JP2022545553A - Ａ型インフルエンザ感染の治療のための組成物及び方法 - Google Patents

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Abstract

本開示は、Ａ型インフルエンザ感染の予防及び治療における使用のための抗体、抗体組成物、及び方法を提供する。特定の実施形態では、本開示の抗体又は抗体組成物の単回投与が、インフルエンザシーズンの全期間に亘ってＡ型インフルエンザ感染からの防御及び／又はその治療に有用である。【選択図】図３６

Description

配列表に関するステートメント
本願に関する配列表は、紙のコピーに代えてテキスト形式で提供され、参照により本明細書に援用される。配列表を含むテキストファイルの名称は、９３０４８５＿４１３ＷＯ＿ＳＥＱＵＥＮＣＥ＿ＬＩＳＴＩＮＧ．ｔｘｔである。テキストファイルは１２．２ＫＢで、２０２０年８月２６日に作成され、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して電子送信されている。
本開示は、Ａ型インフルエンザ感染の予防及び治療のための抗体組成物及び方法に関する。
インフルエンザは感染症であり、毎年流行して世界中に広がり、１年当たり約３００万～５００万の重症化例と、約２９万～６５万の呼吸器関連死に至っている（非特許文献１）。最も一般的な症状としては、突然の発熱、咳（通常、乾性）、頭痛、筋肉痛及び関節痛、重度の倦怠感（体調不良）、咽頭痛、及び鼻水が挙げられる。潜伏期間は１日間～４日間の間で様々であるが、症状は、通常、ウイルス曝露から約２日後に始まる。インフルエンザの合併症としては、肺炎、副鼻腔感染症、喘息又は心不全、敗血症、慢性基礎疾患の悪化などの現在の健康問題の悪化を含むことがある。
インフルエンザは、ネガティブセンスの一本鎖のセグメント化されたＲＮＡゲノムを含む、Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ科の抗原的及び遺伝的に多様なウイルス群であるインフルエンザウイルスによって引き起こされる。４種類のインフルエンザウイルス（Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤ）のうち、３種類（Ａ、Ｂ、及びＣ）がヒトに感染する。Ａ型インフルエンザウイルスは最も毒性の強いヒト病原体であり、最も深刻な疾患を引き起こす。Ａ型インフルエンザウイルスは、存在する主要表面タンパク質、ヘマグルチニン（ＨＡ）及びノイラミニダーゼ（ＮＡ）の様々なサブタイプに基づいて分類することができる。ヘマグルチニン（「ＨＡ」）タンパク質によって定義されるＡ型インフルエンザサブタイプは、少なくとも１８種類存在する。ＨＡは、２つのグループに分類できる。グループ１は、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ５、Ｈ６、Ｈ８、Ｈ９、Ｈ１１、Ｈ１２、Ｈ１３、Ｈ１６、及びＨ１７サブタイプを含み、グループ２は、Ｈ３、Ｈ４、Ｈ７、Ｈ１０、Ｈ１４、及びＨ１５サブタイプを含む。全てのサブタイプがトリに存在するが、殆どの場合、Ｈ１、Ｈ２、及びＨ３サブタイプは、ヒトに疾患を引き起こす。Ｈ５、Ｈ７、及びＨ９サブタイプは、ヒトに散発的な重度の感染症を引き起こしており、新たなパンデミックを引き起こす可能性がある。Ａ型インフルエンザウイルスは絶えず進化し、新たな多様体（バリアント）を発生させる（抗原連続変異と呼ばれる現象）。結果として、過去のウイルスに応答して生成された抗体は、新たなドリフトウイルスに対して不十分又は非防御的である。その結果、出現が予測されるＨ１及びＨ３ウイルスに対して毎年新たなワクチンを製造する必要があり、これは、非常にコストがかかるだけでなく、常に効率的であるとは限らないプロセスである。同様のことが、Ｈ５インフルエンザワクチンの製造にも当てはまる。
ＨＡは、Ａ型インフルエンザウイルスの主要表面タンパク質であり、感染又はワクチン接種によって誘導される中和抗体の主な標的である。ＨＡは、上気道の細胞又は赤血球など、膜上にシアル酸を有する細胞にウイルスを結合させる役割を担う。更に、ＨＡは、ｐＨが低下した後、ウイルスエンベロープのエンドソーム膜との融合を仲介する。ＨＡは、ホモ三量体の内在性膜糖タンパク質である。前記ＨＡ三量体は、３つの同一モノマーから構成され、各モノマーは、２つのジスルフィド架橋によって結合されたＨＡ１及びＨＡ２領域を有するインタクトなＨＡ０単一ポリペプチド鎖から形成される。各ＨＡ２領域は、アルファヘリックスコイルドコイル構造を採用し、主に、ＨＡの「ステム」又は「ストーク（ｓｔａｌｋ）」領域を形成する。一方、ＨＡ１領域は、α／β構造のミックスを含む小さい球状ドメインである（ＨＡの「ヘッド」領域）。球状のＨＡヘッド領域は、シアル酸受容体への結合を仲介し、一方、ＨＡステムは、その後、低ｐＨによってエンドソーム中で引き起こされるウイルス膜と細胞膜との間の融合を仲介する。免疫優勢のＨＡ球状ヘッドドメインは高い可塑性を有し、異なる抗原部位が一定の抗原連続変異を受けるが、ＨＡステム領域は、サブタイプ間で比較的保存されている。現在のインフルエンザワクチンは、主に、ＨＡのステム領域よりも速く進化する免疫優勢で可変のＨＡヘッド領域に対する免疫応答を誘導する（非特許文献２）。したがって、特定のインフルエンザワクチンは、通常、数年以内の防御しか与えず、インフルエンザワクチンの毎年の再開発が必要とされる。
これらの問題点を克服するために、最近、前記ＨＡステムの保存部位を標的とする新たなクラスのインフルエンザ中和抗体が、インフルエンザウイルス治療薬として開発された。ＨＡの前記ステム領域を標的とするこれらの抗体は、通常、ＨＡの前記ヘッド領域を標的とする抗体と比較してより広い中和作用を示す。広く中和するＡ型インフルエンザ抗体に関する概要は、非特許文献３に記載されている。Ｏｋｕｎｏらは、インフルエンザウイルスＡ／Ｏｋｕｄａ／５７（Ｈ２Ｎ２）でマウスを免疫し、ＨＡ２の保存された配座エピトープに結合し、グループ１のＨ２、Ｈ１、及びＨ５サブタイプＡ型インフルエンザウイルスを、動物モデルにおいてインビトロとインビボで中和するモノクローナル抗体（Ｃ１７９）を単離した（非特許文献４～６）。ＨＡステム領域標的抗体の更なる例としては、ＣＲ６２６１（非特許文献７及び非特許文献８）、Ｆ１０（非特許文献９）、ＣＲ８０２０（非特許文献１０）、ＦＩ６（非特許文献１１）、及びＣＲ９１１４（非特許文献１２）が挙げられる。
しかし、グループ１とグループ２の両サブタイプの前記ＨＡステム領域と反応できる抗体は非常に稀であり、通常は、全てのサブタイプを完全にカバーしている訳ではない。最近、抗体ＭＥＤＩ８８５２が報告され、これは、グループ１及びグループ２のＡ型インフルエンザウイルスを中和し、８０年を超える抗原進化の代表的な一連のウイルスを中和することができる（非特許文献１３及び非特許文献１４）。ＭＥＤＩ８８５２は、他の構造的に特徴付けられたステム反応性中和抗体とは著しく異なり、高度に保存されたエピトープに結合することが示された（非特許文献１３）。
ＷＨＯ， Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ （Ｓｅａｓｏｎａｌ） Ｆａｃｔ ｓｈｅｅｔ， Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ６， ２０１８ Ｋｉｒｋｐａｔｒｉｃｋ Ｅ， Ｑｉｕ Ｘ， Ｗｉｌｓｏｎ ＰＣ， Ｂａｈｌ Ｊ， Ｋｒａｍｍｅｒ Ｆ． Ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ ｈｅａｄ ｅｖｏｌｖｅｓ ｆａｓｔｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｅ ｓｔａｌｋ ｄｏｍａｉｎ． Ｓｃｉ Ｒｅｐ． ２０１８ Ｊｕｌ １１；８（１）：１０４３２ Ｃｏｒｔｉ Ｄ． ａｎｄ Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａ Ａ．， Ｂｒｏａｄｌｙ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ａｎｔｉｖｉｒａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ． Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２０１３；３１：７０５－７４２ Ｏｋｕｎｏ ｅｔ ａｌ．，１９９３ Ｓｍｉｒｎｏｖ ｅｔ ａｌ．， １９９９ Ｓｍｉｒｎｏｖ ｅｔ ａｌ．， ２０００ Ｔｈｒｏｓｂｙ Ｍ， ｖａｎ ｄｅｎ Ｂｒｉｎｋ Ｅ， Ｊｏｎｇｅｎｅｅｌｅｎ Ｍ， Ｐｏｏｎ ＬＬＭ， Ａｌａｒｄ Ｐ， Ｃｏｒｎｅｌｉｓｓｅｎ Ｌ， ｅｔ ａｌ． （２００８） Ｈｅｔｅｒｏｓｕｂｔｙｐｉｃ Ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｃｒｏｓｓ－Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ａｇａｉｎｓｔ Ｈ５Ｎ１ ａｎｄ Ｈ１Ｎ１ Ｒｅｃｏｖｅｒｅｄ ｆｒｏｍ Ｈｕｍａｎ ＩｇＭ＋ Ｍｅｍｏｒｙ Ｂ Ｃｅｌｌｓ． ＰＬｏＳ ＯＮＥ ３（１２）： ｅ３９４２． ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．０００３９４２ Ｆｒｉｅｓｅｎ ＲＨＥ， Ｋｏｕｄｓｔａａｌ Ｗ， Ｋｏｌｄｉｊｋ ＭＨ， Ｗｅｖｅｒｌｉｎｇ ＧＪ， Ｂｒａｋｅｎｈｏｆｆ ＪＰＪ， Ｌｅｎｔｉｎｇ ＰＪ， ｅｔ ａｌ． （２０１０） Ｎｅｗ Ｃｌａｓｓ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ Ｓｅｖｅｒｅ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ： Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｉｎ Ｆｅｒｒｅｔｓ． ＰＬｏＳ ＯＮＥ ５（２）： ｅ９１０６． ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．０００９１０６ Ｓｕｉ Ｊ， Ｈｗａｎｇ ＷＣ， Ｐｅｒｅｚ Ｓ， Ｗｅｉ Ｇ， Ａｉｒｄ Ｄ， Ｃｈｅｎ ＬＭ， Ｓａｎｔｅｌｌｉ Ｅ， Ｓｔｅｃ Ｂ， Ｃａｄｗｅｌｌ Ｇ， Ａｌｉ Ｍ， Ｗａｎ Ｈ， Ｍｕｒａｋａｍｉ Ａ， Ｙａｍｍａｎｕｒｕ Ａ， Ｈａｎ Ｔ， Ｃｏｘ ＮＪ， Ｂａｎｋｓｔｏｎ ＬＡ， Ｄｏｎｉｓ ＲＯ， Ｌｉｄｄｉｎｇｔｏｎ ＲＣ， Ｍａｒａｓｃｏ ＷＡ （Ｍａｒｃｈ ２００９）． "Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｂａｓｅｓ ｆｏｒ ｂｒｏａｄ－ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａｖｉａｎ ａｎｄ ｈｕｍａｎ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ ｖｉｒｕｓｅｓ"． Ｎａｔｕｒｅ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ＆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ． １６ （３）： ２６５－７３． ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｓｍｂ．１５６６ Ｅｋｉｅｒｔ ＤＣ， Ｆｒｉｅｓｅｎ ＲＨＥ， Ｂｈａｂｈａ Ｇ， Ｋｗａｋｓ Ｔ， Ｊｏｎｇｅｎｅｅｌｅｎ Ｍ， ｅｔ ａｌ． ２０１１． Ａ ｈｉｇｈｌｙ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ｅｐｉｔｏｐｅ ｏｎ ｇｒｏｕｐ ２ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ ｖｉｒｕｓｅｓ． Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３３（６０４４）：８４３－５０ Ｃｏｒｔｉ Ｄ， Ｖｏｓｓ Ｊ， Ｇａｍｂｌｉｎ ＳＪ， Ｃｏｄｏｎｉ Ｇ， Ｍａｃａｇｎｏ Ａ， ｅｔ ａｌ． ２０１１． Ａ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｐｌａｓｍａ ｃｅｌｌｓ ｔｈａｔ ｂｉｎｄｓ ｔｏ ｇｒｏｕｐ １ ａｎｄ ｇｒｏｕｐ ２ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎｓ． Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３３（６０４４）：８５０－５６ Ｄｒｅｙｆｕｓ Ｃ， Ｌａｕｒｓｅｎ ＮＳ， Ｋｗａｋｓ Ｔ， Ｚｕｉｊｄｇｅｅｓｔ Ｄ， Ｋｈａｙａｔ Ｒ， ｅｔ ａｌ． ２０１２． Ｈｉｇｈｌｙ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｐｉｔｏｐｅｓ ｏｎ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｂ ｖｉｒｕｓｅｓ． Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３７（６１００）：１３４３－４８ Ｋａｌｌｅｗａａｒｄ ＮＬ， Ｃｏｒｔｉ Ｄ， Ｃｏｌｌｉｎｓ ＰＪ， ｅｔ ａｌ． Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｒｅｃｏｇｎｉｚｉｎｇ Ａｌｌ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ Ｓｕｂｔｙｐｅｓ． Ｃｅｌｌ． ２０１６；１６６（３）：５９６－６０８ Ｐａｕｌｅｓ， Ｃ． Ｉ． ｅｔ ａｌ． Ｔｈｅ Ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ Ａ Ｓｔｅｍ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ＭＥＤＩ８８５２ Ｐｒｅｖｅｎｔｓ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｌｉｍｉｔｓ Ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｐａｎｄｅｍｉｃ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｖｉｒｕｓｅｓ． Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ ２１６， ３５６－３６５， ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０９３／ｉｎｆｄｉｓ／ｊｉｘ２９２ （２０１７）
不断の努力にもかかわらず、Ａ型インフルエンザの予防及び／又は治療に使用できる抗体組成物及び方法に対する必要性が依然として存在する。
詳細な説明
本開示は、Ａ型インフルエンザを中和する抗体を含む医薬組成物及びそれらの組成物を使用する方法を提供する。特定の実施形態では、前記医薬組成物は、Ａ型インフルエンザを中和し、単回投与後少なくとも１０週間、少なくとも１５週間、及び少なくとも２０週間から選択される期間、対象における全身性曝露を維持する抗体を含む。具体的な実施形態では、前記抗体及び前記医薬組成物は、予防的に有効な量で投与した場合、対象によって十分に忍容される。他の実施形態では、前記抗体及び前記医薬組成物は、治療的に有効な量で投与した場合、対象によって十分に忍容される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、Ａ型インフルエンザによる感染リスクのある対象に本明細書に係る抗体組成物を投与することを含む。更に他の実施形態では、本明細書に記載の方法は、本明細書に係る抗体組成物をＡ型インフルエンザに感染した対象に投与することを含む。
以下、Ａ型インフルエンザを中和する抗体、これらの抗体を含む医薬組成物、及び係る組成物を使用するための方法について詳細に説明するが、本開示は、本明細書に記載の特定の方法論、プロトコル、及び試薬に、これらは変わる可能性があるので、限定されないことを理解されたい。また、本明細書で使用する用語は、本開示の範囲を限定するものではないことを理解されたい。特段の断りがない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、当業者によって通常理解されるのと同じ意味を有する。
以下に、本開示の態様について説明する。特定の実施形態が提供されるが、本開示の実施形態を任意の方式で任意の数を組み合わせて更なる実施形態を生み出すことができることを理解すべきである。様々に記載される実施例及び実施形態は、本開示を明示的に記載される実施形態に限定することを意図するものではない。この記載は、明示的に記載された実施形態を任意の開示された主題と組み合わせる実施形態をサポート及び包含すると理解すべきである。更に、特に指定しない限り、本願における全ての記載された主題の任意の入れ換え及び組合せが本願の記載によって開示されるとみなすべきである。
本開示全体を通して、特に必要としない限り、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」並びに「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」及び「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」（又は「有している（ｈａｖｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」など）などの変形は、指定されている部材、比、整数（必要に応じて、その一部、例えば、整数の１０分の１及び１００分の１などを含む）、濃度、又は工程を含むが、任意の他の指定されていない部材、整数、濃度、又は工程を除外するものではないことを意味すると理解される。
用語「本質的にからなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」は、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」と等価ではなく、請求項の特定の材料又は工程に言及する、又は特許請求された主題の基本特性に大きく影響しないないものに言及する。例えば、ドメイン、領域、モジュール、又はタンパク質のアミノ酸配列が、合計して、ドメイン、領域、モジュール、又はタンパク質の長さの最大２０％（例えば、最大１５％、１０％、８％、６％、５％、４％、３％、２％、又は１％）に寄与し、ドメイン、領域、モジュール、又はタンパク質の活性（例えば、結合タンパク質の標的結合親和性）に実質的に影響を与えない（即ち、活性を５０％超低下させない、例えば、４０％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、又は１％以下の低下）伸長、欠失、変異、又はそれらの組合せ（例えば、アミノ末端又はカルボキシ末端又はドメイン間のアミノ酸）を含む場合、タンパク質ドメイン、領域、若しくはモジュール（例えば、結合ドメイン）又はタンパク質は、特定のアミノ酸配列から「本質的にからなる」。
用語「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔ ｏｆ）」は、任意の他の指定されていない部材、整数、又は工程が除外される、用語「含む」の特定の実施形態である。本開示において、用語「含む」は、用語「からなる」を包含する。したがって、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」及び「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」を包含し、例えば、Ｘを「含む」組成物は、Ｘのみからなっていてもよく、追加の何かを含んでいてもよい（例えば、Ｘ＋Ｙ）。
更に、本明細書に記載される構造及び置換基の様々な組合せに由来する個々の化合物又は化合物群は、各化合物又は化合物群が個々に示されているのと同程度に本願によって開示されることが理解される。したがって、特定の構造又は特定の置換基の選択は、本開示の範囲内である。
用語「ａ」及び「ａｎ」及び「ｔｈｅ」、並びに本開示の説明（特許請求の範囲を含む）において使用される同様の参照は、本明細書に指定されているか又は文脈上明示的に否定されていない限り、単数及び複数の両方を網羅すると解釈すべきである。本明細書における値の範囲の列挙は、単に、範囲内の各別個の値を個別に参照する簡易的な方法として機能することを意図する。本明細書において特に指定しない限り、各個別の値は、本明細書に個々に列挙されているかのように明細書に組み込まれる。明細書中のいずれの言語も、本明細書に開示される主題の実施に必須の任意の請求されていない要素を示すと解釈されるべきではない。
用語「実質的に」は、「完全に」を除外するものではなく、例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、Ｙを完全に含んでいなくてもよい。特定の実施形態において、「実質的に」は、レファレンス組成物、方法、又は使用と比較した、本開示の組成物、方法、又は使用の所定の量、効果、又は活性を意味し、前記レファレンス組成物、方法、又は使用の量、効果、又は活性の５０％以下、例えば、４０％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、又は１％以下の量、効果、又は活性の減少を記述する。
数値ｘに関連する用語「約」は、ｘ±１０％、例えば、ｘ±５％、又はｘ±７％、又はｘ±１０％、又はｘ±１２％、又はｘ±１５％、又はｘ±２０％を意味する。例えば、特定の実施形態では、「約」は、記載された範囲、値、又は構造の±２０％を意味する。
用語「疾患」は、本明細書で使用するとき、ヒト若しくは動物の身体又は正常な機能が損なわれているその部分のうちの１つの異常な状態を全て反映し、典型的には、識別可能な徴候及び症状によって顕在化し、且つヒト又は動物の寿命又は生活の質を低減するという点で、用語「疾病」及び（病状のような）「状態」と略同義であることを意図し、互換的に使用される。
本明細書で使用するとき、用語「治療的に有効な」は、対象に利益を提供するのに十分である、本明細書に記載の医薬組成物又は抗体の性質又は量を意味する。本開示の文脈では、対象にもたらされる利益は、Ａ型インフルエンザ感染の治療である。本明細書で使用するとき、用語「治療」は、防止、予防、弱毒化、軽減、及び療法を含む。治療の利益は、臨床的成果の改善；感染に関する症状の軽減又は緩和；症状の発生の減少；生活の質の向上；無病状態の延長；感染の予防；感染の程度及び／又は期間の減少；病状の安定化；疾患進行の遅延；寛解；生存；長期生存；又はそれらの任意の組合せを含む。したがって、特定の実施形態では、「治療的に有効な」は、Ａ型インフルエンザに感染した対象の治療、並びに対象におけるＡ型インフルエンザによる感染の防止又は予防の両方を包含する。意図された治療が予防である場合、用語「治療的に有効な」及び「予防的に有効な」は、互換的に使用することができる。用語「対象」又は「患者」は、本明細書では、Ａ型インフルエンザによる感染に感受性のある、又は既にＡ型インフルエンザに感染しているヒト対象を意味するために互換的に使用される。
特定の実施形態では、Ａ型インフルエンザウイルスは、Ｈ１Ｎ１ウイルス、Ｈ３Ｎ２ウイルス、又はその両方を含む。
用量は、しばしば、体重（即ち、対象の体重）に関連して表される。したがって、［ｇ、ｍｇ、又は他の単位］／ｋｇ（又はｇ、ｍｇなど）として表される用量は、たとえ用語「体重」が明示的に言及されていないとしても、「体重１ｋｇ（又はｇ、ｍｇなど）当たりの」［ｇ、ｍｇ、又は他の単位］を意味することができる。
用語「特異的結合」及び同様の用語は、通常、非特異的な結合を含まない。
本明細書で使用するとき、用語「抗体」は、本開示に係る特徴的な性質が保持されている限り、全抗体（ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも２本の重鎖（Ｈ鎖）及び２本の軽鎖（Ｌ鎖）を含む（ただし、軽鎖を欠く重鎖抗体も用語「抗体」に包含されることが理解される））、インタクトな抗体によって認識される抗原標的分子に結合する能力を有する又は保持する抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、又はＦ（ａｂ’）２断片などの）、ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、組換え抗体、及び遺伝子操作若しくは編集又はその他の操作若しくは編集がされた抗体（例えば、多様体又は変異体抗体、イントラボディ、ペプチボディ、キメラ抗体、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、及びヘテロコンジュゲート抗体、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体、ダイアボディ、トリアボディ、及びテトラボディ、タンデムジ－ｓｃＦｖ、タンデムトリ－ｓｃＦｖ、及び当技術分野で知られた他の抗体形態）を含むがこれらに限定されない様々な形態の抗体を包含する。したがって、本明細書における用語「抗体」は、最も広い意味で使用され、インタクトな抗体及びその機能的（抗原結合性）抗体断片（例えば、断片抗原結合（Ｆａｂ）断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆａｂ’断片、Ｆｖ断片、組換えＩｇＧ（ｒＩｇＧ）断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む一本鎖抗体断片、及び単一ドメイン抗体（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｄＦｖ、ナノボディ））を含むポリクローナル及びモノクローナル抗体を含む。いくつかの実施形態では、前記抗体はヒト抗体である。いくつかの実施形態では、前記抗体はモノクローナル抗体である。例えば、前記抗体はヒトモノクローナル抗体である。特段の断りがない限り、用語「抗体」は、その機能的抗体断片（即ち、抗原に結合する能力を保持する抗体の抗原結合断片を含む又はからなる）を包含すると理解される。この用語はまた、ＩｇＧ及びそのサブクラス（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ４）、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、及びＩｇＤを含む任意のクラス又はそのサブクラスの抗体を含むインタクト又は完全長の抗体を包含する。
したがって、本開示の抗体は、任意のアイソタイプ（例えば、それぞれα、γ、及びμ重鎖とも称されるＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ）であることができる。例えば、特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧタイプである。ＩｇＧアイソタイプにおいて、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４サブクラス、例えば、ＩｇＧ１であることができる。いくつかの実施形態では、抗体は、２つの異なるアイソタイプに由来する（例えば、定常ドメインアミノ酸配列の交換による）アミノ酸配列、例えば、ＩｇＡ抗体に由来するアミノ酸配列とＩｇＧ抗体に由来するアミノ酸配列とを含む定常領域を含む抗体を含む。本開示の抗体は、κ又はλ軽鎖を含むことができる。いくつかの実施形態では、前記抗体は、ＩｇＧ１タイプであり、κ軽鎖を含む。
ヒト抗体は知られている（ｖａｎ Ｄｉｊｋ，Ｍ．Ａ．，ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｊ．Ｇ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．５（２００１）３６８－３７４）。ヒト抗体は、免疫時に、内因性免疫グロブリンが産生されていなくてもヒト抗体の完全レパートリー又はセレクションを産生することができるトランスジェニック動物（例えば、マウス）においても産生され得る。係る生殖系列変異体マウスにヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイを移植すると、抗原接種時にヒト抗体が産生される（例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０（１９９３）２５５１－２５５５；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６２（１９９３）２５５－２５８；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｙｅａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．７（１９９３）３３４０を参照）。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリでも産生され得る（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ，Ｈ．Ｒ．，ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｇ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７（１９９２）３８１－３８８；Ｍａｒｋｓ，Ｊ．Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２（１９９１）５８１－５９７）。Ｃｏｌｅら及びＢｏｅｒｎｅｒらの技術も、ヒトモノクローナル抗体を調製するために利用可能である（Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）；及びＢｏｅｒｎｅｒ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（１９９１）８６－９５）。いくつかの実施形態では、ヒトモノクローナル抗体は、Ｔｒａｇｇｉａｉ Ｅ，Ｂｅｃｋｅｒ Ｓ，Ｓｕｂｂａｒａｏ Ｋ，Ｋｏｌｅｓｎｉｋｏｖａ Ｌ，Ｕｅｍａｔｓｕ Ｙ，Ｇｉｓｍｏｎｄｏ ＭＲ，Ｍｕｒｐｈｙ ＢＲ，Ｒａｐｐｕｏｌｉ Ｒ，Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａ Ａ．（２００４）：Ａｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｍｅｔｈｏｄ ｔｏ ｍａｋｅ ｈｕｍａｎ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｒｏｍ ｍｅｍｏｒｙ Ｂ ｃｅｌｌｓ：ｐｏｔｅｎｔ ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ＳＡＲＳ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ．Ｎａｔ Ｍｅｄ．１０（８）：８７１－５に記載の通り、改良されたＥＢＶ－Ｂ細胞の不死化を使用することによって調製される。
本明細書で使用するとき、用語「可変領域」（例えば、軽鎖の可変領域（ＶＬ）、重鎖の可変領域（ＶＨ））は、抗体の抗原に対する結合に直接関与する抗体軽鎖又は抗体重鎖の可変領域を意味する。換言すれば、用語「ＶＬ」又は「ＶＬ」及び「ＶＨ」又は「ＶＨ」は、それぞれ、抗体軽鎖及び抗体重鎖の可変結合領域を意味する。
本明細書に記載の医薬組成物及び方法に含まれる抗体は、典型的には、重鎖（又は重鎖可変領域）上に（少なくとも）３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）と、軽鎖（又は軽鎖可変領域）上に（少なくとも）３つのＣＤＲとを含む。相補性決定領域（ＣＤＲ）は、超可変領域（「ＨＶＲ」）である。ＣＤＲは、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインに存在するＨＶＲと同義である。典型的には、抗体の重鎖のＣＤＲと、同族の軽鎖のＣＤＲとが一緒になって抗原結合部位を形成する（一般に、一緒になって、抗体の抗原特異性及び／又は結合親和性を与える）。通常、３つのＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）は、可変ドメインのフレームワーク配列によって分離される。一般に、抗原結合部位ごとに６つのＣＤＲが存在する（重鎖：ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３；軽鎖：ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３）。例えば、２つの抗原結合部位を含む単一の抗体分子は、１２個のＣＤＲを含む。重鎖及び／又は軽鎖上のＣＤＲは、フレームワーク領域によって一次アミノ酸配列で分離されることがあり、フレームワーク領域（ＦＲ）は、ＣＤＲより可変性が少ない（即ち、ある抗体から別の抗体に対して（例えば、ある抗体から、１以上の同一の対立遺伝子によってコードされる別の抗体に対して））可変ドメイン内の領域である。例えば、鎖（又は、それぞれ各鎖）は、３つのＣＤＲで分けられた４つのフレームワーク領域で構成され得る。特定の実施形態では、抗体ＶＨは、以下のように配置された４つのＦＲと３つのＣＤＲとを含む：ＦＲ１－ＣＤＲＨ１－ＦＲ２－ＣＤＲＨ２－ＦＲ３－ＣＤＲＨ３－ＦＲ４。抗体ＶＬは、以下のように配置された４つのＦＲと３つのＣＤＲとを含む：ＦＲ１－ＣＤＲＬ１－ＦＲ２－ＣＤＲＬ２－ＦＲ３－ＣＤＲＬ３－ＦＲ４。一般に、ＶＨ及びＶＬは、それぞれのＣＤＲを介して、一緒に抗原結合部位を形成するが、いくつかの場合には、結合部位は、１つ、２つ、３つ、４つ、又は５つのＣＤＲによって形成され得る。
重鎖上の３つの異なるＣＤＲ及び軽鎖上の３つの異なるＣＤＲを含む、本開示の例示的な抗体の重鎖及び軽鎖の配列を決定した。前記ＣＤＲのアミノ酸の位置は、ＩＭＧＴナンバリングシステム（ＩＭＧＴ： ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／； ｃｆ． Ｌｅｆｒａｎｃ， Ｍ．－Ｐ． ｅｔ ａｌ． （２００９） Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ３７， Ｄ１００６－Ｄ１０１２）にしたがって定義される。
いくつかの実施形態では、前記抗体は、他のポリペプチドを実質的に含まない医薬組成物、例えば、前記医薬組成物の９０（重量）％未満、又は６０％未満、又は５０％未満が他のポリペプチドで構成される医薬組成物中に存在する。
本開示に係る抗体は、ヒト及び／又は非ヒト（又は異種）宿主、例えば、マウスにおいて免疫原性であり得る。例えば、前記抗体は、非ヒト宿主では免疫原性であるが、ヒト宿主では免疫原性でないイディオトープを有し得る。ヒトで使用するための本開示の抗体は、マウス、ヤギ、ウサギ、ラット、非霊長類哺乳動物などの宿主から容易には単離することができず、且つ一般にヒト化によって又はゼノマウスから入手することができないものを含む。特定の実施形態では、本開示に係る抗体は、ヒトにおいて非免疫原性である、又は実質的に非免疫原性である。
本明細書で使用するとき、「中和抗体」は、宿主において感染を開始及び／又永続化させる病原体の能力を中和する、即ち、予防、阻害、低減、妨害、又は干渉することができるものである。用語「中和抗体」及び「中和する抗体」は、互換的に使用される。
本明細書で使用するとき、用語「変異」は、レファレンス配列、例えば、対応するゲノム配列と比較した、核酸配列及び／又はアミノ酸配列の変化に関する。例えばゲノム配列と比較した変異は、（自然界に存在する）体細胞変異、自然変異、例えば、酵素、化学物質、若しくは放射線によって誘導される誘導変異、又は部位特異的変異誘発（核酸配列及び／又はアミノ酸配列を特異的且つ故意に変化させるための分子生物学的方法）によって得られる変異であってよい。したがって、用語「変異」又は「変異する」とは、例えば、核酸配列又はアミノ酸配列において変異を物理的に引き起こすことも含むと理解されるものとする。変異は、１以上のヌクレオチド又はアミノ酸の置換、欠失、及び挿入に加えて、いくつかの連続するヌクレオチド又はアミノ酸の逆位も含む。アミノ酸配列に変異を生じさせるため、（組換え）変異型ポリペプチドを発現させるために、前記アミノ酸配列をコードしているヌクレオチド配列に変異を導入してよい。変異は、例えば、あるアミノ酸をコードしている核酸分子のコドンを、例えば部位特異的変異誘発によって、変化させて異なるアミノ酸をコードしているコドンを生じさせることにより、又は核酸分子の１以上のヌクレオチドを変異させる必要無しに、ポリペプチドをコードしている核酸分子のヌクレオチド配列を識別し、ポリペプチドの多様体をコードしているヌクレオチド配列を含む核酸分子の合成を設計することによって、配列多様体を合成することにより行ってよい。
いくつかの文献が、本開示において参照されている。本明細書中で参照した各文献（全ての特許、特許出願、科学刊行物、製造者の仕様書、説明書などを含む）は、上記又は下記のいずれかにかかわらず、参照によりその全体を本明細書に援用する。本明細書中のいかなるものも、本開示が、先行する開示によってそのような開示よりも先行する資格がないと認めるものとして解釈されるものではない。
本開示は、本明細書に記載の特定の方法論、プロトコル、及び試薬に、これらは変わる可能性があるので、限定されないことを理解されたい。また、本明細書で使用する用語は、特定の実施形態を説明するためにのみ用いられるのであって、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される本開示の範囲を限定するものではないことを理解されたい。特段の断りがない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、当業者によって通常理解されるのと同じ意味を有する。
抗体
本明細書に記載の医薬組成物及び方法における使用のための抗体は、Ａ型インフルエンザウイルスを中和する。更に、本開示の抗体は、十分に忍容される用量で対象に投与されると、長期間に亘って全身性曝露を維持するインビボ半減期を示す。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体は、Ａ型インフルエンザを中和し、単回投与後少なくとも１０週間、少なくとも１５週間、及び少なくとも２０週間から選択される期間、対象における全身性曝露を維持する。具体的な実施形態では、比較対象物質又はレファレンス抗体と比較したときに、本開示の医薬組成物及び方法に含まれる抗体は、前記比較対象物質又はレファレンス抗体と比較して抗体の血漿濃度が類似しているにもかかわらず、効力の上昇を示す。
本明細書に記載される医薬組成物及び方法における使用のための抗体は、Ａ型インフルエンザウイルスのヘマグルチニンに結合することにより、Ａ型インフルエンザウイルスの感染を中和することができる。特定の実施形態では、本開示に係る抗体は、ＭＥＤＩ８８５２と同一の、Ａ型インフルエンザウイルスヘマグルチニン（ＩＡＶ ＨＡ）ステム領域のエピトープに結合する（Ｋａｌｌｅｗａａｒｄ ＮＬ， Ｃｏｒｔｉ Ｄ， Ｃｏｌｌｉｎｓ ＰＪ， ｅｔ ａｌ． Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｒｅｃｏｇｎｉｚｉｎｇ Ａｌｌ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ Ｓｕｂｔｙｐｅｓ． Ｃｅｌｌ． ２０１６；１６６（３）：５９６－６０８）。これにより、あらゆるＡ型インフルエンザサブタイプの様々なＡ型インフルエンザ血清型に対して広い防御を提供する。
