JP2023501155A - クリザンリズマブ含有抗体製剤 - Google Patents
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Abstract
本発明は、ヒトP-セレクチンに対する抗体、とりわけSEG101又はクリザンリズマブと最大でも3つのアミノ酸の違いを有する抗体の新規な医薬製剤並びにその調製のためのプロセス及び製剤の使用に関する。
Description
本発明は、ヒトP-セレクチンに対する抗体、とりわけSEG101又はクリザンリズマブと最大でも3つのアミノ酸の違いを有する抗体の新規な医薬製剤並びにその調製のためのプロセス及び製剤の使用に関する。
P-セレクチンは、多くの炎症性疾患及び血栓性疾患の原因となっている。従って、国際公開第2008/069999号パンフレットにおいて開示されるようなヒトP-セレクチンに対する抗体、とりわけSEG101(別名クリザンリズマブ及びSelG1)などの、P-セレクチンを標的とする治療薬は、炎症性疾患及び血栓性疾患を治療するための手段として使用することができる。
製剤された抗体は、保存の間に、化学的及び物理的不安定性が原因で生物学的活性を失うかもしれない。抗体又はさらには賦形剤の分解、チャージバリアントの形成、及び異性化反応は、安全性についての懸念並びに製剤の力価及び効力の徐々の減少につながる一般的な要因に含まれる。
扱いやすいように、タンパク質治療薬、例えば抗体の液体医薬製剤は、長期的に安定しており且つ安全で有効な量の治療薬を含有するべきである。凝集体の形成などの物理的及び化学的安定性並びに製造、保存、及び運搬の難しさに関する課題に加えて、タンパク質治療薬の液体製剤の問題は、分解及びチャージバリアントの形成であり、これらは、安全性についての問題点を引き起こす他に、目的のタンパク質の活性及び機能性に悪影響を与え得る。ゆえに、タンパク質治療薬を長い間にわたって安定に維持し、分解率並びにチャージバリアント及び/又はアイソフォームなどの他の分子種の形成を最小限にすることが可能な製剤を開発する必要がある。
保存及び運搬の際に安定している、特にクリザンリズマブ又はクリザンリズマブと最大でも3つのアミノ酸の違いを有する抗体についての抗P-セレクチン抗体製剤を提供することが、本発明の目的である。静脈内(i.v.)投与に適している、安定した液体抗体製剤を提供することが、さらなる目的である。
一態様において、本発明は、それぞれ配列番号10及び配列番号9の軽鎖及び重鎖アミノ酸配列を有するクリザンリズマブ並びに配列番号10の32位のアミノ酸であるアスパラギン酸が、イソアスパラギン酸に変わったクリザンリズマブのバリアント(イソ-クリザンリズマブ)を含む医薬組成物を提供する。適切には、また好ましくは、医薬組成物は、医薬組成物について5.5~7.5、好ましくは5.7~7.0、好ましくは5.7~6.3のpH値をもたらす緩衝系をさらに含む。
医薬組成物は、ヒト対象に投与するのに適していなければならない。含有する有効成分が発する効果は別として、医薬組成物は、過剰な毒性、刺激作用、アレルギー反応、又は他の問題若しくは合併症を伴わずに、人の組織と接触させて使用するのに適しており、妥当なベネフィット/リスク比と釣り合うべきである。
一態様において、本発明は、ヒトP-セレクチンに対する抗体、好ましくはクリザンリズマブ又はクリザンリズマブと最大でも3つのアミノ酸の違いを有する抗体を含む新規な医薬組成物であって、pH値は、5.5~7.5、5.7~7.0、好ましくは5.7~6.3である医薬組成物に関する。
定義
本開示がより容易に理解されるために、特定の用語について最初に定義する。さらなる定義は、詳細な説明の全体にわたって記載される。
本開示がより容易に理解されるために、特定の用語について最初に定義する。さらなる定義は、詳細な説明の全体にわたって記載される。
本明細書において使用されるように、本開示に関して(とりわけ請求項に関して)使用される用語「1つの(a)」、「1つの(an)」、「その(the)」、及び類似する用語は、本明細書において別段の指示がない限り又は文脈によって明らかに否定されない限り、単数及び複数の両方をカバーするように解釈されたい。そのため、用語「1つの(a)」(又は「1つの(an)」)、「1つ以上の」、及び「少なくとも1つ」は、本明細書において区別なく使用することができる。
「及び/又は」は、列挙されている構成成分又は特徴のそれぞれ1つ又は両方又はすべてが、考えられるバリアントであることを意味し、とりわけ、代替的に又は追加的に、2つ以上のバリアントとなる。
数値的な値Xに関する用語「約」は、例えばX±10%、X±5%、X±3%を意味し、この範囲内のすべての値を含む。
語句「薬学的に許容される」は、確かな医学的判断の範囲内にあり、過剰な毒性、刺激作用、アレルギー反応、又は他の問題若しくは合併症を伴わずに、人及び動物の組織と接触させて使用するのに適しており、妥当なベネフィット/リスク比と釣り合っている化合物、材料、組成物、及び/又は剤形を指すために本明細書において使用される。
本明細書において使用されるように、用語「患者」又は「対象」は、ヒトを意味するように解釈される。注釈がつけられる場合を除き、用語「患者」又は「対象」は、区別なく本明細書において使用される。
本明細書において使用されるように、対象が治療から生物学的に、医学的に、又は生活の質において利益を得る場合、このような対象は、このような治療「の必要がある」。
用語「治療」は、以下を含む:(1)状況、障害、若しくは状態にかかっているかもしれない若しくはそれにかかりやすいかもしれないが、状況、障害、若しくは状態の臨床若しくは準臨床症状をまだ経験していない若しくは示していない動物、特に哺乳動物、とりわけヒトにおいて発症する状況、障害、若しくは状態の臨床症状の出現を予防する若しくは遅延させること;(2)状況、障害、若しくは状態を阻害すること(例えば、疾患若しくは維持療法の場合はその再発の、その少なくとも1つの臨床若しくは準臨床症状の発症を阻止する、低下させる、若しくは遅延させること);及び/又は(3)状態を軽減すること(すなわち、状況、障害、若しくは状態又はその臨床若しくは準臨床症状の少なくとも1つの後退を引き起こすこと)。治療される患者の利益は、統計的に有意である又は患者が若しくは医師が少なくとも認知可能である。しかしながら、医薬品が、疾患を治療するために患者に投与される場合、結果として、常に有効な治療となるとは限らないかもしれないことが、十分に理解されるであろう。
詳細な説明
タンパク質治療薬の液体製剤は、タンパク質治療薬の生物活性を完全な状態に保ち、製造及び有効期限の間にタンパク質治療薬の官能基を分解から保護するべきである。タンパク質の分解過程は、化学的不安定性(例えば脱アミド、酸化、クリッピング、異性化等)又は物理的不安定性(例えば凝集体の形成)を伴い得る。抗体の様々な分解産物は、当技術分野においてよく知られている方法、例えばキャピラリー等電点電気泳動(cIEF)、イオン交換クロマトグラフィー、又はキャピラリーゾーン電気泳動によってチャージバリアントとして検出することができる(例えばdoi:10.1016/j.jchromb.2017.02.017及びdoi:10.4161/mabs.2.6.13333を参照されたい)。一般的なチャージバリアントは、シアル酸、脱アミド、C末端リシン、N末端グルタミン酸、未処理のリーダー配列、アスパラギン酸の異性化、及びスクシンイミドの形成である(Yi Du,et al,2012.DOI:10.4161/mabs.21328)。
タンパク質治療薬の液体製剤は、タンパク質治療薬の生物活性を完全な状態に保ち、製造及び有効期限の間にタンパク質治療薬の官能基を分解から保護するべきである。タンパク質の分解過程は、化学的不安定性(例えば脱アミド、酸化、クリッピング、異性化等)又は物理的不安定性(例えば凝集体の形成)を伴い得る。抗体の様々な分解産物は、当技術分野においてよく知られている方法、例えばキャピラリー等電点電気泳動(cIEF)、イオン交換クロマトグラフィー、又はキャピラリーゾーン電気泳動によってチャージバリアントとして検出することができる(例えばdoi:10.1016/j.jchromb.2017.02.017及びdoi:10.4161/mabs.2.6.13333を参照されたい)。一般的なチャージバリアントは、シアル酸、脱アミド、C末端リシン、N末端グルタミン酸、未処理のリーダー配列、アスパラギン酸の異性化、及びスクシンイミドの形成である(Yi Du,et al,2012.DOI:10.4161/mabs.21328)。
クリザンリズマブの微小不均一性は、修飾又は化学的分解に関するものであり、これは、大量の様々に修飾されたバリアントをもたらす。クリザンリズマブについての主要なバリアントは、環状イミド中間体(スクシンイミド)の形成のステップを通る、軽鎖(CDRにおける)の32位のアスパラギン酸のイソアスパラギン酸への異性化を介して形成され(「イソ-クリザンリズマブ」と本明細書において称されるバリアントを生じる)、環状イミド中間体は、およそ1:3のモル比で、アスパラギン酸及びイソアスパラギン酸に加水分解され得る。しかしながら、驚くべきことに、この修飾がCDR中にあるにもかかわらず、イソ-クリザンリズマブが、クリザンリズマブと実質的に等しい生物学的活性を示すことが分かった。さらに、対応するスクシンイミド中間体は、生理学的な件下で、アスパラギン酸及びイソアスパラギン酸に加水分解することが可能であり(それぞれ、クリザンリズマブ及びイソ-クリザンリズマブを生じる)、スクシンイミドバリアントを、患者に投与した後に、生物学的活性形態に変換することができることを意味する。この発見に基づくと、本発明の医薬組成物は、クリザンリズマブ及び大量の様々なバリアントを含有するが、クリザンリズマブの生物学的活性を保持し、長期間安定している。加えて、イソ-クリザンリズマブ及びクリザンリズマブのスクシンイミド形の存在は、免疫原性についての問題点を提示しない。用語「免疫原性」は、本発明の医薬組成物の投与を、健康なボランティア又はその必要がある患者などのヒト対象に行った後の、クリザンリズマブに結合することが可能である宿主抗体の生成を指す。本発明の医薬組成物を受けたすべてのヒト対象のうち2%未満の対象しか、抗クリザンリズマブ抗体を発生させなかった。一方、生理学的条件下では、適切には薬剤投与の1日後、患者における総クリザンリズマブ及びすべてのそのバリアントのうち、クリザンリズマブのスクシンイミド形は、5%未満、適切には2%未満、適切には1%未満、適切には0.5%未満である。さらに、イソ-クリザンリズマブはクリザンリズマブと同じくらい免疫原性が低く、クリザンリズマブと実質的に同じであることを発見したことは驚くべきことである。この文脈において使用される用語「実質的に同じ」は、イソ-クリザンリズマブの免疫原性が、同じ条件下で試験した場合に、クリザンリズマブの5倍以下、3倍以下、適切には2倍以下、適切には1.5倍以下であることを意味する。その代わりに、この文脈において使用される用語「実質的に同じ」は、イソ-クリザンリズマブの免疫原性が、同じ条件下で試験した場合に、クリザンリズマブの20%以上、適切には40%以上、適切には70%以上であることを意味する。
ゆえに、一態様において、本発明は、それぞれ配列番号10及び配列番号9の軽鎖及び重鎖アミノ酸配列を有するクリザンリズマブ並びに配列番号10の32位のアミノ酸であるアスパラギン酸が、イソアスパラギン酸に変わったクリザンリズマブのバリアント(イソ-クリザンリズマブ)を含む医薬組成物を提供する。
用語「イソ-クリザンリズマブ」は、2つの種、ホモ-イソ-クリザンリズマブ及びヘテロ-イソ-クリザンリズマブからなる。ホモ-イソ-クリザンリズマブという用語は、軽鎖の両方の32位のアスパラギン酸残基が、イソアスパラギン酸によって置き換えられている(すなわち異性化した)抗体を指す。ヘテロ-イソ-クリザンリズマブという用語は、軽鎖の一方のみの32位のアスパラギン酸残基が、イソアスパラギン酸によって置き換えられている抗体を指す。
単一の軽鎖について、32位にアスパラギン酸を有する軽鎖は、LCDと命名される。32位にイソアスパラギン酸を有する軽鎖は、LCisoDと命名される。32位にスクシンイミドを有する軽鎖は、LCsucciと命名される。
一態様において、本発明は、それぞれ配列番号10及び配列番号9の軽鎖及び重鎖アミノ酸配列を有するクリザンリズマブと最大でも3つ、好ましくは2つ、より好ましくは1つだけのアミノ酸の違いを有する抗体並びに配列番号10の32位のアスパラギン酸がイソアスパラギン酸に変わった前記抗体のバリアントを含む医薬組成物を提供する。
クリザンリズマブと最大でも3つ、好ましくは2つ、より好ましくは1つだけのアミノ酸の違いを有する抗体に関して、当該違いは、ミスマッチ、すなわち、ある残基の異なる残基により置換することができる。当該違いはまた、クリザンリズマブの配列中のアミノ酸残基の挿入又は欠失とすることもできる。当該違いは、軽鎖及び/又は重鎖の配列中の、例えば抗体の様々なドメインにおける、例えばCH1、CH2、CH3、VH、CL、VL、ヒンジ領域、Fc、及びFabにおける任意の場所とすることができる。好ましくは、前記違いは、その抗原、すなわちヒトP-セレクチンに結合するその能力などの抗体の必須の特性に干渉しない。好ましくは、当該違いは、抗体の機能にとって重大である位置、例えばCDRにない。特に、本発明の医薬組成物に関して、当該違いは、配列番号10の32位にない。
一実施形態において、医薬組成物は、配列番号10の32位がスクシンイミド(すなわちアスパラギン酸のスクシンイミドアイソフォーム)であるバリアントをさらに含む(「クリザンリズマブのスクシンイミド形」)。クリザンリズマブのスクシンイミド形は、典型的に、軽鎖の少なくとも一方の32位にスクシンイミド及び他方の軽鎖の32位にアスパラギン酸若しくはイソアスパラギン酸を有する抗体である又は非常に酸性の条件(例えば5あたりのpH)において、両方のアスパラギン酸を、スクシンイミドにより置き換えることができる。一方の軽鎖にスクシンイミド及び他方の軽鎖にアスパラギン酸を32位に含む抗体は、「クリザンリズマブのD-スクシンイミド」と命名される。スクシンイミドを有する一方の軽鎖及びイソアスパラギン酸を有する他方の軽鎖を32位に含む抗体は、「クリザンリズマブのisoD-スクシンイミド」と命名される。
一実施形態において、医薬組成物は、医薬組成物において総チャージバリアントのうち、少なくとも20%、適切には少なくとも24%、少なくとも30%、適切には少なくとも35%、適切には少なくとも40%のクリザンリズマブ(すなわちメインピーク)を含む。典型的に、また好ましくは、チャージバリアントは、キャピラリーゾーン電気泳動(CZE)によって分析することができる。曲線下面積(AUC)は、一般に、総AUCに対する各ピークの%を決定するために使用されるであろう。明確にするため、クリザンリズマブを含むピークは、クリザンリズマブを含むピークがすべてのピークの中で最も大きなAUCを有するというわけではないまれな状況であっても、本出願の全体にわたって「メインピーク」と呼ばれるであろう。
本出願において使用される用語「チャージバリアント」は、クリザンリズマブのピークを含む、CZEによって特定することができるすべてのピークを指す。本出願において使用される用語「塩基性バリアント」は、CZEダイアグラムにおいてクリザンリズマブと比較して早い時刻に対応するピークを指す。本出願において使用される用語「酸性バリアント」は、CZEダイアグラムにおいてクリザンリズマブのピークと比較して遅い時刻に対応するピークを指す。CZEは、例えば実施例4において記載されるように実行することができる。
