JP2022553200A - ユニバーサル受容体療法のためのレトロウイルスベクター - Google Patents

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Abstract

本開示は、ハプテン結合受容体及びＴ細胞活性化受容体をコードするポリヌクレオチドを含むレトロウイルスベクターに関する。レトロウイルスベクターは、トランスダクションエンハンサーを含み得る。アダプター分子、ならびにアダプター分子のレトロウイルスベクター及びレトロウイルスベクターで形質導入されたＴ細胞との併用も開示される。本開示は、トランスダクションエンハンサー（ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｅｎｈａｎｃｅｒｓ）、Ｔ細胞活性化合成受容体、及び／またはハプテン結合受容体をコードするウイルスベクター、それを含む組成物、ならびにそれらの使用方法に関する。本開示は、ウイルスベクターと共に使用するためのハプテンを含むアダプター分子の使用にも関する。本開示の組成物及び方法は、疾患、例えば、がんの処置に有用であり得る。

Description

関連出願
本出願は、２０１９年１０月１６日に出願された米国仮出願第６２／９１６，１１０号の優先権及びその利益を主張し、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
配列表
本出願は、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介してＡＳＣＩＩフォーマットで提出された配列表を含有し、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。２０２０年１０月１５日に作成された上記ＡＳＣＩＩコピーは、「ＵＭＯＪ－００３－０１ＷＯ＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」という名称であり、７２ＫＢのサイズである。
本開示は、トランスダクションエンハンサー（ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｅｎｈａｎｃｅｒｓ）、Ｔ細胞活性化合成受容体、及び／またはハプテン結合受容体をコードするウイルスベクター、それを含む組成物、ならびにそれらの使用方法に関する。本開示は、ウイルスベクターと共に使用するためのハプテンを含むアダプター分子の使用にも関する。本開示の組成物及び方法は、疾患、例えば、がんの処置に有用であり得る。
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、養子細胞免疫療法に使用するためにＴ細胞を遺伝子操作するために使用される遺伝子操作された受容体である（Ｐｕｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｔｈｅｒ．５：３，２００３；Ｒｅｓｔｉｆｏ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：２６９，２０１２を参照のこと）。これらの受容体は、細胞内シグナル伝達コンポーネント、最も一般的には、単独のまたは１つ以上の共刺激ドメインと組み合わせたＣＤ３に連結された、細胞外リガンド結合ドメイン、最も一般的には、モノクローナル抗体の単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。抗原結合は、ＣＡＲの細胞内セグメントのシグナル伝達ドメインを刺激し、これにより、シグナル伝達経路を活性化する。ＣＡＲベースの養子細胞免疫療法は、従来の標準治療処置に対して治療抵抗性を示す腫瘍を有するがん患者を処置するために使用されてきた（Ｇｒｕｐｐ ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６８：１５０９，２０１３；Ｋａｌｏｓ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．３：９５ｒａ７３，２０１１を参照のこと）。
自家Ｔ細胞は、移植後のインビボでの有効性を増強するように操作されている導入遺伝子を発現するように遺伝子改変され得る。例えば、ＣＤ１９ Ｂ細胞系悪性腫瘍の状況における、導入遺伝子により改変されたＴ細胞の養子移入の成功にもかかわらず、全ての種類のがんに存在するが、正常細胞に存在しないユニバーサルＣＡＲ標的抗原は、同定されていない。従って、この分野は、腫瘍細胞に天然に存在し、身体の正常細胞／組織により最小限に発現される細胞表面標的を同定する必要性により妨げられている。従って、ＣＡＲ Ｔ細胞治療の開発は、ヒトを悩ます大多数のがん種を網羅するために、数十～数百種のＣＡＲ標的及びＣＡＲを精査する潜在的必要性の見通しにより妨げられている。加えて多くの場合、既存のＣＡＲ技術は、宿主にＣＡＲ Ｔ細胞を再注入する前に、ＣＡＲベクターを用いてＴ細胞を活性化及び形質導入するための高価な、かつ時間のかかるエクスビボでの操作ステップを必要とする。更に、ＣＡＲ Ｔ細胞は、危険な、致死的でさえある有害事象を引き起こし得る多数のオフターゲット効果を有し得る。
より安全であり、よりコスト効率が良く、かつより汎用的なＣＡＲ Ｔ細胞工学のまだ満たされていない必要性が存在する。
Ｐｕｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｔｈｅｒ．５：３，２００３；Ｒｅｓｔｉｆｏ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：２６９，２０１２ Ｇｒｕｐｐ ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６８：１５０９，２０１３ ；Ｋａｌｏｓ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．３：９５ｒａ７３，２０１１
本開示は、一般に、（ａ）標的化部分及びハプテンを含むアダプター分子を対象に投与すること；ならびに（ｂ）（ｉ）複数の組換えレトロウイルス粒子または（ｉｉ）エクスビボで免疫細胞を複数の組換えレトロウイルス粒子と接触させることにより生成される細胞のいずれかを当該対象に投与することを含む方法に関する。レトロウイルス粒子の各々は、５’から３’の順序で、（ｉ）５’末端反復配列（ＬＴＲ）または非翻訳領域（ＵＴＲ）、（ｉｉ）プロモーター、（ｉｉｉ）ハプテンに特異的に結合する受容体をコードする配列、及び（ｉｖ）３’ＬＴＲまたはＵＴＲを含むポリヌクレオチドを含む。レトロウイルス粒子の各々は、ウイルスエンベロープを含む。幾つかの実施形態では、本方法は、がんを処置する必要がある対象におけるがんを処置する方法である。幾つかの実施形態では、本方法は、腫瘍細胞を死滅させる必要がある対象における腫瘍細胞を死滅させる方法である。
別の態様では、本開示は、（ａ）標的化部分及びハプテンを含むアダプター分子；ならびに（ｂ）（ｉ）複数の組換えレトロウイルス粒子または（ｉｉ）エクスビボで免疫細胞を複数の組換えレトロウイルス粒子と接触させることにより生成される細胞のいずれかを含むシステムまたは組成物を提供する。レトロウイルス粒子の各々は、５’から３’の順序で、（ｉ）５’末端反復配列（ＬＴＲ）またはＵＴＲ、（ｉｉ）プロモーター、（ｉｉｉ）ハプテンに特異的に結合する受容体をコードする配列、及び（ｉｖ）３’ＬＴＲまたはＵＴＲを含むポリヌクレオチドを含む。レトロウイルス粒子の各々は、ウイルスエンベロープを含む。幾つかの実施形態では、システムまたは組成物は、それらを使用するための使用説明書を含むキットで提供される。
本発明の更なる態様及び実施形態は、以下の発明を実施するための形態により提供される。
形質導入されたＴ細胞におけるＦＩＴＣ－ＣＡＲ構築物の表面発現を示すフローサイトメトリー染色プロットを示す。図１Ａは、リンパ球のフローサイトメトリー染色プロットを示し、これは単一細胞を可視化するために更にゲーティングされた（図１Ｂ）。単一細胞は、ＣＤ３＋細胞を可視化するために更にゲーティングされた（図１Ｃ）。ＣＤ３＋細胞は、ＦＩＴＣ－ＣＡＲ＋細胞を可視化するために更にゲーティングされた（図１Ｄ）。 形質導入されたＴ細胞におけるＦＩＴＣ－ＣＡＲ構築物の表面発現を示すフローサイトメトリー染色プロットを示す。図１Ａは、リンパ球のフローサイトメトリー染色プロットを示し、これは単一細胞を可視化するために更にゲーティングされた（図１Ｂ）。単一細胞は、ＣＤ３＋細胞を可視化するために更にゲーティングされた（図１Ｃ）。ＣＤ３＋細胞は、ＦＩＴＣ－ＣＡＲ＋細胞を可視化するために更にゲーティングされた（図１Ｄ）。 形質導入されたＴ細胞におけるＦＩＴＣ－ＣＡＲ構築物の表面発現を示すフローサイトメトリー染色プロットを示す。図１Ａは、リンパ球のフローサイトメトリー染色プロットを示し、これは単一細胞を可視化するために更にゲーティングされた（図１Ｂ）。単一細胞は、ＣＤ３＋細胞を可視化するために更にゲーティングされた（図１Ｃ）。ＣＤ３＋細胞は、ＦＩＴＣ－ＣＡＲ＋細胞を可視化するために更にゲーティングされた（図１Ｄ）。 形質導入されたＴ細胞におけるＦＩＴＣ－ＣＡＲ構築物の表面発現を示すフローサイトメトリー染色プロットを示す。図１Ａは、リンパ球のフローサイトメトリー染色プロットを示し、これは単一細胞を可視化するために更にゲーティングされた（図１Ｂ）。単一細胞は、ＣＤ３＋細胞を可視化するために更にゲーティングされた（図１Ｃ）。ＣＤ３＋細胞は、ＦＩＴＣ－ＣＡＲ＋細胞を可視化するために更にゲーティングされた（図１Ｄ）。 ＲＡＣＲ－ＣＡＲペイロードを発現する形質導入されたＴ細胞が、ＲＡＣＲを活性化するラパマイシンの添加（図２Ａおよび図２Ｄ）によりどのくらい富化されるか、及び／またはＣＡＲを活性化するＦＩＴＣ抗原（図２Ｂ～２Ｃおよび図２Ｅ～２Ｆ）の添加によりどのくらい富化されるかを示すフローサイトメトリー染色プロットを示す。図２Ａ～２Ｃは、０ｎＭのラパマイシンで処理された形質導入された細胞を示し、図２Ｄ～２Ｆは、１０ｎＭのラパマイシンで処理された形質導入された細胞を示す。図２Ｂおよび２Ｅは、ＦＩＴＣによりコーティングされたビーズで刺激された形質導入された細胞を示し、図２Ｃおよび２Ｆは、プレートに結合したＦＩＴＣで刺激された形質導入された細胞を示す。 刺激されなかったか、ＦＩＴＣでコーティングされたビーズにより刺激されたか、またはプレート結合ＦＩＴＣにより刺激された、かつラパマイシンが添加された（１０ｎＭ）か、または添加されなかった（０ｎＭ）、形質導入された細胞のうちのＦＩＴＣ－ＣＡＲ＋生Ｔ細胞の百分率を示すグラフを示す。 刺激されなかったか、ＦＩＴＣでコーティングされたビーズにより刺激されたか、またはプレート結合ＦＩＴＣにより刺激された、かつラパマイシンが添加された（１０ｎＭ）か、または添加されなかった（０ｎＭ）、形質導入された細胞のうちのＦＩＴＣ－ＣＡＲ＋生Ｔ細胞の総数を示すグラフを示す。 刺激されなかったか、ＦＩＴＣでコーティングされたビーズにより刺激されたか、またはプレート結合ＦＩＴＣにより刺激された、かつラパマイシンが添加された（１０ｎＭ）か、または添加されなかった（０ｎＭ）、形質導入された細胞における活性化マーカーＣＤ２５の上方調節を示すグラフを示す。ｇＭＦＩ＝幾何平均蛍光強度。 ＦＩＴＣ ＣＡＲ－Ｆｒｂ－ＲＡＣＲのベクターマップを示す。 ＣＤ３－コーカルウイルス粒子エンベロープのベクターマップを示す。
本開示は、一般に、（ａ）標的化部分及びハプテンを含むアダプター分子を対象に投与すること；ならびに（ｂ）（ｉ）複数の組換えレトロウイルス粒子または（ｉｉ）エクスビボで免疫細胞を複数の組換えレトロウイルス粒子と接触させることにより生成される細胞のいずれかを当該対象に投与することを含む方法に関する。レトロウイルス粒子の各々は、ハプテンに特異的に結合する受容体をコードする配列を含むポリヌクレオチドを含む。レトロウイルス粒子の各々は、ウイルスエンベロープを含む。幾つかの実施形態では、本方法は、がんを処置する必要がある対象におけるがんを処置する方法である。幾つかの実施形態では、本方法は、腫瘍細胞を死滅させる必要がある対象における腫瘍細胞を死滅させる方法である。
別の態様では、本開示は、（ａ）標的化部分及びハプテンを含むアダプター分子；ならびに（ｂ）（ｉ）複数の組換えレトロウイルス粒子または（ｉｉ）エクスビボで免疫細胞を複数の組換えレトロウイルス粒子と接触させることにより生成される細胞のいずれかを含むシステムまたは組成物を提供する。レトロウイルス粒子の各々は、５’から３’の順序で、（ｉ）５’末端反復配列（ＬＴＲ）または非翻訳領域（ＵＴＲ）、（ｉｉ）プロモーター、（ｉｉｉ）ハプテンに特異的に結合する受容体をコードする配列、及び（ｉｖ）３’ＬＴＲまたはＵＴＲを含むポリヌクレオチドを含む。レトロウイルス粒子の各々は、ウイルスエンベロープを含む。幾つかの実施形態では、システムまたは組成物は、それらを使用するための使用説明書を含むキットで提供される。
レトロウイルス粒子
レトロウイルスとしては、レンチウイルス、γ－レトロウイルス、及びα－レトロウイルスが挙げられ、これらの各々は、当該技術分野において公知の方法を使用して細胞にポリヌクレオチドを送達するために使用され得る。レンチウイルスは、一般的なレトロウイルス遺伝子であるｇａｇ、ｐｏｌ、及びｅｎｖに加えて、調節機能または構造機能を有する他の遺伝子を含有する複合レトロウイルスである。より高い複雑性により、ウイルスは、潜伏感染の過程のように、その生活環を調節することが可能となる。レンチウイルスの幾つかの例としては、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ－１及びＨＩＶ－２）及びサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）が挙げられる。レンチウイルスベクターは、ＨＩＶの病原性遺伝子を複合的に弱毒化することにより作製されており、例えば、遺伝子ｅｎｖ、ｖｉｆ、ｖｐｒ、ｖｐｕ、及びｎｅｆが欠失していることにより、生物学的に安全なベクターとなっている。
例示的なレンチウイルスベクターとしては、Ｎａｌｄｉｎｉ ｅｔ ａｌ．（１９９６） Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７２：２６３－７；Ｚｕｆｆｅｒｅｙ ｅｔ ａｌ．（１９９８） Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７２：９８７３－９８８０；Ｄｕｌｌ ｅｔ ａｌ．（１９９８） Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７２：８４６３－８４７１；米国特許第６，０１３，５１６号；及び米国特許第５，９９４，１３６号（これらの各々はそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるものが挙げられる。一般に、これらのベクターは、ベクターを含有する細胞の選択のための、レンチウイルス粒子に外来核酸を組み込むための、及び標的細胞への核酸の導入のための必須配列を保有するように構成される。
一般的に使用されるレンチウイルスベクターシステムは、いわゆる第三世代システムである。第三世代レンチウイルスベクターシステムは、４つのプラスミドを含む。「導入プラスミド」は、レンチウイルスベクターシステムにより標的細胞に送達されるポリヌクレオチド配列をコードする。導入プラスミドは、一般に、導入プラスミド配列の宿主ゲノムへの組込みを促進する末端反復配列（ＬＴＲ）に挟まれた関心対象の１つ以上の導入遺伝子配列を有する。安全上の理由から、導入プラスミドは、一般に、得られるベクターが複製不能となるように設計される。例えば、導入プラスミドは、宿主細胞内での感染性粒子の生成に必要な遺伝子要素を欠く。加えて、３’ＬＴＲが欠失した導入プラスミドが設計され得、これにより、ウイルスを「自己不活性化」（ＳＩＮ）させる。Ｄｕｌｌ ｅｔ ａｌ．（１９９８） Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７２：８４６３－７１；Ｍｉｙｏｓｈｉ ｅｔ ａｌ．（１９９８） Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７２：８１５０－５７を参照のこと。ウイルス粒子は、３’非翻訳領域（ＵＴＲ）及び５’ＵＴＲも含み得る。ＵＴＲは、パッケージング、逆転写、及びレトロウイルス粒子による細胞との接触後の当該細胞へのプロウイルスゲノムの組込みを補助するレトロウイルス調節エレメントを含む。
第三世代システムは、一般に、２つの「パッケージングプラスミド」及び「エンベローププラスミド」も含む。「エンベローププラスミド」は、一般に、プロモーターに機能的に連結されたＥｎｖ遺伝子をコードする。例示的な第三世代システムにおいて、Ｅｎｖ遺伝子はＶＳＶ－Ｇであり、プロモーターはＣＭＶプロモーターである。第三世代システムは、更なる安全性特徴、すなわち、いわゆる第二世代システムの単一パッケージングプラスミドに優る改良として２つのパッケージングプラスミドを使用し、一方はｇａｇ及びｐｏｌをコードし、他方は、ｒｅｖをコードする。第三世代システムは、より安全ではあるが、より扱いづらい場合があり、更なるプラスミドの追加に起因して、より低いウイルス力価をもたらす。例示的なパッケージングプラスミドとしては、限定されるものではないが、ｐＭＤ２．Ｇ、ｐＲＳＶ－ｒｅｖ、ｐＭＤＬＧ－ｐＲＲＥ、及びｐＲＲＬ－ＧＯＩが挙げられる。
多数のレトロウイルスベクターシステムが、「パッケージング細胞株」の使用に依存する。一般に、パッケージング細胞株は、導入プラスミド、パッケージングプラスミド（複数可）、及びエンベローププラスミドが細胞に導入された場合に、細胞が感染性レトロウイルス粒子を生成することが可能な細胞株である。形質移入またはエレクトロポレーションが含まれる、プラスミドを細胞に導入する様々な方法が使用され得る。幾つかの例では、パッケージング細胞株は、レトロウイルスベクターシステムをレトロウイルス粒子に高効率でパッケージングするのに適している。
本明細書で使用する場合、用語「レトロウイルスベクター」または「レンチウイルスベクター」は、ゲノムパッケージングに必要とされるレトロウイルスまたはレンチウイルスのシス核酸配列及び標的細胞に送達される１つ以上のポリヌクレオチド配列をコードする核酸を意味することを意図する。レトロウイルス粒子またはレンチウイルス粒子は、一般に、ＲＮＡゲノム（導入プラスミドに由来する）、Ｅｎｖタンパク質が埋め込まれた脂質二重層のエンベロープ、ならびにインテグラーゼ、プロテアーゼ、及び基質タンパク質が含まれる他のアクセサリータンパク質を含む。本明細書で使用する場合、用語「レトロウイルス粒子」または「レンチウイルス粒子」は、エンベロープを含み、レンチウイルスの１つ以上の特性を有し、標的宿主細胞に侵入することができるウイルス粒子を指すことを意図する。かかる特性としては、例えば、非分裂宿主細胞に感染すること、非分裂宿主細胞を形質導入すること、宿主免疫細胞に感染するか、もしくはそれを形質導入すること、ｇａｇ構造ポリペプチド、例えば、ｐ７、ｐ２４、及びｐ１７のうちの１つ以上を含むレトロウイルスもしくはレンチウイルスビリオンを含有すること、ｅｎｖにコードされる糖タンパク質、例えば、ｐ４１、ｐ１２０、及びｐ１６０のうちの１つ以上を含むレトロウイルスもしくはレンチウイルスエンベロープを含有すること、複製、プロウイルス組込み、もしくは転写において機能する１つ以上のレトロウイルスもしくはレンチウイルスシス作用配列を含むゲノムを含有すること、レトロウイルスもしくはレンチウイルスのプロテアーゼ、逆転写酵素、もしくはインテグラーゼをコードするゲノムを含有すること、またはＴａｔもしくはＲｅｖなどの調節活性をコードするゲノムを含有することが挙げられる。導入プラスミドは、米国特許第８，０９３，０４２に記載されているように、ｃＰＰＴ配列を含み得る。
システムの効率は、ベクター工学において重要な関心事である。レトロウイルスまたはレンチウイルスベクターシステムの効率は、定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ｑＰＣＲ）などによるベクターコピー数（ＶＣＮ）もしくはベクターゲノム（ｖｇ）の測定、またはミリリットル当たりの感染単位（ＩＵ／ｍＬ）でのウイルスの力価の測定が含まれる、当該技術分野において公知の種々の方法で評価され得る。例えば、力価は、Ｈｕｍｂｅｒｔ ｅｔ ａｌ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｔｈｉｒｄ－ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ Ｃｏｃａｌ Ｅｎｖｅｌｏｐｅ Ｐｒｏｄｕｃｅｒ Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｅｓ ｆｏｒ Ｒｏｂｕｓｔ Ｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ｉｎｔｏ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｔ－ｃｅｌｌｓ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ２４：１２３７－１２４６（２０１６）に記載されているように、培養された腫瘍細胞株ＨＴ１０８０で実行される機能アッセイを使用して評価され得る。絶えず分裂している培養細胞株で力価が評価される場合、刺激は必要とされないため、測定される力価は、レトロウイルス粒子の表面改変による影響を受けない。レトロウイルスベクターシステムの効率を評価するための他の方法は、Ｇａｅｒｅｒｔｓ ｅｔ ａｌ．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒ ｔｉｔｒａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ．ＢＭＣ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．６：３４（２００６）で提供されている。
幾つかの実施形態では、本開示のレトロウイルス粒子及び／またはレンチウイルス粒子は、ハプテンに特異的に結合する受容体をコードする配列を含むポリヌクレオチドを含む。幾つかの実施形態では、ハプテンに特異的に結合する受容体をコードする配列は、プロモーターに機能的に連結されている。例示的プロモーターとしては、限定されるものではないが、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ＣＡＧプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＳＶ４０／ＣＤ４３プロモーター、及びＭＮＤプロモーターが挙げられる。
