JP2023130519A - エクソンスキッピングを誘発する核酸ポリペプチド組成物と方法 - Google Patents

エクソンスキッピングを誘発する核酸ポリペプチド組成物と方法 Download PDF

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Abstract

【課題】エクソンスキッピングを誘発する核酸ポリペプチド組成物と方法の提供。【解決手段】エクソンスキッピングまたはエクソンインクルージョンを誘導するために、誤ってスプライシングされたｍＲＮＡ転写産物における挿入、欠失、複製、あるいは変化を引き起こす分子および医薬組成物が本明細書で開示される。エクソンスキッピングまたはエクソンインクルージョンを誘導するために誤ってスプライシングされたｍＲＮＡ転写産物における挿入、欠失、複製、あるいは変化を引き起こす分子あるいは医薬組成物を含む、疾患または障害を処置する方法が本明細書でさらに記載される。【選択図】図３

Description

相互参照
本出願は、２０１７年９月２２日に出願された米国仮特許出願第６２／５６１，９３９
号と、２０１８年７月１１日に出願された米国仮特許出願第６２／６９６，７６６号の利
益を主張するものであり、これらは各々、その全体における引用により本明細書に組み込
まれる。
ＲＮＡ機能の調節は治療的関心を集める発展途上の領域である。アンチセンスオリゴヌ
クレオチドと低分子干渉ＲＮＡのようにｍＲＮＡ安定性に影響を与える薬物は、ＲＮＡ機
能を調節する一つの方法である。オリゴヌクレオチドの別の群は、最終的な遺伝子産物：
コードされたタンパク質からｍＲＮＡ前駆体の特定の領域を包含または除外するために、
ｍＲＮＡ前駆体の処理を変更することにより、ＲＮＡ機能を調節することができる。した
がって、オリゴヌクレオチド治療薬は、疾患状態におけるタンパク質発現を調節する手段
を表し、したがって、治療薬としての有用性を有している。
本明細書では、特定の実施形態において、ＲＮＡプロセシングを調節するための分子お
よび医薬組成物が開示される。いくつかの実施形態において、筋ジストロフィーの処置の
ための分子と医薬組成物も本明細書で開示される。
本明細書では、ある実施形態において、被験体の誤ってスプライシングされたｍＲＮＡ
転写産物によって引き起こされた疾患または障害を処置する方法が開示され、該方法は、
被験体にポリ核酸分子抱合体を投与する工程を含み、ここで、ポリ核酸分子抱合体は細胞
標的結合部分に結合され、ここで、ポリヌクレオチドは随意に、少なくとも１つの２’修
飾ヌクレオチド、少なくとも１つの修飾されたヌクレオチド間結合、あるいは少なくとも
１つの逆脱塩基部分を含み、ここで、ポリ核酸分子抱合体は、完全に処理されたｍＲＮＡ
転写産物を生成するために、誤ってスプライシングされたｍＲＮＡ転写産物中のエクソン
スキッピングまたはエクソンインクルージョンを誘発するべく、誤ってスプライシングさ
れたｍＲＮＡ転写産物の挿入、欠失、複製、あるいは変化を誘発し、および、ここで、完
全に処理されたｍＲＮＡ転写産物は、機能性タンパク質をコードし、それによって、被験
体の疾患または障害を処置する。いくつかの実施形態において、疾患または障害はさらに
、ｍＲＮＡ中の１つ以上の突然変異を特徴とする。いくつかの実施形態において、疾患ま
たは障害は、神経筋疾患、遺伝病、癌、遺伝性疾患、あるいは心血管疾患を含む。いくつ
かの実施形態において、疾患または障害は筋ジストロフィーである。いくつかの実施形態
において、疾患または障害はデュシェンヌ型筋ジストロフィーである。いくつかの実施形
態において、エクソンスキッピングは、ＤＭＤ遺伝子のエクソン８、２３、３５、４３、
４４、４５、５０、５１、５２、５３、または、５５のものである。いくつかの実施形態
において、エクソンスキッピングはＤＭＤ遺伝子のエクソン２３のものである。いくつか
の実施形態において、ポリ核酸分子抱合体は、式（Ｉ）であり、
Ａ－Ｘ－Ｂ
式Ｉ
式中、
Ａは結合部分であり；
Ｂはポリヌクレオチドであり；および、
Ｘは単結合または第１のリンカーである。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子抱合体は、式（ＩＩ）であり、
Ａ－Ｘ－Ｂ－Ｙ－Ｃ
式ＩＩ
式中、
Ａは結合部分であり；
Ｂはポリヌクレオチドであり；
Ｃは高分子であり；
Ｘは単結合または第１のリンカーであり；および、
Ｙは単結合または第２のリンカーである。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子抱合体は、式（ＩＩＩ）であり：
Ａ－Ｘ－Ｃ－Ｙ－Ｂ
式ＩＩＩ
式中、
Ａは結合部分であり；
Ｂはポリヌクレオチドであり；
Ｃは高分子であり；
Ｘは単結合または第１のリンカーであり；および、
Ｙは単結合または第２のリンカーである。
いくつかの実施形態において、少なくとも１つの２’修飾ヌクレオチドは、モルホリノ、
２’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’－Ｏ－ＭＯＥ）、２’－Ｏ－アミノ
プロピル、２’－デオキシ、Ｔ－デオキシ－２’－フルオロ、２’－Ｏ－アミノプロピル
（２’－Ｏ－ＡＰ）、２’－Ｏ－ジメチルアミノエチル（２’－Ｏ－ＤＭＡＯＥ）、２’
－Ｏ－ジメチルアミノプロピル（２’－Ｏ－ＤＭＡＰ）、Ｔ－Ｏ－ジメチルアミノエチル
オキシエチル（２’－Ｏ－ＤＭＡＥＯＥ）、または、２’－Ｏ－Ｎ－メチルアセトアミド
（２’－Ｏ－ＮＭＡ）修飾ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、少なくと
も１つの２’修飾ヌクレオチドは、ロックド核酸（ＬＮＡ）、エチレン核酸（ＥＮＡ）、
あるいはペプチド核酸（ＰＮＡ）を含む。いくつかの実施形態において、少なくとも１つ
の２’修飾ヌクレオチドは、モルホリノを含む。いくつかの実施形態において、少なくと
も１つの逆塩基部分は少なくとも１つの末端である。いくつかの実施形態において、少な
くとも１つの修飾されたヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート結合あるいはホスホ
ロジチオエート結合を含む。いくつかの実施形態では、ポリ核酸分子は、少なくとも約１
０から約３０ヌクレオチド長さである。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、
約１５から約３０、約１８から約２５、約１８から約２４、約１９から約２３、約２０か
ら約２２ヌクレオチド長さの少なくとも１つである。いくつかの実施形態では、ポリ核酸
分子は、少なくとも約１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または
２５ヌクレオチド長さである。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は以下の少な
くとも１つを含む：約５％から約１００％の修飾、約１０％から約１００％の修飾、約２
０％から約１００％の修飾、約３０％から約１００％の修飾、約４０％から約１００％の
修飾、約５０％から約１００％の修飾、約６０％から約１００％の修飾、約７０％から約
１００％の修飾、約８０％から約１００％の修飾、および、約９０％から約１００％の修
飾。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は以下の少なくとも１つを含む：約１０
％から約９０％の修飾、約２０％から約９０％の修飾、約３０％から約９０％の修飾、約
４０％から約９０％の修飾、約５０％から約９０％の修飾、約６０％から約９０％の修飾
、約７０％から約９０％の修飾、および、約８０％から約１００％の修飾。いくつかの実
施形態において、ポリ核酸分子は以下の少なくとも１つを含む：約１０％から約８０％の
修飾、約２０％から約８０％の修飾、約３０％から約８０％の修飾、約４０％から約８０
％の修飾、約５０％から約８０％の修飾、約６０％から約８０％の修飾、および、約７０
％から約８０％の修飾。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は以下の少なくとも
１つを含む：約１０％から約７０％の修飾、約２０％から約７０％の修飾、約３０％から
約７０％の修飾、約４０％から約７０％の修飾、約５０％から約７０％の修飾、および、
約６０％から約７０％の修飾。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は以下の少な
くとも１つを含む：約１０％から約６０％の修飾、約２０％から約６０％の修飾、約３０
％から約６０％の修飾、約４０％から約６０％の修飾、および約５０％から約６０％の修
飾。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は以下の少なくとも１つを含む：約１０
％から約５０％の修飾、約２０％から約５０％の修飾、約３０％から約５０％の修飾、お
よび約４０％から約５０％の修飾。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は以下の
少なくとも１つを含む：約１０％から約４０％の修飾、約２０％から約４０％の修飾、お
よび約３０％から約４０％の修飾。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は以下の
少なくとも１つを含む：約１０％から約３０％の修飾、および約２０％から約３０％の修
飾。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は約１０％から約２０％の修飾を含む。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は約１５％から約９０％、約２０％から約８
０％、約３０％から約７０％、あるいは約４０％から約６０％の修飾を含む。いくつかの
実施形態において、ポリ核酸分子は少なくとも約１５％、２０％、３０％、４０％、５０
％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％の修飾を含む。いくつかの
実施形態において、ポリ核酸分子は少なくとも約３、約４、約５、約６、約７、約８、約
９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約１６、約１７、約１８、約１
９、約２０、約２１、約２２、またはそれ以上の修飾を含む。いくつかの実施形態では、
ポリ核酸分子は、少なくとも約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、
約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約１６、約１７、約１８、約１９、
約２０、約２１、約２２、またはそれ以上の修飾されたヌクレオチドを含む。いくつかの
実施形態において、ポリ核酸分子は一本鎖を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核
酸分子は二本以上の鎖を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、二本鎖ポ
リ核酸分子を形成するために、第１のポリヌクレオチドと、第１のポリヌクレオチドにハ
イブリダイズされた第２のポリヌクレオチドとを含む。いくつかの実施形態では、第２の
ポリヌクレオチドは少なくとも１つの修飾を含む。いくつかの実施形態では、第１のポリ
ヌクレオチドおよび第２のポリヌクレオチドはＲＮＡ分子である。いくつかの実施形態で
は、第１のポリヌクレオチドおよび第２のポリヌクレオチドはｓｉＲＮＡ分子である。い
くつかの実施形態において、ＸとＹは独立して、単結合、分解性リンカー、非分解性リン
カー、切断リンカー、あるいは非ポリマーリンカー基である。いくつかの実施形態におい
て、Ｘは単結合である。いくつかの実施形態において、ＸはＣ１－Ｃ６アルキル基である
。いくつかの実施形態において、ＹはＣ１－Ｃ６アルキル基である。いくつかの実施形態
において、Ｘは、随意にＣ１－Ｃ６アルキル基に結合された、ホモ二機能性リンカーある
いはヘテロ二機能性リンカーである。いくつかの実施形態において、Ｙはホモ二機能性リ
ンカーあるいはヘテロ二機能性リンカーである。いくつかの実施形態では、結合部分は、
抗体またはその結合フラグメントである。いくつかの実施形態では、抗体またはその結合
フラグメントは、ヒト化抗体またはその結合フラグメント、キメラ抗体またはその結合フ
ラグメント、モノクローナル抗体またはその結合フラグメント、一価Ｆａｂ’、二価Ｆａ
ｂ２、一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏ
ｄｙ）、ナノボディ、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、またはラクダ抗体、あるいはその
結合フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、Ｃはポリエチレングリコールである
。いくつかの実施形態では、Ｃは約５，０００Ｄａの分子量を有する。いくつかの実施形
態において、Ａ－ＸはＢの５’末端へ共役され、Ｙ－ＣはＢの３’末端へ共役される。い
くつかの実施形態において、Ｙ－ＣはＢの５’末端へ共役され、Ａ－ＸはＢの３’末端へ
共役される。いくつかの実施形態において、Ａ－Ｘ、Ｙ－Ｃ、またはその組み合わせは、
ヌクレオチド間結合群に共役される。いくつかの実施形態では、上記方法はＤをさらに含
む。いくつかの実施形態において、ＤはＣあるいはＡに共役される。いくつかの実施形態
において、Ｄは、式（ＩＶ）に係る式（ＩＩ）の分子抱合体に結合され、
（Ａ－Ｘ－Ｂ－Ｙ－Ｃｃ）－Ｌ－Ｄ
式ＩＶ
式中、
Ａは結合部分であり；
Ｂはポリヌクレオチドであり；
Ｃは高分子であり；
Ｘは単結合または第１のリンカーであり；
Ｙは単結合または第２のリンカーであり；
Ｌは単結合または第３のリンカーであり；
Ｄはエンドソーム溶解部分であり；および、
ｃは０と１の間の整数であり；
ここで、ポリヌクレオチドは、少なくとも１つの２’修飾ヌクレオチド、少なくとも１つ
の修飾されたヌクレオチド間結合、あるいは少なくとも１つの逆脱塩基部分を含み、およ
び、Ｄは、Ａ、Ｂ、またはＣのいかなる場所に共役している。
いくつかの実施形態では、ＤはＩＮＦ７またはメリチンである。いくつかの実施形態では
、ＬはＣ１－Ｃ６アルキル基である。いくつかの実施形態では、Ｌはホモ二機能性リンカ
ーあるいはヘテロ二機能性リンカーである。いくつかの実施形態において、上記方法はさ
らに少なくとも第２の結合部分Ａを含む。いくつかの実施形態において、少なくとも第２
の結合部分Ａは、Ａ、Ｂ、またはＣに共役される。
いくつかの実施形態において、誤ってスプライシングされたｍＲＮＡ転写産物中のエク
ソンスキッピングあるいはエクソンインクルージョンを誘発するために、誤ってスプライ
シングされたｍＲＮＡ転写産物の挿入、欠失、複製、または変化を誘発する方法が本明細
書で開示され、前記方法は：標的細胞をポリ核酸分子抱合体に接触させる工程であって、
ポリヌクレオチドが、少なくとも１つの２’修飾ヌクレオチド、少なくとも１つの修飾さ
れたヌクレオチド間結合、あるいは少なくとも１つの逆脱塩基部分を含む、工程と；エク
ソンスキッピングまたはエクソンインクルージョンを誘発するために、誤ってスプライシ
ングされたｍＲＮＡ転写産物の挿入、欠失、複製あるいは変化を誘発するべく、標的細胞
内の誤ってスプライシングされたｍＲＮＡ転写産物へポリ核酸分子抱合体をハイブリダイ
ズする工程であって、誤ってスプライシングされたｍＲＮＡ転写産物がタンパク質の機能
形態をコードすることができる、工程と；前の工程の完全に処理されたｍＲＮＡ転写産物
のタンパク質の機能形態を翻訳する工程を、含む。いくつかの実施形態において、標的細
胞は被験体の標的細胞である。いくつかの実施形態において、誤ってスプライシングされ
たｍＲＮＡ転写産物はさらに疾患または障害を誘発する。いくつかの実施形態において、
疾患または障害はさらに、ｍＲＮＡ中の１つ以上の突然変異を特徴とする。いくつかの実
施形態において、疾患または障害は、神経筋疾患、遺伝病、癌、遺伝性疾患、あるいは心
血管疾患を含む。いくつかの実施形態において、疾患または障害は筋ジストロフィーであ
る。いくつかの実施形態において、疾患または障害はデュシェンヌ型筋ジストロフィーで
ある。いくつかの実施形態において、エクソンスキッピングは、ＤＭＤ遺伝子のエクソン
８、２３、３５、４３、４４、４５、５０、５１、５２、５３、または、５５のものであ
る。いくつかの実施形態において、エクソンスキッピングはＤＭＤ遺伝子のエクソン２３
のものである。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子抱合体は、式（Ｉ）であり、
Ａ－Ｘ－Ｂ
式Ｉ
式中、
Ａは結合部分であり；
Ｂはポリヌクレオチドであり；および、
Ｘは単結合または第１のリンカーである。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子抱合体は、式（ＩＩ）であり、
Ａ－Ｘ－Ｂ－Ｙ－Ｃ
式ＩＩ
式中、
Ａは結合部分であり；
Ｂはポリヌクレオチドであり；
Ｃは高分子であり；
Ｘは単結合または第１のリンカーであり；および、
Ｙは単結合または第２のリンカーである。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子抱合体は、式（ＩＩＩ）であり：
Ａ－Ｘ－Ｃ－Ｙ－Ｂ
式ＩＩＩ
式中、
Ａは結合部分であり；
Ｂはポリヌクレオチドであり；
Ｃは高分子であり；
Ｘは単結合または第１のリンカーであり；および、
Ｙは単結合または第２のリンカーである。
いくつかの実施形態において、少なくとも１つの２’修飾ヌクレオチドは、モルホリノ、
２’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’－Ｏ－ＭＯＥ）、２’－Ｏ－アミノ
プロピル、２’－デオキシ、Ｔ－デオキシ－２’－フルオロ、２’－Ｏ－アミノプロピル
（２’－Ｏ－ＡＰ）、２’－Ｏ－ジメチルアミノエチル（２’－Ｏ－ＤＭＡＯＥ）、２’
－Ｏ－ジメチルアミノプロピル（２’－Ｏ－ＤＭＡＰ）、Ｔ－Ｏ－ジメチルアミノエチル
オキシエチル（２’－Ｏ－ＤＭＡＥＯＥ）、または、２’－Ｏ－Ｎ－メチルアセトアミド
（２’－Ｏ－ＮＭＡ）修飾ヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、少なくと
も１つの２’修飾ヌクレオチドは、ロックド核酸（ＬＮＡ）、エチレン核酸（ＥＮＡ）、
ペプチド核酸（ＰＮＡ）を含む。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの２’修
飾ヌクレオチドは、モルホリノを含む。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの
逆塩基部分は少なくとも１つの末端である。いくつかの実施形態において、少なくとも１
つの修飾されたヌクレオチド間結合は、ホスホロチオエート結合あるいはホスホロジチオ
エート結合を含む。いくつかの実施形態では、ポリ核酸分子は、少なくとも約１０から約
３０ヌクレオチド長さである。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は以下の少な
くとも１つである：約１５から約３０、約１８から約２５、約１８から約２４、約１９か
ら約２３、約２０から約２２ヌクレオチド長さの少なくとも１つである。いくつかの実施
形態では、ポリ核酸分子は、少なくとも約１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、
２３、２４、または２５ヌクレオチド長さである。いくつかの実施形態において、ポリ核
酸分子は以下の少なくとも１つを含む：約５％から約１００％の修飾、約１０％から約１
００％の修飾、約２０％から約１００％の修飾、約３０％から約１００％の修飾、約４０
％から約１００％の修飾、約５０％から約１００％の修飾、約６０％から約１００％の修
飾、約７０％から約１００％の修飾、約８０％から約１００％の修飾、および、約９０％
から約１００％の修飾。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は以下の少なくとも
１つを含む：約１０％から約９０％の修飾、約２０％から約９０％の修飾、約３０％から
約９０％の修飾、約４０％から約９０％の修飾、約５０％から約９０％の修飾、約６０％
から約９０％の修飾、約７０％から約９０％の修飾、および、約８０％から約１００％の
修飾。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は以下の少なくとも１つを含む：約１
０％から約８０％の修飾、約２０％から約８０％の修飾、約３０％から約８０％の修飾、
約４０％から約８０％の修飾、約５０％から約８０％の修飾、約６０％から約８０％の修
飾、および、約７０％から約８０％の修飾。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子
は以下の少なくとも１つを含む：約１０％から約７０％の修飾、約２０％から約７０％の
修飾、約３０％から約７０％の修飾、約４０％から約７０％の修飾、約５０％から約７０
％の修飾、および、約６０％から約７０％の修飾。いくつかの実施形態において、ポリ核
酸分子は以下の少なくとも１つを含む：約１０％から約６０％の修飾、約２０％から約６
０％の修飾、約３０％から約６０％の修飾、約４０％から約６０％の修飾、および約５０
％から約６０％の修飾。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は以下の少なくとも
１つを含む：約１０％から約５０％の修飾、約２０％から約５０％の修飾、約３０％から
約５０％の修飾、および約４０％から約５０％の修飾。いくつかの実施形態において、ポ
リ核酸分子は以下の少なくとも１つを含む：約１０％から約４０％の修飾、約２０％から
約４０％の修飾、および約３０％から約４０％の修飾。いくつかの実施形態において、ポ
リ核酸分子は以下の少なくとも１つを含む：約１０％から約３０％の修飾、および約２０
％から約３０％の修飾。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は約１０％から約２
０％の修飾を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は約１５％から約９０％
、約２０％から約８０％、約３０％から約７０％、あるいは約４０％から約６０％の修飾
を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は少なくとも約１５％、２０％、３
０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％の修飾
を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は少なくとも約３、約４、約５、約
６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約１６、約
１７、約１８、約１９、約２０、約２１、約２２、またはそれ以上の修飾を含む。いくつ
かの実施形態では、ポリ核酸分子は、少なくとも約１、約２、約３、約４、約５、約６、
約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約１６、約１７
、約１８、約１９、約２０、約２１、約２２、またはそれ以上の修飾されたヌクレオチド
を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は一本鎖を含む。いくつかの実施形
態において、ポリ核酸分子は二本以上の鎖を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核
酸分子は、二本鎖ポリ核酸分子を形成するために、第１のポリヌクレオチドと、第１のポ
リヌクレオチドにハイブリダイズされた第２のポリヌクレオチドとを含む。いくつかの実
施形態では、第２のポリヌクレオチドは少なくとも１つの修飾を含む。いくつかの実施形
態では、第１のポリヌクレオチドおよび第２のポリヌクレオチドはＲＮＡ分子である。い
くつかの実施形態では、第１のポリヌクレオチドおよび第２のポリヌクレオチドはｓｉＲ
ＮＡ分子である。いくつかの実施形態において、ＸとＹは独立して、単結合、分解性リン
カー、非分解性リンカー、切断リンカー、あるいは非ポリマーリンカー基である。いくつ
かの実施形態において、Ｘは単結合である。いくつかの実施形態において、ＸはＣ１－Ｃ
６アルキル基である。いくつかの実施形態において、ＹはＣ１－Ｃ６アルキル基である。
いくつかの実施形態において、Ｘは、随意にＣ１－Ｃ６アルキル基に結合された、ホモ二
機能性リンカーあるいはヘテロ二機能性リンカーである。いくつかの実施形態において、
Ｙはホモ二機能性リンカーあるいはヘテロ二機能性リンカーである。いくつかの実施形態
では、結合部分は、抗体またはその結合フラグメントである。いくつかの実施形態では、
抗体またはその結合フラグメントは、ヒト化抗体またはその結合フラグメント、キメラ抗
体またはその結合フラグメント、モノクローナル抗体またはその結合フラグメント、一価
Ｆａｂ’、二価Ｆａｂ２、一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、ミニボ
ディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）、ナノボディ、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、またはラクダ
抗体、あるいはその結合フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、Ｃはポリエチレ
ングリコールである。いくつかの実施形態では、Ｃは約５，０００Ｄａの分子量を有する
。いくつかの実施形態において、Ａ－ＸはＢの５’末端へ共役され、Ｙ－ＣはＢの３’末
端へ共役される。いくつかの実施形態において、Ｙ－ＣはＢの５’末端へ共役され、Ａ－
ＸはＢの３’末端へ共役される。いくつかの実施形態において、Ａ－Ｘ、Ｙ－Ｃ、または
その組み合わせは、ヌクレオチド間結合群に共役される。いくつかの実施形態では、上記
方法はＤをさらに含む。いくつかの実施形態において、ＤはＣあるいはＡに共役される。
いくつかの実施形態において、Ｄは、式（ＩＶ）に係る式（ＩＩ）の分子抱合体に結合さ
れ、
（Ａ－Ｘ－Ｂ－Ｙ－Ｃｃ）－Ｌ－Ｄ
式ＩＶ
式中、
Ａは結合部分であり；
Ｂはポリヌクレオチドであり；
Ｃは高分子であり；
Ｘは単結合または第１のリンカーであり；
Ｙは単結合または第２のリンカーであり；
Ｌは単結合または第３のリンカーであり；
Ｄはエンドソーム溶解部分であり；および、
ｃは０と１の間の整数であり；
ここで、ポリヌクレオチドは、少なくとも１つの２’修飾ヌクレオチド、少なくとも１つ
の修飾されたヌクレオチド間結合、あるいは少なくとも１つの逆脱塩基部分を含み、およ
び、Ｄは、Ａ、Ｂ、またはＣのいかなる場所に共役している。
いくつかの実施形態では、ＤはＩＮＦ７またはメリチンである。いくつかの実施形態では
、ＬはＣ１－Ｃ６アルキル基である。いくつかの実施形態では、Ｌはホモ二機能性リンカ
ーあるいはヘテロ二機能性リンカーである。いくつかの実施形態において、上記方法はさ
らに少なくとも第２の結合部分Ａを含む。いくつかの実施形態において、少なくとも第２
の結合部分Ａは、Ａ、Ｂ、またはＣに共役される。いくつかの実施形態において、方法は
インビボの方法である。いくつかの実施形態において、方法はインビトロの方法である。
いくつかの実施形態では、被験体はヒトである。
特定の実施形態において、本明細書に開示される方法のいずれか１つによって得られた
分子と薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物が開示される。いくつかの実施形態
において、医薬組成物はナノ粒子製剤として製剤される。いくつかの実施形態において、
医薬組成物は、非経口投与、経口投与、鼻腔内投与、バッカル投与、直腸投与、または経
皮投与のために製剤される。
ある実施形態において、ポリ核酸分子抱合体を含む組成物が本明細書で開示され、ここ
で、ポリ核酸分子抱合体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５－９６３に対して少なくとも６０
％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８
％、９９％、あるいは１００％の配列同一性を有する配列を含むポリヌクレオチドを含ん
でいる。ある実施形態において、ポリ核酸分子抱合体を含む組成物が本明細書で開示され
、ここで、ポリ核酸分子抱合体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５－９６３に対して少なくと
も８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００
％の配列同一性を有する配列を含むポリヌクレオチドを含んでいる。特定の実施形態にお
いて、ポリ核酸分子抱合体は、式（Ｉ）であり：
Ａ－Ｘ－Ｂ
式Ｉ
式中、
Ａは結合部分であり；
Ｂはポリヌクレオチドであり；および、
Ｘは単結合または第１のリンカーである。
特定の実施形態において、ポリ核酸分子抱合体は、式（ＩＩ）であり：
Ａ－Ｘ－Ｂ－Ｙ－Ｃ
式ＩＩ
式中、
Ａは結合部分であり；
Ｂはポリヌクレオチドであり；
Ｃは高分子であり；
Ｘは単結合または第１のリンカーであり；および、
Ｙは単結合または第２のリンカーである。
特定の実施形態において、ポリ核酸分子抱合体は、式（ＩＩＩ）であり：
Ａ－Ｘ－Ｃ－Ｙ－Ｂ
式ＩＩＩ
式中、
Ａは結合部分であり；
Ｂはポリヌクレオチドであり；
Ｃは高分子であり；
Ｘは単結合または第１のリンカーであり；および、
Ｙは単結合または第２のリンカーである。
ある実施形態において、少なくとも１つの２’修飾ヌクレオチドは、モルホリノ、２’
－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’－Ｏ－ＭＯＥ）、２’－Ｏ－アミノプロ
ピル、２’－デオキシ、Ｔ－デオキシ－２’－フルオロ、２’－Ｏ－アミノプロピル（２
’－Ｏ－ＡＰ）、２’－Ｏ－ジメチルアミノエチル（２’－Ｏ－ＤＭＡＯＥ）、２’－Ｏ
－ジメチルアミノプロピル（２’－Ｏ－ＤＭＡＰ）、Ｔ－Ｏ－ジメチルアミノエチルオキ
シエチル（２’－Ｏ－ＤＭＡＥＯＥ）、または、２’－Ｏ－Ｎ－メチルアセトアミド（２
’－Ｏ－ＮＭＡ）修飾ヌクレオチドを含む。ある実施形態において、少なくとも１つの２
’修飾ヌクレオチドはモルホリノを含む。
ある実施形態において、ＤＭＤ遺伝子のｍＲＮＡ前駆体転写産物の標的領域にハイブリ
ダイズする少なくとも１つのポリ核酸分子と結合する標的細胞結合部分を含む、ポリ核酸
抱合体が本明細書に開示され、ここで、少なくとも１つのポリ核酸分子は、機能性ジスト
ロフィンタンパク質をコードするｍＲＮＡ転写産物を生成するためにｍＲＮＡ前駆体転写
産物からエクソンのスプライシングアウトを誘発する。いくつかの実施形態において、機
能性ジストロフィンタンパク質は、ジストロフィンタンパク質からの切断された形態であ
る。いくつかの実施形態において、標的領域はエクソン－イントロン接合部にあり、ここ
で、エクソンは、スプライシングアウトされることになっているエクソンである。いくつ
かの実施形態において、エクソンは、エクソン８、２３、３５、４３、４４、４５、５０
、５１、５２、５３、または５５である。いくつかの実施形態において、エクソン－イン
トロン接合部は、スプライシングアウトされることになっているエクソンの５’に位置す
る。いくつかの実施形態において、標的領域はエクソン－イントロン接合部の上流のイン
トロン領域である。いくつかの実施形態において、標的領域は、エクソン－イントロン接
合部の約５００、４５０、４００、３５０、３００、２５０、２００、１５０、１００、
９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、あるいは１０ヌクレオチド上流であ
る。いくつかの実施形態において、エクソン－イントロン接合部は、スプライシングアウ
トされることになっているエクソンの３’に位置する。いくつかの実施形態において、標
的領域はエクソン－イントロン接合部の下流のイントロン領域である。いくつかの実施形
態において、標的領域は、エクソン－イントロン接合部の約５００、４５０、４００、３
５０、３００、２５０、２００、１５０、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０
、３０、２０、あるいは１０ヌクレオチド下流である。いくつかの実施形態において、標
的細胞結合部分は、２以上、３以上、４以上、５以上、６以上、あるいは８以上のポリ核
酸分子に結合する。いくつかの実施形態では、ポリ核酸分子は、約１０から約５０ヌクレ
オチド長さである。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ
：９６４－１２８５から選択された配列に対して、約８０％、８５％、９０％、９５％、
９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の配列同一性を含む。いくつかの実施形態にお
いて、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６４－１２８５から選択された塩基配列
の少なくとも１０、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２
５、２６、またはそれ以上の隣接する塩基を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核
酸分子はさらに、１、２、３、あるいは４つのミスマッチを含む。いくつかの実施形態に
おいて、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６－１０９４、１１４７－１１６
２、または、１１７３－１２１１から選択された塩基配列の少なくとも１０、１５、１６
、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、またはそれ以上の隣
接する塩基を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ
：１０５６－１０７６から選択された塩基配列の少なくとも１０、１５、１６、１７、１
８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、またはそれ以上の隣接する塩基
を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７７
－１０９４から選択された塩基配列の少なくとも１０、１５、１６、１７、１８、１９、
２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、またはそれ以上の隣接する塩基を含む。い
くつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７７－１０９４
から選択された塩基配列の少なくとも１０、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１
、２２、２３、２４、２５、２６、またはそれ以上の隣接する塩基を含む。いくつかの実
施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７３－１２１１から選択さ
れた塩基配列の少なくとも１０、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２
３、２４、２５、２６、またはそれ以上の隣接する塩基を含む。いくつかの実施形態では
、結合部分は抗体を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗トランスフェリン抗
体を含む。いくつかの実施形態において、結合部分は血漿タンパク質を含む。いくつかの
実施形態において、ポリ核酸抱合体は、Ａ－（Ｘ１－Ｂ）ｎ；式（∨）を含み、式中、Ａ
は結合部分を含み；Ｂはポリ核酸分子からなり；Ｘ１は単結合あるいは第１の非高分子リ
ンカーからなり；および、ｎは１－１２から選択された平均値である。いくつかの実施形
態において、ポリ核酸分子は、パッセンジャー鎖とガイド鎖とを含む。いくつかの実施形
態において、ガイド鎖は、少なくとも１つの修飾されたヌクレオチド間結合、少なくとも
１つの逆脱塩基部分、少なくとも１つの５’－ビニルホスホネート修飾された非天然のヌ
クレオチド、あるいは、これらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、ガイ
ド鎖は、約２、３、４、５、６、７、８、あるいは９つのホスホロチオエート修飾された
非天然のヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、ガイド鎖は、１つのホスホ
ロチオエート修飾された非天然のヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、ホ
スホロチオエート修飾された非天然のヌクレオチドは、ポリヌクレオチドのヌクレオチド
間結合に位置する。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの５’－ビニルホスホ
ネート修飾された非天然のヌクレオチドは、ガイド鎖の５’末端から、約１、２、３、４
、あるいは５つの塩基離れて位置する。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの
５’－ビニルホスホネート修飾された非天然のヌクレオチドは、２’－位置でさらに修飾
される。いくつかの実施形態において、２’－修飾は、２’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－メ
トキシエチル（２’－Ｏ－ＭＯＥ）、２’－デオキシ、Ｔ－デオキシ－２’－フルオロ、
２’－Ｏ－アミノプロピル（２’－Ｏ－ＡＰ）、２’－Ｏ－ジメチルアミノエチル（２’
－Ｏ－ＤＭＡＯＥ）、２’－Ｏ－ジメチルアミノプロピル（２’－Ｏ－ＤＭＡＰ）、Ｔ－
Ｏ－ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’－Ｏ－ＤＭＡＥＯＥ）、または、２’－Ｏ
－Ｎ－メチルアセトアミド（２’－Ｏ－ＮＭＡ）修飾されたヌクレオチドから選択される
。いくつかの実施形態において、パッセンジャー鎖は、少なくとも６、７、８、９、１０
、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、またはそれ以上のホ
スホロジアミデートモルホリノオリゴマー修飾された非天然のヌクレオチドを含む。いく
つかの実施形態において、パッセンジャー鎖は、１００％ホスホロジアミデートモルホリ
ノオリゴマー修飾された非天然のヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、パ
ッセンジャー鎖はガイド鎖よりも長さが短く、それによって、５’オーバーハング、３’
オーバーハング、あるいはこれらの組み合わせを生成する。いくつかの実施形態において
、パッセンジャー鎖はガイド鎖と長さが等しく、それによって、ポリ核酸分子の各末端で
平滑末端を生成する。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子はホスホロジアミデー
トモルホリノオリゴマー／ＲＮＡヘテロ二本鎖である。いくつかの実施形態において、パ
ッセンジャー鎖は、少なくとも６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、
１６、１７、１８、１９、２０、またはそれ以上のペプチド核酸修飾された非天然のヌク
レオチドを含む。いくつかの実施形態において、パッセンジャー鎖は、１００％ペプチド
核酸修飾された非天然のヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、パッセンジ
ャー鎖はガイド鎖よりも長さが短く、それによって、５’オーバーハング、３’オーバー
ハング、あるいはこれらの組み合わせを生成する。いくつかの実施形態において、パッセ
ンジャー鎖はガイド鎖と長さが等しく、それによって、ポリ核酸分子の各末端で平滑末端
を生成する。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子はペプチド核酸／ＲＮＡヘテロ
二本鎖である。いくつかの実施形態において、パッセンジャー鎖はＡ－Ｘ１に共役する。
いくつかの実施形態において、Ａ－Ｘ１はパッセンジャー鎖の５’末端に共役する。いく
つかの実施形態において、Ａ－Ｘ１はパッセンジャー鎖の３’末端に共役する。いくつか
の実施形態において、Ｘ１は単結合である。いくつかの実施形態において、Ｘ１はＣ１－
Ｃ６アルキル基である。いくつかの実施形態において、Ｘ１は、Ｃ１－Ｃ６アルキル基に
随意に結合された、ホモ二機能性リンカーあるいはヘテロ二機能性リンカーである。いく
つかの実施形態において、ポリ核酸抱合体はさらにＣを含む。いくつかの実施形態では、
Ｃはポリエチレングリコールである。いくつかの実施形態において、ＣはＸ２を介してＢ
に直接共役する。いくつかの実施形態において、Ｘ２は単結合あるいは第２の非高分子リ
ンカーからなる。いくつかの実施形態において、Ｘ２は単結合である。いくつかの実施形
態において、Ｘ２はＣ１－Ｃ６アルキル基である。いくつかの実施形態において、Ｘ２は
、Ｃ１－Ｃ６アルキル基に随意に結合された、ホモ二機能性リンカーあるいはヘテロ二機
能性リンカーである。いくつかの実施形態において、パッセンジャー鎖はＡ－Ｘ１とＸ２
－Ｃに共役する。いくつかの実施形態において、Ａ－Ｘ１はパッセンジャー鎖の５’末端
に結合され、Ｘ２－Ｃはパッセンジャー鎖の３’末端へ共役する。いくつかの実施形態に
おいて、Ｘ２－Ｃはパッセンジャー鎖の５’末端に結合され、Ａ－Ｘ１はパッセンジャー
鎖の３’末端へ共役する。いくつかの実施形態において、ポリ核酸抱合体はＡ－Ｘ１－（
Ｂ－Ｘ２－Ｃ）ｎ；式（ＶＩ）を含み；式中、Ａは結合部分を含み；Ｂはポリ核酸分子か
らなり；Ｃはポリマーからなり；Ｘ１は単結合あるいは第１の非高分子リンカーからなり
；Ｘ２は単結合あるいは第２の非高分子リンカーからなり；および、ｎは１－１２から選
択された平均値である。いくつかの実施形態において、ポリ核酸抱合体はさらにＤを含む
。いくつかの実施形態において、Ｄはエンドソーム溶解部分である。
特定の実施形態において、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６－１０５８あるいは１０８７
－１０８９から選択された塩基配列の少なくとも２３の隣接する塩基を含むポリ核酸分子
が本明細書に開示され、ここで、ポリ核酸分子は５０以下のヌクレオチド長さを含む。
特定の実施形態において、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６－１０５８を含むポリ核酸分
子が本明細書に開示され、ここで、ポリ核酸分子は５０以下のヌクレオチド長さを含む。
特定の実施形態において、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８７－１０８９を含むポリ核酸分
子が本明細書に開示され、ここで、ポリ核酸分子は５０以下のヌクレオチド長さを含む。
ある実施形態において、医薬組成物が本明細書に開示され、上記医薬組成物は、本明細
書に記載されるポリ核酸抱合体、あるいは本明細書に記載されるポリ核酸分子；および、
薬学的に許容可能な賦形剤を含む。いくつかの実施形態において、医薬組成物は全身送達
のために製剤化される。いくつかの実施形態において、医薬組成物は非経口投与のために
製剤化される。
ある実施形態において、被験体の欠損ｍＲＮＡを特徴とする疾患または疾病を処置する
方法が本明細書に開示され、上記方法は、機能性タンパク質をコードするプロセシングさ
れたｍＲＮＡを生成するために欠損ｍＲＮＡを引き起こすエクソンのスキッピングを誘導
するべく、本明細書に記載されるポリ核酸抱合体あるいは本明細書に記載されるポリ核酸
分子を被験体に投与する工程であって、それによって、被験体の疾患または疾病を処置す
る、工程を含む。いくつかの実施形態において、疾患または疾病は、神経筋疾患、遺伝病
、癌、遺伝性疾患、あるいは心血管疾患である。いくつかの実施形態において、神経筋疾
患は筋ジストロフィーである。いくつかの実施形態において、筋ジストロフィーは、デュ
シェンヌ型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー、顔面肩甲上腕型筋ジストロ
フィー、先天性筋ジストロフィー、あるいは筋緊張性ジストロフィーである。いくつかの
実施形態では、被験体はヒトである。
本明細書には、特定の実施形態において、被験体の筋ジストロフィーを処置する方法が
開示され、上記方法は、本明細書に記載されるポリ核酸抱合体あるいは本明細書に記載さ
れるポリ核酸分子を被験体に投与する工程であって、それによって、被験体の筋ジストロ
フィーを処置する、工程を含む。いくつかの実施形態において、筋ジストロフィーはデュ
シェンヌ型筋ジストロフィーである。いくつかの実施形態では、被験体はヒトである。
特定の実施形態において、本明細書に記載されるポリ核酸抱合体、あるいは本明細書に
記載されるポリ核酸分子を含むキットが本明細書で開示される。
ある実施形態において、本明細書に開示される方法のいずれか１つによって得られた分
子を含むキットが本明細書で開示される。
末端ヌクレオチドを拡張したホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー（ＰＭＯ）配列を描く。 末端ヌクレオチドを拡張したホスホロチオエートアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＰＳ ＡＳＯ）配列を描く。 十分に拡張されたホスホロチオエートアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＰＳ ＡＳＯ）配列を描く。 十分に拡張されたホスホロチオエートアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＰＳ ＡＳＯ）配列を描く。 十分に拡張されたホスホロチオエートアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＰＳ ＡＳＯ）配列を描く。 十分に拡張されたホスホロチオエートアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＰＳ ＡＳＯ）配列を描く。 Ｔａｑｍａｎ ｑＰＣＲを使用して、全ＲＮＡにおけるスキッピングされたＤＭＤ ｍＲＮＡを定量化するために使用される方法を描く。 疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）方法２で生成された抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＭＯ反応混合物のクロマトグラムを描く。 サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）方法１を使用して生成された抗ＣＤ７１ ｍＡｂのクロマトグラムを描く。 サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）方法１を使用して生成された抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＭＯ ＤＡＲ１，２のクロマトグラムを描く。 サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）方法１を使用して生成された抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＭＯ ＤＡＲ＞２のクロマトグラムを描く。 疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）方法２を使用して生成された抗ＣＤ７１ ｍＡｂのクロマトグラムを描く。 疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）方法２を使用して生成された精製された抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＭＯ ＤＡＲ１，２抱合体のクロマトグラムを描く。 疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）方法２を使用して生成された精製された抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＭＯ ＤＡＲ＞２抱合体のクロマトグラムを描く。 疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）方法３を使用して、抗ＣＤ７１Ｆａｂ－ＰＭＯの高速タンパク質液体クロマトグラフィー（ＦＰＬＣ）精製のクロマトグラムを描く。 ＳＥＣ方法１を使用して生成された抗ＣＤ７１ Ｆａｂのクロマトグラムを描く。 ＳＥＣ方法１を使用して生成された抗ＣＤ７１ Ｆａｂ－ＰＭＯ ＤＡＲ１抱合体のクロマトグラムを描く。 ＳＥＣ方法１を使用して生成された抗ＣＤ７１ Ｆａｂ－ＰＭＯ ＤＡＲ２抱合体のクロマトグラムを描く。 ＳＥＣ方法１を使用して生成された抗ＣＤ７１ Ｆａｂ－ＰＭＯ ＤＡＲ３抱合体のクロマトグラムを描く。 ＨＩＣ方法４を使用して生成された抗ＣＤ７１ Ｆａｂのクロマトグラムを描く。 ＨＩＣ方法４を使用して生成された抗ＣＤ７１ Ｆａｂ－ＰＭＯ ＤＡＲ１抱合体のクロマトグラムを描く。 ＨＩＣ方法４を使用して生成された抗ＣＤ７１ Ｆａｂ－ＰＭＯ ＤＡＲ２抱合体のクロマトグラムを描く。 ＨＩＣ方法４を使用して生成された抗ＣＤ７１ Ｆａｂ－ＰＭＯ ＤＡＲ３抱合体のクロマトグラムを描く。 ＳＡＸ方法２を使用して生成された抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＳ ＡＳＯ反応混合物のクロマトグラムを描く。 ＳＥＣ方法１を使用して生成された抗ＣＤ７１ ｍＡｂのクロマトグラムを描く。 ＳＥＣ方法１を使用して生成された抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＳ ＡＳＯ ＤＡＲ１抱合体のクロマトグラムを描く。 ＳＥＣ方法１を使用して生成された抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＳ ＡＳＯ ＤＡＲ２抱合体のクロマトグラムを描く。 ＳＥＣ方法１を使用して生成された抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＳ ＡＳＯ ＤＡＲ３抱合体のクロマトグラムを描く。 ＳＡＸ方法２を使用して生成された抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＳ ＡＳＯ ＤＡＲ１抱合体のクロマトグラムを描く。 ＳＡＸ方法２を使用して生成された抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＳ ＡＳＯ ＤＡＲ２抱合体のクロマトグラムを描く。 ＳＡＸ方法２を使用して生成された抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＳ ＡＳＯ ＤＡＲ３抱合体のクロマトグラムを描く。 ＰＭＯおよび抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＭＯ抱合体を使用して、分化したＣ２Ｃ１２細胞におけるエクソン２３スキッピングを検出するネステッドＰＣＲからのアガロースゲルを描く。 ＰＭＯ、抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＭＯ、および抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＭＯ抱合体を使用して、分化したＣ２Ｃ１２細胞におけるエクソン２３スキッピングを検出するネステッドＰＣＲからのアガロースゲルを描く。 ＰＭＯ、ＡＳＯ、ＤＡＲ１（「ＡＳＣ－ＤＡＲ１」）の共役した抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＡＳＯ、ＤＡＲ２（「ＡＳＣ－ＤＡＲ２」）の共役した抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＡＳＯ、および、ＤＡＲ３（「ＡＳＣ－ＤＡＲ３」）の共役した抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＡＳＯを使用して、分化したＣ２Ｃ１２細胞におけるエクソン２３スキッピングを検出するネステッドＰＣＲからのアガロースゲルを描く。 抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＭＯ抱合体の単回静脈内注射を投与された野生型のマウスの腓腹筋においてエクソン２３スキッピングを検出するネステッドＰＣＲからのアガロースゲルを描く。 腓腹筋からのＰＣＲ産物の定量化のグラフである。 野生型のマウスからの腓腹筋のＴａｑｍａｎ ｑＰＣＲを使用する、インビボのエクソンスキッピングの定量化のグラフである。 単回静脈内注射後に野生型のマウスの心臓筋においてエクソン２３スキッピングを検出するネステッドＰＣＲからのアガロースゲルを描く。 心臓筋からのＰＣＲ産物の定量化のグラフである。 スキッピングと野生型のＰＣＲ産物からのＤＮＡ断片の配列決定データを描く。 トランスフェクトされた初代ヒト骨格筋細胞におけるヒトＤＭＤ ｍＲＮＡ前駆体中のエクソン４５を標的とする様々な長さのエクソンスキッピングＰＭＯのエクソンスキッピング活性を例証する。 インビトロでヒトトランスフェリン受容体に対するｈＴｆＲ１．ｍＡｂ－ＰＭＯ抱合体の結合を例証する。 初代ヒト骨格筋細胞中のｈＴｆＲ１．ｍＡｂ－ＰＭＯ抱合体のエクソンスキッピング活性を例証する。 初代の不死化されたヒト骨格筋細胞の筋管におけるｈＴｆＲ１．ｍＡｂ－ＰＭＯ抱合体のエクソンスキッピング活性を例証する。
核酸（例えば、ＲＮＡｉ）治療は高い選択率と特異性を誇る標的療法である。しかしな
がら、いくつかの例では、核酸治療も、脆弱な細胞内取り込み、標的細胞の不十分な細胞
内濃度、および低い有効性によって妨げられる。こうした諸問題に対応するために、核酸
組成物の様々な修飾、例えば、より優れた安定化および／またはより低い毒性のための新
規なリンカー、増加した標的特異性および／または標的送達用の結合部分の最適化、なら
びに、安定性の増加および／または的外れの効果の減少のための核酸ポリマー修飾などが
探求されている。
いくつかの例では、オリゴヌクレオチドが使用されるそのような１つの領域は、筋ジス
トロフィーを処置するためのものである。筋ジストロフィーは、筋肉に影響を与える複数
の疾患を包含する。デュシェンヌ型筋ジストロフィーは筋ジストロフィーの重症の形態で
あり、ＤＭＤ遺伝子中の突然変異によって引き起こされる。いくつかの例では、ＤＭＤ遺
伝子中の突然変異は、翻訳のリーディングフレームを破壊し、非機能的なジストロフィン
タンパク質をもたらす。
ある実施形態において、翻訳のリーディングフレームを回復させるために使用される、
エクソンスキッピングあるいはエクソンインクルージョンを誘発するために、誤ってスプ
ライシングされたｍＲＮＡ転写産物の挿入、欠失、複製、あるいは変化を誘発するための
核酸療法に関連する方法と組成物が本明細書で開示される。いくつかの実施形態において
、誤ってプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物を特徴とする疾患または障害を処置するた
めの方法と組成物も本明細書で記載され、エクソンの除去の後、ｍＲＮＡは機能性タンパ
ク質をコードすることができ、それによって疾患または障害を処置する。さらなる実施形
態において、上記の疾患または障害を処置するための医薬組成物とキットが本明細書に記
載される。
ＲＮＡプロセシング
ＲＮＡは遺伝子発現と細胞生理の調節において中心的な役割を有する。ＲＮＡの適切な
プロセシングは機能性タンパク質の翻訳のために重要である。ＲＮＡの誤ったスプライシ
ングの結果などのＲＮＡプロセシングの変化は疾患をもたらす可能性がある。例えば、ス
プライス部位の突然変異は、早熟な終止コドンの曝露、エクソンの喪失、あるいはイント
ロンのインクルージョンを引き起こす。いくつかの例では、ＲＮＡプロセシングの変化は
、挿入、欠失、あるいは複製をもたらす。いくつかの例では、ＲＮＡプロセシングの変化
は、エクソンの挿入、欠失、あるいは複製をもたらす。ＲＮＡプロセシングの変化は、場
合によっては、イントロンの挿入、欠失、あるいは複製をもたらす。
エクソンスキッピング
エクソンスキッピングはＲＮＡスプライシングの形態である。場合によっては、エクソ
ンがプロセシングされたｍＲＮＡでスキッピングされるか、プロセシングされたｍＲＮＡ
からスプライシングされるときに、エクソンスキッピングが生じる。エクソンスキッピン
グの結果、プロセシングされたｍＲＮＡはスキッピングされたエクソンを含まない。いく
つかの例では、エクソンスキッピングは変化された生成物の発現をもたらす。
いくつかの例では、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＯＮ）はエクソンスキッピン
グを誘発するために使用される。いくつかの例では、ＡＯＮは、特定のｍＲＮＡあるいは
ｍＲＮＡ前駆体配列と結合する短い核酸配列である。例えば、ＡＯＮはスプライス部位あ
るいはエクソンエンハンサーに結合する。いくつかの例では、特定のｍＲＮＡあるいはｍ
ＲＮＡ前駆体配列にＡＯＮを結合することにより、二本鎖領域が生成される。いくつかの
例では、二本鎖領域の形成は、スプライソソームまたはスプライソソームに関連するタン
パク質が通常結合することになる場所で生じ、エクソンをスキッピングさせる。いくつか
の例では、エクソンのスキッピングは転写産物リーディングフレームの回復を引き起こし
、部分的に機能的なタンパク質の産生を可能にする。
エクソンインクルージョン
いくつかの例では、ＲＮＡ中の突然変異はエクソンスキッピングを引き起こす。場合に
よっては、突然変異は、スプライス部位、スプライス部位の近く、およびスプライス部位
から距離をおいた場所の少なくとも１つである。いくつかの例では、突然変異は、スプラ
イス部位の不活性化または脆弱化、エクソンスプライスエンハンサーあるいはイントロン
スプライスエンハンサーの破壊、およびエクソンスプライスサイレンサーまたはイントロ
ンスプライスエンハンサーの作成の少なくとも１つをもたらす。いくつかの例において、
突然変異はＲＮＡ二次構造を変質する。場合によっては、突然変異はＲＮＡ二次構造を変
質し、エクソン認識にとって重要なシグナルのアクセシビリティーの破壊を引き起こす。
いくつかの例では、ＡＯＮの使用はスキッピングされたエクソンのインクルージョンを
引き起こす。いくつかの例では、ＡＯＮは、スプライス部位、スプライス部位の近くの部
位、スプライス部位から離れた部位の少なくとも１つに結合する。場合によっては、ＡＯ
Ｎは、エクソンスプライスエンハンサーあるいはイントロンスプライスエンハンサーの破
壊を防ぐために、ＲＮＡのある部位で結合する。場合によっては、ＡＯＮは、エクソンス
プライスサイレンサーあるいはイントロンスプライスサイレンサーの生成を防ぐために、
ＲＮＡのある部位で結合する。
指標
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されたポリ核酸分子あるいは医薬組成物
は、欠損したｍＲＮＡを特徴とする疾患または障害の処置に使用される。いくつかの実施
形態において、本明細書に記載されるポリ核酸分子あるいは医薬組成物は、エクソンスキ
ッピングまたはエクソンインクルージョンを誘発するために、誤ってスプライシングされ
たｍＲＮＡ転写産物の挿入、欠失、複製、あるいは変化を誘導することによって疾患また
は障害の処置に使用される。
ヒトのタンパク質コード遺伝子の大部分が代替的にスプライシングされる。いくつかの
例では、突然変異は不適切にスプライシングされたか、部分的にスプライシングされたｍ
ＲＮＡを引き起こす。例えば、突然変異は、タンパク質コード遺伝子、サイレンサーまた
はエンハンサー配列、エクソン配列、あるいはイントロン配列中のスプライス部位の少な
くとも１つにある。いくつかの例では、突然変異は遺伝子機能障害を引き起こす。いくつ
かの例では、突然変異は疾患または障害を引き起こす。
いくつかの例では、不適切にスプライシングされたか、部分的にスプライシングされた
ｍＲＮＡに起因する疾患または障害としては、限定されないが、神経筋疾患、遺伝病、癌
、遺伝性疾患、あるいは心血管疾患が挙げられる。
いくつかの例では、遺伝病または遺伝障害は、常染色体優性障害、常染色体劣性障害、
Ｘ連鎖優性障害、Ｘ連鎖劣性障害、Ｙ連鎖障害、ミトコンドリア遺伝病、あるいは多因子
または多遺伝子障害を含む。
いくつかの例では、高コレステロール血症などの心血管疾患は、不適切にスプライシン
グされたか、あるいは、部分的にスプライシングされたｍＲＮＡに起因する。高コレステ
ロール血症において、低密度リポタンパク質受容体（ＬＤＬＲ）のエクソン１２中の一塩
基多型がエクソンスキッピングを促進することが示されてきた。
いくつかの例では、不適切にスプライシングされたか、部分的にスプライシングされた
ｍＲＮＡは、癌を引き起こす。例えば、不適切にスプライシングされたか、部分的にスプ
ライシングされたｍＲＮＡは、限定されないが、増殖、運動、および薬物応答を含む、癌
に関与する細胞のプロセスに影響を与える。いくつかの例では、固形癌あるいは血液の癌
がある。いくつかの例では、癌は、膀胱癌、肺癌、脳癌、黒色腫、乳癌、非ホジキンリン
パ腫、子宮頚癌、卵巣癌、大腸癌、膵臓癌、食道癌、前立腺癌、腎臓癌、皮膚癌、白血病
、甲状腺癌、肝臓癌、または子宮癌である。
いくつかの例では、不適切にスプライシングされたか、部分的にスプライシングされた