2つの主要な酸性バリアントピークがある。時刻が早い方のピークは、ヘテロ-イソ-クリザンリズマブを含み、時刻が遅い方のピークは、ホモ-イソ-クリザンリズマブを含む。推定であるが、全体で、イソ-クリザンリズマブは、酸性バリアントの約50%~約75%を占める。
少数の塩基性バリアントピークがあり、このうち、時刻が早い一方のピークは、クリザンリズマブのD-スクシンイミドを含み、時刻が遅い他方のピークは、クリザンリズマブのisoD-スクシンイミドを含む。推定であるが、全体で、クリザンリズマブのスクシンイミド形は、塩基性バリアントの約25%~約50%を占める。
一実施形態において、医薬組成物は、CZEにかけられた場合、メインピークを示し、メインピークのAUCは、総AUCの少なくとも20%、適切には少なくとも24%、少なくとも30%、適切には少なくとも35%、適切には少なくとも40%である。
一実施形態において、医薬組成物は、総チャージバリアントのうち、70%以下、適した60%以下、適切には50%以下、適切には45%以下のクリザンリズマブを含む。
一実施形態において、医薬組成物は、CZEにかけられた場合、メインピークを示し、メインピークのAUCは、総AUCの70%以下、適切には60%以下、適切には50%以下、適切には45%以下である。
一実施形態において、医薬組成物は、総チャージバリアントのうち、約20%~約50%、適切には約35%~約45%、適切には約37%~約42%のクリザンリズマブを含む。
一実施形態において、医薬組成物は、総チャージバリアントのうち、約20%~約50%、適切には約35%~約45%、適切には約37%~約42%のメインピークを含む。
一実施形態において、医薬組成物は、総チャージバリアントのうち、少なくとも20%、少なくとも30%のイソ-クリザンリズマブを含む。
一実施形態において、医薬組成物は、総チャージバリアントのうち、少なくとも30%、適切には少なくとも40%の酸性バリアントを含む。
一実施形態において、医薬組成物は、総チャージバリアントのうち、40%以下、適切には35%以下のイソ-クリザンリズマブを含む。
一実施形態において、医薬組成物は、総チャージバリアントのうち、56%以下、適切には45%以下の酸性バリアントを含む。
一実施形態において、医薬組成物は、総チャージバリアントのうち、約20%~約40%、適切には約25%~約35%のイソ-クリザンリズマブを含む。
一実施形態において、医薬組成物は、総チャージバリアントのうち、約30%~約50%、適切には約35%~約45%、適切には約37%~約42%の酸性バリアントを含む。
一実施形態において、医薬組成物は、総チャージバリアントのうち、少なくとも5%、適切には少なくとも10%のクリザンリズマブのスクシンイミド形を含む。
一実施形態において、医薬組成物は、総チャージバリアントのうち、適切には少なくとも10%の塩基性バリアント、少なくとも15%の塩基性バリアントを含む。
一実施形態において、医薬組成物は、総チャージバリアントのうち、15%以下、適切には20%以下のクリザンリズマブのスクシンイミド形を含む。
一実施形態において、医薬組成物は、総チャージバリアントのうち、20%以下、適切には25%以下、適切には35%以下の塩基性バリアントを含む。
一実施形態において、医薬組成物は、総チャージバリアントのうち、約5%~約20%、適切には約10%~15%のクリザンリズマブのスクシンイミド形を含む。
一実施形態において、医薬組成物は、総チャージバリアントのうち、約10%~約35%、適切には約15%~25%の塩基性バリアントを含む。
一実施形態において、医薬組成物は、総チャージバリアントのうち、少なくとも約55%、少なくとも約60%のクリザンリズマブとイソ-クリザンリズマブを含む。
一実施形態において、医薬組成物は、総チャージバリアントのうち、約55%~約85%、約60%~約80%、約65%~約75%のクリザンリズマブとイソ-クリザンリズマブを含む。
一実施形態において、本発明は、それぞれ配列番号10及び配列番号9の軽鎖及び重鎖アミノ酸配列を有するクリザンリズマブ並びに配列番号10の32位のアミノ酸であるアスパラギン酸が、イソアスパラギン酸に変わったクリザンリズマブのバリアント(イソ-クリザンリズマブ)並びに配列番号10の32位がスクシンイミドであるバリアント(クリザンリズマブのスクシンイミド形)を含む医薬組成物を提供する。
キャピラリーゾーン電気泳動(CZE)を使用して、チャージバリアントの分布についてのpH依存性動的挙動を特定した。6.3未満のpHでのインキュベーションの間に、スクシンイミドの蓄積が生じた。
インキュベーションのpHが低いほど、より多くのスクシンイミドが蓄積する。6.3を上回るpH値では、より多くのイソアスパラギン酸が形成されたが、スクシンイミドの初めの量は、出発物質において観察されたものよりもさらに低いレベルまで減少した(図5)。
抗体の相補性決定領域(CDR)における化学的修飾は、標的分子への結合活性に影響を及ぼし得る。結合活性に対するCDR中の異性化バリアントとしてのスクシンイミドの影響は、すでに報告されている(Yan B et al,2009,doi:10.1002/jps.21655;Cacia J et al,1996,doi:10.102l/bi951526c;Valliere-Douglass J et al,2008,doi:10.1016/j.chroma.2008.10.078;Ouellette D et al.,2013,doi:10.4161/mabs.24458)。加えて、異性化バリアントとしてのイソアスパラギン酸もまた、CDR中に存在する場合、結合活性の減少を引き起こすことが示されている(Cacia J et al,1996,doi:10.1021/bi951526c;Harris RJ et al,2001,DOI:10.1016/s0378-4347(00)00548-x;Rehder DS et al.,2008,doi:10.1021/bi7018223)。塩基性画分(スクシンイミドを含有する)の力価が、メインピーク(アスパラギン酸、クリザンリズマブを含有する)の力価と比較して低下したことが分かっているが、イソ-クリザンリズマブを含有する酸性バリアントが、クリザンリズマブと実質的に等しい生物学的活性を保持することを発見したことは驚くべきことである。
ゆえに、一態様において、本発明は、それぞれ配列番号10及び配列番号9の軽鎖及び重鎖アミノ酸配列を含むクリザンリズマブの単離バリアントであって、配列番号10の32位のアミノ酸であるアスパラギン酸が、抗体の軽鎖の一方において又は軽鎖の両方においてイソアスパラギン酸により置き換えられている、クリザンリズマブの単離バリアントを提供する(イソ-クリザンリズマブ)。一実施形態において、置き換えは、スクシンイミド中間体の形成を通る。一態様において、本発明は、クリザンリズマブ、イソ-クリザンリズマブ、及びクリザンリズマブのスクシンイミド形を含む医薬組成物であって、ヒトP-セレクチンに対するイソ-クリザンリズマブの結合親和性は、ヒトP-セレクチンに対するクリザンリズマブの結合親和性と実質的に等しい医薬組成物を提供する。P-セレクチンに対するクリザンリズマブ又はイソ-クリザンリズマブの結合親和性は、通常の手法によって、例えばELISAによって決定することができる(例えば実施例2.1のように)。この文脈における用語「実質的に等しい」は、クリザンリズマブ及びイソ-クリザンリズマブの結合親和性に、2倍を超える違いはない、適切には1.5倍以下、適切には1.3倍以下、適した1.2倍以下であると理解される。適切には、イソ-クリザンリズマブの結合親和性は、クリザンリズマブの結合親和性の80%~125%の範囲内にある。
一実施形態において、イソ-クリザンリズマブの生物学的活性は、クリザンリズマブの生物学的活性と実質的に等しい。用語「クリザンリズマブの生物学的活性」は、ヒトP-セレクチンの、そのリガンドPSGL-1(P-セレクチングリコプロテインリガンド-1)との相互作用を阻害する、典型的に、ヒトP-セレクチンを発現する細胞のPSGL-1との相互作用を阻害する、クリザンリズマブの能力を指す。生物学的活性は、通常の手法によって決定することができる。適切には、生物学的活性は、マイクロタイタープレートからの蛍光シグナルを測定することによって決定され、ウェルは、PSGL-1により最初にコーティングし、次いで、表面にヒトP-セレクション(P-selection)を発現する哺乳動物細胞と、細胞を蛍光標識した後にインキュベートし、本発明の医薬組成物中に含まれるSEG101とインキュベートする。SEG101又はそのバリアントの生物学的活性を測定するための適した方法は、実施例2.1において実証される。この文脈における用語「実質的に等しい」は、クリザンリズマブ及びイソ-クリザンリズマブの生物学的活性に、2倍を超える違いはない、適切には1.5倍以下、適切には1.3倍以下、適した1.2倍以下であると理解される。適切には、イソ-クリザンリズマブの生物学的活性は、クリザンリズマブの生物学的活性の80%~125%の範囲内にある。
別の態様において、本発明は、それぞれ配列番号10及び配列番号9の軽鎖及び重鎖アミノ酸配列を含むクリザンリズマブの単離バリアント(クリザンリズマブのスクシンイミド形)であって、配列番号10の32位のアミノ酸であるアスパラギン酸は、軽鎖の少なくとも一方においてスクシンイミドにより置き換えられており、それに対して、他方の軽鎖の対応する位置は、アスパラギン酸、イソアスパラギン酸、又はスクシンイミドである、クリザンリズマブの単離バリアントを提供する。
一態様において、本発明は、クリザンリズマブ、イソ-クリザンリズマブ、及びクリザンリズマブのスクシンイミド形を含む医薬組成物であって、クリザンリズマブのスクシンイミド形は、イソ-クリザンリズマブ及びクリザンリズマブに加水分解することが可能である医薬組成物を提供する。一実施形態において、クリザンリズマブのスクシンイミド形は、pH7.4±0.4でイソ-クリザンリズマブ及びクリザンリズマブに加水分解することが可能である。一実施形態において、クリザンリズマブのスクシンイミド形は、室温で、典型的に約25℃で、pH7.4±0.4でイソ-クリザンリズマブ及びクリザンリズマブに加水分解することが可能である。一実施形態において、クリザンリズマブのスクシンイミド形は、生理学的条件下で、イソ-クリザンリズマブ及びクリザンリズマブに加水分解することが可能である。用語「生理学的条件」は、pH7.4±0.4及び約36.0~約40.0の間の、好ましくは36.5~38.0、好ましくは約36.5~37.5℃の間の温度として理解される。一実施形態において、約50%のクリザンリズマブのスクシンイミド形は、約2~約5時間以内に、適切には約3~約5時間以内に、適切には約3~約4時間に、生理学的条件下で、イソ-クリザンリズマブ及びクリザンリズマブに加水分解される。一実施形態において、クリザンリズマブのスクシンイミド形は、対象への注入(例えば静脈内)の後に、イソ-クリザンリズマブ及びクリザンリズマブに加水分解される。
一実施形態において、医薬組成物において、クリザンリズマブは、CZEによって決定されるメイン種である。メイン種は、最も大きなAUCを有するとして理解される。
一実施形態において、医薬組成物において、イソ-クリザンリズマブは、CZEによって決定されるメイン種である。
一実施形態において、医薬組成物は、実質的に等しい量のクリザンリズマブ及びイソ-クリザンリズマブを含む。この文脈において使用される用語「実質的に等しい」は、イソ-クリザンリズマブの量が、クリザンリズマブの量の80%~125%の範囲内に、適切にはクリザンリズマブの90%~110%の範囲内にあることを意味する。
一実施形態において、本発明の医薬組成物は、約2℃~約8℃、適切には約5℃に保たれる。適切には、医薬組成物は、冷蔵庫において保たれる。一実施形態において、本発明の医薬組成物は、約2℃~約8℃の間の、適切には約4℃~約6℃の間の、適切には5℃の温度を有する。32位のアスパラギン酸の異性化は、温度の増加と共にかなり速い速度で起こることが分かっている(例えば表6において示されるように)。このような温度条件下で、クリザンリズマブの減少は、好ましくは、CZE試験におけるメインピークのAUCとして決定されるように、医薬組成物を調製した時点の出発物質と比較して、少なくとも12ヵ月間にわたって、適切には18ヵ月間、適切には24ヵ月間、25%以下、20%以下、15%以下、適切には10%以下、適切には5%以下である。このような温度条件下で、総塩基性バリアントの量は、少なくとも12ヵ月間にわたって、適切には18ヵ月間、適切には24ヵ月間、出発物質と比較して、15%を超える変化はない、10%以下、5%以下、適切には3%以下、適した2%以下である。このような温度条件下で、総酸性バリアントの量は、出発物質と比較して、少なくとも12ヵ月間にわたって、適切には18ヵ月間、適切には24ヵ月間、25%を超える増加はない、15%以下、適切には10%以下、適切には5%以下である。医薬組成物が適切なpH範囲を有する場合、上記の変化は、さらに最小限にすることができる。例えば、約5.5~約7.5の間のpH、適切には約5.5~約7の間のpH、適切には約6~約7の間のpH、適切には約6±0.3。適切には、医薬製剤は、約6のpHに保たれる。
一実施形態において、本発明は、適切には18ヵ月又は24ヵ月の有効期限の時点で、総チャージバリアントのうち、少なくとも24%、少なくとも30%、少なくとも35%のメインピーク及び56%以下、50%以下、45%以下の酸性バリアントを含む医薬組成物を提供し、適切には、医薬組成物は、約2~約8℃、適切には約5℃に保たれる。一実施形態において、本発明は、適切には18ヵ月又は24ヵ月の有効期限の時点で、総チャージバリアントのうち、少なくとも24%のメインピーク及び56%以下の酸性バリアントを含む医薬組成物を提供し、適切には、医薬組成物は、約2~約8℃、適切には約5℃に保たれる。
一実施形態において、本発明は、適切には18ヵ月又は24ヵ月の有効期限の時点で、総チャージバリアントのうち、少なくとも24%、少なくとも30%、少なくとも35%のメインピーク、56%以下、50%以下、45%以下の酸性バリアント、35%以下、30%以下、25%以下の塩基性バリアントを含む医薬組成物を提供し、適切には、医薬組成物は、約2~約8℃、適切には約5℃に保たれる。一実施形態において、本発明は、適切には18ヵ月又は24ヵ月の有効期限の時点で、総チャージバリアントのうち、少なくとも24%のメインピーク、56%以下の酸性バリアント、及び35%以下の塩基性バリアントを含む医薬組成物を提供し、適切には、医薬組成物は、約2~約8℃、適切には約5℃に保たれる。
