JP2023162442A - タンパク質製剤 - Google Patents

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Abstract

【課題】タンパク質製剤の提供。【解決手段】本開示は、様々な温度を通して、長期間にわたって安定している固体タンパク質製剤を提供する。本開示はまた、これらの製剤を製造及び使用する方法を提供する。一実施形態では、本発明は、安定剤、糖アルコール、糖、及び界面活性剤を含む固体タンパク質製剤を提供する。別の実施形態では、本発明は、ダルベポエチンアルファ、ヒスチジン、マンニトール、スクロース、及びポリソルベート-80を含む固体タンパク質製剤を提供する。【選択図】図1

Description

本出願は、参照によって本明細書に組み込まれる2014年6月26日出願の米国特許仮出願第62/017,560号の利益を主張する。
本発明の分野は、タンパク質製剤に関する組成物及び方法に関する。
治療用タンパク質薬物は、環境及び他の外部影響に対して不安定かつ易損性であり得、それらの活性を低減する変化につながる可能性がある。治療用タンパク質を配合する試みは往々にして、患者に不快感をもたらす製剤(例えば、低pH製剤)につながり得る。
一部の事例では、治療用タンパク質製剤は、追加のタンパク質をその製剤に添加することによって安定化される。例えば、ヒト血清アルブミン(HSA)が、安定剤として使用されている。しかしながら、医薬製品に追加のタンパク質を添加することは、不利な免疫応答またはウイルス汚染のリスクを含む様々な理由により理想的ではない。
したがって、様々な温度での長期安定性を提供し、注射に関連する疼痛を最小限にするタンパク質製剤が必要とされている。
発明の概要
一実施形態では、本発明は、安定剤、糖アルコール、糖、及び界面活性剤を含む固体タンパク質製剤を提供する。別の実施形態では、本発明は、ダルベポエチンアルファ、ヒスチジン、マンニトール、スクロース、及びポリソルベート-80を含む固体タンパク質製剤を提供する。別の実施形態では、本発明は、グルタミン酸ナトリウム、マンニトール、スクロース、及びポリソルベート20を含む固体タンパク質製剤を提供する。別の実施形態では、本発明は、ヒスチジン、マンニトール、スクロース、及びポリソルベート20を含む固体タンパク質製剤を提供する。さらなる一実施形態では、本発明は、固体タンパク質製剤を調製する方法であって、a)上記タンパク質を凍結乾燥緩衝液で希釈すること;及びb)上記希釈タンパク質を凍結乾燥させることを含む方法を提供する。別の実施形態では、本発明は、固体タンパク質製剤及び再構成用緩衝液を含むキットを提供する。
37℃での、ポリソルベート-80を含まない場合(A)及び含む場合(B)の抗体9G8Aの検出を使用しての、Aranespの変性の比較結果を示すグラフである。 45℃での、ポリソルベート-80を含む抗体9G8Aの検出を使用しての、Aranespの変性の比較結果を示すグラフである。 37℃及び45℃での、液体製剤と比較しての、凍結乾燥製剤中にポリソルベート-80を含まないAranesp(登録商標)のSECによるメインピーク%の比較結果を示すグラフである。 45℃での24ヶ月目に、4%ソルビトールで再構成したポリソルベート-80不含の試料のSEC-HPLCの重ね合わせを示すグラフである。(A)試料の重ね合わせを拡大して示しており、(B)試料の重ね合わせを拡大せずに示している。 45℃での、凍結乾燥製剤の中にポリソルベート-80を含まないAranesp(登録商標)のSECによるメインピーク%の比較結果を示すグラフである。 45℃での、凍結乾燥製剤の中にポリソルベート-80を含むAranesp(登録商標)のSECによるメインピーク%の比較結果を示すグラフである。 45℃での、凍結乾燥製剤及び液体製剤の中にポリソルベート-80を含む場合及び含まない場合のAranesp(登録商標)のpHの比較結果を示すグラフである。 4℃での最高24ヶ月間にわたる貯蔵後のAranesp酸化%の比較結果を示すグラフである。 29℃での最高24ヶ月間にわたる貯蔵後の液体及び凍結製剤におけるAranespの酸化%の比較結果を示すグラフであって、P62N500及びP62N500Tは液体製剤であり、他の試料は、凍結乾燥製剤である。 29℃での貯蔵後のみの凍結製剤におけるAranespの酸化%の比較結果を示すグラフである。 37℃での最高24ヶ月間にわたる貯蔵後の液体及び凍結製剤におけるAranespの酸化%の比較結果を示すグラフであって、P62N500及びP62N500Tは、液体製剤であり、残りは、凍結乾燥製剤である。 37℃での貯蔵後のみの凍結製剤におけるAranespの酸化%の比較結果を示すグラフである。 45℃での最高24ヶ月間にわたる貯蔵後の液体及び凍結製剤におけるAranespの酸化%の比較結果を示すグラフであって、P62N500及びP62N500Tは、液体製剤であり、残りの試料は、凍結乾燥製剤である。 37℃での最高24ヶ月にわたる貯蔵後のみの凍結製剤におけるAranespの酸化%の比較結果を示すグラフである。 24ヶ月にわたって45℃で貯蔵した後の、非還元逆相HPLCによる分解及び短縮種についての、Aranesp液体製剤の間で、凍結乾燥され、かつ4%ソルビトール中で再構成された3種におけるポリソルベート-80を含まないAranesp(500μg/mL)の比較結果を示すグラフである。 24ヶ月にわたって37℃で貯蔵した後の、非還元逆相HPLCによる分解及び短縮種についての、Aranesp液体製剤の間で、凍結乾燥され、かつ4%ソルビトール中で再構成された3種におけるポリソルベート-80を含まないAranespの比較結果を示すグラフである。 4℃での、ポリソルベート80を含有しない試料のSEC-HPLCメインピーク%結果を示すグラフである。 4℃での、ポリソルベート80を含有する試料のSEC-HPLCメインピーク%結果を示すグラフである。 29℃での、ポリソルベート80を含有しない試料のSEC-HPLCメインピーク%結果を示すグラフである。 図20Aは、29℃での、ポリソルベート80を含有する試料のSEC-HPLCメインピーク%結果を示すグラフである。図20Bは、29℃での、ポリソルベート80を含有しない試料のSEC-HPLCメインピーク%結果を示すグラフである。 37℃での、ポリソルベート80を含有する試料のSEC-HPLCメインピーク%結果を示すグラフである。 CZ及びガラスバイアルの間での、異なる温度でのAranesp(登録商標)9G8A結果の比較結果を示すグラフである。CZコンテナは、比較的高温(25℃、37℃、45℃)で、より高い変性を示した。 異なる温度での、3種の異なる再構成用希釈液を含む2種の異なるコンテナ中のAranesp(登録商標)のSECによるHMW%の比較結果を示すグラフである。 異なる温度での、3種の異なる再構成用希釈液を含む2種の異なるコンテナ中のAranesp(登録商標)のSECによるメインピーク%の比較結果を示すグラフである。 異なる温度でのタンパク質試料結果1mL当たりのHIAC粒子カウントの結果を示すグラフである。 凍結乾燥試料の目視観測結果を示す図である。12ヶ月目に、試料は、4℃でのCZバイアル中で、少量の凍結乾燥ケーキを示した。青色のキャップを備えたバイアルは、タンパク質試料を含有する。緑色のキャップを備えたバイアルは、プラセボ試料を含有する。 異なる温度でのAranesp(登録商標)濃度(μg/mL)の比較結果を示すグラフである。 2種の異なるコンテナ(CZ及びガラスバイアル)中、4種の異なる温度(4℃、29℃、37℃、及び45℃)で貯蔵した後のAranespの酸化%の比較結果を示すグラフである。 2種の異なるコンテナ中、4種の異なる温度で12ヶ月にわたって貯蔵した後の、非還元逆相HPLCによるAranespの短縮種の比較結果を示すグラフである。 2種の異なるコンテナ(CZ及びガラスバイアル)中、4種の異なる温度(4℃、29℃、37℃、及び45℃)でのAranespのpHの比較結果を示すグラフである。 2種の異なるコンテナ(CZ及びガラスバイアル)中、4種の異なる温度(4℃、29℃、37℃、及び45℃)でのAranespの重量オスモル濃度の比較結果を示すグラフである。 2種の異なる凍結乾燥製剤の100μg/mL及び500μg/mL試料での、4℃及び37℃での12週間までの試料のSECによる低分子量%分析の結果を示すグラフである。 2種の異なる凍結乾燥製剤の100μg/mL及び500μg/mL試料での、4℃及び37℃での12週間までの試料のSECによる高分子量%分析の結果を示すグラフである。 2種の異なる凍結乾燥製剤の100μg/mL及び500μg/mL試料での、4℃及び37℃での12週間までのSECによる試料分析のメインピーク%の結果を示すグラフである。 2種の異なる凍結乾燥製剤の100μg/mL及び500μg/mL試料での、4℃及び37℃での12週間までの試料のCE-SDSによる重鎖%分析の結果を示すグラフである。 2種の異なる凍結乾燥製剤の100μg/mL及び500μg/mL試料での、4℃及び37℃での12週間までの試料のCE-SDSによる軽鎖%分析の結果を示すグラフである。 2種の異なる凍結乾燥製剤の100μg/mL及び500μg/mL試料での、4℃及び37℃での12週間までの試料のCE-SDSによる非グリコシル化重鎖%分析の結果を示すグラフである。 2種の異なる凍結乾燥製剤であるH=ヒスチジン製剤、G=グルタマート製剤の500μg/mL試料での、7週間にわたって4℃及び37℃で貯蔵した後のCE-SDSによるEPO mAbの電気泳動図の結果を示す図である。 GMST及びHMST緩衝液中の凍結前試料のDSCスキャンの結果を示すグラフである。黒色=0.1mg/mL抗EPO mAb 8C10-GMST、赤色=0.1mg/mL抗EPO mAb 8C10-HMST、緑色=0.5mg/mL抗EPO mAb 8C10-GMST、及び青色=0.5mg/mL抗EPO mAb 8C10-HMST。0.1mg/mL試料のシグナルを、0.5mg/mLに対して正規化した(同じ正規化を、0.1mg/mL試料のすべてについて使用した)。 異なる条件下での0.1mg/mL抗EPO mAb 8C10-GMST試料のDSCスキャンの結果を示すグラフである。黒色=凍結前、赤色=凍結(T=0)、緑色=凍結(4℃でT=7週間)、青色=凍結(37℃でT=7週間)、青緑色=凍結(4℃でT=12週間)、及び暗黄色=凍結(37℃でT=12週間)。 異なる条件下での0.1mg/mL抗EPO mAb 8C10-HMST試料のDSCスキャンの結果を示すグラフである。黒色=凍結前、赤色=凍結(T=0)、緑色=凍結(4℃でT=7週間)、青色=凍結(37℃でT=7週間)。 異なる条件下での0.5mg/mL抗EPO mAb 8C10-GMST試料のDSCスキャンの結果を示すグラフである。黒色=凍結前、赤色=凍結(T=0)、緑色=凍結(4℃でT=7週間)、青色=凍結(37℃でT=7週間)、青緑色=凍結(4℃でT=12週間)、及び暗黄色=凍結(37℃でT=12週間)。 異なる条件下での0.5mg/mL抗EPO mAb 8C10-HMST試料のDSCスキャンの結果を示すグラフである。黒色=凍結前、赤色=凍結(T=0)、緑色=凍結(4℃でT=7週間)、青色=凍結(37℃でT=7週間)。 T=0での抗EPO mAb試料のサイズ分布分析の結果を示すグラフである(10倍に拡大)。 抗EPO mAb試料のAUC分析の結果を示すグラフである。グルタミン酸塩緩衝液は上のパネルであり、ヒスチジン緩衝液は下のパネルである;4℃は青色で示され、37℃は赤色で示されている。凍結前試料は、すべてのグラフにおいてT=0である。
本発明の詳細な説明
本発明は、タンパク質製剤に関する。本発明はさらに、タンパク質製剤に関する組成物、キット、及び方法を提供する。
定義
本明細書において別段に定義されていない限り、本発明に関連して使用する科学用語及び技術用語は、当業者が一般に理解する意味を有することとする。さらに、文脈によって別段に必要とされない限り、単数形の用語は、複数形を含むこととし、複数形の用語は、単数形の用語を含むこととする。一般に、本明細書に記載の細胞及び組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝子及びタンパク質及び核酸化学及びハイブリッド形成に関連して使用する命名法、ならびにそれらの技術は、当技術分野かつ周知で、一般に使用されているものである。本発明の方法及び技術を一般に、当技術分野で周知であり、別段に示さない限り、本明細書を通じて引用及び論述する様々な一般的及びより具体的な参照文献において記載されているとおりの従来の方法に従って行う。例えば、参照によって本明細書に組み込まれるSambrookら、Molecular Cloning:A Laboratory Manual、2d ed.、Cold Spring Harbor Laboratory Press、Cold Spring Harbor、N.Y.(1989)、及びAusubelら、Current Protocols in
Molecular Biology、Greene Publishing Associates (1992)、及びHarlow and Lane Antibodies:A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory Press、Cold Spring Harbor、N.Y.(1990)を参照されたい。酵素反応及び精製技術を、当技術分野で一般に達成されるか、または本明細書において記載のとおりに、製造者の仕様に従って行う。本明細書に記載の分析化学、合成有機化学、ならびに医学及び薬学化学に関連して使用する専門用語、ならびにそれらの実験室手順及び技術は、周知であり、当技術分野で一般に使用されるものである。化学合成、化学分析、医薬品、製剤、及び送達、及び患者の処置について、標準的な技術を使用することができる。
次の用語は、別段に示さない限り、次の意味を有すると理解されたい:
「糖タンパク質」は、オリゴ糖をポリペプチド側鎖に共有結合的に結合させているタンパク質である。
「免疫グロブリン」は、四量体分子である。天然に存在する免疫グロブリンでは、各四量体は、ポリペプチド鎖の2つの同一の対から構成され、各対は、1本の「軽」鎖(約25kDa)及び1本の「重」鎖(約50~70kDa)を有する。各鎖のアミノ末端部分は、抗原認識を主に担う約100~110またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能を主に担う定常領域を規定している。ヒト軽鎖は、カッパ及びラムダ軽鎖として分類される。重鎖は、ミュー、デルタ、ガンマ、アルファ、またはイプシロンとして分類され、それぞれIgM、IgD、IgG、IgA、及びIgEとして、抗体のアイソタイプを規定している。軽鎖及び重鎖内で、可変領域及び定常領域は、約12以上のアミノ酸の「J」領域によって結合されており、重鎖はまた、約10超のアミノ酸の「D」領域を含む。一般には、Fundamental Immunology Ch.7(Paul,W.,ed,2nd ed.,Raven Press、N.Y.(1989))を参照されたい(あらゆる目的についてその全体が参照によって本明細書に組み込まれる)。各軽鎖/重鎖対の可変領域は、インタクトな免疫グロブリンが2つの結合部位を有するように抗体結合部位を形成している。
「抗体」は、インタクトな免疫グロブリン、または別段の指定がない限り、特異的な結合についてインタクトな抗体に匹敵するその抗原結合部分を指す。抗原結合部分を、組換えDNA技術によって、またはインタクトな抗体の酵素的もしくは化学的切断によって生成してもよい。抗原結合部分には、特に、Fab、Fab’、F(ab’)、Fv、ドメイン抗体(dAbs)、相補性決定領域(CDR)を含む断片、一本鎖抗体(scFv)、キメラ抗体、二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体、及びポリペプチドへの特異的な抗原結合をもたらすために十分な免疫グロブリンの少なくとも一部を含有するポリペプチドが含まれる。
抗体の断片または類似体は、当業者であれば、当技術分野で周知の技術を使用して容易に調製することができ、そのような断片または類似体が、本発明の製剤と共に使用するために企図される。
製剤
本発明は、タンパク質製剤、及び特に、安定な固体タンパク質製剤に関する。本発明の特定の態様が、様々な環境条件(例えば、広い温度範囲)において貯蔵及び使用することができるタンパク質製剤を対象としている場合、本発明は、様々なこれらの環境条件においてタンパク質の安定性を維持するような製剤を提供する。本発明において記述する具体的な製剤成分に加えて、本発明の製剤は、製剤の所望の特徴に不利な影響を及ぼさないことを条件として、1種または複数種の他の薬学的に許容される担体、添加剤、または安定剤、例えば、Remington’s Pharmaceutical Sciences 16th edition、Osol,A.Ed.(1980)において記載されているものをさらに含んでよい。
ある種の実施形態では、製剤は、安定剤としてアミノ酸を含む。本発明において使用するために企図されるアミノ酸安定剤の非限定的な例は、ヒスチジン、トリプトファン、メチオニン、ロイシン、フェニルアラニン、セリン、グルタミン酸、アルギニン、またはリシンである。具体的な一実施形態では、アミノ酸安定剤は、ヒスチジンである。本発明の製剤中のアミノ酸安定剤の濃度は、所望の特性に応じて、固体化される前に0.1mM~100mMの範囲であり得る。一実施形態では、製剤は、追加の安定化タンパク質(例えば、アルブミン)を含まない。
一実施形態では、ヒスチジンの濃度は、0.1mM~100mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、0.1mM~50mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、0.1mM~40mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、0.1mM~30mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、0.1mM~20mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、0.1mM~15mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、0.1mM~10mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、0.1mM~5mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、0.1mM~1mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、1mM~100mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、1mM~50mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、1mM~40mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、1mM~30mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、1mM~20mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、1mM~15mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、1mM~10mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、5mM~50mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、5mM~25mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、5mM~15mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、0.1mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、0.5mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、1mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、2mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、3mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、4mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、5mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、6mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、7mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、8mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、9mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、10mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、11mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、12mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、13mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、14mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、15mMである。
一実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約0.1mM~約100mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約0.1mM~約50mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約0.1mM~約40mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約0.1mM~約30mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約0.1mM~約20mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約0.1mM~約15mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約0.1mM~約10mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約0.1mM~約5mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約0.1mM~約1mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約1mM~約100mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約1mM~約50mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約1mM~約40mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約1mM~約30mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約1mM~約20mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約1mM~約15mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約1mM~約10mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約5mM~約50mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約5mM~約25mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約5mM~約15mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約0.1mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約0.5mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約1mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約2mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約3mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約4mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約5mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約6mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約7mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約8mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約9mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約10mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約11mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約12mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約13mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約14mMである。別の実施形態では、ヒスチジンの濃度は、約15mMである。
さらなる実施形態では、製剤は、アミノ酸ではない緩衝剤を含んでよい。具体的な一実施形態では、アミノ酸ではない緩衝剤は、コハク酸ナトリウムである。本発明の製剤中のアミノ酸ではない緩衝剤の濃度は、所望の特性に応じて、固体化される前に0.1mM~100mMmMの範囲であり得る。
