JP2023153866A - スペーサーを含むポリペプチド組成物 - Google Patents

スペーサーを含むポリペプチド組成物 Download PDF

Info

Publication number
JP2023153866A
JP2023153866A JP2023118889A JP2023118889A JP2023153866A JP 2023153866 A JP2023153866 A JP 2023153866A JP 2023118889 A JP2023118889 A JP 2023118889A JP 2023118889 A JP2023118889 A JP 2023118889A JP 2023153866 A JP2023153866 A JP 2023153866A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
region
cells
stalk
car
cell
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2023118889A
Other languages
English (en)
Inventor
アール． シャー，ルトゥル
R Shah Rutul
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Precigen Inc
Original Assignee
Precigen Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Precigen Inc filed Critical Precigen Inc
Publication of JP2023153866A publication Critical patent/JP2023153866A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
    • A61K39/4631—Chimeric Antigen Receptors [CAR]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
    • A61K39/4632—T-cell receptors [TCR]; antibody T-cell receptor constructs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/464403—Receptors for growth factors
    • A61K39/464404—Epidermal growth factor receptors [EGFR]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/464411—Immunoglobulin superfamily
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/464411—Immunoglobulin superfamily
    • A61K39/464412—CD19 or B4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70517—CD8
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70521—CD28, CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2815—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD8
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/10—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterized by the structure of the chimeric antigen receptor [CAR]
    • A61K2239/17—Hinge-spacer domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Virology (AREA)