マススペクトロメトリー(MS)分析は、LCD、LCisoD、及びLCsucciを含む化学的修飾を特定するために使用される。一態様において、本発明は、MSによって決定されるように、LCD、LCisoD、及びLCsucciの総量のうち、少なくとも50%のLCDを含む医薬組成物を提供する。一実施形態において、本発明は、LCD、LCisoD、及びLCsucciの総量のうち、約60%~約85%のLCDを含む医薬組成物を提供する。一実施形態において、本発明は、有効期限の最初の3ヵ月以内で、LCD、LCisoD、及びLCsucciの総量のうち、約70%~約85%のLCDを含む医薬組成物を提供する。一実施形態において、本発明は、有効期限の12ヵ月、適切には有効期限の18ヵ月、適切には有効期限の24ヵ月後に、LCD、LCisoD、及びLCsucciの総量のうち、約60%~約70%のLCDを含む医薬組成物を提供する。一実施形態において、本発明は、LCDを含む医薬組成物であって、LCD、LCisoD、及びLCsucciの総量に対するLCDの減少パーセンテージは、有効期限の始めから有効期限の終わりまで、約30%以下、20%以下、適切には15%以下であり、有効期限は、12ヵ月、適切には18ヵ月、適切には24ヵ月である、医薬組成物を提供する。一実施形態において、本発明は、LCDを含む医薬組成物であって、LCD、LCisoD、及びLCsucciの総量に対するLCDの減少パーセンテージは、少なくとも約18ヵ月間、約20%以下である、医薬組成物を提供する。適切には、医薬組成物は、約2~約8℃、適切には約5℃に保たれる。医薬組成物が適切なpH範囲を有する場合、上記の変化は、さらに最小限にすることができる。例えば、約5.5~約7.5の間のpH、適切には約5.5~約7の間のpH、適切には約6~約7の間のpH、適切には約6±0.3。適切には、医薬製剤は、約6のpHに保たれる。
一実施形態において、本発明は、MSによって決定されるように、LCD、LCisoD、及びLCsucciの総量のうち、少なくとも10%のLCisoDを含む医薬組成物を提供する。一実施形態において、本発明は、MSによって決定されるように、LCD、LCisoD、及びLCsucciの総量のうち、30%以下のLCisoDを含む医薬組成物を提供する。一実施形態において、本発明は、LCD、LCisoD、及びLCsucciの総量のうち、約10%~約30%のLCisoD、適切には約15%~約25%のLCisoD、適切には約20%~約30%のLCisoDを含む医薬組成物を提供する。一実施形態において、本発明は、有効期限の最初の3ヵ月以内で、LCD、LCisoD、及びLCsucciの総量のうち、約25%未満のLCisoDを含む医薬組成物を提供する。一実施形態において、本発明は、有効期限の12ヵ月、適切には18ヵ月、適切には有効期限の24ヵ月後に、LCD、LCisoD、及びLCsucciの総量のうち、約25%を超えるLCisoDを含む医薬組成物を提供する。一実施形態において、本発明は、LCisoDを含む医薬組成物であって、LCD、LCisoD、及びLCsucciの総量に対するLCisoDの変化パーセンテージは、有効期限の始めから有効期限の終わりまで、約30%以下、20%以下、10%以下、適切には5%以下であり、有効期限は、12ヵ月、適切には18ヵ月の有効期限、適切には24ヵ月である、医薬組成物を提供する。一実施形態において、本発明は、LCisoDを含む医薬組成物であって、LCD、LCisoD、及びLCsucciの総量に対するLCDの変化パーセンテージは、少なくとも約18ヵ月間、約20以下である、医薬組成物を提供する。適切には、医薬組成物は、約2~約8℃、適切には約5℃に保たれる。医薬組成物が適切なpH範囲を有する場合、上記の変化は、さらに最小限にすることができる。例えば、約5.5~約7.5の間のpH、適切には約5.5~約7の間のpH、適切には約6~約7の間のpH、適切には約6±0.3。適切には、医薬製剤は、約6のpHに保たれる。
一実施形態において、本発明は、MSによって決定されるように、LCD、LCisoD、及びLCsucciの総量のうち、少なくとも1%のLCsucciを含む医薬組成物を提供する。一実施形態において、本発明は、MSによって決定されるように、LCD、LCisoD、及びLCsucciの総量のうち、10%以下のLCsucciを含む医薬組成物を提供する。一実施形態において、本発明は、LCD、LCisoD、及びLCsucciの総量のうち、約1%~約10%のLCsucciを含む医薬組成物を提供する。一実施形態において、本発明は、有効期限の最初の3ヵ月以内で、LCD、LCisoD、及びLCsucciの総量のうち、約3%未満のLCsucciを含む医薬組成物を提供する。一実施形態において、本発明は、有効期限の12ヵ月、適切には18ヵ月、適切には24ヵ月後に、LCD、LCisoD、及びLCsucciの総量のうち、約5%を超えるLCsucciを含む医薬組成物を提供する。一実施形態において、本発明は、LCsucciを含む医薬組成物であって、LCD、LCisoD、及びLCsucciの総量に対するLCsucciの変化パーセンテージは、有効期限の始めから有効期限の終わりまで、約20%以下、10%以下、適切には5%以下であり、有効期限は、12ヵ月、適切には18ヵ月、適切には24ヵ月である、医薬組成物を提供する。一実施形態において、本発明は、LCsucciを含む医薬組成物であって、LCD、LCisoD、及びLCsucciの総量に対するLCsucciの変化パーセンテージは、少なくとも約18ヵ月間、約10%以下である、医薬組成物を提供する。適切には、医薬組成物は、約2~約8℃、適切には約5℃に保たれる。医薬組成物が適切なpH範囲を有する場合、上記の変化は、さらに最小限にすることができる。例えば、約5.5~約7.5の間のpH、適切には約5.5~約7の間のpH、適切には約6~約7の間のpH、適切には約6±0.3。適切には、医薬製剤は、約6のpHに保たれる。
一実施形態において、本発明は、MSによって決定されるように、LCD、LCisoD、及びLCsucciの総量のうち、約60%~80%のLCD、約15%~30%のLCisoD、及び約1%~10%のLCsucciを含む医薬組成物を提供する。一実施形態において、本発明は、有効期限の最初の3ヵ月以内で、LCD、LCisoD、及びLCsucciの総量のうち、約70%~80%のLCD、約20%~25%のLCisoD、及び約1%~3%のLCsucciを含む医薬組成物を提供する。一実施形態において、本発明は、有効期限の12ヵ月、適切には18ヵ月、適切には24ヵ月後に、LCD、LCisoD、及びLCsucciの総量のうち、約60%~70%のLCD、約20%~30%のLCisoD、及び約5%~10%のLCsucciを含む医薬組成物を提供する。適切には、医薬組成物は、約2~約8℃、適切には約5℃に保たれる。医薬組成物が適切なpH範囲を有する場合、上記の変化は、さらに最小限にすることができる。例えば、約5.5~約7.5の間のpH、適切には約5.5~約7の間のpH、適切には約6~約7の間のpH、適切には約6±0.3。適切には、医薬製剤は、約6のpHに保たれる。
ゆえに、一実施形態において、本発明の医薬組成物は、緩衝系をさらに含む。
本発明は、有効成分としてクリザンリズマブ又はクリザンリズマブと最大でも3つのアミノ酸の違いを有する抗体並びに緩衝系を含む新規な医薬組成物であって、医薬組成物は、約5.0~7.5、約5.5~7.0、約5.5~7.5、約5.5~7.0、約5.5~6.8、約5.5~6.5、約5.7~6.8、約5.7~6.5、約5.7~6.3、約5.9~6.1、又は約6.0のpH値を有する、医薬組成物を提供する。特定の態様において、pHは、上記に挙げられるpH値の範囲内の任意のpH値;例えば5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、及び6.3である。
本発明での使用に適した緩衝系は、クエン酸、アスコルビン酸、グルコン酸、炭酸、酒石酸、コハク酸、酢酸、又はフタール酸の塩などの有機酸の塩;Tris、トロメタミン塩酸塩、又はリン酸バッファーを含むが、これらに限定されない。好ましくは、緩衝系は、クエン酸バッファー又はリン酸バッファー又はその組み合わせである。加えて、アミノ酸の構成成分、例えばグリシンもまた、緩衝剤として使用することができる。アミノ酸は、そのD-及び/又はL-形態で存在してもよいが、L-形態が典型的である。好ましくは、緩衝系は、アルギニン又はヒスチジンを含まない。
本発明による製剤に使用される適したバッファー系の濃度は、約10mM~約100mM、約10mM~約50mM、又は約10mM~約40mMであり、例えば、バッファー及び製剤の所望の安定性に依存する。好ましい実施形態において、緩衝系は、クエン酸であり、クエン酸は、好ましくは、10~50mM、好ましくは15~40mM、好ましくは20~30mMの濃度で使用される。別の好ましい実施形態において、緩衝系は、リン酸であり、リン酸は、好ましくは、10~50mM、好ましくは15~40mM、好ましい20~30mMの濃度で使用される。一実施形態において、クエン酸又はリン酸バッファーの対イオンは、ナトリウム及び/又はカリウムである。好ましい実施形態において、バッファーは、クエン酸ナトリウムバッファーである。
本発明での使用に適した安定化剤は、例えば、粘度増強剤、可溶化剤、等張化剤(isotonizing agent)、及び/又はその他同種のものとして作用することができる。安定化剤は、イオン性とすることができるが、好ましくは非イオン性である(例えば糖)。糖は、単糖、例えばフラクトース、マルトース、ガラクトース、グルコース、D-マンノース、ソルボース、及びその他同種のもの;二糖、例えばラクトース、スクロース、トレハロース、セロビオース、及びその他同種のもの;多糖、例えばラフィノース、メレジトース、マルトデキストリン、デキストラン、デンプン、及びその他同種のもの;並びにマンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトールソルビトール(グルシトール)、及びその他同種のものなどのアルジトールを含むが、これらに限定されない。糖は、糖アルコール又はアミノ糖であってもよい。好ましくは、糖は、還元糖ではない。還元糖は、すべての単糖、ラクトース、マルトース、及びセロビオースを含むが、これらに限定されない。そのため、糖は、好ましくは非還元糖、例えばスクロース、トレハロース、ラフィノース、ソルビトール、及びマンニトールである。スクロースは、特に有用である。イオン性の安定化剤として、それらは、NaClなどの塩又はアミノ酸の構成成分を含む。好ましくは、安定化剤は、アルギニン又はヒスチジンを含まない。アミノ酸は、そのD-及び/又はL-形態で存在してもよいが、L-形態が典型的である。本発明による製剤は、約50~400mM、約50~300mM、好ましくは180~300mM、最も好ましい約220mMの安定化剤、好ましくはスクロースを含む。
本発明の医薬組成物は、クリザンリズマブ又はクリザンリズマブと最大でも3つのアミノ酸の違いを有する抗体及び緩衝系に加えて、1つ以上の以下のものなどのさらなる構成成分を含んでいてもよい:(i)安定化剤;(ii)界面活性剤;及び(iii)塩。
本発明による適した界面活性剤は、非イオン性界面活性剤であり、ポリソルベート(例えばポリソルベート20又は80);ポロキサマー(例えばポロキサマー188);Triton;オクチルグリコシド;ミリスタミドプロピル-、パルミドプロピル-、又はイソステアラミドプロピル-ジメチルアミン;ポリエチル(polyethyl)グリコール、ポリプロピルグリコール、並びにエチレン及びプロピレングリコールのコポリマー(例えばプルロニック、PF68等)を含むが、これらに限定されない。好ましい実施形態において、界面活性剤は、ポリソルベートであり、好ましくは、ポリソルベート20及びポリソルベート80からなる群から選択される。より好ましくは、界面活性剤は、ポリソルベート80である。
本発明による製剤に使用される界面活性剤、好ましくはポリソルベートの濃度は、製剤の約0.01%~0.1%、好ましくは約0.01%~0.05%、最も好ましくは約0.02%重量体積(weight by volume)(w/v)である。
等張化剤は、本発明による製剤の浸透圧を生理学的に許容される値に調整するのに役立つ。等張化剤は、生理学的に許容される構成成分であり、特に限定されない。等張化剤の典型的な例は、例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、又は塩化カルシウム、及びその他同種のものなどの無機塩である。これらは、単独で又はその混合物で使用することができる。いくつかの作用物質は、2つの役割を有していてもよく、例えば、いくつかの糖又は糖アルコールは、安定化剤及び等張化剤の両方として役立ち得ることに注意するべきである。一実施形態において、等張化剤の濃度は、約50mM~約300mMである。一実施形態において、等張化剤は、塩化ナトリウムである。一実施形態において、塩化ナトリウムは、約100mM~約250mM、特に約190mMの濃度である。
一実施形態において、本発明の医薬組成物中の抗体の濃度は、約1mg/ml~100mg/ml、約5mg/ml~100mg/ml、約5mg/ml~75mg/ml、約5mg/ml~50mg/ml、約5mg/ml~30mg/mlである。一実施形態において、抗体の濃度は、少なくとも5mg/mlである。一実施形態において、抗体の濃度は、少なくとも10mg/mlである。一実施形態において、抗体の濃度は、少なくとも20mg/mlである。一実施形態において、抗体の濃度は、約10mg/mlである。文脈上別段の指示がある場合を除き、本明細書において使用される用語「抗体(antibody)」又はその区別なく使用される用語「抗体(ANTIBODY)」は、UVによって検出することができ、そのため、タンパク質濃度を決定する際に関連する、医薬組成物によって含まれるクリザンリズマブ並びにその任意のバリアント(例えばクリザンリズマブのスクシンイミド形及びイソ-クリザンリズマブ)を含む。
さらに、本発明の医薬組成物は、2~8℃での36週(約9ヵ月)間の保存の後でさえ、総抗体の20%、15%、10%、5%、4%、3%、2%、1%未満しか、例えばSEC-HPLCによって測定されるように、凝集しないように、安定している。好ましくは、2~8℃での36週(約9ヵ月)間の保存の後に、総抗体の2%未満しか凝集しない。
本発明の医薬組成物は、2~8℃での12ヵ月間の保存の後でさえ、総抗体の10%、5%、4%、3%、2%、1%未満しか、例えばSEC-HPLCによって測定されるように、凝集しないほど、安定している。好ましくは、2~8℃での12ヵ月間の保存の後に、総抗体の2%未満しか凝集しない。
本発明の医薬組成物は、2~8℃での15ヵ月間の保存の後でさえ、総抗体の10%、5%、4%、3%、2%、1%未満しか、例えばSEC-HPLCによって測定されるように、凝集しないほど、安定している。好ましくは、2~8℃での15ヵ月間の保存の後に、総抗体の2%未満しか凝集しない。
本発明の医薬組成物は、2~8℃での18ヵ月間の保存の後でさえ、総抗体の10%、5%、4%、3%、2%、1%未満しか、例えばSEC-HPLCによって測定されるように、凝集しないほど、安定している。好ましくは、2~8℃での18ヵ月間の保存の後に、総抗体の2%未満しか凝集しない。
本発明の医薬組成物は、2~8℃での24ヵ月間の保存の後でさえ、総抗体の10%、5%、4%、3%、2%、1%未満しか、例えばSEC-HPLCによって測定されるように、凝集しないほど、安定している。好ましくは、2~8℃での24ヵ月間の保存の後に、総抗体の2%未満しか凝集しない。
本発明の医薬組成物は、25℃での12週(約3ヵ月)間の保存の後でさえ、総抗体の5%、4%、3%、2%、1%未満しか、SEC-HPLCによって測定されるように、凝集しないほど、安定している。好ましくは、25℃での12週(約3ヵ月)間の保存の後に、総抗体の2%未満しか凝集しない。