幾つかの実施形態では、レトロウイルス粒子は、トランスダクションエンハンサーを含む。幾つかの実施形態では、レトロウイルス粒子は、Ｔ細胞活性化タンパク質をコードする配列を含むポリヌクレオチドを含む。幾つかの実施形態では、レトロウイルス粒子は、ハプテン結合受容体をコードする配列を含むポリヌクレオチドを含む。幾つかの実施形態では、レトロウイルス粒子は、タグ付けタンパク質を含む。
幾つかの実施形態では、レトロウイルス粒子の各々は、５’から３’の順序で、（ｉ）５’末端反復配列（ＬＴＲ）または非翻訳領域（ＵＴＲ）、（ｉｉ）プロモーター、（ｉｉｉ）ハプテンに特異的に結合する受容体をコードする配列、及び（ｉｖ）３’ＬＴＲまたはＵＴＲを含むポリヌクレオチドを含む。
幾つかの実施形態では、レトロウイルス粒子は、標的宿主細胞上のリガンドに結合する細胞表面受容体を含み、これにより、宿主細胞への形質導入を可能にする。ウイルスベクターは、異種ウイルスエンベロープ糖タンパク質を含み得、偽型ウイルスベクターを生じる。例えば、ウイルスエンベロープ糖タンパク質は、ＲＤ１１４もしくはそのバリアントのうちの１つ、ＶＳＶ－Ｇ、テナガザル白血病ウイルス（ＧＡＬＶ）に由来し得るか、または両栄養性ウイルスエンベロープ、麻疹ウイルスエンベロープ、もしくはヒヒレトロウイルスエンベロープ糖タンパク質に由来し得る。幾つかの実施形態では、細胞表面受容体は、コーカル株由来のＶＳＶ Ｇタンパク質またはその機能的バリアントである。幾つかの実施形態では、ウイルス融合糖タンパク質は、配列番号１（コーカルＧタンパク質）のアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ウイルス融合糖タンパク質は、配列番号１（コーカルＧタンパク質）と少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態では、ウイルス融合糖タンパク質は、配列番号１（コーカルＧタンパク質）と少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％同一なアミノ酸配列を含む。
ＮＦＬＬＬＴＦＩＶＬＰＬＣＳＨＡＫＦＳＩＶＦＰＱＳＱＫＧＮＷＫＮＶＰＳＳＹＨＹＣＰＳＳＳＤＱＮＷＨＮＤＬＬＧＩＴＭＫＶＫＭＰＫＴＨＫＡＩＱＡＤＧＷＭＣＨＡＡＫＷＩＴＴＣＤＦＲＷＹＧＰＫＹＩＴＨＳＩＨＳＩＱＰＴＳＥＱＣＫＥＳＩＫＱＴＫＱＧＴＷＭＳＰＧＦＰＰＱＮＣＧＹＡＴＶＴＤＳＶＡＶＶＶＱＡＴＰＨＨＶＬＶＤＥＹＴＧＥＷＩＤＳＱＦＰＮＧＫＣＥＴＥＥＣＥＴＶＨＮＳＴＶＷＹＳＤＹＫＶＴＧＬＣＤＡＴＬＶＤＴＥＩＴＦＦＳＥＤＧＫＫＥＳＩＧＫＰＮＴＧＹＲＳＮＹＦＡＹＥＫＧＤＫＶＣＫＭＮＹＣＫＨＡＧＶＲＬＰＳＧＶＷＦＥＦＶＤＱＤＶＹＡＡＡＫＬＰＥＣＰＶＧＡＴＩＳＡＰＴＱＴＳＶＤＶＳＬＩＬＤＶＥＲＩＬＤＹＳＬＣＱＥＴＷＳＫＩＲＳＫＱＰＶＳＰＶＤＬＳＹＬＡＰＫＮＰＧＴＧＰＡＦＴＩＩＮＧＴＬＫＹＦＥＴＲＹＩＲＩＤＩＤＮＰＩＩＳＫＭＶＧＫＩＳＧＳＱＴＥＲＥＬＷＴＥＷＦＰＹＥＧＶＥＩＧＰＮＧＩＬＫＴＰＴＧＹＫＦＰＬＦＭＩＧＨＧＭＬＤＳＤＬＨＫＴＳＱＡＥＶＦＥＨＰＨＬＡＥＡＰＫＱＬＰＥＥＥＴＬＦＦＧＤＴＧＩＳＫＮＰＶＥＬＩＥＧＷＦＳＳＷＫＳＴＶＶＴＦＦＦＡＩＧＶＦＩＬＬＹＶＶＡＲＩＶＩＡＶＲＹＲＹＱＧＳＮＮＫＲＩＹＮＤＩＥＭＳＲＦＲＫ
（配列番号１）
様々な融合糖タンパク質が、偽型レンチウイルスベクターに使用され得る。最も一般的に使用される例は、水疱性口炎ウイルス（ＶＳＶＧ）由来のエンベロープ糖タンパク質であるが、多数の他のウイルスタンパク質もレンチウイルスベクターを偽型化するために使用されてきた。Ｊｏｇｌｅｋａｒ ｅｔ ａｌ．Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８：２９１－３０１（２０１７）を参照のこと。本開示は、様々な融合糖タンパク質の置換を意図する。注目すべきことに、一部の融合糖タンパク質は、より高いベクター効率をもたらす。
幾つかの実施形態では、融合糖タンパク質またはその機能的バリアントの偽型化は、限定されるものではないが、Ｔ細胞またはＮＫ細胞が含まれる、特定の細胞種の標的化形質導入を促進する。幾つかの実施形態では、融合糖タンパク質またはその機能的バリアントは、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）のｇｐ１６０、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）のｇｐ７０、テナガザル白血病ウイルス（ＧＡＬＶ）のｇｐ７０、ネコ白血病ウイルス（ＲＤ１１４）のｇｐ７０、アンフォトロピックレトロウイルス（Ａｍｐｈｏ）のｇｐ７０、１０Ａ１ ＭＬＶ（１０Ａ１）のｇｐ７０、エコトロピックレトロウイルス（Ｅｃｏ）のｇｐ７０、ヒヒ内在性ウイルス（ＢａＥＶ）のｇｐ７０、麻疹ウイルス（ＭＶ）のＨ及びＦタンパク質、ニパウイルス（ＮｉＶ）のＨ及びＦタンパク質、狂犬病ウイルス（ＲａｂＶ）のＧタンパク質、モコラウイルス（ＭＯＫＶ）のＧタンパク質、エボラザイールウイルス（ＥｂｏＺ）のＧタンパク質、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）のＧＰ１及びＧＰ２、バキュロウイルスのＧＰ６４、チクングンヤウイルス（ＣＨＩＫＶ）のＥ１及びＥ２、ロスリバーウイルス（ＲＲＶ）のＥ１及びＥ２、セムリキ森林ウイルス（ＳＦＶ）のＥ１及びＥ２、シンドビスウイルス（ＳＶ）のＥ１及びＥ２、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＶＥＥＶ）のＥ１及びＥ２、西部ウマ脳炎ウイルス（ＷＥＥＶ）のＥ１及びＥ２、インフルエンザＡ、Ｂ、Ｃ、もしくはＤのＨＡ、トリペストウイルス（ＦＰＶ）のＨＡ、水疱性口炎ウイルスのＶＳＶ－Ｇ、またはチャンディプラウイルス及びピリウイルスのＣＮＶ－Ｇ及びＰＲＶ－Ｇの全長ポリペプチド（複数可）、機能断片（複数可）、ホモログ（複数可）、または機能的バリアント（複数可）である。
幾つかの実施形態では、融合糖タンパク質またはその機能的バリアントは、水胞性口内炎アラゴウイルス（ＶＳＡＶ）、カラジャスベシクロウイルス（ＣＪＳＶ）、チャンディプラベシクロウイルス（ＣＨＰＶ）、コーカルベシクロウイルス（ＣＯＣＶ）、水胞性口内炎インディアナウイルス（ＶＳＩＶ）、イスファハンベシクロウイルス（ＩＳＦＶ）、マラバベシクロウイルス（ＭＡＲＡＶ）、水胞性口内炎ニュージャージーウイルス（ＶＳＮＪＶ）、バス・コンゴウイルス（ＢＡＳＶ）のＧタンパク質の全長ポリペプチド、機能断片、ホモログ、または機能的バリアントである。幾つかの実施形態では、融合糖タンパク質またはその機能的バリアントは、コーカルウイルスＧタンパク質である。
幾つかの実施形態では、融合糖タンパク質またはその機能的バリアントは、水胞性口内炎アラゴウイルス（ＶＳＡＶ）、カラジャスベシクロウイルス（ＣＪＳＶ）、チャンディプラベシクロウイルス（ＣＨＰＶ）、コーカルベシクロウイルス（ＣＯＣＶ）、水胞性口内炎インディアナウイルス（ＶＳＩＶ）、イスファハンベシクロウイルス（ＩＳＦＶ）、マラバベシクロウイルス（ＭＡＲＡＶ）、水胞性口内炎ニュージャージーウイルス（ＶＳＮＪＶ）、バス・コンゴウイルス（ＢＡＳＶ）のＧタンパク質の全長ポリペプチド、機能断片、ホモログ、または機能的バリアントである。幾つかの実施形態では、融合糖タンパク質またはその機能的バリアントは、コーカルウイルスＧタンパク質である。
更に本開示は、限定されるものではないが、γ－レトロウイルスベクター、α－レトロウイルスベクター、及びレンチウイルスベクターが含まれる、様々なレトロウイルスベクターを提供する。
トランスダクションエンハンサー
幾つかの実施形態では、本開示によるウイルス粒子は、トランスダクションエンハンサーを含む。
本明細書で使用する場合、「トランスダクションエンハンサー」は、Ｔ細胞を活性化する膜貫通タンパク質を指す。トランスダクションエンハンサーは、本開示によるウイルス粒子のウイルスエンベロープに組み込まれ得る。トランスダクションエンハンサーは、分裂促進ドメイン及び／またはサイトカインベースのドメインを含み得る。トランスダクションエンハンサーは、Ｔ細胞活性化受容体、ＮＫ細胞活性化受容体、共刺激分子、またはそれらの一部を含み得る。
分裂促進性トランスダクションエンハンサー
本発明のウイルスベクターは、ウイルスエンベロープに分裂促進性トランスダクションエンハンサーを含み得る。幾つかの実施形態では、分裂促進性トランスダクションエンハンサーは、レトロウイルスベクター生成時の宿主細胞に由来する。幾つかの実施形態では、分裂促進性トランスダクションエンハンサーは、パッケージング細胞により作られ、細胞表面に発現される。新生レトロウイルスベクターが宿主細胞膜から出芽する時、分裂促進性トランスダクションエンハンサーが、パッケージング細胞由来の脂質二重層の一部としてウイルスエンベロープに組み込まれ得る。
幾つかの実施形態では、トランスダクションエンハンサーは、宿主細胞由来である。用語「宿主細胞由来」は、分裂促進性トランスダクションエンハンサーが上記の通り宿主細胞に由来し、ウイルス遺伝子、例えば、主要構造タンパク質をコードするｇａｇ、またはエンベロープタンパク質をコードするｅｎｖのうちの１つからの融合物またはキメラとして生成されないことを示す。
エンベロープタンパク質は、タンパク質を脂質膜に係留する膜貫通（ＴＭ）サブユニット及び細胞受容体に結合する表面（ＳＵ）サブユニットの２つのサブユニットにより形成される。幾つかの実施形態では、本発明のパッケージング細胞由来分裂促進性トランスダクションエンハンサーは、エンベロープ表面サブユニット（ＳＵ）を含まない。
分裂促進性トランスダクションエンハンサーは、Ｍ－Ｓ－ＴＭの構造を有し得、ここで、Ｍは分裂促進ドメインであり、Ｓは任意のスペーサードメインであり、ＴＭは膜貫通ドメインである。
トランスダクションエンハンサーの分裂促進ドメイン
分裂促進ドメインは、Ｔ細胞活性化を引き起こす、分裂促進性トランスダクションエンハンサーの一部である。これは、直接的または間接的に、Ｔ細胞に結合し得るか、またはそうでなければＴ細胞と相互作用し得、これにより、Ｔ細胞活性化を引き起こす。特に、分裂促進ドメインは、Ｔ細胞表面抗原、例えば、ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ１３４、及びＣＤ１３７に結合し得る。
ＣＤ３は、Ｔ細胞共受容体である。これは、４つの異なる鎖から構成されるタンパク質複合体である。哺乳動物において、この複合体は、ＣＤ３ｙ鎖、ＣＤ３５鎖、及び２本のＣＤ３ｅ鎖を含有する。これらの鎖は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）及びζ鎖と結合して、Ｔリンパ球内に活性化シグナルを発生させる。ＴＣＲ、ζ鎖、及びＣＤ３分子は、共にＴＣＲ複合体を構成する。
幾つかの実施形態では、分裂促進ドメインは、ＣＤ３ε鎖に結合し得る。
ＣＤ２８は、Ｔ細胞で発現されるタンパク質の１つであり、Ｔ細胞活性化及び生存に必要とされる共刺激シグナルを提供する。Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）に加えてＣＤ２８によるＴ細胞刺激は、様々なインターロイキン（特にＩＬ－６）の産生の強力なシグナルを発生させ得る。ＯＸ４０としても公知のＣＤ１３４は、受容体のＴＮＦＲスーパーファミリーのメンバーであり、ＣＤ２８と異なり、休止期ナイーブＴ細胞で恒常的に発現されない。ＯＸ４０は、活性化後の２４～７２時間後に発現される二次共刺激分子であり、そのリガンドであるＯＸ４０Ｌも休止期の抗原提示細胞で発現されないが、それらの活性化後に発現される。ＯＸ４０の発現は、Ｔ細胞の完全な活性化に依存し、ＣＤ２８なしでは、ＯＸ４０の発現は、遅延され、４分の１になる。
４－１ＢＢとしても公知のＣＤ１３７は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体ファミリーのメンバーである。ＣＤ１３７は、活性化Ｔ細胞により発現され得るが、ＣＤ４ Ｔ細胞と比べてＣＤ８ Ｔ細胞で大部分が発現される。加えて、ＣＤ１３７発現は、樹状細胞、濾胞樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、顆粒球、及び炎症部位の血管壁の細胞で見出される。ＣＤ１３７の最良に特徴決定された活性は、活性化Ｔ細胞に対するその共刺激活性である。ＣＤ１３７の架橋は、Ｔ細胞の増殖、ＩＬ－２分泌、生存、及び細胞溶解反応を増強する。
分裂促進ドメインは、Ｔ細胞表面抗原に特異的に結合する抗体または他の分子の全体または一部を含み得る。抗体は、ＴＣＲまたはＣＤ２８を活性化し得る。抗体は、ＴＣＲ、ＣＤ３、またはＣＤ２８に結合し得る。かかる抗体の例としては、以下が挙げられる：ＯＫＴ３、１５Ｅ８、及びＴＧＮ１４１２。他の好適な抗体としては、以下が挙げられる。
抗ＣＤ２８：ＣＤ２８．２、１０Ｆ３
抗ＣＤ３／ＴＣＲ：ＵＣＨＴ１、ＹＴＨ１２．５、ＴＲ６６
分裂促進ドメインは、ＯＫＴ３、１５Ｅ８、ＴＧＮ１４１２、ＣＤ２８．２、１０Ｆ３、ＵＣＨＴ１、ＹＴＨ１２．５、またはＴＲ６６由来の結合ドメインを含み得る。
分裂促進ドメインは、共刺激分子、例えば、ＯＸ４０Ｌ及び４１ ＢＢＬの全体または一部を含み得る。例えば、分裂促進ドメインは、ＯＸ４０Ｌまたは４１ ＢＢＬ由来の結合ドメインを含み得る。
ムロモナブ－ＣＤ３としても公知のＯＫＴ３は、ＣＤ３ｅ鎖を標的とするモノクローナル抗体である。これは、臓器移植患者における急性拒絶を低減するために臨床で使用される。これは、ヒトでの臨床使用が承認された最初のモノクローナル抗体であった。ＯＫＴ３のＣＤＲは、以下の通りである。
ＣＤＲＨ１：ＧＹＴＦＴＲＹ（配列番号４）
ＣＤＲＨ２：ＮＰＳＲＧＹ（配列番号５）
ＣＤＲＨ３：ＹＹＤＤＨＹＣＬＤＹ（配列番号６）
ＣＤＲＬ１：ＳＡＳＳＳＶＳＹＭＮ（配列番号７）
ＣＤＲＬ２：ＤＴＳＫＬＡＳ（配列番号８）
ＣＤＲＬ３：ＱＱＷＳＳＮＰＦＴ（配列番号９）
１５Ｅ８は、ヒトＣＤ２８に対するマウスモノクローナル抗体である。そのＣＤＲは、以下の通りである。
ＣＤＲＨ１：ＧＦＳＬＴＳＹ（配列番号１０）
ＣＤＲＨ２：ＷＡＧＧＳ（配列番号１１）
ＣＤＲＨ３：ＤＫＲＡＰＧＫＬＹＹＧＹＰＤＹ（配列番号１２）
ＣＤＲＬ１：ＲＡＳＥＳＶＥＹＹＶＴＳＬＭＱ（配列番号１３）
ＣＤＲＬ２：ＡＡＳＮＶＥＳ（配列番号１４）
ＣＤＲＬ３：ＱＱＴＲＫＶＰＳＴ（配列番号１５）
ＴＧＮ１４１２（ＣＤ２８－ＳｕｐｅｒＭＡＢとしても公知）は、ＣＤ２８受容体に結合するだけでなく、ＣＤ２８受容体の強力なアゴニストであるヒト化モノクローナル抗体である。そのＣＤＲは、以下の通りである。
ＣＤＲＨ１：ＧＹＴＦＳＹ（配列番号１６）
ＣＤＲＨ２：ＹＰＧＮＶＮ（配列番号１７）
ＣＤＲＨ３：ＳＨＹＧＬＤＷＮＦＤＶ（配列番号１８）
ＣＤＲＬ１：ＨＡＳＱＮＩＹＶＬＮ（配列番号１９）
ＣＤＲＬ２：ＫＡＳＮＬＨＴ（配列番号２０）
ＣＤＲＬ３：ＱＱＧＱＴＹＰＹＴ（配列番号２１）
ＯＸ４０Ｌは、ＣＤ１３４のリガンドであり、Ｔｈ２細胞分化の増強を可能にするＤＣ２（樹状細胞のサブタイプ）などの細胞で発現される。ＯＸ４０Ｌは、ＣＤ２５２（分化抗原群２５２）とも称されている。
ＯＸ４０Ｌ配列（配列番号２２）
ＭＥＲＶＱＰＬＥＥＮＶＧＮＡＡＲＰＲＦＥＲＮＫＬＬＬＶＡＳＶＩＱＧＬＧＬＬＬＣＦＴＹＩＣＬＨＦＳＡＬＱＶＳＨＲＹＰＲＩＱＳＩＫＶＱＦＴＥＹＫＫＥＫＧＦＩＬＴＳＱＫＥＤＥＩＭＫＶＱＮＹＬＩＳＬＫＧＹＦＳＱＥＶＮＩＳＬＨＹＱＫＤＥＥＰＬＦＱＬＫＫＶＲＳＶＮＳＬＭＶＡＳＬＴＹＫＤＫＶＹＬＮＶＴＴＤＮＴＳＬＤＤＦＨＶＮＧＧＥＬＩＬＩＨＱＮＰＧＥＦＣＶＬ
４－１ＢＢＬは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）リガンドファミリーに属するサイトカインである。この膜貫通サイトカインは、Ｔリンパ球における共刺激受容体分子である４－１ＢＢのリガンドとして作用する双方向シグナル伝達物質である。４－１ＢＢＬは、Ｔリンパ球増殖を促進することに加えてアネルギー性Ｔリンパ球を再活性化することが示されている。
４－１ＢＢＬ配列（配列番号２３）
ＭＥＹＡＳＤＡＳＬＤＰＥＡＰＷＰＰＡＰＲＡＲＡＣＲＶＬＰＷＡＬＶＡＧＬＬＬＬＬＬＬＡＡＡＣＡＶＦＬＡＣＰＷＡＶＳＧＡＲＡＳＰＧＳＡＡＳＰＲＬＲＥＧＰＥＬＳＰＤＤＰＡＧＬＬＤＬＲＱＧＭＦＡＱＬＶＡＱＮＶＬＬＩＤＧＰＬＳＷＹＳＤＰＧＬＡＧＶＳＬＴＧＧＬＳＹＫＥＤＴＫＥＬＶＶＡＫＡＧＶＹＹＶＦＦＱＬＥＬＲＲＶＶＡＧＥＧＳＧＳＶＳＬＡＬＨＬＱＰＬＲＳＡＡＧＡＡＡＬＡＬＴＶＤＬＰＰＡＳＳＥＡＲＮＳＡＦＧＦＱＧＲＬＬＨＬＳＡＧＱＲＬＧＶＨＬＨＴＥＡＲＡＲＨＡＷＱＬＴＱＧＡＴＶＬＧＬＦＲＶＴＰＥＩＰＡＧＬＰＳＰＲＳＥ
トランスダクションエンハンサーのスペーサードメイン
分裂促進性トランスダクションエンハンサー及び／またはサイトカインベースのトランスダクションエンハンサーは、抗原結合ドメインを膜貫通ドメインと連結するためのスペーサー配列を含み得る。可動性スペーサーは、抗原結合ドメインが異なる方向に配向するのを可能にして、結合を促進する。
スペーサー配列は、例えば、ｌｇＧ１ Ｆｃ領域、ｌｇＧ１ヒンジ、またはヒトＣＤ８ストークもしくはマウスＣＤ８ストークを含み得る。あるいは、スペーサーは、ｌｇＧ１ Ｆｃ領域、ｌｇＧ１ヒンジ、またはＣＤ８ストークと同程度の長さ及び／またはドメイン間隔特性を有する代替的リンカー配列を含み得る。ヒトｌｇＧ１スペーサーは、Ｆｃ結合モチーフを除去するために改変され得る。
これらのスペーサーのアミノ酸配列の例を以下に示す。
配列番号２４（ヒトｌｇＧ１のヒンジ－ＣＨ２ＣＨ３）
ＡＥＰＫＳＰＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＡＲＴＰＥＶＴＣＷＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫＫＤ
配列番号２５（ヒトＣＤ８ストーク）：
ＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩ
配列番号２６（ヒトｌｇＧ１ヒンジ）：
ＡＥＰＫＳＰＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＫＤＰＫ
配列番号２７（ＣＤ２外部ドメイン）：
ＫＥＩＴＮＡＬＥＴＷＧＡＬＧＱＤＩＮＬＤＩＰＳＦＱＭＳＤＤＩＤＤＩＫＷＥＫＴＳＤＫＫＫＩＡＱＦＲＫＥＫＥＴＦＫＥＫＤＴＹＫＬＦＫＮＧＴＬＫＩＫＨＬＫＴＤＤＱＤＩＹＫＶＳＩＹＤＴＫＧＫＮＶＬＥＫＩＦＤＬＫＩＱＥＲＶＳＫＰＫＩＳＷＴＣＩＮＴＴＬＴＣＥＶＭＮＧＴＤＰＥＬＮＬＹＱＤＧＫＨＬＫＬＳＱＲＶＩＴＨＫＷＴＴＳＬＳＡＫＦＫＣＴＡＧＮＫＶＳＫＥＳＳＶＥＰＶＳＣＰＥＫＧＬＤ
配列番号２８（ＣＤ３４外部ドメイン）：
ＳＬＤＮＮＧＴＡＴＰＥＬＰＴＱＧＴＦＳＮＶＳＴＮＶＳＹＱＥＴＴＴＰＳＴＬＧＳＴＳＬＨＰＶＳＱＨＧＮＥＡＴＴＮＩＴＥ ＴＴＶＫＦＴＳＴＳＶＩＴＳＶＹＧＮＴＮＳＳＶＱＳＱＴＳＶＩＳＴＶＦＴＴＰＡＮＶＳＴＰＥＴＴＬＫＰＳＬＳＰＧＮＶＳＤＬＳＴＴＳＴＳＬＡＴＳＰＴＫＰＹＴＳＳＳＰＩＬＳＤＩＫＡＥＩＫＣＳＧＩＲＥＶＫＬＴＱＧＩＣＬＥＱＮＫＴＳＳＣＡＥＦＫＫＤＲＧＥＧＬＡＲＶＬＣＧＥＥＱＡＤＡＤＡＧＡＱＶＣＳＬＬＬＡＱＳＥＶＲＰＱＣＬＬＬＶＬＡＮＲＴＥＩＳＳＫＬＱＬＭＫＫＨＱＳＤＬＫＫＬＧＩＬＤＦＴＥＱＤＶＡＳＨＱＳＹＳＱＫＴ
幾つかの実施形態では、スペーサー配列は、ヒトタンパク質に由来し得る。
トランスダクションエンハンサーの膜貫通ドメイン
膜貫通ドメインは、膜を貫通する分裂促進性トランスダクションエンハンサー及び／またはサイトカインベースのトランスダクションエンハンサーの配列である。膜貫通ドメインは、疎水性αヘリックスを含み得る。膜貫通ドメインは、ＣＤ２８に由来し得る。幾つかの実施形態では、膜貫通ドメインは、ヒトタンパク質に由来する。
膜貫通ドメインの代替的選択肢は、ＧＰＩアンカーなどの膜標的化ドメインである。ＧＰＩによる係留は、小胞体で起こる翻訳後修飾である。事前に組み立てられたＧＰＩアンカー前駆体が、Ｃ末端ＧＰＩシグナル配列を有するタンパク質に転移される。プロセシングの間、ＧＰＩアンカーは、ＧＰＩシグナル配列と置き換わり、アミド結合により標的タンパク質に連結される。ＧＰＩアンカーは、成熟タンパク質を膜に標的化する。幾つかの実施形態では、本発明のタグ付けタンパク質は、ＧＰＩシグナル配列を含む。
サイトカインベースのトランスダクションエンハンサー
本発明のウイルスベクターは、ウイルスエンベロープにサイトカインベースのトランスダクションエンハンサーを含み得る。幾つかの実施形態では、サイトカインベースのトランスダクションエンハンサーは、ウイルスベクター生成時の宿主細胞に由来する。幾つかの実施形態では、サイトカインベースのトランスダクションエンハンサーは、宿主細胞により作られ、細胞表面に発現される。新生ウイルスベクターが宿主細胞膜から出芽する時、サイトカインベースのトランスダクションエンハンサーが、パッケージング細胞由来の脂質二重層の一部としてウイルスエンベロープに組み込まれ得る。
サイトカインベースのトランスダクションエンハンサーは、サイトカインドメイン及び膜貫通ドメインを含み得る。サイトカインベースのトランスダクションエンハンサーは、Ｃ－Ｓ－ＴＭの構造を有し得、ここで、Ｃはサイトカインドメインであり、Ｓは任意のスペーサードメインであり、ＴＭは膜貫通ドメインである。スペーサードメイン及び膜貫通ドメインは、上記記載の通りである。
トランスダクションエンハンサーのサイトカインドメイン
サイトカインドメインは、Ｔ細胞活性化サイトカイン、例えば、ＩＬ２、ＩＬ７、及びＩＬ１５の一部または全体を含み得る。サイトカインドメインは、それが特定の受容体に結合し、Ｔ細胞を活性化する能力を保持する限り、サイトカインの一部を含み得る。
ＩＬ２は、Ｔ細胞及びある種のＢ細胞の増殖及び分化を調節するために、Ｔ細胞により分泌される因子のうちの１つである。ＩＬ２は、反応性Ｔ細胞の増殖を誘発するリンホカインである。これは単一のグリコシル化ポリペプチドとして分泌され、シグナル配列の切断がその活性に必要とされる。溶液ＮＭＲは、ＩＬ２の構造が２つのより短いヘリックス及び幾つかの定まった構造をとらないループに挟まれた、４つのヘリックス（Ａ～Ｄと称される）の束を含むことを示唆する。ヘリックスＡの残基及びヘリックスＡとＢとの間のループ領域の残基が受容体結合に重要である。ＩＬ２の配列を配列番号２９として示す。
配列番号２９：
ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ
ＩＬ７は、Ｂ細胞及びＴ細胞系列の両方の初期リンパ系細胞の増殖因子として機能するサイトカインである。ＩＬ７の配列を配列番号３０として示す。