更に、本開示の医薬組成物及び方法における使用に好適な抗体は、重鎖の定常領域内（ＣＨ３領域内）に２つの変異Ｍ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓを含む。この文脈において、アミノ酸の位置は、当技術分野で認められているＥＵナンバリングシステムにしたがってナンバリングされている。ＥＵインデックス又はＫａｂａｔ若しくはＥＵナンバリングにおけるＥＵインデックスは、ＥＵ抗体のナンバリングを意味する（Ｅｄｅｌｍａｎ ＧＭ， Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ＢＡ， Ｇａｌｌ ＷＥ， Ｇｏｔｔｌｉｅｂ ＰＤ， Ｒｕｔｉｓｈａｕｓｅｒ Ｕ， Ｗａｘｄａｌ ＭＪ． Ｔｈｅ ｃｏｖａｌｅｎｔ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ａｎ ｅｎｔｉｒｅ ｇａｍｍａＧ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ． １９６９；６３（１）：７８－８５； Ｋａｂａｔ Ｅ．Ａ．， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ （Ｕ．Ｓ．） Ｏｆｆｉｃｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｄｉｒｅｃｔｏｒ， “Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”， ５ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ， ＭＤ ： Ｕ．Ｓ． Ｄｅｐｔ． ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ， Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， １９９１、この全体を参照により本明細書に援用する）。
実験室でウイルス感染性（又は「中和」）を試験及び定量するために、当業者は、様々な標準的な「中和アッセイ」を認識している。中和アッセイの場合、動物ウイルスは通常、細胞及び／又は細胞株で増殖させる。例えば、中和アッセイにおいて、培養細胞を、試験対象の抗体の存在下（又は非存在下）で、一定量のＡ型インフルエンザウイルス（ＩＡＶ）と共にインキュベートすることができる。読み取りとして、例えば、フローサイトメトリーを使用することができる。或いは、他の読み取りも考えられる。
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、ヒト抗体である。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、モノクローナル抗体である。例えば、本開示の抗体は、ヒトのモノクローナル抗体である。
本開示の抗体は、任意のアイソタイプ（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、即ち、α、γ、又はμ重鎖）であることができる。例えば、前記抗体は、ＩｇＧ型である。ＩｇＧアイソタイプにおいて、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４サブクラス、例えば、ＩｇＧ１であり得る。開示の抗体は、κ又はλ軽鎖を有し得る。いくつかの実施形態では、抗体は、カッパー（κ）軽鎖を有する。いくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１型であり、κ軽鎖を有する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物及び方法は、配列番号１、配列番号２、及び配列番号３でそれぞれ表される重鎖ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、及びＣＤＲ３配列；配列番号４、配列番号５、及び配列番号６でそれぞれ表される軽鎖ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、及びＣＤＲ３配列；並びに前記重鎖の定常領域に変異Ｍ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓ（ＥＵナンバリングにしたがう）を含む抗体を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物及び方法は、配列番号７と７０％以上（即ち、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８と少なくとも７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、前記定義されたＣＤＲ配列（配列番号１、配列番号２、及び配列番号３でそれぞれ表される重鎖ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、及びＣＤＲ３配列；並びに配列番号４、配列番号５、及び配列番号６でそれぞれ表される軽鎖ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、及びＣＤＲ３配列）が維持される（単離された）抗体を含む。
配列同一性は、通常、レファレンス配列（即ち、本明細書に引用又は言及される配列）の完全長に対して計算される。本明細書において言及するとき、同一性パーセントは、例えば、ＮＣＢＩ（ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）によって指定されたデフォルトパラメーター［Ｂｌｏｓｕｍ６２マトリクス；ギャップオープンペナルティ＝１１、及びギャップエクステンションペナルティ＝１］を用いるＢＬＡＳＴを使用して決定することができる。
「配列多様体」は、レファレンス配列におけるアミノ酸のうちの１以上が欠失、置換、及び／又は１以上のアミノ酸がレファレンスアミノ酸配列の配列に挿入されている、変化した配列を有する。変化の結果、前記アミノ酸配列多様体は、レファレンス配列と少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を有する。一例として、レファレンス配列と少なくとも７０％同一の多様体配列は、レファレンス配列の１００アミノ酸当たり３０以下の変化、即ち、欠失、挿入、又は置換の任意の組合せを有する。
一般に、非保存的アミノ酸置換を有することが可能であるが、置換は、置換されるアミノ酸が、レファレンス配列中の対応するアミノ酸と類似の構造的（例えば、側鎖）又は化学的性質を有する保存的アミノ酸置換を含むことができる。一例として、保存的アミノ酸置換は、ある脂肪族又は疎水性のアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、及びイソロイシン）の別の脂肪族又は疎水性のアミノ酸による置換；あるヒドロキシ含有アミノ酸（例えば、セリン及びスレオニン）の別のヒドロキシル含有アミノ酸による置換；ある酸性残基（例えば、グルタミン酸又はアスパラギン酸）の別の酸性残基による置換；あるアミド含有残基（例えば、アスパラギン及びグルタミン）の別のアミド含有残基による置換；ある芳香族残基（例えば、フェニルアラニン及びチロシン）の別の芳香族残基による置換；ある塩基性残基（例えば、リジン、アルギニン、及びヒスチジン）の別の塩基性残基による置換；並びにある小アミノ酸（例えば、アラニン、セリン、スレオニン、メチオニン、及びグリシン）の別の小アミノ酸による置換を含む。
更なる例として、保存的置換は、以下のグループの１つに見られる置換を含む：グループ１：アラニン（Ａｌａ又はＡ）、グリシン（Ｇｌｙ又はＧ）、セリン（Ｓｅｒ又はＳ）、スレオニン（Ｔｈｒ又はＴ）；グループ２：アスパラギン酸（Ａｓｐ又はＤ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ又はＺ）；グループ３：アスパラギン（Ａｓｎ又はＮ）、グルタミン（Ｇｌｎ又はＱ）；グループ４：アルギニン（Ａｒｇ又はＲ）、リジン（Ｌｙｓ又はＫ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ又はＨ）；グループ５：イソロイシン（Ｉｌｅ又はＩ）、ロイシン（Ｌｅｕ又はＬ）、メチオニン（Ｍｅｔ又はＭ）、バリン（Ｖａｌ又はＶ）；及びグループ６：フェニルアラニン（Ｐｈｅ又はＦ）、チロシン（Ｔｙｒ又はＹ）、トリプトファン（Ｔｒｐ又はＷ）。追加的又は代替的に、アミノ酸は、同様の機能、化学構造、又は組成（例えば、酸性、塩基性、脂肪族、芳香族、又は含硫黄）によって保存的置換基にグループ化することができる。例えば、脂肪族グループは、置換の目的で、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、及びＩｌｅを含むことができる。他の保存的置換グループは、以下を含む：含硫黄：Ｍｅｔ及びシステイン（Ｃｙｓ又はＣ）；酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、及びＧｌｎ；小さな脂肪族、非極性、又は僅かに極性の残基：Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、及びＧｌｙ；極性の負に帯電した残基とそれらのアミド：Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、及びＧｌｎ；極性の正に帯電した残基：Ｈｉｓ、Ａｒｇ、及びＬｙｓ；大きな脂肪族の非極性残基：Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、及びＣｙｓ；及び大きな芳香族残基：Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、及びＴｒｐ。更なる情報は、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ（１９８４）Ｐｒｏｔｅｉｎｓ、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙにみることができる。
アミノ酸配列の挿入は、１残基から１００以上の残基を含むポリペプチドに及ぶ長さの範囲のアミノ及び／又はカルボキシル末端融合、並びに単一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。末端挿入の例としては、アミノ酸配列のＮ又はＣ末端のレポーター分子又は酵素への融合が挙げられる。
「機能的多様体」は、本開示の親又はレファレンス化合物と構造的に類似又は実質的に構造的に類似しているが、ポリペプチド又はコードされたポリペプチドが親ポリペプチドの少なくとも１つの機能を少なくとも５０％の効率で行うことができるように組成が僅かに異なる（例えば、１つの塩基、原子、又は官能基が異なる、付加される、又は除去される）ポリペプチド又はポリヌクレオチドを意味する。特定の実施形態では、機能的多様体は、少なくとも５５％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、又は１００％の効率から選択される効率で、親ポリペプチドの少なくとも１つの機能を行う。換言すれば、本開示のポリペプチド又はコードされたポリペプチドの機能的多様体は、親又はレファレンスポリペプチドと比較し、結合親和性を測定するためのアッセイ（例えば、会合（Ｋａ）又は解離（ＫＤ）定数を測定するＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）又はテトラマー染色）などの選択されたアッセイにおける機能的多様体の性能低下が５０％以下である場合、「類似の結合」、「類似の親和性」、又は「類似の活性」を有する。
本明細書で使用するとき、「機能的部分」又は「機能的断片」は、親又はレファレンス化合物のドメイン、部分、又は断片のみを含むポリペプチド又はポリヌクレオチドを意味し、前記機能的部分又は機能的断片のポリペプチド又はコードされたポリペプチドは、前記親又はレファレンス化合物の前記ドメイン、部分、又は断片に関して、少なくとも５０％の活性を維持する。特定の実施形態では、機能的部分又は機能的断片は、前記親ポリペプチドの前記ドメイン、部分、又は断片に関して、少なくとも５５％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．９％、又は１００％の活性を維持する。いくつかの係る実施形態では、機能的部分又は機能的断片は、生物学的利益（例えば、エフェクター機能）を更に提供する。本開示のポリペプチド又はコードされたポリペプチドの機能的部分又は機能的断片は、前記親又はレファレンスポリペプチド比較し、選択されたアッセイにおける性能低下が５０％以下であるとき、機能的部分又は断片は、「類似の結合」又は「類似の活性」を有する。具体的な実施形態では、類似の結合及び類似の活性は、親和性に関し、前記親又はレファレンスと比較して、２０％以下、１０％以下、及び対数差以下から選択される減少パーセントを意味する。
用語「単離された」は、材料が、それが元々存在していた環境（例えば、天然物である場合は、自然環境）から除去されることを意味する。例えば、動物の生体に存在する天然の核酸又はポリペプチドは単離されていないが、天然系に共存する物質のいくつか又はすべてから分離された同一の核酸又はポリペプチドは、単離されている。係る核酸は、ベクターの一部であることができる、及び／又は係る核酸又はポリペプチドは、組成物（例えば、細胞溶解物）の一部であることができ、係るベクター又は組成物が、核酸又はポリペプチドの自然環境の一部ではないという点で、依然として単離されているということができる。
特定の実施形態では、医薬組成物の抗体は、例えば、対象のインビボ環境から除去される、分離される、又はそれに関与しないという点で、「単離」することができる。
用語「遺伝子」は、ポリペプチド鎖の生成に関与するＤＮＡ又はＲＮＡのセグメントを意味し；特定の文脈では、コーディング領域の前後の領域（例えば、５’非翻訳領域（ＵＴＲ）及び３’ＵＴＲ））及び個々のコーディングセグメント（エクソン）間の介在配列（イントロン）を含む。
核酸分子を細胞に挿入する文脈における用語「導入された」は、「トランスフェクション」、「形質転換」、又は「形質導入」を意味し、真核細胞又は原核細胞への核酸分子の組込みへの言及を含み、前記核酸分子は、細胞のゲノムに組み込まれる（例えば、染色体、プラスミド、プラスチド、又はミトコンドリアＤＮＡ）、自律性レプリコンに変換される、又は一過性発現される（例えば、トランスフェクトされたｍＲＮＡ）ことができる。
本明細書で使用するとき、用語「組換え」（例えば、組換え抗体、組換えタンパク質、組換え核酸など）は、組換え技法によって調製、発現、作製、又は単離され、天然には存在しない任意の分子（抗体、タンパク質、核酸など）を意味する。「組換え」は、「操作された」又は「非天然の」と同義で使用することができ、少なくとも１つの遺伝子改変を含む、又は外因性核酸分子の導入によって修飾された生物、微生物、細胞、核酸分子、又はベクターを意味することができ、係る改変又は修飾は、遺伝子工学（即ち、ヒトの介入）によって導入される。遺伝的改変としては、例えば、タンパク質、融合タンパク質、又は酵素をコードする発現可能な核酸分子を導入する修飾、又は細胞の遺伝物質の他の核酸分子の付加、欠失、置換、又は他の機能的破壊が挙げられる。更なる修飾としては、例えば、前記修飾がポリヌクレオチド、遺伝子、又はオペロンの発現を変化させる非コード調節領域を含む。
本明細書で使用するとき、「異種」、「非内因性」、又は「外因性」は、宿主細胞又は対象にネイティブではない任意の遺伝子、タンパク質、化合物、核酸分子、若しくは活性、又は改変された宿主細胞又は対象にネイティブな任意の遺伝子、タンパク質、化合物、核酸分子、若しくは活性を意味する。異種、非内因性、又は外因性は、構造、活性、又はその両方が、ネイティブと改変された遺伝子、タンパク質、化合物、又は核酸分子との間で異なるように変異された又はその他の方法で改変された遺伝子、タンパク質、化合物、又は核酸分子を含む。特定の実施形態では、異種、非内因性、又は外因性の遺伝子、タンパク質、又は核酸分子は、宿主細胞又は対象に対して内因性ではなく、係る遺伝子、タンパク質、又は核酸分子をコードする核酸を、コンジュゲーション、形質転換、トランスフェクション、エレクトロポレーションなどによって宿主細胞に付加されていた場合があり、前記付加された核酸分子は、宿主細胞ゲノムに組み込まれ得る、又は染色体外遺伝物質として（例えば、プラスミド又は他の自己複製ベクターとして）存在することができる。用語「相同な」又は「ホモログ」は、宿主細胞、種、又は株に存在する又は由来する遺伝子、タンパク質、化合物、核酸分子、又は活性を意味する。例えば、ポリペプチドをコードする異種又は外因性のポリヌクレオチド又は遺伝子は、ネイティブなポリヌクレオチド又は遺伝子と相同であり、相同なポリヌクレオチド又は活性をコードすることができるが、前記ポリヌクレオチド又はポリペプチドは、改変された構造、配列、発現レベル、又はそれらの任意の組合せを有することができる。
非内因性ポリヌクレオチド又は遺伝子、並びにコードされたポリペプチド又は活性は、同一種、異種、又はそれらの組合せに由来することができる。
本明細書で使用するとき、用語「内因性」又は「ネイティブな」は、宿主細胞又は対象に通常存在するポリヌクレオチド、遺伝子、タンパク質、化合物、分子、又は活性を意味する。
本明細書で使用するとき、用語「発現」は、遺伝子などの核酸分子のコード配列に基づいてポリペプチドが生成されるプロセスを意味する。前記プロセスは、転写、転写後制御、転写後修飾、翻訳、翻訳後制御、翻訳後修飾、又はそれらの任意の組合せを含むことができる。発現された核酸分子は、典型的には、発現制御配列（例えば、プロモーター）に作動可能に連結される。
用語「作動可能に連結された」は、一方の機能が他方によって影響を受けるような、単一の核酸断片上の２以上の核酸分子の会合を意味する。例えば、プロモーターは、そのコード配列の発現に影響を与えることができる場合（即ち、前記コード配列が前記プロモーターの転写制御下にある場合）、コード配列と作動可能に連結されている。「連結されていない」とは、関連する遺伝的エレメントが互いに密接に関連しておらず、一方の機能が他方に影響を与えないことを意味する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物及び方法における使用に好適な抗体は、配列番号７で表されるアミノ酸配列と７５％以上（即ち、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８で表されるアミノ酸配列と７５％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、前記定義されたＣＤＲ配列が維持される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物及び方法における使用に好適な抗体は、配列番号７で表されるアミノ酸配列と８０％以上（即ち、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８で表されるアミノ酸配列と８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、前記定義されたＣＤＲ配列が維持される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物及び方法における使用に好適な抗体は、配列番号７で表されるアミノ酸配列と８５％以上（即ち、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８で表されるアミノ酸配列と８５％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、前記定義されたＣＤＲ配列が維持される。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号７で表されるアミノ酸配列と９０％以上（即ち、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８で表されるアミノ酸配列と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、前記定義されたＣＤＲ配列が維持される。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物及び方法における使用に好適な抗体は、配列番号７で表されるアミノ酸配列と９５％以上（即ち、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８で表されるアミノ酸配列と９５％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、前記定義されたＣＤＲ配列が維持される。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物及び方法における使用に好適な抗体は、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む又はからなる重鎖可変領域と、配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む又はからなる軽鎖可変領域とを含み、前記定義されたＣＤＲ配列が維持される。
一般に、本明細書に記載される抗体は、Ｆｃ領域（例えば、ＣＨ２又はＣＨ３領域）に（Ｍ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓに加えて）１以上の更なる変異を含むことができる。しかし、いくつかの実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物及び方法における使用に好適な抗体は、そのＣＨ３領域に、（それぞれの野生型ＣＨ３領域と比較して）Ｍ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓの他に、更なる変異を含まない。いくつかの実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物及び方法における使用に好適な抗体は、そのＦｃ領域に、（それぞれの野生型Ｆｃ領域と比較して）Ｍ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓの他に、更なる変異を含まない。本明細書において使用するとき、用語「野生型」は、例えば、自然界で生じるものとしてのレファレンス配列を意味する。具体例として、用語「野生型」は、自然界で最もよくみられる配列を意味し得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物及び方法における使用に好適な抗体は、配列番号９で表されるアミノ酸配列を含む又はからなる重鎖と、配列番号１０で表されるアミノ酸配列を含む又はからなる軽鎖とを含む。例えば、本開示の抗体は、配列番号９で表されるアミノ酸配列からなる重鎖と、配列番号１０で表されるアミノ酸配列からなる軽鎖とを含むことができる。
多様体抗体も本開示の範囲内に包含される。したがって、本願に記載される配列の多様体もまた、本開示の範囲内に包含される。このような多様体としては、免疫応答中のインビボ又は不死化Ｂ細胞クローンの培養時のインビトロでの体細胞変異によって生成される天然多様体が挙げられる。或いは、多様体は、遺伝暗号の縮退により生じ得る、又は転写若しくは翻訳のエラーにより生じ得る。
核酸
別の態様では、本開示はまた、本明細書に記載の抗体又はその一部をコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子を提供する。核酸分子及び／又はポリヌクレオチドの例としては、例えば、組換えポリヌクレオチド、ベクター、オリゴヌクレオチド、ｒＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、又はｔＲＮＡなどのＲＮＡ分子、又はｃＤＮＡなどのＤＮＡ分子が挙げられる。核酸は、本開示の抗体の軽鎖及び／又は重鎖をコードすることができる。換言すれば、前記抗体の軽鎖及び重鎖は、同一の核酸分子によって（例えば、バイシストロン性の様式で）コードされ得る。或いは、前記抗体の軽鎖及び重鎖は、別々の核酸分子によってコードされ得る。
遺伝暗号の重複性のために、本開示はまた、同じアミノ酸配列をコードする核酸配列の配列多様体も含む。したがって、アミノ酸配列をコードする核酸分子は、同じアミノ酸配列をコードする全てのヌクレオチド配列を含む。前記抗体（又は完全な核酸分子）をコードするポリヌクレオチドは、宿主細胞中での前記抗体の発現のために最適化することができる。例えば、ヌクレオチド配列のコドン最適化を使用して、抗体産生のための発現系における翻訳効率を改善することができる。更に、前記核酸分子は、異種要素（即ち、抗体の（重鎖又は軽鎖）のコード配列と同一の核酸分子上に天然には存在しない要素）を含むことができる。例えば、核酸分子は、異種プロモーター、異種エンハンサー、異種ＵＴＲ（例えば、最適な翻訳／発現のための）、異種ポリ－Ａ－テールなどを含むことができる。
前記ヌクレオチド配列のいくつかのバージョンはまた、共転写又は転写後メカニズムによってイントロンを除去することができる程度のイントロンを含むことができる。異なるヌクレオチド配列は、遺伝暗号の重複性又は縮重の結果として、若しくはスプライシングによって、又はその両方によって、同一アミノ酸配列をコードすることができる。
核酸分子は、核酸成分を含む分子である。核酸分子という用語は、通常、一本鎖又は二本鎖のいずれであってもよい、ＤＮＡ（ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、及び合成ＤＮＡを含む）又はＲＮＡ分子を意味する。一本鎖の場合、前記核酸分子は、コード鎖又は非コード鎖（アンチセンス鎖）であることができる。ポリヌクレオチド（オリゴヌクレオチドを含む）及びその断片は、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）又はインビトロ翻訳によって生成することができる、又はライゲーション、切断、エンドヌクレアーゼ作用、又はエキソヌクレアーゼ作用のいずれかによって生成することができる。それは、用語「ポリヌクレオチド」と同義的に使用することができ、即ち、前記核酸分子は、前記抗体をコードするポリヌクレオチドからなることができる。或いは、前記核酸分子はまた、前記抗体をコードするポリヌクレオチドの他に、更なる要素を含むことができる。典型的には、核酸分子は、糖／リン酸－主鎖のホスホジエステル結合によって互いに共有結合したヌクレオチドモノマーを含む又はからなるポリマーである。用語「核酸分子」はまた、塩基修飾、糖修飾、又は骨格修飾などの修飾核酸分子、例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡ分子を包含する。
例えば、核酸分子は、天然のサブユニット（例えば、プリン又はピリミジン塩基）及び／又は非天然のサブユニット（例えば、モルホリン環）を含むヌクレオチドを含むことができる。プリン塩基は、アデニン、グアニン、ヒポキサンチン、及びキサンチンを含み、ピリミジン塩基は、ウラシル、チミン、及びシトシンを含む。核酸モノマーは、ホスホジエステル結合又は係る結合のアナログによって結合することができる。ホスホジエステル結合のアナログとしては、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレノエート、ホスホロジセレノエート、ホスホロアニロチオエート、ホスホルアニリデート、ホスホルアミデートなどが挙げられる。
核酸分子は、特定の核酸配列を挿入、欠失、又は変更するように操作することができる。係る操作による変更としては、限定するものではないが、制限酵素認識部位を導入するための変更、コドンの使用頻度を変えるための変更、転写及び／又は翻訳調節配列を追加又は最適化するための変更などが挙げられる。また、核酸を変更して、被コードアミノ酸を変えることもできる。例えば、１以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個など）のアミノ酸の置換、欠失、及び／又は挿入を前記抗体のアミノ酸配列に導入することが有用であり得る。係る点変異は、エフェクタ機能、抗原結合親和性、翻訳後修飾、免疫原性などを改変することができ、共有結合基（例えば、標識）の結合のためのアミノ酸を導入することができる、又は（例えば、精製目的のための）タグを導入することができる。或いは、核酸配列の変異は、「サイレント」、即ち、遺伝暗号の重複性のためにアミノ酸配列に反映されないことがある。一般に、変異は特定部位に導入することができ、又はランダムに導入してから選択（分子進化など）することもできる。例えば、本開示の（例示的な）抗体の軽鎖又は重鎖のいずれかをコードする１以上の核酸を、ランダムに又は指向的に（ｄｉｒｅｃｔｉｏｎａｌｌｙ）変異させて、被コードアミノ酸に各種性質を導入することができる。係る変化は、初期の変化が保持され、他のヌクレオチド位置に新たな変化が導入される反復プロセスの結果であり得る。更に、独立した各工程で達成された変化を組み合わせることができる。
いくつかの実施形態では、前記抗体（又は（完全な）核酸分子）をコードするポリヌクレオチドは、コドン最適化され得る。当業者は、コドン最適化のための各種ツールを認識しており、例えば、Ｊｕ Ｘｉｎ Ｃｈｉｎ， Ｂｅｖａｎ Ｋａｉ－Ｓｈｅｎｇ Ｃｈｕｎｇ， Ｄｏｎｇ－Ｙｕｐ Ｌｅｅ， Ｃｏｄｏｎ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ＯｎＬｉｎｅ （ＣＯＯＬ）： ａ ｗｅｂ－ｂａｓｅｄ ｍｕｌｔｉ－ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｐｌａｔｆｏｒｍ ｆｏｒ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｇｅｎｅ ｄｅｓｉｇｎ， Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ， Ｖｏｌｕｍｅ ３０， Ｉｓｓｕｅ １５， １ Ａｕｇｕｓｔ ２０１４， Ｐａｇｅｓ ２２１０－２２１２；又はＧｒｏｔｅ Ａ， Ｈｉｌｌｅｒ Ｋ， Ｓｃｈｅｅｒ Ｍ， Ｍｕｎｃｈ Ｒ， Ｎｏｒｔｅｍａｎｎ Ｂ， Ｈｅｍｐｅｌ ＤＣ， Ｊａｈｎ Ｄ， ＪＣａｔ： ａ ｎｏｖｅｌ ｔｏｏｌ ｔｏ ａｄａｐｔ ｃｏｄｏｎ ｕｓａｇｅ ｏｆ ａ ｔａｒｇｅｔ ｇｅｎｅ ｔｏ ｉｔｓ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｈｏｓｔ． Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ２００５ Ｊｕｌ １；３３（Ｗｅｂ Ｓｅｒｖｅｒ ｉｓｓｕｅ）：Ｗ５２６－３１；又は、例えば、Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ’ｓ ＯｐｔｉｍｕｍＧｅｎｅＴＭ ａｌｇｏｒｉｔｈｍ（米国特許出願公開第２０１１／００８１７０８ Ａ１号明細書に記載）に記載されているツール；又はＧｅｎｅＡｒｔ Ｇｅｎｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｔｏｏｌ （Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）が挙げられる。コドン最適化配列は、部分的にコドン最適化された（即ち、少なくとも１つのコドンが宿主細胞中における発現のために最適化された）配列及び完全にコドン最適化された配列を含む。
本開示はまた、第１及び第２の核酸分子の組合せを提供し、前記第１の核酸分子が、本開示の抗体の重鎖をコードするポリヌクレオチドを含み、前記第２の核酸分子が、同一抗体の対応する軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。本開示の核酸分子の（一般的な）特徴に関する前記記載は、適宜、前記組合せの第１及び第２の核酸分子に適用される。例えば、前記抗体の重鎖及び／又は軽鎖をコードするポリヌクレオチドの一方又は両方が、コドン最適化され得る。
本明細書で使用するとき、指定された核酸、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質に「由来する」核酸配列又はアミノ酸配列は、前記核酸、ペプチド、ポリペプチド、又はタンパク質の起源を意味する。特定の配列に由来する核酸配列又はアミノ酸配列は、それが由来する配列又はその一部と本質的に同一であるアミノ酸配列を有することができ、「本質的に同一である」は、前記定義される配列多様体を含む。特定のペプチド又はタンパク質に由来する核酸配列又はアミノ酸配列は、特定のペプチド又はタンパク質における対応するドメインに由来し得る。この文脈において、「対応する」は、関心のある同一の機能性又は特性を有していることを意味する。したがって、ペプチド、タンパク質、及び核酸の「対応する」部分は、当業者にとって容易に特定可能である。同様に、別の（例えば、「ソース」）配列に「由来する」配列は、前記ソース配列にその起源を有するものとして当業者によって認識され得る。
ベクター
本開示の範囲には、本開示に係る核酸分子を含むベクター、例えば、発現ベクターが更に含まれる。通常、ベクターは、上記に記載の核酸分子を含む。
本開示はまた、第１及び第２のベクターの組合せを提供し、前記第１のベクターは、（核酸分子の組合せのための）上記に記載の第１の核酸分子を含み、前記第２のベクターは、（核酸分子の組合せのための）上記に記載の第２の核酸分子を含む。
ベクターは通常、組換え核酸分子、即ち、天然には存在しない核酸分子である。したがって、前記ベクターは、異種要素（即ち、本質的に異なる起源の配列要素）を含み得る。例えば、前記ベクターは、マルチクローニング部位、異種プロモーター、異種エンハンサー、異種選択マーカー（前記ベクターを含まない細胞と比較して、前記ベクターを含む細胞を同定するため）などを含み得る。本開示の文脈におけるベクターは、所望の核酸配列を組み入れる又は組み込むのに好適である。係るベクターは、ストレージベクター、発現ベクター、クローニングベクター、トランスファーベクターなどであることができる。ストレージベクターは、核酸分子の便利なストレージを可能にするベクターである。したがって、前記ベクターは、例えば、本開示に係る所望の抗体（の重鎖及び／又は軽鎖）に対応する配列を含み得る。発現ベクターは、ＲＮＡ、例えば、ｍＲＮＡ、又はペプチド、ポリペプチド、若しくはタンパク質などの発現産物の産生に使用することができる。例えば、発現ベクターは、（異種）プロモーター配列などの、前記ベクターの配列の一続きの転写に必要な配列を含み得る。クローニングベクターは、典型的には、核酸配列を前記ベクターに組み込むために使することができるクローニング部位を含むベクターである。クローニングベクターは、例えば、プラスミドベクター又はバクテリオファージベクターであることができる。トランスファーベクターは、核酸分子を細胞又は生物に移入するのに好適なベクター、例えばウイルスベクターであることができる。本開示の文脈におけるベクターは、例えば、ＲＮＡベクター又はＤＮＡベクターであることができる。例えば、本願の意味におけるベクターは、クローニング部位、抗生物質耐性因子などの選択マーカー、及び複製起点などの前記ベクターの増殖に好適な配列を含む。本願の文脈におけるベクターは、プラスミドベクターであることができる。
細胞
更なる態様では、本開示はまた、本開示に係る抗体を発現する、及び／又は本開示に係るベクターを含む細胞を提供する。
係る細胞の例としては、真核細胞、例えば、酵母細胞、動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、及びＥ．ｃｏｌｉを含む原核細胞が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、前記細胞は、哺乳動物細胞である。特定の係る実施形態では、前記細胞は、哺乳動物細胞株であり、例えば、ＣＨＯ細胞（例えば、ＤＨＦＲ－ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ７７：４２１６（１９８０），ＣＨＯ－ＫＳＶ，ＥｘｐｉＣＨＯ））、ヒト胎児腎細胞（例えば、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞）、ＰＥＲ．Ｃ６細胞、Ｙ０細胞、Ｓｐ２／０細胞、ＮＳ０細胞、ヒト肝細胞、例えば、Ｈｅｐａ ＲＧ 細胞、骨髄腫細胞、又はハイブリドーマ細胞が挙げられる。哺乳動物宿主細胞株の他の例としては、マウスセルトリ細胞（例えば、ＴＭ４細胞）；ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ－７）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；アフリカングリーンモンキー腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２）；ＴＲＩ細胞；ＭＲＣ ５細胞；及びＦＳ４細胞が挙げられる。抗体産生に適した哺乳動物宿主細胞株としては、例えば、Ｙａｚａｋｉ ａｎｄ Ｗｕ， Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｖｏｌ． ２４８ （Ｂ． Ｋ． Ｃ． Ｌｏ， ｅｄ．， Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ， Ｔｏｔｏｗａ， Ｎ．Ｊ．）， ｐｐ． ２５５－２６８ （２００３）に記載されたものも含む。
特定の実施形態では、宿主細胞は、Ｅ．ｃｏｌｉなどの原核細胞である。Ｅ．ｃｏｌｉなどの原核細胞におけるペプチドの発現は、十分に確立されている（例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ， Ａ． Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：５４５－５５１ （１９９１）を参照）。例えば、抗体は、特にグリコシル化及びＦｃエフェクタ機能が必要とされない場合、細菌で産生させることができる。細菌における抗体の発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号明細書；同第５，７８９，１９９号明細書；及び米国特許第５，８４０，５２３号明細書を参照。
本開示の抗体を発現するのに有用な昆虫細胞は、当技術分野で知られており、例えば、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒａ Ｓｆ９細胞、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ ＢＴＩ－ＴＮ５Ｂ１－４細胞、及びＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒａ ＳｆＳＷＴ０１ “ＭｉｍｉｃＴＭ”細胞が挙げられる。例えば、Ｐａｌｍｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． １５３（３－４）：１６０－１６６ （２０１１）を参照。特にＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクション用として、昆虫細胞と組み合わせて使用できる多数のバキュロウイルス株が同定されている。
糸状菌又は酵母などの真核微生物も、タンパク質をコードするベクターをクローニングする又は発現させるのに適した宿主であり、「ヒト化」グリコシル化経路を有する真菌及び酵母株を含み、部分的又は完全なヒトのグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９－１４１４（２００４）；Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０－２１５（２００６）を参照。
植物細胞もまた、本開示の抗体を発現させるための宿主として利用することができる。例えば、ＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳＴＭ技術（例えば、米国特許第５，９５９，１７７号明細書；同第６，０４０，４９８号明細書；同第６，４２０，５４８号明細書；同第７，１２５，９７８号明細書；及び同第６，４１７，４２９号明細書に記載）は、トランスジェニック植物を用いて抗体を産生する。
本開示と互換性のある任意のタンパク質発現系を使用して、開示の抗体を産生することができる。好適な発現系としては、Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍｓ， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， ｅｄｓ． Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ ｅｔ ａｌ．， １９９９に記載されるトランスジェニック動物を挙げることができる。
