JP2023072634A - 抗ウイルス剤 - Google Patents

Abstract

【課題】本発明は、ＣＯＶＩＤ－１９を始めとするウイルス感染症疾患の治療薬として有効な抗ウイルス剤を提供することを課題とする。【解決手段】下記一般式（Ａ－１）又は（Ａ－２）で表される化合物、前記化合物の塩、又はこれらの溶媒和物からなる、抗ウイルス剤。TIFF2023072634000021.tif53170［式中、Ｒ１はＯ、Ｓ、Ｓｅ、又は＝Ｎ－ＯＲ１１であり；Ｒ２はＯ、Ｓ、Ｓｅ、又は＝Ｎ－ＯＲ１１であり；Ｒ３は－Ｏ－Ｒ１２、－Ｓ－Ｒ１３又はグアニジノ基であり；Ｒ１１はＨ、アルキル基又はアリール基であり；Ｒ１２及びＲ１３はそれぞれ独立して、アルキル基又はアリール基であり；Ｒ４、Ｒ５及びＲ６はそれぞれ独立して、Ｈ等である。］【選択図】なし

Description

本発明は、コロナウイルスやフラビウイルス等のプラス鎖一本鎖ＲＮＡを遺伝子とするエンベロープウイルスによる感染症に対する治療剤として有効な抗ウイルス剤に関する。

コロナウイルスは、プラス鎖一本鎖ＲＮＡを遺伝子とするエンベロープウイルスである。ヒトに感染するコロナウイルスとしては、一般的な風邪の原因ウイルスの他に、急性呼吸器症候群の原因となるものがある。例えば、２００３年に大流行した重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）の原因であるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１、２０１３年に大流行した中東呼吸器症候群（ＭＥＲＳ）の原因であるＭＥＲＳ－ＣｏＶ、２０１９年から大流行した新型コロナウイルス感染症ＣＯＶＩＤ－１９の原因であるＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２がある。特に、ＣＯＶＩＤ－１９は未だ治療薬が少なく、より有効な治療薬の開発が求められている。

ＣＯＶＩＤ－１９の治療薬として、レムデシビルがある。レムデシビル（ＧＳ－５７３４）はＧＳ－４４１５２４のモノホスホルアミデートプロドラッグであり、エボラ出血熱及びマールブルグウイルス感染症の治療薬として開発された核酸化合物からなる抗ウイルス薬である。一本鎖ＲＮＡウイルスに対する抗ウイルス活性がある。ＧＳ－４４１５２４も、ＣＯＶＩＤ－１９に対する治療効果が期待されている（非特許文献１）。

Yan and Muller, ACS Medicinal Chemistry Letters, 2020, vol.11, p.1361-1366.

本発明は、ＣＯＶＩＤ－１９を始めとするウイルス感染症疾患の治療薬として有効な抗ウイルス剤を提供することを目的とする。

本発明者らは、国立大学法人北海道大学薬学研究院創薬科学研究教育センターが保有する核酸化合物を母核とする化合物ライブラリーを用いて、プラス鎖一本鎖ＲＮＡを遺伝子とするエンベロープウイルスの１種であるデングウイルスに対する抗ウイルス活性を有する化合物をスクリーニングし、抗ウイルス活性の高い化合物を選抜することにより、本発明を完成させた。

すなわち、本発明は、以下の、抗ウイルス剤等を提供するものである。
［１］ 下記一般式（Ａ－１）又は（Ａ－２）

［式中、Ｒ^１は、酸素原子、硫黄原子、セレン原子、又は＝Ｎ－ＯＲ^１１であり；Ｒ^２は、酸素原子、硫黄原子、セレン原子、又は＝Ｎ－ＯＲ^１１であり；Ｒ^３は、－Ｏ－Ｒ^１２、－Ｓ－Ｒ^１３、又はグアニジノ基であり；Ｒ^１１は、水素原子、炭素数１～６のアルキル基又はアリール基であり；Ｒ^１２及びＲ^１３は、それぞれ独立して、炭素数１～６のアルキル基又はアリール基であり；Ｒ^４は、水素原子、－ＣＯ－Ｒ^１４、又は－Ｏ－Ｐ（ＯＨ）（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１５であり；Ｒ^１４及びＲ^１５は、それぞれ独立して、フェニル基で置換されていてもよい炭素数１～３０のアルキル基（当該アルキル基は、炭素原子が２以上の場合に、炭素原子間にエーテル結合性の酸素原子を有していてもよい）又はアリール基であり；Ｒ^５及びＲ^６は、それぞれ独立して、水素原子又は－ＣＯ－Ｒ^１６であり；Ｒ^１６は、炭素数１～６のアルキル基又はアリール基である。］
で表される化合物、前記化合物の塩、又はこれらの溶媒和物からなる、抗ウイルス剤。
［２］ 前記一般式（Ａ－１）又は（Ａ－２）で表される化合物が、下記一般式（１）～（９）のいずれかで表される化合物である、前記［１］の抗ウイルス剤。

［３］ 前記一般式（Ａ－１）又は（Ａ－２）で表される化合物が、下記式（Ａ１）、（Ａ５）、（Ａ６）、（Ａ７）、及び（Ａ８）のいずれかで表される化合物である、前記［１］の抗ウイルス剤。

［４］ 前記一般式（Ａ－１）又は（Ａ－２）で表される化合物が、下記式（Ａ２）～（Ａ４）のいずれかで表される化合物である、前記［１］の抗ウイルス剤。

［５］ プラス鎖一本鎖ＲＮＡを遺伝子とするエンベロープウイルスに対する抗ウイルス作用を有する、前記［１］～［４］のいずれかの抗ウイルス剤。
［６］ 前記［１］～［５］のいずれかの抗ウイルス剤を有効成分とする、医薬用組成物。
［７］ プラス鎖一本鎖ＲＮＡを遺伝子とするエンベロープウイルスによる感染症の治療又は予防に用いられる、前記［６］の医薬用組成物。
［８］ コロナウイルス、フラビウイルス、又はトガウイルスによる感染症の治療に用いられる、前記［６］の医薬用組成物。
［９］ ＣＯＶＩＤ－１９の治療又は予防に用いられる、前記［６］の医薬用組成物。
［１０］下記式（Ａ４）～（Ａ７）のいずれかで表される化合物。

本発明に係る抗ウイルス剤は、コロナウイルスやフラビウイルスのようなプラス鎖一本鎖ＲＮＡを遺伝子とするエンベロープウイルスに対して高い抗ウイルス活性を有する核酸化合物を有効成分とする。このため、当該抗ウイルス剤を有効成分とする医薬用組成物は、ｉｎ ｖｉｖｏ又はｅｘ ｖｉｖｏにおける抗ウイルス剤として好適であり、プラス鎖一本鎖ＲＮＡを遺伝子とするエンベロープウイルスによる感染症の治療又は予防のために用いられる医薬用組成物の有効成分として非常に有用である。