Abstract

【課題】ストーク領域及びストーク伸長領域を含む抗原結合ポリペプチドを含む方法および組成物を提供する。【解決手段】ｉ）抗原結合領域、ｉｉ）膜貫通領域、およびｉｉｉ）前記膜貫通領域を前記抗原結合領域と接続するスペーサー領域、を含むキメラポリペプチドであって、前記スペーサー領域は、少なくとも１つの二量体化部位を含むストーク領域（複数可）、およびストーク伸長領域（ｓ’－ｎ）を含み、前記ストーク伸長領域は、前記ストーク領域と比較してより少ない二量体化部位を含む、キメラポリペプチドを提供する。【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１７年１０月１８日に出願された米国仮特許出願第６２／５７４，０６
１号明細書の利益を主張し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
配列表への参照
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出された配列表を含み、その全体が参
照により本明細書に組み入れられる。前記ＡＳＣＩＩコピーは、２０１８年１０月１１日
に作成され、名称は５０４７１－７０４＿６０１＿ＳＬ．ｔｘｔであり、サイズは３４４
，０２２バイトである。
キメラポリペプチドなどの組換えポリペプチドは、研究、診断、製造および治療への応
用に価値がある。確かに、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）およびＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を
使用した適応Ｔ細胞免疫療法は、腫瘍細胞の殺傷を成功裏に導くことが示されている。Ｃ
ＡＲなどの抗原結合ポリペプチドを発現する修飾されたエフェクター細胞は、自己免疫障
害およびがんなどの疾患および障害の治療に有用である。この革新的な技術をさらに発展
させるために、細胞表面におけるＣＡＲ発現を増加させ、および／または抗原結合効率を
増加させる方法を考案することには価値がある。
参照による組み込み
本明細書において言及されているすべての刊行物、特許、および特許出願は、あたかも
各個々の刊行物、特許、または特許出願が具体的であり、個別に参照により組み込まれる
ことが示されたのと同程度に参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書では、（ｉ）抗原結合領域、（ｉｉ）膜貫通領域、および（ｉｉｉ）前記膜貫
通領域を前記抗原結合領域と接続するスペーサー領域を含むキメラポリペプチドが提供さ
れ、前記スペーサー領域は、少なくとも１つの二量体化部位を含むストーク領域（複数可
）、およびストーク伸長領域（ｓ’－ｎ）を含み、前記ストーク伸長領域は、前記ストー
ク領域と比較してより少ない二量体化部位を含む。
本明細書では、（ｉ）抗原結合領域、（ｉｉ）膜貫通領域、および（ｉｉｉ）前記膜貫
通領域を前記抗原結合領域と接続するスペーサー領域を含むキメラポリペプチドが提供さ
れ、前記スペーサー領域は、長さが約２０～約６０アミノ酸であり、少なくとも１つの二
量体化部位を含むストーク領域、およびアミノ酸の数で測定した場合、ストーク領域の長
さの約１～約５倍を含むストーク伸長領域を含む。
本明細書では、（ｉ）抗原結合領域、（ｉｉ）膜貫通領域、および（ｉｉｉ）前記膜貫
通領域を抗原結合領域と接続するスペーサー領域を含むキメラポリペプチドが提供され、
スペーサー領域は、「ｓ」で表されるストーク領域、および「ｓ’－ｎ」で表される少な
くとも１つのストーク伸長領域を含み、ｎは、スペース領域にあるｓ’の単位数を表し、
ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１
６、１７、１８、１９、または２０であり得る。
一部の実施形態では、キメラポリペプチドにおける少なくとも１つのストーク伸長領域
は、ストーク領域の二量体化部位を除いて、ストーク領域と相同な配列を有する。一部の
実施形態では、キメラポリペプチドにおけるスペーサー領域は、膜領域の近位にある。一
部の実施形態では、キメラポリペプチドにおけるスペーサー領域は、膜領域の遠位にある
。一部の実施形態では、キメラポリペプチドは、細胞内シグナル伝達ドメインをさらに含
む。一部の実施形態では、キメラポリペプチドは、細胞内シグナル伝達ドメインを含まな
い。
一部の実施形態では、キメラポリペプチドのストーク伸長領域は、ストーク領域と比較
して、少なくとも１つ少ない二量体化部位を含む。一実施形態では、キメラポリペプチド
は、ストーク伸長領域を欠くが、他には同一である抗原結合ポリペプチドと比較して、改
善された機能的活性を有する。他の実施形態では、キメラポリペプチドは、ストーク伸長
領域を欠くが、他には同一であるポリペプチドと比較して、細胞表面における発現が増加
している。別の実施形態では、ストーク伸長領域は二量体化部位を欠く。さらに別の実施
形態では、ストーク伸長領域の各々は、約２０から約６０アミノ酸長であり、ｎは１、２
、３または４である。さらに別の実施形態では、ストーク伸長領域は、ストーク領域に対
して少なくとも約８０％の同一性を有する配列を有する。いくつか場合では、キメラポリ
ペプチドの少なくとも１つのストーク伸長領域は、ストーク領域と比較して少なくとも１
つ少ない二量体化部位を含む配列を有する。一部の場合では、ストーク伸長領域の各々は
、ストーク領域に対して少なくとも約８０％の同一性を有する配列を有し、ｎは２である
。別の場合では、ストーク伸長領域の各々は、ストーク領域に対して少なくとも約８０％
の同一性を有する配列を有し、ｎは３である。さらに別の場合では、ストーク伸長領域の
各々は、ストーク領域に対して少なくとも約８０％の同一性を有する配列を有し、ｎは４
である。さらに別の場合では、ストーク伸長領域の各々は、ストーク領域に対して少なく
とも約８０％の同一性を有する配列を有し、ｎは少なくとも５である。
一部の場合では、本明細書に提供されるキメラポリペプチドのストーク領域は、ＣＤ８
アルファヒンジドメイン、ＣＤ２８ヒンジドメインおよびＣＴＬＡ－４ヒンジドメインの
うちの少なくとも１つに対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、
９５％、または９９％の同一性を有する配列を含む。一実施形態では、ストーク領域は、
配列番号１に示される配列を有するＣＤ８アルファヒンジドメインである。他の実施形態
では、ストーク領域は、配列番号７に示される配列を有するＣＤ２８ヒンジドメインであ
る。別の実施形態では、ストーク領域は、配列番号１２に示される配列を有するＣＴＬＡ
－４ヒンジドメインである。
一部の実施形態では、本明細書に提供されるキメラポリペプチドの鎖間二量体化は、シ
ステイン残基間の少なくとも１つのジスルフィド結合によって媒介される。一部の実施形
態では、キメラポリペプチドの抗原結合領域は、ＣＤ１９上のエピトープに結合する。一
部の実施形態では、キメラポリペプチドの抗原結合領域は、ＣＤ３３上のエピトープに結
合する。一部の実施形態では、キメラポリペプチドの抗原結合領域は、ＣＤ１９、ＢＣＭ
Ａ、ＣＤ４４、α－葉酸受容体、ＣＡＩＸ、ＣＤ３０、ＲＯＲ１、ＣＥＡ、ＥＧＰ－２、
ＥＧＰ－４０、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、葉酸結合タンパク質、ＧＤ２、ＧＤ３、ＩＬ－１３
Ｒ－ａ２、ＫＤＲ、ＥＤＢ－Ｆ、メソセリン、ＣＤ２２、ＥＧＦＲ、ＧＰＣ３、ＣＳＰＧ
４、ＨＥＲ１／ＨＥＲ３、ＨＥＲ２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／ｖ８、ＣＤ２０、Ｃ
Ｄ１７４、ＣＤ１３８、Ｌ１－ＣＡＭ、ＦＡＰ、ｃ－ＭＥＴ、ＰＳＣＡ、ＣＳ１、ＣＤ３
８、ＩＬ－１１Ｒα、ＥｐｈＡ２、ＣＬＬ－１、葉酸受容体α、ムチン、ＭＵＣ－１、Ｍ
ＵＣ－１６、ＭＡＧＥ－Ａ１、ｈ５Ｔ４、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ－７２、ＥＧＦＲ、ＣＤ２０
、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ１２３ ＶＥＧＦ－Ｒ２、ＮＹ－ＥＳＯ－１、タイチン、ＭＡ
ＲＴ－１、ＨＰＶ、ＨＢＶ、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－Ａ１０、ＭＡＧＥ Ａ３／Ａ６
、ｇｐ１００、ＭＡＧＥ－Ａ１、またはＰＲＡＭＥのうちの少なくとも１つの上のエピト
ープに結合する。
一部の実施形態では、キメラポリペプチドは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む。一
部の実施形態では、ＣＡＲは、少なくとも１つの共刺激シグナル伝達ドメインをさらに含
む。一部の実施形態では、少なくとも１つの共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７、
ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＣＤ１３４、Ｃ
Ｄ３－ゼータもしくはその断片または組合せからのシグナル伝達ドメインを含む。一部の
実施形態では、少なくとも１つの共刺激シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢ、ＣＤ２８
またはそれらの組合せからのシグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＡＲ
は、ＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３－ゼータをさらに含む。一部の実
施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメインをさらに含む。一部の実施
形態では、細胞内細胞シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞
、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、または調節性Ｔ細胞と相互作用する。
一部の実施形態では、キメラポリペプチドは、操作された（engineered）Ｔ細胞受容体
（ＴＣＲ）を含む。一部の実施形態では、操作されたＴＣＲはαβＴＣＲである。一部の
実施形態では、操作されたＴＣＲはγδＴＣＲである。一部の実施形態では、操作された
ＴＣＲの抗原結合領域は、ＣＤ１９、ＢＣＭＡ、ＣＤ４４、α－葉酸受容体、ＣＡＩＸ、
ＣＤ３０、ＲＯＲ１、ＣＥＡ、ＥＧＰ－２、ＥＧＰ－４０、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、葉酸結
合タンパク質、ＧＤ２、ＧＤ３、ＩＬ－１３Ｒ－ａ２、ＫＤＲ、ＥＤＢ－Ｆ、メソセリン
、ＣＤ２２、ＥＧＦＲ、ＧＰＣ３、ＣＳＰＧ４、ＨＥＲ１／ＨＥＲ３、ＨＥＲ２、ＣＤ４
４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／ｖ８、ＣＤ２０、ＣＤ１７４、ＣＤ１３８、Ｌ１－ＣＡＭ、ＦＡ
Ｐ、ｃ－ＭＥＴ、ＰＳＣＡ、ＣＳ１、ＣＤ３８、ＩＬ－１１Ｒα、ＥｐｈＡ２、ＣＬＬ－
１、葉酸受容体α、ムチン、ＭＵＣ－１、ＭＵＣ－１６、ＭＡＧＥ－Ａ１、ｈ５Ｔ４、Ｐ
ＳＭＡ、ＴＡＧ－７２、ＥＧＦＲ、ＣＤ２０、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ１２３、ＶＥＧＦ
－Ｒ２、ＮＹ－ＥＳＯ－１、タイチン、ＭＡＲＴ－１、ＨＰＶ、ＨＢＶ、ＭＡＧＥ－Ａ４
、ＭＡＧＥ－Ａ１０、ＭＡＧＥ Ａ３／Ａ６、ｇｐ１００、ＭＡＧＥ－Ａ１、またはＰＲ
ＡＭＥのうちの少なくとも１つの上のエピトープに結合する。一部の実施形態では、操作
されたＴＣＲの抗原結合領域は、ＮＹ－ＥＳＯ－１、タイチン、ＭＡＲＴ－１、ＨＰＶ、
ＨＢＶ、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－Ａ１０、ＭＡＧＥ Ａ３／Ａ６、ｇｐ１００、ＭＡ
ＧＥ－Ａ１、またはＰＲＡＭＥのうちの少なくとも１つの上のエピトープに結合する。
また、本明細書に記載されるキメラポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが提供
される。本明細書では、ポリヌクレオチドを含む発現ベクターが提供される。一部の実施
形態では、ベクターは、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクターまたは非ウイ
ルスベクターである。一部の実施形態では、ベクターは、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔ
ｙベクターである非ウイルスベクターである。
さらに、本明細書に記載されるキメラポリペプチドをコードするポリペプチドを含む発
現ベクターを含む操作された細胞が提供される。一部の場合では、操作された細胞は、Ｓ
ｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙトランスポザーゼをさらに含む。一部の場合では、Ｓｌｅ
ｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙトランスポザーゼは、ＳＢ１１、ＳＢ１００ＸまたはＳＢ１１
０である。一部の場合では、操作された細胞は動物細胞である。一部の場合では、動物細
胞はヒト細胞である。一部の場合では、ヒト細胞はＴ細胞またはＮＫ細胞である。一部の
場合では、本明細書に記載される操作された細胞は、細胞内シグナル伝達ドメインを含む
ポリペプチドをさらに発現する。
抗原結合領域、膜貫通領域、ストーク領域およびストーク伸長領域を含むキメラ抗原受
容体（ＣＡＲ）が本明細書に提供され、ストーク伸長領域は、ストーク領域と相同であり
、ストーク領域と比較して少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。一部の実施形態では、
ストーク領域は、第２のＣＡＲの相同なストーク領域と二量体化することができる。一部
の実施形態では、ストーク伸長領域は二量体化することができない。一部の実施形態では
、ストーク領域は膜貫通領域に接続されている。一部の実施形態では、抗原結合領域はｓ
ｃＦｖを含む。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、ＣＤ１９、ＢＣＭＡ、ＣＤ４４、α－
葉酸受容体、ＣＡＩＸ、ＣＤ３０、ＲＯＲ１、ＣＥＡ、ＥＧＰ－２、ＥＧＰ－４０、ＨＥ
Ｒ２、ＨＥＲ３、葉酸結合タンパク質、ＧＤ２、ＧＤ３、ＩＬ－１３Ｒ－ａ２、ＫＤＲ、
ＥＤＢ－Ｆ、メソセリン、ＣＤ２２、ＧＰＣ３、ＣＳＰＧ４、ＨＥＲ１／ＨＥＲ３、ＨＥ
Ｒ２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／ｖ８、ＣＤ２０、ＣＤ１７４、ＣＤ１３８、Ｌ１－
ＣＡＭ、ＦＡＰ、ｃ－ＭＥＴ、ＰＳＣＡ、ＣＳ１、ＣＤ３８、ＩＬ－１１Ｒα、ＥｐｈＡ
２、ＣＬＬ－１、ＥＧＦＲ、葉酸受容体α、ムチン、ＭＵＣ－１、ＭＵＣ－１６、ＭＡＧ
Ｅ－Ａ１、ｈ５Ｔ４、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ－７２、ＥＧＦＲ、ＣＤ２０、ＥＧＦＲｖＩＩＩ
、ＣＤ１２３またはＶＥＧＦ－Ｒ２の上のエピトープに結合する。
一部の実施形態では、ＣＡＲのストーク伸長領域は、ｓ’－ｎで表され、ｎは２以上を
含み、それにより、第１のストーク伸長領域および第２のストーク伸長領域を含む。一部
の実施形態では、第１のストーク伸長領域は、第２のストーク伸長領域と相同である。一
部の実施形態では、第１のストーク伸長領域は、ストーク領域と比較して少なくとも１つ
のアミノ酸残基置換を含む。一部の実施形態では、第１のストーク伸長領域は、ＣＡＲの
ストーク領域に二量体化（dimerizing to）することができない。一部の実施形態では、
第２のストーク伸長領域は、ストーク領域と比較して少なくとも１つのアミノ酸残基置換
を含む。一部の実施形態では、第２のストーク伸長領域は、別のストーク伸長領域に二量
体化することができない。一部の実施形態では、ＣＡＲは、第３のストーク伸長領域をさ
らに含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、第４のストーク伸長領域をさらに含む。一部
の実施形態では、ＣＡＲは、５つ以上のストーク伸長領域を含む。一部の実施形態では、
ＣＡＲにおける少なくとも１つのストーク伸長領域は、ジスルフィド結合を形成すること
ができない。一部の実施形態では、ストーク領域は、ＣＤ８アルファヒンジドメイン、Ｃ
Ｄ２８ヒンジドメイン、ＣＴＬＡ－４ヒンジドメインのうちの少なくとも１つに対して少
なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％の同一性を
有する配列を含む。一部の実施形態では、ストーク領域は、ＣＤ８アルファヒンジドメイ
ン、ＣＤ２８ヒンジドメインまたはＣＴＬＡ－４ヒンジドメインである。
一部の場合では、Ｔ細胞またはＮＫ細胞は、本明細書に記載されるＣＡＲを発現する。
一部の場合では、ＣＡＲは、配列番号５３～６８として示される配列、または少なくとも
８０％の配列同一性を有するが、抗原結合能力を保持するその変異体を含む。
本明細書では、ここに記載されるＣＡＲをコードする核酸配列が提供される。一部の場
合では、核酸配列は、配列番号１４７～１６２として示される配列、または少なくとも７
０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９％の配列同一性を有するその
変異体を含む。
本明細書では、ここに記載されるＣＡＲをコードする核酸配列を含むベクターが提供さ
れる。一部の実施形態では、ベクターは、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベク
ター、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙトランスポゾンまたは非ウイルスベクターである
。
本明細書では、Ｔ細胞またはＮＫ細胞を作製する方法が提供され、この方法は、ここに
記載されるＣＡＲをコードする核酸配列をＴ細胞またはＮＫ細胞に導入するステップを含
む。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ポイント・オブ・ケアの場で修飾され、増殖誘導（
propagation）および活性化を受けることなしに、それを必要とする対象に投与される。
一部の実施形態では、Ｔ細胞は、少なくとも０、１、２、４、６、８、１０、１２、１４
、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０日またはそれを超えて刺激される。
一部の実施形態では、Ｔ細胞は、少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、
４０、４５、５０、５５、６０日またはそれを超えて刺激される。一部の実施形態では、
Ｔ細胞は、少なくとも７、１４、２１、２８、３５、４２、４９、５６、６３日またはそ
れを超えて刺激される。
本明細書では、ここに記載されるＣＡＲをコードする核酸配列を含むベクター；および
ここに記載されるＣＡＲを発現するＴ細胞またはＮＫ細胞；および薬学的に許容される担
体、希釈剤または賦形剤のうちの少なくとも１つを含む医薬組成物が提供される。
本明細書では、ここに記載されるＣＡＲを含む細胞の集団が提供される。
本明細書では、対象におけるＴ細胞媒介性免疫応答を刺激する方法であって、ここに記
載されるＣＡＲを発現するように遺伝子修飾された有効量の細胞と対象を接触させること
を含む方法が提供される。
本明細書では、細胞表面上のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の発現を増加させる方法であ
って、ストーク伸長ドメインを含むように、ＣＡＲをコードする核酸を操作し、それによ
り操作されたＣＡＲを生成することを含む方法が提供される。
本明細書では、キメラポリペプチドを発現する操作されたＴ細胞の拡大（expansion）
を増加させる方法であって、ストーク伸長ドメインを含むように、キメラポリペプチドを
コードする核酸を操作し、それにより操作されたＴ細胞を生成することを含む方法が提供
される。
本開示の特徴は、添付の特許請求の範囲に詳細に記載されている。本開示の特徴および
利点のよりよい理解は、本開示の原理が利用される例示的な実施形態を説明する以下の詳
細な説明および添付の図面を参照することによって得られる。
図１Ａは、ストークおよび様々な数のストーク伸長領域（ｓ’－１、ｓ’－２、ｓ’－３）を組み込んでいるスペーサーを有するポリペプチドの図を示す。図１Ｂは、ストーク、および様々な数のストーク伸長領域（ｓ’－１、ｓ’－２、ｓ’－３）を組み込んでいるスペーサーを有するポリペプチドの図を示す。図はまた、例示的な二量体化部位を示す。 同上。 図２Ａは、様々なスペーサー長を有する、キメラ抗原受容体などの例示的なポリペプチドの図を示す。図２Ｂは、様々なスペーサー長を有する、キメラ抗原受容体などの例示的なポリペプチドの図を示す。この例示は、ストーク、および１つ、２つ、または３つのストーク伸長領域を組み込む、スペーサーを有するキメラ抗原受容体を示す。 同上。 図３Ａ～３Ｂは、エクスビボ培養において様々なスペーサー長のＣＡＲを発現するＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞の拡大を示す例示的なデータを示す。図３Ａは、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙ修飾されたＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞が、表面上にＣＤ１９抗原を発現する活性化および増殖誘導細胞（ＡａＰＣ）の存在下、エクスビボで増殖誘導されたことを示す。１つ、２つ、または３つのストーク伸長領域を組み込んでいるスペーサー（ＣＤ８－２Ｘ、ＣＤ８－３ＸおよびＣＤ８－４Ｘ）を有するＣＡＲを発現するＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＣＤ８ストークを組み込んでいるスペーサーを有するＣＡＲと比較して、同様の増殖能を示した。ＣＤ８－３Ｘと比較して、ストーク伸長領域におけるアミノ酸置換を含むストーク伸長領域を組み込んでいるスペーサーＣＤ８－３Ｘｖ２を有するＣＡＲを発現するＴ細胞は、エクスビボで拡大することができなかった。図３Ｂは、ＣＤ８αヒンジストークを組み込んでいるスペーサー（ＣＤ８－１Ｘ）を有するＣＤ１９ ＣＡＲと比較して、２つのストーク伸長領域を組み込んでいるスペーサー（ＣＤ８－３Ｘ）を有するＣＤ１９ ＣＡＲのより高い発現（ＭＦＩ）を示す。 同上。 図４は、ウエスタンブロット分析によって測定された、Ｔ細胞における様々なスペーサー長のＣＤ１９特異的ＣＡＲの発現を示す。 図５Ａ～５Ｂは、様々なスペーサー長を有するＣＤ１９－ＣＡＲを発現するＴ細胞が、ＣＤ１９を発現する標的細胞に対して特異的な細胞毒性効果を発揮し得ることを示す。図５Ａは、様々なエフェクター細胞対標的細胞（Ｅ：Ｔ）の比でＣＤ１９（Ｋ５６２／ＣＤ１９）抗原を発現するように操作されたＫ５６２細胞株に対して、様々なスペーサー長を有するＣＤ１９－ＣＡＲを発現するＴ細胞の細胞傷害活性を示す。１つ、２つ、または３つのストーク伸長領域を組み込んでいるスペーサー（ＣＤ８－２Ｘ、ＣＤ８－３ＸおよびＣＤ８－４Ｘ）を有するＣＡＲを発現するＴ細胞は、１０：１のＥ：Ｔ比で同様の細胞毒性を発揮し、ＣＤ８αヒンジストークのみを有するスペーサー（ＣＤ８－１Ｘ）を組み込んでいるＣＡＲを発現するＴ細胞と比較して、Ｋ５６２／ＣＤ１９細胞株のより低いＥ：Ｔ比で細胞毒性を改善した。図５Ｂは、ＣＤ１９陰性Ｋ５６２またはＥＬ４細胞株、ならびにＣＤ１９陽性Ｋ５６２／ＣＤ１９細胞株に対する、１０：１のＥ：Ｔ比で、様々なスペーサー長を有するＣＤ１９－ＣＡＲを発現するＴ細胞の細胞毒性応答を示す。１つ、２つ、または３つのストーク伸長領域を組み込んでいるスペーサー（ＣＤ８－２Ｘ、ＣＤ８－３ＸおよびＣＤ８－４Ｘ）を有するＣＤ１９－ＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＣＤ８αヒンジストーク（ＣＤ８－１Ｘ）を有するＣＡＲを発現するＴ細胞と比較して、Ｋ５６２／ＣＤ１９細胞株に対して同様の細胞毒性効果を発揮した。しかしながら、伸長されたストーク長の領域（ＣＤ８－２Ｘ、ＣＤ８－３ＸおよびＣＤ８－４Ｘ）を有するＣＡＲを発現するＴ細胞は、ＣＤ１９陰性Ｋ５６２およびＥＬ４細胞株の非特異的細胞毒性の低下を示した。 図６Ａ～６Ｃは、様々なスペーサー長を有するＣＤ１９－ＣＡＲを発現するＴ細胞が、ＣＤ１９抗原を発現する細胞に応答してサイトカインを生成する能力を示す。ＣＤ１９陰性細胞株（Ｋ５６２およびＥＬ４）に応答して放出されるサイトカインのレベルは検出することができないか、または非常に低い、ＣＤ１９抗原に対するＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞の特異性が示された。図６Ａは、１つ、２つまたは３つのストーク伸長領域を組み込んでいるスペーサー（ＣＤ８－２Ｘ、ＣＤ８－３ＸおよびＣＤ８－４Ｘ）を有するＣＤ１９特異的ＣＡＲを発現するＴ細胞が、１０：１のＥ：Ｔ比でＣＤ１９陽性Ｋ５６２／ＣＤ１９細胞株とともに培養した場合、ＣＤ８αヒンジストーク（ＣＤ８－１Ｘ）を有するＣＡＲを発現するＴ細胞と比較して、ＩＦＮγサイトカインの放出の増大を示したことを示す。図６Ｂは、１つ、２つまたは３つのストーク伸長領域を組み込んでいるスペーサー（ＣＤ８－２Ｘ、ＣＤ８－３ＸおよびＣＤ８－４Ｘ）を有するＣＤ１９特異的ＣＡＲを発現するＴ細胞が、１０：１のＥ：Ｔ比でＣＤ１９陽性Ｋ５６２／ＣＤ１９細胞株とともに培養した場合、ＣＤ８αヒンジストークを有するが、ストーク伸長領域を有しない（ＣＤ８－１Ｘ）ＣＡＲを発現するＴ細胞と比較して、ＴＮＦサイトカインの放出の増大を示したことを示す。図６Ｃは、１つ、２つまたは３つのストーク伸長領域を組み込んでいるスペーサー（ＣＤ８－２Ｘ、ＣＤ８－３ＸおよびＣＤ８－４Ｘ）を有するＣＤ１９特異的ＣＡＲを発現するＴ細胞が、１０：１のＥ：Ｔ比でＣＤ１９陽性Ｋ５６２／ＣＤ１９細胞株とともに培養した場合、ＣＤ８αヒンジストーク（ＣＤ８－１Ｘ）を有するＣＡＲを発現するＴ細胞と比較して、グランザイムＢサイトカインの放出の増大を示したことを示す。 図７Ａは、ａＡＰＣにおける連続的なラウンドの刺激後の様々なスペーサー長を有するＲＯＲ－１ ＣＡＲの発現データを示す。図７Ｂは、ａＡＰＣにおける連続ラウンドの刺激後の様々なスペーサー長を有するＲＯＲ－１ ＣＡＲの発現データを示す。データから分かるように、ストーク伸長領域の組み込みは、発現の改善をもたらした。 同上。 図８Ａは、ＣＤ１０７ａ発現およびＩＦＮγ放出によって測定された、様々なスペーサー長を有するＲＯＲ－１ ＣＡＲを発現するＴ細胞の脱顆粒を測定するための機能的活性アッセイからの例示的なデータを示す。図８Ｂは、ＣＤ１０７ａ発現およびＩＦＮγ放出によって測定された、様々なスペーサー長を有するＣＡＲを発現するＴ細胞の脱顆粒を測定するための機能的活性アッセイからの例示的なデータを表す。 図９は、Ｔ細胞の表面上の様々なスペーサー長を有するＣＤ３３特異的ＣＡＲの発現を示す。ヒトＰＢＭＣは、１つ、２つまたは３つのストーク伸長領域を組み込んでいるスペーサー（ＣＤ８－２Ｘ、ＣＤ８－３ＸおよびＣＤ８－４Ｘ）を有するＣＤ３３特異的ＣＡＲをエンコードするＳｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙトランスポゾンでエレクトロポレーションされ、ＣＡＲ－Ｔ細胞のエクスビボ増殖のために、ＣＤ３３抗原を発現するＡａＰＣとともに共培養された。ＣＤ３３特異的ＣＡＲの発現は、ＣＤ３３－Ｆｃタンパク質を用いたフローサイトメトリーによって測定された。２つまたは３つのストーク伸長領域を組み込んでいるスペーサー（ＣＤ８－３ＸおよびＣＤ８－４Ｘ）を有するＣＤ３３特異的ＣＡＲは、ＣＤ８αヒンジストーク（ＣＤ８－１Ｘ）を有するＣＤ３３特異的ＣＡＲと比較すると、７日目に発現およびＣＡＲ－Ｔ細胞増殖の改善を示した。 図１０Ａは、ストーク（複数可）、および様々な数のストーク伸長領域（ｓ’－１、ｓ’－２）を組み込むスペーサーを有する操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の図を示す。図１０Ｂは、ストーク（複数可）、および様々な数のストーク伸長領域（ｓ’－１、ｓ’－２）を組み込むスペーサーを有する操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の図を示す。図はまた、ジスルフィド結合を介した例示的な二量体化部位を示す。 同上。 図１１Ａは、ａＡＰＣにおけるあるラウンドの刺激後の様々なスペーサー長を有する、ＥＧＦＲｖＩＩＩに特異的なＭＲ１－１およびｈｕＭＲ１－１ ＣＡＲの発現データを示す。図１１Ｂは、ａＡＰＣにおける３ラウンドの刺激後の様々なスペーサー長を有する、ＥＧＦＲｖＩＩＩに特異的なＭＲ１－１およびｈｕＭＲ１－１ ＣＡＲの発現データを示す。データから分かるように、ストーク伸長領域の組み込みは、発現の改善をもたらした。図１１Ｃ～Ｄは、ＣＡＲ＋Ｔ細胞の総数、および連続ラウンドのＡａＰＣ刺激後の様々なスペーサーを有するｈｕＭＲ１－１ ＣＡＲ＋Ｔ細胞の倍数拡大を示す。図１１Ｅは、ユーロピウム放出アッセイによって測定された、様々なスペーサーを有するｈｕＭＲ１－１ ＣＡＲ＋Ｔ細胞を発現するＴ細胞の細胞毒性活性を測定する例示的なデータを示す。 同上。 同上。 同上。
開示の詳細な説明
他に定義されない限り、本明細書において使用されるすべての技術用語および科学用語
は、請求される主題が属する当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。詳
細な説明は、例示的であり、説明的なものにすぎず、主張されるいかなる主題も制限する
ものではないことを理解されたい。本出願では、特に他に記述がない限り、単数形の使用
には複数形が含まれる。本明細書において使用する場合、単数形「１つの（ａ）」、「１
つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、文脈が明確に他のことを指示しない限り
、複数の指示対象を含むことに留意されたい。本出願では、他に記述がない限り、「また
は」の使用は「および／または」を意味する。さらに、「含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎ
ｇ）」という用語ならびに「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」
および「含まれる（ｉｎｃｌｕｄｅｄ）」などの他の形態の使用は、限定的ではない。
本明細書において使用されるセクションの見出しは、組織化の目的のみのためであり、
記載された主題を限定するものとして解釈されるべきではない。
様々な特徴を単一の実施形態との関連で説明することはできるが、これらの特徴は、別
個にまたは任意の適切な組合せで提供することもできる。逆に、本開示は、明確にするた
めに別個の実施形態との関連で本明細書において説明することができるが、単一の実施形
態において実行することもできる。
本明細書における「一部の実施形態」、「実施形態」、「一実施形態」または「他の実
施形態」への言及は、実施形態に関連して説明された特定の特徴、構造、または特性が少
なくとも一部の実施形態に含まれるが、必ずしも、本明細書に記載されたすべての実施形
態ではないことを意味する。
本明細書および特許請求の範囲において使用される場合、用語「含んでいる（ｃｏｍｐ
ｒｉｓｉｎｇ）」（ならびに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉ
ｓｅｓ）」などの「含んでいる」の任意の形態）、「有している（ｈａｖｉｎｇ）」（な
らびに「有する（ｈａｖｅ）」および「有する（ｈａｓ）」などの「有している」の任意
の形態）、「含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」（ならびに「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ
）」および「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」などの「含んでいる」の任意の形態）、または「
含んでいる（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」（ならびに「含む（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」および
「含む（ｃｏｎｔａｉｎ）」などの「含んでいる」の任意の形態）は、包括的または制限
がなく、追加の、列挙されていない要素または方法のステップを除外しない。本明細書に
おいて検討されている任意の実施形態は、本明細書に記載される任意の方法または組成物
に関して実行され得、逆もまた同様であることが企図される。さらに、本明細書に記載さ
れる組成物は、本明細書に記載される方法を達成するために使用され得る。
本明細書において使用する場合、範囲および量は、「約」特定の値または範囲として表
すことができる。約はまた正確な量も含む。したがって、「約５μＬ」は、「約５μＬ」
および「５μＬ」を意味する。一般的に、「約」という用語には、実験誤差の範囲内であ
ることが予想される量が含まれる。
「単離された」またはその文法的同等物とは、その自然環境から核酸を除去することを
意味する。「精製された」またはその文法的同等物とは、自然界から除去されたもの（ゲ
ノムＤＮＡおよびｍＲＮＡを含む）または合成（ｃＤＮＡを含む）および／または実験室
条件下で増幅されたものであっても、特定の核酸の純度が増加したことを意味し、ここで
、「純度」は相対的な用語であり、「絶対的な純度」ではない。しかしながら、核酸およ
びタンパク質は、希釈剤またはアジュバントとともに処方され得、なお実用的な目的のた
めに単離され得ることが理解されたい。例えば、核酸は、典型的には、細胞への導入に使
用される場合、許容される担体または希釈剤とともに混合される。
本明細書において使用される「ポリヌクレオチド」または「オリゴヌクレオチド」とは
、リボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドのいずれかの、任意の長さのヌクレ
オチドのポリマー形態を指す。この用語は、分子の一次構造のみを指す。したがって、こ
の用語には、二本鎖および一本鎖ＤＮＡ、三重鎖ＤＮＡ、ならびに二本鎖および一本鎖Ｒ
ＮＡが含まれる。それはまた、例えば、メチル化および／またはキャッピングにより修飾
されたポリヌクレオチドの形態、ならびにポリヌクレオチドの非修飾形態を含む。この用
語はまた、天然に存在しないかまたは合成のヌクレオチド、ならびにヌクレオチド類似体
を含む分子を含むことを意味する。
「ポリペプチド（ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ）」は、用語「ポリペプチド（ｐｏｌｙｐｅ
ｐｔｉｄｅｓ）」、「ペプチド（複数可）」、および「タンパク質（複数可）」と交換可
能に使用され、アミノ酸残基のポリマーを指す。「成熟タンパク質」は、完全長のタンパ
ク質であり、任意選択で、所与の細胞環境におけるタンパク質に典型的なグリコシル化ま
たは他の修飾を含む。
核酸および／または核酸配列は、それらが、共通の祖先の核酸または核酸配列から天然
または人工的に由来する場合、「相同」である。タンパク質および／またはタンパク質配
列は、それらをコードするＤＮＡが、共通の祖先の核酸または核酸配列から天然または人
工的に由来する場合、相同である。相同な分子は、同族体と呼ばれることがある。例えば
、本明細書に記載されるように、任意の天然に存在するタンパク質は、任意の利用可能な
突然変異誘発方法によって修飾され得る。発現された場合、この突然変異誘発された核酸
は、元の核酸によってコードされたタンパク質と相同であるポリペプチドをコードする。
相同性は、一般的に、２つ以上の核酸またはタンパク質（またはそれらの配列）間の配列
同一性から推論される。相同性の確立に役立つ配列間の同一性の正確なパーセンテージは
、問題の核酸およびタンパク質によって変化するが、わずか２５％の配列同一性が、相同
性を確立するために日常的に使用されている。より高いレベルの配列同一性、例えば、３
０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％もしくは９９％、また
はそれを超えるものを使用して、相同性を確立することもできる。
ポリペプチドの２つの核酸配列またはアミノ酸配列との関連で「同一である」または「
配列同一性」という用語は、特定の比較ウィンドウにわたって最大の対応について整列さ
せた場合に同じである、２つの配列中の残基を指す。
１つのクラスの実施形態では、本明細書におけるポリペプチドは、例えば、デフォルト
パラメーターを使用したＢＬＡＳＴＰ（もしくはＣＬＵＳＴＡＬ、または任意の他の利用
可能なアラインメントソフトウェア）によって測定した場合、参照ポリペプチドまたはそ
の断片に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９８％、９９％または１００％同一
である。同様に、核酸はまた、開始核酸を参照して説明することができる。例えば、それ
らは、例えば、デフォルトパラメーターを使用したＢＬＡＳＴＮ（もしくはＣＬＵＳＴＡ
Ｌ、または任意の他の利用可能なアラインメントソフトウェア）によって測定した場合、
参照核酸またはその断片に対して５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９
０％、９８％、９９％または１００％同一であり得る。１つの分子が大きな分子と特定の
割合の配列同一性を有すると言われる場合、２つの分子が最適に整列されている場合に、
２つの分子が最適に整列されている順序に従って、より小さな分子における残基の割合が
より大きな分子における一致した残基を見つけることを意味する。
本明細書に開示されるタンパク質（それらの機能的部分および機能的変異体を含む）は
、１つ以上の天然に存在するアミノ酸の代わりに合成アミノ酸を含み得る。このような合
成アミノ酸は当該技術分野において公知であり、例えば、アミノシクロヘキサンカルボン
酸、ノルロイシン、α－アミノｎ－デカン酸、ホモセリン、Ｓ－アセチルアミノメチル－
システイン、トランス－３－およびトランス－４－ヒドロキシプロリン、４－アミノフェ
ニルアラニン、４－ニトロフェニルアラニン、４－クロロフェニルアラニン、４－カルボ
キシフェニルアラニン、β－フェニルセリンβ－ヒドロキシフェニルアラニン、フェニル
グリシン、α－ナフチルアラニン、シクロヘキシルアラニン、シクロヘキシルグリシン、
インドリン－２－カルボン酸、１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン－３－カルボ
ン酸、アミノマロン酸、アミノマロン酸モノアミド、Ｎ’－ベンジル－Ｎ’－メチル－リ
ジン、Ｎ’，Ｎ’－ジベンジル－リジン、６－ヒドロキシリジン、オルニチン、α－アミ
ノシクロペンタンカルボン酸、α－アミノシクロヘキサンカルボン酸、α－アミノシクロ
ヘプタンカルボン酸、α－（２－アミノ－２－ノルボルナン）－カルボン酸、α，γ－ジ
アミノ酪酸、α，β－ジアミノプロピオン酸、ホモフェニルアラニン、およびα－ｔｅｒ
ｔ－ブチルグリシンを含む。
「トランスポゾン」または「転位エレメント」（ＴＥ）は、ゲノム内でのその位置を変
化させることができるベクターＤＮＡ配列であり、突然変異を生成し、または突然変異か
らの復帰をもたらし、細胞のゲノムサイズを変更する場合がある。多くの場合、転位は、
ＴＥの重複をもたらす。クラスＩ ＴＥは２段階でコピーされる：最初に、それらがＤＮ
ＡからＲＮＡに転写され、次に、生成されたＲＮＡがＤＮＡに逆転写される。その後、こ
のコピーされたＤＮＡは、ゲノム内の新しい位置に挿入される。逆転写ステップは、ＴＥ
自体によってコードされ得る逆転写酵素によって触媒される。レトロトランスポゾンの特
徴は、ＨＩＶなどのレトロウイルスに類似する。クラスＩＩ ＴＥのカットアンドペース
ト転位機構には、ＲＮＡ中間体は関与しない。転位は、いくつかのトランスポザーゼ酵素
によって触媒される。一部のトランスポザーゼは、ＤＮＡの任意の標的部位に非特異的に
結合するが、一方、他は特定のＤＮＡ配列標的に結合する。トランスポザーゼは、標的部
位で互い違いに切断され、一本鎖の５’または３’のＤＮＡオーバーハング（付着末端）
をもたらす。このステップはＤＮＡトランスポゾンを切り出し、次に、新しい標的部位に
ライゲートする：このプロセスは、ギャップを埋めるＤＮＡポリメラーゼの活性、および
糖－リン酸骨格を閉じるＤＮＡリガーゼの活性を伴う。これは、標的部位の重複をもたら
す。ＤＮＡトランスポゾンの挿入部位は、標的ＤＮＡにおける互い違いの切断とＤＮＡポ
リメラーゼによる埋め込みによって作製され得る短い直接反復、続く、トランスポザーゼ
によるＴＥの切り出しに重要な一連の逆方向反復によって同定され得る。ドナー部位が既
に複製されているが、標的部位はまだ複製されていない細胞周期のＳ期中に転位が行われ
る場合、カットアンドペーストＴＥは複製され得る。転位は、クラスＩとクラスＩＩの両
方のＴＥで「自律型」または「非自律型」に分類することができる。自律型ＴＥは、それ
自体で移動することができるが、非自律型ＴＥは、移動するために別のＴＥの存在を必要
とする。これは、多くの場合、非自律型ＴＥがトランスポザーゼ（クラスＩＩの場合）ま
たは逆転写酵素（クラスＩの場合）を欠損しているためである。
「トランスポザーゼ」とは、トランスポゾンの末端に結合し、カットアンドペースト機
構または複製転位機構によってゲノムの別の部分へのトランスポゾンの移動を触媒する酵
素を指す。一部の実施形態では、トランスポザーゼの触媒活性を利用して、遺伝子（複数
可）をベクターからゲノムに移動させることができる。
一部の例では、本明細書に記載されるＣＡＲおよび／またはＴＣＲを発現するための遺
伝子スイッチポリペプチドをコードするポリヌクレオチドはまた、脊椎動物の染色体にＤ
ＮＡ配列を導入するための合成ＤＮＡトランスポゾンシステムを指す、「Ｓｌｅｅｐｉｎ
ｇ Ｂｅａｕｔｙ（ＳＢ）トランスポゾンシステム」などの非ウイルスベースの送達シス
テムを使用してＴ細胞に導入することができる。このシステムの一部の例示的な実施形態
は、例えば、米国特許第６，４８９，４５８号明細書；米国特許第８，２２７，４３２号
明細書；米国特許第９，２２８，１８０号明細書および国際公開第２０１６／１４５１４
６号パンフレットに記載されている。Ｓｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙトランスポゾンシ
ステムは、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙ（ＳＢ）トランスポザーゼおよびＳＢトラン
スポゾンで構成される。実施形態では、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙトランスポゾン
システムは、ＳＢ１１トランスポゾンシステム、ＳＢ１００Ｘトランスポゾンシステム、
またはＳＢ１１０トランスポゾンシステムを含むことができる。
本明細書に開示または企図される核酸配列およびベクターは、「トランスフェクション
」、「形質転換」、または「形質導入」によって細胞に導入することができる。本明細書
において使用される「トランスフェクション」、「形質転換」、または「形質導入」は、
物理的または化学的方法を使用することによる、１つ以上の外因性ポリヌクレオチドの宿
主細胞への導入を指す。多くのトランスフェクション技術が当該技術分野において公知で
あり、例えば、リン酸カルシウムＤＮＡ共沈法（例えば、Murray E. J. (ed.), Methods
in Molecular Biology, Vol. 7, Gene Transfer and Expression Protocols, Humana Pre
ss (1991)）；ＤＥＡＥ－デキストラン；エレクトロポレーション；カチオン性リポソー
ム媒介によるトランスフェクション；タングステン粒子で促進される微粒子衝突（Johnst
on, Nature, 346: 776-777 (1990)）；およびリン酸ストロンチウムＤＮＡ共沈法（Brash
et al., Mol. Cell Biol., 7: 2031-2034 (1987)）が含まれる。ファージまたはウイル
スベクターは、それらの多くが市販されている、適切なパッケージング細胞における感染
性粒子の増殖後、宿主細胞に導入することができる。
「プロモーター」とは、コード配列の転写を開始するポリヌクレオチドの領域を指す。
プロモーターは、遺伝子の転写開始部位の近くであって、同じ鎖上にあり、およびＤＮＡ
の上流（センス鎖の５’領域に向かって）に位置される。一部のプロモーターは構成的で
あり、それらは細胞内のすべての環境において活性であるが、一方、他のプロモーターは
、特定の刺激に応答して活性になるように調節される（例えば、誘導性プロモーター）。
「プロモーター活性」という用語は、その活性が測定されているプロモーターに作動可
能に連結されているヌクレオチド配列の発現の程度を指す。プロモーター活性は、例えば
、ノーザンブロット分析により、生成されたＲＮＡ転写物の量を決定することにより直接
的に測定され得るか、またはプロモーターに連結されたレポーター核酸配列などの連結さ
れた核酸配列によってコードされる生成物の量を決定することにより間接的に測定され得
る。
本明細書で使用される「誘導性プロモーター」とは、転写調節因子、例えば、生物的ま
たは非生物的因子の存在または不存在によって活性化に誘導されるプロモーターを指す。
誘導性プロモーターは、それらに作動可能に連結された遺伝子の発現を、生物の発生の特
定の段階でまたは特定の組織においてオンまたはオフにすることができるため、有用であ
る。誘導性プロモーターの例は、アルコール調節プロモーター、テトラサイクリン調節プ
ロモーター、ステロイド調節プロモーター、金属調節プロモーター、病因調節プロモータ
ー、温度調節プロモーターおよび光調節プロモーターである。一実施形態では、誘導性プ
ロモーターは遺伝子スイッチの一部である。
本明細書で使用される「エンハンサー」という用語は、例えば、それが作動可能に連結
されている核酸配列の転写を増加させるＤＮＡ配列を指す。エンハンサーは、核酸配列の
コード領域から数キロベース離れた場所に位置することができ、調節因子の結合、ＤＮＡ
メチル化のパターン、またはＤＮＡ構造の変化を媒介することができる。様々な異なる供
給源からの多数のエンハンサーが当該技術分野において周知であり、クローン化ポリヌク
レオチドとしてまたはその中で（例えば、ＡＴＣＣなどの寄託機関ならびに他の商業的ま
たは個々の供給源から）入手可能である。プロモーター（一般的に使用されるＣＭＶプロ
モーターなど）を含む多数のポリヌクレオチドもまたエンハンサー配列を含む。エンハン
サーは、コード配列の上流、内部、または下流に位置し得る。「Ｉｇエンハンサー」とい
う用語は、免疫グロブリン（Ｉｇ）遺伝子座内にマッピングされたエンハンサー領域に由
来するエンハンサーエレメントを指す（このようなエンハンサーには、例えば、重鎖（ミ
ュー）５’エンハンサー、軽鎖（カッパ）５’エンハンサー、カッパおよびミューイント
ロンエンハンサー、および３’エンハンサーを指す（一般には、Paul W. E. (ed), Funda
mental Immunology, 3rd Edition, Raven Press, New York (1993), pages 353-363；米
国特許第５，８８５，８２７号明細書を参照されたい）。
「発現ベクター」または「ベクター」は、任意の遺伝学的エレメント、例えば、プラス
ミド、染色体、ウイルス、トランスポゾンであり、それは、細胞内のポリヌクレオチド複
製の自律ユニットとして振る舞う（すなわち、それ自身の制御下で複製することができる
）か、または付着したセグメントの複製および／または発現をもたらすように別のポリヌ
クレオチドセグメントをそれに付着している宿主細胞染色体への挿入により複製が可能に
なる。適切なベクターには、限定されないが、プラスミド、トランスポゾン、バクテリオ
ファージおよびコスミドが含まれる。ベクターは、所望の宿主細胞へのベクターのライゲ
ートまたは挿入をもたらすために、および付着したセグメントの発現をもたらすために必
要とされるポリヌクレオチド配列を含み得る。このような配列は、宿主生物によって異な
る；それらには、転写をもたらすプロモーター配列、転写を増加させるエンハンサー配列
、リボソーム結合部位配列、ならびに転写および翻訳の終結配列が含まれる。あるいは、
発現ベクターは、宿主細胞ＤＮＡ配列へのベクターのライゲートおよび組み込みなしに、
そこにコードされる核酸配列産物を直接発現することが可能であり得る。
ベクターはまた、「選択マーカー遺伝子」を含み得る。本明細書において使用される「
選択マーカー遺伝子」という用語は、対応する選択剤の存在下で、核酸配列を発現する細
胞を特異的にまたは反対に選択することを可能にする核酸配列を指す。適切な選択マーカ
ー遺伝子は、当該技術分野において公知であり、例えば、国際特許出願公開第１９９２／
０８７９６号パンフレットおよび同第１９９４／２８１４３号パンフレット；Wigler et
al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77: 3567 (1980)；O’Hare et al., Proc. Natl. Ac
ad. Sci. USA, 78: 1527 (1981)；Mulligan & Berg, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 78:
2072 (1981)；Colberre-Garapin et al., J. Mol. Biol., 150:1 (1981)；Santerre et a
l., Gene, 30: 147 (1984)；Kent et al., Science, 237: 901-903 (1987)；Wigler et a
l., Cell, 11: 223 (1977); Szybalska & Szybalski, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 48:
2026 (1962)；Lowy et al., Cell, 22: 817 (1980)；米国特許第５，１２２，４６４号
明細書および同第５，７７０，３５９号明細書に記載されている。
一部の実施形態では、ベクターは、宿主細胞において複製することができ、適切な選択
圧の存在下で宿主細胞内のＤＮＡの染色体外セグメントとして存続する「エピソーム発現
ベクター」または「エピソーム」である（例えば、Conese et al., Gene Therapy, 11:17
35-1742 (2004)を参照されたい）。代表的な市販のエピソーム発現ベクターには、限定さ
れないが、エプスタイン・バー核抗原１（ＥＢＮＡ１）およびエプスタイン・バーウイル
ス（ＥＢＶ）複製起点（ｏｒｉＰ）を利用するエピソームプラスミドが含まれる。Ｉｎｖ
ｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ、Ｃａｌｉｆ．）からのベクターｐＲＥＰ４、ｐＣＥ
Ｐ４、ｐＲＥＰ７、およびｐｃＤＮＡ３．１、ならびにＳｔｒａｔａｇｅｎｅ（Ｌａ Ｊ
ｏｌｌａ、Ｃａｌｉｆ．）からのｐＢＫ－ＣＭＶは、ＥＢＮＡ１およびｏｒｉＰの代わり
に、Ｔ抗原およびＳＶ４０複製起点を使用するエピソームベクターの非限定的な例を表す
。
本明細書において使用される「抗体」とは、モノクローナル抗体またはポリクローナル
抗体を指す。本明細書において使用される「モノクローナル抗体」という用語は、Ｂ細胞
の単一のクローンによって生成され、同じエピトープに結合する抗体を指す。対照的に、
「ポリクローナル抗体」とは、異なるＢ細胞によって生成され、同じ抗原の異なるエピト
ープに結合する抗体の集団を指す。抗体全体は、典型的には、４つのポリペプチド：重（
Ｈ）鎖ポリペプチドの２つの同一コピーと軽（Ｌ）鎖ポリペプチドの２つの同一コピーか
らなる。重鎖の各々は、１つのＮ末端可変（ＶＨ）領域および３つのＣ末端定常（ＣＨ１
、ＣＨ２およびＣＨ３）領域を含み、軽鎖の各々は、１つのＮ末端可変（ＶＬ）領域およ
び１つのＣ末端定常（ＣＬ）領域を含む。軽鎖および重鎖の各対の可変領域は、抗体の抗
原結合部位を形成する。ＶＨおよびＶＬ領域は類似した一般的な構造を有し、各々の領域
は４つのフレームワーク領域を含み、それらの配列は比較的保存されている。フレームワ
ーク領域は、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）によって接続される。ＣＤＲ１、ＣＤＲ２
、およびＣＤＲ３として公知である３つのＣＤＲは、抗原結合に関与する抗体の「超可変
領域」を形成する。
「抗体の断片」、「抗体断片」、「抗体の機能的断片」、および「抗原結合部分」とい
う用語は、本明細書において互換的に使用され、抗原に特異的に結合する能力を保持する
抗体の１つ以上の断片または部分を意味する（一般的に、Holliger et al., Nat. Biotec
h., 23(9):1126-1129 (2005)を参照されたい）。抗体断片は、例えば、１つ以上のＣＤＲ
、可変領域（またはその一部）、定常領域（またはその一部）、またはそれらの組合せを
含むことが望ましい。抗体断片の例には、限定されないが、以下：（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、Ｃ
Ｌ、およびＣＨ１ドメインからなる１価の断片であるＦａｂ断片；（ｉｉ）ストーク領域
でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む２価の断片であるＦ（ａ
ｂ’）２断片；（ｉｉｉ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片
；（ｉｖ）２つのドメインを単一のポリペプチド鎖として合成することができるようにす
る合成リンカーで接合されたＦｖ断片の２つのドメイン（すなわち、ＶＬおよびＶＨ）か
らなる１価の分子である一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）（例えば、Bird et al., Science, 242:
423-426 (1988)；Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85: 5879-5883 (1988)
；Osbourn et al., Nat. Biotechnol., 16: 778 (1998)を参照されたい）；ならびに（ｖ
）ポリペプチド鎖の二量体であるダイアボディが挙げられ、各々のポリペプチド鎖は、同
じポリペプチド鎖のＶＨとＶＬの間で、短すぎて対形成することができないペプチドリン
カーによってＶＬに接続されたＶＨを含み、それにより、異なるＶＨ－ＶＬポリペプチド
鎖の相補ドメイン間の対形成を駆動して、２つの機能的な抗原結合部位を有する二量体分
子を生成する。抗体断片は当該技術分野において公知であり、例えば、米国特許出願公開
２００９／００９３０２４Ａ１号明細書にさらに詳細に記載されている。
「機能的部分」という用語は、ＣＡＲに関して使用される場合、本明細書に記載される
ＣＡＲの任意の部分または断片を指し、その部分または断片は、それが一部であるＣＡＲ
（親ＣＡＲ）の生物活性を保持する。親ＣＡＲをコードする核酸配列と比較して、ＣＡＲ
の機能部分をコードする核酸配列は、例えば、約１０％、２５％、３０％、５０％、６８
％、８０％、９０％、９５％、またはそれを超える親ＣＡＲを含むタンパク質をコードす
ることができる。
本明細書において使用される「機能的変異体」という用語は、参照ポリペプチドと実質
的もしくは有意な配列同一性または類似性を有するポリペプチドまたはタンパク質を指し
、それが変異体である参照ポリペプチドの生物活性を保持する。機能的変異体は、例えば
、本明細書に記載されるＣＡＲ（親ＣＡＲ）と類似した程度、同程度、またはより高い程
度に標的細胞を認識する能力を保持する、親ＣＡＲのそれらの変異体を包含する。親ＣＡ
Ｒをコードする核酸配列と比較して、ＣＡＲの機能的変異体をコードする核酸配列は、例
えば、親ＣＡＲをコードする核酸配列と約１０％同一、約２５％同一、約３０％同一、約
５０％同一、約６５％同一、約８０％同一、約９０％同一、約９５％同一、または約９９
％同一であり得る。
本明細書において言及される「増殖性疾患」とは、細胞の過剰な増殖および細胞マトリ
ックスの代謝回転が、がんを含むいくつかの疾患の病因に有意に寄与するという統一され
た概念が提示されることを意味する。
「投与すること」とは、本明細書において、本明細書に記載される組成物を患者に提供
することを指す。例としてであって、限定されないが、組成物の投与、例えば、注射は、
静脈内（ｉ．ｖ．）注射、皮下（ｓ．ｃ．）注射、皮内（ｉ．ｄ．）注射、腹腔内（ｉ．
ｐ．）注射、または筋肉内（ｉ．ｍ．）注射によって行うことができる。１つ以上のこの
ような経路を使用することができる。非経口投与は、例えば、ボーラス注射によるか、ま
たは時間をかけて徐々に灌流することによるものであり得る。あるいは、または同時に、
投与は経口経路によるものであり得る。さらに、投与は、細胞のボーラスもしくはペレッ
トの外科的沈着、または医療デバイスの配置によるものであり得る。
本明細書に記載される修飾または操作された細胞組成物は、本明細書に記載される１つ
以上の核酸配列を発現する宿主細胞、または本明細書に記載される１つ以上の核酸配列を
含むベクターを、増殖性疾患の治療または予防に有効な量で含み得る。本明細書において
使用する場合、「治療」、「治療する」などの用語は、所望の薬理学的および／または生
理学的効果を得ることを指す。実施形態では、効果は治療的であり、すなわち、効果は、
疾患および／または疾患に起因する有害な症状を部分的もしくは完全に治癒する。この目
的のために、本発明の方法は、本発明の核酸配列を発現する宿主細胞、または本発明の核
酸配列を含むベクターを含む、ある「量」の組成物を投与することを含む。
「量」または「用量」とは、所望の治療結果を達成するために必要とされる用量および
期間での有効な量を指す。量は、個体の病状、年齢、性別、および体重、ならびに本発明
の核酸配列が個体において所望の応答を発揮する能力などの要因に応じて変動し得る。
あるいは、薬理学的および／または生理学的効果は、「予防的」であり得る、すなわち
、効果は、疾患またはその症状を完全にもしくは部分的に予防する。
「予防的有効量」とは、所望の予防的結果（例えば、疾患の発症の予防）を達成するた
めに必要とされる用量および期間での有効な量を指す。
本明細書において使用する場合、用語「個体（複数可）」、「対象（複数可）」および
「患者（複数可）」は、任意の哺乳動物を意味する。一部の実施形態では、哺乳動物はヒ
トである。一部の実施形態では、哺乳動物は非ヒトである。いずれの用語も、医療従事者
（例えば、医師、登録看護師、正看護師、医師のアシスタント、秩序あるまたはホスピス
の労働者）の監督（例えば、一定または断続的である）によって特徴付けられる状況を必
要としないかまたはこれらに限定されない。
スペーサー
本明細書では、本明細書に記載されるポリペプチド構築物の２つの領域を接続するスペ
ーサーが記載される。例えば、本明細書に記載されるスペーサーは、ポリペプチドの膜貫
通領域をポリペプチドの抗原またはリガンド結合領域に接続することができる。一部の場
合では、ポリペプチドはキメラポリペプチドであり得る。本明細書に記載されるキメラポ
リペプチドまたはキメラタンパク質は、元々は別々のタンパク質をコードしていた、２つ
以上の遺伝子もしくはその一部または誘導体の接合により作製されたポリペプチドまたは
タンパク質を含む。様々なスペーサーの例示的な記述は、図１および２に見出すことがで
きる。一部の実施形態では、スペーサーは、キメラポリペプチドの異なるドメイン間の距
離を拡張し、スペーサーを欠くが、他には同一であるポリペプチドと比較して、ポリペプ
チドの発現または機能活性の改善をもたらす。一部の例では、スペーサーは、膜貫通領域
を、キメラポリペプチドの細胞外領域または細胞質領域のいずれかに連結するように機能
する任意のポリペプチドを含む。一部の実施形態では、スペーサーは、抗原またはリガン
ド結合領域が、異なる配向に整列して抗原またはリガンド受容体の認識を容易にし得るの
に十分なほど柔軟である。他の実施形態では、スペーサーは、キメラポリペプチドの異な
るドメイン間の距離を拡張し、スペーサーを欠くが、他には同一であるポリペプチドを発
現する細胞（複数可）と比較して、キメラポリペプチドを発現する細胞（複数可）の拡大
または増殖誘導の改善をもたらす。
スペーサーは、ストーク領域およびストーク伸長領域（複数可）を含むことができる。
一実施形態では、スペーサーは、単一のストーク領域を含むことができる。別の実施形態
では、スペーサーは、ストーク領域（「ｓ」で表される）および本明細書において「ｓ’
－ｎ」で表されるストーク伸長領域を含み得る。例えば、スペーサーは、１つのストーク
領域およびｓ’－ｎを含むことができ、ｎは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９
、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０であり得
る。さらなる実施形態では、ストーク領域は、リンカーを介してストーク伸長領域ｓ’－
ｎに連結することができる。本明細書に記載されるリンカーは、例えば、ＧＳＧリンカー
（配列番号９および配列番号１１５）、ＳＧＳＧリンカー（配列番号１０および配列番号
１１６）、（Ｇ４Ｓ）３リンカー（配列番号１１および配列番号１１７）、（Ｇ４Ｓ）４
リンカー（配列番号２５５）および／またはホイットローリンカー（配列番号８および配
列番号１１４）を含むことができる。特定の場合では、ストーク領域とストーク伸長領域
を連結させるための任意の長さまたはサイズのペプチドリンカー。例えば、一部の実施形
態では、ペプチドリンカーは、ストーク領域とストーク伸長領域の間に所望のまたは最適
な距離を維持するようなサイズである。一部の実施形態は、異なるサイズのＧ４Ｓリンカ
ー（配列番号２５６）（Ｇ４Ｓ）ｎ（ｎは０、１、２、３、４、５である）（配列番号２
５７）である。
一部の実施形態では、ストーク領域は、長さが約２０から約３００アミノ酸であり得、
少なくとも１つの二量体化部位を含み、ストーク伸長領域は、アミノ酸の数で測定した場
合、ストーク領域の長さの約１から約１０倍を含み得る。
一部の場合では、ストーク領域は、長さが約２０、２１、２２、２３、２４、２５、２
６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９
、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、
５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０またはそれを超えるアミノ酸であり得
る。他の場合では、ストーク領域は、長さが約１００、１２５、１５０、１７５、２００
、２２５、２５０、２７５または３００アミノ酸であり得る。一部の場合では、ストーク
領域は、長さが２０アミノ酸未満であり得る。
一部の場合では、ストーク伸長領域は、アミノ酸の数によって測定した場合、ストーク
領域の約１～約１０倍の長さを含むことができる。例えば、ストーク伸長領域は、アミノ
酸の数で測定した場合、ストーク領域の約１、２、３、４、５、６、７、８、９、または
１０倍の長さを含むことができる。一部の場合では、ストーク伸長領域は、アミノ酸の数
で測定した場合、ストーク領域の１０倍を超える長さを含むことができる。一部の例では
、ストーク伸長領域は、アミノ酸の数で測定した場合、ストーク領域の最大２倍の長さを
含むことができるが、ストーク領域よりも少ない二量体化部位を含む。
主題の抗原結合ポリペプチドのストーク伸長領域は、ストーク領域と比較して、少なく
とも１つ少ない二量体化部位を含み得る。例えば、ストーク領域が２つの二量体化部位を
含む場合、ストーク伸長領域は、１つまたはゼロの二量体化部位を含むことができる。別
の例として、ストーク領域が１つの二量体化部位を含む場合、ストーク伸長領域はゼロの
二量体化部位を含むことができる。一部の例では、ストーク伸長領域は、二量体化部位を
欠いている。一部の例では、ストーク伸長領域は、アミノ酸の数で測定した場合、ストー
ク領域の最大２倍の長さを含むことができるが、二量体化部位を含まない。一部の例では
、ストーク伸長領域は、アミノ酸の数で測定した場合、ストーク領域の最大３倍の長さを
含むことができるが、二量体化部位を含まない。一部の例では、ストーク伸長領域は、ア
ミノ酸の数で測定した場合、ストーク領域の最大４倍の長さを含むことができるが、二量
体化部位は含まない。一部の場合では、１つ以上の二量体化部位（複数可）が膜の近位に
あり得る。他の場合では、１つ以上の二量体化部位（複数可）が膜の遠位にあり得る。
ストーク伸長領域の各々は、一部の例では、長さが約２０から約６０アミノ酸であり得
る。他の例では、ストーク伸長領域は、長さが約１０、１５、２０、２５、３０、３５、
４０、４５、５０、５５、６０、６５、より長いアミノ酸、またはその範囲内もしくは範
囲外の任意の整数であり得る。一部の場合では、各々のストーク伸長領域は、ストーク領
域に対して少なくとも約６０％の同一性を有する配列を有する。一部の例では、各々のス
トーク伸長領域は、ストーク領域に対して少なくとも約６５％、７０％、７５％、８０％
、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれを超える同一性
を有する配列を有する。
一実施形態では、図１Ａに示されるように、ストーク領域は膜領域の近位にある。別の
実施形態では、図１Ｂに示されるように、ストーク領域は膜領域の遠位にある。
一実施形態では、ストーク領域およびストーク伸長領域（複数可）は、天然または合成
起源のポリペプチドから誘導または設計することができる。ストーク領域および／または
ストーク伸長領域は、細胞表面タンパク質またはその誘導体もしくは変異体に由来するヒ
ンジドメインを含み得る。一部の実施形態では、ストーク領域および／またはストーク伸
長領域は、ＣＤ２８またはＣＤ８アルファ（ＣＤ８α）に由来するヒンジドメインを含み
得る。一部の実施形態では、ストーク領域およびストーク伸長領域の各々は、ＣＤ８アル
ファヒンジドメイン、ＣＤ２８ヒンジドメイン、ＣＴＬＡ－４ヒンジドメイン、ＬＮＧＦ
Ｒ細胞外ドメイン、ＩｇＧ１ヒンジ、ＩｇＧ４ヒンジおよびＣＨ２－ＣＨ３ドメインのう
ちの少なくとも１つに由来し得る。ストーク領域およびストーク伸長領域（複数可）は、
ＣＤ８アルファヒンジドメイン、ＣＤ２８ヒンジドメイン、ＣＴＬＡ－４ヒンジドメイン
、ＬＮＧＦＲ細胞外ドメイン、ＩｇＧ１ヒンジ、ＩｇＧ４ヒンジまたはＣＨ２－ＣＨ３ド
メインの任意の組合せから個別に由来し得る。例として、ストーク領域は、ＣＤ８アルフ
ァヒンジドメインに由来し得、少なくとも１つのストーク伸長領域は、ＣＤ２８ヒンジド
メインに由来し得、このようにしてハイブリッドスペーサーを作製する。別の例として、
ストーク領域は、ＩｇＧ１ヒンジまたはＩｇＧ４ヒンジに由来し得、少なくとも１つのス
トーク伸長領域は、ＩｇＧのＣＨ２－ＣＨ３ドメインに由来し得る。
特定の実施形態では、ストーク領域は、ホモまたはヘテロ二量体化キメラポリペプチド
を形成するために１つ以上の二量体化部位を含み得る。他の実施形態では、ストーク領域
または１つ以上のストーク伸長領域は、二量体化部位を完全に排除する突然変異を含み得
る。一部の実施形態では、ストーク伸長領域（複数可）は、ストーク領域と比較して、少
なくとも１つ少ない二量体化部位を含むことができる。例えば、ストーク領域が２つの二
量体化部位を含む場合、ストーク伸長領域は１つまたはゼロの二量体化部位を含むことが
できる。別の例として、ストーク領域が１つの二量体化部位を含む場合、ストーク伸長領
域はゼロの二量体化部位を含むことができる。一部の例では、ストーク伸長領域は二量体
化部位を欠いている。
ポリペプチド
本明細書では、本明細書に記載されるスペーサーとともに使用され得るポリペプチドが
開示される。一実施形態では、本明細書に記載されるスペーサーを含むこのようなポリペ
プチドは、細胞膜表面上に発現しないポリペプチド、または近接性もしくは立体障害の欠
如のためにそれらの標的に結合することができないポリペプチドである。ポリペプチドの
例には、限定されないが、リガンド、リガンド結合受容体、ペプチド、抗体、またはそれ
らの抗原結合断片、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）２、およびＦｖ断片、１つ以
上のＣＤＲで構成される断片、一本鎖抗体（例えば、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ））、ジ
スルフィド安定化（ｄｓＦｖ）Ｆｖ断片、ヘテロコンジュゲート抗体（例えば、二重特異
性抗体）、ｐＦｖ断片、重鎖一量体または二量体、軽鎖一量体または二量体、および１つ
の重鎖と１つの軽鎖からなる二量体、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）が含まれる。また、抗
原結合領域には、リガンド領域、例えば、増殖誘導性リガンド（ＡＰＲＩＬ）、Ｂ細胞活
性化因子（ＢＡＦＦ）、膜貫通型活性化因子およびカルシウムモジュレーターおよびシク
ロフィリンリガンド相互作用因子（ＴＡＣＩ）、または合成由来のペプチドが含まれる。
一部の実施形態では、ポリペプチドはキメラポリペプチドである。特定の例では、本明
細書に記載されるキメラポリペプチドは、抗原結合ポリペプチドである。一部の実施形態
では、ポリペプチドはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。本明細書に記載されるＣＡＲ
などのポリペプチドは、抗原結合領域、膜貫通領域、および前記膜貫通領域を前記抗原結
合領域と接続するスペーサーを含む。一実施形態では、スペーサーは、少なくとも１つの
二量体化部位を含むストーク領域、およびストーク伸長領域を含む。他の実施形態では、
前記ストーク伸長領域は、前記ストーク領域と比較して、より少ない二量体化部位を含む
ことができる。特定の場合では、本明細書に記載されるキメラポリペプチドはまた、細胞
内シグナル伝達ドメインを含む。一部の場合では、キメラポリペプチドは細胞内シグナル
伝達ドメインを含まない。特定の場合では、細胞内シグナル伝達ドメインは、本明細書に
記載されるキメラポリペプチドを発現する操作された細胞において別個のポリペプチドと
して発現される。
さらに、本明細書では、抗原結合領域、膜貫通領域、および前記膜貫通領域を前記抗原
結合領域と接続するスペーサー領域を含む抗原結合ポリペプチドが開示され、前記スペー
サー領域は、ストーク領域（「ｓ」で表される）および本明細書で検討されるように、本
明細書において「ｓ－ｎ」で表されるストーク伸長領域（複数可）を含むことができる。
スペーサーを含む抗原結合ポリペプチドが開示され、スペーサーは、ストーク領域およ
び１つのストーク伸長領域、すなわち、ｓ’－ｎ（ｎ＝１である）を含む。一部の場合で
は、ストーク伸長領域は、ストーク領域に対して少なくとも６０％の同一性を有する配列
を有する。他の例では、ストーク伸長領域は、他の例では、ストーク伸長領域は、ストー
ク領域に対して少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、
９９％またはそれを超える同一性を有する配列を有する。
スペーサーを含む抗原結合ポリペプチドが開示され、スペーサーは、ストーク領域およ
び２つのストーク伸長領域、すなわち、ｓ’－ｎ（ｎ＝２である）を含む。一部の場合で
は、ストーク伸長領域の各々は、ストーク領域に対して少なくとも６０％の同一性を有す
る配列を有する。他の例では、ストーク伸長領域の各々は、ストーク領域に対して少なく
とも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％またはそれを超
える同一性を有する配列を有する。
スペーサーを含む抗原結合ポリペプチドが開示され、スペーサーは、ストーク領域およ
び３つのストーク伸長領域、すなわち、ｓ’－ｎ（ｎ＝３である）を含む。一部の場合で
は、ストーク伸長領域の各々は、ストーク領域に対して少なくとも６０％の同一性を有す
る配列を有する。他の例では、ストーク伸長領域の各々は、ストーク領域に対して少なく
とも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％またはそれを超
える同一性を有する配列を有する。
スペーサーを含む抗原結合ポリペプチドが開示され、スペーサーは、ストーク領域およ
び４つのストーク伸長領域、すなわち、ｓ’－ｎ（ｎ＝４である）を含む。一部の場合で
は、ストーク伸長領域の各々は、ストーク領域に対して少なくとも６０％の同一性を有す
る配列を有する。他の例では、ストーク伸長領域の各々は、ストーク領域に対して少なく
とも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％またはそれを超
える同一性を有する配列を有する。
スペーサーを含む抗原結合ポリペプチドが開示され、スペーサーは、ストーク領域およ
び５つのストーク伸長領域、すなわち、ｓ’－ｎ（ｎ＝５である）を含む。一部の場合で
は、ストーク伸長領域の各々は、ストーク領域に対して少なくとも６０％の同一性を有す
る配列を有する。他の例では、ストーク伸長領域の各々は、ストーク領域に対して少なく
とも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％またはそれを超
える同一性を有する配列を有する。
スペーサーを含む抗原結合ポリペプチドが開示され、スペーサーは、ストーク領域およ
びストーク伸長領域を含み、ストーク伸長領域は、５つより多くのストーク伸長領域、す
なわちｓ’－ｎ（ｎ＞５である）を含む。このような場合では、ストーク伸長領域は、ｎ
＝６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２
０、またはそれを超えるストーク伸長領域を含むことができる。一部の場合では、前記ス
トーク伸長領域の各々は、ストーク領域に対して少なくとも６０％の同一性を有する配列
を有する。他の例では、前記ストーク伸長領域の各々は、ストーク領域に対して少なくと
も６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％またはそれを超え
る同一性を有する配列を有する。一部の場合では、スペーサーは、配列番号１に示される
ＣＤ８α配列に対して少なくとも約１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、
１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、
２６％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、４０％、５０％、６０％、
６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％またはそれを超える
同一性を有するペプチド配列を含む。一部の場合では、スペーサーは、配列番号１０７に
示されるＣＤ８αヌクレオチド配列に対して少なくとも約１０％、１１％、１２％、１３
％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３
％、２４％、２５％、２６％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、４０
％、５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９
％またはそれを超える同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされるペプチド配
列を含む。
本明細書に開示される実施形態の一部の態様では、対象の抗原結合ポリペプチドのスト
ーク領域は、ＣＤ８アルファヒンジドメインに対して少なくとも約６５％、７０％、７５
％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％またはそれを超える同一性を有する配列を
含む。ＣＤ８αヒンジドメインは、配列番号３に示される配列に対して少なくとも６５％
、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれを超える同一
性を有するペプチド配列、または配列番号１０９に示される配列に対して少なくとも６５
％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれを超える同
一性を有するヌクレオチド配列によってコードされるペプチド配列を含むことができる。
一部の場合では、ストーク伸長領域は、配列番号２に示される配列に対して少なくとも６
５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくはそれを超える同一性
を有するペプチド配列、または配列番号１０８に示される配列に対して少なくとも６５％
、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくはそれを超える同一性を有
するヌクレオチド配列によってコードされるペプチド配列を含む。一部の例では、ストー
ク領域およびストーク伸長領域はともに、配列番号４、５、６または７に示される配列に
対して少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくはそ
れを超える同一性を有するペプチド配列、あるいは配列番号１１０、１１１、１１２また
は１１３に示される配列に対して少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、
９０％、９５％もしくはそれを超える同一性を有するヌクレオチド配列によってコードさ
れるペプチド配列を含むことができる。
一部の実施形態では、ストーク領域およびストーク伸長領域は、ホイットローリンカー
（配列番号８および配列番号１１４）、ＧＳＧリンカー（配列番号９および配列番号１１
５）、ＳＧＳＧリンカー（配列番号１０）または（Ｇ４Ｓ）３リンカー（配列番号１１お
よび配列番号１１７）などのリンカーを介して接続され得る。一実施形態では、（Ｇ４Ｓ
）３リンカー（配列番号１１）に接続されたＣＤ８αヒンジドメインは、配列番号１２に
示されるペプチド配列、または配列番号１１８に示されるヌクレオチド配列によってコー
ドされるペプチド配列を含み得る。別の実施形態では、ホイットローリンカーに接続され
たＣＤ８αヒンジドメインは、配列番号１３に示されるペプチド配列、または配列番号１
１９に示されるヌクレオチド配列によってコードされるペプチド配列を含み得る。さらに
別の実施形態では、ホイットローリンカー（２Ｘ）に接続されたＣＤ８αヒンジドメイン
は、配列番号１４に示されるペプチド配列、または配列番号１２０に示されるヌクレオチ
ド配列によってコードされるペプチド配列を含み得る。別の態様では、ホイットローリン
カー（２Ｘ）に接続されたＣＤ８αヒンジドメインは、配列番号１５に示されるペプチド
配列、または配列番号１２１に示されるヌクレオチド配列によってコードされるペプチド
配列を含み得る。
一部の場合では、スペーサーは、配列番号３１に示されるＣＤ２８配列に対して少なく
とも約１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１
９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２５％、２６％、２
７％、２８％、２９％、３０％、４０％、５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８
０％、８５％、９０％、９５％、９９％またはそれを超える同一性を有するペプチド配列
を含む。一部の場合では、スペーサーは、配列番号１３７に示されるＣＤ２８ヌクレオチ
ド配列に対して少なくとも約１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％
、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％
、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、４０％、５０％、６０％、６５％
、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％またはそれを超える同一性
を有するヌクレオチド配列によってコードされるペプチド配列を含む。本明細書に開示さ
れる少なくとも１つの実施形態の一部の態様では、本明細書に記載されるポリペプチドの
ストーク領域は、ＣＤ２８ヒンジドメインに対して少なくとも約６５％、７０％、７５％
、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれを超える同一性を有する配列を含む。Ｃ
Ｄ２８ヒンジドメインは、配列番号３２に示される配列に対して少なくとも６５％、７０
％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくはそれを超える同一性を有するペ
プチド配列、または配列番号１３８に示される配列に対して少なくとも６５％、７０％、
７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれを超える同一性を有する
ヌクレオチド配列によってコードされるペプチド配列を含み得る。一部の例では、ストー
ク領域およびストーク伸長領域はともに、配列番号３３、３４または３５に示される配列
に対して少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくは
それを超える同一性を有するペプチド配列、あるいは配列番号１３９、配列番号１４０ま
たは配列番号１４１に示される配列に対して少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％
、８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれを超える同一性を有するヌクレオチド配
列によってコードされるペプチド配列を含み得る。
本明細書に開示される実施形態の一部の態様では、本明細書に記載されるポリペプチド
のストーク領域は、ＣＴＬＡ－４細胞外ドメインに対して少なくとも約６５％、７０％、
７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれを超える同一性を有する配列を含
む。一部の態様では、ＣＴＬＡ－４細胞外ドメインは部分配列を含み得る。一部の場合で
は、ＣＴＬＡ－４部分配列は、配列番号３６に示されるＣＴＬＡ－４配列に対して少なく
とも約１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１
９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２５％、２６％、２
７％、２８％、２９％、３０％、４０％、５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８
０％、８５％、９０％、９５％、９９％またはそれを超える同一性を有するペプチド配列
を含む。一部の場合では、スペーサーは、配列番号１４２に示されるＣＴＬＡ－４ヌクレ
オチド配列に対して少なくとも約１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１
６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２
６％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、４０％、５０％、６０％、６
５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％またはそれを超える同
一性を有するヌクレオチドによってコードされるペプチド配列を含む。ＣＴＬＡ－４細胞
外ドメインは、配列番号３７に示される配列に対して少なくとも６５％、７０％、７５％
、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれを超える同一性を有する配列を含み得る
。一部の場合では、ストーク伸長領域は、配列番号３７に示される配列に対して少なくと
も６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれを超える同一
性を有する配列を含む。一部の例では、ストーク領域およびストーク伸長領域はともに、
配列番号３８、配列番号３９または配列番号４０に示される配列に対して少なくとも６５
％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれを超える同一性を有
する配列を含み得る。
本明細書に開示される実施形態の一部の態様では、本明細書に記載されるポリペプチド
のストーク領域またはストーク伸長領域は、完全長のＬＮＧＦＲ細胞外ドメイン（ＥＣＤ
）に対して少なくとも約６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、ま
たはそれを超える同一性を有する配列を含む。一部の場合では、ＬＮＧＦＲ ＥＣＤは二
量体化することができない。ＬＮＧＦＲ ＥＣＤは、配列番号１６に示される配列に対し
て少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくはそれ
を超える同一性を有するペプチド配列、または配列番号１２２に示される配列に対して少
なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそ
れを超える同一性を有するヌクレオチド配列によってコード化されるペプチド配列を含み
得る。一部の場合では、ストーク伸長領域は、配列番号１６に示される配列に対して少な
くとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、もしくはそれを超え
る同一性を有するペプチド配列、または配列番号１２２に示される配列に対して少なくと
も６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれを超
える同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされるペプチド配列を含む。一部の
例では、ストーク領域およびストーク伸長領域はともに、配列番号１７、配列番号１８、
配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２または配列番号２３に示され
る配列に対して少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、
９９％もしくはそれを超える同一性を有するペプチド配列、あるいは配列番号１２３、配
列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７、配列番号１２８また
は配列番号１２９に示される配列に対して少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、
８５％、９０％、９５％、９９％もしくはそれを超える同一性を有するヌクレオチド配列
によってコードされるペプチド配列を含み得る。
一部の場合では、ストーク伸長領域は、配列番号７２または配列番号７３に示される配
列に対して少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしく
はそれを超える同一性を有する配列、あるいは配列番号１６６または配列番号１６７に示
される配列に対して少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５
％、９９％もしくはそれを超える同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる
ペプチド配列を含む。一部の例では、ストーク領域およびストーク伸長領域はともに、配
列番号７７、配列番号７８または配列番号７９に示される配列に対して少なくとも６５％
、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくはそれを超える同一性を有す
るペプチド配列、あるいは配列番号１７１、配列番号１７２または配列番号１７３に示さ
れる配列に対して少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％
、９９％もしくはそれを超える同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされるペ
プチド配列を含むことができる。一部の例では、ストーク領域およびストーク伸長領域は
ともに、配列番号８０、配列番号８１または配列番号８２に示される配列に対して少なく
とも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくはそれを超える同
一性を有するペプチド配列、あるいは配列番号１７４、配列番号１７５または配列番号１
７６に示される配列に対して少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０
％、９５％、９９％もしくはそれを超える同一性を有するヌクレオチド配列によってコー
ドされるペプチド配列を含むことができる。
一部の実施形態では、ストーク領域およびストーク伸長領域は、ホイットローリンカー
（配列番号８および配列番号１１４）、ＧＳＧリンカー（配列番号９および配列番号１１
５）、ＳＧＳＧリンカー（配列番号１０）または（Ｇ４Ｓ）３リンカー（配列番号１１お
よび配列番号１１７）などのリンカーを介して接続され得る。一実施形態では、（Ｇ４Ｓ
）３リンカー（配列番号１１）に接続されたＴＣＲαヒンジドメインは、配列番号７４に
示されるペプチド配列、または配列番号１６８に示されるヌクレオチド配列によってコー
ドされるペプチド配列を含み得る。一実施形態では、（Ｇ４Ｓ）３リンカー（配列番号１
１）に接続されたＴＣＲβヒンジドメインは、配列番号７５に示されるペプチド配列、ま
たは配列番号１６９に示されるヌクレオチド配列によってコードされるペプチド配列を含
み得る。さらに別の実施形態では、ホイットローリンカーに接続されたＴＣＲβヒンジド
メインは、配列番号７６に示されるペプチド配列、または配列番号１７０に示されるヌク
レオチド配列によってコードされるペプチド配列を含み得る。
一部の場合では、ストーク伸長領域は、配列番号８６もしくは配列番号８７に示される
配列に対して少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、ま
たはそれを超える同一性を有する配列、あるいは配列番号１８０もしくは配列番号１８１
に示される配列に対して少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、
９５％、９９％またはそれを超える同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされ
るペプチド配列を含む。一部の例では、ストーク領域およびストーク伸長領域はともに、
配列番号９１、配列番号９２または配列番号９３に示される配列に対して少なくとも６５
％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくはそれを超える同一性を有
するペプチド配列、あるいは配列番号１８５、配列番号１８６または配列番号１８７に示
される配列に対して少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５
％、９９％もしくはそれを超える同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされる
ペプチド配列を含むことができる。一部の例では、ストーク領域およびストーク伸長領域
はともに、配列番号９４、配列番号９５または配列番号９６に示される配列に対して少な
くとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくはそれを超える
同一性を有するペプチド配列、あるいは配列番号１８８、配列番号１８９または配列番号
１９０に示される配列に対して少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９
０％、９５％、９９％もしくはそれを超える同一性を有するヌクレオチド配列によってコ
ードされるペプチド配列を含むことができる。
一部の実施形態では、ストーク領域およびストーク伸長領域は、ホイットローリンカー
（配列番号８および配列番号１１４）、ＧＳＧリンカー（配列番号９および配列番号１１
５）、ＳＧＳＧリンカー（配列番号１０）または（Ｇ４Ｓ）３リンカー（配列番号１１お
よび配列番号１１７）などのリンカーを介して接続され得る。一実施形態では、（Ｇ４Ｓ
）３リンカー（配列番号１１）に接続されたＴＣＲβヒンジドメインは、配列番号８８に
示されるペプチド配列または配列番号１８２に示されるヌクレオチド配列によってコード
されるペプチド配列を含み得る。一実施形態では、（Ｇ４Ｓ）３リンカー（配列番号１１
）に接続されたＴＣＲβヒンジドメインは、配列番号８９に示されるペプチド配列または
配列番号１８３に示されるヌクレオチド配列によってコードされるペプチド配列を含み得
る。さらに別の実施形態では、ホイットローリンカーに接続されたＴＣＲβヒンジドメイ
ンは、配列番号９０に示されるペプチド配列または配列番号１８４に示されるヌクレオチ
ド配列によってコードされるペプチド配列を含み得る。
本明細書に開示される実施形態の一部の態様では、二量体化部位はシステインを含む。
一部の場合では、本明細書に記載されるストーク領域の二量体化部位は、２つのシステイ
ンを含む。一部の態様では、二量体化部位はリガンドにより誘導され得る。
本明細書ではさらに、本明細書に開示されるポリペプチドのいずれかをコードするポリ
ヌクレオチド、ならびに前記ポリヌクレオチドの１つ以上を含むベクターが開示される。
ベクターは、クローニングベクター、送達ベクター、発現ベクター、またはそれらの任意
の組合せであり得る。このようなベクターは、ウイルスベクターまたは非ウイルスベクタ
ーであり得る。例えば、ベクターは、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター
、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕ
ｔｙトランスポゾン、ＡｔｔＳｉｔ（商標）リコンビナーゼ、ＰｉｇｇｙＢａｃ（商標）
トランスポゾンまたは他の非ウイルスベクターであり得る。
一部の場合では、本明細書に開示されるストーク伸長領域（複数可）を有するスペーサ
ーを含む抗原結合ポリペプチドは、ストーク伸長領域（複数可）を欠くが、他の点では同
一である抗原結合ポリペプチドと比較して、増加した抗原結合を有し得る。ストーク伸長
領域（複数可）を含む抗原結合ポリペプチドの抗原結合は、ストーク伸長領域を欠くが、
他の点では同一である抗原結合ポリペプチドと比較して、少なくとも５％、１０％、１５
％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、６５％、７０
％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１５０％、２００％、５００
％、１０００％またはそれを超えて増加し得る。
抗原結合は、フローサイトメトリーもしくは細胞ベースのアッセイまたは任意の他の同
等のアッセイによって評価することができる。細胞ベースのアッセイは、表面上で目的の
抗原を発現する細胞型を利用して、抗原結合を評価することができる。可溶性タンパク質
として発現される抗原またはその断片を利用して、フローサイトメトリーまたは同様のア
ッセイを使用して抗原結合を評価することができる。抗原結合の改善は、抗原結合ポリペ