一実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、0.1mM~100mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、0.1mM~50mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、0.1mM~40mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、0.1mM~30mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、0.1mM~20mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、0.1mM~15mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、0.1mM~10mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、0.1mM~5mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、0.1mM~1mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、1mM~100mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、1mM~50mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、1mM~40mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、1mM~30mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、1mM~20mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、1mM~15mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、1mM~10mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、5mM~50mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、5mM~25mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、5mM~15mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、0.1mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、0.5mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、1mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、2mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、3mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、4mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、5mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、6mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、7mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、8mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、9mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、10mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、11mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、12mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、13mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、14mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、15mMである。
一実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約0.1mM~約100mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約0.1mM~約50mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約0.1mM~約40mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約0.1mM~約30mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約0.1mM~約20mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約0.1mM~約15mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約0.1mM~約10mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約0.1mM~約5mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約0.1mM~約1mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約1mM~約100mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約1mM~約50mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約1mM~約40mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約1mM~約30mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約1mM~約20mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約1mM~約15mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約1mM~約10mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約5mM~約50mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約5mM~約25mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約5mM~約15mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約0.1mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約0.5mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約1mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約2mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約3mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約4mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約5mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約6mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約7mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約8mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約9mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約10mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約11mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約12mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約13mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約14mMである。別の実施形態では、コハク酸ナトリウムの濃度は、約15mMである。
さらなる実施形態では、緩衝剤は、グルタミン酸ナトリウムである。グルタミン酸ナトリウムの濃度は、所望の特性に応じて、固体化される前に0.1mM~100mMmMの範囲であってよい。
一実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、0.1mM~100mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、0.1mM~50mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、0.1mM~40mMである。別の実施形態では、
グルタミン酸ナトリウムの濃度は、0.1mM~30mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、0.1mM~20mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、0.1mM~15mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、0.1mM~10mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、0.1mM~5mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、0.1mM~1mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、1mM~100mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、1mM~50mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、1mM~40mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、1mM~30mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、1mM~20mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、1mM~15mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、1mM~10mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、5mM~50mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、5mM~25mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、5mM~15mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、0.1mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、0.5mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、1mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、2mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、3mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、4mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、5mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、6mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、7mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、8mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、9mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、10mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、11mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、12mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、13mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、14mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、15mMである。
一実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約0.1mM~約100mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約0.1mM~約50mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約0.1mM~約40mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約0.1mM~約30mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約0.1mM~約20mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約0.1mM~約15mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約0.1mM~約10mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約0.1mM~約5mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約0.1mM~約1mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約1mM~約100mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約1mM~約50mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約1mM~約40mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約1mM~約30mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約1mM~約20mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約1mM~約15mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約1mM~約10mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約5mM~約50mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約5mM~約25mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約5mM~約15mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約0.1mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約0.5mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約1mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約2mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約3mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約4mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約5mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約6mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約7mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約8mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約9mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約10mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約11mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約12mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約13mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約14mMである。別の実施形態では、グルタミン酸ナトリウムの濃度は、約15mMである。
さらなる実施形態では、製剤は、無機塩または有機塩を含んでよい。ある種の実施形態では、これらの塩は、タンパク質製剤中で緩衝剤として機能する。無機塩の非限定的な例には、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、及び炭酸水素ナトリウムが含まれる。有機塩の非限定的な例には、クエン酸ナトリウム、クエン酸カリウム、及び酢酸ナトリウムが含まれる。具体的な一実施形態では、無機塩は、リン酸ナトリウムである。本発明の製剤中の無機塩または有機塩の濃度は、所望の特性に応じて、固体化される前に0.1mM~100mMmMの範囲であり得る。
一実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、0.1mM~100mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、0.1mM~50mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、0.1mM~40mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、0.1mM~30mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、0.1mM~20mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、0.1mM~15mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、0.1mM~10mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、0.1mM~5mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、0.1mM~1mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、1mM~100mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、1mM~50mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、1mM~40mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、1mM~30mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、1mM~20mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、1mM~15mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、1mM~10mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、5mM~50mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、5mM~25mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、5mM~15mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、0.1mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、0.5mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、1mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、2mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、3mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、4mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、5mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、6mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、7mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、8mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、9mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、10mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、11mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、12mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、13mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、14mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、15mMである。
一実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約0.1mM~約100mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約0.1mM~約50mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約0.1mM~約40mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約0.1mM~約30mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約0.1mM~約20mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約0.1mM~約15mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約0.1mM~約10mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約0.1mM~約5mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約0.1mM~約1mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約1mM~約100mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約1mM~約50mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約1mM~約40mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約1mM~約30mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約1mM~約20mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約1mM~約15mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約1mM~約10mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約5mM~約50mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約5mM~約25mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約5mM~約15mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約0.1mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約0.5mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約1mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約2mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約3mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約4mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約5mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約6mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約7mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約8mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約9mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約10mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約11mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約12mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約13mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約14mMである。別の実施形態では、リン酸ナトリウムの濃度は、約15mMである。
