JP2021525101A - 改変された抗cd19 car−t細胞 - Google Patents
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Abstract
Description
本願は、その全体を参照により本明細書に援用する、2018年5月24日出願の中国特許出願第201810509014.4号に対する優先権及びその利益を主張する。
NOVARTISのCTL019(Kymriah)は、抗CD19−BBz CAR融合タンパク質であり、細胞外抗CD19 FMC63一本鎖抗体領域(scFv)と、細胞内共刺激因子4−1BB領域と、T受容体CD3zシグナル伝達ドメインとを含み、細胞外抗CD19 FMC63一本鎖抗体領域(scFv)と、細胞内共刺激因子4−1BB領域と、T受容体CD3zシグナル伝達ドメインとは、CD8αのヒンジ領域及び膜貫通ドメインと結合されている(非特許文献1及び2)。しかし、CTL019(Kymriah)には、重度のサイトカイン放出症候群と神経毒性関連する深刻な副作用があり、これらは患者におけるCD19 CAR−T細胞の急速な増殖と、それによる炎症性サイトカインの過剰放出によって引き起こされる。
前記細胞外セグメントは、ヒト抗原CD19に特異的に結合する一本鎖抗体領域とヒンジ領域とを含み、前記一本鎖抗体領域は、一本鎖抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記ヒンジ領域は、55個のアミノ酸残基のヒトCD8アルファ(CD8α)の細胞外ドメインと、前記ヒトCD8αの前記細胞外ドメインのN末端に位置する3個のアラニン残基(AAA)とを含み、
前記膜貫通セグメントは、前記細胞外セグメントの前記ヒンジ領域に結合され、Tリンパ球の細胞膜に埋め込まれたヒトCD8αの膜貫通ドメインを含み、
前記細胞内セグメントは、ヒトCD8αの細胞内ドメイン、4−1BB分子の細胞内ドメイン、及びCD3ζ鎖の細胞内ドメインを含み、前記ヒトCD8αの細胞内ドメインは、7個のアミノ酸残基を含み、前記ヒトCD8αの膜貫通ドメインに結合されている。
FVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD(配列番号1)
IYIWAPLAGTCGVLLLSLVIT(配列番号2)
LYCNHRN(配列番号3)
MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIPDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSSAAAFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD(配列番号4)
IYIWAPLAGTCGVLLLSLVIT(配列番号5)
LYCNHRNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR(配列番号6)
AAAFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD(配列番号7)
MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIPDIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSSAAAFVPVFLPAKPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR(配列番号8)。
ATGCTTCTCCTGGTGACAAGCCTTCTGCTCTGTGAGTTACCACACCCAGCATTCCTCCTGATCCCAGACATCCAGATGACACAGACTACATCCTCCCTGTCTGCCTCTCTGGGAGACAGAGTCACCATCAGTTGCAGGGCAAGTCAGGACATTAGTAAATATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGATGGAACTGTTAAACTCCTGATCTACCATACATCAAGATTACACTCAGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGAACAGATTATTCTCTCACCATTAGCAACCTGGAGCAAGAAGATATTGCCACTTACTTTTGCCAACAGGGTAATACGCTTCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACTAAGTTGGAAATAACAGGCTCCACCTCTGGATCCGGCAAGCCCGGATCTGGCGAGGGATCCACCAAGGGCGAGGTGAAACTGCAGGAGTCAGGACCTGGCCTGGTGGCGCCCTCACAGAGCCTGTCCGTCACATGCACTGTCTCAGGGGTCTCATTACCCGACTATGGTGTAAGCTGGATTCGCCAGCCTCCACGAAAGGGTCTGGAGTGGCTGGGAGTAATATGGGGTAGTGAAACCACATACTATAATTCAGCTCTCAAATCCAGACTGACCATCATCAAGGACAACTCCAAGAGCCAAGTTTTCTTAAAAATGAACAGTCTGCAAACTGATGACACAGCCATTTACTACTGTGCCAAACATTATTACTACGGTGGTAGCTATGCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCAGCGGCCGCATTCGTGCCGGTCTTCCTGCCAGCGAAGCCCACCACGACGCCAGCGCCGCGACCACCAACACCGGCGCCCACCATCGCGTCGCAGCCCCTGTCCCTGCGCCCAGAGGCGTGCCGGCCAGCGGCGGGGGGCGCAGTGCACACGAGGGGGCTGGACTTCGCCTGTGATATCTACATCTGGGCGCCCTTGGCCGGGACTTGTGGGGTCCTTCTCCTGTCACTGGTTATCACCCTTTACTGCAACCACAGGAACAAACGGGGCAGAAAGAAACTCCTGTATATATTCAAACAACCATTTATGAGACCAGTACAAACTACTCAAGAGGAAGATGGCTGTAGCTGCCGATTTCCAGAAGAAGAAGAAGGAGGATGTGAACTGAGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACCAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGACGTGGCCGGGACCCTGAGATGGGGGGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTACAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTACCAGGGTCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCCCCTCGCTAA(配列番号9)