特定の実施形態では、前記細胞は、本明細書に係るベクター、発現ベクターでトランスフェクトすることができる。用語「トランスフェクション」は、ＤＮＡ又はＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）分子などの核酸分子の、細胞への導入、例えば、真核細胞への導入を意味する。本明細書の文脈において、用語「トランスフェクション」は、哺乳動物細胞などの真核細胞に核酸分子を導入するための当業者に知られた任意の方法を包含する。係る方法は、例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション（例えば、カチオン性脂質及び／又はリポソームに基づく）、リン酸カルシウム沈殿、ナノ粒子ベースのトランスフェクション、ウイルスベースのトランスフェクション、又はＤＥＡＥ－デキストラン又はポリエチレンイミンなどのカチオン性ポリマーに基づくトランスフェクションを包含する。特定の実施形態では、前記導入は、非ウイルス性である。
更に、本開示の細胞は、例えば、本明細書に係る抗体を発現させるために、本明細書に係るベクターで安定的又は一過性にトランスフェクトすることができる。係る実施形態では、前記細胞は、結合タンパク質をコードする本明細書に記載のベクターで安定的にトランスフェクトされる。あるいは、細胞は、本明細書に係る抗体をコードする本開示に係るベクターで一過性にトランスフェクトされることができる。本明細書に開示の実施形態のいずれにおいても、ポリヌクレオチドは、前記宿主細胞に対して異種であることができる。
関連する態様において、本開示は、抗体を産生するための方法を提供し、前記方法は、前記抗体を産生するのに十分な条件下及び時間で、本開示の宿主細胞を培養することを含む。
したがって、本開示はまた、本開示の抗体を異種発現する組換え宿主細胞を提供する。例えば、前記細胞は、抗体が完全に又は部分的に得られた種と異なる種のものであることができる（例えば、ヒト抗体又は操作されたヒト抗体を発現するＣＨＯ細胞）。いくつかの実施形態では、前記宿主細胞の細胞種は、本質的に抗体を発現しない。更に、前記宿主細胞は、結合タンパク質のネイティブな状態（又は、対象結合タンパク質が操作された又は由来した、親の結合タンパク質のネイティブな状態）に存在しない結合タンパク質に翻訳後修飾（ＰＴＭ；例えば、グリコシル化又はフコース化）を付与することができる。係るＰＴＭは、機能的な差（例えば、免疫原性の低下）をもたらし得る。したがって、本明細書に開示される宿主細胞によって産生される本開示の結合タンパク質は、そのネイティブな状態の結合タンパク質又は親の結合タンパク質と異なる１以上の翻訳後修飾を含むことができる（例えば、ＣＨＯ細胞によって産生されるヒト抗体は、ヒトから単離された場合、及び／又はネイティブなヒトＢ細胞又はプラズマ細胞によって産生された場合の抗体とは異なる翻訳後修飾を含むことができる）。
抗体の産生
本明細書に記載される医薬組成物及び方法における使用に好適な抗体は、当技術分野において公知の任意の方法によって作製することができる。例えば、ハイブリドーマ技術を使用してモノクローナル抗体を作製するための一般的な方法論は、周知である（Ｋｏｈｌｅｒ，Ｇ．ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ，．１９７５；Ｋｏｚｂａｒ ｅｔ ａｌ．１９８３）。いくつかの実施形態では、国際公開第２００４／０７６６７７号に記載の代替ＥＢＶ不死化方法が用いられる。
いくつかの実施形態では、参照により本明細書に援用する国際公開第２００４／０７６６７７号に記載の方法が用いられる。この方法では、本開示の抗体を産生するＢ細胞を、ＥＢＶ及びポリクローナルＢ細胞活性化剤で形質転換する。任意で、効率を更に高めるために、細胞の増殖及び分化の追加の刺激剤を形質転換工程中に添加してもよい。これら刺激剤は、ＩＬ－２及びＩＬ－１５などのサイトカインであってよい。一態様では、ＩＬ－２を不死化工程中に添加して、不死化効率を更に向上させるが、その使用は必須ではない。次いで、これら方法を用いて産生された不死化Ｂ細胞を、当技術分野において公知の方法で培養し、そこから抗体を単離できる。
別の例示的な方法は、国際公開第２０１０／０４６７７５号に記載されている。この方法では、プラズマ細胞を限定数又は単一プラズマ細胞としてマイクロウェル培養皿で培養する。プラズマ細胞培養物から抗体を単離することができる。更に、前記プラズマ細胞培養物からＲＮＡを抽出することができ、当技術分野において公知の方法を使用してＰＣＲを実施することができる。抗体のＶＨ及びＶＬ領域をＲＴ－ＰＣＲ（逆転写酵素ＰＣＲ）によって増幅させ、配列を決定し、発現ベクターにクローニングし、次いで、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞又は他の宿主細胞にトランスフェクトすることができる。発現ベクターへの核酸のクローニング、宿主細胞のトランスフェクション、トランスフェクトされた宿主細胞の培養、及び産生された抗体の単離は、当業者に公知の任意の方法を使用して行うことができる。
前記抗体は、必要に応じて、濾過、遠心分離、及び様々なクロマトグラフィー法、例えば、ＨＰＬＣ又はアフィニティクロマトグラフィーを用いて更に精製することができる。医薬品グレードの抗体を産生するための技術を含む、抗体、例えば、モノクローナル抗体を精製する技術は、当技術分野において周知である。
分子生物学の標準的な技術を用いて、本開示の抗体をコードしているＤＮＡ配列を調製することができる。オリゴヌクレオチド合成技術を用いて所望のＤＮＡ配列を完全に又は部分的に合成することができる。部位特異的変異誘発及びポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術を適宜使用してよい。
任意の好適な宿主細胞／ベクター系を、本開示の抗体分子をコードしているＤＮＡ配列を発現させるために用いることができる。完全抗体分子などの抗体分子を産生させるために、真核生物、例えば哺乳動物の宿主細胞発現系を使用してよい。好適な哺乳動物宿主細胞としては、本明細書に記載されているもの、例えば、ＣＨＯ、ＨＥＫ２９３Ｔ、ＰＥＲ．Ｃ６、ＮＳ０、骨髄腫、又はハイブリドーマ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
また、本開示は、本明細書に記載される医薬組成物及び方法に含まれ得る抗体分子を産生させるプロセスを提供する。一実施形態では、前記プロセスは、本開示の核酸をコードしているベクターを含む（異種）宿主細胞を、本開示の抗体分子をコードしているＤＮＡからタンパク質を発現させるのに好適な条件下で培養すること、及び前記抗体分子を単離することを含む。
重鎖と軽鎖とを含む抗体を産生させる場合、第１のベクターが軽鎖ポリペプチドをコードしており、第２のベクターが重鎖ポリペプチドをコードしている２つのベクターを細胞株にトランスフェクトしてよい。或いは、軽鎖ポリペプチド及び重鎖ポリペプチドをコードしている配列を含む単一のベクターを使用してもよい。
本明細書に記載の抗体は、（ｉ）例えば、本開示に係るベクターを使用することによって、宿主細胞で本開示に係る核酸配列を発現させ、（ｉｉ）発現した抗体産物を単離することによって産生され得る。更に、前記方法は、（ｉｉｉ）単離抗体を精製することを含み得る。形質転換されたＢ細胞及び培養したプラズマ細胞を、所望の特異性又は機能の抗体を産生するものについてスクリーニングしてよい。
スクリーニング工程は、任意のイムノアッセイ、例えば、ＥＬＩＳＡによって、組織若しくは細胞（トランスフェクトされた細胞を含む）を染色することによって、中和アッセイによって、又は所望の特異性若しくは機能を同定するための当技術分野において公知の多数の他の方法のうちの１つによって実施してよい。前記アッセイでは、１以上の抗原の単純な認識に基づいて選択することもでき、更に所望の機能に基づいて選択して、例えば、単なる抗原結合抗体ではなく中和抗体を選択したり、標的細胞の特徴（例えば、そのシグナル伝達カスケード、形状、増殖速度、他の細胞に影響を与える能力、他の細胞又は他の試薬又は条件の変化による影響に対する応答、分化状態など）を変化させることができる抗体を選択したりすることもできる。
次いで、陽性形質転換Ｂ細胞培養物から個々の形質転換Ｂ細胞クローンが産生され得る。陽性細胞の混合物から個々のクローンを分離するためのクローニング工程は、限界希釈、マイクロマニピュレーション、セルソーティングによる単一細胞沈着、又は当技術分野において公知の別の方法を使用して実施することができる。
当技術分野において公知の方法を用いて、培養プラズマ細胞から核酸を単離し、クローニングし、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞又は他の公知の宿主細胞に発現させることができる。
本明細書に記載される不死化Ｂ細胞クローン又はトランスフェクトされた宿主細胞は、例えば、モノクローナル抗体源として、関心のあるモノクローナル抗体をコードしている核酸（ＤＮＡ又はｍＲＮＡ）源として、試験のためなど、様々な方法で使用することができる。
また、本開示は、本開示に係る抗体を産生する不死化記憶Ｂ細胞又はトランスフェクトされた宿主細胞を含む組成物を提供する。
本開示の不死化Ｂ細胞クローン又は培養プラズマ細胞は、後で組換え発現させるために抗体遺伝子をクローニングするための核酸源として使用することもできる。例えば、安定性、再現性、培養の容易さなどの理由から、Ｂ細胞又はハイブリドーマから発現させるよりも、組換え源から発現させる方が医薬目的では一般的であることがある。
したがって、本開示は、また、組換え細胞を調製する方法であって、（ｉ）関心のある抗体をコードしているＢ細胞クローン又は培養プラズマ細胞から１以上の核酸（例えば、重鎖及び／又は軽鎖ｍＲＮＡ）を得る工程と、（ｉｉ）前記核酸を発現ベクターに挿入する工程と、（ｉｉｉ）（異種）宿主細胞において関心のある抗体を発現させるために、前記ベクターを宿主細胞にトランスフェクトする工程とを含む方法を提供する。
同様に、本開示はまた、組換え細胞を調製する方法であって、（ｉ）関心のある抗体をコードしているＢ細胞クローン又は培養プラズマ細胞からの核酸の配列を決定する工程と、（ｉｉ）工程（ｉ）で得られた配列情報を使用して、宿主細胞において関心のある抗体を発現させるために、前記宿主細胞に挿入するための核酸を調製する工程とを含む方法を提供する。工程（ｉ）と（ｉｉ）との間に、制限酵素部位を導入する、コドンの使用頻度を変更する、及び／又は転写及び／又は翻訳調節配列を最適化するために前記核酸を操作してもよいが、必須ではない。
更に、本開示は、また、トランスフェクトされた宿主細胞を調製する方法であって、関心のある抗体をコードしている１以上の核酸を宿主細胞にトランスフェクトする工程を含み、前記核酸が、本開示の不死化Ｂ細胞クローン又は培養プラズマ細胞に由来する核酸である方法も提供する。したがって、まず核酸を調製し、次いで、それを使用して宿主細胞をトランスフェクトする手順は、異なる場所（例えば、異なる国）で異なる人々によって異なる時点で実施することができる。
次いで、本開示のこれら組換え細胞を発現及び培養目的のために使用することができる。前記組換え細胞は、大規模な医薬品生産のための抗体を発現させるのに特に有用である。また、前記組換え細胞は、医薬組成物の有効成分として用いることもできる。静置培養、ローラーボトル培養、腹水液、中空繊維型バイオリアクタカートリッジ、モジュラーミニ発酵槽、撹拌槽、微粒子担体培養、セラミックコア灌流などが挙げられるがこれらに限定されない任意の好適な培養技術を使用することができる。
Ｂ細胞又はプラズマ細胞から免疫グロブリン遺伝子を取得し、配列を決定する方法は、当技術分野において周知である（例えば、Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第４版、２０００年の第４章）。
前記トランスフェクトされた宿主細胞は、本明細書に開示される任意の宿主細胞を含むことができ、例えば、酵母及び動物細胞を含む真核細胞、特に、哺乳動物細胞（例えば、ＣＨＯ細胞、ＮＳ０細胞、ヒト細胞（例えば、ＰＥＲ．Ｃ６又はＨＫＢ－１１細胞）、骨髄腫細胞、又はヒト肝細胞）に加えて、植物細胞が挙げられる。いくつかの実施形態では、前記トランスフェクトされた宿主細胞は、ヒト細胞などの哺乳動物細胞である。いくつかの実施形態では、発現宿主は、特にそれ自体ヒトにおいて免疫原性ではない炭水化物構造で本開示の抗体をグリコシル化することができる。いくつかの実施形態では、前記トランスフェクトされた宿主細胞は、無血清培地において増殖することができる。更なる実施形態では、前記トランスフェクトされた宿主細胞は、動物由来の生成物が存在しなくても培養物中で増殖することができる。また、前記トランスフェクトされた宿主細胞を培養して、細胞株を得ることもできる。
また、本開示は、関心のある抗体をコードしている１以上の核酸分子（例えば、重鎖及び軽鎖遺伝子）を調製する方法であって、（ｉ）本開示に係る不死化Ｂ細胞クローンを調製するか又はプラズマ細胞を培養する工程と、（ｉｉ）関心のある抗体をコードしている核酸を、前記Ｂ細胞クローン又は前記培養プラズマ細胞から得る工程とを含む方法を提供する。更に、本開示は、関心のある抗体をコードしている核酸配列を得る方法であって、（ｉ）本開示に係る不死化Ｂ細胞クローンを調製するか又はプラズマ細胞を培養する工程と、（ｉｉ）関心のある抗体をコードしている前記Ｂ細胞クローン又は前記培養プラズマ細胞から得られた核酸の配列を決定する工程とを含む方法を提供する。
本開示は、更に、関心のある抗体をコードしている核酸分子を調製する方法であって、本開示の形質転換Ｂ細胞クローン又は培養プラズマ細胞から得られた核酸を得る工程を含む方法を提供する。したがって、先ずＢ細胞クローン又は培養プラズマ細胞を取得し、次いで、前記Ｂ細胞クローン又は前記培養プラズマ細胞から核酸を得るための手順は、異なる場所（例えば、異なる国）で異なる人々によって異なる時点で実施することができる。
また、本開示は、本開示に係る（例えば、製薬に使用するための）抗体を調製する方法であって、（ｉ）関心のある抗体を発現する選択されたＢ細胞クローン又は培養プラズマ細胞から１以上の核酸（例えば、重鎖及び軽鎖の遺伝子）を得る及び／又は配列を決定する工程と；（ｉｉ）前記核酸配列を発現ベクターに挿入するか又は前記核酸配列を使用して発現ベクターを調製する工程と；（ｉｉｉ）関心のある抗体を発現することができる宿主細胞にトランスフェクトする工程と；（ｉｖ）前記トランスフェクトされた宿主細胞を、前記関心のある抗体が発現する条件下で培養又は継代培養する工程と；任意で、（ｖ）前記関心のある抗体を精製する工程とを含む方法を含む。
また、本開示は、トランスフェクトされた宿主細胞集団、例えば、安定的にトランスフェクトされた宿主細胞集団を、関心のある抗体が発現する条件下で培養又は継代培養する工程と；任意で、前記関心のある抗体を精製する工程とを含む、関心のある抗体を調製する方法であって、前記トランスフェクトされた宿主細胞集団が、（ｉ）上記に記載の通り調製したＢ細胞クローン又は培養プラズマ細胞によって産生される、選択された関心のある抗体をコードしている核酸を提供し、（ｉｉ）前記核酸を発現ベクターに挿入し、（ｉｉｉ）前記関心のある抗体を発現することができる宿主細胞に前記ベクターをトランスフェクトし、（ｉｖ）挿入された核酸を含むトランスフェクトされた宿主細胞を培養又は継代培養して、前記関心のある抗体を産生させることによって調製される方法を提供する。したがって、先ず組換え宿主細胞を調製し、次いで、それを培養して抗体を発現させるための手順は、異なる場所（例えば、異なる国）で異なる人々によって異なる時点で実施することができる。
医薬組成物
本開示は、Ａ型インフルエンザを中和する抗体と薬学的に許容される水性ビヒクルとを含む医薬組成物（用語「医薬組成物」及び「抗体組成物」は、本明細書で互換的に使用される）を提供する。ビヒクルは、典型的には、薬学的に活性な化合物、特に本開示に係る抗体などの化合物を貯蔵、輸送、処方、及び／又は投与するのに適した材料であると理解される。例えば、前記ビヒクルは、薬学的に活性な化合物、特に本開示に係る抗体を貯蔵、輸送、及び／又は投与するのに適した生理学的に許容される液体であることができる。
本明細書に記載される医薬組成物は、患者（予防的投与の文脈においてを含み、本明細書では対象とも称される）への注射又は注入用に調製される。いくつかの実施形態では、前記医薬組成物は、静脈内、動脈内、又は脳室内注入用に調製することができる。他の実施形態では、前記医薬組成物は、静脈内、動脈内、脳室内、髄内、腹腔内、髄腔内、脳室内、又は皮下注射用に調製することができる。特定の実施形態では、前記医薬組成物は、筋肉内（「ＩＭ」）注射用に調製される。具体的な実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、ヒト対象への投与に適したｐＨ、等張性、及び安定性を示す、薬学的に許容される滅菌水溶液である。本明細書に記載の医薬組成物の配合に適した水性ビヒクルとしては、水（例えば、滅菌水、注射用ＵＳＰ水）及び、例えば、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、乳酸リンゲル注射液などの等張性ビヒクルが挙げられる。
本明細書に係る医薬組成物は、本明細書に係るＡ型インフルエンザ中和抗体から選択される抗体を含む。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に係る医薬組成物は、配列番号１、配列番号２、及び配列番号３でそれぞれ表される重鎖ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、及びＣＤＲ３配列；配列番号４、配列番号５、及び配列番号６でそれぞれ表される軽鎖ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、及びＣＤＲ３配列；並びに前記重鎖の定常領域に変異Ｍ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓ（ＥＵナンバリングにしたがう）を含む抗体を含む。他の実施形態では、本明細書に係る医薬組成物は、配列番号７と７０％以上（即ち、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８と７０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、前記定義されたＣＤＲ配列（配列番号１、配列番号２、及び配列番号３でそれぞれ表される重鎖ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、及びＣＤＲ３配列；並びに配列番号４、配列番号５、及び配列番号６でそれぞれ表される軽鎖ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、及びＣＤＲ３配列）が維持される抗体を含む。他の実施形態では、本明細書に係る医薬組成物は、配列番号７と７５％以上（即ち、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８と７５％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、前記定義されたＣＤＲ配列が維持される抗体を含む。更に他の実施形態では、本明細書に係る医薬組成物は、配列番号７と８０％以上（即ち、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８と８０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、前記定義されたＣＤＲ配列が維持される抗体を含む。更に他の実施形態では、本明細書に係る医薬組成物は、配列番号７と８５％以上（即ち、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８と８５％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、前記定義されたＣＤＲ配列が維持される抗体を含む。更に他の実施形態では、本明細書に係る医薬組成物は、配列番号７と９０％以上（即ち、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８と９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、前記定義されたＣＤＲ配列が維持される（単離された）抗体を含む。いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、配列番号７と９５％以上（即ち、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上）の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８と９５％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、前記定義されたＣＤＲ配列が維持される。更なる実施形態では、本明細書に係る医薬組成物は、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、前記定義されたＣＤＲ配列が維持される抗体を含む。
特定の実施形態では、本明細書に係る医薬組成物は、配列番号１０で表される軽鎖アミノ酸配列と配列番号９で表される重鎖アミノ酸配列とを含む抗体を含む。
いくつかの実施形態では、前記抗体又は前記抗体を含む医薬組成物は、約２．１７μｇ／ｍＬののインビトロインフルエンザ感染阻害ＩＣ９０を有する。
前記医薬組成物は、患者への治療的に有効な量の抗体の投与を容易にするのに十分な抗体物質を含む。いくつかの実施形態では、前記抗体は、１００ｍｇ／ｍＬ、１１０ｍｇ／ｍＬ、１２０ｍｇ／ｍＬ、１３０ｍｇ／ｍＬ、１４０ｍｇ／ｍＬ、１５０ｍｇ／ｍＬ、１６０ｍｇ／ｍＬ、１７０ｍｇ／ｍＬ、１８０ｍｇ／ｍＬ、１９０ｍｇ／ｍＬ、及び２００ｍｇ／ｍＬから選択される濃度で含有される。他の実施形態では、前記抗体は、５０ｍｇ／ｍＬ超、７５ｍｇ／ｍＬ超、１００ｍｇ／ｍＬ超、１２５ｍｇ／ｍＬ超、１５０ｍｇ／ｍＬ超、１７５ｍｇ／ｍＬ超、２００ｍｇ／ｍＬ超、２２５ｍｇ／ｍＬ超、及び２５０ｍｇ／ｍＬ超から選択される濃度で前記医薬組成物に含有される。他の実施形態では、前記医薬組成物は、５０ｍｇ／ｍＬ～２００ｍｇ／ｍＬの範囲、７５ｍｇ／ｍＬ～２２５ｍｇ／ｍＬの範囲、又は１００ｍｇ／ｍＬ～２００ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度で前記抗体を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、１２５ｍｇ／ｍＬ～１５０ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度で前記抗体を含む。更に他の実施形態では、前記医薬組成物は、１５０ｍｇ／ｍＬの濃度で前記抗体を含む。
本明細書に係る医薬組成物は、バッファ、界面活性剤、又はコブロックポリマー、塩、及び安定剤（糖アルコール、二糖、又は多糖安定剤、及び／又は安定化アミノ酸など）のうちの１以上を含むことができる。更に、必要な場合又は望ましい場合、本明細書に記載の医薬組成物は、１以上の抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、メチオニン、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ））を更に含むように処方することができる。
本開示の医薬組成物は、前記抗体の実行可能性を維持する一方で、注射又は注入にも適しているｐＨを有し、それを維持する。本明細書に記載の医薬組成物は、一般に、５．５～６．５の範囲など、約５．５～約６．５の範囲のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、前記医薬組成物は、５．８～６．２の範囲、例えば、約６．０のｐＨを有する。特定の実施形態では、前記ｐＨは、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、又は６．５であることができる。
前記医薬組成物は、所望のｐＨを達成及び維持するための緩衝剤を含むことができる。本明細書に記載の医薬組成物における使用に適したバッファとしては、例えば、酢酸塩、クエン酸塩、ヒスチジン、コハク酸塩、リン酸塩、及びヒドロキシメチルアミノメタン（トリス）バッファが挙げられる。特定の実施形態では、前記医薬組成物は、ヒスチジンバッファ及びリン酸バッファから選択されるバッファを含む。特定の実施形態では、ヒスチジンは、１０ｍＭ～４０ｍＭの範囲の濃度、又は２０ｍＭ～４０ｍＭの範囲の濃度で前記組成物に含有させることができる。例えば、具体的な実施形態では、本明細書に係る医薬組成物は、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、又は４０ｍＭから選択される濃度のヒスチジンを含む。更なる実施形態では、前記医薬組成物は、１２０ｍｇ／ｍＬ～１６０ｍｇ／ｍＬの範囲（例えば、１２０ｍｇ／ｍＬ、１２５ｍｇ／ｍＬ、１３０ｍｇ／ｍＬ、１３５ｍｇ／ｍＬ、１４０ｍｇ／ｍＬ、１４５ｍｇ／ｍＬ、１５０ｍｇ／ｍＬ、１５５ｍｇ／ｍＬ、又は１６０ｍｇ／ｍＬ）の濃度で前記抗体を含み、前記医薬組成物は、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、又は４０ｍＭの濃度でヒスチジンを含む。他の実施形態では、前記医薬組成物は、約７５ｍｇ／ｍＬの濃度で前記抗体を含み、約１０ｍＭの濃度でヒスチジンを含む。特定の実施形態では、ヒスチジンバッファを含む本開示の医薬組成物は、５．５～６．５、好ましくは５．８～６．２、例えば６のｐＨを有する。具体的な実施形態では、前記医薬組成物は、ｐＨ６を有し、ヒスチジンバッファを含む。
本明細書に記載の医薬組成物はまた、界面活性剤又はトリブロックコポリマーを含むことができる。「洗浄剤」とも称されることがある界面活性剤は、１以上の機能を果たすことができる。例えば、抗体水溶液では、界面活性剤は、抗体の機能性を維持し、抗体又は他の賦形剤の溶解を助け、及び／又は微生物の増殖を制御するように働く。本明細書に記載の医薬組成物に使用することができる界面活性剤としては、例えば、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ ８０）、ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ ２０）、及びポロキサマー１８８が挙げられる。いくつかの実施形態では、前記医薬組成物は、０．０１％～０．０５％（ｗ／ｖ）の範囲（例えば、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、又は０．０５％）で界面活性剤を含む。係る実施形態では、前記界面活性剤は、ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ ８０）、ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ ２０）、及びポロキサマー１８８から選択することができる。具体的な実施形態では、本明細書の医薬組成物は、０．０１％～０．０５％（ｗ／ｖ）の範囲のポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ ８０）又はポロキサマー１８８を含む。他の実施形態では、本明細書の医薬組成物は、０．０２％（ｗ／ｖ）でポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ ８０）又はポロキサマー１８８を含む。
本開示に係る医薬組成物が糖アルコール、二糖、又は多糖安定剤を含む場合、前記安定剤は、例えば、マンニトール、ソルビトール、スクロース、トレハロース、及びデキストラン４０から選択することができる。特定の実施形態では、前記安定剤は、二糖である。特定の実施形態では、前記医薬組成物は、３．０％～９．０％（ｗ／ｖ）の範囲、好ましくは３．６％～８．６％の範囲、より好ましくは４％～６％の範囲、例えば、４．３％～６．３％の範囲（例えば、５．３％）の二糖を含む。特定の係る実施形態では、前記二糖は、スクロースである。いくつかの実施形態では、前記医薬組成物は、３．０％、３．１％、３．２％、３．３％、３．４％、３．５％、３．６％、３．７％、３．８％、３．９％、４．０％、４．１％、４．２％、４．３％、４．４％、４．５％、４．６％、４．７％、４．８％、４．９％、５．０％、５．１％、５．２％、５．３％、５．４％、５．５％、５．６％、５．７％、５．８％、５．９％、６．０％、６．１％、６．２％、６．３％、６．４％、６．５％、６．６％、６．７％、６．８％、６．９％、７．０％、７．１％、７．２％、７．３％、７．４％、７．５％、７．６％、７．７％、７．８％、７．９％、８．０％、８．１％、８．２％、８．３％、８．４％、８．５％、８．６％、８．７％、８．８％、８．９％、又は９．０％（ｗ／ｖ）で、又はこれらの値のうちの任意の２つで形成され且つそれらの値を含む範囲内でスクロースを含む。特定の実施形態では、前記医薬組成物は、５．３％（ｗ／ｖ）でスクロースを含む。
いくつかの実施形態では、前記医薬組成物は、哺乳動物、例えば、ヒト対象への投与用に適合される。係る実施形態では、前記医薬組成物は無菌であり、具体的には、パイロジェンフリーであるように調製することができる。更に、前記医薬組成物は、ヒトに対して等張であり得る。
いくつかの実施形態では、前記医薬組成物は、５．５未満のｐＨを有さない。特定の更なる実施形態では、前記医薬組成物は、酢酸塩又はクエン酸塩を含まない。特定の実施形態では、前記医薬組成物は、塩、例えば、特定の実施形態では、ＮａＣｌを含まない。特定の実施形態では、前記医薬組成物は、高いイオン強度を有さない。特定の実施形態では、前記医薬組成物は、（ｉ）リン酸バッファを含まず、且つ（ｉｉ）７以上のｐＨを有さない。
本明細書に記載の医薬組成物は、対象への直接投与（即ち、再構成又は混合工程を伴わない）のために調製することができる、又は対象への注射又は注入の前に水性ビヒクル中で再構成される凍結乾燥物として調製することができる。対象への直接投与のために、本開示に係る医薬組成物は、例えば、プレフィルドシリンジ、又はガラスバイアルなどのバイアルに提供することができる。いくつかの実施形態では、本開示の医薬組成物は、密閉された容器に供給される。いくつかの実施形態では、前記医薬組成物は、対象に投与する直前に複合組成物が再構成されるように設計されたキット形態であってもよい。例えば、凍結乾燥した抗体を、滅菌水又は滅菌バッファと共にキット形態で提供してよい。
医学的治療及び使用
更なる態様では、本開示は、Ａ型インフルエンザウイルスによる感染の予防及び／又は治療における本開示に係る医薬組成物の使用を提供する。特定の実施形態では、本開示は、Ａ型インフルエンザウイルスによる感染の予防及び／又は治療のための方法であって、それを必要とする対象に、本開示に係る医薬組成物の治療的に有効な量を投与することを含む方法を提供する。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される方法及び医薬組成物を記述又は特徴付けるために、様々な薬物動態（「ＰＫ」）パラメーターが使用される。本開示の文脈において、本明細書に提供される方法に関して参照されるＰＫパラメーターは、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（登録商標）８．２（Ｃｅｒｔａｒａ Ｌ．Ｐ．，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）の標準的な非コンパートメント法を使用して導出される。ＰＫパラメーターを評価することを目的とした抗体血清濃度の収集に関する更なる詳細は、実施例７で参照されるヒトの臨床試験に関連して記載される。用語「ｔ１／２」は、対象に投与される医薬組成物に含まれる抗体の消失半減期を意味する。用語「Ｃｌａｓｔ」は、一般に、最後の測定可能な血漿濃度（即ち、その後は、物質は、血漿中に測定可能な濃度で存在しない）を意味する。本明細書の文脈において、「Ｃｌａｓｔ」は、前記医薬組成物の投与後１４０日目に測定される血漿濃度を意味する。
Ａ型インフルエンザウイルス感染の予防は、特に、対象が、Ａ型インフルエンザウイルス感染と診断されなかった（診断が行われなかった又は診断結果が陰性であった）及び／又は対象が、Ａ型インフルエンザ感染の症状を示さない又は経験しない予防的状況を意味する。Ａ型インフルエンザウイルス感染の予防は、妊婦、小児（例えば、５９か月未満の小児）、高齢者、慢性病状（例えば、慢性的な心臓、肺、腎臓、代謝、神経発達、肝臓、又は血液疾患）を有する個体、及び免疫抑制状態（ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、化学療法又はステロイド投与を受けている、又は悪性腫瘍がある）を有する個体など、感染時に重篤な疾患又は合併症のリスクが高い対象に特に有用である。更に、Ａ型インフルエンザウイルス感染の予防はまた、例えば、公共の場で働いている又は滞在している対象、特に医療従事者など、曝露される機会の増加によってＡ型インフルエンザウイルス感染を罹患するリスクがより高い対象において特に有用である。
対照的に、治療的状況では、対象は通常、Ａ型インフルエンザウイルスに感染しており、Ａ型インフルエンザウイルス感染と診断され、及び／又はＡ型インフルエンザウイルス感染の症状を呈している。なお、Ａ型インフルエンザウイルス感染の「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」及び「治療（ｔｈｅｒａｐｙ）」／「治療的（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）」という用語は、Ａ型インフルエンザウイルス感染及び／又は関連する症状の（完全な）治癒及び軽減／低減（例えば、感染及び／又は症状の重篤度、症状の数、感染及び／又は症状の持続期間、又はそれらの任意の組合せの軽減／低減）を含む。
本明細書に記載の方法は、Ａ型インフルエンザウイルス感染と診断された対象又はＡ型インフルエンザウイルス感染の症状を示している対象におけるＡ型インフルエンザウイルス感染を治療するための方法を含み、前記方法は、本開示に係る医薬組成物の治療的に有効な量を前記対象に投与することを含む。Ａ型インフルエンザと診断された、又はＡ型インフルエンザの症状を示している対象を治療するための方法の特定の実施形態では、前記医薬組成物の投与後、対象は、（ｉ）咳、咽頭痛、鼻漏、及び鬱血から選択される１以上の呼吸器症状の回数及び／又は重篤度の低減、及び／又は（ｉｉ）発熱、悪寒、筋肉痛、頭痛、倦怠感、及び疲労感から選択される１以上の全身症状の回数及び／又は重篤度の低減を経験する。本開示及び本明細書に提供される方法の説明の目的のために、用語「発熱」は、３８℃超（１００．４°Ｆ超）の口腔内温度を意味する。
本明細書に記載の方法は、対象におけるＡ型インフルエンザウイルスによる感染を予防するための方法を含み、前記方法は、本開示に係る医薬組成物の治療的に有効な量を対象に投与することを含む。Ａ型インフルエンザウイルスによる感染の予防のための方法の特定の実施形態では、前記医薬組成物の投与後、前記対象は、（ｉ）咳、咽頭痛、鼻漏、及び鬱血から選択される１以上の呼吸器症状の回数及び／又は重篤度の低減、及び／又は（ｉｉ）発熱、悪寒、筋肉痛、頭痛、倦怠感、及び疲労感から選択される１以上の全身症状の回数及び／又は重篤度の低減を、前記医薬組成物の投与後少なくとも４週間経験する。Ａ型インフルエンザウイルスによる感染の予防のための方法の他の実施形態では、前記医薬組成物の投与後、前記対象は、（ｉ）咳、咽頭痛、鼻漏、及び鬱血から選択される１以上の呼吸器症状の回数及び／又は重篤度の低減、及び／又は（ｉｉ）発熱、悪寒、筋肉痛、頭痛、倦怠感、及び疲労感から選択される１以上の全身症状の回数及び／又は重篤度の低減を、前記医薬組成物の投与後少なくとも１２週間経験する。Ａ型インフルエンザウイルスによる感染の予防のための方法の更に他の実施形態では、前記医薬組成物の投与後、前記対象は、（ｉ）咳、咽頭痛、鼻漏、及び鬱血から選択される１以上の呼吸器症状の回数及び／又は重篤度の低減、及び／又は（ｉｉ）発熱、悪寒、筋肉痛、頭痛、倦怠感、及び疲労感から選択される１以上の全身症状の回数及び／又は重篤度の低減を、前記医薬組成物の投与後少なくとも２０週間経験する。本明細書に記載のＡ型インフルエンザウイルスによる感染の予防のための方法のいくつかの実施形態では、前記医薬組成物の投与は、前記医薬の治療的に有効な量の前記対象への単回季節的投与のみを含む。いくつかの実施形態では、前記医薬組成物の投与は、単回投与後少なくとも１０週間、少なくとも１５週間、及び少なくとも２０週間から選択される期間、本開示に係るＡ型インフルエンザ中和抗体の全身性曝露を前記対象に提供する。
本明細書において、本開示の医薬組成物の投与によってもたらされる、症状の回数及び／又は重篤度の低減への言及は、開示の医薬組成物を投与されなかったレファレンス対象との比較であることが理解される。レファレンス対象は、例えば、（ｉ）より早い期間（例えば、Ａ型インフルエンザウイルスシーズンの前）における同一対象、（ｉｉ）同一又は同様の対象：年齢又は年齢群；性別；妊娠状態；慢性疾患（慢性的な心臓、肺、腎臓、代謝、神経発達、肝臓、又は血液疾患など）又はその欠如；及び／又は免疫抑制状態又はその欠如；又は（ｉｉｉ）Ａ型インフルエンザウイルスシーズン中の集団（例えば、同一又は同様な年齢又は年齢範囲及び／又は一般的な健康状態を含む、地方、地域、又は全国）内の典型的な対象であることができる。予防は、例えば、診断されるＡ型インフルエンザ感染を発症しない、及び／又はＡ型インフルエンザシーズン全体の一部、又はＡ型インフルエンザシーズン全体に亘るＡ型インフルエンザ感染に関連する症状がないことによって決定することができる。
特定の実施形態では、本明細書に提供される方法は、本開示に係る医薬組成物の治療的に有効な量を、Ａ型インフルエンザ感染の即時のリスクを有する対象に投与することを含む。Ａ型インフルエンザ感染の即時のリスクは、通常、Ａ型インフルエンザの流行中に生じる。Ａ型インフルエンザウイルスは循環し、季節性の疾患の流行を引き起こすことが知られている（ＷＨＯ， Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ （Ｓｅａｓｏｎａｌ） Ｆａｃｔ ｓｈｅｅｔ， Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ６， ２０１８）。温暖な気候では、季節性の流行は、主に冬に生じるが、熱帯地域では、インフルエンザが年間を通して発生し、より不規則に流行を引き起こす。例えば、北半球では、１１月、１２月、１月、２月、及び３月にＡ型インフルエンザの流行リスクが高いが、南半球では、５月、６月、７月、８月、及び９月にＡ型インフルエンザの流行リスクが高い。
いくつかの実施形態では、本開示に係る医薬組成物は、Ａ型インフルエンザウイルスによる感染の予防及び／又は治療のために使用され、前記医薬組成物は、（可能性のある）Ａ型インフルエンザウイルス感染の最大３ヶ月前、（可能性のある）Ａ型インフルエンザウイルス感染の最大１ヶ月前、（可能性のある）Ａ型インフルエンザウイルス感染の最大２週間前、（可能性のある）Ａ型インフルエンザウイルス感染の最大１週間前に投与される。係る実施形態では、Ａ型インフルエンザウイルスによる感染の予防及び／又は治療のための方法は、前記医薬組成物の治療的に有効な量を対象に投与することを含み、前記医薬組成物は、（可能性のある）Ａ型インフルエンザウイルス感染の最大６ヶ月前（例えば、Ａ型インフルエンザウイルスへの予想される又は可能性のある曝露の最大６ヶ月前を含む）、（可能性のある）Ａ型インフルエンザウイルス感染の最大３ヶ月前、（可能性のある）Ａ型インフルエンザウイルス感染の最大１ヶ月前、（可能性のある）Ａ型インフルエンザウイルス感染の２週間前、又は（可能性のある）Ａ型インフルエンザウイルス感染の最大１週間前に投与される。特定の他の実施形態では、Ａ型インフルエンザウイルスによる感染の予防及び／又は治療のための方法は、前記医薬組成物の治療的に有効な量を対象に投与することを含み、前記医薬組成物は、Ａ型インフルエンザ感染の最初の症状が生じる前の、最大６日間、最大５日間、最大４日間、最大３日間、又は最大２日間に投与される。係る治療スケジュールは、Ａ型インフルエンザ感染の予防のための医薬組成物の使用に特に適し得る。
本開示に係る医薬組成物が予防のために使用される、本明細書に記載の方法のいくつかの実施形態では、本開示に係る方法は、本開示に係る医薬組成物の治療的に有効な量を、インフルエンザシーズンの開始前１～２ヶ月以内又はインフルエンザシーズンの最初の１～２ヶ月以内に前記対象に投与することを含む。
本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態では、本開示に係る医薬組成物の最初の投与の後、それに続く１回以上の投与を行うすることができる。係る実施形態は、例えば、本明細書に係る医薬組成物の治療的に有効な量を、２ヶ月ごとに１回、３ヶ月ごとに１回、４ヶ月ごとに１回、５ヶ月ごとに１回、及び６ヶ月ごとに１回から選択される間隔で対象に投与することを含む方法を含む。他の係る実施形態は、例えば、本開示に係る方法が、本明細書に係る医薬組成物の治療的に有効な量を１年間に１回及び１年間に２回から選択される間隔で投与することを含む。更に他の係る実施形態では、本開示に係る方法は、１年間、２年間、３年間、４年間、５年間、６年間、７年間、８年間、９年間、１０年間から選択される全治療期間に亘って、１年間に１回及び１年間に２回又は１年間に２回から選択される間隔で、本明細書に係る医薬組成物の治療的に有効な量を投与することを含む。