配列番号３０：
ＭＦＨＶＳＦＲＹＩＦＧＬＰＰＬＩＬＶＬＬＰＶＡＳＳＤＣＤＩＥＧＫＤＧＫＱＹＥＳＶＬＭＶＳＩＤＱＬＬＤＳＭＫＥＩＧＳＮＣＬＮＮＥＦＮＦＦＫＲＨＩＣＤＡＮＫＥＧＭＦＬＦＲＡＡＲＫＬＲＱＦＬＫＭＮＳＴＧＤＦＤＬＨＬＬＫＶＳＥＧＴＴＩＬＬＮＣＴＧＱＶＫＧＲＫＰＡＡＬＧＥＡＱＰＴＫＳＬＥＥＮＫＳＬＫＥＱＫＫＬＮＤＬＣＦＬＫＲＬＬＱＥＩＫＴＣＷＮＫＩＬＭＧＴＫＥＨ
ＩＬ１５は、ＩＬ－２との構造類似性を有するサイトカインである。ＩＬ－２と同様に、ＩＬ－１５は、ＩＬ－２／ＩＬ－１５受容体β鎖及び共通γ鎖から構成される複合体に結合し、それを介してシグナルを伝達する。ＩＬ－１５は、ウイルス（複数可）による感染後に、単核食細胞及び幾つかの他の細胞により分泌される。このサイトカインは、ウイルスに感染した細胞を死滅させることが主な役割である自然免疫系の細胞であるナチュラルキラー細胞の細胞増殖を誘発する。ＩＬ－１５の配列を配列番号３１として示す。
配列番号３１
ＭＲＩＳＫＰＨＬＲＳＩＳＩＱＣＹＬＣＬＬＬＮＳＨＦＬＴＥＡＧＩＨＶＦＩＬＧＣＦＳＡＧＬＰＫＴＥＡＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳ
サイトカインベースのトランスダクションエンハンサーは、以下の配列またはそのバリアントのうちの１つを含み得る。
配列番号３２（膜型ＩＬ７）
ＭＡＨＶＳＦＲＹＩＦＧＬＰＰＬＩＬＶＬＬＰＶＡＳＳＤＣＤＩＥＧＫＤＧＫＱＹＥＳＶＬＭＶＳＩＤＱＬＬＤＳＭＫＥＩＧＳＮＣＬＮＮＥＦＮＦＦＫＲＨＩＣＤＡＮＫＥＧＭＦＬＦＲＡＡＲＫＬＲＱＦＬＫＭＮＳＴＧＤＦＤＬＨＬＬＫＶＳＥＧＴＴＩＬＬＮＣＴＧＱＶＫＧＲＫＰＡＡＬＧＥＡＱＰＴＫＳＬＥＥＮＫＳＬＫＥＱＫＫＬＮＤＬＣＦＬＫＲＬＬＱＥＩＫＴＣＷＮＫＩＬＭＧＴＫＥＨＳＧＧＧＳＰＡＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＮＨＲＮＲＲＲＶＣＫＣＰＲＰＶＶ
配列番号３３（膜型ＩＬ１５）
ＭＧＬＶＲＲＧＡＲＡＧＰＲＭＰＲＧＷＴＡＬＣＬＬＳＬＬＰＳＧＦＭＡＧＩＨＶＦＩＬＧＣＦＳＡＧＬＰＫＴＥＡＮＷＶＮＶＩＳＤＬＫＫＩＥＤＬＩＱＳＭＨＩＤＡＴＬＹＴＥＳＤＶＨＰＳＣＫＶＴＡＭＫＣＦＬＬＥＬＱＶＩＳＬＥＳＧＤＡＳＩＨＤＴＶＥＮＬＩＩＬＡＮＮＳＬＳＳＮＧＮＶＴＥＳＧＣＫＥＣＥＥＬＥＥＫＮＩＫＥＦＬＱＳＦＶＨＩＶＱＭＦＩＮＴＳＳＰＡＫＰＴＴＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＮＨＲＮＲＲＲＶＣＫＣＰＲＰＶＶ
サイトカインベースのトランスダクションエンハンサーは、少なくとも８０、８５、９０、９５、９８、または９９％の配列同一性を有する、配列番号３２または３３として示される配列のバリアントを含み得、ただし、バリアント配列は、必要な特性、すなわち、レトロウイルスまたはレンチウイルスベクターのエンベロープタンパク質に存在する場合にＴ細胞を活性化する能力を有するサイトカインベースのトランスダクションエンハンサーである。
トランスダクションエンハンサーの例示的利点
幾つかの実施形態では、本開示は、トランスダクションエンハンサーが組み込まれたウイルスベクターを提供する。ベクターは、Ｔ細胞を刺激する能力及び更に遺伝子挿入をもたらす能力の両方を有し得る。このことは、以下が含まれる１つ以上の利点をもたらし得る：（１）１つの構成要素のみを添加すればよいため、Ｔ細胞改変のプロセスが単純化されること；（２）ウイルスが不安定であり、除去される必要がないため、ビーズの除去及び付随する収率の減少が回避されること；（３）１つの構成要素のみを製造すればよいため、Ｔ細胞改変のコストが低減されること；（４）各Ｔ細胞改変プロセスが遺伝子導入ベクターを作製することを含み、同じ製品が製品に「適合する」ようにトランスダクションエンハンサーでも作製され得るため、設計の自由度の向上を可能にすること；（５）製造プロセスが短縮されること（可溶性抗原／ビーズに基づく手法において、分裂促進因子及びベクターは、通常、１日間、２日間、または場合により、３日間の間隔をあけて逐次的に投与される。これは、本発明のレトロウイルスベクターにより回避され得る。なぜならば、シグナル伝達増強及びウイルス侵入が同期しており、同時であるためである）；（６）多数の異なる融合タンパク質を発現及び機能について試験する必要性がないため、改変が簡略化されること；（７）２種以上のシグナルの同時添加の実現を可能にすること；ならびに（８）各シグナル／タンパク質の発現及び／または発現レベルの個別の調節を可能にすること。
トランスダクションエンハンサーを含むウイルスベクターの実施形態
幾つかの実施形態では、ウイルスエンベロープは、１種以上のトランスダクションエンハンサーを含む。幾つかの実施形態では、トランスダクションエンハンサーとしては、Ｔ細胞活性化受容体、ＮＫ細胞活性化受容体、及び／または共刺激分子が挙げられる。幾つかの実施形態では、１種以上のトランスダクションエンハンサーは、１種以上の抗ＣＤ３ ｓｃＦｖ、ＣＤ８６、及びＣＤ１３７Ｌを含む。幾つかの実施形態では、トランスダクションエンハンサーは、抗ＣＤ３ ｓｃＦｖ、ＣＤ８６、及びＣＤ１３７Ｌのうちの全てを含む。
幾つかの実施形態では、トランスダクションエンハンサーは、分裂促進刺激及び／またはサイトカイン刺激を含み、これは、ウイルスがＴ細胞の活性化及び形質導入の両方を引き起こすように、レトロウイルスまたはレンチウイルスカプシドに組み込まれている。このことにより、ベクター、分裂促進因子、及びサイトカインを別々に添加する必要がなくなる。幾つかの実施形態では、トランスダクションエンハンサーは、産生細胞またはパッケージング細胞に含まれる分裂促進膜貫通タンパク質及び／またはサイトカインベースの膜貫通タンパク質を含み、これ（ら）は、レトロウイルスが産生細胞またはパッケージング細胞の膜から出芽するときに、当該レトロウイルスに組み込まれる。幾つかの実施形態では、トランスダクションエンハンサーは、ウイルスエンベロープ糖タンパク質の一部ではなく、別個の細胞表面分子として産生細胞上に発現される。
幾つかの実施形態では、本開示は、以下を含むウイルスエンベロープを有するレトロウイルスまたはレンチウイルスベクターを提供する：
（ｉ）分裂促進ドメイン及び膜貫通ドメインを含む分裂促進性トランスダクションエンハンサー；及び／または
（ｉｉ）サイトカインドメイン及び膜貫通ドメインを含むサイトカインベースのトランスダクションエンハンサー。
幾つかの実施形態では、トランスダクションエンハンサーは、ウイルスエンベロープ糖タンパク質の一部ではない。幾つかの実施形態では、レトロウイルスまたはレンチウイルスベクターは、ｅｎｖ遺伝子によりコードされる別個のウイルスエンベロープ糖タンパク質を含む。分裂促進刺激及び／またはサイトカイン刺激がウイルスエンベロープ糖タンパク質とは別個の分子で提供されるため、ウイルスエンベロープ糖タンパク質の完全性が維持され、ウイルス力価に悪影響を及ぼさない。
幾つかの実施形態では、以下を含むウイルスエンベロープを有するレトロウイルスまたはレンチウイルスベクターが提供される：
（ｉ）ウイルスエンベロープ糖タンパク質；及び
（ｉｉ）Ｍ－Ｓ－ＴＭの構造を有する分裂促進性トランスダクションエンハンサーであって、
Ｍが分裂促進ドメインであり、Ｓが任意のスペーサーであり、ＴＭが膜貫通ドメインである、当該分裂促進性トランスダクションエンハンサー；及び／または
（ｉｉｉ）サイトカインドメイン及び膜貫通ドメインを含むサイトカインベースのトランスダクションエンハンサー。
幾つかの実施形態では、分裂促進性トランスダクションエンハンサー及び／またはサイトカインベースのトランスダクションエンハンサーは、ウイルスエンベロープ糖タンパク質の一部ではない。幾つかの実施形態では、それらは、別個のタンパク質としてウイルスエンベロープに存在し、別個の遺伝子によりコードされる。幾つかの実施形態では、分裂促進性トランスダクションエンハンサーは、
Ｍ－Ｓ－ＴＭの構造を有し、
ここで、Ｍは分裂促進ドメインであり、Ｓは任意のスペーサーであり、ＴＭは膜貫通ドメインである。
幾つかの実施形態では、分裂促進性トランスダクションエンハンサーは、活性化Ｔ細胞表面抗原に結合する。幾つかの実施形態では、抗原は、ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ１３４、またはＣＤ１３７である。分裂促進性トランスダクションエンハンサーは、かかる活性化Ｔ細胞表面抗原のアゴニストを含み得る。
分裂促進性トランスダクションエンハンサーは、抗体、例えば、ＯＫＴ３、１５Ｅ８、ＴＧＮ１４１２；または共刺激分子、例えば、ＯＸ４０Ｌもしくは４１ ＢＢＬ由来の結合ドメインを含み得る。ウイルスベクターは、２種以上の分裂促進性トランスダクションエンハンサーをウイルスエンベロープに含み得る。例えば、ウイルスベクターは、ＣＤ３に結合する第１の分裂促進性トランスダクションエンハンサー及びＣＤ２８に結合する第２の分裂促進性トランスダクションエンハンサーを含み得る。サイトカインベースのトランスダクションエンハンサーは、例えば、ＩＬ２、ＩＬ７、及びＩＬ１５から選択されるサイトカインを含み得る。
幾つかの実施形態では、以下を含むウイルスエンベロープを有するレトロウイルスまたはレンチウイルスベクターが提供される：
（ａ）ＣＤ３に結合する第１の分裂促進性トランスダクションエンハンサー；及び
（ｂ）ＣＤ２８に結合する第２の分裂促進性トランスダクションエンハンサー。
幾つかの実施形態では、以下を含むウイルスエンベロープを有するレトロウイルスまたはレンチウイルスベクターが提供される：
（ａ）ＣＤ３に結合する第１の分裂促進性トランスダクションエンハンサー；
（ｂ）ＣＤ２８に結合する第２の分裂促進性トランスダクションエンハンサー；及び
（ｃ）ＩＬ２を含むサイトカインベースのトランスダクションエンハンサー。
幾つかの実施形態では、以下を含むウイルスエンベロープを有するレトロウイルスまたはレンチウイルスベクターが提供される：
（ａ）ＣＤ３に結合する第１の分裂促進性トランスダクションエンハンサー；
（ｂ）ＣＤ２８に結合する第２の分裂促進性トランスダクションエンハンサー；
（ｃ）ＩＬ７を含むサイトカインベースのトランスダクションエンハンサー；及び
（ｄ）ＩＬ１５を含むサイトカインベースのトランスダクションエンハンサー。
Ｔ細胞活性化タンパク質
本開示は、Ｔ細胞活性化タンパク質またはＴ細胞活性化タンパク質複合体をコードする配列を含むポリヌクレオチドを含むウイルスベクターも提供する。本明細書で言及する場合、用語「Ｔ細胞活性化タンパク質」及び「Ｔ細胞活性化タンパク質複合体」は、互換的に使用され得、単一のタンパク質または別個のタンパク質の複合体を指し得る。幾つかの実施形態では、ウイルスベクターは、Ｔ細胞活性化タンパク質をコードするポリヌクレオチドで宿主Ｔ細胞を形質導入し、その結果、Ｔ細胞が当該タンパク質を発現する。次いで、Ｔ細胞活性化タンパク質は、形質導入されたＴ細胞の活性化に関与し得る。幾つかの実施形態では、Ｔ細胞活性化タンパク質は、薬物誘導性Ｔ細胞活性化タンパク質である。幾つかの実施形態では、Ｔ細胞活性化タンパク質は、化学物質誘導性シグナル伝達複合体を形成する。幾つかの実施形態では、Ｔ細胞活性化タンパク質は、リガンドにより誘発された二量体化の直接の結果として細胞の内部にシグナルを誘導する遺伝子操作された複合体を形成する。Ｔ細胞活性化タンパク質は、ホモ二量体（２つの同じ構成要素の二量体化）またはヘテロ二量体（２つの異なる構成要素の二量体化）に含まれ得る。Ｔ細胞活性化タンパク質複合体は、本明細書に記載されるような合成複合体であり得る。Ｔ細胞活性化タンパク質複合体の構成要素部分は、複合体への組み込みに有用な天然または合成の構成要素から構成され得ることを当業者は理解するであろう。従って、本明細書に提供される例は、限定することを意図しない。本明細書において組み込まれ得る追加のＴ細胞活性化タンパク質は、ＷＯ２０１６／１３９４６３及びＷＯ２０１８／１１１８３４において見出され得、それらの開示はそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
幾つかの実施形態では、Ｔ細胞活性化タンパク質配列は、第１及び第２の配列を有し得る。第１の配列は、第１のＴ細胞活性化タンパク質複合体構成要素をコードし得、これは、第１の細胞外結合ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインまたはその一部を含み得る。第２の配列は、第２のＴ細胞活性化タンパク質複合体構成要素をコードし、これは、第２の細胞外結合ドメインまたはその一部、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びシグナル伝達ドメインまたはその一部を含み得る。幾つかの実施形態では、第１及び第２の構成要素は、発現された際、それらがリガンドの存在下で二量体化するように配置され得る。
本明細書で使用する場合、用語「ラパマイシン活性化サイトカイン受容体」または「ＲＡＣＲ」は、互換的に、ラパマイシンの存在下で細胞の増殖及び／または活性を促進する細胞内シグナルを誘導性に生成する多成分受容体を指す。ＲＡＣＲは、ラパマイシンの存在下で、ＩＬ－２Ｒ細胞内ドメイン（複数可）またはそのバリアントを介してＴ細胞内にＩＬ２様シグナルを伝達し得る。
幾つかの実施形態では、本開示は、２つの構成要素のヘテロ二量体Ｔ細胞活性化タンパク質複合体のタンパク質配列または複数のタンパク質配列を提供する。幾つかの実施形態では、第１の構成要素は、ＩＬ２Ｒγ複合体である。幾つかの実施形態では、ＩＬ２Ｒγ複合体は、配列番号３４に記載のアミノ酸配列を含む
（ＭＰＬＧＬＬＷＬＧＬＡＬＬＧＡＬＨＡＱＡＧＶＱＶＥＴＩＳＰＧＤＧＲＴＦＰＫＲＧＱＴＣＶＶＨＹＴＧＭＬＥＤＧＫＫＦＤＳＳＲＤＲＮＫＰＦＫＦＭＬＧＫＱＥＶＩＲＧＷＥＥＧＶＡＱＭＳＶＧＱＲＡＫＬＴＩＳＰＤＹＡＹＧＡＴＧＨＰＧＩＩＰＰＨＡＴＬＶＦＤＶＥＬＬＫＬＧＥＧＳＮＴＳＫＥＮＰＦＬＦＡＬＥＡＶＶＩＳＶＧＳＭＧＬＩＩＳＬＬＣＶＹＦＷＬＥＲＴＭＰＲＩＰＴＬＫＮＬＥＤＬＶＴＥＹＨＧＮＦＳＡＷＳＧＶＳＫＧＬＡＥＳＬＱＰＤＹＳＥＲＬＣＬＶＳＥＩＰＰＫＧＧＡＬＧＥＧＰＧＡＳＰＣＮＱＨＳＰＹＷＡＰＰＣＹＴＬＫＰＥＴ；配列番号３４）。
幾つかの実施形態では、ＩＬ２Ｒγ複合体は、配列番号３６に記載のアミノ酸配列を含む
（ＭＰＬＧＬＬＷＬＧＬＡＬＬＧＡＬＨＡＱＡＧＶＱＶＥＴＩＳＰＧＤＧＲＴＦＰＫＲＧＱＴＣＶＶＨＹＴＧＭＬＥＤＧＫＫＦＤＳＳＲＤＲＮＫＰＦＫＦＭＬＧＫＱＥＶＩＲＧＷＥＥＧＶＡＱＭＳＶＧＱＲＡＫＬＴＩＳＰＤＹＡＹＧＡＴＧＨＰＧＩＩＰＰＨＡＴＬＶＦＤＶＥＬＬＫＬＧＥＧＳＮＴＳＫＥＮＰＦＬＦＡＬＥＡＶＶＩＳＶＧＳＭＧＬＩＩＳＬＬＣＶＹＦＷＬＥＲＴＭＰＲＩＰＴＬＫＮＬＥＤＬＶＴＥＹＨＧＮＦＳＡＷＳＧＶＳＫＧＬＡＥＳＬＱＰＤＹＳＥＲＬＣＬＶＳＥＩＰＰＫＧＧＡＬＧＥＧＰＧＡＳＰＣＮＱＨＳＰＹＷＡＰＰＣＹＴＬＫＰＥＴ；配列番号３６）。
幾つかの実施形態では、ＩＬ２Ｒγ複合体は、配列番号３７に記載のアミノ酸配列を含む
（ＭＰＬＧＬＬＷＬＧＬＡＬＬＧＡＬＨＡＱＡＧＶＱＶＥＴＩＳＰＧＤＧＲＴＦＰＫＲＧＱＴＣＶＶＨＹＴＧＭＬＥＤＧＫＫＦＤＳＳＲＤＲＮＫＰＦＫＦＭＬＧＫＱＥＶＩＲＧＷＥＥＧＶＡＱＭＳＶＧＱＲＡＫＬＴＩＳＰＤＹＡＹＧＡＴＧＨＰＧＩＩＰＰＨＡＴＬＶＦＤＶＥＬＬＫＬＧＥＧＳＮＴＳＫＥＮＰＦＬＦＡＬＥＡＶＶＩＳＶＧＳＭＧＬＩＩＳＬＬＣＶＹＦＷＬＥＲＴＭＰＲＩＰＴＬＫＮＬＥＤＬＶＴＥＹＨＧＮＦＳＡＷＳＧＶＳＫＧＬＡＥＳＬＱＰＤＹＳＥＲＬＣＬＶＳＥＩＰＰＫＧＧＡＬＧＥＧＰＧＡＳＰＣＮＱＨＳＰＹＷＡＰＰＣＹＴＬＫＰＥＴ；配列番号３７）。
幾つかの実施形態では、ＩＬ２Ｒγ複合体は、配列番号３８に記載のアミノ酸配列を含む
（ＭＰＬＧＬＬＷＬＧＬＡＬＬＧＡＬＨＡＱＡＧＶＱＶＥＴＩＳＰＧＤＧＲＴＦＰＫＲＧＱＴＣＶＶＨＹＴＧＭＬＥＤＧＫＫＦＤＳＳＲＤＲＮＫＰＦＫＦＭＬＧＫＱＥＶＩＲＧＷＥＥＧＶＡＱＭＳＶＧＱＲＡＫＬＴＩＳＰＤＹＡＹＧＡＴＧＨＰＧＩＩＰＰＨＡＴＬＶＦＤＶＥＬＬＫＬＧＥＧＳＮＴＳＫＥＮＰＦＬＦＡＬＥＡＶＶＩＳＶＧＳＭＧＬＩＩＳＬＬＣＶＹＦＷＬＥＲＴＭＰＲＩＰＴＬＫＮＬＥＤＬＶＴＥＹＨＧＮＦＳＡＷＳＧＶＳＫＧＬＡＥＳＬＱＰＤＹＳＥＲＬＣＬＶＳＥＩＰＰＫＧＧＡＬＧＥＧＰＧＡＳＰＣＮＱＨＳＰＹＷＡＰＰＣＹＴＬＫＰＥＴ；配列番号３８）。
幾つかの実施形態では、第１のＴ細胞活性化タンパク質複合体構成要素のタンパク質配列は、細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、またはシグナル伝達ドメインをコードするタンパク質配列を含む。実施形態は、細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、またはシグナル伝達ドメインをコードする核酸配列も含む。幾つかの実施形態では、第１の細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及び／またはシグナル伝達ドメインを含む第１のＴ細胞活性化タンパク質複合体構成要素のタンパク質配列は、配列番号１、３、５、もしくは７に記載される配列に対する１００％、９９％、９８％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の配列同一性を含むか、または上述の百分率のうちの任意の２つにより規定される範囲内の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態では、第２のＴ細胞活性化タンパク質複合体構成要素は、ＩＬ２Ｒβ複合体である。幾つかの実施形態では、ＩＬ２Ｒβ複合体は、配列番号３９に記載のアミノ酸配列を含む
（ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＩＬＷＨＥＭＷＨＥＧＬＥＥＡＳＲＬＹＦＧＥＲＮＶＫＧＭＦＥＶＬＥＰＬＨＡＭＭＥＲＧＰＱＴＬＫＥＴＳＦＮＱＡＹＧＲＤＬＭＥＡＱＥＷＣＲＫＹＭＫＳＧＮＶＫＤＬＬＱＡＷＤＬＹＹＨＶＦＲＲＩＳＫＧＫＤＴＩＰＷＬＧＨＬＬＶＧＬＳＧＡＦＧＦＩＩＬＶＹＬＬＩＮＣＲＮＴＧＰＷＬＫＫＶＬＫＣＮＴＰＤＰＳＫＦＦＳＱＬＳＳＥＨＧＧＤＶＱＫＷＬＳＳＰＦＰＳＳＳＦＳＰＧＧＬＡＰＥＩＳＰＬＥＶＬＥＲＤＫＶＴＱＬＬＬＱＱＤＫＶＰＥＰＡＳＬＳＳＮＨＳＬＴＳＣＦＴＮＱＧＹＦＦＦＨＬＰＤＡＬＥＩＥＡＣＱＶＹＦＴＹＤＰＹＳＥＥＤＰＤＥＧＶＡＧＡＰＴＧＳＳＰＱＰＬＱＰＬＳＧＥＤＤＡＹＣＴＦＰＳＲＤＤＬＬＬＦＳＰＳＬＬＧＧＰＳＰＰＳＴＡＰＧＧＳＧＡＧＥＥＲＭＰＰＳＬＱＥＲＶＰＲＤＷＤＰＱＰＬＧＰＰＴＰＧＶＰＤＬＶＤＦＱＰＰＰＥＬＶＬＲＥＡＧＥＥＶＰＤＡＧＰＲＥＧＶＳＦＰＷＳＲＰＰＧＱ ＧＥＦＲＡＬＮＡＲＬＰＬＮＴＤＡＹＬＳＬＱＥＬＱＧＱＤＰＴＨＬＶ；配列番号３９）。
幾つかの実施形態では、ＩＬ２Ｒβ複合体は、配列番号４０に記載のアミノ酸配列を含む
（ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＩＬＷＨＥＭＷＨＥＧＬＥＥＡＳＲＬＹＦＧＥＲＮＶＫＧＭＦＥＶＬＥＰＬＨＡＭＭＥＲＧＰＱＴＬＫＥＴＳＦＮＱＡＹＧＲＤＬＭＥＡＱＥＷＣＲＫＹＭＫＳＧＮＶＫＤＬＬＱＡＷＤＬＹＹＨＶＦＲＲＩＳＫＧＫＤＴＩＰＷＬＧＨＬＬＶＧＬＳＧＡＦＧＦＩＩＬＶＹＬＬＩＮＣＲＮＴＧＰＷＬＫＫＶＬＫＣＮＴＰＤＰＳＫＦＦＳＱＬＳＳＥＨＧＧＤＶＱＫＷＬＳＳＰＦＰＳＳＳＦＳＰＧＧＬＡＰＥＩＳＰＬＥＶＬＥＲＤＫＶＴＱＬＬＬＱＱＤＫＶＰＥＰＡＳＬＳＳＮＨＳＬＴＳＣＦＴＮＱＧＹＦＦＦＨＬＰＤＡＬＥＩＥＡＣＱＶＹＦＴＹＤＰＹＳＥＥＤＰＤＥＧＶＡＧＡＰＴＧＳＳＰＱＰＬＱＰＬＳＧＥＤＤＡＹＣＴＦＰＳＲＤＤＬＬＬＦＳＰＳＬＬＧＧＰＳＰＰＳＴＡＰＧＧＳＧＡＧＥＥＲＭＰＰＳＬＱＥＲＶＰＲＤＷＤＰＱＰＬＧＰＰＴＰＧＶＰＤＬＶＤＦＱＰＰＰＥＬＶＬＲＥＡＧＥＥＶＰＤＡＧＰＲＥＧＶＳＦＰＷＳＲＰＰＧＱＧＥＦＲＡＬＮＡＲＬＰＬＮＴＤＡＹＬＳＬＱＥＬＱＧＱＤＰＴＨＬＶ；配列番号４０）。
幾つかの実施形態では、ＩＬ２Ｒβ複合体は、配列番号４１に記載のアミノ酸配列を含む
（ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＩＬＷＨＥＭＷＨＥＧＬＥＥＡＳＲＬＹＦＧＥＲＮＶＫＧＭＦＥＶＬＥＰＬＨＡＭＭＥＲＧＰＱＴＬＫＥＴＳＦＮＱＡＹＧＲＤＬＭＥＡＱＥＷＣＲＫＹＭＫＳＧＮＶＫＤＬＬＱＡＷＤＬＹＹＨＶＦＲＲＩＳＫＧＫＤＴＩＰＷＬＧＨＬＬＶＧＬＳＧＡＦＧＦＩＩＬＶＹＬＬＩＮＣＲＮＴＧＰＷＬＫＫＶＬＫＣＮＴＰＤＰＳＫＦＦＳＱＬＳＳＥＨＧＧＤＶＱＫＷＬＳＳＰＦＰＳＳＳＦＳＰＧＧＬＡＰＥＩＳＰＬＥＶＬＥＲＤＫＶＴＱＬＬＬＱＱＤＫＶＰＥＰＡＳＬＳＳＮＨＳＬＴＳＣＦＴＮＱＧＹＦＦＦＨＬＰＤＡＬＥＩＥＡＣＱＶＹＦＴＹＤＰＹＳＥＥＤＰＤＥＧＶＡＧＡＰＴＧＳＳＰＱＰＬＱＰＬＳＧＥＤＤＡＹＣＴＦＰＳＲＤＤＬＬＬＦＳＰＳＬＬＧＧＰＳＰＰＳＴＡＰＧＧＳＧＡＧＥＥＲＭＰＰＳＬＱＥＲＶＰＲＤＷＤＰＱＰＬＧＰＰＴＰＧＶＰＤＬＶＤＦＱＰＰＰＥＬＶＬＲＥＡＧＥＥＶＰＤＡＧＰＲＥＧＶＳＦＰＷＳＲＰＰＧＱＧＥＦＲＡＬＮＡＲＬＰＬＮＴＤＡＹＬＳＬＱＥＬＱＧＱＤＰＴＨＬＶ；配列番号４１）。
幾つかの実施形態では、ＩＬ２Ｒβ複合体は、配列番号４２に記載のアミノ酸配列を含む
（ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＩＬＷＨＥＭＷＨＥＧＬＥＥＡＳＲＬＹＦＧＥＲＮＶＫＧＭＦＥＶＬＥＰＬＨＡＭＭＥＲＧＰＱＴＬＫＥＴＳＦＮＱＡＹＧＲＤＬＭＥＡＱＥＷＣＲＫＹＭＫＳＧＮＶＫＤＬＬＱＡＷＤＬＹＹＨＶＦＲＲＩＳＫＧＫＤＴＩＰＷＬＧＨＬＬＶＧＬＳＧＡＦＧＦＩＩＬＶＹＬＬＩＮＣＲＮＴＧＰＷＬＫＫＶＬＫＣＮＴＰＤＰＳＫＦＦＳＱＬＳＳＥＨＧＧＤＶＱＫＷＬＳＳＰＦＰＳＳＳＦＳＰＧＧＬＡＰＥＩＳＰＬＥＶＬＥＲＤＫＶＴＱＬＬＬＱＱＤＫＶＰＥＰＡＳＬＳＳＮＨＳＬＴＳＣＦＴＮＱＧＹＦＦＦＨＬＰＤＡＬＥＩＥＡＣＱＶＹＦＴＹＤＰＹＳＥＥＤＰＤＥＧＶＡＧＡＰＴＧＳＳＰＱＰＬＱＰＬＳＧＥＤＤＡＹＣＴＦＰＳＲＤＤＬＬＬＦＳＰＳＬＬＧＧＰＳＰＰＳＴＡＰＧＧＳＧＡＧＥＥＲＭＰＰＳＬＱＥＲＶＰＲＤＷＤＰＱＰＬＧＰＰＴＰＧＶＰＤＬＶＤＦＱＰＰＰＥＬＶＬＲＥＡＧＥＥＶＰＤＡＧＰＲＥＧＶＳＦＰＷＳＲＰＰＧＱＧＥＦＲＡＬＮＡＲＬＰＬＮＴＤＡＹＬＳＬＱＥＬＱＧＱＤＰＴＨＬＶ；配列番号４２）。
幾つかの実施形態では、第２のＴ細胞活性化タンパク質複合体構成要素は、ＩＬ７Ｒα複合体である。幾つかの実施形態では、ＩＬ７Ｒα複合体は、配列番号４３に記載のアミノ酸配列を含む
（ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＩＬＷＨＥＭＷＨＥＧＬＥＥＡＳＲＬＹＦＧＥＲＮＶＫＧＭＦＥＶＬＥＰＬＨＡＭＭＥＲＧＰＱＴＬＫＥＴＳＦＮＱＡＹＧＲＤＬＭＥＡＱＥＷＣＲＫＹＭＫＳＧＮＶＫＤＬＬＱＡＷＤＬＹＹＨＶＦＲＲＩＳＫＧＫＤＴＩＰＷＬＧＨＬＬＶＧＬＳＧＡＦＧＦＩＩＬＶＹＬＬＩＮＣＲＮＴＧＰＷＬＫＫＶＬＫＣＮＴＰＤＰＳＫＦＦＳＱＬＳＳＥＨＧＧＤＶＱＫＷＬＳＳＰＦＰＳＳＳＦＳＰＧＧＬＡＰＥＩＳＰＬＥＶＬＥＲＤＫＶＴＱＬＬＬＱＱＤＫＶＰＥＰＡＳＬＳＳＮＨＳＬＴＳＣＦＴＮＱＧＹＦＦＦＨＬＰＤＡＬＥＩＥＡＣＱＶＹＦＴＹＤＰＹＳＥＥＤＰＤＥＧＶＡＧＡＰＴＧＳＳＰＱＰＬＱＰＬＳＧＥＤＤＡＹＣＴＦＰＳＲＤＤＬＬＬＦＳＰＳＬＬＧＧＰＳＰＰＳＴＡＰＧＧＳＧＡＧＥＥＲＭＰＰＳＬＱＥＲＶＰＲＤＷＤＰＱＰＬＧＰＰＴＰＧＶＰＤＬＶＤＦＱＰＰＰＥＬＶＬＲＥＡＧＥＥＶＰＤＡＧＰＲＥＧＶＳＦＰＷＳＲＰＰＧＱＧＥＦＲＡＬＮＡＲＬＰＬＮＴＤＡＹＬＳＬＱＥＬＱＧＱＤＰＴＨＬＶ；配列番号４３）。
幾つかの実施形態では、第２のＴ細胞活性化タンパク質複合体構成要素のタンパク質配列は、細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、またはシグナル伝達ドメインをコードするタンパク質配列を含む。実施形態は、第２のＴ細胞活性化タンパク質複合体構成要素の細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、またはシグナル伝達ドメインをコードする核酸配列も含む。幾つかの実施形態では、第２の細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及び／またはシグナル伝達ドメインを含む第２のＴ細胞活性化タンパク質複合体構成要素のタンパク質配列は、配列番号３９～４３に記載される配列に対する１００％、９９％、９８％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の配列同一性を含むか、または上述の百分率のうちの任意の２つにより規定される範囲内の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態では、タンパク質配列は、リンカーを含み得る。幾つかの実施形態では、リンカーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０アミノ酸、例えば、グリシン、または上述の数の任意の２つにより規定される範囲内の数のアミノ酸、例えば、グリシンを含む。幾つかの実施形態では、グリシンスペーサーは、少なくとも３つのグリシンを含む。幾つかの実施形態では、グリシンスペーサーは、配列番号４４（ＧＧＧＳ；配列番号４４）、配列番号４５（ＧＧＧＳＧＧＧ；配列番号４５）、または配列番号４６（ＧＧＧ；配列番号４６）に記載される配列を含む。実施形態は、配列番号４４～４６をコードする核酸配列も含む。幾つかの実施形態では、膜貫通ドメインは、シグナル伝達ドメインのＮ末端に存在し、ヒンジドメインは、膜貫通ドメインのＮ末端に存在し、リンカーは、ヒンジドメインのＮ末端に存在し、細胞外結合ドメインは、リンカーのＮ末端に存在する。
幾つかの実施形態では、２つの構成要素のホモ二量体Ｔ細胞活性化タンパク質複合体のタンパク質配列または複数のタンパク質配列が提供される。幾つかの実施形態では、第１のＴ細胞活性化タンパク質複合体構成要素は、ＩＬ２Ｒγ複合体である。幾つかの実施形態では、ＩＬ２Ｒγ複合体は、配列番号４７に記載のアミノ酸配列を含む
（ＭＰＬＧＬＬＷＬＧＬＡＬＬＧＡＬＨＡＱＡＧＶＱＶＥＴＩＳＰＧＤＧＲＴＦＰＫＲＧＱＴＣＶＶＨＹＴＧＭＬＥＤＧＫＫＦＤＳＳＲＤＲＮＫＰＦＫＦＭＬＧＫＱＥＶＩＲＧＷＥＥＧＶＡＱＭＳＶＧＱＲＡＫＬＴＩＳＰＤＹＡＹＧＡＴＧＨＰＧＩＩＰＰＨＡＴＬＶＦＤＶＥＬＬＫＬＧＥＧＳＮＴＳＫＥＮＰＦＬＦＡＬＥＡＶＶＩＳＶＧＳＭＧＬＩＩＳＬＬＣＶＹＦＷＬＥＲＴＭＰＲＩＰＴＬＫＮＬＥＤＬＶＴＥＹＨＧＮＦＳＡＷＳＧＶＳＫＧＬＡＥＳＬＱＰＤＹＳＥＲＬＣＬＶＳＥＩＰＰＫＧＧＡＬＧＥＧＰＧＡＳＰＣＮＱＨＳＰＹＷＡＰＰＣＹＴＬＫＰＥＴ；配列番号４７）。
幾つかの実施形態では、第１のＴ細胞活性化タンパク質複合体構成要素のタンパク質配列は、細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、またはシグナル伝達ドメインをコードするタンパク質配列を含む。実施形態は、細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、またはシグナル伝達ドメインをコードする核酸配列も含む。幾つかの実施形態では、第１の細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及び／またはシグナル伝達ドメインを含む第１のＴ細胞活性化タンパク質複合体構成要素のタンパク質配列は、配列番号４７に記載される配列に対する１００％、９９％、９８％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の配列同一性を含むか、または上述の百分率のうちの任意の２つにより規定される範囲内の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態では、第２のＴ細胞活性化タンパク質複合体構成要素は、ＩＬ２Ｒβ複合体またはＩＬ２Ｒα複合体である。幾つかの実施形態では、ＩＬ２Ｒβ複合体は、配列番号４８に記載のアミノ酸配列を含む
（ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＩＬＷＨＥＭＷＨＥＧＬＥＥＡＳＲＬＹＦＧＥＲＮＶＫＧＭＦＥＶＬＥＰＬＨＡＭＭＥＲＧＰＱＴＬＫＥＴＳＦＮＱＡＹＧＲＤＬＭＥＡＱＥＷＣＲＫＹＭＫＳＧＮＶＫＤＬＬＱＡＷＤＬＹＹＨＶＦＲＲＩＳＫＧＫＤＴＩＰＷＬＧＨＬＬＶＧＬＳＧＡＦＧＦＩＩＬＶＹＬＬＩＮＣＲＮＴＧＰＷＬＫＫＶＬＫＣＮＴＰＤＰＳＫＦＦＳＱＬＳＳＥＨＧＧＤＶＱＫＷＬＳＳＰＦＰＳＳＳＦＳＰＧＧＬＡＰＥＩＳＰＬＥＶＬＥＲＤＫＶＴＱＬＬＬＱＱＤＫＶＰＥＰＡＳＬＳＳＮＨＳＬＴＳＣＦＴＮＱＧＹＦＦＦＨＬＰＤＡＬＥＩＥＡＣＱＶＹＦＴＹＤＰＹＳＥＥＤＰＤＥＧＶＡＧＡＰＴＧＳＳＰＱＰＬＱＰＬＳＧＥＤＤＡＹＣＴＦＰＳＲＤＤＬＬＬＦＳＰＳＬＬＧＧＰＳＰＰＳＴＡＰＧＧＳＧＡＧＥＥＲＭＰＰＳＬＱＥＲＶＰＲＤＷＤＰＱＰＬＧＰＰＴＰＧＶＰＤＬＶＤＦＱＰＰＰＥＬＶＬＲＥＡＧＥＥＶＰＤＡＧＰＲＥＧＶＳＦＰＷＳＲＰＰＧＱＧＥＦＲＡＬＮＡＲＬＰＬＮＴＤＡＹＬＳＬＱＥＬＱＧＱＤＰＴＨＬＶ；配列番号４８）。
幾つかの実施形態では、ＩＬ２Ｒα複合体は、配列番号４９に記載のアミノ酸配列を含む
（ＭＡＬＰＶＴＡＬＬＬＰＬＡＬＬＬＨＡＡＲＰＩＬＷＨＥＭＷＨＥＧＬＥＥＡＳＲＬＹＦＧＥＲＮＶＫＧＭＦＥＶＬＥＰＬＨＡＭＭＥＲＧＰＱＴＬＫＥＴＳＦＮＱＡＹＧＲＤＬＭＥＡＱＥＷＣＲＫＹＭＫＳＧＮＶＫＤＬＬＱＡＷＤＬＹＹＨＶＦＲＲＩＳＫＧＫＤＴＩＰＷＬＧＨＬＬＶＧＬＳＧＡＦＧＦＩＩＬＶＹＬＬＩＮＣＲＮＴＧＰＷＬＫＫＶＬＫＣＮＴＰＤＰＳＫＦＦＳＱＬＳＳＥＨＧＧＤＶＱＫＷＬＳＳＰＦＰＳＳＳＦＳＰＧＧＬＡＰＥＩＳＰＬＥＶＬＥＲＤＫＶＴＱＬＬＬＱＱＤＫＶＰＥＰＡＳＬＳＳＮＨＳＬＴＳＣＦＴＮＱＧＹＦＦＦＨＬＰＤＡＬＥＩＥＡＣＱＶＹＦＴＹＤＰＹＳＥＥＤＰＤＥＧＶＡＧＡＰＴＧＳＳＰＱＰＬＱＰＬＳＧＥＤＤＡＹＣＴＦＰＳＲＤＤＬＬＬＦＳＰＳＬＬＧＧＰＳＰＰＳＴＡＰＧＧＳＧＡＧＥＥＲＭＰＰＳＬＱＥＲＶＰＲＤＷＤＰＱＰＬＧＰＰＴＰＧＶＰＤＬＶＤＦＱＰＰＰＥＬＶＬＲＥＡＧＥＥＶＰＤＡＧＰＲＥＧＶＳＦＰＷＳＲＰＰＧＱＧＥＦＲＡＬＮＡＲＬＰＬＮＴＤＡＹＬＳＬＱＥＬＱＧＱＤＰＴＨＬＶ；配列番号４９）。
幾つかの実施形態では、第２のＴ細胞活性化タンパク質複合体構成要素のタンパク質配列は、細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、またはシグナル伝達ドメインをコードするタンパク質配列を含む。実施形態は、第２のＴ細胞活性化タンパク質複合体構成要素の細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、またはシグナル伝達ドメインをコードする核酸配列も含む。幾つかの実施形態では、第２の細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及び／またはシグナル伝達ドメインを含む第２のＴ細胞活性化タンパク質複合体構成要素のタンパク質配列は、配列番号４８もしくは配列番号４９に記載される配列に対する１００％、９９％、９８％、９５％、９０％、８５％、もしくは８０％の配列同一性を含むか、または上述の百分率のうちの任意の２つにより規定される範囲内の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態では、２つの構成要素のＴ細胞活性化タンパク質複合体をホモ二量体化するための配列には、リガンドであるＡＰ１９０３によるホモ二量体化のためのＦＫＢＰ Ｆ３６Ｖドメインが組み込まれている。
幾つかの実施形態では、単一構成要素のホモ二量体化Ｔ細胞活性化タンパク質複合体のタンパク質配列または複数のタンパク質配列が提供される。幾つかの実施形態では、単一構成要素のＴ細胞活性化タンパク質複合体は、ＩＬ７Ｒα複合体である。幾つかの実施形態では、ＩＬ７Ｒα複合体は、配列番号５０に記載のアミノ酸配列を含む
（ＭＰＬＧＬＬＷＬＧＬＡＬＬＧＡＬＨＡＱＡＧＶＱＶＥＴＩＳＰＧＤＧＲＴＦＰＫＲＧＱＴＣＶＶＨＹＴＧＭＬＥＤＧＫＫＦＤＳＳＲＤＲＮＫＰＦＫＦＭＬＧＫＱＥＶＩＲＧＷＥＥＧＶＡＱＭＳＶＧＱＲＡＫＬＴＩＳＰＤＹＡＹＧＡＴＧＨＰＧＩＩＰＰＨＡＴＬＶＦＤＶＥＬＬＫＬＧＥＧＳＮＴＳＫＥＮＰＦＬＦＡＬＥＡＶＶＩＳＶＧＳＭＧＬＩＩＳＬＬＣＶＹＦＷＬＥＲＴＭＰＲＩＰＴＬＫＮＬＥＤＬＶＴＥＹＨＧＮＦＳＡＷＳＧＶＳＫＧＬＡＥＳＬＱＰＤＹＳＥＲＬＣＬＶＳＥＩＰＰＫＧＧＡＬＧＥＧＰＧＡＳＰＣＮＱＨＳＰＹＷＡＰＰＣＹＴＬＫＰＥＴ；配列番号５０）。
幾つかの実施形態では、少なくとも１つのＴ細胞活性化タンパク質は、第１の二量体化ドメインを含む第１の受容体タンパク質及び第２の二量体化ドメインを含む第２の受容体タンパク質を含み、ここで、当該第１の二量体化ドメイン及び当該第２の二量体化ドメインは、分子に反応して互いに特異的に結合する。代替的に用語「リガンド」または「作用物質」と称される、Ｔ細胞活性化タンパク質により結合される分子は、所望の生物学的効果を有する分子を指す。幾つかの実施形態では、リガンドは、細胞外結合ドメインにより認識され、結合され、リガンド及び２つの結合しているＴ細胞活性化タンパク質複合体構成要素を含む３成分複合体を形成する。リガンドとしては、限定されるものではないが、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、翻訳後修飾されたタンパク質、抗体などが含まれるが、これらに限定されないタンパク質分子；低分子（１０００ダルトン未満）、無機または有機化合物；ならびに二本鎖もしくは一本鎖ＤＮＡまたは二本鎖もしくは一本鎖ＲＮＡ（例えば、アンチセンス、ＲＮＡｉなど）、アプタマー、及び三重らせん核酸分子が含まれるが、これらに限定されない核酸分子が挙げられる。リガンドは、任意の既知の生物（限定されるものではないが、動物（例えば、哺乳動物（ヒト及び非ヒト哺乳動物））、植物、細菌、真菌、及び原生生物、またはウイルスが含まれる）または合成分子のライブラリーに由来し得るか、またはそれらから得られ得る。幾つかの実施形態では、リガンドは、タンパク質、抗体、低分子、または薬物である。幾つかの実施形態では、リガンドは、ラパマイシンまたはラパマイシン類似体（ラパログ）である。幾つかの実施形態では、ラパログには、ラパマイシンと比較して以下の修飾のうちの１つ以上を有するラパマイシンのバリアントが含まれる：Ｃ７、Ｃ４２、及び／またはＣ２９でのメトキシの脱メチル化、除去、または置換；Ｃ１３、Ｃ４３、及び／またはＣ２８でのヒドロキシの除去、誘導体化、または置換；Ｃ１４、Ｃ２４、及び／またはＣ３０でのケトンの還元、除去、または誘導体化；６員ピペコレート環の５員プロリル環での置換；ならびにシクロヘキシル環上の置換基の変更またはシクロヘキシル環の置換シクロペンチル環での置換。従って、幾つかの実施形態では、ラパログは、エベロリムス、ノボリムス、ピメクロリムス、リダホロリムス、タクロリムス、テムシロリムス、ウミロリムス、ゾタロリムス、ＣＣＩ－７７９、Ｃ２０－メタリルラパマイシン、Ｃ１６－（Ｓ）－３－メチルインドールラパマイシン、Ｃ１６－ｉＲａｐ、ＡＰ２１９６７、ミコフェノール酸ナトリウム、ベニジピン塩酸塩、ラパマイン（ｒａｐａｍｉｎｅ）、ＡＰ２３５７３、もしくはＡＰ１９０３、またはそれらの代謝産物、誘導体、及び／または組み合わせである。幾つかの実施形態では、リガンドは、ＩＭＩＤクラスの薬物（例えば、サリドマイド、ポマリドミド、レナリドマイド、または関連するアナログ）である。
幾つかの実施形態では、分子は、ＦＫ１０１２、タクロリムス（ＦＫ５０６）、ＦＫＣｓＡ、ラパマイシン、クーママイシン、ジベレリン、ＨａＸＳ、ＴＭＰ－ＨＴａｇ、及びＡＢＴ－７３７、またはそれらの機能的誘導体から選択される。
アダプター分子
本明細書で使用する場合、用語「アダプター分子」は、標的化部分に連結された受容体により認識可能なハプテン部分を有する任意の分子を指す。「標的化部分」は、標的細胞に特異的または非特異的に結合する任意の分子である。幾つかの実施形態では、標的化部分は、タンパク質である。標的化部分として使用するための例示的タンパク質としては、米国特許第９，２３３，１２５号に記載されるものが挙げられ、その開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。幾つかの実施形態では、タンパク質は、抗体またはその抗原結合断片である。幾つかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、腫瘍抗原に特異的である。例示的なタンパク質としては、限定されるものではないが、抗がんモノクローナル抗体、例えば、セツキシマブ（抗ＥＧＦＲ）、ニモツズマブ（抗ＥＧＦＲ）、パニツムマブ（抗ＥＧＦＲ）、リツキシマブ（抗ＣＤ２０）、オマリズマブ（抗ＣＤ２０）、トシツモマブ（抗ＣＤ２０）、トラスツズマブ（抗Ｈｅｒ２）、ゲムツズマブ（抗ＣＤ３３）、アレムツズマブ（抗ＣＤ５２）、及びベバシズマブ（抗ＶＥＧＦ）が挙げられる。
幾つかの実施形態では、標的化部分は低分子である。標的化部分として使用するための例示的タンパク質としては、米国特許出願第１５／２９６，６６６号、同第１６／０９２，０５４号、及び同第１６／２５３，５６２号に記載されるものが挙げられ、これらの各々は参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。標的化部分として有用な例示的低分子としては、限定されるものではないが、葉酸、ジカルボキシプロピル）ウレイド］ペンタン二酸（ＤＵＰＡ）、ＮＫ－１Ｒリガンド、ＣＡＩＸリガンド、γグルタミルトランスペプチダーゼのリガンド、ＮＫＧ２Ｄリガンド、またはコレシストキニン２受容体（ＣＣＫ２Ｒ）リガンドが挙げられる。
幾つかの実施形態では、標的化部分は、脂質またはより具体的には、リン脂質エーテル（ＰＬＥ）である。標的化部分として使用するための例示的タンパク質としては、国際特許出願公開第ＷＯ２０１８１４８２２４号、同第ＷＯ２０１９０６０４２５号、及び同第ＷＯ２０１８１４８２２４号に記載されるものが挙げられ、これらの各々は参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。幾つかの実施形態では、脂質は、極性頭基及び疎水基を含む。幾つかの実施形態では、疎水基は、炭素鎖または脂肪酸、例えば、脂肪族鎖である。幾つかの実施形態では、炭素鎖または脂肪酸は、飽和または不飽和である。幾つかの実施形態では、疎水基は、アルキル、アルケニル、またはアルキニル基を含む。幾つかの実施形態では、疎水基は、テルペノイド脂質、例えば、ステロイドもしくはコレステロールを含むか、または芳香環を含む。幾つかの実施形態では、疎水基は、エーテル結合を含み、ここで、当該エーテル結合は、極性頭基と脂肪族鎖との間にある。幾つかの実施形態では、脂質は、リン脂質エーテルである。幾つかの実施形態では、極性頭部は、コリン、ホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、ホスホエタノールアミン基、オリゴ糖残基、糖残基、ホスファチジルセリン、またはフォスファチジルイノシトールを含む。幾つかの実施形態では、糖は、グリセロールである。幾つかの実施形態では、標的部分は、ハプテン、ポリ（ｈｉｓ）タグ、Ｓｔｒｅｐタグ、ＦＬＡＧタグ、ＶＳタグ、Ｍｙｃタグ、ＨＡタグ、ＮＥタグ、ビオチン、ジゴキシゲニン、ジニトロフェノール、またはフルオレセインである。幾つかの実施形態では、疎水基は、炭素アルキル鎖を含み、ここで、当該炭素アルキル鎖は、少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、もしくは２２個の炭素、または任意の２つの上述の値により規定される範囲内の任意の数を含む。幾つかの実施形態では、炭素アルキル鎖は、８～２２個の炭素、例えば、８～１２、１２～１４、１４～１６、または１６～２２個の炭素を含む。幾つかの実施形態では、極性頭基は、ホスホコリン、ピペリジン部分、またはトリメチルアルセノ－エチル－ホスフェート部分を含む。幾つかの実施形態では、脂質は、標的部分を極性頭基から隔てるスペーサーを更に含む。幾つかの実施形態では、スペーサーは、ＰＥＧスペーサー、ハプテン（２ｘ）スペーサー、ハプテン（３ｘ）スペーサー、ハプテン（４ｘ）スペーサー、ハプテン（５ｘ）スペーサー、またはアルカン鎖を含む。幾つかの実施形態では、スペーサーは、ポリ（カルボキシベタイン）、ペプチド、ポリグリシドール、ポリエチレン、ポリ無水物、ポリホスホエステル、ポリカプロラクトン、またはポリ（エチレンオキシド）を含む。幾つかの実施形態では、ＰＥＧスペーサーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、もしくは２１個のＰＥＧ分子、または任意の２つの上述の値により規定される範囲内の任意の量のＰＥＧ分子を含む。幾つかの実施形態では、脂質は、がん細胞などの標的細胞の脂質二重層で挿入される。
幾つかの実施形態では、標的化部分は、抗体またはその抗原結合断片である。本明細書で使用する場合、用語「抗体」は、抗原と特異的に結合する免疫グロブリン分子を指す。抗体は、天然の供給源または組換え供給源に由来するインタクトな免疫グロブリンであり得、インタクトな免疫グロブリンの免疫反応性部分であり得る。この用語はその最も広い意味で使用され、インタクトな抗体が含まれるポリクローナル及びモノクローナル抗体、ならびに抗原結合性断片（Ｆａｂ）が含まれる機能的（抗原結合性）抗体断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆａｂ’断片、Ｆｖ断片、組換えＩｇＧ（ｒｌｇＧ）断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）が含まれる一本鎖抗体断片、ダイアボディ、ならびに単一ドメイン抗体（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｄＦｖ、ナノボディ）断片を含む。用語は、遺伝子操作された免疫グロブリン及び／またはそうでなければ改変形態の免疫グロブリン、例えば、細胞内抗体、ペプチボディ、キメラ抗体、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、及びヘテロコンジュゲート抗体、多重特異性、例えば、二重特異性の抗体、ダイアボディ、トリアボディ、及びテトラボディ、タンデム型ジｓｃＦｖ、タンデム型トリｓｃＦｖを包含する。特に明記しない限り、用語「抗体」は、その機能的抗体断片を包含することを理解すべきである。この用語は、ＩｇＧ及びそのサブクラス、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、及びＩｇＤが含まれる、任意のクラスまたはサブクラスの抗体が含まれる、インタクト抗体または全長抗体も包含する。用語「抗体断片」は、インタクトな抗体の一部を指し、インタクトな抗体の抗原決定可変領域を指す。抗体断片の例としては、限定されるものではないが、抗原結合性断片（Ｆａｂ）、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆａｂ’断片、Ｆｖ断片、組換えＩｇＧ（ｒｌｇＧ）断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）が含まれる一本鎖抗体断片、単一ドメイン抗体（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｄＦｖ、ナノボディ）断片、ダイアボディ、及び抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられる。特定の実施形態では、抗体断片は、ｓｃＦｖである。抗体またはその結合断片の非限定的な例としては、モノクローナル抗体、二重特異性抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ２、Ｆａｂ３、ｓｃＦｖ、ビスｓｃＦｖ、ミニボディ、トリアボディ、ダイアボディ、テトラボディ、ＶｈＨドメイン、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮＡＲ、及びラクダＩｇが挙げられる。抗体の追加の例は、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、及びＩｇＡである。抗体の非限定的な例としては、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体が挙げられる。組換え抗体の非限定的な例としては、腫瘍抗原に特異的に結合する抗体が挙げられる。
幾つかの実施形態では、標的化部分は、リン脂質エーテル（ＰＬＥ）を含む。幾つかの実施形態では、標的化部分は、葉酸を含む。幾つかの実施形態では、アダプター分子は、ＰＬＥにコンジュゲートされたＨＰＦを含む。幾つかの実施形態では、アダプター分子は、ＨＰＦ－ＦＩＴＣ－ＰＥＧ３－Ｃ１８－アルキルリン脂質を含む。幾つかの実施形態では、アダプター分子は、ＨＰＦ－｛リンカー｝－エルフォシン（ｅｒｕｆｏｓｉｎｅ）を含む。