MALPVTALLLPLALLLHAARPGSRKVCNGIGIGEFKDSLSINATNIKHFKNCTSISGDLHILPVAFRGDSFTHTPPLDPQELDILKTVKEITGFLLIQAWPENRTDLHAFENLEIIRGRTKQHGQFSLAVVSLNITSLGLRSLKEISDGDVIISGNKNLCYANTINWKKLFGTSGQKTKIISNRGENSCKATGQVCHALCSPEGCWGPEPRDCVSCRNVSRGRECVDKCNLLEGEPREFVENSECIQCHPECLPQAMNITCTGRGPDNCIQCAHYIDGPHCVKTCPAGVMGENNTLVWKYADAGHVCHLCHPNCTYGCTGPGLEGCPTNGPKIPSIATGMVGALLLLLVVALGIGLFMRR(配列番号10)
ATGGCTCTGCCCGTCACCGCTCTGCTGCTGCCTCTGGCTCTGCTGCTGCACGCCGCACGCCCTGGGAGTCGCAAAGTCTGTAATGGGATCGGCATCGGCGAGTTCAAGGACAGCCTGTCCATCAACGCCACCAATATCAAGCACTTTAAGAATTGCACATCTATCAGCGGCGACCTGCACATCCTGCCAGTGGCCTTCCGGGGCGATTCTTTTACCCACACACCCCCTCTGGACCCTCAGGAGCTGGATATCCTGAAGACCGTGAAGGAGATCACAGGCTTCCTGCTGATCCAGGCCTGGCCTGAGAACAGAACCGATCTGCACGCCTTTGAGAATCTGGAGATCATCCGGGGCAGAACAAAGCAGCACGGCCAGTTCTCCCTGGCCGTGGTGTCTCTGAACATCACCAGCCTGGGCCTGAGGTCCCTGAAGGAGATCTCTGACGGCGATGTGATCATCTCCGGCAACAAGAACCTGTGCTACGCCAACACAATCAATTGGAAGAAGCTGTTTGGCACCTCTGGCCAGAAGACAAAGATCATCTCTAACCGGGGCGAGAATAGCTGCAAGGCAACCGGACAGGTGTGCCACGCACTGTGCAGCCCAGAGGGATGTTGGGGCCCAGAGCCACGGGACTGCGTGAGCTGTAGAAACGTGTCCAGGGGCCGCGAGTGCGTGGATAAGTGTAATCTGCTGGAGGGCGAGCCAAGGGAGTTCGTGGAGAACTCCGAGTGCATCCAGTGTCACCCCGAGTGCCTGCCTCAGGCCATGAACATCACCTGTACAGGCCGCGGCCCCGACAATTGCATCCAGTGTGCCCACTATATCGATGGCCCTCACTGCGTGAAGACCTGTCCAGCCGGCGTGATGGGCGAGAACAATACACTGGTGTGGAAGTACGCAGACGCAGGACACGTGTGCCACCTGTGCCACCCCAATTGCACCTATGGCTGTACAGGACCAGGCCTGGAGGGATGCCCAACCAACGGCCCTAAGATCCCAAGCATCGCCACAGGCATGGTGGGGGCACTGCTGCTGCTGCTGGTGGTGGCTCTGGGGATTGGGCTGTTTATGAGAAGGTAA(配列番号11)
ATGCTTCTCCTGGTGACAAGCCTTCTGCTCTGTGAGTTACCACACCCAGCATTCCTCCTGATCCCAGACATCCAGATGACACAGACTACATCCTCCCTGTCTGCCTCTCTGGGAGACAGAGTCACCATCAGTTGCAGGGCAAGTCAGGACATTAGTAAATATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGATGGAACTGTTAAACTCCTGATCTACCATACATCAAGATTACACTCAGGAGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGAACAGATTATTCTCTCACCATTAGCAACCTGGAGCAAGAAGATATTGCCACTTACTTTTGCCAACAGGGTAATACGCTTCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACTAAGTTGGAAATAACAGGCTCCACCTCTGGATCCGGCAAGCCCGGATCTGGCGAGGGATCCACCAAGGGCGAGGTGAAACTGCAGGAGTCAGGACCTGGCCTGGTGGCGCCCTCACAGAGCCTGTCCGTCACATGCACTGTCTCAGGGGTCTCATTACCCGACTATGGTGTAAGCTGGATTCGCCAGCCTCCACGAAAGGGTCTGGAGTGGCTGGGAGTAATATGGGGTAGTGAAACCACATACTATAATTCAGCTCTCAAATCCAGACTGACCATCATCAAGGACAACTCCAAGAGCCAAGTTTTCTTAAAAATGAACAGTCTGCAAACTGATGACACAGCCATTTACTACTGTGCCAAACATTATTACTACGGTGGTAGCTATGCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCAGCGGCCGCATTCGTGCCGGTCTTCCTGCCAGCGAAGCCCACCACGACGCCAGCGCCGCGACCACCAACACCGGCGCCCACCATCGCGTCGCAGCCCCTGTCCCTGCGCCCAGAGGCGTGCCGGCCAGCGGCGGGGGGCGCAGTGCACACGAGGGGGCTGGACTTCGCCTGTGATATCTACATCTGGGCGCCCTTGGCCGGGACTTGTGGGGTCCTTCTCCTGTCACTGGTTATCACCCTTTACTGCAACCACAGGAACAAACGGGGCAGAAAGAAACTCCTGTATATATTCAAACAACCATTTATGAGACCAGTACAAACTACTCAAGAGGAAGATGGCTGTAGCTGCCGATTTCCAGAAGAAGAAGAAGGAGGATGTGAACTGAGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACCAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGACGTGGCCGGGACCCTGAGATGGGGGGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTACAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTACCAGGGTCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCCCCTCGCTAATCCTACTGCGTCGACTTCGAATTTAAATCGGATCCGCGGCCGCGCCCCTCTCCCTCCCCCCCCCCTAACGTTACTGGCCGAAGCCGCTTGGAATAAGGCCGGTGTGCGTTTGTCTATATGTTATTTTCCACCATATTGCCGTCTTTTGGCAATGTGAGGGCCCGGAAACCTGGCCCTGTCTTCTTGACGAGCATTCCTAGGGGTCTTTCCCCTCTCGCCAAAGGAATGCAAGGTCTGTTGAATGTCGTGAAGGAAGCAGTTCCTCTGGAAGCTTCTTGAAGACAAACAACGTCTGTAGCGACCCTTTGCAGGCAGCGGAACCCCCCACCTGGCGACAGGTGCCTCTGCGGCCAAAAGCCACGTGTATAAGATACACCTGCAAAGGCGGCACAACCCCAGTGCCACGTTGTGAGTTGGATAGTTGTGGAAAGAGTCAAATGGCTCTCCTCAAGCGTATTCAACAAGGGGCTGAAGGATGCCCAGAAGGTACCCCATTGTATGGGATCTGATCTGGGGCCTCGGTGCACATGCTTTACATGTGTTTAGTCGAGGTTAAAAAAACGTCTAGGCCCCCCGAACCACGGGGACGTGGTTTTCCTTTGAAAAACACGATGATAATATGGCCACAACCATGGCGTCCGGATCTAGAATGGCTCTGCCCGTCACCGCTCTGCTGCTGCCTCTGGCTCTGCTGCTGCACGCCGCACGCCCTGGGAGTCGCAAAGTCTGTAATGGGATCGGCATCGGCGAGTTCAAGGACAGCCTGTCCATCAACGCCACCAATATCAAGCACTTTAAGAATTGCACATCTATCAGCGGCGACCTGCACATCCTGCCAGTGGCCTTCCGGGGCGATTCTTTTACCCACACACCCCCTCTGGACCCTCAGGAGCTGGATATCCTGAAGACCGTGAAGGAGATCACAGGCTTCCTGCTGATCCAGGCCTGGCCTGAGAACAGAACCGATCTGCACGCCTTTGAGAATCTGGAGATCATCCGGGGCAGAACAAAGCAGCACGGCCAGTTCTCCCTGGCCGTGGTGTCTCTGAACATCACCAGCCTGGGCCTGAGGTCCCTGAAGGAGATCTCTGACGGCGATGTGATCATCTCCGGCAACAAGAACCTGTGCTACGCCAACACAATCAATTGGAAGAAGCTGTTTGGCACCTCTGGCCAGAAGACAAAGATCATCTCTAACCGGGGCGAGAATAGCTGCAAGGCAACCGGACAGGTGTGCCACGCACTGTGCAGCCCAGAGGGATGTTGGGGCCCAGAGCCACGGGACTGCGTGAGCTGTAGAAACGTGTCCAGGGGCCGCGAGTGCGTGGATAAGTGTAATCTGCTGGAGGGCGAGCCAAGGGAGTTCGTGGAGAACTCCGAGTGCATCCAGTGTCACCCCGAGTGCCTGCCTCAGGCCATGAACATCACCTGTACAGGCCGCGGCCCCGACAATTGCATCCAGTGTGCCCACTATATCGATGGCCCTCACTGCGTGAAGACCTGTCCAGCCGGCGTGATGGGCGAGAACAATACACTGGTGTGGAAGTACGCAGACGCAGGACACGTGTGCCACCTGTGCCACCCCAATTGCACCTATGGCTGTACAGGACCAGGCCTGGAGGGATGCCCAACCAACGGCCCTAAGATCCCAAGCATCGCCACAGGCATGGTGGGGGCACTGCTGCTGCTGCTGGTGGTGGCTCTGGGGATTGGGCTGTTTATGAGAAGGTAA(配列番号12)
CCCCTCTCCCTCCCCCCCCCCTAACGTTACTGGCCGAAGCCGCTTGGAATAAGGCCGGTGTGCGTTTGTCTATATGTTATTTTCCACCATATTGCCGTCTTTTGGCAATGTGAGGGCCCGGAAACCTGGCCCTGTCTTCTTGACGAGCATTCCTAGGGGTCTTTCCCCTCTCGCCAAAGGAATGCAAGGTCTGTTGAATGTCGTGAAGGAAGCAGTTCCTCTGGAAGCTTCTTGAAGACAAACAACGTCTGTAGCGACCCTTTGCAGGCAGCGGAACCCCCCACCTGGCGACAGGTGCCTCTGCGGCCAAAAGCCACGTGTATAAGATACACCTGCAAAGGCGGCACAACCCCAGTGCCACGTTGTGAGTTGGATAGTTGTGGAAAGAGTCAAATGGCTCTCCTCAAGCGTATTCAACAAGGGGCTGAAGGATGCCCAGAAGGTACCCCATTGTATGGGATCTGATCTGGGGCCTCGGTGCACATGCTTTACATGTGTTTAGTCGAGGTTAAAAAAACGTCTAGGCCCCCCGAACCACGGGGACGTGGTTTTCCTTTGAAAAACACGATGATAATATGGCCACAACC(配列番号13)
(GSG) E G R G S L L T C G D V E E N P G P(配列番号14)
(GSG) A T N F S L L K Q A G D V E E N P G P(配列番号15)
(GSG) Q C T N Y A L L K L A G D V E S N P G P(配列番号16)
(GSG) V K Q T L N F D L L K L A G D V E S N P G P(配列番号17)
一態様において、本開示は、キメラ抗原受容体を提供する。
前記細胞外セグメントは、ヒト抗原CD19に特異的に結合する一本鎖抗体領域とヒンジ領域とを含み、前記一本鎖抗体領域は、一本鎖抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記ヒンジ領域は、ヒトCD8アルファ(CD8α)の細胞外ドメインを含み、前記細胞外ドメインは、55個のアミノ酸残基のヒトCD8αの細胞外ドメインと、前記ヒトCD8αの前記細胞外ドメインのN末端に位置する3個のアラニン残基(AAA)とを含み、
