CN115087452A - 用于治疗病况和疾病的反义寡聚体 - Google Patents

用于治疗病况和疾病的反义寡聚体 Download PDF

Info

Publication number
CN115087452A
CN115087452A CN202080095947.9A CN202080095947A CN115087452A CN 115087452 A CN115087452 A CN 115087452A CN 202080095947 A CN202080095947 A CN 202080095947A CN 115087452 A CN115087452 A CN 115087452A
Authority
CN
China
Prior art keywords
aso
diluent
dose
pharmaceutical composition
diluted
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202080095947.9A
Other languages
English (en)
Inventor
伊莎贝尔·阿兹纳雷兹
韩舟
安妮·克里斯蒂安森
米纳·米纳
巴鲁克·蒂乔
吉恩·里奥
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Stoke Therapeutics Inc
Original Assignee
Stoke Therapeutics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Stoke Therapeutics Inc filed Critical Stoke Therapeutics Inc
Publication of CN115087452A publication Critical patent/CN115087452A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/7125—Nucleic acids or oligonucleotides having modified internucleoside linkage, i.e. other than 3'-5' phosphodiesters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/712—Nucleic acids or oligonucleotides having modified sugars, i.e. other than ribose or 2'-deoxyribose
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/22—Heterocyclic compounds, e.g. ascorbic acid, tocopherol or pyrrolidones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0085—Brain, e.g. brain implants; Spinal cord
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1138—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against receptors or cell surface proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/315—Phosphorothioates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/321—2'-O-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/33—Chemical structure of the base
    • C12N2310/334—Modified C
    • C12N2310/3341—5-Methylcytosine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
    • C12N2310/346—Spatial arrangement of the modifications having a combination of backbone and sugar modifications
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/352—Nature of the modification linked to the nucleic acid via a carbon atom
    • C12N2310/3525—MOE, methoxyethoxy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/10—Applications; Uses in screening processes
    • C12N2320/11—Applications; Uses in screening processes for the determination of target sites, i.e. of active nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/30—Special therapeutic applications
    • C12N2320/33—Alteration of splicing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/30—Special therapeutic applications
    • C12N2320/34—Allele or polymorphism specific uses

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Abstract

SCN1A基因中的可变剪接事件可导致非生产性mRNA转录物，其进而可导致异常的蛋白质表达，而可靶向SCN1A基因中的可变剪接事件的治疗剂可调节Dravet综合征患者中的功能性蛋白质的表达水平，并且/或者抑制异常蛋白质表达。此类治疗剂可用来治疗由SCN1A、SCN8A或SCN5A蛋白缺乏引起的病况。