本発明の医薬組成物は、25℃での6ヵ月間の保存の後でさえ、総抗体の5%、4%、3%、2%、1%未満しか、SEC-HPLCによって測定されるように、凝集しないほど、安定している。好ましくは、25℃での6ヵ月間の保存の後に、総抗体の2%未満しか凝集しない。
本発明の医薬組成物は、40℃での2週間の保存の後でさえ、総抗体の20%、15%、10%、5%、4%、3%、2%、1%未満しか、SEC-HPLCによって測定されるように、凝集しないほど、安定している。好ましくは、40℃での2週間の保存の後に、総抗体の2%未満しか凝集しない。
一態様において、本発明は、
a)約5mg/ml~50mg/mlの濃度で使用されるクリザンリズマブ及びその任意のバリアント又はクリザンリズマブと最大でも3つのアミノ酸の違いを有する抗体及びその任意のバリアント;
b)緩衝系、好ましくはクエン酸(例えばクエン酸ナトリウム)及び/又はリン酸(例えばリン酸カリウム)緩衝系、緩衝系は、好ましくは、約10mM~50mMの濃度で使用されてもよい;及び緩衝系のpHは、5.0~7.5、好ましくは5.5~7.0、好ましくは5.7~6.3の範囲内の任意のpH値である;
c)任意選択で、好ましくは約50mM~300mMの濃度の安定化剤、好ましくはスクロース;
d)任意選択で、好ましくは約0.01%w/v(0.1mg/ml)~0.1%w/v(1mg/ml)の濃度の非イオン性界面活性剤、好ましくはポリソルベート80;並びに
e)任意選択で、好ましくは約50~300mM、より好ましくは約100~250mM、特に約190mMの濃度の等張化剤、好ましくはNaCl
を含む医薬組成物を提供する。
a)約5mg/ml~50mg/mlの濃度で使用されるクリザンリズマブ及びその任意のバリアント又はクリザンリズマブと最大でも3つのアミノ酸の違いを有する抗体及びその任意のバリアント;
b)緩衝系、好ましくはクエン酸(例えばクエン酸ナトリウム)及び/又はリン酸(例えばリン酸カリウム)緩衝系、緩衝系は、好ましくは、約10mM~50mMの濃度で使用されてもよい;及び緩衝系のpHは、5.0~7.5、好ましくは5.5~7.0、好ましくは5.7~6.3の範囲内の任意のpH値である;
c)任意選択で、好ましくは約50mM~300mMの濃度の安定化剤、好ましくはスクロース;
d)任意選択で、好ましくは約0.01%w/v(0.1mg/ml)~0.1%w/v(1mg/ml)の濃度の非イオン性界面活性剤、好ましくはポリソルベート80;並びに
e)任意選択で、好ましくは約50~300mM、より好ましくは約100~250mM、特に約190mMの濃度の等張化剤、好ましくはNaCl
を含む医薬組成物を提供する。
好ましい実施形態において、本発明は、約10mg/mlの濃度のSEG101、約220mMスクロース、約20mMクエン酸、及び約0.02%w/vポリソルベート80を含む製剤であって、製剤のpHは、約6.0、好ましくは5.7~6.3、より好ましくは5.9~6.1、例えば6.0である、製剤を提供する。
一実施形態において、本発明は、例えば上記に記載されるように、クリザンリズマブ、イソ-クリザンリズマブ、及びクリザンリズマブのスクシンイミド形を含む医薬組成物であって、医薬組成物は、約10mg/mlの濃度のクリザンリズマブ、リン酸ナトリウム約25mM、pH約7、塩化ナトリウム約190mM、約0.02%w/vポリソルベート80、及び注射用水を含む製剤ではない、医薬組成物を提供する。
一態様において、本発明は、例えば上記に記載されるように、クリザンリズマブ、イソ-クリザンリズマブ、及びクリザンリズマブのスクシンイミド形を含む医薬組成物であって、医薬組成物は、グリシンを含まない、医薬組成物を提供する。
一態様において、本発明は、例えば上記に記載されるように、クリザンリズマブ、イソ-クリザンリズマブ、及びクリザンリズマブのスクシンイミド形を含む医薬組成物であって、医薬組成物は、リン酸ナトリウムを含まない、医薬組成物を提供する。
一態様において、本発明は、例えば上記に記載されるように、クリザンリズマブ、イソ-クリザンリズマブ、及びクリザンリズマブのスクシンイミド形を含む医薬組成物であって、医薬組成物は、pH=7を有していない、医薬組成物を提供する。
一態様において、本発明は、例えば上記に記載されるように、クリザンリズマブ、イソ-クリザンリズマブ、及びクリザンリズマブのスクシンイミド形並びに少なくとも1つの薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
一態様において、本発明は、例えば上記に記載されるように、クリザンリズマブ、イソ-クリザンリズマブ、及びクリザンリズマブのスクシンイミド形を含む医薬組成物であって、医薬組成物は、スクロースをさらに含む、医薬組成物を提供する。一実施形態において、医薬組成物は、少なくとも50mMのスクロースを含む。
一態様において、本発明は、例えば上記に記載されるように、クリザンリズマブ、イソ-クリザンリズマブ、及びクリザンリズマブのスクシンイミド形を含む医薬組成物であって、クリザンリズマブ、イソ-クリザンリズマブ、及びクリザンリズマブのスクシンイミド形の総量は、約5mM~50mM、適切には5mM~30mM、適切には10mMである、医薬組成物を提供する。
一態様において、本発明は、例えば上記に記載されるように、クリザンリズマブ、イソ-クリザンリズマブ、及びクリザンリズマブのスクシンイミド形を含む医薬組成物であって、医薬組成物は、界面活性剤をさらに含む、医薬組成物を提供する。一実施形態において、界面活性剤は、ポリソルベートである。一実施形態において、界面活性剤は、ポリソルベート80である。一実施形態において、医薬組成物は、少なくとも0.01%の界面活性剤を含む。
一態様において、本発明は、例えば上記に記載されるように、クリザンリズマブ、イソ-クリザンリズマブ、及びクリザンリズマブのスクシンイミド形を含む医薬組成物であって、医薬組成物は、緩衝系をさらに含む、医薬組成物を提供する。一実施形態において、緩衝系は、クエン酸バッファーである。一実施形態において、医薬組成物は、10~50mMのクエン酸バッファーを含む。
好ましい実施形態において、本発明の医薬組成物は、液体形態をしている。より好ましくは、前記組成物は、水性である、すなわち、溶媒は、水である。製薬の使用に適した製剤又は組成物は、無菌、均質、及び/又は等張であってもよい。好ましい実施形態において、本発明の医薬組成物は、ヒトへの静脈内投与に適している。しかしながら、本発明の医薬組成物は、皮下投与に適していなくてもよい。
一実施形態において、液体形態をした本発明の医薬組成物はまた、凍結乾燥にも適している。典型的に、凍結乾燥形態は、液体形態よりも安定しており、保存に好ましい形態であろう。しかしながら、液体形態が、少なくとも12ヵ月、少なくとも18ヵ月、又は少なくとも24ヵ月間、理想的には12ヵ月、18ヵ月、又は24ヵ月間、十分に安定している場合、液体形態は、使用のその利便性から好ましい。
一実施形態において、本発明の医薬組成物は、凍結乾燥形態をしており、クリザンリズマブ又はクリザンリズマブと最大でも3つ、好ましくは2つ、より好ましくは1つだけのアミノ酸の違いを有する抗体、好ましくは、それぞれ配列番号10及び配列番号9の軽鎖及び重鎖アミノ酸配列を有するクリザンリズマブ、並びに配列番号10の32位のアミノ酸であるアスパラギン酸が、イソアスパラギン酸に変わったクリザンリズマブのバリアント(イソ-クリザンリズマブ)を含む。一実施形態において、医薬組成物は、クリザンリズマブのスクシンイミド形をさらに含む。
一実施形態において、凍結乾燥にかけられる液体製剤(凍結乾燥前の製剤)は、さらに緩衝系を含み、医薬組成物は、約5.0~7.5、約5.5~7.5、約5.5~7.0、約5.5~6.8、約5.5~6.5、約5.7~6.8、約5.7~6.5、約5.7~6.3、約5.9~6.1、又は約6.0のpH値を有する。特定の態様において、pHは、上記に挙げられるpH値の範囲内の任意のpH値;例えば5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、及び6.3である。
別の実施形態において、凍結乾燥製剤から溶解した製剤は、約5.5~7.5、約5.5~7.0、約5.5~6.8、約5.5~6.5、約5.7~6.8、約5.7~6.5、約5.7~6.3、約5.9~6.1、又は約6.0のpH値を有する。特定の態様において、pHは、上記に挙げられるpH値の範囲内の任意のpH値;例えば5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、及び6.3である。
一実施形態において、緩衝系は、クエン酸バッファー又はリン酸バッファーである。好ましい実施形態において、緩衝系は、クエン酸であり、クエン酸は、好ましくは、10~50mM、好ましくは15~40mM、好ましい20~30mMの濃度で使用される。別の好ましい実施形態において、緩衝系は、リン酸であり、リン酸は、好ましくは、10~50mM、好ましくは15~40mM、好ましい20~30mMの濃度で使用される。
一実施形態において、凍結乾燥形態をした本発明の医薬組成物は、本出願において前の方で教示されるように、安定化剤、界面活性剤、及び等張化剤を含むが、これらに限定されない賦形剤をさらに含む。一実施形態において、凍結乾燥形態は、安定化剤を含む。好ましくは、安定化剤は、スクロースである。一実施形態において、凍結乾燥前の製剤中のスクロースの濃度は、20~120mg/mlの間、適切には40~100mg/mlの間、適切には60~90mg/mlの間である。
一実施形態において、凍結乾燥形態をした本発明の医薬組成物は、凍結乾燥保護剤(lyoprotectant)をさらに含む。典型的に、凍結乾燥保護剤は、凍結乾燥前の製剤に追加される。凍結乾燥保護剤は、スクロースなどの非晶形又はマンニトールなどの結晶形又はその混合物とすることができる。さらなる凍結乾燥保護剤は、グリシン、ポリエチレングリコール、及びソルビトールを含むが、これらに限定されない。本発明による凍結乾燥前の製剤中の総凍結乾燥保護剤の濃度は、20~150mg/ml、適切には40~120mg/ml、適切には60~120mg/ml、適切には60~100mg/mlである。例えば、40mg/mlのスクロース及び60mg/mlのマンニトールが凍結乾燥前の製剤中にある場合、凍結乾燥前の製剤中の総凍結乾燥保護剤の濃度は、100mg/mlである。二つの機能を有する賦形剤の場合、機能を区別することなく総量を計算に入れる。例えば、凍結乾燥前の製剤が40mg/mlのスクロースを含む場合、凍結乾燥保護剤の濃度は、40mg/mlであり、同時に、安定化剤の濃度も、40mg/mlである。
一実施形態において、凍結乾燥保護剤の少なくとも1つは、スクロースである。一実施形態において、唯一の凍結乾燥保護剤は、スクロースである。
一実施形態において、抗体に対する凍結乾燥保護剤のモル比は、少なくとも300、好ましくは少なくとも500、好ましくは少なくとも600、少なくとも700、少なくとも800、又は少なくとも900である。凍結乾燥保護剤の少なくとも1つがスクロースである場合、抗体に対する凍結乾燥保護剤のモル比は、抗体に対するスクロースのモル比しか指さない。例えば、40mg/mlのスクロース及び60mg/mlのマンニトールを含む凍結乾燥前の製剤において、抗体に対する凍結乾燥保護剤のモル比は、553となり、これは、マンニトールの量を凍結乾燥保護剤として考慮していない。抗体の計算において、メインピークを含むすべてのチャージバリアントを総合し、これを、好ましくはUVによって決定する。例えば、凍結乾燥前の製剤が30mg/mlのSEG101を含有する場合、これは、メインピーク(クリザンリズマブ)を含む総チャージバリアントを指す。
一実施形態において、凍結乾燥前の製剤中の抗体の濃度は、約10mg/ml~100mg/ml、約10mg/ml~70mg/ml、約20mg/ml~70mg/ml、約30mg/ml~50mg/ml、例えば約40mg/mlである。
界面活性剤を使用することにより、溶解したタンパク質の凝集を低下させることができる及び/又は溶解した製剤における粒子の形成を低下させることができる。追加される界面活性剤の量は、溶解したタンパク質の凝集を低下させる及び溶解後の粒子の形成を最小限にするような量である。
界面活性剤は、凍結乾燥前の製剤、凍結乾燥製剤、及び/又は溶解した製剤に、所望される通りに、適切には凍結乾燥前の製剤に、追加することができる。
一実施形態において、界面活性剤は、非イオン性界面活性剤である。一実施形態において、界面活性剤は、ポリソルベート、好ましくはポリソルベート80又はポリソルベート20である。好ましくは、界面活性剤は、0.01%w/v(0.1mg/mL)~0.1%w/v(1mg/mL)、好ましくは0.01%w/v(0.1mg/mL)~0.05%w/v(0.5mg/mL)、好ましくは0.02%w/v(0.2mg/mL)の濃度である。
理想的には、凍結乾燥形態は、室温で保存される。その代わりに、凍結乾燥形態は、2~8℃で保存される。理想的には、凍結乾燥形態は、少なくとも18ヵ月、少なくとも24ヵ月、又は少なくとも36ヵ月の有効期限を有する。理想的には、凍結乾燥形態は、18ヵ月、24ヵ月、又は36ヵ月の有効期限を有する。
凍結乾燥製剤は、患者への投与の直前に、溶解することができる。溶解は、許容される期間内で、典型的に10分未満で達成される。溶解により、凍結乾燥前の製剤と比較して、低い、同じ、又は高い抗体濃度がもたらされるが、一般的に、低い抗体濃度がもたらされる。溶解した製剤は、保存中、溶解から使用までの期間、典型的に数時間、最高で数日、物理的及び化学的安定性及び完全性を本質的に保持する。溶解媒質は、水、すなわち無菌水、静菌性注射用水(BWFI)、又は約50mM~約100mMの量の酢酸、プロピオン酸、コハク酸、塩化ナトリウム、塩化マグネシウム、塩化ナトリウムの酸性溶液、塩化マグネシウムの酸性溶液、及びアルギニンの酸性溶液からなる群から選択される。最も好ましい溶解媒質は、無菌水である。溶解した製剤は、投与前に、注入溶液による、溶解した製剤の希釈によって、必要とされる等張性を達成することができる。
一態様において、本発明は、約5.0~7.5、好ましくは5.5~7.5のpH値を有する水性の製剤を凍結乾燥することによって得ることができる凍結乾燥製剤であって、凍結乾燥製剤は、
a)抗体(クリザンリズマブ及びその任意のバリアント);
b)凍結乾燥保護剤、並びに
c)緩衝系
を含む、凍結乾燥製剤を提供する。
a)抗体(クリザンリズマブ及びその任意のバリアント);
b)凍結乾燥保護剤、並びに
c)緩衝系
を含む、凍結乾燥製剤を提供する。
一実施形態において、凍結乾燥製剤は、界面活性剤、好ましくはポリソルベート40又はポリソルベート80をさらに含む。好ましくは、界面活性剤は、約0.01%w/v(0.1mg/mL)~0.1%w/v(1mg/mL)の濃度で水性の製剤中に存在する。
一実施形態において、抗体は、約10mg/mL~100mg/mLの濃度で水性の製剤中に存在する。
一実施形態において、緩衝系は、クエン酸、例えばクエン酸ナトリウムである。好ましくは、緩衝系は、約10mM~50mMの濃度で水性の製剤中に存在する。
一実施形態において、凍結乾燥保護剤は、スクロース、マンニトール、又はその混合物である。好ましくは、凍結乾燥保護剤は、約10mg/mL~100mg/mLの濃度で水性の製剤中に存在する。
一実施形態において、抗体に対する凍結乾燥保護剤、好ましくはスクロースのモル比は、約200~1500である。