本明細書に記載の方法のそれぞれにおいて、治療的に有効な量を投与することは（予防、治療、又はその両方を目的とするかどうかにかかわらず）、Ａ型インフルエンザ中和抗体の治療的に有効な用量を送達する医薬組成物量を投与することを含む。いくつかの実施形態では、治療的に有効な量の医薬組成物を投与することは、約５０ｍｇ～約３，０００ｍｇの範囲の抗体用量を送達することを含む。前記医薬組成物中の抗体の濃度に応じて、所望の抗体用量を達成することは、単回投与の一部として複数回の注射又は注入を必要とする場合がある。例えば、対象が６００ｍｇの抗体用量を投与され、前記医薬組成物が、１５０ｍｇ／ｍｌの濃度でＡ型インフルエンザ中和抗体を含む水溶液２ｍｌを含む調製されたシリンジバイアルに提供される場合、６００ｍｇの用量を投与することは、２回の注射を必要とする（各シリンジバイアルは、前記抗体３００ｍｇを含む）。決まった用量を投与するために複数回の注射又は注入が必要な場合でも、その用量は「単一用量」と称され、その投与は「単回投与」とみなされる。一般に、決まった単一用量を投与するために複数回の注射又は注入が必要な場合、前記複数の注射又は注入は、約５分間以下、約１５分間以下、約３０分間以下、約１時間以下、約２時間以下、約４時間以下、約６時間以下、約１日間以下、約１週間以下、又は約１ヶ月以下の期間に亘って投与される。
本明細書に記載の方法の特定の実施形態では、本開示に係る抗体の治療的に有効な量を送達することは、Ａ型インフルエンザ中和抗体の約６０ｍｇ～約２，５００ｍｇの範囲の単一用量を対象に送達することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、Ａ型インフルエンザ中和抗体の、最大６０ｍｇの用量、最大３００ｍｇの用量、最大１，２００ｍｇの用量、最大１，８００ｍｇの用量、最大２，０００ｍｇの用量、及び最大２，５００ｍｇの用量から選択される単一用量を送達するのに十分な量の前記医薬組成物を対象に投与することを含む。他の実施形態では、本明細書に記載の方法は、Ａ型インフルエンザ中和抗体の、６０ｍｇ、３００ｍｇ、１，２００ｍｇ、及び１，８００ｍｇから選択される単一用量を提供するのに十分な量の前記医薬組成物を対象に送達することを含む。更に別の実施形態では、本明細書に記載の方法は、Ａ型インフルエンザ中和抗体の、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇ、８００ｍｇ、９００ｍｇ、１，０００ｍｇ、１，１００ｍｇ、及び１，２００ｍｇから選択される単一用量を提供するのに十分な量の前記医薬組成物を対象に送達することを含む。
本明細書に記載の方法の特定の実施形態では、前記医薬組成物の投与は、単回投与後少なくとも１０週間、少なくとも１５週間、及び少なくとも２０週間から選択される期間、本開示に係るＡ型インフルエンザ中和抗体の全身性曝露を対象に提供する。特定の係る実施形態では、前記Ａ型インフルエンザ中和抗体は、ヒト対象において４０日間超のｔ１／２を示すことができる。例えば、本明細書に記載の方法、医薬組成物、及びＡ型インフルエンザ中和抗体は、４５日間超、５０日間超、５５日間超、６０日間超、及び６５日間超から選択されるＡ型インフルエンザ中和抗体のｔ１／２を提供することができる。更に他の実施形態では、本明細書に記載の方法、医薬組成物、及びＡ型インフルエンザ中和抗体は、４０～７０日間、４５～６５日間、及び５０～６０日間から選択されるＡ型インフルエンザ中和抗体のｔ１／２を提供することができる。さらに他の実施形態では、本明細書に記載の方法、医薬組成物、及びＡ型インフルエンザ中和抗体は、５０日間、５１日間、５２日間、５３日間、５４日間、５５日間、５６日間、５７日間、５８日間、５９日間、６０日間、６１日間、６２日間、６３日間、６４日間、６５日間、６６日間、６７日間、及び６８日間のいずれか１つから選択されるＡ型インフルエンザ中和抗体のｔ１／２を提供することができる。
本明細書に記載のＡ型インフルエンザウイルスによる感染の予防及び／又は治療の方法は、前記Ａ型インフルエンザ中和抗体の６０ｍｇの単一用量を対象に送達するのに十分な量の前記医薬組成物を投与することを含み得る。特定の係る実施形態では、前記Ａ型インフルエンザ中和抗体の単回６０ｍｇ用量の送達は、前記抗体が、投与後最大１４０日間、約１μｇ／ｍＬ～約４．５μｇ／ｍＬの血清濃度で対象内に存在するように、長期間に亘る対象内の前記抗体の全身性曝露を提供する。
本明細書に記載のＡ型インフルエンザウイルスによる感染の予防及び／又は治療の方法は、前記Ａ型インフルエンザ中和抗体の３００ｍｇの単一用量を対象に送達するのに十分な量の前記医薬組成物を投与することを含み得る。特定の係る実施形態では、前記Ａ型インフルエンザ中和抗体の３００ｍｇの単一用量の送達は、前記抗体が、投与後最大１４０日間、約５μｇ／ｍＬ～約２６．５μｇ／ｍＬの血清濃度で対象内に存在するように、長期間に亘る対象内の前記抗体の全身性曝露を提供する。
本明細書に記載のＡ型インフルエンザウイルスによる感染の予防及び／又は治療の方法は、前記Ａ型インフルエンザ中和抗体の１，２００ｍｇの単一用量を対象に送達するのに十分な量の前記医薬組成物を投与することを含み得る。特定の係る実施形態では、Ａ型インフルエンザ中和抗体の１，２００ｍｇの単一用量の送達は、前記抗体が、投与後最大１４０日間、約２７μｇ／ｍＬ～約１１０μｇ／ｍＬの血清濃度で対象内に存在するように、長期間に亘る対象内の前記抗体の全身性曝露を提供する。
本明細書に記載のＡ型インフルエンザウイルスによる感染の予防及び／又は治療の方法は、前記Ａ型インフルエンザ中和抗体の１，８００ｍｇの単一用量を対象に送達するのに十分な量の前記医薬組成物を投与することを含み得る。特定の係る実施形態では、前記Ａ型インフルエンザ中和抗体の１，８００ｍｇの単一用量の送達は、前記抗体が、投与後最大１４０日間、約３３．５μｇ／ｍＬ～約１５０μｇ／ｍＬの血清濃度で対象内に存在するように、長期間に亘る対象内の前記抗体の全身性曝露を提供する。
本明細書に記載のＡ型インフルエンザウイルスによる感染の予防及び／又は治療のための方法のいずれにおいても、前記医薬組成物は、注射又は注入を介して投与することができる。注入によって投与される場合、前記医薬組成物は、例えば、静脈内、動脈内、又は脳室内注入によって投与され得る。注射によって投与される場合、前記医薬組成物は、例えば、静脈内、動脈内、脳室内、髄内、腹腔内、髄腔内、脳室内、又は皮下注射によって投与され得る。本明細書に記載される方法の具体的な実施形態では、前記医薬組成物は、筋肉内（「ＩＭ」）注射を介して投与される。
本明細書に記載されるＡ型インフルエンザウイルスによる感染の予防及び／又は治療のための方法の特定の実施形態では、前記医薬組成物及びＡ型インフルエンザ中和抗体は、本明細書に記載される量及び用量で投与されたとき、対象によって十分に忍容される。例えば、特定の実施形態では、本明細書に記載されるＡ型インフルエンザウイルスによる感染の予防及び／又は治療のための方法は、有害事象共通用語規準（ＣＴＣＡＥ）にしたがう有害事象（ＡＥ）を対象に経験させない。他の実施形態では、本明細書に記載されるＡ型インフルエンザウイルスによる感染の予防及び／又は治療のための方法は、有害事象共通用語規準（ＣＴＣＡＥ）にしたがう中等度の有害事象（ＡＥ）を対象に経験させない。更に他の実施形態では、本明細書に記載されるＡ型インフルエンザウイルスによる感染の予防及び／又は治療のための方法は、有害事象共通用語規準（ＣＴＣＡＥ）にしたがう重度の有害事象（ＡＥ）を対象に経験させない。
インフルエンザによる感染の予防及び／又は治療のための方法の特定の実施形態では、前記対象は、１８歳～６５歳である。特定の係る実施形態では、前記対象は、１８ｋｇ／ｍ２～３２ｋｇ／ｍ２の範囲及び１８ｋｇ／ｍ２～３５ｋｇ／ｍ２の範囲から選択されるボディマス指数を有する。
併用療法
本開示に係る方法及び使用における本開示に係る医薬組成物の投与は、単独で、又は助剤（ｃｏ－ａｇｅｎｔ）（本明細書では「追加の活性成分」とも呼ばれる）と併用して行うことができ、インフルエンザ感染の予防及び／又は治療に有用であり得る。
本開示は、本開示に係る医薬組成物の投与を包含し、インフルエンザの治療及び／又は予防に有用な助剤又は別の治療レジメンの前に、同時に、又は後に対象に投与される。前記助剤と併用して投与される前記医薬組成物は、同一又は異なる組成物中で、同一又は異なる投与経路によって投与することができる。本明細書において使用するとき、「併用療法」、「併用された投与」、「併用して投与される」などの表現は、（「併用して」投与される）薬物の併用作用を意味する。この目的のために、前記併用された薬物は、通常、同時に及び／又は重複する時間帯内で作用部位に存在する。両方の薬物の効果が相互作用できるように、薬物の一方に起因する効果が持続している間に（薬物それ自体は、既に検出可能な量ではない場合でも）、他方の薬物が投与されることもあり得る。しかし、他の薬物よりも遥かに前（例えば、１、２、３ヶ月間又は１年間を超える間）に投与された薬物で、他の薬物を投与するときに既に検出可能なレベルで存在しない（又はその効果が持続していない）場合、通常、「併用して」投与されるとはみなされない。例えば、異なるインフルエンザの季節（例えば、連続的）に投与されるインフルエンザ薬は、通常、「併用して」投与されない。
前記他の治療レジメン又は助剤は、例えば、抗ウイルス薬であることができる。抗ウイルス薬（又は「抗ウイルス剤」又は「抗ウイルス薬物」）は、ウイルス感染症の治療に特に使用される医薬のクラスを意味する。細菌用の抗生物質と同様に、抗ウイルス薬は、様々なウイルスに対して有用な広域スペクトルの抗ウイルス薬又は特定のウイルスに使用される特定の抗ウイルス薬であることができる。大部分の抗生物質と異なり、抗ウイルス薬は通常、標的病原体を破壊するのではなく、通常、それらの発達を阻害する。
したがって、本開示の別の態様では、本開示に係る医薬組成物は、本明細書に記載の（医学的）使用のための抗ウイルス薬と併用して（その前に、それと同時に、又はその後に）投与される。
一般に、抗ウイルス薬は、広域スペクトルの抗ウイルス薬（インフルエンザウイルス及び他のウイルスに対して有用である）又はインフルエンザウイルス特異的な抗ウイルス薬であることができる。いくつかの実施形態では、前記抗ウイルス剤は、抗体ではない。例えば、前記抗ウイルス薬は、低分子薬であることができる。インフルエンザの予防及び／又は治療に有用な低分子抗ウイルス薬の例は、Ｗｕ Ｘ， Ｗｕ Ｘ， Ｓｕｎ Ｑ， ｅｔ ａｌ． Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ａｇｅｎｔｓ． Ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓ． ２０１７；７（４）：８２６－８４５に記載されている。Ｗｕ ｅｔ ａｌ，２０１７に記載されているように、当業者は、インフルエンザの予防及び／又は治療に有用な抗ウイルス薬に精通している。インフルエンザに有用な更なる抗ウイルス薬は、Ｄａｖｉｄｓｏｎ Ｓ． Ｔｒｅａｔｉｎｇ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ， Ｆｒｏｍ Ｎｏｗ ａｎｄ Ｉｎｔｏ ｔｈｅ Ｆｕｔｕｒｅ． Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２０１８；９：１９４６及びＫｏｓｚａｌｋａ Ｐ， Ｔｉｌｍａｎｉｓ Ｄ， Ｈｕｒｔ ＡＣ． Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ａｎｔｉｖｉｒａｌｓ ｃｕｒｒｅｎｔｌｙ ｉｎ ｌａｔｅ－ｐｈａｓｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌ． Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｏｔｈｅｒ Ｒｅｓｐｉｒ Ｖｉｒｕｓｅｓ． ２０１７；１１（３）：２４０－２４６に記載されている。
インフルエンザの予防及び／又は治療に有用な抗ウイルス薬は、（ｉ）インフルエンザウイルスそれ自体の機能性タンパク質を標的とする剤、及び（ｉｉ）宿主細胞（例えば、上皮）を標的とする剤を含む。
宿主細胞標的剤は、広域スペクトル抗ウイルス薬のチアゾリドクラス、シアリダーゼ融合タンパク質、ＩＩＩ型インターフェロン、Ｂｃｌ－２（Ｂ細胞リンパ腫２）阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、Ｖ－ＡＴＰアーゼ阻害剤、及び抗酸化剤を含む。広域スペクトル抗ウイルス薬のチアゾリドクラスの例としては、血中で活性代謝型チゾキサニド（ＴＩＺ）に迅速に脱アセチル化されるニタゾキサニド（ＮＴＺ）及びＲＭ５０６１など、ＮＴＺに構造的に関連する第２世代チアゾリド化合物が挙げられる。フルダーゼ（ＤＡＳ１８１）は、シアリダーゼ融合タンパク質の例である。ＩＩＩ型ＩＦＮとしては、例えば、ＩＦＮλが挙げられる。Ｂｃｌ－２阻害剤の非限定的な例としては、ＡＢＴ－７３７、ＡＢＴ－２６３、ＡＢＴ－１９９、ＷＥＨＩ－５３９、及びＡ－１３３１８５２（Ｄａｖｉｄｓｏｎ Ｓ． Ｔｒｅａｔｉｎｇ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ， Ｆｒｏｍ Ｎｏｗ ａｎｄ Ｉｎｔｏ ｔｈｅ Ｆｕｔｕｒｅ． Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２０１８；９：１９４６）が挙げられる。プロテアーゼ阻害剤の例としては、ナファモスタット、ロイペプチン、イプシロン－アミノカプロン酸、カモスタット、及びアプロチニンが挙げられる。Ｖ－ＡＴＰアーゼ阻害剤としては、ＮｏｒａｋｉｎＲ、ＰａｒｋｏｐａｎＲ、ＡｎｔｉｐａｒｋｉｎＲ、及びＡｋｉｎｅｔｏｎＲが挙げられる。抗酸化剤の例は、α－トコフェロールである。
いくつかの実施形態では、前記抗ウイルス薬は、インフルエンザウイルスそれ自体の機能性タンパク質を標的とする剤である。例えば、前記抗ウイルス薬は、ヘマグルチニンではないインフルエンザウイルスの機能性タンパク質を標的にすることができる。一般に、インフルエンザウイルスの機能性タンパク質を標的とする抗ウイルス薬は、侵入阻害剤、ヘマグルチニン阻害剤、ノイラミニダーゼ阻害剤、インフルエンザポリメラーゼ阻害剤（ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲｐ）阻害剤）、ヌクレオカプシドタンパク質阻害剤、Ｍ２イオンチャネル阻害剤、及び塩酸アルビドールが挙げられる。侵入阻害剤の非限定的な例としては、グリチルリチン酸（グリチルリチン）及びグリチルレチン酸などのトリテルペノイド誘導体；サポニン；ウラルサポニンＭ－Ｙ（例えば、ウラルサポニンＭ）；デキストラン硫酸（ＤＳ）；シリマリン；クルクミン；並びにコンカナマイシンＡ、バフィロマイシンＡ１、及びクロロキンなどのリソソーム作用剤が挙げられる。ヘマグルチニン阻害剤の非限定的な例としては、ＢＭＹ－２７７０９；スタキフリン；ゴシポール、ルチン、ケルセチン、キシロピン、及びテアフラビンなどの天然物；Ｗｕ Ｘ， Ｗｕ Ｘ， Ｓｕｎ Ｑ， ｅｔ ａｌ． Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ａｇｅｎｔｓ． Ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓ． ２０１７；７（４）：８２６－８４５に記載される化合物１などの３価糖ペプチド模倣物；Ｗｕ Ｘ， Ｗｕ Ｘ， Ｓｕｎ Ｑ， ｅｔ ａｌ． Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ａｇｅｎｔｓ． Ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓ． ２０１７；７（４）：８２６－８４５に記載される化合物２などのポドカルピン酸誘導体；Ｗｕ Ｘ， Ｗｕ Ｘ， Ｓｕｎ Ｑ， ｅｔ ａｌ． Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ａｇｅｎｔｓ． Ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓ． ２０１７；７（４）：８２６－８４５に記載される化合物３などの天然物５環性トリテルペノイド；及びネオエキヌリンＢなどのプレニル化インドールジケトピペラジンアルカロイドなどが挙げられる。ヌセロカプシドタンパク質阻害剤の非限定的な例としては、ヌクレオジン、シクロヘキシミド、ナプロキセン、及びインガビリンが挙げられる。Ｍ２イオンチャネル阻害剤の非限定的な例としては、承認されたＭ２阻害剤であるアマンタジンとリマンタジン及びそれらの誘導体、並びにスペルミン、スペルミジン、スピロピペリジン、及びピナンアミン誘導体などの非アダマンタン誘導体が挙げられる。
いくつかの実施形態では、前記抗ウイルス薬は、ノイラミニダーゼ（ＮＡ）阻害剤及びインフルエンザポリメラーゼ阻害剤（ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲｐ）阻害剤）から選択される。ノイラミニダーゼ（ＮＡ）阻害剤の非限定的な例としては、ザナミビル；オセルタミビル；ペラミビル；ラニナミビル；Ｗｕ Ｘ， Ｗｕ Ｘ， Ｓｕｎ Ｑ， ｅｔ ａｌ． Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ａｇｅｎｔｓ． Ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓ． ２０１７；７（４）：８２６－８４５に記載される化合物４～１０などのそれらの誘導体、及び二量体ザナミビルコンジュゲート（例えば、Ｗｕ Ｘ， Ｗｕ Ｘ， Ｓｕｎ Ｑ， ｅｔ ａｌ． Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ａｇｅｎｔｓ． Ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓ． ２０１７；７（４）：８２６－８４５に記載されるもの）；安息香酸誘導体（例えば、化合物１１～１４などの、Ｗｕ Ｘ， Ｗｕ Ｘ， Ｓｕｎ Ｑ， ｅｔ ａｌ． Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ａｇｅｎｔｓ． Ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓ． ２０１７；７（４）：８２６－８４５に記載されるもの）；ピロリジン誘導体（例えば、化合物１５～１８などの、Ｗｕ Ｘ， Ｗｕ Ｘ， Ｓｕｎ Ｑ， ｅｔ ａｌ． Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ａｇｅｎｔｓ． Ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓ． ２０１７；７（４）：８２６－８４５に記載されるもの）；ギンゲチン－シアル酸コンジュゲート；フラバノンとフラボノイドイソスクテラレイン及びその誘導体（例えば、Ｗｕ Ｘ， Ｗｕ Ｘ， Ｓｕｎ Ｑ， ｅｔ ａｌ． Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ａｇｅｎｔｓ． Ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓ． ２０１７；７（４）：８２６－８４５に記載されるもの）；ＡＶ５０８０；及びＮ－置換オセルタミビルアナログ（例えば、Ｗｕ Ｘ， Ｗｕ Ｘ， Ｓｕｎ Ｑ， ｅｔ ａｌ． Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ａｇｅｎｔｓ． Ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓ． ２０１７；７（４）：８２６－８４５に記載されるもの）が挙げられる。インフルエンザポリメラーゼ阻害剤（ＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＲｄＲｐ））阻害剤の非限定的な例としては、Ｗｕ Ｘ， Ｗｕ Ｘ， Ｓｕｎ Ｑ， ｅｔ ａｌ． Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉ－ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ａｇｅｎｔｓ． Ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓ． ２０１７；７（４）：８２６－８４５に記載されるものなどのＲｄＲｐ破壊化合物；ＪＮＪ６３６２３８７２（ＶＸ－７８７）などのＰＢ２キャップ結合阻害剤；バロキサビルマルボキシル（Ｓ－０３３１８８）などのキャップ依存性エンドヌクレアーゼ阻害剤；ＡＬ－７９４、ＥＧＣＧ、及びその脂肪族アナログ、Ｎ－ヒドロキサム酸及びＮ－ヒドロキシイミド、フルチミド及びその芳香族アナログ、テトラミン酸誘導体、Ｌ－７４２，００１、ＡＮＡ－０、ポリフェノールカテキン、フェネチル－フェニルフタルイミドアナログ、大環状ビスビベンジル、ピリミジノール、フラーレン、ヒドロキシキノリノン、ヒドロキシピリジノン、ヒドロキシピリダジノン、トリヒドロキシフェニル含有化合物、２－ヒドロキシベンズアミド、ヒドロキシピリミジノン、β－ジケト酸及びその生物学的等価性化合物、チオセミカルバゾン、ビスジヒドロキシインドール－カルボキサミド、及びピリドピペラジンジオン（Ｅｎｄｏ－１）などのＰＡエンドヌクレアーゼ阻害剤；リバビリン、ファビピラビル（Ｔ－７０５）、２’－デオキシ－２’－フルオログアノシン（２’－ＦｄＧ）、２’－置換カルバ－ヌクレオシドアナログ、６－メチル－７－置換－７－デアザプリンヌクレオシドアナログ、及び２’－デオキシ－２’－フルオロシチジン（２’－ＦｄＣ）などのヌクレオシド及び核酸塩基アナログ阻害剤が挙げられる。例えば、前記抗ウイルス薬は、ザナミビル、オセルタミビル、又はバロキサビルであることができる。
したがって、本開示に係る医薬組成物は、追加の活性成分の１以上を含むことができる。本開示に係るＡ型インフルエンザ中和抗体は、前記追加の活性成分（助剤）と同一の医薬組成物中に存在することができる。或いは、本開示に係るＡ型インフルエンザ中和抗体及び前記追加の活性成分（助剤）は、別々の医薬組成物中（例えば、同一組成物中ではない）に含有される。したがって、１超の追加の活性成分（助剤）が想定される場合、本開示に係る追加の活性成分（助剤）のそれぞれ、及び抗体又は抗原結合断片は、異なる医薬組成物に含有され得る。係る異なる医薬組成物は、組み合わせて／同時に、又は別々の時点及び／又は別々の投与経路で投与することができる。
本開示に係るＡ型インフルエンザ中和抗体及び前記追加の活性成分（助剤）は、相加的又は相乗的な治療効果をもたらし得る。用語「相乗性」は、それぞれの活性剤の個々の効果の和よりも大きい２以上の活性剤の併用効果を記述するために使用される。したがって、２以上の剤の併用効果が、活性又はプロセスの「相乗的阻害」をもたらす場合、活性又はプロセスの阻害は、それぞれの活性剤の阻害効果の和よりも大きいことが意図される。用語「相乗的治療効果」は、２以上の治療の併用で観察される治療効果であり、個々の治療それぞれで観察される個々の治療効果の和よりも大きい治療効果（これは、いくつかのパラメーターのいずれかによって測定される）を意味する。
したがって、本開示はまた、（ｉ）本明細書に記載のＡ型インフルエンザ中和抗体、及び（ｉｉ）上記に記載の抗ウイルス薬の併用を提供する。
本開示は、以下の例示的な実施形態を含む。
実施形態１．配列番号１、配列番号２、及び配列番号３でそれぞれ表される重鎖ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、及びＣＤＲ３配列；配列番号４、配列番号５、及び配列番号６でそれぞれ表される軽鎖ＣＤＲ１配列、ＣＤＲ２配列、及びＣＤＲ３配列、並びに前記重鎖の定常領域に変異Ｍ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓを含む抗体。
実施形態２．前記抗体が、Ａ型インフルエンザウイルスのヘマグルチニンに結合する、実施形態１に記載の抗体。
実施形態３．前記抗体が、Ａ型インフルエンザウイルスによる感染を中和する、実施形態１又は２に記載の抗体。
実施形態４．前記抗体が、前記重鎖の前記定常領域に前記変異Ｍ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓを含まないことのみ前記抗体と異なる比較抗体によるＡ型インフルエンザの中和に必要な用量の半分を超えない用量でＡ型インフルエンザ感染を中和する、実施形態３に記載の抗体。
実施形態５．前記用量が、前記比較抗体によるＡ型インフルエンザの中和に必要な用量の３分の１を超えない、実施形態４に記載の抗体。
実施形態６．前記用量が、前記比較抗体によるＡ型インフルエンザの中和に必要な用量の５分の１を超えない、実施形態４又は５に記載の抗体。
実施形態７．前記抗体が、ヒト抗体である、前述の実施形態のいずれかに記載の抗体。
実施形態８．前記抗体が、モノクローナル抗体である、前述の実施形態のいずれかに記載の抗体。
実施形態９．前記抗体が、ＩｇＧ型である、前述の実施形態のいずれかに記載の抗体。
実施形態１０．前記抗体が、ＩｇＧ１型である、実施形態６に記載の抗体。
実施形態１１．前記抗体の前記軽鎖が、カッパー軽鎖である、前述の実施形態のいずれかに記載の抗体。
実施形態１２．前記抗体が、配列番号７と少なくとも７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８と少なくとも７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、実施形態１で定義された前記ＣＤＲ配列が維持される、前述の実施形態のいずれかに記載の抗体。
実施形態１３．前記抗体が、配列番号７と少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８と少なくとも７５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、実施形態１で定義された前記ＣＤＲ配列が維持される、前述の実施形態のいずれかに記載の抗体。
実施形態１４．前記抗体が、配列番号７と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、実施形態１で定義された前記ＣＤＲ配列が維持される、前述の実施形態のいずれかに記載の抗体。
実施形態１５．前記抗体が、配列番号７と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、実施形態１で定義された前記ＣＤＲ配列が維持される、前述の実施形態のいずれかに記載の抗体。
実施形態１６．前記抗体が、配列番号７と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、実施形態１で定義された前記ＣＤＲ配列が維持される、前述の実施形態のいずれかに記載の抗体。
実施形態１７．前記抗体が、配列番号７と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８と少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、実施形態１で定義された前記ＣＤＲ配列が維持される、前述の実施形態のいずれかに記載の抗体。
実施形態１８．前記抗体が、配列番号７で表されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号８で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含み、実施形態１で定義された前記ＣＤＲ配列が維持される、前述の実施形態のいずれかに記載の抗体。
実施形態１９．前記抗体の前記ＣＨ３領域が、Ｍ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓの他に更なる変異を含まない、前述の実施形態のいずれかに記載の抗体。
実施形態２０．前記抗体の前記Ｆｃ領域が、Ｍ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓの他に更なる変異を含まない、前述の実施形態のいずれかに記載の抗体。
実施形態２１．前記抗体が、配列番号９で表されるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号１０で表されるアミノ酸配列を含む軽鎖とを含む、前述の実施形態のいずれかに記載の抗体。
実施形態２２．前記抗体が、配列番号９で表されるアミノ酸配列からなる重鎖と、配列番号１０で表されるアミノ酸配列からなる軽鎖とを含む、前述の実施形態のいずれかに記載の抗体。
実施形態２３．Ａ型インフルエンザウイルスによる感染の予防又は治療における使用のための前述の実施形態のいずれかに記載の抗体であって、任意に、前記抗体又は前記抗体を含む医薬組成物が、約２．１７μｇ／ｍＬのインビトロインフルエンザ感染阻害ＩＣ９０を有する抗体。
実施形態２４．前記抗体が、予防的に投与される、実施形態２３に記載の使用のための抗体。
実施形態２５．治療対象が、Ａ型インフルエンザ感染の即時のリスクを有する、実施形態２３又は２４に記載の使用のための抗体。
実施形態２６．実施形態１から２２のいずれかに記載の抗体をコードするポリヌクレオチドを含む、核酸分子。
実施形態２７．実施形態２６に記載の核酸分子を含む、ベクター。
実施形態２８．実施形態１から２２のいずれかに記載の抗体を発現する、又は実施形態２７に記載のベクターを含む、細胞。
実施形態２９．実施形態１から２２のいずれかに記載の抗体、実施形態２６に記載の核酸、実施形態２７に記載のベクター、又は実施形態２８に記載の細胞、及び任意に、薬学的に許容される希釈剤又は担体を含む、医薬組成物。
実施形態３０．前記抗体を、１５０ｍｇ／ｍＬで含む、実施形態２９に記載の医薬組成物。
実施形態３１．水（例えば、注射用ＵＳＰ水又は注射用ＵＳ滅菌水）を更に含む、実施形態３０又は３１に記載の医薬組成物。
実施形態３２．ヒスチジンを更に含み、任意に、前記組成物中、１０ｍＭ～４０ｍＭの範囲の濃度で、好ましくは２０ｍＭで含む、実施形態３８から４０のいずれかに記載の医薬組成物。
実施形態３３．スクロースなどの二糖などの糖を更に含み、任意に、３．０％～９．０％（ｗ／ｖ）の範囲、好ましくは３．６％～８．６％の範囲、より好ましくは４％～６％の範囲で含む、実施形態２９から３２のいずれかに記載の医薬組成物。
実施形態３４．界面活性剤又はトリブロックコポリマー、任意に、ポリソルベート又はポロキサマー１８８、好ましくはポリソルベート８０（ＰＳ８０）を更に含み、任意に、０．０１％～０．０５％（ｗ／ｖ）の範囲で、好ましくは０．０２％（ｗ／ｖ）で含む、実施形態２９から３３のいずれかに記載の医薬組成物。
実施形態３５．前記医薬組成物が、５．５～６．５の範囲、又は５．８～６．２の範囲のｐＨを有する、又は５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、若しくは６．５、好ましくは６．０のｐＨを有する、実施形態２９から３４のいずれかに記載の医薬組成物。
実施形態３６．Ａ型インフルエンザウイルス感染の予防、治療、又は軽減のための医薬の製造における、実施形態１から２２のいずれかに記載の抗体、実施形態２６に記載の核酸、実施形態２７に記載のベクター、実施形態２８に記載の細胞、又は実施形態２９から３５のいずれかに記載の医薬組成物の使用。
実施形態３７．Ａ型インフルエンザウイルスによる感染の予防又は治療における使用のための、実施形態１から２２のいずれかに記載の抗体、実施形態２６に記載の核酸、実施形態２７に記載のベクター、実施形態２８に記載の細胞、又は実施形態２９から３５のいずれかに記載の医薬組成物。
実施形態３８．前記抗体、前記核酸、前記ベクター、前記細胞、又は前記医薬組成物が予防的に投与される、実施形態３７に記載の使用のための抗体、核酸、ベクター、細胞、又は医薬組成物。
実施形態３９．前記抗体、前記核酸、前記ベクター、前記細胞、又は前記組成物が、抗ウイルス剤と併用して投与される、実施形態３７又は３８に記載の使用のための抗体、核酸、ベクター、細胞、又は医薬組成物。
実施形態４０．前記抗ウイルス薬が、ノイラミニダーゼ阻害剤及びインフルエンザポリメラーゼ阻害剤から選択される、実施形態３９に記載の使用のための抗体、核酸、ベクター、細胞、又は医薬組成物。
実施形態４１．前記抗ウイルス薬が、オセルタミビル、ザナミビル、及びバロキサビルから選択される、実施形態３９又は４０に記載の使用のための抗体、核酸、ベクター、細胞、又は医薬組成物。
実施形態４２．
（ｉ）実施形態１から２２のいずれかに記載の抗体と、
（ｉｉ）抗ウイルス剤との併用。
実施形態４３．前記抗ウイルス剤が、ノイラミニダーゼ阻害剤及びインフルエンザポリメラーゼ阻害剤から選択される、実施形態４２に記載の併用。
実施形態４４．前記抗ウイルス剤が、オセルタミビル、ザナミビル、及びバロキサビルから選択される、実施形態４２又は４３に記載の併用。
実施形態４５．Ａ型インフルエンザウイルスによる感染の予防又は治療において使用するための、実施形態４２から４４のいずれかに記載の併用。
実施形態４６．Ａ型インフルエンザウイルス感染を低減する、又はＡ型インフルエンザウイルス感染のリスクを低下させる方法であって、それを必要とする対象に、実施形態１から２２のいずれかに記載の抗体の治療的に有効な量を投与することを含む、方法。
実施形態４７．前記抗体が、予防的に投与される、実施形態４６に記載の方法。
実施形態４８．前記対象が、Ａ型インフルエンザ感染の即時のリスクを有する、実施形態４６又は４７に記載の方法。
実施形態４９．前記抗体が、抗ウイルス剤と併用して投与される、実施形態４６から４８のいずれか記載の方法。
実施形態５０．対象におけるＡ型インフルエンザ感染を治療又は予防する方法であって、実施形態１から２２のいずれかに記載の抗体を含む医薬組成物の単一用量を前記対象に投与することを含み、任意に、前記抗体が、配列番号１０で表される軽鎖アミノ酸配列と配列番号９で表される重鎖アミノ酸配列とを含む、方法。
実施形態５１．前記医薬組成物が、前記抗体を、１００ｍｇ／ｍＬ、１１０ｍｇ／ｍＬ、１２０ｍｇ／ｍＬ、１３０ｍｇ／ｍＬ、１４０ｍｇ／ｍＬ、１５０ｍｇ／ｍＬ、１６０ｍｇ／ｍＬ、１７０ｍｇ／ｍＬ、１８０ｍｇ／ｍＬ、１９０ｍｇ／ｍＬ、又は２００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは１５０ｍｇ／ｍＬなどの、１００ｍｇ／ｍＬ～２００ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度で含む、実施形態５０に記載の方法。
実施形態５２．前記単一用量が、前記対象の体重１ｋｇ当たり３、４、５、６、又は７、好ましくは５ｍｇの前記抗体を含む、実施形態５０又は５１に記載の方法。
実施形態５３．前記単一用量が、最大６０ｍｇ、最大３００ｍｇ、最大１２００ｍｇ、最大１８００ｍｇ、又は最大３０００ｍｇの前記抗体を含む、実施形態５０から５２のいずれかに記載の方法。
実施形態５４．前記抗体が、６０ｍｇ、３００、１２００、又は１８００ｍｇの用量で投与される、実施形態５０から５３のいずれかに記載の方法。
実施形態５５．前記抗体が、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１１００、又は１２００ｍｇの用量で投与される、実施形態５０から５４のいずれかに記載の方法。
実施形態５６．前記対象が、ヒトである、実施形態５０から５５のいずれかに記載の方法。
実施形態５７．前記方法が、筋肉内（ＩＭ）注射を含む、実施形態５０から５６のいずれかに記載の方法。
実施形態５８．前記医薬組成物が、水（例えば、注射用ＵＳＰ水又は注射用ＵＳ滅菌水）を更に含む、実施形態５０から５７のいずれかに記載の方法。
実施形態５９．前記医薬組成物が、ヒスチジンを更に含み、任意に、前記組成物中、１０ｍＭ～４０ｍＭの濃度で、好ましくは２０ｍＭの濃度で含む、実施形態５０から５８のいずれかに記載の方法。
実施形態６０．前記医薬組成物が、スクロースなどの二糖などの糖を更に含み、任意に、３．０％～９．０％（ｗ／ｖ）の範囲、好ましくは３．６％～８．６％の範囲、より好ましくは４％～６％の範囲で含む、実施形態５０から５９のいずれかに記載の方法。
実施形態６１．前記医薬組成物が、界面活性剤又はトリブロックコポリマー、任意に、ポリソルベート又はポロキサマー１８８、好ましくはポリソルベート８０（ＰＳ８０）を更に含み、任意に、０．０１％～０．０５％（ｗ／ｖ）の範囲で、好ましくは０．０２％（ｗ／ｖ）で含む、実施形態５０から６０のいずれかに記載の方法。
実施形態６２．前記医薬組成物が、５．８～６．２の範囲、５．９～６．１の範囲、又は５．８、５．９、６．０、６．１、若しくは６．２のｐＨを有する、実施形態５０から６１のいずれかに記載の方法。
実施形態６３．前記単一用量が、１回の注射当たり０．８ｍＬ～４ｍＬの医薬組成物を含む又はからなる、実施形態５０から６２のいずれかに記載の方法。
実施形態６４．前記単一用量が、１回の注射当たり、０．８ｍＬ、０．９ｍＬ、１．０ｍＬ、１．１ｍＬ、１．２ｍＬ、１．３ｍＬ、１．４ｍＬ、１．５ｍＬ、１．６ｍＬ、１．７ｍＬ、１．８ｍＬ、１．９ｍＬ、２．０ｍＬ、２．１ｍＬ、２．２ｍＬ、２．３ｍＬ、２．４ｍＬ、２．５ｍＬ、２．６ｍＬ、２．７ｍＬ、２．８ｍＬ、２．９ｍＬ、３．０ｍＬ、３．１ｍＬ、３．２ｍＬ、３．３ｍＬ、３．４ｍＬ、３．５ｍＬ、３．６ｍＬ、３．７ｍＬ、３．８ｍＬ、３．９ｍＬ、又は４．０ｍＬの前記医薬組成物を含む又はからなる、実施形態６３に記載の方法。
実施形態６５．前記対象に前記医薬組成物を投与後、約４週間、約１２週間、及び／又は約２０週間で、前記対象が、プラセボを投与された、又はＡ型インフルエンザの治療又はワクチンを受けなかったレファレンス対象（例えば、同じ性別、年齢、体重、及び／又は一般的な健康状態の対象）と同一期間に亘って比較して、（ｉ）咳；咽頭痛；鼻漏；鬱血；又はそれらの任意の組合せから選択される呼吸器症状の回数及び／又は重篤度の低減、及び／又は（ｉｉ）発熱［口腔内温度＞３８℃（１００．４°Ｆ）］；悪寒；筋肉痛；頭痛；倦怠感；疲労感；又はそれらの任意の組合せから選択される全身性症状の回数及び／又は重篤度の低減を経験する、実施形態５０から６４のいずれかに記載の方法。
実施形態６６．前記対象が、１８歳～６５歳である、及び／又は１８ｋｇ／ｍ２～３２ｋｇ／ｍ２の範囲又は１８ｋｇ／ｍ２～３５ｋｇ／ｍ２のボディマス指数を有する、実施形態５０から６７のいずれかに記載の方法。
実施形態６７．（ｉ）前記単一用量が３００ｍｇの前記抗体を含み、前記医薬組成物が１５０ｍｇ／ｍＬで前記抗体を含み、前記用量が２ｍＬの前記医薬組成物を含む単回注射によって投与される；（ｉｉ）前記単一用量が１２００ｍｇの前記抗体を含み、前記医薬組成物が１５０ｍｇ／ｍＬで前記抗体を含み、前記用量が４ｍＬの前記組成物をそれぞれ含む２回の注射によって投与される；（ｉｉｉ）前記単一用量が１８００ｍｇの前記抗体を含み、前記医薬組成物が１５０ｍｇ／ｍＬで前記抗体を含み、前記用量が４ｍＬの前記医薬組成物をそれぞれ含む３回の注射によって投与される；又は（ｉｖ）前記単一用量が６０ｍｇの前記抗体を含み、前記医薬組成物が１５０ｍｇ／ｍＬで前記抗体を含み、前記用量が０．４ｍＬの前記医薬組成物を含む１回の注射によって投与される、実施形態５０から６６のいずれかに記載の方法。
実施形態６８．６ヶ月間の間に前記対象に前記医薬組成物を１回投与することを含む、実施形態５０から６７のいずれかに記載の方法。
実施形態６９．１２ヶ月間の間に前記対象に前記医薬組成物を含む単一用量を１回投与することを含む、実施形態５０から６８のいずれかに記載の方法。
実施形態７０．６ヶ月間の間に前記対象に前記医薬組成物を２回、例えば、３ヶ月間に１回ずつ投与することを含む、実施形態５０から６８のいずれかに記載の方法。
実施形態７１．インフルエンザシーズンの開始前１～２ヶ月間以内（例えば、米国では、インフルエンザシーズンは、１０月、１１月、又は１２月に開始することがある）又は前記インフルエンザシーズンの最初の１～２ヶ月間以内に前記医薬組成物を投与することを含む、実施形態５０から７０のいずれかに記載の方法。
実施形態７２．前記抗体又は前記抗体を含む前記医薬組成物が、約２．１７μｇ／ｍＬのインビトロインフルエンザ感染阻害ＩＣ９０を有する、実施形態５０から７１のいずれかに記載の方法。