Description

用于治疗病况和疾病的反义寡聚体
交叉引用
本申请要求2019年12月6日提交的美国临时申请第62/945,048号和2020年3月24日提交的美国临时申请第62/993,971号的权益，其各自的全部内容通过引用并入本文。
背景技术
神经系统障碍通常与通道病相关，其特征是总体上介导神经元兴奋性、神经元相互作用和脑功能的离子通道功能紊乱。SCN1A基因(是SCN1A-SCN2A-SCN3A基因簇的一部分，其编码神经元电压门控钠通道的α孔形成亚单位)中的突变可导致NaV1.1蛋白(也称为“NaV1.1”)的表达，且与野生型NaV1.1蛋白相比功能降低、NaV1.1表达减少或两者的。SCN1A基因突变与许多疾病和病况的疾病发展相关，如Dravet综合征(DS)(Miller等人,1993-2015,GeneReviews著.Pagon RA等人.Seattle(WA):University of Washington,Seattle,Bookshelf ID:NBK1318和Mulley等人,2005,Hum.Mutat.25:535-542)。
发明内容
SCN1A基因中的可变剪接事件可导致非生产性mRNA转录物，其进而可导致异常蛋白质表达，而可靶向SCN1A基因中的可变剪接事件的治疗剂可调节Dravet综合征患者中功能性蛋白质的表达水平并且/或者抑制异常蛋白质表达。此类治疗剂可用于治疗由SCN1A、SCN8A或SCN5A蛋白缺乏引起的病况。
为药物选择正确的剂量、制剂、给药方案和患者群体是开发药物的关键步骤。例如，没有足够的剂量信息，医生就不可能给患者开药。例如，如果无法确定允许安全和可预测施用的剂量或剂量范围，则该药物不能是医学上有用或商业上可行的药物产品。因此，确定正确的药物剂量是临床实践中需要解决的关键问题。发现药物的治疗有效剂量和剂量方案需要平衡患者依从性、治疗效果和药物的副作用；这需要充实的技能。例如，合适的剂量和剂量方案可以通过临床试验发现，这形成批准过程的部分，需要各方的大量智力和财力资源，而且不属于执业医师的日常工作范围。例如，患者依从性对于各种病况的最佳治疗至关重要。需要的剂量越多，治疗计划就越困难，患者依从性越低；尽管医疗机构有能力提高患者的生活质量(QOL)，但只有正确使用，它们才能做到这一点。因此，很明显，为药物选择正确的剂量、制剂、给药方案和患者群体是复杂和不可预测的。结构相似的化合物在其溶解度、毒性、活性、稳定性和药理学特性上存在显著差异。此外，动物模型和人类对象之间存在着显著的生理差异。因此，将临床前信息转化为临床有效治疗是不可预测且具有挑战性的任务。
本文提供了合适的剂量、制剂、给药方案和患者群体，用于治疗或降低有需要的人类对象中发生以NaV1.1蛋白的表达或功能降低为特征的疾病或病况的可能性。
在一些方面，本文提供了一种在有需要的人类对象中治疗以NaV1.1蛋白的表达或功能降低为特征的疾病或病况或降低其发生的可能性的方法，所述方法包括向所述人类对象施用包含约0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22.5、25、27.5、30、32.5、35、37.5、40、42.5、45、47.5、50、52.5、55、57.5、60、62.5、65、67.5、70、72.5、75、77.5、80、82.5、85、87.5、90、92.5、95、97.5、100、102.5、105、107.5、110、112.5、115、117.5、120、122.5、125、127.5、130、132.5、135、137.5、140、142.5、145、147.5、150、152.5、155、157.5、160、162.5、165、167.5、170、172.5、175、177.5、180、182.5、185、187.5、190、192.5、195、197.5、200、202.5、205、207.5、210、212.5、215、217.5、220、222.5、225、227.5、230、232.5、235、237.5、240、242.5、245、247.5或250mg的第一剂量的反义寡聚体(ASO)的药物组合物，其中，所述ASO包括与SEQ ID NO:21-67、210-256或304-1099中的任一个具有至少80％序列同一性的序列，从而在所述人类对象中治疗所述疾病或病况或降低其发生的可能性。
在一些方面，本文提供了反义寡聚体(ASO)用于制造用于治疗或预防有需要的人类对象中以NaV1.1蛋白的表达或功能降低为特征的疾病或病况的药物的用途，其中所述药物以约0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22.5、25、27.5、30、32.5、35、37.5、40、42.5、45、47.5、50、52.5、55、57.5、60、62.5、65、67.5、70、72.5、75、77.5、80、82.5、85、87.5、90、92.5、95、97.5、100、102.5、105、107.5、110、112.5、115、117.5、120、122.5、125、127.5、130、132.5、135、137.5、140、142.5、145、147.5、150、152.5、155、157.5、160、162.5、165、167.5、170、172.5、175、177.5、180、182.5、185、187.5、190、192.5、195、197.5、200、202.5、205、207.5、210、212.5、215、217.5、220、222.5、225、227.5、230、232.5、235、237.5、240、242.5、245、247.5或250mg的第一剂量施用，并且其中所述ASO包括与SEQ ID NO:21-67、210-256或304-1099中的任一个具有至少80％序列同一性的序列。
在一些方面，本文提供了反义寡聚体(ASO)用于制造用于治疗或预防有需要的人类对象中以NaV1.1蛋白的表达或功能降低为特征的疾病或病况的药物的用途，其中所述药物被制备为以约0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22.5、25、27.5、30、32.5、35、37.5、40、42.5、45、47.5、50、52.5、55、57.5、60、62.5、65、67.5、70、72.5、75、77.5、80、82.5、85、87.5、90、92.5、95、97.5、100、102.5、105、107.5、110、112.5、115、117.5、120、122.5、125、127.5、130、132.5、135、137.5、140、142.5、145、147.5、150、152.5、155、157.5、160、162.5、165、167.5、170、172.5、175、177.5、180、182.5、185、187.5、190、192.5、195、197.5、200、202.5、205、207.5、210、212.5、215、217.5、220、222.5、225、227.5、230、232.5、235、237.5、240、242.5、245、247.5或250mg的第一剂量施用，并且其中所述ASO包括与SEQ ID NO:21-67、210-256或304-1099中的任一个具有至少80％序列同一性的序列。
在一些方面，本文提供了一种在有需要的人类对象中治疗以NaV1.1蛋白的表达或功能降低为特征的疾病或病况或降低其发生的可能性的方法，所述方法包括向所述人类对象施用包含第一剂量的反义寡聚体(ASO)的药物组合物，其中所述ASO包含与SEQ ID NO:21-67、210-256或304-1099中的任一个具有至少80％序列同一性的序列，从而在所述人类对象中治疗所述疾病或病况或降低其发生的可能性；其中所述人类对象在第一剂量时为至多18岁。
在一些方面，本文提供了一种在有需要的人类对象中治疗以NaV1.1蛋白的表达或功能降低为特征的疾病或病况或降低其发生的可能性的方法，所述方法包括向所述人类对象施用包含多个剂量的反义寡聚体(ASO)的药物组合物，其中所述ASO包含与SEQ ID NO:21-67、210-256或304-1099中的任一个具有至少80％序列同一性的序列，从而在所述人类对象中治疗所述疾病或病况或降低其发生的可能性。
在一些实施方案中，第一剂量是多个剂量中的第一个。
在一些实施方案中，人类对象在第一剂量时为至多18岁。
在一些实施方案中，该方法包括向人类对象施用包含约0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22.5、25、27.5、30、32.5、35、37.5、40、42.5、45、47.5、50、52.5、55、57.5、60、62.5、65、67.5、70、72.5、75、77.5、80、82.5、85、87.5、90、92.5、95、97.5、100、102.5、105、107.5、110、112.5、115、117.5、120、122.5、125、127.5、130、132.5、135、137.5、140、142.5、145、147.5、150、152.5、155、157.5、160、162.5、165、167.5、170、172.5、175、177.5、180、182.5、185、187.5、190、192.5、195、197.5、200、202.5、205、207.5、210、212.5、215、217.5、220、222.5、225、227.5、230、232.5、235、237.5、240、242.5、245、247.5或250mg的第一剂量的ASO的药物组合物。
在一些实施方案中，疾病或病况为Dravet综合征。
在一些实施方案中，对象的特征在于：(i)有年龄12个月之前的癫痫发作，伴有复发性局灶性运动性或半惊厥性或全身性强直阵挛发作，其常因过高热而延长和触发；(ii)没有既往因果性磁共振成像病变史；(iii)除Dravet综合征外，没有任何疾病或病况的其他已知的病因；(iv)癫痫发作时发育正常；(v)在SCN1A基因中具有致病性变体或意义不明的变体；(vi)有至少2次既往癫痫治疗，其中一次缺乏充分的癫痫发作控制；(vii)施用前28天内有4次或更多次惊厥发作，其中惊厥发作是选自偏侧阵挛性的、局灶性伴有运动体征的、局灶至双侧性强直阵挛性惊厥、全身性强直阵挛性惊厥、强直性的、强直或失张力性的(跌倒发作)以及阵挛性的中的任何一种；(viii)当前的癫痫干预或采用某剂量的至少一种抗癫痫药的医疗已经稳定至少4周，其中癫痫干预是生酮饮食、迷走神经刺激剂或大麻素或大麻衍生产品；或(ix)(i)–(viii)的任何组合。
在一些实施方案中，对象的额外特征在于不具有以下项中的一个或多个：(a)SCN1A基因中的以下突变之一：Thr226Met、Leu263Val、Val422Leu、Thr1174Ser、Trp1204Arg、Pro1345Ser、Gln1489Lys、Phe1499Leu、Arg1575Cys、Val1611Phe、Leu1624Pro、Arg1648Cys、Leu1649Gln、Leu1670Trp、Gly1674Arg和Asp1866Tyr；(b)引起癫痫的另一基因中的已知致病性突变，其中该致病性突变在已知隐性遗传病的情况下是纯合的；(c)当前使用钠通道阻滞剂(作为维持治疗)和抗凝剂进行治疗，其中钠通道阻滞剂为苯妥英、卡马西平、奥卡西平、拉莫三嗪、拉科酰胺或卢非酰胺，并且其中抗凝剂不是阿司匹林；(d)除癫痫以外的临床上明显不稳定的医疗病况；(e)施用前4周内的临床相关症状或临床重大疾病，癫痫除外；(f)除癫痫、Dravet综合征以外的脑或脊髓疾病史，或细菌性脑膜炎或脑畸形史；(g)脊柱畸形或其他改变脑脊液(CSF)自由流动或植入CSF引流分流器的病况；(h)施用前有临床意义的实验室异常值；(i)天冬氨酸转氨酶或丙氨酸转氨酶>正常上限的2.5倍，血清肌酐高于正常上限或血小板计数低于正常下限；(j)施用前测得的12导联心电图(ECG)中的临床相关异常；(k)精神或行为障碍；(l)当前或过去4周内的抗凝剂用药，其中抗凝剂不是阿司匹林；或(m)(a)–(l)的任何组合。
在一些实施方案中，人类对象为1至18、2至18、3至18、4至18、5至18、6至18、7至18、8至18、9至18、10至18、11至18、12至18、13至18、14至18、15至18、16至18或17至18岁。
在一些实施方案中，人类对象为1至17、1至16、1至15、1至14、1至13、1至12、1至11、1至10、1至9、1至8、1至7、1至6、1至5、1至4、1至3或1至2岁的人类。
在一些实施方案中，人类对象为不到1岁或为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18岁。
在一些实施方案中，将药物组合物施用至人类对象的鞘内空间中。
在一些实施方案中，将药物组合物施用至人类对象的脑脊液中。
在一些实施方案中，将药物组合物施用到人类对象的脑中。
在一些实施方案中，将药物组合物施用至人类对象的脑中的脑脊液中。
在一些实施方案中，以推注(bolus injection)形式施用药物组合物。
在一些实施方案中，通过用输送泵输注而施用药物组合物。
在一些实施方案中，通过脑室内注射施用药物组合物。
在一些实施方案中，通过鞘内注射施用药物组合物。
在一些实施方案中，该方法减少或改善人类对象中Dravet综合征的至少一种症状。
在一些实施方案中，Dravet综合征的症状是癫痫发作。
在一些实施方案中，施用降低或改善发作频率、发作强度或发作持续时间。
在一些实施方案中，ASO包括与SEQ ID NO:21-67、210-256或304-1099中的任一个具有至少83％、88％、94％或100％序列同一性的序列。
在一些实施方案中，ASO由与SEQ ID NO:21-67、210-256或304-1099中的任一个具有至少83％、88％、94％或100％序列同一性的序列组成。
在一些实施方案中，ASO包含至少一个修饰的糖部分。
在一些实施方案中，ASO包含T-甲氧基乙基糖部分。
在一些实施方案中，T-甲氧基乙基糖部分是T-2'-甲氧基乙基糖部分。
在一些实施方案中，ASO包含2'-O-甲氧基乙基部分。
在一些实施方案中，ASO包含含有2'-O-甲氧基乙基部分的胸苷。
在一些实施方案中，ASO的每个核碱基包含2'-O-甲氧基乙基部分。
在一些实施方案中，ASO由8至50个核碱基组成。
在一些实施方案中，ASO由16至20个核碱基组成。
在一些实施方案中，ASO由12至20个核碱基组成。
在一些实施方案中，ASO由8至20个核碱基组成。
在一些实施方案中，ASO包含5'-甲基胞嘧啶(5'-MeC)。
在一些实施方案中，ASO的每个胞嘧啶是5'-甲基胞嘧啶(5'-MeC)。
在一些实施方案中，ASO包含硫代磷酸酯键。
在一些实施方案中，ASO的每个核苷间键是硫代磷酸酯键。
在一些实施方案中，ASO包含锁核酸(LNA)。
在一些实施方案中，该方法还包括评估药物组合物的耐受性或有效性。
在一些实施方案中，该方法还包括向人类对象施用包含0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22.5、25、27.5、30、32.5、35、37.5、40、42.5、45、47.5、50、52.5、55、57.5、60、62.5、65、67.5、70、72.5、75、77.5、80、82.5、85、87.5、90、92.5、95、97.5、100、102.5、105、107.5、110、112.5、115、117.5、120、122.5、125、127.5、130、132.5、135、137.5、140、142.5、145、147.5、150、152.5、155、157.5、160、162.5、165、167.5、170、172.5、175、177.5、180、182.5、185、187.5、190、192.5、195、197.5、200、202.5、205、207.5、210、212.5、215、217.5、220、222.5、225、227.5、230、232.5、235、237.5、240、242.5、245、247.5或250mg的后续剂量的ASO的药物组合物。
在一些实施方案中，在指示不耐受先前剂量的施用之后，后续剂量低于先前剂量。
在一些实施方案中，在指示耐受先前剂量的施用之后，后续剂量与先前剂量相同。
在一些实施方案中，在指示耐受先前剂量的施用之后，后续剂量高于先前剂量。
在一些实施方案中，在指示先前剂量的施用有效之后，后续剂量与先前剂量相同。
在一些实施方案中，在指示先前剂量的施用有效之后，后续剂量低于先前剂量。
在一些实施方案中，在指示先前剂量的施用无效之后，后续剂量高于先前剂量。
在一些实施方案中，在施用先前剂量后施用后续剂量至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月。
在一些实施方案中，在指示先前剂量有效之后，保持或降低剂量频率。
在一些实施方案中，在指示先前剂量无效之后，增加剂量频率。
在一些实施方案中，该方法还包括施用至少一种额外的治疗剂或疗法。
在一些实施方案中，与剂量同时施用至少一种额外的治疗剂或疗法。
在一些实施方案中，在施用剂量之前施用至少一种额外的治疗剂或疗法。
在一些实施方案中，在施用剂量之后施用至少一种额外的治疗剂或疗法。
在一些实施方案中，药物组合物包含药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。
在一些实施方案中，药物组合物是液体组合物。
在一些实施方案中，药物组合物包含0.1mL至50mL的稀释剂，其中ASO被溶解或稀释在稀释剂中。
在一些实施方案中，药物组合物包含约0.1、0.5、1、2、2.5、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45或50mL的稀释剂。
在一些实施方案中，药物组合物包含1mL至20mL的稀释剂、2mL至10mL的稀释剂或1mL至5mL的稀释剂。
在一些实施方案中，稀释剂包含来自对象的脑脊液(CSF)样品或人工脑脊液(aCSF)溶液。
在一些实施方案中，该方法包括从对象获得脑脊髓液样品。
在一些实施方案中，该方法包括将ASO溶解或稀释在来自对象的CSF样品中。
在一些实施方案中，该方法包括以推注形式施用药物组合物。
在一些实施方案中，该方法包括历经1至60分钟、1至50分钟、1至40分钟、1至30分钟、1至20分钟、1至10分钟、1至5分钟或1至3分钟内以推注形式施用药物组合物。
在一些实施方案中，该方法包括使用脊髓麻醉针以推注形式施用药物组合物。
在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在人工脑脊髓液(aCSF)溶液中。
在一些实施方案中，该溶液包含来自对象的脑脊髓液(CSF)样品。
在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在等渗溶液中。
在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在至少pH 5.8的磷酸盐缓冲溶液中。
在一些实施方案中，将ASO被溶解或稀释在磷酸盐缓冲(pH 6.6–7.6)溶液中。
在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在包含25-250mM NaCl的缓冲液中。
在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在包含0.1-20mM KCl的缓冲液中。
在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在包含0.1-50mM Na2HPO4的缓冲液中。
在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在包含0.1-50mM NaH2PO4的缓冲液中。
在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在包含0.1-50mM CaCl2的缓冲液中。
在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在包含0.1-50mM MgCl2的缓冲液中。
在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在包含25-250mM NaCl、0.1-20mM KCl、0.1-50mM Na2HPO4、0.1-50mM NaH2PO4、0.1-50mM CaCl2和0.1-50mM MgCl2的缓冲液中。
在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在包含150mM NaCl、3.0mM KCl、0.7mMNa2HPO4、0.3mM NaH2PO4、0.79mM MgCl2和1.4mM CaCl2的缓冲液中。
在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在还包含碳水化合物的缓冲液中。在一些实施方案中，碳水化合物包括D-葡萄糖。在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在还包含1-100mM D-葡萄糖的缓冲液中。
在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在还包含1-100mM NaHCO3、1-100mM KHCO3或其组合的缓冲液中。
在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在还包含抗氧化剂的缓冲液中。在一些实施方案中，抗氧化剂为叔丁基羟基喹啉(TBHQ)、丁基化羟基甲苯(BHT)、丁基化羟基苯甲醚(BHA)、维生素E或其任何组合。
在一些实施方案中，药物制剂不包含防腐剂。
在一些实施方案中，ASO以0.1mg/mL至250mg/mL的浓度存在于药物组合物中。
在一些实施方案中，ASO以约0.1mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL、2.5mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL、6mg/mL、7mg/mL、8mg/mL、9mg/mL、10mg/mL、11mg/mL、12mg/mL、13mg/mL、14mg/mL、15mg/mL、16mg/mL、17mg/mL、18mg/mL、19mg/mL或20mg/mL的浓度存在于药物组合物中。在一些实施方案中，ASO以约30mg/mL、40mg/mL、50mg/mL、60mg/mL、70mg/mL、80mg/mL、90mg/mL、100mg/mL、110mg/mL、120mg/mL、130mg/mL、140mg/mL、150mg/mL、160mg/mL、170mg/mL、180mg/mL、190mg/mL或200mg/mL的浓度存在于药物组合物中。在一些实施方案中，ASO以约22.5mg/mL、25mg/mL、27.5mg/mL、30mg/mL、32.5mg/mL、35mg/mL、37.5mg/mL、40mg/mL、42.5mg/mL、45mg/mL、47.5mg/mL、50mg/mL、52.5mg/mL、55mg/mL、57.5mg/mL、60mg/mL、62.5mg/mL、65mg/mL、67.5mg/mL、70mg/mL、72.5mg/mL、75mg/mL、77.5mg/mL、80mg/mL、82.5mg/mL、85mg/mL、87.5mg/mL、90mg/mL、92.5mg/mL、95mg/mL、97.5mg/mL、100mg/mL、102.5mg/mL、105mg/mL、107.5mg/mL、110mg/mL、112.5mg/mL、115mg/mL、117.5mg/mL、120mg/mL、122.5mg/mL、125mg/mL、127.5mg/mL、130mg/mL、132.5mg/mL、135mg/mL、137.5mg/mL、140mg/mL、142.5mg/mL、145mg/mL、147.5mg/mL、150mg/mL、152.5mg/mL、155mg/mL、157.5mg/mL、160mg/mL、162.5mg/mL、165mg/mL、167.5mg/mL、170mg/mL、172.5mg/mL、175mg/mL、177.5mg/mL、180mg/mL、182.5mg/mL、185mg/mL、187.5mg/mL、190mg/mL、192.5mg/mL、195mg/mL、197.5mg/mL、200mg/mL、202.5mg/mL、205mg/mL、207.5mg/mL、210mg/mL、212.5mg/mL、215mg/mL、217.5mg/mL、220mg/mL、222.5mg/mL、225mg/mL、227.5mg/mL、230mg/mL、232.5mg/mL、235mg/mL、237.5mg/mL、240mg/mL、242.5mg/mL、245mg/mL、247.5mg/mL或250mg/mL的浓度存在于药物组合物中。在一些实施方案中，ASO以11mg/mL、22mg/mL、33mg/mL、44mg/mL、55mg/mL、66mg/mL、77mg/mL、88mg/mL、99mg/mL或100mg/mL的浓度存在于药物组合物中。
在一些实施方案中，NaV1.1蛋白的表达或功能降低与编码NaV1.1蛋白并包含NMD外显子的前mRNA中诱导无义介导RNA衰变的外显子(NMD外显子)的剪接改变有关。
在一些实施方案中，ASO促进NMD外显子从前mRNA中排除。
在一些实施方案中，ASO结合至包含诱导无义介导RNA衰变的外显子(NMD外显子)且编码NaV1.1蛋白的前mRNA的靶向部分。
在一些实施方案中，ASO促进从包含NMD外显子且编码NaV1.1蛋白的前mRNA中排除NMD外显子。
在一些实施方案中，当ASO被引入细胞时，ASO提高编码NaV1.1蛋白的加工mRNA的水平。
在一些实施方案中，当ASO被引入细胞时，ASO提高NaV1.1蛋白的水平。
在一些实施方案中，靶向部分位于NMD外显子侧翼的内含子序列内。
在一些实施方案中，靶向部分包含NMD外显子的至少一个核苷酸。
在一些实施方案中，靶向部分位于NMD外显子内。
在一些实施方案中，该方法治疗疾病或病况。
在一些方面，本文提供了一种药物制剂，其包括：(a)反义寡聚体(ASO)，其中所述ASO包含与SEQ ID NO:21-67、210-256或304-1099中的任一个具有至少80％序列同一性的序列；和(b)药学上可接受的稀释剂；其中所述ASO以0.1-200mg/mL的浓度被溶解或悬浮在溶液中。
在一些实施方案中，药学上可接受的稀释剂包含人工脑脊髓液(aCSF)溶液。
在一些实施方案中，该溶液包含来自对象的脑脊髓液(CSF)样品。
在一些实施方案中，ASO以约0.1mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL、2.5mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL、6mg/mL、7mg/mL、8mg/mL、9mg/mL、10mg/mL、11mg/mL、12mg/mL、13mg/mL、14mg/mL、15mg/mL、16mg/mL、17mg/mL、18mg/mL、19mg/mL或20mg/mL的浓度存在于药物组合物中。在一些实施方案中，ASO以约22.5mg/mL、25mg/mL、27.5mg/mL、30mg/mL、32.5mg/mL、35mg/mL、37.5mg/mL、40mg/mL、42.5mg/mL、45mg/mL、47.5mg/mL、50mg/mL、52.5mg/mL、55mg/mL、57.5mg/mL、60mg/mL、62.5mg/mL、65mg/mL、67.5mg/mL、70mg/mL、72.5mg/mL、75mg/mL、77.5mg/mL、80mg/mL、82.5mg/mL、85mg/mL、87.5mg/mL、90mg/mL、92.5mg/mL、95mg/mL、97.5mg/mL、100mg/mL、102.5mg/mL、105mg/mL、107.5mg/mL、110mg/mL、112.5mg/mL、115mg/mL、117.5mg/mL、120mg/mL、122.5mg/mL、125mg/mL、127.5mg/mL、130mg/mL、132.5mg/mL、135mg/mL、137.5mg/mL、140mg/mL、142.5mg/mL、145mg/mL、147.5mg/mL、150mg/mL、152.5mg/mL、155mg/mL、157.5mg/mL、160mg/mL、162.5mg/mL、165mg/mL、167.5mg/mL、170mg/mL、172.5mg/mL、175mg/mL、177.5mg/mL、180mg/mL、182.5mg/mL、185mg/mL、187.5mg/mL、190mg/mL、192.5mg/mL、195mg/mL、197.5mg/mL、200mg/mL、202.5mg/mL、205mg/mL、207.5mg/mL、210mg/mL、212.5mg/mL、215mg/mL、217.5mg/mL、220mg/mL、222.5mg/mL、225mg/mL、227.5mg/mL、230mg/mL、232.5mg/mL、235mg/mL、237.5mg/mL、240mg/mL、242.5mg/mL、245mg/mL、247.5mg/mL或250mg/mL的浓度存在于药物组合物中。
在一些实施方案中，ASO以11mg/mL、22mg/mL、33mg/mL、44mg/mL、55mg/mL、66mg/mL、77mg/mL、88mg/mL、99mg/mL或100mg/mL的浓度存在于药物组合物中。
在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在等渗溶液中。
在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在至少pH 5.8的磷酸盐缓冲溶液中。
在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在磷酸盐缓冲(pH 6.6–7.6)溶液中。
在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在包含25-250mM NaCl的缓冲液中。
在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在包含0.1-20mM KCl的缓冲液中。
在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在包含0.1-50mM Na2HPO4的缓冲液中。
在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在包含0.1-50mM NaH2PO4的缓冲液中。
在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在包含0.1-50mM CaCl2的缓冲液中。
在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在包含0.1-50mM MgCl2的缓冲液中。
在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在包含25-250mM NaCl、0.1-20mM KCl、0.1-50mM Na2HPO4、0.1-50mM NaH2PO4、0.1-50mM CaCl2和0.1-50mM MgCl2的缓冲液中。
在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在包含150mM NaCl、3.0mM KCl、0.7mMNa2HPO4、0.3mM NaH2PO4、0.79mM MgCl2和1.4mM CaCl2的缓冲液中。
在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在还包含碳水化合物的缓冲液中。在一些实施方案中，碳水化合物包括D-葡萄糖。在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在还包含1-100mM D-葡萄糖的缓冲液中。
在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在还包含1-100mM NaHCO3、1-100mM KHCO3或其组合的缓冲液中。
在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在还包含抗氧化剂的缓冲液中。在一些实施方案中，抗氧化剂为叔丁基羟基喹啉(TBHQ)、丁基化羟基甲苯(BHT)、丁基化羟基苯甲醚(BHA)、维生素E或其任何组合。
在一些实施方案中，药物制剂不包含防腐剂。
在一些实施方案中，药物制剂适合于脑室内或鞘内注射。
在一些实施方案中，药物制剂包装在单次使用小瓶中。
在一些方面，本文提供了一种试剂盒，其包括：(i)包含反义寡聚体(ASO)的浓缩物，其中所述ASO包含与SEQ ID NO:21-67、210-256或304-1099中的任一个具有至少80％序列同一性的序列；和(ii)稀释剂，其中所述浓缩物可与所述稀释剂混溶；以及(iii)用于在稀释剂中稀释或溶解ASO的说明。
在一些实施方案中，稀释剂为人工脑脊液(aCSF)溶液。
在一些实施方案中，稀释剂包含等渗溶液。
在一些实施方案中，稀释剂包含至少pH 5.8的磷酸盐缓冲溶液。
在一些实施方案中，稀释剂包含磷酸盐缓冲(pH 6.6–7.6)溶液。
在一些实施方案中，稀释剂包含25-250mM NaCl。
在一些实施方案中，稀释剂包含0.1-20mM KCl。
在一些实施方案中，稀释剂包含0.1-50mM Na2HPO4。
在一些实施方案中，稀释剂包含0.1-50mM NaH2PO4。
在一些实施方案中，稀释剂包含0.1-50mM CaCl2。
在一些实施方案中，稀释剂包含0.1-50mM MgCl2。
在一些实施方案中，稀释剂包含25-250mM NaCl、0.1-20mM KCl、0.1-50mMNa2HPO4、0.1-50mM NaH2PO4、0.1-50mM CaCl2和0.1-50mM MgCl2。
在一些实施方案中，稀释剂包含150mM NaCl、3.0mM KCl、0.7mM Na2HPO4、0.3mMNaH2PO4、0.79mM MgCl2和1.4mM CaCl2。
在一些实施方案中，稀释剂还包含碳水化合物。在一些实施方案中，碳水化合物包括D-葡萄糖。在一些实施方案中，稀释剂还包含1-100mM的D-葡萄糖。
在一些实施方案中，稀释剂还包含1-100mM NaHCO3、1-100mM KHCO3或其组合。
在一些实施方案中，稀释剂还包含抗氧化剂。在一些实施方案中，抗氧化剂为叔丁基羟基喹啉(TBHQ)、丁基化羟基甲苯(BHT)、丁基化羟基苯甲醚(BHA)、维生素E或其任何组合。
在一些实施方案中，稀释剂不包含防腐剂。
在一些实施方案中，用于在稀释剂中稀释或溶解ASO的说明包括用于在稀释剂中将ASO稀释或溶解至0.1mg/mL至250mg/mL的浓度的说明。
在一些实施方案中，用于在稀释剂中稀释或溶解ASO的说明包括用于在稀释剂中将ASO稀释或溶解至约0.1mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL、2.5mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL、6mg/mL、7mg/mL、8mg/mL、9mg/mL、10mg/mL、11mg/mL、12mg/mL、13mg/mL、14mg/mL、15mg/mL、16mg/mL、17mg/mL、18mg/mL、19mg/mL或20mg/mL的浓度的说明。
在一些实施方案中，用于在稀释剂中稀释或溶解ASO的说明包括用于在稀释剂中将ASO稀释或溶解至约22.5mg/mL、25mg/mL、27.5mg/mL、30mg/mL、32.5mg/mL、35mg/mL、37.5mg/mL、40mg/mL、42.5mg/mL、45mg/mL、47.5mg/mL、50mg/mL、52.5mg/mL、55mg/mL、57.5mg/mL、60mg/mL、62.5mg/mL、65mg/mL、67.5mg/mL、70mg/mL、72.5mg/mL、75mg/mL、77.5mg/mL、80mg/mL、82.5mg/mL、85mg/mL、87.5mg/mL、90mg/mL、92.5mg/mL、95mg/mL、97.5mg/mL、100mg/mL、102.5mg/mL、105mg/mL、107.5mg/mL、110mg/mL、112.5mg/mL、115mg/mL、117.5mg/mL、120mg/mL、122.5mg/mL、125mg/mL、127.5mg/mL、130mg/mL、132.5mg/mL、135mg/mL、137.5mg/mL、140mg/mL、142.5mg/mL、145mg/mL、147.5mg/mL、150mg/mL、152.5mg/mL、155mg/mL、157.5mg/mL、160mg/mL、162.5mg/mL、165mg/mL、167.5mg/mL、170mg/mL、172.5mg/mL、175mg/mL、177.5mg/mL、180mg/mL、182.5mg/mL、185mg/mL、187.5mg/mL、190mg/mL、192.5mg/mL、195mg/mL、197.5mg/mL、200mg/mL、202.5mg/mL、205mg/mL、207.5mg/mL、210mg/mL、212.5mg/mL、215mg/mL、217.5mg/mL、220mg/mL、222.5mg/mL、225mg/mL、227.5mg/mL、230mg/mL、232.5mg/mL、235mg/mL、237.5mg/mL、240mg/mL、242.5mg/mL、245mg/mL、247.5mg/mL或250mg/mL的浓度的说明。
在一些实施方案中，用于在稀释剂中稀释或溶解ASO的说明书包括用于在稀释剂中将ASO稀释或溶解至约11mg/mL、22mg/mL、33mg/mL、44mg/mL、55mg/mL、66mg/mL、77mg/mL、88mg/mL、99mg/mL或100mg/mL的浓度的说明。
在一些实施方案中，用于在稀释剂中稀释或溶解ASO的说明包括用于在稀释剂中稀释或溶解约0.5mg至约500mg的ASO的说明。
在一些实施方案中，用于在稀释剂中稀释或溶解ASO的说明包括用于在稀释剂中稀释或溶解约0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22.5、25、27.5、30、32.5、35、37.5、40、42.5、45、47.5、50、52.5、55、57.5、60、62.5、65、67.5、70、72.5、75、77.5、80、82.5、85、87.5、90、92.5、95、97.5、100、102.5、105、107.5、110、112.5、115、117.5、120、122.5、125、127.5、130、132.5、135、137.5、140、142.5、145、147.5、150、152.5、155、157.5、160、162.5、165、167.5、170、172.5、175、177.5、180、182.5、185、187.5、190、192.5、195、197.5、200、202.5、205、207.5、210、212.5、215、217.5、220、222.5、225、227.5、230、232.5、235、237.5、240、242.5、245、247.5或250mg的ASO的说明。
在一些方面，本文提供了反义寡聚体(ASO)用于制造用于治疗或预防有需要的人类对象中的以NaV1.1蛋白的表达或功能降低为特征的疾病或病况的药物的用途，其中所述药物以约0.5毫克至约500毫克的第一剂量施用，并且其中所述ASO包含与SEQ ID NO:21-67、210-256或304-1099中的任一个具有至少80％序列同一性的序列。在一些实施方案中，以约0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22.5、25、27.5、30、32.5、35、37.5、40、42.5、45、47.5、50、52.5、55、57.5、60、62.5、65、67.5、70、72.5、75、77.5、80、82.5、85、87.5、90、92.5、95、97.5、100、102.5、105、107.5、110、112.5、115、117.5、120、122.5、125、127.5、130、132.5、135、137.5、140、142.5、145、147.5、150、152.5、155、157.5、160、162.5、165、167.5、170、172.5、175、177.5、180、182.5、185、187.5、190、192.5、195、197.5、200、202.5、205、207.5、210、212.5、215、217.5、220、222.5、225、227.5、230、232.5、235、237.5、240、242.5、245、247.5或250mg的第一剂量施用药物。
援引并入
本说明书中所提及的所有出版物、专利和专利申请均通过引用并入本文，其程度犹如具体地且单独地指出每个单独的出版物、专利或专利申请均通过引用而并入。
附图说明
本发明的特征在所附权利要求中作了特别的阐述。通过参考以下详细描述将获得对本发明的特征和优点的更好理解，所述详细描述阐述了其中利用本发明的原理的说明性实施方案，并且其附图：
图1A-1B描绘了含有诱导无义介导RNA衰变的外显子(NMD外显子mRNA)的靶标前mRNA，以及治疗剂介导的从前mRNA中排除诱导无义介导mRNA衰变的外显子以提高全长靶蛋白或功能性RNA的表达的示意图。图1A显示了分为核室和细胞质室的细胞。在细胞核中，靶基因的前mRNA转录物经过剪接产生经加工mRNA，且该经加工mRNA被输出到细胞质并翻译为靶蛋白。对于该靶基因，经加工mRNA的一些部分含有在细胞质中降解的诱导无义介导mRNA衰变的外显子(NMD外显子mRNA)，从而导致无靶蛋白产生。图1B显示了分为细胞核和细胞质室的同一细胞的示例。用治疗剂如反义寡聚体(ASO)治疗能促进诱导无义介导mRNA衰变的外显子从前mRNA中排除，并导致经加工mRNA的增加，其进而被翻译为更高水平的靶蛋白。
图1C是治疗性ASO介导的从前mRNA中排除诱导无义介导mRNA衰变的外显子的示意图，其减少非生产性经加工mRNA(例如，具有NMD外显子)、增加生产性mRNA(例如，没有NMD外显子)并增加从生产性mRNA的全长靶蛋白的表达。
图1D显示了SCN1A基因中编码诱导无义介导mRNA衰变(NMD)的外显子的示例性序列的鉴定。显示了使用比较基因组学对编码NMD诱导外显子的SCN1A基因中的序列的鉴定，并在UCSC基因组浏览器中可视化。上图显示了SCN1A基因的按比例图形表示。100个脊椎动物物种之间的保守水平显示为峰值。最高的峰对应于外显子(黑框)，而大多数内含子(带箭头的线)没有观察到峰。在内含子20(NM_006920)中鉴定了保守的峰，示于中间图中。对保守序列的检查鉴定了64bp的外显子样序列(底部图，灰色突出显示的序列)，两侧有3′和5′剪接位点(下划线序列)。包含该外显子导致移码，并在外显子21中引入提前终止密码子，从而使转录物成为NMD的靶标。
图2显示了监测野生型(WT)和Dravet综合征(DS)小鼠的研究设计时间表，以及显示监测14周的DS和WT同窝小鼠的存活Kaplan-Meier曲线。
图3显示了DS小鼠及其WT同窝小鼠中EEG癫痫发作监测研究的实验设计。
图4A-4E显示了在施用ASO-22或PBS的小鼠中监测癫痫发作的结果。图4A显示了DS小鼠的示例性ECG记录。图4B显示了两个小鼠组的脑不同区域的癫痫发作次数。*表示p<0.05。图4C总结了被给予PBS(n＝21)或ASO-22(n＝21)的DS小鼠在P22和P46之间记录的自发发作(全身性和局灶性)的总数。*表示p<0.05。图4D显示了各组中出现多次癫痫发作的小鼠数量。图4E显示了ASO-22对被给予PBS(n＝21)或ASO-22(n＝21)的DS小鼠在P22和P46之间首次记录的癫痫发作的潜伏期的影响。
图5A-5G显示，在P2单次ICV注射20μg的ASO-22导致DS小鼠中降低的SUDEP发生率和提高的NaV1.1蛋白表达。图5A是实验设计的示意图。图5B、5C、5D、5E、5F和5G分别示出了在P2单次ICV注射ASO-22(20μg)或PBS后7周或14周时的脑组织中的ASO-22暴露、Scn1a表达和NaV1.1表达。
图6A-6B显示了在P14单次ICV注射ASO-22(60μg)或PBS后的DS和WT小鼠的存活百分比。
图7A-7F分别显示了在P14单次ICV注射ASO-22(60μg)或PBS后，在P35和P90的脑组织中的ASO-22暴露、Scn1a表达和NaV1.1表达。
图8显示了每组使用的实验条件和猴数量。
图9A-9B显示了在研究第3天和第29天食蟹猴脑中ASO-22的水平。
图10A-10B显示了第3天和第29天食蟹猴脑区域中的NaV1.1蛋白的水平。
图11A-11B显示了生产性SCN1A基因与总SCN1A基因的百分比，作为在第3天和第29天在食蟹猴中靶衔接的评估。
图12A显示了鞘内施用ASO-22后食蟹猴中的血浆药代动力学。图12B显示了研究第3天和29天食蟹猴脑脊液(CSF)中的ASO-22的水平。
图13A-13D描绘了SCN1A中导致NMD的可变剪接事件的鉴定。图13A显示了如RT-PCR所证实的，在ReNcell中包括或不包括交替外显子的SCN1A剪接同种型。图13B显示了对4个物种的脑皮层中SCN1A基因的可变剪接事件的评估。图13C显示了对应于从P0到P20和10个月时从WT C57BL/6J小鼠脑提取的总RNA扩增的Scn1a生产性转录物(下条带，498bp)和非生产性转录物(上条带，562bp)的RT-PCR产物的TBE PAGE。小鼠Gapdh用作加载对照。图13D总结了用图13C所示的PCR产物的光密度计算的出生后小鼠的脑中Scn1a生产性和非生产性转录物的表达。
图14A-14E描绘了所选择的ASO抑制ReNcell中NMD剪接事件并增加生产性Scn1amRNA的表达。
图15A-15C显示了ASO-22对ReNcell中Scn1a mRNA剪接和表达的剂量依赖性影响。
图16A-16H描绘了ASO-22ICV注射导致小鼠脑内Scn1a mRNA和NaV1.1蛋白表达的剂量依赖性和持久性增加。
图17显示了ASO-22对ICV注射的新生小鼠脑中的Scn1a mRNA表达的剂量依赖性影响。
图18显示了ASO-22对ICV注射的新生小鼠脑中的NaV1.1表达的剂量依赖性影响。
图19显示了不同注射后天数小鼠脑中Scn1a mRNA的表达。
图20显示了不同注射后天数小鼠脑中NaV1.1的表达。
图21显示了实施例中使用的两个抗NaV1.1抗体的验证。使用从Scn1a-/-小鼠脑(中间泳道)和两个WT同窝小鼠的脑(左和右泳道)制备的总蛋白测试两种抗NaV1.1抗体Alomone ASC-001和NeuroMab 75-023的特异性。
图22显示了Dravet综合征的临床表现及其年龄相关发病率的示意图。AA：非典型发作；AE：急性脑病变；CG：蹲伏步态；CPS：复杂部分性发作；DD：发育迟缓；DS：Dravet综合征；EEG：脑电图；FSz：复杂热性惊厥；GMS：全身运动性发作；HS：过高热敏感性；m：月份；MSz：肌阵挛发作；OS：迟钝(obtundation)状态；SE：癫痫持续状态；SUDEP：癫痫时意外猝死；y：年；*中度发热占60％，主要为阵挛性全身性和单侧运动性癫痫发作；**在没有发作期EEG记录的情况下，很难区分AA和CPS，因此它们的确切发病率未知。参见，例如，Gataullina和Dulac，2017年，其全部内容通过引用并入本文。
图23显示了可用于治疗Dravet综合征的TANGO(核基因输出的靶向扩增)。
图24显示了TANGO技术在Dravet综合征中的转化性潜力。
图25显示方法：研究设计。在美国约20个地点进行的1/2a期开放标签两部分研究。
图26显示了研究设计的示意图。
图27显示了方法：患者。
图28显示了研究评估。
具体实施方式
阐述该描述的某些具体细节，以便提供对各种实施方案的透彻理解。然而，本领域技术人员将理解，可以在没有这些细节的情况下实施本发明。在其他情况下，未详细示出或描述众所周知的结构，以避免不必要地混淆对实施方案的描述。
除非另外定义，否则在此使用的所有技术和科学术语具有与由本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同的含义。虽然与本文所述的那些相似或等同的方法和材料可用于本发明的实践或测试，但下面描述了合适的方法和材料。
定义
除非上下文另有明确规定，如本说明书和所附权利要求中使用的单数形式“一”、“一个”和“该”包括复数指称。
应该注意的是，除非内容另有明确规定，否则术语“或”的含义通常包括“和/或”。如本文所用，术语“和/或”及“其任何组合”及其语法等价物可以互换使用。这些术语可以表明，任何组合都是经过特别考虑的。仅出于说明目的，以下短语“A、B和/或C”或“A、B、C或其任何组合”可表示“单独A；单独B；单独C；A和B；B和C；A和C；以及A、B和C。除非上下文特别提及分离地使用，术语“或”可结合地或分离地使用。
术语“约”或“大约”可指在由本领域普通技术人员确定的特定值的可接受误差范围内，其部分地取决于该值是如何测量或确定的(即，测量系统的局限性)。例如，按照本领域的实践，“约”可以表示在1个或超过1个标准偏差之内。或者，“约”可以表示给定值的至多20％、至多10％、至多5％或至多1％的范围。或者，特别地关于生物系统或过程，该术语可表示在数值的一个数量级内，在5倍之内，且更优选地在2倍之内。除非另有说明，在本申请和权利要求书中描述了特定值的情况下，否则应假设术语“约”表示该特定值在可接受的误差范围内。
如在说明书和权利要求书中所用，词语“包括(comprising)”(和任何形式的包括(comprising)，例如“包括(comprise)”和“包括(comprises)”)，“具有(having)”(和任何形式的具有(having)，例如“具有(have)”和“具有(has)”)，“包括(including)”(以及任何形式的包括(including)，例如“包括(includes)”和“包括(include)”)或“包含(containing)”(以及任何形式的包含(containing)，例如“包含(contains)”和“包含(contain)”)是包含性的或开放式的，并且不排除另外未列举的元素或方法步骤。预期本说明书中所讨论的任何实施方案可以相对于本发明的任何方法或组合物实施，反之亦然。此外，本发明的组合物可用于实现本发明的方法。
说明书中对“实施方案”、“一些实施方案”、“一实施方案”、“一个实施方案”、“某些实施方案”或“其他实施方案”的引用是指结合实施方案描述的特定特征、结构或特性包括在至少一些实施方案中，但不必包括在本发明的所有实施方案中。为了便于理解本发明，下面定义了一些术语和短语。
术语“寡核苷酸序列”、“核酸序列”、“多核苷酸序列”、“核苷酸序列”和“核苷酸(nucleotide acid)序列”在本文中以其最广泛的意义可互换地使用，并且在本文中具有相同的含义，并且优选地指代DNA或RNA。核酸序列是包含核苷酸单体或由核苷酸单体组成的聚合物，核苷酸单体通过糖/磷酸骨架的磷酸二酯键彼此共价连接。术语“核酸序列”还包括修饰的核酸序列，例如碱基修饰、糖修饰或骨架修饰等的DNA或RNA。
在本文中具有相同含义的术语“片段”或“序列片段”是例如核酸分子(如DNA或RNA或蛋白质)的全长序列的较短部分。因此，片段通常由与全长序列中的相应段相同的序列组成。本发明的上下文中的序列的优选片段由实体的连续段，例如对应于由衍生出该片段的分子中实体的连续段的核苷酸或氨基酸组成，其表示衍生出该片段的总(即，全长)分子的至少1％、至少2％、至少3％、至少4％、至少5％、至少6％、至少7％、至少8％、至少9％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.5％或甚至100％。例如，多核苷酸或多肽的“片段”或“功能片段”是比全长、未成熟或成熟核苷酸或多肽短的多核苷酸或多肽片段并且具有全长成熟参考多核苷酸或多肽的活性的至少1％、至少2％、至少3％、至少4％、至少5％、至少6％、至少7％、至少8％、至少9％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.5％或甚至100％或更多。感兴趣的片段可以通过重组、合成或消化方法制成。
当参考例如细胞、核酸、蛋白质或载体使用术语“重组”时，表示细胞、核酸、蛋白质或载体已被实验室方法修饰或是实验室方法的结果。因此，例如，术语“重组多核苷酸”可指非天然存在且在体外合成或操纵的多核苷酸，例如通过实验室方法产生的多核苷酸。重组多核苷酸可在实验室合成和/或可通过使用DNA的酶修饰(如限制酶切、连接和克隆)通过使用重组DNA技术制备。重组多肽可通过重组DNA的体外转录，然后所产生的信使RNA(mRNA)的体外翻译来制备。或者，在适当条件下，可将重组多核苷酸或RNA掺入细胞中，并可在细胞内表达重组多肽。重组蛋白质可包括蛋白质的天然(非重组)形式中未发现的氨基酸残基或可包括已修饰(例如标记)的氨基酸残基。
术语“分离”是指从多核苷酸、多肽、蛋白质或其片段通常在自然界中所关联的成分、细胞和其他方面中分离出来的。例如，就多核苷酸而言，分离的多核苷酸是从与自然存在的序列通常相关的序列的5'和3'端分离的多核苷酸。如本领域技术人员显而易见的，非天然存在的多核苷酸、多肽、蛋白质或其片段不需要“分离”以将其与其天然存在的对应物区分开。此外，“浓缩的”、“分离的”或“稀释的”多核苷酸、多肽、蛋白质或其片段与其天然存在的对应物的区别在于，每体积的分子浓度或数量大于其天然存在的对应物的“浓缩的”或小于其“分离的”或“稀释的”浓度或数量。
在两个或更多个核酸或多肽序列的上下文中，术语“同一性”或百分比“同一性”，是指当在比较窗口或指定区域上进行比较和比对以获得最大对应时，如使用序列比较算法或通过手动比对和目视检查测量的，两个或更多个序列或子序列是相同的或具有指定百分比的相同的核苷酸或氨基酸残基(即，例如本发明的整个多肽序列或本发明多肽的单个结构域的指定区域上30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％、99.5％、99.8％、99.9％或100％同一性)。这种至少80％同一的序列被称为“基本相同”。在一些实施方案中，两个序列是100％同一的。在一些实施方案中，两个序列在其中一个序列(例如，两个序列中较短的一个，其中序列具有不同的长度)的整个长度上是100％同一的。在各种实施方案中，同一性可指测试序列的补体。
在一些实施方案中，同一性存在于长度为至少约2至约400个氨基酸或核苷酸的区域上。在一些实施方案中，同一性存在于长度为至少约2至约390、至少约2至约380、至少约2至约370、至少约2至约360、至少约2至约350、至少约2至约340、至少约2至约330、至少约2至约320、至少约2至约310、至少约2至约300、至少约2至约290、至少约2至约280、至少约2至约270、至少约2至约260、至少约2至约250、至少约2至约200、至少约2至约150、至少约2至约100个氨基酸或核苷酸的区域上。在一些实施方案中，同一性存在于长度为至少约2至约90、至少约2至约85、至少约2至约80、至少约2至约75、至少约2至约70、至少约2至约65、至少约2至约60、至少约2至约55、至少约2至约50、至少约2至约45、至少约2至约40、至少约2至约35、至少约2至约30、至少约2至约25、至少约2至约20、至少约2至约10、至少约2至约5个氨基酸或核苷酸的区域上。
在一些实施方案中，同一性存在于长度为至少约3至约400、约4至约400、约5至约400、约6至约400、约7至约400、约8至约400、约9至约400、约10至约400、约11至约400、约12至约400、约13至约400、约14至约400、约15至约400、约16至约400、约17至约400、约18至约400、约19至约400、约20至约400、约21至约400、约22至约400、约23至约400、约24至约400、约25至约400、约26至约400、约27至约400、约28至约400、约29至约400、约30至约400、约31至约400、约32至约400、约33至约400、约34至约400、约35至约400个氨基酸或核苷酸的区域上。在一些实施方案中，同一性存在于长度为至少约40至约400、约45至约400、约50至约400、约55至约400、约60至约400、约61至约400、约62至约400、约63至约400、约64至约400、约65至约400、约66至约400、约67至约400、约68至约400、约69至约400、约70,至约400、约71至约400、约72至约400、约73至约400、约74至约400、约75至约400、约80至约400、约85至约400、约90至约400、约100至约400、约150至约400、约200至约400、约250至约400、约300至约400、约350至约400个氨基酸或核苷酸的区域上。
在一些实施方案中，同一性存在于长度为至少约2至约343、约3至约343、约4至约343、约7至约343、约9至约343、约11至约343、约15至约343、约16至约343、约20至约343、约25至约343、约62至约343、约2至约317、约3至约317、约4至约317、约7至约317、约9至约317、约11至约317、约15至约317、约16至约317、约20至约317、约25至约317、约62至约317、约2至约300、约3至约300、约4至约300、约7至约300、约9至约300、约11至约300、约15至约300、约16至约300、约20至约300、约25至约300、约62至约300、约2至约62、约3至约62、约4至约62、约7至约62、约9至约62、约11至约62、约15至约62、约16至约62、约20至约62、约25至约62个氨基酸或核苷酸的区域上。
术语“转基因”是指含有和/或表达外源基因或核酸序列，其进而改变细胞或其后代的基因型或表型。换句话说，它是指对细胞内源性核苷酸的任何添加、删除或破坏。
术语“可操作连接”可指两个或更多个核酸序列之间的功能关系，例如，转录调节或信号序列与转录序列的功能关系。例如，如果靶基序或编码靶基序的核酸被表达为参与将编码序列所编码的多肽靶向细胞膜、细胞内或细胞外区室的前蛋白，则其可操作地连接到编码序列。例如，如果信号肽或编码信号肽的核酸被表达为参与编码序列编码的多肽分泌的前蛋白，则其可操作地连接到编码序列。例如，如果启动子刺激或调节编码序列的转录，则其是可操作连接的。
术语“对象”或“患者”包括脊椎动物或哺乳动物。哺乳动物的实例包括但不限于哺乳动物类的任何成员：人类、非人类灵长类动物(如黑猩猩)以及其他猿类和猴类；农场动物，如牛、马、羊、山羊、猪；家畜，如兔、狗和猫；实验动物，包括啮齿动物，如大鼠、小鼠和豚鼠等。在一个方面中，哺乳动物是人。如本文所用，术语“动物”包括人类和非人类动物。在一个实施方案中，“非人动物”是哺乳动物，例如啮齿动物，例如大鼠或小鼠。在一个实施方案中，非人类动物是小鼠。
“对照”是实验中用于比较目的的替代对象或样品。对照可以是“阳性”或“阴性”的。
治疗方法
在一些方面，本文提供了一种治疗或预防有需要的人类对象中以NaV1.1蛋白的表达或功能降低为特征的疾病或病况的方法，包括向人类对象施用包含约0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195或200mg的第一剂量的反义寡聚体(ASO)的药物组合物，其中所述ASO包括与SEQ ID NO:21-67、210-256或304-1099中的任一个具有至少80％序列同一性的序列，从而治疗或预防人类对象中的疾病或病况。在一些实施方案中，ASO包含与表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8a和8b中列出的序列中的任一个具有至少80％序列同一性的序列，从而治疗或预防人类对象中的疾病或病况。
在一些方面，本文提供了一种治疗或预防有需要的人类对象中以NaV1.1蛋白的表达或功能降低为特征的疾病或病况的方法，包括向所述人类对象施用包含第一剂量的反义寡聚体(ASO)的药物组合物，其中所述ASO包含与SEQ ID NO:21-67、210-256或304-1099中的任一个具有至少80％序列同一性的序列，从而治疗或预防人类对象中疾病或病况；其中人类对象为至多18岁。在一些实施方案中，ASO包含与表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8a和8b中列出的序列中的任一个具有至少80％序列同一性的序列，从而治疗或预防人类对象中的疾病或病况；其中人类对象为至多18岁。
在一些方面，本文提供了一种治疗或预防有需要的人类对象中以NaV1.1蛋白的表达或功能降低为特征的疾病或病况的方法，包括向所述人类对象施用包含单个剂量的反义寡聚体(ASO)的药物组合物，其中所述ASO包含与SEQ ID NO:21-67、210-256或304-1099中的任一个具有至少80％序列同一性的序列，从而治疗或预防人类对象中的疾病或病况。在一些实施方案中，ASO包含与表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8a和8b中列出的序列中的任一个具有至少80％序列同一性的序列，从而治疗或预防人类对象中的疾病或病况。
在一些实施方案中，将药物组合物施用至人类对象的鞘内空间中。在一些实施方案中，将药物组合物施用至人类对象的脑脊液中。在一些实施方案中，将药物组合物施用到人类对象的脑中。在一些实施方案中，将药物组合物施用至人类对象的脑中的脑脊液中。
在一些实施方案中，以推注形式施用药物组合物。在一些实施方案中，通过用输送泵输注而施用药物组合物。在一些实施方案中，通过脑室内注射施用药物组合物。在一些实施方案中，通过鞘内注射施用药物组合物。
治疗剂量
在一些实施方案中，第一剂量是单个剂量。在一些实施方案中，该方法还包括评估药物组合物的耐受性或有效性。
在一些实施方案中，本文所述的方法包括向人类对象施用包含约0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195或200mg的第一剂量的如本文所述的ASO的药物组合物。
在一些实施方案中，本文所述的方法包括向人类对象施用包含约0.1至约1000mg、约0.2至约1000mg、约0.3至约1000mg、约0.4至约1000mg、约0.5至约1000mg、约0.6至约1000mg、约0.7至约1000mg、约0.8至约1000mg、约0.9至约1000mg、1至约1000mg、约2至约1000mg、约3至约1000mg、约4至约1000mg、约5至约1000mg、约6至约1000mg、约7至约1000mg、约8至约1000mg、约9至约1000mg、约10至约1000mg、约15至约1000mg、约20至约1000mg、约25至约1000mg、约30至约1000mg、约35至约1000mg、约40至约1000mg、约45至约1000mg、约50至约1000mg、约55至约1000mg、约60至约1000mg、约65至约1000mg、约70至约1000mg、约75至约1000mg、约80至约1000mg、约85至约1000mg、约90至约1000mg、约95至约1000mg、约100至约1000mg、约150至约1000mg、约200至约1000mg、约250至约1000mg、约300至约1000mg、约350至约1000mg、约400至约1000mg、约450至约1000mg、约500至约1000mg、约550至约1000mg、约600至约1000mg、约650至约1000mg、约700至约1000mg、约750至约1000mg、约800至约1000mg、约850至约1000mg、约900至约1000mg或约950至约1000mg的第一剂量的如本文所述的ASO的药物组合物。
在一些实施方案中，本文所述的方法包括向人类对象施用包含0.1至1000mg、0.2至1000mg、0.3至1000mg、0.4至1000mg、0.5至1000mg、0.6至1000mg、0.7至1000mg、0.8至1000mg、0.9至1000mg、1至1000mg、2至1000mg、3至1000mg、4至1000mg、5至1000mg、6至1000mg、7至1000mg、8至1000mg、9至1000mg、10至1000mg、15至1000mg、20至1000mg、25至1000mg、30至1000mg、35至1000mg、40至1000mg、45至1000mg、50至1000mg、55至1000mg、60至1000mg、65至1000mg、70至1000mg、75至1000mg、80至1000mg、85至1000mg、90至1000mg、95至1000mg、100至1000mg、150至1000mg、200至1000mg、250至1000mg、300至1000mg、350至1000mg、400至1000mg、450至1000mg、500至1000mg、550至1000mg、600至1000mg、650至1000mg、700至1000mg、750至1000mg、800至1000mg、850至1000mg、900至1000mg或950至1000mg的第一剂量的如本文所述的ASO的药物组合物。
在一些实施方案中，本文所述的方法包括向人类对象施用包含约0.1至约950mg、约0.1至约900mg、约0.1至约850mg、约0.1至约800mg、约0.1至约750mg、约0.1至约700mg、约0.1至约650mg、约0.1至约600mg、约0.1至约550mg、约0.1至约500mg、约0.1至约450mg、约0.1至约400mg、约0.1至约350mg、约0.1至约300mg、约0.1至约250mg、约0.1至约200mg、约0.1至约150mg、约0.1至约100mg、约0.1至约95mg、约0.1至约90mg、约0.1至约85mg、约0.1至约80mg、约0.1至约75mg、约0.1至约70mg、约0.1至约65mg、约0.1至约60mg、约0.1至约55mg、约0.1至约50mg、约0.1至约45mg、约0.1至约40mg、约0.1至约35mg、约0.1至约30mg、约0.1至约mg、约0.1至约25mg、约0.1至约20mg、约0.1至约10mg、约0.1至约9mg、约0.1至约8mg、约0.1至约7mg、约0.1至约6mg、约0.1至约5mg、约0.1至约4mg、约0.1至约3、约0.1至约2mg、约0.1至约1mg、约0.1至约0.9mg、约0.1至约0.8mg、约0.1至约0.7mg、约0.1至约0.6mg、约0.1至约0.5mg、约0.1至约0.4mg、约0.1至约0.3或约0.1至约0.2mg的第一剂量的如本文所述的ASO的药物组合物。
在一些实施方案中，本文所述的方法包括向人类对象施用包含0.1至950mg、0.1至900mg、0.1至850mg、0.1至800mg、0.1至750mg、0.1至700mg、0.1至650mg、0.1至600mg、0.1至550mg、0.1至500mg、0.1至450mg、0.1至400mg、0.1至350mg、0.1至300mg、0.1至250mg、0.1至200mg、0.1至150mg、0.1至100mg、0.1至95mg、0.1至90mg、0.1至85mg、0.1至80mg、0.1至75mg、0.1至70mg、0.1至65mg、0.1至60mg、0.1至55mg、0.1至50mg、0.1至45mg、0.1至40mg、0.1至35mg、0.1至30mg、0.1至mg、0.1至25mg、0.1至20mg、0.1至10mg、0.1至9mg、0.1至8mg、0.1至7mg、0.1至6mg、0.1至5mg、0.1至4mg、0.1至3、0.1至2mg、0.1至1mg、0.1至0.9mg、0.1至0.8mg、0.1至0.7mg、0.1至0.6mg、0.1至0.5mg、0.1至0.4mg、0.1至0.3或0.1至0.2mg的第一剂量的如本文所述的ASO的药物组合物。
在一些实施方案中，本文所述的方法包括向人类对象施用包含约1至约400mg、约2至约400mg、约3至约400mg、约4至约400mg、约5至约400mg、约6至约400mg、约7至约400mg、约8至约400mg、约9至约400mg、约10至约400mg、约20至约400mg、约30至约400mg、约40至约400mg、约50至约400mg、约60至约400mg、约70至约400mg、约80至约400mg、约90至约400mg、约100至约400mg、约110至约400mg、约120至约400mg、约130至约400mg、约140至约400mg、约150至约400mg、约160至约400mg、约170至约400mg、约180至约400mg、约190至约400mg、约200至约400mg、约210至约400mg、约220至约400mg、约230至约400mg、约240至约400mg、约250至约400mg、约260至约400mg、约270至约400mg、约280至约400mg、约290至约400mg、约300至约400mg、约310至约400mg、约320至约400mg、约330至约400mg、约340至约400mg、约350至约400mg、约360至约400mg、约370至约400mg、约380至约400mg或约390至约400mg的第一剂量的如本文所述的ASO的药物组合物。
在一些实施方案中，本文所述的方法包括向人类对象施用包含1至400mg、2至400mg、3至400mg、4至400mg、5至400mg、6至400mg、7至400mg、8至400mg、9至400mg、10至400mg、20至400mg、30至400mg、40至400mg、50至400mg、60至400mg、70至400mg、80至400mg、90至400mg、100至400mg、110至400mg、120至400mg、130至400mg、约140至400mg、150至400mg、约160至400mg、170至400mg、180至400mg、190至400mg、200至400mg、210至400mg、220至400mg、230至400mg、240至400mg、250至400mg、260至400mg、270至400mg、280至400mg、290至400mg、300至400mg、310至400mg、320至400mg、330至400mg、340至400mg、350至400mg、360至400mg、370至400mg、380至400mg或390至400mg的第一剂量的如本文所述的ASO的药物组合物。
在一些实施方案中，本文所述的方法包括向人类对象施用包含约10至约390mg、约10至约380mg、约10至约370mg、约10至约360mg、约10至约350mg、约10至约340mg、约10至约330mg、约10至约320mg、约10至约310mg、约10至约300mg、约10至约290mg、约10至约280mg、约10至约270mg、约10至约260mg、约10至约250mg、约10至约240mg、约10至约230mg、约10至约220mg、约10至约210mg、约10至约200mg、约10至约190mg、约10至约180mg、约10至约170mg、约10至约160mg、约10至约150mg、约10至约140mg、约10至约130mg、约10至约120mg、约10至约110mg、约10至约90mg、约10至约80mg、约10至约70mg、约10至约60mg、约10至约50mg、约10至约40mg、约10至约30mg或约10至约20mg的第一剂量的如本文所述的ASO的药物组合物。
在一些实施方案中，本文所述的方法包括向人类对象施用包含10至390mg、10至380mg、10至370mg、10至360mg、10至350mg、10至340mg、10至330mg、10至320mg、10至310mg、10至300mg、10至290mg、10至280mg、10至270mg、10至260mg、10至250mg、10至240mg、10至230mg、10至220mg、10至210mg、10至200mg、10至190mg、10至180mg、10至170mg、10至160mg、10至150mg、10至140mg、10至130mg、10至120mg、10至110mg、10至90mg、10至80mg、10至70mg、10至60mg、10至50mg、10至40mg、10至30mg或10至20mg的第一剂量的如本文所述的ASO的药物组合物。
在一些实施方案mg中，本文所述的方法包括向人类对象施用包含约1mg、约2mg、约3mg、约4mg、约5mg、约6mg、约7mg、约8mg、约9mg、约10mg、约11mg、约12mg、约13mg、约14mg、约15mg、约16mg、约17mg、约18mg、约19mg、约20mg、约21mg、约22mg、约23mg、约24mg、约25mg、约26mg、约27mg、约28mg、约29mg、约30mg、约31mg、约32mg、约33mg、约34mg、约35mg、约36mg、约37mg、约38mg、约39mg、约40mg、约41mg、约42mg、约43mg、约44mg、约45mg、约46mg、约47mg、约48mg、约49mg、约50mg、约51mg、约52mg、约53mg、约54mg、约55mg、约56mg、约57mg、约58mg、约59mg、约60mg、约61mg、约62mg、约63mg、约64mg、约65mg、约66mg、约67mg、约68mg、约69mg、约70mg、约71mg、约72mg、约73mg、约74mg、约75mg、约76mg、约77mg、约78mg、约79mg、约80mg、约81mg、约82mg、约83mg、约84mg、约85mg、约86mg、约87mg、约88mg、约89mg、约90mg、约91mg、约92mg、约93mg、约94mg、约95mg、约96mg、约97mg、约98mg、约99mg、约100mg、约101mg、约102mg、约103mg、约104mg、约105mg、约106mg、约107mg、约108mg、约109mg、约110mg、约111mg、约112mg、约113mg、约114mg、约115mg、约116mg、约117mg、约118mg、约119mg、约120mg、约121mg、约122mg、约123mg、约124mg、约125mg、约126mg、约127mg、约128mg、约129mg、约130mg、约131mg、约132mg、约133mg、约134mg、约135mg、约136mg、约137mg、约138mg、约139mg、约140mg、约141mg、约142mg、约143mg、约144mg、约145mg、约146mg、约147mg、约148mg、约149mg、约150mg、约151mg、约152mg、约153mg、约154mg、约155mg、约156mg、约157mg、约158mg、约159mg、约160mg、约161mg、约162mg、约163mg、约164mg、约165mg、约166mg、约167mg、约168mg、约169mg、约170mg、约171mg、约172mg、约173mg、约174mg、约175mg、约176mg、约177mg、约178mg、约179mg、约180mg、约181mg、约182mg、约183mg、约184mg、约185mg、约186mg、约187mg、约188mg、约189mg、约190mg、约191mg、约192mg、约193mg、约194mg、约195mg、约196mg、约197mg、约198mg、约199mg、约200mg、约201mg、约202mg、约203mg、约204mg、约205mg、约206mg、约207mg、约208mg、约209mg、约210mg、约211mg、约212mg、约213mg、约214mg、约215mg、约216mg、约217mg、约218mg、约219mg、约220mg、约221mg、约222mg、约223mg、约224mg、约225mg、约226mg、约227mg、约228mg、约229mg、约230mg、约231mg、约232mg、约233mg、约234mg、约235mg、约236mg、约237mg、约238mg、约239mg、约240mg、约241mg、约242mg、约243mg、约244mg、约245mg、约246mg、约247mg、约248mg、约249mg、约250mg、约251mg、约252mg、约253mg、约254mg、约255mg、约256mg、约257mg、约258mg、约259mg、约260mg、约261mg、约262mg、约263mg、约264mg、约265mg、约266mg、约267mg、约268mg、约269mg、约270mg、约271mg、约272mg、约273mg、约274mg、约275mg、约276mg、约277mg、约278mg、约279mg、约280mg、约281mg、约282mg、约283mg、约284mg、约285mg、约286mg、约287mg、约288mg、约289mg、约290mg、约291mg、约292mg、约293mg、约294mg、约295mg、约296mg、约297mg、约298mg、约299mg、约300mg、约301mg、约302mg、约303mg、约304mg、约305mg、约306mg、约307mg、约308mg、约309mg、约310mg、约311mg、约312mg、约313mg、约314mg、约315mg、约316mg、约317mg、约318mg、约319mg、约320mg、约321mg、约322mg、约323mg、约324mg、约325mg、约326mg、约327mg、约328mg、约329mg、约330mg、约331mg、约332mg、约333mg、约334mg、约335mg、约336mg、约337mg、约338mg、约339mg、约340mg、约341mg、约342mg、约343mg、约344mg、约345mg、约346mg、约347mg、约348mg、约349mg、约350mg、约351mg、约352mg、约353mg、约354mg、约355mg、约356mg、约357mg、约358mg、约359mg、约360mg、约361mg、约362mg、约363mg、约364mg、约365mg、约366mg、约367mg、约368mg、约369mg、约370mg、约371mg、约372mg、约373mg、约374mg、约375mg、约376mg、约377mg、约378mg、约379mg、约380mg、约381mg、约382mg、约383mg、约384mg、约385mg、约386mg、约387mg、约388mg、约389mg、约390mg、约391mg、约392mg、约393mg、约394mg、约395mg、约396mg、约397mg、约398mg、约399mg或400mg的第一剂量的如本文所述的ASO的药物组合物。
在一些实施方案mg中，本文所述的方法包括向人类对象施用包含1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、6mg、7mg、8mg、9mg、10mg、11mg、12mg、13mg、14mg、15mg、16mg、17mg、18mg、19mg、20mg、21mg、22mg、23mg、24mg、25mg、26mg、27mg、28mg、29mg、30mg、31mg、32mg、33mg、34mg、35mg、36mg、37mg、38mg、39mg、40mg、41mg、42mg、43mg、44mg、45mg、46mg、47mg、48mg、49mg、50mg、51mg、52mg、53mg、54mg、55mg、56mg、57mg、58mg、59mg、60mg、61mg、62mg、63mg、64mg、65mg、66mg、67mg、68mg、69mg、70mg、71mg、72mg、73mg、74mg、75mg、76mg、77mg、78mg、79mg、80mg、81mg、82mg、83mg、84mg、85mg、86mg、87mg、88mg、89mg、90mg、91mg、92mg、93mg、94mg、95mg、96mg、97mg、98mg、99mg、100mg、101mg、102mg、103mg、104mg、105mg、106mg、107mg、108mg、109mg、110mg、111mg、112mg、113mg、114mg、115mg、116mg、117mg、118mg、119mg、120mg、121mg、122mg、123mg、124mg、125mg、126mg、127mg、128mg、129mg、130mg、131mg、132mg、133mg、134mg、135mg、136mg、137mg、138mg、139mg、140mg、141mg、142mg、143mg、144mg、145mg、146mg、147mg、148mg、149mg、150mg、151mg、152mg、153mg、154mg、155mg、156mg、157mg、158mg、159mg、160mg、161mg、162mg、163mg、164mg、165mg、166mg、167mg、168mg、169mg、170mg、171mg、172mg、173mg、174mg、175mg、176mg、177mg、178mg、179mg、180mg、181mg、182mg、183mg、184mg、185mg、186mg、187mg、188mg、189mg、190mg、191mg、192mg、193mg、194mg、195mg、196mg、197mg、198mg、199mg、200mg、201mg、202mg、203mg、204mg、205mg、206mg、207mg、208mg、209mg、210mg、211mg、212mg、213mg、214mg、215mg、216mg、217mg、218mg、219mg、220mg、221mg、222mg、223mg、224mg、225mg、226mg、227mg、228mg、229mg、230mg、231mg、232mg、233mg、234mg、235mg、236mg、237mg、238mg、239mg、240mg、241mg、242mg、243mg、244mg、245mg、246mg、247mg、248mg、249mg、250mg、251mg、252mg、253mg、254mg、255mg、256mg、257mg、258mg、259mg、260mg、261mg、262mg、263mg、264mg、265mg、266mg、267mg、268mg、269mg、270mg、271mg、272mg、273mg、274mg、275mg、276mg、277mg、278mg、279mg、280mg、281mg、282mg、283mg、284mg、285mg、286mg、287mg、288mg、289mg、290mg、291mg、292mg、293mg、294mg、295mg、296mg、297mg、298mg、299mg、300mg、301mg、302mg、303mg、304mg、305mg、306mg、307mg、308mg、309mg、310mg、311mg、312mg、313mg、314mg、315mg、316mg、317mg、318mg、319mg、320mg、321mg、322mg、323mg、324mg、325mg、326mg、327mg、328mg、329mg、330mg、331mg、332mg、333mg、334mg、335mg、336mg、337mg、338mg、339mg、340mg、341mg、342mg、343mg、344mg、345mg、346mg、347mg、348mg、349mg、350mg、351mg、352mg、353mg、354mg、355mg、356mg、357mg、358mg、359mg、360mg、361mg、362mg、363mg、364mg、365mg、366mg、367mg、368mg、369mg、370mg、371mg、372mg、373mg、374mg、375mg、376mg、377mg、378mg、379mg、380mg、381mg、382mg、383mg、384mg、385mg、386mg、387mg、388mg、389mg、390mg、391mg、392mg、393mg、394mg、395mg、396mg、397mg、398mg、399mg或400mg的第一剂量的如本文所述的ASO的药物组合物。
治疗目标人群
在一些实施方案中，人类对象为至多18岁。在一些实施方案中，人类对象为1至18、2至18、3至18、4至18、5至18、6至18、7至18、8至18、9至18、10至18、11至18、12至18、13至18、14至18、15至18、16至18或17至18岁。在一些实施方案中，人类对象为1至17、1至16、1至15、1至14、1至13、1至12、1至11、1至10、1至9、1至8、1至7、1至6、1至5、1至4、1至3或1至2岁的人类。在一些实施方案中，人类对象为不到1岁或为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18岁。
在一些实施方案中，人类对象为至多35岁、30岁、29岁、28岁、27岁、26岁、25岁、24岁、23岁、22岁、21岁、20岁、19岁、18岁、17岁、16岁、15岁、14岁、13岁、12岁、11岁、10岁、9岁、8岁、7岁、6岁、5岁、4岁、3岁、2岁或1岁。
在一些实施方案中，人类对象为不到1岁或为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34或35岁。
在一些实施方案中，人类对象为1至35、2至35、3至35、4至35、5至35、6至35、7至35、8至35、9至35、10至35、11至35、12至35、13至35、14至35、15至35、16至35、17至35、18至35、19至35、20至35、21至35、22至35、23至35、24至35、25至35、26至35、27至35、28至35、29至35、30至35、31至35、32至35、33至35或34至35岁。
在一些实施方案中，人类对象为1至35、1至34、1至33、1至32、1至31、1至30、1至29、1至28、1至27、1至26、1至25、1至24、1至23、1至22、1至21、1至20、1至19、1至18、1至17、1至16、1至15、1至14、1至13、1至12、1至11、1至10、1至9、1至8、1至7、1至6、1至5、1至4、1至3或1至2岁的人类。
在一些实施方案中，人类对象为2至35、2至34、2至33、2至32、2至31、2至30、2至29、2至28、2至27、2至26、2至25、2至24、2至23、2至22、2至21、2至20、2至19、2至18、2至17、2至16、2至15、2至14、2至13、2至12、2至11、2至10、2至9、2至8、2至7、2至6、2至5、2至4或2至3岁的人类。在一些实施方案中，人类对象为3至35、3至34、3至33、3至32、3至31、3至30、3至29、3至28、3至27、3至26、3至25、3至24、3至23、3至22、3至21、3至20、3至19、3至18、3至17、3至16、3至15、3至14、3至13、3至12、3至11、3至10、3至9、3至8、3至7、3至6、3至5或3至4岁的人类。
在一些实施方案中，人类对象为4至35、4至34、4至33、4至32、4至31、4至30、4至29、4至28、4至27、4至26、4至25、4至24、4至23、4至22、4至21、4至20、4至19、4至18、4至17、4至16、4至15、4至14、4至13、4至12、4至11、4至10、4至9、4至8、4至7、4至6或4至5岁的人类。
在一些实施方案中，人类对象为5至35、5至34、5至33、5至32、5至31、5至30、5至29、5至28、5至27、5至26、5至25、5至24、5至23、5至22、5至21、5至20、5至19、5至18、5至17、5至16、5至15、5至14、5至13、5至12、5至11、5至10、5至9、5至8、5至7或5至6岁的人类。
在一些实施方案中，人类对象为6至35、6至34、6至33、6至32、6至31、6至30、6至29、6至28、6至27、6至26、6至25、6至24、6至23、6至22、6至21、6至20、6至19、6至18、6至17、6至16、6至15、6至14、6至13、6至12、6至11、6至10、6至9、6至8或6至7岁的人类。
在一些实施方案中，人类对象为7至35、7至34、7至33、7至32、7至31、7至30、7至29、7至28、7至27、7至26、7至25、7至24、7至23、7至22、7至21、7至20、7至19、7至18、7至17、7至16、7至15、7至14、7至13、7至12、7至11、7至10、7至9、7至8岁的人类。
在一些实施方案中，人类对象为8至35、8至34、8至33、8至32、8至31、8至30、8至29、8至28、8至27、8至26、8至25、8至24、8至23、8至22、8至21、8至20、8至19、8至18、8至17、8至16、8至15、8至14、8至13、8至12、8至11、8至10或8至9岁的人类。
在一些实施方案中，对象的特征在于具有：(i)有年龄12个月之前的癫痫发作，伴有复发性局灶性运动性或半惊厥性或全身性强直阵挛发作，其常因过高热而延长和触发；(ii)没有既往因果性磁共振成像病变史；(iii)除Dravet综合征外，没有任何疾病或病况的其他已知的病因；(iv)癫痫发作时发育正常；(v)在SCN1A基因中具有致病性变体或意义不明的变体；(vi)有至少2次既往癫痫治疗，其中一次缺乏充分的癫痫发作控制；(vii)施用前28天内有4次或更多次惊厥发作，其中惊厥发作是选自偏侧阵挛性的、局灶性伴有运动体征的、局灶至双侧性强直阵挛性惊厥、全身性强直阵挛性惊厥、强直性的、强直或失张力性的(跌倒发作)以及阵挛性的中的任何一种；(viii)当前的癫痫干预或采用某剂量的至少一种抗癫痫药的医疗已经稳定至少4周，其中癫痫干预是生酮饮食、迷走神经刺激剂或大麻素或大麻衍生产品；或(ix)(i)–(viii)的任何组合。
在一些实施方案中，对象的特征在于具有以下各项中的至少一个或多个：(i)有年龄12个月之前的癫痫发作，伴有复发性局灶性运动性或半惊厥性或全身性强直阵挛发作，其常因过高热而延长和触发；(ii)没有既往因果性磁共振成像病变史；(iii)除Dravet综合征外，没有任何疾病或病况的其他已知的病因；(iv)癫痫发作时发育正常；(v)在SCN1A基因中具有致病性变体或意义不明的变体；(vi)有至少2次既往癫痫治疗，其中一次缺乏充分的癫痫发作控制；(vii)施用前28天内有4次或更多次惊厥发作，其中惊厥发作是选自偏侧阵挛性的、局灶性伴有运动体征的、局灶至双侧性强直阵挛性惊厥、全身性强直阵挛性惊厥、强直性的、强直或失张力性的(跌倒发作)以及阵挛性的中的任何一种；和(viii)当前的癫痫干预或采用某剂量的至少一种抗癫痫药的医疗已经稳定至少4周，其中癫痫干预是生酮饮食、迷走神经刺激剂或大麻素或大麻衍生产品。在一些实施方案中，对象的特征在于具有以下各项中的至少两个或更多个：(i)有年龄12个月之前的癫痫发作，伴有复发性局灶性运动性或半惊厥性或全身性强直阵挛发作，其常因过高热而延长和触发；(ii)没有既往因果性磁共振成像病变史；(iii)除Dravet综合征外，没有任何疾病或病况的其他已知的病因；(iv)癫痫发作时发育正常；(v)在SCN1A基因中具有致病性变体或意义不明的变体；(vi)有至少2次既往癫痫治疗，其中一次缺乏充分的癫痫发作控制；(vii)施用前28天内有4次或更多次惊厥发作，其中惊厥发作是选自偏侧阵挛性的、局灶性伴有运动体征的、局灶至双侧性强直阵挛性惊厥、全身性强直阵挛性惊厥、强直性的、强直或失张力性的(跌倒发作)以及阵挛性的中的任何一种；和(viii)当前的癫痫干预或采用某剂量的至少一种抗癫痫药的医疗已经稳定至少4周，其中癫痫干预是生酮饮食、迷走神经刺激剂或大麻素或大麻衍生产品。在一些实施方案中，对象的特征在于具有以下各项中的至少三个或多个：(i)有年龄12个月之前的癫痫发作，伴有复发性局灶性运动性或半惊厥性或全身性强直阵挛发作，其常因过高热而延长和触发；(ii)没有既往因果性磁共振成像病变史；(iii)除Dravet综合征外，没有任何疾病或病况的其他已知的病因；(iv)癫痫发作时发育正常；(v)在SCN1A基因中具有致病性变体或意义不明的变体；(vi)有至少2次既往癫痫治疗，其中一次缺乏充分的癫痫发作控制；(vii)施用前28天内有4次或更多次惊厥发作，其中惊厥发作是选自偏侧阵挛性的、局灶性伴有运动体征的、局灶至双侧性强直阵挛性惊厥、全身性强直阵挛性惊厥、强直性的、强直或失张力性的(跌倒发作)以及阵挛性的中的任何一种；和(viii)当前的癫痫干预或采用某剂量的至少一种抗癫痫药的医疗已经稳定至少4周，其中癫痫干预是生酮饮食、迷走神经刺激剂或大麻素或大麻衍生产品。在一些实施方案中，对象的特征在于具有以下各项中的至少四个或多个：(i)有年龄12个月之前的癫痫发作，伴有复发性局灶性运动性或半惊厥性或全身性强直阵挛发作，其常因过高热而延长和触发；(ii)没有既往因果性磁共振成像病变史；(iii)除Dravet综合征外，没有任何疾病或病况的其他已知的病因；(iv)癫痫发作时发育正常；(v)在SCN1A基因中具有致病性变体或意义不明的变体；(vi)有至少2次既往癫痫治疗，其中一次缺乏充分的癫痫发作控制；(vii)施用前28天内有4次或更多次惊厥发作，其中惊厥发作是选自偏侧阵挛性的、局灶性伴有运动体征的、局灶至双侧性强直阵挛性惊厥、全身性强直阵挛性惊厥、强直性的、强直或失张力性的(跌倒发作)以及阵挛性的中的任何一种；和(viii)当前的癫痫干预或采用某剂量的至少一种抗癫痫药的医疗已经稳定至少4周，其中癫痫干预是生酮饮食、迷走神经刺激剂或大麻素或大麻衍生产品。在一些实施方案中，对象的特征在于具有以下各项中的至少五个或多个：(i)有年龄12个月之前的癫痫发作，伴有复发性局灶性运动性或半惊厥性或全身性强直阵挛发作，其常因过高热而延长和触发；(ii)没有既往因果性磁共振成像病变史；(iii)除Dravet综合征外，没有任何疾病或病况的其他已知的病因；(iv)癫痫发作时发育正常；(v)在SCN1A基因中具有致病性变体或意义不明的变体；(vi)有至少2次既往癫痫治疗，其中一次缺乏充分的癫痫发作控制；(vii)施用前28天内有4次或更多次惊厥发作，其中惊厥发作是选自偏侧阵挛性的、局灶性伴有运动体征的、局灶至双侧性强直阵挛性惊厥、全身性强直阵挛性惊厥、强直性的、强直或失张力性的(跌倒发作)以及阵挛性的中的任何一种；和(viii)当前的癫痫干预或采用某剂量的至少一种抗癫痫药的医疗已经稳定至少4周，其中癫痫干预是生酮饮食、迷走神经刺激剂或大麻素或大麻衍生产品。在一些实施方案中，对象的特征在于具有以下各项中的至少六个或多个：(i)有年龄12个月之前的癫痫发作，伴有复发性局灶性运动性或半惊厥性或全身性强直阵挛发作，其常因过高热而延长和触发；(ii)没有既往因果性磁共振成像病变史；(iii)除Dravet综合征外，没有任何疾病或病况的其他已知的病因；(iv)癫痫发作时发育正常；(v)在SCN1A基因中具有致病性变体或意义不明的变体；(vi)有至少2次既往癫痫治疗，其中一次缺乏充分的癫痫发作控制；(vii)施用前28天内有4次或更多次惊厥发作，其中惊厥发作是选自偏侧阵挛性的、局灶性伴有运动体征的、局灶至双侧性强直阵挛性惊厥、全身性强直阵挛性惊厥、强直性的、强直或失张力性的(跌倒发作)以及阵挛性的中的任何一种；和(viii)当前的癫痫干预或采用某剂量的至少一种抗癫痫药的医疗已经稳定至少4周，其中癫痫干预是生酮饮食、迷走神经刺激剂或大麻素或大麻衍生产品。在一些实施方案中，对象的特征在于具有以下各项中的至少七个或多个：(i)有年龄12个月之前的癫痫发作，伴有复发性局灶性运动性或半惊厥性或全身性强直阵挛发作，其常因过高热而延长和触发；(ii)没有既往因果性磁共振成像病变史；(iii)除Dravet综合征外，没有任何疾病或病况的其他已知的病因；(iv)癫痫发作时发育正常；(v)在SCN1A基因中具有致病性变体或意义不明的变体；(vi)有至少2次既往癫痫治疗，其中一次缺乏充分的癫痫发作控制；(vii)施用前28天内有4次或更多次惊厥发作，其中惊厥发作是选自偏侧阵挛性的、局灶性伴有运动体征的、局灶至双侧性强直阵挛性惊厥、全身性强直阵挛性惊厥、强直性的、强直或失张力性的(跌倒发作)以及阵挛性的中的任何一种；和(viii)当前的癫痫干预或采用某剂量的至少一种抗癫痫药的医疗已经稳定至少4周，其中癫痫干预是生酮饮食、迷走神经刺激剂或大麻素或大麻衍生产品。在一些实施方案中，对象的特征在于具有以下各项的所有八个：(i)有年龄12个月之前的癫痫发作，伴有复发性局灶性运动性或半惊厥性或全身性强直阵挛发作，其常因过高热而延长和触发；(ii)没有既往因果性磁共振成像病变史；(iii)除Dravet综合征外，没有任何疾病或病况的其他已知的病因；(iv)癫痫发作时发育正常；(v)在SCN1A基因中具有致病性变体或意义不明的变体；(vi)有至少2次既往癫痫治疗，其中一次缺乏充分的癫痫发作控制；(vii)施用前28天内有4次或更多次惊厥发作，其中惊厥发作是选自偏侧阵挛性的、局灶性伴有运动体征的、局灶至双侧性强直阵挛性惊厥、全身性强直阵挛性惊厥、强直性的、强直或失张力性的(跌倒发作)以及阵挛性的中的任何一种；和(viii)当前的癫痫干预或采用某剂量的至少一种抗癫痫药的医疗已经稳定至少4周，其中癫痫干预是生酮饮食、迷走神经刺激剂或大麻素或大麻衍生产品。
在一些实施方案中，对象的额外特征在于不具有以下项中的一个或多个：(a)SCN1A基因中的以下突变之一：Thr226Met、Leu263Val、Val422Leu、Thr1174Ser、Trp1204Arg、Pro1345Ser、Gln1489Lys、Phe1499Leu、Arg1575Cys、Val1611Phe、Leu1624Pro、Arg1648Cys、Leu1649Gln、Leu1670Trp、Gly1674Arg和Asp1866Tyr；(b)引起癫痫的另一基因中的已知致病性突变，其中该致病性突变在已知隐性遗传病的情况下是纯合的；(c)当前使用钠通道阻滞剂(作为维持治疗)和抗凝剂进行治疗，其中钠通道阻滞剂为苯妥英、卡马西平、奥卡西平、拉莫三嗪、拉科酰胺或卢非酰胺，并且其中抗凝剂不是阿司匹林；(d)除癫痫以外的临床上明显不稳定的医疗病况；(e)施用前4周内的临床相关症状或临床重大疾病，癫痫除外；(f)除癫痫、Dravet综合征以外的脑或脊髓疾病史，或细菌性脑膜炎或脑畸形史；(g)脊柱畸形或其他改变脑脊液(CSF)自由流动或植入CSF引流分流器的病况；(h)施用前有临床意义的实验室异常值；(i)天冬氨酸转氨酶或丙氨酸转氨酶>正常上限2.5倍，血清肌酐>正常上限或血小板计数<正常下限；(j)施用前测得的12导联心电图(ECG)中的临床相关异常；(k)精神或行为障碍；(l)当前或过去4周内的抗凝剂用药，其中抗凝剂不是阿司匹林；或(m)(a)–(l)的任何组合。在一些实施方案中，对象的特征在于不具有以下项中的一个或多个：(a)SCN1A基因中的以下突变之一：Thr226Met、Leu263Val、Val422Leu、Thr1174Ser、TRp1204Arg、Pro1345Ser、Gln1489Lys、Phe1499Leu、Arg1575Cys、Val1611Phe、Leu1624Pro、Arg1648Cys、Leu1649Gln、Leu1670TRp、Gly1674Arg和ASp1866Tyr；(b)引起癫痫的另一基因中的已知致病性突变，其中该致病性突变在已知隐性遗传病的情况下是纯合的；(c)当前使用钠通道阻滞剂(作为维持治疗)和抗凝剂进行治疗，其中钠通道阻滞剂为苯妥英、卡马西平、奥卡西平、拉莫三嗪、拉科酰胺或卢非酰胺，并且其中抗凝剂不是阿司匹林；(d)除癫痫以外的临床上明显不稳定的医疗病况；(e)施用前4周内的临床相关症状或临床重大疾病，癫痫除外；(f)除癫痫、Dravet综合征以外的脑或脊髓疾病史，或细菌性脑膜炎或脑畸形史；(g)脊柱畸形或其他改变脑脊液(CSF)自由流动或植入CSF引流分流器的病况；(h)施用前有临床意义的实验室异常值；(i)天冬氨酸转氨酶或丙氨酸转氨酶>正常上限2.5倍，血清肌酐>正常上限或血小板计数<正常下限；(j)施用前测得的12导联心电图(ECG)中的临床相关异常；(k)精神或行为障碍；和(l)当前或过去4周内的抗凝剂用药，其中抗凝剂不是阿司匹林。在一些实施方案中，对象的额外特征在于不具有以下项中的两个或更多个：(a)SCN1A基因中的以下突变之一：Thr226Met、Leu263Val、Val422Leu、Thr1174Ser、Trp1204Arg、Pro1345Ser、Gln1489Lys、Phe1499Leu、Arg1575Cys、Val1611Phe、Leu1624Pro、Arg1648Cys、Leu1649Gln、Leu1670Trp、Gly1674Arg和Asp1866Tyr；(b)引起癫痫的另一基因中的已知致病性突变，其中该致病性突变在已知隐性遗传病的情况下是纯合的；(c)当前使用钠通道阻滞剂(作为维持治疗)和抗凝剂进行治疗，其中钠通道阻滞剂为苯妥英、卡马西平、奥卡西平、拉莫三嗪、拉科酰胺或卢非酰胺，并且其中抗凝剂不是阿司匹林；(d)除癫痫以外的临床上明显不稳定的医疗病况；(e)施用前4周内的临床相关症状或临床重大疾病，癫痫除外；(f)除癫痫、Dravet综合征以外的脑或脊髓疾病史，或细菌性脑膜炎或脑畸形史；(g)脊柱畸形或其他改变脑脊液(CSF)自由流动或植入CSF引流分流器的病况；(h)施用前有临床意义的实验室异常值；(i)天冬氨酸转氨酶或丙氨酸转氨酶>正常上限2.5倍，血清肌酐>正常上限或血小板计数<正常下限；(j)施用前测得的12导联心电图(ECG)中的临床相关异常；(k)精神或行为障碍；和(l)当前或过去4周内的抗凝剂用药，其中抗凝剂不是阿司匹林。在一些实施方案中，对象的额外特征在于不具有以下项中的三个或更多个：(a)SCN1A基因中的以下突变之一：Thr226Met、Leu263Val、Val422Leu、Thr1174Ser、Trp1204Arg、Pro1345Ser、Gln1489Lys、Phe1499Leu、Arg1575Cys、Val1611Phe、Leu1624Pro、Arg1648Cys、Leu1649Gln、Leu1670Trp、Gly1674Arg和Asp1866Tyr；(b)引起癫痫的另一基因中的已知致病性突变，其中该致病性突变在已知隐性遗传病的情况下是纯合的；(c)当前使用钠通道阻滞剂(作为维持治疗)和抗凝剂进行治疗，其中钠通道阻滞剂为苯妥英、卡马西平、奥卡西平、拉莫三嗪、拉科酰胺或卢非酰胺，并且其中抗凝剂不是阿司匹林；(d)除癫痫以外的临床上明显不稳定的医疗病况；(e)施用前4周内的临床相关症状或临床重大疾病，癫痫除外；(f)除癫痫、Dravet综合征以外的脑或脊髓疾病史，或细菌性脑膜炎或脑畸形史；(g)脊柱畸形或其他改变脑脊液(CSF)自由流动或植入CSF引流分流器的病况；(h)施用前有临床意义的实验室异常值；(i)天冬氨酸转氨酶或丙氨酸转氨酶>正常上限2.5倍，血清肌酐>正常上限或血小板计数<正常下限；(j)施用前测得的12导联心电图(ECG)中的临床相关异常；(k)精神或行为障碍；和(l)当前或过去4周内的抗凝剂用药，其中抗凝剂不是阿司匹林。在一些实施方案中，对象的额外特征在于不具有以下项中的四个或更多个：(a)SCN1A基因中的以下突变之一：Thr226Met、Leu263Val、Val422Leu、Thr1174Ser、Trp1204Arg、Pro1345Ser、Gln1489Lys、Phe1499Leu、Arg1575Cys、Val1611Phe、Leu1624Pro、Arg1648Cys、Leu1649Gln、Leu1670Trp、Gly1674Arg和Asp1866Tyr；(b)引起癫痫的另一基因中的已知致病性突变，其中该致病性突变在已知隐性遗传病的情况下是纯合的；(c)当前使用钠通道阻滞剂(作为维持治疗)和抗凝剂进行治疗，其中钠通道阻滞剂为苯妥英、卡马西平、奥卡西平、拉莫三嗪、拉科酰胺或卢非酰胺，并且其中抗凝剂不是阿司匹林；(d)除癫痫以外的临床上明显不稳定的医疗病况；(e)施用前4周内的临床相关症状或临床重大疾病，癫痫除外；(f)除癫痫、Dravet综合征以外的脑或脊髓疾病史，或细菌性脑膜炎或脑畸形史；(g)脊柱畸形或其他改变脑脊液(CSF)自由流动或植入CSF引流分流器的病况；(h)施用前有临床意义的实验室异常值；(i)天冬氨酸转氨酶或丙氨酸转氨酶>正常上限2.5倍，血清肌酐>正常上限或血小板计数<正常下限；(j)施用前测得的12导联心电图(ECG)中的临床相关异常；(k)精神或行为障碍；和(l)当前或过去4周内的抗凝剂用药，其中抗凝剂不是阿司匹林。在一些实施方案中，对象的额外特征在于不具有以下项中的五个或更多个：(a)SCN1A基因中的以下突变之一：Thr226Met、Leu263Val、Val422Leu、Thr1174Ser、Trp1204Arg、Pro1345Ser、Gln1489Lys、Phe1499Leu、Arg1575Cys、Val1611Phe、Leu1624Pro、Arg1648Cys、Leu1649Gln、Leu1670Trp、Gly1674Arg和Asp1866Tyr；(b)引起癫痫的另一基因中的已知致病性突变，其中该致病性突变在已知隐性遗传病的情况下是纯合的；(c)当前使用钠通道阻滞剂(作为维持治疗)和抗凝剂进行治疗，其中钠通道阻滞剂为苯妥英、卡马西平、奥卡西平、拉莫三嗪、拉科酰胺或卢非酰胺，并且其中抗凝剂不是阿司匹林；(d)除癫痫以外的临床上明显不稳定的医疗病况；(e)施用前4周内的临床相关症状或临床重大疾病，癫痫除外；(f)除癫痫、Dravet综合征以外的脑或脊髓疾病史，或细菌性脑膜炎或脑畸形史；(g)脊柱畸形或其他改变脑脊液(CSF)自由流动或植入CSF引流分流器的病况；(h)施用前有临床意义的实验室异常值；(i)天冬氨酸转氨酶或丙氨酸转氨酶>正常上限2.5倍，血清肌酐>正常上限或血小板计数<正常下限；(j)施用前测得的12导联心电图(ECG)中的临床相关异常；(k)精神或行为障碍；和(l)当前或过去4周内的抗凝剂用药，其中抗凝剂不是阿司匹林。在一些实施方案中，对象的额外特征在于不具有以下项中的六个或更多个：(a)SCN1A基因中的以下突变之一：Thr226Met、Leu263Val、Val422Leu、Thr1174Ser、Trp1204Arg、Pro1345Ser、Gln1489Lys、Phe1499Leu、Arg1575Cys、Val1611Phe、Leu1624Pro、Arg1648Cys、Leu1649Gln、Leu1670Trp、Gly1674Arg和Asp1866Tyr；(b)引起癫痫的另一基因中的已知致病性突变，其中该致病性突变在已知隐性遗传病的情况下是纯合的；(c)当前使用钠通道阻滞剂(作为维持治疗)和抗凝剂进行治疗，其中钠通道阻滞剂为苯妥英、卡马西平、奥卡西平、拉莫三嗪、拉科酰胺或卢非酰胺，并且其中抗凝剂不是阿司匹林；(d)除癫痫以外的临床上明显不稳定的医疗病况；(e)施用前4周内的临床相关症状或临床重大疾病，癫痫除外；(f)除癫痫、Dravet综合征以外的脑或脊髓疾病史，或细菌性脑膜炎或脑畸形史；(g)脊柱畸形或其他改变脑脊液(CSF)自由流动或植入CSF引流分流器的病况；(h)施用前有临床意义的实验室异常值；(i)天冬氨酸转氨酶或丙氨酸转氨酶>正常上限2.5倍，血清肌酐>正常上限或血小板计数<正常下限；(j)施用前测得的12导联心电图(ECG)中的临床相关异常；(k)精神或行为障碍；和(l)当前或过去4周内的抗凝剂用药，其中抗凝剂不是阿司匹林。在一些实施方案中，对象的额外特征在于不具有以下项中的七个或更多个：(a)SCN1A基因中的以下突变之一：Thr226Met、Leu263Val、Val422Leu、Thr1174Ser、Trp1204Arg、Pro1345Ser、Gln1489Lys、Phe1499Leu、Arg1575Cys、Val1611Phe、Leu1624Pro、Arg1648Cys、Leu1649Gln、Leu1670Trp、Gly1674Arg和Asp1866Tyr；(b)引起癫痫的另一基因中的已知致病性突变，其中该致病性突变在已知隐性遗传病的情况下是纯合的；(c)当前使用钠通道阻滞剂(作为维持治疗)和抗凝剂进行治疗，其中钠通道阻滞剂为苯妥英、卡马西平、奥卡西平、拉莫三嗪、拉科酰胺或卢非酰胺，并且其中抗凝剂不是阿司匹林；(d)除癫痫以外的临床上明显不稳定的医疗病况；(e)施用前4周内的临床相关症状或临床重大疾病，癫痫除外；(f)除癫痫、Dravet综合征以外的脑或脊髓疾病史，或细菌性脑膜炎或脑畸形史；(g)脊柱畸形或其他改变脑脊液(CSF)自由流动或植入CSF引流分流器的病况；(h)施用前有临床意义的实验室异常值；(i)天冬氨酸转氨酶或丙氨酸转氨酶>正常上限2.5倍，血清肌酐>正常上限或血小板计数<正常下限；(j)施用前测得的12导联心电图(ECG)中的临床相关异常；(k)精神或行为障碍；和(l)当前或过去4周内的抗凝剂用药，其中抗凝剂不是阿司匹林。在一些实施方案中，对象的额外特征在于不具有以下项中的八个或更多个：(a)SCN1A基因中的以下突变之一：Thr226Met、Leu263Val、Val422Leu、Thr1174Ser、Trp1204Arg、Pro1345Ser、Gln1489Lys、Phe1499Leu、Arg1575Cys、Val1611Phe、Leu1624Pro、Arg1648Cys、Leu1649Gln、Leu1670Trp、Gly1674Arg和Asp1866Tyr；(b)引起癫痫的另一基因中的已知致病性突变，其中该致病性突变在已知隐性遗传病的情况下是纯合的；(c)当前使用钠通道阻滞剂(作为维持治疗)和抗凝剂进行治疗，其中钠通道阻滞剂为苯妥英、卡马西平、奥卡西平、拉莫三嗪、拉科酰胺或卢非酰胺，并且其中抗凝剂不是阿司匹林；(d)除癫痫以外的临床上明显不稳定的医疗病况；(e)施用前4周内的临床相关症状或临床重大疾病，癫痫除外；(f)除癫痫、Dravet综合征以外的脑或脊髓疾病史，或细菌性脑膜炎或脑畸形史；(g)脊柱畸形或其他改变脑脊液(CSF)自由流动或植入CSF引流分流器的病况；(h)施用前有临床意义的实验室异常值；(i)天冬氨酸转氨酶或丙氨酸转氨酶>正常上限2.5倍，血清肌酐>正常上限或血小板计数<正常下限；(j)施用前测得的12导联心电图(ECG)中的临床相关异常；(k)精神或行为障碍；和(l)当前或过去4周内的抗凝剂用药，其中抗凝剂不是阿司匹林。在一些实施方案中，对象的额外特征在于不具有以下项中的九个或更多个：(a)SCN1A基因中的以下突变之一：Thr226Met、Leu263Val、Val422Leu、Thr1174Ser、Trp1204Arg、Pro1345Ser、Gln1489Lys、Phe1499Leu、Arg1575Cys、Val1611Phe、Leu1624Pro、Arg1648Cys、Leu1649Gln、Leu1670Trp、Gly1674Arg和Asp1866Tyr；(b)引起癫痫的另一基因中的已知致病性突变，其中该致病性突变在已知隐性遗传病的情况下是纯合的；(c)当前使用钠通道阻滞剂(作为维持治疗)和抗凝剂进行治疗，其中钠通道阻滞剂为苯妥英、卡马西平、奥卡西平、拉莫三嗪、拉科酰胺或卢非酰胺，并且其中抗凝剂不是阿司匹林；(d)除癫痫以外的临床上明显不稳定的医疗病况；(e)施用前4周内的临床相关症状或临床重大疾病，癫痫除外；(f)除癫痫、Dravet综合征以外的脑或脊髓疾病史，或细菌性脑膜炎或脑畸形史；(g)脊柱畸形或其他改变脑脊液(CSF)自由流动或植入CSF引流分流器的病况；(h)施用前有临床意义的实验室异常值；(i)天冬氨酸转氨酶或丙氨酸转氨酶>正常上限2.5倍，血清肌酐>正常上限或血小板计数<正常下限；(j)施用前测得的12导联心电图(ECG)中的临床相关异常；(k)精神或行为障碍；和(l)当前或过去4周内的抗凝剂用药，其中抗凝剂不是阿司匹林。在一些实施方案中，对象的额外特征在于不具有以下项中的十个或更多个：(a)SCN1A基因中的以下突变之一：Thr226Met、Leu263Val、Val422Leu、Thr1174Ser、Trp1204Arg、Pro1345Ser、Gln1489Lys、Phe1499Leu、Arg1575Cys、Val1611Phe、Leu1624Pro、Arg1648Cys、Leu1649Gln、Leu1670Trp、Gly1674Arg和Asp1866Tyr；(b)引起癫痫的另一基因中的已知致病性突变，其中该致病性突变在已知隐性遗传病的情况下是纯合的；(c)当前使用钠通道阻滞剂(作为维持治疗)和抗凝剂进行治疗，其中钠通道阻滞剂为苯妥英、卡马西平、奥卡西平、拉莫三嗪、拉科酰胺或卢非酰胺，并且其中抗凝剂不是阿司匹林；(d)除癫痫以外的临床上明显不稳定的医疗病况；(e)施用前4周内的临床相关症状或临床重大疾病，癫痫除外；(f)除癫痫、Dravet综合征以外的脑或脊髓疾病史，或细菌性脑膜炎或脑畸形史；(g)脊柱畸形或其他改变脑脊液(CSF)自由流动或植入CSF引流分流器的病况；(h)施用前有临床意义的实验室异常值；(i)天冬氨酸转氨酶或丙氨酸转氨酶>正常上限2.5倍，血清肌酐>正常上限或血小板计数<正常下限；(j)施用前测得的12导联心电图(ECG)中的临床相关异常；(k)精神或行为障碍；和(l)当前或过去4周内的抗凝剂用药，其中抗凝剂不是阿司匹林。在一些实施方案中，对象的额外特征在于不具有以下项中的十一个或更多个：(a)SCN1A基因中的以下突变之一：Thr226Met、Leu263Val、Val422Leu、Thr1174Ser、Trp1204Arg、Pro1345Ser、Gln1489Lys、Phe1499Leu、Arg1575Cys、Val1611Phe、Leu1624Pro、Arg1648Cys、Leu1649Gln、Leu1670Trp、Gly1674Arg和Asp1866Tyr；(b)引起癫痫的另一基因中的已知致病性突变，其中该致病性突变在已知隐性遗传病的情况下是纯合的；(c)当前使用钠通道阻滞剂(作为维持治疗)和抗凝剂进行治疗，其中钠通道阻滞剂为苯妥英、卡马西平、奥卡西平、拉莫三嗪、拉科酰胺或卢非酰胺，并且其中抗凝剂不是阿司匹林；(d)除癫痫以外的临床上明显不稳定的医疗病况；(e)施用前4周内的临床相关症状或临床重大疾病，癫痫除外；(f)除癫痫、Dravet综合征以外的脑或脊髓疾病史，或细菌性脑膜炎或脑畸形史；(g)脊柱畸形或其他改变脑脊液(CSF)自由流动或植入CSF引流分流器的病况；(h)施用前有临床意义的实验室异常值；(i)天冬氨酸转氨酶或丙氨酸转氨酶>正常上限2.5倍，血清肌酐>正常上限或血小板计数<正常下限；(j)施用前测得的12导联心电图(ECG)中的临床相关异常；(k)精神或行为障碍；和(l)当前或过去4周内的抗凝剂用药，其中抗凝剂不是阿司匹林。在一些实施方案中，对象的额外特征在于不具有以下项中的全部：(a)SCN1A基因中的以下突变之一：Thr226Met、Leu263Val、Val422Leu、Thr1174Ser、Trp1204Arg、Pro1345Ser、Gln1489Lys、Phe1499Leu、Arg1575Cys、Val1611Phe、Leu1624Pro、Arg1648Cys、Leu1649Gln、Leu1670Trp、Gly1674Arg和Asp1866Tyr；(b)引起癫痫的另一基因中的已知致病性突变，其中该致病性突变在已知隐性遗传病的情况下是纯合的；(c)当前使用钠通道阻滞剂(作为维持治疗)和抗凝剂进行治疗，其中钠通道阻滞剂为苯妥英、卡马西平、奥卡西平、拉莫三嗪、拉科酰胺或卢非酰胺，并且其中抗凝剂不是阿司匹林；(d)除癫痫以外的临床上明显不稳定的医疗病况；(e)施用前4周内的临床相关症状或临床重大疾病，癫痫除外；(f)除癫痫、Dravet综合征以外的脑或脊髓疾病史，或细菌性脑膜炎或脑畸形史；(g)脊柱畸形或其他改变脑脊液(CSF)自由流动或植入CSF引流分流器的病况；(h)施用前有临床意义的实验室异常值；(i)天冬氨酸转氨酶或丙氨酸转氨酶>正常上限2.5倍，血清肌酐>正常上限或血小板计数<正常下限；(j)施用前测得的12导联心电图(ECG)中的临床相关异常；(k)精神或行为障碍；和(l)当前或过去4周内的抗凝剂用药，其中抗凝剂不是阿司匹林。
在一些实施方案中，对象的额外特征在于没有已知的导致癫痫的另一个基因中的致病性突变。在一些实施方案中，对象的额外特征在于在过去4周内不患有除癫痫以外的临床相关症状或临床重大疾病。在一些实施方案中，对象的额外特征在于不具有经证明导致功能获得的SCN1A基因的特异性突变。在一些实施方案中，对象的额外特征在于当前未使用主要作为钠通道阻滞剂的抗癫痫药进行治疗。在一些实施方案中，对象的额外特征在于不患有除癫痫以外的有临床意义的不稳定医疗病况。
在一些实施方案中，对象在婴儿期患有小儿癫痫、癫痫性脑病、难治性肌阵挛性癫痫或重度肌阵挛性癫痫。在一些实施方案中，对象患有肌阵挛性癫痫、全身性癫痫、癫痫、脑部疾病、中枢神经系统疾病、神经系统疾病或癫痫综合征。在一些实施方案中，如本文所述的治疗方法包括治疗疾病或病况或降低发生疾病或病况的可能性的方法，其中所述疾病或病况是婴儿期的小儿癫痫、癫痫性脑病、难治性肌阵挛性癫痫或重度肌阵挛性癫痫。在一些实施方案中，如本文所述的治疗方法包括治疗疾病或病况或降低发生疾病或病况的可能性的方法，其中所述疾病或病况是肌阵挛性癫痫、全身性癫痫、癫痫、脑部疾病、中枢神经系统疾病、神经系统疾病或癫痫综合征。在一些实施方案中，对象的癫痫发作不受当前抗癫痫药(AED)方案的控制。在一些实施方案中，AED方案包括氯巴占、大麻二酚、左乙拉西坦(levetiracetam)、司替戊醇或丙戊酸/丙戊酸盐。
如本文所用，术语“磁共振成像病变”是指由磁共振成像引起的生物体组织中的任何损伤或异常变化。如本文所用，术语“磁共振成像”是指当置于强磁场中时测量身体组织的原子核对高频无线电波的响应，并产生内部器官的图像的医学成像形式。
如本文所用，术语“生酮饮食”是指在医学上用于例如治疗儿童难治性癫痫的高脂肪、充足蛋白质、低碳水化合物饮食。饮食迫使身体燃烧脂肪而不是碳水化合物。
如本文所用，术语“迷走神经刺激器”或“迷走神经刺激(VNS)”是指涉及向迷走神经传递电脉冲的医学治疗。例如，它被用作某些类型难治性癫痫和难治性抑郁症的额外的治疗。
如本文所用，术语“大麻素”是指在大麻(cannabis)中发现的一种化学物质。示例性大麻素包括但不限于植物大麻素四氢大麻酚(THC)(δ9THC或δ8THC)和大麻二酚(CBD)。如本文所用，大麻素可以是天然或合成化学品。
如本文所用，术语“大麻(marijuan，cannabis)”是指主要用于医疗或娱乐目的的大麻植物中的精神活性药物。大麻的一种示例性主要精神活性组分是四氢大麻酚(THC)。
如本文所用，术语“钠通道阻滞剂”是指损害钠离子(Na+)通过钠通道传导的药物。钠通道阻滞剂的示例包括但不限于生物碱(例如，蛤蚌毒素、新蛤蚌毒素、河豚毒素)、局部麻醉剂(例如，利多卡因)、抗惊厥剂(例如，苯妥英、奥卡西平(卡马西平衍生物))和Ia类(例如，奎尼丁、普鲁卡因胺和丙吡胺)、Ib类(例如，利多卡因、美西律、妥卡尼和苯妥英)和Ic类(例如，恩卡尼、氟卡尼、莫雷西嗪和普罗帕酮)抗心律失常药物。
如本文所用，术语“脑脊液(CSF)”是指在脑和脊髓中发现的透明无色体液。例如，脑脊液(CSF)充当减震垫或缓冲垫，为颅骨内的脑提供基本的机械和免疫保护，并在脑血流的脑自动调节中发挥重要作用。如本文所用，术语“人工脑脊液(aCSF)”是指通常用作向中枢神经系统(CNS)施用药剂的媒介物溶液的生物缓冲液。例如，aCSF与内源性CSF的电解质浓度和生理相容性密切匹配，以通过维持体内平衡、渗透压和生理水平的pH，为神经元组织创造重要的环境。
如本文所用，术语“CSF引流分流术”是指将多余液体从脑排放到身体另一部分的系统，其中液体作为循环过程的一部分被吸收。例如，CSF分流术用于治疗脑积水。
如本文所用，术语“心电图(EKG或ECG)”是指测量心跳电活动，例如，生成心脏电活动的电压-时间曲线图的测试。随着每一次心跳，电脉冲(或“波”)穿过心脏。
如本文所用，“天冬氨酸转氨酶(AST)”也称为天冬氨酸氨基转移酶、AspAT/ASAT/AAT或(血清)谷氨酸草酰乙酸转氨酶(GOT、SGOT)，是指磷酸吡哆醛(PLP)依赖性转氨酶(EC2.6.1.1)。AST包括保持AST活性(例如，与AST相比，在至少50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％活性范围内)的AST蛋白或其变体或同系物的重组或天然存在形式中的任一种。示例性AST活性包括但不限于例如通过催化天冬氨酸和谷氨酸之间的α-氨基的可逆转移等在氨基酸代谢中发挥作用。在一些方面，与天然存在的AST蛋白相比，变体或同系物在整个序列或序列的一部分(例如，50、100、150或200个连续氨基酸部分)上具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。在一些实施方案中，AST蛋白与由UniProt参考号P17174确定的蛋白质或与其具有实质同一性的变体或同系物基本相同。在一些实施方案中，AST蛋白与由UniProt参考号P00505确定的蛋白质或与其具有实质同一性的变体或同系物基本相同。
如本文所用，“丙氨酸转氨酶(ALT)”也称为丙氨酸氨基转移酶(ALAT)、血清谷氨酸丙酮酸转氨酶(SGPT)或血清谷氨酸丙酮酸转氨酶(SGPT)，是指转氨酶(EC 2.6.1.2)。ALT包括保持ALT活性(例如，与ALT相比，在至少50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％活性范围内)的ALT蛋白或其变体或同系物的重组或天然存在形式中的任一种。示例性ALT活性包括但不限于，催化丙氨酸循环的两个部分。在一些方面，与天然存在的ALT蛋白相比，变体或同系物在整个序列或序列的一部分(例如，50、100、150或200个连续氨基酸部分)上具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。在一些实施方案中，ALT蛋白与由UniProt参考号P24298确定的蛋白质或与其具有实质同一性的变体或同系物基本相同。
在一些实施方案中，临床上测量血清AST水平、血清ALT水平及其比率(AST/ALT比率)作为肝脏健康的生物标记物。
如本文所用，术语“实验室值”是指通过实验室测试或测量获得的值。示例性、非限制性实验室测试或测量可能与血液学、凝血、临床化学、血浆、尿液分析、血清、血清或尿液妊娠、尿液或脑脊液有关。
治疗方案
在一些实施方案中，第一剂量是单个剂量。在一些实施方案中，第一剂量是多个剂量中的第一个。在一些实施方案中，该方法还包括评估药物组合物的耐受性或有效性。
在一些实施方案中，本文所述的方法还包括向人类对象施用包含0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195或200mg的后续剂量的如本文所述的ASO的药物组合物。
在一些实施方案中，本文所述的方法还包括向人类对象施用包含约0.1至约1000mg、约0.2至约1000mg、约0.3至约1000mg、约0.4至约1000mg、约0.5至约1000mg、约0.6至约1000mg、约0.7至约1000mg、约0.8至约1000mg、约0.9至约1000mg、1至约1000mg、约2至约1000mg、约3至约1000mg、约4至约1000mg、约5至约1000mg、约6至约1000mg、约7至约1000mg、约8至约1000mg、约9至约1000mg、约10至约1000mg、约15至约1000mg、约20至约1000mg、约25至约1000mg、约30至约1000mg、约35至约1000mg、约40至约1000mg、约45至约1000mg、约50至约1000mg、约55至约1000mg、约60至约1000mg、约65至约1000mg、约70至约1000mg、约75至约1000mg、约80至约1000mg、约85至约1000mg、约90至约1000mg、约95至约1000mg、约100至约1000mg、约150至约1000mg、约200至约1000mg、约250至约1000mg、约300至约1000mg、约350至约1000mg、约400至约1000mg、约450至约1000mg、约500至约1000mg、约550至约1000mg、约600至约1000mg、约650至约1000mg、约700至约1000mg、约750至约1000mg、约800至约1000mg、约850至约1000mg、约900至约1000mg或约950至约1000mg的后续剂量的如本文所述的ASO的药物组合物。
在一些实施方案中，本文所述的方法还包括向人类对象施用包含0.1至1000mg、0.2至1000mg、0.3至1000mg、0.4至1000mg、0.5至1000mg、0.6至1000mg、0.7至1000mg、0.8至1000mg、0.9至1000mg、1至1000mg、2至1000mg、3至1000mg、4至1000mg、5至1000mg、6至1000mg、7至1000mg、8至1000mg、9至1000mg、10至1000mg、15至1000mg、20至1000mg、25至1000mg、30至1000mg、35至1000mg、40至1000mg、45至1000mg、50至1000mg、55至1000mg、60至1000mg、65至1000mg、70至1000mg、75至1000mg、80至1000mg、85至1000mg、90至1000mg、95至1000mg、100至1000mg、150至1000mg、200至1000mg、250至1000mg、300至1000mg、350至1000mg、400至1000mg、450至1000mg、500至1000mg、550至1000mg、600至1000mg、650至1000mg、700至1000mg、750至1000mg、800至1000mg、850至1000mg、900至1000mg或950至1000mg的后续剂量的如本文所述的ASO的药物组合物。
在一些实施方案中，本文所述的方法还包括向人类对象施用包含约0.1至约950mg、约0.1至约900mg、约0.1至约850mg、约0.1至约800mg、约0.1至约750mg、约0.1至约700mg、约0.1至约650mg、约0.1至约600mg、约0.1至约550mg、约0.1至约500mg、约0.1至约450mg、约0.1至约400mg、约0.1至约350mg、约0.1至约300mg、约0.1至约250mg、约0.1至约200mg、约0.1至约150mg、约0.1至约100mg、约0.1至约95mg、约0.1至约90mg、约0.1至约85mg、约0.1至约80mg、约0.1至约75mg、约0.1至约70mg、约0.1至约65mg、约0.1至约60mg、约0.1至约55mg、约0.1至约50mg、约0.1至约45mg、约0.1至约40mg、约0.1至约35mg、约0.1至约30mg、约0.1至约mg、约0.1至约25mg、约0.1至约20mg、约0.1至约10mg、约0.1至约9mg、约0.1至约8mg、约0.1至约7mg、约0.1至约6mg、约0.1至约5mg、约0.1至约4mg、约0.1至约3、约0.1至约2mg、约0.1至约1mg、约0.1至约0.9mg、约0.1至约0.8mg、约0.1至约0.7mg、约0.1至约0.6mg、约0.1至约0.5mg、约0.1至约0.4mg、约0.1至约0.3或约0.1至约0.2mg的后续剂量的如本文所述的ASO的药物组合物。
在一些实施方案中，本文所述的方法还包括向人类对象施用包含0.1至950mg、0.1至900mg、0.1至850mg、0.1至800mg、0.1至750mg、0.1至700mg、0.1至650mg、0.1至600mg、0.1至550mg、0.1至500mg、0.1至450mg、0.1至400mg、0.1至350mg、0.1至300mg、0.1至250mg、0.1至200mg、0.1至150mg、0.1至100mg、0.1至95mg、0.1至90mg、0.1至85mg、0.1至80mg、0.1至75mg、0.1至70mg、0.1至65mg、0.1至60mg、0.1至55mg、0.1至50mg、0.1至45mg、0.1至40mg、0.1至35mg、0.1至30mg、0.1至mg、0.1至25mg、0.1至20mg、0.1至10mg、0.1至9mg、0.1至8mg、0.1至7mg、0.1至6mg、0.1至5mg、0.1至4mg、0.1至3、0.1至2mg、0.1至1mg、0.1至0.9mg、0.1至0.8mg、0.1至0.7mg、0.1至0.6mg、0.1至0.5mg、0.1至0.4mg、0.1至0.3或0.1至0.2mg的后续剂量的如本文所述的ASO的药物组合物。
