JP2023123756A - 血友病を有する対象の出血事象を処置するための方法および組成物 - Google Patents

血友病を有する対象の出血事象を処置するための方法および組成物 Download PDF

Info

Publication number
JP2023123756A
JP2023123756A JP2023107779A JP2023107779A JP2023123756A JP 2023123756 A JP2023123756 A JP 2023123756A JP 2023107779 A JP2023107779 A JP 2023107779A JP 2023107779 A JP2023107779 A JP 2023107779A JP 2023123756 A JP2023123756 A JP 2023123756A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
subject
nucleotides
less
hemophilia
effective amount
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2023107779A
Other languages
English (en)
Other versions
JP2023123756A5 (ja
Inventor
アキン・アキンク
Akinc Akin
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Genzyme Corp
Original Assignee
Genzyme Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Genzyme Corp filed Critical Genzyme Corp
Publication of JP2023123756A publication Critical patent/JP2023123756A/ja
Publication of JP2023123756A5 publication Critical patent/JP2023123756A5/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

【課題】血友病などの出血障害を有する対象に対する代替的な処置を提供する。【解決手段】インヒビターを有さない血友病を有する対象の出血事象を処置する方法であって、Ｓｅｒｐｉｎｃ１の発現を阻害する二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤の約３０ｍｇから約９０ｍｇの固定用量を対象に投与する工程であって、該二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含む、工程と、補充因子の治療有効量を対象に投与する工程であって、該補充因子の有効量は、該補充因子の推奨される有効量に比較して低減される工程と、を含む方法とする。【選択図】なし

