JP2023095339A - 乳酸菌 - Google Patents
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Abstract
Description
Th1細胞により産生されるサイトカイン(Th1型サイトカインとも称される)はTh2細胞によるサイトカインの産生を抑制し、Th2細胞により産生されるサイトカイン(Th2型サイトカインとも称される)はTh1細胞によるサイトカインの産生を抑制する。免疫応答においては両者のバランスが重要であるとされているが、近年増加しているアレルギー疾患はTh1型サイトカイン/Th2型サイトカインバランスがTh2型優位に傾いていることが要因とされている。
項1.
ラクチプランチバチルス ペントーサス(Lactiplantibacillus pentosus)S25株(受領番号:NITE ABP-03571)である、乳酸菌。
項2.
項1に記載の乳酸菌を含む、経口組成物。
項3.
項1に記載の乳酸菌を含む、飲食品組成物又は医薬品組成物。
項4.
免疫調節用、又は細胞性免疫増強用である、項2又は3に記載の組成物。
本開示に包含される乳酸菌は、ラクチプランチバチルス ペントーサス(Lactiplantibacillus pentosus)S25株(受領番号:NITE ABP-03571)である。本明細書において、当該乳酸菌を、「本開示の乳酸菌」と表記することがある。
また、本開示の乳酸菌を用いてブロッコリを発酵すると、IL-6の産生を促進することができる。
また、本開示の乳酸菌を用いてブロッコリを発酵すると、IL-10の産生を促進することができる。
また、本開示は、上記乳酸菌を含む、飲食品組成物をも包含する。
また、本開示は、上記乳酸菌を含む、医薬品組成物をも包含する。
本明細書において、これらの組成物をあわせて、「本開示の組成物」と表記することがある。
ヒトとしては、例えば、血中Th1型サイトカイン/Th2型サイトカインバランスにおいてTh2型サイトカインが優位なヒト;アレルギー症状を有するヒト(例えば、アトピー性皮膚炎、花粉症を有するヒト等);腸管免疫が弱くなっているヒト(例えば、加齢と共に免疫力が落ちる高齢者や、高脂肪食の過剰摂取によって腸の炎症を起こしているヒト等);風邪をひきやすいヒト;気管支喘息のヒト;慢性炎症状態にあるヒト(例えば、潰瘍性大腸炎、喫煙・飲酒頻度の高いヒト、常時疲労感のあるヒト、食生活が乱れているヒト、ストレスの多い環境下のヒト、肥満・糖尿病などの生活習慣病のヒト等);腸管や全身のTh1型サイトカイン/Th2型サイトカインバランスの偏りが発症の一因になると考えられている疾患を有するヒト(当該疾患としては、例えば、アレルギー(小児・成人のアトピー性皮膚炎、花粉症)、炎症性腸疾患(潰瘍性大腸炎)等);全身の免役賦活を必要とするヒト(例えば、ストレスや栄養不足により全身の免役機能(NK細胞活性)が低下しているヒト、がん予防、感冒等のウイルス性感染症の予防を目的として全身の免役機能(NK細胞活性)を高めたいヒト)等が挙げられる。また、これらの症状が見られない場合であっても、免疫機能の維持のために予防的に用いることもできる。
本開示の組成物に含有される乳酸菌量についても、当該一日当たりの乳酸菌摂取量を参考として設定することもできる。乳酸菌死菌粉末1gあたり、通常1.0×1011~1.0~1013個程度の乳酸菌が含まれることから、例えば当該値を参考として本開示の組成物に乳酸菌死菌粉末を上記一日当たりの乳酸菌摂取量が含まれるように設定して組成物を調製することもできる。また、組成物に含まれる乳酸菌量を上記一日当たりの乳酸菌摂取量の例えば1/2若しくは1/3として、当該組成物の摂取を一日数回(2回若しくは3回)とすることもできる。
ヒト末梢血をヘパリン加採血し、Ficoll-Hypaque比重遠沈法(Nycomed Pharma,Oslo,Norway)によりPBMCに分離しRPMI1640 medium(supplemented with 10%FCS,5mM Hepes and antibiotics)で培養した。
in vitro刺激条件
ヒト末梢血PBMC(1×106/ml)を被験物質(乾重量1μg、約l×106細胞)でin vitro刺激しIL-12の変動を検討した。なお、陰性対照としてPBMCのみ、陽性対照として10μg/mlのフィトヘマグルチニン(PHA)で刺激したPBMCを用いた。
IL-12産生量の測定
PBMCを被験物質で18時間in vitro刺激した時の培養上清中のIL-12産生量をELISAで測定した。結果を図1に示す。
一方冷凍ブロッコリピューレを、解凍後透明パウチへ80gずつ充填して、電子レンジにて適宜予備加熱した後、ヒートシールにて密封し、湯せん中(97℃以上)で15分間加熱殺菌した。それらを30~40℃まで冷却して開封し、各Lactobacilli MRS Broth培養液をスターターとして4%(3.2g)接種した。パウチ開口部を再びヒートシールにより密封してから、よくパウチを手で揉んで内容物を混合し、植物性乳酸菌6株は30℃、B.longum株は36℃、いずれも24時間恒温器内で発酵させた。発酵終了して検査用試料採取後、再びヒートシールして、90℃以上の湯せん中にて10分間殺菌処理を行い、サイトカイン誘導試験を開始するまで冷蔵保存した。
図2C及びDに示すとおり、L. pentosus S25株を用いて発酵したブロッコリを添加することによって、IFN-γ及びIL-12の産生が促進されることが確認された。
図2E及びFに示すとおり、L. pentosus S25株を用いて発酵したブロッコリを添加することによって、Th1型サイトカイン/Th2型サイトカイン比(IFN-γ/IL-6、IL-12/IL-10)は1.0以上の高値を示すことが確認された。
解凍したPBMCを10%FCS含有RPMI1640培地で3×106/ml濃度に調製した後、24穴プレートに500μlずつ撒いた。次にLactiplantibacillus pentosus S25株(受領番号:NITE ABP-03571)、又はヨーグルトから分離したLactobacillus acidophilusを50μlずつ加え、37℃、5%C02下で20時間培養した。対照としてPBSを加える試験区分も設けた。
培養終了後、セルストレーナーキャップ付チューブで、大きいdebrisを除去した後、2000rpmで5分間遠心し、沈渣のPBMCをNK活性測定に用いた。
96穴U底マイクロカルチャープレートの各ウェルに膜不透過性核酸結合蛍光色素PIを最終濃度25μg/mlになるように加えた。その上に、RPMI1640培地に浮遊させたPBMC(2×106cells/ml濃度)を100μlずつ分注した後、K562細胞を100μlずつ分注した(E:T比=40:1)。マイクロカルチャープレートを2000rpmで5分間遠心した後、37℃で2時間反応させ、フローサイトメーター(Beckman Coulter)を用いてNK活性を測定した。結果を図3に示す。
なお、NK活性は以下の式で算出した。
NK活性(%)=DiO陽性PI陽性細胞数/(DiO陽性PI陰性細胞数十DiO陽性PI陽性細胞数)×100-spontaneous lysis.