プチドまたはキメラ受容体の機能測定によって間接的に評価することができる。例えば、
キメラ受容体またはＣＡＲの改善された抗原結合は、本明細書に記載されるように、抗原
を発現する標的細胞に対する、増加した特異的細胞毒性によって測定することができる。
一部の場合では、本明細書に開示されるポリペプチドは、１つ以上のストーク伸長領域
（複数可）を欠くが、他の点では同一であるポリペプチドと比較して、細胞表面上で増加
した発現を有し得る。ストーク伸長領域（複数可）を含むポリペプチドの細胞表面発現は
、ストーク伸長領域を欠くが、他の点では同一であるポリペプチドと比較して、少なくと
も５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、
６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１５０
％、２００％、５００％、１０００％またはそれを超えて増加することができる。
本開示のポリペプチドの細胞表面発現レベルは、例えば、フローサイトメトリーベース
のアッセイを使用して評価することができる。抗原結合ポリペプチドの改善された発現は
、前記抗原結合ポリペプチドを発現する分析された細胞のパーセンテージとして、あるい
は細胞の表面上の前記抗原結合ポリペプチドの平均密度として測定することができる。本
明細書に記載される抗原結合ポリペプチドの細胞表面発現を評価するために使用すること
ができるさらなる適切な方法は、ウエスタンブロッティングまたは任意の他の同等のアッ
セイを含む。
キメラ受容体
本明細書に開示されるポリペプチドは、修飾されたエフェクター細胞において発現され
得る。一部の実施形態では、修飾されたエフェクター細胞は、細胞の表面上に発現される
キメラ受容体を含む。一部の例では、キメラ受容体は、腫瘍抗原、例えば、腫瘍関連抗原
または腫瘍特異的抗原の認識および結合を可能にする抗原結合領域を含む。一部の場合で
は、抗原結合領域は、抗体または結合断片、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２
、Ｆ（ａｂ’）３、ｓｃＦｖ、ｓｃ（Ｆｖ）２、ｄｓＦｖ、ダイアボディ、ミニボディ、
およびナノボディまたはそれらの結合断片を含む。一部の場合では、抗原結合領域はｓｃ
Ｆｖを含む。一部の場合では、抗原結合ポリペプチドは、抗原結合ドメインとしてｓｃＦ
ｖを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。一部の例では、キメラ抗原受容体は、パタ
ーン認識受容体を含む。他の場合では、キメラ受容体は、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣ
Ｒ）を含む。
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
本明細書に開示されるポリペプチドは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含み得る。ＣＡ
Ｒは、外因性の特異性を免疫エフェクター細胞に移植する操作された受容体である。
一部の場合では、本明細書に開示されるＣＡＲは、膜貫通領域を抗原結合領域と接続す
るスペーサー領域を含む。一部の場合では、場合では、本明細書に開示されるＣＡＲのス
ペーサー領域は、１）ストーク領域、および２）ストーク領域に隣接するストーク伸長領
域（複数可）を含む。例示的な実施形態は、図１および２に記載される。一部の実施形態
では、本明細書に開示されるＣＡＲは、ストーク領域およびストーク伸長領域（ｓ’－ｎ
、ｎ＝０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５
、１６、１７、１８、１９または２０である）を含むスペーサーを組み込む。
一部の例では、ＣＡＲは、抗原結合領域を含む細胞外領域（エクトドメイン）、ストー
ク領域、ストーク伸長領域、膜貫通領域、および任意選択で細胞内（エンドドメイン）領
域を含む。一部の例では、細胞内領域は、１つ以上の細胞内シグナル伝達領域またはドメ
インをさらに含む。一部の例では、本明細書に記載されるＣＡＲは、抗原結合領域、スト
ーク領域、ストーク伸長領域、膜貫通領域、１つ以上の共刺激領域またはドメイン、およ
びＴ細胞活性化のためのシグナル伝達領域を含む。
抗原結合領域は、モノクローナル抗体の相補性決定領域、モノクローナル抗体の可変領
域、および／またはそれらの抗原結合断片を含み得る。相補性決定領域（ＣＤＲ）は、抗
原を補完し、したがって、特定の抗原に対する特異性を受容体に提供する、抗原受容体（
例えば、免疫グロブリンおよびＴ細胞受容体）タンパク質の可変ドメインに見出される短
いアミノ酸配列である。抗原受容体の各ポリペプチド鎖は、３つのＣＤＲ（ＣＤＲ１、Ｃ
ＤＲ２、およびＣＤＲ３）を含むことができる。一部の場合では、抗原結合領域は、Ｆ（
ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、またはｓｃＦｖを含む。一部の場合では、抗原結
合領域はｓｃＦｖである。一部の場合では、抗原結合領域はＦａｂである。一部の場合で
は、抗原結合領域はＦａｂ’である。一部の場合では、抗原結合領域はＦ（ａｂ’）２で
ある。一部の場合では、抗原結合領域はＦｖである。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲまたはキメラ受容体または抗原結合
ポリペプチドは、ＣＤ１９、ＢＣＭＡ、ＣＤ４４、α－葉酸受容体、ＣＡＩＸ、ＣＤ３０
、ＲＯＲ１、ＣＥＡ、ＥＧＰ－２、ＥＧＰ－４０、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、葉酸結合タンパ
ク質、ＧＤ２、ＧＤ３、ＩＬ－１３Ｒａ２、ＫＤＲ、ＥＤＢ－Ｆ、メソセリン、ＧＰＣ３
、ＣＳＰＧ４、ＨＥＲ１／ＨＥＲ３、ＨＥＲ２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／ｖ８、Ｃ
Ｄ２０、ＣＤ１７４、ＣＤ１３８、Ｌ１－ＣＡＭ、ＦＡＰ、ｃ－ＭＥＴ、ＰＳＣＡ、ＣＳ
１、ＣＤ３８、ＩＬ－１１Ｒα、ＥｐｈＡ２、ＣＬＬ－１、ＣＤ２２、ＥＧＦＲ、葉酸受
容体α、ムチン、例えば、ＭＵＣ－１またはＭＵＣ－１６、ＭＡＧＥ－Ａ１、ｈ５Ｔ４、
ＰＳＭＡ、ＴＡＧ－７２、ＥＧＦＲ、ＣＤ２０、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ１２３またはＶ
ＥＧＦ－Ｒ２上のエピトープに結合する抗原結合領域を含む。一部の実施形態では、本明
細書に記載されるＣＡＲまたはキメラ受容体または抗原結合ポリペプチドは、ＣＤ１９、
ＣＤ３３、ＢＣＭＡ、ＣＤ４４、α－葉酸受容体、ＣＡＩＸ、ＣＤ３０、ＲＯＲ１、ＣＥ
Ａ、ＥＧＰ－２、ＥＧＰ－４０、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、葉酸結合タンパク質、ＧＤ２、Ｇ
Ｄ３、ＩＬ－１３Ｒａ２、ＫＤＲ、ＥＤＢ－Ｆ、メソセリン、ＧＰＣ３、ＣＳＰＧ４、Ｈ
ＥＲ１／ＨＥＲ３、ＨＥＲ２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／ｖ８、ＣＤ２０、ＣＤ１７
４、ＣＤ１３８、Ｌ１－ＣＡＭ、ＦＡＰ、ｃ－ＭＥＴ、ＰＳＣＡ、ＣＳ１、ＣＤ３８、Ｉ
Ｌ－１１Ｒα、ＥｐｈＡ２、ＣＬＬ－１、ＣＤ２２、ＥＧＦＲ、ムチン、例えば、ＭＵＣ
－１またはＭＵＣ－１６、ＭＡＧＥ－Ａ１、ｈ５Ｔ４、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ－７２、ＥＧＦ
ＲｖＩＩＩ、ＣＤ１２３およびＶＥＧＦ－Ｒ２上のエピトープに結合する抗原結合領域を
含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲまたはキメラ受容体または抗原
結合ポリペプチドは、ＣＤ１９またはＣＤ３３上のエピトープに結合する抗原結合領域を
含む。一部の例では、本明細書に記載されるＣＡＲまたはキメラ受容体または抗原結合ポ
リペプチドは、ＣＤ１９上のエピトープに結合する抗原結合領域を含む。一部の場合では
、本明細書に記載されるＣＡＲまたはキメラ受容体または抗原結合ポリペプチドは、ＣＤ
３３上のエピトープに結合する抗原結合領域を含む。一部の場合では、本明細書に記載さ
れるＣＡＲまたはキメラ受容体または抗原結合ポリペプチドは、ＲＯＲ－１上のエピトー
プに結合する抗原結合領域を含む。一部の場合では、本明細書に記載されるＣＡＲまたは
キメラ受容体または抗原結合ポリペプチドは、ＥＧＦＲｖＩＩＩ上のエピトープに結合す
る抗原結合領域を含む。さらなる実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲまたはキメ
ラ受容体または抗原結合ポリペプチドは、ＨＬＡ－Ａ２、ミエリンオリゴデンドロサイト
糖タンパク質（ＭＯＧ）、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）、ＭＡｄＣＡＭ１、ＳＤＦ１、
またはＩＩ型コラーゲン上のエピトープに結合する自己抗原または抗原結合領域を含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるポリヌクレオチド、ポリペプチドおよび方
法は、過剰増殖性疾患、例えば、がん、自己免疫疾患の治療、または感染症、例えば、ウ
イルス、細菌もしくは寄生虫の感染の治療に使用することができる。一部の態様では、抗
原は、がん細胞、自己免疫細胞、またはウイルス、細菌もしくは寄生虫に感染した細胞で
上昇する抗原である。標的とされ得る病原体には、限定されないが、プラスモジウム（Ｐ
ｌａｓｍｏｄｉｕｍ）、トリパノソーマ、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、
カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ＨＳＶ、ＨＰＶ、ＲＳＶ
、ＥＢＶ、ＣＭＶ、ＪＣウイルス、ＢＫウイルス、またはエボラ病原体が含まれる。自己
免疫疾患には、移植片対宿主病、関節リウマチ、狼瘡、セリアック病、クローン病、シェ
ーグレン症候群、多発性筋痛リウマチ、多発性硬化症、視神経脊髄炎、強直性脊椎炎、１
型糖尿病、円形脱毛症、血管炎、側頭動脈炎、類天疱瘡、乾癬、尋常性天疱瘡または自己
免疫性ブドウ膜炎が含まれ得る。
ＣＡＲによって認識される病原体は、本質的に任意の種類の病原体であり得るが、一部
の実施形態では、病原体は、真菌、細菌、またはウイルスである。例示的なウイルス性病
原体には、アデノウイルス科（Adenoviridae）のファミリーのウイルス、エプスタイン・
バーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ＲＳウイルス（ＲＳＶ）、
ＪＣウイルス、ＢＫウイルス、ＨＰＶ、ＨＳＶ、ＨＨＶファミリーのウイルス、肝炎ファ
ミリーのウイルス、ピコナウイルス科（Picornaviridae）、ヘルペスウイルス科（Herpes
viridae）、ヘパドナウイルス科（Hepadnaviridae）、フラビウイルス科（Flaviviridae
）、レトロウイルス科（Retroviridae）、オルトミクソウイルス科（Orthomyxoviridae）
、パラミクソウイルス科（Paramyxoviridae）、パポバウイルス科（Papovaviridae）、ポ
リオーマウイルス、ラブドウイルス科（Rhabdoviridae）、およびトガウイルス科（Togav
iridae）が含まれる。例示的な病原性ウイルスは、天然痘、インフルエンザ、おたふく風
邪、麻疹、水痘、エボラおよび風疹を引き起こす。例示的な病原菌には、カンジダ（Cand
ida）、アスペルギルス（Aspergillus）、クリプトコッカス（Cryptococcus）、ヒストプ
ラズマ（Histoplasma）、ニューモシスチス（Pneumocystis）、およびスタキボトリス（S
tachybotrys）が含まれる。例示的な病原性細菌には、連鎖球菌（Streptococcus）、シュ
ードモナス（Psuedomonas）、赤痢菌（Shigella）、カンピロバクター（Campylobacter）
、ブドウ球菌（Staphylococcus）、ヘリコバクター（Helicobacter）、大腸菌（E.coli）
、リケッチア（Rickettsia）、バチルス（Bacillus）、ボルデテラ（Bordetella）、クラ
ミジア（Chlamydia）、スピロケテス（Spirochetes）、およびサルモネラ（Salmonella）
が含まれる。一部の実施形態では、病原体受容体デクチン－１を使用して、アスペルギル
ス（Aspergillus）などの真菌の細胞壁上の炭水化物構造を認識するＣＡＲを生成するこ
とができる。別の実施形態では、ＣＡＲは、ウイルス決定因子（例えば、ＣＭＶおよびエ
ボラ由来の糖タンパク質）を認識する抗体に基づいて作製され、ウイルス感染および病状
を妨害することができる。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるスペーサー領域を使用して、抗原結合領域
をＣＡＲの膜貫通領域に連結することができる。一部の例では、スペーサーは、膜貫通領
域を細胞外領域またはポリペプチド鎖の細胞質領域のいずれかに連結するように機能する
任意のオリゴヌクレオチドまたはポリペプチドを含むことができる。一部の実施形態では
、スペーサーは、抗原結合領域が異なる方向に配向して抗原認識を促進するのに十分なほ
ど柔軟である。
本明細書に記載されるように、スペーサー領域は、ストーク領域およびストーク伸長領
域（複数可）を含み得る。一部の例では、ストーク領域は、ＩｇＧ１からのヒンジ領域を
含むか、またはストーク領域は、ＩｇＧ１からのヒンジ領域に対して少なくとも８０％の
相同性を有する配列を含む。代替の例では、ストーク領域は、ＩｇＧ３ヒンジ領域、また
はＩｇＧ３ヒンジ領域（配列番号４１）に対して少なくとも８０％の相同性を有する配列
を含む。代替の例では、ストーク領域は、ＩｇＧ４ヒンジ領域、またはＩｇＧ４ヒンジ領
域（配列番号４２）に対して少なくとも８０％の相同性を有する配列を含む。他の場合で
は、ストーク領域は、配列番号４３、４４、４５、４６、４７、または４８に示されるペ
プチド配列に対して少なくとも約６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９
５％、９９％またはそれを超える相同性を有するペプチド配列を含む。別のケースでは、
ストーク領域は、配列番号１４４に示される配列に対して少なくとも約６５％、７０％、
７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％またはそれを超える同一性を有するヌ
クレオチド配列によってコードされるペプチド配列を含む。一部の場合では、ストーク領
域は、ＣＤ８αヒンジ領域、またはＣＤ８αのヒンジ領域に対して少なくとも８０％の相
同性を有する配列を含む。例えば、ストーク領域は、ＣＤ８αのヒンジ領域に対して少な
くとも８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれを超える相同性を有する配列を含み
得る。一部の場合では、ストーク領域は、ＣＤ２８ヒンジ領域、またはＣＤ２８のヒンジ
領域に対して少なくとも８０％の相同性を有する配列を含む。例えば、ストーク領域は、
ＣＤ２８のヒンジ領域に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれ
を超える相同性を有する配列を含むことができる。一部の場合では、ストーク領域は、国
際公開第２０１６／０７３７５５号パンフレットに記載されているように、ＩｇＧ４ １
２アミノ酸ヒンジ領域（ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰ（配列番号４３））またはＩｇＧ４ヒ
ンジ領域（配列番号４２）を含む。
一部の実施形態では、ストーク領域は二量体化部位を含む。二量体化部位は、ジスルフ
ィド結合形成部位を含み得る。二量体化部位は、システイン残基（複数可）を含み得る。
ストーク領域は、ジスルフィド結合を形成することができる。このようなジスルフィド結
合は、ジスルフィド結合形成部位または二量体化部位で形成され得る。一部の例では、二
量体化は、第１のＣＡＲのストーク領域と相同の第２のＣＡＲの相同ストーク領域の間で
起こる。
一部の実施形態では、ストーク伸長領域は、抗原結合領域をストーク領域に連結するた
めに使用される。追加の実施形態では、ストーク伸長領域は、ストーク領域をＣＡＲの膜
貫通領域に連結するために使用される。例えば、ストーク領域がＩｇＧに由来するヒンジ
ドメインを含む場合、非Ｆｃ ＣＨ２またはＣＨ３ドメインをストーク伸長領域として使
用することができる。別の実施形態では、ストーク領域およびストーク伸長領域（複数可
）は、リンカーを介して接続することができる。他の実施形態では、リンカーを介して、
１つのストーク伸長領域を別のストーク伸長領域に接続することができる。このようなリ
ンカーの例は、グリシン－セリンリッチリンカーを含み得る。一実施形態では、本明細書
に記載されるポリペプチドのストーク領域またはストーク伸長領域は、配列番号４９に示
されるＩｇＧ４ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３スペーサー配列に対して少なくとも約６０％、６
５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％またはそれを超える同
一性を有するペプチド配列を含む。一部の場合では、本明細書に記載されるポリペプチド
のストーク領域またはストーク伸長領域は、配列番号１４５に示されるＩｇＧ４ヒンジ－
ＣＨ２－ＣＨ３スペーサーヌクレオチド配列に対して少なくとも約６０％、６５％、７０
％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％またはそれを超える同一性を有す
るヌクレオチド配列によってコードされるペプチド配列を含む。一実施形態では、本明細
書に記載されるポリペプチドのストーク領域またはストーク伸長領域は、配列番号５０に
示されるＩｇＧ４ヒンジ－ＣＨ３スペーサー配列に対して少なくとも約６０％、６５％、
７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％またはそれを超える同一性を
有するペプチド配列を含む。
一部の例では、ストーク伸長ドメインは、ストーク領域に部分的に相同である配列を含
む。一部の例では、ストーク伸長領域の各々は、ストーク伸長領域がストーク領域の二量
体化部位を欠いていることを除いて、ストーク領域と相同である配列を含む。一部の場合
では、ストーク伸長領域の各々は、ストーク領域と同一である配列を含む。他の場合では
、ストーク伸長領域の各々は、ストーク領域に対して少なくとも１つのアミノ酸残基置換
を有する、ストーク領域と同一の配列を含む。一部の場合では、ストーク伸長領域の各々
は、ジスルフィド結合を形成することができないか、または相同のストーク伸長領域と二
量体化することができない。
本明細書に記載される実施形態では、ポリペプチドは、天然または合成の供給源のいず
れかに由来し得る膜貫通領域または膜貫通ドメインを含むことができる。供給源が天然で
ある場合、その領域は、膜結合タンパク質または膜貫通タンパク質に由来することができ
る。適切な膜貫通領域には、限定されないが、Ｔ細胞受容体のアルファ、ベータもしくは
ゼータ鎖の膜貫通領域（複数可）；または、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ３ζ、Ｃ
Ｄ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８アルファ、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、Ｃ
Ｄ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２（ＣＴＬ
Ａ－４）もしくはＣＤ１５４からの膜貫通領域が含まれ得る。あるいは、膜貫通領域また
はドメインは、合成であり得、ロイシンおよびバリンなどの疎水性残基を含み得る。一部
の実施形態では、フェニルアラニン、トリプトファンおよびバリンのトリプレットは、合
成膜貫通ドメインの一方または両方の末端に見られる。任意選択で、一部の実施形態では
、長さが２～１０アミノ酸の短いオリゴヌクレオチドまたはポリペプチドリンカーは、Ｃ
ＡＲの膜貫通ドメインと細胞質シグナル伝達ドメインの間の連結を形成し得る。一部の実
施形態では、リンカーは、グリシン－セリンリンカーである。
一部の実施形態では、膜貫通領域は、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１５２（ＣＴＡＬ
－４）、ＴＣＲγ１、ＴＣＲδまたはＣＤ３ζ膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態で
は、膜貫通領域は、ＣＤ８α膜貫通ドメイン（配列番号２４および配列番号１３０）を含
む。他の実施形態では、膜貫通領域は、ＣＤ３ζ膜貫通ドメインを含む。別の実施形態で
は、膜貫通領域は、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ－４）膜貫通ドメイン（配列番号２５および配
列番号１３１）を含む。さらに別の実施形態では、膜貫通領域は、ＴＣＲα膜貫通ドメイ
ン（配列番号７１および配列番号１６５）、ＴＣＲβ膜貫通ドメイン（配列番号８５およ
び配列番号１７９）、ＴＣＲγ１膜貫通ドメイン（配列番号１０１および配列番号１９５
）を含む。一部の実施形態では、膜貫通領域は、ＴＣＲδ膜貫通ドメイン（配列番号１０
６および配列番号２００）を含む。
細胞内領域または細胞内ドメインは、１つ以上の共刺激ドメインを含むことができる。
例示的な共刺激ドメインには、限定されないが、ＣＤ３ζ、ＣＤ８、ＣＤ２７、ＣＤ２８
、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＩＣＯＳ、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＯＸ４０（ＣＤ１３
４）もしくはその断片または組合せが含まれる。一部の例では、本明細書に記載されるＣ
ＡＲは、ＣＤ３ζ、ＣＤ８、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＩＣＯＳ
、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）もしくはその断片または組合せから
選択される１つ以上、または２つ以上の共刺激ドメインを含む。一部の例では、本明細書
に記載されるＣＡＲは、ＣＤ３ζ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、Ｉ
ＣＯＳ、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）もしくはその断片または組合せから選択される１つ以上
、または２つ以上の共刺激ドメインを含む。一部の例では、本明細書に記載されるＣＡＲ
は、ＣＤ３ζ、ＣＤ８、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）もしくはそれらの断片また
は組合せから選択される１つ以上、または２つ以上の共刺激ドメインを含む。一部の例で
は、本明細書に記載されるＣＡＲは、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）も
しくはその断片または組合せから選択される１つ以上、または２つ以上の共刺激ドメイン
を含む。一部の例では、本明細書に記載されるＣＡＲは、共刺激ドメインＣＤ３ζ、ＣＤ
２８および４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）またはそれらのそれぞれの断片を含む。一部の例で
は、本明細書に記載されるＣＡＲは、共刺激ドメインＣＤ２８およびＯＸ４０（ＣＤ１３
４）またはそれらのそれぞれの断片を含む。一部の例では、本明細書に記載されるＣＡＲ
は、共刺激ドメインＣＤ８およびＣＤ２８またはそれらのそれぞれの断片を含む。一部の
例では、本明細書に記載されるＣＡＲは、共刺激ドメインＣＤ２８（配列番号２６および
配列番号１３２）またはその断片を含む。一部の例では、本明細書に記載されるＣＡＲは
、共刺激ドメイン４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）（配列番号２７および配列番号１３３）また
はその断片を含む。一部の例では、本明細書に記載されるＣＡＲは、共刺激ドメインＯＸ
４０（ＣＤ１３４）またはその断片を含む。一部の例では、本明細書に記載されるＣＡＲ
は、共刺激ドメインＣＤ８またはその断片を含む。一部の例では、本明細書に記載される
ＣＡＲは、共刺激ドメインＣＤ３ζ（配列番号２８および配列番号１３４）またはその断
片を含む。
一部の実施形態では、細胞内領域または細胞内ドメインは、Ｔ細胞活性化のためのシグ
ナル伝達ドメインをさらに含む。一部の例では、Ｔ細胞活性化のためのシグナル伝達ドメ
インは、ＴＣＲゼータ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、Ｃ
Ｄ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂまたはＣＤ６６ｄに由来す
るドメインを含む。一部の場合では、Ｔ細胞活性化のためのシグナル伝達ドメインは、Ｃ
Ｄ３ζに由来するドメインを含む。
ＣＤ１９特異的ＣＡＲ
ＣＤ１９は、免疫グロブリンスーパーファミリーの細胞表面糖タンパク質であり、主に
悪性Ｂ系統細胞に見られる。一部の例では、ＣＤ１９はまた、膵臓がん、肝臓がん、およ
び前立腺がんなどの固形腫瘍において検出されている。
一部の実施形態では、本明細書では、抗原結合領域がＦ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆａ
ｂ、Ｆｖ、またはｓｃＦｖを含む、ＣＤ１９特異的ＣＡＲを含む。一部の例では、抗原結
合領域はＣＤ１９上のエピトープを認識する。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるポリペプチドによって包含される抗原結合
領域は、ＪＣＡＲ０１４、ＪＣＡＲ０１５、ＪＣＡＲ０１７、または１９－２８ｚ ＣＡ
Ｒ（Ｊｕｎｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）によっても認識されるＣＤ１９上のエピトー
プを認識する。一部の実施形態では、ＣＤ１９は、配列番号５１に示されるＣＤ１９配列
に対して少なくとも８０％の相同性を有するペプチド配列を含む。一部の実施形態では、
本明細書に記載されるように、Ｔ細胞などのエフェクター細胞上に発現されるＣＤ１９特
異的ＣＡＲを含み、その抗原結合領域は、ＪＣＡＲ０１４、ＪＣＡＲ０１５、ＪＣＡＲ０
１７、または１９－２８ｚ ＣＡＲ（Ｊｕｎｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）でも認識さ
れるＣＤ１９上のエピトープを認識する。一部の例では、ＣＤ１９特異的ＣＡＲは、ＣＤ
８アルファ膜貫通ドメイン（配列番号２４および配列番号１３０）もしくはＣＤ３ζ膜貫
通ドメインから選択される膜貫通領域または膜貫通ドメイン；ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－
１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＩＣＯＳ、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）も
しくはその断片または組合せから選択される１つ以上の共刺激ドメイン；およびＣＤ３ζ
からのシグナル伝達領域またはシグナル伝達ドメインをさらに含むポリペプチドによって
包含される。一部の例では、ＣＤ１９特異的ＣＡＲは、本明細書に開示されるストーク領
域およびストーク伸長領域をさらに含むポリペプチドの一部として発現される。例えば、
ＣＤ１９特異的ＣＡＲを含むポリペプチドは、ＣＤ８αヒンジ領域を含むストーク領域、
およびストーク伸長領域（ｓ’－ｎ）をさらに含むことができ、ｎ＝０、１、２、３、４
、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９
、または２０であり、各ストーク伸長領域は、二量体化部位が欠いていることを除いて、
ＣＤ８αヒンジ領域と相同である。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるポリペプチドによって包含されるＣＤ１９
特異的ＣＡＲは、ｓｃＦｖ抗原結合領域を含み、抗原結合領域は、ＪＣＡＲ０１４、ＪＣ
ＡＲ０１５、ＪＣＡＲ０１７、または１９－２８ｚ ＣＡＲ（Ｊｕｎｏ Ｔｈｅｒａｐｅ
ｕｔｉｃｓ）によっても認識されるＣＤ１９上のエピトープを認識する。一部の例では、
ＣＤ１９特異的ＣＡＲは、ＣＤ８アルファ膜貫通ドメイン（配列番号２４および配列番号
１３０）またはＣＤ３ζ膜貫通ドメインから選択される膜貫通ドメイン；ＣＤ２７、ＣＤ
２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＩＣＯＳ、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＯＸ４０（ＣＤ
１３４）もしくはその断片または組合せから選択される１つ以上の共刺激ドメイン；およ
びＣＤ３ζからのシグナル伝達ドメインをさらに含むポリペプチドによって包含される。
一部の場合では、ＣＤ１９特異的ＣＡＲは、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ－４）膜貫通ドメイン
（配列番号２５および配列番号１３１）、ＴＣＲα膜貫通ドメイン（配列番号７１および
配列番号１６５）、ＴＣＲβ膜貫通ドメイン（配列番号８５および配列番号１７９）、Ｔ
ＣＲγ１膜貫通ドメイン（配列番号１０１および配列番号１９５）またはＴＣＲδ膜貫通
ドメイン（配列番号１０６および配列番号２００）から選択される膜貫通ドメインをさら
に含むポリペプチドによって包含される。一部の例では、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ細胞を含
むポリペプチドは、本明細書に開示されるストーク領域およびストーク伸長領域をさらに
含む。例えば、ポリペプチドは、ＣＤ８αヒンジ領域を含むストーク領域、およびストー
ク伸長領域（ｓ’－ｎ）をさらに含むことができ、ｎ＝０、１、２、３、４、５、６、７
、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０
であり、各ストーク伸長領域は、二量体化部位が欠いていることを除いて、ＣＤ８αヒン
ジ領域と相同である。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるＴ細胞などのエフェクター細胞上で発現さ
れるＣＤ１９特異的ＣＡＲは、米国特許出願公開第２０１６／０１５２７２３号明細書に
記載される抗ＣＤ１９抗体を含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるポリペプチドに包含される抗原結合領域は
、ＫＴＥ－Ｃ１９（Ｋｉｔｅ Ｐｈａｒｍａ，Ｉｎｃ．）によっても認識されるＣＤ１９
上のエピトープを認識する。一部の実施形態では、本明細書に記載されるように、抗原結
合領域が、ＫＴＥ－Ｃ１９によっても認識されるＣＤ１９上のエピトープを認識するＣＤ
１９特異的ＣＡＲ－Ｔ細胞を含む。いくつか場合では、ＣＤ１９特異的ＣＡＲは、ＣＤ８
アルファ膜貫通ドメイン（配列番号２４および配列番号１３０）またはＣＤ３ζ膜貫通ド
メインから選択される膜貫通ドメイン；ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）
、ＩＣＯＳ、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）もしくはその断片または
組合せから選択される１つ以上の共刺激ドメイン；およびＣＤ３ζからのシグナル伝達ド
メインをさらに含む。一部の場合では、ＣＤ１９特異的ＣＡＲは、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ
－４）膜貫通ドメイン（配列番号２５および配列番号１３１）、ＴＣＲα膜貫通ドメイン
（配列番号７１および配列番号１６５）、ＴＣＲβ膜貫通ドメイン（配列番号８５および
配列番号１７９）、ＴＣＲγ１膜貫通ドメイン（配列番号１０１および配列番号１９５）
またはＴＣＲδ膜貫通ドメイン（配列番号１０６および配列番号２００）から選択される
膜貫通ドメインをさらに含むポリペプチドによって包含される。
一部の実施形態は、本明細書に記載されるように、ｓｃＦｖ抗原結合領域を含むＣＤ１
９特異的ＣＡＲを含み、抗原結合領域は、ＫＴＥ－Ｃ１９によっても認識されるＣＤ１９
上のエピトープを認識する。一部の例では、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＣＤ８ア
ルファ膜貫通ドメイン（配列番号２４および配列番号１３０）またはＣＤ３ζ膜貫通ドメ
インから選択される膜貫通ドメイン；ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、
ＩＣＯＳ、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）もしくはその断片または組
合せから選択される１つ以上の共刺激ドメイン；およびＣＤ３ζからのシグナル伝達ドメ
インをさらに含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるＣＤ１９特異的ＣＡＲは、国際公開第２０
１５／１８７５２８号パンフレットに記載されている抗ＣＤ１９抗体またはその断片もし
くは誘導体を含む。
一部の実施形態では、抗原結合領域は、ＣＴＬ０１９（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）によっても
認識されるＣＤ１９上のエピトープを認識する。一部の実施形態では、抗原結合領域は、
ＵＣＡＲＴ１９（Ｃｅｌｌｅｃｔｉｓ）によっても認識されるＣＤ１９上のエピトープを
認識する。一部の実施形態では、抗原結合領域は、ＢＰＸ－４０１（Ｂｅｌｌｉｃｕｍ）
によっても認識されるＣＤ１９上のエピトープを認識する。一部の場合では、抗原結合領
域は、ブリナツモマブ（Ａｍｇｅｎ）、コルツキシマブラブタンシン（ＩｍｍｕｎｏＧｅ
ｎ Ｉｎｃ．／Ｓａｎｏｆｉ－ａｖｅｎｔｉｓ）、ＭＯＲ２０８（Ｍｏｒｐｈｏｓｙｓ
ＡＧ／Ｘｅｎｃｏｒ Ｉｎｃ．）、ＭＥＤＩ－５５１（Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）、デニンツ
ズマブマフォドチン（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、Ｂ４（またはＤＩ－Ｂ４）
（Ｍｅｒｃｋ Ｓｅｏｎｏ）、タプリツモマバプトックス（国立がん研究所）、ＸｍＡｂ
５８７１（Ａｍｇｅｎ／Ｘｅｎｃｏｒ，Ｉｎｃ．）、ＭＤＸ－１３４２（Ｍｅｄａｒｅ
ｘ）またはＡＦＭ１１（Ａｆｆｉｍｅｄ）でも認識されるＣＤ１９上のエピトープを認識
する。一部の実施形態では、本明細書に記載されるように、抗原結合領域がＣＴＬ０１９
によっても認識されるＣＤ１９上のエピトープを認識する、Ｔ細胞などのエフェクター細
胞上で発現されるＣＤ１９特異的ＣＡＲを含む。一部の例では、ＣＤ１９特異的ＣＡＲは
、ＣＤ８アルファ膜貫通ドメイン（配列番号２４および配列番号１３０）またはＣＤ３ζ
膜貫通ドメインから選択される膜貫通ドメイン；ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ
１３７）、ＩＣＯＳ、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）もしくはその断
片または組合せから選択される１つ以上の共刺激ドメイン；およびＣＤ３ζからのシグナ
ル伝達ドメインをさらに含む。一部の場合では、ＣＤ１９特異的ＣＡＲは、ＣＤ１５２（
ＣＴＬＡ－４）膜貫通ドメイン（配列番号２５および配列番号１３１）、ＴＣＲα膜貫通
ドメイン（配列番号７１および配列番号１６５）、ＴＣＲβ膜貫通ドメイン（配列番号８
５および配列番号１７９）、ＴＣＲγ１膜貫通ドメイン（配列番号１０１および配列番号
１９５）またはＴＣＲδ膜貫通ドメイン（配列番号１０６および配列番号２００）から選
択される膜貫通ドメインをさらに含むポリペプチドによって包含される。一部の例では、
ＣＤ１９特異的ＣＡＲは、本明細書に開示されるストーク領域およびストーク伸長領域を
さらに含むポリペプチドの一部としてコードされる。例えば、ＣＤ１９特異的ＣＡＲは、
ＣＤ８αヒンジ領域を含むストーク領域、およびストーク伸長領域（ｓ’－ｎ）をさらに
含むポリペプチドによって包含され得、ｎ＝０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、
１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０であり、各
ストーク伸長領域は、二量体部位を欠いていることを除いて、ＣＤ８αヒンジ領域と相同
である。
一部の実施形態は、本明細書に記載されるように、ｓｃＦｖ抗原結合領域を含むＴ細胞
などのエフェクター細胞上に発現されるＣＤ１９特異的ＣＡＲを含み、抗原結合領域は、
ＣＴＬ０１９、ＢＰＸ－４０１、ブリナツモマブ（Ａｍｇｅｎ）、コルツキシマブラブタ
ンシン（ＩｍｍｕｎｏＧｅｎ Ｉｎｃ．／Ｓａｎｏｆｉ－ａｖｅｎｔｉｓ）、ＭＯＲ２０
８（Ｍｏｒｐｈｏｓｙｓ ＡＧ／Ｘｅｎｃｏｒ Ｉｎｃ．）、ＭＥＤＩ－５５１（Ｍｅｄ
ｉｍｍｕｎｅ）、デニンツズマブマフォドチン（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、
Ｂ４（またはＤＩ－Ｂ４）（Ｍｅｒｃｋ Ｓｅｒｏｎｏ）、タプリツモマバプトックス（
国立がん研究所）、ＸｍＡｂ ５８７１（Ａｍｇｅｎ／Ｘｅｎｃｏｒ，Ｉｎｃ．）、ＭＤ
Ｘ－１３４２（Ｍｅｄａｒｅｘ）およびＡＦＭ１１（Ａｆｆｉｍｅｄ）のうちの少なくと
も１つによっても認識されるＣＤ１９上のエピトープを認識する。一部の例では、ＣＤ１
９特異的ＣＡＲは、ＣＤ８アルファ膜貫通ドメイン（配列番号２４および配列番号１３０
）またはＣＤ３ζ膜貫通ドメインから選択される膜貫通ドメイン；ＣＤ２７、ＣＤ２８、
４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＩＣＯＳ、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＯＸ４０（ＣＤ１３４
）もしくはその断片または組合せから選択される１つ以上の共刺激ドメイン；およびＣＤ
３ζからのシグナル伝達ドメインをさらに含むポリペプチドによって包含される。一部の
場合では、ＣＤ１９特異的ＣＡＲは、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ－４）膜貫通ドメイン（配列
番号２５および配列番号１３１）、ＴＣＲα膜貫通ドメイン（配列番号７１および配列番
号１６５）、ＴＣＲβ膜貫通ドメイン（配列番号８５および配列番号１７９）、ＴＣＲγ
１膜貫通ドメイン（配列番号１０１および配列番号１９５）またはＴＣＲδ膜貫通ドメイ
ン（配列番号１０６および配列番号２００）から選択される膜貫通ドメインをさらに含む
ポリペプチドによって包含される。一部の場合では、ＣＤ１９特異的ＣＡＲは、ＤＡＰ１
０シグナルドメイン（配列番号２９および配列番号１３５）またはＤＡＰ１２シグナル伝
達メイン（配列番号３０および配列番号１３６）から選択されるシグナル伝達ドメインを
さらに含むポリペプチドによって包含される。一部の例では、ＣＤ１９特異的ＣＡＲを含
むポリペプチドは、本明細書に開示されるストーク領域およびストーク伸長領域をさらに
含む。例えば、ポリペプチドは、ＣＤ８αヒンジ領域を含むストーク領域、およびストー
ク伸長領域（ｓ’－ｎ）をさらに含むことができ、ｎ＝０、１、２、３、４、５、６、７
、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０
であり、各ストーク伸長領域は、二量体化部位を欠いていることを除いて、ＣＤ８αヒン
ジ領域と相同である。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるＣＤ１９特異的ＣＡＲは、配列番号５３に
示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するペプチド配列、または配列番号
１４７に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するヌクレオチド配列によ
ってコードされるペプチド配列を含む抗ＣＤ１９モノクローナル抗体可変軽鎖を含む。一
部の実施形態では、本明細書に記載されるＣＤ１９特異的ＣＡＲは、配列番号５４に示さ
れる配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するペプチド配列、または配列番号１４
８に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するヌクレオチド配列によって
コードされるペプチド配列を含む抗ＣＤ１９モノクローナル抗体可変重鎖を含む。一部の
実施形態では、本明細書に記載されるＣＤ１９特異的ＣＡＲは、配列番号５５に示される
配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するペプチド配列、または配列番号１４９に
示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するヌクレオチド配列によってコー
ドされるペプチド配列を含むホイットローリンカーを有する抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖを含む
。一部の実施形態では、本明細書に記載されるＣＤ１９特異的ＣＡＲは、配列番号５６に
示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するペプチド配列、または配列番号
１５０に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するヌクレオチド配列によ
ってコードされるペプチド配列を含む、ＣＤ８－１Ｘスペーサーを有するＣＤ１９特異的
キメラ抗原受容体（ＣＤ１９－ＣＤ８α－ＣＤ２８－ＣＤ３ζ）を含む。一部の実施形態
では、本明細書に記載されるＣＤ１９特異的ＣＡＲは、配列番号５７に示される配列に対
して少なくとも８０％の相同性を有するペプチド配列、または配列番号１５１に示される
配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するヌクレオチド配列によってコードされる
ペプチド配列を含む、ＣＤ８－２Ｘスペーサーを有するＣＤ１９特異的キメラ抗原受容体
を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるＣＤ１９特異的ＣＡＲは、配列番号
５８に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するペプチド配列、または配
列番号１５２に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するヌクレオチド配
列によってコードされるペプチド配列を含む、ＣＤ８－３Ｘスペーサーを有するＣＤ１９
特異的キメラ抗原受容体を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるＣＤ１９特
異的ＣＡＲは、配列番号５９に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有する
ペプチド配列、または配列番号１５３に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性
を有するヌクレオチド配列によってコードされるペプチド配列を含む、ＣＤ８－３Ｘ ｖ
２スペーサーを有するＣＤ１９特異的キメラ抗原受容体を含む。一部の実施形態では、本
明細書に記載されるＣＤ１９特異的ＣＡＲは、配列番号６０に示される配列に対して少な
くとも８０％の相同性を有するペプチド配列、または配列番号１５４に示される配列に対
して少なくとも８０％の相同性を有するヌクレオチド配列によってコードされるペプチド
配列を含む、ＣＤ８－４Ｘスペーサーを有するＣＤ１９特異的キメラ抗原受容体を含む。
ＣＤ３３特異的ＣＡＲ
ＣＤ３３／Ｓｉｇｌｅｃ－３は、骨髄系細胞において特異的に発現される制限された白
血球抗原である。一部の例では、ＣＤ３３はまた、リンパ系細胞において検出されている
。
一部の実施形態では、本明細書における開示は、ＣＤ３３特異的ＣＡＲを含み、抗原結
合領域は、ＣＤ３３に結合するＦ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、Ｆａｂ、Ｆｖ、またはｓｃＦ
ｖを含む。
一部の実施形態では、抗原結合領域は、リンツズマブ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉ
ｃｓ）、ＢＩ ８３６８５８（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）によっても
認識されるＣＤ３３上のエピトープを認識する。一部の例では、本明細書に記載されるポ
リペプチドは、ＣＤ３３特異的ＣＡＲを含み、ＣＤ８アルファ膜貫通ドメイン（配列番号
２４および配列番号１３０）もしくはＣＤ３ζ膜貫通ドメインから選択される膜貫通領域
または膜貫通ドメイン；ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＩＣＯＳ、Ｄ
ＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、ＣＤ３－ゼータもしくはその断片また
は組合せから選択される１つ以上の共刺激ドメイン；およびＣＤ３ζからのシグナル伝達
領域またはシグナル伝達ドメインをさらに含む。一部の場合では、ＣＤ３３特異的ＣＡＲ
は、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ－４）膜貫通ドメイン（配列番号２５および配列番号１３１）
、ＴＣＲα膜貫通ドメイン（配列番号７１および配列番号１６５）、ＴＣＲβ膜貫通ドメ
イン（配列番号８５および配列番号１７９）、ＴＣＲγ１膜貫通ドメイン（配列番号１０
１および配列番号１９５）またはＴＣＲδ膜貫通ドメイン（配列番号１０６および配列番
号２００）から選択される膜貫通ドメインをさらに含むポリペプチドによって包含される
。いくらか場合で、ＣＤ３３特異的ＣＡＲは、ＤＡＰ１０シグナル伝達ドメイン（配列番
号２９および配列番号１３５）、またはＤＡＰ１２シグナル伝達ドメイン（配列番号３０
および配列番号１３６）から選択されるシグナル伝達ドメインをさらに含むポリペプチド
によって包含される。いくらか場合では、ＣＤ３３特異的ＣＡＲは、ＤＡＰ１０シグナル
伝達ドメイン（配列番号２９および配列番号１３５）、またはＤＡＰ１２シグナル伝達ド
メイン（配列番号３０および配列番号１３６）から選択されるシグナル伝達ドメインをさ
らに含むポリペプチドによって包含される。一部の例では、ＣＤ３３特異的ＣＡＲは、本
明細書に開示されるストーク領域およびストーク伸長領域をさらに含む。例えば、ＣＤ３
３特異的ＣＡＲは、スペーサーをさらに含むことができ、スペーサーは、ＣＤ８αヒンジ
領域を含むストーク領域、およびストーク伸長領域（複数可）、ｓ’－ｎ（ｎ＝０、１、
２、３または４である）を含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるＣＤ３３特異的ＣＡＲは、配列番号６１に
示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するペプチド配列、または配列番号
１５５に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するヌクレオチド配列によ
ってコードされるペプチド配列を含む抗ＣＤ３３モノクローナル抗体可変軽鎖を含む。一
部の実施形態では、本明細書に記載されるＣＤ３３特異的ＣＡＲは、配列番号６２に示さ
れる配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するペプチド配列、または配列番号１５
６に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するヌクレオチド配列によって
コードされるペプチド配列を含む抗ＣＤ３３モノクローナル抗体可変重鎖を含む。一部の
実施形態では、本明細書に記載されるＣＤ３３特異的ＣＡＲは、配列番号６３に示される
配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するペプチド配列、または配列番号１５７に
示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するヌクレオチド配列によってコー
ドされるペプチド配列を含む抗ＣＤ３３モノクローナル抗体ＳｃＦｖを含む。一部の実施
形態では、本明細書に記載されるＣＤ３３特異的ＣＡＲは、配列番号６４に示される配列
に対して少なくとも８０％の相同性を有するペプチド配列、または配列番号１５８に示さ
れる配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するヌクレオチド配列によってコードさ
れるペプチド配列を含む、ＣＤ８ １Ｘスペーサーを有するＣＤ３３特異的キメラ抗原受
容体を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるＣＤ３３特異的ＣＡＲは、配列
番号６５に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するペプチド配列、また
は配列番号１５９に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するヌクレオチ
ド配列によってコードされるペプチド配列を含む、ＣＤ８ ２Ｘスペーサーを有するＣＤ
３３特異的キメラ抗原受容体を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるＣＤ３
３特異的ＣＡＲは、配列番号６６に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有
するペプチド配列、または配列番号１６０に示される配列に対して少なくとも８０％の相
同性を有するヌクレオチド配列によってコードされるペプチド配列を含む、ＣＤ８ ３Ｘ
スペーサーを有するＣＤ３３特異的キメラ抗原受容体を含む。一部の実施形態では、本明
細書に記載されるＣＤ３３特異的ＣＡＲは、配列番号６７に示される配列に対して少なく
とも８０％の相同性を有するペプチド配列、または配列番号１６１に示される配列に対し
て少なくとも８０％の相同性を有するヌクレオチド配列によってコードされるペプチド配
列を含む、ＣＤ８ ３Ｘ ｖ２スペーサーを有するＣＤ３３特異的キメラ抗原受容体を含
む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるＣＤ３３特異的ＣＡＲは、配列番号６８
に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するペプチド配列、または配列番
号１６２に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するヌクレオチド配列に
よってコードされるペプチド配列を含む、ＣＤ８ ４Ｘスペーサーを有するＣＤ３３特異
的キメラ抗原受容体を含む。
ＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的ＣＡＲ
別の実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲは、ＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的ＣＡＲで
ある。「ＥＧＦＲｖＩＩＩ」、「ＥＧＦＲ変異体ＩＩＩ」、「ＥＧＦＲタイプＩＩＩ突然
変異体」、「ＥＧＦＲ．Ｄ２－７」または「ｄｅ２－７ＥＧＦＲ」は、ヒトおよび非ヒト
対象における細胞外タンパク質リガンドの上皮細胞増殖因子（ＥＧＦ）ファミリーのメン
バーの受容体である膜貫通タンパク質である上皮細胞増殖因子受容体（ＥＧＦＲ；Ｅｒｂ
Ｂ－１；ＨＥＲ１）の突然変異型である。ＥＧＦＲｖＩＩＩは、野生型ＥＧＦＲ遺伝子の
エクソン２～７の欠失によって特徴付けられ、これは、完全長の野生型ＥＧＦＲタンパク
質の細胞外ドメインにおいて２６７アミノ酸のインフレーム欠失をもたらす。ＥＧＦＲｖ
ＩＩＩはまた、野生型ＥＧＦＲと比較して、融合接合部に挿入された新規なグリシン残基
を含む。切断型受容体ＥＧＦＲｖＩＩＩは、いずれもの公知のＥＧＦＲリガンドに結合す
ることができない；しかしながら、それは構成的チロシンキナーゼ活性を示す。この構成
的活性化は、その発癌促進効果にとって重要である。キナーゼ欠損ＥＧＦＲｖＩＩＩは、
同様の発癌性の優位性を与えることができない。ＥＧＦＲｖＩＩＩは、膠芽腫（ＧＢＭ）
において高度に発現し、他の一部の固形腫瘍タイプでは検出することができるが、正常組
織では検出することができない。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲの抗原結合部分は、ＥＧＦＲｖＩＩ
Ｉ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ ＣＡＲ）に特異的である。ＥＧＦＲｖＩＩＩ特異亭ＣＡＲは、細
胞表面上に発現した場合、Ｔ細胞の特異性をヒトＥＧＦＲｖＩＩＩへと再方向付けする。
実施形態では、抗原結合ドメインは、グリシン－セリンリンカーまたはホイットローリン
カーなどの可撓性リンカーによって接合された標的抗原特異的モノクローナル抗ＥＧＦＲ
ｖＩＩＩ抗体の可変ドメイン軽鎖（ＶＬ）および可変ドメイン重鎖（ＶＨ）を含む一本鎖
抗体断片（ｓｃＦｖ）を含む。実施形態では、ｓｃＦｖは、クローン１３９（配列番号２
２１および２２２）である。一部の実施形態では、ｓｃＦｖは、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ ｓ
ｃＦｖクローンＭＲ１（配列番号２２３；配列番号２２４）、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ ｓｃ
ＦｖクローンＭＲ１－１（配列番号２２５；配列番号２２６）、抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ ｓ
ｃＦｖクローンｈｕＭＲ１－１（配列番号２２７；配列番号２２８）、抗ＥＧＦＲｖＩＩ
Ｉ ｓｃＦｖクローンｈｕＭＲ１－２（配列番号２２９；配列番号２３０）である。一部
の実施形態では、抗原結合部分は、例えば、Ｎ末端からＣ末端の方向で連結されたＶＨお
よびＶＬ、ＶＨ－リンカー－ＶＬまたはＶＬ－リンカー－ＶＨを含み得る。
実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲは、配列番号２０４（抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ
クローン１３９ＶＬ）のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３
％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の同一性を有する
ＶＬポリペプチドを含む抗原結合部分を含む。実施形態では、本明細書に記載されるＣＡ
Ｒは、配列番号２０２（抗ＥＧＦＲｖＩＩＩクローン１３９ＶＨ）のアミノ酸配列に対し
て少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８
％、９９％または１００％の同一性を有するＶＨポリペプチドを含む抗原結合部分を含む
。
実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲは、配列番号２０８（抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ
クローンＭＲ１ ＶＬ）のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９
３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の同一性を有す
るＶＬポリペプチドを含む抗原結合部分を含む。実施形態では、本明細書に記載されるＣ
ＡＲは、配列番号２０６（抗ＥＧＦＲｖＩＩＩクローンＭＲ１ ＶＨ）のアミノ酸配列に
対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、
９８％、９９％または１００％の同一性を有するＶＨポリペプチドを含む抗原結合部分を
含む。実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲは、配列番号２１２（抗ＥＧＦＲｖＩ
ＩＩクローンＭＲ１－１ ＶＬ）のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９
２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の同一
性を有するＶＬポリペプチドを含む抗原結合部分を含む。実施形態では、本明細書に記載
されるＣＡＲは、配列番号２１０（抗ＥＧＦＲｖＩＩＩクローンＭＲ１－１ ＶＨ）のア
ミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６
％、９７％、９８％、９９％または１００％の同一性を有するＶＨポリペプチドを含む抗
原結合部分を含む。
実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲは、配列番号２１６（抗ＥＧＦＲｖＩＩＩ
クローンｈｕｍＭＲ１－１ ＶＬ）のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、
９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の同
一性を有するＶＬポリペプチドを含む抗原結合部分を含む。実施形態では、本明細書に記
載されるＣＡＲは、配列番号２１４（抗ＥＧＦＲｖＩＩＩクローンｈｕｍＭＲ１－１ Ｖ
Ｈ）のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５
％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の同一性を有するＶＨポリペプチド
を含む抗原結合部分を含む。実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲは、配列番号２
２０（抗ＥＧＦＲｖＩＩＩクローンｈｕｍＭＲ１－２ ＶＬ）のアミノ酸配列に対して少
なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、
９９％または１００％の同一性を有するＶＬポリペプチドを含む抗原結合部分を含む。実
施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲは、配列番号２１８（抗ＥＧＦＲｖＩＩＩクロ
ーンｈｕｍＭＲ１－２ ＶＨ）のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２
％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の同一性
を有するＶＨポリペプチドを含む抗原結合部分を含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的ＣＡＲは、配列番
号２２２に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するペプチド配列、また
は配列番号２２１に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するヌクレオチ
ド配列によってコードされるペプチド配列を含む抗ＥＧＦＲｖＩＩＩモノクローナル抗体
ｓｃＦｖ（クローン１３９）を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるＥＧＦ
ＲｖＩＩＩ特異的ＣＡＲは、配列番号２２４に示される配列に対して少なくとも８０％の
相同性を有するペプチド配列、または配列番号２２３に示される配列に対して少なくとも
８０％の相同性を有するヌクレオチド配列によってコードされるペプチド配列を含む抗Ｅ
ＧＦＲｖＩＩＩモノクローナル抗体ｓｃＦｖ（ＭＲ１）を含む。一部の実施形態では、本
明細書に記載されるＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的ＣＡＲは、配列番号２２６に示される配列に
対して少なくとも８０％の相同性を有するペプチド配列、または配列番号２２５に示され
る配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するヌクレオチド配列によってコードされ
るペプチド配列を含む抗ＥＧＦＲｖＩＩＩモノクローナル抗体ｓｃＦｖ（ＭＲ１－１）を
含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的ＣＡＲは、配
列番号２２８に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するペプチド配列、
または配列番号２２７に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するヌクレ
オチド配列によってコードされるペプチド配列を含む抗ＥＧＦＲｖＩＩＩモノクローナル
抗体ｓｃＦｖ（ｈｕＭＲ１－１）を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるＥ
ＧＦＲｖＩＩＩ特異的ＣＡＲは、配列番号２３０に示される配列に対して少なくとも８０
％の相同性を有するペプチド配列、または配列番号２２９に示される配列に対して少なく
とも８０％の相同性を有するヌクレオチド配列によってコードされるペプチド配列を含む
抗ＥＧＦＲｖＩＩＩモノクローナル抗体ｓｃＦｖ（ｈｕＭＲ１－２）を含む。
一部の例では、本明細書に記載されるポリペプチドは、ＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的ＣＡＲ
を含み、ＣＤ８アルファ膜貫通ドメイン（配列番号２４および配列番号１３０）もしくは
ＣＤ３ζ膜貫通ドメインから選択される膜貫通領域または膜貫通ドメイン；ＣＤ２７、Ｃ
Ｄ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＩＣＯＳ、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＯＸ４０（Ｃ
Ｄ１３４）、ＣＤ３ζもしくはその断片または組合せから選択される１つ以上の共刺激ド
メイン；およびＣＤ３ζからのシグナル伝達領域またはシグナル伝達ドメインをさらに含
む。いくつか場合では、ＥＧＦＲｖＩＩ特異的ＣＡＲは、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ－４）膜
貫通ドメイン（配列番号２５および配列番号１３１）、ＴＣＲα膜貫通ドメイン（配列番
号７１および配列番号１６５）、ＴＣＲβ膜貫通ドメイン（配列番号８５および配列番号
１７９）、ＴＣＲγ１膜貫通ドメイン（配列番号１０１および配列番号１９５）またはＴ
ＣＲδ膜貫通ドメイン（配列番号１０６および配列番号２００）から選択される膜貫通ド
メインをさらに含むポリペプチドによって包含される。一部の場合では、ＥＧＦＲｖＩＩ
Ｉ特異的ＣＡＲは、ＤＡＰ１０シグナル伝達ドメイン（配列番号２９および配列番号１３
５）、またはＤＡＰ１２シグナル伝達ドメイン（配列番号３０および配列番号１３６）か
ら選択されるシグナル伝達ドメインをさらに含むポリペプチドによって包含される。一部
の場合では、ＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的ＣＡＲは、ＤＡＰ１０シグナル伝達ドメイン（配列
番号２９および配列番号１３５）、またはＤＡＰ１２シグナル伝達ドメイン（配列番号３
０および配列番号１３６）から選択されるシグナル伝達ドメインをさらに含むポリペプチ
ドによって包含される。一部の例では、ＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的ＣＡＲは、本明細書に開
示されるストーク領域およびストーク伸長領域をさらに含む。例えば、ＥＧＦＲｖＩＩＩ
特異的ＣＡＲは、スペーサーをさらに含むことができ、スペーサーは、ＣＤ８αヒンジ領
域を含むストーク領域、およびストーク伸長領域、ｓ’－ｎを含み、ｎ＝０、１、２、３
、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、
１９、または２０であり、各ストーク伸長領域は、二量体化部位を欠いていることを除い
てＣＤ８αヒンジ領域に相同である。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的ＣＡＲは、配列番
号２３２に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するペプチド配列、また
は配列番号２３１に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するヌクレオチ
ド配列によってコードされるペプチド配列を含む、ＣＤ８－１Ｘスペーサーを有するＥＧ
ＦＲｖＩＩＩ特異的キメラ抗原受容体（クローン１３９ｓｃＦｖ－ＣＤ８α－４－１ＢＢ
－ＣＤ３ζ）を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるＥＧＦＲｖＩＩＩ特異
的ＣＡＲは、配列番号２３４に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有する
ペプチド配列、または配列番号２３３に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性
を有するヌクレオチド配列によってコードされるペプチド配列を含む、ＣＤ８－１Ｘスペ
ーサーを有するＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的キメラ抗原受容体（クローンＭＲ１ｓｃＦｖ－Ｃ
Ｄ８α－４－１ＢＢ－ＣＤ３ζ）を含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的ＣＡＲは、配列番
号２３６に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するペプチド配列、また
は配列番号２３５に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するヌクレオチ
ド配列によってコードされるペプチド配列を含む、ＣＤ８－１Ｘスペーサーを有するＥＧ
ＦＲｖＩＩＩ特異的キメラ抗原受容体（クローンＭＲ１－１ｓｃＦｖ－ＣＤ８α－４－１
ＢＢ－ＣＤ３ζ）を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるＥＧＦＲｖＩＩＩ
特異的ＣＡＲは、配列番号２４２に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有
するペプチド配列、または配列番号２４１に示される配列に対して少なくとも８０％の相
同性を有するヌクレオチド配列によってコードされるペプチド配列を含む、ＣＤ８－２Ｘ
スペーサーを有するＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的キメラ抗原受容体を含む。一部の実施形態で
は、本明細書に記載されるＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的ＣＡＲは、配列番号２４４に示される
配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するペプチド配列、または配列番号２４３に
示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するヌクレオチド配列によってコー
ドされるペプチド配列を含む、ＣＤ８－３Ｘスペーサーを有するＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的
キメラ抗原受容体を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるＥＧＦＲｖＩＩＩ
特異的ＣＡＲは、配列番号２４６に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有
するペプチド配列、または配列番号２４５に示される配列に対して少なくとも８０％の相
同性を有するヌクレオチド配列によってコードされるペプチド配列を含む、ＣＤ８－４Ｘ
スペーサーを有するＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的キメラ抗原受容体を含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的ＣＡＲは、配列番
号２３８に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するペプチド配列、また
は配列番号２３７に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するヌクレオチ
ド配列によってコードされるペプチド配列を含む、ＣＤ８－１Ｘスペーサーを有するＥＧ
ＦＲｖＩＩＩ特異的キメラ抗原受容体（ｈｕＭＲ１－１－ＣＤ８α－４－１ＢＢ－ＣＤ３
ζ）を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的ＣＡＲ
は、配列番号２４８に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するペプチド
配列、または配列番号２４７に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有する
ヌクレオチド配列によってコードされるペプチド配列を含む、ＣＤ８－３Ｘスペーサーを
有するＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的キメラ抗原受容体を含む。一部の実施形態では、本明細書
に記載されるＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的ＣＡＲは、配列番号２５０に示される配列に対して
少なくとも８０％の相同性を有するペプチド配列、または配列番号２４９に示される配列
に対して少なくとも８０％の相同性を有するヌクレオチド配列によってコードされるペプ
チド配列を含む、ＣＤ８－４Ｘスペーサーを有するＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的キメラ抗原受
容体を含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的ＣＡＲは、配列番
号２４０に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するペプチド配列、また
は配列番号２３９に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するヌクレオチ
ド配列によってコードされるペプチド配列を含む、ＣＤ８－１Ｘスペーサーを有するＥＧ
ＦＲｖＩＩＩ特異的キメラ抗原受容体（ｈｕＭＲ１－２－ＣＤ８α－４－１ＢＢ－ＣＤ３
ζ）を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的ＣＡＲ
は、配列番号２５２に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するペプチド
配列、または配列番号２５１に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有する
ヌクレオチド配列によってコードされるペプチド配列を含む、ＣＤ８－３Ｘスペーサーを
有するＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的キメラ抗原受容体を含む。一部の実施形態では、本明細書
に記載されるＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的ＣＡＲは、配列番号２５４に示される配列に対して
少なくとも８０％の相同性を有するペプチド配列、または配列番号２５３に示される配列
に対して少なくとも８０％の相同性を有するヌクレオチド配列によってコードされるペプ
チド配列を含む、ＣＤ８－４Ｘスペーサーを有するＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的キメラ抗原受
容体を含む。
修飾されたエフェクター細胞
一部の実施形態では、ポリペプチドを発現する修飾されたエフェクター細胞が本明細書
に記載され、本明細書に記載されるＣＡＲなどの抗原結合ポリペプチドが含まれる。一部
の実施形態では、修飾されたエフェクター細胞は、Ｔ細胞および／またはナチュラルキラ
ー細胞を含む修飾された免疫細胞である。Ｔ細胞またはＴリンパ球は、細胞性免疫に関与
する白血球のサブタイプである。例示的なＴ細胞には、Ｔヘルパー細胞、細胞傷害性Ｔ細
胞、ＴＨ１７細胞、幹メモリーＴ細胞（stem memory T cells）（ＴＳＣＭ）、ナイーブ
Ｔ細胞、メモリーＴ細胞、エフェクターＴ細胞、調節性Ｔ細胞、またはナチュラルキラー
Ｔ細胞が含まれる。
Ｔヘルパー細胞（ＴＨ細胞）は、形質細胞およびメモリーＢ細胞へのＢ細胞の成熟、な
らびに細胞傷害性Ｔ細胞およびマクロファージの活性化を含む、免疫学的プロセスにおい
て他の白血球を補助する。一部の例では、ＴＨ細胞は、細胞表面上におけるＣＤ４糖タン
パク質の発現により、ＣＤ４＋Ｔ細胞として公知である。ヘルパーＴ細胞は、抗原提示細
胞（ＡＰＣ）の表面上に発現するＭＨＣクラスＩＩ分子によってペプチド抗原が提示され
た場合に活性化されるようになる。活性化されると、それらは急速に分裂し、サイトカイ
ンと呼ばれる小さなタンパク質を分泌して、活発な免疫応答を調節または補助する。これ
らの細胞は、ＴＨ１、ＴＨ２、ＴＨ３、ＴＨ１７、Ｔｈ９、またはＴＦＨを含むいくつか
のサブタイプの１つに分化し、異なるサイトカインを分泌して、異なるタイプの免疫応答
を促進する。ＡＰＣからのシグナル伝達は、Ｔ細胞を特定のサブタイプへと方向付ける。
細胞傷害性Ｔ細胞（ＴＣ細胞またはＣＴＬ）は、ウイルス感染細胞および腫瘍細胞を破
壊し、また、移植拒絶に関係する。これらの細胞はまた、それらの表面上でＣＤ８糖タン
パク質を発現するため、ＣＤ８＋Ｔ細胞としても公知である。これらの細胞は、すべての
有核細胞の表面上に存在するＭＨＣクラスＩ分子に関連する抗原に結合することによって
、それらの標的を認識する。ＩＬ－１０、アデノシン、および調節性Ｔ細胞によって分泌
される他の分子を介して、ＣＤ８＋細胞を不活性化してアネルギー状態にし、自己免疫疾
患を防ぐことができる。
メモリーＴ細胞は、感染が解消した後に、長期間持続する抗原特異的Ｔ細胞のサブセッ
トである。それらは、それらの同族の抗原への再曝露の際に大多数のエフェクターＴ細胞
に急速に拡大し、したがって、免疫系に過去の感染に対する「メモリー」を提供する。メ
モリーＴ細胞は、サブタイプ：幹メモリーＴ細胞（ＴＳＣＭ）、セントラルメモリーＴ細
胞（ＴＣＭ細胞）、および２種類のエフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ細胞およびＴＥ
ＭＲＡ細胞）を含む。メモリー細胞は、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋のいずれかであり得る。
メモリーＴ細胞は、細胞表面タンパク質ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ４５ＲＡ、および／またはＣ
ＣＲ７を発現し得る。
以前はサプレッサーＴ細胞として知られていた調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞）は、免疫
学的寛容の維持において役割を果たす。それらの主な役割は、免疫反応の終わりに向けて
Ｔ細胞性免疫を停止し、胸腺におけるネガティブ選択のプロセスから逃れた自己反応性Ｔ
細胞を抑制することである。
ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ細胞）は、適応免疫系と自然免疫系を橋渡しする。主
要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子によって提示されるペプチド抗原を認識する従来
のＴ細胞とは異なり、ＮＫＴ細胞は、ＣＤ１ｄと呼ばれる分子によって提示される糖脂質
抗原を認識する。活性化されると、これらの細胞は、Ｔｈ細胞とＴｃ細胞の両方に起因す
る機能（すなわち、サイトカイン生成、および細胞溶解性／細胞殺傷分子の放出）を行う
ことができる。それらはまた、一部の腫瘍細胞、およびヘルペスウイルスに感染した細胞
を認識し、排除することができる。
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、自然免疫系の細胞傷害性リンパ球の一種である。一
部の例では、ＮＫ細胞は、ウイルス感染および／または腫瘍形成に対する第一線の防御を
提供する。ＮＫ細胞は、感染した細胞またはがん細胞に提示されたＭＨＣを検出し、サイ
トカインの放出を引き起こし、続いて溶解およびアポトーシスを誘導することができる。
ＮＫ細胞はさらに、抗体および／またはＭＨＣの非存在下でストレスを受けた細胞を検出
することができ、それにより迅速な免疫応答を可能にする。
操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）
一部の実施形態では、本明細書に記載されるポリペプチドは、操作されたＴ細胞受容体
を含む。Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）は、Ｔ細胞の表面上で対形成して、ヘテロ二量体受容体
を形成する２つの鎖（αβまたはγδ）で構成されている。一部の例では、αβＴＣＲは
体内のほとんどのＴ細胞上に発現し、特定のＭＨＣ制限抗原の認識に関与していることが
公知である。各αおよびβ鎖は、２つのドメイン：タンパク質を細胞膜に固定し、ＣＤ３
シグナル伝達装置の不変サブユニットと会合している定常ドメイン（Ｃ）；および相補性
決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる、６つのループを通じて抗原認識を付与する可変ドメイン
（Ｖ）で構成されている。一部の例では、Ｖドメインの各々は、３つのＣＤＲ；例えば、
超可変領域としてＣＤＲ３を伴うＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。これらの
ＣＤＲは、主要組織適合遺伝子複合体（ｐｅｐＭＨＣ）によってコードされるタンパク質
に結合した抗原ペプチド間で形成される複合体（例えば、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬ
Ａ－Ｃ、ＨＬＡ－ＤＰＡ１、ＨＬＡ－ＤＰＢ１、ＨＬＡ－ＤＱＡ１、ＨＬＡ－ＤＱＢ１、
ＨＬＡ－ＤＲＡ、またはＨＬＡ－ＤＲＢ１複合体）と相互作用する。一部の例では、定常
ドメインは、定常ドメインを可変ドメインに接続する接合領域をさらに含む。一部の場合
では、ベータ鎖はさらに、接続領域の一部を構成する短い多様性領域を含む。
一部の場合では、このようなＴＣＲは、特定の腫瘍抗原、例えば、ＮＹ－ＥＳＯ、タイ
チン、ＭＡＲＴ－１、ＨＰＶ、ＨＢＶ、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－Ａ１０、ＭＡＧＥ
Ａ３／Ａ６、ｇｐ１００、ＭＡＧＥ－Ａ１、またはＰＲＡＭＥに反応性である。他のケー
スでは、このようなＴＣＲは、患者の腫瘍（すなわち、腫瘍によって発現される患者特異
的、体性、非同義突然変異）内で発現する特定の新生抗原に反応性である。一部の場合で
は、操作されたＴＣＲは、親和性を高めることができる。
一部の実施形態では、ＴＣＲは、国際免疫遺伝学（ＩＭＧＴ）ＴＣＲ命名法を使用して
説明され、ＴＣＲ配列のＩＭＧＴ公開データベースにリンクする。例えば、それらのフレ
ームワーク、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列によって区別されるいくつかのタ
イプのアルファ鎖可変（Ｖα）領域およびいくつかのタイプのベータ鎖可変（Ｖβ）領域
が存在し得る。そのため、Ｖαタイプは、ＩＭＧＴ命名法では一意のＴＲＡＶ番号で参照
することができる。例えば、「ＴＲＡＶ２１」は、固有のフレームワークならびにＣＤＲ
１およびＣＤＲ２配列を有するＴＣＲＶα領域、ならびにＴＣＲからＴＣＲに保存されて
いるが、ＴＣＲからＴＣＲに変化するアミノ酸配列も含む、アミノ酸配列によって部分的
に定義されるＣＤＲ３配列を定義する。同様に、「ＴＲＢＶ５－１」は、独自のフレーム
ワークならびにＣＤＲ１およびＣＤＲ２配列を有するが、部分的に定義されたＣＤＲ３配
列のみを含む、ＴＣＲ Ｖβ領域を定義する。
一部の場合では、ベータ鎖多様性領域は、省略形ＴＲＢＤによってＩＭＧＴ命名法で呼
ばれる。
一部の例では、ＩＭＧＴ命名法によって定義される固有の配列は広く公知であり、ＴＣ
Ｒ分野で働いている人々にとってアクセス可能である。例えば、それらは、ＩＭＧＴ公開
データベース、および「Ｔ ｃｅｌｌ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｆａｃｔｓｂｏｏｋ」（２０
０１年）ＬｅＦｒａｎｃおよびＬｅＦｒａｎｃ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、ＩＳＢ
Ｎ ０－１２－４４１３５２－８に見出すことができる。
一部の実施形態では、αβヘテロ二量体ＴＣＲは、例えば、細胞質ドメインと膜貫通ド
メインの両方を有する全長鎖としてトランスフェクトされる。一部の場合では、ＴＣＲは
、例えば、国際公開第２００６／０００８３０号パンフレットに記載されているように、
それぞれの定常ドメインの残基間に導入されたジスルフィド結合を含む。
一部の例では、本明細書に記載されるＴＣＲは、一本鎖形式であり、例えば、国際公開
第２００４／０３３６８５号パンフレットを参照されたい。一本鎖フォーマットには、Ｖ
α－Ｌ－Ｖβ、Ｖβ－Ｌ－Ｖα、Ｖα－Ｃα－Ｌ－Ｖβ、Ｖα－Ｌ－Ｖβ－Ｃβ、Ｖα－
Ｃα－Ｌ－Ｖβ－ＣβタイプのαβＴＣＲポリペプチドが含まれ、ＶαおよびＶβは、そ
れぞれＴＣＲαおよびβ可変領域であり、ＣαおよびＣβは、それぞれＴＣＲαおよびβ
定常領域であり、Ｌはリンカー配列である。特定の実施形態では、本発明の一本鎖ＴＣＲ
は、国際公開第２００４／０３３６８５号パンフレットに記載されているように、それぞ
れの定常ドメインの残基間に導入されたジスルフィド結合を有し得る。
本明細書に記載されるＴＣＲには、検出可能な標識、治療薬またはＰＫ修飾部分が付随
し得る。
診断目的のための例示的な検出可能な標識には、限定されないが、蛍光標識、放射性標
識、酵素、核酸プローブおよび造影剤が含まれる。
一部の場合では、本明細書に開示されるＴＣＲの各鎖、例えば、αβまたはγδは、Ｔ
ＣＲ鎖の定常領域を膜貫通領域に接続する修飾されたスペーサー領域を含む。
一部の場合では、本明細書に開示されるＴＣＲの各鎖のスペーサー領域は、１）ストー
ク領域、および２）前記ストーク領域に隣接するストーク伸長領域（複数可）（ｓ’－ｎ
、ここで、ｎ＝０、１、２、３またはそれを超える）を含む。例示的な実施形態は、図１
Ａおよび図１Ｂに記載される。一部の実施形態では、本明細書に開示されるＴＣＲの各鎖
は、ストーク領域（複数可）およびストーク伸長領域（ｓ’－ｎ、ここで、ｎ＝０、１、
２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、
１８、１９または２０である）を含むスペーサーを組み込む。
本明細書に記載されるように、スペーサー領域は、ストーク領域およびストーク伸長領
域（複数可）を含み得る。一部の例では、ストーク領域は、ＴＣＲαもしくはＴＣＲβ鎖
からの細胞外ヒンジ領域を含むか、またはストーク領域は、ＴＣＲαもしくはＴＣＲβ鎖
からの細胞外ヒンジ領域に対して少なくとも８０％の相同性を有する配列を含む。例えば
、ストーク領域は、ＴＣＲαまたはＴＣＲβ鎖の細胞外領域のヒンジ領域に対して少なく
とも８０％、８５％、９０％、９５％、または９５％を超える相同性を有する配列を含み
得る。代替の例では、ストーク領域は、それぞれＴＣＲαまたはＴＣＲβ定常領域の細胞
外領域に対して少なくとも８０％の相同性を有するＴＣＲαまたはＴＣＲβ定常領域の細
胞外領域の任意の部分を含む。例えば、ストーク領域は、ＴＣＲαまたはＴＣＲβ定常領
域の細胞外領域の任意の部分に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、また
は９５％を超える相同性を有する配列を含み得る。
ＴＣＲ鎖二量体は、α鎖およびβ鎖の細胞外ヒンジ領域における鎖間ジスルフィド結合
によって形成される。一部の実施形態では、ストーク領域は二量体化部位を含む。二量体
化部位は、ジスルフィド結合形成部位を含み得る。二量体化部位は、システイン残基（複
数可）を含み得る。ストーク領域は、ジスルフィド結合を形成することができる。このよ
うなジスルフィド結合は、ジスルフィド結合形成部位または二量体化部位で形成され得る
。一部の例では、二量体化は、ＴＣＲのα鎖とβ鎖の間で生じる。
一部の実施形態では、ストーク伸長領域が使用される。一部の実施形態では、ストーク
伸長領域を使用して、ストーク領域を膜貫通領域のＴＣＲα鎖およびβ鎖に連結する。追
加の実施形態では、ストーク伸長領域を使用して、ストーク領域をＴＣＲαおよびβ鎖の
定常領域に連結する。別の実施形態では、ストーク領域およびストーク伸長領域は、リン
カーを介して接続することができる。
一部の例では、ストーク伸長ドメインは、ストーク領域と部分的に相同である配列を含
む。一部の例では、ストーク伸長領域の各々は、ストーク伸長領域がストーク領域の二量
体化部位を欠いていることを除いて、ストーク領域と相同である配列を含む。一部の場合
では、ストーク伸長領域の各々は、ストーク領域と同一である配列を含む。他の場合では
、ストーク伸長領域の各々は、ストーク領域に対して少なくとも１つのアミノ酸残基置換
を有するストーク領域と同一である配列を含む。一部の場合では、ストーク伸長領域の各
々は、ジスルフィド結合を形成することができないか、または相同なストーク伸長領域と
二量体化することができない。
他の実施形態では、１つのストーク伸長領域は、リンカーを介して、別のストーク伸長
領域に接続することができる。このようなリンカーの例には、グリシン－セリンリッチリ
ンカーが含まれ得る。
一部の実施形態では、ストーク伸長領域（複数可）の追加は、遺伝子修飾されたＴ細胞
によって発現される天然のＴＣＲαおよびβ鎖と、トランスジェニックＴＣＲαおよびβ
鎖の誤った対形成を防止する。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるＴＣＲは、配列番号６９に示される配列に
対して少なくとも８０％の相同性を有するペプチド配列、または配列番号１６３に示され
る配列に対して少なくとも８０％のヌクレオチド配列によってコードされるペプチド配列
を含むＴＣＲα鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるＴＣＲは
、配列番号８３に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するペプチド配列
、または配列番号１７７に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するヌク
レオチド配列によってコードされるペプチド配列を含むＴＣＲβ１鎖定常領域を含む。一
部の実施形態では、本明細書に記載されるＴＣＲは、配列番号９７に示される配列に対し
て少なくとも８０％の相同性を有するペプチド配列、または配列番号１９１に示される配
列に対して少なくとも８０％の相同性を有するヌクレオチド配列によってコードされるペ
プチド配列を含むＴＣＲβ２鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載さ
れるＴＣＲは、配列番号９９に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有する
ペプチド配列、または配列番号１９３に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性
を有するヌクレオチド配列によってコードされるペプチド配列を含むＴＣＲγ１鎖定常領
域を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されるＴＣＲは、配列番号１０２に示さ
れる配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するペプチド配列、または配列番号１９
６に示される配列に対して少なくとも８０％の相同性を有するヌクレオチド配列によって
コードされるペプチド配列を含むＴＣＲγ２鎖定常領域を含む。一部の実施形態では、本
明細書に記載されるＴＣＲは、配列番号１０４に示される配列に対して少なくとも８０％
の相同性を有するペプチド配列、または配列番号１９８に示される配列に対して少なくと
も８０％の相同性を有するヌクレオチド配列によってコードされるペプチド配列を含むＴ
ＣＲδ鎖定常領域を含む。
本明細書に開示される実施形態の一部の態様では、本明細書に記載されるポリペプチド
のストーク領域またはストーク伸長領域は、配列番号７０に示されるヒトＴＣＲα鎖定常
領域配列の細胞外領域に対して少なくとも約１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、
１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、
２５％、２６％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、４０％、５０％、
６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％以上または
それを超える同一性を有するペプチド配列を含む。一部の場合では、本明細書に記載され
るポリペプチドのストーク領域またはストーク伸長領域は、配列番号１６４に示されるヒ
トＴＣＲα鎖定常領域ヌクレオチド配列に対して少なくとも約１０％、１１％、１２％、
１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、
２３％、２４％、２５％、２６％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、
４０％、５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、
９９％またはそれを超える同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされるペプチ
ド配列を含む。一部の場合では、ストーク伸長領域は、配列番号７２または配列番号７３
に示される配列に対して少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、
９５％、もしくはそれを超える同一性を有する配列、あるいは配列番号１６６または配列
番号１６７に示される配列に対して少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％
、９０％、９５％、９９％もしくはそれを超える同一性を有するヌクレオチド配列によっ
てコードされるペプチド配列を含む。一部の例では、ストーク領域およびストーク伸長領
域はともに、配列番号７７、配列番号７８または配列番号７９に示される配列に対して少
なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくはそれを超え
る同一性を有するペプチド配列、あるいは配列番号１７１、配列番号１７２または配列番
号１７３に示される配列に対して少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、
９０％、９５％、９９％もしくはそれを超える同一性を有するヌクレオチド配列によって
コードされるペプチド配列を含み得る。一部の例では、ストーク領域およびストーク伸長
領域はともに、配列番号８０、配列番号８１または配列番号８２に示される配列に対して
少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％もしくはそれを超
える同一性を有するペプチド配列、あるいは配列番号１７４、配列番号１７５または配列
番号１７６に示される配列に対して少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％
、９０％、９５％、９９％もしくはそれを超える同一性を有するヌクレオチド配列によっ
てコードされるペプチド配列を含み得る。
一部の実施形態では、ストーク領域およびストーク伸長領域（複数可）は、ホイットロ
ーリンカー（配列番号８および配列番号１１４）、ＧＳＧリンカー（配列番号９および配
列番号１１５）、ＳＧＳＧリンカー（配列番号１０）または（Ｇ４Ｓ）３リンカー（配列
番号１１および配列番号１１７）などのリンカーを介して接続され得る。一実施形態では
、（Ｇ４Ｓ）３リンカー（配列番号１１）に接続されたＴＣＲαヒンジドメインは、配列
番号７４に示されるペプチド配列、または配列番号１６８に示されるヌクレオチド配列に
よってコードされるペプチド配列を含み得る。一実施形態では、（Ｇ４Ｓ）３リンカー（
配列番号１１）に接続されたＴＣＲβヒンジドメインは、配列番号７５に示されるペプチ
ド配列、または配列番号１６９に示されるヌクレオチド配列によってコードされるペプチ
ド配列を含み得る。さらに別の実施形態では、ホイットローリンカーに接続されたＴＣＲ
βヒンジドメインは、配列番号７６に示されるペプチド配列、または配列番号１７０に示
されるヌクレオチド配列によってコードされるペプチド配列を含み得る。
本明細書に開示される実施形態の一部の態様では、本明細書に記載されるヒトＴＣＲα
鎖定常領域の細胞外領域は、配列番号７０に示されるペプチド配列に対して少なくとも８
０％以上の同一性を有するペプチド配列を含む。一部の場合では、本明細書に記載される
ヒトＴＣＲβ１鎖定常領域の細胞外領域は、配列番号１６４に示されるヒトＴＣＲβ１鎖
定常領域ヌクレオチド配列に対して少なくとも約８０％以上の同一性を有するヌクレオチ
ド配列によってコードされるペプチド配列を含む。本明細書に開示される実施形態の一部
の態様では、本明細書に記載されるヒトＴＣＲβ１鎖定常領域の細胞外領域は、配列番号
８４に示されるペプチド配列に対して少なくとも８０％以上の同一性を有するペプチド配
列を含む。一部の場合では、本明細書に記載されるＴＣＲβ１鎖定常領域の細胞外領域は
、配列番号１７８に示されるヒトＧＣＲβ１鎖定常領域ヌクレオチド配列に対して少なく
とも約８０％以上の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされるペプチド配列
を含む。本明細書に開示される実施形態の一部の態様では、本明細書に記載されるヒトＴ
ＣＲβ２鎖定常領域の細胞外領域は、配列番号９８に示されるペプチド配列に対して少な
