JP2022551947A - Ｐｒｍｔ５阻害剤としての置換三環類化合物及びその応用 - Google Patents

Abstract

本発明は、医薬化学の分野に属し、ＰＲＭＴ５阻害剤としての置換三環類化合物及びその応用に関し、具体的に、本発明は、式（Ａ）で表される化合物又はその異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、結晶又はプロドラッグ、それらの製造方法及びこれらの化合物を含む薬物組成物、並びに、ＰＲＭＴ５媒介性疾患の治療をするためのこれらの化合物又は組成物の用途を提供する。本発明の化合物は、ＰＲＭＴ５に対して有意な抑制活性を示す。【化１】JPEG2022551947000048.jpg25169

Description

発明の詳細な説明

〔技術分野〕
本発明は、医薬化学の分野に属し、具体的に、ＰＲＭＴ５阻害剤としての置換三環類化合物又はその異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、結晶又はプロドラッグ、それらの製造方法及びこれらの化合物を含む薬物組成物、並びに、ＰＲＭＴ５媒介性疾患を治療するためのこれらの化合物又は組成物の用途に関するものである。

〔背景技術〕
ＤＮＡの修飾は、細胞の成長及び発育の様々な段階で遺伝子の発現をトリガーするプログラムにおいて、中心的な役割を果たすが、アルギニンメチル化は、シグナル伝達、転写、ＲＮＡ加工、ＤＮＡ組換え及び修復を含む細胞プロセスにおいて、重要な役割を果たす。タンパク質アルギニンメチルトランスフェラーゼ（ＰＲＭＴｓ）は、メチル基をＳ－アデノシルメチオニン（ＳＡＭ）からアルギニンのグアニジン窒素に転移することにより、特定のアルギニン残基のメチル化を触媒し、アルギニンメチル化を触媒する方式により、ＰＲＭＴｓについて、モノメチル化及び非対称ジメチル化を触媒するＩ型（ＰＲＭＴ １，２，３，４，６及び８）、モノメチル化及び対称ジメチル化を触媒するＩＩ型（ＰＲＭＴ５とＰＲＭＴ９）、及びモノメチル化のみを行うＩＩＩ型（ＰＲＭＴ７）の３種類に分類することができる。

ここで、ＰＲＭＴ５は、メチルトランスフェラーゼ複合体タンパク質５０（ＭＥＰ５０）に特異的に結合して、ヒストンＨ３及びＨ４を対称的にメチル化し、特定の標的ゲノムの転写を調整することができる。ＰＲＭＴ５に触媒されたヒストンＨ３アルギニン８（Ｒ８）及びＨ４Ｒ３の対称的ジメチル化は、例えば、癌抑制遺伝子７（ＳＴ７）、網膜芽細胞腫（ＲＢ）腫瘍抑制遺伝子ファミリー及び受容体Ｏ型タンパク質チロシンホスファターゼ（ＰＴＰＲＯｔ）のような幾つかの腫瘍抑制遺伝子の発現を抑制することが示されていた。

ＰＲＭＴ５は、ヒストンをメチル化する能力に加えて、細胞調整のプロセスにおいて重要な役割を果たすように、幾つかの重要な転写因子をメチル化することもできる。ＰＲＭＴ５は、ｐ５３をメチル化し、そのＤＮＡ結合活性を変化させることによって、ｐ５３が制御する遺伝子発現プログラムの変化を引き起すことができる。ＰＲＭＴ５は、Ｎ－ＭＹＣをメチル化し、そのタンパク質安定性を変化させて、神経芽細胞腫における発癌活性を高めることも示されている。ＰＲＭＴ５は、Ｅ２Ｆ－１及びＮＦ－κＢ／ｐ６５を含む転写因子を直接にメチル化して、その標的遺伝子の発現を誘導することもできる。ＰＲＭＴ５は、核転写因子を修飾できるだけでなく、ｇｏｌｇｉｎ、リボソームタンパク質Ｓ１０（ＲＰＳ１０）のような細胞質タンパク質をメチル化することもできる。したがって、ＰＲＭＴ５は、その自体の標的遺伝子を直接に調整する能力に加えて、主要な転写因子の対称メチル化を通じて間接的にグローバルな遺伝子発現に影響を与え、それによって細胞の成長、増殖及び分化に影響を与えることもできる。

大量の研究により、ＰＲＭＴ５は、Ｂ細胞及びＴ細胞リンパ腫、転移性黒色腫、神経芽細胞腫及び膠芽腫、胚細胞腫瘍、卵巣癌、鼻咽頭癌、乳腺癌、結腸直腸癌及び胃癌を含む、様々な種類及び侵襲性の癌で過剰発現していることが確認された。現在の研究では、ＰＲＭＴ５は、細胞の成長及び増殖の制御において重要な役割を果し、その過剰発現が細胞形質転換を促進することが示されている。

癌細胞において、強化されたＰＲＭＴ５の発現は、その標的腫瘍抑制遺伝子の転写サイレンシングと関連している。ＰＲＭＴ５は、プロモーターヒストンＨ３Ｒ８及びＨ４Ｒ３のメチル化により、そして、Ｅ２Ｆ１及びＮＦ－ｋＢ／ｐ６５を含む主要な転写因子の特定のアルギニン残基を修飾してグローバルなクロマチン変化を引き起こすことにより、癌細胞の成長を促進することができる。ＰＲＭＴ５は、Ｒ１１０でメチル化されてＭＣＦ－７細胞でその腫瘍抑制活性を失われるように、プログラム性細胞死４（ＰＤＣＤ４）と相互作用もする。全体的に言えば、ＰＲＭＴ５の過剰発現は、成長促進タンパク質及び腫瘍抑制タンパク質と相互作用することで、癌細胞の成長、存活及び転移に寄与することができる。

上記のように、ＰＲＭＴ５阻害剤は、腫瘍等の関連疾患の治療において、明確なメカニズムを持っており、腫瘍治療の分野で新規な治療手段となる可能性が高いことから、臨床ニーズを満たすように、より安全でより効果的なＰＲＭＴ５阻害剤を開発する必要がある。

〔発明の概要〕
本発明の目的は、一般式（Ａ）で表される、ＰＲＭＴ５抑制活性を有する化合物又はその異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、結晶又はプロドラッグを提供することである。

ここで、
Ｃｙは、複素環基から選ばれ、前記複素環基は、ハロゲン、ヒドロキシ基、アルキル基、ハロゲン化アルキル基、ヒドロキシアルキル基、アルコキシ基、ハロゲン化アルコキシ基、ヒドロキシアルコキシ基、ニトロ基、カルボキシル基、シアノ基、アミノ基、モノアルキルアミノ基、アルキルアシルアミノ基、アルキルアシル基、アルキルスルホニル基、アミノアシル基、アルキルアミノアシル基、ビスアルキルアミノ基、アルケニル基、アルキニル基、ハロゲン化アルキルアシル基、ヒドロキシアルキルアシル基、シクロアルキルアシル基、複素環基アシル基、シクロアルキル基、複素環基、アリール基、ヘテロアリール基及びオキソ基から選ばれる一つ又は複数の基で置換されてもよい。

本発明の他の目的は、本発明の一般式（Ａ）の化合物又はその異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、結晶又はプロドラッグの製造方法を提供することである。

本発明の更なる目的は、本発明の一般式（Ａ）の化合物又はその異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、結晶又はプロドラッグ及び薬学的に利用可能な担体を含む組成物、並びに、本発明の一般式（Ａ）の化合物又はその異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、結晶又はプロドラッグ及び他の一種又は複数種の薬物を含む組成物を提供することである。

本発明の更なる他の目的は、本発明の一般式（Ａ）の化合物又はその異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、結晶又はプロドラッグを用いてＰＲＭＴ５媒介性疾患を治療する方法、並びに、ＰＲＭＴ５媒介性疾患を治療するための薬物の製造における、本発明の一般式（Ａ）の化合物又はその異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、結晶又はプロドラッグの応用を提供することである。

上記の発明の目的について、本発明は、以下の技術案を提供する。

第１の形態において、本発明は、一般式（Ａ）で表される化合物又はその異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、結晶又はプロドラッグを提供する。

ここで、
Ｃｙは、複素環基から選ばれ、前記複素環基は、ハロゲン、ヒドロキシ基、アルキル基、ハロゲン化アルキル基、ヒドロキシアルキル基、アルコキシ基、ハロゲン化アルコキシ基、ヒドロキシアルコキシ基、ニトロ基、カルボキシル基、シアノ基、アミノ基、モノアルキルアミノ基、アルキルアシルアミノ基、アルキルアシル基、アルキルスルホニル基、アミノアシル基、アルキルアミノアシル基、ビスアルキルアミノ基、アルケニル基、アルキニル基、ハロゲン化アルキルアシル基、ヒドロキシアルキルアシル基、シクロアルキルアシル基、複素環アシル基、シクロアルキル基、複素環基、アリール基、ヘテロアリール基及びオキソ基から選ばれる一つ又は複数の基で置換されてもよい。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明の化合物は、一般式（Ａ）の化合物又はその異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、結晶又はプロドラッグであり、ここで、
Ｃｙは、３～１２員複素環基から選ばれ、前記３～１２員複素環基は、ハロゲン、ヒドロキシ基、Ｃ_１～６アルキル基、ハロゲン化Ｃ_１～６アルキル基、ヒドロキシルＣ_１～６アルキル基、Ｃ_１～６アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ_１～６アルコキシ基、ヒドロキシルＣ_１～６アルコキシ基、ニトロ基、カルボキシル基、シアノ基、アミノ基、モノＣ_１～６アルキルアミノ基、Ｃ_１～６アルキルアシルアミノ基、Ｃ_１～６アルキルアシル基、Ｃ_１～６アルキルスルホニル基、アミノアシル基、Ｃ_１～６アルキルアミノアシル基、ビスＣ_１～６アルキルアミノ基、Ｃ_２～１０アルケニル基、Ｃ_２～１０アルキニル基、ハロゲン化Ｃ_１～６アルキルアシル基、ヒドロキシルＣ_１～６アルキルアシル基、Ｃ_３～１２シクロアルキルアシル基、３～１２員複素環アシル基、Ｃ_３～１２シクロアルキル基、３～１２員複素環基、６～１２員アリール基、５～１２員ヘテロアリール基及びオキソ基から選ばれる一つ又は複数の基で置換されてもよい。

更に好ましくは、Ｃｙは、３～１０員複素環基から選ばれ、前記３～１０員複素環基は、ハロゲン、ヒドロキシ基、Ｃ_１～３アルキル基、ハロゲン化Ｃ_１～３アルキル基、ヒドロキシルＣ_１～３アルキル基、Ｃ_１～３アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ_１～３アルコキシ基、ヒドロキシルＣ_１～３アルコキシ基、ニトロ基、カルボキシル基、シアノ基、アミノ基、モノＣ_１～３アルキルアミノ基、Ｃ_１～３アルキルアシルアミノ基、Ｃ_１～３アルキルアシル基、Ｃ_１～３アルキルスルホニル基、アミノアシル基、Ｃ_１～３アルキルアミノアシル基、ビスＣ_１～３アルキルアミノ基、Ｃ_２～６アルケニル基、Ｃ_２～６アルキニル基、ハロゲン化Ｃ_１～３アルキルアシル基、ヒドロキシルＣ_１～３アルキルアシル基、Ｃ_３～８シクロアルキルアシル基、３～８員複素環アシル基、Ｃ_３～８シクロアルキル基、３～８員複素環基、６～８員アリール基、５～８員ヘテロアリール基及びオキソ基から選ばれる一つ又は複数の基で置換されてもよい。

より更に好ましくは、Ｃｙは、３～１０員複素環基から選ばれ、前記複素環基は、一つ又は複数のＮ、Ｏ又はＳのヘテロ原子を更に含み、前記３～１０員複素環基は、ハロゲン、ヒドロキシ基、Ｃ_１～３アルキル基、ハロゲン化Ｃ_１～３アルキル基、ヒドロキシルＣ_１～３アルキル基、Ｃ_１～３アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ_１～３アルコキシ基、ヒドロキシルＣ_１～３アルコキシ基、ニトロ基、カルボキシル基、シアノ基、アミノ基、モノＣ_１～３アルキルアミノ基、Ｃ_１～３アルキルアシルアミノ基、Ｃ_１～３アルキルアシル基、Ｃ_１～３アルキルスルホニル基、アミノアシル基、Ｃ_１～３アルキルアミノアシル基、ビスＣ_１～３アルキルアミノ基、Ｃ_２～６アルケニル基、Ｃ_２～６アルキニル基、ハロゲン化Ｃ_１～３アルキルアシル基、ヒドロキシルＣ_１～３アルキルアシル基、Ｃ_３～８シクロアルキルアシル基、３～８員複素環アシル基、Ｃ_３～８シクロアルキル基、３～８員複素環基、６～８員アリール基、５～８員ヘテロアリール基及びオキソ基から選ばれる一つ又は複数の基で置換されてもよい。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明の一般式（Ａ）の化合物又はその異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、結晶又はプロドラッグによれば、Ｃｙは、

から選ばれる。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明は、一般式（Ａ）は、下記の一般式（Ｉ）の構造を有する一般式（Ａ）で表される化合物又はその異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、結晶又はプロドラッグを提供する。