一実施形態において、本発明は、凍結乾燥製剤の総重量に基づいて
a)約25~40w/w%、好ましくは約28%~32w/w%の抗体;及び
b)約55%~75w/w%、好ましくは約65%~71w/w%のスクロース
を含む凍結乾燥製剤を提供する。
a)約25~40w/w%、好ましくは約28%~32w/w%の抗体;及び
b)約55%~75w/w%、好ましくは約65%~71w/w%のスクロース
を含む凍結乾燥製剤を提供する。
一実施形態において、凍結乾燥製剤は、水性の製剤を凍結乾燥することから得ることができ、水性の製剤は、約5.7~6.3のpHを有し、
a)約30mg/mL~約50mg/mLの濃度のクリザンリズマブ及びその任意のバリアント;
b)約10mg/mL~100mg/mLの濃度のスクロース;
c)任意選択で、最高100mg/mLの濃度のマンニトール;
d)約20mMの濃度のクエン酸(例えばクエン酸ナトリウム);並びに
e)約0.02%w/v(0.2mg/mL)の濃度のポリソルベート80
を含む。
a)約30mg/mL~約50mg/mLの濃度のクリザンリズマブ及びその任意のバリアント;
b)約10mg/mL~100mg/mLの濃度のスクロース;
c)任意選択で、最高100mg/mLの濃度のマンニトール;
d)約20mMの濃度のクエン酸(例えばクエン酸ナトリウム);並びに
e)約0.02%w/v(0.2mg/mL)の濃度のポリソルベート80
を含む。
一実施形態において、凍結乾燥製剤は、水性の製剤を凍結乾燥することから得ることができ、水性の製剤は、約5.7~6.3のpH、好ましくは約pH6.0を有し、
a)約30mg/mLの濃度のクリザンリズマブ及びその任意のバリアント;
b)約90mg/mLの濃度のスクロース;
c)約20mMの濃度のクエン酸(例えばクエン酸ナトリウム);並びに
d)約0.02%w/v(0.2mg/mL)の濃度のポリソルベート80
を含む。
a)約30mg/mLの濃度のクリザンリズマブ及びその任意のバリアント;
b)約90mg/mLの濃度のスクロース;
c)約20mMの濃度のクエン酸(例えばクエン酸ナトリウム);並びに
d)約0.02%w/v(0.2mg/mL)の濃度のポリソルベート80
を含む。
一実施形態において、凍結乾燥製剤は、水性の製剤を凍結乾燥することから得ることができ、水性の製剤は、約5.7~6.3のpH、好ましくは約pH6.0を有し、
a)約40mg/mLの濃度のクリザンリズマブ及びその任意のバリアント;
b)約90mg/mLの濃度のスクロース;
c)約20mMの濃度のクエン酸(例えばクエン酸ナトリウム);並びに
d)約0.02%w/v(0.2mg/mL)の濃度のポリソルベート80
を含む。
a)約40mg/mLの濃度のクリザンリズマブ及びその任意のバリアント;
b)約90mg/mLの濃度のスクロース;
c)約20mMの濃度のクエン酸(例えばクエン酸ナトリウム);並びに
d)約0.02%w/v(0.2mg/mL)の濃度のポリソルベート80
を含む。
一実施形態において、凍結乾燥製剤は、水性の製剤を凍結乾燥することから得ることができ、水性の製剤は、約5.7~6.3のpH、好ましくは約pH6.0を有し、
a)約50mg/mLの濃度のクリザンリズマブ及びその任意のバリアント;
b)約40mg/mLの濃度のスクロース;
c)約20mMの濃度のクエン酸(例えばクエン酸ナトリウム);並びに
d)約0.02%w/v(0.2mg/mL)の濃度のポリソルベート80
を含む。
a)約50mg/mLの濃度のクリザンリズマブ及びその任意のバリアント;
b)約40mg/mLの濃度のスクロース;
c)約20mMの濃度のクエン酸(例えばクエン酸ナトリウム);並びに
d)約0.02%w/v(0.2mg/mL)の濃度のポリソルベート80
を含む。
一実施形態において、凍結乾燥製剤は、水性の製剤を凍結乾燥することから得ることができ、水性の製剤は、約5.7~6.3のpH、好ましくは約pH6.0を有し、
a)約30mg/mLの濃度のクリザンリズマブ及びその任意のバリアント;
b)約20mg/mLの濃度のスクロース;
c)約40mg/mLの濃度のマンニトール;
d)約20mMの濃度のクエン酸(例えばクエン酸ナトリウム);並びに
e)約0.02%w/v(0.2mg/mL)の濃度のポリソルベート80
を含む。
a)約30mg/mLの濃度のクリザンリズマブ及びその任意のバリアント;
b)約20mg/mLの濃度のスクロース;
c)約40mg/mLの濃度のマンニトール;
d)約20mMの濃度のクエン酸(例えばクエン酸ナトリウム);並びに
e)約0.02%w/v(0.2mg/mL)の濃度のポリソルベート80
を含む。
一実施形態において、凍結乾燥製剤は、水性の製剤を凍結乾燥することから得ることができ、水性の製剤は、約5.7~6.3のpH、好ましくは約pH6.0を有し、
a)約30mg/mLの濃度のクリザンリズマブ及びその任意のバリアント;
b)約40mg/mLの濃度のスクロース;
c)約80mg/mLの濃度のマンニトール;
d)約20mMの濃度のクエン酸(例えばクエン酸ナトリウム);並びに
e)約0.02%w/v(0.2mg/mL)の濃度のポリソルベート80
を含む。
a)約30mg/mLの濃度のクリザンリズマブ及びその任意のバリアント;
b)約40mg/mLの濃度のスクロース;
c)約80mg/mLの濃度のマンニトール;
d)約20mMの濃度のクエン酸(例えばクエン酸ナトリウム);並びに
e)約0.02%w/v(0.2mg/mL)の濃度のポリソルベート80
を含む。
一実施形態において、凍結乾燥製剤は、水性の製剤を凍結乾燥することから得ることができ、水性の製剤は、約5.7~6.3のpH、好ましくは約pH6.0を有し、
a)約30mg/mLの濃度のクリザンリズマブ及びその任意のバリアント;
b)約40mg/mLの濃度のスクロース;
c)約60mg/mLの濃度のマンニトール;
d)約20mMの濃度のクエン酸(例えばクエン酸ナトリウム);並びに
e)約0.02%w/v(0.2mg/mL)の濃度のポリソルベート80
を含む。
a)約30mg/mLの濃度のクリザンリズマブ及びその任意のバリアント;
b)約40mg/mLの濃度のスクロース;
c)約60mg/mLの濃度のマンニトール;
d)約20mMの濃度のクエン酸(例えばクエン酸ナトリウム);並びに
e)約0.02%w/v(0.2mg/mL)の濃度のポリソルベート80
を含む。
一態様において、本発明は、上記に記載されるように、凍結乾燥製剤を溶解することによって得られる液体医薬組成物を提供する。
保存時間の間、安定している抗体製剤を提供することが、本発明の目的である。本発明によれば、安定した製剤は、その中の抗体が、保存中、その力価並びに物理的及び化学的安定性及び完全性を本質的に保持する製剤である。抗体製剤の安定性は、生物学的活性アッセイを使用して測定されてもよい。好ましくは、抗体の活性における低下は、開始時刻(すなわちT=0)と比較して、24若しくは36週間又は12ヵ月、15ヵ月、18ヵ月、若しくは24ヵ月間の長期的な保存条件(2~8℃)において、保存中、20%未満、より好ましくは15%未満、より好ましくは10%未満、より好ましくは5%未満である。SEG101について、生物学的活性は、ヒトP-セレクチンを発現する細胞の、そのリガンドPSGL-1との、例えば、それらの表面にヒトP-セレクチンを提示するように組換え修飾された哺乳動物細胞の、組換えヒトPSGL-1との相互作用を阻害するその能力に基づいて決定される。適切には、生物学的活性は、マイクロタイタープレートからの蛍光シグナルを測定することによって決定され、ウェルは、PSGL-1により最初にコーティングし、次いで、表面にヒトP-セレクションを発現する哺乳動物細胞と、細胞を蛍光標識した後にインキュベートし、本発明の医薬組成物中に含まれるSEG101とインキュベートする。SEG101又はそのバリアントの生物学的活性を測定するための適した方法は、実施例2.1において実証される。
一実施形態において、本発明の医薬組成物は、上記に記載されるように、長期の保存の間に、検出不可能な抗体凝集又は非常に低いレベルの抗体凝集のみ呈する。好ましい実施形態において、製剤中の抗体分子の少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、又は少なくとも99%は、6週間、12週間、24週間、36週間、48週間、1年間、又は18ヵ月間若しくは24ヵ月間の2~8℃での保存の後に、例えばサイズ排除クロマトグラフィー(SEC)によって決定されるように、モノマーとして存在する。最も好ましくは、製剤中の抗体分子の少なくとも97%は、36週間又は1年間、18ヵ月間、若しくは24ヵ月間の2~8℃での保存の後に、モノマーとして存在する。好ましくは、SECは、実施例3において記載されるように実行される。
好ましくは、液体抗体製剤は、6ヵ月以上の有効期限を呈するべきである。本発明の医薬組成物は、好ましくは2~8℃に保たれた場合に、少なくとも9ヵ月、例えば9ヵ月、少なくとも1年、例えば1年、少なくとも18ヵ月、例えば18ヵ月、又は最高2年、例えば24ヵ月の有効期限を呈する。好ましくは、医薬組成物は、約12ヵ月、18ヵ月、又は適切には24ヵ月の有効期限を呈する。有効期限を決定するメインの要因は、普通、副産物及び分解産物の形成並びに生理活性の損失である。その有効期限の間に、クリザンリズマブの生物学的活性は、元々の活性の80%~125%の間に留まるべきである。本発明の製剤は、これらの所望される安定性のレベルを達成する。
抗P-セレクチン抗体
ヒトP-セレクチンに対する抗体は、例えば国際公開第2008/069999号パンフレットから知られており、それぞれ配列番号1、2、及び3の重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3並びに配列番号4、5、及び6の軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3を含むことによって特徴づけられる抗体を含む。ヒトP-セレクチンに対する抗体はまた、配列番号7のアミノ酸配列を有するVHドメイン及び配列番号8のアミノ酸配列を有するVLドメインを含むことによって特徴づけられてもよい。特に、SEG101は、配列番号9の重鎖及び配列番号10の軽鎖を含む、P-セレクチンに対するヒト化モノクローナル抗体である。抗体は、高い親和性及び特異性で、P-セレクチンのアミノ末端に位置するレクチン結合ドメインに結合し、P-セレクチンの、その受容体P-セレクチングリコプロテインリガンド-1(PSGL-1)との相互作用をブロックする。
ヒトP-セレクチンに対する抗体は、例えば国際公開第2008/069999号パンフレットから知られており、それぞれ配列番号1、2、及び3の重鎖CDR1、CDR2、及びCDR3並びに配列番号4、5、及び6の軽鎖CDR1、CDR2、及びCDR3を含むことによって特徴づけられる抗体を含む。ヒトP-セレクチンに対する抗体はまた、配列番号7のアミノ酸配列を有するVHドメイン及び配列番号8のアミノ酸配列を有するVLドメインを含むことによって特徴づけられてもよい。特に、SEG101は、配列番号9の重鎖及び配列番号10の軽鎖を含む、P-セレクチンに対するヒト化モノクローナル抗体である。抗体は、高い親和性及び特異性で、P-セレクチンのアミノ末端に位置するレクチン結合ドメインに結合し、P-セレクチンの、その受容体P-セレクチングリコプロテインリガンド-1(PSGL-1)との相互作用をブロックする。
クリザンリズマブは、ヒトP-セレクチンに対するヒト化モノクローナル抗体であり、これもまた、参考文献国際公開第2018/083645A1号パンフレットにおいて記載される。クリザンリズマブは、配列番号9の重鎖及び配列番号10の軽鎖を含むことによって特徴づけられる。表1は、SEG101の配列の特徴を要約する。
標的疾患及び障害
本発明の医薬組成物は、種々の疾患又は障害を治療する、回復させる又は、予防するために使用することができる。本発明の医薬組成物は、特に、P-セレクチン媒介性又はP-セレクチン関連障害を治療するのに、特に、鎌状赤血球症と関連する血管閉塞(vaso-occlusion)、炎症、及び疼痛発作を低下させる又は排除するのに有用である;例えば国際公開第2018/083645A1号パンフレット及び国際公開第2008/069999A2号パンフレットを参照されたい。
本発明の医薬組成物は、種々の疾患又は障害を治療する、回復させる又は、予防するために使用することができる。本発明の医薬組成物は、特に、P-セレクチン媒介性又はP-セレクチン関連障害を治療するのに、特に、鎌状赤血球症と関連する血管閉塞(vaso-occlusion)、炎症、及び疼痛発作を低下させる又は排除するのに有用である;例えば国際公開第2018/083645A1号パンフレット及び国際公開第2008/069999A2号パンフレットを参照されたい。
本発明に関して、用語「P-セレクチン媒介性障害」又は「P-セレクチン関連障害」は、P-セレクチン/PSGL-1複合体のレベルの増加と関連する又はそれによって特徴づけられる障害を指す。抗P-セレクチン抗体又はその結合断片は、P-セレクチン/PSGL-1複合体の形成を低下させる能力を有することができる。それらはまた、あらかじめ形成されたP-セレクチン/PSGL-1複合体を解離させる能力を有していてもよい。従って、抗P-セレクチン抗体又はその結合断片を含む本発明の医薬組成物の使用は、新たなP-セレクチン/PSGL-1複合体の形成を阻害することによる、P-セレクチン媒介性疾患の予防を可能にすることが十分に理解されるであろう。前記製剤の使用は、あらかじめ形成されたP-セレクチン/PSGL-1複合体を解離させることによって、既存のP-セレクチン媒介性障害の治療を可能にすることもまた、十分に理解されるであろう。適切には、P-セレクチン/PSGL-1複合体の形成における低下及びこのような複合体の解離は、細胞間相互作用の間に生じる。そのため、適切には、本明細書において記載される抗P-セレクチン抗体又はその結合断片によって予防される障害は、細胞間相互作用におけるP-セレクチン/PSGL-1複合体のレベルの増加と関連する障害である。
P-セレクチン/PSGL-1複合体のレベルの増加は、幅広い障害及び/又は症状において観察されてもよい。特に、それらは、炎症性及び/又は血栓性障害及び/又は症状を有する対象又は対象由来のサンプルにおいて観察される。ゆえに、抗P-セレクチン抗体又はその結合断片を含む本発明の医薬組成物は、以下からなる群から選択される炎症性及び/又は血栓性障害などの障害を治療するために使用されてもよい:鎌状赤血球症、鎌状赤血球疼痛発作、関節炎(例えば、関節リウマチ、変形性関節症、及び乾癬性関節炎)、移植片拒絶、移植片対宿主病、喘息、慢性閉塞性肺疾患、乾癬、皮膚炎、敗血症、腎炎、エリテマトーデス、強皮症、鼻炎、アナフィラキシー、糖尿病、多発性硬化症、アテローム性動脈硬化症、血栓症、腫瘍転移、アレルギー反応、甲状腺炎、虚血再灌流傷害(例えば心筋梗塞、脳卒中、又は臓器移植による)、癌(例えば、多発性骨髄腫)、並びに広範囲にわたる外傷と関連する状態又は例えば結核菌(Tubercle bacilli)による感染と関連する、例えばIV型遅延型過敏症などの慢性炎症又は全身性炎症性反応症候群(systematic inflammatory response syndrome)又は多臓器不全。