Description

関連出願
本出願は、２０１７年７月１０日に出願された米国仮特許出願第６２／５３０，５１８号、２０１７年１２月１５日に出願された米国仮特許出願第６２／５９９，２２３号、２０１８年１月５日に出願された米国仮特許出願第６２／６１４，１１１号、および２０１８年５月１８日に出願された米国仮特許出願第６２／６７３，４２４号の優先権の利益を主張するものである。前述の特許出願のそれぞれの内容全体を、参照によって本明細書に組み入れる。
本出願は、２０１６年１２月７日に出願された国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１６／０６５２４５号、２０１５年１２月７日に出願された米国仮特許出願第６２／２６４，０１３号、２０１６年３月３０日に出願された米国仮特許出願第６２／３１５，２２８号、２０１６年７月２５日に出願された米国仮特許出願第６２／３６６，３０４号、および２０１６年１２月２日に出願された米国仮特許出願第６２／４２９，２４１号にも関連する。前述の特許出願のそれぞれの内容全体を参照によって本明細書に組み入れる。
さらに、本出願は、２０１４年５月１２日に出願された米国仮特許出願第６１／９９２，０５７号、２０１４年１２月８日に出願された米国仮特許出願第６２／０８９，０１８号、２０１５年１月１２日に出願された米国仮特許出願第６２／１０２，２８１号、および２０１５年５月１２日に出願された国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０３０３３７号に関連する。前述の特許出願のそれぞれの内容全体を参照によって本明細書に組み入れる。
本出願はまた、２０１２年４月２６日に出願された米国仮特許出願第６１／６３８，９５２号、２０１２年７月９日に出願された米国仮特許出願第６１／６６９，２４９号、２０１２年１２月７日に出願された米国仮特許出願第６１／７３４，５７３号、２０１３年３月１５日に出願された米国特許出願第１３／８３７，１２９号、現米国特許第９，１２７，２７４号、２０１５年７月２２日出願された米国特許出願第１４／８０６，０８４号、現米国特許第９，３７６，６８０号、２０１６年３月１５日に出願された米国特許出願第１５／０７０，３５８号、および２０１３年４月２５日に出願された国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０３８２１８号に関連する。本出願はまた、２０１２年１１月１６日に出願された国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１２／０６５６０１号に関連する。前述の特許出願のそれぞれの内容全体を参照によって本明細書に組み入れる。
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出され、参照によりその全体が本明細書に組み入れられる配列表を含む。２０１８年７月２日に作成された上記ＡＳＣＩＩコピーは、１１７８１１－０２７２０＿ＳＬ．ＴＸＴの名称で、２１，１４７バイトのサイズである。
Ｓｅｒｐｉｎｃ１は、セリンプロテイナーゼインヒビター（セルピン）スーパーファミリーのメンバーである。Ｓｅｒｐｉｎｃ１は、トロンビンならびに第Ｘ、ＩＸ、ＸＩ、ＸＩＩおよびＶＩＩ因子などの凝固系の他の活性型セリンプロテアーゼを阻害し、それにより血液凝固カスケードを調節する血漿プロテアーゼインヒビターである。Ｓｅｒｐｉｎｃ１の抗凝固活性は、ヘパリンおよびトロンビン：アンチトロンビン（ＴＡＴ）複合体の形成を触媒する他の関連グリコサミノグリカンの存在により増強される。
遺伝性または後天性のいずれかの出血障害は、血液凝固が不十分な状態である。例えば、血友病は、血液凝固または凝血を制御する体の能力を害する遺伝する遺伝性出血障害のグループである。血友病Ａは、機能的な凝固第ＶＩＩＩ因子の欠如を伴う劣性Ｘ連鎖遺伝障害であり、血友病症例の８０％に相当する。血友病Ｂは、機能的な凝固第ＩＸ因子の欠如を伴う劣性Ｘ連鎖遺伝障害である。血友病Ｂは、血友病症例のおよそ２０％を構成する。血友病Ｃは、機能的な凝固第ＸＩ因子の欠如を伴う常染色体性遺伝性障害である。血友病Ｃは、ヘテロ接合型個体も出血の増加を示すため、完全に劣性ではない。
現在のところ、血友病に対する治療法はないが、不足した凝固因子、例えば、血友病Ａでは第ＶＩＩＩ因子を定期的に注入することにより制御することができる。しかしながら、一部の血友病患者は、患者に与えられた補充因子に対する抗体（インヒビター）を生じ、それにより、補充凝固因子に対して抵抗性になる。したがって、そのような対象の出血は、適切に制御することができない。
例えば、第ＶＩＩＩ因子およびその他の凝固因子に対する高力価のインヒビターの発生は、血友病治療の最も深刻な問題であり、出血の処置を極めて難しくする。現在、そのような対象の出血を止める唯一の方法は、第ＶＩＩＩ因子インヒビターバイパス活性（ファイバ）および遺伝子組換え活性型第ＶＩＩ因子（ｒＦＶＩＩａ）などの「バイパス薬剤」、血漿交換療法、継続的な因子の補充、ならびに免疫寛容療法の使用であるが、どれも完全に効果的ではない。したがって、当該技術分野において血友病などの出血障害を有する対象に対する代替的な処置が必要とされている。
本発明は、少なくとも部分的には、インヒビターを有さず、Ｓｅｒｐｉｎｃ１遺伝子のＲＮＡ転写物のＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）媒介型切断を引き起こすｉＲＮＡ組成物の治療有効量が投与された、血友病を有する対象において、例えば世界血友病連盟によって（例えば、Ｓｒｉｖａｓｔａｖａら、「Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅｍｏｐｈｉｌｉａ」、Ｈｅｍｏｐｈｉｌｉａ
Ｅｐｕｂ ６、２０１２年７月；ＤＯＩ：１０．１１１１／ｊ．１３６５－２５１６．２０１２．０２９０９．ｘ参照）および／または食品医薬品局によって推奨された、補充因子の推奨される有効量よりも少ない、第ＶＩＩＩ因子または第ＸＩ因子などの補充因子の治療有効量で、出血事象を処置することができ；かつインヒビターを有し、Ｓｅｒｐｉｎｃ１遺伝子のＲＮＡ転写物のＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）媒介型切断を引き起こすｉＲＮＡ組成物の治療有効量が投与された、血友病を有する対象において、例えば世界血友病連盟によって（例えば、Ｓｒｉｖａｓｔａｖａら、「Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅｍｏｐｈｉｌｉａ」、Ｈｅｍｏｐｈｉｌｉａ Ｅｐｕｂ ６、２０１２年７月；ＤＯＩ：１０．１１１１／ｊ．１３６５－２５１６．２０１２．０２９０９．ｘ参照）および／または食品医薬品局によって推奨された、バイパス薬剤の推奨される有効量よりも少ない、活性型プロトロンビン複合体製剤（ａＰＣＣ）または組換え第ＶＩＩａ因子（ｒＦＶＩＩａ）などのバイパス薬剤の治療有効量で、出血事象を処置することができるという意外な発見に基づく。
したがって一態様では、本発明は、インヒビターを有さない血友病などの出血障害を有する対象の出血事象を処置する方法を提供する。方法は、Ｓｅｒｐｉｎｃ１の発現を阻害する二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤の約３０ｍｇから約９０ｍｇの固定用量を対象に投与する工程であって、二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、５’－ＵＵＧＡＡＧＵＡＡＡＵＧＧＵＧＵＵＡＡＣＣＡＧ－３’（配列番号１５）のヌクレオチド配列と３ヌクレオチドを超えずに異なる少なくとも１５の連続
するヌクレオチドを含む、Ｓｅｒｍｉｎｃ１をコードするｍＲＮＡに相補的な領域を含み、センス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドおよびアンチセンス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドは修飾ヌクレオチドであり、センス鎖は、３’－末端で結合したリガンドとコンジュゲートしている工程と；補充因子の治療有効量を対象に投与する工程であって、補充因子の有効量は、補充因子の推奨される有効量に比較して低減される工程とを含み、それによって、インヒビターを有さない血友病を有する対象の出血事象が処置される。
別の態様では、本発明は、インヒビターを有する血友病などの出血障害を有する対象の出血事象を処置する方法を提供する。方法は、Ｓｅｒｐｉｎｃ１の発現を阻害する二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤の約３０ｍｇから約９０ｍｇの固定用量を対象に投与する工程であって、二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖が、５’－ＵＵＧＡＡＧＵＡＡＡＵＧＧＵＧＵＵＡＡＣＣＡＧ－３’（配列番号１５）のヌクレオチド配列と３ヌクレオチドを超えずに異なる少なくとも１５の連続するヌクレオチドを含む、Ｓｅｒｐｉｎｃ１をコードするｍＲＮＡに相補的な領域を含み、センス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドおよびアンチセンス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドは修飾ヌクレオチドであり、センス鎖は、３’－末端で結合したリガンドとコンジュゲートしている工程と；バイパス薬剤の治療有効量を対象に投与する工程であって、バイパス薬剤の有効量は、バイパス薬剤の推奨される有効量に比較して低減される工程とを含み、それによってインヒビターを有する血友病を有する対象の出血事象が処置される。
一態様では、本発明は、インヒビターを有さない血友病などの出血障害を有する対象の出血事象を処置する方法を提供する。方法は、Ｓｅｒｐｉｎｃ１の発現を阻害する二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤の約４０ｍｇから約９０ｍｇの固定用量を対象に投与する工程であって、二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、５’－ＵＵＧＡＡＧＵＡＡＡＵＧＧＵＧＵＵＡＡＣＣＡＧ－３’（配列番号１５）のヌクレオチド配列と３ヌクレオチドを超えずに異なる少なくとも１５の連続するヌクレオチドを含む、Ｓｅｒｐｉｎｃ１をコードするｍＲＮＡに相補的な領域を含み、センス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドおよびアンチセンス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドは修飾ヌクレオチドであり、センス鎖は、３’－末端で結合したリガンドとコンジュゲートしている工程と；補充因子の治療有効量を対象に投与する工程であって、補充因子の有効量は、補充因子の推奨される有効量に比較して低減される工程とを含み、それによってインヒビターを有さない血友病を有する対象の出血事象が処置される。
別の態様では、本発明は、インヒビターを有する血友病などの出血障害を有する対象の出血事象を処置する方法を提供する。方法は、Ｓｅｒｐｉｎｃ１の発現を阻害する二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤の約４０ｍｇから約９０ｍｇの固定用量を対象に投与する工程であって、二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、５’－ＵＵＧＡＡＧＵＡＡＡＵＧＧＵＧＵＵＡＡＣＣＡＧ－３’（配列番号１５）のヌクレオチド配列と３ヌクレオチドを超えずに異なる少なくとも１５の連続するヌクレオチドを含む、Ｓｅｒｐｉｎｃ１をコードするｍＲＮＡに相補的な領域を含み、センス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドおよびアンチセンス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドは修飾ヌクレオチドであり、センス鎖は、３’－末端で結合したリガンドとコンジュゲートしている工程と；バイパス薬剤の治療有効量を対象に投与する工程であって、バイパス薬剤の有効量は、バイパス薬剤の推奨される有効量に比較して低減される工程とを含み、それによってインヒビターを有する血友病を有する対象の出血事象が処置される。
二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、２回分またはそれ以上の用量で対象に投与することができる。
一部の実施形態では、二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、１カ月に１回、５週毎に１回、６週毎に１回、７週毎に１回、２カ月毎に１回、四半期に１回、または必要に応じて対象に投与さ
れる。
一実施形態では、二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、対象に月に１回投与される。別の実施形態では、二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、対象に６週毎に１回投与される。一実施形態では、二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、対象に２カ月毎に１回投与される。さらに別の実施形態では、二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、対象に四半期に１回投与される。
二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、例えば、約２５ｍｇから約１００ｍｇの間、例えば、約２５ｍｇから約９５ｍｇの間、約２５ｍｇから約９０ｍｇの間、約２５ｍｇから約８５ｍｇの間、約２５ｍｇから約８０ｍｇの間、約２５ｍｇから約７５ｍｇの間、約２５ｍｇから約７０ｍｇの間、約２５ｍｇから約６５ｍｇの間、約２５ｍｇから約６０ｍｇの間、約２５ｍｇから約５０ｍｇの間、約５０ｍｇから約１００ｍｇの間、約５０ｍｇから約９５ｍｇの間、約５０ｍｇから約９０ｍｇの間、約５０ｍｇから約８５ｍｇの間、約５０ｍｇから約８０ｍｇの間、約３０ｍｇから約１００ｍｇの間、約３０ｍｇから約９０ｍｇの間、約３０ｍｇから約８０ｍｇの間、約４０ｍｇから約１００ｍｇの間、約４０ｍｇから約９０ｍｇの間、約４０ｍｇから約８０ｍｇの間、約６０ｍｇから約１００ｍｇの間、約６０ｍｇから約９０ｍｇの間、約２５ｍｇから約５５ｍｇの間、約２５ｍｇから約６５ｍｇの間、約３０ｍｇから約９５ｍｇの間、約３０ｍｇから約８５ｍｇの間、約３０ｍｇから約７５ｍｇの間、約３０ｍｇから約６５ｍｇの間、約３０ｍｇから約５５ｍｇの間、約４０ｍｇから約９５ｍｇの間、約４０ｍｇから約８５ｍｇの間、約４０ｍｇから約７５ｍｇの間、約４０ｍｇから約６５ｍｇの間、約４０ｍｇから約５５ｍｇの間、または約４５ｍｇから約９５ｍｇの間の固定用量として対象に投与することができる。
いくつかの実施形態では、二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、約５０ｍｇ、約５５ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約８５ｍｇ、約９０ｍｇ、約９５ｍｇ、または約１００ｍｇの固定用量で投与することができる。
一部の実施形態では、二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、約２５ｍｇの固定用量で；または約５０ｍｇの固定用量で；または約８０ｍｇの固定用量で；または約１００ｍｇの固定用量で対象に投与される。
一実施形態では、二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、対象に皮下投与される。
一実施形態では、対象はヒトである。
血友病は、血友病Ａ、血友病Ｂ、または血友病Ｃである場合もある。
一実施形態では、センス鎖のすべてのヌクレオチドおよびアンチセンス鎖のすべてのヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドである。
一実施形態では、修飾ヌクレオチドは、２’－デオキシ－２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、２’－デオキシ修飾ヌクレオチド、ロックドヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、２’－アミノ修飾ヌクレオチド、２’－アルキル修飾ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホルアミデート、およびヌクレオチドを含む非天然塩基からなる群から独立して選択される。
相補性の領域は、少なくとも１７ヌクレオチド長または１９ヌクレオチド長である場合もある。
一実施形態では、相補性の領域は、１９から２１の間のヌクレオチド長である。別の実施形態では、相補性の領域は、２１から２３の間のヌクレオチド長である。
一実施形態では、それぞれの鎖は、３０ヌクレオチド長を超えない。
二本鎖ＲＮＡｉ薬剤の少なくとも１つの鎖は、少なくとも１ヌクレオチドの３’オーバーハングまたは少なくとも２ヌクレオチド、例えば、２、３、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１３、１４、もしくは１５ヌクレオチドの３’オーバーハングを含む場合もある。他の実施形態では、ＲＮＡｉ薬剤の少なくとも１つの鎖は、少なくとも１ヌクレオチドの５’オーバーハングを含む。特定の実施形態では、少なくとも１つの鎖は、少なくとも２ヌクレオチド、例えば、２、３、４、５、６、７、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５ヌクレオチドの５’オーバーハングを含む。さらに別の実施形態では、ＲＮＡｉ薬剤の一方の鎖の３’および５’末端の両方は、少なくとも１ヌクレオチドのオーバーハングを含む。
特定の実施形態では、リガンドは、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）である。リガンドは、一価、二価、または三価の分岐リンカーを介してＲＮＡｉ薬剤と結合した１つまたはそれ以上のＧａｌＮＡｃである場合もある。リガンドは、二本鎖ＲＮＡｉ薬剤のセンス鎖の３’末端、二本鎖ＲＮＡｉ薬剤のセンス鎖の５’末端、二本鎖ＲＮＡｉ薬剤のアンチセンス鎖の３’末端、または二本鎖ＲＮＡｉ薬剤のアンチセンス鎖の５’末端とコンジュゲートしている場合もある。
いくつかの実施形態では、本発明の二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、それぞれが独立して複数の一価のリンカーを介して二本鎖ＲＮＡｉ薬剤の複数のヌクレオチドに結合した複数、例えば、２、３、４、５、または６つのＧａｌＮＡｃを含む。
特定の実施形態では、リガンドは、以下のものである。
Figure 2023123756000001
一実施形態では、ＲＮＡｉ薬剤は、以下の概略図に示されるとおりリガンドとコンジュゲートし
Figure 2023123756000002
 ＸはＯまたはＳである。
一実施形態では、ＸはＯである。
一実施形態では、相補性の領域は、５’－ＵＵＧＡＡＧＵＡＡＡＵＧＧＵＧＵＵＡＡＣＣＡＧ－３’（配列番号１５）のヌクレオチド配列からなる。
一実施形態では、二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、５’－ＧＧＵＵＡＡＣＡＣＣＡＵＵＵＡＣＵＵＣＡＡ－３’（配列番号１６）のヌクレオチド配列を含むセンス鎖、および５’－ＵＵＧＡＡＧＵＡＡＡＵＧＧＵＧＵＵＡＡＣＣＡＧ－３’（配列番号１５）のヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖を含む。
一実施形態では、センス鎖は、５’－ＧｆｓｇｓＵｆｕＡｆａＣｆａＣｆＣｆＡｆｕＵｆｕＡｆｃＵｆｕＣｆａＡｆ－３’（配列番号１３）を含み、アンチセンス鎖は、５’－ｕｓＵｆｓｇＡｆａＧｆｕＡｆａＡｆｕｇｇＵｆｇＵｆｕＡｆａＣｆｃｓａｓｇ－３’（配列番号１４）を含み、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）Ａ、Ｃ、Ｇ、またはＵであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、またはＵｆは、２’－フルオロＡ、Ｃ、Ｇ、またはＵであり；ｓはホスホロチオエート連結である。
一実施形態では、センス鎖は、５’－ＧｆｓｇｓＵｆｕＡｆａＣｆａＣｆＣｆＡｆｕＵｆｕＡｆｃＵｆｕＣｆａＡｆ－３’（配列番号１３）を含み、アンチセンス鎖は、５’－ｕｓＵｆｓｇＡｆａＧｆｕＡｆａＡｆｕｇｇＵｆｇＵｆｕＡｆａＣｆｃｓａｓｇ－３’（配列番号１４）を含み、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）Ａ、Ｃ、Ｇ、またはＵであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、またはＵｆは、２’－フルオロＡ、Ｃ、Ｇ、またはＵであり；ｓは、ホスホロチオエート連結であり；センス鎖は、以下の概略図
Figure 2023123756000003
 （式中、Ｘは、ＯまたはＳである。）
に示されるようにリガンドとコンジュゲートしている。
一実施形態では、薬剤は、医薬組成物として投与される。一実施形態では、ＲＮＡｉ薬剤は、生理食塩液または水などの非緩衝溶液に投与される。
別の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、酢酸塩、クエン酸塩、プロラミン、炭酸塩、もしくはリン酸塩またはそれらの任意の組み合わせを含む緩衝液などの緩衝液と共に投与される。一実施形態では、緩衝液は、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）である。
一実施形態では、ｄｓＲＮＡ剤の対象への投与は、Ｓｅｒｐｉｎｃ１活性を約７５％またはそれ以上低下させる。
一実施形態では、補充因子が第ＶＩＩＩ因子である。対象に投与される第ＶＩＩＩ因子の治療有効量は、約２００ＩＵ／ｋｇ未満、または約１９０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１８０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１７０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１６０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１５０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１４０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１３０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１２０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１１０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１００ＩＵ／ｋｇ未満、または約９０ＩＵ／ｋｇ未満、または約８０ＩＵ／ｋｇ未満、または約７０ＩＵ／ｋｇ未満、または約６０ＩＵ／ｋｇ未満、または約５０ＩＵ／ｋｇ未満、または約４０ＩＵ／ｋｇ未満、または約３０ＩＵ／ｋｇ未満、または約２０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１０ＩＵ／ｋｇ未満にすることができる。一実施形態では、対象に投与される第ＶＩＩＩ因子の治療有効量は、第ＶＩＩＩ因子の推奨される有効量の、約３分の２から約５分の１であり、例えば約５ＩＵ／ｋｇから２０ＩＵ／ｋｇ、または約１０ＩＵ／ｋｇから約２０ＩＵ／ｋｇの用量、例えば約５、１０、１５、または２０ＩＵ／ｋｇである。一実施形態では、出血事象は中程度の出血事象である。別の実施形態では、出血事象は、大量の出血事象である。
別の実施形態では、補充因子が第ＩＸ因子である。第ＩＸ因子の治療有効量は、約２００ＩＵ／ｋｇ未満、または約１９０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１８０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１７０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１６０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１５０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１４０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１３０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１２０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１１０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１００ＩＵ／ｋｇ未満、または約９０ＩＵ／ｋｇ未満、または約８０ＩＵ／ｋｇ未満、または約７０ＩＵ／ｋｇ未満、または約６０ＩＵ／ｋｇ未満、または約５０ＩＵ／ｋｇ未満、または約４０ＩＵ／ｋｇ未満、または約３０ＩＵ／ｋｇ未満、または約２０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１０ＩＵ／
ｋｇ未満にすることができる。一実施形態では、対象に投与される第ＩＸ因子の治療有効量は、第ＩＸ因子の推奨される有効量の、約２分の１から約６分の１であり、例えば、約１０ＩＵ／ｋｇから約３０ＩＵ／ｋｇ、または約２０から約３０ＩＵ／ｋｇの用量、例えば約１０、１５、２０、２５、または約３０ＩＵ／ｋｇの用量である。一実施形態では、出血事象が中程度の出血事象である。別の実施形態では、出血事象が大量の出血事象である。
一実施形態では、バイパス薬剤が、活性型プロトロンビン複合体製剤（ａＰＣＣ）である。ａＰＣＣの治療有効量は、約１００Ｕ／ｋｇ未満、または約９０Ｕ／ｋｇ未満、または約８０Ｕ／ｋｇ未満、または約７０Ｕ／ｋｇ未満、または約６０Ｕ／ｋｇ未満、または約５０Ｕ／ｋｇ未満、または約４０Ｕ／ｋｇ未満、または約３０Ｕ／ｋｇ未満、または約２０Ｕ／ｋｇ未満、または約１０Ｕ／ｋｇ未満にすることができる。一実施形態では、対象に投与されるａＰＣＣの治療有効量は、ａＰＣＣの推奨される有効量の、約２分の１から約３分の１であり、例えば約３０から約５０Ｕ／ｋｇの用量である。一実施形態では、出血事象は中程度の出血事象である。別の実施形態では、出血事象は大量の出血事象である。
別の実施形態では、バイパス薬剤が、組換え第ＶＩＩａ因子（ｒＦＶＩＩａ）である。バイパス薬剤の治療有効量は、約１２０μｇ／ｋｇ未満、または約１１０μｇ／ｋｇ未満、または約１００μｇ／ｋｇ未満、または約９０μｇ／ｋｇ未満、または約８０μｇ／ｋｇ未満、または約７０μｇ／ｋｇ未満、または約６０μｇ／ｋｇ未満、または約５０μｇ／ｋｇ未満、または約４０μｇ／ｋｇ未満、または約３０μｇ／ｋｇ未満、または約２０μｇ／ｋｇ未満にすることができる。一実施形態では、対象に投与されるｒＦＶＩＩａの治療有効量は、ｒＦＶＩＩａの推奨される有効量の約２分の１であり、例えば約４５μｇ／ｋｇの用量である。一実施形態では、出血事象が中程度の出血事象である。別の実施形態では、出血事象が大量の出血事象である。
一態様では、本発明は、インヒビターを有さない血友病、例えば血友病Ａ、血友病Ｂ、または血友病Ｃの対象の、出血事象を処置する方法を提供する。方法は、Ｓｅｒｐｉｎｃ１の発現を阻害する二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤の約８０ｍｇの固定用量を対象に投与する、例えば皮下投与する工程であって、二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、５’－ＧｆｓｇｓＵｆｕＡｆａＣｆａＣｆＣｆＡｆｕＵｆｕＡｆｃＵｆｕＣｆａＡｆ－３’（配列番号１３）を含み、アンチセンス鎖は、５’－ｕｓＵｆｓｇＡｆａＧｆｕＡｆａＡｆｕｇｇＵｆｇＵｆｕＡｆａＣｆｃｓａｓｇ－３’（配列番号１４）を含み、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）Ａ、Ｃ、Ｇ、またはＵであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、またはＵｆは、２’－フルオロＡ、Ｃ、Ｇ、またはＵであり；ｓは、ホスホロチオエート連結であり；センス鎖の３’－末端は、以下の概略図
Figure 2023123756000004
 （式中、Ｘは、ＯまたはＳである。）
に示されるようにリガンドとコンジュゲートしている工程と；補充因子の治療有効量を対象に投与する工程であって、補充因子の有効量は、補充因子の推奨される有効量に比較して低減される工程とを含み、それによって、インヒビターを有さない血友病を有する対象における出血事象が処置される。
別の態様では、本発明は、インヒビターを有する血友病、例えば血友病Ａ、血友病Ｂ、または血友病Ｃの対象の、出血事象を処置する方法を提供する。方法は、Ｓｅｒｐｉｎｃ１の発現を阻害する二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤の約８０ｍｇの固定用量を対象に投与する、例えば皮下投与する工程であって、二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、５’－ＧｆｓｇｓＵｆｕＡｆａＣｆａＣｆＣｆＡｆｕＵｆｕＡｆｃＵｆｕＣｆａＡｆ－３’（配列番号１３）を含み、アンチセンス鎖は、５’－ｕｓＵｆｓｇＡｆａＧｆｕＡｆａＡｆｕｇｇＵｆｇＵｆｕＡｆａＣｆｃｓａｓｇ－３’（配列番号１４）を含み、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）Ａ、Ｃ、Ｇ、またはＵであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、またはＵｆは、２’－フルオロＡ、Ｃ、Ｇ、またはＵであり；ｓは、ホスホロチオエート連結であり；センス鎖の３’－末端は、以下の概略図
Figure 2023123756000005
 （式中、Ｘは、ＯまたはＳである。）
に示されるようにリガンドとコンジュゲートしている工程と；バイパス薬剤の治療有効量を対象に投与する工程であって、バイパス薬剤の有効量’、バイパス薬剤の推奨される有効量に比較して低減される工程とを含み、それによって、インヒビターを有する血友病を有する対象での出血事象が処置される。
一実施形態では、ＲＮＡｉの固定用量が、皮下から対象に投与される。
一実施形態では、ＲＮＡｉの工程用量が、１カ月に１回、対象に投与される。
血友病は、血友病Ａ、血友病Ｂ、または血友病Ｃとされる。
図１Ａは、１人の健常なヒト対象における血漿のトロンビン形成レベルへの、０．０３ｍｇ／ｋｇのＡＴ３ＳＣ－００１の単回皮下投与の効果を示すグラフである。 図１Ｂは、１人の健常なヒト対象における血漿のトロンビン形成レベルへの、０．０３ｍｇ／ｋｇのＡＴ３ＳＣ－００１の単回皮下投与の効果を示すグラフである。 図１Ｃは、１人の健常なヒト対象における血漿のトロンビン形成レベルへの、０．０３ｍｇ／ｋｇのＡＴ３ＳＣ－００１の単回皮下投与の効果を示すグラフである。 図１Ｄは、１人の健常なヒト対象における血漿のトロンビン形成レベルへの、０．０３ｍｇ／ｋｇのＡＴ３ＳＣ－００１の単回皮下投与の効果を示すグラフである。 図２Ａは、１人の健常なヒト対象における血漿のＡＴ（Ｓｅｒｐｉｎｃ１）タンパク質レベルへの、０．０３ｍｇ／ｋｇのＡＴ３ＳＣ－００１の単回皮下投与の効果を示すグラフである。 図２Ｂは、１人の健常なヒト対象における血漿のＡＴ（Ｓｅｒｐｉｎｃ１）タンパク質レベルへの、０．０３ｍｇ／ｋｇのＡＴ３ＳＣ－００１の単回皮下投与の効果を示すグラフである。 図３は、０．０３ｍｇ／ｋｇのＡＴ３ＳＣ－００１の単回皮下投与を受けた健常な対象における、ＡＴ（Ｓｅｒｐｉｎｃ１）ノックダウンの割合とピークトロンビン形成の増加の割合の間の関連を示すグラフである。 図４は、血友病ＡまたはＢのヒト対象における血漿のＡＴ（Ｓｅｒｐｉｎｃ１）タンパク質レベルへの０．０１５ｍｇ／ｋｇ、０．０４５ｍｇ／ｋｇ、または０．０７５ｍｇ／ｋｇのＡＴ３ＳＣ－００１の複数回用量の効果を示すグラフである。 図５Ａは、血友病ＡまたはＢのヒト対象における血漿のＡＴ（Ｓｅｒｐｉｎｃ１）タンパク質レベルへの０．２２５ｍｇ／ｋｇ、０．４５０ｍｇ／ｋｇ、０．９００ｍｇ／ｋｇ、１．８００ｍｇ／ｋｇ、または８０ｍｇのＡＴ３ＳＣ－００１の複数回用量の効果を示すグラフである。 図５Ｂは、ヒト対象における血漿のＡＴ（Ｓｅｒｐｉｎｃ１）タンパク質レベルへのＡＴ３ＳＣ－００１の用量依存的効果を示すグラフである。 図６Ａは、血友病ＡまたはＢのヒト対象におけるピークトロンビンレベルへの０．０１５ｍｇ／ｋｇまたは０．０４５ｍｇ／ｋｇのＡＴ３ＳＣ－００１の複数回用量の効果を示すグラフである。 図６Ｂは、血友病ＡまたはＢのヒト対象におけるトロンビン形成への０．０１５ｍｇ／ｋｇまたは０．０４５ｍｇ／ｋｇのＡＴ３ＳＣ－００１の複数回用量の効果をベースライン群に対する変化率として示すグラフである。 図７は、血友病Ａの１人の対象（対象１０１－００９）における凝血塊形成時間および凝固時間への０．０４５ｍｇ／ｋｇのＡＴ３ＳＣ－００１の複数回用量の効果を示すグラフである。 図８は、月１回の等価用量による平均最大ＡＴ低下を示すグラフである。 図９は、ＡＴの四分位低下によるトロンビン形成へのＡＴ３ＳＣ－００１の複数回用量の効果を示すグラフである。 図１０Ａは、２２５ｍｃｇ／ｋｇ ｑＭのＡＴ３ＳＣ－００１を投与した対象において測定された、第ＶＩＩＩ因子によって達成されたピークトロンビン形成の割合と関連する相対ＡＴ活性を示すグラフである。 図１０Ｂは、１８００ｍｃｇ／ｋｇ ｑＭのＡＴ３ＳＣ－００１を投与した対象において測定された、第ＶＩＩＩ因子によって達成されたピークトロンビン形成の割合と関連する相対ＡＴ活性を示すグラフである。 図１０Ｃは、８０ｍｇ ｑＭのＡＴ３ＳＣ－００１を投与した対象において測定された、第ＶＩＩＩ因子によって達成されたピークトロンビン形成の割合と関連する相対ＡＴ活性を示すグラフである。 図１１は、ＡＴの四分位低下による出血事象へのＡＴ３ＳＣ－００１の複数回用量の効果を示すグラフである。 図１２は、ＡＴ３ＳＣ－００１のフェーズＩ臨床試験のパートＣに登録された対象の出血事象データを示す表である。 図１３Ａは、ＡＴ３ＳＣ－００１のフェーズＩ臨床試験のパートＣのすべての投与コホートに関して試験の開始前、試験の開始部分時、および試験の観察部分中の年間出血率（ＡＢＲ）中央値を示すグラフである。 図１３Ｂは、ＡＴ３ＳＣ－００１のフェーズＩ臨床試験のパートＣの月１回８０ｍｇ（８０ｍｇ ｑＭ×３）のコホートに関して試験の開始前、試験の開始部分時、および試験の観察部分中の年間出血率（ＡＢＲ）中央値を示すグラフである。 図１４Ａは、月１回５０ｍｇの固定用量のＡＴ３ＳＣ－００１を投与したインヒビター対象において測定した、第ＶＩＩＩ因子によって達成されたピークトロンビン形成の割合と関連する相対ＡＴ活性を示すグラフである。 図１４Ｂは、月１回５０ｍｇの固定用量のＡＴ３ＳＣ－００１を投与したインヒビター対象において測定した、第ＶＩＩＩ因子によって達成されたピークトロンビン形成の割合と関連する相対ＡＴ活性を示すグラフである。 図１４Ｃは、月１回５０ｍｇの固定用量のＡＴ３ＳＣ－００１を投与したインヒビター対象において測定した、第ＶＩＩＩ因子によって達成されたピークトロンビン形成の割合と関連する相対ＡＴ活性を示すグラフである。 図１４Ｄは、月１回５０ｍｇの固定用量のＡＴ３ＳＣ－００１を投与したインヒビター対象において測定した、第ＶＩＩＩ因子によって達成されたピークトロンビン形成の割合と関連する相対ＡＴ活性を示すグラフである。 図１４Ｅは、月１回５０ｍｇの固定用量のＡＴ３ＳＣ－００１を投与したインヒビター対象において測定した、第ＶＩＩＩ因子によって達成されたピークトロンビン形成の割合と関連する相対ＡＴ活性を示すグラフである。 図１４Ｆは、月１回５０ｍｇの固定用量のＡＴ３ＳＣ－００１を投与したインヒビター対象において測定した、第ＶＩＩＩ因子によって達成されたピークトロンビン形成の割合と関連する相対ＡＴ活性を示すグラフである。 図１５は、インヒビターを有する血友病ＡまたはＢのヒト対象のベースラインに対する平均ＡＴ（Ｓｅｒｐｉｎｃ１）活性への、５０ｍｇまたは８０ｍｇのＡＴ３ＳＣ－００１の複数回用量の効果を示すグラフである。 図１６は、５０ｍｇのＡＴ３ＳＣ－００１の複数回用量のＡＴ低下効果が血友病Ａの対象におけるトロンビン形成の増加と相関することを示すグラフである。 図１７Ａは、ＡＴ３ＳＣ－００１のフェーズＩ臨床試験のパートＤに登録された対象の出血事象データを示す表である。 図１７Ｂは、ＡＴ３ＳＣ－００１のフェーズＩ臨床試験のパートＤのすべての対象に関して試験の開始前、試験の開始部分時、および試験の観察部分中の年間出血率（ＡＢＲ）中央値を示すグラフである。 図１８は、ＡＴ３ＳＣ－００１のフェーズＩＩ非盲検延長（ＯＬＥ）試験において、インヒビターを有さない血友病のヒト対象におけるベースラインに対する平均ＡＴ（Ｓｅｒｐｉｎｃ１）活性への８０ｍｇのＡＴ３ＳＣ－００１の複数回用量の効果を示すグラフである。 図１９Ａは、ＡＴ３ＳＣ－００１のフェーズＩＩ非盲検延長（ＯＬＥ）試験において、インヒビターを有するまたは有さない血友病ＡまたはＢのヒト対象におけるベースラインに対する平均ＡＴ（Ｓｅｒｐｉｎｃ１）活性への５０ｍｇまたは８０ｍｇのＡＴ３ＳＣ－００１の複数回用量の効果を示すグラフである。 図１９Ｂは、ＡＴ３ＳＣ－００１のフェーズＩＩ非盲検延長（ＯＬＥ）試験において、インヒビターを有するまたは有さない血友病ＡまたはＢのヒト対象におけるピークトロンビン形成への５０ｍｇまたは８０ｍｇのＡＴ３ＳＣ－００１の複数回用量の効果を示すグラフである。グラフの影を付けた部分は、ＡＴ３ＳＣ－００１を投与された健常なヒトボランティア（ＨＶ）において観察されたピークトロンビンレベルの範囲を表し、実施例１に記載のＡＴ３ＳＣ－００１のフェーズＩ試験において２５％より少ないＡＴノックダウンを示す。ＨＶ範囲中の点線は、健常なヒトボランティア（ＨＶ）において観察されたピークトロンビンレベル中央値を表し、実施例１に記載のＡＴ３ＳＣ－００１のフェーズＩ試験においてＡＴ３ＳＣ－００１の投与による２５％より少ないＡＴノックダウンを示す。 ＡＴ３ＳＣ－００１のフェーズＩＩ ＯＬＥ臨床試験における対象のインヒビターを有さない血友病ＡまたはＢの対象に関する、研究開始前、研究の開始時、および研究の観察部分の最中の、メジアン年間出血率（ＡＢＲ）を示すグラフである。 ＡＴ３ＳＣ－００１のフェーズＩＩ ＯＬＥ臨床試験における対象のインヒビターを有する血友病ＡまたはＢの対象に関する、研究開始前、および研究の観察部分の最中の、メジアン年間出血率（ＡＢＲ）を示すグラフである。 ＡＴ３ＳＣ－００１のフェーズＩＩ ＯＬＥ臨床試験で、インヒビターを有するまたは有さない血友病ＡまたはＢの患者が経験する出血事象の特徴を示す表である。 ＡＴ３ＳＣ－００１のフェーズＩＩ ＯＬＥ臨床試験で、インヒビターを有さない血友病ＡまたはＢの患者が経験する出血事象の管理を示す表である。 ＡＴ３ＳＣ－００１のフェーズＩＩ ＯＬＥ臨床試験で、インヒビターを有する血友病ＡまたはＢの患者が経験する出血事象の特徴を示す表である。 インヒビターを有さない血友病Ａの対象の出血を管理するのに必要とされる第ＶＩＩＩ因子の量に対する、ＡＴ３ＳＣ－００１ ５０ｍｇまたは８０ｍｇの毎月の固定用量の影響を示す、グラフである。 インヒビターを有さない血友病Ｂの対象の出血を管理するのに必要とされる第ＩＸ因子の量に対する、ＡＴ３ＳＣ－００１ ５０ｍｇまたは８０ｍｇの毎月の固定用量の影響を示す、グラフである。 インヒビターを有する血友病ＡまたはＢの対象の出血を管理するのに必要とされるｒＦＶＩＩａの量に対する、ＡＴ３ＳＣ－００１ ５０ｍｇまたは８０ｍｇの毎月の固定用量の影響を示す、グラフである。 インヒビターを有する血友病ＡまたはＢの対象の出血を管理するのに必要とされるａＰＣＣの量に対する、ＡＴ３ＳＣ－００１ ５０ｍｇまたは８０ｍｇの毎月の固定用量の影響を示す、グラフである。 対象にＡＴ３ＳＣ－００１が投与される前（下線）および投与された後（上線）の、インヒビターを有する血友病Ａの対象からの血漿サンプル中のトロンビン形成に対するａＰＣＣの添加の影響を示す、グラフである。 対象にＡＴ３ＳＣ－００１が投与される前（下線）および投与された後（上線）の、インヒビターを有する血友病Ａの対象からの血漿サンプル中のトロンビン形成に対するｒＦＶＩＩａの添加の影響を示す、グラフである。 対象にＡＴ３ＳＣ－００１が投与される前（下線）および投与された後（上線）の、インヒビターを有さない血友病Ａの対象からの血漿サンプル中のトロンビン形成に対するａＰＣＣの添加の影響を示す、グラフである。 対象にＡＴ３ＳＣ－００１が投与される前（下線）および投与された後（上線）の、インヒビターを有さない血友病Ａの対象からの血漿サンプル中のトロンビン形成に対するｒＦＶＩＩａの添加の影響を示す、グラフである。 対象にＡＴ３ＳＣ－００１が投与される前（下線）および投与された後（上線）の、インヒビターを有さない血友病Ａの対象からの血漿サンプル中のトロンビン形成に対するａＰＣＣの添加の影響を示す、グラフである。 対象にＡＴ３ＳＣ－００１が投与される前（下線）および投与された後（上線）の、インヒビターを有さない血友病Ａの対象からの血漿サンプル中のトロンビン形成に対するｒＦＶＩＩａの添加の影響を示す、グラフである。 対象にＡＴ３ＳＣ－００１が投与される前（下線）および投与された後（上線）の、インヒビターを有さない血友病Ａの対象からの血漿サンプル中のトロンビン形成に対するａＰＣＣの添加の影響を示す、グラフである。 対象にＡＴ３ＳＣ－００１が投与される前（下線）および投与された後（上線）の、インヒビターを有さない血友病Ａの対象からの血漿サンプル中のトロンビン形成に対するｒＦＶＩＩａの添加の影響を示す、グラフである。 対象にＡＴ３ＳＣ－００１が投与される前（下線）および投与された後（上線）の、インヒビターを有さない血友病Ａの対象からの血漿サンプル中のトロンビン形成に対するａＰＣＣの添加の影響を示す、グラフである。 対象にＡＴ３ＳＣ－００１が投与される前（下線）および投与された後（上線）の、インヒビターを有さない血友病Ａの対象からの血漿サンプル中のトロンビン形成に対するｒＦＶＩＩａの添加の影響を示す、グラフである。 対象にＡＴ３ＳＣ－００１が投与される前（下線）および投与された後（上線）の、インヒビターを有さない血友病Ａの対象からの血漿サンプル中のトロンビン形成に対するａＰＣＣの添加の影響を示す、グラフである。 対象にＡＴ３ＳＣ－００１が投与される前（下線）および投与された後（上線）の、インヒビターを有さない血友病Ａの対象からの血漿サンプル中のトロンビン形成に対するｒＦＶＩＩａの添加の影響を示す、グラフである。 対象にＡＴ３ＳＣ－００１が投与される前（下線）および投与された後（上線）の、インヒビターを有さない血友病Ａの対象からの血漿サンプル中のトロンビン形成に対するａＰＣＣの添加の影響を示す、グラフである。 対象にＡＴ３ＳＣ－００１が投与される前（下線）および投与された後（上線）の、インヒビターを有さない血友病Ａの対象からの血漿サンプル中のトロンビン形成に対するｒＦＶＩＩａの添加の影響を示す、グラフである。 対象にＡＴ３ＳＣ－００１が投与される前（下線）および投与された後（上線）の、インヒビターを有さない血友病Ａの対象からの血漿サンプル中のトロンビン形成に対するａＰＣＣの添加の影響を示す、グラフである。 対象にＡＴ３ＳＣ－００１が投与される前（下線）および投与された後（上線）の、インヒビターを有さない血友病Ａの対象からの血漿サンプル中のトロンビン形成に対するｒＦＶＩＩａの添加の影響を示す、グラフである。 フェーズＩ／ＩＩ非盲検延長（ＯＬＥ）臨床サンプル中でＡＴの四分位低下によるトロンビン形成に対する、ＡＴ３ＳＣ－００１の多回用量の影響を示す、グラフである。 ＡＴの四分位低下によるトロンビン形成に対する、ＡＴ３ＳＣ－００１の多回用量のシミュレートされた影響を示す、グラフである。 シミュレートされたＴＧ（図２７Ｂ）と測定されたＴＧ（図２７Ａ）との間の強力な相関を示す、散布図である。 様々なＡＴレベルおよび０．１％の第ＦＶＩＩＩ因子に関してシミュレートされた（重症の血友病Ａをシミュレートする）、ｉｎ ｓｉｌｉｃｏトロンビン形成曲線を示す図である。 重症の血友病Ａに関する様々な第ＶＩＩＩ因子の用量（単回用量）およびＡＴレベルでの、ピークトロンビンのヒートマップ表示である。 重症の血友病Ｂに関する様々なＦＩＸ用量（単回用量）およびＡＴレベルでの、ピークトロンビンのヒートマップ表示である。 １００％でＡＴを持つ第ＦＶＩＩＩ因子の５、１０、２０、および５０ＩＵ／ｋｇに関し、時間の関数として、シミュレートされたピークトロンビンポテンシャル（ｎＭ）を示すグラフである。 ベースラインの２０％でＡＴを持つ第ＦＶＩＩＩ因子の５、１０、２０ＩＵ／ｋｇに関し、時間の関数としてシミュレートされたピークトロンビン産生能（ｎＭ）を示すグラフである。
本発明は、少なくとも部分的には、インヒビターを有さず、Ｓｅｒｐｉｎｃ１遺伝子のＲＮＡ転写物のＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）媒介型切断を引き起こすｉＲＮＡ組成物の治療有効量が投与された、血友病（例えば、血友病Ａ、血友病Ｂ、または血友病Ｃ）の対象において、例えば世界血友病連盟によって（例えば、Ｓｒｉｖａｓｔａｖａら、「Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅｍｏｐｈｉｌｉａ」、Ｈｅｍｏｐｈｉｌｉａ Ｅｐｕｂ ６、２０１２年７月；ＤＯＩ：１０．１１１１／ｊ．１３６５－２５１６．２０１２．０２９０９．ｘ参照；その内容全体を参照によって本明細書に組み入れる）および／または食品医薬品局によって（例えば、ＡＤＶＡＴＥ（Ａｎｔｉｈｅｍｏｐｈｉｌｉｃ Ｆａｃｔｏｒ（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ））ｐｒｏｄｕｃｔ ｉｎｓｅｒｔ；１１／２０１６；ＢｅｎｅＦＩＸ（Ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ Ｆａｃｔｏｒ ＩＸ（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ）ｐｒｏｄｕｃｔ ｉｎｓｅｒｔ；１１／２０１１参照；そのそれぞれの内容全体を参照によって本明細書に組み入れる。）推奨された、補充因子の推奨される有効量よりも少ない、第ＶＩＩＩ因子または第ＸＩ因子などの補充因子の治療有効量で、出血事象を処置することができる、という以外な発見に基づく。したがって本発明は、インヒビターを有さない血友病を有する対象の出血事象を処置する方法を提供する。方法は、Ｓｅｒｐｉｎｃ１の発現を阻害する二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤の約３０ｍｇから約９０ｍｇの固定用量を対象に投与する工程であって、二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、５’－ＵＵＧＡＡＧＵＡＡＡＵＧＧＵＧＵＵＡＡＣＣＡＧ－３’（配列番号１５）のヌクレオチド配列と３ヌクレオチドを超えずに異なる少なくとも１５の連続するヌクレオチドを含む、Ｓｅｒｐｉｎｃ１をコードするｍＲＮＡに相補的な領域を含み、センス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドおよびアンチセンス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドは修飾ヌクレオチドであり、センス鎖は、３’－末端で結合したリガンドとコンジュゲートしている工程と；補充因子の治療有効量を対象に投与する工程であって、補充因子の有効量は、補充因子の推奨される有効量に比較して低減される工程とを含み、それによって、インヒビターを有さない血友病を有する対象の出血事象が処置される。
別の態様では、本発明は、インヒビターを有さない血友病を有する対象の出血事象を処置する方法を提供する。方法は、Ｓｅｒｐｉｎｃ１の発現を阻害する二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤の約４０ｍｇから約９０ｍｇの固定用量を対象に投与する工程であって、二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、５’－ＵＵＧＡＡＧＵＡＡＡＵＧＧＵＧＵＵＡＡＣＣＡＧ－３’（配列番号１５）のヌクレオチド配列と３ヌクレオチドを超えずに異なる少なくとも１５の連続するヌクレオチドを含む、Ｓｅｒｐｉｎｃ１をコードするｍＲＮＡに相補的な領域を含み、センス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドおよびアンチセンス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドは修飾ヌクレオチドであり、センス鎖は、３’－末端で結合したリガンドとコンジュゲートしている工程と；補充因子の治療有効量を対象に投与する工程であって、補充因子の有効量は、補充因子の推奨される有効量に比較して低減される工程とを含み、それによってインヒビターを有さない血友病を有する対象の出血事象が処置される。
本発明は、少なくとも部分的には、インヒビターを有さず、Ｓｅｒｐｉｎｃ１遺伝子のＲＮＡ転写物のＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）媒介型切断を引き起こすｉＲＮＡ組成物の治療有効量が投与された、血友病（例えば、血友病Ａ、血友病Ｂ、または血友病Ｃ）の対象において、例えば世界血友病連盟によって（例えば、Ｓｒｉｖａｓｔａｖａら、「Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅｍｏｐｈｉｌｉａ」、Ｈｅｍｏｐｈｉｌｉａ Ｅｐｕｂ ６、２０１２年７月；ＤＯＩ：１０．１１１１／ｊ．１３６５－２５１６．２０１２．０２９０９．ｘ参照）および／または食品医薬品局によって（例えば、ＮｏｖｏＳｅｖｅｎ ＲＴ，Ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ＦａｃｔｏｒＶＩＩＡ（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ）ｐｒｏｄｕｃｔ ｉｎｓｅｒｔ；０７／２０１４；ＦＥＩＢＡ，Ａｎｔｉ－Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ Ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ
Ｃｏｍｐｌｅｘ ｐｒｏｄｕｃｔ ｉｎｓｅｒｔ；１１／２０１３参照；そのそれぞれの内容全体を参照によって本明細書に組み入れる。）推奨された、バイパス薬剤の推奨される有効量よりも少ない、活性型プロトロンビン複合体製剤（ａＰＣＣ）または組換え第ＶＩＩａ（ｒＦＶＩＩａ）因子などのバイパス薬剤の治療有効量で、出血事象を処置することができる、という発見にも基づく。
したがって別の態様では、本発明は、インヒビターを有する血友病を有する対象の出血事象を処置する方法を提供する。方法は、Ｓｅｒｐｉｎｃ１の発現を阻害する二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤の約３０ｍｇから約９０ｍｇの固定用量を対象に投与する工程であって、二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、５’－ＵＵＧＡＡＧＵＡＡＡＵＧＧＵＧＵＵＡＡＣＣＡＧ－３’（配列番号１５）のヌクレオチド配列と３ヌクレオチドを超えずに異なる少なくとも１５の連続するヌクレオチドを含む、Ｓｅｒｐｉｎｃ１をコードするｍＲＮＡに相補的な領域を含み、センス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドおよびアンチセンス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドは修飾ヌクレオチドであり、センス鎖は、３’－末端で結合したリガンドとコンジュゲートしている工程と；バイパス薬剤の治療有効量を対象に投与する工程であって、バイパス薬剤の有効量は、バイパス薬剤の、例えば食品医薬品局によって承認された、推奨される有効量に比較して低減される工程とを含み、それによって、インヒビターを有する血友病を有する対象の出血事象が処置される。
別の態様では、本発明は、インヒビターを有する血友病を有する対象の出血事象を処置する方法を提供する。方法は、Ｓｅｒｐｉｎｃ１の発現を阻害する二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤の約４０ｍｇから約９０ｍｇの固定用量を対象に投与する工程であって、二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、５’－ＵＵＧＡＡＧＵＡＡＡＵＧＧＵＧＵＵＡＡＣＣＡＧ－３’（配列番号１５）のヌクレオチド配列と３ヌクレオチドを超えずに異なる少なくとも１５の連続するヌクレオチドを含む、Ｓｅｒｐｉｎｃ１をコードするｍＲＮＡに相補的な領域を含み、センス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドおよびアンチセンス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドは修飾ヌクレオチドであり、センス鎖は、３’－末端で結合したリガンドとコンジュゲートしている工程と；バイパス薬剤の治療有効量を対象に投与する工程であって、バイパス薬剤の有効量は、バイパス薬剤の、例えば食品医薬品局によって承認された、推奨される有効量に比較して低減される工程とを含み、それによって、インヒビターを有する血友病を有する対象の出血事象が処置される。
本発明の方法に使用するためのｉＲＮＡ薬剤は、一般に約３０ヌクレオチド長またはそれ以下、例えば、１５～３０、１５～２９、１５～２８、１５～２７、１５～２６、１５～２５、１５～２４、１５～２３、１５～２２、１５～２１、１５～２０、１５～１９、１５～１８、１５～１７、１８～３０、１８～２９、１８～２８、１８～２７、１８～２６、１８～２５、１８～２４、１８～２３、１８～２２、１８～２１、１８～２０、１９～３０、１９～２９、１９～２８、１９～２７、１９～２６、１９～２５、１９～２４、
１９～２３、１９～２２、１９～２１、１９～２０、２０～３０、２０～２９、２０～２８、２０～２７、２０～２６、２０～２５、２０～２４，２０～２３、２０～２２、２０～２１、２１～３０、２１～２９、２１～２８、２１～２７、２１～２６、２１～２５、２１～２４、２１～２３、または２１～２２ヌクレオチド長の領域を有するＲＮＡ鎖（アンチセンス鎖）を含み、この領域は、Ｓｅｒｐｉｎｃ１遺伝子のｍＲＮＡ転写物の少なくとも一部と実質的に相補的である。
他の実施形態では、本発明の二本鎖ＲＮＡｉ薬剤の一方または両方の鎖は、最大６６ヌクレオチド長、例えば、３６～６６、２６～３６、２５～３６、３１～６０、２２～４３、２７～５３ヌクレオチド長であり、Ｓｅｒｐｉｎｃ１遺伝子のｍＲＮＡ転写物の少なくとも一部と実質的に相補的な少なくとも１９の連続するヌクレオチドの領域を有する。いくつかの実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖は、１８～３０の連続するヌクレオチドの二重鎖を形成する。
いくつかの実施形態では、本発明の方法に使用するためのｉＲＮＡ薬剤は、最大６６ヌクレオチド長、例えば、３６～６６、２６～３６、２５～３６、３１～６０、２２～４３、２７～５３ヌクレオチド長が可能であり、Ｓｅｒｐｉｎｃ１遺伝子のｍＲＮＡ転写物の少なくとも一部と実質的に相補的な少なくとも１９の連続するヌクレオチドの領域を有するＲＮＡ鎖（アンチセンス鎖）を含む。いくつかの実施形態では、より長い長さのアンチセンス鎖を有するそのようなｉＲＮＡ薬剤は２０～６０ヌクレオチド長の第２のＲＮＡ鎖（センス鎖）を含む場合もあり、センス鎖およびアンチセンス鎖は、１８～３０の連続するヌクレオチドの二重鎖を形成する。
以下の詳細な説明は、Ｓｅｒｐｉｎｃ１遺伝子の発現を阻害するためのｉＲＮＡを含む組成物の生成および使用の仕方、ならびにこの遺伝子の発現の阻害および／または低下から利益を得るであろう疾患ならびに障害を有する対象を処置するための組成物、使用、ならびに方法を開示する。
Ｉ．定義
本発明をより容易に理解できるように、特定の用語をまず定義する。さらに、パラメーターの値または値の範囲が挙げられる場合はいつでも、挙げられた値の中間の値および範囲も本発明の一部であることが意図されることに留意すべきである。
冠詞「１つの（ａおよびａｎ）」は、１つまたは２つ以上（すなわち、少なくとも１つ）の冠詞の文法的対象物を指すよう本明細書中で使用される。例として、「１つの要素（ａｎ ｅｌｅｍｅｎｔ）」は、１つの要素または２つ以上の要素、例えば、複数の要素を意味する。
「含むこと」という用語は、「含むが、それらに限定されるものではない」という語句を意味して本明細書中で使用され、それと同義に使用される。
「または」という用語は、文脈が明らかに別のことを示さない限り、「および／または」という用語を意味して本明細書中で使用され、それと同義に使用される。
本明細書中で使用される場合、「Ｓｅｒｐｉｎｃ１」とは、細胞で発現する特定のポリペプチドを指す。Ｓｅｒｐｉｎｃ１は、セルピンペプチダーゼインヒビター、クレードＣ（アンチトロンビン；ＡＴ）、メンバー１；アンチトロンビンＩＩＩ；ＡＴ３；アンチトロンビン；およびヘパリン補因子１としても知られている。ヒトＳｅｒｐｉｎｃ１ ｍＲＮＡ転写物の配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＧＩ：２５４５８８０５９（ＮＭ＿０００４８８；配列番号１）に見出すことができる。アカゲザルＳｅｒｐｉｎｃ１ ｍ
ＲＮＡの配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＧＩ：１５７１６７１６９（ＮＭ＿００１１０４５８３；配列番号２）に見出すことができる。マウスＳｅｒｐｉｎｃ１ ｍＲＮＡの配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＧＩ：２３７８７４２１６（ＮＭ＿０８０８４４；配列番号３）に見出すことができる。ラットＳｅｒｐｉｎｃ１ ｍＲＮＡの配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＧＩ：５８８６５６２９（ＮＭ＿００１０１２０２７；配列番号４）に見出すことができる。
「Ｓｅｒｐｉｎｃ１」という用語はまた、本明細書中で使用される場合、Ｓｅｒｐｉｎｃ１遺伝子の一塩基多型などのＳｅｒｐｉｎｃ１遺伝子の天然に生じるＤＮＡ配列多様性により細胞で発現する特定のポリペプチドも指す。Ｓｅｒｐｉｎｃ１遺伝子内の数々のＳＮＰが特定され、例えば、ＮＣＢＩ ｄｂＳＮＰ（例えば、ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｓｎｐを参照）に見出すことができる。Ｓｅｒｐｉｎｃ１遺伝子内のＳＮＰの非限定例は、ＮＣＢＩ ｄｂＳＮＰ受託番号ｒｓ６７７；ｒｓ５８７７；ｒｓ５８７８；ｒｓ５８７９；ｒｓ９４１９８８；ｒｓ９４１９８９；ｒｓ１７９９８７６；ｒｓ１９６３７７１１；ｒｓ２００８９４６；およびｒｓ２２２７５８６に見出すことができる。
本明細書中で使用される場合、「対象」は、霊長類（ヒト、非ヒト霊長類、例えば、サル、およびチンパンジーなど）、非霊長類（雌ウシ、ブタ、ラクダ、ラマ、ウマ、ヤギ、ウサギ、ヒツジ、ハムスター、テンジクネズミ、ネコ、イヌ、ラット、マウス、およびクジラなど）を含む哺乳動物、または鳥（例えば、カモもしくはガチョウ）などの動物である。一実施形態では、対象は、本明細書に記載されるＳｅｒｐｉｎｃ１発現の低下から利益を得るであろう疾患、障害もしくは状態に対して処置もしくは評価されるヒト；Ｓｅｒｐｉｎｃ１発現の低下から利益を得るであろう疾患、障害もしくは状態のリスクがあるヒト；Ｓｅｒｐｉｎｃ１発現の低下から利益を得るであろう疾患、障害もしくは状態を有するヒト；および／またはＳｅｒｐｉｎｃ１発現の低下から利益を得るであろう疾患、障害もしくは状態に対して処置されるヒトなどのヒトである。
本明細書中で使用される場合、「処置すること」または「処置」という用語は、検知可能か、検知不能かにかかわらず、１つもしくはそれ以上の症状の軽減もしくは改善、出血の程度の減少、出血の安定化状態（すなわち、悪化しない）、出血の改善もしくは軽減、または出血を止めることが挙げられるが、それらに限定されるものではない有益なもしくは所望の結果を指す。「処置」はまた、処置をしない場合に予測される生存期間と比較した生存期間の延長を意味することがある。本発明の方法において、処置は、オンデマンドの処置および制御、出血の周術期管理および出血症状の頻度を低減するための通常の予防を含む。
対象におけるＳｅｒｐｉｎｃ１または疾患のマーカーもしくは症状のレベルと関連した「低下させる」という用語は、そのようなレベルの統計学的に有意な低下を指す。低下は、例えば、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％またはそれ以上である場合もあり、そのような障害のない個体の正常な範囲内と受け入れられるレベルまで下がっているのが好ましい。
本明細書中で使用される場合、「予防」または「予防すること」とは、Ｓｅｒｐｉｎｃ１遺伝子の発現の低下から利益を得るであろうその疾患、障害もしくは状態に関して使用されるとき、対象が疾患、障害、または状態、例えば、出血などの症状などに関連する症状を発症する可能性の低下を指す。例えば、出血に対する１つまたはそれ以上のリスク因
子を有する個体が同じリスク因子を有するが、本明細書において記載されるとおりの処置を受けていない集団と比較して、出血を起こさないか、または出血を起こすが重症度が低いかのいずれかの場合に、出血を起こす可能性が低下している。疾患、障害もしくは状態を発症しない、またはそのような疾患、障害もしくは状態と関連する症状の発症が（例えば、その疾患もしくは障害に対して臨床的に認められているスケールにおいて少なくとも約１０％）低下する、または（例えば、何日、何週、何カ月または何年の）症状の遅延が示されると、有効な予防と考慮される。
本明細書中で使用される場合、「出血障害」という用語は、不良な血液凝固および／または過剰な出血をもたらす疾患または障害である。出血障害は、血友病もしくはフォン・ヴィルブランド病などの遺伝性障害、または例えば、播種性血管内凝固、妊娠関連子癇、ビタミンＫ欠乏、自己免疫性障害、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、皮膚障害（例えば、乾癬、天疱瘡）、呼吸器疾患（例えば、喘息、慢性閉塞性肺疾患）、アレルギー性薬物反応、例えば、アスピリン、ヘパリン、およびワルファリンなどの薬剤の結果、糖尿病、急性Ｂ型肝炎感染症、急性Ｃ型肝炎感染症、悪性腫瘍もしくは固形腫瘍（例えば、前立腺、肺、結腸、膵臓、胃、胆管、頭頸部、頸部、乳房、メラノーマ、腎臓、および／もしくは血液悪性腫瘍）に関連する後天性障害である場合もある。一実施形態では、遺伝性出血障害は、血友病、例えば、血友病Ａ、Ｂ、またはＣである。一実施形態では、遺伝性出血障害、例えば、血友病を有する対象は、補充凝固療法に対してインヒビター、例えば、同種抗体インヒビターを持つようになっており、本明細書において「インヒビター対象」と称される。一実施形態では、インヒビター対象は、血友病Ａを有する。別の実施形態では、インヒビター対象は、血友病Ｂを有する。さらに別の実施形態では、インヒビター対象は、血友病Ｃを有する。
一実施形態では、出血障害は、まれな出血障害（ＲＢＤ）である。ＲＢＤは、後天性ＲＢＤまたは遺伝性ＲＢＤとされる。遺伝性ＲＢＤは、凝固因子フィブリノゲン、ＦＩＩ、ＦＶ、組み合わせたＦＶおよびＦＶＩＩＩ、ＦＶＩＩ、ＦＸ、ＦＸＩ、ＦＸＩＩＩの欠乏、ならびにビタミンＫ依存性因子の先天性欠乏（ＶＫＣＦＤ）を伴う障害を含む。それらは一般に、常染色体劣勢状態として伝えられるが、場合によっては、ＦＸＩおよび異常フィブリノゲン血症など、常染色体優性とすることができる。ＲＢＤは、ほとんどの母集団で報告され、ホモ接合性または二重ヘテロ接合の発生率は、ＦＶＩＩ欠乏で５００，０００中の１から、プロトトンビンおよびＦＸＩＩＩ欠乏で２から３百万中の１まで様々である。相対頻度は、母集団毎に様々であり、血族または族内結婚が一般的である場合により高く、特異的な変異遺伝子の頻度が増大する。
例示的なＲＢＤは、無フィブリノゲン血症（フィブリノゲン；第Ｉ因子欠乏）；低フィブリノゲン血症（フィブリノゲン；第Ｉ因子欠乏）；異常フィブリノゲン血症（フィブリノゲン；第Ｉ因子欠乏）；機能不全底フィブリノゲン血症（フィブリノゲン；第Ｉ因子欠乏）；低プロトロンビン血症（プロトロンビン；第ＩＩ因子欠乏）；プロトロンビン欠乏（プロトロンビン；第ＩＩ因子欠乏）；血栓形成傾向（プロトロンビン；第ＩＩ因子欠乏）；先天性抗トロンビンＩＩＩ欠乏（トロンボプラスチン；第ＩＩＩ因子；組織因子）；パラ血友病（プロアクセレリン；第Ｖ因子；不安定因子）；オーレン病（プロアクセレリン；第Ｖ因子；不安定因子）；活性化タンパク質Ｃ抵抗（プロアクセレリン；第Ｖ因子；不安定因子）；アレキサンダー病（安定因子プロコンベルチン；第ＶＩＩ因子）；先天性プロコンベルチン／第ＶＩＩ因子欠乏（安定因子プロコンベルチン；第ＶＩＩ因子）；スチュアート・プラウアー欠乏（スチュアート・プラウアー因子；第Ｘ因子）；先天性第ＸＩＩＩａ／ｂ因子欠乏（フィブリン安定化因子である；第ＸＩＩＩ因子）；遺伝性第ＸＩＩＩ因子欠乏（フィブリン安定化因子；第ＸＩＩＩ因子）；およびフィブリン安定化因子欠乏（フィブリン安定化因子；第ＸＩＩＩ因子）を含む。
「治療有効量」は、本明細書中で使用される場合、出血障害および出血を有する対象に投与されたときに、（例えば、既存の疾患もしくは疾患の１つもしくはそれ以上の症状を低減、改善または維持することによって）疾患の処置をもたらすのに十分なＲＮＡｉ薬剤の量を含むことが意図される。「治療有効量」は、ＲＮＡｉ薬剤、どのように薬剤が投与されるか、疾患およびその重症度ならびに処置される対象の病歴、年齢、体重、家族歴、遺伝子構造、先行するもしくは併用の処置のタイプ、あれば、その他の個々の特性により変化する場合もある。
「予防有効量」は、本明細書中で使用される場合、出血障害を有するが出血していない対象、例えば、出血障害を有し、手術が計画されている対象に投与されたときに（例えば、周術期処置）、疾患もしくは疾患の１つもしくはそれ以上の症状を予防または改善するのに十分なｉＲＮＡの量を含むことが意図される。疾患を改善することは、疾患の過程を遅らせること、または後に発症する疾患の重症度を低下させることを含む。「予防有効量」は、ｉＲＮＡ、どのように薬剤が投与されるか、疾患のリスクの程度、ならびに処置される患者の病歴、年齢、体重、家族歴、遺伝子構造、先行するもしくは併用の処置のタイプ、あれば、その他の個々の特性により変化する場合もある。
「治療有効量」または「予防有効量」はまた、任意の処置に対する妥当な利益／リスク比でいくらかの所望の局所的または全身的効果をもたらすＲＮＡｉ薬剤の量を含む。本発明の方法に利用されるｉＲＮＡは、そのような処置に対して適切な妥当な利益／リスク比をもたらすのに十分な量で投与することができる。
「補充因子の推奨される治療有効量」および「バイパス薬剤の推奨される治療有効量」は、世界血友病連盟によって（例えば、Ｓｒｉｖａｓｔａｖａら、「Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅｍｏｐｈｉｌｉａ」、Ｈｅｍｏｐｈｉｌｉａ Ｅｐｕｂ ６、２０１２年７月；ＤＯＩ：１０．１１１１／ｊ．１３６５－２５１６．２０１２．０２９０９．ｘ；ＡＤＶＡＴＥ（Ａｎｔｉｈｅｍｏｐｈｉｌｉｃ
Ｆａｃｔｏｒ（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ））ｐｒｏｄｕｃｔ ｉｎｓｅｒｔ；１１／２０１６；およびＢｅｎｅＦＩＸ（Ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ Ｆａｃｔｏｒ ＩＸ（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ）ｐｒｏｄｕｃｔ ｉｎｓｅｒｔ；１１／２０１１参照）提供されるように、それぞれ、トロンビンを形成し出血をなくすのに十分な、および／または出血している対象の血漿因子のピークレベルを達成するのに十分な、補充因子またはバイパス薬剤の用量である。前述のそれぞれの内用全体を、参照によって本明細書に組み入れる。
例えば、少量の出血がある対象に関する、補充因子またはバイパス薬剤の推奨される用量は、約１０～４０ＩＵ／ｄＬのピーク血漿第ＶＩＩＩ因子レベルを達成するのに十分な用量であり；中程度の出血がある対象に関する、補充因子またはバイパス薬剤の推奨される用量は、約３０～６０ＩＵ／ｄＬのピーク血漿第ＶＩＩＩ因子レベルを達成するのに十分な用量であり；大量の出血がある対象に関する、補充因子またはバイパス薬剤の推奨される用量は、約６０～１００ＩＵ／ｄＬのピーク血漿第ＶＩＩＩ因子レベルを達成するのに十分な用量であり；手術に際する対象に関した、補充因子またはバイパス薬剤の推奨される用量は、約３０～６０ＩＵ／ｄＬのピーク血漿第ＶＩＩＩ因子レベルを達成するのに十分な用量である（例えば、ＡＤＶＡＴＥ（Ａｎｔｉｈｅｍｏｐｈｉｌｉｃ Ｆａｃｔｏｒ（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ））ｐｒｏｄｕｃｔ ｉｎｓｅｒｔ；１１／２０１６の表１および２参照）。
少量の出血がある対象の、補充因子またはバイパス薬剤の推奨される用量は、約１０～３０ＩＵ／ｄＬのピーク血漿第ＩＸ因子レベルを達成するのに十分な用量であり；中程度の出血がある対象の、補充因子またはバイパス薬剤の推奨される用量は、約２５～５０ＩＵ／ｄＬのピーク血漿第ＩＸ因子レベルを達成するのに十分な用量であり；大量の出血が
ある対象の、補充因子またはバイパス薬剤の推奨される用量は、約５０～１００ＩＵ／ｄＬのピーク血漿第ＩＸ因子レベルを達成するのに十分な用量である。
「薬学的に許容される」という語句は、妥当な利益／リスク比に対応する、過度の毒性、刺激症状、アレルギー反応、またはその他の問題もしくは障害を伴わずに、適切な医学的判断の範囲内でヒト対象および動物対象の組織と接触する使用に適した化合物、材料、組成物、ならびに／または剤形を言及するために本明細書において利用される。
「薬学的に許容される担体」という語句は、本明細書中で使用される場合、薬学的に許容される材料、組成物またはビヒクル、例えば、液体もしくは固体増量剤、希釈剤、賦形剤、製造助剤（例えば、滑沢剤、タルク、マグネシウム、カルシウムもしくは亜鉛、もしくはステアリン酸）、または１つの器官もしくは体の部分から別の器官、もしくは体の部分への対象化合物の運搬もしくは輸送に関与する材料を包む溶媒を意味する。それぞれの担体は、製剤の他の成分と適合し、処置される対象に有害でないという意味で「許容され」なければならない。薬学的に許容される担体として働くことができる材料のいくつかの例としては、（１）糖、例えば、ラクトース、グルコースおよびスクロース；（２）デンプン、例えば、トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプン；（３）セルロースおよびその誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロース；（４）粉末トラガント；（５）麦芽；（６）ゼラチン；（７）滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウムおよびタルク；（８）賦形剤、例えば、カカオバターおよび座剤ワックス；（９）油、例えば、ピーナッツ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油および大豆油；（１０）グリコール、例えば、プロピレングリコール；（１１）ポリオール、例えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコール；（１２）エステル、例えば、オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル；（１３）寒天；（１４）緩衝剤、例えば、水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム；（１５）アルギン酸；（１６）パイロジェンフリー水；（１７）生理食塩水；（１８）リンゲル液；（１９）エチルアルコール；（２０）ｐＨ緩衝液；（２１）ポリエステル、ポリカーボネートおよび／またはポリ酸無水物；（２２）増量剤、例えば、ポリペプチドおよびアミノ酸；（２３）血清成分、例えば、血清アルブミン、ＨＤＬおよびＬＤＬ；ならびに（２２）医薬製剤に利用される無毒で適合したその他の物質が挙げられる。
本明細書中で使用される場合、「標的配列」は、Ｓｅｒｐｉｎｃ１遺伝子の転写の過程で形成されるｍＲＮＡ分子のヌクレオチド配列の連続的な部分を指し、一次転写生成物のＲＮＡプロセシングの生成物であるｍＲＮＡを含む。一実施形態では、配列の標的部分は、少なくともＳｅｒｐｉｎｃ１遺伝子の転写の過程で形成されたｍＲＮＡ分子のヌクレオチド配列のその部分またはその付近におけるｉＲＮＡ誘導切断に対する基質として働くのに十分な長さになる。
標的配列は、約９～３６ヌクレオチド長、例えば、約１５～３０ヌクレオチド長である場合もある。例えば、標的配列は、約１５～３０ヌクレオチド、１５～２９、１５～２８、１５～２７、１５～２６、１５～２５、１５～２４、１５～２３、１５～２２、１５～２１、１５～２０、１５～１９、１５～１８、１５～１７、１８～３０、１８～２９、１８～２８、１８～２７、１８～２６、１８～２５、１８～２４、１８～２３、１８～２２、１８～２１、１８～２０、１９～３０、１９～２９、１９～２８、１９～２７、１９～２６、１９～２５、１９～２４、１９～２３、１９～２２、１９～２１、１９～２０、２０～３０、２０～２９、２０～２８、２０～２７、２０～２６、２０～２５、２０～２４，２０～２３、２０～２２、２０～２１、２１～３０、２１～２９、２１～２８、２１～２７、２１～２６、２１～２５、２１～２４、２１～２３、または２１～２２ヌクレオチド長が可能である。上で挙げた範囲および長さの中間の範囲および長さも本発明の一部で
あることが意図される。
本明細書中で使用される場合、「配列を含む鎖」という用語は、標準的なヌクレオチド命名法を使用して言及される配列によって示されるヌクレオチドの鎖を含むオリゴヌクレオチドを指す。
「Ｇ」、「Ｃ」、「Ａ」、「Ｔ」および「Ｕ」はそれぞれ、一般に塩基として、それぞれグアニン、シトシン、アデニン、チミジンおよびウラシルを含むヌクレオチドを表す。ただし、当然のことながら、「リボヌクレオチド」または「ヌクレオチド」という用語は、下でさらに詳述する修飾ヌクレオチド、または代替置換部分（例えば、表１を参照）を指す場合もある。グアニン、シトシン、アデニン、およびウラシルは、そのような置換部分をもつヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドの塩基対合特性を実質的に変えることなく他の部分で置換することができることを当業者は十分にわかっている。例えば、制限なく、塩基としてイノシンを含むヌクレオチドは、アデニン、シトシン、またはウラシルを含むヌクレオチドと塩基対を形成することができる。したがって、本発明で取り上げられるｄｓＲＮＡのヌクレオチド配列中のウラシル、グアニン、またはアデニンを含むヌクレオチドは、例えば、イノシンを含むヌクレオチドで置換することができる。別の例において、オリゴヌクレオチド中のどこのアデニンおよびシトシンでも、グアニンおよびウラシルにより置換されて、それぞれ標的ｍＲＮＡとＧ－Ｕゆらぎ塩基対を形成する場合がある。そのような置換部分を含む配列は、本発明で取り上げられた組成物および方法に適している。
本明細書では同義に使用される「ｉＲＮＡ」、「ＲＮＡｉ薬剤」、「ｉＲＮＡ薬剤」、「ＲＮＡ干渉薬剤」という用語は、その用語が本明細書において定義されるとおりであり、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）経路を介したＲＮＡ転写物の標的化された切断を仲介するＲＮＡを含む薬剤を指す。ｉＲＮＡは、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）として知られているプロセスによるｍＲＮＡの配列特異的な分解を誘導する。ｉＲＮＡは、細胞、例えば、哺乳動物対象などの対象内の細胞におけるＳｅｒｐｉｎｃ１の発現を調節する、例えば、阻害する。
一実施形態では、本発明のＲＮＡｉ薬剤は、標的ＲＮＡの切断を誘導するための、標的ＲＮＡ配列、例えば、Ｓｅｒｐｉｎｃ１標的ｍＲＮＡ配列と相互作用する一本鎖ＲＮＡを含む。理論に縛られることを望まないが、細胞に導入された長い二本鎖ＲＮＡは、ダイサーとして知られているＩＩＩ型エンドヌクレアーゼによってｓｉＲＮＡに分解されると考えられる（Ｓｈａｒｐら、（２００１年）Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．１５：４８５頁）。ダイサー、リボヌクレアーゼＩＩＩ様酵素は、特徴的な２塩基の３’オーバーハングを有する１９～２３塩基対の短い干渉ＲＮＡにｄｓＲＮＡをプロセシングする（Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎら、（２００１年）Ｎａｔｕｒｅ ４０９：３６３頁）。ｓｉＲＮＡは、その後、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）に組み込まれ、そこで、１つまたはそれ以上のヘリカーゼがｓｉＲＮＡ二重鎖をほどき、相補的なアンチセンス鎖が標的認識を導くのを可能にする（Ｎｙｋａｎｅｎら、（２００１年）Ｃｅｌｌ １０７：３０９頁）。適切な標的ｍＲＮＡと結合すると、ＲＩＳＣ内の１つまたはそれ以上のエンドヌクレアーゼが標的を切断して、サイレンシングを誘導する（Ｅｌｂａｓｈｉｒら、（２００１年）Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．１５：１８８頁）。したがって、一態様では、本発明は、細胞内に形成される一本鎖ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）に関し、これは、ＲＩＳＣ複合体の形成を促進して、標的遺伝子、すなわち、Ｓｅｒｐｉｎｃ１遺伝子のサイレンシングを引き起こす。したがって、「ｓｉＲＮＡ」という用語は、上記のとおりのＲＮＡｉも指すよう本明細書中で使用される。
別の実施形態では、ＲＮＡｉ薬剤は、標的ｍＲＮＡを阻害するために細胞または生物に
導入される一本鎖ｓｉＲＮＡである場合もある。一本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、ＲＩＳＣエンドヌクレアーゼ、アルゴノート２と結合し、それが、その後、標的ｍＲＮＡを切断する。一本鎖ｓｉＲＮＡは一般に１５～３０ヌクレオチドであり、化学修飾されている。一本鎖ｓｉＲＮＡの設計および試験については、米国特許第８，１０１，３４８号およびＬｉｍａら、（２０１２年）Ｃｅｌｌ １５０：８８３～８９４頁に記載されており、それらのそれぞれの内容全体を参照によって本明細書に組み入れる。本明細書に記載されている任意のアンチセンスヌクレオチド配列は、本明細書に記載されている一本鎖ｓｉＲＮＡ、またはＬｉｍａら、（２０１２年）Ｃｅｌｌ １５０；：８８３～８９４頁に記載されている方法によって化学修飾された一本鎖ｓｉＲＮＡとして使用することができる。
別の実施形態では、本発明の組成物、使用、および方法に使用するための「ｉＲＮＡ」は二本鎖ＲＮＡであり、本明細書において「二本鎖ＲＮＡｉ薬剤」、「二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）分子」、「ｄｓＲＮＡ薬剤」、または「ｄｓＲＮＡ」と言及される。「ｄｓＲＮＡ」という用語は、標的ＲＮＡ、すなわち、Ｓｅｒｐｉｎｃ１遺伝子に対して「センス」および「アンチセンス」の向きを有すると言及される逆平行で実質的に相補的な２本の核酸鎖を含む二重鎖構造を有するリボ核酸分子の複合体を指す。本発明のいくつかの実施形態では、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）は、本明細書においてＲＮＡ干渉またはＲＮＡｉと称される転写後の遺伝子サイレンシングメカニズムにより、標的ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡの分解を誘発する。
一般に、ｄｓＲＮＡ分子のそれぞれの鎖の大部分のヌクレオチドは、リボヌクレオチドであるが、本明細書において詳細に記載されるとおり、それぞれまたは両方の鎖も１つまたはそれ以上の非リボヌクレオチド、例えば、デオキシリボヌクレオチドおよび／または修飾ヌクレオチドを含むことができる。さらに、本明細書において使用される場合、「ＲＮＡｉ薬剤」は化学修飾を有するリボヌクレオチドを含む場合もあり；ＲＮＡｉ薬剤は複数のヌクレオチドに大幅な修飾を含む場合もある。
本明細書中で使用される場合、「修飾ヌクレオチド」という用語は、独立して、修飾糖部分、修飾されたヌクレオシド間連結、および／または修飾された核酸塩基を有するヌクレオチドを指す。したがって、修飾ヌクレオチドという用語は、ヌクレオシド間連結、糖部分、または核酸塩基に対する例えば、官能基もしくは原子の置換、付加、または除去を包含する。本発明の薬剤に使用するのに適した修飾としては、本明細書中で開示されるか、または当該技術分野において既知のあらゆるタイプの修飾が挙げられる。本明細書および請求項の目的では、ｓｉＲＮＡ型分子に使用されるあらゆるそのような修飾が、「ＲＮＡｉ薬剤」に包含される。
二重鎖領域は、ＲＩＳＣ経路による所望の標的ＲＮＡの特異的な分解を可能にするいかなる長さも可能であり、約９から３６塩基対の長さ、例えば、約１５～３０塩基対の長さ、例えば、約９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、または３６塩基対の長さ、例えば、約１５～３０、１５～２９、１５～２８、１５～２７、１５～２６、１５～２５、１５～２４、１５～２３、１５～２２、１５～２１、１５～２０、１５～１９、１５～１８、１５～１７、１８～３０、１８～２９、１８～２８、１８～２７、１８～２６、１８～２５、１８～２４、１８～２３、１８～２２、１８～２１、１８～２０、１９～３０、１９～２９、１９～２８、１９～２７、１９～２６、１９～２５、１９～２４、１９～２３、１９～２２、１９～２１、１９～２０、２０～３０、２０～２９、２０～２８、２０～２７、２０～２６、２０～２５、２０～２４，２０～２３、２０～２２、２０～２１、２１～３０、２１～２９、２１～２８、２１～２７、２１～２６、２１～２５、２１～２４、２１～２３、もしくは２１～２２塩基対の長さの範囲である場合もある。上で挙げた範囲および長さの中間の範囲および長さも本発