ここで、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｒ^１）（Ｒ^２）及びＮ（Ｒ^３）から選ばれ、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３は、それぞれ独立に、水素、ハロゲン、ヒドロキシ基、アルキル基、ハロゲン化アルキル基、ヒドロキシアルキル基、アルコキシ基、ハロゲン化アルコキシ基、ヒドロキシアルコキシ基、ニトロ基、カルボキシル基、シアノ基、アミノ基、モノアルキルアミノ基、アルキルアシルアミノ基、アルキルアシル基、アミノアシル基、アルキルアミノアシル基、ビスアルキルアミノ基及びシクロアルキル基から選ばれ、且つＲ^１及びＲ^２は、それらに結合された炭素原子と共に複素環基を形成し、前記複素環基は、任意に、ハロゲン、ヒドロキシ基、アルキル基、ハロゲン化アルキル基、ヒドロキシアルキル基、アルコキシ基、ハロゲン化アルコキシ基、ヒドロキシアルコキシ基、ニトロ基、カルボキシル基、シアノ基、アミノ基、モノアルキルアミノ基、アルキルアシルアミノ基、アルキルアシル基、アミノアシル基、アルキルアミノアシル基、ビスアルキルアミノ基及びシクロアルキル基から選ばれる一つ又は複数の基で置換され、
ｍは、１、２、３又は４であり、
ｎは、０、１、２、３又は４である。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明の化合物は、一般式（Ｉ）の化合物又はその異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、結晶又はプロドラッグであり、ここで、
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３は、それぞれ独立に、水素、ハロゲン、ヒドロキシ基、Ｃ_１～６アルキル基、ハロゲン化Ｃ_１～６アルキル基、ヒドロキシルＣ_１～６アルキル基、Ｃ_１～６アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ_１～６アルコキシ基、ヒドロキシルＣ_１～６アルコキシ基、ニトロ基、カルボキシル基、シアノ基、アミノ基、モノＣ_１～６アルキルアミノ基、Ｃ_１～６アルキルアシルアミノ基、Ｃ_１～６アルキルアシル基、アミノアシル基、Ｃ_１～６アルキルアミノアシル基、ビスＣ_１～６アルキルアミノ基及びＣ_３～１２シクロアルキル基から選ばれる。

更に好ましくは、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３は、それぞれ独立に、水素、ハロゲン、ヒドロキシ基、Ｃ_１～３アルキル基、ハロゲン化Ｃ_１～３アルキル基、ヒドロキシルＣ_１～３アルキル基、Ｃ_１～３アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ_１～３アルコキシ基、ヒドロキシルＣ_１～３アルコキシ基、ニトロ基、カルボキシル基、シアノ基、アミノ基、モノＣ_１～３アルキルアミノ基、Ｃ_１～３アルキルアシルアミノ基、Ｃ_１～３アルキルアシル基、アミノアシル基、Ｃ_１～３アルキルアミノアシル基、ビスＣ_１～３アルキルアミノ基及びＣ_３～８シクロアルキル基から選ばれる。

より更に好ましくは、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３は、それぞれ独立に、水素、ハロゲン、ヒドロキシ基、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ハロゲン化Ｃ_１～３アルキル基、ヒドロキシルＣ_１～３アルキル基、Ｃ_１～３アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ_１～３アルコキシ基、ヒドロキシルＣ_１～３アルコキシ基、ニトロ基、カルボキシル基、シアノ基、アミノ基、モノＣ_１～３アルキルアミノ基、Ｃ_１～３アルキルアシルアミノ基、Ｃ_１～３アルキルアシル基、アミノアシル基、Ｃ_１～３アルキルアミノアシル基、ビスＣ_１～３アルキルアミノ基及びＣ_３～８シクロアルキル基から選ばれる。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明の化合物は、一般式（Ｉ）の化合物又はその異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、結晶又はプロドラッグであり、ここで、
Ｒ^１及びＲ^２は、それらに結合された炭素原子と共に３員～８員複素環基を形成し、前記複素環基は、一つ又は複数のＮ、Ｏ又はＳのヘテロ原子を更に含み、且つ前記複素環基は、任意に、ハロゲン、ヒドロキシ基、アルキル基、ハロゲン化アルキル基、ヒドロキシアルキル基、アルコキシ基、ハロゲン化アルコキシ基、ヒドロキシアルコキシ基、ニトロ基、カルボキシル基、シアノ基、アミノ基、モノアルキルアミノ基、アルキルアシルアミノ基、アルキルアシル基、アミノアシル基、アルキルアミノアシル基、ビスアルキルアミノ基及びシクロアルキル基から選ばれる一つ又は複数の基で置換される。

更に好ましくは、Ｒ^１及びＲ^２は、それらに結合された炭素原子と共に３員～６員複素環基を形成し、前記複素環基は、一つ又は複数のＮ、Ｏ又はＳのヘテロ原子を更に含み、且つ前記複素環基は、任意に、ハロゲン、ヒドロキシ基、Ｃ_１～６アルキル基、ハロゲン化Ｃ_１～６アルキル基、ヒドロキシルＣ_１～６アルキル基、Ｃ_１～６アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ_１～６アルコキシ基、ヒドロキシルＣ_１～６アルコキシ基、ニトロ基、カルボキシル基、シアノ基、アミノ基、モノＣ_１～６アルキルアミノ基、Ｃ_１～６アルキルアシルアミノ基、Ｃ_１～６アルキルアシル基、アミノアシル基、Ｃ_１～６アルキルアミノアシル基、ビスＣ_１～６アルキルアミノ基及びＣ_３～１２シクロアルキル基から選ばれる一つ又は複数の基で置換される。

より更に好ましくは、Ｒ^１及びＲ^２は、それらに結合された炭素原子と共に、アジリジニル基、アゼチジニル基、テトラヒドロピロリル基、ピペリジル基、ジヒドロピロリル基、テトラヒドロピリジル基、ピラゾリジニル基、ジヒドロピラゾリル基、イミダゾリジニル基、ジヒドロイミダゾリル基、ピラゾリル基、ジヒドロピラゾリル基、オキサゾリジニル基、ジヒドロオキサゾリル基、チアゾリジニル基、ジヒドロチアゾリル基、イソオキサゾリジニル基、ジヒドロイソオキサゾリル基、イソチアゾリジニル基、ジヒドロイソチアゾリル基、ヘキサヒドロピリミジニル基、テトラヒドロピリミジニル基、ジヒドロピリミジニル基、ヘキサヒドロピリダジニル基、テトラヒドロピリダジニル基、ジヒドロピリダジニル基、ピペラジニル基、テトラヒドロピラジニル基、ジヒドロピラジニル基、モルホリニル基、チオモルホリニル基又はタウルルタム基を形成し、、前記基は、任意に、ハロゲン、ヒドロキシ基、Ｃ_１～３アルキル基、ハロゲン化Ｃ_１～３アルキル基、ヒドロキシルＣ_１～３アルキル基、Ｃ_１～３アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ_１～３アルコキシ基、ヒドロキシルＣ_１～３アルコキシ基、ニトロ基、カルボキシル基、シアノ基、アミノ基、モノＣ_１～３アルキルアミノ基、Ｃ_１～３アルキルアシルアミノ基、Ｃ_１～３アルキルアシル基、アミノアシル基、Ｃ_１～３アルキルアミノアシル基、ビスＣ_１～３アルキルアミノ基及びＣ_３～１２シクロアルキル基から選ばれる一つ又は複数の基で置換される。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明は、一般式（Ｉａ）の化合物又はその異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、結晶又はプロドラッグを提供する。

ここで、Ｘ、ｍ及びｎは、上記の一般式（Ｉ）に記載の定義を有する。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明の一般式（Ｉ）又は一般式（Ｉａ）の化合物又はその異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、結晶又はプロドラッグによれば、

から選ばれる。

本発明は、下記の具体的な化合物又はその異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、結晶又はプロドラッグを提供する。

一方、本発明は、式（１）の化合物を式（２）の化合物と反応するステップを含む本発明の一般式（Ａ）の化合物の製造方法を提供する。

ここで、Ｃｙは、一般式（Ａ）に記載の定義を有し、式（１）の化合物及び式（２）の化合物は、市販の化合物でもよく、当業者の慣用する他の技術手段によって合成してもよい。

第３の形態において、本発明は、本発明の化合物又はその異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、結晶又はプロドラッグを含む薬物組成物を提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、ＰＲＭＴ５媒介性疾患を治療するための、本発明の化合物又はその異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、結晶又はプロドラッグ、並びに、本発明の化合物又はその異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、結晶又はプロドラッグを含む薬物組成物を提供する。

いくつかの実施形態において、本発明は、本発明の化合物又はその異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、結晶又はプロドラッグ及び薬学的に利用可能な担体を含む薬物組成物を提供する。

本発明の化合物又はその異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、結晶又はプロドラッグは、薬学的に利用可能な担体、希釈剤又は賦形剤と混合して経口又は非経口投与に適する薬物製剤に製造することができる。投与方法は、皮内、筋肉内、腹膜内、静脈内、皮下、鼻内及び経口経路が含まれるが、これらに限定されるものではない。前記製剤は、任意の経路により、例えば、注入又は押注で、上皮又は皮膚粘膜（例えば、口腔粘膜又は直腸等）を介して吸収する経路により投与してもよい。投与は、全身でもよく、局所でもよい。経口投与製剤の実例は、固体又は液体剤型を含み、具体的に、錠剤、丸剤、顆粒剤、粉末剤、カプセル剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤等を含む。前記製剤は、当技術分野で公知の方法によって製造してもよく、且つ薬物製剤の分野で通常に使用されている担体、希釈剤又は賦形剤を含んでもよい。

第４の形態において、本発明は、本発明の式（Ａ）、式（Ｉ）又は（Ｉａ）で表される化合物又はその異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、結晶又はプロドラッグ、或いは、これらを含む薬物組成物のＰＲＭＴ５媒介性疾患の治療方法、並びに、ＰＲＭＴ５媒介性疾患を治療するための薬物の製造における、これらを含む薬物組成物の用途を提供する。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明は、本発明の式（Ａ）、式（Ｉ）又は（Ｉａ）で表される化合物又はその異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、結晶又はプロドラッグ、或いは、これらを含む薬物組成物のＰＲＭＴ５媒介性疾患の治療方法、並びに、ＰＲＭＴ５媒介性疾患を治療するための薬物の製造における、これらを含む薬物組成物の用途を提供するが、前記ＰＲＭＴ５媒介性疾患は、増殖性疾患、代謝疾患又は血液疾患が含まれるが、これらに限定されるものではない。いくつかの実施形態において、本発明に記載のＰＲＭＴ５媒介性疾患は、癌である。