くとも８０％以上の同一性を有するペプチド配列を含む。一部の場合では、本明細書に記
載されるヒトＴＣＲβ２鎖定常領域の細胞外領域は、配列番号１９２に示されるヒトＴＣ
Ｒβ１鎖定常領域ヌクレオチド配列に対して少なくとも約８０％以上の同一性を有するヌ
クレオチド配列によってコードされるペプチド配列を含む。本明細書に開示される実施形
態の一部の態様では、本明細書に記載されるヒトＴＣＲγ１鎖定常領域の細胞外領域は、
配列番号１００に示されるペプチド配列に対して少なくとも８０％以上の同一性を有する
ペプチド配列を含む。一部の場合では、本明細書に記載されるヒトＴＣＲγ１鎖定常領域
の細胞外領域は、配列番号１９４に示されるヒトＴＣＲβ１鎖定常領域ヌクレオチド配列
に対して少なくとも約８０％以上の同一性を有するヌクレオチド配列によってコードされ
るペプチド配列を含む。本明細書に開示される実施形態の一部の態様では、本明細書に記
載されるヒトＴＣＲγ２鎖定常領域の細胞外領域は、配列番号１０３に示されるペプチド
配列に対して少なくとも８０％以上の同一性を有するペプチド配列を含む。一部の場合で
は、本明細書に記載されるヒトＴＣＲγ２鎖定常領域の細胞外領域は、配列番号１９７に
示されるヒトＴＣＲβ１鎖定常領域ヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％以上の同
一性を有するヌクレオチド配列によってコードされるペプチド配列を含む。本明細書に開
示される実施形態の一部の態様では、本明細書に記載されるヒトＴＣＲδ鎖定常領域の細
胞外領域は、配列番号１０５に示されるペプチド配列に対して少なくとも８０％以上の同
一性を有するペプチド配列を含む。一部の場合では、本明細書に記載されるヒトＴＣＲδ
鎖定常領域の細胞外領域は、配列番号１９９に示されるヒトＴＣＲβ１鎖定常領域ヌクレ
オチド配列に対して少なくとも約８０％以上の同一性を有するヌクレオチド配列によって
コードされるペプチド配列を含む。
修飾されたエフェクター細胞用量
一部の実施形態では、ある量の修飾されたエフェクター細胞が、それを必要とする対象
に投与され、その量は、有効性およびサイトカイン関連の毒性を誘発する可能性に基づい
て決定される。一部の場合では、修飾された免疫エフェクター細胞の量は、約１０２～約
１０９個の修飾された免疫エフェクター細胞／ｋｇを含む。一部の場合では、修飾された
免疫エフェクター細胞の量は、約１０３～約１０９個の修飾された免疫エフェクター細胞
／ｋｇを含む。一部の場合では、修飾されたエフェクター細胞の量は、約１０４～約１０
９個の修飾されたエフェクター細胞／ｋｇを含む。一部の場合では、修飾されたエフェク
ター細胞の量は、約１０５～約１０９個の修飾されたエフェクター細胞／ｋｇを含む。一
部の場合では、修飾されたエフェクター細胞の量は、約１０５～約１０８個の修飾された
エフェクター細胞／ｋｇを含む。一部の場合では、修飾されたエフェクター細胞の量は、
約１０５～約１０７個の修飾されたエフェクター細胞／ｋｇを含む。一部の場合では、修
飾されたエフェクター細胞の量は、約１０６～約１０９個の修飾されたエフェクター細胞
／ｋｇを含む。一部の場合では、修飾されたエフェクター細胞の量は、約１０６～約１０
８個の修飾されたエフェクター細胞／ｋｇを含む。一部の場合では、修飾されたエフェク
ター細胞の量は、約１０７～約１０９個の修飾されたエフェクター細胞／ｋｇを含む。一
部の場合では、修飾されたエフェクター細胞の量は、約１０５～約１０６個の修飾された
エフェクター細胞／ｋｇを含む。一部の場合では、修飾されたエフェクター細胞の量は、
約１０６～約１０７個の修飾されたエフェクター細胞／ｋｇを含む。一部の場合では、修
飾されたエフェクター細胞の量は、約１０７～約１０８個の修飾されたエフェクター細胞
／ｋｇを含む。一部の場合では、修飾されたエフェクター細胞の量は、約１０８～約１０
９個の修飾されたエフェクター細胞／ｋｇを含む。一部の例では、修飾されたエフェクタ
ー細胞の量は、約１０９個の修飾されたエフェクター細胞／ｋｇを含む。一部の例では、
修飾されたエフェクター細胞の量は、約１０８個の修飾されたエフェクター細胞／ｋｇを
含む。一部の例では、修飾されたエフェクター細胞の量は、約１０７個の修飾されたエフ
ェクター細胞／ｋｇを含む。一部の例では、修飾されたエフェクター細胞の量は、約１０
６個の修飾されたエフェクター細胞／ｋｇを含む。一部の例では、修飾されたエフェクタ
ー細胞の量は、約１０５個の修飾されたエフェクター細胞／ｋｇを含む。一部の例では、
修飾されたエフェクター細胞の量は、約１０４個の修飾されたエフェクター細胞／ｋｇを
含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるポリペプチドを発現する修飾されたエフェ
クター細胞は、修飾されたＴ細胞である。一部の例では、修飾されたＴ細胞はＣＡＲ－Ｔ
細胞である。一部の場合では、ＣＡＲ－Ｔ細胞の量は、約１０２～約１０９個のＣＡＲ－
Ｔ細胞／ｋｇを含む。一部の場合では、ＣＡＲ－Ｔ細胞の量は、約１０３～約１０９個の
ＣＡＲ－Ｔ細胞／ｋｇを含む。一部の場合では、ＣＡＲ－Ｔ細胞の量は、約１０４～約１
０９個のＣＡＲ－Ｔ細胞／ｋｇを含む。一部の場合では、ＣＡＲ－Ｔ細胞の量は、約１０
５～約１０８個のＣＡＲ－Ｔ細胞／ｋｇを含む。一部の場合では、ＣＡＲ－Ｔ細胞の量は
、約１０５～約１０７個のＣＡＲ－Ｔ細胞／ｋｇを含む。一部の場合では、ＣＡＲ－Ｔ細
胞の量は、約１０６～約１０９個のＣＡＲ－Ｔ細胞／ｋｇを含む。一部の場合では、ＣＡ
Ｒ－Ｔ細胞の量は、約１０６～約１０８個のＣＡＲ－Ｔ細胞／ｋｇを含む。一部の場合で
は、ＣＡＲ－Ｔ細胞の量は、約１０７～約１０９個のＣＡＲ－Ｔ細胞／ｋｇを含む。一部
の場合では、ＣＡＲ－Ｔ細胞の量は、約１０５～約１０６個のＣＡＲ－Ｔ細胞／ｋｇを含
む。一部の場合では、ＣＡＲ－Ｔ細胞の量は、約１０６～約１０７個のＣＡＲ－Ｔ細胞／
ｋｇを含む。一部の場合では、ＣＡＲ－Ｔ細胞の量は、約１０７～約１０８個のＣＡＲ－
Ｔ細胞／ｋｇを含む。一部の場合では、ＣＡＲ－Ｔ細胞の量は、約１０８～約１０９個の
ＣＡＲ－Ｔ細胞／ｋｇを含む。一部の例では、ＣＡＲ－Ｔ細胞の量は、約１０９個のＣＡ
Ｒ－Ｔ細胞／ｋｇを含む。一部の例では、ＣＡＲ－Ｔ細胞の量は、約１０８個のＣＡＲ－
Ｔ細胞／ｋｇを含む。一部の例では、ＣＡＲ－Ｔ細胞の量は、約１０７個のＣＡＲ－Ｔ細
胞／ｋｇを含む。一部の例では、ＣＡＲ－Ｔ細胞の量は、約１０６個のＣＡＲ－Ｔ細胞／
ｋｇを含む。一部の例では、ＣＡＲ－Ｔ細胞の量は、約１０５個のＣＡＲ－Ｔ細胞／ｋｇ
を含む。一部の例では、ＣＡＲ－Ｔ細胞の量は、約１０４個のＣＡＲ－Ｔ細胞／ｋｇを含
む。一部の例では、ＣＡＲ－Ｔ細胞の量は、約１０３個のＣＡＲ－Ｔ細胞／ｋｇを含む。
一部の例では、ＣＡＲ－Ｔ細胞の量は、約１０２個のＣＡＲ－Ｔ細胞／ｋｇを含む。
一部の実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ－Ｔ細胞である。一部
の場合では、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ－Ｔ細胞の量は約１０２～約１０９個のＣＡＲ－Ｔ細
胞／ｋｇを含む。一部の場合では、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ－Ｔ細胞の量は約１０３～約１
０９個のＣＡＲ－Ｔ細胞／ｋｇを含む。一部の場合では、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ－Ｔ細胞
の量は約１０４～約１０９個のＣＡＲ－Ｔ細胞／ｋｇを含む。一部の場合では、ＣＤ１９
特異的ＣＡＲ－Ｔ細胞の量は約１０５～約１０８個のＣＡＲ－Ｔ細胞／ｋｇを含む。一部
の場合では、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ－Ｔ細胞の量は約１０５～約１０７個のＣＡＲ－Ｔ細
胞／ｋｇを含む。一部の場合では、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ－Ｔ細胞の量は約１０６～約１
０９個のＣＡＲ－Ｔ細胞／ｋｇを含む。一部の場合では、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ－Ｔ細胞
の量は約１０６～約１０８個のＣＡＲ－Ｔ細胞／ｋｇを含む。一部の場合では、ＣＤ１９
特異的ＣＡＲ－Ｔ細胞の量は約１０７～約１０９個のＣＡＲ－Ｔ細胞／ｋｇを含む。一部
の場合では、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ－Ｔ細胞の量は約１０５～約１０６個のＣＡＲ－Ｔ細
胞／ｋｇを含む。一部の場合では、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ－Ｔ細胞の量は約１０６～約１
０７個のＣＡＲ－Ｔ細胞／ｋｇを含む。一部の場合では、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ－Ｔ細胞
の量は約１０７～約１０８個のＣＡＲ－Ｔ細胞／ｋｇを含む。一部の場合では、ＣＤ１９
特異的ＣＡＲ－Ｔ細胞の量は約１０８～約１０９個のＣＡＲ－Ｔ細胞／ｋｇを含む。一部
の例では、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ－Ｔ細胞の量は約１０９個のＣＡＲ－Ｔ細胞／ｋｇを含
む。一部の例では、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ－Ｔ細胞の量は約１０８個のＣＡＲ－Ｔ細胞／
ｋｇを含む。一部の例では、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ－Ｔ細胞の量は約１０７個のＣＡＲ－
Ｔ細胞／ｋｇを含む。一部の例では、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ－Ｔ細胞の量は約１０６個の
ＣＡＲ－Ｔ細胞／ｋｇを含む。一部の例では、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ－Ｔ細胞の量は約１
０５個のＣＡＲ－Ｔ細胞／ｋｇを含む。一部の例では、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ－Ｔ細胞の
量は約１０４個のＣＡＲ－Ｔ細胞／ｋｇを含む。一部の例では、ＣＤ１９特異的ＣＡＲ－
Ｔ細胞の量は約１０３個のＣＡＲ－Ｔ細胞／ｋｇを含む。一部の例では、ＣＤ１９特異的
ＣＡＲ－Ｔ細胞の量は約１０２個のＣＡＲ－Ｔ細胞／ｋｇを含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるポリペプチドは、操作されたＴＣＲ Ｔ細
胞である修飾されたＴ細胞において発現される。一部の場合では、操作されたＴＣＲ Ｔ
細胞の量は約１０２～約１０９個のＴＣＲ細胞／ｋｇを含む。一部の場合では、操作され
たＴＣＲ Ｔ細胞の量は約１０３～約１０９個のＴＣＲ細胞／ｋｇを含む。一部の場合で
は、操作されたＴＣＲ Ｔ細胞の量は約１０４～約１０９個のＴＣＲ細胞／ｋｇを含む。
一部の場合では、操作されたＴＣＲ Ｔ細胞の量は約１０５～約１０９個のＴＣＲ細胞／
ｋｇを含む。一部の場合では、操作されたＴＣＲ細胞の量は約１０５～約１０８個のＴＣ
Ｒ細胞／ｋｇを含む。一部の場合では、操作されたＴＣＲ細胞の量は約１０５～約１０７
個のＴＣＲ細胞／ｋｇを含む。一部の場合では、操作されたＴＣＲ細胞の量は約１０６～
約１０９個のＴＣＲ細胞／ｋｇを含む。一部の場合では、操作されたＴＣＲ細胞の量は、
約１０６～約１０８個のＴＣＲ細胞／ｋｇを含む。一部の場合では、操作されたＴＣＲ細
胞の量は、約１０７～約１０９個のＴＣＲ細胞／ｋｇを含む。一部の場合では、操作され
たＴＣＲ細胞の量は、約１０５～約１０６個のＴＣＲ細胞／ｋｇを含む。一部の場合では
、操作されたＴＣＲ細胞の量は、約１０６～約１０７個のＴＣＲ細胞／ｋｇを含む。一部
の場合では、操作されたＴＣＲ細胞の量は、約１０７～約１０８個のＴＣＲ細胞／ｋｇを
含む。一部の場合では、操作されたＴＣＲ細胞の量は、約１０８～約１０９個のＴＣＲ細
胞／ｋｇを含む。一部の場合では、操作されたＴＣＲ細胞の量は約１０９個のＴＣＲ細胞
／ｋｇを含む。一部の場合では、操作されたＴＣＲ細胞の量は約１０８個のＴＣＲ細胞／
ｋｇを含む。一部の場合では、操作されたＴＣＲ細胞の量は約１０７個のＴＣＲ細胞／ｋ
ｇを含む。一部の場合では、操作されたＴＣＲ細胞の量は約１０６個のＴＣＲ細胞／ｋｇ
を含む。一部の場合では、操作されたＴＣＲ細胞の量は約１０５個のＴＣＲ細胞／ｋｇを
含む。一部の場合では、操作されたＴＣＲ細胞の量は約１０４個のＴＣＲ細胞／ｋｇを含
む。一部の場合では、操作されたＴＣＲ細胞の量は約１０３個のＴＣＲ細胞／ｋｇを含む
。一部の場合では、操作されたＴＣＲ細胞の量は約１０２個のＴＣＲ細胞／ｋｇを含む。
適応症
一部の実施形態では、本明細書では、本明細書に記載されるポリペプチドを含む修飾さ
れたエフェクター細胞を、障害、例えば、がんを有する対象に投与する方法が開示される
。一部の場合では、がんは、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３３、ＣＤ４４、ＢＣＭＡ、ＣＤ
１２３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、α－葉酸受容体、ＣＡＩＸ、ＣＤ３０、ＲＯＲ１、ＣＥＡ、
ＥＧＰ－２、ＥＧＰ－４０、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、葉酸結合タンパク質、ＧＤ２、ＧＤ３
、ＩＬ－１３Ｒ－ａ２、ＫＤＲ、ＥＤＢ－Ｆ、メソセリン、ＧＰＣ３、ＣＳＰＧ４、ＨＥ
Ｒ１／ＨＥＲ３、ＨＥＲ２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／ｖ８、ＣＤ２０、ＣＤ１７４
、ＣＤ１３８、Ｌ１－ＣＡＭ、ＦＡＰ、ｃ－ＭＥＴ、ＰＳＣＡ、ＣＳ１、ＣＤ３８、ＩＬ
－１１Ｒα、ＥｐｈＡ２、ＣＬＬ－１、ＣＤ２２、ＥＧＦＲ、葉酸受容体α、ムチン、例
えば、ＭＵＣ－１またはＭＵＣ－１６、ＭＡＧＥ－Ａ１、ｈ５Ｔ４、ＰＳＭＡ、ＣＳＰＧ
４、ＴＡＧ－７２またはＶＥＧＦ－Ｒ２の発現に関連付けられるがんである。
一部の実施形態では、本明細書では、本明細書に記載されるポリヌクレオチド、ポリペ
プチドまたはポリヌクレオチドをコードする修飾されたエフェクター細胞を、ＣＤ１９の
過剰発現に関連付けられるがんを有する対象に投与する方法が開示される。一部の実施形
態では、本明細書では、ＣＤ３３の過剰発現に関連付けられるがんを有する対象に修飾さ
れたエフェクター細胞を投与する方法が開示される。一部の実施形態では、本明細書では
、ＣＤ４４、ＣＤ１９、ＢＣＭＡ、ＣＤ１２３、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、α－葉酸受容体、Ｃ
ＡＩＸ、ＣＤ３０、ＲＯＲ１、ＣＥＡ、ＥＧＰ－２、ＥＧＰ－４０、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３
、葉酸結合タンパク質、ＧＤ２、ＧＤ３、ＩＬ－１３Ｒ－ａ２、ＫＤＲ、ＥＤＢ－Ｆ、メ
ソセリン、ＧＰＣ３、ＣＳＰＧ４、ＨＥＲ１／ＨＥＲ３、ＨＥＲ２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ
４４ｖ７／ｖ８、ＣＤ２０、ＣＤ１７４、ＣＤ１３８、Ｌ１－ＣＡＭ、ＦＡＰ、ｃ－ＭＥ
Ｔ、ＰＳＣＡ、ＣＳ１、ＣＤ３８、ＩＬ－１１Ｒα、ＥｐｈＡ２、ＣＬＬ－１、ＣＤ２２
、ＥＧＦＲ、ムチン、例えば、ＭＵＣ－１またはＭＵＣ－１６、ＭＡＧＥ－Ａ１、ｈ５Ｔ
４、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ－７２、またはＶＥＧＦ－Ｒ２の過剰発現に関連付けられるがんを
有する対象に修飾されたエフェクター細胞を投与する方法が開示される。一部の場合では
、がんは転移性がんである。他の場合では、がんは再発性または難治性のがんである。
一部の場合では、がんは固形腫瘍または血液悪性腫瘍である。一部の例では、がんは固
形腫瘍である。他の例では、がんは血液悪性腫瘍である。一部の場合では、がんは転移性
がんである。一部の場合では、がんは再発性または難治性のがんである。
一部の例では、がんは固形腫瘍である。例示的な固形腫瘍には、限定されないが、肛門
がん；虫垂がん；胆管がん（すなわち、胆管癌）；膀胱がん；脳腫瘍；乳がん；子宮頸が
ん；大腸がん；原発不明がん（ＣＵＰ）；食道がん；眼がん；卵管がん；消化器がん；腎
臓がん；肝臓がん；肺がん；髄芽腫；黒色腫；口腔がん；卵巣がん；膵臓がん；副甲状腺
疾患；陰茎がん；下垂体腫瘍；前立腺がん；直腸がん；皮膚がん；胃がん；精巣腫瘍；咽
喉がん；甲状腺がん；子宮がん；膣がん；または外陰がんが含まれる。
一部の例では、がんは血液悪性腫瘍である。一部の場合では、血液悪性腫瘍は、リンパ
腫、白血病、骨髄腫、またはＢ細胞悪性腫瘍を含む。一部の場合では、血液悪性腫瘍は、
リンパ腫、白血病または骨髄腫を含む。一部の例では、例示的な血液悪性腫瘍には、慢性
リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、高リスクＣＬＬ、非ＣＬ
Ｌ／ＳＬＬリンパ腫、前リンパ球性白血病（ＰＬＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、びまん
性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、ヴァルデ
ンストレームマクログロブリン血症、多発性骨髄腫、節外辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、節辺縁
帯Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、非バーキット高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、原発性
縦隔Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＬ）、免疫芽球性大細胞リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リン
パ腫、Ｂ細胞前リンパ性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、脾臓辺縁帯リンパ腫、形質
細胞骨髄腫、形質細胞腫、縦隔（胸腺）大Ｂ細胞リンパ腫、血管内大Ｂ細胞リンパ腫、原
発性滲出液リンパ腫、またはリンパ腫様肉芽腫症が含まれる。一部の実施形態では、血液
悪性腫瘍は骨髄性白血病を含む。一部の実施形態では、血液悪性腫瘍は、急性骨髄性白血
病（ＡＭＬ）または慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）を含む。
一部の例では、本明細書では、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫
（ＳＬＬ）、高リスクＣＬＬ、非ＣＬＬ／ＳＬＬリンパ腫、前リンパ球性白血病（ＰＬＬ
）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、マント
ル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、多発性骨髄腫
、節外辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、節辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、非バーキ
ット高悪性度Ｂ細胞リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＬ）、免疫芽球性大細
胞リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、Ｂ細胞前リンパ性白血病、リンパ形質細胞性
リンパ腫、脾臓辺縁帯リンパ腫、形質細胞骨髄腫、形質細胞腫、縦隔（胸腺）大Ｂ細胞リ
ンパ腫、血管内大Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、またはリンパ腫様肉芽腫症か
ら選択される血液悪性腫瘍を有する対象に、本明細書に記載される修飾されたエフェクタ
ー細胞を投与する方法が開示される。一部の例において、本明細書では、ＡＭＬまたはＣ
ＭＬから選択される血液悪性腫瘍を有する対象に、修飾されたエフェクター細胞を対象に
投与する方法が本明細書に開示される。
ウイルスベースの送達システム
本明細書に開示される特定の実施形態はまた、本明細書に記載されるポリペプチドをコ
ードする核酸が挿入される、ウイルスベースのシステムなどの送達システムを提供する。
代表的なウイルス発現ベクターには、限定されないが、アデノ随伴ウイルスベクター、ア
デノウイルスベースのベクター（例えば、Ｃｒｕｃｅｌｌ，Ｉｎｃ．（Ｌｅｉｄｅｎ、Ｔ
ｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）から入手可能なアデノウイルスベースのＰｅｒ．Ｃ６シ
ステム）、レンチウイルスベースのベクター（例えば、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉ
ｅｓ（Ｃａｒｌｓｂａｄ、Ｃａｌｉｆ．）のレンチウイルスベースのｐＬＰＩ）、レトロ
ウイルスベクター（例えば、ｐＦＢ－ＥＲＶ＋ｐＣＦＢ－ＥＧＳＨ）、およびヘルペスウ
イルスベースのベクターが含まれる。一実施形態では、ウイルスベクターはレンチウイル
スベクターである。レンチウイルスなどのレトロウイルスに由来するベクターは、導入遺
伝子の長期間の安定した組み込み、および娘細胞におけるその増殖誘導を可能にするため
、長期間の遺伝子移入を達成するための適切なツールである。レンチウイルスベクターは
、肝細胞などの非増殖細胞を形質導入することができるという点において、マウス白血病
ウイルスなどの腫瘍レトロウイルスに由来するベクターよりも付加された利点を有する。
それらはまた、免疫原性が低いという付加された利点を有する。追加の実施形態では、ウ
イルスベクターはアデノ随伴ウイルスベクターである。さらなる実施形態では、ウイルス
ベクターはレトロウイルスベクターである。一般的に、および実施形態では、適切なベク
ターは、少なくとも１つの生物において機能的な複製起点、プロモーター配列、好都合な
制限エンドヌクレアーゼ部位、および１つ以上の選択マーカーを含む（例えば、国際公開
第０１／９６５８４号パンフレット；国際公開第０１／２９０５８号パンフレット；およ
び米国特許第６，３２６，１９３号明細書）。
追加の適切なベクターは、宿主細胞のＤＮＡにランダムに組み込まれ得る組み込み発現
ベクターを含むか、または発現ベクターと宿主細胞の染色体の間の特定の組換えを可能に
する組換え部位を含み得る。このような組み込み発現ベクターは、宿主細胞の染色体の内
因性発現制御配列を利用して、所望のタンパク質の発現をもたらすことができる。部位特
異的な方法で組み込むベクターの例には、例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂ
ａｄ、Ｃａｌｉｆ．）からのｆｌｐ－ｉｎシステムの成分（例えば、ｐｃＤＮＡ（商標）
５／ＦＲＴ）、またはｃｒｅ－ｌｏｘシステム、例えば、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ（Ｌａ
Ｊｏｌｌａ、Ｃａｌｉｆ．）からのｐＥｘｃｈａｎｇｅ－６コアベクターに見出されるも
のが含まれる。宿主細胞の染色体にランダムに組み込まれるベクターの例には、例えば、
Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ、Ｃａｌｉｆ．）からのｐｃＤＮＡ３．１（Ｔ
抗原の非存在下で導入される場合）、およびＰｒｏｍｅｇａ（Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ）
からのｐＣＩまたはｐＦＮ１０Ａ（ＡＣＴ）ＦＬＥＸＩ（商標）が含まれる。追加のプロ
モーターエレメント、例えば、エンハンサーは、転写開始の頻度を調節する。典型的には
、これらは、開始部位の３０～１１０ｂｐ上流にある領域に位置されるが、多数のプロモ
ーターは、最近、同様に開始部位の下流に機能的エレメントを含むことが示されている。
多くの場合、プロモーターエレメント間の間隔は柔軟であり、そのため、エレメントが互
いに反転するかまたは移動する場合、プロモーター機能は保存される。チミジンキナーゼ
（ｔｋ）プロモーターでは、活性が低下し始める前に、プロモーターエレメント間の間隔
を５０ｂｐまで広げることができる。プロモーターに応じて、個々のエレメントが協調的
にまたは独立に機能して、転写を活性化することができると考えられる。
適切なプロモーターの一例は、前初期サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター配
列である。このプロモーター配列は、それに機能的に連結された任意のポリヌクレオチド
配列の高レベルの発現を駆動することができる強力な構成的プロモーター配列である。
適切なプロモーターの別の例は、ヒト伸長増殖因子１アルファ１（ｈＥＦ１ａ１）であ
る。実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲおよび／またはＴＣＲを含むベクター構
築物は、ｈＥＦ１ａ１機能的変異体を含む。
しかしながら、他の構成的プロモーター配列もまた使用され得、限定されないが、シミ
アンウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、マウス乳房腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）
、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）長い末端反復（ＬＴＲ）プロモーター、ＭｏＭｕＬＶ
プロモーター、トリ白血病ウイルスプロモーター、エプスタイン・バーウイルス前初期プ
ロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、ならびにヒト遺伝子プロモーター、例え
ば、限定されないが、アクチンプロモーター、ミオシンプロモーター、ヘモグロビンプロ
モーター、およびクレアチンキナーゼプロモーターが含まれる。細胞型特異的プロモータ
ー、例えば、Ｔ細胞特異的プロモーターもまた使用することができる。さらに、開示され
た実施形態は、構成的プロモーターの使用に限定されるべきではない。誘導性プロモータ
ーはまた、本明細書に開示される１つ以上の実施形態の一部として企図される。誘導性プ
ロモーターの使用は、このような発現が望まれる場合に作動可能に連結されているポリヌ
クレオチド配列の発現をオンにするか、または発現が望まれない場合に発現をオフにする
ことができる分子スイッチを提供する。誘導性プロモーターの例には、限定されないが、
メタロチオニンプロモーター、グルココルチコイドプロモーター、プロゲステロンプロモ
ーター、およびテトラサイクリンプロモーターが含まれる。一態様では、誘導性プロモー
ターは、遺伝子スイッチリガンド誘導性プロモーターであり得る。一部の場合では、誘導
性プロモーターは、ＲＨＥＯＳＷＩＴＣＨ（登録商標）遺伝子スイッチなどの低分子リガ
ンド誘導性２ポリペプチドエクジソン受容体ベースの遺伝子スイッチであり得る。
ＣＡＲもしくはＴＣＲポリペプチドまたはその一部の発現を評価するために、細胞に導
入される発現ベクターはまた、選択マーカー遺伝子もしくはレポーター遺伝子のいずれか
または両方を含み、ウイルスベクターを介してトランスフェクトまたは感染することが求
められている細胞の集団から発現細胞の同定および選択を促進することができる。他の態
様では、選択マーカーは、別個のＤＮＡ片上にあり、同時トランスフェクション手法にお
いて使用され得る。選択マーカーとレポーター遺伝子の両方に、適切な調節配列を隣接さ
せて、宿主細胞における発現を可能にすることができる。有用な選択マーカーには、例え
ば、抗生物質耐性遺伝子、例えば、ネオマイシン耐性遺伝子（ｎｅｏ）およびアンピシリ
ン耐性遺伝子などが含まれる。一部の実施形態では、切断型上皮細胞増殖因子受容体（Ｈ
ＥＲ１ｔ）タグを選択マーカー遺伝子として使用することができる。
レポーター遺伝子は、潜在的にトランスフェクトされた細胞を同定するため、および調
節配列の機能を評価するために使用され得る。一般的に、レポーター遺伝子は、レシピエ
ントの生物または組織に存在しないかまたは発現しない遺伝子であり、その発現が、いく
つかの容易に検出可能な特性、例えば、酵素活性によって明らかにされるポリペプチドを
コードする遺伝子である。レポーター遺伝子の発現は、ＤＮＡがレシピエント細胞に導入
された後の適切な時期にアッセイされる。適切なレポーター遺伝子には、ルシフェラーゼ
、ベータ－ガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、分泌
型アルカリホスファターゼをコードする遺伝子、または緑色蛍光タンパク質遺伝子が含ま
れ得る（例えば、Ui-Tei et al., FEBS Letters 479: 79-82 (2000)）。適切な発現系は
周知であり、公知の技術を使用して調製されるか、または商業的に入手することができる
。一般的に、レポーター遺伝子の最高レベルの発現を示す最小の５’フランキング領域を
有する構築物は、プロモーターとして同定される。このようなプロモーター領域は、レポ
ーター遺伝子に連結され、プロモーターにより駆動される転写を調節する能力について薬
剤を評価するために使用され得る。
一部の実施形態では、ベクターは、導入遺伝子の発現を駆動するｈＥＦ１ａ１プロモー
ター、転写を増強するウシ成長ホルモンポリＡ配列、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後
調節エレメント（ＷＰＲＥ）、ならびにｐＦＵＧＷプラスミドに由来するＬＴＲ配列を含
む。
細胞に遺伝子を導入および発現する方法は、当該技術分野において公知である。発現ベ
クターとの関連で、ベクターは、当該技術分野における任意の方法によって、宿主細胞、
例えば、哺乳動物細胞、細菌、酵母、または昆虫細胞に容易に導入することができる。例
えば、発現ベクターは、物理的、化学的、または生物学的手段によって宿主細胞に移入す
ることができる。
ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するための物理的方法には、リン酸カルシウム沈殿
、リポフェクション、粒子衝撃、マイクロインジェクション、エレクトロポレーションな
どが含まれる。ベクターおよび／または外因性核酸を含む細胞を生成する方法は、当該技
術分野において周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（Molecular Cloning: A Labor
atory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York (2001)）を参照されたい。実
施形態では、ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入する方法は、リン酸カルシウムトランス
フェクションまたはポリエチレンイミン（ＰＥＩ）トランスフェクションである。
目的のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを宿主細胞に導入する生物学的方法
には、ＤＮＡおよびＲＮＡベクターの使用が含まれる。ウイルスベクター、特にレトロウ
イルスベクターは、哺乳動物、例えば、ヒト細胞に遺伝子を挿入するための最も広く使用
されている方法になっている。他のウイルスベクターは、レンチウイルス、ポックスウイ
ルス、単純ヘルペスウイルスＩ、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルスなどに由来し
得る。例えば、米国特許第５，３５０，６７４号明細書および同第５，５８５，３６２号
明細書を参照されたい。
ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するための化学的手段には、コロイド分散系、例え
ば、高分子複合体、ナノカプセル、ミクロスフェア、ビーズ、ならびに脂質ベース系、例
えば、水中油型エマルジョン、ミセル、混合ミセル、およびリポソームが含まれる。イン
ビトロおよびインビボでの送達ビヒクルとして使用するための例示的なコロイド系は、リ
ポソーム（例えば、人工膜小胞）である。
特定の実施形態では、例示的な送達ビヒクルはリポソームである。脂質製剤の使用は、
（インビトロ、エクスビボまたはインビボにおける）宿主細胞への核酸の導入のために企
図される。別の態様では、核酸は脂質と会合していてもよい。脂質と会合している核酸は
、リポソームの水性内部に封入され、リポソームの脂質二重層内に散在され、リポソーム
とオリゴヌクレオチドの両方と会合している連結分子を介してリポソームに付着され、リ
ポソームに封入され、リポソームと複合化され、脂質を含む溶液に分散され、脂質と混合
され、脂質と組み合わされ、脂質の懸濁液として含まれ、ミセルに含まれるかもしくは複
合化され、または脂質と会合している。脂質、脂質／ＤＮＡ、または脂質／発現ベクター
会合組成物は、溶液中のいずれもの特定の構造に限定されない。例えば、それらは、ミセ
ルとしてまたは「崩壊した」構造を有する二層構造で存在し得る。それらはまた、単に溶
液中に散在し、おそらくサイズまたは形状が均一でない凝集体を形成する場合がある。脂
質は、天然に存在するまたは合成の脂質である脂肪物質である。例えば、脂質には、細胞
質で天然に存在する脂肪滴、ならびに長鎖脂肪族炭化水素およびそれらの誘導体、例えば
、脂肪酸、アルコール、アミン、アミノアルコール、アルデヒドを含む化合物のクラスが
含まれる。
使用に適した脂質は、商業的供給源から得ることができる。例えば、ジミリスチルホス
ファチジルコリン（「ＤＭＰＣ」）は、Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、Ｍｏから入手す
ることができる；リン酸ジセチル（「ＤＣＰ」）は、Ｋ＆Ｋ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ
（Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ、Ｎ．Ｙ．）から入手することができる；コレステロール（「Ｃｈ
ｏｉ」）はＣａｌｂｉｏｃｈｅｍ－Ｂｅｈｒｉｎｇから入手することができる；ジミリス
チルホスファチジルグリセロール（「ＤＭＰＧ」）および他の脂質は、Ａｖａｎｔｉ Ｐ
ｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ，Ｉｎｃ．（Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、Ａｌａ．）から入手するこ
とができる。クロロホルムまたはクロロホルム／メタノール中の脂質のストック溶液は、
約－２０℃で保存され得る。メタノールよりも蒸発しやすいため、クロロホルムを唯一の
溶媒として使用する。「リポソーム」は、封入された脂質二重層または凝集体の生成によ
って形成される、様々な単一および多層の脂質ビヒクルを包含する総称である。リポソー
ムは、リン脂質二重層膜および内部水性媒体を有する小胞構造を有するものとして特徴付
けることができる。多重膜リポソームは、水性媒体によって分離された複数の脂質層を有
する。それらは、リン脂質が過剰の水溶液に懸濁される場合に自然に形成される。脂質成
分は、閉じた構造が形成される前に自己再構成を受け、脂質二重層の間に水と溶解した溶
質を閉じ込める（Ghosh et al., Glycobiology 5: 505-10 (1991)）。しかしながら、通
常の小胞構造とは異なる溶液中での構造を有する組成物もまた包含される。例えば、脂質
は、ミセル構造をとるか、または単に脂質分子の不均一な凝集体として存在する場合があ
る。リポフェクタミン－核酸複合体もまた企図される。
非ウイルスベースの送達システム
一部の例では、本明細書に記載されるポリペプチドはまた、脊椎動物の染色体にＤＮＡ
配列を導入するために、合成ＤＮＡトランスポゾンシステムを指す「Ｓｌｅｅｐｉｎｇ
Ｂｅａｕｔｙ（ＳＢ）トランスポゾンシステム」などの非ウイルスベースの送達システム
を使用して、Ｔ細胞などのエフェクター細胞に導入することができる。このシステムは、
例えば、米国特許第６，４８９，４５８号明細書および同第８，２２７，４３２号明細書
に記載されている。
Ｓｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙトランスポゾンシステムは、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅ
ａｕｔｙ（ＳＢ）トランスポザーゼおよびＳＢトランスポゾンで構成される。ＤＮＡトラ
ンスポゾンは、１つのＤＮＡ部位から別の部位に、単純なカットアンドペーストで移行す
る。転位は、定義されたＤＮＡセグメントが１つのＤＮＡ分子から切り出され、同じかも
しくは異なるＤＮＡ分子またはゲノムの別の部位に移動する正確なプロセスである。他の
Ｔｃ１／ｍａｒｉｎｅｒタイプのトランスポザーゼと同様に、ＳＢトランスポザーゼは、
トランスポゾンをレシピエントのＤＮＡ配列におけるＴＡジヌクレオチド塩基対に挿入す
る。挿入部位は、同じＤＮＡ分子内の別の場所であるか、または別のＤＮＡ分子（もしく
は染色体）であり得る。ヒトを含む哺乳動物のゲノムでは、約２億個のＴＡ部位がある。
ＴＡ挿入部位は、トランスポゾン組み込みのプロセスで複製される。ＴＡ配列のこの複製
は、転位の特徴であり、いくつかの実験においてその機構を確認するために使用される。
トランスポザーゼは、トランスポゾン内でコードされるか、またはトランスポザーゼを別
の供給源から供給することができ、その場合、トランスポゾンは非自律的エレメントにな
る。非自律的トランスポゾンは、挿入後、独立して切り出しおよび再挿入を続けることが
できないため、遺伝的ツールとして最も有用である。ＳＢトランスポゾンは、脊椎動物の
ゲノムへの遺伝子の導入および遺伝子治療のための非ウイルスベクターとして使用するこ
とが想定される。
簡単に述べれば、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙ（ＳＢ）システム（Hackett et al.
, Mol Ther 18:674-83, (2010）は、Ｔ細胞を遺伝的に修飾するように適合された（Coope
r et al., Blood 105:1622-31, (2005)）。これには、２つのステップが伴う：（ｉ）Ｓ
Ｂトランスポゾン［すなわち、Ｔ細胞特異性を再方向付けするためのキメラ抗原受容体（
ＣＡＲ）（Jin et al., Gene Ther 18:849-56, (2011); Kebriaei et al., Hum Gene The
r 23:444-50, (2012)］およびＳＢトランスポザーゼを発現するＤＮＡプラスミドの電気
的導入、および（ｉｉ）Ｋ５６２細胞株に由来するデザイナー人工抗原提示細胞（ＡａＰ
Ｃ）（ＡａＰＣ（Ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ａｎｄ Ｐｒｏｐａｇａｔｉｎｇ Ｃｅｌｌ）
としても公知である）上での、組み込み体を安定に発現するＴ細胞の増殖および拡大。一
実施形態では、ＳＢトランスポゾンシステムは、ｍｂＩＬ－１５、細胞タグおよび／また
はキメラ抗原受容体をコードするコード配列を含む。一実施形態では、ＳＢトランスポゾ
ンシステムは、ｍｂＩＬ－１５、細胞タグおよび／またはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）をコー
ドするコード配列を含む。別の実施形態では、第２のステップ（ｉｉ）が排除され、遺伝
子修飾されたＴ細胞が凍結保存されるかまたは直ちに患者に注射される。特定の実施形態
では、遺伝子修飾されたＴ細胞は、患者に注射される前に凍結保存されない。
このようなシステムは、例えば、参照により全体が本明細書に組み込まれる、Hudecek
et al., Critical Reviews in Biochemistry and Molecular Biology, 52:4, 355-380 (2
017), Singh et al., Cancer Res (8):68 (2008). April 15, 2008 and Maiti et al., J
Immunother. 36(2): 112-123 (2013)に記載されている。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるポリペプチド、およびＩＬ－２、ＩＬ－２
２またはＩＬ－１５などのサイトカイン、例えば、膜結合型ＩＬ－１５（ｍｂＩＬ－１５
）を発現する修飾されたエフェクター細胞（例えば、ＣＡＲエフェクター細胞またはＴＣ
Ｒエフェクター細胞）は、トランスポゾンＤＮＡプラスミドベクターにコードされ、ＳＢ
トランスポザーゼは別のベクターにコードされる。特定の実施形態では、ＣＡＲは、トラ
ンスポゾンＤＮＡプラスミドベクターにコードされ、ｍｂＩＬ－１５は、第２のトランス
ポゾンＤＮＡプラスミドベクターにコードされ、ＳＢトランスポザーゼは、第３のＤＮＡ
プラスミドベクターにコードされる。一部の実施形態では、ｍｂＩＬ－１５は、切断型上
皮細胞増殖因子受容体タグでコードされる。
外因性核酸を宿主細胞に導入するか、または他には細胞を本明細書に記載されるポリペ
プチドに曝露するために使用される方法に関係なく、宿主細胞において組換えＤＮＡ配列
の存在を確認するために、様々なアッセイを行うことができる。このようなアッセイには
、例えば、当業者に周知である分子アッセイ、例えば、サザンブロッティングおよびノー
ザンブロッティング、ＲＴ－ＰＣＲおよびＰＣＲ；「生化学的」アッセイ、例えば、免疫
学的手段（ＥＬＩＳＡおよびウエスタンブロット）によって、または本開示の範囲内に入
る薬剤を同定するために本明細書に記載されるアッセイによって、特定のペプチドの存在
または非存在を検出するものが含まれる。
実施形態では、本明細書に記載されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドおよ
び他の遺伝的エレメントを含む修飾されたエフェクター細胞は、ＳＢ１１トランスポゾン
システム、ＳＢ１００Ｘトランスポゾンシステム、ＳＢ１１０トランスポゾンシステム、
ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンシステム（例えば、参照により全体が本明細書に組み入
れられる、米国特許第９，２２８，１８０号明細書、Wilson et al, “PiggyBac Transpo
son-mediated Gene Transfer in Human Cells,” Molecular Therapy 15:139-145 (2007)
を参照されたい）、および／またはｐｉｇｇｙＢａｔトランスポゾンシステム（例えば、
Mitra et al., “Functional characterization of piggyBat from the bat Myotis luci
fugus unveils an active mammalian DNA transposon,” Proc. Natl. Acad. Sci USA 11
0:234-239 (2013)を参照されたい）を使用して細胞に送達される。追加のトランスポザー
ゼおよびトランスポゾンシステムは、各々が、参照により全体が本明細書に組み込まれる
米国特許第７，１４８，２０３号明細書；同第８，２２７，４３２号明細書；米国特許出
願公開第２０１１／０１１７０７２号明細書；Mates et al., Nat Genet, 41(6):753-61
(2009). doi: 10.1038/ng.343. Epub 2009 May 3, Gene Ther., 18(9):849-56 (2011). d
oi: 10.1038/gt.2011.40. Epub 2011 Mar 31およびIvics et al., Cell. 91(4):501-10,
(1997)に提供される。
他の実施形態では、本明細書に記載されるポリペプチド、およびサイトカイン、例えば
、ｍｂＩＬ－１５および／またはタグなどの他の遺伝エレメントを、リコンビナーゼおよ
び組み込み発現ベクターを介して免疫エフェクター細胞のＤＮＡに組み込むことができる
。このようなベクターは、宿主細胞のＤＮＡにランダムに組み込むことができるか、また
は組換え部位を含めて、発現ベクターと宿主細胞の染色体の間の特定の組換えを可能にす
ることもできる。このような組み込み発現ベクターは、宿主細胞の染色体の内因性発現制
御配列を利用して、所望のタンパク質の発現をもたらすことができる。一部の実施形態で
は、標的化された組み込みは、組み込み部位に隣接する配列に相同であるドナーポリヌク
レオチド上の配列の存在によって促進される。例えば、本明細書に記載されるドナーポリ
ヌクレオチドを使用した標的化された組み込みは、従来のトランスフェクション技術、例
えば、相同組換えにより遺伝子ノックアウトまたはノックインを作製するために使用され
る技術に従って達成され得る。他の実施形態では、標的化された組み込みは、組み込み部
位に隣接する配列に相同であるドナーポリヌクレオチド上の配列の存在によって、および
部位特異的リコンビナーゼの存在下で細胞をドナーポリヌクレオチドと接触させることに
よって促進される。部位特異的リコンビナーゼ、または単にリコンビナーゼとは、その互
換性のある組換え部位間の保存的な部位特異的組換えを触媒するポリペプチドを意味する
。本明細書において使用する場合、部位特異的リコンビナーゼには、天然ポリペプチド、
ならびに活性を保持する誘導体、変異体および／または断片、ならびに活性を保持するリ
コンビナーゼをコードする天然ポリヌクレオチド、誘導体、変異体および／または断片が
含まれる。
リコンビナーゼは、標的化ベクターの導入の前、それと同時、または後に標的細胞に導
入することができる。リコンビナーゼは、例えば、リポソーム、被覆された粒子、または
マイクロインジェクションを使用して、タンパク質として細胞に直接導入することができ
る。あるいは、適切な発現ベクターを使用して、リコンビナーゼをコードするポリヌクレ
オチド（ＤＮＡまたはメッセンジャーＲＮＡのいずれか）を細胞に導入することができる
。上記の標的化ベクター成分は、目的のリコンビナーゼをコードする配列を含む発現カセ
ットの構築に有用である。しかしながら、リコンビナーゼの発現は、例えば、リコンビナ
ーゼの発現を、調節可能なプロモーター（すなわち、その発現が選択的に誘導または抑制
され得るプロモーター）の制御下に配置することによって、他の方法で調節され得る。
リコンビナーゼは、インテグラーゼまたはリゾルバーゼファミリーに由来し得る。リコ
ンビナーゼのインテグラーゼファミリーには１００以上のメンバーがあり、例えば、ＦＬ
Ｐ、Ｃｒｅ、およびラムダインテグラーゼが含まれる。インテグラーゼファミリーは、チ
ロシンファミリーまたはラムダインテグラーゼファミリーとも呼ばれ、触媒チロシンのヒ
ドロキシル基を使用して、ＤＮＡのホスホジエステル結合に対する求核攻撃を行う。典型
的には、チロシンファミリーのメンバーは、最初にＤＮＡにニックを入れ、後に二本鎖切
断を形成する。チロシンファミリーインテグラーゼの例には、Ｃｒｅ、ＦＬＰ、ＳＳＶ１
、およびラムダ（λ）インテグラーゼが含まれる。セリンリコンビナーゼファミリーとし
ても公知であるレゾルバーゼファミリーでは、保存されたセリン残基が、ＤＮＡ標的部位
への共有結合を形成する（Grindley, et al., (2006) Ann Rev Biochem 16:16）。
一実施形態では、リコンビナーゼは、ＳＰβｃ２リコンビナーゼ、ＳＦ３７０．１リコ
ンビナーゼ、Ｂｘｂ１リコンビナーゼ、Ａ１１８リコンビナーゼおよびφＲｖ１リコンビ
ナーゼからなる群から選択されるリコンビナーゼをコードする核酸配列を含む単離された
ポリヌクレオチド配列である。セリンリコンビナーゼの例は、全体が参照により本明細書
に組み入れられる米国特許第９，０３４，６５２号明細書に詳細に記載されている。
本発明の実施において使用するためのリコンビナーゼは、組換えにより生成されるか、
または精製され得る。所望のリコンビナーゼ活性を有するポリペプチドは、タンパク質硫
酸アンモニウム沈殿、精製の分野において公知である方法、例えば、限定されないが、サ
イズ分画、アフィニティークロマトグラフィー、ＨＰＬＣ、イオン交換クロマトグラフィ
ー、ヘパリンアガロースアフィニティークロマトグラフィー（例えば、Thorpe & Smith,
Proc. Nat. Acad. Sci. 95:5505-5510, 1998）によって、所望の純度に精製することがで
きる。
一実施形態では、リコンビナーゼは、任意の適切な方法によって組換えが望まれる組換
え付着部位を含む真核細胞に導入することができる。例えば、マイクロインジェクション
または他の方法により、機能性タンパク質を細胞に導入する方法は、当該技術分野におい
て周知である。精製されたリコンビナーゼタンパク質の導入は、タンパク質およびその機
能の一時的な存在を保証し、これはしばしば好ましい実施形態である。あるいは、リコン
ビナーゼをコードする遺伝子は、細胞を形質転換するために使用される発現ベクターに含
まれ得、リコンビナーゼをコードするポリヌクレオチドは、真核細胞におけるポリヌクレ
オチドの発現を媒介するプロモーターに作動可能に連結される。リコンビナーゼポリペプ
チドはまた、リコンビナーゼポリペプチドをコードするメッセンジャーＲＮＡにより真核
細胞に導入することができる。一般的には、リコンビナーゼは、修飾されるゲノムへの核
酸断片の挿入に必要な時間だけ存在することが好ましい。したがって、ほとんどの発現ベ
クターに関連付けられる永続性の欠如は、有害であるとは予想されない。目的の外因性ポ
リヌクレオチドの導入の前、後、またはそれと同時に、リコンビナーゼ遺伝子を細胞に導
入することができる。一実施形態では、リコンビナーゼ遺伝子は、挿入されるべきポリヌ
クレオチドを有するベクター内に存在する；リコンビナーゼ遺伝子は、ポリヌクレオチド
内に含めることさえできる。
一実施形態では、部位特異的組換えのための方法は、第１の組換え部位および第２の組
換え部位を与え；第１および第２の組換え部位を原核生物のリコンビナーゼポリペプチド
と接触させ；組換え部位間で組換えをもたらすことを含み、リコンビナーゼポリペプチド
は、第１および第２の組換え部位間の組換えを媒介することができ、第１の組換え部位は
ａｔｔＰまたはａｔｔＢであり、第２の組換え部位はａｔｔＢまたはａｔｔＰ、およびリ
コンビナーゼは、リステリア・モノサイトゲネス（Listeria monocytogenes）ファージリ
コンビナーゼ、化膿連鎖球菌（Streptococcus pyogenes）ファージリコンビナーゼ、枯草
菌（Bacillus subtilis）ファージリコンビナーゼ、ヒト型結核菌（Mycobacterium tuber
culosis）ファージリコンビナーゼ、またはスメグマ菌（Mycobacterium smegmatis）ファ
ージリコンビナーゼであり得、ただし、第１の組換え付着部位がａｔｔＢである場合、第
２の組換え付着部位はａｔｔＰであり、および第１の組換え付着部位がａｔｔＰである場
合、第２の組換え付着部位はａｔｔＢである。
さらなる実施形態は、ゲノムが修飾されるべき細胞への部位特異的リコンビナーゼの導
入を提供する。一実施形態は、真核細胞において部位特異的な組換えを得るための方法に
関し、第１の組換え付着部位および第２の組換え付着部位を含む真核細胞を用意し；第１
および第２の組換え付着部位を原核生物のリコンビナーゼポリペプチドと接触させ、組換
え付着部位間で組換えをもたらすことを含み、リコンビナーゼポリペプチドは、第１およ
び第２の組換え付着部位間の組換えを媒介することができ、第１の組換え付着部位はファ
ージゲノムの組換え付着部位（ａｔｔＰ）または細菌ゲノムの組換え付着部位（ａｔｔＢ
）であり、第２の組換え付着部位はａｔｔＢまたはａｔｔＰであり、リコンビナーゼは、
リステリア・モノサイトゲネス（Listeria monocytogenes）ファージリコンビナーゼ、化
膿連鎖球菌（Streptococcus pyogenes）ファージリコンビナーゼ、枯草菌（Bacillus sub
tilis）ファージリコンビナーゼ、ヒト型結核菌（Mycobacterium tuberculosis）ファー
ジリコンビナーゼ、およびスメグマ菌（Mycobacterium smegmatis）ファージリコンビナ
ーゼからなる群から選択され、ただし、第１の組換え付着部位がａｔｔＢである場合、第
２の組換え付着部位はａｔｔＰであり、および第１の組換え付着部位がａｔｔＰである場
合、第２の組換え付着部位はａｔｔＢである。一実施形態では、リコンビナーゼは、Ａ１
１８リコンビナーゼ、ＳＦ３７０．１リコンビナーゼ、ＳＰβｃ２リコンビナーゼ、φＲ
ｖ１リコンビナーゼ、およびＢｘｂ１リコンビナーゼからなる群から選択される。一実施
形態では、組換えは、組込みをもたらす。
外因性核酸を宿主細胞に導入するために使用される方法に関係なく、宿主細胞における
組換えＤＮＡ配列の存在を確認するために、様々なアッセイを行うことができる。このよ
うなアッセイには、例えば、当業者に周知である「分子生物学的アッセイ」、例えば、サ
ザンブロッティングおよびノーザンブロッティング、ＲＴ－ＰＣＲおよびＰＣＲ；「生化
学的」アッセイ、例えば、免疫学的手段（ＥＬＩＳＡおよびウエスタンブロット）によっ
て、または本発明の範囲内に入るペプチドもしくはタンパク質もしくは核酸を同定するた
めに本明細書に記載されるアッセイによって、特定のペプチドの存在または非存在を検出
するものが含まれる。
免疫エフェクター細胞供給源
特定の態様では、本明細書に記載される実施形態は、本明細書に記載されるポリペプチ
ドを発現する抗原特異的に再方向付けされる免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｎ
Ｋ細胞またはＮＫ Ｔ細胞）を作製しおよび／または拡大する方法を含み、この方法は、
ポリペプチドをコードするＤＮＡ（またはＲＮＡ）構築物を含む発現ベクターで細胞をト
ランスフェクトし、次に、任意選択で、フィーダー細胞、組換え抗原、または受容体に対
する抗体で細胞を刺激して、細胞を増殖させることを含む。特定の態様では、ＣＡＲまた
はＴＣＲを発現するように操作された細胞（または細胞集団）は、幹細胞、ｉＰＳ細胞、
免疫エフェクター細胞またはこれらの細胞の前駆体である。
免疫エフェクター細胞の供給源は、同種供給源と自家供給源の両方を含み得る。一部の
場合では、免疫エフェクター細胞は、幹細胞または人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）から分
化され得る。したがって、実施形態に従って操作するための細胞は、臍帯血、末梢血、ヒ
ト胚性幹細胞、またはｉＰＳＣから単離することができる。例えば、同種異系Ｔ細胞は、
キメラ抗原受容体を含むように（および、任意選択で、機能的ＴＣＲを欠くように）修飾
され得る。一部の態様では、免疫エフェクター細胞は、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）
に由来するＴ細胞などの初代ヒトＴ細胞である。ＰＢＭＣは、末梢血から、またはＧ－Ｃ
ＳＦ（顆粒球コロニー刺激因子）による刺激後の骨髄からのから、または臍帯血から回収
することができる。一部の実施形態では、Ｇ－ＣＳＦは、配列番号５２に示される配列に
対して少なくとも８０％相同であるペプチド配列、または配列番号１４６に示される配列
に対して少なくとも８０％相同であるヌクレオチド配列によってコードされるペプチド配
列を含む。
トランスフェクションまたは形質導入（例えば、ＣＡＲ発現構築物による）後、細胞は
、直ちに注射され得るかまたは凍結保存され得る。特定の態様では、トランスフェクショ
ン後、細胞は、細胞への遺伝子移入後の約１、２、３、４、５日またはそれを超える日以
内にバルク集団としてエクスビボで数日、数週間、または数カ月間、増殖誘導され得る。
さらなる態様では、トランスフェクション後、トランスフェクタントがクローニングされ
、単一の組み込まれたかもしくはエピソームで維持された発現カセットまたはプラスミド
の存在を示すクローン、およびキメラ抗原受容体の発現がエクスビボで拡大される。拡大
用に選択されたクローンは、抗原発現標的細胞を特異的に認識し、溶解する能力を示す。
組換えＴ細胞は、ＩＬ－２、または共通のガンマ鎖に結合する他のサイトカイン（例え
ば、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１など）による刺激によって拡大され
得る。組換えＴ細胞は、人工抗原提示細胞による刺激によって拡大され得る。組換えＴ細
胞は、人工抗原提示細胞上で、またはＴ細胞表面上のＣＤ３を架橋するＯＫＴ３などの抗
体を用いて拡大され得る。組換えＴ細胞のサブセットは、磁気ビーズベースの単離方法お
よび／または蛍光活性化細胞選別技術を使用してさらに選択され、ＡａＰＣとともにさら
に培養され得る。さらなる態様では、遺伝子修飾された細胞は、凍結保存され得る。
Ｔ細胞はまた、多数の供給源から得ることができ、末梢血、骨髄、リンパ節組織、臍帯
血、胸腺組織、感染部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、および腫瘍（腫瘍浸潤リン
パ球）が挙げられる。本明細書に記載される特定の実施形態では、当該技術分野において
利用可能な任意の数のＴ細胞株を使用することができる。特定の実施形態では、Ｔ細胞は
、Ｆｉｃｏｌｌ（登録商標）分離などの当業者に公知である任意の数の技術を使用して、
対象から回収された一群の血液から得ることができる。実施形態では、個体の循環血液由
来の細胞は、アフェレーシスによって得られる。アフェレーシス生成物には、リンパ球、
例えば、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球、赤血球、および血小板が含ま
れる。一実施形態では、アフェレーシスによって回収された細胞を洗浄して、血漿画分を
除去し、その後の処理ステップのために細胞を適切な緩衝液または培地に入れることがで
きる。一実施形態では、細胞は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄される。代替の
実施形態では、洗浄溶液はカルシウムを欠き、マグネシウムを欠く場合があるかまたはす
べてではないにしても多くの二価カチオンを欠く場合がある。カルシウムの非存在下での
最初の活性化ステップは、活性化の拡大をもたらす。当業者が容易に理解するように、洗
浄ステップは、半自動化された「フロースルー」遠心分離機（例えば、Ｃｏｂｅ ２９９
１細胞プロセッサー、Ｂａｘｔｅｒ ＣｙｔｏＭａｔｅ、またはＨａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ
Ｃｅｌｌ Ｓａｖｅｒ ５）を製造元の指示に従って使用することなどの、当業者に公
知である方法によって達成され得る。洗浄後、細胞は、様々な生体適合性緩衝液、例えば
、Ｃａ２＋不含ＰＢＳ、Ｍｇ２＋不含ＰＢＳ、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａ、または緩衝液
ありまたはなしの他の生理食塩水に再懸濁され得る。あるいは、アフェレーシス試料の望
ましくない成分を除去し、細胞を培養培地に直接再懸濁することができる。
別の実施形態では、Ｔ細胞は、例えば、ＰＥＲＣＯＬＬ（登録商標）勾配による遠心分
離によって、または向流遠心分離溶出によって、赤血球を溶解し、単球を枯渇させること
によって、末梢血リンパ球から単離される。ＣＤ３＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋
、ＣＤ４５ＲＡ＋、およびＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞などのＴ細胞の特定の亜集団は、ポジテ
ィブまたはネガティブ選択技術によってさらに分離することができる。例えば、一実施形
態では、Ｔ細胞は、所望のＴ細胞のポジティブ選択に十分な時間、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（
登録商標）Ｍ－４５０ ＣＤ３／ＣＤ２８ Ｔなどの抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８（すなわち、
３ｘ２８）結合ビーズとのインキュベーションにより単離される。一実施形態では、時間
は約３０分である。さらなる実施形態では、時間は３０分から３６時間またはそれを超え
る範囲であり、その間のすべての整数値である。さらなる実施形態では、時間は少なくと
も１、２、３、４、５、または６時間である。さらに別の実施形態では、時間は１０～２
４時間である。一実施形態では、インキュベーション時間は２４時間である。白血病を有
する患者からＴ細胞を分離するために、２４時間などの長いインキュベーション時間を使
用が細胞収量を増加させることができる。腫瘍組織から、または免疫不全の個体から腫瘍
浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を分離する場合など、他の細胞型と比較してＴ細胞が少ない任意
の状況においては、より長いインキュベーション時間を使用して、Ｔ細胞を分離すること
ができる。さらに、より長いインキュベーション時間の使用は、ＣＤ８＋Ｔ細胞の捕捉効
率を増加させることができる。したがって、時間を単に短くするかもしくは長くすること
によって、Ｔ細胞は、ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズに結合することができ、および／またはビ
ーズ対Ｔ細胞の比（本明細書においてさらに記載される）を増加もしくは減少させること
によって、Ｔ細胞の亜集団は、培養開始時にまたはプロセス中の他の時間点で優先的にま
たは反対に選択され得る。さらに、ビーズまたは他の表面上の抗ＣＤ３および／または抗
ＣＤ２８抗体の比を増加または減少させることによって、Ｔ細胞の亜集団は、培養開始時
または他の所望の時間点で優先的にまたは反対に選択され得る。当業者は、複数回の選択
もまた本明細書において使用し得ることを認識する。特定の実施形態では、選択手法を行
い、「選択されていない」細胞を活性化および拡大プロセスで使用することが望ましい場
合がある。「選択されていない」細胞は、さらなる回の選択に供され得る。
ネガティブ選択によるＴ細胞集団の濃縮は、ネガティブに選択された細胞に特有の表面
マーカーに対する抗体の組合せを用いて達成することができる。１つの方法は、ネガティ
ブに選択された細胞に存在する細胞表面マーカーに対するモノクローナル抗体のカクテル
を使用するネガティブ磁気免疫付着またはフローサイトメトリーによる細胞の選別および
／または選択である。例えば、ネガティブ選択によってＣＤ４＋細胞を濃縮するために、
モノクローナル抗体カクテルには、典型的には、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ
１６、ＨＬＡ－ＤＲ、およびＣＤ８に対する抗体が含まれる。特定の実施形態では、典型
的にはＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＧＩＴＲ＋、およびＦｏｘＰ３＋を発現
する調節性Ｔ細胞を濃縮するかまたはポジティブに選択することが望ましい場合がある。
あるいは、特定の実施形態では、Ｔ調節細胞は、抗ＣＤ２５結合ビーズまたは他の類似し
た選択方法によって枯渇される。
ポジティブ選択またはネガティブ選択によって所望の細胞集団を単離するために、細胞
および表面（例えば、ビーズなどの粒子）の濃度を変化させることができる。特定の実施
形態では、細胞とビーズの最大の接触を確実にするために、ビーズおよび細胞がともに混
合される体積を著しく減少させる（すなわち、細胞の濃度を増加させる）ことが望ましい
場合がある。例えば、一実施形態では、２０億個の細胞／ｍｌの濃度が使用される。一実
施形態では、１０億個の細胞／ｍｌの濃度が使用される。さらなる実施形態では、１億個
の細胞／ｍｌを超える濃度が使用される。さらなる実施形態では、１０００万、１５００
万、２０００万、２５００万、３０００万、３５００万、４０００万、４５００万、また
は５０００万個の細胞／ｍｌの細胞濃度が使用される。さらに別の実施形態では、７５０
０万、８０００万、８５００万、９０００万、９５００万、または１億個の細胞／ｍｌの
細胞の濃度が使用される。さらなる実施形態では、１億２５００万個または１億５０００
万個の細胞／ｍｌの濃度が使用され得る。高濃度の使用は、細胞収量、細胞活性化、およ
び細胞拡大の増加をもたらすことができる。さらに、高細胞濃度の使用は、ＣＤ２８陰性
Ｔ細胞などの目的の標的抗原を弱く発現する可能性がある細胞、または多くの腫瘍細胞が
存在する試料（すなわち、白血病血液、腫瘍組織など）からの細胞をより効率的に捕捉す
ることができる。このような細胞の集団は、治療的価値を有する場合があり、得ることが
望ましい。例えば、高濃度の細胞の使用は、通常、ＣＤ２８発現が弱いＣＤ８＋Ｔ細胞を
より効率的に選択することができる。
関連する実施形態では、より低い濃度の細胞を使用することが望ましい場合がある。Ｔ
細胞と表面（例えば、ビーズなどの粒子）の混合物を有意に希釈することによって、粒子
と細胞間の相互作用を最小限にする。これは、粒子に結合される所望の抗原を大量に発現
する細胞を選択する。例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞は、より高いレベルのＣＤ２８を発現し、
希釈濃度においてＣＤ８＋Ｔ細胞よりも効率的に捕捉される。一実施形態では、使用され
る細胞の濃度は、５×１０６／ｍｌである。他の実施形態では、使用される濃度は、約１
×１０５／ｍｌ～１×１０６／ｍｌ、およびその間の任意の整数値であり得る。
他の実施形態では、細胞は、２～１０℃または室温のいずれかで、様々な速度で様々な
長さの時間、ローター上でインキュベートされ得る。
刺激のためのＴ細胞はまた、洗浄ステップ後に凍結され得る。血漿および血小板を除去
する洗浄ステップの後、細胞は、凍結溶液中に懸濁され得る。多くの凍結溶液およびパラ
メーターが当該技術分野において公知であり、これに関連して有用である一方、１つの方
法は、２０％ＤＭＳＯおよび８％ヒト血清アルブミンを含むＰＢＳ、または１０％デキス
トラン４０および５％デキストロース、２０％ヒト血清アルブミンおよび７．５％ＤＭＳ
Ｏ、または３１．２５％Ｐｌａｓｍａｌｙｔｅ－Ａ、３１．２５％デキストロース５％、
０．４５％ＮａＣｌ、１０％デキストラン４０および５％デキストロース、２０％ヒト血
清アルブミン、および７．５％ＤＭＳＯを含む培養培地、または、例えば、Ｈｅｓｐａｎ
およびＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａを含む他の適切な細胞凍結培地を使用することを伴い、
次に、細胞は１℃／分の速度で－８０℃に凍結され、液体窒素貯蔵タンクの気相に貯蔵さ
れる。制御されていた凍結の他の方法、ならびに即座に－２０℃でまたは液体窒素中で、
制御されていない凍結の方法を使用することができる。
特定の実施形態では、凍結保存された細胞は、本明細書に記載されるように解凍および
洗浄され、本明細書に記載される方法を使用する活性化の前に、室温で１時間静置される
。
また、本明細書に記載されるような拡大された細胞が必要とされる場合の前の期間で、
対象由来の血液試料またはアフェレーシス生成物の回収が企図される。したがって、拡大
されるべき細胞の供給源は、必要な任意の時間点で回収することができ、Ｔ細胞などの所
望の細胞を単離および凍結して、後に、本明細書に記載されるものなどのＴ細胞療法から
恩恵を受ける、任意の数の疾患または状態に対するＴ細胞療法において使用することがで
きる。一実施形態では、血液試料またはアフェレーシスは、一般的に健康な対象から採取
される。いまだ疾患を発症していない一般的に健康な対象から採取され、目的の細胞は、
後に使用するために単離および凍結される。特定の実施形態では、Ｔ細胞は、拡大され、
凍結され、後の時間で使用され得る。特定の実施形態では、試料は、本明細書に記載され
る特定の疾患の診断の直後であるが、任意の治療前に患者から回収される。さらなる実施
形態では、細胞は、限定されないが、ナタリズマブ、エファリズマブ、抗ウイルス剤、化
学療法、放射線、免疫抑制剤、例えば、シクロスポリン、アザチオプリン、メトトレキサ
ート、ミコフェノール酸、およびＦＫ５０６、抗体、または他の免疫除去剤（immunoabla
tive agent）、例えば、ＣＡＭＰＡＴＨ、抗ＣＤ３抗体、シトキサン、フルダラビン、シ
クロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸、ステロイド、ＦＲ９０１
２２８、および放射線を含む、任意の数の関連する治療様式の前に、対象からの血液試料
またはアフェレーシスから単離される。これらの薬物は、カルシウム依存性ホスファター
ゼカルシニューリン（シクロスポリンおよびＦＫ５０６）、または増殖因子により誘導さ
れるシグナル伝達に重要なｐ７０Ｓ６キナーゼ（ラパマイシン）のいずれかを阻害する（
Liu et al., Cell 66:807-815, (1991)；Henderson et al., Immun 73:316-321, (1991)
； Bierer et al., Curr. Opin. Immun 5:763-773, (1993)）。さらなる実施形態では、
細胞は、患者のために単離され、骨髄または幹細胞移植、化学療法剤、例えば、フルダラ
ビン、外照射療法（ＸＲＴ）、シクロホスファミド、または抗体、例えば、ＯＫＴ３もし
くはＣＡＭＰＡＴＨのいずれかを用いたＴ細胞除去療法と（例えば、前、同時または後に
）併用した、後の使用のために凍結される。別の実施形態では、細胞は、ＣＤ２０と反応
する薬剤、例えばリツキサンなどのＢ細胞除去療法前に単離され、治療のために後の使用
のために凍結することができる。
さらなる実施形態において、Ｔ細胞は、治療の直後に患者から得られる。これに関して
、特定のがん治療、特に免疫系を損傷する薬物による治療後、患者が通常治療から回復し
ている期間中の治療直後に、得られるＴ細胞の質が最適であり、エクスビボでそれらが拡
大する能力を向上させ得ることが観察されている。同様に、本明細書に記載される方法を
用いたエクスビボでの操作後、これらの細胞は、増強された生着およびインビボ拡大にと
って好ましい状態であり得る。したがって、この回復期の間に、Ｔ細胞、樹状細胞、また
は造血系統の他の細胞を含む血液細胞を収集することが企図される。さらに、特定の実施
形態では、動員（例えば、ＧＭ－ＣＳＦによる動員）および条件付け計画を使用して、特
に治療後の定義された時間枠の間、特定の細胞型の再増殖、再循環、再生、および／また
は拡大が好まれる対象における状態を作り出すことができる。例示的な細胞型には、Ｔ細
胞、Ｂ細胞、樹状細胞、および免疫系の他の細胞が含まれる。
エフェクター細胞の活性化および拡大
本明細書に記載される望ましいポリペプチドを発現するためのエフェクター細胞、例え
ば、Ｔ細胞の遺伝子修飾の前または後のいずれであっても、細胞は、一般的には、例えば
、米国特許第６，３５２，６９４号明細書；同第６，５３４，０５５号明細書；同第６，
９０５，６８０号明細書；同第６，６９２，９６４号明細書；同第５，８５８，３５８号
明細書；同第６，８８７，４６６号明細書；同第６，９０５，６８１号明細書；同第７，
１４４，５７５号明細書；同第７，０６７，３１８号明細書；同第７，１７２，８６９号
明細書；同第７，２３２，５６６号明細書；同第７，１７５，８４３号明細書；同第５，
８８３，２２３号明細書；同第６，９０５，８７４号明細書；同第６，７９７，５１４号
明細書；同第６，８６７，０４１号明細書；および米国特許出願公開第２００６／０１２
１００５号明細書に記載される方法を用いて活性化および拡大され得る。
一般的に、本明細書に記載されるエフェクター細胞は、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体関連シグ
ナルを刺激する薬剤、および細胞の表面上の共刺激分子を刺激するリガンドを付着した表
面との接触によって拡大される。特に、エフェクター細胞集団は、本明細書に記載される
ように、例えば、抗ＣＤ３抗体、もしくはその抗原結合断片、または表面に固定化された
抗ＣＤ２抗体との接触によって、あるいはカルシウムイオノフォアと組み合わせたプロテ
インキナーゼＣ活性化因子（例えば、ブリオスタチン）との接触によって刺激され得る。
細胞の表面上のアクセサリー分子の共刺激のために、アクセサリー分子を結合するリガン
ドが使用される。例えば、エフェクター細胞の集団、例えば、Ｔ細胞は、Ｔ細胞の増殖を
刺激するのに適切な条件下で、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体と接触させることがで
きる。ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を刺激するために、抗ＣＤ３抗体およ
び抗ＣＤ２８抗体。抗ＣＤ２８抗体の例には、９．３、Ｂ－Ｔ３、ＸＲ－ＣＤ２８（Ｄｉ
ａｃｌｏｎｅ、Ｂｅｓａｎｃｏｎ、Ｆｒａｎｃｅ）が含まれ、当該技術分野において一般
的に公知である他の方法と同様に使用することができる（Berg et al., Transplant Proc
. 30(8):3975-3977, (1998)；Haanen et al., J. Exp.Med. 190(9):13191328, (1999)；G
arland et al., J. Immunol Meth. 227(1-2):53-63, (1999)）。
特定の実施形態では、エフェクター細胞の一次刺激シグナルおよび共刺激シグナルは、
異なるプロトコールによって提供され得る。例えば、各シグナルを提供する薬剤は、溶液
中にあるかまたは表面に結合され得る。表面に結合される場合、薬剤は、同じ表面に（す
なわち、「シス」形成で）または別個の表面に（すなわち、「トランス」形成で）結合さ
れ得る。あるいは、一方の薬剤を表面に結合させ、他方の薬剤を溶液中で結合され得る。
一実施形態では、共刺激シグナルを提供する薬剤は細胞表面に結合され、一次活性化シグ
ナルを提供する薬剤は溶液中にあるかまたは表面に結合される。特定の実施形態では、両
方の薬剤が溶液中にあり得る。別の実施形態では、可溶性形態であり得、次に、Ｆｃ受容
体もしくは抗体を発現する細胞、または薬剤に結合する他の結合剤などの薬剤が表面に架
橋され得る。これに関して、例えば、Ｔ細胞の活性化および拡大における使用が企図され
る人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）については、米国特許出願公開第２００４／０１０１５
１９号明細書および同第２００６／００３４８１０号明細書を参照されたい。
一実施形態では、２つの薬剤は、同じビーズ、すなわち「シス」上、または別個のビー
ズ、すなわち「トランス」上のいずれかのビーズ上に固定化される。例として、一次活性
化シグナルを提供する薬剤は、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合断片であり、共刺激シグ
ナルを提供する薬剤は、抗ＣＤ２８抗体またはその抗原結合断片であり；両方の薬剤は、
同等の分子量で同じビーズに同時に固定化される。一実施形態では、ＣＤ４＋Ｔ細胞拡大
およびＴ細胞増殖のためにビーズに結合した各抗体の１：１の比が使用される。本明細書
に記載される特定の態様では、ビーズに結合したある比の抗ＣＤ３：ＣＤ２８抗体を使用
して、１：１の比を使用して観察される拡大と比較してＴ細胞拡大の増加が観察される。
１つの特定の実施形態では、１：１の比を使用して観察される拡大と比較して、約１～約
３倍の増加が観察される。一実施形態では、ビーズに結合したＣＤ３：ＣＤ２８抗体の比
は、１００：１から１：１００の範囲およびそれらの間のすべての整数値である。本明細
書に記載される一態様では、抗ＣＤ３抗体よりも多くの抗ＣＤ２８抗体が粒子に結合し、
すなわち、ＣＤ３：ＣＤ２８の比は１未満である。本明細書に記載される特定の実施形態
では、ビーズに結合された抗ＣＤ２８抗体対抗ＣＤ３抗体の比は２：１より大きい。特定
の一実施形態では、ビーズに結合した抗体の１：１００のＣＤ３：ＣＤ２８比が使用され
る。別の実施形態では、ビーズに結合した抗体の１：７５のＣＤ３：ＣＤ２８比が使用さ
れる。さらなる実施形態では、ビーズに結合した抗体の１：５０のＣＤ３：ＣＤ２８比が
使用される。別の実施形態では、ビーズに結合した抗体の１：３０のＣＤ３：ＣＤ２８比
が使用される。実施形態では、ビーズに結合した抗体の１：１０のＣＤ３：ＣＤ２８比が
使用される。別の実施形態では、ビーズに結合した抗体の１：３のＣＤ３：ＣＤ２８比が
使用される。さらに別の実施形態では、ビーズに結合した抗体の３：１のＣＤ３：ＣＤ２
８比が使用される。
粒子と細胞の１：５００～５００：１の比、およびその間の任意の整数値を使用して、
Ｔ細胞または他の標的細胞などのエフェクター細胞を刺激することができる。当業者が容
易に理解できるように、粒子対細胞の比は、標的細胞に対する粒子サイズに依存し得る。
例えば、小さいサイズのビーズは、少数の細胞にのみ結合することができるが、一方、大
きなビーズは多くの細胞に結合することができる。特定の実施形態では、細胞対粒子の比
は１：１００から１００：１の範囲、およびその間の任意の整数値であり、さらなる実施
形態では、比は１：９から９：１、およびその間の任意の整数値を含み、また、エフェク
ター細胞を刺激するために使用することができる。Ｔ細胞刺激をもたらす抗ＣＤ３および
抗ＣＤ２８結合粒子対Ｔ細胞の比は、上記のように変化する場合があるが、しかしながら
、特定の値には、１：１００、１：５０、１：４０、１：３０、１：２０、１：１０、１
：９、１：８、１：７、１：６、１：５、１：４、１：３、１：２、１：１、２：１、３
：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、および１５：１が
含まれ、１つの比はＴ細胞あたり少なくとも１：１の粒子である。一実施形態では、１：
１以下の粒子対細胞の比が使用される。特定の一実施形態では、粒子：細胞比は１：５で
ある。さらなる実施形態では、粒子対細胞の比は、刺激の日に応じて変化させることがで
きる。例えば、一実施形態では、粒子対細胞の比は、１日目に１：１から１０：１であり
、追加の粒子は、最終的な比で、毎日または一日おきに、その後、最大１０日間、１：１
から１：１０の最終の比（添加の日の細胞数に基づく）で細胞に添加される。特定の一実
施形態では、粒子対細胞の比は、刺激の１日目に１：１であり、刺激の３日目および５日
目に１：５に調整される。別の実施形態では、粒子は、毎日または一日おきベースで、刺
激の１日目における１：１、ならびに３日目および５日目における１：５の最終比まで添
加される。別の実施形態では、粒子対細胞の比は、刺激の１日目に２：１であり、刺激の
３日目および５日目に１：１０に調整される。別の実施形態では、粒子は、毎日または一
日おきベースで、刺激の１日目における１：１、ならびに３日目および５日目における１
：１０の最終比まで添加される。当業者は、様々な他の比が本明細書における使用に適切
であり得ることを理解する。特に、比は、粒子サイズおよび細胞のサイズとタイプに依存
して変化する。
本明細書に記載されるさらなる実施形態では、Ｔ細胞などの細胞は、薬剤で被覆された
ビーズと組み合わせられ、その後、ビーズおよび細胞は分離され、次に、細胞が培養され
る。別の実施形態では、培養前に、薬剤で被覆されたビーズおよび細胞は分離されず、と
もに培養される。さらなる実施形態では、ビーズおよび細胞は、磁力などの力を提供する
ことによって最初に濃縮され、その結果、細胞表面マーカーのライゲーションが増加し、
それにより細胞刺激が誘導される。
一例として、細胞表面タンパク質は、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８が付着している常磁性
ビーズ（３×２８ビーズ）をＴ細胞に接触させることによって、ライゲートされ得る。一
実施形態では、細胞（例えば、１０４～１０９個のＴ細胞）およびビーズ（例えば、１：
１の比のＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ－４５０ ＣＤ３／ＣＤ２８ Ｔ常磁性ビー
ズ、またはＭｉｌｔｅｎｙｉ ＢｉｏｔｅｃからのＭＡＣＳ（登録商標）ＭｉｃｒｏＢｅ
ａｄｓ）は、緩衝液、例えば、ＰＢＳ（カルシウムおよびマグネシウムなどの二価カチオ
ンを含まない）中に組み合わせられる。再び、当業者は、任意の細胞濃度が使用され得る
ことを容易に理解することができる。例えば、標的細胞は、試料中に非常に稀であり、試
料の０．０１％のみを含み得るか、または試料全体（すなわち、１００％）は目的の標的
細胞を含み得る。したがって、いずれもの細胞数は、本明細書に記載されている文脈内に
ある。特定の実施形態では、細胞および粒子の最大の接触を確実にするために、粒子およ
び細胞がともに混合される体積を有意に減少させる（すなわち、細胞の濃度を増加させる
）ことが望ましい場合がある。例えば、一実施形態では、約２０億個の細胞／ｍｌの濃度
が使用される。別の実施形態では、１億個を超える細胞／ｍｌが使用される。さらなる実
施形態では、１０００万、１５００万、２０００万、２５００万、３０００万、３５００
万、４０００万、４５００万、または５０００万個の細胞／ｍｌの細胞濃度が使用される
。さらに別の実施形態では、７５００万、８０００万、８５００万、９０００万、９５０
０万、または１億個の細胞／ｍｌの細胞の濃度が使用される。さらなる実施形態では、１
億２５００万個または１億５０００万個の細胞／ｍｌの濃度を使用することができる。高
濃度の使用は、細胞収量、細胞活性化、および細胞拡大の増加をもたらすことができる。
さらに、高い細胞濃度の使用は、ＣＤ２８陰性Ｔ細胞などの、目的の標的抗原を弱く発現
する可能性のある細胞をより効率的に捕捉することができる。このような細胞の集団は、
治療的価値を有する可能性があり、特定の実施形態において得ることが望ましい。例えば
、高濃度の細胞の使用は、通常、ＣＤ２８発現が弱いＣＤ８＋Ｔ細胞をより効率的に選択
することができる。
本明細書に記載される一実施形態では、混合物は、数時間（約３時間）から約１４日間
、またはその間の任意の時間の整数値で培養され得る。別の実施形態において、混合物は
、２１日間培養され得る。本明細書に記載される一実施形態では、ビーズおよびＴ細胞は
、約８日間、ともに培養される。別の実施形態では、ビーズおよびＴ細胞は、２～３日間
、ともに培養される。Ｔ細胞の培養時間が６０日以上になるように、刺激の数サイクルが
望ましい場合もある。Ｔ細胞培養に適した条件には、増殖および生存に必要な因子、例え
ば、血清（例えば、ウシ胎児血清またはヒト血清）、インターロイキン－２（ＩＬ－２）
、インスリン、ＩＦＮ－ガンマ、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１０、ＩＬ
－１２、ＩＬ－１５、ＴＧＦベータ、およびＴＮＦ－アルファ、または当業者に公知であ
る細胞の増殖のための任意の他の添加剤を含み得る適切な培地（例えば、最小必須培地ま
たはＲＰＭＩ培地１６４０、またはＸ－ｖｉｖｏ １５（Ｌｏｎｚａ））が含まれる。細
胞の増殖のための他の添加剤には、限定されないが、界面活性剤、プラズマネート、およ
び還元剤、例えば、Ｎ－アセチル－システインおよび２－メルカプトエタノールが含まれ
る。培地には、ＲＰＭＩ １６４０、ＡＩＭ－Ｖ、ＤＭＥＭ、ＭＥＭ、アルファ－ＭＥＭ
、Ｆ－１２、Ｘ－Ｖｉｖｏ １５、およびＸ－Ｖｉｖｏ ２０、オプティマイザーを含め
ることができ、アミノ酸、ピルビン酸ナトリウム、およびビタミンが添加され、血清を含
まないかまたは適切な量の血清（もしくは血漿）のいずれか、または規定されたセットの
ホルモン、ならびに／あるいはＴ細胞の増殖および拡大に十分な量のサイトカイン（複数
可）が補足され得る。抗生物質、例えば、ペニシリンやストレプトマイシンは、実験培養
物にのみ含まれ、対象に注射されるべき細胞の培養物には含まれない。標的細胞は、増殖
を支持するのに必要な条件下、例えば、適切な温度（例えば、３７℃）および雰囲気（例
えば、空気＋５％ＣＯ２）で維持される。
エフェクター細胞、例えば、様々な刺激時間に曝露されたＴ細胞は、異なる特徴を示し
得る。例えば、典型的な血液またはアフェレーシスされた末梢血単核細胞生成物は、細胞
毒性またはサプレッサーＴ細胞集団（ＴＣ、ＣＤ８＋）よりも多いヘルパーＴ細胞集団（
ＴＨ、ＣＤ４＋）を有する。ＣＤ３およびＣＤ２８受容体を刺激することによるＴ細胞の
エクスビボ拡大は、約８～９日より前は主にＴＨ細胞からなるＴ細胞の集団を生成し、一
方、約８～９日後は、Ｔ細胞の集団はより多くの増加したＴＣ細胞を含む。したがって、
治療の目的に応じて、主にＴＨ細胞を含むＴ細胞集団を対象に注射することは有利であり
得る。同様に、ＴＣ細胞の抗原特異的なサブセットが単離されている場合は、このサブセ
ットをさらに拡大することが有益な場合がある。
さらに、ＣＤ４およびＣＤ８マーカーに加えて、他の表現型マーカーは、細胞拡大プロ
セスのプロセスで、有意に変動するが、大部分は再現可能である。したがって、このよう
な再現性は、特定の目的のために、活性化されたＴ細胞生成物を調整する能力を可能にす
る。
一部の場合では、実施形態の免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）は、細胞拡大を
助けるために、活性化および増殖誘導細胞（ＡａＰＣ）と共培養される。ＡａＰＣはまた
、人工抗原提示細胞（ａＡＰＣ）とも呼ばれ得る。例えば、抗原提示細胞（ＡＰＣ）は、
実施形態の治療用組成物および細胞治療用製品を調製するのに有用である。一態様では、
ＡａＰＣは、トランスジェニックＫ５６２細胞であり得る。抗原提示システムの調製およ
び使用に関する一般的なガイダンスについては、例えば、各々が参照により組み込まれる
、米国特許第６，２２５，０４２号明細書、同第６，３５５，４７９号明細書、同第６，
３６２，００１号明細書および同第６，７９０，６６２号明細書；米国特許出願公開第２
００９／００１７０００号明細書および同第２００９／０００４１４２号明細書；および
国際公開第２００７／１０３００９号パンフレットを参照されたい。実施形態のなおさら
なる態様では、トランスジェニックＣＡＲ細胞を培養することには、樹状細胞、またはＣ
ＡＲを発現する免疫エフェクター細胞の拡大を刺激する活性化および増殖誘導細胞（Ａａ
ＰＣ）の存在下でトランスジェニックＣＡＲ細胞を培養することが含まれる。なおさらな
る態様では、ＡａＰＣは、ＡａＰＣの表面上に発現されるＣＡＲ結合抗体またはその断片
を含む。ＡａＰＣは、一部の場合においてＴ細胞を活性化または共刺激する追加の分子を
含み得る。追加の分子は、一部の場合では、膜結合Ｃγサイトカインを含み得る。なおさ
らなる態様では、ＡａＰＣは、不活化もしくは照射されているか、または感染性物質がな
いことについて試験され、確認されている。なおさらなる態様では、ＡａＰＣの存在下で
トランスジェニックＣＡＲ細胞を培養することには、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１および／ま
たはＩＬ－２などの可溶性サイトカインを含む培地中でトランスジェニックＣＡＲ細胞を
培養することが含まれる。細胞は、約１０：１から約１：１０；約３：１から約１：５；
約１：１から約１：３（免疫エフェクター細胞対ＡａＰＣ）の比；またはそこから導き出
せる任意の範囲で培養され得る。例えば、Ｔ細胞とＡａＰＣの共培養は、約１：１、約１
：２または約１：３の比であり得る。
一態様では、ＡａＰＣは、ＣＤ１３７Ｌを発現し得る。他の態様では、ＡａＰＣは、Ｃ
Ｄ１９、ＣＤ６４、ＣＤ８６、またはｍＩＬ１５（もしくはｍｂＩＬ－１５）をさらに発
現し得る。特定の態様では、ＡａＰＣは、例えば、ＯＫＴ３および／またはＵＣＨＴ１な
どの、少なくとも１つの抗ＣＤ３抗体クローンまたはその断片を発現し得る。一態様では
、ＡａＰＣは不活性化（例えば、照射またはマイトマイシンＣ処理）され得る。一態様で
は、ＡａＰＣは、感染物質がないことについて試験され、確認されている場合がある。こ
のようなＡａＰＣを作製する方法は当該技術分野において公知である。一態様では、Ａａ
ＰＣとともにＣＡＲ修飾されたＴ細胞集団を培養することには、約１０：１から約１：１
０；約３：１から約１：５；約１：１から約１：３（Ｔ細胞対ＡａＰＣ）；またはそこか
ら導き出せる範囲の比で細胞を培養することが含まれ得る。例えば、Ｔ細胞とＡａＰＣの
共培養は、約１：１、約１：２または約１：３の比であり得る。一態様では、培養ステッ
プは、アミノビスホスホネート（例えば、ゾレドロン酸）を用いた培養がさらに含まれ得
る。
さらなる態様では、ＣＡＲを発現するエフェクター細胞の集団は、７、１４、２１、２
８、３５、４２日、４９、５６、６３または７０日以下の間培養および／または刺激され
る。一部の実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ細胞の集団は、少なくとも０、２、４、６、８、１
０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０日間またはそれを超
えて、培養および／または刺激される。一部の実施形態では、ＣＡＲ－Ｔ細胞の集団は、
少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０日
間またはそれを超えて、培養および／または刺激される。一部の実施形態では、ＣＡＲを
発現するエフェクター細胞の集団は、少なくとも７、１４、２１、２８、３５、４２、４
９、５６、６３日間またはそれを超えて、培養および／または刺激される。他の実施形態
では、刺激は、ＣＡＲ陽性細胞の増殖を促進させるための、ＣＡＲを発する現エフェクタ
ー細胞とＡａＰＣとの共培養を含む。別の態様では、トランスジェニックＣＡＲ細胞の集
団は、１×刺激、２×刺激、３×刺激、４×刺激、５×刺激、５×刺激、６×刺激、７×
刺激、８×刺激、９×刺激または１０×刺激以下で刺激される。一部の例では、トランス
ジェニック細胞は、ＡａＰＣの存在下ではエクスビボで培養されない。一部の特定の例で
は、実施形態の方法は、トランスフェクションおよび／または培養ステップの後に、ＣＡ
Ｒを発現する免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）について細胞集団を濃縮すること
をさらに含む。濃縮は、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）およびＣＡＲ発現細胞の選別を
含み得る。さらなる態様では、ＣＡＲ発現細胞の選別は、ＣＡＲ結合抗体の使用を含む。
濃縮はまた、ＣＤ５６＋細胞の枯渇を含み得る。実施形態のなおさらなる態様では、本方
法は、トランスジェニックＣＡＲ細胞の集団の試料を凍結保存することをさらに含む。
一部の場合では、ＡａＰＣは、追加の処理なしにＭＨＣ分子へのペプチドの直接結合を
可能にする最適な長さのペプチドとともにインキュベートされる。あるいは、細胞は、目
的の抗原を発現することができる（すなわち、ＭＨＣ非依存性抗原認識の場合）。さらに
、一部の場合では、ＡＰＣは、一般的に、特定のＣＡＲポリペプチドまたはＣＡＲポリペ
プチドのいずれかに結合する抗体を発現することができる（例えば、普遍的な活性化およ
び増殖細胞（ｕＡＰＣ））。このような方法は、参照により本明細書に組み込まれる国際
公開第２０１４／１９０２７３号パンフレットに開示されている。目的のペプチド－ＭＨ
Ｃ分子または抗原に加えて、ＡａＰＣシステムはまた、少なくとも１つの外因性補助分子
を含むことができる。補助分子の任意の適切な数および組合せを使用することができる。
補助分子は、共刺激分子および接着分子などの補助分子から選択され得る。例示的な共刺
激分子には、ＣＤ７０およびＢ７．１（以前はＢ７として知られており、ＣＤ８０として
も公知であった）が含まれ、とりわけ、Ｔ細胞の表面上にあるＣＤ２８および／またはＣ
ＴＬＡ－４分子に結合し、それにより、例えば、Ｔ細胞の拡大、Ｔｈ１分化、短期Ｔ細胞
の生存、およびインターロイキン（ＩＬ）－２などのサイトカイン分泌などに影響を与え
る。接着分子には、炭水化物結合糖タンパク質、例えば、セレクチン、膜貫通結合糖タン
パク質、例えば、インテグリン、カルシウム依存性タンパク質、例えば、カドヘリン、お
よび１回膜貫通免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリータンパク質、例えば、細胞間
接着分子（ＩＣＡＭ）が含まれ得、例えば、細胞同士の接触または細胞－マトリックスの
接触を促進する。例示的な接着分子には、ＬＦＡ－３およびＩＣＡＭ、例えば、ＩＣＡＭ
－１が含まれる。共刺激分子および接着分子を含む、例示的な補助分子の選択、クローニ
ング、調製、および発現に有用な技術、方法、および試薬は、例えば、参照により本明細
書に組み込まれる、米国特許第６，２２５，０４２号明細書、同第６，３５５，４７９号
明細書、および同第６，３６２，００１号明細書に例示されている。
ＡａＰＣになるように選択された細胞は、好ましくは、細胞内抗原プロセシング、細胞
内ペプチド輸送、および／または細胞内ＭＨＣクラスＩもしくはクラスＩＩ分子－ペプチ
ドローディングに欠陥があるか、あるいは変温性（poikilothermic）（すなわち、哺乳動
物細胞株よりも温度チャレンジに対して感受性が低い）、または欠陥と変温特性の両方を
有する。好ましくは、ＡａＰＣになるように選択された細胞はまた、外因性ＭＨＣクラス
ＩまたはクラスＩＩ分子に対する少なくとも１つの内因性対応物（例えば、上記の内因性
ＭＨＣクラスＩもしくはクラスＩＩ分子および／または内因性補助分子）、および細胞に
導入される補助分子成分を発現する能力を欠いている。さらに、ＡａＰＣは、好ましくは
、ＡａＰＣを生成するためのそれらの修飾前に、細胞が有していた欠陥および変温特性を
保持する。例示的なＡａＰＣは、昆虫細胞株などの抗原プロセシング（ＴＡＰ）欠損細胞
株に関連するトランスポーターを構成するかまたはそれに由来する。例示的な変温性の昆
虫細胞株は、Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ ２細胞株などのショウジョウバエ細胞株である（例え
ば、Schneider 1972を参照されたい）。Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ２細胞の調製、増殖、および
培養の例示的な方法は、米国特許第６，２２５，０４２号明細書、同第６，３５５，４７
９号明細書、および同第６，３６２，００１号明細書に提供されている。
一実施形態では、ＡａＰＣはまた、凍結－融解サイクルに供される。例示的な凍結－融
解サイクルでは、ＡａＰＣを含む適切な容器を適切な量の液体窒素、固体二酸化炭素（す
なわちドライアイス）、または同様の低温材料と接触させることによりＡａＰＣを凍結し
て、急速に凍結を生じさせることができる。次に、凍結したＡＰＣは、低温材料からＡａ
ＰＣを取り出し、周囲の室温条件に曝露するか、またはぬるい水浴もしくは暖かい手を用
いて融解時間の短縮を促進する、促進された融解プロセスによって融解される。さらに、
融解前にＡａＰＣを凍結して長期間保存することができる。凍結したＡａＰＣはまた、融
解され、次に、さらなる使用の前に凍結乾燥され得る。好ましくは、ジメチルスルホキシ
ド（ＤＭＳＯ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、および他の防腐剤などの凍結－融
解手法に悪影響を与える可能性のある防腐剤は、凍結－融解サイクルを経るＡａＰＣを含
む培地にはないか、または本質的に除去される、あるいは本質的にこのような防腐剤を欠
いている培地へのＡａＰＣの転送などによって本質的に除かれる。
さらなる実施形態では、異種核酸およびＡａＰＣに内因性の核酸は、架橋によって不活
性化され得、そのため、不活性化後に細胞増殖、複製または核酸の発現が本質的には起こ
らない。一実施形態では、ＡａＰＣは、外因性ＭＨＣおよび補助分子の発現、ＡａＰＣの
表面上でのこのような分子の提示、および選択された１つまたは複数のペプチドの提示さ
れたＭＨＣ分子へのローディングに続く時点で不活性化される。したがって、このような