明の一部であることが意図される。
二重鎖構造を形成する２本の鎖は、より大きな１つのＲＮＡ分子の異なる部分である場合もあり、または別々のＲＮＡ分子である場合もある。２本の鎖がより大きな１つの分子の部分である、したがって、二重鎖構造を形成する一方の鎖の３’末端と他方の鎖の５’末端の間のヌクレオチドの連続した鎖によって連結される場合、この連結するＲＮＡ鎖は「ヘアピンループ」と称される。ヘアピンループは、少なくとも１つの対になっていないヌクレオチドを含むことができる。いくつかの実施形態では、ヘアピンループは、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも２３またはそれ以上の対になっていないヌクレオチドを含むことができる。
ｄｓＲＮＡの実質的に相補的な２本の鎖が別々のＲＮＡ分子によって含まれる場合、それらの分子は、共有結合している必要はないが、共有結合することも可能である。２本の鎖が二重鎖構造を形成する一方の鎖の３’末端と他方の鎖の５’末端の間のヌクレオチドの連続した鎖以外により共有結合している場合、連結する構造は「リンカー」と称される。ＲＮＡ鎖は、同じ数または異なる数のヌクレオチドを有することができる。塩基対の最大数は、ｄｓＲＮＡの最短の鎖中のヌクレオチドの数マイナス二重鎖中に存在するあらゆるオーバーハングである。二重鎖構造に加えて、ＲＮＡｉは、１つまたはそれ以上のヌクレオチドオーバーハングを含む場合もある。
一実施形態では、本発明のＲＮＡｉ薬剤は、標的ＲＮＡの切断を誘導するための、標的ＲＮＡ配列、例えば、Ｓｅｒｐｉｎｃ１標的ｍＲＮＡ配列と相互作用する２４～３０ヌクレオチドのｄｓＲＮＡである。理論に縛られることを望まないが、細胞に導入された長い二本鎖ＲＮＡは、ダイサーとして知られているＩＩＩ型エンドヌクレアーゼによってｓｉＲＮＡに分解される（Ｓｈａｒｐら、（２００１年）Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．１５：４８５頁）。ダイサー、リボヌクレアーゼＩＩＩ様酵素は、特徴的な２塩基の３’オーバーハングを有する１９～２３塩基対の短い干渉ＲＮＡにｄｓＲＮＡをプロセシングする（Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎら、（２００１年）Ｎａｔｕｒｅ ４０９：３６３頁）。ｓｉＲＮＡは、その後、ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）に組み込まれ、そこで、１つまたはそれ以上のヘリカーゼがｓｉＲＮＡ二重鎖をほどき、相補的なアンチセンス鎖が標的認識を導くのを可能にする（Ｎｙｋａｎｅｎら、（２００１年）Ｃｅｌｌ １０７：３０９頁）。適切な標的ｍＲＮＡと結合すると、ＲＩＳＣ内の１つまたはそれ以上のエンドヌクレアーゼが標的を切断して、サイレンシングを誘導する（Ｅｌｂａｓｈｉｒら、（２００１年）Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．１５：１８８頁）。
本明細書中で使用される場合、「ヌクレオチドオーバーハング」という用語は、ｉＲＮＡ、例えば、ｄｓＲＮＡの二重鎖構造から突出する少なくとも１つの対になっていないヌクレオチドを指す。例えば、ｄｓＲＮＡの一方の鎖の３’末端が他方の鎖の５’末端を超えて伸びる場合、逆もまた同様に、ヌクレオチドオーバーハングが存在する。ｄｓＲＮＡは、少なくとも１つのヌクレオチドのオーバーハングを含むことができ；あるいは、オーバーハングは、少なくとも２つのヌクレオチド、少なくとも３つのヌクレオチド、少なくとも４つのヌクレオチド、少なくとも５つのヌクレオチドまたはそれ以上を含むことができる。ヌクレオチドオーバーハングは、デオキシヌクレオチド／ヌクレオシドを含むヌクレオチド／ヌクレオシド類似体を含むか、またはそれからなることができる。オーバーハング（複数可）は、センス鎖、アンチセンス鎖またはそれらの任意の組み合わせの上にある場合がある。さらに、オーバーハングのヌクレオチド（複数可）は、ｄｓＲＮＡのアンチセンス鎖またはセンス鎖のいずれかの５’末端、３’末端または両端に存在することができる。
一実施形態では、ｄｓＲＮＡのアンチセンス鎖は、３’末端および／または５’末端に１～１０ヌクレオチド、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０ヌクレオチドのオーバーハングを有する。一実施形態では、ｄｓＲＮＡのセンス鎖は、３’末端および／または５’末端に１～１０ヌクレオチド、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０ヌクレオチドのオーバーハングを有する。別の実施形態では、オーバーハング中の１つまたはそれ以上のヌクレオチドは、ヌクレオシドチオホスフェートにより置換される。
特定の実施形態では、センス鎖もしくはアンチセンス鎖または両鎖にあるオーバーハングは、１０ヌクレオチドより長い延長された長さ、例えば、１０～３０ヌクレオチド、１０～２５ヌクレオチド、１０～２０ヌクレオチドまたは１０～１５ヌクレオチド長を含むことができる。特定の実施形態では、延長されたオーバーハングは、二重鎖のセンス鎖にある。特定の実施形態では、延長されたオーバーハングは、二重鎖のセンス鎖の３’末端に存在する。特定の実施形態では、延長されたオーバーハングは、二重鎖のセンス鎖の５’末端に存在する。特定の実施形態では、延長されたオーバーハングは、二重鎖のアンチセンス鎖にある。特定の実施形態では、延長されたオーバーハングは、二重鎖のアンチセンス鎖の３’末端に存在する。特定の実施形態では、延長されたオーバーハングは、二重鎖のアンチセンス鎖の５’末端に存在する。特定の実施形態では、延長されたオーバーハング中の１つまたはそれ以上のヌクレオチドは、ヌクレオシドチオホスフェートにより置換される。
「平滑」または「平滑末端」は、二本鎖ＲＮＡｉ薬剤の末端に対になっていないヌクレオチドがない、すなわち、ヌクレオチドオーバーハングがないことを意味する。「平滑末端化」ＲＮＡｉ薬剤は、その全長にわたって二本鎖である、すなわち、分子のいずれの末端にもヌクレオチドオーバーハングがないｄｓＲＮＡである。本発明のＲＮＡｉ薬剤としては、一方の末端にヌクレオチドオーバーハングを有するＲＮＡｉ薬剤（すなわち、１つのオーバーハングおよび１つの平滑末端を有する薬剤）または両端にヌクレオチドオーバーハングを有するＲＮＡｉ薬剤が挙げられる。
「アンチセンス鎖」または「ガイド鎖」という用語は、標的配列、例えば、Ｓｅｒｐｉｎｃ１ ｍＲＮＡと実質的に相補的な領域を含むｉＲＮＡ、例えば、ｄｓＲＮＡの鎖を指す。本明細書中で使用される場合、「相補性の領域」という用語は、配列、例えば、標的配列、例えば、本明細書中で定義されるＳｅｒｐｉｎｃ１ヌクレオチド配列と実質的に相補的なアンチセンス鎖にある領域を指す。相補性の領域が標的配列と完全に相補的でない場合、分子の内部または末端領域にミスマッチがある可能性がある。一般に、最も許容されるミスマッチは、末端領域、例えば、ｉＲＮＡの５’末端および／または３’末端の５、４、３、または２ヌクレオチド以内にある。
「センス鎖」、または「パッセンジャー鎖」という用語は、本明細書中で使用される場合、その用語が本明細書において定義されるとおりアンチセンス鎖の領域と実質的に相補的な領域を含むｉＲＮＡの鎖を指す。
本明細書中で使用される場合、「切断領域」という用語は、切断部位のすぐ近隣に位置する領域を指す。切断部位は、切断が起こる標的の部位である。いくつかの実施形態では、切断領域は、切断部位のいずれかの末端、およびそのすぐ近隣の３塩基を含む。いくつかの実施形態では、切断領域は、切断部位のいずれかの末端、およびそのすぐ近隣の２塩基を含む。いくつかの実施形態では、切断部位は、具体的には、アンチセンス鎖のヌクレオチド１０および１１が結合した部位に生じ、切断領域は、ヌクレオチド１１、１２および１３を含む。
本明細書中で使用される場合、別に指示がある場合を除いて、第２のヌクレオチド配列に関して第１のヌクレオチド配列を説明するために使用されるときの「相補的な」という用語は、当業者が理解するであろうとおり、特定の条件下で第２のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドとハイブリダイズし、二重鎖構造を形成する第１のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの能力を指す。そのような条件は、例えば、ストリンジェントな条件が可能であり、ストリンジェントな条件は、以下を含むことができる：４００ｍＭのＮａＣｌ、４０ｍＭのＰＩＰＥＳ ｐＨ６．４、１ｍＭのＥＤＴＡ、１２～１６時間の５０℃または７０℃に続く、洗浄（例えば、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、（１９８９年）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ参照）。生物の内部で直面する可能性のある生理学的に関連した条件などの他の条件が当てはまる場合がある。当業者は、ハイブリダイズしたヌクレオチドの最終的な用途に従って、２つの配列の相補性の試験に最も適切な条件のセットを決定することができる。
ｉＲＮＡ内、例えば、本明細書に記載されるｄｓＲＮＡ内の相補的な配列は、ヌクレオチド配列の一方または両方の全長にわたる、第１のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの、第２のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドとの塩基対合を含む。そのような配列は、本明細書において互いに対して「完全に相補的」と言及することができる。しかしながら、本明細書において第２の配列に対して第１の配列が「実質的に相補的」と言及される場合、２つの配列が完全に相補的である場合があり、またはそれらの最終用途、例えば、ＲＩＳＣ経路による遺伝子発現の阻害に最も関連性のある条件下でハイブリダイズする能力を保持しながら、最大３０塩基対の二重鎖に関するハイブリダイゼーション時に１つまたはそれ以上だが、一般にせいぜい５、４、３もしくは２のミスマッチ塩基対を形成する可能性がある。ただし、ハイブリダイゼーション時に１つまたはそれ以上の一本鎖のオーバーハングを形成するよう、２つのオリゴヌクレオチドが設計される場合、そのようなオーバーハングは、相補性の判定に関してはミスマッチとみなされないものとする。例えば、２１ヌクレオチド長の１つのオリゴヌクレオチドおよび２３ヌクレオチド長の別のオリゴヌクレオチドを含み、長い方のオリゴヌクレオチドが短い方のオリゴヌクレオチドと完全に相補的な２１ヌクレオチドの配列を含むｄｓＲＮＡは、依然として、本明細書に記載される目的に対して「完全に相補的」と言及することができる。
本明細書中で使用される場合、「相補的な」配列は、そのハイブリダイズする能力に関する上記要件が満たされる限り、非ワトソン・クリック塩基対ならびに／もしくは非天然および修飾ヌクレオチドから形成される塩基対も含むことができるか、またはそれから完全に形成される場合がある。そのような非ワトソン・クリック塩基対としては、Ｇ：Ｕゆらぎまたはフーグスティーン塩基対合が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
「相補的な」、「完全に相補的な」および「実質的に相補的な」という用語は、本明細書において、その使用の文脈から理解されるであろうとおり、ｄｓＲＮＡのセンス鎖とアンチセンス鎖の間、またはｉＲＮＡ薬剤のアンチセンス鎖と標的配列の間の塩基マッチに対して使用することができる。
本明細書中で使用される場合、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）「の少なくとも一部と実質的に相補的な」ポリヌクレオチドは、対象のｍＲＮＡ（例えば、Ｓｅｒｐｉｎｃ１をコードするｍＲＮＡ）の連続的な部分と実質的に相補的なポリヌクレオチドを指す。例えば、配列がＳｅｒｐｉｎｃ１をコードするｍＲＮＡの連続した部分と実質的に相補的である場合、ポリヌクレオチドはＳｅｒｐｉｎｃ１ ｍＲＮＡの少なくとも一部と相補的で
ある。
したがって、いくつかの実施形態では、本明細書中で開示されているアンチセンス鎖ポリヌクレオチドは、標的Ｓｅｒｐｉｎｃ１配列と完全に相補的である。他の実施形態では、本明細書中で開示されているアンチセンス鎖ポリヌクレオチドは標的Ｓｅｒｐｉｎｃ１配列と実質的に相補的であり、配列番号１のヌクレオチド配列の相当する領域、または配列番号１のフラグメントとその全長にわたり少なくとも約８０％相補的、例えば、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、もしくは約９９％相補的な連続的なヌクレオチド配列を含む。
一実施形態では、本発明のＲＮＡｉ薬剤は、アンチセンスポリヌクレオチドと実質的に相補的、ひいては、標的Ｓｅｒｐｉｎｃ１配列と相補的なセンス鎖を含み、センス鎖ポリヌクレオチドは、配列番号５のヌクレオチド配列の相当する領域、または配列番号５のいずれか１つのフラグメントとその全長にわたり少なくとも約８０％相補的、例えば、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、もしくは約９９％相補的な連続的なヌクレオチド配列を含む。
本発明の一態様では、本発明の方法および組成物に使用するための薬剤は、アンチセンス阻害メカニズムにより標的ｍＲＮＡを阻害する一本鎖アンチセンスＲＮＡ分子である。一本鎖アンチセンスＲＮＡ分子は、標的ｍＲＮＡ内の配列と相補的である。一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ｍＲＮＡと塩基対を形成し、翻訳機構を物理的に妨げることによって化学量論的な様式で翻訳を阻害することができる。Ｄｉａｓ、Ｎ．ら、（２００２年）Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ １：３４７～３５５頁を参照。一本鎖アンチセンスＲＮＡ分子は、約１５から約３０ヌクレオチド長である場合もあり、標的配列と相補的な配列を有する。例えば、一本鎖アンチセンスＲＮＡ分子は、本明細書に記載されているアンチセンス配列のいずれか１つからの少なくとも約１５、１６、１７、１８、１９、２０、またはそれ以上の連続するヌクレオチドである配列を含む場合もある。
「阻害すること」という用語は、本明細書中で使用される場合、「低下させること」、「サイレンシングすること」、「下方制御すること」、「抑制すること」、およびその他の類似の用語と同義に使用され、あらゆるレベルの阻害を含む。
「Ｓｅｒｐｉｎｃ１の発現を阻害すること」という語句は、本明細書中で使用される場合、Ｓｅｒｐｉｎｃ１タンパク質をコードする任意のＳｅｒｐｉｎｃ１遺伝子（例えば、マウスＳｅｒｐｉｎｃ１遺伝子、ラットＳｅｒｐｉｎｃ１遺伝子、サルＳｅｒｐｉｎｃ１遺伝子、もしくはヒトＳｅｒｐｉｎｃ１遺伝子など）ならびにＳｅｒｐｉｎｃ１遺伝子バリアントまたは変異体の発現の阻害を含む。
「Ｓｅｒｐｉｎｃ１遺伝子の発現を阻害すること」は、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％の阻害などのＳｅｒｐｉｎｃ１遺伝子のあらゆるレベルの阻害、例えば、Ｓｅｒｐｉｎｃ１遺伝子の発現の少なくとも部分的な抑制を含む。
Ｓｅｒｐｉｎｃ１遺伝子の発現は、Ｓｅｒｐｉｎｃ１遺伝子発現と関連する任意の変数のレベル、Ｓｅｒｐｉｎｃ１ ｍＲＮＡレベル、Ｓｅｒｐｉｎｃ１タンパク質レベル、または例えば、トロンビン形成能、出血時間、プロトロンビン時間（ＰＴ）、血小板数、および／もしくは活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）の尺度として例えば、トロンビン：アンチトロンビン複合体レベルに基づいて評価することができる。阻害は、対照レベルと比較したこれらの１つまたはそれ以上の変数の絶対的または相対的レベルの低下によって評価することができる。対照レベルは、当該技術分野において利用される任意のタイプの対照レベル、例えば、投与前のベースラインレベル、または未処置か、もしくは対照（例えば、緩衝剤のみの対照もしくは不活性薬剤対照など）により処置された類似の対象、細胞、もしくはサンプルから求めたレベルである場合もある。
一実施形態では、Ｓｅｒｐｉｎｃ１遺伝子の発現の少なくとも部分的な抑制は、第１の細胞もしくは細胞群と実質的に同一であるが、Ｓｅｒｐｉｎｃ１遺伝子の発現が阻害されるよう処置されていない第２の細胞もしくは細胞群（対照細胞）と比較した場合のＳｅｒｐｉｎｃ１遺伝子が転写され、Ｓｅｒｐｉｎｃ１遺伝子の発現が阻害されるよう処置された第１の細胞もしくは細胞群から単離することができるか、またはそれから検出することができるＳｅｒｐｉｎｃ１ ｍＲＮＡの量の減少によって評価される。阻害の程度は、以下に換算して表すことができる。
Figure 2023123756000006
ｄｓＲＮＡなどの「ＲＮＡｉ薬剤と細胞を接触させること」という語句は、本明細書中で使用される場合、任意の可能な手段によって細胞を接触させることを含む。ＲＮＡｉ薬剤と細胞を接触させることは、インビトロでｉＲＮＡと細胞を接触させることまたはインビボでｉＲＮＡと細胞を接触させることを含む。接触させることは、直接または間接的に行うことができる。したがって、例えば、ＲＮＡｉ薬剤は、方法の個々の実行によって物理的に細胞と接触させることができ、あるいは、ＲＮＡｉ薬剤は、それがその後、細胞と接触することを可能にするか、または接触させることになる状況にすることができる。
インビトロで細胞を接触させることは、例えば、細胞をＲＮＡｉ薬剤とインキュベートすることによって行うことができる。インビボで細胞を接触させることは、例えば、細胞がある組織にもしくはその付近にＲＮＡｉ薬剤を注射することによって、またはＲＮＡｉ薬剤が、その後、接触させられる細胞がある組織に到達することになるよう、別の領域、例えば、血流もしくは皮下空間にＲＮＡｉ薬剤を注射することによって行うことができる。例えば、ＲＮＡｉ薬剤は、目的とする部位、例えば、肝臓にＲＮＡｉ薬剤を誘導するリガンド、例えば、ＧａｌＮＡｃ３を含む、および／またはそれと結合している場合もある。インビトロおよびインビボで接触させる方法の組み合わせも可能である。例えば、細胞は、インビトロでＲＮＡｉ薬剤と接触させられ、その後、対象に移植される場合もある。
一実施形態では、ｉＲＮＡと細胞を接触させることは、細胞への取り込みもしくは吸収を促進することもしくは生じさせることによる「導入すること」または「ｉＲＮＡを細胞に送達すること」を含む。ｉＲＮＡの吸収または取り込みは、助力無しの拡散プロセスもしくは能動的な細胞内プロセスにより、または補助剤もしくはデバイスによって行うことができる。ｉＲＮＡを細胞に導入することは、インビトロおよび／またはインビボにおいて可能である。例えば、インビボ導入に関して、ｉＲＮＡは、組織部位に注射することができ、または全身投与することもできる。インビボ送達は、内容全体を参照によって本明
細書に組み入れる米国特許第５，０３２，４０１号および同第５，６０７，６７７号、および米国出願公開第２００５／０２８１７８１号に記載されているものなどのベータ・グルカン送達系によって行うこともできる。細胞へのインビトロ導入としては、エレクトロポレーションおよびリポフェクションなどの当該技術分野において既知の方法が挙げられる。さらなるアプローチは、本明細書の下に記載される、および／または当該技術分野において知られている。
ＩＩ．本発明の方法
本発明は、例えば、約７５％またはそれ以上、対象内でＳｅｒｐｉｎｃ１活性を低下させる量の、ｉＲＮＡ剤、または本発明のｉＲＮＡ剤を含む医薬組成物と、例えばトロンビンを形成し出血をなくす（凝血塊を形成する）のに十分な量の、例えば世界血友病連盟によって（例えば、Ｓｒｉｖａｓｔａｖａら、「Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅｍｏｐｈｉｌｉａ」、Ｈｅｍｏｐｈｉｌｉａ Ｅｐｕｂ ６、２０１２年７月；ＤＯＩ：１０．１１１１／ｊ．１３６５－２５１６．２０１２．０２９０９．ｘ参照）および／または食品医薬品局によって（（例えば、ＡＤＶＡＴＥ（Ａｎｔｉｈｅｍｏｐｈｉｌｉｃ Ｆａｃｔｏｒ（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ））ｐｒｏｄｕｃｔ ｉｎｓｅｒｔ；１１／２０１６；ＢｅｎｅＦＩＸ（Ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ Ｆａｃｔｏｒ ＩＸ（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ）ｐｒｏｄｕｃｔ ｉｎｓｅｒｔ；１１／２０１１参照）推奨される、補充因子またはバイパス薬剤の推奨される治療有効量に比較して低減した治療有効量の補充因子またはバイパス薬剤とを、対象に投与する工程を含む、血友病（例えば、血友病Ａ、血友病Ｂ、または血友病Ｃ）の対象の出血事象を処置するための治療方法を提供する。前述の内容全体を、参照によって本明細書に組み入れる。
以下の実施例に記述されるように、インヒビターを有するまたは有さない血友病の、例えば血友病Ａ、血友病Ｂ、または血友病Ｃの対象では、対象におけるＳｅｒｐｉｎｃ１活性を約７５％またはそれ以上低下させる量でＳｅｒｐｉｎｃ１の発現を阻害するＲＮＡｉ薬剤の投与が、メジアン年間出血率および突発性年間出血率を低減させ、出血は、補充因子またはバイパス薬剤の推奨される治療有効量に比較して低減される治療有効量の補充因子またはバイパス薬剤によって管理できる（トロンビンが形成され、出血が止まる）ことが、意外にも発見された。
本発明の方法で使用するのに適切な補充因子には、第ＶＩＩＩ因子、例えばＡｄｖａｔｅ、Ｅｌｏｃｔａｔｅ、Ｈａｅｍａｔｅ、Ｈｅｌｉｘａｔｅ、Ｉｍｍｕｎａｔｅ、Ｏｃｔａｎａｔｅ、Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｅ、およびＲｅｆａｃｔｏ、または第ＩＸ因子、例えばＡｉｍａｆｉｘ、Ｂｅｎｅｆｉｘ、Ｉｍｍｕｎｉｎｅ、およびＲｅｆａｃｔｏが含まれる。本発明の方法に使用される適切なバイパス薬剤には、活性型プロトロンビン複合体製剤（ａＰＣＣ）、例えばＦＥＩＢＡおよびＰｒｏｔｈｒｏｍｐｌｅｘ、および組換え第ＶＩＩａ因子（ｒＦＶＩＩａ）、例えばＮｏｖｏＳｅｖｅｎが含まれる。
補充因子は第ＶＩＩＩ因子とすることができ、本発明の方法で対象に投与される補充因子の治療有効量は、約１０～１００ＩＵ／ｄＬ、例えば約１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または約１００ＩＵ／ｄＬのピーク血漿第ＶＩＩＩ因子レベルを達成するのに十分な用量である。
例えば、対象に投与される第ＶＩＩＩ補充因子の治療有効量は、約２００ＩＵ／ｋｇ未満、または約１９０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１８０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１７０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１６０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１５０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１４０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１３０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１２０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１１０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１００ＩＵ／ｋｇ未満、または約９０ＩＵ
／ｋｇ未満、または約８０ＩＵ／ｋｇ未満、または約７０ＩＵ／ｋｇ未満、または約６０ＩＵ／ｋｇ未満、または約５０ＩＵ／ｋｇ未満、または約４０ＩＵ／ｋｇ未満、または約３０ＩＵ／ｋｇ未満、または約２０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１０ＩＵ／ｋｇ未満にすることができる。一実施形態では、対象に投与される第ＶＩＩＩ因子の治療有効量は、補充因子の推奨される有効量の約３分の２から約５分の１であり、例えば約５から約２０ＩＵ／ｋｇ、または約１０から約２０ＩＵ／ｋｇ、例えば５、１０、１５、または２０ＩＵ／ｋｇの用量である。一実施形態では、出血事象が中程度の出血事象である。別の実施形態では、出血事象が大量の出血事象である。
補充因子は、第ＩＸ因子とすることができ、本発明の方法で対象に投与される補充因子の治療有効量は、約１０～１００ＩＵ／ｄＬのピーク血漿第ＩＸ因子レベルを達成するのに十分な用量、例えば約１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または約１００ＩＵ／ｄＬである。
例えば、第ＩＸ補充因子の治療有効量は、約２００ＩＵ／ｋｇ未満、または約１９０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１８０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１７０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１６０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１５０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１４０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１３０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１２０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１１０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１００ＩＵ／ｋｇ未満、または約９０ＩＵ／ｋｇ未満、または約８０ＩＵ／ｋｇ未満、または約７０ＩＵ／ｋｇ未満、または約６０ＩＵ／ｋｇ未満、または約５０ＩＵ／ｋｇ未満、または約４０ＩＵ／ｋｇ未満、または約３０ＩＵ／ｋｇ未満、または約２０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１０ＩＵ／ｋｇ未満にすることができる。一部の実施形態では、対象に投与される第ＩＸ因子の治療有効量は、補充因子の推奨される治療有効量の約２分の１から約６分の１であり、例えば、約１０から約３０ＩＵ／ｋｇまたは約２０から約３０ＩＵ／ｋｇ、例えば約１０、１５、２０、２５、または３０ＩＵ／ｋｇの用量である。一部の実施形態では、出血事象が中程度の出血である。別の実施形態では、出血事象が大量の出血事象である。
バイパス薬剤は、ａＰＣＣとすることができ、本発明の方法で対象に投与されるバイパス薬剤の治療有効量は、トロンビンを形成し出血を止めるのに十分な用量である。
例えば、バイパス薬剤ａＰＣＣの治療有効量は、約１００Ｕ／ｋｇ未満、または約９０Ｕ／ｋｇ未満、または約８０Ｕ／ｋｇ未満、または約７０Ｕ／ｋｇ未満、または約６０Ｕ／ｋｇ未満、または約５０Ｕ／ｋｇ未満、または約４０Ｕ／ｋｇ未満、または約３０Ｕ／ｋｇ未満、または約２０Ｕ／ｋｇ未満、または約１０Ｕ／ｋｇ未満にすることができる。一実施形態では、対象に投与されるａＰＣＣの治療有効量は、補充因子の推奨される有効量の約２分の１から約３分の１であり、例えば約３０から約５０Ｕ／ｋｇ、例えば約３０、３５、４０、４５、または５０Ｕ／ｋｇの用量である。一実施形態では、出血事象が中程度の出血事象である。別の実施形態では、出血事象が大量の出血事象である。
バイパス薬剤は、ｒＦＶＩＩａとすることができ、本発明の方法で対象に投与されるバイパス薬剤の治療有効量は、トロンビンを形成し出血を止めるのに十分な用量である。
例えば、バイパス薬剤ｒＦＶＩＩａの治療有効量は、約１２０μｇ／ｋｇ未満、または約１１０μｇ／ｋｇ未満、または約１００μｇ／ｋｇ未満、または約９０μｇ／ｋｇ未満、または約８０μｇ／ｋｇ未満、または約７０μｇ／ｋｇ未満、または約６０μｇ／ｋｇ未満、または約５０μｇ／ｋｇ未満、または約４０μｇ／ｋｇ未満、または約３０μｇ／ｋｇ未満、または約２０μｇ／ｋｇ未満にすることができる。一実施形態では、対象に投与されるｒＦＶＩＩａの治療有効量は、補充因子の推奨される有効量の約２分の１であり
、例えば約４５μｇ／ｋｇの用量である。一実施形態では、出血事象は中程度の出血事象である。別の実施形態では、出血事象は大量の出血事象である。
いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ薬剤は、約２５ｍｇから約１００ｍｇの間、例えば、約２５ｍｇから約９５ｍｇの間、約２５ｍｇから約９０ｍｇの間、約２５ｍｇから約８５ｍｇの間、約２５ｍｇから約８０ｍｇの間、約２５ｍｇから約７５ｍｇの間、約２５ｍｇから約７０ｍｇの間、約２５ｍｇから約６５ｍｇの間、約２５ｍｇから約６０ｍｇの間、約２５ｍｇから約５０ｍｇの間、約５０ｍｇから約１００ｍｇの間、約５０ｍｇから約９５ｍｇの間、約５０ｍｇから約９０ｍｇの間、約５０ｍｇから約８５ｍｇの間、約５０ｍｇから約８０ｍｇの間、約３０ｍｇから約１００ｍｇの間、約３０ｍｇから約９０ｍｇの間、約３０ｍｇから約８０ｍｇの間、約４０ｍｇから約１００ｍｇの間、約４０ｍｇから約９０ｍｇの間、約４０ｍｇから約８０ｍｇの間、約６０ｍｇから約１００ｍｇの間、約６０ｍｇから約９０ｍｇの間、約２５ｍｇから約５５ｍｇの間、約２５ｍｇから約６５ｍｇの間、約３０ｍｇから約９５ｍｇの間、約３０ｍｇから約８５ｍｇの間、約３０ｍｇから約７５ｍｇの間、約３０ｍｇから約６５ｍｇの間、約３０ｍｇから約５５ｍｇの間、約４０ｍｇから約９５ｍｇの間、約４０ｍｇから約８５ｍｇの間、約４０ｍｇから約７５ｍｇの間、約４０ｍｇから約６５ｍｇの間、約４０ｍｇから約５５ｍｇの間、または約４５ｍｇから約９５ｍｇの間の固定用量で投与される。
いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ薬剤は、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、約５０ｍｇ、約５５ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約８５ｍｇ、約９０ｍｇ、約９５ｍｇ、または約１００ｍｇの固定用量で投与される。
一実施形態では、ＲＮＡｉ薬剤が、Ｓｅｒｐｉｎｃ１活性を約７５％またはそれ以上低下させる用量で、対象に投与される。
したがって、一態様では、本発明は、インヒビターを有する血友病を有する対象の出血事象を処置する方法を提供する。方法は、Ｓｅｒｐｉｎｃ１の発現を阻害する二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤の約３０ｍｇから約９０ｍｇの固定用量（例えば、対象のＳｅｒｐｉｎｃ１活性を約７５％またはそれ以上低下させる量）を、対象に投与する工程であって、二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、５’－ＵＵＧＡＡＧＵＡＡＡＵＧＧＵＧＵＵＡＡＣＣＡＧ－３’（配列番号１５）のヌクレオチド配列と３ヌクレオチドを超えずに異なる少なくとも１５の連続するヌクレオチドを含む、Ｓｅｒｐｉｎｃ１をコードするｍＲＮＡに相補的な領域を含み、センス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドおよびアンチセンス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドは修飾ヌクレオチドであり、センス鎖は、３’－末端で結合したリガンドとコンジュゲートしている工程と；補充因子の治療有効量を対象に投与する工程であって、補充因子の有効量は、補充因子の推奨される有効量に比較して低減された（例えば、約１０～１００ＩＵ／ｄＬのピーク血漿第ＶＩＩＩ因子レベルを達成するのに十分な量（例えば、第ＶＩＩＩ因子が約２００ＩＵ／ｋｇ未満の用量、例えば第ＶＩＩＩ因子が約５から約２０ＩＵ／ｋｇの用量）；または約１０～１００ＩＵ／ｄｌのピーク血漿第ＩＸ因子レベルを達成するのに十分な量（例えば、第ＩＸ因子が約２００ＩＵ／ｋｇ未満の用量、例えば第ＩＸ因子が約１０から約３０ＩＵ／ｋｇの用量））工程とを含み、それによって、インヒビターを有さない血友病を有する対象の出血事象が処置される。
別の態様では、本発明は、インヒビターを有する血友病を有する対象の出血事象を処置する方法を提供する。方法は、Ｓｅｒｐｉｎｃ１の発現を阻害する二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤の約３０ｍｇから約９０ｍｇの固定用量（例えば、対象のＳｅｒｐｉｎｃ１活性を約７５％またはそれ以上低下させる量）を、対象に投与する工程であって、二本鎖Ｒ
ＮＡｉ薬剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、５’－ＵＵＧＡＡＧＵＡＡＡＵＧＧＵＧＵＵＡＡＣＣＡＧ－３’（配列番号１５）のヌクレオチド配列と３ヌクレオチドを超えずに異なる少なくとも１５の連続するヌクレオチドを含む、Ｓｅｒｐｉｎｃ１をコードするｍＲＮＡに相補的な領域を含み、センス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドおよびアンチセンス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドは修飾ヌクレオチドであり、センス鎖は、３’－末端で結合したリガンドとコンジュゲートしている工程と；バイパス薬剤の治療有効量を対象に投与する工程であって、バイパス薬剤の有効量は、バイパス薬剤の推奨される有効量に比較して低減された（例えば、トロンビンを形成し出血を止めるのに十分な量、例えば、ａＰＣＣが約１００Ｕ／ｋｇ未満である用量（例えば、ａＰＣＣが約３０から５０Ｕ／ｋｇの用量）；ｒＦＶＩＩａが約１２０μｇ／ｋｇ未満の用量（例えば、ｒＦＶＩＩａが約４５μｇ／ｋｇの用量））工程とを含み、それによって、インヒビターを有する血友病を有する対象の出血事象が処置される。
別の態様では、本発明は、インヒビターを有さない血友病を有する対象の出血事象を処置する方法を提供する。方法は、Ｓｅｒｐｉｎｃ１の発現を阻害する二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤の約４０ｍｇから約９０ｍｇの固定用量（例えば、対象のＳｅｒｐｉｎｃ１活性を約７５％またはそれ以上低下させる量）を、対象に投与する工程であって、二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、５’－ＵＵＧＡＡＧＵＡＡＡＵＧＧＵＧＵＵＡＡＣＣＡＧ－３’（配列番号１５）のヌクレオチド配列と３ヌクレオチドを超えずに異なる少なくとも１５の連続するヌクレオチドを含む、Ｓｅｒｐｉｎｃ１をコードするｍＲＮＡに相補的な領域を含み、センス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドおよびアンチセンス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドは修飾ヌクレオチドであり、センス鎖は、３’－末端で結合したリガンドとコンジュゲートしている工程と；補充因子の治療有効量を対象に投与する工程であって、補充因子の有効量は、補充因子の推奨される有効量に比較して低減された（例えば、約１０～１００ＩＵ／ｄＬのピーク血漿第ＶＩＩＩ因子レベルを達成するのに十分な量（例えば、第ＶＩＩＩ因子が約２００ＩＵ／ｋｇ未満の用量、例えば第ＶＩＩＩ因子が約５から約２０ＩＵ／ｋｇの用量）；または約１０～１００ＩＵ／ｄｌのピーク血漿第ＩＸ因子レベルを達成するのに十分な量（例えば、第ＩＸ因子が約２００ＩＵ／ｋｇ未満の用量、例えば第ＩＸ因子が約１０から約３０ＩＵ／ｋｇの用量））工程とを含み、それによって、インヒビターを有さない血友病を有する対象の出血事象が処置される。
別の態様では、本発明は、インヒビターを有する血友病を有する対象の出血事象を処置する方法を提供する。方法は、Ｓｅｒｐｉｎｃ１の発現を阻害する二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤の約４０ｍｇから約９０ｍｇの固定用量（例えば、対象のＳｅｒｐｉｎｃ１活性を約７５％またはそれ以上低下させる量）を、対象に投与する工程であって、二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、５’－ＵＵＧＡＡＧＵＡＡＡＵＧＧＵＧＵＵＡＡＣＣＡＧ－３’（配列番号１５）のヌクレオチド配列と３ヌクレオチドを超えずに異なる少なくとも１５の連続するヌクレオチドを含む、Ｓｅｒｐｉｎｃ１をコードするｍＲＮＡに相補的な領域を含み、センス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドおよびアンチセンス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドは修飾ヌクレオチドであり、センス鎖が、３’－末端で結合したリガンドとコンジュゲートしている工程と；バイパス薬剤の治療有効量を対象に投与する工程であって、バイパス薬剤の有効量は、バイパス薬剤の推奨される有効量に比較して低減された（例えば、トロンビンを形成し出血を止めるのに十分な量、例えば、ａＰＣＣが約１００Ｕ／ｋｇ未満である用量（例えば、ａＰＣＣが約３０から５０Ｕ／ｋｇの用量）；ｒＦＶＩＩａが約１２０μｇ／ｋｇ未満の用量（例えば、ｒＦＶＩＩａが約４５μｇ／ｋｇの用量））工程とを含み、それによって、インヒビターを有する血友病を有する対象の出血事象が処置される。
一態様では、本発明は、インヒビターを有さない血友病、例えば血友病Ａ、血友病Ｂ、
または血友病Ｃの対象の出血事象を処置する方法で使用される、約３０ｍｇから９０ｍｇの固定用量（例えば、対象のＳｅｒｐｉｎｃ１活性を約７５％またはそれ以上低下させる量）での対象への投与に適切なＳｅｒｐｉｎｃ１の発現を阻害する二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤と；補充因子の推奨される有効量に比較して低減した用量（例えば、約１０～１００ＩＵ／ｄＬのピーク血漿第ＶＩＩＩ因子レベルを達成するのに十分な量（例えば、第ＶＩＩＩ因子が約２００ＩＵ／ｋｇ未満の用量、例えば第ＶＩＩＩ因子が約５から約２０ＩＵ／ｋｇの用量）；または約１０～１００ＩＵ／ｄｌのピーク血漿第ＩＸ因子レベルを達成するのに十分な量（例えば、第ＩＸ因子が約２００ＩＵ／ｋｇ未満の用量、例えば第ＩＸ因子が約１０から約３０ＩＵ／ｋｇの用量））で、対象への投与に適切な補充因子とを提供する。ＲＮＡｉ薬剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、５’－ＵＵＧＡＡＧＵＡＡＡＵＧＧＵＧＵＵＡＡＣＣＡＧ－３’（配列番号１５）のヌクレオチド配列と３ヌクレオチドを超えずに異なる少なくとも１５の連続するヌクレオチドを含む、Ｓｅｒｐｉｎｃ１をコードするｍＲＮＡに相補的な領域を含み、センス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドおよびアンチセンス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、センス鎖が、３’－末端で結合したリガンドとコンジュゲートしている。
別の態様では、本発明は、インヒビターを有する血友病、例えば血友病Ａ、血友病Ｂ、または血友病Ｃの対象の出血事象を処置する方法で使用される、約３０ｍｇから９０ｍｇの固定用量（例えば、対象のＳｅｒｐｉｎｃ１活性を約７５％またはそれ以上低下させる量）での対象への投与に適切な、Ｓｅｒｐｉｎｃ１の発現を阻害する二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤と；バイパス薬剤の推奨される有効量に比較して低減した用量（例えば、トロンビンを形成し出血を止めるのに十分な量、例えばａＰＣＣが約１００ＩＵ／ｋｇ未満の用量（例えば、ａＰＣＣが約３０から５０Ｕ／ｋｇの用量）；ｒＦＶＩＩａが約１２０μｇ／ｋｇ未満の用量（例えば、ｒＦＶＩＩａが約４５μｇ／ｋｇの用量））で、対象への投与に適切なバイパス薬剤とを提供する。ＲＮＡｉ薬剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、５’－ＵＵＧＡＡＧＵＡＡＡＵＧＧＵＧＵＵＡＡＣＣＡＧ－３’（配列番号１５）のヌクレオチド配列と３ヌクレオチドを超えずに異なる少なくとも１５の連続するヌクレオチドを含む、Ｓｅｒｐｉｎｃ１をコードするｍＲＮＡに相補的な領域を含み、センス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドおよびアンチセンス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、センス鎖が、３’－末端で結合したリガンドとコンジュゲートしている。
一態様では、本発明は、インヒビターを有さない血友病、例えば血友病Ａ、血友病Ｂ、または血友病Ｃの対象の出血事象を処置する方法で使用される、約４０ｍｇから９０ｍｇの固定用量（例えば、対象のＳｅｒｐｉｎｃ１活性を約７５％またはそれ以上低下させる量）での対象への投与に適切なＳｅｒｐｉｎｃ１の発現を阻害する二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤と；補充因子の推奨される有効量に比較して低減した用量（例えば、約１０～１００ＩＵ／ｄＬのピーク血漿第ＶＩＩＩ因子レベルを達成するのに十分な量（例えば、第ＶＩＩＩ因子が約２００ＩＵ／ｋｇ未満の用量、例えば第ＶＩＩＩ因子が約５から約２０ＩＵ／ｋｇの用量）；または約１０～１００ＩＵ／ｄｌのピーク血漿第ＩＸ因子レベルを達成するのに十分な量（例えば、第ＩＸ因子が約２００ＩＵ／ｋｇ未満の用量、例えば第ＩＸ因子が約１０から約３０ＩＵ／ｋｇの用量））で、対象への投与に適切な補充因子とを提供する。ＲＮＡｉ薬剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、５’－ＵＵＧＡＡＧＵＡＡＡＵＧＧＵＧＵＵＡＡＣＣＡＧ－３’（配列番号１５）のヌクレオチド配列と３ヌクレオチドを超えずに異なる少なくとも１５の連続するヌクレオチドを含む、Ｓｅｒｐｉｎｃ１をコードするｍＲＮＡに相補的な領域を含み、センス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドおよびアンチセンス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、センス鎖が、３’－末端で結合したリガンドとコンジュゲートしている。
別の態様では、本発明は、インヒビターを有する血友病、例えば血友病Ａ、血友病Ｂ、または血友病Ｃの対象の出血事象を処置する方法で使用される、約４０ｍｇから９０ｍｇの固定用量（例えば、対象のＳｅｒｐｉｎｃ１活性を約７５％またはそれ以上低下させる量）での対象への投与に適切な、Ｓｅｒｐｉｎｃ１の発現を阻害する二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤と；バイパス薬剤の推奨される有効量に比較して低減した用量（例えば、トロンビンを形成し出血を止めるのに十分な量、例えばａＰＣＣが約１００ＩＵ／ｋｇ未満の用量（例えば、ａＰＣＣが約３０から５０Ｕ／ｋｇの用量）；ｒＦＶＩＩａが約１２０μｇ／ｋｇ未満の用量（例えば、ｒＦＶＩＩａが約４５μｇ／ｋｇの用量））で、対象への投与に適切なバイパス薬剤とを提供する。ＲＮＡｉ薬剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は、５’－ＵＵＧＡＡＧＵＡＡＡＵＧＧＵＧＵＵＡＡＣＣＡＧ－３’（配列番号１５）のヌクレオチド配列と３ヌクレオチドを超えずに異なる少なくとも１５の連続するヌクレオチドを含む、Ｓｅｒｐｉｎｃ１をコードするｍＲＮＡに相補的な領域を含み、センス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドおよびアンチセンス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、センス鎖が、３’－末端で結合したリガンドとコンジュゲートしている。
前述の方法および使用において、一実施形態では、相補性の領域が、５’－ＵＵＧＡＡＧＵＡＡＡＵＧＧＵＧＵＵＡＡＣＣＡＧ－３’（配列番号１５）のヌクレオチド配列からなる。
一実施形態では、二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、５’－ＧＧＵＵＡＡＣＡＣＣＡＵＵＵＡＣＵＵＣＡＡ－３’（配列番号１６）のヌクレオチド配列を含むセンス鎖、および５’－ＵＵＧＡＡＧＵＡＡＡＵＧＧＵＧＵＵＡＡＣＣＡＧ－３’（配列番号１５）のヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖を含む。
一実施形態では、センス鎖は、５’－ＧｆｓｇｓＵｆｕＡｆａＣｆａＣｆＣｆＡｆｕＵｆｕＡｆｃＵｆｕＣｆａＡｆ－３’（配列番号１３）を含み、アンチセンス鎖は、５’－ｕｓＵｆｓｇＡｆａＧｆｕＡｆａＡｆｕｇｇＵｆｇＵｆｕＡｆａＣｆｃｓａｓｇ－３’（配列番号１４）を含み、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）Ａ、Ｃ、Ｇ、またはＵであり；Ａｆ、Ｃｆ、ＧｆまたはＵｆは２’－フルオロＡ、Ｃ、ＧまたはＵであり；ｓはホスホロチオエート連結である。
一実施形態では、センス鎖は、５’－ＧｆｓｇｓＵｆｕＡｆａＣｆａＣｆＣｆＡｆｕＵｆｕＡｆｃＵｆｕＣｆａＡｆ－３’（配列番号１３）を含み、アンチセンス鎖は、５’－ｕｓＵｆｓｇＡｆａＧｆｕＡｆａＡｆｕｇｇＵｆｇＵｆｕＡｆａＣｆｃｓａｓｇ－３’（配列番号１４）を含み、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）Ａ、Ｃ、Ｇ、またはＵであり；Ａｆ、Ｃｆ、ＧｆまたはＵｆは２’－フルオロＡ、Ｃ、ＧまたはＵであり；ｓはホスホロチオエート連結であり；センス鎖は、以下の概略図に示されるとおりリガンドとコンジュゲートし、
Figure 2023123756000007
 ＸはＯまたはＳである。
一実施形態では、薬剤は、医薬組成物として投与される。一実施形態では、食塩水または水などの非緩衝液中のＲＮＡｉ薬剤が投与される。
別の実施形態では、ＲＮＡｉ薬剤は、酢酸塩、クエン酸塩、プロラミン、炭酸塩、もしくはリン酸塩またはそれらの任意の組み合わせを含む緩衝液などの緩衝液と共に投与される。一実施形態では、緩衝液は、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）である。
一態様では、本発明は、インヒビターを有さない血友病、例えば血友病Ａ、血友病Ｂ、または血友病Ｃの対象の出血事象を処置する方法で使用される、約８０ｍｇの固定用量（例えば、対象のＳｅｒｐｉｎｃ１活性を約７５％またはそれ以上低下させる量）での対象への投与に適切なＳｅｒｐｉｎｃ１の発現を阻害する二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤と；補充因子の推奨される有効量に比較して低減した用量（例えば、約１０～１００ＩＵ／ｄＬのピーク血漿第ＶＩＩＩ因子レベルを達成するのに十分な量（例えば、第ＶＩＩＩ因子が約２００ＩＵ／ｋｇ未満の用量、例えば第ＶＩＩＩ因子が約５から約２０ＩＵ／ｋｇの用量）；または約１０～１００ＩＵ／ｄｌのピーク血漿第ＩＸ因子レベルを達成するのに十分な量（例えば、第ＩＸ因子が約２００ＩＵ／ｋｇ未満の用量、例えば第ＩＸ因子が約１０から約３０ＩＵ／ｋｇの用量））で、対象への投与に適切な補充因子とを提供する。ＲＮＡｉ薬剤はセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、５’－ＧｆｓｇｓＵｆｕＡｆａＣｆａＣｆＣｆＡｆｕＵｆｕＡｆｃＵｆｕＣｆａＡｆ－３’（配列番号１３）を含み、アンチセンス鎖は、５’－ｕｓＵｆｓｇＡｆａＧｆｕＡｆａＡｆｕｇｇＵｆｇＵｆｕＡｆａＣｆｃｓａｓｇ－３’（配列番号１４）を含み、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）Ａ、Ｃ、Ｇ、またはＵであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、またはＵｆは、２’－フルオロＡ、Ｃ、Ｇ、またはＵであり；ｓは、ホスホロチオエート連結であり；センス鎖の３’－末端は、以下の概略図
Figure 2023123756000008
 （式中、ＸはＯまたはＳである。）
に示されるようにリガンドとコンジュゲートしている。
別の態様では、本発明は、インヒビターを有する血友病、例えば血友病Ａ、血友病Ｂ、または血友病Ｃの対象の出血事象を処置する方法で使用される、約８０ｍｇの固定用量（例えば、対象のＳｅｒｐｉｎｃ１活性を約７５％またはそれ以上低下させる量）での対象への投与に適切なＳｅｒｐｉｎｃ１の発現を阻害する二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤と；バイパス薬剤の推奨される有効量に比較して低減した用量（例えば、トロンビンを形成し出血を止めるのに十分な量、例えば、ａＰＣＣが約１００Ｕ／ｋｇ未満の用量（例えば、ａＰＣＣが約３０から５０Ｕ／ｋｇの用量）；ｒＦＶＩＩａが約１２０μｇ／ｋｇ未満の用量（例えば、ｒＦＶＩＩａが約４５μｇ／ｋｇの用量））で、対象への投与に適切なバイパス薬剤とを提供する。ＲＮＡｉ薬剤はセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、５’－ＧｆｓｇｓＵｆｕＡｆａＣｆａＣｆＣｆＡｆｕＵｆｕＡｆｃＵｆｕＣｆａＡｆ－３’（配列番号１３）を含み、アンチセンス鎖は、５’－ｕｓＵｆｓｇＡｆａＧｆｕＡｆａＡｆｕｇｇＵｆｇＵｆｕＡｆａＣｆｃｓａｓｇ－３’（配列番号１４）を含み、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）Ａ、Ｃ、Ｇ、またはＵであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、またはＵｆは、２’－フルオロＡ、Ｃ、Ｇ、またはＵであり；ｓは、ホスホロチオエート連結であり；センス鎖の３’－末端は、以下の概略図
Figure 2023123756000009
 （式中、ＸはＯまたはＳである。）
に示されるようにリガンドとコンジュゲートしている。
一実施形態では、ＲＮＡｉ薬剤の固定用量は、皮下投与に適切である。
一実施形態では、ＲＮＡｉ薬剤の固定用量は、１カ月に１回、対象に投与するのに適切である。
本発明は、Ｓｅｒｐｉｎｃ１発現の低減から利益を得るであろう障害、例えば出血障害、例えば血友病を持つ対象の少なくとも１つの症状を予防する方法も提供する。方法は、本発明のｉＲＮＡ剤、例えばｄｓＲＮＡ（例えば、本発明のｄｓＲＮＡを含む医薬組成物）の予防有効量、例えば対象のＳｅｒｐｉｎｃ１活性を約７５％またはそれ以上低下させる量、例えば約２５ｍｇから約１００ｍｇの固定用量を対象に投与する工程を含み、それによって、Ｓｅｒｐｉｎｃ１発現の低減から利益を得るであろう障害を持つ対象の少なくとも１つの症状が予防される。一実施形態では、方法は、予防有効用量、例えば、約５０ｍｇの固定用量の本発明のｉＲＮＡ薬剤、例えば、ｄｓＲＮＡ（例えば、本発明のｄｓＲＮＡを含む医薬組成物）を対象に投与することを含み、それにより、Ｓｅｒｐｉｎｃ１発現の低下から利益を得るであろう障害を有する対象の少なくとも１つの症状を予防する。別の実施形態では、方法は、予防有効用量、例えば、約８０ｍｇの固定用量の本発明のｉＲＮＡ薬剤、例えば、ｄｓＲＮＡ（例えば、本発明のｄｓＲＮＡを含む医薬組成物）を対象に投与することを含み、それにより、Ｓｅｒｐｉｎｃ１発現の低下から利益を得るであろう障害を有する対象の少なくとも１つの症状を予防する。
別の態様では、本発明は、Ｓｅｒｐｉｎｃ１発現の低下から利益を得るであろう障害、例えば、出血障害、例えば、血友病を有する対象を処置する方法であって、治療有効用量、例えば、対象のＳｅｒｐｉｎｃ１活性を約７５％またはそれ以上低下させる量、例えば、約２５ｍｇから約１００ｍｇの固定用量のＳｅｒｐｉｎｃ１遺伝子を標的とするｉＲＮＡ薬剤またはＳｅｒｐｉｎｃ１遺伝子を標的とするｉＲＮＡ薬剤を含む医薬組成物を、対象、例えば、ヒトに投与することを含み、それによりＳｅｒｐｉｎｃ１発現の低下から利益を得るであろう障害を有する対象を処置する方法を提供する。一実施形態では、方法は、治療有効用量、例えば、約５０ｍｇの固定用量の本発明のｉＲＮＡ薬剤、例えば、ｄｓＲＮＡ（例えば、本発明のｄｓＲＮＡを含む医薬組成物）を対象に投与することを含み、それによりＳｅｒｐｉｎｃ１発現の低下から利益を得るであろう障害を有する対象を処置する。別の実施形態では、方法は、治療有効用量、例えば、約８０ｍｇの固定用量の本発明のｉＲＮＡ薬剤、例えば、ｄｓＲＮＡ（例えば、本発明のｄｓＲＮＡを含む医薬組成物）を対象に投与することを含み、それによりＳｅｒｐｉｎｃ１発現の低下から利益を得るであろう障害を有する対象を処置する。
別の態様では、本発明は、出血障害、例えば、血友病などのＳｅｒｐｉｎｃ１発現の低下および／または阻害から利益を得るであろう障害を患っている対象の少なくとも１つの症状を予防するための、予防有効用量、例えば、対象のＳｅｒｐｉｎｃ１活性を約７５％またはそれ以上低下させる量、例えば、約２５ｍｇから約１００ｍｇの固定用量の本発明のｉＲＮＡ、例えば、ｄｓＲＮＡの使用を提供する。一実施形態では、本発明は、出血障害、例えば、血友病などのＳｅｒｐｉｎｃ１発現の低下および／または阻害から利益を得るであろう障害を患っている対象の少なくとも１つの症状を予防するための、予防有効用量、例えば、約５０ｍｇの固定用量の本発明のｉＲＮＡ、例えば、ｄｓＲＮＡの使用を提供する。別の実施形態では、本発明は、出血障害、例えば、血友病などのＳｅｒｐｉｎｃ１発現の低下および／または阻害から利益を得るであろう障害を患っている対象の少なくとも１つの症状を予防するための、予防有効用量、例えば、約８０ｍｇの固定用量の本発明のｉＲＮＡ、例えば、ｄｓＲＮＡの使用を提供する。
さらなる態様では、本発明は、出血障害、例えば、血友病などのＳｅｒｐｉｎｃ１発現の低下および／または阻害から利益を得るであろう障害を患っている対象の少なくとも１つの症状を予防するための薬剤の製造における、予防有効用量、例えば、対象のＳｅｒｐ
ｉｎｃ１活性を約７５％またはそれ以上低下させる量、例えば、約２５ｍｇから約１００ｍｇの固定用量の本発明のｉＲＮＡ薬剤の使用を提供する。一実施形態では、本発明は、出血障害、例えば、血友病などのＳｅｒｐｉｎｃ１発現の低下および／または阻害から利益を得るであろう障害を患っている対象の少なくとも１つの症状を予防するための薬剤の製造における、予防有効用量、例えば、約５０ｍｇの固定用量の本発明のｉＲＮＡ薬剤の使用を提供する。別の実施形態では、本発明は、出血障害、例えば、血友病などのＳｅｒｐｉｎｃ１発現の低下および／または阻害から利益を得るであろう障害を患っている対象の少なくとも１つの症状を予防するための薬剤の製造における、予防有効用量、例えば、約８０ｍｇの固定用量の本発明のｉＲＮＡ薬剤の使用を提供する。
別の態様では、本発明は、対象、例えば、Ｓｅｒｐｉｎｃ１発現の低下および／または阻害から利益を得るであろう対象を処置するための、治療有効用量、例えば、対象のＳｅｒｐｉｎｃ１活性を約７５％またはそれ以上低下させる量、例えば、約２５ｍｇから約１００ｍｇの固定用量の本発明のｉＲＮＡ薬剤の使用を提供する。一実施形態では、本発明は、対象、例えば、Ｓｅｒｐｉｎｃ１発現の低下および／または阻害から利益を得るであろう対象を処置するための、治療有効用量、例えば、約５０ｍｇの固定用量の本発明のｉＲＮＡ薬剤の使用を提供する。別の実施形態では、本発明は、対象、例えば、Ｓｅｒｐｉｎｃ１発現の低下および／または阻害から利益を得るであろう対象を処置するための、治療有効用量、例えば、約８０ｍｇの固定用量の本発明のｉＲＮＡ薬剤の使用を提供する。
さらに別の態様では、本発明は、対象、例えば、出血障害、例えば、血友病を有する対象などのＳｅｒｐｉｎｃ１発現の低下および／または阻害から利益を得るであろう対象を処置するための薬剤の製造における、Ｓｅｒｐｉｎｃ１遺伝子を標的とする本発明のｉＲＮＡ薬剤、例えば、ｄｓＲＮＡまたは治療有効用量、例えば、対象のＳｅｒｐｉｎｃ１活性を約７５％またはそれ以上低下させる量、例えば、約２５ｍｇから約１００ｍｇの固定用量のＳｅｒｐｉｎｃ１遺伝子を標的とするｉＲＮＡ薬剤を含む医薬組成物の使用を提供する。一実施形態では、本発明は、対象、例えば、出血障害、例えば、血友病を有する対象などのＳｅｒｐｉｎｃ１発現の低下および／または阻害から利益を得るであろう対象を処置するための薬剤の製造における、Ｓｅｒｐｉｎｃ１遺伝子を標的とする本発明のｉＲＮＡ薬剤、例えば、ｄｓＲＮＡまたは治療有効用量、例えば、約５０ｍｇの固定用量のＳｅｒｐｉｎｃ１遺伝子を標的とするｉＲＮＡ薬剤を含む医薬組成物の使用を提供する。別の実施形態では、本発明は、対象、例えば、出血障害、例えば、血友病を有する対象などのＳｅｒｐｉｎｃ１発現の低下および／または阻害から利益を得るであろう対象を処置するための薬剤の製造における、Ｓｅｒｐｉｎｃ１遺伝子を標的とする本発明のｉＲＮＡ薬剤、例えば、ｄｓＲＮＡまたは治療有効用量、例えば、約８０ｍｇの固定用量のＳｅｒｐｉｎｃ１遺伝子を標的とするｉＲＮＡ薬剤を含む医薬組成物の使用を提供する。
本発明のいくつかの実施形態では、例えば、二本鎖ＲＮＡｉ薬剤がセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖が５’－ＵＵＧＡＡＧＵＡＡＡＵＧＧＵＧＵＵＡＡＣＣＡＧ－３’（配列番号１５）のヌクレオチド配列と３ヌクレオチドを超えずに異なる少なくとも１５の連続するヌクレオチドを含む、Ｓｅｒｐｉｎｃ１をコードするｍＲＮＡに相補的な領域を含み、センス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドおよびアンチセンス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、センス鎖が３’末端で結合するリガンドとコンジュゲートしている場合、そのような薬剤は、約２５ｍｇから約１００ｍｇの固定用量で、例えば、約２５ｍｇの固定用量で；または約５０ｍｇの固定用量で；または約８０ｍｇの固定用量で；または約１００ｍｇの固定用量で投与される。一実施形態では、固定用量は５０ｍｇである。別の実施形態では、固定用量は８０ｍｇである。
したがって、一態様では、本発明は、Ｓｅｒｐｉｎｃ１発現の低下から利益を得るであろう障害、例えば、出血障害、例えば、血友病を有する対象の少なくとも１つの症状を予
防する方法を提供する。方法は、予防有効用量、例えば、対象のＳｅｒｐｉｎｃ１活性を約７５％またはそれ以上低下させる量、例えば、約２５ｍｇから約１００ｍｇの固定用量の二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤であって、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は５’－ＵＵＧＡＡＧＵＡＡＡＵＧＧＵＧＵＵＡＡＣＣＡＧ－３’（配列番号１５）のヌクレオチド配列と３ヌクレオチドを超えずに異なる少なくとも１５の連続するヌクレオチドを含む、Ｓｅｒｐｉｎｃ１をコードするｍＲＮＡに相補的な領域を含み、センス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドおよびアンチセンス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドは修飾ヌクレオチドであり、センス鎖は、３’末端で結合するリガンドとコンジュゲートしている、二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤（例えば、ＲＮＡｉ薬剤を含む医薬組成物）を対象に投与することを含み、それにより、Ｓｅｒｐｉｎｃ１発現の低下から利益を得るであろう障害を有する対象の少なくとも１つの症状を予防する。一実施形態では、固定用量は５０ｍｇである。別の実施形態では、固定用量は８０ｍｇである。
別の態様では、本発明は、Ｓｅｒｐｉｎｃ１発現の低下から利益を得るであろう障害、例えば、出血障害、例えば、血友病を有する対象を処置する方法を提供し、方法は、治療有効用量、例えば、対象のＳｅｒｐｉｎｃ１活性を約７５％またはそれ以上低下させる量、例えば、約２５ｍｇから約１００ｍｇの固定用量の二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤であって、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は５’－ＵＵＧＡＡＧＵＡＡＡＵＧＧＵＧＵＵＡＡＣＣＡＧ－３’（配列番号１５）のヌクレオチド配列と３ヌクレオチドを超えずに異なる少なくとも１５の連続するヌクレオチドを含む、Ｓｅｒｐｉｎｃ１をコードするｍＲＮＡに相補的な領域を含み、センス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドおよびアンチセンス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドは修飾ヌクレオチドであり、センス鎖は、３’末端で結合するリガンドとコンジュゲートしている、二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤またはＳｅｒｐｉｎｃ１遺伝子を標的とするｉＲＮＡ薬剤を含む医薬組成物を対象、例えば、ヒトに投与することを含み、それによりＳｅｒｐｉｎｃ１発現の低下から利益を得るであろう障害を有する対象を処置する。一実施形態では、固定用量は５０ｍｇである。別の実施形態では、固定用量は８０ｍｇである。
別の態様では、本発明は、出血障害、例えば、血友病などのＳｅｒｐｉｎｃ１発現の低下および／または阻害から利益を得るであろう障害を患っている対象の少なくとも１つの症状を予防するための、予防有効用量、例えば、対象のＳｅｒｐｉｎｃ１活性を約７５％またはそれ以上低下させる量、例えば、約２５ｍｇから約１００ｍｇの固定用量の二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤であって、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は５’－ＵＵＧＡＡＧＵＡＡＡＵＧＧＵＧＵＵＡＡＣＣＡＧ－３’（配列番号１５）のヌクレオチド配列と３ヌクレオチドを超えずに異なる少なくとも１５の連続するヌクレオチドを含む、Ｓｅｒｐｉｎｃ１をコードするｍＲＮＡに相補的な領域を含み、センス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドおよびアンチセンス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドは修飾ヌクレオチドであり、センス鎖は、３’末端で結合するリガンドとコンジュゲートしている、二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤の使用を提供する。一実施形態では、固定用量は５０ｍｇである。別の実施形態では、固定用量は８０ｍｇである。
さらなる態様では、本発明は、出血障害、例えば、血友病などのＳｅｒｐｉｎｃ１発現の低下および／または阻害から利益を得るであろう障害を患っている対象の少なくとも１つの症状を予防するための薬剤の製造における、予防有効用量、例えば、対象のＳｅｒｐｉｎｃ１活性を約７５％またはそれ以上低下させる量、例えば、約２５ｍｇから約１００ｍｇの固定用量の二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤であって、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は５’－ＵＵＧＡＡＧＵＡＡＡＵＧＧＵＧＵＵＡＡＣＣＡＧ－３’（配列番号１５）のヌクレオチド配列と３ヌクレオチドを超えずに異なる少なくとも１５の連続するヌクレオチドを含む、Ｓｅｒｐｉｎｃ１をコードするｍＲＮＡに相補的な領域を含み、センス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドおよびアンチセンス鎖の実質的
にすべてのヌクレオチドは修飾ヌクレオチドであり、センス鎖は、３’末端で結合するリガンドとコンジュゲートしている、二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤の使用を提供する。一実施形態では、固定用量は５０ｍｇである。別の実施形態では、固定用量は８０ｍｇである。
別の態様では、本発明は、対象、例えば、Ｓｅｒｐｉｎｃ１発現の低下および／または阻害から利益を得るであろう対象を処置するための、治療有効用量、例えば、対象のＳｅｒｐｉｎｃ１活性を約７５％またはそれ以上低下させる量、例えば、約２５ｍｇから約１００ｍｇの固定用量の二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤であって、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は５’－ＵＵＧＡＡＧＵＡＡＡＵＧＧＵＧＵＵＡＡＣＣＡＧ－３’（配列番号１５）のヌクレオチド配列と３ヌクレオチドを超えずに異なる少なくとも１５の連続するヌクレオチドを含む、Ｓｅｒｐｉｎｃ１をコードするｍＲＮＡに相補的な領域を含み、センス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドおよびアンチセンス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドは修飾ヌクレオチドであり、センス鎖は、３’末端で結合するリガンドとコンジュゲートしている、二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤の使用を提供する。一実施形態では、固定用量は５０ｍｇである。別の実施形態では、固定用量は８０ｍｇである。
さらに別の態様では、本発明は、対象、例えば、出血障害、例えば、血友病を有する対象などのＳｅｒｐｉｎｃ１発現の低下および／または阻害から利益を得るであろう対象を処置するための薬剤の製造における、Ｓｅｒｐｉｎｃ１遺伝子を標的とする本発明のｉＲＮＡ薬剤、例えば、ｄｓＲＮＡまたは治療有効用量、例えば、対象のＳｅｒｐｉｎｃ１活性を約７５％またはそれ以上低下させる量、例えば、約２５ｍｇから約１００ｍｇの固定用量の二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤であって、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は５’－ＵＵＧＡＡＧＵＡＡＡＵＧＧＵＧＵＵＡＡＣＣＡＧ－３’（配列番号１５）のヌクレオチド配列と３ヌクレオチドを超えずに異なる少なくとも１５の連続するヌクレオチドを含む、Ｓｅｒｐｉｎｃ１をコードするｍＲＮＡに相補的な領域を含み、センス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドおよびアンチセンス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドは修飾ヌクレオチドであり、センス鎖は、３’末端で結合するリガンドとコンジュゲートしている、二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤を含む医薬組成物の使用を提供する。一実施形態では、固定用量は５０ｍｇである。別の実施形態では、固定用量は８０ｍｇである。
本発明の方法および使用は、例えば約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、または約８０日間、標的Ｓｅｒｐｉｎｃ１遺伝子の発現が低下するよう、本明細書に記載される組成物を投与することを含む。一実施形態では、標的Ｓｅｒｐｉｎｃ１遺伝子の発現が、長い持続時間の間、例えば、少なくとも約７日間またはそれ以上、例えば、およそ１週間、２週間、３週間、およそ４週間、およそ５週間、およそ６週間、およそ２カ月、およそ四半期、またはそれ以上の間低下する。
遺伝子発現の低下は、当該技術分野において既知の任意の方法によって評価することができる。例えば、Ｓｅｒｐｉｎｃ１の発現の低下は、当業者には通常の方法、例えば、ノーザンブロッティング、ｑＲＴ－ＰＣＲを使用してＳｅｒｐｉｎｃ１のｍＲＮＡ発現レベルを求めることによって、ウエスタンブロッティング、免疫学的手法などの当業者には通常の方法を使用してＳｅｒｐｉｎｃ１のタンパク質レベルを求めることによって、および
／または例えば、細胞の血液凝固メカニズムに関連する１つまたはそれ以上の分子（またはインビボ環境における、血液凝固自体）に影響を及ぼすＳｅｒｐｉｎｃ１の生物学的活性を確認することによって判断することができる。一実施形態では、Ｓｅｒｐｉｎｃ１発現を評価するために、例えば、全血のＲＯＴＥＭ（登録商標）Ｔｈｒｏｍｂｏｅｌａｓｔｏｍｅｔｒｙ分析を使用してトロンビン形成時間、凝血塊形成時間および／または凝固時間が求められる。
本発明の方法および使用によるｄｓＲＮＡの投与は、Ｓｅｒｐｉｎｃ１関連疾患を有する患者の重症度、徴候、症状、および／またはそのような疾患もしくは障害のマーカーの低減をもたらすことができる。この状況における「低減」とは、そのようなレベルの統計学的に有意な低下を意味する。低減は、例えば、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または約１００％である場合がある。
疾患の処置または予防の有効性は、例えば、疾患進行、疾患寛解、症状の重症度、出血の頻度、疼痛の緩和、クオリティオブライフ、処置の効果を持続するために必要とされる薬剤の用量、疾患マーカーまたは所与の処置される疾患、もしくは予防のために標的とされる疾患に適した任意のその他の測定可能なパラメーターのレベルを測定することによって評価することができる。そのようなパラメーターの任意の１つ、またはパラメーターの任意の組み合わせを測定することによって、処置または予防の有効性を監視することは、十分に当業者の能力の範囲内である。例えば、出血障害の処置の有効性は、例えば、トロンビン：抗トロンビンレベルを定期的に監視することによって評価することができる。後の測定値の初期の測定値との比較は、医師に処置が有効かどうかの目安を提供する。そのようなパラメーターの任意の１つ、またはパラメーターの任意の組み合わせを測定することによって、処置または予防の有効性を監視することは、十分に当業者の能力の範囲内である。Ｓｅｒｐｉｎｃ１を標的とするｉＲＮＡまたはその医薬組成物の投与に関連して、出血障害「に対して有効な」とは、臨床的に適切な様式での投与が、少なくとも統計学的に有意な割合の患者に関して、症状の改善、回復、疾患の緩和、寿命の延長、クオリティオブライフの向上、または出血障害の処置および関連する原因に精通している医師がプラスと一般に認識するその他の効果などの有益な効果をもたらすことを示す。
処置または予防効果は、疾患状態の１つまたはそれ以上のパラメーターに統計学的に有意な改善がある場合、またはそうでなければ予想されるであろう症状の悪化がないか、もしくは発症をしないことによって、明白である。例として、疾患の測定可能なパラメーターの少なくとも１０％、好ましくは少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％またはそれ以上の好ましい変化が有効な処置であることを示す。与えられるｉＲＮＡ薬物またはその薬物の製剤の有効性は、当該技術分野において既知の所与の疾患に対する実験動物モデルを使用して判断することもできる。実験動物モデルを使用する場合、処置の有効性は、マーカーまたは症状に統計学的に有意な低減が観察された場合に立証される。
あるいは、有効性は、臨床的に認められた疾患の重症度評価スケールに基づく診断の当業者によって判断される疾患の重症度の低下によって評価することができる。例えば、適切なスケールを使用して判断される疾患の重症度の低下の結果として生じるあらゆるプラスの変化は、本明細書に記載されるｉＲＮＡまたはｉＲＮＡ製剤を使用した適正な処置を表す。
ｉＲＮＡ（またはｉＲＮＡを含む医薬組成物）は、およそ週に１回、およそ月に２回、およそ６週毎に１回、およそ２カ月毎に１回、または四半期に１回、対象に投与することができる。
二本鎖ｉＲＮＡ薬剤は、１回またはそれ以上の用量として対象に投与することができる。例えば、二本鎖ｉＲＮＡ薬剤は、約０．２００ｍｇ／ｋｇから約１．８２５ｍｇ／ｋｇの月１回の用量として対象に投与することができる。あるいは、二本鎖ｉＲＮＡ薬剤は、約２５ｍｇから約１００ｍｇの固定用量で対象に投与することができる。
一実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖は５’－ＵＵＧＡＡＧＵＡＡＡＵＧＧＵＧＵＵＡＡＣＣＡＧ－３’（配列番号１５）のヌクレオチド配列と３ヌクレオチドを超えずに異なる少なくとも１５の連続するヌクレオチドを含む、Ｓｅｒｐｉｎｃ１をコードするｍＲＮＡに相補的な領域を含み、センス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドおよびアンチセンス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドは修飾ヌクレオチドであり、センス鎖は、３’末端で結合するリガンドとコンジュゲートしている、二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、約２５から約１００ｍｇ、例えば、約２５ｍｇ、５０ｍｇ、８０ｍｇ、または１００ｍｇの固定用量で対象に投与される。一実施形態では、固定用量は５０ｍｇである。別の実施形態では、固定用量は８０ｍｇである。
投与は、例えば、月に１回の１カ月間、２カ月間、３カ月間、４カ月間またはそれより長い期間などの定期的なベースで繰り返すことができる。最初の処置レジメンの後に、より少ない回数ベースで処置を施すことも可能である。例えば、月に１回の３カ月間の投与後に、四半期毎に１回、１年間またはそれ以上の期間の投与を繰り返すことができる。
したがって、いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ薬剤は、間隔が短い投与の「負荷段階」を含む投薬計画で投与され、それにＲＮＡｉ薬剤がより長い間隔を開けて投与される「維持段階」が続くこともある。
負荷投薬スケジュールおよび／または維持投薬スケジュールは、場合により、１回またはそれ以上の反復で繰り返されることもある。反復の回数は、所望の効果の達成、例えば、Ｓｅｒｐｉｎｃ１遺伝子の抑制、ならびに／または治療もしくは予防効果の達成、例えば、血液凝固の増加、凝血塊形成時間の短縮、および／もしくは凝固時間の短縮により決まる場合もある。
ｉＲＮＡの投与は、例えば、患者の細胞、組織、血液、尿またはその他の区画中のＳｅｒｐｉｎｃ１レベルを、少なくとも約５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または少なくとも約９９％もしくはそれ以上、低下させることができる。
ｉＲＮＡは、ある時間にわたって、例えば、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または約２５分間にわたる静脈内注入によって投与することができる。
ｉＲＮＡの全用量の投与前に、患者に５％の注入などのより少ない用量を投与し、アレルギー反応などの有害な影響について監視することができる。別の例において、サイトカイン（例えば、ＴＮＦ－アルファまたはＩＮＦ－アルファ）レベルの増加などの望ましく
ない免疫賦活性の影響に関して患者を監視することができる。
Ｓｅｒｐｉｎｃ１発現に対する阻害効果のために、本発明による組成物またはそれから調製される医薬組成物は、クオリティオブライフを向上させることができる。
本発明のｉＲＮＡは、「裸の」形態、または「遊離型ｉＲＮＡ」として投与することができる。裸のｉＲＮＡは、医薬組成物の非存在下で投与される。適した緩衝液中の裸のｉＲＮＡである場合もある。緩衝液は、酢酸塩、クエン酸塩、プロラミン、炭酸塩、もしくはリン酸塩、またはそれらの任意の組み合わせを含む場合もある。一実施形態では、緩衝液は、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）である。ｉＲＮＡを含む緩衝液のｐＨおよびモル浸透圧濃度は、対象への投与に適するよう、調節することができる。
あるいは、本発明のｉＲＮＡは、ｄｓＲＮＡリポソーム製剤などの医薬組成物として投与することができる。
Ｓｅｒｐｉｎｃ１遺伝子発現の低下および／または阻害から利益を得るであろう対象は、本明細書に記載される出血障害、例えば、遺伝性出血障害または後天性出血障害を有する対象である。一実施形態では、遺伝性出血障害を有する対象は、血友病、例えば、血友病Ａ、Ｂ、またはＣを有する。一実施形態では、遺伝性出血障害、例えば、血友病を有する対象は、インヒビター対象である（補充凝固因子に対して抵抗性になった対象）。一実施形態では、インヒビター対象は、血友病Ａを有する。別の実施形態では、インヒビター対象は、血友病Ｂを有する。さらに別の実施形態では、インヒビター対象は、血友病Ｃを有する。Ｓｅｒｐｉｎｃ１遺伝子発現の低下および／または阻害から利益を得るであろう対象の処置は、治療的処置（例えば、オンデマンド、例えば、対象が出血しており（自然発生的出血もしくは外傷の結果としての出血）、凝固しない）および予防的処置（例えば、対象が出血しておらず、および／もしくは手術を受ける）を含む。
本発明は、例えば、他の医薬品および／または他の治療方法と、例えば、これらの障害を処置するために現在利用されているものなどの例えば、既知の医薬品および／もしくは既知の治療方法と組み合わせて、Ｓｅｒｐｉｎｃ１発現の低下および／または阻害から利益を得るであろう対象、例えば、出血障害を有する対象を処置するための、ｉＲＮＡまたはその医薬組成物の使用のための方法ならびに使用をさらに提供する。
例えば、特定の実施形態では、Ｓｅｒｐｉｎｃ１を標的とするｉＲＮＡは、例えば、本明細書中の別の場所に記載されている出血障害を処置する際に有用な薬剤と組み合わせて投与される。例えば、Ｓｅｒｐｉｎｃ１発現の低下から利益を得るであろう対象、例えば、出血障害を有する対象を処置するのに適した追加の治療薬および治療方法としては、新鮮凍結血漿（ＦＦＰ）；組換え型ＦＶＩＩａ；組換え型ＦＩＸ；ＦＸＩ濃縮物；ウイルス不活化ｖＷＦ含有ＦＶＩＩＩ濃縮物；ステロイドもしくは静注用免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）およびシクロホスファミドを伴い大用量のＦＶＩＩＩまたはＦＩＸを含む場合もある減感作療法；抗線溶療法を伴うか、または伴わずに免疫抑制およびＦＶＩＩＩまたはＦＩＸの注入と併せた血漿交換療法；免疫抑制療法（例えば、シクロホスファミド、プレドニゾン、および／もしくは抗ＣＤ２０）を伴うか、または伴わない免疫寛容誘導（ＩＴＩ）；酢酸デスモプレシン［ＤＤＡＶＰ］；アミノカプロン酸およびトラネキサム酸などの抗線溶薬；活性化プロトロンビン複合体濃縮物（ＰＣＣ）；抗血友病薬剤；副腎皮質ステロイド薬；免疫抑制剤；ならびにエストロゲンが挙げられる。
ｉＲＮＡならびに追加の治療薬および／もしくは処置は、同時におよび／もしくは同じ組み合わせとして、例えば、非経口的に施すことができ、または追加の治療薬は、別々の組成物の一部としてもしくは別々の時間におよび／もしくは当該技術分野において既知の
もしくは本明細書に記載されている別の方法によって投与することができる。
一実施形態では、本発明は、約２５ｍｇから約１００ｍｇの固定用量、例えば、約２５ｍｇ、約５０ｍｇ、約８０ｍｇまたは約１００ｍｇの固定用量（例えば、対象のＳｅｒｐｉｎｃ１活性を約７５％またはそれ以上低下させる量）で化合物ＡＴ３ＳＣ－００１（ＡＤ－５７２１３－センス鎖：５’－ＧｆｓｇｓＵｆｕＡｆａＣｆａＣｆＣｆＡｆｕＵｆｕＡｆｃＵｆｕＣｆａＡｆ－３’（配列番号１３）およびアンチセンス鎖：５’－ｕｓＵｆｓｇＡｆａＧｆｕＡｆａＡｆｕｇｇＵｆｇＵｆｕＡｆａＣｆｃｓａｓｇ－３’（配列番号１４）、ここで、ａ、ｃ、ｇ、およびｕは２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）Ａ、Ｃ、Ｇ、またはＵであり；Ａｆ、Ｃｆ、ＧｆまたはＵｆは２’－フルオロＡ、Ｃ、ＧまたはＵであり；ｓはホスホロチオエート連結である）を対象に皮下投与することによって、出血障害、例えば、血友病を患っている対象を処置するための方法を提供する。一実施形態では、固定用量は５０ｍｇである。別の実施形態では、固定用量は８０ｍｇである。
ＩＩＩ．本発明の方法における使用のためのｉＲＮＡ
本明細書において、例えば出血性障害、例えば血友病などのＳｅｒｐｉｎｃ１関連障害のヒトのような、例えば哺乳動物などの対象内の細胞のような、細胞におけるＳｅｒｐｉｎｃ１遺伝子の発現を阻害する改善された二本鎖ＲＮＡｉ薬剤の使用のための方法を記載する。
したがって、本発明はインビボでの標的遺伝子（すなわち、Ｓｅｒｐｉｎｃ１遺伝子）の発現を阻害することができる化学修飾を有する二本鎖ＲＮＡｉ薬剤を提供する。本発明の特定の態様では、本発明のｉＲＮＡの実質的にすべてのヌクレオチドが修飾されている。本発明の他の実施形態では、本発明のｉＲＮＡのすべてのヌクレオチドが修飾されている。「実質的にすべてのヌクレオチドが修飾されている」本発明のｉＲＮＡは、完全ではないが大部分が修飾され、５、４、３、２、または１つ以下の非修飾ヌクレオチドを含み得る。
ＲＮＡｉ薬剤はセンス鎖およびアンチセンス鎖を含む。ＲＮＡｉ薬剤の各鎖は１２～３０ヌクレオチド長の範囲であり得る。例えば、各鎖は１４～３０ヌクレオチド長、１７～３０ヌクレオチド長、１９～３０ヌクレオチド長、２５～３０ヌクレオチド長、２７～３０ヌクレオチド長、１７～２３ヌクレオチド長、１７～２１ヌクレオチド長、１７～１９ヌクレオチド長、１９～２５ヌクレオチド長、１９～２３ヌクレオチド長、１９～２１ヌクレオチド長、２１～２５ヌクレオチド長、または２１～２３ヌクレオチド長の間であり得る。
センス鎖およびアンチセンス鎖は、典型的には二重鎖の二本鎖ＲＮＡ（「ｄｓＲＮＡ」）を形成し、本明細書において「ＲＮＡｉ薬剤」とも呼ばれる。ＲＮＡｉ薬剤の二重鎖領域は１２～３０ヌクレオチド対長であり得る。例えば、二重鎖領域は、１４～３０ヌクレオチド対長、１７～３０ヌクレオチド対長、２７～３０ヌクレオチド対長、１７～２３ヌクレオチド対長、１７～２１ヌクレオチド対長、１７～１９ヌクレオチド対長、１９～２５ヌクレオチド対長、１９～２３ヌクレオチド対長、１９～２１ヌクレオチド対長、２１～２５ヌクレオチド対長、または２１～２３ヌクレオチド対長の間であり得る。別の例では、二重鎖領域は、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、および２７ヌクレオチド長から選択される。
一実施形態では、ＲＮＡｉ薬剤は１つまたは両方の鎖の３’末端、５’末端、または両端において１つまたはそれ以上のオーバーハング領域および／またはキャッピング基を含有し得る。オーバーハングは１～６ヌクレオチド長、例えば２～６ヌクレオチド長、１～５ヌクレオチド長、２～５ヌクレオチド長、１～４ヌクレオチド長、２～４ヌクレオチド