実施形態７３．前記対象に前記医薬組成物の単一用量を投与することを含み、前記組成物が１５０ｍｇ／ｍＬで前記抗体を含み、前記用量が２ｍＬの前記医薬組成物を含む単回注射によって投与され、（ｉ）投与される前記医薬組成物が約６０ｍｇの前記抗体を含み、前記抗体が投与後最大１２０日間、約１μｇ／ｍＬ～約７μｇ／ｍＬの濃度で前記対象の血清中に存在する；（ｉｉ）投与される前記医薬組成物が約３００ｍｇの前記抗体を含み、前記抗体が投与後最大１２０日間、約８μｇ／ｍＬ～約２０μｇ／ｍＬの濃度で前記対象の血清中に存在する；（ｉｉｉ）投与される前記医薬組成物が約１２００ｍｇの前記抗体を含み、前記抗体が投与後最大１２０日間、約５０μｇ／ｍＬ～約１００μｇ／ｍＬの濃度で前記対象の血清中に存在する；（ｉｖ）投与される前記医薬組成物が約１８００ｍｇの前記抗体を含み、前記抗体が投与後最大１２０日間、約７０μｇ／ｍＬ～約１１０μｇ／ｍＬの濃度で前記対象の血清中に存在する；及び／又は（ｖ）前記抗体が４９日間～６８日間の前記対象におけるインビボｔ１／２を有する、実施形態５０から７２のいずれかに記載の方法。
実施形態７４．前記医薬組成物の前記抗体が、４９日間～６８日間、例えば、４９日間、５０日間、５１日間、５２日間、５３日間、５４日間、５５日間、５６日間、５７日間、５８日間、５９日間、６０日間、６１日間、６２日間、６３日間、６４日間、６５日間、６６日間、６７日間、又は６８日間のヒト対象におけるインビボｔ１／２を有する、実施形態５０から７３のいずれかに記載の方法。
実施形態７５．前記対象が、有害事象共通用語規準（ＣＴＣＡＥ）にしたがう有害事象（ＡＥ）を、前記医薬組成物の前記単一用量の投与後、任意に、最大１４０日間、経験しない、実施形態５０から７４のいずれかに記載の方法。
実施形態７６．前記対象が、有害事象共通用語規準（ＣＴＣＡＥ）にしたがう中等度の有害事象（ＡＥ）を、前記医薬組成物の前記単一用量の投与後、任意に、最大１４０日間、経験しない、実施形態５０から７５のいずれかに記載の方法。
実施形態７７．前記対象が、有害事象共通用語規準（ＣＴＣＡＥ）にしたがう重大な有害事象（ＡＥ）を、前記医薬組成物の前記単一用量の投与後、任意に、最大１４０日間、経験しない、実施形態５０から７６のいずれかに記載の方法。
実施形態７８．（ｉ）前記単一用量が３００ｍｇの前記抗体を含み、前記医薬組成物が１５０ｍｇ／ｍＬで前記抗体を含み、前記単一用量が２ｍＬの前記医薬組成物を含む単回注射を含む；（ｉｉ）前記単一用量が１２００ｍｇの前記抗体を含み、前記医薬組成物が１５０ｍｇ／ｍＬで前記抗体を含み、前記単一用量が４ｍＬの前記医薬組成物をそれぞれ含む２回の注射を含む；（ｉｉｉ）前記単一用量が１８００ｍｇの前記抗体を含み、前記医薬組成物が１５０ｍｇ／ｍＬで前記抗体を含み、前記単一用量が４ｍＬの前記医薬組成物をそれぞれ含む３回の注射を含む；又は（ｉｖ）前記単一用量が６０ｍｇの前記抗体を含み、前記医薬組成物が１５０ｍｇ／ｍＬで前記抗体を含み、前記単一用量が０．４ｍＬの前記組成物を含む、実施形態５０から７７のいずれかに記載の方法。
実施形態７９．配列番号１０で表される軽鎖アミノ酸配列と配列番号９で表される重鎖アミノ酸配列とを含む抗体を含む医薬組成物であって、前記抗体が、１００ｍｇ／ｍＬ～２００ｍｇ／ｍＬの範囲、例えば、１００ｍｇ／ｍＬ、１１０ｍｇ／ｍＬ、１２０ｍｇ／ｍＬ、１３０ｍｇ／ｍＬ、１４０ｍｇ／ｍＬ、１５０ｍｇ／ｍＬ、１６０ｍｇ／ｍＬ、１７０ｍｇ／ｍＬ、１８０ｍｇ／ｍＬ、１９０ｍｇ／ｍＬ、又は２００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは１５０ｍｇ／ｍＬの濃度で前記医薬組成物中に存在する医薬組成物。
実施形態８０．前記医薬組成物が、水（例えば、注射用ＵＳＰ水又は注射用ＵＳ滅菌水）を更に含む、実施形態７９に記載の医薬組成物。
実施形態８１．ヒスチジンを更に含み、任意に、前記組成物中、１０ｍＭ～４０ｍＭの濃度で、好ましくは２０ｍＭの濃度で含む、実施形態７９又は８０に記載の医薬組成物。
実施形態８２．スクロースなどの二糖などの糖を３．０％～９．０％（ｗ／ｖ）の範囲、好ましくは３．６％～８．６％、より好ましくは４％～６％の範囲で更に含む、実施形態７９から８１のいずれかに記載の医薬組成物。
実施形態８３．界面活性剤又はトリブロックコポリマー、任意に、ポリソルベート又はポロキサマー１８８、好ましくはポリソルベート８０（ＰＳ８０）を更に含み、任意に、０．０１％～０．０５％（ｗ／ｖ）の範囲で、好ましくは０．０２％で含む、実施形態７９から８２のいずれかに記載の医薬組成物。
実施形態８４．前記組成物が、５．５～６．５の範囲、又は５．８～６．２の範囲のｐＨを有する、又は５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、若しくは６．５、好ましくは６．０のｐＨを有する、実施形態７９から８３のいずれかに記載の医薬組成物。
実施形態８５．実施形態７９から８４のいずれかに記載の医薬組成物を含む、好ましくはガラス製のバイアル。
実施形態８６．実施形態７９から８４のいずれかに記載の医薬組成物を含む（例えば、プレフィルド）シリンジ。
以下、添付図面の簡単な説明をする。図面は、本開示をより詳細に説明することが意図されている。しかし、それらは本開示の主題を何ら限定することを意図するものではない。
図１は、実施例２に関し、５６日目までＥＬＩＳＡで評価したマカク血漿サンプル中のヒト抗体ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ（白色四角）及びＦｌｕＡＢ＿ｗｔ（比較抗体；黒色丸）の血漿濃度を示す。 図２は、実施例３に関し、総ヒトｍＡｂを定量する抗ＣＨ２抗体ＥＬＩＳＡ又はｍＡｂの機能性を決定するＨＡ抗原結合ＥＬＩＳＡを使用して測定されたＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ（動物Ｃ９０１４２（２Ａ）、Ｃ９０１９０（２Ｂ））の血漿濃度を示す。グラフは、選択された時点（１日目、２１日目、５６日目、８６日目、及び１１３日目）での個々の動物の総ヒトｍＡｂの定量とＨＡ結合との間の線形回帰を示す。 図２は、実施例３に関し、総ヒトｍＡｂを定量する抗ＣＨ２抗体ＥＬＩＳＡ又はｍＡｂの機能性を決定するＨＡ抗原結合ＥＬＩＳＡを使用して測定されたＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ（動物Ｃ９０１４２（２Ａ）、Ｃ９０１９０（２Ｂ））の血漿濃度を示す。グラフは、選択された時点（１日目、２１日目、５６日目、８６日目、及び１１３日目）での個々の動物の総ヒトｍＡｂの定量とＨＡ結合との間の線形回帰を示す。 図３は、実施例４に関し、（３Ａ）ＥＬＩＳＡを使用して測定され、尿素含量に対して規格化された、鼻腔スワブ中のヒト抗体ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びＦｌｕＡＢ＿ｗｔの濃度、及び（３Ｂ）血漿濃度に対する鼻腔スワブの尿素規格化濃度（％）として表されるヒト抗体ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びＦｌｕＡＢ＿ｗｔの生体内分布を示す。個々の動物ＩＤ及び接種されたヒト抗体多様体（ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ又はＦｌｕＡＢ＿ｗｔ）は以下に示す。 図３は、実施例４に関し、（３Ａ）ＥＬＩＳＡを使用して測定され、尿素含量に対して規格化された、鼻腔スワブ中のヒト抗体ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びＦｌｕＡＢ＿ｗｔの濃度、及び（３Ｂ）血漿濃度に対する鼻腔スワブの尿素規格化濃度（％）として表されるヒト抗体ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びＦｌｕＡＢ＿ｗｔの生体内分布を示す。個々の動物ＩＤ及び接種されたヒト抗体多様体（ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ又はＦｌｕＡＢ＿ｗｔ）は以下に示す。 図４は、実施例５に関し、ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ（４Ｂ、４Ｄ、丸）、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ（４Ｃ、４Ｅ、四角）を、１ｍｇ／ｋｇ（４Ｂ、４Ｃ、灰色記号）及び０．３ｍｇ／ｋｇ（４Ｄ、４Ｅ、薄灰色記号）にて処理した又は未処理（４Ａ、三角）のＴｇ３２マウスの経時的累積体重変化を示す；マウスはいずれも、ＰＲ８ウイルスに鼻腔内感染している；個々の動物が示される；太い黒色線は、ＢＷ±ＳＤの平均傾向を表す。群当たりの個体数が示される。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１ｖｓ対照単独（Ａ）、°ｐ＜０．０５、°°ｐ＜０．０１、全マウスｖｓＭＥＤＩ８８５２の相対時点、ボンフェローニの多重検定補正（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ’ｓ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｔｅｓｔ ｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ）を使用した２元配置ＡＮＯＶＡ。 図４は、実施例５に関し、ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ（４Ｂ、４Ｄ、丸）、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ（４Ｃ、４Ｅ、四角）を、１ｍｇ／ｋｇ（４Ｂ、４Ｃ、灰色記号）及び０．３ｍｇ／ｋｇ（４Ｄ、４Ｅ、薄灰色記号）にて処理した又は未処理（４Ａ、三角形）のＴｇ３２マウスの経時的累積体重変化を示す；マウスはいずれも、ＰＲ８ウイルスに鼻腔内感染している；個々の動物が示される；太い黒色線は、ＢＷ±ＳＤの平均傾向を表す。群当たりの個体数が示される。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１ｖｓ対照単独（Ａ）、°ｐ＜０．０５、°°ｐ＜０．０１、全マウスｖｓＭＥＤＩ８８５２の相対時点、ボンフェローニの多重検定補正（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ’ｓ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｔｅｓｔ ｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ）を使用した２元配置ＡＮＯＶＡ。 図４は、実施例５に関し、ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ（４Ｂ、４Ｄ、丸）、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ（４Ｃ、４Ｅ、四角）を、１ｍｇ／ｋｇ（４Ｂ、４Ｃ、灰色記号）及び０．３ｍｇ／ｋｇ（４Ｄ、４Ｅ、薄灰色記号）にて処理した又は未処理（４Ａ、三角形）のＴｇ３２マウスの経時的累積体重変化を示す；マウスはいずれも、ＰＲ８ウイルスに鼻腔内感染している；個々の動物が示される；太い黒色線は、ＢＷ±ＳＤの平均傾向を表す。群当たりの個体数が示される。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１ｖｓ対照単独（Ａ）、°ｐ＜０．０５、°°ｐ＜０．０１、全マウスｖｓＭＥＤＩ８８５２の相対時点、ボンフェローニの多重検定補正（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ’ｓ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｔｅｓｔ ｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ）を使用した２元配置ＡＮＯＶＡ。 図４は、実施例５に関し、ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ（４Ｂ、４Ｄ、丸）、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ（４Ｃ、４Ｅ、四角）を、１ｍｇ／ｋｇ（４Ｂ、４Ｃ、灰色記号）及び０．３ｍｇ／ｋｇ（４Ｄ、４Ｅ、薄灰色記号）にて処理した又は未処理（４Ａ、三角形）のＴｇ３２マウスの経時的累積体重変化を示す；マウスはいずれも、ＰＲ８ウイルスに鼻腔内感染している；個々の動物が示される；太い黒色線は、ＢＷ±ＳＤの平均傾向を表す。群当たりの個体数が示される。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１ｖｓ対照単独（Ａ）、°ｐ＜０．０５、°°ｐ＜０．０１、全マウスｖｓＭＥＤＩ８８５２の相対時点、ボンフェローニの多重検定補正（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ’ｓ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｔｅｓｔ ｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ）を使用した２元配置ＡＮＯＶＡ。 図４は、実施例５に関し、ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ（４Ｂ、４Ｄ、丸）、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ（４Ｃ、４Ｅ、四角）をで、１ｍｇ／ｋｇ（４Ｂ、４Ｃ、灰色記号）及び０．３ｍｇ／ｋｇ（４Ｄ、４Ｅ、薄灰色記号）にて処理した又は未処理（４Ａ、三角形）のＴｇ３２マウスの経時的累積体重変化を示す；マウスはいずれも、ＰＲ８ウイルスに鼻腔内感染している；個々の動物が示される；太い黒色線は、ＢＷ±ＳＤの平均傾向を表す。群当たりの個体数が示される。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１ｖｓ対照単独（Ａ）、°ｐ＜０．０５、°°ｐ＜０．０１、全マウスｖｓＭＥＤＩ８８５２の相対時点、ボンフェローニの多重検定補正（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ’ｓ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｔｅｓｔ ｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ）を使用した２元配置ＡＮＯＶＡ。 図５は、実施例５に関し、未処理の（５Ｂ）、若しくはＦｌｕＡＢ＿ｗｔ、又はＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳで処理した感染Ｔｇ３２雄マウスにおける１ｍｇ／ｋｇ用量（５Ａ）及び０．３ｍｇ／ｋｇ用量（右パネル）の生存率（％）の比較を示す。＊＊ｐ＜０．０１ｖｓ未処理マウス（ＣＴＲ）及び０．３ｍｇ／ｋｇのＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ；°°°ｐ＜０．００１ｖｓＦｌｕＡＢ＿ｗｔ、ログランク分析、Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ法。 図５は、実施例５に関し、未処理の（５Ｂ）、若しくはＦｌｕＡＢ＿ｗｔ、又はＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳで処理した感染Ｔｇ３２雄マウスにおける１ｍｇ／ｋｇ用量（５Ａ）及び０．３ｍｇ／ｋｇ用量（右パネル）の生存率（％）の比較を示す。＊＊ｐ＜０．０１ｖｓ未処理マウス（ＣＴＲ）及び０．３ｍｇ／ｋｇのＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ；°°°ｐ＜０．００１ｖｓＦｌｕＡＢ＿ｗｔ、ログランク分析、Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ法。 図６は、実施例５に関し、注射された抗体の循環レベルを示す。感染直前（０日目）及び感染６日後のマウスの血清中で測定された循環ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ（丸）及びＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ（四角）の個々のレベル（μｇ／ｍｌ）を示す。バーは、平均±ＳＤを表す。 図７は、実施例６に関し、インビトロ中和アッセイで使用されるプレートスキームを示す。 図８は、実施例６に関し、Ｈ１Ｎ１（８Ａ、８Ｃ）及びＨ３Ｎ２（８Ｂ、８Ｄ）ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びオセルタミビル単独の中和活性を示す。 図８は、実施例６に関し、Ｈ１Ｎ１（８Ａ、８Ｃ）及びＨ３Ｎ２（８Ｂ、８Ｄ）ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びオセルタミビル単独の中和活性を示す。 図８は、実施例６に関し、Ｈ１Ｎ１（８Ａ、８Ｃ）及びＨ３Ｎ２（８Ｂ、８Ｄ）ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びオセルタミビル単独の中和活性を示す。 図８は、実施例６に関し、Ｈ１Ｎ１（８Ａ、８Ｃ）及びＨ３Ｎ２（８Ｂ、８Ｄ）ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びオセルタミビル単独の中和活性を示す。 図９は、実施例６に関し、Ｈ１（９Ａ）及びＨ３（９Ｂ）ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びオセルタミビルの併用中和活性を示す。データは、ＭＤＣＫ細胞のＨ１Ｎ１（９Ａ）及びＨ３Ｎ２（９Ｂ）ウイルス感染の両方において、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ単独、及び様々なモル濃度（ｈｅｔｅｒｏｍｏｌａｒ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ）のオセルタミビルとの組合せによる阻害された割合を示す。データは、３つの独立した培養プレートで得られた３連の値の平均±ＳＤとして表される。 図９は、実施例６に関し、Ｈ１（９Ａ）及びＨ３（９Ｂ）ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びオセルタミビルとの併用中和活性を示す。データは、ＭＤＣＫ細胞のＨ１Ｎ１（９Ａ）及びＨ３Ｎ２（９Ｂ）ウイルス感染の両方において、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ単独、及び様々なモル濃度（ｈｅｔｅｒｏｍｏｌａｒ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ）のオセルタミビルとの組合せによる阻害された割合を示す。データは、３つの独立した培養プレートで得られた３連の値の平均±ＳＤとして表される。 図１０は、実施例６に関し、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びオセルタミビルの併用の半数作用プロットを示す。２種の化合物を、表示される一定比率で段階希釈し、Ｈ１（１０Ａ）及びＨ３（１０Ｂ）ウイルス株のいずれかを感染させたＭＤＣＫ細胞に添加した。非一定比率（ＮＣＲ）での、選択された組合せから得られた値も示す。 図１０は、実施例６に関し、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びオセルタミビルの併用の半数作用プロットを示す。２種の化合物を、表示される一定比率で段階希釈し、Ｈ１（１０Ａ）及びＨ３（１０Ｂ）ウイルス株のいずれかを感染させたＭＤＣＫ細胞に添加した。非一定比率（ＮＣＲ）での、選択された組合せから得られた値も示す。 図１１Ａは、実施例６に関し、Ｈ１Ｎ１ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びオセルタミビルの併用指数を示す。ドットは、表示された一定比率での実際の実験点を表し、累積された薬物－薬物濃度を脇に示す。点線の曲線は、効果範囲全体に亘る予測された併用指数を示す。 図１１Ｂは、実施例６に関し、Ｈ１Ｎ１ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びオセルタミビルの併用指数を示す。ドットは、表示された一定比率での実際の実験点を表し、累積された薬物－薬物濃度を脇に示す。点線の曲線は、効果範囲全体に亘る予測された併用指数を示す。 図１１Ｃは、実施例６に関し、Ｈ１Ｎ１ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びオセルタミビルの併用指数を示す。ドットは、表示された一定比率での実際の実験点を表し、累積された薬物－薬物濃度を脇に示す。点線の曲線は、効果範囲全体に亘る予測された併用指数を示す。 図１１Ｄは、実施例６に関し、Ｈ１Ｎ１ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びオセルタミビルの併用指数を示す。ドットは、表示された一定比率での実際の実験点を表し、累積された薬物－薬物濃度を脇に示す。点線の曲線は、効果範囲全体に亘る予測された併用指数を示す。 図１１Ｅは、実施例６に関し、Ｈ１Ｎ１ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びオセルタミビルの併用指数を示す。ドットは、表示された一定比率での実際の実験点を表し、累積された薬物－薬物濃度を脇に示す。点線の曲線は、効果範囲全体に亘る予測された併用指数を示す。 図１１Ｆは、実施例６に関し、Ｈ１Ｎ１ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びオセルタミビルの併用指数を示す。ドットは、表示された一定比率での実際の実験点を表し、累積された薬物－薬物濃度を脇に示す。点線の曲線は、効果範囲全体に亘る予測された併用指数を示す。 図１２Ａは、実施例６に関し、Ｈ３Ｎ２ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びオセルタミビルの併用指数を示す。ドットは、表示された一定比率での実際の実験点を表し、累積された薬物－薬物濃度を脇に示す。点線の曲線は、効果範囲全体に亘る予測された併用指数を示す。 図１２Ｂは、実施例６に関し、Ｈ３Ｎ２ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びオセルタミビルの併用指数を示す。ドットは、表示された一定比率での実際の実験点を表し、累積された薬物－薬物濃度を脇に示す。点線の曲線は、効果範囲全体に亘る予測された併用指数を示す。 図１２Ｃは、実施例６に関し、Ｈ３Ｎ２ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びオセルタミビルの併用指数を示す。ドットは、表示された一定比率での実際の実験点を表し、累積された薬物－薬物濃度を脇に示す。点線の曲線は、効果範囲全体に亘る予測された併用指数を示す。 図１２Ｄは、実施例６に関し、Ｈ３Ｎ２ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びオセルタミビルの併用指数を示す。ドットは、表示された一定比率での実際の実験点を表し、累積された薬物－薬物濃度を脇に示す。点線の曲線は、効果範囲全体に亘る予測された併用指数を示す。 図１２Ｅは、実施例６に関し、Ｈ３Ｎ２ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びオセルタミビルの併用指数を示す。ドットは、表示された一定比率での実際の実験点を表し、累積された薬物－薬物濃度を脇に示す。点線の曲線は、効果範囲全体に亘る予測された併用指数を示す。 図１３Ａは、実施例６に関し、Ｈ１Ｎ１ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ－オセルタミビルの併用のアイソボログラムを示す。ドットは、様々な一定比率のＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ－オセルタミビルの併用でのＩＣ５０、ＩＣ７５、及びＩＣ９０の各値を示す。各実験点について、累積濃度を示す。 図１３Ｂは、実施例６に関し、Ｈ１Ｎ１ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ－オセルタミビルの併用のアイソボログラムを示す。ドットは、様々な一定比率のＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ－オセルタミビルの併用でのＩＣ５０、ＩＣ７５、及びＩＣ９０の各値を示す。各実験点について、累積濃度を示す。 図１３Ｃは、実施例６に関し、Ｈ１Ｎ１ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ－オセルタミビルの併用のアイソボログラムを示す。ドットは、様々な一定比率のＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ－オセルタミビルの併用でのＩＣ５０、ＩＣ７５、及びＩＣ９０の各値を示す。各実験点について、累積濃度を示す。 図１４Ａは、実施例６に関し、Ｈ３Ｎ２ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ－オセルタミビルの併用のアイソボログラムを示す。ドットは、様々な一定比率のＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ－オセルタミビルの併用でのＩＣ５０、ＩＣ７５、及びＩＣ９０の各値を示す。各実験点について、累積濃度を示す。 図１４Ｂは、実施例６に関し、Ｈ３Ｎ２ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ－オセルタミビルの併用のアイソボログラムを示す。ドットは、様々な一定比率のＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ－オセルタミビルの併用でのＩＣ５０、ＩＣ７５、及びＩＣ９０の各値を示す。各実験点について、累積濃度を示す。 図１４Ｃは、実施例６に関し、Ｈ３Ｎ２ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ－オセルタミビルの併用のアイソボログラムを示す。ドットは、様々な一定比率のＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ－オセルタミビルの併用でのＩＣ５０、ＩＣ７５、及びＩＣ９０の各値を示す。各実験点について、累積濃度を示す。 図１５は、実施例６に関し、Ｈ１Ｎ１（１５Ａ、１５Ｃ）及びＨ３Ｎ２（１５Ｂ、１５Ｄ）ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びザナミビル単独の中和活性を示す。 図１５は、実施例６に関し、Ｈ１Ｎ１（１５Ａ、１５Ｃ）及びＨ３Ｎ２（１５Ｂ、１５Ｄ）ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びザナミビル単独の中和活性を示す。 図１５は、実施例６に関し、Ｈ１Ｎ１（１５Ａ、１５Ｃ）及びＨ３Ｎ２（１５Ｂ、１５Ｄ）ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びザナミビル単独の中和活性を示す。 図１５は、実施例６に関し、Ｈ１Ｎ１（１５Ａ、１５Ｃ）及びＨ３Ｎ２（１５Ｂ、１５Ｄ）ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びザナミビル単独の中和活性を示す。 図１６は、実施例６に関し、Ｈ１（Ａ）及びＨ３（Ｂ）ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳとザナミビルとの併用中和活性を示す。データは、ＭＤＣＫ細胞のＨ１Ｎ１（Ａ）及びＨ３Ｎ２（Ｂ）ウイルス感染の両方において、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ単独、及び異なるモル濃度のザナミビルとの併用による阻害された割合を示す。データは、３つの独立した培養プレートで得られた３連の値の平均±ＳＤとして表される。 図１６は、実施例６に関し、Ｈ１（Ａ）及びＨ３（Ｂ）ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳとザナミビルとの併用中和活性を示す。データは、ＭＤＣＫ細胞のＨ１Ｎ１（Ａ）及びＨ３Ｎ２（Ｂ）ウイルス感染の両方において、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ単独、及び異なるモル濃度のザナミビルとの併用による阻害された割合を示す。データは、３つの独立した培養プレートで得られた３連の値の平均±ＳＤとして表される。 図１７は、実施例６に関し、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びザナミビルの併用の半数作用プロットを示す。２種の化合物を、表示される一定比率で段階希釈し、Ｈ１（１７Ａ）及びＨ３（１７Ｂ）ウイルス株のいずれかを感染させたＭＤＣＫ細胞に添加した。非一定比率（ＮＣＲ）での、選択された併用から得られた値も示す。 図１７は、実施例６に関し、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びザナミビルの併用の半数作用プロットを示す。２種の化合物を、表示される一定比率で段階希釈し、Ｈ１（１７Ａ）及びＨ３（１７Ｂ）ウイルス株のいずれかを感染させたＭＤＣＫ細胞に添加した。非一定比率（ＮＣＲ）での、選択された併用から得られた値も示す。 図１８Ａは、実施例６に関し、Ｈ１Ｎ１ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びザナミビルの併用指数を示す。ドットは、表示された一定比率での実際の実験点を表し、累積された薬物－薬物濃度を脇に示す。点線の曲線は、効果範囲全体に亘る予測された併用指数を示す。 図１８Ｂは、実施例６に関し、Ｈ１Ｎ１ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びザナミビルの併用指数を示す。ドットは、表示された一定比率での実際の実験点を表し、累積された薬物－薬物濃度を脇に示す。点線の曲線は、効果範囲全体に亘る予測された併用指数を示す。 図１８Ｃは、実施例６に関し、Ｈ１Ｎ１ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びザナミビルの併用指数を示す。ドットは、表示された一定比率での実際の実験点を表し、累積された薬物－薬物濃度を脇に示す。点線の曲線は、効果範囲全体に亘る予測された併用指数を示す。 図１８Ｄは、実施例６に関し、Ｈ１Ｎ１ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びザナミビルの併用指数を示す。ドットは、表示された一定比率での実際の実験点を表し、累積された薬物－薬物濃度を脇に示す。点線の曲線は、効果範囲全体に亘る予測された併用指数を示す。 図１９Ａは、実施例６に関し、Ｈ３Ｎ２ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びザナミビルの併用指数を示す。ドットは、表示された一定比率での実際の実験点を表し、累積された薬物－薬物濃度を脇に示す。点線の曲線は、効果範囲全体に亘る予測された併用指数を示す。 図１９Ｂは、実施例６に関し、Ｈ３Ｎ２ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びザナミビルの併用指数を示す。ドットは、表示された一定比率での実際の実験点を表し、累積された薬物－薬物濃度を脇に示す。点線の曲線は、効果範囲全体に亘る予測された併用指数を示す。 図１９Ｃは、実施例６に関し、Ｈ３Ｎ２ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びザナミビルの併用指数を示す。ドットは、表示された一定比率での実際の実験点を表し、累積された薬物－薬物濃度を脇に示す。点線の曲線は、効果範囲全体に亘る予測された併用指数を示す。 図１９Ｄは、実施例６に関し、Ｈ３Ｎ２ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びザナミビルの併用指数を示す。ドットは、表示された一定比率での実際の実験点を表し、累積された薬物－薬物濃度を脇に示す。点線の曲線は、効果範囲全体に亘る予測された併用指数を示す。 図２０Ａは、実施例６に関し、Ｈ１Ｎ１ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ－ザナミビルの併用のアイソボログラムを示す。ドットは、様々な一定比率のＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ－ザナミビルの併用でのＩＣ５０、ＩＣ７５、及びＩＣ９０の各値を示す。各実験点について、累積濃度を示す。 図２０Ｂは、実施例６に関し、Ｈ１Ｎ１ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ－ザナミビルの併用のアイソボログラムを示す。ドットは、様々な一定比率のＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ－ザナミビルの併用でのＩＣ５０、ＩＣ７５、及びＩＣ９０の各値を示す。各実験点について、累積濃度を示す。 図２０Ｃは、実施例６に関し、Ｈ１Ｎ１ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ－ザナミビルの併用のアイソボログラムを示す。ドットは、様々な一定比率のＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ－ザナミビルの併用でのＩＣ５０、ＩＣ７５、及びＩＣ９０の各値を示す。各実験点について、累積濃度を示す。 図２１Ａは、実施例６に関し、Ｈ３Ｎ２ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ－ザナミビルの併用のアイソボログラムを示す。ドットは、様々な一定比率のＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ－ザナミビルの併用でのＩＣ５０、ＩＣ７５、及びＩＣ９０の各値を示す。各実験点について、累積濃度を示す。 図２１Ｂは、実施例６に関し、Ｈ３Ｎ２ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ－ザナミビルの併用のアイソボログラムを示す。ドットは、様々な一定比率のＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ－ザナミビルの併用でのＩＣ５０、ＩＣ７５、及びＩＣ９０の各値を示す。各実験点について、累積濃度を示す。 図２１Ｃは、実施例６に関し、Ｈ３Ｎ２ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ－ザナミビルの併用のアイソボログラムを示す。ドットは、様々な一定比率のＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ－ザナミビルの併用でのＩＣ５０、ＩＣ７５、及びＩＣ９０の各値を示す。各実験点について、累積濃度を示す。 図２２は、実施例６に関し、Ｈ１Ｎ１（２２Ａ、２２Ｃ）及びＨ３Ｎ２（２２Ｂ、２２Ｄ）ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びバロキサビル単独の中和活性を示す。 図２２は、実施例６に関し、Ｈ１Ｎ１（２２Ａ、２２Ｃ）及びＨ３Ｎ２（２２Ｂ、２２Ｄ）ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びバロキサビル単独の中和活性を示す。 図２２は、実施例６に関し、Ｈ１Ｎ１（２２Ａ、２２Ｃ）及びＨ３Ｎ２（２２Ｂ、２２Ｄ）ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びバロキサビル単独の中和活性を示す。 図２２は、実施例６に関し、Ｈ１Ｎ１（２２Ａ、２２Ｃ）及びＨ３Ｎ２（２２Ｂ、２２Ｄ）ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びバロキサビル単独の中和活性を示す。 図２３は、実施例６に関し、Ｈ１（２３Ａ）及びＨ３（２３Ｂ）ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びバロキサビルの併用中和活性を示す。データは、ＭＤＣＫ細胞のＨ１Ｎ１（２３Ａ）及びＨ３Ｎ２（２３Ｂ）ウイルス感染の両方において、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ単独、及び異なるモル濃度のバロキサビルとの併用による阻害された割合を示す。データは、３つの独立した培養プレートで得られた３連の値の平均±ＳＤとして表される。 図２３は、実施例６に関し、Ｈ１（２３Ａ）及びＨ３（２３Ｂ）ウイルス感染に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びバロキサビルとの併用中和活性を示す。データは、ＭＤＣＫ細胞のＨ１Ｎ１（２３Ａ）及びＨ３Ｎ２（２３Ｂ）ウイルス感染の両方において、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ単独、及び異なるモル濃度のバロキサビルとの併用による阻害された割合を示す。データは、３つの独立した培養プレートで得られた３連の値の平均±ＳＤとして表される。 図２４は、実施例６に関し、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びバロキサビルの併用の半数作用プロットを示す。２種の化合物を、表示される一定比率で段階希釈し、Ｈ１（２４Ａ）及びＨ３（２４Ｂ）ウイルス株のいずれかを感染させたＭＤＣＫ細胞に添加した。非一定比率（ＮＣＲ）での、選択された併用から得られた値も示す。 図２４は、実施例６に関し、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びバロキサビルの併用の半数作用プロットを示す。２種の化合物を、表示される一定比率で段階希釈し、Ｈ１（２４Ａ）及びＨ３（２４Ｂ）ウイルス株のいずれかを感染させたＭＤＣＫ細胞に添加した。非一定比率（ＮＣＲ）での、選択された併用から得られた値も示す。 図２５Ａは、実施例６に関し、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びバロキサビルの併用指数を示す。ドットは、表示された一定比率での実際の実験点を表し、累積された薬物－薬物濃度を脇に示す。点線の曲線は、効果範囲全体に亘る予測された併用指数を示す。 図２５Ｂは、実施例６に関し、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びバロキサビルの併用指数を示す。ドットは、表示された一定比率での実際の実験点を表し、累積された薬物－薬物濃度を脇に示す。点線の曲線は、効果範囲全体に亘る予測された併用指数を示す。 図２５Ｃは、実施例６に関し、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びバロキサビルの併用指数を示す。ドットは、表示された一定比率での実際の実験点を表し、累積された薬物－薬物濃度を脇に示す。点線の曲線は、効果範囲全体に亘る予測された併用指数を示す。 図２５Ｄは、実施例６に関し、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びバロキサビルの併用指数を示す。ドットは、表示された一定比率での実際の実験点を表し、累積された薬物－薬物濃度を脇に示す。点線の曲線は、効果範囲全体に亘る予測された併用指数を示す。 図２５Ｅは、実施例６に関し、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びバロキサビルの併用指数を示す。ドットは、表示された一定比率での実際の実験点を表し、累積された薬物－薬物濃度を脇に示す。点線の曲線は、効果範囲全体に亘る予測された併用指数を示す。 図２５Ｆは、実施例６に関し、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びバロキサビルの併用指数を示す。