前記膜貫通セグメントは、前記細胞外セグメントの前記ヒンジ領域に結合され、Tリンパ球の細胞膜に埋め込まれたヒトCD8αの膜貫通ドメインを含み、
前記細胞内セグメントは、ヒトCD8αの細胞内ドメイン、4−1BB分子の細胞内ドメイン、及びCD3ζ鎖の細胞内ドメインを含み、前記ヒトCD8αの細胞内ドメインは、7個のアミノ酸残基を含み、前記ヒトCD8αの膜貫通ドメインに結合されている。
別の態様において、本開示は、Tリンパ球又はトランスジェニックリンパ球を提供する。本開示の実施形態によれば、Tリンパ球は、前述したように、非機能性上皮増殖因子受容体(EGFR)と抗CD19キメラ抗原受容体を発現する。非機能性EGFRは、N末端リガンド結合領域と細胞内受容体チロシンキナーゼの活性を欠くが、野生型EGFRの膜貫通領域と、抗EGFR抗体に結合する完全なアミノ酸配列とを含むので、非機能性EGFRは、リンパ球の自殺マークとして使用できる。Tリンパ球又はトランスジェニックリンパ球は、抗CD19キメラ抗原受容体を発現し、腫瘍細胞、特にCD19を高発現する腫瘍細胞に対して標的殺滅能力を有し、緩やかな細胞増殖と、少ないサイトカイン産生を伴い、ゆっくりとした長期に亘る腫瘍殺滅性を示す。得られた改変抗CD19 CAR−T細胞は、より安全な抗腫瘍活性を有する。
別の態様において、本開示は、レンチウイルス又は構築物を提供する。本開示の実施形態によれば、レンチウイルス又は構築物は、キメラ抗原受容体をコードする第1の核酸分子と非機能性EGFRをコードする第2の核酸分子とを含み、前記キメラ抗原受容体は、配列番号8で示されるアミノ酸配列を含み、前記第1の核酸分子は、配列番号9で示されるヌクレオチド配列を含み、前記非機能性EGFRは、配列番号10で示されるアミノ酸配列を含み、前記第2の核酸分子は、配列番号11で示されるヌクレオチド配列を含む。本開示の実施形態によれば、レンチウイルス又は構築物をリンパ球に導入することによって得られるトランスジェニックリンパ球は、細胞膜上に非機能性EGFR及び抗CD19キメラ抗原受容体の両方を発現することができるので、腫瘍細胞に対する強力な標的殺滅能力を有し、細胞増殖が緩やかで、サイトカイン産生が低下し、ゆっくりとした長期に亘る腫瘍殺滅性を示す。したがって、得られた改変抗CD19 CAR−T細胞は、より安全な抗腫瘍活性を有する。
内部リボソーム侵入部位は、キメラ抗原受容体をコードする核酸分子と非機能性EGFRをコードする核酸分子との間に設けられる。内部リボソーム侵入部位は、配列番号13で示されるヌクレオチド配列を有する。内部リボソーム侵入部位は通常、RNAウイルスゲノムの5’非翻訳領域(UTR)に位置し、1つのタンパク質の翻訳を5’キャップ構造から独立させることができ一方で、別のタンパク質の翻訳は、5’キャップ構造に依存するので、IRESの前後の2つの遺伝子の比例的な発現(proportional expression)が可能となる。内部リボソーム侵入部位の導入により、キメラ抗原受容体をコードする第1の核酸分子及び非機能性EGFRをコードする第2の核酸分子を独立して発現させることができる。本開示の実施形態によれば、内部リボソーム侵入部位は、キメラ抗原受容体及び非機能性EGFRの効率的な発現を効果的に確実にし、腫瘍細胞に対するリンパ球の特異的殺滅を、高い安全性で更に改善する。
第3の核酸配列は、第1の核酸配列と第2の核酸配列との間に設けられ、第3の核酸分子は、リンパ球内で切断され得るリンカーペプチドをコードする。本開示の実施形態によれば、リンカーペプチドは、配列番号14〜17で示されるアミノ酸配列を含む。第3の核酸配列の導入により、非機能性EGFR及びキメラ抗原受容体をリンパ球の細胞膜上にて非融合状態で発現させることができるので、非機能性EGFR及びキメラ抗原受容体の生物学的効果を確実にし、リンパ球の腫瘍に対するより強力で特異的な殺滅を、より高い安全性でもたらす。
第1のプロモーターは、キメラ抗原受容体をコードする第1の核酸配列に機能可能に連結され、第2のプロモーターは、非機能性EGFRを発現する核酸配列に機能可能に連結される。本開示の実施形態によれば、第1のプロモーター及び第2のプロモーターは、独立して、CMV、EF−1、LTR、及びRSVの各プロモーターから選択される。第1のプロモーター及び第2のプロモーターの導入により、キメラ抗原受容体をコードする第1の核酸配列及び非機能性EGFRをコードする第2の核酸配列を独立して発現させることができるので、キメラ抗原受容体の効率的な発現を確実にし、リンパ球の腫瘍細胞に対する標的能力及び特異的殺滅能力を、高い安全性で更に向上させる。
本開示の別の態様において、本開示は、前記したTリンパ球又はトランスジェニックリンパ球を調製するための方法を提供する。本開示の実施形態によれば、この方法は、前記した構築物又はレンチウイルスをリンパ球又はTリンパ球に導入することを含む。導入は、宿主細胞のエレクトロポレーション又はウイルス感染によって行うことができる。実施形態によれば、構築物又はレンチウイルスは、リンパ球又はTリンパ球に成功裏に導入されて、非機能性EGFR及び抗CD19キメラ抗原受容体の発現を可能にし、構築物又はレンチウイルスが導入されたリンパ球又はTリンパ球は、腫瘍細胞、特にCD19を高発現する腫瘍細胞に対する特異的殺滅能力を有し、細胞増殖は緩やかで、サイトカイン産生が少なく、ゆっくりとした長期に亘る腫瘍殺滅性を有する。得られた改変抗CD19 CAR−T細胞は、より安全な抗腫瘍活性を有する。
本開示の更なる態様において、本開示は、癌を治療するための治療用組成物を提供する。本開示の実施形態によれば、治療用組成物は、前記した抗CD19キメラ抗原受容体、構築物、レンチウイルス、Tリンパ球、又はトランスジェニックリンパ球を含む。前記治療用組成物の任意の成分は、非機能性EGFR及びキメラ抗原受容体のトランスジェニックリンパ球又はTリンパ球における効率的な発現を達成することができるので、得られたトランスジェニックリンパ球又はTリンパ球は、腫瘍細胞、特にCD19を高発現する腫瘍細胞に対する標的殺滅能力を有することができ、細胞増殖が緩やかで、サイトカイン産生が低下し、より安全な免疫殺滅を示す。
更なる態様において、本開示は、リンパ球療法の安全性を改善するための方法を提供する。この方法は、リンパ球に、キメラ抗原受容体及び非機能性EGFRを発現させることを含む。非機能性EGFR、リンパ球、及びキメラ抗原受容体は、前記した通りである。非機能性EGFRは、N末端リガンド結合領域と細胞内受容体チロシンキナーゼの活性を欠くが、野生型EGFRの膜貫通領域と、抗EGFR抗体に結合する完全なアミノ酸配列とを含むので、非機能性EGFRは、リンパ球の自殺マークとして使用することができる。CD19を高発現する腫瘍細胞の治療に適用する場合、本開示のTリンパ球は、緩やかな細胞増殖と、少ないがより安全なサイトカイン産生を示し、更に、患者が重篤な有害反応を有する場合には殺滅することができる。これにより、サイトカイン放出症候群及び神経毒性に関連する副作用が低減され、より安全且つ有効な免疫殺滅を有する。