いくつかの実施形態において、本発明に記載のＰＲＭＴ５媒介性疾患は、聴覚神経腫、腺癌、副腎癌、肛門癌、血管肉腫（例えば、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、血管肉腫）、付属器癌、良性単クローン性免疫グロブリン血症、胆嚢癌（例えば、胆管癌）、膀胱癌、乳癌（例えば、乳房腺癌、乳房乳頭癌、乳腺癌、乳房髄様癌、トリプルネガティブ乳腺癌）、脳癌（例えば、脳膜腫；例えば、星状細胞腫、乏突起膠腫のような神経膠腫；神経髄芽細胞腫）、気管支癌、カルチノイド腫瘍子宮頸癌（例えば、子宮頸腺癌）、絨毛膜癌、脊索腫、頭蓋咽頭管瘤、結腸直腸癌（例えば、結腸癌、直腸癌、結腸直腸腺癌）、上皮癌、脳室上皮腫、内皮肉腫（例えば、カポシ肉腫（Ｋａｐｏｓｉ’ｓ ｓａｒｃｏｍａ）、多発性特発性出血性肉腫）、子宮内膜癌（例えば、子宮癌、子宮肉腫）、食道癌（例えば、食道腺癌、バレット腺癌（Ｂａｒｒｅｔｔ’ｓ ａｄｅｎｏｃａｒｉｎｏｍａ））、ユーイング肉腫（Ｅｗｉｎｇ ｓａｒｃｏｍａ）、眼癌（例えば、眼内黒色腫、網膜芽細胞腫）、家族性好酸球増加症、胆嚢癌、胃癌（例えば、胃腺癌）、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、頭頸部癌（例えば、頭頸部扁平上皮癌、口腔癌（例えば、口腔扁平上皮癌（ＯＳＣＣ）、咽頭癌（例えば、喉頭癌、咽頭癌、鼻咽頭癌、口腔咽頭癌））、造血器癌（例えば、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）（例えば、Ｂ－細胞ＡＬＬ、Ｔ－細胞ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）（例えば、Ｂ－細胞ＡＭＬ、Ｔ－細胞ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）（例えば、Ｂ－細胞ＣＭＬ、Ｔ－細胞ＣＭＬ）及び慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）（例えば、Ｂ－細胞ＣＬＬ、Ｔ－細胞ＣＬＬ）のような白血病）；ホジキンリンパ腫（ＨＬ）（例えば、Ｂ－細胞ＨＬ、Ｔ－細胞ＨＬ）及び非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）（例えば、びまん性大細胞リンパ腫（ＤＬＣＬ）（例えば、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ））のようなリンパ腫、濾胞性リンパ腫、慢性リンパ性白血病／小リンパ球性リンパ腫（ＣＬＬ／ＳＬＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯Ｂ－細胞リンパ腫（例えば、粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、結節性辺縁帯Ｂ－細胞リンパ腫、脾臓辺縁帯Ｂ－細胞リンパ腫）、原発性縦隔Ｂ－細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫（Ｂｕｒｋｉｔｔｌｙｍｐｈｏｍａ）、リンパ形質細胞性リンパ腫（即ち、「ワルデンストレームマクログロブリン血症（Ｗａｌｄｅｎｓｔｒｏｍ’ｓ ｍａｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎｅｍｉａ）」）、毛状細胞白血病（ＨＣＬ）、免疫芽球性大細胞リンパ腫、前駆体Ｂ－リンパ芽球性リンパ腫及び原発性中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫等のリンパ腫；及び、前駆体Ｔ－リンパ芽球性リンパ腫／白血病、末梢Ｔ－細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）（例えば、皮膚Ｔ－細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）（例えば、菌状息肉腫（ｍｙｃｏｓｉｓ ｆｕｎｇｉｏｄｅｓ）、セザリー症候群（Ｓｅｚａｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ））、血管免疫芽球性Ｔ－細胞リンパ腫、結節外天然キラーＴ－細胞リンパ腫、腸症型Ｔ－細胞リンパ腫、皮下脂肪織炎様Ｔ－細胞リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫）等のＴ－細胞ＮＨＬ；上記の一種又は複数種の白血病／リンパ腫の混合物；及び、多発性骨髄腫（ＭＭ））、重鎖疾患（例えば、α鎖疾患、γ鎖疾患、μ鎖疾患）、血管芽細胞腫、炎症性筋線維芽細胞腫、免疫細胞アミロイドーシス、腎癌（例えば、ウィルムス腫（Ｗｉｌｍｓ’ｔｕｍｏｒ）とも呼ばれる腎芽細胞腫、腎細胞癌）、肝癌（例えば、肝細胞癌（ＨＣＣ）、悪性肝細胞腫）、肺癌（例えば、気管支癌、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、肺腺癌）、平滑筋肉腫（ＬＭＳ）、肥満細胞増加症（例えば、全身性肥満細胞増加症）、骨髄発達発育不良症候群（ＭＤＳ）、中皮腫、骨髄増殖性疾患（ＭＰＤ）（例えば、真性多血症（ＰＶ）、特発性血小板増加症（ＥＴ）、骨髄線維症（ＭＦ）とも呼ばれる特発性髄外化生（ＡＭＭ）、慢性特発性骨髄線維症、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性好中性白血病（ＣＮＬ）、好酸球増加症候群（ＨＥＳ））、神経芽細胞腫、神経線維腫（例えば、１型又は２型の多発性神経線維腫（ＮＦ）、シュワノマトーシス（ｓｃｈｗａｎｎｏｍａｔｏｓｉｓ））、神経内分泌癌（例えば、胃腸膵腺神経内分泌腫瘍（ＧＥＰ－ＮＥＴ）、カルチノイド腫瘍）、骨肉腫、卵巣癌（例えば、嚢腺癌、卵巣胚胎性癌、卵巣腺癌、卵巣透明細胞癌、卵巣漿液性嚢腺癌、）、乳頭状腺癌、膵腺癌（例えば、膵腺腺癌、管内乳頭状粘液瘤（ＩＰＭＮ）、膵島細胞腫瘍）、陰茎癌（例えば、陰茎及び陰嚢のパジェット病（Ｐａｇｅｔ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ））、松果体腫、原発性神経外胚葉腫（ＰＮＴ）、前立腺癌（例えば、前立腺腺癌）、直腸癌、横紋筋肉腫、唾液管癌、皮膚癌（例えば、扁平上皮癌（ＳＣＣ）、ケラトアカントーマ（ＫＡ）、黒色腫、基底細胞癌（ＢＣＣ））、小腸癌（例えば、付属器癌）、軟組織肉腫（例えば、悪性線維性組織球腫（ＭＦＨ）、脂肪肉腫、悪性末梢神経鞘腫瘍（ＭＰＮＳＴ）、軟骨肉腫、線維肉腫、粘液肉腫）、皮脂腺癌、汗腺癌、滑膜腫、精巣癌（例えば、セミノーマ、精巣胚胎性癌）、甲状腺癌（例えば、甲状腺乳頭癌、乳頭状甲状腺癌（ＰＴＣ）、髄質甲状腺癌）、尿道癌、膣癌及び外陰癌（例えば、外陰パジェット病）、髄芽細胞腫、腺様嚢胞癌、黒色腫、膠芽腫が含まれるが、これらに限定されるものではない。

いくつかの実施形態において、本発明に記載のＰＲＭＴ５媒介性疾患は、糖尿病又は肥満のような代謝性疾患を含む。

いくつかの実施形態において、本発明に記載のＰＲＭＴ５媒介性疾患は、鎌状赤血球症又はβ－サラセミアのようなヘモグロビン症を含む。

いくつかの実施形態において、本発明に記載のＰＲＭＴ５媒介性疾患は、炎症性疾患及び自己免疫疾患を含む。

いくつかの好ましい実施形態において、本発明は、本発明の一般式Ｉで表される化合物又はその異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、結晶又はプロドラッグ、或いは、これらを含む薬物組成物を、ＰＲＭＴ５媒介性疾患の治療に使用する方法、及びＰＲＭＴ５媒介性疾患を治療するための薬物の製造に使用する用途を提供し、ここで、前記ＰＲＭＴ５媒介性疾患が、乳腺癌、食道癌、膀胱癌、肺癌、造血器癌、リンパ腫、髄芽細胞腫、神経髄芽細胞腫、直腸腺癌、結腸癌、胃癌、膵腺癌、肝癌、腺様嚢胞癌、前立腺癌、肺癌、頭頸部扁平上皮癌、脳癌、肝細胞癌、黒色腫、乏突起膠腫、膠芽腫、精巣癌、卵巣透明細胞癌、卵巣漿液性嚢腺癌、甲状腺癌、多発性骨髄腫（ＡＭＬ）、腎細胞癌、マントル細胞リンパ腫、トリプルネガティブ乳腺癌、非小細胞肺癌、ヘモグロビン症、糖尿病及び肥満が含まれるが、これらに限定されるものではない。

用語の定義
特に断りがない限り、本明細書及び請求の範囲で使用される用語は、以下の意味を有する。

本発明の化合物中の「水素」、「炭素」、「酸素」は、これらのすべての同位体を含む。同位体には、原子番号は同じで質量数が異なる原子が含まれることを理解するべきである。例えば、水素の同位体には、プロチウム、トリチウム及び重水素が含まれ、炭素の同位体には、^１２Ｃ、^１３Ｃ及び^１４Ｃが含まれ、酸素の同位体には、^１６Ｏ及び^１８Ｏ等が含まれる。

本発明における「異性体」は、同じ原子組成及び接続方式を有するが、異なる三次元空間配置を有する分子を意味し、ジアステレオマー、エナンチオマー、シス－トランス異性体、及びこれらの混合物、例えばラセミ混合物が含まれるが、これらに限定されるものではない。多くの有機化合物は光学活性の形式で存在して、即ち、これらは平面偏光の平面を回転させる能力を有する。光学活性化合物を説明する際、接頭辞Ｄ、Ｌ又はＲ、Ｓは、分子のキラル中心の絶対配置を表すために使用される。接頭辞Ｄ、Ｌ又は（＋）、（－）は、化合物の平面偏光回転を命名するための記号であり、（－）又はＬは、化合物が左旋であることを意味し、接頭辞（＋）又はＤは、化合物が右旋であることを意味する。これらの立体異性体の化学構造は同じであるが、これらの立体構造が異なる。特定の立体異性体はエナンチオマーである可能性があり、通常に、異性体の混合物は、エナンチオマー混合物と呼ばれる。５０：５０のエナンチオマー混合物は、ラセミ混合物又はラセミ体と呼ばれ、これは化学反応プロセス中に立体選択性又は立体特異性がないことに繋がる可能性がある。「ラセミ混合物」及び「ラセミ体」という用語は、等モルの二つエナンチオマーの混合物を意味し、それは光学活性を欠くものである。

出発原料及び方法の選択に応じて、本発明の化合物は、ラセミ体及びジアステレオマー混合物（非対称炭素原子の数に応じて）等の可能な異性体の一つ又はこれらの混合物の形式で存在することが可能である。光学活性の（Ｒ）－又は（Ｓ）－異性体は、可使用キラルシントン又はキラル試薬を使用して製造するもよく、通常の技術を使用して分離してもよい。

得られた任意の立体異性体の混合物は、例えば、クロマトグラフィー及び／又は分別結晶法によって、成分の物理化学性質上の違いに基づいて、ニート又は実質的にニートな幾何異性体、エナンチオマー及びジアステレオマーに分離されてもよい。

本発明の「ハロゲン」とは、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素を意味する。本発明の「ハロゲン化」とは、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素で置換されるを意味する。

本発明の「アルキル基」は、直鎖又は分岐鎖の飽和脂肪族炭化水素基を意味し、好ましくは１～６個の炭素原子を含む直鎖又は分岐鎖基、更に好ましくは１～３個の炭素原子を含む直鎖又は分岐鎖基、非限定性な実例は、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｎ－ペンチル基、１，１－ジメチルプロピル基、１，２－ジメチルプロピル基、２，２－ジメチルプロピル基、１－エチルプロピル基、２－メチルブチル基、３－メチルブチル基、ｎ－ヘキシル基等が含まれる。アルキル基は置換又は非置換であってもよく、置換された場合、置換基は、任意の利用可能な接続点にあってもよい。

本発明の「カルボニル基」、「アシル基」は、両方とも－Ｃ（Ｏ）－を意味する。

本発明の「スルホニル基」は、－Ｓ（Ｏ）_２－を意味する。

本発明の「スルホンアミド基」は、－Ｓ（Ｏ）_２ＮＨ－を意味する。

本発明の「ハロゲン化アルキル基」は、少なくとも一つのハロゲンで置換されたアルキル基を意味する。

本発明の「ヒドロキシアルキル基」は、少なくとも一つのヒドロキシ基で置換されたアルキル基を意味する。

本発明の「アルコキシ基」は、－Ｏ－アルキル基を意味する。アルコキシ基の非限定性な実例は、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ｎ－プロポキシ基、イソプロポキシ基、イソブトキシ基、ｓｅｃ－ブトキシ基等が含まれる。アルコキシ基は置換又は非置換であってもよく、置換された場合、置換基は、任意の利用可能な接続点にあってもよい。

本発明の「シクロアルキル基」は、環状飽和炭化水素基を意味する。適切なシクロアルキル基は、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基等の、３～１２個の炭素原子を有する置換又は非置換の単環、二環又は三環飽和炭化水素基であってもよい。

本発明の「複素環基」は、１～４個のリングヘテロ原子（ここで、各ヘテロ原子は、窒素、酸素、硫黄、ホウ素、リン及びケイ素から独立して選択される）を有する３－～１２－元非芳香族環系の基（「３～１２員複素環基」）を意味する。一つ又は複数の窒素原子を含む複素環基では、接続点は、原子価が許す限り、炭素原子又は窒素原子であってもよい。複素環基は、単環（「単環複素環基」）又は融合、架橋又はスピロ環系（例えば、二環系（「二環複素環基」とも呼ばれる））、飽和又は部分的に不飽和であってもよい。適切な複素環基は、ピペリジル基、アゼチジニル基、アジリジン基、テトラヒドロピロリル基、ピペラジニル基、ジヒドロキナゾリニル基、オキシラニル基、オキセタニル基、テトラヒドロフラニル基、テトラヒドロピラニル基、

等が含まれるが、これらに限定されるものではない。複素環基の各実例は、置換又は非置換であってもよく、置換された場合、置換基は、任意の利用可能な接続点にあってもよい。

本発明の「アリール基」は、単環又は縮合多環を含み得る芳香族系を意味し、好ましくは単環又は縮合二環の芳香族系を含み、それは６～１２個の炭素原子を含み、好ましくは約６～約１０個の炭素原子を含む。適切なアリール基は、フェニル基、ナフチル基、アントラセニル基、フルオレニル基、インダニル基が含まれるが、これらに限定されるものではない。アリール基は置換又は非置換であってもよく、置換された場合、置換基は、任意の利用可能な接続点にあってもよい。

本発明の「ヘテロアリール基」は、少なくとも一つの炭素原子がヘテロ原子で置き換えられた芳基を意味し、好ましくは５～１２個の原子で構成され（５～１２員ヘテロアリール基）、更に好ましくは５～１０個の原子で組成され（５～１０員ヘテロアリール基）、前記ヘテロ原子はＯ、Ｓ、Ｎである。前記ヘテロアリール基は、イミダゾリル基、ピロリル基、フラニル基、チエニル基、ピラゾリル基、オキサゾリル基、チアゾリル基、イソオキサゾリル基、イソチアゾリル基、オキサジアゾリル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基、インドリル基、ピリジル基、ピリミジニル基、ピリダジニル基、ピラジニル基、トリアジニル基、イソインドリル基、ベンゾピラゾリル基、ベンゾイミダゾリル基、ベンゾフラニル基、ベンゾピラニル基、ベンゾチエニル基、ベンゾオキサゾリル基、ベンゾチアゾリル基、ベンゾイソオキサゾリル基、ベンゾイソチアゾリル基、キノリル基、イソキノリル基、キナゾリニル基、シンノリニル基、キノキサリニル基、ベンゾオキサジニル基、ベンゾチアジニル基、イミダゾピリジル基、ピリミドピラゾリル基、ピリミドイミダゾリル基等が含まれるが、これらに限定されるものではない。ヘテロアリール基は置換又は非置換であってもよく、置換された場合、置換基は、任意の利用可能な接続点にあってもよい。

本発明の「薬学的に許容される塩」は、本発明の化合物の塩を意味し、この種類の塩は、哺乳動物の体内で使用する時に、安全性と有効性があり、あるべき生物活性も有する。

本発明の「溶媒和物」は、従来の意味で、溶質（例えば、活性化合物、活性化合物の塩）と溶媒（例えば、水）との組み合わせによって形成される複合体を意味する。溶媒は、当業者によって知られているか又は容易に決定される溶媒を意味する。水の場合、溶媒和物は、通常に水和物と呼ばれ、水和物は、例えば、半水和物、一水和物、二水和物、三水和物又はその代替量等のものがある。