本明細書で使用する場合、「ハプテン」は、受容体、例えば、キメラ抗原受容体などにより特異的に認識されることができる任意の部分を指す。幾つかの実施形態では、アダプター分子は、２つ以上のハプテン、例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、またはそれ以上のハプテンを含有する。ハプテンは、同じであり得るか、互いに異なり得る。一般に、ハプテン（または複数のハプテン）は、直接的に、またはスペーサーを介して標的化部分に共有結合される。限定されるものではないが、ポリ（カルボキシベタイン）、ペプチド、ポリグリシドール、ポリエチレン、ポリ無水物、ポリホスホエステル、ポリカプロラクトン、ポリ（エチレンオキシド）、ＰＥＧスペーサー、低分子ペプチド、またはアルカン鎖が含まれる幾つかの種類の「スペーサー」が、本明細書に記載される実施形態と共に使用されることが意図される。幾つかの実施形態では、アルカンスペーサーは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、もしくは１８個の炭素、または任意の２つの上述の値により規定される範囲の間の任意の数の炭素を含み得る。幾つかの実施形態では、ＰＥＧスペーサーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、もしくは２１個のＰＥＧ分子、または任意の２つの上述の値により規定される範囲内の任意の量のＰＥＧ分子を含む。
様々な低分子ハプテンが当技術分野において公知である。本開示の組成物及び方法に使用するための例示的なハプテンとしては、国際特許出願公開第ＷＯ２０１８１４８２２４号に記載されるもの挙げられ、これはその全体が参照により本明細書に組み込まれる。別の態様では、本開示は、新規のハプテンを選択すること、及びそのハプテンに特異的な抗体を当該技術分野において公知の抗ハプテン抗体生産技術を使用して作製することを意図する。幾つかの実施形態では、ハプテンは、フルオレセインを含む。組換えヒト抗体Ｅ２は、フルオレセインに結合することができる抗体である。幾つかの実施形態では、ハプテンは、フルオレセインを含み、ハプテン結合受容体は、抗フルオレセイン抗体またはその抗原結合断片、例えば、抗体Ｅ２を含む。幾つかの実施形態では、ハプテンは、２，４－ジニトロフェノール（ＤＮＰ）を含む。
幾つかの実施形態では、アダプター分子は、ハプテンに共有結合した１つ以上のマスキング部分を含み、これにより、少なくとも１つのハプテン及び少なくとも１つのマスキング部分を含む「マスクされたハプテン」をもたらす。「マスキング部分」は、通常はアンマスクされた形態のハプテンに結合することができるリガンドまたは受容体のマスクされた形態のハプテンへの結合を防止または阻害する化学部分である。マスキング部分は、ハプテンに特異的なハプテン結合受容体（例えば、キメラ抗原受容体）の結合及び認識を阻害することによりハプテンの認識を防止する保護基を含み得る。アダプター分子が細胞に組み込まれ、ここで、当該細胞が腫瘍環境または活性酸素種の存在部位に存在する場合、マスキング部分は、自己切断され得、これにより、キメラ抗原受容体によるハプテンの結合及び認識を可能にする。幾つかの実施形態では、標的化部分は、リン脂質エーテルである脂質である。幾つかの実施形態では、マスキング部分は、フェノール性ヒドロキシル基またはＰＥＧを含む。幾つかの実施形態では、フェノール性ヒドロキシル基は、フルオレセインのキサンテン部分のヒドロキシルに結合している。幾つかの実施形態では、マスキング部分は、腫瘍微小環境において特異的に切断可能であるように任意に構成される切断可能な部分を介してアダプター分子に結合している。幾つかの実施形態では、腫瘍微小環境において切断可能であるように構成される切断可能な部分は、活性酸素種による反応、酸性ｐＨ、低酸素状態、またはニトロシル化により切断される。幾つかの実施形態では、リン脂質エーテルがハプテンを含み、ＣＡＲが当該ハプテンとの相互作用により当該リン脂質エーテルに連結されている。幾つかの実施形態では、リン脂質エーテルは、極性頭基及び炭素アルキル鎖を含む。幾つかの実施形態では、炭素アルキル鎖は、少なくとも８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、もしくは２２個の炭素、または任意の２つの上述の値により規定される範囲内の任意の数を含む。幾つかの実施形態では、炭素アルキル鎖は、８～２２個の炭素、例えば、８～１２、１２～１４、１４～１６、または１６～２２個の炭素を含む。幾つかの実施形態では、組成物が酸性環境中に存在する場合、マスキング部分が除去される。幾つかの実施形態では、酸性環境には、４、５、６、もしくは６．５のｐＨ、または任意の２つの上述の値により規定される範囲の間の任意のｐＨが含まれる。幾つかの実施形態では、マスキング部分は、ニトロシル化により除去される。
幾つかの実施形態では、マスクされたハプテンは、化学反応がハプテンからマスキング部分を除去するのを可能にするように構成される。幾つかの実施形態では、マスクされたハプテンは、活性酸素種がハプテンからマスキング部分を除去するのを可能にするように構成される。幾つかの実施形態では、マスクされたハプテンは、ヒドロキシフェニル基を含む。幾つかの実施形態では、マスキング部分は、２，４－ジニトロフェノール（ＤＮＰ）基を含む。幾つかの実施形態では、ハプテンは、フルオレセインを含む。幾つかの実施形態では、マスクされたハプテンは、ヒドロキシフェニルフルオレセイン（ＨＰＦ）を含む。幾つかの実施形態では、マスクされたハプテンは、フルオレセイン－ＤＮＰを含む。
ハプテン結合受容体
本開示は、アダプター分子に結合する受容体、特にアダプター分子に含まれるハプテンに結合する受容体も提供する。ハプテン及びアダプター分子は、前のセクションに記載されたもののいずれかであり得る。幾つかの実施形態では、ハプテン結合受容体は、ハプテンに天然に結合する細胞表面受容体である。幾つかの実施形態では、ハプテン結合受容体は、部分的に合成であるか、または全体が合成である。幾つかの実施形態では、ハプテン結合受容体は、組換えタンパク質である。幾つかの実施形態では、ハプテン結合受容体は、キメラ受容体である。
幾つかの実施形態では、ハプテン結合受容体は、キメラ抗原受容体である。用語「キメラ抗原受容体」または「ＣＡＲ」または「キメラＴ細胞受容体」は、分子に結合する抗体または他のタンパク質配列のリガンド結合ドメイン、膜貫通ドメイン、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメイン、及び１つ以上の共刺激ドメインを含む人工的に設計された受容体を指す。リガンド結合ドメインは、スペーサードメインを介してＴ細胞受容体または他の受容体の１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、共刺激ドメインに連結される。キメラ受容体は、人工Ｔ細胞受容体、キメラＴ細胞受容体、キメラ免疫受容体、及びキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）とも称され得る。これらのＣＡＲは、免疫受容体細胞に任意の特異性を導入することができる遺伝子操作された受容体である。幾つかの実施形態では、キメラ抗原受容体のスペーサーは、ＣＡＲの所望の結合特性を達成するように（例えば、スペーサーのアミノ酸の特定の長さについて）選択される。次いで、例えば、細胞上に提示された異なる長さのスペーサーを有するＣＡＲは、ＣＡＲが対象とするアダプター分子及び／またはハプテンと結合または相互作用する能力についてスクリーニングされる。
本明細書における幾つかの実施形態では、ＣＡＲは、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。幾つかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－ＩＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－Ｉ（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、もしくはＣＤ８３に特異的に結合するリガンド、またはそれらの一部に由来する。
幾つかの実施形態では、ＣＡＲは、１つ以上の共刺激ドメインを含む。「共刺激ドメイン」は、例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体のＣＤ３ζ鎖により提供される一次シグナルに加えて、限定されるものではないが、活性化、増殖、分化、サイトカイン分泌などが含まれるＴ細胞反応を媒介するシグナルをＴ細胞に提供するシグナル伝達部分を指す。共刺激ドメインとしては、限定されるものではないが、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－ＩＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－Ｉ（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、またはＣＤ８３に特異的に結合するリガンドの全体または一部が挙げられ得る。幾つかの実施形態では、共刺激ドメインは、他の細胞内メディエーターと相互作用して、活性化、増殖、分化、及びサイトカイン分泌などが含まれる細胞反応を媒介する細胞内シグナル伝達ドメインである。本明細書における幾つかの実施形態では、共刺激ドメインは、４ｌｂｂ及びＣＤ３ζを含む。幾つかの実施形態では、Ｔ細胞であって、アダプター分子上のハプテンに特異的なＣＡＲを含む、当該Ｔ細胞が提供される。幾つかの実施形態では、Ｔ細胞は、８０６ ＣＡＲ（抗ＥＧＦＲ（８０６） ４１ＢＢ－ＣＤ３ζ ＣＡＲ）を更に含む。
幾つかの実施形態では、当該キメラ受容体は、以下に対する少なくとも８０％のアミノ酸同一性、少なくとも９０％のアミノ酸同一性、または少なくとも９５％のアミノ酸同一性を有する：ＳＶＬＴＱＰＳＳＶＳＡＡＰＧＱＫＶＴＩＳＣＳＧＳＴＳＮＩＧＮＮＹＶＳＷＹＱＱＨＰＧＫＡＰＫＬＭＩＹＤＶＳＫＲＰＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＮＳＡＳＬＤＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＡＷＤＤＳＬＳＥＦＬＦＧＴＧＴＫＬＴＶＬＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧＱＶＱＬＶＥＳＧＧＮＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＧＳＦＳＭＳＷＶＲＱＡＰＧＧＧＬＥＷＶＡＧＬＳＡＲＳＳＬＴＨＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＶＹＬＱＭＮＳＬＲＶＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＲＳＹＤＳＳＧＹＷＧＨＦＹＳＹＭＤＶＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＭＦＷＶＬＶＶＶＧＧＶＬＡＣＹＳＬＬＶＴＶＡＦＩＩＦＷＶＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＱＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ（配列番号５３）、または同じ相補性決定領域を共有するそのバリアント。
幾つかの実施形態では、キメラ抗原受容体は、短いＩｇＧ４リンカーを介してＣＤ２８膜貫通スパン及び４－１ＢＢζシグナル伝達尾部にコンジュゲートされた抗ＦＩＴＣ ｓｃＦｖを含む。
抗ＦＩＴＣ ｓｃＦｖを含む例示的なキメラ抗原受容体としては、米国特許出願第６３／０５２，８０６号に記載されるものが挙げられ、それはその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
幾つかの実施形態では、ハプテン結合受容体は、抗体のハプテン特異的抗原結合断片を含む。幾つかの実施形態では、抗原結合断片は、Ｆａｂ断片または一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）を含む。幾つかの実施形態では、ハプテンに特異的に結合する受容体は、ハプテン特異的キメラ抗原受容体を含む。
幾つかの実施形態では、ハプテン結合受容体は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）またはその機能部分である。「Ｔ細胞受容体」または「ＴＣＲ」は、主要組織適合複合体分子に結合した抗原の断片の認識を担う、Ｔリンパ球またはＴ細胞の表面に見出される分子を指す。
幾つかの実施形態では、ハプテン結合受容体は、二量体化活性化受容体開始複合体（ｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ ｃｏｍｐｌｅｘ、ＤＡＲＩＣ）である。ＤＡＲＩＣは、結合構成要素及びシグナル伝達構成要素を提供し、これらは各々が別個の融合タンパク質として発現されるが、細胞表面上での２つの機能的構成要素の再結合のための細胞外多量体化メカニズム（架橋因子）を含有する（米国特許出願第２０１６／０３１１９０１号（明示的にその全体が参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。重要なことに、ＤＡＲＩＣシステムにおいて架橋因子は、ヘテロ二量体の受容体複合体を生じさせ、これは単独では顕著なシグナル伝達を引き起こさない。記載されているＤＡＲＩＣ複合体は、他のＤＡＲＩＣ複合体との更なる共局在後にのみ生理学的に関連するシグナルを惹起する。従って、それらは、（例えば、ＤＡＲＩＣ構成要素のうちの１つに組み込まれた結合ドメインにより結合されるリガンドを発現する腫瘍細胞との接触による）ＤＡＲＩＣ複合体の更なる多量体化のメカニズムなしでは所望の細胞種の選択的な増殖を可能にしない。従って、本明細書で使用する場合、幾つかの実施形態では、ＤＡＲＩＣ構成要素に組み込まれた結合ドメインは、本明細書において開示されるアダプター分子に含まれるハプテンに結合する。
幾つかの実施形態では、ハプテン結合受容体のハプテン結合部分は、抗体または抗原結合性抗体誘導体の抗原結合部分を含み得る。抗体または誘導体の抗原結合部分は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、直鎖状抗体、一本鎖抗体、ミニボディなどであり得る。幾つかの実施形態では、ハプテン結合受容体のハプテン結合部分は、ＤＡＲＰｉｎまたはセンチリンを含み得る。
ハプテン結合受容体は、疾患または障害に関連する分子に結合し得る。本明細書で使用する場合、分子は、アダプター分子に含まれるハプテンであり得る。幾つかの実施形態では、ハプテン結合受容体が結合または相互作用するハプテンは、基質、例えば、膜、ビーズ、または支持体（例えば、ウェル）、または結合剤、例えば、脂質（例えば、ＰＬＥ）、ハプテン、リガンド、または抗体もしくはその結合断片上に提示され得る。幾つかの実施形態では、アダプター分子は、がん細胞に存在する抗原に対する特異性を有する結合剤である。幾つかの実施形態では、アダプター分子は、病原体、例えば、ウイルスまたは細菌に対する特異性を有する結合剤である。１つの手法によれば、所望のハプテンを含む基質またはアダプター分子が当該ハプテンに特異的なハプテン結合受容体を含む複数の細胞と接触され、当該ハプテン結合受容体を含む当該細胞の当該基質または結合剤に存在する当該ハプテンへの結合のレベルまたは量が決定される。結合のかかる評価は、アダプター分子に結合した細胞の染色または蛍光もしくは蛍光の喪失の評価を含み得る。同様に、スペーサーの長さを変更するなどのハプテン結合受容体構造の改変がこのようにして評価され得る。幾つかの手法では、標的細胞も提供され、その結果、本方法は、標的細胞、例えば、がん細胞または細菌細胞または標的ウイルスの存在下で、標的化部分及びハプテンを含むアダプター分子に特異的なハプテン結合受容体を含むＴ細胞などの細胞を接触させること、ならびに当該ハプテン結合受容体を含む当該細胞の当該アダプター分子への結合を評価すること、及び／または当該ハプテン結合受容体を含む当該細胞の当該標的細胞または標的ウイルスへの結合を評価することを含む。ハプテン結合受容体の異なる要素の変化は、例えば、特異的なエピトープまたは抗原に対するより強い結合親和性をもたらし得る。
本明細書に記載される幾つかの実施形態では、ハプテン結合受容体は、腫瘍またはがん細胞を標的とする脂質またはペプチドに特異的であり、ここで、当該脂質またはペプチドは、ハプテンを含み、ハプテン結合受容体は、当該ハプテンとの相互作用により当該脂質に特異的に結合し得る。幾つかの実施形態では、脂質は、リン脂質エーテルである。本明細書に記載される幾つかの実施形態では、ハプテン結合受容体は、リン脂質エーテルに特異的であり、ここで、当該リン脂質エーテルは、ハプテンを含み、当該ハプテン結合受容体は、当該ハプテンとの相互作用により当該リン脂質エーテルに特異的に結合する。
幾つかの実施形態では、ハプテン結合受容体は、抗体またはその結合断片に固定されたハプテンに特異的であり、ここで、当該ハプテン結合受容体は、当該ハプテンとの相互作用により当該抗体またはその結合断片に特異的に結合する。上記抗体またはその結合断片にコンジュゲートされ得る例示的なハプテンとしては、ポリ（ｈｉｓ）タグ、Ｓｔｒｅｐタグ、ＦＬＡＧタグ、ＶＳタグ、Ｍｙｃタグ、ＨＡタグ、ＮＥタグ、ビオチン、ジゴキシゲニン、ジニトロフェノール、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、黄色蛍光タンパク質、橙色蛍光タンパク質、赤色蛍光タンパク質、遠赤色蛍光タンパク質、またはフルオレセイン（例えば、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ））が挙げられる。幾つかの実施形態では、抗体またはその結合断片は、がん細胞または病原体（例えば、ウイルスまたは細菌病原体）に存在する抗原またはリガンドに特異的である。幾つかの実施形態では、抗体またはその結合断片は、腫瘍細胞、ウイルス、好ましくは慢性ウイルス（例えば、肝炎ウイルス、例えば、ＨＢＶまたはＨＣＶ、またはＨＩＶ）、または細菌細胞に存在する抗原またはリガンドに特異的である。
幾つかの実施形態では、ハプテン結合受容体の核酸は、膜貫通ドメインをコードするポリヌクレオチドを含む。膜貫通ドメインは、キメラ受容体の膜への係留を提供する。
幾つかの実施形態では、複合体であって、脂質に結合したハプテン結合受容体を含む、当該複合体が提供され、ここで、当該脂質は、ハプテンを含み、当該ハプテン結合受容体は、当該ハプテンとの相互作用により当該脂質に結合している。
幾つかの実施形態では、複合体であって、抗体またはその結合断片に結合したハプテン結合受容体を含む、当該複合体が提供され、ここで、当該抗体または結合断片は、ハプテン（例えば、ポリ（ｈｉｓ）タグ、Ｓｔｒｅｐタグ、ＦＬＡＧタグ、ＶＳタグ、Ｍｙｃタグ、ＨＡタグ、ＮＥタグ、ビオチン、ジゴキシゲニン、ジニトロフェノール、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、黄色蛍光タンパク質、橙色蛍光タンパク質、赤色蛍光タンパク質、遠赤色蛍光タンパク質、またはフルオレセイン（例えば、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ））を含み、当該ハプテン結合受容体は、当該ハプテンとの相互作用により当該抗体またはその結合断片に結合している。幾つかの実施形態では、抗体またはその結合断片は、がん細胞または病原体（例えば、ウイルスまたは細菌病原体）に存在する抗原またはリガンドに更に結合している。幾つかの実施形態では、抗体またはその結合断片は、腫瘍細胞、ウイルス、好ましくは慢性ウイルス（例えば、肝炎ウイルス、例えば、ＨＢＶまたはＨＣＶ、またはＨＩＶ）、または細菌細胞に存在する抗原またはリガンドに結合している。幾つかの実施形態では、ハプテンは、がん細胞または病原体（例えば、ウイルスまたは細菌細胞）の抗原に特異的な抗体またはその結合断片上に存在し、当該ハプテンは、細胞（例えば、Ｔ細胞）の表面に存在するハプテン結合受容体により結合され、当該ハプテン結合受容体を有する当該細胞は、当該がん細胞または病原体に対して指向される。
幾つかの実施形態では、本開示のハプテン結合受容体またはＴ細胞活性化タンパク質は、免疫抑制物質または抗増殖物質に対する耐性を免疫細胞に付与する。幾つかの例では、レンチウイルスベクターは、免疫抑制物質または抗増殖物質に対する耐性を形質導入された細胞に付与し、これにより、標的細胞の選択的な増殖を促進することにより、標的細胞の選択的な増殖を促進する。本開示は、免疫抑制物質または抗増殖物質に対する耐性を付与する核酸配列のいずれかを含むレンチウイルスベクターを提供する。免疫抑制物質または抗増殖物質の例としては、限定されるものではないが、ラパマイシンまたはその誘導体、ラパログまたはその誘導体、タクロリムスまたはその誘導体、シクロスポリンまたはその誘導体、メトトレキサートまたはその誘導体、及びミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）またはその誘導体が挙げられる。様々な耐性遺伝子が当技術分野において公知である。ラパマイシンに対する耐性は、ｍＴＯＲドメインにおいて見出され、ＦＫＢＰ－ラパマイシン複合体の標的であることが公知であるタンパク質ドメインであるＦＲｂをコードするポリヌクレオチド配列により付与され得る。タクロリムスに対する耐性は、カルシニューリン変異体ＣＮａ２２またはカルシニューリン変異体ＣＮｂ３０をコードするポリヌクレオチド配列により付与され得る。シクロスポリンに対する耐性は、カルシニューリン変異体ＣＮａ１２またはカルシニューリン変異体ＣＮｂ３０をコードするポリヌクレオチド配列により付与され得る。これらのカルシニューリン変異体は、Ｂｒｅｗｉｎ ｅｔ ａｌ．（２００９） Ｂｌｏｏｄ １１４：４７９２－８０３に記載されている。メトトレキサートに対する耐性は、ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）の様々な変異型（Ｖｏｌｐａｔｏ ｅｔ ａｌ．（２０１１） Ｊ Ｍｏｌ Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ２４：１８８－１９８）により提供され得、ＭＭＦに対する耐性は、イノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ（ＩＭＰＤＨ）の様々な変異型（Ｙａｍ ｅｔ ａｌ．（２００６） Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ １４：２３６－２４４）により提供され得る。