長、１～３ヌクレオチド長、２～３ヌクレオチド長、または１～２ヌクレオチド長であり得る。オーバーハングは、１つの鎖が他の鎖よりも長い結果、または同じ長さの２つの鎖がずれた結果であり得る。オーバーハングは、標的ｍＲＮＡとのミスマッチを形成し得るか、または標的とされた遺伝子配列に相補的であり得るか、または別の配列であり得る。第１および第２の鎖も例えばヘアピンを形成するさらなる塩基、または他の非塩基リンカーによって結合される。
一実施形態では、ＲＮＡｉ薬剤のオーバーハング領域のヌクレオチドはそれぞれ独立に、限定はされないが、２－Ｆ、２’－Ｏ－メチル、チミジン（Ｔ）、２’－Ｏ－メトキシエチル－５－メチルウリジン（Ｔｅｏ）、２’－Ｏ－メトキシエチルアデノシン（Ａｅｏ）、２’－Ｏ－メトキシエチル－５－メチルシチジン（ｍ５Ｃｅｏ）、およびそれらの任意の組み合わせのような２’－糖修飾を含む、修飾または非修飾ヌクレオチドであり得る。例えば、ＴＴは、いずれかの鎖のいずれかの末端のオーバーハング配列であり得る。オーバーハングは標的ｍＲＮＡとミスマッチを形成し得るか、または標的とされた遺伝子配列と相補的であり得るか、または別の配列であり得る。
ＲＮＡｉ薬剤のセンス鎖、アンチセンス鎖、または両方の鎖における５’－または３’－オーバーハングはリン酸化される。いくつかの実施形態では、オーバーハング領域は２つのヌクレオチドの間にホスホロチオエートを有する２つのヌクレオチドを含有し、２つのヌクレオチドは同じまたは異なっていてもよい。一実施形態では、オーバーハングはセンス鎖、アンチセンス鎖、または両方の鎖の３’末端に存在する。一実施形態では、この３’－オーバーハングはアンチセンス鎖に存在する。一実施形態では、この３’－オーバーハングはセンス鎖に存在する。
ＲＮＡｉ薬剤は、その全体的安定性には影響せずにＲＮＡｉの緩衝活性を強化し得る、単一のオーバーハングのみを含有し得る。例えば、一本鎖オーバーハングはセンス鎖の３’末端、または代わりにアンチセンス鎖の３’末端に位置し得る。ＲＮＡｉは、アンチセンス鎖の５’末端（またはセンス鎖の３’末端）またはその逆に位置する平滑末端も有し得る。通常、ＲＮＡｉのアンチセンス鎖は３’末端にヌクレオチドオーバーハングを有し、５’末端は平滑である。理論に制約されることを望むものではないが、アンチセンス鎖の５’末端およびアンチセンス鎖の３’末端オーバーハングにおける非対称の平滑末端は、ＲＩＳＣ工程へのガイド鎖導入に有利である。
本発明で取り上げられる任意の核酸は、参照によって本明細書に組み入れる「Ｃｕｒｒｅｎｔ ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、Ｂｅａｕｃａｇｅ，Ｓ．Ｌ．ら（Ｅｄｒｓ．）、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ、ＵＳＡに記載される方法のように、当技術分野において確立された方法によって合成および／または修飾される。修飾としては、例えば末端修飾、例えば５’末端修飾（リン酸化、コンジュゲーション、逆連結）もしくは３’末端修飾（コンジュゲーション、ＤＮＡヌクレオチド、逆連結等）；塩基修飾、例えば安定塩基、不安定塩基、もしくは広範なパートナーと塩基対合する塩基による置換、塩基の除去（脱塩基ヌクレオチド）、もしくはコンジュゲート塩基；糖修飾（例えば、２’位もしくは４’位で）または糖の置換；および／またはホスホジエステル連結の修飾もしくは置換を含む骨格修飾が挙げられる。本明細書に記載の実施形態に有用なｉＲＮＡ化合物の具体例としては、限定はされないが、修飾骨格を含有するか、または天然のヌクレオシド間連結を含有しないＲＮＡが挙げられる。修飾骨格を有するＲＮＡとしては、中でも、骨格にリン原子を有さないものが挙げられる。本明細書の目的のため、および当技術分野において時々言及されるように、そのヌクレオシド間骨格にリン原子を有さない修飾ＲＮＡもオリゴヌクレオシドであると考えられる。いくつかの実施形態では、修飾ｉＲＮＡは、そのヌクレオシド間骨格にリン原子を有する。
修飾ＲＮＡ骨格としては、例えば、ホスホロチオエート、キラルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、メチルおよび３’－アルキレンホスホネートを含む他のアルキルホスホネート、ならびにキラルホスホネート、ホスフィネート、３’－アミノホスホロアミデートおよびアミノアルキルホスホロアミデートを含むホスホロアミデート、チオノホスホロアミデート、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、ならびに正常な３’－５’連結を有するボラノリン酸、これらの２’－５’結合類似体、ならびにヌクレオシド単位の隣接する対が、３’－５’から５’－３’または２’－５’から５’－２’に結合する、逆極性を有するものが挙げられる。様々な塩、混合塩、および遊離酸形態も含まれる。
上記のリン含有連結の調製を教示する代表的な米国特許としては、限定はされないが、米国特許第３，６８７，８０８号；第４，４６９，８６３号；第４，４７６，３０１号；第５，０２３，２４３号；第５，１７７，１９５号；第５，１８８，８９７号；第５，２６４，４２３号；第５，２７６，０１９号；第５，２７８，３０２号；第５，２８６，７１７号；第５，３２１，１３１号；第５，３９９，６７６号；第５，４０５，９３９号；第５，４５３，４９６号；第５，４５５，２３３号；第５，４６６，６７７号；第５，４７６，９２５号；第５，５１９，１２６号；第５，５３６，８２１号；第５，５４１，３１６号；第５，５５０，１１１号；第５，５６３，２５３号；第５，５７１，７９９号；第５，５８７，３６１号；第５，６２５，０５０号；第６，０２８，１８８号；第６，１２４，４４５号；第６，１６０，１０９号；第６，１６９，１７０号；第６，１７２，２０９号；第６，２３９，２６５号；第６，２７７，６０３号；第６，３２６，１９９号；第６，３４６，６１４号；第６，４４４，４２３号；第６，５３１，５９０号；第６，５３４，６３９号；第６，６０８，０３５号；第６，６８３，１６７号；第６，８５８，７１５号；第６，８６７，２９４号；第６，８７８，８０５号；第７，０１５，３１５号；第７，０４１，８１６号；第７，２７３，９３３号；第７，３２１，０２９号；および米国再発行特許第ＲＥ３９４６４号が挙げられ、そのそれぞれの内容全体を参照によって本明細書に組み入れる。
リン原子を含まない修飾ＲＮＡ骨格は、短鎖アルキルもしくはシクロアルキルヌクレオシド間連結、混合ヘテロ原子およびアルキルもしくはシクロアルキルヌクレオシド間連結、または１つもしくはそれ以上の短鎖ヘテロ原子もしくは複素環式ヌクレオシド間連結によって形成される骨格を有する。これらとしては、モルホリノ連結（ヌクレオシドの糖部分から部分的に形成される）を有するもの；シロキサン骨格；スルフィド、スルホキシド、およびスルホン骨格；ホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格；メチレンホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格；アルケン含有骨格；スルファミン酸骨格；メチレンイミノおよびメチレンヒドラジノ骨格；スルホン酸およびスルホンアミド骨格；アミド骨格；ならびに混合Ｎ、Ｏ、Ｓ、およびＣＨ２構成部分を有するその他の骨格が挙げられる。
上記のオリゴヌクレオシドの調製を教示する代表的な米国特許としては、限定はされないが、米国特許第５，０３４，５０６号；第５，１６６，３１５号；第５，１８５，４４４号；第５，２１４，１３４号；第５，２１６，１４１号；第５，２３５，０３３号；第５，６４，５６２号；第５，２６４，５６４号；第５，４０５，９３８号；第５，４３４，２５７号；第５，４６６，６７７号；第５，４７０，９６７号；第５，４８９，６７７号；第５，５４１，３０７号；第５，５６１，２２５号；第５，５９６，０８６号；第５，６０２，２４０号；第５，６０８，０４６号；第５，６１０，２８９号；第５，６１８，７０４号；第５，６２３，０７０号；第５，６６３，３１２号；第５，６３３，３６０号；第５，６７７，４３７号；および第５，６７７，４３９号が挙げられ、そのそれぞれの内容全体を参照によって本明細書に組み入れる。
他の実施形態では、好適なＲＮＡ模倣体がｉＲＮＡにおける使用のために考えられ、ここでは糖およびヌクレオシド間連結の両方、すなわちヌクレオチド単位の骨格が新規の基で置換される。塩基単位は、適切な核酸標的化合物とのハイブリダイゼーションのために維持される。優れたハイブリダイゼーション特性を有することが示されているそのようなオリゴマー化合物の１つであるＲＮＡ模倣体は、ペプチド核酸（ＰＮＡ）と呼ばれる。ＰＮＡ化合物において、ＲＮＡの糖骨格が、アミド含有骨格、特にアミノエチルグリシン骨格で置換される。核酸塩基は保持され、骨格のアミド部分のアザ窒素原子と直接または間接的に結合される。ＰＮＡ化合物の調製を教示する代表的な米国特許としては、限定はされないが、米国特許第５，５３９，０８２号；第５，７１４，３３１号；および第５，７１９，２６２号が挙げられ、そのそれぞれの内容全体を参照によって本明細書に組み入れる。本発明のｉＲＮＡに使用するのに好適なさらなるＰＮＡ化合物が、例えばＮｉｅｌｓｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９９１、２５４、１４９７～１５００頁に記載されている。
本発明で取り上げられるいくつかの実施形態は、ホスホロチオエート骨格を有するＲＮＡおよびヘテロ原子骨格を有するオリゴヌクレオシド、特に、上述の米国特許第５，４８９，６７７号の－－ＣＨ２－－ＮＨ－－ＣＨ２－、－－ＣＨ２－－Ｎ（ＣＨ３）－－Ｏ－－ＣＨ２－－［メチレン（メチルイミノ）またはＭＭＩ骨格として公知］、－－ＣＨ２－－Ｏ－－Ｎ（ＣＨ３）－－ＣＨ２－－、－－ＣＨ２－－Ｎ（ＣＨ３）－－Ｎ（ＣＨ３）－－ＣＨ２－－および－－Ｎ（ＣＨ３）－－ＣＨ２－－ＣＨ２－－［式中、天然のホスホジエステル骨格は、－－Ｏ－－Ｐ－－Ｏ－－ＣＨ２－－として表される］、ならびに上述の米国特許第５，６０２，２４０号のアミド骨格を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で取り上げられるＲＮＡは、上述した米国特許第５，０３４，５０６号のモルホリノ骨格構造を持つ。
修飾ＲＮＡは、１つまたはそれ以上の置換された糖部分も含有し得る。本明細書で取り上げられるｉＲＮＡ、例えばｄｓＲＮＡは、２’位に以下：ＯＨ；Ｆ；Ｏ－、Ｓ－、もしくはＮ－アルキル；Ｏ－、Ｓ－、もしくはＮ－アルケニル；Ｏ－、Ｓ－もしくはＮ－アルキニル；またはＯ－アルキル－Ｏ－アルキルのうちの１つを含むことができ、ここで、アルキル、アルケニル、およびアルキニルは、置換または非置換のＣ１～Ｃ１０アルキルまたはＣ２～Ｃ１０アルケニルおよびアルキニルであり得る。例示的に好適な修飾は、Ｏ［（ＣＨ２）ｎＯ］ｍＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＮＨ２、およびＯ（ＣＨ２）ｎＯＮ［（ＣＨ２）ｎＣＨ３）］２を含み、式中、ｎおよびｍは１から約１０である。他の実施形態では、ｄｓＤＮＡは２’位に以下：Ｃ１～Ｃ１０低級アルキル、置換低級アルキル、アルカリル、アラルキル、Ｏ－アルカリルまたはＯ－アラルキル、ＳＨ、ＳＣＨ３、ＯＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＳＯＣＨ３、ＳＯ２ＣＨ３、ＯＮＯ２、ＮＯ２、Ｎ３、ＮＨ２、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリル、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換シリル、ＲＮＡ開裂基、レポーター基、インターカレーター、ｉＲＮＡの薬物動態学的特性を向上する基、またはｉＲＮＡの薬力学的特性を改善する基、および同様の特性を有する他の置換基のうちの１つを含む。いくつかの実施形態では、修飾は２’－メトキシエトキシ（２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）または２’－ＭＯＥとしても公知の２’－Ｏ－－ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３）（Ｍａｒｔｉｎら、Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ、１９９５、７８：４８６～５０４頁）、すなわちアルコキシ－アルコキシ基を含む。別の例示的な修飾は、本明細書の以下の実施例に記載のように、２’－ＤＭＡＯＥとしても公知の２’－ジメチルアミノオキシエトキシ、すなわちＯ（ＣＨ２）２ＯＮ（ＣＨ３）２基、および２’－ジメチルアミノエトキシエトキシ（当技術分野において２’－Ｏ－ジメチルアミノエトキシエチルまたは２’－ＤＭＡＥＯＥとしても公知）、すなわち２’－Ｏ－－ＣＨ２－－Ｏ－－ＣＨ２－－Ｎ（ＣＨ２）２である。
他の修飾は、２’－メトキシ（２’－ＯＣＨ３）、２’－アミノプロポキシ（２’－ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）および２’－フルオロ（２’－Ｆ）を含む。同様の修飾が、ｉＲＮＡのＲＮＡにおける他の位置、特に３’末端ヌクレオチドまたは２’－５’結合ｄｓＲＮＡの糖の３’位、および５’末端ヌクレオチドの５’位でも行われる。ｉＲＮＡは、ペントフラノシル糖に代わるシクロブチル部分のような糖模倣体も有し得る。そのような修飾糖構造の調製を教示する代表的な米国特許としては、限定はされないが、米国特許第４，９８１，９５７号；第５，１１８，８００号；第５，３１９，０８０号；第５，３５９，０４４号；第５，３９３，８７８号；第５，４４６，１３７号；第５，４６６，７８６号；第５，５１４，７８５号；第５，５１９，１３４号；第５，５６７，８１１号；第５，５７６，４２７号；第５，５９１，７２２号；第５，５９７，９０９号；第５，６１０，３００号；第５，６２７，０５３号；第５，６３９，８７３号；第５，６４６，２６５号；第５，６５８，８７３号；第５，６７０，６３３号；および第５，７００，９２０号が挙げられ、そのいくつかは本出願と所有者が同一である。上記のそれぞれの内容全体を参照によって本明細書に組み入れる。
ｉＲＮＡは、核酸塩基（当技術分野において多くの場合、単に「塩基」と呼ばれる）修飾または置換も含み得る。本明細書で使用する場合、「非修飾」または「天然」核酸塩基は、プリン塩基アデニン（Ａ）およびグアニン（Ｇ）、ならびにピリミジン塩基チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）およびウラシル（Ｕ）を含む。修飾核酸塩基は、デオキシ－チミン（ｄＴ）、５－メチルシトシン（５－ｍｅ－Ｃ）、５－ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２－アミノアデニン、アデニンおよびグアニンの６－メチルおよび他のアルキル誘導体、アデニンおよびグアニンの２－プロピルおよび他のアルキル誘導体、２－チオウラシル、２－チオチミンおよび２－チオシトシン、５－ハロウラシルおよびシトシン、５－プロピニルウラシルおよびシトシン、６－アゾウラシル、シトシンおよびチミン、５－ウラシル（シュードウラシル）、４－チオウラシル、８－ハロ、８－アミノ、８－チオール、８－チオアルキル、８－ヒドロキシルおよび他の８－置換アデニンおよびグアニン、５－ハロ、特に５－ブロモ、５－トリフルオロメチルおよび他の５－置換ウラシルおよびシトシン、７－メチルグアニンおよび７－メチルアデニン、８－アザグアニンおよび８－アザアデニン、７－デアザグアニンおよび７－デアザアデニン、ならびに３－デアザグアニンおよび３－デアザアデニンのような他の合成および天然核酸塩基を含む。さらなる核酸塩基としては、米国特許第３，６８７，８０８号に開示のもの、Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、Ｈｅｒｄｅｗｉｊｎ，Ｐ．ｅｄ．Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ、２００８に開示のもの；Ｔｈｅ Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ Ｏｆ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、８５８～８５９頁、Ｋｒｏｓｃｈｗｉｔｚ，Ｊ．Ｌ，ｅｄ．Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、１９９０に開示のもの、Ｅｎｇｌｉｓｃｈら、Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｄｉｔｉｏｎ、１９９１、３０、６１３頁に開示のもの、およびＳａｎｇｈｖｉ，Ｙ Ｓ．、Ｃｈａｐｔｅｒ １５，ｄｓＲＮＡ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、２８９～３０２頁、Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．Ｔ．ａｎｄ Ｌｅｂｌｅｕ，Ｂ．，Ｅｄ．、ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ、１９９３に開示のものが挙げられる。これらの核酸塩基のいくつかは、本発明で取り上げられるオリゴマー化合物の結合親和性を高めるために特に有用である。これらとしては、２－アミノプロピルアデニン、５－プロピニルウラシル、および５－プロピニルシトシンを含む、５－置換ピリミジン、６－アザピリミジンならびにＮ－２、Ｎ－６、およびＯ－６置換プリンが挙げられる。５－メチルシトシン置換基が、核酸二重鎖安定性を０．６～１．２℃増加させることが示され（Ｓａｎｇｈｖｉ，Ｙ．Ｓ．、Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．Ｔ． ａｎｄ Ｌｅｂｌｅｕ，Ｂ．，Ｅｄｓ．、ｄｓＲＮＡ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ、１９９３、２７６～２７８頁）、それは例示的な塩基置換であり、特に２’－Ｏ－メトキシエチル糖修飾と組み合わせた場合はなお
さらである。
上記の修飾核酸塩基および他の修飾核酸塩基の調製を教示する代表的な米国特許としては、限定はされないが、米国特許第３，６８７，８０８号、第４，８４５，２０５号；第５，１３０，３０号；第５，１３４，０６６号；第５，１７５，２７３号；第５，３６７，０６６号；第５，４３２，２７２号；第５，４５７，１８７号；第５，４５９，２５５号；第５，４８４，９０８号；第５，５０２，１７７号；第５，５２５，７１１号；第５，５５２，５４０号；第５，５８７，４６９号；第５，５９４，１２１号、第５，５９６，０９１号；第５，６１４，６１７号；第５，６８１，９４１号；第５，７５０，６９２号；第６，０１５，８８６号；第６，１４７，２００号；第６，１６６，１９７号；第６，２２２，０２５号；第６，２３５，８８７号；第６，３８０，３６８号；第６，５２８，６４０号；第６，６３９，０６２号；第６，６１７，４３８号；第７，０４５，６１０号；第７，４２７，６７２号；および第７，４９５，０８８号を含み、そのそれぞれの内容全体を参照によって本明細書に組み入れる。
ｉＲＮＡのＲＮＡはまた、１つまたはそれ以上の二環式糖部分を含むようにも修飾される。「二環式糖」は、２つの原子の架橋によって修飾されたフラノシル環である。「二環式ヌクレオシド」（「ＢＮＡ」）は、糖環の２つの炭素原子を結合し、それにより二環式環系を形成する架橋を含む糖部分を有するヌクレオシドである。特定の実施形態では、架橋は糖環の４’－炭素および２’－炭素を結合する。したがって、いくつかの実施形態では、本発明の薬剤はｉＲＮＡのＲＮＡを含み、１つまたはそれ以上のロックド核酸（ＬＮＡ）を含むようにも修飾される。ロックド核酸は、修飾リボース部分を有するヌクレオチドであり、リボース部分は２’および４’炭素を結合する追加の架橋を含む。言い換えると、ＬＮＡは４’－ＣＨ２－Ｏ－２’架橋を含む二環式糖部分を含むヌクレオチドである。この構造は、３’エンド構造的立体配座におけるリボースを有効に「ロックする」。ｓｉＲＮＡにロックド核酸を加えると、血清中のｓｉＲＮＡの安定性が増加し、オフターゲット効果が低下することが示されている（Ｅｌｍｅｎ，Ｊ．ら、（２００５）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３３（１）：４３９～４４７頁；Ｍｏｏｋ，ＯＲ．ら、（２００７）Ｍｏｌ Ｃａｎｃ Ｔｈｅｒ ６（３）：８３３～８４３頁；Ｇｒｕｎｗｅｌｌｅｒ，Ａ．ら、（２００３）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ
３１（１２）：３１８５～３１９３頁）。
本発明のポリヌクレオチドにおける使用のための二環式ヌクレオシドの例としては、限定はされないが、４’および２’リボシル環原子の間の架橋を含むヌクレオシドが挙げられる。特定の実施形態では、本発明のアンチセンスポリヌクレオチド剤は４’－２’架橋を含む１つまたはそれ以上の二環式ヌクレオシドを含む。そのような４’－２’架橋二環式ヌクレオシドの例としては、限定はされないが、４’－（ＣＨ２）－Ｏ－２’（ＬＮＡ）；４’－（ＣＨ２）－Ｓ－２’；４’－（ＣＨ２）２－Ｏ－２’（ＥＮＡ）；４’－ＣＨ（ＣＨ３）－Ｏ－２’（「拘束エチル」または「ｃＥｔ」とも呼ばれる）および４’－ＣＨ（ＣＨ２ＯＣＨ３）－Ｏ－２’（およびその類似体；例えば米国特許第７，３９９，８４５号参照）；４’－Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ３）－Ｏ－２’（およびその類似体；例えば米国特許第８，２７８，２８３号参照）；４’－ＣＨ２－Ｎ（ＯＣＨ３）－２’（およびその類似体；米国特許第８，２７８，４２５号参照）；４’－ＣＨ２－Ｏ－Ｎ（ＣＨ３）－２’（例えば、米国特許出願公開第２００４／０１７１５７０号明細書参照）；４’－ＣＨ２－Ｎ（Ｒ）－Ｏ－２’、式中ＲはＨ、Ｃ１～Ｃ１２アルキル、または保護基（例えば、米国特許第７，４２７，６７２号参照）；４’－ＣＨ２－Ｃ（Ｈ）（ＣＨ３）－２’（例えばＣｈａｔｔｏｐａｄｈｙａｙａら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、２００９、７４、１１８～１３４頁参照）；ならびに４’－ＣＨ２－Ｃ（＝ＣＨ２）－２’（およびその類似体；例えば米国特許第８，２７８，４２６号参照）が挙げられる。先のそれぞれの内容全体を参照によって本明細書に組み入れる。
ロックド核酸ヌクレオチドの調製を教示するさらなる代表的な米国特許および米国特許出願公開としては、限定はされないが、以下：米国特許第６，２６８，４９０号；第６，５２５，１９１号；第６，６７０，４６１号；第６，７７０，７４８号；第６，７９４，４９９号；第６，９９８，４８４号；第７，０５３，２０７号；第７，０３４，１３３号；第７，０８４，１２５号；第７，３９９，８４５号；第７，４２７，６７２号；第７，５６９，６８６号；第７，７４１，４５７号；第８，０２２，１９３号；第８，０３０，４６７号；第８，２７８，４２５号；第８，２７８，４２６号；第８，２７８，２８３号；米国特許出願公開第２００８／００３９６１８号、第２００９／００１２２８１号が挙げられ、そのそれぞれの内容全体を参照によって本明細書に組み入れる。
例えばα－Ｌ－リボフラノースおよびβ－Ｄ－リボフラノースを含む１つまたはそれ以上の立体化学的糖配置を有するように前述の二環式ヌクレオシドのいずれかを調製できる（国際公開第９９／１４２２６号パンフレット参照）。
ｉＲＮＡのＲＮＡはまた、１つまたはそれ以上の拘束エチルヌクレオチドを含むようにも修飾できる。本明細書で使用する場合、「拘束エチルヌクレオチド」または「ｃＥｔ」は４’－ＣＨ（ＣＨ３）－０－２’架橋を含む二環式糖部分を含むロックド核酸である。一実施形態では、拘束エチルヌクレオチドは本明細書において「Ｓ－ｃＥｔ」と呼ばれるＳ立体配座にある。
本発明のｉＲＮＡは、１つまたはそれ以上の「立体配座的制限ヌクレオチド」（「ＣＲＮ」）も含み得る。ＣＲＮは、リボースのＣ２’およびＣ４’炭素またはリボースのＣ３および－Ｃ５’炭素を結合するリンカーを有するヌクレオチド類似体である。ＣＲＮは、リボース環を安定した立体配座へと固定し、ｍＲＮＡに対するハイブリダイゼーション親和性を高める。リンカーは、酸素を安定性および親和性のために最適な位置に配置するのに十分な長さを有し、リボース環のゆがみを少なくする。
上記のＣＲＮのいくつかの調製を教示する代表的な広報としては、限定はされないが、米国特許出願公開第２０１３／０１９０３８３号；およびＰＣＴ広報の国際公開第２０１３／０３６８６８号パンフレットが挙げられ、そのそれぞれの内容全体を参照によって本明細書に組み入れる。
本発明のｉＲＮＡのヌクレオチドの１つまたはそれ以上はまた、ヒドロキシメチル置換ヌクレオチドも含み得る。「ヒドロキシメチル置換ヌクレオチド」は、「アンロックド核酸」（「ＵＮＡ」）修飾とも呼ばれる非環式２’－３’－ｓｅｃｏ－ヌクレオチドである。
ＵＮＡの調製を教示する代表的な米国特許公報としては、限定はされないが、米国特許第８，３１４，２２７号；ならびに米国特許出願公開第２０１３／００９６２８９号；第２０１３／００１１９２２号；および第２０１１／０３１３０２０号が挙げられ、そのそれぞれの内容全体を参照によって本明細書に組み入れる。
ＲＮＡ分子の末端に対する潜在的に安定した修飾は、Ｎ－（アセチルアミノカプロイル）－４－ヒドロキシプロリノール（Ｈｙｐ－Ｃ６－ＮＨＡｃ）、Ｎ－（カプロイル４－ヒドロキシプロリノール（Ｈｙｐ－Ｃ６）、Ｎ－（アセチル－４－ヒドロキシプロリノール（Ｈｙｐ－ＮＨＡｃ）、チミジン－２’－Ｏ－デオキシチミジン（エーテル）、Ｎ－（アミノカプロイル）－４－ヒドロキシプロリノール（Ｈｙｐ－Ｃ６－アミノ）、２－ドコサノイル－ウリジン－３’’－リン酸、逆方向塩基ｄＴ（ｉｄＴ）などを含み得る。この修飾の開示は、ＰＣＴ公開番号国際公開第２０１１／００５８６１号パンフレットに見出さ
れる。
Ａ．本発明のモチーフを含む修飾ｉＲＮＡ
本発明の特定の態様では、本発明の二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、例えば、そのそれぞれの内容全体を参照によって本明細書に組み入れる、２０１１年１１月１８日に出願された米国仮特許出願第６１／５６１，７１０号、または２０１２年１１月１６日に出願されたＰＣＴ／米国特許出願公開第２０１２／０６５６９１号に開示される化学的修飾を有する薬剤を含む。
本明細書、米国仮特許出願第６１／５６１，７１０号、およびＰＣＴ／米国特許出願公開第２０１２／０６５６９１号に示されるように、より優れた結果が、３つの連続的なヌクレオチド上の３つの同一の修飾の１つまたはそれ以上のモチーフを、ＲＮＡｉ薬剤のセンス鎖および／またはアンチセンス鎖、特に、切断部位またはその近くに導入することによって得られる。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ薬剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖は、そうでなければ完全に修飾される。これらのモチーフの導入により、存在する場合、センス鎖および／またはアンチセンス鎖の修飾パターンが中断される。ＲＮＡｉ薬剤は、例えばセンス鎖上で、ＧａｌＮＡｃ誘導体リガンドと場合によりコンジュゲートしている。得られたＲＮＡｉ薬剤はより優れた遺伝子サイレンシング活性を示す。
より詳細には、二本鎖ＲＮＡｉ薬剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖が、ＲＮＡｉ薬剤の少なくとも１つの鎖の切断部位またはその近くに３つの連続的なヌクレオチド上の３つの同一の修飾の１つまたはそれ以上のモチーフを有するように修飾される場合、ＲＮＡｉ薬剤の遺伝子サイレンシング活性が有意に向上されたことが驚くべきことに発見された。
一実施形態では、ＲＮＡｉ薬剤は１９ヌクレオチド長の平滑末端二本鎖（double ended
bluntmer）であり、センス鎖は、５’末端から７位、８位、９位の３つの連続的なヌク
レオチドにおける３つの２’－Ｆ修飾の少なくとも１つのモチーフを含有する。アンチセンス鎖は、５’末端から１１位、１２位、１３位の３つの連続的なヌクレオチドにおける３つの２’－Ｏ－メチル修飾の少なくとも１つのモチーフを含有する。
別の実施形態では、ＲＮＡｉ薬剤は２０ヌクレオチド長の平滑末端二本鎖であり、センス鎖は、５’末端から８位、９位、１０位の３つの連続的なヌクレオチドにおける３つの２’－Ｆ修飾の少なくとも１つのモチーフを含有する。アンチセンス鎖は、５’末端から１１位、１２位、１３位の３つの連続的なヌクレオチドにおける３つの２’－Ｏ－メチル修飾の少なくとも１つのモチーフを含有する。
さらに別の実施形態では、ＲＮＡｉ薬剤は２１ヌクレオチド長の平滑末端二本鎖であり、センス鎖は、５’末端から９位、１０位、１１位の３つの連続的なヌクレオチドにおける３つの２’－Ｆ修飾の少なくとも１つのモチーフを含有する。アンチセンス鎖は、５’末端から１１位、１２位、１３位の３つの連続的なヌクレオチドにおける３つの２’－Ｏ－メチル修飾の少なくとも１つのモチーフを含有する。
一実施形態では、ＲＮＡｉ薬剤は２１ヌクレオチドセンス鎖および２３ヌクレオチドアンチセンス鎖を含み、センス鎖は、５’末端から９位、１０位、１１位の３つの連続的なヌクレオチドにおける３つの２’－Ｆ修飾の少なくとも１つのモチーフを含有し；アンチセンス鎖は、５’末端から１１位、１２位、１３位の３つの連続的なヌクレオチドにおける３つの２’－Ｏ－メチル修飾の少なくとも１つのモチーフを含有し、ＲＮＡｉ薬剤の一方の端が平滑である一方、他方の端は２つのヌクレオチドオーバーハングを含む。好ましくは、２つのヌクレオチドオーバーハングはアンチセンス鎖の３’末端にある。２つのヌクレオチドオーバーハングがアンチセンス鎖の３’末端にある場合、末端の３つのヌクレ
オチドの間に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結があり、３つのうちの２つのヌクレオチドがオーバーハングヌクレオチドであり、第３のヌクレオチドはオーバーハングヌクレオチドに隣接する対合ヌクレオチドである。一実施形態では、ＲＮＡｉ薬剤はセンス鎖の５’末端およびアンチセンス鎖の５’末端の両方における末端の３つのヌクレオチドの間に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結をさらに有する。一実施形態では、モチーフの一部であるヌクレオチドを含むＲＮＡｉ薬剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖中のすべてのヌクレオチドが、修飾ヌクレオチドである。一実施形態では、各残基は独立して、例えば交互のモチーフ中で２’－Ｏ－メチルまたは３’フルオロで修飾される。場合により、ＲＮＡｉ薬剤はリガンド（好ましくはＧａｌＮＡｃ３）をさらに含む。
一実施形態では、ＲＮＡｉ薬剤はセンス鎖およびアンチセンス鎖を含み、ＲＮＡｉ薬剤は少なくとも２５および２９以下のヌクレオチド長を有する第１の鎖と、５’末端から１１位、１２位、１３位の３つの連続的なヌクレオチドにおける３つの２’－Ｏ－メチル修飾の少なくとも１つのモチーフを含む、３０以下のヌクレオチド長を有する第２の鎖とを含み；第１の鎖の３’末端および第２の鎖の５’末端が平滑末端を形成し、第２の鎖はその３’末端で第１の鎖より１～４ヌクレオチド長く、二重鎖領域は、少なくとも２５ヌクレオチド長であり、第２の鎖は、ＲＮＡｉ薬剤が哺乳動物細胞中に導入されたときに標的遺伝子の発現を低下させるように、第２の鎖長の少なくとも１９ヌクレオチドに沿って標的ｍＲＮＡに十分に相補的であり、ＲＮＡｉ薬剤のダイサー切断が、第２の鎖の３’末端を含むｓｉＲＮＡを優先的にもたらし、それにより哺乳動物における標的遺伝子の発現を低下させる。場合により、ＲＮＡｉ薬剤はリガンドをさらに含む。
一実施形態では、ＲＮＡｉ薬剤のセンス鎖は、３つの連続的なヌクレオチドにおける３つの同一の修飾の少なくとも１つのモチーフを含有し、モチーフの１つはセンス鎖の切断部位に存在する。
一実施形態では、ＲＮＡｉ薬剤のアンチセンス鎖も３つの連続的なヌクレオチドにおける３つの同一の修飾の少なくとも１つのモチーフを含有することができ、モチーフの１つはアンチセンス鎖の切断部位またはその近くに存在する。
１７～２３ヌクレオチド長の二重鎖領域を有するＲＮＡｉ薬剤では、アンチセンス鎖の切断部位は、典型的には５’末端から１０位、１１位、および１２位の付近である。したがって、３つの同一の修飾のモチーフは、アンチセンス鎖の５’末端から１つ目のヌクレオチドから数え始めて、またはアンチセンス鎖の５’末端から、二重鎖領域内の１つ目の対合ヌクレオチドから数え始めて、アンチセンス鎖の９位、１０位、１１位；１０位、１１位、１２位；１１位、１２位、１３位；１２位、１３位、１４位；または１３位、１４位、１５位に存在し得る。アンチセンス鎖中の切断部位はまた、５’末端からのＲＮＡｉの二重鎖領域の長さによっても変化し得る。
ＲＮＡｉ薬剤のセンス鎖は、鎖の切断部位に３つの連続的なヌクレオチドにおける３つの同一の修飾の少なくとも１つのモチーフを含有していてもよく；アンチセンス鎖は、鎖の切断部位またはその近くに３つの連続的なヌクレオチドにおける３つの同一の修飾の少なくとも１つのモチーフを有し得る。センス鎖およびアンチセンス鎖がｄｓＲＮＡ二重鎖を形成する場合、センス鎖およびアンチセンス鎖は、センス鎖における３つのヌクレオチドの１つのモチーフおよびアンチセンス鎖における３つのヌクレオチドの１つのモチーフが、少なくとも１つのヌクレオチドの重複を有し、すなわちセンス鎖中のモチーフの３つのヌクレオチドのうちの少なくとも１つが、アンチセンス鎖中のモチーフの３つのヌクレオチドのうちの少なくとも１つと塩基対を形成するように整列され得る。あるいは、少なくとも２つのヌクレオチドが重複してもよく、またはすべての３つのヌクレオチドが重複してもよい。
一実施形態では、ＲＮＡｉ薬剤のセンス鎖は、３つの連続的なヌクレオチドにおける３つの同一の修飾の２つ以上のモチーフを含有し得る。第１のモチーフは、鎖の切断部位またはその近くに存在してもよく、他のモチーフは、ウイング修飾（wing modification）
であり得る。本明細書の用語「ウイング修飾」は、同じ鎖の切断部位またはその近くのモチーフから隔てられた鎖の別の部分に存在するモチーフを指す。ウイング修飾は、第１のモチーフに隣接するか、または少なくとも１つもしくはそれ以上のヌクレオチドによって隔てられている。モチーフが互いに直接隣接している場合、モチーフの化学構造は互いに異なり、モチーフが１つまたはそれ以上のヌクレオチドによって隔てられている場合、化学構造は同じかまたは異なり得る。２つ以上のウイング修飾が存在し得る。例えば、２つのウイング修飾が存在する場合、各ウイング修飾は切断部位もしくはその近くの第１のモチーフに対して１つの端部にまたはリードモチーフ（lead motif）のいずれかの側に存在し得る。
センス鎖と同様に、ＲＮＡｉ薬剤のアンチセンス鎖は、３つの連続的なヌクレオチドにおける３つの同一の修飾の２つ以上のモチーフを含有していてもよく、モチーフの少なくとも１つが、鎖の切断部位またはその近くに存在する。このアンチセンス鎖はまた、センス鎖に存在し得るウイング修飾と同様の配列で１つまたはそれ以上のウイング修飾を含有し得る。
一実施形態では、ＲＮＡｉ薬剤のセンス鎖またはアンチセンス鎖におけるウイング修飾は、典型的には鎖の３’末端、５’末端または両端に第１の１つまたは２つの末端ヌクレオチドを含まない。
別の実施形態では、ＲＮＡｉ薬剤のセンス鎖またはアンチセンス鎖におけるウイング修飾は、典型的には鎖の３’末端、５’末端、または両端の二重鎖領域内に第１の１つまたは２つの対合ヌクレオチドを含まない。
ＲＮＡｉ薬剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖がそれぞれ、少なくとも１つのウイング修飾を含有する場合、ウイング修飾は、二重鎖領域の同じ端に位置してもよく、１つ、２つまたは３つのヌクレオチドの重複を有し得る。
ＲＮＡｉ薬剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖がそれぞれ、少なくとも２つのウイング修飾を含有する場合、センス鎖およびアンチセンス鎖は、１つの鎖から２つの修飾がそれぞれ、二重鎖領域の１つの端に位置して、１つ、２つまたは３つのヌクレオチドの重複を有し、；１つの鎖からの２つの修飾がそれぞれ、二重鎖領域の他方の端に位置して、１つ、２つまたは３つのヌクレオチドの重複を有し；１つの鎖からの２つの修飾がリードモチーフの各側に位置して、二重鎖領域中に１つ、２つまたは３つのヌクレオチドの重複を有するように整列される。
一実施形態では、モチーフの一部であるヌクレオチドを含む、ＲＮＡｉ薬剤のセンス鎖およびアンチセンス鎖中のすべてのヌクレオチドが修飾される。各ヌクレオチドは、同じまたは異なる修飾で修飾され、この修飾は、非結合リン酸酸素および／または結合リン酸酸素の１つもしくはそれ以上の一方または両方の１つまたはそれ以上の変更；リボース糖の成分、例えば、リボース糖の２’ヒドロキシルの変更；「脱リン」リンカーによるリン酸部分の大規模な置換；天然の塩基の修飾または置換；ならびにリボース－リン酸骨格の置換または修飾を含み得る。
核酸がサブユニットのポリマーであるため、例えば塩基、またはリン酸部分、またはリン酸部分の非結合Ｏの修飾などの修飾の多くは、核酸内の繰り返される位置に存在する。
いくつかの場合では、修飾は、核酸中の目的の位置のすべてに存在するが、多くの場合、そうではない。例としては、修飾は、３’または５’末端位置のみに存在してもよく、末端領域、例えば末端ヌクレオチド上の位置または鎖の最後の２、３、４、５、または１０のヌクレオチドのみに存在してもよい。修飾は、二本鎖領域、一本鎖領域、またはその両方に存在してもよい。修飾は、ＲＮＡの二本鎖領域のみに存在してもよく、またはＲＮＡの一本鎖領域のみに存在してもよい。例えば、非結合Ｏ位置におけるホスホロチオエート修飾は、一方または両端のみに存在してもよく、末端領域、例えば末端ヌクレオチド上の位置または鎖の最後の２、３、４、５、または１０のヌクレオチドのみに存在してもよく、または二本鎖および一本鎖領域、特に末端に存在してもよい。５’末端または両端がリン酸化される。
例えば、安定性を高めること、オーバーハング中に特定の塩基を含むこと、または一本鎖オーバーハング、例えば５’もしくは３’オーバーハング、もしくはその両方に修飾ヌクレオチドまたはヌクレオチド代用物を含むことが可能であり得る。例えば、オーバーハング中にプリンヌクレオチドを含むことが望ましい場合がある。いくつかの実施形態では、３’または５’オーバーハング中の塩基のすべてまたはいくつかが、例えば、本明細書に記載される修飾で修飾される。修飾は、例えば、当技術分野において公知の修飾によるリボース糖の２’位における修飾の使用、例えば、核酸塩基のリボ糖の代わりにデオキシリボヌクレオチド、２’－デオキシ－２’－フルオロ（２’－Ｆ）または２’－Ｏ－メチル修飾の使用、およびリン酸基の修飾、例えば、ホスホロチオエート修飾を含み得る。オーバーハングは、標的配列と相同である必要はない。
一実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖の各残基は、独立してＬＮＡ、ＨＮＡ、ＣｅＮＡ、２’－メトキシエチル、２’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－アリル、２’－Ｃ－アリル、２’－デオキシ、２’－ヒドロキシル、または２’－フルオロで修飾される。鎖は、２つ以上の修飾を含有し得る。一実施形態では、センス鎖およびアンチセンス鎖の各残基は、独立して２’－Ｏ－メチルまたは２’－フルオロで修飾される。
少なくとも２つの異なる修飾が、典型的にはセンス鎖およびアンチセンス鎖に存在する。それらの２つの修飾は、２’－Ｏ－メチルまたは２’－フルオロ修飾、または他のものであり得る。
一実施形態では、Ｎａおよび／またはＮｂは、交互のパターンの修飾を含む。本明細書で使用する場合、用語「交互のモチーフ」は、１つまたはそれ以上の修飾を有するモチーフを指し、各修飾が１つの鎖の交互のヌクレオチドに存在する。交互のヌクレオチドは、１つおきのヌクレオチドに１つもしくは３つおきのヌクレオチドに１つ、または同様のパターンを指し得る。例えば、Ａ、Ｂ、およびＣがそれぞれ、ヌクレオチドに対する１つのタイプの修飾を表す場合、交互のモチーフは、「ＡＢＡＢＡＢＡＢＡＢＡＢ・・・」、「ＡＡＢＢＡＡＢＢＡＡＢＢ・・・」、「ＡＡＢＡＡＢＡＡＢＡＡＢ・・・」、「ＡＡＡＢＡＡＡＢＡＡＡＢ・・・」、「ＡＡＡＢＢＢＡＡＡＢＢＢ・・・」、または「ＡＢＣＡＢＣＡＢＣＡＢＣ・・・」などであり得る。
交互のモチーフに含有される修飾のタイプは、同じかまたは異なり得る。例えば、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄがそれぞれ、ヌクレオチド上の１つのタイプの修飾を表す場合、交互のパターン、すなわち１つおきのヌクレオチドにおける修飾は同じであってもよいが、センス鎖またはアンチセンス鎖のそれぞれが、「ＡＢＡＢＡＢ・・・」、「ＡＣＡＣＡＣ・・・」、「ＢＤＢＤＢＤ・・・」、または「ＣＤＣＤＣＤ・・・」などの交互のモチーフ内の修飾のいくつかの可能性から選択される。
一実施形態では、本発明のＲＮＡｉ薬剤は、アンチセンス鎖における交互のモチーフの
修飾パターンに対してシフトされた、センス鎖における交互のモチーフの修飾パターンを含む。このシフトは、センス鎖のヌクレオチドの修飾基が、アンチセンス鎖のヌクレオチドの異なるように修飾された基に対応するか、その逆であるようなシフトであり得る。例えば、センス鎖は、ｄｓＲＮＡ二重鎖におけるアンチセンス鎖と対合される場合、センス鎖における交互のモチーフは、鎖の５’から３’へと「ＡＢＡＢＡＢ」から開始してもよく、アンチセンス鎖における交互のモチーフは、二重鎖領域内の鎖の５’から３’へと「ＢＡＢＡＢＡ」から開始される。別の例として、センス鎖における交互のモチーフは、鎖の５’から３’へと「ＡＡＢＢＡＡＢＢ」から開始してもよく、アンチセンス鎖における交互のモチーフは、二重鎖領域内の鎖の５’から３’へと「ＢＢＡＡＢＢＡＡ」から開始してもよく、それにより、センス鎖とアンチセンス鎖との間の修飾パターンの完全なまたは部分的なシフトが存在する。
一実施形態では、ＲＮＡｉ薬剤は、センス鎖における２’－Ｏ－メチル修飾および２’－Ｆ修飾の交互のモチーフのパターンを含み、最初にアンチセンス鎖における２’－Ｏ－メチル修飾および２’－Ｆ修飾の交互のモチーフのパターンに対するシフトを有し、すなわちセンス鎖における２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチドが、アンチセンス鎖における２’－Ｆ修飾ヌクレオチドと塩基対を形成し、その逆も同様である。センス鎖の１位は、２’－Ｆ修飾から開始してもよく、アンチセンス鎖の１位は、２’－Ｏ－メチル修飾から開始してもよい。
センス鎖および／またはアンチセンス鎖への、３つの連続的なヌクレオチド上の３つの同一の修飾の１つまたはそれ以上のモチーフの導入は、センス鎖および／またはアンチセンス鎖中に存在する最初の修飾パターンを中断する。センス鎖および／またはアンチセンス鎖に３つの連続的なヌクレオチド上の３つの同一の修飾の１つまたはそれ以上のモチーフを導入することによる、センス鎖および／またはアンチセンス鎖の修飾パターンのこの中断は、標的遺伝子に対する遺伝子サイレンシング活性を意外にも高める。
一実施形態では、３つの連続的なヌクレオチド上の３つの同一の修飾のモチーフが、鎖のいずれかに導入される場合、モチーフに隣接するヌクレオチドの修飾は、モチーフの修飾と異なる修飾である。例えば、モチーフを含有する配列の一部は、「・・・ＮａＹＹＹＮｂ・・・」であり、ここで、「Ｙ」は３つの連続的なヌクレオチドにおける３つの同一の修飾のモチーフの修飾を表し、「Ｎａ」および「Ｎｂ」はＹの修飾と異なるモチーフ「ＹＹＹ」に隣接するヌクレオチドの修飾を表し、ＮａおよびＮｂは同じかまたは異なる修飾であり得る。あるいは、Ｎａおよび／またはＮｂは、ウイング修飾が存在する場合、存在していてもまたは存在していなくてもよい。
ＲＮＡｉ薬剤は、少なくとも１つのホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結をさらに含み得る。ホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結の修飾は、鎖のいずれかの位置のセンス鎖またはアンチセンス鎖または両方の鎖の任意のヌクレオチドに存在し得る。例えば、ヌクレオチド間連結の修飾は、センス鎖および／もしくはアンチセンス鎖におけるすべてのヌクレオチドに存在してもよく；各ヌクレオチド間連結の修飾は、センス鎖および／もしくはアンチセンス鎖において交互のパターンで存在してもよく；またはセンス鎖もしくはアンチセンス鎖は、交互のパターンで両方のヌクレオチド間連結の修飾を含有し得る。センス鎖におけるヌクレオチド間連結の修飾の交互のパターンは、アンチセンス鎖と同じかまたは異なっていてもよく、センス鎖におけるヌクレオチド間連結の修飾の交互のパターンは、アンチセンス鎖におけるヌクレオチド間連結の修飾の交互のパターンに対するシフトを有し得る。
一実施形態では、ＲＮＡｉは、オーバーハング領域にホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結の修飾を含む。例えば、オーバーハング領域は、２つの
ヌクレオチド間にホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結を有する２つのヌクレオチドを含有し得る。ヌクレオチド間連結の修飾はまた、オーバーハングヌクレオチドを、二重鎖領域内の末端の対合ヌクレオチドと結合するために形成される。例えば、少なくとも２、３、４、またはすべてのオーバーハングヌクレオチドが、ホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結によって連結し、場合により、オーバーハングヌクレオチドをオーバーハングヌクレオチドに隣接する対合ヌクレオチドと連結するさらなるホスホロチオエートまたはメチルホスホネートヌクレオチド間連結が存在し得る。例えば、末端の３つのヌクレオチド間に少なくとも２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結が存在してもよく、３つのヌクレオチドのうちの２つが、オーバーハングヌクレオチドであり、第３のヌクレオチドが、オーバーハングヌクレオチドに隣接する対合ヌクレオチドである。これらの末端の３つのヌクレオチドは、アンチセンス鎖の３’末端、センス鎖の３’末端、アンチセンス鎖の５’末端、および／またはアンチセンス鎖の５’末端に存在し得る。
一実施形態では、２つのヌクレオチドオーバーハングは、アンチセンス鎖の３’末端にあり、末端の３つのヌクレオチド間に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結が存在し、３つのヌクレオチドのうちの２つが、オーバーハングヌクレオチドであり、第３のヌクレオチドが、オーバーハングヌクレオチドに隣接する対合ヌクレオチドである。場合により、ＲＮＡｉ薬剤は、センス鎖の５’末端およびアンチセンス鎖の５’末端の両方において、末端の３つのヌクレオチド間に２つのホスホロチオエートヌクレオチド間連結をさらに有し得る。
一実施形態では、ＲＮＡｉ薬剤は標的とのミスマッチ、二重鎖内のミスマッチ、またはそれらの組み合わせを含む。「ミスマッチ」は、非正準塩基対合またはヌクレオチドの正準対合以外であり得る。ミスマッチはオーバーハング領域または二重鎖領域で生じ得る。塩基対は、解離または融解（例えば、特定の対合の結合または解離の自由エネルギーに対してであり、最も簡単な手法は、個々の対毎に対を調べることであるが、類似のまたは同様の分析も使用される）を促進する傾向に基づいて評価される。解離の促進に関して：Ａ：ＵがＧ：Ｃより好ましく；Ｇ：ＵがＧ：Ｃより好ましく；Ｉ：ＣがＧ：Ｃより好ましい（Ｉ＝イノシン）。ミスマッチ、例えば非正準または正準以外の対合（本明細書の他の箇所に記載される）が、正準な（Ａ：Ｔ、Ａ：Ｕ、Ｇ：Ｃ）対合より好ましく；ユニバーサル塩基を含む対合が正準な対合より好ましい。「ユニバーサル塩基」は、近傍の塩基対相互作用を著しく不安定化することなく、または修飾オリゴヌクレオチドの期待される機能的な生物化学的利用能を壊すことなく、４つの正常な塩基（Ｇ、Ｃ、Ａ、およびＵ）のいずれかを置換する能力を示す塩基である。ユニバーサル塩基の非限定的な例としては、２’－デオキシイノシン（ヒポキサンチンデオキシヌクレオチド）またはその誘導体、ニトロアゾール類似体、および疎水性芳香族非水素結合塩基が挙げられる。
一実施形態では、ＲＮＡｉ薬剤は、Ａ：Ｕ、Ｇ：Ｕ、Ｉ：Ｃの群から独立して選択されるアンチセンス鎖の５’末端からの二重鎖領域内の最初の１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの塩基対のうちの少なくとも１つ、および二重鎖の５’末端におけるアンチセンス鎖の解離を促進するためのミスマッチ対、例えば、非正準もしくは正準以外の対合またはユニバーサル塩基を含む対合を含む。
一実施形態では、アンチセンス鎖の５’末端からの二重鎖領域内の１位におけるヌクレオチドは、Ａ、ｄＡ、ｄＵ、ＵおよびｄＴからなる群から選択される。あるいは、アンチセンス鎖の５’末端からの二重鎖領域内の最初の１、２、または３塩基対のうちの少なくとも１つは、ＡＵ塩基対である。例えば、アンチセンス鎖の５’末端からの二重鎖領域内の第１の塩基対は、ＡＵ塩基対である。
別の実施形態では、センス鎖の３’末端のヌクレオチドは、デオキシチミン（ｄＴ）である。別の実施形態では、アンチセンス鎖の３’末端のヌクレオチドは、デオキシチミン（ｄＴ）である。一実施形態では、デオキシチミンヌクレオチド、例えばセンス鎖および／またはアンチセンス鎖の３’末端における２つのｄＴヌクレオチドの短い配列がある。
一実施形態では、センス鎖配列は、式（Ｉ）：
５’ ｎｐ－Ｎａ－（ＸＸＸ）ｉ－Ｎｂ－ＹＹＹ－Ｎｂ－（ＺＺＺ）ｊ－Ｎａ－ｎｑ ３’ （Ｉ）
（式中：
ｉおよびｊが、それぞれ独立して０または１であり；
ｐおよびｑが、それぞれ独立して０～６であり；
各Ｎａが、独立して０～２５の修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表し、各配列が、少なくとも２つの異なるように修飾されたヌクレオチドを含み；
各Ｎｂが、独立して０～１０の修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表し；各ｎｐおよびｎｑが、独立してオーバーハングヌクレオチドを表し；
ここで、ＮｂおよびＹが、同じ修飾を有さず；
ＸＸＸ、ＹＹＹおよびＺＺＺが、それぞれ独立して３つの連続的なヌクレオチドにおける３つの同一の修飾の１つのモチーフを表す）
によって表される。好ましくは、ＹＹＹが、すべて２’－Ｆ修飾ヌクレオチドである。
一実施形態では、Ｎａおよび／またはＮｂは、交互のパターンの修飾を含む。
一実施形態では、ＹＹＹモチーフは、センス鎖の切断部位またはその近くに存在する。例えば、ＲＮＡｉ薬剤が、１７～２３ヌクレオチド長の二重鎖領域を有する場合、ＹＹＹモチーフは、５’末端から１つ目のヌクレオチドから数え始めて；または場合により、５’末端から二重鎖領域内の１つ目の対合ヌクレオチドから数え始めて、センス鎖の切断部位またはその付近に存在し得る（例えば：６位、７位、８位、７位、８位、９位、８位、９位、１０位、９位、１０位、１１位、１０位、１１位、１２位、または１１位、１２位、１３位に存在し得る）。
一実施形態では、ｉが１であり、Ｊが０であり、またはｉが０であり、ｊが１であり、またはｉおよびｊの両方が１である。したがって、センス鎖は以下の式：
５’ ｎｐ－Ｎａ－ＹＹＹ－Ｎｂ－ＺＺＺ－Ｎａ－ｎｑ ３’ （１ｂ）；
５’ ｎｐ－Ｎａ－ＸＸＸ－Ｎｂ－ＹＹＹ－Ｎａ－ｎｑ ３’ （Ｉｃ）；または
５’ ｎｐ－Ｎａ－ＸＸＸ－Ｎｂ－ＹＹＹ－Ｎｂ－ＺＺＺ－Ｎａ－ｎｑ ３’ （Ｉｄ）によって表される。
センス鎖が、式（Ｉｂ）によって表される場合、Ｎｂは、０～１０、０～７、０～５、０～４、０～２、または０の修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。各Ｎａは、独立して２～２０、２～１５、または２～１０の修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表し得る。
センス鎖が、式（Ｉｃ）として表される場合、Ｎｂは、０～１０、０～７、０～５、０～４、０～２、または０の修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。各Ｎａは、独立して、２～２０、２～１５、または２～１０の修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表し得る。
センス鎖が、式（Ｉｄ）として表される場合、各Ｎｂは、独立して０～１０、０～７、０～５、０～４、０～２、または０の修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。好ましくは、Ｎｂは、０、１、２、３、４、５、または６である。各Ｎａは、独立
して２～２０、２～１５、または２～１０の修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表し得る。
Ｘ、Ｙ、およびＺのそれぞれが、互いに同じかまたは異なり得る。
他の実施形態では、ｉが０であり、ｊが０であり、センス鎖は式：
５’ ｎｐ－Ｎａ－ＹＹＹ－Ｎａ－ｎｑ ３’ （Ｉａ）
によって表される。
センス鎖が、式（Ｉａ）によって表される場合、各Ｎａは、独立して２～２０、２～１５、または２～１０の修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表し得る。
一実施形態では、ＲＮＡｉのアンチセンス鎖配列は、式（ＩＩ）：
５’ ｎｑ’－Ｎａ’－（Ｚ’Ｚ’Ｚ’）ｋ－Ｎｂ’－Ｙ’Ｙ’Ｙ’－Ｎｂ’－（Ｘ’Ｘ’Ｘ’）ｌ－Ｎ’ａ－ｎｐ’ ３’ （ＩＩ）
（式中：
ｋおよびｌが、それぞれ独立して０または１であり；
ｐ’およびｑ’が、それぞれ独立して０～６であり；
各Ｎａ’が、独立して０～２５の修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表し、各配列が少なくとも２つの異なるように修飾されたヌクレオチドを含み；
各Ｎｂ’が、独立して０～１０の修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表し；
各ｎｐ’およびｎｑ’が、独立してオーバーハングヌクレオチドを表し；
ここで、Ｎｂ’およびＹ’が同じ修飾を有さず；
Ｘ’Ｘ’Ｘ’、Ｙ’Ｙ’Ｙ’、およびＺ’Ｚ’Ｚ’が、それぞれ独立して３つの連続的なヌクレオチドにおける３つの同一の修飾の１つのモチーフを表す）
によって表される。
一実施形態では、Ｎａ’および／またはＮｂ’は、交互のパターンの修飾を含む。
Ｙ’Ｙ’Ｙ’モチーフは、アンチセンス鎖の切断部位またはその近くに存在する。例えば、ＲＮＡｉ薬剤が、１７～２３ヌクレオチド長の二重鎖領域を有する場合、Ｙ’Ｙ’Ｙ’モチーフは、５’末端から１つ目のヌクレオチドから数え始めて；または場合により、５’末端から二重鎖領域内の１つ目の対合ヌクレオチドから数え始めて、アンチセンス鎖の９位、１０位、１１位；１０位、１１位、１２位；１１位、１２位、１３位；１２位、１３位、１４位；または１３位、１４位、１５位に存在し得る。好ましくは、Ｙ’Ｙ’Ｙ’モチーフは、１１位、１２位、１３位に存在する。
一実施形態では、Ｙ’Ｙ’Ｙ’モチーフはすべて２’－ＯＭｅ修飾ヌクレオチドである。
一実施形態では、ｋが１であり、ｌが０であり、またはｋが０であり、ｌが１であり、またはｋおよびｌの両方が１である。
したがって、アンチセンス鎖は、以下の式：
５’ ｎｑ’－Ｎａ’－Ｚ’Ｚ’Ｚ’－Ｎｂ’－Ｙ’Ｙ’Ｙ’－Ｎａ’－ｎｐ’ ３’ （ＩＩｂ）；
５’ ｎｑ’－Ｎａ’－Ｙ’Ｙ’Ｙ’－Ｎｂ’－Ｘ’Ｘ’Ｘ’－ｎｐ’ ３’ （ＩＩｃ）；または
５’ ｎｑ’－Ｎａ’－Ｚ’Ｚ’Ｚ’－Ｎｂ’－Ｙ’Ｙ’Ｙ’－Ｎｂ’－Ｘ’Ｘ’Ｘ’－
Ｎａ’－ｎｐ’ ３’ （ＩＩｄ）
によって表される。
アンチセンス鎖が、式（ＩＩｂ）によって表される場合、Ｎｂ’は、０～１０、０～７、０～５、０～４、０～２または０の修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。各Ｎａ’は、独立して２～２０、２～１５、または２～１０の修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。
アンチセンス鎖が、式（ＩＩｃ）として表される場合、Ｎｂ’は、０～１０、０～７、０～５、０～４、０～２または０の修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。各Ｎａ’は、独立して２～２０、２～１５、または２～１０の修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。
アンチセンス鎖が、式（ＩＩｄ）として表される場合、各Ｎｂ’は、独立して０～１０、０～７、０～５、０～４、０～２または０の修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。各Ｎａ’は、独立して２～２０、２～１５、または２～１０の修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。好ましくは、Ｎｂは０、１、２、３、４、５、または６である。
他の実施形態では、ｋが０であり、ｌが０であり、アンチセンス鎖は式：
５’ ｎｐ’－Ｎａ’－Ｙ’Ｙ’Ｙ’－Ｎａ’－ｎｑ’ ３’ （ＩＩａ）
によって表される。
アンチセンス鎖が、式（ＩＩａ）として表される場合、各Ｎａ’は、独立して２～２０、２～１５、または２～１０の修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。
Ｘ’、Ｙ’、およびＺ’のそれぞれが、互いに同じかまたは異なり得る。
センス鎖およびアンチセンス鎖の各ヌクレオチドは、独立してＬＮＡ、ＨＮＡ、ＣｅＮＡ、２’－メトキシエチル、２’－Ｏ－メチル、２’－Ｏ－アリル、２’－Ｃ－アリル、２’－ヒドロキシル、または２’－フルオロで修飾される。例えば、センス鎖およびアンチセンス鎖の各ヌクレオチドは、独立して２’－Ｏ－メチルまたは２’－フルオロで修飾される。各Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ｘ’、Ｙ’およびＺ’は、特に、２’－Ｏ－メチル修飾または２’－フルオロ修飾を表し得る。
一実施形態では、ＲＮＡｉ薬剤のセンス鎖は、二重鎖領域が２１ヌクレオチドである場合、５’末端から１つ目のヌクレオチドから数え始めて；または場合により、５’末端から、二重鎖領域内の１つ目の対合ヌクレオチドから数え始めて、鎖の９位、１０位、および１１位に存在するＹＹＹモチーフを含有してもよく；Ｙは、２’－Ｆ修飾を表す。センス鎖は、二重鎖領域の反対側の端にウイング修飾としてＸＸＸモチーフまたはＺＺＺモチーフをさらに含有してもよく；ＸＸＸおよびＺＺＺは、それぞれ独立して２’－ＯＭｅ修飾または２’－Ｆ修飾を表す。
一実施形態では、アンチセンス鎖は、５’末端から１つ目のヌクレオチドから数え始めて；または場合により、５’末端から、二重鎖領域内の１つ目の対合ヌクレオチドから数え始めて、鎖の１１位、１２位、１３位に存在するＹ’Ｙ’Ｙ’モチーフを含有してもよく；Ｙ’は、２’－Ｏ－メチル修飾を表す。アンチセンス鎖は、二重鎖領域の反対側の端にウイング修飾としてＸ’Ｘ’Ｘ’モチーフまたはＺ’Ｚ’Ｚ’モチーフをさらに含有してもよく；Ｘ’Ｘ’Ｘ’およびＺ’Ｚ’Ｚ’は、それぞれ独立して２’－ＯＭｅ修飾または２’－Ｆ修飾を表す。
上記の式（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（Ｉｃ）、および（Ｉｄ）のいずれか１つよって表されるセンス鎖は、それぞれ式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）、（ＩＩｃ）、および（ＩＩｄ）のいずれか１つによって表されるアンチセンス鎖と二重鎖を形成する。
したがって、本発明の方法における使用のためのＲＮＡｉ薬剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含んでいてもよく、各鎖は、１４～３０のヌクレオチドを有し、ＲＮＡｉ二重鎖は式（ＩＩＩ）：
センス：５’ ｎｐ－Ｎａ－（ＸＸＸ）ｉ－Ｎｂ－ＹＹＹ－Ｎｂ－（ＺＺＺ）ｊ－Ｎａ－ｎｑ ３’
アンチセンス：３’ ｎｐ’－Ｎａ’－（Ｘ’Ｘ’Ｘ’）ｋ－Ｎｂ’－Ｙ’Ｙ’Ｙ’－Ｎｂ’－（Ｚ’Ｚ’Ｚ’）ｌ－Ｎａ’－ｎｑ’ ５’
（ＩＩＩ）
（式中：
ｉ、ｊ、ｋ、およびｌが、それぞれ独立して０または１であり；
ｐ、ｐ’、ｑ、およびｑ’が、それぞれ独立して０～６であり；
各ＮａおよびＮａ’が、独立して０～２５の修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表し、各配列が、少なくとも２つの異なるように修飾されたヌクレオチドを含み；各ＮｂおよびＮｂ’が、独立して０～１０の修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表し；
ここで、
それぞれ存在していてもまたは存在していなくてもよい各ｎｐ’、ｎｐ、ｎｑ’、およびｎｑが、独立してオーバーハングヌクレオチドを表し；
ＸＸＸ、ＹＹＹ、ＺＺＺ、Ｘ’Ｘ’Ｘ’、Ｙ’Ｙ’Ｙ’、およびＺ’Ｚ’Ｚ’が、それぞれ独立して３つの連続的なヌクレオチド上に３つの同一の修飾の１つのモチーフを表す）によって表される。
一実施形態では、ｉが０であり、ｊが０であり；またはｉが１であり、ｊが０であり；またはｉが０であり、ｊが１であり；またはｉおよびｊの両方が０であり；またはｉおよびｊの両方が１である。別の実施形態では、ｋが０であり、ｌが０であり；またはｋが１であり、ｌが０であり；ｋが０であり、ｌが１であり；またはｋおよびｌの両方が０であり；またはｋおよびｌの両方が１である。
ＲＮＡｉ二重鎖を形成するセンス鎖およびアンチセンス鎖の例示的な組み合わせは、以下の式：
５’ ｎｐ－Ｎａ－ＹＹＹ－Ｎａ－ｎｑ ３’
３’ ｎｐ’－Ｎａ’－Ｙ’Ｙ’Ｙ’－Ｎａ’ｎｑ’ ５’
（ＩＩＩａ）
５’ ｎｐ－Ｎａ－ＹＹＹ－Ｎｂ－ＺＺＺ－Ｎａ－ｎｑ ３’
３’ ｎｐ’－Ｎａ’－Ｙ’Ｙ’Ｙ’－Ｎｂ’－Ｚ’Ｚ’Ｚ’－Ｎａ’ｎｑ’ ５’
（ＩＩＩｂ）
５’ ｎｐ－Ｎａ－ＸＸＸ－Ｎｂ－ＹＹＹ－Ｎａ－ｎｑ ３’
３’ ｎｐ’－Ｎａ’－Ｘ’Ｘ’Ｘ’－Ｎｂ’－Ｙ’Ｙ’Ｙ’－Ｎａ’－ｎｑ’ ５’
（ＩＩＩｃ）
５’ ｎｐ－Ｎａ－ＸＸＸ－Ｎｂ－ＹＹＹ－Ｎｂ－ＺＺＺ－Ｎａ－ｎｑ ３’
３’ ｎｐ’－Ｎａ’－Ｘ’Ｘ’Ｘ’－Ｎｂ’－Ｙ’Ｙ’Ｙ’－Ｎｂ’－Ｚ’Ｚ’Ｚ’－Ｎａ－ｎｑ’ ５’
（ＩＩＩｄ）
５’ －Ｎａ －ＹＹＹ－Ｎａ－ ３’
３’ ｎｐ’－Ｎａ’－Ｙ’Ｙ’Ｙ’－Ｎａ’ ５’
（ＩＩＩｅ）
を含む。
ＲＮＡｉ薬剤が、式（ＩＩＩａ）によって表される場合、各Ｎａは、独立して２～２０、２～１５、または２～１０の修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。
ＲＮＡｉ薬剤が、式（ＩＩＩｂ）によって表される場合、各Ｎｂは、独立して１～１０、１～７、１～５、または１～４の修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。各Ｎａは、独立して２～２０、２～１５、または２～１０の修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。
ＲＮＡｉ薬剤が、式（ＩＩＩｃ）として表される場合、各Ｎｂ、Ｎｂ’は、独立して０～１０、０～７、０～１０、０～７、０～５、０～４、０～２、または０の修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。各Ｎａは、独立して２～２０、２～１５、または２～１０の修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。
ＲＮＡｉ薬剤が、式（ＩＩＩｄ）として表される場合、各Ｎｂ、Ｎｂ’は、独立して０～１０、０～７、０～５、０～４、０～２、または０の修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。各Ｎａ、Ｎａ’は、独立して２～２０、２～１５、または２～１０の修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。Ｎａ、Ｎａ’、Ｎｂ、およびＮｂ’のそれぞれは、独立して交互のパターンの修飾を含む。
ＲＮＡｉ薬剤が、式（ＩＩＩｄ）として表される場合、各Ｎｂ、Ｎｂ’は、独立して０～１０、０～７、０～５、０～４、０～２、または０の修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。各Ｎａ、Ｎａ’は、独立して２～２０、２～１５、または２～１０の修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表す。Ｎａ、Ｎａ’、Ｎｂ、およびＮｂ’のそれぞれは、独立して交互のパターンの修飾を含む。
ＲＮＡｉ薬剤が、式（ＩＩＩｅ）として表される場合、各ＮａおよびＮａ’は、独立して０～２５のヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド配列を表し、それらは、修飾もしくは非修飾またはそれらの組み合わせであり、各配列は少なくとも２つの異なるように修飾されたヌクレオチドを含む。
式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｃ）、（ＩＩＩｄ）、および（ＩＩＩｅ）中のＸ、Ｙ、およびＺのそれぞれは、互いに同じかまたは異なり得る。
ＲＮＡｉ薬剤が、式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｃ）、（ＩＩＩｄ）、および（ＩＩＩｅ）によって表される場合、Ｙヌクレオチドの少なくとも１つが、Ｙ’ヌクレオチドの１つと塩基対を形成し得る。あるいは、Ｙヌクレオチドの少なくとも２つが、対応するＹ’ヌクレオチドと塩基対を形成し；またはＹヌクレオチドのすべての３つがすべて、対応するＹ’ヌクレオチドと塩基対を形成する。
ＲＮＡｉ薬剤が、式（ＩＩＩｂ）または（ＩＩＩｄ）によって表される場合、Ｚヌクレオチドの少なくとも１つが、Ｚ’ヌクレオチドの１つと塩基対を形成し得る。あるいは、Ｚヌクレオチドの少なくとも２つが、対応するＺ’ヌクレオチドと塩基対を形成し；またはＺヌクレオチドのすべての３つがすべて、対応するＺ’ヌクレオチドと塩基対を形成する。
ＲＮＡｉ薬剤が、式（ＩＩＩｃ）または（ＩＩＩｄ）として表される場合、Ｘヌクレオチドの少なくとも１つが、Ｘ’ヌクレオチドの１つと塩基対を形成し得る。あるいは、Ｘ
ヌクレオチドの少なくとも２つが、対応するＸ’ヌクレオチドと塩基対を形成し；またはＸヌクレオチドのすべての３つがすべて、対応するＸ’ヌクレオチドと塩基対を形成する。
一実施形態では、Ｙヌクレオチド上の修飾は、Ｙ’ヌクレオチド上の修飾と異なり、Ｚヌクレオチド上の修飾は、Ｚ’ヌクレオチド上の修飾と異なり、および／またはＸヌクレオチド上の修飾は、Ｘ’ヌクレオチド上の修飾と異なる。
一実施形態では、ＲＮＡｉ薬剤が式（ＩＩＩｄ）によって表される場合、Ｎａ修飾は、２’－Ｏ－メチルまたは２’－フルオロ修飾である。別の実施形態では、ＲＮＡｉ薬剤が式（ＩＩＩｄ）によって表される場合、Ｎａ修飾は、２’－Ｏ－メチルまたは２’－フルオロ修飾であり、ｎｐ’＞０であり、少なくとも１つのｎｐ’が、ホスホロチオエート連結を介して隣接するヌクレオチドと連結している。さらに別の実施形態では、ＲＮＡｉ薬剤が、式（ＩＩＩｄ）によって表される場合、Ｎａ修飾は、２’－Ｏ－メチルまたは２’－フルオロ修飾であり、ｎｐ’＞０であり、少なくとも１つのｎｐ’が、ホスホロチオエート連結を介して隣接するヌクレオチドに連結し、センス鎖は、一価、二価、または三価の分枝リンカーを介して結合した１つまたはそれ以上のＧａｌＮＡｃ誘導体にコンジュゲートしている。別の実施形態では、ＲＮＡｉ薬剤が式（ＩＩＩｄ）によって表される場合、Ｎａ修飾は、２’－Ｏ－メチルまたは２’－フルオロ修飾であり、ｎｐ’＞０であり、少なくとも１つのｎｐ’が、ホスホロチオエート連結を介して隣接するヌクレオチドと連結し、センス鎖は、少なくとも１つのホスホロチオエート連結を含み、センス鎖は一価、二価、または三価の分枝リンカーを介して結合した１つまたはそれ以上のＧａｌＮＡｃ誘導体にコンジュゲートしている。
一実施形態では、ＲＮＡｉ薬剤が式（ＩＩＩａ）によって表される場合、Ｎａ修飾は、２’－Ｏ－メチルまたは２’－フルオロ修飾であり、ｎｐ’＞０であり、少なくとも１つのｎｐ’が、ホスホロチオエート連結を介して隣接するヌクレオチドと連結し、センス鎖は少なくとも１つのホスホロチオエート連結を含み、センス鎖は一価、二価、または三価の分枝リンカーを介して結合した１つまたはそれ以上のＧａｌＮＡｃ誘導体にコンジュゲートしている。
一実施形態では、ＲＮＡｉ薬剤は、式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｃ）、（ＩＩＩｄ）、および（ＩＩＩｅ）によって表される少なくとも２つの二重鎖を含有する多量体であり、この二重鎖はリンカーによって結合される。リンカーは、切断可能または切断不可能であり得る。場合により、多量体はリガンドをさらに含む。二重鎖のそれぞれは、同じ遺伝子もしくは２つの異なる遺伝子を標的とすることができ；または二重鎖のそれぞれは、２つの異なる標的部位において同じ遺伝子を標的とすることができる。
一実施形態では、ＲＮＡｉ薬剤は、式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｃ）、（ＩＩＩｄ）、および（ＩＩＩｅ）によって表される３つ、４つ、５つ、６つ、またはそれ以上の二重鎖を含有する多量体であり、この二重鎖はリンカーによって結合される。リンカーは、切断可能または切断不可能であり得る。場合により、多量体はリガンドをさらに含む。二重鎖のそれぞれは、同じ遺伝子もしくは２つの異なる遺伝子を標的とすることができ；または二重鎖のそれぞれは、２つの異なる標的部位において同じ遺伝子を標的とすることができる。
一実施形態では、式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）、（ＩＩＩｃ）、（ＩＩＩｄ）、および（ＩＩＩｅ）によって表される２つのＲＮＡｉ薬剤は、５’末端および３’末端の一方または両方で互いに連結し、場合により、リガンドにコンジュゲートしてい
る。薬剤のそれぞれは、同じ遺伝子もしくは２つの異なる遺伝子を標的とすることができ；または薬剤のそれぞれは、２つの異なる標的部位において同じ遺伝子を標的とすることができる。
様々な刊行物に、本発明の方法に使用される多量体ＲＮＡｉ薬剤が記載されている。このような刊行物は、国際公開第２００７／０９１２６９号パンフレット、米国特許第７８５８７６９号、国際公開第２０１０／１４１５１１号パンフレット、国際公開第２００７／１１７６８６号パンフレット、国際公開第２００９／０１４８８７号パンフレットおよび国際公開第２０１１／０３１５２０号パンフレットを含み、そのそれぞれの内容全体を参照によって本明細書に組み入れる。
ＲＮＡｉ薬剤に対する１つまたはそれ以上の炭水化物部分のコンジュゲーションを含有するＲＮＡｉ薬剤は、ＲＮＡｉ薬剤の１つまたはそれ以上の特性を最適化することができる。多くの場合、炭水化物部分は、ＲＮＡｉ薬剤の修飾サブユニットに結合される。例えば、ｄｓＲＮＡ薬剤の１つまたはそれ以上のリボヌクレオチドサブユニットのリボース糖は、別の部分、例えば炭水化物リガンドが結合される非炭水化物（好ましくは環状の）担体で置換される。サブユニットのリボース糖がこのように置換されたリボヌクレオチドサブユニットは、本明細書において、リボース置換修飾サブユニット（ＲＲＭＳ）と呼ばれる。環状担体は、炭素環系であってもよく、すなわちすべての環原子が炭素原子であり、または複素環系、すなわち１つもしくはそれ以上の環原子が、ヘテロ原子、例えば窒素、酸素、硫黄であり得る。環状担体は、単環系であってもよく、または２つ以上の環、例えば縮合環を含有し得る。環状担体は、完全に飽和した環系であってもよく、または１つもしくはそれ以上の二重結合を含有し得る。
リガンドは、担体を介してポリヌクレオチドとコンジュゲートしている。担体は、（ｉ）少なくとも１つの「骨格結合点」、好ましくは２つの「骨格結合点」および（ｉｉ）少なくとも１つの「テザリング結合点（tethering attachment point）」を含む。本明細書において使用される「骨格結合点」は、官能基、例えばヒドロキシル基、または一般に骨格、例えばリン酸塩もしくは修飾リン酸塩、例えば硫黄を含有する、リボ核酸の骨格中への担体の組み込みに利用可能であり、それに適した結合を指す。いくつかの実施形態では、「テザリング結合点」（ＴＡＰ）は、選択された部分を接続する環状担体の構成環原子、例えば炭素原子またはヘテロ原子（骨格結合点を提供する原子と異なる）を指す。この部分は、例えば炭水化物、例えば単糖、二糖、三糖、四糖、オリゴ糖および多糖であり得る。場合により、選択された部分は、介在するテザーによって環状担体に接続される。したがって、環状担体は、多くの場合官能基、例えばアミノ基を含み、または一般に、構成環への別の化学成分、例えばリガンドの組み込みもしくはテザリングに適した結合を提供する。
ＲＮＡｉ薬剤は、担体を介してリガンドとコンジュゲートしてもよく、この担体は、環式基または非環式基であり得；好ましくは、環式基は、ピロリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピペリジニル、ピぺラジニル、［１，３］ジオキソラン、オキサゾリジニル、イソキサゾリジニル、モルホリニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、キノキサリニル、ピリダジノニル（pyridazinonyl）、テ
トラヒドロフリルおよびデカリンから選択され；好ましくは、非環式基は、セリノール骨格またはジエタノールアミン骨格から選択される。
ある特定の実施形態では、本発明の方法における使用のためのＲＮＡｉ薬剤は、ＡＴ３ＳＣ－００１（ＡＤ－５７２１３－センス鎖：５’－ＧｆｓｇｓＵｆｕＡｆａＣｆａＣｆＣｆＡｆｕＵｆｕＡｆｃＵｆｕＣｆａＡｆ－３’（配列番号１３）およびアンチセンス鎖：５’－ｕｓＵｆｓｇＡｆａＧｆｕＡｆａＡｆｕｇｇＵｆｇＵｆｕＡｆａＣｆｃｓａｓｇ
－３’（配列番号１４）、ここでａ、ｃ、ｇ、およびｕは２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）Ａ、Ｃ、Ｇ、またはＵであり；Ａｆ、Ｃｆ、ＧｆまたはＵｆは２’－フルオロＡ、Ｃ、ＧまたはＵであり；ｓはホスホロチオエート連結である）である。
これらの薬剤は、リガンドをさらに含み得る。
リガンド
本発明の二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）薬剤は、場合により１つまたはそれ以上のリガンドとコンジュゲートしている。リガンドは、３’末端、５’末端、または両端において、センス鎖、アンチセンス鎖、または両方の鎖と結合している。例えば、リガンドはセンス鎖にコンジュゲートしている。好ましい実施形態では、リガンドはセンス鎖の３’末端とコンジュゲートしている。
一実施形態では、リガンドは、単糖のような炭水化物コンジュゲートである。一実施形態では、リガンドは、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）またはＧａｌＮＡｃ誘導体である。本発明の特定の実施形態では、ＧａｌＮＡｃまたはＧａｌＮＡｃ誘導体は、本発明のｉＲＮＡ薬剤に一価のリンカーを介して結合する。いくつかの実施形態では、ＧａｌＮＡｃまたはＧａｌＮＡｃ誘導体は、本発明のｉＲＮＡ薬剤に二価のリンカーを介して結合する。本発明のさらに他の実施形態では、ＧａｌＮＡｃまたはＧａｌＮＡｃ誘導体は、本発明のｉＲＮＡ薬剤に三価のリンカーを介して結合する。
一実施形態では、本発明の組成物および方法における使用のための炭水化物コンジュゲートは、
Figure 2023123756000010
Figure 2023123756000011
Figure 2023123756000012
Figure 2023123756000013
Figure 2023123756000014
 からなる群から選択される。
一実施形態では、ＧａｌＮＡｃまたはＧａｌＮＡｃ誘導体はＧａｌＮＡｃ３：
Figure 2023123756000015
 である。
いくつかの実施形態では、リガンド、例えばＧａｌＮＡｃリガンドは、ＲＮＡｉ薬剤の３’末端に結合する。一実施形態では、ＲＮＡｉ薬剤は以下の図式
Figure 2023123756000016
 （式中、ＸはＯまたはＳである）
に示すように、リガンド、例えばＧａｌＮＡｃリガンドとコンジュゲートしている。一実施形態では、ＸはＯである。
様々な物質が本発明のＲＮＡｉ薬剤に結合し得る。好ましい成分は、介在するテザーを介して直接または間接のいずれかで、好ましくは共有結合により結合するリガンドである。
好ましい実施形態では、リガンドは、このリガンドが組み込まれる分子の分布、標的化、または寿命を変更する。好ましい実施形態では、リガンドは、例えば、このようなリガンドのない種と比較して、選択された標的、例えば分子、細胞もしくは細胞型、区画、受容体、例えば細胞もしくは器官の区画、身体の組織、器官または領域に対する向上した親和性を提供する。選択された標的に対する向上した親和性を提供するリガンドは、標的化リガンドとも呼ばれる。
いくつかのリガンドは、エンドソーム溶解特性を有し得る。エンドソーム溶解リガンドは、エンドソームの溶解および／または本発明の組成物、もしくはその成分の、エンドソームから細胞の細胞質への輸送を促進する。エンドソーム溶解リガンドは、ｐＨ依存的膜活性および膜融合性を示すポリアニオン性ペプチドまたはペプチド模倣体であり得る。一実施形態では、エンドソーム溶解リガンドは、エンドソームのｐＨでのその活性型立体配座をとると推定される。「活性型」立体配座は、エンドソーム溶解リガンドがエンドソームの溶解および／または本発明の組成物、もしくはその成分の、エンドソームから細胞の細胞質への輸送を促進する立体配座である。例示的なエンドソーム溶解リガンドとしては、ＧＡＬＡペプチド（Ｓｕｂｂａｒａｏら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１９８７、２６：２９６４～２９７２頁）、ＥＡＬＡペプチド（Ｖｏｇｅｌら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１９９６、１１８：１５８１～１５８６頁）、およびそれらの誘導体（Ｔｕｒｋ
ｅｔ ａｌ．、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ、２００２、１５５９：５６～６８頁）が挙げられる。一実施形態では、エンドソーム溶解成分は、ｐＨの変化に応じて電荷またはプロトン化の変化を起こす化学基（例えば、アミノ酸）を含有し得る。エンドソーム溶解成分は直鎖状または分枝鎖状であり得る。
リガンドは、輸送、ハイブリダイゼーション、および特異性の特性を向上することができ、結果として得られる天然もしくは修飾オリゴリボヌクレオチド、または本明細書に記載するモノマーおよび／もしくは天然もしくは修飾リボヌクレオチドの任意の組み合わせを含むポリマー分子のヌクレアーゼ耐性も向上し得る。
リガンドは一般に、例えば、取り込みを増強するための治療用修飾因子；例えば、分布をモニターするための診断化合物またはレポーター基；架橋剤；およびヌクレアーゼ耐性を付与する部分を含み得る。一般的な例としては、脂質、ステロイド、ビタミン、糖、タンパク質、ペプチド、ポリアミン、およびペプチド模倣体が挙げられる。
リガンドは、タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）、またはグロブリン）；炭水化物（例えば、デキストラン、プルラン、キチン、キトサン、イヌリン、シクロデキストリン、またはヒアルロン酸）；または脂質のような天然の物質を含み得る。リガンドはまた、合成ポリマー、例えば、合成ポリアミノ酸、オリゴヌクレオチド（例えば、アプタマー）のような組換えまたは合成分子であり得る。ポリアミノ酸の例としては、ポリアミノ酸は、ポリリジン（ＰＬＬ）、ポリＬ－アスパラギン酸、ポリＬ－グルタミン酸、スチレン－マレイン酸無水物コポリマー、ポリ（Ｌ－ラクチド－コ－グリコリド）コポリマー、ジビニルエーテル－無水マレイン酸コポリマー、Ｎ－（２－ヒドロキシプロピル）メタクリルアミドコポリマー（ＨＭＰＡ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリウレタン、ポリ（２－エチルアクリル酸）、Ｎ－イソプロピルアクリルアミドポリマー、またはポリホスファジンである。ポリアミンの例としては、ポリエチレンイミン、ポリリジン（ＰＬＬ）、スペルミン、スペルミジン、ポリアミン、疑似ペプチド－ポリアミン、ペプチド模倣ポリアミン、デンドリマーポリアミン、アルギニン、アミジン、プロタミン、カチオン性脂質、カチオン性ポルフィリン、ポリアミンの第四級塩、またはα－ヘリックスペプチドが挙げられる。
リガンドはまた、標的基、例えば細胞または組織標的剤、例えば、レクチン、糖タンパク質、脂質、またはタンパク質、例えば腎細胞のような特定の細胞型に結合する抗体を含み得る。標的基は、サイロトロピン、メラノトロピン、レクチン、糖タンパク質、界面活性剤タンパク質Ａ、ムチン炭水化物、多価ラクトース、多価ガラクトース、Ｎ－アセチル－ガラクトサミン、Ｎ－アセチル－グルコサミン、多価マンノース、多価フコース、グリコシル化ポリアミノ酸、多価ガラクトース、トランスフェリン、ビスホスホネート、ポリグルタメート、ポリアスパルテート、脂質、コレステロール、ステロイド、胆汁酸、フォレート、ビタミンＢ１２、ビオチン、ＲＧＤペプチド、ＲＧＤペプチド模倣体またはアプタマーであり得る。
リガンドの他の例としては、色素、挿入剤（例えば、アクリジン）、架橋剤（例えば、ソラレン、マイトマイシンＣ）、ポルフィリン（ＴＰＰＣ４、テキサフィリン、サフィリン）、多環式芳香族炭化水素（例えば、フェナジン、ジヒドロフェナジン）、人工エンドヌクレアーゼ、またはキレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）、親油性分子、例えば、コレステロール、コール酸、アダマンタン酢酸、１－ピレン酪酸、ジヒドロテストステロン、１，３－ビス－Ｏ（ヘキサデシル）グリセロール、ゲラニルオキシへキシル基、ヘキサデシルグリセロール、ボルネオール、メントール、１，３－プロパンジオール、ヘプタデシル基、パルミチン酸、ミリスチン酸、Ｏ３－（オレオイル）リトコール酸、Ｏ３－（オレオイル）コレン酸、ジメトキシトリチル、またはフェノキサジン）およびペプチドコンジュゲート（例えば、アンテナペディアペプチド、Ｔａｔペプチド）、アルキル化剤、リン酸、アミノ、メルカプト、ＰＥＧ（例えば、ＰＥＧ－４０Ｋ）、ＭＰＥＧ、［ＭＰＥＧ］２、ポリアミノ、アルキル、置換アルキル、放射性標識マーカー、酵素、ハプテン（例えば、ビオチン）、輸送／吸収促進剤（例えば、アスピリン、ビタミンＥ、葉酸）、合成リボヌクレアーゼ（例えば、イミダゾール、ビスイミダゾース、ヒスタミン、イミダゾールクラスター、アクリジン－イミダゾールコンジュゲート、Ｅｕ３＋テトラアザ大員環複合体）、ジニトロフェニル、ＨＲＰ、またはＡＰが挙げられる。
リガンドは、タンパク質、例えば、糖タンパク質、またはペプチド、例えば、コリガン