在一些实施方案中，本文所述的方法还包括向人类对象施用包含约1至约400mg、约2至约400mg、约3至约400mg、约4至约400mg、约5至约400mg、约6至约400mg、约7至约400mg、约8至约400mg、约9至约400mg、约10至约400mg、约20至约400mg、约30至约400mg、约40至约400mg、约50至约400mg、约60至约400mg、约70至约400mg、约80至约400mg、约90至约400mg、约100至约400mg、约110至约400mg、约120至约400mg、约130至约400mg、约140至约400mg、约150至约400mg、约160至约400mg、约170至约400mg、约180至约400mg、约190至约400mg、约200至约400mg、约210至约400mg、约220至约400mg、约230至约400mg、约240至约400mg、约250至约400mg、约260至约400mg、约270至约400mg、约280至约400mg、约290至约400mg、约300至约400mg、约310至约400mg、约320至约400mg、约330至约400mg、约340至约400mg、约350至约400mg、约360至约400mg、约370至约400mg、约380至约400mg或约390至约400mg的后续剂量的如本文所述的ASO的药物组合物。
在一些实施方案中，本文所述的方法还包括向人类对象施用包含1至400mg、2至400mg、3至400mg、4至400mg、5至400mg、6至400mg、7至400mg、8至400mg、9至400mg、10至400mg、20至400mg、30至400mg、40至400mg、50至400mg、60至400mg、70至400mg、80至400mg、90至400mg、100至400mg、110至400mg、120至400mg、130至400mg、约140至400mg、150至400mg、约160至400mg、170至400mg、180至400mg、190至400mg、200至400mg、210至400mg、220至400mg、230至400mg、240至400mg、250至400mg、260至400mg、270至400mg、280至400mg、290至400mg、300至400mg、310至400mg、320至400mg、330至400mg、340至400mg、350至400mg、360至400mg、370至400mg、380至400mg或390至400mg的后续剂量的如本文所述的ASO的药物组合物。
在一些实施方案中，本文所述的方法还包括向人类对象施用包含约10至约390mg、约10至约380mg、约10至约370mg、约10至约360mg、约10至约350mg、约10至约340mg、约10至约330mg、约10至约320mg、约10至约310mg、约10至约300mg、约10至约290mg、约10至约280mg、约10至约270mg、约10至约260mg、约10至约250mg、约10至约240mg、约10至约230mg、约10至约220mg、约10至约210mg、约10至约200mg、约10至约190mg、约10至约180mg、约10至约170mg、约10至约160mg、约10至约150mg、约10至约140mg、约10至约130mg、约10至约120mg、约10至约110mg、约10至约90mg、约10至约80mg、约10至约70mg、约10至约60mg、约10至约50mg、约10至约40mg、约10至约30mg或约10至约20mg的后续剂量的如本文所述的ASO的药物组合物。
在一些实施方案中，本文所述的方法还包括向人类对象施用包含10至390mg、10至380mg、10至370mg、10至360mg、10至350mg、10至340mg、10至330mg、10至320mg、10至310mg、10至300mg、10至290mg、10至280mg、10至270mg、10至260mg、10至250mg、10至240mg、10至230mg、10至220mg、10至210mg、10至200mg、10至190mg、10至180mg、10至170mg、10至160mg、10至150mg、10至140mg、10至130mg、10至120mg、10至110mg、10至90mg、10至80mg、10至70mg、10至60mg、10至50mg、10至40mg、10至30mg或10至20mg的后续剂量的如本文所述的ASO的药物组合物。
在一些实施方案mg中，本文所述的方法还包括向人类对象施用包含约1mg、约2mg、约3mg、约4mg、约5mg、约6mg、约7mg、约8mg、约9mg、约10mg、约11mg、约12mg、约13mg、约14mg、约15mg、约16mg、约17mg、约18mg、约19mg、约20mg、约21mg、约22mg、约23mg、约24mg、约25mg、约26mg、约27mg、约28mg、约29mg、约30mg、约31mg、约32mg、约33mg、约34mg、约35mg、约36mg、约37mg、约38mg、约39mg、约40mg、约41mg、约42mg、约43mg、约44mg、约45mg、约46mg、约47mg、约48mg、约49mg、约50mg、约51mg、约52mg、约53mg、约54mg、约55mg、约56mg、约57mg、约58mg、约59mg、约60mg、约61mg、约62mg、约63mg、约64mg、约65mg、约66mg、约67mg、约68mg、约69mg、约70mg、约71mg、约72mg、约73mg、约74mg、约75mg、约76mg、约77mg、约78mg、约79mg、约80mg、约81mg、约82mg、约83mg、约84mg、约85mg、约86mg、约87mg、约88mg、约89mg、约90mg、约91mg、约92mg、约93mg、约94mg、约95mg、约96mg、约97mg、约98mg、约99mg、约100mg、约101mg、约102mg、约103mg、约104mg、约105mg、约106mg、约107mg、约108mg、约109mg、约110mg、约111mg、约112mg、约113mg、约114mg、约115mg、约116mg、约117mg、约118mg、约119mg、约120mg、约121mg、约122mg、约123mg、约124mg、约125mg、约126mg、约127mg、约128mg、约129mg、约130mg、约131mg、约132mg、约133mg、约134mg、约135mg、约136mg、约137mg、约138mg、约139mg、约140mg、约141mg、约142mg、约143mg、约144mg、约145mg、约146mg、约147mg、约148mg、约149mg、约150mg、约151mg、约152mg、约153mg、约154mg、约155mg、约156mg、约157mg、约158mg、约159mg、约160mg、约161mg、约162mg、约163mg、约164mg、约165mg、约166mg、约167mg、约168mg、约169mg、约170mg、约171mg、约172mg、约173mg、约174mg、约175mg、约176mg、约177mg、约178mg、约179mg、约180mg、约181mg、约182mg、约183mg、约184mg、约185mg、约186mg、约187mg、约188mg、约189mg、约190mg、约191mg、约192mg、约193mg、约194mg、约195mg、约196mg、约197mg、约198mg、约199mg、约200mg、约201mg、约202mg、约203mg、约204mg、约205mg、约206mg、约207mg、约208mg、约209mg、约210mg、约211mg、约212mg、约213mg、约214mg、约215mg、约216mg、约217mg、约218mg、约219mg、约220mg、约221mg、约222mg、约223mg、约224mg、约225mg、约226mg、约227mg、约228mg、约229mg、约230mg、约231mg、约232mg、约233mg、约234mg、约235mg、约236mg、约237mg、约238mg、约239mg、约240mg、约241mg、约242mg、约243mg、约244mg、约245mg、约246mg、约247mg、约248mg、约249mg、约250mg、约251mg、约252mg、约253mg、约254mg、约255mg、约256mg、约257mg、约258mg、约259mg、约260mg、约261mg、约262mg、约263mg、约264mg、约265mg、约266mg、约267mg、约268mg、约269mg、约270mg、约271mg、约272mg、约273mg、约274mg、约275mg、约276mg、约277mg、约278mg、约279mg、约280mg、约281mg、约282mg、约283mg、约284mg、约285mg、约286mg、约287mg、约288mg、约289mg、约290mg、约291mg、约292mg、约293mg、约294mg、约295mg、约296mg、约297mg、约298mg、约299mg、约300mg、约301mg、约302mg、约303mg、约304mg、约305mg、约306mg、约307mg、约308mg、约309mg、约310mg、约311mg、约312mg、约313mg、约314mg、约315mg、约316mg、约317mg、约318mg、约319mg、约320mg、约321mg、约322mg、约323mg、约324mg、约325mg、约326mg、约327mg、约328mg、约329mg、约330mg、约331mg、约332mg、约333mg、约334mg、约335mg、约336mg、约337mg、约338mg、约339mg、约340mg、约341mg、约342mg、约343mg、约344mg、约345mg、约346mg、约347mg、约348mg、约349mg、约350mg、约351mg、约352mg、约353mg、约354mg、约355mg、约356mg、约357mg、约358mg、约359mg、约360mg、约361mg、约362mg、约363mg、约364mg、约365mg、约366mg、约367mg、约368mg、约369mg、约370mg、约371mg、约372mg、约373mg、约374mg、约375mg、约376mg、约377mg、约378mg、约379mg、约380mg、约381mg、约382mg、约383mg、约384mg、约385mg、约386mg、约387mg、约388mg、约389mg、约390mg、约391mg、约392mg、约393mg、约394mg、约395mg、约396mg、约397mg、约398mg、约399mg或400mg的后续剂量的如本文所述的ASO的药物组合物。
在一些实施方案mg中，本文所述的方法还包括向人类对象施用包含1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、6mg、7mg、8mg、9mg、10mg、11mg、12mg、13mg、14mg、15mg、16mg、17mg、18mg、19mg、20mg、21mg、22mg、23mg、24mg、25mg、26mg、27mg、28mg、29mg、30mg、31mg、32mg、33mg、34mg、35mg、36mg、37mg、38mg、39mg、40mg、41mg、42mg、43mg、44mg、45mg、46mg、47mg、48mg、49mg、50mg、51mg、52mg、53mg、54mg、55mg、56mg、57mg、58mg、59mg、60mg、61mg、62mg、63mg、64mg、65mg、66mg、67mg、68mg、69mg、70mg、71mg、72mg、73mg、74mg、75mg、76mg、77mg、78mg、79mg、80mg、81mg、82mg、83mg、84mg、85mg、86mg、87mg、88mg、89mg、90mg、91mg、92mg、93mg、94mg、95mg、96mg、97mg、98mg、99mg、100mg、101mg、102mg、103mg、104mg、105mg、106mg、107mg、108mg、109mg、110mg、111mg、112mg、113mg、114mg、115mg、116mg、117mg、118mg、119mg、120mg、121mg、122mg、123mg、124mg、125mg、126mg、127mg、128mg、129mg、130mg、131mg、132mg、133mg、134mg、135mg、136mg、137mg、138mg、139mg、140mg、141mg、142mg、143mg、144mg、145mg、146mg、147mg、148mg、149mg、150mg、151mg、152mg、153mg、154mg、155mg、156mg、157mg、158mg、159mg、160mg、161mg、162mg、163mg、164mg、165mg、166mg、167mg、168mg、169mg、170mg、171mg、172mg、173mg、174mg、175mg、176mg、177mg、178mg、179mg、180mg、181mg、182mg、183mg、184mg、185mg、186mg、187mg、188mg、189mg、190mg、191mg、192mg、193mg、194mg、195mg、196mg、197mg、198mg、199mg、200mg、201mg、202mg、203mg、204mg、205mg、206mg、207mg、208mg、209mg、210mg、211mg、212mg、213mg、214mg、215mg、216mg、217mg、218mg、219mg、220mg、221mg、222mg、223mg、224mg、225mg、226mg、227mg、228mg、229mg、230mg、231mg、232mg、233mg、234mg、235mg、236mg、237mg、238mg、239mg、240mg、241mg、242mg、243mg、244mg、245mg、246mg、247mg、248mg、249mg、250mg、251mg、252mg、253mg、254mg、255mg、256mg、257mg、258mg、259mg、260mg、261mg、262mg、263mg、264mg、265mg、266mg、267mg、268mg、269mg、270mg、271mg、272mg、273mg、274mg、275mg、276mg、277mg、278mg、279mg、280mg、281mg、282mg、283mg、284mg、285mg、286mg、287mg、288mg、289mg、290mg、291mg、292mg、293mg、294mg、295mg、296mg、297mg、298mg、299mg、300mg、301mg、302mg、303mg、304mg、305mg、306mg、307mg、308mg、309mg、310mg、311mg、312mg、313mg、314mg、315mg、316mg、317mg、318mg、319mg、320mg、321mg、322mg、323mg、324mg、325mg、326mg、327mg、328mg、329mg、330mg、331mg、332mg、333mg、334mg、335mg、336mg、337mg、338mg、339mg、340mg、341mg、342mg、343mg、344mg、345mg、346mg、347mg、348mg、349mg、350mg、351mg、352mg、353mg、354mg、355mg、356mg、357mg、358mg、359mg、360mg、361mg、362mg、363mg、364mg、365mg、366mg、367mg、368mg、369mg、370mg、371mg、372mg、373mg、374mg、375mg、376mg、377mg、378mg、379mg、380mg、381mg、382mg、383mg、384mg、385mg、386mg、387mg、388mg、389mg、390mg、391mg、392mg、393mg、394mg、395mg、396mg、397mg、398mg、399mg或400mg的后续剂量的如本文所述的ASO的药物组合物。
在一些实施方案中，如本文所述的方法还包括评估药物组合物的耐受性或有效性。在一些实施方案中，在指示不耐受先前剂量的施用之后，后续剂量低于先前剂量。在一些实施方案中，在指示先前剂量的施用有效之后，后续剂量与先前剂量相同。在一些实施方案中，在指示先前剂量的施用有效之后，后续剂量低于先前剂量。在一些实施方案中，在指示先前剂量的施用无效之后，后续剂量高于先前剂量。
在一些实施方案中，在施用先前剂量后施用后续剂量至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月。
在一些实施方案中，在先前剂量施用后施用后续剂量至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30小时。在一些实施方案中，在先前剂量施用后施用后续剂量至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30天。在一些实施方案中，在先前剂量施用后施用后续剂量至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35或36周。在一些实施方案中，在先前剂量施用后施用后续剂量至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35或36个月。在一些实施方案中，在先前剂量施用后施用后续剂量至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10年。
在一些实施方案中，以相同的时间间隔施用后续剂量。例如，在先前剂量施用后以1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30小时的时间间隔施用每一后续剂量。在一些实施方案中，在先前剂量施用后以1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30天的时间间隔施用每一后续剂量。在一些实施方案中，在先前剂量施用后以1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35或36周的时间间隔施用每一后续剂量。在一些实施方案中，在先前剂量施用后以1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35或36个月的时间间隔施用每一后续剂量。
在一些实施方案中，以不同的时间间隔施用后续剂量。
在一些实施方案中，在指示先前剂量有效之后，保持或降低剂量频率。在一些实施方案中，在指示先前剂量无效之后，增加剂量频率。
在一些实施方案中，该方法还包括施用至少一种额外的治疗剂或疗法。
在一些实施方案中，与剂量同时施用至少一种额外的治疗剂或疗法。在一些实施方案中，在施用剂量之前施用至少一种额外的治疗剂或疗法。
在一些实施方案中，在施用剂量之后施用至少一种额外的治疗剂或疗法。Dravet 综合征及其他相关疾病
在本文中术语“病况”、“疾病”和“病症”可在其最广泛的意义上可互换使用，并包括易感性。在一些实施方案中，该疾病或病况为Dravet综合征。在一些实施方案中，该方法减少或改善人类对象中Dravet综合征的至少一种症状。在一些实施方案中，Dravet综合征的症状是癫痫发作。在一些实施方案中，施用降低或改善发作频率、发作强度或发作持续时间。
Dravet综合征(DS)，也称为婴儿期重度肌阵挛性癫痫(SMEI)，是在出生后一年内出现的癫痫性脑病。Dravet综合征是一种越来越为人们所认识的癫痫性脑病，其中通过大约70-80％的患者中发现的钠通道基因突变支持临床诊断。DS是一种严重的、进行性、发育性和癫痫性脑病，其特点是高癫痫发作频率和严重程度、智力残疾和癫痫中意外猝死风险高。离子通道基因突变在一系列癫痫综合征的发病机制中起着重要作用，导致一些癫痫发作被视为通道病。电压门控钠通道(VGSC)在神经元兴奋性中起重要作用；因此，在编码VGSC亚单位的基因中鉴定了许多与DS相关的突变，这并不奇怪。该疾病由例如Mulley等人(2005)以及OMIM#607208(Online Mendelian Inheritance in Man,Johns HopkinsUniversity,1966-2015)的疾病概述描述，两者通过引用并入本文。
70％至80％的患者携带钠通道al亚单位基因(SCN1A)异常，截断突变占约40％，与更早的癫痫发作年龄有显著相关性。约70％的病例中发现测序突变，包括截断突变(40％)和错义突变(40％)，其余为剪接位点改变。大多数突变是从头发生的，但在5-10％的病例中存在家族性突变且其通常是错义突变。其余的SCN1A突变包括剪接位点突变和错义突变，其中大多数属于钠通道的成孔区。当前，超过500个突变与DS相关，并沿着基因随机分布(Mulley等人，Neurol.2006,67,1094-1095)。
SCN1A基因位于人类染色体2q24上的钠通道基因簇中，编码称为神经元电压门控钠通道NaV1.1的α-成孔亚单位。SCN1A基因跨越约100kb的基因组DNA，并且包含26个外显子。NaV1.1蛋白由四个结构域组成，每个具有六个跨膜区段。已鉴定出两种剪接变异体，它们导致在外显子11的结构域1和2之间的细胞质环中由于存在或不存在11种氨基酸的差异而形成长和短同种型(Miller等人，1993-2015，和Mulley等人，2005,25,535-542，其全部内容通过引用并入本文)。在一些方面，与天然存在的SCN1A基因相比，变体或同系物在整个序列或序列的一部分(例如，50、100、150或200个连续核苷酸部分)上具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的核苷酸序列同一性。在一些实施方案中，SCN1A基因与由Ensembl参考号ENSG00000144285确定的基因或与其具有实质同一性的变体或同系物基本相同。
SCN1A基因中的可变剪接事件可导致非生产性mRNA转录物，其进而可导致异常蛋白质表达，而可以靶向SCN1A基因中的可变剪接事件的治疗剂可调节DS患者中功能性蛋白质的表达水平并且/或者抑制异常蛋白质表达。此类治疗剂可用于治疗由NaV1.1蛋白缺乏引起的病况。
可导致非生产性mRNA转录物的可变剪接事件之一是在mRNA转录物中包含可诱导无义介导的mRNA衰变的额外的外显子。本发明提供了用于调节SCN1A的可变剪接以提高编码成熟mRNA的蛋白质的产生，从而增加翻译的功能性NaV1.1蛋白的组合物和方法。这些组合物和方法包括可导致外显子跳跃和促进SCN1A前mRNA组成性剪接的反义寡聚体(ASO)。在各种实施方案中，可使用本发明的方法增加功能性NaV1.1蛋白以治疗由NaV1.1蛋白缺乏引起的病况。
在一些情况下，疾病或病况是SMEB。
在一些情况下，疾病或病况是GEFS+。
在一些情况下，疾病或病况是热性惊厥(例如，家族性热性惊厥，3A型)。
在一些情况下，疾病或病况是自闭症(也称为自闭症谱系障碍或ASD)。
在一些情况下，疾病或病况是偏头痛(例如，家族性偏瘫性偏头痛，3型)。
在一些情况下，疾病或病况是阿尔茨海默病。
在一些实施方案中，疾病或病况是SMEB。在一些实施方案中，疾病或病况是GEFS+。在一些实施方案中，疾病或病况是热性惊厥(例如，家族性热性惊厥，3A型)。在一些实施方案中，疾病或病况是孤独症(也称为自闭症谱系障碍或ASD)。在一些实施方案中，疾病或病况是偏头痛(例如，家族性偏瘫性偏头痛，3型)。在一些实施方案中，疾病或病况是阿尔茨海默病。在一些实施方案中，疾病或病况是SCN2A脑病。在一些实施方案中，疾病或病况是SCN8A脑病。在一些实施方案中，疾病或病况是SCN5A心律失常。
在一些实施方案中，疾病或病况是由NaV1.1(由SCN1A基因编码的蛋白质)中的突变诱导的。如本文所用，“NaV1.1”也称为钠通道，电压门控，I型，α亚单位(SCN1A)是指人类中由SCN1A基因编码的蛋白质。NaV1.1包括保持NaV1.1活性(例如，与NaV1.1相比，在至少50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％活性范围内)的NaV1.1蛋白或其变体或同系物的重组或天然存在形式中的任一种。在一些方面，与天然存在的NaV1.1蛋白相比，变体或同系物在整个序列或序列的一部分(例如，50、100、150或200个连续氨基酸部分)上具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。在一些实施方案中，NaV1.1蛋白与由UniProt参考号P35498确定的蛋白质或与其具有实质同一性的变体或同系物基本相同。
在一些情况下，突变是NaV1.1的功能丧失性突变。在一些情况下，NaV1.1的功能丧失性突变包含一种或多种突变，其相对于野生型NaV1.1的功能减少或损害NaV1.1功能(例如，10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或更多)。在一些情况下，NaV1.1的功能丧失性突变包含一种或多种导致疾病表型的突变。示例性功能丧失性突变包括但不限于R859C、T875M、V1353L、I1656M、R1657C、A1685V、M1841T和R1916G。
在其他情况下，该突变是NaV1.1中的功能获得性突变。在这种情况下，功能获得性突变包括一种或多种突变，其相对于野生型NaV1.1的功能延长NaV1.1激活(例如，10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或更多)。在这种情况下，NaV1.1的功能获得性突变包含一种或多种导致疾病表型的突变。示例性功能获得性突变包括但不限于D188V、W1204R、R1648H和D1866Y。
在一些实施方案中，疾病或病况是脑病。在一些情况下，脑病是由NaV1.1的功能丧失性突变引起的。
在一些实施方案中，脑病是癫痫性脑病。示例性癫痫性脑病包括但不限于Dravet综合征(DS)(也称为婴儿期重度肌阵挛性癫痫或SMEI)；婴儿重度肌阵挛性癫痫(SMEI)-交界性癫痫(SMEB)；发热性惊厥(FS)；全身性癫痫伴热性惊厥+(GEFS+)；癫痫性脑病，早期婴儿，13型；隐源性全身性癫痫；隐源性局灶性癫痫；肌阵挛性无定向癫痫；Lennox-Gastaut综合征；West综合征；特发性痉挛；早发性肌阵挛性脑病；进行性肌阵挛性癫痫；儿童交替性偏瘫；未分类癫痫性脑病；癫痫中意外猝死(SUDEP)；早期婴儿SCN1A脑病；早期婴儿癫痫性脑病(EIEE)；孤独症；婴儿恶性迁徙性部分性发作；或病态窦房结综合征1型。在一些实施方案中，疾病或病况为癫痫性脑病，任选地选自Dravet综合征(DS)(也称为婴儿期重度肌阵挛性癫痫或SMEI)；婴儿重度肌阵挛性癫痫(SMEI)-交界性癫痫(SMEB)；发热性惊厥(FS)；全身性癫痫伴热性惊厥+(GEFS+)；癫痫性脑病，早期婴儿，13型；隐源性全身性癫痫；隐源性局灶性癫痫；肌阵挛性无定向癫痫；Lennox-Gastaut综合征；West综合征；特发性痉挛；早发性肌阵挛性脑病；进行性肌阵挛性癫痫；儿童交替性偏瘫；未分类癫痫性脑病；癫痫中意外猝死(SUDEP)；和病态窦房结综合征。
在一些情况下，GEFS+是全身性癫痫伴热性惊厥+，2型。
在一些情况下，热性惊厥为家族性热性惊厥，3A型。
在一些情况下，SMEB是无全身性棘波的SMEB(SMEB-SW)、无肌阵挛性发作的SMEB(SMEB-M)、缺乏超过一种SMEI特征的SMEB(SMEB-O)或顽固性小儿癫痫伴全身性强直阵挛性发作(ICEGTC)。
在一些实施方案中，GEFS+是全身性癫痫伴热性惊厥+，2型。在一些实施方案中，热性惊厥为家族性热性惊厥，3A型。在一些实施方案中，SMEB是无全身性棘波的SMEB(SMEB-SW)、无肌阵挛性发作的SMEB(SMEB-M)、缺乏超过一种SMEI特征的SMEB(SMEB-O)或顽固性小儿癫痫伴全身性强直阵挛性发作(ICEGTC)。
在一些实施方案中，由NaV1.1中的功能丧失性突变引起的疾病或病况包括但不限于Dravet综合征(DS)(也称为SMEI)；婴儿重度肌阵挛性癫痫(SMEI)-交界性癫痫(SMEB)；发热性惊厥(FS)；全身性癫痫伴热性惊厥+(GEFS+)；癫痫性脑病，早期婴儿，13型；隐源性全身性癫痫；隐源性局灶性癫痫；肌阵挛性无定向癫痫；Lennox-Gastaut综合征；West综合征；特发性痉挛；早发性肌阵挛性脑病；进行性肌阵挛性癫痫；儿童交替性偏瘫；未分类癫痫性脑病；癫痫中意外猝死(SUDEP)；病态窦房结综合征1型；早期婴儿SCN1A脑病；早期婴儿癫痫性脑病(EIEE)；孤独症；或婴儿恶性迁徙性部分性发作。
在相关实施方案中，该方法是使用ASO降低蛋白质或功能性RNA表达的方法。在一些实施方案中，ASO用于降低具有编码NaV1.1蛋白的含NMD诱导外显子(NIE)前mRNA的对象细胞中的NaV1.1蛋白表达。在一些实施方案中，对象具有NaV1.1中的功能获得性突变，例如偏头痛。在一些实施方案中，ASO用于降低对象细胞中的NaV1.1蛋白表达，对象具有NaV1.1中的功能获得性突变，例如家族性偏瘫性偏头痛，3型。
在一些实施方案中，与在对照细胞(例如，未经反义寡聚体处理的对照细胞或经未结合到含SCN1A NIE的前mRNA的靶向部分的反义寡聚体处理的对照细胞)中产生的编码NaV1.1蛋白的mRNA的量相比时，编码NaV1.1蛋白的mRNA的水平降低1.1至10倍。
在一些实施方案中，疾病或病况是NaV1.1遗传性癫痫。NaV1.1遗传性癫痫可包括NaV1.1中的功能丧失性突变或NaV1.1中的功能获得性突变。在一些情况下，NaV1.1遗传性癫痫包括一种或多种遗传性突变。在其他情况下，NaV1.1遗传性癫痫包括一种或多种从头突变。在一些情况下，NaV1.1遗传性癫痫包括Dravet综合征(DS)(也称为婴儿期重度肌阵挛性癫痫或SMEI)；婴儿重度肌阵挛性癫痫(SMEI)-交界性癫痫(SMEB)；发热性惊厥(FS)；全身性癫痫伴热性惊厥+(GEFS+)；癫痫性脑病，早期婴儿，13型；隐源性全身性癫痫；隐源性局灶性癫痫；肌阵挛性无定向癫痫；Lennox-Gastaut综合征；West综合征；特发性痉挛；早发性肌阵挛性脑病；进行性肌阵挛性癫痫；儿童交替性偏瘫；未分类癫痫性脑病；早期婴儿SCN1A脑病；早期婴儿癫痫性脑病(EIEE)；癫痫中意外猝死(SUDEP)；或婴儿恶性迁徙性部分性发作。在一些情况下，与NaV1.1中的功能失去突变相关的NaV1.1遗传性癫痫包括Dravet综合征(DS)(也称为婴儿严重肌阵挛性癫痫或SMEI)；婴儿重度肌阵挛性癫痫(SMEI)-交界性癫痫(SMEB)；热性惊厥(FS)；全身性癫痫伴热性惊厥+(GEFS+)；癫痫性脑病，早期婴儿，13型；隐源性全身性癫痫；隐源性局灶性癫痫；肌阵挛性无定向癫痫；Lennox-Gastaut综合征；West综合征；特发性痉挛；早期肌阵挛性脑病；进行性肌阵挛性癫痫；儿童交替性偏瘫；未分类的癫痫性脑病；早期幼儿SCN1A脑病；癫痫性脑病，早期婴儿(EIEE)；癫痫中意外猝死(SUDEP)；婴儿恶性迁徙性部分性发作。
在一些实施方案中，疾病或状况与SCN1A基因的单倍性不足相关。示例性的与SCN1A基因的单倍性不足相关的疾病或病况包括但不限于Dravet综合征(DS)(也称为SMEI)；婴儿重度肌阵挛性癫痫(SMEI)-交界性癫痫(SMEB)；热性惊厥(FS)；全身性癫痫伴热性惊厥+(GEFS+)；癫痫性脑病，早期婴儿，13型；隐源性全身性癫痫；隐源性局灶性癫痫；肌阵挛性无定向癫痫；Lennox-Gastaut综合征；West综合征；特发性痉挛；早期肌阵挛性脑病；进行性肌阵挛性癫痫；儿童交替性偏瘫；未分类的癫痫性脑病；癫痫中意外猝死(SUDEP)；病态窦房结综合征1型；早期幼儿SCN1A脑病；癫痫性脑病，早期婴儿(EIEE)；或婴儿恶性迁徙性部分性发作。在一些情况下，该疾病或病况是Dravet综合征(DS)(也称为SMEI)；婴儿重度肌阵挛性癫痫(SMEI)-交界性癫痫(SMEB)；热性惊厥(FS)；全身性癫痫伴热性惊厥+(GEFS+)；癫痫性脑病，早期婴儿，13型；隐源性全身性癫痫；隐源性局灶性癫痫；肌阵挛性无定向癫痫；Lennox-Gastaut综合征；West综合征；特发性痉挛；早期肌阵挛性脑病；进行性肌阵挛性癫痫；儿童交替性偏瘫；未分类的癫痫性脑病；癫痫中意外猝死(SUDEP)；病态窦房结综合征1型；早期幼儿SCN1A脑病；癫痫性脑病，早期婴儿(EIEE)；或婴儿恶性迁徙性部分性发作。
在一些情况下，疾病或病况是Dravet综合征(DS)。
如本文所用，术语“癫痫”是指以复发性癫痫发作为特征的一组神经障碍。如本文所用，“癫癫痫发作”是指从短暂且几乎无法检测到的周期到长时间剧烈发抖的发作。示例性发作类型包括但不限于痉挛性、非痉挛性、局灶性和全身性发作。全身性发作的示例性类型包括但不限于强直阵挛性、强直、阵挛性、肌阵挛性、失神性和失张力性发作。
在一些实施方案中，疾病或病况由NaV1.1中的功能获得性突变诱导。与NaV1.1中的功能获得性突变相关的示例性疾病或病况包括但不限于偏头痛。在一些情况下，由NaV1.1中的功能获得性突变诱导的疾病或病况是偏头痛。在一些实施方案中，偏头痛是家族性偏瘫性偏头痛，3型。
在一些实施方案中，所述方法是通过具有编码NaV1.1蛋白的含NIE的前mRNA的对象的细胞减少NaV1.1蛋白表达的方法，并且其中对象具有NaV1.1中的功能获得性突变。在此种实施方案中，对象具有以升高的量产生NaV1.1蛋白的等位基因或编码诱导细胞中的NaV1.1活性增加的突变SCN1A的等位基因。在一些实施方案中，NaV1.1的活性增加的特征在于由突变体NaV1.1通道介导的延长或接近持续的钠电流、快速失活的减慢、稳态失活的正向移动、重复刺激期间更高的通道可用性、非失活去极化诱导的持续钠电流增加、延迟进入失活、快速失活的加速恢复，和/或低温孵育或相互作用蛋白质的共表达对折叠缺陷的挽救。在这些实施方案中的任一个中，反义寡聚体结合到从第二等位基因转录的含NIE的前mRNA的靶向部分，从而抑制或阻断来自前mRNA的假外显子的外显子跳跃，并导致编码功能性NaV1.1蛋白的成熟mRNA水平降低，以及对象细胞中的NaV1.1蛋白的表达降低。
组合物
在一些实施方案中，ASO包括与SEQ ID NO:21-67、210-256或304-1099中的任一个具有至少83％、88％、94％或100％序列同一性的序列。在一些实施方案中，ASO由与SEQ IDNO:21-67、210-256或304-1099中的任一个具有至少83％、88％、94％或100％序列同一性的序列组成。在一些实施方案中，ASO包括与表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8a和8b中列出的序列中的任一个具有至少83％、88％、94％或100％序列同一性的序列。在一些实施方案中，ASO由与表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8a和8b中列出的序列中的任一个具有至少83％、88％、94％或100％序列同一性的序列组成。
在一些实施方案中，ASO包括与SEQ ID NO:21-67、210-256或304-1099中的任一个具有至少60％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、884％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.8％、99.9％或100％序列同一性的序列。在一些实施方案中，ASO由与SEQ ID NO:21-67、210-256或304-1099中的任一个具有至少60％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、884％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.8％、99.9％或100％序列同一性的序列组成。在一些实施方案中，ASO包括与表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8a和8b中列出的序列中的任一个具有至少60％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、884％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.8％、99.9％或100％序列同一性的序列。在一些实施方案中，ASO由与表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8a和8b中列出的序列中的任一个具有至少60％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、884％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.8％、99.9％或100％序列同一性的序列组成。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO包含至少一个修饰的糖部分。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO包含T-甲氧基乙基糖部分。在一些实施方案中，T-甲氧基乙基糖部分是T-2'-甲氧基乙基糖部分。在一些实施方案中，如本文所述的ASO包含2'-O-甲氧基乙基部分。在一些实施方案中，如本文所述的ASO包含含有2'-O-甲氧基乙基部分的胸苷。在一些实施方案中，如本文所述的ASO的每个核碱基包含2'-O-甲氧基乙基部分。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO由8至50个核碱基组成。在一些实施方案中，如本文所述的ASO由16至20个核碱基组成。在一些实施方案中，如本文所述的ASO由12至20个核碱基组成。在一些实施方案中，如本文所述的ASO由8至20个核碱基组成。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO由5至100、6至100、7至100、8至100、9至100、10至100、11至100、12至100、13至100、14至100、15至100、16至100、17至100、18至100、19至100、20至100、21至100、22至100、23至100、24至100、25至100、30至100、35至100、40至100、45至100、50至100、55至100、60至100、65至100、70至100、75至100、80至100、85至100或90至100个核碱基组成。在一些实施方案中，如本文所述的ASO由5至100、5至95、5至90、5至85、5至80、5至75、5至70、5至65、5至60、5至55、5至50、5至45、5至40、5至35、5至30、5至25、5至20、5至15或5至10个核碱基组成。在一些实施方案中，如本文所述的ASO由8至50、8至45、8至40、8至35、8至30、8至29、8至28、8至27、8至26、8至25、8至24、8至23、8至22、8至21、8至20、8至19、8至18、8至17或8至16个核碱基组成。在一些实施方案中，如本文所述的ASO由9至20、10至20、11至20、12至20、13至20、14至20、15至20、16至20、17至20或18至20个核碱基组成。在一些实施方案中，如本文所述的ASO由5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40个核碱基组成。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO包含5'-甲基胞嘧啶(5'-MeC)。在一些实施方案中，如本文所述的ASO的每个胞嘧啶是5'-甲基胞嘧啶(5'-MeC)。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO包含硫代磷酸酯键。在一些实施方案中，如本文所述的ASO的每个核苷间键是硫代磷酸酯键。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO包含锁核酸(LNA)。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO包含至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个LNA。在一些实施方案中，如本文所述的ASO包含1至20、1至19、1至18、1至17、1至16、1至15、1至14、1至13、1至12、1至11、1至10、1至9、1至8、1至7、1至6、1至5、1至4、1至3或1至2个LNA。在一些实施方案中，如本文所述的ASO包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个LNA。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO的5'端核苷酸是LNA。在一些实施方案中，如本文所述的ASO的3'端核苷酸是LNA。在一些实施方案中，如本文所述的ASO的5'和3'末端核苷酸是LNA。
ASO(反义寡聚体)
本文提供了一种包含反义寡聚体的组合物，该反义寡聚体通过与含SCN1A NIE的前mRNA的靶向部分结合而诱导外显子跳跃。如本文所用的，术语“ASO”和“反义寡聚体”可互换使用，并且指包含核碱基的寡聚体如多核苷酸，该寡聚体通过Watson-Crick碱基配对或摆动碱基配对(G-U)与靶核酸(例如，含SCN1A NIE的前mRNA)序列杂交。ASO可具有与靶序列互补的确切序列或近似互补性(例如，足以结合靶序列并加强剪接位点处的剪接的互补性)。将ASO设计为使得它们与靶核酸(例如，前mRNA转录物的靶向部分)结合(杂交)并在生理条件下保持杂交。通常，如果它们与预期(靶向)的核酸序列之外的位点杂交，则它们与有限数目的非靶核酸的序列(除靶核酸之外的一些位点)杂交。ASO的设计可以考虑存在前mRNA转录物的靶向部分的核酸序列或基因组或细胞前mRNA或转录组中其他位置上足够类似的核酸序列，使得ASO将结合其他位点并引起“脱靶”效应的可能性受到限制。本领域已知的，例如在作为WO 2015/035091公开的名称为“Reducing Nonsense-Mediated mRNADecay”的PCT申请PCT/US2014/054151(其通过引用并入本文)中的任何反义寡聚体可用来实施本文所述的方法。
在一些实施方案中，ASO与靶核酸或含NIE的前mRNA的靶向部分“特异性杂交”或对其具有“特异性”。通常，此类杂交在Tm显著大于37℃、优选至少50℃且通常60℃至约90°下发生。此类杂交优选对应于严格的杂交条件。在给定的离子强度和pH下，Tm是50％的靶序列与互补寡核苷酸杂交的温度。
当两个单链多核苷酸之间以反平行构型发生杂交时，寡聚体(如寡核苷酸)彼此“互补”。如果第一多核苷酸和第二多核苷酸的链中一条之间可以发生杂交，则双链多核苷酸可以与另一多核苷酸“互补”。根据普遍接受的碱基配对规则，互补性(一个多核苷酸与另一个多核苷酸的互补程度)可根据预期相互形成氢键的相对链中碱基的比例(例如百分比)进行量化。反义寡聚体(ASO)的序列不需要与其靶核酸的序列100％互补以进行杂交。在某些实施方案中，ASO可包含与它们所靶向的靶核酸序列内的靶区域至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列互补性。例如，其中寡聚化合物的20个核碱基中有18个核碱基与靶区域互补并因此将特异性杂交的ASO代表90％的互补性。在该示例中，其余的非互补核碱基可以聚集在一起或与互补核碱基穿插，并且不需要彼此相连或与互补核碱基相邻。可以使用本领域已知的BLAST程序(基本局部比对搜索工具)和PowerBLAST程序常规地确定ASO与靶核酸区域的互补性百分比(Altschul等人,J.Mol.Biol.,1990,215,403-410；Zhang和Madden,Genome Res.,1997,7,649-656，其全部内容通过引用并入本文)。
ASO不需要与靶序列中的所有核碱基都杂交，并且与之杂交的核碱基可以是连续的或不连续的。ASO可以在前mRNA转录物的一个或多个区段上杂交，使得间插或相邻的区段不参与该杂交事件(例如，可形成环结构或发夹结构)。在某些实施方案中，ASO与靶标前mRNA转录物中的不连续核碱基杂交。例如，ASO可以与前mRNA转录物中的被不与ASO杂交的一个或多个核碱基隔开的核碱基杂交。
本文所述的ASO包含与含NIE的前mRNA的靶向部分中存在的核碱基互补的核碱基。术语ASO包含含有能够与靶mRNA上的互补核碱基杂交的核碱基但不含有糖部分例如肽核酸(PNA)的寡核苷酸和任何其他寡聚体分子。ASO可包含天然存在的核苷酸、核苷酸类似物、修饰的核苷酸或上述两种或三种的任何组合。术语“天然存在的核苷酸”包括脱氧核糖核苷酸和核糖核苷酸。术语“修饰的核苷酸”包括具有修饰或取代糖基和/或具有修饰主链的核苷酸。在一些实施方案中，ASO的所有核苷酸均为修饰的核苷酸。与本文所述方法和组合物兼容的ASO或ASO组分的化学修饰对于本领域技术人员来说是显而易见的，并且可以例如在美国专利号8,258,109B2、美国专利号5,656,612、美国专利公开号2012/0190728以及Dias和Stein,Mol.Cancer Ther.2002,347-355中找到，其全部内容通过引用并入本文。
ASO的一个或多个核碱基可以是任何天然存在的、未修饰的核碱基，如腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶和尿嘧啶或与未修饰的核碱基十分类似的使其能够与靶标前mRNA上存在的核碱基发生氢键键合的任何合成或修饰的核碱基。修饰的核碱基的实例包括但不限于次黄嘌呤、黄嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、5,6-二氢尿嘧啶、5-甲基胞嘧啶和5-羟甲基胞嘧啶。
本文所述的ASO还包括连接寡聚体组分的主链结构。术语“主链结构”和“寡聚体键”可以互换使用，并且是指ASO单体之间的连接。在天然存在的寡核苷酸中，主链包含连接寡聚体糖部分的3'-5'磷酸二酯键。本文所述的ASO的主链结构或寡聚体键可包括(但不限于)硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硒代磷酸酯酯、二硒代磷酸酯、苯胺硫代磷酸酯、苯胺磷酸酯、氨基磷酸酯等。参见例如，LaPlanche等人,Nucleic Acids Res.14:9081(1986)；Stec等人,J.Am.Chem.Soc.106:6077(1984),Stein等人,Nucleic Acids Res.16:3209(1988),Zon等人,Anti-Cancer Drug Design 6:539(1991)；Zon等人,Oligonucleotides andAnalogues:A Practical Approach,pp.87-108(F.Eckstein,著,Oxford UniversityPress,Oxford England(1991))；Stec等人,美国专利号5,151,510；Uhlmann和Peyman,Chemical Reviews 90:543(1990)，其全部内容通过引用并入本文。在一些实施方案中，ASO的主链结构不包含磷，而是包含例如肽核酸(PNA)中的肽键，或连接基团，包括氨基甲酸酯、酰胺、线性和环状烃基团。在一些实施方案中，主链修饰是硫代磷酸酯键。在一些实施方案中，主链修饰是氨基磷酸酯键。
在实施方案中，在ASO骨架的每个磷核苷酸间键处的立体化学是随机的。在实施方案中，在ASO骨架的每个磷核苷酸间键处的立体化学是受控的并且不是随机的。例如，公开号为2014/0194610的美国专利申请，“Methods for the Synthesis of FunctionalizedNucleic Acids”(其通过引用并入本文)描述了用于独立选择核酸寡聚体中每个磷原子处的手性的偏性(handedness)的方法。在实施方案中，在本发明方法中使用的ASO(包括但不限于本文表5和表6中所示的任何ASO)包括具有非随机的磷核苷酸间键的ASO。在实施方案中，在本发明方法中使用的组合物包含纯的非对映异构的ASO。在实施方案中，在本发明方法中使用的组合物包含非对映异构纯度为至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％、约100％、约90％至约100％、约91％至约100％、约92％至约100％、约93％至约100％、约94％至约100％、约95％至约100％、约96％至约100％、约97％至约100％、约98％至约100％或约99％至约100％的ASO。
在实施方案中，ASO具有其磷核苷酸间键处的Rp和Sp构型的非随机混合物。例如，有人提出，反义寡核苷酸或反义寡聚体中需要Rp和Sp的混合，以实现良好的活性和核酸酶稳定性之间的平衡(Wan等人,2014,“Synthesis,biophysical properties andbiological activity of second generation antisense oligonucleotidescontaining chiral phosphorothioate linkages,”Nucleic Acids Research 42(22):13456-13468，通过引用并入本文)。在实施方案中，在本发明的方法中使用的ASO(包括但不限于本文SEQ ID NO:21-114中所示的任何ASO)包含约5％-100％Rp、至少约5％Rp、至少约10％Rp、至少约15％Rp、至少约20％Rp、至少约25％Rp、至少约30％Rp、至少约35％Rp、至少约40％Rp、至少约45％Rp、至少约50％Rp、至少约55％Rp、至少约60％Rp、至少约65％Rp、至少约70％Rp、至少约75％Rp、至少约80％Rp、至少约85％Rp、至少约90％Rp或至少约95％Rp(其余为Sp)或约100％Rp。在实施方案中，在本发明的方法中使用的ASO(包括但不限于本文SEQ ID NO:21-114中所示的任何ASO)包含约10％至约100％Rp、约15％至约100％Rp、约20％至约100％Rp、约25％至约100％Rp、约30％至约100％Rp、约35％至约100％Rp、约40％至约100％Rp、约45％至约100％Rp、约50％至约100％Rp、约55％至约100％Rp、约60％至约100％Rp、约65％至约100％Rp、约70％至约100％Rp、约75％至约100％Rp、约80％至约100％Rp、约85％至约100％Rp、约90％至约100％Rp或约95％至约100％Rp、约20％至约80％Rp、约25％至约75％Rp、约30％至约70％Rp、约40％至约60％Rp或约45％至约55％Rp，其余为Sp。
在实施方案中，在本发明的方法中使用的ASO(包括但不限于本文SEQ ID NO:21-114中所示的任何ASO)包含约5％-100％Sp、至少约5％Sp、至少约10％Sp、至少约15％Sp、至少约20％Sp、至少约25％Sp、至少约30％Sp、至少约35％Sp、至少约40％Sp、至少约45％Sp、至少约50％Sp、至少约55％Sp、至少约60％Sp、至少约65％Sp、至少约70％Sp、至少约75％Sp、至少约80％Sp、至少约85％Sp、至少约90％Sp或至少约95％Sp(其余为Rp)或约100％Sp。在实施方案中，在本发明的方法中使用的ASO(包括但不限于本文SEQ ID NO:21-114中所示的任何ASO)包含约10％至约100％Sp、约15％至约100％Sp、约20％至约100％Sp、约25％至约100％Sp、约30％至约100％Sp、约35％至约100％Sp、约40％至约100％Sp、约45％至约100％Sp、约50％至约100％Sp、约55％至约100％Sp、约60％至约100％Sp、约65％至约100％Sp、约70％至约100％Sp、约75％至约100％Sp、约80％至约100％Sp、约85％至约100％Sp、约90％至约100％Sp或约95％至约100％Sp、约20％至约80％Sp、约25％至约75％Sp、约30％至约70％Sp、约40％至约60％Sp或约45％至约55％Sp，其余为Rp。
在实施方案中，在本发明的方法中使用的ASO(包括但不限于本文SEQ ID NO:21-67、210-256或304-1099中所示的任何ASO)包含约5-100％Rp、至少约5％Rp、至少约10％Rp、至少约15％Rp、至少约20％Rp、至少约25％Rp、至少约30％Rp、至少约35％Rp、至少约40％Rp、至少约45％Rp、至少约50％Rp、至少约55％Rp、至少约60％Rp、至少约65％Rp、至少约70％Rp、至少约75％Rp、至少约80％Rp、至少约85％Rp、至少约90％Rp或至少约95％Rp(其余为Sp)或约100％Rp。在实施方案中，在本发明的方法中使用的ASO(包括但不限于本文SEQID NO:21-67、210-256或304-1099中所示的任何ASO)包含约10％至约100％Rp、约15％至约100％Rp、约20％至约100％Rp、约25％至约100％Rp、约30％至约100％Rp、约35％至约100％Rp、约40％至约100％Rp、约45％至约100％Rp、约50％至约100％Rp、约55％至约100％Rp、约60％至约100％Rp、约65％至约100％Rp、约70％至约100％Rp、约75％至约100％Rp、约80％至约100％Rp、约85％至约100％Rp、约90％至约100％Rp或约95％至约100％Rp、约20％至约80％Rp、约25％至约75％Rp、约30％至约70％Rp、约40％至约60％Rp或约45％至约55％Rp，其余为Sp。
在实施方案中，在本发明的方法中使用的ASO(包括但不限于本文SEQ ID NO:21-67、210-256或304-1099中所示的任何ASO)包含约5-100％Sp、至少约5％Sp、至少约10％Sp、至少约15％Sp、至少约20％Sp、至少约25％Sp、至少约30％Sp、至少约35％Sp、至少约40％Sp、至少约45％Sp、至少约50％Sp、至少约55％Sp、至少约60％Sp、至少约65％Sp、至少约70％Sp、至少约75％Sp、至少约80％Sp、至少约85％Sp、至少约90％Sp或至少约95％Sp(其余为Rp)或约100％Sp。在实施方案中，在本发明的方法中使用的ASO(包括但不限于本文SEQID NO:21-67、210-256或304-1099中所示的任何ASO)包含约10％至约100％Sp、约15％至约100％Sp、约20％至约100％Sp、约25％至约100％Sp、约30％至约100％Sp、约35％至约100％Sp、约40％至约100％Sp、约45％至约100％Sp、约50％至约100％Sp、约55％至约100％Sp、约60％至约100％Sp、约65％至约100％Sp、约70％至约100％Sp、约75％至约100％Sp、约80％至约100％Sp、约85％至约100％Sp、约90％至约100％Sp或约95％至约100％Sp、约20％至约80％Sp、约25％至约75％Sp、约30％至约70％Sp、约40％至约60％Sp或约45％至约55％Sp，其余为Rp。
在实施方案中，在本发明的方法中使用的ASO(包括但不限于本文表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8a和8b中列出的序列中的任一个所示的任何ASO)包含约5-100％Rp、至少约5％Rp、至少约10％Rp、至少约15％Rp、至少约20％Rp、至少约25％Rp、至少约30％Rp、至少约35％Rp、至少约40％Rp、至少约45％Rp、至少约50％Rp、至少约55％Rp、至少约60％Rp、至少约65％Rp、至少约70％Rp、至少约75％Rp、至少约80％Rp、至少约85％Rp、至少约90％Rp或至少约95％Rp(其余为Sp)或约100％Rp。在实施方案中，在本发明的方法中使用的ASO(包括但不限于本文表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8a和8b中列出的序列中的任一个所示的任何ASO)包含约10％至约100％Rp、约15％至约100％Rp、约20％至约100％Rp、约25％至约100％Rp、约30％至约100％Rp、约35％至约100％Rp、约40％至约100％Rp、约45％至约100％Rp、约50％至约100％Rp、约55％至约100％Rp、约60％至约100％Rp、约65％至约100％Rp、约70％至约100％Rp、约75％至约100％Rp、约80％至约100％Rp、约85％至约100％Rp、约90％至约100％Rp或约95％至约100％Rp、约20％至约80％Rp、约25％至约75％Rp、约30％至约70％Rp、约40％至约60％Rp或约45％至约55％Rp，其余为Sp。
在实施方案中，在本发明的方法中使用的ASO(包括但不限于本文表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8a和8b中列出的序列中的任一个所示的任何ASO)包含约5-100％Sp、至少约5％Sp、至少约10％Sp、至少约15％Sp、至少约20％Sp、至少约25％Sp、至少约30％Sp、至少约35％Sp、至少约40％Sp、至少约45％Sp、至少约50％Sp、至少约55％Sp、至少约60％Sp、至少约65％Sp、至少约70％Sp、至少约75％Sp、至少约80％Sp、至少约85％Sp、至少约90％Sp或至少约95％Sp(其余为Rp)或约100％Sp。在实施方案中，在本发明的方法中使用的ASO(包括但不限于本文表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8a和8b中列出的序列中的任一个所示的任何ASO)包含约10％至约100％Sp、约15％至约100％Sp、约20％至约100％Sp、约25％至约100％Sp、约30％至约100％Sp、约35％至约100％Sp、约40％至约100％Sp、约45％至约100％Sp、约50％至约100％Sp、约55％至约100％Sp、约60％至约100％Sp、约65％至约100％Sp、约70％至约100％Sp、约75％至约100％Sp、约80％至约100％Sp、约85％至约100％Sp、约90％至约100％Sp或约95％至约100％Sp、约20％至约80％Sp、约25％至约75％Sp、约30％至约70％Sp、约40％至约60％Sp或约45％至约55％Sp，其余为Rp。
本文所述的任何ASO可包含如在天然存在的核苷酸中存在的包含核糖或脱氧核糖的糖部分或包括吗啉环的修饰的糖部分或糖类似物。修饰的糖部分的非限制性示例包括2'取代，例如2'-O-甲基(2'-O-Me)、2'-O-甲氧基乙基(2'MOE)、2'-O-氨基乙基、2'F；N3'->P5'氨基磷酸酯、2'二甲氨基氧基乙氧基、2'二甲氨基乙氧基乙氧基、2'-胍、2'-O-胍乙基、氨基甲酸酯修饰的糖和双环修饰的糖。在一些实施方案中，糖部分修饰选自2'-O-Me、2'F和2'MOE。在一些实施方案中，糖部分修饰是例如锁核酸(LNA)中的额外的桥键。在一些实施方案中，糖类似物包含吗啉环，例如二氨基磷酸酯吗啉代(PMO)。在一些实施方案中，糖部分包含核呋喃糖基或2'脱氧核呋喃糖基修饰。在一些实施方案中，糖部分包含2'4'-受限的2'O-甲氧基乙基(cMOE)修饰。在一些实施方案中，糖部分包含cEt 2',4'受限的2'-O乙基BNA修饰。在一些实施方案中，糖部分包含三环DNA(tcDNA)修饰。在一些实施方案中，糖部分包含乙烯核酸(ENA)修饰。在一些实施方案中，糖部分包含MCE修饰。修饰在本领域已知并在文献中描述，例如Jarver等人,2014,Nucleic Acid Therapeutics 24(1):37-47，通过引用并入本文用于此目的。“A Chemical View of Oligonucleotides for Exon Skipping and RelatedDrug Applications,”Nucleic Acid Therapeutics 24(1):37-47，通过引用并入本文用于此目的。
在一些实施方案中，ASO的每个单体以相同的方式进行修饰，例如ASO的骨架的每个连接包含硫代磷酸酯键或者每个核糖糖部分包含2'O-甲基修饰。存在于ASO的每个单体组分上的此类修饰被称为“均一修饰”。在一些实例中，可能需要不同修饰的组合，例如，ASO可包含二氨基磷酸酯键和含有吗啉环(吗啉代)的糖部分的组合。ASO的不同修饰的组合被称为“混合修饰”或“混合化学”。
在一些实施方案中，ASO包含一个或多个骨架修饰。在一些实施方案中，ASO包含一个或多个糖部分修饰。在一些实施方案中，ASO包含一个或多个骨架修饰和一个或多个糖部分修饰。在一些实施方案中，ASO包含2'MOE修饰和硫代磷酸酯骨架。在一些实施方案中，ASO包含二氨基磷酸酯吗啉代(PMO)。在一些实施方案中，ASO包含肽核酸(PNA)。本文所述的任何ASO或ASO的任何组分(例如，核碱基、糖部分、骨架)均可被修饰，以便获得ASO的所需性质或活性或降低ASO的不希望的性质或活性。例如，ASO或任何ASO的一种或多种组分可被修饰以增强对前mRNA转录物上的靶序列的结合亲和力；减少与任何非靶序列的结合；减少由细胞核酸酶(即，RNA酶H)的降解；改善ASO至细胞中和/或至细胞的细胞核中的吸收；改变ASO的药代动力学或药效学；以及/或者调节ASO的半衰期。
在一些实施方案中，ASO由2'-O-(2-甲氧基乙基)(MOE)硫代磷酸酯修饰的核苷酸组成。ASO由特别适合于本文所公开的方法的此类核苷酸组成；已证明具有此类修饰的寡聚体具有针对核酸酶降解的显著增强的抗性和增加的生物利用度，使其适合于例如本文所述的一些实施方案中的口服递送。参见例如，Geary等人,J Pharmacol Exp Ther.2001；296(3):890-7；Geary等人,J Pharmacol Exp Ther.2001；296(3):898-904，其全部内容通过引用并入本文。
本领域技术人员会知晓合成ASO的方法。备选地或另外地，ASO可从商业来源获得。
除非另外指出，否则单链核酸(例如，前mRNA转录物、寡核苷酸、ASO等)序列的左手端为5'末端，并且单链或双链核酸序列的左手方向被称为5'方向。类似地，核酸序列(单链或双链)的右手端或右手方向为3'末端或3'方向。通常，核酸中在参考点的5'侧的区域或序列被称为“上游”，而核酸中在参考点的3'侧的区域或序列被称为“下游”。通常，mRNA的5'方向或5'末端是启动或起始密码子所处的位置，而3'末端或3'方向是终止密码子所处的位置。在一些方面，核酸中在参考点上游的核苷酸可以用负数表示，而在参考点下游的核苷酸则可以用正数表示。例如，参考点(例如，mRNA中的外显子-外显子接界)可以被表示为“零”位点，并且与该参考点直接相邻且在其上游的核苷酸被表示为“负一”，例如，“-1”，而与该参考点直接相邻且在其下游的核苷酸被表示为“正一”，例如，“+1”。
在一些实施方案中，ASO与含SCN1A NIE的前mRNA的靶向部分互补(且结合)，该靶向部分位于含SCN1A NIE的前mRNA中所包括的外显子的5'剪接位点(或NIE的3'末端)下游(在3'方向)(例如，相对于5'剪接位点以正数表示的方向)。在一些实施方案中，ASO与含SCN1A NIE的前mRNA的靶向部分互补，该靶向部分位于相对于所包括的外显子的5'剪接位点(或3'末端)的约+1至约+500区域内。在一些实施方案中，ASO可与含SCN1A NIE的前mRNA的靶向部分互补，该靶向部分位于相对于所包括的外显子的5'剪接位点(或3'末端)的+6至+496核苷酸之间的区域内。在一些方面，该ASO与位于相对于所包括的外显子的5'剪接位点(或3'末端)的约+1至约+500、约+1至约+490、约+1至约+480、约+1至约+470、约+1至约+460、约+1至约+450、约+1至约+440、约+1至约+430、约+1至约+420、约+1至约+410、约+1至约+400、约+1至约+390、约+1至约+380、约+1至约+370、约+1至约+360、约+1至约+350、约+1至约+340、约+1至约+330、约+1至约+320、约+1至约+310、约+1至约+300、约+1至约+290、约+1至约+280、约+1至约+270、约+1至约+260、约+1至约+250、约+1至约+240、约+1至约+230、约+1至约+220、约+1至约+210、约+1至约+200、约+1至约+190、约+1至约+180、约+1至约+170、约+1至约+160、约+1至约+150、约+1至约+140、约+1至约+130、约+1至约+120、约+1至约+110、约+1至约+100、约+1至约+90、约+1至约+80、约+1至约+70、约+1至约+60、约+1至约+50、约+1至约+40、约+1至约+30或约+1至约+20区域内的靶向部分互补。在一些方面，该ASO与位于相对于所包括的外显子的5'剪接位点(或3'末端)的约+1至约+100、约+100至约+200、约+200至约+300、约+300至约+400或约+400至约+500区域内的靶向部分互补。
在一些实施方案中，ASO与含SCN1A NIE的前mRNA的靶向部分互补(且结合)，该靶向部分位于含SCN1A NIE的前mRNA中所包括的外显子的5'剪接位点(或3'末端)上游(在5'方向)(例如，相对于5'剪接位点以负数表示的方向)。在一些实施方案中，ASO与含SCN1ANIE的前mRNA的靶向部分互补，该靶向部分位于相对于所包括的外显子的5'剪接位点(或3'末端)的约-4至约-270区域内。在一些实施方案中，该ASO可与含SCN1A NIE的前mRNA的靶向部分互补，该靶向部分位于相对于所包括的外显子的5'剪接位点(或3'末端)的-1至-264核苷酸之间的区域内。在一些方面，ASO与位于相对于所包括的外显子的5'剪接位点(或3'末端)的约-1至约-270、约-1至约-260、约-1至约-250、约-1至约-240、约-1至约-230、约-1至约-220、约-1至约-210、约-1至约-200、约-1至约-190、约-1至约-180、约-1至约-170、约-1至约-160、约-1至约-150、约-1至约-140、约-1至约-130、约-1至约-120、约-1至约-110、约-1至约-100、约-1至约-90、约-1至约-80、约-1至约-70、约-1至约-60、约-1至约-50、约-1至约-40、约-1至约-30或约-1至约-20区域内的靶向部分互补。在一些方面，ASO与位于相对于所包括的外显子的5'剪接位点(或3'末端)的约-1至约-50、约-50至约-100、约-100至约-150、约-150至约-200或约-200至约-250区域内的靶向部分互补。
在一些实施方案中，ASO与含SCN1A NIE的前mRNA的靶向部分互补，该靶向部分位于含SCN1A NIE的前mRNA中所包括的外显子的3'剪接位点(或5'末端)上游(在5'方向)(例如，以负数表示的方向)。在一些实施方案中，该ASO与含SCN1A NIE的前mRNA的靶向部分互补，该靶向部分位于相对于所包括的外显子的3'剪接位点(或5'末端)的约-1至约-500区域内。在一些实施方案中，ASO与含SCN1A NIE的前mRNA的靶向部分互补，该靶向部分位于相对于所包括的外显子的3'剪接位点的-1至-496区域内。在一些方面，ASO与位于相对于所包括的外显子的3'剪接位点的约-1至约-500、约-1至约-490、约-1至约-480、约-1至约-470、约-1至约-460、约-1至约-450、约-1至约-440、约-1至约-430、约-1至约-420、约-1至约-410、约-1至约-400、约-1至约-390、约+1至约+380、约-1至约-370、约-1至约-360、约-1至约-350、约-1至约-340、约-1至约-330、约-1至约-320、约-1至约-310、约-1至约-300、约-1至约-290、约-1至约-280、约-1至约-270、约-1至约-260、约-1至约-250、约-1至约-240、约-1至约-230、约-1至约-220、约-1至约-210、约-1至约-200、约-1至约-190、约-1至约-180、约-1至约-170、约-1至约-160、约-1至约-150、约-1至约-140、约-1至约-130、约-1至约-120、约-1至约-110、约-1至约-100、约-1至约-90、约-1至约-80、约-1至约-70、约-1至约-60、约-1至约-50、约-1至约-40或约-1至约-30区域内的靶向部分互补。在一些方面，ASO与位于相对于所包括的外显子的3'剪接位点的约-1至约-100、约-100至约-200、约-200至约-300、约-300至约-400或约-400至约-500区域内的靶向部分互补。
在一些实施方案中，ASO与含SCN1A NIE的前mRNA的靶向部分互补，该靶向部分位于含SCN1A NIE的前mRNA中所包括的外显子的3'剪接位点(5'末端)下游(在3'方向)(例如，以正数表示的方向)。在一些实施方案中，ASO与含SCN1A NIE的前mRNA的靶向部分互补，该靶向部分位于相对于所包括的外显子的3'剪接位点的约+1至约+100区域内。在一些方面，ASO与位于相对于所包括的外显子的3'剪接位点的约+1至约+90、约+1至约+80、约+1至约+70、约+1至约+60、约+1至约+50、约+1至约+40、约+1至约+30、约+1至约+20或约+1至约+10区域内的靶向部分互补。
在一些实施方案中，含SCN1A NIE的前mRNA的靶向部分位于相对于所包括的外显子的5'剪接位点(3'末端)的+100至相对于所包括的外显子的3'剪接位点(5'末端)的-100的区域内。在一些实施方案中，含SCN1A NIE的前mRNA的靶向部分位于NIE内。在一些实施方案中，所述含SCN1A NIE的前mRNA的靶向部分包含伪外显子和内含子边界。
ASO可以具有适合于特异性结合和有效增强剪接的任何长度。在一些实施方案中，ASO由8至50个核碱基组成。例如，ASO的长度可以是8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、40、45或50个核碱基。在一些实施方案中，ASO由超过50个核碱基组成。在一些实施方案中，ASO的长度为8至50个核碱基、8至40个核碱基、8至35个核碱基、8至30个核碱基、8至25个核碱基、8至20个核碱基、8至15个核碱基、9至50个核碱基、9至40个核碱基、9至35个核碱基、9至30个核碱基、9至25个核碱基、9至20个核碱基、9至15个核碱基、10至50个核碱基、10至40个核碱基、10至35个核碱基、10至30个核碱基、10至25个核碱基、10至20个核碱基、10至15个核碱基、11至50个核碱基、11至40个核碱基、11至35个核碱基、11至30个核碱基、11至25个核碱基、11至20个核碱基、11至15个核碱基、12至50个核碱基、12至40个核碱基、12至35个核碱基、12至30个核碱基、12至25个核碱基、12至20个核碱基、12至15个核碱基、13至50个核碱基、13至40个核碱基、13至35个核碱基、13至30个核碱基、13至25个核碱基、13至20个核碱基、14至50个核碱基、14至40个核碱基、14至35个核碱基、14至30个核碱基、14至25个核碱基、14至20个核碱基、15至50个核碱基、15至40个核碱基、15至35个核碱基、15至30个核碱基、15至25个核碱基、15至20个核碱基、20至50个核碱基、20至40个核碱基、20至35个核碱基、20至30个核碱基、20至25个核碱基、25至50个核碱基、25至40个核碱基、25至35个核碱基或25至30个核碱基。在一些实施方案中，ASO的长度为18个核苷酸。在一些实施方案中，ASO的长度为15个核苷酸。在一些实施方案中，ASO的长度为25个核苷酸。
在一些实施方案中，使用具有不同化学作用但与含NIE的前mRNA的相同靶向部分互补的两个或更多个ASO。在一些实施方案中，使用与含NIE的前mRNA的不同靶向部分互补的两个或更多个ASO。
在实施方案中，本发明的反义寡核苷酸或反义寡聚体与增强寡核苷酸的活性或细胞摄取的一个或多个部分或缀合物(例如，靶向部分或其他缀合物)化学连接。此类部分包括但不限于，脂质部分(例如胆固醇部分、胆甾醇部分)、脂肪链(例如十二烷二醇或十一烷基残基)、多胺或聚乙二醇链或金刚烷乙酸。包含亲脂性部分的寡核苷酸和制备方法已在已发表的文献中描述。在实施方案中，反义寡核苷酸或反义寡聚体与包括但不限于无碱基核苷酸、聚醚、多胺、聚酰胺、肽、碳水化合物(例如N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)、N-Ac-氨基葡萄糖(GluNAc))或甘露糖(例如甘露糖-6-磷酸)、脂质或多烃化合物的部分缀合。如本领域所理解并在文献中所述的，可以例如使用接头将缀合物连接到包含糖、碱或磷酸基团上的多个位置中的任何位置处的反义寡核苷酸或反义寡聚体的一个或多个任何核苷酸。接头可以包括二价或三价分支连接头。在实施方案中，缀合物附接到反义寡核苷酸或反义寡聚体的3'端。制备寡核苷酸缀合物的方法被描述于例如美国专利号8,450,467，“Carbohydrateconjugates as delivery agents for oligonucleotides”中，其通过引用并入本文中。
在一些实施方案中，被ASO靶向的核酸是在细胞如真核细胞中表达的含SCN1A NIE的前mRNA。在一些实施方案中，术语“细胞”可指细胞群体。在一些实施方案中，该细胞在对象中。在一些实施方案中，该细胞从对象中分离。在一些实施方案中，该细胞是离体的。在一些实施方案中，该细胞是病况或疾病相关的细胞或细胞系。在一些实施方案中，该细胞是体外的(例如，在细胞培养物中)。
在一些实施方案中，ASO是核苷酸的盐。在一些实施方案中，ASO是核苷酸，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的盐。在一些实施方案中，ASO是核苷酸的盐，其中盐与磷酸酯键结合。在一些实施方案中，ASO是核苷酸，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的盐，其中盐与磷酸酯键结合。在一些实施方案中，ASO是核苷酸的钠盐。在一些实施方案中，ASO是核苷酸，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的钠盐。在一些实施方案中，ASO是核苷酸的钠盐，其中钠盐与磷酸酯键结合。在一些实施方案中，ASO是核苷酸，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的钠盐，其中钠盐与磷酸酯键结合。在一些实施方案中，ASO是核苷酸的钾盐。在一些实施方案中，ASO是核苷酸，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的钾盐。在一些实施方案中，ASO是核苷酸的钾盐，其中钾盐与磷酸酯键结合。在一些实施方案中，ASO是核苷酸，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的钾盐，其中钾盐与磷酸酯键结合。
在一些实施方案中，ASO是2-核苷酸(2-聚体)的一钠盐。在一些实施方案中，ASO是3-核苷酸(3-聚体)的二钠盐。在一些实施方案中，ASO是4-核苷酸(4-聚体)的三钠盐。在一些实施方案中，ASO是5-核苷酸(5-聚体)的四钠盐。在一些实施方案中，ASO是6-核苷酸(6-聚体)的五钠盐。在一些实施方案中，ASO是7-核苷酸(7-聚体)的六钠盐。在一些实施方案中，ASO是8-核苷酸(8-聚体)的七钠盐。在一些实施方案中，ASO是9-核苷酸(9-聚体)的八钠盐。在一些实施方案中，ASO是10-核苷酸(10-聚体)的九钠盐。在一些实施方案中，ASO是11-核苷酸(11-聚体)的十钠盐。在一些实施方案中，ASO是12-核苷酸(12-聚体)的十一钠盐。在一些实施方案中，ASO是13-核苷酸(13-聚体)的十二钠盐。在一些实施方案中，ASO是14-核苷酸(14-聚体)的十三钠盐。在一些实施方案中，ASO是15-核苷酸(15-聚体)的十四钠盐。在一些实施方案中，ASO是16-核苷酸(16-聚体)的十五钠盐。在一些实施方案中，ASO是17-核苷酸(17-聚体)的十六钠盐。在一些实施方案中，ASO是18-核苷酸(18-聚体)的十七钠盐。在一些实施方案中，ASO是19-核苷酸(19-聚体)的十八钠盐。在一些实施方案中，ASO是20-核苷酸(20-聚体)的十九钠盐。在一些实施方案中，ASO是21-核苷酸(21-聚体)的二十钠盐。在一些实施方案中，ASO是22-核苷酸(22-聚体)的二十一钠盐。在一些实施方案中，ASO是23-核苷酸(23-聚体)的二十二钠盐。在一些实施方案中，ASO是24-核苷酸(24-聚体)的二十三钠盐。在一些实施方案中，ASO是25-核苷酸(25-聚体)的二十四钠盐。在一些实施方案中，ASO是26-核苷酸(26-聚体)的二十五钠盐。在一些实施方案中，ASO是27-核苷酸(27-聚体)的二十六钠盐。在一些实施方案中，ASO是28-核苷酸(28-聚体)的二十七钠盐。在一些实施方案中，ASO是29-核苷酸(29-聚体)的二十八钠盐。在一些实施方案中，ASO是30-核苷酸(30-聚体)的二十九钠盐。在一些实施方案中，ASO是31-核苷酸(31-聚体)的三十钠盐。在一些实施方案中，ASO是32-核苷酸(32-聚体)的三十一钠盐。在一些实施方案中，ASO是33-核苷酸(33-聚体)的三十二钠盐。在一些实施方案中，ASO是34-核苷酸(34-聚体)的三十三钠盐。在一些实施方案中，ASO是35-核苷酸(35-聚体)的三十四钠盐。在一些实施方案中，ASO是36-核苷酸(36-聚体)的三十五钠盐。在一些实施方案中，ASO是37-核苷酸(37-聚体)的三十六钠盐。在一些实施方案中，ASO是38-核苷酸(38-聚体)的三十七钠盐。在一些实施方案中，ASO是39-核苷酸(39-聚体)的三十八钠盐。在一些实施方案中，ASO是40-核苷酸(40-聚体)的三十九钠盐。在一些实施方案中，ASO是41-核苷酸(41-聚体)的四十钠盐。在一些实施方案中，ASO是42-核苷酸(42-聚体)的四十一钠盐。在一些实施方案中，ASO是43-核苷酸(43-聚体)的四十二钠盐。在一些实施方案中，ASO是44-核苷酸(44-聚体)的四十三钠盐。在一些实施方案中，ASO是45-核苷酸(45-聚体)的四十四钠盐。在一些实施方案中，ASO是46-核苷酸(46-聚体)的四十五钠盐。在一些实施方案中，ASO是47-核苷酸(47-聚体)的四十六钠盐。在一些实施方案中，ASO是48-核苷酸(48-聚体)的四十七钠盐。在一些实施方案中，ASO是49-核苷酸(49-聚体)的四十八钠盐。在一些实施方案中，ASO是50-核苷酸(50-聚体)的四十九钠盐。在一些实施方案中，ASO是51-核苷酸(51-聚体)的五十钠盐。
在一些实施方案中，ASO是2-核苷酸(2-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的一钠盐。在一些实施方案中，ASO是3-核苷酸(3-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的二钠盐。在一些实施方案中，ASO是4-核苷酸(4-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的三钠盐。在一些实施方案中，ASO是5-核苷酸(5-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的四钠盐。在一些实施方案中，ASO是6-核苷酸(6-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的五钠盐。在一些实施方案中，ASO是7-核苷酸(7-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的六钠盐。在一些实施方案中，ASO是8-核苷酸(8-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的七钠盐。在一些实施方案中，ASO是9-核苷酸(9-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的八钠盐。在一些实施方案中，ASO是10-核苷酸(10-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的九钠盐。在一些实施方案中，ASO是11-核苷酸(11-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的十钠盐。在一些实施方案中，ASO是12-核苷酸(12-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的十一钠盐。在一些实施方案中，ASO是13-核苷酸(13-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的十二钠盐。在一些实施方案中，ASO是14-核苷酸(14-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的十三钠盐。在一些实施方案中，ASO是15-核苷酸(15-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的十四钠盐。在一些实施方案中，ASO是16-核苷酸(16-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的十五钠盐。在一些实施方案中，ASO是17-核苷酸(17-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的十六钠盐。在一些实施方案中，ASO是18-核苷酸(18-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的十七钠盐。在一些实施方案中，ASO是19-核苷酸(19-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的十八钠盐。在一些实施方案中，ASO是20-核苷酸(20-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的十九钠盐。在一些实施方案中，ASO是21-核苷酸(21-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的二十钠盐。在一些实施方案中，ASO是22-核苷酸(22-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的二十一钠盐。在一些实施方案中，ASO是23-核苷酸(23-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的二十二钠盐。在一些实施方案中，ASO是24-核苷酸(24-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的二十三钠盐。在一些实施方案中，ASO是25-核苷酸(25-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的二十四钠盐。在一些实施方案中，ASO是26-核苷酸(26-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的二十五钠盐。在一些实施方案中，ASO是27-核苷酸(27-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的二十六钠盐。在一些实施方案中，ASO是28-核苷酸(28-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的二十七钠盐。在一些实施方案中，ASO是29-核苷酸(29-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的二十八钠盐。在一些实施方案中，ASO是30-核苷酸(30-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的二十九钠盐。在一些实施方案中，ASO是31-核苷酸(31-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的三十钠盐。在一些实施方案中，ASO是32-核苷酸(32-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的三十一钠盐。在一些实施方案中，ASO是33-核苷酸(33-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的三十二钠盐。在一些实施方案中，ASO是34-核苷酸(34-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的三十三钠盐。在一些实施方案中，ASO是35-核苷酸(35-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的三十四钠盐。在一些实施方案中，ASO是36-核苷酸(36-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的三十五钠盐。在一些实施方案中，ASO是37-核苷酸(37-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的三十六钠盐。在一些实施方案中，ASO是38-核苷酸(38-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的三十七钠盐。在一些实施方案中，ASO是39-核苷酸(39-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的三十八钠盐。在一些实施方案中，ASO是40-核苷酸(40-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的三十九钠盐。在一些实施方案中，ASO是41-核苷酸(41-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的四十钠盐。在一些实施方案中，ASO是42-核苷酸(42-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的四十一钠盐。在一些实施方案中，ASO是43-核苷酸(43-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的四十二钠盐。在一些实施方案中，ASO是44-核苷酸(44-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的四十三钠盐。在一些实施方案中，ASO是45-核苷酸(45-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的四十四钠盐。在一些实施方案中，ASO是46-核苷酸(46-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的四十五钠盐。在一些实施方案中，ASO是47-核苷酸(47-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的四十六钠盐。在一些实施方案中，ASO是48-核苷酸(48-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的四十七钠盐。在一些实施方案中，ASO是49-核苷酸(49-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的四十八钠盐。在一些实施方案中，ASO是50-核苷酸(50-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的四十九钠盐。在一些实施方案中，ASO是51-核苷酸(51-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的五十钠盐。
在一些实施方案中，ASO是2-核苷酸(2-聚体)的一钾盐。在一些实施方案中，ASO是3-核苷酸(3-聚体)的二钾盐。在一些实施方案中，ASO是4-核苷酸(4-聚体)的三钾盐。在一些实施方案中，ASO是5-核苷酸(5-聚体)的四钾盐。在一些实施方案中，ASO是6-核苷酸(6-聚体)的五钾盐。在一些实施方案中，ASO是7-核苷酸(7-聚体)的六钾盐。在一些实施方案中，ASO是8-核苷酸(8-聚体)的七钾盐。在一些实施方案中，ASO是9-核苷酸(9-聚体)的八钾盐。在一些实施方案中，ASO是10-核苷酸(10-聚体)的九钾盐。在一些实施方案中，ASO是11-核苷酸(11-聚体)的十钾盐。在一些实施方案中，ASO是12-核苷酸(12-聚体)的十一钾盐。在一些实施方案中，ASO是13-核苷酸(13-聚体)的十二钾盐。在一些实施方案中，ASO是14-核苷酸(14-聚体)的十三钾盐。在一些实施方案中，ASO是15-核苷酸(15-聚体)的十四钾盐。在一些实施方案中，ASO是16-核苷酸(16-聚体)的十五钾盐。在一些实施方案中，ASO是17-核苷酸(17-聚体)的十六钾盐。在一些实施方案中，ASO是18-核苷酸(18-聚体)的十七钾盐。在一些实施方案中，ASO是19-核苷酸(19-聚体)的十八钾盐。在一些实施方案中，ASO是20-核苷酸(20-聚体)的十九钾盐。在一些实施方案中，ASO是21-核苷酸(21-聚体)的二十钾盐。在一些实施方案中，ASO是22-核苷酸(22-聚体)的二十一钾盐。在一些实施方案中，ASO是23-核苷酸(23-聚体)的二十二钾盐。在一些实施方案中，ASO是24-核苷酸(24-聚体)的二十三钾盐。在一些实施方案中，ASO是25-核苷酸(25-聚体)的二十四钾盐。在一些实施方案中，ASO是26-核苷酸(26-聚体)的二十五钾盐。在一些实施方案中，ASO是27-核苷酸(27-聚体)的二十六钾盐。在一些实施方案中，ASO是28-核苷酸(28-聚体)的二十七钾盐。在一些实施方案中，ASO是29-核苷酸(29-聚体)的二十八钾盐。在一些实施方案中，ASO是30-核苷酸(30-聚体)的二十九钾盐。在一些实施方案中，ASO是31-核苷酸(31-聚体)的三十钾盐。在一些实施方案中，ASO是32-核苷酸(32-聚体)的三十一钾盐。在一些实施方案中，ASO是33-核苷酸(33-聚体)的三十二钾盐。在一些实施方案中，ASO是34-核苷酸(34-聚体)的三十三钾盐。在一些实施方案中，ASO是35-核苷酸(35-聚体)的三十四钾盐。在一些实施方案中，ASO是36-核苷酸(36-聚体)的三十五钾盐。在一些实施方案中，ASO是37-核苷酸(37-聚体)的三十六钾盐。在一些实施方案中，ASO是38-核苷酸(38-聚体)的三十七钾盐。在一些实施方案中，ASO是39-核苷酸(39-聚体)的三十八钾盐。在一些实施方案中，ASO是40-核苷酸(40-聚体)的三十九钾盐。在一些实施方案中，ASO是41-核苷酸(41-聚体)的四十钾盐。在一些实施方案中，ASO是42-核苷酸(42-聚体)的四十一钾盐。在一些实施方案中，ASO是43-核苷酸(43-聚体)的四十二钾盐。在一些实施方案中，ASO是44-核苷酸(44-聚体)的四十三钾盐。在一些实施方案中，ASO是45-核苷酸(45-聚体)的四十四钾盐。在一些实施方案中，ASO是46-核苷酸(46-聚体)的四十五钾盐。在一些实施方案中，ASO是47-核苷酸(47-聚体)的四十六钾盐。在一些实施方案中，ASO是48-核苷酸(48-聚体)的四十七钾盐。在一些实施方案中，ASO是49-核苷酸(49-聚体)的四十八钾盐。在一些实施方案中，ASO是50-核苷酸(50-聚体)的四十九钾盐。在一些实施方案中，ASO是51-核苷酸(51-聚体)的五十钾盐。
在一些实施方案中，ASO是2-核苷酸(2-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的一钾盐。在一些实施方案中，ASO是3-核苷酸(3-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的二钾盐。在一些实施方案中，ASO是4-核苷酸(4-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的三钾盐。在一些实施方案中，ASO是5-核苷酸(5-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的四钾盐。在一些实施方案中，ASO是6-核苷酸(6-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的五钾盐。在一些实施方案中，ASO是7-核苷酸(7-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的六钾盐。在一些实施方案中，ASO是8-核苷酸(8-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的七钾盐。在一些实施方案中，ASO是9-核苷酸(9-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的八钾盐。在一些实施方案中，ASO是10-核苷酸(10-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的九钾盐。在一些实施方案中，ASO是11-核苷酸(11-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的十钾盐。在一些实施方案中，ASO是12-核苷酸(12-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的十一钾盐。在一些实施方案中，ASO是13-核苷酸(13-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的十二钾盐。在一些实施方案中，ASO是14-核苷酸(14-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的十三钾盐。在一些实施方案中，ASO是15-核苷酸(15-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的十四钾盐。在一些实施方案中，ASO是16-核苷酸(16-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的十五钾盐。在一些实施方案中，ASO是17-核苷酸(17-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的十六钾盐。在一些实施方案中，ASO是18-核苷酸(18-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的十七钾盐。在一些实施方案中，ASO是19-核苷酸(19-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的十八钾盐。在一些实施方案中，ASO是20-核苷酸(20-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的十九钾盐。在一些实施方案中，ASO是21-核苷酸(21-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的二十钾盐。在一些实施方案中，ASO是22-核苷酸(22-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的二十一钾盐。在一些实施方案中，ASO是23-核苷酸(23-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的二十二钾盐。在一些实施方案中，ASO是24-核苷酸(24-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的二十三钾盐。在一些实施方案中，ASO是25-核苷酸(25-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的二十四钾盐。在一些实施方案中，ASO是26-核苷酸(26-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的二十五钾盐。在一些实施方案中，ASO是27-核苷酸(27-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的二十六钾盐。在一些实施方案中，ASO是28-核苷酸(28-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的二十七钾盐。在一些实施方案中，ASO是29-核苷酸(29-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的二十八钾盐。在一些实施方案中，ASO是30-核苷酸(30-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的二十九钾盐。在一些实施方案中，ASO是31-核苷酸(31-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的三十钾盐。在一些实施方案中，ASO是32-核苷酸(32-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的三十一钾盐。在一些实施方案中，ASO是33-核苷酸(33-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的三十二钾盐。在一些实施方案中，ASO是34-核苷酸(34-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的三十三钾盐。在一些实施方案中，ASO是35-核苷酸(35-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的三十四钾盐。在一些实施方案中，ASO是36-核苷酸(36-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的三十五钾盐。在一些实施方案中，ASO是37-核苷酸(37-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的三十六钾盐。在一些实施方案中，ASO是38-核苷酸(38-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的三十七钾盐。在一些实施方案中，ASO是39-核苷酸(39-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的三十八钾盐。在一些实施方案中，ASO是40-核苷酸(40-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的三十九钾盐。在一些实施方案中，ASO是41-核苷酸(41-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的四十钾盐。在一些实施方案中，ASO是42-核苷酸(42-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的四十一钾盐。在一些实施方案中，ASO是43-核苷酸(43-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的四十二钾盐。在一些实施方案中，ASO是44-核苷酸(44-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的四十三钾盐。在一些实施方案中，ASO是45-核苷酸(45-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的四十四钾盐。在一些实施方案中，ASO是46-核苷酸(46-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的四十五钾盐。在一些实施方案中，ASO是47-核苷酸(47-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的四十六钾盐。在一些实施方案中，ASO是48-核苷酸(48-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的四十七钾盐。在一些实施方案中，ASO是49-核苷酸(49-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的四十八钾盐。在一些实施方案中，ASO是50-核苷酸(50-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的四十九钾盐。在一些实施方案中，ASO是51-核苷酸(51-聚体)，完全硫代磷酸酯连接的寡核苷酸的五十钾盐。
SCN1A
SCN1A基因可以编码SCN1A(钠通道，电压门控，I型，α亚单位)蛋白，其也可以称为电压门控钠通道NaV1.1的α亚单位。如上所述，DS中的SCN1A突变分散在整个蛋白质中。在整个基因中，已经鉴定超过100个新的突变，并且从头开始出现更加变弱。这些包括截断(47％)、错义(43％)、缺失(3％)和剪接位点突变(7％)。携带SCN1A突变的对象的百分比在33％至100％之间变化。大多数突变是新的变化(88％)。
在一些实施方案中，本文描述的方法用于调节(例如增加或减少)功能性NaV1.1蛋白的产生。如本文所用，术语“功能性”是指消除治疗的病况(如Dravet综合征；全身性癫痫伴热性惊厥，2型；家族性热性惊厥，3A型；孤独症；癫痫性脑病，早期婴儿，13型；病态窦房结综合征1型；阿尔茨海默病；或SUDEP)的任何一种或多种症状所必需的NaV1.1蛋白的活性或功能的量。在一些实施方案中，所述方法用于增加部分功能性NaV1.1蛋白的产生。如本文所用，术语“部分功能性”是指NaV1.1蛋白的活性或功能的任何量，其小于消除或预防疾病或病况的一种或多种症状所必需的活性或功能的量。在一些实施方案中，部分功能性蛋白质或RNA将具有相对于全功能性蛋白质或RNA少至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％的活性。
在一些实施方案中，所述方法是通过具有编码NaV1.1蛋白的含NIE前mRNA的对象的细胞来提高NaV1.1蛋白的表达的方法，其中对象患有由NaV1.1蛋白的活性的量不足引起的Dravet综合征，并且其中NaV1.1蛋白的不足量由NaV1.1蛋白的单倍性不足引起。在此种实施方案中，对象具有编码功能性NaV1.1蛋白的第一等位基因和第二等位基因，且从该第二等位基因不产生NaV1.1蛋白。在另一个此种实施方案中，对象具有编码功能性NaV1.1蛋白的第一等位基因，和编码无功能性NaV1.1蛋白的第二等位基因。在另一个此种实施方案中，对象具有编码功能性NaV1.1蛋白的第一等位基因，和编码部分功能性NaV1.1蛋白的第二等位基因。在一些实施方案中，对象从一个等位基因表达部分功能性NaV1.1蛋白，其中部分功能性NaV1.1蛋白由移码突变、无义突变、错义突变或部分基因缺失引起。在一些实施方案中，对象从一个等位基因表达无功能性NaV1.1蛋白，其中无功能性NaV1.1蛋白由一个等位基因中的移码突变、无义突变、错义突变或部分基因缺失引起。在一些实施方案中，对象具有一个等位基因中的SCN1A全基因缺失。在这些实施方案中的任一个中，反义寡聚体结合到从第二等位基因转录的含NIE的前mRNA的靶向部分，从而诱导前mRNA的假外显子的外显子跳跃，并导致编码功能性NaV1.1蛋白的成熟mRNA水平提高，以及对象细胞中的NaV1.1蛋白的表达增加。
在本发明的实施方案中，对象可具有SCN1A中的突变。SCN1A的突变可遍布于所述基因中。NaV1.1蛋白可由四个结构域组成。所述SCN1A结构域可以具有跨膜区段。所述NaV1.1蛋白的突变可遍及所述蛋白质中出现。所述NaV1.1蛋白可由至少两种同种型组成。SCN1A的突变可包括R931C、R946C、M934I、R1648C或R1648H。在一些情况下，可以在NaV1.1蛋白的C末端观察到突变。NaV1.1蛋白也可在所述NaV1.1蛋白的前三个结构域的区段5和6之间的环中找到。在一些情况下，可以在NaV1.1蛋白的N末端观察到突变。SCN1A内的示例性突变包括但不限于R222X、R712X、I227S、R1892X、W952X、R1245X、R1407X、W1434R、c.4338+1G>A、51516X、L1670fsX1678或K1846fsX1856。本发明可靶向的突变也可编码离子通道的孔。
在一些实施方案中，本文所述的方法和组合物可用于治疗DS。在其他实施方案中，本文所述的方法和组合物可用于治疗婴儿期重度肌阵挛性癫痫(SMEI)。在其他实施方案中，本文所述的方法和组合物可用于治疗边缘型Dravet综合征；全身性癫痫伴热性惊厥，2型；家族性热性惊厥，3A型；家族性偏瘫性偏头痛，3型；孤独症；癫痫性脑病，早期婴儿，13型；病态窦房结综合征1型；阿尔茨海默病或SUDEP。
在相关实施方案中，该方法是使用ASO提高蛋白质或功能性RNA表达的方法。在一些实施方案中，ASO用于提高具有编码NaV1.1蛋白的含NIE前mRNA的对象的细胞中的NaV1.1蛋白表达，其中对象具有NaV1.1蛋白的量或功能中的缺陷，例如Dravet综合征(DS)(也称为SMEI)；婴儿重度肌阵挛性癫痫(SMEI)-交界性癫痫(SMEB)；发热性惊厥(FS)；全身性癫痫伴热性惊厥+(GEFS+)；癫痫性脑病，早期婴儿，13型；隐源性全身性癫痫；隐源性局灶性癫痫；肌阵挛性无定向癫痫；Lennox-Gastaut综合征；West综合征；特发性痉挛；早发性肌阵挛性脑病；进行性肌阵挛性癫痫；儿童交替性偏瘫；未分类癫痫性脑病；癫痫中意外猝死(SUDEP)；病态窦房结综合征1型；早期婴儿SCN1A脑病；早期婴儿癫痫性脑病(EIEE)；或孤独症。在一些实施方案中，ASO用于增加对象细胞中的NaV1.1蛋白的表达，其中对象具有SCN8A蛋白的量或功能中的缺陷，例如癫痫性脑病，早期婴儿，13型。在一些实施方案中，ASO用于增加对象细胞中的NaV1.1蛋白的表达，其中对象具有SCN5A蛋白的量或功能中的缺陷，例如病态窦房结综合征1型。
在一些实施方案中，本文所述的方法和组合物也可用于治疗边缘型SMEI。此外，本文所述的方法和组合物可用于治疗全身性癫痫伴热性惊厥+(GEFS+)。GEFS+可能与癫痫发作相关离子通道亚单位(如SCN1B或GABRG2)的突变有关。本文所述的方法和组合物也可用于治疗钠通道病。钠通道病可能与SCN1A的突变有关。钠通道病也可能与SCN1A的亚单位有关，如β亚单位，SCN1B。在一些情况下，也可使用本发明治疗与SCN1A突变相关的额外疾病。与SCN1A突变相关的相关SCN1A疾病包括但不限于非典型性先天性肌强直、高钾性周期性瘫痪和先天性副肌强直。
在一些实施方案中，可使用本文所述的方法和组合物治疗具有本领域已知且在文献(例如，Hamdan等人,2009,N.Engl.Med.360(6)pp.599,Mulley等人,2005,Hum.Muta.25535-542，其全部内容通过引用并入本文)中描述的任何SCN1A突变的对象。在一些实施方案中，突变在任何SCN1A内含子或外显子内。
在一些实施方案中，本文所述的ASO靶向编码引起疾病或病况的蛋白质的含NIE前mRNA转录物。在一些实施方案中，本文所述的ASO靶向编码不引起疾病或病况的蛋白质的含NIE前mRNA转录物。例如，因特定途径中第一蛋白质突变或缺乏而造成的疾病可通过靶向编码第二蛋白质的含NIE前mRNA，从而提高该第二蛋白质的产生来改善。在一些实施方案中，第二蛋白质的功能能够补偿第一蛋白质的突变或缺乏(其引起疾病或病况)。
在一些实施方案中，对象具有：
(a)第一突变等位基因，由其
(i)以与从野生型等位基因产生相比降低的水平产生NaV1.1蛋白，
(ii)以与等效野生型蛋白相比具有降低的功能形式产生NaV1.1蛋白或
(iii)未产生NaV1.1蛋白或功能性RNA；和
(b)第二突变等位基因，由其
(i)以与从野生型等位基因产生相比降低的水平产生NaV1.1蛋白，
(ii)以与等效野生型蛋白相比具有降低的功能形式产生NaV1.1蛋白或
(iii)未产生NaV1.1蛋白；并且
其中，从第一等位基因和/或第二等位基因转录含NIE的前mRNA。在这些实施方案中，ASO结合到从第一等位基因或第二等位基因转录的含NIE的前mRNA的靶向部分，从而诱导含NIE的前mRNA的假外显子的外显子跳跃，并导致编码NaV1.1蛋白的mRNA水平提高，且对象的细胞中的靶蛋白或功能性RNA的表达增加。在这些实施方案中，由于含NIE的前mRNA的假外显子的外显子跳跃而导致表达水平提高的靶蛋白或功能性RNA呈与等效野生型蛋白相比具有降低功能(部分功能性)的形式或者呈与等效野生型蛋白质相比具有完全功能(完全功能性)的形式。
在一些实施方案中，与对照细胞(例如，未经反义寡聚体处理的对照细胞或经未结合到含SCN1A NIE的前mRNA的靶向部分的反义寡聚体处理的对照细胞)中产生的编码NaV1.1蛋白的mRNA的量相比时，编码NaV1.1蛋白的mRNA的水平提高1.1至10倍。
在一些实施方案中，使用本发明的方法治疗的对象从一个等位基因表达突变体NaV1.1蛋白，其中突变体NaV1.1蛋白由移码突变、无义突变、错义突变或部分基因缺失引起，并且其中突变体NaV1.1蛋白导致NaV1.1活性水平升高。在一些实施方案中，由于移码突变、无义突变、错义突变或部分基因缺失导致，使用本发明的方法治疗的对象从一个等位基因表达升高量的NaV1.1蛋白。
在一些实施方案中，使用本发明的方法治疗的对象从一个等位基因表达部分功能性NaV1.1蛋白，其中部分功能性NaV1.1蛋白由移码突变、无义突变、错义突变或部分基因缺失引起。在一些实施方案中，使用本发明的方法治疗的对象从一个等位基因表达无功能性NaV1.1蛋白，其中无功能性NaV1.1蛋白由一个等位基因中的移码突变、无义突变、错义突变或部分基因缺失引起。在一些实施方案中，使用本发明的方法治疗的对象具有一个等位基因中的SCN1A全基因缺失。
在一些实施方案中，所述方法是通过具有编码NaV1.1蛋白的含NIE的前mRNA的对象的细胞减少NaV1.1蛋白表达的方法，并且其中对象具有NaV1.1中的功能获得性突变。在此种实施方案中，对象具有以升高的量产生NaV1.1蛋白的等位基因或编码诱导细胞中的NaV1.1活性增加的突变SCN1A的等位基因。在一些实施方案中，NaV1.1的活性增加特征在于由突变体NaV1.1通道介导的延长或接近持续的钠电流、快速失活的减慢、稳态失活的正向移动、重复刺激期间更高的通道可用性、非失活去极化诱导的持续钠电流增加、延迟进入失活、快速失活的加速恢复，和/或低温孵育或相互作用蛋白质的共表达对折叠缺陷的挽救。
靶转录物
可使用诸如刺激NIE外显子跳跃的ASO等治疗剂来诱导已鉴定的SCN1A-NIE前mRNA物种的剪接以产生功能性成熟Scn1a mRNA。诱导外显子跳跃可导致NMD通路的抑制。由此产生的成熟Scn1a mRNA可以在不激活NMD通路的情况下被正常翻译，从而增加患者细胞中NaV1.1蛋白的量，并缓解与SCN1A缺乏相关的病况(如Dravet综合征(DS)；全身性癫痫伴热性惊厥，2型；家族性热性惊厥，3A型；孤独症；癫痫性脑病，早期婴儿，13型；病态窦房结综合征1型；阿尔茨海默病；或SUDEP)的症状。
在各种实施方案中，本发明提供了可靶向SCN1A前mRNA转录物以调节(例如增强或抑制)剪接或蛋白表达水平的治疗剂。治疗剂可以是小分子、多核苷酸或多肽。在一些实施方案中，治疗剂是ASO。治疗剂(如ASO)可靶向SCN1A前mRNA上的不同区域或序列。在一些实施方案中，ASO靶向含有NIE的SCN1A前mRNA转录物。在一些实施方案中，ASO靶向SCN1A前mRNA转录物的NIE内的序列。在一些实施方案中，ASO靶向SCN1A前mRNA转录物的NIE(3'ss)的5'端上游(或5')序列。在一些实施方案中，ASO靶向SCN1A前mRNA转录物的NIE(5'ss)的3'端下游(或3')序列。在一些实施方案中，ASO靶向SCN1A前mRNA转录物的NIE的5'端侧翼的内含子内的序列。在一些实施方案中，ASO靶向SCN1A前mRNA转录物的NIE的3'端侧翼的内含子内的序列。在一些实施方案中，ASO靶向包含SCN1A前mRNA转录物的NIE内含子边界的序列。NIE内含子边界可以指内含子序列和NIE区域的接界。内含子序列可以位于NIE的5'端或3'端的两侧。在一些实施方案中，ASO靶向SCN1A前mRNA转录物的外显子内的序列。在一些实施方案中，ASO靶向SCN1A前mRNA转录物的内含子内的序列。在一些实施方案中，ASO靶向包含部分内含子和部分外显子的序列。
在一些实施方案中，本文所述的治疗剂调节参与含有NMD外显子的前mRNA的剪接的因子的结合。在一些实施方案中，本文所述的治疗剂干扰参与含有NMD外显子的前mRNA的剪接的因子的结合。在一些实施方案中，本文所述的治疗剂防止参与含有NMD外显子的前mRNA的剪接的因子的结合。在一些实施方案中，治疗剂靶向位于包含NMD外显子并编码NaV1.1的前mRNA的两个规范外显子区域之间的内含子区域中的靶向部分，并且其中内含子区域包含NMD外显子。在一些实施方案中，治疗剂靶向与NMD外显子至少部分重叠的靶向部分。在一些实施方案中，治疗剂靶向与NMD外显子上游的内含子至少部分重叠的靶向部分。在一些实施方案中，治疗剂靶向NMD外显子内的靶向部分。
在一些实施方案中，治疗剂靶向包含NMD外显子的至少约5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30个或更多个连续核苷酸的靶向部分。在一些实施方案中，治疗剂靶向包含NMD外显子的至多约5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30个或更多个连续核苷酸的靶向部分。在一些实施方案中，治疗剂靶向包含NMD外显子的约5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30个或更多个连续核苷酸的靶向部分。
在一些实施方案中，治疗剂靶向邻近NMD外显子的靶向部分。
在一些实施方案中，ASO靶向NIE的5'端上游(或5')的约4至约300个核苷酸的序列。在一些实施方案中，ASO靶向NIE区域的5'端上游(或5')的约1至约20个核苷酸、约20至约50个核苷酸、约50至约100个核苷酸、约100至约150个核苷酸、约150至约200个核苷酸、约200至约250个核苷酸、约250至约300、约250至约300个核苷酸、约350至约400个核苷酸、约450至约500个核苷酸、约550至约600个核苷酸、约650至约700个核苷酸、约750至约800个核苷酸、约850至约900个核苷酸、约950至约1000个核苷酸、约1050至约1100个核苷酸、约1150至约1200个核苷酸、约1250至约1300个核苷酸、约1350至约1400个核苷酸或约1450至约1500个核苷酸的序列。在一些实施方案中，ASO可靶向NIE的5'端上游的超过300个核苷酸的序列。在一些实施方案中，ASO靶向NIE的3'端下游(或3')的约4至约300个核苷酸的序列。在一些实施方案中，ASO靶向NIE的3'端下游的约1至约20个核苷酸、约20至约50个核苷酸、约50至约100个核苷酸、约100至约150个核苷酸、约150至约200个核苷酸、约200至约250个核苷酸、约250至约300个核苷酸、约350至约400个核苷酸、约450至约500个核苷酸、约550至约600个核苷酸、约650至约700个核苷酸、约750至约800个核苷酸、约850至约900个核苷酸、约950至约1000个核苷酸、约1050至约1100个核苷酸、约1150至约1200个核苷酸、约1250至约1300个核苷酸、约1350至约1400个核苷酸或约1450至约1500个核苷酸的序列。在一些实施方案中，ASO靶向NIE的3'端下游的超过300个核苷酸的序列。
在一些实施方案中，ASO靶向NIE的5'端上游(或5')的约4至约300个核苷酸的序列。在一些实施方案中，ASO靶向NIE区域的5'端上游(或5')的至少约1个核苷酸、至少约10个核苷酸、至少约20个核苷酸、至少约50个核苷酸、至少约80个核苷酸、至少约85个核苷酸、至少约90个核苷酸、至少约95个核苷酸、至少约96个核苷酸、至少约97个核苷酸、至少约98个核苷酸、至少约99个核苷酸、至少约100个核苷酸、至少约101个核苷酸、至少约102个核苷酸、至少约103个核苷酸、至少约104个核苷酸、至少约105个核苷酸、至少约110个核苷酸、至少约120个核苷酸、至少约150个核苷酸、至少约200个核苷酸、至少约300个核苷酸、至少约400个核苷酸、至少约500个核苷酸、至少约600个核苷酸、至少约700个核苷酸、至少约800个核苷酸、至少约900个核苷酸或至少约1000个核苷酸的序列。在一些实施方案中，ASO靶向NIE的3'端下游(或3')的约4至约300个核苷酸的序列。在一些实施方案中，ASO靶向NIE的3'端下游的至少约1个核苷酸、至少约10个核苷酸、至少约20个核苷酸、至少约50个核苷酸、至少约80个核苷酸、至少约85个核苷酸、至少约90个核苷酸、至少约95个核苷酸、至少约96个核苷酸、至少约97个核苷酸、至少约98个核苷酸、至少约99个核苷酸、至少约100个核苷酸、至少约101个核苷酸、至少约102个核苷酸、至少约103个核苷酸、至少约104个核苷酸、至少约105个核苷酸、至少约110个核苷酸、至少约120个核苷酸、至少约150个核苷酸、至少约200个核苷酸、至少约300个核苷酸、至少约400个核苷酸、至少约500个核苷酸、至少约600个核苷酸、至少约700个核苷酸、至少约800个核苷酸、至少约900个核苷酸或至少约1000个核苷酸的序列。在一些实施方案中，ASO靶向NIE的3'端下游的超过300个核苷酸的序列。
在一些实施方案中，ASO靶向NIE的5'端上游(或5')的约4至约300个核苷酸的序列。在一些实施方案中，ASO靶向NIE区域的5'端上游(或5')的至多约10个核苷酸、至多约20个核苷酸、至多约50个核苷酸、至多约80个核苷酸、至多约85个核苷酸、至多约90个核苷酸、至多约95个核苷酸、至多约96个核苷酸、至多约97个核苷酸、至多约98个核苷酸、至多约99个核苷酸、至多约100个核苷酸、至多约101个核苷酸、至多约102个核苷酸、至多约103个核苷酸、至多约104个核苷酸、至多约105个核苷酸、至多约110个核苷酸、至多约120个核苷酸、至多约150个核苷酸、至多约200个核苷酸、至多约300个核苷酸、至多约400个核苷酸、至多约500个核苷酸、至多约600个核苷酸、至多约700个核苷酸、至多约800个核苷酸、至多约900个核苷酸、至多约1000个核苷酸、至多约1100个核苷酸、至多约1200个核苷酸、至多约1300个核苷酸、至多约1400个核苷酸或至多约1500个核苷酸的序列。在一些实施方案中，ASO靶向NIE的3'端下游(或3')的约4至约300个核苷酸的序列。在一些实施方案中，ASO靶向NIE的3'端下游的至多约10个核苷酸、至多约20个核苷酸、至多约50个核苷酸、至多约80个核苷酸、至多约85个核苷酸、至多约90个核苷酸、至多约95个核苷酸、至多约96个核苷酸、至多约97个核苷酸、至多约98个核苷酸、至多约99个核苷酸、至多约100个核苷酸、至多约101个核苷酸、至多约102个核苷酸、至多约103个核苷酸、至多约104个核苷酸、至多约105个核苷酸、至多约110个核苷酸、至多约120个核苷酸、至多约150个核苷酸、至多约200个核苷酸、至多约300个核苷酸、至多约400个核苷酸、至多约500个核苷酸、至多约600个核苷酸、至多约700个核苷酸、至多约800个核苷酸、至多约900个核苷酸或至多约1000个核苷酸、至多约1100个核苷酸、至多约1200个核苷酸、至多约1300个核苷酸、至多约1400个核苷酸或至多约1500个核苷酸的序列。在一些实施方案中，ASO靶向NIE的3'端下游的超过300个核苷酸的序列。
在一些实施方案中，本文所述的NIE位于GRCh37/hg19:chr2:166,863,740和GRCh37/hg19:chr2:166,863,803之间，如在2图中所述。在一些实施方案中，NIE的5'端位于GRCh37/hg19:chr2:166,863,803。在一些实施方案中，NIE的3'端位于GRCh37/hg19:chr2:166,863,740。
在一些实施方案中，ASO靶向基因组位点GRCh37/hg19:chr2:166,863,803上游(或5')的约4至约300个核苷酸的序列。在一些实施方案中，ASO靶向基因组位点GRCh37/hg19:chr2:166,863,803上游(或5')的约1至约20个核苷酸、约20至约50个核苷酸、约50至约100个核苷酸、约100至约150个核苷酸、约150至约200个核苷酸、约200至约250个核苷酸、约250至约300、约250至约300个核苷酸、约350至约400个核苷酸、约450至约500个核苷酸、约550至约600个核苷酸、约650至约700个核苷酸、约750至约800个核苷酸、约850至约900个核苷酸、约950至约1000个核苷酸、约1050至约1100个核苷酸、约1150至约1200个核苷酸、约1250至约1300个核苷酸、约1350至约1400个核苷酸或约1450至约1500个核苷酸的序列。在一些实施方案中，ASO可靶向基因组位点GRCh37/hg19:chr2:166,863,803上游的超过300个核苷酸的序列。在一些实施方案中，ASO靶向GRCh37/hg19:chr2:166,863,740下游(或3')的约4至约300个核苷酸的序列。在一些实施方案中，ASO靶向GRCh37/hg19:chr2:166,863,740下游的约1至约20个核苷酸、约20至约50个核苷酸、约50至约100个核苷酸、约100至约150个核苷酸、约150至约200个核苷酸、约200至约250个核苷酸、约250至约300个核苷酸、约350至约400个核苷酸、约450至约500个核苷酸、约550至约600个核苷酸、约650至约700个核苷酸、约750至约800个核苷酸、约850至约900个核苷酸、约950至约1000个核苷酸、约1050至约1100个核苷酸、约1150至约1200个核苷酸、约1250至约1300个核苷酸、约1350至约1400个核苷酸或约1450至约1500个核苷酸的序列。在一些实施方案中，ASO靶向GRCh37/hg19:chr2:166,863,740下游的超过300个核苷酸的序列。
在一些实施方案中，ASO靶向基因组位点GRCh37/hg19:chr2:166,863,803上游(或5')的约4至约300个核苷酸的序列。在一些实施方案中，ASO靶向基因组位点GRCh37/hg19:chr2:166,863,803上游(或5')的至少约1个核苷酸、至少约10个核苷酸、至少约20个核苷酸、至少约50个核苷酸、至少约80个核苷酸、至少约85个核苷酸、至少约90个核苷酸、至少约95个核苷酸、至少约96个核苷酸、至少约97个核苷酸、至少约98个核苷酸、至少约99个核苷酸、至少约100个核苷酸、至少约101个核苷酸、至少约102个核苷酸、至少约103个核苷酸、至少约104个核苷酸、至少约105个核苷酸、至少约110个核苷酸、至少约120个核苷酸、至少约150个核苷酸、至少约200个核苷酸、至少约300个核苷酸、至少约400个核苷酸、至少约500个核苷酸、至少约600个核苷酸、至少约700个核苷酸、至少约800个核苷酸、至少约900个核苷酸或至少约1000个核苷酸的序列。在一些实施方案中，ASO靶向GRCh37/hg19:chr2:166,863,740下游(或3')的约4至约300个核苷酸的序列。在一些实施方案中，ASO靶向GRCh37/hg19:chr2:166,863,740下游的至少约1个核苷酸、至少约10个核苷酸、至少约20个核苷酸、至少约50个核苷酸、至少约80个核苷酸、至少约85个核苷酸、至少约90个核苷酸、至少约95个核苷酸、至少约96个核苷酸、至少约97个核苷酸、至少约98个核苷酸、至少约99个核苷酸、至少约100个核苷酸、至少约101个核苷酸、至少约102个核苷酸、至少约103个核苷酸、至少约104个核苷酸、至少约105个核苷酸、至少约110个核苷酸、至少约120个核苷酸、至少约150个核苷酸、至少约200个核苷酸、至少约300个核苷酸、至少约400个核苷酸、至少约500个核苷酸、至少约600个核苷酸、至少约700个核苷酸、至少约800个核苷酸、至少约900个核苷酸或至少约1000个核苷酸的序列。在一些实施方案中，ASO靶向GRCh37/hg19:chr2:166,863,740下游的超过300个核苷酸的序列。
在一些实施方案中，ASO靶向基因组位点GRCh37/hg19:chr2:166,863,803上游(或5')的约4至约300个核苷酸的序列。在一些实施方案中，ASO靶向基因组位点GRCh37/hg19:chr2:166,863,803上游(或5')的至多约10个核苷酸、至多约20个核苷酸、至多约50个核苷酸、至多约80个核苷酸、至多约85个核苷酸、至多约90个核苷酸、至多约95个核苷酸、至多约96个核苷酸、至多约97个核苷酸、至多约98个核苷酸、至多约99个核苷酸、至多约100个核苷酸、至多约101个核苷酸、至多约102个核苷酸、至多约103个核苷酸、至多约104个核苷酸、至多约105个核苷酸、至多约110个核苷酸、至多约120个核苷酸、至多约150个核苷酸、至多约200个核苷酸、至多约300个核苷酸、至多约400个核苷酸、至多约500个核苷酸、至多约600个核苷酸、至多约700个核苷酸、至多约800个核苷酸、至多约900个核苷酸、至多约1000个核苷酸、至多约1100个核苷酸、至多约1200个核苷酸、至多约1300个核苷酸、至多约1400个核苷酸或至多约1500个核苷酸的序列。在一些实施方案中，ASO靶向GRCh37/hg19:chr2:166,863,740下游(或3')的约4至约300个核苷酸的序列。在一些实施方案中，ASO靶向GRCh37/hg19:chr2:166,863,740下游的至多约10个核苷酸、至多约20个核苷酸、至多约50个核苷酸、至多约80个核苷酸、至多约85个核苷酸、至多约90个核苷酸、至多约95个核苷酸、至多约96个核苷酸、至多约97个核苷酸、至多约98个核苷酸、至多约99个核苷酸、至多约100个核苷酸、至多约101个核苷酸、至多约102个核苷酸、至多约103个核苷酸、至多约104个核苷酸、至多约105个核苷酸、至多约110个核苷酸、至多约120个核苷酸、至多约150个核苷酸、至多约200个核苷酸、至多约300个核苷酸、至多约400个核苷酸、至多约500个核苷酸、至多约600个核苷酸、至多约700个核苷酸、至多约800个核苷酸、至多约900个核苷酸或至多约1000个核苷酸、至多约1100个核苷酸、至多约1200个核苷酸、至多约1300个核苷酸、至多约1400个核苷酸或至多约1500个核苷酸的序列。在一些实施方案中，ASO靶向GRCh37/hg19:chr2:166,863,740下游的超过300个核苷酸的序列。
分析SCN1A基因(SEQ ID NO.1)的NIE并观察内含子20(SEQ ID NO.4)的部分(在整个本发明中，该部分称为外显子20x)的包含情况。在一些实施方案中，本文公开的ASO靶向从SCN1A基因组序列转录的含NIE的前mRNA(SEQ ID NO.2)。在一些实施方案中，ASO靶向包含内含子20的部分的来自SCN1A基因组序列的含NIE的前mRNA转录物。在一些实施方案中，ASO靶向包含外显子20x(SEQ ID NO.6)的来自SCN1A基因组序列的含NIE的前mRNA转录物。在一些实施方案中，ASO靶向SEQ ID NO.2或12的含NIE的前mRNA转录物。在一些实施方案中，ASO靶向SEQ ID NO.2或12的含NIE的前mRNA转录物。在一些实施方案中，ASO靶向包含外显子20x(SEQ ID NO.10)的SEQ ID NO.2的含NIE的前mRNA转录物。在一些实施方案中，本文公开的ASO靶向SCN1A前mRNA序列(SEQ ID NO.2或12)。在一些实施方案中，ASO靶向含NIE(SEQ ID NO.10或20)的SCN1A前mRNA序列。在一些实施方案中，ASO靶向根据SEQ ID NO:7-10或17-20中的任一个的SCN1A前mRNA序列。在一些实施方案中，ASO具有根据SEQ ID NO:21-67中的任一个的序列。在一些实施方案中，ASO具有根据SEQ ID NO:68-114中的任一个的序列。在一些实施方案中，ASO具有根据SEQ ID NO:115-209中的任一个的序列。在一些实施方案中，ASO具有根据SEQ ID NO:210-256中的任一个的序列。在一些实施方案中，ASO具有根据SEQ ID NO:257-303中的任一个的序列。在一些实施方案中，ASO具有根据SEQ IDNO:304-341中的任一个的序列。在一些实施方案中，ASO具有根据SEQ ID NO:342-379中的任一个的序列。在一些实施方案中，ASO具有根据SEQ ID NO:380-1099中的任一个的序列。在一些实施方案中，ASO具有根据SEQ ID NO:304-1099中的任一个的序列。在一些实施方案中，ASO具有根据表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8a和8b中列出的序列中的任一个的序列。
