JP2023052053A - 選択的Treg刺激因子RUR20kD-IL-2及び関連組成物 - Google Patents
選択的Treg刺激因子RUR20kD-IL-2及び関連組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2023052053A JP2023052053A JP2022206250A JP2022206250A JP2023052053A JP 2023052053 A JP2023052053 A JP 2023052053A JP 2022206250 A JP2022206250 A JP 2022206250A JP 2022206250 A JP2022206250 A JP 2022206250A JP 2023052053 A JP2023052053 A JP 2023052053A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- composition
- pegylated
- mol
- rur
- conjugate
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 604
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims abstract description 349
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 claims abstract description 349
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims abstract description 57
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 149
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 claims description 128
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 112
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 79
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 71
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 claims description 48
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 claims description 41
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 claims description 41
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 claims description 41
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 41
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 34
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 claims description 32
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 claims description 32
- 108700025316 aldesleukin Proteins 0.000 claims description 29
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 28
- 229960005310 aldesleukin Drugs 0.000 claims description 28
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 28
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 26
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 26
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 23
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 21
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 19
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 18
- 210000001266 CD8-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 17
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 17
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 17
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 claims description 17
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 claims description 17
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 claims description 16
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 15
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 15
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 15
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 claims description 12
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 12
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 claims description 5
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 claims description 5
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 claims description 4
- 150000002669 lysines Chemical class 0.000 claims 1
- 108010038453 Interleukin-2 Receptors Proteins 0.000 abstract description 12
- 102000010789 Interleukin-2 Receptors Human genes 0.000 abstract description 12
- 239000000556 agonist Substances 0.000 abstract description 6
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 63
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 48
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 47
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 44
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 41
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 39
- 102100027581 Forkhead box protein P3 Human genes 0.000 description 38
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 38
- 101000861452 Homo sapiens Forkhead box protein P3 Proteins 0.000 description 37
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 35
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 33
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 32
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 31
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 28
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 27
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 24
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 24
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 22
- 230000004044 response Effects 0.000 description 21
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 20
- 230000008859 change Effects 0.000 description 20
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 20
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 19
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 19
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 18
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 18
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 18
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 18
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 18
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 18
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 17
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 17
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 17
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 17
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 17
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 17
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 17
- 241000894007 species Species 0.000 description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 16
- 239000000047 product Substances 0.000 description 16
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 206010053613 Type IV hypersensitivity reaction Diseases 0.000 description 15
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 15
- 230000005951 type IV hypersensitivity Effects 0.000 description 15
- 208000027930 type IV hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 15
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 14
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 14
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 14
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 14
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 13
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 13
- 230000006870 function Effects 0.000 description 13
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 13
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 13
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 13
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 12
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 12
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 12
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 12
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 12
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 11
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 11
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 11
- -1 hydrochloride Chemical class 0.000 description 11
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 11
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 11
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 10
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 10
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 10
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 10
- 229920001427 mPEG Polymers 0.000 description 10
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 9
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 9
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 9
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 9
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 9
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 8
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 8
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 8
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 8
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 8
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 7
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 7
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 7
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 7
- 239000012537 formulation buffer Substances 0.000 description 7
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 7
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 7
- 238000003998 size exclusion chromatography high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 7
- 230000003393 splenic effect Effects 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 7
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 7
- FSVCELGFZIQNCK-UHFFFAOYSA-N N,N-bis(2-hydroxyethyl)glycine Chemical compound OCCN(CCO)CC(O)=O FSVCELGFZIQNCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 6
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 6
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 6
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 6
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 6
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 6
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 6
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 6
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 6
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 6
- 238000012510 peptide mapping method Methods 0.000 description 6
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 6
- 101001002657 Homo sapiens Interleukin-2 Proteins 0.000 description 5
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 5
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 5
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 5
- 239000002585 base Substances 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 239000007998 bicine buffer Substances 0.000 description 5
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 5
- 230000034994 death Effects 0.000 description 5
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 5
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 5
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 5
- 231100000371 dose-limiting toxicity Toxicity 0.000 description 5
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 5
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 5
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 5
- 125000003588 lysine group Chemical class [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 5
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 5
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 5
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 5
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 5
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 5
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 5
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 101000581981 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 4
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 4
- 206010022095 Injection Site reaction Diseases 0.000 description 4
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 4
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 4
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 4
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 4
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 4
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 4
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 4
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 238000009295 crossflow filtration Methods 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 4
- 230000009266 disease activity Effects 0.000 description 4
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 4
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 4
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 4
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 4
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 4
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 4
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 4
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 4
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 231100000607 toxicokinetics Toxicity 0.000 description 4
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 4
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 4
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 3
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 3
- 229930105110 Cyclosporin A Natural products 0.000 description 3
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010014025 Ear swelling Diseases 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 206010016946 Food allergy Diseases 0.000 description 3
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 3
- 101000716102 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD4 Proteins 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 3
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 3
- 238000012054 celltiter-glo Methods 0.000 description 3
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 3
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 3
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 3
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 3
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 3
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 3
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 3
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 3
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 3
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 3
- 238000002826 magnetic-activated cell sorting Methods 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 3
- NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N phloretic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108700001787 polyethylene glycol-modified interleukin-2 Proteins 0.000 description 3
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 3
- 239000012899 standard injection Substances 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 3
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 3
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WRMNZCZEMHIOCP-UHFFFAOYSA-N 2-phenylethanol Chemical compound OCCC1=CC=CC=C1 WRMNZCZEMHIOCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HVBSAKJJOYLTQU-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzenesulfonic acid Chemical compound NC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 HVBSAKJJOYLTQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N Adenosine triphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 2
- 206010002198 Anaphylactic reaction Diseases 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 2
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 2
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 2
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 2
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 2
- 208000004262 Food Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 2
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 2
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- ZTHYODDOHIVTJV-UHFFFAOYSA-N Propyl gallate Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 ZTHYODDOHIVTJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 2
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 2
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 2
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 2
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 2
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 2
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 2
- 230000036783 anaphylactic response Effects 0.000 description 2
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- FATUQANACHZLRT-KMRXSBRUSA-L calcium glucoheptonate Chemical compound [Ca+2].OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)C([O-])=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)C([O-])=O FATUQANACHZLRT-KMRXSBRUSA-L 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 2
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 2
- 235000015165 citric acid Nutrition 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 2
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000013568 food allergen Substances 0.000 description 2
- 235000020932 food allergy Nutrition 0.000 description 2
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000001434 glomerular Effects 0.000 description 2
- 108700003606 glycosylated interleukin 2 Proteins 0.000 description 2
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 2
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003284 homeostatic effect Effects 0.000 description 2
- 102000055277 human IL2 Human genes 0.000 description 2
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 2
- 230000007233 immunological mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 2
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 210000002602 induced regulatory T cell Anatomy 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000004073 interleukin-2 production Effects 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 2
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- SUMDYPCJJOFFON-UHFFFAOYSA-N isethionic acid Chemical compound OCCS(O)(=O)=O SUMDYPCJJOFFON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000468 ketone group Chemical group 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 231100000062 no-observed-adverse-effect level Toxicity 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 2
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 2
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M potassium acetate Chemical compound [K+].CC([O-])=O SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N potassium nitrate Chemical compound [K+].[O-][N+]([O-])=O FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 2
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N salicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 2
- 239000008227 sterile water for injection Substances 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 2
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N valeric acid Chemical compound CCCCC(O)=O NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 2
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 2
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 2
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 2
- JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N (2r,3r,4s)-2-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]oxolane-3,4-diol Chemical class OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- UWYVPFMHMJIBHE-OWOJBTEDSA-N (e)-2-hydroxybut-2-enedioic acid Chemical compound OC(=O)\C=C(\O)C(O)=O UWYVPFMHMJIBHE-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 1
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Substances CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LDMOEFOXLIZJOW-UHFFFAOYSA-N 1-dodecanesulfonic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCS(O)(=O)=O LDMOEFOXLIZJOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LBLYYCQCTBFVLH-UHFFFAOYSA-N 2-Methylbenzenesulfonic acid Chemical compound CC1=CC=CC=C1S(O)(=O)=O LBLYYCQCTBFVLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WLJVXDMOQOGPHL-PPJXEINESA-N 2-phenylacetic acid Chemical compound O[14C](=O)CC1=CC=CC=C1 WLJVXDMOQOGPHL-PPJXEINESA-N 0.000 description 1
- ATOKJLVNLKSYTM-UHFFFAOYSA-N 3-(ethyliminomethylideneamino)-n,n-dimethylpropan-1-amine;1-hydroxypyrrolidine-2,5-dione Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O.CCN=C=NCCCN(C)C ATOKJLVNLKSYTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010600 3H thymidine incorporation assay Methods 0.000 description 1
- ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J ATP(4-) Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000026872 Addison Disease Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N Amphotericin-B Natural products O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1C=CC=CC=CC=CC=CC=CC=C[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N 0.000 description 1
- 206010002556 Ankylosing Spondylitis Diseases 0.000 description 1
- 208000006820 Arthralgia Diseases 0.000 description 1
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 1
- 208000023328 Basedow disease Diseases 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 108700031361 Brachyury Proteins 0.000 description 1
- 239000004255 Butylated hydroxyanisole Substances 0.000 description 1
- 239000004322 Butylated hydroxytoluene Substances 0.000 description 1
- NLZUEZXRPGMBCV-UHFFFAOYSA-N Butylhydroxytoluene Chemical compound CC1=CC(C(C)(C)C)=C(O)C(C(C)(C)C)=C1 NLZUEZXRPGMBCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100034798 CCAAT/enhancer-binding protein beta Human genes 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 108010028780 Complement C3 Proteins 0.000 description 1
- 102000016918 Complement C3 Human genes 0.000 description 1
- 108010028778 Complement C4 Proteins 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N D-Cellobiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- QWIZNVHXZXRPDR-UHFFFAOYSA-N D-melezitose Natural products O1C(CO)C(O)C(O)C(O)C1OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O QWIZNVHXZXRPDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 206010011878 Deafness Diseases 0.000 description 1
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- FVCPXLWAKNJIKK-UHFFFAOYSA-N Dimexano Chemical compound COC(=S)SSC(=S)OC FVCPXLWAKNJIKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001050985 Disco Species 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000010201 Exanthema Diseases 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 206010018364 Glomerulonephritis Diseases 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 208000024869 Goodpasture syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000015023 Graves' disease Diseases 0.000 description 1
- 208000030836 Hashimoto thyroiditis Diseases 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 208000035186 Hemolytic Autoimmune Anemia Diseases 0.000 description 1
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 1
- 101000945963 Homo sapiens CCAAT/enhancer-binding protein beta Proteins 0.000 description 1
- 101000889276 Homo sapiens Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 1
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 1
- 101000643895 Homo sapiens Ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase 6 Proteins 0.000 description 1
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical group NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical group Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010021245 Idiopathic thrombocytopenic purpura Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N L-(-)-Sorbose Chemical compound OCC1(O)OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- QAQJMLQRFWZOBN-LAUBAEHRSA-N L-ascorbyl-6-palmitate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O QAQJMLQRFWZOBN-LAUBAEHRSA-N 0.000 description 1
- 239000011786 L-ascorbyl-6-palmitate Substances 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 1
- 208000008771 Lymphadenopathy Diseases 0.000 description 1
- 206010025327 Lymphopenia Diseases 0.000 description 1
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 1
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 1
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 description 1
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 101710169891 Mast cell protease 1 Proteins 0.000 description 1
- 101150080763 Mcpt1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101710181812 Methionine aminopeptidase Proteins 0.000 description 1
- 208000000112 Myalgia Diseases 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 1
- 208000008267 Peanut Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 208000031845 Pernicious anaemia Diseases 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 239000001747 Potassium fumarate Substances 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 101710176651 Protein fork head Proteins 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 1
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 206010061481 Renal injury Diseases 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000021386 Sjogren Syndrome Diseases 0.000 description 1
- DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M Sodium bisulfite Chemical compound [Na+].OS([O-])=O DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 201000009594 Systemic Scleroderma Diseases 0.000 description 1
- 206010042953 Systemic sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 208000001871 Tachycardia Diseases 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000031981 Thrombocytopenic Idiopathic Purpura Diseases 0.000 description 1
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100021015 Ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase 6 Human genes 0.000 description 1
- 206010047642 Vitiligo Diseases 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PNNCWTXUWKENPE-UHFFFAOYSA-N [N].NC(N)=O Chemical compound [N].NC(N)=O PNNCWTXUWKENPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BDKZHNJTLHOSDW-UHFFFAOYSA-N [Na].CC(O)=O Chemical compound [Na].CC(O)=O BDKZHNJTLHOSDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940022663 acetate Drugs 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 description 1
- 229960003942 amphotericin b Drugs 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 239000000538 analytical sample Substances 0.000 description 1
- 230000002052 anaphylactic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000022531 anorexia Diseases 0.000 description 1
- 230000003092 anti-cytokine Effects 0.000 description 1
- 230000003460 anti-nuclear Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000010385 ascorbyl palmitate Nutrition 0.000 description 1
- 239000013584 assay control Substances 0.000 description 1
- 238000002820 assay format Methods 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 201000000448 autoimmune hemolytic anemia Diseases 0.000 description 1
- 208000037979 autoimmune inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000006472 autoimmune response Effects 0.000 description 1
- 201000003710 autoimmune thrombocytopenic purpura Diseases 0.000 description 1
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 1
- 229960002170 azathioprine Drugs 0.000 description 1
- LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N azathioprine Chemical compound CN1C=NC([N+]([O-])=O)=C1SC1=NC=NC2=C1NC=N2 LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000008228 bacteriostatic water for injection Substances 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- 229960001950 benzethonium chloride Drugs 0.000 description 1
- UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M benzethonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 238000012455 bioassay technique Methods 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N bis-tris Chemical compound OCCN(CCO)C(CO)(CO)CO OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 235000019282 butylated hydroxyanisole Nutrition 0.000 description 1
- 229940043253 butylated hydroxyanisole Drugs 0.000 description 1
- CZBZUDVBLSSABA-UHFFFAOYSA-N butylated hydroxyanisole Chemical compound COC1=CC=C(O)C(C(C)(C)C)=C1.COC1=CC=C(O)C=C1C(C)(C)C CZBZUDVBLSSABA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010354 butylated hydroxytoluene Nutrition 0.000 description 1
- 229940095259 butylated hydroxytoluene Drugs 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I calcium;potassium;disodium;(2s)-2-hydroxypropanoate;dichloride;dihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[Na+].[Na+].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].C[C@H](O)C([O-])=O BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000011203 carbon fibre reinforced carbon Substances 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 238000000423 cell based assay Methods 0.000 description 1
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 229960001927 cetylpyridinium chloride Drugs 0.000 description 1
- YMKDRGPMQRFJGP-UHFFFAOYSA-M cetylpyridinium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+]1=CC=CC=C1 YMKDRGPMQRFJGP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- RNFNDJAIBTYOQL-UHFFFAOYSA-N chloral hydrate Chemical compound OC(O)C(Cl)(Cl)Cl RNFNDJAIBTYOQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002327 chloral hydrate Drugs 0.000 description 1
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 208000025302 chronic primary adrenal insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 1
- 231100000313 clinical toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000011443 conventional therapy Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 229930182912 cyclosporin Natural products 0.000 description 1
- 150000001945 cysteines Chemical class 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 206010061428 decreased appetite Diseases 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 229910001873 dinitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-M dodecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCC([O-])=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 1
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 description 1
- 230000002884 effect on inflammation Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- AFAXGSQYZLGZPG-UHFFFAOYSA-N ethanedisulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCS(O)(=O)=O AFAXGSQYZLGZPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 201000005884 exanthem Diseases 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000013020 final formulation Substances 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001102 germinal center b cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 239000008241 heterogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-M hexadecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000013628 high molecular weight specie Substances 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 235000003642 hunger Nutrition 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-M hydrogensulfate Chemical compound OS([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 1
- 230000003832 immune regulation Effects 0.000 description 1
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 230000000495 immunoinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 231100001039 immunological change Toxicity 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000037456 inflammatory mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 210000005007 innate immune system Anatomy 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 229940045996 isethionic acid Drugs 0.000 description 1
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 239000000832 lactitol Substances 0.000 description 1
- 235000010448 lactitol Nutrition 0.000 description 1
- VQHSOMBJVWLPSR-JVCRWLNRSA-N lactitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VQHSOMBJVWLPSR-JVCRWLNRSA-N 0.000 description 1
- 229960003451 lactitol Drugs 0.000 description 1
- 229940099584 lactobionate Drugs 0.000 description 1
- JYTUSYBCFIZPBE-AMTLMPIISA-N lactobionic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O JYTUSYBCFIZPBE-AMTLMPIISA-N 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 229940070765 laurate Drugs 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 239000003509 long acting drug Substances 0.000 description 1
- 239000012731 long-acting form Substances 0.000 description 1
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 1
- 230000005980 lung dysfunction Effects 0.000 description 1
- 208000018555 lymphatic system disease Diseases 0.000 description 1
- 210000000207 lymphocyte subset Anatomy 0.000 description 1
- 231100001023 lymphopenia Toxicity 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000845 maltitol Substances 0.000 description 1
- 235000010449 maltitol Nutrition 0.000 description 1
- VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N maltitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N 0.000 description 1
- 229940035436 maltitol Drugs 0.000 description 1
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 229960001855 mannitol Drugs 0.000 description 1
- QWIZNVHXZXRPDR-WSCXOGSTSA-N melezitose Chemical compound O([C@@]1(O[C@@H]([C@H]([C@@H]1O[C@@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)O)CO)CO)[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O QWIZNVHXZXRPDR-WSCXOGSTSA-N 0.000 description 1
- 229940098779 methanesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N monothioglycerol Chemical compound OCC(O)CS PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 description 1
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940049964 oleate Drugs 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 1
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N papa-hydroxy-benzoic acid Natural products OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000007310 pathophysiology Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 201000010853 peanut allergy Diseases 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 210000004976 peripheral blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002732 pharmacokinetic assay Methods 0.000 description 1
- 229960003742 phenol Drugs 0.000 description 1
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- 229940067107 phenylethyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- PDTFCHSETJBPTR-UHFFFAOYSA-N phenylmercuric nitrate Chemical compound [O-][N+](=O)O[Hg]C1=CC=CC=C1 PDTFCHSETJBPTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 150000008105 phosphatidylcholines Chemical class 0.000 description 1
- 229940067605 phosphatidylethanolamines Drugs 0.000 description 1
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 1
- ACVYVLVWPXVTIT-UHFFFAOYSA-N phosphinic acid Chemical compound O[PH2]=O ACVYVLVWPXVTIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 230000004983 pleiotropic effect Effects 0.000 description 1
- 208000008423 pleurisy Diseases 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 208000005987 polymyositis Diseases 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 229940068965 polysorbates Drugs 0.000 description 1
- 238000011176 pooling Methods 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 235000011056 potassium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- SHPKCSFVQGSAJU-SEPHDYHBSA-L potassium fumarate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C(=O)\C=C\C([O-])=O SHPKCSFVQGSAJU-SEPHDYHBSA-L 0.000 description 1
- 235000019295 potassium fumarate Nutrition 0.000 description 1
- 235000011118 potassium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 235000010333 potassium nitrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004323 potassium nitrate Substances 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L potassium sulfate Chemical compound [K+].[K+].[O-]S([O-])(=O)=O OTYBMLCTZGSZBG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910052939 potassium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011151 potassium sulphates Nutrition 0.000 description 1
- 230000009290 primary effect Effects 0.000 description 1
- 238000011809 primate model Methods 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 239000000473 propyl gallate Substances 0.000 description 1
- 235000010388 propyl gallate Nutrition 0.000 description 1
- 229940075579 propyl gallate Drugs 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 230000003946 protein process Effects 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 201000001474 proteinuria Diseases 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 208000005069 pulmonary fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 1
- 206010037844 rash Diseases 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 239000000018 receptor agonist Substances 0.000 description 1
- 229940044601 receptor agonist Drugs 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000001718 repressive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- XWGJFPHUCFXLBL-UHFFFAOYSA-M rongalite Chemical compound [Na+].OCS([O-])=O XWGJFPHUCFXLBL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960004889 salicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000444 skin lesion Toxicity 0.000 description 1
- 206010040882 skin lesion Diseases 0.000 description 1
- 231100000046 skin rash Toxicity 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000015424 sodium Nutrition 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 235000011083 sodium citrates Nutrition 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L sodium disulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)S([O-])(=O)=O HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000010267 sodium hydrogen sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 235000011121 sodium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 235000010262 sodium metabisulphite Nutrition 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 238000012453 sprague-dawley rat model Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 230000037351 starvation Effects 0.000 description 1
- 238000009168 stem cell therapy Methods 0.000 description 1
- 238000009580 stem-cell therapy Methods 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229950000244 sulfanilic acid Drugs 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000006794 tachycardia Effects 0.000 description 1
- 238000004885 tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- 230000004797 therapeutic response Effects 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 238000001269 time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000759 toxicological effect Toxicity 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 229940005605 valeric acid Drugs 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 238000000196 viscometry Methods 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/20—Interleukins [IL]
- A61K38/2013—IL-2
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/02—Inorganic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
- A61K9/0021—Intradermal administration, e.g. through microneedle arrays, needleless injectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
加させる長時間作用型インターロイキン-2受容体(IL-2R)アゴニストTreg刺
激因子組成物、並びに自己免疫疾患及び炎症性疾患、及び/又はTreg刺激療法に反応
する他の状態の治療においてこれらのTreg刺激因子組成物を使用する方法に関する。
特に、本出願は、選択的Treg刺激因子組成物RUR20kD-IL-2及び関連組成
物、並びにそれを作製する方法、それらの製剤、並びにRUR20kD-IL-2及び関
連組成物を自己免疫疾患及び炎症性障害の治療に使用する方法に関する。
る免疫系では、自己抗原に対して免疫反応は起こらず、これは自己寛容と称される。自己
免疫疾患は、自己抗原に対する寛容性が失われたために身体組織がその身体自身の免疫系
によって攻撃された場合に発生する(Dejaco,C.,ら,Immunology.