ある種の実施形態では、タンパク質製剤は、糖アルコールを含む。本発明において使用するために企図される糖アルコールの非限定的な例は、マンニトール、キシリトール、ソルビトール、マルチトール、ラクチトール、グリセロール、エリトリトール、またはアラビトールである。具体的な一実施形態では、糖アルコールは、マンニトールである。本発明の製剤中の糖アルコールの濃度は、所望の特性に応じて、固体化される前に0.1%~10%mMの範囲であり得る。
一実施形態では、マンニトールの濃度は、約0.1%~約10%である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、約1%~10%である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、約1%~約5%である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、約1%~約3%である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、約3%~約5%である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、約5%~約10%である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、約0.1%である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、約0.3%である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、約0.5%である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、約1%である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、約2%である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、約3%である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、約4%である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、約5%である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、約6%である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、約7%である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、約8%である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、約9%である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、約10%である。
一実施形態では、マンニトールの濃度は、0.1%~10%である。一実施形態では、マンニトールの濃度は、1%~10%である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、1%~5%である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、1%~3%である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、3%~5%である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、5%~10%である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、0.1%である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、0.3%である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、0.5%である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、1%である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、2%である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、3%である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、4%である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、5%である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、6%である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、7%である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、8%である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、9%である。別の実施形態では、マンニトールの濃度は、10%である。
ある種の実施形態では、製剤は、糖を含む。糖の非限定的な例は、スクロース、マルトース、ラクトース、グルコース、フルクトース、ガラクトース、マンノース、アラビノース、キシロース、リボース、ラムノース、トレハロース、ソルボース、メレチトース、ラフィノース、チオグルコース、チオマンノース、チオフルクトース、オクタ-O-アセチル-チオトレハロース、チオスクロース、またはチオマルトースである。具体的な一実施形態では、糖は、スクロースである。本発明の製剤中の糖の濃度は、所望の特性に応じて、固体化される前に0.05%~10%mMの範囲であり得る。
一実施形態では、スクロースの濃度は、約0.05%~約10%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約0.5%~約5%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約1%~約5%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約1%~約10%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約1%~約5%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約1%~約3%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約3%~約5%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約5%~約10%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約0.05%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約0.1%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約0.3%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約0.5%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約0.7%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約1%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約2%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約3%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約4%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約5%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約6%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約7%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約8%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約9%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、約10%である。
一実施形態では、スクロースの濃度は、0.05%~10%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、0.5%~5%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、1%~5%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、1%~3%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、3%~5%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、5%~10%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、0.1%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、0.3%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、0.5%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、0.7%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、1%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、2%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、3%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、4%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、5%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、6%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、7%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、8%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、9%である。別の実施形態では、スクロースの濃度は、10%である。
ある種の実施形態では、製剤は、界面活性剤、すなわち、表面活性薬剤を含む。界面活性剤の非限定的な例は、ポリソルベート(例えば、ポリソルベート-80、ポリソルベート-20、ポリソルベート-21、ポリソルベート-40、ポリソルベート-60、ポリソルベート-65、ポリソルベート-81、またはポリソルベート-85、ポロキサマー(例えば、ポロキサマー188)、Triton、ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)、ラウレル硫酸ナトリウム、ナトリウムオクチルグリコシド、ラウリル-、ミリスチル-、リノレイル-、またはステアリル-スルホベタイン、ラウリル-、ミリスチル-、リノレイル-、またはステアリル-サルコシン、リノレイル-、ミリスチル-、または、セチル-ベタイン、ラウロアミドプロピル-、コカミドプロピル-、リノレアミドプロピル-、ミリスタミドプロピル-、パルミドプロピル-、またはイソステアラミドプロピル-ベタイン(例えば、ラウロアミドプロピル)、ミリスタミドプロピル-、パルミドプロピル-、またはイソステアラミドプロピル-ジメチルアミン;ナトリウムメチルココイル-、またはジナトリウムメチルオレイル-タウレート、ポリエチルグリコール、ポリプロピルグリコール、ならびにエチレン及びプロピレングリコールのコポリマー(例えば、Pluronics、PF68など)である。具体的な一実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート-80である。本発明の製剤中の界面活性剤の濃度は、所望の特性に応じて、固体化される前に0.0001%~0.1%の範囲であり得る。
一実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、約0.0001%~約0.1%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、約0.001%~約0.5%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、約0.001%~約0.1%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、約0.005%~約0.1%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、約0.005%~約0.05%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、約0.01%~約0.1%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、約0.5%~約0.1%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、約0.009%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、約0.008%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、約0.007%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、約0.006%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、約0.005%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、約0.004%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、約0.003%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、約0.002%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、約0.001%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、約0.01%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、約0.02%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、約0.03%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、約0.04%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、約0.05%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、約0.06%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、約0.07%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、約0.08%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、約0.09%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、約0.1%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、約0.5%である。
一実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、0.0001%~0.01%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、0.001%~0.5%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、0.001%~0.1%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、0.005%~0.1%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、0.005%~0.05%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、0.01%~0.1%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、0.5%~0.1%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、0.009%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、0.008%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、0.007%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、0.006%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、0.005%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、0.004%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、0.003%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、0.002%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、0.001%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、0.01%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、0.02%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、0.03%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、0.04%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、0.05%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、0.06%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、0.07%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、0.08%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、0.09%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、0.1%である。別の実施形態では、ポリソルベート80の濃度は、0.5%である。
一実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、約0.0001%~約0.1%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、約0.001%~約0.5%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、約0.001%~約0.1%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、約0.005%~約0.1%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、約0.005%~約0.05%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、約0.01%~約0.1%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、約0.5%~約0.1%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、約0.009%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、約0.008%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、約0.007%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、約0.006%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、約0.005%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、約0.004%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、約0.003%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、約0.002%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、約0.001%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、約0.01%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、約0.02%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、約0.03%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、約0.04%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、約0.05%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、約0.06%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、約0.07%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、約0.08%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、約0.09%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、約0.1%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、約0.5%である。