免疫抑制物質または抗増殖物質（例えば、免疫抑制薬）は、ＡＣＴの前、その間、及び／またはその後に一般的に使用される。幾つかの例では、免疫抑制薬の使用が、処置結果を改善し得る。幾つかの例では、免疫抑制薬の使用は、処置の副作用、例えば、限定されるものではないが、急性移植片対宿主病、慢性移植片対宿主病、及び移植後リンパ球増殖性疾患を減弱させ得る。本開示は、限定されるものではないが、レンチウイルスベクターが形質導入された細胞に免疫抑制薬に対する耐性を付与する本開示の方法が含まれる、本開示の疾患または状態を処置または予防する方法のいずれかと共に、免疫抑制薬を使用することを意図する。
ポリヌクレオチド
本開示は、本開示のトランスダクションエンハンサー、Ｔ細胞活性化タンパク質、アダプター分子、及びハプテン結合受容体をコードする核酸及びポリヌクレオチドにも関する。核酸は、上述のタンパク質のいずれかをコードする複数の配列を含む構築物の形態であり得る。本明細書で使用する場合、用語「ポリヌクレオチド」、「ヌクレオチド」、及び「核酸」は、互いに同義語であることを意図する。
多数の異なるポリヌクレオチド及び核酸が、遺伝コードの縮重の結果として同じポリペプチドをコードし得ることが当業者によって理解されるであろう。加えて、当業者は、定型的な技術を使用して、本明細書に記載されるポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド配列に影響を及ぼさないヌクレオチド置換を実行して、当該ポリペプチドが発現されるべき任意の特定の宿主生物のコドンの選択性を反映させ得ると理解されたい。
核酸は、ＤＮＡまたはＲＮＡを含み得る。それらは一本鎖または二本鎖であり得る。それらは、それらの中に合成または修飾ヌクレオチドを含むポリヌクレオチドであり得る。オリゴヌクレオチドの多数の異なる種類の修飾が当技術分野において公知である。これらとしては、メチルホスホネート及びホスホロチオエート骨格、分子の３’及び／または５’末端でのアクリジンまたはポリリジン鎖の付加が挙げられる。本明細書に記載される使用のために、ポリヌクレオチドが当該技術分野において利用可能な任意の方法により修飾され得ると理解されたい。かかる修飾は、関心対象のポリヌクレオチドのインビボでの活性または寿命を増強するために実施され得る。
ヌクレオチド配列に関して、用語「バリアント」、「ホモログ」、または「誘導体」は、１つ（またはそれ以上）の核酸の任意の置換、変異、修飾、置き換え、配列へのまたは配列からの欠失または付加を含む。核酸は、分裂促進性トランスダクションエンハンサーをコードする１つ以上の配列及び／またはサイトカインベースのトランスダクションエンハンサーをコードする１つ以上の配列を含むポリペプチドをもたらし得る。切断部位は自己切断型であり得、その結果、ポリペプチドが生成されると、任意の外因的切断活性を必要とすることなく受容体構成要素及びシグナル伝達構成要素に直ちに切断される。
口蹄疫ウイルス（ＦＭＤＶ）２ａ自己切断型ペプチド及び様々なバリアント及び２Ａ様ペプチドが含まれる、様々な自己切断型部位が公知である。ペプチドは、配列番号５１または５２として示される配列を有し得る。
配列番号５１：ＲＡＥＧＲＧＳＬＬＴＣＧＤＶＥＥＮＰＧＰ。
配列番号５２：ＱＣＴＮＹＡＬＬＫＬＡＧＤＶＥＳＮＰＧＰ。
共発現する配列は、内部リボソーム進入配列（ＩＲＥＳ）であり得る。共発現する配列は、内部プロモーターであり得る。
幾つかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、それにより形質導入された免疫細胞に抗血管新生物質に対する耐性を付与するタンパク質をコードする。
ウイルス粒子タグ付けタンパク質
ウイルスベクターのウイルスエンベロープは、捕捉部分に結合する結合ドメイン及び膜貫通ドメインを含むタグ付けタンパク質も含み得る。
タグ付けタンパク質は、捕捉部分に結合する結合ドメイン；スペーサー；及び膜貫通ドメインを含み得る。
タグ付けタンパク質は、タグ付けタンパク質の捕捉部分への結合により細胞の上澄みからのウイルスベクターの精製を容易にする。「結合ドメイン」は、標的実体、例えば、捕捉部分を認識し、特異的に結合することができる実体、例えば、エピトープを指す。結合ドメインは、捕捉部分に特異的に結合することができる１つ以上のエピトープを含み得る。例えば、結合ドメインは、捕捉部分に特異的に結合することができる少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、または５つのエピトープを含み得る。結合ドメインが２つ以上のエピトープを含む場合、各エピトープは、本明細書に記載されるリンカー配列により隔てられ得る。
結合ドメインは、結合ドメインと比較して捕捉部分に対するより高い結合親和性を有する実体の添加により捕捉部分から遊離可能であり得る。
結合ドメインは、１つ以上のストレプトアビジン結合エピトープ（複数可）を含み得る。例えば、結合ドメインは、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、または５つのストレプトアビジン結合エピトープを含み得る。
ストレプトアビジンは、細菌であるＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ａｖｉｄｉｎｉｉから精製された５２．８ｋＤａのタンパク質である。ストレプトアビジンホモ四量体は、ビオチン（ビタミンＢ７またはビタミンＨ）に対する非常に高い親和性を有し、約１０－１５Ｍの解離定数（Ｋｄ）を有する。ストレプトアビジンは、当該技術分野において周知であり、有機溶媒、変性剤、プロテアーゼ、ならびに過度の温度及びｐＨに対するストレプトアビジン－ビオチン複合体の耐性のために分子生物学及びバイオナノテクノロジーにおいて広範に使用されている。強いストレプトアビジン－ビオチン結合は、様々な生体分子を互いに、または固体支持体に結合させるために使用され得る。過酷な条件がストレプトアビジン－ビオチン相互作用を壊すために必要であるが、過酷な条件は精製される関心対象のタンパク質を変性させ得る。
結合ドメインは、例えば、ビオチン模倣物であり得る。「ビオチン模倣物」は、ストレプトアビジンに特異的に結合する短いペプチド配列（例えば、６～２０、６～１８、８～１８、または８～１５アミノ酸）を指し得る。前述したように、ビオチン／ストレプトアビジン相互作用の親和性は、非常に高い。従って、本発明の利点は、結合ドメインが、ビオチン自体と比較してストレプトアビジンに対するより低い親和性を有するビオチン模倣物を含み得ることである。
特に、ビオチン模倣物は、ビオチンより低い結合親和性でストレプトアビジンに結合し得、その結果、ビオチンがストレプトアビジンにより捕捉されたレトロウイルスベクターを溶出させるために使用され得る。例えば、ビオチン模倣物は、１ｎＭ～１００ｕＭのＫｄでストレプトアビジンに結合し得る。
ビオチン模倣物は、以下の群から選択され得る：Ｓｔｒｅｐｔａｇｌｌ、Ｆｌａｎｋｅｄｃｃｓｔｒｅｐｔａｇ、及びｃｃｓｔｒｅｐｔａｇ。結合ドメインは、２つ以上のビオチン模倣物を含み得る。例えば、結合ドメインは、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、または５つのビオチン模倣物を含み得る。結合ドメインが２つ以上のビオチン模倣物を含む場合、各模倣物は同一のまたは異なる模倣物であり得る。
本開示は、精製されていてもよいウイルス粒子及びその精製方法も提供する。幾つかの実施形態では、ウイルスベクターのウイルスエンベロープは、捕捉部分に結合する結合ドメイン；スペーサー；及び膜貫通ドメインを含むタグ付けタンパク質を含み得、ここで、タグ付けタンパク質は、当該タグ付けタンパク質の捕捉部分への結合により細胞の上澄みからのウイルスベクターの精製を容易にする。
タグ付けタンパク質の結合ドメインは、１つ以上のストレプトアビジン結合エピトープ（複数可）を含み得る。ストレプトアビジン－結合エピトープ（複数可）は、ビオチン模倣物、例えば、ビオチンより低い親和性でストレプトアビジンに結合するビオチン模倣物であり得、その結果、パッケージング細胞により産生され、ストレプトアビジンにより捕捉されたレトロウイルスベクターを溶出させるためにビオチンが使用され得る。好適なビオチン模倣物の例としては、以下が挙げられる：Ｓｔｒｅｐｔａｇｌｌ、Ｆｌａｎｋｅｄｃｃｓｔｒｅｔａｇ、及びｃｃｓｔｒｅｐｔａｇ。本発明の第１の態様のウイルスベクターは、Ｔ細胞受容体またはキメラ抗原受容体をコードする核酸配列を含み得る。ウイルスベクターは、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）であり得る。
産生／パッケージング細胞株
本開示は、本開示によるウイルス粒子の産生のための宿主細胞を提供する。幾つかの実施形態では、宿主細胞は、細胞表面に分裂促進性トランスダクションエンハンサー及び／またはサイトカインベースのトランスダクションエンハンサーを発現する。宿主細胞は、前述の実施形態によるウイルスベクターの産生のためのものであり得る。幾つかの実施形態では、宿主細胞は、ウイルス粒子の精製に有用なタグ付けタンパク質を含み得る。
宿主細胞はパッケージング細胞であり得、以下の遺伝子のうちの１つ以上を含み得る：ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ、及びｒｅｖ。レトロウイルスベクター用のパッケージング細胞は、ｇａｇ、ｐｏｌ、及びｅｎｖ遺伝子を含み得る。レンチウイルスベクター用のパッケージング細胞は、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ、及びｒｅｖ遺伝子を含み得る。
宿主細胞は産生細胞であり得、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ、及び任意にｒｅｖ遺伝子、ならびにレトロウイルスまたはレンチウイルスベクターゲノムを含む。遺伝子治療に使用するための典型的な組換えレトロウイルスまたはレンチウイルスベクターでは、ｇａｇ－ｐｏｌ及びｅｎｖタンパク質コード領域のうちの１つ以上の少なくとも一部がウイルスから除去され得、パッケージング細胞により提供される。これにより、ウイルスは、そのゲノムを宿主ゲノムに組み込むことができるが、改変されたウイルスゲノムは、構造タンパク質の欠如に起因してそれ自体を増殖させることができないため、ウイルスベクターは複製欠損となる。
パッケージング細胞は、ウイルスベクターを増殖させ、多量のウイルスベクターを単離するために、すなわち標的細胞の形質導入のための好適な力価のレトロウイルスベクターを調製するために使用される。
一部の例では、増殖及び単離は、レトロウイルスのｇａｇ－ｐｏｌ及びｅｎｖ（ならびにレンチウイルスの場合、ｒｅｖ）遺伝子の単離、ならびにパッケージング細胞株を作製するための宿主細胞へのそれらの別個の導入を必要とし得る。パッケージング細胞株は、レトロウイルスＤＮＡをパッケージングするのに必要とされるタンパク質を産生するが、ｐｓｉ領域の欠如に起因してキャプシド形成を引き起こすことができない。しかしながら、ｐｓｉ領域を保有する組換えベクターがパッケージング細胞株に導入される場合、ヘルパータンパク質がｐｓｉ陽性組換えベクターをパッケージングして、組換えウイルスストックをもたらし得る。
利用可能なパッケージング株の概要は、“Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ”（１９９７ Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｕｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ Ｅｄｓ：ＪＭ Ｃｏｆｆｉｎ，ＳＭ Ｈｕｇｈｅｓ，ＨＥ Ｖａｒｍｕｓ ｐｐ ４４９）に示される。
ウイルスのｇａｇ、ｐｏｌ、及びｅｎｖ（ならびにレンチウイルスベクターの場合、ｒｅｖ）コード領域を別個の発現プラスミドが保有しており、これらがパッケージング細胞株に独立して形質移入され、その結果、３つの組換え現象が野生型ウイルス産生に必要とされるパッケージング細胞も開発されている。
一過性の形質移入は、安定したベクター産生細胞株を作製するためにより長い時間が必要とされるのを回避し、ベクターまたはレトロウイルスパッケージング構成要素が細胞に対して有毒である場合に使用される。レトロウイルス／レンチウイルスベクターを産生するために通常使用される構成要素は、Ｇａｇ／Ｐｏｌタンパク質をコードするプラスミド、Ｅｎｖタンパク質（及びレンチウイルスベクターの場合、ｒｅｖタンパク質）をコードするプラスミド、及びレトロウイルス／レンチウイルスベクターゲノムを含む。ベクター産生は、これらの構成要素のうちの１つ以上を他の必要な構成要素を含有する細胞に一過性に形質移入することを含む。本発明のパッケージング細胞は、レトロウイルス／レンチウイルスのベクター粒子を産生することができる任意の哺乳動物細胞種であり得る。パッケージング細胞は、懸濁液中での増殖に適応しており、血清なしで増殖する２９３Ｔ細胞または２９３Ｔ細胞のバリアントであり得る。
パッケージング細胞は、以下を用いた一過性の形質移入により作製され得る：
ａ）導入ベクター
ｂ）ｇａｇ－ｐｏｌ発現ベクター
ｃ）ｅｎｖ発現ベクター。ｅｎｖ遺伝子は異種のものであり得、これにより、偽型レトロウイルスベクターをもたらす。例えば、ｅｎｖ遺伝子は、ＲＤ１１４またはそのバリアントのうちの１つ、ＶＳＶ－Ｇ、テナガザル白血病ウイルス（ＧＡＬＶ）、両栄養性ウイルスエンベロープ、麻疹ウイルスエンベロープ、またはヒヒレトロウイルスエンベロープ糖タンパク質に由来し得る。
レンチウイルスベクターの場合、ｒｅｖベクターでの一過性の形質移入も実行される。
本開示は、前述の実施形態によるウイルス粒子を発現する宿主細胞を提供する。幾つかの実施形態では、宿主細胞は、１種以上のトランスダクションエンハンサーを細胞表面に発現する。幾つかの実施形態では、本発明は、
（ａ）分裂促進ドメイン及び膜貫通ドメインを含む分裂促進性トランスダクションエンハンサー；及び／または
（ｂ）サイトカインドメイン及び膜貫通ドメインを含むサイトカインベースのトランスダクションエンハンサーを細胞表面に発現し、
その結果、パッケージング細胞により産生されるレトロウイルスまたはレンチウイルスベクターが、前述の実施形態に記載される通りである宿主細胞を提供する。
幾つかの実施形態では、宿主細胞は、捕捉部分に結合する結合ドメイン；及び膜貫通ドメインを含むタグ付けタンパク質も細胞表面に発現し得、ここで、タグ付けタンパク質は、当該タグ付けタンパク質の当該捕捉部分への結合により細胞の上澄みからのウイルスベクターの精製を容易にし、その結果、パッケージング細胞により産生されるレトロウイルスまたはレンチウイルスベクターは、前述のセクションに記載される特性を有する。
タグ付けタンパク質は、結合ドメインと膜貫通ドメインとの間にスペーサーも含み得る。
宿主細胞という用語は、パッケージング細胞または産生細胞を表現するために使用され得る。パッケージング細胞は、以下の遺伝子のうちの１つ以上を含み得る：ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ、及び／またはｒｅｖ。産生細胞は、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ、及び任意にｒｅｖ遺伝子を含み得、レトロウイルスまたはレンチウイルスゲノムも含む。幾つかの実施形態では、宿主細胞は、分裂促進性トランスダクションエンハンサー及び／またはサイトカインベースのトランスダクションエンハンサーを安定的に発現する任意の好適な細胞株であり得る。宿主細胞は、複製能力のないレトロウイルス／レンチウイルスのベクターを作製するために、導入ベクター、ｇａｇ－ｐｏｌ、ｅｎｖ（ならびにレンチウイルスの場合、ｒｅｖ）を用いて一過性に形質移入され得る。
本開示は、１種以上のトランスダクションエンハンサーをコードする核酸を用いて細胞を形質導入または形質移入するステップを含む、上記に記載の宿主細胞を作製するための方法も提供する。本発明の第２の態様による細胞においてレトロウイルスまたはレンチウイルスゲノムを発現させるステップを含む、前述の実施形態に記載のウイルスベクターを作製するための方法も提供される。
システム及びキット
本開示は、
（ａ）標的化部分及びマスクされたハプテンを含むアダプター分子であって、当該マスクされたハプテンがハプテンに連結されたマスキング部分を含む、当該アダプター分子と、
（ｂ）複数の組換えレトロウイルス粒子と、を含むシステム、治療システム、または組成物を提供し、
ここで、当該レトロウイルス粒子の各々は、５’から３’の順序で、
（ｉ）５’末端反復配列（ＬＴＲ）または非翻訳領域（ＵＴＲ）と、
（ｉｉ）プロモーターと、
（ｉｉｉ）当該ハプテンに特異的に結合する受容体をコードする配列と、
（ｉｖ）３’ＬＴＲまたはＵＴＲと、を含むポリヌクレオチドを含み、
当該レトロウイルス粒子の各々は、
（ｉ）ウイルス融合糖タンパク質と、
（ｉｉ）１種以上のトランスダクションエンハンサーと、を含むウイルスエンベロープを含み、
当該トランスダクションエンハンサーの各々は、任意に、Ｔ細胞活性化受容体、ＮＫ細胞活性化受容体、及び共刺激分子からなる群から選択される。幾つかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、Ｔ細胞活性化タンパク質をコードする配列を追加的に含む。
本開示は、システム及びシステムの使用説明書を含むキットも提供する。
トランスジェニック免疫細胞
本開示は、免疫細胞を前述の実施形態のうちのいずれかによるウイルスベクターと接触させるステップを含む、トランスジェニック活性化免疫細胞を作製するための方法を提供する。免疫細胞は、インビボまたはエクスビボで形質導入され得る。幾つかの実施形態では、宿主細胞の単離及びエクスビボでの操作を必要とせずに免疫細胞がインビボで形質導入されるように、ウイルスベクターが生きている対象に投与される。幾つかの実施形態では、免疫細胞がエクスビボで操作され、次いで、戻される必要がある対象に戻される。
免疫細胞は、一般に哺乳動物細胞、通常はヒト細胞、より典型的には、ヒト初代細胞、例えば、同種または自家ドナー細胞である。細胞は、生体試料などの試料、例えば、対象から得られたか、または対象に由来するものから単離され得る。幾つかの実施形態では、細胞が単離される対象は、疾患もしくは状態を有するか、または細胞療法を必要とするか、もしくは細胞療法が投与される対象である。幾つかの実施形態では、対象は、特定の治療介入、例えば、細胞が単離、処理、及び／または操作される養子細胞療法を必要とするヒトである。幾つかの実施形態では、細胞は、血液、骨髄、リンパ液、またはリンパ器官に由来し、免疫系の細胞、例えば、自然免疫系または適応免疫系の細胞、例えば、リンパ球、典型的には、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞が含まれる骨髄性細胞またはリンパ系細胞である。他の例示的な細胞としては、幹細胞、例えば、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）が含まれる複能性幹細胞及び多能性幹細胞が挙げられる。細胞は、典型的には、初代細胞、例えば、対象から直接単離されたもの及び／または対象から単離され、凍結されたものである。幾つかの実施形態では、細胞としては、Ｔ細胞または他の細胞種の１つ以上のサブセット、例えば、全Ｔ細胞集団、ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞、及びそれらの亜集団、例えば、機能、活性化状態、成熟度、分化能力、増殖、再循環、局在、及び／または持続能力、抗原特異性、抗原受容体の種類、特定の器官もしくは区画における存在、マーカーまたはサイトカイン分泌プロファイル、及び／または分化の程度により定義されるものが挙げられる。
Ｔ細胞及び／またはＣＤ４＋Ｔ細胞及び／またはＣＤ８＋Ｔ細胞のサブタイプ及び亜集団には、ナイーブＴ（ＴＮ）細胞、エフェクターＴ細胞（ＴＥＦＦ）、メモリーＴ細胞、及びそのサブタイプ、例えば、幹細胞メモリーＴ（ＴＳＣＭ）、セントラルメモリーＴ（ＴＣＭ）、エフェクターメモリーＴ（ＴＥＭ）、または終末分化エフェクターメモリーＴ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、未成熟Ｔ細胞、成熟Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、細胞障害性Ｔ細胞、粘膜関連インバリアントＴ（ＭＡＩＴ）細胞、天然型及び適応型制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞、ヘルパーＴ細胞、例えば、ＴＨ１細胞、ＴＨ２細胞、ＴＨ３細胞、ＴＨ１７細胞、ＴＨ９細胞、ＴＨ２２細胞、濾胞ヘルパーＴ細胞、α／βＴ細胞、ならびにδ／γＴ細胞がある。
本明細書における幾つかの実施形態では、提供される細胞は、細胞障害性Ｔリンパ球である。「細胞障害性Ｔリンパ球」（ＣＴＬ）としては、限定されるものではないが、例えば、表面上にＣＤ８を発現するＴリンパ球（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞）挙げられ得る。幾つかの実施形態では、かかる細胞は、好ましくは、抗原を経験した「メモリー」Ｔ細胞（ＴＭ細胞）である。幾つかの実施形態では、細胞は、Ｔ前駆細胞である。幾つかの実施形態では、Ｔ前駆細胞は、造血幹細胞である。幾つかの実施形態では、細胞は、ナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞、セントラルメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞、エフェクターメモリーＣＤ８＋Ｔ細胞、及びバルクＣＤ８＋Ｔ細胞からなる群から選択されるＣＤ８＋細胞障害性Ｔリンパ球細胞である。幾つかの実施形態では、細胞は、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞、セントラルメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞、エフェクターメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞、及びバルクＣＤ４＋Ｔ細胞からなる群から選択されるＣＤ４＋ヘルパーＴリンパ球である。
本明細書で使用する場合、トランスジェニックＴ細胞または形質導入されたＴ細胞、またはそれらの使用への任意の言及は、本明細書において開示される他の免疫細胞種のいずれかにも適用され得る。