ｍＲＮＡは神経筋疾患または障害を引き起こす。例示的な神経筋疾患としては、デュシェ
ンヌ型筋ジストロフィ、ベッカー型筋ジストロフィー、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー
、先天性筋ジストロフィー、あるいは筋緊張性ジストロフィーなどの筋ジストロフィーが
挙げられる、いくつかの例では、筋ジストロフィーは遺伝的である。いくつかの例では、
筋ジストロフィーは自然突然変異によって引き起こされる。ベッカー型筋ジストロフィー
とデュシェンヌ型筋ジストロフィーは、タンパク質ジストロフィンをコードするＤＭＤ遺
伝子中の突然変異に関与していることが示されてきた。顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー
は二重ホメオボックス４（ＤＵＸ４）遺伝子中の突然変異に関与していることが示されて
いる。
いくつかの例では、不適切にスプライシングされたか、部分的にスプライシングされた
ｍＲＮＡは、デュシェンヌ型筋ジストロフィーを引き起こす。デュシェンヌ型筋ジストロ
フィーは重度の筋衰弱を引き起こし、機能的なジストロフィンの産生を消失させるＤＭＤ
遺伝子中の突然変異によって引き起こされる。いくつかの例では、デュシェンヌ型筋ジス
トロフィーは、ＤＭＤ遺伝子中のエクソンの突然変異の結果である。いくつかの例では、
デュシェンヌ型筋ジストロフィーは、ＤＭＤ遺伝子中のエクソン１、２、３、４、５、６
、７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３
０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３
、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、
５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７
０、７１、７２、７３、７４、７５、７６ ７７、７８、および７９の少なくとも１つの
突然変異の結果である。いくつかの例では、デュシェンヌ型筋ジストロフィーは、ＤＭＤ
遺伝子中のエクソン３、４、５、６、７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、
２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３
８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１
、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、および６３の
少なくとも１つの突然変異の結果である。いくつかの例では、デュシェンヌ型筋ジストロ
フィーは、ＤＭＤ遺伝子中のエクソン８、２３、３５、４３、４４、４５、５０、５１、
５２、５３、および５５の少なくとも１つの突然変異の結果である。いくつかの例では、
多くのエクソンが突然変異する。例えば、エクソン４８－５０の突然変異はデュシェンヌ
型筋ジストロフィー患者において一般的である。いくつかの例では、デュシェンヌ型筋ジ
ストロフィーはエクソン５１の突然変異の結果である。いくつかの例では、デュシェンヌ
型筋ジストロフィーはエクソン２３の突然変異の結果である。いくつかの例では、突然変
異は、１以上の複数のエクソンの欠失を含む。いくつかの例では、突然変異は、１以上の
複数の複製を含む。いくつかの例では、突然変異はエクソンを点突然変異に関与している
。例えば、患者の中にはＤＭＤ遺伝子のエクソン５１のナンセンス点突然変異を抱えてい
るものもいることが示されている。
いくつかの例では、本明細書に記載されたポリ核酸分子あるいは医薬組成物は、筋ジス
トロフィーの処置に使用される。いくつかの例では、本明細書に記載されたポリ核酸分子
あるいは医薬組成物は、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー
、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー、先天性筋ジストロフィーあるいは筋緊張性ジストロ
フィーの処置に使用される。いくつかの例では、本明細書に記載されたポリ核酸分子ある
いは医薬組成物は、デュシェンヌ型筋ジストロフィーの処置に使用される。
ポリ核酸分子
いくつかの実施形態において、エクソンスキッピングまたはエクソンインクルージョン
を誘発するために、誤ってスプライシングされたｍＲＮＡ転写産物の挿入、欠失、複製、
あるいは変化を誘発するポリ核酸分子が本明細書に記載される。いくつかの例では、ポリ
核酸分子は翻訳のリーディングフレームを回復させる。いくつかの例では、ポリ核酸分子
は機能的かつ切断されたタンパク質をもたらす。
いくつかの例では、ポリ核酸分子はｍＲＮＡ配列を標的とする。いくつかの例では、ポ
リ核酸分子はスプライス部位を標的とする。いくつかの例では、ポリ核酸分子はシス調節
因子を標的とする。いくつかの例では、ポリ核酸分子はトランス調節因子を標的とする。
いくつかの例では、ポリ核酸分子はエクソンスプライスエンハンサーあるいはイントロン
スプライスエンハンサーを標的とする。いくつかの例では、ポリ核酸分子はエクソンスプ
ライスサイレンサーあるいはイントロンスプライスサイレンサーを標的とする。
いくつかの例では、ポリ核酸分子は、イントロンまたはエクソンで見られる配列を標的
とする。例えば、ポリ核酸分子は、前記エクソンのスプライシングを媒介するエクソン中
で見られる配列を標的とする。いくつかの例では、ポリ核酸分子はエクソン認識配列を標
的とする。いくつかの例では、ポリ核酸分子はエクソンの上流の配列を標的とする。いく
つかの例では、ポリ核酸分子はエクソンの下流の配列を標的とする。
上に記載されたように、ポリ核酸分子は、限定されないが、神経筋疾患、遺伝病、癌、
遺伝性疾患、あるいは心血管疾患などの疾患または障害をもたらす誤ってプロセシングさ
れたｍＲＮＡ転写産物を標的とする。場合によっては、ポリ核酸分子は、神経筋疾患また
は障害を引き起こす誤ってプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物を標的とする。場合によ
っては、神経筋疾患または障害は、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジス
トロフィー、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー、先天性筋ジストロフィー、あるいは筋緊
張性ジストロフィーである。場合によっては、ポリ核酸分子は、デュシェンヌ型筋ジスト
ロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー、先天性筋ジ
ストロフィー、あるいは筋緊張性ジストロフィーを引き起こす誤ってプロセシングされた
ｍＲＮＡ転写産物を標的とする。場合によっては、ポリ核酸分子は、デュシェンヌ型筋ジ
ストロフィーを引き起こす誤ってプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物を標的とする。
いくつかの例では、ポリ核酸分子は、デュシェンヌ型筋ジストロフィーを引き起こすＤ
ＭＤ遺伝子中で突然変異するエクソンを標的とする。デュシェンヌ型筋ジストロフィーを
引き起こすＤＭＤ遺伝子中で突然変異する例示的なエクソンとしては、限定されないが、
エクソン、２、３、４、５、６、７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５
、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、
３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５
２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５
、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、および
７８が挙げられる。いくつかの例では、ポリ核酸分子は突然変異したエクソンに隣接する
配列を標的とする。例えば、エクソン５０の欠失がある場合、エクソン５１がスキッピン
グされるように、ポリ核酸分子はエクソン５１中の配列を標的とする。別の例では、エク
ソン２３に突然変異がある場合、エクソン２３がスキッピングされるように、ポリ核酸分
子はエクソン２２中の配列を標的とする。
いくつかの例では、本明細書に記載されるポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン２
、３、４、５、６、７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７
、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、
４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５
４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７
、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、および７８のエクソ
ン－イントロン接合部にある領域を標的とする。いくつかの例では、本明細書に記載され
るポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン３、４、５、６、７、１８、１９、２０、２
１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４
、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、
４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６
１、６２、または６３のエクソン－イントロン接合部にある領域を標的とする。いくつか
の例では、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン８、２３、３
５、４３、４４、４５、５０、５１、５２、５３、または５５のエクソン－イントロン接
合部にある領域を標的とする。場合によっては、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、
ＤＭＤ遺伝子のエクソン８のエクソン－イントロン接合部にある領域を標的とする。場合
によっては、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン２３のエク
ソン－イントロン接合部にある領域を標的とする。場合によっては、本明細書に記載され
たポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン３５のエクソン－イントロン接合部にある領
域を標的とする。場合によっては、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子
のエクソン４３のエクソン－イントロン接合部にある領域を標的とする。場合によっては
、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン４４のエクソン－イン
トロン接合部にある領域を標的とする。場合によっては、本明細書に記載されたポリ核酸
分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン４５のエクソン－イントロン接合部にある領域を標的と
する。場合によっては、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン
４８のエクソン－イントロン接合部にある領域を標的とする。場合によっては、本明細書
に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン４９のエクソン－イントロン接合
部にある領域を標的とする。場合によっては、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、Ｄ
ＭＤ遺伝子のエクソン５０のエクソン－イントロン接合部にある領域を標的とする。場合
によっては、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン５１のエク
ソン－イントロン接合部にある領域を標的とする。場合によっては、本明細書に記載され
たポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン５２のエクソン－イントロン接合部にある領
域を標的とする。場合によっては、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子
のエクソン５３のエクソン－イントロン接合部にある領域を標的とする。場合によっては
、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン５５のエクソン－イン
トロン接合部にある領域を標的とする。
いくつかの例では、ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン２、３、４、５、６、７
、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、
３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４
４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７
、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、
７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、および７８の少なくとも１つの５’イント
ロン－エクソン接合部あるいは３’エクソン－イントロン接合部にある標的領域にハイブ
リダイズする。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン３、４、５
、６、７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９
、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、
４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５２、５３、５４、５５、５６、５
７、５８、５９、６０、６１、６２、および、６３の少なくとも１つの５’イントロン－
エクソン接合部あるいは３’エクソン－イントロン接合部にある標的領域にハイブリダイ
ズする。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン８、２３、３５、
４３、４４、４５、５０、５１、５２、５３、または５５の５’イントロン－エクソン接
合部あるいは３’エクソン－イントロン接合部にある標的領域にハイブリダイズする。
場合によっては、ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン２、３、４、５、６、７、
１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３
１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４
、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、
５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７
１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、および７８の少なくとも１つの５’イントロ
ン－エクソン接合部にある標的領域にハイブリダイズする（例えば、エクソン３の５’イ
ントロン－エクソン接合部は、イントロン２－エクソン３の接合部である）。場合によっ
ては、ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン３、４、５、６、７、１８、１９、２０
、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、
３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４
７、４８、４９、５０、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１
、６２、および、６３の少なくとも１つの５’イントロン－エクソン接合部にある標的領
域にハイブリダイズする（例えば、エクソン３の５’イントロン－エクソン接合部は、イ
ントロン２－エクソン３の接合部である）。場合によっては、ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺
伝子のエクソン８、２３、３５、４３、４４、４５、５０、５１、５２、５３、または５
５の５’イントロン－エクソン接合部にある標的領域にハイブリダイズする。場合によっ
ては、ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン８の５’イントロン－エクソン接合部に
ある標的領域にハイブリダイズする。場合によっては、ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子の
エクソン２３の５’イントロン－エクソン接合部にある標的領域にハイブリダイズする。
場合によっては、ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン３５の５’イントロン－エク
ソン接合部にある標的領域にハイブリダイズする。場合によっては、ポリ核酸分子は、Ｄ
ＭＤ遺伝子のエクソン４３の５’イントロン－エクソン接合部にある標的領域にハイブリ
ダイズする。場合によっては、ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン４４の５’イン
トロン－エクソン接合部にある標的領域にハイブリダイズする。場合によっては、ポリ核
酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン４５の５’イントロン－エクソン接合部にある標的領
域にハイブリダイズする。場合によっては、ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン５
０の５’イントロン－エクソン接合部にある標的領域にハイブリダイズする。場合によっ
ては、ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン５１の５’イントロン－エクソン接合部
にある標的領域にハイブリダイズする。場合によっては、ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子
のエクソン５２の５’イントロン－エクソン接合部にある標的領域にハイブリダイズする
。場合によっては、ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン５３の５’イントロン－エ
クソン接合部にある標的領域にハイブリダイズする。場合によっては、ポリ核酸分子は、
ＤＭＤ遺伝子のエクソン５５の５’イントロン－エクソン接合部にある標的領域にハイブ
リダイズする。
場合によっては、ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン２、３、４、５、６、７、
１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３
１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４
、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、
５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７
１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、および７８の少なくとも１つの３’エクソン
－イントロン接合部にある標的領域にハイブリダイズする（例えば、エクソン３の３’エ
クソン－イントロン接合部は、エクソン３－イントロン３の接合部である）。場合によっ
ては、ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子の３、４、５、６、７、１８、１９、２０、２１、
２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３
５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８
、４９、５０、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、
および、６３の少なくとも１つの３’エクソン－イントロン接合部にある標的領域にハイ
ブリダイズする（例えば、エクソン３の３’－イントロン接合部は、エクソン３－イント
ロン３の接合部である）。場合によっては、ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン８
、２３、３５、４３、４４、４５、５０、５１、５２、５３、または５５の３’エクソン
－イントロン接合部にある標的領域にハイブリダイズする。場合によっては、ポリ核酸分
子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン８の３’エクソン－イントロン接合部にある標的領域にハ
イブリダイズする。場合によっては、ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン２３の３
’エクソン－イントロン接合部にある標的領域にハイブリダイズする。場合によっては、
ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン３５の３’エクソン－イントロン接合部にある
標的領域にハイブリダイズする。場合によっては、ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエク
ソン４３の３’エクソン－イントロン接合部にある標的領域にハイブリダイズする。場合
によっては、ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン４４の３’エクソン－イントロン
接合部にある標的領域にハイブリダイズする。場合によっては、ポリ核酸分子は、ＤＭＤ
遺伝子のエクソン４５の３’エクソン－イントロン接合部にある標的領域にハイブリダイ
ズする。場合によっては、ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン５０の３’エクソン
－イントロン接合部にある標的領域にハイブリダイズする。場合によっては、ポリ核酸分
子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン５１の３’エクソン－イントロン接合部にある標的領域に
ハイブリダイズする。場合によっては、ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン５２の
３’エクソン－イントロン接合部にある標的領域にハイブリダイズする。場合によっては
、ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン５３の３’エクソン－イントロン接合部にあ
る標的領域にハイブリダイズする。場合によっては、ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエ
クソン５５の３’エクソン－イントロン接合部にある標的領域にハイブリダイズする。
いくつかの例では、本明細書に記載されるポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン２
、３、４、５、６、７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７
、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、
４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５
４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７
、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、および７８のスプラ
イス部位を標的とする。いくつかの例では、本明細書に記載されるポリ核酸分子は、ＤＭ
Ｄ遺伝子のエクソン３、４、５、６、７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、
２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３
８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１
、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、または６３の
スプライス部位を標的とする。いくつかの例では、本明細書に記載されたポリ核酸分子は
、ＤＭＤ遺伝子のエクソン８、２３、３５、４３、４４、４５、５０、５１、５２、５３
、または５５のスプライス部位を標的とする。場合によっては、本明細書に記載されたポ
リ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン８のスプライス部位を標的とする。場合によって
は、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン２３のスプライス部
位を標的とする。場合によっては、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子
のエクソン３５のスプライス部位を標的とする。場合によっては、本明細書に記載された
ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン４３のスプライス部位を標的とする。場合によ
っては、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン４４のスプライ
ス部位を標的とする。場合によっては、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺
伝子のエクソン４５のスプライス部位を標的とする。場合によっては、本明細書に記載さ
れたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン４８のスプライス部位を標的とする。場合
によっては、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン４９のスプ
ライス部位を標的とする。場合によっては、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭ
Ｄ遺伝子のエクソン５０のスプライス部位を標的とする。場合によっては、本明細書に記
載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン５１のスプライス部位を標的とする。
場合によっては、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン５２の
スプライス部位を標的とする。場合によっては、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、
ＤＭＤ遺伝子のエクソン５３のスプライス部位を標的とする。場合によっては、本明細書
に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン５５のスプライス部位を標的とす
る。本明細書で使用されるように、スプライス部位は、エクソンスキッピングまたはエク
ソンインクルージョンを誘発するために、誤ってスプライシングされたｍＲＮＡ転写産物
の挿入、欠失、複製、あるいは変化を誘発することができる、基準スプライス部位、隠れ
たスプライス部位、あるいは代替的なスプライス部位を含む。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、エクソン３、４、５、６、７、１８、
１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３
２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５
、４６、４７、４８、４９、５０、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、
６０、６１、６２、または、６３などのデュシェンヌ型筋ジストロフィーに関与する追加
のエクソンを含む部分的にスプライシングされたｍＲＮＡ配列を標的とする。
いくつかの例では、ポリ核酸分子は、エクソン－イントロン接合部に近位の領域にハイ
ブリダイズする。いくつかの例では、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝
子中のエクソン２、３、４、５、６、７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、
２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３
８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１
、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、
６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、ま
たは７８の少なくとも１０００ヌクレオチド（ｎｔ）、５００ｎｔ、４００ｎｔ、３００
ｎｔ、２００ｎｔ、１００ｎｔ、８０ｎｔ、６０ｎｔ、５０ｎｔ、４０ｎｔ、３０ｎｔ、
２０ｎｔ、１０ｎｔ、または５ｎｔ上流（あるいは、５’から）の領域を標的とする。い
くつかの例では、本明細書に記載されるポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン３、４
、５、６、７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、
２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４
２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５
、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、あるいは６３の少なくとも１０００ヌク
レオチド（ｎｔ）、５００ｎｔ、４００ｎｔ、３００ｎｔ、２００ｎｔ、１００ｎｔ、８
０ｎｔ、６０ｎｔ、５０ｎｔ、４０ｎｔ、３０ｎｔ、２０ｎｔ、１０ｎｔ、あるいは５ｎ
ｔ上流（あるいは５’から）の領域を標的とする。いくつかの例では、本明細書に記載さ
れたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン８、２３、３５、４３、４４、４５、５０
、５１、５２、５３、または５５の少なくとも１０００ｎｔ、５００ｎｔ、４００ｎｔ、
３００ｎｔ、２００ｎｔ、１００ｎｔ、８０ｎｔ、６０ｎｔ、５０ｎｔ、４０ｎｔ、３０
ｎｔ、２０ｎｔ、１０ｎｔ、あるいは５ｎｔ上流（あるいは５’から）にある領域を標的
とする。いくつかの例では、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエク
ソン８の少なくとも１０００ｎｔ、５００ｎｔ、４００ｎｔ、３００ｎｔ、２００ｎｔ、
１００ｎｔ、８０ｎｔ、６０ｎｔ、５０ｎｔ、４０ｎｔ、３０ｎｔ、２０ｎｔ、１０ｎｔ
、あるいは５ｎｔ上流（あるいは５’から）にある領域を標的とする。いくつかの例では
、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン２３の少なくとも１０
００ｎｔ、５００ｎｔ、４００ｎｔ、３００ｎｔ、２００ｎｔ、１００ｎｔ、８０ｎｔ、
６０ｎｔ、５０ｎｔ、４０ｎｔ、３０ｎｔ、２０ｎｔ、１０ｎｔ、あるいは５ｎｔ上流（
あるいは５’から）にある領域を標的とする。いくつかの例では、本明細書に記載された
ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン３５の少なくとも１０００ｎｔ、５００ｎｔ、
４００ｎｔ、３００ｎｔ、２００ｎｔ、１００ｎｔ、８０ｎｔ、６０ｎｔ、５０ｎｔ、４
０ｎｔ、３０ｎｔ、２０ｎｔ、１０ｎｔ、あるいは５ｎｔ上流（あるいは５’から）にあ
る領域を標的とする。いくつかの例では、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ
遺伝子のエクソン４３の少なくとも１０００ｎｔ、５００ｎｔ、４００ｎｔ、３００ｎｔ
、２００ｎｔ、１００ｎｔ、８０ｎｔ、６０ｎｔ、５０ｎｔ、４０ｎｔ、３０ｎｔ、２０
ｎｔ、１０ｎｔ、あるいは５ｎｔ上流（あるいは５’から）にある領域を標的とする。い
くつかの例では、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン４４の
少なくとも１０００ｎｔ、５００ｎｔ、４００ｎｔ、３００ｎｔ、２００ｎｔ、１００ｎ
ｔ、８０ｎｔ、６０ｎｔ、５０ｎｔ、４０ｎｔ、３０ｎｔ、２０ｎｔ、１０ｎｔ、あるい
は５ｎｔ上流（あるいは５’から）にある領域を標的とする。いくつかの例では、本明細
書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン４５の少なくとも１０００ｎｔ
、５００ｎｔ、４００ｎｔ、３００ｎｔ、２００ｎｔ、１００ｎｔ、８０ｎｔ、６０ｎｔ
、５０ｎｔ、４０ｎｔ、３０ｎｔ、２０ｎｔ、１０ｎｔ、あるいは５ｎｔ上流（あるいは
５’から）にある領域を標的とする。いくつかの例では、本明細書に記載されたポリ核酸
分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン４８の少なくとも１０００ヌクレオチド（ｎｔ）、５０
０ｎｔ、４００ｎｔ、３００ｎｔ、２００ｎｔ、１００ｎｔ、８０ｎｔ、６０ｎｔ、５０
ｎｔ、４０ｎｔ、３０ｎｔ、２０ｎｔ、１０ｎｔ、あるいは５ｎｔ上流（あるいは５’か
ら）にある領域を標的とする。いくつかの例では、本明細書に記載されたポリ核酸分子は
、ＤＭＤ遺伝子のエクソン４９の少なくとも１０００ヌクレオチド（ｎｔ）、５００ｎｔ
、４００ｎｔ、３００ｎｔ、２００ｎｔ、１００ｎｔ、８０ｎｔ、６０ｎｔ、５０ｎｔ、
４０ｎｔ、３０ｎｔ、２０ｎｔ、１０ｎｔ、あるいは５ｎｔ上流（あるいは５’から）に
ある領域を標的とする。いくつかの例では、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭ
Ｄ遺伝子のエクソン５０の少なくとも１０００ヌクレオチド（ｎｔ）、５００ｎｔ、４０
０ｎｔ、３００ｎｔ、２００ｎｔ、１００ｎｔ、８０ｎｔ、６０ｎｔ、５０ｎｔ、４０ｎ
ｔ、３０ｎｔ、２０ｎｔ、１０ｎｔ、あるいは５ｎｔ上流（あるいは５’から）にある領
域を標的とする。いくつかの例では、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝
子のエクソン５１の少なくとも１０００ヌクレオチド（ｎｔ）、５００ｎｔ、４００ｎｔ
、３００ｎｔ、２００ｎｔ、１００ｎｔ、８０ｎｔ、６０ｎｔ、５０ｎｔ、４０ｎｔ、３
０ｎｔ、２０ｎｔ、１０ｎｔ、あるいは５ｎｔ上流（あるいは５’から）にある領域を標
的とする。いくつかの例では、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエ
クソン５２の少なくとも１０００ヌクレオチド（ｎｔ）、５００ｎｔ、４００ｎｔ、３０
０ｎｔ、２００ｎｔ、１００ｎｔ、８０ｎｔ、６０ｎｔ、５０ｎｔ、４０ｎｔ、３０ｎｔ
、２０ｎｔ、１０ｎｔ、あるいは５ｎｔ上流（あるいは５’から）にある領域を標的とす
る。いくつかの例では、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン
５３の少なくとも１０００ｎｔ、５００ｎｔ、４００ｎｔ、３００ｎｔ、２００ｎｔ、１
００ｎｔ、８０ｎｔ、６０ｎｔ、５０ｎｔ、４０ｎｔ、３０ｎｔ、２０ｎｔ、１０ｎｔ、
あるいは５ｎｔ上流（あるいは５’から）にある領域を標的とする。いくつかの例では、
本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン５５の少なくとも１００
０ｎｔ、５００ｎｔ、４００ｎｔ、３００ｎｔ、２００ｎｔ、１００ｎｔ、８０ｎｔ、６
０ｎｔ、５０ｎｔ、４０ｎｔ、３０ｎｔ、２０ｎｔ、１０ｎｔ、あるいは５ｎｔ上流（あ
るいは５’から）にある領域を標的とする。
いくつかの例では、ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン２、３、４、５、６、７
、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、
３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４
４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７
、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、
７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、および７８の少なくとも１つの上流（ある
いは５’）にある標的領域にハイブリダイズする。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、
ＤＭＤ遺伝子のエクソン３、４、５、６、７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２
４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７
、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、
５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、および、６３の
少なくとも１つの上流（または５’）である標的領域にハイブリダイズする。いくつかの
例では、ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン８、２３、３５、４３、４４、４５、
５０、５１、５２、５３、または５５の少なくとも１つの上流（または５’）にある標的
領域にハイブリダイズする。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソ
ン３、４、５、６、７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７
、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、
４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５２、５３、５４、５
５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、および、６３の少なくとも１つの約５
、１０、１５、２０、５０、１００、２００、３００、４００、あるいは５００ｂｐ上流
（あるいは５’）である標的領域にハイブリダイズする。
いくつかの例では、本明細書に記載されるポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子中のエクソン
２、３、４、５、６、７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２
７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０
、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、
５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６
７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、または７８の少な
くとも１０００ヌクレオチド（ｎｔ）、５００ｎｔ、４００ｎｔ、３００ｎｔ、２００ｎ
ｔ、１００ｎｔ、８０ｎｔ、６０ｎｔ、５０ｎｔ、４０ｎｔ、３０ｎｔ、２０ｎｔ、１０
ｎｔ、または５ｎｔ下流（あるいは、３’から）の領域を標的とする。いくつかの例では
、本明細書に記載されるポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン３、４、５、６、７、
１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３
１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４
、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、
５８、５９、６０、６１、６２、あるいは６３の少なくとも１０００ヌクレオチド（ｎｔ
）、５００ｎｔ、４００ｎｔ、３００ｎｔ、２００ｎｔ、１００ｎｔ、８０ｎｔ、６０ｎ
ｔ、５０ｎｔ、４０ｎｔ、３０ｎｔ、２０ｎｔ、１０ｎｔ、あるいは５ｎｔ下流（あるい
は３’から）の領域を標的とする。いくつかの例では、本明細書に記載されたポリ核酸分
子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン８、２３、３５、４３、４４、４５、５０、５１、５２、
５３、または５５の少なくとも１０００ヌクレオチド（ｎｔ）、５００ｎｔ、４００ｎｔ
、３００ｎｔ、２００ｎｔ、１００ｎｔ、８０ｎｔ、６０ｎｔ、５０ｎｔ、４０ｎｔ、３
０ｎｔ、２０ｎｔ、１０ｎｔ、あるいは５ｎｔ下流（あるいは３’から）の領域を標的と
する。いくつかの例では、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソ
ン８の少なくとも１０００ヌクレオチド（ｎｔ）、５００ｎｔ、４００ｎｔ、３００ｎｔ
、２００ｎｔ、１００ｎｔ、８０ｎｔ、６０ｎｔ、５０ｎｔ、４０ｎｔ、３０ｎｔ、２０
ｎｔ、１０ｎｔ、あるいは５ｎｔ下流（あるいは３’から）の領域を標的とする。いくつ
かの例では、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン２３の少な
くとも１０００ヌクレオチド（ｎｔ）、５００ｎｔ、４００ｎｔ、３００ｎｔ、２００ｎ
ｔ、１００ｎｔ、８０ｎｔ、６０ｎｔ、５０ｎｔ、４０ｎｔ、３０ｎｔ、２０ｎｔ、１０
ｎｔ、あるいは５ｎｔ下流（あるいは３’から）の領域を標的とする。いくつかの例では
、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン３５の少なくとも１０
００ヌクレオチド（ｎｔ）、５００ｎｔ、４００ｎｔ、３００ｎｔ、２００ｎｔ、１００
ｎｔ、８０ｎｔ、６０ｎｔ、５０ｎｔ、４０ｎｔ、３０ｎｔ、２０ｎｔ、１０ｎｔ、ある
いは５ｎｔ下流（あるいは３’から）の領域を標的とする。いくつかの例では、本明細書
に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン４３の少なくとも１０００ヌクレ
オチド（ｎｔ）、５００ｎｔ、４００ｎｔ、３００ｎｔ、２００ｎｔ、１００ｎｔ、８０
ｎｔ、６０ｎｔ、５０ｎｔ、４０ｎｔ、３０ｎｔ、２０ｎｔ、１０ｎｔ、あるいは５ｎｔ
下流（あるいは３’から）の領域を標的とする。いくつかの例では、本明細書に記載され
たポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン４４の少なくとも１０００ヌクレオチド（ｎ
ｔ）、５００ｎｔ、４００ｎｔ、３００ｎｔ、２００ｎｔ、１００ｎｔ、８０ｎｔ、６０
ｎｔ、５０ｎｔ、４０ｎｔ、３０ｎｔ、２０ｎｔ、１０ｎｔ、あるいは５ｎｔ下流（ある
いは３’から）の領域を標的とする。いくつかの例では、本明細書に記載されたポリ核酸
分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン４５の少なくとも１０００ヌクレオチド（ｎｔ）、５０
０ｎｔ、４００ｎｔ、３００ｎｔ、２００ｎｔ、１００ｎｔ、８０ｎｔ、６０ｎｔ、５０
ｎｔ、４０ｎｔ、３０ｎｔ、２０ｎｔ、１０ｎｔ、あるいは５ｎｔ下流（あるいは３’か
ら）の領域を標的とする。いくつかの例では、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、Ｄ
ＭＤ遺伝子のエクソン４８の少なくとも１０００ヌクレオチド（ｎｔ）、５００ｎｔ、４
００ｎｔ、３００ｎｔ、２００ｎｔ、１００ｎｔ、８０ｎｔ、６０ｎｔ、５０ｎｔ、４０
ｎｔ、３０ｎｔ、２０ｎｔ、１０ｎｔ、あるいは５ｎｔ下流（あるいは３’から）の領域
を標的とする。いくつかの例では、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子
のエクソン４９の少なくとも１０００ヌクレオチド（ｎｔ）、５００ｎｔ、４００ｎｔ、
３００ｎｔ、２００ｎｔ、１００ｎｔ、８０ｎｔ、６０ｎｔ、５０ｎｔ、４０ｎｔ、３０
ｎｔ、２０ｎｔ、１０ｎｔ、あるいは５ｎｔ下流（あるいは３’から）の領域を標的とす
る。いくつかの例では、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン
５０の少なくとも１０００ヌクレオチド（ｎｔ）、５００ｎｔ、４００ｎｔ、３００ｎｔ
、２００ｎｔ、１００ｎｔ、８０ｎｔ、６０ｎｔ、５０ｎｔ、４０ｎｔ、３０ｎｔ、２０
ｎｔ、１０ｎｔ、あるいは５ｎｔ下流（あるいは３’から）の領域を標的とする。いくつ
かの例では、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン５１の少な
くとも１０００ヌクレオチド（ｎｔ）、５００ｎｔ、４００ｎｔ、３００ｎｔ、２００ｎ
ｔ、１００ｎｔ、８０ｎｔ、６０ｎｔ、５０ｎｔ、４０ｎｔ、３０ｎｔ、２０ｎｔ、１０
ｎｔ、あるいは５ｎｔ下流（あるいは３’から）の領域を標的とする。いくつかの例では
、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン５２の少なくとも１０
００ヌクレオチド（ｎｔ）、５００ｎｔ、４００ｎｔ、３００ｎｔ、２００ｎｔ、１００
ｎｔ、８０ｎｔ、６０ｎｔ、５０ｎｔ、４０ｎｔ、３０ｎｔ、２０ｎｔ、１０ｎｔ、ある
いは５ｎｔ下流（あるいは３’から）の領域を標的とする。いくつかの例では、本明細書
に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン５３の少なくとも１０００ヌクレ
オチド（ｎｔ）、５００ｎｔ、４００ｎｔ、３００ｎｔ、２００ｎｔ、１００ｎｔ、８０
ｎｔ、６０ｎｔ、５０ｎｔ、４０ｎｔ、３０ｎｔ、２０ｎｔ、１０ｎｔ、あるいは５ｎｔ
下流（あるいは３’から）の領域を標的とする。いくつかの例では、本明細書に記載され
たポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン５５の少なくとも１０００ヌクレオチド（ｎ
ｔ）、５００ｎｔ、４００ｎｔ、３００ｎｔ、２００ｎｔ、１００ｎｔ、８０ｎｔ、６０
ｎｔ、５０ｎｔ、４０ｎｔ、３０ｎｔ、２０ｎｔ、１０ｎｔ、あるいは５ｎｔ下流（ある
いは３’から）の領域を標的とする。
いくつかの例では、ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン２、３、４、５、６、７
、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、
３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４
４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７
、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、
７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、および７８の少なくとも１つの下流（ある
いは３’）の標的領域にハイブリダイズする。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、ＤＭ
Ｄ遺伝子のエクソン３、４、５、６、７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、
２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３
８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５２
、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、および、６３の少な
くとも１つの下流（または３’）の標的領域にハイブリダイズする。いくつかの例では、
ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン３、４、５、６、７、１８、１９、２０、２１
、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、
３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４
８、４９、５０、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２
、および、６３の少なくとも１つの約５、１０、１５、２０、５０、１００、２００、３
００、４００、あるいは５００ｂｐ下流（あるいは５’）の標的領域にハイブリダイズす
る。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン８、２３、３５、４３
、４４、４５、５０、５１、５２、５３、または５５の少なくとも１つの約５、１０、１
５、２０、５０、１００、２００、３００、４００、あるいは５００ｂｐ下流（あるいは
３’）の標的領域にハイブリダイズする。
いくつかの例では、ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン２、３、４、５、６、７
、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、
３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４
４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７
、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、
７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、あるいは７８内の内部領域を標的とする。
いくつかの例では、本明細書に記載されるポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン３、
４、５、６、７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８
、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、
４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５
５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、または６３内の内部領域を標的とする
。いくつかの例では、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン８
、２３、３５、４３、４４、４５、５０、５１、５２、５３、または５５内の内部領域を
標的とする。いくつかの例では、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子の
エクソン８内の内部領域を標的とする。いくつかの例では、本明細書に記載されたポリ核
酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン２３内の内部領域を標的とする。いくつかの例では、
本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン３５内の内部領域を標的
とする。いくつかの例では、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエク
ソン４３内の内部領域を標的とする。いくつかの例では、本明細書に記載されたポリ核酸
分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン４４内の内部領域を標的とする。いくつかの例では、本
明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン４５内の内部領域を標的と
する。いくつかの例では、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソ
ン４８内の内部領域を標的とする。いくつかの例では、本明細書に記載されたポリ核酸分
子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン４９内の内部領域を標的とする。いくつかの例では、本明
細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン５０内の内部領域を標的とす
る。いくつかの例では、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン
５１内の内部領域を標的とする。いくつかの例では、本明細書に記載されたポリ核酸分子
は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン５２内の内部領域を標的とする。いくつかの例では、本明細
書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン５３内の内部領域を標的とする
。いくつかの例では、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン５
５内の内部領域を標的とする。
いくつかの例では、ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン２、３、４、５、６、７
、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、
３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４
４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７
、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、
７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、および７８の少なくとも１つの標的領域に
ハイブリダイズする。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン３、
４、５、６、７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８
、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、
４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５２、５３、５４、５５、５
６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、および、６３の少なくとも１つの内部にある
標的領域にハイブリダイズする。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエ
クソン８、２３、３５、４３、４４、４５、５０、５１、５２、５３、または５５の少な
くとも１つの内部にある標的領域にハイブリダイズする。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子の
エクソン４４を含む部分的にスプライシングされたｍＲＮＡ配列を標的とする。いくつか
の例では、ポリ核酸分子は、エクソン４４に対して上流（あるいは５’）の標的領域にハ
イブリダイズする。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、エクソン４４の約５、１０、１
５、２０、５０、１００、２００、３００、４００、あるいは５００ｂｐ上流（あるいは
５’）の標的領域にハイブリダイズする。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、エクソン
４４に対して下流（あるいは３’）の標的領域にハイブリダイズする。いくつかの例では
、ポリ核酸分子は、エクソン４４の約５、１０、１５、２０、５０、１００、２００、３
００、４００、あるいは５００ｂｐ下流（あるいは３’）の標的領域にハイブリダイズす
る。
いくつかの例では、ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン４４内にある標的領域に
ハイブリダイズする。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、５’イントロン－エクソン４
４接合部あるいは３’エクソン４４－イントロン接合部にある標的領域にハイブリダイズ
する。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子の
エクソン４５を含む部分的にスプライシングされたｍＲＮＡ配列を標的とする。いくつか
の例では、ポリ核酸分子は、エクソン４５に対して上流（あるいは５’）の標的領域にハ
イブリダイズする。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、エクソン４５の約５、１０、１
５、２０、５０、１００、２００、３００、４００、あるいは５００ｂｐ上流（あるいは
５’）の標的領域にハイブリダイズする。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、エクソン
４５に対して下流（あるいは３’）の標的領域にハイブリダイズする。いくつかの例では
、ポリ核酸分子は、エクソン４５の約５、１０、１５、２０、５０、１００、２００、３
００、４００、あるいは５００ｂｐ下流（あるいは３’）の標的領域にハイブリダイズす
る。
いくつかの例では、ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン４５内にある標的領域に
ハイブリダイズする。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、５’イントロン－エクソン４
５接合部あるいは３’エクソン４５－イントロン接合部にある標的領域にハイブリダイズ
する。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子の
エクソン５１を含む部分的にスプライシングされたｍＲＮＡ配列を標的とする。いくつか
の例では、ポリ核酸分子は、エクソン５１に対して上流（あるいは５’）の標的領域にハ
イブリダイズする。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、エクソン５１の約５、１０、１
５、２０、５０、１００、２００、３００、４００、あるいは５００ｂｐ上流（あるいは
５’）の標的領域にハイブリダイズする。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、エクソン
５１に対して下流（あるいは３’）の標的領域にハイブリダイズする。いくつかの例では
、ポリ核酸分子は、エクソン５１の約５、１０、１５、２０、５０、１００、２００、３
００、４００、あるいは５００ｂｐ下流（あるいは３’）の標的領域にハイブリダイズす
る。
いくつかの例では、ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン５１内にある標的領域に
ハイブリダイズする。場合によっては、ポリ核酸分子は、５’イントロン－エクソン５１
接合部あるいは３’エクソン５１－イントロン接合部にある標的領域にハイブリダイズす
る。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子の
エクソン５３を含む部分的にスプライシングされたｍＲＮＡ配列を標的とする。いくつか
の例では、ポリ核酸分子は、エクソン５３に対して上流（あるいは５’）の標的領域にハ
イブリダイズする。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、エクソン５３の約５、１０、１
５、２０、５０、１００、２００、３００、４００、あるいは５００ｂｐ上流（あるいは
５’）の標的領域にハイブリダイズする。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、エクソン