2006;117(3):289-300)。自己免疫疾患を患っている被験体では、身
体組織は抗原特異的細胞傷害性T細胞又は自己抗体によって破壊され、付随する炎症が機
能障害を引き起こし、場合によっては死に至る可能性がある。自己免疫疾患は、人口のお
よそ6%に影響を与える広範囲の症状を伴う不均一な疾患の集まりである(Siatsk
as,C.,ら,Curr Gene Ther.2006;6(1):45-58)。
自己免疫疾患の臨床的特徴は非常に異なるが、免疫介在性メカニズムは、標的抗原に対す
る適応免疫応答の生成と関連している(Kuby,J.,1994:Autoimmun
ity.Immunology,2nd ed.,p 445-467.WH Free
man and Company,New York)。
様々な従来の治療法は、自己免疫疾患の一部の患者ではわずかに効果的であるが、均一に
効果的ではなく、副作用及び毒性と関連する(Jantunen,E.,ら,Bone
Marrow Transplant.2000;25(4):351-6)。かかる従
来のアプローチでは、自己反応性免疫に関連する根本的な病理に対処することはできない
。
焦点を合わせた可能性のある新たな治療法が開発され、現在評価されている。自己免疫疾
患の病因は不明であるが、遺伝的要因、不適切な免疫調節、及びホルモン要因と環境要因
との間の潜在的な相互作用によって引き起こされると考えられている。自己免疫疾患の誘
発には、隔離された抗原、分子擬態、MHCクラスII分子の不規則な発現、サイトカイ
ンの不均衡、イディオタイプネットワーク調節経路の機能不全、全身の制御性T細胞の欠
陥、及びポリクローナルB細胞の活性化を含む様々なメカニズムが提案されている(Ku
by,1994、同上)。自己免疫疾患の治療のために、B細胞枯渇、抗サイトカイン療
法、及び幹細胞療法を含む幾つかのアプローチが研究されてきたが、これらのアプローチ
には、有効性、安全性及び/又は望ましくない副作用に関して欠点がある。自己免疫疾患
を治療するための従来の治療法は、免疫系全体を抑制することによって機能し、それによ
って感染症及び他の深刻な副作用の重大なリスクにつながる。したがって、自己免疫疾患
の治療に対して有効性、安全性及び/又は忍容性の改善された組み合わせを提供するため
の追加の治療の必要性が残されている。
されてきた。しかしながら、より最近の研究では、IL-2が特定の条件下で慢性自己免
疫性炎症において保護的な役割を果たすことができるということが示唆された。特に、制
御性T細胞(Treg)とエフェクターT細胞(Teff)とのバランスの崩れは、様々
な自己免疫疾患の共通の特徴として特定されており、かかるバランスの崩れはIL-2等
の恒常性サイトカインの影響を受けると考えられている。その薬物動態プロファイルによ
り、自己免疫療法のための未修飾IL-2の投与は、頻繁な毎日又は隔日の投与を必要と
し、これはしばしば痛みのある注射部位反応を伴う。更に、頻繁な注射の必要性は、不快
感及び不便さのためにしばしば患者のコンプライアンスの低下を伴う。IL-2の長期反
復投与はまた、IL-2の望ましくない多面的な全身作用のリスク上昇、並びに関連する
リスク及び有害作用も伴う。更に、治療域が限られているため、免疫恒常性を達成するた
めの未修飾IL-2の使用と、望ましいTreg/Teffバランスの維持は、達成不可
能ではないにしても、長期間にわたって困難であることが判明する可能性がある。更に、
自己免疫疾患療法に関するその狭い治療マージンは、非常に低用量のIL-2の投与を必
要とすることで、その有効性に悪影響を与える。何らかの臨床的利益を得るため低用量の
IL-2を使用することができるが、有害事象によって用量が制限され、Tregの増加
は中程度で短命である。例えば、自己免疫疾患療法に対する未修飾のIL-2の投与は、
IL-5の望ましくない増加と、それに続く好酸球レベルの上昇を誘発し、炎症を引き起
こす可能性がある。そのため、様々な自己免疫疾患において、制御性T細胞及びエフェク
ターT細胞の活性の疾患緩和バランスを促進する方法でIL-2シグナル伝達を選択的に
調節し得る作用物質の必要性が残されている。
的な病因を有しており、これらは疾患の発症に先立つ免疫学的メカニズムとして関係して
いる。自己免疫症状を効果的に軽減し、生活の質を改善し、好ましくは様々な自己免疫疾
患において長期の寛解を提供するために、代替のより効果的な治療用組成物及び治療計画
の必要性が残されている。本開示は、慢性自己免疫疾患を治療するための現在の選択肢の
限られた利用可能性及び関連する欠点に対処する。
基づいている。RUR20kD-IL-2の選択的Treg刺激因子組成物は、定義され
た不均一性のIL-2-PEGコンジュゲート混合物である。それらの組成物は、他の免
疫細胞への影響を最小限に抑えながら、Treg恒常性を選択的に回復するための低用量
皮下投与を目的としている。RUR20kD-IL-2選択的Treg刺激因子組成物は
、20kDaポリエチレングリコール(PEG)部分に安定して共有結合的に複合化され
ている、組換えヒトインターロイキン-2(rhIL-2、特に追加のアミノ酸の変異又
は置換を含まないアルデスロイキンアミノ酸配列)を含むコンジュゲートの混合物であり
、ここで、混合物は、IL-2部分ごとに一定のPEG化を伴う定義された画分を有する
。本開示の組成物は、主にジ-PEG化及びトリ-PEG化IL-2の定義された画分、
並びにモノ-PEG化IL-2及び/又はテトラ若しくはより高PEG化されたIL-2
の定義されたより少ない画分を有するIL-2PEGコンジュゲートの選択された混合物
を含む。特に、本開示の組成物は、選択的Treg刺激因子RUR20kD-IL-2及
び関連組成物、それを作製する方法、それらの製剤、並びにRUR20kD-IL-2及
び関連組成物を自己免疫疾患及び炎症性障害の治療に使用する方法を提供する。RUR2
0kD-IL-2組成物は、抗原特異的T制御性細胞を活性化及び拡大することにより、
免疫炎症性疾患において持続的な応答を誘導する。RUR20kD-IL-2組成物の低
用量皮下投与による自己免疫障害の治療は、従来のT細胞機能への影響を最小限に抑えて
、Treg恒常性を選択的に回復する手段を提供し、それにより、これらの障害を軽減す
るための代替及び/又は改善されたアプローチを提供し得る。
g刺激因子組成物を提供する。概して、本明細書で提供される化学修飾されたIL-2コ
ンジュゲート組成物は、そのアミノ基を介してIL-2に安定に共有結合した特定の優勢
な数の分岐ポリエチレングリコール部分を有することを特徴とする。本明細書で提供され
る組成物は、主にジ-PEG化及びトリ-PEG化IL-2の定義された画分、並びにモ
ノ-PEG化IL-2及び/又はテトラ若しくはより高PEG化されたIL-2の定義さ
れたより少ない画分を有するIL-2PEGコンジュゲートの選択された混合物を含む。
nは各出現で独立して約3~約4000の整数である)
を有するPEG化IL-2を含む組成物を提供する。
特定の実施形態では、各分岐ポリエチレングリコール部分の名目上の平均分子量は、約2
0000ダルトンである。当該組成物の更なる特定の実施形態では、組成物のPEG化I
L-2コンジュゲートは、リジン31に付着したPEG部分を有する。
及び3である)のコンジュゲートを含む組成物である。
10000カルバモイル)-2-プロパノキシ)-4-ブタノイル(IL-2部分のアミ
ノ窒素に共有結合により付着しているカルボニル基まで及びそれを含む)とも称される。
式(I)による混合物の組成物は、一般に、本明細書ではRUR-IL2と称され、これ
は、ある範囲のPEGサイズを包含する。nの例示的な範囲は、例えば、約3~約400
0に加えて、約5~2000、又は約10~1000、又は約10~750、又は約10
~500、又は約10~400、又は約10~300、又は約10~250、又は約20
~250を含む。幾つかの実施形態では、nは平均して約226である。
及び2及び3である)の組成物である。
リコール部分と安定に共有結合したIL-2Rを含み、IL-2部分あたりの分岐PEG
部分の数(PEG化の程度)は、1-mer(モノ-PEG化)及び4-mer(テトラ
-PEG化)を含む微量画分との混合物における2及び3-mer(ジ-及びトリ-PE
G化)の主な分布である。したがって、幾つかの実施形態では、式Iによる組成物中の微
量画分は、n’が1、4、5、又はそれより大きいが、11以下であるコンジュゲートを
含むであろう。
:
れる選択的Treg刺激因子組成物及び関連組成物である。これらの組成物は、本明細書
に記載されるように、合計約20kDの名目上の分子量を有する個々の共有結合性のPE
Gの付着を有するIL-2コンジュゲートを含む。好ましくは、IL-2部分はアルデス
ロイキンである。これらの組成物は、主にジ-PEG化及びトリ-PEG化IL-2の定
義された画分、並びにモノ-PEG化IL-2及び/又はテトラ若しくはより高PEG化
されたIL-2の定義されたより少ない画分を有するIL-2PEGコンジュゲートの選
択された混合物を更に含む。RUR20kD-IL-2組成物の特定の調製物が、以下及
び本出願を通して記載される。本明細書で使用される場合、式AのRUR20kD-IL
-2の組成物、式BのRUR20kD-IL-2の組成物、式CのRUR20kD-IL
-2の組成物、式DのRUR20kD-IL-2の組成物、及び/又は式EのRUR20
kD-IL-2の組成物は、選択的Treg刺激因子RUR20kD-IL-2の特定の
実施形態及び関連組成物を表し、これらの実施形態では、IL-2部分はアルデスロイキ
ンである(本明細書に記載される)。任意に、これらの組成物は、その薬学的に許容可能
な塩を含む。
2の組成物であり、組成物は、モルベースで、約5モル%以下のモノ-PEG化IL-2
コンジュゲート、及び約28モル%~約60モル%のジ-PEG化IL-2コンジュゲー
ト、及び約24モル%~約65モル%のトリ-PEG化IL-2コンジュゲート、及び約
12モル%以下のより高PEG化されたIL-2コンジュゲートを含み、各分岐ポリエチ
レングリコール部分の名目上の平均分子量は約20000ダルトンである。好ましくは、
式AのRUR20kD-IL-2の組成物は、80モル%以上の組み合わされたジ-及び
トリ-PEG化IL-2コンジュゲートを含む。
され、組成物は、モルベースで、約2.5~約4.5モル%のモノ-PEG化IL-2コ
ンジュゲート、及び約35~約50モル%のジ-PEG化IL-2コンジュゲート、及び
約38~約46モル%のトリ-PEG化IL-2コンジュゲート、及び約3~約10モル
%のより高PEG化されたIL-2コンジュゲートを含み、各分岐ポリエチレングリコー
ル部分の名目上の平均分子量は約20000ダルトンである。好ましくは、式BのRUR
20kD-IL-2の組成物は、あわせた合計が約80~約95モル%のジ-PEG化及
びトリ-PEG化IL-2コンジュゲートを含む。
され、組成物は、モルベースで、約2.8~約3.8モル%のモノ-PEG化IL-2コ
ンジュゲート、及び約44~約48モル%のジ-PEG化IL-2コンジュゲート、及び
約41~約44モル%のトリ-PEG化IL-2コンジュゲート、及び約7~約9モル%
のより高PEG化されたIL-2コンジュゲートを含み、各分岐ポリエチレングリコール
部分の名目上の平均分子量は約20000ダルトンである。好ましくは、式CのRUR2
0kD-IL-2組成物は、あわせた合計が約87~約90モル%のジ-PEG化及びト
リ-PEG化IL-2コンジュゲートを含む。
され、ここで、組成物は、モルベースで、約2.8~約3.8モル%のモノ-PEG化I
L-2コンジュゲート、及び約44~約48モル%のジ-PEG化IL-2コンジュゲー
ト、及び約41~約44モル%のトリ-PEG化IL-2コンジュゲート、及び約7~約
9モル%のより高PEG化されたIL-2コンジュゲートを含み、当該組成物はリジンK
7又はK8又はK31又はK75の1つに付着したPEG部分を有するモノ-PEG化I
L-2コンジュゲートの混合物を含み、各分岐ポリエチレングリコール部分の名目上の平
均分子量は約20000ダルトンである。好ましくは、式DのRUR20kD-IL-2
組成物は、あわせた合計が約87~約90モル%のジ-PEG化及びトリ-PEG化IL
-2コンジュゲートを含む。
され、ここで、組成物は、モルベースで、約2.8~約3.8モル%のモノ-PEG化I
L-2コンジュゲート、及び約44~約48モル%のジ-PEG化IL-2コンジュゲー
ト、及び約41~約44モル%のトリ-PEG化IL-2コンジュゲート、及び約7~約
9モル%のより高PEG化されたIL-2コンジュゲートを含み、組成物はリジンK7に
付着したPEG部分を有するモノ-PEG化IL-2コンジュゲートを含み、各分岐ポリ
エチレングリコール部分の名目上の平均分子量は約20000ダルトンである。好ましく
は、式EのRUR20kD-IL-2組成物は、あわせた合計が約87~約90モル%の
ジ-PEG化及びトリ-PEG化IL-2コンジュゲートを含む。
RUR20kD-IL-2、及び/又は式BのRUR20kD-IL-2及び/又は式C
のRUR20kD-IL-2、及び/又は式DのRUR20kD-IL-2、及び/又は
式EのRUR20kD-IL-2、及び/又はこれらの組成物の薬学的に許容可能な塩の
いずれか1つによる1つ以上の組成物を指す場合がある。実施例1及び/又は実施例1A
の調製物は、本開示の「RUR20kD-IL-2及び関連組成物」の非限定的な例であ
る。
本明細書で提供される組成物は、nが2に等しいコンジュゲート、例えば、上に示す1
,3-ビス(メトキシポリ(エチレングリコール)10kDカルバモイル)-2-プロパ
ノキシ)-4-ブタノイル構造をそれぞれ有する2つの分岐ポリエチレングリコールポリ
マーが組成物中の実質的に全てのジ-PEG化IL-2コンジュゲートについて同じ相対
位置に付着しているジ-PEG化コンジュゲートを含み得る。或いは、ジ-PEG化コン
ジュゲートは、ジ-PEG化コンジュゲートの混合物、例えば、分岐ポリエチレングリコ
ール部分の付着がIL-2上の2つの部位で起こり、特定の付着部位が組成物に含まれる
全てのジ-PEG化IL-2コンジュゲートについて同じではない、ジ-PEG化コンジ
ュゲートの混合物を含み得る。したがって、かかるジ-PEG化組成物は、PEG化の程
度、特に付着した分岐PEG部分の数(例えば、2-mer)に関しては均一であるが、
IL-2分子上のPEG付着の位置に関しては不均一であり、この場合、PEG付着の位
置異性体となる。
ングリコール部分が、組成物中の実質的に全てのIL-2コンジュゲートについて同じ相
対位置に付着しているトリ-PEG化コンジュゲートを含み得る。或いは、トリ-PEG
化コンジュゲートは、トリ-PEG化コンジュゲートの混合物、例えば、分岐ポリエチレ
ングリコール部分の付着部位が組成物に含まれるコンジュゲートについてIL-2上の異
なる部位で生じるトリ-PEG化コンジュゲートの混合物を含み得る。したがって、かか
るトリ-PEG化組成物は、PEG化の程度、特に付着した分岐PEG部分の数に関して
は均一であるが、IL-2分子上のPEG付着の位置に関しては不均一であり、この場合
、PEG付着の位置異性体となる。
ングリコール部分が、組成物中の実質的に全てのIL-2コンジュゲートについて同じ相
対位置に付着しているモノ-PEG化コンジュゲートを含み得る。或いは、モノ-PEG
化コンジュゲートは、モノ-PEG化コンジュゲートの混合物、例えば、分岐ポリエチレ
ングリコール部分の付着部位が組成物に含まれるコンジュゲートについてIL-2上の異
なる部位で生じるモノ-PEG化コンジュゲートの混合物を含み得る。したがって、かか
るモノ-PEG化組成物は、PEG化の程度、特に付着した分岐PEG部分の数に関して
は均一であるが、IL-2分子上のPEG付着の位置に関しては不均一であり、この場合
、PEG付着の位置異性体となる。
般的である。例えば、リジンK7又はK8又はK31又はK75は、通常PEG化された
部位である。RUR20kD-IL-2の組成物及び関連組成物は、リジンK7又はK8
又はK31又はK75がPEG化部位であるコンジュゲートを含み得る。RUR20kD
-IL-2の組成物及び関連組成物は、リジンK7又はK8又はK31又はK75がPE
G化部位であるモノ-PEG化コンジュゲートを含み得る。RUR20kD-IL-2の
組成物及び関連組成物は、リジンK7がPEG化部位であるモノ-PEG化コンジュゲー
トを含み得る。RUR20kD-IL-2の組成物及び関連組成物は、リジンK31がP
EG化部位であるモノ-PEG化コンジュゲートを含み得る。
くは約15モル%以下のコンジュゲートを含み、式(I)(式中、n’は、1、4、5、
又は5より大きい整数から選択される整数である)に包含され、モルパーセンテージは総
PEG-IL-2コンジュゲートに基づいている。幾つかの実施形態では、組成物は、あ
わせて考慮した場合、約10モル%以下のコンジュゲートを含み、式(I)(式中、n’
は、1、4、5、又は5より大きい整数から選択される整数である)に包含され、モルパ
ーセンテージは総PEG-IL-2コンジュゲートに基づいている。幾つかの追加の実施
形態では、組成物は、約10モル%以下の単量体、好ましくは約7モル%以下の単量体、
又は約5モルパーセント以下の単量体(すなわち、nが1に等しい場合の構造(I)に従
う)を含む。幾つかの更なる実施形態では、組成物は、約10モル%以下の四量体、好ま
しくは約7モル%以下の四量体、又は約5モルパーセント以下の四量体を含む(すなわち
、nが4に等しい場合の構造(I)に従う)を含む。特定の追加の実施形態では、組成物
は、約10モル%以下の単量体及び約10モル%以下の四量体を含む。或いは、組成物は
、約7モル%以下の単量体及び約7モル%以下の四量体を含むか、又は約5モル%以下の
単量体及び約5モル%以下の四量体を含み得る。
下の特徴のうちの1つ以上を満たすであろう:組成物中のコンジュゲートの少なくとも約
80%は、ジ-PEG化コンジュゲート及びトリ-PEG化コンジュゲートの混合物を含
み、IL-2部分に付着した上記の式(I)に示す構造を有する2個及び3個の分岐ポリ
マーを有するものもある;組成物中のコンジュゲートの少なくとも約85%は、ジ-PE
G化コンジュゲート及びトリ-PEG化コンジュゲートの混合物を含み、IL-2部分に
付着した上記の式(I)に示す構造を有する2個及び3個の分岐ポリマーを有するものも
ある;組成物中のコンジュゲートの少なくとも約90%は、ジ-PEG化コンジュゲート
及びトリ-PEG化コンジュゲートの混合物を含み、IL-2部分に付着した上記の式(
I)に示す構造を有する2個及び3個の分岐ポリマーを有するものもある;組成物中のコ
ンジュゲートの少なくとも約95%は、ジ-PEG化コンジュゲート及びトリ-PEG化
コンジュゲートの混合物を含み、IL-2部分に付着した上記の式(I)に示す構造を有
する2個及び3個の分岐ポリマーを有するものもある;組成物中のコンジュゲートの約2
0%以下が、IL-2部分部分に付着した上記の式(I)に示される構造を有する1個又
は4個以上の分岐ポリマーを有するであろう;組成物中のコンジュゲートの約15%以下
が、IL-2部分部分に付着した上記の式(I)に示される構造を有する1個又は4個以
上の分岐ポリマーを有するであろう;組成物中のコンジュゲートの約10%以下が、IL
-2部分部分に付着した上記の式(I)に示される構造を有する1個、4個以上の分岐ポ
リマーを有するであろう;組成物中のコンジュゲートの約7%以下が、IL-2部分部分
に付着した上記の式(I)に示される構造を有する1個又は4個以上の分岐ポリマーを有
するであろう。
くは約15モル%以下の組成物を含み、式(I)(式中、n’は、1、4、5、又は5よ
り大きい整数から選択される整数である)に包含され、モルパーセンテージは総PEG-
IL-2コンジュゲートに基づいている。幾つかの実施形態では、組成物は、あわせて考
慮した場合、約10モル%以下のコンジュゲートを含み、式(I)(式中、n’は、1、
4、5、又は5より大きい整数から選択される整数である)に包含され、モルパーセンテ
ージは総PEG-IL-2コンジュゲートに基づいている。幾つかの追加の実施形態では
、組成物は、約10モル%以下の単量体、好ましくは約7モル%以下の単量体、又は約5
モルパーセント以下の単量体(すなわち、nが1に等しい場合の構造(I)に従う)を含
む。幾つかの更なる実施形態では、組成物は、約10モル%以下の四量体、好ましくは約
7モル%以下の四量体、又は約5モルパーセント以下の四量体を含む(すなわち、nが4
に等しい場合の構造(I)に従う)を含む。特定の追加の実施形態では、組成物は、約1
0モル%以下の単量体及び約10モル%以下の四量体を含む。或いは、組成物は、約7モ
ル%以下の単量体及び約7モル%以下の四量体を含むか、又は約5モル%以下の単量体及
び約5モル%以下の四量体を含み得る。
1、1.3:1、1.2:1、1.1:1、1:1、1:1.1、1:1.2、1:1.
3又は1:1.4のいずれか1つ以上を含み得る。かかる組成物のIL-2あたりのPE
G部分の平均数は、例えば、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2
.6、2.7、2.8、2.9及び3から選択される。特定の実施形態では、IL-2あ
たりのPEG部分の平均数は、約2.5である。
L-2コンジュゲートを含み、これは、あわせて考慮した場合、式
n’は1、4、5、又は5より大きい整数から選択される。
%)以下のIL-2コンジュゲートを含み、これは、あわせて考慮した場合に、式
1、4、5、又は5より大きい整数から選択されるn’を有する。
IL-2コンジュゲートを含み、これは、あわせて考慮した場合、式
1、4、5、又は5より大きい整数から選択されるn’を有する。
IL-2コンジュゲートを含む。更に幾つかの他の実施形態では、組成物は、n’が1に
等しい約7モル%以下のIL-2コンジュゲートを含む。
-2コンジュゲートを含む。更に幾つかの代替の実施形態では、組成物は、1に等しいn
’を有する約5モル%未満のIL-2コンジュゲートを含む。
に等しいn’を有する約10モル%以下のIL-2コンジュゲートを含む。又は、他の幾
つかの実施形態では、組成物は、n’が4に等しい約7モル%以下のIL-2コンジュゲ
ートを含む。更に幾つかの更なる実施形態では、組成物は、4に等しいn’を有する約5
モル%以下のIL-2コンジュゲートを含む。
、1.2:1、1.1:1、1:1、1:1.1、1:1.2、1:1.3及び1:1.