実施例２において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の各株を感染させた細胞を２－チオウリジン処理した場合の相対ウイルスＲＮＡ量の測定結果を示した図である。 実施例２において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２オミクロン株を感染させた細胞を２－チオウリジン処理した場合の相対ウイルスＲＮＡ量の測定結果を示した図である。 実施例２において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１を感染させた細胞を２－チオウリジン処理した場合の相対ウイルスＲＮＡ量の測定結果を示した図である。 実施例２において、ＨＣｏＶの各株を感染させた細胞を２－チオウリジン処理した場合の相対ウイルスＲＮＡ量の測定結果を示した図である。 実施例２において、ＤＥＮＶ２を感染させた細胞を２－チオウリジン処理した場合の相対ウイルスＲＮＡ量の測定結果を示した図である。 実施例２において、ＺＩＫＶを感染させた細胞を２－チオウリジン処理した場合の相対ウイルスＲＮＡ量の測定結果を示した図である。 実施例２において、ＹＦＶを感染させた細胞を２－チオウリジン処理した場合の相対ウイルスＲＮＡ量の測定結果を示した図である。 実施例２において、ＪＥＶを感染させた細胞を２－チオウリジン処理した場合の相対ウイルスＲＮＡ量の測定結果を示した図である。 実施例２において、ＷＮＶを感染させた細胞を２－チオウリジン処理した場合の相対ウイルスＲＮＡ量の測定結果を示した図である。 実施例２において、ＣＨＩＫＶを感染させた細胞を２－チオウリジン処理した場合の相対ウイルスＲＮＡ量の測定結果を示した図である。 実施例３において、ＡＧ１２９マウス馴化ＤＥＮＶ２に感染させたＡＧ１２９マウスに２－チオウリジンを投与した各群の生存率（％）の経時的変化を示した図である。 実施例３において、ＡＧ１２９マウス馴化ＤＥＮＶ２に感染させたＡＧ１２９マウスに２－チオウリジンを投与した各群の、感染３日後における血清中ウイルスＲＮＡ量の測定結果を示した図である。 実施例５において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＭＡ－Ｐ１０株に感染させたマウスであって、２－チオウリジンをウイルス感染の２時間前に投与した群の肺内のウイルス力価（ｌｏｇ_１０（ＴＣＩＤ_５０）／ｍＬ）の測定結果を示した図である。 実施例５において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＭＡ－Ｐ１０株に感染させたマウスであって、ウイルス感染の２時間前に２－チオウリジンを静脈内投与した群の肺内のウイルスＲＮＡ量（ｌｏｇ_１０（ウイルスコピー数）／ｍＬ）の測定結果を示した図である。 実施例５において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＭＡ－Ｐ１０株に感染させたマウスであって、ウイルス感染の２時間前とウイルス感染翌日から感染４日後までの期間に１日１回の合計５日間、２－チオウリジンを静脈内投与した群の生存率（％）の経時的変化を示した図である。 実施例５において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＭＡ－Ｐ１０株に感染させたマウスであって、ウイルス感染後に２－チオウリジンを経口投与した群の肺内のウイルスＲＮＡ量（ｌｏｇ_１０（ウイルスコピー数）／ｍＬ）の測定結果を示した図である。

本発明及び本願明細書において、「Ｃ_ｙ－ｚ（ｙ及びｚは、ｙ＜ｚを充たす正の整数である。）」は、炭素数がｙ以上ｚ以下であることを意味する。

本発明に係る抗ウイルス剤は、下記一般式（Ａ－１）又は（Ａ－２）で表される化合物、前記化合物の塩、又はこれらの溶媒和物からなる。

一般式（Ａ－１）又は（Ａ－２）中、Ｒ^１は、酸素原子、硫黄原子、セレン原子、又は＝Ｎ－ＯＲ^１１である。Ｒ^１１は、水素原子、炭素数１～６のアルキル基（Ｃ_１－６アルキル基）又はアリール基である。

Ｒ^１１がＣ_１－６アルキル基の場合、当該Ｃ_１－６アルキル基としては、直鎖であっても分岐鎖であってもよい。Ｃ_１－６アルキル基の例としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｔｅｒｔ－ペンチル基、ヘキシル基等が挙げられる。

Ｒ^１１がＣ_１－６アルキル基の場合、当該Ｃ_１－６アルキル基は、置換基を有していてもよい。置換基を有しているＣ_１－６アルキル基とは、Ｃ_１－６アルキル基の炭素原子に結合している水素原子の１又は複数個、好ましくは１～３個が、他の官能基に置換されている基である。２個以上の置換基を有する場合、置換基同士は互いに同種であってもよく、異種であってよい。当該置換基としては、アリール基、ヘテロアリール基等が挙げられる。

Ｒ^１１がアリール基の場合、当該アリール基としては、フェニル基、ナフチル基、アントリル基、９－フルオレニル基等が挙げられ、フェニル基が特に好ましい。

Ｒ^１１がアリール基の場合、当該アリール基は、置換基を有していてもよい。置換基を有しているアリール基とは、アリール基の炭素原子に結合している水素原子の１又は複数個、好ましくは１～３個が、他の官能基に置換されている基である。２個以上の置換基を有する場合、置換基同士は互いに同種であってもよく、異種であってよい。当該置換基としては、Ｃ_１－６アルキル基、Ｃ_１－６アルコキシ基等が挙げられる。Ｃ_１－６アルコキシ基は、直鎖であっても分岐鎖であってもよい。Ｃ_１－６アルコキシ基の例としては、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基、ｔｅｒｔ－ブトキシ基、ペンチルオキシ基、ヘキシルオキシ基等が挙げられる。

一般式（Ａ－１）又は（Ａ－２）中、Ｒ^２は、酸素原子、硫黄原子、セレン原子、又は＝Ｎ－ＯＲ^１１である。Ｒ^１１は、前記Ｒ^１１と同じである。一般式（Ａ－１）中、Ｒ^１とＲ^２は、互いに同じ基であってもよく、異なる基であってもよい。

一般式（Ａ－２）中、Ｒ^３は、－Ｏ－Ｒ^１２、－Ｓ－Ｒ^１３、又はグアニジノ基である。Ｒ^１２及びＲ^１３は、Ｃ_１－６アルキル基又はアリール基である。Ｒ^１２及びＲ^１３がＣ_１－６アルキル基の場合、当該Ｃ_１－６アルキル基としては、Ｒ^１１と同様の基を用いることができる。Ｒ^１２及びＲ^１３がアリール基の場合、当該アリール基としては、Ｒ^１１と同様の基を用いることができる。

一般式（Ａ－１）又は（Ａ－２）中、Ｒ^４は、水素原子、－ＣＯ－Ｒ^１４、又は－Ｏ－Ｐ（ＯＨ）（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１５である。Ｒ^１４及びＲ^１５は、それぞれ独立して、炭素数１～３０のアルキル基（Ｃ_１－３０アルキル基）又はアリール基である。

Ｒ^１４及びＲ^１５がアリール基の場合、当該アリール基としては、Ｒ^１１と同様の基を用いることができる。

Ｒ^１４及びＲ^１５がＣ_１－３０アルキル基の場合、当該アルキル基としては、直鎖であっても分岐鎖であってもよい。Ｃ_１－３０アルキル基の例としては、Ｃ_１－３０アルキル基の例としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｔｅｒｔ－ペンチル基、ヘキシル基、イソヘキシル基、ネオヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、エイコシル基、ヘンエイコシル基、ドコシル基、トリコシル基、テトラコシル基、ペンタコシル基、ヘキサコシル基、ヘプタコシル基、オクタコシル基、ノナコシル基、トリアコンチル基等が挙げられる。