化学式（Ａ）を有する化合物のインビボ作用は、部分的に、化学式（Ａ）を有する化合物を提供した後、人体又は動物体内で形成された一種又は複数種の代謝物を介して発揮してもよい。上記のように、化学式（Ａ）を有する化合物的インビボ作用は、前駆体化合物（「プロドラッグ」）の代謝を介して発揮してもよい。本発明の「プロドラッグ」は、生物体内の生理条件で、酵素、胃酸等と反応により本発明の化合物に変換される化合物、即ち酵素の酸化、還元、加水分解等により本発明の化合物に変換される化合物、及び／又は胃酸等の加水分解反応等により本発明の化合物に変換される化合物等を意味する。

本発明の「結晶」は、そのような規則的な内部構造を持たないアモルファス固体とは異なり、その内部構造が、構成原子（又はその基）を三次元で規則的に繰り返すことにより形成された固体を意味する。

本発明の「薬物組成物」は、対応する異性体、プロドラッグ、溶媒和物、薬学的に許容される塩又はその化学的な保護形態、及び一種又は複数種の薬学的に利用可能な担体及び／又は他の種又は複数種の薬物等の本発明に記載された化合物のいずれか１つを含む混合物を意味する。薬用組成物の目的は、生物への化合物の投与を促進することである。前記組成物は、通常に、一種又は複数種のキナーゼによって媒介される疾患の治療及び／又は予防のための薬物の製造に使用する。

本発明の「薬学的に利用可能な担体」は、有機体に明らかな刺激性を引き起こさず、提供された化合物の生物活性と性質を妨害しない担体を意味し、全ての溶媒、希釈剤又は他の賦形剤、分散剤、界面活性剤、等張剤、増粘剤又は乳化剤、防腐剤、固体接着剤、滑剤等を含む。任意の通常な担体媒体が本発明の化合物と相溶しない場合を除いて。薬学的に許容される担体としても可能な幾つかの実例は、ラクトース、グルコース及びスクロース等の糖類；コーンスターチ及び馬鈴薯デンプン等のデンプン；カルボキシメチルセルロースナトリウム、セルロース、酢酸セルロース等のセルロース及びその誘導体；モルト、ゼラチン等が含まれるが、これらに限定されるものではない。

本発明の「賦形剤」は、薬用組成物に添加されることによって化合物の提供を更に促進した不活性物質を意味する。賦形剤には、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、複数種の糖類及び複数種のデンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油、ポリエチレングリコールが含まれる場合がある。

本発明の「ＰＲＭＴ５」は、野生型ＰＲＭＴ５又は、一つ又は複数の突然変異（例えば、保守的置換）が含むＰＲＭＴ５の任意の突然変異体又は変異体であってもよい。

〔発明を実施するための形態〕
以下、実施例を結合して、本発明を更に詳細に説明するが、本発明は、これらの実施例に限定されるものでない。以下の実施例で使用される材料は、特に明記されていない限り、いずれも商業的に購入して入手されたものである。

実施例１：（Ｒ）－７’－（（１－アセチルピペリジン－４－イル）アミノ）－２’－（３－（３，４－ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－イル）－２－ヒドロキシプロピル）－２’，３’－ジヒドロ－１’Ｈ－スピロ［シクロプロパン－１，４’－［２，６］ナフチリジン］－１’－オン

ステップ１：５－ブロモ－２－クロロイソニコチン酸メチルの製造

５－ブロモ－２－クロロイソニコチン酸（１０ｇ，４２．２９２ｍｍｏｌ）をメタノールに溶解し、０℃で９．２ｍＬの塩化チオニル（９．２ｍＬ，１２６．８ｍｍｏｌ）を加えた。滴下完了後、反応液を８０℃に加熱し、１０時間反応した後、ＬＣＭＳで完全に反応したことをモニターした後、酢酸エチル（２００ｍＬ）を加え、飽和炭酸ナトリウム水溶液のＰＨを約８程度に調整した。有機相及び水相を分離した後、水相を酢酸エチルで３回抽出し、有機相を合わせ、飽和塩化ナトリウムで１回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで有機相を乾燥した後、濃縮することで標記の化合物を得た。ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝２５０．０，２５２．０。

ステップ２：２－クロロ－５－メチルイソニコチン酸メチルの製造

５－ブロモ－２－クロロイソニコチン酸メチル（１０ｇ，５１．８ｍｍｏｌ）及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（４．６ｇ，３．９８ｍｍｏｌ）を無水Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ，２５ｍＬ）に加えた。アルゴンガスの保護下で、トリメチルアルミニウム（２Ｍトルエン溶液、５１．９ｍｍｏｌ，２５．９５ｍＬ）を加え、添加が完了した後、反応系を８０℃に昇温し、反応して一晩中撹拌した。完全に反応した後、反応液を氷水（５００ｍＬ）に注いでクエンチし、酢酸エチル（５００ｍＬ）を加えて抽出した。有機相を飽和塩化ナトリウム水溶液で水洗し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた後、溶媒を減圧留去した。カラムクロマトグラフィー分離により標記の化合物を得た。ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１８６．０。

ステップ３：５－（ブロモメチル）－２－クロロイソニコチン酸メチルの製造

２－クロロ－５－メチルイソニコチン酸メチル（５．１４ｇ，２７．６９ｍｍｏｌ）を四塩化炭素（５０ｍＬ）に溶解し、加入Ｎ－ブロモスクシンイミド（４．９３ｇ，２７．７ｍｍｏｌ）、過酸化ベンゾイル（１ｇ，４．１３ｍｍｏｌ）を加えた後、８０℃で一晩中撹拌反応させた。ＬＣＭＳで完全に反応したことをモニターした後、減圧で有機溶媒を除去した後、水及び酢酸エチルを加えて抽出し、有機相を飽和塩化ナトリウムで２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、カラムクロマトグラフィー分離により標記の化合物を得た。ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝２６４．０，２６６．１。

ステップ４：２－クロロ－５－（シアノメチル）イソニコチン酸メチルの製造

５－（ブロモメチル）－２－クロロイソニコチン酸メチル（５．２９ｇ，２０．１ｍｍｏｌ）を無水アセトニトリル（３５ｍＬ）に溶解し、トリメチルシアノシラン（２．２０ｇ，２２．１７ｍｍｏｌ）を加え、温度を－１０℃に下げた。当該反応液にテトラブチルアンモニウムフルオリド（７．８８ｇ，３０．１４ｍｍｏｌ）を緩やかに滴下し、滴下完了後、０℃に昇温して３時間反応させた。ＬＣＭＳで完全に反応したことをモニターした後、反応液をセライトで吸引濾過した後、水を加え、酢酸エチルで抽出し、有機相を飽和塩化ナトリウムで２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、カラムクロマトグラフィー分離により標記の化合物を得た。ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝２１１．０。

ステップ５：２－クロロ－５－（１－シアノシクロプロピル）イソニコチン酸メチルの製造

２－クロロ－５－（シアノメチル）イソニコチン酸メチル（１．５ｇ，７．１２ｍｍｏｌ）を無水ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、２５ｍＬ）に溶解し、１，２－ジブロモエタン（２．０ｇ，１０．６５ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（４．６４ｇ，１４．２４ｍｍｏｌ）を加えた。Ｎ_２の保護で、７０℃で１時間反応させた。ＬＣＭＳで完全に反応したことをモニターした後、室温まで冷却し、水を加え、酢酸エチルで抽出し、有機相を飽和塩化ナトリウムで２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、カラムクロマトグラフィー分離により標記の化合物を得た。ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝２３７．０。

ステップ６：２－（（１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）ピペリジン－４－イル）アミノ）－５－（１－シアノシクロプロピル）イソニコチン酸メチルの製造

２－クロロ－５－（１－シアノシクロプロピル）イソニコチン酸メチル（０．１ｇ，０．３８ｍｍｏｌ）を無水テトラヒドロフラン（ＴＨＦ、３ｍＬ）に溶解し、４－アミノピペリジン－１－カルボン酸－ｔｅｒｔ－ブチル（１１４．１ｍｇ，０．５７ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（２４７．６ｍｇ，０．７６ｍｍｏｌ）、クロロ（２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２’，６’－ジイソプロピル－１，１’－ビフェニル）［２－（２－アミノエチルフェニル］パラジウム（ＩＩ）（３１．８２ｍｇ，０．０４ｍｍｏｌ）を加え、Ｎ_２によって保護し、７０℃で一晩中反応させた。ＬＣＭＳで完全に反応したことをモニターした後、水を加え、酢酸エチルで抽出し、有機相を飽和塩化ナトリウムで２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、カラムクロマトグラフィー分離により標記の化合物を得た。ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝４０１．２．
ステップ７：２－（（１－アセチルピペリジン－４－イル）アミノ）－５－（１－シアノシクロプロピル）イソニコチン酸メチルの製造

２－（（１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）ピペリジン－４－イル）アミノ）－５－（１－シアノシクロプロピル）イソニコチン酸メチル（１６２ｍｇ，０．４０５ｍｍｏｌ）を無水塩化メチレン（４ｍＬ）に溶解し、アイスバスによって温度を０℃に下げた後、トリフルオロ酢酸（０．４ｍＬ，５．３８ｍｍｏｌ）を緩やかに滴下し、滴下完了後、アイスバスを外し、室温で一晩中撹拌した。有機溶媒を減圧留去した後、無水塩化メチレン（５ｍＬ）を加えた。当該溶液にＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンをｐＨが７－８になるまで添加し、次にＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（５２．３ｍｇ，０．４０５ｍｍｏｌ）を加え、また無水酢酸（４９．０ｍｇ，０．４８ｍｍｏｌ）も加えて、室温で２時間撹拌した。ＬＣＭＳで完全に反応したことをモニターした後、反応液に水を加えてクエンチした後、塩化メチレンで抽出し、有機相を飽和塩化ナトリウムで２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した後標記の化合物を得た。ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝３４３．２。

ステップ８：７’－（（１－アセチルピペリジン－４－イル）アミノ）－２’，３’－ジヒドロ－１’Ｈ－スピロ［シクロプロパン－１，４’－［２，６］ナフチリジン］－１’－オンの製造

２－（（１－アセチルピペリジン－４－イル）アミノ）－５－（１－シアノシクロプロピル）イソニコチン酸メチル（３１１．０ｍｇ，０．９１ｍｍｏｌ）をメタノールに溶解し、アイスバスによって温度を０℃に下げた後、六水和二塩化コバルト（８６５．４ｍｇ，３．６４ｍｍｏｌ）を加え、水素化ホウ素ナトリウム（２０７．２６ｍｇ，５．４８ｍｍｏｌ）をバッチで緩やかに添加し、０℃下で０．５時間撹拌した後常温で１時間撹拌した。ＬＣＭＳで未完全に反応したことをモニターした後、反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液を加えてクエンチした後、酢酸エチルで抽出し、有機相を飽和塩化ナトリウムで２回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、カラムクロマトグラフィー分離により標記の化合物を得た。ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝３１５．２
ステップ９：（Ｒ）－７’－（（１－アセチルピペリジン－４－イル）アミノ）－２’－（３－（３，４－ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－イル）－２－ヒドロキシプロピル）－２’，３’－ジヒドロ－１’Ｈ－スピロ［シクロプロパン－１，４’－［２，６］ナフチリジン］－１’－オンの製造

７’－（（１－アセチルピペリジン－４－イル）アミノ）－２’，３’－ジヒドロ－１’Ｈ－スピロ［シクロプロパン－１，４’－［２，６］ナフチリジン］－１’－オン（４５ｍｇ，０．１７５ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（５ｍＬ）に溶解し、窒素ガスの保護下で、温度を０℃に下げた後、ＮａＨ（１１．４５ｍｇ，０．４８ｍｍｏｌ）を緩やかに添加し、０．５時間後、（Ｒ）－２－（オキシラン－２－イルメチル）－１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン（３２．５３ｍｇ，０．１７２ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩中撹拌した。ＬＣＭＳで未完全に反応したことをモニターした後、１０ｍｇ ＮａＨ、３３ｍｇ（Ｒ）－２－（オキシラン－２－イルメチル）－１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリンを加え、反応を２時間続けた。ＬＣＭＳで完全に反応したことをモニターした後、有機溶媒を減圧留去し、カラムクロマトグラフィー分離により標記の化合物を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ８．１２－８．２３（ｍ，１Ｈ），７．１０－７．１６（ｍ，４Ｈ），６．６５－６．８０（ｍ，１Ｈ），５．５０－５．６０（ｍ，１Ｈ），４．７２（ｓ，１Ｈ），４．１２－４．２５（ｍ，１Ｈ），３．９４－４．１０（ｍ，１Ｈ），３．７１－３．８７（ｍ，２Ｈ），３．６２（ｓ，２Ｈ），３．４２－３．５４（ｍ，２Ｈ），３．３６－３．４１（ｍ，１Ｈ），３．１１－３．２５（ｍ，２Ｈ），２．７５－２．９４（ｍ，３Ｈ），２．６５－２．８０（ｍ，２Ｈ），２．３６－２．４８（ｍ，２Ｈ），２．０５（ｓ，３Ｈ），１．８０－２．００（ｍ，２Ｈ），１．１５－１．３６（ｍ，２Ｈ），０．８０－０．９７（ｍ，４Ｈ）．ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝５０４．３．
実施例２：（Ｒ）－７’－（（２－アセチル－２－アザスピロ［３．３］ヘプト－６－イル）アミノ）－２’－（３－（３，４－ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－イル）－２－ヒドロキシプロピル）－２’，３’－ジヒドロ－１’Ｈ－スピロ［シクロプロパン－１，４’－［２，６］ナフチリジン］－１’－オン