4から選択される)のIL-2コンジュゲートを含む組成物である。
2.5、2.6、2.6、2.7、2.8、2.9及び3からなる群から選択されるIL
-2残基あたり(上記のような構造を有する)分岐ポリエチレングリコール部分の平均数
を有する。特定の実施形態では、IL-2部分あたりの分岐ポリエチレングリコール部分
(上記のような構造を有する)の平均数は約2.5である。前述の1つ以上に関連する幾
つかの実施形態では、nの値は5~2000の範囲である。他の幾つかの実施形態では、
nの値は10~1000の範囲である。更に幾つかの追加の実施形態では、nの値は10
~750の範囲である。幾つかの実施形態では、nの値は、10~500、又は20~2
50の範囲である。
細書に記載の1つ以上の実施形態では、分岐ポリマーのポリエチレングリコールアームの
それぞれにおけるnの値は実質的に同じである。幾つかの更なる実施形態では、分岐ポリ
マーを含むポリマーアームのそれぞれにおけるnの値は、約170~285の範囲である
。更に幾つかの更なる実施形態では、分岐ポリマーを含むポリマーアームのそれぞれにお
けるnの値は、約204~約250の範囲である。1つ以上の特定の実施形態では、分岐
ポリマーを含むポリマーアームのそれぞれにおけるnの値は、約226である。
形態では、各分岐ポリエチレングリコール部分の名目上の平均分子量は、約250ダルト
ン~約90000ダルトンの範囲である。幾つかの他の実施形態では、各分岐ポリエチレ
ングリコール部分の名目上の平均分子量は、約1000ダルトン~約60000ダルトン
の範囲である。更なる実施形態では、各分岐ポリエチレングリコール部分の名目上の平均
分子量は、約5000ダルトン~約60000ダルトンの範囲である。幾つかの他の実施
形態では、各分岐ポリエチレングリコール部分の名目上の平均分子量は、約10000ダ
ルトン~約55000ダルトンの範囲である。
分子量は、約15000ダルトン~約25000ダルトンの範囲である。更に1つ以上の
更なる実施形態では、各分岐ポリエチレングリコール部分の名目上の平均分子量は、約1
8000ダルトン~約22000ダルトンの範囲である。更に幾つかの更なる実施形態で
は、各分岐ポリエチレングリコール部分の名目上の平均分子量は、約20000ダルトン
である。
0ダルトンの範囲の名目上の平均分子量を有する、上記の式による組成物を含む。分子の
ポリマー部分の追加の適切な範囲には、約1000ダルトン~約60000ダルトン、約
5000ダルトン~約60000ダルトンの範囲、約10000ダルトン~約55000
ダルトン、約15000ダルトン~約50000ダルトンの範囲、及び約20000ダル
トン~約50000ダルトンの範囲から選択される範囲の名目上の平均分子量が含まれる
。
ダルトン、約300ダルトン、約400ダルトン、約500ダルトン、約600ダルトン
、約700ダルトン、約750ダルトン、約800ダルトン、約900、約1000ダル
トン、約1500ダルトン、約2000ダルトン、約2200ダルトン、約2,500ダ
ルトン、約3000ダルトン、約4000ダルトン、約4400ダルトン、約4500ダ
ルトン、約5000ダルトン、約5500ダルトン、約6000ダルトン、約7000ダ
ルトン、約7500ダルトン、約8000ダルトン、約9000ダルトン、約10000
ダルトン、約11000ダルトン、約12000ダルトン、約13000ダルトン、約1
4000ダルトン、約15000ダルトン、約20000ダルトン、約22,500ダル
トン、約25000ダルトン約30000ダルトン、約35000ダルトン、約4000
0ダルトン、約45000ダルトン、約50000ダルトン、約55000ダルトン、約
60000ダルトン、約65000ダルトン、約70000ダルトン、及び約75000
ダルトンが含まれる。幾つかの好ましい実施形態では、分岐ポリエチレングリコールポリ
マーの重量平均分子量は、約20000ダルトンである。各分岐PEG部分が約2000
0ダルトンの名目上の分子量を有する幾つかの特定の実施形態では、組成物の結果として
生じる分子量範囲は、組成物全体について特徴付けられる場合、約55kDa~75kD
aである。
に許容可能な塩を含む。上記のように、IL-2コンジュゲート組成物は、薬学的に許容
可能な塩の形態であり得る。典型的には、かかる塩は、薬学的に許容可能な酸又は酸同等
物との反応によって形成される。この点での「薬学的に許容可能な塩」という用語は、一
般に、比較的非毒性の、無機及び有機酸付加塩を指す。これらの塩は、投与ビヒクル又は
剤形製造プロセスにおいてその場で(in situ)、又は本明細書に記載の長時間作
用型インターロイキン-2組成物を適切な有機酸若しくは無機酸と別々に反応させ、こう
して形成された塩を単離することによって調製することができる。代表的な塩としては、
臭化水素酸塩、塩酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、吉草酸、オレイ
ン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸
塩、トシル酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフ
チル酸塩(napthylate)、シュウ酸塩(oxylate)、メシル酸塩、グル
コヘプトン酸塩(glucoheptonate)、ラクトビオン酸塩、及びラウリルス
ルホン酸塩等が挙げられる。(例えば、Bergeら(1977)「Pharmaceu
tical Salts」,J.Pharm.Sci.66:1-19を参照されたい)
。したがって、記載されている塩は、塩酸塩、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン
酸、硝酸等の無機酸から誘導することができ;又は酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリ
コール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パルミ
チン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、
サリチル酸、スルファニル酸、2-アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸
、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イセチオン酸等の有機酸から調製
することができる。本明細書で使用される場合、本明細書に記載のRUR20kD-IL
-2の実施形態及び関連組成物を含む「組成物(複数の場合もある)」という用語は、P
EG化IL-2コンジュゲートの任意及び/又は全ての薬学的に許容可能な塩を含む。こ
の説明は、「又はその薬学的に許容可能な塩」という用語が組成物の説明に追加されるか
どうかにかかわらず適用される。
未修飾のIL-2とは対照的に、本明細書に記載のRUR20kD-IL-2の実施形
態及び関連組成物を含む選択的Treg刺激因子組成物は、自己反応性免疫に関連する根
底にある病理に対処し、並びに有益なT細胞機能をもたらす特定の機構を標的として、未
修飾のIL-2の投与に比べて大幅な改善を提供する。既存の自己免疫疾患療法の欠陥に
対処するため、本組成物は、投与時に持続的な曝露を提供し、独特の薬理学的プロファイ
ルを有する。本発明の組成物は、in vivoで内因性Tregを選択的に拡大及び活
性化し、従来のT細胞及び/又はナチュラルキラー細胞の拡大を制限して、それにより自
己免疫疾患の治療のための優れたアプローチを提供する。
成物を含み、そのアミノ基を介してIL-2に安定に共有結合により連結した特定の優勢
な数の分岐ポリエチレングリコール部分を有する選択的Treg刺激因子組成物は、低用
量で投与された場合に特に効果的であることが発見された。本発明の組成物は、IL-2
受容体に結合及びそれを活性化して、制御性T細胞(Treg)の細胞集団及び免疫抑制
機能を優先的に増加させる一方で、Tエフェクター細胞(Teff)に対する刺激効果を
最小限にするのに効果的である。げっ歯類、非ヒト霊長類研究、及びヒト臨床研究におけ
る本組成物(一般に本明細書ではRUR20kD-IL-2及び関連組成物、又は他の例
ではRUR-IL-2組成物と称される)への持続的曝露は、同等の用量の未修飾IL-
2では達成できなかったTreg対Teff応答の大きさ、持続時間、及び特異性提供す
るのに効果的であった。
足例に記載)のヒトへの投与は、用量規制毒性、重篤な有害事象、又は臨床的に重大な異
常をもたらさなかった。予備的な薬物動態分析は、組成物がほとんどの被験体で投与後約
4~6日あたりで最大濃度に達し、投与後およそ2週間まで濃度の変化がほとんどなく、
その後濃度がおよそ8~9日の半減期で低下したことを示した。予備的な薬力学的評定に
より、選択的長時間作用型IL-2受容体アゴニストTreg刺激因子組成物の投与によ
り、循環CD4+FoxP3+CD25brightTregが用量依存的に増加するこ
とが明らかになり、すなわち、循環CD4+FoxP3+CD25brightTreg
の絶対数が持続的に増加し、投与後およそ20~25日までレベルがベースラインに戻ら
なかった。投与前と比較して、CD4+FoxP3+CD25brightTregの数
に数倍(大きさは投与量に応じて)の平均増加があった。変化の大きさはCD4+Fox
P3+CD25brightTregで観察されたものよりも小さかったものの、CD4
+FoxP3+CD25+Tregの総個体数も増加した。最低用量では、治療を受けた
被験体対プラセボ被験体のTregの数に変化はなかった。どの用量のRUR20kD-
IL-2組成でもT細胞集団(CD4+、CD8+)の割合又は数の変化は観察されなか
ったことから、主な効果はTregで見られた。したがって、本発明の組成物及び方法は
、in vivo/ex vivoバイオアッセイ(代替の化学修飾IL-2化合物と比
較した場合でも)及びヒト研究においても、以下に説明するように、下記の項目にあるそ
の他の特徴とともに、Tregの抑制能力を高めるのに驚くほど効果的である。
的Treg刺激因子組成物は、(とりわけ)自己免疫疾患及び障害を治療するのに有用で
ある。本明細書に記載のRUR-IL-2又はRUR20kD-IL-2組成物の投与に
よって治療することができる例示的な自己免疫疾患としては、全身性エリテマトーデス(
SLE)、潰瘍性大腸炎、クローン病、関節リウマチ、アトピー性皮膚炎、全身性硬化症
、強直性脊椎炎、移植片対宿主病、及び多発性筋炎等の全身状態;又は1型糖尿病、アデ
ィソン病、橋本甲状腺炎、グレーブス病、シェーグレン症候群、白斑、悪性貧血、糸球体
腎炎、重症筋無力症、グッドパスチャー症候群、自己免疫性溶血性貧血、特発性血小板減
少性紫斑病、ピーナッツアレルギー、肺線維症等の臓器特異的自己免疫疾患が挙げられる
。
全身性エリテマトーデス(SLE)は、主に中年の女性に発症する自己免疫性炎症性疾患
である。SLEの特徴としては、例えば、皮膚の発疹、関節痛、再発性胸膜炎、及び腎臓
疾患が含まれる。Tconと比較したTregの進行性恒常性不均衡は、SLEを含む多
くの自己免疫疾患によって共有されている。まとめると、Treg恒常性をSLEの病理
に関連付ける治療仮説、SLE患者における低用量IL-2の活性、及びIL-2と比較
した本明細書に記載のRUR20kD-IL-2及び関連組成物の優れたTreg誘導特
性は、SLE、並びに他の自己免疫疾患及び状態の治療における本発明のRUR-IL-
2又はRUR20kD-IL-2及び関連組成物の使用に対する十分な裏付けを提供する
。1つ以上の更なる実施形態では、本明細書に提供されるのは、本明細書に記載のRUR
-IL-2又はRUR20kD-IL-2関連組成物を投与することによって状態を治療
する方法であり、ここで、状態は、例えば、アレルギー、GVHD、クローン病、潰瘍性
大腸炎、関節リウマチ、1型糖尿病、多発性硬化症及び乾癬からなる群から選択される。
連組成物は、治療有効用量で被験体に投与された場合、従来のT細胞及びナチュラルキラ
ー細胞よりも制御性T細胞を優先的に拡大及び活性化するのに効果的である。
-IL-2又はRUR20kD-IL-2関連組成物を被験体に投与することによって、
被験体における制御性T細胞対エフェクターT細胞の比率を増加させる方法である。
CD25+細胞から選択される。前者の実施形態又は方法に関連する1つ以上の実施形態
では、エフェクターT細胞は、CD4+細胞及びCD8+細胞から選択される。
ンと比較した場合の制御性T細胞の倍増は、in-vivoマウスモデルで評価した場合
、少なくとも約2、又は少なくとも約4、又は更には少なくとも約6に達する。
、ベースラインレベルを超えて持続する。幾つかの追加の実施形態では、制御性T細胞数
の増加が、投与後少なくとも5日間、ベースラインレベルを超えて持続する。好ましくは
、制御性T細胞数の増加が少なくとも7日間、ベースラインレベルを超えて持続する。
れているRUR-IL-2又はRUR20kD-IL-2関連組成物の実施形態を含む治
療有効量の選択的Treg刺激因子組成物を被験体に投与することを含む、自己免疫疾患
を有する被験体を治療する方法である。
UR20kD-IL-2 式B、RUR20kD-IL-2 式C、RUR20kD-I
L-2 式D、及びRUR20kD-IL-2 式Eからなる群から選択される治療有効
量の組成物を被験体に投与することを含む、自己免疫疾患を有する被験体を治療する方法
である。
UR20kD-IL-2 式B、及びRUR20kD-IL-2 式Cからなる群から選
択される治療有効量の組成物を被験体に投与することを含む、自己免疫疾患を有する被験
体を治療する方法である。
2 式Aの組成物を被験体に投与することを含む、自己免疫疾患を有する被験体を治療す
る方法である。
2 式Bの組成物を被験体に投与することを含む、自己免疫疾患を有する被験体を治療す
る方法である。
式Cの組成物を被験体に投与することを含む、自己免疫疾患を有する被験体を治療する
方法である。
UR20kD-IL-2 式B、RUR20kD-IL-2 式C、RUR20kD-I
L-2 式D、及びRUR20kD-IL-2 式Eからなる群から選択される組成物の
治療法における使用である。
成物の治療法における使用である。
成物の治療法における使用である。
成物の治療法における使用である。
成物の治療法における使用である。
成物の治療法における使用である。
のRUR20kD-IL-2 式A、RUR20kD-IL-2 式B、RUR20kD
-IL-2 式C、RUR20kD-IL-2 式D、及びRUR20kD-IL-2
式Eからなる群から選択される選択的Treg刺激因子組成物の使用である。
RUR-IL-2又はRUR20kD-IL-2関連組成物を含む製剤の皮下投与を含む
。例えば、SLEの代表的な動物モデルにおける生理学的免疫応答及び疾患進行の制御に
対するRUR20kD-IL-2組成物誘導性Tregの効果を説明する実施例8に記載
の結果を参照されたい。そこに記載されているように、RUR20kD-IL-2組成物
は、腎傷害のバイオマーカー(SLEを患う患者の特徴の1つ)を正常なマウスで観察さ
れるのとほぼ同じレベルまで抑制するのに効果的であった。
用するための、或いはその治療で使用するための薬剤の製造で使用するための更なる実施
形態でもある。本開示は更に、治療法に使用するための、本明細書に記載のその製剤を含
む、組成物の実施形態のいずれか1つによる組成物を提供する。本開示は更に、自己免疫
疾患の治療に使用するための、本明細書に記載のその製剤を含む、組成物の実施形態のい
ずれか1つによる組成物を提供する。
構造:
nは各出現で独立して約3~約4000の整数である)を有するPEG化IL-2を含
む組成物を提供する。治療法で使用するための当該組成物の特定の実施形態では、IL-
2はアルデスロイキンである。治療法で使用するための当該組成物の特定の実施形態では
、各分岐ポリエチレングリコール部分の名目上の平均分子量は、約20000ダルトンで
ある。治療法で使用するための当該組成物の更なる特定の実施形態では、組成物のPEG
化IL-2コンジュゲートは、リジン31に付着したPEG部分を有する。治療法で使用
するための当該組成物の特定の実施形態では、治療法は自己免疫疾患に使用するためのも
のである。
本開示の特定の特徴を説明及び主張する際に、以下の用語は、別段の指定がない限り、
以下に記載される定義に従って使用される。
特徴を具体化するin vivo免疫学的応答を指すか、又は幾つかの点では免疫学的シ
グナル応答を指すが、他の点ではそうではないことを指す。特に、Treg誘導及び/又
は活性化に関する「選択的」は、ICOS又はKi67又はSTAT5等の活性化の1つ
以上のマーカーによって示されるように、Treg細胞数の増加(CD25が高く、フロ
ーサイトメトリーによる合計)、及び/又はTreg活性化状態の増加を示す免疫応答を
指し、及び/又は活性化は、下流の誘導免疫抑制応答及び/又は誘導免疫寛容応答を指し
、同時に特定の他の免疫応答を欠いていることを指す。これに関して、「選択的Treg
誘導」は、記載されているようにTregの免疫応答を指し、同時に、有意な及び/又は
臨床的に重要なエフェクターT細胞及び関連する免疫学的活性化応答を欠いていることを
指す。重要な及び/又は臨床的に重要なエフェクターT細胞及び関連する免疫学的活性化
応答には、例えば、CD4陽性Tエフェクター細胞及び/又はCD8陽性Tエフェクター
細胞の増殖、及び/又はICOS又はKi67等の活性化のマーカー、又は他の周知のエ
フェクター免疫応答が含まれる。他のエフェクター免疫応答シグナルには、「サイトカイ
ン症候群」として知られるもの等、及び/又はIL-5、INFgamma、IL-6、
IFNalpha、IL-17、IL-22、IL-19等の特定の炎症性サイトカイン
の上昇が含まれる場合がある。選択的Treg刺激は、平均Treg:Tcon比にも反
映され得る。好ましくは、本明細書に記載のRUR-IL-2又はRUR20kD-IL
-2関連組成物に応答して達成される平均Treg:Tcon比は、少なくとも5倍、好
ましくは7倍、より好ましくは10倍以上である。
ンポリペプチドのアミノ基(複数の場合もある)に共有結合により連結した安定なPEG
置換基の数を指す。
0%等の記載された数値の合理的な付近を意味する。好ましくは、本明細書で使用される
場合、「約」又は「およそ、ほぼ」は、所与の量のプラスマイナス5%以内を意味する。
ゲートの混合物を指し、混合物は、本明細書に記載されるように、ジ-PEG化及びトリ
-PEG化のコンジュゲートを含む。
ight表現型等のT細胞を指す。(例えば、Jeffrey A.Bluestone
and Qizhi Tang,Treg cells-the next fron
tier of cell therapy,Science,12 October
2018・Vol.362 Issue 6411,p154-155.を参照されたい
)
「Tcon」又は「従来のT細胞」という用語は、aβT細胞受容体(TCR)、並び
に共受容体CD4又はCD8を発現し、Tヘルパー細胞機能及び細胞傷害性T細胞エフェ
クター機能等の確立された適応免疫エフェクター機能を実行するTリンパ球を指す。例え
ば、TconはCD4+CD25-ナイーブな従来のT細胞を指す場合がある。「エフェ
クターT細胞(Teff)」は、当業者に知られているように、ヘルパーT細胞、細胞傷
害性T細胞等のCD4+及びCD8+細胞エフェクター表現型を指す。「ナチュラルキラ
ー細胞」、「K細胞」、又は「キラー細胞」としても知られる「NK細胞」は、リンパ球
(白血球)の一種であり、自然免疫系の構成要素である。NK細胞は、腫瘍やウイルスに
感染した細胞の宿主拒絶反応において主要な役割を果たす。
R20kD-IL-2」は、IL-2部分が本明細書に記載されるようなアルデスロイキ
ンであり、PEG部分が本明細書に記載されるとおりであるIL-2 PEGコンジュゲ
ートを指す。RUR20kD-IL-2組成物を、一般的に化学名(1,3-ビス(メト
キシポリ(エチレングリコール)10kDカルバモイル)-2-プロパノキシ)-4-ブ
タンアミド)インターロイキン-2)と呼ぶこともできるが、これは組成を完全に説明し
ているわけではない。本明細書で使用される場合、アルデスロイキンは、大腸菌で発現さ
れる組換え非グリコシル化インターロイキン-2である125-L-セリン-2-133
インターロイキン-2)のアミノ酸配列を指す。アルデスロイキンのアミノ酸配列を図2
に示す。当業者に知られている他の宿主系で発現されるアルデスロイキンもまた、本明細
書で使用される用語の意味の範囲内である。
分を指す。「IL-2部分」という用語は、分岐ポリエチレングリコール部分に付着する
前のIL-2部分、並びに共有結合より付着した後のIL-2部分を指す。元のIL-2
部分が、本明細書で提供される分岐ポリエチレングリコールポリマー等のポリエチレング
リコールポリマーに付着される場合、IL-2部分は、ポリエチレングリコール部分への
連結に関連する1つ以上の共有結合の存在のためにわずかに変化することが理解される。
別の分子に付着したそのようなわずかに変化した形態のIL-2部分は、本明細書では、
IL-2部分の「残基」と称される。IL-2の残基に関して「残基」という用語は、本
明細書の式において示されるように、1つ以上の共有結合性の付着部位で、ポリエチレン
グリコール等のポリマーへの共有結合による付着の後に残るIL-2分子の部分を意味す
る。通常、付着部位は、IL-2のリジンの11個のアミン基の1つである。
ー(複数の場合もある)への連結に関連する1つ以上の共有結合の存在により、IL-2
がわずかに変化することが理解されよう。分岐PEG部分等の別の分子に付着したIL-
2のこのわずかに変化した形態は、場合によってはIL-2の「残基」と称されることも
あれば、単に「IL-2」等と称されることもあり、かかるポリマーコンジュゲートに含
まれるIL-2は、1つ以上の共有結合の存在のためにわずかに変化し、それぞれが分岐
したPEG部分をIL-2に連結しているということが理解される。「より高PEG化さ
れたIL-2コンジュゲート」という用語は、テトラPEGコンジュゲート又はペンタP
EGコンジュゲート又はPEG部分が最大11個のコンジュゲートを指す。好ましくは、
「より高PEG化されたIL-2コンジュゲート」は、テトラPEGコンジュゲート又は
ペンタPEGコンジュゲートを指す。
配列番号4のいずれか1つに対応するアミノ酸配列を有するタンパク質は、それに実質的
に相同な任意のタンパク質又はポリペプチドと同様に、例示的なIL-2タンパク質であ
る。実質的に相同であるという用語は、特定の対象配列、例えば、変異配列が、1つ以上
の置換、欠失又は付加によって参照配列から変化しており、その正味の効果が参照配列と
対象配列との間で有害な機能的非類似性をもたらさないことを意味する。本発明の目的の
ため、95パーセントを超える相同性、同等の生物学的活性(ただし、必ずしも同等の生
物学的活性の強度ではない)、及び同等の発現特性を有する配列は、実質的に相同である
とみなされる。相同性を決定する目的で、成熟配列のトランケーションは無視されるべき
である。本明細書で使用される場合、「IL-2」という用語は、例えば、部位特異的突
然変異誘発によって、又は偶発的に突然変異によって改変されたかかるタンパク質を含む
。これらの用語はまた、1個~6個の追加のグリコシル化部位を有する類縁体、追加のア
ミノ酸(複数の場合もある)が少なくとも1つのグリコシル化部位を含むタンパク質のカ
ルボキシ末端に少なくとも1つの追加のアミノ酸を有する類縁体、及び少なくとも1つの
グリコシル化部位を含むアミノ酸配列を有する類縁体を含む。この用語には、天然部分と
組換え生成部分の両方が含まれる。更に、IL-2は、ヒト由来、動物由来、及び植物由
来であり得る。1つの例示的なIL-2は、アルデスロイキンと称されるヒト組換えIL
-2である(図2を参照)。本明細書に記載の長時間作用型IL-2Rアゴニストへの言
及は、その薬学的に許容可能な塩形態を包含することを意味する。
意味で長時間作用型薬剤である。本明細書で提供されるRUR-IL-2又はRUR20
kD-IL-2関連組成物に関して、長時間作用型は、修飾されていない同じIL-2R
アゴニスト(例えば、修飾されていないアルデスロイキン又は他の適切なインターロイキ
ン-2配列)の血清中の循環半減期よりも延長された循環半減期を有するかかる組成物を
指す。例えば、コンパレータアゴニストは、ポリエチレングリコール部分等の1つ以上の
水溶性ポリマー部分へと共有結合により付着することによって修飾されず、同じ薬物動態
分析によって同じ被験体にタンパク質等価用量のIL-2Rアゴニストを投与したものと
して比較される。
溶性ポリ(エチレンオキシド)を包含することを意味する。特に明記しない限り、「PE
Gポリマー」又はポリエチレングリコールは、実質的に全ての(好ましくは全ての)単量
体サブユニットがエチレンオキシドサブユニットであるものであるが、ポリマーは、例え
ば、複合化のために、別個のエンドキャッピング部分又は官能基を含んでもよい。本開示
で使用するためのPEGポリマーは、末端酸素(複数の場合もある)が例えば、合成変換
中に変位されているかどうかに応じて、「-(CH2CH2O)n-」又は「-(CH2
CH2O)n-1CH2CH2-、」の2つの構造のうちの1つを含む。上記のように、
PEGポリマーの場合、変数(n)は約3~4000の範囲であり、末端基及び全体的な
PEGの構造は変化する場合がある。好ましくは、PEGは、本明細書に詳細に記載され
るような特定の意味を有する。
から延びる2つ以上のポリマー「アーム」又は「鎖」を有するポリマーを指す。一例とし
て、例示的なPEG試薬、mPEG2-ブタン酸、N-ヒドロキシスクシンイミドエステ
ル(1,3-ビス(メトキシポリ(エチレングリコール)カルバモイル)-2-プロパノ
キシ)-4-スクシンイミジルブタノエート)は、それぞれがカルバメート結合(~NH
C(O)O~)を介して中央のプロピル基の1-及び3-炭素にそれぞれ共有結合により
付着し、そこからオキシブタノエートスクシンイミジルエステルが伸びる2つの直鎖のP