一実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、0.0001%~0.01%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、0.001%~0.5%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、0.001%~0.1%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、0.005%~0.1%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、0.005%~0.05%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、0.01%~0.1%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、0.5%~0.1%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、0.009%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、0.008%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、0.007%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、0.006%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、0.005%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、0.004%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、0.003%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、0.002%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、0.001%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、0.01%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、0.02%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、0.03%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、0.04%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、0.05%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、0.06%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、0.07%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、0.08%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、0.09%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、0.1%である。別の実施形態では、ポリソルベート20の濃度は、0.5%である。
一実施形態では、pHは、固体化される前に約5.0~約8.0である。別の実施形態では、pHは、約4.0~約10.0である。別の実施形態では、pHは、約5.0~約7.0である。別の実施形態では、pHは、約5.0~約9.0である。別の実施形態では、pHは、約6.0~約9.0である。別の実施形態では、pHは、約5.0である。別の実施形態では、pHは、約5.5である。別の実施形態では、pHは、約6.0である。別の実施形態では、pHは、約6.5である。別の実施形態では、pHは、約7.0である。別の実施形態では、pHは、約7.5である。別の実施形態では、pHは、約8.0である。別の実施形態では、pHは、約8.5である。別の実施形態では、pHは、約9.0である。別の実施形態では、pHは、約9.5である。別の実施形態では、pHは、約10.0である。
一実施形態では、pHは、固体化される前に6.0~8.0である。別の実施形態では、pHは、4.0~10.0である。別の実施形態では、pHは、5.0~7.0である。別の実施形態では、pHは、5.0~9.0である。別の実施形態では、pHは、6.0~9.0である。別の実施形態では、pHは、5.0である。別の実施形態では、pHは、5.1である。別の実施形態では、pHは、5.2である。別の実施形態では、pHは、5.3である。別の実施形態では、pHは、5.4である。別の実施形態では、pHは、5.5である。別の実施形態では、pHは、5.6である。別の実施形態では、pHは、5.7である。別の実施形態では、pHは、5.8である。別の実施形態では、pHは、5.9である。別の実施形態では、pHは、6.0である。別の実施形態では、pHは、6.1である。別の実施形態では、pHは、6.2である。別の実施形態では、pHは、6.3である。別の実施形態では、pHは、6.4である。別の実施形態では、pHは、6.5である。別の実施形態では、pHは、6.6である。別の実施形態では、pHは、6.7である。別の実施形態では、pHは、6.8である。別の実施形態では、pHは、6.9である。別の実施形態では、pHは、7.0である。別の実施形態では、pHは、7.5である。別の実施形態では、pHは、8.0である。別の実施形態では、pHは、8.5である。別の実施形態では、pHは、9.0である。別の実施形態では、pHは、9.5である。別の実施形態では、pHは、10.0である。
一実施形態では、タンパク質の濃度は、約0.01mg/ml~約10mg/mlである。一実施形態では、タンパク質の濃度は、約0.01mg/ml~約1mg/mlである。一実施形態では、タンパク質の濃度は、固体化される前に約0.1mg/ml~約100mg/mlmMである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約1mg/ml~約100mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約1mg/ml~約50mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約1mg/ml~約25mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約1mg/ml~約10mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約5mg/ml~約50mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約5mg/ml~約25mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約10mg/ml~約100mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約10mg/ml~約50mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約10mg/ml~約25mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約0.01mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約0.05mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約0.1mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約0.2mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約0.3mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約0.4mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約0.5mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約1mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約2mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約3mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約4mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約5mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約6mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約7mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約8mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約9mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約10mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約20mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約30mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約40mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約50mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約60mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約70mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約80mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約90mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、約100mg/mlである。
一実施形態では、タンパク質の濃度は、0.01mg/ml~10mg/mlである。一実施形態では、タンパク質の濃度は、0.01mg/ml~1mg/mlである。一実施形態では、タンパク質の濃度は、固体化される前に0.1mg/ml~100mg/mlmMである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、1mg/ml~100mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、1mg/ml~50mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、1mg/ml~25mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、1mg/ml~10mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、5mg/ml~50mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、5mg/ml~25mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、10mg/ml~100mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、10mg/ml~50mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、10mg/ml~25mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、0.01mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、0.05mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、0.1mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、0.2mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、0.3mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、0.4mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、0.5mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、1mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、2mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、3mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、4mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、5mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、6mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、7mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、8mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、9mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、10mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、20mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、30mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、40mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、50mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、60mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、70mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、80mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、90mg/mlである。別の実施形態では、タンパク質の濃度は、100mg/mlである。
固体タンパク質製剤は、これらだけに限定されないが、液体状態で出発し、続いて、液体が除去される(すなわち、水和タンパク質溶液から脱水タンパク質溶液へと進行する)タンパク質製剤を包含する。これを達成する方法の非限定的な例には、凍結乾燥(またフリーズドライまたはクリオデシケーションとも呼ばれる)または噴霧乾燥が含まれる。凍結乾燥では、物質は、急速凍結され、固相から気相への液体の昇華が生じる真空条件下で脱水される。噴霧乾燥は、熱風での急速な乾燥によって、液体またはスラリーから乾燥粉末を生成する方法である。凍結乾燥及び噴霧乾燥のプロセスは、当技術分野で周知であり、所望の結果を生じさせるために容易に最適化することができる。Lyophilization of Biopharmaceuticals,Biotechnology:Pharmaceutical Aspects,Henry R. Costantino(Editor),Michael J. Pikal(Editor);Lyophilization:Introduction and Basic Principles,Thomas A.Jennings,CRC Press,1999;及びFreeze-Drying/Lyophilization Of Pharmaceutical & Biological Products,Second Edition:Revised And Expanded(Drugs and the Pharmaceutical Sciences),Louis Rey(Editor),Joan C.May(Editor),CRC Press 2004も参照されたい。一実施形態では、固体タンパク質製剤を凍結乾燥させる。別の実施形態では、固体タンパク質製剤を噴霧乾燥させる。本開示を通じて、「固体化される前に」との言及が存在し得るが、これは、上記のとおりに液体が除去される前の液体状態のタンパク質製剤を意味する。
本発明の一態様は、安定していて、かつ様々な異なる温度を通じて長期間にわたってそれらの安定性を維持するタンパク質製剤(固体及び液体の両方)を提供することである。この特性は、これらだけに限定されないが、広範囲の様々な臨床設定における貯蔵の容易さを含む様々な異なる理由により、有用である。
一実施形態では、固体タンパク質製剤は、4℃~45℃で少なくとも1ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、4℃~45℃で少なくとも2ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、4℃~45℃で少なくとも3ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、4℃~45℃で少なくとも4ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、4℃~45℃で少なくとも5ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、4℃~45℃で少なくとも6ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、4℃~45℃で少なくとも12ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、4℃~45℃で少なくとも18ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、4℃~45℃で少なくとも24ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、4℃~45℃で少なくとも36ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、4℃~45℃で少なくとも48ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、4℃~45℃で少なくとも60ヶ月間にわたって安定している。
一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約4℃~約45℃で少なくとも約1ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約4℃~約45℃で少なくとも約2ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約4℃~約45℃で少なくとも約3ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約4℃~約45℃で少なくとも約4ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約4℃~約45℃で少なくとも約5ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約4℃~約45℃で少なくとも約6ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約4℃~約45℃で少なくとも約12ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約4℃~約45℃で少なくとも約18ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約4℃~約45℃で少なくとも約24ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約4℃~約45℃で少なくとも約36ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約4℃~約45℃で少なくとも約48ヶ月間にわたって安定している。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約4℃~約45℃で少なくとも約60ヶ月間にわたって安定している。
一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約4℃、約29℃、約37℃、及び/または約45℃で少なくとも約1ヶ月間にわたって安定している。さらなる一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約4℃、約29℃、約37℃、及び/または約45℃で少なくとも約2ヶ月間にわたって安定している。さらなる一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約4℃、約29℃、約37℃、及び/または約45℃で少なくとも約3ヶ月間にわたって安定している。さらなる一実施形態では、固体タンパク質製剤は、少なくとも約4℃、約29℃、約37℃、及び/または約45℃で約4ヶ月間にわたって安定している。さらなる一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約4℃、約29℃、約37℃、及び/または約45℃で少なくとも約5ヶ月間にわたって安定している。さらなる一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約4℃、約29℃、約37℃、及び/または約45℃で少なくとも約6ヶ月間にわたって安定している。さらなる一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約4℃、約29℃、約37℃、及び/または約45℃で少なくとも約12ヶ月間にわたって安定している。さらなる一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約4℃、約29℃、約37℃、及び/または約45℃で少なくとも約18ヶ月間にわたって安定している。さらなる一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約4℃、約29℃、約37℃、及び/または約45℃で少なくとも約24ヶ月間にわたって安定している。さらなる一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約4℃、約29℃、約37℃、及び/または約45℃で少なくとも約36ヶ月間にわたって安定している。さらなる一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約4℃、約29℃、約37℃、及び/または約45℃で少なくとも約48ヶ月間にわたって安定している。さらなる一実施形態では、固体タンパク質製剤は、約4℃、約29℃、約37℃、及び/または約45℃で少なくとも約60ヶ月間にわたって安定している。
またさらなる一実施形態では、固体タンパク質製剤は、液体で再構成される。一実施形態では、固体タンパク質製剤は、水で再構成される。別の実施形態では、固体タンパク質製剤は、ソルビトール及び塩化ナトリウムを含む再構成用溶液で再構成される。ある種の実施形態では、ソルビトールの濃度は、4%であり、塩化ナトリウムの濃度は、0.7%であり、pHは、7である。さらなる実施形態では、固体タンパク質製剤は、ベンジルアルコールをさらに含む再構成用溶液で再構成される。具体的な一実施形態では、ベンジルアルコールの濃度は、1%である。さらなる実施形態では、固体タンパク質製剤を再構成するために使用される液体は、無菌である。
具体的な一実施形態では、本発明は、固体化される前に、pH7で、Aranesp(0.5~5mg/ml)、10mMヒスチジン、2%マンニトール、0.5%スクロース、0.005%ポリソルベート-80からなるか、それらから本質的になるか、またはそれらを含む固体タンパク質製剤を提供する。
具体的な一実施形態では、本発明は、固体化される前に、pH7で、Aranesp(2mg/ml)、10mMヒスチジン、2%マンニトール、0.5%スクロース、0.005%ポリソルベート-80からなるか、それらから本質的になるか、またはそれらを含む固体タンパク質製剤を提供する。
具体的な一実施形態では、本発明は、固体化される前に、pH7で、Aranesp(0.5~5mg/ml)、10mMヒスチジン、2%マンニトール、0.5%スクロース、0.005%ポリソルベート-80からなるか、それらから本質的になるか、またはそれらを含む固体タンパク質製剤を提供する。
具体的な一実施形態では、本発明は、固体化される前に、pH6で、Aranesp(0.5~5mg/ml)、10mMリン酸ナトリウム、4.5%マンニトール、0.5%スクロース、0.005%ポリソルベート-80からなるか、それらから本質的になるか、またはそれらを含む固体タンパク質製剤を提供する。
具体的な一実施形態では、本発明は、固体化される前に、pH7で、Aranesp(0.5~5mg/ml)、10mMリン酸ナトリウム、2%マンニトール、0.5%スクロース、0.005%ポリソルベート-80からなるか、それらから本質的になるか、またはそれらを含む固体タンパク質製剤を提供する。
具体的な一実施形態では、本発明は、固体化される前に、pH7で、Aranesp(0.5~5mg/ml)、10mMコハク酸ナトリウム、2%マンニトール、0.5%スクロース、0.005%ポリソルベート-80からなるか、それらから本質的になるか、またはそれらを含む固体タンパク質製剤を提供する。
具体的な一実施形態では、本発明は、固体化される前に、pH6で、Aranesp(0.5~5mg/ml)、10mMコハク酸ナトリウム、4.5%マンニトール、0.5%スクロース、0.005%ポリソルベート-80からなるか、それらから本質的になるか、またはそれらを含む固体タンパク質製剤を提供する。
具体的な一実施形態では、本発明は、固体化される前に、pH6.2で、Aranesp(0.5~5mg/ml)、20mMリン酸ナトリウム、140mM NaCl、0.005%ポリソルベート-80からなるか、それらから本質的になるか、またはそれらを含む固体タンパク質製剤を提供する。
具体的な一実施形態では、本発明は、固体化される前に、pH7で、Aranesp(0.5~5mg/ml)、10mMヒスチジン、2%マンニトール、0.5%スクロースからなるか、それらから本質的になるか、またはそれらを含む固体タンパク質製剤を提供する。
具体的な一実施形態では、本発明は、固体化される前に、pH7で、Aranesp(2mg/ml)、10mMヒスチジン、2%マンニトール、0.5%スクロースからなるか、それらから本質的になるか、またはそれらを含む固体タンパク質製剤を提供する。
具体的な一実施形態では、本発明は、固体化される前に、pH7で、Aranesp(0.5~5mg/ml)、10mMヒスチジン、2%マンニトール、0.5%スクロースからなるか、それらから本質的になるか、またはそれらを含む固体タンパク質製剤を提供する。
具体的な一実施形態では、本発明は、固体化される前に、pH6で、Aranesp(0.5~5mg/ml)、10mMリン酸ナトリウム、4.5%マンニトール、0.5%スクロースからなるか、それらから本質的になるか、またはそれらを含む固体タンパク質製剤を提供する。
具体的な一実施形態では、本発明は、固体化される前に、pH7で、Aranesp(0.5~5mg/ml)、10mMリン酸ナトリウム、2%マンニトール、0.5%スクロースからなるか、それらから本質的になるか、またはそれらを含む固体タンパク質製剤を提供する。
具体的な一実施形態では、本発明は、固体化される前に、pH7で、Aranesp(0.5~5mg/ml)、10mMコハク酸ナトリウム、2%マンニトール、0.5%スクロースからなるか、それらから本質的になるか、またはそれらを含む固体タンパク質製剤を提供する。