Ｒ^１４及びＲ^１５がＣ_１－３０アルキル基の場合、当該アルキル基は、炭素原子に結合する１個以上の水素原子が、フェニル基で置換されていてもよい。Ｒ^１４及びＲ^１５としては、フェニル基で置換されていないＣ_１－３０アルキル基か、１個の水素原子がフェニル基に置換されているＣ_１－３０アルキル基が好ましい。

Ｒ^１４及びＲ^１５の炭素原子が２以上の場合、すなわち炭素数２～３０のアルキル基（Ｃ_２－３０アルキル基）の場合には、当該アルキル基は、炭素原子間にエーテル結合性の酸素原子を有していてもよい。なお、「エーテル結合性の酸素原子」とは、炭素原子間を連結する酸素原子であり、酸素原子同士が直列に連結された酸素原子は含まれない。

一般式（Ａ－１）又は（Ａ－２）中、Ｒ^５及びＲ^６は、それぞれ独立して、水素原子又は－ＣＯ－Ｒ^１６である。Ｒ^１６は、Ｃ_１－６アルキル基又はアリール基である。Ｃ_１－６アルキル基及びアリール基としては、Ｒ^１１で挙げられた基と同様のものが挙げられる。

一般式（Ａ－１）又は（Ａ－２）で表される化合物としては、下記一般式（１）～（９）のいずれかで表される化合物が好ましい。一般式（１）～（９）中、Ｒ^４～Ｒ^６及びＲ^１１は、一般式（Ａ－１）又は（Ａ－２）中のＲ^４～Ｒ^６及びＲ^１１と同じである。

本発明に係る抗ウイルス剤の有効成分としては、一般式（Ａ－１）又は（Ａ－２）で表される化合物の誘導体であることも好ましい。一般式（Ａ－１）又は（Ａ－２）で表される化合物の誘導体としては、生体内で酵素処理等を受けることによって一般式（Ａ－１）又は（Ａ－２）で表される化合物が産生される誘導体が好ましい。

一般式（Ａ－１）で表される化合物としては、特に、２－チオウリジン（ＣＡＳ番号：２０２３５－７８－３）若しくはその誘導体が好ましい。２－チオウリジンの誘導体としては、生体内で酵素処理等を受けることによって２－チオウリジンが産生される誘導体が好ましい。本発明において、抗ウイルス剤として用いることができる２－チオウリジンの誘導体としては、例えば、核酸化合物を有効成分とする医薬品に対して行われているプロドラック化によって得られる誘導体がより好ましい。具体的には、２－チオウリジン中、フラン環に直接又はメチレン基を介して連結したヒドロキシ基が、アシル基や、リン酸基（ＰＯ_４ ^－）に置換されたリン酸誘導体や、当該ヒドロキシ基がモノホスホルアミダイト基に置換されたモノホスホルアミダイト誘導体、当該ヒドロキシ基がモノホスホロチオエート基に置換されたモノホスホロチオエート誘導体などが挙げられる。例えば、２－チオウリジン（化合物（Ａ１））のヒドロキシ基をアシル化した誘導体として、化合物（Ａ５）～（Ａ８）が挙げられる。

一般式（Ａ－１）又は（Ａ－２）で表される化合物としては、下記式（Ａ２）～（Ａ４）のいずれかで表される化合物若しくはその誘導体も好ましい。これらの誘導体としては、生体内で酵素処理等を受けることによって式（Ａ２）～（Ａ４）のいずれかで表される化合物が産生される誘導体が好ましい。

一般式（Ａ－１）又は（Ａ－２）で表される化合物としては、下記式（Ａ９）～（Ａ１１）のいずれかで表される化合物若しくはその誘導体も好ましい。これらの誘導体としては、生体内で酵素処理等を受けることによって式（Ａ９）～（Ａ１１）のいずれかで表される化合物が産生される誘導体が好ましい。

本発明に係る抗ウイルス剤の有効成分としては、一般式（Ａ－１）又は（Ａ－２）で表される化合物は、塩を形成していてもよく、その塩を形成する酸又は塩基としては、塩酸、硫酸などの鉱酸；酢酸、コハク酸、クエン酸等の有機酸；ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属；カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属等が挙げられる。また、一般式（Ａ－１）又は（Ａ－２）で表される化合物又はその塩は、水和物等の溶媒和物の形態であってもよい。

一般式（Ａ－１）又は（Ａ－２）で表される化合物、当該化合物の塩、又はこれらの溶媒和物（以降において、これらをまとめて、「本発明に係る核酸化合物」ということがある。）は、ウイルス、特に、プラス鎖一本鎖ＲＮＡを遺伝子とするエンベロープウイルスに対する抗ウイルス作用を有している。プラス鎖一本鎖ＲＮＡを遺伝子とするエンベロープウイルスとしては、コロナウイルスやフラビウイルス、トガウイルス等が挙げられる。

本発明に係る核酸化合物が抗ウイルス活性を示すコロナウイルスとしては、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２等が挙げられる。本発明に係る核酸化合物が抗ウイルス活性を示すフラビウイルスとしては、デング熱（デング出血熱）の原因であるデングウイルス（ＤＥＮＶ）、ジカ熱（ジカウイルス感染症）の原因であるジカウイルス（ＺＩＫＶ）、黄熱の原因である黄熱ウイルス（ＹＦＶ）、ウエストナイル熱（ウエストナイル脳炎）の原因であるウエストナイルウイルス（ＷＮＶ）、日本脳炎の原因である日本脳炎ウイルス（ＪＥＶ）等が挙げられる。ＤＥＮＶには、１型から４型までの４種（ＤＥＮＶ１、ＤＥＮＶ２、ＤＥＮＶ３、ＤＥＮＶ４）が存在する。本発明に係る核酸化合物が抗ウイルス活性を示すトガウイルスとしては、チクングニア熱の原因であるチクングニアウイルス（ＣＨＩＫＶ）等が挙げられる。

本発明に係る核酸化合物は、ウイルス感染症、特に、プラス鎖一本鎖ＲＮＡを遺伝子とするエンベロープウイルスのウイルス感染症の治療又は予防に用いられる医薬用組成物の有効成分として有用である。本発明に係る核酸化合物を有効成分とする医薬用組成物は、中でも、コロナウイルス、フラビウイルス、又はトガウイルスによる感染症の治療又は予防に用いられるものが好ましく、特に、ＳＡＲＳ、ＭＥＲＳ、ＣＯＶＩＤ－１９、デング熱、ジカ熱、黄熱、ウエストナイル熱、日本脳炎、チクングニア熱の治療又は予防に用いられるものがより好ましい。

本発明に係る核酸化合物は、低分子化合物であることから、免疫原性等の問題がない。また、経口投与も可能であり、投与経路もあまり制限されないため、特に、ヒトを含む哺乳類に対する医薬の有効成分として有用である。

１種又は２種以上の本発明に係る核酸化合物を医薬組成物に含有せしめる場合、必要に応じて薬学的に許容される担体と配合し、予防又は治療目的に応じて各種の投与形態を採用可能である。該形態としては、例えば、経口剤、注射剤、坐剤、軟膏剤、貼付剤等が挙げられるが、経口剤が好ましい。これらの投与形態は、各々当業者に公知慣用の製剤方法により製造できる。