５３に対して下流（あるいは３’）の標的領域にハイブリダイズする。いくつかの例では
、ポリ核酸分子は、エクソン５３の約５、１０、１５、２０、５０、１００、２００、３
００、４００、あるいは５００ｂｐ下流（あるいは３’）の標的領域にハイブリダイズす
る。
いくつかの例では、ポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子のエクソン５３内にある標的領域に
ハイブリダイズする。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、５’イントロン－エクソン５
３接合部あるいは３’エクソン５３－イントロン接合部にある標的領域にハイブリダイズ
する。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、対象の標的配列に対して少なくとも５
０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９
６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一性を有する配列を含む。い
くつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、対象の標的配列に対して少なくとも５０％
の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、対象
の標的配列に対して少なくとも６０％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施
形態において、ポリ核酸分子は、対象の標的配列に対して少なくとも７０％の配列同一性
を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、対象の標的配列に
対して少なくとも７５％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において
、ポリ核酸分子は、対象の標的配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する配列
を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、対象の標的配列に対して少なく
とも８５％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分
子は、対象の標的配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む。いく
つかの実施形態において、ポリ核酸分子は、対象の標的配列に対して少なくとも９５％の
配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、対象の
標的配列に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形
態において、ポリ核酸分子は、対象の標的配列に対して少なくとも９７％の配列同一性を
有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、対象の標的配列に対
して少なくとも９８％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、
ポリ核酸分子は、対象の標的配列に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を
含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は対象の標的配列からなる。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は第１のポリヌクレオチドと第２のポリヌ
クレオチドを含む。いくつかの例では、第１のポリヌクレオチドは、対象の標的配列に対
して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９
０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一性を有す
る配列を含む。いくつかの例では、第２のポリヌクレオチドは、対象の標的配列に対して
少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％
、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一性を有する配
列を含む。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、対象の標的配列に対して少なくとも５０
％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６
％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一性を有する第１のポリヌクレ
オチドと、対象の標的配列に対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％
、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるい
は１００％の配列同一性を有する第２のポリヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６４－１２８
５に対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５
％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一性
を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：９６４－１２８５に対して少なくとも５０％の配列同一性を有する配列を含む。いく
つかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６４－１２８５に対
して少なくとも６０％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、
ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６４－１２８５に対して少なくとも７０％の配
列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：９６４－１２８５に対して少なくとも７５％の配列同一性を有する配列を含
む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６４－１２
８５に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態に
おいて、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６４－１２８５に対して少なくとも８
５％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６４－１２８５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する
配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６
４－１２８５に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実
施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６４－１２８５に対して少な
くとも９６％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸
分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６４－１２８５に対して少なくとも９７％の配列同一性
を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：９６４－１２８５に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する配列を含む。いく
つかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６４－１２８５に対
して少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、ポリ
核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６４－１２８５からなる。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６－１０
９４に対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８
５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一
性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：１０５６－１０９４に対して少なくとも５０％の配列同一性を有する配列を含む。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６－１０９
４に対して少なくとも６０％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態にお
いて、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６－１０９４に対して少なくとも７
０％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６－１０９４に対して少なくとも７５％の配列同一性を有す
る配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１
０５６－１０９４に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含む。いくつか
の実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６－１０９４に対し
て少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポ
リ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６－１０９４に対して少なくとも９０％の配
列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：１０５６－１０９４に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を
含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６－
１０９４に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形
態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６－１０９４に対して少なく
とも９７％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分
子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６－１０９４に対して少なくとも９８％の配列同一性
を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：１０５６－１０９４に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む。い
くつかの実施形態では、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６－１０９４から
なる。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４７－１１
６２に対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８
５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一
性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：１１４７－１１６２に対して少なくとも５０％の配列同一性を有する配列を含む。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４７－１１６
２に対して少なくとも６０％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態にお
いて、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４７－１１６２に対して少なくとも７
０％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４７－１１６２に対して少なくとも７５％の配列同一性を有す
る配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１
１４７－１１６２に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含む。いくつか
の実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４７－１１６２に対し
て少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポ
リ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４７－１１６２に対して少なくとも９０％の配
列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：１１４７－１１６２に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を
含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４７－
１１６２に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形
態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４７－１１６２に対して少なく
とも９７％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分
子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４７－１１６２に対して少なくとも９８％の配列同一性
を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：１１４７－１１６２に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む。い
くつかの実施形態では、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４７－１１６２から
なる。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７３－１２
１１に対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８
５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一
性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：１１７３－１２１１に対して少なくとも５０％の配列同一性を有する配列を含む。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７３－１２１
１に対して少なくとも６０％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態にお
いて、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７３－１２１１に対して少なくとも７
０％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７３－１２１１に対して少なくとも７５％の配列同一性を有す
る配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１
１７３－１２１１に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含む。いくつか
の実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７３－１２１１に対し
て少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポ
リ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７３－１２１１に対して少なくとも９０％の配
列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：１１７３－１２１１に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を
含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７３－
１２１１に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形
態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７３－１２１１に対して少なく
とも９７％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分
子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７３－１２１１に対して少なくとも９８％の配列同一性
を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：１１７３－１２１１に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む。い
くつかの実施形態では、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７３－１２１１から
なる。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６－１０
７６に対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８
５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一
性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：１０５６－１０７６に対して少なくとも５０％の配列同一性を有する配列を含む。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６－１０７
６に対して少なくとも６０％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態にお
いて、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６－１０７６に対して少なくとも７
０％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６－１０７６に対して少なくとも７５％の配列同一性を有す
る配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１
０５６－１０７６に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含む。いくつか
の実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６－１０７６に対し
て少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポ
リ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６－１０７６に対して少なくとも９０％の配
列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：１０５６－１０７６に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を
含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６－
１０７６に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形
態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６－１０７６に対して少なく
とも９７％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分
子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６－１０７６に対して少なくとも９８％の配列同一性
を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：１０５６－１０７６に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む。い
くつかの実施形態では、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６－１０７６から
なる。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７７－１０
９４に対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８
５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一
性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：１０７７－１０９４に対して少なくとも５０％の配列同一性を有する配列を含む。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７７－１０９
４に対して少なくとも６０％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態にお
いて、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７７－１０９４に対して少なくとも７
０％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７７－１０９４に対して少なくとも７５％の配列同一性を有す
る配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１
０７７－１０９４に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含む。いくつか
の実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７７－１０９４に対し
て少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポ
リ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７７－１０９４に対して少なくとも９０％の配
列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：１０７７－１０９４に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を
含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７７－
１０９４に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形
態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７７－１０９４に対して少なく
とも９７％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分
子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７７－１０９４に対して少なくとも９８％の配列同一性
を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：１０７７－１０９４に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む。い
くつかの実施形態では、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７７－１０９４から
なる。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６－１０
５８に対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８
５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一
性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：１０５６－１０５８に対して少なくとも５０％の配列同一性を有する配列を含む。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６－１０５
８に対して少なくとも６０％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態にお
いて、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６－１０５８に対して少なくとも７
０％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６－１０５８に対して少なくとも７５％の配列同一性を有す
る配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１
０５６－１０５８に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含む。いくつか
の実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６－１０５８に対し
て少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポ
リ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６－１０５８に対して少なくとも９０％の配
列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：１０５６－１０５８に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を
含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６－
１０５８に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形
態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６－１０５８に対して少なく
とも９７％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分
子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６－１０５８に対して少なくとも９８％の配列同一性
を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：１０５６－１０５８に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む。い
くつかの実施形態では、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６－１０５８から
なる。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８７－１０
８９に対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８
５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一
性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：１０８７－１０８９に対して少なくとも５０％の配列同一性を有する配列を含む。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８７－１０８
９に対して少なくとも６０％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態にお
いて、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８７－１０８９に対して少なくとも７
０％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８７－１０８９に対して少なくとも７５％の配列同一性を有す
る配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１
０８７－１０８９に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する配列を含む。いくつか
の実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８７－１０８９に対し
て少なくとも８５％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポ
リ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８７－１０８９に対して少なくとも９０％の配
列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：１０８７－１０８９に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する配列を
含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８７－
１０８９に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形
態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８７－１０８９に対して少なく
とも９７％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分
子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８７－１０８９に対して少なくとも９８％の配列同一性
を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：１０８７－１０８９に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む。い
くつかの実施形態では、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８７－１０８９から
なる。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６４－１２８
５から選択された塩基配列の少なくとも１０、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２
１、２２、２３、２４、２５、２６、またはそれ以上の隣接する塩基を含む。いくつかの
例では、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６－１０９４、１１４７－１１６
２、または、１１７３－１２１１から選択された塩基配列の少なくとも１０、１５、１６
、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、またはそれ以上の隣
接する塩基を含む。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６
－１０７６から選択された塩基配列の少なくとも１０、１５、１６、１７、１８、１９、
２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、またはそれ以上の隣接する塩基を含む。い
くつかの例では、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７７－１０９４から選択さ
れた塩基配列の少なくとも１０、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２
３、２４、２５、２６、またはそれ以上の隣接する塩基を含む。いくつかの例では、ポリ
核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４７－１１６２から選択された塩基配列の少なく
とも１０、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６
、またはそれ以上の隣接する塩基を含む。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：１１７３－１２１１から選択された塩基配列の少なくとも１０、１５、１６
、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、またはそれ以上の隣
接する塩基を含む。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６
－１０５８から選択された塩基配列の少なくとも１０、１５、１６、１７、１８、１９、
２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、またはそれ以上の隣接する塩基を含む。い
くつかの例では、ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８７－１０８９から選択さ
れた塩基配列の少なくとも１０、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２
３、２４、２５、２６、またはそれ以上の隣接する塩基を含む。場合によっては、ポリ核
酸分子はさらに、１、２、３、あるいは４つのミスマッチを含む。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子はガイド鎖とパッセンジャー鎖を含む。い
くつかの例では、ガイド鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６４－１２８５に対して少なくと
も５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％
、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一性を有する配列を含む
。場合によっては、ガイド鎖は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６４－１２８５から選択される
配列を含む。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるポリ核酸分子はＲＮＡまたはＤＮ
Ａを含む。場合によっては、ポリ核酸分子はＲＮＡを含む。いくつかの例では、ＲＮＡは
低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、マイクロＲ
ＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、転移ＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、リボソー
ムＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、またはヘテロ核ＲＮＡ（ｈｎＲＮＡ）を含む。いくつかの例では
、ＲＮＡはｓｈＲＮＡを含む。いくつかの例では、ＲＮＡはｍｉＲＮＡを含む。いくつか
の例では、ＲＮＡはｄｓＲＮＡを含む。いくつかの例では、ＲＮＡはｔＲＮＡを含む。い
くつかの例では、ＲＮＡはｒＲＮＡを含む。いくつかの例では、ＲＮＡはｈｎＲＮＡを含
む。いくつかの例では、ＲＮＡはｓｉＲＮＡを含む。いくつかの例では、ポリ核酸分子は
ｓｉＲＮＡを含む。いくつかの例では、ポリ核酸分子はアンチセンスオリゴヌクレオチド
（ＡＳＯ）である。
いくつかの実施形態では、核酸ポリマーは、約１０から約５０ヌクレオチド長さである
。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、約１０から約３０、約１５から約３０、約１８か
ら約３０、約１８から約２５， ｆｏｒｍ 約１８から約２４、約１９から約２３、約１
９から約３０、約１９から約２５、約１９から約２４、約１９から約２３、約２０から約
３０、約２０から約２５、約２０から約２４、約２０から約２３、または約２０から約２
２ヌクレオチド長さである。
いくつかの実施形態では、ポリ核酸分子は、約５０ヌクレオチド長さである。いくつか
の例では、ポリ核酸分子は、約４５ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、ポリ核
酸分子は、約４０ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、約３５
ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、約３０ヌクレオチド長さ
である。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、約２５ヌクレオチド長さである。いくつか
の例では、ポリ核酸分子は、約２０ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、ポリ核
酸分子は、約１９ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、約１８
ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、約１７ヌクレオチド長さ
である。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、約１６ヌクレオチド長さである。いくつか
の例では、ポリ核酸分子は、約１５ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、ポリ核
酸分子は、約１４ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、約１３
ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、約１２ヌクレオチド長さ
である。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、約１１ヌクレオチド長さである。いくつか
の例では、ポリ核酸分子は、約１０ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、ポリ核
酸分子は、約１０から約５０ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、ポリ核酸分子
は、約１０から約４５ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、約
１０から約４０ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、約１０か
ら約３５ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、約１０から約３
０ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、約１０から約２５ヌク
レオチド長さである。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、約１０から約２０ヌクレオチ
ド長さである。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、約１５から約２５ヌクレオチド長さ
である。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、約１５から約３０ヌクレオチド長さである
。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、約１２から約３０ヌクレオチド長さである。いく
つかの例では、ポリ核酸分子は、約１９から約３０ヌクレオチド長さである。いくつかの
例では、ポリ核酸分子は、約２０から約３０ヌクレオチド長さである。いくつかの例では
、ポリ核酸分子は、約１９から約２５ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、ポリ
核酸分子は、約２０から約２５ヌクレオチド長さである。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、少なくとも１５、１６、１７、１８、
１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４
０、４５、あるいは５０ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、
少なくとも１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６
、２７、２８、２９、あるいは３０ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、ポリ核
酸分子は少なくとも１５ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、ポリ核酸分子は少
なくとも１８ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、ポリ核酸分子は少なくとも１
９ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、ポリ核酸分子は少なくとも２０ヌクレオ
チド長さである。いくつかの例では、ポリ核酸分子は少なくとも２１ヌクレオチド長さで
ある。いくつかの例では、ポリ核酸分子は少なくとも２２ヌクレオチド長さである。いく
つかの例では、ポリ核酸分子は少なくとも２３ヌクレオチド長さである。いくつかの例で
は、ポリ核酸分子は少なくとも２４ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、ポリ核
酸分子は少なくとも２５ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、ポリ核酸分子は少
なくとも３０ヌクレオチド長さである。
いくつかの実施形態では、ポリ核酸分子は、約５０ヌクレオチド長さである。いくつか
の例では、ポリ核酸分子は、約４５ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、ポリ核
酸分子は、約４０ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、約３５
ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、約３０ヌクレオチド長さ
である。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、約２９ヌクレオチド長さである。いくつか
の例では、ポリ核酸分子は、約２８ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、ポリ核
酸分子は、約２７ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、約２６
ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、約２５ヌクレオチド長さ
である。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、約２４ヌクレオチド長さである。いくつか
の例では、ポリ核酸分子は、約２３ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、ポリ核
酸分子は、約２２ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、約２１
ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、約２０ヌクレオチド長さ
である。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、約１９ヌクレオチド長さである。いくつか
の例では、ポリ核酸分子は、約１８ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、ポリ核
酸分子は、約１７ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、約１６
ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、約１５ヌクレオチド長さ
である。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、約１４ヌクレオチド長さである。いくつか
の例では、ポリ核酸分子は、約１３ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、ポリ核
酸分子は、約１２ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、約１１
ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、約１０ヌクレオチド長さ
である。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は第１のポリヌクレオチドを含む。いくつ
かの例では、ポリ核酸分子は第２のポリヌクレオチドを含む。いくつかの例では、ポリ核
酸分子は第１のポリヌクレオチドと第２のポリヌクレオチドを含む。いくつかの例では、
第１のポリヌクレオチドはセンス鎖またはパッセンジャー鎖である。いくつかの例では、
第２のポリヌクレオチドはアンチセンス鎖またはガイド鎖である。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は第１のポリヌクレオチドである。いくつ
かの実施形態では、第１のポリヌクレオチドは、約１０から約５０ヌクレオチド長さであ
る。いくつかの例では、第１のポリヌクレオチドは、約１０から約３０、約１５から約３
０、約１８から約３０、約１８から約２５、約１８から約２４、約１９から約２３、約１
９から約３０、約１９から約２５、約１９から約２４、約１９から約２３、約２０から約
３０、約２０から約２５、約２０から約２４、約２０から約２３、または約２０から約２
２ヌクレオチド長さである。
いくつかの例では、第１のポリヌクレオチドは、約５０ヌクレオチド長さである。いく
つかの例では、第１のポリヌクレオチドは、約４５ヌクレオチド長さである。いくつかの
例では、第１のポリヌクレオチドは、約４０ヌクレオチド長さである。いくつかの例では
、第１のポリヌクレオチドは、約３５ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、第１
のポリヌクレオチドは、約３０ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、第１のポリ
ヌクレオチドは、約２５ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、第１のポリヌクレ
オチドは、約２０ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、第１のポリヌクレオチド
は、約１９ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、第１のポリヌクレオチドは、約
１８ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、第１のポリヌクレオチドは、約１７ヌ
クレオチド長さである。いくつかの例では、第１のポリヌクレオチドは、約１６ヌクレオ
チド長さである。いくつかの例では、第１のポリヌクレオチドは、約１５ヌクレオチド長
さである。いくつかの例では、第１のポリヌクレオチドは、約１４ヌクレオチド長さであ
る。いくつかの例では、第１のポリヌクレオチドは、約１３ヌクレオチド長さである。い
くつかの例では、第１のポリヌクレオチドは、約１２ヌクレオチド長さである。いくつか
の例では、第１のポリヌクレオチドは、約１１ヌクレオチド長さである。いくつかの例で
は、第１のポリヌクレオチドは、約１０ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、第
１のポリヌクレオチドは、約１０から約５０ヌクレオチド長さである。いくつかの例では
、第１のポリヌクレオチドは、約１０から約４５ヌクレオチド長さである。いくつかの例
では、第１のポリヌクレオチドは、約１０から約４０ヌクレオチド長さである。いくつか
の例では、第１のポリヌクレオチドは、約１０から約３５ヌクレオチド長さである。いく
つかの例では、第１のポリヌクレオチドは、約１０から約３０ヌクレオチド長さである。
いくつかの例では、第１のポリヌクレオチドは、約１０から約２５ヌクレオチド長さであ
る。いくつかの例では、第１のポリヌクレオチドは、約１０から約２０ヌクレオチド長さ
である。いくつかの例では、第１のポリヌクレオチドは、約１５から約２５ヌクレオチド
長さである。いくつかの例では、第１のポリヌクレオチドは、約１５から約３０ヌクレオ
チド長さである。いくつかの例では、第１のポリヌクレオチドは、約１２から約３０ヌク
レオチド長さである。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は第２のポリヌクレオチドである。いくつ
かの実施形態では、第２のポリヌクレオチドは、約１０から約５０ヌクレオチド長さであ
る。いくつかの例では、第２のポリヌクレオチドは、約１０から約３０、約１５から約３
０、約１８から約３０、約１８から約２５、約１８から約２４、約１９から約２３、約１
９から約３０、約１９から約２５、約１９から約２４、約１９から約２３、約２０から約
３０、約２０から約２５、約２０から約２４、約２０から約２３、または約２０から約２
２ヌクレオチド長さである。
いくつかの例では、第２のポリヌクレオチドは、約５０ヌクレオチド長さである。いく
つかの例では、第２のポリヌクレオチドは、約４５ヌクレオチド長さである。いくつかの
例では、第２のポリヌクレオチドは、約４０ヌクレオチド長さである。いくつかの例では
、第２のポリヌクレオチドは、約３５ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、第２
のポリヌクレオチドは、約３０ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、第２のポリ
ヌクレオチドは、約２５ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、第２のポリヌクレ
オチドは、約２０ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、第２のポリヌクレオチド
は、約１９ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、第２のポリヌクレオチドは、約
１８ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、第２のポリヌクレオチドは、約１７ヌ
クレオチド長さである。いくつかの例では、第２のポリヌクレオチドは、約１６ヌクレオ
チド長さである。いくつかの例では、第２のポリヌクレオチドは、約１５ヌクレオチド長
さである。いくつかの例では、第２のポリヌクレオチドは、約１４ヌクレオチド長さであ
る。いくつかの例では、第２のポリヌクレオチドは、約１３ヌクレオチド長さである。い
くつかの例では、第２のポリヌクレオチドは、約１２ヌクレオチド長さである。いくつか
の例では、第２のポリヌクレオチドは、約１１ヌクレオチド長さである。いくつかの例で
は、第２のポリヌクレオチドは、約１０ヌクレオチド長さである。いくつかの例では、第
２のポリヌクレオチドは、約１０から約５０ヌクレオチド長さである。いくつかの例では
、第２のポリヌクレオチドは、約１０から約４５ヌクレオチド長さである。いくつかの例
では、第２のポリヌクレオチドは、約１０から約４０ヌクレオチド長さである。いくつか
の例では、第２のポリヌクレオチドは、約１０から約３５ヌクレオチド長さである。いく
つかの例では、第２のポリヌクレオチドは、約１０から約３０ヌクレオチド長さである。
いくつかの例では、第２のポリヌクレオチドは、約１０から約２５ヌクレオチド長さであ
る。いくつかの例では、第２のポリヌクレオチドは、約１０から約２０ヌクレオチド長さ
である。いくつかの例では、第２のポリヌクレオチドは、約１５から約２５ヌクレオチド
長さである。いくつかの例では、第２のポリヌクレオチドは、約１５から約３０ヌクレオ
チド長さである。いくつかの例では、第２のポリヌクレオチドは、約１２から約３０ヌク
レオチド長さである。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は第１のポリヌクレオチドおよび第２のポ
リヌクレオチドを含む。いくつかの例では、ポリ核酸分子はさらに平滑末端、オーバーハ
ングあるいはその組み合わせを含む。いくつかの例では、平滑末端は、５’平滑末端、３
’平滑末端、あるいはその両方である。場合によっては、オーバーハングは５’オーバー
ハング、３’オーバーハング、またはその両方である。場合によっては、オーバーハング
は１、２、３、４、５、６、７、８、９、あるいは１０の非塩基対ヌクレオチドを含む。
場合によっては、オーバーハングは１、２、３、４、５、あるいは６の非塩基対ヌクレオ
チドを含む。場合によっては、オーバーハングは１、２、３、あるいは４の非塩基対ヌク
レオチドを含む。場合によっては、オーバーハングは１つの非塩基対ヌクレオチドを含む
。場合によっては、オーバーハングは２つの非塩基対ヌクレオチドを含む。場合によって
は、オーバーハングは３つの非塩基対ヌクレオチドを含む。場合によっては、オーバーハ
ングは４つの非塩基対ヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子の配列は、本明細書に記載された標的配列
に対して、少なくとも４０％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０
％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％、あるいは９９．５％相補的である。いく
つかの実施形態において、ポリ核酸分子の配列は本明細書に記載された標的配列に少なく
とも５０％相補的である。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子の配列は本明細書
に記載された標的配列に少なくとも６０％相補的である。いくつかの実施形態において、
ポリ核酸分子の配列は本明細書に記載された標的配列に少なくとも７０％相補的である。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子の配列は本明細書に記載された標的配列に少
なくとも８０％相補的である。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子の配列は本明
細書に記載された標的配列に少なくとも９０％相補的である。いくつかの実施形態におい
て、ポリ核酸分子の配列は本明細書に記載された標的配列に少なくとも９５％相補的であ
る。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子の配列は本明細書に記載された標的配列
に少なくとも９９％相補的である。いくつかの例では、ポリ核酸分子の配列は本明細書に
記載された標的配列に１００％相補的である。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子の配列は本明細書に記載された標的配列に
対して５つ以下のミスマッチを有する。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子の配
列は本明細書に記載された標的配列に対して４つ以下のミスマッチを有する。場合によっ
ては、ポリ核酸分子の配列は本明細書に記載された標的配列に対して３つ以下のミスマッ
チを有する。場合によっては、ポリ核酸分子の配列は本明細書に記載された標的配列に対
して２つ以下のミスマッチを有する。場合によっては、ポリ核酸分子の配列は本明細書に
記載された標的配列に対して１つ以下のミスマッチを有する。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載された標的配列にハイブリダイズするポ
リ核酸分子の特異性は、標的配列に対するポリ核酸分子の９５％、９８％、９９％、９９
．５％、あるいは１００％の配列相補性である。いくつかの例では、ハイブリダイゼーシ
ョンは高いストリンジェントなハイブリダイゼーション状態である。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子はオフターゲット効果を減少させた。いく
つかの例において、「オフターゲット」あるいは「オフターゲット効果」とは、所定の標
的に対するポリ核酸ポリマーが、別のｍＲＮＡ配列、ＤＮＡ配列、あるいは細胞タンパク
質またはその他の部分を直接的あるいは間接的に相互作用することによって意図しない効
果を引き起こすあらゆる例を指す。いくつかの例では、その他の転写産物とポリ核酸分子
のセンスおよび／またはアンチセンス鎖との間の部分的な相同性あるいは相補性によって
他の転写産物の同時の分解がある場合に、「オフターゲット効果」が生じる。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は天然または合成または人工のヌクレオチ
ドアナログまたは塩基を含む。場合によっては、ポリ核酸分子は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、およ
び／またはヌクレオチドアナログの組み合わせを含む。いくつかの例では、合成または人
工のヌクレオチドアナログまたは塩基は、リボース部分、リン酸塩部分、ヌクレオシド部
分、あるいはその組み合わせの１つ以上で修飾を含む。
いくつかの実施形態において、ヌクレオチドアナログあるいは人工ヌクレオチド塩基は
、リボース部分の２’水酸基に修飾を有する核酸を含む。いくつかの例では、修飾はＨ、
ＯＲ、Ｒ、ハロ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲ２、あるいはＣＮを含み、ここで、
Ｒはアルキル部分である。例示的なアルキル部分としては、限定されないが、ハロゲン、
硫黄、チオール、チオエーテル、チオエステル、アミン（一級、二級、または三級）、ア
ミド、エーテル、エステル、アルコール、および酸素が挙げられる。いくつかの例では、
アルキル部分はさらに修飾を含む。いくつかの例では、修飾はアゾ基、ケト基、アルデヒ
ド基、カルボキシル基、ニトロ基、ニトロソ基、ニトリル基、複素環（例えば、イミダゾ
ール、ヒドラジノ、あるいはヒドロキシルアミノ）基、イソシアネートまたはシアナート
基、あるいは硫黄含有基（例えば、スルホキシド、スルホン、スルフィド、あるいはジス
ルフィド）を含む。いくつかの例では、アルキル部分はさらにヘテロ置換を含む。いくつ
かの例では、複素環基の炭素は窒素、酸素、あるいは硫黄によって置換される。いくつか
の例では、複素環式置換は、限定されないが、モルホリノ、イミダゾール、および、ピロ
リジノを含む。
いくつかの事例では、２’ヒドロキシル基の修飾は、２’－Ｏ－メチル修飾または２’
－Ｏ－メトキシエチル（２’－Ｏ－ＭＯＥ）修飾である。場合によっては、２’－Ｏ－メ
チル修飾は、メチル基をリボース部分の２’ヒドロキシル基に加え、一方で２’Ｏ－メト
キシエチル修飾は、メトキシエチル基をリボース部分の２’ヒドロキシル基に加える。ア
デノシン分子の２’－Ｏ－メチル修飾およびウリジンの２’Ｏ－メトキシエチル修飾の典
型的な化学構造が、以下に例証される。
いくつかの実施形態では、２’ヒドロキシル基の修飾は、プロピルリンカーを含む伸長