製造方法は、実施例１のステップ６の４－アミノピペリジン－１－カルボン酸－ｔｅｒｔ－ブチルを６－アミノ－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボン酸－ｔｅｒｔ－ブチルにに置き換えることを除いて、実施例１の製造方法と同様に、標記の化合物を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ７．７１（ｓ，１Ｈ），７．００－７．１５（ｍ，４Ｈ），６．８７（ｍ，１Ｈ），４．７８（ｓ，１Ｈ），４．１６（ｓ，１Ｈ），４．０４－４．１０（ｍ，３Ｈ），３．８８（ｍ，１Ｈ），３．７０－３．８０（ｍ，３Ｈ），３．６１－３．６３（ｍ，２Ｈ），２．８０－２．８３（ｍ，２Ｈ），２．７０－２．７２（ｍ，２Ｈ），２．１８－２．２０（ｍ，１Ｈ），１．９８－２．０２（ｍ，４Ｈ），１．７２（ｓ，３Ｈ），１．２４－１．３０（ｍ，４Ｈ），０．９４－１．０（ｍ，４Ｈ）．ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝５１６．３．
本発明の実施例１の合成方法に従って、異なる市販原料を使用して実施例３～９の化合物を合成し、これらの化合物の特徴パラメータを表１に示した。

実施例１０：（Ｒ）－７’－（（２－アセチル－２－アザスピロ［３．３］ヘプト－６－イル）アミノ）－２’－（３－（３，４－ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－イル）－２－ヒドロキシプロピル）－２’，３’－ジヒドロ－１’Ｈ－スピロ［シクロプロパン－１，４’－イソキノリン］－１’－オン

ステップ１：２－（１－シアノシクロプロピル）安息香酸メチルの製造

水素化ナトリウム（４．４６ｇ，１１１ｍｍｏｌ）を３つ口フラスコに入れ、０℃で無水Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド２０ｍＬを加え、５ｍｉｎ撹拌し、２－（シアノメチル）安息香酸メチル（７．８０ｇ，４４．６ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド溶液（８０ｍＬ）を緩やかに添加し、０℃で３０ｍｉｎ撹拌した後、１，２－ジブロモエタン（１０．０ｇ，５３．５ｍｍｏｌ）を緩やかに滴下し、滴下完了後、室温に移して２ｈ反応させた。完全に反応した後、２０ｍＬ飽和塩化アンモニウム溶液を加えてクエンチし、酢酸エチル（３０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせ、水で洗浄し（１０ｍＬ×２）、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去し、カラムクロマトグラフィー分離により標記の化合物を得た。ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝２０２．
ステップ２：２’，３’－ジヒドロ－１’Ｈ－スピロ［シクロプロパン－１，４’－イソキノリン］－１’－オンの製造

２－（１－シアノシクロプロピル）安息香酸メチル（１３．３ｇ，６６．１ｍｍｏｌ）を１５０ｍＬ無水エタノールに溶解し、六水和塩化コバルト（３１．５ｇ，１３２ｍｍｏｌ）を加え、０℃で水素化ホウ素ナトリウム（７．５４ｇ，１９８ｍｍｏｌ）をバッチで添加し、室温に移して１ｈ反応した後８０℃で２ｈ反応させた。完全に反応した後、吸引濾過し、ろ液から溶媒を減圧留去し、カラムクロマトグラフィー分離により標記の化合物を得た。ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１７４．
ステップ３：７’－ニトロ－２’，３’－ジヒドロ－１’Ｈ－スピロ［シクロプロパン－１，４’－イソキノリン］－１’－オンの製造

２’，３’－ジヒドロ－１’Ｈ－スピロ［シクロプロパン－１，４’－イソキノリン］－１’－オン（６．３３ｇ，３６．６ｍｍｏｌ）をアイスバスで冷却された濃硫酸（３０ｍＬ）に溶解し、－１０℃で硝酸カリウム（３．６９ｇ，３６．６ｍｍｏｌ）をバッチで添加し、室温に移して１ｈ反応させた。完全に反応した後、氷水に注ぎ、析出される固体があり、吸引濾過し、フィルターケーキを乾燥させ、標記の化合物を得た。ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝２１９．
ステップ４：（Ｒ）－２’－（３－（３，４－ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－イル）－２－ヒドロキシプロピル）－７’－ニトロ－２’，３’－ジヒドロ－１’Ｈ－スピロ［シクロプロパン－１，４’－イソキノリン］－１’－オンの製造

７’－ニトロ－２’，３’－ジヒドロ－１’Ｈ－スピロ［シクロプロパン－１，４’－イソキノリン］－１’－オン（３００ｍｇ，１．３８ｍｍｏｌ）を１０ｍＬ ＤＭＳＯに溶解し、炭酸セシウム（９００ｍｇ，２．７５ｍｍｏｌ）を加えた後、室温で０．５ｈ撹拌し、（Ｒ）－２－（オキシラン－２－イルメチル）－１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン（５２０ｍｇ，２．７５ｍｍｏｌ）を加え、１００℃で３ｈ反応させた。完全に反応した後、水５０ｍＬを加え、酢酸エチル（３０ｍＬ×３）で抽出し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去し、カラムクロマトグラフィー分離により標記の化合物を得た。ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝４０８．
ステップ５：（Ｒ）－７’－アミノ－２’－（３－（３，４－ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－イル）－２－ヒドロキシプロピル）－２’，３’－ジヒドロ－１’Ｈ－スピロ［シクロプロパン－１，４’－イソキノリン］－１’－オンの製造

（Ｒ）－２’－（３－（３，４－ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－イル）－２－ヒドロキシプロピル）－７’－ニトロ－２’，３’－ジヒドロ－１’Ｈ－スピロ［シクロプロパン－１，４’－イソキノリン］－１’－オン（５００ｍｇ，１．２３ｍｍｏｌ）、還元鉄粉（２７４ｍｇ，４．９ｍｍｏｌ）、塩化アンモニウム（２６０ｍｇ，４．９０ｍｍｏｌ）を、１０ｍＬエタノール及び２ｍＬ水の混合溶液に加えて、７５℃で２ｈ反応させた。完全に反応した後、濾過し、ろ液から溶媒を減圧留去し、塩化メチレン２０ｍＬを加え、濾過し、ろ液から溶媒を減圧留去して、標記の化合物を得た。ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝３７８．
ステップ６：（Ｒ）－６－（（２’－（３－（３，４－ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－イル）－２－ヒドロキシプロピル）－１’－オキソ－２’，３’－ジヒドロ－１’Ｈ－スピロ［シクロプロパン－１，４’－イソキノリン］－７’－イル）アミノ）－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボン酸－ｔｅｒｔ－ブチルの製造

（Ｒ）－７’－アミノ－２’－（３－（３，４－ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－イル）－２－ヒドロキシプロピル）－２’，３’－ジヒドロ－１’Ｈ－スピロ［シクロプロパン－１，４’－イソキノリン］－１’－オン（２００ｍｇ，０．５２６ｍｍｏｌ）、６－オキソ－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボン酸－ｔｅｒｔ－ブチル（６５．０６ｍｇ，０．５８２ｍｍｏｌ）を５ｍＬメタノールに溶解し、氷酢酸を一滴加え、室温で０．５ｈ撹拌し、アイスバスでピリジンボラン（７４．０ｍｇ，０．７９６ｍｍｏｌ）を滴下し、室温で０．５ｈ撹拌した。完全に反応した後、溶媒を減圧留去し、カラムクロマトグラフィー分離により標記の化合物を得た。ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝５７３．
ステップ７：（Ｒ）－７’－（（２－アザスピロ［３．３］ヘプト－６－イル）アミノ）－２’－（３－（３，４－ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－イル）－２－ヒドロキシプロピル）－２’，３’－ジヒドロ－１’Ｈ－スピロ［シクロプロパン－１，４’－イソキノリン］－１’－オンの製造

（Ｒ）－６－（（２’－（３－（３，４－ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－イル）－２－ヒドロキシプロピル）－１’－オキソ－２’，３’－ジヒドロ－１’Ｈ－スピロ［シクロプロパン－１，４’－イソキノリン］－７’－イル）アミノ）－２－アザスピロ［３．３］ヘプタン－２－カルボン酸－ｔｅｒｔ－ブチル（１８０ｍｇ，０．３１５ｍｍｏｌ）を１０ｍＬ塩化水素メタノール（４．０ｍｏｌ／Ｌ）溶液に溶解し、室温で０．５ｈ撹拌した。完全に反応した後、溶媒を減圧留去して、標記の化合物を得た。ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝４７３．
ステップ８：（Ｒ）－７’－（（２－アセチル－２－アザスピロ［３．３］ヘプト－６－イル）アミノ）－２’－（３－（３，４－ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－イル）－２－ヒドロキシプロピル）－２’，３’－ジヒドロ－１’Ｈ－スピロ［シクロプロパン－１，４’－イソキノリン］－１’－オンの製造

（Ｒ）－７’－（（２－アザスピロ［３．３］ヘプト－６－イル）アミノ）－２’－（３－（３，４－ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－イル）－２－ヒドロキシプロピル）－２’，３’－ジヒドロ－１’Ｈ－スピロ［シクロプロパン－１，４’－イソキノリン］－１’－オン（１４０ｍｇ，０．２９７ｍｍｏｌ）を１０ｍＬ塩化メチレンに加え、溶液が弱塩基性になるまでトリエチルアミンを加え、完全に溶解した後、無水酢酸（６１．０ｍｇ，０．５９３ｍｍｏｌ）を加え、室温で１５ｍｉｎ撹拌した。完全に反応した後、溶媒を減圧留去し、カラムクロマトグラフィー分離により標記の化合物を得た。 ^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）δ７．７４（ｓ，１Ｈ），７．３１（ｍ，１Ｈ），７．１４－７．１２（ｍ，４Ｈ），７．０６－７．００（ｍ，１Ｈ），４．２５－４．２３（ｍ，１Ｈ），４．０５－３．８３（ｍ，５Ｈ），３．７０－３．６１（ｍ，２Ｈ），３．４５－３．３７（ｍ，２Ｈ），３．０５－２．９０（ｍ，４Ｈ），２．８７－２．７２（ｍ，２Ｈ），２．０２－１．９８（ｍ，２Ｈ），１．９３（ｓ，３Ｈ），１．８４－１．８１（ｍ，１Ｈ），１．７９－１．７６（ｍ，３Ｈ），１．３４－１．０２（ｍ，４Ｈ）．ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋ＨＣＯ_２ ^－］^－＝５５９．
比較例１：（Ｓ）－６－（（１－アセチルピペリジン－４－イル）アミノ）－Ｎ－（３－（３，４－ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－イル）－２－ヒドロキシプロピル）ピリミジン－４－カルボキサミド

上記の式で表される化合物Ａは、ＷＯ２０１４／１００７１９（ＰＣＴ／ＵＳ２０１３／０７７２３５）における化合物２０８に開示された方法を参照して製造され、水素スペクトル及び質量スペクトルによって同定した。

比較例２：（Ｒ）－７’－（（１－アセチルピペリジン－４－イル）アミノ）－２’－（３－（３，４－ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－イル）－２－ヒドロキシプロピル）－２’，３’－ジヒドロ－１’Ｈ－スピロ［シクロプロパン－１，４’－イソキノリン］－１’－オン

ステップ１：２－（１－シアノシクロプロピル）安息香酸メチルの製造

水素化ナトリウム（４．４６ｇ，１１１ｍｍｏｌ）を３つ口フラスコに入れ、０℃で２０ｍＬ無水Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを加え、５ｍｉｎ撹拌し、２－（シアノメチル）安息香酸メチル（７．８０ｇ，４４．６ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド溶液（８０ｍＬ）を緩やかに添加し、０℃で３０ｍｉｎ撹拌した後、１，２－ジブロモエタン（１０．０ｇ，５３．５ｍｍｏｌ）を緩やかに滴下し、滴下完了後、室温に移して２ｈ反応させた。完全に反応した後、２０ｍＬ飽和塩化アンモニウム溶液を加えてクエンチし、酢酸エチル（３０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせ、水で洗浄し（１０ｍＬ×２）、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去し、カラムクロマトグラフィー分離により標記の化合物を得た。ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝２０２．
ステップ２：２’，３’－ジヒドロ－１’Ｈ－スピロ［シクロプロパン－１，４’－イソキノリン］－１’－オンの製造

２－（１－シアノシクロプロピル）安息香酸メチル（１３．３ｇ，６６．１ｍｍｏｌ）を１５０ｍＬ無水エタノールに溶解し、六水和塩化コバルト（３１．５ｇ，１３２ｍｍｏｌ）を加え、０℃で水素化ホウ素ナトリウム（７．５４ｇ，１９８ｍｍｏｌ）をバッチで添加し、室温に移して１ｈ反応した後８０℃で２ｈ反応させた。完全に反応した後、吸引濾過、ろ液から溶媒を減圧留去し、カラムクロマトグラフィー分離により標記の化合物を得た。ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１７４．
ステップ３：７’－ニトロ－２’，３’－ジヒドロ－１’Ｈ－スピロ［シクロプロパン－１，４’－イソキノリン］－１’－オンの製造

２’，３’－ジヒドロ－１’Ｈ－スピロ［シクロプロパン－１，４’－イソキノリン］－１’－オン（６．３３ｇ，３６．６ｍｍｏｌ）をアイスバスで冷却された濃硫酸（３０ｍＬ）に溶解し、－１０℃で硝酸カリウム（３．６９ｇ，３６．６ｍｍｏｌ）をバッチで添加し、室温に移して１ｈ反応させた。完全に反応した後、氷水に注ぎ、析出される固体があり、吸引濾過し、フィルターケーキを乾燥させ、標記の化合物を得た。ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝２１９．
ステップ４：７’－アミノ－２’，３’－ジヒドロ－１’Ｈ－スピロ［シクロプロパン－１，４’－イソキノリン］－１’－オンの製造