薬学的に許容される担体としては、固形製剤における賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤；液状製剤における溶剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、無痛化剤等が用いられる。また、必要に応じて防腐剤、抗酸化剤、着色剤、甘味剤、安定化剤等の製剤添加物を用いることもできる。

経口用固形製剤を調製する場合は、本発明に係る核酸化合物に賦形剤、必要に応じて、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味・矯臭剤等を加えた後、常法により錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等を製造することができる。

経口用液体製剤を調製する場合は、本発明に係る核酸化合物に、矯味剤、緩衝剤、安定化剤、矯臭剤等を加えて、常法により内服液剤、シロップ剤、エリキシル剤等を製造することができる。

注射剤を調製する場合は、本発明に係る核酸化合物に、ｐＨ調節剤、緩衝剤、安定化剤、等張化剤、局所麻酔剤等を添加し、常法により皮下、筋肉内及び静脈内用注射剤を製造することができる。

坐剤を調製する場合は、本発明に係る核酸化合物に当業界において公知の製剤用担体、例えば、ポリエチレングリコール、ラノリン、カカオ脂、脂肪酸トリグリセリド等を加えた後、常法により製造することができる。
軟膏剤を調製する場合は、本発明に係る核酸化合物に通常使用される基剤、安定剤、湿潤剤、保存剤等が必要に応じて配合され、常法により混合、製剤化される。
貼付剤を調製する場合は、通常の支持体に前記軟膏、クリーム、ゲル、ペースト等を常法により塗布すればよい。

前記の各製剤中の本発明に係る核酸化合物の含有量は、患者の症状、その剤形等により一定ではないが、一般に経口剤では約０．００１～１０００ｍｇ、注射剤では約０．００１～５００ｍｇ、坐剤では約０．０１～１０００ｍｇ程度である。

また、これらの製剤の１日あたりの投与量は、患者の症状、体重、年齢、性別等によって異なり一概には決定できないが、通常成人（体重６０ｋｇ）１日あたり約０．００５～５０００ｍｇ程度であり、０．０１～１０００ｍｇが好ましく、これを１日１回又は２～３回程度に分けて投与するのが好ましい。

本発明に係る核酸化合物を有効成分とする抗ウイルス剤及び医薬用組成物が投与される動物は、特に限定されるものではなく、ヒトであってもよく、ヒト以外の動物であってもよい。非ヒト動物としては、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、サル、イヌ、ネコ、ウサギ、マウス、ラット、ハムスター、モルモット等の哺乳動物や、ニワトリ、ウズラ、カモ等の鳥類等が挙げられる。

次に実施例を示して本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。

＜コロナウイルス＞
以降の実験で使用したコロナウイルスのうち、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２としては、ｈＣｏＶ－１９／Ｊａｐａｎ／ＴＹ／ＷＫ－５２１／２０２０株（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２武漢株）、ｈＣｏＶ－１９／Ｊａｐａｎ／ＱＫ００２／２０２０株（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２アルファ株）、ｈＣｏＶ－１９／Ｊａｐａｎ／ＴＹ８－６１２／２０２１株（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ベータ株）、ｈＣｏＶ－１９／Ｊａｐａｎ／ＴＹ７－５０１／２０２１株（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ガンマ株）、ｈＣｏＶ－１９／Ｊａｐａｎ／ＴＹ１１－９２７／２０２１株（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２デルタ株）、及びｈＣｏＶ－１９／Ｊａｐａｎ／ＴＹ３８－８７３／２０２１株（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２オミクロン（ＢＡ.１）株）を用いた。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１としては、ハノイ株を用いた。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、国立感染症研究所より、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１は、国立大学法人長崎大学より分与されたものを用いた。
ヒトに日常的に感染するコロナウイルス（Ｈｕｍａｎ Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ：ＨＣｏＶ）として、ＡＴＣＣから入手したアルファコロナウイルスＨＣｏＶ－２２９Ｅ株（ＡＴＣＣ：ＶＲ－７４０）、及びベータコロナウイルスＨＣｏＶ－ＯＣ４３株（ＡＴＣＣ：ＶＲ－１５５８）を用いた。

＜フラビウイルス＞
以降の実験で使用したフラビウイルスのうち、ＤＥＮＶ１～ＤＥＮＶ４は、それぞれ、Ｄ１／ｈｕ／ＰＨＬ／１０－０７株、Ｄ２／ｈｕ／ＩＮＤＩＡ／０９－７４株、Ｄ３／ｈｕ／Ｔｈａｉｌａｎｄ／００－４０株、Ｄ４／ｈｕ／Ｓｏｌｏｍｏｎ／０８－１１株を用いた。ＺＩＫＶは、ＭＲ７６６株を用いた。ＹＦＶは、１７Ｄ－２０４株を用いた。ＷＮＶは、ＮＹ９９株を用いた。ＪＥＶは、Ｂｅｉｊｉｎｇ－１株を用いた。ＹＦＶは国立大学法人長崎大学より、その他のウイルス株は国立感染症研究所より分与されたものを用いた。

＜トガウイルス＞
以降の実験で使用したトガウイルスのうち、ＣＨＩＫＶは、ＳＬ１０５７１株を用いた。当該ウイルス株は国立感染症研究所より分与されたものを用いた。

＜培養細胞＞
以降の実験で、ウイルスを感染させるために、ヒト胎児肺由来の培養細胞株ＭＲＣ５細胞、シリアンハムスター腎臓由来の培養細胞株ＢＨＫ－２１細胞、アフリカミドリザル腎臓由来の培養細胞株ＶｅｒｏＥ６細胞、遺伝子組換えによりＴＭＰＲＳＳ２をＶｅｒｏＥ６細胞に発現させた培養細胞株ＶｅｒｏＥ６／ＴＭＰＲＳＳ２細胞、及び、ヒト胚性腎臓由来の培養細胞株ＨＥＫ２９３Ｔ細胞に、ＡＣＥ２遺伝子を導入して、ＡＣＥ２を恒常的に発現させた２９３Ｔ／ＡＣＥ２細胞を用いた。いずれの細胞についても、培養液として、２％ ＦＢＳ／ＭＥＭを用いた。２％ ＦＢＳ／ＭＥＭは、ＭＥＭ（Minimum Essential Medium：ニッスイ社製）に、２％ ＦＢＳ（ウシ胎児血清：Ｇｉｂｃｏ社製）とＬ－グルタミン（Ｗａｋｏ社製）を添加して調製した。

［実施例１］
国立大学法人北海道大学薬学研究院創薬科学研究教育センターが保有する核酸化合物を母核とする化合物ライブラリーの化合物を被験試料として、フラビウイルスに感染させた細胞の細胞死を抑制する効果を奏する化合物をスクリーニングした。フラビウイルスとしてＤＥＮＶ２を用いた。
この結果、使用した化合物ライブラリーに含まれる化合物のうち、ＨＵＰ０７９７（２－チオウリジン）に、抗ウイルス活性があることがわかった。

＜フラビウイルスに対する抗ウイルス活性の測定＞
２－チオウリジンについて、ＢＨＫ－２１細胞に８種類のフラビウイルス（ＤＥＮＶ１、ＤＥＮＶ２、ＤＥＮＶ３、ＤＥＮＶ４、ＺＩＫＶ、ＹＦＶ、ＪＥＶ、ＷＮＶ）を感染させてＭＴＴアッセイを行い、抗ウイルス活性、すなわちウイルス感染による細胞死抑制効果を調べた。