在一些实施方案中，含SCN1A NIE的前mRNA转录物由与SEQ ID NO:1或11具有至少约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的基因序列所编码。在一些实施方案中，该SCN1A NIE前mRNA转录物包含与SEQ ID NO:2-10和12-20中的任一个具有至少约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的序列。
在一些实施方案中，ASO靶向包含NIE外显子20x的含SCN1A NIE的前mRNA的外显子20。在一些实施方案中，ASO靶向NIE外显子20x下游(或3')的外显子21序列。在一些实施方案中，ASO靶向外显子20x的5'端上游(或5')的约4至约300个核苷酸的序列。在一些实施方案中，ASO靶向外显子20x的3'端下游(或3')的约4至约300个核苷酸的序列。在一些实施方案中，ASO具有根据SEQ ID NO:21-67中的任一个的序列。在一些实施方案中，ASO具有根据SEQ ID NO:210-256中的任一个的序列。在一些实施方案中，ASO具有根据SEQ ID NO:380-1099中的任一个的序列。在一些实施方案中，ASO具有根据SEQ ID NO:304-1099中的任一个的序列。在一些实施方案中，ASO具有根据表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8a和8b中列出的序列中的任一个的序列。
在一些实施方案中，ASO靶向NIE的5'端上游的序列。例如，靶向NIE的5'端上游的序列(例如，人类SCN1A中的外显子20x或小鼠SCN1A中的外显子21x)的ASO可包含与SEQ IDNO:21-38中的任一个具有至少80％、85％、90％、95％、97％或100％序列同一性的序列。又例如，靶向NIE的5'端上游的序列(例如，人类SCN1A中的外显子20x或小鼠SCN1A中的外显子21x)的ASO可包含与SEQ ID NO:68-85中的任一个具有至少80％、85％、90％、95％、97％或100％序列同一性的序列。在一些实施方案中，ASO靶向包含外显子-内含子边界(或接界)的序列。例如，靶向包含外显子-内含子边界的序列的ASO可包括与SEQ ID NO:39-41、51、52、228-230、240或241中的任一个具有至少80％、85％、90％、95％、97％或100％序列同一性的序列。又例如，靶向包含外显子-内含子边界的序列的ASO可包括与SEQ ID NO:86-88和98-99中的任一个具有至少80％、85％、90％、95％、97％或100％序列同一性的序列。在一些实施方案中，ASO靶向NIE的3'端下游的序列。例如，靶向NIE的3'端下游的序列(例如，人类SCN1A中的外显子20x或小鼠SCN1A中的外显子21x)的ASO可包含与SEQ ID NO:53-67中的任一个具有至少80％、85％、90％、95％、97％或100％序列同一性的序列。又例如，靶向NIE的3'端下游的序列(例如，人类SCN1A中的外显子20x或小鼠SCN1A中的外显子21x)的ASO可包含与SEQ ID NO:100-114中的任一个具有至少80％、85％、90％、95％、97％或100％序列同一性的序列。在一些实施方案中，ASO靶向NIE内的序列。例如，靶向NIE内的序列(例如，人类SCN1A中的外显子20x或小鼠SCN1A中的外显子21x)的ASO可包含与SEQ ID NO:42-50或231-239中的任一个具有至少80％、85％、90％、95％、97％或100％序列同一性的序列。又例如，靶向NIE内的序列(例如，人类SCN1A中的外显子20x或小鼠SCN1A中的外显子21x)的ASO可包含与SEQ ID NO:89-97中的任一个具有至少80％、85％、90％、95％、97％或100％序列同一性的序列。
在一些实施方案中，ASO靶向包含外显子20x的含SCN1A NIE的前mRNA中的外显子20x。在一些实施方案中，该ASO靶向SCN1A前mRNA的外显子20x的5'末端下游(或3')的外显子20x序列。在一些实施方案中，该ASO靶向SCN1A前mRNA的外显子20x的3'末端上游(或5')的外显子20x序列。
在一些实施方案中，含SCN1A NIE的前mRNA转录物包含与SEQ ID NO:2、7-10、12和17-20中的任一个具有至少约80％、85％、90％、95％、97％或100％序列同一性的序列。在一些实施方案中，含SCN1A NIE的前mRNA转录物由与SEQ ID NO:1、3-6、11和13-16中的任一个具有至少约80％、85％、90％、95％、97％或100％序列同一性的序列编码。在一些实施方案中，含有NMD外显子并编码NaV1.1的前mRNA的靶向部分包含与包含SEQ ID NO:2、7-10、12和17-20的至少8个连续核酸的区域具有至少80％、85％、90％、95％、97％或100％序列同一性的序列。
在一些实施方案中，ASO靶向含NIE的前mRNA转录物。在一些实施方案中，ASO靶向包含NIE的含NIE的前mRNA转录物。在一些实施方案中，ASO靶向包含外显子20x的含NIE的前mRNA转录物。在一些实施方案中，本文公开的ASO靶向SCN1A前mRNA序列。在一些实施方案中，ASO靶向包含NIE的SCN1A前mRNA序列。在一些实施方案中，ASO靶向SCN1A前mRNA序列。在一些实施方案中，ASO具有根据SEQ ID NO:21-67、210-256或304-1099中的任一个的序列。又例如，ASO包含与SEQ ID NO:21-67、210-256或304-1099中的任一个具有至少80％、85％、90％、95％、97％或100％序列同一性的序列。又例如，ASO包含与表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8a和8b中列出的序列中的任一个具有至少80％、85％、90％、95％、97％或100％序列同一性的序列。
在一些实施方案中，ASO靶向包含NIE外显子20x的含SCN1A NIE的前mRNA的外显子20。在一些实施方案中，ASO靶向NIE外显子20x下游(或3')的外显子21序列。在一些实施方案中，ASO靶向外显子20x的5'端上游(或5')的约4至约300个核苷酸的序列。在一些实施方案中，ASO靶向外显子20x的3'端下游(或3')的约4至约300个核苷酸的序列。
在一些实施方案中，ASO靶向NIE的5'端上游的序列。在一些实施方案中，ASO靶向包含外显子-内含子边界(或接界)的序列。在一些实施方案中，ASO靶向NIE(例如，人类SCN1A中的外显子20x或小鼠SCN1A中的外显子21x)的3'端下游的序列。在一些实施方案中，ASO靶向NIE内的序列。
在一些实施方案中，ASO靶向包含外显子20x的含SCN1A NIE的前mRNA的外显子20x。在一些实施方案中，ASO靶向SCN1A前mRNA的外显子20x的5'端下游(或3')的外显子20x序列。在一些实施方案中，ASO靶向SCN1A前mRNA的外显子20x的3'端上游(或5')的外显子20x序列。
在一些实施方案中，含SCN1A NIE的前mRNA的靶向部分在内含子1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25(对应于NM_006920处的mRNA序列的内含子编号)中。在一些实施方案中，ASO与NIE前mRNA的靶向部分的杂交导致内含子1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25内的NIE的至少一个的外显子跳跃，并且随后增加NaV1.1蛋白产生。在一些实施方案中，ASO与NIE前mRNA的靶向部分的杂交抑制或阻断内含子1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25内的NIE的至少一个的外显子跳跃，并且随后降低NaV1.1蛋白产生。在一些实施方案中，含SCN1A NIE的前mRNA的靶向部分在内含子20中。本领域技术人员可以基于本文提供的内含子序列或使用参考NM_006920、NM_001202435、NM_001165964或NM_001165963处的mRNA序列提供的编号来确定任何同种型中的相应内含子编号。本领域技术人员还可以基于本文提供的内含子序列或使用参考NM_006920、NM_001202435、NM_001165964或NM_001165963处的mRNA序列提供的内含子编号，使用本发明的方法确定用于靶向的任何SCN1A同种型中的侧翼外显子序列。
治疗剂
在本公开的多个实施方案中，提供了包含治疗剂的组合物和方法，以调节SCN1A的蛋白质表达水平。在一些实施方案中，本文提供了用来调节SCNA1前mRNA的可变剪接的组合物和方法。在一些实施方案中，本文提供了用来在SCN1A前mRNA的剪接中诱导外显子跳跃，例如在SCN1A前mRNA的剪接期间诱导伪外显子的跨越的组合物和方法。在其他实施方案中，治疗剂可用来诱导外显子的包含，以便降低蛋白质表达水平。
在一些实施方案中，本文公开的治疗剂是小分子、多肽或多核酸聚合物。在一些情况下，该治疗剂是小分子。在一些情况下，该治疗剂是多肽。在一些情况下，该治疗剂是多核酸聚合物。在一些情况下，该治疗剂是阻抑剂。在一些情况下，该治疗剂是增强剂。
本文公开的治疗剂可以是NIE阻抑剂。治疗剂可包含多核酸聚合物。
根据本发明的一个方面，本文提供了一种治疗或预防与功能性NaV1.1蛋白缺乏相关的病况的方法，包括向对象施用NIE阻抑剂以提高功能性NaV1.1蛋白水平，其中该阻抑剂结合到前mRNA转录物的区域以减少成熟转录物中NIE的包含。例如，本文提供了一种治疗或预防与功能性NaV1.1蛋白缺乏相关的病况的方法，包括向对象施用NIE阻抑剂以提高功能性NaV1.1蛋白水平，其中该阻抑剂结合到前mRNA转录物的包含NIE的内含子(例如，人类SCN1A基因中的内含子20)的区域或同一内含子中的NIE激活调节序列。
该多核苷酸聚合物的序列可与mRNA转录物的靶序列(例如，部分经加工mRNA转录物)至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％互补。该多核酸聚合物的序列可与前mRNA转录物的靶序列100％互补。
该多核酸聚合物的序列可与前mRNA转录物的靶序列具有4个或更少错配。该多核酸聚合物的序列可与前mRNA转录物的靶序列具有3个或更少错配。该多核酸聚合物的序列可与前mRNA转录物的靶序列具有2个或更少错配。该多核酸聚合物的序列可与前mRNA转录物的靶序列具有1个或更少错配。该多核酸聚合物的序列可与前mRNA转录物的靶序列没有错配。
该多核酸聚合物可以与前mRNA转录物的靶序列特异性杂交。例如，该多核酸聚合物可以与前mRNA转录物的靶序列具有91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或100％的序列互补性。该杂交可以在高严格性杂交条件下。
该多核酸聚合物可以具有与选自SEQ ID NO:21-67的序列具有至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％序列同一性的序列。该多核酸聚合物可以具有与选自SEQ ID NO:21-67的序列具有100％序列同一性的序列。在一些情况下，该多核酸聚合物可以具有与选自SEQ IDNO:68-114的序列具有至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％序列同一性的序列。在一些情况下，该多核酸聚合物可以具有与选自SEQ ID NO:68-114的序列具有100％序列同一性的序列。
在一些情况下，多核苷酸聚合物可具有与选自SEQ ID NO:21-67、210-256或304-1099的序列具有至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％的序列同一性的序列。在一些情况下，多核苷酸聚合物可具有与选自SEQ ID NO:21-67、210-256或304-1099的序列具有100％的序列同一性的序列。在一些情况下，多核苷酸聚合物可具有与选自表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8a和8b中列出的序列具有100％序列同一性的序列。
在其中NIE阻抑剂包含多核酸聚合物的实施方案中，该多核酸聚合物的长度可以是约50个核苷酸。该多核酸聚合物的长度可以是约45个核苷酸。该多核酸聚合物的长度可以是约40个核苷酸。该多核酸聚合物的长度可以是约35个核苷酸。该多核酸聚合物的长度可以是约30个核苷酸。该多核酸聚合物的长度可以是约24个核苷酸。该多核酸聚合物的长度可以是约25个核苷酸。该多核酸聚合物的长度可以是约20个核苷酸。该多核酸聚合物的长度可以是约19个核苷酸。该多核酸聚合物的长度可以是约18个核苷酸。该多核酸聚合物的长度可以是约17个核苷酸。该多核酸聚合物的长度可以是约16个核苷酸。该多核酸聚合物的长度可以是约15个核苷酸。该多核酸聚合物的长度可以是约14个核苷酸。
该多核酸聚合物的长度可以是约13个核苷酸。该多核酸聚合物的长度可以是约12个核苷酸。该多核酸聚合物的长度可以是约11个核苷酸。该多核酸聚合物的长度可以是约10个核苷酸。该多核酸聚合物的长度可以是约10个至约50个核苷酸。该多核酸聚合物的长度可以是约10个至约45个核苷酸。该多核酸聚合物的长度可以是约10个至约40个核苷酸。该多核酸聚合物的长度可以是约10个至约35个核苷酸。该多核酸聚合物的长度可以是约10个至约30个核苷酸。该多核酸聚合物的长度可以是约10个至约25个核苷酸。该多核酸聚合物的长度可以是约10个至约20个核苷酸。该多核酸聚合物的长度可以是约15个至约25个核苷酸。该多核酸聚合物的长度可以是约15个至约30个核苷酸。该多核酸聚合物的长度可以是约12个至约30个核苷酸。
该多核酸聚合物的序列可以与mRNA转录物的靶序列，例如部分经加工mRNA转录物至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％互补。该多核酸聚合物的序列可以与前mRNA转录物的靶序列100％互补。
如本文在多个实例中所述，人SCN1A基因中的外显子20x等同于小鼠SCN1A基因中的外显子21x。
在本公开的范围内还包括在NMD抑制剂如环己酰亚胺的存在下鉴定或验证诱导NMD的外显子的方法。
当提及多核酸聚合物序列时，技术人员将理解，在该序列中可以容许一个或多个置换，任选地两个置换，以使其保持与靶序列杂交的能力；或者在该置换处于靶序列中的情况下，保持被识别为靶序列的能力。对于序列同一性可以通过BLAST序列比对，使用标准/默认参数，来确定。例如，根据本公开，该序列可以具有99％的同一性并且仍然起作用。在其他实施方案中，根据本公开，该序列可以具有98％的同一性并且仍然起作用。在另一个实施方案中，根据本公开，该序列可以具有95％的同一性并且仍然起作用。在另一个实施方案中，根据本公开，该序列可以具有90％的同一性并且仍然起作用。
药物组合物
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在人工脑脊髓液(aCSF)溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在等渗溶液中。
如本文所用，术语“人工脑脊液(aCSF)”是指通常用作向中枢神经系统(CNS)施用药剂的媒介物溶液的生物缓冲液。例如，aCSF与内源性CSF的电解质浓度和生理相容性密切匹配，以通过维持体内平衡、渗透压和生理水平的pH，为神经元组织创造重要的环境。
如本文所用，术语“等渗溶液”是指含有类似于血流中的血浆的电解质平衡的溶液。向对象或患者施用等渗溶液可以增加对象或患者的体液体积，且没有体液转移。示例性等渗溶液包括但不限于0.9％生理盐水、乳酸林格溶液、林格溶液、勃脉力和5％葡萄糖水溶液(D5W)。
如本文所用，术语“低渗溶液”是指电解质浓度小于血浆浓度的溶液。例如，通过静脉途径施用低渗溶液可能导致体液从血流转移到间质和细胞内空间中的较高浓度的区域。示例性低渗溶液包括但不限于0.45％生理盐水(半生理盐水)、0.33％NaCl溶液、0.225％NaCl溶液和2.5％葡萄糖水溶液(D2.5W)。
如本文所用，术语“高渗溶液”是指电解质浓度大于血浆浓度的溶液。例如，通过静脉途径施用高渗溶液，可能将体液从间质和细胞内空间转移到血流中，以稀释电解质。示例性高渗溶液包括但不限于3％NaCl溶液、5％葡萄糖的0.45％NaCl溶液(D5 1/2Ns)、5％葡萄糖)、5％葡萄糖的0.9％生理盐水(D5NS)、5％葡萄糖的乳酸林格溶液(D5LR)、10％葡萄糖的水溶液(D10W)、20％葡萄糖的水溶液(D20W)和50％葡萄糖的水溶液(D50W)。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在磷酸盐缓冲(pH 6.6-7.6)溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在磷酸盐缓冲(pH 6.0-8.0)溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在磷酸盐缓冲(pH 5.0-8.0)溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在pH 4.5-8.5、pH 4.6-8.5、pH4.7-8.5、pH 4.8-8.5、pH 4.9-8.5、pH5.0-8.5、pH 5.1-8.5、pH5.2-8.5、pH 5.3-8.5、pH5.4-8.5、pH 5.5-8.5、pH5.6-8.5、pH 5.7-8.5、pH 5.8-8.5、H 5.9-8.5、pH 6.0-8.5、pH6.1-8.5、pH 6.2-8.5、pH 6.3-8.5、pH 6.4-8.5、pH 6.5-8.5、pH 6.6-8.5、pH 6.7-8.5、pH6.8-8.5、pH 6.9-8.5、pH 7.0-8.5、pH 7.1-8.5、pH 7.2-8.5、pH 7.3-8.5、pH 7.4-8.5、pH7.5-8.5、pH 7.6-8.5、pH 7.7-8.5、pH 7.8-8.5、pH 7.9-8.5、pH 8.0-8.5、pH 8.1-8.5、pH8.2-8.5、pH 8.3-8.5或pH 8.4-8.5的磷酸盐缓冲溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在具有pH 4.5-8.3、pH 4.5-8.2、pH 4.5-8.1、pH 4.5-8.0、pH 4.5-7.9、pH 4.5-7.8、pH 4.5-7.7、pH 4.5-7.6、pH 4.5-7.5、pH 4.5-7.4、pH 4.5-7.3、pH 4.5-7.2、pH 4.5-7.1、pH 4.5-7.0、pH 4.5-6.9、pH 4.5-6.8、pH 4.5-6.7、pH 4.5-6.6、pH 4.5-6.5、pH 4.5-6.4、pH 4.5-6.3、pH 4.5-6.2、pH 4.5-6.1、pH 4.5-6.0、pH 4.5-5.9、pH 4.5-5.8、pH 4.5-5.7、pH 4.5-5.6、pH 4.5-5.5、pH 4.5-5.4、pH 4.5-5.3、pH 4.5-5.2、pH 4.5-5.1、pH 4.5-5.0、pH 4.5-4.9、pH 4.5-4.8、pH 4.5-4.7或pH 4.5-4.6的磷酸盐缓冲溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在具有pH 6.0-7.6、pH 6.1-7.6、pH6.2-7.6、pH 6.3-7.6、pH 6.4-7.6、pH 6.5-7.6、pH 6.6-7.6、pH 6.7-7.6、pH 6.8-7.6、pH6.9-7.6、pH 7.0-7.6、pH 7.1-7.6、pH 7.2-7.6、pH 7.3-7.6、pH 7.4-7.6或pH 7.5-7.6的磷酸盐缓冲溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在具有pH 6.6-8.0、pH 6.6-7.9、pH 6.6-7.8、pH 6.6-7.7、pH 6.6-7.6、pH 6.6-7.5、pH 6.6-7.4、pH 6.6-7.3、pH 6.6-7.2、pH 6.6-7.1、pH 6.6-7.0、pH 6.6-6.9、pH 6.6-6.8或pH 6.6-6.7的磷酸盐缓冲溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在具有pH 6.0-8.0、pH6.1-8.0、pH 6.2-8.0、pH 6.3-8.0、pH 6.4-8.0、pH 6.5-8.0、pH 6.6-8.0、pH 6.7-8.0、pH6.8-8.0、pH 6.9-8.0、pH 7.0-8.0、pH 7.1-8.0、pH 7.2-8.0、pH 7.3-8.0、pH 7.4-8.0、pH7.5-8.0、pH 7.6-8.0、pH 7.7-8.0、pH 7.8-8.0或pH 7.9-8.0的磷酸盐缓冲溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在具有pH 6.0-7.9、pH 6.0-7.8、pH 6.0-7.7、pH 6.0-7.6、pH 6.0-7.5、pH 6.0-7.4、pH 6.0-7.3、pH 6.0-7.2、pH 6.0-7.1、pH 6.0-7.0、pH 6.0-6.9、pH 6.0-6.8、pH 6.0-6.7、pH 6.0-6.6、pH 6.0-6.5、pH 6.0-6.4、pH 6.0-6.3、pH 6.0-6.2或pH 6.0-6.1的磷酸盐缓冲溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在具有pH 5.7-8.5、5.8-8.4、5.9-8.3、6.0-8.2、6.1-8.1、6.2-8.0、6.3-7.9、6.4-7.8、6.5-7.7或6.6-7.6的磷酸盐缓冲溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在pH约5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.06.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9或8.0的磷酸盐缓冲溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在pH 5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0.6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9或8.0的磷酸盐缓冲溶液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含25-250mM NaCl的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含25-250、30-250、35-250、40-250、45-250、50-250、55-250、60-250、65-250、70-250、75-250、80-250、85-250、90-250、95-250、100-250、105-250、110-250、115-250、120-250、125-250、130-250、135-250、140-250、145-250、150-250、155-250、160-250、165-250、170-250、175-250、180-250、185-250、190-250、195-250、200-250、205-250、210-250、215-250、220-250、225-250、230-250、235-250、240-250或245-250mM NaCl的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含25-245、25-240、25-235、25-230、25-225、25-220、25-215、25-210、25-205、25-200、25-195、25-190、25-185、25-180、25-175、25-170、25-165、25-160、25-155、25-150、25-145、25-140、25-135、25-130、25-125、25-120、25-115、25-110、25-105、25-110、25-105、25-100、25-95、25-90、25-85、25-80、25-75、25-70、25-65、25-60、25-55、25-50、25-45、25-40、25-35或25-30mM NaCl的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含30-245、35-240、40-235、45-230、50-225、55-220、60-215、65-210、70-205、75-200、80-195、85-190、90-185、95-180、100-175、105-170、110-165、115-160、120-155、125-150、130-145或135-140mM NaCl的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含100-140、101-140、102-140、103-140、104-140、105-140、106-140、107-140、108-140、109-140、110-140、111-140、112-140、113-140、114-140、115-140、116-140、117-140、118-140、119-140、120-140、121-140、122-140、123-140、124-140、125-140、126-140、127-140、128-140、129-140、130-140、131-140、132-140、133-140、134-140、135-140、136-140、137-140、138-140或139-140mM NaCl的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含100-139、100-138、100-137、100-136、100-135、100-134、100-133、100-132、100-131、100-130、100-129、100-128、100-127、100-126、100-125、100-124、100-123、100-122、100-121、100-120、100-119、100-118、100-117、100-116、100-115、100-114、100-113、100-112、100-111、100-110、100-109、100-108、100-107、100-106、100-105、100-104、100-103、100-102或100-101mM NaCl的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至少90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139或140mM NaCl的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至多90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139或140mM NaCl的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139或140mM NaCl的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1-20mM KCl的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1-40、0.1-39、0.1-38、0.1-37、0.1-36、0.1-35、0.1-34、0.1-33、0.1-32、0.1-31、0.1-30、0.1-29、0.1-28、0.1-27、0.1-26、0.1-25、0.1-24、0.1-23、0.1-22、0.1-21、0.1-20、0.1-19、0.1-18、0.1-17、0.1-16、0.1-15、0.1-14、0.1-13、0.1-12、0.1-10、0.1-9、0.1-8、0.1-7、0.1-6、0.1-5、0.1-4、0.1-3、0.1-2或0.1-1mM KCl的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.2-40、0.3-40、0.4-40、0.5-40、0.6-40、0.7-40、0.8-40、0.9-40、1-40、2-40、3-40、4-40、5-40、6-40、7-40、8-40、9-40、10-40、11-40、12-40、13-40、14-40、15-40、16-40、17-40、18-40、19-40、20-40、21-40、22-40、23-40、24-40、25-40、26-40、27-40、28-40、29-40、30-40、31-40、32-40、33-40、34-40、35-40、36-40、37-40、38-40或39-40mM KCl的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1-3.5、0.2-3.5、0.3-3.5、0.4-3.5、0.5-3.5、0.6-3.5、0.7-3.5、0.8-3.5、0.9-3.5、1.0-3.5、1.1-3.5、1.2-3.5、1.3-3.5、1.4-3.5、1.5-3.5、1.6-3.5、1.7-3.5、1.8-3.5、1.9-3.5、2.0-3.5、2.1-3.5、2.2-3.5、2.3-3.5、2.4-3.5、2.5-3.5、2.6-3.5、2.7-3.5、2.8-3.5、2.9-3.5、3.0-3.5、3.1-3.5、3.2-3.5、3.3-3.5或3.4-3.5mM KCl的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1-3.4、0.1-3.3、0.1-3.2、0.1-3.1、0.1-3.0、0.1-2.9、0.1-2.8、0.1-2.7、0.1-2.6、0.1-2.5、0.1-2.4、0.1-2.3、0.1-2.2、0.1-2.1、0.1-2.0、0.1-1.9、0.1-1.8、0.1-1.7、0.1-1.6、0.1-1.5、0.1-1.4、0.1-1.3、0.1-1.2、0.1-1.1、0.1-1.0、0.1-0.9、0.1-0.8、0.1-0.7、0.1-0.6、0.1-0.5、0.1-0.4、0.1-0.3或0.1-0.2mM KCl的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至少0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4或3.5mM KCl的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至多0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4或3.5mM KCl的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4或3.5mMKCl的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1-50mM Na2HPO4的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.01-100、0.02-100、0.03-100、0.04-100、0.05-100、0.06-100、0.07-100、0.08-100、0.09-100、0.1-100、0.2-100、0.3-100、0.4-100、0.5-100、0.6-100、0.7-100、0.8-100、0.9-100、1-100、2-100、3-100、4-100、5-100、6-100、7-100、8-100、9-100、10-100、15-100、20-100、25-100、30-100、35-100、40-100、45-100、50-100、55-100、60-100、65-100、70-100、75-100、80-100、85-100、90-100或95-100mM Na2HPO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.01-95、0.01-90、0.01-85、0.01-80、0.01-75、0.01-70、0.01-65、0.01-60、0.01-55、0.01-50、0.01-45、0.01-40、0.01-35、0.01-30、0.01-25、0.01-20、0.01-15、0.01-10、0.01-9、0.01-8、0.01-7、0.01-6、0.01-5、0.01-4、0.01-3、0.01-2、0.01-1、0.01-0.9、0.01-0.8、0.01-0.7、0.01-0.6、0.01-0.5、0.01-0.4、0.01-0.3、0.01-0.2、0.01-0.1、0.01-0.09、0.01-0.08、0.01-0.07、0.01-0.06、0.01-0.05、0.01-0.04、0.01-0.03或0.01-0.02mMNa2HPO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1-3.0、0.1-2.9、0.1-2.8、0.1-2.7、0.1-2.6、0.1-2.5、0.1-2.4、0.1-2.3、0.1-2.2、0.1-2.1、0.1-2.0、0.1-1.9、0.1-1.8、0.1-1.7、0.1-1.6、0.1-1.5、0.1-1.4、0.1-1.3、0.1-1.2、0.1-1.1、0.1-1.0、0.1-0.9、0.1-0.8、0.1-0.7、0.1-0.6、0.1-0.5、0.1-0.4、0.1-0.3或0.1-0.2mMNa2HPO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1-3.0、0.2-3.0、0.3-3.0、0.4-3.0、0.5-3.0、0.6-3.0、0.7-3.0、0.8-3.0、0.9-3.0、1.0-3.0、1.2-3.0、1.3-3.0、1.4-3.0、1.5-3.0、1.6-3.0、1.7-3.0、1.8-3.0、1.9-3.0、2.0-3.0、2.1-3.0、2.2-3.0、2.3-3.0、2.4-3.0、2.5-3.0、2.6-3.0、2.7-3.0、2.8-3.0或2.9-3.0mM Na2HPO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至少0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9或3.0mM Na2HPO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至多0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9或3.0mM Na2HPO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9或3.0mM Na2HPO4的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1-50mM NaH2PO4的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.01-100、0.02-100、0.03-100、0.04-100、0.05-100、0.06-100、0.07-100、0.08-100、0.09-100、0.1-100、0.2-100、0.3-100、0.4-100、0.5-100、0.6-100、0.7-100、0.8-100、0.9-100、1-100、2-100、3-100、4-100、5-100、6-100、7-100、8-100、9-100、10-100、15-100、20-100、25-100、30-100、35-100、40-100、45-100、50-100、55-100、60-100、65-100、70-100、75-100、80-100、85-100、90-100或95-100mM NaH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.01-95、0.01-90、0.01-85、0.01-80、0.01-75、0.01-70、0.01-65、0.01-60、0.01-55、0.01-50、0.01-45、0.01-40、0.01-35、0.01-30、0.01-25、0.01-20、0.01-15、0.01-10、0.01-9、0.01-8、0.01-7、0.01-6、0.01-5、0.01-4、0.01-3、0.01-2、0.01-1、0.01-0.9、0.01-0.8、0.01-0.7、0.01-0.6、0.01-0.5、0.01-0.4、0.01-0.3、0.01-0.2、0.01-0.1、0.01-0.09、0.01-0.08、0.01-0.07、0.01-0.06、0.01-0.05、0.01-0.04、0.01-0.03或0.01-0.02mMNaH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1-3.0、0.1-2.9、0.1-2.8、0.1-2.7、0.1-2.6、0.1-2.5、0.1-2.4、0.1-2.3、0.1-2.2、0.1-2.1、0.1-2.0、0.1-1.9、0.1-1.8、0.1-1.7、0.1-1.6、0.1-1.5、0.1-1.4、0.1-1.3、0.1-1.2、0.1-1.1、0.1-1.0、0.1-0.9、0.1-0.8、0.1-0.7、0.1-0.6、0.1-0.5、0.1-0.4、0.1-0.3或0.1-0.2mMNaH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1-3.0、0.2-3.0、0.3-3.0、0.4-3.0、0.5-3.0、0.6-3.0、0.7-3.0、0.8-3.0、0.9-3.0、1.0-3.0、1.2-3.0、1.3-3.0、1.4-3.0、1.5-3.0、1.6-3.0、1.7-3.0、1.8-3.0、1.9-3.0、2.0-3.0、2.1-3.0、2.2-3.0、2.3-3.0、2.4-3.0、2.5-3.0、2.6-3.0、2.7-3.0、2.8-3.0或2.9-3.0mM NaH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至少0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9或3.0mM NaH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至多0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9或3.0mM NaH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9或3.0mM NaH2PO4的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1-50mM CaCl2的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1-50、0.2-50、0.3-50、0.4-50、0.5-50、0.6-50、0.7-50、0.8-50、0.9-50、1.0-50、-50、1.1-50、1.2-50、1.3-50、1.4-50、1.5-50、1.6-50、1.7-50、1.8-50、1.9-50、2.0-50、2.1-50、2.2-50、2.3-50、2.4-50、2.5-50、2.6-50、2.7-50、2.8-50、2.9-50、3.0-50、3.1-50、3.2-50、3.3-50、3.4-50、3.5-50、3.6-50、3.7-50、3.8-50、3.9-50、4-50、5-50、6-50、7-50、8-50、9-50、10-50、15-50、20-50、25-50、1 30-50、35-50、40-50或45-50mM CaCl2的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1-45、0.1-40、0.1-35、0.1-30、0.1-25、0.1-20、0.1-15、0.1-10、0.1-5、0.1-4、0.1-4.9、0.1-4.8、0.1-4.7、0.1-4.6、0.1-4.5、0.1-4.4、0.1-4.3、0.1-4.2、0.1-4.1、0.1-4.0、0.1-3.9、0.1-3.8、0.1-3.7、0.1-3.6、0.1-3.5、0.1-3.4、0.1-3.3、0.1-3.2、0.1-3.1、0.1-3.0、0.1-2.9、0.1-2.8、0.1-2.7、0.1-2.6、0.1-2.5、0.1-2.4、0.1-2.3、0.1-2.2、0.1-2.1、0.1-2.0、0.1-1.9、0.1-1.8、0.1-1.7、0.1-1.6、0.1-1.5、0.1-1.4、0.1-1.3、0.1-1.2、0.1-1.1、0.1-1.0、0.1-0.9、0.1-0.8、0.1-0.7、0.1-0.6、0.1-0.5、0.1-0.4、0.1-0.3或0.1-0.2mM CaCl2的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至少1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9或4.0mM CaCl2的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至多1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9或4.0mM CaCl2的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9或4.0mM CaCl2的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1-50mM MgCl2的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1-50、0.2-50、0.3-50、0.4-50、0.5-50、0.6-50、0.7-50、0.8-50、0.9-50、1.0-50、-50、1.1-50、1.2-50、1.3-50、1.4-50、1.5-50、1.6-50、1.7-50、1.8-50、1.9-50、2.0-50、2.1-50、2.2-50、2.3-50、2.4-50、2.5-50、2.6-50、2.7-50、2.8-50、2.9-50、3.0-50、3.1-50、3.2-50、3.3-50、3.4-50、3.5-50、3.6-50、3.7-50、3.8-50、3.9-50、4-50、5-50、6-50、7-50、8-50、9-50、10-50、15-50、20-50、25-50、1 30-50、35-50、40-50或45-50mM MgCl2的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1-45、0.1-40、0.1-35、0.1-30、0.1-25、0.1-20、0.1-15、0.1-10、0.1-5、0.1-4、0.1-4.9、0.1-4.8、0.1-4.7、0.1-4.6、0.1-4.5、0.1-4.4、0.1-4.3、0.1-4.2、0.1-4.1、0.1-4.0、0.1-3.9、0.1-3.8、0.1-3.7、0.1-3.6、0.1-3.5、0.1-3.4、0.1-3.3、0.1-3.2、0.1-3.1、0.1-3.0、0.1-2.9、0.1-2.8、0.1-2.7、0.1-2.6、0.1-2.5、0.1-2.4、0.1-2.3、0.1-2.2、0.1-2.1、0.1-2.0、0.1-1.9、0.1-1.8、0.1-1.7、0.1-1.6、0.1-1.5、0.1-1.4、0.1-1.3、0.1-1.2、0.1-1.1、0.1-1.0、0.1-0.9、0.1-0.8、0.1-0.7、0.1-0.6、0.1-0.5、0.1-0.4、0.1-0.3或0.1-0.2mM MgCl2的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至少0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9或4.0mM MgCl2的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至多0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9或4.0mM MgCl2的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9或4.0mM MgCl2的缓冲液中。
在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在还包含1-100mM NaHCO3、1-100mM KHCO3或其组合的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含1-100mM NaHCO3的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含1-99、1-95、1-90、1-85、1-80、1-75、1-70、1-65、1-60、1-55、1-50、1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10、1-9、1-8、1-7、1-6、1-5、1-4、1-3或1-2mM NaHCO3的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含2-100、3-100、4-100、5-100、6-100、7-100、8-100、9-100、10-100、15-100、20-100、25-100、30-100、35-100、40-100、45-100、50-100、55-100、60-100、65-100、70-100、75-100、80-100、85-100、90-100或95-100mM NaHCO3的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含24.0-28.0、24.0-27.9、24.0-27.8、24.0-27.7、24.0-27.6、24.0-27.5、24.0-27.4、24.0-27.3、24.0-27.2、24.0-27.1、24.0-27.0、24.0-26.9、24.0-26.8、24.0-26.7、24.0-26.6、24.0-26.5、24.0-26.4、24.0-26.3、24.0-26.2、24.0-26.1、24.0-26.0、24.0-25.9、4.0-25.8、24.0-25.7、24.0-25.6、24.0-25.5、24.0-25.4、24.0-25.3、24.0-25.2、24.0-25.1、24.0-25.0、24.0-24.9、24.0-24.8、24.0-24.7、24.0-24.6、24.0-24.5、24.0-24.4、24.0-24.3、24.0-24.2或24.0-24.1mM NaHCO3的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含24.1-28.0、24.2-28.0、24.3-28.0、24.4-28.0、24.5-28.0、24.6-28.0、24.7-28.0、24.8-28.0、24.9-28.0、25.0-28.0、25.1-28.0、25.2-28.0、25.3-28.0、25.4-28.0、25.5-28.0、25.6-28.0、25.7-28.0、25.8-28.0、25.9-28.0、26.0-28.0、26.1-28.0、26.2-28.0、26.3-28.0、26.4-28.0、26.5-28.0、26.6-28.0、26.7-28.0、26.8-28.0、26.9-28.0、27.0-28.0、27.1-28.0、27.2-28.0、27.3-28.0、27.4-28.0、27.5-28.0、27.6-28.0、27.7-28.0、27.8-28.0或27.9-28.0mMNaHCO3的缓冲液中。在一些实施方案中，将如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至少24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.0、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9或28.0mM NaHCO3的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至多24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9或28.0mM NaHCO3的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9或28.0mMNaHCO3的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含1-100mM KHCO3的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含1-99、1-95、1-90、1-85、1-80、1-75、1-70、1-65、1-60、1-55、1-50、1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10、1-9、1-8、1-7、1-6、1-5、1-4、1-3或1-2mM KHCO3的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含2-100、3-100、4-100、5-100、6-100、7-100、8-100、9-100、10-100、15-100、20-100、25-100、30-100、35-100、40-100、45-100、50-100、55-100、60-100、65-100、70-100、75-100、80-100、85-100、90-100或95-100mM KHCO3的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含24.0-28.0、24.0-27.9、24.0-27.8、24.0-27.7、24.0-27.6、24.0-27.5、24.0-27.4、24.0-27.3、24.0-27.2、24.0-27.1、24.0-27.0、24.0-26.9、24.0-26.8、24.0-26.7、24.0-26.6、24.0-26.5、24.0-26.4、24.0-26.3、24.0-26.2、24.0-26.1、24.0-26.0、24.0-25.9、4.0-25.8、24.0-25.7、24.0-25.6、24.0-25.5、24.0-25.4、24.0-25.3、24.0-25.2、24.0-25.1、24.0-25.0、24.0-24.9、24.0-24.8、24.0-24.7、24.0-24.6、24.0-24.5、24.0-24.4、24.0-24.3、24.0-24.2或24.0-24.1mM KHCO3的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含24.1-28.0、24.2-28.0、24.3-28.0、24.4-28.0、24.5-28.0、24.6-28.0、24.7-28.0、24.8-28.0、24.9-28.0、25.0-28.0、25.1-28.0、25.2-28.0、25.3-28.0、25.4-28.0、25.5-28.0、25.6-28.0、25.7-28.0、25.8-28.0、25.9-28.0、26.0-28.0、26.1-28.0、26.2-28.0、26.3-28.0、26.4-28.0、26.5-28.0、26.6-28.0、26.7-28.0、26.8-28.0、26.9-28.0、27.0-28.0、27.1-28.0、27.2-28.0、27.3-28.0、27.4-28.0、27.5-28.0、27.6-28.0、27.7-28.0、27.8-28.0或27.9-28.0mMKHCO3的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至少24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.0、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9或28.0mM KHCO3的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至多24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9或28.0mM KHCO3的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9或28.0mM KHCO3的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0-50mM KH2PO4的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0-100、0.01-100、0.02-100、0.03-100、0.04-100、0.05-100、0.06-100、0.07-100、0.08-100、0.09-100、0.1-100、0.2-100、0.3-100、0.4-100、0.5-100、0.6-100、0.7-100、0.8-100、0.9-100、1-100、2-100、3-100、4-100、5-100、6-100、7-100、8-100、9-100、10-100、15-100、20-100、25-100、30-100、35-100、40-100、45-100、50-100、55-100、60-100、65-100、70-100、75-100、80-100、85-100、90-100或95-100mM KH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0-95、0-90、0-85、0-80、0-75、0-70、0-65、0-60、0-55、0-50、0-45、0-40、0-35、0-30、0-25、0-20、0-15、0-10、0-9、0-8、0-7、0-6、0-5、0-4、0-3、0-2、0-1、0-0.9、0-0.8、0-0.7、0-0.6、0-0.5、0-0.4、0-0.3、0-0.2、0-0.1、0-0.09、0-0.08、0-0.07、0-0.06、0-0.05、0-0.04、0-0.03或0-0.02mM KH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.01-95、0.01-90、0.01-85、0.01-80、0.01-75、0.01-70、0.01-65、0.01-60、0.01-55、0.01-50、0.01-45、0.01-40、0.01-35、0.01-30、0.01-25、0.01-20、0.01-15、0.01-10、0.01-9、0.01-8、0.01-7、0.01-6、0.01-5、0.01-4、0.01-3、0.01-2、0.01-1、0.01-0.9、0.01-0.8、0.01-0.7、0.01-0.6、0.01-0.5、0.01-0.4、0.01-0.3、0.01-0.2、0.01-0.1、0.01-0.09、0.01-0.08、0.01-0.07、0.01-0.06、0.01-0.05、0.01-0.04、0.01-0.03或0.01-0.02mMKH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0-3.0、0-2.9、0-2.8、0-2.7、0-2.6、0-2.5、0-2.4、0-2.3、0-2.2、0-2.1、0-2.0、0-1.9、0-1.8、0-1.7、0-1.6、0-1.5、0-1.4、0-1.3、0-1.2、0-1.1、0-1.0、0-0.9、0-0.8、0-0.7、0-0.6、0-0.5、0-0.4、0-0.3或0-0.2mM KH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1-3.0、0.1-2.9、0.1-2.8、0.1-2.7、0.1-2.6、0.1-2.5、0.1-2.4、0.1-2.3、0.1-2.2、0.1-2.1、0.1-2.0、0.1-1.9、0.1-1.8、0.1-1.7、0.1-1.6、0.1-1.5、0.1-1.4、0.1-1.3、0.1-1.2、0.1-1.1、0.1-1.0、0.1-0.9、0.1-0.8、0.1-0.7、0.1-0.6、0.1-0.5、0.1-0.4、0.1-0.3或0.1-0.2mM KH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0-3.0、0.1-3.0、0.2-3.0、0.3-3.0、0.4-3.0、0.5-3.0、0.6-3.0、0.7-3.0、0.8-3.0、0.9-3.0、1.0-3.0、1.2-3.0、1.3-3.0、1.4-3.0、1.5-3.0、1.6-3.0、1.7-3.0、1.8-3.0、1.9-3.0、2.0-3.0、2.1-3.0、2.2-3.0、2.3-3.0、2.4-3.0、2.5-3.0、2.6-3.0、2.7-3.0、2.8-3.0或2.9-3.0mM KH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至少0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9或3.0mM KH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至多0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9或3.0mM KH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9或3.0mM KH2PO4的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0-50mM NaH2PO4的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0-50、0-45、0-40、0-35、0-30、0-25、0-20、0-19、0-18、0-17、0-16、0-15、0-14、0-13、0-12、0-11、0-10、0-9、0-8、0-7、0-6、0-5、0-4、0-3、0-2、0-1、0-0.9、0-0.8、0-0.7、0-0.6、0-0.5、0-0.4、0-0.3或0-0.2mM NaH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1-50、0.1-45、0.1-40、0.1-35、0.1-30、0.1-25、0.1-20、0.1-19、0.1-18、0.1-17、0.1-16、0.1-15、0.1-14、0.1-13、0.1-12、0.1-11、0.1-10、0.1-9、0.1-8、0.1-7、0.1-6、0.1-5、0.1-4、0.1-3、0.1-2、0.1-1、0.1-0.9、0.1-0.8、0.1-0.7、0.1-0.6、0.1-0.5、0.1-0.4、0.1-0.3或0.1-0.2mM NaH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0-50、0.1-50、0.2-50、0.3-50、0.4-50、0.5-50、0.6-50、0.7-50、0.8-50、0.9-50、1-50、2-50、3-50、4-50、5-50、6-50、7-50、8-50、9-50、1-50、11-50、12-50、13-50、14-50、15-50、16-50、17-50、18-50、19-50、20-50、25-50、30-50、35-50、40-50或45-50mM NaH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0-20、0.1-20、0.2-20、0.3-20、0.4-20、0.5-20、0.6-20、0.7-20、0.8-20、0.9-20、1-20、2-20、3-20、4-20、5-20、6-20、7-20、8-20、9-20、10-20、11-20、12-20、13-20、14-20、15-20、16-20、17-20、18-20或19-20mMNaH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至少0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20mM NaH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至多0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20mM NaH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20mM NaH2PO4的缓冲液中。
在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在还包含碳水化合物的缓冲液中。在一些实施方案中，碳水化合物包括D-葡萄糖。在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在还包含1-100mM D-葡萄糖的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含1-100mM D-葡萄糖的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含1-100、1-95、1-90、1-85、1-80、1-75、1-70、1-65、1-60、1-55、1-50、1-45、1-40、1-35、1-30、1-29、1-28、1-27、1-26、1-25、1-24、1-23、1-22、1-21、1-20、1-19、1-18、1-17、1-16、1-15、1-14、1-13、1-12、1-11、1-10、1-9、1-8、1-7、1-6、1-5、1-4、1-3或1-2mM D-葡萄糖的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含2-100、3-100、4-100、5-100、6-100、7-100、8-100、9-100、10-100、11-100、12-100、13-100、14-100、15-100、16-100、17-100、18-100、19-100、20-100、21-100、22-100、23-100、24-100、25-100、26-100、29-100、28-100、29-100、30-100、35-100、40-100、45-100、50-100、55-100、60-100、65-100、70-100、75-100、80-100、85-100、90-100或95-100mM D-葡萄糖的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含2-30、3-30、4-30、5-30、6-30、7-30、8-30、9-30、10-30、11-30、12-30、13-30、14-30、15-30、16-30、17-30、18-30、19-30、20-30、21-30、22-30、23-30、24-30、25-30、26-30、27-30、28-30或29-30mM D-葡萄糖的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30mM D-葡萄糖的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30mM D-葡萄糖的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30mM D-葡萄糖的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含1-100、1-95、1-90、1-85、1-80、1-75、1-70、1-65、1-60、1-55、1-50、1-45、1-40、1-35、1-30、1-29、1-28、1-27、1-26、1-25、1-24、1-23、1-22、1-21、1-20、1-19、1-18、1-17、1-16、1-15、1-14、1-13、1-12、1-11、1-10、1-9、1-8、1-7、1-6、1-5、1-4、1-3或1-2mM葡萄糖的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含2-100、3-100、4-100、5-100、6-100、7-100、8-100、9-100、10-100、11-100、12-100、13-100、14-100、15-100、16-100、17-100、18-100、19-100、20-100、21-100、22-100、23-100、24-100、25-100、26-100、29-100、28-100、29-100、30-100、35-100、40-100、45-100、50-100、55-100、60-100、65-100、70-100、75-100、80-100、85-100、90-100或95-100mM葡萄糖的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含2-30、3-30、4-30、5-30、6-30、7-30、8-30、9-30、10-30、11-30、12-30、13-30、14-30、15-30、16-30、17-30、18-30、19-30、20-30、21-30、22-30、23-30、24-30、25-30、26-30、27-30、28-30或29-30mM葡萄糖的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30mM葡萄糖的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30mM葡萄糖的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30mM葡萄糖的缓冲液中。
在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在包含25-250mM NaCl、0.1-20mM KCl、0.1-50mM Na2HPO4、0.1-50mM NaH2PO4、0.1-50mM CaCl2和0.1-50mM MgCl2的缓冲液中。
在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在包含150mM NaCl、3.0mM KCl、0.7mMNa2HPO4、0.3mM NaH2PO4、0.79mM MgCl2和1.4mM CaCl2的缓冲液中。
在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在还包含抗氧化剂的缓冲液中。在一些实施方案中，抗氧化剂为叔丁基羟基喹啉(TBHQ)、丁基化羟基甲苯(BHT)、丁基化羟基苯甲醚(BHA)、维生素E或其任何组合。在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在还包含抗氧化剂的缓冲液中，其中抗氧化剂为抗坏血酸(维生素C)、谷胱甘肽、硫辛酸、尿酸、胡萝卜素、α-生育酚(维生素E)、泛醇(辅酶Q)或其任何组合。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含25-250mM NaCl、0.1-20mM KCl、0-50mM KH2PO4、1-100mM NaHCO3、0-50mM NaH2PO4、1-100mM D-葡萄糖、0.1-50mMCaCl2、0.1-50mM MgCl2或其组合的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含25-250mM NaCl、0.1-20mM KCl、0-50mM KH2PO4、1-100mM NaHCO3、0-50mM NaH2PO4、1-100mM D-葡萄糖、0.1-50mMCaCl2、0.1-50mM MgCl2的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含127mM NaCl、1.0mMKCl、1.2mM KH2PO4、26mM NaHCO3、10mM D-葡萄糖、2.4mM CaCl2和1.3mM MgCl2的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含119mM NaCl、26.2mMNaHCO3、2.5mM KCl、1mM NaH2PO4、1.3mM MgCl2、10mM葡萄糖和2.5mM CaCl2的缓冲液中。
在一些实施方案中，药物组合物不包含防腐剂。在一些实施方案中，药物组合物包含防腐剂。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO以5-250mg/mL的浓度存在于药物组合物中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO以5-250、5-247.5、5-245、5-242.5、5-240、5-237.5、5-235、5-232.5、5-230、5-227.5、5-225、5-225.5、5-220、5-217.5、5-215、5-212.5、5-210、5-205.5、5-205、5-202.5、5-200、5-197.5、5-195、5-192.5、5-190、5-187.5、5-185、5-182.5、5-180、5-177.5、5-175、5-172.5、5-170、5-167.5、5-165、5-162.5、5-160、5-157.5、5-155、5-152.5、5-150、5-147.5、5-145、5-142.5、5-140、5-137.5、5-135、5-132.5、5-130、5-127.5、5-125、5-122.5、5-120、5-117.5、5-115、5-112.5、5-110、5-107.5、5-105、5-102.5、5-100、5-97.5、5-95、5-92.5、5-90、5-87.5、5-85、5-82.5、5-80、5-77.5、5-75、5-72.5、5-70、5-67.5、5-65、5-62.5、5-60、5-57.5、5-55、5-52.5、5-50、5-47.5、5-45、5-42.5、5-40、5-37.5、5-35、5-32.5、5-30、5-27.5、5-25、5-22.5、5-20、5-17.5、5-15、5-12.5或5-10mg/mL的浓度存在于药物组合物中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO以10-250、15-250、20-250、25-250、30-250、35-250、40-250、45-250、50-250、55-250、60-250、65-250、70-250、75-250、80-250、85-250、90-250、95-250、100-250、105-250、110-250、115-250、120-250、125-250、130-250、135-250、140-250、145-250、150-250、155-250、160-250、165-250、170-250、175-250、180-250、185-250、190-250或195-250、200-250、205-250、210-250、215-250、220-250、225-250、230-250、235-250、240-250或245-250mg/mL的浓度存在于药物组合物中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO以至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249或250mg/mL的浓度存在于药物组合物中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO以至多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249或250mg/mL的浓度存在于药物组合物中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO以1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249或250mg/mL的浓度存在于药物组合物中。
在一些实施方案中，所述方法包括以推注形式施用药物组合物。在一些实施方案中，所述方法包括历经1至180分钟、175分钟、1至170分钟、1至165分钟、1至160分钟、1至155分钟、1至150分钟、1至145分钟、1至140分钟、1至135分钟、1至130分钟、1至125分钟、1至120分钟、1至115分钟、1至110分钟、1至105分钟、1至100分钟、1至95分钟、1至90分钟、1至85分钟、1至80分钟、1至75分钟、1至70分钟、1至65分钟、1至60分钟、1至55分钟、1至50分钟、1至45分钟、1至40分钟、1至35分钟、1至30分钟、1至25分钟、1至20分钟、1至15分钟、1至10分钟、1至5分钟或1至3分钟以推注形式施用药物组合物。在一些实施方案中，该方法包括使用脊髓麻醉针以推注形式施用药物组合物。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO以ASO的浓度存在于药物组合物中，以0.1mg/mL至250mg/mL的浓度存在于药物组合物中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO以约0.1mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL、2.5mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL、6mg/mL、7mg/mL、8mg/mL、9mg/mL、10mg/mL、11mg/mL、12mg/mL、13mg/mL、14mg/mL、15mg/mL、16mg/mL、17mg/mL、18mg/mL、19mg/mL或20mg/mL的浓度存在于药物组合物中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO以约30mg/mL、40mg/mL、50mg/mL、60mg/mL、70mg/mL、80mg/mL、90mg/mL、100mg/mL、110mg/mL、120mg/mL、130mg/mL、140mg/mL、150mg/mL、160mg/mL、170mg/mL、180mg/mL、190mg/mL或200mg/mL的浓度存在于药物组合物中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO以稀释剂中约11mg/mL、22mg/mL、33mg/mL、44mg/mL、55mg/mL、66mg/mL、77mg/mL、88mg/mL、99mg/mL或100mg/mL的浓度存在于药物组合物中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO以0.1mg/mL至250mg/mL、0.2mg/mL至250mg/mL、0.3mg/mL至250mg/mL、0.4mg/mL至250mg/mL、0.5mg/mL至250mg/mL、0.6mg/mL至250mg/mL、0.7mg/mL至250mg/mL、0.8mg/mL至250mg/mL、0.9mg/mL至250mg/mL、1.0mg/mL至250mg/mL、1.1mg/mL至250mg/mL、1.2mg/mL至250mg/mL、1.3mg/mL至250mg/mL、1.4mg/mL至250mg/mL、1.5mg/mL至250mg/mL、1.6mg/mL至250mg/mL、1.7mg/mL至250mg/mL、1.8mg/mL至250mg/mL、1.9mg/mL至250mg/mL、2.0mg/mL至250mg/mL、2.1mg/mL至250mg/mL、2.2mg/mL至250mg/mL、2.3mg/mL至250mg/mL、2.4mg/mL至250mg/mL、2.5mg/mL至250mg/mL、2.6mg/mL至250mg/mL、2.7mg/mL至250mg/mL、2.8mg/mL至250mg/mL、2.9mg/mL至250mg/mL、3.0mg/mL至250mg/mL、3.1mg/mL至250mg/mL、3.2mg/mL至250mg/mL、3.3mg/mL至250mg/mL、3.4mg/mL至250mg/mL、3.5mg/mL至250mg/mL、3.6mg/mL至250mg/mL、3.7mg/mL至250mg/mL、3.8mg/mL至250mg/mL、3.9mg/mL至250mg/mL、4.0mg/mL至250mg/mL、5.0mg/mL至250mg/mL、6.0mg/mL至250mg/mL、7.0mg/mL至250mg/mL、8.0mg/mL至250mg/mL、9.0mg/mL至250mg/mL、10mg/mL至250mg/mL、15mg/mL至250mg/mL、20mg/mL至250mg/mL、25mg/mL至250mg/mL、30mg/mL至250mg/mL、35mg/mL至250mg/mL、40mg/mL至250mg/mL、45mg/mL至250mg/mL、50mg/mL至250mg/mL、55mg/mL至250mg/mL、60mg/mL至250mg/mL、65mg/mL至250mg/mL、70mg/mL至250mg/mL、75mg/mL至250mg/mL、80mg/mL至250mg/mL、85mg/mL至250mg/mL、90mg/mL至250mg/mL、95mg/mL至250mg/mL、100mg/mL至250mg/mL、105mg/mL至250mg/mL、110mg/mL至250mg/mL、115mg/mL至250mg/mL、120mg/mL至250mg/mL、125mg/mL至250mg/mL、130mg/mL至250mg/mL、135mg/mL至250mg/mL、140mg/mL至250mg/mL、145mg/mL至250mg/mL、150mg/mL至250mg/mL、155mg/mL至250mg/mL、160mg/mL至250mg/mL、165mg/mL至250mg/mL、170mg/mL至250mg/mL、175mg/mL至250mg/mL、180mg/mL至250mg/mL、185mg/mL至250mg/mL、190mg/mL至250mg/mL、195mg/mL至250mg/mL、200mg/mL至250mg/mL、205mg/mL至250mg/mL、210mg/mL至250mg/mL、215mg/mL至250mg/mL、220mg/mL至250mg/mL、225mg/mL至250mg/mL、230mg/mL至250mg/mL、235mg/mL至250mg/mL、240mg/mL至250mg/mL或245mg/mL至250mg/mL的浓度存在于药物组合物中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO以0.1mg/mL至250mg/mL、0.1mg/mL至245mg/mL、0.1mg/mL至240mg/mL、0.1mg/mL至235mg/mL、0.1mg/mL至230mg/mL、0.1mg/mL至225mg/mL、0.1mg/mL至220mg/mL、0.1mg/mL至215mg/mL、0.1mg/mL至210mg/mL、0.1mg/mL至205mg/mL、0.1mg/mL至200mg/mL、0.1mg/mL至195mg/mL、0.1mg/mL至190mg/mL、0.1mg/mL至185mg/mL、0.1mg/mL至180mg/mL、0.1mg/mL至175mg/mL、0.1mg/mL至170mg/mL、0.1mg/mL至165mg/mL、0.1mg/mL至160mg/mL、0.1mg/mL至155mg/mL、0.1mg/mL至150mg/mL、0.1mg/mL至145mg/mL、0.1mg/mL至140mg/mL、0.1mg/mL至135mg/mL、0.1mg/mL至130mg/mL、0.1mg/mL至125mg/mL、0.1mg/mL至120mg/mL、0.1mg/mL至115mg/mL、0.1mg/mL至110mg/mL、0.1mg/mL至100mg/mL、0.1mg/mL至95mg/mL、0.1mg/mL至90mg/mL、0.1mg/mL至85mg/mL、0.1mg/mL至80mg/mL、0.1mg/mL至75mg/mL、0.1mg/mL至70mg/mL、0.1mg/mL至65mg/mL、0.1mg/mL至60mg/mL、0.1mg/mL至55mg/mL、0.1mg/mL至50mg/mL、0.1mg/mL至45mg/mL、0.1mg/mL至40mg/mL、0.1mg/mL至35mg/mL、0.1mg/mL至30mg/mL、0.1mg/mL至25mg/mL、0.1mg/mL至20mg/mL、0.1mg/mL至15mg/mL、0.1mg/mL至10mg/mL、0.1mg/mL至9mg/mL、0.1mg/mL至8mg/mL、0.1mg/mL至7mg/mL、0.1mg/mL至6mg/mL、0.1mg/mL至5mg/mL、0.1mg/mL至4mg/mL、0.1mg/mL至3.9mg/mL、0.1mg/mL至3.8mg/mL、0.1mg/mL至3.7mg/mL、0.1mg/mL至3.6mg/mL、0.1mg/mL至3.5mg/mL、0.1mg/mL至3.4mg/mL、0.1mg/mL至3.3mg/mL、0.1mg/mL至3.2mg/mL、0.1mg/mL至3.1mg/mL、0.1mg/mL至3.0mg/mL、0.1mg/mL至2.9mg/mL、0.1mg/mL至2.8mg/mL、0.1mg/mL至2.7mg/mL、0.1mg/mL至2.6mg/mL、0.1mg/mL至2.5mg/mL、0.1mg/mL至2.4mg/mL、0.1mg/mL至2.3mg/mL、0.1mg/mL至2.2mg/mL、0.1mg/mL至2.1mg/mL、0.1mg/mL至2.0mg/mL、0.1mg/mL至1.9mg/mL、0.1mg/mL至1.8mg/mL、0.1mg/mL至1.7mg/mL、0.1mg/mL至1.6mg/mL、0.1mg/mL至1.5mg/mL、0.1mg/mL至1.4mg/mL、0.1mg/mL至1.3mg/mL、0.1mg/mL至1.2mg/mL、0.1mg/mL至1.1mg/mL、0.1mg/mL至1.0mg/mL、0.1mg/mL至0.9mg/mL、0.1mg/mL至0.8mg/mL、0.1mg/mL至0.7mg/mL、0.1mg/mL至0.6mg/mL、0.1mg/mL至0.5mg/mL、0.1mg/mL至0.4mg/mL、0.1mg/mL至0.3mg/mL或0.1mg/mL至0.2mg/mL的浓度存在于药物组合物中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO以稀释剂中至少0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249或250mg/mL的浓度存在于药物组合物中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO以稀释剂中至多0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249或250mg/mL的浓度存在于药物组合物中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO以稀释剂中0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249或250mg/mL的浓度存在于药物组合物中。
可以根据制药工业中众所周知且在已出版文献中描述的常规技术来制备药物组合物，其包含所述组合物的试剂(例如，反义寡核苷酸或反义寡聚体)并用于所述方法中的任一种。在一些实施方案中，用于治疗对象的药物组合物包括有效量的如本文所述的任何反义寡聚体或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物或酯。在一些实施方案中，本文所述的药物组合物还包含药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。
使用一种或多种药学上可接受的无活性成分以常规方式配制药物组合物，这些无活性成分有助于将活性化合物加工成可在药学上使用的制剂。合适的制剂取决于所选的施用途径，而药物组合物的概述可例如在Remington:The Science and Practice ofPharmacy,第19版(Easton,Pa.:Mack Publishing Company,1995)；Hoover,John E.,Remington'ss Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co.,Easton,Pennsylvania1975；Liberman,H.A.和Lachman,L.,著,Pharmaceutical Dosage Forms,Marcel Decker,New York,N.Y.,1980；和Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems,第7版(Lippincott Williams&Wilkins1999)中找到，其通过引用并入本文。在一些实施方案中，药物组合物有助于向生物体施用该化合物。
此类组合物可以包含缓冲剂，例如中性缓冲盐水、磷酸盐缓冲盐水等；碳水化合物，例如葡萄糖、甘露糖、蔗糖或葡聚糖、甘露醇；蛋白质；多肽或氨基酸，例如甘氨酸；抗氧化剂；螯合剂，例如EDTA或谷胱甘肽；佐剂(例如，氢氧化铝)；和防腐剂。
术语“药物组合物”和“药物制剂”(或“制剂”)可互换使用，并表示待施用至有需要的对象(例如，人类)的包含治疗有效量的活性药物成分连同一种或多种药学上可接受的赋形剂的混合物或溶液。
术语“药学上可接受的”表示材料的属性，该材料可用于制备通常安全、无毒且在生物学上或其他方面均不是不良的且可接受用于兽医以及人类医药用途的药物组合物。“药学上可接受的”可指例如载体或稀释剂的材料，其不会消除化合物的生物活性或性质并且相对无毒，即可将该材料施用于个体且不引起不期望的生物效应或以有害方式与包含它的组合物的任何组分相互作用。
术语“药学上可接受的赋形剂”、“药学上可接受的载体”和“治疗上惰性的赋形剂”可以互换使用，并表示对施用的对象不具有治疗活性且无毒的药物组合物中的任何药学上可接受的成分，例如用于配制药品的崩解剂、粘合剂、填料、溶剂、缓冲液、张度剂、稳定剂、抗氧化剂、表面活性剂、载体、稀释剂、赋形剂、防腐剂或润滑剂。
在一些实施方案中，组合物用保护组合物的组分不被快速从体内消除的载体制备，例如控释制剂，其包括植入物和微囊化递送系统。可使用可生物降解的生物相容性聚合物，如乙烯-醋酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。此类制剂的制备方法对本领域技术人员来说是显而易见的。这些材料也可以从Alza Corporation和NovaPharmaceuticals,Inc.商购。脂质体悬浮液(包括带有病毒抗原的单克隆抗体的针对感染细胞的脂质体)也可以用作药物上可接受的载体。这些可以根据本领域技术人员已知的方法例如如美国专利号4,522,811中所述的方法制备，其全部内容通过引用并入本文。
可以根据制药工业中众所周知且在已出版文献中描述的常规技术制备包含所述组合物的试剂(例如，反义寡核苷酸)和用于所述方法中的任一种的药物组合物或制剂。在实施方案中，用于治疗对象的药物组合物或制剂包括有效量的如本文所述的任何反义寡聚体或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物或酯。包含反义寡聚体的药物制剂可还包含药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体。
药学上可接受的盐适用于与人和低等动物的组织相接触且没有不当的毒性、刺激、变态反应等，并且与合理的受益/风险比相称。参见，例如，S.M.Berge等人,J.Pharmaceutical Sciences,66:1-19(1977)，其通过引用并入本文用于此目的。可以在化合物的最终分离和纯化期间原位制备或通过使游离碱官能与合适的有机酸反应而单独制备所述盐。药学上可接受的无毒的酸加成盐的实例是氨基与诸如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸等无机酸或与诸如乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸等有机酸所形成的盐或通过利用其他记录的方法如离子交换形成的盐。其他药学上可接受的盐包括己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖醛酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐(pectinate)、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一酸盐、戊酸盐等。代表性的碱金属或碱土金属盐包括钠盐、锂盐、钾盐、钙盐、镁盐等。适当时，额外的药学上可接受的盐包括利用诸如卤离子、氢氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、低级烷基磺酸根和芳基磺酸根等抗衡离子与铵、季铵和胺阳离子形成的无毒盐。
在一些实施方案中，本文提供了一种生产本文所述的药物组合物的方法。
药物制剂
在一些方面，本文提供了一种药物制剂，其包含：反义寡聚体(如本文所述的ASO)，其中如本文所述的ASO包含与SEQ ID NO:21-67、210-256或304-1099中的任一个具有至少80％序列同一性的序列；和药物可接受的稀释剂；其中约0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22.5、25、27.5、30、32.5、35、37.5、40、42.5、45、47.5、50、52.5、55、57.5、60、62.5、65、67.5、70、72.5、75、77.5、80、82.5、85、87.5、90、92.5、95、97.5、100、102.5、105、107.5、110、112.5、115、117.5、120、122.5、125、127.5、130、132.5、135、137.5、140、142.5、145、147.5、150、152.5、155、157.5、160、162.5、165、167.5、170、172.5、175、177.5、180、182.5、185、187.5、190、192.5、195、197.5、200、202.5、205、207.5、210、212.5、215、217.5、220、222.5、225、227.5、230、232.5、235、237.5、240、242.5、245、247.5或250mg的如本文所述的ASO以0.1-250mg/mL的浓度被溶解或悬浮在溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO包括与表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8a和8b中列出的序列中的任一个具有至少80％序列同一性的序列。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO包含与SEQ ID NO:21-67、210-256或304-1099中的任一个具有至少60％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、884％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.8％、99.9％或100％序列同一性的序列。在一些实施方案中，如本文所述的ASO由与SEQ ID NO:21-67、210-256或304-1099中的任一个具有至少60％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、884％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.8％、99.9％或100％序列同一性的序列组成。在一些实施方案中，如本文所述的ASO由与表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8a和8b中列出的序列中的任一个至少60％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、884％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.8％、99.9％或100％序列同一性的序列组成。
在一些实施方案中，约1-500、2-500、3-500、4-500、5-500、6-500、7-500、8-500、9-500、10-500、15-500、20-500、25-500、30-500、35-500、40-500、45-500、50-500、55-500、60-500、65-500、70-500、75-500、80-500、85-500、90-500、95-500、100-500、105-500、110-500、115-500、120-500、125-500、130-500、135-500、140-500、145-500、150-500、155-500、160-500、165-500、170-500、175-500、180-500、185-500、190-500、195-500、205-500、210-500、215-500、220-500、225-500、230-500、235-500、240-500、245-500、250-500、255-500、260-500、265-500、270-500、275-500、280-500、285-500、290-500、295-500、300-500、305-500、310-500、315-500、320-500、325-500、330-500、335-500、340-500、345-500、350-500、355-500、360-500、365-500、370-500、375-500、380-500、385-500、390-500、395-500、400-500、405-500、410-500、415-500、420-500、425-500、430-500、435-500、440-500、445-500、450-500、455-500、460-500、465-500、470-500、475-500、480-500、485-500、490-500或495-500mg的如本文所述的ASO以5-200mg/mL的浓度被溶解或悬浮在溶液中。在一些实施方案中，约1-495、1-490、1-485、1-480、1-475、1-470、1-465、1-460、1-455、1-450、1-445、1-440、1-435、1-430、1-425、1-420、1-415、1-410、1-405、1-400、1-395、1-390、1-385、1-380、1-375、1-370、1-365、1-360、1-355、1-350、1-345、1-340、1-335、1-330、1-325、1-320、1-315、1-310、1-305、1-300、1-295、1-290、1-285、1-280、1-275、1-270、1-265、1-260、1-255、1-250、1-245、1-240、1-235、1-230、1-225、1-220、1-215、1-210、1-205、1-200、1-195、1-190、1-185、1-180、1-175、1-170、1-165、1-160、1-155、1-150、1-145、1-140、1-135、1-130、1-125、1-120、1-115、1-110、1-105、1-100、1-95、1-90、1-85、1-80、1-75、1-70、1-65、1-60、1-55、1-0、1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10、1-9、1-8、1-7、1-6、1-5、1-4、1-3或1-2mg的如本文所述的ASO以5-200mg/mL的浓度被溶解或悬浮在溶液中。
在一些实施方案中，至少约0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22.5、25、27.5、30、32.5、35、37.5、40、42.5、45、47.5、50、52.5、55、57.5、60、62.5、65、67.5、70、72.5、75、77.5、80、82.5、85、87.5、90、92.5、95、97.5、100、102.5、105、107.5、110、112.5、115、117.5、120、122.5、125、127.5、130、132.5、135、137.5、140、142.5、145、147.5、150、152.5、155、157.5、160、162.5、165、167.5、170、172.5、175、177.5、180、182.5、185、187.5、190、192.5、195、197.5、200、202.5、205、207.5、210、212.5、215、217.5、220、222.5、225、227.5、230、232.5、235、237.5、240、242.5、245、247.5或250mg的如本文所述的ASO以0.1-250mg/mL的浓度被溶解或悬浮在溶液中。在一些实施方案中，至多约0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22.5、25、27.5、30、32.5、35、37.5、40、42.5、45、47.5、50、52.5、55、57.5、60、62.5、65、67.5、70、72.5、75、77.5、80、82.5、85、87.5、90、92.5、95、97.5、100、102.5、105、107.5、110、112.5、115、117.5、120、122.5、125、127.5、130、132.5、135、137.5、140、142.5、145、147.5、150、152.5、155、157.5、160、162.5、165、167.5、170、172.5、175、177.5、180、182.5、185、187.5、190、192.5、195、197.5、200、202.5、205、207.5、210、212.5、215、217.5、220、222.5、225、227.5、230、232.5、235、237.5、240、242.5、245、247.5或250mg的如本文所述的ASO以0.1-250mg/mL的浓度被溶解或悬浮在溶液中。在一些实施方案中，约0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22.5、25、27.5、30、32.5、35、37.5、40、42.5、45、47.5、50、52.5、55、57.5、60、62.5、65、67.5、70、72.5、75、77.5、80、82.5、85、87.5、90、92.5、95、97.5、100、102.5、105、107.5、110、112.5、115、117.5、120、122.5、125、127.5、130、132.5、135、137.5、140、142.5、145、147.5、150、152.5、155、157.5、160、162.5、165、167.5、170、172.5、175、177.5、180、182.5、185、187.5、190、192.5、195、197.5、200、202.5、205、207.5、210、212.5、215、217.5、220、222.5、225、227.5、230、232.5、235、237.5、240、242.5、245、247.5或250mg的如本文所述的ASO以0.1-250mg/mL的浓度被溶解或悬浮在溶液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO以5-250、5-247.5、5-245、5-242.5、5-240、5-237.5、5-235、5-232.5、5-230、5-227.5、5-225、5-225.5、5-220、5-217.5、5-215、5-212.5、5-210、5-205.5、5-205、5-202.5、5-200、5-197.5、5-195、5-192.5、5-190、5-187.5、5-185、5-182.5、5-180、5-177.5、5-175、5-172.5、5-170、5-167.5、5-165、5-162.5、5-160、5-157.5、5-155、5-152.5、5-150、5-147.5、5-145、5-142.5、5-140、5-137.5、5-135、5-132.5、5-130、5-127.5、5-125、5-122.5、5-120、5-117.5、5-115、5-112.5、5-110、5-107.5、5-105、5-102.5、5-100、5-97.5、5-95、5-92.5、5-90、5-87.5、5-85、5-82.5、5-80、5-77.5、5-75、5-72.5、5-70、5-67.5、5-65、5-62.5、5-60、5-57.5、5-55、5-52.5、5-50、5-47.5、5-45、5-42.5、5-40、5-37.5、5-35、5-32.5、5-30、5-27.5、5-25、5-22.5、5-20、5-17.5、5-15、5-12.5或5-10mg/mL的浓度被溶解或悬浮在溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO以10-250、15-250、20-250、25-250、30-250、35-250、40-250、45-250、50-250、55-250、60-250、65-250、70-250、75-250、80-250、85-250、90-250、95-250、100-250、105-250、110-250、115-250、120-250、125-250、130-250、135-250、140-250、145-250、150-250、155-250、160-250、165-250、170-250、175-250、180-250、185-250、190-250或195-250、200-250、205-250、210-250、215-250、220-250、225-250、230-250、235-250、240-250或245-250mg/mL的浓度被溶解或悬浮在溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO以至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249或250mg/mL的浓度被溶解或悬浮在溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO以至多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249或250mg/mL的浓度被溶解或悬浮在溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO以1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249或250mg/mL的浓度被溶解或悬浮在溶液中。
在一些实施方案中，药学上可接受的稀释剂包含人工脑脊髓液(aCSF)溶液。在一些实施方案中，该溶液包含来自对象的脑脊髓液(CSF)样品。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在等渗溶液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在磷酸盐缓冲(pH 6.6-7.6)溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在磷酸盐缓冲(pH 6.0-8.0)溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在磷酸盐缓冲(pH 5.0-8.0)溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在pH 4.5-8.5、pH 4.6-8.5、pH4.7-8.5、pH 4.8-8.5、pH 4.9-8.5、pH5.0-8.5、pH 5.1-8.5、pH5.2-8.5、pH 5.3-8.5、pH5.4-8.5、pH 5.5-8.5、pH5.6-8.5、pH 5.7-8.5、pH 5.8-8.5、H 5.9-8.5、pH 6.0-8.5、pH6.1-8.5、pH 6.2-8.5、pH 6.3-8.5、pH 6.4-8.5、pH 6.5-8.5、pH 6.6-8.5、pH 6.7-8.5、pH6.8-8.5、pH 6.9-8.5、pH 7.0-8.5、pH 7.1-8.5、pH 7.2-8.5、pH 7.3-8.5、pH 7.4-8.5、pH7.5-8.5、pH 7.6-8.5、pH 7.7-8.5、pH 7.8-8.5、pH 7.9-8.5、pH 8.0-8.5、pH 8.1-8.5、pH8.2-8.5、pH 8.3-8.5或pH 8.4-8.5的磷酸盐缓冲溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在pH 4.5-8.3、pH 4.5-8.2、pH 4.5-8.1、pH 4.5-8.0、pH 4.5-7.9、pH4.5-7.8、pH 4.5-7.7、pH 4.5-7.6、pH 4.5-7.5、pH 4.5-7.4、pH 4.5-7.3、pH 4.5-7.2、pH4.5-7.1、pH 4.5-7.0、pH 4.5-6.9、pH 4.5-6.8、pH 4.5-6.7、pH 4.5-6.6、pH 4.5-6.5、pH4.5-6.4、pH 4.5-6.3、pH 4.5-6.2、pH 4.5-6.1、pH 4.5-6.0、pH 4.5-5.9、pH 4.5-5.8、pH4.5-5.7、pH 4.5-5.6、pH 4.5-5.5、pH 4.5-5.4、pH 4.5-5.3、pH 4.5-5.2、pH 4.5-5.1、pH4.5-5.0、pH 4.5-4.9、pH 4.5-4.8、pH 4.5-4.7或pH 4.5-4.6的磷酸盐缓冲溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在pH 6.0-7.6、pH 6.1-7.6、pH 6.2-7.6、pH6.3-7.6、pH 6.4-7.6、pH 6.5-7.6、pH 6.6-7.6、pH 6.7-7.6、pH 6.8-7.6、pH 6.9-7.6、pH7.0-7.6、pH 7.1-7.6、pH 7.2-7.6、pH 7.3-7.6、pH 7.4-7.6或pH 7.5-7.6的磷酸盐缓冲溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在pH 6.6-8.0、pH 6.6-7.9、pH6.6-7.8、pH 6.6-7.7、pH 6.6-7.6、pH 6.6-7.5、pH 6.6-7.4、pH 6.6-7.3、pH 6.6-7.2、pH6.6-7.1、pH 6.6-7.0、pH 6.6-6.9、pH 6.6-6.8或pH 6.6-6.7的磷酸盐缓冲溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在pH 6.0-8.0、pH 6.1-8.0、pH 6.2-8.0、pH6.3-8.0、pH 6.4-8.0、pH 6.5-8.0、pH 6.6-8.0、pH 6.7-8.0、pH 6.8-8.0、pH 6.9-8.0、pH7.0-8.0、pH 7.1-8.0、pH 7.2-8.0、pH 7.3-8.0、pH 7.4-8.0、pH 7.5-8.0、pH 7.6-8.0、pH7.7-8.0、pH 7.8-8.0或pH 7.9-8.0的磷酸盐缓冲溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在pH 6.0-7.9、pH 6.0-7.8、pH 6.0-7.7、pH 6.0-7.6、pH 6.0-7.5、pH6.0-7.4、pH 6.0-7.3、pH 6.0-7.2、pH 6.0-7.1、pH 6.0-7.0、pH 6.0-6.9、pH 6.0-6.8、pH6.0-6.7、pH 6.0-6.6、pH 6.0-6.5、pH 6.0-6.4、pH 6.0-6.3、pH 6.0-6.2或pH 6.0-6.1的磷酸盐缓冲溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在pH 5.7-8.5、5.8-8.4、5.9-8.3、6.0-8.2、6.1-8.1、6.2-8.0、6.3-7.9、6.4-7.8、6.5-7.7或6.6-7.6的磷酸盐缓冲溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在pH约5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9或8.0的磷酸盐缓冲溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在pH 5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9或8.0的磷酸盐缓冲溶液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含25-250mM NaCl的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含25-250、30-250、35-250、40-250、45-250、50-250、55-250、60-250、65-250、70-250、75-250、80-250、85-250、90-250、95-250、100-250、105-250、110-250、115-250、120-250、125-250、130-250、135-250、140-250、145-250、150-250、155-250、160-250、165-250、170-250、175-250、180-250、185-250、190-250、195-250、200-250、205-250、210-250、215-250、220-250、225-250、230-250、235-250、240-250或245-250mM NaCl的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含25-245、25-240、25-235、25-230、25-225、25-220、25-215、25-210、25-205、25-200、25-195、25-190、25-185、25-180、25-175、25-170、25-165、25-160、25-155、25-150、25-145、25-140、25-135、25-130、25-125、25-120、25-115、25-110、25-105、25-110、25-105、25-100、25-95、25-90、25-85、25-80、25-75、25-70、25-65、25-60、25-55、25-50、25-45、25-40、25-35或25-30mM NaCl的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含30-245、35-240、40-235、45-230、50-225、55-220、60-215、65-210、70-205、75-200、80-195、85-190、90-185、95-180、100-175、105-170、110-165、115-160、120-155、125-150、130-145或135-140mM NaCl的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含100-140、101-140、102-140、103-140、104-140、105-140、106-140、107-140、108-140、109-140、110-140、111-140、112-140、113-140、114-140、115-140、116-140、117-140、118-140、119-140、120-140、121-140、122-140、123-140、124-140、125-140、126-140、127-140、128-140、129-140、130-140、131-140、132-140、133-140、134-140、135-140、136-140、137-140、138-140或139-140mM NaCl的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含100-139、100-138、100-137、100-136、100-135、100-134、100-133、100-132、100-131、100-130、100-129、100-128、100-127、100-126、100-125、100-124、100-123、100-122、100-121、100-120、100-119、100-118、100-117、100-116、100-115、100-114、100-113、100-112、100-111、100-110、100-109、100-108、100-107、100-106、100-105、100-104、100-103、100-102或100-101mM NaCl的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至少90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139或140mM NaCl的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至多90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139或140mM NaCl的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139或140mM NaCl的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1-20mM KCl的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1-40、0.1-39、0.1-38、0.1-37、0.1-36、0.1-35、0.1-34、0.1-33、0.1-32、0.1-31、0.1-30、0.1-29、0.1-28、0.1-27、0.1-26、0.1-25、0.1-24、0.1-23、0.1-22、0.1-21、0.1-20、0.1-19、0.1-18、0.1-17、0.1-16、0.1-15、0.1-14、0.1-13、0.1-12、0.1-10、0.1-9、0.1-8、0.1-7、0.1-6、0.1-5、0.1-4、0.1-3、0.1-2或0.1-1mM KCl的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.2-40、0.3-40、0.4-40、0.5-40、0.6-40、0.7-40、0.8-40、0.9-40、1-40、2-40、3-40、4-40、5-40、6-40、7-40、8-40、9-40、10-40、11-40、12-40、13-40、14-40、15-40、16-40、17-40、18-40、19-40、20-40、21-40、22-40、23-40、24-40、25-40、26-40、27-40、28-40、29-40、30-40、31-40、32-40、33-40、34-40、35-40、36-40、37-40、38-40或39-40mM KCl的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1-3.5、0.2-3.5、0.3-3.5、0.4-3.5、0.5-3.5、0.6-3.5、0.7-3.5、0.8-3.5、0.9-3.5、1.0-3.5、1.1-3.5、1.2-3.5、1.3-3.5、1.4-3.5、1.5-3.5、1.6-3.5、1.7-3.5、1.8-3.5、1.9-3.5、2.0-3.5、2.1-3.5、2.2-3.5、2.3-3.5、2.4-3.5、2.5-3.5、2.6-3.5、2.7-3.5、2.8-3.5、2.9-3.5、3.0-3.5、3.1-3.5、3.2-3.5、3.3-3.5或3.4-3.5mM KCl的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1-3.4、0.1-3.3、0.1-3.2、0.1-3.1、0.1-3.0、0.1-2.9、0.1-2.8、0.1-2.7、0.1-2.6、0.1-2.5、0.1-2.4、0.1-2.3、0.1-2.2、0.1-2.1、0.1-2.0、0.1-1.9、0.1-1.8、0.1-1.7、0.1-1.6、0.1-1.5、0.1-1.4、0.1-1.3、0.1-1.2、0.1-1.1、0.1-1.0、0.1-0.9、0.1-0.8、0.1-0.7、0.1-0.6、0.1-0.5、0.1-0.4、0.1-0.3或0.1-0.2mM KCl的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至少0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4或3.5mM KCl的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至多0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4或3.5mM KCl的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4或3.5mMKCl的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1-50mM Na2HPO4的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.01-100、0.02-100、0.03-100、0.04-100、0.05-100、0.06-100、0.07-100、0.08-100、0.09-100、0.1-100、0.2-100、0.3-100、0.4-100、0.5-100、0.6-100、0.7-100、0.8-100、0.9-100、1-100、2-100、3-100、4-100、5-100、6-100、7-100、8-100、9-100、10-100、15-100、20-100、25-100、30-100、35-100、40-100、45-100、50-100、55-100、60-100、65-100、70-100、75-100、80-100、85-100、90-100或95-100mM Na2HPO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.01-95、0.01-90、0.01-85、0.01-80、0.01-75、0.01-70、0.01-65、0.01-60、0.01-55、0.01-50、0.01-45、0.01-40、0.01-35、0.01-30、0.01-25、0.01-20、0.01-15、0.01-10、0.01-9、0.01-8、0.01-7、0.01-6、0.01-5、0.01-4、0.01-3、0.01-2、0.01-1、0.01-0.9、0.01-0.8、0.01-0.7、0.01-0.6、0.01-0.5、0.01-0.4、0.01-0.3、0.01-0.2、0.01-0.1、0.01-0.09、0.01-0.08、0.01-0.07、0.01-0.06、0.01-0.05、0.01-0.04、0.01-0.03或0.01-0.02mMNa2HPO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1-3.0、0.1-2.9、0.1-2.8、0.1-2.7、0.1-2.6、0.1-2.5、0.1-2.4、0.1-2.3、0.1-2.2、0.1-2.1、0.1-2.0、0.1-1.9、0.1-1.8、0.1-1.7、0.1-1.6、0.1-1.5、0.1-1.4、0.1-1.3、0.1-1.2、0.1-1.1、0.1-1.0、0.1-0.9、0.1-0.8、0.1-0.7、0.1-0.6、0.1-0.5、0.1-0.4、0.1-0.3或0.1-0.2mMNa2HPO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1-3.0、0.2-3.0、0.3-3.0、0.4-3.0、0.5-3.0、0.6-3.0、0.7-3.0、0.8-3.0、0.9-3.0、1.0-3.0、1.2-3.0、1.3-3.0、1.4-3.0、1.5-3.0、1.6-3.0、1.7-3.0、1.8-3.0、1.9-3.0、2.0-3.0、2.1-3.0、2.2-3.0、2.3-3.0、2.4-3.0、2.5-3.0、2.6-3.0、2.7-3.0、2.8-3.0或2.9-3.0mM Na2HPO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至少0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9或3.0mM Na2HPO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至多0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9或3.0mM Na2HPO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9或3.0mM Na2HPO4的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1-50mM NaH2PO4的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.01-100、0.02-100、0.03-100、0.04-100、0.05-100、0.06-100、0.07-100、0.08-100、0.09-100、0.1-100、0.2-100、0.3-100、0.4-100、0.5-100、0.6-100、0.7-100、0.8-100、0.9-100、1-100、2-100、3-100、4-100、5-100、6-100、7-100、8-100、9-100、10-100、15-100、20-100、25-100、30-100、35-100、40-100、45-100、50-100、55-100、60-100、65-100、70-100、75-100、80-100、85-100、90-100或95-100mM NaH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.01-95、0.01-90、0.01-85、0.01-80、0.01-75、0.01-70、0.01-65、0.01-60、0.01-55、0.01-50、0.01-45、0.01-40、0.01-35、0.01-30、0.01-25、0.01-20、0.01-15、0.01-10、0.01-9、0.01-8、0.01-7、0.01-6、0.01-5、0.01-4、0.01-3、0.01-2、0.01-1、0.01-0.9、0.01-0.8、0.01-0.7、0.01-0.6、0.01-0.5、0.01-0.4、0.01-0.3、0.01-0.2、0.01-0.1、0.01-0.09、0.01-0.08、0.01-0.07、0.01-0.06、0.01-0.05、0.01-0.04、0.01-0.03或0.01-0.02mMNaH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1-3.0、0.1-2.9、0.1-2.8、0.1-2.7、0.1-2.6、0.1-2.5、0.1-2.4、0.1-2.3、0.1-2.2、0.1-2.1、0.1-2.0、0.1-1.9、0.1-1.8、0.1-1.7、0.1-1.6、0.1-1.5、0.1-1.4、0.1-1.3、0.1-1.2、0.1-1.1、0.1-1.0、0.1-0.9、0.1-0.8、0.1-0.7、0.1-0.6、0.1-0.5、0.1-0.4、0.1-0.3或0.1-0.2mMNaH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1-3.0、0.2-3.0、0.3-3.0、0.4-3.0、0.5-3.0、0.6-3.0、0.7-3.0、0.8-3.0、0.9-3.0、1.0-3.0、1.2-3.0、1.3-3.0、1.4-3.0、1.5-3.0、1.6-3.0、1.7-3.0、1.8-3.0、1.9-3.0、2.0-3.0、2.1-3.0、2.2-3.0、2.3-3.0、2.4-3.0、2.5-3.0、2.6-3.0、2.7-3.0、2.8-3.0或2.9-3.0mM NaH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至少0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9或3.0mM NaH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至多0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9或3.0mM NaH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9或3.0mM NaH2PO4的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1-50mM CaCl2的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1-50、0.2-50、0.3-50、0.4-50、0.5-50、0.6-50、0.7-50、0.8-50、0.9-50、1.0-50、-50、1.1-50、1.2-50、1.3-50、1.4-50、1.5-50、1.6-50、1.7-50、1.8-50、1.9-50、2.0-50、2.1-50、2.2-50、2.3-50、2.4-50、2.5-50、2.6-50、2.7-50、2.8-50、2.9-50、3.0-50、3.1-50、3.2-50、3.3-50、3.4-50、3.5-50、3.6-50、3.7-50、3.8-50、3.9-50、4-50、5-50、6-50、7-50、8-50、9-50、10-50、15-50、20-50、25-50、1 30-50、35-50、40-50或45-50mM CaCl2的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1-45、0.1-40、0.1-35、0.1-30、0.1-25、0.1-20、0.1-15、0.1-10、0.1-5、0.1-4、0.1-4.9、0.1-4.8、0.1-4.7、0.1-4.6、0.1-4.5、0.1-4.4、0.1-4.3、0.1-4.2、0.1-4.1、0.1-4.0、0.1-3.9、0.1-3.8、0.1-3.7、0.1-3.6、0.1-3.5、0.1-3.4、0.1-3.3、0.1-3.2、0.1-3.1、0.1-3.0、0.1-2.9、0.1-2.8、0.1-2.7、0.1-2.6、0.1-2.5、0.1-2.4、0.1-2.3、0.1-2.2、0.1-2.1、0.1-2.0、0.1-1.9、0.1-1.8、0.1-1.7、0.1-1.6、0.1-1.5、0.1-1.4、0.1-1.3、0.1-1.2、0.1-1.1、0.1-1.0、0.1-0.9、0.1-0.8、0.1-0.7、0.1-0.6、0.1-0.5、0.1-0.4、0.1-0.3或0.1-0.2mM CaCl2的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至少1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9或4.0mM CaCl2的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至多1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9或4.0mM CaCl2的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9或4.0mM CaCl2的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1-50mM MgCl2的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1-50、0.2-50、0.3-50、0.4-50、0.5-50、0.6-50、0.7-50、0.8-50、0.9-50、1.0-50、-50、1.1-50、1.2-50、1.3-50、1.4-50、1.5-50、1.6-50、1.7-50、1.8-50、1.9-50、2.0-50、2.1-50、2.2-50、2.3-50、2.4-50、2.5-50、2.6-50、2.7-50、2.8-50、2.9-50、3.0-50、3.1-50、3.2-50、3.3-50、3.4-50、3.5-50、3.6-50、3.7-50、3.8-50、3.9-50、4-50、5-50、6-50、7-50、8-50、9-50、10-50、15-50、20-50、25-50、1 30-50、35-50、40-50或45-50mM MgCl2的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1-45、0.1-40、0.1-35、0.1-30、0.1-25、0.1-20、0.1-15、0.1-10、0.1-5、0.1-4、0.1-4.9、0.1-4.8、0.1-4.7、0.1-4.6、0.1-4.5、0.1-4.4、0.1-4.3、0.1-4.2、0.1-4.1、0.1-4.0、0.1-3.9、0.1-3.8、0.1-3.7、0.1-3.6、0.1-3.5、0.1-3.4、0.1-3.3、0.1-3.2、0.1-3.1、0.1-3.0、0.1-2.9、0.1-2.8、0.1-2.7、0.1-2.6、0.1-2.5、0.1-2.4、0.1-2.3、0.1-2.2、0.1-2.1、0.1-2.0、0.1-1.9、0.1-1.8、0.1-1.7、0.1-1.6、0.1-1.5、0.1-1.4、0.1-1.3、0.1-1.2、0.1-1.1、0.1-1.0、0.1-0.9、0.1-0.8、0.1-0.7、0.1-0.6、0.1-0.5、0.1-0.4、0.1-0.3或0.1-0.2mM MgCl2的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至少0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9或4.0mM MgCl2的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至多0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9或4.0mM MgCl2的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9或4.0mM MgCl2的缓冲液中。