ド、または抗体、例えば、がん細胞、内皮細胞、もしくは骨細胞のような特定の細胞型に結合する抗体に対する特異親和性を有する分子であり得る。リガンドはまた、ホルモンおよびホルモン受容体を含んでもよい。リガンドはまた、脂質、レクチン、炭水化物、ビタミン、補因子、多価ラクトース、多価ガラクトース、Ｎ－アセチル－ガラクトサミン、Ｎ－アセチル－グルコサミン、多価マンノース、多価フコース、またはアプタマーのような非ペプチド種を含み得る。リガンドは、例えば、リポ多糖、ｐ３８ＭＡＰキナーゼの活性化因子、またはＮＦ－κＢの活性化因子であり得る。
リガンドは、例えば、細胞の微小管、マイクロフィラメント、および／または中間径フィラメントを破壊することによって、例えば、細胞骨格を破壊することによって、細胞中へのｉＲＮＡ薬剤の取り込みを向上させ得る物質、例えば薬物であり得る。薬物は、例えば、タクソン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、サイトカラシン、ノコダゾール、ジャスプラキノリド、ラトランクリンＡ、ファロイジン、スウィンホリドＡ、インダノシン、またはミオセルビンであり得る。
リガンドは、例えば、炎症反応を活性化することによって、オリゴヌクレオチドの細胞への取り込みを増加させることができる。このような効果を有し得る例示的なリガンドとしては、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦアルファ）、インターロイキン－１ベータ、またはガンマインターフェロンが挙げられる。
一態様では、リガンドは、脂質または脂質ベースの分子である。このような脂質または脂質ベースの分子は、好ましくは血清タンパク質、例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）に結合する。ＨＳＡ結合リガンドは、コンジュゲートが、標的組織、例えば、身体の非腎臓標的組織に分布するのを可能にする。例えば、標的組織は、肝臓の実質細胞を含む肝臓であってもよい。ＨＳＡに結合し得る他の分子もリガンドとして使用できる。例えば、ナプロキセンまたはアスピリンを使用できる。脂質または脂質ベースのリガンドは、（ａ）コンジュゲートの分解に対する耐性を増大させ、（ｂ）標的細胞もしくは細胞膜への標的化もしくは輸送を増大させ、および／または（ｃ）血清タンパク質、例えば、ＨＳＡに対する結合を調節するために使用できる。
脂質ベースのリガンドは、標的組織に対するコンジュゲートの結合を調節、例えば、制御するために使用できる。例えば、ＨＳＡにより強く結合する脂質または脂質ベースのリガンドは、腎臓を標的とする可能性が低く、したがって、体内から除去される可能性が低い。ＨＳＡにそれほど強く結合しない脂質または脂質ベースのリガンドは、コンジュゲートが腎臓を標的にするように使用できる。
好ましい実施形態では、脂質ベースのリガンドはＨＳＡに結合する。好ましくは、脂質ベースのリガンドは、このコンジュゲートが好ましくは非腎臓組織に分散するように十分な親和性でＨＳＡに結合する。しかしながら、この親和性は、ＨＳＡ－リガンド結合が反転されないような強くない親和性であることが好ましい。
別の好ましい実施形態では、脂質ベースのリガンドは、ＨＳＡに弱く結合するか、または全く結合しないため、このコンジュゲートは、好ましくは腎臓に分散される。腎臓細胞を標的とする他の部分も、脂質ベースのリガンドの代わりに、またはこれに加えて使用することができる。
別の態様では、リガンドは、標的細胞、例えば増殖細胞によって取り込まれる部分、例えば、ビタミンである。これらは、例えば悪性型または非悪性型の、例えば、がん細胞の望ましくない細胞増殖を特徴とする障害を処置するのに特に有用である。例示的なビタミンとしては、ビタミンＡ、Ｅ、およびＫが挙げられる。他の例示的なビタミンとしては、
ビタミンＢ、例えば、葉酸、Ｂ１２、リボフラビン、ビオチン、ピリドキサール、またはがん細胞によって取り込まれる他のビタミンもしくは栄養素が挙げられる。また、ＨＡＳ、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）も含む。
別の態様では、リガンドは、細胞透過剤、好ましくはヘリックス型の細胞透過剤である。好ましくは、薬剤は両親媒性である。例示的な薬剤は、ｔａｔまたはアンテナペディアのようなペプチドである。薬剤がペプチドである場合、ペプチジル模倣体、反転異性体、非ペプチドまたは偽ペプチド連結、およびＤ－アミノ酸の使用を含む修飾を施すことができる。好ましくは、このヘリックス型の薬剤は、好ましくは親油性相および疎油性相を有するアルファヘリックス型の薬剤である。
リガンドは、ペプチドまたはペプチド模倣体であり得る。ペプチド模倣体（本明細書ではオリゴペプチド模倣体とも呼ばれる）は、天然ペプチドと同様の定められた３次元構造に折りたたむことができる分子である。ペプチド部分またはペプチド模倣体部分は、約５～５０のアミノ酸長、例えば、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、または５０のアミノ酸長であり得る。ペプチドまたはペプチド模倣体は、例えば細胞透過ペプチド、カチオン性ペプチド、両親媒性ペプチド、または疎水性ペプチド（例えば、主にＴｙｒ、Ｔｒｐ、もしくはＰｈｅから構成される）であり得る。ペプチド部分は、デンドリマーペプチド、拘束ペプチド、または架橋ペプチドであり得る。別の代替では、ペプチド部分は、疎水性の膜輸送配列（ＭＴＳ）を含み得る。例示的な疎水性ＭＴＳ含有ペプチドは、アミノ酸配列ＡＡＶＡＬＬＰＡＶＬＬＡＬＬＡＰ（配列番号９）を有するＲＦＧＦである。疎水性ＭＴＳを含有するＲＦＧＦ類似体（例えば、アミノ酸配列ＡＡＬＬＰＶＬＬＡＡＰ（配列番号１０））も標的化部分であり得る。ペプチド部分は、「送達」ペプチドであってもよく、この送達ペプチドは、ペプチド、オリゴヌクレオチド、およびタンパク質を含む大きな極性分子を、細胞膜を通過して運搬することができる。例えば、ＨＩＶ Ｔａｔタンパク質由来の配列（ＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲＰＰＱ（配列番号１１））およびショウジョウバエアンテナペディアタンパク質由来の配列（ＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ（配列番号１２））は、送達ペプチドとして機能できることが見出されている。ファージディスプレイライブラリー、または１ビーズ１化合物（ＯＢＯＣ）コンビナトリアルライブラリーから同定されたペプチドのようなペプチドまたはペプチド模倣体は、ＤＮＡのランダム配列によってコードされる（Ｌａｍら、Ｎａｔｕｒｅ、３５４：８２～８４頁、１９９１）。好ましくは、組み込まれたモノマー単位を介してｉＲＮＡ薬剤に連結されたペプチドまたはペプチド模倣体は、アルギニン－グリシン－アスパラギン酸（ＲＧＤ）－ペプチドまたはＲＧＤ模倣体のような細胞標的化ペプチドである。ペプチド部分は、約５アミノ酸長～約４０アミノ酸長の範囲であり得る。ペプチド部分は、安定性または直接的な立体配座特性を高めるためのような、構造修飾を有し得る。下記の構造修飾のいずれも利用できる。ＲＧＤペプチド部分は、内皮腫瘍細胞または乳がん腫瘍細胞のような腫瘍細胞を標的とするために使用できる（Ｚｉｔｚｍａｎｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、６２：５１３９～４３頁、２００２）。ＲＧＤペプチドは、肺、腎臓、脾臓、または肝臓を含む種々の他の組織の腫瘍に対するｉＲＮＡ薬剤の標的化を促進することができる（Ａｏｋｉら、Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ８：７８３～７８７、２００１）。好ましくは、ＲＧＤペプチドは、腎臓に対するｉＲＮＡ薬剤の標的化を促進する。ＲＧＤペプチドは、直鎖状または環状であってよく、特定の組織に対する標的化を促進するために修飾、例えばグリコシル化またはメチル化される。例えば、グリコシル化ＲＧＤペプチドは、αｖβ３を発現する腫瘍細胞にｉＲＮＡ薬剤を送達できる（Ｈａｕｂｎｅｒら、Ｊｏｕｒ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．、４２：３２６～３３６頁、２００１）。増殖細胞に豊富なマーカーを標的とするペプチドを使用できる。例えば、ＲＧＤ含有ペプチドおよびペプチド模倣体は、がん細胞、特に、インテグリンを提示する細胞を標的とすることができる。したがって、ＲＧＤペプチド、ＲＧＤを含有する環状ペプチド、Ｄ－アミノ酸を含むＲＧＤペプチド、ならびに合成ＲＧＤ模倣体を使用できる。ＲＧＤに加えて、インテグ
リンリガンドを標的とする他の部分を使用できる。一般に、このようなリガンドは、増殖細胞および血管新生を制御するために使用できる。この種のリガンドの好ましいコンジュゲートは、ＰＥＣＡＭ－１、ＶＥＧＦ、または他のがん遺伝子、例えば、本明細書に記載のがん遺伝子を標的とする。
「細胞透過ペプチド」は、細胞、例えば、細菌細胞もしくは真菌細胞のような微生物細胞、またはヒト細胞のような哺乳動物細胞を透過できる。微生物細胞を透過するペプチドは、例えば、α－ヘリックス直鎖状ペプチド（例えば、ＬＬ－３７もしくはセロピンＰ１）、ジスルフィド結合含有ペプチド（例えば、α－ディフェンシン、β－ディフェンシン、もしくはバクテネシン）、または１種もしくは２種の優勢なアミノ酸のみを含有するペプチド（例えば、ＰＲ－３９もしくはインドリシジン）であってもよい。細胞透過ペプチドは、核局在化シグナル（ＮＬＳ）も含み得る。例えば、細胞透過ペプチドは、ＨＩＶ－１ｇｐ４１の融合ペプチドドメインおよびＳＶ４０ラージＴ抗原のＮＬＳに由来するＭＰＧのような、二部両親媒性ペプチドであり得る（Ｓｉｍｅｏｎｉら、Ｎｕｃｌ．ＡｃｉｄｓＲｅｓ．３１：２７１７～２７２４頁、２００３）。
一実施形態では、標的化ペプチドは、両親媒性α－ヘリックスペプチドであり得る。例示的な両親媒性α－ヘリックスペプチドとしては、限定はされないが、セクロピン、リコトキシン、パラダキシン、ブフォリン、ＣＰＦ、ボンビニン－様ペプチド（ＢＬＰ）、カテリシジン、セラトトキシン、エボヤ（Ｓ．ｃｌａｖａ）ペプチド、メクラウナギ腸抗菌ペプチド（ＨＦＩＡＰ）、マガイニン、ブレビニン－２、デルマセプチン、メリチン、プレウロシジン、Ｈ２Ａペプチド、アフリカツメガエル（Ｘｅｎｏｐｕｓ）ペプチド、エスクレンチニス－１、およびカエリンを含む。好ましくは、多数の因子が、ヘリックス安定性の完全性を維持するとみなされる。例えば、最大数のヘリックス安定化残基（例えば、ｌｅｕ、ａｌａ、またはｌｙｓ）を利用し、最少のヘリックス不安定化残基（例えば、プロリン、または環状モノマー単位）を利用する。キャッピング残基も考慮される（例えば、Ｇｌｙは、例示的なＮ－キャッピング残基であり、および／またはＣ末端アミド化は、追加的な水素結合を提供してヘリックスを安定するために使用できる。ｉ±３位、またはｉ±４位離れた、反対の電荷を有する残基間の塩架橋の形成によって安定化することができる。リジン、アルギニン、ホモ－アルギニン、オルニチン、またはヒスチジンのようなカチオン性残基は、アニオン性残基であるグルタミン酸またはアスパラギン酸と塩架橋を形成し得る。
ペプチドおよびペプチド模倣体リガンドとしては、天然または修飾ペプチド、例えば、ＤもしくはＬペプチド；α、β、もしくはγペプチド；Ｎ－メチルペプチド；アザペプチド；１つもしくはそれ以上の尿素、チオ尿素、カルバミン酸、もしくはスルホニル尿素連結で置換された１つもしくはそれ以上のアミド結合、すなわちペプチド連結を有するペプチド；または環状ペプチドを有するものを含む。
標的化リガンドは、特定の受容体を標的化することができる任意のリガンドであり得る。例としては：葉酸塩、ＧａｌＮＡｃ、ガラクトース、マンノース、マンノース－６Ｐ、ＧａｌＮＡｃクラスター、マンノースクラスター、ガラクトースクラスターのような糖クラスター、またはアプタマーを含む。クラスターは、２つ以上の糖単位の組み合わせである。標的化リガンドとしては、インテグリン受容体リガンド、ケモカイン受容体リガンド、トランスフェリン、ビオチン、セロトニン受容体リガンド、ＰＳＭＡ、エンドセリン、ＧＣＰＩＩ、ソマトスタチン、ＬＤＬ、およびＨＤＬリガンドも挙げられる。リガンドはまた、核酸、例えば、アプタマーをベースにし得る。アプタマーは、未修飾でもよいし、または本明細書に開示する修飾の任意の組み合わせを有し得る。
エンドソーム放出剤としては、イミダゾール、ポリまたはオリゴイミダゾール、ＰＥＩ
、ペプチド、融合性ペプチド、ポリカルボキシレート、ポリカチオン、マスクオリゴもしくはポリカチオンもしくはアニオン、アセタール、ポリアセタール、ケタール／ポリケチアル、オルトエステル、マスクもしくは非マスクカチオン、またはアニオン電荷を有するポリマー、マスクもしくは非マスクカチオン、またはアニオン電荷を有するデンドリマーを含む。
ＰＫ調節剤とは、薬物動態学的調節剤を意味する。ＰＫ調節剤としては、親油性物質、胆汁酸、ステロイド、リン脂質類似体、ペプチド、タンパク質結合剤、ＰＥＧ、ビタミンなどが挙げられる。例示的なＰＫ調節剤としては、限定はされないが、コレステロール、脂肪酸、コール酸、リトコール酸、ジアルキルグリセリド、ジアシルグリセリド、リン脂質、スフィンゴ脂質、ナプロキセン、イブプロフェン、ビタミンＥ、ビオチンなどが挙げられる。多数のホスホロチオエート連結を含むオリゴヌクレオチドも、血清タンパク質に結合することが公知であり、したがって、骨格に多数のホスホロチオエート連結を含む短鎖オリゴヌクレオチド、例えば、約５塩基、１０塩基、１５塩基、または２０塩基のオリゴヌクレオチドも、リガンドとして（例えば、ＰＫ調節リガンドとして）本発明に適用可能である。
さらに、血清成分（例えば、血清タンパク質）に結合するアプタマーも、ＰＫ調節リガンドとして本発明に適用可能である。
本発明に適用可能な他のリガンドコンジュゲートは、２００４年８月１０日に出願された米国特許第１０／９１６，１８５号；２００４年９月２１日に出願された同第１０／９４６，８７３号；２００７年８月３日に出願された同第１０／８３３，９３４号；２００５年４月２７日に出願された同第１１／１１５，９８９号、および２００７年１１月２１日に出願された同第１１／９４４，２２７号に記載され、その内容全体を参照によって本明細書に組み入れる。
２つ以上のリガンドが存在する場合、リガンドは、すべて同じ特性を有してもよく、すべてが異なる特性を有してもよく、またはいくつかのリガンドが同じ特性を有する一方、他のリガンドが異なる特性を有してもよい。例えば、リガンドは、標的化特性を有してもよく、エンドソーム溶解活性を有してもよく、またはＰＫ調節特性を有してもよい。好ましい実施形態では、すべてのリガンドが異なる特性を有する。
リガンドは、様々な位置、例えば３’末端、５’末端、および／または内部位置で、オリゴヌクレオチドに結合できる。好ましい実施形態では、リガンドは、介在テザー、例えば、本明細書に記載の担体を介してオリゴヌクレオチドに結合する。モノマーが成長している鎖に組み込まれる場合、リガンドまたはテザーリガンドは、このモノマーに存在し得る。いくつかの実施形態では、リガンドは、「前駆体」モノマーが、成長している鎖に組み込まれた後、この「前駆体」モノマーへの結合によって組み込まれる。例えば、アミノ末端テザー（すなわち、リガンドが結合していない）、例えば、ＴＡＰ－（ＣＨ２）ｎＮＨ２を有するモノマーは、成長しているオリゴヌクレオチド鎖に組み込まれる。続く操作において、すなわち、前駆体モノマーが鎖に組み込まれた後、リガンドの求電子基と前駆体モノマーのテザーの末端求核基との結合によって、求電子基、例えば、ペンタフルオロフェニルエステルまたはアルデヒド基を有するリガンドを、その後、前駆体モノマーに結合させる。
別の例では、クリック化学反応に参加するのに適した化学基を有するモノマーを、例えば、アジドまたはアルキン末端のテザー／リンカーに組み込むことができる。続く操作において、すなわち前駆体モノマーが鎖に組み込まれた後、相補的な化学基、例えば、アルキンまたはアジドを有するリガンドを、アルキンおよびアジドを共に結合することによっ
て前駆体モノマーに結合できる。
二本鎖オリゴヌクレオチドにおいて、リガンドは１つまたは両方の鎖に結合できる。いくつかの実施形態では、二本鎖ｉＲＮＡ薬剤は、センス鎖とコンジュゲートしたリガンドを含有する。他の実施形態では、二本鎖ｉＲＮＡ薬剤は、アンチセンス鎖とコンジュゲートしたリガンドを含有する。
いくつかの実施形態では、リガンドは核酸分子の核酸塩基、糖部分、またはヌクレオシド間連結にコンジュゲートできる。プリン核酸塩基またはその誘導体に対するコンジュゲーションは、環内原子および環外原子を含む任意の位置に生じ得る。いくつかの実施形態では、プリン核酸塩基の２位、６位、７位、または８位が、コンジュゲート部分に結合している。また、ピリミジン核酸塩基またはその誘導体に対するコンジュゲーションは、任意の位置で生じ得る。いくつかの実施形態では、ピリミジン核酸塩基の２位、５位、および６位を、コンジュゲート部分と置換できる。ヌクレオシドの糖部分に対するコンジュゲーションは、任意の炭素原子で生じ得る。コンジュゲート部分に結合できる糖部分の炭素原子の例には、２’、３’、および５’炭素原子を含む。１’位も、脱塩基残基のようなコンジュゲート部分に結合できる。ヌクレオシド間連結も、コンジュゲート部分を保持できる。リン含有連結（例えば、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロアミデートなど）の場合、コンジュゲート部分は、リン原子に直接結合する、またはリン原子に結合しているＯ、Ｎ、もしくはＳ原子に結合することができる。アミンまたはアミドを含有するヌクレオシド間連結（例えば、ＰＮＡ）の場合、コンジュゲート部分は、アミンもしくはアミドの窒素原子に、または隣接する炭素原子に結合できる。
ＲＮＡ干渉の分野における任意の好適なリガンドを使用するが、リガンドは、典型的には炭水化物、例えば単糖（ＧａｌＮＡｃのような）、二糖、三糖、四糖、多糖である。
リガンドを核酸にコンジュゲートするリンカーは、上記で論じたものを含む。例えば、リガンドは、一価、二価、または三価の分枝リンカーを介して結合する１つまたはそれ以上のＧａｌＮＡｃ（Ｎ－アセチルグルコサミン）誘導体であり得る。
一実施形態では、本発明のｄｓＲＮＡは、式（ＩＶ）～（ＶＩＩ）：
Figure 2023123756000017
 のいずれかに示される構造を含む二価および三価の分枝リンカーとコンジュゲートし、
式中、
ｑ２Ａ、ｑ２Ｂ、ｑ３Ａ、ｑ３Ｂ、ｑ４Ａ、ｑ４Ｂ、ｑ５Ａ、ｑ５Ｂ、およびｑ５Ｃは、出現する毎に独立して０～２０を表し、繰返し単位は同一または異なっていてもよく；
Ｐ２Ａ、Ｐ２Ｂ、Ｐ３Ａ、Ｐ３Ｂ、Ｐ４Ａ、Ｐ４Ｂ、Ｐ５Ａ、Ｐ５Ｂ、Ｐ５Ｃ、Ｔ２Ａ、Ｔ２Ｂ、Ｔ３Ａ、Ｔ３Ｂ、Ｔ４Ａ、Ｔ４Ｂ、Ｔ５Ａ、Ｔ５Ｂ、Ｔ５Ｃがそれぞれ、出現する毎に独立して、存在しないか、ＣＯ、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、ＯＣ（Ｏ）、ＮＨＣ（Ｏ）、ＣＨ２、ＣＨ２ＮＨまたはＣＨ２Ｏであり；
Ｑ２Ａ、Ｑ２Ｂ、Ｑ３Ａ、Ｑ３Ｂ、Ｑ４Ａ、Ｑ４Ｂ、Ｑ５Ａ、Ｑ５Ｂ、Ｑ５Ｃが、出現する毎に独立して、存在しないか、アルキレン、置換アルキレンであり、ここで１つまたはそれ以上のメチレンが、Ｏ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）、ＳＯ２、Ｎ（ＲＮ）、Ｃ（Ｒ’）＝Ｃ（Ｒ’’）、Ｃ≡ＣまたはＣ（Ｏ）のうちの１つまたはそれ以上により中断または終端されてもよく；
Ｒ２Ａ、Ｒ２Ｂ、Ｒ３Ａ、Ｒ３Ｂ、Ｒ４Ａ、Ｒ４Ｂ、Ｒ５Ａ、Ｒ５Ｂ、Ｒ５Ｃがそれぞれ、出現する毎に独立して、存在しないか、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、ＣＨ２、Ｃ（Ｏ）Ｏ、Ｃ（Ｏ）ＮＨ、ＮＨＣＨ（Ｒａ）Ｃ（Ｏ）、－Ｃ（Ｏ）－ＣＨ（Ｒａ）－ＮＨ－、ＣＯ、ＣＨ＝Ｎ－Ｏ、
Figure 2023123756000018
 またはヘテロシクリルであり、
Ｌ２Ａ、Ｌ２Ｂ、Ｌ３Ａ、Ｌ３Ｂ、Ｌ４Ａ、Ｌ４Ｂ、Ｌ５Ａ、Ｌ５Ｂ、およびＬ５Ｃが、リガンドを表し；すなわち、それぞれ、出現する毎に独立して、単糖（ＧａｌＮＡｃのような）、二糖、三糖、四糖、オリゴ糖、または多糖であり；
Ｒａが、Ｈまたはアミノ酸側鎖である。
三価コンジュゲートＧａｌＮＡｃ誘導体は、式（ＶＩＩ）：
Figure 2023123756000019
 のもののような、標的遺伝子の発現を阻害するためにＲＮＡｉ薬剤との使用に特に有用であり、
式中、Ｌ５Ａ、Ｌ５ＢおよびＬ５Ｃが、ＧａｌＮＡｃ誘導体のような単糖を表す。ＧａｌＮＡｃ誘導体とコンジュゲートする好適な二価および三価の分枝リンカー基の例としては、限定はされないが、以下の化合物：
Figure 2023123756000020
Figure 2023123756000021
Figure 2023123756000022
 を含む。
ＲＮＡコンジュゲートの調製を教示する代表的な米国特許としては、限定はされないが、米国特許第４，８２８，９７９号；第４，９４８，８８２号；第５，２１８，１０５号；第５，５２５，４６５号；第５，５４１，３１３号；第５，５４５，７３０号；第５，５５２，５３８号；第５，５７８，７１７号、第５，５８０，７３１号；第５，５９１，５８４号；第５，１０９，１２４号；第５，１１８，８０２号；第５，１３８，０４５号；第５，４１４，０７７号；第５，４８６，６０３号；第５，５１２，４３９号；第５，５７８，７１８号；第５，６０８，０４６号；第４，５８７，０４４号；第４，６０５，７３５号；第４，６６７，０２５号；第４，７６２，７７９号；第４，７８９，７３７号；第４，８２４，９４１号；第４，８３５，２６３号；第４，８７６，３３５号；第４，９０４，５８２号；第４，９５８，０１３号；第５，０８２，８３０号；第５，１１２，９６３号；第５，２１４，１３６号；第５，０８２，８３０号；第５，１１２，９６３号；第５，２１４，１３６号；第５，２４５，０２２号；第５，２５４，４６９号；第５，２５８，５０６号；第５，２６２，５３６号；第５，２７２，２５０号；第５，２９２，８７３号；第５，３１７，０９８号；第５，３７１，２４１号、第５，３９１，７２３号；第５，４１６，２０３号、第５，４５１，４６３号；第５，５１０，４７５号；第５，５１２，６６７号；第５，５１４，７８５号；第５，５６５，５５２号；第５，５６７，８１０号；第５，５７４，１４２号；第５，５８５，４８１号；第５，５８７，３７１号；第５，５９５，７２６号；第５，５９７，６９６号；第５，５９９，９２３号；第５，５９９，９２８号、および第５，６８８，９４１号；第６，２９４，６６４号；第６，３２０，０１７号；第６，５７６，７５２号；第６，７８３，９３１号；第６，９００，２９７号；第７，０３７，６４６号；第８，１０６，０２２号を含み、そのそれぞれの内容全体を参照によって本明細書に組み入れる。
所与の化合物のすべての位置が均一に修飾されている必要はなく、実際には、上記の修飾のうちの１つより多くを、単一の化合物中にまたはさらにはｉＲＮＡ内の単一のヌクレ
オシドに組み込むことができる。本発明は、キメラ化合物であるｉＲＮＡ化合物も含む。
本発明に関連して、「キメラ」ｉＲＮＡ化合物または「キメラ」は、少なくとも１つのモノマー単位、すなわち、ｄｓＲＮＡ化合物の場合はヌクレオチドからそれぞれ構成される２つ以上の化学的に異なる領域を含有するｉＲＮＡ化合物、好ましくは、ｄｓＲＮＡである。これらのｉＲＮＡは、典型的には少なくとも１つの領域を含有し、ここで、ＲＮＡは、ヌクレアーゼ分解に対する耐性の増加、細胞取り込みの増加、および／または標的核酸に対する結合親和性の増加をｉＲＮＡに与えるように修飾される。ｉＲＮＡのさらなる領域は、ＲＮＡ：ＤＮＡまたはＲＮＡ：ＲＮＡハイブリッドを切断することが可能な酵素のための基質としての役割を果たし得る。例として、ＲＮアーゼＨは、ＲＮＡ：ＤＮＡ二重鎖のＲＮＡ鎖を切断する細胞エンドヌクレアーゼである。したがって、ＲＮアーゼＨの活性化は、ＲＮＡ標的の切断をもたらし、それによって、遺伝子発現のｉＲＮＡ阻害の効率を大幅に高める。その結果として、キメラｄｓＲＮＡが使用される場合、同じ標的領域にハイブリダイズするホスホロチオエートデオキシｄｓＲＮＡと比較して、より短いｉＲＮＡによって同等の結果が得られることが多い。ＲＮＡ標的の切断は、ゲル電気泳動によって、および必要に応じて、当技術分野において公知の関連する核酸ハイブリダイゼーション技術によって、通例検出される。
特定の例では、ｉＲＮＡのＲＮＡは、非リガンド基によって修飾される。いくつかの非リガンド分子が、ｉＲＮＡの活性、細胞分布または細胞取り込みを向上させるためにｉＲＮＡとコンジュゲートしており、このようなコンジュゲートを行うための手順は、科学文献で入手可能である。このような非リガンド部分は、コレステロール（Ｋｕｂｏ，Ｔ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．、２００７，３６５（１）：５４～６１頁；Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９８９、８６：６５５３頁）、コール酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、１９９４、４：１０５３頁）、チオエーテル、例えばヘキシル－Ｓ－トリチルチオール（Ｍａｎｏｈａｒａｎら、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、１９９２、６６０：３０６頁；Ｍａｎｏｈａｒａｎら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔ．、１９９３、３：２７６５頁）、チオコレステロール（Ｏｂｅｒｈａｕｓｅｒら、Ｎｕｃｌ．ＡｃｉｄｓＲｅｓ．、１９９２、２０：５３３頁）、脂肪族鎖、例えば、ドデカンジオールまたはウンデシル残基（Ｓａｉｓｏｎ－Ｂｅｈｍｏａｒａｓら、ＥＭＢＯ Ｊ．、１９９１、１０：１１１頁；Ｋａｂａｎｏｖら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．、１９９０、２５９：３２７頁；Ｓｖｉｎａｒｃｈｕｋら、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ、１９９３、７５：４９頁）、リン脂質、例えば、ジ－ヘキサデシル－ｒａｃ－グリセロールまたはトリエチルアンモニウム１，２－ジ－Ｏ－ヘキサデシル－ｒａｃ－グリセロ－３－Ｈ－ホスホネート（Ｍａｎｏｈａｒａｎら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．、１９９５、３６：３６５１頁；Ｓｈｅａら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、１９９０、１８：３７７７頁）、ポリアミンまたはポリエチレングリコール鎖（Ｍａｎｏｈａｒａｎら、Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ＆ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ、１９９５、１４：９６９頁）、またはアダマンタン酢酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．、１９９５、３６：３６５１頁）、パルミチル部分（Ｍｉｓｈｒａら、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ、１９９５、１２６４：２２９頁）、またはオクタデシルアミンまたはヘキシルアミノ－カルボニル－オキシコレステロール部分（Ｃｒｏｏｋｅら、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．、１９９６、２７７：９２３頁）のような脂質部分を含んでいた。このようなＲＮＡコンジュゲートの調製を教示する代表的な米国特許が上に列挙されている。典型的なコンジュゲーションプロトコルは、配列の１つまたはそれ以上の位置にアミノリンカーを有するＲＮＡの合成を含む。次に、適切なカップリング剤または活性化試薬のいずれかを用いて、アミノ基をコンジュゲートされた分子と反応させる。コンジュゲーション反応は固体担体に依然として結合されたＲＮＡを用いて、または溶液相中のＲＮＡの切断の後に行うことができる。ＨＰＬＣによるＲＮＡコンジュゲート
の精製により、典型的には純粋なコンジュゲートを得る。
いくつかの実施形態では、本発明の二本鎖ＲＮＡｉ薬剤はＡＴ３ＳＣ－００１（ＡＤ－５７２１３）である。
ＩＶ．本発明のｉＲＮＡの送達
細胞、例えば、ヒト対象（例えば、出血性障害を有する対象のような、それを必要とする対象）のような対象中の細胞への本発明のｉＲＮＡの送達は、いくつかの様々な方法で達成できる。例えば、送達は、細胞を、本発明のｉＲＮＡとインビトロまたはインビボのいずれかで接触させることによって行われる。インビボ送達はまた、ｉＲＮＡ、例えばｄｓＲＮＡを含む組成物を対象に投与することによって直接行われる。あるいは、インビボ送達は、ｉＲＮＡの発現をコードし、導く１つまたはそれ以上のベクターを投与することによって、間接的に行われる。これらの代替例は、以下でさらに論じる。
一般に、核酸分子を（インビトロまたはインビボで）送達する任意の方法は、本発明のｉＲＮＡと共に使用するために適合される（例えば、その全体を参照によって本明細書に組み入れる、Ａｋｈｔａｒ Ｓ．ａｎｄ Ｊｕｌｉａｎ ＲＬ．（１９９２）Ｔｒｅｎｄｓ Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２（５）：１３９～１４４頁および国際公開第９４／０２５９５号パンフレット参照）。インビボ送達の場合、ｉＲＮＡ分子を送達するために考慮する因子としては、例えば、送達される分子の生物学的安定性、非特異的効果の防止、および標的組織における送達される分子の蓄積を含む。ｉＲＮＡの非特異的効果は、局所投与によって、例えば、組織への直接注入もしくは移植によって、または製剤を局所的に投与することによって、最小限に抑えられる。処置部位への局所投与は、薬剤の局所濃度を最大にし、薬剤によって悪影響を受けるかまたは薬剤を分解し得る、全身組織への薬剤の曝露を制限し、投与されるｉＲＮＡ分子の総投与量を少なくすることができる。いくつかの研究が、ｉＲＮＡが局所投与される場合の遺伝子産物のノックダウンの成功を示している。例えば、カニクイザルのガラス体内注射によるＶＥＧＦ ｄｓＲＮＡの眼内送達（Ｔｏｌｅｎｔｉｎｏ，ＭＪ．ら（２００４）Ｒｅｔｉｎａ ２４：１３２～１３８頁）およびマウスの網膜下注射（Ｒｅｉｃｈ，ＳＪ．ら（２００３）Ｍｏｌ．Ｖｉｓ．９：２１０～２１６頁）は両方とも、加齢性黄斑変性症の実験モデルにおける新血管形成を防ぐことを示した。さらに、マウスにおけるｄｓＲＮＡの直接腫瘍内投与が腫瘍容積を減少させ（Ｐｉｌｌｅ，Ｊ．ら（２００５）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１１：２６７～２７４頁）、腫瘍担持マウスの生存を延長し得る（Ｋｉｍ，ＷＪ．ら（２００６）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１４：３４３～３５０頁；Ｌｉ，Ｓ．ら（２００７）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１５：５１５～５２３頁）。ＲＮＡ干渉は、直接注入によるＣＮＳへの局所送達（Ｄｏｒｎ，Ｇ．ら（２００４）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ ３２：ｅ４９；Ｔａｎ，ＰＨ．ら（２００５）Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１２：５９～６６頁；Ｍａｋｉｍｕｒａ，Ｈ．ら（２００２）ＢＭＣ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．３：１８頁；Ｓｈｉｓｈｋｉｎａ，ＧＴ．，ら（２００４）Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ １２９：５２１～５２８頁；Ｔｈａｋｋｅｒ，ＥＲ．ら（２００４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０１：１７２７０～１７２７５頁；Ａｋａｎｅｙａ，Ｙ．ら（２００５）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｐｈｙｓｉｏｌ．９３：５９４～６０２頁）および鼻腔内投与による肺への局所送達（Ｈｏｗａｒｄ，ＫＡ．ら（２００６）Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．１４：４７６～４８４頁；Ｚｈａｎｇ，Ｘ．ら（２００４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９：１０６７７～１０６８４頁；Ｂｉｔｋｏ，Ｖ．ら（２００５）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１１：５０～５５頁）による成功も示している。疾患の処置のためにｉＲＮＡを全身投与するために、ＲＮＡは、修飾されるか、あるいは薬剤送達システムを用いて送達され；両方の方法は、インビボでのエンドヌクレアーゼおよびエキソヌクレアーゼによるｄｓＲＮＡの急速な分解を防ぐ役割を果たす。ＲＮＡまたは医薬担体の修飾は、標的組織へのｉＲＮＡ組成物の標的化を可能にし、望ましくないオフターゲット効果を回避することもできる。ｉＲＮＡ分子は、細胞取り込みを向上させ、分解を防ぐコレステロール
のような親油基への化学的コンジュゲーションによって修飾される。例えば、親油性コレステロール部分とコンジュゲートしたＡｐｏＢに対するｉＲＮＡをマウスに全身投与し、肝臓および空腸の両方においてａｐｏＢ ｍＲＮＡのノックダウンを得た（Ｓｏｕｔｓｃｈｅｋ，Ｊ．ら（２００４）Ｎａｔｕｒｅ ４３２：１７３～１７８頁）。アプタマーへのｉＲＮＡのコンジュゲーションは、前立腺がんのマウスモデルにおける腫瘍増殖を阻害し、腫瘍退縮を仲介することが示されている（ＭｃＮａｍａｒａ，ＪＯ．ら（２００６）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２４：１００５～１０１５頁）。代替的な実施形態では、ｉＲＮＡは、ナノ粒子、デンドリマー、ポリマー、リポソーム、またはカチオン性送達システムのような薬剤送達システムを用いて送達される。正に帯電したカチオン性送達システムは、ｉＲＮＡ分子（負に帯電した）の結合を促進し、また、負に帯電した細胞膜における相互作用を向上させて、細胞によるｉＲＮＡの効率的な取り込みを可能にする。カチオン性脂質、デンドリマー、またはポリマーは、ｉＲＮＡに結合されるか、またはｉＲＮＡを包む小胞もしくはミセル（例えば、Ｋｉｍ ＳＨ．ら（２００８）Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ １２９（２）：１０７～１１６頁参照）を形成するように誘導される。小胞またはミセルの形成は、全身投与される場合のｉＲＮＡの分解をさらに防ぐ。カチオン性ｉＲＮＡ複合体を作製し、投与するための方法は、十分当業者の能力の範囲内である（例えば、その全体を参照によって本明細書に組み入れる、Ｓｏｒｅｎｓｅｎ，ＤＲ．ら（２００３）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ ３２７：７６１～７６６頁；Ｖｅｒｍａ，ＵＮ．ら（２００３）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．９：１２９１～１３００頁；Ａｒｎｏｌｄ，ＡＳら（２００７）Ｊ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ．２５：１９７～２０５頁参照）。ｉＲＮＡの全身送達に有用な薬剤送達システムのいくつかの非限定的な例としては、ＤＯＴＡＰ（Ｓｏｒｅｎｓｅｎ，ＤＲ．ら（２００３）、上記参照；Ｖｅｒｍａ，ＵＮ．ら（２００３）、上記参照）、オリゴフェクタミン、「固体核酸脂質粒子」（Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ，ＴＳ．ら（２００６）Ｎａｔｕｒｅ ４４１：１１１～１１４頁）、カルジオリピン（Ｃｈｉｅｎ，ＰＹ．ら（２００５）Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１２：３２１～３２８頁；Ｐａｌ，Ａ．ら（２００５）Ｉｎｔ Ｊ．Ｏｎｃｏｌ．２６：１０８７～１０９１頁）、ポリエチレンイミン（Ｂｏｎｎｅｔ ＭＥ．ら（２００８）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．Ａｕｇ １６ Ｅｐｕｂ ａｈｅａｄ ｏｆ ｐｒｉｎｔ；Ａｉｇｎｅｒ，Ａ．（２００６）Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７１６５９頁）、Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ（ＲＧＤ）ペプチド（Ｌｉｕ，Ｓ．（２００６）Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍ．３：４７２～４８７頁）、およびポリアミドアミン（Ｔｏｍａｌｉａ，ＤＡ．ら（２００７）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．３５：６１～６７頁；Ｙｏｏ，Ｈ．ら（１９９９）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１６：１７９９～１８０４頁）を含む。いくつかの実施形態では、ｉＲＮＡは、全身投与のためにシクロデキストリンと共に複合体を形成する。投与のための方法およびｉＲＮＡおよびシクロデキストリンの医薬組成物が、その全体を参照によって本明細書に組み入れる、米国特許第７，４２７，６０５号に見出される。
Ａ．ベクターでコードされた本発明のｉＲＮＡ
Ｓｅｒｐｉｎｃ１遺伝子を標的とするｉＲＮＡは、ＤＮＡまたはＲＮＡベクターに挿入された転写単位から発現される（例えば、Ｃｏｕｔｕｒｅ，Ａら、ＴＩＧ．（１９９６），１２：５～１０頁；Ｓｋｉｌｌｅｒｎ，Ａ．らの国際ＰＣＴ公開番号国際公開第００／２２１１３号パンフレット、Ｃｏｎｒａｄの国際ＰＣＴ公開番号国際公開第００／２２１１４号パンフレット、およびＣｏｎｒａｄの米国特許第６，０５４，２９９号参照）。発現は、使用される特定の構築物および標的組織または細胞型に応じて、一時的（およそ数時間から数週間）であるかまたは持続される（数週間から数カ月またはそれ以上）。これらの導入遺伝子は、線状構築物、環状プラスミド、またはウイルスベクターとして導入することができ、これらは、組み込みまたは非組み込みベクターであり得る。導入遺伝子は、染色体外プラスミドとして継承されるのを可能にするように構築することもできる（Ｇａｓｓｍａｎｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９９５）９２：
１２９２頁）。
ｉＲＮＡの個々の１つまたは複数の鎖は、発現ベクターにおけるプロモーターから転写される。２本の別々の鎖が発現されて、例えば、ｄｓＲＮＡを生成する場合、２つの別個の発現ベクターが、（例えば、トランスフェクションまたは感染によって）標的細胞中に共導入される。あるいは、ｄｓＲＮＡの各個々の鎖が、同じ発現プラスミド上に位置するプロモーターによって転写される。一実施形態では、ｄｓＲＮＡは、ステム・ループ構造を有するように、リンカーポリヌクレオチド配列によって接合される逆方向反復ポリヌクレオチドとして発現される。
ｉＲＮＡ発現ベクターは、一般に、ＤＮＡプラスミドまたはウイルスベクターである。真核細胞と適合する発現ベクター、好ましくは、脊椎動物細胞と適合する発現ベクターを用いて、本明細書に記載されるｉＲＮＡの発現のための組換え構築物を産生することができる。真核細胞の発現ベクターは、当技術分野において周知であり、多くの商業的供給源から入手可能である。典型的には、所望の核酸セグメントを挿入するのに好都合な制限部位を含有するこのようなベクターが提供される。ｉＲＮＡ発現ベクターの送達は、静脈内もしくは筋肉内投与によるか、患者から移植された標的細胞に投与した後に患者に再導入することによるか、または所望の標的細胞への導入を可能にする任意の他の手段のような全身送達であり得る。
ｉＲＮＡ発現プラスミドは、カチオン性脂質担体（例えば、Ｏｌｉｇｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ）または非カチオン性の脂質ベースの担体（例えば、Ｔｒａｎｓｉｔ－ＴＫＯ（商標））との複合体として標的細胞中にトランスフェクトされる。１週間以上の期間にわたる標的ＲＮＡの異なる領域を標的とするｉＲＮＡを介したノックダウンのための複数回の脂質のトランスフェクションも、本発明によって想定される。宿主細胞中へのベクターの導入の成功は、様々な公知の方法を用いてモニターされる。例えば、一過性のトランスフェクションは、緑色傾向タンパク質（ＧＦＰ）のような蛍光マーカーのようなレポーターを用いて示される。エクスビボでの細胞の安定したトランスフェクションは、トランスフェクト細胞にハイグロマイシンＢ耐性のような特定の環境因子（例えば、抗生物質および薬剤）に対する耐性を与えるマーカーを用いて確実にすることができる。
本明細書に記載する方法および組成物と共に用いられるウイルスベクター系としては、限定はされないが、（ａ）アデノウイルスベクター；（ｂ）レンチウイルスベクター、モロニ－マウス白血病ウイルスなどを含むが、これらに限定されないレトロウイルスベクター；（ｃ）アデノ随伴ウイルスベクター；（ｄ）単純ヘルペスウイルスベクター；（ｅ）ＳＶ４０ベクター；（ｆ）ポリオーマウイルスベクター；（ｇ）パピローマウイルスベクター；（ｈ）ピコルナウイルスベクター；（ｉ）オルソポックス（ｏｒｔｈｏｐｏｘ）、例えば、ワクシニアウイルスベクターまたは鳥ポックス、例えばカナリア痘または鶏痘などのポックスウイルスベクター；および（ｊ）ヘルパー依存性または弱毒アデノウイルスが挙げられる。複製欠損ウイルスも有利であり得る。異なるベクターが、細胞のゲノムに組み込まれるかまたは組み込まれないであろう。構築物は、必要に応じて、トランスフェクションのためのウイルス配列を含み得る。あるいは、構築物は、エピソーム複製が可能なベクター、例えばＥＰＶおよびＥＢＶベクターに組み込まれる。ｉＲＮＡの組換え発現のための構築物は、一般に、標的細胞内でのｉＲＮＡの発現を確実にするために、調節要素、例えば、プロモーター、エンハンサーなどを必要とする。ベクターおよび構築物について考慮される他の態様が、以下にさらに記載される。
ｉＲＮＡの送達に有用なベクターは、所望の標的細胞または組織におけるｉＲＮＡの発現に十分な調節要素（プロモーター、エンハンサーなど）を含むであろう。調節要素は、構成的または調節性／誘導性発現のいずれかを提供するように選択される。
ｉＲＮＡの発現は、例えば、特定の生理的調節因子、例えば、血中グルコースレベル、またはホルモンに対して感受性がある誘導性調節配列を使用することによって、正確に調節される（Ｄｏｃｈｅｒｔｙら、１９９４，ＦＡＳＥＢ Ｊ．８：２０～２４頁）。細胞または哺乳動物におけるｄｓＲＮＡの発現の制御に好適なこのような誘導性発現系としては、例えばエクジソン、エストロゲン、プロゲステロン、テトラサイクリン、二量化の化学誘導物質、およびイソプロピル－ベータ－Ｄ１－チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）による調節が挙げられる。当業者は、ｉＲＮＡ導入遺伝子の目的とする使用に基づいて、適切な調節／プロモーター配列を選択することができるであろう。
ｉＲＮＡをコードする核酸配列を含有するウイルスベクターが使用される。例えば、レトロウイルスベクターが使用される（Ｍｉｌｌｅｒら、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：５８１～５９９頁（１９９３）参照）。これらのレトロウイルスベクターは、ウイルスゲノムの適切なパッケージングおよび宿主細胞ＤＮＡへの組み込みに必要な構成要素を含有する。ｉＲＮＡをコードする核酸配列は、患者への核酸の送達を促進する、１つまたはそれ以上のベクターにクローニングされる。レトロウイルスベクターについてのさらなる詳細は、例えば、Ｂｏｅｓｅｎら、Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ６：２９１～３０２頁（１９９４）に見出すことができ、これには、造血幹細胞を化学療法に対してより耐性にするために、造血幹細胞にｍｄｒ１遺伝子を送達するレトロウイルスベクターの使用が記載されている。遺伝子療法におけるレトロウイルスベクターの使用を示す他の参照文献は、Ｃｌｏｗｅｓら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９３：６４４～６５１頁（１９９４）；Ｋｉｅｍら、Ｂｌｏｏｄ ８３：１４６７～１４７３頁（１９９４）；Ｓａｌｍｏｎｓ ａｎｄ Ｇｕｎｚｂｅｒｇ、Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ４：１２９～１４１頁（１９９３）；およびＧｒｏｓｓｍａｎ ａｎｄ Ｗｉｌｓｏｎ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌ．３：１１０～１１４頁（１９９３）である。使用のために考えられるレンチウイルスベクターとしては、例えば、参照によって本明細書に組み入れる、米国特許第６，１４３，５２０号；第５，６６５，５５７号；および第５，９８１，２７６号に記載されるＨＩＶに基づいたベクターが挙げられる。
アデノウイルスも、本発明のｉＲＮＡの送達における使用のために考えられる。アデノウイルスは、例えば、呼吸上皮に遺伝子を送達するための特に魅力的なビヒクルである。アデノウイルスは、本来、呼吸上皮に感染し、軽度の疾患を引き起こす。アデノウイルスに基づいた送達システムの他の標的は、肝臓、中枢神経系、内皮細胞、および筋肉である。アデノウイルスには、非分裂細胞に感染することが可能であるという利点がある。Ｋｏｚａｒｓｋｙ ａｎｄ Ｗｉｌｓｏｎ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ３：４９９～５０３頁（１９９３）には、アデノウイルスに基づいた遺伝子療法の概説が示されている。Ｂｏｕｔら、Ｈｕｍａｎ
Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ５：３～１０頁（１９９４）は、アカゲザルの呼吸上皮に遺伝子を移送するアデノウイルスベクターの使用を実証した。遺伝子療法におけるアデノウイルスの使用の他の例は、Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５２：４３１～４３４頁（１９９１）；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら、Ｃｅｌｌ ６８：１４３～１５５頁（１９９２）；Ｍａｓｔｒａｎｇｅｌｉら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９１：２２５～２３４頁（１９９３）；ＰＣＴ広報の国際公開第９４／１２６４９号パンフレット；およびＷａｎｇら、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２：７７５～７８３頁（１９９５）に見出すことができる。本発明で取り上げられるｉＲＮＡを発現するのに好適なＡＶベクター、組換えＡＶベクターを構築するための方法、およびベクターを標的細胞中に送達するための方法が、Ｘｉａ Ｈら、（２００２）、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２０：１００６～１０１０頁に記載されている。
アデノ随伴ウイルス（ＡＶＶ）ベクターも、本発明のｉＲＮＡを送達するのに使用され
る（Ｗａｌｓｈら、Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．２０４：２８９～３００頁（１９９３）；米国特許第５，４３６，１４６号）。一実施形態では、ｉＲＮＡは、例えば、Ｕ６もしくはＨ１ ＲＮＡプロモーター、またはサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターのいずれかを有する組換えＡＡＶベクターから、２つの別個の相補的な一本鎖ＲＮＡ分子として発現される。本発明で取り上げられるｄｓＲＮＡを発現するのに好適なＡＡＶベクター、組換えＡＶベクターを構築するための方法、およびベクターを標的細胞中に送達するための方法が、その開示全体を参照によって本明細書に組み入れるＳａｍｕｌｓｋｉ Ｒら（１９８７）、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６１：３０９６～３１０１頁；Ｆｉｓｈｅｒ Ｋ Ｊら（１９９６）、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ、７０：５２０～５３２頁；Ｓａｍｕｌｓｋｉ Ｒら（１９８９）、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６３：３８２２～３８２６頁；米国特許第５，２５２，４７９号；米国特許第５，１３９，９４１号；国際特許出願番号国際公開第９４／１３７８８号パンフレット；および国際特許出願番号国際公開第９３／２４６４１号パンフレットに記載されている。
本発明のｉＲＮＡの送達に好適な別のウイルスベクターは、ワクシニアウイルス、例えば、改変ウイルスアンカラ（ＭＶＡ）またはＮＹＶＡＣのような弱毒化ワクシニア、鶏痘またはカナリア痘のような鳥ポックスのようなポックスウイルスである。
ウイルスベクターの指向性は、エンベロープタンパク質または他のウイルスからの他の表面抗原を用いてベクターをシュードタイピングすることによって、または異なるウイルスカプシドタンパク質を必要に応じて置換することによって、改変される。例えば、レンチウイルスベクターは、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、狂犬病、エボラ、モコラなどからの表面タンパク質を用いてシュードタイピングされる。ＡＡＶベクターは、異なるカプシドタンパク質血清型を発現するようにこのベクターを操作することによって、異なる細胞を標的とするように作製される。例えば、その全開示を参照によって本明細書に組み入れる、Ｒａｂｉｎｏｗｉｔｚ Ｊ Ｅら（２００２）、Ｊ Ｖｉｒｏｌ ７６：７９１～８０１頁を参照。
ベクターの医薬製剤は、許容可能な希釈剤中のベクターを含むことができ。または遺伝子送達ビヒクルが埋め込まれる徐放性マトリックスを含むことができる。あるいは、組換え細胞から、完全な遺伝子送達ベクター、例えば、レトロウイルスベクターが無傷で産生される場合、医薬製剤は遺伝子送達システムを産生する１つまたはそれ以上の細胞を含むことができる。
Ｖ．本発明の医薬組成物
本発明は、本発明のｉＲＮＡを含む医薬組成物および製剤も提供する。一実施形態では、本明細書に記載のｉＲＮＡと、薬学的に許容される担体とを含有する医薬組成物も本明細書に提供される。ｉＲＮＡを含有する医薬組成物は、Ｓｅｒｐｉｎｃ１遺伝子の発現または活性に関連する疾患または障害、例えばＳｅｒｐｉｎｃ１関連疾患を処置するのに有用である。このような医薬組成物は、送達様式に基づいて製剤化される。一例は、非経口投与を介した、例えば皮下（ＳＣ）または静脈内（ＩＶ）送達による全身投与用に製剤化される組成物である。別の例は、例えば、持続性ポンプ注入のような脳への注入による、脳実質への直接送達用に製剤化される組成物である。本発明の医薬組成物は、Ｓｅｒｐｉｎｃ１遺伝子の発現を阻害するのに十分な投与量で投与される。
本発明の特定の実施形態では、例えば、医薬組成物が、３つの連続的なヌクレオチド上の３つの同一の修飾の１つまたはそれ以上のモチーフを含み、薬剤の切断部位またはその近くにそのようなモチーフを含む、二本鎖ＲＮＡｉ薬剤を含み、６つのホスホロチオエート連結、およびＧａｌＮＡｃリガンドを含む場合、組成物は、０．２００～約１．８２５ｍｇ／ｋｇ、０．２００～約１．８００ｍｇ／ｋｇ、約０．２００～約１．７００ｍｇ／
ｋｇ、約０．２００～約１．６００ｍｇ／ｋｇ、約０．２００～約１．５００ｍｇ／ｋｇ、約０．２００～約１．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．２００～約１．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．２００～約１．２００ｍｇ／ｋｇ、約０．２００～約１．１００ｍｇ／ｋｇ、約０．２００～約１．０００ｍｇ／ｋｇ、約０．２００～約０．９００ｍｇ／ｋｇ、約０．２００～約０．８００ｍｇ／ｋｇ、約０．２００～約０．７００ｍｇ／ｋｇ、約０．２００～約０．６００ｍｇ／ｋｇ、約０．２００～約０．５００ｍｇ／ｋｇ、約０．２００～約０．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．２２５～約１．８２５ｍｇ／ｋｇ、約０．２２５～約１．８００ｍｇ／ｋｇ、約０．２２５～約１．７００ｍｇ／ｋｇ、約０．２２５～約１．６００ｍｇ／ｋｇ、約０．２２５～約１．５００ｍｇ／ｋｇ、約０．２２５～約１．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．２２５～約１．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．２２５～約１．２００ｍｇ／ｋｇ、約０．２２５～約１．１００ｍｇ／ｋｇ、約０．２２５～約１．０００ｍｇ／ｋｇ、約０．２２５～約０．９００ｍｇ／ｋｇ、約０．２２５～約０．８００ｍｇ／ｋｇ、約０．２２５～約０．７００ｍｇ／ｋｇ、約０．２２５～約０．６００ｍｇ／ｋｇ、約０．２２５～約０．５００ｍｇ／ｋｇ、約０．２２５～約０．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．２５０～約１．８２５ｍｇ／ｋｇ、約０．２５０～約１．８００ｍｇ／ｋｇ、約０．２５０～約１．７００ｍｇ／ｋｇ、約０．２５０～約１．６００ｍｇ／ｋｇ、約０．２５０～約１．５００ｍｇ／ｋｇ、約０．２５０～約１．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．２５０～約１．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．２５０～約１．２００ｍｇ／ｋｇ、約０．２５０～約１．１００ｍｇ／ｋｇ、約０．２５０～約１．０００ｍｇ／ｋｇ、約０．２５０～約０．９００ｍｇ／ｋｇ、約０．２５０～約０．８００ｍｇ／ｋｇ、約０．２５０～約０．７００ｍｇ／ｋｇ、約０．２５０～約０．６００ｍｇ／ｋｇ、約０．２５０～約０．５００ｍｇ／ｋｇ、約０．２５０～約０．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．４２５～約１．８２５ｍｇ／ｋｇ、約０．４２５～約１．８００ｍｇ／ｋｇ、約０．４２５～約１．７００ｍｇ／ｋｇ、約０．４２５～約１．６００ｍｇ／ｋｇ、約０．４２５～約１．５００ｍｇ／ｋｇ、約０．４２５～約１．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．４２５～約１．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．４２５～約１．２００ｍｇ／ｋｇ、約０．４２５～約１．１００ｍｇ／ｋｇ、約０．４２５～約１．０００ｍｇ／ｋｇ、約０．４２５～約０．９００ｍｇ／ｋｇ、約０．４２５～約０．８００ｍｇ／ｋｇ、約０．４２５～約０．７００ｍｇ／ｋｇ、約０．４２５～約０．６００ｍｇ／ｋｇ、約０．４２５～約０．５００ｍｇ／ｋｇ、約０．４５０～約１．８２５ｍｇ／ｋｇ、約０．４５０～約１．８００ｍｇ／ｋｇ、約０．４５０～約１．７００ｍｇ／ｋｇ、約０．４５０～約１．６００ｍｇ／ｋｇ、約０．４５０～約１．５００ｍｇ／ｋｇ、約０．４５０～約１．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．４５０～約１．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．４５０～約１．２００ｍｇ／ｋｇ、約０．４５０～約１．１００ｍｇ／ｋｇ、約０．４５０～約１．０００ｍｇ／ｋｇ、約０．４５０～約０．９００ｍｇ／ｋｇ、約０．４５０～約０．８００ｍｇ／ｋｇ、約０．４５０～約０．７００ｍｇ／ｋｇ、約０．４５０～約０．６００ｍｇ／ｋｇ、約０．４５０～約０．５００ｍｇ／ｋｇ、約０．４７５～約１．８２５ｍｇ／ｋｇ、約０．４７５～約１．８００ｍｇ／ｋｇ、約０．４７５～約１．７００ｍｇ／ｋｇ、約０．４７５～約１．６００ｍｇ／ｋｇ、約０．４７５～約１．５００ｍｇ／ｋｇ、約０．４７５～約１．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．４７５～約１．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．４７５～約１．２００ｍｇ／ｋｇ、約０．４７５～約１．１００ｍｇ／ｋｇ、約０．４７５～約１．０００ｍｇ／ｋｇ、約０．４７５～約０．９００ｍｇ／ｋｇ、約０．４７５～約０．８００ｍｇ／ｋｇ、約０．４７５～約０．７００ｍｇ／ｋｇ、約０．４７５～約０．６００ｍｇ／ｋｇ、約０．４７５～約０．５００ｍｇ／ｋｇ、約０．８７５～約１．８２５ｍｇ／ｋｇ、約０．８７５～約１．８００ｍｇ／ｋｇ、約０．８７５～約１．７００ｍｇ／ｋｇ、約０．８７５～約１．６００ｍｇ／ｋｇ、約０．８７５～約１．５００ｍｇ／ｋｇ、約０．８７５～約１．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．８７５～約１．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．８７５～約１．２００ｍｇ／ｋｇ、約０．８７５～約１．１００ｍｇ／ｋｇ、約０．８７５～約１．０００ｍｇ／ｋｇ、約０．８７５～約０．９００ｍｇ／ｋｇ、約０．９００～約１．８２５ｍｇ／ｋｇ、約０．９００～約１．８００ｍｇ／ｋｇ、約０．９００～約１．７００ｍｇ／ｋｇ、約０．９００～約１．６００ｍｇ／ｋｇ、約０
．９００～約１．５００ｍｇ／ｋｇ、約０．９００～約１．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．９００～約１．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．９００～約１．２００ｍｇ／ｋｇ、約０．９００～約１．１００ｍｇ／ｋｇ、約０．９００～約１．０００ｍｇ／ｋｇ、約０．９２５～約１．８２５ｍｇ／ｋｇ、約０．９２５～約１．８００ｍｇ／ｋｇ、約０．９２５～約１．７００ｍｇ／ｋｇ、約０．９２５～約１．６００ｍｇ／ｋｇ、約０．９２５～約１．５００ｍｇ／ｋｇ、約０．９２５～約１．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．９２５～約１．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．９２５～約１．２００ｍｇ／ｋｇ、約０．９２５～約１．１００ｍｇ／ｋｇ、または約０．９２５～約１．０００ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。先に列挙した値に対する中間の値および範囲も、本発明の一部であるものとし、例えば、ＲＮＡｉ薬剤は、約０．０１５ｍｇ／ｋｇ～約０．４５ｍｇ／ｋｇの用量で対象に投与される。
例えば、ＲＮＡｉ薬剤、例えば医薬組成物中のＲＮＡｉ薬剤は、約０．２ｍｇ／ｋｇ、０．２２５ｍｇ／ｋｇ、０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．２７５ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．３２５ｍｇ／ｋｇ、０．３５ｍｇ／ｋｇ、０．３７５ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．４２５ｍｇ／ｋｇ、０．４５ｍｇ／ｋｇ、０．４７５ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、０．５２５ｍｇ／ｋｇ、０．５５ｍｇ／ｋｇ、０．５７５ｍｇ／ｋｇ、約０．６ｍｇ／ｋｇ、０．６２５ｍｇ／ｋｇ、０．６５ｍｇ／ｋｇ、０．６７５ｍｇ／ｋｇ、約０．７ｍｇ／ｋｇ、０．７２５ｍｇ／ｋｇ、０．７５ｍｇ／ｋｇ、０．７７５ｍｇ／ｋｇ、約０．８ｍｇ／ｋｇ、０．９２５ｍｇ／ｋｇ、０．９５ｍｇ／ｋｇ、０．９７５ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ、１．０２５ｍｇ／ｋｇ、１．０５ｍｇ／ｋｇ、１．０７５ｍｇ／ｋｇ、約１．１ ｍｇ／ｋｇ、１．１２５ｍｇ／ｋｇ、１．１５ｍｇ／ｋｇ、１．１７
５ｍｇ／ｋｇ、約１．２ｍｇ／ｋｇ、１．２２５ｍｇ／ｋｇ、１．２５ｍｇ／ｋｇ、１．２７５ｍｇ／ｋｇ、約１．３ｍｇ／ｋｇ、１．３２５ｍｇ／ｋｇ、１．３５ｍｇ／ｋｇ、１．３７５ｍｇ／ｋｇ、約１．４ｍｇ／ｋｇ、１．４２５ｍｇ／ｋｇ、１．４５ｍｇ／ｋｇ、１．４７５ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、１．５２５ｍｇ／ｋｇ、１．５５ｍｇ／ｋｇ、１．５７５ｍｇ／ｋｇ、約１．６ｍｇ／ｋｇ、１．６２５ｍｇ／ｋｇ、１．６５ｍｇ／ｋｇ、１．６７５ｍｇ／ｋｇ、約１．７ｍｇ／ｋｇ、１．７２５ｍｇ／ｋｇ、１．７５ｍｇ／ｋｇ、１．７７５ｍｇ／ｋｇ、または約１．８ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。先に列挙した値に対する中間の値も、本発明の一部であるものとする。
本発明のいくつかの実施形態では、例えば、二本鎖ＲＮＡｉ薬剤がセンス鎖およびアンチセンス鎖を含む場合、アンチセンス鎖は、ヌクレオチド配列５’－ＵＵＧＡＡＧＵＡＡＡＵＧＧＵＧＵＵＡＡＣＣＡＧ－３’（配列番号１５）のヌクレオチド配列と異なるヌクレオチドが３つ以下である少なくとも１５の連続ヌクレオチドを含む、Ｓｅｒｐｉｎｃ１をコードするｍＲＮＡに相補的な領域を含み、センス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドおよびアンチセンス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドが修飾ヌクレオチドであり、センス鎖は３’末端で結合するリガンドにコンジュゲートし、そのような医薬組成物中の薬剤は約０．２００～約１．８２５ｍｇ／ｋｇ、０．２００～約１．８００ｍｇ／ｋｇ、約０．２００～約１．７００ｍｇ／ｋｇ、約０．２００～約１．６００ｍｇ／ｋｇ、約０．２００～約１．５００ｍｇ／ｋｇ、約０．２００～約１．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．２００～約１．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．２００～約１．２００ｍｇ／ｋｇ、約０．２００～約１．１００ｍｇ／ｋｇ、約０．２００～約１．０００ｍｇ／ｋｇ、約０．２００～約０．９００ｍｇ／ｋｇ、約０．２００～約０．８００ｍｇ／ｋｇ、約０．２００～約０．７００ｍｇ／ｋｇ、約０．２００～約０．６００ｍｇ／ｋｇ、約０．２００～約０．５００ｍｇ／ｋｇ、約０．２００～約０．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．２２５～約１．８２５ｍｇ／ｋｇ、約０．２２５～約１．８００ｍｇ／ｋｇ、約０．２２５～約１．７００ｍｇ／ｋｇ、約０．２２５～約１．６００ｍｇ／ｋｇ、約０．２２５～約１．５００ｍｇ／ｋｇ、約０．２２５～約１．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．２２５～約１．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．２２５～約１．２００ｍｇ／ｋｇ、約０．２２５～約１．１００ｍｇ／ｋｇ、約０．２２５～約１．０００ｍｇ／ｋｇ、約０．２２５～約０．９００ｍｇ／ｋｇ、約０．２２５～
約０．８００ｍｇ／ｋｇ、約０．２２５～約０．７００ｍｇ／ｋｇ、約０．２２５～約０．６００ｍｇ／ｋｇ、約０．２２５～約０．５００ｍｇ／ｋｇ、約０．２２５～約０．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．２５０～約１．８２５ｍｇ／ｋｇ、約０．２５０～約１．８００ｍｇ／ｋｇ、約０．２５０～約１．７００ｍｇ／ｋｇ、約０．２５０～約１．６００ｍｇ／ｋｇ、約０．２５０～約１．５００ｍｇ／ｋｇ、約０．２５０～約１．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．２５０～約１．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．２５０～約１．２００ｍｇ／ｋｇ、約０．２５０～約１．１００ｍｇ／ｋｇ、約０．２５０～約１．０００ｍｇ／ｋｇ、約０．２５０～約０．９００ｍｇ／ｋｇ、約０．２５０～約０．８００ｍｇ／ｋｇ、約０．２５０～約０．７００ｍｇ／ｋｇ、約０．２５０～約０．６００ｍｇ／ｋｇ、約０．２５０～約０．５００ｍｇ／ｋｇ、約０．２５０～約０．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．４２５～約１．８２５ｍｇ／ｋｇ、約０．４２５～約１．８００ｍｇ／ｋｇ、約０．４２５～約１．７００ｍｇ／ｋｇ、約０．４２５～約１．６００ｍｇ／ｋｇ、約０．４２５～約１．５００ｍｇ／ｋｇ、約０．４２５～約１．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．４２５～約１．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．４２５～約１．２００ｍｇ／ｋｇ、約０．４２５～約１．１００ｍｇ／ｋｇ、約０．４２５～約１．０００ｍｇ／ｋｇ、約０．４２５～約０．９００ｍｇ／ｋｇ、約０．４２５～約０．８００ｍｇ／ｋｇ、約０．４２５～約０．７００ｍｇ／ｋｇ、約０．４２５～約０．６００ｍｇ／ｋｇ、約０．４２５～約０．５００ｍｇ／ｋｇ、約０．４５０～約１．８２５ｍｇ／ｋｇ、約０．４５０～約１．８００ｍｇ／ｋｇ、約０．４５０～約１．７００ｍｇ／ｋｇ、約０．４５０～約１．６００ｍｇ／ｋｇ、約０．４５０～約１．５００ｍｇ／ｋｇ、約０．４５０～約１．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．４５０～約１．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．４５０～約１．２００ｍｇ／ｋｇ、約０．４５０～約１．１００ｍｇ／ｋｇ、約０．４５０～約１．０００ｍｇ／ｋｇ、約０．４５０～約０．９００ｍｇ／ｋｇ、約０．４５０～約０．８００ｍｇ／ｋｇ、約０．４５０～約０．７００ｍｇ／ｋｇ、約０．４５０～約０．６００ｍｇ／ｋｇ、約０．４５０～約０．５００ｍｇ／ｋｇ、約０．４７５～約１．８２５ｍｇ／ｋｇ、約０．４７５～約１．８００ｍｇ／ｋｇ、約０．４７５～約１．７００ｍｇ／ｋｇ、約０．４７５～約１．６００ｍｇ／ｋｇ、約０．４７５～約１．５００ｍｇ／ｋｇ、約０．４７５～約１．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．４７５～約１．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．４７５～約１．２００ｍｇ／ｋｇ、約０．４７５～約１．１００ｍｇ／ｋｇ、約０．４７５～約１．０００ｍｇ／ｋｇ、約０．４７５～約０．９００ｍｇ／ｋｇ、約０．４７５～約０．８００ｍｇ／ｋｇ、約０．４７５～約０．７００ｍｇ／ｋｇ、約０．４７５～約０．６００ｍｇ／ｋｇ、約０．４７５～約０．５００ｍｇ／ｋｇ、約０．８７５～約１．８２５ｍｇ／ｋｇ、約０．８７５～約１．８００ｍｇ／ｋｇ、約０．８７５～約１．７００ｍｇ／ｋｇ、約０．８７５～約１．６００ｍｇ／ｋｇ、約０．８７５～約１．５００ｍｇ／ｋｇ、約０．８７５～約１．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．８７５～約１．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．８７５～約１．２００ｍｇ／ｋｇ、約０．８７５～約１．１００ｍｇ／ｋｇ、約０．８７５～約１．０００ｍｇ／ｋｇ、約０．８７５～約０．９００ｍｇ／ｋｇ、約０．９００～約１．８２５ｍｇ／ｋｇ、約０．９００～約１．８００ｍｇ／ｋｇ、約０．９００～約１．７００ｍｇ／ｋｇ、約０．９００～約１．６００ｍｇ／ｋｇ、約０．９００～約１．５００ｍｇ／ｋｇ、約０．９００～約１．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．９００～約１．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．９００～約１．２００ｍｇ／ｋｇ、約０．９００～約１．１００ｍｇ／ｋｇ、約０．９００～約１．０００ｍｇ／ｋｇ、約０．９２５～約１．８２５ｍｇ／ｋｇ、約０．９２５～約１．８００ｍｇ／ｋｇ、約０．９２５～約１．７００ｍｇ／ｋｇ、約０．９２５～約１．６００ｍｇ／ｋｇ、約０．９２５～約１．５００ｍｇ／ｋｇ、約０．９２５～約１．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．９２５～約１．４００ｍｇ／ｋｇ、約０．９２５～約１．２００ｍｇ／ｋｇ、約０．９２５～約１．１００ｍｇ／ｋｇ、または約０．９２５～約１．０００ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。先に列挙した値に対する中間の値および範囲も、本発明の一部であるものとし、例えば、ＲＮＡｉ薬剤は、約０．０１５ｍｇ／ｋｇ～約０．４５ｍｇ／ｋｇの用量で対象に投与される。
例えば、ＲＮＡｉ薬剤、例えば医薬組成物中のＲＮＡｉ薬剤は、約０．２ｍｇ／ｋｇ、０．２２５ｍｇ／ｋｇ、０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．２７５ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．３２５ｍｇ／ｋｇ、０．３５ｍｇ／ｋｇ、０．３７５ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．４２５ｍｇ／ｋｇ、０．４５ｍｇ／ｋｇ、０．４７５ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、０．５２５ｍｇ／ｋｇ、０．５５ｍｇ／ｋｇ、０．５７５ｍｇ／ｋｇ、約０．６ｍｇ／ｋｇ、０．６２５ｍｇ／ｋｇ、０．６５ｍｇ／ｋｇ、０．６７５ｍｇ／ｋｇ、約０．７ｍｇ／ｋｇ、０．７２５ｍｇ／ｋｇ、０．７５ｍｇ／ｋｇ、０．７７５ｍｇ／ｋｇ、約０．８ｍｇ／ｋｇ、０．９２５ｍｇ／ｋｇ、０．９５ｍｇ／ｋｇ、０．９７５ｍｇ／ｋｇ、約１．０ｍｇ／ｋｇ、１．０２５ｍｇ／ｋｇ、１．０５ｍｇ／ｋｇ、１．０７５ｍｇ／ｋｇ、約１．１ｍｇ／ｋｇ、１．１２５ｍｇ／ｋｇ、１．１５ｍｇ／ｋｇ、１．１７５ｍｇ／ｋｇ、約１．２ｍｇ／ｋｇ、１．２２５ｍｇ／ｋｇ、１．２５ｍｇ／ｋｇ、１．２７５ｍｇ／ｋｇ、約１．３ｍｇ／ｋｇ、１．３２５ｍｇ／ｋｇ、１．３５ｍｇ／ｋｇ、１．３７５ｍｇ／ｋｇ、約１．４ｍｇ／ｋｇ、１．４２５ｍｇ／ｋｇ、１．４５ｍｇ／ｋｇ、１．４７５ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、１．５２５ｍｇ／ｋｇ、１．５５ｍｇ／ｋｇ、１．５７５ｍｇ／ｋｇ、約１．６ｍｇ／ｋｇ、１．６２５ｍｇ／ｋｇ、１．６５ｍｇ／ｋｇ、１．６７５ｍｇ／ｋｇ、約１．７ｍｇ／ｋｇ、１．７２５ｍｇ／ｋｇ、１．７５ｍｇ／ｋｇ、１．７７５ｍｇ／ｋｇ、または約１．８ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。先に列挙した値に対する中間の値も、本発明の一部であるものとする。
いくつかの実施形態では、ｉＲＮＡ薬剤を含む医薬組成物は、固定用量で対象に投与される。「固定用量」（例えばｍｇ単位の用量）は、ｉＲＮＡ薬剤の１回用量が体重などの任意の特定の対象関連因子に関係なくすべての対象に使用されることを意味する。特定の一実施形態では、本発明のｉＲＮＡ薬剤の固定用量は、所定の体重または年齢に基づく。
いくつかの実施形態では、ｉＲＮＡ薬剤を含む医薬組成物は、約２５ｍｇ～約１００ｍｇの間、例えば、約２５ｍｇ～約９５ｍｇの間、約２５ｍｇ～約９０ｍｇの間、約２５ｍｇ～約８５ｍｇの間、約２５ｍｇ～約８０ｍｇの間、約２５ｍｇ～約７５ｍｇの間、約２５ｍｇ～約７０ｍｇの間、約２５ｍｇ～約６５ｍｇの間、約２５ｍｇ～約６０ｍｇの間、約２５ｍｇ～約５０ｍｇの間、約５０ｍｇ～約１００ｍｇの間、約５０ｍｇ～約９５ｍｇの間、約５０ｍｇ～約９０ｍｇの間、約５０ｍｇ～約８５ｍｇの間、約５０ｍｇ～約８０ｍｇの間、約３０ｍｇ～約１００ｍｇの間、約３０ｍｇ～約９０ｍｇの間、約３０ｍｇ～約８０ｍｇの間、約４０ｍｇ～約１００ｍｇの間、約４０ｍｇ～約９０ｍｇの間、約４０ｍｇ～約８０ｍｇの間、約６０ｍｇ～約１００ｍｇの間、約６０ｍｇ～約９０ｍｇの間、約２５ｍｇ～約５５ｍｇの間、約３０ｍｇ～約９５ｍｇの間、約３０ｍｇ～約８５ｍｇの間、約３０ｍｇ～約７５ｍｇの間、約３０ｍｇ～約６５ｍｇの間、約３０ｍｇ～約５５ｍｇの間、約４０ｍｇ～約９５ｍｇの間、約４０ｍｇ～約８５ｍｇの間、約４０ｍｇ～約７５ｍｇの間、約４０ｍｇ～約６５ｍｇの間、約４０ｍｇ～約５５ｍｇの間、または約４５ｍｇ～約９５ｍｇの間の固定用量で投与される。
いくつかの実施形態では、ｉＲＮＡ薬剤を含む医薬組成物は、約２５ｍｇ、約３０ｍｇ、約３５ｍｇ、約４０ｍｇ、約４５ｍｇ、約５０ｍｇ、約５５ｍｇ、約６０ｍｇ、約６５ｍｇ、約７０ｍｇ、約７５ｍｇ、約８０ｍｇ、約８５ｍｇ、約９０ｍｇ、約９５ｍｇ、または約１００ｍｇの固定用量で投与される。
ｉＲＮＡを含む医薬組成物は、約１カ月に１回、約５週毎に１回、約６週毎に１回、約２カ月毎に１回、または四半期に１回、対象に投与される。
ｉＲＮＡ薬剤を含む医薬組成物は、１つまたはそれ以上の用量として対象に投与される。いくつかの実施形態では、二本鎖ＲＮＡｉ薬剤を含む医薬組成物は、約０．２００ｍｇ／ｋｇ～約０．２５０ｍｇ／ｋｇの月１回の用量、約０．４２５ｍｇ／ｋｇ～約０．４７
５ｍｇ／ｋｇの月１回の用量、約０．８７５ｍｇ／ｋｇ～約０．９２５ｍｇ／ｋｇの月１回の用量、または約１．７７５ｍｇ／ｋｇ～約１．８２５ ｍｇ／ｋｇの月１回の用量と
して対象に投与される。いくつかの実施形態では、二本鎖ｉＲＮＡ薬剤を含む医薬組成物は、約２５ｍｇ～約１００ｍｇ、例えば、約２５ｍｇ、約５０ｍｇ、約８０ｍｇ、または約１００ｍｇの固定用量で対象に投与される。
医薬組成物は、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、および２１、２２、２３、２４、または約２５分間のような期間にわたって、静脈内注入によって投与される。投与は、例えば、毎週、隔週（すなわち、２週毎）、毎月、２カ月毎、３カ月毎、４カ月毎またはそれ以上のように、定期的に繰り返される。最初の処置レジメンの後、治療剤は、より少ない頻度で投与される。例えば、毎週または隔週で３カ月間の投与後、投与は月に１回で６カ月間または１年間またはそれ以上にわたって繰り返される。
医薬組成物は１日１回投与され、またはｉＲＮＡは、１日を通して適切な間隔で２、３、もしくはそれ以上の部分用量として、もしくは連続的な注入もしくは持続放出製剤による送達を使用して投与される。その場合、各部分用量に含有されるｉＲＮＡは、総１日投与量に達するように対応して少量である必要がある。投与単位はまた、例えば、数日間にわたりｉＲＮＡを持続放出する従来の持続放出製剤を使用して、数日間にわたる送達のために配合される。持続放出製剤は当技術分野において周知であり特定の部位での薬剤の送達に特に有用であり、本発明の薬剤と使用される。本実施形態では、投与単位は１日用量の対応する倍数を含有する。
他の実施形態では、医薬組成物の単回用量は、長期間継続することができるため、その後の用量が１、２、３、４、５、６、７、または８週間以下の間隔で投与される。本発明のいくつかの実施形態では、本発明の医薬組成物の単回用量は、１カ月に１回投与される。
当業者は、限定はされないが、疾患または障害の重症度、以前の処置、対象の全体的な健康および／または年齢、ならびに存在する他の疾患を含む特定の因子が対象を効果的に処置するのに必要な投与量および時間に影響し得ることを認識するであろう。さらに、治療有効用量の組成物による対象の処置は、単一の処置または一連の処置を含み得る。本発明により包含される個々のｉＲＮＡに関する有効な投与量、およびインビボでの半減期は、従来の方法論を用いて、または本明細書の他の箇所に記載されるような適切な動物モデルを使用するインビボでの試験に基づいて見積もることができる。
マウス遺伝学の進展により、Ｓｅｒｐｉｎｃ１の発現の低下から利益を受けるであろう出血性障害のような様々なヒトの疾患の研究のために多くのマウスモデルが作製されている。このようなモデルは、ｉＲＮＡのインビボ試験、および治療有効用量の決定に使用することができる。当技術分野で公知の好適なマウスモデルとしては、Ｂｏｌｌｉｇｅｒら（２０１０）Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ １０３：１２３３～１２３８頁、Ｂｉ Ｌら（１９９５）Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ １０：１１９～２１頁、Ｌｉｎら（１９９７）Ｂｌｏｏｄ ９０：３９６２～６頁、Ｋｕｎｄｕら（１９９８）Ｂｌｏｏｄ ９２：１６８～７４頁、Ｗａｎｇら（１９９７）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９４：１１５６３～６頁、およびＪｉｎら（２００４） Ｂｌｏｏｄ １０４：１７３３頁に記載されるような、例えば、凝固因子遺伝子のノックアウトを含有するマウスなど、血友病Ａマウスモデルおよび血友病Ｂマウスモデルが挙げられる。
本発明の医薬組成物は、局所的または全身的処置が必要かどうか、および処置される領域に応じていくつかの方法で投与される。投与は、局所（例えば、経皮パッチによる）、
例えば、噴霧器による粉末もしくはエアロゾルの吸入または吹送による経肺；気管内、鼻腔内、表皮および経皮、経口、または非経口であり得る。非経口投与は、静脈内、動脈内、皮下、腹腔内、もしくは筋肉内注射もしくは注入；例えば、埋め込み装置による皮下；または、例えば、実質内、髄腔内、もしくは脳室内による頭蓋内の投与を含む。
ｉＲＮＡは、肝臓（例えば、肝臓の肝細胞）のような特定の組織を標的とするように送達される。
局所投与用の医薬組成物および製剤としては、経皮パッチ、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、液滴、坐薬、噴霧剤、液剤および散剤が挙げられる。従来の医薬担体、水性、粉末、または油性基材、増粘剤などが必要であり、または所望される。被覆コンドーム、手袋なども有用であり得る。好適な局所製剤は、本発明で取り上げられるｉＲＮＡが、脂質、リポソーム、脂肪酸、脂肪酸エステル、ステロイド、キレート化剤、および界面活性剤のような局所送達薬剤との混合物であるものを含む。局所製剤は、参照によって本明細書に組み入れる米国特許第６，７４７，０１４号に詳細に記載される。
Ａ．さらなる製剤
ｉ．エマルション
本発明の組成物は、エマルションとして調製および製剤化される。エマルションは、典型的には、１つの液体が、通常、直径が０．１μｍを超える液滴の形態の別の液体中に分散された不均一系である（例えば、Ａｎｓｅｌ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ａｌｌｅｎ，ＬＶ．、Ｐｏｐｏｖｉｃｈ ＮＧ．、ａｎｄ Ａｎｓｅｌ ＨＣ．、２００４、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ（８ｔｈ ｅｄ．）、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ；Ｉｄｓｏｎ、ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ ａｎｄ Ｂａｎｋｅｒ（Ｅｄｓ．）、１９８８，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．、ｖｏｌｕｍｅ １、１９９頁；Ｒｏｓｏｆｆ、ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ ａｎｄ Ｂａｎｋｅｒ（Ｅｄｓ．）、１９８８、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．、Ｖｏｌｕｍｅ １、２４５頁；Ｂｌｏｃｋ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ ａｎｄ Ｂａｎｋｅｒ（Ｅｄｓ．）、１９８８、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．、ｖｏｌｕｍｅ ２、３３５頁；Ｈｉｇｕｃｈｉら、ｉｎ Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．、１９８５、３０１頁参照）。エマルションは、多くの場合、互いに親密に混合および分散された２つの非混和性液体相を含む二層系である。一般に、エマルションは、油注水（ｗ／ｏ）または水中油（ｏ／ｗ）の種類のいずれかであり得る。水性相は微小滴として塊の油相中に微細に分割および分散された場合、得られた組成物は油中水（ｗ／ｏ）エマルションと呼ばれる。代替的に、油相が微小滴として塊の水性相中に微細に分割および分散された場合、得られた組成物は水中油（ｏ／ｗ）エマルションと呼ばれる。エマルションは、分散相および活性薬物に加えて追加の構成成分を含有することができ、その構成成分は、水性相、油相中いずれかの溶液として、またはそれ自体が別個の相として存在し得る。必要に応じて、エマルション中に乳化剤、安定剤、染料、および抗酸化剤のような医薬賦形剤も存在し得る。医薬エマルションは、例えば、油中水中油（ｏ／ｗ／ｏ）および水中油中水（ｗ／ｏ／ｗ）エマルションの場合のような、２つより多くの相からなる多エマルションでもあり得る。そのような複合製剤は、多くの場合、単純な二成分エマルションが提供しない特定の利点を提供する。ｏ／ｗエマルションの個々の油小滴が小さい水小滴を囲い込む多エマルションは、ｗ／ｏ／ｗエマルションを構成する。同様に、油の連続相中で安定化された水の小球中に囲い込まれた油
小滴の系は、ｏ／ｗ／ｏエマルションを提供する。
エマルションは、熱力学的安定性がほとんどまたは全くないことにより特徴付けられる。多くの場合、エマルションの分散または不連続相は、外部または連続相中に良好に分散され、乳化剤の手段または製剤の粘度によってこの形態に維持される。エマルションの相のいずれかは、エマルション型軟膏ベースおよびクリームの場合のように半固体または固体であり得る。エマルションを安定化させる他の手段には、エマルションのいずれかの相に組み込まれる乳化剤の使用が含まれる。乳化剤は、合成界面活性剤、天然乳化剤、吸収基材、および微細に分散した固体の４つのカテゴリーに大きく分類される（例えば、Ａｎｓｅｌ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ａｌｌｅｎ，ＬＶ．，Ｐｏｐｏｖｉｃｈ ＮＧ．，ａｎｄ Ａｎｓｅｌ ＨＣ．、２００４、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ（８ｔｈ ｅｄ．），Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ；Ｉｄｓｏｎ、ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ ａｎｄ Ｂａｎｋｅｒ（Ｅｄｓ．）、１９８８、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．、ｖｏｌｕｍｅ １、１９９頁参照）。