したアミン基がアミン基を２’酸素に結合する２’－Ｏ－アミノプロピル修飾である。い
くつかの例では、この修飾は、１糖当たりアミン基から１つの正電荷を導入することによ
ってオリゴヌクレオチド分子のリン酸塩由来の全体的な負電荷を中和し、それによって、
その双性イオン特性による細胞取り込み特性を改善する。２’－Ｏ－アミノプロピルヌク
レオシドホスホラミダイトの典型的な化学構造が、以下に例証される。
いくつかの例では、２’水酸基の修飾はロックドまたは架橋リボース修飾（例えば、ロ
ックド核酸またはＬＮＡ）であり、ここで、２’炭素で結合された酸素分子はメチレン基
によって４’炭素に結合され、したがって、２’－Ｃ、４’－Ｃ－オキシ－メチレン結合
二環式リボヌクレオチド単量体を形成する。ＬＮＡの化学構造の代表例が以下に例証され
る。左に示される代表例は、ＬＮＡ単量体の化学結合性を強調している。右に示される代
表例は、ＬＮＡ単量体のフラノース環のロックド３’－ｅｎｄｏ（３Ｅ）構造を強調して
いる。
いくつかの実施形態では、２’ヒドロキシル基での修飾は、糖構造を３’－ｅｎｄｏ糖
のパッカリング構造（ｓｕｇａｒ ｐｕｃｋｅｒｉｎｇ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）へ
とロックする、例えば２’－４’－エチレン架橋した核酸などの、エチレン核酸（ＥＮＡ
）を含む。ＥＮＡは、ＬＮＡも含む修飾された核酸の架橋された核酸クラスの一部である
。ＥＮＡおよび架橋された核酸の典型的な化学構造は、以下に例証される。
いくつかの実施形態では、２’ヒドロキシル基での追加の修飾は、２’－デオキシ、Ｔ
－デオキシ－２’－フルオロ、２’－Ｏ－アミノプロピル（２’－Ｏ－ＡＰ）、２’－Ｏ
－ジメチルアミノエチル（２’－Ｏ－ＤＭＡＯＥ）、２’－Ｏ－ジメチルアミノプロピル
（２’－Ｏ－ＤＭＡＰ）、Ｔ－Ｏ－ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’－Ｏ－ＤＭ
ＡＥＯＥ）、または２’－Ｏ－Ｎ－メチルアセトアミド（２’－Ｏ－ＮＭＡ）を含む。
いくつかの実施形態において、ヌクレオチドアナログは、限定されないが、５－プロピ
ニルウリジン、５－プロピニルシチジン、６－メチルアデニン、６－メチルグアニン、Ｎ
，Ｎ，－ジメチルアデニン、２－プロピルアデニン、２－プロピルグアニン、２－アミノ
アデニン、１－メチルイノシン、３－メチルウリジン、５－メチルシチジン、５－メチル
ウリジン、および、５位置に修飾を有する他のヌクレオチド、５－（２－アミノ）プロピ
ルウリジン、５－ハロシチジン、５－ハロウリジン、４－アセチルシチジン、１－メチル
アデノシン、２－メチルアデノシン、３－メチルシチジン、６－メチルウリジン、２－メ
チルグアノシン、７－メチルグアノシン、２，２－ジメチルグアノシン、５－メチルアミ
ノエチルウリジン、５－メトキシウリジン、７－デアザ－アデノシンなどのデアザヌクレ
オチド、６－アゾウリジン、６－アゾシチジン、６－アゾチミジン、５－メチル－２－チ
オウリジン、他のチオ塩基、例えば、２－チオウリジンと４－チオウリジン、および２－
チオシチジン、ジヒドロウリジン、プソイドウリジン、キューオシン、アルカエオシン、
ナフチルおよび置換されたナフチル基、Ｏ－およびＮ－アルキル化プリンおよびピリミジ
ン、例えば、Ｎ６－メチルアデノシン、５－メチルカルボニルメチルウリジン、ウリジン
、５－オキシ酢酸、ピリジン－４－オン、ピリジン－２－オン、フェニルおよび修飾フェ
ニル基、例えば、アミノフェノールまたは２，４，６－トリメトキシベンゼン、Ｇクラン
プヌクレオチドとして作用する修飾されたシトシン、８－置換されたアデニンおよびグア
ニン、５－置換されたウラシルおよびチミン、アザピリミジン、カルボキシヒドロキシア
ルキルヌクレオチド、カルボキシアルキルアミノアルキルヌクレオチド、および、アルキ
ルカルボニルアルキル化ヌクレオチドなどの修飾塩基を含む。修飾されたヌクレオチドは
さらに、リボシルではない糖あるいはそのアナログを有するヌクレオチドと同様に、糖部
に対して修飾されるヌクレオチドを含む。例えば、場合によっては、糖部は、マンノース
、アラビノース、グルコピラノース、ガラクトピラノース、４’－チオリボース、および
、その他の糖類、複素環、あるいは炭素環であるか、または、これらがベースである。ヌ
クレオチドとの用語はさらに、普遍的な塩基として当技術分野で知られているものを含む
。一例として、普遍的な塩基は、限定されないが、３－ニトロピロール、５－ニトロイン
ドール、またはネブラリンを含む。
いくつかの実施形態では、ヌクレオチドアナログは、モルホリノ、ペプチド核酸（ＰＮ
Ａ）、メチルホスホネートヌクレオチド、チオールホスホネートヌクレオチド、２’－フ
ルオロＮ３－Ｐ５’－ホスホラミダイト、１’，５’－アンヒドロヘキシトール核酸（Ｈ
ＮＡ）、またはそれらの組み合わせをさらに含む。モルホリノまたはホスホロジアミデー
トモルホリノオリゴ（ＰＭＯ）は合成分子を含み、その構造は、正常な糖およびリン酸塩
構造からの偏差（ｄｅｖｉａｔｅｓ）によって天然の核酸構造を模倣している。いくつか
の例では、５員のリボース環は、４つの炭素、１つの窒素、および１つの酸素を含有して
いる６員のモルホリノ環で置換される。いくつかの場合では、リボース単量体は、リン酸
基の代わりにホスホロジアミデート基によって結合される。場合によっては、骨格の変質
は、荷電オリゴヌクレオチドによって使用されるような細胞送達剤（ｃｅｌｌｕｌａｒ
ｄｅｌｉｖｅｒｙ ａｇｅｎｔｓ）の助けを借りることなく細胞膜を横断することができ
るモルホリノ中性分子を作るすべての正および負の電荷を除去する。
いくつかの実施形態において、ペプチド核酸（ＰＮＡ）は、糖骨格環もリン酸塩結合を
含まず、塩基は結合し、オリゴグリシンのような分子によって適切に間隔を置かれ、ゆえ
に、骨格電荷を除去する。
いくつかの実施形態において、１つ以上の修飾が随意にヌクレオチド間結合で生じる。
いくつかの例では、修飾されたヌクレオチド間結合は、限定されないが、ホスホロチオエ
ート、ホスホロジチオエート、メチルホスホネート、５’－アルキレンホスホネート、５
’－メチルホスホネート、３’－アルキレンホスホネート、三フッ化ホウ素（ｂｏｒｏｎ
ｔｒｉｆｌｕｏｒｉｄａｔｅｓ）、３’－５’結合あるいは２’－５’結合のボラノリン
酸エステルおよびセレノホスフェート、ホスホトリエステル、チオノアルキルホスホトリ
エステル、水素ホスホネート結合、アルキルホスホネート、アルキルホスホノチオエート
、アリールホスホロチオエート、ホスホロセレノアート、ホスホロジセレノアート、ホス
フィネート、ホスホルアミデート、３’－アルキルホスホルアミデート、アミノアルキル
ホスホルアミデート、チオノホスホルアミデート、ホスホロピペラジデート、ホスホロア
ニロチオエート、ホスホロアニリデート、ケトン、スルホン、スルホンアミド、カルボネ
ート、カルバメート、メチレンヒドラゾ、メチレンジメチルジメチルヒドラゾ、ホルムア
セタル、チオホルムアセタル、オキシム、メチレンイミノ、メチレンメチルイミノ、チオ
アミデート、リボアセチル基との結合、アミノエチルグリシン、シリル、あるいはシロキ
サン結合、例えば、飽和または不飽和の、および／または、置換されたおよび／またはヘ
テロ原子を含む１～１０の炭素のヘテロ原子を含むまたは含まないアルキルあるいはシク
ロアルキル結合、モルホリノ構造との結合、アミド、塩基が骨格のアザ窒素に直接的ある
いは間接的に結合したポリアミド、またはこれらの組み合わせを含む。ホスホロチオエー
トアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＰＳ ＡＳＯ）は、ホスホロチオエート結合を含む
アンチセンスオリゴヌクレオチドである。例示的なＰＳ ＡＳＯが以下に説明される。
いくつかの例では、修飾は、メチルホスホネートあるいはチオールホスホネート修飾な
どのメチルまたはチオール修飾である。典型的なチオールホスホネートヌクレオチド（左
）およびメチルホスホネートヌクレオチド（右）が、以下に例証される。
いくつかの例では、修飾されたヌクレオチドは、限定されないが、以下のように例示さ
れる２’－フルオロＮ３－Ｐ５’－ホスホロアミダイトを含む：
いくつかの例では、修飾されたヌクレオチドは、限定されないが、以下のように例示さ
れるヘキシトール核酸（あるいは、１’、５’－アンヒドロヘキシトール核酸（ＨＮＡ）
）を含む：
いくつかの実施形態において、ヌクレオチドアナログあるいは人工ヌクレオチド塩基は
、リボース部分の５’水酸基における修飾を有する５’－ビニルホスホネート修飾ヌクレ
オチド核酸を含む。いくつかの実施形態において、５’－ビニルホスホネート修飾ヌクレ
オチドは、以下から提供されたヌクレオチドから選択され、式中、ＸはＯまたはＳであり
；および、Ｂは複素環式塩基部分である。
いくつかの実施形態では、２’ヒドロキシル基の修飾は、プロピルリンカーを含む伸長
したアミン基がアミン基を２’酸素に結合する、２’－Ｏ－アミノプロピル修飾である。
いくつかの例では、この修飾は、１糖当たりアミン基から１つの正電荷を導入することに
よってオリゴヌクレオチド分子のリン酸塩由来の全体的な負電荷を中和し、それによって
、その双性イオン特性による細胞取り込み特性を改善する。
いくつかの例では、５’－ビニルホスホネートはロックドまたは架橋リボース修飾（例
えば、ロックド核酸またはＬＮＡ）でさらに修飾され、ここで、２’炭素で結合された酸
素分子はメチレン基によって４’炭素に結合され、したがって、２’－Ｃ、４’－Ｃ－オ
キシ－メチレン結合二環式リボヌクレオチド単量体を形成する。５’－ビニルホスホネー
ト修飾されたＬＮＡの化学構造の例示的な表現が以下に例示され、式中、ＸはＯまたはＳ
であり；Ｂは複素環式塩基部分であり；および、Ｊは、ポリヌクレオチドの隣接するヌク
レオチドに結合するヌクレオチド間結合基である。
いくつかの実施形態では、２’ヒドロキシル基での追加の修飾は、２’－デオキシ、Ｔ
－デオキシ－２’－フルオロ、２’－Ｏ－アミノプロピル（２’－Ｏ－ＡＰ）、２’－Ｏ
－ジメチルアミノエチル（２’－Ｏ－ＤＭＡＯＥ）、２’－Ｏ－ジメチルアミノプロピル
（２’－Ｏ－ＤＭＡＰ）、Ｔ－Ｏ－ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’－Ｏ－ＤＭ
ＡＥＯＥ）、または２’－Ｏ－Ｎ－メチルアセトアミド（２’－Ｏ－ＮＭＡ）を含む。
いくつかの実施形態において、ヌクレオチドアナログは、修飾塩基、例えば、限定され
ないが、５－プロピニルウリジン、５－プロピニルシチジン、６－メチルアデニン、６－
メチルグアニン、Ｎ，Ｎ，－ジメチルアデニン、２－プロピルアデニン、２－プロピルグ
アニン、２－アミノアデニン、１－メチルイノシン、３－メチルウリジン、５－メチルシ
チジン、５－メチルウリジン、および、５位置に修飾を有する他のヌクレオチド、５－（
２－アミノ）プロピルウリジン、５－ハロシチジン、５－ハロウリジン、４－アセチルシ
チジン、１－メチルアデノシン、２－メチルアデノシン、３－メチルシチジン、６－メチ
ルウリジン、２－メチルグアノシン、７－メチルグアノシン、２，２－ジメチルグアノシ
ン、５－メチルアミノエチルウリジン、５－メトキシウリジン、デアザヌクレオチド（７
－デアザ－アデノシン、６－アゾウリジン、６－アゾシチジン、あるいは６－アゾチミジ
ンなど）、５－メチル－２－チオウリジン、他のチオ塩基（２－チオウリジン、４－チオ
ウリジン、および２－チオシチジンなど）、ジヒドロウリジン、プソイドウリジン、キュ
ーオシン、アルカエオシン、ナフチルおよび置換されたナフチル基、Ｏ－およびＮ－アル
キル化プリンおよびピリミジン、例えば、Ｎ６－メチルアデノシン、５－メチルカルボニ
ルメチルウリジン、ウリジン、５－オキシ酢酸、ピリジン－４－オン、ピリジン－２－オ
ン、フェニルおよび修飾フェニル基、例えば、アミノフェノールまたは２，４，６－トリ
メトキシベンゼン、Ｇクランプヌクレオチドとして作用する修飾されたシトシン、８－置
換されたアデニンおよびグアニン、５－置換されたウラシルおよびチミン、アザピリミジ
ン、カルボキシヒドロキシアルキルヌクレオチド、カルボキシアルキルアミノアルキルヌ
クレオチド、および、アルキルカルボニルアルキル化ヌクレオチドを含む。５’－ビニル
ホスホネート修飾されたヌクレオチドはさらに、リボシルではない糖あるいはそのアナロ
グを有する５’－ビニルホスホネート修飾されたヌクレオチドと同様に、糖部に対して修
飾されるこれらヌクレオチドを含む。例えば、場合によっては、糖部は、マンノース、ア
ラビノース、グルコピラノース、ガラクトピラノース、４’－チオリボース、および、そ
の他の糖類、複素環、あるいは炭素環であるか、または、これらがベースである。ヌクレ
オチドとの用語はさらに、普遍的な塩基として当技術分野で知られているものを含む。一
例として、普遍的な塩基は、限定されないが、３－ニトロピロール、５－ニトロインドー
ル、またはネブラリンを含む。
いくつかの実施形態において、５’－ビニルホスホネート修飾されたヌクレオチドアナ
ログはさらに、モルホリノ、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、メチルホスホネートヌクレオチド
、チオールホスホネートヌクレオチド、２’－フルオロＮ３－Ｐ５’ホスホラミダイト、
あるいは１’，５’－アンヒドロヘキシトール核酸（ＨＮＡ）を含む。モルホリノまたは
ホスホロジアミデートモルホリノオリゴ（ＰＭＯ）は合成分子を含み、その構造は、天然
の核酸構造を模倣しているが、正常な糖とリン酸塩の構造からは逸脱している。いくつか
の例では、５員のリボース環は、４つの炭素、１つの窒素、および１つの酸素を含有して
いる６員のモルホリノ環で置換される。いくつかの場合では、リボース単量体は、リン酸
基の代わりにホスホロジアミデート基によって結合される。そのような場合には、骨格の
変質は、荷電オリゴヌクレオチドによって使用されるような細胞送達剤（ｃｅｌｌｕｌａ
ｒ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ａｇｅｎｔｓ）の助けを借りることなく細胞膜を横断することが
できるモルホリノ中性分子を作るすべての正および負の電荷を除去する。５’－ビニルホ
スホネート修飾されたモルホリノオリゴヌクレオチドの非限定的な例が例示され、式中、
ＸはＯまたはＳであり；および、Ｂは複素環式塩基部分である。
いくつかの実施形態において、上に記載された５’－ビニルホスホネート修飾されたモ
ルホリノまたはＰＭＯは、正電荷またはカチオン電荷を含むＰＭＯである。いくつかの例
では、ＰＭＯはＰＭＯｐｌｕｓ（Ｓａｒｅｐｔａ）である。ＰＭＯｐｌｕｓは、任意の数
の（１－ピペラジノ）ホスフィニリデンデオキシ（ｐｈｏｓｐｈｉｎｙｌｉｄｅｎｅｏｘ
ｙ）、１－（４－（オメガ－グアニジノ－アルカノイル））－ピペラジノ）ホスフィニリ
デンデオキシ結合（例えば、ＰＣＴ公開公報ＷＯ２００８／０３６１２７に記載されるも
のなど）を含むホスホロジアミデートモルホリノオリゴマーを指す。いくつかの例では、
ＰＭＯは、米国特許第７９４３７６２号に記載されるＰＭＯである。
いくつかの実施形態において、上に記載されたモルホリノまたはＰＭＯはＰＭＯ－Ｘ（
Ｓａｒｅｐｔａ）である。場合によっては、ＰＭＯ－Ｘは、ＰＣＴ公開公報ＷＯ２０１１
／１５０４０８と米国公報２０１２／００６５１６９号に記載されるものなどの、開示さ
れた末端修飾の少なくとも１つの結合あるいは少なくとも１つを含むホスホロジアミデー
トモルホリノオリゴマーを指す。
いくつかの実施形態において、上に記載されたモルホリノまたはＰＭＯは、米国公開公
報２０１４／０２９６３２１号の表５に記載されるようなＰＭＯである。
５’－ビニルホスホネート修飾された核酸の化学構造の例示的な表現が以下に例示され
、式中、ＸはＯまたはＳであり；
Ｂは複素環式塩基部分であり；および、Ｊはヌクレオチド間結合である。
いくつかの実施形態において、ペプチド核酸（ＰＮＡ）は、糖骨格環もリン酸塩結合を
含まず、塩基は結合し、オリゴグリシン様分子によって適切に間隔を置かれ、ゆえに、骨
格電荷を除去する。
いくつかの実施形態において、５’－ビニルホスホネート修飾されたオリゴヌクレオチ
ドの１つ以上の修飾は、ヌクレオチド間結合で随意に生じる。いくつかの例では、修飾さ
れたヌクレオチド間結合は、限定されないが、ホスホロチオエート；ホスホロジチオエー
ト；メチルホスホネート；５’－アルキレンホスホネート；５’－メチルホスホネート；
３’－アルキレンホスホネート；三フッ化ホウ素；３’－５’結合あるいは２’－５’結
合のボラノリン酸エステルとセレノホスフェート；ホスホトリエステル；チオノアルキル
ホスホトリエステル；水素ホスホネート結合；アルキルホスホネート；アルキルホスホノ
チオエート；アリールホスホノチオエート；ホスホロセレノアート；ホスホロジセレノア
ート；ホスフィネート；ホスホルアミデート；３’－アルキルホスホルアミデート；アミ
ノアルキルホスホルアミデート；チオノホスホルアミデート；ホスホロピペラジデート；
ホスホロアニロチオエート；ホスホロアニリデート；ケトン；スルホン；スルホンアミド
；炭酸塩；カルバマート；メチレンヒドラゾ；メチレンジメチルジメチルヒドラゾ；ホル
ムアセタル；チオホルムアセタル；オキシム；メチレンイミノ；メチレンメチルイミノ；
チオアミデート；リボアセチル基との結合；アミノエチルグリシン；シリルあるいはシロ
キサン結合；例えば、飽和または不飽和の、および／または、置換されたおよび／または
ヘテロ原子を含む１～１０の炭素のヘテロ原子を含むまたは含まないアルキルあるいはシ
クロアルキル結合；モルホリノ構造との結合、アミド、塩基が骨格のアザ窒素に直接的あ
るいは間接的に結合したポリアミド、またはこれらの組み合わせを含む。
いくつかの例では、修飾は、メチルホスホネートあるいはチオールホスホネート修飾な
どのメチルまたはチオール修飾である。典型的なチオールホスホネートヌクレオチド（左
）、ホスホロジチオエート（中）、およびメチルホスホネートヌクレオチド（右）が、以
下に例証される。
いくつかの例では、５’－ビニルホスホネート修飾されたヌクレオチドは、限定されな
いが、以下として例示されるホスホラミダイトを含む。
いくつかの例では、修飾されたヌクレオチド間結合はホスホロジアミデート結合である
。モルホリノ系を用いるホスホロジアミデート結合の非限定的な例が以下に示される。
いくつかの例では、修飾されたヌクレオチド間結合はメチルホスホネート結合である。
メチルホスホネート結合の非限定的な例が以下に示される。
いくつかの例では、修飾されたヌクレオチド間結合はアミド結合である。アミド結合の
非限定的な例が以下に示される。
いくつかの例では、５’－ビニルホスホネート修飾されたヌクレオチドは、限定されな
いが、以下に例示される修飾された核酸を含む。
いくつかの実施形態において、１つ以上の修飾は、修飾が中性または無荷電の骨格を生
成する、修飾されたホスフェート骨格を含む。いくつかの例では、ホスフェート骨格は、
無荷電または中性のホスフェート骨格を生成するアルキル化によって修飾される。本明細
書で使用されるように、アルキル化は、メチル化、エチル化、およびプロピル化を含む。
場合によっては、アルキル基は、アルキル化の文脈において本明細書で使用されるように
、１～６の炭素原子を含有している直鎖または分岐鎖の飽和炭化水素基を指す。いくつか
の例では、例示的なアルキル基としては、限定されないが、メチル、エチル、ｎ－プロピ
ル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｎ－
ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、１，１－ジメチルブ
チル、２，２－ジメチルブチル、３．３－ジメチルブチル、および２－エチルブチルの基
が挙げられる。場合によっては、修飾されたホスフェートは、米国特許第９４８１９０５
号に記載されるホスフェート基である。
いくつかの実施形態において、追加の修飾されたホスフェート骨格は、メチルホスホネ
ート、エチルホスホネート、メチルチオホスホネート、あるいはメトキシホスホネートを
含む。場合によっては、修飾されたホスフェートはメチルホスホネートである。場合によ
っては、修飾されたホスフェートはエチルホスホネートである。場合によっては、修飾さ
れたホスフェートはメチルチオホスホネートである。場合によっては、修飾されたホスフ
ェートはメトキシホスホネートである。
いくつかの実施形態において、１つ以上の修飾はさらに、リボース部分、ホスフェート
骨格、およびヌクレオシドの修飾、あるいは３’または５’末端のヌクレオチドアナログ
修飾を含む。例えば、３’末端は随意に３’カチオン基を含み、あるいは、３’－３’結
合を含む３’－末端でヌクレオシドを反転させる。別の代替物では、３’－末端は随意に
、アミノアルキル基、例えば、３’Ｃ５－アミノアルキルｄＴと共役される。追加の代替
物では、３’－末端は随意に、脱塩基部位、例えば、アプリン酸またはアピリミジン酸部
位と共役される。いくつかの例では、５’－末端は、アミノアルキル基、例えば、５’－
Ｏ－アミノアルキル置換基と共役される。場合によっては、５’－末端は、脱塩基部位、
例えば、アプリン酸またはアピリミジン酸部位と共役される。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、本明細書に記載された人工ヌクレオチ
ドアナログの１つ以上を含む。いくつかの例では、本明細書に記載されたポリ核酸分子は
、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、
１７、１８、２０、２５以上の本明細書に記載される人工ヌクレオチドアナログを含む。
いくつかの実施形態では、人工ヌクレオチドアナログは、２’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－
メトキシエチル（２’－Ｏ－ＭＯＥ）、２’－Ｏ－アミノプロピル、２’－デオキシ、Ｔ
－デオキシ－２’－フルオロ、２’－Ｏ－アミノプロピル（２’－Ｏ－ＡＰ）、２’－Ｏ
－ジメチルアミノエチル（２’－Ｏ－ＤＭＡＯＥ）、２’－Ｏ－ジメチルアミノプロピル
（２’－Ｏ－ＤＭＡＰ）、Ｔ－Ｏ－ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’－Ｏ－ＤＭ
ＡＥＯＥ）、あるいは、修飾された２’－Ｏ－Ｎ－メチルアセトアミド（２’－Ｏ－ＮＭ
Ａ）、ＬＮＡ、ＥＮＡ、ＰＮＡ、ＨＮＡ、モルホリノ、メチルホスホネートヌクレオチド
、チオールホスホネートヌクレオチド、２’－フルオロＮ３－Ｐ５’－ホスホラミダイト
、あるいはこれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、ポリ核酸分子は、２’
－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’－Ｏ－ＭＯＥ）、２’－Ｏ－アミノプロ
ピル、２’－デオキシ、Ｔ－デオキシ－２’－フルオロ、２’－Ｏ－アミノプロピル（２
’－Ｏ－ＡＰ）、２’－Ｏ－ジメチルアミノエチル（２’－Ｏ－ＤＭＡＯＥ）、２’－Ｏ
－ジメチルアミノプロピル（２’－Ｏ－ＤＭＡＰ）、Ｔ－Ｏ－ジメチルアミノエチルオキ
シエチル（２’－Ｏ－ＤＭＡＥＯＥ）、あるいは、修飾された２’－Ｏ－Ｎ－メチルアセ
トアミド（２’－Ｏ－ＮＭＡ）、ＬＮＡ、ＥＮＡ、ＰＮＡ、ＨＮＡ、モルホリノ、メチル
ホスホネートヌクレオチド、チオールホスホネートヌクレオチド、２’－フルオロＮ３－
Ｐ５’－ホスホラミダイト、あるいはこれらの組み合わせから選択された１、２、３、４
、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、２０
、２５以上の人工ヌクレオチドアナログを含む。いくつかの実施形態では、ポリ核酸分子
は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６
、１７、１８、２０、２５以上の２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチドを含む。いくつかの
実施形態では、ポリ核酸分子は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１
２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、２０、２５以上の２’－Ｏ－メトキシエチル
（２’－Ｏ－ＭＯＥ）修飾ヌクレオチドを含む。いくつかの例では、本明細書に記載され
たポリ核酸分子は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１
４、１５、１６、１７、１８、２０、２５以上のチオールホスホネートヌクレオチドを含
む。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、複数のホスホロジアミデートモルホリ
ノオリゴマーあるいは複数のペプチド核酸修飾された非天然のヌクレオチドを含み、およ
び、少なくとも１つの逆脱塩基部分を随意に含む。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、
少なくとも６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、
１９、２０、またはそれ以上のホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー修飾された非
天然のヌクレオチドを含む。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、１００％ホスホロジア
ミデートモルホリノオリゴマー修飾された非天然のヌクレオチドを含む。
いくつかの例では、ポリ核酸分子は、少なくとも６、７、８、９、１０、１１、１２、
１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、またはそれ以上のペプチド核酸修飾
された非天然のヌクレオチドを含む。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、１００％ペプ
チド核酸修飾された非天然のヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、各ヌクレオチドアナログが立体化学的
に異性型である１つ以上のヌクレオチドアナログを含む。そのような例では、ポリ核酸分
子はキラル分子である。場合によっては、ヌクレオチドアナログは骨格立体化学を含む。
さらなる場合には、ヌクレオチドアナログは、米国特許９，９８２，２５７、９，６９５
，２１１、あるいは９，６０５，０１９に記載されるようなキラルアナログを含む。
いくつかの例では、ポリ核酸分子は、以下の少なくとも１つを含む：約５％から約１０
０％の修飾、約１０％から約１００％の修飾、約２０％から約１００％の修飾、約３０％
から約１００％の修飾、約４０％から約１００％の修飾、約５０％から約１００％の修飾
、約６０％から約１００％の修飾、約７０％から約１００％の修飾、約８０％から約１０
０％の修飾、および、約９０％から約１００％の修飾。
場合によっては、ポリ核酸分子は以下の少なくとも１つを含む：約１０％から約９０％
の修飾、約２０％から約９０％の修飾、約３０％から約９０％の修飾、約４０％から約９
０％の修飾、約５０％から約９０％の修飾、約６０％から約９０％の修飾、約７０％から
約９０％の修飾、および、約８０％から約１００％の修飾。
場合によっては、ポリ核酸分子は以下の少なくとも１つを含む：約１０％から約８０％
の修飾、約２０％から約８０％の修飾、約３０％から約８０％の修飾、約４０％から約８
０％の修飾、約５０％から約８０％の修飾、約６０％から約８０％の修飾、および、約７
０％から約８０％の修飾。
いくつかの例では、ポリ核酸分子は、以下の少なくとも１つを含む：約１０％から約７
０％の修飾、約２０％から約７０％の修飾、約３０％から約７０％の修飾、約４０％から
約７０％の修飾、約５０％から約７０％の修飾、および、約６０％から約７０％の修飾。
いくつかの例では、ポリ核酸分子は、以下の少なくとも１つを含む：約１０％から約６
０％の修飾、約２０％から約６０％の修飾、約３０％から約６０％の修飾、約４０％から
約６０％の修飾、および約５０％から約６０％の修飾。
場合によっては、ポリ核酸分子は以下の少なくとも１つを含む：約１０％から約５０％
の修飾、約２０％から約５０％の修飾、約３０％から約５０％の修飾、および約４０％か
ら約５０％の修飾。
場合によっては、ポリ核酸分子は以下の少なくとも１つを含む：約１０％から約４０％
の修飾、約２０％から約４０％の修飾、および約３０％から約４０％の修飾。
場合によっては、ポリ核酸分子は以下の少なくとも１つを含む：約１０％から約３０％
の修飾、および約２０％から約３０％の修飾。
場合によっては、ポリ核酸分子は約１０％から約２０％の修飾を含む。
場合によっては、ポリ核酸分子は約１５％から約９０％、約２０％から約８０％、約３
０％から約７０％、あるいは約４０％から約６０％の修飾を含む。
さらなる場合には、ポリ核酸分子は少なくとも約１５％、２０％、３０％、４０％、５
０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または９９％の修飾を含む。
いくつかの実施形態では、ポリ核酸分子は、少なくとも約１、約２、約３、約４、約５
、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約１６
、約１７、約１８、約１９、約２０、約２１、約２２、またはそれ以上の修飾を含む。
いくつかの例では、ポリ核酸分子は、少なくとも約１、約２、約３、約４、約５、約６
、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４、約１５、約１６、約１
７、約１８、約１９、約２０、約２１、約２２、またはそれ以上の修飾されたヌクレオチ
ドを含む。
いくつかの例では、約５から約１００％のポリ核酸分子は、本明細書に記載された人工
ヌクレオチドアナログを含む。いくつかの例では、ポリ核酸分子の約５％、１０％、１５
％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５
％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％は、本明細書に
記載される人工ヌクレオチドアナログを含む。いくつかの例では、ポリ核酸分子の約５％
は、本明細書に記載された人工ヌクレオチドアナログを含む。いくつかの例では、ポリ核
酸分子の約１０％は、本明細書に記載された人工ヌクレオチドアナログを含む。いくつか
の例では、ポリ核酸分子の約１５％は、本明細書に記載された人工ヌクレオチドアナログ
を含む。いくつかの例では、ポリ核酸分子の約２０％は、本明細書に記載された人工ヌク
レオチドアナログを含む。いくつかの例では、ポリ核酸分子の約２５％は、本明細書に記
載された人工ヌクレオチドアナログを含む。いくつかの例では、ポリ核酸分子の約３０％
は、本明細書に記載された人工ヌクレオチドアナログを含む。いくつかの例では、ポリ核
酸分子の約３５％は、本明細書に記載された人工ヌクレオチドアナログを含む。いくつか
の例では、ポリ核酸分子の約４０％は、本明細書に記載された人工ヌクレオチドアナログ
を含む。いくつかの例では、ポリ核酸分子の約４５％は、本明細書に記載された人工ヌク
レオチドアナログを含む。いくつかの例では、ポリ核酸分子の約５０％は、本明細書に記
載された人工ヌクレオチドアナログを含む。いくつかの例では、ポリ核酸分子の約５５％
は、本明細書に記載された人工ヌクレオチドアナログを含む。いくつかの例では、ポリ核
酸分子の約６０％は、本明細書に記載された人工ヌクレオチドアナログを含む。いくつか
の例では、ポリ核酸分子の約６５％は、本明細書に記載された人工ヌクレオチドアナログ
を含む。いくつかの例では、ポリ核酸分子の約７０％は、本明細書に記載された人工ヌク
レオチドアナログを含む。いくつかの例では、ポリ核酸分子の約７５％は、本明細書に記
載された人工ヌクレオチドアナログを含む。いくつかの例では、ポリ核酸分子の約８０％
は、本明細書に記載された人工ヌクレオチドアナログを含む。いくつかの例では、ポリ核
酸分子の約８５％は、本明細書に記載された人工ヌクレオチドアナログを含む。いくつか
の例では、ポリ核酸分子の約９０％は、本明細書に記載された人工ヌクレオチドアナログ
を含む。いくつかの例では、ポリ核酸分子の約９５％は、本明細書に記載された人工ヌク
レオチドアナログを含む。いくつかの例では、ポリ核酸分子の約９６％は、本明細書に記
載された人工ヌクレオチドアナログを含む。いくつかの例では、ポリ核酸分子の約９７％
は、本明細書に記載された人工ヌクレオチドアナログを含む。いくつかの例では、ポリ核
酸分子の約９８％は、本明細書に記載された人工ヌクレオチドアナログを含む。いくつか
の例では、ポリ核酸分子の約９９％は、本明細書に記載された人工ヌクレオチドアナログ
を含む。いくつかの例では、ポリ核酸分子の約１００％は、本明細書に記載された人工ヌ
クレオチドアナログを含む。いくつかの実施形態では、人工ヌクレオチドアナログは、２
’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’－Ｏ－ＭＯＥ）、２’－Ｏ－アミノプ
ロピル、２’－デオキシ、Ｔ－デオキシ－２’－フルオロ、２’－Ｏ－アミノプロピル（
２’－Ｏ－ＡＰ）、２’－Ｏ－ジメチルアミノエチル（２’－Ｏ－ＤＭＡＯＥ）、２’－
Ｏ－ジメチルアミノプロピル（２’－Ｏ－ＤＭＡＰ）、Ｔ－Ｏ－ジメチルアミノエチルオ
キシエチル（２’－Ｏ－ＤＭＡＥＯＥ）、あるいは、修飾された２’－Ｏ－Ｎ－メチルア
セトアミド（２’－Ｏ－ＮＭＡ）、ＬＮＡ、ＥＮＡ、ＰＮＡ、ＨＮＡ、モルホリノ、メチ
ルホスホネートヌクレオチド、チオールホスホネートヌクレオチド、２’－フルオロＮ３
－Ｐ５’－ホスホラミダイト、あるいはこれらの組み合わせを含む。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は約１～約２５の修飾を含み、ここで、修
飾は本明細書に記載された人工ヌクレオチドアナログを含む。いくつかの実施形態におい
て、ポリ核酸分子は約１の修飾を含み、ここで、修飾は本明細書に記載された人工ヌクレ
オチドアナログを含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は約２の修飾を含み
、ここで、修飾は本明細書に記載された人工ヌクレオチドアナログを含む。いくつかの実
施形態において、ポリ核酸分子は約３の修飾を含み、ここで、修飾は本明細書に記載され
た人工ヌクレオチドアナログを含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は約４
の修飾を含み、ここで、修飾は本明細書に記載された人工ヌクレオチドアナログを含む。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は約５の修飾を含み、ここで、修飾は本明細
書に記載された人工ヌクレオチドアナログを含む。いくつかの実施形態において、ポリ核
酸分子は約６の修飾を含み、ここで、修飾は本明細書に記載された人工ヌクレオチドアナ
ログを含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は約７の修飾を含み、ここで、
修飾は本明細書に記載された人工ヌクレオチドアナログを含む。いくつかの実施形態にお
いて、ポリ核酸分子は約８の修飾を含み、ここで、修飾は本明細書に記載された人工ヌク
レオチドアナログを含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は約９の修飾を含
み、ここで、修飾は本明細書に記載された人工ヌクレオチドアナログを含む。いくつかの
実施形態において、ポリ核酸分子は約１０の修飾を含み、ここで、修飾は本明細書に記載
された人工ヌクレオチドアナログを含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は
約１１の修飾を含み、ここで、修飾は本明細書に記載された人工ヌクレオチドアナログを
含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は約１２の修飾を含み、ここで、修飾
は本明細書に記載された人工ヌクレオチドアナログを含む。いくつかの実施形態において
、ポリ核酸分子は約１３の修飾を含み、ここで、修飾は本明細書に記載された人工ヌクレ
オチドアナログを含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は約１４の修飾を含
み、ここで、修飾は本明細書に記載された人工ヌクレオチドアナログを含む。いくつかの
実施形態において、ポリ核酸分子は約１５の修飾を含み、ここで、修飾は本明細書に記載
された人工ヌクレオチドアナログを含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は
約１６の修飾を含み、ここで、修飾は本明細書に記載された人工ヌクレオチドアナログを
含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は約１７の修飾を含み、ここで、修飾
は本明細書に記載された人工ヌクレオチドアナログを含む。いくつかの実施形態において
、ポリ核酸分子は約１８の修飾を含み、ここで、修飾は本明細書に記載された人工ヌクレ
オチドアナログを含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は約１９の修飾を含
み、ここで、修飾は本明細書に記載された人工ヌクレオチドアナログを含む。いくつかの
実施形態において、ポリ核酸分子は約２０の修飾を含み、ここで、修飾は本明細書に記載
された人工ヌクレオチドアナログを含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は
約２１の修飾を含み、ここで、修飾は本明細書に記載された人工ヌクレオチドアナログを
含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は約２２の修飾を含み、ここで、修飾
は本明細書に記載された人工ヌクレオチドアナログを含む。いくつかの実施形態において
、ポリ核酸分子は約２３の修飾を含み、ここで、修飾は本明細書に記載された人工ヌクレ
オチドアナログを含む。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は約２４の修飾を含
み、ここで、修飾は本明細書に記載された人工ヌクレオチドアナログを含む。いくつかの
実施形態において、ポリ核酸分子は約２５の修飾を含み、ここで、修飾は本明細書に記載
された人工ヌクレオチドアナログを含む。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は２つの別個のポリヌクレオチドから組み
立てられ、ここで、１つのポリヌクレオチドはセンス鎖を含み、第２のポリヌクレオチド
はポリ核酸分子のアンチセンス鎖を含む。他の実施形態では、センス鎖はリンカー分子に
よってアンチセンス鎖に接続され、これは、いくつかの例では、ポリヌクレオチドリンカ
ーあるいは非ヌクレオチドリンカーである。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子はセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、ここ
で、センス鎖中のピリミジンヌクレオチドは２’－Ｏ－メチルピリミジンヌクレオチドを
含み、センス鎖中のプリンヌクレオチドは２’－デオキシプリンヌクレオチドを含む。い
くつかの実施形態において、ポリ核酸分子はセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、ここで、
センス鎖中に存在するピリミジンヌクレオチドは２’－デオキシ－２’－フルオロピリミ
ジンヌクレオチドを含み、センス鎖中に存在するプリンヌクレオチドは２’－デオキシプ
リンヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子はセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、ここ
で、ピリミジンヌクレオチドは、前記アンチセンス鎖中に存在する場合、２’－デオキシ
－２’－フルオロピリミジンヌクレオチドであり、プリンヌクレオチドは前記アンチセン
ス鎖中に存在する場合、２’－Ｏ－メチルプリンヌクレオチドである。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子はセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、ここ
で、ピリミジンヌクレオチドは、前記アンチセンス鎖中に存在する場合、２’－デオキシ
－２’－フルオロピリミジンヌクレオチドであり、プリンヌクレオチドは前記アンチセン
ス鎖中に存在する場合、２’－デオキシ－プリンヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子はセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、ここ
で、センス鎖は、センス鎖の５’－末端、３’－末端、あるいは５’と３’の末端の両方
でキャップ部分を含む。他の実施形態では、末端のキャップ部分は反転デオキシ脱塩基部
分である。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子はセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、ここ
で、アンチセンス鎖はアンチセンス鎖の３’末端にリン酸塩骨格修飾を含む。いくつかの
例では、ホスフェート骨格修飾は、ホスホロチオエートである。場合によっては、パッセ
ンジャー鎖は、ガイド鎖よりも多くのホスホロチオエート修飾を含む。他の場合では、ガ
イド鎖は、パッセンジャー鎖よりも多くのホスホロチオエート修飾を含む。追加の場合に
は、パッセンジャー鎖は、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上の
ホスホロチオエート修飾を含む。追加の場合には、ガイド鎖は、約２、３、４、５、６、
７、８、９、１０、またはそれ以上のホスホロチオエート修飾を含む。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子はセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、ここ
で、アンチセンス鎖はアンチセンス鎖の３’末端にグリセリル修飾を含む。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子はセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、ここ
で、センス鎖は、１つ以上、例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１
１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、またはそれ以上のホスホ
ロチオエートヌクレオチド間結合、および／または、１つ以上（例えば、約１、２、３、
４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上）の２’－デオキシ、２’－Ｏ－メチル
、２’－デオキシ－２’－フルオロ、ならびに／あるいは、１つ以上（例えば、約１、２
、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上）のに関するおよび／または、普
遍的な塩基修飾ヌクレオチド、ならびに、随意にセンス鎖の３’－末端、５’－末端、あ
るいは３’－と５’－の末端の両方で末端キャップ分子を含み；および、アンチセンス鎖
は、約１から約１０の、とりわけ、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１
、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、またはそれ以上のホスホロ
チオエートヌクレオチド間結合、および／または、１つ以上（例えば、約１、２、３、４
、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上）の２’－デオキシ、２’－Ｏ－メチル、
２’－デオキシ－２’－フルオロ、ならびに／あるいは、１つ以上（例えば、約１、２、
３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上）の普遍的な塩基修飾ヌクレオチド
、ならびに、随意にアンチセンス鎖の３’－末端、５’－末端、あるいは３’－と５’－
の末端の両方で末端キャップ分子を含む。他の実施形態において、１つ以上、例えば、約
１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上の、センス鎖および／また
はアンチセンス鎖のピリミジンヌクレオチドは、２’－デオキシ、２’－Ｏ－メチル、お
よび／または２’－デオキシ－２’－フルオロヌクレオチドを用いて、あるいは１つ以上
、例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上のホスホロチ
オエートヌクレオチド間結合、および／または、同じあるいは異なる鎖に存在する３’－
末端、５’－末端、あるいは３’－と５’－の末端の両方の末端キャップ分子を用いて、
または、用いずに、化学修飾される。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子はセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、ここ
で、センス鎖は、約１～約２５、例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０
、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、またはそれ以上のホ
スホロチオエートヌクレオチド間結合、および／または、１つ以上（例えば、約１、２、
３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上）の２’－デオキシ、２’－Ｏ－メ
チル、２’－デオキシ－２’－フルオロ、ならびに／あるいは、１つ以上（例えば、約１
、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上）の普遍的な塩基修飾ヌクレ
オチド、ならびに、随意にセンス鎖の３’－末端、５’－末端、あるいは３’－と５’－
の末端の両方で末端キャップ分子を含み；および、アンチセンス鎖は、約１から約２５の
、例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１
５、１６、１７、１８、１９、２０、またはそれ以上のホスホロチオエートヌクレオチド
間結合、および／または、１つ以上（例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、
１０、またはそれ以上）の２’－デオキシ、２’－Ｏ－メチル、２’－デオキシ－２’－
フルオロ、ならびに／あるいは、１つ以上（例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８
、９、１０、またはそれ以上）の普遍的な塩基修飾ヌクレオチド、ならびに、随意にアン
チセンス鎖の３’－末端、５’－末端、あるいは３’－と５’－の末端の両方で末端キャ
ップ分子を含む。他の実施形態において、１つ以上、例えば、約１、２、３、４、５、６
、７、８、９、１０、またはそれ以上の、センス鎖および／またはアンチセンス鎖のピリ
ミジンヌクレオチドは、２’－デオキシ、２’－Ｏ－メチル、および／または２’－デオ
キシ－２’－フルオロヌクレオチドを用いて、約１から約２５以上の、例えば、約１、２
、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１
８、１９、２０、またはそれ以上のホスホロチオエートヌクレオチド間結合、および／ま
たは、同じあるいは異なる鎖に存在する３’－末端、５’－末端、あるいは３’－と５’
－の末端の両方の末端キャップ分子を用いて、または、用いずに、化学修飾される。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子はセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、ここ
で、アンチセンス鎖は、１つ以上、例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１
０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、またはそれ以上の
ホスホロチオエートヌクレオチド間結合、および／または、約１つ以上（例えば、約１、
２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上）の２’－デオキシ、２’－Ｏ
－メチル、２’－デオキシ－２’－フルオロ、ならびに／あるいは、１つ以上（例えば、
約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上）の普遍的な塩基修飾ヌ
クレオチド、ならびに、随意にセンス鎖の３’－末端、５’－末端、あるいは３’－と５
’－の末端の両方で末端キャップ分子を含み；および、アンチセンス鎖は、約１から約１
０の、とりわけ、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上のホス
ホロチオエートヌクレオチド間結合、および／または、１つ以上（例えば、約１、２、３
、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上）の２’－デオキシ、２’－Ｏ－メチ
ル、２’－デオキシ－２’－フルオロ、ならびに／あるいは、１つ以上（例えば、約１、
２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上）の普遍的な塩基修飾ヌクレオ
チド、ならびに、随意にアンチセンス鎖の３’－末端、５’－末端、あるいは３’－と５
’－の末端の両方で末端キャップ分子を含む。他の実施形態において、１つ以上、例えば
、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６
、１７、１８、１９、２０、またはそれ以上の、センス鎖および／またはアンチセンス鎖
のピリミジンヌクレオチドは、２’－デオキシ、２’－Ｏ－メチル、および／または２’
－デオキシ－２’－フルオロヌクレオチドを用いて、１つ以上、例えば、約１、２、３、
４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上のホスホロチオエートヌクレオチド間結
合、および／または、同じあるいは異なる鎖に存在する３’－末端、５’－末端、あるい
は３’と５’－の末端の両方の末端キャップ分子を用いて、または、用いずに、化学修飾
される。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子はセンス鎖とアンチセンス鎖を含み、ここ
で、アンチセンス鎖は、約１から約２５の、例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８
、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、またはそ
れ以上のホスホロチオエートヌクレオチド間結合、および／または、１つ以上（例えば、
約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上）の２’－デオキシ、２
’－Ｏ－メチル、２’－デオキシ－２’－フルオロ、ならびに／あるいは、１つ以上（例
えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上）の普遍的な塩基
修飾ヌクレオチド、ならびに、随意にセンス鎖の３’－末端、５’－末端、あるいは３’
－と５’－の末端の両方で末端キャップ分子を含み、および、アンチセンス鎖は、約１か
ら約２５の、例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３
、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、またはそれ以上のホスホロチオエートヌ
クレオチド間結合、および／または、１つ以上（例えば、約１、２、３、４、５、６、７
、８、９、１０、またはそれ以上）の２’－デオキシ、２’－Ｏ－メチル、２’－デオキ
シ－２’－フルオロ、ならびに／あるいは、１つ以上（例えば、約１、２、３、４、５、
６、７、８、９、１０、またはそれ以上）の普遍的な塩基修飾ヌクレオチド、ならびに、
随意にアンチセンス鎖の３’－末端、５’－末端、あるいは３’－と５’－の末端の両方
で末端キャップ分子を含む。他の実施形態において、１つ以上、例えば、約１、２、３、
４、５、６、７、８、９あるいは１０以上の、センス鎖および／またはアンチセンス鎖の
ピリミジンヌクレオチドは、２’－デオキシ、２’－Ｏ－メチル、および／または２’－
デオキシ－２’－フルオロヌクレオチドを用いて、約１から約５、例えば、約１、２、３
、４、５以上のホスホロチオエートヌクレオチド間結合、および／または、同じあるいは
異なる鎖に存在する３’－末端、５’－末端、あるいは３’－と５’－の末端の両方の末
端キャップ分子を用いて、または、用いずに、化学修飾される。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、以下の特性の１つ以上を用いる二本鎖
ポリ核酸分子である：高い肝細胞安定性、全体的な電荷の減少、肝細胞の取り込みの減少
、あるいは薬物動態の拡張。いくつかの実施形態において、二本鎖ポリ核酸分子は、複数
の修飾を含むパッセンジャー鎖（例えば、センス鎖）とガイド鎖（例えば、アンチセンス
鎖）を含む。
いくつかの実施形態において、二本鎖ポリ核酸分子は、上に記載された修飾の１つ以上
を有するガイド鎖（例えば、アンチセンス鎖）、および複数のホスホロジアミデートモル
ホリノオリゴマーあるいは複数のペプチド核酸修飾された非天然のヌクレオチドを有する
パッセンジャー鎖（例えば、センス鎖）を含む。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、ポリ核酸分子の
各鎖において、約１～約２５、例えば、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、
１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、またはそれ以上のホス
ホロチオエートヌクレオチド間結合を有する化学修飾された短干渉核酸分子である。
別の実施形態では、本明細書に記載されたポリ核酸分子は２’－５’ヌクレオチド間結
合を含む。いくつかの例では、２’－５’ヌクレオチド間結合は、一方または両方の配列
鎖の３’－末端、５’－末端、あるいは３’－末端と５’－末端の両方にある。追加の例
では、２’－５’ヌクレオチド間結合は、一方あるいは両方の配列鎖内の様々な他の位置
に存在し、例えば、ポリ核酸分子の一方または両方の鎖中のピリミジンヌクレオチドのす
べてのヌクレオチド間結合の約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ
以上は、２’－５’ヌクレオチド間結合を含み、あるいは、ポリ核酸分子の一方または両
方の鎖中にプリンヌクレオチドのすべてのヌクレオチド間結合の約１、２、３、４、５、
６、７、８、９、１０、またはそれ以上は、２’－５’ヌクレオチド間結合を含む。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、細胞中のＲＮＡｉ活性を媒介するか、
インビトロ系で再構成された単鎖ポリ核酸分子であり、ここで、ポリ核酸分子は、標的核
酸配列に対する相補性を有する単鎖ポリヌクレオチドを含み、および、ポリ核酸中に存在
する１つ以上のピリミジンヌクレオチドは、２’－デオキシ－２’－フルオロピリミジン
ヌクレオチドであり（例えば、ここで、ピリミジンヌクレオチドはすべて２’－デオキシ
－２’－フルオロピリミジンヌクレオチドであり、あるいは、代替的に、複数のピリミジ
ンヌクレオチドは２’－デオキシ－２’－フルオロピリミジンヌクレオチドである）、お
よび、ポリ核酸中に存在する任意のプリンヌクレオチドは、２’－デオキシプリンヌクレ
オチドであり（例えば、すべてのプリンヌクレオチドは２’－デオキシプリンヌクレオチ
ドであるか、あるいは代替的に、複数のプリンヌクレオチドは２’－デオキシプリンヌク
レオチドである）、および、末端のキャップ修飾は、アンチセンス配列の３’－末端、５
’－末端、あるいは３’と５’－末端の両方で随意に存在する。ポリ核酸分子は、ポリ核
酸分子の３’末端に約１～約４（例えば約１、２、３、あるいは４）の末端２’－デオキ
シリボヌクレオチドを随意にさらに含み、ここで、末端のヌクレオチドはさらに、１つ以
上（例えば、１、２、３、あるいは４）のホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含み
、および、ポリ核酸分子は随意に５’－末端リン酸基などの末端リン酸基をさらに含む。
場合によっては、本明細書に記載された人工ヌクレオチドアナログの１つ以上は、天然
のポリ核酸分子と比較して、例えば、ＲＮａｓｅＨなどのリボヌクレアーゼ、ＤＮａｓｅ
などのデオキシリボヌクレアーゼ、または、５’－３’エキソヌクレアーゼや３’－５’
エキソヌクレアーゼのようなエキソヌクレアーゼなどのヌクレアーゼに対して抵抗性であ
る。いくつかの例では、２’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’－Ｏ－ＭＯ
Ｅ）、２’－Ｏ－アミノプロピル、２’－デオキシ、Ｔ－デオキシ－２’－フルオロ、２
’－Ｏ－アミノプロピル（２’－Ｏ－ＡＰ）、２’－Ｏ－ジメチルアミノエチル（２’－
Ｏ－ＤＭＡＯＥ）、２’－Ｏ－ジメチルアミノプロピル（２’－Ｏ－ＤＭＡＰ）、Ｔ－Ｏ
－ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’－Ｏ－ＤＭＡＥＯＥ）、あるいは、修飾され
た２’－Ｏ－Ｎ－メチルアセトアミド（２’－Ｏ－ＮＭＡ）、ＬＮＡ、ＥＮＡ、ＰＮＡ、
ＨＮＡ、モルホリノ、メチルホスホネートヌクレオチド、チオールホスホネートヌクレオ
チド、２’－フルオロＮ３－Ｐ５’－ホスホラミダイト、あるいは、これらの組み合わせ
を含む人工ヌクレオチドアナログは、ＲＮａｓｅＨなどのリボヌクレアーゼ、ＤＮａｓｅ
などのデオキシリボヌクレアーゼ、または、５’－３’エキソヌクレアーゼや３’－５’
エキソヌクレアーゼのようなエキソヌクレアーゼなどのヌクレアーゼに対して抵抗性であ
る。いくつかの例では、２’－Ｏメチル修飾ポリ核酸分子は、ヌクレアーゼ抵抗性（例え
ば、ＲＮａｓｅＨ、ＤＮａｓｅ、５’－３’エキソヌクレアーゼ、あるいは３’－５’エ
キソヌクレアーゼ抵抗性）である。いくつかの例では、２’Ｏ－メトキシエチル（２’－
Ｏ－ＭＯＥ）修飾ポリ核酸分子は、ヌクレアーゼ抵抗性（例えば、ＲＮａｓｅＨ、ＤＮａ
ｓｅ、５’－３’エキソヌクレアーゼ、あるいは３’－５’エキソヌクレアーゼ抵抗性）
である。いくつかの例では、２’－Ｏ－アミノプロピル修飾ポリ核酸分子は、ヌクレアー
ゼ抵抗性（例えば、ＲＮａｓｅＨ、ＤＮａｓｅ、５’－３’エキソヌクレアーゼ、あるい
は３’－５’エキソヌクレアーゼ抵抗性）である。いくつかの例では、２’－デオキシ修
飾ポリ核酸分子は、ヌクレアーゼ抵抗性（例えば、ＲＮａｓｅＨ、ＤＮａｓｅ、５’－３
’エキソヌクレアーゼ、あるいは３’－５’エキソヌクレアーゼ抵抗性）である。いくつ
かの例では、Ｔ－デオキシ－２’－Ｏ－フルオロ修飾ポリ核酸分子は、ヌクレアーゼ抵抗
性（例えば、ＲＮａｓｅＨ、ＤＮａｓｅ、５’－３’エキソヌクレアーゼ、あるいは３’
－５’エキソヌクレアーゼ抵抗性）である。いくつかの例では、２’－Ｏ－アミノプロピ
ル（２’－Ｏ－ＡＰ）修飾ポリ核酸分子は、ヌクレアーゼ抵抗性（例えば、ＲＮａｓｅＨ
、ＤＮａｓｅ、５’－３’エキソヌクレアーゼ、あるいは３’－５’エキソヌクレアーゼ
抵抗性）である。いくつかの例では、２’－Ｏ－ジメチルアミノエチル（２’－Ｏ－ＤＭ
ＡＯＥ）修飾ポリ核酸分子は、ヌクレアーゼ抵抗性（例えば、ＲＮａｓｅＨ、ＤＮａｓｅ
、５’－３’エキソヌクレアーゼ、あるいは３’－５’エキソヌクレアーゼ抵抗性）であ
る。いくつかの例では、２’－Ｏ－ジメチルアミノプロピル（２’－Ｏ－ＤＭＡＰ）修飾
ポリ核酸分子は、ヌクレアーゼ抵抗性（例えば、ＲＮａｓｅＨ、ＤＮａｓｅ、５’－３’
エキソヌクレアーゼ、あるいは３’－５’エキソヌクレアーゼ抵抗性）である。いくつか
の例では、Ｔ－Ｏ－ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’－Ｏ－ＤＭＡＥＯＥ）修飾
ポリ核酸分子は、ヌクレアーゼ抵抗性（例えば、ＲＮａｓｅＨ、ＤＮａｓｅ、５’－３’
エキソヌクレアーゼ、あるいは３’－５’エキソヌクレアーゼ抵抗性）である。いくつか
の例では、２’－Ｏ－Ｎ－メチルアセトアミド（２’－Ｏ－ＮＭＡ）修飾ポリ核酸分子は
、ヌクレアーゼ抵抗性（例えば、ＲＮａｓｅＨ、ＤＮａｓｅ、５’－３’エキソヌクレア
ーゼ、あるいは３’－５’エキソヌクレアーゼ抵抗性）である。いくつかの例では、ＬＮ
Ａ修飾ポリ核酸分子は、ヌクレアーゼ抵抗性（例えば、ＲＮａｓｅＨ、ＤＮａｓｅ、５’
－３’エキソヌクレアーゼ、あるいは３’－５’エキソヌクレアーゼ抵抗性）である。い
くつかの例では、ＥＮＡ修飾ポリ核酸分子は、ヌクレアーゼ抵抗性（例えば、ＲＮａｓｅ
Ｈ、ＤＮａｓｅ、５’－３’エキソヌクレアーゼ、あるいは３’－５’エキソヌクレアー
ゼ抵抗性）である。いくつかの例では、ＨＮＡ修飾ポリ核酸分子は、ヌクレアーゼ抵抗性
（例えば、ＲＮａｓｅＨ、ＤＮａｓｅ、５’－３’エキソヌクレアーゼ、あるいは３’－
５’エキソヌクレアーゼ抵抗性）である。いくつかの例では、モルホリノは、ヌクレアー
ゼ抵抗性（例えば、ＲＮａｓｅＨ、ＤＮａｓｅ、５’－３’エキソヌクレアーゼ、あるい