不活性化され、選択されたペプチドがローディングされたＡａＰＣは、本質的に増殖また
は複製できないようにされているが、選択されたペプチド提示機能を保持している。好ま
しくは、架橋はまた、ＡａＰＣの抗原提示細胞機能を実質的に低下させることなく、細菌
およびウイルスなどの汚染微生物を本質的に含まないＡａＰＣももたらす。したがって、
架橋は、ＡａＰＣを使用して開発された細胞治療製品の安全性に関する懸念を緩和するの
に役立つと同時に、重要なＡａＰＣ機能を維持する。架橋およびＡａＰＣに関連する方法
については、例えば、参照により本明細書に組み入れられる米国特許出願公開第２００９
／００１７０００号明細書を参照されたい。
特定の実施形態では、操作された抗原提示細胞（ＡＰＣ）がさらに提供される。このよ
うな細胞は、例えば、上記のように、エクスビボで免疫エフェクター細胞を増殖誘導する
ために使用され得る。さらなる態様では、操作されたＡＰＣは、それ自体が患者に投与さ
れ得、それにより、インビボで免疫エフェクター細胞の拡大を刺激し得る。実施形態の操
作されたＡＰＣは、それ自体、治療薬として使用され得る。他の実施形態では、操作され
たＡＰＣは、標的抗原に特異的な内因性免疫エフェクター細胞の活性化を刺激し、および
／または標的抗原に特異的である、養子移入された免疫エフェクター細胞の活性または持
続性を増加させることができる治療薬として使用することができる。
本明細書において使用する場合、「操作されたＡＰＣ」という用語は、少なくとも第１
の導入遺伝子を含む細胞（複数可）を指し、第１の導入遺伝子はＨＬＡをコードする。こ
のような操作されたＡＰＣは、抗原がＨＬＡと複合体でＡＰＣの表面上に提示されるよう
に、抗原を発現させるための第２の導入遺伝子をさらに含み得る。一部の態様では、操作
されたＡＰＣは、抗原を提示した細胞型（例えば、樹状細胞）であり得る。さらなる態様
では、操作されたＡＰＣは、Ｔ細胞またはＴ細胞前駆体（「Ｔ－ＡＰＣ」と呼ばれる）な
どの、通常は抗原を提示しない細胞型から生成することができる。したがって、一部の態
様では、実施形態の操作されたＡＰＣは、標的抗原をコードする第１の導入遺伝子、およ
びヒト白血球抗原（ＨＬＡ）をコードする第２の導入遺伝子を含み、そのため、ＨＬＡは
、標的抗原のエピトープと複合体で、操作されたＡＰＣの表面上に発現される。特定の具
体的な態様では、操作されたＡＰＣで発現されるＨＬＡはＨＬＡ－Ａ２である。
一部の態様では、実施形態の操作されたＡＰＣは、少なくとも第３の導入遺伝子をコー
ドする共刺激分子をさらに含み得る。共刺激分子は、膜結合Ｃγサイトカインであり得る
共刺激サイトカインであり得る。特定の態様では、共刺激サイトカインは、ＩＬ－１５、
例えば、膜結合ＩＬ－１５である。一部のさらなる態様では、操作されたＡＰＣは、編集
された（または削除された）遺伝子を含み得る。例えば、阻害遺伝子、例えば、ＰＤ－１
、ＬＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４またはＴＣＲを編集して、遺伝子の発現を低減または排除す
ることができる。実施形態の操作されたＡＰＣは、目的の任意の標的抗原をコードする導
入遺伝子をさらに含み得る。例えば、標的抗原は、感染症抗原または腫瘍関連抗原（ＴＡ
Ａ）であり得る。
ポイント・オブ・ケア
本開示の一実施形態では、本明細書に記載される免疫エフェクター細胞は、ポイント・
オブ・ケアの場で修飾される。本開示の一実施形態では、本明細書に記載される免疫エフ
ェクター細胞は、ポイント・オブ・ケアの場でまたはその近くで修飾される。一部の場合
では、修飾された免疫エフェクター細胞はまた、操作されたＴ細胞と呼ばれる。一部の場
合では、ポイント・オブ・ケアの場は、治療を必要とする対象の近くの病院または施設（
例えば、医療施設）にある。対象はアフェレーシスを受け、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）
またはＰＢＭＣの亜集団は、例えば、溶出、ビーズ選択またはフィコール勾配分離によっ
て濃縮することができる。濃縮されたＰＢＭＣまたはＰＢＭＣの亜集団は、さらに処理す
る前に、任意の適切な凍結保存溶液中で凍結保存され得る。一例では、溶出プロセスは、
ヒト血清アルブミンを含む緩衝液を用いて行われる。Ｔ細胞などの免疫エフェクター細胞
は、本明細書に記載される選択方法によって単離することができる。一例では、Ｔ細胞の
選択方法は、Ｔ細胞上のＣＤ３に特異的なビーズまたはＣＤ４およびＣＤ８に特異的なビ
ーズを含む。ある場合には、ビーズは常磁性ビーズであり得る。回収した免疫エフェクタ
ー細胞は、修飾前に適切な凍結保存液で凍結保存することができる。免疫エフェクター細
胞は、注射前に最大２４時間、３６時間、４８時間、７２時間または９６時間融解するこ
とができる。融解した細胞は、修飾前に、細胞培養、例えば、ウシ胎児血清（ＦＢＳ）も
しくはヒト血清ＡＢを補足した細胞培養（ＲＰＭＩなど）を行うことができ、またはＩＬ
－２もしくはＩＬ－２１などのサイトカインを含む緩衝液に入れることができる。別の態
様において、回収された免疫エフェクター細胞は、凍結保存の必要なしに修飾され得る。
一部の場合では、免疫エフェクター細胞は、キメラ受容体、１つ以上の細胞タグ（複数
可）、および／またはサイトカイン（複数可）を免疫エフェクター細胞に操作／導入する
ことによって修飾され、次に、対象に迅速に注射される。一部の場合では、免疫エフェク
ター細胞の供給源は、同種と自家の供給源の両方を含み得る。ある場合では、免疫エフェ
クター細胞は、Ｔ細胞またはＮＫ細胞であり得る。別の場合では、サイトカインは、ｍｂ
ＩＬ－１５もしくはＩＬ－１２またはそれらの変異体であり得る。さらなる場合では、サ
イトカインは、本明細書に記載されるリガンド誘導性の遺伝子スイッチ発現系によって調
節され得る。例えば、ベレジメクスなどのリガンドを対象に送達して、ｍｂＩＬ－１５ま
たはＩＬ－１２の発現を調節することができる。
別の態様では、ベレジメクスは、５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、
４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇまたは１００ｍｇで提供
される。さらなる態様では、ベレジメクスのより低い用量、例えば、０．５ｍｇ、１ｍｇ
、５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇまたは２０ｍｇが提供される。一実施形態では、ベレジメ
クスは、修飾された免疫エフェクター細胞の注射の０、１、２、３、４、５、６、７、８
、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、１９、２０、ま
たは２１日前に対象に投与される。さらなる実施形態では、ベレジメクスは、修飾された
免疫エフェクター細胞の注射後の有効期間、約１２時間ごとに約１回、約２４時間ごとに
約１回、約３６時間ごとに約１回または約４８時間ごとに約１回、対象に投与される。１
つの実施形態では、ベレジメクス投与の有効期間は、例えば、免疫エフェクター細胞投与
後の約７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２
０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０日である。他の実施
形態では、ベレジメクスは、休薬期間の後、休薬日の後、または対象が再発を経験したと
きに再投与することができる。
対象への悪影響が観察される特定の場合、または治療が必要でない場合、細胞タグは、
本明細書に記載される切断型上皮細胞増殖因子受容体タグなどの細胞タグを含む修飾され
た免疫エフェクター細胞の条件付きインビボアブレーションのために、例えば、セツキシ
マブを介して活性化され得る。
一部の実施形態では、このような免疫エフェクター細胞は、エレクトロポレーションを
介して、本明細書に記載される構築物によって修飾される。一例では、エレクトロポレー
ションは、ＬｏｎｚａのＮｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ（商標）デバイスなどのエレクトロポ
レーターを用いて行われる。他の実施形態では、上記の構築物を含むベクターは、非ウイ
ルスまたはウイルスベクターである。一つ場合では、非ウイルスベクターは、Ｓｌｅｅｐ
ｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙトランスポゾン－トランスポザーゼシステムを含む。一例では、免
疫エフェクター細胞は、特定の配列を使用してエレクトロポレーションされる。例えば、
免疫エフェクター細胞は、１つのトランスポゾン、続くＳｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙ
トランスポザーゼをコードするＤＮＡ、続く第２のトランスポゾンを用いてエレクトロポ
レーションされ得る。別の例では、免疫エフェクター細胞は、すべてのトランスポゾンお
よびトランスポザーゼを用いて同時にエレクトロポレーションされ得る。別の例では、免
疫エフェクター細胞は、トランスポザーゼ、続く、一度に両方のトランスポゾンまたは１
つのトランスポゾンを用いてエレクトロポレーションされ得る。連続したエレクトロポレ
ーションが行われている間、免疫エフェクター細胞は、次のエレクトロポレーションのス
テップの前に一定期間休止することができる。
一部の場合では、修飾された免疫エフェクター細胞は、増殖誘導および活性化のステッ
プを受けない。一部の場合では、修飾された免疫エフェクター細胞は、インキュベーショ
ンまたは培養のステップ（例えば、エクスビボ増殖誘導）を受けない。特定の場合では、
修飾された免疫エフェクター細胞は、注射前にＩＬ－２およびＩＬ－２１を含む緩衝液に
入れられる。他の例では、修飾された免疫エフェクター細胞は、注射前に、細胞培養緩衝
液、例えば、ウシ胎児血清（ＦＢＳ）が補足された細胞培養緩衝液（例えば、ＲＰＭＩ）
に入れられるか、または休止される。注射前に、修飾された免疫エフェクター細胞を回収
し、洗浄し、対象への注射に備えて生理食塩水緩衝液に配合することができる。
一例では、対象は、注射前にリンパ球枯渇を受けている。例示的なリンパ球枯渇計画は
、フルダラビンもしくはシクロホスファミドまたはそれらの組合せの投与を含み得る。
他の例では、リンパ球枯渇は必要とされず、修飾された免疫エフェクター細胞が対象に
迅速に注射される。
さらなる例では、対象は、最小限のリンパ球枯渇を受ける。本明細書における最小限の
リンパ球枯渇とは、リンパ球枯渇計画後の１日、２日または３日以内に、対象に注射する
ことができるように減少したリンパ球枯渇プロトコールを指す。一例において、減少した
リンパ球枯渇プロトコールは、低用量のフルダラビンおよび／またはシクロホスファミド
を含み得る。別の例では、減少したリンパ球枯渇プロトコールは、リンパ球枯渇の期間の
短縮、例えば、１日または２日を含むことができる。
一実施形態では、免疫エフェクター細胞は、キメラ受容体およびサイトカインを前記免
疫エフェクター細胞に操作／導入することによって修飾され、次に、対象に迅速に注射さ
れる。他の場合では、免疫エフェクター細胞は、キメラ受容体およびサイトカインを前記
細胞に操作／導入することによって修飾され、次に、少なくとも０、０．５、１、２、３
、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、
１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３
２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５
、４６、４７、４８、４９、または５０時間内に対象に注射される。他の場合では、免疫
エフェクター細胞は、キメラ受容体およびサイトカインを免疫エフェクター細胞に操作／
導入することによって修飾され、次に、０日、１日未満、２日未満、３日未満、４日未満
、５未満、６日未満、７日未満または８日未満で対象に注射される。
一部の実施形態では、修飾されたエフェクター細胞の量は、それを必要とする対象に投
与され、その量は、有効性、およびサイトカイン関連毒性を誘発する潜在性に基づいて決
定される。別の実施形態では、修飾されたエフェクター細胞は、ＣＡＲ＋およびＣＤ３＋
細胞である。一部の場合では、修飾されたエフェクター細胞の量は、約１０４～約１０９
個の修飾されたエフェクター細胞／ｋｇを含む。一部の場合では、修飾されたエフェクタ
ー細胞の量は、約１０４～約１０５個の修飾されたエフェクター細胞／ｋｇを含む。一部
の場合では、修飾されたエフェクター細胞の量は、約１０５～約１０６個の修飾されたエ
フェクター細胞／ｋｇを含む。一部の場合では、修飾されたエフェクター細胞の量は、約
１０６～約１０７個の修飾されたエフェクター細胞／ｋｇを含む。一部の場合では、修飾
されたエフェクター細胞の量は、＞１０４個であるが≦１０５個の修飾エフェクター細胞
／ｋｇを含む。一部の場合では、修飾されたエフェクター細胞の量は、＞１０５個である
が≦１０６個の修飾されたエフェクター細胞／ｋｇを含む。一部の場合では、修飾された
エフェクター細胞の量は、＞１０６個であるが≦１０７個の修飾されたエフェクター細胞
／ｋｇを含む。
一実施形態では、修飾された免疫エフェクター細胞は、腫瘍組織への直接的な局所送達
を介してがんを標的とする。例えば、卵巣がんでは、修飾された免疫エフェクター細胞は
、腹腔内（ＩＰ）で腹部または腹腔に送達され得る。このようなＩＰ送達は、化学療法薬
の送達用に配置されたポートまたは既存のポートを介して行うことができる。修飾された
免疫エフェクター細胞の局所送達の他の方法には、切除腔へのカテーテル注射、超音波誘
導腫瘍内注射、肝動脈注射または胸膜内送達が含まれ得る。
一実施形態では、それを必要とする対象は、ＩＰを介して送達される修飾された免疫エ
フェクター細胞の第１の用量、続いてＩＶを介して送達される修飾された免疫エフェクタ
ー細胞の第２の用量で治療を開始することができる。さらなる実施形態では、修飾された
免疫エフェクター細胞の第２の用量の後に、ＩＶまたはＩＰを介して送達され得るその後
の用量が続き得る。一実施形態では、第１および第２またはさらなる後続の用量の間の期
間は、約０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１
５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８
、２９、３０日であり得る。一実施形態では、第１および第２またはさらなる後続の用量
の間の期間は、約０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、
１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２
７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、または３６か月であり得る。別
の実施形態では、第１および第２またはさらなる後続の用量の間の期間は、約０、１、２
、３、４、５、６、７、８、９または１０年であり得る。
別の実施形態では、修飾された免疫エフェクター細胞の１、２、３、４、５、６、７、
８、９、１０回の用量のさらなる投与のために、カテーテルを腫瘍または転移部位に配置
することができる。一部の場合では、修飾されたエフェクター細胞の用量は、約１０２～
約１０９個の修飾エフェクター細胞／ｋｇを含むことができる。毒性が観察される場合、
修飾されたエフェクター細胞の用量は、約１０２～約１０５個の修飾されたエフェクター
細胞／ｋｇを含み得る。一部の場合では、修飾されたエフェクター細胞の用量は、約１０
２個の修飾されたエフェクター細胞／ｋｇで開始することができ、その後の用量は、約１
０４、１０５、１０６、１０７、１０８または１０９個の修飾されたエフェクター細胞／
ｋｇまで増加させることができる。
他の実施形態では、操作された細胞の増殖および／または生存を刺激する方法は、対象
から細胞の試料を得、および細胞の試料の細胞を１つ以上のトランスポゾンを含む１つ以
上のポリヌクレオチドでトランスフェクトすることを含む。一実施形態では、トランスポ
ゾン（複数可）は、本明細書に記載されるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、サイトカイン、
１つ以上の細胞タグ、および前記１つまたは複数のポリヌクレオチドを前記細胞のゲノム
に組み込むのに有効なトランスポザーゼをコードし、操作された細胞の集団を提供する。
実施形態では、トランスポゾン（複数可）は、本明細書に記載されるキメラ抗原受容体（
ＣＡＲ）、サイトカイン、１つ以上の細胞タグ、サイトカインのリガンド誘導性制御のた
めの遺伝子スイッチポリペプチド、および前記１つ以上のポリヌクレオチドを前記細胞の
ゲノムに組み込むのに有効なトランスポザーゼをコードし、操作された細胞の集団を提供
する。一実施形態では、遺伝子スイッチポリペプチドは、ｉ）第１の核内受容体リガンド
結合ドメインに融合したＤＮＡ結合ドメインを含む第１の遺伝子スイッチポリペプチド、
およびｉｉ）第２の核内受容体リガンド結合ドメインに融合したトランス活性化ドメイン
を含む第２の遺伝子スイッチポリペプチドを含む。一部の実施形態では、第１の遺伝子ス
イッチポリペプチドおよび第２の遺伝子スイッチポリペプチドは、リンカーによって接続
されている。一例では、操作された細胞を対象に投与する前に、リンパ球枯渇は必要とさ
れない。
一例では、操作された細胞をインビボで拡大または増殖誘導する方法は、対象から細胞
の試料を得、および本明細書に記載されるキメラポリペプチドを含む１つ以上のトランス
ポゾンを含む１つ以上のポリヌクレオチドで細胞の試料の細胞をトランスフェクトするこ
とを含む。一実施形態では、トランスポゾンは、本明細書に記載されるキメラ抗原受容体
（ＣＡＲ）、サイトカイン、１つ以上の細胞タグ、および前記１つ以上のポリヌクレオチ
ドを前記細胞のゲノムに組み込むのに有効なトランスポザーゼをコードし、操作された細
胞の集団を提供する。一実施形態では、トランスポゾン（複数可）は、本明細書に記載さ
れるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、サイトカイン、１つ以上の細胞タグ、サイトカインの
リガンド誘導性制御のための遺伝子スイッチポリペプチド、および前記１つ以上のポリヌ
クレオチドを前記細胞のゲノムに組み込むのに有効なトランスポザーゼをコードし、操作
された細胞の集団を提供する。一実施形態では、遺伝子スイッチポリペプチドは、ｉ）第
１の核内受容体リガンド結合ドメインに融合したＤＮＡ結合ドメインを含む第１の遺伝子
スイッチポリペプチド、およびｉｉ）第２の核内受容体リガンド結合ドメインに融合した
トランス活性化ドメインを含む第２の遺伝子スイッチポリペプチドを含む。一部の実施形
態では、第１の遺伝子スイッチポリペプチドおよび第２の遺伝子スイッチポリペプチドは
、リンカーによって接続されている。一例では、操作された細胞を対象に投与する前に、
リンパ球枯渇は必要とされない。
別の実施形態では、それを必要とする対象における操作された細胞のインビボでの持続
性を増強する方法は、対象からの細胞の試料を得、および細胞の試料の細胞を、本明細書
に記載されるキメラポリペプチドを含む１つ以上のトランスポゾンを含む１つ以上のポリ
ヌクレオチドでトランスフェクトすることを含む。一部の場合では、１つ以上のトランス
ポゾンは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、サイトカイン、１つ以上の細胞タグ、およびＤ
ＮＡを前記細胞のゲノムに組み込むのに有効なトランスポザーゼをコードし、操作された
細胞の集団を提供する。一部の場合では、１つ以上のトランスポゾンは、キメラ抗原受容
体（ＣＡＲ）、サイトカイン、１つ以上の細胞タグ、サイトカインのリガンド誘導性制御
のための遺伝子スイッチポリペプチド、およびＤＮＡを前記細胞のゲノムに組み込むのに
有効なトランスポザーゼをコードし、操作された細胞の集団を提供する。一部の場合では
、遺伝子スイッチポリペプチドは、ｉ）第一の核内受容体リガンド結合ドメインに融合し
たＤＮＡ結合ドメインを含む第１の遺伝子スイッチポリペプチド、およびｉｉ）第２の核
内受容体リガンド結合ドメインに融合したトランス活性化ドメインを含む第２の遺伝子ス
イッチポリペプチドを含み、第１の遺伝子スイッチポリペプチドおよび第２の遺伝子スイ
ッチポリペプチドは、リンカーによって接続されている。一例では、操作された細胞を対
象に投与する前に、リンパ球枯渇は必要とされない。
別の実施形態において、腫瘍を有する対象を治療する方法は、対象からの細胞の試料を
得、本明細書に記載されるキメラポリペプチドを含む１つ以上のトランスポゾンを含む１
つ以上のポリヌクレオチドで試料の細胞をトランスフェクトし、および操作された細胞の
集団を対象に投与することを含む。一例では、操作された細胞を対象に投与する前に、リ
ンパ球枯渇は必要とされない。一部の場合では、１つ以上のトランスポゾンは、キメラ抗
原受容体（ＣＡＲ）、サイトカイン、１つ以上の細胞タグ、およびＤＮＡを細胞のゲノム
に組み込むのに有効なトランスポザーゼをコードする。一部の場合では、１つ以上のトラ
ンスポゾンは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、サイトカイン、１つ以上の細胞タグ、サイ
トカインのリガンド誘導性制御のための遺伝子スイッチポリペプチド、およびＤＮＡを細
胞のゲノムに組み込むのに有効なトランスポザーゼをコードする。一部の場合では、遺伝
子スイッチポリペプチドは、ｉ）第１の核内受容体リガンド結合ドメインに融合したＤＮ
Ａ結合ドメインを含む第１の遺伝子スイッチポリペプチド、およびｉｉ）第２の核内受容
体リガンド結合ドメインに融合したトランス活性化ドメインを含む第２の遺伝子スイッチ
ポリペプチドを含み、第１の遺伝子スイッチポリペプチドおよび第２の遺伝子スイッチポ
リペプチドは、リンカーによって接続されている。一部の場合では、細胞は、エレクトロ
ポレーションを介してトランスフェクトされる。一部の場合では、遺伝子スイッチポリペ
プチドをコードするポリヌクレオチドは、プロモーターによって調節される。一部の場合
では、プロモーターは、組織特異的プロモーターもしくはＥＦ１Ａプロモーターまたはそ
れらの機能的変異体である。一部の場合では、組織特異的プロモーターは、Ｔ細胞特異的
応答エレメントまたはＮＦＡＴ応答エレメントを含む。一部の場合では、サイトカインは
、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１２、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５の融合体、Ｉ
Ｌ－１５ＲアルファまたはＩＬ－１５変異体のうちの少なくとも１つを含む。一部の場合
では、サイトカインは分泌型である。一部の場合では、サイトカインは膜結合型である。
一部の場合では、細胞は、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、Ｔ細胞またはＴ細胞前駆細胞である。
一部の場合では、細胞は、対象に投与される（例えば、操作された細胞を対象に注射する
ことによる）。一部の場合では、本方法は、サイトカインの発現を誘導するために有効量
のリガンド（例えば、ベレジミクス）を投与することをさらに含む。一部の場合では、Ｃ
ＡＲは、少なくともＲＯＲ１に結合することができる。一部の場合では、トランスポザー
ゼは、サケ科のタイプのＴｃ１様トランスポザーゼである。一部の場合では、トランスポ
ザーゼは、ＳＢ１１またはＳＢ１００ｘトランスポザーゼである。他の場合では、トラン
スポザーゼは、ＰｉｇｇｙＢａｃである。一部の場合では、細胞タグは、ＨＥＲ１切断型
変異体またはＣＤ２０切断型変異体のうちの少なくとも１つを含む。
治療への応用
本明細書に記載される実施形態では、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙトランスポゾン
（複数可）およびＳｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙトランスポザーゼで形質導入された免
疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）である。例えば、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔ
ｙトランスポゾンまたは複数のＳｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙトランスポゾンは、抗原
認識ドメインとＣＤ８アルファヒンジのスペーサーを組み合わせるＣＡＲを含むことがで
き、スペーサー領域は、「ｓ」で表されるストーク領域、および「ｓ’－ｎ」（ｎは、ス
ペース領域にあるｓ’の単位数を表し、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１
０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０であり得る）
で表される少なくとも１つのストーク伸長領域、ＣＤ３－ゼータの細胞内ドメイン、ＣＤ
２８、４－１ＢＢ、またはそれらの任意の組合せ、および細胞内ドメインＣＤ３－ゼータ
、１つ以上の細胞タグ、１つ以上のサイトカイン、ならびに任意選択で本明細書に記載さ
れる遺伝子スイッチシステムの成分を含む。したがって、一部の例では、形質導入された
Ｔ細胞は、ＣＡＲを介したＴ細胞応答を誘発することができる。
本明細書に記載される実施形態では、ＣＡＲの使用は、初代Ｔ細胞の特異性を表面抗原
に再方向付けするために提供される。したがって、本発明はまた、哺乳動物の標的細胞集
団または組織に対するＴ細胞媒介性免疫応答を刺激する方法であって、ＣＡＲを発現する
Ｔ細胞を哺乳動物に投与するステップを含む方法を提供し、ＣＡＲは、抗原と特異的に相
互作用する結合部分、スペーサー、例えば、ヒトＣＤ３－ゼータの細胞内ドメインを含む
ゼータ鎖部分、および共刺激シグナル伝達領域を含む。
一実施形態では、本開示は、Ｔ細胞が本発明の抗原特異的ＣＡＲを発現するように遺伝
子修飾され、ＣＡＲ Ｔ細胞がそれを必要とするレシピエントに注射される細胞療法を含
む。注射された細胞は、レシピエントにおいて抗原を過剰発現する細胞を死滅させること
ができる。抗体療法とは異なり、本明細書に記載されるＣＡＲ Ｔ細胞は、インビボで複
製することができ、腫瘍細胞に対する持続的効果をもたらすことができる長期間の持続を
もたらす。
本発明はさらに、対象における抗原の過剰発現を含む疾患を検出する方法を提供し、ａ
）ｉ）対象からの試料、およびｉｉ）本明細書に記載される抗体、または抗原結合断片の
任意の１つ以上を提供し、ｂ）抗体とその抗原とを特異的に結合させるための条件下で、
試料を抗体と接触させ、およびｃ）疾患がない対照飼料と比較して、試料への抗体の結合
レベルの増加を検出して、それにより対象における疾患を検出することを含む。一実施形
態では、疾患はがんである。好ましい実施形態では、がんは、卵巣がんおよび乳がんの群
から選択される。検出方法を限定する意図はないが、一実施形態では、試料への抗体の結
合の検出は、免疫組織化学的な酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、蛍光活性化細
胞選別（ＦＡＣＳ）、ウエスタンブロット、免疫沈降、および／または放射線画像である
。
また、本明細書では、抗原の過剰発現を含む疾患を治療する方法が提供され、疾患を有
する対象に、本明細書に記載される任意の１つ以上のポリペプチドの治療有効量を投与す
ることを含む。
本明細書に記載される修飾されたＴ細胞はまた、哺乳動物におけるエクスビボ免疫化お
よび／またはインビボ治療のための一種のワクチンとして役立ち得る。実施形態では、哺
乳動物はヒトである。エクスビボ免疫化に関して、免疫エフェクター細胞を哺乳動物に投
与する前に、インビトロで以下のうちの少なくとも１つが起こる：ｉ）細胞の拡大、ｉｉ
）ＣＡＲをコードする核酸の細胞への導入、および／またはｉｉｉ）細胞の凍結保存。
エクスビボ手法は周知であり、以下でより十分に検討される。簡単に述べれば、細胞は
、哺乳動物（例えば、ヒト）から単離され、本明細書に開示されるＣＡＲを発現するベク
ターで遺伝子修飾（すなわち、インビトロで形質導入またはトランスフェクト）される。
ＣＡＲ修飾細胞を、哺乳動物のレシピエントに投与して、治療上の利点を提供することが
できる。哺乳動物のレシピエントはヒトであり得、ＣＡＲ修飾細胞はレシピエントに関し
て自家であり得る。あるいは、細胞は、レシピエントに関して同種、同系または異種であ
り得る。
造血幹細胞および前駆細胞のエキソビボ拡大のための手法は、参照により本明細書に組
み込まれる米国特許第５，１９９，９４２号明細書に記載され、本発明の細胞に適用する
ことができる。他の適切な方法は、当該技術分野において公知であり、したがって、本発
明は、細胞のエクスビボ拡大の任意の特定の方法に限定されない。簡単に述べれば、Ｔ細
胞のエクスビボ培養および拡大は：（１）末梢血採取または骨髄外植片から哺乳動物由来
のＣＤ３４＋造血幹細胞および前駆細胞を収集し；および（２）このような細胞をエクス
ビボで拡大することを含む。米国特許第５，１９９，９４２号明細書に記載されている細
胞増殖因子に加えて、ｆｌｔ３－Ｌ、ＩＬ－１、ＩＬ－３およびｃ－ｋｉｔリガンドなど
の他の因子を細胞の培養および拡大に使用することができる。
エクスビボ免疫化に関して細胞ベースのワクチンを使用することに加えて、本発明はま
た、患者において抗原に対して方向付けられた免疫応答を誘発するためにインビボ免疫化
のための組成物および方法を提供する。
一般的に、本明細書に記載されるように活性化および拡大された細胞は、免疫無防備状
態の個体に生じる疾患の治療および予防に利用することができる。特に、本発明の修飾さ
れたＴ細胞は、悪性腫瘍の治療に使用される。特定の実施形態では、本発明の細胞は、悪
性腫瘍を発症するリスクのある患者の治療に使用される。したがって、悪性腫瘍を治療ま
たは予防する方法は、それを必要とする対象に、本発明の修飾されたＴ細胞の治療的有効
量を投与することを含む。実施形態では、本明細書に記載されるように活性化および拡大
された細胞は、悪性腫瘍の治療に利用することができる。
簡単に述べれば、本明細書に記載される医薬組成物は、本明細書に記載される標的細胞
集団を、１つ以上の医薬的もしくは生理学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤と組
み合わせて含むことができる。このような組成物は、緩衝液、例えば、中性緩衝生理食塩
水、リン酸緩衝生理食塩水など；炭水化物、例えば、グルコース、マンノース、スクロー
スまたはデキストラン、マンニトール；タンパク質；ポリペプチドまたはアミノ酸、例え
ば、グリシン；抗酸化剤；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡまたはグルタチオン；アジュバ
ント（例えば、水酸化アルミニウム）；および防腐剤を含むことができる。実施形態では
、本発明の組成物は、静脈内投与用に製剤化される。
本明細書に記載される医薬組成物は、治療（または予防）される疾患に適切な方法で投
与することができる。投与の量および頻度は、患者の状態、患者の疾患の種類および重症
度などの要因によって決定されるが、適切な投薬量は臨床試験によって決定され得る。
「免疫学的有効量」または「治療量」が示される場合、投与される本明細書に記載され
る組成物の正確な量は、患者（対象）の年齢、体重、および状態の個人差を考慮して医師
によって決定され得る。本明細書に記載されるＴ細胞を含む医薬組成物は、１０４～１０
９細胞／ｋｇ体重、１０５～１０６細胞／ｋｇ体重（これらの範囲内のすべての整数値を
含む）の投薬量で投与することができると一般的に述べることができる。Ｔ細胞組成物は
また、これらの投薬量で複数回投与することができる。細胞は、免疫療法において一般的
に公知である注射技術を使用することによって投与することができる（例えば、Rosenber
g et al., New Eng. J. of Med. 319:1676, (1988)を参照されたい）。特定の患者のため
の最適な投薬量および治療計画は、疾患の兆候について患者を監視し、それに応じて治療
を調整することにより、医学の当業者によって容易に決定され得る。
特定の実施形態では、活性化Ｔ細胞を対象に投与し、次に、血液を再採取し（またはア
フェレーシスを行い）、そこからのＴ細胞を活性化し、これらの活性化および拡大された
Ｔ細胞を患者に再注射することが望ましい場合がある。このプロセスは、数週間ごとに複
数回実行することができる。特定の実施形態では、Ｔ細胞は、１０ｃｃから４００ｃｃの
採血から活性化することができる。特定の実施形態では、Ｔ細胞は、２０ｃｃ、３０ｃｃ
、４０ｃｃ、５０ｃｃ、６０ｃｃ、７０ｃｃ、８０ｃｃ、９０ｃｃ、または１００ｃｃの
採血から活性化される。理論にとらわれることなく、この複数回の採血／複数回の再注射
プロトコールの使用は、Ｔ細胞の特定の集団を選択するのに役立つことが可能である。別
の実施形態では、放射線または化学療法のいずれかによって患者のリンパ球枯渇後に、対
象組成物の活性化Ｔ細胞を投与することが望ましい場合がある。
本明細書に記載される組成物の投与は、エアロゾル吸入、注射、摂取、輸血、移植（im
plantation）または移植（transplantation）によるなどの任意の好都合な方法で行うこ
とができる。本明細書に記載される組成物は、皮下、皮内、腫瘍内、結節内、髄内、筋肉
内、静脈内（ｉ．ｖ．）注射、または腹腔内で患者に投与することができる。一実施形態
では、本発明のＴ細胞組成物は、皮内または皮下注射によって患者に投与される。別の実
施形態では、本発明のＣＡＲ－Ｔ細胞組成物は、ｉ．ｖ．注射により投与される。Ｔ細胞
の組成物は、リンパ節、または原発腫瘍もしくは転移の部位に直接注射することができる
。
患者に投与される上記の治療の投薬量は、治療される状態の正確な性質および治療のレ
シピエントによって変化する。ヒトへの投薬量のスケーリングは、当該技術分野において
認められている慣行に従って行うことができる。例えば、上記の治療の用量は、１×１０
４個のＣＡＲ＋細胞／ｋｇ～５×１０６個のＣＡＲ＋細胞／ｋｇの範囲であり得る。例示
的な用量は、１×１０２個のＣＡＲ＋細胞／ｋｇ、１×１０３個のＣＡＲ＋細胞／ｋｇ、
１×１０４個のＣＡＲ＋細胞／ｋｇ、１×１０５個のＣＡＲ＋細胞／ｋｇ、３×１０５個
のＣＡＲ＋細胞／ｋｇ、１×１０６個のＣＡＲ＋細胞／ｋｇ、５×１０６個のＣＡＲ＋細
胞／ｋｇ、１×１０７個のＣＡＲ＋細胞／ｋｇ、１×１０８個のＣＡＲ＋細胞／ｋｇまた
は１×１０９個のＣＡＲ＋細胞／ｋｇであり得る。適切な用量は、成人または小児患者に
応じて適宜調整することができる。
あるいは、哺乳動物（例えば、ヒト）に投与される免疫エフェクター細胞の典型的な量
は、例えば、１００、１０００、１００００、１００万から１０００億個の細胞の範囲で
あり得る；しかしながら、この例示的な範囲より下または上の量は、本発明の範囲内であ
る。例えば、本発明の宿主細胞の用量は、約１００万～約５００億細胞（例えば、約５０
０万細胞、約２５００万細胞、約５億細胞、約１０億細胞、約５０億細胞、約２００億細
胞、約３００億細胞、約４００億細胞、または前述の値のいずれか２つによって定義され
る範囲）、約１０００万～約１０００億細胞（例えば、約２０００万細胞、約３０００万
細胞、約４０００万細胞、約６０００万細胞、約７０００万細胞、約８０００万細胞、約
９０００万細胞、約１００億細胞、約２５０億細胞、約５００億細胞、約７５０億細胞、
約９００億細胞、または前述の値のいずれか２つによって定義される範囲）、約１億細胞
～約５００億細胞（例えば、約１億２０００万細胞、約２億５０００万細胞、約３億５０
００万細胞、約４億５０００万細胞、約６億５０００万細胞、約８億細胞、約９億細胞、
約３０億細胞、約３００億細胞、約４５０億細胞、または前述の値のいずれか２つによっ
て定義される範囲）であり得る。
治療的または予防的有効性は、治療された患者の定期的な評価によって監視することが
できる。数日またはそれより長い反復投与の場合、状態に応じて、疾患症状の望ましい抑
制が起こるまで治療が繰り返される。しかしながら、他の投薬計画が有用であり得、本発
明の範囲内である。所望の投薬量は、組成物の単回ボーラス投与により、組成物の複数回
ボーラス投与により、または組成物の連続注射投与により送達することができる。
開示された核酸配列を発現する免疫エフェクター細胞を含む組成物、またはそれらの核
酸配列を含むベクターは、哺乳動物に同時投与することができる１つ以上の追加の治療薬
とともに投与することができる。「同時投与」とは、１つ以上の追加の治療薬と、および
１つ以上の追加の治療薬の効果を増強するのに十分に近い時間に本発明の宿主細胞または
本発明のベクターを含む組成物とを投与すること、またはその逆を意味する。これに関し
て、本明細書に記載される免疫エフェクター細胞または本明細書に記載されるベクターを
含む組成物は、１つ以上の追加の治療薬と同時に投与することができ、または第１に投与
し、１つ以上の追加の治療薬を第２に投与することができ、またはその逆で投与すること
ができる。あるいは、本明細書に記載される開示された免疫エフェクター細胞またはベク
ターを含む組成物および１つ以上の追加の治療薬を同時に投与することができる。
本発明の宿主細胞および／または本発明のベクターを含む組成物に含まれ得るか、また
はそれと同時投与され得る（もしくはキットに含まれ得る）治療薬の例は、インターロイ
キン、サイトカイン、インターフェロン、アジュバントおよび化学療法剤である。実施形
態では、追加の治療薬は、ＩＦＮ－アルファ、ＩＦＮ－ベータ、ＩＦＮ－ガンマ、ＧＭ－
ＣＳＦ、Ｇ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、ＬＴ－ベータ、ＴＮＦ－アルファ、増殖因子、および
ｈＧＨ、ヒトＴｏｌｌ様受容体ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、Ｔ
ＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、およびＴＬＲ１０のリガンドである。
「消泡剤」は、水性分散液の凝固、完成したフィルム中の気泡をもたらすか、または一
般的には処理を損なう場合がある処理中の発泡を低減する。例示的な消泡剤には、シリコ
ンエマルジョンまたはセスキオレイン酸ソルビタンが含まれる。
「抗酸化剤」には、例えば、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、アスコルビン酸
ナトリウム、アスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウムおよびトコフェロールが含まれる
。特定の実施形態では、抗酸化剤は、必要な場合、化学的安定性を高める。
本明細書に記載される製剤は、抗酸化剤、金属キレート剤、チオール含有化合物および
他の一般的な安定剤から利益を得ることができる。このような安定剤の例には、限定され
ないが、（ａ）約０．５％～約２％ｗ／ｖのグリセロール、（ｂ）約０．１％～約１％ｗ
／ｖのメチオニン、（ｃ）約０．１％～約２％ｗ／ｖのモノチオグリセロール、（ｄ）約
１ｍＭ～約１０ｍＭのＥＤＴＡ、（ｅ）約０．０１％～約２％ｗ／ｖのアスコルビン酸、
（ｆ）０．００３％～約０．０２％ｗ／ｖのポリソルベート８０、（ｇ）０．００１％～
約０．０５％ｗ／ｖのポリソルベート２０、（ｈ）アルギニン、（ｉ）ヘパリン、（ｊ）
硫酸デキストラン、（ｋ）シクロデキストリン、（ｌ）ペントサンポリサルフェートおよ
び他のヘパリノイド、（ｍ）マグネシウムおよび亜鉛などの２価カチオン；または（ｎ）
それらの組合せが含まれる。
「結合剤」は、凝集性を付与し、例えば、アルギン酸およびその塩；セルロース誘導体
、例えば、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース（例、Ｍｅｔｈｏｃｅｌ（登
録商標））、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒド
ロキシプロピルセルロース（例えば、Ｋｌｕｃｅｌ（登録商標））、エチルセルロース（
例えば、Ｅｔｈｏｃｅｌ（登録商標））、および微結晶性セルロース（例えば、Ａｖｉｃ
ｅｌ（登録商標））；微結晶性デキストロース；アミロース；ケイ酸アルミニウムマグネ
シウム；多糖類酸；ベントナイト；ゼラチン；ポリビニルピロリドン／酢酸ビニル共重合
体；クロスポビドン；ポビドン；デンプン；α化デンプン；トラガカント、デキストリン
、糖、例えば、スクロース（例えば、Ｄｉｐａｃ（登録商標））、グルコース、デキスト
ロース、糖蜜、マンニトール、ソルビトール、キシリトール（例えば、Ｘｙｌｉｔａｂ（
登録商標））、およびラクトース；天然または合成ゴム、例えば、アカシア、トラガカン
ト、ガッチゴム、イサポール皮の粘液、ポリビニルピロリドン（例えば、Ｐｏｌｙｖｉｄ
ｏｎｅ（登録商標）ＣＬ、Ｋｏｌｌｉｄｏｎ（登録商標）ＣＬ、Ｐｏｌｙｐｌａｓｄｏｎ
ｅ（登録商標）ＸＬ－１０）、カラマツアラボガラクタン、Ｖｅｅｇｕｍ（登録商標）、
ポリエチレングリコール、ワックス、アルギン酸ナトリウムが含まれる。
「担体」または「担体材料」は、薬剤学において一般的に使用される任意の賦形剤を含
み、イブルチニブおよび抗がん剤の化合物などの本明細書に開示される化合物との適合性
、ならびに望ましい剤形の放出プロファイル特性に基づいて選択されるべきである。例示
的な担体材料には、例えば、結合剤、懸濁剤、崩壊剤、充填剤、界面活性剤、可溶化剤、
安定剤、潤滑剤、湿潤剤、希釈剤などが含まれる。「医薬適合性担体材料」には、限定さ
れないが、アカシア、ゼラチン、コロイド状二酸化ケイ素、グリセロリン酸カルシウム、
乳酸カルシウム、マルトデキストリン、グリセリン、ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピ
ロリドン（ＰＶＰ）、コレステロール、コレステロールエステル、カゼイン酸ナトリウム
、大豆レシチン、タウロコール酸、ホスホチジルコリン、塩化ナトリウム、リン酸三カル
シウム、リン酸二カリウム、セルロースおよびセルロース結合体、糖ステアロイル乳酸ナ
トリウム、カラギーナン、モノグリセリド、ジグリセリド、アルファ化デンプンなどが含
まれ得る。例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Nineteenth Ed
(Easton, Pa.: Mack Publishing Company, 1995)；Hoover, John E., Remington’s Pha
rmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania 1975；Liberman,
H.A. and Lachman, L., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York
, N.Y., 1980；およびPharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Seven
th Ed. (Lippincott Williams & Wilkins1999)を参照されたい。
「分散剤」および／または「粘度調整剤」は、液体媒体または造粒法または混和法によ
り薬物の拡散および均一性を制御する材料を含む。一部の実施形態では、これらの薬剤は
また、コーティングまたは侵食マトリックスの有効性を促進する。例示的な拡散促進剤／
分散剤としては、例えば、親水性ポリマー、電解質、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）６０または
８０、ＰＥＧ、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ；Ｐｌａｓｄｏｎｅ（登録商標）として商
業的に公知である）、および炭水化物ベースの分散剤、例えば、ヒドロキシプロピルセル
ロース（例えば、ＨＰＣ、ＨＰＣ－ＳＬ、およびＨＰＣ－Ｌ）、ヒドロキシプロピルメチ
ルセルロース（例えば、ＨＰＭＣ Ｋ１００、ＨＰＭＣ Ｋ４Ｍ、ＨＰＭＣ Ｋ１５Ｍ、
およびＨＰＭＣ Ｋ１００Ｍ）、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロ
ース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、フタル酸ヒドロキ
シプロピルメチルセルロース、酢酸ステアリン酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース（
ＨＰＭＣＡＳ）、非結晶性セルロース、ケイ酸マグネシウムアルミニウム、トリエタノー
ルアミン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ビニルピロリドン／酢酸ビニル共重合体（
Ｓ６３０）、エチレンオキシドとホルムアルデヒドを含む４－（１，１，３，３－テトラ
メチルブチル）－フェノールポリマー（チロキサポールとしても公知である）、ポロキサ
マー（例えば、酸化エチレンと酸化プロピレンのブロック共重合体であるＰｌｕｒｏｎｉ
ｃｓＦ６８（登録商標）、Ｆ８８（登録商標）、およびＦ１０８（登録商標））；および
ポロキサミン（例えば、Ｔｅｔｒｏｎｉｃ９０８（登録商標）、ポロキサミン９０８（登
録商標）としても公知であり、エチレンジアミンへのプロピレンオキシドおよびエチレン
オキシドの逐次付加から誘導される四官能性ブロック共重合体である）（ＢＡＳＦ Ｃｏ
ｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ．））、ポリビニルピロリドンＫ１
２、ポリビニルピロリドンＫ１７、ポリビニルピロリドンＫ２５、またはポリビニルピロ
リドンＫ３０、ポリビニルピロリドン／酢酸ビニル共重合体（Ｓ－６３０）、ポリエチレ
ングリコール（例えば、ポリエチレングリコールは、約３００～約６０００、または約３
３５０～約４０００、または約７０００～約５４００の分子量を有することができる）、
カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ポリソルベート－８０、ア
ルギン酸ナトリウム、ゴム、例えば、トラガカントゴムおよびアカシアゴム、グアーゴム
、キサンタン、例えば、キサンタンゴム、糖、セルロース系物質、例えば、カルボキシメ
チルセルロースナトリウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム
、ポリソルベート－８０、アルギン酸ナトリウム、ポリエトキシル化ソルビタンモノラウ
レート、ポリエトキシル化ソルビタンモノラウレート、ポビドン、カルボマー、ポリビニ
ルアルコール（ＰＶＡ）、アルギン酸塩、キトサンおよびそれらの組合せが挙げられる。
セルロースまたはトリエチルセルロースなどの可塑剤はまた分散剤として使用することが
できる。リポソーム分散剤および自己乳化分散剤において特に有用な分散剤は、ジミリス
トイルホスファチジルコリン、卵由来の天然ホスファチジルコリン、卵由来の天然ホスフ
ァチジルグリセロール、コレステロールおよびミリスチン酸イソプロピルである。
１つ以上の侵食促進剤と１つ以上の拡散促進剤との組合せが、本発明の組成物において
使用され得る。
「希釈剤」という用語は、送達前に目的の化合物を希釈するために使用される化学化合
物を指す。希釈剤はまた、より安定した環境を提供することができるため、化合物の安定
化にも使用することができる。緩衝液に溶解した塩（これはまた、ｐＨ制御または維持を
提供することができる）は、限定されないが、リン酸緩衝食塩水を含む、当該技術分野に
おいて希釈剤として利用される。特定の実施形態では、希釈剤は、組成物のかさを増加さ
せて、圧縮を促進するか、またはカプセル充填のための均質な混和に十分なかさを作り出
す。このような化合物には、例えば、ラクトース、デンプン、マンニトール、ソルビトー
ル、デキストロース、微結晶性セルロース、例えば、Ａｖｉｃｅｌ（登録商標）；リン酸
二カルシウム、リン酸二カルシウム二水和物；リン酸三カルシウム、リン酸カルシウム；
無水ラクトース、噴霧乾燥されたラクトース；アルファ化デンプン、圧縮性糖、例えば、
Ｄｉ－Ｐａｃ（登録商標）（Ａｍｓｔａｒ）；マンニトール、ヒドロキシプロピルメチル
セルロース、酢酸ステアリン酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、スクロースベース
の希釈剤、製菓用糖；一塩基性硫酸カルシウム一水和物、硫酸カルシウム二水和物；乳酸
カルシウム三水和物、デキストレート；加水分解された穀物固形物、アミロース；粉末セ
ルロース、炭酸カルシウム；グリシン、カオリン；マンニトール、塩化ナトリウム；イノ
シトール、ベントナイトなどが含まれる。
「充填剤」には、ラクトース、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、二塩基性リン酸カ
ルシウム、硫酸カルシウム、微結晶性セルロース、セルロース粉末、デキストロース、デ
キストレート、デキストラン、デンプン、アルファ化デンプン、スクロース、キシリトー
ル、ラクチトール、マンニトール、ソルビトール、塩化ナトリウム、ポリエチレングリコ
ールなどの化合物が含まれる。
「潤滑剤」および「滑剤」は、材料の付着または摩擦を防止、低減または阻害する化合
物である。例示的な潤滑剤には、例えば、ステアリン酸、水酸化カルシウム、タルク、ス
テアリルフマル酸ナトリウム、炭化水素、例えば、鉱油、または水素化植物油、例えば、
水素化大豆油（Ｓｔｅｒｏｔｅｘ（登録商標）、高級脂肪酸ならびにそれらのアルカリ金
属塩およびアルカリ土類金属塩、例えば、アルミニウム、カルシウム、マグネシウム、亜
鉛、ステアリン酸、ステアリン酸ナトリウム、グリセロール、タルク、ワックス、Ｓｔｅ
ａｒｏｗｅｔ（登録商標）、ホウ酸、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリ
ウム、ロイシン、ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ－４０００）またはメトキシ
ポリエチレングリコール、例えば、Ｃａｒｂｏｗａｘ（商標）、オレイン酸ナトリウム、
安息香酸ナトリウム、ベヘン酸グリセリル、ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸マグ
ネシウムまたはラウリル硫酸ナトリウム、コロイドシリカ、例えば、Ｓｙｌｏｉｄ（商標
）、Ｃａｂ－Ｏ－Ｓｉｌ（登録商標）、デンプン、例えば、コーンスターチ、シリコーン
オイル、界面活性剤などが含まれる。
「可塑剤」は、マイクロカプセル化材料またはフィルムコーティングを軟化させて、そ
れらをより脆くしないようにするために使用される化合物である。適切な可塑剤には、例
えば、ポリエチレングリコール、例えば、ＰＥＧ３００、ＰＥＧ４００、ＰＥＧ６００、
ＰＥＧ１４５０、ＰＥＧ３３５０、およびＰＥＧ８００、ステアリン酸、プロピレングリ
コール、オレイン酸、トリエチルセルロースおよびトリアセチンが含まれる。一部の実施
形態では、可塑剤はまた、分散剤または湿潤剤として機能することができる。
「可溶化剤」には、トリアセチン、クエン酸トリエチル、オレイン酸エチル、カプリル
酸エチル、ラウリル硫酸ナトリウム、ドクシン酸ナトリウム、ビタミンＥ ＴＰＧＳ、ジ
メチルアセトアミド、Ｎ－メチルピロリドン、Ｎ－ヒドロキシエチルピロリドン、ポリビ
ニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルシクロデキ
ストリン、エタノール、ｎ－ブタノール、イソプロピルアルコール、コレステロール、胆
汁酸塩、ポリエチレングリコール２００～６００、グリコフロール、トランスクトール、
プロピレングリコール、およびジメチルイソソルビドなどの化合物が含まれる。
「安定剤」は、任意の抗酸化剤、緩衝剤、酸、防腐剤などの化合物を含む。
「懸濁剤」には、ポリビニルピロリドン、例えば、ポリビニルピロリドンＫ１２、ポリ
ビニルピロリドンＫ１７、ポリビニルピロリドンＫ２５、またはポリビニルピロリドンＫ
３０、ビニルピロリドン／酢酸ビニル共重合体（Ｓ６３０）、ポリエチレングリコール（
例えば、ポリエチレングリコールは、約３００～約６０００、または約３３５０～約４０
００、または約７０００～約５４００の分子量を有することができる）、ナトリウムカル
ボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、酢
酸ステアリン酸ヒドロキシメチルセルロース、ポリソルベート－８０、ヒドロキシエチル
セルロース、アルギン酸ナトリウム、ゴム、例えば、ゴムトラガカントおよびゴムアカシ
アゴム、グアーゴム、キサンタン、例えば、キサンタンゴム、糖、セルロース系物質、例
えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセ
ルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロー
ス、ポリソルベート－８０、アルギン酸ナトリウム、モノラウリン酸ポリエトキシル化ソ
ルビタン、モノラウリン酸ポリエトキシル化ソルビタン、ポビドンなどの化合物を含む。
「界面活性剤」には、ラウリル硫酸ナトリウム、ドクシン酸ナトリウム、Ｔｗｅｅｎ６
０または８０、トリアセチン、ビタミンＥ ＴＰＧＳ、モノオレイン酸ソルビタン、モノ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン、ポリソルベート、ポラキソマー、胆汁酸塩、
モノステアリン酸グリセリル、エチレンオキシドとプロピレンオキシドの共重合体、例え
ば、プルロニック（登録商標）（ＢＡＳＦ）などの化合物が含まれる。他のいくつかの界
面活性剤には、ポリオキシエチレン脂肪酸グリセリドおよび植物油、例えば、ポリオキシ
エチレン（６０）硬化ヒマシ油；ならびにポリオキシエチレンアルキルエーテルおよびア
ルキルフェニルエーテル、例えば、オクトキシノール１０、オクトキシノール４０が含ま
れる。一部の実施形態では、界面活性剤は、物理的安定性を高めるために、または他の目
的のために含まれ得る。
「粘度増強剤」には、例えば、メチルセルロース、キサンタンゴム、カルボキシメチル
セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、酢
酸ステアリン酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、フタル酸ヒドロキシプロピルメチ
ルセルロース、カルボマー、ポリビニルアルコール、アルギン酸塩、アカシア、キトサン
およびそれらの組合せが含まれる。
「湿潤剤」には、オレイン酸、モノステアリン酸グリセリル、モノオレイン酸ソルビタ
ン、モノラウリン酸ソルビタン、オレイン酸トリエタノールアミン、モノオレイン酸ポリ
オキシエチレンソルビタン、モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン、ドクセート
ナトリウム、オレイン酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ドクセート（doccusate
）ナトリウム、トリアセチン、Ｔｗｅｅｎ８０、ビタミンＥ ＴＰＧＳ、アンモニウム塩
などの化合物が含まれる。
キット／製品
本明細書では、特定の実施形態において、本明細書に記載される１つ以上の方法で使用
するためのキットおよび製品が開示される。このようなキットには、バイアル、チューブ
などの１つ以上の容器を受け入れるように区画化された担体、パッケージ、または容器を
含み、各容器（複数可）は、本明細書に記載される方法で使用される別個の要素の１つを
含む。適切な容器には、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、および試験管が含まれる
。一実施形態では、容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成される
。
本明細書で提供される製品は、包装材料を含む。医薬品包装材料の例には、限定されな
いが、ブリスターパック、ボトル、チューブ、バッグ、容器、ボトル、ならびに選択され
た製剤、および意図される投与および治療の様式に適した任意の包装材料が含まれる。
例えば、容器（複数可）は、本明細書に記載されるＣＡＲ－Ｔ細胞（例えば、ＣＤ１９
ＣＡＲ－Ｔ細胞）を含み、任意選択で、本明細書に開示されるサイトカインおよび／ま
たは化学療法剤をさらに含む。このようなキットは、任意選択で、本明細書に記載される
方法におけるその使用に関する識別説明またはラベルまたは指示を任意に含む。
キットは、典型的には、内容を列挙するラベルおよび／または使用説明書、ならびに使
用説明書を含む添付文書を含む。一連の説明書もまた典型的には含まれる。
一部の実施形態では、ラベルは、容器上にあるか、または容器に付随する。一実施形態
では、ラベルを形成する文字（letter）、数字、または他の文字（character）が容器自
体に取り付けられ、成形されまたはエッチングされる場合、ラベルは容器上にあり；例え
ば、添付文書として容器も保持するレセプタクルまたはキャリア内に存在する場合、ラベ
ルは容器に付随する。一実施形態では、ラベルは、内容物が特定の治療用途に使用される
ことを示すために使用される。ラベルは、本明細書に記載される方法などにおける内容物
の使用説明書も示す。
配列
本明細書において提供される実施形態に含まれる特定の配列の代表的なリストを以下に
提供する。
これらの実施例は、例示の目的でのみ提供され、本明細書に提供される特許請求の範囲
を限定するものではない。
[実施例１]
様々な長さのＣＤ８α由来のスペーサーを有するキメラ抗原受容体
ストーク領域およびストーク伸長領域を含むスペーサーを組み込んだキメラ抗原受容体
（複数可）を生成した。ストーク領域は、ＣＤ８αヒンジ領域の配列（配列番号３）を含
み、およびストーク伸長領域（複数可）は、１、２、または３つの領域を含んだ。各スト
ーク伸長領域は、ジスルフィド結合を形成するシステイン残基（表１における太字の残基
）がセリン（表１における下線の付いた残基）に変換された、変更されたＣＤ８αヒンジ
領域配列（配列番号２）を含んだ。図２に記述される２Ｘ、３Ｘ、および４Ｘバージョン
では、ＣＤ８αヒンジ配列を含むストーク領域は、ジスルフィド結合を形成するシステイ
ンを保持した。このストーク領域は、システインを欠く改変領域の下流であった。２番目
のバージョンの３Ｘストーク（３Ｘ ｖ２）を生成し、ジスルフィド結合を形成するシス
テインを保持するストーク伸長領域は、ストーク領域およびストーク伸長領域の上流にあ
り、どちらの領域にもシステインを欠いていた。生成された１Ｘ、２Ｘ、３Ｘ、４Ｘ、お
よび３Ｘ ｖ２のストークのアミノ酸配列を表１に列挙する。
[実施例２]
様々な長さのＣＤ８α由来スペーサーを有するＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞を生成するた
めのＳＢシステムによるＰＢＭＣのヌクレオフェクション（ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｉｏｎ
）
スペーサー長が変化するＣＤ１９特異的ＣＡＲを発現するためのＤＮＡプラスミドをＳ
Ｂトランスポゾンベクターにクローニングした。ＳＢトランスポゾンは、Ｔ細胞の特異性
を再方向付けするために、ヌクレオフェクションを介して末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）に
トランスフェクトされた。
０日目に、２０００万個のＰＢＭＣは、計１５μｇのトランスポゾンおよび５μｇのト
ランスポザーゼ（ＳＢ１１）と混合してエレクトロポレーションした１００μＬのＡｍａ
ｘａ Ｈｕｍａｎ Ｔ細胞Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ溶液（Ｌｏｎｚａ、Ｂａｓｅｌ、Ｓ
ｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）に再懸濁された。
翌日（１日目）の細胞をカウントし、ＣＡＲ発現をフローサイトメトリーで測定した。
ＣＡＲ－Ｔ細胞は、γ線照射（１００Ｇｙ）またはマイトマイシンＣで処理したＡａＰＣ
を１：１の比で刺激した。使用したＡａＰＣ細胞は、ＣＤ１９抗原を発現するＫ５６２－
ＡａＰＣであった。培養物には、刺激の初回でのみＩＬ－２１（３０ｎｇ／ｍｌ）を補足
し、その後、残りの刺激のために組換えヒトＩＬ－２（５０ＩＵ／ｍｌ）およびＩＬ－２
１（３０ｎｇ／ｍｌ）（Ｐｅｐｒｏ Ｔｅｃｈ）を補足した。ＣＡＲ－Ｔ細胞培養物は、
典型的には、７日間続けた各刺激サイクルの終わりに表現型分類された。培養物は、プロ
テインＬ、またはＣＤ１９特異的ＣＡＲを認識する抗イディオタイプ抗体のいずれかを利
用したマルチパラメーターフローサイトメトリーにより、ＣＡＲ発現の表現型を決定され
た。培養物はまたＮＫ細胞（ＣＤ３ｎｅｇＣＤ５６＋集団として定義される）の成長につ
いて綿密に監視され、製造元の指示に従って、ＣＤ５６に特異的な磁気ビーズ（Ｓｔｅｍ
Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓおよび／またはＭｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ
）を使用して、割合が全細胞集団の１０％を超えた場合にＣＡＲ Ｔ細胞培養物から削除
された。
[実施例３]
様々な長さのＣＤ８α由来のスペーサーを有するＣＤ１９特異的ＣＡＲの発現
表１に列挙される、ＣＤ１９特異的な抗原結合領域およびＣＤ８α由来のスペーサーを
有するＣＡＲを発現するＴ細胞を生成した。
様々なスペーサー長のＣＤ１９特異的ＣＡＲの発現レベルは、実施例２に記載されるよ
うに、ＡａＰＣとの共培養による刺激を連続回行った後に決定された。ＣＡＲ発現レベル
は、フローサイトメトリーにより決定された。フローサイトメトリー実験では、細胞を穏
やかに再懸濁し、Ｃｏｕｎｔｅｓｓ機器でトリパンブルー排除法を使用して細胞数および
生存率を測定した。各試料の５×１０５細胞を３３０×ｇで４分間回収した。回収された
細胞を氷上でＨＢＳＳ中の１０％ヒトＡＢ血清とともに少なくとも１５分間インキュベー
トした。蛍光結合抗体を含む抗体カクテルには、ＨＢＳＳ＋０．１％ＢＳＡ＋２ｍＭ Ｅ
ＤＴＡ中のＣＤ４（クローンＲＰＡ－Ｔ４）、ＣＤ８（クローンＳＫ１）、ＣＤ３（クロ
ーンＵＣＨＴ１）、ＣＤ５６、およびＣＤ１９特異的ＣＡＲ（抗イディオタイプ抗体）に
特異的な１つ以上の抗体が含まれる。調製した抗体カクテルおよび関連する蛍光マイナス
１つの／アイソタイプ対照を加えて、細胞試料を染色し、次に、試料を氷上で３０分間イ
ンキュベートした。次に、試料をＦＡＣＳ緩衝液（ＨＢＳＳ＋０．５％ＢＳＡ＋２ｍＭ
ＥＤＴＡ）で洗浄し、Ｆｉｘａｂｌｅ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｄｙｅ（ｅＢｉｏｓｃｉｅ
ｎｃｅｓ）を用いて氷上で３０分間染色した。細胞をＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、次に、４
％パラホルムアルデヒド溶液（ＢＤ Ｃｙｔｏｆｉｘ；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）
で固定した。すべての試料をＬＳＲ ＩＩフローサイトメーター、Ｆｏｒｔｅｓｓａ Ｘ
－２０フローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）またはｉＱｕｅ Ｓｃｒ
ｅｅｎｅｒ Ｐｌｕｓ（Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ）で作動し、ＦｌｏｗＪｏ Ｖ１０（Ｔｒ
ｅｅＳｔａｒ、Ａｓｈｌａｎｄ、ＯＲ）またはｉＱｕｅ Ｓｃｒｅｅｎｅｒソフトウェア
を使用してデータを分析した。２つの例示的な実験からのデータを表２にまとめる。エク
スビボ拡大からのＴ細胞カウントもまた追跡し、対応するデータを図３に記述する。
表２に示されるように、スペーサーがストーク領域のみを含む場合（ＣＤ８－１Ｘ）と
比較して、スペーサーがストーク伸長領域を含む場合（ＣＤ８－２Ｘ、ＣＤ８－３Ｘおよ
びＣＤ８－４Ｘ）、同等の可溶性蛍光色素の分子（Molecules of Equivalent Soluble Fl
uorchrome）（ＭＥＳＦ）およびＣＡＲを発現するＴ細胞の％によって測定すると、改善
されたＣＤ１９特異的ＣＡＲ発現が観察された。図３に示されるように、様々な長さのス
ペーサーを有するＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞の同様のレベルの拡大が観察された。ＣＤ８
－３Ｘ ｖ２スペーサーを有するＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞は、細胞表面上でＣＡＲを発
現することができず、ＡａＰＣとの共培養時にエクスビボで拡大することができなかった
。ＣＤ８－３ＸとＣＤ８－３Ｘ ｖ２スペーサー間の違いは、鎖間ジスルフィド結合を破
壊するアミノ酸置換の位置である。このデータは、様々な長さのスペーサーを使用する場
合、二量体化部位のアミノ酸置換の配置がタンパク質の発現に重要であることを示唆する
。
別の健康なドナーのＰＢＭＣに由来するヒトＴ細胞において、ストーク伸長領域を有す
る（ＣＤ８－３Ｘ）またはストーク伸長領域を有しない（ＣＤ８－１Ｘ）ＣＤ１９特異的
ＣＡＲの発現を比較した。ＣＤ１９特異的ＣＡＲは、ＳＢシステムを使用して導入され、
ＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞は、実施例２に記載されるように、エクスビボで２８日間、Ａ
ａＰＣと共培養することにより増殖誘導された。Ｔ細胞は、ヌクレオフェクション後の１
、１４、２１および２８日目にフローサイトメトリーにより分析され、ＣＤ１９特異的Ｃ
ＡＲの発現を測定した。図３Ｂは、ＣＤ１９特異的ＣＡＲに陽性であった培養中のＴ細胞
の％を捕捉し、図３Ｂは、ＣＤ１９特異的ＣＡＲの生の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を捕捉す
る。図３Ｂに示されているデータは、このドナーのＣＡＲ－Ｔ細胞のエクスビボ拡大期を
通じて、Ｔ細胞の同様の割合がＣＤ１９特異的ＣＡＲ発現を示したことを示す。しかしな
がら、ＭＦＩは、ストーク伸長領域なしの場合（ＣＤ８－１Ｘ）と比較して、ストーク伸
長領域（ＣＤ８－３Ｘ）を有するＣＤ１９特異的ＣＡＲの場合に有意に高く、これは、ス
トーク伸長領域を利用したときにＣＡＲの発現レベルが改善されたことを意味した。
様々な長さのスペーサーを有するＣＤ１９特異的ＣＡＲの発現もまた、ウエスタンブロ
ット分析を介して確認された（図４）。
様々なスペーサー長のＣＤ１９特異的ＣＡＲを発現させるために、ＰＢＭＣをＳｌｅｅ
ｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙシステムのプラスミドでヌクレオフェクトした。ヌクレオフェク
トされた細胞は、実施例２に記載されるように、ＡａＰＣの存在下で培養された。
４回の刺激後、細胞溶解物をウエスタンブロット分析のために調製した。ＮｕＰＡＧＥ
１０％Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓゲルの約１０μｇ溶解物／レーンをロードした。タンパク質は
、ｉＢｌｏｔ（登録商標）（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）セミドライ転写装置
を使用して、ゲルからポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）膜に転写された。膜は、ＰＢＳ
＋Ｔｗｅｅｎ－２０（ＰＢＳＴ；１×ＰＢＳ＋０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０）溶液中の５
％（ｗ／ｖ）粉乳溶液を使用してブロックされ、ヤギ抗ヒトＣＤ３ζ一次抗体およびウサ
ギ抗ヤギＩｇＧ ＨＲＰ（ＫＰＬ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）二次抗体で染色された。
増強された化学発光（ＥＣＬ）検出用のＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ（商標）Ｗｅｓｔ Ｐｉ
ｃｏ化学発光基質（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用した。
ウエスタンブロットの画像は、Ｄｉｇｉｔａｌ Ｄａｒｋｒｏｏｍソフトウェアおよび
ＡｌｐｈａＶｉｅｗ（登録商標）ソフトウェア（ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅ）を使用し
て、ＦｌｕｏｒＣｈｅｍ（商標）Ｅイメージャー（ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅ、Ｓａｎ
Ｊｏｓｅ、ＣＡ）システムで捕捉された。図４は、ウエスタンブロットの画像を示す。
図４の矢印で示すように、ストーク伸長領域からのスペーサー長の増加に対応する抗ＣＤ
３ζ抗体によって、ますますより高分子量のバンドが検出された。予期される分子量のネ
イティブＣＤ３ζバンドもまた検出された。
[実施例４]
長さの異なるＣＤ８α由来スペーサーを用いたＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞の細胞毒性
ＣＤ１９抗原（Ｋ５６２／ＣＤ１９）を発現するように修飾されたＫ５６２細胞株に対
する様々な長さのＣＤ８α由来スペーサーを有するＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞の細胞毒性
を、２時間のユーロピウム放出アッセイにおいて測定された。Ｋ５６２／ＣＤ１９標的細
胞株は、ＤＥＬＦＩＡ ＢＡＴＤＡ試薬（ＤＥＬＦＩＡ ＥｕＴＤＡ細胞毒性アッセイ；
Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用して標識された。ＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔエフェクター
（Ｅ）細胞は、標識されたＫ５６２／ＣＤ１９標的（Ｔ）細胞と１０：１、５：１ ２：
２または１：１の（Ｅ：Ｔ）比で共培養された。２時間後、共培養からの上清を回収し、
ＤＥＬＦＩＡユーロピウムアッセイを追加して発色させ、時間分解蛍光装置で読み取って
、標的細胞の細胞毒性を測定した。例示的な実験の結果を図５Ａに記述する。
図５Ａに示されるように、様々な長さのスペーサーを有するＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞
は、Ｋ５６２／ＣＤ１９標的細胞の用量依存的な細胞毒性を示した。ストーク伸長領域（
複数可）を有するＣＤ８α由来スペーサー（ＣＤ８－２Ｘ、ＣＤ８－３ＸおよびＣＤ８－
４Ｘ）を有するＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞は、伸長されたストーク領域を欠く（ＣＤ８－
１Ｘ）ＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞と比較して、Ｋ５６２／ＣＤ１９細胞の類似したまたは
改善した細胞毒性を示した。より長いＣＤ８α由来スペーサー（ＣＤ８－２Ｘ、ＣＤ８－
３ＸおよびＣＤ８－４Ｘ）を有するＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞によって発揮される細胞毒
性は、特により低いＥ：Ｔ比（２：１および１：１）で改善され、ストーク伸長領域を欠
く（ＣＤ８－１Ｘ）ＣＡＲ－Ｔ細胞と比較した、これらのＣＡＲ－Ｔ細胞の効力の増加を
示唆する。
さらに、様々な長さのスペーサーを有するＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞の特異性は、Ｋ５
６２／ＣＤ１９細胞株、ならびに親Ｋ５６２（ＣＤ１９ｎｅｇ）およびＣＤ１９ｎｅｇＥ
Ｌ４細胞株との共培養アッセイにより実証された。すべての標的細胞株は、ＤＥＬＦＩＡ
ＢＡＴＤＡ試薬（ＤＥＬＦＩＡ ＥｕＴＤＡ細胞毒性アッセイ；Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍ
ｅｒ）を使用して標識された。ＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔエフェクター（Ｅ）細胞は、ＣＤ１
９＋またはＣＤ１９ｎｅｇ標識された標的（Ｔ）細胞と１０：１の（Ｅ：Ｔ）比で共培養
された。２時間後、共培養物の上清を回収し、ＤＥＬＦＩＡユーロピウムアッセイを添加
して発色させ、時間分解蛍光測定装置で読み取って、標的細胞の細胞毒性を測定した。ア
ッセイの結果を図５Ｂに示す。
図５Ｂに示されるように、ＣＤ８－１Ｘスペーサーを有するＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞
と比較して、Ｋ５６２／ＣＤ１９細胞株の同様の（ＣＤ８－２ＸおよびＣＤ８－３Ｘ）ま
たは幾分低い（ＣＤ８－４Ｘ）細胞毒性が、スペーサーが伸長されたＣＤ１９－ＣＡＲ－
Ｔ細胞によって観察された。しかしながら、ＣＤ８－１Ｘスペーサーを有するＣＤ１９－
ＣＡＲ－Ｔ細胞は、このアッセイにおいてＣＤ１９ｎｅｇ親Ｋ５６２細胞株の非特異的な
細胞毒性を示した。一方、ストーク伸長領域を有するＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＣＤ
１９ｎｅｇ親Ｋ５６２細胞株の非特異的な細胞毒性を示さなかった。これは、伸長された
スペーサーを有するＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞で観察されたＫ５６２／ＣＤ１９細胞の細
胞毒性がわずかに低いことを説明している可能性がある。重要なことに、伸長されたスペ
ーサーを有するＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞は、より高いＣＤ１９標的特異性を示した。
要約すると、図５は、特により低いＥ：Ｔ比でのＣＤ１９＋標的細胞株の細胞毒性の改
善、ならびにＣＤ１９抗原に対する特異性の改善により示されるように、ストーク伸長領
域を欠くＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞と比較して、ストーク伸長領域を有するＣＤ１９－Ｃ
ＡＲ－Ｔ細胞が優れた機能性を示したことを示す。
[実施例５]
ＣＤ１９抗原を発現する細胞に応答するＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞による特異的サイト
カイン生成
サイトカイン生成は、ＣＤ１９＋またはＣＤ１９ｎｅｇ腫瘍細胞へのＣＤ８α由来スペ
ーサー長を変化させたＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞の共培養後に測定された。簡単に述べれ
ば、ＣＤ８α由来スペーサーが異なるＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞は、Ｋ５６２／ＣＤ１９
（ＣＤ１９＋）またはＫ５６２（ＣＤ１９ｎｅｇ）またはＥＬ４（ＣＤ１９ｎｅｇ）細胞
株と１０：１のＥ：Ｔ比で一晩共培養された。ＱＢｅａｄｓ（登録商標）（Ｉｎｔｅｌｌ
ｉｃｙｔ）を使用して、多重サイトカイン分析のために培養上清を回収した。多重分析は
、回収された培養培地中に存在するヒトＩＦＮγ、ＩＬ－２およびＴＮＦの発現について
行われた。例示的な実験のデータを図６Ａ～６Ｃに示す。
ＣＤ８αヒンジストーク領域のみを含むＣＤ１９特異的ＣＡＲと比較して、ＣＤ１９特
異的ＣＡＲがＣＤ８α由来ストーク伸長領域を含む場合、Ｋ５６２／ＣＤ１９細胞株との
共培養後に有意に高いレベルのＩＦＮγ、ＩＬ－２およびＴＮＦサイトカインが検出され
た。ＣＤ１９ｎｅｇ細胞株がサイトカイン応答を誘導できなかったため、試験されたすべ
てのＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞のサイトカイン応答の上昇は、Ｋ５６２／ＣＤ１９細胞株
の表面上に存在するＣＤ１９抗原に特異的に応答した。プロットされた値は、二重にして
試験された試料の平均±ＳＤを表す。
要約すると、図６は、ストーク伸長領域を有するＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞が、ＣＤ１
９を発現する腫瘍細胞に応答してストーク伸長領域を欠くＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞と比
較して優れたサイトカイン分泌を示したことを示す。
[実施例６]
様々な長さのＣＤ８α由来のスペーサーを有するＣＤ３３－ＣＡＲ－Ｔ細胞の特徴付け
表１に列挙されたＣＤ３３特異的な抗原結合領域およびＣＤ８α由来スペーサーを有す
るＣＡＲを発現するＴ細胞をＳＢシステムによって生成した。
簡単に述べれば、ＣＤ３３特異的ＣＡＲベクターは、トランスポゾンのゲノム組み込み
を媒介するためにＳｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙベースのトランスポゾンシステムを使
用して、エレクトロポレーションを介してＰＢＭＣに導入された。０日目に、２，０００
万個のＰＢＭＣを１００μＬのＡｍａｘａヒトＴ細胞Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ溶液（カ
タログ番号ＶＰＡ－１００２；Ｌｏｎｚａ、Ｂａｓｅｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）に懸
濁し、１５μｇのＣＡＲトランスポゾンおよび５μｇのＳＢトランスポザーゼと混合し、
エレクトロポレーションした。翌日（１日目）の細胞数および生存率を測定し、続いて、
フローサイトメトリーでＣＡＲの発現を定量化した。ＣＡＲ－Ｔ細胞は、γ線照射（１０
０Ｇｙ）またはマイトマイシンＣで処理したＡａＰＣを１：１の比で刺激した。使用した
ＡａＰＣ細胞は、ＣＤ３３抗原を発現するＫ５６２細胞株であった。ＣＤ３３－ＣＡＲ－
Ｔ細胞は、ＡａＰＣを１：１の比で週１回刺激することにより、エクスビボで拡大された
。培養物をＩＬ－２（５０ＩＵ／ｍｌ）および／またはＩＬ－２１（３０ｎｇ／ｍｌ）で
維持した。ＣＤ３３特異的ＣＡＲ発現は、マルチパラメーターフローサイトメトリーによ
って検出された組換えＣＤ３３／Ｆｃタンパク質染色を使用して測定された。
２人の健康なドナー由来のＴ細胞からのスペーサー長が変化するＣＤ３３特異的ＣＡＲ
の発現レベルは、表３および図９に要約される。
表３に示すように、スペーサーがＣＤ８αストーク領域のみを含む場合（ＣＤ８－１Ｘ
）と比較して、スペーサーがＣＤ８α由来のストーク伸長領域を含む場合（ＣＤ８－３Ｘ
）、ＣＡＲを発現するＴ細胞の％によって測定すると、改善されたＣＤ３３特異的ＣＡＲ
発現が遺伝子移入後に観察された。ＣＤ１９ ＣＡＲ－Ｔ細胞で観察されたように、ＣＤ
８－３Ｘ ｖ２スペーサーを有するＣＤ３３－ＣＡＲ－Ｔ細胞は、Ｔ細胞表面上での有意
なＣＡＲ発現を示すことができず、ＡａＰＣとの共培養で拡大することができなかった。
ＣＤ８－３ＸとＣＤ８－３Ｘ ｖ２スペーサーの違いは、鎖間ジスルフィド結合を破壊す
るアミノ酸置換の位置である。このデータは、アミノ酸置換の配置が、様々な長さのスペ
ーサーを使用したタンパク質の発現に重要であることを示唆する。
[実施例７]
様々な長さのスペーサーを有するＲＯＲ－１ ＣＡＲ Ｔ細胞の特徴付け
ＲＯＲ－１特異的抗原結合領域および表１に列挙されるＣＤ８α由来スペーサー、なら
びにＬＮＧＦＲ ＥＣＤスペーサー（表４）を有するＣＡＲを発現するＴ細胞は、実施例
２で説明される方法を使用するＳＢシステムを用いて生成された。
様々なストーク長を有するＲＯＲ－１ ＣＡＲの発現レベルは、実施例６において説明
されたものと同様の方法を使用して、ＲＯＲ－１－Ｆｃ融合タンパク質で染色することに
よるフローサイトメトリーを使用して決定された。２つの異なる健常なドナー細胞からの
データを図７Ａ～Ｂに記述する。図７Ａおよび７Ｂに示されるように、ストーク伸長領域
を有しない（ＣＤ８－１Ｘ）ＲＯＲ－１ ＣＡＲは、Ｔ細胞の表面上で発現させることが
できなかった。ストーク伸長領域を有しない（ＣＤ８－１Ｘ）ＲＯＲ－１ ＣＡＲはまた
、エクスビボ培養で拡大させることができなかった（データを示さず）。ストーク伸長領
域（ＣＤ８－２Ｘ、ＣＤ８－３ＸおよびＣＤ８－４Ｘ）を有するＲＯＲ－１ ＣＡＲは、
細胞表面上で高レベルのＣＡＲ発現を示した。要約すると、ＲＯＲ－１ ＣＡＲは、Ｔ細
胞表面上でのＣＡＲの発現を可能にするためにストーク伸長領域（複数可）を必要とする
。
実施例２で説明される方法を使用するＳＢシステムを用いて、表１に列挙されるＣＤ８
α由来のストークおよびＣＤ２８－ＣＤ３ゼータ共刺激ドメインを有する、ＲＯＲ－１特
異的な抗原結合領域を有するＣＡＲを発現するＴ細胞を生成した。これらのＣＡＲ－Ｔ細
胞は、ＲＯＲ－１を発現する腫瘍細胞に対するそれらの機能的活性について評価された。
リソソーム関連膜タンパク質－１（ＬＡＭＰ－１）としても公知であるＣＤ１０７ａは
、細胞の後期エンドソーム－リソソームで構成的に発現されるが、脱顆粒細胞の細胞表面
上で一時的に発現される。脱顆粒アッセイは、ＣＤ８－３Ｘスペーサーを有するＲＯＲ－
１ ＣＡＲ－Ｔ細胞が、細胞ごとを基準に、同時に細胞内ＩＦＮγ検出を伴う、ＲＯＲ－
１発現の有無にかかわらず標的細胞を認識する能力を評価するために確立された。ＲＯＲ
－１ ＣＡＲ－Ｔ細胞を１０：１のＥ：Ｔ比で標的細胞と共培養した。標的細胞には、Ｅ
Ｌ４（ＲＯＲ－１ｎｅｇ）、ＥＬ４－ＲＯＲ－１（ＲＯＲ－１＋）が含まれた。共培養の
開始時に、蛍光を結合させたＣＤ１０７ａまたはアイソタイプ抗体を輸送阻害剤カクテル
（モネンシンおよびブレフェルディンを含む、１Ｘ；ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）とともに
添加し、３７℃で４時間インキュベートした。インキュベーション期間の最後に、細胞を
プレート中でペレット化し、ＣＡＲ発現およびＴ細胞マーカーを検出するために細胞表面
抗原を染色した。細胞表面染色後、製造元の指示に従って、細胞をＦｉｘａｂｌｅ Ｃｅ
ｌｌ生存率色素（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で染色し、次に、洗浄した後、Ｆｉｘ／Ｐｅ
ｒｍ溶液（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で固定した。試料を固定した後、細胞をＰｅ
ｒｍ／Ｗａｓｈ溶液（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で洗浄し、次に、蛍光を結合させ
た抗ヒトＩＦＮγ抗体で細胞内染色した。試料を洗浄し、次に、適切な染色バッファーに
再懸濁し、データは、ＬＳＲ ＩＩフローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ
ｓ）で取得した。例示的な実験のデータを図８Ａ～８Ｂに記述する。ＣＤ８－３Ｘスペー
サーを有するＲＯＲ－１ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、抗原特異的脱顆粒およびＩＦＮγ発現を示
した。
[実施例８]
様々な長さのＬＮＧＦＲ由来のスペーサーを有するキメラ抗原受容体
ストーク領域およびストーク伸長領域を含むキメラ抗原受容体を生成した。表４に示さ
れるように、スペーサー領域は、ＬＮＧＦＲ ＥＣＤ（配列番号１７）、ＬＮＧＦＲ Ｃ
ｙｓ２、３、４（配列番号１８）またはＣｙｓ３、４（配列番号１９）の配列を含んだ。
[実施例９]
様々な長さのＣＤ２８由来のスペーサーを有するキメラ抗原受容体
ストーク領域およびストーク伸長領域を含むキメラ抗原受容体を生成した。ストーク領
域は、ＣＤ２８ヒンジ領域の配列（配列番号３２）、およびストーク伸長領域（ｓ’－ｎ
）（ｎ＝１、２、または３である）を含み、各ストーク伸長領域は、ジスルフィド結合を
形成するシステイン残基（表５における太字の残基）がセリン（表５における下線の付い
た残基）に変換された、変更されたＣＤ２８ヒンジ領域を含んだ。２Ｘ（配列番号３３）
、３Ｘ（配列番号３４）、および４Ｘ（配列番号３５）バージョンでは、ジスルフィド結
合を形成するシステインを保持するＣＤ２８ヒンジ領域は、システインを欠く変更された
領域の下流であった。（ｓ’－ｎ）（ｎ＝０、１、２、および３である）を含む、生成さ
れたＣＤ２８由来の１Ｘ、２Ｘ、３Ｘ、および４Ｘのストークは、それぞれ表５に列挙さ
れる。
[実施例１０]
様々な長さのＣＴＬＡ－４由来のスペーサーを有するキメラ抗原受容体
ストーク領域およびストーク伸長領域を含むキメラ抗原受容体を生成した。ストーク領
域は、ＣＴＬＡ－４ヒンジ領域（配列番号３７）の配列、およびストーク伸長領域（ｓ’
－ｎ）（ｎ＝１、２、または３である）を含み、各ストーク伸長領域は、ジスルフィド結
合を形成するシステイン残基（表６における太字の残基）がセリン（表６における下線の
付いた残基）に変換された、変更されたＣＬＴＡ－４ヒンジ領域を含んだ。２Ｘ（配列番
号３８）、３Ｘ（配列番号３９）、および４Ｘ（配列番号４０）バージョンでは、ジスル
フィド結合を形成するシステインを保持するＣＴＬＡ－４ヒンジ領域は、システインを欠
く変更された領域の下流であった。（ｓ’－ｎ）（それぞれｎ＝０、１、２、および３で
ある）を含む、生成されたＣＴＬＡ－４－由来の１Ｘ、２Ｘ、３Ｘ、および４Ｘストーク
は、それぞれ表６に列挙される。
[実施例１０]
様々な長さのＴＣＲαおよびＴＣＲβヒンジドメイン由来のスペーサーを有するＴ細胞
受容体（ＴＣＲ）
ストーク領域およびストーク伸長領域を含むＴ細胞受容体（ＴＣＲ）αおよびβ鎖を生
成した。ＴＣＲα鎖のストーク領域は、ＴＣＲαヒンジ領域（配列番号７２）の配列、お
よびストーク伸長領域（ｓ’－ｎ）（ｎ＝１、２、または３である）を含み、各巣トーク
伸長領域は、ジスルフィド結合を形成するシステイン残基（表７における太字の残基）が
セリン（表７における下線の付いた残基）に変換された変更されたＴＣＲαヒンジ領域を
含んだ。表７に示される２Ｘ（配列番号７７）、３Ｘ（配列番号７８）、および４Ｘ（配
列番号７９）バージョンでは、ジスルフィド結合を形成するシステインを保持するＴＣＲ
αヒンジ領域は、システインを欠く変更された領域の下流（Ｃ末端）にあった。（ｓ’－
ｎ）（それぞれｎ＝０、１、２、および３である）を含む、生成されたＴＣＲαヒンジ領
域由来の１Ｘ、２Ｘ、３Ｘ、および４Ｘのストークは、表７に列挙される。
ＴＣＲβ鎖のストーク領域は、ＴＣＲβヒンジ領域（配列番号８６）の配列、およびス
トーク伸長領域（ｓ’－ｎ）（ｎ＝１、２、または３である）を含み、各ストーク伸長領
域は、ジスルフィド結合を形成するシステイン残基（表８における太字の残基）がセリン
（表８における下線の付いた残基）に変換された、変更されたＴＣＲβヒンジ領域を含ん
だ（配列番号８７）。表８に示される２Ｘ（配列番号９１）、３Ｘ（配列番号９２）、お
よび４Ｘ（配列番号９３）バージョンでは、ジスルフィド結合を形成するシステインを保
持するＴＣＲβヒンジ領域は、システインを欠く変更された領域の下流（Ｃ末端）であっ
た。生成されたＴＣＲβヒンジ領域に由来する、（ｓ’－ｎ）（それぞれｎ＝０、１、２
、および３である）を含む１Ｘ、２Ｘ、３Ｘ、および４Ｘのストークは、表８に列挙され
る。
[実施例１１]
様々な長さのＣＤ８α由来のスペーサーを有するＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的ＣＡＲの発現
表１に列挙される、ＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的な抗原結合領域（ＭＲ１－１およびｈｕＭ
Ｒ１－１）およびＣＤ８α由来のスペーサーを有するＣＡＲを発現するＴ細胞をＳＢシス
テムによって生成した。
簡単に述べれば、ＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的ＣＡＲベクターは、トランスポゾンのゲノム
組み込みを媒介するために、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙベースのトランスポゾンシ
ステムを使用して、エレクトロポレーションを介して導入された。０日目に、ＰＢＭＣは
、ＣＡＲトランスポゾンおよびＳＢトランスポザーゼと混合され、エレクトロポレーショ
ンされた。翌日（１日目）、細胞数および生存率を測定し、続いて、フローサイトメトリ
ーでＣＡＲの発現を定量化した。ＣＡＲ－Ｔ細胞は、γ線照射またはマイトマイシンＣ処
理されたＡａＰＣとの共培養により刺激された。使用されたＡａＰＣ細胞は、ＥＧＦＲｖ
ＩＩＩ抗原を発現するＫ５６２細胞株であった。ＥＧＦＲｖＩＩＩ－ＣＡＲ－Ｔ細胞は、
ＡａＰＣで週１回刺激することによってエクスビボで拡大された。培養物は、ＩＬ－２（
および／またはＩＬ－２１）が補足された培地中で維持された。ＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的
ＣＡＲ発現は、マルチパラメーターフローサイトメトリーで検出した場合、組換えＥＧＦ
ＲｖＩＩＩ／Ｆｃタンパク質染色を使用して測定された。
２人の健康なドナー由来のＴ細胞からの異なるスペーサー長を有するＥＧＦＲｖＩＩＩ
特異的ＣＡＲの発現レベルは、図１１Ａ～Ｂに要約される。ヌクレオフェクションの１日
後、異なるＣＤ８αスペーサー長のＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的ＣＡＲの同様のレベルが、Ｍ
Ｒ１－１またはｈｕＭＲ１－１ベースのＣＡＲを使用して観察された（図１１Ａ）。しか
しながら、より長いＣＤ８αスペーサー長（３Ｘおよび４Ｘ）を有するＥＧＦＲｖＩＩＩ
特異的ＣＡＲを発現するＣＡＲ－Ｔ細胞のみが、ＡａＰＣ共培養を使用してＥＧＦＲｖＩ
ＩＩ抗原特異的刺激によって濃縮することができ（図１１Ｂ）、ＡａＰＣの表面上でＥＧ
ＦＲｖＩＩＩ抗原との相互作用にとってより長いスペーサーが重要であることを示した。
[実施例１２]
様々な長さのＣＤ８α由来のスペーサーを含むＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的ＣＡＲの拡大
ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＣＡＲが認識する抗原を発現する腫瘍細胞の認識時に、注射後にイ
ンビボでの拡大を受ける。ＣＡＲ－Ｔ細胞のインビボでの拡大は、抗腫瘍活性にとって非
常に重要である。抗原特異的細胞株、例えば、ＡａＰＣとの共培養によるエクスビボ拡大
は、腫瘍細胞が存在しない場合のＣＡＲ－Ｔ細胞の増殖を刺激する。ＣＡＲ－Ｔ細胞のエ
クスビボ拡大は、患者の治療のために十分なＣＡＲ＋Ｔ細胞を得るために、製造中にしば
しば行われる。
ＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的ＣＡＲ－Ｔ細胞は、実施例１１に記載されるように、ＳＢ由来
のトランスポゾン／トランスポザーゼによる遺伝子移入後、ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗原を発現
するＡａＰＣ細胞株との共培養を使用する繰り返しの刺激により、インビトロで拡大され
た。ＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的ＣＡＲ＋Ｔ細胞の総数および各ＡａＰＣ刺激後のエクスビボ
培養におけるそれらの拡大倍数を測定した。図１１Ｃに示されるように、より長いＣＤ８
αスペーサー長（３Ｘおよび４Ｘ）を有するＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的ＣＡＲを発現するＣ
ＡＲ－Ｔ細胞は、４つのＡａＰＣ刺激後に強力な拡大を示した。しかしながら、１ＸＣＤ
８αスペーサーを有するＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的ＣＡＲを発現するＣＡＲ－Ｔ細胞は、拡
大することができなかった。より長いＣＤ８αスペーサー長（３Ｘおよび４Ｘ）を有する
ＣＡＲ－Ｔ細胞の強力な拡大はさらに明白であり、４つのＡａＰＣ刺激で２００倍を超え
て拡大する（図１１Ｄ）。
[実施例１３]
様々な長さのスペーサーによるＥＧＦＲｖＩＩＩ ＣＡＲ Ｔ細胞の細胞毒性
ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗原を発現するように修飾されたＫ５６２細胞株に対する様々な長さ
のＣＤ８α由来スペーサーを有するｈｕＭＲ１－１ ＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的ＣＡＲ－Ｔ
細胞（Ｋ５６２－ＥＧＦＲｖＩＩＩ）の細胞毒性を２時間のユーロピウム放出アッセイに
おいて測定した。ＥＧＦＲｖＩＩＩを発現しないＫ５６２親細胞株を対照として使用した
。Ｋ５６２およびＫ５６２－ＥＧＦＲｖＩＩＩ標的細胞株は、ＤＥＬＦＩＡ ＢＡＴＤＡ
試薬を使用して標識された。ＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的ＣＡＲ－Ｔエフェクター（Ｅ）細胞
は、標識されたＫ５６２－ＥＧＦＲｖＩＩＩ標的（Ｔ）細胞と１０：１、５：１または１
：１の（Ｅ：Ｔ）比で共培養された。２時間後、共培養物の上清を回収し、ＤＥＬＦＩＡ
ユーロピウムアッセイを追加して、発色させ、時間分解蛍光測定装置で読み取り、標的細
胞の細胞毒性を測定した。例示的な実験の結果を図１１Ｅに記述する。
図１１Ｅに示されるように、様々な長さのスペーサーを有するＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的
ＣＡＲ－Ｔ細胞は、Ｋ５６２－ＥＧＦＲｖＩＩＩ標的細胞の用量依存的な細胞毒性を示し
た。存在するエフェクター細胞の濃度が高いためである可能性がある最大の１０：１のＥ
：Ｔ比を除いて、ＥＧＦＲｖＩＩＩを発現しないＫ５６２細胞の非常に低いバックグラウ
ンド細胞毒性が観察された。ストーク伸長領域を有するＣＤ８α由来のスペーサー（ＣＤ
８－３ＸおよびＣＤ８－４Ｘ）を有するＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的ＣＡＲ－Ｔ細胞は、伸長
されたストーク領域を欠く（ＣＤ８－１Ｘ）ＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的ＣＡＲ－Ｔ細胞と比
較してＫ５６２－ＥＧＦＲｖＩＩＩ細胞の細胞毒性の改善を示した。より長いＣＤ８α由
来のスペーサー（ＣＤ８－３ＸおよびＣＤ８－４Ｘ）を有するＥＧＦＲｖＩＩＩ特異的Ｃ
ＡＲ－Ｔ細胞によって発揮される細胞毒性は、特に、より低いＥ：Ｔ比（５：１および１
：１）で改善され、これは、ストーク伸長領域を欠く（ＣＤ８－１Ｘ）ＣＡＲ－Ｔ細胞と
比較した、これらのＣＡＲ－Ｔ細胞の効力の増加を示唆した。
本開示の好ましい実施形態が本明細書に示され、説明されたが、このような実施形態が
例としてのみ提供されていることは当業者には明らかである。ここで、本開示から逸脱す
ることなく、多数の変形、変更、および置換が当業者に想到される。本明細書に記載され
た実施形態の様々な代替、またはそれらに記載されたこれらの実施形態もしくは態様の１
つ以上の組合せが、本開示を実施する際に使用され得ることを理解されたい。以下の特許
請求の範囲が本開示の範囲を定義し、これらの特許請求の範囲内の方法および構造ならび
にそれらの同等物がそれによってカバーされることが意図されている。
本開示の好ましい実施形態が本明細書に示され、説明されたが、このような実施形態が例としてのみ提供されていることは当業者には明らかである。ここで、本開示から逸脱することなく、多数の変形、変更、および置換が当業者に想到される。本明細書に記載された実施形態の様々な代替、またはそれらに記載されたこれらの実施形態もしくは態様の１つ以上の組合せが、本開示を実施する際に使用され得ることを理解されたい。以下の特許請求の範囲が本開示の範囲を定義し、これらの特許請求の範囲内の方法および構造ならびにそれらの同等物がそれによってカバーされることが意図されている。