本開示は、１種以上の外来性核酸分子を含むトランスジェニック免疫細胞も提供する。幾つかの実施形態では、トランスジェニック免疫細胞は、ハプテン結合受容体をコードするポリヌクレオチドを含む。幾つかの実施形態では、トランスジェニック免疫細胞は、トランスダクションエンハンサーをコードするポリヌクレオチドを含む。幾つかの実施形態では、トランスジェニック免疫細胞は、Ｔ細胞活性化タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む。幾つかの実施形態では、トランスジェニック免疫細胞は、ハプテン結合受容体をコードするポリヌクレオチド及びＴ細胞活性化タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む。
本開示の組成物を用いて対象を処置する方法
本開示は、処置する必要がある対象を、本明細書において開示される組成物、治療用組成物、細胞、ベクター、及びポリヌクレオチドを用いて処置する方法を提供する。幾つかの実施形態では、本開示は、対象におけるがんを処置し、及び／またはがん細胞を死滅させる方法であって、治療上有効量の本開示のウイルス粒子を当該対象に投与することを含み、投与ステップの前、その間、またはその後に、当該対象が、がん細胞をハプテンで標識するのに有効な用量の標的化部分及びマスクされたハプテンを含むアダプター分子を投与されたか、または投与される、当該方法を提供する。対象における腫瘍を処置し、及び／または腫瘍細胞を死滅させる方法であって、有効量のアダプター分子を当該対象に投与することを含み、当該アダプター分子がマスクされたハプテンで腫瘍細胞を標識し、前記マスクされたハプテンが活性酸素種により活性化され、これにより、ハプテンを生成し、投与ステップの前、その間、またはその後に、当該対象が、前述の実施形態のうちのいずれかによるレトロウイルス粒子を投与されたか、または投与される、当該方法も提供される。
幾つかの実施形態では、本明細書において開示される方法は、治療上有効量の前述の実施形態のうちのいずれかによるレンチウイルス粒子を投与することにより対象におけるがんを処置し、及び／またはがん細胞を死滅させるために使用され得、ここで、投与ステップの前に、当該対象は、がん細胞をハプテンで標識するのに有効な用量の標的化部分及び当該ハプテンを含むアダプター分子を投与されている。幾つかの実施形態では、本明細書において開示される方法は、システムを投与することによりがんを処置し、及び／またはがん細胞を死滅させるために使用され得る。
本開示は、対象におけるがんを処置し、及び／またはがん細胞を死滅させる方法であって、前述の実施形態のいずれかのシステムを当該対象に投与することを含む、当該方法も提供する。
幾つかの実施形態では、本開示は、本明細書において提供される組成物のいずれかを用いてがんを処置する方法を提供する。「がん」は、本明細書に照らして読まれる場合、その一般的かつ通常の意味を有し、これには、限定されるものではないが、例えば、身体の他の部分に浸潤または伝播する可能性のある異常細胞増殖を伴う疾患の一群が挙げられ得る。本明細書に記載される方法を使用して対処され得る対象としては、限定されるものではないが、大腸癌、肺癌、肝臓癌、乳癌、腎臓癌、前立腺癌、卵巣癌、皮膚癌（黒色腫が含まれる）、骨癌、及び脳癌などが含まれる、がんを有すると同定されたか、または有するとして選択された対象が挙げられる。かかる同定及び／または選択は、臨床評価または診断評価によりなされ得る。幾つかの実施形態では、黒色腫、乳癌、脳癌、扁平上皮細胞癌、大腸癌、白血病、骨髄腫、及び／または前立腺癌などの腫瘍関連抗原または分子が公知である。例としては、限定されるものではないが、Ｂ細胞リンパ腫、乳癌、脳癌、前立腺癌、及び／または白血病が挙げられる。幾つかの実施形態では、１種以上の発がんポリペプチドが、腎臓癌、子宮癌、大腸癌、肺癌、肝臓癌、乳癌、腎臓癌、前立腺癌、卵巣癌、皮膚癌（黒色腫が含まれる）、骨癌、脳癌、腺癌、膵臓癌、慢性骨髄性白血病、または白血病に関連する。幾つかの実施形態では、対象におけるがんを処置、改善、または阻害する方法が提供される。幾つかの実施形態では、がんは、乳癌、卵巣癌、肺癌、膵臓癌、前立腺癌、黒色腫、腎臓癌、膵臓癌、グリア芽細胞腫、神経芽細胞腫、髄芽腫、肉腫、肝臓癌、大腸癌、皮膚癌（黒色腫が含まれる）、骨癌、または脳癌である。
幾つかの実施形態では、標的細胞は、腫瘍細胞である。幾つかの実施形態では、標的細胞は、免疫細胞である。幾つかの実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞またはＢ細胞である。幾つかの実施形態では、標的細胞は、腫瘍微小環境中に存在する。
幾つかの実施形態では、形質導入されたＴ細胞は、アダプター分子組成物の投与の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１５、２０、２４、３６、４８、６０、もしくは７２時間後、または任意の２つの上述の値により規定される範囲内の任意の時間後に対象に提供される。幾つかの実施形態では、細胞は、組成物の投与の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１５、２０、２４、３６、もしくは４８時間前、または任意の２つの上述の値により規定される範囲内の任意の時間前に対象に提供される。幾つかの実施形態では、細胞は、対象への組成物の提供の数秒または数分以内、例えば、１時間未満以内に対象に提供される。幾つかの実施形態では、追加の細胞及び／または組成物が対象に提供される。幾つかの実施形態では、ウイルスベクターは、対象に直接投与される。幾つかの実施形態では、ウイルスベクターは、Ｔ細胞と共に投与される。幾つかの実施形態では、ウイルスベクター及びＴ細胞は、別々に投与される。幾つかの実施形態では、投与されたウイルスベクターによりＴ細胞が活性化され、インビボで形質導入される。
幾つかの実施形態では、追加のがん治療、例えば、低分子、例えば、化合物、抗体療法、例えば、放射性核種、毒素、もしくは薬物とのコンジュゲーションを有するか、もしくは有さないヒト化モノクローナル抗体、手術、及び／または放射線が提供される。
幾つかの実施形態では、対象は、がん治療、放射線、化学療法、またはがんの処置のための薬物が挙げられ得る追加のがん治療を受けるように選択される。幾つかの実施形態では、薬物には、アビラテロン、アレムツズマブ、アナストロゾール、アプレピタント、三酸化ヒ素、アテゾリズマブ、アザシチジン、ベバシズマブ、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、カバジタキセル、カペシタビン、カルボプラチン、セツキシマブ、化学療法剤の組み合わせ、シスプラチン、クリゾチニブ、シクロホスファミド、シタラビン、デノスマブ、ドセタキセル、ドキソルビシン、エリブリン、エルロチニブ、エトポシド、エベロリムス、エクセメスタン、フィルグラスチム、フルオロウラシル、フルベストラント、ゲムシタビン、イマチニブ、イミキモド、イピリムマブ、イクサベピロン、ラパチニブ、レナリドマイド、レトロゾール、ロイプロリド、メスナ、メトトレキサート、ニボルマブ、オキサリプラチン、パクリタキセル、パロノセトロン、ペムブロリズマブ、ペメトレキセド、プレドニゾン、ラジウム－２２３、リツキシマブ、シプリューセル－Ｔ、ソラフェニブ、スニチニブ、胸膜腔内注入用タルク、タモキシフェン、テモゾロミド、テムシロリムス、サリドマイド、トラスツズマブ、ビノレルビン、またはゾレドロン酸が含まれる。
投与様式及び投薬様式
本開示のウイルス粒子、アダプター分子、及び免疫細胞は、局所処置が望ましいか、または全身処置が望ましいかに応じて多数の方法で投与され得る。
養子細胞療法の場合、養子細胞療法のための細胞の投与方法は、公知であり、提供される方法及び組成物と共に使用され得る。例えば、養子Ｔ細胞療法は、例えば、Ｇｒｕｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｔに属する米国特許出願公開第２００３／０１７０２３８号；Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇに属する米国特許第４，６９０，９１５号；Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ （２０１１） Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ．８（１０）：５７７－８５に記載されている。例えば、Ｔｈｅｍｅｌｉ ｅｔ ａｌ．（２０１３） Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３１（１０）：９２８－９３３；Ｔｓｕｋａｈａｒａ ｅｔ ａｌ．（２０１３） Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ ４３８（１）：８４－９；Ｄａｖｉｌａ ｅｔ ａｌ．（２０１３） ＰＬｏＳ ＯＮＥ ８（４）：ｅ６１３３８を参照のこと。
一般に、投与は、局所投与、非経口投与、または経腸投与であり得る。本開示の組成物は、通常、非経口投与に好適である。本明細書で使用する場合、医薬組成物の「非経口投与」としては、対象の組織を物理的に突き破ること、及び当該組織の破れ目を通して医薬組成物を投与することを特徴とし、これにより、一般に血流、筋肉、または内臓への直接的投与をもたらす任意の投与経路が挙げられる。従って、非経口投与としては、限定されるものではないが、組成物の注射による医薬組成物の投与、外科切開による組成物の適用による医薬組成物の投与、組織を貫通する非外科的創傷を通した組成物の適用による医薬組成物の投与などが挙げられる。特に、非経口投与としては、限定されるものではないが、皮下、腹腔内、筋肉内、胸骨内、静脈内、動脈内、クモ膜下腔内、心室内、尿道内、頭蓋内、腫瘍内、滑液嚢内注射または注入；及び腎臓透析注入法が挙げられることを意図する。好ましい実施形態では、本開示の組成物の非経口投与は、静脈内投与を含む。
非経口投与に好適な医薬組成物の製剤は、通常、薬学的に許容される担体、例えば、滅菌水または無菌の等張食塩水と組み合わされた活性成分を典型的に含む。かかる製剤は、ボーラス投与または連続投与に好適な形態に調製されるか、それらの形態に包装されるか、またはそれらの形態で販売され得る。注射製剤は、単位剤形、例えば、アンプルまたは防腐剤を含有する多回投与用容器に調製されるか、それらの形態に包装されるか、またはそれらの形態で販売され得る。非経口投与用製剤としては、限定されるものではないが、懸濁液、溶液、油性または水性ビヒクル中のエマルション、ペーストなどが挙げられる。かかる製剤は、限定されるものではないが、懸濁化剤、安定化剤、または分散剤が含まれる１種以上の追加の成分を更に含み得る。非経口投与用製剤の一実施形態では、活性成分は、再構成された組成物の非経口投与の前に好適なビヒクル（例えば、無菌の発熱物質を含まない水）で再構成するために乾燥（すなわち、粉末または顆粒）形態で提供される。非経口製剤としては、賦形剤、例えば、塩、炭水化物、及び緩衝剤（好ましくは３～９のｐＨとなるまで）を含有し得る水溶液も挙げられるが、一部の用途では、それらは、無菌の非水溶液として、または好適なビヒクル、例えば、無菌の発熱物質を含まない水と共に使用される乾燥形態としてより適切に製剤化され得る。例示的な非経口投与形態としては、滅菌水溶液、例えば、水性プロピレングリコールまたはデキストロース溶液中の溶液または懸濁液が挙げられる。かかる剤形は、必要に応じて、適切に緩衝され得る。有用な他の非経口投与可能な製剤としては、微晶質形態の活性成分またはリポソーム製剤中の活性成分を含むものが挙げられる。非経口投与用製剤は、即時放出及び／または調節放出となるように製剤化され得る。調節放出製剤としては、遅延放出、持続放出、パルス放出、制御放出、標的化放出、及びプログラム化放出が挙げられる。
本発明の組成物は、医薬組成物中に通常見出される他の補助成分を追加的に含有し得る。従って、例えば、組成物は、例えば、止痒剤、収れん剤、局所麻酔薬、もしくは抗炎症剤などの追加の適合可能な薬学的活性物質を含有し得るか、または本発明の組成物の様々な剤形の物理的製剤化に有用な追加の物質、例えば、色素、香味剤、防腐剤、抗酸化剤、乳白剤、増粘剤、及び安定剤を含有し得る。しかしながら、添加される場合、かかる物質は、本発明の組成物の成分の生物活性に過度に干渉するべきではない。製剤は滅菌され得、必要に応じて、補助剤、例えば、製剤の核酸（複数可）と有害な相互作用を起こさない滑沢剤、防腐剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を与えるための塩、緩衝剤、着色剤、香味料、及び／または芳香剤などと混合され得る。
本発明のウイルス粒子、アダプター分子、及び／または免疫細胞の組成物は、疾患または状態を処置または予防するのに有効な量、例えば、治療上有効量または予防上有効量で投与され得る。幾つかの実施形態では、処置された対象の定期評価により治療有効性または予防有効性がモニタリングされる。状態に応じた数日間またはそれ以上にわたる反復投与の場合、処置は、疾患の症状の所望される抑制が生じるまで繰り返される。しかしながら、他の投与計画が有用であってもよく、決定され得る。所望の投与量は、組成物の単回ボーラス投与により、組成物の複数回ボーラス投与により、または組成物の持続注入投与により送達され得る。
ある種の実施形態では、本開示による免疫細胞またはトランスジェニック免疫細胞の注入の文脈において、対象は、約１００万個～約１，０００億個の範囲の細胞、例えば、１００万個～約５００億個の範囲の細胞（例えば、約５００万個の細胞、約２，５００万個の細胞、約５，０００万個の細胞、約１０億個の細胞、約５０億個の細胞、約２００億個の細胞、約３００億個の細胞、約４００億個の細胞、または前述の値のうちの任意の２つにより規定される範囲）、例えば、約１０００万個～約１，０００億個の細胞（例えば、約２，０００万個の細胞、約３，０００万個の細胞、約４，０００万個の細胞、約６，０００万個の細胞、約７，０００万個の細胞、約８，０００万個の細胞、約９，０００万個の細胞、約１００億個の細胞、約２５０億個の細胞、約５００億個の細胞、約７５０億個の細胞、約９００億個の細胞、または前述の値のうちの任意の２つにより規定される範囲）、及び場合によっては、約１億個の細胞～約５００億個の細胞（例えば、約１億２，０００万個の細胞、約２億５，０００万個の細胞、約３億５，０００万個の細胞、約４億５，０００万個の細胞、約６億５，０００万個の細胞、約８億０，０００万個の細胞、約９億０，０００万個の細胞、約３０億個の細胞、約３００億個の細胞、約４５０億個の細胞）など、もしくはこれらの範囲の間の任意の値、及び／または対象の体重１ｋｇ当たりのかかる数の細胞を投与される。例えば、幾つかの実施形態では、細胞または細胞集団の投与は、ｋｇ体重当たり約１０３～約１０９個の細胞（それらの範囲内の全ての整数値の細胞数が含まれる）の投与を含み得る。
ウイルス粒子の投与の文脈において、ウイルス粒子の量及びかかる粒子の投与回数は、本発明の教示の利益を享受する当業者の権限の範囲内である。幾つかの実施形態では、治療上有効量の本開示の組成物の投与は、例えば、かかる処置を受けている患者に治療効果をもたらすのに十分な数のウイルス粒子の単回注射などの単回投与により達成され得る。幾つかの実施形態では、かかる組成物の投与を監督する医療従事者により決定され得るように、比較的短期間または比較的長期間のいずれかにわたるレンチウイルスベクター組成物の複数回投与または連続投与が対象に提供される。例えば、哺乳動物に投与される感染性粒子の数は、処置される特定の疾患または障害の治療を達成するのに必要とされ得る、約１０７、１０８、１０９、１０１０、１０１１、１０１２、１０１３個程度、または更にそれ以上のウイルス粒子／ｍｌであり得、単回用量として投与されるか、または２回以上の投与に分割されるかのいずれかである。幾つかの実施形態では、対象は、特定の治療計画の所望の効果を達成するために、２種以上の異なるウイルスベクター組成物を、単独または１種以上の他の治療薬との組み合わせのいずれかで投与され得る。幾つかの実施形態では、ウイルスベクターは、トランスジェニック免疫細胞と組み合わせて投与される。幾つかの実施形態では、ウイルスベクターは、まだ形質導入されていない免疫細胞と組み合わせて投与される。語句「組み合わせて」には、同時または短い期間の範囲内の、例えば、１週間、１日間、１２時間、６時間、１時間、３０分間、１０分間、５分間、もしくは１分間以内の異なる時間が含まれ得る。
アダプター分子の投与の文脈において、用量は、標的細胞の種類、アダプター分子に含まれる標的化部分、及びアダプター分子に含まれるハプテン分子に依存する。疾患の種類及び重症度に応じて、アダプター分子の例示的投与量は、限定されるものではないが、５ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、または１５ｍｇ／ｋｇが含まれる、約１μｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇまたは約５ｍｇ／ｋｇ～約１５ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。投与頻度は、疾患の種類及び重症度に応じて異なる。状態に応じた数日間またはそれ以上にわたる反復投与の場合、処置は、状態、例えば、がんが処置されるか、または当該技術分野において公知の方法により測定して所望の治療効果が達成されるまで継続され得る。幾つかの実施形態では、アダプター分子は、１回投与される。幾つかの実施形態では、アダプター分子は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週間、２週間、３週間、４週間、１ヵ月、２ヵ月、３ヵ月、４ヵ月、５ヵ月、６ヵ月、７ヵ月、８ヵ月、９ヵ月、１０ヵ月、１１ヵ月、または１年毎に１回投与される。アダプター分子は、本明細書において開示されるウイルス粒子及び／またはトランスジェニック免疫細胞と組み合わせて投与され得る。語句「組み合わせて」には、同時または短い期間の範囲内の、例えば、１週間、１日間、１２時間、６時間、１時間、３０分間、１０分間、５分間、もしくは１分間以内の異なる時間が含まれ得る。
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本明細書に記載される全ての刊行物及び特許は、各個別の刊行物または特許が参照により組み込まれることが具体的に、かつ個々に示されているかのように、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。矛盾する場合、本明細書における任意の定義を含め、本出願が優先する。しかしながら、本明細書において引用されるいかなる参考文献、論文、刊行物、特許、特許公報、及び特許出願への言及も、それらが有効な先行技術を構成するか、または世界の任意の国における一般的知識の一部をなすことの容認、または任意の形態の示唆ではなく、そのようにみなされるべきではない。
本明細書において、いかなる濃度範囲、百分率範囲、比範囲、または整数範囲も、特に明記しない限り、記載された範囲内の任意の整数の値、及び適切な場合には、その分数（例えば、整数の１０分の１及び１００分の１）を含むと理解されるべきである。用語「約」は、数または数字の直前にある場合、当該数または数字がプラスまたはマイナス１０％の範囲であることを意味する。本明細書で使用する場合、用語「ａ」及び「ａｎ」は、特に明記しない限り、示される構成要素のうちの「１つ以上」を指すと理解されるべきである。選択肢（例えば、「または」）の使用は、選択肢のうちの一方、両方、またはそれらの任意の組み合わせのいずれかを意味すると理解されるべきである。用語「及び／または」は、選択肢のちの一方または両方のいずれかを意味すると理解されるべきである。本明細書で使用する場合、用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」及び「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」は同義的に使用される。
本明細書において使用される見出しは、単に編成のためであり、記載される主題を限定するものとして解釈されるべきではない。
例示的実施形態が示され、記載されたが、本発明の要旨及び範囲から逸脱することなく、様々な変更がその中でなされ得ることが理解されよう。
以下の実施例は、本明細書に記載される組成物及び方法がどのように使用され得、作られ得、評価され得るかの説明を当業者に提供するために示され、単に本発明を例示することを意図したものであり、本発明とみなされるものの範囲を限定することを意図しない。
実施例１：ＦＩＴＣ ＣＡＲの形質導入、濃縮、及び活性化
この実施例は、抗原であるフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）の存在下でのＣＡＲを発現するＴ細胞の増殖及び活性化の増強を実証する。
ＰＢＭＣの解凍及び刺激の非存在下での培養
プロトコールの０日目に、凍結された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、３７℃の浴槽の湯中で素早く解凍し、９ｍＬの暖かいＲＰＭＩ－Ｃ（ＲＰＭＩ １６４０＋Ｐ／Ｓ＋１０％のＦＢＳ）培地にゆっくりと添加した。次いで、解凍したＰＢＭＣを２００×ｇで１０分間遠心した。遠心後、培地を吸引し、細胞を計数し、１×１０６個細胞／ｍＬの細胞密度で約２５０ｍＬのフラスコのＲＰＭＩ－Ｃ培地中に蒔いた。５０Ｕ／ｍＬのＩＬ－２もフラスコに添加した。蒔いた後の生細胞の総数は、ＩＬ－２を含有する２０ｍＬのＲＰＭＩ－Ｃ培地中２．３２×１０７個細胞であった。
ＦＩＴＣ ＣＡＲベクターでの形質導入
プロトコールの１日目に、１×１０７個のＰＢＭＣ細胞を５０ｍＬのコニカルチューブに集め、４００×ｇで５分間遠心した。次いで、細胞を、６ウェルプレート内の５０Ｕ／ｍＬのＩＬ－２を含有する合計２．５ｍＬのＲＰＭＩ－Ｃ培地中に２．５×１０６個細胞／ウェルの濃度で蒔いた。ＣＤ３－コーカルエンベロープで改変され、ＦＩＴＣ ＣＡＲ－Ｆｒｂ－ＲＡＣＲ多シストロン性ベクターを含有するレンチウイルス粒子を使用して、１０の感染多重度（ＭＯＩ）でＰＢＭＣを形質導入した。形質導入に使用されたレンチウイルス力価は、１．６１×１０８ＴＵ／ｍＬであり、２．５×１０７ＴＵ／ウェルの標的力価であった。各ウェルに添加した粒子の容量は、１５５μＬであった。形質導入した細胞をインキュベーター内で６日間維持し、５０Ｕ／ｍＬのＩＬ－２を３日毎に細胞に添加した。形質導入した細胞を毎日モニタリングし、細胞培地が橙黄色を呈するのが観察された場合に、５０Ｕ／ｍＬのＩＬ－２を含有するＲＰＭＩ－Ｃ培地をウェルに添加した。
細胞のラパマイシン添加条件への分割