当業者であれば、以下の実施例が説明的であり、本開示の範囲を限定するとみなされ得ないことを理解しよう。特定の技術又は条件が実施例に指定されていない場合、当該技術分野の文献(例えば、“Molecular Cloning Experiment Guide”J.Sambrooket al.,Huang Peitang et al.により翻訳,第3版,Science Press)に記載される技術若しくは条件又は製品取扱説明書にしたがうものとする。試薬又は機器の製造元が指定されない場合には、試薬又は機器は、市販品であることができる。
本開示の実施例で使用される細胞株及び基本的な実験技術は、以下の通りである。
レンチウイルスの産生及びヒトTリンパ球の導入
複製欠損レンチウイルスベクターを作成し、次いで、ヒトTリンパ球の後続の導入用に遠心分離により回収する。レンチウイルスベクターの作成及び回収の実験プロセスを簡単に記載した。293T細胞を、底面積が150cm2の細胞培養皿にプレーティングした後、Express−In(Open Biosystems/THERMO SCIENTIFIC,Waltham MAから購入)を取扱説明書にしたがい用いて、レンチウイルスを導入した。15μgのレンチウイルストランスジェニックプラスミド、5μgのVSV糖タンパク質発現プラスミド(pVSV−G)、10μgのpCMVR8.74プラスミド(Gag/Pol/Tat/Rev発現プラスミド)、及び174μlのExpress−In(濃度:1μg/μl)を、293T細胞を各細胞培養皿に添加した。その後、24時間と48時間で上清をそれぞれ回収し、遠心ローター(Beckman SW 32 Ti,BECKMAN COULTER,Brea,Californiaから購入)付き超遠心機を使用して、28,000rpmで2時間遠心分離した。レンチウイルスプラスミドペレットを、0.75mlのロズウェルパーク記念研究所(RPMI)−1640培地で再懸濁した。
ADCCに関連する実施例では、非機能性EGFRを発現するリンパ球を4時間51Cr放出法で検出して、抗EGFR抗体によって誘発される細胞依存性溶解能力を評価した。レンチウイルスベクターが導入されたヒトTリンパ球を、標的細胞として使用した。100μのCiNa2 51CrO4(GE HEALTHCARE LIFE SCIENCES,Marlborough,MAから購入)を使用して2〜5×106の標的細胞を、37℃で1時間振とうしながらインキュベートすることにより標識した。標識した標的細胞を、リン酸緩衝生理食塩水(PBS)で3回洗浄し、培地で再懸濁して1×105細胞/mlの細胞密度とした。次いで、5×103個の標識細胞を含有する培地50μlを、96ウェルプレートの各ウェルに添加し、細胞プレーティングし、50μlの抗EGFR抗体(ERBITUX,Genentechから購入)を添加し、最終濃度20μg/mlとし、次いで、室温で30分間インキュベートした。一方、51Crの自然放出を検出するために、各ウェルに5×103個の標識細胞を含有する別の培地に、抗EGFR抗体を含まない通常培地を添加した。更に、51Crの最大放出を確実にするために、最終濃度1%のTriton X−100を添加した。ADCCに関連する以下の実施例では、ヒト末梢血単核球(PBMC、エフェクター細胞)を、5×105細胞/ウェルで、96ウェルプレートに添加した後、細胞を37℃で一晩インキュベートした。翌日、上清を回収し、ガンマ(γ)カウンターで計算されるカウント毎分(cpm)値により51Crの放出を測定した。細胞毒性比は次の式で計算した:%特異的溶解=(実験的放出cpm値−自発的放出cpm値)/(最大放出cpm値−自発的放出cpm値)×100(式中、最大放出cpm値は、標的細胞にTriton X−100を追加添加して得られた値であり、自発的放出cpm値は、抗EGFR抗体及びエフェクター細胞の非存在下で得られた値である。)
実施例において、4時間51Cr放出法を適用して、抗CD19キメラ抗原受容体T細胞(即ち、抗CD19 CAR−Tリンパ球)の細胞毒性活性を評価した、これは、以下の具体的ステップを含む。標的試験細胞を、37℃にて1時間51Crで標識した後、標識試験細胞を、10%胎児子牛血清(FCS)を含むRPMI培地で洗浄した。洗浄後の細胞を、1×105細胞/mlの濃度で、10%FCSを含むRPMI培地に再懸濁した。形質導入されたT細胞を、様々な比のエフェクター細胞と標的細胞(E:T)で標的試験細胞の懸濁液に添加した後、各ウェル200μlの容量の96ウェルに播種した。細胞を、37℃のインキュベーターで4時間培養した。その後、各ウェル中の上清30μlを、カウント分析のためにカウンター(即ち、トップカウンティングNXTマイクロシンチレーションカウンター、PACKARD BIOSCIENCEから購入)の96マイクロプレートに入れた。各カウントウェルのエフェクター細胞の数を、形質導入T細胞の総数に基づいて決定した。標識された標的試験細胞は、ATCCからのヒト胸膜中皮腫細胞、CD19+MSTO−211H細胞とした。
この実施例において、本発明者らは、両端のXbaI及びBstBIクローニング部位と共に、抗ヒトCD19一本鎖抗体、ヒトCD8α、4−1BB分子の細胞内ドメイン、及びT細胞受容体のCD3ζ鎖をコードする配列を人工的に合成した。人工合成配列を、EF−1プロモーター(即ち、PCDH−EF1−MCS−IRES−GFP、SYSTEM BIOSCIENCES, Palo Alto, CA)を含むレンチウイルスベクターのシャトルプラスミドに、XbaI及びBstBIの二重酵素消化、ライゲーション、スクリーニング、及び標的プラスミドの増幅によってクローニングした。更に、本発明者らは、非機能性tEGFR並びにBspEI及びSalIクローニング部位を両端にコードする配列を人工的に合成し、次いで、非機能性tEGFR及び抗CD19キメラ抗原受容体を共発現するレンチウイルスベクターのシャトルプラスミド(LV−CD19−BBz(86)と命名)を、二重酵素消化、ライゲーション、スクリーニング、及び標的プラスミドの増幅によって構築した。