（１）ウイルス感染とＭＴＴアッセイ
まず、９６ウェルプレートの各ウェル内で、各化合物で処理した細胞に各種ウイルスを感染させて、ＣＯ_２インキュベーター（３７℃、５％ ＣＯ_２）内で、ＤＥＮＶ２は４日間、ＤＥＮＶ１、３、４は５日間、ＺＩＫＶ、ＹＦＶ、ＷＮＶ、ＪＥＶは３日間培養した。
培養した９６ウェルプレートを、肉眼及び顕微鏡下で観察し、細胞の形態、結晶の有無等を確認した。次いで、ＭＴＴ溶液（3-(4,5-dimethyl-2-thiazol)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide（ナカライテスク社製）を５μｇ／ｍＬになるようにＰＢＳで溶解させた溶液）を、各ウェルに３０μＬずつ添加し、ＣＯ_２インキュベーター内で２時間培養した。その後、当該プレートから、細胞を吸わないようにして上清を１５０μＬずつ除き、細胞溶解液（ウイルス不活化液：５００ｍＬのイソプロパノールに、５０ｍＬのＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、４ｍＬの塩酸（１２Ｎ）を入れて調製したもの）を各ウェルに１５０μＬずつ添加し、プレートミキサーで混和した。その後、当該９６ウェルプレートについて、吸光度計を用いて５７０ｎｍ／６３０ｎｍの２波長の吸光度を測定した。

（２）ＥＣ_５０の算出
以下の計算式に基づき、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌ又は同等の計算処理能力を有するプログラムを使用し、ウイルス感染細胞の５０％細胞死阻害濃度（ＥＣ_５０）を算出した。

[EC₅₀] ＝ 10^Z
Z ＝ ([50% OD] － [Low OD]) / ([High OD] － [Low OD]) × {log (High conc.) － log (Low conc.)} ＋ log (Low conc.)
[50% OD] ＝ {OD (cell control) － OD (virus control)} × 0.5 ＋ OD (virus control)

OD：吸光度
conc.：薬剤濃度
OD (cell control): コントロールのウェルの吸光度の平均値
OD (virus control):ウイルスコントロールのウェルの吸光度の平均値

ＥＣ_５０は、吸光度と薬剤濃度曲線上の５０％ ＯＤ値を挟む２点A-High (High OD, High conc.) とB-Low (Low OD, Low conc.)から計算した。

結果を表１に示す。表１に示すように、２－チオウリジンは、ＤＥＮＶ１、ＤＥＮＶ２、ＤＥＮＶ３、ＤＥＮＶ４、ＺＩＫＶ、ＹＦＶ、ＷＮＶ、及びＪＥＶに対して、高い抗ウイルス活性があることがわかった。

＜コロナウイルス及びトガウイルスに対する抗ウイルス活性の測定＞
ＭＲＣ５細胞にＨＣｏＶ－２２９Ｅ株又はＨＣｏＶ－ＯＣ４３株を、ＢＨＫ－２１細胞にＣＨＩＫＶをそれぞれ感染させて、前記と同様にして抗ウイルス活性を調べた。結果を表２に示す。

表２に示すように、２－チオウリジンは、トガウイルスであるＣＨＩＫＶに対しても、コロナウイルスであるＨＣｏＶ－２２９Ｅ株及びＨＣｏＶ－ＯＣ４３株に対しても抗ウイルス活性を有することが確認された。すなわち、２－チオウリジンは、広範なプラス鎖一本鎖ＲＮＡを遺伝子とするエンベロープウイルスに対して高い抗ウイルス活性を有していた。

［実施例２］
実施例１において、抗ウイルス活性が確認された２－チオウリジンについて、コロナウイルス、フラビウイルス、及びトガウイルスに対するウイルスＲＮＡ複製抑制効果を調べた。

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２武漢株、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２アルファ株、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ベータ株、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ガンマ株、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２デルタ株、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２オミクロン株、及びＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１ハノイ株は、ＶｅｒｏＥ６／ＴＭＰＲＳＳ２細胞に感染させた。ＨＣｏＶ―２２９Ｅ株は、ＭＲＣ５細胞に感染させた。ＨＣｏＶ―ＯＣ４３株、ＤＥＮＶ２、ＺＩＫＶ、ＹＦＶ、ＪＥＶ、ＷＮＶ、及びＣＨＩＫＶは、ＶｅｒｏＥ６細胞に感染させた。

＜コロナウイルスに対するウイルスＲＮＡ複製抑制効果の確認＞
（１）培養細胞へのウイルス感染
被験試料（２－チオウリジン）、各種コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２武漢株、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２アルファ株、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ベータ株、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ガンマ株、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２デルタ株、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２オミクロン株、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１ハノイ株、ＨＣｏＶ―２２９Ｅ株、ＨＣｏＶ―ＯＣ４３株）、及び各種細胞（ＶｅｒｏＥ６／ＴＭＰＲＳＳ２、ＭＲＣ５、ＶｅｒｏＥ６）の希釈には、２％ ＦＢＳ／ＭＥＭからなる培養液を用いた。
まず、９６又は４８ウェルプレートに、適当細胞数に調製した細胞溶液を１００又は３００μＬ／ウェルずつ分注し、ＣＯ_２インキュベーター（３７℃、５％ ＣＯ_２）で一晩培養した。次いで、このプレート中の細胞を入れた各ウェルに、予め培養液で適度な濃度に希釈した被験試料を、２倍段階希釈系列を作製するように添加し（５０又は１５０μＬ／ウェル）、プレートミキサーで混和した。この被験試料を入れたプレートに、予め培養液で適当な濃度に希釈したウイルス液を５０又は１５０μＬ／ウェルずつ分注した。その後、当該プレートをプレートミキサーで混和し、ＣＯ_２インキュベーター（３７℃、５％ ＣＯ_２）で２４～４８時間培養した。

（２）ＲＮＡ抽出・精製
培養後の前記プレートの各ウェルから、培養上清を除去し、ＲＮＡ抽出キット（製品名：ＰｕｒｅＬｉｎｋ Ｐｒｏ ９６ ｔｏｔａｌ ＲＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ、又は、ＰｕｒｅＬｉｎｋ ＲＮＡ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）に付属のＬｙｓｉｓバッファーを各ウェルに添加して細胞溶解液を回収した。その後、当該キットに付属のプロトコルに従って、ｔｏｔａｌ ＲＮＡを精製した。

（３）ウイルスＲＮＡの測定
精製した各種ウイルスＲＮＡのｎｕｃｌｅｏｃａｐｓｉｄ領域に設計したＰｒｏｂｅ／Ｐｒｉｍｅｒセットを用いて、ｑＲＴ－ＰＣＲ（real-time quantitative reverse transcription PCR）を実施した。ｑＲＴ－ＰＣＲは、市販のキット（製品名：ＥＸＰＲＥＳＳ Ｏｎｅ－Ｓｔｅｐ ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ｑＲＴ－ＰＣＲ ｋｉｔ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）と、リアルタイムＰＣＲシステム（製品名：ＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ ７ Ｆｌｅｘ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）を用いて行った。