EG鎖で構成される分岐ポリエチレングリコールポリマーである。
平均分子量のいずれかとして表すことができる。特に明記しない限り、本明細書における
分子量への全ての言及は、名目上の平均分子量を指す。数平均と重量平均の両方の分子量
測定は、ゲル浸透クロマトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィー、又は他の液体クロ
マトグラフィーの手法を使用して測定することができる。また、分子量の平均値を決定す
るための末端基分析若しくは束一的性質(凝固点降下、沸点上昇、又は浸透圧等)の測定
等の使用、又は重量平均分子量を決定するための光散乱技術、超遠心分離若しくは粘度測
定の使用等の分子量値を測定する他の方法を使用することもできる。ゲルろ過クロマトグ
ラフィーは、分岐ポリマーの平均分子量を決定するために頻繁に使用される。PEGポリ
マーは、典型的には多分散性であり(すなわち、ポリマーの数平均分子量及び重量平均分
子量は等しくない)、好ましくは約1.2未満、より好ましくは約1.15未満、更によ
り好ましくは約1.10未満、更により好ましくは約1.05未満、及び最も好ましくは
約1.03未満の低い多分散性値を有する。
長期間にわたって感知できる程度に加水分解を受けない化学結合を指す。加水分解的に安
定な連結の例としては、限定されるものではないが、一般に、炭素-炭素結合(例えば、
脂肪族鎖)、エーテル、アミド、アミン等が挙げられる。一般に、安定した連結とは、生
理学的条件下で1日あたり約1~2%未満の加水分解速度を示す結合である。代表的な化
学結合の加水分解速度は、ほとんどの標準的な化学の教科書に記載されている。
の(the)」には、文脈で別段の明確な指示がない限り、複数の指示対象が含まれる。
例えば、所与の量の95%以上を意味する。
調製及び実施例は、限定ではなく例示として記載されており、当業者によって様々な修
正を加えることができることを理解されたい。RUR20kD-IL-2の実施形態及び
関連組成物を含む、選択的Treg刺激因子組成物を調製する方法は、本明細書に記載さ
れ、及び/又は当業者に知られている。試薬及び開始物質は、容易に入手可能であるか、
又は当業者によって容易に合成され得る。これらの方法の工程に適した条件はよく知られ
ており、緩衝液及び試薬の適切な置換は当業者の範囲内である。更に、当業者は、幾つか
の状況では、組成物が製造される工程及び順序が変更されてもよく、これは当業者によっ
て十分に理解されることを理解するであろう。同様に、調製物は、必要に応じて又は所望
に応じて、様々な周知の手法によって単離及び/又は精製され得ることが理解されるであ
ろう。
IL-2部分は、非組換え法及び/又は組換え法から誘導することができ、本開示は、
この点に関して限定されない。IL-2部分は、ヒト由来、動物由来、及び植物由来であ
り得る。例えば、生物学的システムからIL-2を単離すること、或いは培養培地からI
L-2を得ることが可能である。例えば、米国特許第4,401,756号及びPaul
yら(1984)J.Immunol Methods 75(1):73-84に記載
されている手順を参照されたい。
ドを産生及び発現するための方法は、当業者によく知られている。例えば、米国特許第5
,614,185号を参照されたい。IL-2部分を、細菌[例えば大腸菌、例えば、F
ischerら(1995)Biotechnol.Appl.BioIL-2m.21
(3):295-311を参照されたい]、哺乳動物[例えば、Kronmanら(19
92)Gene 121:295-304を参照されたい]、酵母[例えば、Pichi
a pastoris、例えば、Morelら(1997)Biochem.J.328
(1):121-129を参照されたい]、及び植物[例えば、Morら(2001)B
iotechnol.Bioeng.75(3):259-266を参照されたい]の発
現系において発現させることができる。タンパク質を調製するための組換えベースの方法
は異なる場合があるが、組換え方法は通常、所望のポリペプチド又はフラグメントをコー
ドする核酸を構築すること、核酸を発現ベクターにクローニングすること、宿主細胞(例
えば、植物、細菌、酵母、トランスジェニック動物細胞、又はチャイニーズハムスター卵
巣細胞若しくはベビーハムスター腎臓細胞等の哺乳動物細胞)を形質転換すること、及び
核酸を発現させて、所望のポリペプチド又はフラグメントを産生することを含む。タンパ
ク質精製の様々な方法を用いて、本開示の組成物を精製することができ、かかる方法は当
技術分野で知られており、例えば、Scopes,Protein Purificat
ion:Principles and Practice,3rd Edition,
Springer,NY(1994)に記載されている。組換えポリペプチドの同定及び
精製を容易にするために、エピトープタグ又は他の親和性結合配列をコードする核酸配列
を、コード配列とインフレームで挿入又は付加することができ、それにより、所望のポリ
ペプチド及び結合に適したポリペプチドで構成される融合タンパク質を生成する。
-2部分は、非グリコシル化又はグリコシル化され得て、これらのいずれかを使用するこ
とができる。すなわち、IL-2部分は、グリコシル化されていなくてもよく、IL-2
部分は、グリコシル化されていてもよく、1つ以上の好ましい実施形態では、IL-2部
分は、グリコシル化されていない。IL-2部分はまた、ポリマーのアミノ酸の側鎖内の
原子への容易な付着を提供するために、例えば、リジン、システイン及び/又はアルギニ
ン等の1つ以上のアミノ酸残基を含む及び/又はそれを置換するように有利に修飾され得
る。IL-2部分の置換の例は、米国特許第5,206,344号公報に記載されている
。更に、IL-2部分は、天然に存在しないアミノ酸残基を含むように修飾することがで
きる。アミノ酸残基及び天然に存在しないアミノ酸残基を付加するための手法は、当業者
によく知られている。
能基含有アミノ酸残基の付加による場合を除く)。例えば、IL-2部分は、チオール基
を含むように修飾することができる。更に、IL-2部分はN末端アルファ炭素を含むよ
うに修飾することができる。更に、IL-2部分は、1つ以上の炭水化物部分を含むよう
に改変することができる。更に、IL-2部分を修飾してアルデヒド基を含めることがで
きる。更に、IL-2部分を修飾してケトン基を含めることができる。本開示の幾つかの
実施形態では、IL-2部分は、チオール基、N末端アルファ炭素、炭水化物、アルデヒ
ド基及びケトン基のうちの1つ以上を含むように修飾されないことが好ましい。
43号、同第5,153,310号、同第5,635,597号、同第7,101,96
5号及び同第7,567,215号、並びに米国特許出願公開第2010/003609
7号公報及び同第2004/0175337号公報に記載されている。好ましいIL-2
部分は、図2に提供されるアミノ酸配列を有し、本明細書で使用されるアルデスロイキン
のアミノ酸配列を表す。
現が別個のユニットに組織化される。他の例では、IL-2部分は、タンパク質の2つの
単量体形態が(例えば、ジスルフィド結合によって)互いに会合している「二量体」(例
えば、組換えIL-2の二量体)の形態である。例えば、組換えヒトIL-2の二量体と
の関連で、二量体は、各単量体のCys125残基から形成されるジスルフィド結合によ
って互いに会合された2つの単量体の形態であり得る。
-2活性を有するかどうかを判断することが可能である。in vitroでIL-2活
性を決定するための様々な方法が当技術分野及び本明細書に記載されている。例示的なア
プローチは、本明細書に記載のCTTL-2細胞増殖アッセイである。例示的なアプロー
チは、Moreauら(1995)Mol.Immunol.32:1047-1056
)にも記載されている。簡単に説明すると、非特異的結合アッセイでは、提案されるIL
-2部分又は組成物を、IL-2の受容体を持つ細胞株の存在下で4℃で1時間プレイン
キュベートさせる。その後、125I標識IL-2を系内で4℃で3時間インキュベート
する。データは、野生型IL-2に対する提案されるIL-2部分活性の%阻害能力とし
て表される。電位測定法、分光光度法、クロマトグラフィー及び放射測定法を含む、当技
術分野で知られている他の方法論もまた、IL-2機能を評定するために使用することが
できる。
組成物の調製:
RUR20kD-IL-2の例示的な選択的Treg刺激因子組成物は、一般に、約9
の高pHのビシン溶液中で、精製IL-2をモル過剰(IL-2に関してモル当量の過剰
)のPEG試薬、mPEG2(20kD)-ブタン酸、N-ヒドロキシスクシンイミドエ
ステル(又は他の適切に活性化されたエステル)(1,3-ビス(メトキシポリ(エチレ
ングリコール)MW10000カルバモイル)-2-プロパノキシ)-4-スクシンイミ
ジルブタノエートと反応させることによって調製される。反応物を、一般に穏やかな条件
下、例えば、約20℃~約65℃、又は約20℃~約40℃、又は周囲温度若しくは室温
で約30分~約5時間、又は約30分~4時間、又は約30分~2時間、又は約30分~
1時間混合する。反応は、酢酸等の適切な酸の添加による低pHへの酸性化によってクエ
ンチされる。
切な方法によって精製される。例えば、イオン交換クロマトグラフィーを使用する場合、
RUR20kD-IL-2組成物は、樹脂に結合し、次いで、塩化ナトリウム勾配等の適
切な勾配で溶出される。次いで、クロマトグラフィー生成物プールを濃縮し、例えば、タ
ンジェント流ろ過(TFF)を使用して、適切な製剤バッファー(例えば、スクロースを
含む酢酸ナトリウムバッファー)にダイアフィルトレーションする。
ciences又はVydac等の企業から市販されているC18カラム又はC3カラム
)を使用する逆相高速液体クロマトグラフィー(RP-HPLC)を使用する逆相クロマ
トグラフィーによって、又はイオン交換カラム、例えば、Amersham Biosc
iencesから入手可能なSepharose(商標)イオン交換カラムを使用するイ
オン交換クロマトグラフィーによって位置異性体へと更に分離することができる。どちら
のアプローチも、同じ分子量を有するポリマー活性作用物質の異性体(すなわち、位置ア
イソフォーム)を分離するために使用することができる。
成物は、本明細書に記載の及び/又は分析HPLC、SDS-Page、LCMS、並び
にCTLL-2増殖及びin vivoでのTreg誘導等のバイオアッセイを含む当業
者に既知の様々な分析及びバイオアッセイの手法によって特性評価され得る。
本明細書で提供される更に1つ以上の実施形態は、RUR20kD-IL-2の実施形
態及び関連組成物を含む選択的Treg刺激因子組成物であり、本明細書に記載のIL-
2コンジュゲート組成物、及び薬学的に許容可能な賦形剤を含む。
組成物に含めることができ、被験体に重大な有害な毒物学的影響を引き起こさない成分を
指す。本開示の組成物は、好ましくは、静脈内、筋肉内又は皮下を含む非経口投与等、組
成物を生物学的に利用可能にする任意の経路によって投与される医薬組成物として配合さ
れる。そかかる医薬組成物及びそれを調製するためのプロセスは、当技術分野で周知であ
る(例えば、Remington:The Science and Practice
of Pharmacy(D.B.Troy,Editor,21st Editio
n,Lippincott,Williams&Wilkins,2006)を参照され
たい)。任意に、本明細書で提供される組成物は薬学的に許容可能な賦形剤を更に含むこ
とができ、例示的な賦形剤としては、限定されるものではないが、炭水化物、無機塩、抗
菌剤、抗酸化剤、界面活性剤、バッファー、酸、塩基、アミノ酸及びそれらの組み合わせ
からなる群から選択されるものが挙げられる。組成物中の個々の賦形剤の量は、賦形剤の
活性及び組成物の特定の必要性に応じて変化するであろう。通常、任意の個々の賦形剤の
最適量は、実験、すなわち、様々な量の賦形剤(低から高までの範囲)を含む組成物を調
製し、安定性及び他のパラメータを調べ、次いで、重大な有害作用を伴わずに最適な性能
が得られる範囲を決定することによって決定される。糖等の炭水化物、アルジトール、ア
ルドン酸、エステル化糖、及び/又は糖ポリマー等の誘導体化糖が賦形剤として存在し得
る。特定の炭水化物の賦形剤としては、例えば、フルクトース、マルトース、ガラクトー
ス、グルコース、D-マンノース、ソルボース等の単糖;ラクトース、スクロース、トレ
ハロース、セロビオース等の二糖;ラフィノース、メレジトース、マルトデキストリン、
デキストラン、デンプン等の多糖;及びマンニトール、キシリトール、マルチトール、ラ
クチトール、キシリトール、ソルビトール(グルシトール)、ピラノシルソルビトール、
ミオイノシトール、シクロデキストリン等のアルジトール等が挙げられる。賦形剤はまた
、クエン酸、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸ナトリウム、硝酸カリウム、一塩基性
リン酸ナトリウム、二塩基性リン酸ナトリウム、及びそれらの組み合わせ等の無機塩又は
バッファーを含み得る。組成物はまた、微生物の増殖を防止又は抑止するための抗菌剤を
含むことができる。本開示の1つ以上の実施形態に適した抗菌剤の非限定的な例としては
、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、塩化セチルピリジ
ニウム、クロロブタノール、フェノール、フェニルエチルアルコール、硝酸フェニル水銀
、チメロサール(thimersol)、及びそれらの組み合わせが挙げられる。抗酸化
剤も組成物中に存在することができる。酸化防止剤は酸化を防ぐために使用され、それに
よってコンジュゲート又は製剤の他の成分の劣化を防ぐ。本開示の1つ以上の実施形態で
使用するのに適した抗酸化剤としては、例えば、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒ
ドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、次亜リン酸、モノチオグリセロール
、没食子酸プロピル、亜硫酸水素ナトリウム、ホルムアルデヒドスルホキシル酸ナトリウ
ム、二亜硫酸ナトリウム、及びそれらの組み合わせが挙げられる。界面活性剤は、賦形剤
として存在することができる。例示的な界面活性剤としては、「Tween 20」及び
「Tween 80」等のポリソルベート、並びにF68及びF88(これらは両方とも
ニュージャージー州マウントオリーブのBASFから入手可能)等のプルロニック;ソル
ビタンエステル;レシチン及び他のホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールア
ミン(ただし、好ましくはリポソーム形態ではない)等のリン脂質、脂肪酸及び脂肪酸エ
ステル等の脂質;コレステロール等のステロイド;並びにEDTA等のキレート剤;亜鉛
及び他のかかる適切な陽イオンが挙げられる。酸又は塩基は、組成物中の賦形剤として存
在することができる。使用できる酸の非限定的な例としては、塩酸、酢酸、リン酸、クエ
ン酸、リンゴ酸、乳酸、ギ酸、トリクロロ酢酸、硝酸、過塩素酸、リン酸、硫酸、フマル
酸、及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるそれらの酸が挙げられる。適切な
塩基の例としては、限定されるものではないが、水酸化ナトリウム、酢酸ナトリウム、水
酸化アンモニウム、水酸化カリウム、酢酸アンモニウム、酢酸カリウム、リン酸ナトリウ
ム、リン酸カリウム、クエン酸ナトリウム、ギ酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸カリ
ウム、フマル酸カリウム(potassium fumerate)及びそれらの組み合
わせからなる群から選択される塩基が挙げられる。1つ以上のアミノ酸は、本明細書に記
載の組成物中に賦形剤として存在することができる。この点に関する例示的なアミノ酸に
は、アルギニン、リジン、及びグリシンが含まれる。追加の適切な薬学的に許容可能な賦
形剤としては、例えば、Handbook of Pharmaceutical Ex
cipients,7th ed.,Rowe,R.C.,Ed.,Pharmaceu
tical Press,2012に記載されているものが挙げられる。本明細書で提供
されるRUR20kD-IL-2の実施形態及び関連組成物を含む選択的Treg刺激因
子組成物の好ましい製剤は、1.5mg/mlタンパク質当量、10mM酢酸ナトリウム
、110mM塩化ナトリウム、2%スクロース(重量/体積)、pH5.0である。RU
R20kD-IL-2組成物を、滅菌済みで供給されすぐに使用できる、シリコンライナ
ー付きのポリプロピレンキャップを備えた適切な容量の滅菌済みの使い捨てポリカーボネ
ートボトルに保管することができる。
本明細書で提供されるRUR20kD-IL-2の実施形態及び関連組成物を含む選択
的Treg刺激因子組成物の投薬量は、幾つかの要因に応じて変化するが、組成物が単位
用量容器(例えば、バイアル)に保管される場合、治療上有効な用量であることが最適で
ある。更に、製剤は注射器に収容することができる。治療有効用量は、自己免疫症状及び
/又は免疫抑制の緩和、及び/又は寛容の誘導等の本明細書に記載の臨床的に望ましいエ
ンドポイントをもたらす量を決定するために、本明細書に提供されるRUR20kD-I
L-2実施形態及び関連組成物を含む選択的Treg刺激因子組成物の漸増量の反復投与
によって実験的に決定され得る。
性T細胞を優先的に拡大及び活性化するのに有効な低投与量である。制御性T細胞の活性
化を、様々なアプローチで測定することができる。例えば、IL-2依存性T細胞プロセ
スにおけるSTAT5の不可欠な役割を考えると、リンパ球におけるSTAT5の増加の
検出は、Treg活性化の重要なマーカーとして利用することができる。表現型的には、
Tregの活性化は、細胞表面IL-2Rα(CD25)の増加、及び/又はTreg系
統の主要制御因子であるタンパク質フォークヘッドボックスP3(FoxP3)の細胞内
発現の増加、及び/又は細胞増殖に関連するタンパク質Ki67の発現増加を通じて、フ
ローサイトメトリーによって測定することもできる。まとめると、これらのマーカーはT
reg細胞の機能と関連しており、自己免疫疾患においてかかる細胞ではしばしば調節不
全になっている。本明細書において、Treg細胞の誘導及び活性化の好ましい検出は、
フローサイトメトリーによるものである。Tregの機能性は、従来のT細胞の増殖を阻
害する能力を測定するex vivo抑制アッセイによっても評定することができる。T
regの動員及び活性化の結果は、抗原駆動型炎症モデルを使用してin vivoで直
接測定することもできる。
型的には注射によるものである。肺、鼻、頬、直腸、舌下及び経皮等の他の投与様式も企
図されている。本明細書で使用される場合、「非経口」という用語は、皮下、静脈内、動
脈内、腫瘍内、リンパ管内、腹腔内、心臓内、髄腔内、及び筋肉内の注射、並びに点滴注
入を含む。特定の実施形態では、注射は皮下である。例えば、患者への投与は、本明細書
で提供されるRUR20kD-IL-2の実施形態及び関連組成物と希釈剤とを含む組成
物の注射によって達成することができる。可能な希釈剤に関して、希釈剤は、例えば、注
射用静菌水、水中の5%デキストロース、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液、乳酸リ
ンガー溶液、生理食塩水、滅菌水、脱イオン水及びそれらの組み合わせから選択され得る
。当業者は、2つの所与の薬理学的成分が所与の製剤において一緒に適合性があるかどう
かを試験することによって判断することができる。患者に投与するための例示的な組成物
、例えば、皮下製剤は、例えば、治療有効量の本明細書で提供されるRUR20kD-I
L-2の実施形態及び関連組成物、水、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム及びスクロース
を含む。液体組成物は、約4.5~7.5、又は約4.5~6の範囲のpHを有する。
関連組成物を含む、選択的Treg刺激因子組成物は固体形態である。好ましい固体形態
は、例えば、5重量パーセント未満の水、又は好ましくは2重量パーセント未満の水を含
有する、固体の乾燥形態のものである。固体形態は、一般に、水性希釈剤での再構成に適
している。好ましい固体製剤は、約0℃~10℃の温度で密封容器に保管された場合、少
なくとも約24ヶ月間安定である。
本明細書で提供される組成物の投与によって予防又は治療することができる状態に罹患し
ている、又はその傾向がある生物を指し、ヒト及び動物の両方を含む。被験体としては、
限定されるものではないが、哺乳動物(例えば、ネズミ、サル、ウマ、ウシ、ブタ、イヌ
、ネコ等)が挙げられ、好ましくはヒトである。特定の実施形態では、患者、好ましくは
ヒトは、本開示の組成物の投与から利益を得るであろう、自己免疫状態等の疾患、障害又
は状態を更に特徴とする。
これらの状態の症状及び合併症と闘う又は緩和する目的で、本開示の組成物の投与が示さ
れる状態を有する患者の管理及びケアを指す。治療には、症状若しくは合併症の発症を予
防するため、症状若しくは合併症を軽減するため、又は疾患、状態若しくは障害を排除す
るために、それを必要とする患者に本開示の組成物を投与することが含まれる。例えば、
自己免疫障害。好ましくは、治療は、免疫抑制及び/又は寛容をもたらすために、それを
必要とする患者に本開示の組成物を投与することを含む。治療される患者は動物であり、
好ましくはヒトである。本明細書で使用される投与には、患者が組成物を消費するとき、
及び/又は患者が組成物を消費するように指示されるときのいずれかが含まれる。
に有効な量」という句は、本明細書で同じ意味で使用され、血流又は標的組織内の物質の
望ましいレベルを達成するのに必要とされる、本明細書で提供されるRUR20kD-I
L-2及び関連組成物の量を指す。正確な量は、例えば、治療される特定の状態、意図さ
れる患者集団、個々の患者の考慮事項、投与される治療用組成物の成分及び物理的特性等
の多くの要因に依存するであろう。
ることができる。非経口投与は、シリンジ、任意にペン状シリンジ又は機械的駆動注射器
による皮下、筋肉内又は静脈内の注射によって実施され得る。或いは、非経口投与は、注
入ポンプによって行われてもよい。本開示の実施形態は、それを必要とする患者に、治療
有効量の本開示の組成物及び1つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤を投与することを含む
、患者への投与に適した医薬組成物を提供する。かかる医薬組成物を、当技術分野で周知
の医薬品用の従来の賦形剤を使用する様々な手法のいずれかによって調製することができ
る。(Remington’s Pharmaceutical Sciences,2
1st Edition,University of the Sciences i
n Philadelphia,Philadelphia,PA,USA(2006)
)。
刺激因子組成物の用量と並んで、方法及び組成物と関連する投与計画は、被験体の年齢、
体重及び全身状態と並んで、治療されている状態の種類及び状況、医療専門家の判断、並
びに投与される特定の選択的Treg刺激因子組成物に応じて変化する。
数回用量の投与時に、研究者、獣医、医師若しくは他の臨床医が求めている、組織、器官
、動物、哺乳動物若しくはヒトの生物学的若しくは医学的応答、又はそれらに対する所望
の治療効果を誘発する本開示の組成物の量又は用量を指す。好ましくは、有効量は、患者
又は被験体への単回又は複数回用量の投与時に、投与前レベルの少なくとも10倍の選択
的Treg細胞増加を誘導する、本開示の組成物の量又は用量を指す。用量は、より高い
初期負荷用量、それに続くより低い用量を含み得る。1つ以上の例では、本明細書で提供
されるRUR20kD-IL-2及び関連組成物を含む治療有効量の選択的Treg刺激
因子組成物は、IL-2の量で表される以下の範囲:約0.10~約700μg/kg、
約0.20~約650μg/kg、約0.30~約600μg/kg、約1.0~約55
0μg/kg、約2.0~約500μg/kg、約10~約450μg/kg、約25~
約400μg/kg、約50~約350μg/kg、又は約100~約300μg/kg
の1つ以上に包含される量であり、前述の範囲のそれぞれ及び全てからの前述の開始値及
び終了値のありとあらゆる組み合わせを含む。幾つかの実施形態では、例えば、自己免疫
疾患、又は被験体における従来のT細胞及びナチュラルキラー細胞よりも制御性T細胞の
優先的な拡大及び活性化から利益を得ることができる疾患若しくは状態を治療するために
、本明細書で提供されるRUR20kD-IL-2の実施形態及び関連組成物を含む選択
的Treg刺激因子組成物は、用量、例えば500μg/kg以下の用量で投与される。
本開示の好ましい投与計画は、RUR20kD-IL-2及び関連組成物、特に式A~E
の組成物が、2週間に1回、3~24μg/kgの用量で投与される場合である。本開示
の別の好ましい用量レジメンは、RUR20kD-IL-2及び関連組成物、特に式A~
Eの組成物が、2週間に1回、3~18μg/kgの用量で投与される場合である。本開
示の別の好ましい投与計画は、RUR20kD-IL-2及び関連組成物、特に式A~E
の組成物が、2週間に1回、3~12μg/kgの用量で投与される場合である。本開示
の別の好ましい投与計画は、RUR20kD-IL-2及び関連組成物、特に式A~Eの
組成物が、2週間に1回、3~6μg/kgの用量で投与される場合である。本開示の別
の好ましい投与計画は、RUR20kD-IL-2及び関連組成物、特に式A~Eの組成
物が、2週間に1回3μg/kgの用量で投与される場合である。
えば、Treg機能不全が自己免疫疾患、アレルギー及び移植片拒絶等の役割を果たす疾
患にプラスの影響を与える能力を有する。一実施形態では、本明細書で提供されるのは、
RUR20kD-IL-2実施形態及び関連組成物を含む選択的Treg刺激因子組成物
を投与することにより、in vivoで内因性Tregを選択的に拡大する方法である