７’－ニトロ－２’，３’－ジヒドロ－１’Ｈ－スピロ［シクロプロパン－１，４’－イソキノリン］－１’－オン（４．５７ｇ，２１０ｍｍｏｌ）を、４０ｍＬエタノールと１０ｍＬ水の混合溶媒中に溶解し、鉄粉（２．９３ｇ，５２．４ｍｍｏｌ）、塩化アンモニウム（３．３３ｇ，６２．９ｍｍｏｌ）を加えて、８０℃で２ｈ反応させた。完全に反応した後、吸引濾過し、ろ液を減圧濃縮し、塩化メチレン（３０ｍＬ×３）で抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去し、カラムクロマトグラフィー分離により標記の化合物を得た。ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝１８９．
ステップ５：７’－（（１－アセチルピペリジン－４－イル）アミノ）－２’，３’－ジヒドロ－１’Ｈ－スピロ［シクロプロパン－１，４’－イソキノリン］－１’－オンの製造

７’－アミノ－２’，３’－ジヒドロ－１’Ｈ－スピロ［シクロプロパン－１，４’－イソキノリン］－１’－オン（１．５５ｇ，８．２４ｍｍｏｌ）、１－アセチル－４－ピペリドン（１．１６ｇ，８．２４ｍｍｏｌ）を２０ｍＬメタノールに溶解して、氷酢酸（０．４７２ｍＬ，８．２４ｍｍｏｌ）を加え、室温で２ｈ反応させた。次に、０℃でボランピリジン錯体（１．２４ｍＬ，１２．４ｍｍｏｌ）を緩やかに滴下し、室温に移して２ｈ反応させた。完全に反応した後、飽和炭酸水素ナトリウム溶液でｐＨを塩基性になるまで調整し、塩化メチレン（２０ｍＬ×３）抽出し、有機相を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去し、カラムクロマトグラフィー分離により標記の化合物を得た。ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝３１４．
ステップ６：（Ｒ）－７’－（（１－アセチルピペリジン－４－イル）アミノ）－２’－（３－（３，４－ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－イル）－２－ヒドロキシプロピル）－２’，３’－ジヒドロ－１’Ｈ－スピロ［シクロプロパン－１，４’－イソキノリン］－１’－オン（化合物Ｂ）の製造

７’－（（１－アセチルピペリジン－４－イル）アミノ）－２’，３’－ジヒドロ－１’Ｈ－スピロ［シクロプロパン－１，４’－イソキノリン］－１’－オン（１．５６ｇ，４．９８ｍｍｏｌ）を１０ｍＬ無水Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド溶液に溶解し、０℃で水素化ナトリウム（０．２９９ｇ，７．４８ｍｍｏｌ）をバッチで添加し、３０ｍｉｎ撹拌し、（Ｒ）－２－（オキシラン－２－イルメチル）－１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン（０．９４２ｇ，４．９８ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド溶液（５ｍＬ）を加え、室温に移して一晩中反応させた。完全に反応した後、８ｍＬ飽和塩化アンモニウム溶液を加えてクエンチし、溶媒を減圧留去し、カラムクロマトグラフィー分離し、ｐｒｅｐ－ＨＰＬＣ（製造液相）製造分離により標記の化合物を得た。 ^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ_６）δ７．１６－７．２３（ｍ，１Ｈ），７．０５－７．１６（ｍ，３Ｈ），６．９９－７．０５（ｍ，１Ｈ），６．６５－６．７７（ｍ，２Ｈ），５．５７（ｄ，１Ｈ），４．７５（ｓ，１Ｈ），４．１９（ｄ，１Ｈ），３．９４－４．１０（ｍ，１Ｈ），３．７１－３．８７（ｍ，２Ｈ），３．６２（ｓ，２Ｈ），３．４２－３．５４（ｍ，２Ｈ），３．３４－３．４１（ｍ，１Ｈ），３．１１－３．２５（ｍ，２Ｈ），２．７５－２．９４（ｍ，３Ｈ），２．６２－２．７４（ｍ，２Ｈ），２．３６－２．４８（ｍ，２Ｈ），２．００（ｓ，３Ｈ），１．７９－１．９６（ｍ，２Ｈ），１．１２－１．３６（ｍ，２Ｈ），０．７５－０．９７（ｍ，４Ｈ）．ＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ：［Ｍ＋Ｈ］^＋＝５０３．
実験例１ 化合物のインビトロのキナーゼ活性の評価
１．実験材料
化合物：上記の実施例で製造された本発明の化合物について、各化合物は、ＤＭＳＯを使用して１０ｍＭの母液に製造し、最終的に検出のために１０個の濃度に希釈し、最終濃度は、１００００．００ｎＭ、３３３３．３３ｎＭ、１１１１．１１ｎＭ、３７０．３７ｎＭ、１２３．４６ｎＭ、４１．１５ｎＭ、１３．７２ｎＭ、４．５７ｎＭ、１．５２ｎＭ、０．５１ｎＭである。

試薬と消耗品：ＰＲＭＴ５は、Ａｃｔｉｖｅ Ｍｏｔｉｆ社から購入し、製品番号が３１９２１であり；ポリペプチド基質Ｈ４（１－２１）Ｓ１ａｃは、ＧＬ Ｂｉｏｃｈｅｍ（Ｓｈａｎｇｈａｉ）社から購入し、製品番号が３４２０９５であり；［^３Ｈ］－ＳＡＭは、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社から購入し、製品番号がＮＥＴ１５５Ｖ００１ＭＣであり；ＳＡＭは、Ｓｉｇｍａから購入し、製品番号がＡ７００７－１００ＭＧであり；ＳＡＨは、Ｓｉｇｍａ社から購入し、製品番号がＡ９３８４－２５ＭＧであり；ＤＴＴは、Ｓａｎｇｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ（Ｓｈａｎｇｈａｉ）株式会社から購入し、製品番号がＡ６２００５８－０００５である。Ｃｏｒｎｉｎｇ－３６５７は、Ｃｏｒｎｉｎｇ社から購入し、製品番号が３６５７であり；Ｅｃｈｏ Ｑｕａｌｉｆｉｅｄ ３８４－Ｗｅｌｌは、Ｌａｂｃｙｔｅ社から購入し、製品番号がＰ－０５５２５であり；ＦｌａｓｈＰｌａｔｅは、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒから購入し、製品番号がＳＭＰ４１０Ｊ００１ＰＫである。

機器：シンチレーションカウンターは、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社から購入し、型番がＭｉｃｒｏＢｅｔａ２であり；超音波ナノリットル液体処理システムは、Ｌａｂｃｙｔｅ社から購入し、型番がＥｃｈｏ ５５０である。

２．実験方法
２．１．反応緩衝液及び反応終止液の製造：１倍の反応緩衝液体の成分は、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ ８．０であり；０．０１％Ｔｗｅｅｎ－２０であり；１ｍＭ ＤＴＴである。反応終止液成分は、１２５μＭの^３Ｈ－ＳＡＭ溶液である。

２．２ 化合物の製造
２．２．１ 化合物の希釈
化合物を１００％ＤＭＳＯに溶解して１０ｍＭの母液にした後、化合物をＥｃｈｏ３８４ウェルプレートで必要な濃度に希釈した。

２．２．２ ３８４反応プレートへの化合物の転移
Ｅｃｈｏ５５０機器を使用して、２５０ｎＬの上記の希釈された化合物をＥｃｈｏ３８４ウェルプレートから３８４ウェル反応プレートに転移した。

２．３ 酵素学反応
２．３．１ １．６７倍の酵素溶液の製造
ＰＲＭＴ５を１倍反応緩衝液に加えて、１．６７倍酵素溶液を形成した。

２．３．２ ２．５倍の基質溶液の製造
ポリペプチド基質及び［^３Ｈ］－ＳＡＭを１倍反応緩衝液に加えて、２．５倍基質溶液（最終濃度はそれぞれ１００ｎＭ及び２５０ｎＭである）を形成した。

２．３．３ ３８４ウェルプレートへの酵素溶液の添加
３８４ウェル反応プレートウェルに１５μＬの１．６７倍酵素溶液を加えた。酵素活性のないコントロールウェルについて、酵素溶液の代わりに１５μＬの１倍反応緩衝液を使用した。１０００ｒｐｍで１ｍｉｎ遠心分離し、室温で１５分間インキュベートした。

２．３．４ ３８４ウェルプレートに基質溶液を加え、酵素学反応を開始
３８４ウェル反応プレートの各ウェルに１０μＬの２．５倍基質溶液を加えた。１０００ｒｐｍで１ｍｉｎ遠心分離した。２５℃で６０分間反応させた。

２．３．５ 酵素学反応の終止
３８４ウェル反応プレートの各ウェルに５μＬの反応終止液を加えて、反応を終止した。試験プレートの各ウェルから２５μＬを取り出し、フラッシュプレートに移し、室温で１ｈ放置した。次に、０．１％のＴｗｅｅｎ－２０溶液でフラッシュプレートを３回洗浄した。

２．４ ＭｉｃｒｏＢｅｔａ ２でのデータの読み取り
２．４ 抑制率の計算
Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ ２からデータをコピーした。データを抑制率データに変換した。ここで、最大値は、ＤＭＳＯ対照の変換率を意味し、最小値は、酵素活性のない対照の変換率を意味する。抑制率（％）＝（最大値－サンプル値）／（最大値－最小値）×１００％。

データをＧｒａｐｈＰａｄにインポートし、「ｌｏｇ（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）ｖｓ．ｒｅｓｐｏｎｓｅ－－Ｖａｒｉａｂｌｅ ｓｌｏｐｅ」を使用してカーブフィッティングを行い、ＩＣ_５０を得た。一部の化合物のＩＣ_５０結果を表２に示した。

実験例２ 化合物のインビトロの細胞活性の評価
１．実験材料
被験化合物：上記の実施例で製造された本発明の化合物について、各化合物は、ＤＭＳＯを使用して１０ｍＭの母液に製造し、最終的に検出のために８個の濃度に希釈し、Ｚ－１３８細胞実験における化合物の最終濃度は３３３３３．００ｎＭ、６６６６．６０ｎＭ、１３３３．３２ｎＭ、２６６．６６ｎＭ、５３．３３ｎＭ、１０．６７ｎＭ、２．１３ｎＭ、０．４３ｎＭであり、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８及びＮＣＩ－Ｈ３５８細胞実験における化合物の最終濃度は５００００ｎＭ、１００００ｎＭ、２０００ｎＭ、４００ｎＭ、８０ｎＭ、１６ｎＭ、３．２ｎＭ、０．６４ｎＭである。

ヒトマントル細胞リンパ腫細胞Ｚ－１３８、トリプルネガティブ乳腺癌細胞ＭＤＡ－ＭＢ－４６８、ヒト非小細胞肺癌細胞ＮＣＩ－Ｈ３５８は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）から購入した。

試薬：Ｉｓｃｏｖｅ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ（ＩＭＥＭ培地）は、製品番号がＡＴＣＣ３０－２００５であり；Ｌｅｉｂｏｖｉｔｚ’ｓ Ｌ－１５Ｍｅｄｉｕｍ（Ｌ－１５培地）は、製品番号がＧｉｂｃｏ １１４１５－０６４であり；１６４０培地は、製品番号がＧｉｂｃｏ ２２４０００８９であり；馬血清は、製品番号がＧｉｂｃｏ １６０５０１２２であり；Ｆｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍは、製品番号がＧｉｂｃｏ １００９９－１４１であり；ペニシリンストレプトマイシンは、製品番号がＧｉｂｃｏ１５１４０－１２２であり；ピルビン酸ナトリウムは、製品番号がＧｉｂｃｏ １１３６００７０であり；ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙは、製品番号がＰｒｏｍｅｇａ Ｇ７５７１である。ＣＣＫ－８増殖抑制検出キットは、製品番号がＫｅｙＧＥＮ ＫＧＡ３１７である。

２．実験方法
２．１ 細胞の蘇生：
２．１．１ Ｚ－１３８細胞の蘇生：液体窒素タンクからＺ－１３８細胞凍結保存チューブを取り出し、３７℃ウォーターバスに置き、軽く振ってできるだけ早く解凍させた。解凍後、凍結保存チューブを取り出し、アルコールコットンボールで消毒した後、蓋を緩め、細胞液を遠心分離管に吸引し、１０％馬血清を含む完全培地１ｍＬを加え、均一に混合した後、遠心分離機に置き、１０００ｒｐｍで５ｍｉｎ遠心分離した。その後、上澄みを捨て、完全培地を加え、細胞が完全に吹き散らして、再懸濁するまでピペッティングを繰り返した。適切な濃度でシャーレに接種した。３７℃、５％ＣＯ_２、９５％湿度空気でＣＯ_２インキュベーター内に置き、培養した。

２．１．２ ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞の蘇生：液体窒素タンクからＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞凍結保存チューブを取り出し、３７℃ウォーターバスに置き、軽く振ってできるだけ早く解凍させた。解凍後、凍結保存チューブを取り出し、アルコールコットンボールで消毒した後、蓋を緩め、細胞液を遠心分離管に吸引し、１０％ＦＢＳを含むＬ－１５培地１ｍＬを加え、均一に混合した後、遠心分離機に置き、１０００ｒｐｍで５ｍｉｎ遠心分離した。その後、上澄みを捨て、完全培地を加え、細胞が完全に吹き散らして、再懸濁するまでピペッティングを繰り返した。適切な濃度でシャーレに接種した。３７℃、９５％湿度空気でＣＯ_２を含まないインキュベーター内に置き、培養した。