鎌状赤血球疼痛発作は、鎌状赤血球症を有する対象が経験するかもしれない。抗P-セレクチン抗体又はその結合断片を含む本発明の医薬組成物は、対象における鎌状赤血球症における血管閉塞性疼痛発作を治療する及び予防することにおいて、特定の有用性を有していてもよい。適切には、鎌状赤血球症を有する対象は、以下からなる群から選択される遺伝子型を有する:HbSS、HbSC、HbSβ0-サラセミア、及びHbSβ0+サラセミア。
患者投与
P-セレクチン媒介性疾患又は病状の治療のための本発明の製剤の使用を提供することが、本発明の目的である。本発明は、P-セレクチン媒介性疾患又は病状、適切には鎌状赤血球症を治療するための方法であって、その必要がある対象に本発明の医薬組成物を投与するステップを含む方法を提供する。本発明の医薬組成物は、P-セレクチン媒介性疾患又は病状、例えば炎症性及び血栓性疾患、腫瘍転移の予防及び治療に並びに特に、鎌状赤血球症と関連する血管閉塞、炎症、及び疼痛発作を、好ましくは、国際公開第2018/083645A1号パンフレットの13頁、第3段落から19頁、第3段落において記載される投薬法により低下させる又は排除するのに有用であり、前記頁は、ここに、参照によって援用される。本発明の製剤は、単独の治療として又は本明細書において前に記載される状態を治療するのに有用な他の薬剤若しくは療法と併せて投与されてもよい。
P-セレクチン媒介性疾患又は病状の治療のための本発明の製剤の使用を提供することが、本発明の目的である。本発明は、P-セレクチン媒介性疾患又は病状、適切には鎌状赤血球症を治療するための方法であって、その必要がある対象に本発明の医薬組成物を投与するステップを含む方法を提供する。本発明の医薬組成物は、P-セレクチン媒介性疾患又は病状、例えば炎症性及び血栓性疾患、腫瘍転移の予防及び治療に並びに特に、鎌状赤血球症と関連する血管閉塞、炎症、及び疼痛発作を、好ましくは、国際公開第2018/083645A1号パンフレットの13頁、第3段落から19頁、第3段落において記載される投薬法により低下させる又は排除するのに有用であり、前記頁は、ここに、参照によって援用される。本発明の製剤は、単独の治療として又は本明細書において前に記載される状態を治療するのに有用な他の薬剤若しくは療法と併せて投与されてもよい。
一態様において、本発明は、P-セレクチン媒介性疾患又は病状の治療及び/又は予防において、例えば鎌状赤血球疼痛発作の予防において使用するための医薬組成物であって、前記組成物は、最初に、導入期において提供され、この間、対象は、5mg/kg~7.5mg/kgの量で、抗体の2回の導入用量を受け、2回の導入用量の間の時間間隔は、2週間(+/ー3日)であり、次いで、維持期においてさらに、提供され、この間、対象は、5mg/kg~7.5mg/kgの量で、抗体の複数回の維持用量を受け、複数回の維持用量の間の時間間隔は、4週間である、医薬組成物に関する。
一態様において、本発明の医薬組成物は、バイアル中にある。
一態様において、本発明の医薬組成物は、典型的に、注入を行う、等張溶液(例えば0.9%NaCl又は5%ブドウ糖)を充填した注入容器(例えばプラスチックで作製された注入バッグ)にシリンジを介して医薬組成物を移すことによって、静脈内ルートによって患者に投与される。
一実施形態において、本発明の医薬組成物は、対象、典型的に、健康なボランティア又は患者に、好ましくは静脈内ルートによって、好ましくは5mg/kgの量で、好ましくは、2週間間隔の2回の導入用量、その後に続く4週間毎の複数回の維持用量で、投与される。一実施形態において、血清中のクリザンリズマブ及びその任意のバリアントの濃度は、決定され、以下のPKパラメーターの1つ以上又はすべては、満たされる:
a)前記医薬組成物の投与後の、1.5~2.5h、好ましくは1.92hの好ましい中央値を有する、0.4~10時間(h)、好ましくは0.55h~6.25hの範囲のtmax;
b)最初の用量後、116±91.3μg/mL;又は好ましくは、定常状態で、50~200μg/mL、好ましくは124±31.6μg/mLの範囲のCmax;
c)100h~300hの範囲の、好ましくは150h~210hの範囲の、例えば約183h(7.6日)の見かけのt1/2;
d)10000~30000μg×h/mLの範囲の、好ましくは15週目に20400μg×h/mLの、好ましくは23.5%の変動係数を有するAUCtau,ss。「tau」は、ここで、投薬間隔を指し、従って、AUCtau、定常状態(ss)は、15週目1日目の注入の始まりから19週目の日の注入の直前までのAUCである;
e)10~30mL/h、好ましくは15~20mL/hの範囲の、例えば約17.2mL/hの、SCD及び典型的に70kgの体重を有する患者における、定常状態15週目の平均クリアランス;
f)約3.78μg/mL~9.8μg/mLの範囲の、定常状態において4週間毎に、とりわけ7週目~27週目に得られるPKトラフ濃度。加えて、前回の注入の2週間後の3週目に、トラフ濃度は、約12μg/mL~約24μg/mL、好ましくは約15μg/mL~約21μg/mL、好ましくは約18.2μg/mLとなる。
a)前記医薬組成物の投与後の、1.5~2.5h、好ましくは1.92hの好ましい中央値を有する、0.4~10時間(h)、好ましくは0.55h~6.25hの範囲のtmax;
b)最初の用量後、116±91.3μg/mL;又は好ましくは、定常状態で、50~200μg/mL、好ましくは124±31.6μg/mLの範囲のCmax;
c)100h~300hの範囲の、好ましくは150h~210hの範囲の、例えば約183h(7.6日)の見かけのt1/2;
d)10000~30000μg×h/mLの範囲の、好ましくは15週目に20400μg×h/mLの、好ましくは23.5%の変動係数を有するAUCtau,ss。「tau」は、ここで、投薬間隔を指し、従って、AUCtau、定常状態(ss)は、15週目1日目の注入の始まりから19週目の日の注入の直前までのAUCである;
e)10~30mL/h、好ましくは15~20mL/hの範囲の、例えば約17.2mL/hの、SCD及び典型的に70kgの体重を有する患者における、定常状態15週目の平均クリアランス;
f)約3.78μg/mL~9.8μg/mLの範囲の、定常状態において4週間毎に、とりわけ7週目~27週目に得られるPKトラフ濃度。加えて、前回の注入の2週間後の3週目に、トラフ濃度は、約12μg/mL~約24μg/mL、好ましくは約15μg/mL~約21μg/mL、好ましくは約18.2μg/mLとなる。
血清中のクリザンリズマブ及びそのバリアントの濃度は、典型的にエクスビボにおいて、典型的にELISAによって、典型的に、ベイトとしてP-セレクチンを使用して決定される。それゆえに、方法は、P-セレクチンに結合することが可能であり、好ましくは、アッセイにおいて使用される抗ヒトIgG抗体がさらに結合することができるすべての血清クリザンリズマブ及びそのバリアントを測定する。
典型的に、サンドイッチELISAは、ヒト血清中のクリザンリズマブ及びその任意のバリアントを検出するために使用される。高結合能のイムノプレートを、マウス抗ヒトP-セレクチン抗体によりコーティングした。プレートを、次いで、ヒトP-セレクチンによりコーティングした。定量化したクリザンリズマブ及びその任意のバリアントを、標準物質及び品質管理(QC)サンプルを調製するために使用し、次いで、指定されたサンプルウェルに追加した。結合したクリザンリズマブの量は、ビオチン化ヤギ抗ヒトIgG、ホースラディッシュペルオキシダーゼに共有結合されたストレプトアビジンタンパク質(ストレプトアビジン-HRP)、及び発色基質、テトラメチルベンジジン(TMB)の続く追加によって視覚化し、この反応の産物は、分光光度計により450nmで検出した。血清サンプル中のクリザンリズマブ及びそのバリアントの濃度は、標準検量線から逆算する。
一実施形態において、本発明の医薬組成物は、対象、典型的に、健康なボランティア又は患者に、好ましくは静脈内ルートによって、好ましくは5mg/kgの量で、好ましくは、2週間間隔の2回の導入用量、その後に続く4週間毎の複数回の維持用量で、投与され、血清中のクリザンリズマブ及びそのバリアントは、典型的に、表面プラズモン共鳴(SPR)アッセイによって決定される、PSGL-1へのP-セレクチンの結合の、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも95%の阻害を達成する。
表面プラズモン共鳴(SPR)アッセイは、インビトロ結合競合アッセイである。クリザンリズマブ及びその任意のバリアントの非存在下において、P-セレクチンのその標的PSGL-1への結合は、定量化可能なシグナルを産出し、100%として設定される。例えば本発明の製薬組成物を追加することによる又は本発明の製薬組成物を受けたヒト対象から得られる血清を追加することによるクリザンリズマブ及びその任意のバリアントの追加は、P-セレクチンのPSGL-1への結合を阻害し、シグナルの低下をもたらし、これを、阻害のパーセンテージとして計算することができる。
SPRアッセイの一実施形態において、P-セレクチンは、免疫グロブリンに融合されたP-セレクチン(PSel-Ig)によって置換され、PSGL-1は、PSel-Igに結合することがなお可能なPSGL-1の最小限のペプチドバージョンに相当するグリコスルホペプチド(glycosulfopeptide)6(GSP6)によって置換される。
さらなるSPRの実施形態は、実施例6において詳細に説明される。
一態様において、本発明の医薬組成物は、クリザンリズマブ及びイソ-クリザンリズマブを含み、医薬組成物を使用することによって決定されるIC50は、約4~7μg/ml、典型的に約4.6~6.2μg/ml、典型的に約5.0~5.7μg/mlの範囲、典型的に約5.2μg/mlである。一実施形態において、IC50は、インビトロアッセイにおいて決定される。
実施例1:SEG101の液体製剤の調製
SEG101は、例えば、国際公開第2008/069999号パンフレットの15頁、20行目~18頁、29行目において記載される方法によって産生することができ、これらの頁は、参照によって本明細書において援用される。表2は、SEG101に対するそれらの適合性について試験した製剤を示す。サンプルB及びC並びにサンプルF及びGは、それぞれ、製剤内のばらつきを判定するために同一とする。
SEG101は、例えば、国際公開第2008/069999号パンフレットの15頁、20行目~18頁、29行目において記載される方法によって産生することができ、これらの頁は、参照によって本明細書において援用される。表2は、SEG101に対するそれらの適合性について試験した製剤を示す。サンプルB及びC並びにサンプルF及びGは、それぞれ、製剤内のばらつきを判定するために同一とする。
1 結果
1.1 力価アッセイ
すべてのサンプルについて、ELISA及び細胞ベースのアッセイによって測定する力価は、予想される範囲内での安定性についての研究に着手した時のものとした。ELISAの通例の基準は、参照物質と比較して、80%~125%の相対的生物学的活性であった。
1.1 力価アッセイ
すべてのサンプルについて、ELISA及び細胞ベースのアッセイによって測定する力価は、予想される範囲内での安定性についての研究に着手した時のものとした。ELISAの通例の基準は、参照物質と比較して、80%~125%の相対的生物学的活性であった。
結合ELISAによる力価アッセイは、サンプル又は安定性について測定した時点のいずれについても重要な変化を示さなかった(表3)。細胞ベースのアッセイ(表4)において、力価の著しい低下は、すべてのヒスチジン及び/又はアルギニン含有サンプル(表3)について40℃/2週間並びに25℃/12週間で観察された。リン酸又はクエン酸バッファー中のサンプルは、力価におけるこのような低下を示さなかった。
製剤Kについての別個の実験において、力価を、様々な時点において、ELISA及び細胞ベースのアッセイによって(他の製剤と同じ方法を使用して)測定した(表5)。
サンプルは、密封したバイアル中に保った。バイアルの外側の湿度は、実際には、薬剤の安定性にとって重要ではない。
1.2 CZEによるチャージバリアント
長期的な保存条件(2~8℃)では、チャージバリアントプロファイルにおける徐々の変化は、非常に限られたものしかなかった。しかしながら、変化は、温度を上げた(25℃)及びストレスがかかる(40℃)条件では、非常に明白である。
長期的な保存条件(2~8℃)では、チャージバリアントプロファイルにおける徐々の変化は、非常に限られたものしかなかった。しかしながら、変化は、温度を上げた(25℃)及びストレスがかかる(40℃)条件では、非常に明白である。
1.2.1 分解過程に対するpH値の影響
CZEメインピークにおける変化は、主に、温度によって引き起こされるように思われ、重要な違いは、pH6.0及びpH7.0の設定点の間では観察されない(図1、表6)。
CZEメインピークにおける変化は、主に、温度によって引き起こされるように思われ、重要な違いは、pH6.0及びpH7.0の設定点の間では観察されない(図1、表6)。
出発物質と比較して、塩基性バリアントは、pH6.0で増加したが、pH7.0では、徐々に減少することが、観察される(図2、表7)。pH6.0の2~8℃では、塩基性ピークのレベルは、ほぼ一定のままであったが、2~8℃のpH7.0では、遅いが一定の減少が、観察された。温度を上げた条件(25℃)では、pH6.0及び7.0の両方で、プラトーに達するように思われる。
塩基性ピークのpH依存性の様々な発生とは対照的に、酸性バリアントは、出発物質と比較して、両方のpH値で徐々に増加する(図3)。pH7.0では、酸性バリアントの相対的ピーク面積において観察される増加は、すべての温度で、pH6.0と比較して量が約2倍である。さらにまた、pH6.0では、酸性バリアントにおける非常に小さな増加のみ、2~8℃で検出可能である。
そのため、pH6.0の製剤は、長い間にわたって、チャージバリアントプロファイルにおける絶対的な変化をそれほど示さず、pH7.0の製剤と比較して、保存の間に、よりむらのない製品品質を提供すると結論づけることができる。
製剤Kについての別個の実験において、チャージ不均一性を、様々な時点において、CZEによって(他の製剤と同じ方法を使用して)測定した(表9)。
1.3 サイズ排除クロマトグラフィー(SEC)による純度
すべての試験した条件で、凝集体のレベルは、pH6.0の製剤で1.5%~2%であり、pH7.0の10mg/mLの製剤で2%~2.5%である(図4、表10~12)。凝集体のレベルにおいて重要な変化は、観察されない。断片は、およそ0.1%の分量で存在する。モノマーのピークは、>96%であり、また、保存時間にわたってほとんど変化を示さない。pH7.0の50mg/mL製剤は、保存時間にわたって、まぎれもなくより高い凝集体レベルを示し、ストレスがかかっている条件では最高約4%に至る。
すべての試験した条件で、凝集体のレベルは、pH6.0の製剤で1.5%~2%であり、pH7.0の10mg/mLの製剤で2%~2.5%である(図4、表10~12)。凝集体のレベルにおいて重要な変化は、観察されない。断片は、およそ0.1%の分量で存在する。モノマーのピークは、>96%であり、また、保存時間にわたってほとんど変化を示さない。pH7.0の50mg/mL製剤は、保存時間にわたって、まぎれもなくより高い凝集体レベルを示し、ストレスがかかっている条件では最高約4%に至る。