具体的な一実施形態では、本発明は、固体化される前に、pH6で、Aranesp(0.5~5mg/ml)、10mMコハク酸ナトリウム、4.5%マンニトール、0.5%スクロースからなるか、それらから本質的になるか、またはそれらを含む固体タンパク質製剤を提供する。
具体的な一実施形態では、本発明は、固体化される前に、pH6.2で、Aranesp(0.5~5mg/ml)、20mMリン酸ナトリウム、140mM NaClからなるか、それらから本質的になるか、またはそれらを含む固体タンパク質製剤を提供する。
別の実施形態では、本発明は、安定な固体タンパク質製剤を調製する方法であって、a)上記タンパク質を凍結乾燥緩衝液で希釈すること;及びb)固体化する前に、上記希釈タンパク質を凍結乾燥させることを含む方法を提供する。
ある種の実施形態では、本発明の製剤は、糖タンパク質を含む。一実施形態では、タンパク質は、エリスロポイエチンである。別の実施形態では、タンパク質は、エリスロポイエチンの類似体である。さらなる一実施形態では、タンパク質は、ダルベポエチンアルファである。またさらなる一実施形態では、タンパク質は、抗体である。また別の実施形態では、タンパク質は、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体である。
エリスロポイエチンは、赤血球への赤血球前駆細胞の成熟に関係する糖タンパク質ホルモンである。これは、循環における赤血球のレベルの調節において必須である。天然に存在するエリスロポイエチンは、胎生期の間に肝臓によって、かつ成人の腎臓によって産生され、血液中を循環し、骨髄において赤血球の産生を刺激する。貧血は、ほとんど常に、腎臓からのエリスロポイエチンの産生の低下による腎不全の結果である。エリスロポイエチンをコードする遺伝子で形質転換された宿主細胞からのタンパク質産生物の発現を伴う遺伝子操作技術によって産生された組換えエリスロポイエチンは、慢性腎不全から生じた貧血の処置において使用すると、有効であることが見出されている。
エリスロポイエチンをコードする遺伝子の特定、クローニング、及び発現は、米国特許第4,703,008号において記載されている。組換えエリスロポイエチンプラスミドを含有する哺乳動物細胞の成長を支持した細胞培地からの組換えエリスロポイエチンの精製の記載は、例えば、米国特許第4,667,016号に含まれる。組換えプラスミド上にエリスロポイエチン遺伝子を含有する哺乳動物細胞宿主からの、生物学的に活性な組換えエリスロポイエチンの発現及び回収は、治療適用に適した利用可能な量のエリスロポイエチンをもたらしている。エリスロポイエチンのいくつかの種でのポリヌクレオチド及びポリペプチド配列が公知である。
現在、数種の組換えヒトエリスロポイエチン医薬品が市販されている(例えば、Epogen(登録商標);エポエチンアルファ)。エポエチンアルファに加えて、他のエポエチンが開発されている(例えば、エポエチンベータ、デルタ、オメガ、ゼータ)。本発明の内容では、「エリスロポイエチン」または「組換えヒトエリスロポイエチン」という用語を使用する場合、エリスロポイエチンのすべての形態が包含されることが意図されている。
ヒトエリスロポイエチンの類似体を含む特定の製剤も、本発明に包含される。ある種の実施形態では、「ヒトエリスロポイエチンの類似体」という語句は、ヒトエリスロポイエチンのアミノ酸配列において1つまたは複数の変化を伴い、シアル酸結合のための部位の数が増大しているエリスロポイエチンを指す。非限定的な一例は、ヒトエリスロポイエチンのハイパーグリコシル化類似体であるダルベポエチンアルファ(Aranesp(登録商標))である。これらの類似体においてグリコシル化のために付加された部位は、ヒトエリスロポイエチンよりも多数の炭水化物鎖、及び高いシアル酸含有率をもたらし得る。少なくとも1つの、グリコシル化のための部位の再編成を含むアミノ酸配列を含むエリスロポイエチン類似体も提供されている。エリスロポイエチンのカルボキシ末端への1個または複数個のアミノ酸の付加を含み、その付加が少なくとも1つのグリコシル化部位を提供している類似体も包含される。類似体は、グリコシル化に利用可能である部位を増大または変更するアミノ酸残基の付加、欠失、または置換を有する特定部位の変異誘発によって生成することができる。そのような類似体は、ヒトエリスロポイエチンよりも多数の炭水化物鎖を有してよい。加えて、例えば、米国特許第7,217,689を参照されたい。
別の態様では、本発明は、ヒトエリスロポイエチンに特異的に結合する抗体、抗体断片、抗体誘導体、抗体変異タンパク質、及び抗体変異体を含む製剤を提供する。
抗体は、当技術分野で公知の任意の定常領域を含み得る。軽鎖定常領域は、例えば、カッパ型またはラムダ型軽鎖定常領域、例えば、ヒトカッパ型またはラムダ型軽鎖定常領域であり得る。重鎖定常領域は、例えば、アルファ型、デルタ型、イプシロン型、ガンマ型、またはミュー型重鎖定常領域、例えば、ヒトアルファ型、デルタ型、イプシロン型、ガンマ型、またはニュー型重鎖定常領域であり得る。一実施形態では、軽鎖または重鎖定常領域は、天然に存在する定常領域の断片、誘導体、変異体、または変異タンパク質である。
一実施形態では、抗体はさらに、定常軽鎖カッパもしくはラムダドメイン、またはこれらの断片を含む。軽鎖定常領域及びそれらをコードするポリヌクレオチドの配列は、当技術分野で周知である。別の実施形態では、さらに重鎖定常ドメイン、またはその断片、例えば、IgG1またはIgG2重鎖定常領域を含み、そのような配列は、当技術分野で周知である。
抗体には、所望のアイソタイプ(例えば、IgA、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgE、及びIgD)を有するもの、さらには、そのFabまたはF(ab’)断片が含まれる。さらに、IgG4が望ましいならば、Bloomら、1997、Protein Science 6:407(参照によって本明細書に組み込まれる)において記載されているとおり、点突然変異をヒンジ領域に導入して、IgG4抗体における異質性をもたらし得るH鎖内ジスルフィド結合を形成する傾向を緩和することが望ましいこともある。
「抗体」という用語は、定義のセクションにおいて広範に記載したとおり、インタクトな抗体、またはその抗原結合断片を指す。抗体は、完全抗体分子(ポリクローナル、モノクローナル、キメラ、ヒト化、または全長重鎖及び/もしくは軽鎖を有するヒトバージョンを含む)を含んでよいか、またはその抗原結合断片を含む。抗体断片には、F(ab’)、Fab、Fab’、Fv、Fc、及びFd断片が含まれ、それらを、単一ドメイン抗体、一本鎖抗体、マキシボディ、ミニボディ、細胞内抗体、二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体、v-NAR、及びビス-scFvに組み込むことができる(例えば、Hollinger and Hudson、2005、Nature Biotechnology、23、9、1126~1136を参照されたい)。フィブロネクチンポリペプチドモノボディを含む、米国特許第6,703,199号において開示されているものなどの抗体ポリペプチドも含まれる。他の抗体ポリペプチドは、米国特許出願公開第2005/0238646号において開示されており、それらは単鎖ポリペプチドである。
本発明は、安定なタンパク質製剤を提供する。安定な(安定している)という用語は、特定の非限定的な実施形態では、タンパク質の構造及び活性に関する。ある種の実施形態では、安定な(安定している)は、タンパク質が適正なアミノ酸配列及び配座構造を維持していることを意味する。これをアッセイするための方法の非限定的な例には、抗体結合アッセイまたはゲル電気泳動が含まれる。
ある種の実施形態では、安定性の一態様は、貯蔵期間にわたって測定される酸化パーセントである。タンパク質は酸化するにつれて、他の特性の中でも、活性を喪失し得る。一実施形態では、本発明の製剤中のタンパク質は、約5%~約10%の酸化パーセントを有する。別の実施形態では、本発明の製剤中のタンパク質は、約10%未満の酸化パーセントを有する。別の実施形態では、本発明の製剤中のタンパク質は、約5%未満の酸化パーセントを有する。一実施形態では、本発明の製剤中のタンパク質は、5%~10%の酸化パーセントを有する。別の実施形態では、本発明の製剤中のタンパク質は、10%未満の酸化パーセントを有する。別の実施形態では、本発明の製剤中のタンパク質は、5%未満の酸化パーセントを有する。
またさらなる実施形態では、安定な(安定している)は、製剤中に存在するタンパク質が生物学的作用を有し、かつ維持していることを意味する。非限定的な例には、in vitroでの細胞系に対するタンパク質の作用を測定するバイオアッセイ、またはin vivoでの動物に対するタンパク質の作用を測定するバイオアッセイが含まれる。
本発明のタンパク質製剤は、患者に、適応及び組成物に適切な様々な経路を通じて投与することができる。本発明のタンパク質製剤は、これらだけに限定されないが、非経口投与を含む任意の適切な技術によって投与してよい。注射するならば、製剤を、例えば、関節内、静脈内、筋肉内、病変内、腹腔内、または皮下経路を介して、大量注射、または連続注入によって投与することができる。
投薬量及び投与頻度は、投与経路、使用される特定のタンパク質、治療を受ける疾患の性質及び重症度、その状態が急性か、または慢性か、ならびに対象の体格及び全身状態などの因子に従って、様々であってよい。関連技術において公知の手順によって、例えば、用量漸増研究を含んでよい治験において、適切な投薬量を決定することができる、
本発明の製剤中の1種または複数種のタンパク質、及び本明細書において論述した状態のいずれかの処置において使用するためのラベルまたは他の取扱説明書を含む、医師及び/または対象が使用するためのキットを提供する。一実施形態では、キットは、本発明の凍結乾燥製剤中の1種または複数種のタンパク質の無菌製剤、及び別になっている無菌再構成用溶液を含み、これらは、1つまたは複数のバイアル中にあってよい。
本発明を記載してきたが、次の実施例は、実例として提示するものであって、限定ではない。
実施例1
1. 目的
この研究の目的は、取扱い及び貯蔵において利点を有する室温安定なAranesp(登録商標)製剤を開発する実行可能性を調査することであった。現行の市販製剤は、2~8℃で貯蔵される液体製剤である。凍結乾燥製剤は、再構成する必要があり、2ステップ手順を伴う注射剤であるので、市場において好ましい製剤ではない。再構成及び注射プロセスの両方をシームレスな単一ステップに組み合わせることによって、液体プレフィルドシリンジとして凍結乾燥製剤を送達する簡便な方法を提供するデバイスであるLyoTip(登録商標)以来、凍結乾燥製剤を、3ccガラスバイアル中の室温安定な製剤で、長期貯蔵性研究について調査してきた。
2. 実験の概要
Aranesp(登録商標)バルクを透析することによって、Aranesp(登録商標)(2mg/mL)を凍結乾燥製剤の5種中に配合し、貯蔵性を20mMリン酸ナトリウム、140mM塩化ナトリウム、pH6.2中の液体製剤と比較した。透析試料(0.25mL)を、ガラス製3ccバイアルに充填し、凍結乾燥させた。凍結乾燥試料を貯蔵性のために、4℃、29℃、37℃、及び45℃で24ヶ月にわたって貯蔵した。各時点で、試料を3種の再構成用溶液1mL(P45MSu6及びS45MSu6では水を使用し、P2MSu7、S2MSu7、及びH2MSu7では4%ソルビトール及び0.7%塩化ナトリウムを使用した)で再構成して、500μg/mLの最終濃度にした。再構成試料を、SEC-HPLC(サイズ排除HPLC)、抗体9G8A(相対タンパク質アンフォールディングをモニター)、pH、酸化%、RP-HPLC(不純物及び短縮物)、肉眼では見えない粒子、濃度、及び重量オスモル濃度について分析した。
3. 物質及び装置
次の物質を使用した。Aranespバルク物質(2mg/mL)、ポリソルベート80、ガラス製3ccバイアル、凍結乾燥用のDaikyoロングストッパー。次の6種の配合緩衝液を調製した。
P2MSu7:10mMリン酸ナトリウム、2%マンニトール、0.5%スクロース、pH7(Lot#29070904-11)
S2MSu7:10mMコハク酸ナトリウム、2%マンニトール、0.5%スクロース、pH7(Lot#29070904-21)
H2MSu7:10mMヒスチジン、2%マンニトール、0.5%スクロース、pH7(Lot#29070904-19)
P45MSu6:10mMリン酸ナトリウム、4.5%マンニトール、0.5%スクロース、pH6(Lot#29070627-18)
S45MSu6:10mMコハク酸ナトリウム、4.5%マンニトール、0.5%スクロース、pH6(Lot#29070627-19)
P62N:20mMリン酸ナトリウム、140mM NaCl、pH6.2
使用する追加の装置には、Slide-A Lyser透析カセット(Pierce)、Corningフィルター(0.22μm)、2日間にわたって試料を透析するための冷蔵室が含まれ、Virtis凍結乾燥機を凍結乾燥のために使用した。
4. 試料の調製手順
4.1. 試料の調製
Slide-A Lyser透析カセットを使用して、冷蔵室(2~8℃)内で、2日間にわたって、Aranesp(登録商標)(2mg/mL)を5種の配合緩衝液中に透析した。緩衝液を室温でpH及び重量オスモル濃度についてチェックし、その後、試料を透析した。透析の後に、試料の濃度をA280によってチェックした。試料を、0.005%ポリソルベート-80を用いて、及びポリソルベート-80を用いずに調製した。10%(w/v)ポリソルベート-80ストック溶液を試料に添加して、0.005%にすることによって、ポリソルベート-80を含む試料を調製した。10%ポリソルベート-80溶液を、2.5gのポリソルベート-80を秤量し、各緩衝液25mLで溶かして作製した。無菌フード内でCorningフィルター(0.22μm)を使用して、試料を濾過した。濾過試料及びプラセボ(0.25mL)を3ccガラスバイアルに充填し、Virtis凍結乾燥機を使用して、凍結乾燥サイクルに掛けた(表1)。ポリソルベート-80をバルクに添加して0.005%にすることによって、20mMリン酸ナトリウム、140mM塩化ナトリウム、0.005%ポリソルベート-80、pH6.2中の液体試料を調製した。液体対照試料、凍結乾燥試料、及びプラセボを貯蔵性のために4℃、29℃、37℃、及び45℃で24ヶ月にわたって貯蔵した。各時点で、試料を3種の再構成用溶液1mL(水をP45MSu6及びS45MSu6では使用し、4%ソルビトール及び0.7%塩化ナトリウムをP2MSu7、S2MSu7、及びH2MSu7では使用した)で再構成して、500μg/mLの最終濃度にした。0.005%ポリソルベート-80を含む試料(0.25mL)を、個々の再構成用緩衝液1mLで再構成した場合、試料は、再構成用緩衝液1mLで希釈したので、ポリソルベート-80 0.00125%を含有した。再構成された試料を、SEC-HPLC(サイズ排除HPLC)、9G8A(相対タンパク質アンフォールディングをモニター)、pH、酸化%、及び非還元RP-HPLC(不純物及び短縮物)について分析した。
試料リスト、時点、及び温度を付記1に示す。
4.2. 凍結乾燥手順:
試料バイアルを、凍結乾燥機の事前冷却しておいた(4℃)シェルフに装填した。試料を、凍結、一次乾燥、及び二次乾燥からなる3ステップに掛けた。初めに、試料を60分間にわたって4℃で保持し、次いで、180分かけて4℃から-50℃に冷却した。-45℃で60分間にわたって保持した後に、シェルフ温度を70分かけて-12℃に上昇させた。次いで、-12℃で360分間にわたって保持した後に、温度を再び70分かけて-50℃に低下させた。試料を60分間にわたって-50℃にした。一次乾燥のために、シェルフ温度を-10℃に40分間にわたって上昇させ、チャンバー真空を50mTorrに維持して1500分間にわたって保持した。二次乾燥のために、シェルフ温度を350分かけて25℃に上昇させ、720分間にわたって保持した。次いで、温度を140分間にわたって5℃に低下させた。すべてのサイクルが終了した後に、乾燥チャンバー内部で、バイアルにストッパーを設置した。
Figure 2023162442000002
Figure 2023162442000003
5. 分析方法
5.1. 9G8A法
5.1.1. 9G8A法1
Bioveris機器を使用して、12ヶ月まで、アッセイを分析した。系列希釈法を使用して、試料を、希釈液(PBS中の1%BSA及び0.1%PS-80)で0.4μg/mLに希釈した。希釈液を用いて、標準曲線希釈も調製した。各試料10μLを、96ウェルプレートに4連で装填した。次いで、プレートを室温、暗所で1時間にわたってインキュベートした。TAG標識9G8A抗体50μL(希釈液3mL当たり9G8A5μL)を各ウェルに添加し、プレートをさらに1時間インキュベートした。ビオチン-ヤギポリクローナル抗体50μL(希釈液3mL当たりビオチン-ヤギ5μL)をウェルに添加し、さらに1時間インキュベートした。ストレプトアビジンビーズ25μLをウェルに添加し、30分間にわたってインキュベートした。最後に、1倍PBS115μLをウェルに添加した。Bioveris M-8分析器を使用して、プレートを分析した。ECL(酵素-化学-発光(Enzymatic-chemo-luminescent))値が報告され、ECL値が、相対変性パーセントに変換された。
5.1.2. 9G8A法2
BioVeris社が計器をサポートすることができなかったので、本発明者らが、手動による方法を開発しなければならなかった。18ヶ月目からは、新たな9G8A法を使用して、試料を分析した。希釈した9G8A抗体溶液(100μL)を、分析セットに必要なウェルのそれぞれに添加した。プレートを1時間にわたって室温でインキュベートした。次いで、プレートを希釈液(PBS中の1%BSA及び0.1%PS-80)で3回洗浄し、洗浄の間に、乾燥ブロットした。希釈した標準、対照、または試料100μLをウェルのそれぞれに移した。1時間のインキュベーションの後に、液体をプレートからデカンテーションし、3回洗浄した。二次抗体溶液を添加し、さらに1時間インキュベートした。液体をプレートからデカンテーションし、再び洗浄した。HRP100μLをウェルのそれぞれに添加し、さらに30分間にわたってインキュベートした。液体をプレートからデカンテーションし、希釈液で3回洗浄した。調製した基質試薬100μLを各ウェルに添加し、プレートを、分析のためのプレートリーダーに入れた。
5.2. サイズ排除クロマトグラフィー(SE-HPLC)
サイズ排除クロマトグラフィーを、安定性指示アッセイとして使用した。Chromeleonソフトウェアを備えたAgilent 1100 HPLCシステムで、分離を行った。この方法は、ガードカラム(TSKgel Guard Column SWXL 6.0mm×4.0cm)に沿って連続して取り付けられている2つのカラム(TosoHaas TSK gel G3000SWxl,7.8mm×300mm)を使用した。タンパク質10μgをカラムに装填し、0.5mL/分の流速で、20mMリン酸ナトリウム、140mM塩化ナトリウム、pH6.2からなる移動相を用いて定組成で溶離した。215nm及び280nmでのUV検出を使用して、タンパク質をモニターした。クロマトグラムにおける総面積カウントに対するピーク面積パーセントを、高分子量種(HMW)及び低分子量種(LMW)の量を定量するために使用した。
5.3. 酸化パーセント
変性ペプチドマップ分析を介して、メチオニン54酸化検出を行った。試料からの糖の除去は、遠心分離(25℃で20分間にわたって12000rpm)を介しての濾過(Millipore Microcon Centrifugal Filter Devices Ultracel YM-10)を必要とした。トリプシン消化のために、試料体積を水で元の濃度に戻した。試料を希釈緩衝液(20mMリン酸ナトリウム、140mM塩化ナトリウム、0.005%ポリソルベート80、pH6.2)で20μg/mLに希釈した。消化緩衝液(500mMトリス-HCl中の10mMメチオニン、pH8)を、消化緩衝液と全体積との比1:10で添加した。次いで、トリプシン(1mg/mL)を、トリプシンと最終タンパク質濃度との比1:5(μgで)で添加した。試料を29℃で15時間にわたってインキュベートし、次いで、25%TFA10μLでクエンチした。
酸化検出は、逆相クロマトグラフィー分析を使用し、その際、C8カラム(Phenomenex Develosil 5u 300C8-HG 300A 150×2.0mm)に装填した試料2μg(100μL)を、2mL/分の流速でステップ勾配を使用して分離した。(40%アセトニトリル及び0.1%TFAからなる移動相Aを5分間にわたって流した。次に、46%アセトニトリル及び0.1%TFAからなる移動相Bを0.15分で0%~100%に傾斜させ、15分間にわたって流した。最後に、移動相Aを10分間にわたって流した)。カラム温度を55℃に設定した。クロマトグラフィー分析を、イオン定量のためのThermo LCQ Deca質量分析計に連結されたBeckman HPLC Goldシステムで行った。ピーク検出は、214nm(UV)においてであり、質量分光分析(シングルイオンモード)は、選択されたm/z:1264(非酸化)、1272(酸化)、1342(部分非酸化)、及び1350(部分酸化)でのズームスキャンを使用した。データを酸化%として報告した。
5.4. 非還元逆相
この技術を用いると、分解生成物が容易に検出されるので、非還元逆相高速液体クロマトグラフィー(NRRP-HPLC)を使用して、タンパク質含有率及び純度を決定した。非還元逆相(NRRP)HPLCを使用して、全長エリスロポイエチンモノマーからの短縮種を分離した。Shimadzu高速液体クロマトグラフィーで、Phenomenex Jupiter 5μm、300A、C4結合相シリカカラム(150×4.6mm)を使用して、測定を行った。移動相Aは、水中の0.0651%トリフルオロ酢酸(v/v)であり、移動相Bは、90%アセトニトリル中の0.0651%トリフルオロ酢酸であった。試料を、215nmでの検出で、1.0mL/分の流速で135分で20%Bから100%Bへの勾配システムによって分析した。クロマトグラムの重ね合わせを使用して、分解種または短縮種の検出を比較した。
5.5. pH
Mettler Toledo MP200pHメーターを使用して、pHについて、試料をモニターした。機器を、pH4及びpH7標準緩衝液を使用して較正した。
5.6. 重量オスモル濃度
重量オスモル濃度データを使用して、再構成用緩衝液のパーセンテージを決定した。重量オスモル濃度を、Advanced Instruments,Inc製Micro Osmometer、モデル330で測定した。290mOsm標準を、基準として使用した。
6. 結果及び考察
6.1. 9G8A
9G8A抗体結合アッセイ(Elliott、Changら、1996、Elliott、Lorenziniら、1996)を使用して、生成物試料の配座異性相似性を評価した。9G8Aモノクローナル抗体は、天然及び変性Aranespの両方において、アミノ酸13~17からなる線状エピトープであるERYLLを認識する。これらのアミノ酸は、Aranespの配座異性変化、またはその変性の後にさらに露出して、9G8A結合の増大をもたらす。データを、ダルベポエチンアルファ標準の反応性に対する、試料の反応性の比としてプロットした。1の値は、試料及び標準の間で反応性の差がないことを示している。
ポリソルベート-80をまない場合(A)または含む場合(B)の凍結乾燥製剤は、37℃での24ヶ月の貯蔵までは、液体製剤よりも安定していることを示した。液体製剤P62Nは、より高温では、より高い相対変性を示した(図1)。
6.2. サイズ排除クロマトグラフィー(SEC)による凝集検出
P45MSu6中の試料を除いて、Aranesp凍結乾燥製剤の大部分は、より高温(37℃及び45℃)で、24ヶ月の貯蔵まで液体製剤よりも高い安定性を実証した(図3)。加えて、変性は、温度と共に増大する。
この研究において使用したSE-HPLC法は、ポリソルベートピークをHMW種から分離しない。したがって、ポリソルベート-80不含試料と比較して、ポリソルベート含有試料では、HMW種%のわずかな増加が観察されている(図3及び6)。4℃及び29℃で、凍結乾燥製剤の間で有意な差はなかったが、しかしながら、P45MSu6Tは、37℃及び45℃で、他の凍結乾燥製剤と比較して、高い変性を有することが観察された(図5及び6)。H2MSu7が、他の製剤よりも安定していたことが観察されている(図4)。H2MSu7製剤中の試料は、45℃で24ヶ月貯蔵した後の重ね合わせにおいて、最小の二量体ピーク(矢印)を示した。加えて、ソルビトールまたは塩化ナトリウムで再構成された試料の間で、有意な差はなかった。
6.3. pH測定
24ヶ月の貯蔵では、すべての温度(4℃、29℃、37℃、及び45℃)において、製剤の大部分で10%未満の変化があった。
6.4. 酸化パーセント
メチオニンは、Aranespの54位にあり、酸化しやすい。LC/MS分析によって定量したのは、トリプシン消化試料のこの酸化である。示されているデータは、酸化%である。
4℃での24ヶ月の貯蔵の後に、すべての凍結乾燥製剤は、液体製剤以下の酸化を示した(図8)。さらに、3種の再構成用緩衝液の間で、差は観察されなかった。ポリソルベート-80の添加は、凍結乾燥製剤の安定性に対して有意な作用を示さなかった。
高温(29℃、37℃、及び45℃)での最高24ヶ月にわたる貯蔵で、すべての凍結乾燥製剤が、3種の再構成タイプすべてについて、液体製剤よりも有意に低い酸化レベルを示すこととなったが、酸化は、温度が上昇するにつれて上昇した(図9~11)。しかしながら、ポリソルベート凍結乾燥製剤を含まないヒスチジンは、他の凍結乾燥製剤すべてと比較すると、12ヶ月まで、有意に高い酸化を有した。塩化ナトリウム及びソルビトール再構成用緩衝液の間で、差は観察されなかった。2種の追加の凍結乾燥製剤、ポリソルベート及びリン酸塩を含むヒスチジンも、45℃で最高24ヶ月にわたって貯蔵した場合、高い酸化を示した(しかし、リン酸塩製剤は、水再構成での結果を示した)。最後に、ポリソルベート含有液体製剤は、ポリソルベート不含液体製剤よりも高い酸化を示したが、それらの凍結乾燥製剤において、有意な差は観察されなかった。
6.5. 非還元逆相HPLCによる分解及び短縮種の検出
非還元逆相HPLCを使用して、分解及び短縮種を検出する。24ヶ月にわたって45℃で貯蔵した後のAranesp(登録商標)の非還元逆相クロマトグラフィーからのクロマトグラムの重ね合わせが図12において示されている。図13は、24ヶ月にわたって37℃で貯蔵した後のクロマトグラムの重ね合わせを示している。3種の凍結乾燥試料は、24ヶ月にわたって4℃、29℃、37℃、及び45℃で貯蔵した後に、2種の異なる再構成用希釈液で、いずれの分解または短縮種も示さなかった。しかしながら、液体製剤試料は、両方の温度で多くが分解した。液体製剤中の試料のメインピークは、45℃でほぼ減少した。
7. 結論
Aranespの凍結乾燥製剤を、室温から45℃まで、及び24ヶ月で安定性について評価した。得られたデータは、凝集、短縮、アンフォールディング種、及び酸化などの評価された計数値において有意な変化がないことを示唆している。比較的少量のマンニトール2%を含有する製剤は、4.5%マンニトール製剤と比較して、良好な安定性プロファイルを示した。この実行可能性から得られたデータは、Aranesp凍結乾燥製剤が、室温から少なくとも45℃までにおいて、かつ少なくとも24ヶ月目に安定していることを示唆している。
付記1.