２．１．３ ＮＣＩ－Ｈ３５８細胞の蘇生：液体窒素タンクからＮＣＩ－Ｈ３５８細胞凍結保存チューブを取り出し、３７℃ウォーターバスに置き、軽く振ってできるだけ早く解凍させた。解凍後、凍結保存チューブを取り出し、アルコールコットンボールで消毒した後、蓋を緩め、細胞液を遠心分離管に吸引し、１０％ＦＢＳを含む１６４０培地１ｍＬを加え、均一に混合した後、遠心分離機に置き、１０００ｒｐｍで５ｍｉｎ遠心分離した。その後、上澄みを捨て、完全培地を加え、細胞が完全に吹き散らして、再懸濁するまでピペッティングを繰り返した。適切な濃度でシャーレに接種した。３７℃、５％ＣＯ_２、９５％湿度空気のでＣＯ_２インキュベーター内に置き、培養した。

２．２ 細胞の培養及び継代：
２．２．１ Ｚ－１３８細胞の培養及び継代：細胞を約８０－９０％に成長させ、培地（ＩＭＤＭ培地＋１０％馬血清＋１％ペニシリンストレプトマイシン）を１５ｍＬ遠心分離管に転移し、１０００ｒｐｍで５ｍｉｎ遠心分離した。上澄みを取り除き、完全培地を使用して細胞を再懸濁し、必要な密度に応じてシャーレに接種し、３７℃、５％ＣＯ_２、９５％湿度空気でインキュベーター内に置き、培養して、細胞の成長に応じて、培養液を２～３日ごとに補充するか、細胞の継代を行った。

２．２．２ ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞の培養及び継代：細胞を約８０－９０％に成長させ、培地（Ｌｅｉｂｏｖｉｔｚ’ｓ Ｌ－１５Ｍｅｄｉｕｍ培地＋１０％ＦＢＳ＋１％ペニシリンストレプトマイシン）を１５ｍＬ遠心分離管に転移し、１０００ｒｐｍで５ｍｉｎ遠心分離した。上澄みを取り除き、完全培地を使用して細胞を再懸濁し、必要な密度に応じてシャーレに接種し、３７℃、９５％湿度空気でＣＯ_２を含まないインキュベーター内に置き、培養して、細胞の成長に応じて、培養液を２～３日ごとに交換するか、細胞の継代を行った。

２．２．３ ＮＣＩ－Ｈ３５８細胞の培養及び継代：細胞を約８０－９０％に成長させ、培地（１６４０培地＋１０％ＦＢＳ＋１％ペニシリンストレプトマイシン＋１ｍＭピルビン酸ナトリウム）を１５ｍＬ遠心分離管に転移し、１０００ｒｐｍで５ｍｉｎ遠心分離した。上澄みを取り除き、完全培地を使用して細胞を再懸濁し、必要な密度に応じてシャーレに接種し、３７℃、５％ＣＯ_２、９５％湿度空気でＣＯ_２インキュベーター内に置き、培養して、細胞の成長に応じて、培養液を２～３日ごとに交換するか、細胞の継代を行った。

２．３ 実験手順：
実験の初日：
Ｚ－１３８細胞が継代した後、１０００個／ウェルの密度で完全培地に再懸濁し、９６ウェル培養プレート内に接種した；９６ウェルプレートの最も外輪の３６個のウェルには、周辺培地の蒸発が比較的に速いことにより内部プレートウェルの培養条件の差異が大きすぎるのを防ぐために、２００μＬのＰＢＳが充填した；内部の６０個のウェルの最も左端の列はブランクウェルであり、細胞を添加せず、等体積のＰＢＳで充填した；残りの５４個のウェルをマルチチャンネルピペットで細胞プレーティングし、各ウェルには対応する細胞を含む１００μＬ培地であり、プレーティング完了した後、９６ウェルプレートをタッピングして細胞を均一に懸濁させ、５％ＣＯ_２インキュベーター内に入れ、３７℃で２４ｈ培養した。

ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞が継代した後、対応する密度である２０００個／ウェルで完全培地に再懸濁し、９６ウェル培養プレート内に接種した；細胞の外側の輪には、周辺培地の蒸発が比較的に速いことにより内部プレートウェルの培養条件の差異が大きすぎるのを防ぐために、２００μＬのＰＢＳが充填した；内部の６０個のウェルの最も左端の列はブランクウェルであり、細胞を添加せず、等体積のＰＢＳで充填した；残りの５４個のウェルをマルチチャンネルピペットで細胞プレーティングし、各ウェルには１００μＬであり、ＣＯ_２を含まないインキュベーター内に入れ、３７℃で２４ｈ培養した。

ＮＣＩ－Ｈ３５８細胞が継代した後、対応する密度である１０００個／ウェルで完全培地に再懸濁し、９６ウェル培養プレート内に接種した；細胞の外側の輪には、周辺培地の蒸発が比較的に速いことにより内部プレートウェルの培養条件の差異が大きすぎるのを防ぐために、２００μＬのＰＢＳが充填した；内部の６０個のウェルの最も左端の列はブランクウェルであり、細胞を添加せず、等体積のＰＢＳで充填した；残りの５４個のウェルをマルチチャンネルピペットで細胞プレーティングし、各ウェルには１００μＬであり、５％ＣＯ_２インキュベーター内に入れ、３７℃で２４ｈ培養した。

実験の２日目：
元の培地（１００μＬ）に基づいて、Ｚ－１３８細胞に５０μＬの（３×）薬物を加え、各濃度グループに２つのレプリケートウェルを設定し、ＣＯ_２インキュベーターに入れ、７日間培養を続けた。化合物は次のように製造した：事前に化合物１－２ｍｇを秤量し、ＤＭＳＯを使用して１０ｍＭ母液を製造した。完全培地を使用して薬物を希釈し、薬物の最終濃度は、３３３３３．００ｎＭを開始最高濃度とし、１：４の勾配で６６６６．６０ｎＭ、１３３３．３２ｎＭ、２６６．６６ｎＭ、５３．３３ｎＭ、１０．６７ｎＭ、２．１３ｎＭ、０．４３ｎＭである７つの濃度勾配に順次希釈した。［１］１０ｍＭの母液を取り、１：４で対応する合計８つの濃度の薬液に希釈した（１０μＬ母液＋４０μＬ ＤＭＳＯ）；［２］５μＬ［１］の薬物を加えた４９５μＬ完全培地を取り、対応する濃度（３×）（１００倍に希釈する）に製造した。

元の培地（１００μＬ）に基づいて、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８細胞に１００μＬの（２×）薬物を加え、各濃度グループに２つのレプリケートウェルを設定し、ＣＯ_２を含まないインキュベーターに入れ、培７日間培養を続けた。化合物は次のように製造した；事前に化合物１－２ｍｇを秤量し、ＤＭＳＯを使用して１０ｍＭ母液を製造した。完全培地を使用して薬物を希釈し、薬物の最終濃度は、５００００ｎＭを開始最高濃度とし、１：４の勾配で５００００ｎＭ、１００００ｎＭ、２０００ｎＭ、４００ｎＭ、８０ｎＭ、１６ｎＭ、３．２ｎＭ、０．６４ｎＭである７つの濃度勾配に順次希釈した。［１］１０ｍＭの母液を取り、１：４で対応する合計８つの濃度の薬液に希釈した（１０μＬ母液＋４０μＬ ＤＭＳＯ）；［２］５μＬ［１］の薬物を加えた４９５μＬ完全培地を取り、対応する濃度（２×）（１００倍に希釈する）に製造した。

元の培地（１００μＬ）に基づいて、ＮＣＩ－Ｈ３５８細胞に１００μＬの（２×）薬物を加え、各濃度グループに２つのレプリケートウェルを設定し、５％ＣＯ_２インキュベーターに入れ、７日間培養を続けた。化合物は次のように製造した：事前に化合物１－２ｍｇを秤量し、ＤＭＳＯを使用して１０ｍＭ母液を製造した。完全培地を使用して薬物を希釈し、薬物の最終濃度は、５００００ｎＭを開始最高濃度とし、１：４の勾配で５００００ｎＭ、１００００ｎＭ、２０００ｎＭ、４００ｎＭ、８０ｎＭ、１６ｎＭ、３．２ｎＭ、０．６４ｎＭである７つの濃度勾配に順次希釈した。［１］１０ｍＭの母液を取り、１：４で対応する合計８つの濃度の薬液に希釈した（１０μＬ母液＋４０μＬ ＤＭＳＯ）；［２］５μＬ［１］の薬物を加えた４９５μＬ完全培地を取り、対応する濃度（２×）（１００倍に希釈する）に製造した。

実験の８日目：
Ｚ－１３８細胞を７日間薬物処理した後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｌｉｔｙ Ａｓｓａｙを３０ｍｉｎ前に取り出し、室温に平衡した。ブランクウェルのＰＢＳを吸引除去し、１５０μＬの完全培地を添加した後、７５μＬのＣｅｌｌｔｉｔｅｒ－Ｇｌｏ ｒｅａｇｅｎｔをブランクウェル、投与ウェル及びＤＭＳＯウェルに加え、室温で２ｍｉｎ振とうした。室温インキュベートを１０ｍｉｎ続けた後、各ウェルから１８０μＬづつ吸い取り、不透明な白いプレートに転移し、気泡を取り除いた後、検出化学発光シグナル、振とう、Ｒｅａｄサンプル注入検出条件は５００ｍｓである。マイクロプレートリーダーから導出されたＡ．Ｕ．値に応じて、溶媒コントロールウェルに対する各ウェルの抑制率を計算した：Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ（％）＝１００－（Ａ．Ｕ．_{実験ウェル}－Ａ．Ｕ．_{ブランクウェル}）／（Ａ．Ｕ．_{溶媒コントロールウェル}－Ａ．Ｕ．_{ブランクウェル}）×１００。異なる薬物濃度及びそれに対応する抑制率に応じて、ＧｒａｇｈＰａｄ ５．０ソフトウェアを使用して、ＩＣ_５０プロットを描き、データを分析し、最終ＩＣ_５０値を取得し、実験結果を表３に示した。

ＭＤＡ－ＭＢ－４６８及びＮＣＩ－Ｈ３５８細胞を７日間薬物処理した後、ウェル内の培地を吸引除去し、ＣＣＫ－８を加えた完全培地（ＣＣＫ－８：完全培地＝１：１０）１００μＬを添加し、第一の縦列のＰＢＳはブランクコントロールウェルとして使用し、１００μＬのＣＣＫ－８を同期的に加えた後、インキュベーターに入れ、約４０ｍｉｎ－２ｈ培養し、ＣＣＫ－８の発色の深さに応じて、最適な検出時間を決定した（ＤＭＳＯ組のＯＤ値は約１．０であるときは最適である）。ＣＣＫ－８の発色がオレンジ色に変わり、肉眼で識別できる一定の勾配が現れた後、９６ウェルプレートをインキュベーターから取り出し、室温に置いて５～１０分間平衡した；マイクロプレートリーダーソフトウェアを開き、検出パラメータを調整し、４５０ｎｍでの吸光度（ＯＤ値）を検出した；培養プレートのカバーを外し、培養プレートをプレートスロット内に直接水平に置き、読み取りを開始した；読み取りが完了した後、プログラムを保存し、データを導出して、ソフトウェア及びコンピューターを閉じた。マイクロプレートリーダーから導出されたＯＤ値に応じて、溶媒コントロールウェルに対する各ウェルの抑制率を計算した：Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ（％）＝１００－（ＯＤ_{実験ウェル}－ＯＤ_{ブランクウェル}）／（ＯＤ_{溶媒コントロールウェル}－ＯＤ_{ブランクウェル}）×１００。異なる薬物濃度及びそれに対応する抑制率に応じて、ＧｒａｇｈＰａｄ ５．０ソフトウェアを使用して、ＩＣ_５０プロットを描き、データを分析し、最終ＩＣ_５０値を取得し、実験結果を表３に示した。

上記の実験から分かるように、本発明の化合物は、ヒトマントル細胞リンパ腫細胞Ｚ－１３８、トリプルネガティブ乳腺癌細胞ＭＤＡ－ＭＢ－４６８及びヒト非小細胞肺癌細胞ＮＣＩ－Ｈ３５８に対して良好な抑制活性を示し、リンパ腫、トリプルネガティブ乳腺癌、非小細胞肺癌の治療剤になる可能性が非常に高い。

実験例３ 電気生理学的手動パッチクランプによるｈＥＲＧカリウムチャネルに対する化合物の作用の検出
ｈＥＲＧカリウムイオンチャネルは、薬物安全スクリーニングの標準である。ｈＥＲＧカリウムイオンチャネルが遮断されると、心臓中毒及び心室再分極の延長につながる可能性があり、重症の場合、突然死につながる可能性がある。ｈＥＲＧカリウムチャネルの抑制作用を有する薬物は、薬の臨床使用の潜在的な災いとなる可能性がある。したがって、ｈＥＲＧカリウムイオンチャネルに対する化合物の抑制作用が弱いと、安全性が高い。薬剤によるＱＴ間隔延長は、致命的な心室性不整脈及び突然死のリスクの増加と関連する。