この実施例では、匿名のドナーから採取した末梢血リンパ球を、勾配遠心分離機Ficoll−Hypaqueを用いて勾配遠心分離により分離した。Tリンパ球と、CD3/CD28に対するモノクローナル抗体をコーティングしたTリンパ球活性化磁気ビーズ(INVITROGEN,Carlsbad,Californiaから購入)を、2mmol/Lグルタミン、10%高温不活化胎児子牛血清(FCS)(SIGMA−ALDRICH Co.から購入)、及び100U/mlペニシリン/ストレプトマイシン(INVITROGEN GIBCOから購入、カタログ番号12633−012)を含む高度RPMI 1640培地中、5%CO2、37℃で72時間インキュベートした。72時間の活性化及び培養の後、T細胞を洗浄緩衝液で洗浄して磁気ビーズを除去した。洗浄後のT細胞を、組換えフィブロネクチン断片(FN ch−296;RETRONECTIN)をコーティングした細胞培養皿に播種した。その後、T細胞に、改善されたLV−CD19−BBz(86)のレンチウイルス、先行技術のLV−CD19−BBz、又はtEGFRのみを発現するブランクベクターLV−コントロールを導入した。これは、実施例1に記載した通りに行った。形質導入T細胞をRPMI−1640培地で培養し、組換えヒトIL−2因子(100ng/ml,R&D SYSTEMSから購入)で7〜10日間誘導し、増殖させた後、照射されたCD19陽性Raji腫瘍細胞と共培養した。本発明者らは、ELISA法を使用して、共培養上清中の様々なサイトカインの濃度を測定した。図2Aの結果から、CD19陽性Raji腫瘍細胞との共培養下で、改善されたLV−CD19−BBz(86)が導入されたCAR−Tリンパ球によって産生された様々なサイトカインの濃度が、先行技術のLV−CD19−BBzが導入されたCAR−Tリンパ球による場合よりも遥かに低いことが示された。非CD19特異的抗CD3との共培養下では、改善されたLV−CD19−BBz(86)が導入されたCAR−Tリンパ球は、先行技術のLV−CD19−BBzが導入されたCAR−Tリンパ球による場合と同じ濃度のサイトカインを産生した(図2B)。コントロールとしてのブランクベクターLV−コントロール(即ち、LV−コントロール/NS)が導入されたCAR−Tリンパ球は、CD19陽性Raji腫瘍細胞及び非CD19特異的抗CD3の非存在下において非常に低い濃度のサイトカインを産生した。
この実施例では、匿名のドナーから採取した末梢血リンパ球を、勾配遠心分離機Ficoll−Hypaqueを用いて勾配遠心分離により分離した。Tリンパ球と、CD3/CD28に対するモノクローナル抗体をコーティングしたTリンパ球活性化磁気ビーズ(INVITROGEN,Carlsbad,Californiaから購入)を、2mmol/Lグルタミン、10%高温不活化胎児子牛血清(FCS)(SIGMA−ALDRICH Co.から購入)、及び100U/mlペニシリン/ストレプトマイシン(INVITROGEN GIBCOから購入、カタログ番号12633−012)を含む高度RPMI 1640培地中、5%CO2、37℃で72時間インキュベートした。72時間の活性化及び培養の後、T細胞を洗浄緩衝液で洗浄して磁気ビーズを除去した。洗浄後のT細胞を、組換えフィブロネクチン断片(FN ch−296;RETRONECTIN)をコーティングした細胞培養皿に播種した。その後、T細胞に、改善されたLV−CD19−BBz(86)のレンチウイルス、先行技術のLV−CD19−BBz、又はtEGFRのみを発現するブランクベクターLV−コントロールを導入した。これは、実施例1に記載した通りに行った。形質導入T細胞をRPMI−1640培地で培養し、組換えヒトIL−2因子(100ng/ml,R&D SYSTEMSから購入)で7〜10日間誘導し、増殖させた後、機能試験実験に付した。本発明者らは、各種レンチウイルスを導入したT細胞のCD19陽性Raji腫瘍細胞に対する殺滅能力を、実施例1に記載の標準的な4時間51Cr放出法にしたがって、エフェクター細胞と標的細胞との様々な比率で測定した。図3における結果から、改善されたLV−CD19−BBz(86)が導入されたCAR−Tリンパ球と、エフェクター細胞としてのLV−CD19−BBzが導入されたCAR−Tリンパ球の両方が、標的細胞としてのCD19陽性Raji腫瘍細胞を有意に殺滅できることが示され、一方、非機能性EGFRのみを発現するレンチウイルスが導入されたTリンパ球(即ち、LV−コントロールTリンパ球)は、CD19陽性腫瘍細胞を僅かに殺滅する。これらの結果から、改善されたLV−CD19−BBz(86)が導入されたCAR−Tリンパ球が、サイトカインを著しく低い濃度で様々な産生するにもかかわらず、依然として強力な腫瘍細胞殺滅能力を有することが示された。
この実施例では、匿名のドナーから採取した末梢血リンパ球を、勾配遠心分離機Ficoll−Hypaqueを用いて勾配遠心分離により分離した。Tリンパ球と、CD3/CD28に対するモノクローナル抗体をコーティングしたTリンパ球活性化磁気ビーズ(INVITROGEN,Carlsbad,Californiaから購入)を、2mmol/Lグルタミン、10%高温不活化胎児子牛血清(FCS)(SIGMA−ALDRICH Co.から購入)、及び100U/mlペニシリン/ストレプトマイシン(INVITROGEN GIBCOから購入、カタログ番号12633−012)を含む高度RPMI 1640培地中、5%CO2、37℃で72時間インキュベートした。72時間の活性化及び培養の後、T細胞を洗浄緩衝液で洗浄して磁気ビーズを除去した。洗浄後のT細胞を、組換えフィブロネクチン断片(FN ch−296;RETRONECTIN)をコーティングした細胞培養皿に播種した。その後、T細胞に、改善されたLV−CD19−BBz(86)のレンチウイルス、先行技術のLV−CD19−BBz、又はブランクベクターLV−コントロールを導入した。これは、実施例1に記載した通りに行った。非機能性EGFRを発現する形質導入T細胞を、抗EGFR抗体で染色し、フローサイトメトリー(即ち、蛍光活性化セルソーティング、FACS)で単離した。標的細胞としての単離後T細胞を、RPMI−1640培地で培養し、組換えヒトIL−2因子(100ng/ml;R&D SYSTEMSから購入)で7〜10日間誘導し、増殖させた。本発明者らは、ADCCアッセイのための標準的な4時間51Cr放出法にしたがって、抗EGFR抗体によって媒介される各種レンチウイルスが導入されたT細胞に対する殺滅効果を測定した。これは、実施例1に記載した通りに行った。抗EGFR抗体は、非機能性EGFRを発現するTリンパ球の殺滅を効果的に媒介できるが、抗EGFR抗体は、非機能性EGFRを発現しない非形質導入Tリンパ球の殺滅を媒介できないことが示される。
本発明者らは、改善されたLV−CD19−BBz(86)が導入されたCAR−Tリンパ球の増殖活性を試験した。健康なヒトから単離した末梢血リンパ球を、CD3/CD28に対するモノクローナル抗体(THERMOFISHER SCIENTIFIC,Waltham,MA)をコーティングした免疫磁気ビーズで、1:1の比で一晩活性化した。その後、活性化されたリンパ球に、改善されたLV−CD19−BBz(86)又は先行技術のLV−CD19−BBzを導入した。T細胞のカウントから、改善されたLV−CD19−BBz(86)が導入されたTリンパ球とLV−CD19−BBzが導入されたTリンパ球は、経時で同様の速度で増殖したことが示された。このことは、CD19−CARの導入が、T細胞の内因性TCRシグナル伝達に影響を及ぼさなかったことを示している。更に、本発明者らは、抗原特異的細胞下での形質導入CAR−Tリンパ球の増殖を試験した。本発明者らは、形質導入CAR−T細胞を回収した後、免疫磁気ビーズを除去し、次いで、照射されたCD19+K562細胞と3:1の比で共培養した。改善されたLV−CD19−BBz(86)が導入されたCAR−Tリンパ球は、LV−CD19−BBzが導入されたCAR−Tリンパ球よりもゆっくりと増殖した。このことは、改善されたCD19−BBz(86)が導入されたCAR−Tリンパ球の細胞増殖が低下したことを示す。