。例示的な投薬範囲としては、例えば、約100μg/kg~約500μg/kg、又は
約150μg/kg~約450μg/kg、又は約175μg/kg~約400μg/k
g、又は更には約175μg/kg~約350μg/kgが挙げられる。好ましい用量及
び投与計画は、本明細書に提供される実施例に記載されている。Teff細胞及びNK細
胞の刺激を最小限に抑えながら、Treg細胞を最大限に増幅するには、適切な用量が効
果的であり、このようなものは、フローサイトメトリー分析のために末梢血を収集するこ
とによってモニタリングして、Treg細胞、エフェクターCD4+及びCD8+T細胞
、及びNK細胞の出現率を特定することができる。これらの数値に基づいて、投与量を適
切に調整することができる。
静脈内(i.v.)若しくは非静脈内投与、局所若しくは全身、又はそれらの組み合わせ
の投与スケジュールは、通常、単回ボーラス投与量又は連続注入から、1日あたり(例え
ば、4時間~6時間ごと)の複数回投与までの範囲であるか、又は治療する医師及び患者
の状態によって指定される。RUR20kD-IL-2の実施形態及び本明細書で提供さ
れる関連組成物を含む選択的Treg刺激因子組成物を投与する頻度及びスケジュールに
関して、当業者は、適切な投与計画を決定することができる。例えば、治療サイクルにお
いて、臨床医は、単回用量として、又は一連の用量として、(例えば、数日又は数週間に
わたって)、組成物を投与することを決定することができる。組成物の長時間作用性に基
づいて、通常、比較的まれにしか投与されないことが好ましい(例えば、3週間に1回、
2週間に1回、8日~10日に1回、毎週1回等)。治療過程に関連する例示的な期間と
しては、約1週間、約2週間、約3週間、約4週間、約5週間、約6週間、約7週間、約
8週間、約9週間、約10週間、約11週間、約12週間、約13週間、約14週間、約
15週間、約16週間、約17週間、約18週間、約19週間、約20週間、約21週間
、約22週間、約23週間、約24週間、約7ヶ月、約8ヶ月、約9ヶ月、約10ヶ月、
約11ヶ月、約12ヶ月、約13ヶ月、約14ヶ月、約15ヶ月、約16ヶ月、約17ヶ
月、約18ヶ月、約19ヶ月、約20ヶ月、約21ヶ月、約22ヶ月、約23ヶ月、約2
4ヶ月、約30ヶ月、約3年、約4年及び約5年が挙げられる。本明細書に記載の治療方
法は、通常、患者のケアを監督する臨床医が治療方法が効果的であるとみなす限り、すな
わち、患者が治療に反応している限り、又は状態の関連する症状が治まるまで継続される
。治療法が有効であることを示す非限定的なパラメータには、CD25+Treg及びF
oxP3+Treg等の制御性T細胞の数の増加、及び/又はNK細胞、並びにCD4+
及びCD8+エフェクター細胞の数の減少の1つ以上が含まれる
本明細書で提供される組成物は、治療有効用量で被験体に投与された場合、CD4+細
胞及びCD8+細胞等のエフェクターT細胞に対するFoxP3+細胞及びCD25+細
胞等の制御性T細胞の比率を増加させるのに有用である。例えば、本明細書で提供される
RUR20kD-IL-2及び関連組成物を含む選択的Treg刺激因子組成物の投与は
、ベースラインと比較され、例えば本明細書に記載されるようなin-vivoマウスモ
デルにおいて評価される場合、制御性T細胞の少なくとも2倍の増加をもたらすのに効果
的であり得る。この方法はまた、幾つかの実施形態では、ベースラインと比較され、例え
ば本明細書に記載されるようなin-vivoマウスモデルにおいて評価される場合、制
御性T細胞の少なくとも4倍の増加をもたらすのに有効であり得る。場合によっては、制
御性T細胞数の増加は、投与後少なくとも3日間、又は更には投与後少なくとも5日間、
ベースラインレベルを超えて持続する。
施形態及び関連組成物を含む選択的Treg刺激因子組成物は、適切な投与量範囲内で投
与される場合、Tエフェクター細胞に対して最小限の刺激効果を持ちながら、制御性T細
胞の細胞集団及び免疫抑制機能を優先的に増加させるのに効果的である。特定の実施形態
では、本明細書で提供されるRUR20kD-IL-2の実施形態及び関連組成物を含む
選択的Treg刺激因子組成物は、同等のネイティブIL-2の用量では達成できないT
reg対Tef応答の大きさ、持続時間及び特異性を提供するための持続的曝露を達成す
ることができる。
)を説明することを意図しており、限定するものではないことを理解されたい。本開示の
範囲内の他の態様、利点、及び修正は、本開示が属する技術分野の当業者には明らかであ
ろう。
アルデスロイキン(デス-アラニル-1、セリン-125ヒトインターロイキン-2、
図2を参照されたい)と同一のアミノ酸配列を有する組換えヒトIL-2をクローン化し
、発現させ、使用して、ここではRUR20kD-IL-2と称される例示的な選択的T
reg刺激因子組成物を調製する。この配列は、天然の成熟ヒトIL-2配列からアミノ
酸#1(アラニン)を除外しており、アミノ酸#125にシステインからセリンへのアミ
ノ酸変異がある。配列の第1のアミノ酸は、細菌を直接発現させるためのメチオニンであ
る(シグナルペプチドはコードされていない)。発現すると、N末端メチオニンは宿主メ
チオニンアミノペプチダーゼによって除去される。単一のジスルフィド結合が、アミノ酸
58位と105位とのシステイン間に形成される。このタンパク質は大腸菌に由来するた
め、グリコシル化されていない。一部の記載において、複合化されたIL-2組成物は、
幾つかの点で(1,3-ビス(メトキシポリ(エチレングリコール)カルバモイル)-2
-プロパノキシ)-4-ブタンアミド)インターロイキン-2)として記載する場合があ
り、この命名法はPEG化パターン又は混合物を完全に説明するものではないことに留意
されたい。
クシンイミドエステル(1,3-ビス(メトキシポリ(エチレングリコール)10kDカ
ルバモイル)-2-プロパノキシ)-4-スクシンイミジルブタノエート(本明細書では
mPEG2-ru-20K NHSとも称される)は、米国特許第7,887,789号
公報の実施例2に記載されているとおりに調製される。外観:白色から灰白色の粒状粉末
;分子量(Mn)18~22kDa(ポリマーの多分散性による)。1,3-ビス(メト
キシポリ(エチレングリコール)10kDカルバモイル)-2-プロパノキシ)-4-ス
クシンイミジルブタノエートの構造を以下に示す。
関連組成物を含む選択的Treg刺激因子組成物の濃度、量及び投薬レベルはタンパク質
ベースで報告され、タンパク質成分が寄与する質量のみをカウントし、PEG部分が寄与
するものではない。タンパク質ベースを使用することにより、計算に使用される有効なR
UR20kD-IL-2組成分子量は、rIL-2タンパク質のみがカウントされるため
、様々な程度のPEG化を有する複合化されたrIL-2分子の混合物でも15.3kD
aである。
グリコール(PEG)部分に複合化されたrhIL-2(アルデスロイキン配列)からな
るPEG化コンジュゲート混合組成物である。rhIL-2分子あたりのPEG部分の数
(PEG化の程度)は、1分子(ジ又はトリ-PEG化)あたり主に2及び3のPEG部
分の分布であり、少数種は1 PEG(モノ-PEG化)及び4 PEG(テトラ-PE
G化)及び/又はより高PEG化された分子を含み、rhIL-2あたり平均約2.5の
PEG部分をもたらす。各PEG部分の名目上の分子量は20kDaであり、rhIL-
2の分子量は15.3 kDaであるため、名目上のRUR20kD-IL-2の分子量
は65kDaになる。
RUR20kD-IL-2及び関連組成物の調製
mPEG2-ru-20K NHSのストック溶液(100mg/ml)を2mM H
Cl中に調製する。IL-2の典型的なPEG化反応を次のように行う:IL-2(アル
デスロイキン)ストック溶液(1.3mg/ml)115mLを250mLのプラスチッ
クボトルに移し、0.5Mビシン(N,N-ビス(2-ヒドロキシエチル)グリシン)1
5mL、pH9.2及び水0.5mLをIL-2の溶液に加える。PEG化を、19.5
mLのmPEG2-ru-20K NHSストック溶液をIL-2含有溶液に滴下するこ
とで開始する。得られた反応混合物は、1mg/mlのIL-2、50mM ビシン、及
び10モル当量のmPEG2-ru-20K NHS(タンパク質に関して)を含み、p
Hは8.7である。穏やかに攪拌しながら、反応を周囲温度で40分間進行させる。酢酸
2.2mLを加えて反応物のpHを4.1に下げることにより、反応を停止する。
交換クロマトグラフィーによって精製する。コンジュゲーション反応が完了したら、反応
混合物を20倍量の10mM酢酸ナトリウムバッファー(pH4.0)に対して透析する
。透析したサンプルを水で1:4に希釈し、SPFFセファロース樹脂を充填したカラム
にロードする。陽イオン交換クロマトグラフィーに使用されるバッファーは次のとおりで
ある:バッファーA:10mM酢酸ナトリウム(pH4.0)、及びバッファーB:10
mM酢酸ナトリウム、1.0M塩化ナトリウム(pH4.0)。サンプルをロードする前
に、樹脂をバッファーBで洗浄し、バッファーAで平衡化する。ロード後、樹脂を3カラ
ム容量のバッファーAで洗浄する。5カラム容量に0~50%バッファーB、1カラム容
量に25%~50%バッファーB、1カラム容量に50%バッファーB、1カラム容量に
50%~100%、及び1カラム容量に100%バッファーBからなる4段階の勾配を用
いて、28cm/時の流速で複合化された及び複合化されていないIL-2を溶出する。
2及び3(すなわち、二量体及び三量体)のPEG化度(dP)を有するIL-2コンジ
ュゲートを含む画分を、SDS-PAGEによって識別し、プールする。
窒素ガスを使用して濃縮する。最終生成物の組成を、移動相:A、水中0.09%TFA
、及びB、アセトニトリル中0.04%TFAを使用するRP-HPLCによって決定す
る。Intrada WP-RP C18カラム(3×150mm)を流速0.5mL/
分、カラム温度50℃で使用する。精製されたコンジュゲート混合物は、約4.6%(モ
ル)のモノ-PEG化rIL-2、約47.7%(モル)のジ-PEG化rIL-2、約
42.9%(モル)のトリ-PEG化rIL-2、及び約4.8%(モル)のテトラPE
G化IL-2を含むと決定される。溶出時間がx軸に示されている図1を参照されたい。
最終生成物の混合物の平均PEG化度は、2.48(すなわち、約2.5)であると決定
される。最終生成物の混合物には遊離IL-2は検出されない。この調製物は、式AのR
UR20kD-IL-2の組成物の例である。
RUR20kD-IL-2及び関連組成物の代替の調製
所望のRUR20kD-IL-2及び関連組成物の調製は、rhIL-2タンパク質プ
ロセス中間体の発酵及び精製、rhIL-2とPEG試薬開始物質mPEG2-ru-2
0K NHSとの複合化、特定の程度のPEG化を有するIL-2コンジュゲート画分の
精製、並びに本明細書に記載の実施形態による所望の分布のRUR20kD-IL-2組
成物を生成するためのPEG化rhIL-2コンジュゲートの最終の製剤化からなる。
リコール)10kDカルバモイル)-2-プロパノキシ)-4-スクシンイミジルブタノ
エート(本明細書ではmPEG2-ru-20K NHSとも称される)をインターロイ
キン-2(IL-2)タンパク質(アルデスロイキン配列)のリジン残基と反応させるこ
とで調製され、PEG化IL-2コンジュゲートの分布をもたらす。この生成物は、主に
ジ-PEG化及びトリ-PEG化種を含み、モノ-PEG化及び/又はテトラ-PEG化
種の量は少ない。
H4.5バッファー中の精製組換えIL-2(アルデスロイキン配列))を室温まで解凍
する。PEG反応物であるmPEG2-ru-20K NHS(粉末)を、室温で約90
g/Lの2mM HCl溶液に添加することにより可溶化し、最低15分間攪拌する。次
いで、溶液を反応容器に充填する。解凍したIL-2を反応容器に加え、水で適切に希釈
した後、0.75MビシンpH9.7バッファーを加える。反応混合物中の最終的なIL
-2濃度はおよそ1.0g/Lであり、ビシン濃度は目標のpH8.7に達するようにお
よそ50mMである。一般に、タンパク質をPEG化するためのPEG:rhIL-2の
質量比は、pH8.5~9.5のビシン緩衝液中で約10:1~13:1である。mPE
G2-ru-20K NHS溶液の添加が完了してから測定する場合、反応液を22℃で
40分間撹拌を続けながらインキュベートする。インキュベーション期間の終わりに、1
N酢酸を添加して反応を停止し、pHを急速に下げ、すぐに追加の1N酢酸を使用してp
H4.0まで更に段階的に滴定する。クエンチした反応液を水を加えて10倍に希釈する
。希釈したクエンチした反応液を0.22μmフィルターでろ過し、粗生成物を提供する
。
トグラフィーを粗生成物に対して行い、PEG化反応画分を部分的に分離する。SP S
EPHAROSE(登録商標)Fast Flow陽イオン交換クロマトグラフィーカラ
ムを平衡化し、フィードを室温で約5分の滞留時間でロードした後、ロードバッファーで
5CV(カラム容量)で洗浄する。PEG化rhIL-2は樹脂に結合するが、遊離PE
Gは洗い流される。次いで、生成物を、10mM酢酸ナトリウムpH4.0バッファーバ
ックグラウンド中の0~500mM塩化ナトリウムによる線形勾配溶出を使用して溶出す
る。それぞれ0.15CVの画分を収集し、溶出を約1CVから開始する。280nmで
の吸光度がピーク最大値の5%未満になったとき、画分の収集を終了する。各画分におけ
るPEG化画分濃度(すなわち、モノ-PEG化IL-2(単量体)、ジ-PEG化IL
-2(二量体)、トリ-PEG化IL-2(三量体)、テトラ-PEG化IL-2(四量
体)等)を280nmの波長での吸光度によって測定する。PEG化画分の分布は、本明
細書に記載されているようにRP-HPLCによって測定され、モノ-PEG、ジ-PE
G、トリ-PEG、及びそれ以上の成分を含む画分が特定され、必要な画分の再プールを
決定するために使用されて本明細書で提供されるRUR20kD-IL-2組成物、特に
式A~式Eに記載される、標的PEG化画分の分布プロファイルを有する組成物を生成す
る。特定された組成物の選択された画分のアリコート、例えば、ジ-PEG-IL-2、
及びトリ-PEG-IL-2及び/又はモノ-PEG以上のPEGは、本明細書に提供さ
れる標的プロファイルを達成するように計算され、次いで、必要に応じて再プールして、
PEG化画分の望ましい分布を持つ生成物を有するRUR20kD-IL-2組成物を得
る。或いは、精製スキームを考案することができ、それにより、溶出及び収集は、再プー
ルする必要なしに、本明細書に記載の実施形態による所望のプロファイルを提供し得る。
次いで、所望の(及び/又は再プールされた)クロマトグラフィー精製した調製物を濃縮
し、タンジェント流ろ過(TFF)を用いて10mM酢酸ナトリウム、150mM塩化ナ
トリウム、2%重量/体積スクロース、pH5.0にダイアフィルトレーションして、R
UR20kD-IL-2組成物の原薬の最終目標濃度1mg/ml(タンパク質ベース)
を達成する。
イルを評定するために、RP-HPLCを含む本明細書に記載される方法によって検証す
る。式A~式EのRUR20kD-IL-2組成物に関する本明細書の仕様に従った組成
物の調製物を、以下の表1に収載される1番~4番の製品バッチの例によって示す。属性
のアッセイは当業者に知られており、及び/又は実施例1-B~実施例1-Iに記載され
ているか、そうでなければ本明細書に記載されている。適切な履歴標準サンプル組成物を
確立し、後続の調製での比較に使用する。
異なるバッチからのサンプルの実例分析の要約
%未満の遊離の非結合IL-2(より好ましくは、検出可能な遊離IL-2なし)、5%
以下のモノ-PEG化IL-2、28%~約60%のジ-PEG化IL-2、約24%~
約65%のトリ-PEG化IL-2、12%以下のより高PEG化されたIL-2種、及
び80%以上の組み合わされたジ-PEG化IL-2及びトリ-PEG化IL-2種を含
有する。
ル%未満の遊離IL-2、約2.5~約4.5モル%のモノ-PEG化IL-2、約35
~約50モル%のジ-PEG化IL-2、約38~約46モル%のトリ-PEG化IL-
2、約3~約10モル%のより高PEG化されたIL-2種、及びあわせた合計が約80
~約95モル%のジ-PEG化及びトリ-PEG化IL-2を含有する。
スで5%以下のモノ-PEG化IL-2と、28%~約60%のジ-PEG化IL-2と
、約24%~約65%のトリ-PEG化IL-2と、12%以下のより高PEG化された
IL-2種を含有する。好ましくは、組成物は、80%以上の組み合わされたジ-及びト
リ-PEG化IL-2コンジュゲートを含む。
~約4.5モル%はモノ-PEG化IL-2を含み、約35~約50モル%はジ-PEG
化IL-2を含み、約38~約46モル%はトリ-PEG化IL-2を含み、約3~約1
0モル%はより高PEG化されたIL-2種を含む。好ましくは、組成物は、あわせた合
計が約80~約95モル%のジ-PEG化及びトリ-PEG化IL-2を含む。
~約3.8モル%はモノ-PEG化IL-2を含み、約44~約48モル%はジ-PEG
化IL-2を含み、約41~約44モル%はトリ-PEG化IL-2を含み、約7~9モ
ル%はより高PEG化されたIL-2種を含む。好ましくは、組成物は、あわせた合計が
約87~約90モル%のジ-PEG化及びトリ-PEG化IL-2を含む。
~約3.8モル%はモノ-PEG化IL-2を含み、約44~約48モル%はジ-PEG
化IL-2を含み、約41~約44モル%はトリ-PEG化IL-2を含み、約7~約9
モル%はより高PEG化されたIL-2種を含み、ここで、当該組成物は、リジンK7又
はK8又はK31又はK75の1つに付着したPEG部分を有するモノ-PEG化IL-
2コンジュゲートの混合物を含む。好ましくは、組成物は、あわせた合計が約87~約9
0モル%のジ-PEG化及びトリ-PEG化IL-2を含む。
~約3.8モル%はモノ-PEG化IL-2を含み、約44~約48モル%はジ-PEG
化IL-2を含み、約41~約44モル%はトリ-PEG化IL-2を含み、約7~約9
モル%はより高PEG化されたIL-2種を含み、ここで、当該組成物は、リジンK7に
付着したPEG部分を有するモノ-PEG化IL-2コンジュゲートを含む。好ましくは
、組成物は、あわせた合計が約87~約90モル%のジ-PEG化及びトリ-PEG化I
L-2を含む。
逆相高速液体クロマトグラフィーによるRUR20kD-IL-2組成物の純度及び特
性評価
ダイオードアレイ検出器(215nmのUV)を備えたAgilent 1200シリ
ーズ機器を用いて、逆相高速液体クロマトグラフィー(RP-HPLC)を使用し、RU
R20kD-IL-2組成のサンプルのクロマトグラフィー純度及び同一性を評定する。
使用するカラムは、ACE 3 Phenyl-300カラム(Mac-Mod Ana
lytical Inc.)(又は他の適切なカラム)で、溶離液の流量は0.6mL/
分である。RP-HPLCは、2つの移動相:(1)移動相A、0.1%ギ酸水溶液、及
び(2)移動相B、0.1%ギ酸のアセトニトリル溶液の混合物を含む勾配を使用し行わ
れる。線形勾配は、60%移動相A/40%移動相Bから40%移動相A/60%移動相
B、20%移動相A/80%移動相B、60%移動相A/40%移動相Bの範囲であった
。希釈剤/配合バッファーの成分は、10mM酢酸ナトリウム、200mM塩化ナトリウ
ム、2%スクロース、pH5.0である。
ァーで1.0mg/mlに希釈する。製剤バッファーの少なくとも1つのブランク対照を
、注入によって最初にRP-HPLCに供し、RUR20kD-IL-2組成物に関連す
るピークの分析に干渉しないことを確実にする。次に、RUR20kD-IL-2組成物
標準物質又は対照を5回注入した。次に、RUR20kD-IL-2組成物サンプルを注
入する。RUR20kD-IL-2組成物標準物質/対照を、6回のサンプル注入ごとに
、注入順序の最後に注入する。
L-2組成物を含む最初の5つの標準物質注入の保持時間の%相対標準偏差(RSD)は
2.0%以下である。ジ-PEG及びトリ-PEG成分の全ての標準物質RUR20kD
-IL-2組成物注入の%RSD面積パーセントは5.0%以下である。標準及びサンプ
ルの注入からの全てのRUR20kD-IL-2組成物のピークが統合されている。具体
的には、1.0mg/mlの濃度のRUR20kD-IL-2組成物の場合、0.5%の
検出限界(LOD)を超えるジ-PEG及びトリ-PEG RUR20kD-IL-2組
成物種、及び0.3%LODを超えるrhIL-2ピークがそれぞれ統合されている。R
UR20kD-IL-2の濃度が1.0mg/mlの場合、定量限界(LOQ)はジ-P
EG及びトリ-PEG RUR20kD-IL-2種で1.0%、rhIL-2で0.5
%である。分析結果を下記表2(6サンプル)及び表3(12サンプル)に示す。
ルからのモノ-PEG、ジ-PEG、トリ-PEG、テトラ-PEG及びペンタ-PEG
画分の面積パーセント
プルからのモノ-PEG、ジ-PEG、トリ-PEG、テトラ-PEG及びペンタ-PE
G画分の面積パーセント
サイズ排除高速液体クロマトグラフィーによるRUR20kD-IL-2組成物の純度
及び特性評価
ダイオードアレイ検出器(280nmのUV)及びYarraSEC-2000カラム
(Phenomenex)を備えたAgilent1200シリーズ機器を用いて、0.
225mL/分の溶離液流量で、サイズ排除高速液体クロマトグラフィー(SEC-HP
LC)を使用し、RUR20kD-IL-2組成物の純度を決定し、特性評価をすること
もできる。移動相は、アセトニトリルを含む80:20の体積比の0.2M酢酸アンモニ
ウム(pH5.5)である。希釈剤/製剤バッファーは、10mM酢酸ナトリウム、20
0mM塩化ナトリウム、2%スクロースを含み、pHは5.0であった。
ッファーで1.0mg/mlに希釈する。サンプルは、溶液中5℃で最大5日間安定であ
る。
RP-HPLCに供し、RUR20kD-IL-2に関連するピークの分析に干渉しない
ことを確実にする。次に、RUR20kD-IL-2組成物、システム適合性溶液を注入
して、凝集体又は高分子量種がテトラ-PEG RUR20kD-IL-2画分から確実
に分離されるようにする。続いて、RUR20kD-IL-2組成物の標準物質又は対照
を5回注入する。次に、RUR20kD-IL-2組成物サンプルを注入する。RUR2
0kD-IL-2組成物標準物質/対照を、6回のサンプル注入ごとに、注入順序の最後
に注入する。
IL-2フラクションの保持時間の%RSDは2.0%以下である。全ての標準物質の注
入に対するジ-PEG及びトリ-PEG RUR20kD-IL-2の%RSD面積パー
セントは5.0%以下である。標準及びサンプルの注入からの全てのRUR20kD-I
L-2画分のピークが統合されている。具体的には、1.0mg/mlの濃度のRUR2
0kD-IL-2組成物の場合、1.0%の検出限界(LOD)を超えるジ-PEG及び
トリ-PEG RUR20kD-IL-2画分が統合される。1.0mg/mlの濃度の
RUR20kD-IL-2の場合、3.0%LOQを超えるジ-PEG及びトリ-PEG
RUR20kD-IL-2のみが報告された。
表中にRUR20kD-IL-2組成物のモノ-PEG、ジ-PEG、トリ-PEG、テ
トラ-PEG、及びペンタ-PEG画分のピーク面積を示す。
、トリ-PEG、テトラ-PEG、及びペンタ-PEG成分の%ピーク面積
G、ジ-PEG、トリ-PEG、テトラ-PEG、及びペンタ-PEG画分の%ピーク面
積
々なサンプルの代表的な分析の要約を表1に示す。わかるように、RUR20kD-IL
-2組成物調製物は、PEG化画分の混合物(すなわち、モノ-PEG化、ジ-PEG化
、トリ-PEG化、テトラ-PEG化、ペンタ-PEG化等)に関して、良好なバッチ間
の一貫性を実証する。
SDS-Page
SDS-PAGEを、RUR20kD-IL-2組成物の同一性の確認に利用する。R
UR20kD-IL-2組成物のサンプル、分子量マーカー、及び適切なRUR20kD
-IL-2組成物の標準物質を、NuPAGE Bis-Trisゲルにロードし、ゲル
内を泳動させる。電気泳動後、GelCodeTM Blue Safe Protei
n Stainを使用してゲルを染色する。ゲル泳動のバンドパターンを標準物質と比較
し、サンプルに新たなバンドがないことを確認すると、サンプルの同一性が確認される。
最も強い2つのバンドは、トリ-PEG化画分とジ-PEG化画分に対応する。レーンの
一番上のバンドはより高PEG化された変種に対応し、最も低いバンドはモノ-PEG化
変種に対応する。
表面プラズモン共鳴(SPR)を使用したIL-2Rαβに対する親和性、及びヒトI
L-2Rαβα複合体を発現するU-2 OS細胞における効力。
-100表面プラズモン共鳴を使用して決定する。この手法では、Biacore CM
5センサーチップの表面をN-ヒドロキシスクシンイミド1-エチル-3-(3-ジメチ
ルアミノプロピル)-カルボジイミド(NHS EDC)の1:1複合体で活性化して、
活性NHSエステルを生成する。酢酸ナトリウム中のヤギ抗ヒトFc抗体、pH4.0バ
ッファーがチップの表面に共有結合により付着している。残留NHSエステルを1Mエタ
ノールアミンでクエンチする。IL-2-Rα-Fc(ヒトIL-2Rα-Fcキメラ;
Symansis)とIL-2Rβ-Fc(ヒトIL-2Rβ-Fcキメラ;Syman
sis)の1:1混合物を、0.1%BSAを含むHBS-EPバッファー(1mM H
EPES、pH7.4、15mM NaCl、0.3mM EDTA、0.0005%体
積/体積界面活性剤P20)を使用してチップに捕捉する。RUR20kD-IL-2組
成物を0.1%BSAを含むHBS-EPバッファーで連続希釈し、センサーチップ上に
注入する。動的結合親和性を、3分間の溶液(kon)、続いて3分間洗浄(koff)
の適用中によって測定する。koffとkonの比率を、動的結合親和性KDを計算する
ために使用する。RUR20kD-IL-2組成物の2つのバッチの3回の分析の結果を
表6に示す。結合親和性及び結合率は、2つの原薬ロットで一貫している。