表面活性剤としても公知の合成界面活性剤は、エマルションの製剤化に広範な適用性が見出されており、文献に概説されている（例えば、Ａｎｓｅｌ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ａｌｌｅｎ，ＬＶ．，Ｐｏｐｏｖｉｃｈ ＮＧ．，ａｎｄ Ａｎｓｅｌ ＨＣ．、２００４、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ（８ｔｈ ｅｄ．）、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ；Ｒｉｅｇｅｒ，ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ，Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ ａｎｄ Ｂａｎｋｅｒ（Ｅｄｓ．）、１９８８、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．、ｖｏｌｕｍｅ １、２８５頁；Ｉｄｓｏｎ，ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ，Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ ａｎｄ Ｂａｎｋｅｒ（Ｅｄｓ．）、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．、１９８８、ｖｏｌｕｍｅ １、１９９頁参照）。界面活性剤は、典型的には、両親媒性であり、親水性部分および疎水性部分を含む。界面活性剤の疎水性に対する親水性の比率は、親水性／親油性バランス（ＨＬＢ）と称されており、製剤の調製の際の界面活性剤の分類および選択の際の貴重な手段である。界面活性剤は親水性基の性質に基づいて、異なる種類：非イオン性、アニオン性、カチオン性および両性に分類される（例えば、Ａｎｓｅｌ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ａｌｌｅｎ，ＬＶ．，Ｐｏｐｏｖｉｃｈ ＮＧ．，ａｎｄ Ａｎｓｅｌ ＨＣ．、２００４、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ（８ｔｈ ｅｄ．）、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ、Ｒｉｅｇｅｒ，ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ，Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ ａｎｄ Ｂａｎｋｅｒ （Ｅｄｓ．）、１９８８、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．、ｖｏｌｕｍｅ １、２８５頁参照）。
エマルション製剤中に使用される、天然に存在する乳化剤としては、ラノリン、蜜蝋、ホスファチド、レシチンおよびアカシアが挙げられる。吸収ベースは、無水ラノリンおよび親水性ワセリンのように、水を取り入れてｗ／ｏエマルションを形成するが、それらの半固体稠度を維持する親水性特性を持つ。微粉化固体は、特に界面活性剤の組み合わせ中、および粘性の製剤中で、良好な乳化剤としても使用されている。これらとしては、重金属水酸化物のような極性無機固体、ベントナイト、アタパルジャイト、ヘクトライト、カオリン、モンモリロナイト、コロイド状ケイ酸アルミニウムおよびコロイド状ケイ酸アルミニウムマグネシウムのような非膨張粘土、顔料、および炭素のような非極性固体または
トリステアリン酸グリセリンが挙げられる。
非常に多様な非乳化材料もエマルション製剤中に含まれ、エマルションの特性に寄与する。それらとしては、脂肪、油、蝋、脂肪酸、脂肪アルコール、脂肪エステル、湿潤剤、親水性コロイド、保存剤および抗酸化剤が挙げられる（Ｂｌｏｃｋ，ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ，Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ ａｎｄ Ｂａｎｋｅｒ （Ｅｄｓ．）、１９８８、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．、ｖｏｌｕｍｅ １、３３５頁；Ｉｄｓｏｎ，ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ，Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ ａｎｄ Ｂａｎｋｅｒ（Ｅｄｓ．）、１９８８、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．、ｖｏｌｕｍｅ １、１９９頁）。
親水性コロイドまたは親水コロイドとしては、多糖（例えば、アカシア、寒天、アルギン酸、カラゲナン、グアーガム、カラヤガム、およびトラガカント）のような天然に存在するゴムおよび合成ポリマー、セルロース誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロースおよびカルボキシプロピルセルロース）、ならびに合成ポリマー（例えば、カルボマー、セルロースエーテル、およびカルボキシビニルポリマー）が挙げられる。これらは水中に分散または膨張して、分散相の小滴の周囲に強力な界面フィルムを形成することにより、および、外部相の粘度を増大させることにより、エマルションを安定化するコロイド溶液を形成する。
エマルションは、多くの場合、微生物の増殖を容易に支持し得る炭水化物、タンパク質、ステロール、およびホスファチドのような多数の成分を含有するため、これらの製剤は、多くの場合、保存剤を組み込んでいる。エマルション製剤に含まれる、通常使用される保存剤としては、メチルパラベン、プロピルパラベン、第四級アンモニウム塩、塩化ベンズアルコニウム、ｐ－ヒドロキシ安息香酸のエステル、およびホウ酸が挙げられる。抗酸化剤も、通常、エマルション製剤に加えられ、製剤の変質を防止する。使用される抗酸化剤は、トコフェロール、没食子酸アルキル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエンのような遊離基スカベンジャー、またはアスコルビン酸およびメタ重亜硫酸ナトリウムのような還元剤、ならびにクエン酸、酒石酸およびレシチンのような抗酸化剤共力剤であり得る。
皮膚、経口および非経口経路を介したエマルション製剤の適用ならびにそれらの製造方法は、文献に概説されている（例えば、Ａｎｓｅｌ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ａｌｌｅｎ，ＬＶ．，Ｐｏｐｏｖｉｃｈ ＮＧ．，ａｎｄ Ａｎｓｅｌ ＨＣ．、２００４、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ（８ｔｈ ｅｄ.）
、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｉｄｓｏｎ，ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ，Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ ａｎｄ Ｂａｎｋｅｒ（Ｅｄｓ．）、１９８８、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．、ｖｏｌｕｍｅ １、１９９頁参照）。経口送達用のエマルション製剤は、製剤化の容易さ、ならびに吸収および生物学的利用能の観点からの有効性のため、非常に広範に使用されている（例えば、Ａｎｓｅｌ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ａｌｌｅｎ，ＬＶ．，Ｐｏｐｏｖｉｃｈ ＮＧ．，ａｎｄ Ａｎｓｅｌ ＨＣ．、２００４、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ（８ｔｈ ｅｄ．）、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｒｏｓｏｆｆ，ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ，Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ ａｎｄ Ｂａｎｋｅｒ（Ｅｄｓ．）、１９８８、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．、ｖｏｌｕｍｅ １、２４５頁；Ｉｄｓｏｎ，ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ
Ｆｏｒｍｓ，Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ ａｎｄ Ｂａｎｋｅｒ（Ｅｄｓ．）、１９８８、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．、ｖｏｌｕｍｅ １、１９９頁参照）。鉱油基材の緩下剤、油溶性ビタミンおよび高脂肪栄養製剤が、ｏ／ｗ型エマルションとして一般的に経口投与されている材料に含まれる。
ｉｉ．マイクロエマルション
本発明の一実施形態では、ｉＲＮＡおよび核酸の組成物は、マイクロエマルションとして製剤化される。マイクロエマルションは、単一の光学的に等方性であり、熱力学的に安定した液体溶液である、水、油、および両親媒性物質の系として定義される（例えば、Ａｎｓｅｌ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ａｌｌｅｎ，ＬＶ．，Ｐｏｐｏｖｉｃｈ ＮＧ．，ａｎｄ Ａｎｓｅｌ ＨＣ．、２００４、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ（８ｔｈ ｅｄ．）、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｒｏｓｏｆｆ，ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ，Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ ａｎｄ Ｂａｎｋｅｒ（Ｅｄｓ．）、１９８８、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．、ｖｏｌｕｍｅ １、２４５頁参照）。典型的には、マイクロエマルションは、最初に油を水性界面活性剤溶液中に分散し、次いで十分な量の第４の構成成分、一般に中間の鎖長のアルコールを加えて透明系を形成することにより調製される系である。したがって、マイクロエマルションは、表面活性分子の界面フィルムにより安定化されている２つの非混和性液体の熱力学的に安定な、当方的に透明な分散物としても記載されている（Ｌｅｕｎｇ ａｎｄ Ｓｈａｈ，ｉｎ：Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ Ｄｒｕｇｓ：Ｐｏｌｙｍｅｒｓ ａｎｄ Ａｇｇｒｅｇａｔｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｒｏｓｏｆｆ，Ｍ．，Ｅｄ．、１９８９、ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１８５～２１５頁）。マイクロエマルションは通常、油、水、界面活性剤、補助界面活性剤および電解質を含む３～５つの構成成分の組み合わせを用いて調製される。マイクロエマルションが油中水（ｗ／ｏ）タイプまたは水中油（ｏ／ｗ）タイプのいずれのものであるかは、使用される油および界面活性剤の特性、ならびに界面活性剤分子の極性頭部および炭化水素尾部の構造および幾何学的充填に依存する（Ｓｃｈｏｔｔ，ｉｎ Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．、１９８５、２７１頁）。
状態図を用いる現象論的手法が広範に研究されており、マイクロエマルションを製剤化する方法についての広範な知識を当業者にもたらしている（例えば、Ａｎｓｅｌ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ａｌｌｅｎ，ＬＶ．，Ｐｏｐｏｖｉｃｈ ＮＧ．，ａｎｄ Ａｎｓｅｌ ＨＣ．、２００４、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ（８ｔｈ ｅｄ．）、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｒｏｓｏｆｆ，ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ，Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ
ａｎｄ Ｂａｎｋｅｒ（Ｅｄｓ．）、１９８８、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．、ｖｏｌｕｍｅ １、２４５頁；Ｂｌｏｃｋ，ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ，Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ ａｎｄ Ｂａｎｋｅｒ（Ｅｄｓ．）、１９８８、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．、ｖｏｌｕｍｅ １、３３５頁参照）。従来のエマルションと比較して、マイクロエマルションは自発的に形成する熱力学的に安定な小滴の製剤中で水不溶性薬物を可溶化する利点を提供する。
マイクロエマルションの調製に使用される界面活性剤としては、単独または補助界面活性剤との組み合わせで、限定はされないが、イオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、Ｂｒｉｊ９６、ポリオキシエチレンオレイルエーテル、ポリグリセロール脂肪酸エステ
ル、モノラウリン酸テトラグリセロール（ＭＬ３１０）、モノオレイン酸テトラグリセロール（ＭＯ３１０）、モノオレイン酸ヘキサグリセロール（ＰＯ３１０）、ペンタオレイン酸ヘキサグリセロール（ＰＯ５００）、モノカプリン酸デカグリセロール（ＭＣＡ７５０）、モノオレイン酸デカグリセロール（ＭＯ７５０）、セスキオレイン酸デカグリセロール（ＳＯ７５０）、デカオレイン酸デカグリセロール（ＤＡＯ７５０）が挙げられる。通常、エタノール、１－プロパノール、および１－ブタノールのような短鎖アルコールである補助界面活性剤は、界面活性剤フィルム中に浸透し、その結果、界面活性剤分子間に生成された空隙空間によって不規則フィルムを形成することにより、界面流動性を増大させる役割を果たす。しかしながら、マイクロエマルションは、補助界面活性剤を使用することなく調製され、アルコールフリー自己乳化型マイクロエマルション系は、当技術分野において公知である。水性相は、典型的には、限定はされないが、水、薬物の水性溶液、グリセロール、ＰＥＧ３００、ＰＥＧ４００、ポリグリセロール、プロピレングリコール、およびエチレングリコールの誘導体であり得る。油相は、限定はされないが、Ｃａｐｔｅｘ３００、Ｃａｐｔｅｘ３５５、Ｃａｐｍｕｌ ＭＣＭ、脂肪酸エステル、中鎖（Ｃ８～Ｃ１２）モノ、ジ、およびトリ－グリセリド、ポリオキシエチル化グリセリル脂肪酸エステル、脂肪アルコール、ポリグリコール化グリセリド、飽和ポリグリコール化Ｃ８～Ｃ１０グリセリド、植物油ならびにシリコーン油のような材料を含み得る。
マイクロエマルションは、薬物可溶化および薬物吸収向上の観点から特に興味深い。脂質ベースのマイクロエマルション（ｏ／ｗおよびｗ／ｏの両方）は、ペプチドを含む薬物の経口バイオアベイラビリティの向上に提案されている（例えば、米国特許第６，１９１，１０５号；第７，０６３，８６０号；第７，０７０，８０２号；第７，１５７，０９９号；Ｃｏｎｓｔａｎｔｉｎｉｄｅｓら、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１９９４、１１、１３８５～１３９０頁；Ｒｉｔｓｃｈｅｌ，Ｍｅｔｈ．Ｆｉｎｄ．Ｅｘｐ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１９９３、１３、２０５頁参照）。マイクロエマルションは、薬物可溶化の改善、酵素加水分解からの薬物の保護、界面活性剤誘導による膜流動性および透過性の変更に起因する薬物吸収の可能な向上、調製の容易さ、固体剤形を超える経口投与の容易さ、臨床的効能の改善、ならびに毒性の低下の利点を提供する（例えば、米国特許第６，１９１，１０５号；第７，０６３，８６０号；第７，０７０，８０２号；第７，１５７，０９９号；Ｃｏｎｓｔａｎｔｉｎｉｄｅｓら、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、１９９４、１１、１３８５頁；Ｈｏら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．、１９９６、８５、１３８～１４３頁参照）。多くの場合、マイクロエマルションは、その構成成分が周囲温度で一緒にされた際に自発的に形成される。このことは、易熱性薬物、ペプチド、またはｉＲＮＡを製剤化する際に特に有利であり得る。マイクロエマルションはまた美容および医薬用途の両方において活性構成成分の経皮送達にも有効である。本発明のマイクロエマルション組成物および製剤が胃腸管からのｉＲＮＡおよび核酸の全身吸収の増大、ならびにｉＲＮＡおよび核酸の局部細胞取り込みの改善を促進することが期待される。
本発明のマイクロエマルションはまた、モノステアリン酸ソルビタン（Ｇｒｉｌｌ ３）、ラブラソール、および透過促進剤のような追加の構成成分および添加剤を含有し、製剤の特性を改善し、本発明のｉＲＮＡおよび核酸の吸収を向上させる。本発明のマイクロエマルション中で使用される浸透促進剤は、５つの広いカテゴリーの１つに属するものとして分類される－－界面活性剤、脂肪酸、胆汁酸塩、キレート化剤、および非キレート化非界面活性剤（Ｌｅｅら、Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ、１９９１、９２頁）。これらのクラスの各々は、上記で論じられている。
ｉｉｉ．微粒子
本発明のＲＮＡｉ薬剤は、粒子、例えば、微粒子に組み込まれてもよい。微粒子は、噴
霧乾燥によって生成されるが、凍結乾燥、蒸発、流体床乾燥、真空乾燥、またはこれらの技術の組み合わせを含む他の方法によって生成されてもよい。
ｉｖ．浸透促進剤
一実施形態では、本発明は、動物の皮膚への、核酸、特にｉＲＮＡの効率的な送達を行うために様々な浸透促進剤を用いる。ほとんどの薬剤が、イオン化および非イオン化の両方の形態で溶液中に存在する。しかしながら、通常、脂溶性または親油性の薬剤のみが、細胞膜を容易に透過する。透過される膜が浸透促進剤で処理されている場合、非親油性薬剤でも細胞膜を透過できることが発見されている。細胞膜をわたる非親油性薬剤の拡散の補助に加えて、浸透促進剤は、親油性薬剤の浸透性も向上させる。
浸透促進剤は、５つの広いカテゴリー、すなわち、界面活性剤、脂肪酸、胆汁塩、キレート剤、および非キレート非界面活性剤のうちの１つに属するものとして分類される（例えば、Ｍａｌｍｓｔｅｎ，Ｍ．Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓ ａｎｄ ｐｏｌｙｍｅｒｓ ｉｎ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ、Ｉｎｆｏｒｍａ Ｈｅａｌｔｈ Ｃａｒｅ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ、２００２；Ｌｅｅら、Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ、１９９１、９２頁参照）。浸透促進剤の上記のクラスのそれぞれが、以下により詳細に記載される。
界面活性剤（または「表面活性剤」）は、水溶液に溶解されると、溶液の表面張力または水溶液と別の液体との間の界面張力を低下させ、粘膜を通るｉＲＮＡの吸収が向上されるという結果を生じる化学物質である。胆汁塩および脂肪酸に加えて、これらの浸透促進剤としては、例えば、ラウリル硫酸ナトリウム、ポリオキシエチレン－９－ラウリルエーテルおよびポリオキシエチレン－２０－セチルエーテル）（例えば、Ｍａｌｍｓｔｅｎ，Ｍ．Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓ ａｎｄ ｐｏｌｙｍｅｒｓ ｉｎ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ、Ｉｎｆｏｒｍａ Ｈｅａｌｔｈ Ｃａｒｅ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ、２００２；Ｌｅｅら、Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ、１９９１、９２頁参照）；およびＦＣ－４３のようなペルフルオロ化合物エマルション（Ｔａｋａｈａｓｈｉら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１９８８、４０、２５２頁）を含む。
浸透促進剤として作用する様々な脂肪酸およびそれらの誘導体としては、例えば、オレイン酸、ラウリン酸、カプリン酸（ｎ－デカン酸）、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、リノレン酸、ジカプレート、トリカプレート、モノオレイン（１－モノオレイル－ｒａｃ－グリセロール）、ジラウリン、カプリル酸、アラキドン酸、グリセロール１－モノカプレート、１－ドデシルアザシクロヘプタン－２－オン、アシルカルニチン、アシルコリン、それらのＣ１～２０アルキルエステル（例えば、メチル、イソプロピル、およびｔ－ブチル）、ならびにそれらのモノおよびジグリセリド（すなわち、オレエート、ラウレート、カプレート、ミリステート、パルミテート、ステアレート、リノレエートなど）が挙げられる（例えば、Ｔｏｕｉｔｏｕ，Ｅ．ら、Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ、Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ、２００６；Ｌｅｅら、Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ、１９９１、９２頁；Ｍｕｒａｎｉｓｈｉ，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ、１９９０、７、１～３３頁；Ｅｌ Ｈａｒｉｒｉら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１９９２、４４、６５１～６５４頁参照）。
胆汁の生理学的役割には、脂質および脂溶性ビタミンの分散および吸収の促進が含まれる（例えば、Ｍａｌｍｓｔｅｎ，Ｍ．Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓ ａｎｄ ｐｏｌｙｍｅｒｓ ｉｎ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ、Ｉｎｆｏｒｍａ Ｈｅａｌｔｈ Ｃａｒｅ、Ｎ
ｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ、２００２；Ｂｒｕｎｔｏｎ、Ｃｈａｐｔｅｒ ３８ ｉｎ：Ｇｏｏｄｍａｎ ＆ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，９ｔｈ Ｅｄ．、ＨａｒｄｍａｎらＥｄｓ．，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９６、９３４～９３５頁参照）。様々な天然の胆汁塩、およびそれらの合成誘導体が、浸透促進剤として作用する。したがって、「胆汁塩」という用語は、胆汁の天然成分のいずれかおよびそれらの合成誘導体のいずれかを含む。好適な胆汁塩としては、例えば、コール酸（またはその薬学的に許容されるナトリウム塩、コール酸ナトリウム）、デヒドロコール酸（デヒドロコール酸ナトリウム）、デオキシコール酸（デオキシコール酸ナトリウム）、グルコール酸（グルコール酸ナトリウム）、グリコール酸（グリコール酸ナトリウム）、グリコデオキシコール酸（グリコデオキシコール酸ナトリウム）、タウロコール酸（タウロコール酸ナトリウム）、タウロデオキシコール酸（タウロデオキシコール酸ナトリウム）、ケノデオキシコール酸（ケノデオキシコール酸ナトリウム）、ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）、ナトリウムタウロ－２４，２５－ジヒドロ－フシデート（ＳＴＤＨＦ）、グリコジヒドロフシジン酸ナトリウムおよびポリオキシエチレン－９－ラウリルエーテル（ＰＯＥ）が挙げられる（例えば、Ｍａｌｍｓｔｅｎ，Ｍ．Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓ ａｎｄ ｐｏｌｙｍｅｒｓ ｉｎ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ、Ｉｎｆｏｒｍａ Ｈｅａｌｔｈ Ｃａｒｅ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ、２００２；Ｌｅｅら、Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ、１９９１、９２頁；Ｓｗｉｎｙａｒｄ、Ｃｈａｐｔｅｒ ３９ Ｉｎ：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄ．、Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．、１９９０、７８２～７８３頁；Ｍｕｒａｎｉｓｈｉ、Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ、１９９０、７、１～３３頁；Ｙａｍａｍｏｔｏら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．、１９９２、２６３、２５頁；Ｙａｍａｓｈｉｔａら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．、１９９０、７９、５７９～５８３頁参照）。
本発明に関連して使用されるキレート剤は、金属イオンとの錯体を形成することによって溶液から金属イオンを除去し、粘膜を通るｉＲＮＡの吸収が向上されるという結果を生じる化合物として定義される。本発明における浸透促進剤としてのキレート剤の使用に関して、ほとんどの特徴付けられたＤＮＡヌクレアーゼが触媒作用のために二価金属イオンを必要とし、したがって、キレート剤によって阻害されるため、キレート剤は、ＤＮアーゼ阻害剤としても作用するというさらなる利点を有する（Ｊａｒｒｅｔｔ，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．、１９９３、６１８，３１５～３３９頁）。好適なキレート剤としては、限定はされないが、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム（ＥＤＴＡ）、クエン酸、サリチレート（例えば、サリチル酸ナトリウム、５－メトキシサリチレート、およびホモバニレート）、コラーゲンのＮ－アシル誘導体、ラウレス－９およびβ－ジケトンのＮ－アミノアシル誘導体（エナミン）が挙げられる（例えば、Ｋａｔｄａｒｅ，Ａ．ら、Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｆｏｒ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ，ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ａｎｄ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ、２００６；Ｌｅｅら、Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ、１９９１、９２頁；Ｍｕｒａｎｉｓｈｉ、Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ、１９９０、７、１～３３頁；Ｂｕｕｒら、Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌ．、１９９０、１４、４３～５１頁参照）。
本明細書で使用する場合、非キレート非界面活性剤の浸透促進化合物は、キレート剤または界面活性剤としてのわずかな活性を示すが、それにもかかわらず、消化器粘膜を通るｉＲＮＡの吸収を増大する化合物として定義される（例えば、Ｍｕｒａｎｉｓｈｉ、Ｃｒ
ｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ、１９９０、７、１～３３頁参照）。このクラスの浸透促進剤としては、例えば、不飽和環状尿素、１－アルキル－および１－アルケニルアザシクロ－アルカノン誘導体（Ｌｅｅら、Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ、１９９１、９２頁）；ならびにジクロフェナクナトリウム、インドメタシン、およびフェニルブタゾンのような非ステロイド性抗炎症剤（Ｙａｍａｓｈｉｔａら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１９８７、３９、６２１～６２６頁）が挙げられる。
細胞レベルにおけるｉＲＮＡの取り込みを促進する薬剤も、本発明の医薬組成物および他の組成物に加えられる。例えば、リポフェクチンなどのカチオン性脂質（Ｊｕｎｉｃｈｉら、米国特許第５，７０５，１８８号）、カチオン性グリセロール誘導体、およびポリリジンのようなポリカチオン性分子（Ｌｏｌｌｏら、ＰＣＴ出願の国際公開第９７／３０７３１号パンフレット）も、ｄｓＲＮＡの細胞取り込みを促進することが公知である。市販のトランスフェクション試薬の例としては、特に、例えば、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００（商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）、２９３ｆｅｃｔｉｎ（商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）、Ｃｅｌｌｆｅｃｔｉｎ（商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）、ＤＭＲＩＥ－Ｃ（商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）ＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２０００ ＣＤ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）、ＲＮＡｉＭＡＸ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）、Ｏｌｉｇｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）、Ｏｐｔｉｆｅｃｔ（商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）、Ｘ－ｔｒｅｍｅＧＥＮＥ Ｑ２ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｒｏｃｈｅ；Ｇｒｅｎｚａｃｈｅｒｓｔｒａｓｓｅ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ＤＯＴＡＰ Ｌｉｐｏｓｏｍａｌ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｇｒｅｎｚａｃｈｅｒｓｔｒａｓｓｅ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ＤＯＳＰＥＲ Ｌｉｐｏｓｏｍａｌ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｇｒｅｎｚａｃｈｅｒｓｔｒａｓｓｅ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、またはＦｕｇｅｎｅ（Ｇｒｅｎｚａｃｈｅｒｓｔｒａｓｓｅ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、Ｔｒａｎｓｆｅｃｔａｍ（登録商標）Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ；Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）、ＴｒａｎｓＦａｓｔ（商標）Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ；Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）、Ｔｆｘ（商標）２０ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ；Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）、Ｔｆｘ（商標）－５０ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ；Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）、ＤｒｅａｍＦｅｃｔ（商標）（ＯＺ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；Ｍａｒｓｅｉｌｌｅ、Ｆｒａｎｃｅ）、ＥｃｏＴｒａｎｓｆｅｃｔ（ＯＺ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；Ｍａｒｓｅｉｌｌｅ、Ｆｒａｎｃｅ）、ＴｒａｎｓＰａｓｓａ Ｄ１ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ
Ｂｉｏｌａｂｓ；Ｉｐｓｗｉｃｈ、ＭＡ、ＵＳＡ）、ＬｙｏＶｅｃ（商標）／ＬｉｐｏＧｅｎ（商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）、ＰｅｒＦｅｃｔｉｎ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｇｅｎｌａｎｔｉｓ；Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）、ＮｅｕｒｏＰＯＲＴＥＲ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ
Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｇｅｎｌａｎｔｉｓ；Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）、ＧｅｎｅＰＯＲＴＥＲ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｒｅａｇｅｎｔ（Ｇｅｎｌａｎｔｉｓ；Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）、ＧｅｎｅＰＯＲＴＥＲ ２ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｒｅａｇｅｎｔ（Ｇｅｎｌａｎｔｉｓ；Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）、Ｃｙｔｏｆｅｃｔｉｎ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｇｅｎｌａｎｔｉｓ；Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）、ＢａｃｕｌｏＰＯＲＴＥＲ Ｔｒａｎｓｆｅｃ
ｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｇｅｎｌａｎｔｉｓ；Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）、ＴｒｏｇａｎＰＯＲＴＥＲ（商標） ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｇｅｎｌａｎｔｉｓ；Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）、ＲｉｂｏＦｅｃｔ（Ｂｉｏｌｉｎｅ；Ｔａｕｎｔｏｎ、ＭＡ、ＵＳＡ）、ＰｌａｓＦｅｃｔ（Ｂｉｏｌｉｎｅ；Ｔａｕｎｔｏｎ、ＭＡ、ＵＳＡ）、ＵｎｉＦＥＣＴＯＲ（Ｂ－Ｂｒｉｄｇｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ；Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ、ＵＳＡ）、ＳｕｒｅＦＥＣＴＯＲ（Ｂ－Ｂｒｉｄｇｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ；Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ、ＵＳＡ）、またはＨｉＦｅｃｔ（商標）（ＢーＢｒｉｄｇｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ、ＵＳＡ）が挙げられる。
エチレングリコールおよびプロピレングリコールのようなグリコール、２－ピロールのようなピロール、アゾン、ならびにリモネンおよびメントンのようなテルペンを含む、他の薬剤を用いて、投与される核酸の浸透を促進することができる。
ｖ．担体
本発明の特定の組成物は、製剤中に担体化合物も組み込んでいる。本明細書で使用する場合、「担体化合物」または「担体」は、不活性（すなわち、それ自体が生物学的活性を持たない）であるが、例えば、生物学的に活性な核酸を分解する、または循環からの核酸の除去を促進することによる、生物学的活性を有する核酸のバイオアベイラビリティを低下させるインビボでのプロセスによって核酸と認識される核酸またはその類似体を指すことができる。核酸および担体化合物の共投与、典型的には過剰な後者の物質による共投与により、おそらくは共通の受容体に対する担体化合物と核酸との競合に起因して、肝臓、腎臓、または他の循環外リザーバーの中で回収される核酸の量が実質的に低下し得る。例えば、肝組織内での部分的ホスホロチオエートｄｓＲＮＡの回収は、それがポリイノシン酸、デキストラン硫酸塩、ポリシチジル酸、または４－アセトアミド－４’イソチオシアノ－スチルベン－２，２’－ジスルホン酸と共投与された場合、低下する（Ｍｉｙａｏら、ＤｓＲＮＡ Ｒｅｓ．Ｄｅｖ．、１９９５、５、１１５～１２１頁；Ｔａｋａｋｕｒａら、ＤｓＲＮＡ ＆ Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ．、１９９６、６、１７７～１８３頁）。
ｖｉ．賦形剤
担体化合物とは対照的に、「医薬担体」または「賦形剤」は、動物に１つまたはそれ以上の核酸を送達するための薬学的に許容される溶媒、懸濁剤、または任意の他の薬学的に不活性なビヒクルである。賦形剤は、液体または固体とすることができ、計画された投与方法を考慮に入れて、核酸および所与の医薬組成物の他の構成成分と組み合わされた場合に、所望の容積、稠度などを提供するように選択される。典型的な医薬担体としては、限定はされないが、結合剤（例えば、α化トウモロコシでんぷん、ポリビニルピロリドン、またはヒドロキシプロピルメチルセルロースなど）；充填剤（例えば、乳糖および他の糖、微結晶セルロース、ペクチン、ゼラチン、硫酸カルシウム、エチルセルロース、ポリアクリレート、またはリン酸水素カルシウムなど）；潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、シリカ、コロイド状二酸化ケイ素、ステアリン酸、金属ステアリン酸塩、水素化植物油、トウモロコシでんぷん、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウムなど）；錠剤崩壊剤（例えば、でんぷん、でんぷんグリコール酸ナトリウムなど）；および湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウムなど）が挙げられる。
核酸と有害に反応しない、非－非経口投与に好適な薬学的に許容される有機または無機賦形剤も本発明の組成物の製剤化に使用される。好適な薬学的に許容される担体としては、限定はされないが、水、塩溶液、アルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、乳糖、アミロース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘性パラフィン、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドンなどが挙げられる。
核酸の局所投与用の製剤は、アルコールのような通常の溶媒中の無菌および非無菌水性溶液、非水性溶液、または液体もしくは固体油ベース中の核酸の溶液を含み得る。溶液は、緩衝剤、希釈剤、および他の好適な添加剤も含み得る。核酸と有害に反応しない、非－非経口投与に好適な薬学的に許容される有機または無機賦形剤を使用し得る。
好適な薬学的に許容される賦形剤としては、限定はされないが、水、塩溶液、アルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、乳糖、アミロース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘性パラフィン、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドンなどが挙げられる。
ｖｉｉ．他の構成成分
本発明の組成物はさらに、医薬組成物中に従来見出される他の補助構成成分も、当技術分野で確立されたそれらの使用レベルで含有し得る。したがって、例えば、組成物は、例えば、鎮痒薬、収斂薬、局所麻酔薬もしくは抗炎症薬剤のような、さらなる適合可能な、薬学的に活性な材料を含有することができ、または染料、風味剤、保存剤、抗酸化剤、乳白剤、増粘剤、および安定剤のような本発明の組成物の様々な剤形を物理的に製剤化するのに有用なさらなる材料を含有することができる。しかしながら、そのような材料は、加えられたときに、本発明の組成物の構成成分の生物学的活性を過度に妨害しない必要がある。製剤は滅菌されてもよく、また所望の場合、製剤の核酸と有害に相互作用しない補助剤、例えば潤滑剤、保存剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を与える塩、緩衝液、着色料、調味料および／または芳香性物質などと混合される。
水性懸濁液は、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールおよび／またはデキストランを含む、懸濁液の粘度を増大させる物質を含有し得る。懸濁液は、安定剤も含み得る。
いくつかの実施形態では、本発明で取り上げられる医薬組成物は、（ａ）１つまたはそれ以上のｉＲＮＡ化合物、および（ｂ）非ＲＮＡｉ機構によって機能し、溶血性障害を処置するのに有用な１つまたはそれ以上の薬剤を含む。そのような薬剤の例としては、限定はされないが、抗炎症剤、抗脂肪症剤、抗ウイルス剤、および／または抗繊維症剤が挙げられる。さらに、シリマリンのような、肝臓を保護するのに一般的に使用される他の物質も、本明細書に記載のｉＲＮＡと共に使用される。肝疾患を処置するのに有用な他の薬剤としては、テルビブジン、エンテカビル、およびテラプレビルのようなプロテアーゼ阻害剤、ならびに例えば、Ｔｕｎｇら、米国特許出願公開第２００５／０１４８５４８号、第２００４／０１６７１１６号、および第２００３／０１４４２１７号；ならびにＨａｌｅら、米国特許出願公開第２００４／０１２７４８８号に開示されている他の薬剤を含む。
そのような化合物の毒性および処置効果は、例えば、ＬＤ５０（個体群の５０％に致死的な用量）およびＥＤ５０（個体群の５０％に治療有効な用量）を決定するための、細胞培養物または実験動物における標準的な薬学的手順によって決定される。毒性作用と処置効果との間の用量比は、治療指数であり、ＬＤ５０／ＥＤ５０比として表される。高い治療指数を示す化合物が好ましい。
細胞培養アッセイおよび動物試験から得られたデータは、ヒトにおける使用のためのある範囲の投与量を製剤化するのに使用される。本発明において本明細書で取り上げられる組成物の投与量は、一般に、ほとんどまたは全く毒性を伴わずにＥＤ５０を含む血中濃度の範囲内である。投与量は、用いられる剤形および利用される投与経路に応じて、この範囲内で変化し得る。本発明で取り上げられる方法に使用される任意の化合物では、治療有効用量は、細胞培養アッセイから最初に推測される。用量は、細胞培養物中で測定して、
ＩＳＥＲＰＩＮＣ１０（すなわち、症状の最大阻害の半分を達成する試験化合物の濃度）を含む、化合物の、または適切な場合、標的配列のポリペプチド産物の循環血漿濃度範囲を動物モデル内で達成する（例えば、ポリペプチドの濃度の低下を達成する）ように製剤化される。そのような情報を使用して、ヒトでの有用な用量をより正確に決定することができる。血漿中のレベルは、例えば高速液体クロマトグラフィーにより測定することができる。
上記で論じたように、それらの投与に加えて、本発明で取り上げられるｉＲＮＡは、ＳＥＲＰＩＮＣ１発現により仲介される病理仮定の処置に有効な他の公知の薬剤と組み合わせて投与される。いずれの場合でも、投与する医師は、観察された結果に基づいて、当技術分野で公知のまたは本明細書に記載の標準的な有効性の尺度を使用して、ｉＲＮＡ投与の量および時間を調整することができる。
ＶＩ．キット
本発明は、本発明の任意の方法を行うためのキットも提供する。このようなキットは、１つまたはそれ以上のＲＮＡｉ薬剤および使用説明書、例えば予防または治療有効用量のＲＮＡｉ薬剤の投与のための説明書を含む。キットは場合により、ＲＮＡｉ薬剤を投与するための手段（例えば、注入装置）、またはＳｅｒｐｉｎｃ１の阻害を測定するための手段（例えば、Ｓｅｒｐｉｎｃ１ ｍＲＮＡ、Ｓｅｒｐｉｎｃ１タンパク質、および／またはＳｅｒｐｉｎｃ１活性の阻害を測定するための手段）をさらに含み得る。Ｓｅｒｐｉｎｃ１の阻害を測定するためのこのような手段は、例えば血漿サンプルのような対象からのサンプルを得るための手段を含み得る。本発明のキットは、場合により、治療有効用量または予防有効量を決定するための手段をさらに含み得る。
特に定義されない限り、本明細書で使用するすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する当業者により通常に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載したものと同様のまたは等価な方法および材料を、本発明で取り上げられるｉＲＮＡおよび方法の実践または試験に使用できるが、好適な方法および材料は下記に記載されている。本明細書に言及したすべての刊行物、特許出願、特許および他の参考文献は、それらの全体を参照によって本明細書に組み入れる。さらに、材料、方法、および実施例は、単なる例示であり、限定を意図するものではない。
Figure 2023123756000023
Figure 2023123756000024
健常なヒト対象への単回用量のＡＴ３ＳＣ－００１の投与
３：１（実薬：プラセボ）のコホートの、２４人の健常なヒトボランティアに、単回用量０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、または１．０ｍｇ／ｋｇのＡＴ３ＳＣ－００１（センス（５’から３’）：ＧｆｓｇｓＵｆｕＡｆａＣｆａＣｆＣｆＡｆｕＵｆｕＡｆｃＵｆｕＣｆａＡｆＬ９６（配列番号１３）；アンチセンス（５’から３’）：ｕｓＵｆｓｇＡｆａＧｆｕＡｆａＡｆｕｇｇＵｆｇＵｆｕＡｆａＣｆｃｓａｓｇ（配列番号１４））を投与した。血漿試料を、投与後０、１、２、３、７、１０、１４、２１、２８、４２、５６、および７０日目に回収し、ＡＴタンパク質レベル、ＡＴ活性、およびＡＴタンパク質サイレンシングの期間をモニターした。ＡＴタンパク質レベルは、ＥＬＩＳＡを使用してモニターし、ＡＴ活性レベルは、Ｃａｌｉｂｒａｔｅｄ Ａｕｔｏｍａｔｅｄ Ｔｈｒｏｍｂｉｎｏｓｃｏｐｅ（組織因子＝１ｐＭ）を使用してトロンビン形成曲線の作製によってモニターした。ピークトロンビンの倍数変化は、各対象に対する２つのプレ用量値に関して平均ピークトロンビン値と比較して算出した。
重大な有害事象はなく、薬剤の投与に関連しないと考えられる３つの軽度の有害事象、および薬剤の投与に関連すると考えられる１つの軽度の有害事象（頭痛）があった。また、注射部位の反応もなく、すべての対象の身体検査、バイタルサイン、および心電図は正常範囲内であった。さらに、すべての対象のすべての肝機能検査、総ビリルビンレベル、プロトロンビン時間の国際標準比（ＰＴ／ＩＮＲ）、血小板数、ヘモグロビンレベル、および凝固検査（すなわち、活性化部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）、プロトロンビン時間（ＰＴ）、フィブリノーゲンレベル、およびフィブリンＤ－ダイマーレベル）は、試験期間中変化せず、正常範囲内であった。
図１Ａ～Ｄおよび２Ａ～Ｂは、単回用量０．０３ｍｇ／ｋｇのＡＴ３ＳＣ－００１が、ＡＴタンパク質レベルのおよそ２０％から最大３３％の低下（図２Ａおよび２Ｂ）、ならびに６０日より長い持続時間で低下する、相対するＡＴ活性の低下（図１Ａ～Ｄ）をもたらすことを示す。
図３は、ＡＴノックダウンおよびピークトロンビン形成の間に重要な関連があることをさらに実証する。特に、ピークトロンビン形成の最大１５２％増加が観察され、ピークトロンビンの平均最大増加は１３８％±８．９％（平均±ＳＥＭ）であった。さらに、ＡＴノックダウンの増加に伴うトロンビン形成の増加と一致して、第ＶＩＩＩ因子または第ＩＸ因子のレベルは正常であった。
血友病ＡまたはＢのヒト患者への複数回用量のＡＴ３ＳＣ－００１の投与
フェーズＩ－パートＢ、Ｃ、およびＤ臨床試験
ＡＴ３ＳＣ－００１（センス（５’から３’）：ＧｆｓｇｓＵｆｕＡｆａＣｆａＣｆＣｆＡｆｕＵｆｕＡｆｃＵｆｕＣｆａＡｆＬ９６（配列番号１３）；アンチセンス（５’から３’）：ｕｓＵｆｓｇＡｆａＧｆｕＡｆａＡｆｕｇｇＵｆｇＵｆｕＡｆａＣｆｃｓａｓｇ（配列番号１４））のフェーズＩ臨床試験のパートＢでは、血友病Ａ（ｎ＝２）またはＢ（ｎ＝１）の３人の患者に、ＡＴ３ＳＣ－００１を３週間毎週０．０１５ｍｇ／ｋｇ皮下投与し（１５μｇ／ｋｇ ｑｗ×３；１５ｍｃｇ／ｋｇ）；血友病Ａの６人の患者に、ＡＴ３ＳＣ－００１を３週間毎週０．０４５ｍｇ／ｋｇ皮下投与し（４５μｇ／ｋｇ ｑｗ×３；４５ｍｃｇ／ｋｇ）；血友病Ａ（ｎ＝２）またはＢ（ｎ＝１）の３人の患者に、ＡＴ３ＳＣ－００１を３週間毎週０．０７５ｍｇ／ｋｇ皮下投与した（７５μｇ／ｋｇ ｑｗ×３；７５ｍｃｇ／ｋｇ）。
ＡＴ３ＳＣ－００１（センス（５’から３’）：ＧｆｓｇｓＵｆｕＡｆａＣｆａＣｆＣｆＡｆｕＵｆｕＡｆｃＵｆｕＣｆａＡｆＬ９６（配列番号１３）；アンチセンス（５’から３’）：ｕｓＵｆｓｇＡｆａＧｆｕＡｆａＡｆｕｇｇＵｆｇＵｆｕＡｆａＣｆｃｓａｓｇ（配列番号１４））のフェーズＩ臨床試験のパートＣでは、血友病Ａ（ｎ＝２）またはＢ（ｎ＝１）の３人の患者に、０．２２５ｍｇ／ｋｇ用量のＡＴ３ＳＣ－００１を３カ月間毎月皮下投与し（２２５μｇ／ｋｇ ｑｍ×３；２２５ｍｃｇ／ｋｇ）；血友病Ａ（ｎ＝２）またはＢ（ｎ＝１）の３人の患者に、０．４５０ｍｇ／ｋｇ用量のＡＴ３ＳＣ－００１を３カ月間毎月皮下投与し（４５０μｇ／ｋｇ ｑｍ×３；４５０ｍｃｇ／ｋｇ）；血友病Ａの３人の患者に、０．９００ｍｇ／ｋｇ用量のＡＴ３ＳＣ－００１を３カ月間毎月皮下投与し（９００μｇ／ｋｇ ｑｍ×３；９００ｍｃｇ／ｋｇ）；血友病Ａの３人の患者に、１．８００ｍｇ／ｋｇ用量のＡＴ３ＳＣ－００１を３カ月間毎月皮下投与し（１８００μｇ／ｋｇ ｑｍ×３；１８００ｍｃｇ／ｋｇ）；血友病Ａ（ｎ＝３）またはＢ（ｎ＝３）の６人の患者に、固定用量８０ｍｇのＡＴ３ＳＣ－００１を３カ月間毎月皮下投与した（８０ｍｇ ｑＭ×３）。
ＡＴ３ＳＣ－００１（センス（５’から３’）：ＧｆｓｇｓＵｆｕＡｆａＣｆａＣｆＣｆＡｆｕＵｆｕＡｆｃＵｆｕＣｆａＡｆＬ９６（配列番号１３）；アンチセンス（５’から３’）：ｕｓＵｆｓｇＡｆａＧｆｕＡｆａＡｆｕｇｇＵｆｇＵｆｕＡｆａＣｆｃｓａｓｇ（配列番号１４））のフェーズＩ臨床試験のパートＤでは、血友病Ａ（ｎ＝５）またはＢ（ｎ＝１）であり、出血管理のためバイパス止血製剤（ＢＰＡ）を使用している６人のインヒビター患者に、固定用量５０ｍｇのＡＴ３ＳＣ－００１を３カ月間毎月皮下投与し（５０ｍｇ ｑＭ×３）；血友病Ａであり、出血管理のためバイパス止血製剤（ＢＰＡ）を使用している１０人の患者に、固定用量８０ｍｇのＡＴ３ＳＣ－００１を３カ月間毎月皮下投与した（８０ｍｇ ｑＭ×３）。
血漿試料を、ＡＴ３ＳＣ－００１の投与後に回収し、ＡＴタンパク質レベル、ＡＴ活性、およびＡＴタンパク質サイレンシングの期間をモニターした。ＡＴタンパク質レベルは、ＥＬＩＳＡを使用してモニターし、ＡＴ活性レベルは、Ｃａｌｉｂｒａｔｅｄ Ａｕｔｏｍａｔｅｄ Ｔｈｒｏｍｂｉｎｏｓｃｏｐｅ（組織因子＝１ｐＭ）を使用してトロンビン形成曲線の作製によってモニターした。ピークトロンビンの倍数変化は、各対象に対する２つのプレ用量値に関して平均ピークトロンビン値と比較して算出した。
試験のパートＢ、Ｃ、およびＤに参加する患者の人口統計学的特性およびベースライン特性を表２に提供する。
Figure 2023123756000025
試験のパートＢ、Ｃ、およびＤに関しては、重大な有害事象はなく、中断もなく、注射部位の反応もなく、すべての患者の身体検査、バイタルサイン、および心電図は正常範囲
内であった。さらに、すべての患者のすべての肝機能検査、総血球数は試験期間中変化せず、正常範囲内であった。また、本試験の期間中、血栓塞栓事象は見られず、いずれの患者においてもフィブリンＤ－ダイマーレベルの臨床的に著しい増加は見られなかった。いずれの出血事象も、標準的な補充因子またはバイパス止血製剤の投与によって成功裏に管理された。さらに、抗薬物抗体（ＡＤＡ）形成の事例はなかった。
ベースラインに対する平均ＡＴノックダウンとして示される、１５ｍｃｇ／ｋｇ、４５ｍｃｇ／ｋｇ、および７５ｍｃｇ／ｋｇのコホートにおけるＡＴレベルのノックダウンを、図４に示す。図４は、３週間、０．０１５ｍｇ／ｋｇのＡＴ３ＳＣ－００１の週１回の用量が、２９％±１２％（平均±ＳＥＭ）の平均最大ＡＴノックダウンをもたらすことを実証する。最大ＡＴノックタウンは最大５３％であった。図４はまた、３週間、０．０４５ｍｇ／ｋｇのＡＴ３ＳＣ－００１の週１回の用量が、５５±９％（平均±ＳＥＭ）の平均最大ＡＴノックダウンおよび８６％の最大ＡＴノックタウンをもたらすことを実証する。さらに、図４はまた、３週間、０．０７５ｍｇ／ｋｇのＡＴ３ＳＣ－００１の週１回の用量が、６１±８％（平均±ＳＥＭ）の平均最大ＡＴノックダウンおよび７４％の最大ＡＴノックタウンをもたらすことを実証する。
ベースラインに対する平均ＡＴノックダウンとして示される、２２５ｍｃｇ／ｋｇ、４５０ｍｃｇ／ｋｇ、９００ｍｃｇ／ｋｇ、１８００ｍｃｇ／ｋｇ、および８０ｍｇのコホートにおけるＡＴレベルのノックダウンを、図５Ａに示す。図５Ａは、３カ月間、０．２２５ｍｇ／ｋｇのＡＴ３ＳＣ－００１の月１回の用量が、７０％±９％（平均±ＳＥＭ）の平均最大ＡＴノックダウンをもたらすことを実証する。最大ＡＴノックタウンは最大８０％であった。図５Ａはまた、３カ月間、０．４５０ｍｇ／ｋｇのＡＴ３ＳＣ－００１の月１回の用量が、７７±５％（平均±ＳＥＭ）の平均最大ＡＴノックダウンおよび８５％の最大ＡＴノックタウンをもたらすことを実証する。さらに、図５Ａはまた、３カ月間、０．９００ｍｇ／ｋｇのＡＴ３ＳＣ－００１の月１回の用量が、７８±７％（平均±ＳＥＭ）の平均最大ＡＴノックダウンおよび８８％の最大ＡＴノックタウンをもたらすことを実証する。さらに、図５Ａは、３カ月間、１．８００ｍｇ／ｋｇのＡＴ３ＳＣ－００１の月１回の用量が、７９±３％（平均±ＳＥＭ）の平均最大ＡＴノックダウンおよび８４％の最大ＡＴノックタウンをもたらすことを実証する。図５Ａはまた、３カ月間、８０ｍｇのＡＴ３ＳＣ－００１の月１回の用量が、８７±１％（平均±ＳＥＭ）の平均最大ＡＴノックダウンをもたらすことを実証する。
ＡＴ３ＳＣ－００１の用量対ＡＴタンパク質レベルの相対最下点をグラフ化した図５Ｂで実証したように、ＡＴ３ＳＣ－００１のヒト患者への投与は用量依存的にＡＴタンパク質レベルを低下する。
健常なヒトボランティア（実施例１）および血友病ＡまたはＢの患者におけるトロンビン形成の評価により、ＡＴ３ＳＣ－００１の週１回の用量が、ＡＴを≧５０％ノックダウンした場合、ベースラインと比較して、トロンビン形成が平均１１２±３８％（ｐ＜０．０５）増加し、血友病患者のトロンビン形成において最大３３４％の増加（ベースラインと比較して）をもたらすことを実証した（図６Ｂ）。図６Ａは、ＡＴ３ＳＣ－００１を週１回の用量投与した血友病ＡまたはＢの患者において達成された最大ピークトロンビンは、正常な対象におけるトロンビン形成の低範囲であったことを実証する。
１人の対象（対象１０１－００９）由来の全血液のＲＯＴＥＭ（登録商標）Ｔｈｒｏｍｂｏｅｌａｓｔｏｍｅｔｒｙ分析（例えば、Ｙｏｕｎｇら、（２０１３）Ｂｌｏｏｄ １２１：１９４４頁参照）により、３週間、毎週０．０４５ｍｇ／ｋｇでのＡＴ３ＳＣ－００１の投与が、ピークトロンビン形成の増加をもたらすだけでなく、凝血塊形成および凝固時間の増加によって実証されるように全血液の凝血塊形成の明白で永続的な改善ももた
らすことが実証される（図７）。対象１０１－００９は２日目から出血事象がなく、現時点では４７日間出血がない。
ＡＴ低下四分位値によるトロンビン形成の事後分析（パートＢおよびＣ）は、最高ＡＴ低下四分位値（＞７５％ ＡＴ低下）において、ベースラインと比較して平均トロンビン形成において２８９％の増加を実証する（図９）。トロンビン形成のこのレベルは、健常なボランティアにおいて観察されたトロンビン形成の範囲内である。
３人の患者のサブ解析により、ＡＴ３ＳＣ－００１投与および第ＶＩＩＩ因子投与の等価性を調査した。簡潔に言うと、第ＶＩＩＩ因子を３人の患者それぞれに投与し、投与後－０．５、１、２、６、２４、および４８時間で患者から血漿を回収した。各対象からの試料は、第ＶＩＩＩ因子レベルおよびトロンビン形成レベルに関して分析し、個別化した第ＶＩＩＩ因子－ピークトロンビン形成の関連を確立するために使用した。このデータは、次いで、ＡＴ３ＳＣ－００１の投与によって達成されたピークトロンビン形成レベルとの比較のために使用した。図１０Ａ～１０Ｃに示すように、ＡＴ３ＳＣ－００１の投与は、対象への第ＶＩＩＩ因子の投与によって達成されるのとほぼ同じレベルまで対象におけるピークトロンビン形成レベルを達成するのに十分であり、対象において約４０％より高いピークトロンビン形成レベルを達成するのに十分である。
ＡＴ低下四分位値による出血事象の事後分析（パートＢおよびＣ）は、最高ＡＴ低下四分位値において、平均推定年間出血率（ＡＢＲ）５±２（中央値＝１）の、ＡＴ低下レベルの増加による出血傾向の減少を実証する（図１１）。この分析は、１６人の患者における＞７５％のＡＴ低下を伴う、１１００日より多くの累積日数を含む。
パートＣコホートにおける出血事象の事後分析も実施した。図１２は、この分析に使用した患者のデータを提供する。図１３Ａで実証したように、コホートＣに登録され、予防（ＰＰｘ）補充因子を投与したすべての患者の過去のＡＢＲ中央値は２であり、コホートＣに登録され、オンデマンド（ＯＤ）補充因子を投与したすべての患者の過去のＡＢＲ中央値は２８であった。これらの患者へのＡＴ３ＳＣ－００１の投与は、ＡＢＲ中央値の著しい減少をもたらした。特に、ＡＴ３ＳＣ－００１の投与は、観察期間中（２９日目から最終診察日または最終投与＋５６日、いずれか早い方）、出血を報告しない患者の５３％の中央値をもたらし、観察期間中、突発性出血を報告しない患者の８２％の中央値をもたらした。図１３Ｂは、コホートＣで８０ｍｇのＡＴ３ＳＣ－００１を毎月投与され、予防（ＰＰｘ）補充因子を投与した患者に関して、過去のＡＢＲ中央値が６であることを実証する。しかしながら、ＡＴ３ＳＣ－００１の投与後、観察期間中のＡＢＲ中央値は０であった。
フェーズＩ試験のパートＤでは、投与した補充因子に対する抗体（インヒビター）を産生し、したがって補充凝固因子に対して無反応性になった血友病ＡまたはＢの患者における、ＡＴ３ＳＣ－００１投与の効果を評価した。したがって、ＡＴ３ＳＣ－００１の投与前に、これらの患者のピークトロンビン応答を評価するため、５０ｍｇのコホートに登録された患者に、それらの標準的なバイパス止血製剤（ＢＰＡ）を投与し（例えば、活性型プロトロンビン複合体製剤（ＡＰＣＣ）および／または組換え活性型ＦＶＩＩ（ｒＦＶＩＩａ））、血漿試料をＢＰＡ投与後－１、２、６、および２４時間で回収し、試料はトロンビン形成に関して分析した。図１４Ａ～１４Ｆに示すように、ＡＴ３ＳＣ－００１を投与したインヒビター患者におけるＡＴ低下およびトロンビン形成は、非インヒビター患者において同様の用量のＡＴ３ＳＣ－００１の投与後に観察されたＡＴ低下およびトロンビン形成に匹敵した。さらに、図１４Ａ～１４Ｆは、ＡＴ３ＳＣ－００１の投与後のトロンビン形成が、ＢＰＡ投与によって達成された一過性のレベルを一貫して超えることを実証する。
図１５で実証したように、５０ｍｇおよび８０ｍｇのＡＴ３ＳＣ－００１の１カ月に１回の皮下投与により、インヒビターを有する血友病患者において約８０％の用量依存的なＡＴ低下を達成した。さらに、図１６で実証したように、ＡＴ３ＳＣ－００１を投与した患者において達成されたＡＴ低下効果は、トロンビン形成の増加と関連した。
試験のパートＤの患者における出血事象の試験的事後分析も実施した。図１７Ａは、血友病ＡまたはＢのインヒビター患者への、５０ｍｇまたは８０ｍｇのいずれかの用量で毎月１回ＡＴ３ＳＣ－００１の投与により、プレ試験ＡＢＲにおける著しい減少をもたらしたことを示す。さらに、図１７Ｂで実証したように、年間出血率（ＡＢＲ）中央値は、本フェーズＩ試験のパートＤにおいてＡＴ３ＳＣ－００１を投与したすべてのインヒビター患者に関してゼロであり、５６％の患者が出血せず、６９％の患者が突発性出血ゼロを経験した。
要約すると、ＡＴ３ＳＣ－００１は、インヒビターを有するまたは有さない血友病ＡおよびＢの患者において良好な耐用性を示した。試験薬に関連するＳＡＥおよび血栓塞栓事象はなかった。データは、非インヒビター患者において血友病表現型の臨床活性および相関があることを実証する。データはさらに、１カ月に１回の皮下投与レジメンによる用量依存的なＡＴ低下およびトロンビン形成の増加、ならびに５０ｍｇまたは８０ｍｇの固定用量のＡＴ３ＳＣ－００１の投与がおよそ８０％の一貫したＡＴ低下を提供することを実証する。
さらに、データは、インヒビター患者へのＡＴ３ＳＣ－００１の投与が非インヒビター患者と一貫して、ＡＴ低下およびトロンビン形成の増加をもたらし、トロンビン形成がＢＰＡ投与によって一過的に達成されたものを超えて一貫して増加することを実証する。
血友病ＡまたはＢのヒト患者への複数回用量のＡＴ３ＳＣ－００１の投与
フェーズＩＩ非盲検継続投与（ＯＬＥ）臨床試験
ＡＴ３ＳＣ－００１（センス（５’から３’）：ＧｆｓｇｓＵｆｕＡｆａＣｆａＣｆＣｆＡｆｕＵｆｕＡｆｃＵｆｕＣｆａＡｆＬ９６（配列番号１３）；アンチセンス（５’から３’）：ｕｓＵｆｓｇＡｆａＧｆｕＡｆａＡｆｕｇｇＵｆｇＵｆｕＡｆａＣｆｃｓａｓｇ（配列番号１４））のフェーズＩＩ ＯＬＥ研究では、上述のフェーズＩパートＢおよびＣ臨床試験でＡＴ３ＳＣ－００１が事前に投与されたインヒビターを有するまたは有さない患者が、フェーズＩＩ非盲検延長（ＯＬＥ）研究に登録するのに適格であった。ＡＴ３Ｓｃ－００１が３週間にわたって毎週０．０１５ｍｇ／ｋｇ皮下投与された（１５マイクログラム／ｋｇ ｑｗ×３；１５ｍｃｇ／ｋｇ）；またはＡＴ３ＳＣ－００１が３週間にわたって毎週０．０４５ｍｇ／ｋｇ皮下投与された（４５マイクログラム／ｋｇ ｑｗ×３；４５ｍｃｇ／ｋｇ）；またはＡＴ３ＳＣ－００１が３週間にわたって毎週０．０７５ｍｇ／ｋｇ皮下投与された、インヒビターを有さない血友病ＡまたはＢを有するフェーズＩパートＢ研究からの１５名の患者と；３カ月にわたってＡＴ３ＳＣ－００１が毎月０．２２５ｍｇ／ｋｇ用量で皮下投与された（２２５マイクログラム／ｋｇ ｑｍ×３；２２５ｍｃｇ／ｋｇ）；または３カ月にわたってＡＴ３ＳＣ－００１が毎月０．４５０ｍｇ／ｋｇ用量で皮下投与された（４５０マイクログラム／ｋｇ ｑｍ×３；４５０ｍｃｇ／ｋｇ）；または３カ月にわたってＡＴ３ＳＣ－００１が毎月０．９００ｍｇ／ｋｇ用量で皮下投与された（９００マイクログラム／ｋｇ ｑｍ×３；９００ｍｃｇ／ｋｇ）；または３カ月にわたってＡＴ３ＳＣ－００１が毎月１，８００ｍｇ／ｋｇ用量で皮下投与された（１８００マイクログラム／ｌｇ ｑｍ×３；１８００ｍｃｇ／ｋｇ）；または３カ月にわたってＡＴ３ＳＣ－００１が８０ｍｇの月間固定用量で皮下投与された（８０ｍｇ ｑＭ×３）、インヒビターを有さない血友病ＡまたはＢを有するフェーズＩパートＣ研究
からの１８名の患者と；３カ月にわたってＡＴ３ＳＣ－００１が５０ｍｇの月間固定用量で皮下投与された（５０ｍｇ ｑＭ×３）；または３カ月にわたってＡＴ３ＳＣ－００１が８０ｍｇの月間固定用量で皮下投与された（８０ｍｇ ｑＭ×３）、インヒビターを有する血友病ＡまたはＢを有するフェーズＩパートＤ研究からの１６名の患者は、この研究に登録するのに適格であった。
３３名の患者をこの研究に登録し、２９名の患者は研究を継続し、５名の患者は中断した（４名は承諾の撤回に起因し、１名はＡＥに起因する。）。インヒビターを有さない血友病Ａ（ｎ＝７）または血友病Ｂ（ｎ＝３）を有する１０名の患者に、３カ月にわたって毎月、ＡＴ３ＳＣ－００１を、５０ｍｇの固定用量で皮下投与し（５０ｍｇ ｑＭ×３）；インヒビターを有さない血友病Ａ（ｎ＝７）または血友病Ｂ（ｎ＝２）を有する９名の患者に、３カ月にわたって毎月、ＡＴ３ＳＣ－００１を、８０ｍｇの固定用量で皮下投与した（５０ｍｇ ｑＭ×３）。同様に、インヒビターを有する血友病Ａ（ｎ＝３）を有する３名の患者に、３カ月にわたって毎月、ＡＴ３ＳＣ－００１を５０ｍｇの固定用量で皮下投与し（５０ｍｇ ｑＭ×３）；インヒビターを有する血友病Ａ（ｎ＝１１）または血友病Ｂ（ｎ＝１）を有する１１名の患者に、３カ月にわたって毎月、ＡＴ３ＳＣ－００１を８０ｍｇの固定用量で皮下投与した（５０ｍｇ ｑＭ×３）。この研究に登録された患者の、人口統計学的、ベースライン特性、およびＡＴ３ＳＣ－００１への曝露の持続時間を、下記の表３に示す。
Figure 2023123756000026
ＡＴ３ＳＣ－００１は一般に、フェーズＩＩ ＯＬＥにおいて、インヒビターを有さない患者で十分な耐容性を示した。６名の患者は重大な有害事象（ＳＡＥ）が報告され、その２つのＳＡＥがおそらくはＡＴ３ＳＣ－００１の投与に関連しているとみなされ；慢性ＨＣＶ感染症の１名の対象は、ＡＬＴおよびＡＳＴの上昇を経験し、その後、研究を中断し、発作性障害を持つ１名の対象は、患者の混乱を伴う発作を経験した。血栓塞栓事象がなく、または病的な凝血塊の形成の実験室での証拠もなかった。有害事象（ＡＥ）の大部分は、その重症度が軽度または中程度であり、ＡＴ３ＳＣ－００１の投与に関係なかった
。正常上限（ＵＬＮ）の３倍を超えた無症候性アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）の増大が、ＵＬＮの２倍を超えたビリルビンの同時上昇なしに、１１名の患者で観察され、それらのすべてはＣ型肝炎感染症の病歴を有する。すべての破綻出血事象は、補充因子またはバイパス薬剤で首尾良く管理された。さらに、抗薬物抗体（ＡＤＡ）形成の例もなかった。
図１８、１９Ａ、および１９Ｂはさらに、ＡＴ３ＳＣ－００１投与の臨床活性を実証する。詳細には、図１８で実証されるように、８０ｍｇでのＡＴ３ＳＣ－００１の毎月１回の皮下投薬は、ＡＴの低下を一貫して実現した。図１９Ａで実証されるように、５０ｍｇまたは８０ｍｇでのＡＴ３ＳＣ－００１の毎月１回の皮下投薬は、低い患者間変動を伴う約８０％の用量依存性ＡＴ低下を実現し、図１９Ｂで実証されるように、５０ｍｇまたは８０ｍｇでのＡＴ３ＳＣ－００１の毎月１回の皮下投薬は、正常範囲の下限に近づくトロンビン形成レベルを実現する。
フェーズＩＩ ＯＬＥ研究におけるインヒビターおよび非インヒビター患者の出血事象の試験的事後分析も行った。図２０Ａは、５０ｍｇまたは８０ｍｇのいずれかの用量での毎月１回の、インヒビターを有さない血友病ＡまたはＢを有する患者へのＡＴ３ＳＣ－００１の投与が、研究前ＡＢＲの有意な低減をもたらすことを示し、図２０Ｂは、５０ｍｇまたは８０ｍｇのいずれかの用量での毎月１回の、インヒビターを有する血友病ＡまたはＢを有する患者へのＡＴ３ＳＣ－００１の投与が、研究前ＡＢＲの有意な低減をもたらすことを示す。ＯＬＥ研究に参加するすべての患者のメジアンＡＢＲまとめると、観察期間中、患者の４８％（１６／３３）で出血がなく、観察期間中のメジアンＡＢＲの全体は、１であった。さらに、患者の６７％は、観察期間中に突発的な出血がないことが報告され、全体として、観察期間中のＡＢＲは０であった。ＯＬＥ研究中、インヒビターを有するおよび有さない患者が経験する出血事象の特性を、図２１に示す。対象の出血事象を、抗トロンビンの低下が≧７５％であるときに評価した。
図２２は、インヒビターを有さない血友病ＡまたはＢの患者が経験する出血事象の管理の詳細を提供し、図２３は、インヒビターを有する血友病ＡまたはＢの患者が経験する出血事象の管理の詳細を提供する。意外にも、インヒビターを有さない血友病ＡまたはＢの対象、およびインヒビターを有する血友病ＡまたはＢを有する患者であって、５０ｍｇまたは８０ｍｇのいずれかの用量で毎月１回ＡＴ３ＳＣ－００１が投与されたもの、および出血事象を経験したものは、出血を処置するために推奨される用量に比較して著しく低い補充因子またはバイパス薬剤、例えば、より低い用量の第ＶＩＩＩ因子またはより低い用量のａＰＣＣを必要とした。
まとめると、ＡＴ３ＳＣ－００１は一般に、インヒビターを有するおよび有さない血友病ＡおよびＢの患者において十分な耐容性を示した。さらにデータは、５０ｍｇおよび８０ｍｇでの毎月１回の皮下投薬が、低い患者間変動で約８０％の用量依存性ＡＴ低下を、ならびに正常範囲の下端に近づくトロンビン形成レベルを実現させるので、ＡＴ３ＳＣ－００１が臨床活性を有することを実証する。さらに、インヒビターを有するまたは有さない血友病ＡまたはＢの患者における出血事象の試験的事後分析は、ＡＴ３ＳＣ－００１の投与が、メジアンＡＢＲを１に低減させ、メジアン年間換算突発性出血率（ＡｓＢＲ）をゼロに低減させたことを実証する。観察期間中、３３名のうち１６名（４８％）の患者には出血がなく、３３名のうち２２名（６７％）の患者は、ゼロの突発性出血を経験した。すべての出血事象は、補充因子またはバイパス薬剤で首尾良く管理された。
更新される出血管理投薬指針：補充因子／バイパス薬剤の用量低減
上記にて提示される、フェーズＩおよびフェーズＩ／ＩＩ ＯＬＥ研究から得られたデ
ータは、ＡＴ３ＳＣ－００１が５０ｍｇまたは８０ｍｇである固定用量の毎月１回の皮下投薬が、約８０％の一貫したＡＴ低下もたらし、インヒビターを有するおよび有さない血友病ＡまたはＢの対象において用量依存性ＡＴの低下およびトロンビン形成の増大があることを実証する。
ｉｎ ｓｉｌｉｃｏモデリングデータはこれらの観察を裏付け、一部の実施形態では約７５％またはそれ以下のＡＴレベルの減少も含めた、ＡＴレベルの減少に応答して、高いトロンビン形成があることを予測する。インヒビターを有するおよび有さない血友病ＡおよびＢの患者の血漿サンプルから得られたデータは、ＡＴ３ＳＣ－００１での患者の投薬後、補充因子およびバイパス薬剤に応答した高いトロンビン形成を示す。さらに臨床データは、インヒビターを有さない血友病ＡまたはＢを有する患者（図２２）、およびインヒビターを有する血友病ＡまたはＢを有する患者（図２３）であって、５０ｍｇまたは８０ｍｇのいずれかの用量で毎月１回、ＡＴ３ＳＣ－００１が投与されたもの、および出血事象を経験したものは、出血の処置に推奨される用量に比較して、より低い用量の補充因子またはバイパス薬剤、例えば、より低い用量の第ＶＩＩＩ因子、またはより低い用量の第ＩＸ因子、またはより低い用量の延長された半減期の第ＩＸ因子、またはより低い用量の組換え第ＶＩＩａ因子、またはより低い用量のａＰＣＣを使用したことを実証する。
図２４Ａ～２４Ｄに提示される、追加の臨床出血管理データはさらに、補充因子またはバイパス薬剤のより低い量で、ＡＴ３ＳＣ－００１が投与された対象における出血の首尾良い処置を実証する。
したがって本明細書に提示されるデータは、ＡＴ３ＳＣ－００１が投与された、すなわち毎月固定された皮下用量５０ｍｇまたは８０ｍｇが投与された対象への、より低い用量の補充因子またはバイパス薬剤の投与を裏付け、例えば対象へのｄｓＲＮＡ剤の投与は、Ｓｅｒｐｉｎｃ１活性を約７５％またはそれ以上低下させる。したがって表４で述べるように、５０ｍｇまたは８０ｍｇのＡＴ３ＳＣ－００１の毎月皮下用量を受ける対象の出血管理の指針は、更新され、そのような出血は、より低い用量の補充因子またはバイパス薬剤を使用して管理されることになる。
例えば、インヒビターを有する血友病Ａを有する対象の出血、例えば中程度の出血または大量の出血を処置するための、補充因子（第ＶＩＩＩ因子）の推奨される有効量は、約３０～５０ＩＵ／ｋｇである。しかし、血友病Ａを有しかつ毎月固定皮下用量５０ｍｇまたは８０ｍｇのＡＴ３ＳＣ－００１が投与された対象の出血、例えば中程度の出血または大量の出血は、例えば対象に対するｄｓＲＮＡ剤の投与がＳｅｒｐｉｎｃ１活性を約７５％またはそれ以上低下させる場合、第ＶＩＩＩ因子が約５から約２０ＩＵ／ｋｇの用量で処置することができる。インヒビターを有さない血友病Ｂを有する対象では、出血、例えば大量の出血を処置するための補充因子（第ＩＸ因子または延長された半減期の第ＩＸ因子）の推奨される有効量は、約６５～１３０ＩＵ／ｋｇである。しかし、血友病Ｂを有しかつＡＴ３ＳＣ－００１の毎月固定皮下用量５０ｍｇまたは８０ｍｈが投与された対象の出血、例えば大量の出血は、例えば対象に対するｄｓＲＮＡ剤の投与がＳｅｒｐｉｎｃ１活性を約７５％またはそれ以上低下させる場合、第ＩＸ因子または延長された半減期の第ＩＸ因子の用量約１０から約３０ＩＵ／ｋｇの用量で処置することができる。インヒビターを有する血友病ＡまたはＢを有する対象では、出血、例えば中程度の出血または大量の出血を処置するためのバイパス薬剤（活性型プロトロンビン複合体製剤；ａＰＣＣ）の推奨される有効量は、約１００Ｕ／ｋｇである。しかしインヒビターを有する血友病ＡまたはＢを有しかつＡＴ３ＳＣ－００１が５０ｍｇまたは８０ｍｇの毎月固定皮下用量で投与される対象の出血、例えば中程度の出血または大量の出血は、対象に対するｄｓＲＮＡ剤の投与がＳｅｒｐｉｎｃ１活性を約７５％またはそれ以上低下させる場合、ａＰＣＣの用量約３０から約５０Ｕ／ｋｇの用量で処置することができる。インヒビターを有する血友
病ＡまたはＢを有する対象では、出血、例えば中程度の出血または大量の出血を処置するためのバイパス薬剤（組換え第ＶＩＩａ因子；ｒＦＶＩＩａ）の推奨される有効量は、約９０マイクログラム／ｋｇである。しかしインヒビターを有する血友病ＡまたはＢを有しかつＡＴ３ＳＣ－００１が５０ｍｇまたは８０ｍｇの毎月固定皮下用量で投与される対象の出血、例えば中程度の出血または大量の出血は、例えば対象に対するｄｓＲＮＡ剤の投与がＳｅｒｐｉｎｃ１活性を約７５％またはそれ以上低下させる場合、約１０から約４５μｇ／ｋｇのｒＦＶＩＩａの用量で処置することができる。
Figure 2023123756000027
血友病Ａの処置に関し、ＡＴ３ＳＣ－００１で処置したヒト患者の血漿におけるバイパス薬剤の添加によるトロンビン形成応答
実施例４で示したように、インヒビターを有するおよび有さない血友病Ａの患者の血漿サンプルから得られたデータは、ＡＴ３ＳＣ－００１を患者に投薬した後に、補充因子およびバイパス薬剤（ＢＰＡ）に対して高いトロンビン形成応答を示す。特に、フェーズＩＩ ＯＬＥ研究から得られたデータは、ＡＴ３ＳＣ－００１の皮下投薬が、ＢＰＡの添加による投薬前血漿サンプルに比較して投薬後血漿サンプル中で高いトロンビン形成をもたらすことを実証し；より低い用量のＢＰＡを、類似の止血効果を実現するために潜在的に使用できることを示唆する。
ＡＴ３ＳＣ－００１媒介型ＡＴ低下の患者からの、選択された血漿サンプルでのＢＰＡに対するトロンビン形成応答を調査するために、ＡＴ３ＳＣ－００１での処置の前後の両方で、血小板に乏しい血漿を血友病Ａの８名の患者（７名はインヒビターを有さず、１名
はインヒビターを有する）から収集した。患者の血漿ＡＴ活性を測定し、ＦＸａ活性ベースの色素産生アッセイ（ＳＩＥＭＥＮＳ ＩＮＮＯＶＡＮＣＥ（登録商標）抗トロンビン）によって、正常なプール血漿に対して正規化した。血漿に、ｅｘ ｖｉｖｏで様々な用量のＢＰＡをスパイクした：ａＰＣＣ（０．５または１Ｕ／ｍＬ；それぞれ３７．５および７５Ｕ／ｋｇの用量に対応する）またはｒＦＶＩＩａ（０．７５、１．７５、または２．５μｇ／ｍＬ；２７、６３、および９０μｇ／ｋｇの用量に対応する）。トロンビン形成応答およびＡＴ活性レベルを、較正自動化トロンビノスコープ（組織因子＝１ｐＭ）を使用してトロンビン形成曲線を作成することによりモニターした。トロンビン較正物質、ＦｌｕＣａキット、およびＰＰＰ－試薬－Ｌｏｗ（１ｐＭ組織因子［ＴＦ］および４μＭリン脂質）を含むすべての試薬は、Ｔｈｒｏｍｂｉｎｏｓｃｏｐｅ ＢＶから得た。
図２５Ａ～２６Ｎに提示されるデータは、ＡＴ低下後に対象から得られた血漿サンプル中の高いトロンビン形成が、ＡＴ３ＳＣ－００１の投与によって実現されたことを実証する。事実、ＡＴ低下は単独で、増大するピークトロンビン形成をもたらした。ａＰＣＣおよびｒＦＶＩＩａは共に、ＡＴ３ＳＣ－００１で処置した患者の血漿に添加されたとき、ピークトロンビン形成に直線的な増大をもたらした。より低い用量のａＰＣＣは、インヒビターを有する（図２５Ａおよび２５Ｂ）またはインヒビターを有さない（図２６Ａ～２６Ｎ）血友病Ａ患者のプレＡＴ３ＳＣ－００１血漿中の完全ａＰＣＣ投薬で実現された場合に等しい、ピークトロンビン形成レベルをもたらすのに十分であった。すべての患者の血漿において、トロンビン形成は、ＡＴ低下血漿までｒＦＶＩＩａの全量を添加して、正常な（ＬＬＮ）範囲の下限に近づいたがその下限よりも低いままであった。
まとめると、バイパス薬剤の添加による投薬前血漿サンプルに比較して、高いトロンビン形成が、投薬後血漿サンプルでのＡＴ３ＳＣ－００１投与により実現された。これらの結果はさらに、例えば補充因子またはバイパス薬剤の低減した初期用量および補充因子またはバイパス薬剤の低減した最大用量、投薬間の最小間隔、ならびに２４時間未満の間隔での補充因子またはバイパス薬剤の反復投薬が不要であること（ｒＦＶＩＩａを除く）も含め、上記実施例４で記述されるＡＴ３ＳＣ－００１処置中の突発的出血を経験する患者の止血を実現するために、推奨される用量に比較してより低い用量のバイパス薬剤の使用を裏付ける。
併用されるＡＴ低下および因子補充によるトロンビン形成を予測するための定量的システム薬理学（ＱＳＰ）
血友病ＡおよびＢは、それぞれ第ＶＩＩＩ因子および第ＩＸ因子の欠乏に起因する、不十分なトロンビン形成を特徴とする出血障害である。上述のように、ＡＴ３ＳＣ－００１は、インヒビターを有するまたは有さない血友病Ａおよび血友病Ｂの患者におけるトロンビン形成を改善しかつ止血を促進させる手段としての、毎月１回皮下投与される治験用ＲＮＡｉ治療標的抗トロンビン（ＡＴ）である。ＡＴ３ＳＣ－００１を受ける患者は、それにも関わらず、補充因子での処置が必要とされる突発的出血を経験する。上述のように、臨床データおよびｅｘ ｖｉｖｏスパイクデータは、ＡＴ３ＳＣ－００１処置中に突発的出血を経験する患者における止血を実現するのに推奨される用量に比較して、より低い用量のバイパス薬剤および補充因子の使用を裏付ける。
ＡＴ３ＳＣ－００１処置中の突発的出血を経験する患者において止血を実現するのに推奨される用量に比較して、より低い用量のバイパス薬剤および補充因子の使用をさらに裏付けるために、ならびにＡＴレベル、因子投薬、およびトロンビン形成（ＴＧ）の関係のより深い理解を得るために、凝血カスケードについて記述するｉｎ ｓｉｌｉｃｏ定量的システム薬理学（ＱＳＰ）の動力学的モデルを使用して（Ｎａｙａｋら、（２０１５）ＣＰＴ：ｐｈａｒｍａｃｏｍｅｔｒｉｃｓ ＆ ｓｙｓｔｅｍｓ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇ
ｙ ４．７：３９６～４０５）、ｅｘ ｖｉｖｏトロンビン形成（ＴＧ）アッセイをシミュレートした。詳細には、モデルは、６６の反応および１０６のパラメーターによって記述され、初期血漿因子濃度は、血友病およびまれな出血障害がシミュレートされるように様々であった。さらに、血漿因子濃度は個体全体を通して±５０％変動するので、Ｍｏｎｔｅ Ｃａｒｌｏ法を適用することにより、ＴＧの正常範囲をシミュレートした：平均－１４０ｎＭ；範囲５０～２５０ｎＭ。
下記の表は、様々な病状のモデルに使用される入力因子濃度を提示する。
Figure 2023123756000028
図２７Ａ～２７Ｃに示されるように、ＱＳＰモデルを使用して作成されたデータは、ＡＴ低下を伴うトロンビン形成（ＴＧ）を予測した。特に、ＴＧに関する臨床正常範囲はＱＳＰ予測に整合し、相関が、ＡＴ低下のある患者に関して臨床的に測定されたおよびモデル予測されたＴＧの間に観察された。図２７Ａは、暫定フェーズＩ（パートＡ～Ｃ）の結果から測定されたＴＧを示し、図２７Ｂは、シミュレートされたＴＧ（ＡＴノックダウンに基づく）を示し、それぞれは、ＡＴの四分位低下によってビニング（ｂｉｎｎｅｄ）された通りである。図２７Ｃは、シミュレートされたＴＧデータと測定されたＴＧデータとの間の強力な相関を示す、散乱プロットである。
ｉｎ ｓｉｌｉｃｏ ＱＳＰモデルは、重症の血友病Ａに関するＴＧ、ＡＴ低下、および第ＶＩＩＩ因子用量の間の非線形関係を定量するためにも適用した（図２８Ａ）。ＡＴ低下および第ＶＩＩＩ因子投薬を伴うＴＧの、ヒートマップの表示は、ＡＴ３ＳＣ－００１で観察されたＡＴレベル（１０～２５％）での５～１０ＩＵ／ｋｇの間の第ＶＩＩＩ因子は、ＴＧを正規化するのに十分になることを実証する（図２８Ｂ）。同様に、ＡＴ低下および第ＩＸ因子投薬を伴うＴＧのヒートマップの表示は、１０～２５％のＡＴでの１０～２０ＩＵ／ｋｇの第ＩＸ因子が、ＴＧを正規化するのに十分になることを実証する（図２８Ｃ）。
因子薬物動態（１コンパートメントモデル）およびＱＳＰモデルを統合して、因子投薬後の時間の関数としてピークトロンビンポテンシャル（ＰＴＰ）をシミュレートした。図
２９Ａ（１００％ＡＴ）に対して図２９Ｂ（２０％ベースラインＡＴ）は、重症の血友病Ａの患者における因子投薬の時間経過の影響を示し、ＡＴ低下が、突発的出血エピソードに関するＦＶＩＩＩ投与後のピークおよびトラフ時点の両方でトロンビン形成を増強することを実証する。