Claims (27)
- 細胞外セグメントと、膜貫通セグメントと、細胞内セグメントとを含む抗CD19キメラ抗原受容体であって、
前記細胞外セグメントは、ヒト抗原CD19に特異的に結合する一本鎖抗体領域とヒンジ領域とを含み、前記一本鎖抗体領域は、一本鎖抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記ヒンジ領域は、55個のアミノ酸残基のヒトCD8アルファ(CD8α)の細胞外ドメインと、前記ヒトCD8αの前記細胞外ドメインのN末端に位置する3個のアラニン残基(AAA)とを含み、
前記膜貫通セグメントは、前記細胞外セグメントの前記ヒンジ領域に結合され、Tリンパ球の細胞膜に埋め込まれた前記ヒトCD8αの膜貫通ドメインを含み、
前記細胞内セグメントは、前記ヒトCD8αの細胞内ドメイン、4−1BB分子の細胞内ドメイン、及びCD3ζ鎖の細胞内ドメインを含み、前記ヒトCD8αの細胞内ドメインは、7個のアミノ酸残基を含み、前記ヒトCD8αの膜貫通ドメインに結合されていることを特徴とする抗CD19キメラ抗原受容体。 - 前記ヒトCD8αの細胞外ドメインが、配列番号1で示されるアミノ酸配列を含み、
任意に、前記ヒトCD8αの膜貫通ドメインが、配列番号2で示されるアミノ酸配列を含み、
任意に、前記ヒトCD8αの細胞内ドメインが、配列番号3で示されるアミノ酸配列を含み、
任意に、前記細胞外セグメントが、配列番号4で示されるアミノ酸配列を含み、
任意に、前記膜貫通セグメントが、配列番号5で示されるアミノ酸配列を含み、
任意に、前記細胞内セグメントが、配列番号6で示されるアミノ酸配列を含み、
任意に、前記ヒンジ領域が、配列番号7で示されるアミノ酸配列を含む請求項1に記載の抗CD19キメラ抗原受容体。 - 非機能性上皮増殖因子受容体(EGFR)と、請求項1から2のいずれかに記載の抗CD19キメラ抗原受容体を発現するTリンパ球。
- 以下を有することを特徴とするレンチウイルス:
キメラ抗原受容体をコードする第1の核酸分子であって、前記キメラ抗原受容体が、配列番号8で示されるアミノ酸配列を含み、前記第1の核酸分子が、配列番号9で示されるヌクレオチド配列を含む;及び
非機能性EGFRをコードする第2の核酸分子であって、前記非機能性EGFRが、配列番号10で示されるアミノ酸配列を含み、前記第2の核酸分子が、配列番号11で示されるヌクレオチド配列を含む。 - 配列番号12で示されるヌクレオチド配列を含むことを特徴とするレンチウイルス。
- 非機能性EGFR及びキメラ抗原受容体を発現することを特徴とするトランスジェニックリンパ球であって、
前記キメラ抗原受容体が、細胞外セグメントと、膜貫通セグメントと、細胞内セグメントと含み、
前記細胞外セグメントが、腫瘍抗原に特異的に結合する一本鎖抗体領域と、ヒンジ領域とを含み、前記一本鎖抗体が、一本鎖抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含み、前記腫瘍抗原がCD19であり、
前記細胞内セグメントが、免疫共刺激分子の細胞内ドメインを含むトランスジェニックリンパ球 - 前記免疫共刺激分子が、独立して、4−1BB、OX−40、CD40L、CD27、CD30、CD28、及びそれらの誘導体から選択される少なくとも1つである請求項6に記載のトランスジェニックリンパ球。
- 前記免疫共刺激分子の細胞内ドメインが、4−1BBの細胞内ドメインである請求項7に記載のトランスジェニックリンパ球。
- 前記トランスジェニックリンパ球が、CD8+Tリンパ球である請求項7に記載のトランスジェニックリンパ球。
- 前記ヒンジ領域が、ヒトCD8αと3個のアミノ酸残基(AAA)の細胞外ドメインを含み、前記3個のアミノ酸残基(AAA)が、前記ヒトCD8αの細胞外ドメインのN末端に位置し、55個のアミノ酸残基を含み、
前記膜貫通セグメントが、前記細胞外セグメントの前記ヒンジ領域に結合されたヒトCD8αの膜貫通ドメインを含み、
前記細胞内セグメントが、ヒトCD8αの細胞内ドメイン、4−1BBの細胞内ドメイン、及びCD3ζ鎖の細胞内ドメインを含み、前記ヒトCD8αの細胞内ドメインが、7個のアミノ酸残基を含み、前記ヒトCD8αの膜貫通ドメインに結合されており、
任意に、前記ヒトCD8αの細胞外ドメインが、配列番号1で示されるアミノ酸配列を含み、
任意に、前記ヒトCD8αの膜貫通ドメインが、配列番号2に示されるアミノ酸配列を含み、
任意に、前記ヒトCD8αの細胞内ドメインが、配列番号3に示されるアミノ酸配列を含み、
任意に、前記細胞外セグメントが、配列番号4で示されるアミノ酸配列を含み、
任意に、前記膜貫通セグメントが、配列番号5で示されるアミノ酸配列を含み、
任意に、前記細胞内セグメントが、配列番号6で示されるアミノ酸配列を含み、
任意に、前記ヒンジ領域が、配列番号7で示されるアミノ酸配列を含み請求項6に記載のトランスジェニックリンパ球。 - 前記トランスジェニックリンパ球が、細胞毒性T細胞であり、
任意に、前記トランスジェニックリンパ球が、ナチュラルキラー(NK)細胞であり、
任意に、前記トランスジェニックリンパ球が、ナチュラルキラーT(NKT)細胞である請求項6に記載のトランスジェニックリンパ球。 - 請求項1から2及び4から11のいずれかに記載のキメラ抗原受容体をコードする第1の核酸配列と、
請求項4から11のいずれかに記載の非機能性EGFRをコードする第2の核酸配列とを含むことを特徴とする構築物。 - 前記第1の核酸配列及び前記第2の核酸配列が、請求項6から11のいずれかに記載のトランスジェニックリンパ球に、前記キメラ抗原受容体と前記非機能性EGFRとを発現するように設けられ、前記キメラ抗原受容体と前記非機能性EGFRが、非融合型である請求項12に記載の構築物。
- 前記第1の核酸配列に機能可能に結合された第1のプロモーターと、
前記第2の核酸配列に機能可能に結合された第2のプロモーターとを更に含む請求項13に記載の構築物。 - 前記第1のプロモーター及び前記第2のプロモーターが、独立して、CMV、EF−1、LTR、及びRSVの各プロモーターから選択される請求項14に記載の構築物。
- 前記第1の核酸配列と前記第2の核酸配列との間に設けられる内部リボソーム侵入部位を更に含み、
前記内部リボソーム侵入部位が、配列番号13で示されるヌクレオチド配列を含む請求項12に記載の構築物。 - 前記第1の核酸配列と前記第2の核酸配列との間に設けられる、リンカーペプチドをコードする第3の核酸配列を更に含み、前記リンカーペプチドが、リンパ球内で切断され得る請求項12に記載の構築物。