合親和性
に使用できる細胞アッセイ形式であり、培養細胞よりも堅牢で一貫性のある細胞応答を提
供する。酵素(β-ガラクトシダーゼ)フラグメント補完アッセイ(カナダのDisco
verX CorporationによるPathHunter(登録商標)プラットフ
ォーム)を使用して、薬物/リガンド-受容体相互作用を測定する。RUR20kD-I
L-2組成物の効力を、ヒトIL-2Rαβα複合体を発現するU-2 OS細胞で測定
する。アッセイの基礎は、単独では不活性である開裂酵素(split enzyme)
のフラグメントを利用する。2つの酵素フラグメントがIL-2Rβ又はIL-2Rγサ
ブユニットの細胞内ドメインに融合し、受容体とのリガンド相互作用により、受容体サブ
ユニットが近接して酵素活性を回復する。基質を加えると、酵素が作用して発光シグナル
を生成する。酵素フラグメント補完による受容体の活性化を、サンプル及び標準を細胞と
約6時間インキュベートした後に測定する。RUR20kD-IL-2組成物は、高親和
性ヘテロ三量体αβγIL-2受容体(IL-2R)により低用量のシグナル伝達を提供
する。
RUR20kD-IL-2組成物のPEG化部位占有率
2つのロットに由来するRUR20kD-IL-2組成物のPEG化部位占有率を、ペ
プチドマッピングによるRUR20kD-IL-2組成物とrhIL-2との直接比較に
よって特性評価する。RUR20kD-IL-2消化物において、リジン含有ペプチドは
PEG化され得て、標準rhIL-2消化物中の同じペプチドと比較して、より少ない存
在量を有する対応する天然のリジン含有ペプチドによって反映され得る。したがって、P
EG化部位の占有率は、分析されたRUR20kD-IL-2消化物中の天然ペプチドの
存在量の減少に基づいて計算することができる。更に、代用物質のペプチドマッピングを
、部位占有率の追加確認に使用できる。
では、RUR20kD-IL-2組成及びrhIL-2標準対照サンプルをGluC及び
GluC/トリプシンで同時に消化した後、LC-UV/MS/MS分析を行ってペプチ
ドの同定と存在量を提供する。RUR20kD-IL-2組成とrhIL-2とのペプチ
ドマッピングの比較を用いて、PEG化部位の占有率を決定する。
組成とrhIL-2分析の両方で標準(複数の場合もある)として選択する。ペプチドの
相対強度は、それらの標準(複数の場合もある)に対する正規化である。リジンによるネ
イティブペプチド(RR)の相対存在量の減少は、ペプチドの相対強度によって計算され
る(式1)。リジンでのPEG化部位の占有率は、リジンを含むペプチドによる平均RR
である。
(標準ペプチド)
RUR20kD-IL-2組成の代用物として使用される物質は、単分散4kD PE
GのrhIL-2のリジンへの複合化による結合生じる生成物である。RUR20kD-
IL-2組成物のPEG化プロファイルを模倣するため、代用物を同じ複合化リンカーを
使用して調製し、複合化反応を、RUR20kD-IL-2組成物を調製するために使用
したのと同じ反応条件下で実施した。LC MS/MSベースのGluCマッピング及び
代用物のトリプシンマッピングは、PEG化されたリジンを識別し、RUR20kD-I
L-2を裏付ける情報を提供する。
%の配列包括度を有する。RUR20kD-IL-2のGluCマップをrhIL-2と
直接比較すると、RUR20kD-IL-2の11個のリジンのうち4個の相対的定量が
得られ(表7を参照されたい)、ここで、リジン7及びリジン8はペプチドマップで1つ
の部位としてカウントした。GluCマップの残りのリジンを含むペプチドは、部位差別
化(site differentiation)のないPEG化の証拠を示している。
GluC/トリプシンマップでリジンを含むペプチドを更にトリプシンで切断すると、K
31、K34、K42及びK47でPEGが占有される。RUR20kD-IL-2及び
rhIL-2によるGluC/トリプシンマッピングクロマトグラムを比較すると、これ
らのペプチドが大幅に減少していることがわかる(表7を参照されたい)。K48部位の
PEG化占有率は、酵素による切断の誤り(mis-cleavage)が原因であり、
トリプシン/GluCマップでは利用できない(N/A)。
ジンを含むペプチドが高い質量精度(5ppm未満)で同定される。RUR20kD-I
L-2及び4k PEG化rhIL-2代用物の直接ペプチドマッピングの結果をあわせ
ると、K7、K31及びK75が主要なPEG化部位であることがわかる(表8を参照さ
れたい)。RUR20kD-IL-2組成物のあまり優勢でないPEG化部位は、K8、
K34、K42、K47、K53及びK63である可能性がある。K48はPEG化され
ている可能性があり、K96は未定である。
開発ロットで同等である(表7を参照されたい)。GluCマッピングとトリプシン/G
luCマッピングとを組み合わせたアプローチにより、RUR20kD-IL-2組成物
のコンジュゲートの幾つかの主要なPEG化部位に関するロット間情報が提供される。
RUR20kD-IL-2組成物におけるPEG化部位占有率:GMPロット及びDE
MOロット
るPEG化部位占有率の要約
RUR20kD-IL-2組成物の液相安定性
RUR20kD-IL-2組成物(2%(重量/体積)スクロースを含む10mM酢酸
ナトリウム、200mM塩化ナトリウム、pH5中の約1mg/mlのrhIL-2当量
)1.0mg/mlの溶液の安定性を、室温(周囲実験室条件)、5℃(冷蔵)及び-2
0℃の3つの異なる保管条件下で、前述のようにRP-HPLCによって1、3、5及び
7日間の時点で評価する。
kD-IL-2組成物サンプル溶液に対して評価する。室温、5℃及び-20℃で最大7
日間保管したRUR20kD-IL-2組成物サンプルのジ-PEG及びトリ-PEG種
は、名目上の-70℃サンプル保管と比較して最大1%の相対差を示す。RUR20kD
-IL-2の成分PEG化種(モノ-PEG、テトラ-PEG、ペンタ-PEG種)の割
合が少ない場合の相対差(Rel.Diff.)は最大8%である。これは、これらの代
表的な保管条件下で保管された溶液サンプルが安定していることを示している。
in vitro法は、IL-2受容体複合体の代表である受容体の活性化後の生物学
的活性を特性評価するための細胞ベースのアッセイを含む、RUR20kD-IL-2組
成物の生物学的効力の更なる測定及び生物学的特性評価に使用され得る。
モデルを使用して評価する。RUR20kD-IL-2組成物サンプルの効力を、50%
有効濃度(EC50)比により標準物質と比較して測定する。
CTLL-2細胞増殖アッセイ
細胞増殖アッセイでは、サンプル及び標準を約26時間インキュベートした後、CTL
L-2細胞を使用してin vitroで細胞増殖を測定し、ここでは細胞増殖は、発光
アデノシン三リン酸ベースのアッセイ(CellTiter-Glo(登録商標)、ウィ
スコンシン州のPromega)で測定される。例えば、この細胞ベースの増殖アッセイ
では、rhIL-2タンパク質に対して用量依存的な増殖応答を示すCTLL-2細胞株
を使用する。rhIL-2はアッセイ対照として使用され、この方法ではRUR20kD
-IL-2組成とは異なる濃度範囲で調製される。このアッセイを96ウェルプレートフ
ォーマットで行う。CTLL-2細胞を飢餓培地でrhIL-2の飢餓状態にし、37℃
及び5%CO2インキュベーター内で20±3時間一晩インキュベートする。飢餓状態の
細胞を96ウェルプレートにプレーティングし、RUR20kD-IL-2組成物の希釈
系列を細胞に供給し、37℃及び5%CO2インキュベーターで更に25±3時間インキ
ュベートする。RUR20kD-IL-2組成により誘導される各ウェルの細胞増殖を、
PromegaのCellTiterGlo(登録商標)検出キットを使用して測定する
。CellTiterGlo(登録商標)は、各ウェルに存在するATPの量に比例する
発光シグナルを生成し、これは、存在する生細胞に正比例する。発光シグナルをSpec
tramaxM5プレートリーダーで読み取る。RUR20kD-IL-2組成物の標準
物質及び各サンプルの用量反応曲線を、発光シグナル(y軸)を濃度(x軸)に対してプ
ロットすることによって生成する。プロットを、4パラメータのロジスティック非線形回
帰モデルに適合させる。Parallel Line Analysis(PLA)ソフ
トウェアを使用して、回帰の有意性である勾配の差(平行度)に対する同等性試験を評定
し、同じプレート内の標準物質に対するサンプルの効力比を計算する。
リン酸-STAT5の活性化
受容体結合後のリン酸化STAT5アッセイでは、下流の細胞シグナル伝達がリン酸化
を介してシグナル伝達性転写因子5(STAT5)を活性化し、遺伝子発現を促進して細
胞増殖を誘導する。リン酸-STAT5の活性化は、IL-2依存性マウスTリンパ球細
胞株であるCTLL-2細胞において、サンプル及び標準の約10分間の処理に応答して
、リン酸-STAT5/全STAT5マルチプレックスアッセイ(メリーランド州のMe
so Scale Discovery)を使用して測定される。
in vivo研究:マウスにおける単回用量PK/PD研究
RUR20kD-IL-2組成物によるTregの選択的刺激を、マウスで実証するこ
とができる。C57BL/6マウス(n=4/群)に、0.03、0.1及び0.3mg
/kgの用量のRUR20kD-IL-2組成物の単回皮下投与を行う。投与後、投与後
1~7日目及び10日目に血液及び脾臓のサンプルを収集する。より具体的には、各時点
で、血液及び脾臓のサンプルを収集し、サンプルをプールし、フローサイトメトリーによ
るリンパ球細胞集団に対する薬物作用の薬力学的分析について評定し(例えば、実施例5
を参照されたい)、ビヒクル対照と比較した倍率変化として表す。細胞数の変化に加えて
、機能マーカー及び活性マーカーを定量する。最後に、血漿薬物濃度も評定する。
と脾臓の両方においてCD4+Tregの用量依存的増加をもたらし、投与の4日後に細
胞数のピーク増加をもたらす。試験した最高用量(0.3mg/kg)では、Treg動
員に対する持続的な効果が達成され、Tregレベルは投与後7日~10日までベースラ
インレベルに戻らない。血液中では、試験した最高用量の投与後にNK細胞が上昇するが
、CD4T細胞への変化はわずかであり、CD8T細胞のわずかな減少が起こる(図4A
~図4C)。B細胞及びCD8T細胞は、試験した最高用量の投与後にわずかに減少し、
この用量では、NK細胞の増加も2倍未満になる。Tregの機能及び活性のマーカー(
図5A及び図5B)は、試験した最高用量で、RUR20kD-IL-2組成物の投与に
より、CD25及びFoxP3の平均蛍光強度(MFI)により測定されるTreg活性
化が増加することを示している。Treg数は投与後4日まで最大値に達しないが、これ
らの活性化マーカーは投与後最初の2日で最大値に達し、RUR20kD-IL-2の血
漿曝露に従ってゆっくりと減少する。Ki67で測定した急速に増殖するTregの割合
は、投与後2日で急速に上昇し、6日目まで持続してベースラインレベルに戻った。更に
、細胞表面マーカー誘導性T細胞共刺激因子(ICOS)を発現するTregの割合も増
加し、これは、ICOSの発現が自己免疫環境におけるTregの抑制活性の増加に関連
しているという注目すべき知見である。Ki67及びICOSの増加は、ピークRUR2
0kD-IL-2組成物濃度に比べていくらか遅れているように見えるが、ベースライン
レベルへの復帰は、この前臨床マウス研究における血漿濃度の減少と一致している。
in vitro Treg抑制アッセイ
この研究の目的は、制御性T細胞の阻害機能を評定することである。皮下投与後1日~
7日及び10日に、ナイーブ及びRUR20kD-IL-2組成物で治療したC57BL
/6マウスからTregを磁気的に分離する。Treg及びTconを1:2~1:51
2の範囲の比率で3日間共培養する。アッセイの最後の16時間に3H-チミジンの取り
込みによって細胞増殖を評価し、プレート対照と比較した増殖細胞の割合を計算する。
のRUR20kD-IL-2組成物又は投薬後の指定された時間にビヒクルで処理された
雌性C57BL/6マウス(n=4マウス/治療群/時間)から収集する。単一細胞分離
物を各脾臓に対して調製し、得られた脾細胞混合物を各時点で各用量群に対してプールす
る。1つの脾臓に相当するプールされたサンプルの一部を、免疫細胞プロファイリングの
ために分注する。残りの脾細胞調製物を、制御性T細胞(Treg)の分離に利用する。
CD4+CD25+Tregを、CD4+CD25+制御性T細胞分離、マウス、キット
(ドイツ国ベルギッシュグラートバッハのMiltenyi Biotec)を製造元の
推奨に従って利用する磁気活性化セルソーティング(MACS)によってマウス脾臓から
分離する。CD4+T細胞を陰性選択し、CD4+CD25-T細胞とCD4+CD25
+Tregとに分離する。ナイーブな従来のCD4+CD25-T細胞(Tcon)を、
ナイーブCD4+T細胞分離キット(Miltenyi Biotec)を使用し、メー
カーの推奨手順に従って、未治療の動物より採取したマウス脾臓からMACSによって分
離する。
mMピルビン酸ナトリウム、0.5μMβ-メルカプトエタノール、及び1×抗生物質/
抗真菌剤(100単位/mLペニシリン、100μg/mLストレプトマイシン及び25
0ng/mLアンホテリシンB)を添加したRPMI1640培地で行う。5×104T
conを、抗CD3及び抗CD28(T Cell Activation/Expan
sionキット、マウス、Miltenyi Biotec)でコーティングされたビー
ズで、96ウェル丸底プレートの100μl培地において各Tconに対してビーズ2個
の比率で刺激する。Tregsの抑制能力を、Tconに様々な比率(Treg:Tco
nの比率が2:1~1:512)でTregを追加することによって評定する。各Tre
g:Tcon比を3回試験する。細胞を加湿雰囲気下で37℃、5%CO2で72時間共
培養し、アッセイ終了の16時間前に、0.5μCi[3H]-チミジンをウェルに添加
する。取り込まれなかった[3H]-チミジンを含まない細胞を洗浄した後、マイクロプ
レートシンチレーションカウンター(TopCount NXT、Perkin Elm
er)を使用して、チミジンの取り込みを1分あたりのカウント(CPM)として測定す
る。個々のCPM値を、4つの最低Treg:Tcon希釈で記録した平均CPMで割る
ことにより、最大増殖に対して正規化する。濃度応答曲線を、Prism(登録商標)6
.03(カリフォルニア州サンディエゴのGraphPad Software)で4パ
ラメータ非線形回帰及び1/y2重み付けを使用してグラフ化する。
された脾臓Tregは抑制能力を示し、最大の抑制は1:2の比率で発生する。しかしな
がら、RUR20kD-IL-2組成物の投与後のこれらの時点で分離されたTregは
、特に1:8を超える比率で、Tcon増殖の減少によって証明されるように、大幅に増
加した抑制能力を示す。1:2の比率でTconとともに培養された単離されたTreg
の相対的抑制能力も経時的に評定する(図7)。RUR20kD-IL-2投与後、増加
したTreg抑制活性は4日間維持された後、ビヒクル対照治療群によって示されるベー
スライン活性に戻る。
マウスKLH DTH有効性モデルにおけるRUR20kD-IL-2組成物の評価
T細胞抗原による炎症を抑制するRUR20kD-IL-2組成物の投与によるTre
g誘導の能力を評定するため、Balb/cマウス(n=6~10/群)を遅延型過敏症
(DTH)のモデルで利用する。完全フロイントアジュバント(CFA)及び不完全フロ
イントアジュバントをそれぞれ1:1:1の比率で含むエマルションに、100μgのキ
ーホールリンピットヘモシアニン(KLH)を含む100μlの皮下注射を用いて、マウ
スを背部の皮下で感作する。5日後、チャレンジの前にベースラインの耳介厚を測定し、
左耳に10μgのKLHを皮内投与し、右耳は未治療のままにする。耳介厚の測定値を、
全ての群でKLHチャレンジの24時間、48時間、72時間及び96時間後にキャリパ
ーで測定する。RUR20kD-IL-2組成物を、感作時の0日目に、3日ごとに0.
003mg/kg~0.3mg/kgの範囲の皮下用量で投与する。シクロスポリン(1
0mg/kg、単回用量)からなる陽性対照を0日目に投与した。
耳介厚の平均増加が48時間で最大14mm超に達する。ナイーブのチャレンジされてい
ない耳介は、研究の過程で厚さの変化を示さなかった。この研究における感作及びチャレ
ンジ期間を通してRUR20kD-IL-2組成物の投与は、ビヒクル対照と比較して各
時点での炎症の減少によって証明されるように、耳介の腫れの有意な用量依存的減少をも
たらす。チャレンジ後の効果をより定量的に評定するために、厚さの変化のAUCを各治
療群(AUC0-96時間)について計算する。図8A及び図8Bに示されるように、最
小有効量は0.01mg/kg q3dであり、最大効果は0.3mg/kg q3dで
達成される。ビヒクル群からの統計学的に有意なAUC値は、アスタリスクで示される(
p<0.05;ANOVA、Tukey)。まとめると、このデータは、投与後に達成さ
れたTregの動員及び活性化の増強が、in vivoでの抗原駆動性炎症機構を抑制
できることを示している。
いてin vivo投与後に評定する。マウスでは、RUR20kD-IL-2組成によ
り、Tregが用量依存的に増加し、投与後4日に最大に達する。マウスにおいてRUR
20kD-IL-2組成物によって誘導されたTregのフローサイトメトリー分析は、
FoxP3及びCD25平均蛍光強度(MFI)等のTreg活性化のマーカーが、投与
後最初の2日以内に最大値に達し、RUR20kD-IL-2組成物の血漿曝露に応じて
経時的に徐々に減少することを示した。活発に増殖しているTregの割合も、投与後2
日以内に最大値に達し、6日目まで持続する。Treg機能マーカーICOSの発現は、
3日目にピークに達して、7日目までにベースラインに戻る。治療を受けたマウスの脾臓
から分離されたTregは、投与後最初の4日間で抑制能力を大幅に増加させた後、ベー
スレベルの活性に戻る。実施例1のRUR20kD-IL-2組成物は、3日ごとに投与
された場合、遅延型過敏症(DTH)マウスモデルにおいて抗原駆動性炎症反応を抑制し
た。
カニクイザルにおける単回用量研究
この研究では、雌1匹と雄1匹のカニクイザルに、25μg/kgのRUR20kD-
IL-2組成物を皮下投与する。Treg細胞数と活性化状態のフローサイトメトリーに
よる評定のため、治療前(-6及び-1日目)と治療後の複数の間隔で各動物から一連の
血液サンプルを採取する。
収集する:治療前(-6及び-1日目)、治療後2日目、3日目、4日目、5日目、6日
目、7日目、10日目、14日目、21日目。静脈穿刺サンプルを、抗凝固剤K2EDT
Aを含むチューブに収集し、チューブを移送するまで湿った氷の上に置く。全血サンプル
を、以下のパネルを使用したフローサイトメトリーによって分析し、サンプルは以下につ
いて分析する:
T細胞パネル:CD45/CD3/CD4/CD8/ICOS
T/B/NKパネル:CD45/CD3/CD16/CD20
pSTAT5パネル:CD3/CD4/CD8/CD25/CD127/pSTAT5
Tregパネル1:CD3/CD4/CD8/CD25/FoxP3/Ki67
Tregパネル2:CD3/CD4/CD8/CD25/FoxP3/Helios
コンピュータ化されたシステムを研究の実施に使用することができ、例えば、フローサ
イトメトリーデータの取得にはBD FACSCanto II/FACSDiva L
EGENDPlexデータ分析ソフトウェアを使用でき、フローサイトメトリーデータ分
析にはDe Novo FCS Expressソフトウェアを使用できる。
図9に示されるように、Treg細胞数は、投与後に実質的に増加し、投与の7日後にそ
れらの最大レベルに達し、14~21日目までにほぼd-1レベルに戻る。図9A中、白
抜きの三角形で示されているように、Ki67で測定した場合、RUR20kD-IL-
2組成物によって誘導されたほぼ全てのTregは増殖性である。
状態は、FoxP3及びCD25の平均蛍光強度(MFI)によって更に測定される。C
D25 MFIは、6日目に最大値に達し、その後10日目までプラトーに達した後、2
1日目までにほぼ投与前のレベルに戻る。FoxP3 MFIはまた、投与後6日目に最
大に達し、その後14日目~21日目で投与前のレベルにほぼ戻る。まとめると、これら
のデータは、Treg活性化の増加を伴って、同様の大きさの血中Treg誘導が見られ
ることから、マウスでの所見のカニクイザルへのトランスレータビリティ(transl
atability)を示している。しかしながら、マウスでの発見とは対照的に、カニ
クイザルでの影響は本質的により長くなる。
マウス、ラット及びサルにおける単回用量の薬物動態及び毒物動態
マウス、ラット、及びサルにおけるRUR20kD-IL-2組成物の単回用量の薬物
動態/毒物動態の結果を要約する。投与計画の詳細を表10に示す。
要
リウム、200mM塩化ナトリウム、及び2%スクロース(pH5)である。ラット及び
サルの研究では、RUR20kD-IL-2組成物のビヒクルは、50mM酢酸ナトリウ
ム、200mM塩化ナトリウム、及び2%スクロース(pH5)である。
0.33~1.0日、1.0~2.3日及び2.0日のTmaxでゆっくりと吸収される
(表11)。RUR20kD-IL-2組成の血漿曝露は、マウス及びラットで多かれ少
なかれ用量を比例的に増加させる。バイオアベイラビリティは、ラットで29.8~46
.0%の範囲、サルで86.2%である。
ラットで増加するようであり、25.1(0.01mg/kg)~52.6mL/kg
1.0mg/kg)の範囲であった(表12)。全体として、Vssはラット及びサルの
種特異的血漿量よりもそれぞれ1倍~2倍及び2倍~4倍大きく、RUR20kD-IL
-2が主に血管空間に留まっていることを示唆している。
g、サルで0.245mL/時/kg)(表)。静脈内又は皮下投与後、RUR20kD
-IL-2組成物濃度は、マウスで1.85~2.24日、ラットで1.25~2.44
日、及びサルで10.4~12.9日の半減期を伴って単指数関数的減衰を示すようであ
る(表11及び12、並びに図10A、図10B)。RUR20kD-IL-2の腎排泄
は、糸球体フィルターの分子量カットオフに近い平均分子量63kDaであるため、低い
と予測される。
ルにRUR20kD-IL-2組成物を単回皮下投与した後の平均±SE血漿薬物動態/
毒物動態パラメータ
L-2組成物を単回静脈内用量を投与した後の平均±SE血漿薬物動態パラメータ
マウスでの比較研究
C57BL/6マウスに、0.03、0.1及び0.3mg/kgのRUR20kD-
IL-2組成物の単回皮下用量を投与するか、又は0.03mg/kg(qddx5)、
0.1mg/kg(qdx5)及び1mg/kg(qdx5)の投与量の未修飾IL-2
(アルデスロイキン)を投与する、実施例2に記載の研究と本質的に同様の研究を実施す
る。投与後、血液及び脾臓のサンプルを収集し、フローサイトメトリーによるリンパ球細
胞集団に対する薬力学的分析のために分析して、ビヒクル対照と比較した倍率変化として
表す。結果を図10A及び図10Bに示す(RUR20kD-IL-2組成物は「RUR
-IL-2」と表示され、アルデスロイキンは「IL-2」と表示される)。
全身性エリテマトーデス(SLE)のマウスモデルにおけるRUR20kD-IL-2
組成物の有効性の調査
この研究は、この疾患の最も一般的に研究されているマウスモデルであるMRL/Mp
J-Faslprマウスモデル(Perry D.,ら,J Biomed Biote
chnol 2011:271694)を使用して、SLEの発症と進行及びそれに関連
する特徴に対するRUR20kD-IL-2組成物の有効性を決定するために実施される
。MRL/MpJ-Faslprマウスモデルは、リンパ節腫大、IgGレベルの上昇、
抗核抗体産生、タンパク尿、及び糸球体の炎症による腎不全等、ヒトSLEの病態を反映
する自己免疫疾患を発症する。実施例1に記載のRUR20kD-IL-2組成物のスト
ック溶液を、注射用滅菌水(SWFI)、USPで調製;pH5.0±0.1)に調製し
たビヒクル(透明な液体;10mM酢酸ナトリウム/200mM塩化ナトリウム/2%(
重量/体積)スクロース)中に供給される試験品(1.58mg/mL)として使用する
。投与日に、適切な量の試験品を取り出し、ビヒクルで希釈して、所望の投与濃度(0.
03mg/kg用量及び0.3mg/kg用量)に到達させる。投薬量は5mL/kgで
あった。この研究に使用した動物は、MRL/MpJ-Faslprマウス及びMRL/
MpJナイーブの雌性マウスで、6週齢~8週齢である。動物を無作為化に治療群に割り
当てる。治療群を、以下の表13に記載する。45匹のMRL/MpJ-Faslprマ
ウスを、実験開始前の体重及び尿中のタンパク質含有量のレベルに基づいて、3群(群2
~4でそれぞれ15匹)に無作為化する。群2~4の動物には、表6に記載されているよ
うに、ビヒクル又は試験品を皮下投与する。群1-MRL/MpJマウスは陰性対照とし
てとしてビヒクルを受ける。
プルを収集して処理した。体重を、研究の開始から週に2回測定し、終わりまで継続する
。
レベルを、Siemens Clinitek Status Analyzerを使用
して測定する。
の腹腔内注射により全てのマウスに麻酔をかける。血液サンプルを採取し、10000r
/分で10分間遠心分離して、血清サンプルを取得する。血清を、臨床生化学検査まで-
80℃で保管する。血清サンプル(100μl)をELISA(マウス抗dsDNA I
gG特異的ELISAキット、Alpha Diagnostic Internati
onal、カタログ番号5120)で分析し、Hitachi7020自動生化学分析装
置を使用して血清のBUN濃度を試験する。リンパ球分析では、血液サンプルをEDTA
-Kチューブに収集し、フローサイトメトリーによってCD3/CD4/CD8/Tre
g/NK/B細胞%を試験する。結果を図11に示す。そこに示されているように、0.