ドットは、表示された一定比率での実際の実験点を表し、累積された薬物－薬物濃度を脇に示す。点線の曲線は、効果範囲全体に亘る予測された併用指数を示す。 図２６Ａは、実施例６に関し、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ－バロキサビルの併用のアイソボログラムを示す。ドットは、様々な一定比率のＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ－バロキサビルの併用でのＩＣ５０、ＩＣ７５、及びＩＣ９０の各値を示す。各実験点について、累積濃度を示す。 図２６Ｂは、実施例６に関し、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ－バロキサビルの併用のアイソボログラムを示す。ドットは、様々な一定比率のＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ－バロキサビルの併用でのＩＣ５０、ＩＣ７５、及びＩＣ９０の各値を示す。各実験点について、累積濃度を示す。 図２６Ｃは、実施例６に関し、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ－バロキサビルの併用のアイソボログラムを示す。ドットは、様々な一定比率のＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ－バロキサビルの併用でのＩＣ５０、ＩＣ７５、及びＩＣ９０の各値を示す。各実験点について、累積濃度を示す。 図２６Ｄは、実施例６に関し、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ－バロキサビルの併用のアイソボログラムを示す。ドットは、様々な一定比率のＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ－バロキサビルの併用でのＩＣ５０、ＩＣ７５、及びＩＣ９０の各値を示す。各実験点について、累積濃度を示す。 図２６Ｅは、実施例６に関し、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ－バロキサビルの併用のアイソボログラムを示す。ドットは、様々な一定比率のＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ－バロキサビルの併用でのＩＣ５０、ＩＣ７５、及びＩＣ９０の各値を示す。各実験点について、累積濃度を示す。 図２６Ｆは、実施例６に関し、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ－バロキサビルの併用のアイソボログラムを示す。ドットは、様々な一定比率のＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ－バロキサビルの併用でのＩＣ５０、ＩＣ７５、及びＩＣ９０の各値を示す。各実験点について、累積濃度を示す。 図２７Ａは、実施例７に関し、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの臨床試験における評価の患者スケジュール（実施例７の「パートＡ」の患者）を示す。 図２７Ｂは、実施例７に関し、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの臨床試験における評価の患者スケジュール（実施例７の「パートＡ」の患者）を示す。 図２８Ａは、実施例７に関し、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの臨床試験における評価の患者スケジュール（実施例７の「パートＢ」の患者）を示す。 図２８Ｂは、実施例７に関し、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの臨床試験における評価の患者スケジュール（実施例７の「パートＢ」の患者）を示す。 図２９Ａは、実施例７に関し、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの臨床試験における評価の患者スケジュール（実施例７の「パートＣ」の患者）を示す。 図２９Ｂは、実施例７に関し、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの臨床試験における評価の患者スケジュール（実施例７の「パートＣ」の患者）を示す。 図３０は、実施例７に関し、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの臨床試験で使用されたインフルエンザ様モニタリングスケジュールを示す。 図３１は、実施例７に関し、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの臨床試験で使用された薬物動態評価の時点を示す。 図３２は、実施例７に関し、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの臨床試験で使用された実験室評価の一覧を示す。 図３３は、インフルエンザ関連の合併症を発症するリスクが高い集団を示す。 図３４は、実施例７に記載される臨床試験にしたがってＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳを投与したヒト対象におけるＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの血清濃度を示し、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳを初回投与量３００ｍｇ及び１，２００ｍｇでそれぞれ２０週間と１２週間まで投与した患者の抗体血清濃度を示す。 図３５は、実施例７に記載される臨床試験にしたがってＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳを投与したヒト対象におけるＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの血清濃度を示し、対象に３００ｍｇ及び１，２００ｍｇの用量を投与後最大６ヶ月間のＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの予測抗体血清濃度を示す。 図３６は、実施例７に記載の臨床試験にしたがってＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳを投与したヒト対象におけるＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの抗体血清濃度を示す。投与後２０週間までの抗体血清濃度は、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの初期投与量６０ｍｇ、３００ｍｇ、１，２００ｍｇ、及び１，８００ｍｇを投与した対象について提供される。 図３７は、実施例７で詳述した臨床試験で観察された様々なＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ ＰＫパラメーターを示す表を提供する。 図３８は、ｐＨ＝６．０（Ａ）又はｐＨ＝７．４（Ｂ）でＯｃｔｅｔによって測定した固定化ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ又はＦｌｕＡＢ＿ｗｔに対する溶液中のヒトＦｃＲｎの結合を示す。０秒の時点は、ベースラインバッファからヒトＦｃＲｎ含有バッファへの切り替えを表す。４２０秒の時点（垂直の点線）は、対応するｐＨでのブランクバッファへの切り替えを表す。会合及び解離プロファイルは、Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ９６（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を使用してリアルタイムで測定した。 図３８は、ｐＨ＝６．０（Ａ）又はｐＨ＝７．４（Ｂ）でＯｃｔｅｔによって測定した固定化ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ又はＦｌｕＡＢ＿ｗｔに対する溶液中のヒトＦｃＲｎの結合を示す。０秒の時点は、ベースラインバッファからヒトＦｃＲｎ含有バッファへの切り替えを表す。４２０秒の時点（垂直の点線）は、対応するｐＨでのブランクバッファへの切り替えを表す。会合及び解離プロファイルは、Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ９６（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を使用してリアルタイムで測定した。 図３９は、マウス抗薬物ＩｇＧを検出するＥＬＩＳＡによって測定されたＡＤＡ応答のレベル（Ａ；バーは、処理群の平均±ＳＤを表す）；及びｉ．ｖ．注射後１４日目に測定された循環ヒトＩｇＧのレベル（Ｘ軸）と、同一時点のＡＤＡのシグナル（Ｙ軸）との間の相関分析（Ｂ）を示す。有意な値について、ノンパラメトリックなスピアマンの相関係数を示す。 図３９は、マウス抗薬物ＩｇＧを検出するＥＬＩＳＡによって測定されたＡＤＡ応答のレベル（Ａ；バーは、処理群の平均±ＳＤを表す）；及びｉ．ｖ．注射後１４日目に測定された循環ヒトＩｇＧのレベル（Ｘ軸）と、同一時点のＡＤＡのシグナル（Ｙ軸）との間の相関分析（Ｂ）を示す。有意な値について、ノンパラメトリックなスピアマンの相関係数を示す。 図４０は、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ又はＦｌｕＡＢ＿ｗｔのいずれかの皮下（ｓ．ｃ．）注射後のＡＤＡ応答レベルを示す。データは、ＰＢＳ中、１：２５で事前希釈し、次いで更に５倍で段階希釈された、ｓ．ｃ．注射（ｎ＝５／群）後３週間で得られた個々の血清で検出されたＡＤＡシグナル（ＯＤ４５０ｎｍ）の値として表される。
以下に、本開示の実施形態及び態様を示す具体的な例を示す。しかし、本開示は、本明細書に記載される特定の実施形態によって範囲が限定されるものではない。以下の調製及び例は、当業者が本開示をより明確に理解し、実施することを可能にするために与えられる。しかし、本開示は、例示された実施形態によって範囲が限定されない。実際に、本明細書に記載されたものに加えて、本開示の様々な変更が、前述の記載、添付の図面、及び以下の実施例から、当業者に容易に明らかとなる。係る変更はいずれも、添付の特許請求の範囲内である。
実施例１：カニクイザルにおける本開示に係る抗体の安全性及び忍容性
（ｉ）配列番号１～６で表されるＣＤＲ配列と、（ｉｉ）重鎖定常領域における２つの変異Ｍ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓとを含む、本開示に係る抗体を設計及び製造した。より具体的には、前記抗体は、（ｉ）配列番号７で表される重鎖可変領域（ＶＨ）配列及び配列番号８で表される軽鎖可変領域（ＶＬ）配列、並びに（ｉｉ）重鎖定常領域における２つの変異Ｍ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓを含む。更により具体的には、前記抗体は、配列番号９で表されるアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号１０で表されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む。この抗体を本明細書では「ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ」と称する。
比較のために、抗体「ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ」を使用した。これは、重鎖定常領域に変異Ｍ４２８Ｌ及びＮ４３４Ｓを含まないという点でのみ、抗体「ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ」と異なる。したがって、比較抗体「ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ」は、配列番号１１で表されるアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号１０で表されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む。
１試験群当たり３頭の雌性カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）に、２．５ｍｌ／ｋｇの容量で、５ｍｇ／ｋｇのＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ又はＦｌｕＡＢ＿ｗｔを、６０分間、単回静脈内注入した。臨床化学及び血液学的分析のための血液又は尿は、投与前及び投与後７日目と２１日目に採取した。
ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ又はＦｌｕＡＢ＿ｗｔを５ｍｇ／ｋｇで６０分間静脈内注入した後、前記雌性カニクイザルの健康状態と体重を綿密にモニターし、血液と尿を定期的に採取した。抗体の静脈内接種後、一部の動物における接種部位の投与後２４時間のあざと投与後３日目の紅皮症を除いて、有害事象は観察されなかった。全ての動物は、概して健康であり、正常な食物消費を示し、試験を通して全体的に正の体重増加を示した。臨床化学、血液学、及び尿検査のパラメーターは、投与前のサンプルと比較して、投与後７日目又は２１日目で正常であった。
まとめると、カニクイザルへのＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ又はＦｌｕＡＢ＿ｗｔのいずれかの単回静脈内注入は有害事象を誘発せず、概ねに忍容性が良好であった。
実施例２：血漿濃度及び薬物動態の決定
これらの実験は、濃度を決定すること、半減期を決定すること、本開示に係る抗体ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの単回静脈内注射後の血漿中の薬物動態を比較抗体ＦｌｕＡＢ＿ｗｔと比較することを目的とした。
投薬前に、ドット免疫結合アッセイを使用して、動物を、インフルエンザ特異的抗体に対して陰性であることを試験した。既存の免疫がこの試験に干渉する可能性があるので、血清陽性動物を試験から除外した。更に、抗薬物抗体（ＡＤＡ）応答を発現している動物は、除外した。
１試験群当たり３頭の雌性マカクに、２．５ｍｌ／ｋｇ容量で、５ｍｇ／ｋｇのＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ又はＦｌｕＡＢ＿ｗｔを、６０分間、単回静脈内注入した。血液は、投与後、約１、６、２４、９６、１６８、５０４、８４０、及び１３４４時間（ｈ）後に、投与前のＫ２ＥＤＴＡを含むチューブに回収し、薬物動態試験のために血漿に処理した。
前記抗体の血漿濃度を、ＥＬＩＳＡアッセイを使用してインビトロで決定した。簡単に説明すると、ＩＡＶ－ＨＡ抗原（Ａ型インフルエンザウイルスＨ１Ｎ１ Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／２００９ ヘマグルチニンタンパク質抗原（Ｈｉｓタグ付き）；Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）を、ＰＢＳ中で２μｇ／ｍｌに希釈し、２５μｌを９６ウェル平底１／２－面積ＥＬＩＳＡプレートに添加し、４℃で一晩コーティングした。コーティング後、自動ＥＬＩＳＡウォッシャを使用して、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を添加した０．５×ＰＢＳ（洗浄溶液）で前記プレートを２回洗浄した。次に、プレートを、１００μｌ／ウェルの１％ＢＳＡを添加したＰＢＳ（ブロッキング溶液）で室温（ＲＴ）にて１時間ブロッキングした後、２回洗浄した。血漿サンプルを１０，０００ｇで１０分間、４℃で遠心分離した後、希釈（１：１０続いて１：３０）し、９６ウェル細胞培養プレートのブロッキング溶液中で、最終的に１：３００に希釈した。定量に使用したマカク血漿の最小希釈率（１：３００）を試験し、マトリックス効果が無視できるように設定した。次いで、サンプルを３連で１：２の段階希釈をし、合計１２回希釈した。試験される各抗体の標準は、全ての試験動物からの接種前血漿のプール中で各抗体を１：３００～１μｇ／ｍｌに希釈し、試験サンプルのマトリックスを模倣することによって同様に調製した。次に、標準をブロッキング溶液にて３連で１：３の段階希釈をし、合計１２回希釈した。調製したサンプル又は標準の２５μｌを、ヘマグルチニン（ＨＡ）コーティングウェルに添加し、ＲＴで１時間インキュベートした。４回洗浄後、検出のために、１ウェル当たり２５μｌの、ブロッキング溶液で１：５，０００（最終濃度０．１６μｇ／ｍｌ）に希釈したヤギ抗ヒトＩｇＧ ＨＲＰコンジュゲート（ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｃγ断片特異的；Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を添加し、１時間ＲＴでインキュベートした。４回洗浄後、１ウェル当たり４０μｌのＳｕｒｅＢｌｕｅ ＴＭＢ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（Ｂｉｏｃｏｎｃｅｐｔ）を添加して、プレートを発色させた。ＲＴで、～７～２０分間インキュベートした後、発色反応がプラトー（最大ＯＤ～３．８）に達したときに、１ウェル当たり４０μｌの１％ＨＣｌを添加して反応を停止し、分光光度計を使用して４５０ｎｍにて吸光度を測定した。
カニクイザル血漿中の前記抗体の濃度を決定するために、ＥＬＩＳＡデータからのＯＤ値を、Ｇｅｎ５ソフトウェア（ＢｉｏＴｅｋ）において濃度に対してプロットした。非線形曲線フィットは、可変勾配モデル、４つのパラメーター、及び式Ｙ＝（Ａ－Ｄ）／（１＋（Ｘ／Ｃ）＾Ｂ）＋Ｄ）を使用して適用した。検量線の予測可能なアッセイ範囲内にあるサンプル希釈物のＯＤ値（検量線の上方部分、中間部分、又は下方部分における品質管理サンプルによってセットアップ実験で決定される）を、サンプルを定量するために補間した。次いで、前記抗体の血漿濃度を、前記サンプルの最終希釈を考慮して決定した。サンプル希釈物の１超の値が検量線の直線範囲内にある場合は、これらの値の平均を使用した。薬物動態（ＰＫ）データは、ＷＩＮＮＯＮＬＩＮ ＮＯＮＣＯＭＰＡＲＴＭＥＮＴＡＬ ＡＮＡＬＹＳＩＳ ＰＲＯＧＲＡＭ（８．１．０．３５３０ Ｃｏｒｅ Ｖｅｒｓｉｏｎ，Ｐｈｏｅｎｉｘ ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｃｅｒｔａｒａ）を使用して、次の設定で分析した：Ｍｏｄｅｌ：Ｐｌａｓｍａ Ｄａｔａ，Ｃｏｎｓｔａｎｔ Ｉｎｆｕｓｉｏｎ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ；Ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｎｏｎ－ｍｉｓｓｉｎｇ ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｓ：８；Ｓｔｅａｄｙ ｓｔａｔｅ ｉｎｔｅｒｖａｌ Ｔａｕ：１．００；Ｄｏｓｅ ｔｉｍｅ：０．００；Ｄｏｓｅ ａｍｏｕｎｔ：５．００ｍｇ／ｋｇ；Ｌｅｎｇｔｈ ｏｆ Ｉｎｆｕｓｉｏｎ：０．０４日間；Ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ：Ｌｉｎｅａｒ Ｔｒａｐｅｚｏｉｄａｌ ｗｉｔｈ Ｌｉｎｅａｒ Ｉｎｔｅｒｐｏｌａｔｉｏｎ；Ｗｅｉｇｈｔｉｎｇ ｆｏｒ ｌａｍｂｄａ＿ｚ ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓ：Ｕｎｉｆｏｒｍ ｗｅｉｇｈｔｉｎｇ；Ｌａｍｂｄａ＿ｚ ｍｅｔｈｏｄ：Ｆｉｎｄ ｂｅｓｔ ｆｉｔ ｆｏｒ ｌａｍｂｄａ＿ｚ，Ｌｏｇ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ。グラフ化及び統計分析（線形回帰又は外れ値分析）は、Ｐｒｉｓｍ ７．０ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して行った。外れ値分析は、ＲＯＵＴメソッド（Ｑ＝１％）を使用して行い、両方向で任意の数の外れ値が発見される可能性がある。
結果を図１に示す。接種後５６日目までに採取したカニクイザル血漿サンプルの分析から、本開示に係る抗体ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳが比較抗体ＦｌｕＡＢ＿ｗｔと比較して延長されたインビボ半減期を有することが示された（図１）。ＷｉｎＮｏｎＬｉｎを用いた非コンパートメント分析を使用して、Ｔ１／２は、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳでは１９．５日間と推定され、比較抗体ＦｌｕＡＢ＿ｗｔのＴ１／２は、１１．６日間と推定された。定量下限は、３００ｎｇ／ｍｌであった。
まとめると、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳは、少なくとも接種後５６日目まで、比較抗体ＦｌｕＡＢ＿ｗｔと比較して延長されたインビボ半減期を有していた。
実施例３：インビボでの長期安定性
ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの抗原結合のインビボ安定性及び機能性を経時で試験するために、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳを投与した群の薬物動態測定（実施例２に記載）を、接種後８６日目及び１１３日目に延長した。接種後１、２１、５６、８６、１１３日目に、機能的ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳを、実施例２に記載されるようにヘマグルチニン（ＨＡ）結合ＥＬＩＳＡを使用して定量した。
更に、マカク血漿中の総ヒト抗体は、サルの抗体ではなくヒトのＣＨ２領域に特異的に結合する捕捉ｍＡｂを使用する、特異的抗ＣＨ２ ＥＬＩＳＡを使用して定量した。総ヒトＩｇＧを測定し、カニクイザル血漿中の接種された総ヒト抗体を定量するために、ヒトＩｇＧに特異的なマウス抗ＣＨ２ドメイン（クローンＲ１０Ｚ８Ｅ９；Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によるＥＬＩＳＡ捕捉を用いた。このｍＡｂは、サルＩｇＧと交差反応しないことが確認された。９６ウェル平底１／２－面積ＥＬＩＳＡプレートをコーティングするために、マウス抗ヒトＩｇＧ ＣＨ２をＰＢＳに０．５μｇ／ｍｌで添加し、４℃で一晩インキュベートした。次いで、プレートを洗浄し、５％ＢＳＡを含む１００μｌ／ウェルのブロッキング溶液をＲＴで１時間添加した。ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの標準液は、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳをブロッキング溶液中で１ｎｇ／ｍｌに希釈することによって調製した。次いで、標準液を、２連でブロッキング溶液中にて１：１．５に段階希釈し、合計１２回希釈した。カニクイザル血漿サンプルを１０，０００ｇで１０分間、４℃で遠心分離し、ブロッキング溶液中で最終的に１：１，０００、１：５，０００、又は１：１５，０００に段階希釈した。プレート洗浄後、２５μｌのサンプル又は標準液をＥＬＩＳＡプレートに添加し、ＲＴで１時間インキュベートした。３回洗浄後、２５μｌの、０．０４μｇ／ｍｌのヤギ抗ヒトＩｇＧ ＨＲＰ（ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅ Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｃγ断片特異的；Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を、検出用に１％ＢＳＡ含有ブロッキング溶液に添加し、ＲＴで４５分間インキュベートした。３回洗浄後、１ウェル当たり４０μｌのＳｕｒｅＢｌｕｅ ＴＭＢ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（Ｂｉｏｃｏｎｃｅｐｔ）を添加して、プレートを発色させた。ＲＴで２０分間インキュベートした後、４０μｌの１％ＨＣｌを添加して反応を停止させ、４５０ｎｍで吸光度を測定した。
結果を図２Ａ及び図２Ｂに示す。いずれの定量も、カニクイザル血漿中のヒト抗体濃度は同様となった（図２Ａ及び図２Ｂ）。線形回帰による更なる分析によれば、ＨＡ結合による定量と総抗ＣＨ２定量と間の関係が、選択された全ての時点で線形パターンにしたがっていることが示された。その結果、血漿中に存在するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの総量は、インビボで８６日間後及び１１３日後でも、Ａ型インフルエンザウイルス（ＩＡＶ）のヘマグルチニン（ＨＡ）ステム領域に結合する機能を有していた。
まとめると、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳは、試験延長期間中の接種後１１３日目まで、インビボにおいて、機能的な抗原結合性、即ち、良好な長期安定性を示した。
実施例４：鼻腔スワブにおける抗体濃度及び生体内分布
血漿に対する鼻粘液間のＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳと比較抗体ＦｌｕＡＢ＿ｗｔとの生体内分布を決定するために、前記抗体の濃度を鼻腔スワブで決定した。このために、実施例２に記載のマカクの鼻腔スワブを、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ又は比較抗体ＦｌｕＡＢ＿ｗｔの投与後２４、５０４、及び１３４４時間で収集した。鼻腔スワブ中の抗体ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びＦｌｕＡＢ＿ｗｔの濃度は、血漿中での測定のために以下の微調整を行って、実施例２に本質的に記載されるように測定した：（ａ）ＥＬＩＳＡプレートを２時間、ＲＴでブロッキングした；（ｂ）鼻腔スワブサンプルを、ＰＢＳ中の１％ＢＳＡで１：２から希釈し、続いて、１：２で段階希釈して、合計８個の希釈点とした；（ｃ）鼻腔スワブ培地（ＲＴ ＭＩＮＩ Ｖｉｒａｌ Ｔｒａｎｓｐｏｒｔ Ｍｅｄｉｕｍ；Ｃｏｐａｎ）をアッセイマトリックス対照として使用した。
スワビング中における、又は各動物及び異なる時点（１日目、２１日目、及び５６日目）に存在する鼻分泌物量における差を排除するために、鼻腔スワブの結果を尿素含量に対して規格化した。尿素は、血液間で自由に拡散し、これらの血漿又はスワブサンプルに同様の量で存在する（Ｌｉｍ ｅｔ ａｌ．， ２０１７， Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ ６１（８）：ｅ００２７９－１７）。このために、尿素窒素（ＢＵＮ）を、製造業者の手順にしたがって、「Ｕｒｅａ Ｎｉｔｒｏｇｅｎ （ＢＵＮ） Ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ」（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して定量的に測定した。簡単に説明すると、サンプルをＰＢＳ中で１：３に希釈し、キット試薬Ａ及びＢと混合し、室温で３０分間インキュベートした。酸化還元反応の着色生成物を、９６ウェルマイクロプレートリーダを使用して４５０ｎｍで読み取った。定量は、同様に処理したキット付属ＢＵＮ標準液とサンプルを比較することによって行った。
結果を図３Ａ及び図３Ｂに示す。鼻腔スワブ中の規格化された抗体の量は、経時で減少した（図３Ａ）。鼻と血漿の濃度を比較することによって生体内分布を決定することにより、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳと比較抗体ＦｌｕＡＢ＿ｗｔとの間に差がないことが明らかになり（図３Ｂ）、ＭＬＮＳ－Ｆｃ変異は、血漿中のＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの半減期を延長するものの、鼻粘液への抗体の生体内分布が向上しなかったことが示唆された。
要約すると、鼻腔スワブサンプルは、ｍＡｂ多様体間で鼻粘液と血漿との間の生体内分布に有意な差を示さなかった。
実施例５：ＰＲ８に感染したＴｇ３２マウスにおける抗体ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの予防活性
次に、抗体ＦｌｕＡＢ＿ｗｔと比較したＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの予防活性を、致死的なＡ型インフルエンザ感染のＨ１Ｎ１マウスモデルで決定した。
予防効果を評価するために、９～１４週齢のＦｃＲｎ－／－ｈＦｃＲｎ系統３２Ｔｇマウス（Ｃ５７Ｂ６バックグラウンド）に、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ又は比較抗体ＦｌｕＡＢ＿ｗｔを０．３～１ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で含む溶液５ｍｌ／ｋｇを、（尾静脈経由で）静脈内（ｉ．ｖ．）注射した。ｉ．ｖ．注射後２４時間で、感染前に血清抗体レベルを測定するために、マウスの尾静脈から採血した。採血は、感染後（ｐ．ｉ．）６日目と１３日目にも繰り返した。抗体を注射したマウスと、未処理のマウスの両方に麻酔をし（イソフルラン、Ｏ２中４％、０．３Ｌ／ｍｉｎ）、５頭のマウス致死量の５０％（５ ｍｏｕｓｅ ｌｅｔｈａｌ ｄｏｓｅ ｆｉｆｔｙ ｐｅｒｃｅｎｔ）（５ＭＬＤ５０、１２００ＴＣＩＤ５０／マウスに相当）のＡ型インフルエンザウイルス（Ｈ１Ｎ１， Ａ／Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃｏ／８／３４，Ｃｏｔｔｅｙ， Ｒ．， Ｒｏｗｅ， Ｃ．Ａ．， ａｎｄ Ｂｅｎｄｅｒ， Ｂ．Ｓ． （２００１）．Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ． Ｃｕｒｒ Ｐｒｏｔｏｃ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｃｈａｐｔｅｒ １９， Ｕｎｉｔ１９．１１－１９．１１．３２）に記載）を含むＰＢＳの５０μｌ（２５μｌ／各鼻腔）を両鼻腔内にゆっくりと滴下注入することにより鼻腔内（ｉ．ｎ．）接種した。各マウスを、鼻孔から接種物が滴下する可能性を低減するために、その頭部を僅かに後ろに傾け、約１分間直立させた。手順の後及び正向反射の発生時に、動物をケージに戻した。マウスは、ｐ．ｉ．１４日目まで体重減少及び疾患症状について毎日モニターし、初期体重（感染日を０％と設定する）の２０％超が減少したとき、又は罹患率スコア４に達したときに安楽死させた。表１は、適用された罹患率スコアの詳細を示す。
表１－ＰＲ８感染マウスの罹患率スコア
Figure 2022545553000002
動物はいずれも、血清と肺を回収するために、最終的に屠殺した。
血清の調製：
約０．０５ｍｌの血液をゲル含有チューブに回収し、ＲＴで３０分間放置した。チューブを、５５００ｒｐｍ（３２００×ｇ）で５分間回転させ、血清を新たなチューブに移し、使用時まで－２０℃で保存した。
以下の設計にしたがって、２つの独立した実験を行った。
表２－試験計画実験１：
Figure 2022545553000003
 表３－試験計画実験２：
Figure 2022545553000004
循環ｍＡｂのＥＬＩＳＡ定量：
０日目と６日目に循環抗体のレベルについて、血清を評価した。簡単に説明すると、２分の１－面積ＥＬＩＳＡプレートを、Ｈ１Ｎ１株Ａ／Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ／０７／０９（２μｇ／ｍｌ、ＰＢＳ中、２５μｌ／ウェル）からの組換えヘマグルチニン（ＨＡ）で４℃にて一晩コーティングした。ブロッキング（ＰＢＳ／１％ＢＳＡ、１００μｌ／ウェル、１時間ＲＴ）及びＥＬＩＳＡ洗浄溶液（ＰＢＳＴ）による２回の洗浄（２２０μｌ／ウェル）の後、血清の両希釈（初期希釈１：１５０（１ｍｇ／ｋｇの場合）、１：５０（０．３ｍｇ／ｋｇの場合）及び抗体標準液（ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びＦｌｕＡＢ＿ｗｔ、０．１μｇ／ｍｌ）を２連で添加（２５μｌ／ウェル）し、段階希釈した（血清希釈の場合、１：２×１０点、抗体標準液の場合、１：３×８点）。１．５時間のＲＴインキュベーション後、プレートをＰＢＳＴで４回洗浄し、更に、ＨＲＰ標識抗ヒト二次抗体（０．１６μｇ／ｍｌ、２５μｌ／ウェル）と共にＲＴで１．５時間インキュベートした。ＰＢＳＴで４回洗浄後、プレートに基質溶液（２５μｌ／ウェル）を分注し、１４分間発色させ、１％ＨＣｌ（ｖ／ｖ、２５μｌ／ウェル）で制止した。プレートを、シグナル定量のために分光光度計にて４５０ｎｍで最終的に読み取った。濃度値は、ｌｏｇ（アゴニスト）対応答の非線形回帰モデル（可変勾配モデル、４つのパラメーター、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ）を使用して計算した。
データ分析：
データは、Ｍａｃｉｎｔｏｓｈ用のＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアバージョン８．０、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ ＵＳＡ、ｗｗｗ．ｇｒａｐｈｐａｄ．ｃｏｍを使用してプロット及び分析した。連続変数は、ボンフェローニ多重比較検定で補正した通常の２元配置ＡＮＯＶＡを使用して統計的有意差（ｐ＜０．０５、９５％信頼区間）について評価した。Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ法によるログランク分析を使用して生存率データを比較した（ｐ＜０．０５を、統計的有意とみなす）。前記２つの独立した実験からのデータをプールした。
結果：
予防活性は、鼻腔内感染によるＨ１Ｎ１ ＰＲ８ウイルス接種１日前のＴｇ３２マウスへのＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ及びＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ（１及び０．３ｍｇ／ｋｇ）のｉ．ｖ．投与時に試験した。結果を図４Ａ～図６に示す。
図４Ａ～図４Ｅに示すように、１ｍｇ／ｋｇ（４Ｄ）又は０．３ｍｇ／ｋｇ（４Ｅ）のＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳで処理したマウスは、未処理（４Ａ）とＦｌｕＡＢ＿ｗｔ注射（４Ｂ及び４Ｃ）のマウスの両方と比較して、体重減少が少なかった。
ＦｌｕＡＢ＿ｗｔに対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳのより優れた防御活性は、図５Ａ及び図５Ｂに示す生存率分析で確認された。
ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳとＦｌｕＡＢ＿ｗｔと間の有効性の差は、抗体のｉ．ｖ．投与後１日目と７日目に測定されるように、血清中の循環抗体の各レベルと相関しなかった（図６）。注目すべきことに、注射後１４日目には、検出可能なレベルの循環抗体は測定されなかった（図示せず）。
まとめると、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳは、Ｔｇ３２マウスにおいて、比較抗体ＦｌｕＡＢ＿ｗｔよりもＨ１Ｎ１ ＰＲ８鼻腔内ウイルス接種に対してより優れた防御能を示した。有効性は、循環抗体レベルと無関係であった。これらのデータは、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳと、Ｔｇ３２マウスによって発現されるｈＦｃＲｎとの相互作用の強化が、防御活性に関する有効性の上昇など、抗体半減期の延長と無関係のインビトロ効果も媒介することを示唆する。
実施例６：抗体ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳと各種抗ウイルス剤との併用
薬物の併用は、耐性を選択する可能性を低減しつつ、効果を高める明確な機会を提供する。更に、推定される相加効果又は相乗効果は、最終的に用量が節約されるアプローチになる可能性がある。現在ＦＤＡによって承認されているインフルエンザ治療薬としては、ノイラミニダーゼ阻害剤であるオセルタミビルとザナミビル、及びエンドヌクレアーゼ阻害剤クラスに属する最近承認されたバロキサビルマルボキシルが挙げられる。
ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳと抗ウイルス薬であるオセルタミビル、ザナミビル、又はバロキサビルマルボキシルとの併用活性を、Ｈ１Ｎ１及びＨ３Ｎ２の代表的なウイルス株の両方に対して評価するために、インビトロ中和を行って、結果として生じる阻害効果を評価した。併用効果の分析は、半数作用プロット（ｍｅｄｉａｎ－ｅｆｆｅｃｔ ｐｌｏｔ）と併用指数（ＣＩ）の計算を使用して行った。
簡単に説明すると、ＭＤＣＫ（Ｍａｄｉｎ－Ｄａｒｂｙイヌ腎臓）細胞を、３０，０００細胞／ウェルで９６ウェルプレート（平底、黒色）に播種した。細胞を３７℃、５％ＣＯ２で一晩培養した。２４時間後、６０μｌの感染培地（ＭＥＭ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｍ０６４４）＋Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、４１０９０－０２８）＋１μｇ／ｍｌのＴＰＣＫ処理トリプシン（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ＃ＬＳ００３７５０）＋１０μｇ／ｍｌカナマイシン）中の４×抗体及び抗ウイルス薬（オセルタミビル、ザナミビル、又はバロキサビルマルボキシル）希釈物を、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ（最終１６６．７ｎＭから開始、９水平点）と、各種抗ウイルス薬（オセルタミビル、ザナミビル、又はバロキサビルマルボキシル）（１２５（ザナミビルの場合は、２５０）ｎＭから７垂直点まで）との十字交差（ｃｒｉｓｓｃｒｏｓｓ）１：２段階希釈を用いて、図７に示すプレートスキームにしたがって調製した。
各併用について、薬物－薬物併用比をそれぞれ３連とするために、３つの独立したプレートを調製した。単一化合物滴定（即ち、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ、９点及び各抗ウイルス薬、８点）を各プレートに含有させた。ウイルス溶液は、６０μｌ中、１２０×ＴＣＩＤ５０の濃度で調製し、ＭＥＭ中１：１で希釈する又はＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ希釈液と１：１で混合し、３３℃で１時間インキュベートした。添加剤を含まない２００μｌ／ウェルのＭＥＭを使用して、細胞を２回洗浄した後、１００μｌのウイルス単独又は１００μｌのＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ／ウイルスミックス（１００×ＴＣＩＤ５０／ウェル）を添加し、３３℃、５％ＣＯ２で４時間インキュベートした。１００μｌ／ウェルの感染培地を添加した後、細胞を、３３℃、５％ＣＯ２で７２時間、更にインキュベートした。感染後３日目に、２０μＭのＭｕＮＡＮＡ（４－ＭＵＮＡＮＡ（２＿－（４－メチルウンベリフェリル）－α－ＤＮ－アセチルノイラミン酸ナトリウム塩水和物（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）＃６９５８７）溶液を、ＭｕＮＡＮＡバッファ（ＭＥＳ ３２．５ｍＭ／ＣａＣｌ２ ４ｍＭ、ｐＨ６．５）に調整し、５０μｌ／ウェルで、黒色の９６ウェルプレートに分注した。中和又はウイルス単独の滴定上清５０μｌをプレートに移し、３７℃で６０分間インキュベートした。次いで、１００μｌ／ウェルの０．２Ｍグリシン／５０％ＥｔＯＨ、ｐＨ１０．７で反応を停止させた。蛍光は、蛍光計（Ｂｉｏ－Ｔｅｋ）にて４６０ｎｍで定量した。