Claims (56)

  1. インヒビターを有さない血友病を有する対象の出血事象を処置する方法であって、
    Ｓｅｒｐｉｎｃ１の発現を阻害する二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤の約３０ｍｇから約９０ｍｇの固定用量を対象に投与する工程であって、
    該二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、５’－ＵＵＧＡＡＧＵＡＡＡＵＧＧＵＧＵＵＡＡＣＣＡＧ－３’（配列番号１５）のヌクレオチド配列と３ヌクレオチドを超えずに異なる少なくとも１５の連続するヌクレオチドを含むＳｅｒｍｉｎｃ１をコードするｍＲＮＡに相補的な領域を含み、該センス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドおよび該アンチセンス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドは修飾ヌクレオチドであり、該センス鎖は、３’－末端で結合したリガンドとコンジュゲートしている工程と、
    補充因子の治療有効量を対象に投与する工程であって、該補充因子の有効量は、該補充因子の推奨される有効量に比較して低減される工程と
    を含み、それによって、インヒビターを有さない血友病を有する対象の出血事象を処置する、前記方法。
  2. インヒビターを有する血友病を有する対象の出血事象を処置する方法であって、
    Ｓｅｒｐｉｎｃ１の発現を阻害する二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤の約３０ｍｇから約９０ｍｇの固定用量を対象に投与する工程であって、
    該二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、５’－ＵＵＧＡＡＧＵＡＡＡＵＧＧＵＧＵＵＡＡＣＣＡＧ－３’（配列番号１５）のヌクレオチド配列と３ヌクレオチドを超えずに異なる少なくとも１５の連続するヌクレオチドを含むＳｅｒｐｉｎｃ１をコードするｍＲＮＡに相補的な領域を含み、該センス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドおよび該アンチセンス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドは修飾ヌクレオチドであり、該センス鎖は、３’－末端で結合したリガンドとコンジュゲートしている工程と、
    バイパス薬剤の治療有効量を対象に投与する工程であって、該バイパス薬剤の有効量は、該バイパス薬剤の推奨される有効量に比較して低減される工程と
    を含み、それによって、インヒビターを有する血友病を有する対象の出血事象を処置する、前記方法。
  3. インヒビターを有さない血友病を有する対象の出血事象を処置する方法であって、
    Ｓｅｒｐｉｎｃ１の発現を阻害する二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤の約４０ｍｇから約９０ｍｇの固定用量を対象に投与する工程であって、
    該二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、５’－ＵＵＧＡＡＧＵＡＡＡＵＧＧＵＧＵＵＡＡＣＣＡＧ－３’（配列番号１５）のヌクレオチド配列と３ヌクレオチドを超えずに異なる少なくとも１５の連続するヌクレオチドを含むＳｅｒｐｉｎｃ１をコードするｍＲＮＡに相補的な領域を含み、該センス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドおよび該アンチセンス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドは修飾ヌクレオチドであり、該センス鎖は、３’－末端で結合したリガンドとコンジュゲートしている工程と、
    補充因子の治療有効量を対象に投与する工程であって、該補充因子の有効量は、該補充因子の推奨される有効量に比較して低減される工程と
    を含み、それによって、インヒビターを有さない血友病を有する対象の出血事象を処置する、前記方法。
  4. インヒビターを有する血友病を有する対象の出血事象を処置する方法であって、
    Ｓｅｒｐｉｎｃ１の発現を阻害する二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤の約４０ｍｇから約９０ｍｇの固定用量を対象に投与する工程であって、
    該二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、該アンチセンス鎖は、５’－ＵＵＧＡＡＧＵＡＡＡＵＧＧＵＧＵＵＡＡＣＣＡＧ－３’（配列番号１５）のヌクレオチド配列と３ヌクレオチドを超えずに異なる少なくとも１５の連続するヌクレオチドを含むＳｅｒｐｉｎｃ１をコードするｍＲＮＡに相補的な領域を含み、該センス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドおよび該アンチセンス鎖の実質的にすべてのヌクレオチドは修飾ヌクレオチドであり、該センス鎖は、３’－末端で結合したリガンドとコンジュゲートしている工程と、
    バイパス薬剤の治療有効量を対象に投与する工程であって、該バイパス薬剤の有効量は、該バイパス薬剤の推奨される有効量に比較して低減される工程と
    を含み、それによって、インヒビターを有する血友病を有する対象の出血事象を処置する、前記方法。
  5. 固定用量の二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、月に１回、６週毎に１回、２カ月毎に１回、または年に４回、対象に投与される、請求項１～４のいずれか１項に記載の方法。
  6. 二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、約５０ｍｇの固定用量で対象に投与される、請求項１～４のいずれか１項に記載の方法。
  7. 二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、約８０ｍｇの固定用量で対象に投与される、請求項１～４のいずれか１項に記載の方法。
  8. 二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、対象に皮下投与される、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。
  9. 対象はヒトである、請求項１～６のいずれか１項に記載の方法。
  10. 血友病は血友病Ａ、血友病Ｂ、または血友病Ｃである、請求項９に記載の方法。
  11. センス鎖のすべてのヌクレオチドおよびアンチセンス鎖のすべてのヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドである、請求項１～１０のいずれか１項に記載の方法。
  12. 修飾ヌクレオチドは、２’－デオキシ－２’－フルオロ修飾ヌクレオチド、２’－デオキシ修飾ヌクレオチド、ロックドヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、２’－アミノ修飾ヌクレオチド、２’－アルキル修飾ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホルアミデート、およびヌクレオチドを含む非天然塩基からなる群から独立して選択される、請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法。
  13. 相補性の領域は、少なくとも１７ヌクレオチド長である、請求項１～１２のいずれか１項に記載の方法。
  14. 相補性の領域は、１９から２１の間のヌクレオチド長である、請求項１～１３のいずれか１項に記載の方法。
  15. 相補性の領域は１９ヌクレオチド長である、請求項１４に記載の方法。
  16. それぞれの鎖は３０ヌクレオチド長を超えない、請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法。
  17. センス鎖およびアンチセンス鎖のそれぞれは独立して１９～２５ヌクレオチド長である、請求項１～１６のいずれか１項に記載の方法。
  18. センス鎖およびアンチセンス鎖のそれぞれは独立して２１から２３ヌクレオチド長である、請求項１～１７のいずれか１項に記載の方法。
  19. センス鎖は２１ヌクレオチド長であり、アンチセンス鎖は２３ヌクレオチド長である、請求項１～１８のいずれか１項に記載の方法。
  20. 少なくとも１つの鎖は、少なくとも１ヌクレオチドの３’オーバーハングを含む、請求項１～１９のいずれか１項に記載の方法。
  21. 少なくとも１つの鎖は、少なくとも２ヌクレオチドの３’オーバーハングを含む、請求項１～１９のいずれか１項に記載の方法。
  22. リガンドは、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）誘導体である、請求項１～２１のいずれか１項に記載の方法。
  23. リガンドは
    Figure 2023123756000029
     である、請求項２２に記載の方法。
  24. 二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、以下の概略図に示されるとおりリガンドとコンジュゲートし、
    Figure 2023123756000030
     ＸはＯまたはＳである、請求項２３に記載の方法。
  25. ＸはＯである、請求項２４に記載の方法。
  26. 相補性の領域は、５’－ＵＵＧＡＡＧＵＡＡＡＵＧＧＵＧＵＵＡＡＣＣＡＧ－３’（配列番号１５）のヌクレオチド配列からなる、請求項１～２５のいずれか１項に記載の方法。
  27. 二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、５’－ＧＧＵＵＡＡＣＡＣＣＡＵＵＵＡＣＵＵＣＡＡ－３’（配列番号１６）のヌクレオチド配列を含むセンス鎖、および５’－ＵＵＧＡＡＧＵＡＡＡＵＧＧＵＧＵＵＡＡＣＣＡＧ－３’（配列番号１５）のヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖を含む、請求項１～２６のいずれか１項に記載の方法。
  28. センス鎖は、５’－ＧｆｓｇｓＵｆｕＡｆａＣｆａＣｆＣｆＡｆｕＵｆｕＡｆｃＵｆｕＣｆａＡｆ－３’（配列番号１３）を含み、アンチセンス鎖は、５’－ｕｓＵｆｓｇＡｆａＧｆｕＡｆａＡｆｕｇｇＵｆｇＵｆｕＡｆａＣｆｃｓａｓｇ－３’（配列番号１４）を含み、
    ａ、ｃ、ｇ、およびｕは２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）Ａ、Ｃ、Ｇ、またはＵであり；Ａｆ、Ｃｆ、ＧｆまたはＵｆは２’－フルオロＡ、Ｃ、ＧまたはＵであり；ｓはホスホロチオエート連結である、請求項２７に記載の方法。
  29. センス鎖は、５’－ＧｆｓｇｓＵｆｕＡｆａＣｆａＣｆＣｆＡｆｕＵｆｕＡｆｃＵｆｕＣｆａＡｆ－３’（配列番号１３）を含み、アンチセンス鎖は、５’－ｕｓＵｆｓｇＡｆａＧｆｕＡｆａＡｆｕｇｇＵｆｇＵｆｕＡｆａＣｆｃｓａｓｇ－３’（配列番号１４）を含み、
    ａ、ｃ、ｇ、およびｕは２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）Ａ、Ｃ、Ｇ、またはＵであり；Ａｆ、Ｃｆ、ＧｆまたはＵｆは２’－フルオロＡ、Ｃ、ＧまたはＵであり；ｓはホスホロチオエート連結であり、
    該センス鎖は、以下の概略図に示されるとおりリガンドとコンジュゲートし、
    Figure 2023123756000031
     ＸはＯまたはＳである、請求項１～２８のいずれか１項に記載の方法。
  30. 二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、医薬組成物として対象に投与される、請求項１～２９のいずれか１項に記載の方法。
  31. ｄｓＲＮＡ剤の対象への投与は、Ｓｅｒｐｉｎｃ１活性を約７５％またはそれ以上低下させる、請求項１～３０のいずれか１項に記載の方法。
  32. 補充因子は第ＶＩＩＩ因子である、請求項１、３、および５～３１のいずれか１項に記載の方法。
  33. 対象に投与される第ＶＩＩＩ因子の治療有効量は、約２００ＩＵ／ｋｇ未満、または約１９０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１８０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１７０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１６０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１５０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１４０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１３０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１２０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１１０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１００ＩＵ／ｋｇ未満、または約９０ＩＵ／ｋｇ未満、または約８０ＩＵ／ｋｇ未満、または約７０ＩＵ／ｋｇ未満、または約６０ＩＵ／ｋｇ未満、または約５０ＩＵ／ｋｇ未満、または約４０ＩＵ／ｋｇ未満、または約３０ＩＵ／ｋｇ未満、または約２０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１０ＩＵ／ｋｇ未満である、請求項３２に記載の方法。
  34. 対象に投与される第ＶＩＩＩ因子の治療有効量は、第ＶＩＩＩ因子の推奨される有効量の約３分の２から約５分の１である、請求項３２に記載の方法。
  35. 対象に投与される第ＶＩＩＩ因子の治療有効量は、約１０から約２０ＩＵ／ｋｇの用量である、請求項３４に記載の方法。
  36. 補充因子は第ＩＸ因子である、請求項１、３、および５～２８のいずれか１項に記載の方法。
  37. 対象に投与される第ＩＸ因子の治療有効量は、約２００ＩＵ／ｋｇ未満、または約１９０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１８０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１７０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１６０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１５０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１４０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１３０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１２０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１１０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１００ＩＵ／ｋｇ未満、または約９０ＩＵ／ｋｇ未満、または約８０ＩＵ／ｋｇ未満、または約７０ＩＵ／ｋｇ未満、または約６０ＩＵ／ｋｇ未満、または約５０ＩＵ／ｋｇ未満、または約４０ＩＵ／ｋｇ未満、または約３０ＩＵ／ｋｇ未満、または約２０ＩＵ／ｋｇ未満、または約１０ＩＵ／ｋｇ未満である、請求項３６に記載の方法。
  38. 対象に投与される第ＩＸ因子の治療有効量は、第ＩＸ因子の推奨される有効量の約２分の１から約６分の１である、請求項３６に記載の方法。
  39. 対象に投与される第ＩＸ因子の治療有効量は、約２０から約３０ＩＵ／ｋｇの用量である、請求項３８に記載の方法。
  40. バイパス薬剤は、活性型プロトロンビン複合体製剤（ａＰＣＣ）である、請求項２および４～３１のいずれか１項に記載の方法。
  41. 対象に投与されるａＰＣＣの治療有効量は、約１００Ｕ／ｋｇ未満、または約９０Ｕ／ｋｇ未満、または約８０Ｕ／ｋｇ未満、または約７０Ｕ／ｋｇ未満、または約６０Ｕ／ｋｇ未満、または約５０Ｕ／ｋｇ未満、または約４０Ｕ／ｋｇ未満、または約３０Ｕ／ｋｇ未満、または約２０Ｕ／ｋｇ未満、または約１０Ｕ／ｋｇ未満である、請求項４０に記載の方法。
  42. 対象に投与されるａＰＣＣの治療有効量は、ａＰＣＣの推奨される有効量の約２分の１から約３分の１である、請求項４０に記載の方法。
  43. 対象に投与されるａＰＣＣの治療有効量は、約３０から約５０Ｕ／ｋｇの用量である、請求項４２に記載の方法。
  44. バイパス薬剤は、組換え第ＶＩＩａ因子（ｒＦＶＩＩａ）である、請求項２および４～３１のいずれか１項に記載の方法。
  45. 対象に投与されるｒＦＶＩＩａの治療有効量は、約１２０μｇ／ｋｇ未満、または約１１０μｇ／ｋｇ未満、または約１００μｇ／ｋｇ未満、または約９０μｇ／ｋｇ未満、または約８０μｇ／ｋｇ未満、または約７０μｇ／ｋｇ未満、または約６０μｇ／ｋｇ未満、または約５０μｇ／ｋｇ未満、または約４０μｇ／ｋｇ未満、または約３０μｇ／ｋｇ未満、または約２０μｇ／ｋｇ未満である、請求項４４に記載の方法。
  46. 対象に投与されるｒＦＶＩＩａの治療有効量は、ｒＦＶＩＩａの推奨される有効量の約２分の１である、請求項４５に記載の方法。
  47. 対象に投与されるｒＦＶＩＩａの治療有効量は、約４５μｇ／ｋｇの用量である、請求項４６に記載の方法。
  48. 対象のトロンビンレベルを測定する工程をさらに含む、請求項１～４７のいずれか１項に記載の方法。
  49. 対象の補充因子レベルを測定する工程をさらに含む、請求項１～４８のいずれか１項に記載の方法。
  50. インヒビターを有さない血友病を有する対象の出血事象を処置する方法であって、
    Ｓｅｒｐｉｎｃ１の発現を阻害する二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤の約８０ｍｇの固定用量を対象に投与する工程であって、
    該二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、
    該センス鎖は、５’－ＧｆｓｇｓＵｆｕＡｆａＣｆａＣｆＣｆＡｆｕＵｆｕＡｆｃＵｆｕＣｆａＡｆ－３’（配列番号１３）を含み、該アンチセンス鎖は、５’－ｕｓＵｆｓｇＡｆａＧｆｕＡｆａＡｆｕｇｇＵｆｇＵｆｕＡｆａＣｆｃｓａｓｇ－３’（配列番号１４）を含み、
    ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）Ａ、Ｃ、Ｇ、またはＵであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、またはＵｆは、２’－フルオロＡ、Ｃ、Ｇ、またはＵであり；ｓは、ホスホロチオエート連結であり、
    該センス鎖の３’－末端は、以下の概略図
    Figure 2023123756000032
     （式中、Ｘは、ＯまたはＳである。）
    に示されるようにリガンドとコンジュゲートしている工程と、
    補充因子の治療有効量を対象に投与する工程であって、
    該補充因子の有効量は、該補充因子の推奨される有効量に比較して低減される工程と
    を含み、それによって、インヒビターを有さない血友病を有する対象の出血事象を処置する、前記方法。
  51. インヒビターを有する血友病を有する対象の出血事象を処置する方法であって、
    Ｓｅｒｐｉｎｃ１の発現を阻害する二本鎖リボ核酸（ＲＮＡｉ）薬剤の約８０ｍｇの固定用量を対象に投与する工程であって、
    該二本鎖ＲＮＡｉ薬剤は、センス鎖およびアンチセンス鎖を含み、
    該センス鎖は、５’－ＧｆｓｇｓＵｆｕＡｆａＣｆａＣｆＣｆＡｆｕＵｆｕＡｆｃＵｆｕＣｆａＡｆ－３’（配列番号１３）を含み、該アンチセンス鎖は、５’－ｕｓＵｆｓｇＡｆａＧｆｕＡｆａＡｆｕｇｇＵｆｇＵｆｕＡｆａＣｆｃｓａｓｇ－３’（配列番号１４）を含み、
    ａ、ｃ、ｇ、およびｕは、２’－Ｏ－メチル（２’－ＯＭｅ）Ａ、Ｃ、Ｇ、またはＵであり；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、またはＵｆは、２’－フルオロＡ、Ｃ、Ｇ、またはＵであり；ｓは、ホスホロチオエート連結であり、
    該センス鎖の３’－末端は、以下の概略図
    Figure 2023123756000033
     （式中、Ｘは、ＯまたはＳである。）
    に示されるようにリガンドとコンジュゲートしている工程と、
    バイパス薬剤の治療有効量を対象に投与する工程であって、
    該バイパス薬剤の有効量は、該バイパス薬剤の推奨される有効量に比較して低減される工程と
    を含み、それによって、インヒビターを有する血友病を有する対象の出血事象を処置する、前記方法。
  52. ＲＮＡｉ薬剤の固定用量は、対象に皮下投与される、請求項５０または５１に記載の方法。
  53. ＲＮＡｉ薬剤の固定用量は、対象に、１カ月に１回投与される、請求項５０または５１に記載の方法。
  54. 血友病は、血友病Ａである、請求項５０または５１に記載の方法。
  55. 血友病は、血友病Ｂである、請求項５０または５１に記載の方法。
  56. 血友病は、血友病Ｃである、請求項５０または５１に記載の方法。
JP2023107779A 2017-07-10 2023-06-30 血友病を有する対象の出血事象を処置するための方法および組成物 Pending JP2023123756A (ja)