3mg/kgの用量でのRUR20kD-IL-2組成物の投与は、腎臓損傷のバイオマ
ーカー(すなわち、尿中のタンパク質レベル)を正常なマウスで観察されるのとほぼ同じ
レベルに抑制するのに効果的である。この研究は、SLEの代表的な動物モデルにおける
生理学的免疫応答及び疾患進行の制御に対するRUR-IL-2誘導性Tregの効果を
更に解明する。
抗原依存性、T細胞性、遅延型過敏症(DTH)モデルにおけるRUR20kD-IL
-2組成の研究
この研究は、RUR20kD-IL-2組成物によるin vivo Treg刺激及
び増殖が、高度のアナフィラキシーが確立される食物アレルギーモデルにおいて、抗原依
存的にT細胞性遅延型過敏症(DTH)応答を下方制御する方法をモデル化している。
デル抗原キーホールリンペットヘモシアニン(KLH)の皮下投与でBalb/cマウス
を感作する。RUR20kD-IL-2組成物(0.003、0.01、0.3、0.1
又は0.3mg/kg、q3d)又はシクロスポリンA(10mg/kg、qd)の皮下
投与を0日目に開始し、8日目まで継続し、5日目にKLHの皮内チャレンジを投与して
、耳介の腫れを4日間測定した。炎症を起こした耳を免疫組織化学(IHC)に供し、K
LHチャレンジ後のFoxP3+Treg細胞の割合を定量する。応答の特異性を、KL
H再チャレンジ、又は無関係の抗原であるオボアルブミン(OVA)による感作及びチャ
レンジを行うことのいずれかによる治療をせずに、更に3週間~4週間後に評定する。食
物アレルゲンに対するRUR20kD-IL-2組成物-拡張Tregの効果を理解する
ため、Balb/cマウスを、OVAをミョウバンで腹腔内に乳化することによって週に
2回感作する。2回目の感作の10日後、マウスを隔日で8回経口的にOVAでチャレン
ジする。RUR20kD-IL-2組成物(0.1mg/kg、q3d×3)又はシクロ
スポリンA(10mg/kg、qd)の皮下投与を0日目に開始し、8日目まで継続する
。アレルギー反応の重症度を、8回目のチャレンジ後30分~45分以内の臨床スコアに
よって評定する。更に、血清肥満細胞プロテアーゼ1(MCPT 1)及びOVA特異的
IgEの力価を定量する。パーセントTregを、末梢血及び脾臓のフローサイトメトリ
ーによって決定する。
H再チャレンジに対する炎症反応が用量依存的に抑制された。炎症を起こした耳介のIH
C分析は、FoxP3+Treg細胞の有意な浸潤を示している。炎症に対する抑制効果
は、RUR20kD-IL-2組成物を更に投与せず、感作後の同じ抗原及び無関係の抗
原による3週間~4週間後の再チャレンジによって例示されるとおり、永続性があり、抗
原特異的である。最後に、RUR20kD-IL-2組成物の投与は、モデル食品アレル
ゲンであるOVAの反復投与によって引き起こされる高度なアナフィラキシー症状の軽減
に効果的であることがわかった。アナフィラキシーの臨床スコアの低下は、MCPT1の
レベル及び抗OVA特異的IgEの力価の有意な低下、並びにTregの有意な増加と相
関している。RUR20kD-IL-2組成物は、抗原特異的で永続性のあるTreg増
殖、及びこのKLH過敏症モデルのマウスにおける治療反応を示した。更に、RUR20
kD-IL-2組成物は、食物アレルギーモデルで有効であることがわかっている。この
データは、自己免疫疾患及び/又は炎症性疾患の場合のように、抗原特異的炎症に対する
RUR20kD-IL-2組成物の使用を支持している。
20kD-IL-2組成物が自己免疫及び炎症性の障害の治療のために制御性T細胞の数
及び抑制機能を増加させるという概念を裏付ける。IL-2産生の障害及び制御性T細胞
の機能障害は、複数の自己免疫疾患の免疫学的メカニズムとして関係している。臨床的利
益を得るため低用量のIL-2を使用することができるが、薬物動態が不十分な場合は毎
日の送達が必要であり、有害事象は用量を制限し、Tregの増加は中程度で短命である
。RUR20kD-IL-2組成物は、従来のT細胞機能への影響を最小限に抑えながら
Treg恒常性を選択的に回復する低用量皮下投与を目的としたIL-2コンジュゲート
Treg刺激因子を提供する。ここに、マウス及び非ヒト霊長類モデルにおいてTreg
の数及び活性を選択的に拡大するRUR20kD-IL-2組成物の能力を特性評価し、
自己免疫のモデルにおけるRUR20kD-IL-2組成物の有効性を評定するためのデ
ータを提供する。IL-2受容体への親和性を、表面プラズモン共鳴によって評定する。
ヒトPBMCの活性を、フローサイトメトリー及び飛行時間型質量分析(CyToF)を
使用して、複数のリンパ球集団におけるpSTAT5誘導によって測定することができる
。C57BL/6マウス又はカニクイザルの皮下投与後のin vivo活性を、リンパ
球数の変化及びフローサイトメトリーによる活性化によって測定する。ex vivoの
Treg機能を、単離された脾臓TregによるTcon増殖の阻害によって決定する。
有効性を、MRL/MpJ-Faslprマウスを使用して全身性エリテマトーデス(S
LE)のモデルで評定する。RUR20kD-IL-2組成物は、IL-2Rα及びIL
-2Rαβ複合体と比較してヒトIL-2Rβに対する親和性を大幅に弱め、低親和性I
L-2Rβγを発現するTconよりも高親和性IL-2Rαβγを発現するTregの
優先的な活性化を示唆している。in vitroでは、TregはRUR20kD-I
L-2組成刺激に対してより感受性が高く、ヒトPBMCの他のリンパ球サブセットと比
較してSTAT5リン酸化の増加を示す。マウスでは、単回投与により、Tcon活性化
を伴わずに、血液及び脾臓で7日間~10日間Treg動員が持続し、これは、Treg
活性化マーカーの誘導及びex vivoでの抑制能力の増加が同時に起こる効果である
。カニクイザルでは、血漿曝露は、単回投与後14日間以上、持続的なTreg動員及び
活動により延長され、これは、5日間毎日投与されるrhIL-2の同等の総投与量と比
較して、大きさ、期間及び特異性に優れた反応である。最後に、RUR20kD-IL-
2組成物はSLEのマウスモデルで有効である。SLEモデルでは、12週間にわたって
RUR20kD-IL-2組成物を繰り返し投与すると、Tregの上昇が持続し、血中
尿素窒素が減少し、尿タンパクレベル及び腎臓の組織病理学が正常に戻る。cGVHDモ
デルでは、RUR20kD-IL-2組成物を繰り返し投与すると、Tregが増加し、
脾臓の胚中心B細胞が減少し、肺機能障害が逆転する。RUR20kD-IL-2組成物
は、Tregの持続的で優先的な活性化をもたらし、SLEのモデル系で有効性を示す。
健康なボランティアにおけるRUR20kD-IL-2組成物の単回漸増皮下投与の安
全性、忍容性、薬物動態及び薬力学を評価するための第I相、二重盲検、無作為化プラセ
ボ対照研究
健康なボランティアにおけるRUR20kD-IL-2組成物(RUR20kD-IL
-2)の単回漸増低皮下用量の安全性、忍容性、薬物動態及び薬力学を評価するために、
二重盲検、無作為化、プラセボ対照研究を行う。この研究は7つのコホートに分けられ、
被験者は0.3、1.0、3.0、6.0、9.0、13.5又は20.0μg/kgの
RUR20kD-IL-2を受けた。12人の被験者を各用量コホートに無作為化され、
そのうち9人はRUR20kD-IL-2の単回皮下投与を受け、3人はプラセボを受け
た。RUR20kD-IL-2を、0.9%塩化ナトリウム滅菌液で希釈した皮下注射用
の滅菌液として配合する。医薬品を使い捨てガラスバイアルで供給し、2℃~8℃で保管
する。医薬品の各バイアルには、0.75±0.1mgのrhIL-2(RUR20kD
-IL-2に基づく)が含まれていた。RUR20kD-IL-2を、10mM酢酸ナト
リウム、150mM塩化ナトリウム、2%(重量/体積)スクロース、pH5.0中にお
よそ1.0mg/mlタンパク質の濃度で配合する。プラセボは市販の0.9%塩化ナト
リウム溶液である。0.3μg/kgの開始用量は、最小予測生物学的影響レベル(MA
BEL)アプローチを使用して選択され、非臨床毒性研究からの最も感受性の高い種にお
ける無毒性量(NOAEL)によって支持される。RUR20kD-IL-2の薬物動態
及び安全性の評価を可能にするため、開始用量を0.3μg/kgに設定する。1人はR
UR20kD-IL-2を受け、もう1人はプラセボを受けた2人の被験者に二重盲検法
で投薬し、研究開始前の少なくとも7日間、起こりうる副作用を監視する。
全性及び忍容性を評価することである。この研究の副次目的は、(1)制御性T細胞(T
reg)の数及び/又は活性の変化の時間経過と程度を観察すること、(2)単回皮下用
量として投与したRUR20kD-IL-2の薬物動態(PK)プロファイルを特性評価
すること、並びに(3)サイトカイン、T細胞、他の末梢血集団、他の血清タンパク質、
遺伝子発現の変化、及び抗薬物抗体への影響を含む、血液中のRUR20kD-IL-2
の免疫学的影響を評定することである。研究の最初の段階では、免疫マーカーを投与前か
ら投与後20時間まで試験する。具体的には、Treg、CD4+-T細胞、CD8+-
T細胞、ナチュラルキラー(NK)細胞、サイトカイン、可溶性CD25及びRNAを、
RUR20kD-IL-2受容及びプラセボ受容のコホートで試験する。その後のフェー
ズでは、同じ免疫マーカーを投薬後4日目、5日目、6日目、7日目、8日目、10日目
、12日目、15日目、18日目、20日目、25日目、30日目、40日目及び50日
目にも試験する。
告されていない。有害事象(AE)は、軽度(グレード1)の注射部位反応に限定されて
おり、高用量のIL-2に関連することが知られているAEの証拠は観察されなかった。
日あたりで最大濃度に達し、投与後およそ2週間まで濃度の変化がほとんどなく、その後
濃度がおよそ8日~9日の半減期で低下したことを示す。
25brightTregの用量依存的な増加をもたらすことを明らかにしている。3.
0、6.0、9.0、13.5及び20.0μg/kgの単回用量コホートでは、循環C
D4+FoxP3+CD25brightTregの絶対数が持続的に増加し、レベルは
投与後およそ20日~25日までベースラインに戻らない。それぞれ3.0、6.0、9
.0、13.5及び20.0μg/kgの用量では、投与前と比較して、CD4+Fox
P3+CD25brightTregの数が平均で3、3.5、4.1、5及び8.1倍
増加する。3.0、6.0、9.0、13.5及び20.0μg/kgの用量では、CD
4+FoxP3+CD25+Tregの総数も増加するが、変化の大きさはCD4+Fo
xP3+CD25brightTregで観察されたものよりも小さくなる。プラセボを
受けた被験者と比較して、0.3及び1.0μg/kgの用量でのRUR20kD-IL
-2治療被験者対プラセボ被験者のTregの数に変化はない。どの用量のRUR20k
D-IL-2でも、T細胞集団(CD4+、CD8+)の割合又は数に変化が見られない
ことから、RUR20kD-IL-2の主な効果はTregで見られる。13.5及び2
0.0μg/kgでNK細胞の割合及び絶対数がわずかに増加しているが、高用量IL-
2に関連するAEの証拠はない。
5brightTregの用量依存的な増加をもたらした。3.0、6.0、9.0及び
13.5μg/kgでは、CD4+FoxP3+CD25brightTregの絶対数
の持続的な増加をもたらし、投与後20~25日までレベルはベースラインに戻らなかっ
た。CD4+FoxP3+CD25brightTregsの数は、3.0、6.0、9
.0及び13.5μg/kgの用量では、プラセボと比較して、それぞれ3.0、3.5
、4.1及び5.0倍の平均増加があり、最大応答は、3.0μg/kgで84時間のピ
ークから、13.5μg/kgで7~12日続くより延長されたピーク応答にシフトし、
20日~25日目までにベースラインレベルに戻る。図13に示すように、3.0、6.
0、9.0及び13.5μg/kgの用量では、CD4+FoxP3+CD25+Tre
gの総集団も用量依存的に増加したが、変化の大きさはCD4+FoxP3+CD25b
right制御性T細胞で観察されたものよりも小さくなる。0.3μg/kg及び1μ
g/kgの用量で、RUR20kD-IL-2治療被験者対プラセボ被験者の合計CD4
+Tregに変化は観察されなかった(図13)。
おいてもTcon細胞集団(CD4+、CD8+)の割合の変化は観察されなかったため
、RUR20kD-IL-2の主な効果はTregで見られた。しかしながら、RUR2
0kD-IL-2の被験者では、13.5μg/kgでCD8+T細胞の絶対数及びKi
67+CD8+T細胞の割合のわずかな増加が観察された(図14A~図14D)。どの
用量レベルでもCD4+T細胞の絶対数に変化はなかった。
5μg/kgの用量レベルではこの細胞サブセットの割合が同様に増加したが、低用量レ
ベルでは増加しなかった。また、3.0、6.0、9.0及び13.5μg/kgで、増
殖のマーカーであり、したがって活性化のマーカーであるKi67を発現するCD56+
NK細胞の割合の用量依存的な増加が認められた。3.0、6.0及び9.0μg/kg
で、Ki67を発現する割合は、RUR20kD-IL-2投与後、それぞれ約10%、
20~30%及び30~40%であった。13.5μg/kgの用量ではKi67を発現
する割合の更なる増加はなく、30~40%のままであった。
rightTregの数の持続的な増加をもたらし、投与後20~25日までレベルはベ
ースラインに戻らなかった。変化の大きさはCD4+FoxP3+CD25bright
Tregで観察されたものよりも小さかったものの、CD4+FoxP3+CD25+T
regの総個体数も増加した。CD8+T細胞及びNK細胞の数の増加が13.5μg/
kgで観察された。
ボ(n=3)、及びRUR20kD-IL-2、28.0mg/kg(n=9);プラセ
ボ(n=3)も実施した。各コホートを50日間追跡し、有害事象、バイタルサイン、及
び臨床検査評価、並びにTreg、Tcon、及びNK細胞及びサブセットの数及び活性
の時間経過及び程度の変化、RUR20kD-IL-2の薬物動態、並びにサイトカイン
レベル、末梢血細胞集団、血清タンパク質及び遺伝子発現等の他の免疫学的効果によって
評価される、健康なボランティアにおけるRUR20kD-IL-2の単回漸増用量の皮
下投が被験者の安全性及び忍容性に及ぼす影響を評定する。
臨床上重要なバイタルサイン、ECG又は身体検査の異常は見られなかった。有害事象は
主に軽度又は中等度(グレード1又はグレード2)の注射部位反応に限定され、4人の被
験者がグレード1の頭痛事象を経験し、1人の被験者が試験した最高用量(28.0μg
/kg)でサイトカインレベルの上昇に起因する軽度(グレード1)の兆候及び発熱、食
欲不振、嘔吐、下痢、頻脈及び筋肉痛(全てグレード1の重症度)の症状を経験し、抗薬
物抗体の誘発はなかった。
0kD-IL-2に応答して観察された(図15を参照されたい)。28μg/kgのR
UR20kD-IL-2組成物では、投与前の値を超えるCD25-bright Tr
egの数の17倍の平均ピーク増加が観察された。Tregレベルは10日目~12日目
にピークに達し、投与後20日~25日までベースラインに戻らない。Treg活性化マ
ーカーであるICOS及びCTLA4の増加は、13.5μg/kg以上の用量で観察さ
れた。
たCD56+NK細胞では最小限の増加が観察された(図16を参照されたい)。(CD
16+CD56+NK細胞も数えた。データは示されていない)。NK細胞の増加は用量
依存的ではなかった。RUR20kD-IL-2の最高濃度でNK細胞の2倍の増加が観
察された。RUR20kD-IL-2は、28μg/kgまでCD8+T細胞を誘導する
ことはなく、Tregの用量依存的な増加を誘導する。RUR20kD-IL-2の投与
により、28μg/kgのベースラインよりも平均ピークTreg:CD8比が15倍に
増加する。(図17を参照されたい)。
IL-2の安全性及び忍容性を評定した。更に、Treg、従来のCD4+及びCD8+
T細胞、NK細胞、サイトカインレベルの数及び割合の変化の時間経過及び程度、並びに
末梢血中のRUR20kD-IL-2組成物の薬物動態(PK)を調査した。このヒト初
の二重盲検、単回漸増用量研究では、健康なボランティアに0.3~28μg/kgの範
囲のSC用量(コホートあたり、治療薬9:プラセボ3)を投与し、被験者を50日間追
跡した。計画した8つのコホート全てが投薬を完了した。バイタルサイン、心電図又は臨
床検査値には、用量規制毒性、重篤な有害事象、死亡又は臨床上重大な異常はなかった。
RUR20kD-IL-2に起因する有害事象は、主に軽度(グレード1)の注射部位反
応に限定されていた。試験した最高用量の1人の被験者は、サイトカインレベルの上昇及
びリンパ球減少症の一過性で軽度(グレード1)の症状を示したが、治療せずに解消した
。他のどの用量レベルの個人にも、IL-2療法に関連することが知られている全身性の
兆候又は症状はなかった。これまでに最初の6つのコホートで抗薬物抗体の検査を行った
が、いずれも検出されていない。RUR20kD-IL-2は、投与後4日~6日で最大
血漿レベルに達し、約2週間はほとんど変化せず、その後、約8日~9日の半減期で減少
した。RUR20kD-IL-2の主な効果はTregで見られた。3.0~28.0μ
g/kgの用量コホートでは、循環CD4+FoxP3+CD25bright Tre
gの絶対数及び割合の用量依存的で持続的な増加が観察された。上昇したレベルは10~
12日目にピークに達し、投与後約20~25日までベースラインに戻らなかった。28
.0μg/kgでは、これらのCD25bright Tregの数の平均ピーク増加は
ベースラインの17倍であり、平均ピークパーセンテージは0.5%から7.4%に増加
した。更に、13.5μg/kg以上の用量ではTreg活性化マーカーが増加した。試
験した最高用量では、NK細胞の割合及び数は平均3.5倍増加したが、従来のCD4+
又はCD8+T細胞の割合及び数に変化は見られなかった。RUR20kD-IL-2組
成物は、Tregを選択的に誘導し、28.0μg/kg群のベースラインを超える平均
ピークTreg:CD8比の15倍の増加によって証明される。結論として、試験した用
量範囲でのIL-2コンジュゲートT-reg刺激因子RUR20kD-IL-2の単回
投与は、忍容性が高く安全であった。RUR20kD-IL-2は、循環CD25bri
ght Tregの顕著な選択的用量依存的増加をもたらし、従来のT細胞への影響は最
小限で、NK細胞への影響は比較的小さかった。これらの臨床結果は、RUR20kD-
IL-2の長期にわたるTreg選択的作用を示す以前の動物研究を拡大し、全身性エリ
テマトーデス等の自己免疫疾患の新たな治療法としてRUR20kD-IL-2を試験す
るための強力な裏付けを提供する。
研究で十分に忍容され、循環CD25-brightTreg細胞の顕著な選択的用量依
存的増加をもたらした。Tcons及びNK細胞への影響は最小限であり、この研究デー
タは、自己免疫疾患及び炎症性疾患におけるRUR20kD-IL-2を試験するための
裏付けを提供する。
全身性エリテマトーデス患者における皮下RUR20kD-IL-2の安全性、忍容性
、薬物動態及び薬力学を評価するための第I相、二重盲検、無作為化プラセボ対照漸増複
数回用量研究
最小から中等度の全身性エリテマトーデス(SLE)の患者の4つの用量コホートにお
けるRUR20kD-IL-2の漸増複数回用量の安全性、忍容性、PK及び免疫学的効
果を評価するための二重盲検、無作為化、プラセボ対照研究を行う。SLE疾患活動性へ
の影響も評価する。疾患活動性が最小から中程度の12人のSLE患者を、4つの用量コ
ホートのそれぞれに無作為化し、そのうち9人はRUR-IL-2-20kDの1.0m
g/ml水溶液の皮下用量を複数回受け、3人はプラセボを受けた。RUR20kD-I
L-2薬物及びプラセボを、本明細書に記載されているように、例えば実施例1-Aのと
おりに調製する。活動性の臨床SLE疾患活動は選択基準として必要とされない。コホー
ト1では、3.0μg/kgの開始用量を2週間間隔で3回投与する(1、15及び29
日目)。この開始用量は、上記の研究で以前に決定されたRUR20kD-IL-2の単
一皮下用量の好ましい安全性及びPDプロファイルに基づいている。コホート2、3及び
4のその後の用量レベルは、それぞれ、前の用量コホートの最大2倍であった。コホート
1~3の患者は、2週間間隔で合計4週間にわたって3回の治験薬の投与を受けた。研究
の過程で評価される用量は、3.0μg/kg~24μg/kgの範囲である。コホート
4の患者は、1、15、29、43、57、71及び85日目に投与されるRUR20k
D-IL-2による12週間の治療を受ける。このコホートは、RUR20kD-IL-
2治療の長期にわたる投与の安全性、並びにPK及びPDプロファイルに関するデータを
提供する。RUR20kD-IL-2又はプラセボの最終投与を受けた後、安全性、PK
、PD及び予備的有効性を評価するために患者を更に50日間追跡する。各コホートの1
2人の被験者のうち8人を、安全性の問題の可能性について、安全性審査委員会によって
最終患者の3回目の投薬の2週間後に評価する。更に、安全性審査委員会によって2回、
すなわち(1)最初の8人の被験者が3回目の投与を受けてから2週間後、及び(2)全
ての被験者が全ての投与量の治験薬を投与されてから2週間後にコホート4の全ての患者
を評価する
安全性の所見に加えて、Treg、CD4+-T細胞、CD8+-T細胞、NK細胞応
答、サイトカインレベル、利用可能なPKデータ等の免疫学的変化を使用して、用量レベ
ルを決定する。この研究の主要目的は、SLE患者に複数回漸増皮下用量として投与され
たRUR20kD-IL-2の安全性及び忍容性を評価することであり、この研究の副次
目的は、(1)SLE患者における複数回の皮下投与後のRUR20kD-IL-2のP
Kプロファイルを特性評価すること、(2)SLE患者におけるTreg及びTregサ
ブセットの数及び機能、CD4+-T細胞、CD8+-T細胞、NK細胞、並びにサイト
カインレベルを含む、PDバイオマーカーの変化の時間経過及び程度に関するRUR20
kD-IL-2の効果を評定すること、(3)二本鎖DNAに対する抗体の存在及びレベ
ル、並びにSLE患者の補体C3及びC4のレベルに対するRUR20kD-IL-2の
効果を評定すること、並びに(4)SLE患者の疾患活動性に対するRUR20kD-I
L-2の効果を評定することである。漸増複数回用量研究からの予備的なPKデータを表
す結果を、以下の表15の単回皮下研究からのデータと比較する。
[1]構造:
nは各出現で独立して約3~約4000の整数である)
を有するPEG化IL-2コンジュゲートを含む組成物。
[2]IL-2がアルデスロイキンである、上記[1]に記載の組成物。
[3]前記組成物が、あわせて考慮した場合に、
式
[4]前記組成物が、あわせて考慮した場合に、
式
[5]前記組成物が、あわせて考慮した場合に、式
[6]1に等しいn’を有するPEG化IL-2コンジュゲートを約10モル%以下で含む、上記[3]~[5]に記載のいずれか一項に記載の組成物。
[7]1に等しいn’を有するPEG化IL-2コンジュゲートを約7モル%以下で含む、上記[3]~[5]に記載のいずれか一項に記載の組成物。
[8]1に等しいn’を有するPEG化IL-2コンジュゲートを約5モル%以下で含む、上記[3]~[5]に記載のいずれか一項に記載の組成物。
[9]4に等しいn’を有するPEG化IL-2コンジュゲートを約10モル%以下で含む、上記[3]~[8]に記載のいずれか一項に記載の組成物。
[10]4に等しいn’を有するPEG化IL-2コンジュゲートを約7モル%以下で含む、上記[3]~[8]に記載のいずれか一項に記載の組成物。
[11]4に等しいn’を有するPEG化IL-2コンジュゲートを約5モル%以下で含む、上記[3]~[8]に記載のいずれか一項に記載の組成物。
[12]前記組成物が、ほぼ等モル量の
[13]組前記組成物が、式
[14]アルデスロイキンあたりの分岐ポリエチレングリコール部分、
[15]アルデスロイキンあたりの分岐ポリエチレングリコール部分の平均数が約2.5である、上記[13]に記載の組成物。
[16]nの値が5~2000の範囲である、上記[1]~[15]に記載のいずれか一項に記載の組成物。
[17]nの値が10~1000の範囲である、上記[1]~[15]に記載のいずれか一項に記載の組成物。
[18]nの値が10~750の範囲である、上記[1]~[15]に記載のいずれか一項に記載の組成物。
[19]nの値が10~500の範囲である、上記[1]~[15]に記載のいずれか一項に記載の組成物。
[20]nの値が20~250の範囲である、上記[1]~[15]に記載のいずれか一項に記載の組成物。
[21]nの平均値が約226である、上記[1]~[15]に記載のいずれか一項に記載の組成物。
[22]各分岐ポリエチレングリコール部分の名目上の平均分子量が、約250ダルトン~約90000ダルトンの範囲にある、上記[1]~[15]に記載のいずれか一項に記載の組成物。
[23]各分岐ポリエチレングリコール部分の名目上の平均分子量が、約1000ダルトン~約60000ダルトンの範囲にある、上記[1]~[15]に記載のいずれか一項に記載の組成物。
[24]各分岐ポリエチレングリコール部分の名目上の平均分子量が、約5000ダルトン~約60000ダルトンの範囲にある、上記[1]~[15]に記載のいずれか一項に記載の組成物。
[25]各分岐ポリエチレングリコール部分の名目上の平均分子量が、約10000ダルトン~約55000ダルトンの範囲にある、上記[1]~[15]に記載のいずれか一項に記載の組成物。
[26]モルベースで、約5モル%以下のモノ-PEG化IL-2コンジュゲート、及び約28モル%~約60モル%のジ-PEG化IL-2コンジュゲート、及び約24モル%~約65モル%のトリ-PEG化IL-2コンジュゲート、及び約12モル%以下のより高PEG化されたIL-2コンジュゲートを含み、各分岐ポリエチレングリコール部分の名目上の平均分子量が約20000ダルトンである、上記[1]又は[2]に記載の組成物。
[27]80%以上の組み合わされたジ-及びトリ-PEG化IL-2コンジュゲートを更に含む、上記[26]に記載の組成物。
[28]モルベースで、約2.5~約4.5モル%のモノ-PEG化IL-2コンジュゲート、及び約35~約50モル%のジ-PEG化IL-2コンジュゲート、及び約38~約46モル%のトリ-PEG化IL-2コンジュゲート、及び約3~約10モル%のより高PEG化されたIL-2コンジュゲートを含み、各分岐ポリエチレングリコール部分の名目上の平均分子量が約20000ダルトンである、上記[1]又は[2]に記載の組成物。
[29]あわせた合計が約80~約95モル%のジ-PEG化及びトリ-PEG化IL-2コンジュゲートを更に含む、上記[28]に記載の組成物。
[30]モルベースで、約2.8~約3.8モル%のモノ-PEG化IL-2コンジュゲート、及び約44~約48モル%のジ-PEG化IL-2コンジュゲート、及び約41~約44モル%のトリ-PEG化IL-2コンジュゲート、及び約7~約9モル%のより高PEG化されたIL-2コンジュゲートを含み、各分岐ポリエチレングリコール部分の名目上の平均分子量が約20000ダルトンである、上記[1]又は[2]に記載の組成物。
[31]あわせた合計が約87~約90モル%のジ-PEG化及びトリ-PEG化IL-2コンジュゲートを更に含む、上記[30]に記載の組成物。
[32]モルベースで、約2.8~約3.8モル%のモノ-PEG化IL-2コンジュゲート、及び約44~約48モル%のジ-PEG化IL-2コンジュゲート、及び約41~約44モル%のトリ-PEG化IL-2コンジュゲート、及び約7~約9モル%のより高PEG化されたIL-2コンジュゲートを含み、前記組成物がリジンK7又はK8又はK31又はK75の1つに付着したPEG部分を有するモノ-PEG化IL-2コンジュゲートの混合物を含み、各分岐ポリエチレングリコール部分の名目上の平均分子量が約20000ダルトンである、上記[1]又は[2]に記載の組成物。
[33]あわせた合計が約87~約90モル%のジ-PEG化及びトリ-PEG化IL-2コンジュゲートを更に含む、上記[32]に記載の組成物。
[34]モルベースで、約2.8~約3.8モル%のモノ-PEG化IL-2コンジュゲート、及び約44~約48モル%のジ-PEG化IL-2コンジュゲート、及び約41~約44モル%のトリ-PEG化IL-2コンジュゲート、及び約7~約9モル%のより高PEG化されたIL-2コンジュゲートを含み、前記組成物がリジンK7に付着したPEG部分を有するモノ-PEG化IL-2コンジュゲートを含み、各分岐ポリエチレングリコール部分の名目上の平均分子量が約20000ダルトンである、上記[1]又は[2]に記載の組成物。
[35]あわせた合計が約87~約90モル%のジ-PEG化及びトリ-PEG化IL-2コンジュゲートを更に含む、上記[34]に記載の組成物。
[36]薬学的に許容可能な賦形剤を更に含む、上記[1]~[35]に記載のいずれか一項に記載の組成物。
[37]非経口投与に適した形態の、上記[1]~[35]に記載のいずれか一項に記載の組成物。
[38]皮下投与に適した形態の、上記[1]~[35]に記載のいずれか一項に記載の組成物。
[39]水性希釈剤を含む、上記[36]に記載の組成物。
[40]約5のpHを有する、上記[39]に記載の組成物。
[41]酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム及びスクロースを更に含む、上記[39]又は上記[40]に記載の組成物。
[42]1.5mg/mlタンパク質当量、10mM酢酸ナトリウム、110mM塩化ナトリウム、2%スクロース(重量/体積)、pH5.0を含む上記[37]記載の組成物。
[43]上記[1]~[42]に記載のいずれか一項に記載の組成物の治療有効量を被験体に投与することにより、被験体における制御性T細胞対エフェクターT細胞の比率を増加させる方法。
[44]制御性T細胞がFoxp3+細胞及びCD25+細胞から選択される、上記[43]に記載の方法。
[45]エフェクターT細胞がCD4+細胞及びCD8+細胞から選択される、上記[44]に記載の方法。
[46]ベースラインと比較した場合、制御性T細胞の倍増が、in-vivoマウスモデルで評価した場合、少なくとも約2の値に達する、上記[43]~[45]に記載のいずれか一項に記載の方法。
[47]ベースラインと比較した場合、制御性T細胞の倍増が、in-vivoマウスモデルで評価した場合、少なくとも約4の値に達する、上記[43]~[45]に記載のいずれか一項に記載の方法。
[48]制御性T細胞数の増加が、投与後少なくとも3日間、ベースラインレベルを超えて持続する、上記[43]~[47]に記載のいずれか一項に記載の方法。
[49]制御性T細胞数の増加が、投与後少なくとも5日間、ベースラインレベルを超えて持続する、上記[43]に記載の方法。