標題:LyoTipを用いて室温安定な凍結乾燥Aranesp製剤を開発する実行可能性
目的:LyoTip用のNESP凍結乾燥製剤を開発及び最適化するために、各製剤0.25mL(2mg/mL)を凍結乾燥させ、4種の温度での安定性研究のために整えた。この試料を、再構成用溶液1mLで希釈し、500μg/mLにする。
温度及び貯蔵条件:4℃、29℃、37℃、45℃
間隔:0、1、3、6、12、18、24ヶ月
緩衝剤:コハク酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、ヒスチジン
配合濃度:出発濃度:約2mg/mL、再構成試料濃度:約500μg/mL
ポリソルベート濃度:0.005%
ARANESP:濃度:2mg/mL
バイアル:3ccバイアルタイプ、バイアルを洗浄し、滅菌した。
ストッパー:凍結乾燥ストッパー
試料調製:
1. 様々な緩衝液:
1. P2MSu7:10mMリン酸ナトリウム、2%マンニトール、0.5%スクロース、pH7~11)
2. S2MSu7:10mMコハク酸ナトリウム、2%マンニトール、0.5%スクロース、pH7
3. H2MSu7:10mMヒスチジン、2%マンニトール、0.5%スクロース、pH7
4. P45MSu6:10mMリン酸ナトリウム、4.5%マンニトール、0.5%スクロース、pH6
5. S45MSu6:10mMコハク酸ナトリウム、4.5%マンニトール、0.5%スクロース、pH6
2. 凍結乾燥製剤:
透析するためにSlide-A Lyserを使用して、Aranespバルク(1製剤当たり100mL)を冷蔵室内で、2日間にわたって配合緩衝液中に透析した。透析の後に、濃度をUV-Visによって測定した。
3. 試料調製:
各試料に、水中の10%ポリソルベート溶液を添加して、0.005%ポリソルベート製剤にする。各試料を、無菌フード内で、0.22μmシリンジフィルターを使用して濾過した。
a. ポリソルベートを含まない試料
試料0.25mLを3ccバイアルに充填し、凍結乾燥ストッパーを凍結乾燥試料のために使用する。P62N500試料を、対照のための液体溶液として残すこととする。
Figure 2023162442000004
b. ポリソルベートを含む試料
Figure 2023162442000005
試料0.25mLを3ccバイアルに充填し、凍結乾燥ストッパーを凍結乾燥試料のために使用する。P62N500試料を、対照のための液体溶液として残すこととする。
c. ポリソルベートを含まないプラセボ
Figure 2023162442000006
d. ポリソルベートを含むプラセボ
Figure 2023162442000007
4. 試料の明細
Figure 2023162442000008
Figure 2023162442000009
Figure 2023162442000010
5. 分析のための試料の構成:各時点で、次の溶液1mLで試料を再構成した
a. P45MSu6及びS45MSu6では水
P2MSu7、S2MSu7、及びH2MSu7では、次の溶液を使用
b. 3%ソルビトール:1mL
c. 0.45%塩化ナトリウム:1mL
分析及び時点:
試料バイアル1つ当たり1mL
Figure 2023162442000011
分析方法:
C4 Jupiterカラム300A;250×4.6mm;S./No.:202394、バッチ番号5267-4
移動相;A-水中の0.065%TFA、B-95%アセトニトリル中の0.065%TFA、
実行時間:145分、流速0.75ml/分、
検出:215nm、230nm、280nm
勾配:20%B(5分);20%~70%B(100分);洗浄及び平衡化(40分)
試料装填:3μg
SEC HPLC:
カラム:2つのTSK G3000swxlカラム、定組成で流速0.5mL/分、実行時間80分、緩衝液100mMリン酸ナトリウム、0.5M塩化ナトリウム(pH6.9)
検出:215nm、230nm、280nm、緩衝液注入:100μL、
HSA及びTween試料:3μg。
総面積及び総面積に対するメインピーク%について215nmで報告
1時点当たりの試料リスト
Figure 2023162442000012
Figure 2023162442000013
Figure 2023162442000014
Figure 2023162442000015
Figure 2023162442000016
実施例2
1. 目的
Aranesp凍結乾燥製剤を上記実施例1から選択したが、LyoTip(登録商標)が、Crystal Zenithプラスチック材料から作製されているので、ガラスバイアルに対しするCZプラスチック製バイアル(Diakyo Crystal Zenith)の適合性研究を必要とした。この研究では、Aranesp(登録商標)貯蔵性の作用及びAranesp(登録商標)無刺痛(sting free)製剤の可能性に向けて、ガラスバイアルに対するコンテナ(Daikyo Crystal Zenith)の適合性を行った。無刺痛製剤では、pH7.0で0.7%塩化ナトリウムを含む1%ベンジルアルコール溶液を、凍結乾燥試料を再構成するために使用した。
2. 実験の概要
Aranesp配合緩衝液(20mMリン酸ナトリウム、140mM塩化ナトリウム、pH6.2)の透析によって、Aranesp(登録商標)(1.84mg/mL)を、10mMヒスチジン、2%マンニトール、0.5%スクロース、0.005%ポリソルベート80、pH7中に配合した。透析試料(0.25mL)を、2cc Crystal
Zenithバイアル及び3ccガラスバイアルに充填し、凍結乾燥させた。凍結乾燥試料を、貯蔵性のために4℃、29℃、37℃、及び45℃で12ヶ月にわたって貯蔵した。各時点で、試料を、3種の再構成用溶液1mL(0.70%NaCl、pH7;0.70%NaCl+1%ベンジルアルコール、pH7.0;0.004%PS-80を含む0.70%NaCl、pH7)で再構成して、500μg/mLの最終濃度にした。再構成試料を、SE-HPLC(サイズ排除HPLC)、9G8A(相対タンパク質アンフォールディングをモニター)、pH、酸化%、RP-HPLC(不純物及び短縮物)、肉眼では見えない粒子、濃度、ならびに重量オスモル濃度によって分析した。
3. 物質及び装置
3.1. Aranespバルク(1.84mg/mL)
3.2. ポリソルベート-80
3.3. ブローバックガラス製3ccバイアル(1型ガラスEP)
3.4. Diakyo Crystal Zenithバイアル(West.Daikyo製のDS CZ バイアル2mL 13mm、凍結乾燥用のロングストッパーをストッパーのために使用した。)
3.5. 10mMヒスチジン、2%マンニトール、0.5%スクロース、pH7(H2MSu7)
3.6. Slide-A Lyser透析カセットは、Pierceから入手した。
3.7. Corningフィルター(0.22μm)を濾過のために使用した。
3.8. 試料を冷蔵室内で2日間にわたって透析した。
3.9. Virtis凍結乾燥機を凍結乾燥のために使用した。
4. 試料調製手順
Slide-A Lyser透析カセットを使用して、冷蔵室(2~8℃)内で2日間にわたるAranesp配合緩衝液(20mMリン酸ナトリウム、140mM塩化ナトリウム、pH6.2)の透析によって、Aranesp(登録商標)(1.84mg/mL)を、10mMヒスチジン、2%マンニトール、0.5%スクロース、0.005%ポリソルベート80、pH7中に配合した。透析の前に、緩衝液を、室温でpH及び重量オスモル濃度についてチェックした。透析の後に、試料の濃度をチェックした。ポリソルベート-80 1%(w/v)ストック溶液を試料に添加して、0.005%にした。ポリソルベート80 0.25gをHM2MSu7緩衝液25mLに添加することによって、1%ポリソルベート-80溶液を作製した。無菌フード内で、Corningフィルター(0.22μm)を使用して、試料を濾過した。濾過試料(0.25mL)を2つの異なる種類のバイアル(Crystal Zenith及びガラスバイアル)に充填し、Virtis凍結乾燥機を使用して、ビルディング8内で、凍結乾燥サイクルに掛けた(表2)。プラセボ及びタンパク質含有製剤0.25mLを凍結乾燥させ、貯蔵性のために、4℃、29℃、37℃、及び45℃で12ヶ月にわたって貯蔵した。各時点で、試料を3種の再構成用溶液1mL(0.70%NaCl、pH7;0.70%NaCl+1%ベンジルアルコール、pH7.0;0.004%PS-80を含む0.70%NaCl、pH7)で再構成して、500μg/mLの最終濃度にした。再構成試料を、SEC-HPLC(サイズ排除HPLC)、9G8A(相対タンパク質アンフォールディングをモニター)、pH、酸化%、非還元RP-HPLC(不純物及び短縮物)、肉眼では見えない粒子、濃度、及び重量オスモル濃度について分析した。試料リスト、時点、及び温度を付記1及び2において示す。
Figure 2023162442000017
Figure 2023162442000018
5. 分析方法
5.1. 9G8A法
必要ならば、試料を、1倍PBS、1%BSA、0.1%ポリソルベート-80緩衝液中で、0.34から4.2μg/mLに希釈し、96ウェルプレートに分配した。TAG(BioVeris)標識9G8A(2μg/mL)抗rHuEPO抗体50μLを添加し、試料をプレート振盪機上で1時間にわたって室温でインキュベートした。次いで、アフィニティー精製されたビオチン化ウサギ抗rHuEPO抗体50μL(ストック濃度0.5μg/mL)を添加し、試料を、プレート振盪機上で1時間にわたって室温でインキュベートした。次に、1倍リン酸緩衝溶液(PBS)、1%ウシ血清アルブミン、及び0.1%ポリソルベート-80中で0.6μg/mLに希釈されたストレプトアビジンコーティングされたビーズ25μL(ストック濃度、0.566μg/mL)を添加し、試料を、振盪機プレート上で30分間にわたって室温でインキュベートした。プレートをM8分析器(IGEN International、Gaithersburg、MD)に移し、製造者指示書に従って、化学発光シグナルを測定した。化学発光シグナルを、試料とAranespバルク標準との比に変換し、相対反応性として報告したが、その際、1は、標準に等しく、値>1は、タンパク質変性を示す。
5.2. サイズ排除クロマトグラフィー(SE-HPLC)
サイズ排除クロマトグラフィーを、安定性指示アッセイとして使用した。Chromeleonソフトウェアを備えたAgilent 1100 HPLCシステムで、分離を行った。この方法は、ガードカラム(TSKgel Guard Column SWXL 6.0mm×4.0cm)に沿って連続して取り付けられている2つのカラム(TosoHaas TSK gel G3000SWxl、7.8mm×300mm)を使用した。タンパク質10μgをカラムに装填し、0.5mL/分の流速で、20mMリン酸ナトリウム、140mM塩化ナトリウム、pH6.2からなる移動相を用いて定組成で溶離した。215nm及び280nmでのUV検出を使用して、タンパク質をモニターした。クロマトグラムにおける総面積カウントに対するピーク面積パーセントを、高分子量種(HMW)及び低分子量種(LMW)の量を定量するために使用した。
5.3. 濃度
タンパク質濃度を、Agilent UV/Vis分光光度計モデル8453システムを使用するUV/VIS分光法によって、Chemstationソフトウェアを使用して決定した。1cm路長を有するキュベット中で、0.98の吸光係数でベールの法則を使用して、280nmでの吸収を決定した。
5.4. HIACを用いての、肉眼では見えない粒子の分析
肉眼では見えない粒子のカウントを、2~25μm範囲で、HIACによってモニターした。分析の前に、キャップを空けたまま、試料を1時間にわたって真空下で脱気した。各試料について4回、0.2mL測定を行い、試料の測定前に、Millipore水を使用して、システムをブランクにした。初回の実行は廃棄し、最後の3回を平均して、1ミリリットル当たりの累積カウントを得た。USPガイドラインのもとで、2、5、7.5、10、15、20、及び25μmの粒子サイズをモニターした。
5.5. 酸化%
トリプシンによる試料の消化、続く、質量分析検出を伴う逆相クロマトグラフィー(RP-HPLC/MS)を含む酸化検出アッセイを行った。LC/MS酸化アッセイを使用して、酸化メチオニン54のパーセンテージを決定した。すべての試料の溶液を、20mMリン酸ナトリウム、140mM塩化ナトリウム、0.005%ポリソルベート80、pH6.2中の0.02mg/mL試料500μlまたは10μgで調製した。次いで、0.5Mトリス-HCl、10mMメチオニン(pH8.0)50μlを試料に添加した。トリプシン(1mg/mlを2μl)を試料に添加し、終夜29℃でインキュベートした。試料を25%TFA10μlでクエンチした。LCQ Deca質量分析計(Promasseous)に連結しているBeckman HPLC System Gold(Osiris、System ID #408774)を使用して、試料の分析を達成した。移動相として42%アセトニトリル、0.1%TFAを用いる定組成法、Zorbax 300SB-C8カラム(150×2.1mm、5μm、300オングストローム、Part Number:883750-906)を60℃の温度で使用して、流速は0.20ml/分であった。検出は、UVで215及び280nmで行い、選択されたm/z:1264(非酸化)、1272(酸化)、1342(部分非酸化)、及び1350(部分酸化)でのズームスキャンを使用した。具体的なペプチドピークの比を使用して、酸化生成物のパーセンテージを評価した。
5.6. 非還元逆相
非還元逆相高速液体クロマトグラフィー(NRRP-HPLC)を使用して、タンパク質含有率及び純度を決定したが、それというのも、この技術を使用すると、分解生成物が容易に検出されるためである。非還元逆相(NRRP)HPLCを、全長エリスロポイエチンモノマーから短縮種を分離するために使用した。Phenomenex Jupiter 5μm、300A、C4結合相シリカカラム(150×4.6mm、00F-4167-E0)を使用するShimadzu高性能液体クロマトグラフィーグラフで、測定を行った。移動相Aは、水中の0.0651%トリフルオロ酢酸(v/v)であり、移動相Bは、90%アセトニトリル中の0.0651%トリフルオロ酢酸であった。1.0mL/分の流速で135分で20%Bから100%Bへの勾配システムによって、215nmでの検出で、試料を分析した。クロマトグラムの重ね合わせを使用して、分解または短縮種の検出を比較した。
5.7. pH測定
Mettler Toledo MP200 pHメーターを使用して、pHについて試料をモニターした。pH4及びpH7の標準緩衝液を使用して、機器を較正した。
5.8. 重量オスモル濃度決定
Advanced Instruments,Inc製Micro Osmometer、モデル330を用いて、重量オスモル濃度を測定した。290mOsm標準を参照として使用した。
6. 結果及び考察
6.1. 9G8A
9G8A抗体結合アッセイを使用して、製品試料の配座異性相似性を評価した(Elliott,Changら、1996、Elliott,Lorenziniら、1996)。9G8Aモノクローナル抗体は、天然及び変性Aranespの両方において、アミノ酸13~17からなる線状エピトープであるERYLLを認識する。これらのアミノ酸は、Aranespの配座異性変化、またはその変性の後にさらに露出して、9G8A結合の増大をもたらす。データを、ダルベポエチンアルファ標準の反応性に対する、試料の反応性の比としてプロットした。1の値は、試料及び標準の間で反応性の差がないことを示す。