プロトコールの７日目に、１×１０７個のＰＢＭＣ細胞を１５ｍＬのコニカルチューブに集め、ＲＰＭＩ－Ｃ培地で洗浄し、４００×ｇで５分間遠心した。細胞を、５０Ｕ／ｍＬのＩＬ－２を含有する２ｍＬのＲＰＭＩ－Ｃ培地中に２×１０６個細胞／ウェルの細胞密度で６ウェルプレートの２つのウェルに分割した。１０ｎＭのラパマイシンは、ウェルのうちの１つに添加し、０ｎＭを２つ目のウェルに添加した。ラパマイシン処理された細胞及び処理されていない細胞を、インキュベーター内で４日間維持し、５０Ｕ／ｍＬのＩＬ－２を３日毎に細胞に添加した。細胞を毎日モニタリングし、細胞培地が橙黄色を呈するのが観察された場合に、５０Ｕ／ｍＬのＩＬ－２を含有するＲＰＭＩ－Ｃ培地＋／－１０ｎＭのラパマイシンをウェルに添加した。
プレートのＦＩＴＣ－ＯＶＡでのコーティング
プロトコールの１０日目に、ＰＢＳ中５μｇ／ｍＬの蛍光標識オボアルブミン（ＦＩＴＣ－ＯＶＡ）溶液を調製した。４８ウェルプレートのウェル１つ当たり１２５μＬのＦＩＴＣ－ＯＶＡ溶液を添加した。アルミニウム箔で包んだプレートを溶液と共に４℃で一晩インキュベートした。
ＦＩＴＣ－ビオチンとビーズのコンジュゲーション
プロトコールの１０日目に、抗ビオチンＭＡＣＳｉＢｅａｄ粒子をボルテックスし、３０μｇのＦＩＴＣ－ビオチン一次抗体を、１０×１０８個のＭＡＣＳｉＢｅａｄ粒子に添加した。０．５％のＢＳＡ及び２ｎＭのＥＤＴＡと共にＰＢＳを含有する緩衝液を使用して、総容量を１ｍＬにした。
細胞の抗原（ＦＩＴＣ）刺激条件への分割
プロトコールの１１日目に、０ｎＭのラパマイシン中でインキュベートした合計４．８×１０６個の生細胞及び１０ｎＭのラパマイシン中でインキュベートした合計１．９×１０６個の生細胞を１５ｍＬのコニカルチューブに集め、ＲＰＭＩ－Ｃ培地で洗浄し、４００×ｇで５分間遠心した。洗浄した細胞を、１ｍＬ当たり２．５×１０６個細胞の細胞密度でＩＬ－２を含有しないＲＰＭＩ－Ｃ培地中に再懸濁した。
ＦＩＴＣ－ＯＶＡ溶液を処理したプレートから吸引し、冷ＰＢＳで３回洗浄した。細胞を、５００μＬのＲＰＭＩ－Ｃ培地＋／－１０ｎＭのラパマイシン中に２．５×１０５個細胞／ウェルで４８ウェルプレートに分割した。表１は、試料の刺激条件を示す。ＦＩＴＣ－ビオチンビーズ条件下で処理される細胞について、１：１の比率のビーズ：細胞を使用した。細胞をインキュベーター内で５日間維持した。細胞を毎日モニタリングし、細胞培地が橙黄色を呈するのが観察された場合に、ＲＰＭＩ－Ｃ培地＋／－１０ｎＭラパマイシンをウェルに添加した。
Figure 2022553200000002
フローサイトメトリーによるＣＡＲ発現及び活性化の評価
プロトコールの１６日目に、各々の刺激条件の細胞を計数した。細胞数の結果を表２に示す。
Figure 2022553200000003
細胞を９６ウェルＶ底プレートの個々のウェルに移し、プレートを４００×ｇで５分間遠心し、細胞を２００μＬのＰＢＳで洗浄し、４００×ｇで再び５分間遠心した。細胞を５０μＬ／ウェルのＺｏｍｂｉｅ ＮＩＲ Ｆｉｘａｂｌｅ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｄｙｅ（ＰＢＳ中に１：３０００希釈）中で室温にて１０分間インキュベートした。次いで、細胞を１５０μＬのＦＡＣＳ緩衝液（１Ｘ ＰＢＳ＋２％のＦＢＳ）で洗浄し、プレートを４００×ｇで５分間遠心した。次に、ＦＡＣＳ緩衝液中の５０μＬ／ウェルの表面染色剤を細胞に添加し、４℃で４５分間インキュベートした。
細胞を１５０μＬのＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、プレートを４００×ｇで５分間遠心した。次いで、細胞を１００μＬ／ウェルのＢＤ Ｃｙｔｏｆｉｘ／Ｃｙｔｏｐｅｒｍ緩衝液で４℃にて２０分間固定した。次いで、細胞を、水中に１０倍希釈した１００μＬのＢＤ Ｐｅｒｍ／Ｗａｓｈで洗浄し、プレートを４００×ｇで５分間遠心した。細胞を、水中に１０倍希釈した２００μＬのＢＤ Ｐｅｒｍ／Ｗａｓｈで再び洗浄し、プレートを４００×ｇで再び５分間遠心した。１Ｘ ＢＤ Ｐｅｒｍ／Ｗａｓｈ中の５０μＬ／ウェルの細胞内染色剤を細胞に添加し、４℃で３０分間インキュベートした。細胞を１５０μＬのＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、プレートを４００×ｇで５分間遠心し、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ＣｙｔｏＦＬＥＸ Ｓサイトメーターを使用した解析のために、細胞を２００μＬのＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁した。図２Ａ～２Ｆに図示するように、ＣＡＲ発現するＴ細胞は、抗原であるＦＩＴＣの存在下で増殖し、この増殖はラパマイシンにより増強される。
フローサイトメトリー解析用の抗体及び蛍光標識分子は、以下の希釈度で使用した。
ＦＩＴＣデキストラン（１：１０）
ＣＤ３－ＡＦ７００（１：１００）
ＣＤ２５－ＢＶ４２１（１：１００）
ＰＤ１－ＢＶ６５０（１：１００）
Ｌａｇ３－ＰＥＣｙ７（１：１００）
２Ａ－ＡＦ６４７（１：１００）

Claims (89)

  1. （ａ）標的化部分及びハプテンを含むアダプター分子を対象に投与することと、
    （ｂ）（ｉ）複数の組換えレトロウイルス粒子または（ｉｉ）エクスビボで複数の組換えレトロウイルス粒子と接触された免疫細胞のいずれかを前記対象に投与することと、を含む方法であって、
    前記レトロウイルス粒子の各々が、前記ハプテンに特異的に結合する受容体をコードする配列を含むポリヌクレオチドを含み、
    前記レトロウイルス粒子の各々が、ウイルスエンベロープを含む、前記方法。
  2. 前記免疫細胞がＴ細胞である、請求項１に記載の方法。
  3. 前記レトロウイルス粒子がレンチウイルス粒子である、請求項１または２に記載の方法。
  4. 前記ウイルスエンベロープが、前記免疫細胞に特異的に結合する細胞表面受容体を含む、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。
  5. 前記細胞表面受容体が、多成分シグナル伝達複合体を含む、請求項４に記載の方法。
  6. 前記多成分シグナル伝達複合体が、架橋因子の存在下で機能性多成分シグナル伝達複合体を形成する、請求項５に記載の方法。
  7. 前記ウイルスエンベロープが１種以上のトランスダクションエンハンサーを含む、請求項１～６のいずれか１項に記載の方法。
  8. 前記トランスダクションエンハンサーの各々が、Ｔ細胞活性化受容体、ＮＫ細胞活性化受容体、または共刺激分子である、請求項７に記載の方法。
  9. 前記アダプター分子が、前記ハプテンに共有結合した１つ以上のマスキング部分を含むマスクされたハプテンを含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。
  10. 前記マスクされたハプテンが、化学反応が前記ハプテンから前記マスキング部分を除去するのを可能にするように構成されている、請求項７に記載の方法。
  11. 前記マスクされたハプテンが、活性酸素種が前記ハプテンから前記マスキング部分を除去するのを可能にするように構成されている、請求項９または１０のいずれかに記載の方法。
  12. 前記マスクされたハプテンがヒドロキシフェニル基を含む、請求項９～１１のいずれか１項に記載の方法。
  13. 前記ハプテンが２，４－ジニトロフェノール（ＤＮＰ）基を含む、請求項９～１２のいずれか１項に記載の方法。
  14. 前記ハプテンがフルオレセインを含む、請求項１～１３のいずれか１項に記載の方法。
  15. 前記ハプテンがヒドロキシフェニルフルオレセイン（ＨＰＦ）を含むマスクされたハプテンである、請求項１４に記載の方法。
  16. 前記ハプテンがフルオレセイン－ＤＮＰを含むマスクされたハプテンである、請求項１４に記載の方法。
  17. 前記標的化部分がリン脂質エーテル（ＰＬＥ）を含む、請求項１～１６のいずれか１項に記載の方法。
  18. 前記標的化部分が葉酸を含む、請求項１～１６のいずれか１項に記載の方法。
  19. 前記アダプター分子が、ＰＬＥにコンジュゲートされたＨＰＦを含む、請求項１５に記載の方法。
  20. 前記アダプター分子が、ＨＰＦ－ＰＥＧ３－Ｃ１８－アルキルリン脂質を含む、請求項１５に記載の方法。
  21. 前記アダプター分子が、式Ｉ：
    Figure 2022553200000004
     の分子を含む、請求項１７に記載の方法。
  22. 前記アダプター分子が、ＨＰＦ－｛リンカー｝－エルフォシン（ｅｒｕｆｏｓｉｎｅ）を含む、請求項１７に記載の方法。
  23. 前記ウイルスエンベロープが、コーカル（Ｃｏｃａｌ）株由来のウイルス融合糖タンパク質またはその機能的バリアントを含む、請求項１～２２のいずれか１項に記載の方法。
  24. 前記ウイルスエンベロープが、配列番号１（コーカルＧタンパク質）と少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を含むウイルス融合糖タンパク質を含む、請求項１～２３のいずれか１項に記載の方法。
  25. 前記１種以上のトランスダクションエンハンサーが、抗ＣＤ３ ｓｃＦｖ、ＣＤ８６、及びＣＤ１３７Ｌのうちの１つ以上を含む、請求項１～２４のいずれか１項に記載の方法。
  26. 前記トランスダクションエンハンサーが、抗ＣＤ３ ｓｃＦｖ、ＣＤ８６、及びＣＤ１３７Ｌのうちの全てを含む、請求項１～２５のいずれか１項に記載の方法。
  27. 前記ポリヌクレオチドが、少なくとも１種のＴ細胞活性化タンパク質をコードする配列を含む、請求項１～２６のいずれか１項に記載の方法。
  28. 前記少なくとも１種のＴ細胞活性化タンパク質が、二量体Ｔ細胞活性化受容体である、請求項２７に記載の方法。
  29. 前記少なくとも１種のＴ細胞活性化タンパク質が、第１の二量体化ドメインを含む第１の受容体タンパク質及び第２の二量体化ドメインを含む第２の受容体タンパク質を含み、
    前記第１の二量体化ドメイン及び前記第２の二量体化ドメインが、分子に反応して互いに特異的に結合する、請求項２７または２８に記載の方法。
  30. 前記分子が、ＦＫ１０１２、タクロリムス（ＦＫ５０６）、ＦＫＣｓＡ、ラパマイシン、クーママイシン、ジベレリン、ＨａＸＳ、ＴＭＰ－ＨＴａｇ、ＡＢＴ－７３７、及びそれらの機能的誘導体からなるリストから選択される、請求項２９に記載の方法。
  31. 前記ハプテンに特異的に結合する前記受容体が、抗体のハプテン特異的抗原結合断片を含む、請求項１～３０のいずれか１項に記載の方法。
  32. 前記抗原結合断片が、Ｆａｂ断片、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、または一本鎖重鎖抗体を含む、請求項３１に記載の方法。
  33. 前記ハプテンに特異的に結合する前記受容体が、ハプテン特異的キメラ抗原受容体を含む、請求項１～３２のいずれか１項に記載の方法。
  34. 前記ハプテン特異的キメラ抗原受容体が、アミノ酸配列ハプテン：ＮＮと少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を含む、請求項３３に記載の方法。
  35. 前記対象におけるＴ細胞が、前記レトロウイルス粒子により形質導入される、請求項１～３４のいずれか１項に記載の方法。
  36. 前記対象におけるＴ細胞が、前記ハプテンに特異的に結合する受容体を発現する、請求項１～３５のいずれか１項に記載の方法。
  37. 前記アダプター分子が、前記対象におけるがん細胞に特異的に結合し、及び／またはこれを標識する、請求項１～３６のいずれか１項に記載の方法。
  38. 前記マスクされたハプテンが、前記対象における化学反応により除去される、請求項１～３７のいずれか１項に記載の方法。
  39. 前記レトロウイルス粒子により形質導入されたＴ細胞が、アンマスクされたハプテンを含むがん細胞を特異的に死滅させる、請求項１～３８のいずれか１項に記載の方法。
  40. 前記対象ががんに罹患しており、前記方法が前記がんを処置する、請求項１～３９のいずれか１項に記載の方法。
  41. 前記方法が腫瘍細胞を死滅させる、請求項１～４０のいずれか１項に記載の方法。
  42. （ａ）標的化部分及びマスクされたハプテンを含むアダプター分子であって、前記マスクされたハプテンがハプテンに連結されたマスキング部分を含む、前記アダプター分子と、
    （ｂ）複数の組換えレトロウイルス粒子と、を含む、システム、治療システム、または組成物であって、
    前記レトロウイルス粒子の各々が、５’から３’の順序で、
    （ｉ）５’ＵＴＲと、
    （ｉｉ）プロモーターと、
    （ｉｉｉ）前記ハプテンに特異的に結合する受容体をコードする配列と、
    （ｉｖ）３’ＵＴＲと、を含むポリヌクレオチドを含み、
    前記レトロウイルス粒子の各々が、
    （ｉ）細胞表面受容体と、
    （ｉｉ）１種以上のトランスダクションエンハンサーと、を含むウイルスエンベロープを含み、
    前記トランスダクションエンハンサーの各々が、任意に、Ｔ細胞活性化受容体、ＮＫ細胞活性化受容体、及び共刺激分子からなる群から選択される、前記システム、前記治療システム、または前記組成物。
  43. 前記レトロウイルス粒子がレンチウイルス粒子である、請求項４２に記載のシステム。
  44. 前記ウイルスエンベロープが、免疫細胞に特異的に結合する細胞表面受容体を含む、請求項４２または４３に記載のシステム。
  45. 前記細胞表面受容体が、多成分シグナル伝達複合体を含む、請求項４４に記載のシステム。
  46. 前記多成分シグナル伝達複合体が、架橋因子の存在下で機能性多成分シグナル伝達複合体を形成する、請求項４５に記載のシステム。
  47. 前記ウイルスエンベロープが１種以上のトランスダクションエンハンサーを含む、請求項４２～４６のいずれか１項に記載のシステム。
  48. 前記トランスダクションエンハンサーの各々が、Ｔ細胞活性化受容体、ＮＫ細胞活性化受容体、または共刺激分子である、請求項４７に記載のシステム。
  49. 前記アダプター分子が、前記ハプテンに共有結合した１つ以上のマスキング部分を含むマスクされたハプテンを含む、請求項４２～４８のいずれか１項に記載のシステム。
  50. 前記マスクされたハプテンが、化学反応が前記ハプテンから前記マスキング部分を除去するのを可能にするように構成されている、請求項４９に記載のシステム。
  51. 前記マスクされたハプテンが、活性酸素種が前記ハプテンから前記マスキング部分を除去するのを可能にするように構成されている、請求項４９または５０のいずれかに記載のシステム。
  52. 前記マスクされたハプテンがヒドロキシフェニル基を含む、請求項４９～５１のいずれか１項に記載のシステム。
  53. 前記マスキング部分が２，４－ジニトロフェノール（ＤＮＰ）基を含む、請求項４９～５２のいずれか１項に記載のシステム。
  54. 前記ハプテンがフルオレセインを含む、請求項４２～５３のいずれか１項に記載のシステム。
  55. 前記ハプテンがヒドロキシフェニルフルオレセイン（ＨＰＦ）を含むマスクされたハプテンである、請求項５４に記載のシステム。
  56. 前記ハプテンがフルオレセイン－ＤＮＰを含むマスクされたハプテンである、請求項５４に記載のシステム。
  57. 前記標的化部分がリン脂質エーテル（ＰＬＥ）を含む、請求項４２～５６のいずれか１項に記載のシステム。
  58. 前記標的化部分が葉酸を含む、請求項４２～５６のいずれか１項に記載のシステム。
  59. 前記アダプター分子が、ＰＬＥにコンジュゲートされたＨＰＦを含む、請求項５７に記載のシステム。
  60. 前記アダプター分子が、ＨＰＦ－ＦＩＴＣ－ＰＥＧ３－Ｃ１８－アルキルリン脂質を含む、請求項５７に記載のシステム。
  61. 前記アダプター分子が、式Ｉ：
    Figure 2022553200000005
     の分子を含む、請求項４９に記載のシステム。
  62. 前記アダプター分子が、ＨＰＦ－｛リンカー｝－エルフォシン（ｅｒｕｆｏｓｉｎｅ）を含む、請求項５７に記載のシステム。
  63. 前記ウイルスエンベロープが、コーカル株由来のウイルス融合糖タンパク質またはその機能的バリアントを含む、請求項４２～６２のいずれか１項に記載のシステム。
  64. 前記ウイルスエンベロープが、配列番号１（コーカルＧタンパク質）と少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を含むウイルス融合糖タンパク質を含む、請求項４２～６３のいずれか１項に記載のシステム。
  65. 前記１種以上のトランスダクションエンハンサーが、抗ＣＤ３ ｓｃＦｖ、ＣＤ８６、及びＣＤ１３７Ｌのうちの１つ以上を含む、請求項４２～６４のいずれか１項に記載のシステム。
  66. 前記トランスダクションエンハンサーが、抗ＣＤ３ ｓｃＦｖ、ＣＤ８６、及びＣＤ１３７Ｌのうちの全てを含む、請求項４２～６５のいずれか１項に記載のシステム。
  67. 前記ポリヌクレオチドが、少なくとも１種のＴ細胞活性化タンパク質をコードする配列を含む、請求項４２～６６のいずれか１項に記載のシステム。
  68. 前記少なくとも１種のＴ細胞活性化タンパク質が、二量体Ｔ細胞活性化受容体である、請求項６７に記載のシステム。
  69. 前記少なくとも１種のＴ細胞活性化タンパク質が、第１の二量体化ドメインを含む第１の受容体タンパク質及び第２の二量体化ドメインを含む第２の受容体タンパク質を含み、
    前記第１の二量体化ドメイン及び前記第２の二量体化ドメインが、分子に反応して互いに特異的に結合する、請求項６７または６８に記載のシステム。
  70. 前記分子が、ＦＫ１０１２、タクロリムス（ＦＫ５０６）、ＦＫＣｓＡ、ラパマイシン、クーママイシン、ジベレリン、ＨａＸＳ、ＴＭＰ－ＨＴａｇ、ＡＢＴ－７３７、及びそれらの機能的誘導体からなるリストから選択される、請求項６９に記載のシステム。
  71. 前記ハプテンに特異的に結合する前記受容体が、抗体のハプテン特異的抗原結合断片を含む、請求項４２～７０のいずれか１項に記載のシステム。
  72. 前記抗原結合断片が、Ｆａｂ断片、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）、または一本鎖重鎖抗体を含む、請求項７１に記載のシステム。
  73. 前記ハプテンに特異的に結合する前記受容体が、ハプテン特異的キメラ抗原受容体を含む、請求項４２～７２のいずれか１項に記載のシステム。
  74. 前記ハプテン特異的キメラ抗原受容体が、配列番号５３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一なアミノ酸配列を含む、請求項７３に記載のシステム。
  75. 対象におけるＴ細胞が、前記レトロウイルス粒子により形質導入される、請求項４２～７４のいずれか１項に記載のシステム。
  76. 前記対象におけるＴ細胞が、前記ハプテンに特異的に結合する受容体を発現する、請求項４２～７５のいずれか１項に記載のシステム。
  77. 前記アダプター分子が、前記対象におけるがん細胞に特異的に結合し、及び／またはこれを標識する、請求項４２～７６のいずれか１項に記載のシステム。
  78. 前記マスクされたハプテンが、前記対象における化学反応により除去される、請求項４２～７７のいずれか１項に記載のシステム。
  79. 前記レトロウイルス粒子により形質導入されたＴ細胞が、アンマスクされたハプテンを含むがん細胞を特異的に死滅させる、請求項４２～７８のいずれか１項に記載のシステム。
  80. 前記対象ががんに罹患しており、前記システムが前記がんを処置する、請求項４２～７９のいずれか１項に記載のシステム。
  81. 前記システムが腫瘍細胞を死滅させる、請求項４２～８０のいずれか１項に記載のシステム。
  82. 請求項４２～８１のいずれか１項に記載のシステム、及び前記システムの使用説明書を含むキット。
  83. （ａ）５’から３’の順序で、
    （ｉ）５’ＬＴＲまたはＵＴＲと、
    （ｉｉ）プロモーターと、
    （ｉｉｉ）ハプテンに特異的に結合する受容体をコードする配列と、
    （ｉｖ）３’ＬＴＲまたはＵＴＲと、を含むポリヌクレオチドと、
    （ｂ）
    （ｉ）細胞表面受容体と、
    （ｉｉ）１種以上のトランスダクションエンハンサーと、を含むウイルスエンベロープと、を含むレトロウイルス粒子であって、
    前記トランスダクションエンハンサーの各々が、任意に、Ｔ細胞活性化受容体、ＮＫ細胞活性化受容体、または共刺激分子である、前記レトロウイルス粒子。
  84. 標的化部分及びマスクされたハプテンを含むアダプター分子が投与されたか、投与されるか、または投与されるであろう対象におけるがん細胞死を引き起こすのに十分な量の請求項８３に記載のレトロウイルス粒子を含む治療用組成物。
  85. 対象におけるがんを処置し、及び／またはがん細胞を死滅させる方法であって、治療上有効量の請求項８３に記載のレトロウイルス粒子を前記対象に投与することを含み、前記投与するステップの前、その間、またはその後に、前記対象が、がん細胞をハプテンで標識するのに有効な用量の標的化部分及びマスクされたハプテンを含むアダプター分子を投与されたか、または投与される、前記方法。
  86. 対象における腫瘍を処置し、及び／または腫瘍細胞を死滅させる方法であって、有効量のアダプター分子を前記対象に投与することを含み、
    前記アダプター分子がマスクされたハプテンで腫瘍細胞を標識し、
    前記マスクされたハプテンが活性酸素種により活性化され、これにより、ハプテンを生成し、
    前記投与するステップの前、その間、またはその後に、前記対象が、請求項８３に記載のレトロウイルス粒子を投与されたか、または投与される、前記方法。
  87. 対象におけるがんを処置し、及び／またはがん細胞を死滅させる方法であって、治療上有効量の請求項８３に記載のレトロウイルス粒子を前記対象に投与することを含み、投与ステップの前に、前記対象が、がん細胞を前記ハプテンで標識するのに有効な用量の標的化部分及びマスクされたハプテンを投与されている、前記方法。
  88. 請求項８３に記載のレトロウイルス粒子を産生するように構成された細胞株。
  89. 対象におけるがんを処置し、及び／またはがん細胞を死滅させる方法であって、請求項４２～８１のいずれか１項に記載のシステムを前記対象に投与することを含む、前記方法。
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