本発明は以下の態様を含み得る。
［１］
ｉ）抗原結合領域、
ｉｉ）膜貫通領域、および
ｉｉｉ）前記膜貫通領域を前記抗原結合領域と接続するスペーサー領域
を含むキメラポリペプチドであって、前記スペーサー領域は、少なくとも１つの二量体化部位を含むストーク領域（複数可）、およびストーク伸長領域（ｓ’－ｎ）を含み、前記ストーク伸長領域は、前記ストーク領域と比較してより少ない二量体化部位を含む、キメラポリペプチド。
［２］
ｉ）抗原結合領域、
ｉｉ）膜貫通領域、および
ｉｉｉ）前記膜貫通領域を前記抗原結合領域と接続するスペーサー領域
を含むキメラポリペプチドであって、前記スペーサー領域は、長さが約２０～約６０アミノ酸であり、少なくとも１つの二量体化部位を含むストーク領域、およびアミノ酸の数で測定した場合、前記ストーク領域の長さの約１倍から約５倍を含むストーク伸長領域を含む、キメラポリペプチド。
［３］
ｉ）抗原結合領域、
ｉｉ）膜貫通領域、および
ｉｉｉ）前記膜貫通領域を前記抗原結合領域と接続するスペーサー領域
を含むキメラポリペプチドであって、前記スペーサー領域は、「ｓ」で表されるストーク領域、および「ｓ’－ｎ」で表される少なくとも１つのストーク伸長領域を含み、
ｎは、前記スペース領域にあるｓ’の単位数を表し、および
ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０である、キメラポリペプチド。
［４］
少なくとも１つのストーク伸長領域が、前記ストーク領域の二量体化部位を除いて、前記ストーク領域と相同な配列を有する、請求項１～３のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
［５］
前記スペーサー領域が前記膜領域の近位にある、請求項１～４のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
［６］
前記スペーサー領域が前記膜領域の遠位にある、請求項１～４のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
［７］
細胞内シグナル伝達ドメインをさらに含む、請求項１～６のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
［８］
前記キメラポリペプチドが細胞内シグナル伝達ドメインを含まない、請求項１～６のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
［９］
前記ストーク伸長領域が、前記ストーク領域と比較して少なくとも１つ少ない二量体化部位を含む、請求項２～６のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
［１０］
前記キメラポリペプチドが、前記ストーク伸長領域を欠くが、他の点では同一である抗原結合ポリペプチドと比較して、改善された機能的活性を有する、請求項１～９のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
［１１］
前記キメラポリペプチドが、前記ストーク伸長領域を欠くが、他の点では同一であるポリペプチドと比較して、細胞表面上での発現が増加している、請求項１～１０のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
［１２］
前記ストーク伸長領域が二量体化部位を欠いている、請求項１～１１のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
［１３］
前記ストーク伸長領域の各々が約２０～約６０アミノ酸の長さであり、ｎが１、２、３または４である、請求項１～１１のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
［１４］
前記ストーク伸長領域の各々が、前記ストーク領域に対して少なくとも約８０％の同一性を有する配列を有する、請求項１３に記載のキメラポリペプチド。
［１５］
少なくとも１つの前記ストーク伸長領域が、前記ストーク領域と比較して少なくとも１つ少ない二量体化部位を含む配列を有する、請求項１４に記載のキメラポリペプチド。
［１６］
前記ストーク伸長領域の各々が、前記ストーク領域に対して少なくとも約８０％の同一性を有する配列を有し、ｎが２である、請求項１３～１５のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
［１７］
前記ストーク伸長領域の各々が、前記ストーク領域に対して少なくとも約８０％の同一性を有する配列を有し、ｎが３である、請求項１３～１５のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
［１８］
前記ストーク伸長領域の各々が、前記ストーク領域に対して少なくとも約８０％の同一性を有する配列を有し、ｎが４である、請求項１３～１５のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
［１９］
前記ストーク伸長領域の各々が、前記ストーク領域に対して少なくとも約８０％の同一性を有する配列を有し、ｎが少なくとも５である、請求項１３～１５のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
［２０］
前記ストーク領域が、ＣＤ８アルファヒンジドメイン、ＣＤ２８ヒンジドメインおよびＣＴＬＡ－４ヒンジドメインのうちの少なくとも１つに対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９％の同一性を有する配列を含む、請求項１～１９のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
［２１］
前記ストーク領域が、配列番号１に示される配列を有するＣＤ８アルファヒンジドメインである、請求項２０に記載のキメラポリペプチド。
［２２］
前記ストーク領域が、配列番号７に示される配列を有するＣＤ２８ヒンジドメインである、請求項２０に記載のキメラポリペプチド。
［２３］
前記ストーク領域が、配列番号１２に示される配列を有するＣＴＬＡ－４ヒンジドメインである、請求項２０に記載のキメラポリペプチド。
［２４］
前記キメラポリペプチドの鎖間二量体化が、システイン残基間の少なくとも１つのジスルフィド結合によって媒介される、請求項１～２３のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
［２５］
前記抗原結合領域がＣＤ１９上のエピトープに結合する、請求項１～２４のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
［２６］
前記抗原結合領域がＣＤ３３上のエピトープに結合する、請求項１～２４のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
［２７］
前記抗原結合領域が、ＣＤ１９、ＢＣＭＡ、ＣＤ４４、α－葉酸受容体、ＣＡＩＸ、ＣＤ３０、ＲＯＲ１、ＣＥＡ、ＥＧＰ－２、ＥＧＰ－４０、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、葉酸結合タンパク質、ＧＤ２、ＧＤ３、ＩＬ－１３Ｒ－ａ２、ＫＤＲ、ＥＤＢ－Ｆ、メソセリン、ＣＤ２２、ＥＧＦＲ、葉酸受容体α、ムチン、ＭＵＣ－１、ＭＵＣ－１６、ＧＰＣ３、ＣＳＰＧ４、ＨＥＲ１／ＨＥＲ３、ＨＥＲ２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／ｖ８、ＣＤ２０、ＣＤ１７４、ＣＤ１３８、Ｌ１－ＣＡＭ、ＦＡＰ、ｃ－ＭＥＴ、ＰＳＣＡ、ＣＳ１、ＣＤ３８、ＩＬ－１１Ｒα、ＥｐｈＡ２、ＣＬＬ－１、ＭＡＧＥ－Ａ１、ｈ５Ｔ４、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ－７２、ＥＧＦＲ、ＣＤ２０、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ１２３およびＶＥＧＦ－Ｒ２のうちの少なくとも１つ上のエピトープに結合する、請求項１～２４のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド
［２８］
前記キメラポリペプチドがキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む、請求項１～２７のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
［２９］
前記ＣＡＲが少なくとも１つの共刺激シグナル伝達ドメインをさらに含む、請求項２８に記載のキメラポリペプチド。
［３０］
前記少なくとも１つの共刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＣＤ１３４、ＣＤ３－ゼータもしくはその断片またはその組合せに由来するシグナル伝達ドメインを含む、請求項２９に記載のキメラポリペプチド。
［３１］
前記少なくとも１つの共刺激シグナル伝達ドメインが、４－１ＢＢ、ＣＤ２８またはそれらの組合せに由来するシグナル伝達ドメインを含む、請求項２９または請求項３０に記載のキメラポリペプチド。
［３２］
前記ＣＡＲが、ＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３－ゼータをさらに含む、請求項２８～３１のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
［３３］
前記ＣＡＲがＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメインをさらに含む、請求項２８～３２のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
［３４］
前記細胞内の細胞シグナル伝達ドメインが、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、または調節性Ｔ細胞と相互作用する、請求項７に記載のキメラポリペプチド。
［３５］
前記キメラポリペプチドが、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む、請求項１～２４のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
［３６］
前記操作されたＴＣＲがαβＴＣＲである、請求項３５に記載のキメラポリペプチド。
［３７］
前記操作されたＴＣＲがγδＴＣＲである、請求項３５に記載のキメラポリペプチド。
［３８］
前記抗原結合領域が、ＮＹ－ＥＳＯ－１、タイチン、ＭＡＲＴ－１、ＨＰＶ、ＨＢＶ、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－Ａ１０、ＭＡＧＥ Ａ３／Ａ６、ｇｐ１００、ＭＡＧＥ－Ａ１、またはＰＲＡＭＥのうちの少なくとも１つ上のエピトープに結合する、請求項１～２４および３５～３７のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
［３９］
請求項１～３８のいずれか一項に記載のキメラポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
［４０］
請求項３９に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
［４１］
前記ベクターが、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、または非ウイルスベクターである、請求項４０に記載のベクター。
［４２］
前記ベクターがＳｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙベクターである非ウイルスベクターである、請求項４１に記載のベクター。
［４３］
請求項３８～４２のいずれか一項に記載の発現ベクターを含む操作された（engineered）細胞。
［４４］
Ｓｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙトランスポザーゼをさらに含む、請求項４３に記載の操作された細胞。
［４５］
前記Ｓｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙトランスポザーゼが、ＳＢ１１、ＳＢ１００ＸまたはＳＢ１１０である、請求項４４に記載の操作された細胞。
［４６］
前記操作された細胞が動物細胞である、請求項４３～４５のいずれか一項に記載の操作された細胞。
［４７］
前記動物細胞がヒト細胞である、請求項４６に記載の操作された細胞。
［４８］
前記ヒト細胞がＴ細胞またはＮＫ細胞である、請求項４７に記載の操作された細胞。
［４９］
細胞内シグナル伝達ドメインを含むポリペプチドをさらに発現する、請求項４３～４８のいずれか一項に記載の操作された細胞。
［５０］
抗原結合領域、膜貫通領域、ストーク領域およびストーク伸長領域を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、前記ストーク伸長領域は、前記ストーク領域に相同であり、前記ストーク領域に対して少なくとも１つのアミノ酸置換を含むキメラ抗原受容体。
［５１］
前記ストーク領域が、第２のＣＡＲの相同ストーク領域と二量体化することができる、請求項５０に記載のＣＡＲ。
［５２］
前記ストーク伸長領域が二量体化することができない、請求項５０～５１のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
［５３］
前記ストーク領域が前記膜貫通領域に接続されている、請求項５０～５２のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
［５４］
前記抗原結合領域がｓｃＦｖを含む、請求項５０～５３のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
［５５］
前記ｓｃＦｖが、ＣＤ１９、ＢＣＭＡ、ＣＤ４４、α－葉酸受容体、ＣＡＩＸ、ＣＤ３０、ＲＯＲ１、ＣＥＡ、ＥＧＰ－２、ＥＧＰ－４０、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、葉酸結合タンパク質、ＧＤ２、ＧＤ３、ＩＬ－１３Ｒ－ａ２、ＫＤＲ、ＥＤＢ－Ｆ、メソセリン、ＣＤ２２、ＥＧＦＲ、葉酸受容体α、ムチン、ＭＵＣ－１、ＧＰＣ３、ＣＳＰＧ４、ＨＥＲ１／ＨＥＲ３、ＨＥＲ２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／ｖ８、ＣＤ２０、ＣＤ１７４、ＣＤ１３８、Ｌ１－ＣＡＭ、ＦＡＰ、ｃ－ＭＥＴ、ＰＳＣＡ、ＣＳ１、ＣＤ３８、ＩＬ－１１Ｒα、ＥｐｈＡ２、ＣＬＬ－１、ＭＵＣ－１６、ＭＡＧＥ－Ａ１、ｈ５Ｔ４、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ－７２、ＥＧＦＲ、ＣＤ２０、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ１２３またはＶＥＧＦ－Ｒ２上のエピトープに結合する、請求項５４に記載のＣＡＲ。
［５６］
ストーク伸長領域（ｓ’－ｎ）であって、ｎは２つ以上を含み、それにより第１のストーク伸長領域および第２のストーク伸長領域を含む、請求項５０～５５のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
［５７］
前記第１のストーク伸長領域は、前記第２のストーク伸長領域と相同である、請求項５６に記載のＣＡＲ。
［５８］
前記第１のストーク伸長領域が、前記ストーク領域と比較して少なくとも１つのアミノ酸残基置換を含む、請求項５６～５７のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
［５９］
前記第１のストーク伸長領域は、ＣＡＲのストーク領域に二量体化することができない、請求項５６～５９のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
［６０］
前記第２のストーク伸長領域が、前記ストーク領域と比較して少なくとも１つのアミノ酸残基置換を含む、請求項５６～５９のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
［６１］
前記第２のストーク伸長領域は、別のストーク伸長領域に二量体化することができない、請求項５６～６０のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
［６２］
第３のストーク伸長領域をさらに含む、請求項５６～６１のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
［６３］
第４のストーク伸長領域をさらに含む、請求項６２に記載のＣＡＲ。
［６４］
５つ以上のストーク伸長領域を含む、請求項６３に記載のＣＡＲ。
［６５］
少なくとも１つのストーク伸長領域は、ジスルフィド結合を形成することができない、請求項５６～６４のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
［６６］
前記ストーク領域が、ＣＤ８アルファヒンジドメイン、ＣＤ２８ヒンジドメインおよびＣＴＬＡ－４ヒンジドメインのうちの少なくとも１つに対して少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９％の同一性を有する配列を含む、請求項５０～６５のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
［６７］
前記ストーク領域が、ＣＤ８アルファヒンジドメイン、ＣＤ２８ヒンジドメインまたはＣＴＬＡ－４ヒンジドメインである、請求項６６に記載のＣＡＲ。
［６８］
請求項５０～６７のいずれかに記載のＣＡＲを発現するＴ細胞またはＮＫ細胞。
［６９］
配列番号５３～６８として示される配列、または少なくとも８０％の配列同一性を有するが、抗原結合能力を保持するその変異体を含む、請求項５０～６７のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
［７０］
請求項５０～６７のいずれか一項に記載のＣＡＲをコードする核酸配列。
［７１］
配列番号１４７～１６２として示される配列、または少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９％の配列同一性を有するその変異体を含む、請求項７０に記載の核酸配列。
［７２］
請求項７０または７１に記載の核酸配列を含むベクター。
［７３］
前記ベクターが、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙトランスポゾンまたは非ウイルスベクターである、請求項７２に記載のベクター。
［７４］
請求項６４に記載のＴ細胞またはＮＫ細胞を作製する方法であって、請求項７０または７１に記載の核酸配列をＴ細胞またはＮＫ細胞に導入するステップを含む方法。
［７５］
前記Ｔ細胞がポイント・オブ・ケアの場で修飾され、増殖誘導（propagation）および活性化を受けることなく、それを必要とする対象に投与される、請求項７４に記載の方法。
［７６］
前記Ｔ細胞が、少なくとも０、１、２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０日間またはそれより長い間刺激される、請求項７４に記載の方法。
［７７］
前記Ｔ細胞が、少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０日間またはそれより長い間刺激される、請求項７４に記載の方法。
［７８］
前記Ｔ細胞が、少なくとも７、１４、２１、２８、３５、４２、４９、５６、６３日間またはそれより長い間刺激される、請求項７４に記載の方法。
［７９］
請求項７２または７３のいずれか一項に記載のベクター；および
請求項６８に記載のＴ細胞または請求項６８に記載のＮＫ細胞；および薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤
のうちの少なくとも１つを含む医薬組成物。
［８０］
請求項５０～６７のいずれか一項に記載のＣＡＲを含む細胞の集団。
［８１］
対象におけるＴ細胞媒介免疫応答を刺激する方法であって、前記対象と、ＣＡＲを発現するように遺伝子修飾された細胞の有効量を接触させることを含み、前記ＣＡＲが請求項５０～６７のいずれか一項のＣＡＲを含む、方法。
［８２］
細胞表面上のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の発現を増加させる方法であって、ストーク伸長ドメインを含むように前記ＣＡＲをコードする核酸を操作し、それにより操作されたＣＡＲを生成することを含む方法。
［８３］
キメラポリペプチドを発現する操作されたＴ細胞の拡大（expansion）を増加させる方法であって、ストーク伸長ドメインを含むように前記キメラポリペプチドをコードする核酸を操作し、それにより操作されたＴ細胞を生成することを含む方法。
［８４］
前記ＣＡＲが、請求項５０～６７のいずれか一項に記載のＣＡＲを含む、請求項８２～８３のいずれか一項に記載の方法。