ΔΔＣｔ法を用いて、２－チオウリジンを添加しなかった細胞のウイルスＲＮＡ量を１．０として、各濃度の２－チオウリジン処理した細胞における相対ウイルスＲＮＡ量を算出した。この際、内在性コントロールとして、ＡＣＴＢ遺伝子を用いた。各感染細胞における相対ウイルスＲＮＡ量の測定結果を図１Ａ～図１Ｄに示す。

＜その他のウイルスに対するウイルスＲＮＡ複製抑制効果の確認＞
感染に使用するウイルスとしてＤＥＮＶ２、ＺＩＫＶ、ＹＦＶ、ＪＥＶ、ＷＮＶ、及びＣＨＩＫＶを用い、感染させる細胞をＶｅｒｏＥ６細胞とし、さらに、ＤＥＮＶ２、ＺＩＫＶ、ＹＦＶ及びＪＥＶはウイルス感染から４８時間培養後、ＷＮＶとＣＨＩＫＶはウイルス感染から２４時間後の細胞からウイルスＲＮＡを抽出した以外は、前記と同様にして、各ウイルスに対する２－チオウリジンのウイルスＲＮＡ複製抑制効果を調べた。各感染細胞における相対ウイルスＲＮＡ量の測定結果を図１Ｅ～図１Ｊに示す。

図１Ａ～図１Ｊに示すように、２－チオウリジンで処理した細胞では、全てのウイルスに感染した細胞におけるウイルスＲＮＡ量が低下していた。これらの結果から、２－チオウリジンは、コロナウイルス、フラビウイルス、及びトガウイルスのウイルスＲＮＡ複製に対する抑制効果を有しており、抗ウイルス活性を有することが確認された。これらの結果から、２－チオウリジンは、プラス鎖一本鎖ＲＮＡを遺伝子とするエンベロープウイルスに対して広範な抗ウイルス活性を有することが示された。

［実施例３］
フラビウイルスを感染させたマウスを、２－チオウリジン処理し、治療効果が得られるかどうかを調べた。実験には、インターフェロンα受容体とインターフェロンγ受容体を欠損させたＡＧ１２９マウスと、ＤＥＮＶ２をＡＧ１２９マウスで継代して馴化させたウイルス（ＡＧ１２９マウス馴化ＤＥＮＶ２）を用いた。２－チオウリジンは、５％ＤＭＳＯ／０．５％ＭＣ水溶液（１００％のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で溶解させた２－チオウリジン（最終濃度５％）を０．５％のメチルセルロースで溶解させた水溶液）で希釈した溶液として、マウスに経口投与した。

実験開始日の朝に、ＡＧ１２９マウス（７週齢の雌）に、マウス１匹当たり０．１ｍＬのＡＧ１２９マウス馴化ＤＥＮＶ２液（１×１０^２ＰＦＵ／マウス）を腹腔内投与して感染させた。ウイルス感染日（感染０日目）から感染後４日目までの５日間、朝と夜の２回、２－チオウリジンを体重当たり５０ｍｇ／ｋｇ（５０ｍｇ／ｋｇ投与群、ｎ＝３）又は１５０ｍｇ／ｋｇ（１５０ｍｇ／ｋｇ投与群、ｎ＝４）で経口投与した。感染０日目には、感染後直ちに、２－チオウリジンの経口投与を行った。対照として、５％ＤＭＳＯ／０．５％ＭＣ水溶液を同様に経口投与した（Ｖｅｈｉｃｌｅ投与群、ｎ＝４）。

感染後毎日マウスを観察し、初期体重の８０％を切った個体は致死とみなした。各群の生存率（％）の結果を図２Ａに示す。Ｖｅｈｉｃｌｅ投与群では、ウイルス感染後１０日内に全てのマウスが致死となったのに対して、５０ｍｇ／ｋｇ投与群ではウイルス感染後１２日までは全てのマウスが生存しており、１５０ｍｇ／ｋｇ投与群ではウイルス感染後１５日までは全てのマウスが生存していた。

さらに、５０ｍｇ／ｋｇ投与群、１５０ｍｇ／ｋｇ投与群、及びＶｅｈｉｃｌｅ投与群をそれぞれ５匹ずつ追加して、同様にＡＧ１２９マウス馴化ＤＥＮＶ２を接種して感染実験を行った。感染後毎日マウスを観察し、初期体重の７０％を切った個体は致死とみなした。図２Ａに記載されたマウス個体についても、致死とみなす基準を初期体重の７０％を切った個体として、再解析を実施した。図２Ａの結果に、新たに取得したデータを追加して得られた各群の生存率（％）の結果を表３に示す。Ｖｅｈｉｃｌｅ投与群（ｎ＝９）では、ウイルス感染後１０日内に全てのマウスが致死となったのに対して、５０ｍｇ／ｋｇ投与群（ｎ＝８）及び１５０ｍｇ／ｋｇ投与群（ｎ＝９）では、投与量依存的にウイルスに感染したマウスの生存率が上昇していた。

また、感染３日後に各個体の血液を採取し、血清中のウイルスＲＮＡ量（ｌｏｇ_１０（ＤＥＮＶ２コピー数）／ｍＬ）を測定した（各群ｎ＝５）。測定結果を図２Ｂに示す。５０ｍｇ／ｋｇ投与群及び１５０ｍｇ／ｋｇ投与群では、薬剤なしの媒体のみを投与したＶｅｈｉｃｌｅ投与群よりも、２－チオウリジンの投与量依存的に血中のウイルス量が減少していた（図２Ｂ）。

これらの結果から、２－チオウリジンは、デングウイルスに感染した動物に対する致死抑制効果を有しており、デングウイルスによる感染症の治療又は予防のための医薬品の有効成分となり得ることが示された。

［実施例４］
２－チオウリジンの構造類似化合物を合成し、そのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２武漢株に対する抗ウイルス活性を測定した。

（１）化合物（Ａ２）及び化合物（Ａ３）
化合物（Ａ２）の２－セレノウリジン（ＣＡＳ番号：４０５５５－２９－１）と、化合物（Ａ３）の１－（（３Ｒ，４ｓ，５Ｒ）－３，４－ジヒドキシ－５－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン－２－イル）－２－（メチルチオ）ピリジン－４（１Ｈ）－オン（ＣＡＳ番号：１７５８７５－３２－８）は、常法で合成されたものを用いた。

（２）化合物（Ａ４）
化合物（Ａ４）の２－ヒドロキシイソシチジンは、以下の通りにして合成した。まず、２，５’－アンヒドロウリジン（ＣＡＳ番号：２２３２９－２０－０）及び塩酸ヒドロキシルアミン（１５３ｍｇ、２．２１ｍｍｏｌ）をメタノール（１０ｍＬ）に懸濁し、トリエチルアミン（３０８μＬ）を加え、７０℃で１時間、マイクロウエーブをかけた。次いで、反応液を室温に戻した後、溶媒を減圧下留去し、残渣をエタノールから結晶化して、化合物（Ａ４）（９７ｍｇ、収率８４．８％）を得た。

ESI-MS m/z 260 (M+H)^+
1H-NMR (DMSO-d₆)(400 MHz) d, 9.53(s, 1H), 9.36 (s, 1H), 7.84 (d, 1H, J = 8.2 Hz), 5.54 (d, 1H, J = 3.2 Hz), 5.28 (d, 1H, J = 4.4 Hz), 5.12 (t, 1H, J = 5.1, 5.4 Hz), 5.09-5.07 (m, 2H), 3.98-3.92 (m, 2H), 3.80 (ddd, 1H, J = 3.2, 3.7, 5.6 Hz), 3.69 (ddd, 1H, J = 3.2, 5.4, 12.4 Hz), 3.55 (ddd, 1H, J = 2.7, 5.1, 12.4 Hz).