ウイルス中和の割合は、以下の式にしたがって計算した。
Figure 2022545553000005
式中、ｆｘ＝サンプル蛍光シグナル（細胞＋ウイルス＋ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ＋抗ウイルス薬）；ｆｍｉｎ＝最小蛍光シグナル（細胞単独、ウイルスなし）；ｆｍａｘ＝最大蛍光シグナル（細胞＋ウイルスのみ）。
中和された割合データを使用して、ＣｈｏｕとＴａｌａｌａｙの方法（Ｃｈｏｕ ＴＣ， Ｔａｌａｌａｙ Ｐ： Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｄｏｓｅ－ｅｆｆｅｃｔ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ： ｔｈｅ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｄｒｕｇｓ ｏｒ ｅｎｚｙｍｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ． Ａｄｖ． Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｇｕｌ． １９８４， ２２：２７－５５）にしたがって、薬物－薬物併用の用量作用関係の定性分析を計算した。併用指数、影響された割合（Ｆａ）、及びアイソボログラムを、ＣｏｍｐｕＳｙｎソフトウェア（ＣｏｍｂｏＳｙｎ Ｉｎｃ．， Ｐａｒａｍｕｓ， ＮＪ， ＵＳＡ）（Ｃｈｏｕ Ｔ－Ｃ： Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ ｂａｓｉｓ， ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｄｅｓｉｇｎ， ａｎｄ ｃｏｍｐｕｔｅｒｉｚｅｄ ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｙｎｅｒｇｉｓｍ ａｎｄ ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ ｉｎ ｄｒｕｇ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｓｔｕｄｉｅｓ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ２００６， ５８：６２１－６８１）を使用して取得した。
結果を図８Ａ～図２６Ｆに示し、以下に記載する。
ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳとオセルタミビルとの併用
Ａ型インフルエンザウイルスを中和するためのＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳとオセルタミビルの相対的有効性を、Ｈ３Ｎ２株とＨ１Ｎ１株の両方の２つのウイルス血清型の代表例に対してインビトロで比較した。図８Ａ～図８Ｄに示すように、両化合物は、別々に試験したとき、Ｈ３Ｎ３及びＨ１Ｎ１ウイルスに独立して曝露した場合、用量依存的に細胞感染を十分に阻害することができた（図８Ａ、図８Ｂ）。データログの線形化（Ｃｈｏｕ ＴＣ， Ｔａｌａｌａｙ Ｐ： Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｄｏｓｅ－ｅｆｆｅｃｔ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ： ｔｈｅ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｄｒｕｇｓ ｏｒ ｅｎｚｙｍｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ． Ａｄｖ． Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｇｕｌ． １９８４， ２２：２７－５５に記載）後の半数作用プロット（図８Ｃ、図８Ｄ）から計算されたＩＣ５０値は、確かに、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ（Ｈ３及びＨ１株でそれぞれ１７．９及び１５．６ｎＭ）及びオセルタミビル（Ｈ３及びＨ１株でそれぞれ７及び９．１ｎＭ）の両方でナノモル範囲であった。全体として、Ｈ３ウイルス感染とＨ１ウイルス感染との間で、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳによる阻害反応に関して実質的な差は測定されなかったが、Ｈ１Ｎ１ウイルスは、オセルタミビルの阻害作用に対して僅かにより感受性であった。
ＭＤＣＫ細胞のＨ３及びＨ１ウイルスによる感染の中和における、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳとオセルタミビルとの併用の効果を試験するために、両化合物を上記に記載の各種比率で段階希釈し、異なる薬物濃度の存在下における、ノイラミニダーゼ（ＮＡ；培養物中のウイルス含量の読み取りとして）の酵素活性を評価し、単一薬物効果と比較した。ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳで測定された中和効果は、２番目の化合物が様々な濃度で同時に存在することによって大幅に向上されるため、Ｈ３ウイルス感染及びＨ１ウイルス感染の両方に対して、習慣性（ａｄｄｉｃｔｉｖｅ）効果ではなく相乗効果が示唆される（図９Ａ及び図９Ｂ）。オセルタミビルの阻害作用に対して、Ｈ１ウイルスとＨ３ウイルスの僅かに異なる感受性が検出された。
様々な薬物併用比の推定相乗効果を正確に定量するために、中和データを半数作用原理にしたがって更に変換し、上記に記載のようにＣｏｍｐｕＳｙｎソフトウェアで分析した。図１０Ａ及び図１０Ｂに示すように、いくつかの異なるＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ－オセルタミビルの併用定数比の効果を、半数作用プロットにプロットした。
ＣｏｍｐｕＳｙｎソフトウェアは、半数作用式の対数変換を実験データに適用し、様々な薬物の併用の効果（ＩＣ５０）と、いわゆる併用指数（ＣＩ）の両方を計算する。前記ＣＩは、質量作用の法則の物理化学的性質を考慮したＣｈｏｕ－Ｔａｌａｌａｙ（半数作用）式から導出されたパラメーターであり、同一効果を得るために単一薬物１及び２の用量で除した特定効果を達成するために薬物２と併用される薬物１の用量の部分の間の２つの比の和から得られる。この数学的アルゴリズムによれば、ＣＩ＝１は習慣性効果を示し、ＣＩ＜１は相乗作用を示し、ＣＩ＞１は拮抗作用を示す。
図１１Ａ～図１１Ｆ及び図１２Ａ～図１２Ｅに示すように、試験した全ての併用比、及びＨ１ウイルス（図１１Ａ～図１１Ｆ）とＨ３ウイルス（図１２Ａ～図１２Ｅ）の両方について、阻害された割合範囲全体に亘って予測されたＣＩ値は、全ての薬物の併用比で１を遥かに下回る曲線を描き、各種併用濃度の実際の実験点も、殆ど全ての併用で１未満の範囲であった。全体として、前記データは、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳとオセルタミビルとを併用した場合の相乗効果を示している。
或いは、同一データをアイソボログラムプロットで記述することもできる。アイソボログラムプロットは、単剤と併用剤の両方の等効力濃度を比較する。図１３及び図１４に示すように、３種の異なる併用比のＩＣ５０、ＩＣ７５、及びＩＣ９０値の分布は、Ｈ１（図１３Ａ～図１３Ｃ）とＨ３（図１４Ａ～図１４Ｃ）の両方について、試験した各単剤のＩＣ５０、ＩＣ７５、及びＩＣ９０を結ぶアイソボール線を遥かに下回っており、一貫した相乗効果を示す（一方、相加及び拮抗作用は、単剤アイソボール上又は上方に局在する等位点を生成する）。
ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳとザナミビルとの併用
Ａ型インフルエンザウイルスを中和するためのＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳとザナミビルの相対的有効性も、Ｈ３Ｎ２株とＨ１Ｎ１株の両方の２つのウイルス血清型の代表例に対してインビトロで比較した。図１５Ａ～図１５Ｄに示すように、両化合物は、別々に試験したとき、Ｈ３Ｎ３及びＨ１Ｎ１ウイルスに独立して曝露した場合、用量依存的に細胞感染を十分に阻害することができた。相対的な計算されたＩＣ５０値は、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳで２３．１～２４．４ｎＭ、ザナミビルで１０．７～１３．７ｎＭであった。
ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳとザナミビルとの併用効果について、図１６Ａ及び図１６Ｂは、オセルタミビルと同様に、ザナミビルがＨ１ウイルスとＨ３ウイルスの両方に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの阻害能を大きく向上させることを示す。
相乗効果の定量は、上記に記載のようにＣｏｍｐｕＳｙｎと半数作用原理を使用して同様に計算した。ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳとザナミビルの併用効果の半数作用プロットを、図１７Ａ及び図１７Ｂに示す。ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳとザナミビルの計算されたＣＩを、図１８Ａ～図１８Ｄ及び図１９Ａ～図１９Ｄに示す。試験した実験点がいずれも１未満の値であることから示されるように、Ｈ１ウイルス（図１８Ａ～図１８Ｄ）とＨ３ウイルス（図１９Ａ～図１９Ｄ）の両方で、２種の薬剤間の相乗効果を明確に示している。一貫して、両方のウイルス株で、アイソボログラムは、ＩＣ５０、ＩＣ７５、及びＩＣ９０値（図２０Ａ～２Ｃ及び図２１Ａ～図２１Ｃに示される）全体に亘って強力な相乗効果を示しており、これらはいずれも、単一薬剤の各ＩＣ値を有意に下回っている。
ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳとバロキサビルマルボキシルとの併用
最近承認されたエンドヌクレアーゼ阻害剤であるバロキサビルマルボキシルは、オセルタミビルとザナミビルについて上記に記載のと同様に、まず、Ｈ１株及びＨ３株の両方に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ単独と比較した。結果を図２２Ａ～図２２Ｄに示す。相対的な計算されたＩＣ５０値は、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳで２０．１～１５．４ｎＭ、バロキサビルマルボキシルで４．９～２．３ｎＭであった。
バロキサビルは、ＮＡ阻害剤と比較してウイルス複製の阻害において異なる作用機序を有するものの、この薬剤は、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの阻害能を強力に向上させることができ、相乗効果を明らかに示している（図２３Ａ及び図２３Ｂ）。様々な併用比で得られた阻害データを使用して、ＣｏｍｐｕＳｙｎソフトウェアで半数作用を計算及びプロットし、上記に記載のように薬物間相互作用のタイプを計算した（図２４Ａ及び図２４Ｂ）。ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳとバロキサビルマルボキシルの計算されたＣＩ（図２５Ａ～図２５Ｆ）は、試験した実験点の大部分で１未満の値であることから示されるように、Ｈ１ウイルスとＨ３ウイルスの両方で、２種の薬剤間の相乗効果を明確に示している。アイソボログラムは、ＩＣ５０、ＩＣ７５、及びＩＣ９０値全体に亘ってロバスト且つ完全な相乗効果を示している（図２６Ａ～図２６Ｆ）。
まとめると、Ｈ１株とＨ３株の両方に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの中和能力は、各種抗ウイルス薬、即ち、ＮＡ阻害剤であるオセルタミビルとザナミビル、及びエンドヌクレアーゼ阻害剤であるバロキサビル－マルボキシルによって相乗的に向上する。
実施例７：ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの臨床試験
Ａ型インフルエンザの症状の治療と予防のためのＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの安全性、忍容性、薬物動態、免疫原性、及び有効性を評価するために、第１／２相ランダム化プラセボ対照試験を実施する。ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳは、配列番号１０で表される軽鎖アミノ酸配列と配列番号９で表される重鎖アミノ酸配列とを含む。試験は、以下の３つのパートで構成される。
パートＡ：１００名の健康な成人対象におけるＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの単回漸増用量の安全性、忍容性、薬物動態、及び免疫原性を評価するための二重盲検試験。
パートＢ：パートＡの約３０～８０名の対象において、初回投与（即ち、パートＡにおける）から約１年後に２回目の投与を行った後のＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの安全性、薬物動態、及び免疫原性を評価する非盲検試験。
パートＣ：Ａ型インフルエンザの症状の治療及び予防のためのプラセボと比較したＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの安全性、忍容性、有効性、薬物動態、及び免疫原性を評価するためのランダム化二重盲検プラセボ対照試験。対象の数は、最大２，７６０名である。本試験は、Ａ型インフルエンザの症状が確認された対象のＡ型インフルエンザ関連パラメーターに対する、プラセボと比較したＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの効果を評価する。これらのパラメーターは、Ａ型インフルエンザの症状が現れたときの、症状の重篤度、症状の持続期間、鼻咽頭分泌物中のウイルス量を含む。更に、本試験は、下記も行う：
・Ａ型インフルエンザ疾患後の宿主応答の潜在的なバイオマーカーに対する、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの影響を評価する；
・Ａ型インフルエンザの病状を呈している対象におけるＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳに対するウイルス耐性の出現をモニターする；
・対象の遺伝子多型とＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの作用機序及び／又は薬物動態との間の潜在的関係を評価する；
・Ａ型インフルエンザ疾患による医療機関来診回数を測定する；
・Ａ型インフルエンザ疾患による、仕事から離れる時間と生産性に対する、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの影響を測定する。
ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳは、インフルエンザに関連する重篤な合併症を発症するリスクが低い健康な成人のＡ型インフルエンザ疾患の予防について評価される。ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳは、Ａ型インフルエンザウイルスの様々な季節性及びパンデミック株に対して高いインビトロ効力を有し、動物モデルにおける致死性のＡ型インフルエンザ感染の予防に有効である。更に、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳによって認識されるエピトープは、Ａ型インフルエンザウイルス間で高度に保存されており、インビトロでの耐性発現に対して高い障壁を有する。
このランダム化、プラセボ対照、ファースト－イン－ヒューマン複合第１／２相試験は、インフルエンザ感染による重篤な合併症のリスク要因を有さない健康な成人のＡ型インフルエンザ疾患の予防に対する、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの安全性、忍容性、薬物動態（ＰＫ）、及び有効性を評価するように設計される。試験のパートＡとＢは、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの安全性と忍容性に関する情報、及びＰＫプロファイルと抗薬物抗体（ＡＤＡ）の生成に関する関連データを収集するように設計される。試験のパートＣは、Ａ型インフルエンザの予防におけるＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの有効性を評価し、更なる安全性、忍容性、及びＰＫデータを収集するように設計される。潜在的リスクは、アナフィラキシー並びに他の重篤なアレルギー反応、免疫複合疾患、及び注射部位関連反応など、ｍＡｂで観察される一般的な安全性リスクに基づく。
Ａ型インフルエンザ感染の存在下では、疾患の、抗体を介した増強（ＡＤＥ）の理論的なリスクが存在する。対象を、Ａ型インフルエンザ感染の存在下での安全性の評価を含む重要な潜在的リスクについてモニターし、定期的なファーマコビジランスとリスク最小化活動が行われる。
前記試験は、今期の季節性インフルエンザワクチン接種を受けていない、インフルエンザ感染による重篤な合併症のリスク要因を有さない１８～６４歳の健康な成人を含む。
プラセボが本試験の対照である。
ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳがＡ型インフルエンザ疾患を予防する能力を適切に評価するために、インフルエンザのシーズンに先立って治験薬の投与を行う。これに関連して、試験のパートＡで収集されたデータが、より多くの健康な成人の集団に拡大するための安全性とＰＫの十分な観察を提供すると考えられる。
単回一定用量漸増範囲である６０～１８００ｍｇ（６０、３００、１２００、１８００ｍｇ）の、ＩＭ投与されるＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳが、試験に選択される。ヒトで推奨される最高開始用量は、約５ｍｇ／ｋｇ又は３００ｍｇの一定用量である。
試験設計
前記試験設計は、今シーズンにインフルエンザワクチンを接種されていない１８～６４歳の健康な成人ボランティアに筋肉内（ＩＭ）投与されたＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳのランダム化プラセボ対照第１／２相試験である。前記試験は、Ａ型インフルエンザの症状の予防におけるＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの安全性、忍容性、ＰＫ、免疫原性、及び有効性を評価するように設計される。
試験は、３つのパートで実施される。
・パートＡ：第１相、二重盲検、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの単回漸増用量。
・パートＢ：第１相、非盲検、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの２回目の投与後の安全性、及びＰＫ。
・パートＣ：第２相、市中感染Ａ型インフルエンザ疾患の予防におけるＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの有効性を評価するための二重盲検試験。
前記試験のパートＡで収集したデータは、概念実証を確立するために、より多くの健康な成人の集団に拡大するための安全性とＰＫの観察を提供する。パートＡにおけるＳＲＣオーバーサイトとパートＣにおける独立ＤＭＣを含む安全性管理計画は、安全データの徹底的な評価と潜在的な安全性シグナルの早期検出を確実にするように設計される。
安全性、有効性、及び無益性の中間分析は、最初のインフルエンザシーズンの約半分のデータが利用可能になったときに実施する。
対象が重度なインフルエンザ疾患を経験する場合、治験責任医師が適切と判断したときに、抗ウイルス療法が施される。
試験参加期間
パートＡ：スクリーニングとフォローアップを含む、各対象の推定合計試験時間は、約１３ヶ月間である。
パートＢ：各対象の推定合計試験時間は、パートＢで約６ヶ月間、パートＡとパートＢとを合わせて最大１９ヶ月間である。
パートＣ：スクリーニングとフォローアップを含む、各対象の推定合計試験時間は、約８ヶ月間である。
パートＡ
２５名の対象からなる４つのコホートはそれぞれ、プラセボと比較したＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの安全性と忍容性を評価するために、１回（又は複数回）の筋肉内（ＩＭ）注射からなるＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳプラセボの単一用量を投与された。４つのコホートの投与レジメンを、表Ａに示す。
Figure 2022545553000006
 適格な対象は、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ又はプラセボのいずれかを投与するために、４：１の比率でランダム化された３つの連続するコホートに登録した。各コホートの最初の２名の対象は、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ又はプラセボのいずれかを投与するために１：１でランダム化した。センチネル対象の観察後２４時間で、各コホート内の残りの全対象は同日に投与され、投与後４８時間は臨床検査部に滞在する。
３日目に解消されなかった局所的な忍容性の症状について、解消又は１４日目（いずれか早い方）まで追跡する。局所的な忍容性パラメーターは、注射部位の疼痛／圧痛、腫れ、発赤、あざ、及び掻痒を含む。
対象は、試験全体を通してインフルエンザ様疾患（ＩＬＩ）について積極的にモニターされる。３日目から、対象は、電子機器で週２回、ＩＬＩ症状のサーベイランス問診を完了する。対象は、安全性、ＰＫ、及びＡＤＡの評価を完了するために、約１年間、治験に留まる。
結果：
１００名の対象が、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ（Ｎ＝８０）又はプラセボ（Ｎ＝２０）の単一用量を投与された。全コホートの予備的な盲検安全性データと、３００及び１２００ｍｇのコホートのＰＫデータを収集した。
血清ＰＫサンプルは、５２週間の指定された来診時に採取した。ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ血清濃度は、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）プラットフォームで検証されたエレクトロケミルミネッセンス法を使用して決定した。ＰＫパラメーターは、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ（登録商標）８．２（Ｃｅｒｔａｒａ Ｌ．Ｐ．，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ， ＮＪ）の標準的な非コンパートメント法を使用して推定した。ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ ＰＫパラメーターは、記述統計学を用いて要約した。
有害事象のモニタリング、臨床検査、身体検査、及びＥＣＧ評価を、試験全体を通して行った。注射部位の忍容性評価は、投与後約３０分間、２時間、１２時間、２４時間、４８時間、及び１週間後に行った。
投与は、十分に忍容された。即ち、対象の６％（６／１００）が、軽度の注射部位反応を経験したが、４８時間以内にほぼ解消した。投与後１２週間の間、有害事象（ＡＥ）の大部分（１１０／１１２１２４／１２６；９８．２４％）は、事実上、軽度から中等度であり、重篤なＡＥは報告されず、ＡＥのために中止に至った対象はいなかった。入手可能なデータに基づくと、３００～１２００ｍｇのＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの曝露（Ｃｍａｘ及びＡＵＣ）は、用量に比例して増加した。ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳのＰＫプロファイルを図３４に示す。これは、半減期が延長されたＩｇＧと一致する。ＰＫの収集は、投与後５２週間、継続される（例えば、図３５）。
ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳは、健康な対象に最大１８００ｍｇの単回ＩＭ投与後、十分に忍容された。ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの予備ＰＫプロファイルから、シーズンごとに１回の投与が可能である。
２０週目までの全投与群のＰＫデータを、図３６及び図３７に示す。Ｃｍａｘ及びＡＵＣＤ０－１４０に、おおよその用量比例増加が観測され、ｔ１／２は、約５８日間と推定される（予備）。
パートＢ
パートＡを完了した対象は、試験終了時の来診時は盲検化されない。ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳを投与された対象は、パートＢへの参加に同意する機会を有する。適格な対象（≧３０）は、初回投与の約１２ヶ月後にＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの２回目の投与（ＩＭ）を受け、反復投与後のＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの免疫原性、安全性、及びＰＫを評価する。
対象は、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの安全性と局所忍容性を評価するために、投与後最低２時間、臨床検査部に滞在し、安全性、ＰＫ、及びＡＤＡの評価を完了するために２４週間、治験に留まる。
パートＢにおいて、各対象の治験薬投与を一時停止する又は中止する決定は、所定の中止規則にしたがって行われる。中止規則が充足されると、投薬が一時停止される。対象は、インフルエンザ様疾患（ＩＬＩ）をモニターするために、試験終了まで、電子機器で週２回、症状サーベイランス問診の完了を継続する。
パートＣ
パートＣは、健康な成人の市中感染Ａ型インフルエンザ疾患の予防におけるＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの安全性及び有効性を評価するように設計される。パートＣにおける用量選択と登録は、コホート１から最低４５日間、コホート２から最低２１日間で利用可能な安全性データを含む、パートＡから収集した利用可能なＰＫ及び安全性データをレビューした後に開始される。コホート３及び４の利用可能な安全性データもレビューされる。
パートＡのＰＫデータをレビューして、パートＣの用量選択を決定する。パートＣでは、最大２つの用量レベルが評価され、曝露応答分析と更なる第３相試験の用量選択が可能になる。パートＣでの評価のために選択された用量は、投与後少なくとも６ヶ月間、８μｇ／ｍＬの最低ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ血清濃度を維持するために、パートＡから利用可能なＰＫデータを考慮する。ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ又はプラセボを投与するために、最大１３８０名の対象がランダム化及び登録される。
パートＣでは、１つ又は２つの用量レベルが評価され得る。２つの用量レベルを評価する場合、適格な対象は、２（ｎ＝４６０）：２（ｎ＝４６０）：１（ｎ＝２３０）：１（ｎ＝２３０）の比で、１日目にＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ又はプラセボのいずれかが投与されるようにランダム化される。１つの用量レベルを評価する場合、対象は、１（ｎ＝４６０）：１（ｎ＝４６０）の比で、ランダム化される。各用量レベルは、注射回数と量に対応するプラセボを有する。対象は、注射部位でのＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの安全性及び局所忍容性を評価し、評価を完了するために、投与後最低２時間、臨床検査部に滞在する。
対象は、試験全体を通してＩＬＩについて積極的にモニターされる。対象は、電子機器で週２回のＩＬＩ症状サーベイランス問診を完了する。クリニック内でＩＬＩ評価を完了している対象は、インフルエンザ症状の重症度と及びＷＰＡＩ問診票を自己報告し、追跡される。ＩＬＩと一致する症状を経験している対象を、以下のように定義する。
・１以上の呼吸器症状（咳、咽頭痛、鼻漏、鬱血）
及び
・１以上の全身性症状（発熱［口腔内温度＞３８℃（１００．４°Ｆ）］、悪寒、筋肉痛、頭痛、倦怠感、疲労感）
前記試験の全パートで、血液サンプルを採取して、抗薬物抗体（ＡＤＡ）の有無と力価を決定する。サンプルは、必要に応じて、抗ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ抗体の中和能についても特徴付けることができる。
対象はいずれも、治験薬投与約４週間後及び１２週間後、並びにインフルエンザシーズンの終了後約２週間後に、安全性、ＰＫ、及びＡＤＡの評価のためにフォローアップ来診する。用量レベルがＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの２回目の注射を必要とする場合、２回目の注射は１２週目の来診時に行う。対象は、注射部位におけるＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの安全性と局所的な忍容性を評価するために、投与後最低２時間、クリニックに滞在する。
中間分析は、最初のインフルエンザシーズンの約半分のデータがパートＣで利用可能になり、シーズンの終わりに試験を終了するか、第２のインフルエンザシーズンの登録を継続するかを決定するための基礎を形成するときに行われる。
パートＣの場合、試験終了時の来診は、各半球におけるインフルエンザシーズンのおおよその終了に基づいて定義される。南半球の参加国の場合、インフルエンザシーズンの終わりを９月３０日と定義し、試験終了時の来診は、１０月中旬までに完了する。北半球の参加国の場合、インフルエンザシーズンの終わりを４月３０日と定義し、試験終了時の来診は、５月中旬頃に完了する。
パートＣの場合のみ、ＩｇＧのＦｃ受容体（ＦｃγＲ）及びＩｇＧ１対立遺伝子の遺伝子型決定のための血液サンプルを採取して、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの作用機序又はＰＫとの潜在的な関係を評価する。対象には、特に遺伝子型評価のためのインフォームドコンセントが提供される。
対象集団
対象は、ランダム化の時点で１８歳～６４歳である。対象は、パートＡ及びパートＢでは、急性又は慢性の病態がない健康な男性及び女性である。パートＣでは、対象は、病歴（例えば、高血圧、高脂血症、胃食道逆流症、不安症、又は鬱病など慢性病態は、安定した投薬量である必要がある）、及び身体検査、１２誘導ＥＣＧ、バイタルサイン、及び検査値からの臨床的に有意な所見がないことから判断して健康な状態である必要がある。ボディマス指数は、パートＡ及びＢで１８ｋｇ／ｍ２～３２ｋｇ／ｍ２、パートＣで１８ｋｇ／ｍ２～３５ｋｇ／ｍ２である。女性は、妊娠検査で陰性である、又は閉経後の状態を確認する必要がある。出産の可能性のある女性パートナーを持つ男性対象は、最後のフォローアップ来診まで避妊具の使用、又は無精子症の記録を伴う精管切除に同意する必要がある。パートＡとパートＢにおける患者は、非喫煙者である。パートＡの患者は、治験薬投与前に、アルコールを７２時間、カフェインを２４時間控えることに同意する必要がある。パートＢにおける患者は、約１２ヶ月前にＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳを投与され、パートＡを完了済みである。
試験手続
パートＡ
スクリーニング
スクリーニングは、１日目の来診前４週間以内に行い、書面によるインフォームドコンセント、適格性の判断、人口統計学的特性及び病歴の収集、並びに身体検査（バイタルを含む）、臨床検査、１２誘導心電図（ＥＣＧ）、及びパートＡの評価スケジュール（図２７Ａ及び図２７Ｂ）にしたがうその他の評価が含まれた。
入院期間（－１日目～３日目）：
対象はいずれも、－１日目に臨床検査部に入院させ、投与前に少なくとも１２時間、投与後４８時間、観察、実験室評価、及びＰＫサンプリングのために滞在させた。適格な対象は、１日目にＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ又はプラセボが投与されるようにランダム化した。血清及び鼻咽頭のＰＫサンプルは、薬物動態時点のスケジュール（図３１）にしたがって採取した。３日目に全試験評価を行った後、対象を退院させた。
フォローアップ期間：
対象は、身体検査（バイタルを含む）、１２誘導心電図、臨床検査（安全性、ＰＫ、及びＡＤＡを含む）、必要に応じて、ＡＥ及び併用薬のレビューを含むがこれらに限定されないパートＡの評価スケジュール（図２７Ａ及び図２７Ｂ）にしたがう対面評価のために臨床検査部に戻された。血清及び鼻咽頭のＰＫサンプルは、薬物動態時点のスケジュール（図３１）にしたがって採取した。対象は、試験終了まで、電子機器で週２回、ＩＬＩ症状のサーベイランス問診を完了した。対象がＩＬＩを経験した場合、インフルエンザ様疾患のモニタリングスケジュール（図３０）にしたがって、パートＣと同一の規定でモニタリングされた
パートＢ
スクリーニング：
試験のパートＡ及びＣの安全性、ＰＫ、及び有効性データの評価が更なる製品開発を支援する場合、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳを投与された対象は、パートＢに進むことができる。対象のランダム化は、パートＡの試験終了時の来診時に盲検化されず、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳを投与された対象は、初回投与後約１２ヶ月間で、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの２回目の投与を受ける適格性に関して評価されることに同意することができる。パートＢの評価スケジュール（図２８Ａ及び図２８Ｂ）にしたがうスクリーニング評価は、１日目の来診前４週間以内に行われる。
投薬（１日目）：
適格な対象に、１日目にＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳを投与する。対象は、投与後最低２時間クリニックに滞在させ、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの安全性と局所的な忍容性を評価し、パートＢの評価スケジュール（図２８Ａ及び図２８Ｂ）にしたがって評価を完了する。
フォローアップ期間：
対象は、身体検査（バイタルを含む）、臨床検査（安全性、ＰＫ、及びＡＤＡを含む）、必要に応じて、ＡＥ及び併用薬のレビューを含むがこれらに限定されないパートＢの評価スケジュール（図２８Ａ及び図２８Ｂ）にしたがう対面評価のために臨床検査部に戻る。対象は、試験終了まで、電子機器で週２回、ＩＬＩ症状のサーベイランス問診を完了する。ＩＬＩを経験している対象は、インフルエンザ様疾患のモニタリングスケジュール（図３０）にしたがって、パートＣと同一の規定でモニタリングされる。
パートＣ
スクリーニング：
スクリーニングは、１日目の来診前４週間以内に行い、書面によるインフォームドコンセント、適格性の判断、人口統計学的特性及び病歴の収集、並びに身体検査（バイタルを含む）、臨床検査、１２誘導心電図（ＥＣＧ）、及びパートＣの評価スケジュール（図２９Ａ及び図２９Ｂ）にしたがうその他の評価が含まれた。
投薬（１日目）：
２つの用量レベルを評価する場合、適格な対象は、２（ｎ＝４６０）：２（ｎ＝４６０）：１（ｎ＝２３０）：１（ｎ＝２３０）の比で、１日目にＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ又はプラセボのいずれかが投与されるようにランダム化される。１つの用量レベルを評価する場合、対象は、１（ｎ＝４６０）：１（ｎ＝４６０）の比で、ランダム化される。選択した用量レベルがＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの第２の注射を必要とする場合、第２の注射は、１２週間目の来診時に投与される。各用量レベルは、注射回数と量に対応するプラセボを有する。対象は、注射部位の安全性及び局所忍容性を評価し、パートＣの評価スケジュール（図２９Ａ及び図２９Ｂ）にしたがう評価を完了するために、投与後最低２時間、臨床検査部に滞在する。
フォローアップ期間：
対象は、パートＣの評価スケジュール（付録４）にしたがって、臨床検査部に戻り、クリニック内評価を行う。対象は、試験終了まで、電子機器で週２回、ＩＬＩ症状のサーベイランス問診を完了する。フォローアップ中に、１以上の呼吸器症状（咳、咽頭痛、鼻漏、鬱血）及び１以上の全身性症状（発熱、悪寒、筋肉痛、頭痛、倦怠感、疲労感）として定義されるＩＬＩと一致する症状を経験している対象は、発症日と同日に症状を報告し、インフルエンザ様疾患のモニタリングスケジュール（図３０）にしたがうクリニック内評価をアレンジする必要がある。
クリニック内評価は、限定されるものではないが、身体検査（バイタルサインを含む）、臨床検査（安全性を含む）、ウイルス学のための鼻咽頭スワブ、ＰＫ及びＡＤＡのための血液サンプル、並びに必要に応じて、ＡＥ及び併用薬のレビューを含む。対象はまた、インフルエンザ症状の重症度を自己報告し、インフルエンザ様疾患のモニタリングスケジュール（図３０）にしたがってＷＰＡＩ質問票を完成させる。前記ＷＰＡＩは、長期欠勤（労働時間の損失）、疾病就業（業務効率の低下）、労働生産性損失、特定の健康問題による活動障害の、検証済みの、患者により報告される、定量評価である。ＩＬＩを示す対象は、ＩＬＩ－Ｄ１及びＩＬＩＤ８に関する６項目のＷＰＡＩ問診票を完成させる（図３０を参照）。
インフルエンザ症状の重症度に関する問診票
対象は、インフルエンザに関連する全身性症状及び呼吸器症状（即ち、咳、咽頭痛、頭痛、鼻づまり、発熱又は悪寒、筋肉痛又は関節痛、及び疲労感）について自己評価を行う。対象は、４段階の評価尺度（０、なし；１、軽度；２、中等度；３、重度）を用いて症状の重篤度を評価する。この情報は、インフルエンザ様疾患のモニタリング期間中に、ＩＬＩ－Ｄ１～ＩＬＩ－Ｄ１０（１０日間）、１日２回、電子機器に入力される（図３０）。
抗Ａ型インフルエンザ抗体価
前記試験の全パートで、血液サンプルを採取して、パートＡ、Ｂ、及びＣの評価スケジュール（それぞれ、図２７Ａ／２７Ｂ、図２８、及び図２９）及び図３０のインフルエンザ様疾患のモニタリングスケジュールにしたがう標準的な方法を用いて、抗Ａ型インフルエンザ抗体価を決定する。サンプルの処理に関する詳細は、ラボマニュアルに記載されている。
耐性サーベイランス
前記試験の全パートで、インフルエンザ様疾患のモニタリングスケジュール（図３０）にしたがって、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳに対する耐性の潜在的な出現に対する耐性サーベイランスを、治験薬が投与され、実験室でＡ型インフルエンザウイルス感染が確認された全対象に対して実施する。Ａ型インフルエンザウイルス感染が確認された対象の鼻咽頭スワブサンプルを、ＨＡ遺伝子のディープシークエンシング分析に付し、アミノ酸多様体を決定する。抗ウイルス耐性の出現を評価するために、実験室でＡ型インフルエンザウイルス感染が確認された対象に対してウイルス培養を試み、ＩＡＶが確認された対象から培養されたウイルスに対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの抗ウイルス活性のインビトロ表現型分析を試みる。ＩＡＶが培養できない対象の場合、Ａ型インフルエンザウイルス陽性の対象のＨＡ遺伝子を含む組換えウイルスを、確立された逆遺伝学の手順を使用して生成し、組換えウイルスを表現型分析に付す
探索的バイオマーカー
パートＣ及びＩＬＩモニタリング中に、感染又は宿主応答の潜在的なバイオマーカーを探索するために、評価スケジュール（それぞれ、図２９Ａ及び図２９Ｂ並びに図３０）にしたがってサンプルを採取する。サンプルの採取と処理の詳細は、ラボマニュアルに記載されている。