は３’－５’エキソヌクレアーゼ抵抗性）である。いくつかの例では、ＰＮＡ修飾ポリ核
酸分子は、ヌクレアーゼに対する耐性を有する（例えば、ＲＮａｓｅＨ、ＤＮａｓｅ、５
’－３’エキソヌクレアーゼ、あるいは３’－５’エキソヌクレアーゼ抵抗性）。いくつ
かの例では、メチルホスホネートヌクレオチド修飾ポリ核酸分子は、ヌクレアーゼ抵抗性
（例えば、ＲＮａｓｅＨ、ＤＮａｓｅ、５’－３’エキソヌクレアーゼ、あるいは３’－
５’エキソヌクレアーゼ抵抗性）である。いくつかの例では、チオールホスホネートヌク
レオチド修飾ポリ核酸分子は、ヌクレアーゼ抵抗性（例えば、ＲＮａｓｅＨ、ＤＮａｓｅ
、５’－３’エキソヌクレアーゼ、あるいは３’－５’エキソヌクレアーゼ抵抗性）であ
る。いくつかの例では、２’－フルオロＮ３－Ｐ５’－ホスホラミダイトを含むポリ核酸
分子は、ヌクレアーゼ抵抗性（例えば、ＲＮａｓｅＨ、ＤＮａｓｅ、５’－３’エキソヌ
クレアーゼ、あるいは３’－５’エキソヌクレアーゼ抵抗性）である。いくつかの例では
、本明細書に記載された５’抱合体は５’－３’エキソヌクレアーゼ切断を阻害する。い
くつかの例では、本明細書に記載された３’抱合体は３’－５’エキソヌクレアーゼ切断
を阻害する。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載された人工ヌクレオチドアナログの１つ
以上は、同等の天然のポリ核酸分子と比して、そのｍＲＮＡ標的に対する結合親和性を増
大させた。２’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’－Ｏ－ＭＯＥ）、２’－
Ｏ－アミノプロピル、２’－デオキシ、Ｔ－デオキシ－２’－フルオロ、２’－Ｏ－アミ
ノプロピル（２’－Ｏ－ＡＰ）、２’－Ｏ－ジメチルアミノエチル（２’－Ｏ－ＤＭＡＯ
Ｅ）、２’－Ｏ－ジメチルアミノプロピル（２’－Ｏ－ＤＭＡＰ）、Ｔ－Ｏ－ジメチルア
ミノエチルオキシエチル（２’－Ｏ－ＤＭＡＥＯＥ）、あるいは、修飾された２’－Ｏ－
Ｎ－メチルアセトアミド（２’－Ｏ－ＮＭＡ）、ＬＮＡ、ＥＮＡ、ＰＮＡ、ＨＮＡ、モル
ホリノ、メチルホスホネートヌクレオチド、チオールホスホネートヌクレオチド、または
２’－フルオロＮ３－Ｐ５’－ホスホラミダイトを含む人工ヌクレオチドアナログの１つ
以上を含むポリ核酸分子は、同等の天然のポリ核酸分子と比して、そのｍＲＮＡ標的に対
する結合親和性を増大させた。いくつかの例では、２’－Ｏ－メチル修飾ポリ核酸分子は
、同等の天然のポリ核酸分子と比して、そのｍＲＮＡ標的に対する結合親和性を増大させ
た。いくつかの例では、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’－Ｏ－ＭＯＥ）修飾ポリ核酸分
子は、同等の天然のポリ核酸分子と比して、そのｍＲＮＡ標的に対する結合親和性を増大
させた。いくつかの例では、２’－Ｏ－アミノプロピル修飾ポリ核酸分子は、同等の天然
のポリ核酸分子と比して、そのｍＲＮＡ標的に対する結合親和性を増大させた。いくつか
の例では、２’－デオキシ修飾ポリ核酸分子は、同等の天然のポリ核酸分子と比して、そ
のｍＲＮＡ標的に対する結合親和性を増大させた。いくつかの例では、Ｔ－デオキシ－２
’－フルオロ修飾ポリ核酸分子は、同等の天然のポリ核酸分子と比して、そのｍＲＮＡ標
的に対する結合親和性を増大させた。いくつかの例では、２’－Ｏ－アミノプロピル（２
’－Ｏ－ＡＰ）修飾ポリ核酸分子は、同等の天然のポリ核酸分子と比して、そのｍＲＮＡ
標的に対する結合親和性を増大させた。いくつかの例では、２’－Ｏ－ジメチルアミノエ
チル（２’－Ｏ－ＤＭＡＯＥ）修飾ポリ核酸分子は、同等の天然のポリ核酸分子と比して
、そのｍＲＮＡ標的に対する結合親和性を増大させた。いくつかの例では、２’－Ｏ－ジ
メチルアミノプロピル（２’－Ｏ－ＤＭＡＰ）修飾ポリ核酸分子は、同等の天然のポリ核
酸分子と比して、そのｍＲＮＡ標的に対する結合親和性を増大させた。いくつかの例では
、２’－Ｏ－ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’－Ｏ－ＤＭＡＥＯＥ）修飾ポリ核
酸分子は、同等の天然のポリ核酸分子と比して、そのｍＲＮＡ標的に対する結合親和性を
増大させた。いくつかの例では、２’－Ｏ－Ｎ－メチルアセトアミド（２’－Ｏ－ＮＭＡ
）修飾ポリ核酸分子は、同等の天然のポリ核酸分子と比して、そのｍＲＮＡ標的に対する
結合親和性を増大させた。いくつかの例では、ＬＮＡ修飾ポリ核酸分子は、同等の天然の
ポリ核酸分子と比して、そのｍＲＮＡ標的に対する結合親和性を増大させた。いくつかの
例では、ＥＮＡ修飾ポリ核酸分子は、同等の天然のポリ核酸分子と比して、そのｍＲＮＡ
標的に対する結合親和性を増大させた。いくつかの例では、ＰＮＡ修飾ポリ核酸分子は、
同等の天然のポリ核酸分子と比して、そのｍＲＮＡ標的に対する結合親和性を増大させた
。いくつかの例では、ＨＮＡ修飾ポリ核酸分子は、同等の天然のポリ核酸分子と比して、
そのｍＲＮＡ標的に対する結合親和性を増大させた。いくつかの例では、モルホリノ修飾
ポリ核酸分子は、同等の天然のポリ核酸分子と比して、そのｍＲＮＡ標的に対する結合親
和性を増大させた。いくつかの例では、メチルホスホネートヌクレオチド修飾ポリ核酸分
子は、同等の天然のポリ核酸分子と比して、そのｍＲＮＡ標的に対する結合親和性を増大
させた。いくつかの例では、チオールホスホネートヌクレオチド修飾ポリ核酸分子は、同
等の天然のポリ核酸分子と比して、そのｍＲＮＡ標的に対する結合親和性を増大させた。
いくつかの例では、２’－フルオロＮ３－Ｐ５’－ホスホラミダイトを含むポリ核酸分子
は、同等の天然のポリ核酸分子と比して、そのｍＲＮＡ標的に対する結合親和性を増大さ
せた。場合によっては、増加した親和性は、低Ｋｄ、高融解温度（Ｔｍ）、あるいはその
組み合わせで例証される。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、キラル純粋（あ
るいはステレオ純粋）なポリ核酸分子、あるいは単一のエナンチオマーを含むポリ核酸分
子である。いくつかの例では、ポリ核酸分子はＬ－ヌクレオチドを含む。いくつかの例で
は、ポリ核酸分子はＤ－ヌクレオチドを含む。いくつかの例において、ポリ核酸分子組成
物は、その鏡像異性体の３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、
２％、１％、またはそれ以下を含む。場合によっては、ポリ核酸分子組成物は、ラセミ混
合物の３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％、１％、また
はそれ以下を含む。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、米国特許出願公開第：２０１４
／１９４６１０号と２０１５／２１１００６号；ＷＯ２０１５１０７４２５に記載される
ポリ核酸分子である。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、アプタマー共役
部分を含めるようにさらに修飾される。いくつかの例では、アプタマー共役部分はＤＮＡ
アプタマー共役部分である。いくつかの例では、アプタマー共役部分は、Ａｌｐｈａｍｅ
ｒ（Ｃｅｎｔａｕｒｉ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）であり、これは、特定細胞表面標的
と、循環抗体に結合するための特定のエピトープを示す部分とを認識するアプタマー部分
を含んでいる。いくつかの例において、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、米国特許
第８，６０４，１８４号、８，５９１，９１０号、および、７，８５０，９７５号に記載
されるようなアプタマー共役部分を含めるようにさらに修飾される：
追加の実施形態では、本明細書に記載されたポリ核酸分子はその安定性を増大させるた
めに修飾される。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子はＲＮＡ（例えばｓｉＲＮ
Ａ）である。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、その安定性を増大させるために上に記
載された修飾の１つ以上によって修飾されている。場合によっては、ポリ核酸分子は、２
’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’－Ｏ－ＭＯＥ）、２’－Ｏ－アミノプ
ロピル、２’－デオキシ、Ｔ－デオキシ－２’－フルオロ、２’－Ｏ－アミノプロピル（
２’－Ｏ－ＡＰ）、２’－Ｏ－ジメチルアミノエチル（２’－Ｏ－ＤＭＡＯＥ）、２’－
Ｏ－ジメチルアミノプロピル（２’－Ｏ－ＤＭＡＰ）、Ｔ－Ｏ－ジメチルアミノエチルオ
キシエチル（２’－Ｏ－ＤＭＡＥＯＥ）、または、２’－Ｏ－Ｎ－メチルアセトアミド（
２’－Ｏ－ＮＭＡ）修飾、あるいは、ロックドまたは架橋リボース構造（例えば、ＬＮＡ
またはＥＮＡ）によるなどして、２ヒドロキシル位置で修飾される。場合によっては、ポ
リ核酸分子は２’－Ｏ－メチルおよび／または２’－Ｏ－メトキシエチルリボースによっ
て修飾される。場合によっては、ポリ核酸分子はさらに、その安定性を増大させるために
、モルホリノ、ＰＮＡ、ＨＮＡ、メチルホスホネートヌクレオチド、チオールホスホネー
トヌクレオチド、および／または２’－フルオロＮ３－Ｐ５’－ホスホラミダイトを含む
。いくつかの例では、ポリ核酸分子はキラル純粋な（あるいはステレオ純粋な）ポリ核酸
分子である。いくつかの例では、キラル純粋な（あるいはステレオ純粋な）ポリ核酸分子
はその安定性を増大させるために修飾されている。送達の安定性を増大させるためのＲＮ
Ａの適切な修飾は当業者には明らかである。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるポリ核酸分子は、限定されないが
、ＤＭＤ、ＤＵＸ４、ＤＹＳＦ、ＥＭＤ、あるいはＬＭＮＡなどの筋ジストロフィーに関
与する遺伝子によってコードされたＲＮＡの発現を調節するＲＮＡｉ活性を有する。いく
つかの例では、本明細書に記載されるポリ核酸分子は、ＤＭＤ、ＤＵＸ４、ＤＹＳＦ、Ｅ
ＭＤ、あるいはＬＭＮＡの少なくとも１つの発現をダウンレギュレートする二本鎖ｓｉＲ
ＮＡ分子であり、ここで、二本鎖ｓｉＲＮＡ分子の鎖の１つは、ＤＭＤ、ＤＵＸ４、ＤＹ
ＳＦ、ＥＭＤ、あるいはＬＭＮＡ、または、ＤＭＤ、ＤＵＸ４、ＤＹＳＦ、ＥＭＤ、ある
いはＬＭＮＡの少なくとも１つによってコードされたＲＮＡ、またはその一部の少なくと
も１つのヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含み、ここで、二本鎖ｓｉＲＮ
Ａ分子の鎖の第２の鎖は、ＤＭＤ、ＤＵＸ４、ＤＹＳＦ、ＥＭＤ、あるいはＬＭＮＡの少
なくとも１つ、または、ＤＭＤ、ＤＵＸ４、ＤＹＳＦ、ＥＭＤ、あるいはＬＭＮＡの少な
くとも１つによってコードされたＲＮＡ、またはその一部のヌクレオチド配列に実質的に
類似するヌクレオチド配列を含む。場合によっては、本明細書に記載されるポリ核酸分子
は、ＤＭＤ、ＤＵＸ４、ＤＹＳＦ、ＥＭＤ、あるいはＬＭＮＡの少なくとも１つの発現を
ダウンレギュレートする二本鎖ｓｉＲＮＡ分子であり、ここで、ｓｉＲＮＡ分子のそれぞ
れの鎖は、約１５～２５、１８～２４、あるいは１９～約２３のヌクレオチドを含み、お
よび、それぞれの鎖は、別の鎖のヌクレオチドに相補的な少なくとも約１４、１７、ある
いは１９のヌクレオチドを含む。場合によっては、本明細書に記載されるポリ核酸分子は
、ＤＭＤ、ＤＵＸ４、ＤＹＳＦ、ＥＭＤ、あるいはＬＭＮＡの少なくとも１つの発現をダ
ウンレギュレートする二本鎖ｓｉＲＮＡ分子であり、ここで、ｓｉＲＮＡ分子のそれぞれ
の鎖は約１９～約２３のヌクレオチドを含み、および、それぞれの鎖は、別の鎖のヌクレ
オチドに相補的な少なくとも約１９のヌクレオチドを含む。いくつかの例では、ＲＮＡｉ
活性は細胞内で生じる。他の例では、ＲＮＡｉ活性は再構成されたインビトロ系で生じる
。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるポリ核酸分子は、ＤＭＤ遺伝子に
よってコードされたＲＮＡの発現を調節するＲＮＡｉ活性を有する。いくつかの例では、
本明細書に記載されるポリ核酸分子はＤＭＤの発現をダウンレギュレートする単鎖ｓｉＲ
ＮＡ分子であり、ここで、単鎖ｓｉＲＮＡ分子は、ＤＭＤ、または、ＤＭＤによってコー
ドされたＲＮＡ、またはその一部のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含む
。場合によっては、本明細書に記載されるポリ核酸分子はＤＭＤの発現をダウンレギュレ
ートする単鎖ｓｉＲＮＡ分子であり、ここで、ｓｉＲＮＡ分子は、約１５～２５、１８～
２４、あるいは１９～約２３のヌクレオチドを含む。場合によっては、本明細書に記載さ
れるポリ核酸分子はＤＭＤの発現をダウンレギュレートする単鎖ｓｉＲＮＡ分子であり、
ここで、ｓｉＲＮＡ分子は約１９～約２３のヌクレオチドを含む。いくつかの例では、Ｒ
ＮＡｉ活性は細胞内で生じる。他の例では、ＲＮＡｉ活性は再構成されたインビトロ系で
生じる。
いくつかの例では、ポリ核酸分子は、自己相補的なセンスおよびアンチセンス領域を含
む、二本鎖ポリヌクレオチド分子であり、ここで、アンチセンス領域は、標的核酸分子ま
たはその一部中のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含み、センス領域は標
的核酸配列またはその一部に対応するヌクレオチド配列を有する。いくつかの例では、ポ
リ核酸分子は２つの別々のポリヌクレオチドから組み立てられ、１つの鎖はセンス鎖であ
り、もう一つの鎖はアンチセンス鎖であり、ここで、アンチセンス鎖とセンス鎖は自己相
補的であり（例えば、それぞれの鎖は、別の鎖のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチ
ド配列を含む；アンチセンス鎖とセンス鎖が二重鎖または二本鎖構造を形成する場合など
。例えば、二本鎖領域は約１９、２０、２１、２２、２３、またはそれ以上の塩基対であ
る）；アンチセンス鎖は、標的核酸分子またはその一部のヌクレオチド配列に相補的なヌ
クレオチド配列を含み、センス鎖は標的核酸配列またはその一部に対応するヌクレオチド
配列を含む。代替的に、ポリ核酸分子は単一のオリゴヌクレオチドから組み立てられ、ポ
リ核酸分子の自己相補的なセンス領域とアンチセンス領域は、核酸ベースまたは非核酸ベ
ースのリンカーによって結合される。
場合によっては、ポリ核酸分子は、自己相補的なセンス領域とアンチセンス領域を有す
る、二重の、非対称的で二重の、ヘアピン型の、または非対称的なヘアピン型の二次構造
を有するポリヌクレオチドであり、ここで、アンチセンス領域は、別の標的核酸分子また
はその一部のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含み、センス領域は標的核
酸配列またはその一部に対応するヌクレオチド配列を有する。他の場合には、ポリ核酸分
子は、２つ以上のループ構造と、自己相補的なセンス領域とアンチセンス領域を含む基部
とを有する、環状の単鎖ポリヌクレオチドであり、ここで、アンチセンス領域は、標的核
酸分子またはその一部のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含み、センス領
域は標的核酸配列またはその一部に対応するヌクレオチド配列を有し、環状ポリヌクレオ
チドは、ＲＮＡｉを媒介することが可能な活性なポリ核酸分子を生成するためにインビボ
またはインビトロで処理される。さらなる場合には、ポリ核酸分子はさらに、標的核酸分
子またはその一部のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を有する単鎖ポリヌク
レオチドを含み（例えば、そのようなポリ核酸分子は、標的核酸配列またはその一部に対
応するヌクレオチド配列のポリ核酸分子内に存在することを必要としない）、単鎖ポリヌ
クレオチドはさらに、５’－リン酸塩（例えば、Ｍａｒｔｉｎｅｚ ｅｔ ａｌ．， ２
００２， Ｃｅｌｌ．， １１０， ５６３－５７４と、Ｓｃｈｗａｒｚ ｅｔ ａｌ．
， ２００２， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌ， １０， ５３７－５６８を参照）あ
るいは５’，３’－二リン酸塩などの末端のリン酸基を含む。
いくつかの例では、アンチセンス領域と、ヌクレオチドあるいは非ヌクレオチドを含む
ループ部分と、センス領域とを含む、直鎖のポリ核酸分子が非対称的であり、センス領域
は、アンチセンス領域と塩基対をなすとともにループを有する二本鎖を形成するのに十分
な相補的なヌクレオチドを有する程度に、アンチセンス領域よりも少ないヌクレオチドを
含む。例えば、非対称的なヘアピン型のポリ核酸分子は、細胞中またはインビトロ系でＲ
ＮＡｉを媒介するのに十分な長さを有し、かつ、および約４～約８のヌクレオチドを含む
ループ領域を有するアンチセンス領域（例えば約１９～約２２ヌクレオチド）と、アンチ
センス領域に相補的な約３～約１８のヌクレオチドを有するセンス領域とを含む。場合に
よっては、非対称的なヘアピン型のポリ核酸分子はさらに、化学修飾された５’末端のリ
ン酸基を含む。さらなる場合には、非対称的なヘアピン型のポリ核酸分子のループ部分は
、ヌクレオチド、非ヌクレオチド、リンカー分子、あるいは抱合体分子を含む。
いくつかの実施形態において、非対称的な二重鎖は、センス領域およびアンチセンス領
域を含む２つの別々の鎖を有するポリ核酸分子であり、センス領域は、アンチセンス領域
と塩基対をなすのに十分な相補的なヌクレオチドを有し、かつ、二重鎖を形成する程度で
、アンチセンス領域よりも少ないヌクレオチドを含む。例えば、非対称的な二重のポリ核
酸分子は、細胞中またはインビトロ系でＲＮＡｉを媒介するのに十分な長さを有するアン
チセンス領域（例えば約１９約２２のヌクレオチド）、および、アンチセンス領域に相補
的な約３～約１８のヌクレオチドを有するセンス領域とを含む。
場合によっては、普遍的な塩基とは、ほとんど識別されない天然のＤＮＡ／ＲＮＡ塩基
の各々と塩基対を形成するヌクレオチド塩基アナログを指す。普遍的な塩基の非限定的な
例は、従来技術で知られているようなＣ－フェニル、Ｃ－ナフチル、および他の芳香族誘
導体、イノシン、アゾールカルボキサミド、ならびに、３－ニトロピロール、４－ニトロ
インドール、５－ニトロインドール、および６－ニトロインドールなどのニトロアゾール
誘導体を含む（例えば、Ｌｏａｋｅｓ， ２００１， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒ
ｅｓｅａｒｃｈ， ２９， ２４３７－２４４７を参照）。
ポリ核酸分子合成
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されたポリ核酸分子は、当該技術分野で
知られている手順を用いて、化学合成および／または酵素ライゲーション反応を用いて構
築される。例えば、ポリ核酸分子は、自然発生のヌクレオチドを使用して、あるいは、分
子の生体安定性を増大させるために、または、ポリ核酸分子と標的核酸との間で形成され
た二重鎖の物理安定度を増大させるために設計されたさまざまな修飾ヌクレオチドを用い
て、化学合成される。例示的な方法は、米国特許第５，１４２，０４７号；第５，１８５
，４４４号；第５，８８９，１３６号；第６，００８，４００号；および、第６，１１１
，０８６号；ＰＣＴ公開公報第ＷＯ２００９０９９９４２号；あるいは、欧州公開公報第
１５７９０１５号に記載されるものを含む。追加の例示的な方法は、以下に記載されるも
のを含む：Ｇｒｉｆｆｅｙ ｅｔ ａｌ．， “２’－Ｏ－ａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ ｒ
ｉｂｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ： ａ ｚｗｉｔｔｅｒｉｏｎｉｃ ｍｏｄｉｆｉｃａｔ
ｉｏｎ ｔｈａｔ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｔｈｅ ｅｘｏｎｕｃｌｅａｓｅ ｒｅｓｉｓｔ
ａｎｃｅ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ａｎｔｉｓｅｎｓ
ｅ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，” Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ３９（２６
）：５１００－５１０９ （１９９７））； Ｏｂｉｋａ， ｅｔ ａｌ． “Ｓｙｎｔ
ｈｅｓｉｓ ｏｆ ２’－Ｏ，４’－Ｃ－ｍｅｔｈｙｌｅｎｅｕｒｉｄｉｎｅ ａｎｄ
－ｃｙｔｉｄｉｎｅ． Ｎｏｖｅｌ ｂｉｃｙｃｌｉｃ ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ｈａ
ｖｉｎｇ ａ ｆｉｘｅｄ Ｃ３， －ｅｎｄｏ ｓｕｇａｒ ｐｕｃｋｅｒｉｎｇ”．
Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ ３８ （５０）： ８７３５ （１９９７
）； Ｋｏｉｚｕｍｉ， Ｍ． “ＥＮＡ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｓ
ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ”． Ｃｕｒｒｅｎｔ ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ ｍｏｌｅｃｕ
ｌａｒ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ８ （２）： １４４－１４９ （２００６）；
ａｎｄ Ａｂｒａｍｏｖａ ｅｔ ａｌ．， “Ｎｏｖｅｌ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔ
ｉｄｅ ａｎａｌｏｇｕｅｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏ ｎｕｃｌｅｏ
ｓｉｄｅ ｓｕｂｕｎｉｔｓ－ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ： ｎｅ
ｗ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｐｏｓｓｉｂｉｌｉｔｉｅｓ，” Ｉｎｄｉａｎ Ｊｏｕｒｎａ
ｌ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４８Ｂ：１７２１－１７２６ （２００９）。代替的に
、ポリ核酸分子は、ポリ核酸分子がアンチセンス配向にサブクローン化された発現ベクタ
ーを用いて生物学的に生成される（つまり、挿入されたポリ核酸分子の転写されたＲＮＡ
は所望の標的ポリ核酸分子に対してアンチセンス配向になる）。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子はタンデム合成方法によって合成され、こ
こで、両方の鎖は切断リンカーによって分離された単一の隣接するオリゴヌクレオチドフ
ラグメントあるいは鎖として合成され、これはその後切断されることで、二重鎖をハイブ
リダイズして二重鎖の精製を可能にする別々のフラグメントまたは鎖をもたらす。
いくつかの例では、ポリ核酸分子も２つの特徴的な核酸鎖あるいはフラグメントから組
み立てられ、ここで、１つのフラグメントはセンス領域を含み、第２のフラグメントは分
子のアンチセンス領域を含む。
例えば、糖、塩基、およびホスフェート修飾を組み込むためのさらなる修飾方法は、以
下を含む：Ｅｃｋｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｐｕｂｌ
ｉｃａｔｉｏｎ ＰＣＴ Ｎｏ． ＷＯ ９２／０７０６５； Ｐｅｒｒａｕｌｔ ｅｔ
ａｌ． Ｎａｔｕｒｅ， １９９０， ３４４， ５６５－５６８； Ｐｉｅｋｅｎ
ｅｔ ａｌ． Ｓｃｉｅｎｃｅ， １９９１， ２５３， ３１４－３１７； Ｕｓｍａ
ｎ ａｎｄ Ｃｅｄｅｒｇｒｅｎ， Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｓｃｉ．
， １９９２， １７， ３３４－３３９； Ｕｓｍａｎ ｅｔ ａｌ． Ｉｎｔｅｒｎ
ａｔｉｏｎａｌ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ＰＣＴ Ｎｏ． ＷＯ ９３／１５１８７；
Ｓｐｒｏａｔ， Ｕ．Ｓ． Ｐａｔ． Ｎｏ． ５，３３４，７１１ ａｎｄ Ｂｅｉ
ｇｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．， １９９５， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２７０
， ２５７０２； Ｂｅｉｇｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ
ＰＣＴ ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ． ＷＯ ９７／２６２７０； Ｂｅｉｇｅｌ
ｍａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｕ．Ｓ． Ｐａｔ． Ｎｏ． ５，７１６，８２４； Ｕｓｍ
ａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｕ．Ｓ． Ｐａｔ． Ｎｏ． ５，６２７，０５３； Ｗｏｏｌ
ｆ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＰＣＴ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ
Ｎｏ． ＷＯ ９８／１３５２６； Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｕ．Ｓ． Ｓ
ｅｒ． Ｎｏ． ６０／０８２，４０４ ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｆｉｌｅｄ ｏｎ Ａｐ
ｒ． ２０， １９９８； Ｋａｒｐｅｉｓｋｙ ｅｔ ａｌ．， １９９８， Ｔｅｔ
ｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．， ３９， １１３１； Ｅａｒｎｓｈａｗ ａｎｄ Ｇ
ａｉｔ， １９９８， Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ （Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｓｃｉ
ｅｎｃｅｓ）， ４８， ３９－５５； Ｖｅｒｍａ ａｎｄ Ｅｃｋｓｔｅｉｎ， １
９９８， Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．， ６７， ９９－１３４；および
、Ｂｕｒｌｉｎａ ｅｔ ａｌ．， １９９７， Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ
．， ５， １９９９－２０１０．上記公報は、触媒作用を調節することなく、核酸分子
へ糖、塩基、および／またはリン酸塩修飾を取り込むための位置を決定するための方法や
戦術を記載している。
いくつかの例では、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、および／または５’
－メチルホスホネート結合とのポリ核酸分子のヌクレオチド間結合の化学修飾が安定性を
改善する一方で、過度の修飾はしばしば毒性または活性の減少を引き起こす。したがって
、核酸分子を設計する場合、これらのヌクレオチド間結合の量は場合によっては最小限に
抑えられる。そのような場合、これらの結合の濃度の減少は、これらの分子の毒性を低下
させ、有効性と高い特異性を増加させる。
核酸ポリペプチド抱合体
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子はさらに、所望の部位へ送達されるポリペ
プチドＡに共役される。場合によっては、ポリ核酸分子はポリペプチドＡと随意にポリマ
ー部分に共役される。
いくつかの例では、少なくとも１つのポリペプチドＡは少なくとも１つのＢに共役され
る。いくつかの例では、少なくとも１つのポリペプチドＡは、Ａ－Ｂ抱合体を形成するた
めに少なくとも１つのＢに共役される。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの
Ａは、Ｂの５’末端、Ｂの３’末端、Ｂの内部部位、あるいはその任意の組み合わせに共
役される。いくつかの例では、少なくとも１つのポリペプチドＡは少なくとも２つのＢに
共役される。いくつかの例では、少なくとも１つのポリペプチドＡは、少なくとも２、３
、４、５、６、７、８、あるいはそれ以上のＢに共役される。
いくつかの実施形態において、少なくとも１つのポリペプチドＡは少なくとも１つのＢ
の１つの末端で共役し、その一方で、少なくとも１つのＣは、Ａ－Ｂ－Ｃ抱合体を形成す
るために少なくとも１つのＢの反対側の末端で共役される。いくつかの例では、少なくと
も１つのポリペプチドＡは少なくとも１つのＢの１つの末端で共役し、その一方で、Ｃの
少なくとも１つは少なくとも１つのＢの内部部位で共役される。いくつかの例では、少な
くとも１つのポリペプチドＡは少なくとも１つのＣに直接共役される。いくつかの例では
、少なくとも１つのＢは、Ａ－Ｃ－Ｂ抱合体を形成するために少なくとも１つのＣを介し
て少なくとも１つのポリペプチドＡに間接的に共役される。
いくつかの例では、少なくとも１つのＢおよび／または少なくとも１つのＣ、ならびに
随意に少なくとも１つのＤは、少なくとも１つのポリペプチドＡに共役される。いくつか
の例では、少なくとも１つのＢは、少なくとも１つのポリペプチドＡに末端（例えば、５
’末端あるいは３’末端）で共役され、あるいは少なくとも１つのポリペプチドＡに内部
部位を介して共役される。場合によっては、少なくとも１つのＣは、少なくとも１つのポ
リペプチドＡに直接的に、あるいは少なくとも１つのＢによって間接的に共役される。間
接的に、少なくとも１つのＢによって、少なくとも１つのＣは、Ｂ上の少なくとも１つの
ポリペプチドＡと同じ末端で、少なくとも１つのポリペプチドＡからの対抗する末端で、
あるいは、独立して内部部位で共役される。いくつかの例では、少なくとも１つの追加の
ポリペプチドＡはさらに、少なくとも１つのポリペプチドＡ、Ｂ、あるいはＣに共役され
る。さらなる例では、少なくとも１つのＤは随意に、少なくとも１つのポリペプチドＡ、
少なくとも１つのＢ、あるいは少なくとも１つのＣに、直接的あるいは間接的に共役され
る。直接的に少なくとも１つのポリペプチドＡに共役される場合、少なくとも１つのＤも
Ａ－Ｄ－Ｂ抱合体を形成するために少なくとも１つのＢに随意に共役され、あるいは、Ａ
－Ｄ－Ｂ－Ｃ抱合体を形成するために少なくとも１つのＢと少なくとも１つのＣに随意に
共役される。いくつかの例では、Ｄ－Ａ－Ｂ－Ｃ抱合体を形成するために、少なくとも１
つのＤは、少なくとも１つのポリペプチドＡに直接的に、および少なくとも１つのＢと少
なくとも１つのＣに間接的に共役される。間接的に少なくとも１つのポリペプチドＡに共
役される場合、少なくとも１つのＤもＡ－Ｂ－Ｄ抱合体を形成するために少なくとも１つ
のＢに随意に共役され、あるいは、Ａ－Ｂ－Ｄ－Ｃ抱合体を形成するために少なくとも１
つのＢと少なくとも１つのＣに随意に共役される。いくつかの例では、少なくとも１つの
追加のＤはさらに、少なくとも１つのポリペプチドＡ、Ｂ、あるいはＣに共役される。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子抱合体は、例示されるような構築物を含む
：
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子抱合体は、例示されるような構築物を含む
：
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子抱合体は、例示されるような構築物を含む
：
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子抱合体は、例示されるような構築物を含む
：
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子抱合体は、例示されるような構築物を含む
：
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子抱合体は、例示されるような構築物を含む
：
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子抱合体は、例示されるような構築物を含む
：
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子抱合体は、例示されるような構築物を含む
：
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子抱合体は、例示されるような構築物を含む
：
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子抱合体は、例示されるような構築物を含む
：
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子抱合体は、例示されるような構築物を含む
：
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子抱合体は、例示されるような構築物を含む
：
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子抱合体は、例示されるような構築物を含む
：

は、例示目的のために過ぎず、ヒト化抗体またはその結合フラグメント、キメラ抗体また
はその結合フラグメント、モノクローナル抗体またはその結合フラグメント、一価Ｆａｂ
’、二価Ｆａｂ２、一本鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、ダイアボディ、ミニボディ（
ｍｉｎｉｂｏｄｙ）、ナノボディ、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、あるいは、ラクダ抗
体またはその結合フラグメントを包含する。
結合部分
いくつかの実施形態において、結合部分Ａはポリペプチドである。いくつかの例では、
ポリペプチドは、抗体またはそのフラグメントである。場合によっては、フラグメントは
結合フラグメントである。いくつかの例では、抗体またはその結合フラグメントは、ヒト
化抗体またはその結合フラグメント、マウス抗体またはその結合フラグメント、キメラ抗
体またはその結合フラグメント、モノクローナル抗体またはその結合フラグメント、一価
Ｆａｂ’、二価Ｆａｂ２、Ｆ（ａｂ）’３フラグメント、単鎖可変フラグメント（ｓｃＦ
ｖ）、ビス－ｓｃＦｖ（ｓｃＦｖ）２、ダイアボディ、ミニボディ、ナノボディ、三重特
異性抗体、四重特異性抗体、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（ｄｓＦｖ）、単一ドメ
イン抗体（ｓｄＡｂ）、Ｉｇ ＮＡＲ、ラクダ科抗体またはその結合フラグメント、二重
特異性抗体またはその結合フラグメント、あるいはその化学修飾された誘導体を含む。
いくつかの例では、Ａは抗体またはその結合フラグメントである。いくつかの例では、
Ａは、ヒト化抗体またはその結合フラグメント、マウス抗体またはその結合フラグメント
、キメラ抗体またはその結合フラグメント、モノクローナル抗体またはその結合フラグメ
ント、一価Ｆａｂ’、二価Ｆａｂ２、Ｆ（ａｂ）’３フラグメント、単鎖可変フラグメン
ト（ｓｃＦｖ）、ビス－ｓｃＦｖ（ｓｃＦｖ）２、ダイアボディ、ミニボディ、ナノボデ
ィ、三重特異性抗体、四重特異性抗体、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（「ｄｓＦｖ
」）、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、Ｉｇ ＮＡＲ、ラクダ科抗体またはその結合フラ
グメント、二重特異性抗体またはその結合フラグメント、あるいはその化学修飾された誘
導体である。いくつかの例では、Ａはヒト化抗体またはその結合フラグメントである。い
くつかの例では、Ａはマウス抗体またはその結合フラグメントである。いくつかの例では
、Ａはキメラ抗体またはその結合フラグメントである。いくつかの例では、Ａはモノクロ
ーナル抗体またはその結合フラグメントである。いくつかの例では、Ａは一価Ｆａｂ’で
ある。いくつかの例では、Ａは二価Ｆａｂ２である。いくつかの例では、Ａは単鎖可変フ
ラグメント（ｓｃＦｖ）である。
いくつかの実施形態では、結合部分Ａは、二重特異性抗体またはその結合フラグメント
である。いくつかの例では、二重特異性抗体は三機能性抗体あるいは二重特異性ミニ抗体
である。場合によっては、二重特異性抗体は三機能性抗体である。いくつかの例では、三
機能性抗体は、２つの異なる抗原のための結合部位を含む完全長のモノクローナル抗体で
ある。
場合によっては、二重特異性抗体は二重特異性ミニ抗体である。いくつかの例では、二
重特異性ミニ抗体は、二価Ｆａｂ２、Ｆ（ａｂ）’３フラグメント、ビス－ｓｃＦｖ（ｓ
ｃＦｖ）２、ダイアボディ、ミニボディ、三重特異性抗体、四重特異性抗体、あるいは二
重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）を含む。いくつかの実施形態において、二重
特異性Ｔ細胞エンゲージャーは、２つのｓｃＦｖｓが２つの異なる抗原のエピトープを標
的とする２つの単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖｓ）を含む融合タンパク質である。
いくつかの実施形態において、結合部分Ａは二重特異性ミニ抗体である。いくつかの例
では、Ａは二重特異性Ｆａｂ２である。いくつかの例では、Ａは二重特異性Ｆ（ａｂ）’
３フラグメントである。場合によっては、Ａは二重特異性ビス－ｓｃＦｖである。場合に
よっては、Ａは二重特異性（ｓｃＦｖ）であるいくつかの実施形態では、Ａは二重特異性
ダイアボディである。いくつかの実施形態では、Ａは二重特異性ミニボディである。いく
つかの実施形態では、Ａは二重特異性の三重特異性抗体である。他の実施形態では、Ａは
二重特異性の四重特異性抗体である。他の実施形態では、Ａは二重特異性のＴ細胞エンゲ
ージャー（ＢｉＴＥ）である。
いくつかの実施形態において、結合部分Ａは三重特異性抗体である。いくつかの例では
、三重特異性抗体はＦ（ａｂ）’３フラグメントあるいは三重特異性抗体を含む。いくつ
かの例では、Ａは三重特異性Ｆ（ａｂ）’３フラグメントである。場合によっては、Ａは
三重特異性抗体である。いくつかの実施形態において、Ａは、Ｄｉｍａｓ、ｅｔ ａｌ．
、“Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｔｒｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ
ｄｅｓｉｇｎｅｄ ｔｏ ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ ａｎｄ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ
ｌｙ ｔａｒｇｅｔ ｔｈｒｅｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ａｎｔｉｇｅｎｓ ｏｎ ｔｕ
ｍｏｒ ｃｅｌｌｓ，” Ｍｏｌ． Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ、１２（９）： ３４
９０－３５０１（２０１５）に記載されるような三重特異性抗体である。
いくつかの実施形態において、結合部分Ａは、細胞表面タンパク質を認識する抗体また
はその結合フラグメントである。いくつかの例では、結合部分Ａは、筋細胞上の細胞表面
タンパク質を認識する抗体またはその結合フラグメントである。抗体またはその結合フラ
グメントによって認識される例示的な細胞表面タンパク質は、限定されないが、Ｓｃａ－
１、ＣＤ３４、Ｍｙｏ－Ｄ、ミオゲニン、ＭＲＦ４、ＮＣＡＭ、ＣＤ４３、およびＣＤ９
５（Ｆａｓ）を含む。
いくつかの例では、細胞表面タンパク質は、分化（ＣＤ）細胞表面マーカーのクラスタ
を含む。例示的なＣＤ細胞表面マーカーは限定されないが、ＣＤ１、ＣＤ２、ＣＤ３、Ｃ
Ｄ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１０、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、
ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤｗ１２、ＣＤ１３、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１５ｓ、Ｃ
Ｄ１６、ＣＤｗ１７、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、
ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ２６、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３１、
ＣＤ３２、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ３５、ＣＤ３６、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ３９、
ＣＤ４０、ＣＤ４１、ＣＤ４２、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ４
５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４６、ＣＤ４７、ＣＤ４８、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ
４９ｃ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５０、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ５
３、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＣＤ５７、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤｗ６０、ＣＤ
６１、ＣＤ６２Ｅ、ＣＤ６２Ｌ （Ｌ－セレクチン）、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ６３、ＣＤ６４
、ＣＤ６５、ＣＤ６６ａ、ＣＤ６６ｂ、ＣＤ６６ｃ、ＣＤ６６ｄ、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７９
（例えば、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ）、ＣＤ９０、ＣＤ９５ （Ｆａｓ）、ＣＤ１０３
、ＣＤ１０４、ＣＤ１２５ （ＩＬ５ＲＡ）、ＣＤ１３４ （ＯＸ４０）、ＣＤ１３７
（４－１ＢＢ）、ＣＤ１５２ （ＣＴＬＡ－４）、ＣＤ２２１、ＣＤ２７４、ＣＤ２７９
（ＰＤ－１）、ＣＤ３１９ （ＳＬＡＭＦ７）、ＣＤ３２６ （ＥｐＣＡＭ）などを含
む。
いくつかの例では、結合部分Ａは、ＣＤ細胞表面マーカーを認識する、抗体またはその
結合フラグメントである。いくつかの例では、結合部分Ａは、ＣＤ１、ＣＤ２、ＣＤ３、
ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１０、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ
、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１１ｄ、ＣＤｗ１２、ＣＤ１３、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１５ｓ、
ＣＤ１６、ＣＤｗ１７、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３
、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ２６、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ２９、ＣＤ３０、ＣＤ３１
、ＣＤ３２、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ３５、ＣＤ３６、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ３９
、ＣＤ４０、ＣＤ４１、ＣＤ４２、ＣＤ４３、ＣＤ４４、ＣＤ４５、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ
４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ４６、ＣＤ４７、ＣＤ４８、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９ｂ、Ｃ
Ｄ４９ｃ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ５０、ＣＤ５１、ＣＤ５２、ＣＤ
５３、ＣＤ５４、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＣＤ５７、ＣＤ５８、ＣＤ５９、ＣＤｗ６０、Ｃ
Ｄ６１、ＣＤ６２Ｅ、ＣＤ６２Ｌ （Ｌ－セレクチン）、ＣＤ６２Ｐ、ＣＤ６３、ＣＤ６
４、ＣＤ６５、ＣＤ６６ａ、ＣＤ６６ｂ、ＣＤ６６ｃ、ＣＤ６６ｄ、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７
９ （例えば、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ）、ＣＤ９０、ＣＤ９５ （Ｆａｓ）、ＣＤ１０
３、ＣＤ１０４、ＣＤ１２５ （ＩＬ５ＲＡ）、ＣＤ１３４ （ＯＸ４０）、ＣＤ１３７
（４－１ＢＢ）、ＣＤ１５２ （ＣＴＬＡ－４）、ＣＤ２２１、ＣＤ２７４、ＣＤ２７
９ （ＰＤ－１）、ＣＤ３１９ （ＳＬＡＭＦ７）、ＣＤ３２６ （ＥｐＣＡＭ）、また
はこれらの組み合わせを認識する、抗体またはその結合フラグメントである。
いくつかの実施形態において、結合部分Ａは、抗ミオシン抗体、抗トランスフェリン抗
体、および、筋特異的キナーゼ（ＭｕＳＫ）を認識する抗体である。
いくつかの例では、結合部分Ａは抗ミオシン抗体である。場合によっては、抗ミオシン
抗体はヒト化抗体である。他の場合では、抗ミオシン抗体はキメラ抗体である。さらなる
場合には、抗ミオシン抗体は、一価、二価、あるいは多価の抗体である。
いくつかの例では、結合部分Ａは抗トランスフェリン（抗ＣＤ７１）抗体である。場合
によっては、抗トランスフェリン抗体はヒト化抗体である。他の場合には、抗トランスフ
ェリン抗体はキメラ抗体である。さらなる場合には、抗トランスフェリン抗体は、一価、
二価、あるいは多価の抗体である。いくつかの実施形態において、例示的な抗トランスフ
ェリン抗体は、Ｒ＆Ｄ ＳｙｓｔｅｍｓのＭＡＢ５７４６、Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｉｅｓのＡＨＰ８５８、Ｂｅｔｈｙｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ｉｎｃ．
のＡ８０－１２８Ａ、およびＭｉｌｌｉｐｏｒｅＳｉｇｍａのＴ２０２７を含む。
いくつかの例では、結合部分ＡはＭｕＳＫを認識する抗体である。場合によっては、抗
ＭｕＳＫ抗体はヒト化抗体である。他の場合には、抗ＭｕＳＫ抗体はキメラ抗体である。
さらなる場合には、抗ＭｕＳＫ抗体は、一価、二価、あるいは多価の抗体である。
いくつかの実施形態において、結合部分Ａは、ポリ核酸分子（Ｂ）に非特異的に共役さ
れる。いくつかの例では、結合部分Ａは、非部位特異的なやり方で、リシン残基またはシ
ステイン残基を介してポリ核酸分子（Ｂ）に共役される。いくつかの例では、結合部分Ａ
は、非部位特異的なやり方で、リシン残基を介してポリ核酸分子（Ｂ）に共役される。場
合によっては、結合部分Ａは、非部位特異的なやり方で、システイン残基を介してポリ核
酸分子（Ｂ）に共役される。
いくつかの実施形態において、結合部分Ａは、非部位特異的なやり方で、ポリ核酸分子
（Ｂ）に共役される。いくつかの例では、結合部分Ａは、部位特異的なやり方で、リシン
残基、システイン残基を介して、５’－末端で、３’－末端で、非天然アミノ酸、あるい
は酵素修飾または酵素触媒された残留物で、ポリ核酸分子（Ｂ）に共役される。いくつか
の例では、結合部分Ａは、部位特異的なやり方で、リシン残基を介してポリ核酸分子（Ｂ
）に共役される。いくつかの例では、結合部分Ａは、部位特異的なやり方で、システイン
残基を介してポリ核酸分子（Ｂ）に共役される。いくつかの例では、結合部分Ａは、部位
特異的なやり方で、５’末端でポリ核酸分子（Ｂ）に共役される。いくつかの例では、結
合部分Ａは、部位特異的なやり方で、３’末端でポリ核酸分子（Ｂ）に共役される。いく
つかの例では、結合部分Ａは、部位特異的なやり方で、非天然アミノ酸を介してポリ核酸
分子（Ｂ）に共役される。いくつかの例では、結合部分Ａは、部位特異的なやり方で酵素
修飾または酵素触媒された残留物を介してポリ核酸分子（Ｂ）に共役される。
いくつかの実施形態において、１つ以上のポリ核酸分子（Ｂ）は結合部分Ａに共役され
る。いくつかの例では、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１
３、１４、１５、１６、またはそれ以上のポリ核酸分子は、１つの結合部分Ａに共役され
る。いくつかの例では、約１のポリ核酸分子が１つの結合部分Ａに共役される。いくつか
の例では、約２のポリ核酸分子が１つの結合部分Ａに共役される。いくつかの例では、約
３のポリ核酸分子が１つの結合部分Ａに共役される。いくつかの例では、約４のポリ核酸
分子が１つの結合部分Ａに共役される。いくつかの例では、約５のポリ核酸分子が１つの
結合部分Ａに共役される。いくつかの例では、約６のポリ核酸分子が１つの結合部分Ａに
共役される。いくつかの例では、約７のポリ核酸分子が１つの結合部分Ａに共役される。
いくつかの例では、約８のポリ核酸分子が１つの結合部分Ａに共役される。いくつかの例
では、約９のポリ核酸分子が１つの結合部分Ａに共役される。いくつかの例では、約１０
のポリ核酸分子が１つの結合部分Ａに共役される。いくつかの例では、約１１のポリ核酸
分子が１つの結合部分Ａに共役される。いくつかの例では、約１２のポリ核酸分子が１つ
の結合部分Ａに共役される。いくつかの例では、約１３のポリ核酸分子が１つの結合部分
Ａに共役される。いくつかの例では、約１４のポリ核酸分子が１つの結合部分Ａに共役さ
れる。いくつかの例では、約１５のポリ核酸分子が１つの結合部分Ａに共役される。いく
つかの例では、約１６のポリ核酸分子が１つの結合部分Ａに共役される。場合によっては
、１つ以上のポリ核酸分子が同じである。他の例では、１つ以上のポリ核酸分子が異なる
。
いくつかの実施形態において、結合部分Ａに共役したポリ核酸分子（Ｂ）の数は、ある
比率を形成する。いくつかの例では、比率はＤＡＲ（薬物対抗体の）比率と呼ばれ、本明
細書で言及されるような薬物はポリ核酸分子（Ｂ）である。いくつかの例では、結合部分
Ａに対するポリ核酸分子（Ｂ）のＤＡＲ比率は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９
、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、またはそれ以上である。いくつかの例で
は、結合部分Ａに対するポリ核酸分子（Ｂ）のＤＡＲ比率は、約１以上である。いくつか
の例では、結合部分Ａに対するポリ核酸分子（Ｂ）のＤＡＲ比率は、約２以上である。い
くつかの例では、結合部分Ａに対するポリ核酸分子（Ｂ）のＤＡＲ比率は、約３以上であ
る。いくつかの例では、結合部分Ａに対するポリ核酸分子（Ｂ）のＤＡＲ比率は、約４以
上である。いくつかの例では、結合部分Ａに対するポリ核酸分子（Ｂ）のＤＡＲ比率は、
約５以上である。いくつかの例では、結合部分Ａに対するポリ核酸分子（Ｂ）のＤＡＲ比
率は、約６以上である。いくつかの例では、結合部分Ａに対するポリ核酸分子（Ｂ）のＤ
ＡＲ比率は、約７以上である。いくつかの例では、結合部分Ａに対するポリ核酸分子（Ｂ
）のＤＡＲ比率は、約８以上である。いくつかの例では、結合部分Ａに対するポリ核酸分
子（Ｂ）のＤＡＲ比率は、約９以上である。いくつかの例では、結合部分Ａに対するポリ
核酸分子（Ｂ）のＤＡＲ比率は、約１０以上である。いくつかの例では、結合部分Ａに対
するポリ核酸分子（Ｂ）のＤＡＲ比率は、約１１以上である。いくつかの例では、結合部
分Ａに対するポリ核酸分子（Ｂ）のＤＡＲ比率は、約１２以上である。
いくつかの例では、結合部分Ａに対するポリ核酸分子（Ｂ）のＤＡＲ比率は、約１、２
、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６であ
る。いくつかの例では、結合部分Ａに対するポリ核酸分子（Ｂ）のＤＡＲ比率は、約１で
ある。いくつかの例では、結合部分Ａに対するポリ核酸分子（Ｂ）のＤＡＲ比率は、約２
である。いくつかの例では、結合部分Ａに対するポリ核酸分子（Ｂ）のＤＡＲ比率は、約
３である。いくつかの例では、結合部分Ａに対するポリ核酸分子（Ｂ）のＤＡＲ比率は、
約４である。いくつかの例では、結合部分Ａに対するポリ核酸分子（Ｂ）のＤＡＲ比率は
、約５である。いくつかの例では、結合部分Ａに対するポリ核酸分子（Ｂ）のＤＡＲ比率
は、約６である。いくつかの例では、結合部分Ａに対するポリ核酸分子（Ｂ）のＤＡＲ比
率は、約７である。いくつかの例では、結合部分Ａに対するポリ核酸分子（Ｂ）のＤＡＲ
比率は、約８である。いくつかの例では、結合部分Ａに対するポリ核酸分子（Ｂ）のＤＡ
Ｒ比率は、約９である。いくつかの例では、結合部分Ａに対するポリ核酸分子（Ｂ）のＤ
ＡＲ比率は、約１０である。いくつかの例では、結合部分Ａに対するポリ核酸分子（Ｂ）
のＤＡＲ比率は、約１１である。いくつかの例では、結合部分Ａに対するポリ核酸分子（
Ｂ）のＤＡＲ比率は、約１２である。いくつかの例では、結合部分Ａに対するポリ核酸分
子（Ｂ）のＤＡＲ比率は、約１３である。いくつかの例では、結合部分Ａに対するポリ核
酸分子（Ｂ）のＤＡＲ比率は、約１４である。いくつかの例では、結合部分Ａに対するポ
リ核酸分子（Ｂ）のＤＡＲ比率は、約１５である。いくつかの例では、結合部分Ａに対す
るポリ核酸分子（Ｂ）のＤＡＲ比率は、約１６である。
いくつかの例では、結合部分Ａに対するポリ核酸分子（Ｂ）のＤＡＲ比率は、１、２、
３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６である
。いくつかの例では、結合部分Ａに対するポリ核酸分子（Ｂ）のＤＡＲ比率は、１である
。いくつかの例では、結合部分Ａに対するポリ核酸分子（Ｂ）のＤＡＲ比率は、２である
。いくつかの例では、結合部分Ａに対するポリ核酸分子（Ｂ）のＤＡＲ比率は、４である
。いくつかの例では、結合部分Ａに対するポリ核酸分子（Ｂ）のＤＡＲ比率は、６である
。いくつかの例では、結合部分Ａに対するポリ核酸分子（Ｂ）のＤＡＲ比率は、８である
。いくつかの例では、結合部分Ａに対するポリ核酸分子（Ｂ）のＤＡＲ比率は、１２であ
る。
いくつかの例では、結合部分Ａを伴わないポリ核酸分子（Ｂ）を含む抱合体と比較して
、ポリ核酸分子（Ｂ）と結合部分Ａを含む抱合体は、活性を改善させた。いくつかの例で
は、改善された活性は、生物学的に関連する機能の増強、例えば、疾患状態の処置または
予防における安定性、親和性、結合、機能的な活性、および有効性の改善をもたらす。い
くつかの例では、疾患状態は、遺伝子の１つ以上の突然変異エクソンの結果である。いく
つかの例では、結合部分Ａを伴わないポリ核酸分子（Ｂ）を含む抱合体と比較して、ポリ
核酸分子（Ｂ）と結合部分Ａを含む抱合体は、１つ以上の突然変異したエクソンのエクソ
ンスキッピングの増加をもたらす。いくつかの例では、結合部分Ａを伴わないポリ核酸分
子（Ｂ）を含む抱合体と比較して、エクソンスキッピングは、ポリ核酸分子（Ｂ）と結合
部分Ａを含む抱合体において、少なくともまたは約５％、１０％、２０％、２５％、３０
％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、あるいは、９５％以上
増加する。
いくつかの実施形態において、抗体またはその結合フラグメントは、単独であるいは組
み合わせて、当該技術分野で知られている従来の技術を使用して、例えば、アミノ酸の欠
失、挿入、置換、追加を用いることによって、および／または、組換え、ならびに／ある
いは、当該技術分野で知られている他の修飾（例えば、グリコシル化とリン酸化などの翻
訳後および化学的な修飾）によって、さらに修飾される。いくつかの例では、修飾は、Ｆ
ｃ受容体との相互作用を調節するための修飾をさらに含む。いくつかの例では、１つ以上
の修飾は、例えば、国際公開第ＷＯ９７／３４６３１に記載されるものを含み、当該文献
はＦｃドメインとＦｃＲｎ受容体との間の相互作用に関与するアミノ酸残基を開示してい
る。抗体またはその結合フラグメントのアミノ酸配列の基礎となる核酸配列にそのような
修飾を導入する方法は、当業者に周知である。
いくつかの例では、抗体結合フラグメントはさらにその誘導体を包含し、少なくとも１
つのＣＤＲを含むポリペプチド配列を含んでいる。
いくつかの例では、本明細書に記載されるような「単鎖」との用語は、二重特異性の単
鎖構築物の第１と第２のドメインが、好ましくは、単一核酸分子によってコードすること
ができる共線形アミノ酸配列の形態で共有結合されるということを意味する。
いくつかの例では、二重特異性単鎖抗体構築物は、２つの抗体由来の結合ドメインを含
む構築物に関する。そのような実施形態では、二重特異性の単鎖抗体構築物はタンデムｂ
ｉ－ｓｃＦｖあるいはダイアボディである。いくつかの例では、ｓｃＦｖは、リンカーペ
プチドによって接続されたＶＨとＶＬのドメインを含む。いくつかの例では、リンカーは
、第１と第２のドメインのそれぞれが、互いから独立して、その差次的な結合特異性を保
持することができる十分な長さと配列である。
いくつかの実施形態において、本明細書で使用されるように、～との結合または～によ
る相互作用とは、互いに少なくとも２つの抗原相互作用部位の結合／相互作用を定義する
。いくつかの例では、抗原相互作用部位は、特異性抗原または抗原の特異的な群との特定
の相互作用の能力を示すポリペプチドのモチーフを定義する。場合によっては、結合／相
互作用は特定の認識を定義するとも理解される。そのような場合、特定の認識は、抗体あ
るいはその結合フラグメントが、標的分子の各々の少なくとも２つのアミノ酸に特異的に
相互作用および／または結合することができるということを指す。例えば、特定の認識は
、抗体分子の特異性、あるいは標的分子の特定の範囲を区別するその能力に関する。追加
の例では、抗原相互作用部位のその特異性抗原との特定の相互作用は、例えば、抗原の立
体配座の変化、抗原のオリゴマー化などの誘導による、シグナルの開始をもたらす。さら
なる実施形態では、結合は「鍵と鍵穴の原則（ｋｅｙ－ｌｏｃｋ－ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ）
」の特異性によって例証される。したがって、いくつかの例では、抗原相互作用部位およ
び抗原のアミノ酸配列における特定のモチーフは、上記構造の第２の修飾の結果と同様に
、その１次、２次、または３次構造の結果として互いに結合する。そのような場合、抗原
相互作用部位のその特異性抗原との特定の相互作用は、その部位の抗原への簡単な結合を
もたらす。
いくつかの例では、特異的な相互作用はさらに、抗体またはその結合フラグメントの減
少した交差反応性、あるいは減少したオフターゲット効果を指す。例えば、所望のポリペ
プチド／タンパク質に結合するが、他のポリペプチドのいずれにも本質的には結合しない
抗体あるいはその結合フラグメントは、所望のポリペプチド／タンパク質に対して特異的
であるとみなされる。抗原相互作用部位の特異性抗原との特定の相互作用の例は、リガン
ドのその受容体との特異性、例えば、抗原決定基群（エピトープ）の、抗体の抗原結合部
位との相互作用を含む。
追加の結合部分
いくつかの実施形態において、結合部分は血漿タンパク質である。いくつかの例では、
血漿タンパク質はアルブミンを含む。いくつかの例では、結合部分Ａはアルブミンである
。いくつかの例では、アルブミンは、本明細書に記載される結合化学の１つ以上によって
、ポリ核酸分子に結合される。いくつかの例では、アルブミンは、天然のライゲーション
化学によってポリ核酸分子に結合される。いくつかの例では、アルブミンは、リジン結合
によってポリ核酸分子に結合される。
いくつかの例では、結合部分はステロイドである。例示的なステロイドは、コレステロ
ール、リン脂質、ジアシルグリセロールおよびトリアシルグリセロール、脂肪酸、炭化水
素（飽和、不飽和であり、置換を含む）、あるいはそれらの組み合わせである。いくつか
の例では、ステロイドはコレステロールである。いくつかの例では、結合部分はコレステ
ロールである。いくつかの例では、コレステロールは、本明細書に記載される結合化学の
１つ以上によってポリ核酸分子に結合される。いくつかの例では、コレステロールは、天
然のライゲーション化学によってポリ核酸分子に結合される。いくつかの例では、コレス
テロールは、リジン結合によってポリ核酸分子に結合される。
いくつかの例では、結合部分は、限定されないが、細胞上の特定の表面マーカーに結合
するポリ核酸分子アプタマーを含むポリマーである。この例では、結合部分は、標的遺伝
子またはｍＲＮＡにハイブリダイズしないが、その代りに、細胞表面マーカーのその特定