１ 実験材料
主な試薬：ペニシリン－ストレプトマイシン溶液（１００×）、ＤＭＥＭ／Ｆ１２は、Ｇｉｂｃｏ社から購入；ウシ胎児血清は、ＰＡＡ社から購入；ＤＭＳＯ、ＥＧＴＡ、ＭｇＡＴＰは、Ｓｉｇｍａ社から購入；ＫＣｌ、ＣａＣｌ_２・２Ｈ_２Ｏ、ＭｇＣｌ_２・６Ｈ_２Ｏ、ＮａＣｌは、Ｓｉｎｏｐｈａｒｍ社から購入；グルコースは、Ｇｅｎｅｒａｌ－ｒｅａｇｅｎｔ社から購入；ＨＥＰＥＳは、Ｓｏｌａｒｂｉｏ社から購入；キニジンは、ａｌａｄｄｉｎ社から購入した。

機器：ＴＩ－Ｓ－ＦＬＵ顕微鏡は、Ｎｉｋｏｎ社から購入；ＳＭＺ－１４０／１４３顕微鏡は、Ｍｏｔｉｃ社から購入；ＥＰＣ－１０増幅器、Ｐａｔｃｈｍａｓｔｅｒ Ｖ２Ｘ６０は、ＨＥＫＡ社から購入；ＴＭＣ－３６防振テーブルは、ＴＭＣ社から購入；ＭＰ－２２５、ＭＰＣ－２００マニピュレータ、ＲＯＥ－２００マイクロマニピュレーター、Ｐ－９７ピペットプラーは、Ｓｕｔｔｅｒ社から購入；ＶＣ３－８ＰＰ灌流投与システムは、ＡＬＡ社から購入した。

２ 実験方法
試験溶媒の製造：細胞外液の製造（ｍＭ）：１３７ＮａＣｌ、４ＫＣｌ、１．８ＣａＣｌ_２、１ＭｇＣｌ_２、１０グルコース及び１０ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）；細胞内液の製造（ｍＭ）：１３０ＫＣｌ、１ＭｇＣｌ_２、５ＥＧＴＡ、５ＭｇＡＴＰ及び１０ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．２）；陰性対照の製造：細胞外液＋０．３％ＤＭＳＯ；陽性対照：キニジン。

化合物の処理：化合物を秤量し、ＤＭＳＯに溶解して１０ｍＭ母液を製造し、ＤＭＳＯを使用して母液を３．３、１．１、０．３７、０．１２ｍＭの濃度の二次母液になるように希釈した。それぞれ９０μＬの母液及び二次母液を取り、３０ｍＬ細胞外液中に希釈して、電気生理学的検出に使用した。化合物の最終濃度は３０、１０、３．３、１．１、０．３７μＭであり、ＤＭＳＯの最終濃度は３：１０００である。

安定したトランスフェクト細胞の培養：細胞株は、過剰発現したｈＥＲＧカリウムイオンチャネルＨＥＫ－２９３細胞に由来し、ニューヨーク大学医学部のＭｏｈａｍｅｄ Ｂｏｕｔｊｄｉｒ博士の研究室から技術サポートを提供した後、Ｃｒｅｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌと協力して、確立と検証された。細胞は、３７℃、５％ＣＯ_２インキュベーターで培養された。細胞密度がシャーレの８０％に達するとき、先ずリン酸塩緩衝液（ＰＢＳ）で前洗浄した後、トリプシン／ＥＤＴＡで細胞を２－３ｍｉｎ消化し、細胞培地を加えて消化を停止し、細胞をそっと吹き飛ばして遠心分離管に移し、１０００ｒｐｍで３ｍｉｎ遠心分離した後、上澄み液を捨て、細胞培地を加え、細胞を軽くピペッティングして均一に混合し、その後で、継代培養のためにシャーレに移して、又は細胞を円形スライドガラスの上にドリップして、シャーレに置き、細胞接着した後、実験に使用した。

細胞培地の組成：ＤＭＥＭ、１５％ウシ胎児血清及び１％１００×ペニシリン－ストレプトマイシン。

電気生理学的手動パッチクランプシステム実験：安定したトランスフェクト細胞を５０％未満の細胞密度でスライドガラスに接種し、一晩中培養した。実験用細胞を一つの倒立顕微鏡ステージに埋め込まれた約１ｍＬの浴槽に転移し、細胞外液を２．７ｍＬ／ｍｉｎの灌流速度で灌流した。５分間安定させた後、実験を開始すれば良い。膜電流は、ＨＥＫＡ ＥＰＣ－１０パッチクランプ増幅器とＰＡＴＣＨＭＡＳＴＥＲ採取システムを使用して記録した。すべての実験は室温（２２－２４℃）で行われた。実験でＰ－９７マイクロピペットプラーを使用して、電極をまっすぐにする（ＢＦ１５０－１１０－１０）。電極の内径は１－１．５ｍｍであり、内液で満ちた後の入水抵抗は２－４ＭΩである。ｈＥＲＧカリウムチャネルの電気生理学的刺激スキームは、まず、膜電圧を－８０ｍＶにクランプし、細胞に連続２ｓ、＋２０ｍＶ電圧の刺激を与え、ｈＥＲＧカリウムチャネルが活性化され、再び－５０ｍＶに再分極し、５ｓ連続して、外向きのテール電流が生成され、刺激周波数は１５ｓに１回である。電流値はテール電流のピーク値である。実験では、全細胞記録モードでチャネル電流を記録した。まず、細胞外液を灌流して（約毎分２ｍＬ）持続的に記録し、電流が安定（５分間内で電流減衰（Ｒｕｎ－Ｄｏｗｎ）は５％未満）することを待ち、この時、テール電流のピーク値が対照電流値になる。次に、試験待ちの薬物を含む細胞外液を灌流し、ｈＥＲＧ電流に対する薬物の抑制作用が安定状態に達するまで持続的に記録し、この時、テール電流のピーク値が薬剤添加後の電流値になる。安定状態の標準は、最近の３つの連続する電流記録ラインが重なっているかどうかに基づいて判断した。安定態勢に達した後、細胞外液で灌流リンスした後に、ｈＥＲＧ電流が薬物を添加した前の大きさに戻るかそれに近い場合は、灌流を継続して、他の濃度又は薬物を試験してもよい。使用した細胞が適切に応答していることを保証するため、３０μＭのキニジンを陽性対照として実験に使用した。

３ パラメータ分析及びデータ分析の統計
本研究では、対照組及び薬物処理組の電流最大値を測定し、対照組最大電流値が占す処理組最大電流値の比率を計算することにより、試験濃度でのｈＥＲＧカリウムイオンチャネルに対する試験待ちの化合物の作用效果（Ｍｅａｎ±ＳＥ）を評価した。

実験データは、ＰＡＴＣＨＭＡＳＴＥＲ Ｖ２Ｘ６０を使用して採取し、Ｏｒｉｇｉｎ ８．５ソフトウェア及びＭｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌを使用して分析及び統計を行った。実験結果は表４に示した。

上記の実験から、本発明の実施例１及び２の化合物は、ｈＥＲＧカリウムチャネルに対する抑制作用が少なく、心臓に対する毒性が低く、化合物Ｂより優れていることが分かる。

更に、化合物Ｂは、孤立した心臓の実験においてＱＴ間隔の有意な延長を示したが、本発明の実施例１及び２の化合物は、孤立した心臓の実験においてＱＴ間隔に影響がないことを示した。本発明の化合物は、より良好な心臓安全性を有する。

本発明は上記で詳細に説明されてきたが、本発明の主旨及び範囲から逸脱することなく、本発明に対して様々な修正及び変更が可能であることは当業者によって理解される。本発明の範囲は、上記の詳細な説明に限定されず、請求の範囲に属するべきである。

Claims (10)

1. 一般式（Ａ）で表される化合物又はその異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、結晶又はプロドラッグ。
   

   

   
   （ここで、Ｃｙは、複素環基から選ばれ、前記複素環基は、ハロゲン、ヒドロキシ基、アルキル基、ハロゲン化アルキル基、ヒドロキシアルキル基、アルコキシ基、ハロゲン化アルコキシ基、ヒドロキシアルコキシ基、ニトロ基、カルボキシル基、シアノ基、アミノ基、モノアルキルアミノ基、アルキルアシルアミノ基、アルキルアシル基、アルキルスルホニル基、アミノアシル基、アルキルアミノアシル基、ビスアルキルアミノ基、アルケニル基、アルキニル基、ハロゲン化アルキルアシル基、ヒドロキシアルキルアシル基、シクロアルキルアシル基、複素環基アシル基、シクロアルキル基、複素環基、アリール基、ヘテロアリール基及びオキソ基から選ばれる一つ又は複数の基で置換されてもよい。）
2. 一般式（Ａ）は、下記の一般式（Ｉ）の構造を有する請求項１に記載の化合物又はその異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、結晶又はプロドラッグ。
   

   

   
   （ここで、Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｒ^１）（Ｒ^２）及びＮ（Ｒ^３）から選ばれ、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３は、それぞれ独立に、水素、ハロゲン、ヒドロキシ基、アルキル基、ハロゲン化アルキル基、ヒドロキシアルキル基、アルコキシ基、ハロゲン化アルコキシ基、ヒドロキシアルコキシ基、ニトロ基、カルボキシル基、シアノ基、アミノ基、モノアルキルアミノ基、アルキルアシルアミノ基、アルキルアシル基、アミノアシル基、アルキルアミノアシル基、ビスアルキルアミノ基及びシクロアルキル基から選ばれ、且つＲ^１及びＲ^２は、それらに結合された炭素原子と共に複素環基を形成し、前記複素環基は、任意に、ハロゲン、ヒドロキシ基、アルキル基、ハロゲン化アルキル基、ヒドロキシアルキル基、アルコキシ基、ハロゲン化アルコキシ基、ヒドロキシアルコキシ基、ニトロ基、カルボキシル基、シアノ基、アミノ基、モノアルキルアミノ基、アルキルアシルアミノ基、アルキルアシル基、アミノアシル基、アルキルアミノアシル基、ビスアルキルアミノ基及びシクロアルキル基から選ばれる一つ又は複数の基で置換され、
   ｍは、１、２、３又は４であり、
   ｎは、０、１、２、３又は４である。）
3. Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３は、それぞれ独立に、水素、ハロゲン、ヒドロキシ基、Ｃ_１～６アルキル基、ハロゲン化Ｃ_１～６アルキル基、ヒドロキシルＣ_１～６アルキル基、Ｃ_１～６アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ_１～６アルコキシ基、ヒドロキシルＣ_１～６アルコキシ基、ニトロ基、カルボキシル基、シアノ基、アミノ基、モノＣ_１～６アルキルアミノ基、Ｃ_１～６アルキルアシルアミノ基、Ｃ_１～６アルキルアシル基、アミノアシル基、Ｃ_１～６アルキルアミノアシル基、ビスＣ_１～６アルキルアミノ基及びＣ_３～１２シクロアルキル基から選ばれる請求項２に記載の化合物又はその異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、結晶又はプロドラッグ。
4. Ｒ^１及びＲ^２は、それらに結合された炭素原子と共に３員～８員複素環基を形成し、前記複素環基は、一つ又は複数のＮ、Ｏ又はＳのヘテロ原子を更に含み、且つ前記複素環基は、任意に、ハロゲン、ヒドロキシ基、アルキル基、ハロゲン化アルキル基、ヒドロキシアルキル基、アルコキシ基、ハロゲン化アルコキシ基、ヒドロキシアルコキシ基、ニトロ基、カルボキシル基、シアノ基、アミノ基、モノアルキルアミノ基、アルキルアシルアミノ基、アルキルアシル基、アミノアシル基、アルキルアミノアシル基、ビスアルキルアミノ基及びシクロアルキル基から選ばれる一つ又は複数の基で置換される請求項２～３のいずれか一項に記載の化合物又はその異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、結晶又はプロドラッグ。
5. Ｒ^１及びＲ^２は、それらに結合された炭素原子と共に３員～６員複素環基を形成し、前記複素環基は、一つ又は複数のＮ、Ｏ又はＳのヘテロ原子を更に含み、且つ前記複素環基は、任意に、ハロゲン、ヒドロキシ基、Ｃ_１～６アルキル基、ハロゲン化Ｃ_１～６アルキル基、ヒドロキシルＣ_１～６アルキル基、Ｃ_１～６アルコキシ基、ハロゲン化Ｃ_１～６アルコキシ基、ヒドロキシルＣ_１～６アルコキシ基、ニトロ基、カルボキシル基、シアノ基、アミノ基、モノＣ_１～６アルキルアミノ基、Ｃ_１～６アルキルアシルアミノ基、Ｃ_１～６アルキルアシル基、アミノアシル基、Ｃ_１～６アルキルアミノアシル基、ビスＣ_１～６アルキルアミノ基及びＣ_３～１２シクロアルキル基から選ばれる一つ又は複数の基で置換される請求項２～４のいずれか一項に記載の化合物又はその異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、結晶又はプロドラッグ。
6. 一般式（Ｉ）は、下記の一般式（Ｉａ）の構造を有する請求項２～５のいずれか一項に記載の化合物又はその異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、結晶又はプロドラッグ。
   

   

   
   （ここで、Ｘ、ｍ及びｎは、請求項２～５に記載の定義を有する。）
7. 

   
   から選ばれる請求項２～６のいずれか一項に記載の化合物又はその異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、結晶又はプロドラッグ。
8. 前記化合物は、下記の化合物から選ばれる請求項１に記載の化合物又はその異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、結晶又はプロドラッグ。
   

   
9. 請求項１～８のいずれか一項に記載の化合物又はその異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、結晶又はプロドラッグ及び薬学的に利用可能な担体を含む薬物組成物。
10. ＰＲＭＴ５媒介性疾患を治療するための薬物の製造における、請求項１～８のいずれか一項に記載の化合物又はその異性体、薬学的に許容される塩、溶媒和物、結晶又はプロドラッグ又は請求項９に記載の薬物組成物の用途。