Applications Claiming Priority (10)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762530518P 2017-07-10 2017-07-10
US62/530,518 2017-07-10
US201762599223P 2017-12-15 2017-12-15
US62/599,223 2017-12-15
US201862614111P 2018-01-05 2018-01-05
US62/614,111 2018-01-05
US201862673424P 2018-05-18 2018-05-18
US62/673,424 2018-05-18
PCT/US2018/041400 WO2019014187A1 (en) 2017-07-10 2018-07-10 METHODS AND COMPOSITIONS FOR TREATING A BLEEDING EVENT IN A SUBJECT WITH HEMOPHILIA
JP2020500824A JP2020530442A (ja) 2017-07-10 2018-07-10 血友病を有する対象の出血事象を処置するための方法および組成物

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2020500824A Division JP2020530442A (ja) 2017-07-10 2018-07-10 血友病を有する対象の出血事象を処置するための方法および組成物

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2023123756A true JP2023123756A (ja) 2023-09-05
JP2023123756A5 JP2023123756A5 (ja) 2024-01-19

Family

ID=63036452

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2020500824A Pending JP2020530442A (ja) 2017-07-10 2018-07-10 血友病を有する対象の出血事象を処置するための方法および組成物
JP2023107779A Pending JP2023123756A (ja) 2017-07-10 2023-06-30 血友病を有する対象の出血事象を処置するための方法および組成物

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2020500824A Pending JP2020530442A (ja) 2017-07-10 2018-07-10 血友病を有する対象の出血事象を処置するための方法および組成物

Country Status (14)

Country Link
US (2) US20200163987A1 (ja)
EP (1) EP3651852A1 (ja)
JP (2) JP2020530442A (ja)
KR (1) KR20200026960A (ja)
CN (1) CN111093771A (ja)
AU (2) AU2018301801A1 (ja)
BR (1) BR112020000400A2 (ja)
CA (1) CA3069150A1 (ja)
CO (1) CO2020001354A2 (ja)
IL (1) IL271646A (ja)
SG (1) SG11201912243PA (ja)
TW (1) TWI843703B (ja)
UY (1) UY37803A (ja)
WO (1) WO2019014187A1 (ja)

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA3188137A1 (en) 2020-06-22 2021-12-30 Genzyme Corporation Methods and compositions for treating hemophilia
WO2022076835A1 (en) * 2020-10-09 2022-04-14 Dyax Corp. Methods and apparatuses for modeling adamts13 and von willebrand factor interactions
WO2022120291A1 (en) 2020-12-06 2022-06-09 Genzyme Corporation Treatment of hemophilia with fitusiran
IL303452A (en) 2020-12-06 2023-08-01 Genzyme Corp Treatment of hemophilia with Fitusiran
TW202342065A (zh) 2021-12-22 2023-11-01 美商健臻公司 治療血友病的方法和組成物
WO2023240193A2 (en) 2022-06-08 2023-12-14 Genzyme Corporation Treatment of hemophilia with fitusiran in pediatric patients
WO2023240199A2 (en) 2022-06-08 2023-12-14 Genzyme Corporation Treatment of hemophilia with fitusiran
WO2024094701A1 (en) 2022-10-31 2024-05-10 Sanofi Assembly for a drug delivery device
WO2024094700A1 (en) 2022-10-31 2024-05-10 Sanofi Method for assembling an assembly for a drug delivery device and drug delivery device.
WO2024094706A1 (en) 2022-10-31 2024-05-10 Sanofi Audible indicator, indicator holder and method of assembling an audible indicator
WO2024094707A1 (en) 2022-10-31 2024-05-10 Sanofi Drug delivery device with feedback element and method for providing a user of a drug delivery device feedback regarding a dose dispensing process
WO2024094703A1 (en) 2022-10-31 2024-05-10 Sanofi Plunger for expelling a drug, drug delivery device, rear sub-assembly and corresponding methods
WO2024094702A1 (en) 2022-10-31 2024-05-10 Sanofi Device body for a drug delivery device, assembly for a drug delivery device and drug delivery device
WO2024094699A1 (en) 2022-10-31 2024-05-10 Sanofi Container holder and drug delivery device comprising the container holder
WO2024094698A1 (en) 2022-10-31 2024-05-10 Sanofi Front sub-assembly for a drug delivery device
WO2024094704A1 (en) 2022-10-31 2024-05-10 Sanofi Arrangement for a drug delivery device, drug delivery device and method for assembly
WO2024094705A1 (en) 2022-10-31 2024-05-10 Sanofi Drug delivery device having a two-part user indicator
WO2024097190A1 (en) 2022-11-02 2024-05-10 Genzyme Corporation Systems and methods for modeling thrombin-antithrombin

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2009284393B2 (en) * 2008-08-22 2014-09-25 Takeda Pharmaceutical Company Limited Methods for treating bleeding disorders
CN105848668A (zh) * 2013-11-04 2016-08-10 加利福尼亚大学董事会 治疗或预防与出血或低凝血相关联的病状的疗法
TW201607559A (zh) * 2014-05-12 2016-03-01 阿尼拉製藥公司 治療ｓｅｒｐｉｎｃ１相關疾患之方法和組成物
WO2016085852A1 (en) * 2014-11-24 2016-06-02 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Tmprss6 irna compositions and methods of use thereof
RU2754188C2 (ru) * 2015-12-07 2021-08-30 Джензим Корпорейшн Способы и композиции для лечения ассоциированного с serpinc1 расстройства

Also Published As

Publication number Publication date
TW201920670A (zh) 2019-06-01
EP3651852A1 (en) 2020-05-20
US20200163987A1 (en) 2020-05-28
SG11201912243PA (en) 2020-01-30
RU2020105876A (ru) 2021-08-10
CN111093771A (zh) 2020-05-01
US20230158058A1 (en) 2023-05-25
AU2018301801A1 (en) 2020-02-06
IL271646A (en) 2020-02-27
BR112020000400A2 (pt) 2020-07-14
KR20200026960A (ko) 2020-03-11
UY37803A (es) 2019-02-28
AU2024204136A1 (en) 2024-07-11
CA3069150A1 (en) 2019-01-17
RU2020105876A3 (ja) 2021-11-16
CO2020001354A2 (es) 2020-05-29
TWI843703B (zh) 2024-06-01
WO2019014187A1 (en) 2019-01-17
JP2020530442A (ja) 2020-10-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7422120B2 (ja) Ｓｅｒｐｉｎｃ１関連障害を処置するための方法および組成物
JP2023123756A (ja) 血友病を有する対象の出血事象を処置するための方法および組成物
ES2905889T3 (es) Composiciones y métodos para inhibir la expresión del gen HAO1 (hidroxiácido-oxidasa 1 (glicolato-oxidasa))
JP2022000022A (ja) Ｓｅｒｐｉｎｃ１ ｉＲＮＡ組成物およびその使用方法
WO2015175510A1 (en) Methods and compositions for treating a serpinc1-associated disorder
RU2801263C2 (ru) Способы и композиции для лечения явления кровотечения у больного гемофилией
TW202434265A (zh) 於患有血友病之個體中治療出血事件之方法及組成物
AKINC et al. Patent 3007014 Summary
AKINC et al. Sommaire du brevet 3007014

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20230630

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20230630

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20240110

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20240521

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20240821