Claims (84)

  1. ｉ）抗原結合領域、
    ｉｉ）膜貫通領域、および
    ｉｉｉ）前記膜貫通領域を前記抗原結合領域と接続するスペーサー領域
    を含むキメラポリペプチドであって、前記スペーサー領域は、少なくとも１つの二量体化
    部位を含むストーク領域（複数可）、およびストーク伸長領域（ｓ’－ｎ）を含み、前記
    ストーク伸長領域は、前記ストーク領域と比較してより少ない二量体化部位を含む、キメ
    ラポリペプチド。
  2. ｉ）抗原結合領域、
    ｉｉ）膜貫通領域、および
    ｉｉｉ）前記膜貫通領域を前記抗原結合領域と接続するスペーサー領域
    を含むキメラポリペプチドであって、前記スペーサー領域は、長さが約２０～約６０アミ
    ノ酸であり、少なくとも１つの二量体化部位を含むストーク領域、およびアミノ酸の数で
    測定した場合、前記ストーク領域の長さの約１倍から約５倍を含むストーク伸長領域を含
    む、キメラポリペプチド。
  3. ｉ）抗原結合領域、
    ｉｉ）膜貫通領域、および
    ｉｉｉ）前記膜貫通領域を前記抗原結合領域と接続するスペーサー領域
    を含むキメラポリペプチドであって、前記スペーサー領域は、「ｓ」で表されるストーク
    領域、および「ｓ’－ｎ」で表される少なくとも１つのストーク伸長領域を含み、
    ｎは、前記スペース領域にあるｓ’の単位数を表し、および
    ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、
    １６、１７、１８、１９、または２０である、キメラポリペプチド。
  4. 少なくとも１つのストーク伸長領域が、前記ストーク領域の二量体化部位を除いて、前
    記ストーク領域と相同な配列を有する、請求項１～３のいずれか一項に記載のキメラポリ
    ペプチド。
  5. 前記スペーサー領域が前記膜領域の近位にある、請求項１～４のいずれか一項に記載の
    キメラポリペプチド。
  6. 前記スペーサー領域が前記膜領域の遠位にある、請求項１～４のいずれか一項に記載の
    キメラポリペプチド。
  7. 細胞内シグナル伝達ドメインをさらに含む、請求項１～６のいずれか一項に記載のキメ
    ラポリペプチド。
  8. 前記キメラポリペプチドが細胞内シグナル伝達ドメインを含まない、請求項１～６のい
    ずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
  9. 前記ストーク伸長領域が、前記ストーク領域と比較して少なくとも１つ少ない二量体化
    部位を含む、請求項２～６のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
  10. 前記キメラポリペプチドが、前記ストーク伸長領域を欠くが、他の点では同一である抗
    原結合ポリペプチドと比較して、改善された機能的活性を有する、請求項１～９のいずれ
    か一項に記載のキメラポリペプチド。
  11. 前記キメラポリペプチドが、前記ストーク伸長領域を欠くが、他の点では同一であるポ
    リペプチドと比較して、細胞表面上での発現が増加している、請求項１～１０のいずれか
    一項に記載のキメラポリペプチド。
  12. 前記ストーク伸長領域が二量体化部位を欠いている、請求項１～１１のいずれか一項に
    記載のキメラポリペプチド。
  13. 前記ストーク伸長領域の各々が約２０～約６０アミノ酸の長さであり、ｎが１、２、３
    または４である、請求項１～１１のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
  14. 前記ストーク伸長領域の各々が、前記ストーク領域に対して少なくとも約８０％の同一
    性を有する配列を有する、請求項１３に記載のキメラポリペプチド。
  15. 少なくとも１つの前記ストーク伸長領域が、前記ストーク領域と比較して少なくとも１
    つ少ない二量体化部位を含む配列を有する、請求項１４に記載のキメラポリペプチド。
  16. 前記ストーク伸長領域の各々が、前記ストーク領域に対して少なくとも約８０％の同一
    性を有する配列を有し、ｎが２である、請求項１３～１５のいずれか一項に記載のキメラ
    ポリペプチド。
  17. 前記ストーク伸長領域の各々が、前記ストーク領域に対して少なくとも約８０％の同一
    性を有する配列を有し、ｎが３である、請求項１３～１５のいずれか一項に記載のキメラ
    ポリペプチド。
  18. 前記ストーク伸長領域の各々が、前記ストーク領域に対して少なくとも約８０％の同一
    性を有する配列を有し、ｎが４である、請求項１３～１５のいずれか一項に記載のキメラ
    ポリペプチド。
  19. 前記ストーク伸長領域の各々が、前記ストーク領域に対して少なくとも約８０％の同一
    性を有する配列を有し、ｎが少なくとも５である、請求項１３～１５のいずれか一項に記
    載のキメラポリペプチド。
  20. 前記ストーク領域が、ＣＤ８アルファヒンジドメイン、ＣＤ２８ヒンジドメインおよび
    ＣＴＬＡ－４ヒンジドメインのうちの少なくとも１つに対して少なくとも約７０％、７５
    ％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９％の同一性を有する配列を含む、請求項
    １～１９のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
  21. 前記ストーク領域が、配列番号１に示される配列を有するＣＤ８アルファヒンジドメイ
    ンである、請求項２０に記載のキメラポリペプチド。
  22. 前記ストーク領域が、配列番号７に示される配列を有するＣＤ２８ヒンジドメインであ
    る、請求項２０に記載のキメラポリペプチド。
  23. 前記ストーク領域が、配列番号１２に示される配列を有するＣＴＬＡ－４ヒンジドメイ
    ンである、請求項２０に記載のキメラポリペプチド。
  24. 前記キメラポリペプチドの鎖間二量体化が、システイン残基間の少なくとも１つのジス
    ルフィド結合によって媒介される、請求項１～２３のいずれか一項に記載のキメラポリペ
    プチド。
  25. 前記抗原結合領域がＣＤ１９上のエピトープに結合する、請求項１～２４のいずれか一
    項に記載のキメラポリペプチド。
  26. 前記抗原結合領域がＣＤ３３上のエピトープに結合する、請求項１～２４のいずれか一
    項に記載のキメラポリペプチド。
  27. 前記抗原結合領域が、ＣＤ１９、ＢＣＭＡ、ＣＤ４４、α－葉酸受容体、ＣＡＩＸ、Ｃ
    Ｄ３０、ＲＯＲ１、ＣＥＡ、ＥＧＰ－２、ＥＧＰ－４０、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、葉酸結合
    タンパク質、ＧＤ２、ＧＤ３、ＩＬ－１３Ｒ－ａ２、ＫＤＲ、ＥＤＢ－Ｆ、メソセリン、
    ＣＤ２２、ＥＧＦＲ、葉酸受容体α、ムチン、ＭＵＣ－１、ＭＵＣ－１６、ＧＰＣ３、Ｃ
    ＳＰＧ４、ＨＥＲ１／ＨＥＲ３、ＨＥＲ２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／ｖ８、ＣＤ２
    ０、ＣＤ１７４、ＣＤ１３８、Ｌ１－ＣＡＭ、ＦＡＰ、ｃ－ＭＥＴ、ＰＳＣＡ、ＣＳ１、
    ＣＤ３８、ＩＬ－１１Ｒα、ＥｐｈＡ２、ＣＬＬ－１、ＭＡＧＥ－Ａ１、ｈ５Ｔ４、ＰＳ
    ＭＡ、ＴＡＧ－７２、ＥＧＦＲ、ＣＤ２０、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ１２３およびＶＥＧ
    Ｆ－Ｒ２のうちの少なくとも１つ上のエピトープに結合する、請求項１～２４のいずれか
    一項に記載のキメラポリペプチド
  28. 前記キメラポリペプチドがキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む、請求項１～２７のいず
    れか一項に記載のキメラポリペプチド。
  29. 前記ＣＡＲが少なくとも１つの共刺激シグナル伝達ドメインをさらに含む、請求項２８
    に記載のキメラポリペプチド。
  30. 前記少なくとも１つの共刺激シグナル伝達ドメインが、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１Ｂ
    Ｂ、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＣＤ１３４、ＣＤ３－ゼータもしく
    はその断片またはその組合せに由来するシグナル伝達ドメインを含む、請求項２９に記載
    のキメラポリペプチド。
  31. 前記少なくとも１つの共刺激シグナル伝達ドメインが、４－１ＢＢ、ＣＤ２８またはそ
    れらの組合せに由来するシグナル伝達ドメインを含む、請求項２９または請求項３０に記
    載のキメラポリペプチド。
  32. 前記ＣＡＲが、ＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメインおよびＣＤ３－ゼータをさらに含
    む、請求項２８～３１のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
  33. 前記ＣＡＲがＣＤ２８共刺激シグナル伝達ドメインをさらに含む、請求項２８～３２の
    いずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
  34. 前記細胞内の細胞シグナル伝達ドメインが、Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、
    細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、または調節性Ｔ細胞と相互作用する、請求項７に記載
    のキメラポリペプチド。
  35. 前記キメラポリペプチドが、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む、請求項１～２
    ４のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
  36. 前記操作されたＴＣＲがαβＴＣＲである、請求項３５に記載のキメラポリペプチド。
  37. 前記操作されたＴＣＲがγδＴＣＲである、請求項３５に記載のキメラポリペプチド。
  38. 前記抗原結合領域が、ＮＹ－ＥＳＯ－１、タイチン、ＭＡＲＴ－１、ＨＰＶ、ＨＢＶ、
    ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－Ａ１０、ＭＡＧＥ Ａ３／Ａ６、ｇｐ１００、ＭＡＧＥ－Ａ
    １、またはＰＲＡＭＥのうちの少なくとも１つ上のエピトープに結合する、請求項１～２
    ４および３５～３７のいずれか一項に記載のキメラポリペプチド。
  39. 請求項１～３８のいずれか一項に記載のキメラポリペプチドをコードするポリヌクレオ
    チド。
  40. 請求項３９に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
  41. 前記ベクターが、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、または非ウイル
    スベクターである、請求項４０に記載のベクター。
  42. 前記ベクターがＳｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙベクターである非ウイルスベクターで
    ある、請求項４１に記載のベクター。
  43. 請求項３８～４２のいずれか一項に記載の発現ベクターを含む操作された（engineered
    ）細胞。
  44. Ｓｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙトランスポザーゼをさらに含む、請求項４３に記載の
    操作された細胞。
  45. 前記Ｓｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙトランスポザーゼが、ＳＢ１１、ＳＢ１００Ｘま
    たはＳＢ１１０である、請求項４４に記載の操作された細胞。
  46. 前記操作された細胞が動物細胞である、請求項４３～４５のいずれか一項に記載の操作
    された細胞。
  47. 前記動物細胞がヒト細胞である、請求項４６に記載の操作された細胞。
  48. 前記ヒト細胞がＴ細胞またはＮＫ細胞である、請求項４７に記載の操作された細胞。
  49. 細胞内シグナル伝達ドメインを含むポリペプチドをさらに発現する、請求項４３～４８
    のいずれか一項に記載の操作された細胞。
  50. 抗原結合領域、膜貫通領域、ストーク領域およびストーク伸長領域を含むキメラ抗原受
    容体（ＣＡＲ）であって、前記ストーク伸長領域は、前記ストーク領域に相同であり、前
    記ストーク領域に対して少なくとも１つのアミノ酸置換を含むキメラ抗原受容体。
  51. 前記ストーク領域が、第２のＣＡＲの相同ストーク領域と二量体化することができる、
    請求項５０に記載のＣＡＲ。
  52. 前記ストーク伸長領域が二量体化することができない、請求項５０～５１のいずれか一
    項に記載のＣＡＲ。
  53. 前記ストーク領域が前記膜貫通領域に接続されている、請求項５０～５２のいずれか一
    項に記載のＣＡＲ。
  54. 前記抗原結合領域がｓｃＦｖを含む、請求項５０～５３のいずれか一項に記載のＣＡＲ
    。
  55. 前記ｓｃＦｖが、ＣＤ１９、ＢＣＭＡ、ＣＤ４４、α－葉酸受容体、ＣＡＩＸ、ＣＤ３
    ０、ＲＯＲ１、ＣＥＡ、ＥＧＰ－２、ＥＧＰ－４０、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、葉酸結合タン
    パク質、ＧＤ２、ＧＤ３、ＩＬ－１３Ｒ－ａ２、ＫＤＲ、ＥＤＢ－Ｆ、メソセリン、ＣＤ
    ２２、ＥＧＦＲ、葉酸受容体α、ムチン、ＭＵＣ－１、ＧＰＣ３、ＣＳＰＧ４、ＨＥＲ１
    ／ＨＥＲ３、ＨＥＲ２、ＣＤ４４ｖ６、ＣＤ４４ｖ７／ｖ８、ＣＤ２０、ＣＤ１７４、Ｃ
    Ｄ１３８、Ｌ１－ＣＡＭ、ＦＡＰ、ｃ－ＭＥＴ、ＰＳＣＡ、ＣＳ１、ＣＤ３８、ＩＬ－１
    １Ｒα、ＥｐｈＡ２、ＣＬＬ－１、ＭＵＣ－１６、ＭＡＧＥ－Ａ１、ｈ５Ｔ４、ＰＳＭＡ
    、ＴＡＧ－７２、ＥＧＦＲ、ＣＤ２０、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＣＤ１２３またはＶＥＧＦ－
    Ｒ２上のエピトープに結合する、請求項５４に記載のＣＡＲ。
  56. ストーク伸長領域（ｓ’－ｎ）であって、ｎは２つ以上を含み、それにより第１のスト
    ーク伸長領域および第２のストーク伸長領域を含む、請求項５０～５５のいずれか一項に
    記載のＣＡＲ。
  57. 前記第１のストーク伸長領域は、前記第２のストーク伸長領域と相同である、請求項５
    ６に記載のＣＡＲ。
  58. 前記第１のストーク伸長領域が、前記ストーク領域と比較して少なくとも１つのアミノ
    酸残基置換を含む、請求項５６～５７のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  59. 前記第１のストーク伸長領域は、ＣＡＲのストーク領域に二量体化することができない
    、請求項５６～５９のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  60. 前記第２のストーク伸長領域が、前記ストーク領域と比較して少なくとも１つのアミノ
    酸残基置換を含む、請求項５６～５９のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  61. 前記第２のストーク伸長領域は、別のストーク伸長領域に二量体化することができない
    、請求項５６～６０のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  62. 第３のストーク伸長領域をさらに含む、請求項５６～６１のいずれか一項に記載のＣＡ
    Ｒ。
  63. 第４のストーク伸長領域をさらに含む、請求項６２に記載のＣＡＲ。
  64. ５つ以上のストーク伸長領域を含む、請求項６３に記載のＣＡＲ。
  65. 少なくとも１つのストーク伸長領域は、ジスルフィド結合を形成することができない、
    請求項５６～６４のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  66. 前記ストーク領域が、ＣＤ８アルファヒンジドメイン、ＣＤ２８ヒンジドメインおよび
    ＣＴＬＡ－４ヒンジドメインのうちの少なくとも１つに対して少なくとも約７０％、７５
    ％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９％の同一性を有する配列を含む、請求項
    ５０～６５のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  67. 前記ストーク領域が、ＣＤ８アルファヒンジドメイン、ＣＤ２８ヒンジドメインまたは
    ＣＴＬＡ－４ヒンジドメインである、請求項６６に記載のＣＡＲ。
  68. 請求項５０～６７のいずれかに記載のＣＡＲを発現するＴ細胞またはＮＫ細胞。
  69. 配列番号５３～６８として示される配列、または少なくとも８０％の配列同一性を有す
    るが、抗原結合能力を保持するその変異体を含む、請求項５０～６７のいずれか一項に記
    載のＣＡＲ。
  70. 請求項５０～６７のいずれか一項に記載のＣＡＲをコードする核酸配列。
  71. 配列番号１４７～１６２として示される配列、または少なくとも７０％、７５％、８０
    ％、８５％、９０％、９５％または９９％の配列同一性を有するその変異体を含む、請求
    項７０に記載の核酸配列。
  72. 請求項７０または７１に記載の核酸配列を含むベクター。
  73. 前記ベクターが、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、Ｓｌｅｅｐｉｎ
    ｇ Ｂｅａｕｔｙトランスポゾンまたは非ウイルスベクターである、請求項７２に記載の
    ベクター。
  74. 請求項６４に記載のＴ細胞またはＮＫ細胞を作製する方法であって、請求項７０または
    ７１に記載の核酸配列をＴ細胞またはＮＫ細胞に導入するステップを含む方法。
  75. 前記Ｔ細胞がポイント・オブ・ケアの場で修飾され、増殖誘導（propagation）および
    活性化を受けることなく、それを必要とする対象に投与される、請求項７４に記載の方法
    。
  76. 前記Ｔ細胞が、少なくとも０、１、２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、
    ２０、２２、２４、２６、２８、３０日間またはそれより長い間刺激される、請求項７４
    に記載の方法。
  77. 前記Ｔ細胞が、少なくとも５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５
    ０、５５、６０日間またはそれより長い間刺激される、請求項７４に記載の方法。
  78. 前記Ｔ細胞が、少なくとも７、１４、２１、２８、３５、４２、４９、５６、６３日間
    またはそれより長い間刺激される、請求項７４に記載の方法。
  79. 請求項７２または７３のいずれか一項に記載のベクター；および
    請求項６８に記載のＴ細胞または請求項６８に記載のＮＫ細胞；および薬学的に許容さ
    れる担体、希釈剤または賦形剤
    のうちの少なくとも１つを含む医薬組成物。
  80. 請求項５０～６７のいずれか一項に記載のＣＡＲを含む細胞の集団。
  81. 対象におけるＴ細胞媒介免疫応答を刺激する方法であって、前記対象と、ＣＡＲを発現
    するように遺伝子修飾された細胞の有効量を接触させることを含み、前記ＣＡＲが請求項
    ５０～６７のいずれか一項のＣＡＲを含む、方法。
  82. 細胞表面上のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の発現を増加させる方法であって、ストーク
    伸長ドメインを含むように前記ＣＡＲをコードする核酸を操作し、それにより操作された
    ＣＡＲを生成することを含む方法。
  83. キメラポリペプチドを発現する操作されたＴ細胞の拡大（expansion）を増加させる方
    法であって、ストーク伸長ドメインを含むように前記キメラポリペプチドをコードする核
    酸を操作し、それにより操作されたＴ細胞を生成することを含む方法。
  84. 前記ＣＡＲが、請求項５０～６７のいずれか一項に記載のＣＡＲを含む、請求項８２～
    ８３のいずれか一項に記載の方法。
JP2023118889A 2017-10-18 2023-07-21 スペーサーを含むポリペプチド組成物 Pending JP2023153866A (ja)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762574061P 2017-10-18 2017-10-18
US62/574,061 2017-10-18
PCT/US2018/056334 WO2019079486A1 (en) 2017-10-18 2018-10-17 POLYPEPTIDE COMPOSITIONS COMPRISING SPACERS
JP2020521861A JP2021500882A (ja) 2017-10-18 2018-10-17 スペーサーを含むポリペプチド組成物