ベンジルアルコール及びポリソルベート-80を含む異なる再構成希釈液を比較した場合、有意な差はなかった。しかしながら、ガラスバイアル中の試料と比較した場合、Crystal Zenith(CZ)バイアル中の試料では比較的高い温度で、相対変性においてわずかな増大があった。結果を図22においてまとめる。
6.2. サイズ排除クロマトグラフィー(SEC)による凝集物の検出
最高37℃では、ベンジルアルコール及びポリソルベート-80を含む3種の異なる再構成希釈液を比較した場合、Aranesp(登録商標)において、HMW種%に有意な差はなかった(図23)。しかしながら、Crystal Zenith(CZ)バイアル中の試料と比較した場合、45℃では、ガラスバイアル中の試料で高分子量種のわずかな増大があった(図23)。CZバイアル中のAranesp(登録商標)は、45℃で、ガラスバイアル中の試料よりも高いメインピーク%を示した(図24)。
6.3. 肉眼では見えない粒子の分析、
ガラス及びczバイアル中の試料の間で、粒子カウントにおける傾向は観察されなかった。粒子カウントは、4種の温度すべてで、タンパク質及びプラセボ試料の両方において、10μm及び25μm粒子について、USPガイドライン未満にとどまった(図25)。USPガイドラインは、≧10μmの粒子では、コンテナ1つ当たり≦6,000粒子であり、≧25μmの粒子では、コンテナ1つ当たり≦600粒子である。
6.4. 外観検査
4℃で12ヶ月にわたって貯蔵したCZバイアル中の試料は、CZバイアル中のタンパク質及びプラセボの両方について、凍結乾燥ケーキが溶けたことを示した(図26)。これは、水分がCZバイアルに浸透することを示している。
6.5. 濃度測定
試料をCZバイアル中、4℃で12ヶ月間にわたって貯蔵した後に、タンパク質濃度がわずかに低下した。しかしながら、他の温度及び時点では、試料及びコンテナの間で、タンパク質濃度に差はなかった。
6.6. 酸化%
4種の異なる温度(4℃、29℃、37℃、及び45℃)で12ヶ月にわたって貯蔵されたAranespでの酸化%を図28に示す。29℃、37℃、及び45℃で、ガラスバイアル中の試料と比較すると、CZバイアル中の試料では、急速な酸化速度が観察された。12ヶ月のインキュベーションの後に、29℃の貯蔵温度では、CZバイアル中の試料は、約25%の酸化を示したが、ガラスバイアル中の試料は、約5%の酸化を示した。より高温の貯蔵では、差はより有意である。4種の温度(4℃、29℃、37℃、及び45℃)について、12ヶ月までの貯蔵で、3種の再構成用緩衝液(0.7%塩化ナトリウム、1%ベンジルアルコール、または0.004%ポリソルベート-80)の間で、差はなかった。
6.7. 非還元逆相HPLCによる分解及び短縮種の検出
非還元逆相HPLCを使用して、分解及び短縮種を検出した。4種の異なる温度で12ヶ月にわたって貯蔵した後のAranesp(登録商標)の非還元逆相クロマトグラフィーからのクロマトグラムの重ね合わせを図29において示している。CZバイアル中、またはガラスバイアル中の凍結乾燥試料は、3種の異なる再構成希釈液で、4℃、29℃、37℃、及び45℃で12ヶ月にわたって貯蔵した後に、分解または短縮種のいずれも示さなかった。
6.8. pH測定
貯蔵期間にわたって、かつ4種の異なる温度で、当初pHは変化しなかった(図30)。
6.9. 重量オスモル濃度測定
ベンジルアルコールで再構成した試料は、4種の温度すべてについて、他の試料よりも高い重量オスモル濃度を示す。異なるコンテナナ中の試料の間で、差はなかった。4℃試料に異常値があったが、傾向はなかった。結果を図31においてまとめる。
7. 結論
本発明者らは、室温で少なくとも2年間にわたって貯蔵することができ、無刺痛であり得るAranespの有望な再配合を調査した。
Aranesp凍結乾燥製剤(10mMヒスチジン、2%マンニトール、0.5%スクロース、0.005%ポリソルベート80、pH7)及び3種の再構成用緩衝液(0.7%塩化ナトリウム、1%ベンジルアルコール、0.004%ポリソルベート-80)を使用して、ガラスバイアルに対して、Daikyo Crystal Zenith(CZ)バイアルにおけるAranesp安定性について先行コンテナ比較研究を行った。SE-HPLC、酸化%、pH、RP-HPLC、及び9G8Aイムノアッセイを使用して、物理的及び化学的分解をモニターした。結果は、9G8A(アンフォールディング)、肉眼では見えない粒子、RP-HPLC(短縮物)、及びSE-HPLC(凝集)分析に基づき、再構成用緩衝液(0.7%塩化ナトリウム、1%ベンジルアルコール、0.004%ポリソルベート-80)、及び異なるコンテナ(CZ及びガラスバイアル)の間で、差を示していない。しかしながら、ガラスバイアル中の試料と比較して、CZバイアル中の試料について、ケーキ構造の減少及びより高いパーセントの酸化が観察された。これは、CZバイアルが、水分及び酸素の浸透を受けやすいことを示した。この研究は、1%ベンジルアルコールを無刺痛目的のために、再構成用緩衝液として使用することができることを示した。また、室温で少なくとも2年間にわたって貯蔵することができるpH7の凍結乾燥Aranesp製剤は、刺痛作用を軽減し得る。
8. 付記
Figure 2023162442000019
Figure 2023162442000020
Figure 2023162442000021
付記2.時点及び期日
Figure 2023162442000022
実施例3
概要
抗EPOモノクローナル抗体の凍結乾燥製剤を室温安定な製剤のために開発した。2種の凍結乾燥製剤及び2種の濃度(100ug/mL、500ug/mL)を調査した。
1. GMST:10mMグルタミン酸Na(グルタミン酸から)、4%マンニトール、2%スクロース、0.01%ポリソルベート20、pH5.2
2. HMST:10mMヒスチジン、4%マンニトール、2%スクロース、0.01%ポリソルベート20、pH6.0
ヒスチジン製剤中の試料は、SE-HPLC結果に基づき、グルタミン酸塩緩衝液中においてよりもわずかに高いメインピーク%を示した。総じて、2種の製剤からの試料は、37℃での12週間までのインキュベーション後に、凝集及び全体構造及び熱安定性において何ら有意な変化を示さなかった。
材料、方法、及び装置
材料:
抗EPO mAb 8C10(米国特許出願公開第20130295113A1号、出願番号第13/888,777号を参照されたい)
配合緩衝液:
GMST:10mMグルタミン酸Na(グルタミン酸から)、4%マンニトール、2%スクロース、0.01%ポリソルベート20、pH5.2
HMST:10mMヒスチジン、4%マンニトール、2%スクロース、0.01%ポリソルベート20、pH6.0
Figure 2023162442000023
方法:
サイズ排除クロマトグラフィー(SEC)
サイズ排除(SEC)法を使用して、モノマー及び高分子量種(HMWS)、例えば、二量体及び凝集をモニターした。この方法は、Agilent 1100(Name:KGB)HPLCを使用して、ガードカラム(TSKgel Guard Column SWXL 6.0mm×4.0cm)に沿って連続して取り付けられている2つのカラム(Tosoh G3000SWxl、7.8mm×300mm)を使用した。流速は、50mMリン酸ナトリウム;300mM塩化ナトリウム、pH6.8からなる移動相での定組成で、0.5mL/分であった。215nmでのUV検出を使用して、タンパク質の検出をモニターした。メインピーク%及びHMW(高分子量)ピーク%について、総面積カウントに対する面積カウントパーセントを利用した。
還元CE-SDS法
Beckman SDS-MWキットと共に、100×800開口部及び裸の融解シリカを備えた20cm(有効長さ)及び/30cm(全長)で内径50umのBeckman Coulter PA-800(両面)を使用して、CE-SDS法を行った。Beckman Karat 32ソフトウェアを使用して、データを収集した。Chromeleonを使用して、ピーク統合を行い、Excelを使用して、補正面積に基づき純度%を計算した。30K MWCO Nanospinを使用して、GMST100及びHMST100の100mcg/mL試料1.0mL、ならびにGMST500及びHMST500の500mcg/mL試料200uLをそれぞれ濃縮して、45uLの最終体積にした。試料緩衝液50uL及び2-メルカプトエタノール5uLを添加し、70℃で10分間にわたって加熱し、次いで、CE-SDSアッセイのために、PCR試料管に装填した。
DSC
参照及び試料セルの間での温度差を連続して測定し、出力ユニットに対して較正するMicroCal VP-Capillary DSCシステムでのDSCによって、試料の熱安定性を評価した。このデータチャネルは、DPシグナル、または参照及び試料セルの間での示差出力と呼ばれる。タンパク質分子のアンフォールディングは、DSCサーモグラム上で吸熱転移として現れ、熱転移(溶融)温度(T)によって特徴づけられ得る。試料を、60℃/時間の加熱速度で4℃から110℃へと加熱した。走査前時間は15分であり、フィルター期間は10秒であった。DSC実験において使用した濃度は、0.1及び0.5mg/mLであった。データ分析を、MicroCal Origin 7ソフトウェアを使用して行った。
分析用超遠心分離(AUC)分析
Beckman Coulter ProteomeLab XL-I機器によって、試料を分析した。分析前に抗EPO mAb試料を4℃で貯蔵し、希釈せずに分析した。45,000rpmで、沈降速度実験を行い、280nmでの吸光度を追跡した。石英窓を備えたダブルセクターセンターピースセルアセンブリ内で、実験を行った。20℃で、スキャンの間に遅延を伴うことなく、各試料当たり120スキャンで、スキャンを収集した。「Continuous c(s) distribution」モデルを使用するSedfit v11.8を使用して、AUC-SVデータを分析した。c(s)分散分析でのパラメーターは:s範囲2~30、分解200、及び分析のためのデータ選択6.4~6.8であった。非線形最小二乗適合中に、AUC-SV分析において、摩擦比、時間不変ノイズ(time invariant noise)、及びメニスカス位置が浮上することを可能にした。AUC-SV分布のために、次のパラメーター:部分比体積0.73mL/gを使用し、Glu及びHis緩衝液の両方の密度及び粘度は、1.02100g/mL、及び0.01210Paであった。
試料の調製法
試料を、2~8℃で3日間にわたって、2種の配合緩衝液に対して透析した。試料の透析後に、A280nmを使用して、試料の濃度を測定した。2種の配合緩衝液で、試料を希釈または濃縮して、100μg/mL及び500μg/mLにした。試料を0.22μmフィルターで濾過し、試料1mLを3ccバイアルに分取し、バイアルに栓をした。一部の試料を凍結前0時試験のために用いた。試料を、凍結乾燥プロセスに従って凍結乾燥させた。凍結乾燥の後に、各時点まで、試料を冷蔵室内で貯蔵した。各時点で、試料を水1mLで再構成した。
凍結乾燥手順
試料バイアルを、凍結乾燥機の「事前冷却」しておいた(4℃)シェルフに装填した。試料を、凍結、一次乾燥、及び二次乾燥からなる3ステップに掛けた。初めに、試料を30分間にわたって4℃で保持し、123分かけて4℃から-45℃に冷却し、45℃で180分間にわたって保持した。-45℃で180分間にわたって保持した後に、シェルフ温度を150分かけて-12℃に上昇させた。次いで、-12℃で240分間にわたって保持した後に、温度を再び150分かけて-45℃に低下させた。試料を120分間にわたって-45℃にした。一次乾燥のために、シェルフ温度を-10℃に上昇させ、コンデンサー温度を-50℃未満にした後に、チャンバー真空を120mTorrに維持して25時間にわたって保持した。二次乾燥のために、チャンバー圧力を100mTorrに低下させながら、シェルフ温度を234分かけて25℃に上昇させた。その後、チャンバー圧力を100mTorrに維持しながら、シェルフ温度を11時間にわたって25℃にした。すべてのサイクルが終了した後に、乾燥チャンバー内部で、バイアルにストッパーを設置した。
結果及び考察
サイズ排除クロマトグラフィー(SEC)
凍結乾燥試料は両方とも、4℃及び37℃貯蔵の両方について12週間までの貯蔵で、低分子量種%(LMW%)のわずかな増大を示した(図32)。より高温(37℃)での7週目のデータに基づき、ヒスチジン製剤中の試料は、100μg/mLについて、より低いLMW%を示した。高分子量種%(HMW%)についても、ヒスチジン製剤は、より高温で、グルタミン酸塩製剤中の試料よりもわずかに少なく示した(図33)。しかしながら、凍結乾燥の前後で、差はなかった。総じて、ヒスチジン製剤中の試料は、グルタミン酸塩製剤においてよりも高いメインピーク%を示した(図34)。試料の利用性によって、12週目には、ヒスチジン製剤を評価しなかった。
毛細管電気泳動(CE-SDS)による分解
この分析法を使用して、還元及び変性条件下で、重鎖(HC)、軽鎖(LC)、非グリコシル化HC(NGHC)、及び他のマイナーピーク種を分析する。還元CE-SDSは、還元及び変性条件下でのそれらの流体力学サイズにおける差に基づき、タンパク質を分離する。タンパク質種を、陰イオン性界面活性剤であるSDSに結合させ、SDSゲル緩衝液を充填された裸の融解シリカ毛細管に界面動電的に注入する。電圧を毛細管を通して印加すると、その下で、SDSコーティングされたタンパク質が、親水性ポリマーベースの溶液中での泳動におけるそれらの差によって分離される。タンパク質は、UV検出ウィンドウを通過する際に、フォトダイオードアレイ(PDA)検出器によって検出される。各成分の較正ピーク面積パーセントを決定することによって、純度を評価する。還元CE-SDS法によると、重鎖%(図35)、軽鎖%(図36)、及び非グリコシル化重鎖%(図37)について、製剤の間で有意な差はなかった。図38において示されている重ね合わせた電気泳動図は、7週間目に試験された条件のすべてにおいて、観察される検出可能な分解種が存在しなかったことを実証した。
示差走査熱分析(DSC)による熱安定性
示差走査熱分析(DSC)を使用して、2種の異なる緩衝液中の抗EPO mAb試料を分析した。この技術を用いると、各試料の相対熱安定性を比較することができる。GMST及びHMST緩衝液中の4種の凍結前試料のDSCスキャンを図39において示し、熱遷移温度を表3において列挙する。熱遷移温度測定の典型的な標準偏差は、±0.5℃以内であった。DSCデータは、凍結前試料の熱安定性は、両方の緩衝液中、及び両方の濃度で同様であったことを示唆した。異なる条件及び時点での各抗EPO mAb試料のDSCスキャンの比較を、図40~43において示し、熱遷移温度も表4において列挙する。もう一度、DSCデータは、試料の熱安定性が、12週間までにわたる時間で、両方の緩衝液中、ならびに両方の濃度及び温度で同様なままであったことを示唆した。7週間後に、各試料のC2ドメインが、0時でのものと比較して、比較的低温でアンフォールドすると考えられた。さらなる研究は、その差が、異なる時間に試料を分析することに起因し得るであろうことを示唆した。
Figure 2023162442000024
Figure 2023162442000025
抗EPO mAb中の凝集体の分析用超遠心分離(AUC)分析
分析用超遠心分離沈降速度(AUC-SV)法を使用して、抗EPO mAb試料のサイズ分布を決定した。AUC-SVの主な利点は、実際の配合緩衝液中で分析が行われること、及びカラムマトリックスまたはフィルターに対する凝集体の損失についての懸念が存在しないことである。したがって、AUC-SVは、弱会合している可逆的高分子量種(HMWS)も検出することができる。AUC-SVは、共有結合及び非共有結合の両方の二量体以上の規模の凝集体を特性決定し、それらのサイズを決定し、かつ凝集体含有量を定量することができる。