[50]上記[1]~[42いずれか一項]に記載の組成物の治療有効量を被験体に投与することを含む、自己免疫疾患を有する被験体を治療する方法。
[51]前記投与が皮下注射によるものである、上記[50]に記載の方法。
[52]前記投与が2週間に1回又は4週間に1回行われる、上記[50]~[51]に記載のいずれか一項に記載の方法。
[53]前記投与が、2週間に1回、3μg/kg~24μg/kgの用量を含む、上記[50]~[52]に記載のいずれか一項に記載の方法。
[54]治療法に使用するための、上記[1]~[42]に記載のいずれか一項に記載の組成物。
[55]自己免疫疾患の治療に使用するための、上記[1]~[42]に記載のいずれか一項に記載の組成物。
[56]自己免疫疾患を治療するための薬剤を製造するための、上記[1]~[42]に記載のいずれか一項に記載の組成物の使用。
Claims (56)
- IL-2がアルデスロイキンである、請求項1に記載の組成物。
- 1に等しいn’を有するPEG化IL-2コンジュゲートを約10モル%以下で含む、
請求項3~5のいずれか一項に記載の組成物。 - 1に等しいn’を有するPEG化IL-2コンジュゲートを約7モル%以下で含む、請
求項3~5のいずれか一項に記載の組成物。 - 1に等しいn’を有するPEG化IL-2コンジュゲートを約5モル%以下で含む、請
求項3~5のいずれか一項に記載の組成物。 - 4に等しいn’を有するPEG化IL-2コンジュゲートを約10モル%以下で含む、
請求項3~8のいずれか一項に記載の組成物。 - 4に等しいn’を有するPEG化IL-2コンジュゲートを約7モル%以下で含む、請
求項3~8のいずれか一項に記載の組成物。 - 4に等しいn’を有するPEG化IL-2コンジュゲートを約5モル%以下で含む、請
求項3~8のいずれか一項に記載の組成物。 - アルデスロイキンあたりの分岐ポリエチレングリコール部分の平均数が約2.5である
、請求項13に記載の組成物。 - nの値が5~2000の範囲である、請求項1~15のいずれか一項に記載の組成物。
- nの値が10~1000の範囲である、請求項1~15のいずれか一項に記載の組成物
。 - nの値が10~750の範囲である、請求項1~15のいずれか一項に記載の組成物。
- nの値が10~500の範囲である、請求項1~15のいずれか一項に記載の組成物。
- nの値が20~250の範囲である、請求項1~15のいずれか一項に記載の組成物。
- nの平均値が約226である、請求項1~15のいずれか一項に記載の組成物。
- 各分岐ポリエチレングリコール部分の名目上の平均分子量が、約250ダルトン~約9
0000ダルトンの範囲にある、請求項1~15のいずれか一項に記載の組成物。 - 各分岐ポリエチレングリコール部分の名目上の平均分子量が、約1000ダルトン~約
60000ダルトンの範囲にある、請求項1~15のいずれか一項に記載の組成物。 - 各分岐ポリエチレングリコール部分の名目上の平均分子量が、約5000ダルトン~約
60000ダルトンの範囲にある、請求項1~15のいずれか一項に記載の組成物。 - 各分岐ポリエチレングリコール部分の名目上の平均分子量が、約10000ダルトン~
約55000ダルトンの範囲にある、請求項1~15のいずれか一項に記載の組成物。 - モルベースで、約5モル%以下のモノ-PEG化IL-2コンジュゲート、及び約28
モル%~約60モル%のジ-PEG化IL-2コンジュゲート、及び約24モル%~約6
5モル%のトリ-PEG化IL-2コンジュゲート、及び約12モル%以下のより高PE
G化されたIL-2コンジュゲートを含み、各分岐ポリエチレングリコール部分の名目上
の平均分子量が約20000ダルトンである、請求項1又は2に記載の組成物。 - 80%以上の組み合わされたジ-及びトリ-PEG化IL-2コンジュゲートを更に含
む、請求項26に記載の組成物。 - モルベースで、約2.5~約4.5モル%のモノ-PEG化IL-2コンジュゲート、
及び約35~約50モル%のジ-PEG化IL-2コンジュゲート、及び約38~約46
モル%のトリ-PEG化IL-2コンジュゲート、及び約3~約10モル%のより高PE
G化されたIL-2コンジュゲートを含み、各分岐ポリエチレングリコール部分の名目上
の平均分子量が約20000ダルトンである、請求項1又は2に記載の組成物。 - あわせた合計が約80~約95モル%のジ-PEG化及びトリ-PEG化IL-2コン
ジュゲートを更に含む、請求項28に記載の組成物。 - モルベースで、約2.8~約3.8モル%のモノ-PEG化IL-2コンジュゲート、
及び約44~約48モル%のジ-PEG化IL-2コンジュゲート、及び約41~約44
モル%のトリ-PEG化IL-2コンジュゲート、及び約7~約9モル%のより高PEG
化されたIL-2コンジュゲートを含み、各分岐ポリエチレングリコール部分の名目上の
平均分子量が約20000ダルトンである、請求項1又は2に記載の組成物。 - あわせた合計が約87~約90モル%のジ-PEG化及びトリ-PEG化IL-2コン
ジュゲートを更に含む、請求項30に記載の組成物。 - モルベースで、約2.8~約3.8モル%のモノ-PEG化IL-2コンジュゲート、
及び約44~約48モル%のジ-PEG化IL-2コンジュゲート、及び約41~約44
モル%のトリ-PEG化IL-2コンジュゲート、及び約7~約9モル%のより高PEG
化されたIL-2コンジュゲートを含み、前記組成物がリジンK7又はK8又はK31又
はK75の1つに付着したPEG部分を有するモノ-PEG化IL-2コンジュゲートの
混合物を含み、各分岐ポリエチレングリコール部分の名目上の平均分子量が約20000
ダルトンである、請求項1又は2に記載の組成物。 - あわせた合計が約87~約90モル%のジ-PEG化及びトリ-PEG化IL-2コン
ジュゲートを更に含む、請求項32に記載の組成物。 - モルベースで、約2.8~約3.8モル%のモノ-PEG化IL-2コンジュゲート、
及び約44~約48モル%のジ-PEG化IL-2コンジュゲート、及び約41~約44
モル%のトリ-PEG化IL-2コンジュゲート、及び約7~約9モル%のより高PEG
化されたIL-2コンジュゲートを含み、前記組成物がリジンK7に付着したPEG部分
を有するモノ-PEG化IL-2コンジュゲートを含み、各分岐ポリエチレングリコール
部分の名目上の平均分子量が約20000ダルトンである、請求項1又は2に記載の組成
物。 - あわせた合計が約87~約90モル%のジ-PEG化及びトリ-PEG化IL-2コン
ジュゲートを更に含む、請求項34に記載の組成物。 - 薬学的に許容可能な賦形剤を更に含む、請求項1~35のいずれか一項に記載の組成物
。 - 非経口投与に適した形態の、請求項1~35のいずれか一項に記載の組成物。
- 皮下投与に適した形態の、請求項1~35のいずれか一項に記載の組成物。
- 水性希釈剤を含む、請求項36に記載の組成物。
- 約5のpHを有する、請求項39に記載の組成物。
- 酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム及びスクロースを更に含む、請求項39又は請求項4
0に記載の組成物。 - 1.5mg/mlタンパク質当量、10mM酢酸ナトリウム、110mM塩化ナトリウ
ム、2%スクロース(重量/体積)、pH5.0を含む請求項37記載の組成物。 - 請求項1~42のいずれか一項に記載の組成物の治療有効量を被験体に投与することに
より、被験体における制御性T細胞対エフェクターT細胞の比率を増加させる方法。 - 制御性T細胞がFoxp3+細胞及びCD25+細胞から選択される、請求項43に記
載の方法。 - エフェクターT細胞がCD4+細胞及びCD8+細胞から選択される、請求項44に記
載の方法。 - ベースラインと比較した場合、制御性T細胞の倍増が、in-vivoマウスモデルで
評価した場合、少なくとも約2の値に達する、請求項43~45のいずれか一項に記載の
方法。 - ベースラインと比較した場合、制御性T細胞の倍増が、in-vivoマウスモデルで
評価した場合、少なくとも約4の値に達する、請求項43~45のいずれか一項に記載の
方法。 - 制御性T細胞数の増加が、投与後少なくとも3日間、ベースラインレベルを超えて持続
する、請求項43~47のいずれか一項に記載の方法。 - 制御性T細胞数の増加が、投与後少なくとも5日間、ベースラインレベルを超えて持続
する、請求項43に記載の方法。 - 請求項1~42いずれか一項に記載の組成物の治療有効量を被験体に投与することを含
む、自己免疫疾患を有する被験体を治療する方法。 - 前記投与が皮下注射によるものである、請求項50に記載の方法。
- 前記投与が2週間に1回又は4週間に1回行われる、請求項50~51のいずれか一項
に記載の方法。 - 前記投与が、2週間に1回、3μg/kg~24μg/kgの用量を含む、請求項50
~52のいずれか一項に記載の方法。 - 治療法に使用するための、請求項1~42のいずれか一項に記載の組成物。
- 自己免疫疾患の治療に使用するための、請求項1~42のいずれか一項に記載の組成物
。 - 自己免疫疾患を治療するための薬剤を製造するための、請求項1~42のいずれか一項
に記載の組成物の使用。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2024092962A JP2024116272A (ja) | 2018-05-21 | 2024-06-07 | 選択的Treg刺激因子RUR20kD-IL-2及び関連組成物 |
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201862674244P | 2018-05-21 | 2018-05-21 | |
US62/674,244 | 2018-05-21 | ||
JP2020564540A JP7235772B2 (ja) | 2018-05-21 | 2019-05-20 | 選択的Treg刺激因子RUR20kD-IL-2及び関連組成物 |
PCT/US2019/033100 WO2019226538A1 (en) | 2018-05-21 | 2019-05-20 | SELECTIVE TREG STIMULATOR RUR20kD-IL-2 AND RELATED COMPOSITIONS |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020564540A Division JP7235772B2 (ja) | 2018-05-21 | 2019-05-20 | 選択的Treg刺激因子RUR20kD-IL-2及び関連組成物 |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2024092962A Division JP2024116272A (ja) | 2018-05-21 | 2024-06-07 | 選択的Treg刺激因子RUR20kD-IL-2及び関連組成物 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2023052053A true JP2023052053A (ja) | 2023-04-11 |
Family
ID=67002369
Family Applications (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020564540A Active JP7235772B2 (ja) | 2018-05-21 | 2019-05-20 | 選択的Treg刺激因子RUR20kD-IL-2及び関連組成物 |
JP2022206250A Pending JP2023052053A (ja) | 2018-05-21 | 2022-12-23 | 選択的Treg刺激因子RUR20kD-IL-2及び関連組成物 |
JP2024092962A Pending JP2024116272A (ja) | 2018-05-21 | 2024-06-07 | 選択的Treg刺激因子RUR20kD-IL-2及び関連組成物 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020564540A Active JP7235772B2 (ja) | 2018-05-21 | 2019-05-20 | 選択的Treg刺激因子RUR20kD-IL-2及び関連組成物 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2024092962A Pending JP2024116272A (ja) | 2018-05-21 | 2024-06-07 | 選択的Treg刺激因子RUR20kD-IL-2及び関連組成物 |
Country Status (19)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20210205413A1 (ja) |
EP (1) | EP3796940A1 (ja) |
JP (3) | JP7235772B2 (ja) |
CN (1) | CN112399859A (ja) |
AU (2) | AU2019274409B2 (ja) |
BR (1) | BR112020021564A2 (ja) |
CA (1) | CA3100204A1 (ja) |
CL (1) | CL2020003008A1 (ja) |
CO (1) | CO2020014510A2 (ja) |
CR (1) | CR20200546A (ja) |
DO (1) | DOP2020000212A (ja) |
EA (1) | EA202092489A1 (ja) |
EC (1) | ECSP20074392A (ja) |
IL (2) | IL312646A (ja) |
JO (1) | JOP20200290A1 (ja) |
PE (1) | PE20211307A1 (ja) |
PH (1) | PH12020551976A1 (ja) |
SG (1) | SG11202011242SA (ja) |
WO (1) | WO2019226538A1 (ja) |
Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN115315436A (zh) | 2020-01-10 | 2022-11-08 | 明峰治疗股份公司 | 修饰的il-2多肽及其用途 |
CN113121670B (zh) * | 2020-01-15 | 2022-11-22 | 天津键凯科技有限公司 | 二取代peg化白细胞介素2及其制备方法、应用 |
WO2021143572A1 (zh) * | 2020-01-15 | 2021-07-22 | 天津键凯科技有限公司 | 一种制备结合位点可控的peg化生物分子的方法 |
JP2021143142A (ja) * | 2020-03-11 | 2021-09-24 | 花王株式会社 | 制御性t細胞誘導剤 |
WO2021236474A1 (en) * | 2020-05-22 | 2021-11-25 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Novel processes for preparing conjugates of the il-2 protein |
TW202228784A (zh) | 2020-09-23 | 2022-08-01 | 奧地利商艾柏力維亞生技有限公司 | 用以於一患者中螯合非預期的抗peg抗體的化合物 |
WO2022109477A1 (en) * | 2020-11-23 | 2022-05-27 | University Of Florida Research Foundation, Incorporated | Use of insulin-like growth factors with gamma-chain cytokines to induce homeostatic proliferation of lymphocytes |
KR20240123817A (ko) | 2021-12-14 | 2024-08-14 | 넥타르 테라퓨틱스 | 선택적 TREG 자극제 RUR20kD-IL-2를 위한 투여 계획 및 관련 조성물 |
Family Cites Families (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4401756A (en) | 1981-04-14 | 1983-08-30 | Immunex Corporation | Process for preparing human interleukin 2 |
US4569790A (en) | 1984-03-28 | 1986-02-11 | Cetus Corporation | Process for recovering microbially produced interleukin-2 and purified recombinant interleukin-2 compositions |
US5116943A (en) | 1985-01-18 | 1992-05-26 | Cetus Corporation | Oxidation-resistant muteins of Il-2 and other protein |
US5206344A (en) | 1985-06-26 | 1993-04-27 | Cetus Oncology Corporation | Interleukin-2 muteins and polymer conjugation thereof |
US5153310A (en) | 1989-02-28 | 1992-10-06 | Du Pont Merck Pharmaceutical Company | Il-2 analogs containing n-linked glycosylation sites |
US5635597A (en) | 1994-05-27 | 1997-06-03 | Affymax Technologies, N.V. | Peptides that bind IL-2 receptors |
US6168785B1 (en) | 1998-07-16 | 2001-01-02 | Institut Pasteur | Biological applications of new peptides of IL-2 and derivatives and use as therapeutic agents |
FR2826365B1 (fr) | 2001-06-20 | 2003-09-26 | Oreal | Compositions cosmetiques photoprotectrices contenant des derives amides, sulfonamides ou carbamates aromatiques d'acrylonitrile et nouveaux derives amides, sulfonamides ou carbamates d'acrylonitrile |
PT2644206T (pt) | 2003-05-23 | 2019-07-10 | Nektar Therapeutics | Derivados de peg contendo duas cadeias de peg |
WO2005007121A2 (en) | 2003-07-18 | 2005-01-27 | Massachusetts Institute Of Technology | Mutant interleukin-2(il-2) polypeptides |
US7567215B1 (en) | 2007-10-23 | 2009-07-28 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Portable and inflatable antenna device |
RS61854B1 (sr) * | 2010-11-12 | 2021-06-30 | Nektar Therapeutics | Konjugati il-2 dela i polimera |
EP3766513A1 (en) * | 2011-03-11 | 2021-01-20 | Assistance Publique Hôpitaux de Paris | Use of low dosage il-2 for treating vasculitis |
EP3431096A4 (en) * | 2016-03-16 | 2020-01-15 | Xie, Yanhui | GLUCOCORTICOID COMBINED WITH INTERLEUKIN-2 MODIFIED BY POLYETHYLENE GLYCOL TO TREAT RESPIRATORY DISEASE |
-
2019
- 2019-05-20 EA EA202092489A patent/EA202092489A1/ru unknown
- 2019-05-20 AU AU2019274409A patent/AU2019274409B2/en active Active
- 2019-05-20 IL IL312646A patent/IL312646A/en unknown
- 2019-05-20 CN CN201980034052.1A patent/CN112399859A/zh active Pending
- 2019-05-20 PE PE2020001854A patent/PE20211307A1/es unknown
- 2019-05-20 CA CA3100204A patent/CA3100204A1/en active Pending
- 2019-05-20 IL IL278528A patent/IL278528B1/en unknown
- 2019-05-20 US US17/056,050 patent/US20210205413A1/en active Pending
- 2019-05-20 EP EP19732788.5A patent/EP3796940A1/en active Pending
- 2019-05-20 SG SG11202011242SA patent/SG11202011242SA/en unknown
- 2019-05-20 WO PCT/US2019/033100 patent/WO2019226538A1/en active Application Filing
- 2019-05-20 JO JOP/2020/0290A patent/JOP20200290A1/ar unknown
- 2019-05-20 CR CR20200546A patent/CR20200546A/es unknown
- 2019-05-20 JP JP2020564540A patent/JP7235772B2/ja active Active
- 2019-05-20 BR BR112020021564-3A patent/BR112020021564A2/pt unknown
-
2020
- 2020-11-18 PH PH12020551976A patent/PH12020551976A1/en unknown
- 2020-11-19 DO DO2020000212A patent/DOP2020000212A/es unknown
- 2020-11-19 CL CL2020003008A patent/CL2020003008A1/es unknown
- 2020-11-20 EC ECSENADI202074392A patent/ECSP20074392A/es unknown
- 2020-11-23 CO CONC2020/0014510A patent/CO2020014510A2/es unknown
-
2022
- 2022-10-06 AU AU2022246440A patent/AU2022246440A1/en active Pending
- 2022-12-23 JP JP2022206250A patent/JP2023052053A/ja active Pending
-
2024
- 2024-06-07 JP JP2024092962A patent/JP2024116272A/ja active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CR20200546A (es) | 2021-05-18 |
WO2019226538A1 (en) | 2019-11-28 |
PH12020551976A1 (en) | 2021-09-13 |
AU2022246440A1 (en) | 2022-11-03 |
IL312646A (en) | 2024-07-01 |
JOP20200290A1 (ar) | 2020-11-15 |
CA3100204A1 (en) | 2019-11-28 |
IL278528A (ja) | 2021-01-31 |
AU2019274409A1 (en) | 2020-11-12 |
CO2020014510A2 (es) | 2021-03-08 |
US20210205413A1 (en) | 2021-07-08 |
DOP2020000212A (es) | 2021-03-15 |
IL278528B1 (en) | 2024-06-01 |
SG11202011242SA (en) | 2020-12-30 |
ECSP20074392A (es) | 2021-03-31 |
JP7235772B2 (ja) | 2023-03-08 |
EA202092489A1 (ru) | 2021-03-16 |
AU2019274409B2 (en) | 2022-07-14 |
CL2020003008A1 (es) | 2021-07-30 |
PE20211307A1 (es) | 2021-07-20 |
CN112399859A (zh) | 2021-02-23 |
JP2024116272A (ja) | 2024-08-27 |
JP2021523922A (ja) | 2021-09-09 |
BR112020021564A2 (pt) | 2021-03-02 |
KR20210002577A (ko) | 2021-01-08 |
EP3796940A1 (en) | 2021-03-31 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7235772B2 (ja) | 選択的Treg刺激因子RUR20kD-IL-2及び関連組成物 | |
AU2022203691B2 (en) | Long-acting interleukin-15 receptor agonists and related immunotherapeutic compositions and methods | |
JP2018154644A (ja) | Il−2部分とポリマーとのコンジュゲート | |
JP2017511322A (ja) | Il−15部分とポリマーとのコンジュゲート | |
KR20170125839A (ko) | Il-7 부분 및 중합체의 접합체 | |
KR20170084033A (ko) | 질환 및 장애를 치료하기 위해 인터루킨-10을 사용하는 방법 | |
Katsara et al. | Design of novel cyclic altered peptide ligands of myelin basic protein MBP83− 99 that modulate immune responses in SJL/J mice | |
WO2015000585A1 (en) | Muteins of cytokines of the gamma-chain receptor family conjugated to a non-protein group | |
WO2022020637A1 (en) | Il-7 receptor agonist composition and related methods and uses | |
KR102706554B1 (ko) | 선택적 TREG 자극제 RUR20kD-IL-2 및 관련 조성물 | |
KR20240137713A (ko) | 선택적 TREG 자극제 RUR20kD-IL-2 및 관련 조성물 | |
US20100267651A1 (en) | T cell antigen receptor peptides | |
Thomas et al. | Design of glycoengineered IL-4 antagonists employing chemical and biosynthetic glycosylation | |
US20230303649A1 (en) | Modified il-2 polypeptides for treatment of inflammatory and autoimmune diseases | |
EA043667B1 (ru) | Длительно действующие агонисты рецептора интерлейкина-15, связанные с ними композиции и способы их получения и применения |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230120 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20230120 |
|
RD03 | Notification of appointment of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7423 Effective date: 20230721 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20230724 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20231207 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20240305 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20240502 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20240607 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20240806 |