製剤Kについての別個の実験において、純度を、様々な時点において、SECによって(他の製剤と同じ方法を使用して)測定した(表13)。
実施例2:SEG101の生理活性を測定するためのアッセイ
2.1 ELISA
ELISAにおいて、SEG101サンプルの力価及び同一性は、組換えヒトP-セレクチンに結合するそれらの能力に基づいて測定する。ELISAプレートを、組換えヒトP-セレクチンによりコーティングし、段階的な量のSEG101を追加する。結合したSEG101は、ホースラディッシュペルオキシダーゼにつながれた抗ヒトIgG抗体を使用し、その後に続く比色基質の追加によって、定量化する。比色反応の結果は、光吸収によって測定する。SEG101試験サンプルの力価は、P-セレクチンに結合するその能力を、SEG101参照標準と比較することによって、定量化する。サンプル及び標準物質は、タンパク質含有量に基づいて標準化する。相対的な力価は、欧州薬局方に従って平行線定量法を使用して計算する。最終的な結果は、参照標準と比較した、サンプルの相対的な力価として(パーセントで)表す。
2.1 ELISA
ELISAにおいて、SEG101サンプルの力価及び同一性は、組換えヒトP-セレクチンに結合するそれらの能力に基づいて測定する。ELISAプレートを、組換えヒトP-セレクチンによりコーティングし、段階的な量のSEG101を追加する。結合したSEG101は、ホースラディッシュペルオキシダーゼにつながれた抗ヒトIgG抗体を使用し、その後に続く比色基質の追加によって、定量化する。比色反応の結果は、光吸収によって測定する。SEG101試験サンプルの力価は、P-セレクチンに結合するその能力を、SEG101参照標準と比較することによって、定量化する。サンプル及び標準物質は、タンパク質含有量に基づいて標準化する。相対的な力価は、欧州薬局方に従って平行線定量法を使用して計算する。最終的な結果は、参照標準と比較した、サンプルの相対的な力価として(パーセントで)表す。
2.2 細胞ベースのアッセイ-P-セレクチン発現Raji細胞のPSGL-1への付着の阻害
V底マイクロタイタープレートを、組換えヒトPSGL-1によりコーティングし、次いで、段階的な量のSEG101を追加する。表面にヒトP-セレクチンを提示するように組換え修飾したRaji細胞を、蛍光標識し、プレートに追加する。インキュベーション後、プレートを、遠心分離すると、非付着細胞は、V字形のウェルの底に蓄積し、非付着細胞を蛍光リーダーを使用して測定する。SEG101試験サンプルの力価は、P-セレクチン発現Raji細胞のPSGL-1への付着を阻害するその能力をSEG101参照標準と比較することによって定量化する。サンプル及び標準物質は、タンパク質含有量に基づいて標準化する。相対的な力価は、欧州薬局方に従って平行線定量法を使用して計算する。最終的な結果は、参照標準と比較した、サンプルの相対的な力価として(パーセントで)表す。
V底マイクロタイタープレートを、組換えヒトPSGL-1によりコーティングし、次いで、段階的な量のSEG101を追加する。表面にヒトP-セレクチンを提示するように組換え修飾したRaji細胞を、蛍光標識し、プレートに追加する。インキュベーション後、プレートを、遠心分離すると、非付着細胞は、V字形のウェルの底に蓄積し、非付着細胞を蛍光リーダーを使用して測定する。SEG101試験サンプルの力価は、P-セレクチン発現Raji細胞のPSGL-1への付着を阻害するその能力をSEG101参照標準と比較することによって定量化する。サンプル及び標準物質は、タンパク質含有量に基づいて標準化する。相対的な力価は、欧州薬局方に従って平行線定量法を使用して計算する。最終的な結果は、参照標準と比較した、サンプルの相対的な力価として(パーセントで)表す。
実施例3:サイズ排除クロマトグラフィー(SEC)による純度
この試験は、UV検出とサイズ排除クロマトグラフィー(SEC)に基づく。様々なサイズのバリアント(例えば低分子量及び高分子量バリアント並びに不純物)を、適したカラムで未変性条件下でSECによって分離する。メインピークの純度並びに凝集体及び断片の量は、各クロマトグラムにおけるサンプルについて得られた総面積のうちのパーセンテージとして決定する。
この試験は、UV検出とサイズ排除クロマトグラフィー(SEC)に基づく。様々なサイズのバリアント(例えば低分子量及び高分子量バリアント並びに不純物)を、適したカラムで未変性条件下でSECによって分離する。メインピークの純度並びに凝集体及び断片の量は、各クロマトグラムにおけるサンプルについて得られた総面積のうちのパーセンテージとして決定する。
使用するHPLCシステムは、ポンプ、注入システム、及びオンラインデガッサー、冷却装置を備えたオートサンプラー、カラム加熱、並びに210nmで吸光度をモニターすることが可能なUV検出器を備えた適した高速液体クロマトグラフィーシステムとする。カラムは、TSKgel G3000SWXL、5μm;7.8mm×300mm又は等価物とする。
サンプル溶液を、およそ0.75mg SEG101/mLの最終濃度まで、移動相(pH6.5±0.1の150mMリン酸カリウム溶液)により希釈する。参照溶液を作製するために、参照物質を、およそ0.75mg SEG101/mLの最終濃度まで、移動相により希釈する。移動相を、ブランクとして使用する。LOQ溶液は、およそ0.75μg SEG101/mL、2mgアプロチニン/mLの最終濃度まで、アプロチニン溶液により参照物質を希釈することによって作製する。
クロマトグラフィー条件は、流速0.4mL/分、UV210nmによる検出、カラム温度30℃±2℃、オートサンプラー温度およそ5℃、実行時間35分間、並びに参照溶液中およそ7.5μgのSEG101と等価な注入容量10μLの試験溶液及び参照溶液として調整した。ブランクのクロマトグラムにおいて、干渉ピークは、ブランクにおいて検出されるべきではなく、試験溶液のクロマトグラムの統合範囲において、シグナルの高さ≧LOQシグナルの高さとなるべきである。定量限界(LOQ)は、SEG101ピークについて、シグナルノイズ比≧10となるようにする。ピーク面積の再現性は、PArefによって割ったPAsampleが、少なくとも0.80、最大1.20となるようにするべきである。PAsampleは、mAU×minでの個々のサンプル注入ごとの総ピーク面積を指す。PArefは、mAU×minでのサンプルブロックの前の参照注入についての総ピーク面積を指す。
純度(メインピークの%P)、0.95の相対保持時間のピークを有していない凝集体(メイン構成成分よりも前に溶出する)の合計(%)、及び断片(メイン構成成分よりも後に溶出する)の合計(%)について報告する。0.95の相対保持時間(モノマー/メインピークの保持時間と比べた保持時間)のピークについて、個々に報告する。
実施例4:CZEによる同一性及びチャージ不均一性
キャピラリーゾーン電気泳動(CZE)の分離原理は、電場において様々な質量対実効電荷比を有するタンパク質の様々な電気泳動易動度に基づく。そのpIを下回るpHでは、各タンパク質は、正に荷電し、陽極から陰極に移動する。メインピークと比較したタンパク質バリアントの移動速度は、タンパク質バリアントの質量対実効電荷比の増加と共に速くなる。明確にするために、用語「メインピーク」は、たとえ、ある条件下で、医薬組成物中の主な形態がイソ-クリザンリズマブ形態であっても、クリザンリズマブを指す。種々の理由により、様々な易動度がもたらされるかもしれないが、メインバリアントよりも速く移動するバリアントは、「塩基性バリアント」と一般に命名され、ゆっくり移動するバリアントは、「酸性バリアント」と命名される。UV吸光度による検出の後に、チャージバリアントは、相対的時間補正ピーク面積の決定によって定量化する。
キャピラリーゾーン電気泳動(CZE)の分離原理は、電場において様々な質量対実効電荷比を有するタンパク質の様々な電気泳動易動度に基づく。そのpIを下回るpHでは、各タンパク質は、正に荷電し、陽極から陰極に移動する。メインピークと比較したタンパク質バリアントの移動速度は、タンパク質バリアントの質量対実効電荷比の増加と共に速くなる。明確にするために、用語「メインピーク」は、たとえ、ある条件下で、医薬組成物中の主な形態がイソ-クリザンリズマブ形態であっても、クリザンリズマブを指す。種々の理由により、様々な易動度がもたらされるかもしれないが、メインバリアントよりも速く移動するバリアントは、「塩基性バリアント」と一般に命名され、ゆっくり移動するバリアントは、「酸性バリアント」と命名される。UV吸光度による検出の後に、チャージバリアントは、相対的時間補正ピーク面積の決定によって定量化する。
同一性は、コミックスにおけるメインピークパターンを観察することによって又は電気泳動図を比較することによって決定する。
214nmでの検出が可能なUV検出器を備えたキャピラリー電気泳動システムを、使用することができる。毛細管は、コーティングしてない溶融シリカ毛細管、内径50μmとする。
サンプル溶液を、およそ3.0mg SEG101/mLの最終濃度まで、サンプルバッファー(5mMリン酸pH7.3±0.1)により希釈する。参照物質を、およそ3.0mg SEG101/mLの最終濃度まで、サンプルバッファーにより希釈する。感度溶液は、およそ60μg SEG101/mLの最終濃度まで、サンプルバッファーにより参照物質を希釈することによって作製する。コミックス溶液は、3:2の比(v/v)で、参照溶液と試験溶液を混合することによって作製する。サンプルバッファーを、ブランクとして使用する。
電気泳動条件は、入口から検出器まで毛細管の長さが40cm、毛細管の毛細管全長が50cm、電圧が20kV、極性が正、毛細管温度が25℃±2℃、オートサンプラー温度が15℃±3℃、実行時間が45分間、データ転送速度が8Hz、検出が214nm、及び口径が100×800μm並びに注入時間が8秒間0.5psi(4psi×秒)となるように調整する。
干渉ピークは、ブランクにおいて検出されるべきではなく、サンプルの電気泳動図の統合範囲において、シグナルの高さ≧LOQシグナルの高さとなるべきである。分離度は、Rs≧1.4となるべきであり、分離度Rsは、毛細管の性能を評価するために、参照溶液の最初及び最後の注入について計算する。定量限界(0.60%)を確立するために、LOQ溶液(2.0%希釈)におけるSEG101メインピークについてのシグナルノイズ比(S/N)を、≧10にしなければならない。ピーク面積の再現性は、PArefによって割ったPAsampleが、少なくとも0.80、最大1.20となるようにするべきである。PAsampleは、試験溶液の個々の注入ごとの時間補正総ピーク面積を指し(mAU)、PArefは、参照溶液の最初の注入についての時間補正総ピーク面積を指す(mAU)。
純度については、各サンプルごとに、酸性バリアントの相対的時間補正ピーク面積(メインピークと比べた移動時間>1.0)、塩基性バリアントの相対的時間補正ピーク面積(メインピークと比べた移動時間<1.0)、及びメインピークについて報告する。チャージバリアント<0.60%(LOQ)は、酸性バリアント又は塩基性バリアントの合計の計算に含まない。
同一性については、コミックス溶液中のメインピークについて観察される単一のピークが、必要とされる。追加的に、サンプル溶液のピークパターンを、参照のピークパターンと比較する。
実施例5:SEG101の凍結乾燥製剤の調製
表2は、SEG101に対するそれらの適合性について試験した液体製剤を示す。
表2は、SEG101に対するそれらの適合性について試験した液体製剤を示す。
SEG101はまた、さまざまな異なるタンパク質濃度、凍結乾燥保護剤対タンパク質モル比、及び非晶凍結乾燥保護剤のみ(スクロース)の又は結晶増量剤(マンニトール)と組み合わせた使用を包含する6つの異なる凍結乾燥製剤に製剤した。製剤の正確な組成を、表15に示す。
5.1 凍結乾燥プロセス条件
製剤組成、すなわち非晶対部分的に結晶の製剤における違いにより(表15)、2つの異なる凍結乾燥プロセスを、遂行した。
製剤組成、すなわち非晶対部分的に結晶の製剤における違いにより(表15)、2つの異なる凍結乾燥プロセスを、遂行した。
表16に要約される第1の実行を、非晶製剤DP1、DP2、及びDP3について選択した。表17に要約される第2の実行において、スクロース及びマンニトールの組み合わせを含有する製剤、すなわちDP4、DP5、及びDP6を、凍結乾燥した。PDフェーズの間の両方の実行におけるチャンバー圧力を、0.133mbarに設定した。二次乾燥フェーズ(SD)を、両方の実行について同一とした。全体的な乾燥材料含有量が候補の製剤において比較的高いので(非晶製剤において最高443mg及び部分的に結晶の製剤において最高557mg)、残留する湿気レベルの増加のリスクがある。そのため、SDの間のチャンバー圧力を、0.05mbarまで低下させ、設定棚温度を、8時間30℃とした。
5.2 安定性
凍結乾燥安定性研究の目的は、6つの凍結乾燥SEG101製剤(表15)の物理化学的安定性を比較することであった。製剤を、予定される(5±3℃)、温度を上げた(25±2℃、60±5%r.h.;r.h.:相対湿度)、及びストレス(40±2℃、75±5%r.h.)保存条件に、最高12ヵ月曝露し、分析した。
凍結乾燥安定性研究の目的は、6つの凍結乾燥SEG101製剤(表15)の物理化学的安定性を比較することであった。製剤を、予定される(5±3℃)、温度を上げた(25±2℃、60±5%r.h.;r.h.:相対湿度)、及びストレス(40±2℃、75±5%r.h.)保存条件に、最高12ヵ月曝露し、分析した。
凍結乾燥プロセスに入ろうとしている凍結乾燥前の溶液についての結果と、凍結乾燥サイクル直後に溶解した溶液についての結果との比較は、溶解及び凍結乾燥サイクル自体は、実際には、製剤の物理化学的特性に対して影響を有していないことを示す。
5.3 SECによる凝集体及びCZEによるチャージバリアントの決定
凍結乾燥製剤を、様々な時点で、APW(追加的に精製した水)中に溶解し、SEC(表18)及びCZE(表19)による分析にかけた。
凍結乾燥製剤を、様々な時点で、APW(追加的に精製した水)中に溶解し、SEC(表18)及びCZE(表19)による分析にかけた。
5.4 DP2についてのさらなる研究
5.4.1 長期安定性試験(5℃)
5℃でのDP2の6ヵ月の保存後、結果はすべて、長期保存条件のために設定される必要条件の範囲内にある。試験した品質の特徴すべてについて、いかなる傾向もなかった。
5.4.1 長期安定性試験(5℃)
5℃でのDP2の6ヵ月の保存後、結果はすべて、長期保存条件のために設定される必要条件の範囲内にある。試験した品質の特徴すべてについて、いかなる傾向もなかった。
5.4.2 温度を上げた安定性試験(25℃/60パーセントRH)
25℃/60%RHでのDP2の6ヵ月の保存後、表20に示す結果を除く品質の特徴すべてについて、いかなる傾向もなかった。すべての他の方法についての結果は、温度を上げた条件について予想される傾向をたどる。結果はすべて、長期保存条件のために設定される必要条件の範囲内にある。
25℃/60%RHでのDP2の6ヵ月の保存後、表20に示す結果を除く品質の特徴すべてについて、いかなる傾向もなかった。すべての他の方法についての結果は、温度を上げた条件について予想される傾向をたどる。結果はすべて、長期保存条件のために設定される必要条件の範囲内にある。
5.4.3 ストレス安定性試験(摂氏40度/75パーセントRH)