（３）化合物（Ａ５）
化合物（Ａ５）の２’，３’－Ｏ－イソプロピリデン－５’－Ｏ－プロピニル－２－チオウリジンは、以下の通りにして合成した。まず、２’，３’－Ｏ－イソプロピリデン－２－チオウリジン（ｉｓｏｐ－ｓ２Ｕ）（ＣＡＳ番号：６９８４－５５－０）（２００ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（ＣＨ_３ＣＮ）（５ｍＬ）に懸濁し、４－ジメチルアミノピリジン（５ｍｇ）及び無水プロピオン酸（１３０μＬ、１．５等量）を加え、室温で攪拌した。３０分後にメタノール（１ｍＬ）を加え、さらに３０分間攪拌した後、溶媒を減圧下留去し、残渣を酢酸エチル（１０ｍＬ）に溶解し、水（５ｍＬ）、飽和重曹水（５ｍＬ）、水（５ｍＬ）の順に分液した。得られた酢酸エチル層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させた後、減圧下留去し、残渣を９８％ ギ酸（２ｍＬ）に溶解させて、６時間室温下で攪拌した。撹拌後の反応液を減圧下濃縮し、水を加えて共沸を３回繰り返してギ酸を除去した。得られた残渣をシリカゲルカラムで精製（ヘキサン：酢酸エチル＝１：１～１：３（容量比））し、泡状の化合物（Ａ５）（１７９ｍｇ、収率８５％)を得た。

ESI-MS m/z 316 (M+H)^+
1H-NMR (DMSO-d₆)(400 MHz) δ, 7.75 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 6.56 (d, 1H, J = 3.2 Hz), 6.03 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 5.55 (d, 1H, J = 5.6 Hz), 5.32 (d, 1H, J = 6.0 Hz), 4.24-4.32 (m, 2H), 4.05-4.09 (m, 2H), 3.90 (ddd, 1H, J = 6.0 Hz), 2.38 (q, 2H, J = 7.6 Hz), 1.04 (t, 3H, J = 7.6 Hz).

（４）化合物（Ａ６）
化合物（Ａ６）の２’，３’－Ｏ－イソプロピリデン－５’－Ｏ－イソブチリル－２－チオリジンは、以下の通りにして合成した。まず、ｉｓｏｐ－ｓ２Ｕ（２００ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（５ｍＬ）に懸濁し、４－ジメチルアミノピリジン（５ｍｇ）及び無水イソ酪酸（１７０μＬ、１．５等量）を加え、室温で攪拌した。３０分後にメタノール（１ｍＬ）を加え、さらに３０分間攪拌した後、溶媒を減圧下留去し、残渣を酢酸エチル（１０ｍＬ）に溶解し、水（５ｍＬ）、飽和重曹水（５ｍＬ）、水（５ｍＬ）の順に分液した。得られた酢酸エチル層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させた後、減圧下留去し、残渣を９８％ ギ酸（２ｍＬ）に溶解させて、６時間室温下で攪拌した。撹拌後の反応液を減圧下濃縮し、水を加えて共沸を３回繰り返してギ酸を除去した。得られた残渣をシリカゲルカラムで精製（ヘキサン：酢酸エチル＝１：１～１：３（容量比））し、泡状の化合物（Ａ６）（１９７ｍｇ、収率８９．５％)を得た。

ESI-MS m/z 330 (M+H)^+
1H-NMR (DMSO-d₆)(400 MHz) δ, 7.74 (d, 1H, J = 8.2 Hz), 6.57 (d, 1H, J = 3.2 Hz), 6.01 (d, 1H, J = 8.2 Hz), 5.56 (d, 1H, J = 5.6 Hz), 5.33 (d, 1H, J = 6.0 Hz), 4.28 (d, 2H, J = 3.6 Hz), 4.06-4.10 (m, 2H), 3.90 (ddd, 1H, J = 6.0 Hz), 2.61 (sept, 1H, J = 7.0 Hz), 1.11 (d, 6H, J = 7.0 Hz).

（５）化合物（Ａ７）
化合物（Ａ７）の２’，３’，５’トリ－Ｏ－イソブチリル－２－チオウリジンは、以下の通りにして合成した。まず、２－チオウリジン（１３０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１０ｍＬ）に懸濁し、４－ジメチルアミノピリジン（１０ｍｇ）及び無水イソ酪酸（３７５μＬ、２．４ｍｍｏｌ）を加え、室温で攪拌した。３０分後にメタノール（１ｍＬ）を加え、さらに３０分間攪拌した後、溶媒を減圧下留去し、残渣を酢酸エチル（２０ｍＬ）に溶解し、水（５ｍＬ）、飽和重曹水（５ｍＬ×２）、水（５ｍＬ）の順に分液した。得られた酢酸エチル層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させた後、減圧下留去し、泡状の化合物（Ａ７）（２３０ｍｇ、収率９７．９％）を得た。

ESI-MS m/z 471 (M+H)^+
1H-NMR (CDCl₃)(400 MHz) δ, 9.40 (br s, 1H), 7.72 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 6.86 (d, 1H, J = 4.4 Hz), 6.02 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 5.41 (dd, 1H, J = 4.4, 5.4 Hz), 5.26 (dd, 1H, J = 5.5 Hz), 4.30-4.47 (m, 3H), 2.55-2.66 (m, 3H), 1.18-1.24 (m, 18H).

抗ウイルス活性の測定は、実施例１と同様にして行った。測定結果を表４に示す。いずれの化合物も、２－チオウリジンと同様に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２武漢株に対する抗ウイルス活性を有していた。なかでも、化合物（Ａ２）、（Ａ４）、及び（Ａ６）は、ＥＣ_５０とＣＣ_５０の濃度差が十分であり、抗ウイルス剤として特に有望であった。

［実施例５］
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のマウス馴化株（ＭＡ－Ｐ１０株、ＷＫ－５２１株由来）を感染させたマウスモデルを用いて、２－チオウリジンのウイルス感染予防効果及び治療効果を調べた。２－チオウリジンは、生理食塩水で希釈した溶液として、マウスに静脈内投与した。また、５％ＤＭＳＯ／０．５％ＭＣ水溶液（１００％のＤＭＳＯで溶解させた２－チオウリジン（最終濃度５％）を０．５％のメチルセルロースで溶解させた水溶液）で希釈した溶液として、マウスに経口投与した。