のエピトープに結合する抗体と同様に、細胞表面マーカーに選択的に結合することができ
るポリ核酸である。
場合によっては、結合部分はペプチドである。場合によっては、ペプチドは約１～約３
ｋＤａを含む。場合によっては、ペプチドは、約１．２～約２．８ｋＤａ、約１．５～約
２．５ｋＤａ、あるいは約１．５～約２ｋＤａを含む。幾つかの例では、ペプチドは二環
式ペプチドである。場合によっては、二環式ペプチドはコンストレインド二環式ペプチド
（ｃｏｎｓｔｒａｉｎｅｄ ｂｉｃｙｃｌｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅ）である。いくつかの例
では、ペプチド部分は二環式ペプチド（例えば、Ｂｉｃｙｃｌｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉ
ｃｓのｂｉｃｙｃｌｅｓ）である。
さらなる場合では、結合部分は小分子である。いくつかの例では、小分子は抗体動員小
分子（ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｒｅｃｒｕｉｔｉｎｇ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅ）であ
る。場合によっては、抗体動員小分子は、標的結合末端および抗体結合末端を含み、標的
結合末端はそれで細胞表面受容体を認識して、相互作用することができる。例えば、いく
つかの例では、グルタミン酸塩尿素（ｇｌｕｔａｍａｔｅ ｕｒｅａ）化合物を含む標的
結合末端は、ＰＳＭＡとの相互作用を可能にし、それにより、ＰＳＭＡを発現する細胞と
の抗体相互作用を増強する。いくつかの例では、結合部分は、Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．
， “Ａ ｒｅｍｏｔｅ ａｒｅｎｅ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅ ｏｎ ｐｒｏｓｔａ
ｔｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｍｅｍｂｒａｎｅ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｂｙ
ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｒｅｃｒｕｉｔｉｎｇ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，” Ｊ
Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ． １３２（３６）： １２７１１－１２７１６ （２０１０
）；あるいは、ＭｃＥｎａｎｅｙ， ｅｔ ａｌ．， “Ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｒｅｃｒｕ
ｉｔｉｎｇ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ： ａｎ ｅｍｅｒｇｉｎｇ ｐａｒａｄｉｇｍ ｆｏ
ｒ ｅｎｇａｇｉｎｇ ｉｍｍｕｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ｔｒｅａｔｉｎｇ ｈ
ｕｍａｎ ｄｉｓｅａｓｅ，” ＡＣＳ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ． ７（７）： １１３９
－１１５１ （２０１２）に記載される小分子である。
結合化学
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子Ｂは結合部分に結合される。いくつかの例
では、結合部分は、アミノ酸、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、抗体、抗原、毒素
、ホルモン、脂質、ヌクレオチド、ヌクレオシド、糖類、炭水化物、ポリエチレングリコ
ールとポリプロピレングリコールなどのポリマー、ならびに、これらのクラスの物質のす
べてのアナログあるいは誘導体を含む。結合部分の追加の例はさらに、コレステロール、
リン脂質、ジアシルグリセロールおよびトリアシルグリセロール、脂肪酸、炭化水素（例
えば、飽和、不飽和、または、置換を含む）、酵素基質、ビオチン、ジゴキシゲニン、お
よび多糖類などのステロイドを含む。いくつかの例では、結合部分は、抗体またはその結
合フラグメントである。いくつかの例では、ポリ核酸分子はさらにポリマーに結合され、
随意にエンドソーム溶解性部分に結合される。
いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、化学的なライゲーションプロセスによ
って結合部分に結合される。いくつかの例では、ポリ核酸分子は天然のライゲーションに
よって結合部分に結合される。いくつかの例において、結合は以下に記載される通りであ
る：Ｄａｗｓｏｎ， ｅｔ ａｌ． “Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ
ｂｙ ｎａｔｉｖｅ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｌｉｇａｔｉｏｎ，” Ｓｃｉｅｎｃｅ １９
９４， ２６６， ７７６－７７９； Ｄａｗｓｏｎ， ｅｔ ａｌ． “Ｍｏｄｕｌａ
ｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ Ｎａｔｉｖｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｌｉ
ｇａｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ Ｕｓｅ ｏｆ Ｔｈｉｏｌ Ａｄｄｉｔｉｖｅ
ｓ，” Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． １９９７， １１９， ４３２５－４３
２９； Ｈａｃｋｅｎｇ， ｅｔ ａｌ． “Ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｂ
ｙ ｎａｔｉｖｅ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｌｉｇａｔｉｏｎ：Ｅｘｐａｎｄｅｄ ｓｃｏｐ
ｅ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｓｔｒａｉｇｈｔｆｏｒｗａｒｄ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ．，
” Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ １９９９， ９６， １
００６８－１００７３；あるいは、Ｗｕ， ｅｔ ａｌ． “Ｂｕｉｌｄｉｎｇ ｃｏｍ
ｐｌｅｘ ｇｌｙｃｏｐｅｐｔｉｄｅｓ： Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｃｙｓ
ｔｅｉｎｅ－ｆｒｅｅ ｎａｔｉｖｅ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｌｉｇａｔｉｏｎ ｐｒｏｔ
ｏｃｏｌ，” Ａｎｇｅｗ． Ｃｈｅｍ． Ｉｎｔ． Ｅｄ． ２００６， ４５， ４
１１６－４１２５。いくつかの例では、結合は米国特許第８，９３６，９１０号に記載さ
れるとおりである。いくつかの実施形態において、ポリ核酸分子は、天然のライゲーショ
ン化学を介して、結合部分に部位特異的あるいは非特異的に結合される。
いくつかの例では、ポリ核酸分子は、「トレースレス（ｔｒａｃｅｌｅｓｓ）」カップ
リング技術（ＰｈｉｌｏＣｈｅｍ）を利用する部位指定的な方法によって結合部分に結合
される。いくつかの例では、「トレースレス」カップリング技術は、アルデヒド基を含む
ポリ核酸分子とその後結合される結合部分のＮ末端 １，２－アミノチオール基を利用す
る。（ｓｅｅ Ｃａｓｉ ｅｔ ａｌ．， “Ｓｉｔｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｔｒａｃｅ
ｌｅｓｓ ｃｏｕｐｌｉｎｇ ｏｆ ｐｏｔｅｎｔ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ｄｒｕｇｓ
ｔｏ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ ｐｈａｒｍａｃｏｄｅ
ｌｉｖｅｒｙ，” ＪＡＣＳ １３４（１３）： ５８８７－５８９２ （２０１２）を
参照）
いくつかの例では、ポリ核酸分子は、結合部分に組み込まれた非天然のアミノ酸を利用
する部位指定的な方法によって結合部分に結合される。いくつかの例では、非天然アミノ
酸はｐ－アセチルフェニルアラニン（ｐＡｃＰｈｅ）を含む。いくつかの例では、ｐＡｃ
Ｐｈｅのケト基は、オキシム結合を形成するために、アルコキシ－アミン由来の結合部分
に選択的に結合される。（Ａｘｕｐ ｅｔ ａｌ．， “Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｓ
ｉｔｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｕｓ
ｉｎｇ ｕｎｎａｔｕｒａｌ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ，” ＰＮＡＳ １０９（４０）
： １６１０１－１６１０６ （２０１２））を参照）。
いくつかの例では、ポリ核酸分子は、酵素触媒プロセスを利用する部位指定的な方法に
よって結合部分に結合される。いくつかの例では、部位指定的な方法はＳＭＡＲＴａｇ（
商標）技術（Ｒｅｄｗｏｏｄ）を利用する。いくつかの例では、ＳＭＡＲＴａｇ（商標）
技術は、アルデヒドタグの存在下での酸化プロセスを介するホルミルグリシン生成酵素（
ＦＧＥ）によるシステインからのホルミルグリシン（ＦＧｌｙ）残留物の生成、および、
ヒドラジノ－Ｐｉｃｔｅｔ－Ｓｐｅｎｇｌｅｒ（ＨＩＰＳ）ライゲーションを介するアル
キルヒドラジン機能化ポリ核酸分子へのＦＧｌｙのその後の結合を含む。（Ｗｕ ｅｔ
ａｌ．， “Ｓｉｔｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏ
ｎ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｉｎ ｍａ
ｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ ｅ
ｎｃｏｄｅｄ ａｌｄｅｈｙｄｅ ｔａｇ，” ＰＮＡＳ １０６（９）： ３０００－
３００５ （２００９）； Ａｇａｒｗａｌ， ｅｔ ａｌ．， ”Ａ Ｐｉｃｔｅｔ－
Ｓｐｅｎｇｌｅｒ ｌｉｇａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｍ
ｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ，” ＰＮＡＳ １１０（１）： ４６－５１ （２０１３）を
参照）
いくつかの例では、酵素触媒プロセスは、微生物トランスグルタミナーゼ（ｍＴＧ）を
含む。いくつかの例では、ポリ核酸分子は、微生物トランスグルタミナーゼ触媒プロセス
を用いて結合部分に結合される。いくつかの例では、ｍＴＧは、認識配列内のグルタミン
のアミド側鎖と機能化されたポリ核酸分子の一級アミンとの間の共有結合の形成を触媒す
る。いくつかの例では、ｍＴＧはストレプトマイセス・モバラエンシス（Ｓｔｒｅｐｔｏ
ｍｙｃｅｓ ｍｏｂａｒｅｎｓｉｓ）から産生される。（Ｓｔｒｏｐ ｅｔ ａｌ．，“
Ｌｏｃａｔｉｏｎ ｍａｔｔｅｒｓ： ｓｉｔｅ ｏｆ ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ｍｏ
ｄｕｌａｔｅｓ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏ
ｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ，”Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎ
ｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２０（２） １６１－１６７ （２０１３）を参照）
いくつかの例では、ポリ核酸分子は、配列に特異的なトランスペプチダーゼを利用する
、ＰＣＴ公開公報第ＷＯ２０１４／１４０３１７号に記載される方法によって結合部分に
結合される。
いくつかの例では、ポリ核酸分子は、米国特許公報第２０１５／０１０５５３９号およ
び第２０１５／０１０５５４０号に記載される方法によって結合部分に結合される。
抗体あるいはその結合フラグメントの産生
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるポリペプチド（例えば、抗体とそ
の結合フラグメント）は、ポリペプチド（例えば抗体）の合成に有用な当該技術分野で知
られている任意の方法を使用して、特に化学合成によって、あるいは組換え発現によって
生成され、および、好ましくは組換え体発現技術によって生成される。
いくつかの例では、抗体あるいはその結合フラグメントは組み換えで発現され、および
、抗体またはその結合フラグメントをコードする核酸は、化学的に合成されたオリゴヌク
レオチド（例えば、Ｋｕｔｍｅｉｅｒ ｅｔ ａｌ．， １９９４， ＢｉｏＴｅｃｈｎ
ｉｑｕｅｓ １７：２４２に記載される）から組み立てられ、それは、抗体をコードする
配列の部分を含有するオリゴヌクレオチドをオーバーラップする合成、それらのオリゴヌ
クレオチドのアニーリングおよびライゲーション、その後の、ライゲートされたオリゴヌ
クレオチドのＰＣＲによる増幅に関与する。
代替的に、抗体をコードする核酸分子は、配列の３’と５’の末端へハイブリダイズす
ることができる合成プライマーを使用するＰＣＲ増幅によって、あるいは特定の遺伝子配
列に特異的なオリゴヌクレオチドプローブを使用してクローンを作ることによって、適切
なソース（例えば、抗体ｃＤＮＡライブラリ、あるいは免疫グロブリンを発現する任意の
組織あるいは細胞から生成されたｃＤＮＡライブラリ）から随意に生成される。
いくつかの例では、抗体またはその結合は、ポリクローナル抗体を生成するためにウサ
ギなどの動物を免疫化することにより、あるいは、より好ましくは、例えばＫｏｈｌｅｒ
ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ （１９７５， Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５－４９７）
によって記載される、あるいは、Ｋｏｚｂｏｒ ｅｔ ａｌ． （１９８３， Ｉｍｍ
ｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ ４：７２）またはＣｏｌｅ ｅｔ ａｌ． （１９８５
ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ
ａｐｙ， Ａｌａｎ Ｒ． Ｌｉｓｓ， Ｉｎｃ．， ｐｐ． ７７－９６）によって記
載されるようなモノクローナル抗体を生成することによって、随意に生成される。代替的
に、少なくとも抗体のＦａｂ部分をコードするクローンは、特異性抗原に結合するＦＡｂ
フラグメントのクローンのためにＦａｂ発現ライブラリ（例えば、Ｈｕｓｅ ｅｔ ａｌ
．， １９８９， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５－１２８１に記載される）をスク
リーニングすることにより、あるいは抗体ライブラリ（Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．
， １９９１， Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４； Ｈａｎｅ ｅｔ ａｌ．， １９９
７ Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ９４：４９３７を参照）
をスクリーニングすることにより、随意に得られる。
いくつかの実施形態において、適切な生物学的活性のヒト抗体分子の遺伝子と一緒に、
適切な抗原特異性のマウス抗体分子からの遺伝子をスプライシングすることにより、「キ
メラ抗体」（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， １９８４， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ８１：８５１－８５５； Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．
， １９８４， Ｎａｔｕｒｅ ３１２：６０４－６０８； Ｔａｋｅｄａ ｅｔ ａｌ
．， １９８５， Ｎａｔｕｒｅ ３１４：４５２－４５４）を生成するために開発され
た技術が使用される。キメラ抗体は、異なる部分が、マウスのモノクローナル抗体に由来
する可変領域、およびヒト免疫グロブリン定常領域（例えば、ヒト化抗体）を有する動物
種などの様々な動物種に由来する分子である。
いくつかの実施形態において、単鎖抗体（米国特許第４，６９４，７７８号； Ｂｉｒ
ｄ， １９８８， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２； Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａ
ｌ．， １９８８， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８５：
５８７９－５８８３；およびＷａｒｄ ｅｔ ａｌ．， １９８９， Ｎａｔｕｒｅ ３
３４：５４４－５４）の生成のために記載される技術は、単鎖抗体を生成するのに適して
いる。単鎖抗体は、アミノ酸ブリッジによってＦｖ領域の重鎖または軽鎖のフラグメント
を結合することによって形成され、結果として単鎖ポリペプチドを生じさせる。大腸菌中
の機能的なＦｖフラグメントの組み立てのための技術も随意に使用される（Ｓｋｅｒｒａ
ｅｔ ａｌ．， １９８８， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：１０３８－１０４１）。
いくつかの実施形態において、抗体のヌクレオチド配列を含む発現ベクターあるいは抗
体のヌクレオチド配列は、従来の技術（例えば、エレクトロポレーション、リポソームト
ランスフェクション、およびリン酸カルシウム沈澱反応）によって宿主細胞に導入され、
その後、トランスフェクトされた細胞は、抗体を生成するために従来の技術によって培養
される。特定の実施形態では、抗体の発現は、構成的、誘導可能、あるいは組織特異的な
プロモーターによって調節される。
いくつかの実施形態において、様々な宿主発現ベクター系は、本明細書に記載される抗
体またはその結合フラグメントを発現するために利用される。そのような宿主発現系は、
抗体のコード配列が生成され、その後精製されるビヒクルを表すだけでなく、適切なヌク
レオチドコード配列で変形されるか、あるいはトランスフェクトされるときに、抗体また
はその結合フラグメントをインサイチュで発現する細胞も表す。これらは、限定されない
が、組み換え体バクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、あるいは抗体またはその
結合フラグメントコード配列を含むコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された細菌（
例えば、大腸菌と枯草菌）などの微生物；抗体あるいはその結合フラグメントコード配列
を含む組換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母（例えば、サッカロミケス・ピキア
）；抗体あるいはその結合フラグメントコード配列を含む組替えウイルス発現ベクターに
感染した昆虫細胞系（例えばバキュロウィルス）；組換えウイルス発現ベクター（例えば
、カリフラワーモザイクウイルス（ＣａＭＶ）およびタバコモザイクウイルス（ＴＭＶ）
）に感染した、または、抗体あるいはその結合フラグメントコード配列を含む組換えプラ
スミド発現ベクター（例えば、Ｔｉプラスミド）で形質転換された植物細胞系；あるいは
、哺乳動物細胞（例えば、メタロチオネイン・プロモーター）のゲノム、あるいは、哺乳
動物ウイルス（例えば、アデノウイルス後期プロモーター；ワクシニアウイルス７．５Ｋ
プロモーター）に由来するプロモーターを含む、組換え発現構築物を保護する哺乳動物細
胞系（例えば、ＣＯＳ、ＣＨＯ、ＢＨ、２９３、２９３Ｔ、３Ｔ３細胞）を含む。
組換え型タンパク質の長期的かつ高収率の生成のためには、安定した発現が好ましい。
いくつかの例では、安定して抗体を発現する細胞株が随意に操作される。ウイルスの複製
開始点を含む発現ベクターを使用するのではなく、宿主細胞は、適切な発現制御要素（例
えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位な
ど）および選択可能なマーカーによって制御されたＤＮＡで形質転換される。外来性ＤＮ
Ａの導入後に、細胞を操作して栄養強化培地で１－２日間成長させ、その後、選択培地に
切り替える。組換えプラスミドにおける選択可能なマーカーは、選択に対する耐性を与え
、細胞が、プラスミドをその染色体に安定的に統合させ、成長し、クローン化されて細胞
株へと拡張するフォーカスを形成するのを可能にする。この方法は、抗体またはその結合
フラグメントを発現する細胞株を操作するために有利に使用することができる。
いくつかの例では、限定されないが、それぞれｔｋ細胞、ｈｇｐｒｔ細胞、あるいはａ
ｐｒｔ細胞で採用される単純疱疹ウイルス・チミジンキナーゼ（Ｗｉｇｌｅｒ ｅｔ ａ
ｌ．， １９７７， Ｃｅｌｌ １１：２２３）、ヒポキサンチン－グアニンホスホリボ
シルトランスフェラーゼ（Ｓｚｙｂａｌｓｋａ ＆ Ｓｚｙｂａｌｓｋｉ， １９２，
Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ４８：２０２）、およびアデ
ニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏｗｙ ｅｔ ａｌ．， １９８０， Ｃｅ
ｌｌ ２２：８１７）遺伝子を含む、多くの選択系が使用される。同様に、代謝拮抗薬の
耐性は、以下の遺伝子の選定基準として使用される：メトトレキサートに対する耐性を与
えるｄｈｆｒ（Ｗｉｇｌｅｒ ｅｔ ａｌ．， １９８０， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ７７：３５７； Ｏ’Ｈａｒｅ ｅｔ ａｌ．， １９
８１， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ７８：１５２７）；
ミコフェノール酸に対する耐性を与えるｇｐｔ（Ｍｕｌｌｉｇａｎ ＆ Ｂｅｒｇ， １
９８１， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ７８：２０７２）
；アミノグリコシドＧ－４１８に対する耐性を与えるｎｅｏ（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａ
ｒｍａｃｙ １２：４８８－５０５； Ｗｕ ａｎｄ Ｗｕ， １９９１， Ｂｉｏｔｈ
ｅｒａｐｙ ３：８７－９５； Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ， １９９３， Ａｎｎ． Ｒｅ
ｖ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． Ｔｏｘｉｃｏｌ． ３２：５７３－５９６； Ｍｕｌｌｉ
ｇａｎ， １９９３， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６０：９２６－９３２；およびＭｏｒｇａｎ
ａｎｄ Ａｎｄｅｒｓｏｎ， １９９３， Ａｎｎ． Ｒｅｖ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．
６２：１９１－２１７；Ｍａｙ， １９９３， ＴＩＢ ＴＥＣＨ １１（５）：１５５
－２１５）、ならびに、ヒグロマイシンに対する耐性を与えるｈｙｇｒｏ（Ｓａｎｔｅｒ
ｒｅ ｅｔ ａ ｌ．， １９８４， Ｇｅｎｅ ３０：１４７）。使用可能な組換えＤ
ＮＡ技術の当該技術分野で知られている既知の方法は一般に、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａ
ｌ． （ｅｄｓ．， １９９３， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， ＮＹ； Ｋ
ｒｉｅｇｌｅｒ， １９９０， Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓ
ｉｏｎ， Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ
， ＮＹ； ａｎｄ ｉｎ Ｃｈａｐｔｅｒｓ １２ ａｎｄ １３， Ｄｒａｃｏｐｏ
ｌｉ ｅｔ ａｌ． （ｅｄｓ）， １９９４， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ
ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， Ｎ
Ｙ．； Ｃｏｌｂｅｒｒｅ－Ｇａｒａｐｉｎ ｅｔ ａｌ．， １９８１， Ｊ． Ｍｏ
ｌ． Ｂｉｏｌ． １５０：１）に記載される。
いくつかの例では、抗体の発現レベルはベクター増幅によって増大する（レビューのた
めに、Ｂｅｂｂｉｎｇｔｏｎ ａｎｄ Ｈｅｎｔｓｃｈｅｌ， Ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ
ｖｅｃｔｏｒｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｇｅｎｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｆｏｒ
ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｌｏｎｅｄ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｍａｍｍａｌ
ｉａｎ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ＤＮＡ ｃｌｏｎｉｎｇ， Ｖｏｌ． ３． （Ａｃａｄｅ
ｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９８７を参照）。抗体を発現するベクタ
ー系におけるマーカーが増幅可能である場合、宿主細胞の培養物中に存在する阻害剤のレ
ベルが増大すると、標識遺伝子のコピーの数が増大する。増幅した領域が抗体のヌクレオ
チド配列に関連しているため、抗体の産生も増加する（Ｃｒｏｕｓｅ ｅｔ ａｌ．，
１９８３， Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ． ３：２５７）。
いくつかの例では、抗体または抗体抱合体の精製あるいは分析のための当該技術分野で
既知の任意の方法が使用され、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、親和
性、とりわけ、プロテインＡの後の特異性抗原への親和性、および、サイジングカラムク
ロマトグラフィー）、遠心分離、差次的溶解性、あるいはタンパク質の精製のための他の
標準的な技術による方法が使用される。例示的なクロマトグラフィー方法としては、限定
されないが、強力な陰イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィ
ー、サイズ排除クロマトグラフィー、および高速タンパク質液体クロマトグラフィーが挙
げられる。
ポリマー結合部分
いくつかの実施形態において、ポリマー部分Ｃは、本明細書に記載されるポリ核酸分子
、本明細書に記載される結合部分、あるいはこれらの組み合わせにさらに結合される。い
くつかの例では、ポリマー部分Ｃはポリ核酸分子に結合される。場合によっては、ポリマ
ー部分Ｃは結合部分に結合される。他の場合には、ポリマー部分Ｃはポリ核酸分子結合部
分分子に結合される。さらなる場合には、ポリマー部分Ｃは上で例証されるように結合さ
れる。
いくつかの例では、ポリマー部分Ｃは分枝したあるいは分枝していない単量体、および
／または、二次元または三次元の単量体の架橋したネットワークの長鎖からなる、天然ま
たは合成のポリマーである。いくつかの例では、ポリマー部分Ｃは多糖、リグニン、ゴム
、あるいはポリアルキルエンオキシド（例えば、ポリエチレングリコール）を含む。いく
つかの例では、少なくとも１つのポリマー部分Ｃとしては、限定されないが、アルファ－
ジヒドロキシルポリエチレングリコール、オメガ－ジヒドロキシルポリエチレングリコー
ル、生物分解性ラクトンベースのポリマー、例えば、ポリアクリル酸、ポリラクチド酸（
ＰＬＡ）、ポリ（グリコール酸）（ＰＧＡ）、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリオレ
フィン、ポリアミド、ポリシアノアクリレート、ポリイミド、ポリエチレンテレフタレー
ト（ＰＥＴ、ＰＥＴＧ）、ポリエチレン・テレフタレート（ＰＥＴＥ）、ポリテトラメチ
レン・グリコール（ＰＴＧ）、あるいはポリウレタン、およびこれらの混合物が挙げられ
る。本明細書で使用されるように、混合物は、ブロックコポリマーに関連する場合と同様
に、同じ化合物内の様々なポリマーの使用を指す。場合によっては、ブロックコポリマー
は、ポリマーの少なくとも１つの部分が別のポリマーの単量体から構築されるポリマーで
ある。いくつかの例では、ポリマー部分Ｃはポリアルキレンオキシドを含む。いくつかの
例では、ポリマー部分ＣはＰＥＧを含む。いくつかの例では、ポリマー部分Ｃはポリエチ
レン・イミド（ＰＥＩ）またはヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）を含む。
いくつかの例では、ＣはＰＥＧ部分である。いくつかの例では、ＰＥＧ部分はポリ核酸
分子の５’末端で結合されるが、結合部分はポリ核酸分子の３’末端で結合される。いく
つかの例では、ＰＥＧ部分はポリ核酸分子の３’末端で結合されるが、結合部分はポリ核
酸分子の５’末端で結合される。いくつかの例では、ＰＥＧ部分はポリ核酸分子の内部部
位に結合される。いくつかの例では、ＰＥＧ部分、結合部分、あるいはその組み合わせは
、ポリ核酸分子の内部部位に結合される。いくつかの例において、抱合体は直接抱合体で
ある。いくつかの例では、結合は天然のライゲーションを介する。
いくつかの実施形態において、ポリアルキレンオキシド（例えば、ＰＥＧ）は多分散ま
たは単分散の化合物である。いくつかの例では、多分散材料は、平均重量（重量平均）サ
イズおよび分散度を特徴とする、異なる分子量の材料の分散した分布を含む。いくつかの
例では、単分散のＰＥＧは１つのサイズの分子を含む。いくつかの実施形態において、Ｃ
は多分散または単分散のポリアルキレンオキシド（例えば、ＰＥＧ）であり、示された分
子量は、ポリアルキレンオキシド（例えば、ＰＥＧ）分子の分子量の平均を表す。
いくつかの実施形態において、ポリアルキレンオキシド（例えば、ＰＥＧ）の分子量は
、約２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１
１００、１２００、１３００、１４００、１４５０、１５００、１６００、１７００、１
８００、１９００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２
６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３２５０、３３５０、３５００、３
７５０、４０００、４２５０、４５００、４６００、４７５０、５０００、５５００、６
０００、６５００、７０００、７５００、８０００、１０，０００、１２，０００、２０
，０００、３５，０００、４０，０００、５０，０００、６０，０００、あるいは１００
，０００Ｄａである。
いくつかの実施形態において、Ｃはポリアルキレンオキシド（例えば、ＰＥＧ）であり
、約２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１
１００、１２００、１３００、１４００、１４５０、１５００、１６００、１７００、１
８００、１９００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２
６００、２７００、２８００、２９００、３０００、３２５０、３３５０、３５００、３
７５０、４０００、４２５０、４５００、４６００、４７５０、５０００、５５００、６
０００、６５００、７０００、７５００、８０００、１０，０００、１２，０００、２０
，０００、３５，０００、４０，０００、５０，０００、６０，０００、あるいは１００
，０００Ｄａの分子量を有する。いくつかの実施形態において、ＣはＰＥＧであり、約２
００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１１００
、１２００、１３００、１４００、１４５０、１５００、１６００、１７００、１８００
、１９００、２０００、２１００、２２００、２３００、２４００、２５００、２６００
、２７００、２８００、２９００、３０００、３２５０、３３５０、３５００、３７５０
、４０００、４２５０、４５００、４６００、４７５０、５０００、５５００、６０００
、６５００、７０００、７５００、８０００、１０，０００、１２，０００、２０，００
０、３５，０００、４０，０００、５０，０００、６０，０００、あるいは１００，００
０Ｄａの分子量を有する。いくつかの例では、Ｃの分子量は約２００Ｄａである。いくつ
かの例では、Ｃの分子量は約３００Ｄａである。いくつかの例では、Ｃの分子量は約４０
０Ｄａである。いくつかの例では、Ｃの分子量は約５００Ｄａである。いくつかの例では
、Ｃの分子量は約６００Ｄａである。いくつかの例では、Ｃの分子量は約７００Ｄａであ
る。いくつかの例では、Ｃの分子量は約８００Ｄａである。いくつかの例では、Ｃの分子
量は約９００Ｄａである。いくつかの例では、Ｃの分子量は約１０００Ｄａである。いく
つかの例では、Ｃの分子量は約１１００Ｄａである。いくつかの例では、Ｃの分子量は約
１２００Ｄａである。いくつかの例では、Ｃの分子量は約１３００Ｄａである。いくつか
の例では、Ｃの分子量は約１４００Ｄａである。いくつかの例では、Ｃの分子量は約１４
５０Ｄａである。いくつかの例では、Ｃの分子量は約１５００Ｄａである。いくつかの例
では、Ｃの分子量は約１６００Ｄａである。いくつかの例では、Ｃの分子量は約１７００
Ｄａである。いくつかの例では、Ｃの分子量は約１８００Ｄａである。いくつかの例では
、Ｃの分子量は約１９００Ｄａである。いくつかの例では、Ｃの分子量は約２０００Ｄａ
である。いくつかの例では、Ｃの分子量は約２１００Ｄａである。いくつかの例では、Ｃ
の分子量は約２２００Ｄａである。いくつかの例では、Ｃの分子量は約２３００Ｄａであ
る。いくつかの例では、Ｃの分子量は約２４００Ｄａである。いくつかの例では、Ｃの分
子量は約２５００Ｄａである。いくつかの例では、Ｃの分子量は約２６００Ｄａである。
いくつかの例では、Ｃの分子量は約２７００Ｄａである。いくつかの例では、Ｃの分子量
は約２８００Ｄａである。いくつかの例では、Ｃの分子量は約２９００Ｄａである。いく
つかの例では、Ｃの分子量は約３０００Ｄａである。いくつかの例では、Ｃの分子量は約
３２５０Ｄａである。いくつかの例では、Ｃの分子量は約３３５０Ｄａである。いくつか
の例では、Ｃの分子量は約３５００Ｄａである。いくつかの例では、Ｃの分子量は約３７
５０Ｄａである。いくつかの例では、Ｃの分子量は約４０００Ｄａである。いくつかの例
では、Ｃの分子量は約４２５０Ｄａである。いくつかの例では、Ｃの分子量は約４５００
Ｄａである。いくつかの例では、Ｃの分子量は約４６００Ｄａである。いくつかの例では
、Ｃの分子量は約４７５０Ｄａである。いくつかの例では、Ｃの分子量は約５０００Ｄａ
である。いくつかの例では、Ｃの分子量は約５５００Ｄａである。いくつかの例では、Ｃ
の分子量は約６０００Ｄａである。いくつかの例では、Ｃの分子量は約６５００Ｄａであ
る。いくつかの例では、Ｃの分子量は約７０００Ｄａである。いくつかの例では、Ｃの分
子量は約７５００Ｄａである。いくつかの例では、Ｃの分子量は約８０００Ｄａである。
いくつかの例では、Ｃの分子量は約１０，０００Ｄａである。いくつかの例では、Ｃの分
子量は約１２，０００Ｄａである。いくつかの例では、Ｃの分子量は約２０，０００Ｄａ
である。いくつかの例では、Ｃの分子量は約３５，０００Ｄａである。いくつかの例では
、Ｃの分子量は約４０，０００Ｄａである。いくつかの例では、Ｃの分子量は約５０，０
００Ｄａである。いくつかの例では、Ｃの分子量は約６０，０００Ｄａである。いくつか
の例では、Ｃの分子量は約１００，０００Ｄａである。
いくつかの実施形態において、ポリアルキレンオキシド（例えば、ＰＥＧ）は、分散Ｐ
ＥＧであり、分散ＰＥＧは、１以上の反復エチレンオキサイド単位を含む高分子ＰＥＧで
ある。いくつかの例では、分散ＰＥＧ（ｄＰＥＧ）は、２～６０、２～５０、あるいは２
～４８の反復エチレンオキサイド単位を含む。いくつかの例では、ｄＰＥＧは、約２、３
、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、
１９、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３５、４０、４２、４８、５０、またはそ
れ以上を含む。いくつかの例では、ｄＰＥＧは約２以上の反復エチレンオキサイド単位を
含む。いくつかの例では、ｄＰＥＧは約３以上の反復エチレンオキサイド単位を含む。い
くつかの例では、ｄＰＥＧは約４以上の反復エチレンオキサイド単位を含む。いくつかの
例では、ｄＰＥＧは約５以上の反復エチレンオキサイド単位を含む。いくつかの例では、
ｄＰＥＧは約６以上の反復エチレンオキサイド単位を含む。いくつかの例では、ｄＰＥＧ
は約７以上の反復エチレンオキサイド単位を含む。いくつかの例では、ｄＰＥＧは約８以
上の反復エチレンオキサイド単位を含む。いくつかの例では、ｄＰＥＧは約９以上の反復
エチレンオキサイド単位を含む。いくつかの例では、ｄＰＥＧは約１０以上の反復エチレ
ンオキサイド単位を含む。いくつかの例では、ｄＰＥＧは約１１以上の反復エチレンオキ
サイド単位を含む。いくつかの例では、ｄＰＥＧは約１２以上の反復エチレンオキサイド
単位を含む。いくつかの例では、ｄＰＥＧは約１３以上の反復エチレンオキサイド単位を
含む。いくつかの例では、ｄＰＥＧは約１４以上の反復エチレンオキサイド単位を含む。
いくつかの例では、ｄＰＥＧは約１５以上の反復エチレンオキサイド単位を含む。いくつ
かの例では、ｄＰＥＧは約１６以上の反復エチレンオキサイド単位を含む。いくつかの例
では、ｄＰＥＧは約１７以上の反復エチレンオキサイド単位を含む。いくつかの例では、
ｄＰＥＧは約１８以上の反復エチレンオキサイド単位を含む。いくつかの例では、ｄＰＥ
Ｇは約１９以上の反復エチレンオキサイド単位を含む。いくつかの例では、ｄＰＥＧは約
２０以上の反復エチレンオキサイド単位を含む。いくつかの例では、ｄＰＥＧは約２２以
上の反復エチレンオキサイド単位を含む。いくつかの例では、ｄＰＥＧは約２４以上の反
復エチレンオキサイド単位を含む。いくつかの例では、ｄＰＥＧは約２６以上の反復エチ
レンオキサイド単位を含む。いくつかの例では、ｄＰＥＧは約２８以上の反復エチレンオ
キサイド単位を含む。いくつかの例では、ｄＰＥＧは約３０以上の反復エチレンオキサイ
ド単位を含む。いくつかの例では、ｄＰＥＧは約３５以上の反復エチレンオキサイド単位
を含む。いくつかの例では、ｄＰＥＧは約４０以上の反復エチレンオキサイド単位を含む
。いくつかの例では、ｄＰＥＧは約４２以上の反復エチレンオキサイド単位を含む。いく
つかの例では、ｄＰＥＧは約４８以上の反復エチレンオキサイド単位を含む。いくつかの
例では、ｄＰＥＧは約５０以上の反復エチレンオキサイド単位を含む。場合によっては、
ｄＰＥＧは、純粋な（例えば、約９５％、９８％、９９％、あるいは９９．５％）出発物
質から単一の分子量化合物として段階的に合成される。場合によっては、ｄＰＥＧは平均
分子量ではなく、特定の分子量を有する。場合によっては、本明細書に記載されるｄＰＥ
ＧはＱｕａｎｔａ Ｂｉｏｄｅｓｉｇｎ， ＬＭＤのｄＰＥＧである。
いくつかの実施形態において、ポリマー部分Ｃはカチオン性ムチン酸ベースのポリマー
（ｃＭＡＰ）を含む。いくつかの例では、ｃＭＡＰは、少なくとも１つの反復サブユニッ
トの１つ以上のサブユニットを含み、サブユニット構造は式（Ｖ）として表される：
式中、ｍは、各出現時、独立して１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０、
好ましくは、４－６、あるいは５であり；および、ｎは、各出現時、独立して、１、２、
３、４、または５である。いくつかの実施形態において、ｍとｎは、例えば、約１０であ
る。
いくつかの例では、ｃＭＡＰはＰＥＧ部分にさらに結合され、ｃＭＡＰ－ＰＥＧコポリ
マー、ｍＰＥＧ－ｃＭＡＰ－ＰＥＧｍトリブロックポリマー、あるいはｃＭＡＰ－ＰＥＧ
－ｃＭＡＰトリブロックポリマーを生成する。いくつかの例では、ＰＥＧ部分は約５００
Ｄａ～約５０，０００Ｄａの範囲である。いくつかの例では、ＰＥＧ部分は、約５００Ｄ
ａ～約１０００Ｄａ、１０００Ｄａより大きい～約５０００Ｄａ、５０００Ｄａより大き
い～約１０，０００Ｄａ、１０，０００より大きい～約２５，０００Ｄａ、２５，０００
Ｄａより大きい～約５０，０００Ｄａ、あるいはこれらの範囲の２つ以上の任意の組み合
わせである。
いくつかの例では、ポリマー部分Ｃは、ｃＭＡＰ－ＰＥＧコポリマー、ｍＰＥＧ－ｃＭ
ＡＰ－ＰＥＧｍトリブロックポリマー、あるいはｃＭＡＰ－ＰＥＧ－ｃＭＡＰトリブロッ
クポリマーである。場合によっては、ポリマー部分ＣはｃＭＡＰ－ＰＥＧコポリマーであ
る。他の場合には、ポリマー部分ＣはｍＰＥＧ－ｃＭＡＰ－ＰＥＧｍトリブロックポリマ
ーである。さらなる場合には、ポリマー部分ＣはｃＭＡＰ－ＰＥＧ－ｃＭＡＰトリブロッ
クポリマーである。
いくつかの実施形態において、ポリマー部分Ｃは、上で例証されるように、ポリ核酸分
子、結合部分、および、随意にエンドソーム溶解性部分に結合される。
エンドソーム溶解性部分
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）：Ａ－Ｘ－Ｂ－Ｙ－Ｃの分子は追加の抱合部分
をさらに含む。いくつかの例では、追加の結合部分はエンドソーム溶解性部分である。場
合によっては、エンドソーム溶解性部分は、細胞区画放出成分、例えば、エンドソーム、
リソソーム、小胞体（ＥＲ）、ゴルジ体、微小管、ペルオキシソーム、あるいは細胞を有
する他の小胞体などの、当該技術分野で知られている細胞の区分のいずれかから放出する
ことができる化合物である。場合によっては、エンドソーム溶解性部分は、エンドソーム
溶解性ポリペプチド、エンドソーム溶解性ポリマー、エンドソーム溶解性脂質、あるいは
エンドソーム溶解性小分子を含む。場合によっては、エンドソーム溶解性部分はエンドソ
ーム溶解性ポリペプチドを含む。他の場合では、エンドソーム溶解性部分はエンドソーム
溶解性ポリマーを含む。
エンドソーム溶解性ポリペプチド
いくつかの実施形態において、式（Ｉ）：Ａ－Ｘ－Ｂ－Ｙ－Ｃの分子はエンドソーム溶
解性ポリペプチドとさらに結合される。いくつかの実施形態において、式（Ｖ）：Ａ－（
Ｘ１－Ｂ）ｎあるいは式（ＩＩ）：Ａ－Ｘ１－（Ｂ－Ｘ２－Ｃ）ｎの分子は、エンドソー
ム溶解性ポリペプチドとさらに結合する。場合によっては、エンドソーム溶解性ポリペプ
チドはｐＨ依存性膜活性ペプチドである。場合によっては、エンドソーム溶解性ポリペプ
チドは両親媒性ポリペプチドである。追加の場合には、エンドソーム溶解性ポリペプチド
はペプチド模倣薬である。いくつかの例では、エンドソーム溶解性ポリペプチドは、ＩＮ
Ｆ、メリチン、ムチン（ｍｅｕｃｉｎ）、あるいはそのそれぞれの誘導体を含む。いくつ
かの例では、エンドソーム溶解性ポリペプチドは、ＩＮＦまたはその誘導体を含む。他の
場合には、エンドソーム溶解性ポリペプチドは、メリチンまたはその誘導体を含む。さら
なる場合には、エンドソーム溶解性ポリペプチドは、ムチンまたはその誘導体を含む。
いくつかの例では、ＩＮＦ７は２４残留物ポリペプチドであり、これらの配列は、ＣＧ
ＩＦＧＥＩＥＥＬＩＥＥＧＬＥＮＬＩＤＷＧＮＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）、あるいは
ＧＬＦＥＡＩＥＧＦＩＥＮＧＷＥＧＭＩＤＧＷＹＧＣ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）を含む
。いくつかの例では、ＩＮＦ７またはその誘導体は、以下の配列を含む：ＧＬＦＥＡＩＥ
ＧＦＩＥＮＧＷＥＧＭＩＷＤＹＧＳＧＳＣＧ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ３）、ＧＬＦＥ
ＡＩＥＧＦＩＥＮＧＷＥＧＭＩＤＧ ＷＹＧ－（ＰＥＧ）６－ＮＨ２ （ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ： ４）、または ＧＬＦＥＡＩＥＧＦＩＥＮＧＷＥＧＭＩＷＤＹＧ－ＳＧＳＣ－Ｋ
（ＧａｌＮＡｃ）２ （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５）。
場合によっては、メリチンは２６残基ポリペプチドであり、この配列は、ＣＬＩＧＡＩ
ＬＫＶＬＡＴＧＬＰＴＬＩＳＷＩＫＮＫＲＫＱ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）、あるいはＧ
ＩＧＡＶＬＫＶＬＴＴＧＬＰＡＬＩＳＷＩＫＲＫＲＱＱ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）を含
む。いくつかの例では、メリチンは、米国特許第８，５０１，９３０号に記載されるポリ
ペプチド配列を含む。
いくつかの例では、ムチンは、サソリ（Ｍｅｓｏｂｕｔｈｕｓ ｅｕｐｅｕｓ）の毒液
腺に由来する抗菌ペプチド（ＡＭＰ）である。いくつかの例では、ムチンはムチン－１３
（これらの配列は、ＩＦＧＡＩＡＧＬＬＫＮＩＦ－ＮＨ２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）を
含む）およびムチン－１８（これらの配列は、ＦＦＧＨＬＦＫＬＡＴＫＩＩＰＳＬＦＱ（
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）を含む）から構成される。
いくつかの例では、エンドソーム溶解性ポリペプチドは、配列がＩＮＦ７あるいはその
誘導体、メリチンあるいはその誘導体、または、ムチンあるいはその誘導体に対して、少
なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、あるいは９９％の配列同一
性であるポリペプチドを含む。いくつかの例では、エンドソーム溶解性部分は、ＩＮＦ７
またはその誘導体、メリチンまたはその誘導体、あるいはムチンまたはその誘導体を含む
。
いくつかの例では、エンドソーム溶解性部分はＩＮＦ７またはその誘導体である。いく
つかの例では、エンドソーム溶解性部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１－５に対して少なく
とも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５
％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一性を有するポリペプ
チドを含む。いくつかの例では、エンドソーム溶解性部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に
対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、
９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一性を有
するポリペプチドを含む。いくつかの例では、エンドソーム溶解性部分は、ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：２－５に対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、
８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％
の配列同一性を有するポリペプチドを含む。場合によっては、エンドソーム溶解性部分は
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１を含む。場合によっては、エンドソーム溶解性部分はＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：２－５を含む。場合によっては、エンドソーム溶解性部分はＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：１からなる。場合によっては、エンドソーム溶解性部分はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２－
５からなる。
いくつかの例では、エンドソーム溶解性部分はメリチンまたはその誘導体である。いく
つかの例では、エンドソーム溶解性部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６または７に対して少
なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、
９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一性を有するポリ
ペプチドを含む。いくつかの例では、エンドソーム溶解性部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
６に対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５
％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一性
を有するポリペプチドを含む。いくつかの例では、エンドソーム溶解性部分は、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：７に対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、
８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％
の配列同一性を有するポリペプチドを含む。場合によっては、エンドソーム溶解性部分は
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６を含む。場合によっては、エンドソーム溶解性部分はＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：７を含む。場合によっては、エンドソーム溶解性部分はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
６からなる。場合によっては、エンドソーム溶解性部分はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７からな
る。
いくつかの例では、エンドソーム溶解性部分はムチンまたはその誘導体である。いくつ
かの例では、エンドソーム溶解性部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８または９に対して少な
くとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９
５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一性を有するポリペ
プチドを含む。いくつかの例では、エンドソーム溶解性部分は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８
に対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％
、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の配列同一性を
有するポリペプチドを含む。いくつかの例では、エンドソーム溶解性部分は、ＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：９に対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８
０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、あるいは１００％の
配列同一性を有するポリペプチドを含む。場合によっては、エンドソーム溶解性部分はＳ
ＥＱ ＩＤ ＮＯ：８を含む。場合によっては、エンドソーム溶解性部分はＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：９を含む。場合によっては、エンドソーム溶解性部分はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８
からなる。場合によっては、エンドソーム溶解性部分はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９からなる
。
いくつかの例では、エンドソーム溶解性部分は以下の表１に示される配列を含む。
場合によっては、エンドソーム溶解性部分は、Ｂｃｌ－２および／またはＢｃｌ－ｘＬ
などの抑制遺伝子標的の拮抗を介してアポトーシスを誘発するＢａｋ ＢＨ３ポリペプチ
ドを含む。いくつかの例では、エンドソーム溶解性部分は、Ａｌｂａｒｒａｎ， ｅｔ
ａｌ．， “Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏ
ｆ ａ ｐｒｏ－ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅ ｗｉｔｈ ａ ｐＨ－ｒｅｓｐ
ｏｎｓｉｖｅ ｃａｒｒｉｅｒ，” Ｒｅａｃｔｉｖｅ ＆ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｐ
ｏｌｙｍｅｒｓ ７１： ２６１－２６５ （２０１１）に記載されるＢａｋ ＢＨ３ポ
リペプチドを含む。
いくつかの例では、エンドソーム溶解性部分は、ＰＣＴ公開公報第ＷＯ２０１３／１６
６１５５号および第ＷＯ２０１５／０６９５８７．号に記載されるポリペプチド（例えば
、細胞透過性ポリペプチド）を含む。
エンドソーム溶解性ポリマー
いくつかの実施形態において、式（Ｖ）：Ａ－（Ｘ１－Ｂ）ｎあるいは式（ＶＩ）：Ａ
－Ｘ１－（Ｂ－Ｘ２－Ｃ）ｎの分子は、エンドソーム溶解性ポリマーとさらに結合される
。本明細書で使用される場合、エンドソーム溶解性ポリマーは、線状、分岐ネットワーク
、星型、くし型、あるいは、はしご型のポリマーを含む。いくつかの例では、エンドソー
ム溶解性ポリマーは、２つ以上の異なる型の単量体を含むホモポリマーあるいはコポリマ
ーである。場合によっては、エンドソーム溶解性ポリマーはポリカチオンポリマーである
。他の場合において、エンドソーム溶解性ポリマーはポリアニオンポリマーである。
いくつかの例では、ポリカチオンポリマーは、正の電荷、中性の電荷、あるいは負の電
荷であるモノマー単位を含み、正味の電荷は正である。他の場合において、ポリカチオン
ポリマーは、２つ以上の正電荷を含有する非ポリマー分子を含む。例示的なカチオンポリ
マーとしては、限定されないが、ポリ（Ｌ－リジン）（ＰＬＬ）、ポリ（Ｌ－アルギニン
）（ＰＬＡ）、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、ポリ［α－（４－アミノブチル）－Ｌ－
グリコール酸］（ＰＡＧＡ）、２－（ジメチルアミノ）エチルメタクリレート（ＤＭＡＥ
ＭＡ）、あるいはＮ，Ｎ－ジエチルアミノエチル メタクリレート（ＤＥＡＥＭＡ）が挙
げられる。
場合によっては、ポリアニオンポリマーは、正の電荷、中性の電荷、あるいは負の電荷
であるモノマー単位を含み、正味の電荷は負である。他の場合において、ポリアニオンポ
リマーは、２つ以上の負の荷電を含有する非ポリマー分子を含む。例示的なアニオンポリ
マーは、ｐ（アルキルアクリレート）（例えば、ポリ（プロピルアクリル酸）（ＰＰＡＡ
））、あるいはポリ（Ｎ－イソプロピルアクリルアミド）（ＮＩＰＡＭ）を含む。さらな
る例は、ＰＰ７５、Ｋｈｏｒｍａｅｅ， ｅｔ ａｌ．， “Ｅｄｏｓｏｍｏｌｙｔｉｃ
ａｎｉｏｎｉｃ ｐｏｌｙｍｅｒ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ ｄｅｌ
ｉｖｅｒｙ ｏｆ ｓｉＲＮＡｓ ｉｎ ｌｏｃａｌｉｚｅｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ａｐｐ
ｌｉｃａｔｉｏｎｓ，” Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｍａｔｅｒｉａｌ
ｓ ２３： ５６５－５７４ （２０１３）に記載されるＬ－フェニルアラニン－ポリ（
Ｌ－リジン イソフタルアミド）ポリマーを含む。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるエンドソーム溶解性ポリマーは、
ｐＨ応答性のエンドソーム溶解性ポリマーである。ｐＨ応答性ポリマーは、環境のｐＨに
応じてサイズを増大させる（膨潤させる）か、崩壊するポリマーを含む。ポリアクリル酸
およびキトサンはｐＨ応答性ポリマーの例である。
いくつかの例では、本明細書に記載されるエンドソーム溶解性部分は、膜破壊的ポリマ
ー（ｍｅｍｂｒａｎｅ－ｄｉｓｒｕｐｔｉｖｅ ｐｏｌｙｍｅｒ）である。場合によって
は、膜破壊的ポリマーは、カチオンポリマー、中性または疎水性ポリマー、あるいはアニ
オンポリマーを含む。幾つかの例では、膜破壊的ポリマーは親水性ポリマーである。
いくつかの例では、本明細書に記載されるエンドソーム溶解性部分は、ｐＨ応答性の膜
破壊的ポリマーである。例示的なｐＨ応答性の膜破壊的ポリマーは、ｐ（アルキルアクリ
ル酸）、ポリ（Ｎ－イソプロピルアクリルアミド）（ＮＩＰＡＭ）コポリマー、サクシニ
ル化されたｐ（グリシドール）、およびｐ（β－リンゴ酸）ポリマーを含む。
いくつかの例では、ｐ（アルキルアクリル酸）は、ポリ（プロピルアクリル酸）（ポリ
ＰＡＡ）、ポリ（メタクリル酸）（ＰＭＡＡ）、ポリ（エチルアクリル酸（ＰＥＡＡ）、
およびポリ（プロピルアクリル酸）（ＰＰＡＡ）を含む。いくつかの例では、ｐ（アルキ
ルアクリル酸）は、Ｊｏｎｅｓ， ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｊｏｕ
ｒｎａｌ ３７２： ６５－７５ （２００３）に記載されるｐ（アルキルアクリル酸）
を含む。
いくつかの実施形態において、ｐＨ応答性膜破壊的ポリマーは、ｐ（ブチルアクリレー
ト－ｃｏ－メタクリル酸）を含む。（Ｂｕｌｍｕｓ， ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ ９３： １０５－１２０ （２００３
）； ａｎｄ Ｙｅｓｓｉｎｅ， ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉ
ｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ １６１３： ２８－３８ （２００３）を参照）
いくつかの実施形態において、ｐＨ応答性膜破壊的ポリマーは、ｐ（スチレン－ａｌｔ
－無水マレイン酸）を含む。（Ｈｅｎｒｙ， ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌ
ｅｃｕｌｅｓ ７： ２４０７－２４１４ （２００６）を参照）
いくつかの実施形態において、ｐＨ応答性膜破壊的ポリマーは、ピリジル ジスルフィ
ド（ｐｙｒｉｄｙｌｄｉｓｕｌｆｉｄｅ）アクリレート（ＰＤＳＡ）ポリマー、例えば、
ポリ（ＭＡＡ－ｃｏ－ＰＤＳＡ）、ポリ（ＥＡＡ－ｃｏ－ＰＤＳＡ）、ポリ（ＰＡＡ－ｃ
ｏ－ＰＤＳＡ）、ポリ（ＭＡＡ－ｃｏ－ＢＡ－ｃｏ－ＰＤＳＡ）、ポリ（ＥＡＡ－ｃｏ－
ＢＡ－ｃｏ－ＰＤＳＡ）、あるいはポリ（ＰＡＡ－ｃｏ－ＢＡ－ｃｏ－ＰＤＳＡ）ポリマ
ーを含む。（Ｅｌ－Ｓａｙｅｄ， ｅｔ ａｌ．， “Ｒａｔｉｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ
ｏｆ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ
ｓ ｆｏｒ ｐＨ－ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ａｎｄ ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ－ｒｅａｃ
ｔｉｖｅ ｐｏｌｙｍｅｒ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，” Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃ
ｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ １０４： ４１７－４２７ （２００５）；ある
いはＦｌａｎａｒｙ ｅｔ ａｌ．， “Ａｎｔｉｇｅｎ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｗｉｔｈ
ｐｏｌｙ（ｐｒｏｐｙｌａｃｒｙｌｉｃ ａｃｉｄ） ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ｅｎ
ｈａｎｃｅｄ ＭＨＣ－１ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔ－ｃｅｌｌ ａｃｔ