AUC-SVは、本質的に高い変動性がある技術である。標準的なAUC-SV分析を、0.5mg/mLのタンパク質濃度で3連で行った。抗EPO mAb試料の一部は、0.1mg/mLでのみ利用可能であったが、0.5mg/mL未満の濃度での分析は、通常よりも高い変動性をもたらす。0.5mg/mLで配合された試料は、少量でしか利用することができず、したがって、分析を、1つの複製のみで行った。Biacore分析後の残りは、0.5mg/mL試料の3つでのみ利用可能であり、これらを、2連で分析した。また、T=12週目のGlu試料のみが利用可能であった。
抗EPO mAb試料の高分解能沈降係数分布c(s)を、図44において図示する。グラフの垂直軸は、濃度分布を示し、水平軸は、それらの沈降係数に基づき、種の分離を示す。比較的高い分子量の種の小さい画分をより良好に可視化するために、グラフは10倍に拡大されている。分析試料はすべて、非常に類似した分布パターンを有し、複製測定のすべてにおいて検出されたメジャーなHMWSは二量体であり、少量の三量体が、一部の複製において検出された。T=7週間及びT=12週間後のサイズ分布パターン(図示せず)は、図13において図示されているT=0週間のものと同様であった。痕跡量のLMWS種が、多くの複製において検出された。
AUC-SV分析のすべての結果を、表5にまとめ、より容易に解釈するために、図45においてグラフでも表す。データから分かり得るとおり、すべての試料におけるHMWS含有率は、2~5%の範囲内で変動し、方法のかなり高い変動性によって(理由は上記で論述した)、緩衝液組成物(Glu対His)またはタンパク質濃度(0.1対0.5mg/mL)の作用についての結論を引き出すことはできない。唯一の観察可能な作用は、His緩衝液試料におけるLMWS含有率の上昇であり、凍結前試料は、0.1%未満の痕跡量のLMWSを含有し、これは、凍結後試料では、0.7±0.4%に上昇した。37℃で12週間後に、Glu緩衝液中のHMWS含有率が上昇する指標(7.1%)も存在するが、残念なことに、対応するHis-37℃-12週間試料は利用不可能であった。この実験セットからの推奨は、長期安定性に対する緩衝液組成物及びタンパク質濃度の可能な作用を観察するためには、かなり長期の実験(この実験よりも少なくとも数倍長い)を高温(37℃)で行うことであろう。
まとめると、7週間の実験の間、緩衝液組成物(Glu対His)またはタンパク質濃度(0.1対0.5mg/mL)の検出可能な作用は、AUC-SVによって観察されなかった。
Figure 2023162442000026
Figure 2023162442000027
Figure 2023162442000028
結論
結論として、SEC、AUC、還元CE-SDS、及びDSCを使用したところ、2種の凍結乾燥製剤は、4℃及び37℃での少なくとも12週間の貯蔵について、抗体安定性を維持した。
本明細書において引用した各参照文献は、それが教示するものすべてについて、かつあらゆる目的について、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
本発明は、本発明の個々の態様の単一の説明として意図されている本明細書に記載の具体的な実施形態によって範囲を限定されるものではなく、機能的に同等の方法及び成分は、発明である。実際に、本明細書に図示及び記載されているものに加えて、本発明の様々な変更形態が、上述の記載及び添付の図面から、当業者には明らかであろう。そのような変更形態は、添付の請求の範囲内に該当することが意図されている。
本発明の実施形態の例として、以下の項目が挙げられる。
(項目1)
安定剤、糖アルコール、糖、及び界面活性剤を含む固体タンパク質製剤であって、前記安定剤がヒスチジン、トリプトファン、メチオニン、ロイシン、フェニルアラニン、セリン、グルタミン酸、アルギニン、またはリシンからなる群から選択され;前記糖アルコールが、マンニトール、キシリトール、ソルビトール、マルチトール、ラクチトール、グリセロール、エリトリトール、またはアラビトールからなる群から選択され;前記糖が、スクロース、マルトース、ラクトース、グルコース、フルクトース、またはガラクトースからなる群から選択され;前記界面活性剤がポリソルベート-80、ポリソルベート-20、ポリソルベート-21、ポリソルベート-40、ポリソルベート-60、ポリソルベート-65、ポリソルベート-81、またはポリソルベート-85からなる群から選択される前記固体タンパク質製剤。
(項目2)
前記安定剤がヒスチジンである、項目1に記載の製剤。
(項目3)
ヒスチジンの濃度が、固体化される前に約0.1mM~約100mMである、項目2に記載の製剤。
(項目4)
ヒスチジンの濃度が、固体化される前に約10mMである、項目3に記載の製剤。
(項目5)
前記糖アルコールがマンニトールである、項目1に記載の製剤。
(項目6)
マンニトールの濃度が、固体化される前に約0.1%~約10%である、項目5に記載の製剤。
(項目7)
マンニトールの濃度が、固体化される前に2%である、項目6に記載の製剤。
(項目8)
前記糖がスクロースである、項目1に記載の製剤。
(項目9)
スクロースの濃度が、固体化される前に約0.05%~約5%である、項目8に記載の製剤。
(項目10)
スクロースの濃度が、固体化される前に0.5%である、項目9に記載の製剤。
(項目11)
前記界面活性剤がポリソルベート-80である、項目1に記載の製剤。
(項目12)
ポリソルベート-80の濃度が、固体化される前に約0.001%~約0.01%である、項目11に記載の製剤。
(項目13)
ポリソルベート-80の濃度が、固体化される前に0.005%である、項目12に記載の製剤。
(項目14)
pHが、固体化される前に約6.0~約8.0である、項目1に記載の製剤。
(項目15)
pHが、固体化される前に7.0である、項目14に記載の製剤。
(項目16)
タンパク質の濃度が、固体化される前に約0.1mg/ml~約100mg/mlである、項目1に記載の製剤。
(項目17)
タンパク質の濃度が、固体化される前に約2mg/mlである、項目16に記載の製剤。
(項目18)
前記タンパク質が糖タンパク質である、項目1に記載の製剤。
(項目19)
前記タンパク質がダルベポエチンアルファである、項目18に記載の製剤。
(項目20)
前記タンパク質が抗体である、項目18のいずれかに記載の製剤。
(項目21)
前記抗体がモノクローナル抗体である、項目20に記載の製剤。
(項目22)
前記抗体がポリクローナル抗体である、項目20に記載の製剤。
(項目23)
凍結乾燥されている、項目1に記載の製剤。
(項目25)
液体で再構成される、項目23に記載の製剤。
(項目26)
ダルベポエチンアルファ、ヒスチジン、マンニトール、スクロース、ポリソルベート-80を含む固体タンパク質製剤。
(項目27)
固体化される前に、前記ヒスチジン濃度が10mMであり、前記マンニトール濃度が2%であり、前記スクロース濃度が0.5%であり、前記ポリソルベート-80濃度が0.005%である、項目26に記載の製剤。
(項目28)
前記タンパク質が安定している、項目1または26に記載の製剤。
(項目29)
前記タンパク質が、少なくとも1ヶ月間にわたって安定している、項目28に記載の製剤。
(項目30)
前記タンパク質が、少なくとも3ヶ月にわたって安定している、項目28に記載の製剤。
(項目31)
前記タンパク質が、少なくとも6ヶ月間にわたって安定している、項目28に記載の製剤。
(項目32)
前記タンパク質が少なくとも12ヶ月間にわたって安定している、項目28に記載の製剤。
(項目33)
前記タンパク質が、少なくとも18ヶ月間にわたって安定している、項目28に記載の製剤。
(項目34)
前記タンパク質が、少なくとも24ヶ月間にわたって安定している、項目28に記載の製剤。
(項目35)
前記タンパク質が、約4~45℃で安定している、項目28に記載の製剤。
(項目36)
前記タンパク質が、約4℃で安定している、項目28に記載の製剤。
(項目37)
前記タンパク質が、約29℃で安定している、項目28に記載の製剤。
(項目38)
前記タンパク質が、約37℃で安定している、項目28に記載の製剤。
(項目39)
前記タンパク質が、約45℃で安定している、項目28に記載の製剤。
(項目40)
前記タンパク質の酸化パーセントが、約5%~約10%である、項目1または26に記載の製剤。
(項目41)
前記タンパク質の酸化パーセントが、約10%未満である、項目1または26に記載の製剤。
(項目42)
前記タンパク質の酸化パーセントが、約5%未満である、項目1または26に記載の製剤。
(項目43)
項目1または26に記載の固体タンパク質製剤を調製する方法であって、
a)前記タンパク質を凍結乾燥緩衝液で希釈すること、及び
b)前記希釈タンパク質を凍結乾燥させること
を含む前記方法。
(項目44)
項目1または26に記載の固体タンパク質製剤と、再構成用緩衝液とを含むキット。
(項目45)
モノクローナル抗体、グルタミン酸ナトリウム、マンニトール、スクロース、及びポリソルベート20を含む固体タンパク質製剤。
(項目46)
モノクローナル抗体、ヒスチジン、マンニトール、スクロース、及びポリソルベート20を含む固体タンパク質製剤。
(項目47)
前記モノクローナル抗体の濃度が、固体化される前に約100μg/ml~約500μg/mlである、項目45または46に記載のタンパク質製剤。
(項目48)
pHが、固体化される前に約5.2である、項目45に記載のタンパク質製剤。
(項目49)
pHが、固体化される前に約6.0である、項目46に記載のタンパク質製剤。
(項目50)
グルタミン酸ナトリウムの濃度が、固体化される前に約10mMである、項目45に記載のタンパク質製剤。
(項目51)
ヒスチジンの濃度が、固体化される前に約10mMである、項目46に記載のタンパク質製剤。
(項目52)
マンニトールの濃度が、固体化される前に約4%である、項目45または46に記載のタンパク質製剤。
(項目53)
スクロースの濃度が、固体化される前に約2%である、項目45または46に記載のタンパク質製剤。
(項目54)
ポリソルベート20の濃度が、固体化される前に約0.01%である、項目45または46に記載のタンパク質製剤。

Claims (1)

  1. 明細書に記載の組成物。
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Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101994456B1 (ko) * 2017-03-15 2019-06-28 이건무 당 수액제 조성물
MX2020004936A (es) * 2017-11-16 2020-08-27 Amgen Inc Composiciones estables de compuestos de carfilzomib pegilado.
MA52570A (fr) 2018-05-10 2021-03-17 Regeneron Pharma Formulations contenant des protéines de fusion du récepteur vegf à haute concentration
BR112021015034A2 (pt) 2019-02-18 2021-10-05 Eli Lilly And Company Formulação de anticorpo terapêutico
MX2022008655A (es) * 2020-01-13 2022-09-23 Aptevo Res & Development Llc Metodos y composiciones para prevenir la adsorcion de proteinas terapeuticas en componentes del sistema de administracion de farmacos.
WO2022063913A1 (en) * 2020-09-24 2022-03-31 Novo Nordisk A/S Pharmaceutical formulation of concizumab and method of production thereof
WO2024141645A1 (en) 2022-12-30 2024-07-04 Biotalys N.V. Agglomerate

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4703008A (en) 1983-12-13 1987-10-27 Kiren-Amgen, Inc. DNA sequences encoding erythropoietin
US4667016A (en) 1985-06-20 1987-05-19 Kirin-Amgen, Inc. Erythropoietin purification
US7217689B1 (en) 1989-10-13 2007-05-15 Amgen Inc. Glycosylation analogs of erythropoietin
US6267958B1 (en) * 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
CN100360184C (zh) * 1995-07-27 2008-01-09 基因技术股份有限公司 稳定等渗的冻干蛋白质制剂
CA2293632C (en) 1997-06-12 2011-11-29 Research Corporation Technologies, Inc. Artificial antibody polypeptides
US20030133939A1 (en) 2001-01-17 2003-07-17 Genecraft, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
US20030113316A1 (en) * 2001-07-25 2003-06-19 Kaisheva Elizabet A. Stable lyophilized pharmaceutical formulation of IgG antibodies
US7956160B2 (en) * 2005-07-22 2011-06-07 Amgen Inc. Concentrated protein lyophilates, methods, and uses
CN101541345A (zh) * 2006-09-25 2009-09-23 米迪缪尼有限公司 稳定化的抗体制剂和其应用
KR20120027031A (ko) * 2009-06-18 2012-03-20 와이어쓰 엘엘씨 소형 모듈 면역제약용 동결건조 제제
JP5819303B2 (ja) * 2009-09-21 2015-11-24 バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッドBaxter International Incorp0Rated 安定化された液体および凍結乾燥adamts13製剤
US9072668B2 (en) * 2010-03-09 2015-07-07 Janssen Biotech, Inc. Non-aqueous high concentration reduced viscosity suspension formulations of antibodies
US20110223208A1 (en) * 2010-03-09 2011-09-15 Beth Hill Non-Aqueous High Concentration Reduced Viscosity Suspension Formulations
US9441039B2 (en) 2012-05-07 2016-09-13 Amgen Inc. Anti-erythropoietin antibodies

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