在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在还包含1-100mM NaHCO3、1-100mM KHCO3或其组合的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含1-100mM NaHCO3的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含1-99、1-95、1-90、1-85、1-80、1-75、1-70、1-65、1-60、1-55、1-50、1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10、1-9、1-8、1-7、1-6、1-5、1-4、1-3或1-2mM NaHCO3的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含2-100、3-100、4-100、5-100、6-100、7-100、8-100、9-100、10-100、15-100、20-100、25-100、30-100、35-100、40-100、45-100、50-100、55-100、60-100、65-100、70-100、75-100、80-100、85-100、90-100或95-100mM NaHCO3的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含24.0-28.0、24.0-27.9、24.0-27.8、24.0-27.7、24.0-27.6、24.0-27.5、24.0-27.4、24.0-27.3、24.0-27.2、24.0-27.1、24.0-27.0、24.0-26.9、24.0-26.8、24.0-26.7、24.0-26.6、24.0-26.5、24.0-26.4、24.0-26.3、24.0-26.2、24.0-26.1、24.0-26.0、24.0-25.9、4.0-25.8、24.0-25.7、24.0-25.6、24.0-25.5、24.0-25.4、24.0-25.3、24.0-25.2、24.0-25.1、24.0-25.0、24.0-24.9、24.0-24.8、24.0-24.7、24.0-24.6、24.0-24.5、24.0-24.4、24.0-24.3、24.0-24.2或24.0-24.1mM NaHCO3的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含24.1-28.0、24.2-28.0、24.3-28.0、24.4-28.0、24.5-28.0、24.6-28.0、24.7-28.0、24.8-28.0、24.9-28.0、25.0-28.0、25.1-28.0、25.2-28.0、25.3-28.0、25.4-28.0、25.5-28.0、25.6-28.0、25.7-28.0、25.8-28.0、25.9-28.0、26.0-28.0、26.1-28.0、26.2-28.0、26.3-28.0、26.4-28.0、26.5-28.0、26.6-28.0、26.7-28.0、26.8-28.0、26.9-28.0、27.0-28.0、27.1-28.0、27.2-28.0、27.3-28.0、27.4-28.0、27.5-28.0、27.6-28.0、27.7-28.0、27.8-28.0或27.9-28.0mMNaHCO3的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至少24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.0、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9或28.0mM NaHCO3的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至多24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9或28.0mM NaHCO3的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9或28.0mMNaHCO3的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含1-100mM KHCO3的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含1-99、1-95、1-90、1-85、1-80、1-75、1-70、1-65、1-60、1-55、1-50、1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10、1-9、1-8、1-7、1-6、1-5、1-4、1-3或1-2mM KHCO3的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含2-100、3-100、4-100、5-100、6-100、7-100、8-100、9-100、10-100、15-100、20-100、25-100、30-100、35-100、40-100、45-100、50-100、55-100、60-100、65-100、70-100、75-100、80-100、85-100、90-100或95-100mM KHCO3的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含24.0-28.0、24.0-27.9、24.0-27.8、24.0-27.7、24.0-27.6、24.0-27.5、24.0-27.4、24.0-27.3、24.0-27.2、24.0-27.1、24.0-27.0、24.0-26.9、24.0-26.8、24.0-26.7、24.0-26.6、24.0-26.5、24.0-26.4、24.0-26.3、24.0-26.2、24.0-26.1、24.0-26.0、24.0-25.9、4.0-25.8、24.0-25.7、24.0-25.6、24.0-25.5、24.0-25.4、24.0-25.3、24.0-25.2、24.0-25.1、24.0-25.0、24.0-24.9、24.0-24.8、24.0-24.7、24.0-24.6、24.0-24.5、24.0-24.4、24.0-24.3、24.0-24.2或24.0-24.1mM KHCO3的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被被溶解或稀释在包含24.1-28.0、24.2-28.0、24.3-28.0、24.4-28.0、24.5-28.0、24.6-28.0、24.7-28.0、24.8-28.0、24.9-28.0、25.0-28.0、25.1-28.0、25.2-28.0、25.3-28.0、25.4-28.0、25.5-28.0、25.6-28.0、25.7-28.0、25.8-28.0、25.9-28.0、26.0-28.0、26.1-28.0、26.2-28.0、26.3-28.0、26.4-28.0、26.5-28.0、26.6-28.0、26.7-28.0、26.8-28.0、26.9-28.0、27.0-28.0、27.1-28.0、27.2-28.0、27.3-28.0、27.4-28.0、27.5-28.0、27.6-28.0、27.7-28.0、27.8-28.0或27.9-28.0mMKHCO3的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至少24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.0、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9或28.0mM KHCO3的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至多24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9或28.0mM KHCO3的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9或28.0mM KHCO3的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0-50mM KH2PO4的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0-100、0.01-100、0.02-100、0.03-100、0.04-100、0.05-100、0.06-100、0.07-100、0.08-100、0.09-100、0.1-100、0.2-100、0.3-100、0.4-100、0.5-100、0.6-100、0.7-100、0.8-100、0.9-100、1-100、2-100、3-100、4-100、5-100、6-100、7-100、8-100、9-100、10-100、15-100、20-100、25-100、30-100、35-100、40-100、45-100、50-100、55-100、60-100、65-100、70-100、75-100、80-100、85-100、90-100或95-100mM KH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0-95、0-90、0-85、0-80、0-75、0-70、0-65、0-60、0-55、0-50、0-45、0-40、0-35、0-30、0-25、0-20、0-15、0-10、0-9、0-8、0-7、0-6、0-5、0-4、0-3、0-2、0-1、0-0.9、0-0.8、0-0.7、0-0.6、0-0.5、0-0.4、0-0.3、0-0.2、0-0.1、0-0.09、0-0.08、0-0.07、0-0.06、0-0.05、0-0.04、0-0.03或0-0.02mM KH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.01-95、0.01-90、0.01-85、0.01-80、0.01-75、0.01-70、0.01-65、0.01-60、0.01-55、0.01-50、0.01-45、0.01-40、0.01-35、0.01-30、0.01-25、0.01-20、0.01-15、0.01-10、0.01-9、0.01-8、0.01-7、0.01-6、0.01-5、0.01-4、0.01-3、0.01-2、0.01-1、0.01-0.9、0.01-0.8、0.01-0.7、0.01-0.6、0.01-0.5、0.01-0.4、0.01-0.3、0.01-0.2、0.01-0.1、0.01-0.09、0.01-0.08、0.01-0.07、0.01-0.06、0.01-0.05、0.01-0.04、0.01-0.03或0.01-0.02mMKH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0-3.0、0-2.9、0-2.8、0-2.7、0-2.6、0-2.5、0-2.4、0-2.3、0-2.2、0-2.1、0-2.0、0-1.9、0-1.8、0-1.7、0-1.6、0-1.5、0-1.4、0-1.3、0-1.2、0-1.1、0-1.0、0-0.9、0-0.8、0-0.7、0-0.6、0-0.5、0-0.4、0-0.3或0-0.2mM KH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1-3.0、0.1-2.9、0.1-2.8、0.1-2.7、0.1-2.6、0.1-2.5、0.1-2.4、0.1-2.3、0.1-2.2、0.1-2.1、0.1-2.0、0.1-1.9、0.1-1.8、0.1-1.7、0.1-1.6、0.1-1.5、0.1-1.4、0.1-1.3、0.1-1.2、0.1-1.1、0.1-1.0、0.1-0.9、0.1-0.8、0.1-0.7、0.1-0.6、0.1-0.5、0.1-0.4、0.1-0.3或0.1-0.2mM KH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0-3.0、0.1-3.0、0.2-3.0、0.3-3.0、0.4-3.0、0.5-3.0、0.6-3.0、0.7-3.0、0.8-3.0、0.9-3.0、1.0-3.0、1.2-3.0、1.3-3.0、1.4-3.0、1.5-3.0、1.6-3.0、1.7-3.0、1.8-3.0、1.9-3.0、2.0-3.0、2.1-3.0、2.2-3.0、2.3-3.0、2.4-3.0、2.5-3.0、2.6-3.0、2.7-3.0、2.8-3.0或2.9-3.0mM KH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至少0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9或3.0mM KH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至多0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9或3.0mM KH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9或3.0mM KH2PO4的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0-50mM NaH2PO4的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0-50、0-45、0-40、0-35、0-30、0-25、0-20、0-19、0-18、0-17、0-16、0-15、0-14、0-13、0-12、0-11、0-10、0-9、0-8、0-7、0-6、0-5、0-4、0-3、0-2、0-1、0-0.9、0-0.8、0-0.7、0-0.6、0-0.5、0-0.4、0-0.3或0-0.2mM NaH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0.1-50、0.1-45、0.1-40、0.1-35、0.1-30、0.1-25、0.1-20、0.1-19、0.1-18、0.1-17、0.1-16、0.1-15、0.1-14、0.1-13、0.1-12、0.1-11、0.1-10、0.1-9、0.1-8、0.1-7、0.1-6、0.1-5、0.1-4、0.1-3、0.1-2、0.1-1、0.1-0.9、0.1-0.8、0.1-0.7、0.1-0.6、0.1-0.5、0.1-0.4、0.1-0.3或0.1-0.2mM NaH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0-50、0.1-50、0.2-50、0.3-50、0.4-50、0.5-50、0.6-50、0.7-50、0.8-50、0.9-50、1-50、2-50、3-50、4-50、5-50、6-50、7-50、8-50、9-50、1-50、11-50、12-50、13-50、14-50、15-50、16-50、17-50、18-50、19-50、20-50、25-50、30-50、35-50、40-50或45-50mM NaH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0-20、0.1-20、0.2-20、0.3-20、0.4-20、0.5-20、0.6-20、0.7-20、0.8-20、0.9-20、1-20、2-20、3-20、4-20、5-20、6-20、7-20、8-20、9-20、10-20、11-20、12-20、13-20、14-20、15-20、16-20、17-20、18-20或19-20mMNaH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至少0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20mM NaH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至多0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20mM NaH2PO4的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20mM NaH2PO4的缓冲液中。
在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在还包含碳水化合物的缓冲液中。在一些实施方案中，碳水化合物包括D-葡萄糖。在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在还包含1-100mM D-葡萄糖的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含1-100mM D-葡萄糖的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含1-100、1-95、1-90、1-85、1-80、1-75、1-70、1-65、1-60、1-55、1-50、1-45、1-40、1-35、1-30、1-29、1-28、1-27、1-26、1-25、1-24、1-23、1-22、1-21、1-20、1-19、1-18、1-17、1-16、1-15、1-14、1-13、1-12、1-11、1-10、1-9、1-8、1-7、1-6、1-5、1-4、1-3或1-2mM D-葡萄糖的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含2-100、3-100、4-100、5-100、6-100、7-100、8-100、9-100、10-100、11-100、12-100、13-100、14-100、15-100、16-100、17-100、18-100、19-100、20-100、21-100、22-100、23-100、24-100、25-100、26-100、29-100、28-100、29-100、30-100、35-100、40-100、45-100、50-100、55-100、60-100、65-100、70-100、75-100、80-100、85-100、90-100或95-100mM D-葡萄糖的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含2-30、3-30、4-30、5-30、6-30、7-30、8-30、9-30、10-30、11-30、12-30、13-30、14-30、15-30、16-30、17-30、18-30、19-30、20-30、21-30、22-30、23-30、24-30、25-30、26-30、27-30、28-30或29-30mM D-葡萄糖的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30mM D-葡萄糖的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含至多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30mM D-葡萄糖的缓冲液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30mM D-葡萄糖的缓冲液中。
在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在包含25-250mM NaCl、0.1-20mM KCl、0.1-50mM Na2HPO4、0.1-50mM NaH2PO4、0.1-50mM CaCl2和0.1-50mM MgCl2的缓冲液中。
在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在包含150mM NaCl、3.0mM KCl、0.7mMNa2HPO4、0.3mM NaH2PO4、0.79mM MgCl2和1.4mM CaCl2的缓冲液中。
在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在还包含抗氧化剂的缓冲液中。在一些实施方案中，抗氧化剂为叔丁基羟基喹啉(TBHQ)、丁基化羟基甲苯(BHT)、丁基化羟基苯甲醚(BHA)、维生素E或其任何组合。在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在还包含抗氧化剂的缓冲液中，其中抗氧化剂为抗坏血酸(维生素C)、谷胱甘肽、硫辛酸、尿酸、胡萝卜素、α-生育酚(维生素E)、泛醇(辅酶Q)或其任何组合。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含25-250mM NaCl、0.1-20mM KCl、0-50mM KH2PO4、1-100mM NaHCO3、0-50mM NaH2PO4、1-100mM D-葡萄糖、0.1-50mMCaCl2、0.1-50mM MgCl2或其任何组合的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含25-250mM NaCl、0.1-20mM KCl、0-50mM KH2PO4、1-100mM NaHCO3、0-50mM NaH2PO4、1-100mM D-葡萄糖、0.1-50mMCaCl2和0.1-50mM MgCl2的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含127mM NaCl、1.0mMKCl、1.2mM KH2PO4、26mM NaHCO3、10mM D-葡萄糖、2.4mM CaCl2和1.3mM MgCl2的缓冲液中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在包含119mM NaCl、26.2mMNaHCO3、2.5mM KCl、1mM NaH2PO4、1.3mM MgCl2、10mM葡萄糖和2.5mM CaCl2的缓冲液中。
在一些实施方案中，药物制剂不包含防腐剂。在一些实施方案中，药物制剂包含防腐剂。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在稀释剂中至5-250mg/mL的浓度。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在稀释剂中至5-250、5-247.5、5-245、5-242.5、5-240、5-237.5、5-235、5-232.5、5-230、5-227.5、5-225、5-225.5、5-220、5-217.5、5-215、5-212.5、5-210、5-205.5、5-205、5-202.5、5-200、5-197.5、5-195、5-192.5、5-190、5-187.5、5-185、5-182.5、5-180、5-177.5、5-175、5-172.5、5-170、5-167.5、5-165、5-162.5、5-160、5-157.5、5-155、5-152.5、5-150、5-147.5、5-145、5-142.5、5-140、5-137.5、5-135、5-132.5、5-130、5-127.5、5-125、5-122.5、5-120、5-117.5、5-115、5-112.5、5-110、5-107.5、5-105、5-102.5、5-100、5-97.5、5-95、5-92.5、5-90、5-87.5、5-85、5-82.5、5-80、5-77.5、5-75、5-72.5、5-70、5-67.5、5-65、5-62.5、5-60、5-57.5、5-55、5-52.5、5-50、5-47.5、5-45、5-42.5、5-40、5-37.5、5-35、5-32.5、5-30、5-27.5、5-25、5-22.5、5-20、5-17.5、5-15、5-12.5或5-10mg/mL的浓度。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在稀释剂中至10-250、15-250、20-250、25-250、30-250、35-250、40-250、45-250、50-250、55-250、60-250、65-250、70-250、75-250、80-250、85-250、90-250、95-250、100-250、105-250、110-250、115-250、120-250、125-250、130-250、135-250、140-250、145-250、150-250、155-250、160-250、165-250、170-250、175-250、180-250、185-250、190-250或195-250、200-250、205-250、210-250、215-250、220-250、225-250、230-250、235-250、240-250或245-250mg/mL的浓度。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在稀释剂中至至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249或250mg/mL的浓度。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在稀释剂中至至多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249或250mg/mL的浓度。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在稀释剂中至1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249或250mg/mL的浓度。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO以ASO的浓度存在于药物组合物中，以0.1mg/mL至250mg/mL的浓度存在于药物组合物中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO以约0.1mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL、2.5mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL、6mg/mL、7mg/mL、8mg/mL、9mg/mL、10mg/mL、11mg/mL、12mg/mL、13mg/mL、14mg/mL、15mg/mL、16mg/mL、17mg/mL、18mg/mL、19mg/mL或20mg/mL的浓度存在于药物组合物中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO以约30mg/mL、40mg/mL、50mg/mL、60mg/mL、70mg/mL、80mg/mL、90mg/mL、100mg/mL、110mg/mL、120mg/mL、130mg/mL、140mg/mL、150mg/mL、160mg/mL、170mg/mL、180mg/mL、190mg/mL或200mg/mL的浓度存在于药物组合物中。在一些实施方案中，ASO以约22.5mg/mL、25mg/mL、27.5mg/mL、30mg/mL、32.5mg/mL、35mg/mL、37.5mg/mL、40mg/mL、42.5mg/mL、45mg/mL、47.5mg/mL、50mg/mL、52.5mg/mL、55mg/mL、57.5mg/mL、60mg/mL、62.5mg/mL、65mg/mL、67.5mg/mL、70mg/mL、72.5mg/mL、75mg/mL、77.5mg/mL、80mg/mL、82.5mg/mL、85mg/mL、87.5mg/mL、90mg/mL、92.5mg/mL、95mg/mL、97.5mg/mL、100mg/mL、102.5mg/mL、105mg/mL、107.5mg/mL、110mg/mL、112.5mg/mL、115mg/mL、117.5mg/mL、120mg/mL、122.5mg/mL、125mg/mL、127.5mg/mL、130mg/mL、132.5mg/mL、135mg/mL、137.5mg/mL、140mg/mL、142.5mg/mL、145mg/mL、147.5mg/mL、150mg/mL、152.5mg/mL、155mg/mL、157.5mg/mL、160mg/mL、162.5mg/mL、165mg/mL、167.5mg/mL、170mg/mL、172.5mg/mL、175mg/mL、177.5mg/mL、180mg/mL、182.5mg/mL、185mg/mL、187.5mg/mL、190mg/mL、192.5mg/mL、195mg/mL、197.5mg/mL、200mg/mL、202.5mg/mL、205mg/mL、207.5mg/mL、210mg/mL、212.5mg/mL、215mg/mL、217.5mg/mL、220mg/mL、222.5mg/mL、225mg/mL、227.5mg/mL、230mg/mL、232.5mg/mL、235mg/mL、237.5mg/mL、240mg/mL、242.5mg/mL、245mg/mL、247.5mg/mL或250mg/mL的浓度存在于药物组合物中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在稀释剂中至11mg/mL、22mg/mL、33mg/mL、44mg/mL、55mg/mL、66mg/mL、77mg/mL、88mg/mL、99mg/mL或100mg/mL的浓度。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO以0.1mg/mL至250mg/mL、0.2mg/mL至250mg/mL、0.3mg/mL至250mg/mL、0.4mg/mL至250mg/mL、0.5mg/mL至250mg/mL、0.6mg/mL至250mg/mL、0.7mg/mL至250mg/mL、0.8mg/mL至250mg/mL、0.9mg/mL至250mg/mL、1.0mg/mL至250mg/mL、1.1mg/mL至250mg/mL、1.2mg/mL至250mg/mL、1.3mg/mL至250mg/mL、1.4mg/mL至250mg/mL、1.5mg/mL至250mg/mL、1.6mg/mL至250mg/mL、1.7mg/mL至250mg/mL、1.8mg/mL至250mg/mL、1.9mg/mL至250mg/mL、2.0mg/mL至250mg/mL、2.1mg/mL至250mg/mL、2.2mg/mL至250mg/mL、2.3mg/mL至250mg/mL、2.4mg/mL至250mg/mL、2.5mg/mL至250mg/mL、2.6mg/mL至250mg/mL、2.7mg/mL至250mg/mL、2.8mg/mL至250mg/mL、2.9mg/mL至250mg/mL、3.0mg/mL至250mg/mL、3.1mg/mL至250mg/mL、3.2mg/mL至250mg/mL、3.3mg/mL至250mg/mL、3.4mg/mL至250mg/mL、3.5mg/mL至250mg/mL、3.6mg/mL至250mg/mL、3.7mg/mL至250mg/mL、3.8mg/mL至250mg/mL、3.9mg/mL至250mg/mL、4.0mg/mL至250mg/mL、5.0mg/mL至250mg/mL、6.0mg/mL至250mg/mL、7.0mg/mL至250mg/mL、8.0mg/mL至250mg/mL、9.0mg/mL至250mg/mL、10mg/mL至250mg/mL、15mg/mL至250mg/mL、20mg/mL至250mg/mL、25mg/mL至250mg/mL、30mg/mL至250mg/mL、35mg/mL至250mg/mL、40mg/mL至250mg/mL、45mg/mL至250mg/mL、50mg/mL至250mg/mL、55mg/mL至250mg/mL、60mg/mL至250mg/mL、65mg/mL至250mg/mL、70mg/mL至250mg/mL、75mg/mL至250mg/mL、80mg/mL至250mg/mL、85mg/mL至250mg/mL、90mg/mL至250mg/mL、95mg/mL至250mg/mL、100mg/mL至250mg/mL、105mg/mL至250mg/mL、110mg/mL至250mg/mL、115mg/mL至250mg/mL、120mg/mL至250mg/mL、125mg/mL至250mg/mL、130mg/mL至250mg/mL、135mg/mL至250mg/mL、140mg/mL至250mg/mL、145mg/mL至250mg/mL、150mg/mL至250mg/mL、155mg/mL至250mg/mL、160mg/mL至250mg/mL、165mg/mL至250mg/mL、170mg/mL至250mg/mL、175mg/mL至250mg/mL、180mg/mL至250mg/mL、185mg/mL至250mg/mL、190mg/mL至250mg/mL、195mg/mL至250mg/mL、200mg/mL至250mg/mL、205mg/mL至250mg/mL、210mg/mL至250mg/mL、215mg/mL至250mg/mL、220mg/mL至250mg/mL、225mg/mL至250mg/mL、230mg/mL至250mg/mL、235mg/mL至250mg/mL、240mg/mL至250mg/mL或245mg/mL至250mg/mL的浓度存在于药物组合物中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO以0.1mg/mL至250mg/mL、0.1mg/mL至245mg/mL、0.1mg/mL至240mg/mL、0.1mg/mL至235mg/mL、0.1mg/mL至230mg/mL、0.1mg/mL至225mg/mL、0.1mg/mL至220mg/mL、0.1mg/mL至215mg/mL、0.1mg/mL至210mg/mL、0.1mg/mL至205mg/mL、0.1mg/mL至200mg/mL、0.1mg/mL至195mg/mL、0.1mg/mL至190mg/mL、0.1mg/mL至185mg/mL、0.1mg/mL至180mg/mL、0.1mg/mL至175mg/mL、0.1mg/mL至170mg/mL、0.1mg/mL至165mg/mL、0.1mg/mL至160mg/mL、0.1mg/mL至155mg/mL、0.1mg/mL至150mg/mL、0.1mg/mL至145mg/mL、0.1mg/mL至140mg/mL、0.1mg/mL至135mg/mL、0.1mg/mL至130mg/mL、0.1mg/mL至125mg/mL、0.1mg/mL至120mg/mL、0.1mg/mL至115mg/mL、0.1mg/mL至110mg/mL、0.1mg/mL至100mg/mL、0.1mg/mL至95mg/mL、0.1mg/mL至90mg/mL、0.1mg/mL至85mg/mL、0.1mg/mL至80mg/mL、0.1mg/mL至75mg/mL、0.1mg/mL至70mg/mL、0.1mg/mL至65mg/mL、0.1mg/mL至60mg/mL、0.1mg/mL至55mg/mL、0.1mg/mL至50mg/mL、0.1mg/mL至45mg/mL、0.1mg/mL至40mg/mL、0.1mg/mL至35mg/mL、0.1mg/mL至30mg/mL、0.1mg/mL至25mg/mL、0.1mg/mL至20mg/mL、0.1mg/mL至15mg/mL、0.1mg/mL至10mg/mL、0.1mg/mL至9mg/mL、0.1mg/mL至8mg/mL、0.1mg/mL至7mg/mL、0.1mg/mL至6mg/mL、0.1mg/mL至5mg/mL、0.1mg/mL至4mg/mL、0.1mg/mL至3.9mg/mL、0.1mg/mL至3.8mg/mL、0.1mg/mL至3.7mg/mL、0.1mg/mL至3.6mg/mL、0.1mg/mL至3.5mg/mL、0.1mg/mL至3.4mg/mL、0.1mg/mL至3.3mg/mL、0.1mg/mL至3.2mg/mL、0.1mg/mL至3.1mg/mL、0.1mg/mL至3.0mg/mL、0.1mg/mL至2.9mg/mL、0.1mg/mL至2.8mg/mL、0.1mg/mL至2.7mg/mL、0.1mg/mL至2.6mg/mL、0.1mg/mL至2.5mg/mL、0.1mg/mL至2.4mg/mL、0.1mg/mL至2.3mg/mL、0.1mg/mL至2.2mg/mL、0.1mg/mL至2.1mg/mL、0.1mg/mL至2.0mg/mL、0.1mg/mL至1.9mg/mL、0.1mg/mL至1.8mg/mL、0.1mg/mL至1.7mg/mL、0.1mg/mL至1.6mg/mL、0.1mg/mL至1.5mg/mL、0.1mg/mL至1.4mg/mL、0.1mg/mL至1.3mg/mL、0.1mg/mL至1.2mg/mL、0.1mg/mL至1.1mg/mL、0.1mg/mL至1.0mg/mL、0.1mg/mL至0.9mg/mL、0.1mg/mL至0.8mg/mL、0.1mg/mL至0.7mg/mL、0.1mg/mL至0.6mg/mL、0.1mg/mL至0.5mg/mL、0.1mg/mL至0.4mg/mL、0.1mg/mL至0.3mg/mL或0.1mg/mL至0.2mg/mL的浓度存在于药物组合物中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在稀释剂中至至少0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249或250mg/mL的浓度。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在稀释剂中至至多0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249或250mg/mL的浓度。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在稀释剂中至0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249或250mg/mL的浓度。
在一些实施方案中，药物制剂不包含防腐剂。在一些实施方案中，药物制剂包含防腐剂。
本发明的治疗方法中使用的药物组合物被配制成与其预期施用途径相容。
在一些实施方案中，药物制剂适合于脑室内或鞘内注射。
在一些实施方案中，药物制剂适于口服、直肠、鼻内、皮内、皮下、鞘内、脑室内、腹腔内、肌肉内、玻璃体内、静脉内、颅内、颊内或舌下施用。在一些实施方案中，药物制剂适于皮内、皮下、鞘内、鼻内、颅内、脑室内、腹腔内、肌肉内、玻璃体内或静脉内注射。
在一些实施方案中，药物制剂被包装在单次使用小瓶中。在一些实施方案中，药物制剂被包装在多次使用小瓶中。
可以根据制药工业中众所周知且在已出版文献中描述的常规技术来制备药物制剂，其包含所述组合物的试剂(例如，反义寡核苷酸或反义寡聚体)并用于所述方法中的任一种。在一些实施方案中，用于治疗对象的药物制剂包括有效量的如本文所述的任何反义寡聚体或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物或酯。在一些实施方案中，本文所述的药物组合物还包含药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。
此类组合物可以包含缓冲剂，例如中性缓冲盐水、磷酸盐缓冲盐水等；碳水化合物，例如葡萄糖、甘露糖、蔗糖或葡聚糖、甘露醇；蛋白质；多肽或氨基酸，例如甘氨酸；抗氧化剂；螯合剂，例如EDTA或谷胱甘肽；佐剂(例如，氢氧化铝)；和防腐剂。
本发明的治疗方法中使用的药物组合物被配制成与其预期施用途径相容。
术语“药物组合物”和“药物制剂”(或“制剂”)可互换使用，并表示待施用至有需要的对象(例如，人类)的包含治疗有效量的活性药物成分连同一种或多种药学上可接受的赋形剂的混合物或溶液。
在一些实施方案中，将组合物配制成许多可能剂型中的任一种，例如但不限于溶液剂、液体剂、片剂、胶囊、凝胶胶囊、液体糖浆剂、软凝胶剂、栓剂和灌肠剂。在一些实施方案中，将组合物配制为水性、非水性或混合介质中的悬浮液。水性悬浮液还可含有增加悬浮液黏度的物质，包括例如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇和/或葡聚糖。悬浮液也可包含稳定剂。在一些实施方案中，本发明的药物制剂或组合物包括但不限于溶液、乳液、微乳液、泡沫或含脂质体(例如阳离子或非阳离子脂质体)的制剂。
本文所述的药物组合物或制剂可以包含视情况而定并且为本领域技术人员熟知或在已发表文献中描述的一种或多种渗透促进剂、载体、赋形剂或其他活性或非活性成分。在实施方案中，脂质体还包括空间稳定的脂质体，例如，包含一种或多种特殊脂质的脂质体。这些特殊脂质导致脂质体具有延长的循环寿命。在实施方案中，空间稳定的脂质体包含一种或多种糖脂或衍生有一种或多种亲水性聚合物(例如聚乙二醇(PEG)部分)。在实施方案中，药物制剂或组合物中包括表面活性剂。在药物产品、制剂和乳液中使用表面活性剂是本领域熟知的。在实施方案中，本发明采用渗透增强剂来实现反义寡核苷酸或反义寡聚体的有效递送，例如，以助于扩散穿过细胞膜和/或增强亲脂性药物的渗透性。在实施方案中，渗透促进剂是表面活性剂、脂肪酸、胆汁盐、螯合剂或非螯合非表面活性剂。
在实施方案中，药物制剂包含多种反义寡核苷酸或反义寡聚体。在实施方案中，反义寡核苷酸或反义寡聚体与另一种药物或治疗剂联合施用。
适用于可注射用途的药物组合物包括无菌水溶液(在水溶性的情况下)或分散体和用于即配成无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末。用于肠胃外、鼻内、皮内或皮下应用的溶液或混悬剂可以包括以下组分：无菌稀释剂，例如注射用水、盐水溶液、不挥发油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶剂；抗菌剂，例如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，例如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，例如乙二胺四乙酸；缓冲剂，例如醋酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐，以及用于调节张力的试剂，例如氯化钠或葡萄糖。例如，根据注射部位，媒介物可以含有水、合成油或植物油，和/或有机助溶剂。在某些实例中，例如对于冻干产品或浓缩物，在施用前复溶或稀释肠胃外制剂。可以用酸或碱(例如盐酸或氢氧化钠)调节pH。提供本发明组合物的控释或缓释的贮库制剂可以包括纳米/微米颗粒或纳米/微米或非微粉化晶体的可注射混悬剂。
对于静脉内施用，合适的载体包括生理盐水、抑菌水、Cremophor ELTM(BASF，Parsippany，N.J.)或磷酸盐缓冲盐水(PBS)。在所有情况下，组合物必须是无菌的并且应该是流体以达到以易于注射的程度存在。它必须在制造和储存条件下保持稳定，并且必须防止微生物(例如细菌和真菌)的污染作用。载体可以是溶剂或分散介质，例如，含有水、乙醇、聚(醇)(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)及其合适的混合物。例如，可以通过使用包衣(例如卵磷脂)、通过在分散体的情况下保持所需的粒度和通过使用表面活性剂来保持适当的流动性。
可以通过将所需量的组合物掺入具有以上列举的成分中的一种或组合(根据需要)的适当的溶剂中，然后过滤灭菌来制备无菌可注射溶液。可以通过各种抗菌剂和抗真菌剂(例如，对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等)来实现防止微生物的作用。
通常，通过将活性组合物掺入无菌媒介物中来制备分散体，该无菌媒介物含有基本分散介质和来自以上列举的那些所需的其他成分。在用于制备无菌注射溶液的无菌粉末的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥，该制备方法从其先前无菌过滤的溶液中产生活性成分加上任何其他所需成分的粉末。在许多情况下，优选在组合物中包括等渗剂，例如，糖、多元醇(例如甘露醇)、山梨糖醇和氯化钠。可通过在组合物中包括延迟吸收的试剂(例如单硬脂酸铝和明胶)来延长可注射组合物的吸收。肠胃外制剂可以被封装在安瓿、一次性注射器或玻璃或塑料制成的多剂量小瓶中。
对于口服施用，可以将组合物配制成液体或固体剂型以及作为速释或控释/缓释制剂。用于对象口服摄取的合适剂型包括粉剂、片剂、丸剂、颗粒剂、糖衣丸、硬壳和软壳胶囊、液体、凝胶、糖浆剂、浆液、混悬剂、乳剂等。口服组合物通常包括惰性稀释剂或可食用载体。它们可以封装在明胶胶囊中或压制成片剂。为了口服治疗施用的目的，活性剂可以与赋形剂合并并以片剂、锭剂或胶囊的形式使用。还可以使用流体载体制备口腔组合物以用作漱口水，其中流体载体中的试剂被口服施用并漱口和吐出或吞咽。可以包括药学上相容的粘合剂和/或佐剂材料作为组合物的一部分。片剂、颗粒剂、丸剂、胶囊、锭剂等可以含有以下任何成分或类似性质的化合物：粘合剂，例如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂，例如淀粉或乳糖；溶解延缓剂；抗粘附剂；阳离子交换树脂；润湿剂；抗氧化剂；防腐剂；崩解剂，例如海藻酸、Primogel或玉米淀粉；润滑剂，例如硬脂酸镁或Sterotes；助流剂，例如胶体二氧化硅；防腐剂；着色剂；甜味剂，例如糖类，例如葡萄糖、蔗糖或糖精；或调味剂，例如薄荷、水杨酸甲酯或橙味调味剂，这些中的每一种均是合成的和/或天然的。
对于通过吸入施用，例如鼻内施用，以气溶胶喷雾剂的形式从包含合适的推进剂(例如，气体，例如二氧化碳)的压力容器或分配器或喷雾器递送组合物。全身施用还可以通过经粘膜或经皮方式进行。对于经粘膜或经皮施用，在制剂中使用适合待渗透屏障的渗透剂。此类渗透剂通常是本领域中通常是已知的，并且包括，例如，用于经粘膜施用的去污剂、胆汁盐和夫西地酸衍生物。经粘膜施用可以通过使用鼻喷雾剂或栓剂来完成。对于经皮施用，将活性剂配制成如本领域通常所知的软膏、油膏、凝胶或乳膏、乳剂、溶液、混悬剂或泡沫。，例如，使用渗透增强剂；包括水、有机溶剂、蜡、油、合成和天然聚合物、表面活性剂、乳化剂的亲脂性、亲水性和两亲性赋形剂的合适选择或组合；通过调整pH；使用络合剂和其他技术，例如离子电渗疗法，可用于调节活性成分的皮肤渗透，可以调节药物渗透入皮肤和下层组织。
组合物还可以配制成直肠组合物，例如栓剂(例如，具有常规栓剂基质，例如可可脂和其他甘油酯)或保留灌肠剂。
药学上或生理学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的实例包括但不限于，消泡剂、抗氧化剂、粘合剂、载体或载体材料、分散剂、黏度调节剂、稀释剂、填充剂、润滑剂、助流剂、增塑剂、增溶剂、稳定剂、混悬剂、表面活性剂、增粘剂和润湿剂。
可以预先混合本发明的组合物的单独组分或者可以根据预定剂量将每种组分单独添加至相同环境中，以达到治疗组分的期望浓度水平，只要这些组分最终相互充分混合。此外，可以在连续或间歇的基础上施用或递送本发明。
特别有利的是配制剂量单位形式的口服或肠胃外组合物，以便于施用和剂量的均匀性。如本文所用的剂量单位形式是指适合作为待治疗对象的单位剂量的物理离散单位；每单位含有与所需的药物载体结合的经计算可产生期望的治疗效果的预定量的活性化合物。本发明的剂量单位形式的规格由组合物的独特特征和待实现的特定治疗效果以及将此类试剂混合用于治疗对象的领域中固有的限制规定并直接取决于组合物的独特特征和待实现的特定治疗效果以及将此类试剂混合用于治疗对象的领域中固有的限制。
在一些实施方案中，本文提供了一种产生如本文所述的药物制剂的方法。
联合疗法
在一些实施方案中，本公开中公开的ASO可以与一种或多种额外的治疗剂联合使用。在一些实施方案中，一种或多种额外的治疗剂可以包含小分子。例如，一种或多种额外的治疗剂可以包含WO2016128343A1、WO2017053982A1、WO2016196386A1、WO201428459A1、WO201524876A2、WO2013119916A2和WO2014209841A2(它们通过引用以其全文并入本文)中描述的小分子。在一些实施方案中，一种或多种额外的治疗剂包含可用于纠正内含子保留的ASO。在一些实施方案中，一种或多种其他药剂选自表8a或表8b中列出的ASO。
对象的治疗
可向个体施用本文提供的任何组合物。“个体”可与“对象”或“患者”互换使用。个体可以是哺乳动物，例如人或动物，如非人灵长类动物、啮齿动物、兔、大鼠、小鼠、马、驴、山羊、猫、狗、牛、猪或绵羊。在实施方案中，该个体是人。在实施方案中，该个体是胎儿、胚胎或儿童。在其他实施方案中，该个体可以是另一种真核生物体，如植物。在一些实施方案中，将本文提供的组合物施用于离体细胞。
在一些实施方案中，向个体施用本文提供的组合物作为治疗疾病或病症的方法。在一些实施方案中，该个体患有遗传病，如本文所述的任何疾病。在一些实施方案中，该个体处于患有疾病如本文所述的任何疾病的风险中。在一些实施方案中，该个体患有由蛋白质的量不足或蛋白质的活性不足引起的疾病或病症的风险增加。如果个体患有由蛋白质的量不足或蛋白质的活性不足引起的疾病或病症的“风险增加”，则该方法包括预防性或防范性处理。例如，个体可能由于该疾病的家族史而导致患有此种疾病或病症的的风险增加。通常，患有此种疾病或病症的风险增加的个体受益于预防性处理(例如，通过预防或延迟该疾病或病症的发作或进展)。在实施方案中，在子宫内对胎儿进行治疗，例如通过直接或间接地(例如，通过母体)向胎儿施用ASO组合物。
用于施用本公开的ASO的合适途径可以根据期望向其递送ASO的细胞类型而变化。多个组织和器官受Dravet综合征；全身性癫痫伴有热性惊厥，2型；热性惊厥，家族性，3A型；偏头痛，家族性偏瘫，3型；自闭症；癫痫性脑病，早期婴儿，13型；病态窦房结综合征1型；阿尔茨海默病或SUDEP的影响，其中脑是受影响最严重的组织。可以向患者肠胃外，例如通过鞘内注射、脑室内注射、腹腔注射、肌内注射、皮下注射、玻璃体内注射或静脉内注射施用本公开的ASO。
作用方式
在一些实施方案中，NaV1.1蛋白的表达或功能降低与诱导无义介导RNA衰变的外显子(NMD外显子)从含NMD外显子且编码NaV1.1蛋白的前mRNA的剪接改变有关。例如，NaV1.1蛋白的表达或功能降低可能与诱导无义介导RNA衰变的外显子(NMD外显子)从含NMD外显子且编码NaV1.1蛋白的前mRNA的剪接减少有关。
在一些实施方案中，本文所述的ASO促进从含NMD外显子且编码NaV1.1蛋白的前mRNA排除NMD外显子。
在一些实施方案中，如通过任何标准技术所测量，与未经处理的对照细胞、组织或对象相比或与用如本文所述的ASO治疗前相同类型的细胞、组织或对象中的相应活性相比，如本文所述的ASO使从含NMD外显子且编码NaV1.1蛋白的前mRNA的NMD外显子排除提升至少5％、至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少100％、至少200％、至少300％、至少400％、至少500％、至少600％、至少700％、至少800％、至少900％、至少1000％、至少2000％、至少3000％、至少4000％、至少5000％、至少6000％、至少7000％、至少8000％、至少9000％、至少10000％、至少20000％、至少30000％、至少40000％、至少50000％、至少60000％、至少70000％、至少80000％、至少90000％或至少100000％。在一些实施方案中，如通过任何标准技术所测量，与未经处理的对照细胞、组织或对象相比或与用如本文所述的ASO治疗前相同类型的细胞、组织或对象中的相应活性相比，如本文所述的ASO使从含NMD外显子且编码NaV1.1蛋白的前mRNA的NMD外显子排除提升至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少25倍、至少30倍、至少40倍、至少50倍、至少60倍、至少70倍、至少80倍、至少90倍、至少100倍、至少200倍、至少300倍、至少400倍、至少500倍、至少600倍、至少700倍、至少800倍、至少900倍、至少1000倍、至少2000倍、至少3000倍、至少4000倍、至少5000倍、至少6000倍、至少7000倍、至少8000倍、至少9000倍或至少10000倍。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO与含有诱导无义介导RNA衰变的外显子且编码NaV1.1蛋白的前mRNA的靶向部分结合。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO促进从含NMD外显子且编码NaV1.1蛋白的前mRNA排除诱导无义介导mRNA衰变的外显子(NMD外显子)。
在一些实施方案中，如通过任何标准技术所测量，与未经处理的对照细胞、组织或对象相比或与用如本文所述的ASO治疗前相同类型的细胞、组织或对象中的相应活性相比，如本文所述的ASO使从含NMD外显子且编码NaV1.1蛋白的前mRNA的NMD外显子排除提升至少5％、至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少100％、至少200％、至少300％、至少400％、至少500％、至少600％、至少700％、至少800％、至少900％、至少1000％、至少2000％、至少3000％、至少4000％、至少5000％、至少6000％、至少7000％、至少8000％、至少9000％、至少10000％、至少20000％、至少30000％、至少40000％、至少50000％、至少60000％、至少70000％、至少80000％、至少90000％或至少100000％。在一些实施方案中，如通过任何标准技术所测量，与未经处理的对照细胞、组织或对象相比或与用如本文所述的ASO治疗前相同类型的细胞、组织或对象中的相应活性相比，如本文所述的ASO使从含NMD外显子且编码NaV1.1蛋白的前mRNA的NMD外显子排除提升至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少25倍、至少30倍、至少40倍、至少50倍、至少60倍、至少70倍、至少80倍、至少90倍、至少100倍、至少200倍、至少300倍、至少400倍、至少500倍、至少600倍、至少700倍、至少800倍、至少900倍、至少1000倍、至少2000倍、至少3000倍、至少4000倍、至少5000倍、至少6000倍、至少7000倍、至少8000倍、至少9000倍或至少10000倍。
在一些实施方案中，当如本文所述的ASO被引入具有含NMD外显子且编码NaV1.1蛋白的前mRNA的细胞中时，该ASO提高该细胞中编码NaV1.1蛋白的经加工mRNA水平。
在一些实施方案中，当如本文所述的ASO被引入具有含NMD外显子且编码NaV1.1蛋白的前mRNA的细胞中时，如通过任何标准技术所测量的，与未经处理的对照细胞、组织或对象相比或与用如本文所述的ASO治疗前相同类型的细胞、组织或对象中的相应活性相比，该ASO使该细胞中编码NaV1.1蛋白的经加工mRNA水平提高至少5％、至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少100％、至少200％、至少300％、至少400％、至少500％、至少600％、至少700％、至少800％、至少900％、至少1000％、至少2000％、至少3000％、至少4000％、至少5000％、至少6000％、至少7000％、至少8000％、至少9000％、至少10000％、至少20000％、至少30000％、至少40000％、至少50000％、至少60000％、至少70000％、至少80000％、至少90000％或至少100000％。在一些实施方案中，当如本文所述的ASO被引入具有含NMD外显子且编码NaV1.1蛋白的前mRNA的细胞中时，如通过任何标准技术所测量的，与未处理的对照细胞、组织或对象相比或与用如本文所述的ASO治疗前相同类型的细胞、组织或对象中的相应活性相比，该ASO使该细胞中编码NaV1.1蛋白的经加工mRNA水平提高至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少25倍、至少30倍、至少40倍、至少50倍、至少60倍、至少70倍、至少80倍、至少90倍、至少100倍、至少200倍、至少300倍、至少400倍、至少500倍、至少600倍、至少700倍、至少800倍、至少900倍、至少1000倍、至少2000倍、至少3000倍、至少4000倍、至少5000倍、至少6000倍、至少7000倍、至少8000倍、至少9000倍或至少10000倍。
在一些实施方案中，当如本文所述的ASO被引入具有含NMD外显子且编码NaV1.1蛋白的前mRNA的细胞中时，该ASO提高该细胞中NaV1.1蛋白的水平。
在一些实施方案中，当如本文所述的ASO被引入具有含NMD外显子且编码NaV1.1蛋白的前mRNA的细胞中时，如通过任何标准技术所测量的，与未经处理的对照细胞、组织或对象相比或与用如本文所述的ASO治疗前相同类型的细胞、组织或对象中的相应活性相比，该ASO提高该细胞中NaV1.1蛋白的水平至少5％、至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少100％、至少200％、至少300％、至少400％、至少500％、至少600％、至少700％、至少800％、至少900％、至少1000％、至少2000％、至少3000％、至少4000％、至少5000％、至少6000％、至少7000％、至少8000％、至少9000％、至少10000％、至少20000％、至少30000％、至少40000％、至少50000％、至少60000％、至少70000％、至少80000％、至少90000％或至少100000％。在一些实施方案中，当如本文所述的ASO被引入具有含NMD外显子且编码NaV1.1蛋白的前mRNA的细胞中时，如通过任何标准技术所测量的，与未经处理的对照细胞、组织或对象相比或与用如本文所述的ASO治疗前相同类型的细胞、组织或对象中的相应活性相比，该ASO使该细胞中NaV1.1蛋白的水平提高至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少25倍、至少30倍、至少40倍、至少50倍、至少60倍、至少70倍、至少80倍、至少90倍、至少100倍、至少200倍、至少300倍、至少400倍、至少500倍、至少600倍、至少700倍、至少800倍、至少900倍、至少1000倍、至少2000倍、至少3000倍、至少4000倍、至少5000倍、至少6000倍、至少7000倍、至少8000倍、至少9000倍或至少10000倍。
在一些实施方案中，靶向部分在NMD外显子侧翼的内含子序列内。
在一些实施方案中，靶向部分包含NMD外显子的至少一个核苷酸。
在一些实施方案中，靶向部分包含NMD外显子的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48或49个核苷酸。在一些实施方案中，靶向部分包含NMD外显子的至多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48或49个核苷酸。
在一些实施方案中，靶向部分在NMD外显子内。
在一些实施方案中，NMD外显子包含与选自表1或表2中所列序列的序列具有至少80％、至少90％或100％序列同一性的序列。在一些实施方案中，NMD外显子包含选自表1或表2中所列序列的序列。在一些实施方案中，前mRNA包含与选自表1或表2中所列序列的序列具有至少约80％、85％、90％、95％、97％或100％序列同一性的序列。在一些实施方案中，前mRNA由与选自表1或表2中所列序列的序列具有至少约80％、85％、90％、95％、97％或100％序列同一性的遗传序列编码。
剪接和无义介导的mRNA衰变
间插序列或内含子由被称为剪接体的大型且高度动态的RNA-蛋白质复合物去除，该剪接体协调初级转录物、小核RNA(snRNA)和大量蛋白质之间的复杂相互作用。剪接体以有序的方式从U1snRNA识别5'剪接位点(5'ss)或U2途径识别3'剪接位点(3'ss)开始在每个内含子上特定组装，这涉及U2辅助因子(U2AF)与3'ss区域结合以促进U2与分支点序列(BPS)结合。U2AF是稳定的异二聚体，其由U2AF2编码的65-kD亚基(U2AF65)和U2AF1编码的35-kD亚基(U2AF35)组成，该U2AF65结合多嘧啶片(PPT)，该U2AF35在3'ss处与高度保守的AG二核苷酸相互作用并稳定U2AF65结合。除了BPS/PPT单元和3'ss/5'ss之外，准确剪接还需要称为内含子或外显子剪接增强子或沉默子的激活或抑制剪接位点识别的辅助序列或结构。这些元件允许在高等真核生物基因组中大量隐蔽或伪位点中识别真正的剪接位点，这些隐蔽或伪位点具有相同的序列，但比真实的位点的数量多一个数量级。尽管这些元件通常具有调节功能，但对其激活或抑制的确切机制却知之甚少。
是否进行剪接的决定通常可以建模为随机过程而不是确定性过程，因此即使是最明确的剪接信号有时也可能被不正确地剪接。然而，在正常条件下，前mRNA剪接以出乎意料的高保真度进行。这部分归因于相邻顺式作用的辅助外显子和内含子剪接调节元件(ESR或ISR)的活性。通常，这些功能元件基于它们刺激或抑制剪接的能力被分别分类为外显子或内含子剪接增强子(ESE或ISE)或沉默子(ESS或ISS)。尽管现在有证据表明一些辅助顺式作用元件可以通过影响剪接体组装的动力学例如U1 snRNP和5'ss之间复合物的排列而起作用，许多元件似乎很可能与反式作用的RNA结合蛋白(RBP)一起发挥作用。例如，RBP(SR蛋白)的富含丝氨酸和精氨酸家族是保守的蛋白质家族，其在定义外显子中起关键作用。SR蛋白通过将前剪接体的组分募集至相邻的剪接位点或通过拮抗附近ESS的作用来促进外显子识别。ESS的抑制作用可以由异质核核糖核蛋白(hnRNP)家族的成员介导，并且可以改变核心剪接因子向相邻剪接位点的募集。除了它们在剪接调节中的作用外，沉默子元件被认为在抑制伪外显子(具有典型外显子间隔但没有功能性开放阅读框的一组诱饵内含子剪接位点)中起作用。ESE和ESS与其同源的反式作用RBP合作，代表指定mRNA如何、何地以及何时从其前体组装的剪接控制组中的重要组分。
标记外显子-内含子边界的序列是可以在人类基因中以高频率出现的不同强度的简并信号。在多外显子基因中，不同的剪接位点对可以以许多不同的组合连接在一起，从而从单个基因产生多种转录物。这通常被称为可变前mRNA剪接。尽管通过可变剪接产生的大多数mRNA同种型可以从细胞核中输出并被翻译成功能性多肽，但来自单个基因的不同mRNA同种型的翻译效率可能有很大差异。那些在外显子连接复合物上游至少50bp处具有提前终止密码子(PTC)的mRNA同种型可能称为通过无义介导的mRNA衰变(NMD)途径降解的目标。传统(BPS/PPT/3'ss/5'ss)和辅助剪接基序的突变导致异常剪接，例如外显子跳跃或隐蔽(或伪)外显子包含或剪接位点激活，并且显著促进人发病率和死亡率。异常剪接模式和可变剪接模式均可以受到外显子和内含子中天然DNA变异的影响。
鉴于外显子-内含子边界可以出现在密码子的三个位置中的任何一个位置，显然只有一部分可变剪接事件可以保持规范的开放阅读框。例如，在没有任何阅读框改变的情况下，只有可被3整除的外显子可以被跳过或包含在mRNA中。没有兼容相的剪接事件将诱导移码。除非被下游事件逆转，否则移码肯定会导致一个或多个PTC，可能导致随后被NMD降解。NMD是一种翻译偶联机制，其消除含有PTC的mRNA。NMD可以作为存在于所有真核生物中的监督途径起作用。NMD可以通过消除含有提前终止密码子的mRNA转录物来减少基因表达中的错误。在一些情况下，这些异常mRNA的翻译可导致所得蛋白质的有害功能获得或显性不良活性。NMD不仅靶向具有PTC的转录物，而且还靶向从许多内源基因表达的大量mRNA同种型，表明NMD是驱动细胞中稳态RNA水平的微调和粗调的主要调节物。
NMD诱导外显子(NIE)是外显子或伪外显子，它是内含子内的区域，如果包含在成熟的RNA转录物中，则可以激活NMD途径。在组成型剪接事件中，含有NIE的内含子通常被剪接掉，但内含子或其一部分(例如NIE)可以在可变或异常剪接事件中保留。由于诱导NMD途径的移码，含有这种NIE的成熟mRNA转录物可能是非生产性的。在成熟RNA转录物中包含NIE可以下调基因表达。在本公开中含有NIE的mRNA转录物，例如前mRNA转录物，可以称为“含NIE的mRNA”或“NMD外显子mRNA”。
隐蔽(或伪剪接)位点具有与真正的剪接位点相同的剪接识别序列，但不用于剪接反应。它们比人类基因组中真正的剪接位点多一个数量级，并且通常受到迄今为止知之甚少的分子机制的抑制。隐蔽的5'剪接位点具有一致的NNN/GUNNNN或NNN/GCNNNN，其中N是任何核苷酸并且是外显子-内含子边界。隐蔽的3'剪接位点具有一致的NAG/N。它们的激活受到周围核苷酸的积极影响，使它们更类似于真实的剪接位点的最佳共有序列，即分别为MAG/GURAGU和YAG/G，其中M是C或A，R是G或A，并且Y是C或U。
剪接位点及其调节序列可由技术人员使用公开可获得的合适算法容易地鉴定，被列于例如Kralovicova,J.和Vorechovsky,I.(2007)Kralovicova,J.and Vorechovsky,I.(2007)Global control of aberrant splice site activation by auxiliary splicingsequences:evidence for a gradient in exon and intron definition.Nucleic AcidsRes.,35,6399-6413,(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2095810/pdf/gkm680.pd f)中。
隐蔽的剪接位点或剪接调节序列可以与NIE的剪接位点竞争RNA结合蛋白，如U2AF。在一个实施方案中，药剂可以与隐蔽的剪接位点或剪接调节序列结合，以防止RNA结合蛋白的结合，从而有利于NIE剪接位点的利用。
在一个实施方案中，隐蔽的剪接位点可以不包含NIE的5'或3'剪接位点。隐蔽的剪接位点可以在NIE 5'剪接位点上游至少10个核苷酸处。隐蔽的剪接位点可以在NIE 5'剪接位点上游至少20个核苷酸处。隐蔽的剪接位点可以在NIE 5'剪接位点上游至少50个核苷酸处。隐蔽的剪接位点可以在NIE 5'剪接位点上游至少100个核苷酸处。隐蔽的剪接位点可以在NIE 5'剪接位点上游至少200个核苷酸处。
隐蔽的剪接位点可以在NIE 3'剪接位点下游至少10个核苷酸处。隐蔽的剪接位点可以在NIE 3'剪接位点下游至少20个核苷酸处。隐蔽的剪接位点可以在NIE 3'剪接位点下游至少50个核苷酸处。隐蔽的剪接位点可以在NIE 3'剪接位点下游至少100个核苷酸处。隐蔽的剪接位点可以在NIE 3'剪接位点下游至少200个核苷酸处。
在一些实施方案中，本公开的方法利用从SCN1A基因转录的前mRNA中存在的NIE。可以使用刺激NIE外显子跳跃的治疗剂(例如ASO)来诱导已鉴定的SCN1A NIE前mRNA种类的剪接以产生功能性成熟Scn1a mRNA。诱导外显子跳跃可以导致NMD途径的抑制。在不激活NMD途径的情况下产生的成熟Scn1a mRNA可以被正常翻译，从而增加患者细胞中NaV1.1(本文也称为“NaV1.1蛋白”)的量并减轻与SCN1A缺乏相关的病况，例如Dravet综合征(DS)；全身性癫痫伴有热性惊厥，2型；热性惊厥，家族性，3A型；自闭症；癫痫性脑病，早期婴儿，13型；病态窦房结综合征1型；阿尔茨海默病；或SUDEP的症状。
当提及减少成熟mRNA中的NIE包含时，该减少可以是完全的，例如100％，或者可以是部分的。该减少可以是临床上有意义的。该减少/纠正可以相对于未经治疗的对象中的NIE包含水平或者相对于相似对象的群体中的NIE包含量。该减少/纠正可以是相对于普通对象或治疗前的对象少至少10％的NIE包含。该减少可以是相对于普通对象或治疗前的对象少至少20％的NIE包含。该减少可以是相对于普通对象或治疗前的对象少至少40％的NIE包含。该减少可以是相对于普通对象或治疗前的对象少至少50％的NIE包含。该减少可以是相对于普通对象或治疗前的对象少至少60％的NIE包含。该减少可以是相对于普通对象或治疗前的对象少至少80％的NIE包含。该减少可以是相对于普通对象或治疗前的对象少至少90％的NIE包含。
当提及提高活性NaV1.1蛋白水平时，该提高可以是临床上有临床意义的。该提高可以相对于未经治疗的对象中的活性NaV1.1蛋白水平或相对于相似对象人群中的活性NaV1.1蛋白的量。该提高可以是相对于普通对象或治疗前的对象，活性NaV1.1蛋白多至少10％。该提高可以是相对于普通对象或治疗前的对象，活性NaV1.1蛋白多至少20％。该提高可以是相对于普通对象或治疗前的对象，活性NaV1.1蛋白多至少40％。该提高可以是相对于普通对象或治疗前的对象，活性NaV1.1蛋白多至少50％。该提高可以是相对于普通对象或治疗前的对象，活性NaV1.1蛋白多至少80％。该提高可以是相对于普通对象或治疗前的对象，活性NaV1.1蛋白多至少100％。该提高可以是相对于普通对象或治疗前的对象，活性NaV1.1蛋白多至少200％。该提高可以是相对于普通对象或治疗前的对象，活性NaV1.1蛋白多至少500％。
外显子包含
如本文所用，“含NIE的前mRNA”是含有至少一个伪外显子的前mRNA转录物。可变或异常剪接可以导致在成熟mRNA转录物中包含至少一个伪外显子。在本文中术语“成熟mRNA”和“完全剪接的mRNA”可互换使用以描述完全经加工mRNA。至少一个伪外显子的包含可以是非生产性mRNA并导致成熟mRNA的NMD。含NIE的成熟mRNA有时可以导致蛋白质表达异常。
基于本文提供的内含子序列或使用参考NM_006920、NM_001202435、NM_001165964或NM_001165963中的mRNA序列提供的内含子编号，本领域技术人员还可以使用本公开的方法确定用于靶向的任何SCN1A同种型中侧翼外显子的序列。
在一些实施方案中，本公开的方法和组合物用来通过诱导或抑制含SCN1A NIE的前mRNA的伪外显子的外显子跳跃来调节，例如增加或减少SCN1A的表达。在一些实施方案中，该伪外显子是内含子1-25中的任一个内的序列。在一些实施方案中，该伪外显子是内含子2、4、6、13、14、15、16、17、18、20、21、22、23、24和25中的任一个内的序列。在一些实施方案中，该伪外显子是内含子15、18和19中的任一个内的序列。在一些实施方案中，该伪外显子可以是任何SCN1A内含子或其一部分。在一些实施方案中，该伪外显子在内含子20内。本文使用的SCN1A内含子编号对应于NM_006920处的mRNA序列。应当理解，内含子编号可以参照不同的SCN1A同种型序列而改变。
在一些实施方案中，包含的伪外显子是在从细胞中编码靶蛋白的基因转录的含NIE的前mRNA群体中最高丰度的伪外显子。在一些实施方案中，包含的伪外显子是在从细胞中编码靶蛋白的基因转录的含NIE的前mRNA群体中最高丰度的伪外显子，其中含NIE的前mRNA群体包含两个或更多个所包含的伪外显子。在一些实施方案中，靶向在编码靶蛋白的含NIE的前mRNA群体中最高丰度的伪外显子的反义寡聚体诱导该群体中一个或两个或更多个伪外显子(包括靶向或结合反义寡聚体的伪外显子)发生外显子跳跃。在实施方案中，靶向区域位于伪外显子中，该伪外显子是在编码NaV1.1蛋白的含NIE的前mRNA中最高丰度的伪外显子。
外显子包含的程度可以被表示为外显子包含百分比，例如，其中包括给定伪外显子的转录物的百分比。简言之，外显子包含百分比可以被计算为具有外显子包含的RNA转录物的量相对于具有外显子包含的RNA转录物的平均量加上具有外显子排除的RNA转录物的平均量之和的百分比。
在一些实施方案中，包含的伪外显子是基于至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％或至少约50％包含的确定而被鉴定为包含的伪外显子的外显子。在一些实施方案中，包含的伪外显子是基于约5％至约100％、约5％至约95％、约5％至约90％、约5％至约85％、约5％至约80％、约5％至约75％、约5％至约70％、约5％至约65％、约5％至约60％、约5％至约55％、约5％至约50％、约5％至约45％、约5％至约40％、约5％至约35％、约5％至约30％、约5％至约25％、约5％至约20％、约5％至约15％、约10％至约100％、约10％至约95％、约10％至约90％、约10％至约85％、约10％至约80％、约10％至约75％、约10％至约70％、约10％至约65％、约10％至约60％、约10％至约55％、约10％至约50％、约10％至约45％、约10％至约40％、约10％至约35％、约10％至约30％、约10％至约25％、约10％至约20％、约15％至约100％、约15％至约95％、约15％至约90％、约15％至约85％、约15％至约80％、约15％至约75％、约15％至约70％、约15％至约65％、约15％至约60％、约15％至约55％、约15％至约50％、约15％至约45％、约15％至约40％、约15％至约35％、约15％至约30％、约15％至约25％、约20％至约100％、约20％至约95％、约20％至约90％、约20％至约85％、约20％至约80％、约20％至约75％、约20％至约70％、约20％至约65％、约20％至约60％、约20％至约55％、约20％至约50％、约20％至约45％、约20％至约40％、约20％至约35％、约20％至约30％、约25％至约100％、约25％至约95％、约25％至约90％、约25％至约85％、约25％至约80％、约25％至约75％、约25％至约70％、约25％至约65％、约25％至约60％、约25％至约55％、约25％至约50％、约25％至约45％、约25％至约40％或约25％至约35％包含的确定而被鉴定为包含的伪外显子的外显子。ENCODE数据(例如，Tilgner等人，2012,“Deep sequencing ofsubcellular RNA fractions shows splicing to be predominantly co-transcriptional in the human genome but inefficient for lncRNAs,”GenomeResearch 22(9):1616-25所述的，其全部内容通过引用并入本文)可用于帮助鉴定外显子包含。
在一些实施方案中，与由不存在ASO/未经处理的细胞产生的蛋白的量相比，使细胞与互补于SCN1A前mRNA转录物靶向部分的ASO接触导致产生的NaV1.1蛋白的量增加至少10、20、30、40、50、60、80、100、150、200、250、300、350、400、450、500或1000％。在一些实施方案中，与由对照化合物产生的靶蛋白的量相比，由与反义寡聚体接触的细胞产生的NaV1.1蛋白的总量增加约1.1至约10倍、约1.5至约10倍、约2至约10倍、约3至约10倍、约4至约10倍、约1.1至约5倍、约1.1至约6倍、约1.1至约7倍、约1.1至约8倍、约1.1至约9倍、约2至约5倍、约2至约6倍、约2至约7倍、约2至约8倍、约2至约9倍、约3至约6倍、约3至约7倍、约3至约8倍、约3至约9倍、约4至约7倍、约4至约8倍、约4至约9倍、至少约1.1倍、至少约1.5倍、至少约2倍、至少约2.5倍、至少约3倍、至少约3.5倍、至少约4倍、至少约5倍或至少约10倍。对照化合物可以是，例如，与前mRNA的靶向部分不互补的寡核苷酸。
在一些实施方案中，与由不存在ASO/未经处理的细胞产生的蛋白的量相比，使细胞与互补于SCN1A前mRNA转录物靶向部分的ASO接触导致产生的NaV1.1蛋白量减少至少10、20、30、40、50、60、80、100、150、200、250、300、350、400、450、500或1000％。在一些实施方案中，与由对照化合物产生的靶蛋白的量相比，由与反义寡聚体接触的细胞产生的NaV1.1蛋白的总量减少约1.1至约10倍、约1.5至约10倍、约2至约10倍、约3至约10倍、约4至约10倍、约1.1至约5倍、约1.1至约6倍、约1.1至约7倍、约1.1至约8倍、约1.1至约9倍、约2至约5倍、约2至约6倍、约2至约7倍、约2至约8倍、约2至约9倍、约3至约6倍、约3至约7倍、约3至约8倍、约3至约9倍、约4至约7倍、约4至约8倍、约4至约9倍、至少约1.1倍、至少约1.5倍、至少约2倍、至少约2.5倍、至少约3倍、至少约3.5倍、至少约4倍、至少约5倍或至少约10倍。对照化合物可以是，例如，与前mRNA的靶向部分不互补的寡核苷酸。
在一些实施方案中，使细胞与互补于SCN1A前mRNA转录物的靶向部分的ASO接触导致编码SCN1A的mRNA(包括编码靶蛋白的成熟mRNA)的量增加。在一些实施方案中，与由不存在ASO/未经处理的细胞产生的蛋白的量相比，编码NaV1.1蛋白的mRNA或编码NaV1.1蛋白的成熟mRNA的量增加至少10、20、30、40、50、60、80、100、150、200、250、300、350、400、450、500或1000％。在一些实施方案中，与未经处理的细胞(例如，未经处理的细胞或经对照化合物处理的细胞)中产生的成熟RNA的量相比，与反义寡聚体接触的细胞中产生的编码NaV1.1蛋白的mRNA或编码NaV1.1蛋白的成熟mRNA的总量增加约1.1至约10倍、约1.5至约10倍、约2至约10倍、约3至约10倍、约4至约10倍、约1.1至约5倍、约1.1至约6倍、约1.1至约7倍、约1.1至约8倍、约1.1至约9倍、约2至约5倍、约2至约6倍、约2至约7倍、约2至约8倍、约2至约9倍、约3至约6倍、约3至约7倍、约3至约8倍、约3至约9倍、约4至约7倍、约4至约8倍、约4至约9倍、至少约1.1倍、至少约1.5倍、至少约2倍、至少约2.5倍、至少约3倍、至少约3.5倍、至少约4倍、至少约5倍或至少约10倍。对照化合物可以是，例如，与含SCN1A NIE的前mRNA的靶向部分不互补的寡核苷酸。
在一些实施方案中，使细胞与互补于SCN1A前mRNA转录物的靶向部分的ASO接触导致编码SCN1A的mRNA(包括编码靶蛋白的成熟mRNA)的量减少。在一些实施方案中，与由不存在ASO/未经处理的细胞产生的蛋白的量相比，编码NaV1.1蛋白的mRNA或编码NaV1.1蛋白的成熟mRNA的量减少至少10、20、30、40、50、60、80、100、150、200、250、300、350、400、450、500或1000％。在一些实施方案中，与未经处理的细胞(例如，未经处理的细胞或经对照化合物处理的细胞)中产生的成熟RNA的量相比，与反义寡聚体接触的细胞中产生的编码NaV1.1蛋白的mRNA或编码NaV1.1蛋白的成熟mRNA的总量减少约1.1至约10倍、约1.5至约10倍、约2至约10倍、约3至约10倍、约4至约10倍、约1.1至约5倍、约1.1至约6倍、约1.1至约7倍、约1.1至约8倍、约1.1至约9倍、约2至约5倍、约2至约6倍、约2至约7倍、约2至约8倍、约2至约9倍、约3至约6倍、约3至约7倍、约3至约8倍、约3至约9倍、约4至约7倍、约4至约8倍、约4至约9倍、至少约1.1倍、至少约1.5倍、至少约2倍、至少约2.5倍、至少约3倍、至少约3.5倍、至少约4倍、至少约5倍或至少约10倍。对照化合物可以是，例如，与含SCN1A NIE的前mRNA的靶向部分不互补的寡核苷酸。
NIE可以是任何长度。在一些实施方案中，NIE包含内含子的全序列，在这种情况下，它可以称为内含子保留。在一些实施方案中，NIE可以是内含子的一部分。在一些实施方案中，NIE可以是包含5'ss序列的内含子的5'末端部分。在一些实施方案中，NIE可以是包含3'ss序列的内含子的3'末端部分。在一些实施方案中，NIE可以是不包含5'ss序列的内含子内的部分。在一些实施方案中，NIE可以是不包含3'ss序列的内含子内的部分。在一些实施方案中，NIE可以是不包含5'ss或3'ss序列的内含子内的部分。在一些实施方案中，该NIE的长度可以是5个核苷酸至10个核苷酸、10个核苷酸至15个核苷酸、15个核苷酸至20个核苷酸、20个核苷酸至25个核苷酸、25个核苷酸至30个核苷酸、30个核苷酸至35个核苷酸、35个核苷酸至40个核苷酸、40个核苷酸至45个核苷酸、45个核苷酸至50个核苷酸、50个核苷酸至55个核苷酸、55个核苷酸至60个核苷酸、60个核苷酸至65个核苷酸、65个核苷酸至70个核苷酸、70个核苷酸至75个核苷酸、75个核苷酸至80个核苷酸、80个核苷酸至85个核苷酸、85个核苷酸至90个核苷酸、90个核苷酸至95个核苷酸或95个核苷酸至100个核苷酸。在一些实施方案中，该NIE的长度可以是至少10个核苷酸、至少20个核苷酸、至少30个核苷酸、至少40个核苷酸、至少50个核苷酸、至少60个核苷酸、至少70个核苷酸、至少80个核苷酸、至少90个核苷酸或至少100个核苷酸。在一些实施方案中，该NIE的长度可以是100至200个核苷酸、200至300个核苷酸、300至400个核苷酸、400至500个核苷酸、500至600个核苷酸、600至700个核苷酸、700至800个核苷酸、800至900个核苷酸、900至1,000个核苷酸。在一些实施方案中，该NIE的长度可以比1,000个核苷酸长。
伪外显子的包含可导致移码以及在成熟mRNA转录物中引入提前终止密码子(PIC)，从而使该转录物成为NMD的靶标。含NIE的成熟mRNA转录物可以是不导致蛋白质表达的非生产性mRNA转录物。该PIC可以存在于NIE下游的任何位置。在一些实施方案中，该PIC可以存在于NIE下游的任何外显子中。在一些实施方案中，该PIC可以存在于NIE内。例如，在由SCN1A基因编码的mRNA转录物中包含外显子20x可以诱导mRNA转录物中的PIC，例如mRNA转录物的外显子21中的PIC。
可利用动物模型(例如已敲入全长人类基因的转基因小鼠模型或疾病的人源化小鼠模型)体内测试ASO，该ASO当与前mRNA的区域杂交时导致外显子跳跃(或含有NIE的内含子的剪接增强)和增加的蛋白质产生。合适的ASO施用途径可根据需要递送ASO的疾病和/或细胞类型而不同。例如，可通过鞘内注射、脑室内注射、腹膜内注射、肌肉内注射、皮下注射、玻璃体注射或静脉内注射来施用ASO。施用后，可以评估模型动物的细胞、组织和/或器官，以通过例如由本领域已知和本文所述的方法评价剪接(效率、速率、程度)和蛋白质产生来确定ASO治疗的效果。该动物模型还可以是疾病或疾病严重程度的任何表型或行为指示。
在实施方案中，通过本领域已知的任何方法施用所述反义寡核苷酸以及能够促进该反义寡核苷酸跨越血脑屏障渗透的一种或多种药剂。例如，美国专利号6,632,427，“Adenoviral-vector-mediated gene transfer into medullary motor neurons”中描述了通过向肌肉组织中的运动神经元施用腺病毒载体来递送药剂，其通过引用并入本文。例如，美国专利号6,756,523，“Adenovirus vectors for the transfer of foreign genesinto cells of the central nervous system particularly in brain”中描述了将载体直接递送至脑，例如纹状体、丘脑、海马体或黑质，其通过引用并入本文。
在实施方案中，反义寡核苷酸与提供所需药物或药效学性质的药剂连接或缀合。在实施方案中，该反义寡核苷酸与本领域已知的物质例如转铁蛋白受体的抗体偶联，以促进跨越血脑屏障的渗透或转运。在实施方案中，该反义寡核苷酸与病毒载体连接，例如，以使该反义化合物更有效或增加跨越血脑屏障的转运。在实施方案中，通过输注糖，例如内消旋赤藓醇、木糖醇、D(+)半乳糖、D(+)乳糖、D(+)木糖、卫矛醇、肌醇、L(-)果糖、D(-)甘露醇、D(+)葡萄糖、D(+)阿拉伯糖、D(-)阿拉伯糖、纤维二糖、D(+)麦芽糖、D(+)棉子糖、L(+)鼠李糖、D(+)蜜二糖、D(-)核糖、侧金盏花醇、D(+)阿拉伯糖醇、L(-)阿拉伯糖醇、D(+)岩藻糖、L(-)岩藻糖、D(-)来苏糖、L(+)来苏糖和L(-)来苏糖；或氨基酸，例如谷氨酰胺、赖氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸和牛磺酸，辅助渗透性血脑屏障破坏。用于增强血脑屏障渗透的方法和材料描述于例如美国专利号9,193,969“Compositions and methodsfor selective delivery of oligonucleotide molecules to specific neurontypes”、美国专利4,866,042“Method for the delivery of genetic material acrossthe blood brain barrier”、美国专利号6,294,520“Material for passage through theblood-brain barrier”以及美国专利号6,936,589“Parenteral delivery systems”，上述每一个专利均通过引用并入本文。
在实施方案中，使用例如美国专利号9,193,969(其通过引用并入本文)中描述的方法，将本公开的ASO与多巴胺再摄取抑制剂(DRI)、选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRI)、去甲肾上腺素再摄取抑制剂(NRI)、去甲肾上腺素-多巴胺再摄取抑制剂(NDRI)和5-羟色胺-去甲肾上腺素-多巴胺再摄取抑制剂(SNDRI)偶联。
在实施方案中，利用本领域已知和描述的任何方法评价使用所述方法和组合物治疗的对象的病况改善。
在一些实施方案中，含SCN1A NIE的前mRNA转录物由与表1或表2中列出的序列中的任一个具有至少约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的遗传序列编码。在一些实施方案中，SCN1A NIE前mRNA转录物包含与表1或表2中列出的序列中的任一个具有至少约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的序列。
在一些实施方案中，含SCN1A NIE的前mRNA转录物包含与表1或表2中列出的序列中的任一个具有至少约80％、85％、90％、95％、97％或100％序列同一性的序列。在一些实施方案中，含SCN1A NIE的前mRNA转录物由与表1或表2中列出的序列中的任一个具有至少约80％、85％、90％、95％、97％或100％序列同一性的序列编码。在一些实施方案中，含有NMD外显子并编码NaV1.1的前mRNA的靶向部分包含与包含表1或表2中列出的序列中的任一个的至少8个连续核酸的区域具有至少80％、85％、90％、95％、97％或100％序列同一性的序列。
在一些实施方案中，前mRNA转录物包含与本文所述的SCN1A前mRNA转录物或其互补物的前mRNA转录物具有至少约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的序列。在一些实施方案中，选自SCN1A前mRNA的前mRNA的靶向部分包含与包含表1或表2的前mRNA转录物或其互补物的序列的至少8个连续核酸的区域具有至少80％、85％、90％、95％、97％或100％序列同一性的序列。在一些实施方案中，SCN1A前mRNA的前mRNA的靶向部分包含与表1或表2的序列或其互补序列的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续核酸互补的序列。
在一些实施方案中，前mRNA转录物包含与本文所述的SCN1A前mRNA转录物的前mRNA转录物或其互补物具有至少约80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的序列。在一些实施方案中，选自SCN1A前mRNA的前mRNA的靶向部分包含与包含表1或表2的前mRNA转录物或其互补物的序列的至少8个连续核酸的区域具有至少80％、85％、90％、95％、97％或100％序列同一性的序列。在一些实施方案中，SCN1A前mRNA的前mRNA的靶向部分包含与表1或表2的序列或其互补序列的至少8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个连续核酸互补的序列。
在一些实施方案中，SCN1A前mRNA的靶向部分包含与包含表3的序列或其互补序列的至少8个连续核酸的区域具有至少80％、85％、90％、95％、97％或100％序列同一性的序列。在一些实施方案中，SCN1A前mRNA的靶向部分包含与包含选自表2或表3中列出的序列或其互补序列的序列的至少8个连续核酸的区域具有至少80％、85％、90％、95％、97％或100％序列同一性的序列。
在一些实施方案中，ASO具有与根据表1或表2中列出的序列中的任一个的含有NMD外显子的前mRNA的靶向部分互补的序列。在一些实施方案中，ASO靶向NIE的5'末端上游的序列。例如，靶向NIE的5'末端上游序列的ASO包含与表1或表2中列出的序列中的任一个的至少8个连续核酸至少约80％、85％、90％、95％、97％或100％互补的序列。例如，靶向NIE的5'末端上游序列的ASO可以包含与表1或表2中列出的序列中的任一个具有至少80％、85％、90％、95％、97％或100％序列同一性的序列。
在一些实施方案中，ASO靶向含有外显子-内含子边界(或接界)的序列。例如，靶向含有外显子-内含子边界的序列的ASO可以包含与表1或表2中列出的序列中的任一个的至少8个连续核酸至少约80％、85％、90％、95％、97％或100％互补的序列。在一些实施方案中，ASO靶向NIE的3'末端下游序列。例如，靶向NIE的3'末端下游序列的ASO可以包含与表1或表2中列出的序列中的任一个具有至少80％、85％、90％、95％、97％或100％序列同一性的序列。例如，靶向NIE的3'末端下游序列的ASO可以包含与表1或表2中列出的序列中的任一个具有至少80％、85％、90％、95％、97％或100％序列同一性的序列。在一些实施方案中，ASO靶向NIE内的序列。
鉴定诱导外显子跳跃的其他ASO的方法
本公开的范围内还包括用于鉴定或确定诱导含SCN1A NIE的前mRNA的外显子跳跃的ASO的方法。例如，方法可以包括鉴定或确定诱导含SCN1A NIE的前mRNA的伪外显子跳跃的ASO。可以筛选与前mRNA的靶区域内的不同核苷酸特异性杂交的ASO，以鉴定或确定改善靶内含子的剪接速率和/或程度的ASO。在一些实施方案中，该ASO可以阻断或干扰剪接阻抑物/沉默子的结合位点。可利用本领域已知的任何方法来鉴定(确定)当与外显子的靶区域杂交时导致所需效果(例如，伪外显子跳跃、蛋白质或功能性RNA产生)的ASO。这些方法还可用于鉴定通过与位于所包括的外显子侧翼的内含子中或非包括的外显子中的靶向区域结合而诱导所包括的外显子的外显子跳跃的ASO。以下提供了可以使用的方法的实例。
可采用被设计为与前mRNA的靶区域杂交的ASO来进行被称为ASO“步移(walk)”的一轮筛选。例如，ASO步移中所用的ASO可从所包括的外显子的3'剪接位点上游约100个核苷酸(例如，位于目标/所包括的外显子上游的外显子序列的一部分)至该目标/所包括的外显子的3'剪接位点下游约100个核苷酸，和/或从所包括的外显子的5'剪接位点上游约100个核苷酸至该目标/所包括的外显子的5'剪接位点下游约100个核苷酸(例如，位于该目标/所包括的外显子下游的外显子序列的一部分)，以每5个核苷酸进行平铺。例如，长度为15个核苷酸的第一ASO可被设计为与相对于目标/所包括的外显子的3'剪接位点的+6至+20核苷酸特异性杂交。第二ASO可被设计为与相对于目标/所包括的外显子的3'剪接位点的+11至+25核苷酸特异性杂交。将ASO设计为跨越前mRNA的靶区域。在实施方案中，ASO可更紧密地平铺，例如，每1、2、3或4个核苷酸。此外，ASO可从5'剪接位点下游的100个核苷酸至3'剪接位点上游的100个核苷酸进行平铺。在一些实施方案中，ASO可从3'剪接位点上游的约1,160个核苷酸至5'剪接位点下游的约500个核苷酸进行平铺。在一些实施方案中，ASO可从3'剪接位点上游的约500个核苷酸至3'剪接位点下游的约1,920个核苷酸进行平铺。
例如，通过转染将一个或多个ASO或对照ASO(具有杂乱序列-预期不与靶区域杂交的序列-的ASO)递送至表达目标前mRNA(例如，本文所述的含NIE的前mRNA)的疾病相关细胞系中。可通过本领域已知的任何方法，例如通过采用跨越剪接点的引物的逆转录酶(RT)-PCR，评估每个ASO的外显子跳跃效果。与在对照ASO处理的细胞中相比，在ASO处理的细胞中采用跨越含有所包括的外显子(例如，包括NIE的侧翼外显子)的区域的引物所产生的更长RT-PCR产物的减少或不存在，表明靶NIE的剪接已经被增强。在一些实施方案中，可利用本文所述的ASO改善外显子跳跃效率(或剪接含有NIE的内含子的剪接效率)、已剪接的与未剪接的前mRNA之比率、剪接速率或剪接程度。还可以评估由目标前mRNA编码的蛋白质或功能性RNA的量，以确定每个ASO是否均获得了所需效果(例如，增强的功能性蛋白质产生)。可以使用本领域已知用于评估和/或定量蛋白质产生量的任何方法，如Western印迹法、流式细胞术、免疫荧光显微术和ELISA。
可使用被设计为与前mRNA的靶区域杂交的ASO来进行被称为ASO“微步移”的第二轮筛选。在ASO微步移中使用的ASO以每隔1个核苷酸进行平铺，以进一步精修当与ASO杂交时导致外显子跳跃(或增强的NIE剪接)的前mRNA的核苷酸序列。
借助于ASO“微步移”-其涉及以1-nt步长间隔的ASO以及更长的ASO(一般为18-25nt)，更详细地探讨了由促进靶内含子剪接的ASO所限定的区域。
如以上对于ASO步移所述，通过将一个或多个ASO或对照ASO(具有杂乱序列-预期不与靶区域杂交的序列-的ASO)例如通过转染递送至表达目标前mRNA的疾病相关细胞系中来进行ASO微步移。如本文所述，可通过本领域已知的任何方法，例如通过使用跨越NIE的引物的逆转录酶(RT)-PCR，评估每个ASO的剪接诱导效果。与在对照ASO处理的细胞中相比，在ASO处理的细胞中使用跨越NIE的引物所产生的更长RT-PCR产物的减少或不存在，表明外显子跳跃(或含有NIE的靶内含子的剪接)已经被增强。在一些实施方案中，可利用本文所述的ASO改善外显子跳跃效率(或剪接含NIE的内含子的剪接效率)、已剪接的与未剪接的前mRNA之比率、剪接速率或剪接程度。还可以评估由目标前mRNA编码的蛋白质或功能性RNA的量，以确定每个ASO是否均获得了所需效果(例如，增强的功能性蛋白质产生)。可以使用本领域已知用于评估和/或定量蛋白质产生量的任何方法，如Western印迹法、流式细胞术、免疫荧光显微术和ELISA。
试剂盒和组合物
在一些方面，本文提供了一种试剂盒，其包含：包含反义寡聚体(ASO)的浓缩物，其中ASO包含与SEQ ID NO:21-67、210-256或304-1099中的任一种具有至少80％序列同一性的序列；和稀释剂，其中浓缩物与稀释剂混溶；以及在稀释剂中稀释或溶解ASO的说明。在一些实施方案中，ASO包含与表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8a和8b中列出的序列中的任一个具有至少80％序列同一性的序列。
在一些实施方案中，ASO包含与SEQ ID NO:21-67、210-256或304-1099中的任一个具有至少60％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、884％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.8％、99.9％或100％序列同一性的序列。在一些实施方案中，ASO由与SEQ ID:21-67、210-256或304-1099中的任一个具有至少60％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、884％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.8％、99.9％或100％序列同一性的序列组成。在一些实施方案中，ASO包含与表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8a和8b中列出的序列中的任一个具有至少60％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、884％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.8％、99.9％或100％序列同一性的序列。在一些实施方案中，ASO由与表4a、4b、5a、5b、6a、6b、7、8a和8b中列出的序列中的任一个具有至少60％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、884％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.8％、99.9％或100％序列同一性的序列组成。
在一些实施方案中，稀释剂是人工脑脊髓液(aCSF)溶液。在一些实施方案中，溶液包含来自对象的脑脊髓液(CSF)样品。在一些实施方案中，稀释剂包含等渗溶液。在一些实施方案中，稀释剂包含磷酸盐缓冲(pH 6.6-7.6)溶液。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在磷酸盐缓冲(pH 6.6-7.6)溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在磷酸盐缓冲(pH 6.0-8.0)溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在磷酸盐缓冲(pH 5.0-8.0)溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在pH 4.5-8.5、pH 4.6-8.5、pH4.7-8.5、pH 4.8-8.5、pH 4.9-8.5、pH5.0-8.5、pH 5.1-8.5、pH5.2-8.5、pH 5.3-8.5、pH5.4-8.5、pH 5.5-8.5、pH5.6-8.5、pH 5.7-8.5、pH 5.8-8.5、H 5.9-8.5、pH 6.0-8.5、pH6.1-8.5、pH 6.2-8.5、pH 6.3-8.5、pH 6.4-8.5、pH 6.5-8.5、pH 6.6-8.5、pH 6.7-8.5、pH6.8-8.5、pH 6.9-8.5、pH 7.0-8.5、pH 7.1-8.5、pH 7.2-8.5、pH 7.3-8.5、pH 7.4-8.5、pH7.5-8.5、pH 7.6-8.5、pH 7.7-8.5、pH 7.8-8.5、pH 7.9-8.5、pH 8.0-8.5、pH 8.1-8.5、pH8.2-8.5、pH 8.3-8.5或pH 8.4-8.5的磷酸盐缓冲溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在pH 4.5-8.3、pH 4.5-8.2、pH 4.5-8.1、pH 4.5-8.0、pH 4.5-7.9、pH4.5-7.8、pH 4.5-7.7、pH 4.5-7.6、pH 4.5-7.5、pH 4.5-7.4、pH 4.5-7.3、pH 4.5-7.2、pH4.5-7.1、pH 4.5-7.0、pH 4.5-6.9、pH 4.5-6.8、pH 4.5-6.7、pH 4.5-6.6、pH 4.5-6.5、pH4.5-6.4、pH 4.5-6.3、pH 4.5-6.2、pH 4.5-6.1、pH 4.5-6.0、pH 4.5-5.9、pH 4.5-5.8、pH4.5-5.7、pH 4.5-5.6、pH 4.5-5.5、pH 4.5-5.4、pH 4.5-5.3、pH 4.5-5.2、pH 4.5-5.1、pH4.5-5.0、pH 4.5-4.9、pH 4.5-4.8、pH 4.5-4.7或pH 4.5-4.6的磷酸盐缓冲溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在pH 6.0-7.6、pH 6.1-7.6、pH 6.2-7.6、pH6.3-7.6、pH 6.4-7.6、pH 6.5-7.6、pH 6.6-7.6、pH 6.7-7.6、pH 6.8-7.6、pH 6.9-7.6、pH7.0-7.6、pH 7.1-7.6、pH 7.2-7.6、pH 7.3-7.6、pH 7.4-7.6或pH 7.5-7.6的磷酸盐缓冲溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在pH 6.6-8.0、pH 6.6-7.9、pH6.6-7.8、pH 6.6-7.7、pH 6.6-7.6、pH 6.6-7.5、pH 6.6-7.4、pH 6.6-7.3、pH 6.6-7.2、pH6.6-7.1、pH 6.6-7.0、pH 6.6-6.9、pH 6.6-6.8或pH 6.6-6.7的磷酸盐缓冲溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在pH 6.0-8.0、pH 6.1-8.0、pH 6.2-8.0、pH6.3-8.0、pH 6.4-8.0、pH 6.5-8.0、pH 6.6-8.0、pH 6.7-8.0、pH 6.8-8.0、pH 6.9-8.0、pH7.0-8.0、pH 7.1-8.0、pH 7.2-8.0、pH 7.3-8.0、pH 7.4-8.0、pH 7.5-8.0、pH 7.6-8.0、pH7.7-8.0、pH 7.8-8.0或pH 7.9-8.0的磷酸盐缓冲溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在pH 6.0-7.9、pH 6.0-7.8、pH 6.0-7.7、pH 6.0-7.6、pH 6.0-7.5、pH6.0-7.4、pH 6.0-7.3、pH 6.0-7.2、pH 6.0-7.1、pH 6.0-7.0、pH 6.0-6.9、pH 6.0-6.8、pH6.0-6.7、pH 6.0-6.6、pH 6.0-6.5、pH 6.0-6.4、pH 6.0-6.3、pH 6.0-6.2或pH 6.0-6.1的磷酸盐缓冲溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在pH 5.7-8.5、5.8-8.4、5.9-8.3、6.0-8.2、6.1-8.1、6.2-8.0、6.3-7.9、6.4-7.8、6.5-7.7或6.6-7.6的磷酸盐缓冲溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在pH约5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0.6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9或8.0的磷酸盐缓冲溶液中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在pH 5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0.6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9或8.0的磷酸盐缓冲溶液中。
在一些实施方案中，稀释剂包含25-250mM NaCl。
在一些实施方案中，稀释剂包含25-250、30-250、35-250、40-250、45-250、50-250、55-250、60-250、65-250、70-250、75-250、80-250、85-250、90-250、95-250、100-250、105-250、110-250、115-250、120-250、125-250、130-250、135-250、140-250、145-250、150-250、155-250、160-250、165-250、170-250、175-250、180-250、185-250、190-250、195-250、200-250、205-250、210-250、215-250、220-250、225-250、230-250、235-250、240-250或245-250mM NaCl。在一些实施方案中，稀释剂包含25-245、25-240、25-235、25-230、25-225、25-220、25-215、25-210、25-205、25-200、25-195、25-190、25-185、25-180、25-175、25-170、25-165、25-160、25-155、25-150、25-145、25-140、25-135、25-130、25-125、25-120、25-115、25-110、25-105、25-110、25-105、25-100、25-95、25-90、25-85、25-80、25-75、25-70、25-65、25-60、25-55、25-50、25-45、25-40、25-35或25-30mM NaCl。在一些实施方案中，稀释剂包含30-245、35-240、40-235、45-230、50-225、55-220、60-215、65-210、70-205、75-200、80-195、85-190、90-185、95-180、100-175、105-170、110-165、115-160、120-155、125-150、130-145或135-140mM NaCl。在一些实施方案中，稀释剂包含100-140、101-140、102-140、103-140、104-140、105-140、106-140、107-140、108-140、109-140、110-140、111-140、112-140、113-140、114-140、115-140、116-140、117-140、118-140、119-140、120-140、121-140、122-140、123-140、124-140、125-140、126-140、127-140、128-140、129-140、130-140、131-140、132-140、133-140、134-140、135-140、136-140、137-140、138-140或139-140mM NaCl。在一些实施方案中，稀释剂包含100-139、100-138、100-137、100-136、100-135、100-134、100-133、100-132、100-131、100-130、100-129、100-128、100-127、100-126、100-125、100-124、100-123、100-122、100-121、100-120、100-119、100-118、100-117、100-116、100-115、100-114、100-113、100-112、100-111、100-110、100-109、100-108、100-107、100-106、100-105、100-104、100-103、100-102或100-101mM NaCl。在一些实施方案中，稀释剂包含至少90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139或140mM NaCl。在一些实施方案中，稀释剂包含至多90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139或140mM NaCl。在一些实施方案中，稀释剂包含90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139或140mM NaCl。
在一些实施方案中，稀释剂包含0.1-20mM KCl。
在一些实施方案中，稀释剂包含0.1-40、0.1-39、0.1-38、0.1-37、0.1-36、0.1-35、0.1-34、0.1-33、0.1-32、0.1-31、0.1-30、0.1-29、0.1-28、0.1-27、0.1-26、0.1-25、0.1-24、0.1-23、0.1-22、0.1-21、0.1-20、0.1-19、0.1-18、0.1-17、0.1-16、0.1-15、0.1-14、0.1-13、0.1-12、0.1-10、0.1-9、0.1-8、0.1-7、0.1-6、0.1-5、0.1-4、0.1-3、0.1-2或0.1-1mM KCl。在一些实施方案中，稀释剂包含0.2-40、0.3-40、0.4-40、0.5-40、0.6-40、0.7-40、0.8-40、0.9-40、1-40、2-40、3-40、4-40、5-40、6-40、7-40、8-40、9-40、10-40、11-40、12-40、13-40、14-40、15-40、16-40、17-40、18-40、19-40、20-40、21-40、22-40、23-40、24-40、25-40、26-40、27-40、28-40、29-40、30-40、31-40、32-40、33-40、34-40、35-40、36-40、37-40、38-40或39-40mM KCl。在一些实施方案中，稀释剂包含0.1-3.5、0.2-3.5、0.3-3.5、0.4-3.5、0.5-3.5、0.6-3.5、0.7-3.5、0.8-3.5、0.9-3.5、1.0-3.5、1.1-3.5、1.2-3.5、1.3-3.5、1.4-3.5、1.5-3.5、1.6-3.5、1.7-3.5、1.8-3.5、1.9-3.5、2.0-3.5、2.1-3.5、2.2-3.5、2.3-3.5、2.4-3.5、2.5-3.5、2.6-3.5、2.7-3.5、2.8-3.5、2.9-3.5、3.0-3.5、3.1-3.5、3.2-3.5、3.3-3.5或3.4-3.5mM KCl。在一些实施方案中，稀释剂包含0.1-3.4、0.1-3.3、0.1-3.2、0.1-3.1、0.1-3.0、0.1-2.9、0.1-2.8、0.1-2.7、0.1-2.6、0.1-2.5、0.1-2.4、0.1-2.3、0.1-2.2、0.1-2.1、0.1-2.0、0.1-1.9、0.1-1.8、0.1-1.7、0.1-1.6、0.1-1.5、0.1-1.4、0.1-1.3、0.1-1.2、0.1-1.1、0.1-1.0、0.1-0.9、0.1-0.8、0.1-0.7、0.1-0.6、0.1-0.5、0.1-0.4、0.1-0.3或0.1-0.2mM KCl。在一些实施方案中，稀释剂包含至少0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4或3.5mM KCl。在一些实施方案中，稀释剂包含至多0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4或3.5mM KCl。在一些实施方案中，稀释剂包含0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4或3.5mM KCl。
在一些实施方案中，稀释剂包含0-50mM Na2HPO4。
在一些实施方案中，稀释剂包含0-50、0-45、0-40、0-35、0-30、0-25、0-20、0-19、0-18、0-17、0-16、0-15、0-14、0-13、0-12、0-11、0-10、0-9、0-8、0-7、0-6、0-5、0-4、0-3、0-2、0-1、0-0.9、0-0.8、0-0.7、0-0.6、0-0.5、0-0.4、0-0.3或0-0.2mM Na2HPO4。在一些实施方案中，稀释剂包含0.1-50、0.1-45、0.1-40、0.1-35、0.1-30、0.1-25、0.1-20、0.1-19、0.1-18、0.1-17、0.1-16、0.1-15、0.1-14、0.1-13、0.1-12、0.1-11、0.1-10、0.1-9、0.1-8、0.1-7、0.1-6、0.1-5、0.1-4、0.1-3、0.1-2、0.1-1、0.1-0.9、0.1-0.8、0.1-0.7、0.1-0.6、0.1-0.5、0.1-0.4、0.1-0.3或0.1-0.2mM Na2HPO4。在一些实施方案中，稀释剂包含0-50、0.1-50、0.2-50、0.3-50、0.4-50、0.5-50、0.6-50、0.7-50、0.8-50、0.9-50、1-50、2-50、3-50、4-50、5-50、6-50、7-50、8-50、9-50、1-50、11-50、12-50、13-50、14-50、15-50、16-50、17-50、18-50、19-50、20-50、25-50、30-50、35-50、40-50或45-50mM Na2HPO4。在一些实施方案中，稀释剂包含0-20、0.1-20、0.2-20、0.3-20、0.4-20、0.5-20、0.6-20、0.7-20、0.8-20、0.9-20、1-20、2-20、3-20、4-20、5-20、6-20、7-20、8-20、9-20、10-20、11-20、12-20、13-20、14-20、15-20、16-20、17-20、18-20或19-20mM Na2HPO4。在一些实施方案中，稀释剂包含至少0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20mMNa2HPO4。在一些实施方案中，稀释剂包含至多0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20mM Na2HPO4。在一些实施方案中，稀释剂包含0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20mM Na2HPO4。
在一些实施方案中，稀释剂包含0-50mM NaH2PO4。
在一些实施方案中，稀释剂包含0-50、0-45、0-40、0-35、0-30、0-25、0-20、0-19、0-18、0-17、0-16、0-15、0-14、0-13、0-12、0-11、0-10、0-9、0-8、0-7、0-6、0-5、0-4、0-3、0-2、0-1、0-0.9、0-0.8、0-0.7、0-0.6、0-0.5、0-0.4、0-0.3或0-0.2mM NaH2PO4。在一些实施方案中，稀释剂包含0.1-50、0.1-45、0.1-40、0.1-35、0.1-30、0.1-25、0.1-20、0.1-19、0.1-18、0.1-17、0.1-16、0.1-15、0.1-14、0.1-13、0.1-12、0.1-11、0.1-10、0.1-9、0.1-8、0.1-7、0.1-6、0.1-5、0.1-4、0.1-3、0.1-2、0.1-1、0.1-0.9、0.1-0.8、0.1-0.7、0.1-0.6、0.1-0.5、0.1-0.4、0.1-0.3或0.1-0.2mM NaH2PO4。在一些实施方案中，稀释剂包含0-50、0.1-50、0.2-50、0.3-50、0.4-50、0.5-50、0.6-50、0.7-50、0.8-50、0.9-50、1-50、2-50、3-50、4-50、5-50、6-50、7-50、8-50、9-50、1-50、11-50、12-50、13-50、14-50、15-50、16-50、17-50、18-50、19-50、20-50、25-50、30-50、35-50、40-50或45-50mM NaH2PO4。在一些实施方案中，稀释剂包含0-20、0.1-20、0.2-20、0.3-20、0.4-20、0.5-20、0.6-20、0.7-20、0.8-20、0.9-20、1-20、2-20、3-20、4-20、5-20、6-20、7-20、8-20、9-20、10-20、11-20、12-20、13-20、14-20、15-20、16-20、17-20、18-20或19-20mM NaH2PO4。在一些实施方案中，稀释剂包含至少0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20mMNaH2PO4。在一些实施方案中，稀释剂包含至多0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20mM NaH2PO4。在一些实施方案中，稀释剂包含0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20mM NaH2PO4。
在一些实施方案中，稀释剂包含0.1-50mM CaCl2。
在一些实施方案中，稀释剂包含0.1-50、0.2-50、0.3-50、0.4-50、0.5-50、0.6-50、0.7-50、0.8-50、0.9-50、1.0-50、-50、1.1-50、1.2-50、1.3-50、1.4-50、1.5-50、1.6-50、1.7-50、1.8-50、1.9-50、2.0-50、2.1-50、2.2-50、2.3-50、2.4-50、2.5-50、2.6-50、2.7-50、2.8-50、2.9-50、3.0-50、3.1-50、3.2-50、3.3-50、3.4-50、3.5-50、3.6-50、3.7-50、3.8-50、3.9-50、4-50、5-50、6-50、7-50、8-50、9-50、10-50、15-50、20-50、25-50、1 30-50、35-50、40-50或45-50mM CaCl2。在一些实施方案中，稀释剂包含0.1-45、0.1-40、0.1-35、0.1-30、0.1-25、0.1-20、0.1-15、0.1-10、0.1-5、0.1-4、0.1-4.9、0.1-4.8、0.1-4.7、0.1-4.6、0.1-4.5、0.1-4.4、0.1-4.3、0.1-4.2、0.1-4.1、0.1-4.0、0.1-3.9、0.1-3.8、0.1-3.7、0.1-3.6、0.1-3.5、0.1-3.4、0.1-3.3、0.1-3.2、0.1-3.1、0.1-3.0、0.1-2.9、0.1-2.8、0.1-2.7、0.1-2.6、0.1-2.5、0.1-2.4、0.1-2.3、0.1-2.2、0.1-2.1、0.1-2.0、0.1-1.9、0.1-1.8、0.1-1.7、0.1-1.6、0.1-1.5、0.1-1.4、0.1-1.3、0.1-1.2、0.1-1.1、0.1-1.0、0.1-0.9、0.1-0.8、0.1-0.7、0.1-0.6、0.1-0.5、0.1-0.4、0.1-0.3或0.1-0.2mM CaCl2。在一些实施方案中，稀释剂包含至少1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9或4.0mM CaCl2。在一些实施方案中，稀释剂包含至多1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9或4.0mM CaCl2。在一些实施方案中，稀释剂包含1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9或4.0mM CaCl2。
在一些实施方案中，稀释剂包含0.1-50mM MgCl2。
在一些实施方案中，稀释剂包含0.1-50、0.2-50、0.3-50、0.4-50、0.5-50、0.6-50、0.7-50、0.8-50、0.9-50、1.0-50、-50、1.1-50、1.2-50、1.3-50、1.4-50、1.5-50、1.6-50、1.7-50、1.8-50、1.9-50、2.0-50、2.1-50、2.2-50、2.3-50、2.4-50、2.5-50、2.6-50、2.7-50、2.8-50、2.9-50、3.0-50、3.1-50、3.2-50、3.3-50、3.4-50、3.5-50、3.6-50、3.7-50、3.8-50、3.9-50、4-50、5-50、6-50、7-50、8-50、9-50、10-50、15-50、20-50、25-50、1 30-50、35-50、40-50或45-50mM MgCl2。在一些实施方案中，稀释剂包含0.1-45、0.1-40、0.1-35、0.1-30、0.1-25、0.1-20、0.1-15、0.1-10、0.1-5、0.1-4、0.1-4.9、0.1-4.8、0.1-4.7、0.1-4.6、0.1-4.5、0.1-4.4、0.1-4.3、0.1-4.2、0.1-4.1、0.1-4.0、0.1-3.9、0.1-3.8、0.1-3.7、0.1-3.6、0.1-3.5、0.1-3.4、0.1-3.3、0.1-3.2、0.1-3.1、0.1-3.0、0.1-2.9、0.1-2.8、0.1-2.7、0.1-2.6、0.1-2.5、0.1-2.4、0.1-2.3、0.1-2.2、0.1-2.1、0.1-2.0、0.1-1.9、0.1-1.8、0.1-1.7、0.1-1.6、0.1-1.5、0.1-1.4、0.1-1.3、0.1-1.2、0.1-1.1、0.1-1.0、0.1-0.9、0.1-0.8、0.1-0.7、0.1-0.6、0.1-0.5、0.1-0.4、0.1-0.3或0.1-0.2mM MgCl2。在一些实施方案中，稀释剂包含至少0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9或4.0mM MgCl2。在一些实施方案中，稀释剂包含至多0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9或4.0mM MgCl2。在一些实施方案中，稀释剂包含0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9或4.0mM MgCl2。
在一些实施方案中，稀释剂包含1-100mM NaHCO3、1-100mM KHCO3或其组合。
在一些实施方案中，稀释剂包含1-100mM NaHCO3。