（１）２－チオウリジンのウイルス感染予防効果
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＭＡ－Ｐ１０株感染マウスモデルを用いた増殖評価モデルにより、ウイルス感染前に投与した２－チオウリジンによるマウス肺内ウイルス増殖抑制効果を調べた。
まず、５週齢のＢＡＬＢ／ｃマウスに、２－チオウリジンを単回静脈内投与（２又は２０ｍｇ／ｋｇ）した（２ｍｇ／ｋｇ投与群と２０ｍｇ／ｋｇ投与群のいずれもｎ＝５）。対照として、生理食塩水を同様に単回静脈内投与した（Ｖｅｈｉｃｌｅ投与群、ｎ＝５）。
２－チオウリジン投与から２時間後の各マウスに、ＭＡ－Ｐ１０株（２×１０^２ ＴＣＩＤ_５０／マウス）を経鼻接種し、感染翌日に各個体の肺を回収して、肺内のウイルス力価及びウイルスＲＮＡ量を測定した。各群の肺内のウイルス力価（ｌｏｇ_１０（ＴＣＩＤ_５０）／ｍＬ）の測定結果（平均値±ＳＤ）を図３Ａに、肺内のウイルスＲＮＡ量（ｌｏｇ_１０（ウイルスコピー数）／ｍＬ）の測定結果（平均値±ＳＤ）を図３Ｂに、それぞれ示す。

図３に示すように、２－チオウリジンをＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のウイルス感染の２時間前に単回静脈内投与したマウスでは、２－チオウリジンの投与量依存的に肺内ウイルス量が減少していた。当該結果から、２－チオウリジンには、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のウイルス感染の予防効果があること、すなわち、２－チオウリジンがＣＯＶＩＤ－１９の予防薬として期待できることが確認された。

（２）２－チオウリジンの致死抑制効果
次に、ＭＡ－Ｐ１０株感染マウスモデルを用いて、２－チオウリジンの致死抑制効果を調べた。
具体的には、１０匹の３０～５０週齢のＢＡＬＢ／ｃマウスに、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（ＭＡ－Ｐ１０株）（２×１０^２ ＴＣＩＤ_５０／マウス）を経鼻接種し、ウイルス感染から１０日間の生存率（％）を調べた。このうち半数の５匹のマウスには、２－チオウリジンを感染２時間前に１回、感染翌日から感染４日後までの期間に１日１回の合計５日間静脈内投与（２０ｍｇ／ｋｇ）した（２０ｍｇ／ｋｇ投与群）。残る５匹のマウスには、２－チオウリジンに代えて生理食塩水を同様に静脈内投与した（Ｖｅｈｉｃｌｅ投与群）。

生存率の測定結果を図４に示す。２－チオウリジン投与群では、感染１０日後の生存率が８０％であったのに対して、Ｖｅｈｉｃｌｅ投与群のマウスの生存率は、感染８日目には０％であった。すなわち、２－チオウリジンを連続投与することによって、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２による致死効果を抑制する結果が得られることが確認された。

（３）２－チオウリジンのウイルス感染症治療効果
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＭＡ－Ｐ１０株感染マウスモデルを用いた増殖評価モデルにより、ウイルス感染後に投与した２－チオウリジンによるマウス肺内ウイルス増殖抑制効果を調べた。
まず、８匹の５週齢のＢＡＬＢ／ｃマウスに、ＭＡ－Ｐ１０株（２×１０^２ ＴＣＩＤ_５０／マウス）を経鼻接種した。このうちの５匹のマウスには、２－チオウリジンを感染直後から、経口投与（１日２回、１回あたり３００ｍｇ／ｋｇ）した（３００ｍｇ／ｋｇ投与群）。残る３匹のマウスには、２－チオウリジンに代えて５％ＤＭＳＯ／０．５％ＭＣ水溶液を同様に経口投与した（Ｖｅｈｉｃｌｅ投与群）。この際、感染直後と感染から１２時間後に２－チオウリジンを経口投与し、その後感染から２４時間後に各個体の肺を回収して、肺内のウイルス力価（ｌｏｇ_１０（ＴＣＩＤ_５０）／ｍＬ）を測定した。各群の測定結果（平均値±ＳＤ）を図５に示す。

図５に示すように、２－チオウリジンをＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のウイルス感染後に経口投与したマウスでは、２－チオウリジンを投与しなかったマウスよりも、肺内ウイルス力価が明らかに減少していた。当該結果から、２－チオウリジンは、感染後の投与によっても体内のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ウイルス量を低減できること、このため、２－チオウリジンは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のウイルス感染症に対する治療薬として期待できることが明らかとなった。

Claims (10)

1. 下記一般式（Ａ－１）又は（Ａ－２）
   

   

   ［式中、Ｒ^１は、酸素原子、硫黄原子、セレン原子、又は＝Ｎ－ＯＲ^１１であり；Ｒ^２は、酸素原子、硫黄原子、セレン原子、又は＝Ｎ－ＯＲ^１１であり；Ｒ^３は、－Ｏ－Ｒ^１２、－Ｓ－Ｒ^１３、又はグアニジノ基であり；Ｒ^１１は、水素原子、炭素数１～６のアルキル基又はアリール基であり；Ｒ^１２及びＲ^１３は、それぞれ独立して、炭素数１～６のアルキル基又はアリール基であり；Ｒ^４は、水素原子、－ＣＯ－Ｒ^１４、又は－Ｏ－Ｐ（ＯＨ）（＝Ｏ）－Ｏ－Ｒ^１５であり；Ｒ^１４及びＲ^１５は、それぞれ独立して、フェニル基で置換されていてもよい炭素数１～３０のアルキル基（当該アルキル基は、炭素原子が２以上の場合に、炭素原子間にエーテル結合性の酸素原子を有していてもよい）又はアリール基であり；Ｒ^５及びＲ^６は、それぞれ独立して、水素原子又は－ＣＯ－Ｒ^１６であり；Ｒ^１６は、炭素数１～６のアルキル基又はアリール基である。］
   で表される化合物、前記化合物の塩、又はこれらの溶媒和物からなる、抗ウイルス剤。
2. 前記一般式（Ａ－１）又は（Ａ－２）で表される化合物が、下記一般式（１）～（９）
   

   

   のいずれかで表される化合物である、請求項１に記載の抗ウイルス剤。
3. 前記一般式（Ａ－１）又は（Ａ－２）で表される化合物が、下記式（Ａ１）、（Ａ５）、（Ａ６）、（Ａ７）、及び（Ａ８）
   

   

   のいずれかで表される化合物である、請求項１に記載の抗ウイルス剤。
4. 前記一般式（Ａ－１）又は（Ａ－２）で表される化合物が、下記式（Ａ２）～（Ａ４）
   

   

   のいずれかで表される化合物である、請求項１に記載の抗ウイルス剤。
5. プラス鎖一本鎖ＲＮＡを遺伝子とするエンベロープウイルスに対する抗ウイルス作用を有する、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗ウイルス剤。
6. 請求項１～５のいずれか一項に記載の抗ウイルス剤を有効成分とする、医薬用組成物。
7. プラス鎖一本鎖ＲＮＡを遺伝子とするエンベロープウイルスによる感染症の治療又は予防に用いられる、請求項６に記載の医薬用組成物。
8. コロナウイルス、フラビウイルス、又はトガウイルスによる感染症の治療又は予防に用いられる、請求項６に記載の医薬用組成物。
9. ＣＯＶＩＤ－１９の治療又は予防に用いられる、請求項６に記載の医薬用組成物。
10. 下記式（Ａ４）～（Ａ７）
    

    

    のいずれかで表される化合物。

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