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2020521861A Division JP2021500882A (ja) 2017-10-18 2018-10-17 スペーサーを含むポリペプチド組成物

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2023153866A true JP2023153866A (ja) 2023-10-18

Family

ID=66096807

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2020521861A Pending JP2021500882A (ja) 2017-10-18 2018-10-17 スペーサーを含むポリペプチド組成物
JP2023118889A Pending JP2023153866A (ja) 2017-10-18 2023-07-21 スペーサーを含むポリペプチド組成物

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2020521861A Pending JP2021500882A (ja) 2017-10-18 2018-10-17 スペーサーを含むポリペプチド組成物

Country Status (10)

Country Link
US (2) US11771718B2 (ja)
EP (1) EP3697438A4 (ja)
JP (2) JP2021500882A (ja)
KR (1) KR20200096758A (ja)
CN (1) CN111511391A (ja)
AU (2) AU2018352984B2 (ja)
CA (1) CA3079264A1 (ja)
IL (1) IL273961A (ja)
SG (1) SG11202003543WA (ja)
WO (1) WO2019079486A1 (ja)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3820484A4 (en) * 2018-07-10 2022-05-04 Precigen, Inc. ROR-1 SPECIFIC CHIMERA ANTIGEN RECEPTORS AND USES THEREOF
WO2020047257A1 (en) * 2018-08-31 2020-03-05 Seattle Children's Hospital (dba Seattle Children's Research Institute) Methods and compositions comprising b7h3 chimeric antigen receptors
SE544015C2 (en) * 2019-06-18 2021-11-02 Tx Medic Ab Allogenic car-t cell therapy
CN114222763A (zh) * 2019-06-19 2022-03-22 尤利乌斯·马克西米利安维尔茨堡大学 在嵌合抗原受体设计中实现的超模块化IgG3间隔区结构域和多功能位点
JP2022548796A (ja) 2019-09-24 2022-11-21 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア ヒンジドメインを有するノッチ受容体
CN112111014A (zh) * 2020-09-22 2020-12-22 廖文强 一种抗氧化嵌合型抗原受体和免疫细胞
AU2022205683A1 (en) * 2021-01-11 2023-07-06 Precigen, Inc. Chimeric receptor therapy
WO2022170093A2 (en) * 2021-02-05 2022-08-11 University Of Utah Research Foundation Compositions and methods for treating with car cells
IL308257A (en) 2021-05-05 2024-01-01 Immatics Biotechnologies Gmbh Antigen binding proteins that uniquely bind PRAME

Family Cites Families (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8993524B2 (en) * 2010-03-05 2015-03-31 The Johns Hopkins University Compositions and methods for targeted immunomodulatory antibodies and fusion proteins
EP3012268B1 (en) * 2010-09-08 2017-11-15 Chemotherapeutisches Forschungsinstitut Georg-Speyer-Haus Chimeric antigen receptors with an optimized hinge region
AU2012325915A1 (en) 2011-10-20 2014-04-24 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Anti-CD22 chimeric antigen receptors
CA2899433A1 (en) 2012-01-27 2013-08-01 Gliknik Inc. Fusion proteins comprising igg2 hinge domains
PT2884999T (pt) 2012-08-20 2021-01-05 Seattle Childrens Hospital Dba Seattle Childrens Res Inst Método e composições para imunoterapêutica celular
WO2014186469A2 (en) 2013-05-14 2014-11-20 Board Of Regents, The University Of Texas System Human application of engineered chimeric antigen receptor (car) t-cells
KR102483822B1 (ko) 2013-12-20 2023-01-03 프레드 허친슨 캔서 센터 태그된 키메라 이펙터 분자 및 그의 리셉터
US10287354B2 (en) 2013-12-20 2019-05-14 Novartis Ag Regulatable chimeric antigen receptor
DK3105335T3 (da) * 2014-02-14 2020-01-13 Univ Texas Kimære antigenreceptorer og fremgangsmåder til fremstilling heraf
CN106414502A (zh) * 2014-02-27 2017-02-15 Ucl商务股份有限公司 April变体
CN106573969B (zh) 2014-04-10 2021-07-30 西雅图儿童医院（Dba西雅图儿童研究所） 药物相关的转基因表达
RU2745705C2 (ru) 2014-09-15 2021-03-30 МОЛМЕД СпА Химерные рецепторы антигенов
EP3204491A1 (en) 2014-10-07 2017-08-16 Cellectis Method for modulating car-induced immune cells activity
WO2016168769A1 (en) 2015-04-15 2016-10-20 The California Institute For Biomedical Research Chimeric receptor t cell switches for her2
WO2016201304A1 (en) * 2015-06-10 2016-12-15 Nantkwest, Inc. Modified nk-92 cells for treating cancer
EP3313874B1 (en) 2015-06-26 2021-03-10 University of Southern California Masking chimeric antigen receptor t cells for tumor-specific activation
JP7162530B2 (ja) 2015-08-07 2022-10-28 シアトル チルドレンズ ホスピタル （ディービーエイ シアトル チルドレンズ リサーチ インスティテュート） 固形腫瘍を標的とする二重特異性ｃａｒ ｔ細胞
US11400145B2 (en) * 2015-11-27 2022-08-02 Cartherics Pty. Ltd. Genetically modified cells and uses thereof
MA45341A (fr) 2016-06-06 2019-04-10 Hutchinson Fred Cancer Res Procédés de traitement de malignités de lymphocytes b au moyen d'une thérapie cellulaire adoptive
CN110191898B (zh) * 2016-06-08 2024-05-10 英特瑞克斯顿股份有限公司 Cd33特异性嵌合抗原受体
CA3049652A1 (en) * 2017-01-10 2018-07-19 Intrexon Corporation Modulating expression of polypeptides via new gene switch expression systems
KR102557834B1 (ko) * 2017-06-07 2023-07-21 프레시전 인코포레이티드 신규의 세포 태그의 발현
US11319380B2 (en) * 2018-06-04 2022-05-03 Precigen, Inc. MUC16 specific chimeric antigen receptors and uses thereof
JP2021531754A (ja) * 2018-07-09 2021-11-25 プレシゲン，インコーポレイテッド 融合構築物およびその使用法
EP3820484A4 (en) * 2018-07-10 2022-05-04 Precigen, Inc. ROR-1 SPECIFIC CHIMERA ANTIGEN RECEPTORS AND USES THEREOF
CA3188596A1 (en) * 2020-07-10 2022-01-13 Precigen, Inc. Fusion constructs and methods of using thereof
AU2022205683A1 (en) * 2021-01-11 2023-07-06 Precigen, Inc. Chimeric receptor therapy

Also Published As

Publication number Publication date
JP2021500882A (ja) 2021-01-14
EP3697438A1 (en) 2020-08-26
CN111511391A (zh) 2020-08-07
AU2018352984B2 (en) 2024-02-01
IL273961A (en) 2020-05-31
WO2019079486A1 (en) 2019-04-25
US11771718B2 (en) 2023-10-03
KR20200096758A (ko) 2020-08-13
AU2023282226A1 (en) 2024-01-18
SG11202003543WA (en) 2020-05-28
US20230414661A1 (en) 2023-12-28
AU2018352984A1 (en) 2020-05-07
CA3079264A1 (en) 2019-04-25
US20190111080A1 (en) 2019-04-18
EP3697438A4 (en) 2021-08-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11946054B2 (en) Modulating expression of polypeptides via new gene switch expression systems
US11787848B2 (en) CD33 specific chimeric antigen receptors
US20230414661A1 (en) Polypeptide compositions comprising spacers
JP7262403B2 (ja) 新規の細胞タグの発現
JP2021530217A (ja) Ｒｏｒ−１特異的キメラ抗原受容体およびその使用
US11981746B2 (en) MUC16 specific chimeric antigen receptors and uses thereof
RU2796334C2 (ru) Экспрессия новых клеточных меток
RU2796334C9 (ru) Экспрессия новых клеточных меток
JP2024073449A (ja) Ｒｏｒ－１特異的キメラ抗原受容体およびその使用

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20230818

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20230818

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20230926

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20231208