在一些实施方案中，稀释剂包含1-99、1-95、1-90、1-85、1-80、1-75、1-70、1-65、1-60、1-55、1-50、1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10、1-9、1-8、1-7、1-6、1-5、1-4、1-3或1-2mM NaHCO3。在一些实施方案中，稀释剂包含2-100、3-100、4-100、5-100、6-100、7-100、8-100、9-100、10-100、15-100、20-100、25-100、30-100、35-100、40-100、45-100、50-100、55-100、60-100、65-100、70-100、75-100、80-100、85-100、90-100或95-100mM NaHCO3。在一些实施方案中，稀释剂包含24.0-28.0、24.0-27.9、24.0-27.8、24.0-27.7、24.0-27.6、24.0-27.5、24.0-27.4、24.0-27.3、24.0-27.2、24.0-27.1、24.0-27.0、24.0-26.9、24.0-26.8、24.0-26.7、24.0-26.6、24.0-26.5、24.0-26.4、24.0-26.3、24.0-26.2、24.0-26.1、24.0-26.0、24.0-25.9、4.0-25.8、24.0-25.7、24.0-25.6、24.0-25.5、24.0-25.4、24.0-25.3、24.0-25.2、24.0-25.1、24.0-25.0、24.0-24.9、24.0-24.8、24.0-24.7、24.0-24.6、24.0-24.5、24.0-24.4、24.0-24.3、24.0-24.2或24.0-24.1mM NaHCO3。在一些实施方案中，稀释剂包含24.1-28.0、24.2-28.0、24.3-28.0、24.4-28.0、24.5-28.0、24.6-28.0、24.7-28.0、24.8-28.0、24.9-28.0、25.0-28.0、25.1-28.0、25.2-28.0、25.3-28.0、25.4-28.0、25.5-28.0、25.6-28.0、25.7-28.0、25.8-28.0、25.9-28.0、26.0-28.0、26.1-28.0、26.2-28.0、26.3-28.0、26.4-28.0、26.5-28.0、26.6-28.0、26.7-28.0、26.8-28.0、26.9-28.0、27.0-28.0、27.1-28.0、27.2-28.0、27.3-28.0、27.4-28.0、27.5-28.0、27.6-28.0、27.7-28.0、27.8-28.0或27.9-28.0mM NaHCO3。在一些实施方案中，稀释剂包含至少24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.0、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9或28.0mM NaHCO3。在一些实施方案中，稀释剂包含至多24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9或28.0mM NaHCO3。在一些实施方案中，稀释剂包含24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9或28.0mMNaHCO3。
在一些实施方案中，稀释剂包含1-100mM KHCO3。
在一些实施方案中，稀释剂包含1-99、1-95、1-90、1-85、1-80、1-75、1-70、1-65、1-60、1-55、1-50、1-45、1-40、1-35、1-30、1-25、1-20、1-15、1-10、1-9、1-8、1-7、1-6、1-5、1-4、1-3或1-2mM KHCO3。在一些实施方案中，稀释剂包含2-100、3-100、4-100、5-100、6-100、7-100、8-100、9-100、10-100、15-100、20-100、25-100、30-100、35-100、40-100、45-100、50-100、55-100、60-100、65-100、70-100、75-100、80-100、85-100、90-100或95-100mM KHCO3。在一些实施方案中，稀释剂包含24.0-28.0、24.0-27.9、24.0-27.8、24.0-27.7、24.0-27.6、24.0-27.5、24.0-27.4、24.0-27.3、24.0-27.2、24.0-27.1、24.0-27.0、24.0-26.9、24.0-26.8、24.0-26.7、24.0-26.6、24.0-26.5、24.0-26.4、24.0-26.3、24.0-26.2、24.0-26.1、24.0-26.0、24.0-25.9、4.0-25.8、24.0-25.7、24.0-25.6、24.0-25.5、24.0-25.4、24.0-25.3、24.0-25.2、24.0-25.1、24.0-25.0、24.0-24.9、24.0-24.8、24.0-24.7、24.0-24.6、24.0-24.5、24.0-24.4、24.0-24.3、24.0-24.2或24.0-24.1mM KHCO3。在一些实施方案中，稀释剂包含24.1-28.0、24.2-28.0、24.3-28.0、24.4-28.0、24.5-28.0、24.6-28.0、24.7-28.0、24.8-28.0、24.9-28.0、25.0-28.0、25.1-28.0、25.2-28.0、25.3-28.0、25.4-28.0、25.5-28.0、25.6-28.0、25.7-28.0、25.8-28.0、25.9-28.0、26.0-28.0、26.1-28.0、26.2-28.0、26.3-28.0、26.4-28.0、26.5-28.0、26.6-28.0、26.7-28.0、26.8-28.0、26.9-28.0、27.0-28.0、27.1-28.0、27.2-28.0、27.3-28.0、27.4-28.0、27.5-28.0、27.6-28.0、27.7-28.0、27.8-28.0或27.9-28.0mM KHCO3。在一些实施方案中，稀释剂包含至少24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.0、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9或28.0mM KHCO3。在一些实施方案中，稀释剂包含至多24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9或28.0mM KHCO3。在一些实施方案中，稀释剂包含24.0、24.1、24.2、24.3、24.4、24.5、24.6、24.7、24.8、24.9、25.0、25.1、25.2、25.3、25.4、25.5、25.6、25.7、25.8、25.9、26.1、26.2、26.3、26.4、26.5、26.6、26.7、26.8、26.9、27.0、27.1、27.2、27.3、27.4、27.5、27.6、27.7、27.8、27.9或28.0mMKHCO3。
在一些实施方案中，稀释剂包含1-100mM D-葡萄糖。
在一些实施方案中，稀释剂包含1-100、1-95、1-90、1-85、1-80、1-75、1-70、1-65、1-60、1-55、1-50、1-45、1-40、1-35、1-30、1-29、1-28、1-27、1-26、1-25、1-24、1-23、1-22、1-21、1-20、1-19、1-18、1-17、1-16、1-15、1-14、1-13、1-12、1-11、1-10、1-9、1-8、1-7、1-6、1-5、1-4、1-3或1-2mM D-葡糖糖。在一些实施方案中，稀释剂包含2-100、3-100、4-100、5-100、6-100、7-100、8-100、9-100、10-100、11-100、12-100、13-100、14-100、15-100、16-100、17-100、18-100、19-100、20-100、21-100、22-100、23-100、24-100、25-100、26-100、29-100、28-100、29-100、30-100、35-100、40-100、45-100、50-100、55-100、60-100、65-100、70-100、75-100、80-100、85-100、90-100或95-100mM D-葡糖糖。在一些实施方案中，稀释剂包含2-30、3-30、4-30、5-30、6-30、7-30、8-30、9-30、10-30、11-30、12-30、13-30、14-30、15-30、16-30、17-30、18-30、19-30、20-30、21-30、22-30、23-30、24-30、25-30、26-30、27-30、28-30或29-30mM D-葡糖糖。在一些实施方案中，稀释剂包含至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30mM D-葡糖糖。在一些实施方案中，稀释剂包含至多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30mM D-葡糖糖。在一些实施方案中，稀释剂包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30mM D-葡糖糖。
在一些实施方案中，稀释剂包含1-100、1-95、1-90、1-85、1-80、1-75、1-70、1-65、1-60、1-55、1-50、1-45、1-40、1-35、1-30、1-29、1-28、1-27、1-26、1-25、1-24、1-23、1-22、1-21、1-20、1-19、1-18、1-17、1-16、1-15、1-14、1-13、1-12、1-11、1-10、1-9、1-8、1-7、1-6、1-5、1-4、1-3或1-2mM葡萄糖。在一些实施方案中，稀释剂包含2-100、3-100、4-100、5-100、6-100、7-100、8-100、9-100、10-100、11-100、12-100、13-100、14-100、15-100、16-100、17-100、18-100、19-100、20-100、21-100、22-100、23-100、24-100、25-100、26-100、29-100、28-100、29-100、30-100、35-100、40-100、45-100、50-100、55-100、60-100、65-100、70-100、75-100、80-100、85-100、90-100或95-100mM葡萄糖。在一些实施方案中，稀释剂包含2-30、3-30、4-30、5-30、6-30、7-30、8-30、9-30、10-30、11-30、12-30、13-30、14-30、15-30、16-30、17-30、18-30、19-30、20-30、21-30、22-30、23-30、24-30、25-30、26-30、27-30、28-30或29-30mM葡萄糖。在一些实施方案中，稀释剂包含至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30mM葡萄糖。在一些实施方案中，稀释剂包含至多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30mM葡萄糖。在一些实施方案中，稀释剂包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30mM葡萄糖。
在一些实施方案中，稀释剂包含25-250mM NaCl、0.1-20mM KCl、0.1-50mMNa2HPO4、0.1-50mM NaH2PO4、0.1-50mM CaCl2和0.1-50mM MgCl2。
在一些实施方案中，稀释剂包含150mM NaCl、3.0mM KCl、0.7mM Na2HPO4、0.3mMNaH2PO4、0.79mM MgCl2和1.4mM CaCl2。
在一些实施方案中，稀释剂还包含抗氧化剂。在一些实施方案中，抗氧化剂是叔丁基羟基喹啉(TBHQ)、丁基羟基甲苯(BHT)、丁基羟基茴香醚(BHA)、维生素E或其任何组合。在一些实施方案中，ASO被溶解或稀释在还包含抗氧化剂的缓冲液中，其中抗氧化剂为抗坏血酸(维生素C)、谷胱甘肽、硫辛酸、尿酸、胡萝卜素、α-生育酚(维生素E)、泛醇(辅酶Q)或其任何组合。
在一些实施方案中，稀释剂包含25-250mM NaCl、0.1-20mM KCl、0-50mM KH2PO4、1-100mM NaHCO3、0-50mM NaH2PO4、1-100mM D-葡萄糖、0.1-50mM CaCl2、0.1-50mM MgCl2或其任何组合。
在一些实施方案中，稀释剂包含25-250mM NaCl、0.1-20mM KCl、0-50mM KH2PO4、1-100mM NaHCO3、0-50mM NaH2PO4、1-100mM D-葡萄糖、0.1-50mM CaCl2和0.1-50mM MgCl2。
在一些实施方案中，稀释剂包含127mM NaCl、1.0mM KCl、1.2mM KH2PO4、26mMNaHCO3、10mM D-葡萄糖、2.4mM CaCl2和1.3mM MgCl2。
在一些实施方案中，稀释剂包含119mM NaCl、26.2mM NaHCO3、2.5mM KCl、1mMNaH2PO4、1.3mM MgCl2、10mM葡萄糖和2.5mM CaCl2。
在一些实施方案中，稀释剂不包含防腐剂。在一些实施方案中，稀释剂包含防腐剂。
在一些实施方案中，用于将如本文所述的ASO稀释或溶解在稀释剂中的说明包括用于将如本文所述的ASO在稀释剂中稀释或溶解至浓度为5-200mg/mL的说明。
在一些实施方案中，用于将如本文所述的ASO稀释或溶解在稀释剂中的说明包括用于将如本文所述的ASO在稀释剂中稀释或溶解至浓度为5-250、5-247.5、5-245、5-242.5、5-240、5-237.5、5-235、5-232.5、5-230、5-227.5、5-225、5-225.5、5-220、5-217.5、5-215、5-212.5、5-210、5-205.5、5-205、5-202.5、5-200、5-197.5、5-195、5-192.5、5-190、5-187.5、5-185、5-182.5、5-180、5-177.5、5-175、5-172.5、5-170、5-167.5、5-165、5-162.5、5-160、5-157.5、5-155、5-152.5、5-150、5-147.5、5-145、5-142.5、5-140、5-137.5、5-135、5-132.5、5-130、5-127.5、5-125、5-122.5、5-120、5-117.5、5-115、5-112.5、5-110、5-107.5、5-105、5-102.5、5-100、5-97.5、5-95、5-92.5、5-90、5-87.5、5-85、5-82.5、5-80、5-77.5、5-75、5-72.5、5-70、5-67.5、5-65、5-62.5、5-60、5-57.5、5-55、5-52.5、5-50、5-47.5、5-45、5-42.5、5-40、5-37.5、5-35、5-32.5、5-30、5-27.5、5-25、5-22.5、5-20、5-17.5、5-15、5-12.5或5-10mg/mL的说明。在一些实施方案中，用于将如本文所述的ASO稀释或溶解在稀释剂中的说明包括用于将如本文所述的ASO在稀释剂中稀释或溶解至浓度为10-250、15-250、20-250、25-250、30-250、35-250、40-250、45-250、50-250、55-250、60-250、65-250、70-250、75-250、80-250、85-250、90-250、95-250、100-250、105-250、110-250、115-250、120-250、125-250、130-250、135-250、140-250、145-250、150-250、155-250、160-250、165-250、170-250、175-250、180-250、185-250、190-250、或195-250、200-250、205-250、210-250、215-250、220-250、225-250、230-250、235-250、240-250或245-250mg/mL的说明。在一些实施方案中，用于将如本文所述的ASO稀释或溶解在稀释剂中的说明包括用于将如本文所述的ASO在稀释剂中稀释或溶解至浓度为至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249或250mg/mL的说明。在一些实施方案中，用于将如本文所述的ASO稀释或溶解在稀释剂中的说明包括用于将如本文所述的ASO在稀释剂中稀释或溶解至浓度为至多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249或250mg/mL的说明。在一些实施方案中，用于将如本文所述的ASO稀释或溶解在稀释剂中的说明包括用于将如本文所述的ASO在稀释剂中稀释或溶解至浓度为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249或250mg/mL的说明。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO以0.1mg/mL至250mg/mL的浓度存在于药物组合物中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO以约0.1mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL、2.5mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL、6mg/mL、7mg/mL、8mg/mL、9mg/mL、10mg/mL、11mg/mL、12mg/mL、13mg/mL、14mg/mL、15mg/mL、16mg/mL、17mg/mL、18mg/mL、19mg/mL或20mg/mL的浓度存在于药物组合物中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO以约30mg/mL、40mg/mL、50mg/mL、60mg/mL、70mg/mL、80mg/mL、90mg/mL、100mg/mL、110mg/mL、120mg/mL、130mg/mL、140mg/mL、150mg/mL、160mg/mL、170mg/mL、180mg/mL、190mg/mL或200mg/mL的浓度存在于药物组合物中。在一些实施方案中，如本文所述的ASO以约22.5mg/mL、25mg/mL、27.5mg/mL、30mg/mL、32.5mg/mL、35mg/mL、37.5mg/mL、40mg/mL、42.5mg/mL、45mg/mL、47.5mg/mL、50mg/mL、52.5mg/mL、55mg/mL、57.5mg/mL、60mg/mL、62.5mg/mL、65mg/mL、67.5mg/mL、70mg/mL、72.5mg/mL、75mg/mL、77.5mg/mL、80mg/mL、82.5mg/mL、85mg/mL、87.5mg/mL、90mg/mL、92.5mg/mL、95mg/mL、97.5mg/mL、100mg/mL、102.5mg/mL、105mg/mL、107.5mg/mL、110mg/mL、112.5mg/mL、115mg/mL、117.5mg/mL、120mg/mL、122.5mg/mL、125mg/mL、127.5mg/mL、130mg/mL、132.5mg/mL、135mg/mL、137.5mg/mL、140mg/mL、142.5mg/mL、145mg/mL、147.5mg/mL、150mg/mL、152.5mg/mL、155mg/mL、157.5mg/mL、160mg/mL、162.5mg/mL、165mg/mL、167.5mg/mL、170mg/mL、172.5mg/mL、175mg/mL、177.5mg/mL、180mg/mL、182.5mg/mL、185mg/mL、187.5mg/mL、190mg/mL、192.5mg/mL、195mg/mL、197.5mg/mL、200mg/mL、202.5mg/mL、205mg/mL、207.5mg/mL、210mg/mL、212.5mg/mL、215mg/mL、217.5mg/mL、220mg/mL、222.5mg/mL、225mg/mL、227.5mg/mL、230mg/mL、232.5mg/mL、235mg/mL、237.5mg/mL、240mg/mL、242.5mg/mL、245mg/mL、247.5mg/mL或250mg/mL的浓度存在于药物组合物中。在一些实施方案中，将如本文所述的ASO溶解或稀释在稀释剂中至浓度为11mg/mL、22mg/mL、33mg/mL、44mg/mL、55mg/mL、66mg/mL、77mg/mL、88mg/mL、99mg/mL或100mg/mL。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO以0.1mg/mL至250mg/mL、0.2mg/mL至250mg/mL、0.3mg/mL至250mg/mL、0.4mg/mL至250mg/mL、0.5mg/mL至250mg/mL、0.6mg/mL至250mg/mL、0.7mg/mL至250mg/mL、0.8mg/mL至250mg/mL、0.9mg/mL至250mg/mL、1.0mg/mL至250mg/mL、1.1mg/mL至250mg/mL、1.2mg/mL至250mg/mL、1.3mg/mL至250mg/mL、1.4mg/mL至250mg/mL、1.5mg/mL至250mg/mL、1.6mg/mL至250mg/mL、1.7mg/mL至250mg/mL、1.8mg/mL至250mg/mL、1.9mg/mL至250mg/mL、2.0mg/mL至250mg/mL、2.1mg/mL至250mg/mL、2.2mg/mL至250mg/mL、2.3mg/mL至250mg/mL、2.4mg/mL至250mg/mL、2.5mg/mL至250mg/mL、2.6mg/mL至250mg/mL、2.7mg/mL至250mg/mL、2.8mg/mL至250mg/mL、2.9mg/mL至250mg/mL、3.0mg/mL至250mg/mL、3.1mg/mL至250mg/mL、3.2mg/mL至250mg/mL、3.3mg/mL至250mg/mL、3.4mg/mL至250mg/mL、3.5mg/mL至250mg/mL、3.6mg/mL至250mg/mL、3.7mg/mL至250mg/mL、3.8mg/mL至250mg/mL、3.9mg/mL至250mg/mL、4.0mg/mL至250mg/mL、5.0mg/mL至250mg/mL、6.0mg/mL至250mg/mL、7.0mg/mL至250mg/mL、8.0mg/mL至250mg/mL、9.0mg/mL至250mg/mL、10mg/mL至250mg/mL、15mg/mL至250mg/mL、20mg/mL至250mg/mL、25mg/mL至250mg/mL、30mg/mL至250mg/mL、35mg/mL至250mg/mL、40mg/mL至250mg/mL、45mg/mL至250mg/mL、50mg/mL至250mg/mL、55mg/mL至250mg/mL、60mg/mL至250mg/mL、65mg/mL至250mg/mL、70mg/mL至250mg/mL、75mg/mL至250mg/mL、80mg/mL至250mg/mL、85mg/mL至250mg/mL、90mg/mL至250mg/mL、95mg/mL至250mg/mL、100mg/mL至250mg/mL、105mg/mL至250mg/mL、110mg/mL至250mg/mL、115mg/mL至250mg/mL、120mg/mL至250mg/mL、125mg/mL至250mg/mL、130mg/mL至250mg/mL、135mg/mL至250mg/mL、140mg/mL至250mg/mL、145mg/mL至250mg/mL、150mg/mL至250mg/mL、155mg/mL至250mg/mL、160mg/mL至250mg/mL、165mg/mL至250mg/mL、170mg/mL至250mg/mL、175mg/mL至250mg/mL、180mg/mL至250mg/mL、185mg/mL至250mg/mL、190mg/mL至250mg/mL、195mg/mL至250mg/mL、200mg/mL至250mg/mL、205mg/mL至250mg/mL、210mg/mL至250mg/mL、215mg/mL至250mg/mL、220mg/mL至250mg/mL、225mg/mL至250mg/mL、230mg/mL至250mg/mL、235mg/mL至250mg/mL、240mg/mL至250mg/mL或245mg/mL至250mg/mL的浓度存在于药物组合物中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO以0.1mg/mL至250mg/mL、0.1mg/mL至245mg/mL、0.1mg/mL至240mg/mL、0.1mg/mL至235mg/mL、0.1mg/mL至230mg/mL、0.1mg/mL至225mg/mL、0.1mg/mL至220mg/mL、0.1mg/mL至215mg/mL、0.1mg/mL至210mg/mL、0.1mg/mL至205mg/mL、0.1mg/mL至200mg/mL、0.1mg/mL至195mg/mL、0.1mg/mL至190mg/mL、0.1mg/mL至185mg/mL、0.1mg/mL至180mg/mL、0.1mg/mL至175mg/mL、0.1mg/mL至170mg/mL、0.1mg/mL至165mg/mL、0.1mg/mL至160mg/mL、0.1mg/mL至155mg/mL、0.1mg/mL至150mg/mL、0.1mg/mL至145mg/mL、0.1mg/mL至140mg/mL、0.1mg/mL至135mg/mL、0.1mg/mL至130mg/mL、0.1mg/mL至125mg/mL、0.1mg/mL至120mg/mL、0.1mg/mL至115mg/mL、0.1mg/mL至110mg/mL、0.1mg/mL至100mg/mL、0.1mg/mL至95mg/mL、0.1mg/mL至90mg/mL、0.1mg/mL至85mg/mL、0.1mg/mL至80mg/mL、0.1mg/mL至75mg/mL、0.1mg/mL至70mg/mL、0.1mg/mL至65mg/mL、0.1mg/mL至60mg/mL、0.1mg/mL至55mg/mL、0.1mg/mL至50mg/mL、0.1mg/mL至45mg/mL、0.1mg/mL至40mg/mL、0.1mg/mL至35mg/mL、0.1mg/mL至30mg/mL、0.1mg/mL至25mg/mL、0.1mg/mL至20mg/mL、0.1mg/mL至15mg/mL、0.1mg/mL至10mg/mL、0.1mg/mL至9mg/mL、0.1mg/mL至8mg/mL、0.1mg/mL至7mg/mL、0.1mg/mL至6mg/mL、0.1mg/mL至5mg/mL、0.1mg/mL至4mg/mL、0.1mg/mL至3.9mg/mL、0.1mg/mL至3.8mg/mL、0.1mg/mL至3.7mg/mL、0.1mg/mL至3.6mg/mL、0.1mg/mL至3.5mg/mL、0.1mg/mL至3.4mg/mL、0.1mg/mL至3.3mg/mL、0.1mg/mL至3.2mg/mL、0.1mg/mL至3.1mg/mL、0.1mg/mL至3.0mg/mL、0.1mg/mL至2.9mg/mL、0.1mg/mL至2.8mg/mL、0.1mg/mL至2.7mg/mL、0.1mg/mL至2.6mg/mL、0.1mg/mL至2.5mg/mL、0.1mg/mL至2.4mg/mL、0.1mg/mL至2.3mg/mL、0.1mg/mL至2.2mg/mL、0.1mg/mL至2.1mg/mL、0.1mg/mL至2.0mg/mL、0.1mg/mL至1.9mg/mL、0.1mg/mL至1.8mg/mL、0.1mg/mL至1.7mg/mL、0.1mg/mL至1.6mg/mL、0.1mg/mL至1.5mg/mL、0.1mg/mL至1.4mg/mL、0.1mg/mL至1.3mg/mL、0.1mg/mL至1.2mg/mL、0.1mg/mL至1.1mg/mL、0.1mg/mL至1.0mg/mL、0.1mg/mL至0.9mg/mL、0.1mg/mL至0.8mg/mL、0.1mg/mL至0.7mg/mL、0.1mg/mL至0.6mg/mL、0.1mg/mL至0.5mg/mL、0.1mg/mL至0.4mg/mL、0.1mg/mL至0.3mg/mL或0.1mg/mL至0.2mg/mL的浓度存在于药物组合物中。
在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在稀释剂中至浓度为至少0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249或250mg/mL。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在稀释剂中至浓度为至多0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249或250mg/mL。在一些实施方案中，如本文所述的ASO被溶解或稀释在稀释剂中至浓度为0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249或250mg/mL。
在一些实施方案中，用于将如本文所述的ASO稀释或溶解在稀释剂中的说明包括用于将如本文所述的ASO稀释或溶解至浓度为0.1mg/mL至200mg/mL的说明。在一些实施方案中，用于将如本文所述的ASO稀释或溶解在稀释剂中的说明包括用于将如本文所述的ASO稀释或溶解至浓度为约0.1mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL、2.5mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL、6mg/mL、7mg/mL、8mg/mL、9mg/mL、10mg/mL、11mg/mL、12mg/mL、13mg/mL、14mg/mL、15mg/mL、16mg/mL、17mg/mL、18mg/mL、19mg/mL或20mg/mL的说明。在一些实施方案中，用于将如本文所述的ASO稀释或溶解在稀释剂中的说明包括用于将如本文所述的ASO稀释或溶解至浓度为约30mg/mL、40mg/mL、50mg/mL、60mg/mL、70mg/mL、80mg/mL、90mg/mL、100mg/mL、110mg/mL、120mg/mL、130mg/mL、140mg/mL、150mg/mL、160mg/mL、170mg/mL、180mg/mL、190mg/mL或200mg/mL的说明。在一些实施方案中，用于将如本文所述的ASO稀释或溶解在稀释剂中的说明包括用于将如本文所述的ASO稀释或溶解至浓度为11mg/mL、22mg/mL、33mg/mL、44mg/mL、55mg/mL、66mg/mL、77mg/mL、88mg/mL、99mg/mL或100mg/mL的说明。
在一些实施方案中，用于将如本文所述的ASO稀释或溶解在稀释剂中的说明包括用于将如本文所述的ASO稀释或溶解至浓度为0.1mg/mL至200mg/mL、0.2mg/mL至200mg/mL、0.3mg/mL至200mg/mL、0.4mg/mL至200mg/mL、0.5mg/mL至200mg/mL、0.6mg/mL至200mg/mL、0.7mg/mL至200mg/mL、0.8mg/mL至200mg/mL、0.9mg/mL至200mg/mL、1.0mg/mL至200mg/mL、1.1mg/mL至200mg/mL、1.2mg/mL至200mg/mL、1.3mg/mL至200mg/mL、1.4mg/mL至200mg/mL、1.5mg/mL至200mg/mL、1.6mg/mL至200mg/mL、1.7mg/mL至200mg/mL、1.8mg/mL至200mg/mL、1.9mg/mL至200mg/mL、2.0mg/mL至200mg/mL、2.1mg/mL至200mg/mL、2.2mg/mL至200mg/mL、2.3mg/mL至200mg/mL、2.4mg/mL至200mg/mL、2.5mg/mL至200mg/mL、2.6mg/mL至200mg/mL、2.7mg/mL至200mg/mL、2.8mg/mL至200mg/mL、2.9mg/mL至200mg/mL、3.0mg/mL至200mg/mL、3.1mg/mL至200mg/mL、3.2mg/mL至200mg/mL、3.3mg/mL至200mg/mL、3.4mg/mL至200mg/mL、3.5mg/mL至200mg/mL、3.6mg/mL至200mg/mL、3.7mg/mL至200mg/mL、3.8mg/mL至200mg/mL、3.9mg/mL至200mg/mL、4.0mg/mL至200mg/mL、5.0mg/mL至200mg/mL、6.0mg/mL至200mg/mL、7.0mg/mL至200mg/mL、8.0mg/mL至200mg/mL、9.0mg/mL至200mg/mL、10mg/mL至200mg/mL、15mg/mL至200mg/mL、20mg/mL至200mg/mL、25mg/mL至200mg/mL、30mg/mL至200mg/mL、35mg/mL至200mg/mL、40mg/mL至200mg/mL、45mg/mL至200mg/mL、50mg/mL至200mg/mL、55mg/mL至200mg/mL、60mg/mL至200mg/mL、65mg/mL至200mg/mL、70mg/mL至200mg/mL、75mg/mL至200mg/mL、80mg/mL至200mg/mL、85mg/mL至200mg/mL、90mg/mL至200mg/mL、95mg/mL至200mg/mL、100mg/mL至200mg/mL、105mg/mL至200mg/mL、110mg/mL至200mg/mL、115mg/mL至200mg/mL、120mg/mL至200mg/mL、125mg/mL至200mg/mL、130mg/mL至200mg/mL、135mg/mL至200mg/mL、140mg/mL至200mg/mL、145mg/mL至200mg/mL、150mg/mL至200mg/mL、155mg/mL至200mg/mL、160mg/mL至200mg/mL、165mg/mL至200mg/mL、170mg/mL至200mg/mL、175mg/mL至200mg/mL、180mg/mL至200mg/mL、185mg/mL至200mg/mL、190mg/mL至200mg/mL或195mg/mL至200mg/mL的说明。
在一些实施方案中，用于将如本文所述的ASO稀释或溶解在稀释剂中的说明包括用于将如本文所述的ASO稀释或溶解至浓度为0.1mg/mL至200mg/mL、0.1mg/mL至195mg/mL、0.1mg/mL至190mg/mL、0.1mg/mL至185mg/mL、0.1mg/mL至180mg/mL、0.1mg/mL至175mg/mL、0.1mg/mL至170mg/mL、0.1mg/mL至165mg/mL、0.1mg/mL至160mg/mL、0.1mg/mL至155mg/mL、0.1mg/mL至150mg/mL、0.1mg/mL至145mg/mL、0.1mg/mL至140mg/mL、0.1mg/mL至135mg/mL、0.1mg/mL至130mg/mL、0.1mg/mL至125mg/mL、0.1mg/mL至120mg/mL、0.1mg/mL至115mg/mL、0.1mg/mL至110mg/mL、0.1mg/mL至100mg/mL、0.1mg/mL至95mg/mL、0.1mg/mL至90mg/mL、0.1mg/mL至85mg/mL、0.1mg/mL至80mg/mL、0.1mg/mL至75mg/mL、0.1mg/mL至70mg/mL、0.1mg/mL至65mg/mL、0.1mg/mL至60mg/mL、0.1mg/mL至55mg/mL、0.1mg/mL至50mg/mL、0.1mg/mL至45mg/mL、0.1mg/mL至40mg/mL、0.1mg/mL至35mg/mL、0.1mg/mL至30mg/mL、0.1mg/mL至25mg/mL、0.1mg/mL至20mg/mL、0.1mg/mL至15mg/mL、0.1mg/mL至10mg/mL、0.1mg/mL至9mg/mL、0.1mg/mL至8mg/mL、0.1mg/mL至7mg/mL、0.1mg/mL至6mg/mL、0.1mg/mL至5mg/mL、0.1mg/mL至4mg/mL、0.1mg/mL至3.9mg/mL、0.1mg/mL至3.8mg/mL、0.1mg/mL至3.7mg/mL、0.1mg/mL至3.6mg/mL、0.1mg/mL至3.5mg/mL、0.1mg/mL至3.4mg/mL、0.1mg/mL至3.3mg/mL、0.1mg/mL至3.2mg/mL、0.1mg/mL至3.1mg/mL、0.1mg/mL至3.0mg/mL、0.1mg/mL至2.9mg/mL、0.1mg/mL至2.8mg/mL、0.1mg/mL至2.7mg/mL、0.1mg/mL至2.6mg/mL、0.1mg/mL至2.5mg/mL、0.1mg/mL至2.4mg/mL、0.1mg/mL至2.3mg/mL、0.1mg/mL至2.2mg/mL、0.1mg/mL至2.1mg/mL、0.1mg/mL至2.0mg/mL、0.1mg/mL至1.9mg/mL、0.1mg/mL至1.8mg/mL、0.1mg/mL至1.7mg/mL、0.1mg/mL至1.6mg/mL、0.1mg/mL至1.5mg/mL、0.1mg/mL至1.4mg/mL、0.1mg/mL至1.3mg/mL、0.1mg/mL至1.2mg/mL、0.1mg/mL至1.1mg/mL、0.1mg/mL至1.0mg/mL、0.1mg/mL至0.9mg/mL、0.1mg/mL至0.8mg/mL、0.1mg/mL至0.7mg/mL、0.1mg/mL至0.6mg/mL、0.1mg/mL至0.5mg/mL、0.1mg/mL至0.4mg/mL、0.1mg/mL至0.3mg/mL或from 0.1mg/mL至0.2mg/mL的说明。
本公开的一方面涉及包括如本文所述的ASO的试剂盒。试剂盒还可以包括一种或多种额外的治疗方案或试剂。
在一些实施方案中，本文还公开了与本文所述的一种或多种方法一起使用的试剂盒和制品。此类试剂盒包括被分隔以接收一个或多个容器，例如小瓶、管等的载体、包装或容器，每个容器包含待用于本文所述方法中的单独元件中的一个。合适的容器包括例如瓶子、小瓶、注射器和试管。在一个实施方案中，容器由多种材料(例如玻璃或塑料)制成。
本文提供的制品包含包装材料。药物包装材料的实例包括但不限于泡罩包装、瓶子、管、袋子、容器、瓶子以及适用于所选择的制剂和预期的施用和治疗模式的任何包装材料。
例如，容器包括本发明的组合物，并且任选地另外包括本文公开的治疗方案或药剂。此类试剂盒任选地包括与其在本文所述方法中的用途有关的鉴定描述或标签或说明。
试剂盒通常包括列出内容物和/或使用说明的标签，以及具有使用说明的包装插页。通常还将包括一组说明。
在一些实施方案中，标签在容器上或与容器相关联。在一个实施方案中，当形成标签的字母、数字或其他字符被附着、模制或蚀刻至容器本身中时，标签在容器上；当标签存在于还容纳容器的容器托或载体中例如，作为包装插页时，标签与容器相关联。在一个实施方案中，标签用于指示内容物将用于特定的治疗应用。标签还指示，例如在本文所述的方法中使用内容物的用法说明。
实施例
本公开将通过以下实施例更具体地说明。然而，应当理解，本公开不受这些实施例以任何方式限制。
实施例1：TANGO(核基因输出的靶向增强)机制
TANGO使用ASO通过靶向天然存在的非生产性可变剪接事件来专门增加蛋白表达。TANGO可以减少非生产性信使RNA(mRNA)，其通常被无义介导的mRNA衰变(NMD)靶向降解，如图1A和1B所示。反过来，TANGO可以增加生产性mRNA和蛋白。TANGO可以特异性增加具有内源性基因表达的组织中规范靶mRNA和全长蛋白的表达。由于这些事件是天然存在的，TANGO可以在常染色体显性单倍性不足的情况下上调野生型等位基因，从而为治疗疾病提供潜在的独特机会。
实施例2：向小鼠实验性施用反义寡聚体ASO-22
在出生后P2天或P14天，向小鼠施用单次脑室内(ICV)注射ASO-22或媒介物(PBS)。监测小鼠生存至14周。为了监测癫痫发作，向小鼠植入8201-EEG Headmount(PinnacleTechnology,Inc.,Lawrence,KS)，并从P22至P46连续监测癫痫发作活动。ASO-22测量：ASO-22水平通过液相色谱质谱(LCMS)测量；SCN1A基因表达测量：生产性Scn1a mRNA转录物使用Taqman qPCR测定测量。NaV1.1蛋白测量：NaV1.1蛋白使用Mesoscale Discovery电化学发光(MSD-ECL)测定测量，MSD-ECL测定利用野生型小鼠脑组织裂解物中的NaV1.1表达作为标准。
实施例3：在出生后2天施用ASO-22后监测小鼠的生存
在施用ASO-22后监测小鼠组的生存。图2显示了示例性生存曲线，证明在Dravet小鼠模型中由靶向SCN1A的ASO(称为“ASO-22”)提供的100％长期生存获益。WT和杂合子Dravet小鼠(+/-)，来自129S-scn1atm1Kea x C57BL/6J杂交的F1后代，在出生后2天设盲接受单个剂量的ICV注射20μg PBS或ASO-22，并监测其生存直至14周。如所示，接受PBS处理的Dravet小鼠从出生后约20天开始死亡，而其他三组的所有小鼠，包括接受ASO-22处理组的Dravet小鼠，均生存至少70天。Kaplan-Meier曲线显示了DS和WT同窝出生小鼠监测至14周的生存。ASO-22的施用显著(p<0.0001；****＝p<0.0001，图2)改善了Dravet小鼠模型的生存。与PBS处理组中14/62只动物相比，33/34只生存直至14周。在P2施用ASO-22能够预防DS小鼠模型中的SUDEP(癫痫中意外猝死)。
实施例4：监测小鼠癫痫发作
对小鼠进行EEG记录以监测癫痫发作。图3显示了DS小鼠(n＝21只/组)及其WT同窝仔(n＝11-12只/组)中EEG癫痫发作监测研究的实验设计。小鼠在P2接受20μg ICV注射ASO-22或PBS媒介物，在P20进行EEG头戴式手术，并从P22至P46通过EEG连续监测。在整个监测期间注射ASO-22的WT小鼠具有正常EEG(数据未显示)。图4A显示了在注射PBS的DS小鼠的脑的不同部分(包括额叶皮层、海马体和顶叶皮层)记录的癫痫发作事件期间来自三个通道的代表性轨迹。如图4B所示，在展示强烈癫痫发作自由度的DS小鼠中记录的小鼠自发性癫痫发作次数显著减少。如在脑的不同区域获得的类似数据所观察到的，在所有小鼠中，癫痫发作主要是全身性的。图4C总结了被给予PBS(n＝21)或ASO-22(n＝21)的DS小鼠在P22和P46之间记录的自发发作(全身性和局灶性)的总数。*表示p<0.05。另外，如图4D所示，在P2施用ASO-22后，无癫痫发作的小鼠数量增加，而与对照相比，癫痫发作2次或更多次的小鼠数量减少。无论处理如何，野生型小鼠均无任何癫痫发作。在出生后2天施用ASO-22并在出生后22天至第46天之间通过EEG监测后，未经历癫痫发作的小鼠数量增加50％(76％相比于48％)。与安慰剂相比，在出生后2天施用ASO-22后经历两次或更多次癫痫发作的小鼠数量减少(14％相比于38％)。与安慰剂相比，在出生后22天至第46天之间检测到的自发性癫痫发作平均次数减少了80％(3相比于15)(p<0.05)。在P14施用ASO-22能够显著降低DS小鼠模型中的SUDEP。此外，在记录期间，ASO-22的施用显著延长DS小鼠首次癫痫发作的潜伏期(p<0.05，图4E)。ASO-22施用后的评估期内无统计学意义的趋势表明，无癫痫发作的DS小鼠数量增加(48％PBS相比于76％ASO-22)，有2次或更多次癫痫发作的DS小鼠数量减少(38％PBS相比于14％ASO-22)。
实施例5：小鼠脑中ASO-22暴露和蛋白质表达水平的检测
收集小鼠脑部以检测ASO对脑组织的暴露以及检测脑组织中的蛋白质表达水平。图5A显示了实验时间线。来自129S-scn1atm1Kea x C57BL/6J杂交的野生型(WT)或杂合Dravet小鼠(HET)F1小鼠在出生后2天接受脑室内(ICV)注射20μg的ASO-22或PBS。在7周时从所有小鼠组的小鼠子集中收集小鼠的脑。在14周时，从所有小鼠组中的另一小鼠子集中进行第二次脑收集。如使用液相色谱-质谱(LC-MS)测量的，脑组织显示出强烈且持久暴露于ASO-22(7周时约13μg/g；图5B和14周时约8μg/g；图5E)。在7周(图5C)和14周(图5F)施用ASO-22后，WT和DS小鼠中Scnla生产性转录物的表达水平增加约1.5-2倍。图5D(7周)和图5G(14周)显示在ASO-22处理的DS小鼠中NaV1.1蛋白增加。在7周和14周时，ASO-22处理的DS小鼠脑中的NaV1.1蛋白增加至与PBS处理的WT脑无法区分的水平。注射ASO-22的WT动物的脑中的NaV1.1蛋白也相较于PBS处理的WT小鼠增加，且没有明显不良反应。
实施例6：在出生后2天施用ASO-22后监测小鼠的生存
在P14施用ASO-22后监测小鼠组的生存。图6A显示了在P14注射并监测至P90的小鼠的研究设计时间线。图6B显示了示例性生存曲线，证明在Dravet小鼠模型中靶向SCN1A的ASO提供的长期生存获益。WT和杂合Dravet小鼠(+/-)，来自129S-scn1atm1Kea x C57BL/6J杂交的F1后代，在出生后14天(约疾病发作时间)接受单个剂量ICV注射60μg PBS或ASO，并且监测其生存直至P90。如所示，接受PBS处理的Dravet小鼠从约出生后20天开始死亡，导致P90时的生存率低于用ASO-22处理的DS小鼠。PBS处理的DS小鼠中47/74生存至P90，而用ASO-22处理的DS小鼠中45/53(p<0.005)生存至P90。
实施例7：小鼠脑中ASO-22暴露和蛋白质表达水平的检测
收集小鼠脑以检测ASO对脑组织的暴露以及检测脑组织中的蛋白质表达水平。图7A显示了实验时间线。在出生后14天来自129S-scn1atm1Kea x C57BL/6J杂交的野生型(WT)或杂合Dravet小鼠(HET)F1小鼠接受脑室内(ICV)注射60μg ASO-22或PBS。在P35从所有小鼠组中的小鼠子集中收集小鼠的脑。在P90时，从所有小鼠组中的另一小鼠子集中进行第二次脑收集。如使用LCMS测量的，脑组织显示出强烈且持久暴露于ASO-22(P35时约36μg/g；图7A和P90时约10μg/g；图7D)。在施用ASO-22后，在P90(图7E)WT和DS小鼠中Scn1a生产性转录物的表达水平提高约1.5倍，而在P35(图7B)没有显著变化。图7F显示了在P90在ASO-22处理的DS小鼠中NaV1.1蛋白增加，而在P35没有显著变化(图7C)。在P90时，ASO-22处理的DS小鼠脑中的NaV1.1蛋白增加至与PBS处理的WT脑无法区分的水平。注射ASO-22的WT动物大脑中的NaV1.1蛋白也相较于PBS处理的WT小鼠增加，且没有明显不良反应。
实施例8：向食蟹猴施用ASO。
在研究首日，向2-3岁原始食蟹猴施用单次鞘内腰椎推注(IT-L)人工脑脊液(aCSF)或者一个或两个剂量水平的ASO-22反义寡聚体(ASO)。在食蟹猴中评价对于靶向啮齿动物Scn1a中的非生产性可变剪接事件具有活性的两个剂量水平的优化ASO的安全性、脑生物分布、靶衔接和药效学。在ASO单次鞘内腰椎推注(IT-L)后，处死动物并在第3天(给药后48小时)和第29天(给药后28天)测量ASO、Scn1a mRNA和NaV1.1蛋白水平。图8显示了用于示例性研究的动物的处理、给药和数量。
给药后，对动物进行标准临床和神经学观察，并收集血液样品。尸检时收集CSF和脑。收集各个区域的单独打孔(punch)用于ASO-22浓度水平、基因表达和蛋白质表达测量。通过组织中的液相色谱质谱(LCMS)以及血浆和CSF中的杂交酶联免疫吸附试验(HELISA)测量ASO-22水平。使用Taqman qPCR测量生产性和非生产性(NMD诱导)Scn1a mRNA转录物，以进行SCN1A基因表达测量。使用利用NaV1.1的重组片段作为标准的Mesoscale Discovery电化学发光(MSD-ECL)测定测量NaV1.1蛋白。两种剂量水平上的ASO均具有良好的耐受性，且体格检查和神经系统检查无变化，摄食量、体重、肝功能或血小板计数无变化，无补体系统激活，并且在所有检查的组织中均未观察到异常的组织病理学。
实施例9：食蟹猴脑组织中ASO-22ASO的检测
使用LCMS分析2-3岁原始食蟹猴的脑的ASO-22ASO水平。在研究第3天和研究第29天处死食蟹猴，以观察对于不同剂量在不同脑组织中ASO-22的水平。图9A显示了研究第3天猴脑的不同区域的ASO-22水平。在低剂量下，大多数脑区域的ASO-22暴露量低于定量限(BLQ)。在高剂量下，可检测到ASO-22，主要在皮层和小脑中检测到。图9B显示了第29天的ASO-22水平。在低剂量下，脑的大部分区域的脑组织暴露为BLQ。对于高剂量水平，大脑皮层区域的暴露量通常高于更深结构，并且暴露水平通常从第3天开始增加。观察到在较高剂量水平下ASO-22广泛分布在非人灵长类动物的脑中。
实施例10：食蟹猴脑组织中NaV1.1表达的检测
对2-3岁原始食蟹猴的大脑进行NaV1.1表达水平分析。在研究第3天和研究第29天处死食蟹猴，以观察对于不同剂量在不同脑组织中NaV1.1的表达水平。图10A显示了研究第3天猴脑的不同区域的ASO-22水平。所有评估的脑区域均有可测量的NaV1.1水平，在中脑、运动皮层、枕叶皮层和运动皮层中最高。在低剂量或高剂量水平的ASO-22下，观察到脑组织中NaV1.1水平的没有变化或变化很小。图10B显示了在研究第29天的ASO-22水平。在低剂量的ASO-22下，观察到脑组织中NaV1.1水平的没有变化或轻微变化。与aCSF处理的动物相比，在高剂量的ASO-22下，运动皮层、枕叶皮层、顶叶皮层和前额叶皮层的NaV1.1蛋白水平增加1.2至3倍。
实施例11：食蟹猴脑组织中SCN1A表达的检测
对2-3岁原始食蟹猴的脑进行SCN1A表达水平分析。测定生产性SCN1A基因水平和总SCN1A基因表达水平，以评价ASO-22ASO的靶衔接。在研究第3天和研究第29天处死食蟹猴，以观察对于不同剂量在不同脑组织中SCN1A的表达水平。图11A显示了在研究第3天猴脑的不同区域中生产性SCN1A基因表达/总SCN1A基因表达的百分比。在第3天观察到与任何脑区的对照aCSF表达相比，两种剂量下的生产性基因表达百分比均没有显著变化，表明已发生的靶衔接有限。图11B显示了在研究第29天猴脑的不同区域中生产性SCN1A基因表达/总SCN1A基因表达的百分比。在第29天，在高剂量ASO-22下，在前额叶皮层、顶叶皮层、枕叶皮层和边缘叶中观察到通过测量生产性SCN1A基因表达/总SCN1A基因表达确定的显著靶衔接。
实施例12：食蟹猴血浆和CSF中ASO-22ASO的检测
在鞘内施用ASO-22后，对2-3岁原始食蟹猴的血浆和CSF进行ASO-22水平分析。图12A显示了对于低剂量和高剂量猴中ASO-22的血浆药代动力学。在施用后1小时直至施用后29天的时间点观察血浆水平。ASO-22达到平均峰血浆水平的时间对于低剂量为约1小时(第一次收集)，高剂量为2小时。浓度以双相方式下降。每种化合物的峰值和总暴露量随剂量的增加而增加。在给药前和aCSF给药样品中测量的ASO-22水平低于每种测定的定量限。
图12B显示了第3天和第29天食蟹猴CSF中的ASO-22水平。在第3天，在低剂量组和高剂量组中观察到的CSF暴露相似。从第3天至第29天，两种剂量的CSF ASO-22水平显著下降，表明在此期间从分布阶段过渡到清除阶段。平均暴露水平是可变的，但在第29天与低剂量组相比，高剂量组略高。
实施例13：使用下一代测序通过RNAseq鉴定SCN1A转录物中的NMD诱导外显子包含事件
使用下一代测序进行全转录组鸟枪法测序，以显示由SCN1A基因产生的转录物的快照，从而鉴定NIE包含事件。为此，从HCN(人皮质神经元)的细胞核和细胞质部分中分离出聚A+RNA，并使用Illumina的TruSeq Stranded mRNA文库制备试剂盒来构建cDNA文库。对该文库进行双端测序，从而产生映射到人类基因组的100个核苷酸的读取(2009年2月，GRCh37/hg19装配体)。简言之，利用UCSC基因组浏览器(由UCSC基因组信息学小组(Centerfor Biomolecular Science&Engineering,University of California,Santa Cruz,1156High Street,Santa Cruz,CA 95064)运行并由例如Rosenbloom等人,2015,“The UCSCGenome Browser database:2015update,”Nucleic Acids Research 43,Database Issue,doi:10.1093/nar/gku1177描述的)可视化所映射的读取，并且可通过峰信号推断读取的覆盖范围和数目。峰高指示由特定区域中读取的密度给出的表达水平。上图按比例示出了SCN1A基因的图示。在100个脊椎动物物种中的保守水平作为峰示出。最高的峰对应于外显子(黑框)，而对于大多数内含子(带箭头的线)未观察到峰。在内含子20(NM_006920)中鉴定了保守的峰，在中间图中示出。保守序列的检查鉴定了侧翼是3'和5'剪接位点(带下划线的序列)的64bp的外显子样序列(下图，以灰色突出显示的序列)。包含该外显子导致移码和在外显子21中引入提前终止密码子，使转录物成为NMD的靶标。
示例性SCN1A基因、前mRNA、外显子和内含子序列总结于表1中。各个外显子或内含子的序列总结于表2中。
表1.靶SCN1A基因和前mRNA序列的列表。
Figure BDA0003786749980002321
表2.SCN1A前mRNA转录物中的靶外显子或内含子的序列
Figure BDA0003786749980002331
Figure BDA0003786749980002341
Figure BDA0003786749980002351
Figure BDA0003786749980002361
Figure BDA0003786749980002371
实施例14：SCN1A外显子20x区域ASO步移
使用2′-MOE ASO、PS主链，对紧接3'剪接位点上游、跨3'剪接位点、外显子20x、跨5'剪接位点和5'剪接位点下游的SCN1A外显子20x区域靶向序列进行ASO步移。ASO被设计通过一次移动5个核苷酸来覆盖这些区域。表3总结了靶向SCN1A的ASO列表。表4a和表4b以及表5a和表5b总结了ASO的序列。
表3.靶向SCN1A的ASO列表。
Figure BDA0003786749980002381
表4a.靶向人SCN1A的ASO序列。
Figure BDA0003786749980002382
Figure BDA0003786749980002391
表4b.靶向人SCN1A的ASO序列。
Figure BDA0003786749980002392
Figure BDA0003786749980002401
表5a.靶向小鼠SCN1A的ASO序列。
Figure BDA0003786749980002411
Figure BDA0003786749980002421
表5b.靶向小鼠SCN1A的ASO序列。
Figure BDA0003786749980002422
Figure BDA0003786749980002431
ASO序列总结于表6a和表6b中。
表6a.靶向人SCN1A的ASO序列。
Figure BDA0003786749980002432
Figure BDA0003786749980002441
表6b.靶向人SCN1A的ASO序列。
Figure BDA0003786749980002442
Figure BDA0003786749980002451
ASO序列总结于表7中。
表7.靶向人SCN1A的ASO序列。
Figure BDA0003786749980002461
Figure BDA0003786749980002471
Figure BDA0003786749980002481
Figure BDA0003786749980002491
Figure BDA0003786749980002501
Figure BDA0003786749980002511
Figure BDA0003786749980002521
Figure BDA0003786749980002531
Figure BDA0003786749980002541
Figure BDA0003786749980002551
Figure BDA0003786749980002561
Figure BDA0003786749980002571
Figure BDA0003786749980002581
Figure BDA0003786749980002591
Figure BDA0003786749980002601
Figure BDA0003786749980002611
Figure BDA0003786749980002621
Figure BDA0003786749980002631
Figure BDA0003786749980002641
Figure BDA0003786749980002651
表8a.纠正内含子保留的示例性ASO
Figure BDA0003786749980002652
Figure BDA0003786749980002661
表8b.纠正内含子保留的示例性ASO
Figure BDA0003786749980002662
Figure BDA0003786749980002671
实施例15：产生NMD的SCN1A前mRNA的可变剪接在多个物种和DS患者中是保守的。
人脑样品的生物信息学分析揭示了SCN1A基因中的外显子包含事件，该事件导致移码和引入提前终止密码子。本实施例展示了这种非生产性剪接事件在各种物种中(包括在人DS患者中)的验证。
图13A显示了通过RT-PCR对用或不用翻译抑制剂环己酰亚胺(CHX)处理的人细胞的这种非生产性剪接事件的示意图表示和验证。生产性(规范)同种型(底部条带)不包含可变外显子并转化为功能性NaV1.1蛋白。非生产同种型包含可变外显子(顶部条带)。DMSO：二甲基亚砜，CHX：环己酰亚胺。
NCBI数据库的BLAST搜索鉴定了该SCN1A NMD诱导外显子在多个物种中的高度保守同源物，并通过RT-PCR验证结果(图13B)。此外，来自DS患者的脑组织中保留NMD-诱导外显子包含事件的存在(图13B)，表明NMD-外显子包含事件的水平在健康个体和DS个体之间没有变化。图13B显示来自健康女性对象、DS患者、食蟹猴、DS小鼠、WT小鼠(C57BL/6J)和sprague Dawley大鼠的大脑皮层中SCN1A转录物的RT-PCR产物的TBE-PAGE。规范的SCN1A转录物由下条带表示，对应于NMD-外显子包含的产物由上条带表示。位于此处鉴定的NMD-诱导外显子区域的患者变体已显示导致NMD-外显子包含水平提高和生产性mRNA减少，这引起DS。参见Carvill等人，Am J Hum Genet 103,1022-1029(2018)。
还进行了RT-PCR分析以测量来自P0至P20和10月龄的WT C57BL/6J小鼠的冠状脑切片中NMD-诱导外显子和生产性Scn1a mRNA的包含水平(图13C)。RT-PCR产物的光密度测量表明，在发育过程中含有NMD-诱导外显子的转录物(上条带)基本没有变化，而生产性mRNA(下条带)增加(图13D)。在约P7至8的生产性Scn1a转录水平(图13D)开始显著提高。如图13D所示，首先将Scn1a转录物的表达相对于内源性Gapdh归一化，然后相对于P0时的Scn1a生产性转录物归一化。数据在图中表示为平均值±SD(每个数据点的个体动物的n＝2或3个样品)。将Scn1a生产性转录物的表达拟合成四参数非线性曲线。将Scn1a非生产性转录物的表达最佳拟合成线性曲线。这些结果表明，可以通过将含有NMD-外显子的转录物转化为生产性转录物来提高总生产性转录物水平，并且这种操作的影响在出生后早期脑发育期间将是最大的。
实施例16：ASO施用增加培养的人细胞和小鼠脑中的SCN1A表达。
设计一系列ASO，它们与人SCN1A外显子20X和周围内含子序列结合。初始筛选中使用的所有ASO均基于具有硫代磷酸酯骨架的寡核苷酸的2'-甲氧基-乙基(MOE)修饰。通过自由摄取在人神经祖细胞中筛选ASO，然后使用RT-PCR和qPCR分析SCN1A生产性和含有外显子20X的非生产性转录物。如图14A所示，在20μM下筛选总共47个ASO。包括非靶向ASO(NT)和无ASO对照(-)。RpL32用作上样对照。鉴定许多ASO，它们显著降低NMD-诱导外显子包含并提高生产性转录物表达(图14A-14C)。选择活性最高的ASO(ASO-22，由图14A-14C中的箭头表示)用于进一步评价。证实ASO-22的作用具有剂量依赖性(图15)。非靶向ASO对照(NT)对任一转录同种型的水平均没有影响(图15)。
使用自由摄取或核转染递送方法在人神经祖细胞中测定ASO-22的剂量-反应关系。EC50值为3μM(通过自由摄取确定)和529nM(通过核转染确定)(图14D)。还通过测量处理细胞中四个高度同源的VGSC a亚基基因表达的影响来评估ASO-22的特异性。在通过自由摄取的20、8或3μM ASO处理后，观察到ReNcell中的SCN2A、SCN3A、SCN8A或SCN9A的表达水平没有变化(图14E)。这些结果表明，ASO-22有效且特异性地增加人神经祖细胞中的Scn1a mRNA产量。
图14A显示了ReNcell中的ASO筛选。在裸(自由)摄取ASO后，ReNcell中RT-PCR产物的TBE PAGE对应于SCN1A生产性mRNA(下带，549bp)和含有外显子20X的非生产性mRNA(上带，613bp)。图14B显示了SCN1A转录物中外显子20X包含的百分比，如从图14A中所示的RT-PCR产物定量的。PCR产物通过光密度测定进行定量，并绘制为含外显子20X的mRNA占总数(含外显子20X和生产性mRNA)的百分比。每个ASO处理组，n＝1；NT组，n＝2；假处理组，n＝11。图14C显示了通过SYBR绿qPCR确定的经ASO处理的ReNcell中SCN1A生产性mRNA的表达。首先将SCN1A生产性mRNA的表达相对于内源性RpL32归一化，然后相对于无ASO对照(-)归一化。qPCR结果表示为每个处理的平均值±SD。每个ASO处理，n＝1；NT组，n＝2；假处理组，n＝10。图14D展示了使用自由摄取和核转染的ReNcell中ASO-22的剂量-反应关系。将SCN1A的表达相对于内源性RpL32归一化，然后相对于无ASO对照归一化。qPCR结果表示为平均值±SD。(两种处理，n＝2)。将SCN1A生产性转录物的表达拟合成四参数非线性曲线。图14E展示了所选择的ASO对ReNcell中同源VGSCα亚基基因表达的影响。在自由摄取20、8或3μM的ASO-22或非靶标ASO对照(NT)后，通过基于探针的qPCR测量ReNcell中的SCN2A、3A、8A和9A的表达。首先将SCN mRNA水平相对于内源性Gapdh归一化，然后相对于无ASO(-)处理的细胞归一化。qPCR结果表示为每次分析的平均值±SD(每个ASO处理，n＝4；无ASO对照，n＝8)。
图15A-15C显示了ASO-22对ReNcell中Scn1a mRNA的剪接和表达的剂量依赖性作用。ReNcell通过裸摄取用20、8或3μM ASO-22进行处理72h，然后在收获前用DMSO或环己酰亚胺(CHX)进行处理3h。包括非靶向ASO对照(NT)和无ASO对照(假处理)。图15A显示了对应于ReNcell中含有外显子20X的SCN1A生产性mRNA(下条带，549bp)和非生产性mRNA(上条带，613bp)的RT-PCR产物的TBE PAGE。RpL32用作上样对照。通过基于探针的qPCR对裸摄取ASO-22后ReNcell中SCN1A转录物的表达进行定量。用两种qPCR测定分别测量SCN1A生产性(图15B)和非生产性(图15C)mRNA的水平(参见方法中的描述)。首先将转录表达相对于内源性RpL32信号归一化，然后相对于无ASO(假处理)对照归一化。假处理qPCR结果以每组的平均值±SD表示。(独立重复实验：ASO-22处理，n＝1；假处理，n＝3；假处理+CHX，n＝3)。
为确定ASO-22施用是否可以在体内以剂量依赖性方式上调生产性mRNA和蛋白质，以0.3、1、3、5、10、20或30μg向P2 WT C57BL/6J小鼠给予单次ICV注射ASO-22，并在处理后5天对小鼠实施安乐死(图16A)。收集脑组织并分别分析非生产性和生产性Scn1a转录物以及NaV1.1蛋白水平的变化。Scn1a转录物中的NMD外显子包含随ASO剂量的增加而减少(图16B)。使用基于探针的qPCR(图16C)和RT-PCR(图17)还观察到生产性Scn1a表达呈剂量依赖性增加，在10μg剂量组中检测到表达水平增加约6倍，并且观察到在20和30μg没有进一步增加。最后，NaV1.1蛋白的表达水平以类似的剂量依赖性方式提高(图16D和图18)。非靶向ASO对照(NT)对Scn1a转录物或NaV1.1的水平没有影响。在接受ASO的小鼠脑中八种密切相关的VGSCα亚基基因加上Nax(Scn7a)的表达不受影响(图16E)。
为了确定ASO-22效应在脑中的持久性，在注射后的不同时间点检查ICV注射10μgASO-22的P2 WT小鼠的Scn1a生产性转录水平的脑表达(图16F)。在注射后长达30天观察到生产性Scn1a转录物水平增加(图16G和图19)。与PBS注射对照相比，NaV1.1蛋白的水平也在30天观察期期间提高且得以保持(图16H和图20)。
图16A显示了体内ASO-22剂量-反应关系的实验设计。图16B显示了通过TBE PAGERT-PCR产物的光密度测定进行定量的小鼠脑中Scn1a转录物中NMD-诱导外显子的百分比(图17中所示的凝胶)。定量结果表示为平均值±SD(每个治疗组，n＝3-14)。将图16B中绘制的数据拟合成四参数非线性曲线。与PBS处理的动物相似，NT ASO处理组的NMD-诱导外显子包含百分比为45.8％±0.7％。图16C显示了小鼠脑中Scn1a生产性转录物表达的倍数变化，如通过基于探针的qPCR所定量的。qPCR结果表示为平均值±SD(每个处理组，n＝3-14)。将绘制的数据拟合成四参数非线性曲线。与PBS处理的动物相似，NT ASO处理组的Scn1a mRNA的倍数变化为0.9±0.1。图16D显示了小鼠中NaV1.1蛋白表达的倍数变化，如通过MesoScale Discovery(MSD)方法定量的。定量结果表示为平均值±SD(每个处理组为n＝3-8)。将绘制的数据拟合成四参数非线性曲线。与PBS处理的动物相似，与成人脑相比，NT ASO处理组的NaV1.1表达为16.8％±0.9％。图16E显示了ASO-22对小鼠脑中表达的9个VGSCα亚基基因加Nax(Scn7a)表达的影响。通过基于探针的qPCR来测量在ICV注射PBS、非靶标ASO对照(NT，20μg)或不同剂量的ASO-22后的小鼠脑中Scn1a生产性转录物和其余8个VGSCα亚基基因加Nax(Scn7a)的表达。首先将每个转录物的表达相对于内源性Gapdh归一化，然后与PBS注射对照进行比较。此处使用的qPCR测定在方法中列出。数据表示为平均值±SD(每个处理组，n＝3-14)。图16F显示了用于评估ICV注射ASO-22后小鼠脑中的作用持续时间的实验设计。图16G显示在P2时注射10μg ASO-22后选定天数的小鼠脑中Scn1a生产性转录物的定量。首先Scn1a转录物被相对于内源性Gapdh归一化，然后被与接受PBS注射后1天的小鼠脑比较。qPCR结果表示为平均值±SD(每个处理组为n＝4-9)。将绘制的数据适合成四参数非线性曲线。图16H显示在P2时注射10μg ASO-22后选定天数的小鼠脑中的NaV1.1蛋白表达的倍数变化。NaV1.1蛋白表达通过MSD方法定量。MSD结果表示为平均值±SD(n＝4-5个从每个处理组中随机选择的样品)。
图17显示了ASO-22对ICV注射的新生小鼠脑中的Scn1a表达的剂量依赖性影响。在P2时用PBS，用非靶标(NT，20μg)对照，0.3、1、3、5、10、20或30μg ASO-22ICV注射WT C57BL/6J小鼠。注射后5天收获脑并分析Scn1a mRNA表达。RT-PCR产物的TBE PAGE显示小鼠脑中的Scn1a生产性(下条带，498bp，由*表示)和NMD-诱导转录物(上条带，562bp，由§表示)。外显子21X包含百分比的定量显示在图16B中。通过qPCR的Scn1a生产性mRNA表达的定量显示在图16C中。M：DNA梯状物、NEB、N3231L。
图18显示了ASO-22对ICV注射的新生小鼠脑中的NaV1.1表达的剂量依赖性影响。在P2时用0.3、1、3或10μg ASO-22或PBSICV注射WT C57BL/6J小鼠。注射后5天收获脑并分析NaV1.1的表达。通过对来自每个给药组的两个随机选择的脑样品进行免疫印迹来评估NaV1.1表达(约223kDa，由*表示)。每个泳道上样50μg蛋白质。包括丽春红染色的印迹以显示同等上样。包括来自注射10μg ASO的脑的一半蛋白质输入，用于测试免疫印迹的信号饱和度。来自未经处理的Scn1a+/-和WT同窝小鼠的脑样品作为对照。通过Meso ScaleDiscovery(MSD)方法的NaV1.1表达定量显示在图16D中。
图19显示了在不同注射后天数Scn1a mRNA在小鼠脑中的表达。在P2时用3或10μgASO-22或PBS ICV注射WT C57BL/6J小鼠。在注射后1、3、5、10、20或30天收获脑并分析Scn1amRNA表达。RT-PCR产物的TBE PAGE显示小鼠脑中的Scn1a生产性(下条带，498bp，由*表示)和NMD-诱导转录物(上条带，562bp，由§表示)。Gapdh用作上样对照。通过qPCR的Scn1a生产性mRNA表达的定量显示在图16G中。M：DNA梯状物、NEB、N3231L。
图20显示了注射后不同天数的小鼠脑中NaV1.1的表达。小鼠在P2时ICV注射10μgASO-22或PBS至WT C57BL/6J。通过对注射后10、20和30天小鼠的两个随机选择的脑样品进行免疫印迹来评估NaV1.1表达(约223kDa，用*表示)。每个泳道上样50μg总蛋白。包括丽春红染色的印迹以显示同等上样。通过Meso Scale Discovery(MSD)方法的NaV1.1表达变化的定量显示在图16H中。
实施例17：治疗Dravet综合征
Dravet综合征(DS)是一种罕见的婴儿期耐药性发育性和癫痫性脑病，且长期预后不佳。Dravet综合征在美国影响估计1:15,700个体或约20,000个体的人群(Wu等人，2015,Pediatrics,136:e1310-5，其全部内容通过引用并入本文)。Dravet综合征最常见的原因是SCN1A基因的致病性突变(Scheffer 2012,Eur.J.Paediatr.Neurol.16,Suppl1:S5-8，其全部内容通过引用并入本文)。已经报道了单核苷酸取代、小插入或缺失，甚至是全基因缺失，迄今为止，在DS患者中已经描述了SCN1A基因中至少1257种不同的突变(Djémié等人，2016,Mol Genet Genomic Med.4:457-64，其全部内容通过引用并入本文)。SCN1A基因编码钠电压门控通道α亚基(NaV1.1蛋白)。与DS相关的SCN1A(NaV1.1通道)突变大多是截断或错义，导致>95％的病例中NaV1.1蛋白功能丧失(Catterall等人，2010,J.Physiol.588:1849-59；Meng等人，2015,Hum Mutat.2015；36:573–80，其全部内容通过引用并入本文)。突变在DS患者中是杂合的，并导致NaV1.1蛋白的单倍性不足。
已在患有早期婴儿SCN1A脑病的儿童中鉴定一些SCN1A突变(Thr226Met、Val422Leu)，该脑病是在表型上不同于DS的严重发育性和癫痫性脑病(Sadleir等人，2017,Neurology,89:1035-42，其全部内容通过引用并入本文)。在使用动态动作电位钳评估的功能性生物物理测试中，经查明导致早期婴儿疾病的突变已被证明可引起NaV1.1蛋白的功能获得性变化(Berecki等人，2019,Ann Neurol.85:514-25，其全部内容通过引用并入本文)。使用功能测试已发现其他几种突变可导致NaV1.1的功能获得性变化(V1611F、D1866Y、W1204R)，这些变化也与不同于DS的癫痫发作表型有关(Meng等人，2015,Hum Mutat.2015；36:573-80，其全部内容通过引用并入本文)。此外，家族性偏瘫偏头痛(FHM)，一种通常与癫痫无关的疾病，在某些情况下已被证明与SCN1A中的功能获得性突变(L263V、T1174S、Q1489K、F1499L、L1624P、L1649Q、L1670W)有关(Dhifallah等人，2018,FrontMol.Neurosci.11:232；Fan等人，2016,Cephalalgia.36:1238-47；Cestele等人，2013,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.2013；110:17546–51，其全部内容通过引用并入本文)。其他潜在的功能获得性SCN1A突变与非DS症状例如Rasmussen综合征(Arg1575Cys)有关(Depienne等人，2009,J.Med Genet.46:183-91，其全部内容通过引用并入本文)。
抑制性中间神经元中NaV1.1通道的丢失可能导致DS患者癫痫发作和提前死亡(Cheah等人，2012,PNAS.109:14646-51，其全部内容通过引用并入本文)。其他神经细胞中NaV1.1通道的丢失可能导致癫痫，以及DS的其他方面(Liu等人，2013,Ann Neurol.74:128-39，其全部内容通过引用并入本文)。Dravet综合征以多种癫痫发作类型为特征，经常发展为需要立即干预的癫痫持续状态或持续超过5分钟的长时间癫痫发作。几乎所有患者(>90％)除了癫痫发作外，还患有多种合并症，包括运动和语言障碍、严重的智力和发育障碍、学习困难、自闭症、注意力缺陷/多动障碍、睡眠和步态异常以及行为困难(Lagae等人，2018,Dev.Med.Child Neurol.60:63-72，其全部内容通过引用并入本文)。因此，DS患者的生活质量非常低(Lagae等人，2018,Dev.Med.Child Neurol.60:63-72，其通过引用并入本文)。
在直到2岁的DS患儿中，神经系统检查和认知通常是正常的(Ragona等人，2011,Epilepsia.52:386-92，其全部内容通过引用并入本文)。然而，在>4岁的DS患者中，近100％有智力受损(Genton等人，2011,Epilepsia.52,Suppl 2:44-9；Ragona等人，2011,Epilepsia.52:386-92，其全部内容通过引用并入本文)。神经行为受损的程度为从轻度学习困难到智力残疾。1岁至8岁之间的时间段(恶化阶段)是干预的关键时期(图3)。8岁后，几乎100％的DS患者都被证实有严重智力残疾(Gataullina和Dulac，2017,Seizure 44:58-64，其全部内容通过引用并入本文)。DS的认知受损不仅是癫痫发作的结果。癫痫发作很少的患者可能有非常严重的脑病，相反，频繁癫痫发作的患者认知能力下降可能相对较少。此外，认知结果与SCN1A突变类型之间似乎没有相关性，无论是错义突变还是截断突变(Ragona等人，2011,Epilepsia.52:386-92，其通过引用并入本文)。在疾病的前5年内长期使用禁忌药物(例如钠通道阻滞剂)可对DS患者的认知结果产生负面影响(de Lange等人，2018,Epilepsia,59:1154-65，其全部内容通过引用并入本文)。
Dravet综合征是最具耐药性形式的癫痫之一，尽管接受了多种抗癫痫药(AED)的治疗，仍有超过90％的患者继续有无法控制的癫痫发作，这使他们处于受伤或死亡的高风险之中。DS治疗的主要目标是减少癫痫发作的频率和严重程度；然而，对于这些患者仍然非常需要额外的治疗来解决DS的其他合并症。Dravet综合征与生活质量低下有关(Lagae等人，2018,Dev.Med.Child.Neurol.60:63-72，其通过引用并入本文)。减少癫痫发作频率并改善认知和步态可能显著改善生活质量。
治疗剂
用于治疗Dravet综合征的示例性治疗剂是靶向核糖核酸(RNA)剪接以提高蛋白质水平以治疗严重遗传疾病的反义寡核苷酸或反义寡聚体(ASO)药物。具体地，STK-001是用于治疗DS的ASO的实施方案，DS是由SCN1A基因的突变引起的。Dravet综合征最常由SCN1A基因的一个等位基因突变引起。这些患者拥有一个野生型等位基因和一个突变等位基因。虽然NaV1.1蛋白是由野生型等位基因产生的，但突变等位基因被翻译成非功能性蛋白质，并导致患者50％的正常蛋白质表达。STK-001被设计以提高生产性SCN1A信使RNA(mRNA)的水平，从而提高钠通道NaV1.1蛋白的表达。也就是说，STK-001与SCN1A前mRNA结合并重定向剪接机制以减少非生产性mRNA的数量并增加生产性mRNA，该生产性mRNA被翻译成来自野生型等位基因的增加的NaV1.1蛋白。将NaV1.1恢复至生理水平可以减少癫痫发作和其他非癫痫发作合并症的发生。这种基于RNA的方法可能不是基因治疗，而是RNA调节，因为它不操纵也不插入遗传脱氧核糖核酸密码。
开发STK-001是为了采用TANGO(核基因输出的靶向增强)技术来利用人和小鼠SCN1A中天然存在的非生产性可变剪接外显子，从而导致引入提前终止密码子和随后的转录物(mRNA)降解。这些非生产性剪接事件是正常基因调节的部分，非生产性剪接事件是SCN1A基因的野生型或正常序列的部分。适合TANGO的非生产性剪接事件是导致无义介导的mRNA衰变外显子或NMD外显子的可变剪接。NMD外显子在超过10％的基因转录物中被发现，并且与保留的内含子一样，是该基因野生型序列的部分。包括这些NMD外显子的非生产性mRNA在细胞的细胞质中通过无义介导的mRNA衰变而降解，并且不被翻译成蛋白质。STK-001与前mRNA结合并重定向剪接机制以防止NMD外显子包含。这种剪接转换减少了非生产性mRNA并增加了生产性mRNA，生产性mRNA被翻译为增加的来自野生型等位基因的全长功能蛋白。TANGO机制上调野生型等位基因的表达，这意味着TANGO机制不依赖于针对特定突变。TANGO ASO减少了非生产性mRNA的数量并提高了生产性mRNA的水平，从而导致产生更多的蛋白质。TANGO以与突变无关的方式运作，因为它利用一个野生型等位基因，并且不改变蛋白质编码剪接同种型。
啮齿动物脑中的Scn1a mRNA和NaV1.1蛋白水平在出生后4周达到峰值。在小鼠中，NaV1.1通道的上升从出生后10天开始并持续到4周龄(Cheah等人，2013,Channels,7:468-72，其全部内容通过引用并入本文)。使用亚型特异性抗体的人脑免疫印迹显示，NaV1.1蛋白表达与啮齿动物脑中的表达相似，NaV1.1水平在出生时较低，在20个月时稳定升高至峰值，并在30个月内保持稳定(Cheah等人，2013,Channels,7:468-72，其通过引用并入本文)。在人脑中进行的另一项研究显示，NaV1.1免疫反应性神经元和神经突在胎儿晚期和出生后时期增加，在出生后7至9个月达到峰值(Wang等人，2011,Brain Res.1389:61-70，其全部内容通过引用并入本文)。在非人灵长类动物(NHP)和人中观察到了类似的模式。尽管从不同年龄的小鼠获得的脑组织中NMD底物的绝对量是相似的，由于脑中生产性Scn1a mRNA和NaV1.1蛋白随着年龄的增长而逐渐增加，STK-001处理小鼠中Scn1a和NaV1.1的倍数变化在年轻动物中高于老年动物。因此，STK-001处理可以更有效地将儿科DS患者的NaV1.1蛋白恢复到生理正常水平。使用STK-001在DS新生小鼠模型中进行的临床前测试显示，出生后35至90天的动物(相当于大于2岁的人类)中的死亡率显著降低(Arzimanoglou等人，2018,Pediatr.Drugs.20:249-64，其全部内容通过引用并入本文)。
基于寡核苷酸的化合物被开发用于通过在血脑屏障内直接递送来治疗人脑疾病。CNS中直接给药的寡核苷酸具有几种独特的药代动力学(PK)和药效学(PD)特性，包括主动摄取机制、低全身暴露、长半衰期(t1/2)、积累和从亚细胞库中逐渐释放(Khorkova和Wahlestedt,2017,Nat.Biotechnol.35:249-63，其全部内容通过引用并入本文)。ASO(例如STK-001)的CNS递送不是基因疗法(即使用病毒技术递送或表达的疗法)。STK-001是合成制造的化学产品，FDA将其归类为小分子。STK-001是化学合成的，不能被视为生物制品。
实施例18：在非人模型中治疗剂的药理学评价
在小鼠(包括野生型和DS小鼠模型)中进行STK-001的初始靶衔接、药理学和疗效研究。SCN1A中的靶向非生产性剪接事件在多个物种(包括小鼠、非人类灵长类动物(NHP)和人)中高度保守。STK-001的靶序列在不同物种之间也是相同的。
在野生型小鼠中对STK-001的靶衔接和药理学进行了表征。通过脑室内注射向新生(出生后一天)小鼠施用单个剂量的STK-001。在生命的第5天，将脑分离并进行加工以得到RNA和蛋白质。STK-001处理导致非生产性Scn1a mRNA的剂量依赖性减少。此外，非生产性mRNA的减少与生产性Scn1a mRNA的增加和NaV1.1蛋白的增加有关。
还在Scn1a杂合缺失的转基因小鼠中研究了STK-001的药理学和疗效。该模型是通过在Scn1a基因的第一个编码外显子中引入靶向缺失而创建的。这些小鼠表现出DS表型的许多方面，包括癫痫发作和过早致死，并且之前已用于评估DS的新AED。通过脑室内注射向新生小鼠(出生后二天)和野生型同窝仔鼠对照施用单个剂量的安慰剂(由磷酸盐缓冲溶液组成)或STK-001。单次注射STK-001可使DS小鼠中的NaV1.1蛋白在7周和14周时恢复至接近野生型小鼠的水平。STK-001处理的样品显示SCN1A基因的表达增加，而任何其他SCN家庭成员均没有增加。这些结果表明，STK-001在高度同源的钠通道基因家族中对SCN1A具有高度特异性，表明脱靶活性的可能性很低。除了增加NaV1.1蛋白外，在DS小鼠中施用单个剂量的STK-001导致过早死亡率显著降低。与安慰剂处理的小鼠的23％生存率相比，STK-001处理导致DS小鼠在出生后90天观察期内的生存率为97％。出生后90天的小鼠相当于大于2岁的人类(Arzimanoglou等人，2018,Pediatr Drugs.20:249-64，其通过引用并入本文)。
总之，使用STK-001获得的临床前数据证明了STK-001的机制证明和临床疗效。在野生型小鼠脑中，STK-001与靶标结合并引发预测的药理学。在DS小鼠中施用单个剂量的STK-001导致过早死亡率显著降低(p<0.0001)。
还在食蟹猴中评价了STK-001的药理学、分布和耐受性。以与估计的治疗剂量范围一致并保持低于基于猴的耐受性的最大耐受剂量和化学类似分子的公开数据的剂量范围通过鞘内(IT)注射向青春期前的猴施用单个剂量的STK-001或对照溶液。在给药后2天或28天处死动物(处理组，n＝3；对照组，n＝2)。观察到NaV1.1蛋白增加了两倍。NaV1.1的增加也与脑组织中STK-001的存在相关。
实施例19:人患者中的治疗剂的药理学评价
DS是一种高度耐药的遗传性癫痫，与多种严重的合并症有关。恶化阶段(1至8岁)是用于减少合并症(例如智力障碍)的发生率和严重程度的治疗干预的关键窗口。因此，开发可向儿科人群施用的用于DS治疗的新疗法是至关重要的。
安全性和PK终点是，例如，STK-001单次给药或多次给药的安全性和PK。用于分析的安全变量包括但不限于AE的发生率、类型和严重程度、生命体征、ECG/Holter、实验室和体格检查参数。PK参数可以通过非房室分析从STK-001的血浆浓度获得，包括但不限于：最大血浆浓度(Cmax)、达到最大血浆浓度的时间(Tmax)、从时间0至无穷大以及至最后可测量浓度的血浆浓度-时间曲线下面积(AUC0-∞，AUC0-t)以及与剂量水平相比Cmax和AUC的倍数变化。可以通过测量STK-001的浓度来评估STK-001在CSF中的暴露。
疗效终点是，例如，剂量效应的证据，以及以下方面的基线和治疗结束之间的比较：(i)在4周时间段内计算的惊厥发作频率(通过纸质记录测量)相对于基线的百分比变化；(ii)在4周时间段内计算的惊厥发作频率(通过纸质记录测量)减少≥50％、≥75％和100％(与基线相比)的患者比例；(iii)总体临床状态相对于基线的变化，按以下量表衡量：照护人员总体变化印象(CaGIC)、临床总体变化印象(CGIC)和由EuroQol-5D(青年版)(EQ-5D-Y)仪器测量的患者生活质量较基线的变化。
其他疗效终点包括但不限于所有惊厥和非惊厥发作的次数和类型、在例如4周时间段内计算的总癫痫发作频率(通过纸质记录测量)相对于基线的百分比变化、在例如在4周时间段内计算的总癫痫发作频率(通过纸质记录测量)减少≥50％、≥75％和100％(与基线相比)的患者比例、10-20次脑电图(EEG)参数的变化、通过体动记录仪测量的总睡眠时间和通过睡眠记录测量的每周睡眠持续时间(小时)、通过例如Embrace2可穿戴装置测量的惊厥发作频率、通过Gillette功能评估问卷(FAQ)22项技能集测量的步移和步态评估，以及分析CSF、血浆或血清样品的探索性生物标志物(例如，NaV1.1、神经丝轻链等)。
剂量水平
通过鞘内(IT)注射而施用于DS患者单个或多个剂量的STK-001，例如0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195或200mg。剂量水平可以根据安全监测委员会(SMC)的决定进行调整。对于每个剂量水平，队列之间的剂量递增可能是两倍或更低。
患者人群
符合以下标准(入选标准)的患者可具有资格：(i)患者和/或授权代表必须愿意并且能够给予知情同意/允许以及当地法律要求的参与研究的任何授权；(ii)患者及其照护人员必须愿意并能够遵守所有方案要求；(iii)患者在筛查时必须年满18岁(含)；(iv)患者必须患有以下定义的DS：(a)在12月龄之前发作，伴有反复发作的局部运动或半惊厥或全身强直-阵挛性癫痫发作，这些发作通常延长并由高热引发，(b)没有因果磁共振成像(MRI)病变的既往史(不需要MRI来确认没有病变)，(c)没有其他已知病因，和(d)癫痫发作时发育正常；(v)患者必须具有与DS相关的SCN1A基因中的记录的致病性、可能致病性变体或意义不明的变体。SCN1A检测结果为阴性(未发现具有临床意义的变体)的患者不得入组；(vi)患者先前至少接受过2次癫痫治疗，这些治疗缺乏足够的癫痫发作控制(需要额外的AED)或因AE不得不停药；(vii)在初始观察期间患者必须经历4次或以上的惊厥发作(半阵挛、局部伴有运动体征、局部至双侧强直阵挛性惊厥、全身性强直阵挛性惊厥、强直性的、强直或失张力性的(跌倒发作)以及阵挛性的)；(viii)患者当前必须服用在筛选前已稳定至少4周的剂量的至少一种AED；(ix)所有癫痫药物或癫痫干预措施(包括生酮饮食或迷走神经刺激器)必须在筛选前稳定(包括产品类型、剂量和设置)至少4周；(x)允许使用任何基于大麻或大麻素的产品或药物，但治疗必须在筛选前至少稳定4周，包括供应商、比例和剂量；以及(xi)患者必须符合IT药物施用程序的适龄机构指南。
符合以下标准(排除标准)的患者可能不具有资格：(i)患者具有SCN1A基因中的以下突变中的一个：Thr226Met、Leu263Val、Val422Leu、Thr1174Ser、Trp1204Arg、Pro1345Ser、Gln1489Lys、Phe1499Leu、Arg1575Cys、Val1611Phe、Leu1624Pro、Arg1648Cys、Leu1649Gln、Leu1670Trp、Gly1674Arg或Asp1866Tyr；(ii)患者具有另一个导致癫痫的基因中的已知的致病突变(在已知隐性遗传病的情况下，致病突变必须是纯合的)；(iii)患者当前正在接受钠通道阻滞剂(作为维持治疗)，包括：苯妥英、卡马西平、奥卡西平、拉莫三嗪、拉考沙胺或卢非酰胺；(iv)患者患有除癫痫以外的临床上显著不稳定的医疗病况；(v)患者在筛选或第1天给药前4周内已经有临床相关症状或临床重大疾病，但癫痫除外；(vi)患者有脑或脊髓疾病病史(癫痫或DS除外)或细菌性脑膜炎或脑畸形病史；(vii)患者有脊柱畸形或其他可能改变CSF自由流动或植入CSF引流分流器的疾病；(viii)患者在筛选时或第1天给药前具有临床上显著的(根据研究者的判断)异常实验室值；(ix)患者在筛选和重复检测时AST或ALT>2.5倍ULN，血清肌酐>ULN或血小板计数<正常下限；(x)患者在筛选时或第1天施用前测量的12导联ECG有临床相关异常；(xi)患者患有精神或行为障碍，研究者认为可能干扰患者参与研究；(xii)患者当前正在服用或既往4周内服用过任何抗凝剂(阿司匹林除外)；(xiii)有生育能力的女性患者和其伴侣有生育能力的男性患者，除非愿意保证她们或其伴侣使用有效的避孕措施，例如，在研究期间和其后3个月内禁欲、口服避孕药、双重屏障或宫内节育器；(xiv)在研究过程中以及在STK-001末次给药后3个月内怀孕、哺乳或计划怀孕的患者；(xv)当前在筛选前2个月内参加或已参与涉及研究产品的设盲临床研究的患者；以及(xvi)患者患有任何其他重大疾病或病症，研究者认为这些疾病或病症可能因参与研究而使患者处于危险之中，可能影响研究结果或可能影响患者参与研究的能力。
STK-001的作用机制可能导致功能获得性突变蛋白水平的增加，治疗可能导致症状恶化。携带SCN1A功能获得性突变的患者可能被排除出研究，因为他们不符合DS诊断标准。
治疗剂施用
该药物产品是浓缩物，预期用人工脑脊液(aCSF)溶液稀释，然后进行鞘内施用。用于施用的稀释剂aCSF与药物产品一起提供。可以生产具有足够填充体积的药物产品以允许抽取例如5.0mL。该溶液是透明、无色的液体，基本上不含可见颗粒。可以包括有关药物储存、制备和给药的说明。
施用方式：稀释的药物产品可以以IT缓慢推注方式施用。
示例性药物产品在由3个小瓶组成的试剂盒中提供：1个小瓶的适当浓度的药物产品；1个小瓶的aCSF稀释剂；和1个用于混合的空的无菌小瓶。它以适当的方式包装，以防止产品在运输过程中变质，并在研究点例如在-20℃下冷冻储存。可以提供有关储存和运输条件的更多信息。研究药物可以在干冰上运输并在研究点在例如-20℃下储存。
除了本文所述的治疗剂，例如STK-001，在研究期间患者可以服用至少一种AED，并且患者服用的任何AED在筛选之前和给药之后可以被维持在稳定剂量。对于一些实例，除了如本文所述的治疗剂例如STK-001之外，在研究期间患者可以服用至少一种AED，并且患者服用的任何AED可以被维持在稳定剂量，持续例如筛选前至少4周以及例如给药后前12周。用于癫痫的示例性药物或干预措施包括但不限于生酮饮食、迷走神经刺激器、大麻素或大麻衍生产品。允许家庭使用的示例性救援药物包括但不限于劳拉西泮、咪达唑仑和地西泮。劳拉西泮可根据需要以0.1-0.2mg/kg(PRN)颊内、舌下或静脉内使用。咪达唑仑可以以0.1-0.2mg/kg PRN鼻内、颊内或静脉内使用。地西泮可以以0.2-0.5mg/kg PRN直肠或静脉内使用。
不能与本文所述的治疗剂(例如，STK-001)同时使用的示例性药物包括但不限于作为维持治疗的钠通道阻滞剂(例如苯妥英、卡马西平、奥卡西平、拉莫三嗪、拉考沙胺或卢非酰胺)、抗凝剂(阿司匹林除外)和任何研究产品或装置。
研究评估
癫痫基因组检测：在筛选时收集唾液样品，以确定患者的DS突变并确认资格。使用遗传性癫痫组对样品进行分析。该组还分析与癫痫综合征和非综合征原因相关的基因(包括SCN1A)，并为遗传性癫痫提供综合分析。
基线评估：准备从所有患者收集的的示例性患者人口统计和基线特征数据包括但不限于，筛选时的年龄、性别、人种/民族、DS发病年龄以及DS的诊断和治疗史。
实施例20：在Dravet综合征小鼠模型中SCN1A核基因输出的靶向增强(TANGO)减少癫痫发作并挽救小清蛋白阳性中间神经元放电频率
Dravet综合征(DS)是一种严重的进行性发育性和癫痫性脑病，其特征是癫痫发作频率和严重程度高、智力残疾以及癫痫中意外猝死的高风险(SUDEP)。约85％的DS病例是由编码电压门控钠通道α亚基NaV1.1的SCN1A基因的自发杂合功能缺失突变引起的。我们开发了一种新型治疗方法以使用反义寡核苷酸(ASO)来增加Scn1a mRNA和NaV1.1蛋白的内源性表达来治疗DS。我们正在使用F2:129S-Scn1a+/-x C57BL/6J DS小鼠模型检测这种方法，该模型之前已显示可概括许多患者表型。
方法
靶向增强核基因输出(TANGO)可调节天然存在的非生产性剪接事件以增加靶蛋白表达，其被用于筛选和鉴定可增加体内生产性Scn1a mRNA和NaV1.1蛋白的ASO(STK-001)。通过单次脑室内(ICV)注射向出生后(P)2天的DS小鼠和野生型(WT)同窝小鼠施用20μgTANGO ASO或PBS对照。通过脑电图(EEG)在断奶前(P13-19)和断奶后(P20-40)监测小鼠。还将DS小鼠与小清蛋白(PV)-tdTomato荧光报告基因半合子的WT小鼠杂交，以产生在表达PV的中间神经元中特异性表达tdTomato的DS小鼠。这些小鼠在P2通过ICV施用接受20μg ASO或PBS，然后在P17和23之间从躯体感觉皮质中的表达tdTomato的细胞中获取电生理记录。
结果
在第16天之前，在任何小鼠中均未检测到癫痫发作。在P16-19之间，注射ASO的DS小鼠继续无癫痫发作(0/5只动物)，而50％(4/8只动物)的PBS注射对照DS小鼠有癫痫发作。断奶后(P20-40)评估时，2/11的P2 ASO注射DS小鼠出现癫痫发作，一只动物死亡，而9/11P2PBS注射对照DS小鼠出现癫痫发作，七只动物死亡。在P17至P23之间评估的DS小鼠中的PV中间神经元的放电频率显著受损。在一系列电流注射步骤中，DS PV中间神经元的发射频率明显低于WT PV中间神经元(P<0.05)。在P2 ASO处理后，DS小鼠中的PV中间神经元的放电频率增加，并且与WT水平不再有显著性差异。
结论
这些结果提供了使用TANGO ASO实现的Scn1a和NaV1.1表达增加可以大大降低SCN1A相关DS小鼠模型中的癫痫发作和死亡率的证据。此外，当前的数据支持DS表型的改善是部分由于表达PV的中间神经元的兴奋性恢复的假设。
实施例21：在Dravet综合征小鼠模型中SCN1A核基因输出的靶向增强(TANGO)减少癫痫发作并挽救小清蛋白阳性中间神经元放电频率
Dravet综合征(DS)是一种严重的发育性和癫痫性脑病。DS主要由生理功能丧失性SCN1A突变引起，导致抑制性中间神经元机能减退。患者患有难治性癫痫、认知和运动障碍，并且有很大的SUDEP风险。需要直接解决疾病遗传原因的治疗策略。
STK-001降低DS小鼠中的癫痫发作频率并延长生存期，而在WT小鼠中观察到没有显著的有害影响。STK-001处理可挽救DS小鼠中的小清蛋白阳性抑制性中间神经元的神经元兴奋性，这支持恢复抑制性中间神经元的兴奋性是挽救DS小鼠免于癫痫发作和死亡的可行方法的假设。
潜在的未来评价：收集电压门控钠通道活动的电生理记录；探索对其他抑制性中间神经元群体(SST、VIP等)的影响；检查对网络兴奋性的影响(突触抑制等)。
实施例22：在患有Dravet综合征的儿童和青少年中反义寡核苷酸STK-001的安全性和药代动力学：开放标签的1/2a期MONARCH研究的单次递增剂量设计
研究依据
Dravet综合征(DS)是一种严重的进行性发育性和癫痫性脑病，始于出生后的第一年，其特点是癫痫发作频率和严重程度高、智力残疾以及癫痫中意外猝死的高风险。约85％的DS病例是由编码电压门控钠通道α亚基NaV1.1的SCN1A基因的自发杂合功能缺失突变引起的。上调NaV1.1蛋白表达可以恢复功能神经元并防止癫痫发作和许多非癫痫发作合并症的发生。STK-001是使用靶向增强核基因输出(TANGO)独特平台的一种研究性反义寡核苷酸治疗，其利用天然存在的非生产性剪接事件来增加NaV1.1蛋白表达。当前的治疗集中于癫痫发作控制。STK-001可能是DS的首个精准医学方法。本临床研究旨在主要评估鞘内施用STK-001的安全性、耐受性和药代动力学。次要目标旨在评估STK-001对Dravet综合征患者惊厥发作频率、整体临床状态和生活质量的影响。
方法
这项1/2a期开放标签单次递增剂量研究包括2-18岁且在12月龄之前发病并伴有反复发作(局部运动、半惊厥或全身强直阵挛)和经基因证实的SCN1A变异的患者。将会向基于年龄(2-12岁和13-18岁)的2个队列鞘内(IT)施用单次剂量的STK-001。每个队列将招募至多4名患者，并可选择根据临床评估在同一水平上给药每个队列至多3名额外患者。所有患者将有为期28天的观察期来评价癫痫发作频率。第1天，患者接受脑脊液(CSF)收集，然后进行单次IT STK-001施用和24小时给药后评估。给药后将有6个月的随访期。在整个研究过程中监测不良事件。将在多个时间点收集血浆和CSF。患者还将在整个研究期间保持癫痫发作/睡眠记录。
结果
本研究将深入了解DS患者中STK-001的递增剂量的安全性、耐受性和药代动力学特征。此外，STK-001对惊厥发作频率和生活质量的影响可能表明个体剂量的初始临床效果。
结论
STK-001有可能成为首个通过恢复生理NaV1.1水平和减少癫痫发作和许多非癫痫发作合并症的发生来解决DS遗传原因的改变疾病的疗法。这项研究的剂量影响可能更好地为未来的临床试验提供用于疗效量度的适当且有效剂量的信息。
实施例23：在患有Dravet综合征的儿童和青少年中的反义寡核苷酸STK-001的安全性和药代动力学：开放标签的1/2a期moncarch研究的单次递增剂量设计
背景
Dravet综合征(DS)是一种严重的进行性遗传性癫痫，其特征是从出生后的第一年内开始出现频繁、长期和难治性癫痫。现有疗法不能充分控制90％的DS患者的癫痫发作，并且它们不能解决疾病的其他方面，包括智力障碍、发育迟缓、运动和语言障碍、行为问题、睡眠异常以及癫痫中意外猝死的风险增加。该疾病的并发症通常导致患者及其照护人员的生活质量下降。在约85％的病例中，DS是由SCN1A基因中自发的杂合功能缺失突变引起的，该基因编码电压门控钠通道1型α亚基(NaV1.1)。上调NaV1.1可恢复功能神经元并预防癫痫发作并减少DS中非癫痫发作相关的合并症。
STK-001
STK-001是一种研究性专有反义寡核苷酸(ASO)，被设计通过利用SCN1A的非突变(野生型)拷贝恢复生理NaV1.1水平来上调NaV1.1蛋白的表达。
专有的TANGO平台旨在提高基因健康拷贝的蛋白质产量。在DS中，患者有一个功能性基因拷贝(橙色)和一个突变拷贝(红色)，从而产生维持健康所需的一半蛋白质，这些基因被转录成前信使RNA(前mRNA)；大多数前mRNA是生产性的，成为蛋白质生产的模板，但有些是非生产性的前mRNA。合成的ASO(绿色)与特定的前mRNA片段结合，减少非生产性mRNA的合成并增加生产性mRNA的合成。来自功能性基因拷贝的生产性mRNA水平提高可提高蛋白质产量，从而将靶蛋白恢复至接近正常水平。
STK-001可能是用于DS的同类首个改变疾病的药剂(或精准医学)。
方法：研究设计
每个剂量队列招募至多4名患者，可选择给药每个队列至多6名额外的患者以进行安全性评估。A部分：3个剂量水平的单次递增给药(SAD)：10、20和30mg；B部分：多次递增给药(MAD)：每4周3次给药。
本研究中超过30mg的给药仍处于FDA部分临床限制中。剂量递增基于安全监测委员会(包括外部审查员)的安全性和耐受性评估。每个队列中的给药开始于13至18岁，内部安全团队将批准在更年轻患者(2-12岁)中给药。
研究访视包括以下(图26)：筛选访问；4周观察期：当前的抗癫痫治疗、生酮饮食或迷走神经刺激器设置没有变化，照护人员在此期间跟踪儿童的癫痫发作频率；基线访视：血液和尿液分析、生活质量、神经系统和一般儿科评估；住院治疗期：患者在给药当天入院，并在完成给药后评估之后出院：所有患者均接受STK-001鞘内施用；6个月随访期。
完成研究的患者如果符合入组标准，将可选择在开放标签扩展研究中接受STK-001。
实施例24：在患有Dravet综合征的儿童和青少年中的反义寡核苷酸STK-001的安全性和药代动力学：开放标签的1/2a期MONARCH研究的单次和多次递增剂量设计
前言
Dravet综合征(DS)是一种严重的进行性遗传性癫痫，其特征是从出生后的第一年开始出现频繁、长期和难治性癫痫。现有疗法不能充分控制90％的DS患者的癫痫发作，并且不能解决疾病的其他方面，包括智力障碍、发育迟缓、运动和语言障碍、行为问题、睡眠异常以及癫痫中意外猝死的风险增加。该疾病的并发症通常导致患者及其照护人员的生活质量下降。在约85％的病例中，DS是由SCN1A基因中自发的杂合功能缺失突变引起的，该基因编码电压门控钠通道1型α亚基(NaV1.1)。上调NaV1.1可恢复功能神经元并预防癫痫发作并减少DS中非癫痫发作相关的合并症。
STK-001
STK-001是一种研究性专有反义寡核苷酸(ASO)，被设计通过利用SCN1A的非突变(野生型)拷贝来恢复生理NaV1.1水平来上调NaV1.1蛋白的表达。
专有的TANGO平台旨在提高基因健康拷贝的蛋白质产量(图24)。在DS中，患者有一个功能性基因拷贝(橙色)和一个突变拷贝(红色)，从而产生维持健康所需的一半蛋白质。这些基因被转录成前信使RNA(前mRNA)；大多数前mRNA是生产性的，成为蛋白质生产的模板，但有些是非生产性的前mRNA。合成的ASO(绿色)与特定的前mRNA片段结合，减少非生产性mRNA的合成并增加生产性mRNA的合成。来自功能性基因拷贝的生产性mRNA水平提高可增加蛋白质产量，从而将靶蛋白恢复至接近正常水平。
STK-001可能是用于DS的同类首个改变疾病的药剂(或精准医学)。
研究设计
每个剂量队列招募至多4名患者，可选择给药每个队列至多6名额外的患者以进行安全性评估。A部分：3个剂量水平的单次递增给药(SAD)：10、20和30mg；B部分：多次递增给药(MAD)：每4周3次给药。
本研究中超过30mg的给药仍处于FDA部分临床限制中。剂量递增基于安全监测委员会(包括外部审查员)的安全性和耐受性评估。每个队列中的给药开始于13至18岁，内部安全团队将批准在更年轻患者(2-12岁)中给药。
研究访视包括以下(图26)：筛选访问；4周观察期：当前的抗癫痫治疗、生酮饮食或迷走神经刺激器设置没有变化，照护人员在此期间跟踪儿童的癫痫发作频率；基线访视：血液和尿液分析、生活质量、神经系统和一般儿科评估；住院治疗期：患者在给药当天入院，并在完成给药后评估之后出院：所有患者均接受STK-001鞘内施用；6个月随访期。
完成研究的患者如果符合入组标准，将可以选择在开放标签扩展研究中接受STK-001。
实施例25：在患有Dravet综合征的儿童和青少年中研究单次递增剂量的安全性的开放标签研究
病况或疾病：Dravet综合征。
干预/治疗：药物：STK-001
分期：1期，2期
详细说明：
STK-001是用于治疗Dravet综合征的研究性新药。STK-001是反义寡核苷酸(ASO)，旨在提高生产性SCN1A信使RNA(mRNA)的水平，从而增加钠通道NaV1.1蛋白的表达。这种基于RNA的方法不是基因治疗，而是RNA调节，因为它不操纵也不插入遗传脱氧核糖核酸(DNA)。
STK-001被设计上调来自SCN1A基因的非突变(野生型)拷贝的NaV1.1蛋白表达，以恢复生理NaV1.1水平。Dravet综合征患者的NaV1.1水平降低。中风已生成临床前数据，说明STK-001的机制证明。
研究分组和干预：
研究分组：实验：队列1：STK-001剂量水平1招募两个年龄组患者。2名13至18岁(含)的患者的哨兵组，以及2名2至12岁的患者的扩展组。将选择在同一水平上给药至多3名额外的患者。
药物：STK-001-STK-001药物产品是以鞘内注射方式施用的反义寡核苷酸。将施用从AA至BB mg的单个剂量水平。
研究分组：实验：队列2：STK-001剂量水平2招募两个年龄组患者。2名13至18岁(含)的患者的哨兵组，以及2名2至12岁的患者的扩展组。将选择在同一水平上给药至多3名额外的患者。
药物：STK-001-STK-001药物产品是以鞘内注射方式施用的反义寡核苷酸。将施用从AA至BB mg的单个剂量水平。
结果量度：
主要结果量度：
1.不良事件的发生比例[时间范围：筛选至单次给药后7个月]STK-001的安全性将通过经历不良事件、严重不良事件和导致停药的不良事件的对象比例来评估。
2.药代动力学(PK)参数[时间范围：筛选至单次给药后7个月]STK-001血浆浓度分析
3.STK-001在脑脊液(CSF)中的暴露[时间范围：筛选直至单次给药后6个月]STK-001浓度的测量
次要结果量度：
1.癫痫发作频率的测量[时间范围：筛选至单次给药后7个月]，通过纸质记录测量
2.临床状态的变化[时间范围：筛选至单次给药后7个月]，总体临床状态较基线的变化，由照护人员总体变化印象(CaGIC)测量
量表值：a.极大改善；b.明显改善；c.极小改善；d.没有变化；e.极小恶化；f.很大程度上恶化；g.极大程度上恶化
3.临床状态的变化[时间范围：筛选至单次给药后7个月]，总体临床状态较基线的变化，通过临床总体变化印象(CGIC)测量
量表值：a.极大改善；b.明显改善；c.极小改善；d.没有变化；e.极小恶化；f.很大程度上恶化；g.极大程度上恶化
4.生活质量的测量[时间范围：筛选至单次给药后7个月]，通过EuroQOL生活质量问卷、青年版(EQ-5D-Y)仪器测量患者健康较基线的变化。该量表的评分为0-100。提及高分表明生活质量的更好结果。
结果量度：
主要结果量度：
具有研究资格的年龄：2岁至18岁(儿童、成人)
具有研究资格的性别：全部
接受健康志愿者：否
标准
入选标准：必须在12个月大之前出现DS，并伴有反复局部运动或半惊厥或全身强直-阵挛性癫痫发作，往往因体温过高而延长和触发；无因果MRI病变史；没有其他已知的病因；癫痫发作时发育正常；在与DS相关的SCN1A基因中记录的致病性、可能致病性变异或原因不明的变异；至少接受过2次癫痫治疗，这些治疗缺乏足够的癫痫发作控制(需要额外的AED)或者因AE不得不停药；当前正在服用在筛选前已稳定至少4周的剂量的至少一种AED；所有癫痫药物或癫痫干预措施(包括生酮饮食或迷走神经刺激器)必须在筛选前稳定至少4周(包括产品类型、剂量和设置)。
排除标准：导致癫痫的另一个基因的已知致病突变；当前正在使用主要作为钠通道阻滞剂的抗癫痫药(包括：苯妥英、卡马西平、奥卡西平、拉莫三嗪、拉考沙胺或卢非酰胺)进行治疗；除癫痫以外的具有临床意义的不稳定医疗病况；在筛选或第1天给药之前的4周内有临床相关症状或临床重大疾病，但癫痫除外；研究者认为可能因参与研究而使患者处于危险之中、可能影响研究结果或可能影响患者参与研究的能力的任何其他重大疾病或病症。
虽然本文已经示出和描述了本公开的优选实施方案，但是对于本领域技术人员而言显而易见的是，这些实施方案仅作为示例提供。在不背离本公开的情况下，本领域技术人员现将想到许多变化、改变和替换。应当理解，在实施本公开时可以采用对本文描述的本公开的实施方案的各种可选方案。旨在以下权利要求限定本公开的范围，并且由此涵盖这些权利要求范围内的方法和结构及其等同物。
具体实施方案
实施方案1.一种通过调节对象细胞中的NaV1.1蛋白表达来治疗有需要的对象中的疾病或病况的方法，包括：向所述对象施用0.5毫克至500毫克的反义寡聚体(ASO)，其中所述ASO调节来自细胞中前mRNA的诱导无义介导mRNA衰变的外显子(NMD外显子)的剪接，从而调节编码所述NaV1.1蛋白的经加工mRNA的水平并调节所述对象的所述细胞中NaV1.1蛋白的表达，所述前mRNA包含所述NMD外显子并编码所述NaV1.1蛋白。
实施方案2.如实施方案1所述的方法，其中所述方法包括向所述对象施用0.5毫克至500毫克的所述ASO。
实施方案3.如实施方案1所述的方法，其中所述方法包括向所述对象施用1毫克至300毫克的所述ASO。
实施方案4.如实施方案1所述的方法，其中所述方法包括向所述对象施用2毫克至300毫克的所述ASO。
实施方案5.如实施方案1所述的方法，其中所述方法包括向所述对象施用1毫克至200毫克的所述ASO。
实施方案6.如实施方案1所述的方法，其中所述方法包括向所述对象施用2毫克至200毫克的所述ASO。
实施方案7.如实施方案1所述的方法，其中所述ASO：
(a)与包含所述NMD外显子并编码所述NaV1.1蛋白的所述前mRNA的靶向部分结合；
(b)调节参与包含所述NMD外显子并编码所述NaV1.1蛋白的所述前mRNA的剪接的因子的结合；或
(c)(a)和(b)的组合。
实施方案8.如实施方案7所述的方法，其中所述ASO干扰参与来自所述靶向部分的区域的所述NMD外显子的剪接的因子的结合。
实施方案9.如实施方案1所述的方法，其中所述ASO促进从所述细胞中的所述前mRNA中排除诱导无义介导mRNA衰变的外显子(NMD外显子)，所述前mRNA包含所述NMD外显子且编码所述NaV1.1蛋白。
实施方案10.如实施方案7所述的方法，其中所述靶向部分靠近所述NMD外显子。
实施方案11.如实施方案10所述的方法，其中所述靶向部分为所述NMD外显子的5'端上游的至多约1500个核苷酸、约1000个核苷酸、约800个核苷酸、约700个核苷酸、约600个核苷酸、约500个核苷酸、约400个核苷酸、约300个核苷酸、约200个核苷酸、约100个核苷酸、约80个核苷酸、约70个核苷酸、约60个核苷酸、约50个核苷酸。
实施方案12.如实施方案10所述的方法，其中所述靶向部分为所述NMD外显子的5'端上游的至少约1500个核苷酸、约1000个核苷酸、约800个核苷酸、约700个核苷酸、约600个核苷酸、约500个核苷酸、约400个核苷酸、约300个核苷酸、约200个核苷酸、约100个核苷酸、约80个核苷酸、约70个核苷酸、约60个核苷酸、约50个核苷酸、约40个核苷酸、约30个核苷酸、约20个核苷酸、约10个核苷酸、约5个核苷酸、约4个核苷酸、约2个核苷酸、约1个核苷酸。
实施方案13.如实施方案10所述的方法，其中所述靶向部分为所述NMD外显子的3'端下游的至多约1500个核苷酸、约1000个核苷酸、约800个核苷酸、约700个核苷酸、约600个核苷酸、约500个核苷酸、约400个核苷酸、约300个核苷酸、约200个核苷酸、约100个核苷酸、约80个核苷酸、约70个核苷酸、约60个核苷酸、约50个核苷酸。
实施方案14.如实施方案10所述的方法，其中所述靶向部分为所述NMD外显子的3'端下游的至少约1500个核苷酸、约1000个核苷酸、约800个核苷酸、约700个核苷酸、约600个核苷酸、约500个核苷酸、约400个核苷酸、约300个核苷酸、约200个核苷酸、约100个核苷酸、约80个核苷酸、约70个核苷酸、约60个核苷酸、约50个核苷酸、约40个核苷酸、约30个核苷酸、约20个核苷酸、约10个核苷酸、约5个核苷酸、约4个核苷酸、约2个核苷酸、约1个核苷酸。
实施方案15.如实施方案7所述的方法，其中所述靶向部分位于包含所述NMD外显子且编码所述NaV1.1蛋白的所述前mRNA的两个规范外显子区域之间的内含子区域中，并且其中所述内含子区域包含所述NMD外显子。
实施方案16.如实施方案7所述的方法，其中所述靶向部分与所述NMD外显子至少部分重叠。
实施方案17.如实施方案7所述的方法，其中所述靶向部分与所述NMD外显子上游的内含子至少部分重叠。
实施方案18.如实施方案7所述的方法，其中所述靶向部分包括5'NMD外显子-内含子接界或3'NMD外显子-内含子接界。
实施方案19.如实施方案7所述的方法，其中所述靶向部分位于所述NMD外显子内。
实施方案20.如实施方案7所述的方法，其中所述靶向部分包含所述NMD外显子的约5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或更多的连续核苷酸。
实施方案21.如实施方案1所述的方法，其中包含所述NMD外显子并且编码所述NaV1.1蛋白的所述前mRNA包含与SEQ ID NO:2或7-10中的任一个具有至少约80％、85％、90％、95％、97％或100％序列同一性的序列。
实施方案22.如实施方案1所述的方法，其中包含所述NMD外显子并且编码所述NaV1.1蛋白的所述前mRNA由与SEQ ID NO:1或3-6中的任一个具有至少约80％、85％、90％、95％、97％或100％序列同一性的基因序列编码。
实施方案23.如实施方案10所述的方法，其中所述靶向部分为基因组位点GRCh37/hg19:chr2:166,863,803上游的至多约1500个核苷酸、约1000个核苷酸、约800个核苷酸、约700个核苷酸、约600个核苷酸、约500个核苷酸、约400个核苷酸、约300个核苷酸、约200个核苷酸、约100个核苷酸、约80个核苷酸、约70个核苷酸、约60个核苷酸、约50个核苷酸。
实施方案24.如实施方案10所述的方法，其中所述靶向部分为基因组位点GRCh37/hg19:chr2:166,863,803上游的约1000个核苷酸、约800个核苷酸、约700个核苷酸、约600个核苷酸、约500个核苷酸、约400个核苷酸、约300个核苷酸、约200个核苷酸、约100个核苷酸、约80个核苷酸、约70个核苷酸、约60个核苷酸、约50个核苷酸、约40个核苷酸、约30个核苷酸、约20个核苷酸、约10个核苷酸、约5个核苷酸、约4个核苷酸、约2个核苷酸、约1个核苷酸。
实施方案25.如实施方案10所述的方法，其中所述靶向部分为基因组位点GRCh37/hg19:chr2:166,863,740下游的至多约1500个核苷酸、约1000个核苷酸、约800个核苷酸、约700个核苷酸、约600个核苷酸、约500个核苷酸、约400个核苷酸、约300个核苷酸、约200个核苷酸、约100个核苷酸、约80个核苷酸、约70个核苷酸、约60个核苷酸、约50个核苷酸。
实施方案26.如实施方案10所述的方法，其中所述靶向部分为基因组位点GRCh37/hg19:chr2:166,863,740下游的约1000个核苷酸、约800个核苷酸、约700个核苷酸、约600个核苷酸、约500个核苷酸、约400个核苷酸、约300个核苷酸、约200个核苷酸、约100个核苷酸、约80个核苷酸、约70个核苷酸、约60个核苷酸、约50个核苷酸、约40个核苷酸、约30个核苷酸、约20个核苷酸、约10个核苷酸、约5个核苷酸、约4个核苷酸、约2个核苷酸、约1个核苷酸。
实施方案27.如实施方案7所述的方法，其中包含所述NMD外显子且编码所述NaV1.1蛋白的所述前mRNA的所述靶向部分包含与包含SEQ ID NO:SEQ ID NO:2或7-10的至少8个连续核酸的区域具有至少80％、85％、90％、95％、97％或100％序列同一性的序列。
实施方案28.如实施方案1所述的方法，其中所述ASO包含与SEQ ID NO:21-67、210-256、304-379或380-1099中的任一个具有至少约80％、85％、90％、95％、97％或100％同一性的序列。
实施方案29.如实施方案7所述的方法，其中包含所述NMD外显子且编码所述NaV1.1蛋白的所述前mRNA的所述靶向部分位于所述SCN1A的诱导无义介导RNA衰变的外显子20x内。
实施方案30.如实施方案29所述的方法，其中所述ASO包含与SEQ ID NO:42-50或231-239中的任一个具有至少约80％、85％、90％、95％、97％或100％同一性的序列。
实施方案31.如实施方案7所述的方法，其中包含所述NMD外显子且编码所述NaV1.1蛋白的所述前mRNA的所述靶向部分在所述SCN1A的诱导无义介导RNA衰变的外显子20x上游或下游。
实施方案32.如实施方案31所述的方法，其中所述ASO包含与SEQ ID NO:21-38、53-67、210-227、242-256或380-1099中的任一个具有至少约80％、85％、90％、95％、97％或100％同一性的序列。
实施方案33.如实施方案7所述的方法，其中包含所述NMD外显子且编码所述NaV1.1蛋白的所述前mRNA的所述靶向部分包含SCN1A的外显子20x的外显子-内含子接界。
实施方案34.如实施方案33所述的方法，其中所述ASO包含与SEQ ID NO:39-41、51、52、228-230、240或241中的任一个具有至少约80％、85％、90％、95％、97％或100％同一性的序列。
实施方案35.如实施方案1所述的方法，其中所述ASO促进从包含所述NMD外显子且编码所述NaV1.1蛋白的所述前mRNA中排除所述NMD外显子。
实施方案36.如实施方案35所述的方法，其中与在对照细胞中从编码NaV1.1蛋白的经加工mRNA中所述NMD外显子的排除相比，在所述细胞中从包含所述NMD外显子且编码NaV1.1蛋白的所述前mRNA中所述NMD外显子的排除增加约1.1至约10倍、约1.5至约10倍、约2至约10倍、约3至约10倍、约4至约10倍、约1.1至约5倍、约1.1至约6倍、约1.1至约7倍、约1.1至约8倍、约1.1至约9倍、约2至约5倍、约2至约6倍、约2至约7倍、约2至约8倍、约2至约9倍、约3至约6倍、约3至约7倍、约3至约8倍、约3至约9倍、约4至约7倍、约4至约8倍、约4至约9倍、至少约1.1倍、至少约1.5倍、至少约2倍、至少约2.5倍、至少约3倍、至少约3.5倍、至少约4倍、至少约5倍或至少约10倍。
实施方案37.如实施方案35所述的方法，其中所述ASO提高所述细胞中编码NaV1.1蛋白的经加工mRNA的水平。
实施方案38.如实施方案35所述的方法，其中与在对照细胞中编码NaV1.1蛋白的经加工mRNA的总量相比，与所述ASO接触的细胞中编码NaV1.1蛋白的经加工mRNA的量增加约1.1至约10倍、约1.5至约10倍、约2至约10倍、约3至约10倍、约4至约10倍、约1.1至约5倍、约1.1至约6倍、约1.1至约7倍、约1.1至约8倍、约1.1至约9倍、约2至约5倍、约2至约6倍、约2至约7倍、约2至约8倍、约2至约9倍、约3至约6倍、约3至约7倍、约3至约8倍、约3至约9倍、约4至约7倍、约4至约8倍、约4至约9倍、至少约1.1倍、至少约1.5倍、至少约2倍、至少约2.5倍、至少约3倍、至少约3.5倍、至少约4倍、至少约5倍或至少约10倍。
实施方案39.如实施方案35所述的方法，其中所述ASO提高所述细胞中NaV1.1蛋白的表达。
实施方案40.如实施方案35所述的方法，其中与在对照细胞中产生的NaV1.1蛋白的总量相比，与所述ASO接触的细胞中产生的NaV1.1蛋白的量增加约1.1至约10倍、约1.5至约10倍、约2至约10倍、约3至约10倍、约4至约10倍、约1.1至约5倍、约1.1至约6倍、约1.1至约7倍、约1.1至约8倍、约1.1至约9倍、约2至约5倍、约2至约6倍、约2至约7倍、约2至约8倍、约2至约9倍、约3至约6倍、约3至约7倍、约3至约8倍、约3至约9倍、约4至约7倍、约4至约8倍、约4至约9倍、至少约1.1倍、至少约1.5倍、至少约2倍、至少约2.5倍、至少约3倍、至少约3.5倍、至少约4倍、至少约5倍或至少约10倍。
实施方案41.如实施方案1所述的方法，其中所述疾病或病况由NaV1.1中的功能丧失性突变诱导。
实施方案42.如实施方案41所述的方法，其中所述疾病或病况与所述SCN1A基因的单倍性不足相关，其中所述对象具有编码功能性NaV1.1蛋白的第一等位基因和不产生NaV1.1蛋白或以降低的水平产生NaV1.1蛋白的第二等位基因或编码非功能性NaV1.1蛋白或部分功能性NaV1.1蛋白的第二等位基因。
实施方案43.如实施方案41所述的方法，其中所述疾病或病况是脑病。
实施方案44.如实施方案43所述的方法，其中所述脑病是癫痫性脑病。
实施方案45.如实施方案41所述的方法，其中所述疾病或病况为Dravet综合征(DS)；婴儿重度肌阵挛性癫痫(SMEI)-交界性癫痫(SMEB)；热性惊厥(FS)；全身性癫痫伴热性惊厥(GEFS+)；癫痫性脑病，早期婴儿，13型；隐源性全身性癫痫；隐源性局灶性癫痫；肌阵挛性无定向癫痫；Lennox-Gastaut综合征；West综合征；特发性痉挛；早期肌阵挛性脑病；进行性肌阵挛性癫痫；儿童交替性偏瘫；未分类癫痫性脑病；癫痫中意外猝死(SUDEP)；病态窦房结综合征1型；孤独症；或婴儿恶性迁徙性部分性发作。
实施方案46.如实施方案45所述的方法，其中GEFS+是全身性癫痫伴热性惊厥+，2型。
实施方案47.如实施方案45所述的方法，其中所述热性惊厥为家族性热性惊厥，3A型。
实施方案48.如实施方案45所述的方法，其中SMEB是无全身性棘波的SMEB(SMEB-SW)、无肌阵挛性发作的SMEB(SMEB-M)、缺乏超过一种SMEI特征的SMEB(SMEB-O)或顽固性小儿癫痫伴全身性强直阵挛性发作(ICEGTC)。
实施方案49.如实施方案41所述的方法，其中所述ASO促进从包含所述NMD外显子且编码所述NaV1.1蛋白的所述前mRNA中排除所述NMD外显子，并且提高所述细胞中NaV1.1蛋白的表达。
实施方案50.如实施方案41所述的方法，其中所述ASO包含与SEQ ID NO:22-24、26、27、29-35、37-62、64-67或304-379中的任一个至少约80％、85％、90％、95％、97％或100％互补的序列。
实施方案51.如实施方案1所述的方法，其中所述ASO抑制所述NMD外显子从编码NaV1.1蛋白的经加工mRNA中排除。
实施方案52.如实施方案51所述的方法，其中与在对照细胞中从编码NaV1.1蛋白的经加工mRNA中所述NMD外显子的排除相比，从与所述ASO接触的细胞中编码NaV1.1蛋白的经加工mRNA中所述NMD外显子的排除减少约1.1至约10倍、约1.5至约10倍、约2至约10倍、约3至约10倍、约4至约10倍、约1.1至约5倍、约1.1至约6倍、约1.1至约7倍、约1.1至约8倍、约1.1至约9倍、约2至约5倍、约2至约6倍、约2至约7倍、约2至约8倍、约2至约9倍、约3至约6倍、约3至约7倍、约3至约8倍、约3至约9倍、约4至约7倍、约4至约8倍、约4至约9倍、至少约1.1倍、至少约1.5倍、至少约2倍、至少约2.5倍、至少约3倍、至少约3.5倍、至少约4倍、至少约5倍或至少约10倍。
实施方案53.如实施方案51所述的方法，其中所述ASO降低所述细胞中编码NaV1.1蛋白的经加工mRNA的水平。
实施方案54.如实施方案51所述的方法，其中与对照细胞中的编码NaV1.1蛋白的经加工mRNA的总量相比，与所述ASO接触的细胞中的编码NaV1.1蛋白的经加工mRNA的量降低约1.1至约10倍、约1.5至约10倍、约2至约10倍、约3至约10倍、约4至约10倍、约1.1至约5倍、约1.1至约6倍、约1.1至约7倍、约1.1至约8倍、约1.1至约9倍、约2至约5倍、约2至约6倍、约2至约7倍、约2至约8倍、约2至约9倍、约3至约6倍、约3至约7倍、约3至约8倍、约3至约9倍、约4至约7倍、约4至约8倍、约4至约9倍、至少约1.1倍、至少约1.5倍、至少约2倍、至少约2.5倍、至少约3倍、至少约3.5倍、至少约4倍、至少约5倍或至少约10倍。
实施方案55.如实施方案51所述的方法，其中所述ASO降低所述细胞中NaV1.1蛋白的表达。
实施方案56.如实施方案51所述的方法，其中与对照细胞中产生的NaV1.1蛋白的总量相比，与所述ASO接触的细胞中产生的NaV1.1蛋白的量降低约1.1至约10倍、约1.5至约10倍、约2至约10倍、约3至约10倍、约4至约10倍、约1.1至约5倍、约1.1至约6倍、约1.1至约7倍、约1.1至约8倍、约1.1至约9倍、约2至约5倍、约2至约6倍、约2至约7倍、约2至约8倍、约2至约9倍、约3至约6倍、约3至约7倍、约3至约8倍、约3至约9倍、约4至约7倍、约4至约8倍、约4至约9倍、至少约1.1倍、至少约1.5倍、至少约2倍、至少约2.5倍、至少约3倍、至少约3.5倍、至少约4倍、至少约5倍或至少约10倍。
实施方案57.如实施方案1所述的方法，其中所述疾病或病况由NaV1.1中的功能获得性突变诱导。
实施方案58.如实施方案57所述的方法，其中所述对象在细胞中具有以提高的水平产生NaV1.1蛋白的等位基因或编码诱导增强的NaV1.1活性的突变NaV1.1蛋白的等位基因。
实施方案59.如实施方案57所述的方法，其中所述疾病或病况为偏头痛。
实施方案60.如实施方案59所述的方法，其中所述偏头痛为家族性偏瘫性偏头痛，3型。
实施方案61.如实施方案1所述的方法，其中所述疾病或病况是NaV1.1遗传性癫痫。
实施方案62.如实施方案57所述的方法，其中所述ASO抑制所述NMD外显子从编码NaV1.1蛋白的经加工mRNA中排除并且降低所述细胞中NaV1.1蛋白的表达。
实施方案63.如实施方案57所述的方法，其中所述ASO包含与SEQ ID NO:21、25、28、36或63中的任一个至少约80％、85％、90％、95％、97％或100％互补的序列。
实施方案64.如实施方案1所述的方法，其中所述ASO包括主链修饰，所述主链修饰包括硫代磷酸酯键或二氨基磷酸酯键。
实施方案65.如实施方案1所述的方法，其中所述反义寡聚体包含二氨基磷酸酯吗啉代物、锁核酸、肽核酸、2'-O-甲基、2'-氟或2'-O-甲氧基乙基部分。
实施方案66.如实施方案1所述的方法，其中所述反义寡聚体包含至少一个修饰的糖部分。
实施方案67.如实施方案66所述的方法，其中每个糖部分是修饰的糖部分。
实施方案68.如实施方案1所述的方法，其中所述反义寡聚体由8至50个核碱基、8至40个核碱基、8至35个核碱基、8至30个核碱基、8至25个核碱基、8至20个核碱基、8至15个核碱基、9至50个核碱基、9至40个核碱基、9至35个核碱基、9至30个核碱基、9至25个核碱基、9至20个核碱基、9至15个核碱基、10至50个核碱基、10至40个核碱基、10至35个核碱基、10至30个核碱基、10至25个核碱基、10至20个核碱基、10至15个核碱基、11至50个核碱基、11至40个核碱基、11至35个核碱基、11至30个核碱基、11至25个核碱基、11至20个核碱基、11至15个核碱基、12至50个核碱基、12至40个核碱基、12至35个核碱基、12至30个核碱基、12至25个核碱基、12至20个核碱基或12至15个核碱基组成。
实施方案69.如实施方案7所述的方法，其中所述反义寡聚体与包含所述NMD外显子且编码所述蛋白质的所述前mRNA的所述靶向部分至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％互补。
实施方案70.如实施方案1所述的方法，其中所述方法还包括评估Scn1a mRNA或蛋白表达。
实施方案71.如实施方案1所述的方法，其中所述对象是人类。
实施方案72.如实施方案1所述的方法，其中所述对象为非人动物。
实施方案73.如实施方案1所述的方法，其中所述对象是胎儿、胚胎或儿童。
实施方案74.如实施方案1所述的方法，其中所述ASO通过所述对象的鞘内注射、脑室内注射、腹腔内注射、肌肉内注射、皮下注射、玻璃体内注射或静脉内注射来施用。
实施方案75.如实施方案1所述的方法，其中所述方法还包括向所述对象施用第二治疗剂。
实施方案76.如实施方案75所述的方法，其中所述第二治疗剂为小分子。
实施方案77.如实施方案75所述的方法，其中所述第二治疗剂为ASO。
实施方案78.如实施方案77所述的方法，其中所述ASO包含与SEQ ID NO:115-161中的任一个具有至少80％、85％、90％、95％、97％或100％序列同一性的序列。
实施方案79.如实施方案75所述的方法，其中所述第二治疗剂校正内含子保留。
实施方案80.如实施方案1所述的方法，其中所述疾病或病况为阿尔茨海默病、SCN2A脑病、SCN8A脑病或SCN5A心律失常。
实施方案81.如实施方案35、37或39所述的方法，其中所述疾病或病况为阿尔茨海默病、SCN2A脑病、SCN8A脑病或SCN5A心律失常。
实施方案82.一种药物组合物，其包含：
(a)0.5毫克至500毫克的反义寡聚体(ASO)；和
(b)药学上可接受的赋形剂；
其中所述ASO调节来自对象细胞中的mRNA的诱导无义介导mRNA衰变的外显子(NMD外显子)的剪接，从而调节编码所述NaV1.1蛋白的经加工mRNA的水平并调节所述对象细胞中的NaV1.1蛋白的表达，所述mRNA包含所述NMD外显子并编码所述NaV1.1蛋白。
实施方案83.如实施方案82所述的药物组合物，其中所述药学上可接受的赋形剂包含脑脊液。
实施方案84.如实施方案82所述的药物组合物，其中所述药学上可接受的赋形剂包含人工脑脊液。
实施方案85.如实施方案82所述的药物组合物，其中所述药物组合物被配制用于鞘内施用。
实施方案86.如实施方案82所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含0.5毫克至500毫克的所述ASO。
实施方案87.如实施方案82所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含1毫克至300毫克的所述ASO。
实施方案88.如实施方案82所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含2毫克至300毫克的所述ASO。
实施方案89.如实施方案82所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含1毫克至200毫克的所述ASO。
实施方案90.如实施方案82所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含2毫克至200毫克的所述ASO。
实施方案91.如实施方案82所述的药物组合物，其中所述对象具有Dravet综合征(DS)。