- 前記リンカーペプチドが、配列番号14〜17で示されるアミノ酸配列を含む請求項17に記載の構築物。
- 前記構築物のベクターが、非病原性ウイルスベクターである請求項12に記載の構築物。
- 前記ウイルスベクターが、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、及びアデノ関連ウイルスベクターから選択される少なくとも1つである請求項19に記載の構築物。
- 請求項3に記載の改善されたTリンパ球又は請求項6から11のいずれかに記載のトランスジェニックリンパ球を調製するための方法であって、
請求項4から5のいずれかに記載のレンチウイルス又は請求項12から20のいずれかに記載の構築物を、Tリンパ球に導入することを含むことを特徴とする方法。 - 請求項1から2のいずれかに記載の抗CD19キメラ抗原受容体、請求項3に記載の改善されたTリンパ球、請求項4から5のいずれかに記載のレンチウイルス、請求項6から11のいずれかに記載のトランスジェニックリンパ球、又は請求項12から20のいずれかに記載の構築物を含むことを特徴とする癌を治療するための治療用組成物。
- 前記癌の腫瘍細胞が、CD19を高発現する請求項22に記載の治療用組成物。
- リンパ球療法の安全性を改善するための方法であって、
請求項1から11のいずれかに記載のリンパ球に、請求項1から11のいずれかに記載のキメラ抗原受容体と、請求項1から11のいずれかに記載の非機能性EGFRとを発現させることを含むことを特徴とする方法。 - 請求項1から2のいずれかに記載の抗CD19キメラ抗原受容体、請求項3に記載の改善されたTリンパ球、請求項4から5のいずれかに記載のレンチウイルス、請求項6から11のいずれかに記載のトランスジェニックリンパ球、又は請求項12から20のいずれかに記載の構築物を、必要とする患者に投与することを含むことを特徴とする癌を治療するための方法。
- 前記癌の腫瘍細胞が、CD19を高発現する請求項25に記載の方法。
- 前記癌が、白血病又はリンパ腫である請求項25に記載の方法。
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Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2016090470A1 (en) * | 2014-12-08 | 2016-06-16 | Brian Chen | Cleavable nucleic acid linkers for protein quantification ratioing |
WO2017028374A1 (en) * | 2015-08-20 | 2017-02-23 | Beijing Marino Biotechnology Pty Ltd. | Construct, genetically modified lymphocyte, preparation method and usage thereof |
WO2017120997A1 (zh) * | 2016-01-13 | 2017-07-20 | 北京马力喏生物科技有限公司 | 共表达抗EGFRvIII嵌合抗原受体和无功能EGFR的转基因淋巴细胞及其用途 |
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CN107880128A (zh) * | 2017-12-21 | 2018-04-06 | 常州费洛斯药业科技有限公司 | 一种抗cd19的全人源抗体或抗体片段及其方法和应用 |
Family Cites Families (4)
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Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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WO2017028374A1 (en) * | 2015-08-20 | 2017-02-23 | Beijing Marino Biotechnology Pty Ltd. | Construct, genetically modified lymphocyte, preparation method and usage thereof |
WO2017120997A1 (zh) * | 2016-01-13 | 2017-07-20 | 北京马力喏生物科技有限公司 | 共表达抗EGFRvIII嵌合抗原受体和无功能EGFR的转基因淋巴细胞及其用途 |
CN107034193A (zh) * | 2016-02-03 | 2017-08-11 | 北京马力喏生物科技有限公司 | 治疗b细胞白血病及b细胞淋巴瘤的治疗组合物 |
CN107880128A (zh) * | 2017-12-21 | 2018-04-06 | 常州费洛斯药业科技有限公司 | 一种抗cd19的全人源抗体或抗体片段及其方法和应用 |
Non-Patent Citations (2)
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---|
ALABANZA, LEAH, ET AL.: "Function of novel anti-CD19 chimeric antigen receptors with human variable regions is affected by hi", MOLECULAR THERAPY, vol. 25, no. 11, JPN6021047969, 1 November 2017 (2017-11-01), pages 2452 - 2465, XP055505801, ISSN: 0004943377, DOI: 10.1016/j.ymthe.2017.07.013 * |
YING, ZHITAO, ET AL.: "Application progress of chimeric antigen receptor T cell in treatment of B cell lymphoma and existin", JOURNAL OF INTERNAL MEDICINE CONCEPTS & PRACTICE, vol. 12, no. 5, JPN7021005236, 5 December 2017 (2017-12-05), pages 318 - 323, XP009525192, ISSN: 0004943376, DOI: 10.16138/j.1673-6087.2017.05.005 * |
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