ｉｖａｔｉｏｎ，” Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ． ２０： ２４１－２４８
（２００９）を参照）
いくつかの実施形態において、ｐＨ応答性膜破壊的ポリマーは、下記の基本構造を含む
細胞溶解性ポリマーを含む：
いくつかの例では、本明細書に記載されるエンドソーム溶解性部分は、追加の抱合体、
例えば、ポリマー（例えば、ＰＥＧ）あるいは修飾されたポリマー（例えば、コレステロ
ールで修飾されたポリマー）にさらに結合される。
いくつかの例では、追加の抱合体は、界面活性剤（例えば、トリトンＸ－１００）を含
む。いくつかの例では、本明細書に記載されるエンドソーム溶解性部分は、界面活性剤（
例えば、トリトンＸ－１００）と結合されたポリマー（例えば、ポリ（アミドアミン））
を含む。いくつかの例では、本明細書に記載されるエンドソーム溶解性部分は、ポリ（ア
ミドアミン）－トリトンＸ－１００抱合体（Ｄｕｎｃａｎ， ｅｔ ａｌ．， “Ａ ｐ
ｏｌｙｍｅｒ－Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ ｃａｐａｂｌｅ ｏｆ
ｐＨ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｒｅｄ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ ｌｙｓｉｓ： ａ ｍｏ
ｄｅｌ ｓｙｓｔｅｍ ｉｌｌｕｓｔｒａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｐｏｓｓｉｂｉｌｉｔｙ
ｏｆ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｗｉｔｈｉｎ ａｃｉｄｉｃ ｉｎｔｒａｃｅｌｌ
ｕｌａｒ ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔｓ，” Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇ
ｅｔｉｎｇ ２： ３４１－３４７ （１９９４））を含む。
エンドソーム溶解性脂質
いくつかの実施形態において、エンドソーム溶解性部分は、脂質（例えば、融合性脂質
）である。いくつかの実施形態において、式（Ｖ）：Ａ－（Ｘ１－Ｂ）ｎあるいは式（Ｖ
Ｉ）：Ａ－Ｘ１－（Ｂ－Ｘ２－Ｃ）ｎの分子は、エンドソーム溶解性脂質（例えば、融合
性脂質）とさらに結合する。例示的な融合性脂質は、１，２－ジレオイル（ｄｉｌｅｏｙ
ｌ）－ｓｎ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、ホスファチジルエタノールアミ
ン（ＰＯＰＥ）、パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、（６Ｚ、
９Ｚ、２８Ｚ、３１Ｚ）－ヘプタトリアコンタ－６、９、２８、３１－テトラエン－１９
－オール（Ｄｉ－Ｌｉｎ）、およびＮ－メチル（２，２－ジ（９Ｚ、１２Ｚ）－オクタデ
カ－９，１２－ジエニル）－１，３－ジオキソラン－４－イル）メタンアミン（ＤＬｉｎ
－ｋ－ＤＭＡ）ならびにＮ－メチル－２－（２，２－ジ（９Ｚ、１２Ｚ）－オクタデカ－
９，１２－ジエニル）－１，３－ジオキソラン－４－イル）エタンアミン（ＸＴＣ）を含
む。
いくつかの例では、エンドソーム溶解性部分は、ＰＣＴ公開公報第ＷＯ０９／１２６，
９３３号に記載される脂質（例えば、融合性脂質）である。
エンドソーム溶解性小分子
いくつかの実施形態では、エンドソーム溶解性部分は小分子である。いくつかの実施形
態において、式（Ｉ）：Ａ－（Ｘ１－Ｂ）ｎあるいは式（ＩＩ）：Ａ－Ｘ１－（Ｂ－Ｘ２
－Ｃ）ｎの分子は、エンドソーム溶解性小分子とさらに結合される。エンドソーム溶解性
部分として適切な例示的な小分子としては、限定されないが、キニーネ、クロロキン、水
酸化クロロキン、アモジアキン（ｃａｒｎｏｑｕｉｎｅｓ）、アモピロキン、プリマキン
、メフロキン、ｎｉｖａｑｕｉｎｅｓ、ハロファントリン、キノンイミン、あるいはそれ
らの組み合わせを含む。いくつかの例では、キノリンエンドソーム溶解性部分としては、
限定されないが、７－クロロ－４－（４－ジエチルアミノ－１－メチルブチル－アミノ）
キノリン（クロロキン）；７－クロロ－４－（４－エチル－（２－ヒドロキシエチル）－
アミノ－１－メチルブチル－アミノ）キノリン（ヒドロキシクロロキン）；７－フルオロ
－４－（４－ジエチルアミノ－１－メチルブチル－アミノ）キノリン；４－（４－ジエチ
ルアミノ－１－メチルブチルアミノ）キノリン；７－ヒドロキシ－４－（４－ジエチル－
アミノ－１－メチルブチルアミノ）キノリン；７－クロロ－４－（４－ジエチルアミノ－
１－ブチルアミノ）キノリン（デスメチルクロロキン）；７－フルオロ－４－（４－ジエ
チルアミノ－１－ブチルアミノ）キノリン；４－（４－ジエチル－アミノ－１－ブチルア
ミノ）キノリン；７－ヒドロキシ－４－（４－ジエチルアミノ－１－ブチルアミノ）キノ
リン；７－クロロ－４－（１－カルボキシ－４－ジエチルアミノ－１－ブチルアミノ）キ
ノリン；７－フルオロ－４－（１－カルボキシ－４－ジエチル－アミノ－１－ブチルアミ
ノ）キノリン；４－（１－カルボキシ－４－ジエチルアミノ－１－ブチルアミノ）キノリ
ン；７－ヒドロキシ－４－（１－カルボキシ－４－ジエチルアミノ－１－ブチルアミノ）
キノリン；７－クロロ－４－（１－カルボキシ－４－ジエチルアミノ－１－メチルブチル
アミノ）キノリン；７－フルオロ－４－（１－カルボキシ－４－ジエチル－アミノ－１－
メチルブチルアミノ）キノリン；４－（１－カルボキシ－４－ジエチルアミノ－１－メチ
ルブチルアミノ）キノリン；７－ヒドロキシ－４－（１－カルボキシ－４－ジエチルアミ
ノ－１－メチルブチルアミノ）キノリン；７－フルオロ－４－（４－エチル－（２－ヒド
ロキシエチル）－アミノ－１－メチルブチルアミノ）キノリン；４－（４－エチル－（２
－ヒドロキシ－エチル）－アミノ－１－メチルブチルアミノ－）キノリン；７－ヒドロキ
シ－４－（４－エチル－（２－ヒドロキシエチル）－アミノ－１－メチルブチルアミノ）
キノリン；ヒドロキシクロロキンホスフェート；７－クロロ－４－（４－エチル－（２－
ヒドロキシエチル－１）－アミノ－１－ブチルアミノ）キノリン（デスメチルヒドロキシ
クロロキン）；７－フルオロ－４－（４－エチル－（２－ヒドロキシエチル）－アミノ－
１－ブチルアミノ）キノリン；４－（４－エチル－（２－ヒドロキシエチル）－アミノ－
１－ブチルアミノ）キノリン；７－ヒドロキシ－４－（４－エチル－（２－ヒドロキシエ
チル）－アミノ－１－ブチルアミノ（キノリン；７－クロロ－４－（１－カルボキシ－４
－エチル－（２－ヒドロキシエチル）－アミノ－１－ブチルアミノ）キノリン；７－フル
オロ－４－（１－カルボキシ－４－エチル－（２－ヒドロキシエチル）－アミノ－１－ブ
チルアミノ）キノリン；４－（１－カルボキシ－４－エチル－（２－ヒドロキシエチル）
－アミノ－１－ブチルアミノ）キノリン；７－ヒドロキシ－４－（１－カルボキシ－４－
エチル－（２－ヒドロキシエチル）－アミノ－１－ブチルアミノ）キノリン；７－クロロ
－４－（１－カルボキシ－４－エチル－（２－ヒドロキシエチル）－アミノ－１－メチル
ブチルアミノ）キノリン；７－フルオロ－４－（１－カルボキシ－４－エチル－（２－ヒ
ドロキシエチル）－アミノ－１－メチルブチルアミノ）キノリン；４－（１－カルボキシ
－４－エチル－（２－ヒドロキシエチル）－アミノ－１－メチルブチルアミノ）キノリン
；７－ヒドロキシ－４－（１－カルボキシ－４－エチル－（２－ヒドロキシエチル）－ア
ミノ－１－メチルブチルアミノ）キノリン；８－［（４－アミノペンチル）アミノ－６－
メトキシジヒドロクロリドキノリン；１－アセチル－１，２，３，４－テトラヒドロキノ
リン；８－［（４－アミノペンチル）アミノ］－６－メトキシキノリンジヒドロクロリド
；１－ブチリル－１，２，３，４－テトラヒドロキノリン；３－クロロ－４－（４－ヒド
ロキシ－α，α’－ビス（２－メチル－１－ピロリジニル）－２，５－キシリジノキノリ
ン）（４－［（４－ジエチル－アミノ）－１－メチルブチル－アミノ］－６－メトキシキ
ノリン；３－フルオロ－４－（４－ヒドロキシ－α，α’－ビス（２－メチル－１－ピロ
リジニル）－２，５－キシリジノキノリン（４－［（４－ジエチルアミノ）－１－メチル
ブチル－アミノ］－６－メトキシキノリン；４－（４－ヒドロキシ－α、α’－ビス（２
－メチル－１－ピロリジニル）－２，５－キシリジノキノリン；４－［（４－ジエチルア
ミノ）－１－メチルブチル－アミノ］－６－メトキシキノリン；３，４－ジヒドロ－１－
（２Ｈ）－キノリンカルボキシアルデヒド；１、１’－ペンタメチレンキノリニウムヨー
ジド；８－硫酸キノリノールおよびアミノ、アルデヒド、カルボン酸、ヒドロキシル、ハ
ロゲン、ケト、スルフヒドリル、ならびにビニル誘導体またはそのアナログが挙げられる
。いくつかの例では、エンドソーム溶解性部分は、Ｎａｉｓｂｉｔｔ ｅｔ ａｌ （１
９９７， Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒａｐｙ ２８０：８８４－８９３
）および米国特許第５，７３６，５５７号に記載される小分子である。いくつかの実施形
態において、エンドソーム溶解性部分は、ニゲリシンあるいはその抱合体、例えば、葉酸
－ニゲリシンのエステル抱合体、葉酸－ニゲリシンのアミド抱合体、または葉酸－ニゲリ
シンのカルバマート結合などである。いくつかの例では、エンドソーム溶解性部分は、Ｒ
ａｎｇａｓａｍｙ， ｅｔ． ａｌ．， “Ｎｅｗ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｆｏｒ ｒｅ
ｌｅａｓｅ ｏｆ ｅｎｄｏｓｏｍａｌ ｃｏｎｔｅｎｔｓ： ｏｓｍｏｔｉｃ ｌｙｓ
ｉｓ ｖｉａ ｎｉｇｅｒｉｃｉｎ－ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｋ＋／Ｈ＋ ｅｘｃｈａｎｇｅ
，” Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ． ２９：１０４７－１０５９ （２０１８
）に記載されるニゲリシンである。
リンカー
いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるリンカーは、切断可能なリンカー
または切断不可能なリンカーである。いくつかの例では、リンカーは切断可能なリンカー
である。他の例では、リンカーは切断不可能なリンカーである。
場合によっては、リンカーは非ポリマーリンカーである。非ポリマーリンカーは、重合
プロセスによって生成された単量体の反復単位を含まないリンカーを指す。例示的な非ポ
リマーリンカーとしては、限定されないが、Ｃ１－Ｃ６アルキル基（例えば、Ｃ５、Ｃ４
、Ｃ３、Ｃ２、あるいはＣ１アルキル基）、ホモ二機能性架橋リンカー、ヘテロ二機能性
架橋リンカー、ペプチドリンカー、トレースレスリンカー、自壊性リンカー、マレイミド
ベースのリンカー、あるいはこれらの組み合わせが挙げられる。場合によっては、非ポリ
マーリンカーは、Ｃ１－Ｃ６アルキル基（例えば、Ｃ５、Ｃ４、Ｃ３、Ｃ２、あるいはＣ
１アルキル基）、ホモ二機能性架橋リンカー、ヘテロ二機能性架橋リンカー、ペプチドリ
ンカー、トレースレスリンカー、自壊性リンカー、マレイミドベースのリンカー、あるい
はこれらの組み合わせを含む。さらなる場合には、非ポリマーリンカーは、２つを超える
同じタイプのリンカー、例えば、２つを超えるホモ二機能性架橋リンカー、あるいは２つ
を超えるペプチドリンカーを含まない。さらなる場合には、非ポリマーリンカーは随意に
１つ以上の反応性官能基を含む。
いくつかの例では、非ポリマーリンカーは、上に記載されたポリマーを包含しない。い
くつかの例では、非ポリマーリンカーは、ポリマー部分Ｃによって包含されるポリマーを
包含しない。場合によっては、非ポリマーリンカーはポリアルキレンオキシド（例えばＰ
ＥＧ）を包含しない。場合によっては、非ポリマーリンカーはＰＥＧを包含しない。
いくつかの例では、リンカーはホモ二機能性リンカーを含む。例示的なホモ二機能性リ
ンカーとしては、限定されないが、Ｌｏｍａｎｔの試薬ジチオビス（スクシンイミジルプ
ロピオネート）ＤＳＰ、３’３’－ジチオビス（スルホスクシンイミジルプロプリオネー
ト（ＤＴＳＳＰ）、ジスクシンイミジルスベレート（ＤＳＳ）、ビス（スルホスクシンイ
ミジル）スベレート（ＢＳ）、ジスクシンイミジルタルトレート（ＤＳＴ）、ジスルホス
クシンイミジルタルトレート（スルホＤＳＴ）、エチレングリコビス（スクシンイミジル
スクシネート）（ＥＧＳ）、ジスクシンイミジルグルタレート（ＤＳＧ）、Ｎ、Ｎ’－ジ
スクシンイミジルカルボナート（ＤＳＣ）、ジメチルアジピミデート（ＤＭＡ）、ジメチ
ルピメリミデートピメリミデート（ＤＭＰ）、ジメチルスベリミデート（ＤＭＳ）、ジメ
チル－３，３’－ジチオビスプロピオンイミデート（ＤＴＢＰ）、１，４－ジ－３’－（
２’－ピリジルジチオ）プロピオンアミド）ブタン（ＤＰＤＰＢ）、ビスマレイミドヘキ
サン（ＢＭＨ）、例えば、１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼン、１，３－ジ
フルオロ－４，６－ジニトロベンゼンなどのハロゲン化アリール含有化合物（ＤＦＤＮＢ
）、４，４’－ジフルオロ－３，３’－ジニトロフェニルスルホン（ＤＦＤＮＰＳ）、ビ
ス－［β－（４－アジドサリチルアミド）エチル］ジスルフィド（ＢＡＳＥＤ）、ホルム
アルデヒド、グルタルアルデヒド、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル、アジ
ピン酸ジヒドラジド、カルボヒドラジド、ｏ－トルイジン、３，３’－ジメチルベンジジ
ン、ベンジジン、α，α’－ｐ－ジアミノジフェニル、ジヨード－ｐ－キシレンスルホン
酸、Ｎ，Ｎ’－エチレン－ビス（ヨードアセトアミド）、あるいは、Ｎ，Ｎ’－ヘキサメ
チレン－ビス（ヨードアセトアミド）が挙げられる。
いくつかの実施形態では、リンカーはヘテロ二機能性リンカーを含む。例示的なヘテロ
二機能性リンカーとしては、限定されないが、アミン反応的およびスルフヒドリル架橋リ
ンカー、例えば、Ｎ－スクシンイミジル ３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート，
（ｓＰＤＰ）、長鎖Ｎ－スクシンイミジル ３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート
，（ＬＣ－ｓＰＤＰ）、水溶性の長鎖Ｎ－スクシンイミジル ３－（２－ピリジルジチオ
）プロピオネート（スルホ－ＬＣ－ｓＰＤＰ）、スクシンイミジルオキシカルボニル－α
－メチル－α－（２－ピリジルジチオ）トルエン（ｓＭＰＴ）、スルホスクシンイミジル
－６－［α－メチル－α－（２－ピリジルジチオ）トルアミド］ヘキサノアート（スルホ
ＬＣ－ｓＭＰＴ）、スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－
１－カルボキシレート（ｓＭＣＣ）、スルホスクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメ
チル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（スルホ－ｓＭＣＣ）、ｍ－マレイミドベ
ンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢｓ）、ｍ－マレイミドベンゾイ
ル－Ｎ－ヒドロキシスルホスクシンイミドエステル（スルホ－ＭＢ）、Ｎ－スクシンイミ
ジル（４－ヨードアセチル）アミノベンゾエート（ｓＩＡＢ）、スルホスクシンイミジル
（４－ｉｏｄｏａｃｔｅｙｌ）アミノベンゾエート（スルホ－ｓＩＡＢ）、スクシンイミ
ジル－４－（ｐ－マレイミドフェニル）ブチレート（ｓＭＰＢ）、スルホスクシンイミジ
ル－４－（ｐ－マレイミドフェニル）ブチレート（スルホ－ｓＭＰＢ）、Ｎ－（γ－マレ
イミドブチリルオキシ）スクシンイミド・エステル（ＧＭＢ）、Ｎ－（γ－マレイミドブ
チリルオキシ）スルホスクシンイミドエステル（スルホ－ＧＭＢ）、スクシンイミジル
６－（（ヨードアセチル）アミノ）ヘキサノアート（ｓＩＡＸ）、スクシンイミジル ６
－［６－（（（ヨードアセチル）アミノ）ヘキサノイル）アミノ］ヘキサノアート（ｓＩ
ＡＸＸ）、スクシンイミジル ４－（（（ヨードアセチル）アミノ）メチル）シクロヘキ
サン－１－カルボキシレート（ｓＩＡＣ）、スクシンイミジル ６－（（（（４－ヨード
アセチル）アミノ）メチル）シクロヘキサン－１－カルボニル）アミノ）ヘキサノアート
（ｓＩＡＣＸ）、ｐ－ニトロフェニルヨードアセテート（ＮＰＩＡ）、４－（４－Ｎ－マ
レイミドフェニル）酪酸ヒドラジド（ＭＰＢＨ）、４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロ
ヘキサン－１－カルボキシル－ヒドラジド－８（Ｍ２Ｃ２Ｈ）、３－（２－ピリジルジチ
オ）プロピオニルヒドラジド（ＰＤＰＨ）などのカルボニル反応的およびスルフヒドリル
反応的な架橋リンカー、アミン反応的および光反応性の架橋リンカー、例えば、Ｎ－ヒド
ロキシスクシンイミジル－４－アジドサリチル酸（ＮＨ－ＡｓＡ）、Ｎ－ヒドロキシスル
ホスクシンイミジル－４－アジドサリチル酸（スルホ－ＮＨ－ＡｓＡ）、スルホスクシン
イミジル－（４－アジドサリチルアミド）ヘキサノアート（スルホ－ＮＨ－ＬＣ－ＡｓＡ
）、スルホスクシンイミジル－２－（ρ－アジドサリチルアミド）エチル－１，３’－ジ
チオプロピオネート（ｓＡｓＤ）、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジル－４－アジドベンゾ
エート（ＨｓＡＢ）、Ｎ－ヒドロキシスルホスクシンイミジル－４－アジドベンゾエート
（スルホ－ＨｓＡＢ）、Ｎ－スクシンイミジル－６－（４’－アジド－２’－ニトロフェ
ニルアミノ）ヘキサノアート（ｓＡＮＰＡＨ）、スルホスクシンイミジル－６－（４’－
アジド－２’－ニトロフェニルアミノ）ヘキサノアート（スルホ－ｓＡＮＰＡＨ）、Ｎ－
５－アジド－２－ニトロベンゾイルオキシスクシンイミド（ＡＮＢ－ＮＯｓ）、スルホス
クシンイミジル－２－（ｍ－アジド－ｏ－ニトロベンズアミド）－エチル－１，３’－ジ
チオプロピオネート（ｓＡＮＤ）、Ｎ－スクシンイミジル－４（４－アジドフェニル）１
，３’－ジチオプロピオネート（ｓＡＤＰ）、Ｎ－スルホスクシンイミジル（４－アジド
フェニル）－１，３’－ジチオプロピオネート（スルホ－ｓＡＤＰ）、スルホスクシンイ
ミジル ４－（ρ－アジドフェニル）ブチレート（スルホ－ｓＡＰＢ）、スルホスクシン
イミジル ２－（７－アジド－４－メチルクマリン－３－アセトアミド）エチル－１，３
’－ジチオプロピオネート（ｓＡＥＤ）、スルホスクシンイミジル ７－アジド－４－メ
チルクマリン－３－アセテート（スルホ－ｓＡＭＣＡ）、ρ－ニトロフェニル・ジアゾピ
ルバート（ρＮＰＤＰ）、ρ－ニトロフェニル－２－ジアゾ－３，３，３－トリフルオロ
プロピオネート（ＰＮＰ－ＤＴＰ）、スルフヒドリル反応的および光反応性の架橋リンカ
ー、例えば、１－（ρ－アジドサリチルアミド）－４－（ヨードアセトアミド）ブタン（
ＡｓＩＢ）、Ｎ－［４－（ρ－アジドサリチルアミド）ブチル］－３’－（２’－ピリジ
ルジチオ）プロピオンアミド（ＡＰＤＰ）、ベンゾフェノン－４－ヨードアセトアミド、
ベンゾフェノン－４－マレイミドカルボニル反応的および光反応性の架橋リンカー、例え
ば、ρ－アジドベンゾイルヒドラジド（ＡＢＨ）、カルボン酸塩反応的および光反応性の
架橋リンカー、例えば、４－（ρ－アジドサリチルアミド）ブチルアミン（ＡｓＢＡ）、
および、アルギニン反応的および光反応性の架橋リンカー、例えば、ρ－アジドフェニル
グリオキサール（ＡＰＧ）が挙げられる。
いくつかの例では、リンカーは反応性官能基を含む。場合によっては、反応性官能基は
、結合部分に存在する求電子基に反応性の求核基を含む。例示的な求電子基は、アルデヒ
ド、ケトン、カルボン酸、エステル、アミド、エノン、ハロゲン化アシル、または酸無水
物などのカルボニル基を含む。いくつかの実施形態において、反応性官能基はアルデヒド
である。例示的な求核基は、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカル
バゾン、ヒドラジンカルボキシレート、およびアリールヒドラジドを含む。
いくつかの実施形態では、リンカーはマレイミド基を含む。いくつかの例では、マレイ
ミド基はマレイミドスペーサーとも呼ばれる。いくつかの例では、マレイミド基はカプロ
ン酸をさらに包含し、マレイミドカプロイル（ｍｃ）を形成する。場合によっては、リン
カーはマレイミドカプロイル（ｍｃ）を含む。場合によっては、リンカーはマレイミドカ
プロイル（ｍｃ）である。他の例では、マレイミド基は、上に記載されたスクシンイミジ
ル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ｓＭＣＣ）
、あるいは、スルホスクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－
１－カルボキシレート（スルホ－ｓＭＣＣ）などのマレイミドメチル基を含む。
いくつかの実施形態において、マレイミド基は自己安定化マレイミドである。いくつか
の例では、自己安定化マレイミドは、チオスクシンイミド環加水分解の分子内の触媒作用
をもたらすために、マレイミドに隣接する塩基性アミノ基を取り込むべくジアミノプロピ
オン酸（ＤＰＲ）を利用し、それによって、マレイミドがレトロマイケル反応による脱離
反応を経験することのないようにする。いくつかの例では、自己安定化マレイミドは、Ｌ
ｙｏｎ， ｅｔ ａｌ．， “Ｓｅｌｆ－ｈｙｄｒｏｌｙｚｉｎｇ ｍａｌｅｉｍｉｄｅ
ｓ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉ
ｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔ
ｅｓ，” Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ３２（１０）：１０５９－１０６２ （
２０１４）に記載されるマレイミド基である。いくつかの例では、リンカーは自己安定化
マレイミドを含む。いくつかの例では、リンカーは自己安定化マレイミドである。
いくつかの実施形態では、リンカーはペプチド部分を含む。いくつかの例では、ペプチ
ド部分は、少なくとも１、２、３、４、５、あるいは６より多くのアミノ酸残基を含む。
いくつかの例では、ペプチド部分は、多くとも１、２、３、４、５、６、７、あるいは８
のアミノ酸残基を含む。いくつかの例では、ペプチド部分は、約２、約３、約４、約５、
あるいは約６アミノ酸残基を含む。いくつかの例では、ペプチド部分は、切断可能なペプ
チド部分（例えば、酵素的または化学的に）である。いくつかの例では、ペプチド部分は
切断不可能なペプチド部分である。いくつかの例では、ペプチド部分は、Ｖａｌ－Ｃｉｔ
（バリン－シトルリン）、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－
Ｌｙｓ、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－
Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｒｇ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、Ｉｌｅ－Ｃｉｔ、Ｔｒｐ－
Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、あるいはＧｌｙ－Ｐｈｅ－
Ｌｅｕ－Ｇｌｙを含む。いくつかの例では、リンカーは、Ｖａｌ－Ｃｉｔ（バリン－シト
ルリン）、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｇｌｙ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｇｌｙ
－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ｐｈｅ
－Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｒｇ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、Ｉｌｅ－Ｃｉｔ、Ｔｒｐ－Ｃｉｔ、Ｐｈｅ
－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、あるいはＧｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ
などのペプチド部分を含む。場合によっては、リンカーはＶａｌ－Ｃｉｔを含む。場合に
よっては、リンカーはＶａｌ－Ｃｉｔである。
いくつかの実施形態において、リンカーは安息香酸基あるいはその誘導体を含む。いく
つかの例では、安息香酸基あるいはその誘導体はパラアミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）を含む
。いくつかの例では、安息香酸基あるいはその誘導体はγ－アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）を含
む。
いくつかの実施形態において、リンカーは、任意の組み合わせで、マレイミド基、ペプ
チド部分、および／または、安息香酸基の１つ以上を含む。いくつかの実施形態において
、リンカーは、マレイミド基、ペプチド部分、および／または、安息香酸基の組み合わせ
を含む。いくつかの例では、マレイミド基はマレイミドカプロイル（ｍｃ）である。いく
つかの例では、ペプチド基はｖａｌ－ｃｉｔである。いくつかの例では、安息香酸基はＰ
ＡＢＡである。いくつかの例では、リンカーはｍｃ－ｖａｌ－ｃｉｔ基を含む。場合によ
っては、リンカーはｖａｌ－ｃｉｔ－ＰＡＢＡ基を含む。さらなる場合には、リンカーは
ｍｃ－ｖａｌ－ｃｉｔ－ＰＡＢＡ基を含む。
いくつかの実施形態において、リンカーは自壊性リンカーあるいは自己排除リンカーで
ある。場合によっては、リンカーは自壊性リンカーである。他の場合には、リンカーは自
己排除リンカー（例えば、環化自己排除リンカー）である。いくつかの例では、リンカー
は、米国特許第９，０８９，６１４号あるいはＰＣＴ公開公報ＷＯ２０１５０３８４２６
に記載されるリンカーを含む。
いくつかの実施形態において、リンカーは樹状型リンカーである。いくつかの例では、
樹状型リンカーは分岐した多機能リンカー部分を含む。いくつかの例では、樹状型リンカ
ーは、ポリヌクレオチドＢ対結合部分Ａのモル比を増加させるために使用される。いくつ
かの例では、樹状型リンカーはＰＡＭＡＭデンドリマーを含む。
いくつかの実施形態において、リンカーは、トレースレスリンカーあるいは切断後にリ
ンカー部分（例えば、原子あるいはリンカー基）を結合部分Ａ、ポリヌクレオチドＢ、ポ
リマーＣ、またはエンドソーム溶解性部分Ｄに残さないリンカーである。例示的なトレー
スレスリンカーとしては、限定されないが、ゲルマニウムリンカー、ケイ素リンカー（ｓ
ｅｌｅｎｉｕｍ ｌｉｎｋｅｒ）、硫黄リンカー、セレンリンカー、窒素リンカー、リン
リンカー、ホウ素リンカー、クロムリンカー、あるいはフェニルヒドラジドリンカーが挙
げられる。場合によっては、リンカーは、Ｈｅｊｅｓｅｎ， ｅｔ ａｌ．， “Ａ ｔ
ｒａｃｅｌｅｓｓ ａｒｙｌ－ｔｒｉａｚｅｎｅ ｌｉｎｋｅｒ ｆｏｒ ＤＮＡ－ｄｉ
ｒｅｃｔｅｄ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，” Ｏｒｇ Ｂｉｏｍｏｌ Ｃｈｅｍ １１（１５
）： ２４９３－２４９７ （２０１３）に記載されるトレースレスアリール－トリアゼ
ンリンカーである。いくつかの例では、リンカーは、Ｂｌａｎｅｙ， ｅｔ ａｌ．，
“Ｔｒａｃｅｌｅｓｓ ｓｏｌｉｄ－ｐｈａｓｅ ｏｒｇａｎｉｃ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ
，” Ｃｈｅｍ． Ｒｅｖ． １０２： ２６０７－２０２４ （２００２）に記載され
るトレースレスリンカーである。いくつかの例では、リンカーは、米国特許第６，８２１
，７８３号に記載されるトレースレスリンカーである。
幾つかの実施形態では、リンカーは、米国特許第６，８８４，８６９号；第７，４９８
，２９８号；第８，２８８，３５２号；第８，６０９，１０５号；あるいは、第８，６９
７，６８８号；米国特許公開第２０１４／０１２７２３９号；第２０１３／０２８９１９
号；第２０１４／２８６９７０号；第２０１３／０３０９２５６号；第２０１５／０３７
３６０号；あるいは、第２０１４／０２９４８５１号；または、ＰＣＴ公開公報ＷＯ２０
１５０５７６９９；ＷＯ２０１４０８０２５１；ＷＯ２０１４１９７８５４；ＷＯ２０１
４１４５０９０；あるいは、ＷＯ２０１４１７７０４２に記載されるリンカーである。
いくつかの実施形態において、Ｘ、Ｙ、およびＬは独立して単結合またはリンカーであ
る。いくつかの例では、Ｘ、Ｙ、およびＬは独立して単結合である。場合によっては、Ｘ
、Ｙ、およびＬは独立してリンカーである。
いくつかの例では、Ｘは単結合またはリンカーである。いくつかの例では、Ｘは単結合
である。いくつかの例では、Ｘはリンカーである。いくつかの例では、リンカーはＣ１－
Ｃ６アルキル基である。場合によっては、Ｘは、例えば、Ｃ５、Ｃ４、Ｃ３、Ｃ２、ある
いはＣ１アルキル基などのＣ１－Ｃ６アルキル基である。場合によっては、Ｃ１－Ｃ６ア
ルキル基は非置換のＣ１－Ｃ６アルキル基である。リンカーの文脈において、とりわけ、
Ｘの文脈において使用される場合、アルキルは、最大で６つの炭素原子を含む飽和した直
鎖または分岐鎖の炭化水素ラジカルを意味する。いくつかの例では、Ｘは非ポリマーリン
カーである。いくつかの例では、Ｘは上に記載されたホモ二機能性リンカーあるいはヘテ
ロ二機能性リンカーを含む。場合によっては、Ｘはヘテロ二機能性リンカーを含む。場合
によっては、ＸはｓＭＣＣを含む。他の例では、Ｘは、Ｃ１－Ｃ６アルキル基に随意に結
合したヘテロ二機能性リンカーを含む。他の例では、Ｘは、Ｃ１－Ｃ６アルキル基に随意
に結合したｓＭＣＣを含む。いくつかの追加の例では、Ｘは、上に記載されたホモ二機能
性リンカーあるいはヘテロ二機能性リンカーを含まない。
いくつかの例では、Ｙは単結合またはリンカーである。いくつかの例では、Ｙは単結合
である。他の場合には、Ｙはリンカーである。いくつかの実施形態において、ＹはＣ１－
Ｃ６アルキル基である。いくつかの例では、Ｙは上に記載されたホモ二機能性リンカーあ
るいはヘテロ二機能性リンカーである。いくつかの例では、Ｙは上に記載されたホモ二機
能性リンカーである。いくつかの例では、Ｙは上に記載されたヘテロ二機能性リンカーで
ある。いくつかの例では、Ｙは、上に記載されたマレイミドカプロイル（ｍｃ）などのマ
レイミド基、あるいは自己安定化マレイミド基を含む。いくつかの例では、ＹはＶａｌ－
Ｃｉｔなどのペプチド部分を含む。いくつかの例では、ＹはＰＡＢＡなどの安息香酸基を
含む。さらなる例では、Ｙは、マレイミド基、ペプチド部分、および／または、安息香酸
基の組み合わせを含む。追加の例では、Ｙはｍｃ基を含む。追加の例では、Ｙはｍｃ－ｖ
ａｌ－ｃｉｔ基を含む。追加の例では、Ｙはｖａｌ－ｃｉｔ－ＰＡＢＡ基を含む。追加の
例では、Ｙはｍｃ－ｖａｌ－ｃｉｔ－ＰＡＢＡ基を含む。
いくつかの例では、Ｌは単結合またはリンカーである。場合によっては、Ｌは単結合で
ある。場合によっては、Ｌはリンカーである。いくつかの実施形態では、ＬはＣ１－Ｃ６
アルキル基である。いくつかの例では、Ｌは上に記載されたホモ二機能性リンカーあるい
はヘテロ二機能性リンカーである。いくつかの例では、Ｌは上に記載されたホモ二機能性
リンカーである。いくつかの例では、Ｌは上に記載されたヘテロ二機能性リンカーである
。いくつかの例では、Ｌは、上に記載されたマレイミドカプロイル（ｍｃ）などのマレイ
ミド基、あるいは自己安定化マレイミド基を含む。いくつかの例では、ＬはＶａｌ－Ｃｉ
ｔなどのペプチド部分を含む。いくつかの例では、ＬはＰＡＢＡなどの安息香酸基を含む
。さらなる例では、Ｌは、マレイミド基、ペプチド部分、および／または、安息香酸基の
組み合わせを含む。さらなる例では、Ｌはｍｃ基を含む。さらなる例では、Ｌはｍｃ－ｖ
ａｌ－ｃｉｔ基を含む。さらなる例では、Ｌはｖａｌ－ｃｉｔ－ＰＡＢＡ基を含む。さら
なる例では、Ｌはｍｃ－ｖａｌ－ｃｉｔ－ＰＡＢＡ基を含む。
いくつかの実施形態において、Ｘ１とＸ２はそれぞれ独立して、単結合あるいは非ポリ
マーリンカーである。いくつかの例では、Ｘ１とＸ２はそれぞれ独立して単結合である。
場合によっては、Ｘ１とＸ２はそれぞれ独立して非ポリマーリンカーである。
いくつかの例では、Ｘ１は単結合または、非ポリマーリンカーを含む。いくつかの例で
は、Ｘ１は単結合である。いくつかの例では、Ｘ１は非ポリマーリンカーである。いくつ
かの例では、リンカーはＣ１－Ｃ６アルキル基である。場合によっては、Ｘ１は、例えば
、Ｃ５、Ｃ４、Ｃ３、Ｃ２、あるいはＣ１アルキル基などのＣ１－Ｃ６アルキル基である
。場合によっては、Ｃ１－Ｃ６アルキル基は非置換のＣ１－Ｃ６アルキル基である。リン
カーの文脈において、とりわけ、Ｘ１の文脈において使用される場合、アルキルは、最大
で６つの炭素原子を含む飽和した直鎖または分岐鎖の炭化水素ラジカルを意味する。いく
つかの例では、Ｘ１は上に記載されたホモ二機能性リンカーあるいはヘテロ二機能性リン
カーを含む。場合によっては、Ｘ１はヘテロ二機能性リンカーを含む。場合によっては、
Ｘ１はｓＭＣＣを含む。他の例では、Ｘ１は、Ｃ１－Ｃ６アルキル基に随意に結合したヘ
テロ二機能性リンカーを含む。他の例では、Ｘ１は、Ｃ１－Ｃ６アルキル基に随意に結合
したｓＭＣＣを含む。いくつかの追加例では、Ｘ１は、上に記載されたホモ二機能性リン
カーあるいはヘテロ二機能性リンカーを含まない。
いくつかの例では、Ｘ２は単結合またはリンカーである。いくつかの例では、Ｘ２は単
結合である。その他の場合において、Ｘ２はリンカーである。さらなる場合には、Ｘ２は
非ポリマーリンカーである。いくつかの実施形態では、Ｘ２はＣ１－Ｃ６アルキル基であ
る。いくつかの例では、Ｘ２は上に記載されたホモ二機能性リンカーあるいはヘテロ二機
能性リンカーである。いくつかの例では、Ｘ２は上に記載されたホモ二機能性リンカーで
ある。いくつかの例では、Ｘ２は上に記載されたヘテロ二機能性リンカーである。いくつ
かの例では、Ｘ２は、上に記載されたマレイミドカプロイル（ｍｃ）などのマレイミド基
、あるいは自己安定化マレイミド基を含む。いくつかの例では、Ｘ２はＶａｌ－Ｃｉｔな
どのペプチド部分を含む。いくつかの例では、Ｘ２はＰＡＢＡなどの安息香酸基を含む。
さらなる例では、Ｘ２は、マレイミド基、ペプチド部分、および／または、安息香酸基の
組み合わせを含む。追加の例では、Ｘ２はｍｃ基を含む。追加の例では、Ｘ２はｍｃ－ｖ
ａｌ－ｃｉｔ基を含む。追加の例では、Ｘ２はｖａｌ－ｃｉｔ－ＰＡＢＡ基を含む。追加
の例では、Ｘ２はｍｃ－ｖａｌ－ｃｉｔ－ＰＡＢＡ基を含む。
医薬製剤
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される医薬製剤は、限定されないが、非
経口（例えば、静脈内、皮下、筋肉内）、経口、鼻腔内、頬側、直腸、または経皮の投与
経路を含む、複数の投与経路によって被験体に投与される。いくつかの例では、本明細書
に記載される医薬組成物は、非経口（例えば、静脈内、皮下、筋肉内、動脈内、腹腔内、
髄腔内、大脳内、脳室内、あるいは頭蓋内）投与のために製剤化される。他の例において
、本明細書に記載される医薬組成物は、経口投与のために製剤化される。また他の例にお
いて、本明細書に記載される医薬組成物は、経鼻投与のために製剤化される。
いくつかの実施形態において、医薬組成物としては、限定されないが、水性分散液、自
己乳化分散液、固溶体、リポソーム分散液、エアロゾル、固形剤形、粉末、即時放出製剤
、制御放出製剤、速溶製剤、錠剤、カプセル、丸剤、遅延放出製剤、拡張放出製剤、パル
ス放出製剤、多粒子製剤（例えば、ナノ粒子製剤）、および、即時放出と制御放出の混合
製剤が挙げられる。
いくつかの例では、医薬製剤は多粒子製剤を含む。いくつかの例では、医薬製剤はナノ
粒子製剤を含む。いくつかの例では、ナノ粒子は、ｃＭＡＰ、シクロデキストリン、ある
いは脂質を含む。場合によっては、ナノ粒子は、固体脂質ナノ粒子、ポリマーナノ粒子、
自己乳化ナノ粒子、リポソーム、マイクロエマルジョン、あるいはミセル溶液を含む。さ
らなる例示的なナノ粒子としては、限定されないが、常磁性ナノ粒子、超常磁性ナノ粒子
、金属ナノ粒子、フラーレン様材料、無機ナノチューブ、デンドリマー（共有結合した金
属キレートを有するものなど）、ナノファイバー、ナノホーン、ナノオニオン、ナノロッ
ド、ナノロープ、および量子ドットが挙げられる。いくつかの例では、ナノ粒子は、金属
ナノ粒子、例えば、スカンジウム、チタン、バナジウム、クロム、マンガン、鉄、コバル
ト、ニッケル、銅、亜鉛、イットリウム、ジルコニウム、ニオブ、モリブデン、ルテニウ
ム、ロジウム、パラジウム、銀、カドミウム、ハフニウム、タンタル、タングステン、レ
ニウム、オスミウム、イリジウム、白金、金、ガドリニウム、アルミニウム、ガリウム、
インジウム、スズ、タリウム、鉛、ビスマス、マグネシウム、カルシウム、ストロンチウ
ム、バリウム、リチウム、ナトリウム、カリウム、ホウ素、シリコン、リン、ゲルマニウ
ム、ヒ素、アンチモン、およびこれらの組み合わせ、その合金またはオキシドのナノ粒子
である。
いくつかの例では、ナノ粒子は、コア、あるいは、コアシェルナノ粒子のようにコアと
シェルを含む。
いくつかの例では、ナノ粒子は、機能要素の結合のために分子、例えば、本明細書に記
載されるポリ核酸分子または結合部分の１つ以上でさらにコーティングされる。いくつか
の例では、コーティングは、硫酸コンドロイチン、硫酸デキストラン、カルボキシメチル
デキストラン、アルギン酸、ペクチン、カラギーナン、フコイダン、アガロペクチン、ポ
ルフィラン、カラヤゴム、ジェランガム、キサンタンガム、ヒアルロン酸、グルコサミン
、ガラクトサミン、キチン（あるいはキトサン）、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン
酸、リゾチーム、チトクロムＣ、リボヌクレアーゼ、トリプシノゲン、キモトリプシノー
ゲン、α－キモトリプシン、ポリリシン、ポリアルギニン、ヒストン、プロタミン、オバ
ルブミン、またはデキストリンあるいはシクロデキストリンを含む。いくつかの例では、
ナノ粒子はグラフェンコーティングされたナノ粒子を含む。
場合によっては、ナノ粒子は、約５００ｎｍ、４００ｎｍ、３００ｎｍ、２００ｎｍ、
あるいは１００ｎｍ未満の少なくとも１つの寸法を有する。
いくつかの例では、ナノ粒子製剤は、常磁性ナノ粒子、超常磁性ナノ粒子、金属ナノ粒
子、フラーレン様材料、無機ナノチューブ、デンドリマー（共有結合した金属キレートを
有するものなど）、ナノファイバー、ナノホーン、ナノオニオン、ナノロッド、ナノロー
プ、または量子ドットを含む。いくつかの例では、本明細書に記載されるポリ核酸分子あ
るいは結合部分は、ナノ粒子に直接的あるいは間接的に結合される。いくつかの例では、
本明細書に記載される少なくとも１、５、１０、１５、２０、３０、４０、５０、６０、
７０、８０、９０、あるいは１００以上のポリ核酸分子あるいは結合部分は、ナノ粒子に
直接的あるいは間接的に結合される。
いくつかの実施形態において、医薬製剤は、送達ベクター、例えば、細胞中へのポリ核
酸分子の送達のための組換えベクターを含む。いくつかの例では、組換えベクターはＤＮ
Ａプラスミドである。他の例において、組換えベクターは、ウイルスベクターである。例
示的なウイルスベクターは、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、あ
るいはアルファウイルスに由来したベクターを含む。いくつかの例では、ポリ核酸分子を
発現することができる組換えベクターは、標的細胞中での安定した発現をもたらす。さら
なる例では、ポリ核酸分子の一時的発現をもたらすウイルスベクターが使用される。
いくつかの実施形態において、医薬製剤は、本明細書に開示される組成物との適合性な
らびに所望の剤形の放出プロフィール特性に基づいて選択された担体または担体材料を含
む。例示的な担体物質としては、例えば、結合剤、懸濁剤、崩壊剤、充填剤、界面活性剤
、可溶化剤、安定化剤、滑沢剤、加湿剤、希釈剤などが含まれる。薬学的に適合可能な担
体材料としては 限定されないが、アカシア、ゼラチン、コロイド状二酸化ケイ素、グリ
セロリン酸カルシウム、乳酸カルシウム、マルトデキストリン、グリセリン、ケイ酸マグ
ネシウム、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、コレステロール、コレステロールエステル
、カゼイン酸ナトリウム、大豆レシチン、タウロコール酸、ホスファチジルコリン、塩化
ナトリウム、リン酸三カルシウム、リン酸二カリウム、セルロースおよびセルロース抱合
体、糖ステアロイル乳酸ナトリウム（ｓｕｇａｒｓ ｓｏｄｉｕｍ ｓｔｅａｒｏｙｌ
ｌａｃｔｙｌａｔｅ）、カラギーナン、モノグリセリド、ジグリセリド、α化デンプンな
どが挙げられる。参照（例えばレミングトン）：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒ
ａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ， Ｎｉｎｅｔｅｅｎｔｈ Ｅｄ（Ｅａｓｔｏｎ
，Ｐａ．： Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ， １９９５）、Ｈｏｏ
ｖｅｒ，Ｊｏｈｎ Ｅ．，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓ
ｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓ
ｙｌｖａｎｉａ １９７５、Ｌｉｂｅｒｍａｎ，Ｈ．Ａ．ａｎｄ Ｌａｃｈｍａｎ，Ｌ．
，Ｅｄｓ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ， Ｍａｒｃｅ
ｌ Ｄｅｃｋｅｒ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９８０、および、Ｐｈａｒｍａｃ
ｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓ
ｙｓｔｅｍｓ， Ｓｅｖｅｎｔｈ Ｅｄ．（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ
＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ１９９９）。
いくつかの例では、医薬製剤は、酢酸、ホウ酸、クエン酸、乳酸、リン酸、および、塩
酸などの酸；水酸化ナトリウム、リン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、クエン酸ナトリ
ウム、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、およびトリスヒドロキシメチルアミノメタンな
どの塩基、ならびに、クエン酸塩／デキストロース、重炭酸ナトリウム、および塩化アン
モニウムなどの緩衝剤を含む、ｐＨ調節剤または緩衝剤をさらに含む。このような酸、塩
基、および緩衝液は、組成物のｐＨを許容可能な範囲で維持するのに必要な量で含まれる
。
いくつかの例では、医薬製剤は、組成物の浸透圧重量モル濃度を許容範囲にするのに必
要な量の１以上の塩を含む。こうした塩は、ナトリウム、カリウム、またはアンモニウム
のカチオン、ならびに塩化物、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、ホウ酸塩、リン酸塩、炭
酸水素塩、硫酸塩、チオ硫酸塩、または重亜硫酸塩のアニオンを含み、適切な塩は、塩化
ナトリウム、塩化カリウム、チオ硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、および、硫酸
アンモニウムを含む。
いくつかの例では、希釈液がより安定した環境を提供することができるため、医薬製剤
は、化合物を安定化させるために使用される希釈液をさらに含む。限定されないが、リン
酸緩衝生理食塩水を含む緩衝液中に溶解した塩（ｐＨの制御あるいは維持ももたらす）が
、当該技術分野の希釈剤として利用される。特定の例において、希釈剤は、組成物の大き
さを増大させて、圧縮を促進するか、またはカプセル充填のための均質な混合のために十
分な大きさ（ｂｕｌｋ）を作り出す。そのような化合物は、例えば、ラクトース、デンプ
ン、マンニトール、ソルビトール、デキストロース、Ａｖｉｃｅｌ（登録商標）などの微
結晶性セルロース；リン酸水素カルシウム、リン酸カルシウム二水和物；リン酸三カルシ
ウム、リン酸カルシウム；無水乳糖、噴霧乾燥したラクトース；α化デンプン、Ｄｉ－Ｐ
ａｃ（登録商標）（Ａｍｓｔａｒ）などの圧縮可能な糖；マンニトール、ヒドロキシプロ
ピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース・アセタート・ステアラー
ト、スクロース系の希釈剤、粉砂糖；一塩基の硫酸カルシウム一水和物、硫酸カルシウム
二水和物；乳酸カルシウム三水和物、デキストラート（ｄｅｘｔｒａｔｅｓ）；加水分解
したシリアル固形物、アミロース；粉末セルロース、炭酸カルシウム；グリシン、カオリ
ン；マンニトール、塩化ナトリウム；イノシトール、ベントナイトなどを含む。
場合によっては、医薬製剤は、物質の分解または崩壊を促進する崩壊剤（ｄｉｓｉｎｔ
ｅｇｒａｔｉｏｎ ａｇｅｎｔｓ ｏｒ ｄｉｓｉｎｔｅｇｒａｎｔｓ）を含む。用語「
分解する」は、胃腸液と接触した際の剤形の溶解および分散の両方を含む。崩壊剤の例は
、デンプン、例えば、天然のデンプン、例えば、トウモロコシデンプンまたはジャガイモ
デンプン、α化デンプン、例えば、Ｎａｔｉｏｎａｌ １５５１またはＡｍｉｊｅｌ（登
録商標）、またはナトリウムデンプングリコラート、例えば、Ｐｒｏｍｏｇｅｌ（登録商
標）またはＥｘｐｌｏｔａｂ（登録商標）、セルロース、例えば、木製品、メチル結晶セ
ルロース、例えばＡｖｉｃｅｌ（登録商標）、Ａｖｉｃｅｌ（登録商標）ＰＨ１０１、Ａ
ｖｉｃｅｌ（登録商標）ＰＨ１０２、Ａｖｉｃｅｌ（登録商標）ＰＨ１０５、Ｅｌｃｅｍ
ａ（登録商標）Ｐ１００、Ｅｍｃｏｃｅｌ（登録商標）、Ｖｉｖａｃｅｌ（登録商標）、
Ｍｉｎ Ｔｉａ（登録商標）、およびＳｏｌｋａ－ＦｌｏＣ（登録商標））、メチルセル
ロース、クロスカルメロース、または架橋セルロース、例えば、架橋カルボキシメチルセ
ルロースナトリウム（Ａｃ－Ｄｉ－Ｓｏｌ（登録商標））、架橋カルボキシメチルセルロ
ース、または架橋クロスカルメロースの架橋デンプン、例えば、ナトリウムデンプングリ
コラート、クロスポビドンなどの架橋ポリマー、架橋ポリビニルピロリドン、アルギン酸
塩、例えばアルギン酸またはアルギン酸ナトリウムなどのアルギン酸の塩、Ｖｅｅｇｕｍ
（登録商標）ＨＶ（ケイ酸アルミニウムマグネシウム）などの粘土、ゴム、例えば、寒天
、グアー、ローカストビーン、カラヤ、ペクチン、またはトラガカント、ナトリウムデン
プングリコラート、ベントナイト、天然のスポンジ、界面活性剤、陽イオン交換樹脂など
の樹脂、柑橘類のパルプ、ラウリル硫酸ナトリウム、デンプンを組み合わせたラウリル硫
酸ナトリウムなど、を含む。
いくつかの例では、医薬製剤としては、ラクトース、炭酸カルシウム、リン酸カルシウ
ム、リン酸水素カルシウム、硫酸カルシウム、微結晶性セルロース、セルロース粉末、デ
キストロース、デキストラート、デキストラン、デンプン、α化デンプン、スクロース、
キシリトール、ラクチトール、マンニトール、ソルビトール、塩化ナトリウム、ポリエチ
レングリコール、などの充填剤が挙げられる。
材料の接着または摩擦を防ぎ、減少させ、あるいは阻害するために、潤滑剤および滑剤
が本明細書に記載される医薬製剤に随意にさらに含まれる。典型的な潤滑剤は、例えば、
ステアリン酸、水酸化カルシウム、タルク、ナトリウム・ステアリル・フマラート、鉱油
などの炭化水素、水素添加大豆油（Ｓｔｅｒｏｔｅｘ（登録商標））などの硬化植物油、
高級脂肪酸、およびアルカリ金属とアルカリ土類金属塩、例えばアルミニウム、カルシウ
ム、マグネシウム、亜鉛、ステアリン酸、ステアリン酸ナトリウム、グリセロール、タル
ク、ワックス、Ｓｔｅａｒｏｗｅｔ（登録商標）、ホウ酸、安息香酸ナトリウム、酢酸ナ
トリウム、塩化ナトリウム、ロイシン、ポリエチレングリコール（例えばＰＥＧ－４００
０）またはメトキシポリエチレン・グリコール、例えばＣａｒｂｏｗａｘ（商標）、オレ
イン酸ナトリウム、安息香酸ナトリウム、ベへン酸グリセリル、ポリエチレングリコール
、ラウリル硫酸マグネシウムまたはラウリル硫酸ナトリウム、Ｓｙｌｏｉｄ（商標）など
のコロイダルシリカ、Ｃａｂ－Ｏ－Ｓｉｌ（登録商標）、トウモロコシデンプンなどのデ
ンプン、シリコーン油、界面活性剤などを含む。
可塑剤は、マイクロカプセル化材料またはフィルムコーティングを軟化して、それらの
脆性を低減するために使用される化合物を含む。適切な可塑剤は、例えば、ＰＥＧ３００
、ＰＥＧ４００、ＰＥＧ６００、ＰＥＧ１４５０、ＰＥＧ３３５０、およびＰＥＧ８００
などのポリエチレングリコール、ステアリン酸、プロピレングリコール、オレイン酸、ト
リエチルセルロース、トリアセチンを含む。可塑剤は、分散剤または湿潤剤としても機能
する。
可溶化剤は、トリアセチン、クエン酸トリエチル、オレイン酸エチル、カプリル酸エチ
ル、ラウリル硫酸ナトリウム、ドクセートナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｄｏｃｃｕｓａｔ
ｅ）、ビタミンＥ ＴＰＧＳ、ジメチルアセトアミド、Ｎ－メチルピロリドン、Ｎ－ヒド
ロキシエチルピロリドン、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース
、ヒドロキシプロピル・シクロデキストリン、エタノール、ｎ－ブタノール、イソプロピ
ルアルコール、コレステロール、胆汁酸塩、ポリエチレングリコール２００－６００、グ
リコフロール、トランスクトール（ｔｒａｎｓｃｕｔｏｌ）、プロピレングリコール、お
よびジメチル・イソソルビドなどの化合物を含む。
安定化剤は、任意の抗酸化剤、緩衝剤、酸、防腐剤などの混合物を含む。
懸濁化剤は、例えば、ポリビニルピロリドンＫ１２、ポリビニルピロリドンＫ１７、ポ
リビニルピロリドンＫ２５、またはポリビニルピロリドンＫ３０などのポリビニルピロリ
ドン、ビニルピロリドン／酢酸ビニル共重合体（Ｓ６３０）、ポリエチレングリコール（
例えば、ポリエチレングリコールは、約３００～約６０００、約３３５０～約４０００、
または約７０００～約５４００の分子量を有する）、カルボキシメチルセルロースナトリ
ウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシメチルセル
ロースアセテートステアレート、ポリソルベート８０、ヒドロキシエチルセルロース、ア
ルギン酸ナトリウム、ゴム、例えばトラガカントゴム、アラビアゴム、グアーゴム、キサ
ンタンガムを含むキサンタン、糖、セルロース化合物、例えばカルボキシメチルセルロー
ス、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメ
チルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ポリソルベート８０、アルギン酸ナトリ
ウム、ポリエトキシル化ソルビタンモノラウレート、ポリエトキシル化ソルビタンモノラ
ウレート、ポビドンなどの化合物を含む。
サーファクタントは、ラウリル硫酸ナトリウム、ドクセートナトリウム、またはＴｗｅ
ｅｎ ６０または８０、トリアセチン、ビタミンＥ ＴＰＧＳ、ソルビタンモノオレアー
ト、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレアート（ｐｏｌｙｏｘｙｅｔｈｙｌｅｎｅ
ｓｏｒｂｉｔａｎ ｍｏｎｏｏｌｅａｔｅ）、ポリソルベート、ポロクサマー（ｐｏｌａ
ｘｏｍｅｒｓ）、胆汁酸塩、モノステアリン酸グリセリン、エチレンオキシドおよびプロ
ピレンオキシドのコポリマー、例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ（登録商標）（ＢＡＳＦ）など
の化合物を含む。付加的な界面活性剤は、ポリオキシエチレン脂肪酸グリセリドおよび植
物油（例えば、ポリオキシエチレン（６０）水素化ヒマシ油）；および、ポリオキシエチ
レンアルキルエーテルとアルキルフェニルエーテル、例えば、オクトキシノール１０、オ
クトキシノール４０などを含む。しばしば、界面活性剤は、物理的安定性を高めるために
、または他の目的のために含まれる。
粘度増強剤は、例えば、メチルセルロース、キサンタンガム、カルボキシメチルセルロ
ース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキ
シプロピルメチルセルロースアセテートステアレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロ
ースフタラート、カルボマー、ポリビニルアルコール、アルギン酸塩、アカシア、キトサ
ン、およびこれらの組み合わせを含む。
湿潤剤は、オレイン酸、モノステアリン酸グリセリル、モノオレイン酸ソルビタン、モ
ノラウリン酸ソルビタン、オレイン酸トリエタノールアミン、モノオレイン酸ポリオキシ
エチレンソルビタン、モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン、ドクサートナトリ
ウム、オレイン酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ドキュセートナトリウム、トリ
アセチン、Ｔｗｅｅｎ８０、ビタミンＥ ＴＰＧＳ、アンモニウム塩などの化合物を含む
。
治療レジメン
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される医薬組成物は治療用途のために投
与される。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、１日に一回、１日に２回、１日
に３回、またはそれ以上投与される。医薬組成物は、毎日、１日おき、週５日、週１日、
１週おき、月２週間、月３週間、月１回、月２回、月３回、またはそれ以上投与される。
医薬組成物は、少なくとも１か月、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、７か月、
８か月、９か月、１０か月、１１か月、１２か月、１８か月、２年、３年、またはそれ以
上の間投与される。
いくつかの実施形態では、１以上の医薬組成物は、同時に、連続して、またはある時間
間隔で投与される。いくつかの実施形態では、１以上の医薬組成物は同時に投与される。
場合によっては、１つ以上の医薬組成物は連続して投与される。さらなる場合には、１以
上の医薬組成物は、ある時間間隔で投与される（例えば、第１の医薬組成物の第１の投与
は１日目であり、その後、少なくとも第２の医薬組成物の投与前に少なくとも１、２、３
、４、５日またはそれ以上の間隔を空ける）。
いくつかの実施形態において、２つ以上の様々な医薬組成物は同時投与される。いくつ
かの例では、２以上の異なる医薬組成物が同時に投与される。場合によっては、２つ以上
の異なる医薬組成物が、投与間の間隔なく連続して同時投与される。他の場合には、２つ
以上の異なる医薬組成物が、投与間に約０．５時間、１時間、２時間、３時間、１２時間
、１日、２日の間隔をおいて連続して投与される。
患者の状態が改善する場合、医者の判断で、組成物の投与は継続的に行われ；代替的に
、投与されている組成物の用量は、一時的に減少されるか、または特定の期間の間一時的
に中断される（つまり、「休薬期間」）。いくつかの例では、休薬期間の長さは、ほんの
一例として、２日、３日、４日、５日、６日、７日、１０日、１２日、１５日、２０日、
２８日、３５日、５０日、７０日、１００日、１２０日、１５０日、１８０日、２００日
、２５０日、２８０日、３００日、３２０日、３５０日、または３６５日を含む、２日～
１年の間で変わる。休薬日中の投与量の減少は、ほんの一例として、１０％、１５％、２
０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７
０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、あるいは１００％を含む、１０％～１
００％である。
いったん患者の状態が改善すると、必要に応じて維持量が投与される。その後、投与量
または投与頻度、あるいはその両方は、症状に応じて、改善された疾患、障害、または疾
病が保持されるレベルにまで減少可能である。
いくつかの実施形態では、そのような量に相当する所定の薬剤の量は、特定の化合物、
疾患の重症度、処置を必要としている被験体または宿主の性質（例えば、体重）などの要
因に左右されるが、それにもかかわらず、例えば、投与されている特定の薬剤、投与経路
、および処置されている被験体または宿主を含む、症例を取り巻く特定の環境に従って、
当該技術分野で既知の方法で日常的に判定される。いくつかの例では、所望の投与量は一
回量で、あるいは、同時に（または短時間にわたって）、あるいは適切な間隔を置いて投
与された分割量、例えば、１日当たり２、３、あるいは４以上の分割用量（ｓｕｂ－ｄｏ
ｓｅｓ）として、都合よく提示される。
個々の処置レジメンに関する変数の数が大きいため、前述の範囲は単なる示唆的なもの
に過ぎず、これらの推奨値からかなり逸脱することは珍しいことではない。そのような投
与量は、限定されないが、使用される化合物の活性、処置される疾患または疾病、投与の
様式、個々の被験体の必要条件、処置されている疾患または疾病の重症度、および医師の
判断を含む、多くの変数に依存して変更される。
いくつかの実施形態では、こうした治療レジメンの毒性と治療の有効性は、限定されな
いが、ＬＤ５０（集団の５０％までの致死投与量）と、ＥＤ５０（集団の５０％に治療上
有効な投与量）の決定を含む、細胞培養または実験動物における標準的な製薬手順によっ
て決定される。毒性と治療効果との間の用量比が治療指数であり、これは、ＬＤ５０とＥ
Ｄ５０との間の比率として表される。高い治療指数を示す化合物が好ましい。細胞培養ア
ッセイと動物研究から得られたデータは、ヒトで使用される一連の投与量を製剤化するの
に使用される。こうした化合物の投与量は、最小限の毒性を備えるＥＤ５０を含む一連の
循環濃度内に位置するのが好ましい。投与量は、使用される剤形と利用される投与経路に
応じて、この範囲内で変わる。
キット／製品
ある実施形態において、本明細書に記載される１つ以上の組成物および方法とともに使
用されるキットおよび製品が本明細書で開示される。このようなキットは、バイアル、チ
ューブなどの１つ以上の容器を収容するために仕切られた運搬装置、包装または容器を含
み、各容器は、本明細書中に記載されている方法を使用するための別個の要素の１つを備
える。適切な容器は、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、および試験管を含む。一実
施形態において、容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成される。
本明細書で提供される製品は包装材料を含む。製薬用包装材料の例としては、限定され
ないが、ブリスターパック、瓶、チューブ、バッグ、容器、瓶、および選択された製剤と
意図した投与および処置のモードに適する任意の包装材料が挙げられる。
例えば、容器は、本明細書に記載される標的核酸分子を含む。そのようなキットは、識
別用の記載またはラベル、あるいは本明細書に記載される方法における使用に関する説明
書を随意に含む。
キットは典型的には、内容物および／または使用説明書を列挙するラベルと、使用説明
書を備えた添付文書とを含んでいる。１セットの説明書も典型的に含まれる。
一実施形態において、ラベルが容器上にあるか容器に付随する。一実施形態において、
ラベルを形成する文字、数字または他の表示が、容器自体に貼り付けられるか、成形され
るか、あるいは刻まれている場合は、ラベルは容器上に取付けられる。ラベルは、例えば
、添付文書として容器を保持するレセプタクルまたは運搬装置内に存在するとき、容器に
付随する。一実施形態において、ラベルは、内容物が特定の治療用途に用いられるべきも
のであるということを示すために使用される。ラベルは、例えば、本明細書に記載の方法
で、内容物の使用方法も示している。
ある実施形態では、医薬組成物は、本明細書で提供される化合物を含む１以上の単位剤
形を含有するパックまたはディスペンサーデバイスで提示される。パックは、例えば、ブ
リスターパックなどの金属またはプラスチックホイルを含む。一実施形態において、パッ
クまたはディスペンサーデバイスには、投与のための説明書が添付してある。一実施形態
において、パックまたはディスペンサーには、医薬品の製造、使用または販売を制御する
政府機関によって規定された形態の容器に付属の通知書が添付してあり、この通知書は、
ヒトまたは動物の投与のための薬物の形態についての、政府機関の承認を反映するもので
ある。このような通知書は、例えば、処方薬または承認された添付文書に関して、米国食
品医薬品局により承認されたラベルである。一実施形態において、適合する製薬担体で製
剤化される本明細書で提供される化合物を含む組成物も調製され、適切な容器に入れられ
、示された疾病の処置のためにラベル付けされる。
特定の用語
別段の定めのない限り、本明細書で使用される技術用語および科学用語はすべて、主題
が属する当該技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。前述
の一般的な記載および以下の詳細な記載は例示的かつ説明的なものに過ぎず、任意の主題
に限定されるものではないことが理解されよう。本出願では、単数の使用は、特別に別記
しない限り複数を含む。明細書および添付の請求項内で用いられる場合、単数形「ａ」、
「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、その文脈が明確に他のことを定めていない限り、複数の