項1.
ラクチプランチバチルス プランタラム(Lactiplantibacillus plantalum)S25株(受領番号:NITE ABP-03571)である、乳酸菌。
項2.
項1に記載の乳酸菌を含む、経口組成物。
項3.
項1に記載の乳酸菌を含む、飲食品組成物又は医薬品組成物。
項4.
免疫調節用、又は細胞性免疫増強用である、項2又は3に記載の組成物。
本開示に包含される乳酸菌は、ラクチプランチバチルス プランタラム(Lactiplantibacillus plantalum)S25株(受領番号:NITE ABP-03571)である。本明細書において、当該乳酸菌を、「本開示の乳酸菌」と表記することがある。
図2C及びDに示すとおり、L. plantalum S25株を用いて発酵したブロッコリを添加することによって、IFN-γ及びIL-12の産生が促進されることが確認された。
図2E及びFに示すとおり、L. plantalum S25株を用いて発酵したブロッコリを添加することによって、Th1型サイトカイン/Th2型サイトカイン比(IFN-γ/IL-6、IL-12/IL-10)は1.0以上の高値を示すことが確認された。
解凍したPBMCを10%FCS含有RPMI1640培地で3×106/ml濃度に調製した後、24穴プレートに500μlずつ撒いた。次にLactiplantibacillus plantalum S25株(受領番号:NITE ABP-03571)、又はヨーグルトから分離したLactobacillus acidophilusを50μlずつ加え、37℃、5%C02下で20時間培養した。対照としてPBSを加える試験区分も設けた。
培養終了後、セルストレーナーキャップ付チューブで、大きいdebrisを除去した後、2000rpmで5分間遠心し、沈渣のPBMCをNK活性測定に用いた。
項1.
ラクチプランチバチルス プランタラム(Lactiplantibacillus plantarum)S25株(受領番号:NITE ABP-03571)である、乳酸菌。
項2.
項1に記載の乳酸菌を含む、経口組成物。
項3.
項1に記載の乳酸菌を含む、飲食品組成物又は医薬品組成物。
項4.
免疫調節用、又は細胞性免疫増強用である、項2又は3に記載の組成物。
本開示に包含される乳酸菌は、ラクチプランチバチルス プランタラム(Lactiplantibacillus plantarum)S25株(受領番号:NITE ABP-03571)である。本明細書において、当該乳酸菌を、「本開示の乳酸菌」と表記することがある。
図2C及びDに示すとおり、L. plantarum S25株を用いて発酵したブロッコリを添加することによって、IFN-γ及びIL-12の産生が促進されることが確認された。
図2E及びFに示すとおり、L. plantarum S25株を用いて発酵したブロッコリを添加することによって、Th1型サイトカイン/Th2型サイトカイン比(IFN-γ/IL-6、IL-12/IL-10)は1.0以上の高値を示すことが確認された。
解凍したPBMCを10%FCS含有RPMI1640培地で3×106/ml濃度に調製した後、24穴プレートに500μlずつ撒いた。次にLactiplantibacillus plantarum S25株(受領番号:NITE ABP-03571)、又はヨーグルトから分離したLactobacillus acidophilusを50μlずつ加え、37℃、5%C02下で20時間培養した。対照としてPBSを加える試験区分も設けた。
培養終了後、セルストレーナーキャップ付チューブで、大きいdebrisを除去した後、2000rpmで5分間遠心し、沈渣のPBMCをNK活性測定に用いた。
Claims (4)
- ラクチプランチバチルス ペントーサス(Lactiplantibacillus pentosus)S25株(受領番号:NITE ABP-03571)である、乳酸菌。
- 請求項1に記載の乳酸菌を含む、経口組成物。
- 請求項1に記載の乳酸菌を含む、飲食品組成物又は医薬品組成物。
- 免疫調節用、又は細胞性免疫増強用である、請求項2又は3に記載の組成物。
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