メトキシエチル糖部分である。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、2’-O-メトキシエチル部分を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、2’-O-メトキシエチル部分を含むチミジンを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOの各核酸塩基は、2’-O-メトキシエチル部分を含む。
[0299]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、8~50個の核酸塩基からなる。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、16~20個の核酸塩基からなる。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、12~20個の核酸塩基からなる。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、8~20個の核酸塩基からなる。
[0300]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、5~100、6~100、7~100、8~100、9~100、10~100、11~100、12~100、13~100、14~100、15~100、16~100、17~100、18~100、19~100、20~100、21~100、22~100、23~100、24~100、25~100、30~100、35~100、40~100、45~100、50~100、55~100、60~100、65~100、70~100、75~100、80~100、85~100または90~100個の核酸塩基からなる。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、5~100、5~95、5~90、5~85、5~80、5~75、5~70、5~65、5~60、5~55、5~50、5~45、5~40、5~35、5~30、5~25、5~20、5~15または5~10個の核酸塩基からなる。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、8~50、8~45、8~40、8~35、8~30、8~29、8~28、8~27、8~26、8~25、8~24、8~23、8~22、8~21、8~20、8~19、8~18、8~17または8~16個の核酸塩基からなる。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、9~20、10~20、11~20、12~20、13~20、14~20、15~20、16~20、17~20または18~20個の核酸塩基からなる。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39または40個の核酸塩基からなる。
[0301]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、5’-メチルシトシン(5’-MeC)を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOの各シトシンは、5’-メチルシトシン(5’-MeC)である。
[0302]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、ホスホロチオエート結合を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOの各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である。
[0303]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、ロックド核酸(LNA)を含む。
[0304]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20のLNAを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、1~20、1~19、1~18、1~17、1~16、1~15、1~14、1~13、1~12、1~11、1~10、1~9、1~8、1~7、1~6、1~5、1~4、1~3または1~2つのLNAを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20のLNAを含む。
[0304]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20のLNAを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、1~20、1~19、1~18、1~17、1~16、1~15、1~14、1~13、1~12、1~11、1~10、1~9、1~8、1~7、1~6、1~5、1~4、1~3または1~2つのLNAを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20のLNAを含む。
[0305]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOの5’末端ヌクレオチドは、LNAである。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOの3’末端ヌクレオチドは、LNAである。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOの5’および3’末端ヌクレオチドは、LNAである。
ASO(アンチセンスオリゴマー)
[0306]本明細書では、プレmRNAを含有するSCN1A NIEの標的化される部分に結合することによってエクソンスキッピングを誘導するアンチセンスオリゴマーを含む組成物が提供される。本明細書で使用される場合、用語「ASO」および「アンチセンスオリゴマー」は、互換的に使用され、ワトソン-クリック塩基対形成またはゆらぎ塩基対形成(G-U)によって標的核酸(例えば、プレmRNAを含有するSCN1A NIE)配列にハイブリダイズする核酸塩基を含む、ポリヌクレオチドなどのオリゴマーを指す。ASOは、標的配列に相補的な正確な配列、またはほぼ相補性(例えば、標的配列に結合するのに十分な相補性、およびスプライス部位でのスプライシングを増強する)を有することができる。ASOは、それらが標的核酸(例えば、プレmRNA転写物の標的化される部分)に結合(ハイブリダイズ)し、生理学的条件下でハイブリダイズしたままであるようにデザインされる。典型的には、それらが意図された(標的化された)核酸配列以外の部位にハイブリダイズする場合、それらは、標的核酸ではない限定された数の配列(標的核酸以外のいくつかの部位)にハイブリダイズする。ASOのデザインは、ASOが他の部位に結合し、「オフターゲット」効果を引き起こす可能性が制限されるように、プレmRNA転写物の標的化される部分の核酸配列、あるいはゲノムまたは細胞のプレmRNAもしくはトランスクリプトームの他の位置における十分に類似した核酸配列の発生を考慮することができる。当技術分野において公知である任意のアンチセンスオリゴマー、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、「Reducing Nonsense-Mediated mRNA Decay」と題する国際公開第2015/035091号として公開されたPCT出願第PCT/US2014/054151号におけるものは、本明細書に記載される方法を行うために使用することができる。
[0306]本明細書では、プレmRNAを含有するSCN1A NIEの標的化される部分に結合することによってエクソンスキッピングを誘導するアンチセンスオリゴマーを含む組成物が提供される。本明細書で使用される場合、用語「ASO」および「アンチセンスオリゴマー」は、互換的に使用され、ワトソン-クリック塩基対形成またはゆらぎ塩基対形成(G-U)によって標的核酸(例えば、プレmRNAを含有するSCN1A NIE)配列にハイブリダイズする核酸塩基を含む、ポリヌクレオチドなどのオリゴマーを指す。ASOは、標的配列に相補的な正確な配列、またはほぼ相補性(例えば、標的配列に結合するのに十分な相補性、およびスプライス部位でのスプライシングを増強する)を有することができる。ASOは、それらが標的核酸(例えば、プレmRNA転写物の標的化される部分)に結合(ハイブリダイズ)し、生理学的条件下でハイブリダイズしたままであるようにデザインされる。典型的には、それらが意図された(標的化された)核酸配列以外の部位にハイブリダイズする場合、それらは、標的核酸ではない限定された数の配列(標的核酸以外のいくつかの部位)にハイブリダイズする。ASOのデザインは、ASOが他の部位に結合し、「オフターゲット」効果を引き起こす可能性が制限されるように、プレmRNA転写物の標的化される部分の核酸配列、あるいはゲノムまたは細胞のプレmRNAもしくはトランスクリプトームの他の位置における十分に類似した核酸配列の発生を考慮することができる。当技術分野において公知である任意のアンチセンスオリゴマー、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、「Reducing Nonsense-Mediated mRNA Decay」と題する国際公開第2015/035091号として公開されたPCT出願第PCT/US2014/054151号におけるものは、本明細書に記載される方法を行うために使用することができる。
[0307]一部の実施形態では、ASOは、標的核酸もしくはプレmRNAを含有するNIEの標的化される部分に「特異的にハイブリダイズする」かまたは「特異的」である。典型的には、このようなハイブリダイゼーションは、実質的に37℃より大きいTm、好ましくは少なくとも50℃、典型的には60℃~約90℃で起こる。このようなハイブリダイゼーションは、好ましくはストリンジェントなハイブリダイゼーション条件に対応する。所定のイオン強度およびpHにおいて、Tmは、標的配列の50%が相補的オリゴヌクレオチドにハイブリダイズする温度である。
[0308]オリゴヌクレオチドなどのオリゴマーは、ハイブリダイゼーションが2つの一本鎖ポリヌクレオチド間で逆平行配置において起こる場合、互いに「相補的」である。ハイブリダイゼーションが第1のポリヌクレオチド鎖の一方と第2のポリヌクレオチド鎖の一方の間で起こり得る場合、二本鎖ポリヌクレオチドは別のポリヌクレオチドに対して「相補的」であり得る。相補性(あるポリヌクレオチドが別のポリヌクレオチドと相補的である程度)は、一般的に受け入れられている塩基対形成規則に従って、互いに水素結合を形成することが予想される対立する鎖中の塩基の割合(例えば、パーセンテージ)に関して定量可能である。アンチセンスオリゴマー(ASO)の配列は、ハイブリダイズする標的核酸の配列に100%相補的である必要はない。ある特定の実施形態では、ASOは、それらが標的化される標的核酸配列内の標的化領域に対して少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、または少なくとも99%の配列相補性を含み得る。例えば、オリゴマー化合物の20個の核酸塩基のうち18個が標的化領域に相補的であり、したがって、特異的にハイブリダイズするASOは90パーセントの相補性を表す。この例では、残りの非相補的核酸塩基は、互いにクラスター化され得るか、または相補的核酸塩基とともに散在され得、互いにもしくは相補的核酸塩基と隣接する必要はない。ASOと標的核酸の領域との相補性パーセントは、BLASTプログラム(基本的局所アライメント検索ツール)および当技術分野において公知であるPowerBLASTプログラム(全内容が参照により本明細書に組み込まれるAltschulら、J.Mol.Biol.、1990年、215巻、403~410頁;ZhangおよびMadden、Genome Res.、1997年、7巻、649~656頁)を用いて日常的に決定することができる。
[0309]ASOは、標的配列中の全ての核酸塩基にハイブリダイズする必要はなく、ハイブリダイズする核酸塩基は、隣接しているかまたは隣接していない場合がある。ASOは、プレmRNA転写物の1つまたは複数のセグメント上でハイブリダイズすることができ、それにより、介在または隣接するセグメントがハイブリダイゼーション事象に関与しないようにする(例えば、ループ構造またはヘアピン構造を形成することができる)。ある特定の実施形態では、ASOは、標的プレmRNA転写物中の非隣接核酸塩基にハイブリダイズする。例えば、ASOは、ASOがハイブリダイズしない1つまたは複数の核酸塩基によって分離されたプレmRNA転写物中の核酸塩基にハイブリダイズすることができる。
[0310]本明細書に記載されるASOは、プレmRNAを含有するNIEの標的化される部分に存在する核酸塩基に相補的である核酸塩基を含む。用語「ASO」は、標的mRNA上の相補的核酸塩基にハイブリダイズすることができる核酸塩基を含むが、ペプチド核酸(PNA)などの糖部分を含まないオリゴヌクレオチドおよび任意の他のオリゴマー分子を包含する。ASOは、天然に存在するヌクレオチド、ヌクレオチドアナログ、修飾ヌクレオチド、または前述のうちの2つもしくは3つの任意の組合せを含み得る。用語「天然に存在するヌクレオチド」には、デオキシリボヌクレオチドおよびリボヌクレオチドが含まれる。用語「修飾ヌクレオチド」は、修飾されたかもしくは置換された糖基を有する、および/または修飾された骨格を有するヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、ASOのヌクレオチドの全ては修飾ヌクレオチドである。本明細書に記載される方法および組成物に適合するASOまたはASOの成分の化学的修飾は、当業者には明らかであり、例えば、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第8,258,109号、米国特許第5,656,612号、米国特許出願公開第2012/0190728号、ならびにDiasおよびStein、Mol.Cancer Ther.2002年、347~355頁に見出すことができる。
[0311]ASOの1つまたは複数の核酸塩基は、アデニン、グアニン、シトシン、チミンおよびウラシルなどの天然に存在する未修飾核酸塩基、または標的プレmRNA上に存在する核酸塩基と水素結合することができるように未修飾核酸塩基と十分に類似する任意の合成もしくは修飾核酸塩基であり得る。修飾核酸塩基の例としては、限定されないが、ヒポキサンチン、キサンチン、7-メチルグアニン、5,6-ジヒドロウラシル、5-メチルシトシン、および5-ヒドロキシメチルシトシン(5-hydroxymethoylcytosine)が挙げられる。
[0312]本明細書に記載されるASOはまた、オリゴマーの成分を接続する骨格構造を含む。用語「骨格構造」および「オリゴマー結合」は、互換的に使用することができ、ASOのモノマー間の接続を指す。天然に存在するオリゴヌクレオチドにおいて、骨格は、オリゴマーの糖部分を接続する3’-5’ホスホジエステル結合を含む。本明細書に記載されるASOの骨格構造またはオリゴマー結合には、(限定されないが)ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレノエート、ホスホロジセレノエート、ホスホロアニロチオエート、ホスホロアニラデート、ホスホロアミデートなどが含まれ得る。例えば、それらの内容が参照により本明細書に組み込まれるLaPlancheら、Nucleic Acids Res.14巻:9081頁(1986年);Stecら、J.Am.Chem.Soc.106巻:6077頁(1984年)、Steinら、Nucleic Acids Res.16巻:3209頁(1988年)、Zonら、Anti-Cancer Drug Design 6巻:539頁(1991年);Zonら、Oligonucleotides and Analogues:A Practical Approach、87~108頁(F.Eckstein編、Oxford University Press、Oxford England(1991年));Stecら、米国特許第5,151,510号;UhlmannおよびPeyman、Chemical Reviews 90巻:543頁(1990年)を参照されたい。一部の実施形態では、ASOの骨格構造は、リンを含有せず、むしろペプチド結合、例えば、ペプチド核酸(PNA)におけるペプチド結合、またはカルバメート、アミド、ならびに直鎖および環状炭化水素基を含む結合基を含有する。一部の実施形態では、骨格修飾はホスホチオエート結合である。一部の実施形態では、骨格修飾はホスホロアミデート結合である。
[0313]実施形態では、ASO骨格のリンヌクレオチド間結合の各々における立体化学はランダムである。実施形態では、ASO骨格のリンヌクレオチド間結合の各々における立体化学は制御され、ランダムではない。例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第2014/0194610号、「Methods for the Synthesis of Functionalized Nucleic Acids」は、核酸オリゴマー中の各リン原子におけるキラリティーの掌性を独立して選択する方法を記載する。実施形態では、本発明の方法において使用されるASOは、限定されないが、表5および6に記載されるASOのうちのいずれかを含み、ランダムでないリンヌクレオチド間結合を有するASOを含む。実施形態では、本発明の方法において使用される組成物は、純粋なジアステレオマーASOを含む。実施形態では、本発明の方法において使用される組成物は、少なくとも約90%、少なくとも約91%、少なくとも約92%、少なくとも約93%、少なくとも約94%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、少なくとも約99%、約100%、約90%~約100%、約91%~約100%、約92%~約100%、約93%~約100%、約94%~約100%、約95%~約100%、約96%~約100%、約97%~約100%、約98%~約100%、または約99%~約100%のジアステレオマー純度を有するASOを含む。
[0314]実施形態では、ASOは、そのリンヌクレオチド間結合におけるRpおよびSp配置の非ランダム混合物を有する。例えば、良好な活性とヌクレアーゼ安定性の間のバランスを達成するために、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはアンチセンスオリゴマーにおいてRpおよびSpの混合物が必要であることが示唆されている(参照により本明細書に組み込まれる、Wanら、2014年、「Synthesis,biophysical properties and biological activity of second generation antisense oligonucleotides containing chiral phosphorothioate linkages」、Nucleic Acids Research 42巻(22号):13456~13468頁)。実施形態では、本発明の方法において使用されるASOは、限定されないが、配列番号21~114における本明細書に記載されるASOのうちのいずれかを含み、約5~100%Rp、少なくとも約5%Rp、少なくとも約10%Rp、少なくとも約15%Rp、少なくとも約20%Rp、少なくとも約25%Rp、少なくとも約30%Rp、少なくとも約35%Rp、少なくとも約40%Rp、少なくとも約45%Rp、少なくとも約50%Rp、少なくとも約55%Rp、少なくとも約60%Rp、少なくとも約65%Rp、少なくとも約70%Rp、少なくとも約75%Rp、少なくとも約80%Rp、少なくとも約85%Rp、少なくとも約90%Rp、または少なくとも約95%Rpを含み、残りはSpであるか、または約100%Rpを含む。実施形態では、本発明の方法において使用されるASOは、限定されないが、配列番号21~114における本明細書に記載されるASOのうちのいずれかを含み、約10%~約100%Rp、約15%~約100%Rp、約20%~約100%Rp、約25%~約100%Rp、約30%~約100%Rp、約35%~約100%Rp、約40%~約100%Rp、約45%~約100%Rp、約50%~約100%Rp、約55%~約100%Rp、約60%~約100%Rp、約65%~約100%Rp、約70%~約100%Rp、約75%~約100%Rp、約80%~約100%Rp、約85%~約100%Rp、約90%~約100%Rp、もしくは約95%~約100%Rp、約20%~約80%Rp、約25%~約75%Rp、約30%~約70%Rp、約40%~約60%Rp、または約45%~約55%Rpを含み、残りはSpである。
[0315]実施形態では、本発明の方法において使用されるASOは、限定されないが、配列番号21~114における本明細書に記載されるASOのうちのいずれかを含み、約5~100%Sp、少なくとも約5%Sp、少なくとも約10%Sp、少なくとも約15%Sp、少なくとも約20%Sp、少なくとも約25%Sp、少なくとも約30%Sp、少なくとも約35%Sp、少なくとも約40%Sp、少なくとも約45%Sp、少なくとも約50%Sp、少なくとも約55%Sp、少なくとも約60%Sp、少なくとも約65%Sp、少なくとも約70%Sp、少なくとも約75%Sp、少なくとも約80%Sp、少なくとも約85%Sp、少なくとも約90%Sp、または少なくとも約95%Spを含み、残りはRpであるか、または約100%Spを含む。実施形態では、本発明の方法において使用されるASOは、限定されないが、配列番号21~114における本明細書に記載されるASOのうちのいずれかを含み、約10%~約100%Sp、約15%~約100%Sp、約20%~約100%Sp、約25%~約100%Sp、約30%~約100%Sp、約35%~約100%Sp、約40%~約100%Sp、約45%~約100%Sp、約50%~約100%Sp、約55%~約100%Sp、約60%~約100%Sp、約65%~約100%Sp、約70%~約100%Sp、約75%~約100%Sp、約80%~約100%Sp、約85%~約100%Sp、約90%~約100%Sp、もしくは約95%~約100%Sp、約20%~約80%Sp、約25%~約75%Sp、約30%~約70%Sp、約40%~約60%Sp、または約45%~約55%Spを含み、残りはRpである。
[0316]実施形態では、本発明の方法において使用されるASOは、限定されないが、配列番号21~67、210~256または304~1099における本明細書に記載されるASOのうちのいずれかを含み、約5~100%Rp、少なくとも約5%Rp、少なくとも約10%Rp、少なくとも約15%Rp、少なくとも約20%Rp、少なくとも約25%Rp、少なくとも約30%Rp、少なくとも約35%Rp、少なくとも約40%Rp、少なくとも約45%Rp、少なくとも約50%Rp、少なくとも約55%Rp、少なくとも約60%Rp、少なくとも約65%Rp、少なくとも約70%Rp、少なくとも約75%Rp、少なくとも約80%Rp、少なくとも約85%Rp、少なくとも約90%Rp、または少なくとも約95%Rpを含み、残りはSpであるか、または約100%Rpを含む。実施形態では、本発明の方法において使用されるASOは、限定されないが、配列番号21~67、210~256または304~1099における本明細書に記載されるASOのうちのいずれかを含み、約10%~約100%Rp、約15%~約100%Rp、約20%~約100%Rp、約25%~約100%Rp、約30%~約100%Rp、約35%~約100%Rp、約40%~約100%Rp、約45%~約100%Rp、約50%~約100%Rp、約55%~約100%Rp、約60%~約100%Rp、約65%~約100%Rp、約70%~約100%Rp、約75%~約100%Rp、約80%~約100%Rp、約85%~約100%Rp、約90%~約100%Rp、もしくは約95%~約100%Rp、約20%~約80%Rp、約25%~約75%Rp、約30%~約70%Rp、約40%~約60%Rp、または約45%~約55%Rpを含み、残りはSpである。
[0317]実施形態では、本発明の方法において使用されるASOは、限定されないが、配列番号21~67、210~256または304~1099における本明細書に記載されるASOのうちのいずれかを含み、約5~100%Sp、少なくとも約5%Sp、少なくとも約10%Sp、少なくとも約15%Sp、少なくとも約20%Sp、少なくとも約25%Sp、少なくとも約30%Sp、少なくとも約35%Sp、少なくとも約40%Sp、少なくとも約45%Sp、少なくとも約50%Sp、少なくとも約55%Sp、少なくとも約60%Sp、少なくとも約65%Sp、少なくとも約70%Sp、少なくとも約75%Sp、少なくとも約80%Sp、少なくとも約85%Sp、少なくとも約90%Sp、または少なくとも約95%Spを含み、残りはRpであるか、または約100%Spを含む。実施形態では、本発明の方法において使用されるASOは、限定されないが、配列番号21~67、210~256または304~1099における本明細書に記載されるASOのうちのいずれかを含み、約10%~約100%Sp、約15%~約100%Sp、約20%~約100%Sp、約25%~約100%Sp、約30%~約100%Sp、約35%~約100%Sp、約40%~約100%Sp、約45%~約100%Sp、約50%~約100%Sp、約55%~約100%Sp、約60%~約100%Sp、約65%~約100%Sp、約70%~約100%Sp、約75%~約100%Sp、約80%~約100%Sp、約85%~約100%Sp、約90%~約100%Sp、もしくは約95%~約100%Sp、約20%~約80%Sp、約25%~約75%Sp、約30%~約70%Sp、約40%~約60%Sp、または約45%~約55%Spを含み、残りはRpである。
[0318]実施形態では、本発明の方法において使用されるASOは、限定されないが、表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8a、および8bに列挙された配列のうちのいずれか1つにおける本明細書に記載されるASOのうちのいずれかを含み、約5~100%Rp、少なくとも約5%Rp、少なくとも約10%Rp、少なくとも約15%Rp、少なくとも約20%Rp、少なくとも約25%Rp、少なくとも約30%Rp、少なくとも約35%Rp、少なくとも約40%Rp、少なくとも約45%Rp、少なくとも約50%Rp、少なくとも約55%Rp、少なくとも約60%Rp、少なくとも約65%Rp、少なくとも約70%Rp、少なくとも約75%Rp、少なくとも約80%Rp、少なくとも約85%Rp、少なくとも約90%Rp、もしくは少なくとも約95%Rpを含み、残りはSpであるか、または約100%Rpを含む。実施形態では、本発明の方法において使用されるASOは、限定されないが、表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8a、および8bに列挙された配列のうちのいずれか1つにおける本明細書に記載されるASOのうちのいずれかを含み、約10%~約100%Rp、約15%~約100%Rp、約20%~約100%Rp、約25%~約100%Rp、約30%~約100%Rp、約35%~約100%Rp、約40%~約100%Rp、約45%~約100%Rp、約50%~約100%Rp、約55%~約100%Rp、約60%~約100%Rp、約65%~約100%Rp、約70%~約100%Rp、約75%~約100%Rp、約80%~約100%Rp、約85%~約100%Rp、約90%~約100%Rp、もしくは約95%~約100%Rp、約20%~約80%Rp、約25%~約75%Rp、約30%~約70%Rp、約40%~約60%Rp、または約45%~約55%Rpを含み、残りはSpである。
[0319]実施形態では、本発明の方法において使用されるASOは、限定されないが、表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8a、および8bに列挙された配列のうちのいずれか1つにおける本明細書に記載されるASOのうちのいずれかを含み、約5~100%Sp、少なくとも約5%Sp、少なくとも約10%Sp、少なくとも約15%Sp、少なくとも約20%Sp、少なくとも約25%Sp、少なくとも約30%Sp、少なくとも約35%Sp、少なくとも約40%Sp、少なくとも約45%Sp、少なくとも約50%Sp、少なくとも約55%Sp、少なくとも約60%Sp、少なくとも約65%Sp、少なくとも約70%Sp、少なくとも約75%Sp、少なくとも約80%Sp、少なくとも約85%Sp、少なくとも約90%Sp、もしくは少なくとも約95%Spを含み、残りはRpであるか、または約100%Spを含む。実施形態では、本発明の方法において使用されるASOは、限定されないが、表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8a、および8bに列挙された配列のうちのいずれか1つにおける本明細書に記載されるASOのうちのいずれかを含み、約10%~約100%Sp、約15%~約100%Sp、約20%~約100%Sp、約25%~約100%Sp、約30%~約100%Sp、約35%~約100%Sp、約40%~約100%Sp、約45%~約100%Sp、約50%~約100%Sp、約55%~約100%Sp、約60%~約100%Sp、約65%~約100%Sp、約70%~約100%Sp、約75%~約100%Sp、約80%~約100%Sp、約85%~約100%Sp、約90%~約100%Sp、もしくは約95%~約100%Sp、約20%~約80%Sp、約25%~約75%Sp、約30%~約70%Sp、約40%~約60%Sp、または約45%~約55%Spを含み、残りはRpである。
[0320]本明細書に記載されるASOのいずれも、天然に存在するヌクレオチド中に存在するようなリボースもしくはデオキシリボースを含む糖部分、またはモルホリン環を含む修飾糖部分もしくは糖アナログを含み得る。修飾糖部分の非限定的な例としては、2’置換、例えば、2’-O-メチル(2’-O-Me)、2’-O-メトキシエチル(2’MOE)、2’-O-アミノエチル、2’F;N3’->P5’ホスホロアミデート、2’ジメチルアミノオキシエトキシ、2’-ジメチルアミノエトキシエトキシ、2’-グアニジニジウム、2’-O-グアニジニウムエチル、カルバメート修飾糖、および二環式修飾糖が挙げられる。一部の実施形態では、糖部分修飾は、2’-O-Me、2’F、および2’MOEから選択される。一部の実施形態では、糖部分修飾は、ロックド核酸(LNA)におけるような余分な架橋結合である。一部の実施形態では、糖アナログは、モルホリン環、例えば、ホスホロジアミデートモルホリノ(PMO)を含有する。一部の実施形態では、糖部分は、リボフランシルまたは2’デオキシリボフランシル修飾を含む。一部の実施形態では、糖部分は、2’,4’制限付きの2’O-メチルオキシエチル(cMOE)修飾を含む。一部の実施形態では、糖部分は、cEt2’,4’制限付きの2’-OエチルBNA修飾を含む。一部の実施形態では、糖部分は、トリシクロDNA(tcDNA)修飾を含む。一部の実施形態では、糖部分は、エチレン核酸(ENA)修飾を含む。一部の実施形態では、糖部分は、MCE修飾を含む。修飾は、当技術分野において公知であり、文献において、例えば、本明細書の目的のために参照により組み込まれるJarverら、2014年、Nucleic Acid Therapeutics 24巻(1号):37~47頁、本明細書の目的のために参照により組み込まれる、「A Chemical View of Oligonucleotides for Exon Skipping and Related Drug Applications」、Nucleic Acid Therapeutics 24巻(1号):37~47頁に記載されている。
[0321]一部の実施形態では、ASOの各モノマーは、同じ方法で修飾され、例えば、ASOの骨格の各結合は、ホスホロチオエート結合を含むか、または各リボース糖部分は、2’O-メチル修飾を含む。ASOのモノマー成分の各々に存在するこのような修飾は、「均一修飾」と呼ばれる。一部の例では、異なる修飾の組合せが所望され得る。例えば、ASOは、ホスホロジアミデート結合とモルホリン環を含む糖部分(モルホリノース)の組合せを含み得る。ASOに対する異なる修飾の組合せは、「混合修飾」または「混合化学」と呼ばれる。
[0322]一部の実施形態では、ASOは1つまたは複数の骨格修飾を含む。一部の実施形態では、ASOは1つまたは複数の糖部分修飾を含む。一部の実施形態では、ASOは1つまたは複数の骨格修飾および1つまたは複数の糖部分修飾を含む。一部の実施形態では、ASOは、2’MOE修飾およびホスホロチオエート骨格を含む。一部の実施形態では、ASOは、ホスホロジアミデートモルホリノ(PMO)を含む。一部の実施形態では、ASOはペプチド核酸(PNA)を含む。本明細書に記載されるASOのうちのいずれかまたはASOの任意の成分(例えば、核酸塩基、糖部分、骨格)は、ASOの所望の特性もしくは活性を達成するためか、またはASOの望ましくない特性もしくは活性を低減するために修飾され得る。例えば、ASOまたは任意のASOの1つまたは複数の成分を修飾して、プレmRNA転写物上の標的配列に対する結合親和性を増強し;任意の非標的配列への結合を低減し;細胞ヌクレアーゼ(すなわち、RNase H)による分解を低減し;細胞内および/もしくは細胞の核内へのASOの取り込みを改善し;ASOの薬物動態もしくは薬力学を変化させ;ならびに/またはASOの半減期をモジュレートすることができる。
[0323]一部の実施形態では、ASOは、2’-O-(2-メトキシエチル)(MOE)ホスホロチオエート改変ヌクレオチドで構成される。このようなヌクレオチドで構成されるASOは、特に本明細書に開示される方法によく適しており、このような修飾を有するオリゴマーは、ヌクレアーゼ分解に対する耐性が著しく増強され、バイオアベイラビリティが増加し、例えば、それらを本明細書に記載される一部の実施形態における経口送達に適したものにすることが示されている。例えば、その全内容は参照により本明細書に組み込まれるGearyら、J Pharmacol Exp Ther.2001年;296巻(3号):890~7頁;Gearyら、J Pharmacol Exp Ther.2001年;296巻(3号):898~904頁を参照されたい。
[0324]ASOを合成する方法は当業者に公知である。代わりにまたはそれに加えて、ASOは、商業的供給源から入手することができる。
[0325]特に断らない限り、一本鎖核酸(例えば、プレmRNA転写物、オリゴヌクレオチド、ASOなど)配列の左端は5’末端であり、一本鎖または二本鎖核酸配列の左端は5’方向と呼ばれる。同様に、核酸配列(一本鎖または二本鎖)の右端または方向は、3’末端または3’方向である。一般的に、核酸中の基準点に対して5’である領域または配列は「上流」と呼ばれ、核酸中の基準点に対して3’である領域または配列は「下流」と呼ばれる。一般的に、mRNAの5’方向または5’末端は開始コドンまたは開始コドンが位置する場所であり、一方、3’末端または3’方向は終止コドンが位置する場所である。一部の態様では、核酸中の基準点の上流であるヌクレオチドは、負の数字で示すことができ、一方、基準点の下流であるヌクレオチドは、正の数字で示すことができる。例えば、基準点(例えば、mRNA中のエクソン-エクソン連結部)を「ゼロ」部位として指定することができ、基準点に直接隣接し、その上流にあるヌクレオチドを「マイナス1」、例えば「-1」と指定し、一方、基準点に直接隣接し、その下流にあるヌクレオチドを「プラス1」、例えば「+1」と指定する。
[0325]特に断らない限り、一本鎖核酸(例えば、プレmRNA転写物、オリゴヌクレオチド、ASOなど)配列の左端は5’末端であり、一本鎖または二本鎖核酸配列の左端は5’方向と呼ばれる。同様に、核酸配列(一本鎖または二本鎖)の右端または方向は、3’末端または3’方向である。一般的に、核酸中の基準点に対して5’である領域または配列は「上流」と呼ばれ、核酸中の基準点に対して3’である領域または配列は「下流」と呼ばれる。一般的に、mRNAの5’方向または5’末端は開始コドンまたは開始コドンが位置する場所であり、一方、3’末端または3’方向は終止コドンが位置する場所である。一部の態様では、核酸中の基準点の上流であるヌクレオチドは、負の数字で示すことができ、一方、基準点の下流であるヌクレオチドは、正の数字で示すことができる。例えば、基準点(例えば、mRNA中のエクソン-エクソン連結部)を「ゼロ」部位として指定することができ、基準点に直接隣接し、その上流にあるヌクレオチドを「マイナス1」、例えば「-1」と指定し、一方、基準点に直接隣接し、その下流にあるヌクレオチドを「プラス1」、例えば「+1」と指定する。
[0326]一部の実施形態では、ASOは、プレmRNAを含有するSCN1A NIE中の含まれるエクソンの5’スプライス部位(またはNIEの3’末端)の下流(3’方向)であるプレmRNAを含有するSCN1A NIEの標的化される部分(例えば、5’スプライス部位に対して正の数字で示される方向)に相補的である(および結合する)。一部の実施形態では、ASOは、含まれるエクソンの5’スプライス部位(または3’末端)に対して約+1~約+500の領域内にあるプレmRNAを含有するSCN1A NIEの標的化される部分に相補的である。一部の実施形態では、ASOは、含まれるエクソンの5’スプライス部位(または3’末端)に対してヌクレオチド+6と+496の間の領域内にあるプレmRNAを含有するSCN1A NIEの標的化される部分に相補的であり得る。一部の態様では、ASOは、含まれるエクソンの5’スプライス部位(または3’末端)に対して約+1~約+500、約+1~約+490、約+1~約+480、約+1~約+470、約+1~約+460、約+1~約+450、約+1~約+440、約+1~約+430、約+1~約+420、約+1~約+410、約+1~約+400、約+1~約+390、約+1~約+380、約+1~約+370、約+1~約+360、約+1~約+350、約+1~約+340、約+1~約+330、約+1~約+320、約+1~約+310、約+1~約+300、約+1~約+290、約+1~約+280、約+1~約+270、約+1~約+260、約+1~約+250、約+1~約+240、約+1~約+230、約+1~約+220、約+1~約+210、約+1~約+200、約+1~約+190、約+1~約+180、約+1~約+170、約+1~約+160、約+1~約+150、約+1~約+140、約+1~約+130、約+1~約+120、約+1~約+110、約+1~約+100、約+1~約+90、約+1~約+80、約+1~約+70、約+1~約+60、約+1~約+50、約+1~約+40、約+1~約+30、または約+1~約+20の領域内にある標的化される部分に相補的である。一部の態様では、ASOは、含まれるエクソンの5’スプライス部位(または3’末端)に対して約+1~約+100、約+100~約+200、約+200~約+300、約+300~約+400、または約+400~約+500の領域内である標的化される部分に相補的である。
[0327]一部の実施形態では、ASOは、プレmRNAを含有するSCN1A NIE中の含まれるエクソンの5’スプライス部位(または3’末端)の上流(5’方向)(例えば、5’スプライス部位に対して負の数字で示される方向)であるプレmRNAを含有するSCN1A NIEの標的化される部分に相補的である(および結合する)。一部の実施形態では、ASOは、含まれるエクソンの5’スプライス部位(または3’末端)に対して約-4~約-270の領域内にあるプレmRNAを含有するSCN1A NIEの標的化される部分に相補的である。一部の実施形態では、ASOは、含まれるエクソンの5’スプライス部位(または3’末端)に対してヌクレオチド-1と-264の間の領域内にあるプレmRNAを含有するSCN1A NIEの標的化される部分に相補的であり得る。一部の態様では、ASOは、含まれるエクソンの5’スプライス部位(または3’末端)に対して約-1~約-270、約-1~約-260、約-1~約-250、約-1~約-240、約-1~約-230、約-1~約-220、約-1~約-210、約-1~約-200、約-1~約-190、約-1~約-180、約-1~約-170、約-1~約-160、約-1~約-150、約-1~約-140、約-1~約-130、約-1~約-120、約-1~約-110、約-1~約-100、約-1~約-90、約-1~約-80、約-1~約-70、約-1~約-60、約-1~約-50、約-1~約-40、約-1~約-30、または約-1~約-20の領域内にある標的化される部分に相補的である。一部の態様では、ASOは、含まれるエクソンの5’スプライス部位(または3’末端)に対して約-1~約-50、約-50~約-100、約-100~約-150、約-150~約-200、または約-200~約-250の領域内にある標的化される部分に相補的である。
[0328]一部の実施形態では、ASOは、プレmRNAを含有するSCN1A NIE中の含まれるエクソンの3’スプライス部位(または5’末端)の上流(5’方向)(例えば、負の数字で示される方向)であるプレmRNAを含有するSCN1A NIEの標的化領域に相補的である。一部の実施形態では、ASOは、含まれるエクソンの3’スプライス部位(または5’末端)に対して約-1~約-500の領域内にあるプレmRNAを含有するSCN1A NIEの標的化される部分に相補的である。一部の実施形態では、ASOは、含まれるエクソンの3’スプライス部位に対して-1~-496の領域内にあるプレmRNAを含有するSCN1A NIEの標的化される部分に相補的である。一部の態様では、ASOは、含まれるエクソンの3’スプライス部位に対して約-1~約-500、約-1~約-490、約-1~約-480、約-1~約-470、約-1~約-460、約-1~約-450、約-1~約-440、約-1~約-430、約-1~約-420、約-1~約-410、約-1~約-400、約-1~約-390、約-1~約-380、約-1~約-370、約-1~約-360、約-1~約-350、約-1~約-340、約-1~約-330、約-1~約-320、約-1~約-310、約-1~約-300、約-1~約-290、約-1~約-280、約-1~約-270、約-1~約-260、約-1~約-250、約-1~約-240、約-1~約-230、約-1~約-220、約-1~約-210、約-1~約-200、約-1~約-190、約-1~約-180、約-1~約-170、約-1~約-160、約-1~約-150、約-1~約-140、約-1~約-130、約-1~約-120、約-1~約-110、約-1~約-100、約-1~約-90、約-1~約-80、約-1~約-70、約-1~約-60、約-1~約-50、約-1~約-40、または約-1~約-30の領域内にある標的化される部分に相補的である。一部の態様では、ASOは、含まれるエクソンの3’スプライス部位に対して約-1~約-100、約-100~約-200、約-200~約-300、約-300~約-400、または約-400~約-500の領域内にある標的化される部分に相補的である。
[0329]一部の実施形態では、ASOは、プレmRNAを含有するSCN1A NIE中の含まれるエクソンの3’スプライス部位(5’末端)の下流(3’方向)(例えば、正の数字で示される方向)であるプレmRNAを含有するSCN1A NIEの標的化領域に相補的である。一部の実施形態では、ASOは、含まれるエクソンの3’スプライス部位に対して約+1~約+100の領域内にあるプレmRNAを含有するSCN1A NIEの標的化される部分に相補的である。一部の態様では、ASOは、含まれるエクソンの3’スプライス部位に対して約+1~約+90、約+1~約+80、約+1~約+70、約+1~約+60、約+1~約+50、約+1~約+40、約+1~約+30、約+1~約+20、または約+1~約+10の領域内にある標的化される部分に相補的である。
[0330]一部の実施形態では、プレmRNAを含有するSCN1A NIEの標的化される部分は、含まれるエクソンの5’スプライス部位(3’末端)に対して+100~含まれるエクソンの3’スプライス部位(5’末端)に対して-100の領域内にある。一部の実施形態では、プレmRNAを含有するSCN1A NIEの標的化される部分は、NIE内にある。一部の実施形態では、プレmRNAを含有するSCN1A NIEの標的化される部分は、偽エクソンおよびイントロン境界を含む。
[0331]ASOは、特異的結合およびスプライシングの効果的な増強に適した任意の長さであり得る。一部の実施形態では、ASOは、8~50個の核酸塩基からなる。例えば、ASOは、長さが8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、40、45、または50個の核酸塩基であり得る。一部の実施形態では、ASOは、50個を超える核酸塩基からなる。一部の実施形態では、ASOは、長さが8~50核酸塩基、8~40核酸塩基、8~35核酸塩基、8~30核酸塩基、8~25核酸塩基、8~20核酸塩基、8~15核酸塩基、9~50核酸塩基、9~40核酸塩基、9~35核酸塩基、9~30核酸塩基、9~25核酸塩基、9~20核酸塩基、9~15核酸塩基、10~50核酸塩基、10~40核酸塩基、10~35核酸塩基、10~30核酸塩基、10~25核酸塩基、10~20核酸塩基、10~15核酸塩基、11~50核酸塩基、11~40核酸塩基、11~35核酸塩基、11~30核酸塩基、11~25核酸塩基、11~20核酸塩基、11~15核酸塩基、12~50核酸塩基、12~40核酸塩基、12~35核酸塩基、12~30核酸塩基、12~25核酸塩基、12~20核酸塩基、12~15核酸塩基、13~50核酸塩基、13~40核酸塩基、13~35核酸塩基、13~30核酸塩基、13~25核酸塩基、13~20核酸塩基、14~50核酸塩基、14~40核酸塩基、14~35核酸塩基、14~30核酸塩基、14~25核酸塩基、14~20核酸塩基、15~50核酸塩基、15~40核酸塩基、15~35核酸塩基、15~30核酸塩基、15~25核酸塩基、15~20核酸塩基、20~50核酸塩基、20~40核酸塩基、20~35核酸塩基、20~30核酸塩基、20~25核酸塩基、25~50核酸塩基、25~40核酸塩基、25~35核酸塩基、または25~30核酸塩基である。一部の実施形態では、ASOは、長さが18ヌクレオチドである。一部の実施形態では、ASOは、長さが15ヌクレオチドである。一部の実施形態では、ASOは、長さが25ヌクレオチドである。
[0332]一部の実施形態では、異なる化学を有するが、プレmRNAを含有するNIEの同じ標的化される部分に相補的である2つ以上のASOが使用される。一部の実施形態では、プレmRNAを含有するNIEの異なる標的化される部分に相補的である2つ以上のASOが使用される。
[0333]実施形態では、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはアンチセンスオリゴマーは、1つまたは複数の部分またはコンジュゲート、例えば、オリゴヌクレオチドの活性または細胞取り込みを増強する標的化される部分または他のコンジュゲートに化学的に連結される。このような部分には、限定されないが、脂質部分、例えば、コレステロール部分、コレステリル部分として、脂肪族鎖、例えば、ドデカンジオールもしくはウンデシル残基、ポリアミンもしくはポリエチレングリコール鎖、またはアダマンタン酢酸が含まれる。親油性部分を含むオリゴヌクレオチドおよび調製方法は、公開された文献に記載されている。実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはアンチセンスオリゴマーは、限定されないが、脱塩基ヌクレオチド、ポリエーテル、ポリアミン、ポリアミド、ペプチド、炭水化物、例えば、N-アセチルガラクトサミン(GalNAc)、N-Ac-グルコサミン(GluNAc)、またはマンノース(例えば、マンノース-6-リン酸)、脂質、またはポリ炭化水素化合物を含む部分とコンジュゲートされる。コンジュゲートは、当技術分野において理解され、文献に記載されるように、例えばリンカーを用いて、糖、塩基またはリン酸基上のいくつかの位置のうちのいずれかでアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはアンチセンスオリゴマーを含む任意のヌクレオチドのうちの1つまたは複数に連結することができる。リンカーは、二価または三価の分枝リンカーを含むことができる。実施形態では、コンジュゲートは、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはアンチセンスオリゴマーの3’末端に結合される。オリゴヌクレオチドコンジュゲートを調製する方法は、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第8,450,467号、「Carbohydrate conjugates as delivery agents for oligonucleotides」に記載される。
[0334]一部の実施形態では、ASOにより標的化される核酸は、真核細胞などの細胞において発現されるプレmRNAを含むSCN1A NIEである。一部の実施形態では、用語「細胞」とは、細胞の集団を指すことができる。一部の実施態様では、細胞は対象内にある。一部の実施形態では、細胞は対象から単離される。一部の実施形態では、細胞はex vivoである。一部の実施形態では、細胞は、状態または疾患に関連する細胞または細胞系である。一部の実施形態では、細胞はin vitro(例えば、細胞培養)である。
[0335]一部の実施形態では、ASOはヌクレオチドの塩である。一部の実施形態では、ASOは、ヌクレオチド、完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドの塩である。一部の実施形態では、ASOは、塩がリン酸結合に結合するヌクレオチドの塩である。一部の実施形態では、ASOは、塩がリン酸結合に結合するヌクレオチド、完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドの塩である。一部の実施形態では、ASOはヌクレオチドのナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、ヌクレオチド、完全にホスホロチオエート結合されたオリゴヌクレオチドのナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、ナトリウム塩がリン酸結合に結合するヌクレオチドのナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、ナトリウム塩がリン酸結合に結合するヌクレオチド、完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOはヌクレオチドのカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、ヌクレオチド、完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、カリウム塩がリン酸結合に結合するヌクレオチドのカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、カリウム塩がリン酸結合に結合するヌクレオチド、完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのカリウム塩である。
[0336]一部の実施形態では、ASOは、2-ヌクレオチド(2-mer)のモノナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、3-ヌクレオチド(3-mer)のジナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、4-ヌクレオチド(4-mer)のトリナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、5-ヌクレオチド(5-mer)のテトラナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、6-ヌクレオチド(6-mer)のペンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、7-ヌクレオチド(7-mer)のヘキサナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、8-ヌクレオチド(8-mer)のヘプタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、9-ヌクレオチド(9-mer)のオクタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、10-ヌクレオチド(10-mer)のノナナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、11-ヌクレオチド(11-mer)のデカナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、12-ヌクレオチド(12-mer)のウンデカナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、13-ヌクレオチド(13-mer)のドデカナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、14-ヌクレオチド(14-mer)のトリデカナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、15-ヌクレオチド(15-mer)のテトラデカナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、16-ヌクレオチド(16-mer)のペンタデカナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、17-ヌクレオチド(17-mer)のヘキサデカナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、18-ヌクレオチド(18-mer)のヘプタデカナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、19-ヌクレオチド(19-mer)のオクタデカナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、20-ヌクレオチド(20-mer)のノナデカナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、21-ヌクレオチド(21-mer)のイコサナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、22-ヌクレオチド(22-mer)のヘニコサナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、23-ヌクレオチド(23-mer)のドコサナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、24-ヌクレオチド(24-mer)のトリコサナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、25-ヌクレオチド(25-mer)のテトラコサナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、26-ヌクレオチド(26-mer)のペンタコサナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、27-ヌクレオチド(27-mer)のヘキサコサナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、28-ヌクレオチド(28-mer)のヘプタコサナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、29-ヌクレオチド(29-mer)のオクタコサナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、30-ヌクレオチド(30-mer)のノナコサナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、31-ヌクレオチド(31-mer)のトリアコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、32-ヌクレオチド(32-mer)のヘントリアコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、33-ヌクレオチド(33-mer)のドトリアコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、34-ヌクレオチド(34-mer)のトリトリアコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、35-ヌクレオチド(35-mer)のテトラトリアコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、36-ヌクレオチド(36-mer)のペンタトリアコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、37-ヌクレオチド(37-mer)のヘキサトリアコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、38-ヌクレオチド(38-mer)のヘプタトリアコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、39-ヌクレオチド(39-mer)のオクタトリアコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、40-ヌクレオチド(40-mer)のノナトリアコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、41-ヌクレオチド(41-mer)のテトラコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、42-ヌクレオチド(42-mer)のヘンテトラコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、43-ヌクレオチド(43-mer)のドテトラコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、44-ヌクレオチド(44-mer)のトリテトラコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは45-ヌクレオチド(45-mer)のテトラテトラコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、46-ヌクレオチド(46-mer)のペンタテトラコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、47-ヌクレオチド(47-mer)のヘキサテトラコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、48-ヌクレオチド(48-mer)のヘプタテトラコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、49-ヌクレオチド(49-mer)のオクタテトラコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、50-ヌクレオチド(50-mer)のノナテトラコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、51-ヌクレオチド(51-mer)のペンタコンタナトリウム塩である。
[0337]一部の実施形態では、ASOは、2-ヌクレオチド(2-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのモノナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、3-ヌクレオチド(3-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのジナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、4-ヌクレオチド(4-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのトリナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、5-ヌクレオチド(5-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのテトラナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、6-ヌクレオチド(6-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのペンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、7-ヌクレオチド(7-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのヘキサナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、8-ヌクレオチド(8-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのヘプタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、9-ヌクレオチド(9-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのオクタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、10-ヌクレオチド(10-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのノナナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、11-ヌクレオチド(11-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのデカナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、12-ヌクレオチド(12-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのウンデカナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、13-ヌクレオチド(13-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのドデカナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、14-ヌクレオチド(14-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのトリデカナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、15-ヌクレオチド(15-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのテトラデカナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、16-ヌクレオチド(16-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのペンタデカナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、17-ヌクレオチド(17-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのヘキサデカナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、18-ヌクレオチド(18-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのヘプタデカナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、19-ヌクレオチド(19-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのオクタデカナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、20-ヌクレオチド(20-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのノナデカナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、21-ヌクレオチド(21-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのイコサナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、22-ヌクレオチド(22-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのヘニコサナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、23-ヌクレオチド(23-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのドコサナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、24-ヌクレオチド(24-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのトリコサナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、25-ヌクレオチド(25-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのテトラコサナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、26-ヌクレオチド(26-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのペンタコサナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、27-ヌクレオチド(27-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのヘキサコサナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、28-ヌクレオチド(28-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのヘプタコサナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、29-ヌクレオチド(29-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのオクタコサナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、30-ヌクレオチド(30-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのノナコサナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、31-ヌクレオチド(31-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのトリアコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、32-ヌクレオチド(32-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのヘントリアコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、33-ヌクレオチド(33-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのドトリアコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、34-ヌクレオチド(34-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのトリトリアコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、35-ヌクレオチド(35-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのテトラトリアコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、36-ヌクレオチド(36-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのペンタトリアコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、37-ヌクレオチド(37-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのヘキサトリアコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、38-ヌクレオチド(38-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのヘプタトリアコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、39-ヌクレオチド(39-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのオクタトリアコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、40-ヌクレオチド(40-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのノナトリアコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、41-ヌクレオチド(41-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのテトラコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、42-ヌクレオチド(42-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのヘンテトラコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、43-ヌクレオチド(43-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのドテトラコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、44-ヌクレオチド(44-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのトリテトラコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、45-ヌクレオチド(45-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのテトラテトラコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、46-ヌクレオチド(46-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのペンタテトラコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、47-ヌクレオチド(47-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのヘキサテトラコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、48-ヌクレオチド(48-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのヘプタテトラコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、49-ヌクレオチド(49-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのオクタテトラコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、50-ヌクレオチド(50-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのノナテトラコンタナトリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、51-ヌクレオチド(51-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのペンタコンタナトリウム塩である。
[0338]一部の実施形態では、ASOは、2-ヌクレオチド(2-mer)のモノカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、3-ヌクレオチド(3-mer)のジカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、4-ヌクレオチド(4-mer)のトリカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、5-ヌクレオチド(5-mer)のテトラカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、6-ヌクレオチド(6-mer)のペンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、7-ヌクレオチド(7-mer)のヘキサカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、8-ヌクレオチド(8-mer)のヘプタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、9-ヌクレオチド(9-mer)のオクタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、10-ヌクレオチド(10-mer)のノナカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、11-ヌクレオチド(11-mer)のデカカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、12-ヌクレオチド(12-mer)のウンデカカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、13-ヌクレオチド(13-mer)のドデカカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、14-ヌクレオチド(14-mer)のトリデカカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、15-ヌクレオチド(15-mer)のテトラデカカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、16-ヌクレオチド(16-mer)のペンタデカカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、17-ヌクレオチド(17-mer)のヘキサデカカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、18-ヌクレオチド(18-mer)のヘプタデカカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、19-ヌクレオチド(19-mer)のオクタデカカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、20-ヌクレオチド(20-mer)のノナデカカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、21-ヌクレオチド(21-mer)のイコサカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、22-ヌクレオチド(22-mer)のヘニコサカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、23-ヌクレオチド(23-mer)のドコサカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、24-ヌクレオチド(24-mer)のトリコサカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、25-ヌクレオチド(25-mer)のテトラコサカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、26-ヌクレオチド(26-mer)のペンタコサカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、27-ヌクレオチド(27-mer)のヘキサコサカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、28-ヌクレオチド(28-mer)のヘプタコサカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、29-ヌクレオチド(29-mer)のオクタコサカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、30-ヌクレオチド(30-mer)のノナコサカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、31-ヌクレオチド(31-mer)のトリアコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、32-ヌクレオチド(32-mer)のヘントリアコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、33-ヌクレオチド(33-mer)のドトリアコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、34-ヌクレオチド(34-mer)のトリトリアコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、35-ヌクレオチド(35-mer)のテトラトリアコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、36-ヌクレオチド(36-mer)のペンタトリアコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、37-ヌクレオチド(37-mer)のヘキサトリアコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、38-ヌクレオチド(38-mer)のヘプタトリアコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、39-ヌクレオチド(39-mer)のオクタトリアコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、40-ヌクレオチド(40-mer)のノナトリアコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、41-ヌクレオチド(41-mer)のテトラコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、42-ヌクレオチド(42-mer)のヘンテトラコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、43-ヌクレオチド(43-mer)のドテトラコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、44-ヌクレオチド(44-mer)のトリテトラコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、45-ヌクレオチド(45-mer)のテトラテトラコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、46-ヌクレオチド(46-mer)のペンタテトラコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、47-ヌクレオチド(47-mer)のヘキサテトラコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、48-ヌクレオチド(48-mer)のヘプタテトラコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、49-ヌクレオチド(49-mer)のオクタテトラコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、50-ヌクレオチド(50-mer)のノナテトラコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、51-ヌクレオチド(51-mer)のペンタコンタカリウム塩である。
[0339]一部の実施形態では、ASOは、2-ヌクレオチド(2-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのモノカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、3-ヌクレオチド(3-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのジカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、4-ヌクレオチド(4-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのトリカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、5-ヌクレオチド(5-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのテトラカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、6-ヌクレオチド(6-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのペンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、7-ヌクレオチド(7-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのヘキサカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、8-ヌクレオチド(8-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのヘプタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、9-ヌクレオチド(9-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのオクタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、10-ヌクレオチド(10-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのノナカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、11-ヌクレオチド(11-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのデカカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、12-ヌクレオチド(12-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのウンデカカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、13-ヌクレオチド(13-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのドデカカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、14-ヌクレオチド(14-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのトリデカカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、15-ヌクレオチド(15-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのテトラデカカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、16-ヌクレオチド(16-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのペンタデカカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、17-ヌクレオチド(17-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのヘキサデカカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、18-ヌクレオチド(18-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのヘプタデカカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、19-ヌクレオチド(19-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのオクタデカカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、20-ヌクレオチド(20-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのノナデカカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、21-ヌクレオチド(21-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのイコサカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、22-ヌクレオチド(22-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのヘニコサカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、23-ヌクレオチド(23-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのドコサカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、24-ヌクレオチド(24-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのトリコサカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、25-ヌクレオチド(25-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのテトラコサカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、26-ヌクレオチド(26-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのペンタコサカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、27-ヌクレオチド(27-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのヘキサコサカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、28-ヌクレオチド(28-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのヘプタコサカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、29-ヌクレオチド(29-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのオクタコサカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、30-ヌクレオチド(30-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのノナコサカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、31-ヌクレオチド(31-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのトリアコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、32-ヌクレオチド(32-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのヘントリアコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、33-ヌクレオチド(33-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのドトリアコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、34-ヌクレオチド(34-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのトリトリアコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、35-ヌクレオチド(35-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのテトラトリアコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、36-ヌクレオチド(36-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのペンタトリアコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、37-ヌクレオチド(37-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのヘキサトリアコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、38-ヌクレオチド(38-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのヘプタトリアコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、39-ヌクレオチド(39-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのオクタトリアコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、40-ヌクレオチド(40-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのノナアトリアコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、41-ヌクレオチド(41-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのテトラコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、42-ヌクレオチド(42-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのヘンテトラコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、43-ヌクレオチド(43-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのドテトラコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、44-ヌクレオチド(44-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのトリテトラコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、45-ヌクレオチド(45-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのテトラテトラコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、46-ヌクレオチド(46-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのペンタテトラコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、47-ヌクレオチド(47-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのヘキサテトラコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、48-ヌクレオチド(48-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのヘプタテトラコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、49-ヌクレオチド(49-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのオクタテトラコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、50-ヌクレオチド(50-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのノナテトラコンタカリウム塩である。一部の実施形態では、ASOは、51-ヌクレオチド(51-mer)の完全にホスホロチオエート結合したオリゴヌクレオチドのペンタコンタカリウム塩である。
SCN1A
[0340]SCN1A遺伝子はSCN1A(ナトリウムチャネル、電位依存性、I型、アルファサブユニット)タンパク質をコードすることができ、電位依存性ナトリウムチャネルNaV1.1のアルファ-サブユニットとも呼ぶことができる。また、上述したように、DSにおけるSCN1A突然変異は、タンパク質全体に広がっている。遺伝子全体で100を超える新規な突然変異が同定されており、デノボではより多くの衰弱が生じている。これらは短縮(47%)、ミスセンス(43%)、欠失(3%)、およびスプライス部位突然変異(7%)を構成する。SCN1A突然変異を有する対象のパーセンテージは33~100%で変化する。突然変異の大部分は新規の変化(88%)である。
[0340]SCN1A遺伝子はSCN1A(ナトリウムチャネル、電位依存性、I型、アルファサブユニット)タンパク質をコードすることができ、電位依存性ナトリウムチャネルNaV1.1のアルファ-サブユニットとも呼ぶことができる。また、上述したように、DSにおけるSCN1A突然変異は、タンパク質全体に広がっている。遺伝子全体で100を超える新規な突然変異が同定されており、デノボではより多くの衰弱が生じている。これらは短縮(47%)、ミスセンス(43%)、欠失(3%)、およびスプライス部位突然変異(7%)を構成する。SCN1A突然変異を有する対象のパーセンテージは33~100%で変化する。突然変異の大部分は新規の変化(88%)である。
[0341]一部の実施形態では、本明細書に記載される方法は、機能性NaV1.1タンパク質の産生をモジュレートする、例えば、増加または減少させるために使用される。本明細書で使用される場合、用語「機能性」とは、処置される状態のうちの任意の1つまたは複数の症状、例えば、ドラベ症候群、てんかん、全身性、熱性けいれんプラスを伴う、2型;熱性けいれん、家族性、3A;自閉症;てんかん性脳症、早期乳児、13;洞不全症候群1;アルツハイマー病;またはSUDEPを排除するために必要なNaV1.1タンパク質の活性または機能の量を指す。一部の実施形態では、本方法は、部分的機能性NaV1.1タンパク質の産生を増加させるために使用される。本明細書で使用される場合、用語「部分的機能性」とは、疾患または状態の任意の1つまたは複数の症状を排除または予防するのに必要な活性または機能の量よりも少ない、NaV1.1タンパク質の活性または機能の任意の量を指す。一部の実施形態では、部分的機能性タンパク質またはRNAは、完全に機能するタンパク質またはRNAに対して少なくとも10%、少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%、少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、または少なくとも95%少ない活性を有する。
[0342]一部の実施形態では、本方法は、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAを含有するNIEを有する対象の細胞によってNaV1.1タンパク質の発現を増加させる方法であり、対象は、NaV1.1タンパク質の活性の不足量により引き起こされるドラベ症候群を有し、NaV1.1タンパク質の不足量は、NaV1.1タンパク質のハプロ不全により引き起こされる。このような実施形態では、対象は、機能性NaV1.1タンパク質をコードする第1の対立遺伝子、およびNaV1.1タンパク質が産生されない第2の対立遺伝子を有する。別のこのような実施形態では、対象は、機能性NaV1.1タンパク質をコードする第1の対立遺伝子、および非機能性NaV1.1タンパク質をコードする第2の対立遺伝子を有する。別のこのような実施形態では、対象は、機能性NaV1.1タンパク質をコードする第1の対立遺伝子、および部分的機能性NaV1.1タンパク質をコードする第2の対立遺伝子を有する。一部の実施形態では、対象は、1つの対立遺伝子由来の部分的機能性NaV1.1タンパク質を発現し、部分的機能性NaV1.1タンパク質は、フレームシフト突然変異、ナンセンス突然変異、ミスセンス突然変異、または部分的遺伝子欠失によって引き起こされる。一部の実施形態では、対象は、1つの対立遺伝子由来の非機能性NaV1.1タンパク質を発現し、非機能性NaV1.1タンパク質は、1つの対立遺伝子におけるフレームシフト突然変異、ナンセンス突然変異、ミスセンス突然変異、部分的遺伝子欠失によって引き起こされる。一部の実施形態では、対象は、1つの対立遺伝子において、SCN1A全遺伝子欠失を有する。これらの実施形態のいずれかでは、アンチセンスオリゴマーは、第2の対立遺伝子から転写されたプレmRNAを含有するNIEの標的化される部分に結合し、それにより、プレmRNAからの偽エクソンのエクソンスキッピングを誘導し、機能性NaV1.1タンパク質をコードする成熟mRNAのレベルの増加、および対象の細胞におけるNaV1.1タンパク質の発現の増加を引き起こす。
[0343]本発明の実施形態では、対象はSCN1Aにおいて突然変異を有することができる。SCN1Aにおける突然変異は、上記遺伝子全体に広がることができる。NaV1.1タンパク質は4つのドメインからなり得る。上記SCN1Aドメインは、膜貫通セグメントを有することができる。上記NaV1.1タンパク質における突然変異は、上記タンパク質全体に生じ得る。上記NaV1.1タンパク質は、少なくとも2つのアイソフォームからなり得る。SCN1Aにおける突然変異は、R931C、R946C、M934I、R1648C、またはR1648Hを含み得る。一部の場合には、突然変異は、NaV1.1タンパク質のC末端で観察される場合がある。NaV1.1タンパク質における突然変異は、上記NaV1.1タンパク質の最初の3つのドメインのセグメント5と6の間のループ中にも見出すことができる。一部の場合には、突然変異は、NaV1.1タンパク質のN末端で観察される場合がある。SCN1A内の例示的な突然変異には、限定されないが、R222X、R712X、I227S、R1892X、W952X、R1245X、R1407X、W1434R、c.4338+1G>A、51516X、L1670fsX1678、またはK1846fsX1856が含まれる。本発明を標的化することができる突然変異はまた、イオンチャネルの孔をコードすることができる。
[0344]一部の実施形態では、本明細書に記載される方法および組成物は、DSを処置するために使用することができる。他の実施形態では、本明細書に記載される方法および組成物は、乳児重症ミオクロニーてんかん(severe myclonic epilepsy of infancy)(SMEI)を処置するために使用することができる。他の実施形態では、本明細書に記載される方法および組成物は、境界性ドラベ症候群;てんかん、全身性、熱性けいれんプラスを伴う、2型;熱性けいれん、家族性、3A;片頭痛、家族性片麻痺、3;自閉症;てんかん性脳症、早期乳児、13;洞不全症候群1;アルツハイマー病またはSUDEPを処置するために使用することができる。
[0345]関連する実施形態では、本方法は、ASOを使用して、タンパク質または機能性RNAの発現を増加させる方法である。一部の実施形態では、ASOは、NaV1.1タンパク質の量および機能において、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAを含有するNIEを有する対象の細胞におけるNaV1.1タンパク質の発現を増大させるために使用され、対象は、欠損症、例えば、ドラベ症候群(DS)(SMEIとしても公知である);乳児重症ミオクロニーてんかん(SMEI)境界性(SMEB);熱性けいれん(FS);てんかん、全身性、熱性けいれんプラスを伴う(GEFS+);てんかん性脳症、早期乳児、13;原因不明性全身性てんかん;原因不明性焦点てんかん;ミオクローヌス性-失立てんかん;レノックス・ガストー症候群;ウエスト症候群;特発性れん縮;早期ミオクロニー脳症;進行性ミオクロニーてんかん;小児の交代性片麻痺;未分類のてんかん性脳症;てんかんの突然の予期せぬ死亡(SUDEP);洞不全症候群1;早期乳児SCN1A脳症;早期乳児てんかん性脳症(EIEE);または自閉症を有する。一部の実施形態では、ASOは、SCN8Aタンパク質の量または機能において、対象の細胞におけるNaV1.1タンパク質の発現を増加させるために使用され、対象は、欠損症、例えば、てんかん性脳症、早期乳児、13を有する。一部の実施形態では、ASOは、SCN5Aタンパク質の量または機能において、対象の細胞におけるNaV1.1タンパク質の発現を増加させるために使用され、対象は、欠損症、例えば、洞不全症候群1を有する。
[0346]一部の実施形態では、本明細書に記載される方法および組成物はまた、境界性SMEIを処置するために使用することができる。さらに、本明細書に記載される方法および組成物は、熱性けいれんプラスを伴う(GEFS+)を伴う全身性てんかんを処置するために使用することができる。GEFS+は、SCN1BまたはGABRG2などのてんかん関連イオンチャネルサブユニットにおける突然変異と関連している場合がある。本明細書に記載される方法および組成物はまた、ナトリウムチャネル病を処置するために使用することができる。ナトリウムチャネル病は、SCN1Aにおける突然変異と関連している場合がある。ナトリウムチャネル病はまた、ベータサブユニットSCN1BなどのSCN1Aのサブユニットに関連している場合がある。一部の場合には、SCN1A突然変異に関連する追加の疾患もまた、本開示を用いて処置することができる。SCN1A突然変異に関連する関連SCN1A疾患には、限定されないが、非定型先天性ミオトニア、高カリウム性周期性麻痺、先天性パラミオトニアが含まれる。
[0347]一部の実施形態では、当技術分野において公知であり、文献(例えば、全内容が参照により本明細書に組み込まれるHamdanら、2009年、N.Engl.Med.360巻(6号)599頁、Mulleyら、2005年、Hum.Muta.25巻、535~542頁)に記載されている任意のSCN1A突然変異を有する対象は、本明細書に記載される方法および組成物を用いて処置することができる。一部の実施形態では、突然変異は、任意のSCN1Aイントロンまたはエクソン内にある。
[0348]一部の実施形態では、疾患または状態の原因であるタンパク質をコードするプレmRNA転写物を含有するNIEは、本明細書に記載されるASOによって標的化される。一部の実施形態では、疾患の原因とならないタンパク質をコードするプレmRNA転写物を含有するNIEは、ASOによって標的化される。例えば、特定の経路における第1のタンパク質の突然変異または欠損の結果である疾患は、第2のタンパク質をコードするプレmRNAを含有するNIEを標的化することによって改善され、それによって、第2のタンパク質の産生を増加させることができる。一部の実施形態では、第2のタンパク質の機能は、(疾患または状態の原因である)第1のタンパク質の突然変異または欠損を補うことができる。
[0349]一部の実施態様では、対象は、
(a)第1の突然変異対立遺伝子であって、
(i)NaV1.1タンパク質が、野生型対立遺伝子からの産生に比べて低減したレベルで産生されるか、
(ii)NaV1.1タンパク質が、等価な野生型タンパク質と比較して機能が低減した形態で産生されるか、または
(iii)NaV1.1タンパク質もしくは機能性RNAが産生されない
第1の突然変異対立遺伝子;および
(b)第2の突然変異対立遺伝子であって、
(i)NaV1.1タンパク質が、野生型対立遺伝子からの産生に比べて低減したレベルで産生されるか、
(ii)NaV1.1タンパク質が、等価な野生型タンパク質と比較して機能が低減した形態で産生されるか、または
(iii)NaV1.1タンパク質が産生されない
第2の突然変異対立遺伝子
を有し、プレmRNAを含有するNIEは、第1の対立遺伝子および/または第2の対立遺伝子から転写される。これらの実施形態では、ASOは、第1の対立遺伝子または第2の対立遺伝子から転写されたプレmRNAを含有するNIEの標的化される部分に結合し、それにより、プレmRNAを含有するNIEからの偽エクソンのエクソンスキッピングを誘導し、NaV1.1タンパク質をコードするmRNAのレベルの増加および対象の細胞における標的タンパク質または機能性RNAの発現の増加を引き起こす。これらの実施形態では、プレmRNAを含有するNIEからの偽エクソンのエクソンスキッピングから生じる発現レベルの増加を有する標的タンパク質または機能性RNAは、等価な野生型タンパク質と比較して機能が低減した形態(部分的に機能性)であるか、または等価な野生型タンパク質と比較して完全な機能を有する形態(完全に機能性)のいずれかである。
(a)第1の突然変異対立遺伝子であって、
(i)NaV1.1タンパク質が、野生型対立遺伝子からの産生に比べて低減したレベルで産生されるか、
(ii)NaV1.1タンパク質が、等価な野生型タンパク質と比較して機能が低減した形態で産生されるか、または
(iii)NaV1.1タンパク質もしくは機能性RNAが産生されない
第1の突然変異対立遺伝子;および
(b)第2の突然変異対立遺伝子であって、
(i)NaV1.1タンパク質が、野生型対立遺伝子からの産生に比べて低減したレベルで産生されるか、
(ii)NaV1.1タンパク質が、等価な野生型タンパク質と比較して機能が低減した形態で産生されるか、または
(iii)NaV1.1タンパク質が産生されない
第2の突然変異対立遺伝子
を有し、プレmRNAを含有するNIEは、第1の対立遺伝子および/または第2の対立遺伝子から転写される。これらの実施形態では、ASOは、第1の対立遺伝子または第2の対立遺伝子から転写されたプレmRNAを含有するNIEの標的化される部分に結合し、それにより、プレmRNAを含有するNIEからの偽エクソンのエクソンスキッピングを誘導し、NaV1.1タンパク質をコードするmRNAのレベルの増加および対象の細胞における標的タンパク質または機能性RNAの発現の増加を引き起こす。これらの実施形態では、プレmRNAを含有するNIEからの偽エクソンのエクソンスキッピングから生じる発現レベルの増加を有する標的タンパク質または機能性RNAは、等価な野生型タンパク質と比較して機能が低減した形態(部分的に機能性)であるか、または等価な野生型タンパク質と比較して完全な機能を有する形態(完全に機能性)のいずれかである。
[0350]一部の実施形態では、NaV1.1タンパク質をコードするmRNAのレベルは、対照細胞において産生されるNaV1.1タンパク質をコードするmRNAの量、例えば、アンチセンスオリゴマーで処置されないもの、またはプレmRNAを含有するSCN1A NIEの標的化される部分に結合しないアンチセンスオリゴマーで処置されるものと比較した場合、1.1~10倍増加する。
[0351]一部の実施形態では、本開示の方法を用いて処置される対象は、1つの対立遺伝子由来の突然変異体NaV1.1タンパク質を発現し、突然変異体NaV1.1タンパク質は、フレームシフト突然変異、ナンセンス突然変異、ミスセンス突然変異、または部分的遺伝子欠失によって引き起こされ、突然変異体NaV1.1タンパク質はNaV1.1の活性レベルの上昇を引き起こす。一部の実施形態では、本開示の方法を用いて処置される対象は、フレームシフト突然変異、ナンセンス突然変異、ミスセンス突然変異、または部分的遺伝子欠失に起因する1つの対立遺伝子由来の上昇した量のNaV1.1タンパク質を発現する。
[0352]一部の実施形態では、本開示の方法を用いて処置される対象は、1つの対立遺伝子由来の部分的機能性NaV1.1タンパク質を発現し、部分的機能性NaV1.1タンパク質は、フレームシフト突然変異、ナンセンス突然変異、ミスセンス突然変異、または部分的遺伝子欠失によって引き起こされる。一部の実施形態では、本開示の方法を用いて処置される対象は、1つの対立遺伝子由来の非機能性NaV1.1タンパク質を発現し、非機能性NaV1.1タンパク質は、1つの対立遺伝子におけるフレームシフト突然変異、ナンセンス突然変異、ミスセンス突然変異、部分的遺伝子欠失によって引き起こされる。一部の実施形態では、本開示の方法を用いて処置される対象は、1つの対立遺伝子において、SCN1A全遺伝子欠失を有する。
[0353]一部の実施形態では、本方法は、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAを含有するNIEを有する対象の細胞によるNaV1.1タンパク質の発現を減少させる方法であり、対象は、NaV1.1において機能獲得型突然変異を有する。このような実施形態では、対象は、NaV1.1タンパク質が上昇した量で産生される対立遺伝子、または細胞においてNaV1.1活性の増加を誘導する突然変異体SCN1Aをコードする対立遺伝子を有する。一部の実施形態では、NaV1.1の増加した活性は、突然変異体NaV1.1チャネルによって媒介される長時間またはほぼ持続するナトリウム電流、迅速な不活化の遅延、定常状態の不活化における正のシフト、反復刺激中のより高いチャネル利用可能性、増加した非不活化脱分極誘導持続ナトリウム電流、不活化への遅延した進入、迅速な不活化からの回復の加速、および/または相互作用するタンパク質のより低い温度でのインキュベーションもしくは共発現によるフォールディング欠陥の回復によって特徴付けられる。
標的転写物
[0354]機能性成熟Scn1a mRNAを産生するための同定されたSCN1A NIEプレmRNA種のスプライシングは、NIEのエクソンスキッピングを刺激するASOなどの治療剤を用いて誘導することができる。エクソンスキッピングの誘導は、NMD経路の阻害をもたらすことができる。その結果生じる成熟Scn1a mRNAは、NMD経路を活性化することなく正常に翻訳し、それにより、患者細胞におけるNaV1.1タンパク質の量を増加させ、ドラベ症候群(DS);てんかん、全身性、熱性けいれんプラスを伴う、2型;熱性けいれん、家族性、3A;自閉症;てんかん性脳症、早期乳児、13;洞不全症候群1;アルツハイマー病;またはSUDEPなどのSCN1A欠損症に関連する状態の症状を緩和することができる。
[0354]機能性成熟Scn1a mRNAを産生するための同定されたSCN1A NIEプレmRNA種のスプライシングは、NIEのエクソンスキッピングを刺激するASOなどの治療剤を用いて誘導することができる。エクソンスキッピングの誘導は、NMD経路の阻害をもたらすことができる。その結果生じる成熟Scn1a mRNAは、NMD経路を活性化することなく正常に翻訳し、それにより、患者細胞におけるNaV1.1タンパク質の量を増加させ、ドラベ症候群(DS);てんかん、全身性、熱性けいれんプラスを伴う、2型;熱性けいれん、家族性、3A;自閉症;てんかん性脳症、早期乳児、13;洞不全症候群1;アルツハイマー病;またはSUDEPなどのSCN1A欠損症に関連する状態の症状を緩和することができる。
[0355]種々の実施形態では、本開示は、SCN1AプレmRNA転写物を標的化し、スプライシングまたはタンパク質発現レベルをモジュレートする、例えば、増強するかまたは阻害することができる治療剤を提供する。治療剤は、小分子、ポリヌクレオチド、またはポリペプチドであり得る。一部の実施形態では、治療剤はASOである。SCN1AプレmRNA上の種々の領域または配列は、ASOなどの治療剤によって標的化することができる。一部の実施形態では、ASOは、NIEを含有するSCN1AプレmRNA転写物を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、SCN1AプレmRNA転写物のNIE内の配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、SCN1AプレmRNA転写物のNIE(3’ss)の5’末端から上流(または5’)の配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、SCN1AプレmRNA転写物のNIE(5’ss)の3’末端から下流(または3’)の配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、SCN1AプレmRNA転写物のNIEの5’末端に隣接するイントロン内にある配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、SCN1AプレmRNA転写物のNIEの3’末端に隣接するイントロン内にある配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、SCN1AプレmRNA転写物のNIE-イントロン境界を含む配列を標的化する。NIE-イントロン境界は、イントロン配列とNIE領域の接合部を指すことができる。イントロン配列は、NIEの5’末端、またはNIEの3’末端に隣接することができる。一部の実施形態では、ASOは、SCN1AプレmRNA転写物のエクソン内の配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、SCN1AプレmRNA転写物のイントロン内の配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、イントロンの一部とエクソンの一部の両方を含む配列を標的化する。
[0356]一部の実施形態では、本明細書に記載される治療剤は、NMDエクソンを含有するプレmRNAのスプライシングに関与する因子の結合をモジュレートする。一部の実施形態では、本明細書に記載される治療剤は、NMDエクソンを含有するプレmRNAのスプライシングに関与する因子の結合を妨げる。一部の実施形態では、本明細書に記載される治療剤は、NMDエクソンを含有するプレmRNAのスプライシングに関与する因子の結合を予防する。一部の実施形態では、治療剤は、NMDエクソンを含有し、NaV1.1をコードするプレmRNAの2つの標準エクソン領域の間のイントロン領域に位置する標的化される部分を標的とし、イントロン領域はNMDエクソンを含有する。一部の実施形態では、治療剤は、NMDエクソンに対して少なくとも部分的にオーバーラップする標的化される部分を標的化する。一部の実施形態では、治療剤は、NMDエクソンの上流のイントロンに対して少なくとも部分的にオーバーラップする標的化される部分を標的化する。一部の実施形態では、治療剤は、NMDエクソン内の標的化される部分を標的化する。
[0357]一部の実施形態では、治療剤は、少なくとも約5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、またはそれを超える、NMDエクソンの連続したヌクレオチドを含む標的化される部分を標的化する。一部の実施形態では、治療剤は、多くても約5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、またはそれを超える、NMDエクソンの連続したヌクレオチドを含む標的化される部分を標的化する。一部の実施形態では、治療剤は、約5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、またはそれを超える、NMDエクソンの連続したヌクレオチドを含む標的化される部分を標的化する。
[0358]一部の実施形態では、治療剤は、NMDエクソンの近位にある標的化される部分を標的化する。
[0359]一部の実施形態では、ASOは、NIEの5’末端から約4~約300ヌクレオチド上流(または5’)の配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、NIE領域の5’末端から約1~約20ヌクレオチド、約20~約50ヌクレオチド、約50~約100ヌクレオチド、約100~約150ヌクレオチド、約150~約200ヌクレオチド、約200~約250ヌクレオチド、約250~約300、約250~約300ヌクレオチド、約350~約400ヌクレオチド、約450~約500ヌクレオチド、約550~約600ヌクレオチド、約650~約700ヌクレオチド、約750~約800ヌクレオチド、約850~約900ヌクレオチド、約950~約1000ヌクレオチド、約1050~約1100ヌクレオチド、約1150~約1200ヌクレオチド、約1250~約1300ヌクレオチド、約1350~約1400ヌクレオチド、または約1450~約1500ヌクレオチド上流(または5’)の配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、NIEの5’末端から300ヌクレオチドを超える上流の配列を標的化することができる。一部の実施形態では、ASOは、NIEの3’末端から約4~約300ヌクレオチド下流(または3’)の配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、NIEの3’末端から約1~約20ヌクレオチド、約20~約50ヌクレオチド、約50~約100ヌクレオチド、約100~約150ヌクレオチド、約150~約200ヌクレオチド、約200~約250ヌクレオチド、約250~約300ヌクレオチド、約350~約400ヌクレオチド、約450~約500ヌクレオチド、約550~約600ヌクレオチド、約650~約700ヌクレオチド、約750~約800ヌクレオチド、約850~約900ヌクレオチド、約950~約1000ヌクレオチド、約1050~約1100ヌクレオチド、約1150~約1200ヌクレオチド、約1250~約1300ヌクレオチド、約1350~約1400ヌクレオチド、または約1450~約1500ヌクレオチド下流の配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、NIEの3’末端から300ヌクレオチドを超える下流の配列を標的化する。
[0359]一部の実施形態では、ASOは、NIEの5’末端から約4~約300ヌクレオチド上流(または5’)の配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、NIE領域の5’末端から約1~約20ヌクレオチド、約20~約50ヌクレオチド、約50~約100ヌクレオチド、約100~約150ヌクレオチド、約150~約200ヌクレオチド、約200~約250ヌクレオチド、約250~約300、約250~約300ヌクレオチド、約350~約400ヌクレオチド、約450~約500ヌクレオチド、約550~約600ヌクレオチド、約650~約700ヌクレオチド、約750~約800ヌクレオチド、約850~約900ヌクレオチド、約950~約1000ヌクレオチド、約1050~約1100ヌクレオチド、約1150~約1200ヌクレオチド、約1250~約1300ヌクレオチド、約1350~約1400ヌクレオチド、または約1450~約1500ヌクレオチド上流(または5’)の配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、NIEの5’末端から300ヌクレオチドを超える上流の配列を標的化することができる。一部の実施形態では、ASOは、NIEの3’末端から約4~約300ヌクレオチド下流(または3’)の配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、NIEの3’末端から約1~約20ヌクレオチド、約20~約50ヌクレオチド、約50~約100ヌクレオチド、約100~約150ヌクレオチド、約150~約200ヌクレオチド、約200~約250ヌクレオチド、約250~約300ヌクレオチド、約350~約400ヌクレオチド、約450~約500ヌクレオチド、約550~約600ヌクレオチド、約650~約700ヌクレオチド、約750~約800ヌクレオチド、約850~約900ヌクレオチド、約950~約1000ヌクレオチド、約1050~約1100ヌクレオチド、約1150~約1200ヌクレオチド、約1250~約1300ヌクレオチド、約1350~約1400ヌクレオチド、または約1450~約1500ヌクレオチド下流の配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、NIEの3’末端から300ヌクレオチドを超える下流の配列を標的化する。
[0360]一部の実施形態では、ASOは、NIEの5’末端から約4~約300ヌクレオチド上流(または5’)の配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、NIE領域の5’末端から少なくとも約1ヌクレオチド、少なくとも約10ヌクレオチド、少なくとも約20ヌクレオチド、少なくとも約50ヌクレオチド、少なくとも約80ヌクレオチド、少なくとも約85ヌクレオチド、少なくとも約90ヌクレオチド、少なくとも約95ヌクレオチド、少なくとも約96ヌクレオチド、少なくとも約97ヌクレオチド、少なくとも約98ヌクレオチド、少なくとも約99ヌクレオチド、少なくとも約100ヌクレオチド、少なくとも約101ヌクレオチド、少なくとも約102ヌクレオチド、少なくとも約103ヌクレオチド、少なくとも約104ヌクレオチド、少なくとも約105ヌクレオチド、少なくとも約110ヌクレオチド、少なくとも約120ヌクレオチド、少なくとも約150ヌクレオチド、少なくとも約200ヌクレオチド、少なくとも約300ヌクレオチド、少なくとも約400ヌクレオチド、少なくとも約500ヌクレオチド、少なくとも約600ヌクレオチド、少なくとも約700ヌクレオチド、少なくとも約800ヌクレオチド、少なくとも約900ヌクレオチド、または少なくとも約1000ヌクレオチド上流(または5’)の配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、NIEの3’末端から約4~約300ヌクレオチド下流(または3’)の配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、NIEの3’末端から少なくとも約1ヌクレオチド、少なくとも約10ヌクレオチド、少なくとも約20ヌクレオチド、少なくとも約50ヌクレオチド、少なくとも約80ヌクレオチド、少なくとも約85ヌクレオチド、少なくとも約90ヌクレオチド、少なくとも約95ヌクレオチド、少なくとも約96ヌクレオチド、少なくとも約97ヌクレオチド、少なくとも約98ヌクレオチド、少なくとも約99ヌクレオチド、少なくとも約100ヌクレオチド、少なくとも約101ヌクレオチド、少なくとも約102ヌクレオチド、少なくとも約103ヌクレオチド、少なくとも約104ヌクレオチド、少なくとも約105ヌクレオチド、少なくとも約110ヌクレオチド、少なくとも約120ヌクレオチド、少なくとも約150ヌクレオチド、少なくとも約200ヌクレオチド、少なくとも約300ヌクレオチド、少なくとも約400ヌクレオチド、少なくとも約500ヌクレオチド、少なくとも約600ヌクレオチド、少なくとも約700ヌクレオチド、少なくとも約800ヌクレオチド、少なくとも約900ヌクレオチド、または少なくとも約1000ヌクレオチド下流の配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、NIEの3’末端から300ヌクレオチドを超える下流の配列を標的化する。
[0361]一部の実施形態では、ASOは、NIEの5’末端から約4~約300ヌクレオチド上流(または5’)の配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、NIE領域の5’末端から最大で約10ヌクレオチド、最大で約20ヌクレオチド、最大で約50ヌクレオチド、最大で約80ヌクレオチド、最大で約85ヌクレオチド、最大で約90ヌクレオチド、最大で約95ヌクレオチド、最大で約96ヌクレオチド、最大で約97ヌクレオチド、最大で約98ヌクレオチド、最大で約99ヌクレオチド、最大で約100ヌクレオチド、最大で約101ヌクレオチド、最大で約102ヌクレオチド、最大で約103ヌクレオチド、最大で約104ヌクレオチド、最大で約105ヌクレオチド、最大で約110ヌクレオチド、最大で約120ヌクレオチド、最大で約150ヌクレオチド、最大で約200ヌクレオチド、最大で約300ヌクレオチド、最大で約400ヌクレオチド、最大で約500ヌクレオチド、最大で約600ヌクレオチド、最大で約700ヌクレオチド、最大で約800ヌクレオチド、最大で約900ヌクレオチド、最大で約1000ヌクレオチド、最大で約1100ヌクレオチド、最大で約1200ヌクレオチド、最大で約1300ヌクレオチド、最大で約1400ヌクレオチド、または最大で約1500ヌクレオチド上流(または5’)の配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、NIEの3’末端から約4~約300ヌクレオチド下流(または3’)の配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、NIEの3’末端から最大で約10ヌクレオチド、最大で約20ヌクレオチド、最大で約50ヌクレオチド、最大で約80ヌクレオチド、最大で約85ヌクレオチド、最大で約90ヌクレオチド、最大で約95ヌクレオチド、最大で約96ヌクレオチド、最大で約97ヌクレオチド、最大で約98ヌクレオチド、最大で約99ヌクレオチド、最大で約100ヌクレオチド、最大で約101ヌクレオチド、最大で約102ヌクレオチド、最大で約103ヌクレオチド、最大で約104ヌクレオチド、最大で約105ヌクレオチド、最大で約110ヌクレオチド、最大で約120ヌクレオチド、最大で約150ヌクレオチド、最大で約200ヌクレオチド、最大で約300ヌクレオチド、最大で約400ヌクレオチド、最大で約500ヌクレオチド、最大で約600ヌクレオチド、最大で約700ヌクレオチド、最大で約800ヌクレオチド、最大で約900ヌクレオチド、または最大で約1000ヌクレオチド、最大で約1100ヌクレオチド、最大で約1200ヌクレオチド、最大で約1300ヌクレオチド、最大で約1400ヌクレオチド、または最大で約1500ヌクレオチド下流の配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、NIEの3’末端から300ヌクレオチドを超える下流の配列を標的化する。
[0362]一部の実施態様では、本明細書に記載されるNIEは、図2に示されるように、GRCh37/hg19:chr2:166,863,740とGRCh37/hg19:chr2:166,863,803の間に位置する。一部の実施形態では、NIEの5’末端は、GRCh37/hg19:chr2:166,863,803に位置する。一部の実施形態では、NIEの3’末端は、GRCh37/hg19:chr2:166,863,740に位置する。
[0363]一部の実施形態では、ASOは、ゲノム部位GRCh37/hg19:chr2:166,863,803から約4~約300ヌクレオチド上流(または5’)の配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、ゲノム部位GRCh37/hg19:chr2:166,863,803から約1~約20ヌクレオチド、約20~約50ヌクレオチド、約50~約100ヌクレオチド、約100~約150ヌクレオチド、約150~約200ヌクレオチド、約200~約250ヌクレオチド、約250~約300、約250~約300ヌクレオチド、約350~約400ヌクレオチド、約450~約500ヌクレオチド、約550~約600ヌクレオチド、約650~約700ヌクレオチド、約750~約800ヌクレオチド、約850~約900ヌクレオチド、約950~約1000ヌクレオチド、約1050~約1100ヌクレオチド、約1150~約1200ヌクレオチド、約1250~約1300ヌクレオチド、約1350~約1400ヌクレオチド、または約1450~約1500ヌクレオチド上流(または5’)の配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、ゲノム部位GRCh37/hg19:chr2:166,863,803から300ヌクレオチドを超える上流の配列を標的化することができる。一部の実施形態では、ASOは、GRCh37/hg19:chr2:166,863,740から約4~約300ヌクレオチド下流(または3’)の配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、GRCh37/hg19:chr2:166,863,740から約1~約20ヌクレオチド、約20~約50ヌクレオチド、約50~約100ヌクレオチド、約100~約150ヌクレオチド、約150~約200ヌクレオチド、約200~約250ヌクレオチド、約250~約300ヌクレオチド、約350~約400ヌクレオチド、約450~約500ヌクレオチド、約550~約600ヌクレオチド、約650~約700ヌクレオチド、約750~約800ヌクレオチド、約850~約900ヌクレオチド、約950~約1000ヌクレオチド、約1050~約1100ヌクレオチド、約1150~約1200ヌクレオチド、約1250~約1300ヌクレオチド、約1350~約1400ヌクレオチド、または約1450~約1500ヌクレオチド下流の配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、GRCh37/hg19:chr2:166,863,740の300ヌクレオチドを超える下流の配列を標的化する。
[0364]一部の実施形態では、ASOは、ゲノム部位GRCh37/hg19:chr2:166,863,803から約4~約300ヌクレオチド上流(または5’)の配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、ゲノム部位GRCh37/hg19:chr2:166,863,803から少なくとも約1ヌクレオチド、少なくとも約10ヌクレオチド、少なくとも約20ヌクレオチド、少なくとも約50ヌクレオチド、少なくとも約80ヌクレオチド、少なくとも約85ヌクレオチド、少なくとも約90ヌクレオチド、少なくとも約95ヌクレオチド、少なくとも約96ヌクレオチド、少なくとも約97ヌクレオチド、少なくとも約98ヌクレオチド、少なくとも約99ヌクレオチド、少なくとも約100ヌクレオチド、少なくとも約101ヌクレオチド、少なくとも約102ヌクレオチド、少なくとも約103ヌクレオチド、少なくとも約104ヌクレオチド、少なくとも約105ヌクレオチド、少なくとも約110ヌクレオチド、少なくとも約120ヌクレオチド、少なくとも約150ヌクレオチド、少なくとも約200ヌクレオチド、少なくとも約300ヌクレオチド、少なくとも約400ヌクレオチド、少なくとも約500ヌクレオチド、少なくとも約600ヌクレオチド、少なくとも約700ヌクレオチド、少なくとも約800ヌクレオチド、少なくとも約900ヌクレオチド、または少なくとも約1000ヌクレオチド上流(または5’)の配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、GRCh37/hg19:chr2:166,863,740から約4~約300ヌクレオチド下流(または3’)の配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、GRCh37/hg19:chr2:166,863,740から少なくとも約1ヌクレオチド、少なくとも約10ヌクレオチド、少なくとも約20ヌクレオチド、少なくとも約50ヌクレオチド、少なくとも約80ヌクレオチド、少なくとも約85ヌクレオチド、少なくとも約90ヌクレオチド、少なくとも約95ヌクレオチド、少なくとも約96ヌクレオチド、少なくとも約97ヌクレオチド、少なくとも約98ヌクレオチド、少なくとも約99ヌクレオチド、少なくとも約100ヌクレオチド、少なくとも約101ヌクレオチド、少なくとも約102ヌクレオチド、少なくとも約103ヌクレオチド、少なくとも約104ヌクレオチド、少なくとも約105ヌクレオチド、少なくとも約110ヌクレオチド、少なくとも約120ヌクレオチド、少なくとも約150ヌクレオチド、少なくとも約200ヌクレオチド、少なくとも約300ヌクレオチド、少なくとも約400ヌクレオチド、少なくとも約500ヌクレオチド、少なくとも約600ヌクレオチド、少なくとも約700ヌクレオチド、少なくとも約800ヌクレオチド、少なくとも約900ヌクレオチド、または少なくとも約1000ヌクレオチド下流の配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、GRCh37/hg19:chr2:166,863,740から300ヌクレオチドを超える下流の配列を標的化する。
[0365]一部の実施形態では、ASOは、ゲノム部位GRCh37/hg19:chr2:166,863,803から約4~約300ヌクレオチド上流(または5’)の配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、ゲノム部位GRCh37/hg19:chr2:166,863,803から最大で約10ヌクレオチド、最大で約20ヌクレオチド、最大で約50ヌクレオチド、最大で約80ヌクレオチド、最大で約85ヌクレオチド、最大で約90ヌクレオチド、最大で約95ヌクレオチド、最大で約96ヌクレオチド、最大で約97ヌクレオチド、最大で約98ヌクレオチド、最大で約99ヌクレオチド、最大で約100ヌクレオチド、最大で約101ヌクレオチド、最大で約102ヌクレオチド、最大で約103ヌクレオチド、最大で約104ヌクレオチド、最大で約105ヌクレオチド、最大で約110ヌクレオチド、最大で約120ヌクレオチド、最大で約150ヌクレオチド、最大で約200ヌクレオチド、最大で約300ヌクレオチド、最大で約400ヌクレオチド、最大で約500ヌクレオチド、最大で約600ヌクレオチド、最大で約700ヌクレオチド、最大で約800ヌクレオチド、最大で約900ヌクレオチド、最大で約1000ヌクレオチド、最大で約1100ヌクレオチド、最大で約1200ヌクレオチド、最大で約1300ヌクレオチド、最大で約1400ヌクレオチド、または最大で約1500ヌクレオチド上流(または5’)の配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、GRCh37/hg19:chr2:166,863,740から約4~約300ヌクレオチド下流(または3’)の配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、GRCh37/hg19:chr2:166,863,740から最大で約10ヌクレオチド、最大で約20ヌクレオチド、最大で約50ヌクレオチド、最大で約80ヌクレオチド、最大で約85ヌクレオチド、最大で約90ヌクレオチド、最大で約95ヌクレオチド、最大で約96ヌクレオチド、最大で約97ヌクレオチド、最大で約98ヌクレオチド、最大で約99ヌクレオチド、最大で約100ヌクレオチド、最大で約101ヌクレオチド、最大で約102ヌクレオチド、最大で約103ヌクレオチド、最大で約104ヌクレオチド、最大で約105ヌクレオチド、最大で約110ヌクレオチド、最大で約120ヌクレオチド、最大で約150ヌクレオチド、最大で約200ヌクレオチド、最大で約300ヌクレオチド、最大で約400ヌクレオチド、最大で約500ヌクレオチド、最大で約600ヌクレオチド、最大で約700ヌクレオチド、最大で約800ヌクレオチド、最大で約900ヌクレオチド、または最大で約1000ヌクレオチド、最大で約1100ヌクレオチド、最大で約1200ヌクレオチド、最大で約1300ヌクレオチド、最大で約1400ヌクレオチド、または最大で約1500ヌクレオチド下流の配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、GRCh37/hg19:chr2:166,863,740から300ヌクレオチドを超える下流の配列を標的化する。
[0366]SCN1A遺伝子(配列番号1)をNIEについて分析し、イントロン20の一部(配列番号4)の含有(この部分は、本開示全体を通してエクソン20xと呼ばれる)を観察した。一部の実施形態では、本明細書に開示されるASOは、SCN1Aゲノム配列から転写されるプレmRNA(配列番号2)を含有するNIEを標的化する。一部の実施形態では、ASOは、イントロン20の一部を含むSCN1Aゲノム配列由来のプレmRNA転写物を含有するNIEを標的化する。一部の実施形態では、ASOは、エクソン20x(配列番号6)を含むSCN1Aゲノム配列由来のプレmRNA転写物を含有するNIEを標的化する。一部の実施形態では、ASOは、配列番号2または12のプレmRNA転写物を含有するNIEを標的化する。一部の実施形態では、ASOは、NIEを含む配列番号2または12のプレmRNA転写物を含有するNIEを標的化する。一部の実施形態では、ASOは、エクソン20x(配列番号10)を含む配列番号2のプレmRNA転写物を含有するNIEを標的化する。一部の実施形態では、本明細書に開示されるASOは、SCN1AプレmRNA配列(配列番号2または12)を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、NIEを含むSCN1AプレmRNA配列(配列番号10または20)を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、配列番号7~10または17~20のうちのいずれか1つによるSCN1AプレmRNA配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、配列番号21~67のうちのいずれか1つによる配列を有する。一部の実施形態では、ASOは、配列番号68~114のうちのいずれか1つによる配列を有する。一部の実施形態では、ASOは、配列番号115~209のうちのいずれか1つによる配列を有する。一部の実施形態では、ASOは、配列番号210~256のうちのいずれか1つによる配列を有する。一部の実施形態では、ASOは、配列番号257~303のうちのいずれか1つによる配列を有する。一部の実施形態では、ASOは、配列番号304~341のうちのいずれか1つによる配列を有する。一部の実施形態では、ASOは、配列番号342~379のうちのいずれか1つによる配列を有する。一部の実施形態では、ASOは、配列番号380~1099のうちのいずれか1つによる配列を有する。一部の実施形態では、ASOは、配列番号304~1099のうちのいずれか1つによる配列を有する。一部の実施形態では、ASOは、表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8a、および8bに列挙された配列のうちのいずれか1つによる配列を有する。
[0367]一部の実施形態では、プレmRNA転写物を含有するSCN1A NIEは、配列番号1または11に対して少なくとも約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%の配列同一性を有する遺伝子配列によりコードされる。一部の実施形態では、SCN1A NIEプレmRNA転写物は、配列番号2~10および12~20のうちのいずれか1つに対して少なくとも約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%の配列同一性を有する配列を含む。
[0368]一部の実施形態では、ASOは、NIEエクソン20xを含むプレmRNAを含有するSCN1A NIEのエクソン20を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、NIEエクソン20xの下流(または3’)のエクソン21配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、エクソン20xの5’末端から約4~約300ヌクレオチド上流(または5’)の配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、エクソン20xの3’末端から約4~約300ヌクレオチド下流(または3’)の配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、配列番号21~67のうちのいずれか1つによる配列を有する。一部の実施形態では、ASOは、配列番号210~256のうちのいずれか1つによる配列を有する。一部の実施形態では、ASOは、配列番号380~1099のうちのいずれか1つによる配列を有する。一部の実施形態では、ASOは、配列番号304~1099のうちのいずれか1つによる配列を有する。一部の実施形態では、ASOは、表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8a、および8bに列挙された配列のうちのいずれか1つによる配列を有する。
[0369]一部の実施形態では、ASOは、NIEの5’末端から上流の配列を標的化する。例えば、NIEの5’末端から上流の配列(例えば、ヒトSCN1Aにおけるエクソン20x、またはマウスSCN1Aにおけるエクソン21x)を標的化するASOは、配列番号21~38のうちのいずれか1つに対して少なくとも80%、85%、90%、95%、97%、または100%の配列同一性を有する配列を含むことができる。別の例では、NIEの5’末端から上流の配列(例えば、ヒトSCN1Aにおけるエクソン20x、またはマウスSCN1Aにおけるエクソン21x)を標的化するASOは、配列番号68~85のうちのいずれか1つに対して少なくとも80%、85%、90%、95%、97%、または100%の配列同一性を有する配列を含むことができる。一部の実施形態では、ASOは、エクソン-イントロン境界(または接合部)を含有する配列を標的化する。例えば、エクソン-イントロン境界を含有する配列を標的化するASOは、配列番号39~41、51、52、228~230、240、または241のうちのいずれか1つに対して少なくとも80%、85%、90%、95%、97%、または100%の配列同一性を有する配列を含むことができる。別の例では、エクソン-イントロン境界を含有する配列を標的化するASOは、配列番号86~88および98~99のうちのいずれか1つに対して少なくとも80%、85%、90%、95%、97%、または100%の配列同一性を有する配列を含むことができる。一部の実施形態では、ASOは、NIEの3’末端から下流の配列を標的化する。例えば、NIEの3’末端から下流の配列(例えば、ヒトSCN1Aにおけるエクソン20x、またはマウスSCN1Aにおけるエクソン21x)を標的化するASOは、配列番号53~67のうちのいずれか1つに対して少なくとも80%、85%、90%、95%、97%、または100%の配列同一性を有する配列を含むことができる。別の例では、NIEの3’末端から下流の配列(例えば、ヒトSCN1Aにおけるエクソン20x、またはマウスSCN1Aにおけるエクソン21x)を標的化するASOは、配列番号100~114のうちのいずれか1つに対して少なくとも80%、85%、90%、95%、97%、または100%の配列同一性を有する配列を含むことができる。一部の実施形態では、ASOは、NIE内の配列を標的化する。例えば、NIE内の配列(例えば、ヒトSCN1Aにおけるエクソン20x、またはマウスSCN1Aにおけるエクソン21x)を標的化するASOは、配列番号42~50または231~239のうちのいずれか1つに対して少なくとも80%、85%、90%、95%、97%、または100%の配列同一性を有する配列を含むことができる。別の例では、NIE内の配列(例えば、ヒトSCN1Aにおけるエクソン20x、またはマウスSCN1Aにおけるエクソン21x)を標的化するASOは、配列番号89~97のうちのいずれか1つに対して少なくとも80%、85%、90%、95%、97%、または100%の配列同一性を有する配列を含むことができる。
[0370]一部の実施形態では、ASOは、エクソン20xを含むプレmRNAを含有するSCN1A NIEにおけるエクソン20xを標的化する。一部の実施形態では、ASOは、SCN1AプレmRNAのエクソン20xの5’末端から下流(または3’)のエクソン20x配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、SCN1AプレmRNAのエクソン20xの3’末端から上流(または5’)のエクソン20x配列を標的化する。
[0371]一部の実施形態では、プレmRNA転写物を含有するSCN1A NIEは、配列番号2、7~10、12、および17~20のうちのいずれか1つに対して少なくとも約80%、85%、90%、95%、97%、または100%の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、プレmRNA転写物を含有するSCN1A NIEは、配列番号1、3~6、11、および13~16に対して少なくとも約80%、85%、90%、95%、97%、または100%の配列同一性を有する配列によりコードされる。一部の実施形態では、NMDエクソンを含有し、NaV1.1をコードするプレmRNAの標的化される部分は、配列番号2、7~10、12および17~20の少なくとも8つの連続する核酸を含む領域に対して少なくとも80%、85%、90%、95%、97%、または100%の配列同一性を有する配列を含む。
[0372]一部の実施形態では、ASOは、プレmRNA転写物を含有するNIEを標的化する。一部の実施形態では、ASOは、NIEを含むプレmRNA転写物を含有するNIEを標的化する。一部の実施形態では、ASOは、エクソン20xを含むプレmRNA転写物を含有するNIEを標的化する。一部の実施形態では、本明細書に開示されるASOは、SCN1AプレmRNA配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、NIEを含むSCN1AプレmRNA配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、SCN1AプレmRNA配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、配列番号21~67、210~256または304~1099のうちのいずれか1つによる配列を有する。別の例では、ASOは、配列番号21~67、210~256または304~1099のうちのいずれか1つに対して少なくとも80%、85%、90%、95%、97%、または100%の配列同一性を有する配列を含む。別の例では、ASOは、表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8a、および8bに列挙された配列のうちのいずれか1つに対して少なくとも80%、85%、90%、95%、97%、または100%の配列同一性を有する配列を含む。
[0373]一部の実施形態では、ASOは、NIEエクソン20xを含むプレmRNAを含有するSCN1A NIEのエクソン20を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、NIEエクソン20xの下流(または3’)のエクソン21配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、エクソン20xの5’末端から約4~約300ヌクレオチド上流(または5’)の配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、エクソン20xの3’末端から約4~約300ヌクレオチド下流(または3’)の配列を標的化する。
[0374]一部の実施形態では、ASOは、NIEの5’末端から上流の配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、エクソン-イントロン境界(または接合部)を含有する配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、NIEの3’末端から下流の配列(例えば、ヒトSCN1Aにおけるエクソン20x、またはマウスSCN1Aにおけるエクソン21x)を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、NIE内の配列を標的化する。
[0375]一部の実施形態では、ASOは、エクソン20xを含むプレmRNAを含有するSCN1A NIEにおけるエクソン20xを標的化する。一部の実施形態では、ASOは、SCN1AプレmRNAのエクソン20xの5’末端から下流(または3’)のエクソン20x配列を標的化する。一部の実施形態では、ASOは、SCN1AプレmRNAのエクソン20xの3’末端から上流(または5’)のエクソン20x配列を標的化する。
[0376]一部の実施形態では、プレmRNAを含有するSCN1A NIEの標的化される部分は、イントロン1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、または25(NM_006920のmRNA配列に対応するイントロン番号付け)にある。一部の実施形態では、NIEプレmRNAの標的化される部分へのASOのハイブリダイゼーションは、イントロン1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、または25内のNIEの少なくとも1つのエクソンスキッピングをもたらし、その後、NaV1.1タンパク質産生を増加させる。一部の実施形態では、NIEプレmRNAの標的化される部分へのASOのハイブリダイゼーションは、イントロン1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、または25内のNIEの少なくとも1つのエクソンスキッピングを阻害または遮断し、その後、NaV1.1タンパク質産生を減少させる。一部の実施形態では、プレmRNAを含有するSCN1A NIEの標的化される部分はイントロン20内にある。当業者は、本明細書に提供されるイントロン配列に基づいて、またはNM_006920、NM_001202435、NM_001165964、もしくはNM_001165963におけるmRNA配列に関して提供される番号を用いて、任意のアイソフォーム中の対応するイントロン番号を決定することができる。当業者は、本明細書に提供されるイントロン配列に基づいて、またはNM_006920、NM_001202435、NM_001165964、もしくはNM_001165963におけるmRNA配列に関して提供されるイントロン番号を用いて、本発明の方法を用いて標的化するための任意のSCN1Aアイソフォーム中の隣接エクソンの配列を決定することもできる。
治療剤
[0377]本開示の種々の実施形態では、治療剤を含む組成物および方法は、SCN1Aのタンパク質発現レベルをモジュレートするために提供される。一部の実施形態では、本明細書では、SCNA1プレmRNAの代替スプライシングをモジュレートするための組成物および方法が提供される。一部の実施形態では、本明細書では、SCN1AプレmRNAのスプライシング中にエクソンスキッピングを誘導し、例えば、SCN1AプレmRNAのスプライシング中に偽エクソンのスキッピングを誘導するための組成物および方法が提供される。他の実施形態では、治療剤は、タンパク質発現レベルを減少させるために、エクソンの包含を誘導するために使用され得る。
[0377]本開示の種々の実施形態では、治療剤を含む組成物および方法は、SCN1Aのタンパク質発現レベルをモジュレートするために提供される。一部の実施形態では、本明細書では、SCNA1プレmRNAの代替スプライシングをモジュレートするための組成物および方法が提供される。一部の実施形態では、本明細書では、SCN1AプレmRNAのスプライシング中にエクソンスキッピングを誘導し、例えば、SCN1AプレmRNAのスプライシング中に偽エクソンのスキッピングを誘導するための組成物および方法が提供される。他の実施形態では、治療剤は、タンパク質発現レベルを減少させるために、エクソンの包含を誘導するために使用され得る。
[0378]一部の実施形態では、本明細書に開示される治療剤は、小分子、ポリペプチド、またはポリ核酸ポリマーである。一部の例では、治療剤は小分子である。一部の例では、治療剤はポリペプチドである。一部の例では、治療剤はポリ核酸ポリマーである。一部の場合には、治療剤はリプレッサー剤である。さらなる場合には、治療剤はエンハンサー剤である。
[0379]本明細書に開示される治療剤は、NIEリプレッサー剤であり得る。治療剤は、ポリ核酸ポリマーを含み得る。
[0380]本開示の一態様によれば、本明細書では、機能性NaV1.1タンパク質のレベルを増加させるために、NIEリプレッサー剤を対象に投与することを含む、機能性NaV1.1タンパク質欠損に関連する状態の処置または予防の方法が提供され、NIEリプレッサー剤がプレmRNA転写物の領域に結合して、成熟転写物中のNIEの包含を減少させる。例えば、本明細書では、機能性NaV1.1タンパク質のレベルを増加させるために、NIEリプレッサー剤を対象に投与することを含む、機能性NaV1.1タンパク質欠損に関連する状態の処置または予防の方法が提供され、NIEリプレッサー剤がプレmRNA転写物のNIEを含有するイントロンの領域(例えば、ヒトSCN1A遺伝子におけるイントロン20)、または同じイントロン中のNIE活性化調節配列に結合する。
[0380]本開示の一態様によれば、本明細書では、機能性NaV1.1タンパク質のレベルを増加させるために、NIEリプレッサー剤を対象に投与することを含む、機能性NaV1.1タンパク質欠損に関連する状態の処置または予防の方法が提供され、NIEリプレッサー剤がプレmRNA転写物の領域に結合して、成熟転写物中のNIEの包含を減少させる。例えば、本明細書では、機能性NaV1.1タンパク質のレベルを増加させるために、NIEリプレッサー剤を対象に投与することを含む、機能性NaV1.1タンパク質欠損に関連する状態の処置または予防の方法が提供され、NIEリプレッサー剤がプレmRNA転写物のNIEを含有するイントロンの領域(例えば、ヒトSCN1A遺伝子におけるイントロン20)、または同じイントロン中のNIE活性化調節配列に結合する。
[0381]ポリ核酸ポリマーの配列は、mRNA転写物、例えば、部分的にプロセシングされたmRNA転写物の標的配列に少なくとも50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または99.5%相補的であり得る。ポリ核酸ポリマーの配列は、プレmRNA転写物の標的配列に100%相補的であり得る。
[0382]ポリ核酸ポリマーの配列は、プレmRNA転写物の標的配列に対して4つまたはそれより少ないミスマッチを有することができる。ポリ核酸ポリマーの配列は、プレmRNA転写物の標的配列に対して3つまたはそれより少ないミスマッチを有することができる。ポリ核酸ポリマーの配列は、プレmRNA転写物の標的配列に対して2つまたはそれより少ないミスマッチを有することができる。ポリ核酸ポリマーの配列は、プレmRNA転写物の標的配列に対して1つまたはそれより少ないミスマッチを有することができる。ポリ核酸ポリマーの配列は、プレmRNA転写物の標的配列とミスマッチを有しない場合がある。
[0383]ポリ核酸ポリマーは、プレmRNA転写物の標的配列に特異的にハイブリダイズすることができる。例えば、ポリ核酸ポリマーは、プレ-mRNA転写物の標的配列に91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%または100%の配列相補性を有し得る。ハイブリダイゼーションは、高ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下であり得る。
[0384]ポリ核酸ポリマーは、配列番号21~67からなる群から選択される配列に対して少なくとも50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または99.5%の配列同一性を有する配列を有し得る。ポリ核酸ポリマーは、配列番号21~67からなる群から選択される配列に対して100%の配列同一性を有する配列を有し得る。一部の例では、ポリ核酸ポリマーは、配列番号68~114からなる群から選択される配列に対して少なくとも50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または99.5%の配列同一性を有する配列を有し得る。一部の場合には、ポリ核酸ポリマーは、配列番号68~114からなる群から選択される配列に対して100%の配列同一性を有する配列を有し得る。
[0385]一部の例では、ポリ核酸ポリマーは、配列番号21~67、210~256または304~1099からなる群から選択される配列に対して少なくとも50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または99.5%の配列同一性を有する配列を有し得る。一部の場合には、ポリ核酸ポリマーは、配列番号21~67、210~256または304~1099からなる群から選択される配列に対して100%の配列同一性を有する配列を有し得る。一部の場合には、ポリ核酸ポリマーは、表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8a、および8bに列挙された配列から選択される配列に対して100%の配列同一性を有する配列を有し得る。
[0386]NIEリプレッサー剤がポリ核酸ポリマーを含む実施形態では、ポリ核酸ポリマーは、長さが約50ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーは、長さが約45ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーは、長さが約40ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーは、長さが約35ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーは、長さが約30ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーは、長さが約24ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーは、長さが約25ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーは、長さが約20ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーは、長さが約19ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーは、長さが約18ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーは、長さが約17ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーは、長さが約16ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーは、長さが約15ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーは、長さが約14ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーは、長さが約13ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーは、長さが約12ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーは、長さが約11ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーは、長さが約10ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーは、長さが約10~約50ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーは、長さが約10~約45ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーは、長さが約10~約40ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーは、長さが約10~約35ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーは、長さが約10~約30ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーは、長さが約10~約25ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーは、長さが約10~約20ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーは、長さが約15~約25ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーは、長さが約15~約30ヌクレオチドであり得る。ポリ核酸ポリマーは、長さが約12~約30ヌクレオチドであり得る。
[0387]ポリ核酸ポリマーの配列は、mRNA転写物、例えば、部分的にプロセシングされたmRNA転写物の標的配列に少なくとも50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、または99.5%相補的であり得る。ポリ核酸ポリマーの配列は、プレmRNA転写物の標的配列に100%相補的であり得る。
[0388]種々の実施例において本明細書に記載されるように、ヒトSCN1A遺伝子におけるエクソン20xは、マウスSCN1A遺伝子におけるエクソン21xと同等である。
[0389]また、本開示の範囲内には、NMD阻害剤、例えば、シクロヘキシミドの存在下でNMD誘導性エクソンを同定または検証する方法がある。
[0389]また、本開示の範囲内には、NMD阻害剤、例えば、シクロヘキシミドの存在下でNMD誘導性エクソンを同定または検証する方法がある。
[0390]ポリ核酸ポリマー配列に言及する場合、当業者は、1つもしくは複数の置換が許容され得ること、標的配列にハイブリダイズする能力を維持するように、任意に2つの置換が配列中で許容され得ること、または置換が標的配列中にある場合、標的配列として認識される能力を理解する。配列同一性への言及は、標準/デフォルトパラメーターを用いたBLAST配列アラインメントによって決定され得る。例えば、配列は、99%の同一性を有し、本開示に従ってなお機能することができる。他の実施形態では、配列は、98%の同一性を有し、本開示に従ってなお機能することができる。別の実施形態では、配列は、95%の同一性を有し、本開示に従ってなお機能することができる。別の実施形態では、配列は、90%の同一性を有し、本開示に従ってなお機能することができる。
医薬組成物
[0391]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、人工脳脊髄液(aCSF)溶液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、等張液中に可溶化または希釈される。
[0391]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、人工脳脊髄液(aCSF)溶液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、等張液中に可溶化または希釈される。
[0392]「人工脳脊髄液(aCSF)」という用語は、本明細書で使用される場合、中枢神経系(CNS)への薬剤の投与のためのビヒクル溶液としてよく使用される生物学的緩衝溶液を指す。aCSFは、例えば、内因性CSFの電解質濃度および生理学的適合性と厳密に一致し、ホメオスタシス、浸透圧およびpHを生理学的レベルで維持することによって神経組織の生命維持環境を可能にする。
[0393]「等張液」という用語は、本明細書で使用される場合、血流中の血漿と同様の電解質バランスを含有する溶液を指す。対象または患者への等張液の投与は、体液移動を伴わずに対象または患者の体液量を増大させる可能性がある。例示的等張溶液として、それだけには限らないが、0.9%生理食塩水、乳酸リンゲル溶液、リンゲル溶液、プラズマライト(plasmalyte)および水中の5%デキストロース(D5W)が挙げられる。
[0394]「低調液」という用語は、本明細書で使用される場合、血漿よりも低い濃度の電解質を有する溶液を指す。例えば、静脈内経路を介した低調液の投与は、血流から間質性および細胞内空間中のより高い濃度の領域への体液の移動につながる可能性がある。例示的低調液として、それだけには限らないが、0.45%生理食塩水(2分の1生理食塩水)、0.33%のNaCl溶液、0.225%のNaCl溶液および水中の2.5%のデキストロース(D2.5W)が挙げられる。
[0395]「高張液」という用語は、本明細書で使用される場合、血漿よりも高い濃度の電解質を有する溶液を指す。例えば、静脈内経路を介した高調液の投与は、電解質を希釈するために、間質性および細胞内空間から血流中へ体液を移動する可能性がある。例示的高張液として、それだけには限らないが、3%のNaCl溶液、0.45% NaCl中の5%のデキストロース(D5 1/2 NS)、0.9%生理食塩水中の5%デキストロース(D5NS)、乳酸リンゲル溶液中の5%デキストロース(D5LR)、水中の10%デキストロース(D10W)、水中の20%デキストロース(D20W)および水中の50%デキストロース(D50W)が挙げられる。
[0396]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、リン酸緩衝(pH6.6~7.6)溶液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、リン酸緩衝(pH6.0~8.0)溶液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、リン酸緩衝(pH5.0~8.0)溶液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、pH4.5~8.5、pH4.6~8.5、pH4.7~8.5、pH4.8~8.5、pH4.9~8.5、pH5.0~8.5、pH5.1~8.5、pH5.2~8.5、pH5.3~8.5、pH5.4~8.5、pH5.5~8.5、pH5.6~8.5、pH5.7~8.5、pH5.8~8.5、H5.9~8.5、pH6.0~8.5、pH6.1~8.5、pH6.2~8.5、pH6.3~8.5、pH6.4~8.5、pH6.5~8.5、pH6.6~8.5、pH6.7~8.5、pH6.8~8.5、pH6.9~8.5、pH7.0~8.5、pH7.1~8.5、pH7.2~8.5、pH7.3~8.5、pH7.4~8.5、pH7.5~8.5、pH7.6~8.5、pH7.7~8.5、pH7.8~8.5、pH7.9~8.5、pH8.0~8.5、pH8.1~8.5、pH8.2~8.5、pH8.3~8.5またはpH8.4~8.5を有するリン酸緩衝溶液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、pH4.5~8.3、pH4.5~8.2、pH4.5~8.1、pH4.5~8.0、pH4.5~7.9、pH4.5~7.8、pH4.5~7.7、pH4.5~7.6、pH4.5~7.5、pH4.5~7.4、pH4.5~7.3、pH4.5~7.2、pH4.5~7.1、pH4.5~7.0、pH4.5~6.9、pH4.5~6.8、pH4.5~6.7、pH4.5~6.6、pH4.5~6.5、pH4.5~6.4、pH4.5~6.3、pH4.5~6.2、pH4.5~6.1、pH4.5~6.0、pH4.5~5.9、pH4.5~5.8、pH4.5~5.7、pH4.5~5.6、pH4.5~5.5、pH4.5~5.4、pH4.5~5.3、pH4.5~5.2、pH4.5~5.1、pH4.5~5.0、pH4.5~4.9、pH4.5~4.8、pH4.5~4.7またはH4.5~4.6を有するリン酸緩衝溶液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、pH6.0~7.6、pH6.1~7.6、pH6.2~7.6、pH6.3~7.6、pH6.4~7.6、pH6.5~7.6、pH6.6~7.6、pH6.7~7.6、pH6.8~7.6、pH6.9~7.6、pH7.0~7.6、pH7.1~7.6、pH7.2~7.6、pH7.3~7.6、pH7.4~7.6またはpH7.5~7.6を有するリン酸緩衝溶液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、pH6.6~8.0、pH6.6~7.9、pH6.6~7.8、pH6.6~7.7、pH6.6~7.6、pH6.6~7.5、pH6.6~7.4、pH6.6~7.3、pH6.6~7.2、pH6.6~7.1、pH6.6~7.0、pH6.6~6.9、pH6.6~6.8またはpH6.6~6.7を有するリン酸緩衝溶液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、pH6.0~8.0、pH6.1~8.0、pH6.2~8.0、pH6.3~8.0、pH6.4~8.0、pH6.5~8.0、pH6.6~8.0、pH6.7~8.0、pH6.8~8.0、pH6.9~8.0、pH7.0~8.0、pH7.1~8.0、pH7.2~8.0、pH7.3~8.0、pH7.4~8.0、pH7.5~8.0、pH7.6~8.0、pH7.7~8.0、pH7.8~8.0またはpH7.9~8.0を有するリン酸緩衝溶液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、pH6.0~7.9、pH6.0~7.8、pH6.0~7.7、pH6.0~7.6、pH6.0~7.5、pH6.0~7.4、pH6.0~7.3、pH6.0~7.2、pH6.0~7.1、pH6.0~7.0、pH6.0~6.9、pH6.0~6.8、pH6.0~6.7、pH6.0~6.6、pH6.0~6.5、pH6.0~6.4、pH6.0~6.3、pH6.0~6.2またはpH6.0~6.1を有するリン酸緩衝溶液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、pH5.7~8.5、5.8~8.4、5.9~8.3、6.0~8.2、6.1~8.1、6.2~8.0、6.3~7.9、6.4~7.8、6.5~7.7または6.6~7.6を有するリン酸緩衝溶液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、pH約5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9または8.0を有するリン酸緩衝溶液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、pH5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9または8.0を有するリン酸緩衝溶液中に可溶化または希釈される。
[0397]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、25~250mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0398]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、25~250、30~250、35~250、40~250、45~250、50~250、55~250、60~250、65~250、70~250、75~250、80~250、85~250、90~250、95~250、100~250、105~250、110~250、115~250、120~250、125~250、130~250、135~250、140~250、145~250、150~250、155~250、160~250、165~250、170~250、175~250、180~250、185~250、190~250、195~250、200~250、205~250、210~250、215~250、220~250、225~250、230~250、235~250、240~250または245~250mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、25~245、25~240、25~235、25~230、25~225、25~220、25~215、25~210、25~205、25~200、25~195、25~190、25~185、25~180、25~175、25~170、25~165、25~160、25~155、25~150、25~145、25~140、25~135、25~130、25~125、25~120、25~115、25~110、25~105、25~110、25~105、25~100、25~95、25~90、25~85、25~80、25~75、25~70、25~65、25~60、25~55、25~50、25~45、25~40、25~35または25~30mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、30~245、35~240、40~235、45~230、50~225、55~220、60~215、65~210、70~205、75~200、80~195、85~190、90~185、95~180、100~175、105~170、110~165、115~160、120~155、125~150、130~145または135~140mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、100~140、101~140、102~140、103~140、104~140、105~140、106~140、107~140、108~140、109~140、110~140、111~140、112~140、113~140、114~140、115~140、116~140、117~140、118~140、119~140、120~140、121~140、122~140、123~140、124~140、125~140、126~140、127~140、128~140、129~140、130~140、131~140、132~140、133~140、134~140、135~140、136~140、137~140、138~140または139~140mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、100~139、100~138、100~137、100~136、100~135、100~134、100~133、100~132、100~131、100~130、100~129、100~128、100~127、100~126、100~125、100~124、100~123、100~122、100~121、100~120、100~119、100~118、100~117、100~116、100~115、100~114、100~113、100~112、100~111、100~110、100~109、100~108、100~107、100~106、100~105、100~104、100~103、100~102または100~101mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139または140mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139または140mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139または140mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0398]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、25~250、30~250、35~250、40~250、45~250、50~250、55~250、60~250、65~250、70~250、75~250、80~250、85~250、90~250、95~250、100~250、105~250、110~250、115~250、120~250、125~250、130~250、135~250、140~250、145~250、150~250、155~250、160~250、165~250、170~250、175~250、180~250、185~250、190~250、195~250、200~250、205~250、210~250、215~250、220~250、225~250、230~250、235~250、240~250または245~250mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、25~245、25~240、25~235、25~230、25~225、25~220、25~215、25~210、25~205、25~200、25~195、25~190、25~185、25~180、25~175、25~170、25~165、25~160、25~155、25~150、25~145、25~140、25~135、25~130、25~125、25~120、25~115、25~110、25~105、25~110、25~105、25~100、25~95、25~90、25~85、25~80、25~75、25~70、25~65、25~60、25~55、25~50、25~45、25~40、25~35または25~30mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、30~245、35~240、40~235、45~230、50~225、55~220、60~215、65~210、70~205、75~200、80~195、85~190、90~185、95~180、100~175、105~170、110~165、115~160、120~155、125~150、130~145または135~140mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、100~140、101~140、102~140、103~140、104~140、105~140、106~140、107~140、108~140、109~140、110~140、111~140、112~140、113~140、114~140、115~140、116~140、117~140、118~140、119~140、120~140、121~140、122~140、123~140、124~140、125~140、126~140、127~140、128~140、129~140、130~140、131~140、132~140、133~140、134~140、135~140、136~140、137~140、138~140または139~140mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、100~139、100~138、100~137、100~136、100~135、100~134、100~133、100~132、100~131、100~130、100~129、100~128、100~127、100~126、100~125、100~124、100~123、100~122、100~121、100~120、100~119、100~118、100~117、100~116、100~115、100~114、100~113、100~112、100~111、100~110、100~109、100~108、100~107、100~106、100~105、100~104、100~103、100~102または100~101mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139または140mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139または140mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139または140mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0399]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~20mMのKClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0400]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~40、0.1~39、0.1~38、0.1~37、0.1~36、0.1~35、0.1~34、0.1~33、0.1~32、0.1~31、0.1~30、0.1~29、0.1~28、0.1~27、0.1~26、0.1~25、0.1~24、0.1~23、0.1~22、0.1~21、0.1~20、0.1~19、0.1~18、0.1~17、0.1~16、0.1~15、0.1~14、0.1~13、0.1~12、0.1~10、0.1~9、0.1~8、0.1~7、0.1~6、0.1~5、0.1~4、0.1~3、0.1~2または0.1~1mMのKClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.2~40、0.3~40、0.4~40、0.5~40、0.6~40、0.7~40、0.8~40、0.9~40、1~40、2~40、3~40、4~40、5~40、6~40、7~40、8~40、9~40、10~40、11~40、12~40、13~40、14~40、15~40、16~40、17~40、18~40、19~40、20~40、21~40、22~40、23~40、24~40、25~40、26~40、27~40、28~40、29~40、30~40、31~40、32~40、33~40、34~40、35~40、36~40、37~40、38~40または39~40mMのKClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~3.5、0.2~3.5、0.3~3.5、0.4~3.5、0.5~3.5、0.6~3.5、0.7~3.5、0.8~3.5、0.9~3.5、1.0~3.5、1.1~3.5、1.2~3.5、1.3~3.5、1.4~3.5、1.5~3.5、1.6~3.5、1.7~3.5、1.8~3.5、1.9~3.5、2.0~3.5、2.1~3.5、2.2~3.5、2.3~3.5、2.4~3.5、2.5~3.5、2.6~3.5、2.7~3.5、2.8~3.5、2.9~3.5、3.0~3.5、3.1~3.5、3.2~3.5、3.3~3.5または3.4~3.5mMのKClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~3.4、0.1~3.3、0.1~3.2、0.1~3.1、0.1~3.0、0.1~2.9、0.1~2.8、0.1~2.7、0.1~2.6、0.1~2.5、0.1~2.4、0.1~2.3、0.1~2.2、0.1~2.1、0.1~2.0、0.1~1.9、0.1~1.8、0.1~1.7、0.1~1.6、0.1~1.5、0.1~1.4、0.1~1.3、0.1~1.2、0.1~1.1、0.1~1.0、0.1~0.9、0.1~0.8、0.1~0.7、0.1~0.6、0.1~0.5、0.1~0.4、0.1~0.3または0.1~0.2mMのKClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4または3.5mMのKClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4または3.5mMのKClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4または3.5mMのKClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0400]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~40、0.1~39、0.1~38、0.1~37、0.1~36、0.1~35、0.1~34、0.1~33、0.1~32、0.1~31、0.1~30、0.1~29、0.1~28、0.1~27、0.1~26、0.1~25、0.1~24、0.1~23、0.1~22、0.1~21、0.1~20、0.1~19、0.1~18、0.1~17、0.1~16、0.1~15、0.1~14、0.1~13、0.1~12、0.1~10、0.1~9、0.1~8、0.1~7、0.1~6、0.1~5、0.1~4、0.1~3、0.1~2または0.1~1mMのKClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.2~40、0.3~40、0.4~40、0.5~40、0.6~40、0.7~40、0.8~40、0.9~40、1~40、2~40、3~40、4~40、5~40、6~40、7~40、8~40、9~40、10~40、11~40、12~40、13~40、14~40、15~40、16~40、17~40、18~40、19~40、20~40、21~40、22~40、23~40、24~40、25~40、26~40、27~40、28~40、29~40、30~40、31~40、32~40、33~40、34~40、35~40、36~40、37~40、38~40または39~40mMのKClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~3.5、0.2~3.5、0.3~3.5、0.4~3.5、0.5~3.5、0.6~3.5、0.7~3.5、0.8~3.5、0.9~3.5、1.0~3.5、1.1~3.5、1.2~3.5、1.3~3.5、1.4~3.5、1.5~3.5、1.6~3.5、1.7~3.5、1.8~3.5、1.9~3.5、2.0~3.5、2.1~3.5、2.2~3.5、2.3~3.5、2.4~3.5、2.5~3.5、2.6~3.5、2.7~3.5、2.8~3.5、2.9~3.5、3.0~3.5、3.1~3.5、3.2~3.5、3.3~3.5または3.4~3.5mMのKClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~3.4、0.1~3.3、0.1~3.2、0.1~3.1、0.1~3.0、0.1~2.9、0.1~2.8、0.1~2.7、0.1~2.6、0.1~2.5、0.1~2.4、0.1~2.3、0.1~2.2、0.1~2.1、0.1~2.0、0.1~1.9、0.1~1.8、0.1~1.7、0.1~1.6、0.1~1.5、0.1~1.4、0.1~1.3、0.1~1.2、0.1~1.1、0.1~1.0、0.1~0.9、0.1~0.8、0.1~0.7、0.1~0.6、0.1~0.5、0.1~0.4、0.1~0.3または0.1~0.2mMのKClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4または3.5mMのKClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4または3.5mMのKClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4または3.5mMのKClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0401]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~50mMのNa2HPO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0402]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.01~100、0.02~100、0.03~100、0.04~100、0.05~100、0.06~100、0.07~100、0.08~100、0.09~100、0.1~100、0.2~100、0.3~100、0.4~100、0.5~100、0.6~100、0.7~100、0.8~100、0.9~100、1~100、2~100、3~100、4~100、5~100、6~100、7~100、8~100、9~100、10~100、15~100、20~100、25~100、30~100、35~100、40~100、45~100、50~100、55~100、60~100、65~100、70~100、75~100、80~100、85~100、90~100または95~100mMのNa2HPO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.01~95、0.01~90、0.01~85、0.01~80、0.01~75、0.01~70、0.01~65、0.01~60、0.01~55、0.01~50、0.01~45、0.01~40、0.01~35、0.01~30、0.01~25、0.01~20、0.01~15、0.01~10、0.01~9、0.01~8、0.01~7、0.01~6、0.01~5、0.01~4、0.01~3、0.01~2、0.01~1、0.01~0.9、0.01~0.8、0.01~0.7、0.01~0.6、0.01~0.5、0.01~0.4、0.01~0.3、0.01~0.2、0.01~0.1、0.01~0.09、0.01~0.08、0.01~0.07、0.01~0.06、0.01~0.05、0.01~0.04、0.01~0.03または0.01~0.02mMのNa2HPO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~3.0、0.1~2.9、0.1~2.8、0.1~2.7、0.1~2.6、0.1~2.5、0.1~2.4、0.1~2.3、0.1~2.2、0.1~2.1、0.1~2.0、0.1~1.9、0.1~1.8、0.1~1.7、0.1~1.6、0.1~1.5、0.1~1.4、0.1~1.3、0.1~1.2、0.1~1.1、0.1~1.0、0.1~0.9、0.1~0.8、0.1~0.7、0.1~0.6、0.1~0.5、0.1~0.4、0.1~0.3または0.1~0.2mMのNa2HPO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~3.0、0.2~3.0、0.3~3.0、0.4~3.0、0.5~3.0、0.6~3.0、0.7~3.0、0.8~3.0、0.9~3.0、1.0~3.0、1.2~3.0、1.3~3.0、1.4~3.0、1.5~3.0、1.6~3.0、1.7~3.0、1.8~3.0、1.9~3.0、2.0~3.0、2.1~3.0、2.2~3.0、2.3~3.0、2.4~3.0、2.5~3.0、2.6~3.0、2.7~3.0、2.8~3.0または2.9~3.0mMのNa2HPO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9または3.0mMのNa2HPO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9または3.0mMのNa2HPO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9または3.0mMのNa2HPO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0402]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.01~100、0.02~100、0.03~100、0.04~100、0.05~100、0.06~100、0.07~100、0.08~100、0.09~100、0.1~100、0.2~100、0.3~100、0.4~100、0.5~100、0.6~100、0.7~100、0.8~100、0.9~100、1~100、2~100、3~100、4~100、5~100、6~100、7~100、8~100、9~100、10~100、15~100、20~100、25~100、30~100、35~100、40~100、45~100、50~100、55~100、60~100、65~100、70~100、75~100、80~100、85~100、90~100または95~100mMのNa2HPO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.01~95、0.01~90、0.01~85、0.01~80、0.01~75、0.01~70、0.01~65、0.01~60、0.01~55、0.01~50、0.01~45、0.01~40、0.01~35、0.01~30、0.01~25、0.01~20、0.01~15、0.01~10、0.01~9、0.01~8、0.01~7、0.01~6、0.01~5、0.01~4、0.01~3、0.01~2、0.01~1、0.01~0.9、0.01~0.8、0.01~0.7、0.01~0.6、0.01~0.5、0.01~0.4、0.01~0.3、0.01~0.2、0.01~0.1、0.01~0.09、0.01~0.08、0.01~0.07、0.01~0.06、0.01~0.05、0.01~0.04、0.01~0.03または0.01~0.02mMのNa2HPO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~3.0、0.1~2.9、0.1~2.8、0.1~2.7、0.1~2.6、0.1~2.5、0.1~2.4、0.1~2.3、0.1~2.2、0.1~2.1、0.1~2.0、0.1~1.9、0.1~1.8、0.1~1.7、0.1~1.6、0.1~1.5、0.1~1.4、0.1~1.3、0.1~1.2、0.1~1.1、0.1~1.0、0.1~0.9、0.1~0.8、0.1~0.7、0.1~0.6、0.1~0.5、0.1~0.4、0.1~0.3または0.1~0.2mMのNa2HPO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~3.0、0.2~3.0、0.3~3.0、0.4~3.0、0.5~3.0、0.6~3.0、0.7~3.0、0.8~3.0、0.9~3.0、1.0~3.0、1.2~3.0、1.3~3.0、1.4~3.0、1.5~3.0、1.6~3.0、1.7~3.0、1.8~3.0、1.9~3.0、2.0~3.0、2.1~3.0、2.2~3.0、2.3~3.0、2.4~3.0、2.5~3.0、2.6~3.0、2.7~3.0、2.8~3.0または2.9~3.0mMのNa2HPO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9または3.0mMのNa2HPO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9または3.0mMのNa2HPO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9または3.0mMのNa2HPO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0403]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~50mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0404]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.01~100、0.02~100、0.03~100、0.04~100、0.05~100、0.06~100、0.07~100、0.08~100、0.09~100、0.1~100、0.2~100、0.3~100、0.4~100、0.5~100、0.6~100、0.7~100、0.8~100、0.9~100、1~100、2~100、3~100、4~100、5~100、6~100、7~100、8~100、9~100、10~100、15~100、20~100、25~100、30~100、35~100、40~100、45~100、50~100、55~100、60~100、65~100、70~100、75~100、80~100、85~100、90~100または95~100mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.01~95、0.01~90、0.01~85、0.01~80、0.01~75、0.01~70、0.01~65、0.01~60、0.01~55、0.01~50、0.01~45、0.01~40、0.01~35、0.01~30、0.01~25、0.01~20、0.01~15、0.01~10、0.01~9、0.01~8、0.01~7、0.01~6、0.01~5、0.01~4、0.01~3、0.01~2、0.01~1、0.01~0.9、0.01~0.8、0.01~0.7、0.01~0.6、0.01~0.5、0.01~0.4、0.01~0.3、0.01~0.2、0.01~0.1、0.01~0.09、0.01~0.08、0.01~0.07、0.01~0.06、0.01~0.05、0.01~0.04、0.01~0.03または0.01~0.02mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~3.0、0.1~2.9、0.1~2.8、0.1~2.7、0.1~2.6、0.1~2.5、0.1~2.4、0.1~2.3、0.1~2.2、0.1~2.1、0.1~2.0、0.1~1.9、0.1~1.8、0.1~1.7、0.1~1.6、0.1~1.5、0.1~1.4、0.1~1.3、0.1~1.2、0.1~1.1、0.1~1.0、0.1~0.9、0.1~0.8、0.1~0.7、0.1~0.6、0.1~0.5、0.1~0.4、0.1~0.3または0.1~0.2mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~3.0、0.2~3.0、0.3~3.0、0.4~3.0、0.5~3.0、0.6~3.0、0.7~3.0、0.8~3.0、0.9~3.0、1.0~3.0、1.2~3.0、1.3~3.0、1.4~3.0、1.5~3.0、1.6~3.0、1.7~3.0、1.8~3.0、1.9~3.0、2.0~3.0、2.1~3.0、2.2~3.0、2.3~3.0、2.4~3.0、2.5~3.0、2.6~3.0、2.7~3.0、2.8~3.0または2.9~3.0mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9または3.0mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9または3.0mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9または3.0mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0404]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.01~100、0.02~100、0.03~100、0.04~100、0.05~100、0.06~100、0.07~100、0.08~100、0.09~100、0.1~100、0.2~100、0.3~100、0.4~100、0.5~100、0.6~100、0.7~100、0.8~100、0.9~100、1~100、2~100、3~100、4~100、5~100、6~100、7~100、8~100、9~100、10~100、15~100、20~100、25~100、30~100、35~100、40~100、45~100、50~100、55~100、60~100、65~100、70~100、75~100、80~100、85~100、90~100または95~100mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.01~95、0.01~90、0.01~85、0.01~80、0.01~75、0.01~70、0.01~65、0.01~60、0.01~55、0.01~50、0.01~45、0.01~40、0.01~35、0.01~30、0.01~25、0.01~20、0.01~15、0.01~10、0.01~9、0.01~8、0.01~7、0.01~6、0.01~5、0.01~4、0.01~3、0.01~2、0.01~1、0.01~0.9、0.01~0.8、0.01~0.7、0.01~0.6、0.01~0.5、0.01~0.4、0.01~0.3、0.01~0.2、0.01~0.1、0.01~0.09、0.01~0.08、0.01~0.07、0.01~0.06、0.01~0.05、0.01~0.04、0.01~0.03または0.01~0.02mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~3.0、0.1~2.9、0.1~2.8、0.1~2.7、0.1~2.6、0.1~2.5、0.1~2.4、0.1~2.3、0.1~2.2、0.1~2.1、0.1~2.0、0.1~1.9、0.1~1.8、0.1~1.7、0.1~1.6、0.1~1.5、0.1~1.4、0.1~1.3、0.1~1.2、0.1~1.1、0.1~1.0、0.1~0.9、0.1~0.8、0.1~0.7、0.1~0.6、0.1~0.5、0.1~0.4、0.1~0.3または0.1~0.2mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~3.0、0.2~3.0、0.3~3.0、0.4~3.0、0.5~3.0、0.6~3.0、0.7~3.0、0.8~3.0、0.9~3.0、1.0~3.0、1.2~3.0、1.3~3.0、1.4~3.0、1.5~3.0、1.6~3.0、1.7~3.0、1.8~3.0、1.9~3.0、2.0~3.0、2.1~3.0、2.2~3.0、2.3~3.0、2.4~3.0、2.5~3.0、2.6~3.0、2.7~3.0、2.8~3.0または2.9~3.0mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9または3.0mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9または3.0mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9または3.0mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0405]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~50mMのCaCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0406]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~50、0.2~50、0.3~50、0.4~50、0.5~50、0.6~50、0.7~50、0.8~50、0.9~50、1.0~50、~50、1.1~50、1.2~50、1.3~50、1.4~50、1.5~50、1.6~50、1.7~50、1.8~50、1.9~50、2.0~50、2.1~50、2.2~50、2.3~50、2.4~50、2.5~50、2.6~50、2.7~50、2.8~50、2.9~50、3.0~50、3.1~50、3.2~50、3.3~50、3.4~50、3.5~50、3.6~50、3.7~50、3.8~50、3.9~50、4~50、5~50、6~50、7~50、8~50、9~50、10~50、15~50、20~50、25~50、1 30~50、35~50、40~50または45~50mMのCaCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~45、0.1~40、0.1~35、0.1~30、0.1~25、0.1~20、0.1~15、0.1~10、0.1~5、0.1~4、0.1~4.9、0.1~4.8、0.1~4.7、0.1~4.6、0.1~4.5、0.1~4.4、0.1~4.3、0.1~4.2、0.1~4.1、0.1~4.0、0.1~3.9、0.1~3.8、0.1~3.7、0.1~3.6、0.1~3.5、0.1~3.4、0.1~3.3、0.1~3.2、0.1~3.1、0.1~3.0、0.1~2.9、0.1~2.8、0.1~2.7、0.1~2.6、0.1~2.5、0.1~2.4、0.1~2.3、0.1~2.2、0.1~2.1、0.1~2.0、0.1~1.9、0.1~1.8、0.1~1.7、0.1~1.6、0.1~1.5、0.1~1.4、0.1~1.3、0.1~1.2、0.1~1.1、0.1~1.0、0.1~0.9、0.1~0.8、0.1~0.7、0.1~0.6、0.1~0.5、0.1~0.4、0.1~0.3または0.1~0.2mMのCaCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9または4.0mMのCaCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9または4.0mMのCaCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9または4.0mMのCaCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0406]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~50、0.2~50、0.3~50、0.4~50、0.5~50、0.6~50、0.7~50、0.8~50、0.9~50、1.0~50、~50、1.1~50、1.2~50、1.3~50、1.4~50、1.5~50、1.6~50、1.7~50、1.8~50、1.9~50、2.0~50、2.1~50、2.2~50、2.3~50、2.4~50、2.5~50、2.6~50、2.7~50、2.8~50、2.9~50、3.0~50、3.1~50、3.2~50、3.3~50、3.4~50、3.5~50、3.6~50、3.7~50、3.8~50、3.9~50、4~50、5~50、6~50、7~50、8~50、9~50、10~50、15~50、20~50、25~50、1 30~50、35~50、40~50または45~50mMのCaCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~45、0.1~40、0.1~35、0.1~30、0.1~25、0.1~20、0.1~15、0.1~10、0.1~5、0.1~4、0.1~4.9、0.1~4.8、0.1~4.7、0.1~4.6、0.1~4.5、0.1~4.4、0.1~4.3、0.1~4.2、0.1~4.1、0.1~4.0、0.1~3.9、0.1~3.8、0.1~3.7、0.1~3.6、0.1~3.5、0.1~3.4、0.1~3.3、0.1~3.2、0.1~3.1、0.1~3.0、0.1~2.9、0.1~2.8、0.1~2.7、0.1~2.6、0.1~2.5、0.1~2.4、0.1~2.3、0.1~2.2、0.1~2.1、0.1~2.0、0.1~1.9、0.1~1.8、0.1~1.7、0.1~1.6、0.1~1.5、0.1~1.4、0.1~1.3、0.1~1.2、0.1~1.1、0.1~1.0、0.1~0.9、0.1~0.8、0.1~0.7、0.1~0.6、0.1~0.5、0.1~0.4、0.1~0.3または0.1~0.2mMのCaCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9または4.0mMのCaCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9または4.0mMのCaCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9または4.0mMのCaCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0407]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~50mMのMgCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0408]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~50、0.2~50、0.3~50、0.4~50、0.5~50、0.6~50、0.7~50、0.8~50、0.9~50、1.0~50、~50、1.1~50、1.2~50、1.3~50、1.4~50、1.5~50、1.6~50、1.7~50、1.8~50、1.9~50、2.0~50、2.1~50、2.2~50、2.3~50、2.4~50、2.5~50、2.6~50、2.7~50、2.8~50、2.9~50、3.0~50、3.1~50、3.2~50、3.3~50、3.4~50、3.5~50、3.6~50、3.7~50、3.8~50、3.9~50、4~50、5~50、6~50、7~50、8~50、9~50、10~50、15~50、20~50、25~50、1 30~50、35~50、40~50または45~50mMのMgCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~45、0.1~40、0.1~35、0.1~30、0.1~25、0.1~20、0.1~15、0.1~10、0.1~5、0.1~4、0.1~4.9、0.1~4.8、0.1~4.7、0.1~4.6、0.1~4.5、0.1~4.4、0.1~4.3、0.1~4.2、0.1~4.1、0.1~4.0、0.1~3.9、0.1~3.8、0.1~3.7、0.1~3.6、0.1~3.5、0.1~3.4、0.1~3.3、0.1~3.2、0.1~3.1、0.1~3.0、0.1~2.9、0.1~2.8、0.1~2.7、0.1~2.6、0.1~2.5、0.1~2.4、0.1~2.3、0.1~2.2、0.1~2.1、0.1~2.0、0.1~1.9、0.1~1.8、0.1~1.7、0.1~1.6、0.1~1.5、0.1~1.4、0.1~1.3、0.1~1.2、0.1~1.1、0.1~1.0、0.1~0.9、0.1~0.8、0.1~0.7、0.1~0.6、0.1~0.5、0.1~0.4、0.1~0.3または0.1~0.2mMのMgCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9または4.0mMのMgCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9または4.0mMのMgCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9または4.0mMのMgCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0408]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~50、0.2~50、0.3~50、0.4~50、0.5~50、0.6~50、0.7~50、0.8~50、0.9~50、1.0~50、~50、1.1~50、1.2~50、1.3~50、1.4~50、1.5~50、1.6~50、1.7~50、1.8~50、1.9~50、2.0~50、2.1~50、2.2~50、2.3~50、2.4~50、2.5~50、2.6~50、2.7~50、2.8~50、2.9~50、3.0~50、3.1~50、3.2~50、3.3~50、3.4~50、3.5~50、3.6~50、3.7~50、3.8~50、3.9~50、4~50、5~50、6~50、7~50、8~50、9~50、10~50、15~50、20~50、25~50、1 30~50、35~50、40~50または45~50mMのMgCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~45、0.1~40、0.1~35、0.1~30、0.1~25、0.1~20、0.1~15、0.1~10、0.1~5、0.1~4、0.1~4.9、0.1~4.8、0.1~4.7、0.1~4.6、0.1~4.5、0.1~4.4、0.1~4.3、0.1~4.2、0.1~4.1、0.1~4.0、0.1~3.9、0.1~3.8、0.1~3.7、0.1~3.6、0.1~3.5、0.1~3.4、0.1~3.3、0.1~3.2、0.1~3.1、0.1~3.0、0.1~2.9、0.1~2.8、0.1~2.7、0.1~2.6、0.1~2.5、0.1~2.4、0.1~2.3、0.1~2.2、0.1~2.1、0.1~2.0、0.1~1.9、0.1~1.8、0.1~1.7、0.1~1.6、0.1~1.5、0.1~1.4、0.1~1.3、0.1~1.2、0.1~1.1、0.1~1.0、0.1~0.9、0.1~0.8、0.1~0.7、0.1~0.6、0.1~0.5、0.1~0.4、0.1~0.3または0.1~0.2mMのMgCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9または4.0mMのMgCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9または4.0mMのMgCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9または4.0mMのMgCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0409]一部の実施形態では、ASOは、1~100mMのNaHCO3、1~100mMのKHCO3またはそれらの組合せをさらに含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0410]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、1~100mMのNaHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0410]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、1~100mMのNaHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0411]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、1~99、1~95、1~90、1~85、1~80、1~75、1~70、1~65、1~60、1~55、1~50、1~45、1~40、1~35、1~30、1~25、1~20、1~15、1~10、1~9、1~8、1~7、1~6、1~5、1~4、1~3または1~2mMのNaHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、2~100、3~100、4~100、5~100、6~100、7~100、8~100、9~100、10~100、15~100、20~100、25~100、30~100、35~100、40~100、45~100、50~100、55~100、60~100、65~100、70~100、75~100、80~100、85~100、90~100または95~100mMのNaHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、24.0~28.0、24.0~27.9、24.0~27.8、24.0~27.7、24.0~27.6、24.0~27.5、24.0~27.4、24.0~27.3、24.0~27.2、24.0~27.1、24.0~27.0、24.0~26.9、24.0~26.8、24.0~26.7、24.0~26.6、24.0~26.5、24.0~26.4、24.0~26.3、24.0~26.2、24.0~26.1、24.0~26.0、24.0~25.9、4.0~25.8、24.0~25.7、24.0~25.6、24.0~25.5、24.0~25.4、24.0~25.3、24.0~25.2、24.0~25.1、24.0~25.0、24.0~24.9、24.0~24.8、24.0~24.7、24.0~24.6、24.0~24.5、24.0~24.4、24.0~24.3、24.0~24.2または24.0~24.1mMのNaHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、24.1~28.0、24.2~28.0、24.3~28.0、24.4~28.0、24.5~28.0、24.6~28.0、24.7~28.0、24.8~28.0、24.9~28.0、25.0~28.0、25.1~28.0、25.2~28.0、25.3~28.0、25.4~28.0、25.5~28.0、25.6~28.0、25.7~28.0、25.8~28.0、25.9~28.0、26.0~28.0、26.1~28.0、26.2~28.0、26.3~28.0、26.4~28.0、26.5~28.0、26.6~28.0、26.7~28.0、26.8~28.0、26.9~28.0、27.0~28.0、27.1~28.0、27.2~28.0、27.3~28.0、27.4~28.0、27.5~28.0、27.6~28.0、27.7~28.0、27.8~28.0または27.9~28.0mMのNaHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.0、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9または28.0mMのNaHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9または28.0mMのNaHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9または28.0mMのNaHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0412]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、1~100mMのKHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0413]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、1~99、1~95、1~90、1~85、1~80、1~75、1~70、1~65、1~60、1~55、1~50、1~45、1~40、1~35、1~30、1~25、1~20、1~15、1~10、1~9、1~8、1~7、1~6、1~5、1~4、1~3または1~2mMのKHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、2~100、3~100、4~100、5~100、6~100、7~100、8~100、9~100、10~100、15~100、20~100、25~100、30~100、35~100、40~100、45~100、50~100、55~100、60~100、65~100、70~100、75~100、80~100、85~100、90~100または95~100mMのKHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、24.0~28.0、24.0~27.9、24.0~27.8、24.0~27.7、24.0~27.6、24.0~27.5、24.0~27.4、24.0~27.3、24.0~27.2、24.0~27.1、24.0~27.0、24.0~26.9、24.0~26.8、24.0~26.7、24.0~26.6、24.0~26.5、24.0~26.4、24.0~26.3、24.0~26.2、24.0~26.1、24.0~26.0、24.0~25.9、4.0~25.8、24.0~25.7、24.0~25.6、24.0~25.5、24.0~25.4、24.0~25.3、24.0~25.2、24.0~25.1、24.0~25.0、24.0~24.9、24.0~24.8、24.0~24.7、24.0~24.6、24.0~24.5、24.0~24.4、24.0~24.3、24.0~24.2または24.0~24.1mMのKHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、24.1~28.0、24.2~28.0、24.3~28.0、24.4~28.0、24.5~28.0、24.6~28.0、24.7~28.0、24.8~28.0、24.9~28.0、25.0~28.0、25.1~28.0、25.2~28.0、25.3~28.0、25.4~28.0、25.5~28.0、25.6~28.0、25.7~28.0、25.8~28.0、25.9~28.0、26.0~28.0、26.1~28.0、26.2~28.0、26.3~28.0、26.4~28.0、26.5~28.0、26.6~28.0、26.7~28.0、26.8~28.0、26.9~28.0、27.0~28.0、27.1~28.0、27.2~28.0、27.3~28.0、27.4~28.0、27.5~28.0、27.6~28.0、27.7~28.0、27.8~28.0または27.9~28.0mMのKHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.0、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9または28.0mMのKHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9または28.0mMのKHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9または28.0mMのKHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0413]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、1~99、1~95、1~90、1~85、1~80、1~75、1~70、1~65、1~60、1~55、1~50、1~45、1~40、1~35、1~30、1~25、1~20、1~15、1~10、1~9、1~8、1~7、1~6、1~5、1~4、1~3または1~2mMのKHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、2~100、3~100、4~100、5~100、6~100、7~100、8~100、9~100、10~100、15~100、20~100、25~100、30~100、35~100、40~100、45~100、50~100、55~100、60~100、65~100、70~100、75~100、80~100、85~100、90~100または95~100mMのKHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、24.0~28.0、24.0~27.9、24.0~27.8、24.0~27.7、24.0~27.6、24.0~27.5、24.0~27.4、24.0~27.3、24.0~27.2、24.0~27.1、24.0~27.0、24.0~26.9、24.0~26.8、24.0~26.7、24.0~26.6、24.0~26.5、24.0~26.4、24.0~26.3、24.0~26.2、24.0~26.1、24.0~26.0、24.0~25.9、4.0~25.8、24.0~25.7、24.0~25.6、24.0~25.5、24.0~25.4、24.0~25.3、24.0~25.2、24.0~25.1、24.0~25.0、24.0~24.9、24.0~24.8、24.0~24.7、24.0~24.6、24.0~24.5、24.0~24.4、24.0~24.3、24.0~24.2または24.0~24.1mMのKHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、24.1~28.0、24.2~28.0、24.3~28.0、24.4~28.0、24.5~28.0、24.6~28.0、24.7~28.0、24.8~28.0、24.9~28.0、25.0~28.0、25.1~28.0、25.2~28.0、25.3~28.0、25.4~28.0、25.5~28.0、25.6~28.0、25.7~28.0、25.8~28.0、25.9~28.0、26.0~28.0、26.1~28.0、26.2~28.0、26.3~28.0、26.4~28.0、26.5~28.0、26.6~28.0、26.7~28.0、26.8~28.0、26.9~28.0、27.0~28.0、27.1~28.0、27.2~28.0、27.3~28.0、27.4~28.0、27.5~28.0、27.6~28.0、27.7~28.0、27.8~28.0または27.9~28.0mMのKHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.0、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9または28.0mMのKHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9または28.0mMのKHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9または28.0mMのKHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0414]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0~50mMのKH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0415]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0~100、0.01~100、0.02~100、0.03~100、0.04~100、0.05~100、0.06~100、0.07~100、0.08~100、0.09~100、0.1~100、0.2~100、0.3~100、0.4~100、0.5~100、0.6~100、0.7~100、0.8~100、0.9~100、1~100、2~100、3~100、4~100、5~100、6~100、7~100、8~100、9~100、10~100、15~100、20~100、25~100、30~100、35~100、40~100、45~100、50~100、55~100、60~100、65~100、70~100、75~100、80~100、85~100、90~100または95~100mMのKH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0~95、0~90、0~85、0~80、0~75、0~70、0~65、0~60、0~55、0~50、0~45、0~40、0~35、0~30、0~25、0~20、0~15、0~10、0~9、0~8、0~7、0~6、0~5、0~4、0~3、0~2、0~1、0~0.9、0~0.8、0~0.7、0~0.6、0~0.5、0~0.4、0~0.3、0~0.2、0~0.1、0~0.09、0~0.08、0~0.07、0~0.06、0~0.05、0~0.04、0~0.03または0~0.02mMのKH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.01~95、0.01~90、0.01~85、0.01~80、0.01~75、0.01~70、0.01~65、0.01~60、0.01~55、0.01~50、0.01~45、0.01~40、0.01~35、0.01~30、0.01~25、0.01~20、0.01~15、0.01~10、0.01~9、0.01~8、0.01~7、0.01~6、0.01~5、0.01~4、0.01~3、0.01~2、0.01~1、0.01~0.9、0.01~0.8、0.01~0.7、0.01~0.6、0.01~0.5、0.01~0.4、0.01~0.3、0.01~0.2、0.01~0.1、0.01~0.09、0.01~0.08、0.01~0.07、0.01~0.06、0.01~0.05、0.01~0.04、0.01~0.03または0.01~0.02mMのKH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0~3.0、0~2.9、0~2.8、0~2.7、0~2.6、0~2.5、0~2.4、0~2.3、0~2.2、0~2.1、0~2.0、0~1.9、0~1.8、0~1.7、0~1.6、0~1.5、0~1.4、0~1.3、0~1.2、0~1.1、0~1.0、0~0.9、0~0.8、0~0.7、0~0.6、0~0.5、0~0.4、0~0.3または0~0.2mMのKH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~3.0、0.1~2.9、0.1~2.8、0.1~2.7、0.1~2.6、0.1~2.5、0.1~2.4、0.1~2.3、0.1~2.2、0.1~2.1、0.1~2.0、0.1~1.9、0.1~1.8、0.1~1.7、0.1~1.6、0.1~1.5、0.1~1.4、0.1~1.3、0.1~1.2、0.1~1.1、0.1~1.0、0.1~0.9、0.1~0.8、0.1~0.7、0.1~0.6、0.1~0.5、0.1~0.4、0.1~0.3または0.1~0.2mMのKH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0~3.0、0.1~3.0、0.2~3.0、0.3~3.0、0.4~3.0、0.5~3.0、0.6~3.0、0.7~3.0、0.8~3.0、0.9~3.0、1.0~3.0、1.2~3.0、1.3~3.0、1.4~3.0、1.5~3.0、1.6~3.0、1.7~3.0、1.8~3.0、1.9~3.0、2.0~3.0、2.1~3.0、2.2~3.0、2.3~3.0、2.4~3.0、2.5~3.0、2.6~3.0、2.7~3.0、2.8~3.0または2.9~3.0mMのKH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9または3.0mMのKH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9または3.0mMのKH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9または3.0mMのKH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0415]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0~100、0.01~100、0.02~100、0.03~100、0.04~100、0.05~100、0.06~100、0.07~100、0.08~100、0.09~100、0.1~100、0.2~100、0.3~100、0.4~100、0.5~100、0.6~100、0.7~100、0.8~100、0.9~100、1~100、2~100、3~100、4~100、5~100、6~100、7~100、8~100、9~100、10~100、15~100、20~100、25~100、30~100、35~100、40~100、45~100、50~100、55~100、60~100、65~100、70~100、75~100、80~100、85~100、90~100または95~100mMのKH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0~95、0~90、0~85、0~80、0~75、0~70、0~65、0~60、0~55、0~50、0~45、0~40、0~35、0~30、0~25、0~20、0~15、0~10、0~9、0~8、0~7、0~6、0~5、0~4、0~3、0~2、0~1、0~0.9、0~0.8、0~0.7、0~0.6、0~0.5、0~0.4、0~0.3、0~0.2、0~0.1、0~0.09、0~0.08、0~0.07、0~0.06、0~0.05、0~0.04、0~0.03または0~0.02mMのKH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.01~95、0.01~90、0.01~85、0.01~80、0.01~75、0.01~70、0.01~65、0.01~60、0.01~55、0.01~50、0.01~45、0.01~40、0.01~35、0.01~30、0.01~25、0.01~20、0.01~15、0.01~10、0.01~9、0.01~8、0.01~7、0.01~6、0.01~5、0.01~4、0.01~3、0.01~2、0.01~1、0.01~0.9、0.01~0.8、0.01~0.7、0.01~0.6、0.01~0.5、0.01~0.4、0.01~0.3、0.01~0.2、0.01~0.1、0.01~0.09、0.01~0.08、0.01~0.07、0.01~0.06、0.01~0.05、0.01~0.04、0.01~0.03または0.01~0.02mMのKH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0~3.0、0~2.9、0~2.8、0~2.7、0~2.6、0~2.5、0~2.4、0~2.3、0~2.2、0~2.1、0~2.0、0~1.9、0~1.8、0~1.7、0~1.6、0~1.5、0~1.4、0~1.3、0~1.2、0~1.1、0~1.0、0~0.9、0~0.8、0~0.7、0~0.6、0~0.5、0~0.4、0~0.3または0~0.2mMのKH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~3.0、0.1~2.9、0.1~2.8、0.1~2.7、0.1~2.6、0.1~2.5、0.1~2.4、0.1~2.3、0.1~2.2、0.1~2.1、0.1~2.0、0.1~1.9、0.1~1.8、0.1~1.7、0.1~1.6、0.1~1.5、0.1~1.4、0.1~1.3、0.1~1.2、0.1~1.1、0.1~1.0、0.1~0.9、0.1~0.8、0.1~0.7、0.1~0.6、0.1~0.5、0.1~0.4、0.1~0.3または0.1~0.2mMのKH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0~3.0、0.1~3.0、0.2~3.0、0.3~3.0、0.4~3.0、0.5~3.0、0.6~3.0、0.7~3.0、0.8~3.0、0.9~3.0、1.0~3.0、1.2~3.0、1.3~3.0、1.4~3.0、1.5~3.0、1.6~3.0、1.7~3.0、1.8~3.0、1.9~3.0、2.0~3.0、2.1~3.0、2.2~3.0、2.3~3.0、2.4~3.0、2.5~3.0、2.6~3.0、2.7~3.0、2.8~3.0または2.9~3.0mMのKH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9または3.0mMのKH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9または3.0mMのKH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9または3.0mMのKH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0416]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0~50mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0417]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0~50、0~45、0~40、0~35、0~30、0~25、0~20、0~19、0~18、0~17、0~16、0~15、0~14、0~13、0~12、0~11、0~10、0~9、0~8、0~7、0~6、0~5、0~4、0~3、0~2、0~1、0~0.9、0~0.8、0~0.7、0~0.6、0~0.5、0~0.4、0~0.3または0~0.2mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~50、0.1~45、0.1~40、0.1~35、0.1~30、0.1~25、0.1~20、0.1~19、0.1~18、0.1~17、0.1~16、0.1~15、0.1~14、0.1~13、0.1~12、0.1~11、0.1~10、0.1~9、0.1~8、0.1~7、0.1~6、0.1~5、0.1~4、0.1~3、0.1~2、0.1~1、0.1~0.9、0.1~0.8、0.1~0.7、0.1~0.6、0.1~0.5、0.1~0.4、0.1~0.3または0.1~0.2mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0~50、0.1~50、0.2~50、0.3~50、0.4~50、0.5~50、0.6~50、0.7~50、0.8~50、0.9~50、1~50、2~50、3~50、4~50、5~50、6~50、7~50、8~50、9~50、1~50、11~50、12~50、13~50、14~50、15~50、16~50、17~50、18~50、19~50、20~50、25~50、30~50、35~50、40~50または45~50mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0~20、0.1~20、0.2~20、0.3~20、0.4~20、0.5~20、0.6~20、0.7~20、0.8~20、0.9~20、1~20、2~20、3~20、4~20、5~20、6~20、7~20、8~20、9~20、10~20、11~20、12~20、13~20、14~20、15~20、16~20、17~20、18~20または19~20mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0417]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0~50、0~45、0~40、0~35、0~30、0~25、0~20、0~19、0~18、0~17、0~16、0~15、0~14、0~13、0~12、0~11、0~10、0~9、0~8、0~7、0~6、0~5、0~4、0~3、0~2、0~1、0~0.9、0~0.8、0~0.7、0~0.6、0~0.5、0~0.4、0~0.3または0~0.2mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~50、0.1~45、0.1~40、0.1~35、0.1~30、0.1~25、0.1~20、0.1~19、0.1~18、0.1~17、0.1~16、0.1~15、0.1~14、0.1~13、0.1~12、0.1~11、0.1~10、0.1~9、0.1~8、0.1~7、0.1~6、0.1~5、0.1~4、0.1~3、0.1~2、0.1~1、0.1~0.9、0.1~0.8、0.1~0.7、0.1~0.6、0.1~0.5、0.1~0.4、0.1~0.3または0.1~0.2mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0~50、0.1~50、0.2~50、0.3~50、0.4~50、0.5~50、0.6~50、0.7~50、0.8~50、0.9~50、1~50、2~50、3~50、4~50、5~50、6~50、7~50、8~50、9~50、1~50、11~50、12~50、13~50、14~50、15~50、16~50、17~50、18~50、19~50、20~50、25~50、30~50、35~50、40~50または45~50mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0~20、0.1~20、0.2~20、0.3~20、0.4~20、0.5~20、0.6~20、0.7~20、0.8~20、0.9~20、1~20、2~20、3~20、4~20、5~20、6~20、7~20、8~20、9~20、10~20、11~20、12~20、13~20、14~20、15~20、16~20、17~20、18~20または19~20mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0418]一部の実施形態では、ASOは、炭水化物をさらに含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、炭水化物は、D-グルコースを含む。一部の実施形態では、ASOは、1~100mMのD-グルコースをさらに含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0419]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、1~100mMのD-グルコースを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0420]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、1~100、1~95、1~90、1~85、1~80、1~75、1~70、1~65、1~60、1~55、1~50、1~45、1~40、1~35、1~30、1~29、1~28、1~27、1~26、1~25、1~24、1~23、1~22、1~21、1~20、1~19、1~18、1~17、1~16、1~15、1~14、1~13、1~12、1~11、1~10、1~9、1~8、1~7、1~6、1~5、1~4、1~3または1~2mMのD-グルコースを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、2~100、3~100、4~100、5~100、6~100、7~100、8~100、9~100、10~100、11~100、12~100、13~100、14~100、15~100、16~100、17~100、18~100、19~100、20~100、21~100、22~100、23~100、24~100、25~100、26~100、29~100、28~100、29~100、30~100、35~100、40~100、45~100、50~100、55~100、60~100、65~100、70~100、75~100、80~100、85~100、90~100または95~100mMのD-グルコースを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、2~30、3~30、4~30、5~30、6~30、7~30、8~30、9~30、10~30、11~30、12~30、13~30、14~30、15~30、16~30、17~30、18~30、19~30、20~30、21~30、22~30、23~30、24~30、25~30、26~30、27~30、28~30または29~30mMのD-グルコースを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30mMのD-グルコースを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30mMのD-グルコースを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30mMのD-グルコースを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0420]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、1~100、1~95、1~90、1~85、1~80、1~75、1~70、1~65、1~60、1~55、1~50、1~45、1~40、1~35、1~30、1~29、1~28、1~27、1~26、1~25、1~24、1~23、1~22、1~21、1~20、1~19、1~18、1~17、1~16、1~15、1~14、1~13、1~12、1~11、1~10、1~9、1~8、1~7、1~6、1~5、1~4、1~3または1~2mMのD-グルコースを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、2~100、3~100、4~100、5~100、6~100、7~100、8~100、9~100、10~100、11~100、12~100、13~100、14~100、15~100、16~100、17~100、18~100、19~100、20~100、21~100、22~100、23~100、24~100、25~100、26~100、29~100、28~100、29~100、30~100、35~100、40~100、45~100、50~100、55~100、60~100、65~100、70~100、75~100、80~100、85~100、90~100または95~100mMのD-グルコースを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、2~30、3~30、4~30、5~30、6~30、7~30、8~30、9~30、10~30、11~30、12~30、13~30、14~30、15~30、16~30、17~30、18~30、19~30、20~30、21~30、22~30、23~30、24~30、25~30、26~30、27~30、28~30または29~30mMのD-グルコースを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30mMのD-グルコースを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30mMのD-グルコースを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30mMのD-グルコースを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0421]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、1~100、1~95、1~90、1~85、1~80、1~75、1~70、1~65、1~60、1~55、1~50、1~45、1~40、1~35、1~30、1~29、1~28、1~27、1~26、1~25、1~24、1~23、1~22、1~21、1~20、1~19、1~18、1~17、1~16、1~15、1~14、1~13、1~12、1~11、1~10、1~9、1~8、1~7、1~6、1~5、1~4、1~3または1~2mMのグルコースを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、2~100、3~100、4~100、5~100、6~100、7~100、8~100、9~100、10~100、11~100、12~100、13~100、14~100、15~100、16~100、17~100、18~100、19~100、20~100、21~100、22~100、23~100、24~100、25~100、26~100、29~100、28~100、29~100、30~100、35~100、40~100、45~100、50~100、55~100、60~100、65~100、70~100、75~100、80~100、85~100、90~100または95~100mMのグルコースを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、2~30、3~30、4~30、5~30、6~30、7~30、8~30、9~30、10~30、11~30、12~30、13~30、14~30、15~30、16~30、17~30、18~30、19~30、20~30、21~30、22~30、23~30、24~30、25~30、26~30、27~30、28~30または29~30mMのグルコースを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30mMのグルコースを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30mMのグルコースを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30mMのグルコースを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0422]一部の実施形態では、ASOは、25~250mMのNaCl、0.1~20mMのKCl、0.1~50mMのNa2HPO4、0.1~50mMのNaH2PO4、0.1~50mMのCaCl2および0.1~50mMのMgCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0423]一部の実施形態では、ASOは、150mMのNaCl、3.0mMのKCl、0.7mMのNa2HPO4、0.3mMのNaH2PO4、0.79mMのMgCl2および1.4mMのCaCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0424]一部の実施形態では、ASOは、抗酸化剤をさらに含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、抗酸化剤は、t-ブチルヒドロキシキノリン(TBHQ)、ブチル化ヒドロキシトルエン(BHT)、ブチル化ヒドロキシアニソール(BHA)、ビタミンEまたはそれらの任意の組合せである。一部の実施形態では、ASOは、抗酸化剤をさらに含む緩衝液中に可溶化または希釈され、抗酸化剤は、アスコルビン酸(ビタミンC)、グルタチオン、リポ酸、尿酸、カロテン、α-トコフェロール(ビタミンE)、ユビキノール(補酵素Q)またはそれらの任意の組合せである。
[0425]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、25~250mMのNaCl、0.1~20mMのKCl、0~50mMのKH2PO4、1~100mMのNaHCO3、0~50mMのNaH2PO4、1~100mMのD-グルコース、0.1~50mMのCaCl2、0.1~50mMのMgCl2またはそれらの任意の組合せを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0426]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、25~250mMのNaCl、0.1~20mMのKCl、0~50mMのKH2PO4、1~100mMのNaHCO3、0~50mMのNaH2PO4、1~100mMのD-グルコース、0.1~50mMのCaCl2および0.1~50mMのMgCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0427]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、127mMのNaCl、1.0mMのKCl、1.2mMのKH2PO4、26mMのNaHCO3、10mMのD-グルコース、2.4mMのCaCl2および1.3mMのMgCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0428]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、119mMのNaCl、26.2mMのNaHCO3、2.5mMのKCl、1mMのNaH2PO4、1.3mMのMgCl2、10mMのグルコースおよび2.5mMのCaCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0429]一部の実施形態では、医薬組成物は、保存料を含まない。一部の実施形態では、医薬組成物は、保存料を含む。
[0430]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、5~250mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する。
[0430]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、5~250mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する。
[0431]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、5~250、5~247.5、5~245、5~242.5、5~240、5~237.5、5~235、5~232.5、5~230、5~227.5、5~225、5~225.5、5~220、5~217.5、5~215、5~212.5、5~210、5~205.5、5~205、5~202.5、5~200、5~197.5、5~195、5~192.5、5~190、5~187.5、5~185、5~182.5、5~180、5~177.5、5~175、5~172.5、5~170、5~167.5、5~165、5~162.5、5~160、5~157.5、5~155、5~152.5、5~150、5~147.5、5~145、5~142.5、5~140、5~137.5、5~135、5~132.5、5~130、5~127.5、5~125、5~122.5、5~120、5~117.5、5~115、5~112.5、5~110、5~107.5、5~105、5~102.5、5~100、5~97.5、5~95、5~92.5、5~90、5~87.5、5~85、5~82.5、5~80、5~77.5、5~75、5~72.5、5~70、5~67.5、5~65、5~62.5、5~60、5~57.5、5~55、5~52.5、5~50、5~47.5、5~45、5~42.5、5~40、5~37.5、5~35、5~32.5、5~30、5~27.5、5~25、5~22.5、5~20、5~17.5、5~15、5~12.5または5~10mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、10~250、15~250、20~250、25~250、30~250、35~250、40~250、45~250、50~250、55~250、60~250、65~250、70~250、75~250、80~250、85~250、90~250、95~250、100~250、105~250、110~250、115~250、120~250、125~250、130~250、135~250、140~250、145~250、150~250、155~250、160~250、165~250、170~250、175~250、180~250、185~250、190~250または195~250、200~250、205~250、210~250、215~250、220~250、225~250、230~250、235~250、240~250または245~250mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249または250mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249または250mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249または250mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する。
[0432]一部の実施形態では、方法は、医薬組成物をボーラス注射として投与するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、医薬組成物をボーラス注射として、1~180分、175分、1~170分、1~165分、1~160分、1~155分、1~150分、1~145分、1~140分、1~135分、1~130分、1~125分、1~120分、1~115分、1~110分、1~105分、1~100分、1~95分、1~90分、1~85分、1~80分、1~75分、1~70分、1~65分、1~60分、1~55分、1~50分、1~45分、1~40分、1~35分、1~30分、1~25分、1~20分、1~15分、1~10分、1~5分または1~3分かけて投与するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、医薬組成物を、脊髄麻酔針を使用してボーラス注射として投与するステップを含む。
[0433]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1mg/mL~250mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在するASOの濃度で医薬組成物中に存在する。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、約0.1mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL、2.5mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL、6mg/mL、7mg/mL、8mg/mL、9mg/mL、10mg/mL、11mg/mL、12mg/mL、13mg/mL、14mg/mL、15mg/mL、16mg/mL、17mg/mL、18mg/mL、19mg/mLまたは20mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、約30mg/mL、40mg/mL、50mg/mL、60mg/mL、70mg/mL、80mg/mL、90mg/mL、100mg/mL、110mg/mL、120mg/mL、130mg/mL、140mg/mL、150mg/mL、160mg/mL、170mg/mL、180mg/mL、190mg/mLまたは200mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、希釈剤中に約11mg/mL、22mg/mL、33mg/mL、44mg/mL、55mg/mL、66mg/mL、77mg/mL、88mg/mL、99mg/mLまたは100mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する。
[0434]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1mg/mL~250mg/mL、0.2mg/mL~250mg/mL、0.3mg/mL~250mg/mL、0.4mg/mL~250mg/mL、0.5mg/mL~250mg/mL、0.6mg/mL~250mg/mL、0.7mg/mL~250mg/mL、0.8mg/mL~250mg/mL、0.9mg/mL~250mg/mL、1.0mg/mL~250mg/mL、1.1mg/mL~250mg/mL、1.2mg/mL~250mg/mL、1.3mg/mL~250mg/mL、1.4mg/mL~250mg/mL、1.5mg/mL~250mg/mL、1.6mg/mL~250mg/mL、1.7mg/mL~250mg/mL、1.8mg/mL~250mg/mL、1.9mg/mL~250mg/mL、2.0mg/mL~250mg/mL、2.1mg/mL~250mg/mL、2.2mg/mL~250mg/mL、2.3mg/mL~250mg/mL、2.4mg/mL~250mg/mL、2.5mg/mL~250mg/mL、2.6mg/mL~250mg/mL、2.7mg/mL~250mg/mL、2.8mg/mL~250mg/mL、2.9mg/mL~250mg/mL、3.0mg/mL~250mg/mL、3.1mg/mL~250mg/mL、3.2mg/mL~250mg/mL、3.3mg/mL~250mg/mL、3.4mg/mL~250mg/mL、3.5mg/mL~250mg/mL、3.6mg/mL~250mg/mL、3.7mg/mL~250mg/mL、3.8mg/mL~250mg/mL、3.9mg/mL~250mg/mL、4.0mg/mL~250mg/mL、5.0mg/mL~250mg/mL、6.0mg/mL~250mg/mL、7.0mg/mL~250mg/mL、8.0mg/mL~250mg/mL、9.0mg/mL~250mg/mL、10mg/mL~250mg/mL、15mg/mL~250mg/mL、20mg/mL~250mg/mL、25mg/mL~250mg/mL、30mg/mL~250mg/mL、35mg/mL~250mg/mL、40mg/mL~250mg/mL、45mg/mL~250mg/mL、50mg/mL~250mg/mL、55mg/mL~250mg/mL、60mg/mL~250mg/mL、65mg/mL~250mg/mL、70mg/mL~250mg/mL、75mg/mL~250mg/mL、80mg/mL~250mg/mL、85mg/mL~250mg/mL、90mg/mL~250mg/mL、95mg/mL~250mg/mL、100mg/mL~250mg/mL、105mg/mL~250mg/mL、110mg/mL~250mg/mL、115mg/mL~250mg/mL、120mg/mL~250mg/mL、125mg/mL~250mg/mL、130mg/mL~250mg/mL、135mg/mL~250mg/mL、140mg/mL~250mg/mL、145mg/mL~250mg/mL、150mg/mL~250mg/mL、155mg/mL~250mg/mL、160mg/mL~250mg/mL、165mg/mL~250mg/mL、170mg/mL~250mg/mL、175mg/mL~250mg/mL、180mg/mL~250mg/mL、185mg/mL~250mg/mL、190mg/mL~250mg/mL、195mg/mL~250mg/mL、200mg/mL~250mg/mL、205mg/mL~250mg/mL、210mg/mL~250mg/mL、215mg/mL~250mg/mL、220mg/mL~250mg/mL、225mg/mL~250mg/mL、230mg/mL~250mg/mL、235mg/mL~250mg/mL、240mg/mL~250mg/mLまたは245mg/mL~250mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する。
[0435]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1mg/mL~250mg/mL、0.1mg/mL~245mg/mL、0.1mg/mL~240mg/mL、0.1mg/mL~235mg/mL、0.1mg/mL~230mg/mL、0.1mg/mL~225mg/mL、0.1mg/mL~220mg/mL、0.1mg/mL~215mg/mL、0.1mg/mL~210mg/mL、0.1mg/mL~205mg/mL、0.1mg/mL~200mg/mL、0.1mg/mL~195mg/mL、0.1mg/mL~190mg/mL、0.1mg/mL~185mg/mL、0.1mg/mL~180mg/mL、0.1mg/mL~175mg/mL、0.1mg/mL~170mg/mL、0.1mg/mL~165mg/mL、0.1mg/mL~160mg/mL、0.1mg/mL~155mg/mL、0.1mg/mL~150mg/mL、0.1mg/mL~145mg/mL、0.1mg/mL~140mg/mL、0.1mg/mL~135mg/mL、0.1mg/mL~130mg/mL、0.1mg/mL~125mg/mL、0.1mg/mL~120mg/mL、0.1mg/mL~115mg/mL、0.1mg/mL~110mg/mL、0.1mg/mL~100mg/mL、0.1mg/mL~95mg/mL、0.1mg/mL~90mg/mL、0.1mg/mL~85mg/mL、0.1mg/mL~80mg/mL、0.1mg/mL~75mg/mL、0.1mg/mL~70mg/mL、0.1mg/mL~65mg/mL、0.1mg/mL~60mg/mL、0.1mg/mL~55mg/mL、0.1mg/mL~50mg/mL、0.1mg/mL~45mg/mL、0.1mg/mL~40mg/mL、0.1mg/mL~35mg/mL、0.1mg/mL~30mg/mL、0.1mg/mL~25mg/mL、0.1mg/mL~20mg/mL、0.1mg/mL~15mg/mL、0.1mg/mL~10mg/mL、0.1mg/mL~9mg/mL、0.1mg/mL~8mg/mL、0.1mg/mL~7mg/mL、0.1mg/mL~6mg/mL、0.1mg/mL~5mg/mL、0.1mg/mL~4mg/mL、0.1mg/mL~3.9mg/mL、0.1mg/mL~3.8mg/mL、0.1mg/mL~3.7mg/mL、0.1mg/mL~3.6mg/mL、0.1mg/mL~3.5mg/mL、0.1mg/mL~3.4mg/mL、0.1mg/mL~3.3mg/mL、0.1mg/mL~3.2mg/mL、0.1mg/mL~3.1mg/mL、0.1mg/mL~3.0mg/mL、0.1mg/mL~2.9mg/mL、0.1mg/mL~2.8mg/mL、0.1mg/mL~2.7mg/mL、0.1mg/mL~2.6mg/mL、0.1mg/mL~2.5mg/mL、0.1mg/mL~2.4mg/mL、0.1mg/mL~2.3mg/mL、0.1mg/mL~2.2mg/mL、0.1mg/mL~2.1mg/mL、0.1mg/mL~2.0mg/mL、0.1mg/mL~1.9mg/mL、0.1mg/mL~1.8mg/mL、0.1mg/mL~1.7mg/mL、0.1mg/mL~1.6mg/mL、0.1mg/mL~1.5mg/mL、0.1mg/mL~1.4mg/mL、0.1mg/mL~1.3mg/mL、0.1mg/mL~1.2mg/mL、0.1mg/mL~1.1mg/mL、0.1mg/mL~1.0mg/mL、0.1mg/mL~0.9mg/mL、0.1mg/mL~0.8mg/mL、0.1mg/mL~0.7mg/mL、0.1mg/mL~0.6mg/mL、0.1mg/mL~0.5mg/mL、0.1mg/mL~0.4mg/mL、0.1mg/mL~0.3mg/mLまたは0.1mg/mL~0.2mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する。
[0436]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、希釈剤中の少なくとも0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249または250mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、希釈剤中の最高で0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249または250mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、希釈剤中の0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249または250mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する。
[0437]記載された方法のいずれかにおいて使用するための、記載された組成物の薬剤、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはアンチセンスオリゴマーを含む医薬組成物は、製薬業界で周知であり、公開された文献に記載されている従来の技術に従って調製できる。一部の実施形態では、対象を処置するための医薬組成物は、有効量の、本明細書に記載される任意のアンチセンスオリゴマーまたは薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物またはエステルを含む。一部の実施形態では、本明細書で記載される医薬組成物は、薬学的に許容される賦形剤、担体または希釈剤をさらに含む。
[0438]医薬組成物は、活性化合物の、薬学的に使用できる調製物への処理を促進する、1つまたは複数の薬学的に許容される不活性成分を使用して従来法で製剤化できる。妥当な製剤は、選択された投与経路に応じて変わり、医薬組成物の概要は、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、Remington:The Scinence and Practice of Pharmacy、第19版(Easton,Pa.:Mack Publishing Company、1995年)、Hoover、 John E.、Remington’s Pharmaceutical Sciences、Mack Publishing Co.、Easton、Pennsylvania 1975年、Liberman,H.A.およびLachman,L.編、Pharmaceutical Dosage Forms、Marcel Decker、New York、N.Y.、1980年およびPharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems、第7版(Lippincott Williams & Wilkins 1999年))に見出すことができる。一部の実施形態では、医薬組成物は、生物への化合物の投与を容易にする。このような組成物は、緩衝液、例えば、中性緩衝食塩水、リン酸緩衝食塩水など、炭水化物、例えば、グルコース、マンノース、スクロースまたはデキストラン、マンニトール、タンパク質、ポリペプチドまたはアミノ酸、例えば、グリシン、抗酸化物質、キレート化剤、例えば、EDTAまたはグルタチオン、アジュバント(例えば、水酸化アルミニウム)および保存料を含み得る。
[0439]「医薬組成物」および「医薬製剤」(または「製剤」)という用語は、同義的に使用され、対象、例えば、それを必要とするヒトに投与されるべき、1つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤と一緒に、活性医薬成分の治療有効量を含む混合物または溶液を示す。
[0440]「薬学的に許容される」という用語は、一般に、安全であり、非毒性であり、生物学的にもその他の方法でも望ましいものではなく、獣医学ならびにヒトの医薬用途のために許容される、医薬組成物の調製において有用である材料の属性を示す。「薬学的に許容される」とは、化合物の生物活性または特性を抑制しない、比較的非毒性である、材料、例えば、担体または希釈剤を指す場合がある、すなわち、材料は、望ましくない生物学的効果を引き起こすことなく、または含有される組成物の構成成分のいずれかと有害な方法で相互作用することなく個体に投与され得る。
[0441]「薬学的に許容される賦形剤」、「薬学的に許容される担体」および「治療上不活性の賦形剤」という用語は、同義的に使用される場合があり、投与される対象に対して治療活性を有さず、非毒性である、医薬組成物中の任意の薬学的に許容される成分、例えば、医薬品の製剤化において使用される崩壊剤、結合剤、増量剤、溶媒、緩衝液、等張剤、安定剤、抗酸化物質、界面活性剤、担体、希釈剤、賦形剤、保存料または滑沢剤を示す。
[0442]一部の実施形態では、組成物は、身体からの迅速排出から組成物の構成成分を保護する担体を用いて調製される、例えば、インプラントおよびマイクロカプセル化送達システムを含む徐放性製剤。エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーが使用され得る。このような製剤を調製する方法は、当業者には明らかとなろう。材料はまた、Alza CorporationおよびNova Pharmaceuticals, Inc.から商業的に入手することもできる。リポソーム懸濁液(ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体を用いて感染細胞に標的化されるリポソームを含む)もまた、薬学的に許容される担体として使用され得る。これらは、当業者に公知の方法に従って、例えば、その全開示内容が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第4,522,811号に記載されるように調製できる。
[0443]記載された方法のいずれかにおいて使用するための、記載された組成物の薬剤、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物または製剤は、製薬業界で周知であり、公開された文献に記載されている従来の技術に従って調製できる。実施形態では、対象を処置するための医薬組成物または製剤は、有効量の、本明細書に記載される任意のアンチセンスオリゴマーまたは薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物またはエステルを含む。アンチセンスオリゴマーを含む医薬製剤は、薬学的に許容される賦形剤、希釈剤または担体をさらに含み得る。
[0444]薬学的に許容される塩は、過度の毒性、刺激作用、アレルギー応答などを伴わず、ヒトおよび下等動物の組織と接触させた使用に適しており、合理的な利益/リスク比に見合ったものである(例えば、この目的のために参照により本明細書に組み込まれるS.M.Bergeら、J.Pharmaceutical Sciences、66巻:1~19頁(1977年)を参照されたい。塩は、化合物の最終単離および精製の際にin situで、または遊離塩基官能基を適した有機酸と反応させることによって別個に調製され得る。薬学的に許容される非毒性酸付加塩の例として、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸および過塩素酸などの無機酸と、または酢酸、シュウ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸もしくはマロン酸などの有機酸と、またはイオン交換などの他の実証された方法論を使用することによって形成されるアミノ基の塩がある。他の薬学的に許容される塩として、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、グルコン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヨウ化水素酸塩、2-ヒドロキシ-エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、2-ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチネート(pectinate)、過硫酸塩、3-フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、p-トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などが挙げられる。代表的なアルカリまたはアルカリ土類金属塩として、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどが挙げられる。さらなる薬学的に許容される塩として、適切な場合、ハロゲン化物、水酸化物、カルボン酸塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、低級アルキルスルホン酸塩およびアリールスルホン酸塩などの対イオンを使用して形成される、非毒性アンモニウム、第四級アンモニウムおよびアミンカチオンが挙げられる。
[0445]一部の実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物を生成する方法が本明細書で提供される。
医薬製剤
[0446]一部の態様では、配列番号21~67、210~256または304~1099のうちいずれか1つに対して少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含むアンチセンスオリゴマー(本明細書に記載されるASO)および薬学的に許容される希釈剤を含む医薬製剤が本明細書で提供され、本明細書に記載されるASOの約0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22.5、25、27.5、30、32.5、35、37.5、40、42.5、45、47.5、50、52.5、55、57.5、60、62.5、65、67.5、70、72.5、75、77.5、80、82.5、85、87.5、90、92.5、95、97.5、100、102.5、105、107.5、110、112.5、115、117.5、120、122.5、125、127.5、130、132.5、135、137.5、140、142.5、145、147.5、150、152.5、155、157.5、160、162.5、165、167.5、170、172.5、175、177.5、180、182.5、185、187.5、190、192.5、195、197.5、200、202.5、205、207.5、210、212.5、215、217.5、220、222.5、225、227.5、230、232.5、235、237.5、240、242.5、245、247.5または250mgが、0.1~250mg/mLの濃度で溶液中に溶解または懸濁されている。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8aおよび8bに列挙される配列のうちいずれか1つに対して少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む。
医薬製剤
[0446]一部の態様では、配列番号21~67、210~256または304~1099のうちいずれか1つに対して少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含むアンチセンスオリゴマー(本明細書に記載されるASO)および薬学的に許容される希釈剤を含む医薬製剤が本明細書で提供され、本明細書に記載されるASOの約0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22.5、25、27.5、30、32.5、35、37.5、40、42.5、45、47.5、50、52.5、55、57.5、60、62.5、65、67.5、70、72.5、75、77.5、80、82.5、85、87.5、90、92.5、95、97.5、100、102.5、105、107.5、110、112.5、115、117.5、120、122.5、125、127.5、130、132.5、135、137.5、140、142.5、145、147.5、150、152.5、155、157.5、160、162.5、165、167.5、170、172.5、175、177.5、180、182.5、185、187.5、190、192.5、195、197.5、200、202.5、205、207.5、210、212.5、215、217.5、220、222.5、225、227.5、230、232.5、235、237.5、240、242.5、245、247.5または250mgが、0.1~250mg/mLの濃度で溶液中に溶解または懸濁されている。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8aおよび8bに列挙される配列のうちいずれか1つに対して少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む。
[0447]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、配列番号21~67、210~256または304~1099のうちいずれか1つに対して、少なくとも60%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、884%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%、99.8%、99.9%または100%の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、配列番号21~67、210~256または304~1099のうちいずれか1つに対して、少なくとも60%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、884%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%、99.8%、99.9%または100%の配列同一性を有する配列からなる。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8aおよび8bに列挙される配列のうちいずれか1つに対して少なくとも60%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、884%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%、99.8%、99.9%または100%の配列同一性を有する配列からなる。
[0448]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASO約1~500、2~500、3~500、4~500、5~500、6~500、7~500、8~500、9~500、10~500、15~500、20~500、25~500、30~500、35~500、40~500、45~500、50~500、55~500、60~500、65~500、70~500、75~500、80~500、85~500、90~500、95~500、100~500、105~500、110~500、115~500、120~500、125~500、130~500、135~500、140~500、145~500、150~500、155~500、160~500、165~500、170~500、175~500、180~500、185~500、190~500、195~500、205~500、210~500、215~500、220~500、225~500、230~500、235~500、240~500、245~500、250~500、255~500、260~500、265~500、270~500、275~500、280~500、285~500、290~500、295~500、300~500、305~500、310~500、315~500、320~500、325~500、330~500、335~500、340~500、345~500、350~500、355~500、360~500、365~500、370~500、375~500、380~500、385~500、390~500、395~500、400~500、405~500、410~500、415~500、420~500、425~500、430~500、435~500、440~500、445~500、450~500、455~500、460~500、465~500、470~500、475~500、480~500、485~500、490~500または495~500mgが、5~200mg/mLの濃度で溶液中に溶解または懸濁されている。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOの約1~495、1~490、1~485、1~480、1~475、1~470、1~465、1~460、1~455、1~450、1~445、1~440、1~435、1~430、1~425、1~420、1~415、1~410、1~405、1~400、1~395、1~390、1~385、1~380、1~375、1~370、1~365、1~360、1~355、1~350、1~345、1~340、1~335、1~330、1~325、1~320、1~315、1~310、1~305、1~300、1~295、1~290、1~285、1~280、1~275、1~270、1~265、1~260、1~255、1~250、1~245、1~240、1~235、1~230、1~225、1~220、1~215、1~210、1~205、1~200、1~195、1~190、1~185、1~180、1~175、1~170、1~165、1~160、1~155、1~150、1~145、1~140、1~135、1~130、1~125、1~120、1~115、1~110、1~105、1~100、1~95、1~90、1~85、1~80、1~75、1~70、1~65、1~60、1~55、1~0、1~45、1~40、1~35、1~30、1~25、1~20、1~15、1~10、1~9、1~8、1~7、1~6、1~5、1~4、1~3または1~2mgが、5~200mg/mLの濃度で溶液中に溶解または懸濁されている。
[0449]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOの少なくとも約0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22.5、25、27.5、30、32.5、35、37.5、40、42.5、45、47.5、50、52.5、55、57.5、60、62.5、65、67.5、70、72.5、75、77.5、80、82.5、85、87.5、90、92.5、95、97.5、100、102.5、105、107.5、110、112.5、115、117.5、120、122.5、125、127.5、130、132.5、135、137.5、140、142.5、145、147.5、150、152.5、155、157.5、160、162.5、165、167.5、170、172.5、175、177.5、180、182.5、185、187.5、190、192.5、195、197.5、200、202.5、205、207.5、210、212.5、215、217.5、220、222.5、225、227.5、230、232.5、235、237.5、240、242.5、245、247.5または250mgが、0.1~250mg/mLの濃度で溶液中に溶解または懸濁されている。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOの最高で約0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22.5、25、27.5、30、32.5、35、37.5、40、42.5、45、47.5、50、52.5、55、57.5、60、62.5、65、67.5、70、72.5、75、77.5、80、82.5、85、87.5、90、92.5、95、97.5、100、102.5、105、107.5、110、112.5、115、117.5、120、122.5、125、127.5、130、132.5、135、137.5、140、142.5、145、147.5、150、152.5、155、157.5、160、162.5、165、167.5、170、172.5、175、177.5、180、182.5、185、187.5、190、192.5、195、197.5、200、202.5、205、207.5、210、212.5、215、217.5、220、222.5、225、227.5、230、232.5、235、237.5、240、242.5、245、247.5または250mgが、0.1~250mg/mLの濃度で溶液中に溶解または懸濁されている。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOの約0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22.5、25、27.5、30、32.5、35、37.5、40、42.5、45、47.5、50、52.5、55、57.5、60、62.5、65、67.5、70、72.5、75、77.5、80、82.5、85、87.5、90、92.5、95、97.5、100、102.5、105、107.5、110、112.5、115、117.5、120、122.5、125、127.5、130、132.5、135、137.5、140、142.5、145、147.5、150、152.5、155、157.5、160、162.5、165、167.5、170、172.5、175、177.5、180、182.5、185、187.5、190、192.5、195、197.5、200、202.5、205、207.5、210、212.5、215、217.5、220、222.5、225、227.5、230、232.5、235、237.5、240、242.5、245、247.5または250mgが、0.1~250mg/mLの濃度で溶液中に溶解または懸濁されている。
[0450]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、5~250、5~247.5、5~245、5~242.5、5~240、5~237.5、5~235、5~232.5、5~230、5~227.5、5~225、5~225.5、5~220、5~217.5、5~215、5~212.5、5~210、5~205.5、5~205、5~202.5、5~200、5~197.5、5~195、5~192.5、5~190、5~187.5、5~185、5~182.5、5~180、5~177.5、5~175、5~172.5、5~170、5~167.5、5~165、5~162.5、5~160、5~157.5、5~155、5~152.5、5~150、5~147.5、5~145、5~142.5、5~140、5~137.5、5~135、5~132.5、5~130、5~127.5、5~125、5~122.5、5~120、5~117.5、5~115、5~112.5、5~110、5~107.5、5~105、5~102.5、5~100、5~97.5、5~95、5~92.5、5~90、5~87.5、5~85、5~82.5、5~80、5~77.5、5~75、5~72.5、5~70、5~67.5、5~65、5~62.5、5~60、5~57.5、5~55、5~52.5、5~50、5~47.5、5~45、5~42.5、5~40、5~37.5、5~35、5~32.5、5~30、5~27.5、5~25、5~22.5、5~20、5~17.5、5~15、5~12.5または5~10mg/mLの濃度で溶液中に溶解または懸濁されている。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、10~250、15~250、20~250、25~250、30~250、35~250、40~250、45~250、50~250、55~250、60~250、65~250、70~250、75~250、80~250、85~250、90~250、95~250、100~250、105~250、110~250、115~250、120~250、125~250、130~250、135~250、140~250、145~250、150~250、155~250、160~250、165~250、170~250、175~250、180~250、185~250、190~250または195~250、200~250、205~250、210~250、215~250、220~250、225~250、230~250、235~250、240~250または245~250mg/mLの濃度で溶液中に溶解または懸濁されている。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249または250mg/mLの濃度で溶液中に溶解または懸濁されている。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249または250mg/mLの濃度で溶液中に溶解または懸濁されている。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249または250mg/mLの濃度で溶液中に溶解または懸濁されている。
[0451]一部の実施形態では、薬学的に許容される希釈剤は、人工脳脊髄液(aCSF)溶液を含む。一部の実施形態では、溶液は、対象由来の脳脊髄液(CSF)試料を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、等張液中に可溶化または希釈される。
[0452]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、リン酸緩衝(pH6.6~7.6)溶液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、リン酸緩衝(pH6.0~8.0)溶液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、リン酸緩衝(pH5.0~8.0)溶液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、pH4.5~8.5、pH4.6~8.5、pH4.7~8.5、pH4.8~8.5、pH4.9~8.5、pH5.0~8.5、pH5.1~8.5、pH5.2~8.5、pH5.3~8.5、pH5.4~8.5、pH5.5~8.5、pH5.6~8.5、pH5.7~8.5、pH5.8~8.5、H5.9~8.5、pH6.0~8.5、pH6.1~8.5、pH6.2~8.5、pH6.3~8.5、pH6.4~8.5、pH6.5~8.5、pH6.6~8.5、pH6.7~8.5、pH6.8~8.5、pH6.9~8.5、pH7.0~8.5、pH7.1~8.5、pH7.2~8.5、pH7.3~8.5、pH7.4~8.5、pH7.5~8.5、pH7.6~8.5、pH7.7~8.5、pH7.8~8.5、pH7.9~8.5、pH8.0~8.5、pH8.1~8.5、pH8.2~8.5、pH8.3~8.5またはpH8.4~8.5を有するリン酸緩衝溶液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、pH4.5~8.3、pH4.5~8.2、pH4.5~8.1、pH4.5~8.0、pH4.5~7.9、pH4.5~7.8、pH4.5~7.7、pH4.5~7.6、pH4.5~7.5、pH4.5~7.4、pH4.5~7.3、pH4.5~7.2、pH4.5~7.1、pH4.5~7.0、pH4.5~6.9、pH4.5~6.8、pH4.5~6.7、pH4.5~6.6、pH4.5~6.5、pH4.5~6.4、pH4.5~6.3、pH4.5~6.2、pH4.5~6.1、pH4.5~6.0、pH4.5~5.9、pH4.5~5.8、pH4.5~5.7、pH4.5~5.6、pH4.5~5.5、pH4.5~5.4、pH4.5~5.3、pH4.5~5.2、pH4.5~5.1、pH4.5~5.0、pH4.5~4.9、pH4.5~4.8、pH4.5~4.7またはpH4.5~4.6を有するリン酸緩衝溶液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、pH6.0~7.6、pH6.1~7.6、pH6.2~7.6、pH6.3~7.6、pH6.4~7.6、pH6.5~7.6、pH6.6~7.6、pH6.7~7.6、pH6.8~7.6、pH6.9~7.6、pH7.0~7.6、pH7.1~7.6、pH7.2~7.6、pH7.3~7.6、pH7.4~7.6またはpH7.5~7.6を有するリン酸緩衝溶液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、pH6.6~8.0、pH6.6~7.9、pH6.6~7.8、pH6.6~7.7、pH6.6~7.6、pH6.6~7.5、pH6.6~7.4、pH6.6~7.3、pH6.6~7.2、pH6.6~7.1、pH6.6~7.0、pH6.6~6.9、pH6.6~6.8またはpH6.6~6.7を有するリン酸緩衝溶液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、pH6.0~8.0、pH6.1~8.0、pH6.2~8.0、pH6.3~8.0、pH6.4~8.0、pH6.5~8.0、pH6.6~8.0、pH6.7~8.0、pH6.8~8.0、pH6.9~8.0、pH7.0~8.0、pH7.1~8.0、pH7.2~8.0、pH7.3~8.0、pH7.4~8.0、pH7.5~8.0、pH7.6~8.0、pH7.7~8.0、pH7.8~8.0またはpH7.9~8.0を有するリン酸緩衝溶液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、pH6.0~7.9、pH6.0~7.8、pH6.0~7.7、pH6.0~7.6、pH6.0~7.5、pH6.0~7.4、pH6.0~7.3、pH6.0~7.2、pH6.0~7.1、pH6.0~7.0、pH6.0~6.9、pH6.0~6.8、pH6.0~6.7、pH6.0~6.6、pH6.0~6.5、pH6.0~6.4、pH6.0~6.3、pH6.0~6.2またはpH6.0~6.1を有するリン酸緩衝溶液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、pH5.7~8.5、5.8~8.4、5.9~8.3、6.0~8.2、6.1~8.1、6.2~8.0、6.3~7.9、6.4~7.8、6.5~7.7または6.6~7.6を有するリン酸緩衝溶液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、pH約5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9または8.0を有するリン酸緩衝溶液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、pH5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9または8.0を有するリン酸緩衝溶液中に可溶化または希釈される。
[0453]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、25~250mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0454]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、25~250、30~250、35~250、40~250、45~250、50~250、55~250、60~250、65~250、70~250、75~250、80~250、85~250、90~250、95~250、100~250、105~250、110~250、115~250、120~250、125~250、130~250、135~250、140~250、145~250、150~250、155~250、160~250、165~250、170~250、175~250、180~250、185~250、190~250、195~250、200~250、205~250、210~250、215~250、220~250、225~250、230~250、235~250、240~250または245~250mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、25~245、25~240、25~235、25~230、25~225、25~220、25~215、25~210、25~205、25~200、25~195、25~190、25~185、25~180、25~175、25~170、25~165、25~160、25~155、25~150、25~145、25~140、25~135、25~130、25~125、25~120、25~115、25~110、25~105、25~110、25~105、25~100、25~95、25~90、25~85、25~80、25~75、25~70、25~65、25~60、25~55、25~50、25~45、25~40、25~35または25~30mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、30~245、35~240、40~235、45~230、50~225、55~220、60~215、65~210、70~205、75~200、80~195、85~190、90~185、95~180、100~175、105~170、110~165、115~160、120~155、125~150、130~145または135~140mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、100~140、101~140、102~140、103~140、104~140、105~140、106~140、107~140、108~140、109~140、110~140、111~140、112~140、113~140、114~140、115~140、116~140、117~140、118~140、119~140、120~140、121~140、122~140、123~140、124~140、125~140、126~140、127~140、128~140、129~140、130~140、131~140、132~140、133~140、134~140、135~140、136~140、137~140、138~140または139~140mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、100~139、100~138、100~137、100~136、100~135、100~134、100~133、100~132、100~131、100~130、100~129、100~128、100~127、100~126、100~125、100~124、100~123、100~122、100~121、100~120、100~119、100~118、100~117、100~116、100~115、100~114、100~113、100~112、100~111、100~110、100~109、100~108、100~107、100~106、100~105、100~104、100~103、100~102または100~101mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139または140mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139または140mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139または140mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0454]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、25~250、30~250、35~250、40~250、45~250、50~250、55~250、60~250、65~250、70~250、75~250、80~250、85~250、90~250、95~250、100~250、105~250、110~250、115~250、120~250、125~250、130~250、135~250、140~250、145~250、150~250、155~250、160~250、165~250、170~250、175~250、180~250、185~250、190~250、195~250、200~250、205~250、210~250、215~250、220~250、225~250、230~250、235~250、240~250または245~250mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、25~245、25~240、25~235、25~230、25~225、25~220、25~215、25~210、25~205、25~200、25~195、25~190、25~185、25~180、25~175、25~170、25~165、25~160、25~155、25~150、25~145、25~140、25~135、25~130、25~125、25~120、25~115、25~110、25~105、25~110、25~105、25~100、25~95、25~90、25~85、25~80、25~75、25~70、25~65、25~60、25~55、25~50、25~45、25~40、25~35または25~30mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、30~245、35~240、40~235、45~230、50~225、55~220、60~215、65~210、70~205、75~200、80~195、85~190、90~185、95~180、100~175、105~170、110~165、115~160、120~155、125~150、130~145または135~140mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、100~140、101~140、102~140、103~140、104~140、105~140、106~140、107~140、108~140、109~140、110~140、111~140、112~140、113~140、114~140、115~140、116~140、117~140、118~140、119~140、120~140、121~140、122~140、123~140、124~140、125~140、126~140、127~140、128~140、129~140、130~140、131~140、132~140、133~140、134~140、135~140、136~140、137~140、138~140または139~140mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、100~139、100~138、100~137、100~136、100~135、100~134、100~133、100~132、100~131、100~130、100~129、100~128、100~127、100~126、100~125、100~124、100~123、100~122、100~121、100~120、100~119、100~118、100~117、100~116、100~115、100~114、100~113、100~112、100~111、100~110、100~109、100~108、100~107、100~106、100~105、100~104、100~103、100~102または100~101mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139または140mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139または140mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139または140mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0455]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~20mMのKClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0456]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~40、0.1~39、0.1~38、0.1~37、0.1~36、0.1~35、0.1~34、0.1~33、0.1~32、0.1~31、0.1~30、0.1~29、0.1~28、0.1~27、0.1~26、0.1~25、0.1~24、0.1~23、0.1~22、0.1~21、0.1~20、0.1~19、0.1~18、0.1~17、0.1~16、0.1~15、0.1~14、0.1~13、0.1~12、0.1~10、0.1~9、0.1~8、0.1~7、0.1~6、0.1~5、0.1~4、0.1~3、0.1~2または0.1~1mMのKClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.2~40、0.3~40、0.4~40、0.5~40、0.6~40、0.7~40、0.8~40、0.9~40、1~40、2~40、3~40、4~40、5~40、6~40、7~40、8~40、9~40、10~40、11~40、12~40、13~40、14~40、15~40、16~40、17~40、18~40、19~40、20~40、21~40、22~40、23~40、24~40、25~40、26~40、27~40、28~40、29~40、30~40、31~40、32~40、33~40、34~40、35~40、36~40、37~40、38~40または39~40mMのKClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~3.5、0.2~3.5、0.3~3.5、0.4~3.5、0.5~3.5、0.6~3.5、0.7~3.5、0.8~3.5、0.9~3.5、1.0~3.5、1.1~3.5、1.2~3.5、1.3~3.5、1.4~3.5、1.5~3.5、1.6~3.5、1.7~3.5、1.8~3.5、1.9~3.5、2.0~3.5、2.1~3.5、2.2~3.5、2.3~3.5、2.4~3.5、2.5~3.5、2.6~3.5、2.7~3.5、2.8~3.5、2.9~3.5、3.0~3.5、3.1~3.5、3.2~3.5、3.3~3.5または3.4~3.5mMのKClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~3.4、0.1~3.3、0.1~3.2、0.1~3.1、0.1~3.0、0.1~2.9、0.1~2.8、0.1~2.7、0.1~2.6、0.1~2.5、0.1~2.4、0.1~2.3、0.1~2.2、0.1~2.1、0.1~2.0、0.1~1.9、0.1~1.8、0.1~1.7、0.1~1.6、0.1~1.5、0.1~1.4、0.1~1.3、0.1~1.2、0.1~1.1、0.1~1.0、0.1~0.9、0.1~0.8、0.1~0.7、0.1~0.6、0.1~0.5、0.1~0.4、0.1~0.3または0.1~0.2mMのKClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4または3.5mMのKClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4または3.5mMのKClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4または3.5mMのKClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0456]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~40、0.1~39、0.1~38、0.1~37、0.1~36、0.1~35、0.1~34、0.1~33、0.1~32、0.1~31、0.1~30、0.1~29、0.1~28、0.1~27、0.1~26、0.1~25、0.1~24、0.1~23、0.1~22、0.1~21、0.1~20、0.1~19、0.1~18、0.1~17、0.1~16、0.1~15、0.1~14、0.1~13、0.1~12、0.1~10、0.1~9、0.1~8、0.1~7、0.1~6、0.1~5、0.1~4、0.1~3、0.1~2または0.1~1mMのKClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.2~40、0.3~40、0.4~40、0.5~40、0.6~40、0.7~40、0.8~40、0.9~40、1~40、2~40、3~40、4~40、5~40、6~40、7~40、8~40、9~40、10~40、11~40、12~40、13~40、14~40、15~40、16~40、17~40、18~40、19~40、20~40、21~40、22~40、23~40、24~40、25~40、26~40、27~40、28~40、29~40、30~40、31~40、32~40、33~40、34~40、35~40、36~40、37~40、38~40または39~40mMのKClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~3.5、0.2~3.5、0.3~3.5、0.4~3.5、0.5~3.5、0.6~3.5、0.7~3.5、0.8~3.5、0.9~3.5、1.0~3.5、1.1~3.5、1.2~3.5、1.3~3.5、1.4~3.5、1.5~3.5、1.6~3.5、1.7~3.5、1.8~3.5、1.9~3.5、2.0~3.5、2.1~3.5、2.2~3.5、2.3~3.5、2.4~3.5、2.5~3.5、2.6~3.5、2.7~3.5、2.8~3.5、2.9~3.5、3.0~3.5、3.1~3.5、3.2~3.5、3.3~3.5または3.4~3.5mMのKClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~3.4、0.1~3.3、0.1~3.2、0.1~3.1、0.1~3.0、0.1~2.9、0.1~2.8、0.1~2.7、0.1~2.6、0.1~2.5、0.1~2.4、0.1~2.3、0.1~2.2、0.1~2.1、0.1~2.0、0.1~1.9、0.1~1.8、0.1~1.7、0.1~1.6、0.1~1.5、0.1~1.4、0.1~1.3、0.1~1.2、0.1~1.1、0.1~1.0、0.1~0.9、0.1~0.8、0.1~0.7、0.1~0.6、0.1~0.5、0.1~0.4、0.1~0.3または0.1~0.2mMのKClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4または3.5mMのKClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4または3.5mMのKClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4または3.5mMのKClを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0457]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~50mMのNa2HPO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0458]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.01~100、0.02~100、0.03~100、0.04~100、0.05~100、0.06~100、0.07~100、0.08~100、0.09~100、0.1~100、0.2~100、0.3~100、0.4~100、0.5~100、0.6~100、0.7~100、0.8~100、0.9~100、1~100、2~100、3~100、4~100、5~100、6~100、7~100、8~100、9~100、10~100、15~100、20~100、25~100、30~100、35~100、40~100、45~100、50~100、55~100、60~100、65~100、70~100、75~100、80~100、85~100、90~100または95~100mMのNa2HPO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.01~95、0.01~90、0.01~85、0.01~80、0.01~75、0.01~70、0.01~65、0.01~60、0.01~55、0.01~50、0.01~45、0.01~40、0.01~35、0.01~30、0.01~25、0.01~20、0.01~15、0.01~10、0.01~9、0.01~8、0.01~7、0.01~6、0.01~5、0.01~4、0.01~3、0.01~2、0.01~1、0.01~0.9、0.01~0.8、0.01~0.7、0.01~0.6、0.01~0.5、0.01~0.4、0.01~0.3、0.01~0.2、0.01~0.1、0.01~0.09、0.01~0.08、0.01~0.07、0.01~0.06、0.01~0.05、0.01~0.04、0.01~0.03または0.01~0.02mMのNa2HPO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~3.0、0.1~2.9、0.1~2.8、0.1~2.7、0.1~2.6、0.1~2.5、0.1~2.4、0.1~2.3、0.1~2.2、0.1~2.1、0.1~2.0、0.1~1.9、0.1~1.8、0.1~1.7、0.1~1.6、0.1~1.5、0.1~1.4、0.1~1.3、0.1~1.2、0.1~1.1、0.1~1.0、0.1~0.9、0.1~0.8、0.1~0.7、0.1~0.6、0.1~0.5、0.1~0.4、0.1~0.3または0.1~0.2mMのNa2HPO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~3.0、0.2~3.0、0.3~3.0、0.4~3.0、0.5~3.0、0.6~3.0、0.7~3.0、0.8~3.0、0.9~3.0、1.0~3.0、1.2~3.0、1.3~3.0、1.4~3.0、1.5~3.0、1.6~3.0、1.7~3.0、1.8~3.0、1.9~3.0、2.0~3.0、2.1~3.0、2.2~3.0、2.3~3.0、2.4~3.0、2.5~3.0、2.6~3.0、2.7~3.0、2.8~3.0または2.9~3.0mMのNa2HPO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9または3.0mMのNa2HPO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9または3.0mMのNa2HPO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9または3.0mMのNa2HPO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0458]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.01~100、0.02~100、0.03~100、0.04~100、0.05~100、0.06~100、0.07~100、0.08~100、0.09~100、0.1~100、0.2~100、0.3~100、0.4~100、0.5~100、0.6~100、0.7~100、0.8~100、0.9~100、1~100、2~100、3~100、4~100、5~100、6~100、7~100、8~100、9~100、10~100、15~100、20~100、25~100、30~100、35~100、40~100、45~100、50~100、55~100、60~100、65~100、70~100、75~100、80~100、85~100、90~100または95~100mMのNa2HPO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.01~95、0.01~90、0.01~85、0.01~80、0.01~75、0.01~70、0.01~65、0.01~60、0.01~55、0.01~50、0.01~45、0.01~40、0.01~35、0.01~30、0.01~25、0.01~20、0.01~15、0.01~10、0.01~9、0.01~8、0.01~7、0.01~6、0.01~5、0.01~4、0.01~3、0.01~2、0.01~1、0.01~0.9、0.01~0.8、0.01~0.7、0.01~0.6、0.01~0.5、0.01~0.4、0.01~0.3、0.01~0.2、0.01~0.1、0.01~0.09、0.01~0.08、0.01~0.07、0.01~0.06、0.01~0.05、0.01~0.04、0.01~0.03または0.01~0.02mMのNa2HPO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~3.0、0.1~2.9、0.1~2.8、0.1~2.7、0.1~2.6、0.1~2.5、0.1~2.4、0.1~2.3、0.1~2.2、0.1~2.1、0.1~2.0、0.1~1.9、0.1~1.8、0.1~1.7、0.1~1.6、0.1~1.5、0.1~1.4、0.1~1.3、0.1~1.2、0.1~1.1、0.1~1.0、0.1~0.9、0.1~0.8、0.1~0.7、0.1~0.6、0.1~0.5、0.1~0.4、0.1~0.3または0.1~0.2mMのNa2HPO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~3.0、0.2~3.0、0.3~3.0、0.4~3.0、0.5~3.0、0.6~3.0、0.7~3.0、0.8~3.0、0.9~3.0、1.0~3.0、1.2~3.0、1.3~3.0、1.4~3.0、1.5~3.0、1.6~3.0、1.7~3.0、1.8~3.0、1.9~3.0、2.0~3.0、2.1~3.0、2.2~3.0、2.3~3.0、2.4~3.0、2.5~3.0、2.6~3.0、2.7~3.0、2.8~3.0または2.9~3.0mMのNa2HPO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9または3.0mMのNa2HPO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9または3.0mMのNa2HPO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9または3.0mMのNa2HPO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0459]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~50mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0460]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.01~100、0.02~100、0.03~100、0.04~100、0.05~100、0.06~100、0.07~100、0.08~100、0.09~100、0.1~100、0.2~100、0.3~100、0.4~100、0.5~100、0.6~100、0.7~100、0.8~100、0.9~100、1~100、2~100、3~100、4~100、5~100、6~100、7~100、8~100、9~100、10~100、15~100、20~100、25~100、30~100、35~100、40~100、45~100、50~100、55~100、60~100、65~100、70~100、75~100、80~100、85~100、90~100または95~100mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.01~95、0.01~90、0.01~85、0.01~80、0.01~75、0.01~70、0.01~65、0.01~60、0.01~55、0.01~50、0.01~45、0.01~40、0.01~35、0.01~30、0.01~25、0.01~20、0.01~15、0.01~10、0.01~9、0.01~8、0.01~7、0.01~6、0.01~5、0.01~4、0.01~3、0.01~2、0.01~1、0.01~0.9、0.01~0.8、0.01~0.7、0.01~0.6、0.01~0.5、0.01~0.4、0.01~0.3、0.01~0.2、0.01~0.1、0.01~0.09、0.01~0.08、0.01~0.07、0.01~0.06、0.01~0.05、0.01~0.04、0.01~0.03または0.01~0.02mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~3.0、0.1~2.9、0.1~2.8、0.1~2.7、0.1~2.6、0.1~2.5、0.1~2.4、0.1~2.3、0.1~2.2、0.1~2.1、0.1~2.0、0.1~1.9、0.1~1.8、0.1~1.7、0.1~1.6、0.1~1.5、0.1~1.4、0.1~1.3、0.1~1.2、0.1~1.1、0.1~1.0、0.1~0.9、0.1~0.8、0.1~0.7、0.1~0.6、0.1~0.5、0.1~0.4、0.1~0.3または0.1~0.2mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~3.0、0.2~3.0、0.3~3.0、0.4~3.0、0.5~3.0、0.6~3.0、0.7~3.0、0.8~3.0、0.9~3.0、1.0~3.0、1.2~3.0、1.3~3.0、1.4~3.0、1.5~3.0、1.6~3.0、1.7~3.0、1.8~3.0、1.9~3.0、2.0~3.0、2.1~3.0、2.2~3.0、2.3~3.0、2.4~3.0、2.5~3.0、2.6~3.0、2.7~3.0、2.8~3.0または2.9~3.0mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9または3.0mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9または3.0mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9または3.0mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0460]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.01~100、0.02~100、0.03~100、0.04~100、0.05~100、0.06~100、0.07~100、0.08~100、0.09~100、0.1~100、0.2~100、0.3~100、0.4~100、0.5~100、0.6~100、0.7~100、0.8~100、0.9~100、1~100、2~100、3~100、4~100、5~100、6~100、7~100、8~100、9~100、10~100、15~100、20~100、25~100、30~100、35~100、40~100、45~100、50~100、55~100、60~100、65~100、70~100、75~100、80~100、85~100、90~100または95~100mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.01~95、0.01~90、0.01~85、0.01~80、0.01~75、0.01~70、0.01~65、0.01~60、0.01~55、0.01~50、0.01~45、0.01~40、0.01~35、0.01~30、0.01~25、0.01~20、0.01~15、0.01~10、0.01~9、0.01~8、0.01~7、0.01~6、0.01~5、0.01~4、0.01~3、0.01~2、0.01~1、0.01~0.9、0.01~0.8、0.01~0.7、0.01~0.6、0.01~0.5、0.01~0.4、0.01~0.3、0.01~0.2、0.01~0.1、0.01~0.09、0.01~0.08、0.01~0.07、0.01~0.06、0.01~0.05、0.01~0.04、0.01~0.03または0.01~0.02mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~3.0、0.1~2.9、0.1~2.8、0.1~2.7、0.1~2.6、0.1~2.5、0.1~2.4、0.1~2.3、0.1~2.2、0.1~2.1、0.1~2.0、0.1~1.9、0.1~1.8、0.1~1.7、0.1~1.6、0.1~1.5、0.1~1.4、0.1~1.3、0.1~1.2、0.1~1.1、0.1~1.0、0.1~0.9、0.1~0.8、0.1~0.7、0.1~0.6、0.1~0.5、0.1~0.4、0.1~0.3または0.1~0.2mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~3.0、0.2~3.0、0.3~3.0、0.4~3.0、0.5~3.0、0.6~3.0、0.7~3.0、0.8~3.0、0.9~3.0、1.0~3.0、1.2~3.0、1.3~3.0、1.4~3.0、1.5~3.0、1.6~3.0、1.7~3.0、1.8~3.0、1.9~3.0、2.0~3.0、2.1~3.0、2.2~3.0、2.3~3.0、2.4~3.0、2.5~3.0、2.6~3.0、2.7~3.0、2.8~3.0または2.9~3.0mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9または3.0mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9または3.0mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9または3.0mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0461]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~50mMのCaCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0462]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~50、0.2~50、0.3~50、0.4~50、0.5~50、0.6~50、0.7~50、0.8~50、0.9~50、1.0~50、~50、1.1~50、1.2~50、1.3~50、1.4~50、1.5~50、1.6~50、1.7~50、1.8~50、1.9~50、2.0~50、2.1~50、2.2~50、2.3~50、2.4~50、2.5~50、2.6~50、2.7~50、2.8~50、2.9~50、3.0~50、3.1~50、3.2~50、3.3~50、3.4~50、3.5~50、3.6~50、3.7~50、3.8~50、3.9~50、4~50、5~50、6~50、7~50、8~50、9~50、10~50、15~50、20~50、25~50、1 30~50、35~50、40~50または45~50mMのCaCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~45、0.1~40、0.1~35、0.1~30、0.1~25、0.1~20、0.1~15、0.1~10、0.1~5、0.1~4、0.1~4.9、0.1~4.8、0.1~4.7、0.1~4.6、0.1~4.5、0.1~4.4、0.1~4.3、0.1~4.2、0.1~4.1、0.1~4.0、0.1~3.9、0.1~3.8、0.1~3.7、0.1~3.6、0.1~3.5、0.1~3.4、0.1~3.3、0.1~3.2、0.1~3.1、0.1~3.0、0.1~2.9、0.1~2.8、0.1~2.7、0.1~2.6、0.1~2.5、0.1~2.4、0.1~2.3、0.1~2.2、0.1~2.1、0.1~2.0、0.1~1.9、0.1~1.8、0.1~1.7、0.1~1.6、0.1~1.5、0.1~1.4、0.1~1.3、0.1~1.2、0.1~1.1、0.1~1.0、0.1~0.9、0.1~0.8、0.1~0.7、0.1~0.6、0.1~0.5、0.1~0.4、0.1~0.3または0.1~0.2mMのCaCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9または4.0mMのCaCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9または4.0mMのCaCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9または4.0mMのCaCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0462]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~50、0.2~50、0.3~50、0.4~50、0.5~50、0.6~50、0.7~50、0.8~50、0.9~50、1.0~50、~50、1.1~50、1.2~50、1.3~50、1.4~50、1.5~50、1.6~50、1.7~50、1.8~50、1.9~50、2.0~50、2.1~50、2.2~50、2.3~50、2.4~50、2.5~50、2.6~50、2.7~50、2.8~50、2.9~50、3.0~50、3.1~50、3.2~50、3.3~50、3.4~50、3.5~50、3.6~50、3.7~50、3.8~50、3.9~50、4~50、5~50、6~50、7~50、8~50、9~50、10~50、15~50、20~50、25~50、1 30~50、35~50、40~50または45~50mMのCaCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~45、0.1~40、0.1~35、0.1~30、0.1~25、0.1~20、0.1~15、0.1~10、0.1~5、0.1~4、0.1~4.9、0.1~4.8、0.1~4.7、0.1~4.6、0.1~4.5、0.1~4.4、0.1~4.3、0.1~4.2、0.1~4.1、0.1~4.0、0.1~3.9、0.1~3.8、0.1~3.7、0.1~3.6、0.1~3.5、0.1~3.4、0.1~3.3、0.1~3.2、0.1~3.1、0.1~3.0、0.1~2.9、0.1~2.8、0.1~2.7、0.1~2.6、0.1~2.5、0.1~2.4、0.1~2.3、0.1~2.2、0.1~2.1、0.1~2.0、0.1~1.9、0.1~1.8、0.1~1.7、0.1~1.6、0.1~1.5、0.1~1.4、0.1~1.3、0.1~1.2、0.1~1.1、0.1~1.0、0.1~0.9、0.1~0.8、0.1~0.7、0.1~0.6、0.1~0.5、0.1~0.4、0.1~0.3または0.1~0.2mMのCaCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9または4.0mMのCaCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9または4.0mMのCaCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9または4.0mMのCaCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0463]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~50mMのMgCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0464]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~50、0.2~50、0.3~50、0.4~50、0.5~50、0.6~50、0.7~50、0.8~50、0.9~50、1.0~50、~50、1.1~50、1.2~50、1.3~50、1.4~50、1.5~50、1.6~50、1.7~50、1.8~50、1.9~50、2.0~50、2.1~50、2.2~50、2.3~50、2.4~50、2.5~50、2.6~50、2.7~50、2.8~50、2.9~50、3.0~50、3.1~50、3.2~50、3.3~50、3.4~50、3.5~50、3.6~50、3.7~50、3.8~50、3.9~50、4~50、5~50、6~50、7~50、8~50、9~50、10~50、15~50、20~50、25~50、1 30~50、35~50、40~50または45~50mMのMgCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~45、0.1~40、0.1~35、0.1~30、0.1~25、0.1~20、0.1~15、0.1~10、0.1~5、0.1~4、0.1~4.9、0.1~4.8、0.1~4.7、0.1~4.6、0.1~4.5、0.1~4.4、0.1~4.3、0.1~4.2、0.1~4.1、0.1~4.0、0.1~3.9、0.1~3.8、0.1~3.7、0.1~3.6、0.1~3.5、0.1~3.4、0.1~3.3、0.1~3.2、0.1~3.1、0.1~3.0、0.1~2.9、0.1~2.8、0.1~2.7、0.1~2.6、0.1~2.5、0.1~2.4、0.1~2.3、0.1~2.2、0.1~2.1、0.1~2.0、0.1~1.9、0.1~1.8、0.1~1.7、0.1~1.6、0.1~1.5、0.1~1.4、0.1~1.3、0.1~1.2、0.1~1.1、0.1~1.0、0.1~0.9、0.1~0.8、0.1~0.7、0.1~0.6、0.1~0.5、0.1~0.4、0.1~0.3または0.1~0.2mMのMgCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9または4.0mMのMgCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9または4.0mMのMgCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9または4.0mMのMgCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0464]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~50、0.2~50、0.3~50、0.4~50、0.5~50、0.6~50、0.7~50、0.8~50、0.9~50、1.0~50、~50、1.1~50、1.2~50、1.3~50、1.4~50、1.5~50、1.6~50、1.7~50、1.8~50、1.9~50、2.0~50、2.1~50、2.2~50、2.3~50、2.4~50、2.5~50、2.6~50、2.7~50、2.8~50、2.9~50、3.0~50、3.1~50、3.2~50、3.3~50、3.4~50、3.5~50、3.6~50、3.7~50、3.8~50、3.9~50、4~50、5~50、6~50、7~50、8~50、9~50、10~50、15~50、20~50、25~50、1 30~50、35~50、40~50または45~50mMのMgCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~45、0.1~40、0.1~35、0.1~30、0.1~25、0.1~20、0.1~15、0.1~10、0.1~5、0.1~4、0.1~4.9、0.1~4.8、0.1~4.7、0.1~4.6、0.1~4.5、0.1~4.4、0.1~4.3、0.1~4.2、0.1~4.1、0.1~4.0、0.1~3.9、0.1~3.8、0.1~3.7、0.1~3.6、0.1~3.5、0.1~3.4、0.1~3.3、0.1~3.2、0.1~3.1、0.1~3.0、0.1~2.9、0.1~2.8、0.1~2.7、0.1~2.6、0.1~2.5、0.1~2.4、0.1~2.3、0.1~2.2、0.1~2.1、0.1~2.0、0.1~1.9、0.1~1.8、0.1~1.7、0.1~1.6、0.1~1.5、0.1~1.4、0.1~1.3、0.1~1.2、0.1~1.1、0.1~1.0、0.1~0.9、0.1~0.8、0.1~0.7、0.1~0.6、0.1~0.5、0.1~0.4、0.1~0.3または0.1~0.2mMのMgCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9または4.0mMのMgCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9または4.0mMのMgCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9または4.0mMのMgCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0465]一部の実施形態では、ASOは、1~100mMのNaHCO3、1~100mMのKHCO3またはそれらの組合せをさらに含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0466]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、1~100mMのNaHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0466]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、1~100mMのNaHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0467]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、1~99、1~95、1~90、1~85、1~80、1~75、1~70、1~65、1~60、1~55、1~50、1~45、1~40、1~35、1~30、1~25、1~20、1~15、1~10、1~9、1~8、1~7、1~6、1~5、1~4、1~3または1~2mMのNaHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、2~100、3~100、4~100、5~100、6~100、7~100、8~100、9~100、10~100、15~100、20~100、25~100、30~100、35~100、40~100、45~100、50~100、55~100、60~100、65~100、70~100、75~100、80~100、85~100、90~100または95~100mMのNaHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、24.0~28.0、24.0~27.9、24.0~27.8、24.0~27.7、24.0~27.6、24.0~27.5、24.0~27.4、24.0~27.3、24.0~27.2、24.0~27.1、24.0~27.0、24.0~26.9、24.0~26.8、24.0~26.7、24.0~26.6、24.0~26.5、24.0~26.4、24.0~26.3、24.0~26.2、24.0~26.1、24.0~26.0、24.0~25.9、4.0~25.8、24.0~25.7、24.0~25.6、24.0~25.5、24.0~25.4、24.0~25.3、24.0~25.2、24.0~25.1、24.0~25.0、24.0~24.9、24.0~24.8、24.0~24.7、24.0~24.6、24.0~24.5、24.0~24.4、24.0~24.3、24.0~24.2または24.0~24.1mMのNaHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、24.1~28.0、24.2~28.0、24.3~28.0、24.4~28.0、24.5~28.0、24.6~28.0、24.7~28.0、24.8~28.0、24.9~28.0、25.0~28.0、25.1~28.0、25.2~28.0、25.3~28.0、25.4~28.0、25.5~28.0、25.6~28.0、25.7~28.0、25.8~28.0、25.9~28.0、26.0~28.0、26.1~28.0、26.2~28.0、26.3~28.0、26.4~28.0、26.5~28.0、26.6~28.0、26.7~28.0、26.8~28.0、26.9~28.0、27.0~28.0、27.1~28.0、27.2~28.0、27.3~28.0、27.4~28.0、27.5~28.0、27.6~28.0、27.7~28.0、27.8~28.0または27.9~28.0mMのNaHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.0、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9または28.0mMのNaHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9または28.0mMのNaHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9または28.0mMのNaHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0468]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、1~100mMのKHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0469]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、1~99、1~95、1~90、1~85、1~80、1~75、1~70、1~65、1~60、1~55、1~50、1~45、1~40、1~35、1~30、1~25、1~20、1~15、1~10、1~9、1~8、1~7、1~6、1~5、1~4、1~3または1~2mMのKHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、2~100、3~100、4~100、5~100、6~100、7~100、8~100、9~100、10~100、15~100、20~100、25~100、30~100、35~100、40~100、45~100、50~100、55~100、60~100、65~100、70~100、75~100、80~100、85~100、90~100または95~100mMのKHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、24.0~28.0、24.0~27.9、24.0~27.8、24.0~27.7、24.0~27.6、24.0~27.5、24.0~27.4、24.0~27.3、24.0~27.2、24.0~27.1、24.0~27.0、24.0~26.9、24.0~26.8、24.0~26.7、24.0~26.6、24.0~26.5、24.0~26.4、24.0~26.3、24.0~26.2、24.0~26.1、24.0~26.0、24.0~25.9、4.0~25.8、24.0~25.7、24.0~25.6、24.0~25.5、24.0~25.4、24.0~25.3、24.0~25.2、24.0~25.1、24.0~25.0、24.0~24.9、24.0~24.8、24.0~24.7、24.0~24.6、24.0~24.5、24.0~24.4、24.0~24.3、24.0~24.2または24.0~24.1mMのKHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、24.1~28.0、24.2~28.0、24.3~28.0、24.4~28.0、24.5~28.0、24.6~28.0、24.7~28.0、24.8~28.0、24.9~28.0、25.0~28.0、25.1~28.0、25.2~28.0、25.3~28.0、25.4~28.0、25.5~28.0、25.6~28.0、25.7~28.0、25.8~28.0、25.9~28.0、26.0~28.0、26.1~28.0、26.2~28.0、26.3~28.0、26.4~28.0、26.5~28.0、26.6~28.0、26.7~28.0、26.8~28.0、26.9~28.0、27.0~28.0、27.1~28.0、27.2~28.0、27.3~28.0、27.4~28.0、27.5~28.0、27.6~28.0、27.7~28.0、27.8~28.0または27.9~28.0mMのKHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.0、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9または28.0mMのKHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9または28.0mMのKHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9または28.0mMのKHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0469]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、1~99、1~95、1~90、1~85、1~80、1~75、1~70、1~65、1~60、1~55、1~50、1~45、1~40、1~35、1~30、1~25、1~20、1~15、1~10、1~9、1~8、1~7、1~6、1~5、1~4、1~3または1~2mMのKHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、2~100、3~100、4~100、5~100、6~100、7~100、8~100、9~100、10~100、15~100、20~100、25~100、30~100、35~100、40~100、45~100、50~100、55~100、60~100、65~100、70~100、75~100、80~100、85~100、90~100または95~100mMのKHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、24.0~28.0、24.0~27.9、24.0~27.8、24.0~27.7、24.0~27.6、24.0~27.5、24.0~27.4、24.0~27.3、24.0~27.2、24.0~27.1、24.0~27.0、24.0~26.9、24.0~26.8、24.0~26.7、24.0~26.6、24.0~26.5、24.0~26.4、24.0~26.3、24.0~26.2、24.0~26.1、24.0~26.0、24.0~25.9、4.0~25.8、24.0~25.7、24.0~25.6、24.0~25.5、24.0~25.4、24.0~25.3、24.0~25.2、24.0~25.1、24.0~25.0、24.0~24.9、24.0~24.8、24.0~24.7、24.0~24.6、24.0~24.5、24.0~24.4、24.0~24.3、24.0~24.2または24.0~24.1mMのKHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、24.1~28.0、24.2~28.0、24.3~28.0、24.4~28.0、24.5~28.0、24.6~28.0、24.7~28.0、24.8~28.0、24.9~28.0、25.0~28.0、25.1~28.0、25.2~28.0、25.3~28.0、25.4~28.0、25.5~28.0、25.6~28.0、25.7~28.0、25.8~28.0、25.9~28.0、26.0~28.0、26.1~28.0、26.2~28.0、26.3~28.0、26.4~28.0、26.5~28.0、26.6~28.0、26.7~28.0、26.8~28.0、26.9~28.0、27.0~28.0、27.1~28.0、27.2~28.0、27.3~28.0、27.4~28.0、27.5~28.0、27.6~28.0、27.7~28.0、27.8~28.0または27.9~28.0mMのKHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.0、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9または28.0mMのKHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9または28.0mMのKHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9または28.0mMのKHCO3を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0470]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0~50mMのKH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0471]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0~100、0.01~100、0.02~100、0.03~100、0.04~100、0.05~100、0.06~100、0.07~100、0.08~100、0.09~100、0.1~100、0.2~100、0.3~100、0.4~100、0.5~100、0.6~100、0.7~100、0.8~100、0.9~100、1~100、2~100、3~100、4~100、5~100、6~100、7~100、8~100、9~100、10~100、15~100、20~100、25~100、30~100、35~100、40~100、45~100、50~100、55~100、60~100、65~100、70~100、75~100、80~100、85~100、90~100または95~100mMのKH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0~95、0~90、0~85、0~80、0~75、0~70、0~65、0~60、0~55、0~50、0~45、0~40、0~35、0~30、0~25、0~20、0~15、0~10、0~9、0~8、0~7、0~6、0~5、0~4、0~3、0~2、0~1、0~0.9、0~0.8、0~0.7、0~0.6、0~0.5、0~0.4、0~0.3、0~0.2、0~0.1、0~0.09、0~0.08、0~0.07、0~0.06、0~0.05、0~0.04、0~0.03または0~0.02mMのKH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.01~95、0.01~90、0.01~85、0.01~80、0.01~75、0.01~70、0.01~65、0.01~60、0.01~55、0.01~50、0.01~45、0.01~40、0.01~35、0.01~30、0.01~25、0.01~20、0.01~15、0.01~10、0.01~9、0.01~8、0.01~7、0.01~6、0.01~5、0.01~4、0.01~3、0.01~2、0.01~1、0.01~0.9、0.01~0.8、0.01~0.7、0.01~0.6、0.01~0.5、0.01~0.4、0.01~0.3、0.01~0.2、0.01~0.1、0.01~0.09、0.01~0.08、0.01~0.07、0.01~0.06、0.01~0.05、0.01~0.04、0.01~0.03または0.01~0.02mMのKH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0~3.0、0~2.9、0~2.8、0~2.7、0~2.6、0~2.5、0~2.4、0~2.3、0~2.2、0~2.1、0~2.0、0~1.9、0~1.8、0~1.7、0~1.6、0~1.5、0~1.4、0~1.3、0~1.2、0~1.1、0~1.0、0~0.9、0~0.8、0~0.7、0~0.6、0~0.5、0~0.4、0~0.3または0~0.2mMのKH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~3.0、0.1~2.9、0.1~2.8、0.1~2.7、0.1~2.6、0.1~2.5、0.1~2.4、0.1~2.3、0.1~2.2、0.1~2.1、0.1~2.0、0.1~1.9、0.1~1.8、0.1~1.7、0.1~1.6、0.1~1.5、0.1~1.4、0.1~1.3、0.1~1.2、0.1~1.1、0.1~1.0、0.1~0.9、0.1~0.8、0.1~0.7、0.1~0.6、0.1~0.5、0.1~0.4、0.1~0.3または0.1~0.2mMのKH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0~3.0、0.1~3.0、0.2~3.0、0.3~3.0、0.4~3.0、0.5~3.0、0.6~3.0、0.7~3.0、0.8~3.0、0.9~3.0、1.0~3.0、1.2~3.0、1.3~3.0、1.4~3.0、1.5~3.0、1.6~3.0、1.7~3.0、1.8~3.0、1.9~3.0、2.0~3.0、2.1~3.0、2.2~3.0、2.3~3.0、2.4~3.0、2.5~3.0、2.6~3.0、2.7~3.0、2.8~3.0または2.9~3.0mMのKH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9または3.0mMのKH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9または3.0mMのKH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9または3.0mMのKH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0471]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0~100、0.01~100、0.02~100、0.03~100、0.04~100、0.05~100、0.06~100、0.07~100、0.08~100、0.09~100、0.1~100、0.2~100、0.3~100、0.4~100、0.5~100、0.6~100、0.7~100、0.8~100、0.9~100、1~100、2~100、3~100、4~100、5~100、6~100、7~100、8~100、9~100、10~100、15~100、20~100、25~100、30~100、35~100、40~100、45~100、50~100、55~100、60~100、65~100、70~100、75~100、80~100、85~100、90~100または95~100mMのKH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0~95、0~90、0~85、0~80、0~75、0~70、0~65、0~60、0~55、0~50、0~45、0~40、0~35、0~30、0~25、0~20、0~15、0~10、0~9、0~8、0~7、0~6、0~5、0~4、0~3、0~2、0~1、0~0.9、0~0.8、0~0.7、0~0.6、0~0.5、0~0.4、0~0.3、0~0.2、0~0.1、0~0.09、0~0.08、0~0.07、0~0.06、0~0.05、0~0.04、0~0.03または0~0.02mMのKH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.01~95、0.01~90、0.01~85、0.01~80、0.01~75、0.01~70、0.01~65、0.01~60、0.01~55、0.01~50、0.01~45、0.01~40、0.01~35、0.01~30、0.01~25、0.01~20、0.01~15、0.01~10、0.01~9、0.01~8、0.01~7、0.01~6、0.01~5、0.01~4、0.01~3、0.01~2、0.01~1、0.01~0.9、0.01~0.8、0.01~0.7、0.01~0.6、0.01~0.5、0.01~0.4、0.01~0.3、0.01~0.2、0.01~0.1、0.01~0.09、0.01~0.08、0.01~0.07、0.01~0.06、0.01~0.05、0.01~0.04、0.01~0.03または0.01~0.02mMのKH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0~3.0、0~2.9、0~2.8、0~2.7、0~2.6、0~2.5、0~2.4、0~2.3、0~2.2、0~2.1、0~2.0、0~1.9、0~1.8、0~1.7、0~1.6、0~1.5、0~1.4、0~1.3、0~1.2、0~1.1、0~1.0、0~0.9、0~0.8、0~0.7、0~0.6、0~0.5、0~0.4、0~0.3または0~0.2mMのKH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~3.0、0.1~2.9、0.1~2.8、0.1~2.7、0.1~2.6、0.1~2.5、0.1~2.4、0.1~2.3、0.1~2.2、0.1~2.1、0.1~2.0、0.1~1.9、0.1~1.8、0.1~1.7、0.1~1.6、0.1~1.5、0.1~1.4、0.1~1.3、0.1~1.2、0.1~1.1、0.1~1.0、0.1~0.9、0.1~0.8、0.1~0.7、0.1~0.6、0.1~0.5、0.1~0.4、0.1~0.3または0.1~0.2mMのKH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0~3.0、0.1~3.0、0.2~3.0、0.3~3.0、0.4~3.0、0.5~3.0、0.6~3.0、0.7~3.0、0.8~3.0、0.9~3.0、1.0~3.0、1.2~3.0、1.3~3.0、1.4~3.0、1.5~3.0、1.6~3.0、1.7~3.0、1.8~3.0、1.9~3.0、2.0~3.0、2.1~3.0、2.2~3.0、2.3~3.0、2.4~3.0、2.5~3.0、2.6~3.0、2.7~3.0、2.8~3.0または2.9~3.0mMのKH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9または3.0mMのKH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9または3.0mMのKH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9または3.0mMのKH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0472]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0~50mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0473]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0~50、0~45、0~40、0~35、0~30、0~25、0~20、0~19、0~18、0~17、0~16、0~15、0~14、0~13、0~12、0~11、0~10、0~9、0~8、0~7、0~6、0~5、0~4、0~3、0~2、0~1、0~0.9、0~0.8、0~0.7、0~0.6、0~0.5、0~0.4、0~0.3または0~0.2mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~50、0.1~45、0.1~40、0.1~35、0.1~30、0.1~25、0.1~20、0.1~19、0.1~18、0.1~17、0.1~16、0.1~15、0.1~14、0.1~13、0.1~12、0.1~11、0.1~10、0.1~9、0.1~8、0.1~7、0.1~6、0.1~5、0.1~4、0.1~3、0.1~2、0.1~1、0.1~0.9、0.1~0.8、0.1~0.7、0.1~0.6、0.1~0.5、0.1~0.4、0.1~0.3または0.1~0.2mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0~50、0.1~50、0.2~50、0.3~50、0.4~50、0.5~50、0.6~50、0.7~50、0.8~50、0.9~50、1~50、2~50、3~50、4~50、5~50、6~50、7~50、8~50、9~50、1~50、11~50、12~50、13~50、14~50、15~50、16~50、17~50、18~50、19~50、20~50、25~50、30~50、35~50、40~50または45~50mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0~20、0.1~20、0.2~20、0.3~20、0.4~20、0.5~20、0.6~20、0.7~20、0.8~20、0.9~20、1~20、2~20、3~20、4~20、5~20、6~20、7~20、8~20、9~20、10~20、11~20、12~20、13~20、14~20、15~20、16~20、17~20、18~20または19~20mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0473]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0~50、0~45、0~40、0~35、0~30、0~25、0~20、0~19、0~18、0~17、0~16、0~15、0~14、0~13、0~12、0~11、0~10、0~9、0~8、0~7、0~6、0~5、0~4、0~3、0~2、0~1、0~0.9、0~0.8、0~0.7、0~0.6、0~0.5、0~0.4、0~0.3または0~0.2mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1~50、0.1~45、0.1~40、0.1~35、0.1~30、0.1~25、0.1~20、0.1~19、0.1~18、0.1~17、0.1~16、0.1~15、0.1~14、0.1~13、0.1~12、0.1~11、0.1~10、0.1~9、0.1~8、0.1~7、0.1~6、0.1~5、0.1~4、0.1~3、0.1~2、0.1~1、0.1~0.9、0.1~0.8、0.1~0.7、0.1~0.6、0.1~0.5、0.1~0.4、0.1~0.3または0.1~0.2mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0~50、0.1~50、0.2~50、0.3~50、0.4~50、0.5~50、0.6~50、0.7~50、0.8~50、0.9~50、1~50、2~50、3~50、4~50、5~50、6~50、7~50、8~50、9~50、1~50、11~50、12~50、13~50、14~50、15~50、16~50、17~50、18~50、19~50、20~50、25~50、30~50、35~50、40~50または45~50mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0~20、0.1~20、0.2~20、0.3~20、0.4~20、0.5~20、0.6~20、0.7~20、0.8~20、0.9~20、1~20、2~20、3~20、4~20、5~20、6~20、7~20、8~20、9~20、10~20、11~20、12~20、13~20、14~20、15~20、16~20、17~20、18~20または19~20mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0474]一部の実施形態では、ASOは、炭水化物をさらに含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、炭水化物は、D-グルコースを含む。一部の実施形態では、ASOは、1~100mMのD-グルコースをさらに含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0475]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、1~100mMのD-グルコースを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0476]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、1~100、1~95、1~90、1~85、1~80、1~75、1~70、1~65、1~60、1~55、1~50、1~45、1~40、1~35、1~30、1~29、1~28、1~27、1~26、1~25、1~24、1~23、1~22、1~21、1~20、1~19、1~18、1~17、1~16、1~15、1~14、1~13、1~12、1~11、1~10、1~9、1~8、1~7、1~6、1~5、1~4、1~3または1~2mMのD-グルコースを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、2~100、3~100、4~100、5~100、6~100、7~100、8~100、9~100、10~100、11~100、12~100、13~100、14~100、15~100、16~100、17~100、18~100、19~100、20~100、21~100、22~100、23~100、24~100、25~100、26~100、29~100、28~100、29~100、30~100、35~100、40~100、45~100、50~100、55~100、60~100、65~100、70~100、75~100、80~100、85~100、90~100または95~100mMのD-グルコースを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、2~30、3~30、4~30、5~30、6~30、7~30、8~30、9~30、10~30、11~30、12~30、13~30、14~30、15~30、16~30、17~30、18~30、19~30、20~30、21~30、22~30、23~30、24~30、25~30、26~30、27~30、28~30または29~30mMのD-グルコースを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30mMのD-グルコースを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30mMのD-グルコースを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30mMのD-グルコースを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0476]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、1~100、1~95、1~90、1~85、1~80、1~75、1~70、1~65、1~60、1~55、1~50、1~45、1~40、1~35、1~30、1~29、1~28、1~27、1~26、1~25、1~24、1~23、1~22、1~21、1~20、1~19、1~18、1~17、1~16、1~15、1~14、1~13、1~12、1~11、1~10、1~9、1~8、1~7、1~6、1~5、1~4、1~3または1~2mMのD-グルコースを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、2~100、3~100、4~100、5~100、6~100、7~100、8~100、9~100、10~100、11~100、12~100、13~100、14~100、15~100、16~100、17~100、18~100、19~100、20~100、21~100、22~100、23~100、24~100、25~100、26~100、29~100、28~100、29~100、30~100、35~100、40~100、45~100、50~100、55~100、60~100、65~100、70~100、75~100、80~100、85~100、90~100または95~100mMのD-グルコースを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、2~30、3~30、4~30、5~30、6~30、7~30、8~30、9~30、10~30、11~30、12~30、13~30、14~30、15~30、16~30、17~30、18~30、19~30、20~30、21~30、22~30、23~30、24~30、25~30、26~30、27~30、28~30または29~30mMのD-グルコースを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30mMのD-グルコースを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、最高で1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30mMのD-グルコースを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30mMのD-グルコースを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0477]一部の実施形態では、ASOは、25~250mMのNaCl、0.1~20mMのKCl、0.1~50mMのNa2HPO4、0.1~50mMのNaH2PO4、0.1~50mMのCaCl2および0.1~50mMのMgCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0478]一部の実施形態では、ASOは、150mMのNaCl、3.0mMのKCl、0.7mMのNa2HPO4、0.3mMのNaH2PO4、0.79mMのMgCl2および1.4mMのCaCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0479]一部の実施形態では、ASOは、抗酸化剤をさらに含む緩衝液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、抗酸化剤は、t-ブチルヒドロキシキノリン(TBHQ)、ブチル化ヒドロキシトルエン(BHT)、ブチル化ヒドロキシアニソール(BHA)、ビタミンEまたはそれらの任意の組合せである。一部の実施形態では、ASOは、抗酸化剤をさらに含む緩衝液中に可溶化または希釈され、抗酸化剤は、アスコルビン酸(ビタミンC)、グルタチオン、リポ酸、尿酸、カロテン、α-トコフェロール(ビタミンE)、ユビキノール(補酵素Q)またはそれらの任意の組合せである。
[0480]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、25~250mMのNaCl、0.1~20mMのKCl、0~50mMのKH2PO4、1~100mMのNaHCO3、0~50mMのNaH2PO4、1~100mMのD-グルコース、0.1~50mMのCaCl2、0.1~50mMのMgCl2またはそれらの任意の組合せを含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0481]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、25~250mMのNaCl、0.1~20mMのKCl、0~50mMのKH2PO4、1~100mMのNaHCO3、0~50mMのNaH2PO4、1~100mMのD-グルコース、0.1~50mMのCaCl2および0.1~50mMのMgCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0482]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、127mMのNaCl、1.0mMのKCl、1.2mMのKH2PO4、26mMのNaHCO3、10mMのD-グルコース、2.4mMのCaCl2および1.3mMのMgCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0483]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、119mMのNaCl、26.2mMのNaHCO3、2.5mMのKCl、1mMのNaH2PO4、1.3mMのMgCl2、10mMのグルコースおよび2.5mMのCaCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈される。
[0484]一部の実施形態では、医薬製剤は、保存料を含まない。一部の実施形態では、医薬製剤は、保存料を含む。
[0485]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、希釈剤中に5~250mg/mLの濃度に可溶化または希釈される。
[0485]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、希釈剤中に5~250mg/mLの濃度に可溶化または希釈される。
[0486]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、希釈剤中に5~250、5~247.5、5~245、5~242.5、5~240、5~237.5、5~235、5~232.5、5~230、5~227.5、5~225、5~225.5、5~220、5~217.5、5~215、5~212.5、5~210、5~205.5、5~205、5~202.5、5~200、5~197.5、5~195、5~192.5、5~190、5~187.5、5~185、5~182.5、5~180、5~177.5、5~175、5~172.5、5~170、5~167.5、5~165、5~162.5、5~160、5~157.5、5~155、5~152.5、5~150、5~147.5、5~145、5~142.5、5~140、5~137.5、5~135、5~132.5、5~130、5~127.5、5~125、5~122.5、5~120、5~117.5、5~115、5~112.5、5~110、5~107.5、5~105、5~102.5、5~100、5~97.5、5~95、5~92.5、5~90、5~87.5、5~85、5~82.5、5~80、5~77.5、5~75、5~72.5、5~70、5~67.5、5~65、5~62.5、5~60、5~57.5、5~55、5~52.5、5~50、5~47.5、5~45、5~42.5、5~40、5~37.5、5~35、5~32.5、5~30、5~27.5、5~25、5~22.5、5~20、5~17.5、5~15、5~12.5または5~10mg/mLの濃度に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、希釈剤中に10~250、15~250、20~250、25~250、30~250、35~250、40~250、45~250、50~250、55~250、60~250、65~250、70~250、75~250、80~250、85~250、90~250、95~250、100~250、105~250、110~250、115~250、120~250、125~250、130~250、135~250、140~250、145~250、150~250、155~250、160~250、165~250、170~250、175~250、180~250、185~250、190~250または195~250、200~250、205~250、210~250、215~250、220~250、225~250、230~250、235~250、240~250または245~250mg/mLの濃度に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、希釈剤中に少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249または250mg/mLの濃度に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、希釈剤中に最高で1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249または250mg/mLの濃度に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、希釈剤中に1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249または250mg/mLの濃度に可溶化または希釈される。
[0487]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1mg/mL~250mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在するASOの濃度で医薬組成物中に存在する。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、約0.1mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL、2.5mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL、6mg/mL、7mg/mL、8mg/mL、9mg/mL、10mg/mL、11mg/mL、12mg/mL、13mg/mL、14mg/mL、15mg/mL、16mg/mL、17mg/mL、18mg/mL、19mg/mLまたは20mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、約30mg/mL、40mg/mL、50mg/mL、60mg/mL、70mg/mL、80mg/mL、90mg/mL、100mg/mL、110mg/mL、120mg/mL、130mg/mL、140mg/mL、150mg/mL、160mg/mL、170mg/mL、180mg/mL、190mg/mLまたは200mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する。一部の実施形態では、ASOは、約22.5mg/mL、25mg/mL、27.5mg/mL、30mg/mL、32.5mg/mL、35mg/mL、37.5mg/mL、40mg/mL、42.5mg/mL、45mg/mL、47.5mg/mL、50mg/mL、52.5mg/mL、55mg/mL、57.5mg/mL、60mg/mL、62.5mg/mL、65mg/mL、67.5mg/mL、70mg/mL、72.5mg/mL、75mg/mL、77.5mg/mL、80mg/mL、82.5mg/mL、85mg/mL、87.5mg/mL、90mg/mL、92.5mg/mL、95mg/mL、97.5mg/mL、100mg/mL、102.5mg/mL、105mg/mL、107.5mg/mL、110mg/mL、112.5mg/mL、115mg/mL、117.5mg/mL、120mg/mL、122.5mg/mL、125mg/mL、127.5mg/mL、130mg/mL、132.5mg/mL、135mg/mL、137.5mg/mL、140mg/mL、142.5mg/mL、145mg/mL、147.5mg/mL、150mg/mL、152.5mg/mL、155mg/mL、157.5mg/mL、160mg/mL、162.5mg/mL、165mg/mL、167.5mg/mL、170mg/mL、172.5mg/mL、175mg/mL、177.5mg/mL、180mg/mL、182.5mg/mL、185mg/mL、187.5mg/mL、190mg/mL、192.5mg/mL、195mg/mL、197.5mg/mL、200mg/mL、202.5mg/mL、205mg/mL、207.5mg/mL、210mg/mL、212.5mg/mL、215mg/mL、217.5mg/mL、220mg/mL、222.5mg/mL、225mg/mL、227.5mg/mL、230mg/mL、232.5mg/mL、235mg/mL、237.5mg/mL、240mg/mL、242.5mg/mL、245mg/mL、247.5mg/mLまたは250mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、希釈剤中に11mg/mL、22mg/mL、33mg/mL、44mg/mL、55mg/mL、66mg/mL、77mg/mL、88mg/mL、99mg/mLまたは100mg/mLの濃度に可溶化または希釈される。
[0488]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1mg/mL~250mg/mL、0.2mg/mL~250mg/mL、0.3mg/mL~250mg/mL、0.4mg/mL~250mg/mL、0.5mg/mL~250mg/mL、0.6mg/mL~250mg/mL、0.7mg/mL~250mg/mL、0.8mg/mL~250mg/mL、0.9mg/mL~250mg/mL、1.0mg/mL~250mg/mL、1.1mg/mL~250mg/mL、1.2mg/mL~250mg/mL、1.3mg/mL~250mg/mL、1.4mg/mL~250mg/mL、1.5mg/mL~250mg/mL、1.6mg/mL~250mg/mL、1.7mg/mL~250mg/mL、1.8mg/mL~250mg/mL、1.9mg/mL~250mg/mL、2.0mg/mL~250mg/mL、2.1mg/mL~250mg/mL、2.2mg/mL~250mg/mL、2.3mg/mL~250mg/mL、2.4mg/mL~250mg/mL、2.5mg/mL~250mg/mL、2.6mg/mL~250mg/mL、2.7mg/mL~250mg/mL、2.8mg/mL~250mg/mL、2.9mg/mL~250mg/mL、3.0mg/mL~250mg/mL、3.1mg/mL~250mg/mL、3.2mg/mL~250mg/mL、3.3mg/mL~250mg/mL、3.4mg/mL~250mg/mL、3.5mg/mL~250mg/mL、3.6mg/mL~250mg/mL、3.7mg/mL~250mg/mL、3.8mg/mL~250mg/mL、3.9mg/mL~250mg/mL、4.0mg/mL~250mg/mL、5.0mg/mL~250mg/mL、6.0mg/mL~250mg/mL、7.0mg/mL~250mg/mL、8.0mg/mL~250mg/mL、9.0mg/mL~250mg/mL、10mg/mL~250mg/mL、15mg/mL~250mg/mL、20mg/mL~250mg/mL、25mg/mL~250mg/mL、30mg/mL~250mg/mL、35mg/mL~250mg/mL、40mg/mL~250mg/mL、45mg/mL~250mg/mL、50mg/mL~250mg/mL、55mg/mL~250mg/mL、60mg/mL~250mg/mL、65mg/mL~250mg/mL、70mg/mL~250mg/mL、75mg/mL~250mg/mL、80mg/mL~250mg/mL、85mg/mL~250mg/mL、90mg/mL~250mg/mL、95mg/mL~250mg/mL、100mg/mL~250mg/mL、105mg/mL~250mg/mL、110mg/mL~250mg/mL、115mg/mL~250mg/mL、120mg/mL~250mg/mL、125mg/mL~250mg/mL、130mg/mL~250mg/mL、135mg/mL~250mg/mL、140mg/mL~250mg/mL、145mg/mL~250mg/mL、150mg/mL~250mg/mL、155mg/mL~250mg/mL、160mg/mL~250mg/mL、165mg/mL~250mg/mL、170mg/mL~250mg/mL、175mg/mL~250mg/mL、180mg/mL~250mg/mL、185mg/mL~250mg/mL、190mg/mL~250mg/mL、195mg/mL~250mg/mL、200mg/mL~250mg/mL、205mg/mL~250mg/mL、210mg/mL~250mg/mL、215mg/mL~250mg/mL、220mg/mL~250mg/mL、225mg/mL~250mg/mL、230mg/mL~250mg/mL、235mg/mL~250mg/mL、240mg/mL~250mg/mLまたは245mg/mL~250mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する。
[0489]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1mg/mL~250mg/mL、0.1mg/mL~245mg/mL、0.1mg/mL~240mg/mL、0.1mg/mL~235mg/mL、0.1mg/mL~230mg/mL、0.1mg/mL~225mg/mL、0.1mg/mL~220mg/mL、0.1mg/mL~215mg/mL、0.1mg/mL~210mg/mL、0.1mg/mL~205mg/mL、0.1mg/mL~200mg/mL、0.1mg/mL~195mg/mL、0.1mg/mL~190mg/mL、0.1mg/mL~185mg/mL、0.1mg/mL~180mg/mL、0.1mg/mL~175mg/mL、0.1mg/mL~170mg/mL、0.1mg/mL~165mg/mL、0.1mg/mL~160mg/mL、0.1mg/mL~155mg/mL、0.1mg/mL~150mg/mL、0.1mg/mL~145mg/mL、0.1mg/mL~140mg/mL、0.1mg/mL~135mg/mL、0.1mg/mL~130mg/mL、0.1mg/mL~125mg/mL、0.1mg/mL~120mg/mL、0.1mg/mL~115mg/mL、0.1mg/mL~110mg/mL、0.1mg/mL~100mg/mL、0.1mg/mL~95mg/mL、0.1mg/mL~90mg/mL、0.1mg/mL~85mg/mL、0.1mg/mL~80mg/mL、0.1mg/mL~75mg/mL、0.1mg/mL~70mg/mL、0.1mg/mL~65mg/mL、0.1mg/mL~60mg/mL、0.1mg/mL~55mg/mL、0.1mg/mL~50mg/mL、0.1mg/mL~45mg/mL、0.1mg/mL~40mg/mL、0.1mg/mL~35mg/mL、0.1mg/mL~30mg/mL、0.1mg/mL~25mg/mL、0.1mg/mL~20mg/mL、0.1mg/mL~15mg/mL、0.1mg/mL~10mg/mL、0.1mg/mL~9mg/mL、0.1mg/mL~8mg/mL、0.1mg/mL~7mg/mL、0.1mg/mL~6mg/mL、0.1mg/mL~5mg/mL、0.1mg/mL~4mg/mL、0.1mg/mL~3.9mg/mL、0.1mg/mL~3.8mg/mL、0.1mg/mL~3.7mg/mL、0.1mg/mL~3.6mg/mL、0.1mg/mL~3.5mg/mL、0.1mg/mL~3.4mg/mL、0.1mg/mL~3.3mg/mL、0.1mg/mL~3.2mg/mL、0.1mg/mL~3.1mg/mL、0.1mg/mL~3.0mg/mL、0.1mg/mL~2.9mg/mL、0.1mg/mL~2.8mg/mL、0.1mg/mL~2.7mg/mL、0.1mg/mL~2.6mg/mL、0.1mg/mL~2.5mg/mL、0.1mg/mL~2.4mg/mL、0.1mg/mL~2.3mg/mL、0.1mg/mL~2.2mg/mL、0.1mg/mL~2.1mg/mL、0.1mg/mL~2.0mg/mL、0.1mg/mL~1.9mg/mL、0.1mg/mL~1.8mg/mL、0.1mg/mL~1.7mg/mL、0.1mg/mL~1.6mg/mL、0.1mg/mL~1.5mg/mL、0.1mg/mL~1.4mg/mL、0.1mg/mL~1.3mg/mL、0.1mg/mL~1.2mg/mL、0.1mg/mL~1.1mg/mL、0.1mg/mL~1.0mg/mL、0.1mg/mL~0.9mg/mL、0.1mg/mL~0.8mg/mL、0.1mg/mL~0.7mg/mL、0.1mg/mL~0.6mg/mL、0.1mg/mL~0.5mg/mL、0.1mg/mL~0.4mg/mL、0.1mg/mL~0.3mg/mLまたは0.1mg/mL~0.2mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する。
[0490]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、希釈剤中に少なくとも0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249または250mg/mLの濃度に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、希釈剤中に最高で0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249または250mg/mLの濃度に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、希釈剤中に0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249または250mg/mLの濃度に可溶化または希釈される。
[0491]一部の実施形態では、医薬製剤は、保存料を含まない。一部の実施形態では、医薬製剤は、保存料を含む。
[0492]本発明の治療方法において使用される医薬組成物は、その意図される投与経路と適合するように製剤化される。
[0492]本発明の治療方法において使用される医薬組成物は、その意図される投与経路と適合するように製剤化される。
[0493]一部の実施形態では、医薬製剤は、脳室内またはくも膜下腔内注射に適している。
[0494]一部の実施形態では、医薬製剤は、経口、直腸、鼻腔内、皮内、皮下、くも膜下腔内、脳室内、腹腔内、筋肉内、硝子体内、静脈内、頭蓋内、頬内または舌下投与に適している。一部の実施形態では、医薬製剤は、皮内、皮下、くも膜下腔内、鼻腔内、頭蓋内、脳室内、腹腔内、筋肉内、硝子体内または静脈内注射に適している。
[0494]一部の実施形態では、医薬製剤は、経口、直腸、鼻腔内、皮内、皮下、くも膜下腔内、脳室内、腹腔内、筋肉内、硝子体内、静脈内、頭蓋内、頬内または舌下投与に適している。一部の実施形態では、医薬製剤は、皮内、皮下、くも膜下腔内、鼻腔内、頭蓋内、脳室内、腹腔内、筋肉内、硝子体内または静脈内注射に適している。
[0495]一部の実施形態では、医薬製剤は、単回使用バイアルにパッケージングされる。一部の実施形態では、医薬製剤は、複数回使用バイアルにパッケージングされる。
[0496]記載された方法のいずれかにおいて使用するための、記載された組成物の薬剤、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはアンチセンスオリゴマーを含む医薬製剤は、製薬業界で周知であり、公開された文献に記載されている従来の技術に従って調製できる。一部の実施形態では、対象を処置するための医薬製剤は、有効量の、本明細書に記載される任意のアンチセンスオリゴマーまたは薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物またはエステルを含む。一部の実施形態では、本明細書で記載される医薬組成物は、薬学的に許容される賦形剤、担体または希釈剤をさらに含む。
[0496]記載された方法のいずれかにおいて使用するための、記載された組成物の薬剤、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはアンチセンスオリゴマーを含む医薬製剤は、製薬業界で周知であり、公開された文献に記載されている従来の技術に従って調製できる。一部の実施形態では、対象を処置するための医薬製剤は、有効量の、本明細書に記載される任意のアンチセンスオリゴマーまたは薬学的に許容されるその塩、溶媒和物、水和物またはエステルを含む。一部の実施形態では、本明細書で記載される医薬組成物は、薬学的に許容される賦形剤、担体または希釈剤をさらに含む。
[0497]このような組成物は、緩衝液、例えば、中性緩衝食塩水、リン酸緩衝食塩水など、炭水化物、例えば、グルコース、マンノース、スクロースまたはデキストラン、マンニトール、タンパク質、ポリペプチドまたはアミノ酸、例えば、グリシン、抗酸化物質、キレート化剤、例えば、EDTAまたはグルタチオン、アジュバント(例えば、水酸化アルミニウム)および保存料を含み得る。
[0498]本発明の治療方法において使用される医薬組成物は、その意図される投与経路と適合するように製剤化される。
[0499]「医薬組成物」および「医薬製剤」(または「製剤」)という用語は、同義的に使用され、対象、例えば、それを必要とするヒトに投与されるべき、1つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤と一緒に、活性医薬成分の治療有効量を含む混合物または溶液を示す。
[0499]「医薬組成物」および「医薬製剤」(または「製剤」)という用語は、同義的に使用され、対象、例えば、それを必要とするヒトに投与されるべき、1つまたは複数の薬学的に許容される賦形剤と一緒に、活性医薬成分の治療有効量を含む混合物または溶液を示す。
[0500]一部の実施形態では、組成物は、多数のあり得る投与形、例えば、それだけには限らないが、溶液、液体、錠剤、カプセル剤、ゲルカプセル剤、液体シロップ、ソフトゲル、坐剤および浣腸のいずれかに製剤化される。一部の実施形態では、組成物は、水性、非水性または混合媒体中の懸濁液として製剤化される。水性懸濁液は、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールおよび/またはデキストランを含む、懸濁液の粘稠度を増大させる物質をさらに含有し得る。懸濁液はまた、安定剤を含有し得る。一部の実施形態では、本発明の医薬製剤または組成物には、それだけには限らないが、溶液、エマルジョン、マイクロエマルジョン、フォームまたはリポソーム含有製剤(例えば、カチオン性または非カチオン性リポソーム)が含まれる。
[0501]本明細書で記載される医薬組成物または製剤は、必要に応じて、当業者に周知の、または公開された文献に記載されている1つまたは複数の浸透促進剤、担体、賦形剤または他の活性もしくは不活性成分を含み得る。実施形態では、リポソームはまた、立体的に安定化されたリポソーム、例えば、1つまたは複数の特殊な脂質を含むリポソームを含む。これらの特殊な脂質は、循環寿命が増強されたリポソームをもたらす。実施形態では、立体的に安定化されたリポソームは、1つもしくは複数の糖脂質を含む、または1つもしくは複数の親水性ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール(PEG)部分を用いて誘導体化される。実施形態では、医薬製剤または組成物中に界面活性剤が含まれる。薬物製品、製剤およびエマルジョンにおける界面活性剤の使用は、当技術分野で周知である。実施形態では、本発明は、例えば、細胞膜を越える核酸を補助する、および/または親油性薬物の透過性を増強するために、浸透促進剤を利用して、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはアンチセンスオリゴマーの効率的な送達を達成する。実施形態では、浸透促進剤は、界面活性剤、脂肪酸、胆汁酸塩、キレート化剤または非キレート化非界面活性剤である。
[0502]実施形態では、医薬製剤は、複数のアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはアンチセンスオリゴマーを含む。実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはアンチセンスオリゴマーは、別の薬物または治療剤と組み合わせて投与される。
[0503]注射用使用に適した医薬組成物は、滅菌水溶液(水溶性の場合)または分散物および滅菌注射用溶液または分散物の即時調製のための滅菌散剤を含む。非経口、鼻腔内、皮内または皮下適用のために使用される溶液または懸濁液は、以下の構成成分:滅菌希釈剤、例えば、注射用水、生理食塩水溶液、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶剤、抗菌剤、例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン、抗酸化物質、例えば、アスコルビン酸または重亜硫酸ナトリウム、キレート化剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸、緩衝液、例えば、酢酸、クエン酸またはリン酸および張力の調整のための薬剤、例えば、塩化ナトリウムまたはデキストロースを含み得る。例えば、注射部位に応じて、ビヒクルは、水、合成または植物性油および/または有機共溶媒を含有し得る。凍結乾燥製品または濃縮物を用いるといったある特定の例では、非経口製剤は、投与の前に再構成または希釈されるであろう。pHは、酸または塩基、例えば、塩酸または水酸化ナトリウムを用いて調整され得る。本発明の組成物の徐放または持続放出を提供するデポー製剤は、ナノ/マイクロ粒子またはナノ/マイクロもしくは非微粒子化結晶の注射用懸濁液を含み得る。
[0504]静脈内投与のためには、適した担体として、生理食塩水、静菌性水、Cremophor EL(商標)(BASF、Parsippany、N.J.)またはリン酸緩衝食塩水(PBS)が挙げられる。全ての場合において、組成物は、無菌でなくてはならず、容易な注射可能性が存在する程度に流動性であるべきである。製造および保存の条件下で安定でなくてはならず、細菌および真菌などの微生物の汚染作用から保護されなくてはならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリ(オール)(例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコールなど)を含有する溶媒または分散媒およびそれらの適した混合物であり得る。妥当な流動性は、例えば、コーティング、例えば、レシチンの使用によって、分散物の場合には必要な粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって維持され得る。
[0505]滅菌注射用溶液は、必要に応じて上記で列挙された成分のうち1つまたは組合せを有する適当な溶媒中に、必要な量の組成物を組み込むことと、それに続く濾過滅菌によって調製され得る。微生物の作用の防止は、種々の抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどによって達成され得る。
[0506]一般に、分散物は、基本分散媒および上記で列挙されたものから必要な他の成分を含有する滅菌ビヒクル中に活性組成物を組み込むことによって調製される。滅菌注射用溶液の調製のための滅菌散剤の場合には、好ましい調製方法は、その事前に滅菌濾過された溶液から有効成分および任意の追加の所望の成分の散剤をもたらす、真空乾燥および凍結乾燥である。多くの場合、組成物中に等張剤、例えば、糖、ポリアルコール、例えば、マンニトール(manitol)、ソルビトールおよび塩化ナトリウムを含むことが好ましい。注射用組成物の吸収の延長は、組成物中に、吸収を遅延する薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを含むことによって引き起こされ得る。非経口調製物は、アンプル、ディスポーザブルシリンジまたは硝子もしくはプラスチック製の複数回用量バイアル中に封入され得る。
[0507]経口投与のためには、組成物は、液体または固体投与形に、および即時放出または徐放/持続放出製剤として製剤化され得る。対象による経口摂取のための適した投与形として、散剤、錠剤、丸剤、顆粒剤、糖衣錠、ハードおよびソフトシェルカプセル剤、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液、エマルジョンなどが挙げられる。経口組成物は、一般に、不活性希釈剤または食用担体を含む。それらは、ゼラチンカプセル中に封入され得る、または錠剤に打錠され得る。経口治療投与の目的のために、活性薬剤は賦形剤とともに組み込まれ、錠剤、トローチ剤またはカプセル剤の形態で使用され得る。経口組成物はまた、マウスウォッシュとしての使用のために流体担体を使用して調製される場合があり、流体担体中の薬剤は経口適用され、素早く動かされ、吐き出されるかまたは飲み込まれる。薬学的に適合する結合剤および/またはアジュバント材料は、組成物の一部として含まれ得る。錠剤、顆粒剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤などは、以下の成分のいずれかまたは同様の性質の化合物を含有し得る:結合剤、例えば、微晶質セルロース、トラガカントゴムまたはゼラチン、賦形剤、例えば、デンプンまたはラクトース、溶解遅延剤、接着防止剤、陽イオン交換樹脂、湿潤剤、抗酸化物質、保存料、崩壊剤、例えば、アルギン酸、Primogelまたはコーンスターチ、滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウムまたはSterote、流動促進剤、例えば、コロイド状二酸化ケイ素、保存料、着色剤、甘味剤、例えば、糖、例えば、デキストロース、スクロースもしくはサッカリンまたは矯味剤、例えば、ペパーミント、サリチル酸メチルもしくはオレンジ香味料、これらの各々は、合成および/または天然である。
[0508]吸入による投与、例えば、鼻腔内(経鼻)投与のためには、組成物は、適した噴射剤、例えば、二酸化炭素などのガスを含有する加圧容器もしくはディスペンサーまたは噴霧器からエアゾールスプレーの形態で送達される。全身投与はまた、経粘膜または経皮手段によってであり得る。経粘膜または経皮投与のためには、製剤中に、透過されるべきバリアに適切な浸透剤が使用される。このような浸透剤は、一般に、当技術分野で公知であり、例えば、経粘膜投与のためには、洗浄剤、胆汁酸塩およびフシジン酸誘導体が含まれる。経粘膜投与は、鼻腔スプレーまたは坐剤の使用によって達成され得る。経皮投与のためには、活性薬剤は、当技術分野で一般に知られるような、軟膏剤、軟膏、ゲルまたはクリーム、エマルジョン、溶液、懸濁液またはフォームに製剤化される。薬物の、皮膚および根底にある組織への浸透は、例えば、浸透促進剤、水、有機溶媒、ワックス、オイル、合成および天然ポリマー、界面活性剤、乳化剤を含む親油性、親水性および両親媒性賦形剤の適切な選択および組合せを使用して、pH調整剤によって調節される場合があり、錯化剤の使用ならびにイオン導入法などの他の技術が、有効成分の皮膚浸透を調節するために使用される場合がある。
[0509]組成物はまた、直腸組成物、例えば、坐剤(例えば、従来の坐剤基剤、例えば、ココアバターおよび他のグリセリドを用いて)または保留浣腸に製剤化され得る。
[0510]薬学的にまたは生理学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤の例として、それだけには限らないが、消泡剤、抗酸化物質、結合剤、担体または担体材料、分散剤、粘度調節剤、希釈剤、増量剤、滑沢剤、流動促進剤、可塑剤、可溶化剤、安定剤、懸濁化剤、界面活性剤、粘度増強剤および湿潤剤が挙げられる。
[0510]薬学的にまたは生理学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤の例として、それだけには限らないが、消泡剤、抗酸化物質、結合剤、担体または担体材料、分散剤、粘度調節剤、希釈剤、増量剤、滑沢剤、流動促進剤、可塑剤、可溶化剤、安定剤、懸濁化剤、界面活性剤、粘度増強剤および湿潤剤が挙げられる。
[0511]本発明の組成物の別個の構成成分は、事前に混合され得る、または各成分は、処置構成成分の所望の濃度レベルを達成する目的のために、構成成分が最終的に互いに密接な混合物となる限り、所定の投薬量に従って同一環境に別個に付加され得る。さらに、本発明は、継続的にまたは時々投与または送達され得る。
[0512]経口または非経口組成物を、投与の容易性および投薬量の均一性のために投薬単位形態に製剤化することは特に有利である。投薬単位形態とは、本明細書で使用される場合、処置されるべき対象の単位投薬量として適している物理的に別々の単位を指し、各単位は、必要な製薬担体と関連して所望の治療効果をもたらすように算出された所定量の活性化合物を含有する。本発明の投薬単位形態の仕様は、組成物の独特の特徴および達成されるべき特定の治療効果、ならびに対象の処置のためにこのような薬剤を配合する技術分野において固有の制限によって決定され、直接的に左右される。
[0513]一部の実施形態では、本明細書に記載される医薬製剤を生成する方法が本明細書で提供される。
併用療法
[0514]一部の実施形態では、本開示において開示されるASOは、1つまたは複数の追加の治療剤と組み合わせて使用され得る。一部の実施形態では、1つまたは複数の追加の治療剤は、小分子を含み得る。例えば、1つまたは複数の追加の治療剤は、その全体で参照により本明細書に組み込まれるWO2016128343A1、WO2017053982A1、WO2016196386A1、WO201428459A1、WO201524876A2、WO2013119916A2およびWO2014209841A2に記載される小分子を含み得る。一部の実施形態では、1つまたは複数の追加の治療剤は、イントロン保持を修正するために使用できるASOを含む。一部の実施形態では、1つまたは複数の他の薬剤は、表8aまたは8bに列挙されたASOから選択される。
併用療法
[0514]一部の実施形態では、本開示において開示されるASOは、1つまたは複数の追加の治療剤と組み合わせて使用され得る。一部の実施形態では、1つまたは複数の追加の治療剤は、小分子を含み得る。例えば、1つまたは複数の追加の治療剤は、その全体で参照により本明細書に組み込まれるWO2016128343A1、WO2017053982A1、WO2016196386A1、WO201428459A1、WO201524876A2、WO2013119916A2およびWO2014209841A2に記載される小分子を含み得る。一部の実施形態では、1つまたは複数の追加の治療剤は、イントロン保持を修正するために使用できるASOを含む。一部の実施形態では、1つまたは複数の他の薬剤は、表8aまたは8bに列挙されたASOから選択される。
対象の処置
[0515]本明細書で提供される組成物のいずれも、個体に投与され得る。「個体」は、「対象」または「患者」と同義的に使用され得る。個体は、哺乳動物、例えば、ヒトまたは動物、例えば、非ヒト霊長類、げっ歯類、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ロバ、ヤギ、ネコ、イヌ、ウシ、ブタまたはヒツジであり得る。実施形態では、個体はヒトである。実施形態では、個体は、胎児、胚または小児である。他の実施形態では、個体は、別の真核生物、例えば、植物であり得る。一部の実施形態では、本明細書で提供される組成物は、ex vivoで細胞に投与される。
[0515]本明細書で提供される組成物のいずれも、個体に投与され得る。「個体」は、「対象」または「患者」と同義的に使用され得る。個体は、哺乳動物、例えば、ヒトまたは動物、例えば、非ヒト霊長類、げっ歯類、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ロバ、ヤギ、ネコ、イヌ、ウシ、ブタまたはヒツジであり得る。実施形態では、個体はヒトである。実施形態では、個体は、胎児、胚または小児である。他の実施形態では、個体は、別の真核生物、例えば、植物であり得る。一部の実施形態では、本明細書で提供される組成物は、ex vivoで細胞に投与される。
[0516]一部の実施形態では、本明細書で提供される組成物は、疾患または障害を処置する方法として個体に投与される。一部の実施形態では、個体は、遺伝性疾患、例えば、本明細書で記載される疾患のいずれかを有する。一部の実施形態では、個体は、疾患、例えば、本明細書で記載される疾患のいずれかを有するリスクにある。一部の実施形態では、個体は、タンパク質の不十分な量またはタンパク質の不十分な活性によって引き起こされる疾患または障害を有する増大したリスクにある。個体がタンパク質の不十分な量またはタンパク質の不十分な活性によって引き起こされる疾患または障害を有する「増大したリスクにある」場合には、方法は、防止的または予防的処置を含む。例えば、個体は、疾患の家族歴のためにこのような疾患または障害を有する増大したリスクにある場合がある。通常、このような疾患または障害を有する増大したリスクにある個体は、予防的処置(例えば、疾患または障害の開始または進行を防止または遅延することによる)から恩恵を受ける。実施形態では、胎児は、例えば、ASO組成物を胎児に直接的または間接的に(例えば、母体を介して)投与することによって子宮内で処置される。
[0517]本開示のASOの適した投与経路は、ASOの送達が望まれる細胞種に応じて変わり得る。複数の組織および臓器が、ドラベ症候群、全身性の熱性発作プラスのてんかん、2型、熱性発作、家族性、3A、片頭痛、家族性片麻痺性、3、自閉症、てんかん性脳症、早期乳児、13、洞不全症候群1、アルツハイマー病またはSUDEPによって影響を受けるが、脳が最も著しく影響を受ける組織である。本開示のASOは、非経口的に、例えば、くも膜下腔内注射、脳室内注射、腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射、硝子体内注射または静脈内注射によって患者に投与され得る。
作用機序
[0518]一部の実施形態では、NaV1.1タンパク質の発現または機能の低減は、NMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNA由来の、ナンセンス変異依存RNA崩壊誘導性エクソン(NMDエクソン)の変更されたスプライシングと関連する。例えば、NaV1.1タンパク質の発現または機能の低減は、NMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNA由来の、ナンセンス変異依存RNA崩壊誘導性エクソン(NMDエクソン)の低減されたスプライシングと関連し得る。
作用機序
[0518]一部の実施形態では、NaV1.1タンパク質の発現または機能の低減は、NMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNA由来の、ナンセンス変異依存RNA崩壊誘導性エクソン(NMDエクソン)の変更されたスプライシングと関連する。例えば、NaV1.1タンパク質の発現または機能の低減は、NMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNA由来の、ナンセンス変異依存RNA崩壊誘導性エクソン(NMDエクソン)の低減されたスプライシングと関連し得る。
[0519]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、NMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAからのNMDエクソンの排除を促進する。
[0520]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、NMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAからのNMDエクソンの排除を、未処置の対照細胞、組織もしくは対象と比較して、または本明細書に記載されるASOによる処置前の同じタイプの細胞、組織もしくは対象における対応する活性と比較して、任意の標準的な技術によって測定した場合、少なくとも5%、少なくとも10%、少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%、少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも100%、少なくとも200%、少なくとも300%、少なくとも400%、少なくとも500%、少なくとも600%、少なくとも700%、少なくとも800%、少なくとも900%、少なくとも1000%、少なくとも2000%、少なくとも3000%、少なくとも4000%、少なくとも5000%、少なくとも6000%、少なくとも7000%、少なくとも8000%、少なくとも9000%、少なくとも10000%、少なくとも20000%、少なくとも30000%、少なくとも40000%、少なくとも50000%、少なくとも60000%、少なくとも70000%、少なくとも80000%、少なくとも90000%、または少なくとも100000%促進する。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、NMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAからのNMDエクソンの排除を、未処置の対照細胞、組織もしくは対象と比較して、または本明細書に記載されるASOによる処置前の同じタイプの細胞、組織もしくは対象における対応する活性と比較して、任意の標準的な技術によって測定した場合、少なくとも2倍、少なくとも3倍、少なくとも4倍、少なくとも5倍、少なくとも10倍、少なくとも20倍、少なくとも25倍、少なくとも30倍、少なくとも40倍、少なくとも50倍、少なくとも60倍、少なくとも70倍、少なくとも80倍、少なくとも90倍、少なくとも100倍、少なくとも200倍、少なくとも300倍、少なくとも400倍、少なくとも500倍、少なくとも600倍、少なくとも700倍、少なくとも800倍、少なくとも900倍、少なくとも1000倍、少なくとも2000倍、少なくとも3000倍、少なくとも4000倍、少なくとも5000倍、少なくとも6000倍、少なくとも7000倍、少なくとも8000倍、少なくとも9000倍、または少なくとも10000倍促進する。
[0521]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、ナンセンス変異依存RNA崩壊誘導性エクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAの標的化される部分に結合する。
[0522]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、NMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNA由来のナンセンス変異依存mRNA崩壊誘導性エクソン(NMDエクソン)の排除を促進する。
[0523]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、NMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAからのNMDエクソンの排除を、未処置の対照細胞、組織もしくは対象と比較して、または本明細書に記載されるASOによる処置前の同じタイプの細胞、組織もしくは対象における対応する活性と比較して、任意の標準的な技術によって測定した場合、少なくとも5%、少なくとも10%、少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%、少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも100%、少なくとも200%、少なくとも300%、少なくとも400%、少なくとも500%、少なくとも600%、少なくとも700%、少なくとも800%、少なくとも900%、少なくとも1000%、少なくとも2000%、少なくとも3000%、少なくとも4000%、少なくとも5000%、少なくとも6000%、少なくとも7000%、少なくとも8000%、少なくとも9000%、少なくとも10000%、少なくとも20000%、少なくとも30000%、少なくとも40000%、少なくとも50000%、少なくとも60000%、少なくとも70000%、少なくとも80000%、少なくとも90000%、または少なくとも100000%促進する。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、NMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAからのNMDエクソンの排除を、未処置の対照細胞、組織もしくは対象と比較して、または本明細書に記載されるASOによる処置前の同じタイプの細胞、組織もしくは対象における対応する活性と比較して、任意の標準的な技術によって測定した場合、少なくとも2倍、少なくとも3倍、少なくとも4倍、少なくとも5倍、少なくとも10倍、少なくとも20倍、少なくとも25倍、少なくとも30倍、少なくとも40倍、少なくとも50倍、少なくとも60倍、少なくとも70倍、少なくとも80倍、少なくとも90倍、少なくとも100倍、少なくとも200倍、少なくとも300倍、少なくとも400倍、少なくとも500倍、少なくとも600倍、少なくとも700倍、少なくとも800倍、少なくとも900倍、少なくとも1000倍、少なくとも2000倍、少なくとも3000倍、少なくとも4000倍、少なくとも5000倍、少なくとも6000倍、少なくとも7000倍、少なくとも8000倍、少なくとも9000倍、または少なくとも10000倍促進する。
[0524]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、本明細書に記載されるASOが細胞内に導入された場合、NMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAを有する細胞において、NaV1.1タンパク質をコードするプロセシングされたmRNAのレベルを増加させる。
[0525]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOが細胞内に導入された場合、本明細書に記載されるASOは、NMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAを有する細胞において、NaV1.1タンパク質をコードするプロセシングされたmRNAのレベルを、未処置の対照細胞、組織もしくは対象と比較して、または本明細書に記載されるASOによる処置前の同じタイプの細胞、組織もしくは対象における対応する活性と比較して、任意の標準的な技術によって測定した場合、少なくとも5%、少なくとも10%、少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%、少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも100%、少なくとも200%、少なくとも300%、少なくとも400%、少なくとも500%、少なくとも600%、少なくとも700%、少なくとも800%、少なくとも900%、少なくとも1000%、少なくとも2000%、少なくとも3000%、少なくとも4000%、少なくとも5000%、少なくとも6000%、少なくとも7000%、少なくとも8000%、少なくとも9000%、少なくとも10000%、少なくとも20000%、少なくとも30000%、少なくとも40000%、少なくとも50000%、少なくとも60000%、少なくとも70000%、少なくとも80000%、少なくとも90000%、または少なくとも100000%増加させる。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOが細胞内に導入された場合、本明細書に記載されるASOは、NMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAを有する細胞において、NaV1.1タンパク質をコードするプロセシングされたmRNAのレベルを、未処置の対照細胞、組織もしくは対象と比較して、または本明細書に記載されるASOによる処置前の同じタイプの細胞、組織もしくは対象における対応する活性と比較して、任意の標準的な技術によって測定した場合、少なくとも2倍、少なくとも3倍、少なくとも4倍、少なくとも5倍、少なくとも10倍、少なくとも20倍、少なくとも25倍、少なくとも30倍、少なくとも40倍、少なくとも50倍、少なくとも60倍、少なくとも70倍、少なくとも80倍、少なくとも90倍、少なくとも100倍、少なくとも200倍、少なくとも300倍、少なくとも400倍、少なくとも500倍、少なくとも600倍、少なくとも700倍、少なくとも800倍、少なくとも900倍、少なくとも1000倍、少なくとも2000倍、少なくとも3000倍、少なくとも4000倍、少なくとも5000倍、少なくとも6000倍、少なくとも7000倍、少なくとも8000倍、少なくとも9000倍、または少なくとも10000倍増加させる。
[0526]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、本明細書に記載されるASOが細胞内に導入された場合、NMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAを有する細胞におけるNaV1.1タンパク質のレベルを増加させる。
[0527]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOが細胞内に導入された場合、本明細書に記載されるASOは、NMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAを有する細胞におけるNaV1.1タンパク質のレベルを、未処置の対照細胞、組織もしくは対象と比較して、または本明細書に記載されるASOによる処置前の同じタイプの細胞、組織もしくは対象における対応する活性と比較して、任意の標準的な技術によって測定した場合、少なくとも5%、少なくとも10%、少なくとも20%、少なくとも30%、少なくとも40%、少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも100%、少なくとも200%、少なくとも300%、少なくとも400%、少なくとも500%、少なくとも600%、少なくとも700%、少なくとも800%、少なくとも900%、少なくとも1000%、少なくとも2000%、少なくとも3000%、少なくとも4000%、少なくとも5000%、少なくとも6000%、少なくとも7000%、少なくとも8000%、少なくとも9000%、少なくとも10000%、少なくとも20000%、少なくとも30000%、少なくとも40000%、少なくとも50000%、少なくとも60000%、少なくとも70000%、少なくとも80000%、少なくとも90000%、または少なくとも100000%増加させる。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOが細胞に導入された場合、本明細書に記載されるASOは、NMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAを有する細胞におけるNaV1.1タンパク質のレベルを、未処置の対照細胞、組織もしくは対象と比較して、または本明細書に記載されるASOによる処置前の同じタイプの細胞、組織もしくは対象における対応する活性と比較して、任意の標準的な技術によって測定した場合、少なくとも2倍、少なくとも3倍、少なくとも4倍、少なくとも5倍、少なくとも10倍、少なくとも20倍、少なくとも25倍、少なくとも30倍、少なくとも40倍、少なくとも50倍、少なくとも60倍、少なくとも70倍、少なくとも80倍、少なくとも90倍、少なくとも100倍、少なくとも200倍、少なくとも300倍、少なくとも400倍、少なくとも500倍、少なくとも600倍、少なくとも700倍、少なくとも800倍、少なくとも900倍、少なくとも1000倍、少なくとも2000倍、少なくとも3000倍、少なくとも4000倍、少なくとも5000倍、少なくとも6000倍、少なくとも7000倍、少なくとも8000倍、少なくとも9000倍、または少なくとも10000倍増加させる。
[0528]一部の実施形態では、標的化される部分は、NMDエクソンに隣接するイントロン配列内にある。
[0529]一部の実施形態では、標的化される部分は、NMDエクソンの少なくとも1つのヌクレオチドを含む。
[0529]一部の実施形態では、標的化される部分は、NMDエクソンの少なくとも1つのヌクレオチドを含む。
[0530]一部の実施形態では、標的化される部分は、NMDエクソンの少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、または49ヌクレオチドを含む。一部の実施形態では、標的化される部分は、NMDエクソンの最大1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、または49ヌクレオチドを含む。
[0531]一部の実施形態では、標的化される部分は、NMDエクソン内にある。
[0532]一部の実施形態では、NMDエクソンは、表1または表2に列挙された配列からなる群から選択される配列に対して少なくとも80%、少なくとも90%、または100%の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、NMDエクソンは、表1または表2に列挙された配列からなる群から選択される配列を含む。一部の実施形態では、プレmRNAは、表1または表2に列挙された配列からなる群から選択される配列に対して少なくとも約80%、85%、90%、95%、97%、または100%の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、プレmRNAは、表1または表2に列挙された配列からなる群から選択される配列に対して少なくとも約80%、85%、90%、95%、97%、または100%の配列同一性を有する遺伝子配列によりコードされる。
スプライシングおよびナンセンス変異依存mRNA崩壊
[0533]介在配列またはイントロンは、一次転写物、核内低分子RNA(snRNA)および多数のタンパク質の間の複合体相互作用を調整する、スプライセオソームと呼ばれる大きく、非常に動的なRNA-タンパク質複合体によって除去される。スプライセオソームは、U1 snRNAによる5’スプライス部位(5’ss)またはU2経路による3’スプライス部位(3’ss)の認識から始まり、順序付けられた方法で各イントロン上、その場でアセンブルし、分岐点配列(BPS)へのU2の結合を促進するための3’ss領域へのU2補助因子(U2AF)の結合を伴う。U2AFは、ポリピリミジントラクト(PPT)に結合するU2AF2をコードする65kDサブユニット(U2AF65)、および3’ssで高度に保存されたAGジヌクレオチドと相互作用し、U2AF65結合を安定化するU2AF1をコードする35kDサブユニット(U2AF35)で構成される安定なヘテロ二量体である。BPS/PPTユニットおよび3’ss/5’ssに加えて、正確なスプライシングは、イントロン性もしくはエクソン性スプライシングエンハンサーまたはサイレンサーとして公知であるスプライス部位認識を活性化または抑制する補助配列または構造を必要とする。これらのエレメントは、同一の配列を有するが、1桁の大きさで本物の部位を上回る数を有する、高等真核生物のゲノムにおける非常に過剰な潜在的または擬似的部位の間で、真のスプライス部位を認識することを可能にする。それらはしばしば調節機能を有するが、それらの活性化または抑制の正確なメカニズムはほとんど解明されていない。
[0532]一部の実施形態では、NMDエクソンは、表1または表2に列挙された配列からなる群から選択される配列に対して少なくとも80%、少なくとも90%、または100%の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、NMDエクソンは、表1または表2に列挙された配列からなる群から選択される配列を含む。一部の実施形態では、プレmRNAは、表1または表2に列挙された配列からなる群から選択される配列に対して少なくとも約80%、85%、90%、95%、97%、または100%の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、プレmRNAは、表1または表2に列挙された配列からなる群から選択される配列に対して少なくとも約80%、85%、90%、95%、97%、または100%の配列同一性を有する遺伝子配列によりコードされる。
スプライシングおよびナンセンス変異依存mRNA崩壊
[0533]介在配列またはイントロンは、一次転写物、核内低分子RNA(snRNA)および多数のタンパク質の間の複合体相互作用を調整する、スプライセオソームと呼ばれる大きく、非常に動的なRNA-タンパク質複合体によって除去される。スプライセオソームは、U1 snRNAによる5’スプライス部位(5’ss)またはU2経路による3’スプライス部位(3’ss)の認識から始まり、順序付けられた方法で各イントロン上、その場でアセンブルし、分岐点配列(BPS)へのU2の結合を促進するための3’ss領域へのU2補助因子(U2AF)の結合を伴う。U2AFは、ポリピリミジントラクト(PPT)に結合するU2AF2をコードする65kDサブユニット(U2AF65)、および3’ssで高度に保存されたAGジヌクレオチドと相互作用し、U2AF65結合を安定化するU2AF1をコードする35kDサブユニット(U2AF35)で構成される安定なヘテロ二量体である。BPS/PPTユニットおよび3’ss/5’ssに加えて、正確なスプライシングは、イントロン性もしくはエクソン性スプライシングエンハンサーまたはサイレンサーとして公知であるスプライス部位認識を活性化または抑制する補助配列または構造を必要とする。これらのエレメントは、同一の配列を有するが、1桁の大きさで本物の部位を上回る数を有する、高等真核生物のゲノムにおける非常に過剰な潜在的または擬似的部位の間で、真のスプライス部位を認識することを可能にする。それらはしばしば調節機能を有するが、それらの活性化または抑制の正確なメカニズムはほとんど解明されていない。
[0534]スプライシングをするかまたはスプライシングしないかの決定は、典型的には、決定論的ではなく確率論的プロセスとしてモデル化することができ、そのため、最も定義されたスプライシングシグナルでさえ、時には誤ってスプライシングする可能性がある。しかしながら、通常の条件下では、プレmRNAのスプライシングは驚くほど正確に進行する。これは、部分的には、隣接するシス作用性補助エクソン性およびイントロン性スプライシング調節エレメント(ESRまたはISR)の活性に起因する。典型的には、これらの機能性エレメントは、それぞれスプライシングを刺激または阻害するそれらの能力に基づいて、エクソン性もしくはイントロン性スプライシングエンハンサー(ESEもしくはISE)またはサイレンサー(ESSもしくはISS)のいずれかに分類される。U1 snRNPと5’ssの間の複合体の配置などの、いくつかの補助的シス作用性エレメントがスプライセオソームアセンブリの動力学に影響することによって作用し得る証拠が現在あるが、多数のエレメントがトランス作用性RNA結合タンパク質(RBP)と協調して機能する可能性が非常に高いようである。例えば、セリンおよびアルギニンに富むRBPファミリー(SRタンパク質)は、エクソンの定義に重要な役割を果たす保存されたタンパク質ファミリーである。SRタンパク質は、プレスプライセオソームの構成成分を、隣接するスプライス部位に動員するか、または近傍のESSの作用に拮抗することによって、エクソン認識を促進する。ESSの抑制効果は、不均一な核リボ核タンパク質(hnRNP)ファミリーのメンバーによって媒介され、コアスプライシング因子の隣接するスプライス部位への動員を変更させることができる。スプライシング調節におけるそれらの役割に加えて、サイレンサーエレメントは、機能的なオープンリーディングフレームをもたないが、エクソンの典型的な間隔を有する偽エクソン、一組のデコイイントロン性スプライス部位の抑制に役割を有することが示唆される。ESEおよびESSは、それらの同族のトランス作用性RBPと協力して、mRNAが前駆体からどのように、どこで、いつアセンブルされるかを特定する一連のスプライシング制御の重要な構成要素を表す。
[0535]エクソン-イントロン境界を作る配列は、ヒト遺伝子内で高頻度で起こり得る様々な強度の縮重シグナルである。複数のエクソン遺伝子では、異なるスプライス部位の対が多数の異なる組合せで連結され、単一の遺伝子由来の多様な転写物のアレイが作製され得る。これは、通常、プレmRNAの選択的スプライシングと呼ばれる。選択的スプライシングによって生成されるほとんどのmRNAアイソフォームは核から輸送され、機能性ポリペプチドに翻訳され得るが、単一の遺伝子由来の異なるmRNAアイソフォームは、それらの翻訳効率が大きく異なる場合がある。エクソン接合部複合体の少なくとも50bp上流に未成熟終止コドン(PTC)を有するこれらのmRNAアイソフォームは、ナンセンス変異依存mRNA崩壊(NMD)経路による分解の標的となる可能性が高い。伝統的な(BPS/PPT/3’ss/5’ss)および補助スプライシングモチーフにおける突然変異は、エクソンスキッピングまたは潜在的(もしくは擬似的)エクソン含有またはスプライス部位活性化などの異常なスプライシングを引き起こし、ヒトの罹患率および死亡率に有意に寄与し得る。異常なスプライシングパターンと選択的スプライシングパターンはともに、エクソンおよびイントロンの天然のDNAバリアントにより影響を受ける場合がある。
[0536]エクソン-イントロン境界がコドンの3つの位置のいずれかで起こり得ることを考慮すると、選択的スプライシング事象のサブセットだけが標準オープンリーディングフレームを維持できることは明らかである。例えば、3で等しく分割することができるエクソンだけが、リーディングフレームの変更なしに、スキップされるかまたはmRNAに含まれ得る。互換性のあるフェーズを持たないスプライシング事象は、フレームシフトを誘導する。下流の事象によって逆転されない限り、フレームシフトは、1つまたは複数のPTCを確実にもたらし、おそらく、NMDによるその後の分解をもたらす。NMDは、PTCを含有するmRNAを除去する翻訳共役機構である。NMDは、全ての真核生物に存在する監視経路として機能し得る。NMDは、未成熟な終止コドンを含有するmRNA転写物を除去することによって、遺伝子発現の誤りを低減させることができる。これらの異常なmRNAの翻訳は、一部の場合には、結果として生じるタンパク質の有害な機能獲得活性または優性阻害活性をもたらす可能性がある。NMDは、PTCを有する転写物だけでなく、多数の内因性遺伝子から発現されるmRNAアイソフォームの広範なアレイを標的化し、これは、NMDが、細胞内の定常状態RNAレベルにおける微細および粗の調整の両方を駆動するマスター調節因子であることを示唆する。
[0537]NMD誘導性エクソン(NIE)は、イントロン内の領域であり、成熟RNA転写物に含まれる場合、NMD経路を活性化することができるエクソンまたは偽エクソンである。恒常的なスプライシング事象では、NIEを含有するイントロンは、通常、スプライシングされるが、イントロンまたはその一部(例えば、NIE)は、選択的または異常なスプライシング事象の間に保持されることがある。このようなNIEを含有する成熟mRNA転写物は、NMD経路を誘導するフレームシフトのために非生産的であり得る。成熟RNA転写物へのNIEの含有は、遺伝子発現を下方制御することができる。NIEを含有するプレmRNA転写物などのmRNA転写物は、本開示において「NIE含有mRNA」または「NMDエクソンmRNA」と称されることがある。
[0538]潜在的スプライス部位(または擬似的スプライス部位)は、真のスプライス部位と同じスプライシング認識配列を有するが、スプライシング反応に使用されない。それらはヒトゲノム中の真のスプライス部位を1桁上回っており、通常、これまでほとんど解明されていない分子機構によって抑制されている。潜在的5’スプライス部位は、コンセンサスNNN/GUNNNNまたはNNN/GCNNNNを有し、Nは任意のヌクレオチドであり、および/またはエクソン-イントロン境界である。潜在的3’スプライス部位はコンセンサスNAG/Nを有する。それらの活性化は周囲のヌクレオチドによって正の影響を受け、それらを真のスプライス部位の最適なコンセンサスに、すなわち、それぞれMAG/GURAGUおよびYAG/G(MはCまたはAであり、RはGまたはAであり、YはCまたはUである)に類似される。
[0539]スプライス部位およびそれらの調節配列は、例えば、Kralovicova,J.およびVorechovsky,I.(2007年)Global control of aberrant splice site activation by auxiliary splicing sequences:evidence for a gradient in exon and intron definition.Nucleic Acids Res.、35巻、6399~6413頁、(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2095810/pdf/gkm680.pdf)に列挙される、公衆に利用可能な適切なアルゴリズムを使用して、当業者により容易に同定され得る。
[0540]潜在的スプライス部位またはスプライシング調節配列は、U2AFなどのRNA結合タンパク質をNIEのスプライス部位と競合させることができる。一実施形態では、作用物質は、潜在的スプライス部位またはスプライシング調節配列に結合して、RNA結合タンパク質の結合を妨げ、それによってNIEスプライス部位の利用を促進させることができる。
[0541]一実施形態では、潜在的スプライス部位は、NIEの5’または3’スプライス部位を含まないことがある。潜在的スプライス部位は、NIE5’スプライス部位の少なくとも10ヌクレオチド上流であり得る。潜在的スプライス部位は、NIE5’スプライス部位の少なくとも20ヌクレオチド上流であり得る。潜在的スプライス部位は、NIE5’スプライス部位の少なくとも50ヌクレオチド上流であり得る。潜在的スプライス部位は、NIE5’スプライス部位の少なくとも100ヌクレオチド上流であり得る。潜在的スプライス部位は、NIE5’スプライス部位の少なくとも200ヌクレオチド上流であり得る。
[0542]潜在的スプライス部位は、NIE3’スプライス部位の少なくとも10ヌクレオチド下流であり得る。潜在的スプライス部位は、NIE3’スプライス部位の少なくとも20ヌクレオチド下流であり得る。潜在的スプライス部位は、NIE3’スプライス部位の少なくとも50ヌクレオチド下流であり得る。潜在的スプライス部位は、NIE3’スプライス部位の少なくとも100ヌクレオチド下流であり得る。潜在的スプライス部位は、NIE3’スプライス部位の少なくとも200ヌクレオチド下流であり得る。
[0543]一部の実施形態では、本開示の方法は、SCN1A遺伝子から転写されたプレmRNA中のNIEの存在を利用する。機能性成熟Scn1a mRNAを産生するための同定されたSCN1A NIEプレmRNA種のスプライシングは、NIEのエクソンスキッピングを刺激するASOなどの治療剤を用いて誘導することができる。エクソンスキッピングの誘導は、NMD経路の阻害をもたらすことができる。得られた成熟Scn1a mRNAは、NMD経路を活性化することなく正常に翻訳され得、それにより、患者の細胞中のNaV1.1(本明細書では「NaV1.1タンパク質」とも呼ばれる)の量を増加させ、ドラベ症候群(DS);てんかん、全身性、熱性けいれんプラスを伴う、2型;熱性けいれん、家族性、3A;自閉症;てんかん性脳症、早期乳児、13;洞不全症候群1;アルツハイマー病;またはSUDEPなどのSCN1A欠損症と関連する状態の症状を緩和することができる。
[0544]成熟mRNA中のNIE含有量の低減に言及する場合、低減は完全であり、例えば、100%であり得る、または部分的であり得る。この低減は臨床的に有意であり得る。低減/修正は、処置されていない対象におけるNIE含有のレベルに相対的であるか、又は類似の対象集団におけるNIE含有の量に相対的であり得る。低減/修正は、平均的な対象または処置前の対象と比較して、少なくとも10%少ないNIE含有であり得る。低減は、平均的な対象または処置前の対象と比較して、少なくとも20%少ないNIE含有であり得る。低減は、平均的な対象または処置前の対象と比較して、少なくとも40%少ないNIE含有であり得る。低減は、平均的な対象または処置前の対象と比較して、少なくとも50%少ないNIE含有であり得る。低減は、平均的な対象または処置前の対象と比較して、少なくとも60%少ないNIE含有であり得る。低減は、平均的な対象または処置前の対象と比較して、少なくとも80%少ないNIE含有であり得る。低減は、平均的な対象または処置前の対象と比較して、少なくとも90%少ないNIE含有であり得る。
[0545]活性なNaV1.1タンパク質レベルの増加に言及する場合、増加は臨床的に有意であり得る。増加は、処置されていない対象における活性なNaV1.1タンパク質のレベルに相対的であるか、または類似の対象集団における活性なNaV1.1タンパク質の量に相対的であり得る。増加は、平均的な対象または処置前の対象と比較して、少なくとも10%多い活性なNaV1.1タンパク質であり得る。増加は、平均的な対象または処置前の対象と比較して、少なくとも20%多い活性なNaV1.1タンパク質であり得る。増加は、平均的な対象または処置前の対象と比較して、少なくとも40%多い活性なNaV1.1タンパク質であり得る。増加は、平均的な対象または処置前の対象と比較して、少なくとも50%多い活性なNaV1.1タンパク質であり得る。増加は、平均的な対象または処置前の対象と比較して、少なくとも80%多い活性なNaV1.1タンパク質であり得る。増加は、平均的な対象または処置前の対象と比較して、少なくとも100%多い活性なNaV1.1タンパク質であり得る。増加は、平均的な対象または処置前の対象と比較して、少なくとも200%多い活性なNaV1.1タンパク質であり得る。増加は、平均的な対象または処置前の対象と比較して、少なくとも500%多い活性なNaV1.1タンパク質であり得る。
エクソン含有
[0546]本明細書で使用される場合、「プレmRNAを含有するNIE」は、少なくとも1つの偽エクソンを含有するプレmRNA転写物である。選択的または異常スプライシングは、成熟mRNA転写物に少なくとも1つの偽エクソンの含有をもたらすことができる。「成熟mRNA」と「完全にスプライシングされたmRNA」という用語は、本明細書では、完全にプロセシングされたmRNAを説明するために、互換的に使用される。少なくとも1つの偽エクソンの含有は、非生産的mRNAであり得、成熟mRNAのNMDをもたらす。成熟mRNAを含有するNIEは、時々、異常なタンパク質発現をもたらすことがある。
[0546]本明細書で使用される場合、「プレmRNAを含有するNIE」は、少なくとも1つの偽エクソンを含有するプレmRNA転写物である。選択的または異常スプライシングは、成熟mRNA転写物に少なくとも1つの偽エクソンの含有をもたらすことができる。「成熟mRNA」と「完全にスプライシングされたmRNA」という用語は、本明細書では、完全にプロセシングされたmRNAを説明するために、互換的に使用される。少なくとも1つの偽エクソンの含有は、非生産的mRNAであり得、成熟mRNAのNMDをもたらす。成熟mRNAを含有するNIEは、時々、異常なタンパク質発現をもたらすことがある。
[0547]当業者はまた、本明細書に提供されるイントロン配列に基づいて、またはNM_006920、NM_001202435、NM_001165964、もしくはNM_001165963におけるmRNA配列に関して提供されるイントロン番号を用いて、本開示の方法を用いて標的化するための任意のSCN1Aアイソフォーム中の隣接するエクソンの配列を決定することができる。
[0548]一部の実施形態では、本開示の方法および組成物は、プレmRNAを含有するSCN1A NIEの偽エクソンのエクソンスキッピングを誘導または阻害することにより、SCN1Aの発現をモジュレートする、例えば、増加または減少させるために使用される。一部の実施形態では、偽エクソンは、イントロン1~25のうちのいずれかの内の配列である。一部の実施形態では、偽エクソンは、イントロン2、4、6、13、14、15、16、17、18、20、21、22、23、24、および25のうちのいずれかの内の配列である。一部の実施形態では、偽エクソンは、イントロン15、18、および19のうちのいずれかの内の配列である。一部の実施形態では、偽エクソンは、任意のSCN1Aイントロンまたはその一部であり得る。一部の実施形態では、偽エクソンはイントロン20内にある。本明細書で使用されるSCN1Aイントロン番号付けは、NM_006920におけるmRNA配列に対応する。イントロン番号付けは、異なるSCN1Aアイソフォーム配列に関して変化し得ることが理解される。
[0549]一部の実施形態では、含まれる偽エクソンは、細胞内の標的タンパク質をコードする遺伝子から転写されたプレmRNAを含有するNIEの集団における最も豊富な偽エクソンである。一部の実施形態では、含まれる偽エクソンは、細胞内の標的タンパク質をコードする遺伝子から転写されたプレmRNAを含有するNIEの集団における最も豊富な偽エクソンであり、プレmRNAを含有するNIEの集団は、2つ以上の含まれる偽エクソンを含む。一部の実施形態では、標的タンパク質をコードするプレmRNAを含有するNIEの集団における最も豊富な偽エクソンを標的化するアンチセンスオリゴマーは、アンチセンスオリゴマーが標的化されるかまたは結合する偽エクソンを含む、集団中の1つまたは2つまたはそれを超える偽エクソンのエクソンスキッピングを誘導する。実施形態では、標的化領域は、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAを含有するNIEにおける最も豊富な偽エクソンである偽エクソン中にある。
[0550]エクソン含有の程度は、エクソン含有パーセント、例えば、所定の偽エクソンが含まれる転写物のパーセンテージとして表すことができる。簡単には、エクソン含有パーセントは、エクソン含有を伴うRNA転写物の量の平均に、エクソン排除を伴うRNA転写物の量の平均を加えたものの合計を超える、エクソン含有を伴うRNA転写物の量のパーセンテージとして計算することができる。
[0551]一部の実施形態では、含まれる偽エクソンは、少なくとも約5%、少なくとも約10%、少なくとも約15%、少なくとも約20%、少なくとも約25%、少なくとも約30%、少なくとも約35%、少なくとも約40%、少なくとも約45%、または少なくとも約50%の含有の決定に基づいて、含まれる偽エクソンとして同定されるエクソンである。実施形態では、含まれる偽エクソンは、約5%~約100%、約5%~約95%、約5%~約90%、約5%~約85%、約5%~約80%、約5%~約75%、約5%~約70%、約5%~約65%、約5%~約60%、約5%~約55%、約5%~約50%、約5%~約45%、約5%~約40%、約5%~約35%、約5%~約30%、約5%~約25%、約5%~約20%、約5%~約15%、約10%~約100%、約10%~約95%、約10%~約90%、約10%~約85%、約10%~約80%、約10%~約75%、約10%~約70%、約10%~約65%、約10%~約60%、約10%~約55%、約10%~約50%、約10%~約45%、約10%~約40%、約10%~約35%、約10%~約30%、約10%~約25%、約10%~約20%、約15%~約100%、約15%~約95%、約15%~約90%、約15%~約85%、約15%~約80%、約15%~約75%、約15%~約70%、約15%~約65%、約15%~約60%、約15%~約55%、約15%~約50%、約15%~約45%、約15%~約40%、約15%~約35%、約15%~約30%、約15%~約25%、約20%~約100%、約20%~約95%、約20%~約90%、約20%~約85%、約20%~約80%、約20%~約75%、約20%~約70%、約20%~約65%、約20%~約60%、約20%~約55%、約20%~約50%、約20%~約45%、約20%~約40%、約20%~約35%、約20%~約30%、約25%~約100%、約25%~約95%、約25%~約90%、約25%~約85%、約25%~約80%、約25%~約75%、約25%~約70%、約25%~約65%、約25%~約60%、約25%~約55%、約25%~約50%、約25%~約45%、約25%~約40%、または約25%~約35%の含有の決定に基づいて、含まれる偽エクソンとして同定されるエクソンである。ENCODEデータ(例えば、全内容が参照により本明細書に組み込まれる、Tilgnerら、2012年。「Deep sequencing of subcellular RNA fractions shows splicing to be predominantly co-transcriptional in the human genome but inefficient for lncRNAs」、Genome Research 22巻(9号):1616~25頁に記載される)は、エクソン含有を同定するのを助けるために使用することができる。
[0552]一部の実施形態では、SCN1AプレmRNA転写物の標的化される部分に相補的であるASOとの細胞の接触は、ASOの不在下/処置の不在下で細胞によって産生されるタンパク質の量と比較して、少なくとも10、20、30、40、50、60、80、100、150、200、250、300、350、400、450、500、または1000%産生されるNaV1.1タンパク質の量の増加をもたらす。一部の実施形態では、アンチセンスオリゴマーが接触される細胞によって産生されるNaV1.1タンパク質の総量は、対照化合物によって産生される標的タンパク質の量と比較して、約1.1~約10倍、約1.5~約10倍、約2~約10倍、約3~約10倍、約4~約10倍、約1.1~約5倍、約1.1~約6倍、約1.1~約7倍、約1.1~約8倍、約1.1~約9倍、約2~約5倍、約2~約6倍、約2~約7倍、約2~約8倍、約2~約9倍、約3~約6倍、約3~約7倍、約3~約8倍、約3~約9倍、約4~約7倍、約4~約8倍、約4~約9倍、少なくとも約1.1倍、少なくとも約1.5倍、少なくとも約2倍、少なくとも約2.5倍、少なくとも約3倍、少なくとも約3.5倍、少なくとも約4倍、少なくとも約5倍、または少なくとも約10倍増加する。対照化合物は、例えば、プレmRNAの標的化される部分に相補的ではないオリゴヌクレオチドであり得る。
[0553]一部の実施形態では、SCN1AプレmRNA転写物の標的化される部分に相補的であるASOとの細胞の接触は、ASOの不在下/処置の不在下で細胞によって産生されるタンパク質の量と比較して、少なくとも10、20、30、40、50、60、80、100、150、200、250、300、350、400、450、500、または1000%産生されるNaV1.1タンパク質の量の減少をもたらす。一部の実施形態では、アンチセンスオリゴマーが接触される細胞によって産生されるNaV1.1タンパク質の総量は、対照化合物によって産生される標的タンパク質の量と比較して、約1.1~約10倍、約1.5~約10倍、約2~約10倍、約3~約10倍、約4~約10倍、約1.1~約5倍、約1.1~約6倍、約1.1~約7倍、約1.1~約8倍、約1.1~約9倍、約2~約5倍、約2~約6倍、約2~約7倍、約2~約8倍、約2~約9倍、約3~約6倍、約3~約7倍、約3~約8倍、約3~約9倍、約4~約7倍、約4~約8倍、約4~約9倍、少なくとも約1.1倍、少なくとも約1.5倍、少なくとも約2倍、少なくとも約2.5倍、少なくとも約3倍、少なくとも約3.5倍、少なくとも約4倍、少なくとも約5倍、または少なくとも約10倍減少する。対照化合物は、例えば、プレmRNAの標的化される部分に相補的ではないオリゴヌクレオチドであり得る。
[0554]一部の実施形態では、SCN1AプレmRNA転写物の標的化される部分に相補的であるASOとの細胞の接触は、標的タンパク質をコードする成熟mRNAを含む、SCN1AをコードするmRNAの量の増加をもたらす。一部の実施形態では、NaV1.1タンパク質をコードするmRNA、またはNaV1.1タンパク質をコードする成熟mRNAの量は、ASOの不在下/処置の不在下で細胞によって産生されるタンパク質の量と比較して、少なくとも10、20、30、40、50、60、80、100、150、200、250、300、350、400、450、500、または1000%増加する。一部の実施形態では、アンチセンスオリゴマーが接触される細胞において産生される、NaV1.1タンパク質をコードするmRNA、またはNaV1.1タンパク質をコードする成熟mRNAの総量は、未処置の細胞、例えば、未処置の細胞または対照化合物で処置された細胞において産生された成熟RNAの量と比較して、約1.1~約10倍、約1.5~約10倍、約2~約10倍、約3~約10倍、約4~約10倍、約1.1~約5倍、約1.1~約6倍、約1.1~約7倍、約1.1~約8倍、約1.1~約9倍、約2~約5倍、約2~約6倍、約2~約7倍、約2~約8倍、約2~約9倍、約3~約6倍、約3~約7倍、約3~約8倍、約3~約9倍、約4~約7倍、約4~約8倍、約4~約9倍、少なくとも約1.1倍、少なくとも約1.5倍、少なくとも約2倍、少なくとも約2.5倍、少なくとも約3倍、少なくとも約3.5倍、少なくとも約4倍、少なくとも約5倍、または少なくとも約10倍増加する。対照化合物は、例えば、プレmRNAを含有するSCN1A NIEの標的化される部分に相補的ではないオリゴヌクレオチドであり得る。
[0555]一部の実施形態では、SCN1AプレmRNA転写物の標的化される部分に相補的であるASOとの細胞の接触は、標的タンパク質をコードする成熟mRNAを含む、SCN1AをコードするmRNAの量の減少をもたらす。一部の実施形態では、NaV1.1タンパク質をコードするmRNA、またはNaV1.1タンパク質をコードする成熟mRNAの量は、ASOの不在下/処置の不在下で細胞によって産生されるタンパク質の量と比較して、少なくとも10、20、30、40、50、60、80、100、150、200、250、300、350、400、450、500、または1000%減少する。一部の実施形態では、アンチセンスオリゴマーが接触される細胞において産生されるNaV1.1タンパク質をコードするmRNA、またはNaV1.1タンパク質をコードする成熟mRNAの総量は、未処置の細胞、例えば、未処置の細胞または対照化合物で処置された細胞において産生された成熟RNAの量と比較して、約1.1~約10倍、約1.5~約10倍、約2~約10倍、約3~約10倍、約4~約10倍、約1.1~約5倍、約1.1~約6倍、約1.1~約7倍、約1.1~約8倍、約1.1~約9倍、約2~約5倍、約2~約6倍、約2~約7倍、約2~約8倍、約2~約9倍、約3~約6倍、約3~約7倍、約3~約8倍、約3~約9倍、約4~約7倍、約4~約8倍、約4~約9倍、少なくとも約1.1倍、少なくとも約1.5倍、少なくとも約2倍、少なくとも約2.5倍、少なくとも約3倍、少なくとも約3.5倍、少なくとも約4倍、少なくとも約5倍、または少なくとも約10倍減少する。対照化合物は、例えば、プレmRNAを含有するSCN1A NIEの標的化される部分に相補的ではないオリゴヌクレオチドであり得る。
[0556]NIEは任意の長さであり得る。一部の実施形態では、NIEは、イントロンの完全な配列を含み、その場合、それは、イントロン保持と呼ばれることがある。一部の実施形態では、NIEはイントロンの一部であり得る。一部の実施形態では、NIEは、5’ssの配列を含むイントロンの5’末端部分であり得る。一部の実施形態では、NIEは、3’ssの配列を含むイントロンの3’末端部分であり得る。一部の実施形態では、NIEは、5’ssの配列を含まないイントロン内の一部であり得る。一部の実施形態では、NIEは、3’ssの配列を含まないイントロン内の一部であり得る。一部の実施形態では、NIEは、5’ssの配列または3’ssの配列のいずれも含まないイントロン内の一部であり得る。一部の実施形態では、NIEは、長さが5ヌクレオチド~10ヌクレオチド、長さが10ヌクレオチド~15ヌクレオチド、長さが15ヌクレオチド~20ヌクレオチド、長さが20ヌクレオチド~25ヌクレオチド、長さが25ヌクレオチド~30ヌクレオチド、長さが30ヌクレオチド~35ヌクレオチド、長さが35ヌクレオチド~40ヌクレオチド、長さが40ヌクレオチド~45ヌクレオチド、長さが45ヌクレオチド~50ヌクレオチド、長さが50ヌクレオチド~55ヌクレオチド、長さが55ヌクレオチド~60ヌクレオチド、長さが60ヌクレオチド~65ヌクレオチド、長さが65ヌクレオチド~70ヌクレオチド、長さが70ヌクレオチド~75ヌクレオチド、長さが75ヌクレオチド~80ヌクレオチド、長さが80ヌクレオチド~85ヌクレオチド、長さが85ヌクレオチド~90ヌクレオチド、長さが90ヌクレオチド~95ヌクレオチド、または長さが95ヌクレオチド~100ヌクレオチドであり得る。一部の実施形態では、NIEは、長さが少なくとも10ヌクレオチド、少なくとも20ヌクレオチド、少なくとも30ヌクレオチド、少なくとも40ヌクレオチド、少なくとも50ヌクレオチド、少なくとも60ヌクレオチド(nucleoids)、少なくとも70ヌクレオチド、少なくとも80ヌクレオチド、少なくとも90ヌクレオチド、または少なくとも100ヌクレオチドであり得る。一部の実施形態では、NIEは、長さが100~200ヌクレオチド、長さが200~300ヌクレオチド、長さが300~400ヌクレオチド、長さが400~500ヌクレオチド、長さが500~600ヌクレオチド、長さが600~700ヌクレオチド、長さが700~800ヌクレオチド、長さが800~900ヌクレオチド、長さが900~1,000ヌクレオチドであり得る。一部の実施形態では、NIEは、長さが1,000ヌクレオチドより長い場合がある。
[0557]偽エクソンの含有は、フレームシフトをもたらすことができ、成熟mRNA転写物への未成熟終止コドン(PIC)の導入は、転写物をNMDの標的とする。NIEを含有する成熟mRNA転写物は、タンパク質発現をもたらさない非生産的mRNA転写物であり得る。PICは、NIEの下流の任意の位置に存在することができる。一部の実施形態では、PICは、NIEの下流の任意のエクソンに存在することができる。一部の実施形態では、PICは、NIE内に存在することができる。例えば、SCN1A遺伝子によってコードされるmRNA転写物へのエクソン20xの含有は、mRNA転写物にPIC、例えば、mRNA転写物のエクソン21にPICを誘導することができる。
[0558]プレmRNAの領域にハイブリダイズした場合、エクソンスキッピング(またはNIEを含有するイントロンの増強されたスプライシング)をもたらし、タンパク質産生を増加するASOは、動物モデル、例えば、完全長ヒト遺伝子がノックインされたトランスジェニックマウスモデルまたはヒト化マウス疾患モデルを用いてin vivoで試験することができる。ASOの投与のための適切な経路は、ASOの送達が望まれる疾患および/または細胞型に依存して変化させることができる。ASOは、例えば、髄腔内注射、脳室内注射、腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射、硝子体内注射、または静脈内注射によって投与され得る。投与後、モデル動物の細胞、組織、および/または臓器を評価して、例えば、スプライシング(効率、速度、程度)およびタンパク質産生を、当技術分野において公知である方法および本明細書に記載される方法によって評価することによって、ASO処置の効果を決定することができる。動物モデルはまた、疾患もしくは疾患の重症度の任意の表現型または行動的指標であり得る。
[0559]実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、当技術分野において公知である任意の方法によって血液脳関門を通過する本アンチセンスオリゴヌクレオチドの浸透を促進することができる1種または複数の薬剤とともに投与される。例えば、アデノウイルスベクターの筋肉組織中の運動ニューロンへの投与による薬剤の送達は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第6,632,427号、「Adenoviral-vector-mediated gene transfer into medullary motor neurons」に記載される。脳、例えば、線条体、視床、海馬、または黒質への直接的なベクターの送達は、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第6,756,523号、「Adenovirus vectors for the transfer of foreign genes into cells of the central nervous system particularly in brain」に記載される。
[0560]実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、所望の薬学的または薬力学的特性を提供する薬剤と連結またはコンジュゲートされる。実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、血液脳関門を通過する浸透または輸送を促進するために、当技術分野において公知である物質、例えば、トランスフェリン受容体に対する抗体に結合される。実施形態では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、例えば、アンチセンス化合物をより効果的にするため、または血液脳関門を通過する輸送を増加させるために、ウイルスベクターと連結される。実施形態では、浸透圧性血液脳関門破壊は、糖、例えば、mesoエリスリトール、キシリトール、D(+)ガラクトース、D(+)ラクトース、D(+)キシロース、ダルシトール、ミオイノシトール、L(-)フルクトース、D(-)マンニトール、D(+)グルコース、D(+)アラビノース、D(-)アラビノース、セロビオース、D(+)マルトース、D(+)ラフィノース、L(+)ラムノース、D(+)メリビオース、D(-)リボース、アドニトール、D(+)アラビトール、L(-)アラビトール、D(+)フコース、L(-)フコース、D(-)リキソース、L(+)リキソース、およびL(-)リキソース、またはアミノ酸、例えば、グルタミン、リシン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、チロシン、バリン、およびタウリンの注入によって支援される。血液脳関門の浸透を増強するための方法および材料は、例えば、各々が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第9,193,969号、「Compositions and methods for selective delivery of oligonucleotide molecules to specific neuron types」、米国特許第4,866,042号、「Method for the delivery of genetic material across the blood brain barrier」、米国特許第6,294,520号、「Material for passage through the blood-brain barrier」、および米国特許第6,936,589号、「Parenteral delivery systems」に記載される。
[0561]実施形態では、本開示のASOは、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第9,193,969号に記載された方法を用いて、ドーパミン再取り込み阻害剤(DRI)、選択的セロトニン再取り込み阻害剤(SSRI)、ノルアドレナリン再取り込み阻害剤(NRI)、ノルエピネフリン-ドーパミン再取り込み阻害剤(NDRI)、およびセロトニン-ノルエピネフリン-ドーパミン再取り込み阻害剤(SNDRI)に結合される。
[0562]実施形態では、本方法および組成物を用いて処置される対象は、当技術分野において公知であり、記載される任意の方法を用いて、状態の改善について評価される。
[0563]一部の実施形態では、プレmRNA転写物を含有するSCN1A NIEは、表1または表2に列挙された配列のうちのいずれか1つに対して少なくとも約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%の配列同一性を有する遺伝子配列によりコードされる。一部の実施形態では、SCN1A NIEプレmRNA転写物は、表1または表2に列挙された配列のうちのいずれか1つに対して少なくとも約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%の配列同一性を有する配列を含む。
[0563]一部の実施形態では、プレmRNA転写物を含有するSCN1A NIEは、表1または表2に列挙された配列のうちのいずれか1つに対して少なくとも約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%の配列同一性を有する遺伝子配列によりコードされる。一部の実施形態では、SCN1A NIEプレmRNA転写物は、表1または表2に列挙された配列のうちのいずれか1つに対して少なくとも約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%または100%の配列同一性を有する配列を含む。
[0564]一部の実施形態では、プレmRNA転写物を含有するSCN1A NIEは、表1または表2に列挙された配列のうちのいずれか1つに対して少なくとも約80%、85%、90%、95%、97%、または100%の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、プレmRNA転写物を含有するSCN1A NIEは、表1または表2に列挙された配列のうちのいずれか1つに対して少なくとも約80%、85%、90%、95%、97%、または100%の配列同一性を有する配列によりコードされる。一部の実施形態では、NMDエクソンを含有し、NaV1.1をコードするプレmRNAの標的化される部分は、表1または表2に列挙された配列のうちのいずれか1つの少なくとも8つの連続する核酸を含む領域に対して少なくとも80%、85%、90%、95%、97%、または100%の配列同一性を有する配列を含む。
[0565]一部の実施形態では、プレmRNA転写物は、本明細書に記載されるSCN1AプレmRNA転写物のプレmRNA転写物に対して少なくとも約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%もしくは100%の配列同一性を有する配列、またはその相補体を含む。一部の実施形態では、SCN1AプレmRNAからなる群から選択されるプレmRNAの標的化される部分は、表1または表2のプレmRNA転写物の配列の少なくとも8つの連続する核酸を含む領域に対して少なくとも80%、85%、90%、95%、97%、もしくは100%の配列同一性を有する配列、またはその相補体を含む。一部の実施形態では、SCN1AプレmRNAのプレmRNAの標的化される部分は、表1または表2の配列の少なくとも8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19もしくは20個の連続する核酸に相補的である配列、またはそれらの相補体を含む。
[0566]一部の実施形態では、プレmRNA転写物は、本明細書に記載されるSCN1AプレmRNA転写物のプレmRNA転写物に対して少なくとも約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99もしくは100%の配列同一性を有する配列、またはその相補体を含む。一部の実施形態では、SCN1AプレmRNAからなる群から選択されるプレmRNAの標的化される部分は、表1または表2のプレmRNA転写物の配列の少なくとも8つの連続する核酸を含む領域に対して少なくとも80%、85%、90%、95%、97%、もしくは100%の配列同一性を有する配列、またはその相補体を含む。一部の実施形態では、SCN1AプレmRNAのプレmRNAの標的化される部分は、表1または表2の配列の少なくとも8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19もしくは20個の連続する核酸に相補的である配列、またはその相補体を含む。
[0567]一部の実施形態では、SCN1AプレmRNAの標的化される部分は、表3の配列の少なくとも8つの連続する核酸を含む領域に対して少なくとも80%、85%、90%、95%、97%、もしくは100%の配列同一性を有する配列、またはその相補体を含む。一部の実施形態では、SCN1AプレmRNAの標的化される部分は、表2または表3に列挙された配列からなる群から選択される配列の少なくとも8つの連続する核酸を含む領域に対して少なくとも80%、85%、90%、95%、97%、もしくは100%の配列同一性を有する配列またはその相補体を含む。
[0568]一部の実施形態では、ASOは、表1または表2に列挙された配列のうちのいずれか1つによる、NMDエクソンを含有するプレmRNAの標的化される部分に相補的な配列を有する。一部の実施形態では、ASOは、NIEの5’末端から上流の配列を標的化する。例えば、NIEの5’末端から上流の配列を標的化するASOは、表1または表2に列挙された配列のうちのいずれか1つの少なくとも8つの連続する核酸に少なくとも約80%、85%、90%、95%、97%、または100%相補的である配列を含む。例えば、NIEの5’末端から上流の配列を標的化するASOは、表1または表2に列挙された配列のうちのいずれか1つに対して少なくとも80%、85%、90%、95%、97%、または100%の配列同一性を有する配列を含むことができる。
[0569]一部の実施形態では、ASOは、エクソン-イントロン境界(または接合部)を含有する配列を標的化する。例えば、エクソン-イントロン境界を含有する配列を標的化するASOは、表1または表2に列挙された配列のうちのいずれか1つの少なくとも8つの連続する核酸に少なくとも約80%、85%、90%、95%、97%、または100%相補的である配列を含むことができる。一部の実施形態では、ASOは、NIEの3’末端から下流の配列を標的化する。例えば、NIEの3’末端から下流の配列を標的化するASOは、表1または表2に列挙された配列のうちのいずれか1つに対して少なくとも80%、85%、90%、95%、97%、または100%の配列同一性を有する配列を含むことができる。例えば、NIEの3’末端から下流の配列を標的化するASOは、表1または表2に列挙された配列のうちのいずれか1つに対して少なくとも80%、85%、90%、95%、97%、または100%の配列同一性を有する配列を含むことができる。一部の実施形態では、ASOは、NIE内の配列を標的化する。
エクソンスキッピングを誘導する追加のASOを同定する方法
[0570]また、プレmRNAを含有するSCN1A NIEのエクソンスキッピングを誘導するASOを同定または決定する方法は、本開示の範囲内である。例えば、方法は、プレmRNAを含有するSCN1A NIEの偽エクソンスキッピングを誘導するASOを同定または決定することを含むことができる。プレmRNAの標的領域内の異なるヌクレオチドに特異的にハイブリダイズするASOをスクリーニングして、標的イントロンのスプライシングの速度および/または程度を改善するASOを同定または決定することができる。一部の実施形態では、ASOは、スプライシングリプレッサー(複数可)/サイレンサーの結合部位(複数可)を遮断または妨害することができる。エクソンの標的領域にハイブリダイズする場合、所望の効果(例えば、偽エクソンスキッピング、タンパク質または機能性RNA産生)をもたらすASOを同定する(決定する)ために、当技術分野において公知である任意の方法を使用することができる。これらの方法はまた、含まれるエクソンに隣接するイントロン中のまたは含まれないエクソン中の標的化される領域に結合することによって、含まれるエクソンのエクソンスキッピングを誘導するASOを同定するために用いることができる。使用され得る方法の例を以下に示す。
[0570]また、プレmRNAを含有するSCN1A NIEのエクソンスキッピングを誘導するASOを同定または決定する方法は、本開示の範囲内である。例えば、方法は、プレmRNAを含有するSCN1A NIEの偽エクソンスキッピングを誘導するASOを同定または決定することを含むことができる。プレmRNAの標的領域内の異なるヌクレオチドに特異的にハイブリダイズするASOをスクリーニングして、標的イントロンのスプライシングの速度および/または程度を改善するASOを同定または決定することができる。一部の実施形態では、ASOは、スプライシングリプレッサー(複数可)/サイレンサーの結合部位(複数可)を遮断または妨害することができる。エクソンの標的領域にハイブリダイズする場合、所望の効果(例えば、偽エクソンスキッピング、タンパク質または機能性RNA産生)をもたらすASOを同定する(決定する)ために、当技術分野において公知である任意の方法を使用することができる。これらの方法はまた、含まれるエクソンに隣接するイントロン中のまたは含まれないエクソン中の標的化される領域に結合することによって、含まれるエクソンのエクソンスキッピングを誘導するASOを同定するために用いることができる。使用され得る方法の例を以下に示す。
[0571]ASO「ウォーク」と呼ばれるスクリーニングのラウンドは、プレmRNAの標的化領域にハイブリダイズするようにデザインされたASOを用いて行うことができる。例えば、ASOウォークにおいて使用されるASOは、含まれるエクソンの3’スプライス部位の約100ヌクレオチド上流(例えば、標的/含まれるエクソンの上流に位置するエクソンの配列の一部)から標的/含まれるエクソンの3’スプライス部位の約100ヌクレオチド下流、および/または含まれるエクソンの5’スプライス部位の約100ヌクレオチド上流から標的/含まれるエクソンの5’スプライス部位の約100ヌクレオチド下流(例えば、標的/含まれるエクソンの下流に位置するエクソンの配列の一部)まで、5ヌクレオチドごとにタイル化することができる。例えば、長さが15ヌクレオチドの第1のASOは、標的/含まれるエクソンの3’スプライス部位に対して+6~+20のヌクレオチドに特異的にハイブリダイズするようにデザインすることができる。第2のASOは、標的/含まれるエクソンの3’スプライス部位に対して+11~+25のヌクレオチドに特異的にハイブリダイズするようにデザインすることができる。ASOはプレmRNAの標的領域に及ぶようにデザインされる。実施形態では、ASOは、例えば、1、2、3、または4ヌクレオチドごとに、より密接にタイル化することができる。さらに、ASOは、5’スプライス部位の100ヌクレオチド下流から3’スプライス部位の100ヌクレオチド上流までタイル化することができる。一部の実施形態では、ASOは、3’スプライス部位の約1,160ヌクレオチド上流から5’スプライス部位の約500ヌクレオチド下流までタイル化することができる。一部の実施形態では、ASOは、3’スプライス部位の約500ヌクレオチド上流から3’スプライス部位の約1,920ヌクレオチド下流までタイル化することができる。
[0572]1つもしくは複数のASO、または対照ASO(スクランブル配列を有するASO、標的領域にハイブリダイズすることが期待されない配列)は、例えば、トランスフェクションによって、標的プレmRNAを発現する疾患関連細胞株(例えば、本明細書に記載されるプレmRNAを含有するNIE)に送達される。ASOの各々のエクソンスキッピング効果は、当技術分野において公知である任意の方法、例えば、スプライス接合部に及ぶプライマーを用いる逆転写酵素(RT)-PCRによって評価することができる。対照のASO処置された細胞と比較して、ASO処置された細胞において、含まれたエクソン(例えば、NIEの隣接エクソンを含む)を含有する領域に及ぶプライマーを用いて生成されたより長いRT-PCR産物の低減または不在は、標的NIEのスプライシングが増強されたことを示す。一部の実施形態では、エクソンスキッピング効率(またはNIEを含有するイントロンをスプライシングするスプライシング効率)、スプライシングされたプレmRNAとスプライシングされていないプレmRNAの比、スプライシングの速度、またはスプライシングの程度は、本明細書に記載されるASOを用いて改善することができる。標的プレmRNAによってコードされるタンパク質または機能性RNAの量はまた、各ASOが所望の効果(例えば、増強された機能性タンパク質産生)を達成したかどうかを決定するために評価することができる。ウエスタンブロット、フローサイトメトリー、免疫蛍光顕微鏡法、およびELISAなどの、タンパク質産生を評価および/または定量するための当技術分野において公知である任意の方法を使用することができる。
[0573]ASO「マイクロウォーク」と呼ばれる第2ラウンドのスクリーニングは、プレmRNAの標的領域にハイブリダイズするようにデザインされたASOを用いて行うことができる。ASOマイクロウォークで使用されるASOは、ASOとハイブリダイズする場合、エクソンスキッピング(またはNIEの増強されたスプライシング)をもたらすプレmRNAのヌクレオチド酸配列をさらに精製するために、1ヌクレオチドごとにタイル化される。
[0574]標的イントロンのスプライシングを促進するASOによって定義される領域は、ASO「マイクロウォーク」によってより詳細に探索され、1ntステップで間隔を空けたASO、ならびにより長いASO、典型的には18~25ntを伴う。
[0575]上述のASOウォークに関して記載したように、ASOマイクロウォークは、例えば、トランスフェクションによって、標的プレmRNAを発現する疾患関連細胞株に、1つもしくは複数のASO、または対照ASO(スクランブル配列を有するASO、標的領域にハイブリダイズすることが期待されない配列)を送達させることによって行われる。ASOの各々のスプライシング誘導効果は、本明細書に記載されるように、例えば、NIEに及ぶプライマーを用いる逆転写酵素(RT)-PCRによるなどの、当技術分野において公知である任意の方法によって評価することができる。対照のASO処置された細胞と比較して、ASO処置された細胞においてNIEに及ぶプライマーを用いて産生されたより長いRT-PCR産物の低減または不在は、エクソンスキッピング(またはNIEを含有する標的イントロンのスプライシング)が増強されたことを示す。一部の実施形態では、エクソンスキッピング効率(またはNIEを含有するイントロンをスプライシングするスプライシング効率)、スプライシングされたプレmRNAとスプライシングされていないプレmRNAの比、スプライシングの速度、またはスプライシングの程度は、本明細書に記載されるASOを用いて改善することができる。標的プレmRNAによってコードされるタンパク質または機能性RNAの量はまた、各ASOが所望の効果(例えば、増強された機能性タンパク質産生)を達成したかどうかを決定するために評価することができる。ウエスタンブロット、フローサイトメトリー、免疫蛍光顕微鏡法、およびELISAなどの、タンパク質産生を評価および/または定量するための当技術分野において公知である任意の方法を使用することができる。
キットおよび組成物
[0576]一部の態様では、アンチセンスオリゴマー(ASO)を含む濃縮物であって、ASOが配列番号21~67、210~256または304~1099のうちいずれか1つに対して少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む、濃縮物および希釈剤であって、濃縮物が該希釈剤と混和性である、希釈剤およびASOを希釈剤中に希釈または可溶化するための使用説明書を含むキットが本明細書で提供される。一部の実施形態では、ASOは、表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8aおよび8bに列挙される配列のうちいずれか1つに対して少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む。
[0576]一部の態様では、アンチセンスオリゴマー(ASO)を含む濃縮物であって、ASOが配列番号21~67、210~256または304~1099のうちいずれか1つに対して少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む、濃縮物および希釈剤であって、濃縮物が該希釈剤と混和性である、希釈剤およびASOを希釈剤中に希釈または可溶化するための使用説明書を含むキットが本明細書で提供される。一部の実施形態では、ASOは、表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8aおよび8bに列挙される配列のうちいずれか1つに対して少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む。
[0577]一部の実施形態では、ASOは、配列番号21~67、210~256または304~1099のうちいずれか1つに対して少なくとも60%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、884%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%、99.8%、99.9%または100%の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ASOは、配列番号21~67、210~256または304~1099のうちいずれか1つに対して少なくとも60%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、884%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%、99.8%、99.9%または100%の配列同一性を有する配列からなる。一部の実施形態では、ASOは、表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8aおよび8bに列挙される配列のうちいずれか1つに対して少なくとも60%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、884%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%、99.8%、99.9%または100%の配列同一性を有する配列を含む。一部の実施形態では、ASOは、表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8aおよび8bに列挙される配列のうちいずれか1つに対して少なくとも60%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、884%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%、99.8%、99.9%または100%の配列同一性を有する配列からなる。
[0578]一部の実施形態では、希釈剤は、人工脳脊髄液(aCSF)溶液である。一部の実施形態では、溶液は、対象由来の脳脊髄液(CSF)試料を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、等張液を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、リン酸緩衝(pH6.6~7.6)溶液を含む。
[0579]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、リン酸緩衝(pH6.6~7.6)溶液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、リン酸緩衝(pH6.0~8.0)溶液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、リン酸緩衝(pH5.0~8.0)溶液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、pH4.5~8.5、pH4.6~8.5、pH4.7~8.5、pH4.8~8.5、pH4.9~8.5、pH5.0~8.5、pH5.1~8.5、pH5.2~8.5、pH5.3~8.5、pH5.4~8.5、pH5.5~8.5、pH5.6~8.5、pH5.7~8.5、pH5.8~8.5、H5.9~8.5、pH6.0~8.5、pH6.1~8.5、pH6.2~8.5、pH6.3~8.5、pH6.4~8.5、pH6.5~8.5、pH6.6~8.5、pH6.7~8.5、pH6.8~8.5、pH6.9~8.5、pH7.0~8.5、pH7.1~8.5、pH7.2~8.5、pH7.3~8.5、pH7.4~8.5、pH7.5~8.5、pH7.6~8.5、pH7.7~8.5、pH7.8~8.5、pH7.9~8.5、pH8.0~8.5、pH8.1~8.5、pH8.2~8.5、pH8.3~8.5またはpH8.4~8.5を有するリン酸緩衝溶液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、pH4.5~8.3、pH4.5~8.2、pH4.5~8.1、pH4.5~8.0、pH4.5~7.9、pH4.5~7.8、pH4.5~7.7、pH4.5~7.6、pH4.5~7.5、pH4.5~7.4、pH4.5~7.3、pH4.5~7.2、pH4.5~7.1、pH4.5~7.0、pH4.5~6.9、pH4.5~6.8、pH4.5~6.7、pH4.5~6.6、pH4.5~6.5、pH4.5~6.4、pH4.5~6.3、pH4.5~6.2、pH4.5~6.1、pH4.5~6.0、pH4.5~5.9、pH4.5~5.8、pH4.5~5.7、pH4.5~5.6、pH4.5~5.5、pH4.5~5.4、pH4.5~5.3、pH4.5~5.2、pH4.5~5.1、pH4.5~5.0、pH4.5~4.9、pH4.5~4.8、pH4.5~4.7またはH4.5~4.6を有するリン酸緩衝溶液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、pH6.0~7.6、pH6.1~7.6、pH6.2~7.6、pH6.3~7.6、pH6.4~7.6、pH6.5~7.6、pH6.6~7.6、pH6.7~7.6、pH6.8~7.6、pH6.9~7.6、pH7.0~7.6、pH7.1~7.6、pH7.2~7.6、pH7.3~7.6、pH7.4~7.6またはpH7.5~7.6を有するリン酸緩衝溶液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、pH6.6~8.0、pH6.6~7.9、pH6.6~7.8、pH6.6~7.7、pH6.6~7.6、pH6.6~7.5、pH6.6~7.4、pH6.6~7.3、pH6.6~7.2、pH6.6~7.1、pH6.6~7.0、pH6.6~6.9、pH6.6~6.8またはpH6.6~6.7を有するリン酸緩衝溶液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、pH6.0~8.0、pH6.1~8.0、pH6.2~8.0、pH6.3~8.0、pH6.4~8.0、pH6.5~8.0、pH6.6~8.0、pH6.7~8.0、pH6.8~8.0、pH6.9~8.0、pH7.0~8.0、pH7.1~8.0、pH7.2~8.0、pH7.3~8.0、pH7.4~8.0、pH7.5~8.0、pH7.6~8.0、pH7.7~8.0、pH7.8~8.0またはpH7.9~8.0を有するリン酸緩衝溶液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、pH6.0~7.9、pH6.0~7.8、pH6.0~7.7、pH6.0~7.6、pH6.0~7.5、pH6.0~7.4、pH6.0~7.3、pH6.0~7.2、pH6.0~7.1、pH6.0~7.0、pH6.0~6.9、pH6.0~6.8、pH6.0~6.7、pH6.0~6.6、pH6.0~6.5、pH6.0~6.4、pH6.0~6.3、pH6.0~6.2またはpH6.0~6.1を有するリン酸緩衝溶液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、pH5.7~8.5、5.8~8.4、5.9~8.3、6.0~8.2、6.1~8.1、6.2~8.0、6.3~7.9、6.4~7.8、6.5~7.7または6.6~7.6を有するリン酸緩衝溶液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、pH約5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9または8.0を有するリン酸緩衝溶液中に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、pH5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9または8.0を有するリン酸緩衝溶液中に可溶化または希釈される。
[0580]一部の実施形態では、希釈剤は、25~250mMのNaClを含む。
[0581]一部の実施形態では、希釈剤は、25~250、30~250、35~250、40~250、45~250、50~250、55~250、60~250、65~250、70~250、75~250、80~250、85~250、90~250、95~250、100~250、105~250、110~250、115~250、120~250、125~250、130~250、135~250、140~250、145~250、150~250、155~250、160~250、165~250、170~250、175~250、180~250、185~250、190~250、195~250、200~250、205~250、210~250、215~250、220~250、225~250、230~250、235~250、240~250または245~250mMのNaClを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、25~245、25~240、25~235、25~230、25~225、25~220、25~215、25~210、25~205、25~200、25~195、25~190、25~185、25~180、25~175、25~170、25~165、25~160、25~155、25~150、25~145、25~140、25~135、25~130、25~125、25~120、25~115、25~110、25~105、25~110、25~105、25~100、25~95、25~90、25~85、25~80、25~75、25~70、25~65、25~60、25~55、25~50、25~45、25~40、25~35または25~30mMのNaClを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、30~245、35~240、40~235、45~230、50~225、55~220、60~215、65~210、70~205、75~200、80~195、85~190、90~185、95~180、100~175、105~170、110~165、115~160、120~155、125~150、130~145または135~140mMのNaClを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、100~140、101~140、102~140、103~140、104~140、105~140、106~140、107~140、108~140、109~140、110~140、111~140、112~140、113~140、114~140、115~140、116~140、117~140、118~140、119~140、120~140、121~140、122~140、123~140、124~140、125~140、126~140、127~140、128~140、129~140、130~140、131~140、132~140、133~140、134~140、135~140、136~140、137~140、138~140または139~140mMのNaClを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、100~139、100~138、100~137、100~136、100~135、100~134、100~133、100~132、100~131、100~130、100~129、100~128、100~127、100~126、100~125、100~124、100~123、100~122、100~121、100~120、100~119、100~118、100~117、100~116、100~115、100~114、100~113、100~112、100~111、100~110、100~109、100~108、100~107、100~106、100~105、100~104、100~103、100~102または100~101mMのNaClを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、少なくとも90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139または140mMのNaClを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、最高で90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139または140mMのNaClを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139または140mMのNaClを含む。
[0581]一部の実施形態では、希釈剤は、25~250、30~250、35~250、40~250、45~250、50~250、55~250、60~250、65~250、70~250、75~250、80~250、85~250、90~250、95~250、100~250、105~250、110~250、115~250、120~250、125~250、130~250、135~250、140~250、145~250、150~250、155~250、160~250、165~250、170~250、175~250、180~250、185~250、190~250、195~250、200~250、205~250、210~250、215~250、220~250、225~250、230~250、235~250、240~250または245~250mMのNaClを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、25~245、25~240、25~235、25~230、25~225、25~220、25~215、25~210、25~205、25~200、25~195、25~190、25~185、25~180、25~175、25~170、25~165、25~160、25~155、25~150、25~145、25~140、25~135、25~130、25~125、25~120、25~115、25~110、25~105、25~110、25~105、25~100、25~95、25~90、25~85、25~80、25~75、25~70、25~65、25~60、25~55、25~50、25~45、25~40、25~35または25~30mMのNaClを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、30~245、35~240、40~235、45~230、50~225、55~220、60~215、65~210、70~205、75~200、80~195、85~190、90~185、95~180、100~175、105~170、110~165、115~160、120~155、125~150、130~145または135~140mMのNaClを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、100~140、101~140、102~140、103~140、104~140、105~140、106~140、107~140、108~140、109~140、110~140、111~140、112~140、113~140、114~140、115~140、116~140、117~140、118~140、119~140、120~140、121~140、122~140、123~140、124~140、125~140、126~140、127~140、128~140、129~140、130~140、131~140、132~140、133~140、134~140、135~140、136~140、137~140、138~140または139~140mMのNaClを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、100~139、100~138、100~137、100~136、100~135、100~134、100~133、100~132、100~131、100~130、100~129、100~128、100~127、100~126、100~125、100~124、100~123、100~122、100~121、100~120、100~119、100~118、100~117、100~116、100~115、100~114、100~113、100~112、100~111、100~110、100~109、100~108、100~107、100~106、100~105、100~104、100~103、100~102または100~101mMのNaClを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、少なくとも90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139または140mMのNaClを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、最高で90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139または140mMのNaClを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139または140mMのNaClを含む。
[0582]一部の実施形態では、希釈剤は、0.1~20mMのKClを含む。
[0583]一部の実施形態では、希釈剤は、0.1~40、0.1~39、0.1~38、0.1~37、0.1~36、0.1~35、0.1~34、0.1~33、0.1~32、0.1~31、0.1~30、0.1~29、0.1~28、0.1~27、0.1~26、0.1~25、0.1~24、0.1~23、0.1~22、0.1~21、0.1~20、0.1~19、0.1~18、0.1~17、0.1~16、0.1~15、0.1~14、0.1~13、0.1~12、0.1~10、0.1~9、0.1~8、0.1~7、0.1~6、0.1~5、0.1~4、0.1~3、0.1~2または0.1~1mMのKClを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、0.2~40、0.3~40、0.4~40、0.5~40、0.6~40、0.7~40、0.8~40、0.9~40、1~40、2~40、3~40、4~40、5~40、6~40、7~40、8~40、9~40、10~40、11~40、12~40、13~40、14~40、15~40、16~40、17~40、18~40、19~40、20~40、21~40、22~40、23~40、24~40、25~40、26~40、27~40、28~40、29~40、30~40、31~40、32~40、33~40、34~40、35~40、36~40、37~40、38~40または39~40mMのKClを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、0.1~3.5、0.2~3.5、0.3~3.5、0.4~3.5、0.5~3.5、0.6~3.5、0.7~3.5、0.8~3.5、0.9~3.5、1.0~3.5、1.1~3.5、1.2~3.5、1.3~3.5、1.4~3.5、1.5~3.5、1.6~3.5、1.7~3.5、1.8~3.5、1.9~3.5、2.0~3.5、2.1~3.5、2.2~3.5、2.3~3.5、2.4~3.5、2.5~3.5、2.6~3.5、2.7~3.5、2.8~3.5、2.9~3.5、3.0~3.5、3.1~3.5、3.2~3.5、3.3~3.5または3.4~3.5mMのKClを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、0.1~3.4、0.1~3.3、0.1~3.2、0.1~3.1、0.1~3.0、0.1~2.9、0.1~2.8、0.1~2.7、0.1~2.6、0.1~2.5、0.1~2.4、0.1~2.3、0.1~2.2、0.1~2.1、0.1~2.0、0.1~1.9、0.1~1.8、0.1~1.7、0.1~1.6、0.1~1.5、0.1~1.4、0.1~1.3、0.1~1.2、0.1~1.1、0.1~1.0、0.1~0.9、0.1~0.8、0.1~0.7、0.1~0.6、0.1~0.5、0.1~0.4、0.1~0.3または0.1~0.2mMのKClを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、少なくとも0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4または3.5mMのKClを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、最高で0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4または3.5mMのKClを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4または3.5mMのKClを含む。
[0583]一部の実施形態では、希釈剤は、0.1~40、0.1~39、0.1~38、0.1~37、0.1~36、0.1~35、0.1~34、0.1~33、0.1~32、0.1~31、0.1~30、0.1~29、0.1~28、0.1~27、0.1~26、0.1~25、0.1~24、0.1~23、0.1~22、0.1~21、0.1~20、0.1~19、0.1~18、0.1~17、0.1~16、0.1~15、0.1~14、0.1~13、0.1~12、0.1~10、0.1~9、0.1~8、0.1~7、0.1~6、0.1~5、0.1~4、0.1~3、0.1~2または0.1~1mMのKClを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、0.2~40、0.3~40、0.4~40、0.5~40、0.6~40、0.7~40、0.8~40、0.9~40、1~40、2~40、3~40、4~40、5~40、6~40、7~40、8~40、9~40、10~40、11~40、12~40、13~40、14~40、15~40、16~40、17~40、18~40、19~40、20~40、21~40、22~40、23~40、24~40、25~40、26~40、27~40、28~40、29~40、30~40、31~40、32~40、33~40、34~40、35~40、36~40、37~40、38~40または39~40mMのKClを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、0.1~3.5、0.2~3.5、0.3~3.5、0.4~3.5、0.5~3.5、0.6~3.5、0.7~3.5、0.8~3.5、0.9~3.5、1.0~3.5、1.1~3.5、1.2~3.5、1.3~3.5、1.4~3.5、1.5~3.5、1.6~3.5、1.7~3.5、1.8~3.5、1.9~3.5、2.0~3.5、2.1~3.5、2.2~3.5、2.3~3.5、2.4~3.5、2.5~3.5、2.6~3.5、2.7~3.5、2.8~3.5、2.9~3.5、3.0~3.5、3.1~3.5、3.2~3.5、3.3~3.5または3.4~3.5mMのKClを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、0.1~3.4、0.1~3.3、0.1~3.2、0.1~3.1、0.1~3.0、0.1~2.9、0.1~2.8、0.1~2.7、0.1~2.6、0.1~2.5、0.1~2.4、0.1~2.3、0.1~2.2、0.1~2.1、0.1~2.0、0.1~1.9、0.1~1.8、0.1~1.7、0.1~1.6、0.1~1.5、0.1~1.4、0.1~1.3、0.1~1.2、0.1~1.1、0.1~1.0、0.1~0.9、0.1~0.8、0.1~0.7、0.1~0.6、0.1~0.5、0.1~0.4、0.1~0.3または0.1~0.2mMのKClを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、少なくとも0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4または3.5mMのKClを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、最高で0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4または3.5mMのKClを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4または3.5mMのKClを含む。
[0584]一部の実施形態では、希釈剤は、0~50mMのNa2HPO4を含む。
[0585]一部の実施形態では、希釈剤は、0~50、0~45、0~40、0~35、0~30、0~25、0~20、0~19、0~18、0~17、0~16、0~15、0~14、0~13、0~12、0~11、0~10、0~9、0~8、0~7、0~6、0~5、0~4、0~3、0~2、0~1、0~0.9、0~0.8、0~0.7、0~0.6、0~0.5、0~0.4、0~0.3または0~0.2mMのNa2HPO4を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、0.1~50、0.1~45、0.1~40、0.1~35、0.1~30、0.1~25、0.1~20、0.1~19、0.1~18、0.1~17、0.1~16、0.1~15、0.1~14、0.1~13、0.1~12、0.1~11、0.1~10、0.1~9、0.1~8、0.1~7、0.1~6、0.1~5、0.1~4、0.1~3、0.1~2、0.1~1、0.1~0.9、0.1~0.8、0.1~0.7、0.1~0.6、0.1~0.5、0.1~0.4、0.1~0.3または0.1~0.2mMのNa2HPO4を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、0~50、0.1~50、0.2~50、0.3~50、0.4~50、0.5~50、0.6~50、0.7~50、0.8~50、0.9~50、1~50、2~50、3~50、4~50、5~50、6~50、7~50、8~50、9~50、1~50、11~50、12~50、13~50、14~50、15~50、16~50、17~50、18~50、19~50、20~50、25~50、30~50、35~50、40~50または45~50mMのNa2HPO4を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、0~20、0.1~20、0.2~20、0.3~20、0.4~20、0.5~20、0.6~20、0.7~20、0.8~20、0.9~20、1~20、2~20、3~20、4~20、5~20、6~20、7~20、8~20、9~20、10~20、11~20、12~20、13~20、14~20、15~20、16~20、17~20、18~20または19~20mMのNa2HPO4を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、少なくとも0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20mMのNa2HPO4を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、最高で0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20mMのNa2HPO4を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20mMのNa2HPO4を含む。
[0585]一部の実施形態では、希釈剤は、0~50、0~45、0~40、0~35、0~30、0~25、0~20、0~19、0~18、0~17、0~16、0~15、0~14、0~13、0~12、0~11、0~10、0~9、0~8、0~7、0~6、0~5、0~4、0~3、0~2、0~1、0~0.9、0~0.8、0~0.7、0~0.6、0~0.5、0~0.4、0~0.3または0~0.2mMのNa2HPO4を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、0.1~50、0.1~45、0.1~40、0.1~35、0.1~30、0.1~25、0.1~20、0.1~19、0.1~18、0.1~17、0.1~16、0.1~15、0.1~14、0.1~13、0.1~12、0.1~11、0.1~10、0.1~9、0.1~8、0.1~7、0.1~6、0.1~5、0.1~4、0.1~3、0.1~2、0.1~1、0.1~0.9、0.1~0.8、0.1~0.7、0.1~0.6、0.1~0.5、0.1~0.4、0.1~0.3または0.1~0.2mMのNa2HPO4を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、0~50、0.1~50、0.2~50、0.3~50、0.4~50、0.5~50、0.6~50、0.7~50、0.8~50、0.9~50、1~50、2~50、3~50、4~50、5~50、6~50、7~50、8~50、9~50、1~50、11~50、12~50、13~50、14~50、15~50、16~50、17~50、18~50、19~50、20~50、25~50、30~50、35~50、40~50または45~50mMのNa2HPO4を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、0~20、0.1~20、0.2~20、0.3~20、0.4~20、0.5~20、0.6~20、0.7~20、0.8~20、0.9~20、1~20、2~20、3~20、4~20、5~20、6~20、7~20、8~20、9~20、10~20、11~20、12~20、13~20、14~20、15~20、16~20、17~20、18~20または19~20mMのNa2HPO4を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、少なくとも0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20mMのNa2HPO4を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、最高で0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20mMのNa2HPO4を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20mMのNa2HPO4を含む。
[0586]一部の実施形態では、希釈剤は、0~50mMのNaH2PO4を含む。
[0587]一部の実施形態では、希釈剤は、0~50、0~45、0~40、0~35、0~30、0~25、0~20、0~19、0~18、0~17、0~16、0~15、0~14、0~13、0~12、0~11、0~10、0~9、0~8、0~7、0~6、0~5、0~4、0~3、0~2、0~1、0~0.9、0~0.8、0~0.7、0~0.6、0~0.5、0~0.4、0~0.3または0~0.2mMのNaH2PO4を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、0.1~50、0.1~45、0.1~40、0.1~35、0.1~30、0.1~25、0.1~20、0.1~19、0.1~18、0.1~17、0.1~16、0.1~15、0.1~14、0.1~13、0.1~12、0.1~11、0.1~10、0.1~9、0.1~8、0.1~7、0.1~6、0.1~5、0.1~4、0.1~3、0.1~2、0.1~1、0.1~0.9、0.1~0.8、0.1~0.7、0.1~0.6、0.1~0.5、0.1~0.4、0.1~0.3または0.1~0.2mMのNaH2PO4を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、0~50、0.1~50、0.2~50、0.3~50、0.4~50、0.5~50、0.6~50、0.7~50、0.8~50、0.9~50、1~50、2~50、3~50、4~50、5~50、6~50、7~50、8~50、9~50、1~50、11~50、12~50、13~50、14~50、15~50、16~50、17~50、18~50、19~50、20~50、25~50、30~50、35~50、40~50または45~50mMのNaH2PO4を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、0~20、0.1~20、0.2~20、0.3~20、0.4~20、0.5~20、0.6~20、0.7~20、0.8~20、0.9~20、1~20、2~20、3~20、4~20、5~20、6~20、7~20、8~20、9~20、10~20、11~20、12~20、13~20、14~20、15~20、16~20、17~20、18~20または19~20mMのNaH2PO4を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、少なくとも0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20mMのNaH2PO4を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、最高で0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20mMのNaH2PO4を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20mMのNaH2PO4を含む。
[0587]一部の実施形態では、希釈剤は、0~50、0~45、0~40、0~35、0~30、0~25、0~20、0~19、0~18、0~17、0~16、0~15、0~14、0~13、0~12、0~11、0~10、0~9、0~8、0~7、0~6、0~5、0~4、0~3、0~2、0~1、0~0.9、0~0.8、0~0.7、0~0.6、0~0.5、0~0.4、0~0.3または0~0.2mMのNaH2PO4を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、0.1~50、0.1~45、0.1~40、0.1~35、0.1~30、0.1~25、0.1~20、0.1~19、0.1~18、0.1~17、0.1~16、0.1~15、0.1~14、0.1~13、0.1~12、0.1~11、0.1~10、0.1~9、0.1~8、0.1~7、0.1~6、0.1~5、0.1~4、0.1~3、0.1~2、0.1~1、0.1~0.9、0.1~0.8、0.1~0.7、0.1~0.6、0.1~0.5、0.1~0.4、0.1~0.3または0.1~0.2mMのNaH2PO4を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、0~50、0.1~50、0.2~50、0.3~50、0.4~50、0.5~50、0.6~50、0.7~50、0.8~50、0.9~50、1~50、2~50、3~50、4~50、5~50、6~50、7~50、8~50、9~50、1~50、11~50、12~50、13~50、14~50、15~50、16~50、17~50、18~50、19~50、20~50、25~50、30~50、35~50、40~50または45~50mMのNaH2PO4を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、0~20、0.1~20、0.2~20、0.3~20、0.4~20、0.5~20、0.6~20、0.7~20、0.8~20、0.9~20、1~20、2~20、3~20、4~20、5~20、6~20、7~20、8~20、9~20、10~20、11~20、12~20、13~20、14~20、15~20、16~20、17~20、18~20または19~20mMのNaH2PO4を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、少なくとも0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20mMのNaH2PO4を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、最高で0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20mMのNaH2PO4を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20mMのNaH2PO4を含む。
[0588]一部の実施形態では、希釈剤は、0.1~50mMのCaCl2を含む。
[0589]一部の実施形態では、希釈剤は、0.1~50、0.2~50、0.3~50、0.4~50、0.5~50、0.6~50、0.7~50、0.8~50、0.9~50、1.0~50、~50、1.1~50、1.2~50、1.3~50、1.4~50、1.5~50、1.6~50、1.7~50、1.8~50、1.9~50、2.0~50、2.1~50、2.2~50、2.3~50、2.4~50、2.5~50、2.6~50、2.7~50、2.8~50、2.9~50、3.0~50、3.1~50、3.2~50、3.3~50、3.4~50、3.5~50、3.6~50、3.7~50、3.8~50、3.9~50、4~50、5~50、6~50、7~50、8~50、9~50、10~50、15~50、20~50、25~50、1 30~50、35~50、40~50または45~50mMのCaCl2を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、0.1~45、0.1~40、0.1~35、0.1~30、0.1~25、0.1~20、0.1~15、0.1~10、0.1~5、0.1~4、0.1~4.9、0.1~4.8、0.1~4.7、0.1~4.6、0.1~4.5、0.1~4.4、0.1~4.3、0.1~4.2、0.1~4.1、0.1~4.0、0.1~3.9、0.1~3.8、0.1~3.7、0.1~3.6、0.1~3.5、0.1~3.4、0.1~3.3、0.1~3.2、0.1~3.1、0.1~3.0、0.1~2.9、0.1~2.8、0.1~2.7、0.1~2.6、0.1~2.5、0.1~2.4、0.1~2.3、0.1~2.2、0.1~2.1、0.1~2.0、0.1~1.9、0.1~1.8、0.1~1.7、0.1~1.6、0.1~1.5、0.1~1.4、0.1~1.3、0.1~1.2、0.1~1.1、0.1~1.0、0.1~0.9、0.1~0.8、0.1~0.7、0.1~0.6、0.1~0.5、0.1~0.4、0.1~0.3または0.1~0.2mMのCaCl2を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、少なくとも1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9または4.0mMのCaCl2を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、最高で1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9または4.0mMのCaCl2を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9または4.0mMのCaCl2を含む。
[0589]一部の実施形態では、希釈剤は、0.1~50、0.2~50、0.3~50、0.4~50、0.5~50、0.6~50、0.7~50、0.8~50、0.9~50、1.0~50、~50、1.1~50、1.2~50、1.3~50、1.4~50、1.5~50、1.6~50、1.7~50、1.8~50、1.9~50、2.0~50、2.1~50、2.2~50、2.3~50、2.4~50、2.5~50、2.6~50、2.7~50、2.8~50、2.9~50、3.0~50、3.1~50、3.2~50、3.3~50、3.4~50、3.5~50、3.6~50、3.7~50、3.8~50、3.9~50、4~50、5~50、6~50、7~50、8~50、9~50、10~50、15~50、20~50、25~50、1 30~50、35~50、40~50または45~50mMのCaCl2を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、0.1~45、0.1~40、0.1~35、0.1~30、0.1~25、0.1~20、0.1~15、0.1~10、0.1~5、0.1~4、0.1~4.9、0.1~4.8、0.1~4.7、0.1~4.6、0.1~4.5、0.1~4.4、0.1~4.3、0.1~4.2、0.1~4.1、0.1~4.0、0.1~3.9、0.1~3.8、0.1~3.7、0.1~3.6、0.1~3.5、0.1~3.4、0.1~3.3、0.1~3.2、0.1~3.1、0.1~3.0、0.1~2.9、0.1~2.8、0.1~2.7、0.1~2.6、0.1~2.5、0.1~2.4、0.1~2.3、0.1~2.2、0.1~2.1、0.1~2.0、0.1~1.9、0.1~1.8、0.1~1.7、0.1~1.6、0.1~1.5、0.1~1.4、0.1~1.3、0.1~1.2、0.1~1.1、0.1~1.0、0.1~0.9、0.1~0.8、0.1~0.7、0.1~0.6、0.1~0.5、0.1~0.4、0.1~0.3または0.1~0.2mMのCaCl2を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、少なくとも1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9または4.0mMのCaCl2を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、最高で1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9または4.0mMのCaCl2を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9または4.0mMのCaCl2を含む。
[0590]一部の実施形態では、希釈剤は、0.1~50mMのMgCl2を含む。
[0591]一部の実施形態では、希釈剤は、0.1~50、0.2~50、0.3~50、0.4~50、0.5~50、0.6~50、0.7~50、0.8~50、0.9~50、1.0~50、~50、1.1~50、1.2~50、1.3~50、1.4~50、1.5~50、1.6~50、1.7~50、1.8~50、1.9~50、2.0~50、2.1~50、2.2~50、2.3~50、2.4~50、2.5~50、2.6~50、2.7~50、2.8~50、2.9~50、3.0~50、3.1~50、3.2~50、3.3~50、3.4~50、3.5~50、3.6~50、3.7~50、3.8~50、3.9~50、4~50、5~50、6~50、7~50、8~50、9~50、10~50、15~50、20~50、25~50、1 30~50、35~50、40~50または45~50mMのMgCl2を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、0.1~45、0.1~40、0.1~35、0.1~30、0.1~25、0.1~20、0.1~15、0.1~10、0.1~5、0.1~4、0.1~4.9、0.1~4.8、0.1~4.7、0.1~4.6、0.1~4.5、0.1~4.4、0.1~4.3、0.1~4.2、0.1~4.1、0.1~4.0、0.1~3.9、0.1~3.8、0.1~3.7、0.1~3.6、0.1~3.5、0.1~3.4、0.1~3.3、0.1~3.2、0.1~3.1、0.1~3.0、0.1~2.9、0.1~2.8、0.1~2.7、0.1~2.6、0.1~2.5、0.1~2.4、0.1~2.3、0.1~2.2、0.1~2.1、0.1~2.0、0.1~1.9、0.1~1.8、0.1~1.7、0.1~1.6、0.1~1.5、0.1~1.4、0.1~1.3、0.1~1.2、0.1~1.1、0.1~1.0、0.1~0.9、0.1~0.8、0.1~0.7、0.1~0.6、0.1~0.5、0.1~0.4、0.1~0.3または0.1~0.2mMのMgCl2を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、少なくとも0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9または4.0mMのMgCl2を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、最高で0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9または4.0mMのMgCl2を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9または4.0mMのMgCl2を含む。
[0591]一部の実施形態では、希釈剤は、0.1~50、0.2~50、0.3~50、0.4~50、0.5~50、0.6~50、0.7~50、0.8~50、0.9~50、1.0~50、~50、1.1~50、1.2~50、1.3~50、1.4~50、1.5~50、1.6~50、1.7~50、1.8~50、1.9~50、2.0~50、2.1~50、2.2~50、2.3~50、2.4~50、2.5~50、2.6~50、2.7~50、2.8~50、2.9~50、3.0~50、3.1~50、3.2~50、3.3~50、3.4~50、3.5~50、3.6~50、3.7~50、3.8~50、3.9~50、4~50、5~50、6~50、7~50、8~50、9~50、10~50、15~50、20~50、25~50、1 30~50、35~50、40~50または45~50mMのMgCl2を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、0.1~45、0.1~40、0.1~35、0.1~30、0.1~25、0.1~20、0.1~15、0.1~10、0.1~5、0.1~4、0.1~4.9、0.1~4.8、0.1~4.7、0.1~4.6、0.1~4.5、0.1~4.4、0.1~4.3、0.1~4.2、0.1~4.1、0.1~4.0、0.1~3.9、0.1~3.8、0.1~3.7、0.1~3.6、0.1~3.5、0.1~3.4、0.1~3.3、0.1~3.2、0.1~3.1、0.1~3.0、0.1~2.9、0.1~2.8、0.1~2.7、0.1~2.6、0.1~2.5、0.1~2.4、0.1~2.3、0.1~2.2、0.1~2.1、0.1~2.0、0.1~1.9、0.1~1.8、0.1~1.7、0.1~1.6、0.1~1.5、0.1~1.4、0.1~1.3、0.1~1.2、0.1~1.1、0.1~1.0、0.1~0.9、0.1~0.8、0.1~0.7、0.1~0.6、0.1~0.5、0.1~0.4、0.1~0.3または0.1~0.2mMのMgCl2を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、少なくとも0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9または4.0mMのMgCl2を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、最高で0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9または4.0mMのMgCl2を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9または4.0mMのMgCl2を含む。
[0592]一部の実施形態では、希釈剤は、1~100mMのNaHCO3、1~100mMのKHCO3またはそれらの組合せを含む。
[0593]一部の実施形態では、希釈剤は、1~100mMのNaHCO3を含む。
[0593]一部の実施形態では、希釈剤は、1~100mMのNaHCO3を含む。
[0594]一部の実施形態では、希釈剤は、1~99、1~95、1~90、1~85、1~80、1~75、1~70、1~65、1~60、1~55、1~50、1~45、1~40、1~35、1~30、1~25、1~20、1~15、1~10、1~9、1~8、1~7、1~6、1~5、1~4、1~3または1~2mMのNaHCO3を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、2~100、3~100、4~100、5~100、6~100、7~100、8~100、9~100、10~100、15~100、20~100、25~100、30~100、35~100、40~100、45~100、50~100、55~100、60~100、65~100、70~100、75~100、80~100、85~100、90~100または95~100mMのNaHCO3を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、24.0~28.0、24.0~27.9、24.0~27.8、24.0~27.7、24.0~27.6、24.0~27.5、24.0~27.4、24.0~27.3、24.0~27.2、24.0~27.1、24.0~27.0、24.0~26.9、24.0~26.8、24.0~26.7、24.0~26.6、24.0~26.5、24.0~26.4、24.0~26.3、24.0~26.2、24.0~26.1、24.0~26.0、24.0~25.9、4.0~25.8、24.0~25.7、24.0~25.6、24.0~25.5、24.0~25.4、24.0~25.3、24.0~25.2、24.0~25.1、24.0~25.0、24.0~24.9、24.0~24.8、24.0~24.7、24.0~24.6、24.0~24.5、24.0~24.4、24.0~24.3、24.0~24.2または24.0~24.1mMのNaHCO3を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、24.1~28.0、24.2~28.0、24.3~28.0、24.4~28.0、24.5~28.0、24.6~28.0、24.7~28.0、24.8~28.0、24.9~28.0、25.0~28.0、25.1~28.0、25.2~28.0、25.3~28.0、25.4~28.0、25.5~28.0、25.6~28.0、25.7~28.0、25.8~28.0、25.9~28.0、26.0~28.0、26.1~28.0、26.2~28.0、26.3~28.0、26.4~28.0、26.5~28.0、26.6~28.0、26.7~28.0、26.8~28.0、26.9~28.0、27.0~28.0、27.1~28.0、27.2~28.0、27.3~28.0、27.4~28.0、27.5~28.0、27.6~28.0、27.7~28.0、27.8~28.0または27.9~28.0mMのNaHCO3を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、少なくとも24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.0、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9または28.0mMのNaHCO3を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、最高で24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9または28.0mMのNaHCO3を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9または28.0mMのNaHCO3を含む。
[0595]一部の実施形態では、希釈剤は、1~100mMのKHCO3を含む。
[0596]一部の実施形態では、希釈剤は、1~99、1~95、1~90、1~85、1~80、1~75、1~70、1~65、1~60、1~55、1~50、1~45、1~40、1~35、1~30、1~25、1~20、1~15、1~10、1~9、1~8、1~7、1~6、1~5、1~4、1~3または1~2mMのKHCO3を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、2~100、3~100、4~100、5~100、6~100、7~100、8~100、9~100、10~100、15~100、20~100、25~100、30~100、35~100、40~100、45~100、50~100、55~100、60~100、65~100、70~100、75~100、80~100、85~100、90~100または95~100mMのKHCO3を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、24.0~28.0、24.0~27.9、24.0~27.8、24.0~27.7、24.0~27.6、24.0~27.5、24.0~27.4、24.0~27.3、24.0~27.2、24.0~27.1、24.0~27.0、24.0~26.9、24.0~26.8、24.0~26.7、24.0~26.6、24.0~26.5、24.0~26.4、24.0~26.3、24.0~26.2、24.0~26.1、24.0~26.0、24.0~25.9、4.0~25.8、24.0~25.7、24.0~25.6、24.0~25.5、24.0~25.4、24.0~25.3、24.0~25.2、24.0~25.1、24.0~25.0、24.0~24.9、24.0~24.8、24.0~24.7、24.0~24.6、24.0~24.5、24.0~24.4、24.0~24.3、24.0~24.2または24.0~24.1mMのKHCO3を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、24.1~28.0、24.2~28.0、24.3~28.0、24.4~28.0、24.5~28.0、24.6~28.0、24.7~28.0、24.8~28.0、24.9~28.0、25.0~28.0、25.1~28.0、25.2~28.0、25.3~28.0、25.4~28.0、25.5~28.0、25.6~28.0、25.7~28.0、25.8~28.0、25.9~28.0、26.0~28.0、26.1~28.0、26.2~28.0、26.3~28.0、26.4~28.0、26.5~28.0、26.6~28.0、26.7~28.0、26.8~28.0、26.9~28.0、27.0~28.0、27.1~28.0、27.2~28.0、27.3~28.0、27.4~28.0、27.5~28.0、27.6~28.0、27.7~28.0、27.8~28.0または27.9~28.0mMのKHCO3を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、少なくとも24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.0、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9または28.0mMのKHCO3を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、最高で24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9または28.0mMのKHCO3を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9または28.0mMのKHCO3を含む。
[0596]一部の実施形態では、希釈剤は、1~99、1~95、1~90、1~85、1~80、1~75、1~70、1~65、1~60、1~55、1~50、1~45、1~40、1~35、1~30、1~25、1~20、1~15、1~10、1~9、1~8、1~7、1~6、1~5、1~4、1~3または1~2mMのKHCO3を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、2~100、3~100、4~100、5~100、6~100、7~100、8~100、9~100、10~100、15~100、20~100、25~100、30~100、35~100、40~100、45~100、50~100、55~100、60~100、65~100、70~100、75~100、80~100、85~100、90~100または95~100mMのKHCO3を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、24.0~28.0、24.0~27.9、24.0~27.8、24.0~27.7、24.0~27.6、24.0~27.5、24.0~27.4、24.0~27.3、24.0~27.2、24.0~27.1、24.0~27.0、24.0~26.9、24.0~26.8、24.0~26.7、24.0~26.6、24.0~26.5、24.0~26.4、24.0~26.3、24.0~26.2、24.0~26.1、24.0~26.0、24.0~25.9、4.0~25.8、24.0~25.7、24.0~25.6、24.0~25.5、24.0~25.4、24.0~25.3、24.0~25.2、24.0~25.1、24.0~25.0、24.0~24.9、24.0~24.8、24.0~24.7、24.0~24.6、24.0~24.5、24.0~24.4、24.0~24.3、24.0~24.2または24.0~24.1mMのKHCO3を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、24.1~28.0、24.2~28.0、24.3~28.0、24.4~28.0、24.5~28.0、24.6~28.0、24.7~28.0、24.8~28.0、24.9~28.0、25.0~28.0、25.1~28.0、25.2~28.0、25.3~28.0、25.4~28.0、25.5~28.0、25.6~28.0、25.7~28.0、25.8~28.0、25.9~28.0、26.0~28.0、26.1~28.0、26.2~28.0、26.3~28.0、26.4~28.0、26.5~28.0、26.6~28.0、26.7~28.0、26.8~28.0、26.9~28.0、27.0~28.0、27.1~28.0、27.2~28.0、27.3~28.0、27.4~28.0、27.5~28.0、27.6~28.0、27.7~28.0、27.8~28.0または27.9~28.0mMのKHCO3を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、少なくとも24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.0、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9または28.0mMのKHCO3を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、最高で24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9または28.0mMのKHCO3を含む。一部の実施形態では、希釈剤は、24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9または28.0mMのKHCO3を含む。
[0597]一部の実施形態では、希釈剤は、1~100mMのD-グルコースを含む。
[0598]一部の実施形態では、希釈剤は、1~100、1~95、1~90、1~85、1~80、1~75、1~70、1~65、1~60、1~55、1~50、1~45、1~40、1~35、1~30、1~29、1~28、1~27、1~26、1~25、1~24、1~23、1~22、1~21、1~20、1~19、1~18、1~17、1~16、1~15、1~14、1~13、1~12、1~11、1~10、1~9、1~8、1~7、1~6、1~5、1~4、1~3または1~2mMのD-グルコースを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、2~100、3~100、4~100、5~100、6~100、7~100、8~100、9~100、10~100、11~100、12~100、13~100、14~100、15~100、16~100、17~100、18~100、19~100、20~100、21~100、22~100、23~100、24~100、25~100、26~100、29~100、28~100、29~100、30~100、35~100、40~100、45~100、50~100、55~100、60~100、65~100、70~100、75~100、80~100、85~100、90~100または95~100mMのD-グルコースを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、2~30、3~30、4~30、5~30、6~30、7~30、8~30、9~30、10~30、11~30、12~30、13~30、14~30、15~30、16~30、17~30、18~30、19~30、20~30、21~30、22~30、23~30、24~30、25~30、26~30、27~30、28~30または29~30mMのD-グルコースを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30mMのD-グルコースを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、最高で1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30mMのD-グルコースを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30mMのD-グルコースを含む。
[0598]一部の実施形態では、希釈剤は、1~100、1~95、1~90、1~85、1~80、1~75、1~70、1~65、1~60、1~55、1~50、1~45、1~40、1~35、1~30、1~29、1~28、1~27、1~26、1~25、1~24、1~23、1~22、1~21、1~20、1~19、1~18、1~17、1~16、1~15、1~14、1~13、1~12、1~11、1~10、1~9、1~8、1~7、1~6、1~5、1~4、1~3または1~2mMのD-グルコースを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、2~100、3~100、4~100、5~100、6~100、7~100、8~100、9~100、10~100、11~100、12~100、13~100、14~100、15~100、16~100、17~100、18~100、19~100、20~100、21~100、22~100、23~100、24~100、25~100、26~100、29~100、28~100、29~100、30~100、35~100、40~100、45~100、50~100、55~100、60~100、65~100、70~100、75~100、80~100、85~100、90~100または95~100mMのD-グルコースを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、2~30、3~30、4~30、5~30、6~30、7~30、8~30、9~30、10~30、11~30、12~30、13~30、14~30、15~30、16~30、17~30、18~30、19~30、20~30、21~30、22~30、23~30、24~30、25~30、26~30、27~30、28~30または29~30mMのD-グルコースを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30mMのD-グルコースを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、最高で1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30mMのD-グルコースを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30mMのD-グルコースを含む。
[0599]一部の実施形態では、希釈剤は、1~100、1~95、1~90、1~85、1~80、1~75、1~70、1~65、1~60、1~55、1~50、1~45、1~40、1~35、1~30、1~29、1~28、1~27、1~26、1~25、1~24、1~23、1~22、1~21、1~20、1~19、1~18、1~17、1~16、1~15、1~14、1~13、1~12、1~11、1~10、1~9、1~8、1~7、1~6、1~5、1~4、1~3または1~2mMのグルコースを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、2~100、3~100、4~100、5~100、6~100、7~100、8~100、9~100、10~100、11~100、12~100、13~100、14~100、15~100、16~100、17~100、18~100、19~100、20~100、21~100、22~100、23~100、24~100、25~100、26~100、29~100、28~100、29~100、30~100、35~100、40~100、45~100、50~100、55~100、60~100、65~100、70~100、75~100、80~100、85~100、90~100または95~100mMのグルコースを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、2~30、3~30、4~30、5~30、6~30、7~30、8~30、9~30、10~30、11~30、12~30、13~30、14~30、15~30、16~30、17~30、18~30、19~30、20~30、21~30、22~30、23~30、24~30、25~30、26~30、27~30、28~30または29~30mMのグルコースを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30mMのグルコースを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、最高で1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30mMのグルコースを含む。一部の実施形態では、希釈剤は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29または30mMのグルコースを含む。
[0600]一部の実施形態では、希釈剤は、25~250mMのNaCl、0.1~20mMのKCl、0.1~50mMのNa2HPO4、0.1~50mMのNaH2PO4、0.1~50mMのCaCl2および0.1~50mMのMgCl2を含む。
[0601]一部の実施形態では、希釈剤は、150mMのNaCl、3.0mMのKCl、0.7mMのNa2HPO4、0.3mMのNaH2PO4、0.79mMのMgCl2および1.4mMのCaCl2を含む。
[0602]一部の実施形態では、希釈剤は、抗酸化剤をさらに含む。一部の実施形態では、抗酸化剤は、t-ブチルヒドロキシキノリン(TBHQ)、ブチル化ヒドロキシトルエン(BHT)、ブチル化ヒドロキシアニソール(BHA)、ビタミンEまたはそれらの任意の組合せである。一部の実施形態では、ASOは、抗酸化剤をさらに含む緩衝液中に可溶化または希釈され、抗酸化剤は、アスコルビン酸(ビタミンC)、グルタチオン、リポ酸、尿酸、カロテン、α-トコフェロール(ビタミンE)、ユビキノール(補酵素Q)またはそれらの任意の組合せである。
[0603]一部の実施形態では、希釈剤は、25~250mMのNaCl、0.1~20mMのKCl、0~50mMのKH2PO4、1~100mMのNaHCO3、0~50mMのNaH2PO4、1~100mMのD-グルコース、0.1~50mMのCaCl2、0.1~50mMのMgCl2またはそれらの任意の組合せを含む。
[0604]一部の実施形態では、希釈剤は、25~250mMのNaCl、0.1~20mMのKCl、0~50mMのKH2PO4、1~100mMのNaHCO3、0~50mMのNaH2PO4、1~100mMのD-グルコース、0.1~50mMのCaCl2および0.1~50mMのMgCl2を含む。
[0605]一部の実施形態では、希釈剤は、127mMのNaCl、1.0mMのKCl、1.2mMのKH2PO4、26mMのNaHCO3、10mMのD-グルコース、2.4mMのCaCl2および1.3mMのMgCl2を含む。
[0606]一部の実施形態では、希釈剤は、119mMのNaCl、26.2mMのNaHCO3、2.5mMのKCl、1mMのNaH2PO4、1.3mMのMgCl2、10mMのグルコースおよび2.5mMのCaCl2を含む。
[0607]一部の実施形態では、希釈剤は、保存料を含まない。一部の実施形態では、希釈剤は、保存料を含む。
[0608]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOを、希釈剤中に希釈または可溶化するための使用説明書は、本明細書に記載されるASOを、希釈剤中に5~200mg/mLの濃度に希釈または可溶化するための使用説明書を含む。
[0608]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOを、希釈剤中に希釈または可溶化するための使用説明書は、本明細書に記載されるASOを、希釈剤中に5~200mg/mLの濃度に希釈または可溶化するための使用説明書を含む。
[0609]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOを、希釈剤中に希釈または可溶化するための使用説明書は、本明細書に記載されるASOを、希釈剤中に5~250、5~247.5、5~245、5~242.5、5~240、5~237.5、5~235、5~232.5、5~230、5~227.5、5~225、5~225.5、5~220、5~217.5、5~215、5~212.5、5~210、5~205.5、5~205、5~202.5、5~200、5~197.5、5~195、5~192.5、5~190、5~187.5、5~185、5~182.5、5~180、5~177.5、5~175、5~172.5、5~170、5~167.5、5~165、5~162.5、5~160、5~157.5、5~155、5~152.5、5~150、5~147.5、5~145、5~142.5、5~140、5~137.5、5~135、5~132.5、5~130、5~127.5、5~125、5~122.5、5~120、5~117.5、5~115、5~112.5、5~110、5~107.5、5~105、5~102.5、5~100、5~97.5、5~95、5~92.5、5~90、5~87.5、5~85、5~82.5、5~80、5~77.5、5~75、5~72.5、5~70、5~67.5、5~65、5~62.5、5~60、5~57.5、5~55、5~52.5、5~50、5~47.5、5~45、5~42.5、5~40、5~37.5、5~35、5~32.5、5~30、5~27.5、5~25、5~22.5、5~20、5~17.5、5~15、5~12.5または5~10mg/mLの濃度に希釈または可溶化するための使用説明書を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOを、希釈剤中に希釈または可溶化するための使用説明書は、本明細書に記載されるASOを、希釈剤中に10~250、15~250、20~250、25~250、30~250、35~250、40~250、45~250、50~250、55~250、60~250、65~250、70~250、75~250、80~250、85~250、90~250、95~250、100~250、105~250、110~250、115~250、120~250、125~250、130~250、135~250、140~250、145~250、150~250、155~250、160~250、165~250、170~250、175~250、180~250、185~250、190~250または195~250、200~250、205~250、210~250、215~250、220~250、225~250、230~250、235~250、240~250または245~250mg/mLの濃度に希釈または可溶化するための使用説明書を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOを、希釈剤中に希釈または可溶化するための使用説明書は、本明細書に記載されるASOを、希釈剤中に少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249または250mg/mLの濃度に希釈または可溶化するための使用説明書を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOを、希釈剤中に希釈または可溶化するための使用説明書は、本明細書に記載されるASOを、希釈剤中に最高で1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249または250mg/mLの濃度に希釈または可溶化するための使用説明書を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOを、希釈剤中に希釈または可溶化するための使用説明書は、本明細書に記載されるASOを、希釈剤中に1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249または250mg/mLの濃度に希釈または可溶化するための使用説明書を含む。
[0610]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1mg/mL~250mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在するASOの濃度で医薬組成物中に存在する。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、約0.1mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL、2.5mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL、6mg/mL、7mg/mL、8mg/mL、9mg/mL、10mg/mL、11mg/mL、12mg/mL、13mg/mL、14mg/mL、15mg/mL、16mg/mL、17mg/mL、18mg/mL、19mg/mLまたは20mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、約30mg/mL、40mg/mL、50mg/mL、60mg/mL、70mg/mL、80mg/mL、90mg/mL、100mg/mL、110mg/mL、120mg/mL、130mg/mL、140mg/mL、150mg/mL、160mg/mL、170mg/mL、180mg/mL、190mg/mLまたは200mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する。一部の実施形態では、ASOは、22.5mg/mL、25mg/mL、27.5mg/mL、30mg/mL、32.5mg/mL、35mg/mL、37.5mg/mL、40mg/mL、42.5mg/mL、45mg/mL、47.5mg/mL、50mg/mL、52.5mg/mL、55mg/mL、57.5mg/mL、60mg/mL、62.5mg/mL、65mg/mL、67.5mg/mL、70mg/mL、72.5mg/mL、75mg/mL、77.5mg/mL、80mg/mL、82.5mg/mL、85mg/mL、87.5mg/mL、90mg/mL、92.5mg/mL、95mg/mL、97.5mg/mL、100mg/mL、102.5mg/mL、105mg/mL、107.5mg/mL、110mg/mL、112.5mg/mL、115mg/mL、117.5mg/mL、120mg/mL、122.5mg/mL、125mg/mL、127.5mg/mL、130mg/mL、132.5mg/mL、135mg/mL、137.5mg/mL、140mg/mL、142.5mg/mL、145mg/mL、147.5mg/mL、150mg/mL、152.5mg/mL、155mg/mL、157.5mg/mL、160mg/mL、162.5mg/mL、165mg/mL、167.5mg/mL、170mg/mL、172.5mg/mL、175mg/mL、177.5mg/mL、180mg/mL、182.5mg/mL、185mg/mL、187.5mg/mL、190mg/mL、192.5mg/mL、195mg/mL、197.5mg/mL、200mg/mL、202.5mg/mL、205mg/mL、207.5mg/mL、210mg/mL、212.5mg/mL、215mg/mL、217.5mg/mL、220mg/mL、222.5mg/mL、225mg/mL、227.5mg/mL、230mg/mL、232.5mg/mL、235mg/mL、237.5mg/mL、240mg/mL、242.5mg/mL、245mg/mL、247.5mg/mLまたは250mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、希釈剤中に11mg/mL、22mg/mL、33mg/mL、44mg/mL、55mg/mL、66mg/mL、77mg/mL、88mg/mL、99mg/mLまたは100mg/mLの濃度に可溶化または希釈される。
[0611]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1mg/mL~250mg/mL、0.2mg/mL~250mg/mL、0.3mg/mL~250mg/mL、0.4mg/mL~250mg/mL、0.5mg/mL~250mg/mL、0.6mg/mL~250mg/mL、0.7mg/mL~250mg/mL、0.8mg/mL~250mg/mL、0.9mg/mL~250mg/mL、1.0mg/mL~250mg/mL、1.1mg/mL~250mg/mL、1.2mg/mL~250mg/mL、1.3mg/mL~250mg/mL、1.4mg/mL~250mg/mL、1.5mg/mL~250mg/mL、1.6mg/mL~250mg/mL、1.7mg/mL~250mg/mL、1.8mg/mL~250mg/mL、1.9mg/mL~250mg/mL、2.0mg/mL~250mg/mL、2.1mg/mL~250mg/mL、2.2mg/mL~250mg/mL、2.3mg/mL~250mg/mL、2.4mg/mL~250mg/mL、2.5mg/mL~250mg/mL、2.6mg/mL~250mg/mL、2.7mg/mL~250mg/mL、2.8mg/mL~250mg/mL、2.9mg/mL~250mg/mL、3.0mg/mL~250mg/mL、3.1mg/mL~250mg/mL、3.2mg/mL~250mg/mL、3.3mg/mL~250mg/mL、3.4mg/mL~250mg/mL、3.5mg/mL~250mg/mL、3.6mg/mL~250mg/mL、3.7mg/mL~250mg/mL、3.8mg/mL~250mg/mL、3.9mg/mL~250mg/mL、4.0mg/mL~250mg/mL、5.0mg/mL~250mg/mL、6.0mg/mL~250mg/mL、7.0mg/mL~250mg/mL、8.0mg/mL~250mg/mL、9.0mg/mL~250mg/mL、10mg/mL~250mg/mL、15mg/mL~250mg/mL、20mg/mL~250mg/mL、25mg/mL~250mg/mL、30mg/mL~250mg/mL、35mg/mL~250mg/mL、40mg/mL~250mg/mL、45mg/mL~250mg/mL、50mg/mL~250mg/mL、55mg/mL~250mg/mL、60mg/mL~250mg/mL、65mg/mL~250mg/mL、70mg/mL~250mg/mL、75mg/mL~250mg/mL、80mg/mL~250mg/mL、85mg/mL~250mg/mL、90mg/mL~250mg/mL、95mg/mL~250mg/mL、100mg/mL~250mg/mL、105mg/mL~250mg/mL、110mg/mL~250mg/mL、115mg/mL~250mg/mL、120mg/mL~250mg/mL、125mg/mL~250mg/mL、130mg/mL~250mg/mL、135mg/mL~250mg/mL、140mg/mL~250mg/mL、145mg/mL~250mg/mL、150mg/mL~250mg/mL、155mg/mL~250mg/mL、160mg/mL~250mg/mL、165mg/mL~250mg/mL、170mg/mL~250mg/mL、175mg/mL~250mg/mL、180mg/mL~250mg/mL、185mg/mL~250mg/mL、190mg/mL~250mg/mL、195mg/mL~250mg/mL、200mg/mL~250mg/mL、205mg/mL~250mg/mL、210mg/mL~250mg/mL、215mg/mL~250mg/mL、220mg/mL~250mg/mL、225mg/mL~250mg/mL、230mg/mL~250mg/mL、235mg/mL~250mg/mL、240mg/mL~250mg/mLまたは245mg/mL~250mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する。
[0612]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、0.1mg/mL~250mg/mL、0.1mg/mL~245mg/mL、0.1mg/mL~240mg/mL、0.1mg/mL~235mg/mL、0.1mg/mL~230mg/mL、0.1mg/mL~225mg/mL、0.1mg/mL~220mg/mL、0.1mg/mL~215mg/mL、0.1mg/mL~210mg/mL、0.1mg/mL~205mg/mL、0.1mg/mL~200mg/mL、0.1mg/mL~195mg/mL、0.1mg/mL~190mg/mL、0.1mg/mL~185mg/mL、0.1mg/mL~180mg/mL、0.1mg/mL~175mg/mL、0.1mg/mL~170mg/mL、0.1mg/mL~165mg/mL、0.1mg/mL~160mg/mL、0.1mg/mL~155mg/mL、0.1mg/mL~150mg/mL、0.1mg/mL~145mg/mL、0.1mg/mL~140mg/mL、0.1mg/mL~135mg/mL、0.1mg/mL~130mg/mL、0.1mg/mL~125mg/mL、0.1mg/mL~120mg/mL、0.1mg/mL~115mg/mL、0.1mg/mL~110mg/mL、0.1mg/mL~100mg/mL、0.1mg/mL~95mg/mL、0.1mg/mL~90mg/mL、0.1mg/mL~85mg/mL、0.1mg/mL~80mg/mL、0.1mg/mL~75mg/mL、0.1mg/mL~70mg/mL、0.1mg/mL~65mg/mL、0.1mg/mL~60mg/mL、0.1mg/mL~55mg/mL、0.1mg/mL~50mg/mL、0.1mg/mL~45mg/mL、0.1mg/mL~40mg/mL、0.1mg/mL~35mg/mL、0.1mg/mL~30mg/mL、0.1mg/mL~25mg/mL、0.1mg/mL~20mg/mL、0.1mg/mL~15mg/mL、0.1mg/mL~10mg/mL、0.1mg/mL~9mg/mL、0.1mg/mL~8mg/mL、0.1mg/mL~7mg/mL、0.1mg/mL~6mg/mL、0.1mg/mL~5mg/mL、0.1mg/mL~4mg/mL、0.1mg/mL~3.9mg/mL、0.1mg/mL~3.8mg/mL、0.1mg/mL~3.7mg/mL、0.1mg/mL~3.6mg/mL、0.1mg/mL~3.5mg/mL、0.1mg/mL~3.4mg/mL、0.1mg/mL~3.3mg/mL、0.1mg/mL~3.2mg/mL、0.1mg/mL~3.1mg/mL、0.1mg/mL~3.0mg/mL、0.1mg/mL~2.9mg/mL、0.1mg/mL~2.8mg/mL、0.1mg/mL~2.7mg/mL、0.1mg/mL~2.6mg/mL、0.1mg/mL~2.5mg/mL、0.1mg/mL~2.4mg/mL、0.1mg/mL~2.3mg/mL、0.1mg/mL~2.2mg/mL、0.1mg/mL~2.1mg/mL、0.1mg/mL~2.0mg/mL、0.1mg/mL~1.9mg/mL、0.1mg/mL~1.8mg/mL、0.1mg/mL~1.7mg/mL、0.1mg/mL~1.6mg/mL、0.1mg/mL~1.5mg/mL、0.1mg/mL~1.4mg/mL、0.1mg/mL~1.3mg/mL、0.1mg/mL~1.2mg/mL、0.1mg/mL~1.1mg/mL、0.1mg/mL~1.0mg/mL、0.1mg/mL~0.9mg/mL、0.1mg/mL~0.8mg/mL、0.1mg/mL~0.7mg/mL、0.1mg/mL~0.6mg/mL、0.1mg/mL~0.5mg/mL、0.1mg/mL~0.4mg/mL、0.1mg/mL~0.3mg/mLまたは0.1mg/mL~0.2mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する。
[0613]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、希釈剤中に少なくとも0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249または250mg/mLの濃度に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、希釈剤中に最高で0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249または250mg/mLの濃度に可溶化または希釈される。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOは、希釈剤中に0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249または250mg/mLの濃度に可溶化または希釈される。
[0614]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOを、希釈剤中に希釈または可溶化するための使用説明書は、本明細書に記載されるASOを、0.1mg/mL~200mg/mLの濃度に希釈または可溶化するための使用説明書を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOを、希釈剤中に希釈または可溶化するための使用説明書は、本明細書に記載されるASOを、約0.1mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL、2.5mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL、6mg/mL、7mg/mL、8mg/mL、9mg/mL、10mg/mL、11mg/mL、12mg/mL、13mg/mL、14mg/mL、15mg/mL、16mg/mL、17mg/mL、18mg/mL、19mg/mLまたは20mg/mLの濃度に希釈または可溶化するための使用説明書を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOを、希釈剤中に希釈または可溶化するための使用説明書は、本明細書に記載されるASOを、約30mg/mL、40mg/mL、50mg/mL、60mg/mL、70mg/mL、80mg/mL、90mg/mL、100mg/mL、110mg/mL、120mg/mL、130mg/mL、140mg/mL、150mg/mL、160mg/mL、170mg/mL、180mg/mL、190mg/mLまたは200mg/mLの濃度に希釈または可溶化するための使用説明書を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOを、希釈剤中に希釈または可溶化するための使用説明書は、本明細書に記載されるASOを、希釈剤中に11mg/mL、22mg/mL、33mg/mL、44mg/mL、55mg/mL、66mg/mL、77mg/mL、88mg/mL、99mg/mLまたは100mg/mLの濃度に希釈または可溶化するための使用説明書を含む。
[0615]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOを、希釈剤中に希釈または可溶化するための使用説明書は、本明細書に記載されるASOを、0.1mg/mL~200mg/mL、0.2mg/mL~200mg/mL、0.3mg/mL~200mg/mL、0.4mg/mL~200mg/mL、0.5mg/mL~200mg/mL、0.6mg/mL~200mg/mL、0.7mg/mL~200mg/mL、0.8mg/mL~200mg/mL、0.9mg/mL~200mg/mL、1.0mg/mL~200mg/mL、1.1mg/mL~200mg/mL、1.2mg/mL~200mg/mL、1.3mg/mL~200mg/mL、1.4mg/mL~200mg/mL、1.5mg/mL~200mg/mL、1.6mg/mL~200mg/mL、1.7mg/mL~200mg/mL、1.8mg/mL~200mg/mL、1.9mg/mL~200mg/mL、2.0mg/mL~200mg/mL、2.1mg/mL~200mg/mL、2.2mg/mL~200mg/mL、2.3mg/mL~200mg/mL、2.4mg/mL~200mg/mL、2.5mg/mL~200mg/mL、2.6mg/mL~200mg/mL、2.7mg/mL~200mg/mL、2.8mg/mL~200mg/mL、2.9mg/mL~200mg/mL、3.0mg/mL~200mg/mL、3.1mg/mL~200mg/mL、3.2mg/mL~200mg/mL、3.3mg/mL~200mg/mL、3.4mg/mL~200mg/mL、3.5mg/mL~200mg/mL、3.6mg/mL~200mg/mL、3.7mg/mL~200mg/mL、3.8mg/mL~200mg/mL、3.9mg/mL~200mg/mL、4.0mg/mL~200mg/mL、5.0mg/mL~200mg/mL、6.0mg/mL~200mg/mL、7.0mg/mL~200mg/mL、8.0mg/mL~200mg/mL、9.0mg/mL~200mg/mL、10mg/mL~200mg/mL、15mg/mL~200mg/mL、20mg/mL~200mg/mL、25mg/mL~200mg/mL、30mg/mL~200mg/mL、35mg/mL~200mg/mL、40mg/mL~200mg/mL、45mg/mL~200mg/mL、50mg/mL~200mg/mL、55mg/mL~200mg/mL、60mg/mL~200mg/mL、65mg/mL~200mg/mL、70mg/mL~200mg/mL、75mg/mL~200mg/mL、80mg/mL~200mg/mL、85mg/mL~200mg/mL、90mg/mL~200mg/mL、95mg/mL~200mg/mL、100mg/mL~200mg/mL、105mg/mL~200mg/mL、110mg/mL~200mg/mL、115mg/mL~200mg/mL、120mg/mL~200mg/mL、125mg/mL~200mg/mL、130mg/mL~200mg/mL、135mg/mL~200mg/mL、140mg/mL~200mg/mL、145mg/mL~200mg/mL、150mg/mL~200mg/mL、155mg/mL~200mg/mL、160mg/mL~200mg/mL、165mg/mL~200mg/mL、170mg/mL~200mg/mL、175mg/mL~200mg/mL、180mg/mL~200mg/mL、185mg/mL~200mg/mL、190mg/mL~200mg/mLまたは195mg/mL~200mg/mLの濃度に希釈または可溶化するための使用説明書を含む。
[0616]一部の実施形態では、本明細書に記載されるASOを、希釈剤中に希釈または可溶化するための使用説明書は、本明細書に記載されるASOを、0.1mg/mL~200mg/mL、0.1mg/mL~195mg/mL、0.1mg/mL~190mg/mL、0.1mg/mL~185mg/mL、0.1mg/mL~180mg/mL、0.1mg/mL~175mg/mL、0.1mg/mL~170mg/mL、0.1mg/mL~165mg/mL、0.1mg/mL~160mg/mL、0.1mg/mL~155mg/mL、0.1mg/mL~150mg/mL、0.1mg/mL~145mg/mL、0.1mg/mL~140mg/mL、0.1mg/mL~135mg/mL、0.1mg/mL~130mg/mL、0.1mg/mL~125mg/mL、0.1mg/mL~120mg/mL、0.1mg/mL~115mg/mL、0.1mg/mL~110mg/mL、0.1mg/mL~100mg/mL、0.1mg/mL~95mg/mL、0.1mg/mL~90mg/mL、0.1mg/mL~85mg/mL、0.1mg/mL~80mg/mL、0.1mg/mL~75mg/mL、0.1mg/mL~70mg/mL、0.1mg/mL~65mg/mL、0.1mg/mL~60mg/mL、0.1mg/mL~55mg/mL、0.1mg/mL~50mg/mL、0.1mg/mL~45mg/mL、0.1mg/mL~40mg/mL、0.1mg/mL~35mg/mL、0.1mg/mL~30mg/mL、0.1mg/mL~25mg/mL、0.1mg/mL~20mg/mL、0.1mg/mL~15mg/mL、0.1mg/mL~10mg/mL、0.1mg/mL~9mg/mL、0.1mg/mL~8mg/mL、0.1mg/mL~7mg/mL、0.1mg/mL~6mg/mL、0.1mg/mL~5mg/mL、0.1mg/mL~4mg/mL、0.1mg/mL~3.9mg/mL、0.1mg/mL~3.8mg/mL、0.1mg/mL~3.7mg/mL、0.1mg/mL~3.6mg/mL、0.1mg/mL~3.5mg/mL、0.1mg/mL~3.4mg/mL、0.1mg/mL~3.3mg/mL、0.1mg/mL~3.2mg/mL、0.1mg/mL~3.1mg/mL、0.1mg/mL~3.0mg/mL、0.1mg/mL~2.9mg/mL、0.1mg/mL~2.8mg/mL、0.1mg/mL~2.7mg/mL、0.1mg/mL~2.6mg/mL、0.1mg/mL~2.5mg/mL、0.1mg/mL~2.4mg/mL、0.1mg/mL~2.3mg/mL、0.1mg/mL~2.2mg/mL、0.1mg/mL~2.1mg/mL、0.1mg/mL~2.0mg/mL、0.1mg/mL~1.9mg/mL、0.1mg/mL~1.8mg/mL、0.1mg/mL~1.7mg/mL、0.1mg/mL~1.6mg/mL、0.1mg/mL~1.5mg/mL、0.1mg/mL~1.4mg/mL、0.1mg/mL~1.3mg/mL、0.1mg/mL~1.2mg/mL、0.1mg/mL~1.1mg/mL、0.1mg/mL~1.0mg/mL、0.1mg/mL~0.9mg/mL、0.1mg/mL~0.8mg/mL、0.1mg/mL~0.7mg/mL、0.1mg/mL~0.6mg/mL、0.1mg/mL~0.5mg/mL、0.1mg/mL~0.4mg/mL、0.1mg/mL~0.3mg/mLまたは0.1mg/mL~0.2mg/mLの濃度に希釈または可溶化するための使用説明書を含む。
[0617]本開示の一態様は、本明細書に記載されるASOを含むキットに関する。キットは、1つまたは複数の追加の治療レジメンまたは薬剤をさらに含み得る。
[0618]また、一部の実施形態では、本明細書で記載される1つまたは複数の方法を用いて使用するためのキットおよび製造品も本明細書で開示される。このようなキットは、1つもしくは複数の容器、例えば、バイアル、チューブなどを受け入れるように区分けされている運搬体、パッケージまたは容器を含み、容器の各々は、本明細書で記載される方法において使用されるべき別個の要素のうち1つを含む。適した容器として、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、試験管が挙げられる。一実施形態では、容器は、さまざまな材料、例えば、ガラスまたはプラスチックから形成される。
[0618]また、一部の実施形態では、本明細書で記載される1つまたは複数の方法を用いて使用するためのキットおよび製造品も本明細書で開示される。このようなキットは、1つもしくは複数の容器、例えば、バイアル、チューブなどを受け入れるように区分けされている運搬体、パッケージまたは容器を含み、容器の各々は、本明細書で記載される方法において使用されるべき別個の要素のうち1つを含む。適した容器として、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、試験管が挙げられる。一実施形態では、容器は、さまざまな材料、例えば、ガラスまたはプラスチックから形成される。
[0619]本明細書で提供される製造品は、パッケージング材料を含有する。医薬品パッケージング材料の例として、それだけには限らないが、ブリスターパック、ボトル、チューブ、バッグ、容器、ボトルならびに選択された製剤および意図された投与および処置様式に適した任意のパッケージング材料が挙げられる。
[0620]例えば、容器(複数可)は、本発明の組成物を、任意選択でさらに本明細書で開示される治療レジメンまたは薬剤とともに含む。このようなキットは、任意選択で、本明細書で記載される方法におけるその使用に関連する、識別する記載またはラベルまたは使用説明書を含む。
[0621]キットは、通常、内容物および/または使用のための使用説明書を記載するラベルならびに使用のための使用説明書を含む添付文書を含む。使用説明書のセットも通常含まれる。
[0622]一部の実施形態では、ラベルは、容器上にあるか、または容器と関連している。一実施形態では、ラベルは、ラベルを形成する文字(letters)、数字または他の文字(characters)が、容器自体に付着、成形またはエッチングされている場合、容器上にあり、ラベルは、容器を保持することもする容器(receptacle)または運搬体内に、例えば、添付文書として存在する場合、容器と関連している。一実施形態では、ラベルは、内容物が特定の治療適用のために使用されるべきであるということを示すために使用される。ラベルはまた、本明細書で記載される方法などにおける内容物の使用法を示す。
[0623]本開示は、以下の実施例によってより具体的に例証される。しかしながら、本開示は、これらの実施例によっていずれかの方法で限定されるものではないことを理解されたい。
実施例1:TANGOのメカニズム(核遺伝子出力の標的化された増強)
[0624]TANGOは、天然に存在する非生産的選択的スプライシング事象を標的化することにより、ASOを用いてタンパク質発現を特異的に増加させる。TANGOは、通常、図1Aおよび1Bに示されるように、ナンセンス変異依存mRNA崩壊(NMD)による分解に対して標的化される非生産的メッセンジャーRNA(mRNA)を低減することができる。次に、TANGOは、生産的なmRNAおよびタンパク質を増加させることができる。TANGOは、内因性遺伝子発現を伴う組織において、標準の標的mRNAおよび完全長タンパク質の発現を特異的に増加させることができる。これらの事象は天然に存在するため、TANGOは、常染色体優性半数体不全の状況下で野生型対立遺伝子を上方制御することができ、したがって、疾患を処置する潜在的に固有の機会を提供する。
[0624]TANGOは、天然に存在する非生産的選択的スプライシング事象を標的化することにより、ASOを用いてタンパク質発現を特異的に増加させる。TANGOは、通常、図1Aおよび1Bに示されるように、ナンセンス変異依存mRNA崩壊(NMD)による分解に対して標的化される非生産的メッセンジャーRNA(mRNA)を低減することができる。次に、TANGOは、生産的なmRNAおよびタンパク質を増加させることができる。TANGOは、内因性遺伝子発現を伴う組織において、標準の標的mRNAおよび完全長タンパク質の発現を特異的に増加させることができる。これらの事象は天然に存在するため、TANGOは、常染色体優性半数体不全の状況下で野生型対立遺伝子を上方制御することができ、したがって、疾患を処置する潜在的に固有の機会を提供する。
実施例2:マウスへのアンチセンスオリゴマーASO-22の実験的投与
[0625]マウスにASO-22またはビヒクル(PBS)の単回脳室内(ICV)注射を出生後P2またはP14日に投与した。生存について14週間にわたってマウスをモニタリングした。発作をモニタリングするために、マウスに8201-EEGヘッドマウント(Pinnacle Technology,Inc.、Lawrence、KS)を移植し、発作活性をP22-P46から連続的にモニタリングした。ASO-22測定:ASO-22レベルは、液体クロマトグラフィー質量分析(LCMS)により測定された。SCN1A遺伝子発現測定 Taqman qPCRアッセイを用いて、生産的Scn1a mRNA転写物を測定した。NaV1.1タンパク質測定:NaV1.1タンパク質は、標準として野生型マウス脳組織溶解物におけるNaV1.1発現を利用するメソスケールディスカバリー電気化学発光(MSD-ECL)アッセイを用いて測定された。
[0625]マウスにASO-22またはビヒクル(PBS)の単回脳室内(ICV)注射を出生後P2またはP14日に投与した。生存について14週間にわたってマウスをモニタリングした。発作をモニタリングするために、マウスに8201-EEGヘッドマウント(Pinnacle Technology,Inc.、Lawrence、KS)を移植し、発作活性をP22-P46から連続的にモニタリングした。ASO-22測定:ASO-22レベルは、液体クロマトグラフィー質量分析(LCMS)により測定された。SCN1A遺伝子発現測定 Taqman qPCRアッセイを用いて、生産的Scn1a mRNA転写物を測定した。NaV1.1タンパク質測定:NaV1.1タンパク質は、標準として野生型マウス脳組織溶解物におけるNaV1.1発現を利用するメソスケールディスカバリー電気化学発光(MSD-ECL)アッセイを用いて測定された。
実施例3:出生後2日目のASO-22投与後のマウスの生存のモニタリング
[0626]ASO-22を投与した後の生存についてマウス群をモニタリングした。図2は、ドラベマウスモデルにおいて、ASOを標的化するSCN1A(「ASO-22」と呼ばれる)によって提供される100%の長期生存利益を示す例示的な生存曲線を示す。WTおよびヘテロ接合ドラベマウス(+/-)、129S-scn1atm1Kea×C57BL/6J交配からのF1子孫は、20μgのPBSまたはASO-22のICV単回用量注射を出生後2日目に盲検的に受け、それらの生存を14週間までモニタリングした。図示されるように、PBS処置を受けたドラベマウスは、出生後20日目頃から死亡し始めたが、一方、ASO-22処置を受けたドラベマウス群を含む他の3つの群の全てのマウスは、少なくとも70日間生存した。DSおよびWT同腹仔マウスを生存について14週間までモニタリングしたことを示すカプランマイヤー曲線。ASO-22の投与は、有意に(p<0.0001;図2において****=p<0.0001)、ドラベマウスモデルにおける生存率を改善した。33/34匹が14週まで生存したのに対し、PBS処置群では14/62匹であった。P2でのASO-22投与は、DSマウスモデルにおいてSUDEP(てんかんの突然の予期せぬ死亡)を予防することができた。
[0626]ASO-22を投与した後の生存についてマウス群をモニタリングした。図2は、ドラベマウスモデルにおいて、ASOを標的化するSCN1A(「ASO-22」と呼ばれる)によって提供される100%の長期生存利益を示す例示的な生存曲線を示す。WTおよびヘテロ接合ドラベマウス(+/-)、129S-scn1atm1Kea×C57BL/6J交配からのF1子孫は、20μgのPBSまたはASO-22のICV単回用量注射を出生後2日目に盲検的に受け、それらの生存を14週間までモニタリングした。図示されるように、PBS処置を受けたドラベマウスは、出生後20日目頃から死亡し始めたが、一方、ASO-22処置を受けたドラベマウス群を含む他の3つの群の全てのマウスは、少なくとも70日間生存した。DSおよびWT同腹仔マウスを生存について14週間までモニタリングしたことを示すカプランマイヤー曲線。ASO-22の投与は、有意に(p<0.0001;図2において****=p<0.0001)、ドラベマウスモデルにおける生存率を改善した。33/34匹が14週まで生存したのに対し、PBS処置群では14/62匹であった。P2でのASO-22投与は、DSマウスモデルにおいてSUDEP(てんかんの突然の予期せぬ死亡)を予防することができた。
実施例4:マウスにおける発作のモニタリング
[0627]発作をモニタリングするために、マウスにEEG記録を行った。図3は、DSマウス(n=21匹/群)およびそれらのWT同腹仔(n=11~12匹/群)におけるEEG発作モニタリング研究に関する実験デザインを示す。マウスは、P2でASO-22またはPBSビヒクルの20μgICV注射を受け、P20でEEGヘッドマウントの手術を受け、P22からP46までEEGにより連続的にモニタリングされた。ASO-22を注射されたWTマウスは、モニタリング期間を通して正常なEEGを有した(データを示さず)。図4Aは、前頭皮質、海馬、および頭頂皮質を含む、PBS注射されたDSマウスの脳の異なる部分において記録された発作事象中の3つのチャネルからの代表的なトレースを示す。図4Bに示されるように、マウスにおいて記録された自発性発作の数は、強固な発作消失を示すDSマウスにおいて有意に低減することが示された。全マウスにおいて、発作は、脳の異なる領域で得られた同様のデータによって観察されたように、主に全身性であった。図4Cは、PBS(n=21)またはASO-22(n=21)を投薬されたDSマウスにおいて、P22とP46の間に記録された自発性発作(全身性および局所性)の総数におけるASO-22の効果の概要である。*p<0.05を示す。さらに、図4Dに示されるように、無発作マウスの数は、P2でのASO-22投与後に増加したが、一方、2回以上の発作を有するマウスの数は、対照と比較して減少した。野生型マウスは、処置にかかわらずいずれの発作も有しなかった。出生後2日目にASO-22を投与後に発作を経験せず、出生後22日目から46日目の間にEEGによってモニタリングされたマウス数が50%増加した(76%対48%)。出生後2日目のASO-22を投与後に2回以上の発作を経験したマウスの数は、プラセボと比較して低減した(14%対38%)。ASO-22による処置後の出生後22日目から46日目までに検出された自発性発作の平均数は、プラセボと比較して80%低減した(3対15)(p<0.05)。P14でのASO-22投与は、DSマウスモデルにおいてSUDEPを有意に低減させることができた。さらに、ASO-22の投与は、記録期間中にDSマウスの最初の発作までの潜時を有意に延長した(p<0.05、図4E)。ASO-22投与後の評価期間中、無発作のDSマウス数の増加(48%PBS対76%ASO-22)および2回以上の発作を伴うDSマウス数の減少(38%PBS対14%ASO-22)を示唆する統計学的に有意でない傾向があった。
[0627]発作をモニタリングするために、マウスにEEG記録を行った。図3は、DSマウス(n=21匹/群)およびそれらのWT同腹仔(n=11~12匹/群)におけるEEG発作モニタリング研究に関する実験デザインを示す。マウスは、P2でASO-22またはPBSビヒクルの20μgICV注射を受け、P20でEEGヘッドマウントの手術を受け、P22からP46までEEGにより連続的にモニタリングされた。ASO-22を注射されたWTマウスは、モニタリング期間を通して正常なEEGを有した(データを示さず)。図4Aは、前頭皮質、海馬、および頭頂皮質を含む、PBS注射されたDSマウスの脳の異なる部分において記録された発作事象中の3つのチャネルからの代表的なトレースを示す。図4Bに示されるように、マウスにおいて記録された自発性発作の数は、強固な発作消失を示すDSマウスにおいて有意に低減することが示された。全マウスにおいて、発作は、脳の異なる領域で得られた同様のデータによって観察されたように、主に全身性であった。図4Cは、PBS(n=21)またはASO-22(n=21)を投薬されたDSマウスにおいて、P22とP46の間に記録された自発性発作(全身性および局所性)の総数におけるASO-22の効果の概要である。*p<0.05を示す。さらに、図4Dに示されるように、無発作マウスの数は、P2でのASO-22投与後に増加したが、一方、2回以上の発作を有するマウスの数は、対照と比較して減少した。野生型マウスは、処置にかかわらずいずれの発作も有しなかった。出生後2日目にASO-22を投与後に発作を経験せず、出生後22日目から46日目の間にEEGによってモニタリングされたマウス数が50%増加した(76%対48%)。出生後2日目のASO-22を投与後に2回以上の発作を経験したマウスの数は、プラセボと比較して低減した(14%対38%)。ASO-22による処置後の出生後22日目から46日目までに検出された自発性発作の平均数は、プラセボと比較して80%低減した(3対15)(p<0.05)。P14でのASO-22投与は、DSマウスモデルにおいてSUDEPを有意に低減させることができた。さらに、ASO-22の投与は、記録期間中にDSマウスの最初の発作までの潜時を有意に延長した(p<0.05、図4E)。ASO-22投与後の評価期間中、無発作のDSマウス数の増加(48%PBS対76%ASO-22)および2回以上の発作を伴うDSマウス数の減少(38%PBS対14%ASO-22)を示唆する統計学的に有意でない傾向があった。
実施例5:マウス脳におけるASO-22曝露およびタンパク質発現レベルの検出
[0628]ASOの脳組織への曝露を検出し、脳組織中のタンパク質発現レベルを検出するためにマウス脳を収集した。図5Aは実験のタイムラインを示す。野生型(WT)または129S-scn1atm1Kea×C57BL/6J交配からのヘテロ接合ドラベマウス(HET)F1マウスを、20μgのASO-22またはPBSの出生後2日目に脳室内(ICV)注射に供した。マウスの脳は、全マウス群のマウスのサブセットから7週目に収集された。2回目の脳の収集は、全マウス群の別のサブセットのマウスから14週目に行われた。脳組織は、液体クロマトグラフィー-質量分析(LC-MS)を用いて測定した場合、ASO-22(7週間で約13μg/g;図5B、および14週間で約8μg/g;図5E)への頑強であり、長期持続する曝露を有することが示された。Scn1a産生転写物の発現レベルは、7週間(図5C)および14週間(図5F)でWTとDSマウスの両方で約1.5~2倍までASO-22投与後に増加した。図5D(7週間)および図5G(14週間)は、ASO-22処置されたDSマウスにおいてNaV1.1タンパク質の増加を示す。NaV1.1タンパク質は、ASO-22処置DSマウス脳において、7週間と14週間でPBS処置されたWT脳と区別できないレベルまで増加した。ASO-22を注射されたWT動物の脳内のNaV1.1タンパク質はまた、PBSで処置されたWTマウスに比べて増加したが、明らかな有害効果はなかった。
[0628]ASOの脳組織への曝露を検出し、脳組織中のタンパク質発現レベルを検出するためにマウス脳を収集した。図5Aは実験のタイムラインを示す。野生型(WT)または129S-scn1atm1Kea×C57BL/6J交配からのヘテロ接合ドラベマウス(HET)F1マウスを、20μgのASO-22またはPBSの出生後2日目に脳室内(ICV)注射に供した。マウスの脳は、全マウス群のマウスのサブセットから7週目に収集された。2回目の脳の収集は、全マウス群の別のサブセットのマウスから14週目に行われた。脳組織は、液体クロマトグラフィー-質量分析(LC-MS)を用いて測定した場合、ASO-22(7週間で約13μg/g;図5B、および14週間で約8μg/g;図5E)への頑強であり、長期持続する曝露を有することが示された。Scn1a産生転写物の発現レベルは、7週間(図5C)および14週間(図5F)でWTとDSマウスの両方で約1.5~2倍までASO-22投与後に増加した。図5D(7週間)および図5G(14週間)は、ASO-22処置されたDSマウスにおいてNaV1.1タンパク質の増加を示す。NaV1.1タンパク質は、ASO-22処置DSマウス脳において、7週間と14週間でPBS処置されたWT脳と区別できないレベルまで増加した。ASO-22を注射されたWT動物の脳内のNaV1.1タンパク質はまた、PBSで処置されたWTマウスに比べて増加したが、明らかな有害効果はなかった。
実施例6:出生後2日目のASO-22投与後のマウスの生存のモニタリング
[0629]P14にASO-22を投与した後、マウス群の生存をモニタリングした。図6Aは、P14に注射され、P90までモニタリングされたマウスを用いた研究デザインのスケジュールを示す。図6Bは、ドラベマウスモデルにおいてASOを標的化するSCN1Aによって提供される長期生存利益を示す例示的な生存曲線を示す。WTとヘテロ接合ドラベマウス(+/-)、129S-scn1atm1Kea×C57BL/6J交配からのF1子孫は、出生後14日目(疾患発症の時間あたりであった)に盲検的に60μgのPBSまたはASOの単回用量ICV注射を受け、それらの生存はP90までモニタリングされた。図示されるように、PBS処置を受けたドラベマウスは、出生後20日目頃から死亡し始め、ASO-22で処置されたDSマウスよりもP90で低い生存率をもたらした。PBS処置されたDSマウスの47/74匹はP90まで生存したが、ASO-22処置されたDSマウスの45/53匹(p<0.005)はP90まで生存した。
[0629]P14にASO-22を投与した後、マウス群の生存をモニタリングした。図6Aは、P14に注射され、P90までモニタリングされたマウスを用いた研究デザインのスケジュールを示す。図6Bは、ドラベマウスモデルにおいてASOを標的化するSCN1Aによって提供される長期生存利益を示す例示的な生存曲線を示す。WTとヘテロ接合ドラベマウス(+/-)、129S-scn1atm1Kea×C57BL/6J交配からのF1子孫は、出生後14日目(疾患発症の時間あたりであった)に盲検的に60μgのPBSまたはASOの単回用量ICV注射を受け、それらの生存はP90までモニタリングされた。図示されるように、PBS処置を受けたドラベマウスは、出生後20日目頃から死亡し始め、ASO-22で処置されたDSマウスよりもP90で低い生存率をもたらした。PBS処置されたDSマウスの47/74匹はP90まで生存したが、ASO-22処置されたDSマウスの45/53匹(p<0.005)はP90まで生存した。
実施例7:マウス脳におけるASO-22曝露およびタンパク質発現レベルの検出
[0630]ASOの脳組織への曝露を検出し、脳組織中のタンパク質発現レベルを検出するために、マウス脳を収集した。図7Aは実験のタイムラインを示す。野生型(WT)または129S-scn1atm1Kea×C57BL/6J交配からのヘテロ接合ドラベマウス(HET)F1マウスを、60μgのASO-22またはPBSの出生後14日目に脳室内(ICV)注射に供した。マウスの脳は、全マウス群のマウスのサブセットからP35で収集された。2回目の脳の収集は、全マウス群の別のサブセットのマウスからP90で行われた。脳組織は、LCMSを用いて測定した場合、ASO-22(P35で約36μg/g;図7AおよびP90で約10μg/g;図7D)への頑強であり、長時間持続する曝露を有することが示された。Scn1a産生転写物の発現レベルは、P90(図7E)でWTとDSマウスの両方で約1.5倍までASO-22投与後に増加し、P35では有意な変化はなかった(図7B)。図7Fは、P90でASO-22処置されたDSマウスにおけるNaV1.1タンパク質の増加を示し、P35では有意な変化はなかった(図7C)。NaV1.1タンパク質は、ASO-22処置されたDSマウス脳において、P90でPBS処置されたWT脳と区別することができないレベルまで増加した。ASO-22を注射されたWT動物の脳内のNaV1.1タンパク質はまた、PBSで処置されたWTマウスに比べて増加したが、明らかな有害効果はなかった。
[0630]ASOの脳組織への曝露を検出し、脳組織中のタンパク質発現レベルを検出するために、マウス脳を収集した。図7Aは実験のタイムラインを示す。野生型(WT)または129S-scn1atm1Kea×C57BL/6J交配からのヘテロ接合ドラベマウス(HET)F1マウスを、60μgのASO-22またはPBSの出生後14日目に脳室内(ICV)注射に供した。マウスの脳は、全マウス群のマウスのサブセットからP35で収集された。2回目の脳の収集は、全マウス群の別のサブセットのマウスからP90で行われた。脳組織は、LCMSを用いて測定した場合、ASO-22(P35で約36μg/g;図7AおよびP90で約10μg/g;図7D)への頑強であり、長時間持続する曝露を有することが示された。Scn1a産生転写物の発現レベルは、P90(図7E)でWTとDSマウスの両方で約1.5倍までASO-22投与後に増加し、P35では有意な変化はなかった(図7B)。図7Fは、P90でASO-22処置されたDSマウスにおけるNaV1.1タンパク質の増加を示し、P35では有意な変化はなかった(図7C)。NaV1.1タンパク質は、ASO-22処置されたDSマウス脳において、P90でPBS処置されたWT脳と区別することができないレベルまで増加した。ASO-22を注射されたWT動物の脳内のNaV1.1タンパク質はまた、PBSで処置されたWTマウスに比べて増加したが、明らかな有害効果はなかった。
実施例8:カニクイザルへのASO投与
[0631]2~3歳のナイーブカニクイザルに、最初の試験日に人工脳脊髄液(aCSF)、または1もしくは2用量レベルのASO-22アンチセンスオリゴマー(ASO)の単回腰椎髄腔内ボーラス(IT-L)注射を投与した。げっ歯類におけるScn1aの非生産的選択的スプライシング事象の標的化に活性を示す最適化されたASOの2つの用量レベルは、カニクイザルにおいて安全性、脳生物学的分布、標的関与および薬力学について評価された。ASOの単回腰椎髄腔内ボーラス注射(IT-L)後、動物を屠殺し、ASO、Scn1a mRNAおよびNaV1.1タンパク質レベルを3日目(投与後48時間)および29日目(投与後28日)に測定した。図8は、例示的な試験に使用された動物の処置、投薬および量を示す。
[0631]2~3歳のナイーブカニクイザルに、最初の試験日に人工脳脊髄液(aCSF)、または1もしくは2用量レベルのASO-22アンチセンスオリゴマー(ASO)の単回腰椎髄腔内ボーラス(IT-L)注射を投与した。げっ歯類におけるScn1aの非生産的選択的スプライシング事象の標的化に活性を示す最適化されたASOの2つの用量レベルは、カニクイザルにおいて安全性、脳生物学的分布、標的関与および薬力学について評価された。ASOの単回腰椎髄腔内ボーラス注射(IT-L)後、動物を屠殺し、ASO、Scn1a mRNAおよびNaV1.1タンパク質レベルを3日目(投与後48時間)および29日目(投与後28日)に測定した。図8は、例示的な試験に使用された動物の処置、投薬および量を示す。
[0632]投薬後、動物は、標準的な臨床的および神経学的観察を受け、血液試料を収集した。剖検時にCSFおよび脳を収集した。ASO-22濃度レベル、遺伝子発現およびタンパク質発現測定のために、様々な領域の別々のパンチを収集した。ASO-22レベルは、組織中の液体クロマトグラフィー質量分析(LCMS)ならびに血漿およびCSF中のハイブリダイゼーション酵素結合免疫吸着測定法(HELISA)により測定された。SCN1A遺伝子発現測定を行うために、Taqman qPCRを用いて生産的および非生産的(NMD誘導性)Scn1a mRNA転写物を測定した。NaV1.1タンパク質は、標準としてNaV1.1の組換え断片を利用するメソスケールディスカバリー電気化学発光(MSD-ECL)アッセイを用いて測定された。ASOは、両用量レベルで良好な耐容性を示し、身体的および神経学的検査に変化はなく、摂餌量、体重、肝機能または血小板数に変化もなく、補体系活性化もなく、検査した全組織において異常な組織病理学的変化もなかった。
実施例9:カニクイザルの脳組織におけるASO-22 ASOの検出
[0633]2~3歳のナイーブカニクイザルの脳を、LCMSを用いてASO-22ASOのレベルについて分析した。カニクイザルを研究3日目および研究29日目に屠殺し、様々な用量について様々な脳組織中のASO-22レベルを観察した。図9Aは、研究3日目のサルの脳の様々な部位におけるASO-22のレベルを示す。低用量では、ASO-22曝露は、大部分の脳領域において定量限界(BLQ)未満であった。高用量では、ASO-22が検出可能であり、主に皮質および小脳で検出された。図9Bは、研究29日目のASO-22のレベルを示す。低用量では、脳組織曝露量は大部分の脳領域でBLQであった。高用量レベルでは、大脳皮質領域の曝露は、全般的に深部構造よりも高く、曝露のレベルは、全般的に3日目から増加した。ASO-22は、高用量レベルで非ヒト霊長類脳に広く分布することが観察されている。
[0633]2~3歳のナイーブカニクイザルの脳を、LCMSを用いてASO-22ASOのレベルについて分析した。カニクイザルを研究3日目および研究29日目に屠殺し、様々な用量について様々な脳組織中のASO-22レベルを観察した。図9Aは、研究3日目のサルの脳の様々な部位におけるASO-22のレベルを示す。低用量では、ASO-22曝露は、大部分の脳領域において定量限界(BLQ)未満であった。高用量では、ASO-22が検出可能であり、主に皮質および小脳で検出された。図9Bは、研究29日目のASO-22のレベルを示す。低用量では、脳組織曝露量は大部分の脳領域でBLQであった。高用量レベルでは、大脳皮質領域の曝露は、全般的に深部構造よりも高く、曝露のレベルは、全般的に3日目から増加した。ASO-22は、高用量レベルで非ヒト霊長類脳に広く分布することが観察されている。
実施例10:カニクイザルの脳組織におけるNaV1.1発現の検出
[0634]2~3歳のナイーブカニクイザルの脳をNaV1.1発現レベルについて分析した。カニクイザルを研究3日目および研究29日目に屠殺し、様々な用量について様々な脳組織中のNaV1.1の発現レベルを観察した。図10Aは、研究3日目のサルの脳の様々な部位におけるASO-22のレベルを示す。評価した全ての脳領域は、測定可能なレベルのNaV1.1を有し、中脳、運動皮質、後頭皮質および運動皮質が最も高かった。低用量または高用量レベルのASO-22では、脳組織中のNaV1.1レベルに変化は観察されなかったかまたはわずかな変化であった。図10Bは、研究29日目のASO-22のレベルを示す。低用量のASO-22では、脳組織中のNaV1.1レベルに変化は認められなかったかまたはわずかな変化であった。高用量のASO-22では、NaV1.1タンパク質レベルは、運動皮質、後頭皮質、頭頂皮質、前頭前皮質において、aCSF処置動物と比較して1.2~3倍増加した。
[0634]2~3歳のナイーブカニクイザルの脳をNaV1.1発現レベルについて分析した。カニクイザルを研究3日目および研究29日目に屠殺し、様々な用量について様々な脳組織中のNaV1.1の発現レベルを観察した。図10Aは、研究3日目のサルの脳の様々な部位におけるASO-22のレベルを示す。評価した全ての脳領域は、測定可能なレベルのNaV1.1を有し、中脳、運動皮質、後頭皮質および運動皮質が最も高かった。低用量または高用量レベルのASO-22では、脳組織中のNaV1.1レベルに変化は観察されなかったかまたはわずかな変化であった。図10Bは、研究29日目のASO-22のレベルを示す。低用量のASO-22では、脳組織中のNaV1.1レベルに変化は認められなかったかまたはわずかな変化であった。高用量のASO-22では、NaV1.1タンパク質レベルは、運動皮質、後頭皮質、頭頂皮質、前頭前皮質において、aCSF処置動物と比較して1.2~3倍増加した。
実施例11:カニクイザルの脳組織におけるSCN1A発現の検出
[0635]2~3歳のナイーブカニクイザルの脳をSCN1A発現レベルについて分析した。ASO-22 ASOの標的結合を評価するために、生産的SCN1A遺伝子のレベルおよび総SCN1A遺伝子発現のレベルを決定した。カニクイザルを研究3日目および研究29日目に屠殺し、様々な用量について様々な脳組織におけるSCN1Aの発現レベルを観察した。図11Aは、研究3日目のサルの脳の様々な領域における生産的SCN1A遺伝子発現/総SCN1A遺伝子発現のパーセンテージを示す。いずれの脳領域についても、3日目の対照aCSF発現と比較して、いずれの投薬量でも生産的遺伝子発現のパーセンテージに有意な変化は観察されず、限定された標的関与が起こったことを示す。図11Bは、研究29日目のサルの脳の様々な領域における生産的SCN1A遺伝子発現/総SCN1A遺伝子発現のパーセンテージを示す。生産的SCN1A遺伝子発現/総SCN1A遺伝子発現の測定により決定した場合、有意な標的関与が、ASO-22の高用量で29日目に前頭前皮質、頭頂皮質、後頭皮質および大脳辺縁葉で観察された。
[0635]2~3歳のナイーブカニクイザルの脳をSCN1A発現レベルについて分析した。ASO-22 ASOの標的結合を評価するために、生産的SCN1A遺伝子のレベルおよび総SCN1A遺伝子発現のレベルを決定した。カニクイザルを研究3日目および研究29日目に屠殺し、様々な用量について様々な脳組織におけるSCN1Aの発現レベルを観察した。図11Aは、研究3日目のサルの脳の様々な領域における生産的SCN1A遺伝子発現/総SCN1A遺伝子発現のパーセンテージを示す。いずれの脳領域についても、3日目の対照aCSF発現と比較して、いずれの投薬量でも生産的遺伝子発現のパーセンテージに有意な変化は観察されず、限定された標的関与が起こったことを示す。図11Bは、研究29日目のサルの脳の様々な領域における生産的SCN1A遺伝子発現/総SCN1A遺伝子発現のパーセンテージを示す。生産的SCN1A遺伝子発現/総SCN1A遺伝子発現の測定により決定した場合、有意な標的関与が、ASO-22の高用量で29日目に前頭前皮質、頭頂皮質、後頭皮質および大脳辺縁葉で観察された。
実施例12:カニクイザルの血漿およびCSF中のASO-22 ASOの検出
[0636]2~3歳のナイーブカニクイザルの血漿およびCSFは、ASO-22の髄腔内投与後のASO-22のレベルについて分析された。図12Aは、低用量および高用量についてサルにおけるASO-22の血漿薬物動態を示す。血漿レベルは、投与1時間後から投与29日後までの時間点で観察された。ASO-22は、低用量では約1時間(収集の初回)、高用量では2時間で平均ピーク血漿レベルに達した。濃度は二相性に低下した。各化合物のピークおよび総曝露量は、用量の増加に伴って増加した。投薬前およびaCSF投薬試料中のASO-22の測定されたレベルは、各アッセイの定量限界未満であった。
[0636]2~3歳のナイーブカニクイザルの血漿およびCSFは、ASO-22の髄腔内投与後のASO-22のレベルについて分析された。図12Aは、低用量および高用量についてサルにおけるASO-22の血漿薬物動態を示す。血漿レベルは、投与1時間後から投与29日後までの時間点で観察された。ASO-22は、低用量では約1時間(収集の初回)、高用量では2時間で平均ピーク血漿レベルに達した。濃度は二相性に低下した。各化合物のピークおよび総曝露量は、用量の増加に伴って増加した。投薬前およびaCSF投薬試料中のASO-22の測定されたレベルは、各アッセイの定量限界未満であった。
[0637]図12Bは、3日目および29日目のカニクイザルCSF中のASO-22レベルを示す。3日目には、低用量群と高用量群で観察されたCSF曝露は同様であった。CSF ASO-22レベルは、両用量について3日目から29日目に顕著に減少し、この期間中の分布からクリアランス相への移行を示唆した。平均曝露レベルはばらつきがあったが、29日目には高用量群の方が低用量群よりわずかに高かった。
実施例13:次世代シークエンシングを用いたRNAseqによるSCN1A転写物中のNMD誘導エクソン含有事象の同定
[0638]全トランスクリプトームショットガン配列決定は、NIE含有事象を同定するためにSCN1A遺伝子により産生された転写物のスナップショットを明らかにするために、次世代シークエンシングを用いて行われた。この目的のために、HCN(ヒト皮質ニューロン)の核および細胞質画分からのポリA+RNAを単離し、IlluminaのTruSeqストランドmRNAライブラリーPrepキットを用いてcDNAライブラリーを構築した。ライブラリーを対末端配列決定し、ヒトゲノムにマッピングされた100ヌクレオチドの読み取りを得た(2009年2月、GRCh37/hg19アセンブリ)。簡単に説明すると、マッピングされた読み取りは、UCSCゲノムブラウザー(UCSCゲノムインフォマティクスグループ(Center for Biomolecular Science & Engineering、University of California、Santa Cruz、1156 High Street、Santa Cruz、CA 95064)によって操作され、例えば、Rosenbloomら、2015年、「The UCSC Genome Browser database:2015 update」、Nucleic Acids Research 43巻、Database Issue、doi:10.1093/nar/gku1177に記載される)を用いて視覚化され、読み取りの範囲と数はピークシグナルから推測することができる。ピークの高さは、特定の領域における読み取りの密度によって与えられる発現レベルを示す。上段パネルは、スケールに合わせたSCN1A遺伝子のグラフ表示を示す。100種の脊椎動物種にわたる保存レベルはピークとして示される。最も高いピークはエクソン(黒枠)に対応するが、一方、大部分のイントロン(矢印の頭線)ではピークは観察されない。保存のピークは、中央のパネルに示されるイントロン20(NM_006920)において同定された。保存された配列を調査により、3’および5’スプライス部位(下線のある配列)に隣接された64bpのエクソン様配列(下段パネル、灰色で強調された配列)として同定された。このエクソンの含有は、フレームシフトをもたらし、エクソン21に未成熟な終止コドンの導入は、転写物をNMDの標的とする。
[0638]全トランスクリプトームショットガン配列決定は、NIE含有事象を同定するためにSCN1A遺伝子により産生された転写物のスナップショットを明らかにするために、次世代シークエンシングを用いて行われた。この目的のために、HCN(ヒト皮質ニューロン)の核および細胞質画分からのポリA+RNAを単離し、IlluminaのTruSeqストランドmRNAライブラリーPrepキットを用いてcDNAライブラリーを構築した。ライブラリーを対末端配列決定し、ヒトゲノムにマッピングされた100ヌクレオチドの読み取りを得た(2009年2月、GRCh37/hg19アセンブリ)。簡単に説明すると、マッピングされた読み取りは、UCSCゲノムブラウザー(UCSCゲノムインフォマティクスグループ(Center for Biomolecular Science & Engineering、University of California、Santa Cruz、1156 High Street、Santa Cruz、CA 95064)によって操作され、例えば、Rosenbloomら、2015年、「The UCSC Genome Browser database:2015 update」、Nucleic Acids Research 43巻、Database Issue、doi:10.1093/nar/gku1177に記載される)を用いて視覚化され、読み取りの範囲と数はピークシグナルから推測することができる。ピークの高さは、特定の領域における読み取りの密度によって与えられる発現レベルを示す。上段パネルは、スケールに合わせたSCN1A遺伝子のグラフ表示を示す。100種の脊椎動物種にわたる保存レベルはピークとして示される。最も高いピークはエクソン(黒枠)に対応するが、一方、大部分のイントロン(矢印の頭線)ではピークは観察されない。保存のピークは、中央のパネルに示されるイントロン20(NM_006920)において同定された。保存された配列を調査により、3’および5’スプライス部位(下線のある配列)に隣接された64bpのエクソン様配列(下段パネル、灰色で強調された配列)として同定された。このエクソンの含有は、フレームシフトをもたらし、エクソン21に未成熟な終止コドンの導入は、転写物をNMDの標的とする。
[0639]例示的なSCN1A遺伝子、プレmRNA、エクソン、およびイントロンの配列を表1にまとめる。各エクソンまたはイントロンの配列を表2にまとめる。
実施例14:SCN1Aエクソン20x領域ASOウォーク
[0640]3’スプライス部位のすぐ上流であり、3’スプライス部位を超え、エクソン20x、5’スプライス部位を超え、および5’スプライス部位の下流の配列を標的化するSCN1Aエクソン20x領域について、2’-MOE ASO、PS骨格を用いてASOウォークを行った。ASOは、一度に5ヌクレオチドシフトすることによって、これらの領域をカバーするようにデザインされた。SCN1Aを標的化するASOのリストを表3にまとめる。ASOの配列を表4aおよび表4bならびに表5aおよび表5bにまとめる。
[0640]3’スプライス部位のすぐ上流であり、3’スプライス部位を超え、エクソン20x、5’スプライス部位を超え、および5’スプライス部位の下流の配列を標的化するSCN1Aエクソン20x領域について、2’-MOE ASO、PS骨格を用いてASOウォークを行った。ASOは、一度に5ヌクレオチドシフトすることによって、これらの領域をカバーするようにデザインされた。SCN1Aを標的化するASOのリストを表3にまとめる。ASOの配列を表4aおよび表4bならびに表5aおよび表5bにまとめる。
[0641]ASOの配列を表6aおよび表6bにまとめる。
[0642]ASOの配列を表7にまとめる。
実施例15:NMDをもたらすSCN1AプレmRNAの選択的スプライシングは、複数の種およびDS患者において保存される
[0643]ヒト脳試料のバイオインフォマティクス分析は、フレームシフトおよび早期終止コドンの導入をもたらすSCN1A遺伝子におけるエクソン含有事象を明らかにした。この実施例は、ヒトDS患者を含む、様々な種におけるこの非生産的スプライシング事象の検証を実証する。
[0643]ヒト脳試料のバイオインフォマティクス分析は、フレームシフトおよび早期終止コドンの導入をもたらすSCN1A遺伝子におけるエクソン含有事象を明らかにした。この実施例は、ヒトDS患者を含む、様々な種におけるこの非生産的スプライシング事象の検証を実証する。
[0644]図13Aは、翻訳阻害剤であるシクロヘキシミド(CHX)で処置したまたは処置していないヒト細胞のRT-PCRによる、この非生産的スプライシング事象の概略図および検証を示す。生産的な(標準)アイソフォーム(底部バンド)は、選択的エクソンを含有せず、機能性NaV1.1タンパク質に翻訳する。非生産的アイソフォームは、選択的エクソン(上部バンド)を含有する。DMSO:ジメチルスルホキシド、CHX:シクロヘキシミド。
[0645]NCBIデータベースのBLAST検索は、複数種において、このSCN1A NMD誘導エクソンの高度に保存された相同体を同定し、その結果がRT-PCRによって検証された(図13B)。さらに、NMD誘導エクソン含有事象の存在は、DS患者由来の脳組織に保持され(図13B)、NMD-エクソン含有事象のレベルが健康な個体とDS個体の間で変化しないことを示唆する。図13Bは、健康な女性対象、DS患者、カニクイザル、DSマウス、WTマウス(C57BL/6J)およびSprague Dawleyラット由来の大脳皮質におけるSCN1A転写物のRT-PCR産物のTBE-PAGEを示す。標準SCN1A転写物は下側バンドで表され、NMD-エクソン含有に対応する産物は上側バンドで表される。ここで同定されたNMD誘導エクソン領域に位置する患者バリアントは、NMD-エクソン含有レベルの増加およびDSをもたらす生産的mRNAの低減を引き起こすことが示されている。Carvillら、Am J Hum Genet 103巻、1022~1029頁(2018年)を参照されたい。
[0646]また、RT-PCR分析を行って、P0-P20および10ヶ月齢のWT C57BL/6Jマウス由来の冠状脳切片におけるNMD誘導エクソンおよび生産的Scn1a mRNAの含有レベルを測定した(図13C)。RT-PCR産物のデンシトメトリー測定は、転写物を含有するNMD誘導エクソン(上側バンド)が発生中にほとんど変化せず、一方、生産的mRNA(下側バンド)が増加することを示した(図13D)。生産的Scn1a転写物レベル(図13D)はP7-8あたりで劇的に増加し始める。図13Dに示されるように、Scn1a転写物の発現は、最初に内因性Gapdhに、次に、P0でScn1a生産的転写物に正規化された。データは、図において平均値±SDとして示される(n=各データポイントについて個体動物由来の2または3個の試料)。Scn1a生産的転写物の発現は、4パラメーター非線形曲線に適合した。Scn1aの非生産的転写物の発現は、線形曲線に最も適合された。これらの結果は、NMD-エクソンを含有する転写物を生産的転写物に変換することにより、全生産的転写物レベルを増加させることが可能であり、この操作の影響は出生後の初期脳発達中に最大であることを示唆した。
実施例16:ASO投与は、培養ヒト細胞およびマウス脳においてSCN1A発現を増加させる
[0647]ヒトSCN1Aエクソン20Xおよび周囲のイントロン配列に結合する一連のASOをデザインした。最初のスクリーニングにおいて使用された全てのASOは、ホスホロチオエート骨格を有するオリゴヌクレオチドの2’-メトキシ-エチル(MOE)修飾に基づいた。ASOは、ヒト神経前駆細胞において自由取り込みによってスクリーニングされ、次に、RT-PCRおよびqPCRを用いてSCN1A生産的およびエクソン20X含有非生産的転写物の分析が行われた。図14Aに示されるように、合計47個のASOを20μMでスクリーニングした。非標的ASO(NT)およびASOなし対照(-)を含めた。泳動対照としてRPL32を使用した。NMD誘導エクソン含有を有意に減少させ、生産的転写物発現を増加させる多数のASOが同定された(図14A-14C)。最も活性の高いASO(ASO-22、図14A-14Cにおいて矢印で示される)をさらに評価するために選択した。ASO-22の効果は用量依存性であることが確認された(図15)。非標的ASO対照(NT)は、いずれの転写物アイソフォームのレベルにも影響を及ぼさなかった(図15)。
[0647]ヒトSCN1Aエクソン20Xおよび周囲のイントロン配列に結合する一連のASOをデザインした。最初のスクリーニングにおいて使用された全てのASOは、ホスホロチオエート骨格を有するオリゴヌクレオチドの2’-メトキシ-エチル(MOE)修飾に基づいた。ASOは、ヒト神経前駆細胞において自由取り込みによってスクリーニングされ、次に、RT-PCRおよびqPCRを用いてSCN1A生産的およびエクソン20X含有非生産的転写物の分析が行われた。図14Aに示されるように、合計47個のASOを20μMでスクリーニングした。非標的ASO(NT)およびASOなし対照(-)を含めた。泳動対照としてRPL32を使用した。NMD誘導エクソン含有を有意に減少させ、生産的転写物発現を増加させる多数のASOが同定された(図14A-14C)。最も活性の高いASO(ASO-22、図14A-14Cにおいて矢印で示される)をさらに評価するために選択した。ASO-22の効果は用量依存性であることが確認された(図15)。非標的ASO対照(NT)は、いずれの転写物アイソフォームのレベルにも影響を及ぼさなかった(図15)。
[0648]ASO-22の用量-応答関係は、自由取り込みまたはヌクレオフェクション送達法を用いて、ヒト神経前駆細胞において決定された。EC50値は、自由取り込みによって決定すると3μMであり、ヌクレオフェクションによって決定すると529nMであった(図14D)。ASO-22の特異性はまた、処置細胞における4つの高度に相同なVGSCaサブユニット遺伝子の発現におけるその効果を測定することによって評価された。SCN2A、SCN3A、SCN8A、またはSCN9Aの発現レベルの変化は、自由取り込みを介した20、8または3μMのASO処置後のReN細胞において観察されなかった(図14E)。これらの結果は、ASO-22がヒト神経前駆細胞において生産的Scn1a mRNAを強力かつ特異的に増加させることを示す。
[0649]図14Aは、ReN細胞におけるASOスクリーニングを示す。ASOのジムノティック(gymnotic)(自由)取り込み後のReN細胞におけるSCN1A生産的(低バンド、549bp)およびエクソン20Xを含有する非生産的mRNA(上バンド、613bp)に対応するRT-PCR産物のTBE PAGE。図14Bは、図14Aに示されるRT-PCR産物から定量化した場合、SCN1A転写物中のエクソン20X含有のパーセンテージを示す。PCR産物をデンシトメトリーにより定量化し、全体(エクソン20X含有および生産的mRNA)に対するエクソン20X含有mRNAのパーセンテージとしてプロットした。各ASO処置群についてn=1;NTについてn=2;偽についてn=11。図14Cは、SYBRグリーンqPCRによって決定されたASO処置ReN細胞におけるSCN1A生産的mRNAの発現を示す。SCN1A生産的mRNAの発現は、最初に内因性RPL32に正規化され、次に、ASOなし対照(-)に正規化された。qPCR結果は、各処置の平均値±SDとして示された。各ASO処置についてn=1;NTについてn=2;偽についてn=10。図14Dは、自由取り込みおよびヌクレオフェクションによるReN細胞におけるASO-22の用量-応答関係を示す。SCN1Aの発現は、内因性RPL32に正規化され、次に、ASOなし対照に正規化された。qPCR結果は、平均値±SDとして示された。(両処置についてn=2)。SCN1A生産的転写物の発現は、4パラメーター非線形曲線に適合した。図14Eは、ReN細胞における相同なVGSCαサブユニット遺伝子の発現における選択されたASOの効果を示す。ReN細胞におけるSCN2A、3A、8A、および9Aの発現は、20、8または3μMのASO-22または非標的ASO対照(NT)のジムノティック取り込み後に、プローブベースのqPCRによって測定された。SCN mRNAレベルは、最初に内因性Gapdhに正規化され、次に、ASOなし(-)処置細胞に正規化された。qPCR結果は、各分析の平均値±SDとして示された(各ASO処置についてn=4;ASOなし対照についてn=8)。
[0650]図15A-15Cは、ReN細胞におけるScn1a mRNAのスプライシングおよび発現に対するASO-22の用量依存的効果を示す。ReN細胞は、ジムノティック取り込により20、8または3μMのASO-22で72時間処置され、続いてDMSOまたはシクロヘキシミド(CHX)処置を回収前3時間行った。非標的ASO対照(NT)およびASOなし対照(偽)を含めた。図15Aは、RT-PCR産物のTBE PAGEが、ReN細胞においてSCN1A生産的mRNA(下側バンド、549bp)およびエクソン20X(上側バンド、613bp)を含有する非生産的mRNAに対応することを示す。泳動対照としてRPL32を使用した。ASO-22のジムノティック取り込後のReN細胞におけるSCN1A転写物の発現をプローブベースのqPCRにより定量化した。SCN1A生産的(図15B)および非生産的(図15C)mRNAのレベルは、2つのqPCRアッセイ(方法の説明を参照されたい)を用いて別々に測定された。転写物発現は、最初に内因性RPL32シグナルに正規化され、次に、ASOなし(偽)対照に正規化された。偽qPCR結果は、各群について平均値±SDとして示される。(実験の独立した繰り返し:ASO-22処置についてn=1;偽についてn=3;偽+CHXについてn=3)。
[0651]ASO-22投与がin vivoで生産的mRNAおよびタンパク質を用量依存的に上方制御し得るかどうかを決定するために、P2 WT C57BL/6Jマウスに0.3、1、3、5、10、20または30μgのASO-22を単回ICV注射し、処置後5日目で安楽死させた(図16A)。脳組織を収集し、非生産的および生産的Scn1a転写物、ならびにNaV1.1タンパク質のレベルの変化について分析した。Scn1a転写物中のNMDエクソンの含有は、ASO用量の増加と共に減少した(図16B)。プローブベースのqPCR(図16C)およびRT-PCR(図17)を用いて、生産的Scn1a発現の用量依存的増加はまた観察され、発現レベルの約6場合の増加が10μg投薬群において検出され、20および30μg投薬群においてはさらなる増加は観察されなかった。最後に、NaV1.1タンパク質の発現レベルは、同様の用量依存的に増加した(図16Dおよび図18)。非標的ASO対照(NT)は、Scn1a転写物またはNaV1.1のいずれのレベルにおいても影響を及ぼさなかった。ASOを受けたマウスの脳では、8つの密接に関連したVGSCαサブユニット遺伝子プラスNax(Scn7a)の発現は影響を受けなかった(図16E)。
[0652]脳におけるASO-22効果の持続性を決定するために、10μgのASO-22を注射したP2 WTマウスICVを、注射後の様々な時間点でのScn1a産生転写物レベルの脳発現について調べた(図16F)。増殖性Scn1a転写物の増加したレベルは、注射後30日まで観察された(図16Gおよび図19)。NaV1.1タンパク質のレベルはまた増加し、PBS注射対照と比較して30日間の観察期間中に維持された(図16Hおよび図20)。
[0653]図16Aは、in vivoでのASO-22用量-応答関係のための実験デザインを示す。図16Bは、TBE PAGE RT-PCR産物のデンシトメトリーにより定量化した場合、マウス脳におけるScn1a転写物中のNMD誘導エクソン含有のパーセンテージを示す(図17に示されるゲル)。定量結果は、平均値±SDとして示される(各処置群ではn=3~14)。図16Bにおいてプロットされたデータは、4パラメーター非線形曲線に適合した。PBS処置動物と同様に、NT ASO処置群のNMD誘導エクソン含有のパーセンテージは45.8%±0.7%であった。図16Cは、プローブベースのqPCRにより定量化した場合、マウス脳におけるScn1a産生転写物の発現における倍数変化を示す。qPCRの結果は、平均値±SDとして示される(各処置群についてn=3~14)。プロットされたデータは、4パラメーター非線形曲線に適合した。PBS処置動物と同様に、NT ASO処置群におけるScn1a mRNAの倍数変化は0.9±0.1であった。図16Dは、メソスケールディスカバリー(MSD)法により定量化した場合、マウスにおけるNaV1.1タンパク質の発現の倍数変化を示す。定量結果は、平均値±SDとして示される(各処置群についてn=3~8)。プロットしたデータは、4パラメーター非線形曲線に適合した。PBS処置動物と同様に、NTASO処置群のNaV1.1発現は、成体脳と比較して16.8%±0.9%であった。図16Eは、マウス脳において発現される9つのVGSCαサブユニット遺伝子プラスNax(Scn7a)の発現におけるASO-22の効果を示す。PBS、非標的ASO対照(NT、20μg)または異なる用量のASO-22のICV注射後のマウス脳におけるScn1a生産的転写物および残りの8つのVGSCαサブユニット遺伝子プラスNax(Scn7a)の発現をプローブベースのqPCRにより測定した。各転写物の発現は、最初に内因性Gapdhに正規化され、次に、PBS中佐対照と比較された。本明細書において使用するqPCRアッセイは、方法に列挙される。データは平均値±SDとして示される(各投与群についてn=3~14)。図16Fは、ASO-22のICV注射後のマウス脳における効果持続時間の評価のための実験デザインを示す。図16Gは、P2で10μgのASO-22の注射後、選択された日でのマウス脳におけるScn1a生産的転写物の定量化を示す。Scn1a転写物は、最初に内因性Gapdhに正規化され、次に、PBS注射を受けた1日後にマウス脳と比較された。qPCRの結果は、平均値±SDとして示された(各処置群についてn=4~9)。プロットしたデータは、4パラメーターの非線形曲線に適合した。図16Hは、P2で10μgのASO-22の注射後、選択された日におけるマウス脳におけるNaV1.1タンパク質の発現の倍数変化を示す。NaV1.1タンパク質発現をMSD法により定量化した。MSDの結果は、平均値±SDとして示された(n=4~5個の各処置群から無作為に選択された試料)。
[0654]図17は、ICV注射された新生マウス脳におけるScn1aの発現におけるASO-22の用量依存的効果を示す。WT C57BL/6Jマウスに、P2で、PBS、非標的(NT、20μg)対照、0.3、1、3、5、10、20または30μgのASO-22をICV注射した。注射後5日目に脳を回収し、Scn1a mRNA発現について分析した。RT-PCR産物のTBE PAGEは、マウス脳においてScn1a生産的(*で示される底部バンド、498bp)およびNMD誘導性転写物(§で示される上側バンド、562bp)を示す。エクソン21X含有のパーセンテージの定量化を図16Bに示す。qPCRによるScn1a生産的mRNA発現の定量化を図16Cに示す。M:DNAラダー、NEB、N3231L。
[0655]図18は、ICV注射された新生マウス脳におけるNaV1.1の発現におけるASO-22の用量依存的効果を示す。WT C57BL/6Jマウスに、P2で0.3、1、3または10μgのASO-22またはPBSをICV注射した。注射後5日目に脳を回収し、NaV1.1発現について分析した。NaV1.1発現(*で示される約223kDa)を、各投薬群から無作為に選択された2つの脳試料のイムノブロットにより評価した。レーンあたり50μgのタンパク質を装填した。ポンソーS染色されたブロットは等しい装填を示すために含まれる。10μgのASOを注射された脳からのタンパク質の半分の投入量を、イムノブロッティングのシグナル飽和を試験するために含めた。未処置Scn1a+/-およびWT同腹仔マウスの脳試料を対照として含めた。メソスケールディスカバリー(MSD)法によるNaV1.1発現の定量化を図16Dに示す。
[0656]図19は、異なる注射後の日でのマウス脳におけるScn1a mRNAの発現を示す。WT C57BL/6Jマウスに3もしくは10μgのASO-22またはPBSをP2でICV注射した。注射の1、3、5、10、20または30日後に脳を回収し、Scn1a mRNA発現について分析した。RT-PCR産物のTBE PAGEは、マウス脳においてScn1a生産的(*で示される底部バンド、498bp)およびNMD誘導性転写物(§で示される上部バンド、562bp)を示す。装填対照としてGapdhを用いた。qPCRによるScn1a産生mRNA発現の定量化を図16Gに示す。M:DNAラダー、NEB、N3231L。
[0657]図20は、様々な注射後の日におけるマウス脳におけるNaV1.1の発現を示す。WT C57BL/6JマウスにP2で10μgのASO-22またはPBSをICV注射した。注射後10日、20日、および30日のマウスから無作為に選択した2つの脳試料のイムノブロット法により、NaV1.1発現(*で示される約223kDa)を評価した。レーンあたり50μgの総タンパク質を装填した。ポンソーS染色されたブロットは等しい装填を示すために含まれる。メソスケールディスカバリー(MSD)法によるNaV1.1発現の変化の定量化を図16Hに示す。
実施例17:ドラベ症候群の処置
[0658]ドラベ症候群(DS)は、長期予後不良の稀な乳児発症型薬剤耐性発達性およびてんかん性脳症である。ドラベ症候群は、米国における推定される1:15,700個体、または約20,000個体の集団に影響を及ぼす(全内容が参照により本明細書に組み込まれるWuら、2015年、Pediatrics、136巻:e1310-5)。ドラベ症候群は、SCN1A遺伝子の病原性突然変異によって最も一般的に引き起こされる(全内容が参照により本明細書に組み込まれるScheffer 2012年、Eur.J.Paediatr.Neurol.16巻、Suppl 1:S5-8)。単一塩基置換、小さな挿入または欠失、さらには全遺伝子欠失が報告されており、SCN1A遺伝子における少なくとも1257の異なる突然変異が現在までにDS患者において報告されている(全内容が参照により本明細書に組み込まれるDjemieら、2016年、Mol Genet Genomic Med.4巻:457~64頁)。SCN1A遺伝子は、ナトリウム電位依存性チャネルアルファサブユニット(NaV1.1タンパク質)をコードする。DSに関連するSCN1A(NaV1.1チャネル)突然変異は、ほとんどが短縮またはミスセンスであり、症例の95%を超えるNaV1.1タンパク質の機能喪失をもたらす(全内容が参照により本明細書に組み込まれるCatterallら、2010年、J.Physiol.588巻:1849~59頁;Mengら、2015年、Hum Mutat.2015年;36巻:573~80頁)。これらの突然変異はDS患者ではヘテロ接合性であり、NaV1.1タンパク質のパプロ不全をもたらす。
[0658]ドラベ症候群(DS)は、長期予後不良の稀な乳児発症型薬剤耐性発達性およびてんかん性脳症である。ドラベ症候群は、米国における推定される1:15,700個体、または約20,000個体の集団に影響を及ぼす(全内容が参照により本明細書に組み込まれるWuら、2015年、Pediatrics、136巻:e1310-5)。ドラベ症候群は、SCN1A遺伝子の病原性突然変異によって最も一般的に引き起こされる(全内容が参照により本明細書に組み込まれるScheffer 2012年、Eur.J.Paediatr.Neurol.16巻、Suppl 1:S5-8)。単一塩基置換、小さな挿入または欠失、さらには全遺伝子欠失が報告されており、SCN1A遺伝子における少なくとも1257の異なる突然変異が現在までにDS患者において報告されている(全内容が参照により本明細書に組み込まれるDjemieら、2016年、Mol Genet Genomic Med.4巻:457~64頁)。SCN1A遺伝子は、ナトリウム電位依存性チャネルアルファサブユニット(NaV1.1タンパク質)をコードする。DSに関連するSCN1A(NaV1.1チャネル)突然変異は、ほとんどが短縮またはミスセンスであり、症例の95%を超えるNaV1.1タンパク質の機能喪失をもたらす(全内容が参照により本明細書に組み込まれるCatterallら、2010年、J.Physiol.588巻:1849~59頁;Mengら、2015年、Hum Mutat.2015年;36巻:573~80頁)。これらの突然変異はDS患者ではヘテロ接合性であり、NaV1.1タンパク質のパプロ不全をもたらす。
[0659]いくつかのSCN1A突然変異(Thr226Met、Val422Leu)は、DSとは表現型的に異なる深刻な発達性およびてんかん性脳症である早期乳児SCN1A脳症を有する小児において同定されている(全内容が参照により本明細書に組み込まれるSadleirら、2017年、Neurology、89巻:1035~42頁)。動的活動電位クランプ評価を用いた機能性生物物理学的試験では、早期乳児疾患の原因となることが見出された突然変異は、NaV1.1タンパク質の機能獲得的変化を引き起こすことが示されている(全内容が参照により本明細書に組み込まれるBereckiら、2019年、Ann Neurol.85巻:514~25頁)。他のいくつかの突然変異は、DSとは異なる発作表現型とも関連するNaV1.1(V1611F、D1866Y、W1204R)の機能獲得的変化を引き起こす機能試験を用いて見出されている(全内容が参照により本明細書に組み込まれるMengら、2015年、Hum Mutat.2015年;36巻:573~80頁)。さらに、家族性片麻痺性片頭痛(FHM)は、典型的にはてんかんとは関連しない疾患であり、一部の場合には、SCN1Aにおける機能獲得的突然変異(L263V、T1174S、Q1489K、F1499L、L1624P、L1649Q、L1670W)と関連することが示されている(全内容が参照により本明細書に組み込まれるDhifallahら、2018年、Front Mol.Neurosci.11巻:232頁;Fanら、2016年、Cephalalgia.36巻:1238~47頁;Cesteleら、2013年、Proc.Natl.Acad.Sci.USA.2013年;110巻:17546~51頁)。他の潜在的な機能獲得的SCN1A突然変異は、ラスムッセン症候群などの非DS症状と関連している(全内容が参照により本明細書に組み込まれるDepienneら、2009年、J.Med Genet.46巻:183~91頁)。
[0660]阻害性介在ニューロンにおけるNaV1.1チャネルの喪失は、DSを有する患者においててんかんおよび早死を引き起こす可能性がある(全内容が参照により本明細書に組み込まれるCheahら、2012年、PNAS.109巻:14646~51頁)。他の神経細胞におけるNaV1.1チャネルの喪失は、発作、ならびにDSの他の態様に寄与する可能性がある(全内容が参照により本明細書に組み込まれるLiuら、2013年、Ann Neurol.74巻:128~39頁)。ドラベ症候群は、複数の発作型によって特徴付けられ、てんかん重積状態または5分を超えて続く長期の発作に進行することが多く、即時の介入が必要である。ほとんど全ての患者(>90%)は、運動および言語障害、重度の知的および発達障害、学習困難、自閉症、注意欠陥/多動性障害、睡眠および歩行異常、ならびに行動障害を含む発作に加えて、いくつかの併存疾患を患っている(全内容が参照により本明細書に組み込まれるLagaeら、2018年、Dev.Med.Child Neurol.60巻:63~72頁)。結果として、DS患者は、著しく低い生活の質を有する(参照により本明細書に組み込まれるLagaeら、2018年、Dev.Med.Child Neurol.60巻:63~72頁)。
[0661]神経学的検査および認知は、通常、2歳までのDSを有する小児では正常である(全内容が参照により本明細書に組み込まれるRagonaら、2011年、Epilepsia.52巻:386~92頁)。しかしながら、4歳を超えるDS患者のうち、ほぼ100%が知的障害を有する(全内容が参照により本明細書に組み込まれるGentonら、2011年、Epilepsia.52巻、Suppl 2:44~9頁;Ragonaら、2011年、Epilepsia.52巻:386~92頁)。神経行動障害の程度は、軽度の学習困難から知的障害まで様々である。1歳から8歳までの期間(悪化ステージ)は、介入の重要な間隔である(図3)。8歳以降、DS患者のほぼ100%が実質的な知的障害の証拠を有する(全内容が参照により本明細書に組み込まれるGataullinaおよびDulac、2017年、Seizure 44巻:58~64頁)。DSにおける認知障害は、純粋に発作の結果ではない。発作の少ない患者は非常に重度の脳症を呈することがあり、逆に発作の頻度が高い患者では認知機能の低下が比較的少ないことがある。さらに、ミスセンスまたは短縮突然変異にかかわらず、認知的転帰とSCN1A突然変異型の間に相関はないようである(全内容が参照により本明細書に組み込まれるRagonaら、2011年、Epilepsia.52巻:386~92頁)。疾患の最初の5年間の禁忌薬剤(例えば、ナトリウムチャネル遮断薬)の長期使用は、DSを有する患者の認知転帰に悪影響を及ぼす可能性がある(全内容が参照により本明細書に組み込まれるde Langeら、2018年、Epilepsia、59巻:1154~65頁)。
[0662]ドラベ症候群は最も薬剤耐性のてんかんの1つであり、90%を超える患者が複数の抗てんかん薬(AED)による処置を受けているにもかかわらず、制御不能の発作を起こし続け、けがまたは死亡のリスクが高くなる。DSに対する治療の第1の目標は発作の頻度および重症度を低減させることであるが、しかしながら、DSの他の併存疾患に対処するために、これらの患者に対する追加処置の必要性は依然として残される。ドラベ症候群は生活の質の低下と関連している(参照により本明細書に組み込まれる(Lagaeら、2018年、Dev.Med.Child.Neurol.60巻:63~72頁)。発作頻度の低減、ならびに認知および歩行の改善は、生活の質が劇的に改善される可能性が高い。
治療剤
[0663]ドラベ症候群を処置するための例示的な治療剤は、重度の遺伝性疾患の処置のためのタンパク質レベルを増加させるためにリボ核酸(RNA)スプライシングを標的化するアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはアンチセンスオリゴマー(ASO)医薬である。具体的には、STK-001は、SCN1A遺伝子の突然変異によって引き起こされるDSの処置のためのASOの実施形態である。ドラベ症候群は、SCN1A遺伝子の1つの対立遺伝子の突然変異によって引き起こされることが最も多い。これらの患者は1つの野生型対立遺伝子と1つの突然変異型対立遺伝子を有する。NaV1.1タンパク質は野生型対立遺伝子から産生されるが、突然変異型対立遺伝子は非機能性タンパク質に翻訳され、患者における正常タンパク質発現の50%をもたらす。STK-001は、生産的SCN1AメッセンジャーRNA(mRNA)のレベルを増加させ、結果としてナトリウムチャネルNaV1.1タンパク質の発現を増加させるようにデザインされた。すなわち、STK-001はSCN1AプレmRNAに結合し、スプライシング装置を再指向して、非生産的mRNAの量を減少させ、生産的mRNAを増加させる。これは野生型対立遺伝子から増加したNaV1.1タンパク質に翻訳される。生理学的レベルにNaV1.1を回復させることにより、発作および他の非発作併存症の発生を減少させることができる。このRNAベースのアプローチは、遺伝子処置ではなく、むしろRNA修飾である可能性がある。それは、遺伝子デオキシリボ核酸コードを操作することも挿入することもないためである。
[0663]ドラベ症候群を処置するための例示的な治療剤は、重度の遺伝性疾患の処置のためのタンパク質レベルを増加させるためにリボ核酸(RNA)スプライシングを標的化するアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはアンチセンスオリゴマー(ASO)医薬である。具体的には、STK-001は、SCN1A遺伝子の突然変異によって引き起こされるDSの処置のためのASOの実施形態である。ドラベ症候群は、SCN1A遺伝子の1つの対立遺伝子の突然変異によって引き起こされることが最も多い。これらの患者は1つの野生型対立遺伝子と1つの突然変異型対立遺伝子を有する。NaV1.1タンパク質は野生型対立遺伝子から産生されるが、突然変異型対立遺伝子は非機能性タンパク質に翻訳され、患者における正常タンパク質発現の50%をもたらす。STK-001は、生産的SCN1AメッセンジャーRNA(mRNA)のレベルを増加させ、結果としてナトリウムチャネルNaV1.1タンパク質の発現を増加させるようにデザインされた。すなわち、STK-001はSCN1AプレmRNAに結合し、スプライシング装置を再指向して、非生産的mRNAの量を減少させ、生産的mRNAを増加させる。これは野生型対立遺伝子から増加したNaV1.1タンパク質に翻訳される。生理学的レベルにNaV1.1を回復させることにより、発作および他の非発作併存症の発生を減少させることができる。このRNAベースのアプローチは、遺伝子処置ではなく、むしろRNA修飾である可能性がある。それは、遺伝子デオキシリボ核酸コードを操作することも挿入することもないためである。
[0664]STK-001は、ヒトおよびマウスSCN1Aにおいて天然に存在する非生産的選択的スプライシングされたエクソンを利用するためにTANGO(核遺伝子出力の標的化された増強)技術を利用するために開発されたものであり、早期終止コドンの取り込みおよびその後の転写物(mRNA)分解をもたらす。これらの非生産的スプライシング現象は正常な遺伝子調節の一部であり、非生産的スプライシング現象はSCN1A遺伝子の野生型または正常な配列の一部である。TANGOに適した非生産的スプライシング事象は、ナンセンス変異依存mRNA崩壊エクソン、またはNMDエクソンをもたらす選択的スプライシングである。NMDエクソンは、遺伝子転写物の10%以上に見出され、保持されているイントロンと同様に、遺伝子の野生型配列の一部である。これらのNMDエクソンを含む非生産的mRNAは、ナンセンス媒介mRNA分解によって細胞質で分解され、タンパク質に翻訳されない。STK-001はプレmRNAに結合し、スプライシング装置を再指向してNMDエクソンの包含を防ぐ。このスプライススイッチングは、非生産的mRNAを減少させ、生産的mRNAを増加させ、野生型対立遺伝子からの増加した全長機能タンパク質に翻訳される。TANGOメカニズムは野生型対立遺伝子の発現を上方制御する。すなわち、TANGOメカニズムは特定の突然変異を標的化することに依存しない。TANGO ASOは、非生産的mRNAの量を減少させ、生産的mRNAのレベルを増加させ、より多くのタンパク質の生成をもたらす。TANGOは、1つの野生型対立遺伝子を利用し、スプライシングアイソフォームをコードするタンパク質を変化させないため、突然変異に依存しない方法で作用する。
[0665]げっ歯類の脳におけるScn1a mRNAおよびNaV1.1タンパク質レベルは、生後4週間でピークに達する。マウスでは、NaV1.1チャネルの上昇は出生後10日目で始まり、4週齢まで続く(全内容が参照により本明細書に組み込まれるCheahら、2013年、Channels、7巻:468~72頁)。サブタイプ特異的抗体を用いたヒト脳のイムノブロッティングは、NaV1.1タンパク質発現がげっ歯類の脳におけるそれと類似しており、NaV1.1レベルは出生時に低く、20ヶ月までにピーク値まで着実に増加し、30ヶ月まで安定していることを示した(全内容が参照により本明細書に組み込まれる(Cheahら、2013年、Channels、7巻:468~72頁)。ヒト脳における別の研究では、NaV1.1免疫反応性ニューロンおよび神経突起が胎児期後期および出生後期間に増加し、出生後7~9ヶ月でピークに達したことが示された(全内容が参照により本明細書に組み込まれるWangら、2011年、Brain Res.1389巻:61~70頁)。非ヒト霊長類(NHP)およびヒトにおいて同様のパターンが観察されている。NMD基質の絶対量は、異なる年齢のマウスから得られた脳組織では類似しているが、脳内の生産的Scn1a mRNAおよびNaV1.1タンパク質が加齢に伴って徐々に増加するため、STK-001処置マウスにおけるScn1aおよびNaV1.1の倍数変化は、高齢動物よりも若齢動物でより高い。したがって、STK-001処置は、小児糖尿病患者のNaV1.1タンパク質を生理学的に正常なレベルに回復させるのに、より効果的であり得る。STK-001を用いたDSの新生マウスモデルにおける前臨床試験では、出生後35~90日(2歳以上のヒトに同等)の動物において有意な死亡率の改善が示された(全内容が参照により本明細書に組み込まれるArzimanoglouら、2018年、Pediatr.Drugs.20巻:249~64頁)。
[0666]オリゴヌクレオチドベースの化合物は、血液脳関門内での直接送達によるヒト脳障害の処置のために開発される。中枢神経系に直接投与されたオリゴヌクレオチドは、活性取り込み機構、低全身曝露、長い半減期(t1/2)、蓄積、および細胞内貯蔵所からの徐放を含むいくつかの固有の薬物動態(PK)および薬力学(PD)特性を有する(全内容が参照により本明細書に組み込まれるKhorkovaおよびWahlestedt、2017年、Nat.Biotechnol.35巻:249~63頁)。STK-001などのASOのCNS送達は、遺伝子処置(すなわち、ウイルス技術を用いて送達または発現される処置)ではない。STK-001は、FDAが小分子として分類する合成化学製品である。STK-001は化学的に合成され、生物学的製剤とはみなされない場合がある。
実施例18:非ヒトモデルにおける治療薬の薬理学的評価
[0667]STK-001の初期標的結合、薬理学、および有効性試験を、野生型とDSマウスモデルの両方を含むマウスで行った。SCN1Aにおける標的非生産的スプライシング事象は、マウス、非ヒト霊長類(NHP)、およびヒトを含む複数種にわたって高度に保存される。STK-001の標的配列はまた種間で同一である。
[0667]STK-001の初期標的結合、薬理学、および有効性試験を、野生型とDSマウスモデルの両方を含むマウスで行った。SCN1Aにおける標的非生産的スプライシング事象は、マウス、非ヒト霊長類(NHP)、およびヒトを含む複数種にわたって高度に保存される。STK-001の標的配列はまた種間で同一である。
[0668]野生型マウスにおいて、STK-001の標的結合および薬理学の特徴付けを行った。新生児(出生後1日目)マウスにSTK-001を脳室内注射により単回投与した。生後5日目、脳を単離し、RNAおよびタンパク質の処理を行った。STK-001による処置は、非生産的Scn1a mRNAの用量依存的な低減をもたらした。さらに、非生産的mRNAの低減は、生産的Scn1a mRNAの増加およびNaV1.1タンパク質の増加と関連した。
[0669]また、Scn1aのヘテロ接合欠失を有するトランスジェニックマウスを用いて、STK-001の薬理学および有効性を調査した。このモデルは、Scn1a遺伝子の最初のコードエクソンに標的化された欠失を導入することによって作製された。これらのマウスは、発作および早期致死性を含むDS表現型の多くの態様を示し、DSのための新しいAEDを評価するために以前に使用されていた。新生児(出生後2日目)および野生型同腹仔対照に、プラセボ(リン酸緩衝液からなる)またはSTK-001のいずれかを脳室内注射により単回投与した。STK-001の単回注射は、DSマウスのNaV1.1タンパク質を、7週と14週の両方で野生型マウスのレベルに近いレベルに回復させた。STK-001処置試料はSCN1A遺伝子の発現の増加を示したが、他のSCNファミリーメンバーのいずれも増加を示されなかった。これらの結果は、STK-001がナトリウムチャネル遺伝子の高度に相同なファミリーの中のSCN1Aに対して高度に特異的であり、標的外活性の可能性が低いことを示す。NaV1.1タンパク質の増加に加えて、DSマウスにおける単回用量のSTK-001の投与は、早期死亡の有意な低減をもたらした。STK-001による投与は、出生後90日間のDSマウスの生存率は97%であったのに対し、プラセボ投与マウスでは23%であった。出生後90日目のマウスは、2歳以上のヒトに同等する(参照により本明細書に組み込まれるArzimanoglouら、2018年、Pediatr Drugs.20巻:249~64頁)。
[0670]以上をまとめると、STK-001を用いて得られた前臨床データは、STK-001のメカニズムの証明および臨床的有効性を実証する。STK-001は標的と結合し、野生型マウス脳において予測される薬理作用を誘発する。DSマウスにおける単回用量のSTK-001の投与は、早期死亡の有意な低減をもたらした(p<0.0001)。
[0671]STK-001の薬理学、分布および耐容性もまたカニクイザルにおいて評価した。思春期前のサルに単回用量のSTK-001または対照溶液を、推定される治療用量範囲と一致する用量範囲で髄腔内(IT)注射により投与し、サルの耐容性および類似の化学物質に関する公表データに基づいて最大耐容量を下回った。動物(処置群ではn=3、対照群ではn=2)は投薬後2日目または28日目に屠殺された。NaV1.1タンパク質の2倍の増加が観察された。NaV1.1の増加はまた、脳組織におけるSTK-001の存在とも相関した。
実施例19:ヒト患者における治療剤の薬理学的評価
[0672]DSは、高度に薬剤耐性形態の遺伝性てんかんであり、多発性の重篤な併存疾患に関連する。悪化ステージ(1~8歳の間)は、知的障害などの併存疾患の発生と重症度を軽減するための治療介入の重要な枠組みである。したがって、小児集団に投与され得るDSの処置のための新規治療薬を開発することは極めて重要である。
[0672]DSは、高度に薬剤耐性形態の遺伝性てんかんであり、多発性の重篤な併存疾患に関連する。悪化ステージ(1~8歳の間)は、知的障害などの併存疾患の発生と重症度を軽減するための治療介入の重要な枠組みである。したがって、小児集団に投与され得るDSの処置のための新規治療薬を開発することは極めて重要である。
[0673]安全性およびPKの評価項目は、例えば、STK-001の単回または複数回投薬の安全性プロファイルおよびPKである。分析のための安全性変数には、限定されないが、有害事象の発現率、種類および重症度、バイタルサイン、心電図/ホルター心電図、臨床検査および身体検査のパラメーターが含まれる。薬物動態パラメーターは、STK-001の血漿中濃度から非コンパートメント分析により得ることができ、これには、限定されないが、最大血漿中濃度(Cmax)、最高血漿中濃度到達時間(Tmax)、時間0から無限から最終測定可能濃度までの血漿中濃度-時間曲線下面積(AUC0-∞、AUC0-t)、および用量レベルと比較したCmaxおよびAUCの倍数変化が含まれる。CSF中のSTK-001の曝露は、STK-001の濃度を測定することによって評価することができる。
[0674]有効性評価項目は、例えば、(i)4週間にわたって算出したけいれん性発作頻度(紙日誌で測定した場合)のベースラインからの変化パーセンテージ、(ii)4週間にわたって算出したけいれん性発作頻度(紙日誌で測定した場合)における50%以上、75%以上、100の低減(ベースラインと比較)を有する患者の割合;(iii)以下のスケール:EuroQol-5D(Youth)(EQ-5D-Y)装置で測定した場合、介護者のグローバルな変化の印象(CaGIC)、臨床的なグローバルな変化の印象(CGIC)、および患者の生活の質のベースラインからの変化、におけるベースラインと処置の終了の間での投薬効果および比較の証拠である。
[0675]他の有効性評価項目には、限定されないが、全てのけいれん性発作および非けいれん性発作の数と種類、例えば4週間の期間にわたって、計算された総発作頻度(紙日記で測定した場合)のベースラインからの変化パーセンテージ、例えば4週間の期間にわたって計算された総発作頻度(紙日記で測定した場合)が50%以上、75%以上、および100%の低減(ベースラインと比較)を有する患者の比率、10~20の脳波(EEG)パラメーターの変化、アクチグラフによって測定された総睡眠時間、および睡眠日誌による週ごとの睡眠時間(時間)、Embrace2装着可能なデバイスなどによって測定された場合のけいれん性発作頻度、ジレット機能評価質問票(FAQ)22項目のスキルセットによって測定された場合の移動と歩行の評価、ならびに探索的バイオマーカー(例えば、NaV1.1、ニューロフィラメント軽鎖など)のCSF、血漿、または血清試料の分析が含まれる。
用量レベル
[0676]STK-001の単回または複数回用量、例えば、0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、または200mgは、DSを有する患者に髄腔内(IT)注射によって投与される。用量レベルは、安全監視委員会(SMC)の決定に基づいて調整することができる。コホート間の用量漸増は、各用量レベルで2倍以下の増加である可能性がある。
[0676]STK-001の単回または複数回用量、例えば、0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、または200mgは、DSを有する患者に髄腔内(IT)注射によって投与される。用量レベルは、安全監視委員会(SMC)の決定に基づいて調整することができる。コホート間の用量漸増は、各用量レベルで2倍以下の増加である可能性がある。
患者集団
[0677]以下の基準(組み入れ者基準)を満たす患者が適格であり得る:(i)患者および/または権限のある代表者は、インフォームドコンセント/同意および研究への参加のために現地法で要求される承認を進んで行うことができなければならない;(ii)患者とそれらの介護者は、全てのプロトコル要件を進んで遵守することができなければならない;(iii)患者はスクリーニング時に18歳まででなければならない;(iv)患者は次のように定義されるDSを有しなければならない:(a)再発性限局性運動または半けいれん性もしくは全身性強直間代発作を伴う年齢が12ヶ月よりも前に発症し、これはしばしば長期化して高体温によって引き起こされる、(b)原因となる磁気共鳴画像法(MRI)病変の過去の病歴がない(病変がないことを確認するためにMRIは必要ない)、(c)他の公知の病因はない、(d)発作発症時の正常な発達;(v)患者は、文書化された病原性、おそらく病原性のバリアント、またはDSに関連するSCN1A遺伝子の重要性が不確かなバリアントを有しなければならない。SCN1A試験結果が陰性(臨床的意義のバリアントが特定されていない)の患者は登録することができない;(vi)患者は、適切な発作制御がない(追加のAEDが必要である)かまたはAE(複数可)のために中止しなければならなかったてんかんの処置を少なくとも2回受けたことがある;(vii)患者は、最初の観察期間中に4回以上のけいれん性発作(ヘミクロニック、運動徴候を伴う限局性、限局性から両側性の強直間代性けいれん、全身性強直間代性けいれん、強直性、強直性/無緊張性(落下発作)、およびクロニック)を経験している必要がある;(viii)患者は現在、スクリーニング前に少なくとも4週間安定している用量で少なくとも1つのAEDを服用していなければならない;(ix)全てのてんかん医薬またはてんかんに対する介入(ケトン食療法または迷走神経刺激装置を含む)は、スクリーニング前の少なくとも4週間は安定している必要がある(製品の種類、用量、および設定を含む);(x)マリファナもしくはカンナビノイドベースの製品または医薬品は許可されるが、処置は、サプライヤー、比率、および用量を含め、スクリーニング前に少なくとも4週間安定している必要がある;ならびに(xi)患者は、IT薬剤投与手順に関する年齢に適した施設のガイドラインを満たさなければならない。
[0677]以下の基準(組み入れ者基準)を満たす患者が適格であり得る:(i)患者および/または権限のある代表者は、インフォームドコンセント/同意および研究への参加のために現地法で要求される承認を進んで行うことができなければならない;(ii)患者とそれらの介護者は、全てのプロトコル要件を進んで遵守することができなければならない;(iii)患者はスクリーニング時に18歳まででなければならない;(iv)患者は次のように定義されるDSを有しなければならない:(a)再発性限局性運動または半けいれん性もしくは全身性強直間代発作を伴う年齢が12ヶ月よりも前に発症し、これはしばしば長期化して高体温によって引き起こされる、(b)原因となる磁気共鳴画像法(MRI)病変の過去の病歴がない(病変がないことを確認するためにMRIは必要ない)、(c)他の公知の病因はない、(d)発作発症時の正常な発達;(v)患者は、文書化された病原性、おそらく病原性のバリアント、またはDSに関連するSCN1A遺伝子の重要性が不確かなバリアントを有しなければならない。SCN1A試験結果が陰性(臨床的意義のバリアントが特定されていない)の患者は登録することができない;(vi)患者は、適切な発作制御がない(追加のAEDが必要である)かまたはAE(複数可)のために中止しなければならなかったてんかんの処置を少なくとも2回受けたことがある;(vii)患者は、最初の観察期間中に4回以上のけいれん性発作(ヘミクロニック、運動徴候を伴う限局性、限局性から両側性の強直間代性けいれん、全身性強直間代性けいれん、強直性、強直性/無緊張性(落下発作)、およびクロニック)を経験している必要がある;(viii)患者は現在、スクリーニング前に少なくとも4週間安定している用量で少なくとも1つのAEDを服用していなければならない;(ix)全てのてんかん医薬またはてんかんに対する介入(ケトン食療法または迷走神経刺激装置を含む)は、スクリーニング前の少なくとも4週間は安定している必要がある(製品の種類、用量、および設定を含む);(x)マリファナもしくはカンナビノイドベースの製品または医薬品は許可されるが、処置は、サプライヤー、比率、および用量を含め、スクリーニング前に少なくとも4週間安定している必要がある;ならびに(xi)患者は、IT薬剤投与手順に関する年齢に適した施設のガイドラインを満たさなければならない。
[0678]次の基準(除外基準)を満たす患者は適格ではない場合がある:(i)患者は、SCN1A遺伝子において次の突然変異のいずれかを有する:Thr226Met、Leu263Val、Val422Leu、Thr1174Ser、Trp1204Arg、Pro1345Ser、Gln1489Lys、Phe1499Leu、Arg1575Cys、Val1611Phe、Leu1624Pro、Arg1648Cys、Leu1649Gln、Leu1670Trp、Gly1674Arg、またはAsp1866Tyr;(ii)患者は、てんかんを引き起こす別の遺伝子に公知の病原性突然変異を有する。(公知の劣性疾患の場合、病原性突然変異はホモ接合でなければならない);(iii)患者は、現在、フェニトイン、カルバマゼピン、オキシカルバゼピン、ラモトリジン、ラコサミド、またはルフィナミドを含む維持処置としてナトリウムチャネル遮断薬で処置されている;(iv)患者は、てんかん以外の臨床的に重大な不安定な医学的状態を有する;(v)患者は、てんかん以外の、スクリーニング前または1日目の投薬前の4週間に、臨床的に関連する症状または臨床的に重大な病気を有していた;(vi)患者は、脳もしくは脊髄疾患(てんかんまたはDSを除く)の病歴、または細菌性髄膜炎股もしくは脳奇形の病歴を有する;(vii)患者は、CSFの自由な流れを変更する可能性のある脊椎変形もしくは他の状態を有するか、または移植されたCSFドレナージシャントを有する;(viii)患者は、スクリーニング時または1日目の投薬前に臨床的に有意な(治験責任医師の判断において)異常な検査値を有する;(ix)患者は、スクリーニング時および反復検査時に、ASTまたはALT>2.5倍のULN、血清クレアチニン>ULN、または血小板数<正常下限値を有する;(x)患者は、スクリーニング時または1日目の投薬前に測定された12誘導心電図に臨床的に関連する異常を有する;(xi)患者は、精神障害または行動障害を有し、治験責任医師の意見では、患者の研究への参加を妨げる可能性がある;(xii)患者は、現在または過去4週間にいずれかの抗凝固薬(アスピリンを除く)を服用している;(xiii)出産の可能性のある女性患者およびパートナーが出産の可能性のある男性患者は、ただし、彼らまたはそのパートナーが、研究中およびその後3ヶ月間、禁欲、経口避妊薬、二重バリア、または子宮内避妊器具などの効果的な避妊薬を使用することを保証する意思がないという場合;(xiv)研究期間中、およびSTK-001の最後の投与後3ヶ月間、妊娠中、授乳中、または妊娠を計画している患者;(xv)スクリーニング前の2ヶ月以内に研究中の製造物を伴う盲検臨床試験に現在登録されているかまたはその一部である患者;ならびに(xvi)患者は、研究者の意見では、研究への参加のために患者を危険にさらす可能性があるか、研究の結果に影響を与える可能性があるか、または研究に参加する患者の能力に影響を与える可能性があるいずれかの他の重大な疾患または障害を有する。
[0679]STK-001の作用機序は、機能獲得的突然変異タンパク質のレベルの増加を引き起こす場合があり、処置は、症状の悪化をもたらす場合がある。SCN1Aにおいて機能獲得的突然変異を有する患者は、DS診断の基準を満たさないため、研究から除外される可能性がある。
治療剤の投与
[0680]薬剤製造物は、人工脳脊髄液(aCSF)溶液で希釈し、続いて髄腔内投与することが意図される濃縮物である。投与用の希釈剤aCSFは、薬剤製剤とともに供給される。製剤は、例えば、5.0mLの回収を可能にするのに十分な充填量で製造することができる。この溶液は、本質的に可視粒子を含まない透明な無色の液体である。薬剤の保存、調整および投薬に関する指示書を含むことができる。
[0680]薬剤製造物は、人工脳脊髄液(aCSF)溶液で希釈し、続いて髄腔内投与することが意図される濃縮物である。投与用の希釈剤aCSFは、薬剤製剤とともに供給される。製剤は、例えば、5.0mLの回収を可能にするのに十分な充填量で製造することができる。この溶液は、本質的に可視粒子を含まない透明な無色の液体である。薬剤の保存、調整および投薬に関する指示書を含むことができる。
[0681]投与方法:希釈した薬剤製剤をIT遅延ボーラスとして投与することができる。
[0682]例示的な薬物製剤は、適切な濃度の1バイアルの薬剤製剤;1バイアルのCSF希釈剤;および混合用の1つの空の無菌バイアルの3バイアルで構成されるキットにおいて提供される。輸送中の劣化から製造物を保護するような方法で適切にパッケージングされ、研究機関で、例えば-20℃で凍結保存される。保存および輸送条件に関するさらなる情報を提供することができる。研究薬剤は、ドライアイスで出荷し、例えば-20℃で機関で保存することができる。
[0682]例示的な薬物製剤は、適切な濃度の1バイアルの薬剤製剤;1バイアルのCSF希釈剤;および混合用の1つの空の無菌バイアルの3バイアルで構成されるキットにおいて提供される。輸送中の劣化から製造物を保護するような方法で適切にパッケージングされ、研究機関で、例えば-20℃で凍結保存される。保存および輸送条件に関するさらなる情報を提供することができる。研究薬剤は、ドライアイスで出荷し、例えば-20℃で機関で保存することができる。
[0683]本明細書に記載される治療剤、例えば、STK-001に加えて、患者は、研究中に少なくとも1つのAEDを服用することができ、患者が服用する任意のAEDは、スクリーニング前および投薬後に安定した用量で維持することができる。一部の例では、患者は、研究中に少なくとも1つのAEDを服用することができ、患者が服用するAEDは、本明細書に記載される治療剤、例えば、STK-001に加えて、スクリーニング前の少なくとも4週間、および最初の、例えば、服用後12週間、安定した用量で維持することができる。てんかんに対する例示的な医薬または介入には、限定されないが、ケトン生成食、迷走神経刺激薬、カンナビノイドまたはマリファナ由来の製造物が含まれる。家庭用に許容される例示的な救出薬には、限定されないが、ロラゼパム、ミダゾラム、およびジアゼパムが含まれる。ロラゼパムは、必要に応じて0.1~0.2mg/kg(PRN)を口腔内、舌下、または静脈内で使用され得る。ミダゾラムは、0.1~0.2mg/kgのPRNを鼻腔内、口腔内、または静脈内で使用され得る。ジアゼパムは、0.2~0.5mg/kgのPRNを直腸または静脈内で使用され得る。
[0684]本明細書に記載される治療剤、例えば、STK-001と併用することができない例示的な医薬には、限定されないが、維持処置としてのナトリウムチャネル遮断薬(例えば、フェニトイン、カルバマゼピン、オキシカルバゼピン、ラモトリギン、ラコサミド、またはルフィナミド)、抗凝固剤(アスピリンを除く)、およびいずれもの研究中の製造物またはデバイスが含まれる。
研究評価
[0685]てんかん遺伝学パネル試験:スクリーニング時に唾液試料を収集し、患者のDS突然変異の決定および適格性の確認を行う。試料は、遺伝性てんかんパネルを用いて分析される。パネルはまた、てんかんの症候性と非症候性の原因(SCN1Aを含む)の両方に関連する遺伝子を分析しており、遺伝性てんかんの包括的な分析を提供している。
[0685]てんかん遺伝学パネル試験:スクリーニング時に唾液試料を収集し、患者のDS突然変異の決定および適格性の確認を行う。試料は、遺伝性てんかんパネルを用いて分析される。パネルはまた、てんかんの症候性と非症候性の原因(SCN1Aを含む)の両方に関連する遺伝子を分析しており、遺伝性てんかんの包括的な分析を提供している。
[0686]ベースライン評価:全ての患者について収集されるべき例示的な患者人口統計学的データおよびベースライン特性データは、限定されないが、スクリーニング時の年齢、性別、人種/民族性、DS疾患発症年齢、DSの診断および処置歴が含まれる。
実施例20:SCN1Aの核遺伝子出力の標的化された増強(TANGO)は、ドラベ症候群のマウスモデルにおいて発作を低減させ、パルブアルブミン陽性ニューロン間発火頻度を救出する
[0687]ドラベ症候群(DS)は、高い発作頻度および重症度、知的障害、ならびにてんかんの突然の予期せぬ死亡(SUDEP)の高いリスクによって特徴付けられる重症であり、進行性の発達性およびてんかん性脳症である。DS症例の約85%は、電位依存性Na+チャネルαサブユニットNaV1.1をコードするSCN1A遺伝子における機能欠損突然変異の自然発生的なヘテロ接合により引き起こされる。本発明者らは、Scn1a mRNAおよびNaV1.1タンパク質の内因性発現を増加させるために、アンチセンスオリゴヌクレオチド(ASO)を用いてDSを処置するための新規な治療法を開発した。本発明者らは、以前に多くの患者表現型を再現することが示されているF2:129S-Scn1a+/-x C57BL/6J DSマウスモデルを用いてこのアプローチを試験している。
[0687]ドラベ症候群(DS)は、高い発作頻度および重症度、知的障害、ならびにてんかんの突然の予期せぬ死亡(SUDEP)の高いリスクによって特徴付けられる重症であり、進行性の発達性およびてんかん性脳症である。DS症例の約85%は、電位依存性Na+チャネルαサブユニットNaV1.1をコードするSCN1A遺伝子における機能欠損突然変異の自然発生的なヘテロ接合により引き起こされる。本発明者らは、Scn1a mRNAおよびNaV1.1タンパク質の内因性発現を増加させるために、アンチセンスオリゴヌクレオチド(ASO)を用いてDSを処置するための新規な治療法を開発した。本発明者らは、以前に多くの患者表現型を再現することが示されているF2:129S-Scn1a+/-x C57BL/6J DSマウスモデルを用いてこのアプローチを試験している。
方法
[0688]標的タンパク質発現を増加させるために天然に存在する非生産的スプライシング事象を調節する核遺伝子出力の標的化された増強(TANGO)を用いて、in vivoで生産的Scn1a mRNAおよびNaV1.1タンパク質を増加させることができるASO(STK-001)をスクリーニングし、同定した。本発明者らは、出生後(P)2日目に、20μgのTANGO ASOまたはPBS対照をDSマウスおよび野生型(WT)同腹仔に単回脳室内(ICV)注射により投与した。マウスは、離乳前(P13~19)および離乳後(P20~40)の脳波検査(EEG)によってモニタリングされた。DSマウスはまた、パルブアルブミン(PV)-tdTomato蛍光レポーターを半接合したWTマウスと交配して、PV発現介在ニューロンにおいて特異的にtdTomatoを発現するDSマウスを作製した。これらのマウスは、P2でICV投与により20μgのASOまたはPBSを受け、次に、P17と23の間の体性感覚皮質におけるtdTomato発現細胞から電気生理学的記録を取った。
[0688]標的タンパク質発現を増加させるために天然に存在する非生産的スプライシング事象を調節する核遺伝子出力の標的化された増強(TANGO)を用いて、in vivoで生産的Scn1a mRNAおよびNaV1.1タンパク質を増加させることができるASO(STK-001)をスクリーニングし、同定した。本発明者らは、出生後(P)2日目に、20μgのTANGO ASOまたはPBS対照をDSマウスおよび野生型(WT)同腹仔に単回脳室内(ICV)注射により投与した。マウスは、離乳前(P13~19)および離乳後(P20~40)の脳波検査(EEG)によってモニタリングされた。DSマウスはまた、パルブアルブミン(PV)-tdTomato蛍光レポーターを半接合したWTマウスと交配して、PV発現介在ニューロンにおいて特異的にtdTomatoを発現するDSマウスを作製した。これらのマウスは、P2でICV投与により20μgのASOまたはPBSを受け、次に、P17と23の間の体性感覚皮質におけるtdTomato発現細胞から電気生理学的記録を取った。
結果
[0689]16日前のいずれのマウスにおいても発作は検出されなかった。P16~19の間に、ASO注射されたDSマウスは発作がない状態を継続したが(0/5動物)、一方、PBS注射された対照DSマウスの50%(4/8動物)は発作があった。離乳後(P20~40)に評価した場合、2/11のP2 ASO注射されたDSマウスは発作を発症し、1匹が死亡したが、一方、9/11のP2 PBS注射された対照DSマウスは発作を発症し、7匹が死亡した。P17~P23の間で評価されたDSマウスにおけるPV介在ニューロンの発火頻度は有意に障害された。DS PV介在ニューロンは、WT PV介在ニューロンよりも有意に低い頻度(P<0.05)で、一連の電流注入段階にわたって発火した。P2でのASO処置後、DSマウスにおけるPV介在ニューロンの発火頻度は増加し、もはやWTレベルと有意差はなかった。
[0689]16日前のいずれのマウスにおいても発作は検出されなかった。P16~19の間に、ASO注射されたDSマウスは発作がない状態を継続したが(0/5動物)、一方、PBS注射された対照DSマウスの50%(4/8動物)は発作があった。離乳後(P20~40)に評価した場合、2/11のP2 ASO注射されたDSマウスは発作を発症し、1匹が死亡したが、一方、9/11のP2 PBS注射された対照DSマウスは発作を発症し、7匹が死亡した。P17~P23の間で評価されたDSマウスにおけるPV介在ニューロンの発火頻度は有意に障害された。DS PV介在ニューロンは、WT PV介在ニューロンよりも有意に低い頻度(P<0.05)で、一連の電流注入段階にわたって発火した。P2でのASO処置後、DSマウスにおけるPV介在ニューロンの発火頻度は増加し、もはやWTレベルと有意差はなかった。
結論
[0690]これらの結果は、SCN1A連結DSのマウスモデルにおいて、TANGOASOを用いて達成されたScn1aおよびNaV1.1発現の増加が発作および死亡率を大幅に減少し得ることを示す証拠を提供する。さらに、現在のデータは、DS表現型の改善は、部分的にPV発現介在ニューロンの興奮性の回復によるものであるという仮説を支持する。
[0690]これらの結果は、SCN1A連結DSのマウスモデルにおいて、TANGOASOを用いて達成されたScn1aおよびNaV1.1発現の増加が発作および死亡率を大幅に減少し得ることを示す証拠を提供する。さらに、現在のデータは、DS表現型の改善は、部分的にPV発現介在ニューロンの興奮性の回復によるものであるという仮説を支持する。
実施例21:SCN1Aの核遺伝子出力の標的化された増強(TANGO)は、ドラベ症候群のマウスモデルにおいて発作を減少させ、パルブアルブミン陽性介在ニューロン発火頻度を救出する
[0691]ドラベ症候群(DS)は、重度の発達性およびてんかん性脳症である。DSは主に、抑制性介在ニューロンの機能低下をもたらす生理学的機能喪失型SCN1A突然変異によって引き起こされる。患者は難治性発作、認知障害および運動障害を患い、SUDEPのかなりのリスクを有する。疾患の遺伝的原因に直接対処する治療戦略が求められる。
[0691]ドラベ症候群(DS)は、重度の発達性およびてんかん性脳症である。DSは主に、抑制性介在ニューロンの機能低下をもたらす生理学的機能喪失型SCN1A突然変異によって引き起こされる。患者は難治性発作、認知障害および運動障害を患い、SUDEPのかなりのリスクを有する。疾患の遺伝的原因に直接対処する治療戦略が求められる。
[0692]STK-001はDSマウスにおいて発作頻度を低減させ、生存期間を延長させたが、WTマウスでは有意な有害作用は観察されなかった。STK-001による処置は、DSマウスにおけるパルブアルブミン陽性の抑制性介在ニューロンのニューロン興奮性を救出し、抑制性介在ニューロンへの興奮性の回復が、DSマウスの発作および死亡からの救出に有効なアプローチであるという仮説を支持するものである。
[0693]潜在的な将来の評価:電位依存性ナトリウムチャネル活性の電気生理学的記録の収集;他の抑制性介在ニューロン集団(SST、VIPなど)における効果の探求;ネットワーク興奮性(シナプス抑制など)における影響の調査。
実施例22:ドラベ症候群を有する小児および青年におけるアンチセンスオリゴヌクレオチドSTK-001の安全性および薬物動態:非盲検第1/2a相のMONARCH研究のための単回および複数回の漸増用量デザイン
根拠
[0694]ドラベ症候群(DS)は、生後1年で始まり、高い発作頻度と重症度、知的障害、およびてんかんの突然の予期せぬ死亡の高いリスクによって特徴付けられる重症であり、進行性の発達性およびてんかん性脳症である。DS症例の約85%は、電位依存性ナトリウムチャネルアルファサブユニットNaV1.1をコードするSCN1A遺伝子における機能欠損突然変異の自然発生的なヘテロ接合により引き起こされる。NaV1.1タンパク質発現の上方制御は、機能性ニューロンを回復させ、発作および重大な非発作の併存症の発現を予防することができる。STK-001は、NaV1.1タンパク質発現を増加させるために天然に存在する非生産的スプライシング事象を利用する、固有のプラットフォームである核遺伝子出力の標的化された増強(TANGO)を用いた研究中のアンチセンスオリゴヌクレオチド処置である。現在の処置は発作制御に焦点を当てている。STK-001は、DSに対する最初の精密医学的アプローチであり得る。本臨床試験の目的は、主に髄腔内投与されたSTK-001の安全性、耐容性および薬物動態を評価することである。副次目的は、ドラベ症候群患者におけるけいれん性発作頻度、全体的な臨床状態および生活の質におけるSTK-001の効果を評価することである。
根拠
[0694]ドラベ症候群(DS)は、生後1年で始まり、高い発作頻度と重症度、知的障害、およびてんかんの突然の予期せぬ死亡の高いリスクによって特徴付けられる重症であり、進行性の発達性およびてんかん性脳症である。DS症例の約85%は、電位依存性ナトリウムチャネルアルファサブユニットNaV1.1をコードするSCN1A遺伝子における機能欠損突然変異の自然発生的なヘテロ接合により引き起こされる。NaV1.1タンパク質発現の上方制御は、機能性ニューロンを回復させ、発作および重大な非発作の併存症の発現を予防することができる。STK-001は、NaV1.1タンパク質発現を増加させるために天然に存在する非生産的スプライシング事象を利用する、固有のプラットフォームである核遺伝子出力の標的化された増強(TANGO)を用いた研究中のアンチセンスオリゴヌクレオチド処置である。現在の処置は発作制御に焦点を当てている。STK-001は、DSに対する最初の精密医学的アプローチであり得る。本臨床試験の目的は、主に髄腔内投与されたSTK-001の安全性、耐容性および薬物動態を評価することである。副次目的は、ドラベ症候群患者におけるけいれん性発作頻度、全体的な臨床状態および生活の質におけるSTK-001の効果を評価することである。
方法
[0695]この第1/2a相非盲検単回漸増用量試験には、再発性発作(限局性運動、半けいれん性または全身性強直間代)および遺伝的に確認されたSCN1Aバリアントを伴う12ヵ月齢前に発症した疾患を有する2~18歳の患者が含まれる。年齢(2~12歳および13~18歳)に基づく2つのコホートにSTK-001を髄腔内(IT)に単回投与する。各コホートは、臨床評価に基づき、コホートあたり最大3例の追加患者を同じレベルで投薬する選択肢を有する最大4例の患者を登録する。全患者に発作頻度を評価する28日間の観察期間を設ける。1日目に、患者は、脳脊髄液(CSF)収集を受け、続いて、STK-001をITで単回投与し、24時間後に評価される。投薬後6ヵ月間の追跡調査期間がある。有害事象は研究を通じてモニタリングされる。血漿およびCSFは複数の時間点で収集される。患者はまた、研究の全期間中、発作/睡眠日誌を保管する。
[0695]この第1/2a相非盲検単回漸増用量試験には、再発性発作(限局性運動、半けいれん性または全身性強直間代)および遺伝的に確認されたSCN1Aバリアントを伴う12ヵ月齢前に発症した疾患を有する2~18歳の患者が含まれる。年齢(2~12歳および13~18歳)に基づく2つのコホートにSTK-001を髄腔内(IT)に単回投与する。各コホートは、臨床評価に基づき、コホートあたり最大3例の追加患者を同じレベルで投薬する選択肢を有する最大4例の患者を登録する。全患者に発作頻度を評価する28日間の観察期間を設ける。1日目に、患者は、脳脊髄液(CSF)収集を受け、続いて、STK-001をITで単回投与し、24時間後に評価される。投薬後6ヵ月間の追跡調査期間がある。有害事象は研究を通じてモニタリングされる。血漿およびCSFは複数の時間点で収集される。患者はまた、研究の全期間中、発作/睡眠日誌を保管する。
結果
[0696]本研究は、DS患者におけるSTK-001の漸増用量の安全性、耐容性、および薬物動態プロファイルについての洞察を提供する。さらに、けいれん性発作の頻度および生活の質におけるSTK-001の影響は、個々の用量の初期の臨床効果を示すことができる。
[0696]本研究は、DS患者におけるSTK-001の漸増用量の安全性、耐容性、および薬物動態プロファイルについての洞察を提供する。さらに、けいれん性発作の頻度および生活の質におけるSTK-001の影響は、個々の用量の初期の臨床効果を示すことができる。
結論
[0697]STK-001は、生理学的NaV1.1レベルを回復させ、発作と重大な非発作併存疾患の発症を低減させることにより、DSの遺伝的原因に対処する最初の疾患修飾療法となる可能性がある。この研究の用量の意味合いは、有効性測定のための適切であり、有効な投薬について、将来の臨床試験により良い情報を提供する。
[0697]STK-001は、生理学的NaV1.1レベルを回復させ、発作と重大な非発作併存疾患の発症を低減させることにより、DSの遺伝的原因に対処する最初の疾患修飾療法となる可能性がある。この研究の用量の意味合いは、有効性測定のための適切であり、有効な投薬について、将来の臨床試験により良い情報を提供する。
実施例23:ドラベ症候群を有する小児および青年におけるアンチセンスオリゴヌクレオチドSTK-001の安全性および薬物動態:非盲検第1/2a相のMONARCH研究のための単回漸増用量デザイン
背景
[0698]ドラベ症候群(DS)は、生後1年以内に始まる頻発性、遷延性、および難治性の発作によって特徴付けられる重症であり、進行性の遺伝性てんかんである。利用可能な治療は、DS患者の90%において発作を適切に制御するものではなく、知的障害、発達遅延、運動および言語障害、行動上の問題、睡眠異常、ならびにてんかんの突然の予期せぬ死亡のリスクの増加加などの疾患の他の側面に対処していない。疾患の合併症は、患者および彼らの介護者の生活の質の低下の一因となることが多い。症例の約85%において、DSは、電圧依存性ナトリウムチャネル1型αサブユニット(Nav1.1)をコードするSCN1A遺伝子における機能突然変異の自然発生的なヘテロ接合性欠損によって引き起こされる。Nav1.1の上方制御は、機能するニューロンを回復させ、発作を予防し、DSにおける非発作関連の併存疾患を低減させることができる。
背景
[0698]ドラベ症候群(DS)は、生後1年以内に始まる頻発性、遷延性、および難治性の発作によって特徴付けられる重症であり、進行性の遺伝性てんかんである。利用可能な治療は、DS患者の90%において発作を適切に制御するものではなく、知的障害、発達遅延、運動および言語障害、行動上の問題、睡眠異常、ならびにてんかんの突然の予期せぬ死亡のリスクの増加加などの疾患の他の側面に対処していない。疾患の合併症は、患者および彼らの介護者の生活の質の低下の一因となることが多い。症例の約85%において、DSは、電圧依存性ナトリウムチャネル1型αサブユニット(Nav1.1)をコードするSCN1A遺伝子における機能突然変異の自然発生的なヘテロ接合性欠損によって引き起こされる。Nav1.1の上方制御は、機能するニューロンを回復させ、発作を予防し、DSにおける非発作関連の併存疾患を低減させることができる。
STK-001
[0699]STK-001は、生理学的NaV1.1レベルを回復するためにSCN1Aの非突然変異型(野生型)コピーを利用することによって、Nav1.1タンパク質発現を上方制御するようにデザインされた研究中の独自のアンチセンスオリゴヌクレオチド(ASO)である。
[0699]STK-001は、生理学的NaV1.1レベルを回復するためにSCN1Aの非突然変異型(野生型)コピーを利用することによって、Nav1.1タンパク質発現を上方制御するようにデザインされた研究中の独自のアンチセンスオリゴヌクレオチド(ASO)である。
[0700]独自のTANGOプラットフォームは、健常な遺伝子のコピーからのタンパク質産生を増加させることを目的とする。DSでは、患者は、1つの機能性遺伝子コピー(オレンジ色)と1つの突然変異型コピー(赤色)を有し、その結果、健康を維持するのに必要なタンパク質の半分になる。これらの遺伝子は、プレメッセンジャーRNA(プレmRNA)に転写される;ほとんどのプレmRNAは生産的であり、タンパク質産生の鋳型となるが、一部は非生産的なプレmRNAになる。合成されたASO(緑色)はプレmRNAの特定の領域に結合し、非生産的mRNAの合成を減少させ、生産的mRNAの合成を増加させる。機能性遺伝子コピーからの生産的mRNAレベルの増加は、タンパク質産生を増加させ、それによって標的タンパク質をほぼ正常レベルに回復させる。
[0701]STK-001は、DSに対するファーストインクラスの疾患改変薬(または精密医療)であり得る。
方法:研究デザイン
[0702]各用量コホートには最大4例の患者が登録され、安全性評価のためにコホートあたり最大6例の追加の患者に投薬する選択肢がある。パートA:3用量レベル:10、20、および30mgの単回増量(SAD);パートB:複数回増量(MAD):4週間ごとに3用量を与える。
方法:研究デザイン
[0702]各用量コホートには最大4例の患者が登録され、安全性評価のためにコホートあたり最大6例の追加の患者に投薬する選択肢がある。パートA:3用量レベル:10、20、および30mgの単回増量(SAD);パートB:複数回増量(MAD):4週間ごとに3用量を与える。
[0703]本試験で30mgを超える用量は、FDAの部分的臨床試験中である。用量漸増は、安全性モニタリング委員会(外部審査官を含む)による安全性および耐容性の評価に基づく。投薬は13~18歳の各コホートで開始し、若年患者(2~12歳)には社内の安全チームが投与を承認する。
[0704]研究来院は以下を含む(図26):スクリーニング来院;4週間の観察期間:現在の抗てんかん薬療法、ケトン体生成食、または迷走神経刺激薬の設定に変化なし;この期間中の介護者は小児の発作頻度を追跡する;ベースライン来院:血液および尿の分析、生活の質、神経学的および一般的な小児の評価;入院処置期間:患者は投薬日に入院し、投薬後の評価が完了した後に退院する。全患者にSTK-001を髄腔内投与し、追跡期間は6ヵ月とする。
[0705]本研究を完了した患者は、彼らが登録基準を満たす場合、非盲検延長試験においてSTK-001を受ける選択肢を有する。
実施例24:ドラベ症候群を有する小児および青年におけるアンチセンスオリゴヌクレオチドSTK-001の安全性および薬物動態:非盲検第1/2a相のMONARCH研究のための単回および複数回の漸増用量デザイン
導入
[0706]ドラベ症候群(DS)は、生後1年以内に始まる頻発性、遷延性、および難治性の発作によって特徴付けられる重症であり、進行性の遺伝性てんかんである。利用可能な治療は、DS患者の90%において発作を適切に制御するものではなく、知的障害、発達遅延、運動および言語障害、行動上の問題、睡眠異常、ならびにてんかんの突然の予期せぬ死亡のリスクの増加加などの疾患の他の側面に対処していない。疾患の合併症は、患者および彼らの介護者の生活の質の低下の一因となることが多い。症例の約85%において、DSは、電圧依存性ナトリウムチャネル1型αサブユニット(Nav1.1)をコードするSCN1A遺伝子における機能突然変異の自然発生的なヘテロ接合性欠損によって引き起こされる。Nav1.1の上方制御は、機能するニューロンを回復させ、発作を予防し、DSにおける非発作関連の併存疾患を低減させることができる。
実施例24:ドラベ症候群を有する小児および青年におけるアンチセンスオリゴヌクレオチドSTK-001の安全性および薬物動態:非盲検第1/2a相のMONARCH研究のための単回および複数回の漸増用量デザイン
導入
[0706]ドラベ症候群(DS)は、生後1年以内に始まる頻発性、遷延性、および難治性の発作によって特徴付けられる重症であり、進行性の遺伝性てんかんである。利用可能な治療は、DS患者の90%において発作を適切に制御するものではなく、知的障害、発達遅延、運動および言語障害、行動上の問題、睡眠異常、ならびにてんかんの突然の予期せぬ死亡のリスクの増加加などの疾患の他の側面に対処していない。疾患の合併症は、患者および彼らの介護者の生活の質の低下の一因となることが多い。症例の約85%において、DSは、電圧依存性ナトリウムチャネル1型αサブユニット(Nav1.1)をコードするSCN1A遺伝子における機能突然変異の自然発生的なヘテロ接合性欠損によって引き起こされる。Nav1.1の上方制御は、機能するニューロンを回復させ、発作を予防し、DSにおける非発作関連の併存疾患を低減させることができる。
STK-001
[0707]STK-001は、生理学的NaV1.1レベルを回復するためにSCN1Aの非突然変異型(野生型)コピーを利用することにより、Nav1.1タンパク質発現を上方制御するようにデザインされた研究中の独自のアンチセンスオリゴヌクレオチド(ASO)である。
[0707]STK-001は、生理学的NaV1.1レベルを回復するためにSCN1Aの非突然変異型(野生型)コピーを利用することにより、Nav1.1タンパク質発現を上方制御するようにデザインされた研究中の独自のアンチセンスオリゴヌクレオチド(ASO)である。
[0708]独自のTANGOプラットフォームは、遺伝子の健全なコピーからのタンパク質産生を増加させることを目的とする(図24)。DSでは、患者は、1つの機能性遺伝子コピー(オレンジ色)および1つの突然変異コピー(赤色)を有し、健康を維持するのに必要な量の半分のタンパク質をもたらす。これらの遺伝子は、プレメッセンジャーRNA(プレmRNA)に転写され、ほとんどのプレmRNAは生産的であり、タンパク質産生の鋳型となるが、一部は非生産的なプレmRNAとなる。合成されたASO(緑色)はプレmRNAの特定の領域に結合し、非生産的mRNAの合成を低減させ、生産的mRNAの合成を増加させる。機能性遺伝子コピーからの生産的mRNAのレベルの増加は、タンパク質産生を増加させ、それによって標的タンパク質をほぼ正常レベルに回復させる。
[0709]STK-001は、DSに対するファーストインクラスの疾患改変薬(または精密医療)であり得る。
研究デザイン
[0710]各用量コホートには最大4例の患者が登録され、安全性評価のためにコホートあたり最大6例の追加の患者に投薬する選択肢がある。パートA:3用量レベル:10、20、および30mgの単回増量(SAD);パートB:複数回増量(MAD):4週間ごとに3用量を与える。
研究デザイン
[0710]各用量コホートには最大4例の患者が登録され、安全性評価のためにコホートあたり最大6例の追加の患者に投薬する選択肢がある。パートA:3用量レベル:10、20、および30mgの単回増量(SAD);パートB:複数回増量(MAD):4週間ごとに3用量を与える。
[0711]本試験で30mgを超える用量は、FDAの部分的臨床試験中である。用量漸増は、安全性モニタリング委員会(外部審査官を含む)による安全性および耐容性の評価に基づく。投薬は13~18歳の各コホートで開始し、若年患者(2~12歳)には社内の安全チームが投与を承認する。
[0712]研究来院は以下を含む(図26):スクリーニング来院;4週間の観察期間:現在の抗てんかん薬療法、ケトン体生成食、または迷走神経刺激薬の設定に変化なし;この期間中の介護者は小児の発作頻度を追跡する;ベースライン来院:血液および尿の分析、生活の質、神経学的および一般的な小児の評価;入院処置期間:患者は投薬日に入院し、投薬後の評価が完了した後に退院する。全患者にSTK-001を髄腔内投与し、追跡期間は6ヵ月とする。
[0713]本研究を完了した患者は、彼らが登録基準を満たす場合、非盲検延長試験においてSTK-001を受ける選択肢を有する。
実施例25:ドラベ症候群を有する小児および青年における単回漸増投薬の安全性を調査する非盲検研究
[0714]状態または疾患:ドラベ症候群
[0715]介入/処置:薬剤:STK-001
[0716]第1相、第2相
詳細な説明
[0717]STK-001は、ドラベ症候群の処置のための研究中の新しい医薬である。STK-001は、生産的SCN1AメッセンジャーRNA(mRNA)のレベルを増加させ、結果としてナトリウムチャネルNav1.1タンパク質の発現を増加させることを意図したアンチセンスオリゴヌクレオチド(ASO)である。このRNAベースのアプローチは、遺伝子処置ではなく、むしろRNA修飾である。これは、遺伝子デオキシリボ核酸(DNA)を操作したり挿入したりしないためである。
実施例25:ドラベ症候群を有する小児および青年における単回漸増投薬の安全性を調査する非盲検研究
[0714]状態または疾患:ドラベ症候群
[0715]介入/処置:薬剤:STK-001
[0716]第1相、第2相
詳細な説明
[0717]STK-001は、ドラベ症候群の処置のための研究中の新しい医薬である。STK-001は、生産的SCN1AメッセンジャーRNA(mRNA)のレベルを増加させ、結果としてナトリウムチャネルNav1.1タンパク質の発現を増加させることを意図したアンチセンスオリゴヌクレオチド(ASO)である。このRNAベースのアプローチは、遺伝子処置ではなく、むしろRNA修飾である。これは、遺伝子デオキシリボ核酸(DNA)を操作したり挿入したりしないためである。
[0718]STK-001は、SCN1A遺伝子の非突然変異型(野生型)コピーからのNav1.1タンパク質発現を上方制御して、生理学的Nav1.1レベルを回復するようにデザインされる。Nav1.1レベルは、ドラベ症候群の患者では低減する。Stokeは、STK-001のメカニズムの証明を実証する前臨床データを作成した。
アームおよび介入:
[0719]アーム:実験:コホート1:STK-001用量レベル1 2つの年齢群の患者の登録。13~18歳(両端を含む)の患者2人からなるセンチネル群、および2~12歳の患者2人からなる拡大群。同レベルで最大3例の追加患者に投薬する選択肢がある。
[0719]アーム:実験:コホート1:STK-001用量レベル1 2つの年齢群の患者の登録。13~18歳(両端を含む)の患者2人からなるセンチネル群、および2~12歳の患者2人からなる拡大群。同レベルで最大3例の追加患者に投薬する選択肢がある。
[0720]薬剤:STK-001-STK-001製剤は、くも膜下腔内注射として投与されるアンチセンスオリゴヌクレオチドである。AA~BB mgの範囲の単回投薬量を投与する。
[0721]アーム:実験:コホート2:STK-001用量レベル2 2つの年齢群の患者の登録。13~18歳(両端を含む)の患者2人からなるセンチネル群、および2~12歳の患者2人からなる拡大群。同レベルで最大3例の追加患者に投薬する選択肢がある。
[0722]薬剤:STK-001-STK-001製剤は、くも膜下腔内注射として投与されるアンチセンスオリゴヌクレオチドである。AA~BB mgの範囲の単回投薬量を投与する。
評価項目:
[0723]主要評価項目:
[0724]1.有害事象の発現率[期間:単剤投薬後7ヵ月までのスクリーニング STK-001の安全性は、有害事象、重篤な有害事象、および薬剤中止に至った有害事象を経験した対象の割合によって評価する。
[0723]主要評価項目:
[0724]1.有害事象の発現率[期間:単剤投薬後7ヵ月までのスクリーニング STK-001の安全性は、有害事象、重篤な有害事象、および薬剤中止に至った有害事象を経験した対象の割合によって評価する。
[0725]2.薬物動態(PK)パラメーター[期間:単剤投薬後7ヵ月までのスクリーニング] STK-001の血漿中濃度の分析
[0726]3.脳脊髄液(CSF)におけるSTK-001の曝露量[期間:単剤投薬後6ヵ月までのスクリーニング]STK-001濃度の測定
[0727]副次的評価項目:
[0728]1.発作頻度の測定[期間:単剤投薬後7ヵ月までのスクリーニング]毎日紙にて測定する
[0729]2.臨床状態の変化[期間:単剤投薬後7ヵ月までのスクリーニング]介護者の全般的変化の印象(CaGIC)で測定した場合の全般的な臨床状態のベースラインからの変化
[0730]スケールの値:a.非常に改善;b.大幅に改善;c.軽度に改善;d.変化なし;e.軽度に悪化;f.大幅に悪化;g.非常に悪化
[0731]3.臨床状態の変化[期間:単剤投薬後7ヵ月までのスクリーニング]全般的変化の印象(CGIC)で測定した場合の全般的な臨床状態のベースラインからの変化
[0732]尺度の値:a.非常に改善;b.大幅に改善;c.軽度に改善;d.変化なし;e.軽度に悪化;f.大幅に悪化;g.非常に悪化
[0733]4.生活の質の測定[期間:単剤投薬後7ヵ月までのスクリーニング]患者の健康状態のベースラインからの変化は、EuroQOL生活の質の質問票、若年版(EQ-5D-Y)を用いて測定される。スケールは0~100のスコアを付ける。高いスコアへの言及は、生活の質の良好な転帰を示す。
[0726]3.脳脊髄液(CSF)におけるSTK-001の曝露量[期間:単剤投薬後6ヵ月までのスクリーニング]STK-001濃度の測定
[0727]副次的評価項目:
[0728]1.発作頻度の測定[期間:単剤投薬後7ヵ月までのスクリーニング]毎日紙にて測定する
[0729]2.臨床状態の変化[期間:単剤投薬後7ヵ月までのスクリーニング]介護者の全般的変化の印象(CaGIC)で測定した場合の全般的な臨床状態のベースラインからの変化
[0730]スケールの値:a.非常に改善;b.大幅に改善;c.軽度に改善;d.変化なし;e.軽度に悪化;f.大幅に悪化;g.非常に悪化
[0731]3.臨床状態の変化[期間:単剤投薬後7ヵ月までのスクリーニング]全般的変化の印象(CGIC)で測定した場合の全般的な臨床状態のベースラインからの変化
[0732]尺度の値:a.非常に改善;b.大幅に改善;c.軽度に改善;d.変化なし;e.軽度に悪化;f.大幅に悪化;g.非常に悪化
[0733]4.生活の質の測定[期間:単剤投薬後7ヵ月までのスクリーニング]患者の健康状態のベースラインからの変化は、EuroQOL生活の質の質問票、若年版(EQ-5D-Y)を用いて測定される。スケールは0~100のスコアを付ける。高いスコアへの言及は、生活の質の良好な転帰を示す。
評価項目:
[0734]主要評価項目:
[0735]研究対象年齢:2歳~18歳(小児、成人)
[0736]研究対象性別:全員
[0737]健常ボランティアの受け入れ:なし
[0738]基準
[0739]組み入れ基準:12ヶ月前に発症し、しばしば高体温によって長期化し、誘発される、再発性限局性運動または半けいれん性もしくは全身性強直間代発作を伴うDSを患っている必要がある;原因となるMRI病変の病歴なし;他の公知の病因なし;発作開始時の正常な発達;文書化された病原性、おそらく病原性のバリアント、またはDSに関連するSCN1A遺伝子の重要性が不確かなバリアント;適切な発作制御がない(追加のAEDが必要)かまたはAE(複数可)のために中止しなければならなかったてんかんの処置を少なくとも2回受けた。現在、スクリーニング前の少なくても4週間安定している用量で少なくとも1つのAEDを服用している;てんかんに対する全ての薬物療法または介入(ケトン性食事または迷走神経刺激薬を含む)は、スクリーニング前の少なくとも4週間は安定していなければならない(製品タイプ、用量、および設定を含む)。
[0734]主要評価項目:
[0735]研究対象年齢:2歳~18歳(小児、成人)
[0736]研究対象性別:全員
[0737]健常ボランティアの受け入れ:なし
[0738]基準
[0739]組み入れ基準:12ヶ月前に発症し、しばしば高体温によって長期化し、誘発される、再発性限局性運動または半けいれん性もしくは全身性強直間代発作を伴うDSを患っている必要がある;原因となるMRI病変の病歴なし;他の公知の病因なし;発作開始時の正常な発達;文書化された病原性、おそらく病原性のバリアント、またはDSに関連するSCN1A遺伝子の重要性が不確かなバリアント;適切な発作制御がない(追加のAEDが必要)かまたはAE(複数可)のために中止しなければならなかったてんかんの処置を少なくとも2回受けた。現在、スクリーニング前の少なくても4週間安定している用量で少なくとも1つのAEDを服用している;てんかんに対する全ての薬物療法または介入(ケトン性食事または迷走神経刺激薬を含む)は、スクリーニング前の少なくとも4週間は安定していなければならない(製品タイプ、用量、および設定を含む)。
[0740]除外基準:てんかんを引き起こす別の遺伝子の公知の病原性突然変異;現在、主にナトリウムチャネル遮断薬として作用する抗てんかん剤、例えば、フェニトイン、カルバマゼピン、オキシカルバゼピン、ラモトリジン、ラコサミド、またはルフィナミドで処置されている;てんかん以外の臨床的に重大な不安定な状態;てんかん以外の、スクリーニング前の4週間または1日目の投薬前に、臨床的に関連する症状または臨床的に重大な病気があった。治験責任医師の意見では、研究への参加のために患者を危険にさらす可能性があるか、研究の結果に影響を与える可能性があるか、または研究に参加する患者の能力に影響を与える可能性がある任意の他の重大な疾患または障害。
[0741]本開示の好ましい実施形態を本明細書に示し、説明したが、このような実施形態が例示としてのみ提供されることは当業者には明らかである。ここで、本開示から逸脱することなく、当業者に多数の変形、変化、および置換が生じる。本明細書に記載される開示の実施形態に対する種々の代替物を、本開示を実施する際に使用することができることが理解されるべきである。以下の特許請求の範囲は、開示の範囲を定義し、これらの特許請求の範囲の範囲内の方法および構造、ならびにそれらの同等物が、それによってカバーされることが意図される。
特定の実施形態
[0742]実施形態1.疾患または状態の処置を必要とする対象において、対象の細胞においてNaV1.1タンパク質の発現をモジュレートすることによって疾患または状態を処置する方法であって、対象に0.5ミリグラム~500ミリグラムのアンチセンスオリゴマー(ASO)を投与するステップを含み、ASOは、細胞においてNMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAからのナンセンス変異依存mRNA崩壊誘導性エクソン(NMDエクソン)のスプライシングをモジュレートし、それによって、NaV1.1タンパク質をコードするプロセシングされたmRNAのレベルをモジュレートし、対象の細胞におけるNaV1.1タンパク質の発現をモジュレートする、方法。
[0742]実施形態1.疾患または状態の処置を必要とする対象において、対象の細胞においてNaV1.1タンパク質の発現をモジュレートすることによって疾患または状態を処置する方法であって、対象に0.5ミリグラム~500ミリグラムのアンチセンスオリゴマー(ASO)を投与するステップを含み、ASOは、細胞においてNMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAからのナンセンス変異依存mRNA崩壊誘導性エクソン(NMDエクソン)のスプライシングをモジュレートし、それによって、NaV1.1タンパク質をコードするプロセシングされたmRNAのレベルをモジュレートし、対象の細胞におけるNaV1.1タンパク質の発現をモジュレートする、方法。
[0743]実施形態2.対象に0.5ミリグラム~500ミリグラムのASOを投与するステップを含む、実施形態1に記載の方法。
[0744]実施形態3.対象に1ミリグラム~300ミリグラムのASOを投与するステップを含む、実施形態1に記載の方法。
[0744]実施形態3.対象に1ミリグラム~300ミリグラムのASOを投与するステップを含む、実施形態1に記載の方法。
[0745]実施形態4.対象に2ミリグラム~300ミリグラムのASOを投与するステップを含む、実施形態1に記載の方法。
[0746]実施形態5.対象に1ミリグラム~200ミリグラムのASOを投与するステップを含む、実施形態1に記載の方法。
[0746]実施形態5.対象に1ミリグラム~200ミリグラムのASOを投与するステップを含む、実施形態1に記載の方法。
[0747]実施形態6.対象に2ミリグラム~200ミリグラムのASOを投与するステップを含む、実施形態1に記載の方法。
[0748]実施形態7.ASOが、
(a)NMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAの標的化される部分に結合する、
(b)NMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAのスプライシングに関与する因子の結合をモジュレートする、または
(c)(a)および(b)の組合せである、実施形態1に記載の方法。
[0748]実施形態7.ASOが、
(a)NMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAの標的化される部分に結合する、
(b)NMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAのスプライシングに関与する因子の結合をモジュレートする、または
(c)(a)および(b)の組合せである、実施形態1に記載の方法。
[0749]実施形態8.ASOが、標的化される部分の領域からのNMDエクソンのスプライシングに関与する因子の結合に干渉する、実施形態7に記載の方法。
[0750]実施形態9.ASOが、NMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードする細胞内のプレmRNAからのナンセンス変異依存mRNA崩壊誘導性エクソン(NMDエクソン)の排除を促進する、実施形態1に記載の方法。
[0750]実施形態9.ASOが、NMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードする細胞内のプレmRNAからのナンセンス変異依存mRNA崩壊誘導性エクソン(NMDエクソン)の排除を促進する、実施形態1に記載の方法。
[0751]実施形態10.標的化される部分が、NMDエクソンに近接している、実施形態7に記載の方法。
[0752]実施形態11.標的化される部分が、NMDエクソンの5’末端の最高で約1500ヌクレオチド、約1000ヌクレオチド、約800ヌクレオチド、約700ヌクレオチド、約600ヌクレオチド、約500ヌクレオチド、約400ヌクレオチド、約300ヌクレオチド、約200ヌクレオチド、約100ヌクレオチド、約80ヌクレオチド、約70ヌクレオチド、約60ヌクレオチド、約50ヌクレオチド上流である、実施形態10に記載の方法。
[0752]実施形態11.標的化される部分が、NMDエクソンの5’末端の最高で約1500ヌクレオチド、約1000ヌクレオチド、約800ヌクレオチド、約700ヌクレオチド、約600ヌクレオチド、約500ヌクレオチド、約400ヌクレオチド、約300ヌクレオチド、約200ヌクレオチド、約100ヌクレオチド、約80ヌクレオチド、約70ヌクレオチド、約60ヌクレオチド、約50ヌクレオチド上流である、実施形態10に記載の方法。
[0753]実施形態12.標的化される部分が、NMDエクソンの5’末端の少なくとも約1500ヌクレオチド、約1000ヌクレオチド、約800ヌクレオチド、約700ヌクレオチド、約600ヌクレオチド、約500ヌクレオチド、約400ヌクレオチド、約300ヌクレオチド、約200ヌクレオチド、約100ヌクレオチド、約80ヌクレオチド、約70ヌクレオチド、約60ヌクレオチド、約50ヌクレオチド、約40ヌクレオチド、約30ヌクレオチド、約20ヌクレオチド、約10ヌクレオチド、約5ヌクレオチド、約4ヌクレオチド、約2ヌクレオチド、約1ヌクレオチド上流である、実施形態10に記載の方法。
[0754]実施形態13.標的化される部分が、NMDエクソンの3’末端の最高で約1500ヌクレオチド、約1000ヌクレオチド、約800ヌクレオチド、約700ヌクレオチド、約600ヌクレオチド、約500ヌクレオチド、約400ヌクレオチド、約300ヌクレオチド、約200ヌクレオチド、約100ヌクレオチド、約80ヌクレオチド、約70ヌクレオチド、約60ヌクレオチド、約50ヌクレオチド下流である、実施形態10に記載の方法。
[0755]実施形態14.標的化される部分が、NMDエクソンの3’末端の少なくとも約1500ヌクレオチド、約1000ヌクレオチド、約800ヌクレオチド、約700ヌクレオチド、約600ヌクレオチド、約500ヌクレオチド、約400ヌクレオチド、約300ヌクレオチド、約200ヌクレオチド、約100ヌクレオチド、約80ヌクレオチド、約70ヌクレオチド、約60ヌクレオチド、約50ヌクレオチド、約40ヌクレオチド、約30ヌクレオチド、約20ヌクレオチド、約10ヌクレオチド、約5ヌクレオチド、約4ヌクレオチド、約2ヌクレオチド、約1ヌクレオチド下流である、実施形態10に記載の方法。
[0756]実施形態15.標的化される部分が、NMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAの2つの標準エクソン領域の間のイントロン領域中に位置し、イントロン領域が、NMDエクソンを含有する、実施形態7に記載の方法。
[0757]実施形態16.標的化される部分が、NMDエクソンと少なくとも部分的に重複する、実施形態7に記載の方法。
[0758]実施形態17.標的化される部分が、NMDエクソンの上流のイントロンと少なくとも部分的に重複する、実施形態7に記載の方法。
[0758]実施形態17.標的化される部分が、NMDエクソンの上流のイントロンと少なくとも部分的に重複する、実施形態7に記載の方法。
[0759]実施形態18.標的化される部分が、5’NMDエクソン-イントロン接合部または3’NMDエクソン-イントロン接合部を含む、実施形態7に記載の方法。
[0760]実施形態19.標的化される部分が、NMDエクソン内にある、実施形態7に記載の方法。
[0760]実施形態19.標的化される部分が、NMDエクソン内にある、実施形態7に記載の方法。
[0761]実施形態20.標的化される部分が、NMDエクソンの約5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30またはそれより多い連続ヌクレオチドを含む、実施形態7に記載の方法。
[0762]実施形態21.NMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAが、配列番号2または7~10のいずれか1つに対して少なくとも約80%、85%、90%、95%、97%または100%の配列同一性を有する配列を含む、実施形態1に記載の方法。
[0763]実施形態22.NMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAが、配列番号1または3~6に対して少なくとも約80%、85%、90%、95%、97%または100%の配列同一性を有する遺伝子配列によってコードされる、実施形態1に記載の方法。
[0764]実施形態23.標的化される部分が、ゲノム部位GRCh37/hg19: chr2:166,863,803の最高で約1500ヌクレオチド、約1000ヌクレオチド、約800ヌクレオチド、約700ヌクレオチド、約600ヌクレオチド、約500ヌクレオチド、約400ヌクレオチド、約300ヌクレオチド、約200ヌクレオチド、約100ヌクレオチド、約80ヌクレオチド、約70ヌクレオチド、約60ヌクレオチド、約50ヌクレオチド上流である、実施形態10に記載の方法。
[0765]実施形態24.標的化される部分が、ゲノム部位GRCh37/hg19:chr2:166,863,803の約1000ヌクレオチド、約800ヌクレオチド、約700ヌクレオチド、約600ヌクレオチド、約500ヌクレオチド、約400ヌクレオチド、約300ヌクレオチド、約200ヌクレオチド、約100ヌクレオチド、約80ヌクレオチド、約70ヌクレオチド、約60ヌクレオチド、約50ヌクレオチド、約40ヌクレオチド、約30ヌクレオチド、約20ヌクレオチド、約10ヌクレオチド、約5ヌクレオチド、約4ヌクレオチド、約2ヌクレオチド、約1ヌクレオチド上流である、実施形態10に記載の方法。
[0766]実施形態25.標的化される部分が、ゲノム部位GRCh37/hg19:chr2:166,863,740の最高で約1500ヌクレオチド、約1000ヌクレオチド、約800ヌクレオチド、約700ヌクレオチド、約600ヌクレオチド、約500ヌクレオチド、約400ヌクレオチド、約300ヌクレオチド、約200ヌクレオチド、約100ヌクレオチド、約80ヌクレオチド、約70ヌクレオチド、約60ヌクレオチド、約50ヌクレオチド下流である、実施形態10に記載の方法。
[0767]実施形態26.標的化される部分が、ゲノム部位GRCh37/hg19: chr2:166,863,740の約1000ヌクレオチド、約800ヌクレオチド、約700ヌクレオチド、約600ヌクレオチド、約500ヌクレオチド、約400ヌクレオチド、約300ヌクレオチド、約200ヌクレオチド、約100ヌクレオチド、約80ヌクレオチド、約70ヌクレオチド、約60ヌクレオチド、約50ヌクレオチド、約40ヌクレオチド、約30ヌクレオチド、約20ヌクレオチド、約10ヌクレオチド、約5ヌクレオチド、約4ヌクレオチド、約2ヌクレオチド、約1ヌクレオチド下流である、実施形態10に記載の方法。
[0768]実施形態27.NMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAの標的化される部分が、配列番号2または7~10の少なくとも8の連続核酸を含む領域に対して少なくとも80%、85%、90%、95%、97%または100%の配列同一性を有する配列を含む、実施形態7に記載の方法。
[0769]実施形態28.ASOが、配列番号21~67、210~256、304~379または380~1099のいずれか1つに対して少なくとも約80%、85%、90%、95%、97%または100%同一性である配列を含む、実施形態1に記載の方法。
[0770]実施形態29.NMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAの標的化される部分が、SCN1Aのナンセンス変異依存RNA崩壊誘導性エクソン20×内にある、実施形態7に記載の方法。
[0771]実施形態30.ASOが、配列番号42~50または231~239のいずれか1つに対して少なくとも約80%、85%、90%、95%、97%または100%同一性である配列を含む、実施形態29に記載の方法。
[0772]実施形態31.NMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAの標的化される部分が、SCN1Aのナンセンス変異依存RNA崩壊誘導性エクソン20×の上流または下流である、実施形態7に記載の方法。
[0773]実施形態32.ASOが、配列番号21~38、53~67、210~227、242~256または380~1099のいずれか1つに対して少なくとも約80%、85%、90%、95%、97%または100%同一性である配列を含む、実施形態31に記載の方法。
[0774]実施形態33.NMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAの標的化される部分が、SCN1Aのエクソン20×のエクソン-イントロン接合部を含む、実施形態7に記載の方法。
[0775]実施形態34.ASOが、配列番号39~41、51、52、228~230、240または241のいずれか1つに対して少なくとも約80%、85%、90%、95%、97%または100%同一性である配列を含む、実施形態33に記載の方法。
[0776]実施形態35.ASOが、NMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAからのNMDエクソンの排除を促進する、実施形態1に記載の方法。
[0777]実施形態36.細胞におけるNMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAからのNMDエクソンの排除が、対照細胞におけるNaV1.1タンパク質をコードするプロセシングされたmRNAからのNMDエクソンの排除と比較して約1.1~約10倍、約1.5~約10倍、約2~約10倍、約3~約10倍、約4~約10倍、約1.1~約5倍、約1.1~約6倍、約1.1~約7倍、約1.1~約8倍、約1.1~約9倍、約2~約5倍、約2~約6倍、約2~約7倍、約2~約8倍、約2~約9倍、約3~約6倍、約3~約7倍、約3~約8倍、約3~約9倍、約4~約7倍、約4~約8倍、約4~約9倍、少なくとも約1.1倍、少なくとも約1.5倍、少なくとも約2倍、少なくとも約2.5倍、少なくとも約3倍、少なくとも約3.5倍、少なくとも約4倍、少なくとも約5倍または少なくとも約10倍増大される、実施形態35に記載の方法。
[0778]実施形態37.ASOが、細胞におけるNaV1.1タンパク質をコードするプロセシングされたmRNAのレベルを増大させる、実施形態35に記載の方法。
[0779]実施形態38.ASOと接触した細胞におけるNaV1.1タンパク質をコードするプロセシングされたmRNAの量が、対照細胞におけるNaV1.1タンパク質をコードするプロセシングされたmRNAの総量と比較して、約1.1~約10倍、約1.5~約10倍、約2~約10倍、約3~約10倍、約4~約10倍、約1.1~約5倍、約1.1~約6倍、約1.1~約7倍、約1.1~約8倍、約1.1~約9倍、約2~約5倍、約2~約6倍、約2~約7倍、約2~約8倍、約2~約9倍、約3~約6倍、約3~約7倍、約3~約8倍、約3~約9倍、約4~約7倍、約4~約8倍、約4~約9倍、少なくとも約1.1倍、少なくとも約1.5倍、少なくとも約2倍、少なくとも約2.5倍、少なくとも約3倍、少なくとも約3.5倍、少なくとも約4倍、少なくとも約5倍または少なくとも約10倍増大される、実施形態35に記載の方法。
[0779]実施形態38.ASOと接触した細胞におけるNaV1.1タンパク質をコードするプロセシングされたmRNAの量が、対照細胞におけるNaV1.1タンパク質をコードするプロセシングされたmRNAの総量と比較して、約1.1~約10倍、約1.5~約10倍、約2~約10倍、約3~約10倍、約4~約10倍、約1.1~約5倍、約1.1~約6倍、約1.1~約7倍、約1.1~約8倍、約1.1~約9倍、約2~約5倍、約2~約6倍、約2~約7倍、約2~約8倍、約2~約9倍、約3~約6倍、約3~約7倍、約3~約8倍、約3~約9倍、約4~約7倍、約4~約8倍、約4~約9倍、少なくとも約1.1倍、少なくとも約1.5倍、少なくとも約2倍、少なくとも約2.5倍、少なくとも約3倍、少なくとも約3.5倍、少なくとも約4倍、少なくとも約5倍または少なくとも約10倍増大される、実施形態35に記載の方法。
[0780]実施形態39.ASOが、細胞におけるNaV1.1タンパク質の発現を増大させる、実施形態35に記載の方法。
[0781]実施形態40.ASOと接触した細胞において産生されたNaV1.1タンパク質の量が、対照細胞において産生されたNaV1.1タンパク質の総量と比較して、約1.1~約10倍、約1.5~約10倍、約2~約10倍、約3~約10倍、約4~約10倍、約1.1~約5倍、約1.1~約6倍、約1.1~約7倍、約1.1~約8倍、約1.1~約9倍、約2~約5倍、約2~約6倍、約2~約7倍、約2~約8倍、約2~約9倍、約3~約6倍、約3~約7倍、約3~約8倍、約3~約9倍、約4~約7倍、約4~約8倍、約4~約9倍、少なくとも約1.1倍、少なくとも約1.5倍、少なくとも約2倍、少なくとも約2.5倍、少なくとも約3倍、少なくとも約3.5倍、少なくとも約4倍、少なくとも約5倍または少なくとも約10倍増大される、実施形態35に記載の方法。
[0781]実施形態40.ASOと接触した細胞において産生されたNaV1.1タンパク質の量が、対照細胞において産生されたNaV1.1タンパク質の総量と比較して、約1.1~約10倍、約1.5~約10倍、約2~約10倍、約3~約10倍、約4~約10倍、約1.1~約5倍、約1.1~約6倍、約1.1~約7倍、約1.1~約8倍、約1.1~約9倍、約2~約5倍、約2~約6倍、約2~約7倍、約2~約8倍、約2~約9倍、約3~約6倍、約3~約7倍、約3~約8倍、約3~約9倍、約4~約7倍、約4~約8倍、約4~約9倍、少なくとも約1.1倍、少なくとも約1.5倍、少なくとも約2倍、少なくとも約2.5倍、少なくとも約3倍、少なくとも約3.5倍、少なくとも約4倍、少なくとも約5倍または少なくとも約10倍増大される、実施形態35に記載の方法。
[0782]実施形態41.疾患または状態が、NaV1.1における機能喪失型突然変異によって誘導される、実施形態1に記載の方法。
[0783]実施形態42.疾患または状態が、SCN1A遺伝子のハプロ不全と関連し、対象が、機能性NaV1.1タンパク質をコードする第1の対立遺伝子と、NaV1.1タンパク質が産生されないか、もしくは低減されたレベルで産生される第2の対立遺伝子、または非機能性NaV1.1タンパク質もしくは部分機能性NaV1.1タンパク質をコードする第2の対立遺伝子とを有する、実施形態41に記載の方法。
[0783]実施形態42.疾患または状態が、SCN1A遺伝子のハプロ不全と関連し、対象が、機能性NaV1.1タンパク質をコードする第1の対立遺伝子と、NaV1.1タンパク質が産生されないか、もしくは低減されたレベルで産生される第2の対立遺伝子、または非機能性NaV1.1タンパク質もしくは部分機能性NaV1.1タンパク質をコードする第2の対立遺伝子とを有する、実施形態41に記載の方法。
[0784]実施形態43.疾患または状態が、脳症である、実施形態41に記載の方法。
[0785]実施形態44.脳症が、てんかん性脳症である、実施形態43に記載の方法。
[0786]実施形態45.疾患または状態が、ドラベ症候群(DS)、乳児期の重症ミオクローヌス性てんかん(SMEI)-境界型(SMEB)、熱性発作(FS)、全身性の熱性発作プラスのてんかん(GEFS+)、てんかん性脳症、早期乳児、13、原因不明性全身性てんかん、原因不明性焦点性てんかん、ミオクローヌス性-失立てんかん、レノックス・ガストー症候群、ウエスト症候群、特発性れん縮、早期ミオクローヌス性脳症、進行性ミオクローヌス性てんかん、小児の交代性片麻痺、未分類てんかん性脳症、てんかんにおける予期せぬ突然死(SUDEP)、洞不全症候群1、自閉症または遊走性焦点発作を伴う乳児てんかんである、実施形態41に記載の方法。
[0785]実施形態44.脳症が、てんかん性脳症である、実施形態43に記載の方法。
[0786]実施形態45.疾患または状態が、ドラベ症候群(DS)、乳児期の重症ミオクローヌス性てんかん(SMEI)-境界型(SMEB)、熱性発作(FS)、全身性の熱性発作プラスのてんかん(GEFS+)、てんかん性脳症、早期乳児、13、原因不明性全身性てんかん、原因不明性焦点性てんかん、ミオクローヌス性-失立てんかん、レノックス・ガストー症候群、ウエスト症候群、特発性れん縮、早期ミオクローヌス性脳症、進行性ミオクローヌス性てんかん、小児の交代性片麻痺、未分類てんかん性脳症、てんかんにおける予期せぬ突然死(SUDEP)、洞不全症候群1、自閉症または遊走性焦点発作を伴う乳児てんかんである、実施形態41に記載の方法。
[0787]実施形態46.GEFS+が、全身性の熱性発作プラスのてんかん、2型である、実施形態45に記載の方法。
[0788]実施形態47.熱性発作が、熱性発作、家族性、3Aである、実施形態45に記載の方法。
[0788]実施形態47.熱性発作が、熱性発作、家族性、3Aである、実施形態45に記載の方法。
[0789]実施形態48.SMEBが、全身性棘波を伴わないSMEB(SMEB-SW)、ミオクローヌス性発作を伴わないSMEB(SMEB-M)、SMEIの2つ以上の特徴を欠くSMEB(SMEB-O)または全身性強直間代性発作を伴う難治性小児てんかん(ICEGTC)である、実施形態45に記載の方法。
[0790]実施形態49.ASOが、NMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAからのNMDエクソンの排除を促進し、細胞におけるNaV1.1タンパク質の発現を増大させる、実施形態41に記載の方法。
[0791]実施形態50.ASOが、配列番号22~24、26、27、29~35、37~62、64~67または304~379のいずれか1つに対して少なくとも約80%、85%、90%、95%、97%または100%相補的である配列を含む、実施形態41に記載の方法。
[0792]実施形態51.ASOが、NaV1.1タンパク質をコードするプロセシングされたmRNAからのNMDエクソンの排除を阻害する、実施形態1に記載の方法。
[0793]実施形態52.ASOと接触した細胞におけるNaV1.1タンパク質をコードするプロセシングされたmRNAからのNMDエクソンの排除が、対照細胞におけるNaV1.1タンパク質をコードするプロセシングされたmRNAからのNMDエクソンの排除と比較して、約1.1~約10倍、約1.5~約10倍、約2~約10倍、約3~約10倍、約4~約10倍、約1.1~約5倍、約1.1~約6倍、約1.1~約7倍、約1.1~約8倍、約1.1~約9倍、約2~約5倍、約2~約6倍、約2~約7倍、約2~約8倍、約2~約9倍、約3~約6倍、約3~約7倍、約3~約8倍、約3~約9倍、約4~約7倍、約4~約8倍、約4~約9倍、少なくとも約1.1倍、少なくとも約1.5倍、少なくとも約2倍、少なくとも約2.5倍、少なくとも約3倍、少なくとも約3.5倍、少なくとも約4倍、少なくとも約5倍または少なくとも約10倍減少される、実施形態51に記載の方法。
[0793]実施形態52.ASOと接触した細胞におけるNaV1.1タンパク質をコードするプロセシングされたmRNAからのNMDエクソンの排除が、対照細胞におけるNaV1.1タンパク質をコードするプロセシングされたmRNAからのNMDエクソンの排除と比較して、約1.1~約10倍、約1.5~約10倍、約2~約10倍、約3~約10倍、約4~約10倍、約1.1~約5倍、約1.1~約6倍、約1.1~約7倍、約1.1~約8倍、約1.1~約9倍、約2~約5倍、約2~約6倍、約2~約7倍、約2~約8倍、約2~約9倍、約3~約6倍、約3~約7倍、約3~約8倍、約3~約9倍、約4~約7倍、約4~約8倍、約4~約9倍、少なくとも約1.1倍、少なくとも約1.5倍、少なくとも約2倍、少なくとも約2.5倍、少なくとも約3倍、少なくとも約3.5倍、少なくとも約4倍、少なくとも約5倍または少なくとも約10倍減少される、実施形態51に記載の方法。
[0794]実施形態53.ASOが、細胞におけるNaV1.1タンパク質をコードするプロセシングされたmRNAのレベルを減少させる、実施形態51に記載の方法。
[0795]実施形態54.ASOと接触した細胞におけるNaV1.1タンパク質をコードするプロセシングされたmRNAの量が、対照細胞におけるNaV1.1タンパク質をコードするプロセシングされたmRNAの総量と比較して、約1.1~約10倍、約1.5~約10倍、約2~約10倍、約3~約10倍、約4~約10倍、約1.1~約5倍、約1.1~約6倍、約1.1~約7倍、約1.1~約8倍、約1.1~約9倍、約2~約5倍、約2~約6倍、約2~約7倍、約2~約8倍、約2~約9倍、約3~約6倍、約3~約7倍、約3~約8倍、約3~約9倍、約4~約7倍、約4~約8倍、約4~約9倍、少なくとも約1.1倍、少なくとも約1.5倍、少なくとも約2倍、少なくとも約2.5倍、少なくとも約3倍、少なくとも約3.5倍、少なくとも約4倍、少なくとも約5倍または少なくとも約10倍減少される、実施形態51に記載の方法。
[0795]実施形態54.ASOと接触した細胞におけるNaV1.1タンパク質をコードするプロセシングされたmRNAの量が、対照細胞におけるNaV1.1タンパク質をコードするプロセシングされたmRNAの総量と比較して、約1.1~約10倍、約1.5~約10倍、約2~約10倍、約3~約10倍、約4~約10倍、約1.1~約5倍、約1.1~約6倍、約1.1~約7倍、約1.1~約8倍、約1.1~約9倍、約2~約5倍、約2~約6倍、約2~約7倍、約2~約8倍、約2~約9倍、約3~約6倍、約3~約7倍、約3~約8倍、約3~約9倍、約4~約7倍、約4~約8倍、約4~約9倍、少なくとも約1.1倍、少なくとも約1.5倍、少なくとも約2倍、少なくとも約2.5倍、少なくとも約3倍、少なくとも約3.5倍、少なくとも約4倍、少なくとも約5倍または少なくとも約10倍減少される、実施形態51に記載の方法。
[0796]実施形態55.ASOが、細胞におけるNaV1.1タンパク質の発現を減少させる、実施形態51に記載の方法。
[0797]実施形態56.ASOと接触した細胞において産生されたNaV1.1タンパク質の量が、対照細胞において産生されたNaV1.1タンパク質の総量と比較して、約1.1~約10倍、約1.5~約10倍、約2~約10倍、約3~約10倍、約4~約10倍、約1.1~約5倍、約1.1~約6倍、約1.1~約7倍、約1.1~約8倍、約1.1~約9倍、約2~約5倍、約2~約6倍、約2~約7倍、約2~約8倍、約2~約9倍、約3~約6倍、約3~約7倍、約3~約8倍、約3~約9倍、約4~約7倍、約4~約8倍、約4~約9倍、少なくとも約1.1倍、少なくとも約1.5倍、少なくとも約2倍、少なくとも約2.5倍、少なくとも約3倍、少なくとも約3.5倍、少なくとも約4倍、少なくとも約5倍または少なくとも約10倍減少される、実施形態51に記載の方法。
[0797]実施形態56.ASOと接触した細胞において産生されたNaV1.1タンパク質の量が、対照細胞において産生されたNaV1.1タンパク質の総量と比較して、約1.1~約10倍、約1.5~約10倍、約2~約10倍、約3~約10倍、約4~約10倍、約1.1~約5倍、約1.1~約6倍、約1.1~約7倍、約1.1~約8倍、約1.1~約9倍、約2~約5倍、約2~約6倍、約2~約7倍、約2~約8倍、約2~約9倍、約3~約6倍、約3~約7倍、約3~約8倍、約3~約9倍、約4~約7倍、約4~約8倍、約4~約9倍、少なくとも約1.1倍、少なくとも約1.5倍、少なくとも約2倍、少なくとも約2.5倍、少なくとも約3倍、少なくとも約3.5倍、少なくとも約4倍、少なくとも約5倍または少なくとも約10倍減少される、実施形態51に記載の方法。
[0798]実施形態57.疾患または状態が、NaV1.1中の機能獲得型突然変異によって誘導される、実施形態1に記載の方法。
[0799]実施形態58.対象が、NaV1.1タンパク質が増大したレベルで産生される対立遺伝子または細胞においてNaV1.1の増大した活性を誘導する突然変異体NaV1.1タンパク質をコードする対立遺伝子を有する、実施形態57に記載の方法。
[0799]実施形態58.対象が、NaV1.1タンパク質が増大したレベルで産生される対立遺伝子または細胞においてNaV1.1の増大した活性を誘導する突然変異体NaV1.1タンパク質をコードする対立遺伝子を有する、実施形態57に記載の方法。
[0800]実施形態59.疾患または状態が、片頭痛である、実施形態57に記載の方法。
[0801]実施形態60.片頭痛が、片頭痛、家族性片麻痺性、3である、実施形態59に記載の方法。
[0801]実施形態60.片頭痛が、片頭痛、家族性片麻痺性、3である、実施形態59に記載の方法。
[0802]実施形態61.疾患または状態が、NaV1.1遺伝子てんかんである、実施形態1に記載の方法。
[0803]実施形態62.ASOが、NaV1.1タンパク質をコードするプロセシングされたmRNAからのNMDエクソンの排除を阻害し、細胞におけるNaV1.1タンパク質の発現を減少させる、実施形態57に記載の方法。
[0803]実施形態62.ASOが、NaV1.1タンパク質をコードするプロセシングされたmRNAからのNMDエクソンの排除を阻害し、細胞におけるNaV1.1タンパク質の発現を減少させる、実施形態57に記載の方法。
[0804]実施形態63.ASOが、配列番号21、25、28、36または63のいずれか1つに対して少なくとも約80%、85%、90%、95%、97%または100%相補的である配列を含む、実施形態57に記載の方法。
[0805]実施形態64.ASOが、ホスホロチオエート結合またはホスホロジアミデート結合を含む骨格修飾を含む、実施形態1に記載の方法。
[0806]実施形態65.アンチセンスオリゴマーが、ホスホロジアミデートモルホリノ、ロックド核酸、ペプチド核酸、2’-O-メチル、2’-フルオロまたは2’-O-メトキシエチル部分を含む、実施形態1に記載の方法。
[0806]実施形態65.アンチセンスオリゴマーが、ホスホロジアミデートモルホリノ、ロックド核酸、ペプチド核酸、2’-O-メチル、2’-フルオロまたは2’-O-メトキシエチル部分を含む、実施形態1に記載の方法。
[0807]実施形態66.アンチセンスオリゴマーが、少なくとも1つの修飾糖部分を含む、実施形態1に記載の方法。
[0808]実施形態67.各糖部分が、修飾糖部分である、実施形態66に記載の方法。
[0808]実施形態67.各糖部分が、修飾糖部分である、実施形態66に記載の方法。
[0809]実施形態68.アンチセンスオリゴマーが、8~50個の核酸塩基、8~40個の核酸塩基、8~35個の核酸塩基、8~30個の核酸塩基、8~25個の核酸塩基、8~20個の核酸塩基、8~15個の核酸塩基、9~50個の核酸塩基、9~40個の核酸塩基、9~35個の核酸塩基、9~30個の核酸塩基、9~25個の核酸塩基、9~20個の核酸塩基、9~15個の核酸塩基、10~50個の核酸塩基、10~40個の核酸塩基、10~35個の核酸塩基、10~30個の核酸塩基、10~25個の核酸塩基、10~20個の核酸塩基、10~15個の核酸塩基、11~50個の核酸塩基、11~40個の核酸塩基、11~35個の核酸塩基、11~30個の核酸塩基、11~25個の核酸塩基、11~20個の核酸塩基、11~15個の核酸塩基、12~50個の核酸塩基、12~40個の核酸塩基、12~35個の核酸塩基、12~30個の核酸塩基、12~25個の核酸塩基、12~20個の核酸塩基または12~15個の核酸塩基からなる、実施形態1に記載の方法。
[0810]実施形態69.アンチセンスオリゴマーが、NMDエクソンを含有し、タンパク質をコードするプレmRNAの標的化される部分に対して、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%、少なくとも99%または100%相補的である、実施形態7に記載の方法。
[0811]実施形態70.Scn1a mRNAまたはタンパク質発現を評価するステップをさらに含む、実施形態1に記載の方法。
[0812]実施形態71.対象がヒトである、実施形態1に記載の方法。
[0812]実施形態71.対象がヒトである、実施形態1に記載の方法。
[0813]実施形態72.対象が、非ヒト動物である、実施形態1に記載の方法。
[0814]実施形態73.対象が、胎児、胚または小児である、実施形態1に記載の方法。
[0815]実施形態74.ASOが、対象のくも膜下腔内注射、脳室内注射、腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射、硝子体内または静脈内注射によって投与される、実施形態1に記載の方法。
[0814]実施形態73.対象が、胎児、胚または小児である、実施形態1に記載の方法。
[0815]実施形態74.ASOが、対象のくも膜下腔内注射、脳室内注射、腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射、硝子体内または静脈内注射によって投与される、実施形態1に記載の方法。
[0816]実施形態75.対象に第2の治療剤を投与するステップをさらに含む、実施形態1に記載の方法。
[0817]実施形態76.第2の治療剤が小分子である、実施形態75に記載の方法。
[0817]実施形態76.第2の治療剤が小分子である、実施形態75に記載の方法。
[0818]実施形態77.第2の治療剤がASOである、実施形態75に記載の方法。
[0819]実施形態78.ASOが、配列番号115~161のいずれか1つに対して少なくとも約80%、85%、90%、95%、97%または100%相補的である配列を含む、実施形態77に記載の方法。
[0819]実施形態78.ASOが、配列番号115~161のいずれか1つに対して少なくとも約80%、85%、90%、95%、97%または100%相補的である配列を含む、実施形態77に記載の方法。
[0820]実施形態79.第2の治療剤が、イントロン保持を修正する、実施形態75に記載の方法。
[0821]実施形態80.疾患または状態が、アルツハイマー病、SCN2A脳症、SCN8A脳症またはSCN5A不整脈である、実施形態1に記載の方法。
[0821]実施形態80.疾患または状態が、アルツハイマー病、SCN2A脳症、SCN8A脳症またはSCN5A不整脈である、実施形態1に記載の方法。
[0822]実施形態81.疾患または状態が、アルツハイマー病、SCN2A脳症、SCN8A脳症またはSCN5A不整脈である、実施形態35、37または39に記載の方法。
[0823]実施形態82.(a)0.5ミリグラム~500ミリグラムのアンチセンスオリゴ(ASO)、および
(b)薬学的に許容される賦形剤
を含む医薬組成物であって、
ASOが、対象の細胞においてNMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするmRNAからのナンセンス変異依存mRNA崩壊誘導性エクソン(NMDエクソン)のスプライシングをモジュレートし、それによって、NaV1.1タンパク質をコードするプロセシングされたmRNAのレベルをモジュレートし、対象の細胞におけるNaV1.1タンパク質の発現をモジュレートする、医薬組成物。
[0823]実施形態82.(a)0.5ミリグラム~500ミリグラムのアンチセンスオリゴ(ASO)、および
(b)薬学的に許容される賦形剤
を含む医薬組成物であって、
ASOが、対象の細胞においてNMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするmRNAからのナンセンス変異依存mRNA崩壊誘導性エクソン(NMDエクソン)のスプライシングをモジュレートし、それによって、NaV1.1タンパク質をコードするプロセシングされたmRNAのレベルをモジュレートし、対象の細胞におけるNaV1.1タンパク質の発現をモジュレートする、医薬組成物。
[0824]実施形態83.薬学的に許容される賦形剤が、脳脊髄液を含む、実施形態82に記載の医薬組成物。
[0825]実施形態84.薬学的に許容される賦形剤が、人工脳脊髄液を含む、実施形態82に記載の医薬組成物。
[0825]実施形態84.薬学的に許容される賦形剤が、人工脳脊髄液を含む、実施形態82に記載の医薬組成物。
[0826]実施形態85.くも膜下腔内投与のために製剤化される、実施形態82に記載の医薬組成物。
[0827]実施形態86.0.5ミリグラム~500ミリグラムのASOを含む、実施形態82に記載の医薬組成物。
[0827]実施形態86.0.5ミリグラム~500ミリグラムのASOを含む、実施形態82に記載の医薬組成物。
[0828]実施形態87.1ミリグラム~300ミリグラムのASOを含む、実施形態82に記載の医薬組成物。
[0829]実施形態88.2ミリグラム~300ミリグラムのASOを含む、実施形態82に記載の医薬組成物。
[0829]実施形態88.2ミリグラム~300ミリグラムのASOを含む、実施形態82に記載の医薬組成物。
[0830]実施形態89.1ミリグラム~200ミリグラムのASOを含む、実施形態82に記載の医薬組成物。
[0831]実施形態90.2ミリグラム~200ミリグラムのASOを含む、実施形態82に記載の医薬組成物。
[0831]実施形態90.2ミリグラム~200ミリグラムのASOを含む、実施形態82に記載の医薬組成物。
[0832]実施形態91.対象が、ドラベ症候群(DS)を有する、実施形態82に記載の医薬組成物。
Claims (155)
- NaV1.1タンパク質の発現または機能の低減を特徴とする疾患または状態の処置またはそれを発症する可能性の低減を必要とするヒト対象において、該疾患または状態を処置するまたはそれを発症する可能性を低減する方法であって、ヒト対象に、約0.5ミリグラム~約500ミリグラムの第1の用量でアンチセンスオリゴマー(ASO)を含む医薬組成物を投与するステップを含み、ASOは、配列番号21~67、210~256または304~1099のうちいずれか1つに対して少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含み、それによって、ヒト対象において該疾患または状態を処置するまたはそれを発症する可能性を低減する、方法。
- NaV1.1タンパク質の発現または機能の低減を特徴とする疾患または状態の処置またはそれを発症する可能性の低減を必要とするヒト対象において、該疾患または状態を処置するまたはそれを発症する可能性を低減する方法であって、ヒト対象に、アンチセンスオリゴマー(ASO)の第1の用量を含む医薬組成物を投与するステップを含み、ASOは、配列番号21~67、210~256または304~1099のうちいずれか1つに対して少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含み、それによって、ヒト対象において該疾患または状態を処置しまたはそれを発症する可能性を低減し、ヒト対象は、第1の用量時に最高で18歳である、方法。
- NaV1.1タンパク質の発現または機能の低減を特徴とする疾患または状態の処置またはそれを発症する可能性の低減を必要とするヒト対象において、該疾患または状態を処置するまたはそれを発症する可能性を低減する方法であって、ヒト対象に、アンチセンスオリゴマー(ASO)の複数回の用量を含む医薬組成物を投与するステップを含み、ASOは、配列番号21~67、210~256または304~1099のうちいずれか1つに対して少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含み、それによって、ヒト対象において該疾患または状態を処置するまたはそれを発症する可能性を低減する、方法。
- 第1の用量が、複数回の用量の最初である、請求項1または2に記載の方法。
- ヒト対象が、第1の用量時に最高で18歳である、請求項1または3に記載の方法。
- ヒト対象に、約0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22.5、25、27.5、30、32.5、35、37.5、40、42.5、45、47.5、50、52.5、55、57.5、60、62.5、65、67.5、70、72.5、75、77.5、80、82.5、85、87.5、90、92.5、95、97.5、100、102.5、105、107.5、110、112.5、115、117.5、120、122.5、125、127.5、130、132.5、135、137.5、140、142.5、145、147.5、150、152.5、155、157.5、160、162.5、165、167.5、170、172.5、175、177.5、180、182.5、185、187.5、190、192.5、195、197.5、200、202.5、205、207.5、210、212.5、215、217.5、220、222.5、225、227.5、230、232.5、235、237.5、240、242.5、245、247.5または250mgの第1の用量のASOを含む医薬組成物を投与するステップを含む、請求項1から3のいずれか一項に記載の方法。
- 疾患または状態がドラベ症候群である、請求項1から6のいずれか一項に記載の方法。
- 対象が、
(i)しばしば長期化し、高熱によって引き起こされる、再発性焦点性運動性または片側けいれん性または全身性強直間代性発作を伴う、12ヶ月齢より前の発作開始、
(ii)原因となる磁気共鳴画像法病変の過去の病歴なし、
(iii)ドラベ症候群を除く任意の疾患または状態の他の既知の病因なし、
(iv)発作開始時の正常な発達、
(v)SCN1A遺伝子における病原性バリアントまたは重要性の不確かなバリアント、
(vi)いずれかが適切な発作管理を欠いていた、てんかんのための少なくとも2つの以前の処置、
(vii)投与前28日の間の4回以上のけいれん発作であって、片側間代性、運動性徴候を伴う焦点性、焦点性から両側性強直間代性けいれん、全身性強直間代性けいれん、強直性、強直性または無緊張性(転倒発作)および間代性から選択されるいずれか1つであるけいれん発作、
(viii)ケトン食療法、迷走神経刺激剤もしくはカンナビノイドもしくはマリファナ由来製品である、てんかんのための現在の介入、または少なくとも4週間安定であった用量で少なくとも1つの抗てんかん薬を用いる投薬、あるいは
(ix)(i)~(viii)の任意の組合せ
を有することを特徴とする、請求項1から7のいずれか一項に記載の方法。 - 対象がさらに、以下:
(a)SCN1A遺伝子における以下の突然変異:Thr226Met、Leu263Val、Val422Leu、Thr1174Ser、Trp1204Arg、Pro1345Ser、Gln1489Lys、Phe1499Leu、Arg1575Cys、Val1611Phe、Leu1624Pro、Arg1648Cys、Leu1649Gln、Leu1670Trp、Gly1674ArgおよびAsp1866Tyrのうち1つ、
(b)既知の劣性遺伝病の場合にはホモ接合性である、てんかんを引き起こす別の遺伝子における既知の病原性突然変異、
(c)維持処置としてのナトリウムチャネル遮断薬および抗凝固剤を用いて現在処置されており、ナトリウムチャネル遮断薬は、フェニトイン、カルバマゼピン、オキシカルバゼピン、ラモトリジン、ラコサミドまたはルフィナミドであり、抗凝固剤は、アスピリンではないこと、
(d)てんかん以外の臨床的に著しく不安定な医学的状態、
(e)てんかん以外の、投与前4週間における臨床的に関連する症状または臨床的に重大な疾病、
(f)てんかん、ドラベ症候群以外の脳もしくは脊髄の疾患の病歴または細菌性髄膜炎もしくは脳奇形の病歴、
(g)脊柱変形、または脳脊髄液(CSF)の自由な流れを変更するもしくはCSFドレナージシャントが埋め込まれている他の状態、
(h)投与前の臨床的に重大な異常臨床検査値、
(i)正常の上限の2.5倍を超えるアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼもしくはアラニンアミノトランスフェラーゼ、正常の上限より多い血清クレアチニンまたは正常の下限より少ない血小板数、
(j)投与前に測定された12誘導心電図(ECG)における臨床的に関連する異常、
(k)精神障害または行動障害、
(l)現在または過去4週間における、アスピリンではない抗凝固剤の投薬、あるいは
(m)(a)~(l)の任意の組合せ
のうち1つまたは複数を有しないことを特徴とする、請求項1から8のいずれか一項に記載の方法。 - ヒト対象が、1~18、2~18、3~18、4~18、5~18、6~18、7~18、8~18、9~18、10~18、11~18、12~18、13~18、14~18、15~18、16~18または17~18歳である、請求項1から9のいずれか一項に記載の方法。
- ヒト対象が、1~17、1~16、1~15、1~14、1~13、1~12、1~11、1~10、1~9、1~8、1~7、1~6、1~5、1~4、1~3または1~2歳のヒトである、請求項1から10のいずれか一項に記載の方法。
- ヒト対象が、1歳未満または1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17または18歳である、請求項1から11のいずれか一項に記載の方法。
- 医薬組成物が、ヒト対象のくも膜下腔内空間中に投与される、請求項1から12のいずれか一項に記載の方法。
- 医薬組成物が、ヒト対象の脳脊髄液中に投与される、請求項1から13のいずれか一項に記載の方法。
- 医薬組成物が、ヒト対象の脳中に投与される、請求項1から14のいずれか一項に記載の方法。
- 医薬組成物が、ヒト対象の脳中の脳脊髄液中に投与される、請求項1から15のいずれか一項に記載の方法。
- 医薬組成物が、ボーラス注射として投与される、請求項1から16のいずれか一項に記載の方法。
- 医薬組成物が、送達ポンプを用いる注入によって投与される、請求項1から17のいずれか一項に記載の方法。
- 医薬組成物が、脳室内注射によって投与される、請求項1から18のいずれか一項に記載の方法。
- 医薬組成物が、くも膜下腔内注射によって投与される、請求項1から18のいずれか一項に記載の方法。
- ヒト対象においてドラベ症候群の少なくとも1つの症状を低減または改善する、請求項1から20のいずれか一項に記載の方法。
- ドラベ症候群の症状が、発作である、請求項21に記載の方法。
- 投与が、発作頻度、発作強度または発作持続期間を低減または改善する、請求項1から22のいずれか一項に記載の方法。
- ASOが、配列番号21~67、210~256または304~1099のうちいずれか1つに対して少なくとも83%、88%、94%または100%の配列同一性を有する配列を含む、請求項1から23のいずれか一項に記載の方法。
- ASOが、配列番号21~67、210~256または304~1099のうちいずれか1つに対して少なくとも83%、88%、94%または100%の配列同一性を有する配列からなる、請求項1から24のいずれか一項に記載の方法。
- ASOが、少なくとも1つの修飾糖部分を含む、請求項1から25のいずれか一項に記載の方法。
- ASOが、T-メトキシエチル糖部分を含む、請求項1から26のいずれか一項に記載の方法。
- T-メトキシエチル糖部分が、T-2’-メトキシエチル糖部分である、請求項1から27のいずれか一項に記載の方法。
- ASOが、2’-O-メトキシエチル部分を含む、請求項1から28のいずれか一項に記載の方法。
- ASOが、2’-O-メトキシエチル部分を含むチミジンを含む、請求項1から29のいずれか一項に記載の方法。
- ASOの各核酸塩基が、2’-O-メトキシエチル部分を含む、請求項1から30のいずれか一項に記載の方法。
- ASOが、8~50個の核酸塩基からなる、請求項1から31のいずれか一項に記載の方法。
- ASOが、16~20個の核酸塩基からなる、請求項1から32のいずれか一項に記載の方法。
- ASOが、12~20個の核酸塩基からなる、請求項1から33のいずれか一項に記載の方法。
- ASOが、8~20個の核酸塩基からなる、請求項1から34のいずれか一項に記載の方法。
- ASOが、5’-メチルシトシン(5’-MeC)を含む、請求項1から35のいずれか一項に記載の方法。
- ASOの各シトシンが、5’-メチルシトシン(5’-MeC)である、請求項1から36のいずれか一項に記載の方法。
- ASOが、ホスホロチオエート結合を含む、請求項1から37のいずれか一項に記載の方法。
- ASOの各ヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエート結合である、請求項1から38のいずれか一項に記載の方法。
- ASOが、ロックド核酸(LNA)を含む、請求項1から39のいずれか一項に記載の方法。
- 医薬組成物の耐容性または有効性を評価するステップをさらに含む、請求項1から40のいずれか一項に記載の方法。
- ヒト対象に、約0.5ミリグラム~約500ミリグラムの後続の用量でASOを含む医薬組成物を投与するステップをさらに含む、請求項1から41のいずれか一項に記載の方法。
- 後続の用量が、0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22.5、25、27.5、30、32.5、35、37.5、40、42.5、45、47.5、50、52.5、55、57.5、60、62.5、65、67.5、70、72.5、75、77.5、80、82.5、85、87.5、90、92.5、95、97.5、100、102.5、105、107.5、110、112.5、115、117.5、120、122.5、125、127.5、130、132.5、135、137.5、140、142.5、145、147.5、150、152.5、155、157.5、160、162.5、165、167.5、170、172.5、175、177.5、180、182.5、185、187.5、190、192.5、195、197.5、200、202.5、205、207.5、210、212.5、215、217.5、220、222.5、225、227.5、230、232.5、235、237.5、240、242.5、245、247.5または250mgである、請求項42に記載の方法。
- 以前の用量の投与に耐容性がないことが示された後、後続の用量が以前の用量よりも低い、請求項42または43に記載の方法。
- 以前の用量の投与に耐容性があることが示された後、後続の用量が以前の用量と同じである、請求項42または43に記載の方法。
- 以前の用量の投与に耐容性があることが示された後、後続の用量が以前の用量より高い、請求項42または43に記載の方法。
- 以前の用量の投与が有効であることが示された後、後続の用量が以前の用量と同じである、請求項42または43に記載の方法。
- 以前の用量の投与が有効であることが示された後、後続の用量が以前の用量より低い、請求項42または43に記載の方法。
- 以前の用量の投与が有効ではないことが示された後、後続の用量が以前の用量より高い、請求項42または43に記載の方法。
- 後続の用量が、以前の用量の投与の少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11または12ヶ月後に投与される、請求項42から49のいずれか一項に記載の方法。
- 以前の用量が有効であることが示された後、投薬頻度が維持または低減される、請求項1から50のいずれか一項に記載の方法。
- 以前の用量が有効ではないことが示された後、投薬頻度が増大される、請求項1から51のいずれか一項に記載の方法。
- 少なくとも1つの追加の治療剤または療法を投与するステップをさらに含む、請求項1から52のいずれか一項に記載の方法。
- 少なくとも1つの追加の治療剤または療法が、用量と同時に投与される、請求項53に記載の方法。
- 少なくとも1つの追加の治療剤または療法が、用量の投与の前に投与される、請求項53に記載の方法。
- 少なくとも1つの追加の治療剤または療法が、用量の投与後に投与される、請求項53に記載の方法。
- 医薬組成物が、薬学的に許容される賦形剤、担体または希釈剤を含む、請求項1から56のいずれか一項に記載の方法。
- 医薬組成物が液体組成物である、請求項1から57のいずれか一項に記載の方法。
- 医薬組成物が、0.1mL~50mLの希釈剤を含み、ASOが、希釈剤中に可溶化または希釈されている、請求項1から58のいずれか一項に記載の方法。
- 医薬組成物が、約0.1、0.5、1、2、2.5、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45または50mLの希釈剤を含む、請求項59に記載の方法。
- 医薬組成物が、1mL~20mLの希釈剤、2mL~10mLの希釈剤または1mL~5mLの希釈剤を含む、請求項59に記載の方法。
- 希釈剤が、対象由来の脳脊髄液(CSF)試料または人工脳脊髄液(aCSF)溶液を含む、請求項59から61のいずれか一項に記載の方法。
- 対象から脳脊髄液試料を得るステップを含む、請求項1から62のいずれか一項に記載の方法。
- ASOを、対象由来のCSF試料中に可溶化または希釈するステップを含む、請求項1から63のいずれか一項に記載の方法。
- 医薬組成物をボーラス注射として投与するステップを含む、請求項1から64のいずれか一項に記載の方法。
- 医薬組成物をボーラス注射として1~60分、1~50分、1~40分、1~30分、1~20分、1~10分、1~5分または1~3分かけて投与するステップを含む、請求項1~65のいずれか一項に記載の方法。
- 医薬組成物を、脊髄麻酔針を使用してボーラス注射として投与するステップを含む、請求項1から66のいずれか一項に記載の方法。
- ASOが、人工脳脊髄液(aCSF)溶液中に可溶化または希釈されている、請求項1から67のいずれか一項に記載の方法。
- 溶液が、対象由来の脳脊髄液(CSF)試料を含む、請求項1から68のいずれか一項に記載の方法。
- ASOが、等張液中に可溶化または希釈されている、請求項1から69のいずれか一項に記載の方法。
- ASOが、少なくともpH5.8を有するリン酸緩衝溶液中に可溶化または希釈されている、請求項1から70のいずれか一項に記載の方法。
- ASOが、リン酸緩衝(pH6.6~7.6)溶液中に可溶化または希釈されている、請求項1から70のいずれか一項に記載の方法。
- ASOが、25~250mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈されている、請求項1から72のいずれか一項に記載の方法。
- ASOが、0.1~20mMのKClを含む緩衝液中に可溶化または希釈されている、請求項1から73のいずれか一項に記載の方法。
- ASOが、0.1~50mMのNa2HPO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈されている、請求項1から74のいずれか一項に記載の方法。
- ASOが、0.1~50mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈されている、請求項1から75のいずれか一項に記載の方法。
- ASOが、0.1~50mMのCaCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈されている、請求項1から76のいずれか一項に記載の方法。
- ASOが、0.1~50mMのMgCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈されている、請求項1から77のいずれか一項に記載の方法。
- ASOが、25~250mMのNaCl、0.1~20mMのKCl、0.1~50mMのNa2HPO4、0.1~50mMのNaH2PO4、0.1~50mMのCaCl2および0.1~50mMのMgCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈されている、請求項1から78のいずれか一項に記載の方法。
- ASOが、150mMのNaCl、3.0mMのKCl、0.7mMのNa2HPO4、0.3mMのNaH2PO4、0.79mMのMgCl2および1.4mMのCaCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈されている、請求項1から79のいずれか一項に記載の方法。
- ASOが、炭水化物をさらに含む緩衝液中に可溶化または希釈されている、請求項68から80のいずれか一項に記載の方法。
- 炭水化物が、D-グルコースを含む、請求項81に記載の方法。
- ASOが、1~100mMのD-グルコースをさらに含む緩衝液中に可溶化または希釈されている、請求項68から80のいずれか一項に記載の方法。
- ASOが、1~100mMのNaHCO3、1~100mMのKHCO3またはそれらの組合せをさらに含む緩衝液中に可溶化または希釈されている、請求項68から83のいずれか一項に記載の方法。
- ASOが、抗酸化剤をさらに含む緩衝液中に可溶化または希釈されている、請求項1から84のいずれか一項に記載の方法。
- 抗酸化剤が、t-ブチルヒドロキシキノリン(TBHQ)、ブチル化ヒドロキシトルエン(BHT)、ブチル化ヒドロキシアニソール(BHA)、ビタミンEまたはそれらの任意の組合せである、請求項85に記載の方法。
- 医薬製剤が保存料を含まない、請求項1から86のいずれか一項に記載の方法。
- ASOが、0.1mg/mL~250mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する、請求項1から87のいずれか一項に記載の方法。
- ASOが、約0.1mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL、2.5mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL、6mg/mL、7mg/mL、8mg/mL、9mg/mL、10mg/mL、11mg/mL、12mg/mL、13mg/mL、14mg/mL、15mg/mL、16mg/mL、17mg/mL、18mg/mL、19mg/mLまたは20mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する、請求項1から88のいずれか一項に記載の方法。
- ASOが、約22.5mg/mL、25mg/mL、27.5mg/mL、30mg/mL、32.5mg/mL、35mg/mL、37.5mg/mL、40mg/mL、42.5mg/mL、45mg/mL、47.5mg/mL、50mg/mL、52.5mg/mL、55mg/mL、57.5mg/mL、60mg/mL、62.5mg/mL、65mg/mL、67.5mg/mL、70mg/mL、72.5mg/mL、75mg/mL、77.5mg/mL、80mg/mL、82.5mg/mL、85mg/mL、87.5mg/mL、90mg/mL、92.5mg/mL、95mg/mL、97.5mg/mL、100mg/mL、102.5mg/mL、105mg/mL、107.5mg/mL、110mg/mL、112.5mg/mL、115mg/mL、117.5mg/mL、120mg/mL、122.5mg/mL、125mg/mL、127.5mg/mL、130mg/mL、132.5mg/mL、135mg/mL、137.5mg/mL、140mg/mL、142.5mg/mL、145mg/mL、147.5mg/mL、150mg/mL、152.5mg/mL、155mg/mL、157.5mg/mL、160mg/mL、162.5mg/mL、165mg/mL、167.5mg/mL、170mg/mL、172.5mg/mL、175mg/mL、177.5mg/mL、180mg/mL、182.5mg/mL、185mg/mL、187.5mg/mL、190mg/mL、192.5mg/mL、195mg/mL、197.5mg/mL、200mg/mL、202.5mg/mL、205mg/mL、207.5mg/mL、210mg/mL、212.5mg/mL、215mg/mL、217.5mg/mL、220mg/mL、222.5mg/mL、225mg/mL、227.5mg/mL、230mg/mL、232.5mg/mL、235mg/mL、237.5mg/mL、240mg/mL、242.5mg/mL、245mg/mL、247.5mg/mLまたは250mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する、請求項1から88のいずれか一項に記載の方法。
- ASOが、11mg/mL、22mg/mL、33mg/mL、44mg/mL、55mg/mL、66mg/mL、77mg/mL、88mg/mL、99mg/mLまたは100mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する、請求項1から88のいずれか一項に記載の方法。
- NaV1.1タンパク質の発現または機能の低減が、NMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAからのナンセンス変異依存RNA崩壊誘導性エクソンのスプライシングの変化と関連している、請求項1から91のいずれか一項に記載の方法。
- ASOが、NMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAからのNMDエクソンの排除を促進する、請求項1から92のいずれか一項に記載の方法。
- ASOが、NMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAの標的化される部分に結合する、請求項1から93のいずれか一項に記載の方法。
- ASOが、NMDエクソンを含有し、NaV1.1タンパク質をコードするプレmRNAからのNMDエクソンの排除を促進する、請求項94に記載の方法。
- ASOが細胞中に導入されると、ASOが、NaV1.1タンパク質をコードするプロセシングされたmRNAのレベルを増大させる、請求項94から95のいずれか一項に記載の方法。
- ASOが細胞中に導入されると、ASOがNaV1.1タンパク質のレベルを増大させる、請求項94から96のいずれか一項に記載の方法。
- 標的化される部分が、NMDエクソンに隣接するイントロン配列内にある、請求項94から97のいずれか一項に記載の方法。
- 標的化される部分が、NMDエクソンの少なくとも1つのヌクレオチドを含む、請求項94から97のいずれか一項に記載の方法。
- 標的化される部分が、NMDエクソン内にある、請求項94から97のいずれか一項に記載の方法。
- 疾患または状態を処置する、請求項94から100のいずれか一項に記載の方法。
- (a)配列番号21~67、210~256または304~1099のうちいずれか1つに対して少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含むアンチセンスオリゴマー(ASO)、
(b)薬学的に許容される希釈剤
を含み、
ASOが、0.1~200mg/mLの濃度で溶液中に溶解または懸濁されている、医薬製剤。 - 薬学的に許容される希釈剤が、人工脳脊髄液(aCSF)溶液を含む、請求項102に記載の医薬製剤。
- 溶液が、対象由来の脳脊髄液(CSF)試料を含む、請求項102または103に記載の医薬製剤。
- ASOが、約0.1mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL、2.5mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL、6mg/mL、7mg/mL、8mg/mL、9mg/mL、10mg/mL、11mg/mL、12mg/mL、13mg/mL、14mg/mL、15mg/mL、16mg/mL、17mg/mL、18mg/mL、19mg/mLまたは20mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する、請求項102から104のいずれか一項に記載の医薬製剤。
- ASOが、約22.5mg/mL、25mg/mL、27.5mg/mL、30mg/mL、32.5mg/mL、35mg/mL、37.5mg/mL、40mg/mL、42.5mg/mL、45mg/mL、47.5mg/mL、50mg/mL、52.5mg/mL、55mg/mL、57.5mg/mL、60mg/mL、62.5mg/mL、65mg/mL、67.5mg/mL、70mg/mL、72.5mg/mL、75mg/mL、77.5mg/mL、80mg/mL、82.5mg/mL、85mg/mL、87.5mg/mL、90mg/mL、92.5mg/mL、95mg/mL、97.5mg/mL、100mg/mL、102.5mg/mL、105mg/mL、107.5mg/mL、110mg/mL、112.5mg/mL、115mg/mL、117.5mg/mL、120mg/mL、122.5mg/mL、125mg/mL、127.5mg/mL、130mg/mL、132.5mg/mL、135mg/mL、137.5mg/mL、140mg/mL、142.5mg/mL、145mg/mL、147.5mg/mL、150mg/mL、152.5mg/mL、155mg/mL、157.5mg/mL、160mg/mL、162.5mg/mL、165mg/mL、167.5mg/mL、170mg/mL、172.5mg/mL、175mg/mL、177.5mg/mL、180mg/mL、182.5mg/mL、185mg/mL、187.5mg/mL、190mg/mL、192.5mg/mL、195mg/mL、197.5mg/mL、200mg/mL、202.5mg/mL、205mg/mL、207.5mg/mL、210mg/mL、212.5mg/mL、215mg/mL、217.5mg/mL、220mg/mL、222.5mg/mL、225mg/mL、227.5mg/mL、230mg/mL、232.5mg/mL、235mg/mL、237.5mg/mL、240mg/mL、242.5mg/mL、、245mg/mL、247.5mg/mLまたは250mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する、請求項102から104のいずれか一項に記載の医薬製剤。
- ASOが、11mg/mL、22mg/mL、33mg/mL、44mg/mL、55mg/mL、66mg/mL、77mg/mL、88mg/mL、99mg/mLまたは100mg/mLの濃度で医薬組成物中に存在する、請求項102から104のいずれか一項に記載の医薬製剤。
- ASOが、等張液中に可溶化または希釈されている、請求項102から107のいずれか一項に記載の医薬製剤。
- ASOが、少なくともpH5.8を有するリン酸緩衝溶液中に可溶化または希釈されている、請求項102から108のいずれか一項に記載の医薬製剤。
- ASOが、リン酸緩衝(pH6.6~7.6)溶液中に可溶化または希釈されている、請求項102から108のいずれか一項に記載の医薬製剤。
- ASOが、25~250mMのNaClを含む緩衝液中に可溶化または希釈されている、請求項102から110のいずれか一項に記載の医薬製剤。
- ASOが、0.1~20mMのKClを含む緩衝液中に可溶化または希釈されている、請求項102から111のいずれか一項に記載の医薬製剤。
- ASOが、0.1~50mMのNa2HPO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈されている、請求項102から112のいずれか一項に記載の医薬製剤。
- ASOが、0.1~50mMのNaH2PO4を含む緩衝液中に可溶化または希釈されている、請求項102から113のいずれか一項に記載の医薬製剤。
- ASOが、0.1~50mMのCaCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈されている、請求項102から114のいずれか一項に記載の医薬製剤。
- ASOが、0.1~50mMのMgCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈されている、請求項102から115のいずれか一項に記載の医薬製剤。
- ASOが、25~250mMのNaCl、0.1~20mMのKCl、0.1~50mMのNa2HPO4、0.1~50mMのNaH2PO4、0.1~50mMのCaCl2および0.1~50mMのMgCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈されている、請求項102から116のいずれか一項に記載の医薬製剤。
- ASOが、150mMのNaCl、3.0mMのKCl、0.7mMのNa2HPO4、0.3mMのNaH2PO4、0.79mMのMgCl2および1.4mMのCaCl2を含む緩衝液中に可溶化または希釈されている、請求項102から117のいずれか一項に記載の医薬製剤。
- ASOが、炭水化物をさらに含む緩衝液中に可溶化または希釈されている、請求項102から118のいずれか一項に記載の医薬製剤。
- 炭水化物が、D-グルコースを含む、請求項119に記載の医薬製剤。
- ASOが、1~100mMのD-グルコースをさらに含む緩衝液中に可溶化または希釈されている、請求項102から120のいずれか一項に記載の医薬製剤。
- ASOが、1~100mMのNaHCO3、1~100mMのKHCO3またはそれらの組合せをさらに含む緩衝液中に可溶化または希釈されている、請求項102から121のいずれか一項に記載の医薬製剤。
- ASOが、抗酸化剤をさらに含む緩衝液中に可溶化または希釈されている、請求項102から122のいずれか一項に記載の医薬製剤。
- 抗酸化剤が、t-ブチルヒドロキシキノリン(TBHQ)、ブチル化ヒドロキシトルエン(BHT)、ブチル化ヒドロキシアニソール(BHA)、ビタミンEまたはそれらの任意の組合せである、請求項123に記載の医薬製剤。
- 保存料を含まない、請求項102から124のいずれか一項に記載の医薬製剤。
- 脳室内またはくも膜下腔内注射に適している、請求項102から125のいずれか一項に記載の医薬製剤。
- 単回使用バイアルにパッケージングされている、請求項102から126のいずれか一項に記載の医薬製剤。
- (i)アンチセンスオリゴマー(ASO)を含む濃縮物であって、ASOが、配列番号21~67、210~256または304~1099のうちいずれか1つに対して少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む、濃縮物、および
(ii)希釈剤であって、濃縮物が該希釈剤と混和性である、希釈剤、および
(iii)ASOを希釈剤中に希釈または可溶化するための使用説明書
を含む、キット。 - 希釈剤が、人工脳脊髄液(aCSF)溶液である、請求項128に記載のキット。
- 希釈剤が、等張液を含む、請求項128から129のいずれか一項に記載のキット。
- 希釈剤が、少なくともpH5.8を有するリン酸緩衝溶液を含む、請求項128から130のいずれか一項に記載のキット。
- 希釈剤が、リン酸緩衝(pH6.6~7.6)溶液を含む、請求項128から130のいずれか一項に記載のキット。
- 希釈剤が、25~250mMのNaClを含む、請求項128から132のいずれか一項に記載のキット。
- 希釈剤が、0.1~20mMのKClを含む、請求項128から133のいずれか一項に記載のキット。
- 希釈剤が、0.1~50mMのNa2HPO4を含む、請求項128から134のいずれか一項に記載のキット。
- 希釈剤が、0.1~50mMのNaH2PO4を含む、請求項128から135のいずれか一項に記載のキット。
- 希釈剤が、0.1~50mMのCaCl2を含む、請求項128から136のいずれか一項に記載のキット。
- 希釈剤が、0.1~50mMのMgCl2を含む、請求項128から137のいずれか一項に記載のキット。
- 希釈剤が、25~250mMのNaCl、0.1~20mMのKCl、0.1~50mMのNa2HPO4、0.1~50mMのNaH2PO4、0.1~50mMのCaCl2および0.1~50mMのMgCl2を含む、請求項128から138のいずれか一項に記載のキット。
- 希釈剤が、150mMのNaCl、3.0mMのKCl、0.7mMのNa2HPO4、0.3mMのNaH2PO4、0.79mMのMgCl2および1.4mMのCaCl2を含む、請求項128から139のいずれか一項に記載のキット。
- 希釈剤が、炭水化物をさらに含む、請求項128から140のいずれか一項に記載のキット。
- 炭水化物が、D-グルコースを含む、請求項141に記載のキット。
- 希釈剤が、1~100mMのD-グルコースをさらに含む、請求項128から142のいずれか一項に記載のキット。
- 希釈剤が、1~100mMのNaHCO3、1~100mMのKHCO3またはそれらの組合せをさらに含む、請求項128から143のいずれか一項に記載のキット。
- 希釈剤が、抗酸化剤をさらに含む、請求項128から144のいずれか一項に記載のキット。
- 抗酸化剤が、t-ブチルヒドロキシキノリン(TBHQ)、ブチル化ヒドロキシトルエン(BHT)、ブチル化ヒドロキシアニソール(BHA)、ビタミンEまたはそれらの任意の組合せである、請求項145に記載のキット。
- 希釈剤が保存料を含まない、請求項128から146のいずれか一項に記載のキット。
- ASOを希釈剤中に希釈または可溶化するための使用説明書が、ASOを希釈剤中に0.1mg/mL~250mg/mLの濃度に希釈または可溶化するための使用説明書を含む、請求項128から147のいずれか一項に記載のキット。
- ASOを希釈剤中に希釈または可溶化するための使用説明書が、ASOを希釈剤中に約0.1mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL、2.5mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL、6mg/mL、7mg/mL、8mg/mL、9mg/mL、10mg/mL、11mg/mL、12mg/mL、13mg/mL、14mg/mL、15mg/mL、16mg/mL、17mg/mL、18mg/mL、19mg/mLまたは20mg/mLの濃度に希釈または可溶化するための使用説明書を含む、請求項128から148のいずれか一項に記載のキット。
- ASOを希釈剤中に希釈または可溶化するための使用説明書が、ASOを希釈剤中に約22.5mg/mL、25mg/mL、27.5mg/mL、30mg/mL、32.5mg/mL、35mg/mL、37.5mg/mL、40mg/mL、42.5mg/mL、45mg/mL、47.5mg/mL、50mg/mL、52.5mg/mL、55mg/mL、57.5mg/mL、60mg/mL、62.5mg/mL、65mg/mL、67.5mg/mL、70mg/mL、72.5mg/mL、75mg/mL、77.5mg/mL、80mg/mL、82.5mg/mL、85mg/mL、87.5mg/mL、90mg/mL、92.5mg/mL、95mg/mL、97.5mg/mL、100mg/mL、102.5mg/mL、105mg/mL、107.5mg/mL、110mg/mL、112.5mg/mL、115mg/mL、117.5mg/mL、120mg/mL、122.5mg/mL、125mg/mL、127.5mg/mL、130mg/mL、132.5mg/mL、135mg/mL、137.5mg/mL、140mg/mL、142.5mg/mL、145mg/mL、147.5mg/mL、150mg/mL、152.5mg/mL、155mg/mL、157.5mg/mL、160mg/mL、162.5mg/mL、165mg/mL、167.5mg/mL、170mg/mL、172.5mg/mL、175mg/mL、177.5mg/mL、180mg/mL、182.5mg/mL、185mg/mL、187.5mg/mL、190mg/mL、192.5mg/mL、195mg/mL、197.5mg/mL、200mg/mL、202.5mg/mL、205mg/mL、207.5mg/mL、210mg/mL、212.5mg/mL、215mg/mL、217.5mg/mL、220mg/mL、222.5mg/mL、225mg/mL、227.5mg/mL、230mg/mL、232.5mg/mL、235mg/mL、237.5mg/mL、240mg/mL、242.5mg/mL、、245mg/mL、247.5mg/mLまたは250mg/mLの濃度に希釈または可溶化するための使用説明書を含む、請求項128から148のいずれか一項に記載のキット。
- ASOを希釈剤中に希釈または可溶化するための使用説明書が、ASOを希釈剤中に約11mg/mL、22mg/mL、33mg/mL、44mg/mL、55mg/mL、66mg/mL、77mg/mL、88mg/mL、99mg/mLまたは100mg/mLの濃度に希釈または可溶化するための使用説明書を含む、請求項128から148のいずれか一項に記載のキット。
- ASOを希釈剤中に希釈または可溶化するための使用説明書が、約0.5ミリグラム~約500ミリグラムのASOを希釈剤中に希釈または可溶化するための使用説明書を含む、請求項128から151のいずれか一項に記載のキット。
- ASOを希釈剤中に希釈または可溶化するための使用説明書が、約0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22.5、25、27.5、30、32.5、35、37.5、40、42.5、45、47.5、50、52.5、55、57.5、60、62.5、65、67.5、70、72.5、75、77.5、80、82.5、85、87.5、90、92.5、95、97.5、100、102.5、105、107.5、110、112.5、115、117.5、120、122.5、125、127.5、130、132.5、135、137.5、140、142.5、145、147.5、150、152.5、155、157.5、160、162.5、165、167.5、170、172.5、175、177.5、180、182.5、185、187.5、190、192.5、195、197.5、200、202.5、205、207.5、210、212.5、215、217.5、220、222.5、225、227.5、230、232.5、235、237.5、240、242.5、245、247.5または250mgのASOを希釈剤中に希釈または可溶化するための使用説明書を含む、請求項128から152のいずれか一項に記載のキット。
- NaV1.1タンパク質の発現または機能の低減を特徴とする疾患または状態の処置または予防を必要とするヒト対象において、該疾患または状態を処置または予防するための医薬の製造のためのアンチセンスオリゴマー(ASO)の使用であって、医薬が、約0.5ミリグラム~約500ミリグラムの第1の用量で投与され、ASOが、配列番号21~67、210~256または304~1099のうちいずれか1つに対して少なくとも80%の配列同一性を有する配列を含む、使用。
- 医薬が、約0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22.5、25、27.5、30、32.5、35、37.5、40、42.5、45、47.5、50、52.5、55、57.5、60、62.5、65、67.5、70、72.5、75、77.5、80、82.5、85、87.5、90、92.5、95、97.5、100、102.5、105、107.5、110、112.5、115、117.5、120、122.5、125、127.5、130、132.5、135、137.5、140、142.5、145、147.5、150、152.5、155、157.5、160、162.5、165、167.5、170、172.5、175、177.5、180、182.5、185、187.5、190、192.5、195、197.5、200、202.5、205、207.5、210、212.5、215、217.5、220、222.5、225、227.5、230、232.5、235、237.5、240、242.5、245、247.5または250mgの第1の用量で投与される、請求項154に記載の使用。
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