Claims (155)

1.一种在有需要的人类对象中治疗以NaV1.1蛋白的表达或功能降低为特征的疾病或病况或降低其发生的可能性的方法，所述方法包括向所述人类对象施用包含约0.5毫克至约500毫克的第一剂量的反义寡聚体(ASO)的药物组合物，其中所述ASO包含与SEQ ID NO:21-67、210-256或304-1099中的任一个具有至少80％序列同一性的序列，从而在所述人类对象中治疗所述疾病或病况或降低其发生的可能性。
2.一种在有需要的人类对象中治疗以NaV1.1蛋白的表达或功能降低为特征的疾病或病况或降低其发生的可能性的方法，所述方法包括向所述人类对象施用包含第一剂量的反义寡聚体(ASO)的药物组合物，其中所述ASO包含与SEQ ID NO:21-67、210-256或304-1099中的任一个具有至少80％序列同一性的序列，从而在所述人类对象中治疗所述疾病或病况或降低其发生的可能性；其中所述人类对象在第一剂量时为至多18岁。
3.一种在有需要的人类对象中治疗以NaV1.1蛋白的表达或功能降低为特征的疾病或病况或降低其发生的可能性的方法，所述方法包括向所述人类对象施用包含多个剂量的反义寡聚体(ASO)的药物组合物，其中所述ASO包含与SEQ ID NO:21-67、210-256或304-1099中的任一个具有至少80％序列同一性的序列，从而在所述人类对象中治疗所述疾病或病况或降低其发生的可能性。
4.如权利要求1或2所述的方法，其中所述第一剂量为多个剂量中的第一剂量。
5.如权利要求1或3所述的方法，其中所述人类对象在第一剂量时为至多18岁。
6.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述方法包括向所述人类对象施用包含约0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22.5、25、27.5、30、32.5、35、37.5、40、42.5、45、47.5、50、52.5、55、57.5、60、62.5、65、67.5、70、72.5、75、77.5、80、82.5、85、87.5、90、92.5、95、97.5、100、102.5、105、107.5、110、112.5、115、117.5、120、122.5、125、127.5、130、132.5、135、137.5、140、142.5、145、147.5、150、152.5、155、157.5、160、162.5、165、167.5、170、172.5、175、177.5、180、182.5、185、187.5、190、192.5、195、197.5、200、202.5、205、207.5、210、212.5、215、217.5、220、222.5、225、227.5、230、232.5、235、237.5、240、242.5、245、247.5或250mg的第一剂量的ASO的药物组合物。
7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述疾病或病况为Dravet综合征。
8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述对象的特征在于：
(i)有年龄12个月之前的癫痫发作，伴有复发性局灶性运动性或半惊厥性或全身性强直阵挛发作，其常因过高热而延长和触发；
(ii)没有既往因果性磁共振成像病变史；
(iii)除Dravet综合征外，没有任何疾病或病况的其他已知的病因；
(iv)癫痫发作时发育正常；
(v)在SCN1A基因中具有致病性变体或意义不明的变体；
(vi)有至少2次既往癫痫治疗，其中一次缺乏充分的癫痫发作控制；
(vii)施用前28天内有4次或更多次惊厥发作，其中惊厥发作是选自偏侧阵挛性的、局灶性伴有运动体征的、局灶至双侧性强直阵挛性惊厥、全身性强直阵挛性惊厥、强直性的、强直或失张力性的(跌倒发作)以及阵挛性的中的任何一种；
(viii)当前的癫痫干预或采用某剂量的至少一种抗癫痫药的医疗已经稳定至少4周，其中所述癫痫干预是生酮饮食、迷走神经刺激剂或大麻素或大麻衍生产品；或
(ix)(i)–(viii)的任何组合。
9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述对象的额外特征在于不具有以下项中的一个或多个：
(a)所述SCN1A基因中的以下突变之一：Thr226Met、Leu263Val、Val422Leu、Thr1174Ser、Trp1204Arg、Pro1345Ser、Gln1489Lys、Phe1499Leu、Arg1575Cys、Val1611Phe、Leu1624Pro、Arg1648Cys、Leu1649Gln、Leu1670Trp、Gly1674Arg和Asp1866Tyr；
(b)引起癫痫的另一基因中的已知致病性突变，其中所述致病性突变在已知隐性遗传病的情况下是纯合的；
(c)当前使用作为维持治疗的钠通道阻滞剂和抗凝剂进行治疗，其中所述钠通道阻滞剂为苯妥英、卡马西平、奥卡西平、拉莫三嗪、拉科酰胺或卢非酰胺，并且其中所述抗凝剂不是阿司匹林；
(d)除癫痫以外的临床上明显不稳定的医疗病况；
(e)施用前4周内的临床相关症状或临床重大疾病，癫痫除外；
(f)除癫痫、Dravet综合征以外的脑或脊髓疾病史，或细菌性脑膜炎或脑畸形史；
(g)脊柱畸形或改变脑脊液(CSF)自由流动或植入CSF引流分流器的其他病况；
(h)施用前有临床意义的实验室异常值；
(i)天冬氨酸转氨酶或丙氨酸转氨酶>正常上限的2.5倍，血清肌酐高于正常上限或血小板计数低于正常下限；
(j)施用前测得的12导联心电图(ECG)中的临床相关异常；
(k)精神或行为障碍；
(l)当前或过去4周内的抗凝剂用药，其中所述抗凝剂不是阿司匹林；或
(m)(a)–(l)的任何组合。
10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述人类对象为1至18、2至18、3至18、4至18、5至18、6至18、7至18、8至18、9至18、10至18、11至18、12至18、13至18、14至18、15至18、16至18或17至18岁。
11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述人类对象为1至17、1至16、1至15、1至14、1至13、1至12、1至11、1至10、1至9、1至8、1至7、1至6、1至5、1至4、1至3或1至2岁的人类。
12.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述人类对象为不到1岁或为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17或18岁。
13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中将所述药物组合物施用于所述人类对象的鞘内空间中。
14.如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中将所述药物组合物施用于所述人类对象的脑脊液中。
15.如权利要求1-14中任一项所述的方法，其中将所述药物组合物施用于所述人类对象的脑中。
16.如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中将所述药物组合物施用于所述人类对象的脑的脑脊液中。
17.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述药物组合物以推注形式施用。
18.如权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所述药物组合物通过用输送泵输注而施用。
19.如权利要求1-18中任一项所述的方法，其中所述药物组合物通过脑室内注射施用。
20.如权利要求1-18中任一项所述的方法，其中所述药物组合物通过鞘内注射施用。
21.如权利要求1-20中任一项所述的方法，其中所述方法减少或改善所述人类对象中的Dravet综合征的至少一种症状。
22.如权利要求21所述的方法，其中所述Dravet综合征的所述症状为癫痫发作。
23.如权利要求1-22中任一项所述的方法，其中所述施用降低或改善发作频率、发作强度或发作持续时间。
24.如权利要求1-23中任一项所述的方法，其中所述ASO包括与SEQ ID NO:21-67、210-256或304-1099中的任一个具有至少83％、88％、94％或100％序列同一性的序列。
25.如权利要求1-24中任一项所述的方法，其中所述ASO由与SEQ ID NO:21-67、210-256或304-1099中的任一个具有至少83％、88％、94％或100％序列同一性的序列组成。
26.如权利要求1-25中任一项所述的方法，其中所述ASO包含至少一个修饰的糖部分。
27.如权利要求1-26中任一项所述的方法，其中所述ASO包含T-甲氧基乙基糖部分。
28.如权利要求1-27中任一项所述的方法，其中所述T-甲氧基乙基糖部分为T-2'-甲氧基乙基糖部分。
29.如权利要求1-28中任一项所述的方法，其中所述ASO包含2'-O-甲氧基乙基部分。
30.如权利要求1-29中任一项所述的方法，其中所述ASO包含含有2'-O-甲氧基乙基部分的胸苷。
31.如权利要求1-30中任一项所述的方法，其中所述ASO的每个核碱基包含2'-O-甲氧基乙基部分。
32.如权利要求1-31中任一项所述的方法，其中所述ASO由8至50个核碱基组成。
33.如权利要求1-32中任一项所述的方法，其中所述ASO由16至20个核碱基组成。
34.如权利要求1-33中任一项所述的方法，其中所述ASO由12至20个核碱基组成。
35.如权利要求1-34中任一项所述的方法，其中所述ASO由8至20个核碱基组成。
36.如权利要求1-35中任一项所述的方法，其中所述ASO包含5'-甲基胞嘧啶(5'-MeC)。
37.如权利要求1-36中任一项所述的方法，其中所述ASO的每个胞嘧啶是5'-甲基胞嘧啶(5'-MeC)。
38.如权利要求1-37中任一项所述的方法，其中所述ASO包含硫代磷酸酯键。
39.如权利要求1-38中任一项所述的方法，其中所述ASO的每个核苷间键是硫代磷酸酯键。
40.如权利要求1-39中任一项所述的方法，其中所述ASO包含锁核酸(LNA)。
41.如权利要求1-40中任一项所述的方法，其中所述方法还包括评估所述药物组合物的耐受性或有效性。
42.如权利要求1-41中任一项所述的方法，其中所述方法还包括向所述人类对象施用包含约0.5毫克至约500毫克的后续剂量的所述ASO的药物组合物。
43.如权利要求42所述的方法，其中所述后续剂量为0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22.5、25、27.5、30、32.5、35、37.5、40、42.5、45、47.5、50、52.5、55、57.5、60、62.5、65、67.5、70、72.5、75、77.5、80、82.5、85、87.5、90、92.5、95、97.5、100、102.5、105、107.5、110、112.5、115、117.5、120、122.5、125、127.5、130、132.5、135、137.5、140、142.5、145、147.5、150、152.5、155、157.5、160、162.5、165、167.5、170、172.5、175、177.5、180、182.5、185、187.5、190、192.5、195、197.5、200、202.5、205、207.5、210、212.5、215、217.5、220、222.5、225、227.5、230、232.5、235、237.5、240、242.5、245、247.5或250mg。
44.如权利要求42或43所述的方法，其中在指示不耐受先前剂量的施用之后，所述后续剂量低于所述先前剂量。
45.如权利要求42或43所述的方法，其中在指示耐受先前剂量的施用之后，所述后续剂量与所述先前剂量相同。
46.如权利要求42或43所述的方法，其中在指示耐受先前剂量的施用之后，所述后续剂量高于所述先前剂量。
47.如权利要求42或43所述的方法，其中在指示先前剂量的施用有效之后，所述后续剂量与所述先前剂量相同。
48.如权利要求42或43所述的方法，其中在指示先前剂量的施用有效之后，所述后续剂量低于所述先前剂量。
49.如权利要求42或43所述的方法，其中在指示先前剂量的施用无效之后，所述后续剂量高于所述先前剂量。
50.如权利要求42-49中任一项所述的方法，其中在施用所述先前剂量后施用所述后续剂量至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月。
51.如权利要求1-50中任一项所述的方法，其中在指示所述先前剂量有效之后，保持或降低剂量频率。
52.如权利要求1-51中任一项所述的方法，其中在指示所述先前剂量无效之后，增加剂量频率。
53.如权利要求1-52中任一项所述的方法，其中所述方法还包括施用至少一种额外的治疗剂或疗法。
54.如权利要求53所述的方法，其中所述至少一种额外的治疗剂或疗法与所述剂量同时施用。
55.如权利要求53所述的方法，其中所述至少一种额外的治疗剂或疗法在施用所述剂量之前施用。
56.如权利要求53所述的方法，其中所述至少一种额外的治疗剂或疗法在施用所述剂量之后施用。
57.如权利要求1-56中任一项所述的方法，其中所述药物组合物包含药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。
58.如权利要求1-57中任一项所述的方法，其中所述药物组合物为液体组合物。
59.如权利要求1-58中任一项所述的方法，其中所述药物组合物包含0.1mL至50mL的稀释剂，其中所述ASO被溶解或稀释在所述稀释剂中。
60.如权利要求59所述的方法，其中所述药物组合物包含约0.1、0.5、1、2、2.5、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45或50mL的所述稀释剂。
61.如权利要求59所述的方法，其中所述药物组合物包含1mL至20mL的所述稀释剂、2mL至10mL的所述稀释剂或1mL至5mL的所述稀释剂。
62.如权利要求59-61中任一项所述的方法，其中所述稀释剂包含来自所述对象的脑脊液(CSF)样品或人工脑脊液(aCSF)溶液。
63.如权利要求1-62中任一项所述的方法，其中所述方法包括从所述对象获得脑脊髓液样品。
64.如权利要求1-63中任一项所述的方法，其中所述方法包括将所述ASO在来自所述对象的CSF样品中溶解或稀释。
65.如权利要求1-64中任一项所述的方法，其中所述方法包括以推注形式施用所述药物组合物。
66.如权利要求1-65中任一项所述的方法，其中所述方法包括历经1至60分钟、1至50分钟、1至40分钟、1至30分钟、1至20分钟、1至10分钟、1至5分钟或1至3分钟以推注形式施用所述药物组合物。
67.如权利要求1-66中任一项所述的方法，其中所述方法包括使用脊髓麻醉针以推注形式施用所述药物组合物。
68.如权利要求1-67中任一项所述的方法，其中所述ASO被溶解或稀释在人工脑脊液(aCSF)溶液中。
69.如权利要求1-68中任一项所述的方法，其中所述溶液包含来自所述对象的脑脊液(CSF)样品。
70.如权利要求1-69中任一项所述的方法，其中所述ASO被溶解或稀释在等渗溶液中。
71.如权利要求1-70中任一项所述的方法，其中所述ASO被溶解或稀释在至少pH 5.8的磷酸盐缓冲溶液中。
72.如权利要求1-70中任一项所述的方法，其中所述ASO被溶解或稀释在磷酸盐缓冲(pH 6.6–7.6)溶液中。
73.如权利要求1-72中任一项所述的方法，其中所述ASO被溶解或稀释在包含25-250mMNaCl的缓冲液中。
74.如权利要求1-73中任一项所述的方法，其中所述ASO被溶解或稀释在包含0.1-20mMKCl的缓冲液中。
75.如权利要求1-74中任一项所述的方法，其中所述ASO被溶解或稀释在包含0.1-50mMNa2HPO4的缓冲液中。
76.如权利要求1-75中任一项所述的方法，其中所述ASO被溶解或稀释在包含0.1-50mMNaH2PO4的缓冲液中。
77.如权利要求1-76中任一项所述的方法，其中所述ASO被溶解或稀释在包含0.1-50mMCaCl2的缓冲液中。
78.如权利要求1-77中任一项所述的方法，其中所述ASO被溶解或稀释在包含0.1-50mMMgCl2的缓冲液中。
79.如权利要求1-78中任一项所述的方法，其中所述ASO被溶解或稀释在包含25-250mMNaCl、0.1-20mM KCl、0.1-50mM Na2HPO4、0.1-50mM NaH2PO4、0.1-50mM CaCl2和0.1-50mMMgCl2的缓冲液中。
80.如权利要求1-79中任一项所述的方法，其中所述ASO被溶解或稀释在包含150mMNaCl、3.0mM KCl、0.7mM Na2HPO4、0.3mM NaH2PO4、0.79mM MgCl2和1.4mM CaCl2的缓冲液中。
81.如权利要求68-80中任一项所述的方法，其中所述ASO被溶解或稀释在还包含碳水化合物的缓冲液中。
82.如权利要求81所述的方法，其中所述碳水化合物包括D-葡萄糖。
83.如权利要求68-80中任一项所述的方法，其中所述ASO被溶解或稀释在还包含1-100mM D-葡萄糖的缓冲液中。
84.如权利要求68-83中任一项所述的方法，其中所述ASO被溶解或稀释在还包含1-100mM NaHCO3、1-100mM KHCO3或其组合的缓冲液中。
85.如权利要求1-84中任一项所述的方法，其中所述ASO被溶解或稀释在还包含抗氧化剂的缓冲液中。
86.如权利要求85所述的方法，其中所述抗氧化剂为叔丁基羟基喹啉(TBHQ)、丁基化羟基甲苯(BHT)、丁基化羟基苯甲醚(BHA)、维生素E或其任何组合。
87.如权利要求1-86中任一项所述的方法，其中所述药物制剂不包含防腐剂。
88.如权利要求1-87中任一项所述的方法，其中所述ASO以0.1mg/mL至250mg/mL的浓度存在于所述药物组合物中。
89.如权利要求1-88中任一项所述的方法，其中所述ASO以约0.1mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL、2.5mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL、6mg/mL、7mg/mL、8mg/mL、9mg/mL、10mg/mL、11mg/mL、12mg/mL、13mg/mL、14mg/mL、15mg/mL、16mg/mL、17mg/mL、18mg/mL、19mg/mL或20mg/mL的浓度存在于所述药物组合物中。
90.如权利要求1-88中任一项所述的方法，其中所述ASO以约22.5mg/mL、25mg/mL、27.5mg/mL、30mg/mL、32.5mg/mL、35mg/mL、37.5mg/mL、40mg/mL、42.5mg/mL、45mg/mL、47.5mg/mL、50mg/mL、52.5mg/mL、55mg/mL、57.5mg/mL、60mg/mL、62.5mg/mL、65mg/mL、67.5mg/mL、70mg/mL、72.5mg/mL、75mg/mL、77.5mg/mL、80mg/mL、82.5mg/mL、85mg/mL、87.5mg/mL、90mg/mL、92.5mg/mL、95mg/mL、97.5mg/mL、100mg/mL、102.5mg/mL、105mg/mL、107.5mg/mL、110mg/mL、112.5mg/mL、115mg/mL、117.5mg/mL、120mg/mL、122.5mg/mL、125mg/mL、127.5mg/mL、130mg/mL、132.5mg/mL、135mg/mL、137.5mg/mL、140mg/mL、142.5mg/mL、145mg/mL、147.5mg/mL、150mg/mL、152.5mg/mL、155mg/mL、157.5mg/mL、160mg/mL、162.5mg/mL、165mg/mL、167.5mg/mL、170mg/mL、172.5mg/mL、175mg/mL、177.5mg/mL、180mg/mL、182.5mg/mL、185mg/mL、187.5mg/mL、190mg/mL、192.5mg/mL、195mg/mL、197.5mg/mL、200mg/mL、202.5mg/mL、205mg/mL、207.5mg/mL、210mg/mL、212.5mg/mL、215mg/mL、217.5mg/mL、220mg/mL、222.5mg/mL、225mg/mL、227.5mg/mL、230mg/mL、232.5mg/mL、235mg/mL、237.5mg/mL、240mg/mL、242.5mg/mL、245mg/mL、247.5mg/mL或250mg/mL的浓度存在于所述药物组合物中。
91.如权利要求1-88中任一项所述的方法，其中所述ASO以11mg/mL、22mg/mL、33mg/mL、44mg/mL、55mg/mL、66mg/mL、77mg/mL、88mg/mL、99mg/mL或100mg/mL的浓度存在于所述药物组合物中。
92.如权利要求1-91中任一项所述的方法，其中所述NaV1.1蛋白的表达或功能降低与来自前mRNA的诱导无义介导RNA衰变的外显子的剪接改变有关，所述前mRNA包含所述NMD外显子并编码所述NaV1.1蛋白。
93.如权利要求1-92中任一项所述的方法，其中所述ASO促进从包含所述NMD外显子且编码所述NaV1.1蛋白的所述前mRNA中排除所述NMD外显子。
94.如权利要求1-93中任一项所述的方法，其中所述ASO结合至包含所述NMD外显子且编码所述NaV1.1蛋白的所述前mRNA的靶向部分。
95.如权利要求94所述的方法，其中所述ASO促进从包含所述NMD外显子且编码所述NaV1.1蛋白的所述前mRNA中排除所述NMD外显子。
96.如权利要求94-95中任一项所述的方法，其中当所述ASO被引入所述细胞时，所述ASO提高编码所述NaV1.1蛋白的经加工mRNA的水平。
97.如权利要求94-96中任一项所述的方法，其中当所述ASO被引入所述细胞时，所述ASO提高所述NaV1.1蛋白的水平。
98.如权利要求94-97中任一项所述的方法，其中所述靶向部分位于所述NMD外显子侧翼的内含子序列内。
99.如权利要求94-97中任一项所述的方法，其中所述靶向部分包含所述NMD外显子的至少一个核苷酸。
100.如权利要求94-97中任一项所述的方法，其中所述靶向部分在所述NMD外显子内。
101.如权利要求94-100中任一项所述的方法，其中所述方法治疗所述疾病或病况。
102.一种药物制剂，其包含：
(a)反义寡聚体(ASO)，其中所述ASO包含与SEQ ID NO:21-67、210-256或304-1099中的任一个具有至少80％序列同一性的序列；和
(b)药学上可接受的稀释剂；
其中所述ASO以0.1-200mg/mL的浓度被溶解或悬浮在溶液中。
103.如权利要求102所述的药物制剂，其中所述药学上可接受的稀释剂包含人工脑脊髓液(aCSF)溶液。
104.如权利要求102或103所述的药物制剂，其中所述溶液包含来自所述对象的脑脊液(CSF)样品。
105.如权利要求102-104中任一项所述的药物制剂，其中所述ASO以约0.1mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL、2.5mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL、6mg/mL、7mg/mL、8mg/mL、9mg/mL、10mg/mL、11mg/mL、12mg/mL、13mg/mL、14mg/mL、15mg/mL、16mg/mL、17mg/mL、18mg/mL、19mg/mL或20mg/mL的浓度存在于所述药物组合物中。
106.如权利要求102-104中任一项所述的药物制剂，其中所述ASO以约22.5mg/mL、25mg/mL、27.5mg/mL、30mg/mL、32.5mg/mL、35mg/mL、37.5mg/mL、40mg/mL、42.5mg/mL、45mg/mL、47.5mg/mL、50mg/mL、52.5mg/mL、55mg/mL、57.5mg/mL、60mg/mL、62.5mg/mL、65mg/mL、67.5mg/mL、70mg/mL、72.5mg/mL、75mg/mL、77.5mg/mL、80mg/mL、82.5mg/mL、85mg/mL、87.5mg/mL、90mg/mL、92.5mg/mL、95mg/mL、97.5mg/mL、100mg/mL、102.5mg/mL、105mg/mL、107.5mg/mL、110mg/mL、112.5mg/mL、115mg/mL、117.5mg/mL、120mg/mL、122.5mg/mL、125mg/mL、127.5mg/mL、130mg/mL、132.5mg/mL、135mg/mL、137.5mg/mL、140mg/mL、142.5mg/mL、145mg/mL、147.5mg/mL、150mg/mL、152.5mg/mL、155mg/mL、157.5mg/mL、160mg/mL、162.5mg/mL、165mg/mL、167.5mg/mL、170mg/mL、172.5mg/mL、175mg/mL、177.5mg/mL、180mg/mL、182.5mg/mL、185mg/mL、187.5mg/mL、190mg/mL、192.5mg/mL、195mg/mL、197.5mg/mL、200mg/mL、202.5mg/mL、205mg/mL、207.5mg/mL、210mg/mL、212.5mg/mL、215mg/mL、217.5mg/mL、220mg/mL、222.5mg/mL、225mg/mL、227.5mg/mL、230mg/mL、232.5mg/mL、235mg/mL、237.5mg/mL、240mg/mL、242.5mg/mL、245mg/mL、247.5mg/mL或250mg/mL的浓度存在于所述药物组合物中。
107.如权利要求102-104中任一项所述的药物制剂，其中所述ASO以11mg/mL、22mg/mL、33mg/mL、44mg/mL、55mg/mL、66mg/mL、77mg/mL、88mg/mL、99mg/mL或100mg/mL的浓度存在于所述药物组合物中。
108.如权利要求102-107中任一项所述的药物制剂，其中所述ASO被溶解或稀释在等渗溶液中。
109.如权利要求102-108中任一项所述的药物制剂，其中所述ASO被溶解或稀释在至少pH 5.8的磷酸盐缓冲溶液中。
110.如权利要求102-108中任一项所述的药物制剂，其中所述ASO被溶解或稀释在磷酸盐缓冲(pH 6.6–7.6)溶液中。
111.如权利要求102-110中任一项所述的药物制剂，其中所述ASO被溶解或稀释在包含25-250mM NaCl的缓冲液中。
112.如权利要求102-111中任一项所述的药物制剂，其中所述ASO被溶解或稀释在包含0.1-20mM KCl的缓冲液中。
113.如权利要求102-112中任一项所述的药物制剂，其中所述ASO被溶解或稀释在包含0.1-50mM Na2HPO4的缓冲液中。
114.如权利要求102-113中任一项所述的药物制剂，其中所述ASO被溶解或稀释在包含0.1-50mM NaH2PO4的缓冲液中。
115.如权利要求102-114中任一项所述的药物制剂，其中所述ASO被溶解或稀释在包含0.1-50mM CaCl2的缓冲液中。
116.如权利要求102-115中任一项所述的药物制剂，其中所述ASO被溶解或稀释在包含0.1-50mM MgCl2的缓冲液中。
117.如权利要求102-116中任一项所述的药物制剂，其中所述ASO被溶解或稀释在包含25-250mM NaCl、0.1-20mM KCl、0.1-50mM Na2HPO4、0.1-50mM NaH2PO4、0.1-50mM CaCl2和0.1-50mM MgCl2的缓冲液中。
118.如权利要求102-117中任一项所述的药物制剂，其中所述ASO被溶解或稀释在包含150mM NaCl、3.0mM KCl、0.7mM Na2HPO4、0.3mM NaH2PO4、0.79mM MgCl2和1.4mM CaCl2的缓冲液中。
119.如权利要求102-118中任一项所述的药物制剂，其中所述ASO被溶解或稀释在还包含碳水化合物的缓冲液中。
120.如权利要求119所述的药物制剂，其中所述碳水化合物包括D-葡萄糖。
121.如权利要求102-120中任一项所述的药物制剂，其中所述ASO被溶解或稀释在还包含1-100mM D-葡萄糖的缓冲液中。
122.如权利要求102-121中任一项所述的药物制剂，其中所述ASO被溶解或稀释在还包含1-100mM NaHCO3、1-100mM KHCO3或其组合的缓冲液中。
123.如权利要求102-122中任一项所述的药物制剂，其中所述ASO被溶解或稀释在还包含抗氧化剂的缓冲液中。
124.如权利要求123所述的药物制剂，其中所述抗氧化剂为叔丁基羟基喹啉(TBHQ)、丁基化羟基甲苯(BHT)、丁基化羟基苯甲醚(BHA)、维生素E或其任何组合。
125.如权利要求102-124中任一项所述的药物制剂，其中所述药物制剂不包含防腐剂。
126.如权利要求102-125中任一项所述的药物制剂，其中所述药物制剂适于脑室内或鞘内注射。
127.如权利要求102-126中任一项所述的药物制剂，其中所述药物制剂包装在单次使用小瓶中。
128.一种试剂盒，其包括：
(i)包含反义寡聚体(ASO)的浓缩物，其中所述ASO包含与SEQ ID NO:21-67、210-256或304-1099中的任一个具有至少80％序列同一性的序列；和
(ii)稀释剂，其中所述浓缩物与所述稀释剂可混溶；以及
(iii)用于在所述稀释剂中稀释或溶解所述ASO的说明。
129.如权利要求128所述的试剂盒，其中所述稀释剂是人工脑脊液(aCSF)溶液。
130.如权利要求128-129中任一项所述的试剂盒，其中所述稀释剂包含等渗溶液。
131.如权利要求128-130中任一项所述的试剂盒，其中所述稀释剂包含至少pH 5.8的磷酸盐缓冲溶液。
132.如权利要求128-130中任一项所述的试剂盒，其中所述稀释剂包含磷酸盐缓冲(pH6.6-7.6)溶液。
133.如权利要求128-132中任一项所述的试剂盒，其中所述稀释剂包含25-250mMNaCl。
134.如权利要求128-133中任一项所述的试剂盒，其中所述稀释剂包含0.1-20mM KCl。
135.如权利要求128-134中任一项所述的试剂盒，其中所述稀释剂包含0.1-50mMNa2HPO4。
136.如权利要求128-135中任一项所述的试剂盒，其中所述稀释剂包含0.1-50mMNaH2PO4。
137.如权利要求128-136中任一项所述的试剂盒，其中所述稀释剂包含0.1-50mMCaCl2。
138.如权利要求128-137中任一项所述的试剂盒，其中所述稀释剂包含0.1-50mMMgCl2。
139.如权利要求128-138中任一项所述的试剂盒，其中所述稀释剂包含25-250mMNaCl、0.1-20mM KCl、0.1-50mM Na2HPO4、0.1-50mM NaH2PO4、0.1-50mM CaCl2和0.1-50mMMgCl2。
140.如权利要求128-139中任一项所述的试剂盒，其中所述稀释剂包含150mM NaCl、3.0mM KCl、0.7mM Na2HPO4、0.3mM NaH2PO4、0.79mM MgCl2和1.4mM CaCl2。
141.如权利要求128-140中任一项所述的试剂盒，其中所述稀释剂还包含碳水化合物。
142.如权利要求141所述的试剂盒，其中所述碳水化合物包括D-葡萄糖。
143.如权利要求128-142中任一项所述的试剂盒，其中所述稀释剂还包含1-100mM D-葡萄糖。
144.如权利要求128-143中任一项所述的试剂盒，其中所述稀释剂还包含1-100mMNaHCO3、1-100mM KHCO3或其组合。
145.如权利要求128-144中任一项所述的试剂盒，其中所述稀释剂还包含抗氧化剂。
146.如权利要求145所述的试剂盒，其中所述抗氧化剂为叔丁基羟基喹啉(TBHQ)、丁基化羟基甲苯(BHT)、丁基化羟基苯甲醚(BHA)、维生素E或其任何组合。
147.如权利要求128-146中任一项所述的试剂盒，其中所述稀释剂不包含防腐剂。
148.如权利要求128-147中任一项所述的试剂盒，其中用于在所述稀释剂中稀释或溶解所述ASO的所述说明包括用于在所述稀释剂中将所述ASO稀释或溶解至0.1mg/mL至250mg/mL的浓度的说明。
149.如权利要求128-148中任一项所述的试剂盒，其中用于在所述稀释剂中稀释或溶解所述ASO的所述说明包括用于在所述稀释剂中将所述ASO稀释或溶解至约0.1mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL、2.5mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL、6mg/mL、7mg/mL、8mg/mL、9mg/mL、10mg/mL、11mg/mL、12mg/mL、13mg/mL、14mg/mL、15mg/mL、16mg/mL、17mg/mL、18mg/mL、19mg/mL或20mg/mL的浓度的说明。
150.如权利要求128-148中任一项所述的试剂盒，其中用于在所述稀释剂中稀释或溶解所述ASO的所述说明包括用于在所述稀释剂中将所述ASO稀释或溶解至约22.5mg/mL、25mg/mL、27.5mg/mL、30mg/mL、32.5mg/mL、35mg/mL、37.5mg/mL、40mg/mL、42.5mg/mL、45mg/mL、47.5mg/mL、50mg/mL、52.5mg/mL、55mg/mL、57.5mg/mL、60mg/mL、62.5mg/mL、65mg/mL、67.5mg/mL、70mg/mL、72.5mg/mL、75mg/mL、77.5mg/mL、80mg/mL、82.5mg/mL、85mg/mL、87.5mg/mL、90mg/mL、92.5mg/mL、95mg/mL、97.5mg/mL、100mg/mL、102.5mg/mL、105mg/mL、107.5mg/mL、110mg/mL、112.5mg/mL、115mg/mL、117.5mg/mL、120mg/mL、122.5mg/mL、125mg/mL、127.5mg/mL、130mg/mL、132.5mg/mL、135mg/mL、137.5mg/mL、140mg/mL、142.5mg/mL、145mg/mL、147.5mg/mL、150mg/mL、152.5mg/mL、155mg/mL、157.5mg/mL、160mg/mL、162.5mg/mL、165mg/mL、167.5mg/mL、170mg/mL、172.5mg/mL、175mg/mL、177.5mg/mL、180mg/mL、182.5mg/mL、185mg/mL、187.5mg/mL、190mg/mL、192.5mg/mL、195mg/mL、197.5mg/mL、200mg/mL、202.5mg/mL、205mg/mL、207.5mg/mL、210mg/mL、212.5mg/mL、215mg/mL、217.5mg/mL、220mg/mL、222.5mg/mL、225mg/mL、227.5mg/mL、230mg/mL、232.5mg/mL、235mg/mL、237.5mg/mL、240mg/mL、242.5mg/mL、245mg/mL、247.5mg/mL或250mg/mL的浓度的说明。
151.如权利要求128-148中任一项所述的试剂盒，其中用于在所述稀释剂中稀释或溶解所述ASO的所述说明包括用于在所述稀释剂中将所述ASO稀释或溶解至约11mg/mL、22mg/mL、33mg/mL、44mg/mL、55mg/mL、66mg/mL、77mg/mL、88mg/mL、99mg/mL或100mg/mL的浓度的说明。
152.如权利要求128-151中任一项所述的试剂盒，其中用于在所述稀释剂中稀释或溶解所述ASO的所述说明包括用于在所述稀释剂中稀释或溶解约0.5毫克至约500毫克的所述ASO的说明。
153.如权利要求128-152中任一项所述的试剂盒，其中用于在所述稀释剂中稀释或溶解所述ASO的所述说明包括用于在所述稀释剂中稀释或溶解约0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22.5、25、27.5、30、32.5、35、37.5、40、42.5、45、47.5、50、52.5、55、57.5、60、62.5、65、67.5、70、72.5、75、77.5、80、82.5、85、87.5、90、92.5、95、97.5、100、102.5、105、107.5、110、112.5、115、117.5、120、122.5、125、127.5、130、132.5、135、137.5、140、142.5、145、147.5、150、152.5、155、157.5、160、162.5、165、167.5、170、172.5、175、177.5、180、182.5、185、187.5、190、192.5、195、197.5、200、202.5、205、207.5、210、212.5、215、217.5、220、222.5、225、227.5、230、232.5、235、237.5、240、242.5、245、247.5或250mg的所述ASO的说明。
154.反义寡聚体(ASO)用于制造用于在有需要的人类对象中治疗或预防以NaV1.1蛋白的表达或功能降低为特征的疾病或病况的药物的用途，其中以约0.5毫克至约500毫克的第一剂量施用所述药物，并且其中所述ASO包含与SEQ ID NO:21-67、210-256或304-1099中的任一个具有至少80％序列同一性的序列。
155.如权利要求154所述的用途，其中所述药物以约0.1、0.5、1、2.5、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、22.5、25、27.5、30、32.5、35、37.5、40、42.5、45、47.5、50、52.5、55、57.5、60、62.5、65、67.5、70、72.5、75、77.5、80、82.5、85、87.5、90、92.5、95、97.5、100、102.5、105、107.5、110、112.5、115、117.5、120、122.5、125、127.5、130、132.5、135、137.5、140、142.5、145、147.5、150、152.5、155、157.5、160、162.5、165、167.5、170、172.5、175、177.5、180、182.5、185、187.5、190、192.5、195、197.5、200、202.5、205、207.5、210、212.5、215、217.5、220、222.5、225、227.5、230、232.5、235、237.5、240、242.5、245、247.5或250mg的第一剂量施用。
CN202080095947.9A 2019-12-06 2020-12-03 用于治疗病况和疾病的反义寡聚体 Pending CN115087452A (zh)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201962945048P 2019-12-06 2019-12-06
US62/945,048 2019-12-06
US202062993971P 2020-03-24 2020-03-24
US62/993,971 2020-03-24
PCT/US2020/063157 WO2021113541A1 (en) 2019-12-06 2020-12-03 Antisense oligomers for treatment of conditions and diseases