遺伝子型決定
サンプル採取を行う前に、特に遺伝子型決定評価用の対象の署名及び日付のあるインフォームドコンセントを取得する。パートＣの場合のみ、ＩｇＧのＦｃ受容体（ＦｃγＲ）及びＩｇＧ１対立遺伝子の遺伝子型決定のための血液サンプルを、図２９の評価スケジュールにしたがって採取し、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの作用機序又はＰＫとの潜在的な関係を評価する。
製品
ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳは、３００ｍｇの凍結乾燥固体として気密栓付きガラスバイアルに提供される。注射用のＵＳＰ水で１５０ｍｇ／ｍＬに再構成すると、医薬品は、投与時に、ｐＨ６で２０ｍＭヒスチジン、５．３％スクロース、及び０．０２％ＰＳ８０を含む。ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳを筋肉内注射する。単位用量は体積に基づく（１回の注射当たり０．８ｍＬ～４ｍＬ）。ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳを安全に取り扱うための特別な手順は必要とされない。前記ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳは、安全な温度制御された環境に保存される。
プラセボは、ＩＭ注射用の無菌の防腐剤を含まない通常の生理食塩水０．９％溶液である。
統計的手法
パートＡ及びパートＢ
統計分析は主に記述的である。全試験データが、データリストに表示される。
要約表は、必要に応じて、各ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ用量及びプラセボごとのコホートによる結果を示す。記述統計学は、連続変数で表され、頻度とパーセンテージは、カテゴリ変数と順序変数で表される。パーセンテージは、用量群内の欠落していない値の数に基づく。ＡＤＡのＰＫに対する影響、及びＡＥとＳＡＥとの関連を評価することができる。
パートＣ
有効性分析の一次分析母集団は、最大の解析対象集団（ＦＡＳ）であり、これは、任意の量の治験薬を投与された、ランダム化された全対象を含む。一次有効性エンドポイントは、１以上の呼吸器症状と１以上の全身性症状として定義される、実験室で確認された（ＲＴ－ＰＣＲによる）Ａ型インフルエンザ疾患の対象の割合である。前記一次分析は、プロトコルで定義されたＡ型インフルエンザ疾患の発症率の低下に基づく、プラセボと比較したＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの優越性検定からなる。２つの用量レベルが評価される場合、以下の仮説が、両側０．０５レベルでの逐次検定の原則にしたがって検定される。帰無仮説が棄却されない場合、正式な逐次検定を止め、残りの仮説について名目上の有意性のみが報告される：
１．プロトコルで定義されたＡ型インフルエンザ疾患の発症率に基づく、プラセボと比較したＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ用量レベル２（高）の優越性
２．プロトコルで定義されたＡ型インフルエンザ疾患の発症率に基づく、プラセボと比較したＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ用量レベル１（低）の優越性
パートＣにおいて２つの用量レベルを評価する場合、各ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ群の４６０名の対象及び対応する各プラセボ群の２３０名の対象のサンプルサイズは、両側０．０５レベルの検定を使用する、プラセボ群とＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ群との間で、プロトコルで定義された疾患率（４．５％～１．３５％）の７０％の低下を検出する約８０％の検出力を提供する。合計約１３８０名の対象が登録されている。
１つの用量レベルのみが評価される場合、合計約９２０名の対象が登録される。ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ群の４６０名の対象とプラセボ群の４６０名の対象のサンプルサイズは、両側０．０５レベルの検定を使用する、プラセボ群とＶＩＲ－２４８２群との間で、プロトコルで定義された疾患率（４．５％～１．３５％）の７０％の低下を検出する約８０％の検出力を提供する。
中間分析が追加対象の登録を促す場合、２つの用量レベルが評価されると、約１３８０名の追加対象が登録される。試験の合計サンプルサイズは、約２７６０名の対象である。１つの用量レベルのみが評価される場合、約９２０名の追加対象が登録される。試験の合計サンプルサイズは、約１８４０名である。ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ群の９２０名の対象とプラセボ群の９２０名の対象のサンプルサイズは、両側０．０５レベルの検定を使用する、プラセボ群とＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ群との間で、プロトコルで定義された疾患率（２．２５％～０．６７５％）の７０％の低下を検出する約８０％の検出力を提供する。
エンドポイント
パートＡ
プライマリーエンドポイントは、
・治療下で発現した有害事象（ＴＥＡＥ）の発生率と臨床評価によって測定されるＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの安全性及び忍容性
セカンダリーエンドポイントは、
・単一用量ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ血清ＰＫパラメーター（例えば、Ｃｍａｘ、Ｃｌａｓｔ、Ｔｍａｘ、Ｔｌａｓｔ、ＡＵＣｉｎｆ、ＡＵＣｌａｓｔ、％ＡＵＣｅｘｐ、ｔ１／２、λｚ、Ｖｚ／Ｆ、ＣＬ／Ｆ）
・ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳに対する血清ＡＤＡの発生率と力価（該当する場合）
探索的エンドポイントは、以下を含むことができる：
・単一用量ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ鼻咽頭分泌ＰＫパラメーター（例えば、Ｃｍａｘ、Ｃｌａｓｔ、Ｔｍａｘ、Ｔｌａｓｔ、ＡＵＣｉｎｆ、ＡＵＣｌａｓｔ、％ＡＵＣｅｘｐ、ｔ１／２、λｚ、Ｖｚ／Ｆ、ＣＬ／Ｆ）
パートＢ
プライマリーエンドポイントは、
・ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳに対するＡＤＡの発生率と力価（該当する場合）
セカンダリーエンドポイントは、
・治療下で発現した有害事象（ＴＥＡＥ）の発生率と臨床評価によって測定されるＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの安全性及び忍容性
・ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ血清ＰＫパラメーター（例えば、Ｃｍａｘ、Ｃｌａｓｔ、Ｔｍａｘ、Ｔｌａｓｔ、ＡＵＣｉｎｆ、ＡＵＣｌａｓｔ、％ＡＵＣｅｘｐ、ｔ１／２、λｚ、Ｖｚ／Ｆ、ＣＬ／Ｆ）
パートＣ
プライマリーエンドポイントは、
・治療下で発現した有害事象（ＴＥＡＥ）の発生率と臨床評価によって測定されるＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの安全性及び忍容性
・有効性：１以上の呼吸器症状及び１以上の全身性症状として定義される、実験室で確認された（ＲＴ－ＰＣＲによる）Ａ型インフルエンザ疾患を有する対象の割合
セカンダリーエンドポイントは、
・培養により確認されたＡ型インフルエンザ疾患を有する対象の割合
・Ａ型インフルエンザによるＩＬＩの対象により報告された兆候及び症状の重篤度と期間
・ＲＴ－ｑＰＣＲ及びウイルス培養による初期症状発現時の鼻咽頭分泌物に存在するウイルス量の定量化
・血清中のＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳのＰＫ
・ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳに対するＡＤＡの発生率と力価（該当する場合）
探索的エンドポイントは、以下を含むことができる：
・ＩＬＩ発現後の宿主応答の潜在的バイオマーカーに対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの効果
・Ａ型インフルエンザの病状を呈している対象におけるＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳに対するウイルス耐性の出現
・遺伝子型決定と、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの作用機序及び／又はＰＫとの潜在的関係によって決定されるＦｃＲ多型
・遺伝子型決定によって決定されるＩｇＧ１アロタイプ
・ＩＬＩモニタリング期間中の医療機関への医療上の来診率
・Ａ型インフルエンザ疾患による労働生産性と活動性障害（ＷＰＡＩ）の測定
前記実施例における略語と用語の定義のリスト
ＡＤＡ 抗薬物抗体
ＡＤＥ 抗体依存性増強
ＡＥ 有害事象
ＡＬＴ アラニンアミノトランスフェラーゼ
ＡＬＰ アルカリホスファターゼ
ＡＳＴ アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ
ＡＵＣ 曲線下面積
ＢＬＱ 定量限界未満
ＢＭＩ ボディマス指数
ＢＵＮ 血中尿素窒素
ＣＬｃｒ クレアチニンクリアランス
ＣＭＣ 化学、製造、及び品質管理
ＣＴＣＡＥ 有害事象共通用語規準
ＤＭＣ データ監視委員会
ＥＣ 倫理委員会
ＥＣＧ 心電図
ｅＣＲＦ 電子症例報告フォーム
ＥＯＳ 試験終了
ＥＴ 早期終了
ＦｃＲ ＩｇＧのＦｃ受容体
ＦＤＡ 食品医薬品局
ＧＣＰ グッドクリニカルプラクティス
ＧＧＴ ガンマグルタミルトランスフェラーゼ
ＧＬＰ グッドラボラトリープラクティス
ＧＭＰ グッドマニュファクチャリングプラクティス
ＨＡ ヘマグルチニン
ＨＥＤ ヒト等価用量
Ｈｇｂ ヘモグロビン
ＩＣＦ インフォームドコンセントフォーム
ＩＣＨ 医薬品規制ハーモナイゼーション国際会議
ＩｇＧ 免疫グロブリンＧ
ＩＬＩ インフルエンザ様疾患
ＩＭ 筋肉内
ＩＮＤ 治験薬
ＩＮＲ 国際標準比
ＩＰ 治験薬
ＩＲＢ 機関審査委員会
ＩＶ 静脈内
ＩＷＲＳ インタラクティブウェブ応答システム
ＬＤＨ 乳酸デヒドロゲナーゼ
ＬＬＮ 正常下限
ＬＬＯＱ 定量下限
ＬＬＴ 下層語
ｍＡｂ モノクローナル抗体
ＭｅｄＤＲＡ 医薬品規制用語集
ＮＯＡＥＬ 無毒性量
ＯＴＣ オーバーザカウンター
ＰＫ 薬物動態
ＰＯＣ 概念実証
ＲＢＣ 赤血球
ＳＡＤ 単回漸増用量
ＳＡＥ 重大な有害事象
ＳＤ 標準偏差
ＳＯＣ 器官別大分類
ＳＲＣ 安全性審査委員会
ＳＵＳＡＲ 疑わしい予期せぬ重篤な有害反応
ＵＬＮ 正常上限
ＷＢＣ 白血球
ＷＨＯ 世界保健機関
ＷＯＣＢＰ 出産の可能性のある女性
ＷＰＡＩ 労働生産性と活動性障害
実施例８：様々なｐＨでのヒトＦｃＲｎへの結合
ＦｌｕＡＢ＿ｗｔとＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳを、生体層干渉法（ＢＬＩ）を使用して新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に結合する能力について、対照比較した。
この目的のために、ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ及びＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳのヒトＦｃＲｎへの結合を、Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤ９６機器（生体層干渉法、ＢＬＩ、ＦｏｒｔｅＢｉｏ）で測定した。抗ヒトＦａｂ－ＣＨＩでコーティングしたバイオセンサを、ＲＴで１０分間、キネティクスバッファで事前に水和した。次いで、ヒトｍＡｂ（ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ又はＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳ）を、ｐＨ７．４のキネティクスバッファ中で、１μｇ／ｍｌで３０分間、バイオセンサにロードした。ベースラインは、キネティクスバッファ（滅菌ろ過された０．０１％エンドトキシンフリーウシ血清アルブミン、０．００２％Ｔｗｅｅｎ－２０（ポリソルベート２０）、０．００５％ＮａＮ３のＰＢＳ溶液）中、ｐＨ＝７．４又はｐＨ＝６．０で４分間測定した。次いで、ヒトｍＡｂをロードしたセンサを、ｐＨ＝７．４又はｐＨ＝６．０のキネティクスバッファ中、１μｇ／ｍｌのヒトＦｃＲｎの溶液に７分間曝露し、様々な環境でＦｃＲｎ－ｍＡｂの会合を測定した（オンレート）。次いで、解離を、同一ｐＨのキネティクスバッファ中で、更に５分間測定した（オフレート）。いずれの工程も、３０℃、１０００ｒｐｍで攪拌しながら行った。会合及び解離プロファイルは、干渉パターンの変化としてリアルタイムで測定した。
図３８Ａ及び図３８Ｂに示すように、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳは、酸性ｐＨ（ｐＨ６．０）でＦｌｕＡＢ＿ｗｔと比較して高い親和性でヒトＦｃＲｎに結合したが、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳもＦｌｕＡＢ＿ｗｔも、中性ｐＨ（ｐＨ７．４）ではＦｃＲｎに結合しない。
実施例９：抗体の拡張エピトープで同定された多型の特性評価
拡張エピトープにおける過去の多型を、Ａ／Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃｏ／８／３４（ＰＲ８）バックグラウンドでのＨ１ＨＡ又はＨ３ＨＡを使用した逆遺伝学によって生成したウイルスを使用して、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの中和活性に対する影響について評価した。
一塩基多型を、部位特異的変異誘発を使用して、ＰＲ８ Ｈ１ＨＡ又はＡ／Ａｉｃｈｉ／２／６８（Ａｉｃｈｉ）ｈ－ＩＡ ｐＨＷ２０００プラスミドに導入した。組換えＡ型インフルエンザウイルスは、標準的な方法を使用して、ＰＲ８バックボーン上の会合するＨ１又はＨ３ ＨＡでレスキューした（例えば、Ｅｒｉｃｈ Ｈｏｆｆｍａｎｎ， Ｇａｂｒｉｅｌｅ Ｎｅｕｍａｎｎ， Ｙｏｓｈｉｈｉｒｏ Ｋａｗａｏｋａ， Ｇｅｒｄ Ｈｏｂｏｍ， Ｒｏｂｅｒｔ Ｇ． Ｗｅｂｓｔｅｒ， ２０００， Ａ ＤＮＡ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ ｖｉｒｕｓ ｆｒｏｍ ｅｉｇｈｔ ｐｌａｓｍｉｄｓ． Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｍａｙ ２０００， ９７ （１１）： ６１０８－６１１３； ｄｏｉ： １０．１０７３／ｐｎａｓ．ｔ ００－１３３６９７に記載されるように）。
中和活性は、標準的な方法を使用してＭＤＣＫ細胞で評価した。例えば、中和活性は、９６ウェルプレート中などのＭＤＣＫ細胞で評価することができる。この目的のために、ＭＣＤＫ細胞は、感染の２４時間前に３０，０００細胞／ウェルで播種することができる。抗体ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳは、ＭＤＣＫ細胞に添加する前に、３７℃で１時間、ウイルスとインキュベートすることができる。この目的のために、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの１：２．５の９点段階希釈を感染培地で作成し、各希釈物を３連で試験し（例えば、５０μｇ／ｍＬ～０．０３μｇ／ｍＬ（最終濃度））、３７℃で１時間、ウイルスの１２０ＴＣＩＤ５０とインキュベートすることができる。ＭＤＣＫ細胞をＰＢＳで２回洗浄し、１００ｐｌ／ウェルのウイルス：抗体溶液を添加し、細胞を３７℃で４時間インキュベートすることができる。４時間後、更に１００μＬ／ウェルの感染培地を細胞に添加することができる。３７℃で７２時間培養した後、ウイルスＲＮＡを抽出し、ｑＲＴ－ＰＣＲで、例えば、ＷＨＯプライマー（Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ． ＣＤＣ ｐｒｏｔｏｃｏｌ ｏｆ ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＲＴ－ＰＣＲ ｆｏｒ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ Ｈ１Ｎ１． Ａｐｒｉｌ ２８， ２００９）を使用して測定することができる。ＩＣ５０は、ウイルス複製の５０％を減少させるμｇ／ｍＬ単位の抗体濃度として表現され、対照ウェル（ウイルスなし及びウイルス単独）に対して規格化されたデータの非線形４パラメーターロジスティックフィット曲線を用いて計算することができる。
拡張エピトープにおけるＨＩ及びＨ３のＨＡ多型に対するＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの中和活性を、以下の表４に示す。
Figure 2022545553000007
 表４において、Ａｉｃｈｉ＝Ａ／Ａｉｃｈｉ／２／６８；Ｇｅｏｍｅａｎ＝幾何平均；ＨＡ＝ヘマグルチニン；ＮＡ＝該当なし；ＰＲ８＝Ａ／Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃｏ／８／３４ Ｈ１Ｎ１；ｗｔ＝野生型。
Ｈ３ ＨＡをコードするウイルスでは、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳは、野生型ウイルスと同様のＩＣ５０値で、変異ＨＡ１ Ｐ１１Ｓ、ＨＡ２ Ｄ４６Ｎ、又はＨＡ２ Ｎ４９Ｔを有するウイルスを中和した（野生型ウイルスに対してＩＣ５０が２倍未満の変化）。Ｈ１ ＨＡをコードするウイルスでは、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳは、野生型ウイルスと同様のＩＣ５０値で、ＨＡ２ Ｎ１４６Ｄをコードするウイルスを中和した（野生型ウイルスに対してＩＣ５０が２倍未満の変化）。更に、使用したＰＲ８野生型株は、ＨＡ２多型Ｌ３８Ｑ及びＤ４６Ｎをコードし、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳによって４．７μｇ／ｍＬのＩＣ５０値で中和された。全体として、評価した多型はいずれも、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの野生型ウイルスと比較して２未満のＩＣ５０倍数変化をもたらした。まとめると、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳは、拡張エピトープ（Ｈ３ ＨＡ：ＨＡ１ Ｐ１１Ｓ、ＨＡ２ Ｄ４６Ｎ、又はＨＡ２ Ｎ４９Ｔ；Ｈ１ ＨＡ：Ｎ１４６Ｄ）で評価された過去の多型のいずれをも効果的に中和した。
実施例１０：Ｔｇ３２マウスにおける抗薬物抗体応答
Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ変異に関して、最近、前記変異が、この変異を含む抗体の免疫原性を高めるという懸念が提起された（Ｂｒｉａｎ Ｃ． Ｍａｃｋｎｅｓｓ， Ｊｕｌｉｅ Ａ． Ｊａｗｏｒｓｋｉ， Ｅｋａｔｅｒｉｎａ Ｂｏｕｄａｎｏｖａ， Ａｎｎａ Ｐａｒｋ， Ｄｅｌｐｈｉｎｅ Ｖａｌｅｎｔｅ， Ｃｈｒｉｓｔｉｎｅ Ｍａｕｒｉａｃ， Ｏｌｉｖｉｅｒ Ｐａｓｑｕｉｅｒ， Ｔｈｏｒｓｔｅｎ Ｓｃｈｍｉｄｔ， Ｍｏｓｔａｆａ Ｋａｂｉｒｉ， Ａｂｄｕｌｌａｈ Ｋａｎｄｉｒａ， Ｋａｔａｒｉｎａ Ｒａｄｏｓｅｖｉｃ ＆ Ｈｕａｗｅｉ Ｑｉｕ （２０１９） Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｆｃ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｆｏｒ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｎｅｏｎａｔａｌ Ｆｃ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｂｉｎｄｉｎｇ ａｎｄ ｐｒｏｌｏｎｇｅｄ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ｈａｌｆ－ｌｉｆｅ， ｍＡｂｓ， １１：７， １２７６－１２８８； Ｍａｅｄａ Ａ， Ｉｗａｙａｎａｇｉ Ｙ， Ｈａｒａｙａ Ｋ， ｅｔ ａｌ． Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ＩｇＧ１ ｖａｒｉａｎｔ ｗｉｔｈ ｅｎｈａｎｃｅｄ ＦｃＲｎ ｂｉｎｄｉｎｇ ａｎｄ ｗｉｔｈｏｕｔ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｂｉｎｄｉｎｇ ｔｏ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ｆａｃｔｏｒ ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｙ． ＭＡｂｓ． ２０１７；９（５）：８４４－８５３）。
親抗体ＦｌｕＡＢ＿ｗｔと比較した抗体ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの免疫原性、特に抗薬物応答（抗薬物抗体；ＡＤＡ）を評価するために、ＴＧ３２マウス（ヒトＦｃＲｎについてトランスジェニックである）の２つの別々の群（ｎ＝５）に、ＦｌｕＡＢ－ＭＬＮＳ又はＦｌｕＡＢ＿ｗｔモノクローナル抗体のいずれかを５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．注射した。次いで、注射したｍＡｂの循環レベルを評価するために、様々な時点で血液サンプルを採取した。注射後１４日目と２１日目に採取したサンプルを使用して、特異的ＥＬＩＳＡにより、注射したヒトモノクローナル抗体に対する抗薬物抗体（ＡＤＡ）応答を評価した。
簡単に説明すると、精製したＦｌｕＡＢ＿ｗｔ及びＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳモノクローナル抗体を、９６ウェルプレートに２μｇ／ｍｌでコーティングした。ブロッキング後、注射後１４日目及び２１日目に得た被処理動物の血清を１：１８０に希釈したものを、室温（ＲＴ）で１．５時間インキュベートした。洗浄後、ペルオキシダーゼ標識ヤギ抗マウスＩｇＧ Ｆ（ａｂ’）２断片（０．１６μｇ／ｍｌ）をプレートに添加し、ＲＴで１．５時間インキュベートした。次いで、ＡＤＡ ＩｇＧ（注射された抗体ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ及びＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳに対するマウス抗体）を適切な基質で発色させ、分光光度計で読み取った。示したデータは、抗体のｉ．ｖ．投与後１４日目及び２１日目に収集した個々の血清（ｎ＝５／群）で得たＯＤ値（４５０ｎｍ）である。ナイーブなＴｇ３２マウス（対照）の血清を、陰性対照として使用した。
結果を図３９Ａ及び図３９Ｂに示す。驚くべきことに、ＦｌｕＡＢ－ＭＬＮＳ抗体に対して反応するマウス血清ＩｇＧのシグナルは非常に弱く、注射をされていない対照動物で検出されたシグナルに対応していたが、一方で、ＦｌｕＡＢ＿ｗｔを注射されたマウスの血清で測定されたＡＤＡ応答は、ｉ．ｖ．注射後１４日目と２１日目の両方で有意に高かった（図３９Ａ）。更に、注射後１４日目に測定されたＡＤＡのレベルは、循環ＦｌｕＡＢ＿ｗｔのレベルと有意に逆相関した（血清ＦｌｕＡＢ＿ｗｔレベルは、ＦｌｕＡＢ＿ｗｔに対するマウス抗体のために減少した）が、一方で、同時に測定した循環ＦｌｕＡＢ－ＭＬＮＳのレベルは、確かに、遥かに高く、均一であった（図３９Ｂ）。
まとめると、これらのデータは、驚くべきことに、抗薬物応答（抗薬物抗体；ＡＤＡ）、即ち、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの免疫原性が、ＦｌｕＡＢ＿ｗｔと比較して減少したことを示す。
実施例１１：ｓ．ｃ．投与後の抗薬物抗体応答及び免疫原性
より免疫原性の高い環境でこの驚くべき知見を更に裏付けるために、ＴＧ３２マウスの別々の群（ｎ＝５）に、ＦｌｕＡＢ－ＭＬＮＳ又はＦｌｕＡＢ＿ｗｔのいずれか（５ｍｇ／ｋｇ）を皮下（ｓ．ｃ．）注射した。ｓ．ｃ．注射は、免疫原性のより高い投与経路と一般に考えられている。ｓ．ｃ．投与後３週間で、抗薬物抗体のレベルを、ＦｌｕＡＢ＿ｗｔ又はＦＬｕＡＢ＿ＭＬＮＳのいずれかをｓ．ｃ．注射したマウスの血清中のマウス抗薬物特異的ＥＬＩＳＡ（実施例１０に記載したように）によって血清中で測定した。陰性対照として、ナイーブな未処理動物から得た１０種の血清のプールを使用した。
結果を図４０に示す。より免疫原性の高い環境にもかかわらず、ＦｌｕＡＢ－ＭＬＮＳをｓ．ｃ．投与された動物は、注射をされていない対照動物の血清で検出されたものと重複する抗ｈＩｇＧ抗体の血清力価で確認されるように、体液性免疫原性応答を引き起こさなかった。反対に、ＦｌｕＡＢ＿ｗｔで処理した動物のＡＤＡ力価は明らかに陽性であり、処理動物の全てにおいて測定可能であった。注射された抗体の循環レベルと抗ｈＩｇＧ内因性応答との間の逆相関が、ＦｌｕＡＢ＿ｗｔのみを注射されたマウスの血清で検出された（図示せず）。
これらのデータは、驚くべきことに、抗体ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳが、その親抗体ＦｌｕＡＢ＿ｗｔと比較して免疫原性が低いことを示している。
実施例１２：インビトロ中和活性
Ａ型インフルエンザウイルスを広く中和するＦｌｕＡＢ＿ＷＴの能力は、マイクロ中和アッセイを使用した２つの別々の試験でインビトロにて評価した。１９３３年～２０１４年に収集した、２４種の群１のウイルス（サブタイプＨ１、Ｈ２、Ｈ５、Ｈ６、及びＨ９）及び２８種の群２のウイルス（サブタイプＨ３及びＨ７）の５２種のＡ型インフルエンザ分離株を試験した。１つの試験では、ＦｌｕＡＢ＿ＷＴは、全３７種のウイルスを中和し、最大阻害濃度の中央値ＩＣ５０は０．７８μｇ／ｍＬ（０．１２～３．０７μｇ／ｍＬの範囲）であった。他の試験では、ＦｌｕＡＢ＿ＷＴは、２０１０年～２０１４年に単離された１５種の更なるウイルス株を中和し、ＩＣ５０の中央値は０．１９９μｇ／ｍＬ（０．０６７～２．６９μｇ／ｍＬの範囲）であった。２つの７：１組換えＰＲ８ウイルスを除く２つの試験における群１及び群２の全ウイルスのＩＣ５０値の中央値は、群１ウイルスで０．１μｇ／ｍＬ、群２ウイルスで０．８０μｇ／ｍＬであった（それぞれ、ｎ＝２４及びｎ＝２６）。合計で、１７種のＨ１Ｎ１ウイルスが試験され、中央値ＩＣ５０が０．２８μｇ／ｍＬであり、ＩＣ９０が２．１７μｇ／ｍＬであった。したがって、ＦｌｕＡＢ＿ＷＴは、自然に発生する抗原ドリフトにもかかわらず、一貫した中和活性をもたらすことができる。これらのデータは、ＦｌｕＡＢ＿ＭＬＮＳの一貫した中和活性も支持する。
配列及び配列番号の表（配列表）
Figure 2022545553000008
Figure 2022545553000009
本明細書又は添付の出願データシートで言及される米国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、外国特許、外国特許出願、及び非特許刊行物はいずれも、本明細書と矛盾しない範囲で、その全体を参照により本明細書に援用する。
２０１９年８月２９日出願の米国仮出願６２／８９３，７４７号明細書、２０２０年３月２３日出願の米国仮出願６２／９９３，５１９号明細書、及び２０２０年６月１８日出願の米国仮出願６３／０４０，９６６号明細書の全体を、参照により本明細書に援用する。
前記したことから、本発明の具体的な実施形態は、例示の目的で本明細書に記載されているが、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、様々な変更を行うことができることが理解される。したがって、本発明は、添付の特許請求の範囲による場合を除き限定されない。

Claims (38)

  1. 対象におけるＡ型インフルエンザ感染を治療又は予防する方法であって、抗体を含む医薬組成物の単一用量を前記対象に投与することを含み、前記抗体が、配列番号１０で表される軽鎖アミノ酸配列と配列番号９で表される重鎖アミノ酸配列とを含むことを特徴とする、方法。
  2. 前記医薬組成物が、前記抗体を、１００ｍｇ／ｍＬ、１１０ｍｇ／ｍＬ、１２０ｍｇ／ｍＬ、１３０ｍｇ／ｍＬ、１４０ｍｇ／ｍＬ、１５０ｍｇ／ｍＬ、１６０ｍｇ／ｍＬ、１７０ｍｇ／ｍＬ、１８０ｍｇ／ｍＬ、１９０ｍｇ／ｍＬ、又は２００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは１５０ｍｇ／ｍＬなどの、１００ｍｇ／ｍＬ～２００ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度で含む、請求項１に記載の方法。
  3. 前記単一用量が、前記対象の体重１ｋｇ当たり３、４、５、６、又は７、好ましくは５ｍｇの前記抗体を含む、請求項１又は２に記載の方法。
  4. 前記単一用量が、最大６０ｍｇ、最大３００ｍｇ、最大１２００ｍｇ、最大１８００ｍｇ、又は最大３０００ｍｇの前記抗体を含む、請求項１から３のいずれかに記載の方法。
  5. 前記単一用量が、最大６０ｍｇ、最大７０ｍｇ、最大８０ｍｇ、最大９０ｍｇ、最大１００ｍｇ、最大２００ｍｇ、最大３００ｍｇ、最大４００ｍｇ、最大５００ｍｇ、最大６００ｍｇ、最大７００ｍｇ、最大８００ｍｇ、最大９００ｍｇ、最大１０００ｍｇ、最大１１００ｍｇ、最大１２００ｍｇ、最大１３００ｍｇ、最大１４００ｍｇ、最大１５００ｍｇ、最大１６００ｍｇ、最大１７００ｍｇ、最大１８００ｍｇ、最大２，０００ｍｇ、最大２，５００ｍｇ、又は最大３０００ｍｇの前記抗体を含む、請求項１から４のいずれかに記載の方法。
  6. 前記抗体が、６０ｍｇ、３００ｍｇ、１２００ｍｇ、又は１８００ｍｇの用量で投与される、請求項１から５のいずれかに記載の方法。
  7. 前記抗体が、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇ、８００ｍｇ、９００ｍｇ、１１００ｍｇ、又は１２００ｍｇの用量で投与される、請求項１から５のいずれかに記載の方法。
  8. （ｉ）前記単一用量が３００ｍｇの前記抗体を含み、前記医薬組成物が１５０ｍｇ／ｍＬで前記抗体を含み、前記用量が２ｍＬの前記医薬組成物を含む単回注射によって投与される；
    （ｉｉ）前記単一用量が１２００ｍｇの前記抗体を含み、前記医薬組成物が１５０ｍｇ／ｍＬで前記抗体を含み、前記用量が４ｍＬの前記医薬組成物をそれぞれ含む２回の注射によって投与される；
    （ｉｉｉ）前記単一用量が１８００ｍｇの前記抗体を含み、前記医薬組成物が１５０ｍｇ／ｍＬで前記抗体を含み、前記用量が４ｍＬの前記医薬組成物をそれぞれ含む３回の注射によって投与される；又は
    （ｉｖ）前記単一用量が６０ｍｇの前記抗体を含み、前記医薬組成物が１５０ｍｇ／ｍＬで前記抗体を含み、前記用量が０．４ｍＬの前記医薬組成物を含む１回の注射によって投与される、請求項１から７のいずれかに記載の方法。
  9. 前記対象が、ヒトである、請求項１から８のいずれかに記載の方法。
  10. 前記方法が、筋肉内（ＩＭ）注射を含む、請求項１から９のいずれかに記載の方法。
  11. 前記医薬組成物が、水（例えば、注射用ＵＳＰ水又は注射用ＵＳ滅菌水）を更に含む、請求項１から１０のいずれかに記載の方法。
  12. 前記医薬組成物が、ヒスチジンを更に含み、任意に、前記医薬組成物中、１０ｍＭ～４０ｍＭの範囲の濃度で、好ましくは２０ｍＭの濃度で含む、請求項１から１１のいずれかに記載の方法。
  13. 前記医薬組成物が、スクロースなどの二糖などの糖を更に含み、任意に、３．０％～９．０％（ｗ／ｖ）の範囲、好ましくは３．６％～８．６％の範囲、より好ましくは４％～６％の範囲で含む、請求項１から１２のいずれかに記載の方法。
  14. 前記医薬組成物が、界面活性剤又はトリブロックコポリマー、任意に、ポリソルベート又はポロキサマー１８８、好ましくはポリソルベート８０（ＰＳ８０）を更に含み、任意に、０．０１％～０．０５％（ｗ／ｖ）の範囲で、好ましくは０．０２％（ｗ／ｖ）で含む、請求項１から１３のいずれかに記載の方法。
  15. 前記医薬組成物が、５．５～６．５の範囲、又は５．８～６．２の範囲のｐＨを有する、又は５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、若しくは６．５、好ましくは６．０のｐＨを有する、請求項１から１４のいずれかに記載の方法。
  16. 前記単一用量が、１回の注射当たり０．８ｍＬ～４ｍＬ含む、請求項１から１５のいずれかに記載の方法。
  17. 前記単一用量が、１回の注射当たり、０．８ｍＬ、０．９ｍＬ、１．０ｍＬ、１．１ｍＬ、１．２ｍＬ、１．３ｍＬ、１．４ｍＬ、１．５ｍＬ、１．６ｍＬ、１．７ｍＬ、１．８ｍＬ、１．９ｍＬ、２．０ｍＬ、２．１ｍＬ、２．２ｍＬ、２．３ｍＬ、２．４ｍＬ、２．５ｍＬ、２．６ｍＬ、２．７ｍＬ、２．８ｍＬ、２．９ｍＬ、３．０ｍＬ、３．１ｍＬ、３．２ｍＬ、３．３ｍＬ、３．４ｍＬ、３．５ｍＬ、３．６ｍＬ、３．７ｍＬ、３．８ｍＬ、３．９ｍＬ、又は４．０ｍＬの前記組成物を含む又はからなる、請求項１６に記載の方法。
  18. 前記対象に前記医薬組成物を投与後、約４週間、約１２週間、及び／又は約２０週間で、前記対象が、プラセボを投与された、又はＡ型インフルエンザの治療又はワクチンを受けなかったレファレンス対象と同一期間に亘って比較して、
    （ｉ）咳；咽頭痛；鼻漏；鬱血；又はそれらの任意の組合せから選択される呼吸器症状の回数及び／又は重篤度の低減、及び／又は
    （ｉｉ）発熱［口腔内温度＞３８℃（１００．４°Ｆ）］；悪寒；筋肉痛；頭痛；倦怠感；疲労感；又はそれらの任意の組合せから選択される全身性症状の回数及び／又は重篤度の低減を経験する、請求項１から１７のいずれかに記載の方法。
  19. 前記対象が、１８歳～６５歳であり、１８ｋｇ／ｍ２～３２ｋｇ／ｍ２の範囲又は１８ｋｇ／ｍ２～３５ｋｇ／ｍ２の範囲のボディマス指数を有する、請求項１から１８のいずれかに記載の方法。
  20. ６ヶ月間の間に前記対象に前記医薬組成物を含む前記単一用量を１回投与することを含む、請求項１から１９のいずれかに記載の方法。
  21. １２ヶ月間の間に前記対象に前記医薬組成物を含む前記単一用量を１回投与することを含む、請求項１から２０のいずれかに記載の方法。
  22. ３ヶ月に１回などの、６ヶ月間の間に前記対象に前記医薬組成物を含む前記単一用量を２回投与することを含む、請求項１から２０のいずれかに記載の方法。
  23. インフルエンザシーズンの開始前１～２ヶ月間以内（例えば、３０日間以内～６０日間以内）又は前記インフルエンザシーズンの最初の１～２ヶ月間以内に前記医薬組成物を含む前記単一用量を投与することを含む、請求項１から２２のいずれかに記載の方法。
  24. 前記抗体又は前記抗体を含む前記医薬組成物が、約２．１７μｇ／ｍＬのインビトロインフルエンザ感染阻害ＩＣ９０を有する、請求項１から２３のいずれかに記載の方法。
  25. （ｉ）投与される前記医薬組成物が６０ｍｇの前記抗体を含み、前記抗体が投与後最大１２０日間、約１μｇ／ｍＬ～約７μｇ／ｍＬの濃度で前記対象の血清中に存在する；
    （ｉｉ）投与される前記医薬組成物が３００ｍｇの前記抗体を含み、前記抗体が投与後最大１２０日間、約８μｇ／ｍＬ～約２０μｇ／ｍＬの濃度で前記対象の血清中に存在する；
    （ｉｉｉ）投与される前記医薬組成物が１２００ｍｇの前記抗体を含み、前記抗体が投与後最大１２０日間、約５０μｇ／ｍＬ～約１００μｇ／ｍＬの濃度で前記対象の血清中に存在する；
    （ｉｖ）投与される前記医薬組成物が１８００ｍｇの前記抗体を含み、前記抗体が投与後最大１２０日間、約７０μｇ／ｍＬ～約１１０μｇ／ｍＬの濃度で前記対象の血清中に存在する；及び／又は
    （ｖ）前記抗体が４９日間～６８日間の前記対象におけるインビボｔ１／２を有する、請求項１から２４のいずれかに記載の方法。
  26. 前記医薬組成物の前記抗体が、４９日間、５０日間、５１日間、５２日間、５３日間、５４日間、５５日間、５６日間、５７日間、５８日間、５９日間、６０日間、６１日間、６２日間、６３日間、６４日間、６５日間、６６日間、６７日間、又は６８日間などの、４９日間～６８日間のヒト対象におけるインビボｔ１／２を有する、請求項１から２５のいずれかに記載の方法。
  27. 前記対象が、有害事象共通用語規準（ＣＴＣＡＥ）にしたがう有害事象（ＡＥ）を、前記医薬組成物の前記単一用量の投与後、任意に、最大１４０日間、経験しない、請求項１から２６のいずれかに記載の方法。
  28. 前記対象が、有害事象共通用語規準（ＣＴＣＡＥ）にしたがう中等度の有害事象（ＡＥ）を、前記医薬組成物の前記単一用量の投与後、任意に、最大１４０日間、経験しない、請求項１から２７のいずれかに記載の方法。
  29. 前記対象が、有害事象共通用語規準（ＣＴＣＡＥ）にしたがう重大な有害事象（ＡＥ）を、前記医薬組成物の前記単一用量の投与後、任意に、最大１４０日間、経験しない、請求項１から２８のいずれかに記載の方法。
  30. （ｉ）前記単一用量が３００ｍｇの前記抗体を含み、前記医薬組成物が１５０ｍｇ／ｍＬで前記抗体を含み、前記単一用量が２ｍＬの前記医薬組成物を含む単回注射を含む；
    （ｉｉ）前記単一用量が１２００ｍｇの前記抗体を含み、前記医薬組成物が１５０ｍｇ／ｍＬで前記抗体を含み、前記単一用量が４ｍＬの前記医薬組成物をそれぞれ含む２回の注射を含む；
    （ｉｉｉ）前記単一用量が１８００ｍｇの前記抗体を含み、前記医薬組成物が１５０ｍｇ／ｍＬで前記抗体を含み、前記単一用量が４ｍＬの前記医薬組成物をそれぞれ含む３回の注射を含む；又は
    （ｉｖ）前記単一用量が６０ｍｇの前記抗体を含み、前記医薬組成物が１５０ｍｇ／ｍＬで前記抗体を含み、前記単一用量が０．４ｍＬの前記医薬組成物を含む、請求項１から２９のいずれかに記載の方法。
  31. 配列番号１０で表される軽鎖アミノ酸配列と配列番号９で表される重鎖アミノ酸配列とを含む抗体を含む医薬組成物であって、前記抗体が、１００ｍｇ／ｍＬ、１１０ｍｇ／ｍＬ、１２０ｍｇ／ｍＬ、１３０ｍｇ／ｍＬ、１４０ｍｇ／ｍＬ、１５０ｍｇ／ｍＬ、１６０ｍｇ／ｍＬ、１７０ｍｇ／ｍＬ、１８０ｍｇ／ｍＬ、１９０ｍｇ／ｍＬ、又は２００ｍｇ／ｍＬ、好ましくは１５０ｍｇ／ｍＬなどの、１００ｍｇ／ｍＬ～２００ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度で前記組成物中に存在することを特徴とする、医薬組成物。
  32. 前記医薬組成物が、水（例えば、注射用ＵＳＰ水又は注射用ＵＳ滅菌水）を更に含む、請求項３１に記載の医薬組成物。
  33. 前記医薬組成物が、ヒスチジンを更に含み、任意に、前記組成物中、１０ｍＭ～４０ｍＭの範囲の濃度で、好ましくは２０ｍＭの濃度で含む、請求項３１又は３２に記載の医薬組成物。
  34. 前記医薬組成物が、スクロースなどの二糖などの糖を更に含み、任意に、３．０％～９．０％（ｗ／ｖ）の範囲、好ましくは３．６％～８．６％、より好ましくは４％～６％の範囲で含む、請求項３１から３３のいずれかに記載の医薬組成物。
  35. 前記医薬組成物が、界面活性剤又はトリブロックコポリマー、任意に、ポリソルベート又はポロキサマー１８８、好ましくはポリソルベート８０（ＰＳ８０）を更に含み、任意に、０．０１％～０．０５％（ｗ／ｖ）の範囲で、好ましくは０．０２％で含む、請求項３１から３４のいずれかに記載の医薬組成物。
  36. 前記組成物が、５．５～６．５の範囲、又は５．８～６．２の範囲のｐＨを有する、又は５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、若しくは６．５、好ましくは６．０のｐＨを有する、請求項３１から３５のいずれかに記載の医薬組成物。
  37. 請求項３１から３６のいずれかに記載の医薬組成物を含むことを特徴とする、好ましくはガラス製のバイアル。
  38. 請求項３１から３６のいずれかに記載の医薬組成物を含むことを特徴とする、シリンジ。
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