指示対象を含む。本出願において、「または」の使用は特に明記しない限り、「および／
または」を意味する。さらに、用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」の使用は、「含む（
ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、および「含まれる（ｉｎｃｌｕｄ
ｅｄ）」といった他の形態と同じく、限定的なものではない。
本明細書で使用される場合、範囲および量は、「約」特定の値または範囲として表現可
能である。「約」は正確な量も含んでいる。したがって、「約５μＬ」は、「約５μＬ」
と「５μＬ」も意味する。一般に、用語「約」は、実験誤差内にあると予想される量を含
んでいる。
本明細書に使用される段落の見出しは、組織化するためのものに過ぎず、記載される主
題を制限するものと解釈されてはならない。
本明細書で使用される場合、用語「個体」、「被験体」、および「患者」は、任意の哺
乳動物を意味する。いくつかの実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。いくつかの実施
形態では、哺乳動物は非ヒトである。いかなる用語も、保健従事者（例えば、医者、正看
護師、臨床看護師、医師助手、看護助手、あるいはホスピスの職員）の監督（例えば、常
時または断続的）を特徴とする状況に制限されない。
これらの実施例は説明目的のために提供されるにすぎず、請求項の範囲を制限するもの
ではない。
実施例１。アンチセンスオリゴヌクレオチド配列および合成
ホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー（ＰＭＯ）、ホスホロチオエートアンチセ
ンスオリゴヌクレオチド（ＰＳ ＡＳＯ）、およびアンチセンスオリゴヌクレオチド（Ａ
ＳＯ）を合成した。
ＰＭＯ配列は、５’ＧＧＣＣＡＡＡＣＣＴＣＧＧＣＴＴＡＣＣＴＧＡＡＡＴ３’一級ア
ミン（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）であり、末端ヌクレオチドが拡張されて図１で見られ
る。ＰＭＯは、結合のために分子の３’末端にＣ３－ＮＨ２結合ハンドルを含む。ＰＭＯ
は、標準的な固相合成プロトコルを使用して固相上で完全に組み立てられ、ＨＰＬＣで精
製された。
ＰＳ ＡＳＯ配列は、アミン－Ｃ６－ＧＧＣＣＡＡＡＣＣＵＣＧＧＣＵＵＡＣＣＵ（Ｓ
ＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９）であり、末端ヌクレオチドが拡張されて図２Ａ－２Ｂで見られ
る。ＰＳ ＡＳＯの構造は、１００％のホスホロチオエート結合であるリン酸塩骨格を含
み、リボース糖類はすべて２’２’ＯＭｅ修飾を含んでいた。ＰＳ ＡＳＯは、結合のた
めに分子の５’末端にＣ６－ＮＨ２結合ハンドルも含んでいた。ＰＭＯは、標準的な固相
ホスホラミダイト化学を使用して固相上で完全に組み立てられ、ＨＰＬＣで精製された。
ＡＳＯは、標準的な固相ホスホラミダイト化学を使用して固相上で完全に組み立てられ
、ＨＰＬＣで精製された。ＡＳＯは、結合のために分子の５’末端にＣ６－ＮＨ２結合ハ
ンドルを含んでいた。
実施例２：ＤＭＤエクソンスキッピングの検出
分化したＣ１Ｃ１２細胞におけるＤＭＤエクソン２３スキッピングを判定するための方
法
マウス筋芽細胞Ｃ２Ｃ１２細胞を、０．５ｍＬの１０％ＦＢＳ ＲＰＭＩ １６４０培
地中の２４ウェルプレートに５０，０００－１００，０００／ウェルで蒔き、５％のＣＯ
２を用いて３７°Ｃで夜通しインキュベートした。２日目に、細胞を分化培地（２％のウ
マ血清ＲＰＭＩ １６４０および１μＭインスリン）に移し、３－５日間インキュベート
した。インキュベーション後、サンプルを加え、２４時間インキュベートした。サンプル
処理の後、１ｍＬの新鮮な培地（化合物を含まない）をさらに２日間、毎日交換した。処
置開始から７２時間後に、細胞を採取した。ＩｎｖｉＴｒａｐ ＲＮＡ細胞ＨＴＳ ９６
キット（Ｂ－Ｂｒｉｄｇｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＃７０６１３００４００）を
用いてＲＮＡを単離して、Ｈｉｇｈ Ｃａｐａｃｉｔｙ ｃＤＮＡ逆転写キット（Ｔｈｅ
ｒｍｏＦｉｓｈｅｒ ＃４３６８８１３）を使用して逆転写した。ＤｒｅａｍＴａｑ（商
標） ＰＣＲマスターミックス（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ ＃Ｋ１０７２）を使用して
ＰＣＲ反応を実施した。一次ＰＣＲは、エクソン２０（Ｅｘ２０Ｆ ５’－ＣＡＧＡＡＴ
ＴＣＴＧＣＣＡＡＴＴＧＣＴＧＡＧ）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）およびエクソン２６
（Ｅｘ２６Ｒ ５’－ＴＴＣＴＴＣＡＧＣＴＴＧＴＧＴＣＡＴＣＣ）（ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：３１）におけるプライマーを使用して、スキッピングされたおよびスキッピングされ
ていない両方の分子を、表２のプロトコルを用いて増幅した。
ネステッドＰＣＲについては、一次ＰＣＲ反応を水で１００倍に希釈し、５μｌをネス
テッドＰＣＲ反応に使用した（５０μｌの総反応量）。ネステッドＰＣＲは、エクソン２
０（Ｅｘ２０Ｆ２： ５’－ ＡＣＣＣＡＧＴＣＴＡＣＣＡＣＣＣＴＡＴＣ）（ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：３２）およびエクソン２５（Ｅｘ２５Ｒ： ５’－ ＣＴＣＴＴＴＡＴＣＴ
ＴＣＴＧＣＣＣＡＣＣＴＴ）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３）におけるプライマーを使用し
て、スキッピングされたおよびスキッピングされていない両方の分子を、表３のプロトコ
ルを用いて増幅した。
ＰＣＲ反応を４％のＴＡＥアガロースゲルを使用して分析した。野生型（ＷＴ）のＤＭ
Ｄ生成物は、予想されたサイズの７８８の塩基対と、５７５の塩基対のスキッピングされ
たＤＭＤΔ２３とを有していた。
動物
ＵＳＤＡ Ａｎｉｍａｌ Ｗｅｌｆａｒｅ Ａｃｔで概説された規則を厳守する、Ｅｘ
ｐｌｏｒａ ＢｉｏＬａｂｓのＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ
ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ（ＩＡＣＵＣ）、ならびに“Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ
ｔｈｅ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓ”
（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｕｎｃｉｌ ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ，
８ｔｈ Ｅｄ．， ｒｅｖｉｓｅｄ ｉｎ ２０１１）”に基づくプロトコルに従って、
動物研究を実施した。マウスはすべて、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｉｅｓまたはＨａｒｌａｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓのいずれかから入手した。
インビボのマウスモデル
指示されたアンチセンス抱合体（ＡＳＣ）および投与量を、静脈内（ｉｖ）注射によっ
てＷＴ ＣＤ－１マウス（４－６週齢）に投与した。「ネイキッド」ＰＭＯあるいはＡＳ
Ｏを、指示された投与量で筋肉内注射によって投薬した。４、７、あるいは１４日後、心
臓および腓腹筋の組織を採取して液体窒素で急速凍結した。ＲＮＡをＴｒｉｚｏｌ ａｎ
ｄ ＲＮｅａｓｙ Ｐｌｕｓ ９６ Ｋｉｔ （Ｑｉａｇｅｎ， ＃７４１９２）で単離
し、Ｈｉｇｈ Ｃａｐａｃｉｔｙ ｃＤＮＡ Ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉ
ｏｎ Ｋｉｔ （ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ ＃４３６８８１３）を用いて逆転写した。
ネステッドＰＣＲ反応を記載の通りに実施した。ＰＣＲ反応を４％のＴＡＥアガロースゲ
ル中で分析し、デンシトメトリーによって定量化した。
処置されたマウスのエクソン２３スキッピングを確認するために、ＤＮＡフラグメント
を４％のアガロースゲルから単離して配列決定した。
スキッピングされたＤＭＤ ｍＲＮＡのコピー数を定量的に決定するために、ｑＰＣＲ
プライマー／プローブセットを設計して、スキッピングされたおよびＷＴ ＤＭＤ ｍＲ
ＮＡ（図３）を定量化した。表４で見られるような設計されたＰＣＲプライマーを使用し
、ＰＣＲによって、ｑＰＣＲ定量化標準を設計および生成した。ＷＴおよびＤＭＤのため
のｑＰＣＲ標準については、ＰＣＲ後に、７３３の塩基対フラグメントをアガロースゲル
から単離した。スキッピングされたＤＭＡのｑＰＣＲ標準については、ネステッドプライ
マーを使用した。
ｑＰＣＲプライマー／プローブの増幅効率は、予想された効率の１０％以内であると判
定された。ｑＰＣＲ反応を、メーカーの説明書に従って、ＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ ７お
よびＴａｑｍａｎ（商標）ＰＣＲ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｍａｓｔｅｒｍｉｘ ＩＩ（Ｔ
ｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ ＃４４４００４１）で実施した。
実施例３：抱合体合成
分析および精製方法
分析および精製方法を表５－１１に従って実施した。
抗トランスフェリン受容体抗体
使用された抗マウストランスフェリン受容体抗体あるいは抗ＣＤ７１ ｍＡｂは、マウ
スＣＤ７１またはマウストランスフェリン受容体１（ｍＴｆＲ１）を結合するラットＩｇ
Ｇ２ａサブクラスモノクローナル抗体であった。抗体はＢｉｏＸｃｅｌｌによって産生さ
れ、市販で入手可能である（カタログ＃ ＢＥ０１７５）。
抗ＣＤ７１抗体モルホリノアンチセンスオリゴヌクレオチド抱合体（抗ＣＤ７１ ｍＡ
ｂ－ＰＭＯ）
抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＭＯ抱合体
水中に４当量のトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）を加えて、４
時間３７°Ｃでインキュベートすることによって、ホウ酸塩緩衝液（２５ｍＭの四ホウ酸
ナトリウム、２５ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのジエチレントリアミンペンタ酢酸、ｐＨ８．
０）中の抗ＣＤ７１抗体（１０ｍｇ／ｍＬ）を還元した。ＤＭＳＯ中の１０当量のＳＭＣ
Ｃ（１０ｍｇ／ｍＬ）を用いてＤＭＳＯ中のＰＭＯ（５０ｍｇ／ｍＬ）を１時間インキュ
ベートすることにより、４（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボン酸Ｎ－ヒド
ロキシスクシンイミドエステル（ＳＭＣＣ）を、ホスホロジアミデートモルホリノオリゴ
マー（ＰＭＯ）の３’末端で一級アミンに結合させた。３ｋＤａのＭＷＣＯを有するＡｍ
ｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ－１５遠心濾過機ユニットを使用した限外濾過により、非結合ＳＭ
ＣＣを除去した。ＰＭＯ－ＳＭＣＣを、緩衝酢酸溶液（１０ｍＭの酢酸ナトリウム、ｐＨ
６．０）で３回洗浄して、すぐに使用した。還元された抗体を、２．２５当量のＰＭＯ－
ＳＭＣＣと混合し、４°Ｃで夜通しインキュベートした。その後、反応混合物のｐＨを７
．５まで減らし、８当量のＮ－エチルマレイミドを室温で３０分間にわたって混合物に加
えて、未反応のシステインをクエンチした。疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ
）方法２による反応混合物の分析は、未反応の抗体およびＰＭＯと共に、抗体－ＰＭＯ抱
合体を示した（図４）。図４は、ＨＩＣ方法２で産生された抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＭＯ
反応混合物のクロマトグラムを示しており、遊離抗体ピーク（１）、遊離ＰＭＯ（２）、
ＤＡＲ １（３）、ＤＡＲ ２（４）、ＤＡＲ ３（５）、ＤＡＲ＞３（６）を示してい
る。「ＤＡＲ」は薬物対抗体比を指す。括弧の中の数はクロマトグラムのピークを指す。
精製
ＨＩＣ方法１を使用して、ＡＫＴＡ Ｅｘｐｌｏｒｅｒ ＦＰＬＣで反応混合物を精製
した。１（ＤＡＲ１）と２（ＤＡＲ２）の薬物対抗体比を有する抱合体を含む画分を組み
合わせ、２を超えるＤＡＲを有する抱合体とは別に、５０ｋＤａのＭＷＣＯを有するＡｍ
ｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ１５遠心濾過機ユニットで濃縮した。濃縮抱合体を、分析の前に、
Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ１５遠心濾過機ユニットを使用して、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）と
緩衝液交換した。
精製された抱合体の分析
単離させた抱合体を、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）およびＨＩＣで特徴づ
けた。高分子量の凝集塊と非結合ＰＭＯが存在しないことを確認するために、ＳＥＣ方法
１を使用した（図５Ａ－５Ｃ）。図５Ａは、ＳＥＣ方法１を使用して産生された抗ＣＤ７
１ ｍＡｂのクロマトグラムを示す。図５Ｂは、ＳＥＣ方法１を使用して産生された抗Ｃ
Ｄ７１ ｍＡｂ－ＰＭＯ ＤＡＲ １および２のクロマトグラムを示す。図５Ｃは、ＳＥ
Ｃ方法１を使用して産生された２を超える抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＭＯ ＤＡＲのクロマ
トグラムを示す。「ＤＡＲ」は薬物対抗体比を指す。
ＨＩＣ方法２を使用して分析的ＨＰＬＣによって、抱合体の純度を評価した（図６Ａ－
６Ｃ）。図６Ａは、ＨＩＣ方法２を使用して産生された抗ＣＤ７１ ｍＡｂのクロマトグ
ラムを示す。図６Ｂは、ＨＩＣ方法２を使用して産生された抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＭＯ
ＤＡＲ１および２抱合体のクロマトグラムを示す。図６Ｃは、ＨＩＣ方法２を使用して
産生された抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＭＯ ＤＡＲ＞２抱合体のクロマトグラムを示す。各
サンプルの２６０／２８０ｎｍのＵＶ吸光度比率を、ＰＭＯと抗体の既知の比率の標準曲
線と比較して、ＤＡＲを確認した。ＤＡＲ１および２のサンプルは～１．６の平均ＤＡＲ
を有していたが、２を超えるＤＡＲのサンプルは～３．７の平均ＤＡＲを有していた。「
ＤＡＲ」は薬物対抗体比を指す。
抗ＣＤ７１Ｆａｂモルホリノアンチセンスオリゴヌクレオチド抱合体（抗ＣＤ７１ Ｆ
ａｂ－ＰＭＯ）
ペプシンによる抗体消化
２０ｍＭの緩衝酢酸溶液（ｐＨ４．０）中の抗ＣＤ７１抗体（５ｍｇ／ｍＬ）を、３７
°Ｃで３時間、固定されたペプシンを用いてインキュベートした。樹脂を取り除き、反応
混合物を、３０ｋＤａのＭＷＣＯを有するＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ１５遠心濾過機ユニ
ットを使用して、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）で洗浄した。残留物を集めて、サイズ排除クロマ
トグラフィー（ＳＥＣ）方法２を使用して精製し、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを単離し
た。
抗ＣＤ７１（Ｆａｂ）－ＰＭＯ抱合体
水中に１０当量のＴＣＥＰを加えて、３７°Ｃで２時間インキュベートすることによっ
て、ホウ酸塩緩衝液（ｐＨ８．０）中のＦ（ａｂ’）２フラグメント（１５ｍｇ／ｍＬ）
を還元した。ＤＭＳＯ中の１０当量のＳＭＣＣ（１０ｍｇ／ｍＬ）を用いてＤＭＳＯ中の
ＰＭＯ（５０ｍｇ／ｍＬ）を１時間インキュベートすることにより、ＳＭＣＣをＰＭＯの
３’末端の一級アミンに加えた。３ｋＤａのＭＷＣＯを有するＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ
－１５遠心濾過機ユニットを使用した限外濾過により、非結合ＳＭＣＣを除去した。ＰＭ
Ｏ－ＳＭＣＣを、緩衝酢酸溶液（ｐＨ６．０）で３回洗浄してすぐに使用した。１０ｋＤ
ａのＭＷＣＯを有するＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ１５遠心濾過機ユニットを使用して、還
元されたＦ（ａｂ’）フラグメント（Ｆａｂ）をホウ酸塩緩衝液（ｐＨ８．０）へと緩衝
液交換し、１．７５当量のＰＭＯ－ＳＭＣＣを加えて、４°Ｃで夜通しインキュベートし
た。その後、反応混合物のｐＨを７．５まで減らし、６当量のＮ－エチルマレイミドを室
温で３０分間にわたって混合物に加えて、未反応のシステインをクエンチした。疎水性相
互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）方法３による反応混合物の分析は、未反応のＦａｂ
とともに抗ＣＤ７１（Ｆａｂ）－ＰＭＯ抱合体を示した（図１４ａ）。図７Ａは、ＨＩＣ
方法３を使用した抗ＣＤ７１ Ｆａｂ－ＰＭＯのＦＰＬＣ精製のクロマトグラムを示す。
精製
ＨＩＣ方法３を使用して、ＡＫＴＡ Ｅｘｐｌｏｒｅｒ ＦＰＬＣで反応混合物を精製
した。１、２、および３のＤＡＲの抱合体を含む画分を組み合わせて、別々に濃縮した。
濃縮抱合体を、分析の前に、１０ｋＤａのＭＷＣＯを有するＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ１
５遠心濾過機ユニットを使用して、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）と緩衝液交換した。
精製された抱合体の分析
単離させた抱合体をＳＥＣとＨＩＣで特徴づけた。高分子量の凝集塊および未結合ＰＭ
Ｏが存在しないことを確認するために、ＳＥＣ方法１を使用した。図７Ｂ－図７Ｅを参照
する。図７Ｂは、ＳＥＣ方法１を使用して産生された抗ＣＤ７１ Ｆａｂのクロマトグラ
ムを示す。図７Ｃは、ＳＥＣ方法１を使用して産生された抗ＣＤ７１ Ｆａｂ－ＰＭＯ
ＤＡＲ１抱合体のクロマトグラムを示す。図７Ｄは、ＳＥＣ方法１を使用して産生された
抗ＣＤ７１ Ｆａｂ－ＰＭＯ ＤＡＲ２抱合体のクロマトグラムを示す。図７Ｅは、ＳＥ
Ｃ方法１を使用して産生された抗ＣＤ７１ Ｆａｂ－ＰＭＯ ＤＡＲ３抱合体のクロマト
グラムを示す。ＨＩＣ方法４を使用した分析的ＨＰＬＣによって、抱合体の純度を評価し
た。図７Ｆ－図７Ｉを参照。図７Ｆは、ＨＩＣ方法４を使用して産生された抗ＣＤ７１
Ｆａｂのクロマトグラムを示す。図７Ｇは、ＨＩＣ方法４を使用して産生された抗ＣＤ７
１ Ｆａｂ－ＰＭＯ ＤＡＲ１抱合体のクロマトグラムを示す。図７Ｈは、ＨＩＣ方法４
を使用して産生された抗ＣＤ７１ Ｆａｂ－ＰＭＯ ＤＡＲ２抱合体のクロマトグラムを
示す。図７Ｉは、ＨＩＣ方法４を使用して産生された抗ＣＤ７１ Ｆａｂ－ＰＭＯ ＤＡ
Ｒ３抱合体のクロマトグラムを示す。「ＤＡＲ」は薬物対抗体比を指す。各サンプルの２
６０／２８０ｎｍのＵＶ吸光度比率を、ＰＭＯとＦａｂの既知の比率の標準曲線と比較し
て、ＤＡＲを確認した。
抗ＣＤ７１抗体ホスホロチオエートアンチセンスオリゴヌクレオチド抱合体（抗ＣＤ７
１ ｍＡｂ－ＰＳ ＡＳＯ）
抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＳ ＡＳＯ
水中に４当量のＴＣＥＰを加えて、４時間３７°Ｃでインキュベートすることにより、
ホウ酸塩緩衝液（ｐＨ８．０）中の抗ＣＤ７１（１０ｍｇ／ｍＬ）を還元した。ＤＭＳＯ
中の１０当量のＳＭＣＣ（１０ｍｇ／ｍＬ）を有する２５０ｍＭのＰＢ（ｐＨ７．５）お
よびＤＭＳＯの１：１混合物においてＰＳ ＡＳＯ（５０ｍｇ／ｍＬ）を１時間インキュ
ベートすることにより、４（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボン酸Ｎ－ヒド
ロキシスクシンイミドエステル（ＳＭＣＣ）を、ＰＳ－ＡＳＯの５’末端の一級アミンに
加えた。３ｋＤａのＭＷＣＯを有するＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ－１５遠心濾過機ユニッ
トを使用した限外濾過により、非結合ＳＭＣＣを除去した。ＰＳ ＡＳＯ－ＳＭＣＣを、
緩衝酢酸溶液（ｐＨ６．０）で３回洗浄してすぐに使用した。還元された抗体を、１．７
当量のＰＳ ＡＳＯ－ＳＭＣＣと混合して、４°Ｃで夜通しインキュベートした。その後
、反応混合物のｐＨを７．４まで減らし、８当量のＮ－エチルマレイミドを室温で３０分
間にわたって混合物に加えて、未反応のシステインをクエンチした。強力な陰イオン交換
クロマトグラフィー（ＳＡＸ）方法２による反応混合物の分析は、未反応の抗体およびＡ
ＳＯと共に抗体－ＰＳ ＡＳＯ抱合体を示した（図８Ａ）。図８Ａは、ＳＡＸ方法２で産
生された抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＳ ＡＳＯ反応混合物のクロマトグラムを示しており、
遊離抗体ピーク（１）、遊離ＰＳ ＡＳＯ（５）、ＤＡＲ １（２）、ＤＡＲ ２（３）
、ＤＡＲ＞２（４）を示している。「ＤＡＲ」は薬物対抗体比を指す。括弧の中の数はピ
ークを指す。
精製
ＳＡＸ方法１を使用して、ＡＫＴＡ Ｅｘｐｌｏｒｅｒ ＦＰＬＣで反応混合物を精製
した。１、２、および３の薬物対抗体比（ＤＡＲ）の抱合体を含む画分を組み合わせて、
別々に濃縮し、分析の前に、５０ｋＤａのＭＷＣＯを有するＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ１
５遠心濾過機ユニットを使用して、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）で緩衝液交換した。
精製された抱合体の分析
単離させた抱合体を、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）およびＳＡＸで特徴づ
けた。高分子量の凝集塊と非結合ＡＳＯが存在しないことを確認するために、サイズ排除
クロマトグラフィー方法１を使用した。図８Ｂ－図８Ｅを参照する。図８Ｂは、ＳＥＣ方
法１を使用して産生された抗ＣＤ７１ ｍＡｂのクロマトグラムを示す。図８Ｃは、ＳＥ
Ｃ方法１を使用して産生された抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＳ ＡＳＯ ＤＡＲ１抱合体のク
ロマトグラムを示す。図８Ｄは、ＳＥＣ方法１を使用して産生された抗ＣＤ７１ ｍＡｂ
－ＰＳ ＡＳＯ ＤＡＲ２抱合体のクロマトグラムを示す。図８Ｅは、ＳＥＣ方法１を使
用して産生された抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＳ ＡＳＯ ＤＡＲ３抱合体のクロマトグラム
を示す。抱合体の純度を、ＳＡＸ方法２を使用した分析的ＨＰＬＣによって評価した。図
８Ｆ－図８Ｈを参照する。図８Ｆは、ＳＡＸ方法２を使用して産生された抗ＣＤ７１ ｍ
Ａｂ－ＰＳ ＡＳＯ ＤＡＲ１抱合体のクロマトグラムを示す。図８Ｇは、ＳＡＸ方法２
を使用して産生された抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＳ ＡＳＯ ＤＡＲ２抱合体のクロマトグ
ラムを示す。図８Ｈは、ＳＡＸ方法２を使用して産生された抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＳ
ＡＳＯ ＤＡＲ３抱合体のクロマトグラムを示す。各サンプルの２６０／２８０ｎｍのＵ
Ｖ吸光度比率を、ＡＳＯと抗体の既知の比率の標準曲線と比較して、薬物対抗体比（ＤＡ
Ｒ）を確認した。
実施例４：抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＭＯ抱合体のインビトロ活性
実施例３に記載されるように、抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＭＯ抱合体が作られ、特徴づけ
られた。実施例２と同様の方法を使用するネステッドＰＣＲを利用して、分化したＣ２Ｃ
１２細胞においてインビトロのエクソンスキッピングを媒介する能力について抱合体を評
価した。簡潔に言えば、「ネイキッド」モルホリノＡＳＯ（「ＰＭＯ」）の効能を、関連
するビヒクル対照を用いて、複数の濃度の抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＭＯ抱合体と比較した
。対照はビヒクル（「Ｖｅｈ」）、５０ｕＭのスクランブル・モルホリノ（「Ｓｃｒ５０
」）を含んでおり、抗体（「Ｎｅｇ－Ａｂ」）は含んでいなかった。使用したＰＭＯの濃
度は、５０ｕＭ、１ｕＭ、および０．０２ｕＭを含んでいた。使用した抗ＣＤ７１ ｍＡ
Ｂ－ＰＭＯ ＤＡＲ １および２の濃度は、２００ｎＭ、２０ｎＭ、および２ｎＭを含ん
でいた。「ＤＡＲ」は薬物対抗体比を指す。
ｃＤＮＡ合成後に、２回のＰＣＲ増幅（一次ＰＣＲおよびネステッドＰＣＲ）を使用し
て、エクソンスキッピングを検出した。ＰＣＲ反応を４％のＴＡＥアガロースゲル中で分
析した（図９）。
図９を参照すると、抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＭＯ抱合体は、分化したＣ２Ｃ１２細胞に
おいて、「ネイキッド」ＰＭＯ対照よりも低い濃度の、測定可能なエクソン２３スキッピ
ングをもたらした。野生型の生成物は、予想されたサイズの７８８の塩基対と、５７５の
塩基対のスキッピングされたＤＭＤΔ２３とを有していた。
別の実験は、抗ＣＤ７１Ｆａｂ－ＰＭＯ抱合体と、陰性対照として抗ＥＧＦＲ（「Ｚ－
ＰＭＯ」）で標的化されたＰＭＯを含んでいた（図１０）。使用したＰＭＯの濃度は、１
０ｕＭと２ｕＭを含んでいた。使用した抗ＣＤ７１ｍＡｂ－ＰＭＯの濃度は、０．２ｕＭ
と０．０４ｕＭを含んでいた。抗ＣＤ７１ｍＡｂ－ＰＭＯは２のＤＡＲを有していた。Ｚ
－ＰＭＯは０．２ｕＭの濃度で使用され、２のＤＡＲを有していた。抗ＣＤ７１Ｆａｂ－
ＰＭＯの濃度は０．６ｕＭと０．１２ｕＭを含んでいた。０．６ｕＭおよび０．１２ｕＭ
の抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＭＯの１、２、および、３のＤＡＲを分析した。
図１０を参照すると、トランスフェリン受容体、抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＭＯ、および
抗ＣＤ７１ Ｆａｂ－ＰＭＯ抱合体を利用する受容体を媒介とする取り込みは、Ｃ２Ｃ１
２細胞において、「ネイキッド」ＰＭＯ対照よりも低い濃度の、測定可能なエクソン２３
スキッピングをもたらした。抗ＣＤ７１抱合体からスキッピングをもたらした試験濃度に
おいて、Ｚ－ＰＭＯからの測定可能なエクソン２３スキッピングはなかった。
実施例５。抗－ＣＤ７１－ＡＳＯ ｍＡｂ ＰＳ抱合体のインビトロ活性
実施例３に記載されるように、抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＳ ＡＳＯ抱合体を作り、特徴
づけた。実施例２に記載される方法と同様の方法を使用し、ネステッドＰＣＲを利用して
、分化したＣ２Ｃ１２細胞においてインビトロのエクソンスキッピングを媒介する能力に
ついて抱合体を評価した。簡潔に言えば、「ネイキッド」ホスホロチオエートＡＳＯ（Ｐ
Ｓ ＡＳＯ）の効能を、関連するビヒクル対照を用いて、複数の濃度の抗ＣＤ７１ ｍＡ
ｂ－ＰＳ ＡＳＯ抱合体と比較した。ｃＤＮＡ合成後に、２回のＰＣＲ増幅（一次ＰＣＲ
とネステッドＰＣＲ）を実施して、エクソンスキッピングを検出した。ＰＣＲ反応を４％
のＴＡＥアガロースゲル中で分析した（図１１）。図１１は、ＰＭＯ、ＡＳＯ、ＤＡＲ１
の結合した抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＡＳＯ（「ＡＳＣ－ＤＡＲ１」）、ＤＡＲ２の結合した
抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＡＳＯ（「ＡＳＣ－ＤＡＲ２」）、および、ＤＡＲ３の結合した抗
ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＡＳＯ（「ＡＳＣ－ＤＡＲ３」）のアガロースゲルを示す。「ＰＭＯ
」および「ＡＳＯ」は、（抗体に結合していない）遊離ＰＭＯおよびＡＳＯを指す。「Ｖ
ｅｈ」はビヒクルのみを指す。試験した濃度は、０．２、１、および５マイクロモル（μ
Ｍ）を含んでいた。
図１１を参照すると、抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＳ ＡＳＯ抱合体は、分化したＣ２Ｃ１
２細胞において、「ネイキッド」ＰＳ ＡＳＯ対照よりも低い濃度の、測定可能なエクソ
ン２３スキッピングをもたらした。野生型の生成物は、予想されたサイズの７８８の塩基
対と、５７５の塩基対のスキッピングされたＤＭＤΔ２３とを有していた。
実施例６：抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＭＯ抱合体のインビボ活性
実施例３に記載されるように、抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＭＯ抱合体を作り、特徴づけた
。抱合体抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＭＯ ＤＡＲ１、２および抗ＣＤ７１ ｍＡｂ－ＰＭＯ
ＤＡＲ＞２を、実施例２に記載される方法と同様の方法を用いて、野生型のＣＤ－１マ
ウスにおけるインビボのエクソンスキッピングを媒介するその能力について評価した。「
ＤＡＲ」は薬物対抗体比を指す。
表１２で提供される投与量で、静脈内（ｉｖ）注射によって、ｍＡｂ、ビヒクル対照、
およびアンチセンス抱合体（ＡＳＣ）をマウスに投与した。「ＤＡＲ」は薬物対抗体比を
指す。「ネイキッド」ＰＭＯを、表１２に提供される投与量で、筋肉内注射によって腓腹
筋へと投与した。４、７、あるいは１４日後、心臓および腓腹筋の組織を採取して液体窒
素で急速凍結した。ＲＮＡを単離し、逆転写し、ネステッドＰＣＲ反応を実施した。ＰＣ
Ｒ反応を４％のＴＡＥアガロースゲル中で分析し、デンシトメトリーによって定量化した
。
図１２Ａは、４、７、あるいは１４日間の、抗ＣＤ７１のｍＡｂ－ＰＭＯ ＤＡＲ１、
２、抗ＣＤ７１のｍＡｂ－ＰＭＯ ＤＡＲ＞２、抗ＣＤ７１のｍＡｂ、ＰＭＯ、およびビ
ヒクルを投与されたマウスからの腓腹筋サンプルのゲル電気泳動を示す。野生型の生成物
は、予想されたサイズの７８８の塩基対と、５７５の塩基対のスキッピングされたＤＭＤ
Δ２３とを有していた。抗ＣＤ７１のｍＡｂ－ＰＭＯ ＤＡＲ １、２、および抗ＣＤ７
１のｍＡｂ－ＰＭＯ ＤＡＲ＞は、腓腹筋において、「ネイキッド」ＰＭＯ対照よりも低
い濃度の、測定可能なエクソン２３スキッピングをもたらした。ゲル上のバンドの強度（
図１２Ａ）は、図１２Ｂで見られるデンシトメトリーによって定量化された。図１２Ｃは
、Ｔａｑｍａｎ ｑＰＣＲを使用した、野生型のマウス腓腹筋におけるインビボのエクソ
ンスキッピングの定量化を示す。
図１３Ａは、４、７、あるいは１４日間の、抗ＣＤ７１のｍＡｂ－ＰＭＯ ＤＡＲ １
、２、抗ＣＤ７１のｍＡｂ－ＰＭＯ ＤＡＲ＞２、抗ＣＤ７１のｍＡｂ、ＰＭＯ、および
ビヒクルを投与されたマウスからの心臓サンプルのゲル電気泳動を示す。野生型の生成物
は、予想されたサイズの７８８の塩基対と、５７５の塩基対のスキッピングされたＤＭＤ
Δ２３とを有していた。ゲル上のバンドの強度（図１３Ａ）は、図１３Ｂで見られるデン
シトメトリーによって定量化された。腓腹筋サンプルを用いても同様の結果が得られた。
抗ＣＤ７１のｍＡｂ－ＰＭＯ ＤＡＲ １、２、および抗ＣＤ７１のｍＡｂ－ＰＭＯ Ｄ
ＡＲ＞は、腓腹筋において、「ネイキッド」ＰＭＯ対照よりも低い濃度の、測定可能なエ
クソン２３スキッピングをもたらした。
その後、ＤＮＡフラグメントを、４％のアガロースゲルから単離して配列決定した。配
列決定データは、図１４で見られるスキッピングされた野生型の生成物における、適切な
配列を確認した。
実施例７。配列
表１３は、本明細書に記載される組成物および方法を使用して、ＤＭＤ遺伝子の挿入、
欠失、複製、あるいは変化を誘発するための、例示的な標的配列を示す。表１４は、本明
細書に記載される組成物および方法を使用して、ＤＭＤ遺伝子の挿入、欠失、複製、ある
いは変化を誘発するための、例示的なヌクレオチド配列を示す。表１５および表１６は、
遺伝子の挿入、欠失、複製、あるいは変化を誘発するための、いくつかの遺伝子における
例示的な標的配列を示す。表１７は、本明細書に記載される組成物および方法を使用して
、遺伝子の挿入、欠失、複製、あるいは変化を誘発するためのＤＭＤ遺伝子の配列を含む
、例示的な配列を説明する。
工程１：マレイミド－ＰＥＧ－ＮＨＳ、その後のｓｉＲＮＡ－ＤＭＤ抱合体との抗体結
合
抗ジストロフィン抗体を、１Ｘリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）と交換して、最大で５ｍｇ
／ｍｌの濃度にした。この溶液に、２当量のＳＭＣＣリンカーあるいはマレイミド－ＰＥ
ＧｘｋＤａ－ＮＨＳ（ｘ＝１、５、１０、２０）を加えて、室温で４時間回転させた。未
反応のマレイミド－ＰＥＧを、５０ｋＤａのＭＷＣＯのＡｍｉｃｏｎスピンフィルターお
よびＰＢＳ ｐＨ７．４を使用する回転濾過によって除去した。抗体－ＰＥＧＭａｌ抱合
体を集めて、反応容器に移した。表１３－１７に示される配列を使用して、様々なｓｉＲ
ＮＡ抱合体を合成する。ｓｉＲＮＡ－ＤＭＤ抱合体（２当量）をＰＢＳ中の抗体－ＰＥＧ
マレイミドに室温で加え、夜通し回転させた。反応混合物を分析的ＳＡＸカラムクロマト
グラフィーによって分析すると、未反応の抗体およびｓｉＲＮＡと共に抱合体が見られる
。
工程２：精製
粗製反応混合物を、陰イオン交換クロマトグラフィーを使用するＡＫＴＡ ｅｘｐｌｏ
ｒｅｒ ＦＰＬＣによって精製した。抗体－ＰＥＧ－ＤＭＤ抱合体を含む画分をプールし
、濃縮し、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）と緩衝液交換した。ＳＭＣＣリンカー、ＰＥＧ１ｋＤａ
、ＰＥＧ５ｋＤａ、およびＰＥＧ１０ｋＤａを有する抗体ｓｉＲＮＡ抱合体を、ｓｉＲＮ
Ａ負荷に基づいて分離する。
工程３：精製された抱合体の分析
単離した抱合体を、質量スペクトルまたはＳＤＳ－ＰＡＧＥのいずれかによって特徴付
けた。抱合体の純度を、陰イオン交換クロマトグラフィーを使用して、分析的ＨＰＬＣに
よって評価した。
実施例８。追加の配列
表１８は、本明細書に記載される追加のポリ核酸分子配列を示す。
実施例９：トランスフェクトされた初代ヒト骨格筋細胞におけるＤＭＤエクソン４４お
よび４５のスキッピングＰＭＯ
初代のあらかじめ分化したヒト骨格筋細胞（Ｇｉｂｃｏ、＃Ａ１１４４０）を、メーカ
ーの説明書に従って、２％のウマ血清および１ｘＩＴＳ（Ｇｉｂｃｏ、＃１９３３２８６
）で補充されたＤＭＥＭ中の、１型コラーゲンでコーティングされた２４ウェルプレート
（Ｇｉｂｃｏ、＃１９７０７８８）に蒔いた。細胞を３７°Ｃ＋５％のＣＯ２で２日間成
長させて、筋管を確立した。その後、これらの細胞を、水中の定義された濃度のＰＭＯお
よび２ｕＭのＥｎｄｏポーター（Ｇｅｎｅ Ｔｏｏｌｓ、＃ＥＰ６Ｐ１－１）で処置し、
細胞へのＰＭＯ取り込みを促進した。培地を吸引し、その後、ウェル当たり３００ｕｌの
ＴＲＩＺＯＬを加えることによって、処置から４８時間後に細胞を収集した。Ｄｉｒｅｃ
ｔ－ｚｏｌ（商標）－９６ ＲＮＡキット（Ｚｙｍｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、＃Ｒ２０５６
）を使用してＲＮＡを調製する前に、細胞を－８０°Ｃで冷凍した。全ＲＮＡ濃度を分光
学的で定量化した。１００－２００ｎｇの全ＲＮＡを、高容量ｃＤＮＡ逆転写キット（Ａ
ｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、＃４３６８８１３）を使用して逆転写した。ＲＴ
ＰＣＲ反応を、２５°Ｃで１０分間、３７°Ｃで１２０分間、８５°Ｃで５分間インキ
ュベートし、その後、４°Ｃで保持した。反応物を水で１：１に希釈した。ゲル電気泳動
をエクソンスキッピングの定量化については、全ｍＲＮＡ（スキッピングされた＋スキッ
ピングされていない）およびスキッピングされたｍＲＮＡを表すＤＮＡ断片を、 Ｔａｑ
ｍａｎ Ｆａｓｔ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｍａｓｔｅｒ ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏ
ｓｙｓｔｅｍｓ、＃４４４４５５８）および特定のプライマー対（表１９を参照）を使用
して、ｑＰＣＲによって増幅した。ｑＰＣＲ反応物を、ＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ ７Ｆｌ
ｅｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、９５°Ｃで２０秒間インキ
ュベートし、その後、９５°Ｃで１秒間および６０°Ｃで２０秒間の３２サイクルでイン
キュベートした。ＰＣＲ産物をＴＡＥローディングバッファーで４：１に希釈し、Ｇｅｌ
Ｇｒｅｅｎを含有している２４ウェルの４％ＴＡＥゲル（Ｅｍｂｉ Ｔｅｃ， ＃ＧＧ３
８０７）に載せた。ＰＣＲ産物を電気泳動（２時間５０Ｖ）によって分離した。全ＤＭＤ
およびスキッピングされたＤＭＤ産物に対応するバンドの強度を、ＣｈｅｍｉＤｏｃ（商
標）ＸＲＳ＋（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用したデンシトメトリーによって定量化した。
Ｔａｑｍａｎ ｑＰＣＲプライマーおよびプローブが表１９に示される。
全ｈＤＭＤＨｓ０１０４９４０１＿ｍ１、ヒト ＤＭＤ ＶＩＣ－ＭＧＢ， ３６０
ｒｘｎｓ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）
表２０Ａは、トランスフェクトされた初代ヒト骨格筋細胞におけるＤＭＤエクソン４５
を標的とするＰＭＯ（３０ｍｅｒ）のエクソンスキッピング活性を示す。
表２０Ｂは、トランスフェクトされた初代ヒト骨格筋細胞におけるＤＭＤエクソン４４
を標的とするＰＭＯ（３０ｍｅｒ）のエクソンスキッピング活性を示す。
図１５は、トランスフェクトされた初代ヒト骨格筋細胞におけるｈＥｘ４５＿Ａｃ９
ＰＭＯの様々な長さのエクソンスキッピング活性を示す。
実施例１０：ヒトＴｆＲ１ ＰＭＯ抱合体の合成および精製
抗ヒトトランスフェリン受容体抗体を産生した。ＰＭＯ（２８－ｍｅｒ）をＧｅｎｅＴ
ｏｏｌｓによって合成した。水中に４当量のトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン
（ＴＣＥＰ）を加えて、３７°Ｃで４時間インキュベートすることによって、ホウ酸塩緩
衝液（２５ｍＭの四ホウ酸ナトリウム、２５ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのジエチレントリア
ミンペンタ酢酸、ｐＨ８．０）中のＣＤ７１抗体（１０ｍｇ／ｍＬ）を還元した。ＤＭＳ
Ｏ中の１０当量のＳＭＣＣ（１０ｍｇ／ｍＬ）を用いてＤＭＳＯ中のＰＭＯ（５０ｍｇ／
ｍＬ）を１時間インキュベートすることにより、４（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキ
サンカルボン酸Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＳＭＣＣ）を、ＰＭＯの３’末
端で一級アミンに結合させた。３ｋＤａのＭＷＣＯを有するＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ－
１５遠心濾過機ユニットを使用した限外濾過により、非結合ＳＭＣＣを除去した。ＰＭＯ
－ＳＭＣＣを、緩衝酢酸溶液（１０ｍＭの酢酸ナトリウム、ｐＨ６．０）で３回洗浄して
、すぐに使用した。還元された抗体を、２．２５当量のＰＭＯ－ＳＭＣＣと混合し、４°
Ｃで夜通しインキュベートした。その後、反応混合物のｐＨを７．５まで減らし、８当量
のＮ－エチルマレイミドを室温で３０分間にわたって混合物に加えて、未反応のシステイ
ンをクエンチした。疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）方法２による反応混合
物の分析は、未反応の抗体およびＰＭＯと共に、抗体－ＰＭＯ抱合体を示した。
ＨＩＣ方法１を使用して、反応混合物をＡＫＴＡ Ｅｘｐｌｏｒｅｒ ＦＰＬＣで精製
した。抱合体に基づいて、１（ＤＡＲ １）、２（ＤＡＲ ２）、および３（ＤＡＲ ３
）の薬物対抗体比を有する抱合体のいずれかを含有する画分、あるいは３＋（ＤＡＲ ３
＋）または４＋（ＤＡＲ ４＋）の薬物対抗体比を有する抱合体を含有する画分を組み合
わせて、５０ｋＤａのＭＷＣＯを有するアミコンウルトラ１５遠心式フィルターユニット
で濃縮した。濃縮抱合体を、分析の前に、Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ１５遠心濾過機ユニ
ットを使用して、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）と緩衝液交換した。
疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）方法－１
１．カラム：ＧＥ、ＨｉＳｃｒｅｅｎ Ｂｕｔｙｌ ＨＰ、４．７ｍｌ
２．溶媒Ａ：５０ｍＭのリン酸塩緩衝液、０．７Ｍの硫酸アンモニウム、ｐＨ７．０；溶
媒Ｂ：８０％の５０ｍＭのリン酸塩緩衝液、２０％のＩＰＡ、ｐＨ７．０；流速：１．０
ｍＬ／分
３．勾配：
ａ．％Ａ ％Ｂ カラム体積
ｂ．１００ ０ １
ｃ．７０ ３０ ２５
ｄ．０ １００ １
ｅ．０ １００ ２
ヒトトランスフェリン受容体へのｈＴｆＲ１．ｍＡｂ－ＰＭＯ抱合体の結合
抗体抱合体（ＡＯＣ）結合をＥＬＩＳＡによって測定した。組換えヒトトランスフェリ
ン受容体（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ １１０２０－Ｈ０７Ｈ）を、高結合プレー
ト （Ｃｏｓｔａｒ ３６９０） 上に、ＰＢＳ中の１ｎｇ／ｕＬで夜通しコーティング
した。プレートを洗浄し、ＡＯＣまたはｍＡｂのサンプルを最大１０ｎＭの濃度で加えた
。着色剤は、ＨＲＰ結合二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ １
０９－０３５－００６）および２Ｎ硫酸で止められたＴＭＢ基質（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈ
ｅｒ ３４０２８）によって開発された。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用してＫｄ
を決定した。
図１６は、ヒトトランスフェリン受容体へのｈＴｆＲ１．ｍＡｂ－ＰＭＯ抱合体のイン
ビトロでの結合を例証する。
初代ヒト骨格筋細胞におけるＴｆＲ１ ｍＡｂ－ＰＭＯ抱合体の活性
初代のあらかじめ分化したヒト骨格筋細胞（Ｇｉｂｃｏ、＃Ａ１１４４０）を、メーカ
ーの説明書に従って、２％のウマ血清および１ｘＩＴＳ（Ｇｉｂｃｏ、＃１９３３２８６
）で補充されたＤＭＥＭに、１型コラーゲンでコーティングされた２４ウェルプレート（
Ｇｉｂｃｏ、＃１９７０７８８）に蒔いた。細胞を３７°Ｃ＋５％のＣＯ２で２日間成長
させ、筋管を確立した。健康なドナー（Ｍｙｏｌｏｇｙ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｐａｒｉ
ｓ）の不死化ヒト骨格筋細胞を、５％のＦＢＳで補充された骨格筋細胞増殖培地（Ｓｋｅ
ｌｅｔａｌ Ｍｕｓｃｌｅ Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ ｍｅｄｉｕｍ）（Ｐｒｏｍｏｃｅ
ｌｌ、Ｃ－２３１６０）中の１型コラーゲンでコーティングされた２４ウェルプレート（
Ｇｉｂｃｏ、＃１９７０７８８）上で蒔いた。筋芽細胞が培養密度に達した後、ゲンタマ
イシン（５０ｕｇ／ｍｌ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、１５７５０－０４５）およびインス
リン（１０ｕｇ／ｍｌ）（Ｓｉｇｍａ、９１０７７）で補充されたＤＭＥＭを含有する分
化培地において筋管形成を誘発した。その後、それぞれの培地中の定義された濃度のＡＯ
Ｃで筋管を処置した。培地を吸引し、その後、ウェル当たり３００ｕｌのＴＲＩＺＯＬを
加えることによって、処置から７２時間後に細胞を収集した。例９に記載されるように、
ＤＭＤエクソンスキッピングのＲＮＡ単離および定量化を実施した。
図１７は、初代ヒト骨格筋細胞におけるｈＴｆＲ１．ｍＡｂ－ＰＭＯ（２８－ｍｅｒ）
抱合体のエクソンスキッピング活性を示す。
図１８は、初代の不死化ヒト骨格筋細胞の筋管におけるｈＴｆＲ１．ｍＡｂ－ＰＭＯ抱
合体のエクソンスキッピング活性を示す。
本開示の好ましい実施形態が本明細書中で示され、記載されてきたが、このような実施
形態はほんの一例として提供されているに過ぎないということは、当業者に明らかであろ
う。多くの変形、変更、および置き換えは、本開示から逸脱することなく、当業者によっ
て想到されるものである。本明細書に記載される開示の実施形態の様々な代案が、本開示
の実施において利用され得ることを理解されたい。以下の特許請求の範囲は本開示の範囲
を定義するものであり、ならびに、この特許請求の範囲およびその同等物の範囲内の方法
および構造はそれによって包含されることが、意図されている。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
ＤＭＤ遺伝子のｍＲＮＡ前駆体転写産物の標的領域にハイブリダイズする少なくとも１つのポリ核酸分子と結合する標的細胞結合部分を含む、ポリ核酸抱合体であって、
ここで、少なくとも１つのポリ核酸分子は、機能性ジストロフィンタンパク質をコードするｍＲＮＡ転写産物を生成するためにｍＲＮＡ前駆体転写産物からエクソンのスプライシングアウトを誘発する、ポリ核酸抱合体。
（項目２）
機能性ジストロフィンタンパク質は、ジストロフィンタンパク質からの切断された形態である、項目１に記載のポリ核酸抱合体。
（項目３）
標的領域はエクソン－イントロン接合部にあり、エクソンは、スプライシングアウトされることになっているエクソンである、項目１に記載のポリ核酸抱合体。
（項目４）
エクソンは、エクソン８、２３、３５、４３、４４、４５、５０、５１、５２、５３、または５５である、項目３に記載のポリ核酸抱合体。
（項目５）
エクソン－イントロン接合部は、スプライシングアウトされることになっているエクソンの５’に位置する、項目３に記載のポリ核酸抱合体。
（項目６）
標的領域はエクソン－イントロン接合部の上流のイントロン領域である、項目５に記載のポリ核酸抱合体。
（項目７）
標的領域は、エクソン－イントロン接合部の約５００、４５０、４００、３５０、３００、２５０、２００、１５０、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、あるいは１０ヌクレオチド上流である、項目５または６に記載のポリ核酸抱合体。
（項目８）
エクソン－イントロン接合部は、スプライシングアウトされることになっているエクソンの３’に位置する、項目３に記載のポリ核酸抱合体。
（項目９）
標的領域はエクソン－イントロン接合部の下流のイントロン領域である、項目８に記載のポリ核酸抱合体。
（項目１０）
標的領域は、エクソン－イントロン接合部の約５００、４５０、４００、３５０、３００、２５０、２００、１５０、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、あるいは１０ヌクレオチド下流である、項目８または９に記載のポリ核酸抱合体。
（項目１１）
標的細胞結合部分は、２以上、３以上、４以上、５以上、６以上、あるいは８以上のポリ核酸分子に結合する、項目１－１０のいずれか１つに記載のポリ核酸抱合体。
（項目１２）
ポリ核酸分子は、約１０から約５０ヌクレオチド長さを含む、項目１－１０のいずれか１つに記載のポリ核酸抱合体。
（項目１３）
ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６４－１２８５から選択された配列に対して、約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、あるいは９９％の配列同一性を含む、項目１－１２のいずれか１つに記載のポリ核酸抱合体。
（項目１４）
ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６４－１２８５から選択された塩基配列の少なくとも１０、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、またはそれ以上の隣接する塩基を含む、項目１－１３のいずれか１つに記載のポリ核酸抱合体。
（項目１５）
ポリ核酸分子はさらに、１、２、３、あるいは４つのミスマッチを含む、項目１－１４のいずれか１つに記載のポリ核酸抱合体。
（項目１６）
ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６－１０９４、１１４７－１１６２、または、１１７３－１２１１から選択された塩基配列の少なくとも１０、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、またはそれ以上の隣接する塩基を含む、項目１－１５のいずれか１つに記載のポリ核酸抱合体。
（項目１７）
ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６－１０７６から選択された塩基配列の少なくとも１０、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、またはそれ以上の隣接する塩基を含む、項目１６に記載のポリ核酸抱合体。
（項目１８）
ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０７７－１０９４から選択された塩基配列の少なくとも１０、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、またはそれ以上の隣接する塩基を含む、項目１６に記載のポリ核酸抱合体。
（項目１９）
ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１４７－１１６２から選択された塩基配列の少なくとも１０、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、またはそれ以上の隣接する塩基を含む、項目１６に記載のポリ核酸抱合体。
（項目２０）
ポリ核酸分子は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１７３－１２１１から選択された塩基配列の少なくとも１０、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、またはそれ以上の隣接する塩基を含む、項目１６に記載のポリ核酸抱合体。
（項目２１）
結合部分は抗体を含む、項目１－１９のいずれか１つに記載のポリ核酸抱合体。
（項目２２）
抗体は抗トランスフェリン抗体を含む、項目２１に記載のポリ核酸抱合体。
（項目２３）
結合部分は血漿タンパク質を含む、項目１－１９のいずれか１つに記載のポリ核酸抱合体。
（項目２４）
ポリ核酸抱合体は、
Ａ－（Ｘ １ －Ｂ） ｎ
式（∨）
を含み、
式中、
Ａは結合部分を含み；
Ｂはポリ核酸分子からなり；
Ｘ １ は単結合あるいは第１の非高分子リンカーからなり；および、
ｎは１－１２から選択された平均値である、項目１－２３のいずれか１つに記載のポリ核酸抱合体。
（項目２５）
ポリ核酸分子は、パッセンジャー鎖とガイド鎖とを含む、項目１－２４のいずれか１つに記載のポリ核酸抱合体。
（項目２６）
ガイド鎖は、少なくとも１つの修飾されたヌクレオチド間結合、少なくとも１つの逆脱塩基部分、少なくとも１つの５’－ビニルホスホネート修飾された非天然のヌクレオチド、あるいは、これらの組み合わせを含む、項目２５に記載のポリ核酸抱合体。
（項目２７）
ガイド鎖は、約２、３、４、５、６、７、８、あるいは９つのホスホロチオエート修飾された非天然のヌクレオチドを含む、項目２５に記載のポリ核酸抱合体。
（項目２８）
ガイド鎖は、１つのホスホロチオエート修飾された非天然のヌクレオチドを含む、項目２５に記載のポリ核酸抱合体。
（項目２９）
ホスホロチオエート修飾された非天然のヌクレオチドは、ポリヌクレオチドのヌクレオチド間結合に位置する、項目２６－２８のいずれか１つに記載のポリ核酸抱合体。
（項目３０）
少なくとも１つの５’－ビニルホスホネート修飾された非天然のヌクレオチドは、ガイド鎖の５’末端から、約１、２、３、４、あるいは５つの塩基離れて位置する、項目２６に記載のポリ核酸抱合体。
（項目３１）
少なくとも１つの５’－ビニルホスホネート修飾された非天然のヌクレオチドは、２’－位置でさらに修飾される、項目２６または３０に記載のポリ核酸抱合体。
（項目３２）
２’－修飾は、２’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’－Ｏ－ＭＯＥ）、２’－デオキシ、Ｔ－デオキシ－２’－フルオロ、２’－Ｏ－アミノプロピル（２’－Ｏ－ＡＰ）、２’－Ｏ－ジメチルアミノエチル（２’－Ｏ－ＤＭＡＯＥ）、２’－Ｏ－ジメチルアミノプロピル（２’－Ｏ－ＤＭＡＰ）、Ｔ－Ｏ－ジメチルアミノエチルオキシエチル（２’－Ｏ－ＤＭＡＥＯＥ）、または、２’－Ｏ－Ｎ－メチルアセトアミド（２’－Ｏ－ＮＭＡ）修飾されたヌクレオチドから選択される、項目３１に記載のポリ核酸抱合体。
（項目３３）
パッセンジャー鎖は、少なくとも６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、またはそれ以上のホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー修飾された非天然のヌクレオチドを含む、項目２５に記載のポリ核酸抱合体。
（項目３４）
パッセンジャー鎖は、１００％ホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー修飾された非天然のヌクレオチドを含む、項目２５に記載のポリ核酸抱合体。
（項目３５）
パッセンジャー鎖はガイド鎖よりも長さが短く、それによって、５’オーバーハング、３’オーバーハング、あるいはこれらの組み合わせを生成する、項目２５に記載のポリ核酸抱合体。
（項目３６）
パッセンジャー鎖はガイド鎖と長さが等しく、それによって、ポリ核酸分子の各末端で平滑末端を生成する、項目２５に記載のポリ核酸抱合体。
（項目３７）
ポリ核酸分子はホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー／ＲＮＡヘテロ二本鎖である、項目３５または３６に記載のポリ核酸抱合体。
（項目３８）
パッセンジャー鎖は、少なくとも６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、またはそれ以上のペプチド核酸修飾された非天然のヌクレオチドを含む、項目２５に記載のポリ核酸抱合体。
（項目３９）
パッセンジャー鎖は、１００％ペプチド核酸修飾された非天然のヌクレオチドを含む、項目２５に記載のポリ核酸抱合体。
（項目４０）
パッセンジャー鎖はガイド鎖よりも長さが短く、それによって、５’オーバーハング、３’オーバーハング、あるいはこれらの組み合わせを生成する、項目２５に記載のポリ核酸抱合体。
（項目４１）
パッセンジャー鎖はガイド鎖と長さが等しく、それによって、ポリ核酸分子の各末端で平滑末端を生成する、項目２５に記載のポリ核酸抱合体。
（項目４２）
ポリ核酸分子はペプチド核酸／ＲＮＡヘテロ二本鎖である、項目４０または４１に記載のポリ核酸抱合体。
（項目４３）
パッセンジャー鎖はＡ－Ｘ １ に結合される、項目２５に記載のポリ核酸抱合体。
（項目４４）
Ａ－Ｘ １ はパッセンジャー鎖の５’末端に結合される、項目４３に記載のポリ核酸抱合体。
（項目４５）
Ａ－Ｘ １ はパッセンジャー鎖の３’末端に結合される、項目４３に記載のポリ核酸抱合体。
（項目４６）
Ｘ １ は単結合である、項目２４または４３－４５のいずれか１つに記載のポリ核酸抱合体。
（項目４７）
Ｘ １ はＣ １ －Ｃ ６ アルキル基である、項目２４または４３－４５のいずれか１つに記載のポリ核酸抱合体。
（項目４８）
Ｘ １ は、随意にＣ １ －Ｃ ６ アルキル基に結合された、ホモ二機能性リンカーあるいはヘテロ二機能性リンカーである、項目２４または４３－４５のいずれか１つに記載のポリ核酸抱合体。
（項目４９）
さらにＣを含む、項目１に記載のポリ核酸抱合体。
（項目５０）
Ｃはポリエチレングリコールである、項目４９に記載のポリ核酸抱合体。
（項目５１）
ＣはＸ ２ を介して直接Ｂに結合される、項目２４－５０のいずれか１つに記載のポリ核酸抱合体。
（項目５２）
Ｘ ２ は単結合あるいは第２の非高分子リンカーからなる、項目５１に記載のポリ核酸抱合体。
（項目５３）
Ｘ ２ は単結合である、項目５２に記載のポリ核酸抱合体。
（項目５４）
Ｘ ２ はＣ １ －Ｃ ６ アルキル基である、項目５２に記載のポリ核酸抱合体。
（項目５５）
Ｘ ２ は、随意にＣ １ －Ｃ ６ アルキル基に結合された、ホモ二機能性リンカーあるいはヘテロ二機能性リンカーである、項目５２に記載のポリ核酸抱合体。
（項目５６）
パッセンジャー鎖はＡ－Ｘ １ とＸ ２ －Ｃに結合される、項目１－５５のいずれか１つに記載のポリ核酸抱合体。
（項目５７）
Ａ－Ｘ １ はパッセンジャー鎖の５’末端に結合され、Ｘ ２ －Ｃはパッセンジャー鎖の３’末端に結合される、項目１－５６のいずれか１つに記載のポリ核酸抱合体。
（項目５８）
Ｘ ２ －Ｃはパッセンジャー鎖の５’末端に結合され、Ａ－Ｘ １ はパッセンジャー鎖の３’末端に結合される、項目１－５６のいずれか１つに記載のポリ核酸抱合体。
（項目５９）
ポリ核酸抱合体は、
Ａ－Ｘ １ －（Ｂ－Ｘ ２ －Ｃ） ｎ
式（ＶＩ）
を含み；
式中、
Ａは結合部分を含み；
Ｂはポリ核酸分子からなり；
Ｃはポリマーからなり；
Ｘ １ は単結合あるいは第１の非高分子リンカーからなり；
Ｘ ２ は単結合あるいは第２の非高分子リンカーからなり；および、
ｎは１－１２から選択された平均値である、項目１－５８のいずれか１つに記載のポリ核酸抱合体。
（項目６０）
さらにＤを含む、項目１に記載のポリ核酸抱合体。
（項目６１）
Ｄはエンドソーム溶解部分である、項目６０に記載のポリ核酸抱合体。
（項目６２）
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６－１０５８あるいは１０８７－１０８９から選択された塩基配列の少なくとも２３の隣接する塩基を含むポリ核酸分子であって、ここで、ポリ核酸分子は５０以下のヌクレオチド長さを含む、ポリ核酸分子。
（項目６３）
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０５６－１０５８を含むポリ核酸分子であって、ここで、ポリ核酸分子は５０以下のヌクレオチド長さを含む、ポリ核酸分子。
（項目６４）
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０８７－１０８９を含むポリ核酸分子であって、ここで、ポリ核酸分子は５０以下のヌクレオチド長さを含む、ポリ核酸分子。
（項目６５）
項目１－６１のポリ核酸抱合体、あるいは、項目６２－６４のポリ核酸分子；および、薬学的に許容可能な賦形剤を含む、医薬組成物。
（項目６６）
前記医薬組成物は全身送達のために製剤化される、項目６５に記載の医薬組成物。
（項目６７）
前記医薬組成物は非経口投与のために製剤化される、項目６５または６６に記載の医薬組成物。
（項目６８）
被験体の欠損ｍＲＮＡを特徴とする疾患または疾病を処置する方法であって、
前記方法は、
機能性タンパク質をコードするプロセシングされたｍＲＮＡを生成するために欠損ｍＲＮＡを引き起こすエクソンのスキッピングを誘導するべく、項目１－６１のポリ核酸抱合体、あるいは、項目６２－６４のポリ核酸分子を、被験体に投与する工程であって、それによって、被験体の疾患または疾病を処置する、工程、を含む、方法。
（項目６９）
前記疾患または疾病が、神経筋疾患、遺伝病、癌、遺伝性疾患、あるいは心血管疾患である、項目６８に記載の方法。
（項目７０）
神経筋疾患が筋ジストロフィーである、項目６９に記載の方法。
（項目７１）
筋ジストロフィーは、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー、先天性筋ジストロフィー、あるいは筋緊張性ジストロフィーである、項目７０に記載の方法。
（項目７２）
被験体の筋ジストロフィーを処置する方法であって、前記方法は：
項目１－６１のポリ核酸抱合体、あるいは、項目６２－６４のポリ核酸分子を被験体に投与する工程であって、それによって、被験体の筋ジストロフィーを処置する、工程、を含む、方法。
（項目７３）
筋ジストロフィーはデュシェンヌ型筋ジストロフィーである、項目７２に記載の方法。
（項目７４）
被験体はヒトである、項目１－７３のいずれか１つに記載の方法。
（項目７５）
項目１－６１のポリ核酸抱合体あるいは項目６２－６４のポリ核酸分子を含む、キット。

Claims (1)

  1. 明細書に記載の発明。
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