40℃/75%RHでのDP2の6ヵ月の保存後、表21に示す結果を除く品質の特徴すべてについて、いかなる傾向もなかった。
40℃/75%RHでのDP2の6ヵ月の保存後、表21に示す結果を除く品質の特徴すべてについて、いかなる傾向もなかった。
すべての他の方法についての結果は、ストレス条件について予想される傾向をたどる。結果はすべて、長期保存条件のために設定される必要条件の範囲内にある。
5.5 他の分析方法についての結果
すべての溶解した製剤は、すべての抜き取り時点で実質的に可視粒子がなく、無色であった。UV含有量及びpHは、すべてのストレス条件で変化していなかった(方法によるばらつき又は予想されるバイアル間のばらつきの範囲内であった)。ELISA及び細胞ベースのアッセイにより決定される製剤DP1、DP2、及びDP3の生物学的活性は、40℃で6ヵ月後に並びにDP1及びDP2については5℃及び25℃で12ヵ月後に、変化していなかった(予想される方法によるばらつきの範囲内であった)(表22)。
すべての溶解した製剤は、すべての抜き取り時点で実質的に可視粒子がなく、無色であった。UV含有量及びpHは、すべてのストレス条件で変化していなかった(方法によるばらつき又は予想されるバイアル間のばらつきの範囲内であった)。ELISA及び細胞ベースのアッセイにより決定される製剤DP1、DP2、及びDP3の生物学的活性は、40℃で6ヵ月後に並びにDP1及びDP2については5℃及び25℃で12ヵ月後に、変化していなかった(予想される方法によるばらつきの範囲内であった)(表22)。
実施例6:表面プラズモン共鳴解析(SPR)を使用するヒトサンプル(PD)におけるクリザンリズマブ及びその任意のバリアントによるP-セレクチン阻害の測定
SPRベースの方法は、クリザンリズマブにより治療されたヒトドナー由来のヒト血清サンプルにおけるクリザンリズマブのエクスビボP-セレクチン阻害%を測定するために使用した。このPDアッセイにより、P-セレクチン(抗原;リガンド)がPSGL-1(リガンド受容体)に結合するのをブロックする、血清中のクリザンリズマブ及びそのバリアントの能力を測定した。クリザンリズマブ及びその任意のバリアントによるブロックは、PSGL-1結合ドメインを模倣するペプチドアナログである、グリコスルホペプチド6(GSP-6)に結合する、免疫グロブリンに融合された添加P-セレクチン(Psel-Ig)の阻害%として測定した。例えば、ストレプトアビジンを、標準的なアミンカップリングを使用して、使用されるバイオセンサーチップの2つのチャネル(FC-2及びFC-3)上に固定し、その後、解析用のペプチドを固定するためにビオチン化GSP-6を注入した。参照チャネル(FC-1)は、ビオチンブロッキングストレプトアビジンによって調製した。治療前のサンプルにより、対象ごとの最大の結合を確かめ、これを、種々の時点での対象由来の投薬後血清サンプルを使用して阻害%を計算するための基準として使用した。一連の希釈液中の定量化したクリザンリズマブ及びその任意のバリアントは、標準阻害曲線を生成するために使用し、すべての条件下でクリザンリズマブについて5.2μg/mLのIC50値を示した。
SPRベースの方法は、クリザンリズマブにより治療されたヒトドナー由来のヒト血清サンプルにおけるクリザンリズマブのエクスビボP-セレクチン阻害%を測定するために使用した。このPDアッセイにより、P-セレクチン(抗原;リガンド)がPSGL-1(リガンド受容体)に結合するのをブロックする、血清中のクリザンリズマブ及びそのバリアントの能力を測定した。クリザンリズマブ及びその任意のバリアントによるブロックは、PSGL-1結合ドメインを模倣するペプチドアナログである、グリコスルホペプチド6(GSP-6)に結合する、免疫グロブリンに融合された添加P-セレクチン(Psel-Ig)の阻害%として測定した。例えば、ストレプトアビジンを、標準的なアミンカップリングを使用して、使用されるバイオセンサーチップの2つのチャネル(FC-2及びFC-3)上に固定し、その後、解析用のペプチドを固定するためにビオチン化GSP-6を注入した。参照チャネル(FC-1)は、ビオチンブロッキングストレプトアビジンによって調製した。治療前のサンプルにより、対象ごとの最大の結合を確かめ、これを、種々の時点での対象由来の投薬後血清サンプルを使用して阻害%を計算するための基準として使用した。一連の希釈液中の定量化したクリザンリズマブ及びその任意のバリアントは、標準阻害曲線を生成するために使用し、すべての条件下でクリザンリズマブについて5.2μg/mLのIC50値を示した。
Psel-Igを有していない及びPsel-Igを有するブロッキングバッファーと混合したSCDを有する患者由来の血清サンプルは、それぞれ、ネガティブコントロールサンプル及びポジティブコントロールサンプルとして機能した。
アッセイは、患者から収集した血清中のクリザンリズマブ及びその任意のバリアントが実際に標的と結合することを示す。患者血清中のクリザンリズマブ及びその任意のバリアントは、グリコスルホペプチド6(GSP-6)に結合する添加P-セレクチン(Psel-Ig)の98%をブロックした。
Claims (54)
- それぞれ配列番号10及び配列番号9の軽鎖及び重鎖アミノ酸配列を有するクリザンリズマブ並びに配列番号10の32位のアミノ酸であるアスパラギン酸が、イソアスパラギン酸に変わったクリザンリズマブのバリアント(イソ-クリザンリズマブ)を含む医薬組成物。
- 配列番号10の32位がスクシンイミドであるクリザンリズマブをさらに含む、請求項1に記載の医薬組成物。
- 前記イソ-クリザンリズマブは、ホモ-イソ-クリザンリズマブ及びヘテロ-イソ-クリザンリズマブからなる、請求項1又は2に記載の医薬組成物。
- 前記医薬組成物において総チャージバリアントのうち、少なくとも20%のクリザンリズマブを含む、請求項1~3のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記医薬組成物において前記総チャージバリアントのうち、50%以下のクリザンリズマブを含む、請求項1~4のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記医薬組成物において前記総チャージバリアントのうち、約20%~約50%のクリザンリズマブを含む、請求項1~5のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 緩衝系をさらに含み、前記組成物は、約5.5~約7.5のpHを有する、請求項1~6のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記pHは、約5.5~約7、好ましくは約5.5~約6.5、好ましくは約5.7~約6.3である、請求項7に記載の医薬組成物。
- 前記pHは、約5.9~約6.1である、請求項7又は8に記載の医薬組成物。
- 前記緩衝系は、クエン酸バッファーである、請求項7~9のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記緩衝系は、リン酸バッファーである、請求項7~9のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 安定化剤をさらに含む、請求項1~11のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記安定化剤は、スクロースである、請求項12に記載の医薬組成物。
- スクロースは、50mM~350mM、好ましくは100mM~300mMの濃度である、請求項13に記載の医薬組成物。
- 等張化剤をさらに含む、請求項1~14のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記等張化剤は、塩化ナトリウムである、請求項15に記載の医薬組成物。
- 塩化ナトリウムは、50mM~300mMの濃度である、請求項16に記載の医薬組成物。
- 界面活性剤をさらに含む、請求項1~17のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記界面活性剤は、非イオン性界面活性剤である、請求項18に記載の医薬組成物。
- 前記界面活性剤は、ポリソルベート、好ましくはポリソルベート80である、請求項18又は19に記載の医薬組成物。
- 前記界面活性剤、好ましくはポリソルベートは、0.01%w/v(0.1mg/mL)~0.1%w/v(1mg/mL)の濃度である、請求項18~20のいずれかに記載の医薬組成物。
- 抗体は、5mg/ml~50mg/mlの濃度である、請求項1~21のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 約5~約50mg/mlの濃度の抗体及び緩衝系を含む医薬組成物であって、前記組成物は、約5.5~約7.5のpHを有する、医薬組成物。
- 前記pHは、約5.7~約6.3である、請求項23に記載の医薬組成物。
- 前記緩衝系は、クエン酸(例えばクエン酸ナトリウム)及び/又はリン酸(例えばリン酸カリウム)である、請求項23又は24に記載の医薬組成物。
- 安定化剤をさらに含む、請求項23~25のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記安定化剤は、スクロースである、請求項26に記載の医薬組成物。
- 前記安定化剤は、約50mM~約300mMの濃度で存在する、請求項26又は27に記載の医薬組成物。
- 非イオン性界面活性剤をさらに含む、請求項23~28のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記界面活性剤は、ポリソルベート80である、請求項29に記載の医薬組成物。
- 前記界面活性剤は、約0.01%w/v(0.1mg/ml)~0.1%w/v(1mg/ml)の濃度で存在する、請求項29又は30に記載の医薬組成物。
- 等張化剤をさらに含む、請求項23~31のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記等張化剤は、NaClである、請求項32に記載の医薬組成物。
- 前記等張化剤は、約50mM~300mMの濃度で存在する、請求項32又は33に記載の医薬組成物。
- 約5~約50mg/mlの濃度の抗体(クリザンリズマブ及びその任意のバリアント)、約50mM~約350mMの濃度のスクロース、並びに緩衝系を含む医薬組成物であって、前記組成物は、約5.5~約7.5のpHを有する並びに前記緩衝系は、クエン酸バッファー及び/又はリン酸バッファーである、医薬組成物。
- 前記医薬組成物のpHは、約5.7~約6.3、例えば約6.0である、請求項35に記載の医薬組成物。
- 凍結乾燥形態した請求項1~36のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 水性の製剤を凍結乾燥することによって得ることができる凍結乾燥製剤であって、前記凍結乾燥製剤は、
a)抗体(クリザンリズマブ及びその任意のバリアント);
b)凍結乾燥保護剤、並びに
c)緩衝系
を含む、凍結乾燥製剤。 - 界面活性剤をさらに含む、請求項38に記載の凍結乾燥製剤。
- 前記界面活性剤は、ポリソルベート80である、請求項39に記載の凍結乾燥製剤。
- 抗体は、約10mg/mL~100mg/mLの濃度で前記水性の製剤中に存在する、請求項38~40のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。
- 前記緩衝系は、クエン酸、例えばクエン酸ナトリウムである、請求項38~41のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。
- 凍結乾燥保護剤としてスクロース及び/又はマンニトールをさらに含む、請求項38~42のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤。
- 前記水性の製剤は、約10mg/mL~100mg/mLの濃度のスクロースを含む、請求項38~43のいずれかに記載の凍結乾燥製剤。
- 抗体に対するスクロースのモル比は、約200~1500である、請求項43~44のいずれかに記載の凍結乾燥製剤。
- 前記凍結乾燥製剤の総重量に基づいて
a)約25~40w/w%、好ましくは約28~32w/w%の抗体;及び
b)約55~75w/w%、好ましくは約65~71w/w%のスクロース
を含む、請求項38~45のいずれかに記載の凍結乾燥製剤。 - 請求項37~46のいずれか一項に記載の凍結乾燥製剤を溶解することによって得られる液体医薬組成物。
- 前記医薬組成物を使用することによって決定されるIC50は、約4.6~6.2μg/mlの範囲にある、請求項1~37、47のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記IC50は、インビトロにおいて決定される、請求項48に記載の医薬組成物。
- 鎌状赤血球症の治療、とりわけ、血管閉塞発作(VOC)の予防を、その必要がある対象において行うための方法であって、請求項1~47のいずれか一項に記載の医薬組成物中に含まれる、治療的に有効な用量の抗体(クリザンリズマブ及びその任意のバリアント)を対象に投与することを含み、前記治療的に有効な用量は、対象の体重1キログラムにつき5mg又は7.5mgである、方法。
- 最初の2回の用量は、2週間間隔で投与され、その後、4週間毎に同じ用量が投与される、請求項50に記載の方法。
- 前記医薬組成物は、静脈内ルートによって対象に投与される、請求項50又は51に記載の方法。
- 前記治療的に有効な用量は、対象の体重1キログラムにつき5mgであり、前記最初の2回の用量は、2週間間隔で投与され、その後、4週間毎に同じ用量が投与され、並びに以下のPKパラメーター:
a)前記医薬組成物の投与後の、1.5~2.5h、好ましくは1.92hの好ましい中央値を有する、0.4~10時間(h)、好ましくは0.55h~6.25hの範囲のtmax;
b)最初の用量後、116±91.3μg/mL;又は好ましくは、定常状態で、50~200μg/mL、好ましくは124±31.6μg/mLの範囲のCmax;
c)100h~300hの範囲の、好ましくは150h~210hの範囲の、例えば約183h(7.6日)の見かけのt1/2;
d)10000~30000μg×h/mLの範囲の、好ましくは15週目に20400μg×h/mLの、好ましくは23.5%の変動係数を有するAUCtau,ss;
e)10~30mL/h、好ましくは15~20mL/hの範囲の、例えば約17.2mL/hの、好ましくは、SCD及び70kgの体重を有する患者における、定常状態15週目の平均クリアランス;
f)約3.78μg/mL~9.8μg/mLの範囲の、定常状態において4週間毎に、とりわけ7週目~27週目に得られるPKトラフ濃度
の1つ以上又はすべてが満たされる、請求項50~52のいずれか一項に記載の方法。 - 血清中のクリザンリズマブ及びその任意のバリアントは、少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも90%、少なくとも95%の、P-セレクチンのPSGL-1との結合の阻害を達成する、請求項50~52のいずれか一項に記載の方法。
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