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN115087452A true CN115087452A (zh) 2022-09-20

Family

ID=76222665

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202080095947.9A Pending CN115087452A (zh) 2019-12-06 2020-12-03 用于治疗病况和疾病的反义寡聚体

Country Status (11)

Country Link
US (1) US20230116704A1 (zh)
EP (1) EP4069256A4 (zh)
JP (1) JP2023504195A (zh)
KR (1) KR20220113743A (zh)
CN (1) CN115087452A (zh)
AU (1) AU2020395835A1 (zh)
BR (1) BR112022010882A2 (zh)
CA (1) CA3159162A1 (zh)
IL (1) IL293531A (zh)
MX (1) MX2022006858A (zh)
WO (1) WO2021113541A1 (zh)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP4110919A4 (en) * 2020-02-28 2024-06-05 Ionis Pharmaceuticals, Inc. COMPOUNDS AND METHODS FOR MODULATING SCN1A EXPRESSION
KR20230022409A (ko) 2020-05-11 2023-02-15 스톡 테라퓨틱스, 인크. 병태 및 질환의 치료를 위한 opa1 안티센스 올리고머
CA3230299A1 (en) * 2021-08-27 2023-03-02 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Compounds and methods for modulating scn1a expression
WO2024026122A2 (en) * 2022-07-29 2024-02-01 Stoke Therapeutics, Inc. Compounds for treatment of conditions and diseases
WO2024035946A1 (en) * 2022-08-11 2024-02-15 Wave Life Sciences Ltd. Oligonucleotide compositions and methods thereof

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2016118528A (ru) * 2010-06-23 2018-10-31 Курна, Инк. Лечение заболеваний, связанных с альфа-субъединицей потенциалзависимого натриевого канала (scna), путем ингибирования природного антисмыслового транскрипта гена scna
EP3933041B1 (en) * 2015-12-14 2024-01-31 Cold Spring Harbor Laboratory Antisense oligomers for treatment of autosomal dominant retardation
PL3673080T3 (pl) * 2017-08-25 2024-03-11 Stoke Therapeutics, Inc. Oligomery antysensowne do leczenia stanów i chorób
WO2019224864A1 (ja) * 2018-05-21 2019-11-28 国立研究開発法人理化学研究所 Ｓｃｎ１ａ遺伝子の発現増強法とそれによるドラベ症候群の治療法
JP2022522205A (ja) * 2019-02-27 2022-04-14 ストーク セラピューティクス，インク． 病態及び疾患の治療用アンチセンスオリゴマー

Also Published As

Publication number Publication date
KR20220113743A (ko) 2022-08-16
BR112022010882A2 (pt) 2022-10-04
AU2020395835A1 (en) 2022-06-23
WO2021113541A1 (en) 2021-06-10
EP4069256A1 (en) 2022-10-12
JP2023504195A (ja) 2023-02-01
US20230116704A1 (en) 2023-04-13
CA3159162A1 (en) 2021-06-10
EP4069256A4 (en) 2023-10-18
MX2022006858A (es) 2022-07-11
IL293531A (en) 2022-08-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN115087452A (zh) 用于治疗病况和疾病的反义寡聚体
US11873490B2 (en) Antisense oligomers for treatment of conditions and diseases
JP6012591B2 (ja) β−ＮＧＦに対するアプタマー及びβ−ＮＧＦ介在疾患及び障害の治療におけるその使用
US9574191B2 (en) Selective inhibition of polyglutamine protein expression
US20010056077A1 (en) Pharmaceutical composition for treatment of duchenne muscular dystrophy
KR20240036132A (ko) 대상에게서 ｓｍｎ２ 스플라이싱을 조정하기 위한 조성물 및 방법
US20200063142A1 (en) Inhibitors of cacna1a/alpha1a subunit internal ribosomal entry site (ires) and methods of treating spinocerebellar ataxia type 6
JP2018198615A (ja) 疾病の発症又は進行の一因となる異常スプライシングを抑制できる物質のスクリーニング方法
WO2014095757A1 (en) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of x-linked charcot-marie-tooth
JP2022518292A (ja) ホスホジエステラーゼ４（ｐｄｅ４）阻害によるてんかんの治療方法
WO2024026122A2 (en) Compounds for treatment of conditions and diseases
US9993522B2 (en) Treatment of pain by inhibition of USP5 de-ubiquitinase
WO2024112937A2 (en) Compositions and methods for treatment of cancer and metabolic disease
WO2023178386A1 (en) Methods of treating glaucoma
CA3192372A1 (en) Methods for the reduction of z-aat protein levels
WO2007052728A1 (ja) Ｄｎａオリゴマーを遺伝子導入担体として用いた、細胞の形質転換効率、相同性組換え効率の改善法、およびそれにより形質転換された細胞

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination