JP2022544990A - Ｐｄ－１アゴニストによる標的化免疫容 - Google Patents

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Abstract

部位特異的免疫特権または局所免疫特権を付与するための方法およびポリペプチド。【選択図】図１

Description

関連出願の相互参照
本出願は、参照によりその全体において本明細書に組み入れられる、２０１９年８月１９日に出願された、米国特許仮出願第６２／８８８，６９４号、および２０２０年５月２０日に出願された、米国特許仮出願第６３／０２７，４４９号に対する優先権を主張する。
本出願は、それらの各々が、参照によりその全体において本明細書に組み入れられる、２０１８年８月２３日に出願された、米国特許仮出願第６２／７２１，６４４号、２０１８年５月２４日に出願された、米国特許仮出願第６２／６７５，９７２号、２０１７年１２月６日に出願された、米国特許仮出願第６２／５９５，３５７号、２０１７年１２月６日に出願された、米国特許仮出願第６２／５９５，３４８号、２０１８年８月２３日に出願された、米国特許非仮出願第１６／１０９，８７５号、２０１８年８月２３日に出願された、米国特許非仮出願第１６／１０９，８９７号、２０１８年５月２４日に出願された、米国特許非仮出願第１５／９８８，３１１号、２０１８年５月２４日に出願された、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０３４３３４号、および２０１８年１１月２８日に出願された、ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０６２７８０号にも関する。
本明細書で提供される実施形態は、例えば、局所免疫特権または標的化された免疫特権のための方法および組成物に関する。
例えば、移植組織の拒絶または自己免疫障害における、望ましくない免疫応答の症例は、世界中の何百万人もの人々にとって、主要な健康問題を構成する。臓器移植についての、長期の転帰は、しばしば、慢性拒絶により特徴づけられ、最終的に、移植された臓器の不全症により特徴づけられる。体内の、本質的に全ての臓器に影響を及ぼし、北米だけで、５００万人を超える人々に影響を及ぼす、２０を超える自己免疫障害が公知である。両方の状況における、病原性免疫応答に対抗するために使用される、広域活性型の免疫抑制性医薬は、重篤な副作用を有する。
本明細書では、部位特異的免疫特権をもたらす、方法および治療用化合物が開示される。本明細書で開示される実施形態は、参照により本節へと組み入れられる。
一部の実施形態では、治療用化合物は、操作多特異性化合物、例えば、操作二特異性分子、例えば、操作二特異性抗体分子であって：
１）特異的標的化部分であって：
ａ）例えば、ドナー標的に優先的に（レシピエント抗原への結合と比較して、優先的に）結合し、移植組織、例えば、ドナーに由来する臓器に対する部位特異的免疫特権をもたらすために有用である、ドナー特異的標的化部分；または
ｂ）例えば、対象の標的組織に優先的に（対象の非標的組織と比較して、優先的に）結合し、例えば、自己免疫障害における、免疫による、望ましくない攻撃を受ける対象組織に対する部位特異的免疫特権をもたらすために有用である、組織特異的標的化部分
から選択される、特異的標的化部分と；
２）エフェクター結合性／モジュレーティング部分であって：
（ａ）免疫細胞阻害性分子結合性／モジュレーティング部分（本明細書では、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分と称される）；
（ｂ）免疫抑制性免疫細胞結合性／モジュレーティング部分（本明細書では、ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分と称される）；
（ｃ）治療用化合物の一部として、例えば、標的の近傍において、標的の免疫系による攻撃を阻害または最小化する物質（本明細書では、ＳＭ結合性／モジュレーティング部分と称される）を提供することにより、免疫抑制性の局所微小環境を促進する、エフェクター結合性／モジュレーティング部分；または
（ｄ）免疫細胞刺激分子結合性／モジュレーティング部分（本明細書では、ＩＣＳＭ結合性／モジュレーティング部分と称される）であって、ＩＣＳＭは、例えば、共刺激分子と、そのカウンター構造との相互作用を遮断することにより、免疫活性化を阻害する、免疫細胞刺激分子結合性／モジュレーティング部分
から選択される、エフェクター結合性／モジュレーティング部分と
を含む、操作多特異性化合物を含む。
エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、クラスａ、ｂ、およびｃのうちの１つを超えるクラスへと収まりうる。例えば、下記に示される通り、ＣＴＬＡ－４結合性分子は、類別ａおよびｂのいずれにも収まる。
一部の実施形態では、治療用化合物は、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分を含む。一部の実施形態では、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング分子は、阻害性分子、例えば、阻害性免疫チェックポイント分子に結合し、これをアゴナイズするか、または免疫細胞、例えば、細胞傷害性Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、または骨髄細胞、例えば、好中球もしくはマクロファージの活性を、他の形で阻害するか、または低減する。
一部の実施形態では、治療用化合物は、操作多特異性化合物、例えば、操作二特異性分子、例えば、操作二特異性抗体分子であって：
１）特異的標的化部分、例えば、ドナー特異的標的化部分（ドナー標的に結合し、移植組織、例えば、ドナーに由来する臓器に対する部位特異的免疫特権をもたらすために有用）、または組織特異的標的化部分（対象組織標的に結合し、例えば、自己免疫障害における、免疫による、望ましくない攻撃を受ける対象組織に対する部位特異的免疫特権をもたらすために有用）と；
２）免疫細胞上のエフェクター分子、例えば、阻害性受容体、例えば、ＰＤ－１に結合する、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分を含む、エフェクター結合性／モジュレーティング部分とを含み、特異的標的化部分が、その標的に結合し、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分が、免疫細胞上のエフェクター分子に結合すると、免疫細胞の活性、例えば、免疫細胞が、免疫による攻撃をかける能力は、例えば、免疫細胞上のエフェクター分子のクラスター化に依存する阻害シグナルを介して、下方調節される、操作多特異性化合物を含む。一部の実施形態では、操作多特異性化合物は、それが、３つまたは４つのようであるがこれらに限定されない、２つを超える特異的分子に結合するように、さらなる結合性部分を含む。
一部の実施形態では、治療用化合物は、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分を含み、以下の特性：（ａ）免疫細胞の下方調節のレベルは、治療用化合物が、その標的に結合される場合に、治療用化合物が、その標的に結合されない場合より大きいこと；および（ｂ）治療用化合物は、免疫細胞上の細胞表面阻害性受容体、例えば、ＰＤ－１と係合される場合に、細胞表面の阻害性受容体が、内因性リガンドに結合する能力を阻害しないか、または実質的に阻害しないことの一方または両方を有する。
一部の実施形態では、免疫細胞の下方調節のレベルは、治療用化合物が、その標的に結合される場合に、治療用化合物が、その標的に結合されない場合より大きい。複数の実施形態では、標的に結合された治療用化合物による下方調節のレベルは、その標的に結合されない場合に見られるレベルに等しいか、１．５倍、２倍、４倍、８倍、または１０倍を超える。複数の実施形態では、治療用化合物は、標的に結合されない場合、免疫細胞を下方調節しないか、または著明には下方調節しない。したがって、阻害性受容体、例えば、ＰＤ－１の、無差別的アゴニズムまたは望ましくないアゴニズムは、最小化されるか、または消失される。例えば、治療用化合物が、免疫細胞に結合されるが、標的化された部分に結合されない場合、治療用化合物による、阻害性免疫チェックポイント分子への係合は、下方調節を結果としてもたらさないか、または、実質的な下方調節を結果としてもたらさない、例えば、治療用化合物が結合される、免疫細胞上の阻害性受容体は、クラスター化されないか、または免疫細胞の下方調節または実質的な阻害をもたらすのに十分な阻害シグナルを結果としてもたらすのに十分にはクラスター化されない。
複数の実施形態では、治療用化合物は、免疫細胞上の細胞表面阻害性受容体、例えば、ＰＤ－１と係合される場合に、細胞表面の阻害性受容体が、内因性リガンドに結合する能力を阻害しないか、または実質的に阻害しない。一部の実施形態では、治療用化合物は、ＰＤ－１上のＰＤ－Ｌ１／２結合性部位に結合することが可能である。したがって、阻害性受容体、例えば、ＰＤ－１の、無差別的アゴニズムまたは望ましくないアゴニズムは、最小化されるか、または消失される。複数の実施形態では、治療用化合物の、免疫細胞上の阻害性受容体、例えば、ＰＤ－１への結合は、阻害性受容体が、天然リガンド、例えば、ＰＤ－Ｌ１に結合する能力を損なわないか、またはこれを実質的に損なわない。複数の実施形態では、治療用化合物の、免疫細胞上の阻害性受容体、例えば、ＰＤ－１への結合は、天然リガンド、例えば、ＰＤ－Ｌ１の結合を、治療用化合物の非存在下で見られる結合に対して、５０、４０、３０、２０、１０、または５％未満低減する。一部の実施形態では、部分は、ＰＤ－１に結合する抗体である。一部の実施形態では、抗体はＰＤ－１アゴニストである。一部の実施形態では、抗体は、可溶性ＰＤ－１アンタゴニストアッセイにおいてＰＤ－１アンタゴニストではない。
一部の実施形態では、治療用化合物は、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分を含み、対象へと、治療有効用量で投与された場合、ある種類の全ての免疫細胞内、例えば、全てのＴ細胞内の、阻害性受容体の無差別的なアゴニズムが生じた場合に可能な、許容されないレベルの、全身免疫抑制、または治療用化合物が、阻害性受容体の、その天然リガンドとの相互作用をアンタゴナイズした場合に可能な、許容されないレベルの、全身性免疫活性化を結果としてもたらさない。
理論に束縛されることを望まずに述べると、対象へと投与されると、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分を含む治療用化合物は、以下の４つの状態のうちのいずれか１つにおいて存在する：ｉ）結合されずに、遊離溶液中に存在する；ｉｉ）ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分を介して、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞の表面上で発現される、阻害性受容体だけに結合されて存在する；ｉｉｉ）標的化部分を介して、標的移植組織または対象組織の表面だけに結合されて存在する；ｉｖ）標的化部分を介して、標的移植組織または対象組織の表面、およびＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分を介して、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞の表面上で発現される、阻害性受容体の両方に結合されて存在すると考えられる。標的化部分を介して、標的移植組織または対象組織だけに結合される場合（ｉｉｉ）、治療用化合物は、標的移植組織または標的組織に対して、作用を及ぼさないか、または実質的な作用を及ぼさない。標的化部分を介して、標的移植組織または標的組織に結合され、かつ、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分を介して、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞の表面上で発現される、阻害性受容体に結合される場合（ｉｖ）、治療用化合物は、標的臓器または標的組織において免疫特権を創出する。理論に束縛されることを望まずに述べると、これは、例えば、複数の治療用化合物分子を、高密度および高価数で固定化することにより、治療用化合物分子を、その表面上に多量体化する、標的移植組織またはドナー組織により達成されると考えられる。治療用化合物分子の多量体化は、治療用化合物の、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分が、免疫細胞、例えば、病原性Ｔ細胞の表面上で発現される、阻害性受容体のクラスター化を促進し、阻害シグナルの伝送が、免疫細胞をサイレンシングまたは下方調節するように機能することを可能とする。例えば、Ｔ細胞の場合、ＰＤ－Ｌ１分子または抗ＰＤ－１ Ａｂ（例えば、アゴニスト抗ＰＤ－１ Ａｂ）を含む、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分を含む治療用化合物を使用することができる。複数の治療用化合物分子の、標的への結合は、治療用化合物分子の多量体化を結果としてもたらし、これは、ＰＤ－Ｌ１分子または機能的な抗ＰＤ－１抗体分子のために、ＰＤ－１の、Ｔ細胞上のクラスター化をもたらす。このクラスター化が生じると、標的ＭＨＣによる、Ｔ細胞上のＴ細胞受容体への抗原提示の文脈では、負のシグナルが発生され、Ｔ細胞は不活化される。ある実施形態では、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分、例えば、機能的抗体分子は、エフェクター分子に結合するが、エフェクター分子の、その天然のリガンド（複数可）との相互作用を阻害しないか、または実質的に阻害しない。
一部の実施形態では、治療用化合物は、免疫抑制性免疫細胞、例えば、Ｔｒｅｇ、例えば、Ｆｏｘｐ３＋ ＣＤ２５＋ Ｔｒｅｇに結合し、これらを、標的組織の近傍へと動員する、ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分を含む。
一部の実施形態では、治療用化合物は、免疫応答をモジュレートする物質、例えば、可溶性分子、例えば、ＡＴＰまたはＡＭＰをモジュレートする、例えば、これらに結合し、これらを阻害、封鎖、分解するか、または他の形で中和する、ＳＭ結合性／モジュレーティング部分を含む。
一部の実施形態では、治療用化合物は、免疫細胞上の標的に特異的な標的化部分を含む。一部の実施形態では、標的は、本明細書で記載される通りである。一部の実施形態では、標的は、ＭＡｄＣＡＭである。一部の実施形態では、標的化部分は、ＭＡｄＣＡＭに結合する抗体である。
一部の実施形態では、治療用化合物は、刺激分子、例えば、共刺激分子に結合する、ＩＣＳＭ結合性／モジュレーティング部分を含む。一部の実施形態では、ＩＣＳＭは、共刺激分子カウンター構造を阻害する。共刺激分子または共刺激分子カウンター構造への結合／このモジュレーティングは、免疫細胞が、免疫応答を開始する能力を下方調節するのに用いることができる。一部の実施形態では、ＩＣＳＭ結合性／モジュレーティング部分は、免疫細胞上の刺激分子、例えば、共刺激分子、例えば、Ｔ細胞上のＯＸ４０、またはＮＫ細胞、マスト細胞、樹状細胞のような免疫細胞、または、例えば、内皮細胞もしくは平滑筋細胞のような非免疫細胞のようであるがこれらに限定されない、別の細胞上の刺激分子のカウンターメンバー、例えば、ＯＸ４０Ｌに結合することが可能である。
一部の実施形態では、治療用化合物は、ドナー特異的標的化部分を含み、対象に植え込まれるドナー移植組織のために、部位特異的免疫特権をもたらす。一部の実施形態では、治療用化合物は、組織特異的標的化部分を含み、対象の組織、例えば、自己免疫障害において、望ましくない免疫応答に罹患する組織のために、部位特異的免疫特権をもたらす。
標的化部分は、免疫系から保護される、ドナー移植組織または対象組織に特異的である。一部の実施形態では、エフェクター分子結合性部分は、デノボで作出された結合性ドメイン、例えば、機能的抗体分子を含む。一部の実施形態では、エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞の表面上で発現される、阻害性受容体を認識する天然リガンドに由来するアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、治療用化合物は、機能のために、標的移植組織またはドナー組織の存在を要求するので、治療用化合物は、保護される移植組織またはドナー組織に近位の免疫細胞、例えば、Ｔ細胞をサイレンシングするが、標的に近位でない免疫細胞、例えば、Ｔ細胞はサイレンシングしない。これは、治療用化合物が、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞により発現される、阻害性受容体だけに結合する場合と対照的であり、この場合、機能的帰結は生じない。
本明細書で記載される方法および治療用化合物は、少なくとも部分的に、部位特異的免疫特権を付与することに基づく。本明細書で記載される治療用化合物およびそれらを使用する方法は、例えば、自己免疫疾患、または組織移植、例えば、臓器移植のような、免疫応答の反転および抑制が所望される臨床状況における、免疫抑制治療剤の、非部位特異的全身投与の最小化、例えば、低減または消失を可能とする。免疫系の異常により駆動される、基礎的病態生理が影響を受ける場合に、臨床的に有意味な応答が可能である一方で、広域作用型免疫抑制剤は、患者の全身免疫系の機能を低減する、所望されない作用も及ぼす。正常に機能する免疫系の役割は、周囲の環境に存在する、病原性生物および日和見生物の、不断の来襲に対抗し、健常な個体から、がん性細胞を不断に除去することであるので、慢性免疫抑制を施される患者は、感染症およびがんを発症する危険性が増大される。本明細書で記載される方法および治療用化合物は、病態を有する部位における、病原性免疫応答だけを、選択的に標的化し、これを弱めるか、低減するか、または消滅させる一方で、別の場所における、正常な、全身の免疫系機能に対する阻害は、最小限とする治療をもたらす。
本明細書で提供される一部の実施形態では、治療用化合物が提供される。一部の実施形態では、化合物は、ｉ）特異的標的化部分であって：ａ）例えば、ドナー標的に優先的に結合する、ドナー特異的標的化部分；またはｂ）例えば、対象の標的組織に優先的に結合する、組織特異的標的化部分から選択される、特異的標的化部分と；ｉｉ）エフェクター結合性／モジュレーティング部分であって：（ａ）免疫細胞阻害性分子結合性／モジュレーティング部分（ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分）；（ｂ）免疫抑制性免疫細胞結合性／モジュレーティング部分（ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分）；または（ｃ）治療用化合物の一部として、例えば、標的の近傍において、標的の免疫系による攻撃を阻害または最小化する物質（ＳＭ結合性／モジュレーティング部分）を提供することにより免疫抑制性の局所微小環境を促進する、エフェクター結合性／モジュレーティング部分から選択される、エフェクター結合性／モジュレーティング部分とを含む。
一部の実施形態では、エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分を含む。一部の実施形態では、エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、阻害性免疫チェックポイント分子のリガンド分子を含む、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分を含む。一部の実施形態では、阻害性免疫分子のカウンターリガンド分子は、ＰＤ－Ｌ１分子を含む。一部の実施形態では、阻害性免疫分子のカウンターリガンド分子は、ＰＤ－１、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ、またはＣＴＬＡ－４から選択される、コグネイト阻害性免疫チェックポイント分子を係合する。一部の実施形態では、ＩＣＩＭは、抗体である。一部の実施形態では、ＩＣＩＭは、ＰＤ－１に結合する抗体、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ、またはＣＴＬＡ－４を含む。一部の実施形態では、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分は、細胞表面阻害性分子に対する機能的抗体分子を含む。一部の実施形態では、抗体は、抗ＰＤ－１アゴニストＡｂである。
一部の実施形態では、細胞表面阻害性分子は、阻害性免疫チェックポイント分子である。一部の実施形態では、阻害性免疫チェックポイント分子は、ＰＤ－１、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ２、ＣＴＬＡ－４から選択されるか、または表１から選択される。
一部の実施形態では、エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分を含む。
一部の実施形態では、化合物は、Ｎ末端から、Ｃ末端へと、式：
Ｒ１－リンカー領域Ａ－Ｒ２またはＲ３－リンカー領域Ｂ－Ｒ４、
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、各々、独立に、エフェクター結合性／モジュレーティング部分、例えば、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分、ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分、ＩＣＳＭ結合性／モジュレーティング部分、もしくはＳＭ結合性／モジュレーティング部分；特異的標的化部分を含むか；または存在せず；ただし、エフェクター結合性／モジュレーティング部分、および特異的標的化部分が存在することを条件とする］
を有する。
一部の実施形態では、標的細胞に結合する標的化部分と、エフェクター結合性／モジュレーティング部分とを含み、エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、突然変異体ＩＬ－２タンパク質である、ＩＬ－２ムテインポリペプチド（ＩＬ－２ムテイン）であるポリペプチドが提供される。一部の実施形態では、標的化部分は、標的細胞の表面上の標的タンパク質に結合する抗体を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、本明細書で提供される、２つのポリペプチド鎖を含む。一部の実施形態では、第１の鎖は、標的細胞、またはＭＡｄＣＡＭのようであるがこれらに限定されない、標的細胞上で発現されるタンパク質に結合する抗体のＶＨドメインを含み、第２の鎖は、これらのＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、標的化部分は、ＭＡｄＣＡＭに結合する抗体である。一部の実施形態では、標的化部分は、ＯＡＴ１（ＳＬＣ２２Ａ６）またはＯＣＴ２（ＳＬＣ２２Ａ２）に結合する。一部の実施形態では、標的化部分は、ＯＡＴ１（ＳＬＣ２２Ａ６）またはＯＣＴ２（ＳＬＣ２２Ａ２）に結合する抗体である。一部の実施形態では、標的化部分は、ＯＡＴ１（ＳＬＣ２２Ａ６）またはＯＣＴ２（ＳＬＣ２２Ａ２）に結合しない。誤解を避けるために述べると、本明細書で言及されるＯＣＴ２は、転写因子ではなく、腎臓組織内で発現される表面タンパク質である。一部の実施形態では、標的化部分は、膵臓内で見出されるタンパク質に特異的に結合する部分である。一部の実施形態では、標的化部分は、ＥＮＴＰＤ３、ＦＸＹＤ２、ＴＳＰＡＮ７、ＤＰＰ６、ＨＥＰＡＣＡＭ２、ＴＭＥＭ２７、またはＧＰＲ１１９に結合する。一部の実施形態では、標的化部分は、ＥＮＴＰＤ３、ＦＸＹＤ２、ＴＳＰＡＮ７、ＤＰＰ６、ＨＥＰＡＣＡＭ２、ＴＭＥＭ２７、またはＧＰＲ１１９に結合しない。一部の実施形態では、標的化部分は、ＥＮＴＰＤ３、ＦＸＹＤ２、ＴＳＰＡＮ７、ＤＰＰ６、ＨＥＰＡＣＡＭ２、ＴＭＥＭ２７、またはＧＰＲ１１９に結合する抗体である。
一部の実施形態では、ポリペプチドは、ポリペプチドまたは治療用化合物を形成する、第１の鎖および第２の鎖を含み、
第１の鎖は：
ＶＨ－Ｈｃ－リンカー－Ｃ１であって、ＶＨは、第２の鎖のＶＬドメインと共に、標的細胞に結合する、重鎖可変ドメインであり；Ｈｃは、ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインを含む、抗体の重鎖であり、リンカーは、本明細書で提供される、グリシン／セリンアミノ酸配列であるか、または存在せず、Ｃ１は、本明細書で提供される、Ｎ末端またはＣ末端に配置されて、Ｆｃタンパク質へと、融合されるＩＬ－２ムテインであり、ＩＬ－２ムテインを、Ｆｃタンパク質へと連結する、グリシン／セリンリンカーが存在する場合がある、ＶＨ－Ｈｃ－リンカー－Ｃ１
を含み；
第２の鎖は：
ＶＬ－Ｌｃであって、ＶＬは、第１の鎖のＶＨドメインと共に、標的細胞に結合する、軽鎖可変ドメインであり、Ｌｃドメインは、軽鎖ＣＫドメインである、ＶＬ－Ｌｃ
を含む。一部の実施形態では、第１の鎖は、可変項が上記で規定された、Ｃ１－リンカー－ＶＨ－Ｈｃを含む。
一部の実施形態では、ポリペプチドは、Ｃ１－リンカー－ＣＨ２－ＣＨ３－リンカー－ｓｃＦｖの式［式中、Ｃ１およびリンカーは、上記で規定され、本明細書でも規定される通りであり、ＣＨ２およびＣＨ３は、重鎖ドメインであり、ｓｃＦｖは、本明細書で提供される、組織標的に結合する標的化部分として作用する、単鎖抗体様断片である］を含む。一部の実施形態では、ムテインは、本明細書で提供される通り、Ｆｃ領域へと融合され、リンカーのうちの１つまたはそれ以上は存在しない。一部の実施形態では、リンカーは、本明細書で提供される、グリシン／セリンリンカーである。一部の実施形態では、リンカーは、ペプチド配列である。
本明細書の一部の実施形態では、自己免疫疾患または自己免疫状態を処置する方法であって、本明細書で提供される、治療用化合物またはポリペプチドのうちの、１つまたはそれ以上を投与する工程を含む方法が提供される。
本明細書の一部の実施形態では、本明細書で記載される疾患または状態を処置する方法であって、本明細書で提供される、治療用化合物またはポリペプチドのうちの、１つまたはそれ以上を投与する工程を含む方法が提供される。
一部の実施形態では、炎症性腸疾患を有する対象を処置する方法であって、本明細書で提供される治療用化合物またはポリペプチドを、対象へと投与して、炎症性腸疾患を処置する工程を含む方法が提供される。一部の実施形態では、対象は、クローン病または潰瘍性大腸炎を有する。
一部の実施形態では、自己免疫性肝炎を有する対象を処置する方法であって、本明細書で提供される治療用化合物またはポリペプチドを、対象へと投与して、自己免疫性肝炎を処置する工程を含む方法が提供される。
一部の実施形態では、原発性硬化性胆管炎を処置する方法であって、本明細書で提供される治療用化合物またはポリペプチドを、対象へと投与して、原発性硬化性胆管炎を処置する工程を含む方法が提供される。
一部の実施形態では、腸における炎症を処置する（例えば、軽減する）方法であって、本明細書で提供される治療用化合物または治療用ポリペプチドを、対象へと投与して、腸における炎症を処置する工程を含む方法が提供される。一部の実施形態では、炎症は、小腸における炎症である。一部の実施形態では、炎症は、大腸における炎症である。一部の実施形態では、炎症は、腸管または結腸における炎症である。
一部の実施形態では、膵臓における炎症を処置する（例えば、軽減する）方法であって、本明細書で提供される治療用化合物または治療用ポリペプチドを、対象へと投与して、膵臓における炎症を処置する工程を含む方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、膵炎を処置する。
一部の実施形態では、１型糖尿病を処置する方法であって、本明細書で提供される治療用化合物またはポリペプチドを、対象へと投与して、１型糖尿病を処置する工程を含む方法が提供される。
一部の実施形態では、移植対象を処置する方法であって、治療有効量の、本明細書で提供される治療用化合物またはポリペプチドを、対象へと投与し、これにより、移植（レシピエント）対象を処置する工程を含む方法が提供される。
一部の実施形態では、移植されたドナー組織を有する対象における移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を処置する方法であって、本明細書で提供される治療有効量の治療用化合物または治療用ポリペプチドを、対象へと投与する工程を含む方法が提供される。
一部の実施形態では、自己免疫障害を有するか、またはこれを有する危険性があるかもしくは上昇している対象を処置する方法であって、治療有効量の、本明細書で提供される治療用化合物または治療用ポリペプチドを投与し、これにより、対象を処置する工程を含む方法が提供される。
一部の実施形態では、化合物は、Ｎ末端から、Ｃ末端へと、式：
Ａ１－－－リンカーＡ－－－Ａ２－－－リンカーＢ－－－Ａ３またはＡ３－－－リンカーＡ－－－Ａ２－－－リンカーＢ－－－Ａ１
［式中、Ａ１およびＡ３は、各々、独立に、エフェクター結合性／モジュレーティング部分、例えば、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分、ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分、ＩＣＳＭ結合性／モジュレーティング部分、もしくはＳＭ結合性／モジュレーティング部分であるか；または特異的標的化部分であり、ここで、Ａ２はＦｃ領域を含むか、または存在せず；リンカーＡおよびリンカーＢはリンカーであるが、必ずしも同じでなくてもよい］
を有する。
一部の実施形態では、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体および抗ＰＤ－１抗体を含むポリペプチドが提供される。一部の実施形態では、ポリペプチドは、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドを含み、第１のポリペプチドは、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体に直接的または間接的に連結された第２のポリペプチドの可変軽鎖ドメインと共にＰＤ－１に結合する可変重鎖ドメインを含み；第２のポリペプチドは、第１のポリペプチドの可変重鎖ドメインと共にＰＤ－１に結合する可変軽鎖ドメインを含む。
一部の実施形態では、ＰＤ１ＶＨ－定常ドメイン－リンカーＡ－ＭＡｄＣＡＭｓｃＦｖの式を有するポリペプチド［式中、ＰＤ１ＶＨは、本明細書で提供される任意のＰＤ－１抗体のＰＤ－１重鎖可変ドメインであり；定常ドメインは、ＩｇＧ１定常ドメイン、またはＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４のような任意の他の定常ドメインであり；リンカーＡは、本明細書で提供されるもののようなＧ／ＳまたはＧ／Ａリンカーであり；ＭＡｄＣＡＭｓｃＦｖは、以下の式：ＭＡｄＣＡＭＶＨ－リンカーＢ－ＭＡｄＣＡＭＶＫ（式中、ＭＡｄＣＡＭＶＨは、本明細書で提供されるＭＡｄＣＡＭ重鎖可変ドメインであり；リンカーＢは、本明細書で提供されるもののようなＧ／ＳまたはＧ／Ａリンカーであり；ＭＡｄＣＡＭＶＫは、本明細書で提供される軽鎖可変ドメインである）を有する］が提供される。
一部の実施形態では、ＰＤ－１に結合する抗体またはポリペプチドが提供される。一部の実施形態では、抗体は、ＰＤ－１抗体の表４またはＰＤ－１抗体の表５に提供される配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、ｓｃＦＶまたはＦＡｂ型抗体である。
本明細書で提供される治療用化合物についての、非限定的実施形態を描示する図である。 本明細書で提供される治療用化合物が、どのように機能しうるのかについての、非限定的例示を描示する図である。 本明細書で提供される治療用化合物についての、非限定的例示を描示する図である。 本明細書で提供される治療用化合物についての、非限定的例示を描示する図である。 本明細書で提供される治療用化合物についての、非限定的例示を描示する図である。 本明細書で提供される治療用化合物についての、非限定的例示を描示する図である。 本明細書で提供される治療用化合物についての、非限定的例示を描示する図である。 本明細書で提供される治療用化合物についての、非限定的例示を描示する図である。 本明細書で提供される治療用化合物についての、非限定的例示を描示する図である。 本明細書で提供される治療用化合物についての、非限定的例示を描示する図である。 本明細書で提供される治療用化合物についての、非限定的例示を描示する図である。 本明細書で提供される治療用化合物についての、非限定的例示を描示する図である。 本明細書で提供される治療用化合物についての、非限定的例示を描示する図である。 本明細書で提供される治療用化合物についての、非限定的例示を描示する図である。 本明細書で提供される治療用化合物についての、非限定的例示を描示する図である。 本明細書で提供される治療用化合物についての、非限定的例示を描示する図である。 本明細書で提供される治療用化合物についての、非限定的例示を描示する図である。 本明細書で提供される治療用化合物についての、非限定的例示を描示する図である。 本明細書で提供される治療用化合物についての、非限定的例示を描示する図である。 本明細書で提供される治療用化合物についての、非限定的例示を描示する図である。 本明細書で提供される分子、例えばＭＡｄＣＡＭ係留ＰＤ－１アゴニストが、異種移植片対宿主病モデルにおいて生存を延長する能力を示す図である。
本出願は、以下の各々を参照によりその全体において組み入れる：２０１８年３月１５日に出願された、米国特許出願第１５／９２２，５９２号および２０１８年３月１５日に出願された、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０２２６７５号。本出願はまた、以下の各々を、参照によりその全体において本明細書に組み入れる：２０１８年８月２３日に出願された、米国特許仮出願第６２／７２１，６４４号、２０１８年５月２４日に出願された、米国特許仮出願第６２／６７５，９７２号、２０１７年１２月６日に出願された、米国特許仮出願第６２／５９５，３５７号、２０１７年１２月６日に出願された、米国特許仮出願第６２／５９５，３４８号、２０１８年８月２３日に出願された、米国特許非仮出願第１６／１０９，８７５号、２０１８年８月２３日に出願された、米国特許非仮出願第１６／１０９，８９７号、２０１８年５月２４日に出願された、米国特許非仮出願第１５／９８８，３１１号、２０１８年５月２４日に出願された、ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０３４３３４号、および２０１８年１１月２８日に出願された、ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０６２７８０号。
本明細書で使用され、他の形で指し示されない限りにおいて、「約」という用語は、それが修飾する値の平均値±５％であることが意図される。したがって、約１００とは、９５～１０５を意味する。
本明細書および付属の特許請求の範囲で使用される、単数形の「ある（ａ）」、「ある（ａｎ）」、および「その」は、文脈が、そうでないことを、明確に指示するのでない限りにおいて、複数の指示対象を含む。
本明細書で使用される、「約」という用語は、数値が近似値であり、小さな変動であれば、開示される実施形態の実施に、著明に影響を及ぼさないことを意味する。数値の限界が使用され、文脈により、そうでないことが指し示されるのでない限りにおいて、「約」とは、数値が、±１０％変動する可能性があるが、依然として、開示される実施形態の範囲内にあることを意味する。
本明細書で使用される、「動物」という用語は、ヒト、ならびに野生動物、家畜、および農場動物のような非ヒト脊椎動物を含むがこれらに限定されない。
本明細書で使用される、「～を接触させること」という用語は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ系またはｉｎ ｖｉｖｏ系において、２つの要素を一体にすることを意味する。例えば、治療用化合物を、個体または患者または細胞と「接触」させることは、化合物の、ヒトのような個体または患者への投与のほか、例えば、化合物を、標的を含有する、細胞調製物または精製調製物を含有するサンプルへと導入することを含む。
本明細書および特許請求の範囲で使用される、「～を含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」（ならびに「～を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「～を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、および「含まれた（ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ）」のような、「～を含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」の任意の形態）、「～を有すること」（ならびに「～を有する（ｈａｖｅ）」および「～を有する（ｈａｓ）」のような、「～を有すること」の任意の形態）、「～を含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」（ならびに「～を含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」および「～を含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」のような、「～を含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」の任意の形態）、または「～を含有すること」（ならびに「～を含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）」および「～を含有する（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」のような、「～を含有すること」の任意の形態）という用語は、包含的またはオープンエンドであり、さらなる、列挙されていない要素または方法工程を除外しない。「～を含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語を連用する、任意の組成物または方法はまた、このような組成物が、列挙された構成要素または要素からなるか、または本質的になると記載することも理解される。
本明細書で使用される通り、異なるドメインまたは異種配列を有するタンパク質に言及して使用される、「融合させた」または「連結された」という用語は、タンパク質ドメインが、ペプチド結合または他の共有結合により互いと接続された、同じペプチド鎖の一部であることを意味する。ドメインまたはセクションは、互いと、直接連結するか、または融合させることもでき、別のドメインまたはペプチド配列を、２つドメインまたは配列の間に置くこともできるが、このような配列もなお、互いと融合されるか、または連結されると考えられよう。一部の実施形態では、本明細書で提供される、多様なドメインまたはタンパク質は、互いと直接連結されるか、または融合される場合もあり、２つのドメインを一体に連結する、本明細書で記載されるグリシン／セリン配列のようなリンカー配列と連結されるか、または融合される場合もある。
本明細書で使用される通り、互換的に使用される、「個体」、「対象」、または「患者」という用語は、マウス、ラット、他の齧歯動物、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ、またはヒトのような霊長動物のような哺乳動物を含む、任意の動物を意味する。
本明細書で使用される、「～を阻害する」という用語とは、結果、症状、または活性を阻害しつつある化合物の非存在下における活性または結果と比較して低減される、結果、症状、または活性を指す。一部の実施形態では、結果、症状、または活性は、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、もしくは９９％、または、少なくともこれらのパーセント阻害される。結果、症状、または活性はまた、完全に消失または消滅された場合に、阻害される場合もある。
本明細書で使用される、「それを必要とする」という語句は、対象が、特定の方法または処置に対する必要を有すると同定されていることを意味する。一部の実施形態では、同定は、任意の診断手段により可能である。本明細書で記載される方法および処置のうちのいずれかでは、対象は、それを必要とする場合がある。一部の実施形態では、対象は、特定の疾患、障害、または状態が蔓延する環境にいるか、またはこの環境へと旅行する予定である。
本明細書で使用される、「Ｘ～Ｙの整数」という語句は、端点を含む、任意の整数を意味する。例えば、「Ｘ～Ｙの整数」という語句は、１、２、３、４、または５を意味する。
本明細書で使用される、「哺乳動物」という用語は、齧歯動物（すなわち、マウス、ラット、またはモルモット）、サル、ネコ、イヌ、ウシ、ウマ、ブタ、またはヒトを意味する。一部の実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。
本明細書の一部の実施形態では、治療用化合物が提供される。一部の実施形態では、治療用化合物は、互いと相互作用する、複数の鎖を有する、タンパク質またはポリペプチドである。ポリペプチドは、互いと、非共有結合的相互作用を介して相互作用する場合もあり、ジスルフィド結合、または他の共有結合を介する共有結合的相互作用のような、共有結合的相互作用を介して相互作用する場合もある。したがって、実施形態が、治療用化合物を指す場合、それはまた、文脈が指示する通りに、本明細書に提供されるタンパク質またはポリペプチドを指すと言われる場合もあり、この逆の場合もある。
本明細書で使用された、「眼内で許容可能」という語句は、処置される眼もしくはその機能、または処置される対象の全般的健康に対して、遷延する有害作用を及ぼさないことを意味する。しかし、微弱な刺激または「ヒリヒリ」感のような、一過性の作用は、薬物の局所眼内投与に関して一般的であり、このような一過性の作用の存在が、本明細書において、「眼内で許容可能」と規定される、問題の組成物、製剤、または成分（例えば、賦形剤）と整合しないわけではないことが認識されるであろう。一部の実施形態では、医薬組成物は、眼内で許容可能であるか、または眼内投与に適することが可能である。
特定の抗原、標的、またはエピトープへの「特異的結合」、またはこれらに「特異的に結合する」、またはこれらに「特異的」とは、非特異的相互作用と、測定可能に異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、分子の結合を、一般に、構造は類似するが、結合活性を有さない分子である、対照分子の結合と比較して決定することにより測定することができる。例えば、特異的結合は、標的と類似する対照分子との競合により決定することができる。
特定の抗原、標的、またはエピトープへの特異的結合は、例えば、抗原またはエピトープに対して、少なくとも約１０－４Ｍ、少なくとも約１０－５Ｍ、少なくとも約１０－６Ｍ、少なくとも約１０－７Ｍ、少なくとも約１０－８Ｍ、少なくとも約１０－９Ｍ、代替的に、少なくとも約１０－１０Ｍ、少なくとも約１０－１１Ｍ、少なくとも約１０－１２Ｍ以上のＫＤを有する抗体により呈される場合があり、この場合、ＫＤとは、特定の抗体－標的間相互作用の解離速度を指す。典型的に、抗原または標的に特異的に結合する抗体は、対照分子に対して、抗原またはエピトープと比べて、２、４、５、１０、２０、５０、１００、５００、１０００、５，０００、１０，０００倍以上であるか、または少なくともこれらの倍数であるＫＤを有するであろう。
一部の実施形態では、特定の抗原、標的、またはエピトープへの特異的結合は、例えば、標的、抗原、またはエピトープに対して、対照と比べて、少なくとも２、４、５、２０、５０、１００、５００、１０００、５，０００、１０，０００倍以上のＫＡまたはＫａを有する抗体により呈される場合があり、この場合、ＫＡまたはＫａとは、特定の抗体－抗原間相互作用の会合速度を指す。
本明細書で提供される通り、治療用化合物および組成物は、本明細書で提供される処置法において使用することができる。本明細書で使用される、「～を処置する」、「処置された」、または「～を処置すること」という用語は、目的は、所望されない生理学的状態、障害、もしくは疾患を、下方に緩徐化する（減殺する）か、または有益であるか、もしくは所望される臨床的結果をうることである、治療的処置および予防的措置の両方を意味する。これらの実施形態の目的では、有益であるか、または所望される臨床的結果は、症状の緩和；状態、障害、もしくは疾患の程度の減殺；状態、障害、もしくは疾患の状態の安定化（すなわち、無増悪）；状態、障害、もしくは疾患の発生の遅延、またはこれらの進行の緩徐化；検出可能であれ、検出不能であれ、状態、障害、もしくは疾患状態の改善（ａｍｅｌｉｏｒａｔｉｏｎ）もしくは寛解（部分寛解であれ、完全寛解であれ）；患者により必ずしも感知可能ではない、少なくとも１つの、測定可能な身体パラメータの改善（ａｍｅｌｉｏｒａｔｉｏｎ）；または状態、障害、もしくは疾患の軽快化もしくは改善（ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ）を含むがこれらに限定されない。処置は、過剰レベルの副作用を伴わずに、臨床的に著明な応答を誘発することを含む。処置はまた、生存を、処置を施されなかった場合に予測される生存と比較して延長することも含む。
本明細書では、標的化部分と、エフェクター結合性／モジュレーティング部分とを、典型的に、別個のドメインとして含む、治療用化合物、例えば、治療用タンパク質分子、例えば、融合タンパク質が提供される。また、治療用化合物を使用する方法、および治療用化合物を作製する方法も提供される。標的化部分は、治療用化合物を、免疫特権が所望される部位へと局在化させるのに用いられ、したがって、エフェクター結合性／モジュレーティング部分を、この部位へと局在化させるのに用いられる。エフェクター結合性／モジュレーティング部分は：（ａ）免疫細胞阻害性分子結合性／モジュレーティング部分（ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分）：（ｂ）免疫抑制性免疫細胞結合性／モジュレーティング部分（ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分）；（ｃ）可溶性分子結合性／モジュレーティング部分（ＳＭ結合性／モジュレーティング部分）；または（ｄ）免疫細胞刺激分子結合性／モジュレーティング部分を遮断または阻害する分子（本明細書では、ＩＣＳＭ結合性／モジュレーティング部分と称される）のうちの１つまたはそれ以上を含む。一部の実施形態では、ＩＣＳＭは、例えば、共刺激分子と、そのカウンター構造との相互作用を遮断することにより、免疫活性化を阻害する。一部の実施形態では、治療用化合物は：（ａ）および（ｂ）；（ａ）および（ｃ）；（ａ）および（ｄ）；（ｂ）および（ｃ）；（ｂ）および（ｄ）；（ｃ）および（ｄ）；または（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、および（ｄ）を含む。
本開示は、例えば、ＰＤ－１アゴニストとして作用することが可能な分子を提供する。一部の実施形態では、アゴニストは、ＰＤ－１に結合する抗体である。いかなる特定の理論にも束縛されずに述べると、ＰＤ－１のアゴニズムは、Ｔ細胞の活性化／Ｔ細胞によるシグナル伝達を阻害し、異なる機構により達することができる。一部の実施形態では、これは、活性化またはＴｒｅｇをもたらしうる。これは、例えば、活性化された免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）でありうるＣＤ４および／またはＣＤ８免疫細胞と相互作用することによって達成することができる。したがって、一部の実施形態では、Ｔｒｅｇを活性化する方法は、細胞を、本明細書で提供されるポリペプチドと接触させることによって提供される。例えば、架橋は、アゴニズムをもたらすことが可能であり、ビーズを結合された、機能的ＰＤ－１アゴニストについて記載されている（参照により本明細書に組み入れられる、Ａｋｋａｙａ、博士論文：「Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＰＤ－１ ｐａｔｈｗａｙ ｂｙ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｓｕｐｅｒａｇｏｎｉｓｔｓ」、Ｃｈｒｉｓｔ Ｃｈｕｒｃｈ Ｃｏｌｌｅｇｅ、Ｏｘｆｏｒｄ、ＵＫ、２０１２）。ＰＤ－１の、非重複エピトープに結合する、２つのｍＡｂとの架橋は、ＰＤ－１シグナル伝達を誘導する（参照により本明細書に組み入れられる、Ｄａｖｉｓ、ＵＳ２０１１／０１７１２２０）。別の例は、可溶性である場合に、アゴニストとして作用する（参照により本明細書に組み入れられる、Ｓａｉｄら、２０１０、Ｎａｔ Ｍｅｄ）、ヤギ抗ＰＤ－１抗血清（例えば、参照により本明細書に組み入れられる、ＡＦ１０８６、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）の使用により例示される。本実施形態において使用することができる、ＰＤ－１アゴニストの非限定的な例は、ＵＣＢクローン１９またはクローン１０、ＰＤ１ＡＢ－１、ＰＤ１ＡＢ－２、ＰＤ１ＡＢ－３、ＰＤ１ＡＢ－４およびＰＤ１ＡＢ－５、ＰＤ１ＡＢ－６（Ａｎａｐｔｙｓ／Ｃｅｌｇｅｎｅ）、ＰＤ１－１７、ＰＤ１－２８、ＰＤ１－３３およびＰＤ１－３５（参照により本明細書に組み入れられる、Ｃｏｌｌｉｎｓら、ＵＳ２００８／０３１１１１７Ａ１、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ ＰＤ－１ ａｎｄ ｕｓｅｓ ｔｈｅｒｅｆｏｒ）を含むがこれらに限定されないか、または二特異性一価抗ＰＤ－１／抗ＣＤ３（Ｏｎｏ）などでありうる。一部の実施形態では、ＰＤ－１アゴニスト抗体は、ＰＤ－Ｌ１のＰＤ－１への結合を遮断する抗体でありうる。一部の実施形態では、ＰＤ－１アゴニスト抗体は、ＰＤ－Ｌ１の、ＰＤ－１への結合を遮断する抗体でありうる。一部の実施形態では、抗体は、ＰＤ－１のアンタゴニストとして作用しない。
ＰＤ－１アゴニズムは、実施例において記載される方法のような、任意の方法により測定することができる。例えば、１）ベータ－ガラクトシダーゼへと融合されたヒトＰＤ－１ポリペプチドである、「酵素ドナー」と、２）ベータ－ガラクトシダーゼへと融合されたＳＨＰ－２ポリペプチドである、「酵素アクセプター」とを含む構築物を、安定的に発現することを含む、この構築物を発現する細胞を構築することができる。いかなる特定の理論にも束縛されずに述べると、ＰＤ－１が係合されると、ＳＨＰ－２が、ＰＤ－１へと動員される。酵素アクセプターと、酵素ドナーとは、完全に活性のベータ－ガラクトシダーゼ酵素を形成し、これをアッセイすることができる。アッセイは、ＰＤ－１アゴニズムを直接示さないが、ＰＤ－１シグナル伝達の活性化を示す。いかなる特定の理論にも束縛されずに述べると、ＰＤ－１アゴニズムは、抗ＣＤ３に誘導される、Ｔ細胞の活性化を阻害するため、ＰＤ－１アゴニズムは、Ｔ細胞活性化の阻害を測定することによってもまた、測定することができる。例えば、ＰＤ－１アゴニズムは、それらが、ＰＤ－１を発現するように、Ｔ細胞を、ＰＨＡ（ヒトＴ細胞のための）またはＣｏｎＡ（マウスＴ細胞のための）であらかじめ活性化させることにより測定することができる。次いで、ＰＤ－１アゴニズムアッセイのために、細胞を、抗ＰＤ－１（またはＰＤ－Ｌ１）の存在下で、抗ＣＤ３により再活性化させることができる。抗ＣＤ３の存在下で、ＰＤ－１アゴニストシグナルを施されるＴ細胞は、抗ＣＤ３による刺激単独と比べて、活性化の減殺を示す。活性化は、増殖またはサイトカイン産生（ＩＬ－２、ＩＦＮｇ、ＩＬ－１７）、またはＣＤ６９活性化マーカーのような他のマーカーにより読み取ることができる。したがって、ＰＤ－１アゴニズムは、サイトカイン産生により測定することもでき、細胞増殖により測定することもできる。ＰＤ－１アゴニズムを測定するのに、他の方法もまた使用することができる。
ＰＤ－１は、活性化Ｔ細胞上および他の免疫細胞上で発現される、Ｉｇスーパーファミリーメンバーである。ＰＤ－１の天然リガンドは、ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２であると考えられる。いかなる特定の理論にも束縛されずに述べると、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２が、活性化Ｔ細胞上で、ＰＤ－１に結合すると、阻害性シグナル伝達カスケードが誘発される結果として、活性化エフェクターＴ細胞機能の減弱をもたらす。したがって、Ｔ細胞上のＰＤ－１と、別の細胞（例えば、腫瘍細胞）上のＰＤ－Ｌ１／２との相互作用の、ＰＤ－１アンタゴニストによる遮断は、チェックポイント阻害として公知であり、Ｔ細胞を、阻害から解放する。これに対し、ＰＤ－１アゴニスト抗体は、ＰＤ－１に結合し、阻害シグナルを送り、Ｔ細胞の機能を弱めることが可能である。したがって、ＰＤ－１アゴニスト抗体は、本明細書で記載される、エフェクター分子結合性／モジュレーティング部分として、多様な実施形態へと組み入れることができ、これは、標的化部分と対にされると、組織特異的免疫モジュレーションの局在化を達することができる。
エフェクター分子結合性／モジュレーティング部分は、免疫抑制シグナルまたは免疫抑制環境を、様々な形でもたらしうる。一部の実施形態では、エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、病態を駆動する一因となる、免疫細胞により発現される阻害性受容体に直接結合し（本明細書で記載される、適切な条件下で）、これを活性化させる、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分を含む。別の実施形態では、エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分を含み、免疫抑制性免疫細胞に結合し、これらを蓄積させる。一部の実施形態では、蓄積された免疫抑制性細胞は、免疫特権を促進する別の実施形態では、エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、周囲の微小環境を操作して、免疫細胞、例えば、病態を駆動する免疫細胞の機能に対する許容性を低下させる、ＳＭ結合性／モジュレーティング部分を含む。一部の実施形態では、ＳＭ結合性／モジュレーティング部分は、免疫による攻撃または免疫の活性化を促進する実体を枯渇させる。一部の実施形態では、エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、刺激分子、例えば、共刺激分子の対のメンバーに結合し、ＯＸ４０またはＣＤ３０またはＣＤ４０、およびＯＸ４０ＬまたはＣＤ３０ＬまたはＣＤ４０Ｌのようであるがこれらに限定されない、共刺激分子と、共刺激分子カウンター構造との相互作用を阻害し、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、または対のメンバーを含む、他の免疫細胞のようであるがこれらに限定されない細胞による、免疫の刺激を阻害する、ＩＣＳＭ結合性／モジュレーティング部分を含む。
標的化部分と、エフェクター結合性／モジュレーティング部分とは、共有結合的に、もしくは非共有結合的に、直接的に、またはリンカー実体を介して、互いと、例えば、治療用タンパク質分子内の、同じタンパク質分子のメンバーとして、物理的に係留される。一部の実施形態では、標的化部分とエフェクター結合性／モジュレーティング部分とは、治療用タンパク質分子内、例えば、融合タンパク質内で、典型的に、別個のドメインとして提供される。一部の実施形態では、標的化部分、エフェクター結合性／モジュレーティング部分、またはこれらの両方は、各々、単一ドメイン抗体分子、例えば、ラクダ科動物抗体ＶＨＨ分子、またはヒト可溶性ＶＨドメインを含む。標的化部分、エフェクター結合性／モジュレーティング部分、またはこれらの両方はまた、単鎖断片可変（ｓｃＦｖ）ドメインまたはＦａｂドメインも含有しうる。一部の実施形態では、治療用タンパク質分子、または治療用タンパク質分子をコードする核酸、例えば、ｍＲＮＡもしくはＤＮＡは、対象へと投与することができる。一部の実施形態では、標的化部分およびエフェクター結合性／モジュレーティング部分は、第３の実体、例えば、担体、例えば、ポリマー性担体、デンドリマー、または粒子、例えば、ナノ粒子へと連結される。治療用化合物を使用して、全身性の免疫抑制機能を有さないか、または実質的に低下させながら、選択された標的または部位の組織における免疫応答、または組織内の免疫応答を下方調節することができる。標的または部位は、ドナー組織を含む場合もあり、自家組織を含む場合もある。
本明細書では、本明細書で開示される治療用化合物により、移植されたドナー組織、例えば、同種移植組織、例えば、本明細書で記載される組織、例えば、同種移植肝臓、同種移植腎臓、同種移植心臓、同種移植膵臓、同種移植胸腺もしくは同種移植胸腺組織、同種移植皮膚、または同種移植肺に対する部位特異的免疫特権をもたらす方法が提供される。ある実施形態では、処置は、ドナー移植組織の拒絶を最小化し、免疫エフェクター細胞媒介性損傷を最小化して、ドナー移植組織の受容を延長するか、またはドナー移植組織の機能的寿命を延長する。
本明細書ではまた、本明細書において開示される治療用化合物で、ドナー免疫細胞、例えば、ドナーＴ細胞が、免疫による、レシピエント組織に対する攻撃を媒介する能力を最小化することにより、ＧＶＨＤを阻害する方法も提供される。
本明細書ではまた、本明細書で開示される、治療用化合物の投与により、対象における自己免疫障害または自己免疫応答を処置する、例えば、治療的に処置するか、または予防的に処置して（またはこれを防止して）、例えば、免疫系の、部位特異的モジュレーションまたは組織特異的モジュレーションをもたらす方法も提供される。一部の実施形態では、方法は、対象組織に対するトレランス、対象組織に対する拒絶の最小化、対象組織に対する免疫エフェクター細胞媒介性損傷の最小化、または対象組織の機能の拡張をもたらす。一部の実施形態では、治療用化合物は、自己免疫による攻撃下にあるか、またはこの危険性がある組織を標的化する、例えば、特異的に標的化する、標的化部分を含む。非限定的な例示的組織は、膵臓、ミエリン、唾液腺、滑膜細胞、および筋細胞を含むがこれらに限定されない。
本明細書で使用される、「～を処置する」、「処置された」、または「～を処置すること」という用語は、目的は、所望されない生理学的状態、障害、もしくは疾患を、下方に緩徐化する（減殺する）か、または有益であるか、もしくは所望される臨床的結果をうることである、治療的処置に関する。例えば、有益であるか、または所望される臨床的結果は、症状の緩和；状態、障害、もしくは疾患の程度の減殺；状態、障害、もしくは疾患の状態の安定化（すなわち、無増悪）；状態、障害、もしくは疾患の発生の遅延、またはこれらの進行の緩徐化；検出可能であれ、検出不能であれ、状態、障害、もしくは疾患状態の改善（ａｍｅｌｉｏｒａｔｉｏｎ）もしくは寛解（部分寛解であれ、完全寛解であれ）；患者により必ずしも感知可能ではない、少なくとも１つの、測定可能な身体パラメータの改善（ａｍｅｌｉｏｒａｔｉｏｎ）；または状態、障害、もしくは疾患の軽快化もしくは改善（ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ）を含むがこれらに限定されない。処置は、過剰レベルの副作用を伴わずに、臨床的に著明な応答を誘発することを含む。処置はまた、生存を、処置を施されなかった場合に予測される生存と比較して延長することも含む。したがって、「自己免疫疾患／障害の処置」とは、本明細書で記載される、自己免疫疾患／障害、または他の状態と関連する、原発性現象または続発性症状のうちのいずれかを、緩和または改善する行為を意味する。本明細書では、多様な疾患または状態が提供される。治療的処置はまた、疾患または状態を、発生の前に防止または軽減するように、予防的に投与される場合もある。
一部の実施形態では、治療用化合物の投与は、障害が現れた後で始まる。一部の実施形態では、治療用化合物の投与は、障害の発生、または完全な発生の前に始まる。一部の実施形態では、治療用化合物の投与は、例えば、障害を有する対象、高危険性の対象、障害の危険性もしくは存在についてのバイオマーカーを有する対象、障害の家族歴、または障害の危険性についての他の指標、もしくは無症状性の障害の存在を有する対象において、障害の発生、または完全な発生の前に始まる。例えば、一部の実施形態では、膵島細胞損傷を有するが、未だ糖尿病性ではない対象が処置される。
理論に束縛されることを望まずに述べると、標的化部分は、免疫特権が所望される解剖学的部位において、選択的に発現される標的に結合し、治療剤を、これへと蓄積させるように機能すると考えられる。一部の実施形態では、例えば、ドナー組織移植の文脈では、標的化部分は、標的、例えば、ドナー組織内に存在するが、レシピエントには存在しない、対立遺伝子産物に結合する。自己免疫障害を処置するために、標的化部分は、例えば、膵臓内の、免疫特権が所望される解剖学的部位において、選択的に発現される標的に結合する。ＧＶＨＤを処置するために、標的化部分は、宿主組織を標的化し、宿主を、移植組織に由来する、移植免疫エフェクター細胞からの攻撃に対して保護する。
再度、理論に束縛されることを望まずに述べると、エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、免疫抑制シグナルを送達するか、または他の形で、免疫特権付与環境を創出するのに用いられると考えられる。
そうでないことが規定されない限りにおいて、本明細書において使用される、全ての技術用語および科学用語は、これらの実施形態が属する技術分野の当業者により一般に理解される意味と同じ意味を有する。本実施形態の実施または試験において、本明細書において記載される方法および材料と同様または同等な方法および材料も使用することができるが、下記では、適切な方法および材料について記載される。本明細書において言及される、全ての刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は、参照によりそれらの全体において組み入れられる。加えて、材料、方法、および例は、例示的なものであるに過ぎず、限定を意図するものではない。見出し、小見出し、または番号付けもしくは文字づけされた要素、例えば、（ａ）、（ｂ）、（ｉ）などは、読みやすさのためだけに提示される。本文献における、見出しまたは番号付けもしくは文字づけされた要素の使用は、工程または要素が、アルファベット順に実施されることを要求するものでも、工程または要素が、互いと個別であることを必ず要求するものでもない。実施形態の、他の構成、目的、および利点は、記載および図面、ならびに特許請求の範囲から明らかであろう。
さらなる定義
そうでないことが規定されない限りにおいて、本明細書で使用される、全ての技術用語および科学用語は、実施形態が関連する技術分野の当業者により一般に理解される意味と同じ意味を有する。本実施形態の記載および特許請求において、以下の用語法、および本出願を通して他の形で言及される用語法は、定義がなされる場合において、それがどのように規定されるのかに従い使用される。
また、本明細書で使用される用語法は、特定の実施形態だけについて記載することを目的とするものであり、限定的であることを意図するものではないことも理解されるものとする。
本明細書で使用される用語としての、抗体分子とは、少なくとも１つの機能的な免疫グロブリン可変ドメイン配列を含むポリペプチド、例えば、免疫グロブリン鎖またはこの断片を指す。抗体分子は、抗体（例えば、全長抗体）および抗体断片を包摂する。一部の実施形態では、抗体分子は、全長抗体の、抗原結合性断片もしくは機能的断片、または全長免疫グロブリン鎖を含む。例えば、全長抗体は、自然発生の免疫グロブリン（Ｉｇ）分子（例えば、ＩｇＧ抗体）、または通常の免疫グロブリン遺伝子断片組換え工程により形成されるＩｇ分子である。複数の実施形態では、抗体分子とは、抗体断片のような、免疫グロブリン分子の、免疫学的に活性である、抗原結合性部分を指す。抗体断片、例えば、機能的断片は、抗体の部分、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）２、可変断片（Ｆｖ）、ドメイン抗体（ｄＡｂ）、または単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。機能的抗体断片は、無傷（例えば、全長）抗体により認識される抗原と同じ抗原に結合する。「抗体断片」または「機能的断片」という用語はまた、重鎖および軽鎖の可変領域からなる「Ｆｖ」断片、または軽鎖可変領域と、重鎖可変領域とが、ペプチドリンカーにより接続された、組換え単鎖ポリペプチド分子（「ｓｃＦｖタンパク質」）のような、可変領域からなる単離断片も含む。一部の実施形態では、抗体断片は、Ｆｃ断片、または単一のアミノ酸残基のような、抗原結合活性を伴わない抗体の部分を含まない。例示的な抗体分子は、全長抗体、ならびに抗体断片、例えば、ｄＡｂ（ドメイン抗体）、単鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ’）２断片、ならびに単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。
「抗体分子」という用語はまた、また、「ｓｄＡｂ」または「ＶＨＨ」と称される場合もある、全抗体、またはドメイン抗体の抗原結合性断片、または単一ドメイン抗体も包摂する。ドメイン抗体は、単独型抗体断片として作用する場合がある、ＶＨまたはＶＬを含む。加えて、ドメイン抗体は、重鎖だけの抗体（ＨＣＡｂ）を含む。ドメイン抗体はまた、ＩｇＧのＣＨ２ドメインも、ＣＤＲループがグラフトされる基礎骨格として含む。ドメイン抗体はまた、一般に、３つの相補性決定領域により中断された、４つのフレームワーク領域から構成される、アミノ酸配列を含むポリペプチドまたはタンパク質として規定される場合もある。これは、ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４として表される。ｓｄＡｂは、ラマのようなラクダ科動物において産生される場合もあるが、また、当技術分野で周知の技法を使用して、合成的に作出することもできる。ｓｄＡｂまたはポリペプチドの、アミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔら（参照により本明細書に組み入れられる、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、ＵＳ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ、第９１号刊行物）によりもたらされる、ＶＨドメインについての一般的番号付けに従う。この番号付けに従い、ｓｄＡｂのＦＲ１は、１～３０位におけるアミノ酸残基を含み、ｓｄＡｂのＣＤＲ１は、３１～３６位におけるアミノ酸残基を含み、ｓｄＡｂのＦＲ２は、３６～４９位におけるアミノ酸を含み、ｓｄＡｂのＣＤＲ２は、５０～６５位におけるアミノ酸残基を含み、ｓｄＡｂのＦＲ３は、６６～９４位におけるアミノ酸残基を含み、ｓｄＡｂのＣＤＲ３は、９５～１０２位におけるアミノ酸残基を含み、ｓｄＡｂのＦＲ４は、１０３～１１３位におけるアミノ酸残基を含む。ドメイン抗体はまた、それらの各々が、参照により本明細書に組み入れられる、ＷＯ２００４０４１８６２およびＷＯ２０１６０６５３２３においても記載されている。ドメイン抗体は、本明細書で記載される標的化部分でありうる。
抗体分子は、単一特異性（例えば、一価または二価）の場合もあり、二特異性（例えば、二価、三価、四価、五価、または六価）の場合もあり、三特異性（例えば、三価、四価、五価、六価）の場合もあり、高次の特異性（例えば、四特異性）および／または六価を超える、高次の価数を伴う場合もある。抗体分子は、軽鎖可変領域の機能的断片と、重鎖可変領域の機能的断片とを含む場合もあり、重鎖と、軽鎖とが、単一のポリペプチドへと、併せて融合される場合もある。
多特異性治療用化合物、例えば、二特異性抗体分子のためのフォーマットの例は、以下の非限定例において示される。抗体分子により例示されるが、他の非抗体部分を、特異的結合性部分またはエフェクター部分として含む、治療用分子のためのプラットフォームとしても使用することができる。一部の実施形態では、これらの非限定例は、対称型Ｆｃフォーマットまたは非対称型Ｆｃフォーマットに基づく。
例えば、図は、非限定的で多様な、対称型ホモ二量体法を例示する。一部の実施形態では、二量体化界面は、ＣＨ２／ＣＨ２およびＣＨ３／ＣＨ３の両方にわたる接触面を介して二量体化する、ヒトＩｇＧ１のＣＨ２－ＣＨ３ドメインの近傍に中心を置く。結果として得られる、表示の二特異性抗体は、二量体の各側のＮ末端における、２つの同一な結合単位と、二量体の各側のＣ末端における、２つの同一な結合単位とを伴う、４つの結合単位から構成される全価数を有する。各場合に、ホモ二量体のＮ末端における結合単位は、ホモ二量体のＣ末端における結合単位と異なる。阻害性Ｔ細胞受容体および組織係留抗原の両方に対するこの種の二価性の使用は、分子の両端において達成することができる。
例えば、図３には、非限定的実施形態が例示される。ホモ二量体のＮ末端は、ＶＨ／ＶＬ間相互作用と、ＣカッパまたはＣラムダの、ＣＨ１との相互作用とを介して、各重鎖のＮ末端のＶＨ－ＣＨ１ドメインと界面をなす、別個のポリペプチドである、２つの同一な軽鎖から構成される、２つの同一なＦａｂドメインを含有する。ＣカッパまたはＣラムダと、ＣＨ１との間には、天然のジスルフィド結合が存在し、軽鎖と重鎖との間に、共有結合的アンカーをもたらす。このデザインのＣ末端には、（本例では、）ＦｃのＣＨ３ドメインのＣ末端に、典型的に、セリン残基、グリシン残基、アラニン残基、および／またはトレオニン残基から構成される（が、これらに限定されない）、可撓性の疎水性リンカーが後続し、これに、各ｓｃＦｖ単位のＶＨドメインが後続し、これに、グリシン／セリンに富むリンカーに続く、ＶＬドメインが後続する、２つの同一なｓｃＦｖ単位を置く。これらのタンデムのＶＨドメインと、ＶＬドメインとは、会合して、ＦｃのＣ末端に付加された、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を形成する。２つのこのような単位は、Ｆｃに中心を置く、ホモ二量体的性格のために、この分子のＣ末端に存在する。ｓｃＦｖのドメインの順序は、Ｎ末端から、Ｃ末端へと、ＶＨ－リンカー－ＶＬまたはＶＬ－リンカー－ＶＨとなるように構成することができる。
異なる末端において、異なる結合性領域を有する、分子の非限定例は、１つの末端が、ＰＤ－１アゴニストであり、標的特異性をもたらす抗体が、抗ＭＡｄＣＡＭ－１抗体である分子である。これは、例えば、分子を、異なる配置において例示する、図３Ａに示される通りに例示することができる。
一部の実施形態では、ＭＡｄＣＡＭ抗体は、本明細書の別の箇所で記載される通り、遮断抗体または非遮断抗体である。いかなる理論にも束縛されずに述べると、ＭＡｄＣＡＭは、その２つのＩｇスーパーファミリーＩセットドメイン内の複数の残基を介して、リンパ球上で発現される、インテグリンα４β７のヘッドピース部分と相互作用することが示されており、この相互作用についての原子のレベル構造的基礎についても記載されている（それらの各々が、参照によりその全体において本明細書に組み入れられる、Ｖｉｎｅｙ ＪＬら（１９９６）、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５７、２４８８～２４９７；Ｙｕ Ｙら（２０１３）、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．、２８８、６２８４～６２９４；Ｙｕ Ｙら（２０１２）、Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．、１９６、１３１～１４６）。ヒト（Ｃｈｅｎ Ｊら（２００３）、Ｎａｔ Ｓｔｒｕｃｔ Ｂｉｏｌ．、１０、９９５～１００１；ｄｅ Ｃｈａｔｅａｕ Ｍら（２００１）、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、４０、１３９７２～１３９７９）、およびマウス（Ｄａｙ ＥＳら（２００２）、Ｃｅｌｌ Ｃｏｍｍｕｎ Ａｄｈｅｓ．、９、２０５～２１９；Ｈｏｓｈｉｎｏ Ｈら（２０１１）、Ｊ Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．、５９、５７２～５８３）いずれの分子系においても、ＭＡｄＣＡＭの、α４β７との任意の相互作用は、インテグリンβ７サブユニットＩ様ドメイン内に存在する、３つのジカチオン結合性部位に依存し、これらの金属結合性部位は、Ｃａ２＋、Ｍｎ２＋、およびＭｇ２＋と共に、配位結合をなすことが可能であることが、構造的、機構的、および機能的に、極めて詳細に示されている。細胞接着アッセイ、フローサイトメトリー、および／またはフローチャンバーアッセイを、Ｍｇ２＋またはＭｎ２＋を伴うか、または伴わない、高レベルのＣａ２＋の存在下で使用すると、ＭＡｄＣＡＭ／α４β７間相互作用は、機能的アフィニティーが小さな相互作用であることが示され、リンパ球のローリング接着を可能とするのに対し、インテグリンを活性化させる、低Ｃａ２＋であるが、高Ｍｇ２＋または高Ｍｎ２＋下では、ＭＡｄＣＡＭ／α４β７間相互作用は、機能的アフィニティーが大きな相互作用であり、リンパ球の強力接着を媒介する（Ｃｈｅｎ Ｊら（２００３）、Ｎａｔ Ｓｔｒｕｃｔ Ｂｉｏｌ．、１０、９９５～１００１）。多数の研究グループが、多様な細胞：細胞、細胞：膜調製物、および／または細胞：タンパク質ベースの接着／相互作用アッセイを、ＦＡＣＳ、細胞フローチャンバーベースのカウント、またはＩＨＣベースのリードアウトと共に利用して、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体または抗α４β７抗体の、ＭＡｄＣＡＭの、α４β７との相互作用に対する影響をモニタリングすることができ、遮断抗体または非遮断抗体を同定することを可能とすることを示している（Ｎａｋａｃｈｅ Ｍら（１９８９）、Ｎａｔｕｒｅ、３３７、１７９～１８１；Ｓｔｒｅｅｔｅｒ ＰＲら（１９８８）、Ｎａｔｕｒｅ、３３１、４１～４６；Ｙａｎｇ Ｙら（１９９５）、Ｓｃａｎｄ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．、４２、２３５～２４７；Ｌｅｕｎｇ Ｅら（２００４）、Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．、８２、４００～４０９；Ｐｕｌｌｅｎ Ｎら（２００９）、Ｂ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１５７、２８１～２９３；Ｓｏｌｅｒ Ｄら（２００９）、Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ．、３３０、８６４～８７５；Ｑｉ Ｊら（２０１２）、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．、２８７、１５７４９～１５７５９）。
これは、マウス系の設定において、ＭＥＣＡ８９（非遮断抗体）およびＭＥＣＡ３６７（遮断抗体）のような抗マウスＭＡｄＣＡＭ抗体の同定と共に例示されている（Ｎａｋａｃｈｅ Ｍら（１９８９）、Ｎａｔｕｒｅ、３３７、１７９～１８１；Ｓｔｒｅｅｔｅｒ ＰＲら（１９８８）、Ｎａｔｕｒｅ、３３１、４１～４６；Ｙａｎｇ Ｙら（１９９５）、Ｓｃａｎｄ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．、４２、２３５～２４７）。ヒト系では、抗ヒトＭＡｄＣＡＭである、ＰＦ－００５４７６５９（Ｐｕｌｌｅｎ Ｎら（２００９）、Ｂ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１５７、２８１～２９３）、および抗ヒトα４β７である、ベドリズマブ（Ｓｏｌｅｒ Ｄら（２００９）、Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ．、３３０、８６４～８７５）のような、ヒトＭＡｄＣＡＭの、ヒトα４β７との相互作用を遮断する抗体のほか、抗ヒトＭＡｄＣＡＭクローンである、１７Ｆ５（Ｓｏｌｅｒ Ｄら（２００９）、Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ．、３３０、８６４～８７５）、および抗ヒトα４β７クローンである、Ｊ１９（Ｑｉ Ｊら（２０１２）、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．、２８７、１５７４９～１５７５９）のような、相互作用を遮断しない抗体も同定されている。したがって、抗体は、所望される効果に基づき、遮断抗体の場合もあり、非遮断抗体の場合もある。一部の実施形態では、抗体は、ＭＡｄＣＡＭ非遮断抗体である。一部の実施形態では、抗体は、ＭＡｄＣＡＭ遮断抗体である。抗体が、遮断抗体であるのか、非遮断遮断抗体であるのかを裏付ける、１つの非限定例は、実施例６で見出すことができるが、任意の方法を使用することができる。本明細書で記載される参考文献の各々は、参照によりその全体において組み入れられる。一部の実施形態では、ＰＤ－１アゴニストは、本明細書で記載されるＩＬ－２ムテインのようであるがこれらに限定されない、ＩＬ－２ムテインで置きかえられる。
別の例では、かつ、図４に描示される通り、ホモ二量体のＮ末端は、ＶＨ／ＶＬ間相互作用と、ＣカッパまたはＣラムダの、ＣＨ１との相互作用とを介して、各重鎖のＮ末端のＶＨ－ＣＨ１ドメインと界面をなす、別個のポリペプチドである、２つの同一な軽鎖から構成される、２つの同一なＦａｂドメインを含有する。ＣカッパまたはＣラムダと、ＣＨ１との間には、天然のジスルフィド結合が存在し、軽鎖と重鎖との間に、共有結合的アンカーをもたらす。このデザインのＣ末端には、（本例では、）ＦｃのＣＨ３ドメインのＣ末端に、典型的に、セリン残基、グリシン残基、アラニン残基、および／またはトレオニン残基から構成される（が、これらに限定されない）、可撓性の疎水性リンカーが後続し、これに、可溶性の、独立した、生殖細胞系列ファミリーＶＨ３ベースのＶＨドメインが後続する、２つの同一なＶＨ単位（また、ここで、または４つの末端の接合／融合点のうちのいずれかにおいて、非抗体部分により置換される場合もある）を置く。２つのこのような単位は、Ｆｃに中心を置く、ホモ二量体的性格のために、この分子のＣ末端に存在する。
別の非限定例では、図５に描示される通り、ホモ二量体のＮ末端は、図３および図４と異なり、Ｎ末端において、ＣカッパまたはＣラムダのＣ末端と、ＶＨのＮ末端との間のリンカーを介して、重鎖と、物理的に接続される、２つの同一な軽鎖から構成される、２つの同一なＦａｂドメインを含有する。リンカーは、３６～８０アミノ酸の長さでありえ、セリン残基、グリシン残基、アラニン残基、およびトレオニン残基から構成される場合がある。物理的に接続されたＮ末端の軽鎖は、ＶＨ／ＶＬ間相互作用と、ＣカッパまたはＣラムダの、ＣＨ１との相互作用とを介して、各重鎖のＮ末端のＶＨ－ＣＨ１ドメインと界面をなす。ＣカッパまたはＣラムダと、ＣＨ１との間には、天然のジスルフィド結合が存在し、軽鎖と重鎖との間に、さらなる安定性をもたらす。このデザインのＣ末端には、（本例では、）ＦｃのＣＨ３ドメインのＣ末端に、典型的に、セリン残基、グリシン残基、アラニン残基、および／またはトレオニン残基から構成される（が、これらに限定されない）、可撓性の疎水性リンカーが後続し、これに、ＣＨ１ドメインに続く、Ｃ末端におけるＶＨドメインが後続する、２つの同一なＦａｂ単位を置く。Ｃ末端のＣＨ１／ＶＨドメインと対合するようにデザインされた軽鎖は、記載される通り、Ｎ末端のＶＨ／ＣＨ１ドメインへと接続される、Ｎ末端の軽鎖と異なり、別個のポリペプチドとして発現される。Ｃ末端の軽鎖は、ＶＨ／ＶＬの間、およびＣカッパまたはＣラムダと、ＣＨ１との間に、界面を形成する。天然のジスルフィドは、この軽鎖を、重鎖へとアンカリングする。ここでもまた、４つの接合／融合点のうちのいずれかにおける、抗体部分のうちのいずれかは、非抗体部分、例えば、抗体分子を含まない、エフェクター結合性／モジュレーティング部分で置換することができる。
二特異性抗体はまた、以下の非限定例において示される通り、非対称型の場合もある。非限定例はまた、非対称型／ヘテロ二量体法を例示する、図６、図７、および図８にも描示される。これらのフォーマットのうちのいずれかでもまた、４つの接合／融合点のうちのいずれかにおける、抗体部分のうちのいずれかは、非抗体部分、例えば、抗体分子を含まない、エフェクター結合性／モジュレーティング部分で置換することができる。一部の実施形態では、二量体化界面は、ＣＨ２／ＣＨ２およびＣＨ３／ＣＨ３の両方にわたる接触面を介して二量体化する、ヒトＩｇＧ１のＣＨ２－ＣＨ３ドメインの近傍に中心を置く。しかし、各重鎖の、ホモ二量体化ではなく、ヘテロ二量体化を達成するために、各ＣＨ３ドメインに、突然変異が導入される。ヘテロ二量体化突然変異は、１つのＣＨ３ドメイン内の、Ｔ３６６Ｗ突然変異（Ｋａｂａｔ）と、他のＣＨ３ドメイン内の、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、およびＹ４０７Ｖ（Ｋａｂａｔ）突然変異とを含む。ヘテロ二量体化界面は、天然残基の、ＣＨ３／ＣＨ３界面の反対側における、Ｓ３５４およびＹ３４９のようなシステイン残基への突然変異を介する、デノボにおけるジスルフィド結合により、さらに安定化させることができる。結果として得られる、表示の二特異性抗体は、４つの結合単位から構成される全価数を有する。この手法により、分子の全体を、ただ１つの末端において、二特異性を有し、他の末端では、単一特異性を有する（全体では、三特異性である）か、または両方の末端において、二特異性を有し、全体では、２つまたは４つの分子特異性を有するようにデザインすることができる。下記の例示的な例では、Ｃ末端は、例えば、組織係留標的に対する二価の単一特異性をもたらすことが可能な、２つの同一な結合性ドメインを含む。例示的な例の３つ全てのＮ末端では、両方の結合性ドメインは、同じエフェクター部分の標的上の２つの異なるエピトープの認識を達成することが可能な場合もあり、例えば、Ｔ細胞阻害性受容体およびＣＤ３を認識することが可能な場合もある、異なる認識エレメント／パラトープを含む。一部の実施形態では、Ｎ末端の結合性部分は、例えば、ｓｃＦｖ、単鎖Ｆａｂ、タンデムｓｃＦｖ、ＶＨドメイン抗体、またはＶＨＨドメイン抗体の構成のような、他の単一のポリペプチドフォーマットと交換することができる。直鎖状ペプチドまたは環状ペプチドのような、他の種類の認識エレメントもまた使用することができる。
非対称型分子の例は、図６に描示される。図６に言及すると、分子のＮ末端は、ＶＨ／ＶＬ間相互作用と、Ｃカッパ／ＣＨ１間相互作用またはＣラムダ／ＣＨ１間相互作用と、共有結合的係留から構成される、天然の重／軽鎖間ジスルフィド結合とを介して、第１の重鎖と対合された、第１の軽鎖から構成される。このヘテロ二量体分子の反対側では、ＣカッパまたはＣラムダのＣ末端と、ＶＨのＮ末端との間のリンカーを介して、物理的に接続された、第２の軽鎖および第２の重鎖を、Ｎ末端に置く。リンカーは、３６～８０アミノ酸の長さでありえ、セリン残基、グリシン残基、アラニン残基、およびトレオニン残基から構成される場合がある。物理的に接続されたＮ末端の軽鎖は、ＶＨ／ＶＬ間相互作用と、ＣカッパまたはＣラムダの、ＣＨ１との相互作用とを介して、各重鎖のＮ末端のＶＨ－ＣＨ１ドメインと界面をなす。ＣカッパまたはＣラムダと、ＣＨ１との間には、天然のジスルフィド結合が存在し、軽鎖と重鎖との間に、さらなる安定性をもたらす。分子のＣ末端には、Ｎ末端のグリシン／セリン／アラニン／トレオニンベースのリンカーを介して、重鎖１および重鎖２の両方の、ＣＨ３ドメインＣ末端へと接続された、生殖細胞系列ファミリーＶＨ３による、２つの同一な可溶性ＶＨドメインを置く。
一部の実施形態では、非対称型分子は、図７に例示される通りでありうる。例えば、分子のＮ末端は、グリシン／セリン／アラニン／トレオニンベースのリンカーを介して、ヒトＩｇＧ１のヒンジ領域へと連結された、生殖細胞系列ＶＨ３ベースの、２つの異なる可溶性ＶＨドメインから構成される。第１の重鎖へと接続されたＶＨドメインは、第２の重鎖へと接続されたＶＨドメインと異なる。各重鎖のＣ末端には、２つの重鎖の各々において同一な、生殖細胞系列ＶＨ３ベースの、さらなる可溶性ＶＨドメインを置く。重鎖は、ＦｃモジュールのＣＨ３界面に存在する、既に記載されている、ノブイントゥーホール突然変異を介して、ヘテロ二量体化する。
一部の実施形態では、非対称型分子は、図８に例示される通りでありうる。本例は、Ｎ末端のＦａｂ単位の両方が、軽鎖１および軽鎖２が、ＣカッパまたはＣラムダのＣ末端と、それぞれの各ＶＨのＮ末端との間のリンカーを介して、重鎖１および重鎖２と、物理的に接続されるように構成される点を除き、図７に示された分子と同様である。各場合におけるリンカーは、３６～８０アミノ酸の長さでありえ、セリン残基、グリシン残基、アラニン残基、およびトレオニン残基から構成される場合がある。物理的に接続されたＮ末端の軽鎖は、ＶＨ／ＶＬ間相互作用と、ＣカッパまたはＣラムダの、ＣＨ１との相互作用とを介して、各重鎖のＮ末端のＶＨ－ＣＨ１ドメインと界面をなす。ＣカッパまたはＣラムダと、ＣＨ１との間には、天然のジスルフィド結合が存在し、軽鎖と重鎖との間に、さらなる安定性をもたらす。
二特異性分子はまた、混合型フォーマットも有する場合がある。これは、例えば、図９、図１０、および図１１において例示されている。
例えば、図９は、図７の部分フォーマット選択と組み合わされた、ホモ二量体Ｆｃベースの手法（図３、４、および５を参照されたい）であって、総分子価数は、４であるが、特異性は、二特異性に制約された手法を例示する。Ｎ末端は、生殖細胞系列ＶＨ３ベースの、２つの同一な可溶性ＶＨドメインから構成され、Ｃ末端は、Ｎ末端ドメインとは特異性が異なる、生殖細胞系列ＶＨ３ベースの、２つの同一な可溶性ＶＨドメインから構成される。したがって、各特異性は、価数２を有する。このフォーマットでもまた、４つの接合／融合点のうちのいずれかにおける、抗体部分のうちのいずれかは、非抗体部分、例えば、抗体分子を含まない、エフェクター結合性／モジュレーティング部分で置換することができる。
図１０は、別の例を例示する。本例では、分子は、生殖細胞系列ＶＨ３ベースの、４つの可溶性ＶＨドメインから構成される。第１の２つドメインは、同じ特異性（例えば、阻害性受容体）を有し、Ｎ末端に由来する第３のドメインは、組織抗原に対する特異性を有することが可能であり、Ｎ末端に由来する第４のドメインは、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）に対する特異性を有することが可能であり、これにより、Ｉｇ Ｆｃドメインの非存在下で、分子の半減期の延長を保証する。３つの、グリシン、セリン、アラニン、および／またはトレオニンに富むリンカーが、ドメイン１とドメイン２との間、ドメイン２とドメイン３との間、およびドメイン３とドメイン４との間に存在する。このフォーマットは、最大で四特異性を伴うが、各場合に一価ずつで構成することもでき、各場合に二価性ずつで、二特異性を有するように構成することもできる。ドメインの順序は、変化させることができる。このフォーマットでもまた、抗体部分のうちのいずれかは、非抗体部分、例えば、抗体分子を含まない、エフェクター結合性／モジュレーティング部分で置換することができる。
図１１は、さらに別の手法を例示する。本例は、分子のＮ末端において、２つの同一なＦａｂ単位（二価単一特異性）を伴うホモ二量体ベースのＦｃであるという点において、図３および４と同様である。本例は、各重鎖のＣ末端が、タンデムｓｃＦｖにより付加されるという点で異なる。したがって、各場合に、ＦｃのＣＨ３ドメインのＣ末端は、グリシン／セリン／アラニン／トレオニンベースのリンカーを介して、第１のＶＨドメインのＮ末端へと連結され、これが、Ｃ末端を介して、１２～１５アミノ酸の、グリシン／セリンに富むリンカーにより、第１のＶＬドメインのＮ末端へと連結され、これが、２５～３５アミノ酸の、グリシン／セリン／アラニン／トレオニンベースのリンカーを介して、Ｃ末端により、第２のＶＨドメインのＮ末端へと連結され、これが、Ｃ末端を介して、１２～１５アミノ酸の、グリシン／セリンベースのリンカーにより、第２のＶＬドメインのＮ末端へと連結される。したがって、このＦｃホモ二量体ベースの分子には、分子のＣ末端に、２つの同一なタンデムｓｃＦｖが存在し、例えば、単一の組織抗原に対する四価性、または２つの異なる分子に対する二価性をもたらす。このフォーマットはまた、ヘテロ二量体Ｆｃコアにより、図５、６、および７における通りの単鎖Ｆａｂ構成の使用を介して、Ｎ末端における二価の単一特異性、またはＮ末端における一価の二特異性を保持しながら、Ｃ末端において、一価の四特異性を可能とする、ＦｃのＣ末端における、２つの異なるタンデムｓｃＦｖを許容するようにも適合させることができる。したがって、この分子は、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つの特異性を有するように構成することができる。タンデムｓｃＦｖ単位内の、ｓｃＦｖのドメインの順序は、Ｎ末端から、Ｃ末端へと、ＶＨ－リンカー－ＶＬまたはＶＬ－リンカー－ＶＨとなるように構成することができる。このフォーマットでもまた、４つの接合／融合点のうちのいずれかにおける、抗体部分のうちのいずれかは、非抗体部分、例えば、抗体分子を含まない、エフェクター結合性／モジュレーティング部分で置換することができる。
二特異性抗体はまた、例えば、組織透過性を増大させながら、全身ＰＫを短縮するようにも構築することができる。これらの種類の抗体は、例えば、ヒトＶＨ３ベースのドメイン抗体フォーマットに基づくことが可能である。これらは、例えば、図１２、１３、および１４において例示される。図１２、１３、および１４は、各々、生殖細胞系列ファミリーＶＨ３ベースの、可溶性ＶＨドメインモジュールを含んだ。各ドメインは、小さな全分子量を可能とする、約１２．５ｋＤａであり、これは、いかなる特定の理論にも束縛されずに述べると、組織透過性の増強に有益なはずである。これらの例では、ＶＨドメインのいずれも、ＦｃＲｎまたはＨＳＡのような、半減期延長標的を認識しない。図１２に例示される通り、分子は、第１のドメインのＣ末端と、第２のドメインのＮ末端との間において、可撓性で疎水性の、グリシン／セリンベースのリンカーで接合された、２つのＶＨドメインから構成される。本例では、１つのドメインは、Ｔ細胞共刺激性受容体を認識することが可能であり、第２のドメインは、組織係留抗原を認識することが可能である。図１３に例示される通り、分子は、疎水性の、グリシン／セリンベースのリンカーによる、Ｎ末端－Ｃ末端間連結を伴う、３つのＶＨドメインから構成される。分子は、三特異性であるが、各標的について、一価となるように構成することができる。分子は、１つの標的に対して二価性であり、別の標的に対して単一価性である、二特異性でありうる。図１４に例示される通り、分子は、各ドメイン間に、Ｎ末端－Ｃ末端間の、グリシン／セリンに富むリンカーを伴う、４つのＶＨドメインから構成される。この分子は、各場合に、抗原価数性を変動させて、四特異性、三特異性、または二特異性となるように構成することができる。このフォーマットでもまた、抗体部分のうちのいずれかは、非抗体部分、例えば、抗体分子を含まない、エフェクター結合性／モジュレーティング部分で置換することができる。
二特異性抗体についての、他の実施形態は、図１５および１６に例示される。図１５および１６は、天然では、相互作用を、共有結合的にアンカリングする、Ｃ末端重鎖／軽鎖間ジスルフィド結合を含む、ヒトＩｇＧ ＣＨ１／Ｃカッパ間界面のヘテロ二量体化コアから構成される。このフォーマットは、Ｆｃ、または半減期の延長のための部分を含有しない。図１５に例示される通り、分子は、ＣカッパドメインのＮ末端に、Ｎ末端ＶＨドメインからなるｓｃＦｖ断片を付加し、そのＣ末端でＶＬドメインのＮ末端に、１２～１５アミノ酸のグリシン／セリンベースのリンカーを介して連結され、これは、天然ＶＬ－Ｃカッパエルボー配列を介してＣカッパドメインのＮ末端にそのＣ末端によって連結される。ＣＨ１ドメインは、Ｎ末端に、１２～１５アミノ酸のグリシン／セリンリンカーを介してそのＣ末端でＶＨドメインのＮ末端に連結されたＮ末端ＶＬドメインからなるｓｃＦｖ断片を付加させ、天然ＶＨ－ＣＨ１エルボー配列を介してそのＣ末端においてＣＨ１ドメインのＮ末端に連結される。図１６に例示される通り、分子は、図１３と同じ、Ｎ末端の立体構造を有する。しかし、ＣカッパのドメインおよびＣＨ１ドメインのＣ末端は、ＶＨ－ＶＬ立体構造の場合もあり、ＶＬ－ＶＨ立体構造の場合もある、ｓｃＦｖモジュールを付加され、同じ抗原に特異的な場合もあり、２つの異なる抗原に特異的な場合もある。ＶＨ／ＶＬドメイン間リンカーは、１２～１５アミノ酸の長さでありえ、グリシン／セリン残基からなる。ｓｃＦｖ結合性サブユニットは、可溶性ＶＨドメイン、もしくはペプチド認識エレメント、なおまたはタンデムｓｃＦｖエレメントとも交換することができる。この手法はまた、Ｖラムダドメインおよび／またはＣラムダドメインを使用するにも構成することができる。このフォーマットでもまた、接合／融合点のうちのいずれかにおける、抗体部分のうちのいずれかは、非抗体部分、例えば、抗体分子を含まない、エフェクター結合性／モジュレーティング部分で置換することができる。
図１７は、別の実施形態を例示する。図１７は、１２～１５アミノ酸のグリシン／セリンに富むリンカーを有する第１のＶＨドメインのＮ末端にそのＣ末端において連結された第１のＮ末端ＶＬドメイン、続いて第１のＶＨ Ｃ末端において、第２のＶＬドメインのＮ末端に２５～３０アミノ酸のグリシン／セリン／アラニン／トレオニンベースのリンカーからなるタンデムｓｃＦｖフォーマットを表す。第２のＶＬドメインは、１２～１５アミノ酸のグリシン／セリンリンカーにより、Ｃ末端で第２のＶＨドメインのＮ末端に連結される。各ｓｃＦｖは、共刺激性Ｔ細胞分子および組織係留標的のような異なる標的抗原を認識する。このフォーマットでもまた、抗体部分のうちのいずれかは、非抗体部分、例えば、抗体分子を含まない、エフェクター結合性／モジュレーティング部分で置換することができる。
図１８は、別の実施形態を例示する。図１８は、Ｆ（ａｂ’）２ ｓｃＦｖ融合体である。これは、ヒトＩｇＧ ＣＨ１ドメインのＣ末端側の、天然ヒトＩｇＧ１のヒンジ領域内の、２つのジスルフィド結合を介して接合された、２つの同一なＦａｂ構成要素からなる。ヒトＩｇＧ１のＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインは、存在しない。重鎖１および重鎖２のＣ末端には、グリシン／セリン／アラニン／トレオニンに富むリンカーを介して、ｈｕＩｇＧ１ヒンジ領域のＣ末端へと連結された、２つの同一なｓｃＦｖ断片を置く。表示の立体配置では、ＶＨは、各ｓｃＦｖ単位内のＮ末端にあり、１２～１５アミノ酸の、グリシン／セリンに富むリンカーを介して、ＶＬドメインのＮ末端へと連結される。代替的な立体配置は、Ｎ末端－ＶＬ－リンカー－ＶＨ－Ｃ末端となろう。このデザインでは、構築物は、各標的について、二価性を伴う、二特異性である。このフォーマットでもまた、４つの接合／融合点のうちのいずれかにおける、抗体部分のうちのいずれかは、非抗体部分、例えば、抗体分子を含まない、エフェクター結合性／モジュレーティング部分で置換することができる。
本明細書で使用される用語としての、ＣＤ３９分子とは、治療用化合物の一部として、ＡＴＰを、ＡＭＰへとリン酸加水分解するのに十分なＣＤ３９配列を有するポリペプチドを指す。一部の実施形態では、ＣＤ３９分子は、自然発生のＣＤ３９、例えば、ＣＤ３９分子が導出されたＣＤ３９の速度と等しいか、またはこの、少なくとも、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、もしくは９５％の速度で、ＡＴＰを、ＡＭＰへと、リン酸加水分解する。一部の実施形態では、ＣＤ３９分子は、自然発生のＣＤ３９と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９５、９９、もしくは１００％の配列同一性、または実質的な配列同一性を有する。
任意の機能的なアイソフォームを使用することができる（ＣＤ３９または本明細書で論じられる、他のタンパク質と共に）。例示的なＣＤ３９配列は、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号：ＮＰ＿００１７６７．３、または以下の配列：
ＭＥＤＴＫＥＳＮＶＫＴＦＣＳＫＮＩＬＡＩＬＧＦＳＳＩＩＡＶＩＡＬＬＡＶＧＬＴＱＮＫＡＬＰＥＮＶＫＹＧＩＶＬＤＡＧＳＳＨＴＳＬＹＩＹＫＷＰＡＥＫＥＮＤＴＧＶＶＨＱＶＥＥＣＲＶＫＧＰＧＩＳＫＦＶＱＫＶＮＥＩＧＩＹＬＴＤＣＭＥＲＡＲＥＶＩＰＲＳＱＨＱＥＴＰＶＹＬＧＡＴＡＧＭＲＬＬＲＭＥＳＥＥＬＡＤＲＶＬＤＶＶＥＲＳＬＳＮＹＰＦＤＦＱＧＡＲＩＩＴＧＱＥＥＧＡＹＧＷＩＴＩＮＹＬＬＧＫＦＳＱＫＴＲＷＦＳＩＶＰＹＥＴＮＮＱＥＴＦＧＡＬＤＬＧＧＡＳＴＱＶＴＦＶＰＱＮＱＴＩＥＳＰＤＮＡＬＱＦＲＬＹＧＫＤＹＮＶＹＴＨＳＦＬＣＹＧＫＤＱＡＬＷＱＫＬＡＫＤＩＱＶＡＳＮＥＩＬＲＤＰＣＦＨＰＧＹＫＫＶＶＮＶＳＤＬＹＫＴＰＣＴＫＲＦＥＭＴＬＰＦＱＱＦＥＩＱＧＩＧＮＹＱＱＣＨＱＳＩＬＥＬＦＮＴＳＹＣＰＹＳＱＣＡＦＮＧＩＦＬＰＰＬＱＧＤＦＧＡＦＳＡＦＹＦＶＭＫＦＬＮＬＴＳＥＫＶＳＱＥＫＶＴＥＭＭＫＫＦＣＡＱＰＷＥＥＩＫＴＳＹＡＧＶＫＥＫＹＬＳＥＹＣＦＳＧＴＹＩＬＳＬＬＬＱＧＹＨＦＴＡＤＳＷＥＨＩＨＦＩＧＫＩＱＧＳＤＡＧＷＴＬＧＹＭＬＮＬＴＮＭＩＰＡＥＱＰＬＳＴＰＬＳＨＳＴＹＶＦＬＭＶＬＦＳＬＶＬＦＴＶＡＩＩＧＬＬＩＦＨＫＰＳＹＦＷＫＤＭＶ（配列番号１）に由来する成熟形態を含む。
一部の実施形態では、ＣＤ３９分子は、ヒトおよびマウスの血液中で循環することが見出される、ＣＤ３９の、可溶性の触媒活性形態を含む。例えば、「Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｏｆ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ＡＤＰ ｉｎ ｔｈｅ ｂｌｏｏｄｓｔｒｅａｍ ｉｓ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｖｉａ ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｓｏｌｕｂｌｅ ａｄｅｎｙｌａｔｅ ｋｉｎａｓｅ－１ ａｎｄ ＮＴＰＤａｓｅ１／ＣＤ３９ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ」、Ｙｅｇｕｔｋｉｎら、ＦＡＳＥＢ Ｊ．、２０１２年９月；２６（９）：３８７５～８３を参照されたい。可溶性の組換えＣＤ３９断片もまた、組換え可溶性細胞外ＡＤＰアーゼ／ＣＤ３９による、血小板機能の阻害において記載されている。Ｇａｙｌｅら、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．、１９９８年５月１日；１０１（９）：１８５１～１８５９。
本明細書で使用される用語としての、ＣＤ７３分子とは、治療用化合物の一部として、細胞外ＡＭＰを、アデノシンへと脱リン酸化させるのに十分なＣＤ７３配列を有するポリペプチドを指す。一部の実施形態では、ＣＤ７３分子は、自然発生のＣＤ７３、例えば、ＣＤ７３分子が導出されたＣＤ７３の速度と等しいか、またはこの、少なくとも、１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、もしくは９５％の速度で、細胞外ＡＭＰを、アデノシンへと、脱リン酸化させる。一部の実施形態では、ＣＤ７３分子は、自然発生のＣＤ７３と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９５、９９、もしくは１００％の配列同一性、または実質的な配列同一性を有する。例示的なＣＤ７３配列は、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号：ＡＡＨ６５９３７．１、５’－ヌクレオチダーゼ、細胞外（ＣＤ７３）［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］、または以下の配列：
ＭＣＰＲＡＡＲＡＰＡＴＬＬＬＡＬＧＡＶＬＷＰＡＡＧＡＷＥＬＴＩＬＨＴＮＤＶＨＳＲＬＥＱＴＳＥＤＳＳＫＣＶＮＡＳＲＣＭＧＧＶＡＲＬＦＴＫＶＱＱＩＲＲＡＥＰＮＶＬＬＬＤＡＧＤＱＹＱＧＴＩＷＦＴＶＹＫＧＡＥＶＡＨＦＭＮＡＬＲＹＤＡＭＡＬＧＮＨＥＦＤＮＧＶＥＧＬＩＥＰＬＬＫＥＡＫＦＰＩＬＳＡＮＩＫＡＫＧＰＬＡＳＱＩＳＧＬＹＬＰＹＫＶＬＰＶＧＤＥＶＶＧＩＶＧＹＴＳＫＥＴＰＦＬＳＮＰＧＴＮＬＶＦＥＤＥＩＴＡＬＱＰＥＶＤＫＬＫＴＬＮＶＮＫＩＩＡＬＧＨＳＧＦＥＭＤＫＬＩＡＱＫＶＲＧＶＤＶＶＶＧＧＨＳＮＴＦＬＹＴＧＮＰＰＳＫＥＶＰＡＧＫＹＰＦＩＶＴＳＤＤＧＲＫＶＰＶＶＱＡＹＡＦＧＫＹＬＧＹＬＫＩＥＦＤＥＲＧＮＶＩＳＳＨＧＮＰＩＬＬＮＳＳＩＰＥＤＰＳＩＫＡＤＩＮＫＷＲＩＫＬＤＮＹＳＴＱＥＬＧＫＴＩＶＹＬＤＧＳＳＱＳＣＲＦＲＥＣＮＭＧＮＬＩＣＤＡＭＩＮＮＮＬＲＨＡＤＥＴＦＷＮＨＶＳＭＣＩＬＮＧＧＧＩＲＳＰＩＤＥＲＮＮＧＴＩＴＷＥＮＬＡＡＶＬＰＦＧＧＴＦＤＬＶＱＬＫＧＳＴＬＫＫＡＦＥＨＳＶＨＲＹＧＱＳＴＧＥＦＬＱＶＧＧＩＨＶＶＹＤＬＳＲＫＰＧＤＲＶＶＫＬＤＶＬＣＴＫＣＲＶＰＳＹＤＰＬＫＭＤＥＶＹＫＶＩＬＰＮＦＬＡＮＧＧＤＧＦＱＭＩＫＤＥＬＬＲＨＤＳＧＤＱＤＩＮＶＶＳＴＹＩＳＫＭＫＶＩＹＰＡＶＥＧＲＩＫＦＳＴＧＳＨＣＨＧＳＦＳＬＩＦＬＳＬＷＡＶＩＦＶＬＹＱ（配列番号２）に由来する成熟形態を含む。
一部の実施形態では、ＣＤ７３分子は、ＧＰＩアンカーの、タンパク質分解性切断または加水分解、およびせん断応力により、内皮細胞の膜から脱落する可能性がある、ＣＤ７３の可溶性形態を含む。例えば、参考文献：Ｙｅｇｕｔｋｉｎ Ｇ、Ｂｏｄｉｎ Ｐ、Ｂｕｒｎｓｔｏｃｋ Ｇ．、「Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｓｈｅａｒ ｓｔｒｅｓｓ ｏｎ ｔｈｅ ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ ｓｏｌｕｂｌｅ ｅｃｔｏ－ｅｎｚｙｍｅｓ ＡＴＰａｓｅ ａｎｄ ５’－ｎｕｃｌｅｏｔｉｄａｓｅ ａｌｏｎｇ ｗｉｔｈ ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ＡＴＰ ｆｒｏｍ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ」、Ｂｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、２０００；１２９：９２１～６を参照されたい。ＣＤ７３の機能については、Ｃｏｌｇａｎら、「Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｏｌｅｓ ｆｏｒ ｅｃｔｏ－５’－ｎｕｃｌｅｏｔｉｄａｓｅ（ＣＤ７３）」、Ｐｕｒｉｎｅｒｇｉｃ Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ、２００６年６月、２：３５１を参照されたい。
本明細書で使用される用語としての、細胞表面分子結合剤とは、細胞上、例えば、免疫抑制性免疫細胞上、例えば、Ｔｒｅｇ上の細胞表面分子に、例えば、特異的に結合する分子、典型的に、ポリペプチドを指す。一部の実施形態では、細胞表面結合剤は、細胞表面分子（細胞表面分子のリガンド）に特異的に結合することが可能な、細胞表面分子の自然発生のリガンドに由来する、十分な配列を有する。一部の実施形態では、細胞表面結合剤は、細胞表面分子に結合する、例えば、これに特異的に結合する抗体分子である。
本明細書で使用される用語としての、ドナー特異的標的化部分とは、治療用化合物の構成要素として、治療用化合物を、レシピエントの組織と対比して、植え込まれたドナー組織へと、優先的に局在化させる部分、例えば、抗体分子を指す。治療用化合物の構成要素として、ドナー特異的標的化部分は、移植組織、例えば、ドナーに由来する臓器に対する部位特異的免疫特権をもたらす。
一部の実施形態では、ドナー特異的標的化部分は、遺伝子座に存在する対立遺伝子であって、（レシピエント）対象における遺伝子座に存在しない対立遺伝子の産物、例えば、ポリペプチド産物に結合する。一部の実施形態では、ドナー特異的標的化部分は、産物上のエピトープであって、（レシピエント）対象において存在しないエピトープに結合する。
一部の実施形態では、治療用化合物の構成要素としての、ドナー特異的標的化部分は、ドナー標的またはドナー抗原に優先的に結合する、例えば、ドナー標的に対して、対象抗原または対象組織に対するアフィニティーの、例えば、少なくとも２、４、５、１０、５０、１００、５００、１，０００、５，０００、または１０，０００倍である、結合アフィニティーを有する。一部の実施形態では、ドナー特異的標的化部分は、ドナー組織内に存在する（が、対象に存在しない）遺伝子座の対立遺伝子の産物に対して、対象に存在する、遺伝子座の対立遺伝子（この対立遺伝子は、ドナー組織内に存在しない）の産物に対する結合アフィニティーの、少なくとも２、４、５、１０、５０、１００、５００、１，０００、５，０００、または１０，０００倍である、結合アフィニティーを有する。ドナー特異的部分がその構成要素である、治療用化合物のアフィニティーは、細胞懸濁液中で測定することができる、例えば、対立遺伝子を有する懸濁細胞に対するアフィニティーは、対立遺伝子を有さない懸濁細胞に対するアフィニティーと比較される。一部の実施形態では、ドナー対立遺伝子保有細胞に対する結合アフィニティーは、１０ｎＭを下回る。一部の実施形態では、ドナー対立遺伝子保有細胞に対する結合アフィニティーは、１００ｐＭ、５０ｐＭ、または１０ｐＭを下回る。
一部の実施形態では、ドナー対立遺伝子の産物に対する特異性は、ドナー特異的標的化部分が、免疫下方調節エフェクターへとカップリングされる場合に：ｉ）例えば、臨床状況における、組織学的炎症性応答、浸潤性エフェクターＴ細胞、または臓器機能、例えば、腎臓についてのクレアチニンにより測定される、植込み組織に対する免疫による攻撃は、例えば、他の点では同様であるが、免疫下方調節エフェクターカップリングされた、ドナー特異的標的化部分を欠く移植片と比較して、実質的に低減される；および／またはｉｉ）植込み組織の外部における、または植込み組織から離れた、レシピエントにおける免疫機能は、実質的に維持される程度に十分である。一部の実施形態では、以下のうちの、１つまたはそれ以上が見られる：治療用化合物の治療レベルでは、末梢血リンパ球カウントは、実質的に影響を受けない、例えば、Ｔ細胞のレベルは、正常の２５、５０、７５、８５、９０、もしくは９５％以内であり、Ｂ細胞のレベルは、正常の２５、５０、７５、８５、９０、もしくは９５％以内であり、かつ／または顆粒球（ＰＭＮ細胞）のレベルは、正常の２５、５０、７５、８５、９０、もしくは９５％以内であるか、もしくは単球のレベルは、正常の２５、５０、７５、８５、９０、もしくは９５％以内であるか；治療用化合物の治療レベルでは、ｅｘ ｖｉｖｏにおける、非疾患関与性抗原に対する末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の増殖機能は、実質的に正常であるか、もしくは正常の７０、８０、もしくは９０％以内であるか；治療用化合物の治療レベルでは、免疫抑制と関連する、日和見感染およびがんの発生率または危険性は、正常より実質的に増大しないか；または治療用化合物の治療レベルでは、免疫抑制と関連する、日和見感染およびがんの発生率または危険性は、標準療法もしくは標的化されていない免疫抑制により見られる発生率または危険性より実質的に小さいであろう。一部の実施形態では、ドナー特異的標的化部分は、抗体分子、標的特異的結合性ポリペプチド、または標的リガンド結合性分子を含む。
本明細書で使用される用語としての、エフェクターとは、免疫応答を媒介する実体、例えば、細胞または分子、例えば、可溶性分子または細胞表面分子を指す。
本明細書で使用される、エフェクターリガンド結合性分子とは、エフェクターに、エフェクター結合性／モジュレーティング分子として用いうるのに十分な特異性で結合することが可能なエフェクターの、自然発生のカウンターリガンドに由来する、十分な配列を有するポリペプチドを指す。一部の実施形態では、エフェクターリガンド結合性分子は、エフェクターに、自然発生のカウンターリガンドの、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または９５％のアフィニティーで結合する。一部の実施形態では、エフェクターリガンド結合性分子は、エフェクターに対する、自然発生のカウンターリガンドと、少なくとも６０、７０、８０、９０、９５、９９、もしくは１００％の配列同一性、または実質的な配列同一性を有する。
本明細書で使用される、エフェクター特異的結合性ポリペプチドとは、エフェクター結合性／モジュレーティング部分として用いうるのに十分な特異性で結合することが可能なポリペプチドを指す。一部の実施形態では、特異的結合性ポリペプチドは、エフェクターリガンド結合性分子を含む。
本明細書で使用される、危険性の上昇とは、対象における障害の危険性を指し、この場合、対象は、障害もしくは障害の症状の病歴、障害もしくは障害の症状と関連するバイオマーカー、または障害もしくは障害の症状の家族歴のうちの、１つまたはそれ以上を有する。
本明細書で使用される用語としての、エフェクターまたは阻害性免疫チェックポイント分子に対する機能的抗体分子とは、多量体化治療用化合物のＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分として存在する場合に、エフェクターまたは阻害性免疫チェックポイント分子に結合し、これをアゴナイズすることが可能である抗体分子を指す。一部の実施形態では、抗エフェクター抗体分子、または抗阻害性免疫チェックポイント分子抗体分子は、エフェクターまたは阻害性免疫チェックポイント分子に、単量体として結合する（か、または治療用化合物が多量体化されずに結合する）場合、阻害性免疫チェックポイント分子の内因性カウンターリガンドの、阻害性免疫チェックポイント分子への結合をアンタゴナイズしないか、もしくは実質的にアンタゴナイズしないか、もしくは防止しないか、またはこの実質的な結合を防止しない。一部の実施形態では、抗エフェクター抗体分子、または抗阻害性免疫チェックポイント分子抗体分子は、阻害性免疫チェックポイント分子に、単量体として結合する（か、または治療用化合物が多量体化されずに結合する）場合、エフェクターまたは阻害性分子をアゴナイズしないか、または実質的にアゴナイズしない。
本明細書で使用される用語としての、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分とは、治療用化合物の一部として、細胞表面阻害性分子、例えば、阻害性免疫チェックポイント分子、例えば、ＰＤ－１に結合し、これをアゴナイズするか、または細胞内シグナル伝達分子に結合するか、もしくはこれをモジュレートする、例えば、ＦＣＲＬ、例えば、ＦＣＲＬ１～６に結合するか、または免疫機能を促進する分子に結合し、これをアンタゴナイズする、エフェクター結合性／モジュレーティング部分を指す。
本明細書で使用される用語としての、ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分とは、治療用化合物の一部として、免疫抑制性免疫細胞に結合する、エフェクター結合性／モジュレーティング部分を指す。一部の実施形態では、ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分は、結合性部位における、免疫抑制性免疫細胞の数または濃度を増大させる。
本明細書で使用される用語としての、ＩＣＳＭ結合性／モジュレーティング部分とは、刺激性結合対、例えば、共刺激性結合対の免疫刺激性効果をアンタゴナイズする、エフェクター結合性／モジュレーティング部分を指す。本明細書で使用される用語としての、刺激性結合対または共刺激性結合対は、２つのメンバー、１）免疫細胞の表面上の分子；および２）さらなる免疫細胞分子の場合もあり、非免疫細胞分子の場合もある、この細胞分子に対する結合パートナーを含む。通常、一方のメンバーが、他方のメンバーに結合し、他方のメンバーの要求が満たされたとすると、免疫細胞表面上のメンバーは、免疫細胞、例えば、共刺激分子を刺激し、免疫応答が促進される。共刺激分子および共刺激分子カウンター構造の両方が、免疫細胞上で発現される状況では、両方の細胞の、両方向的活性化が生じる可能性がある。ある実施形態では、ＩＣＳＭ結合性／モジュレーティング部分は、結合対のうちの、免疫細胞により発現されたメンバーに結合し、これをアンタゴナイズする。例えば、ＩＣＳＭ結合性／モジュレーティング部分は、ＯＸ４０に結合し、これをアンタゴナイズする。別の実施形態では、ＩＣＳＭ結合性／モジュレーティング部分は、それ自体が、免疫細胞により発現されたメンバーに結合する、結合対のメンバーに結合し、これをアンタゴナイズする、例えば、ＩＣＳＭ結合性／モジュレーティング部分は、ＯＸ４０Ｌに結合し、これをアンタゴナイズする。いずれの場合にも、免疫細胞の刺激または共刺激の阻害が達成される。ある実施形態では、ＩＣＳＭ結合性／モジュレーティング部分は、結合性部位における、免疫刺激性免疫細胞の数または活性を減少させる。
本明細書で使用される用語としての、ＩＬ－２ムテイン分子とは、ＣＤ２５（ＩＬ－２Ｒアルファ鎖）に、高アフィニティーで結合し、他のＩＬ－２Ｒシグナル伝達成分である、ＣＤ１２２（ＩＬ－２Ｒベータ）およびＣＤ１３２（ＩＬ－２Ｒガンマ）に、低アフィニティーで結合する、ＩＬ－２変異体を指す。このようなＩＬ－２ムテイン分子は、Ｔｒｅｇ細胞を、優先的に活性化させる。複数の実施形態では、単独で、または治療用化合物の構成要素として、ＩＬ－２ムテインは、Ｔｒｅｇを、細胞傷害性Ｔ細胞またはエフェクターＴ細胞の、少なくとも２、５、１０、または１００倍活性化させる。例示的なＩＬ－２ムテイン分子については、ＷＯ２０１００８５４９５、ＷＯ２０１６／１６４９３７、ＵＳ２０１４／０２８６８９８Ａ１、ＷＯ２０１４１５３１１１Ａ２、ＷＯ２０１０／０８５４９５、ＷＯ２０１６０１４４２８Ａ２、ＷＯ２０１６０２５３８５Ａ１、およびＵＳ２００６０２６９５１５において記載されている。さらなるドメイン、例えば、Ｆｃドメイン、または半減期を延長するための他のドメインを含む、これらの参考文献において開示されるムテインは、このようなさらなるドメインを伴わない、本明細書で記載される治療用化合物および方法でも使用することができる。別の実施形態では、ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分は、別のポリペプチド、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏにおける半減期を延長するポリペプチド、例えば、免疫グロブリン定常領域へとカップリングされた、例えば、融合された、ＩＬ－２ムテインもしくはこの活性断片、またはこれらの多量体もしくは二量体、例えば、ＡＭＧ５９２を含む。ある実施形態では、治療用化合物は、ＡＭＧ５９２のＩＬ－２部分を含む。ある実施形態では、治療用化合物は、ＡＭＧ５９２のＩＬ－２部分を含むが、免疫グロブリン部分を含まない。一部の実施形態では、ムテインは、Ｆｃ領域を含まない。一部のＩＬ－２ムテインについて、そのような領域は、ムテインの半減期を延長することが示されているため、ムテインは、Ｆｃ領域を含有するように操作される。一部の実施形態では、半減期の延長は、本明細書で記載され、実施される方法のために必要ではない。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインと融合されるＦｃ領域は、Ｎ２９７Ａのようであるがこれらに限定されない、Ｎ２９７突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインと融合されるＦｃ領域は、Ｎ２９７Ａのようであるがこれらに限定されない、Ｎ２９７突然変異を含まない。
本明細書で使用される用語としての、「阻害性免疫チェックポイント分子のリガンド分子」とは、多量体化治療用化合物のＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分として存在する場合に、そのコグネイト阻害性免疫チェックポイント分子、例えば、再度、ＰＤ－Ｌ１分子の場合に、ＰＤ－１に結合し、これをアゴナイズすることが可能である、十分な阻害性免疫チェックポイント分子のリガンド配列、例えば、ＰＤ－Ｌ１分子の場合に、十分なＰＤ－Ｌ１配列を有するポリペプチドを指す。
一部の実施形態では、阻害性免疫チェックポイント分子のリガンド分子、例えば、ＰＤ－Ｌ１分子は、そのコグネイトリガンド、例えば、ＰＤ－１に、単量体として結合する（か、または治療用化合物が多量体化されずに結合する）場合、阻害性免疫チェックポイント分子の内因性リガンドの、阻害性免疫チェックポイント分子への結合をアンタゴナイズしないか、もしくは実質的にアンタゴナイズしないか、もしくは防止しないか、またはこの実質的な結合を防止しない。例えば、ＰＤ－Ｌ１分子の場合、ＰＤ－Ｌ１分子は、内因性ＰＤ－Ｌ１の、ＰＤ－１への結合をアンタゴナイズしない。
一部の実施形態では、阻害性免疫チェックポイント分子のリガンドは、そのコグネイト阻害性免疫チェックポイント分子に、単量体として結合する場合、阻害性免疫チェックポイント分子をアゴナイズしないか、または実質的にアゴナイズしない。例を目的として述べると、例えば、ＰＤ－Ｌ１分子は、ＰＤ－１に結合する場合、ＰＤ－１をアゴナイズしないか、または実質的にアゴナイズしない。
一部の実施形態では、阻害性免疫チェックポイント分子のリガンド分子は、自然発生の阻害性免疫チェックポイント分子のリガンドと、少なくとも６０、７０、８０、９０、９５、９９、もしくは１００％の配列同一性、または実質的な配列同一性を有する。
例示的な、阻害性免疫チェックポイント分子のリガンド分子は：阻害性免疫チェックポイント分子である、ＰＤ－１に結合し、複数の実施形態では、自然発生のＰＤ－Ｌ１と、少なくとも６０、７０、８０、９０、９５、９９、もしくは１００％の配列同一性、または実質的な配列同一性を有するＰＤ－Ｌ１分子、例えば、ＭＲＩＦＡＶＦＩＦＭＴＹＷＨＬＬＮＡＦＴＶＴＶＰＫＤＬＹＶＶＥＹＧＳＮＭＴＩＥＣＫＦＰＶＥＫＱＬＤＬＡＡＬＩＶＹＷＥＭＥＤＫＮＩＩＱＦＶＨＧＥＥＤＬＫＶＱＨＳＳＹＲＱＲＡＲＬＬＫＤＱＬＳＬＧＮＡＡＬＱＩＴＤＶＫＬＱＤＡＧＶＹＲＣＭＩＳＹＧＧＡＤＹＫＲＩＴＶＫＶＮＡＰＹＮＫＩＮＱＲＩＬＶＶＤＰＶＴＳＥＨＥＬＴＣＱＡＥＧＹＰＫＡＥＶＩＷＴＳＳＤＨＱＶＬＳＧＫＴＴＴＴＮＳＫＲＥＥＫＬＦＮＶＴＳＴＬＲＩＮＴＴＴＮＥＩＦＹＣＴＦＲＲＬＤＰＥＥＮＨＴＡＥＬＶＩＰＥＬＰＬＡＨＰＰＮＥＲＴＨＬＶＩＬＧＡＩＬＬＣＬＧＶＡＬＴＦＩＦＲＬＲＫＧＲＭＭＤＶＫＫＣＧＩＱＤＴＮＳＫＫＱＳＤＴＨＬＥＥＴ（配列番号３）の配列、またはこの活性断片を含むＰＤ－Ｌ１分子を含み；一部の実施形態では、活性断片は、ＰＤ－Ｌ１配列の、残基１９～２９０を含み；阻害性免疫チェックポイント分子である、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＬＩＬＲＢ１、およびＬＩＬＲＢ２のうちのいずれかに結合し、複数の実施形態では、自然発生のＨＬＡ－Ｇと、少なくとも６０、７０、８０、９０、９５、９９、もしくは１００％の配列同一性、または実質的な配列同一性を有するＨＬＡ－Ｇ分子を含む。例示的なＨＬＡ－Ｇ配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ Ｐ１７６９３．１の、ＲｅｃＮａｍｅ：Ｆｕｌｌ＝ＨＬＡクラスＩ組織適合性抗原、アルファ鎖Ｇ；ＡｌｔＮａｍｅ：Ｆｕｌｌ＝ＨＬＡ Ｇ抗原；ＡｌｔＮａｍｅ：Ｆｕｌｌ＝ＭＨＣクラスＩ抗原Ｇ；Ｆｌａｇｓ：前駆体における配列、または配列である、ＭＶＶＭＡＰＲＴＬＦＬＬＬＳＧＡＬＴＬＴＥＴＷＡＧＳＨＳＭＲＹＦＳＡＡＶＳＲＰＧＲＧＥＰＲＦＩＡＭＧＹＶＤＤＴＱＦＶＲＦＤＳＤＳＡＣＰＲＭＥＰＲＡＰＷＶＥＱＥＧＰＥＹＷＥＥＥＴＲＮＴＫＡＨＡＱＴＤＲＭＮＬＱＴＬＲＧＹＹＮＱＳＥＡＳＳＨＴＬＱＷＭＩＧＣＤＬＧＳＤＧＲＬＬＲＧＹＥＱＹＡＹＤＧＫＤＹＬＡＬＮＥＤＬＲＳＷＴＡＡＤＴＡＡＱＩＳＫＲＫＣＥＡＡＮＶＡＥＱＲＲＡＹＬＥＧＴＣＶＥＷＬＨＲＹＬＥＮＧＫＥＭＬＱＲＡＤＰＰＫＴＨＶＴＨＨＰＶＦＤＹＥＡＴＬＲＣＷＡＬＧＦＹＰＡＥＩＩＬＴＷＱＲＤＧＥＤＱＴＱＤＶＥＬＶＥＴＲＰＡＧＤＧＴＦＱＫＷＡＡＶＶＶＰＳＧＥＥＱＲＹＴＣＨＶＱＨＥＧＬＰＥＰＬＭＬＲＷＫＱＳＳＬＰＴＩＰＩＭＧＩＶＡ（配列番号４）において見出される成熟形態を含む。
本明細書で使用される用語としての、阻害性分子のカウンターリガンド分子とは、多量体化治療用化合物のＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分として存在する場合に、コグネイト阻害性分子に結合し、これをアゴナイズすることが可能であるように、十分な阻害性分子カウンターリガンド配列を有するポリペプチドを指す。一部の実施形態では、阻害性分子のカウンターリガンド分子は、阻害性分子に、単量体として結合する（か、または治療用化合物が多量体化されずに結合する）場合、阻害性分子の内因性カウンターリガンドの、阻害性分子への結合をアンタゴナイズしないか、もしくは実質的にアンタゴナイズしないか、もしくは防止しないか、またはこの実質的な結合を防止しない。一部の実施形態では、阻害性分子のカウンターリガンド分子は、阻害性分子に、単量体として結合する（か、または治療用化合物が多量体化されずに結合する）場合、阻害性分子をアゴナイズしないか、または実質的にアゴナイズしない。
本明細書で使用される、配列同一性、同一性百分率、および関連の用語は、２つの配列、例えば、２つの核酸配列、または２つのアミノ酸配列もしくはポリペプチド配列の類縁性を指す。本明細書の、アミノ酸の文脈では、「実質的に同一」という用語は、第１のアミノ酸配列と、第２のアミノ酸配列とが、共通の構造ドメイン、および／または共通の機能的活性を有することが可能であるよう、ｉ）第２のアミノ酸配列内の、アライメントされたアミノ酸残基と同一であるか、またはｉｉ）これらの保存的置換である、十分であるか、または最小限の数のアミノ酸残基を含有する第１のアミノ酸配列を指すように使用される。例えば、参照配列、例えば、本明細書で提供される配列に対する少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有する、共通の構造ドメインを含有するアミノ酸配列である。
本明細書の、ヌクレオチドの文脈では、「実質的に同一」という用語は、第１のヌクレオチド配列と、第２のヌクレオチド配列とが、共通の機能的活性を有するポリペプチドをコードするか、または共通の構造的ポリペプチドドメイン、もしくは共通の機能的ポリペプチド活性をコードするよう、第２の核酸配列内の、アライメントされたヌクレオチドと同一である、十分であるか、または最小限の数のヌクレオチドを含有する第１の核酸配列を指すように使用される。例えば、参照配列、例えば、本明細書で提供される配列に対する少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を有するヌクレオチド配列である。
「機能的変異体」という用語は、自然発生の配列と、実質的に同一なアミノ酸配列を有するか、または実質的に同一なヌクレオチド配列によりコードされ、自然発生の配列の、１つまたはそれ以上の活性を有することが可能なポリペプチドを指す。
配列間の相同性または配列同一性（本明細書では、用語は、互換的に使用される）の計算は、以下の通りに実施される。
２つのアミノ酸配列、または２つの核酸配列の同一性パーセントを決定するために、配列は、最適の比較を目的としてアライメントされる（例えば、最適のアライメントのために、第１のアミノ酸配列もしくは核酸配列、および第２のアミノ酸もしくは核酸配列の、一方または両方に、ギャップを導入し、非相同配列を、比較目的で、棄却することができる）。好ましい実施形態では、比較を目的としてアライメントされる参照配列の長さは、参照配列の長さの、少なくとも３０％、好ましくは、少なくとも４０％、より好ましくは、少なくとも５０％、６０％であり、なおより好ましくは、少なくとも７０％、８０％、９０％、１００％である。次いで、対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置における、アミノ酸残基またはヌクレオチドが比較される。第１の配列内の位置が、対応する、第２の配列内の位置と、同じアミノ酸残基またはヌクレオチドにより占有される場合、分子は、この位置において同一である（本明細書で使用される、アミノ酸または核酸の「同一性」とは、アミノ酸または核酸の「相同性」と同義である）。
２つの配列の間の同一性パーセントとは、２つの配列の、最適のアライメントのために導入される必要があるギャップの数、および各ギャップの長さを考慮するときに、配列により共有される、同一な位置の数の関数である。
２つの配列の間の配列の比較、および同一性パーセントの決定は、数学的アルゴリズムを使用して達することができる。好ましい実施形態では、２つのアミノ酸配列の間の同一性パーセントは、Ｂｌｏｓｕｍ ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックス、ならびに１６、１４、１２、１０、８、６、または４のギャップ重み、および１、２、３、４、５、または６の長さ重みを使用する、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍにおいて入手可能である）内のＧＡＰプログラムへと組み込まれた、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（（１９７０）、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、４８：４４４～４５３）によるアルゴリズムを使用して決定される。さらに別の好ましい実施形態では、２つのヌクレオチド配列の間の同一性パーセントは、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックス、ならびに４０、５０、６０、７０、または８０のギャップ重み、および１、２、３、４、５、または６の長さ重みを使用する、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍにおいて入手可能である）内のＧＡＰプログラムを使用して決定される。特に好ましいパラメータのセット（かつ、そうでないことが指定されない限りにおいて、使用すべきパラメータのセット）は、ギャップペナルティーを１２とし、ギャップ伸長ペナルティーを４とし、フレームシフトギャップペナルティーを５とする、Ｂｌｏｓｕｍ ６２評定マトリックスである。
２つのアミノ酸配列またはヌクレオチド配列の間の同一性パーセントは、ギャップ長ペナルティーを１２とし、ギャップペナルティーを４とする、ＰＡＭ１２０重み付け残基表を使用する、ＡＬＩＧＮプログラム（ｖｅｒｓｉｏｎ ２．０）へと組み込まれた、Ｅ．ＭｅｙｅｒｓおよびＷ．Ｍｉｌｌｅｒ（（１９８９）、ＣＡＢＩＯＳ、４：１１～１７）によるアルゴリズムを使用して決定することができる。
本明細書で記載される核酸配列およびタンパク質配列は、公開されているデータベースに対する検索を実施して、例えば、他のファミリーメンバーまたは類縁の配列を同定するための「クエリー配列」としても使用することができる。Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０）、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２１５：４０３～１０による、ＮＢＬＡＳＴプログラムおよびＸＢＬＡＳＴプログラム（ｖｅｒｓｉｏｎ ２．０）を使用して、このような検索を実施することができる。スコア＝１００、ワード長＝１２とするＮＢＬＡＳＴプログラムにより、ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索を実施して、本明細書で提供される、任意の核酸配列と相同なヌクレオチド配列をうることができる。スコア＝５０、ワード長＝３とするＸＢＬＡＳＴプログラムにより、ＢＬＡＳＴタンパク質検索を実施して、本明細書で提供されるタンパク質分子と相同なアミノ酸配列をうることができる。比較を目的として、ギャップ処理されたアライメントをうるためには、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９７）、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、２５：３３８９～３４０２において記載されている、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴを利用することができる。ＢＬＡＳＴプログラムおよびＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトのパラメータを使用することができる。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖを参照されたい。
本明細書で使用される、「低度の厳密性、中程度の厳密性、高度の厳密性、または極めて高度の厳密性の条件下でハイブリダイズする」という用語は、ハイブリダイゼーションおよび洗浄のための条件について記載する。ハイブリダイゼーション反応を実施するための指針は、参照により本明細書に組み入れられる、「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、Ｎ．Ｙ．、６．３．１～６．３．６、１９８９において見出すことができる。この参考文献には、水性法および非水性法が記載されており、いずれの方法も使用することができる。本明細書において言及される、具体的なハイブリダイゼーション条件は、以下の通り：１）低度の厳密性のハイブリダイゼーション条件：約４５℃における、６倍濃度の塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）に続く、０．２倍濃度のＳＳＣ、０．１％のＳＤＳ中、少なくとも５０℃における、２回にわたる洗浄（低度の厳密性条件では、洗浄温度を、５５℃へと上昇させることができる）；２）中程度の厳密性のハイブリダイゼーション条件：約４５℃における、６倍濃度のＳＳＣに続く、０．２倍濃度のＳＳＣ、０．１％のＳＤＳ中、６０℃における、１回またはそれ以上の洗浄；３）高度の厳密性のハイブリダイゼーション条件：約４５℃における、６倍濃度のＳＳＣに続く、０．２倍濃度のＳＳＣ、０．１％のＳＤＳ中、６５℃における、１回またはそれ以上の洗浄であり；好ましくは、４）極めて高度の厳密性のハイブリダイゼーション条件：６５℃における、０．５Ｍのリン酸ナトリウム、７％のＳＤＳに続く、０．２倍濃度のＳＳＣ、１％のＳＤＳ中、６５℃における、１回またはそれ以上の洗浄である。極めて高度の厳密性条件（４）は、好ましい条件であり、そうでないことが指定されない限りにおいて、使用すべき条件である。
本実施形態の分子および化合物は、さらなる保存的アミノ酸置換または非必須アミノ酸置換を有する場合があり、これらは、それらの機能に対して、実質的な影響を及ぼさないことが理解される。
「アミノ酸」という用語は、天然であれ、合成であれ、アミノ官能基および酸官能基の両方を含み、自然発生のアミノ酸のポリマー内に含まれることが可能な、全ての分子を包摂することが意図される。例示的なアミノ酸は、自然発生のアミノ酸；これらの類似体、誘導体、および同族体；変異体側鎖を有するアミノ酸類似体；ならびに前出のうちのいずれかの、全ての立体異性体を含む。本明細書で使用される「アミノ酸」という用語は、Ｄ－光学異性体およびＬ－光学異性体の両方、ならびにペプチド模倣体を含む。
「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置きかえられる置換である。当技術分野では、類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーが規定されている。これらのファミリーは、塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非帯電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ－分枝側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）、および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を伴うアミノ酸を含む。ここに示した、一体にグループ化されたアミノ酸は互いに置換され、保存的置換とみなすことができる。
一部の実施形態では、分子は、ＣＤ３９分子、ＣＤ７３分子、細胞表面分子結合剤、ドナー特異的標的化部分エフェクターリガンド結合分子、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分、抑制性免疫チェックポイント分子リガンド分子、抑制性分子カウンターリガンド分子、ＳＭ結合性／モジュレーティング部分、またはＩＣＳＭ結合性／モジュレーティング部分を含む。
本明細書で使用される用語としての、ＳＭ結合性／モジュレーティング部分とは、治療用化合物の一部として、例えば、標的の近傍において、標的の免疫系による攻撃を阻害または最小化する物質を提供することにより、免疫抑制性の局所微小環境を促進する、エフェクター結合性／モジュレーティング部分を指す。一部の実施形態では、ＳＭ結合性／モジュレーティング部分は、標的の免疫系による攻撃を阻害または最小化する分子を含むか、またはこれに結合する。一部の実施形態では、治療用化合物は、免疫抑制機能を有する可溶性物質、例えば、内因性物質または外因性物質に結合し、これを蓄積するＳＭ結合性／モジュレーティング部分を含む。一部の実施形態では、治療用化合物は、免疫による攻撃を促進する物質、例えば、可溶性物質、典型的に、内因性可溶性物質に結合し、これを阻害、封鎖、分解するか、または他の形で中和する、ＳＭ結合性／モジュレーティング部分を含む。一部の実施形態では、治療用化合物は、免疫抑制物質、例えば、免疫抑制性であることが公知のタンパク質の断片を含む、ＳＭ結合性／モジュレーティング部分を含む。例を目的として述べると、免疫エフェクター細胞機能を促進する成分、例えば、ＡＴＰまたはＡＭＰを枯渇させる物質、例えば、ＣＤ３９分子またはＣＤ７３分子に結合するか、またはこれらを含む、エフェクター分子結合性部分である。
本明細書で使用される用語としての、特異的標的化部分とは、ドナー特異的標的化部分、または組織特異的標的化部分を指す。
本明細書で使用される用語としての、対象とは、哺乳動物対象、例えば、ヒト対象を指す。一部の実施形態では、対象は、非ヒト哺乳動物、例えば、ウマ、イヌ、ネコ、ウシ、ヤギ、またはブタである。
本明細書で使用される、標的リガンド結合性分子とは、標的組織（例えば、ドナー組織または対象の標的組織）上の標的リガンドに、特異的標的化部分として用いうるのに十分な特異性で結合することが可能な標的リガンドの、自然発生のカウンターリガンドに由来する、十分な配列を有するポリペプチドを指す。一部の実施形態では、標的リガンド結合性分子は、標的組織または標的細胞に、自然発生のカウンターリガンドの、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、または９５％のアフィニティーで結合する。一部の実施形態では、標的リガンド結合性分子は、標的リガンドに対する、自然発生のカウンターリガンドと、少なくとも６０、７０、８０、９０、９５、９９、もしくは１００％の配列同一性、または実質的な配列同一性を有する。
本明細書で使用される用語としての、標的部位とは、標的化部分により結合される実体、例えば、エピトープを含有する部位を指す。一部の実施形態では、標的部位は、免疫特権が確立された部位である。
本明細書で使用される用語としての、組織特異的標的化部分とは、治療用分子の構成要素として、治療用分子を、対象の標的組織に、対象の他の組織と対比して、優先的に局在化させる部分、例えば、抗体分子を指す。治療用化合物の構成要素として、組織特異的標的化部分は、標的組織、例えば、自己免疫による攻撃を受けるか、またはこの危険性がある、臓器または組織のための部位特異的免疫特権をもたらす。一部の実施形態では、組織特異的標的化部分は、標的組織の外部に存在しないか、または治療用分子の治療濃度では、許容されないレベルの免疫抑制が存在しないか、または実質的に存在しない程度に、十分に低レベルで存在する産物、例えば、ポリペプチド産物に結合する。一部の実施形態では、組織特異的標的化部分は、標的部位の外部に存在しないか、または標的部位の外部に実質的に存在しないエピトープに結合する。
一部の実施形態では、治療用化合物の構成要素としての、組織特異的標的化部分は、標的組織または標的組織抗原に優先的に結合する、例えば、標的組織または標的抗原に対して、標的組織の外部に存在する、非標的組織または非標的抗原に対する結合アフィニティーの、例えば、少なくとも２、４、５、１０、５０、１００、５００、１，０００、５，０００、または１０，０００倍である、結合アフィニティーを有する。組織特異的部分がその構成要素である、治療用化合物のアフィニティーは、細胞懸濁液中で測定することができる、例えば、標的抗原を有する懸濁細胞に対するアフィニティーは、標的抗原を有さない懸濁細胞に対するアフィニティーと比較される。一部の実施形態では、標的抗原保有細胞に対する結合アフィニティーは、１０ｎＭを下回る。
一部の実施形態では、標的抗原保有細胞に対する結合アフィニティーは、１００ｐＭ、５０ｐＭ、または１０ｐＭを下回る。一部の実施形態では、標的抗原に対する特異性は、組織特異的標的化部分が、免疫下方調節エフェクターへとカップリングされる場合に：ｉ）例えば、臨床状況における、組織学的炎症性応答、浸潤性エフェクターＴ細胞、または臓器機能、例えば、腎臓についてのクレアチニンにより測定される、標的組織に対する免疫による攻撃は、例えば、他の点では同様であるが、免疫下方調節エフェクターカップリングされた、組織特異的標的化部分を欠く移植片と比較して、実質的に低減される；および／またはｉｉ）標的組織の外部における、または標的組織から離れた、レシピエントにおける免疫機能は、実質的に維持される程度に十分である。
一部の実施形態では、以下のうちの、１つまたはそれ以上が見られる：治療用化合物の治療レベルでは、末梢血リンパ球カウントは、実質的に影響を受けない、例えば、Ｔ細胞のレベルは、正常の２５、５０、７５、８５、９０、もしくは９５％以内であり、Ｂ細胞のレベルは、正常の２５、５０、７５、８５、９０、もしくは９５％以内であり、かつ／または顆粒球（ＰＭＮ細胞）のレベルは、正常の２５、５０、７５、８５、９０、もしくは９５％以内であるか、もしくは単球のレベルは、正常の２５、５０、７５、８５、９０、もしくは９５％以内であるか；治療用化合物の治療レベルでは、ｅｘ ｖｉｖｏにおける、非疾患関与性抗原に対するＰＢＭＣの増殖機能は、実質的に正常であるか、もしくは正常の７０、８０、もしくは９０％以内であるか；治療用化合物の治療レベルでは、免疫抑制と関連する、日和見感染およびがんの発生率または危険性は、正常より実質的に増大しないか；または治療用化合物の治療レベルでは、免疫抑制と関連する、日和見感染およびがんの発生率または危険性は、標準療法もしくは標的化されていない免疫抑制により見られる発生率または危険性より実質的に小さいであろう。一部の実施形態では、組織特異的標的化部分は、抗体分子を含む。一部の実施形態では、ドナー特異的標的化部分は、抗体分子、標的特異的結合性ポリペプチド、または標的リガンド結合性分子を含む。一部の実施形態では、組織特異的標的化部分は、もっぱら標的組織上に、または実質的にもっぱら標的組織上に存在するか、または標的組織上で発現される、産物または産物上の部位に結合する。
ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分：阻害性受容体に結合する、エフェクター結合性／モジュレーティング部分
本明細書で記載される方法および化合物は、免疫細胞の表面上の阻害性受容体に直接結合し、これを活性化させて、例えば、免疫細胞が、免疫による攻撃を媒介する能力を低減するか、または消失させるか、または実質的に消失させる、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分を含む、エフェクター結合性／モジュレーティング部分を有する治療用化合物をもたらす。ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分の、標的化実体とのカップリングは、免疫細胞応答の、例えば、標的化部分に対する結合性部位を有する場所へと、実質的に制約された、部位特異的下方調節または局所的下方調節を促進する。したがって、正常な全身の免疫機能は、実質的に保持される。一部の実施形態では、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分は、阻害性免疫チェックポイント分子のカウンターリガンド分子、例えば、阻害性免疫チェックポイント分子の天然リガンド、または天然リガンドの断片（例えば、ＰＤ－Ｌ１またはＨＬＡ－Ｇ）を含む。一部の実施形態では、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分は、機能的抗体分子、例えば、阻害性免疫チェックポイント分子を係合する、ｓｃＦｖ結合性ドメインを含む、機能的抗体分子を含む。
一部の実施形態では、例えば、機能的抗体分子、または阻害性免疫チェックポイント分子のリガンド分子を含む、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分は、阻害性受容体に結合するが、阻害性受容体の天然リガンドの、阻害性受容体への結合を防止しない。ある実施形態では、標的化部分は、例えば、ｓｃＦｖドメインを含む、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分へとカップリングされる、例えば、融合され、阻害性受容体が結合しても、溶液中（例えば、血液中またはリンパ中）では、（かつ、おそらくは、単量体フォーマットでは）、治療用分子は：ｉ）免疫細胞上の阻害性受容体を、アゴナイズできないか、または実質的にアゴナイズできず（例えば、完全なアゴナイズ分子により見られるレベルの、３０、２０、１５、１０、または５％未満のレベルでアゴナイズする）；かつ／またはｉｉ）免疫細胞上の阻害性受容体を、アンタゴナイズできないか、または実質的にアンタゴナイズできない（例えば、完全なアンタゴナイズ分子により見られるレベルの、３０、２０、１５、１０、または５％未満のレベルでアンタゴナイズする）ように構成されたフォーマットが使用される。候補分子は、例えば、ＭＬＲ（混合リンパ球反応）ベースのアッセイを使用して、標的が発現されない、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞ベースのアッセイにおいて、免疫応答を増大させるか、または減少させる、その能力により、これを、アゴナイズするか、またはアゴナイズしない、その能力について査定することができる。
一部の実施形態では、候補ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分は、全身性免疫抑制および全身性免疫活性化を、低減するか、完全に、もしくは実質的に消失させることができる。一部の実施形態では、治療用化合物の標的化ドメインは、標的に結合されると、免疫保護を所望する組織の表面上に、治療用化合物を、クラスター化または多量体化するであろう。一部の実施形態では、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分、例えば、ｓｃＦｖドメインを含む、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分は、アゴニスト性シグナルおよび免疫抑制シグナル、または実質的なレベルの、このようなシグナルを、局所免疫細胞へと送達することが可能となるように、クラスター化状態または多量体状態を要求する。この種の治療剤は、例えば、局所免疫抑制をもたらす一方で、全身性免疫系は、攪乱されないか、または実質的に攪乱されないままに放置することが可能である。すなわち、免疫抑制は、全身性であり、特定の領域または組織型へと局在化されない場合と対比して、抑制が必要とされる場所に局在化される。
一部の実施形態では、標的、例えば、標的臓器、標的組織、または標的細胞型に結合すると、治療用化合物は、標的、例えば、標的臓器、標的組織、または標的細胞型をコーティングする。循環リンパ球が、標的に係合し、これを破壊しようとすると、この治療剤は、治療用化合物蓄積部位だけに、または、より大きな程度で、治療用化合物蓄積部位に、「オフ」シグナルをもたらすであろう。
候補治療用化合物は、例えば、ＥＬＩＳＡ、細胞ベースのアッセイ、または表面プラズモン共鳴により、その標的に結合する、例えば、特異的に結合する能力について査定することができる。この特性は、一般に、それが、免疫特権の部位特異的性格および局所的性格を媒介するときに最大化されるはずである。候補治療用化合物は、例えば、細胞ベースの活性アッセイにより、標的に結合されると、免疫細胞を下方調節する能力について査定することができる。この特性は、一般に、それが、免疫特権の部位特異的性格および局所的性格を媒介するときに最大化されるはずである。単量体（または非結合）形態にある候補治療用化合物によりもたらされる、下方調節のレベルは、例えば、細胞ベースの活性アッセイにより査定することができる。この特性は、一般に、免疫系の、全身性の下方調節を媒介するときに最小化されるはずである。単量体（または非結合）形態にある候補治療用化合物によりもたらされる、細胞表面阻害性分子、例えば、阻害性免疫チェックポイント分子のアンタゴニズムのレベルは、例えば、細胞ベースの活性アッセイにより査定することができる。この特性は、一般に、免疫系の、全身性の望ましくない活性化を媒介するときに最小化されるはずである。一般に、特性は、阻害性免疫チェックポイント分子の、許容されないレベルの、非部位特異的アゴニズムまたはアンタゴニズムを伴わずに、十分に頑健な部位特異的免疫特権をもたらすように、選択され、均衡されるものとする。
例示的な阻害性免疫チェックポイント分子
例示的な阻害性分子（例えば、阻害性免疫チェックポイント分子）（それらのカウンターリガンドと併せた）は、表１に見出すことができる。この表は、例示的ＩＣＩＭ結合性部分が結合することのできる分子を列挙する。
Figure 2022544990000002
ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１経路
プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１と称されることが多い）とは、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する、細胞表面受容体である。ＰＤ－１は、Ｔ細胞、およびＢ細胞、骨髄細胞、樹状細胞、単球、調節性Ｔ細胞、ｉＮＫ Ｔ細胞を含むがこれらに限定されない、他の細胞型において発現される。ＰＤ－１は、２つのリガンドである、ＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２に結合し、阻害性免疫チェックポイント分子である。コグネイトリガンドである、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２の係合は、抗原がロードされたＭＨＣの、Ｔ細胞上のＴ細胞受容体との係合の文脈では、Ｔ細胞の活性化および機能を最小化または防止する。ＰＤ－１の阻害効果は、リンパ節の抗原特異的Ｔ細胞内の、アポトーシスの促進（プログラム細胞死）と、調節性Ｔ細胞（抑制性Ｔ細胞）内の、アポトーシスの低減とを含みうる。
一部の実施形態では、治療用化合物は、ＰＤ－１による阻害をアゴナイズする、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分を含む。ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分は、例えば、ＰＤ－１のリガンドの断片（例えば、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２の断片）を含む、阻害性分子カウンターリガンド分子、または別の部分、例えば、ＰＤ－１に結合するｓｃＦｖドメインを含む、例えば、機能的抗体分子を含みうる。
一部の実施形態では、治療用化合物は、対象に存在しないドナー抗原、または対象に実質的に低レベルで存在するドナー抗原、例えば、表２によるドナー抗原に優先的に結合し、対象におけるドナー移植片組織へと局在化される、標的化部分を含む。一部の実施形態では、治療用化合物は、他の組織に結合しないか、または実質的に結合しない。一部の実施形態では、治療用化合物は、ＨＬＡ－Ａ２に特異的であり、ドナー同種移植組織に特異的に結合するが、宿主組織に結合しないか、または実質的に結合しない、標的化部分を含みうる。一部の実施形態では、治療用化合物は、治療用化合物が、例えば、標的に結合されると、ＰＤ－１を活性化させるように、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分、例えば、ＰＤ－１のリガンドの断片（例えば、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２の断片）を含む、例えば、阻害性分子カウンターリガンド分子、または別の部分、例えば、ＰＤ－１に結合するｓｃＦｖドメインを含む、例えば、機能的抗体分子を含む。治療用化合物は、同種移植物を標的化し、同種移植物に、局所免疫特権をもたらす。
一部の実施形態では、治療用化合物は、表３の抗原に優先的に結合し、対象、例えば、自己免疫障害、例えば、表３の自己免疫障害を有する対象における標的へと局在化される、標的化部分を含む。一部の実施形態では、治療用化合物は、他の組織に結合しないか、または実質的に結合しない。一部の実施形態では、治療用化合物は、治療用化合物が、例えば、標的に結合されると、ＰＤ－１を活性化させるように、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分、例えば、ＰＤ－１のリガンドの断片（例えば、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２の断片）を含む、例えば、阻害性分子カウンターリガンド分子、または別の部分、例えば、ＰＤ－１に結合するｓｃＦｖドメインを含む、例えば、機能的抗体分子を含む。治療用化合物は、自己免疫による攻撃下にある組織を標的化し、組織に、局所免疫特権をもたらす。
ＰＤ－Ｌ１およびＰＤＬ２、またはこれらに由来するポリペプチドは、ＩＣＩＭ結合性部分の候補物質をもたらしうる。しかし、例えば、治療用化合物が、血液中またはリンパ中を循環する、単量体形態にある場合、この分子は、ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－１経路をアンタゴナイズする、所望されない影響を及ぼす恐れがあり、標的、例えば、標的臓器の表面上で、クラスター化されるか、または多量体化された場合に限り、ＰＤ－１経路をアゴナイズすることができる。一部の実施形態では、治療用化合物は、可溶性形態では、ＰＤ－１経路に対して、不活性であるか、または実質的に不活性であるが、組織の表面上で（標的化部分により）、多量体化されると、阻害シグナルをアゴナイズし、駆動する、機能的抗体分子、例えば、ｓｃＦｖドメインを含む、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分を含む。
ＨＬＡ－Ｇ：ＫＩＲ２ＤＬ４／ＬＩＬＲＢ１／ＬＩＬＲＢ２経路
ＫＩＲ２ＤＬ４、ＬＩＬＲＢ１、およびＬＩＬＲＢ２は、Ｔ細胞上、ＮＫ細胞上、および骨髄細胞上で見出される阻害性分子である。ＨＬＡ－Ｇは、各々に対するカウンターリガンドである。
ＫＩＲ２ＤＬ４はまた、ＣＤ１５８Ｄ、Ｇ９Ｐ、ＫＩＲ－１０３ＡＳ、ＫＩＲ１０３、ＫＩＲ１０３ＡＳ、ＫＩＲ、ＫＩＲ－２ＤＬ４の、キラー細胞免疫グロブリン様受容体、および２つのＩｇドメイン、および長い細胞質テール４としても公知である。ＬＩＬＲＢ１はまた、ＬＩＬＲＢ１、ＣＤ８５Ｊ、ＩＬＴ－２、ＩＬＴ２、ＬＩＲ－１、ＬＩＲ１、ＭＩＲ－７、ＭＩＲ７、ＰＩＲ－Ｂ、ＰＩＲＢ、白血球免疫グロブリン様受容体Ｂ１としても公知である。ＬＩＬＲＢ２はまた、ＣＤ８５Ｄ、ＩＬＴ－４、ＬＩＲ－２、ＬＩＲ２、ＭＩＲ－１０、ＭＩＲ１０、およびＩＬＴ４としても公知である。
ＨＬＡ－Ｇ分子を含む治療用化合物を使用して、例えば、ＨＬＡ－Ｇ分子を含む、多量体化治療用化合物分子により、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＬＩＬＲＢ１、およびＬＩＬＲＢ２のうちのいずれかを含む免疫細胞へと、阻害シグナルをもたらし、これにより、部位特異的免疫特権をもたらすことができる。
アゴニスト性の、抗ＫＩＲ２ＤＬ４抗体分子、抗ＬＩＬＲＢ１抗体分子、または抗ＬＩＬＲＢ２抗体分子を含む治療用化合物を使用して、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＬＩＬＲＢ１、およびＬＩＬＲＢ２のうちのいずれかを含む免疫細胞へと、阻害シグナルをもたらすことができる。
ＨＬＡ－Ｇは、多量体化された場合、例えば、細胞の表面において発現された場合、またはビーズの表面へとコンジュゲートされた場合に限り、阻害シグナルを送達する。複数の実施形態では、ＨＬＡ－Ｇ分子を含む治療用化合物であって、溶液中で多量体化しない（または著明なレベルの、阻害性分子のアゴナイゼーションを結果としてもたらすのに十分には多量体化しない）治療用化合物が提供される。溶液中の多量体化を最小化する、ＨＬＡ－Ｇ分子の使用は、免疫細胞に対する全身性のアゴナイゼーション、および望ましくない免疫抑制を最小化するであろう。
理論に束縛されることを望まずに述べると、ＨＬＡ－Ｇは、多量体化されなければ、下方調節において有効でないが、治療用化合物の、標的への結合は、標的化部分を介して、ＩＣＩＭ結合性実体を多量体化させ、多量体化されたＩＣＩＭ結合性実体は、免疫細胞の表面上の阻害性分子に結合し、これをクラスター化し、これにより、免疫細胞を下方調節する、負のシグナルを媒介すると考えられる。こうして、抗原提示細胞、ならびに他の骨髄細胞、ＮＫ細胞、およびＴ細胞を含む、浸潤性免疫細胞による、標的組織を損傷しようとする試みは、下方調節される。
単量体形態にある場合に、アンタゴニズムを最小化するＨＬＡ－Ｇ分子が所望されるが、ＬＩＬＲＢ１と、ＬＩＬＲＢ２との冗長性は、ある程度の単量体アンタゴニズムを伴ってもなお、全身作用への影響を最小化するであろう。
一部の実施形態では、治療用化合物は、ＨＬＡ－Ｇ分子、例えば、Ｂ２Ｍ非含有アイソフォーム（例えば、ＨＬＡ－Ｇ５）を含む、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分を含む。Ｃａｒｏｓｅｌｌａら、Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、２０１５、１２７：３３を参照されたい。Ｂ２Ｍ非含有フォーマットでは、ＨＬＡ－Ｇは、ＬＩＬＲＢ２に優先的に結合する。
ＨＬＡ－Ｇ分子の構築に適する配列は、ＧｅｎＢａｎｋ Ｐ１７６９３．１の、ＲｅｃＮａｍｅ：Ｆｕｌｌ＝ＨＬＡクラスＩ組織適合性抗原、アルファ鎖Ｇ；ＡｌｔＮａｍｅ：Ｆｕｌｌ＝ＨＬＡ Ｇ抗原；ＡｌｔＮａｍｅ：Ｆｕｌｌ＝ＭＨＣクラスＩ抗原Ｇ；Ｆｌａｇｓ：前駆体、またはＭＶＶＭＡＰＲＴＬＦＬＬＬＳＧＡＬＴＬＴＥＴＷＡＧＳＨＳＭＲＹＦＳＡＡＶＳＲＰＧＲＧＥＰＲＦＩＡＭＧＹＶＤＤＴＱＦＶＲＦＤＳＤＳＡＣＰＲＭＥＰＲＡＰＷＶＥＱＥＧＰＥＹＷＥＥＥＴＲＮＴＫＡＨＡＱＴＤＲＭＮＬＱＴＬＲＧＹＹＮＱＳＥＡＳＳＨＴＬＱＷＭＩＧＣＤＬＧＳＤＧＲＬＬＲＧＹＥＱＹＡＹＤＧＫＤＹＬＡＬＮＥＤＬＲＳＷＴＡＡＤＴＡＡＱＩＳＫＲＫＣＥＡＡＮＶＡＥＱＲＲＡＹＬＥＧＴＣＶＥＷＬＨＲＹＬＥＮＧＫＥＭＬＱＲＡＤＰＰＫＴＨＶＴＨＨＰＶＦＤＹＥＡＴＬＲＣＷＡＬＧＦＹＰＡＥＩＩＬＴＷＱＲＤＧＥＤＱＴＱＤＶＥＬＶＥＴＲＰＡＧＤＧＴＦＱＫＷＡＡＶＶＶＰＳＧＥＥＱＲＹＴＣＨＶＱＨＥＧＬＰＥＰＬＭＬＲＷＫＱＳＳＬＰＴＩＰＩＭＧＩＶＡＧＬＶＶＬＡＡＶＶＴＧＡＡＶＡＡＶＬＷＲＫＫＳＳＤ（配列番号５）を含む。ＨＬＡ－Ｇ分子の候補物質は、例えば、「Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ＨＬＡ－Ｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｕｓｅ ｉｎ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ」、 ＬｅＭａｏｕｌｔら、２０１３、ＦＡＳＥＢ Ｊｏｕｒｎａｌ、２７：３６４３において記載されている方法と類似の方法により、方法および化合物における使用のための適性について、調べることができる。
一部の実施形態では、治療用化合物は、対象に存在しないドナー抗原、または対象に実質的に低レベルで存在するドナー抗原、例えば、表２によるドナー抗原に優先的に結合し、対象におけるドナー移植片組織へと局在化される、標的化部分を含む。一部の実施形態では、治療用化合物は、他の組織に結合しないか、または実質的に結合しない。一部の実施形態では、治療用化合物は、ＨＬＡ－Ａ２に特異的であり、ドナー同種移植組織に特異的に結合するが、宿主組織に結合せず、治療用化合物が、例えば、標的に結合されると、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＬＩＬＲＢ１、またはＬＩＬＲＢ２を活性化させるように、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＬＩＬＲＢ１、またはＬＩＬＲＢ２に結合するＨＬＡ－Ｇ分子を含む、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分と組み合わされる、標的化部分を含みうる。治療用化合物は、同種移植物を標的化し、同種移植物に、局所免疫特権をもたらす。
一部の実施形態では、治療用化合物は、組織特異的抗原、例えば、表３による抗原に優先的に結合し、対象、例えば、自己免疫障害、例えば、表３による自己免疫障害を有する対象における標的部位へと局在化される、標的化部分を含む。一部の実施形態では、治療用化合物は、他の組織に結合しないか、または実質的に結合しない。ある実施形態では、治療用化合物は、治療用化合物が、例えば、標的に結合されると、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＬＩＬＲＢ１、またはＬＩＬＲＢ２を活性化させるように、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＬＩＬＲＢ１、またはＬＩＬＲＢ２に結合するＨＬＡ－Ｇ分子を含む、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分を含む。治療用化合物は、自己免疫による攻撃下にある組織を標的化し、組織に、局所免疫特権をもたらす。
ＬＩＬＲＢ１にもまた結合することが可能な、安定かつ可溶性のＨＬＡ－Ｇ－Ｂ２Ｍ融合タンパク質を操作することができる可能性が高い。例えば、ＨＬＡ－Ｇの結晶構造は、ＨＬＡ－Ｇ／Ｂ２Ｍ単量体を使用して決定された（Ｃｌｅｍｅｎｔｓら、２００５、ＰＮＡＳ、１０２：３３６０）。
ＦＣＲＬファミリー
ＦＣＲＬ１～６は、一般に、Ｂ細胞の活性化またはＢ細胞機能を阻害する。これらの１型膜貫通糖タンパク質は、各タンパク質が、３つ～９つのドメインからなり、個々のドメイン型は、全てのＦＣＲＬタンパク質を通して保存されない、５種類の免疫グロブリン様ドメインの、異なる組合せから構成される。一般に、ＦＣＲＬの発現は、主要な発現を、Ｂリンパ球内の発現とする、リンパ球に制約される。一般に、ＦＣＲＬは、Ｂ細胞の活性化を抑制するように機能する。
一部の実施形態では、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分は、アゴニスト性抗ＦＣＲＬ抗体分子を含みうる。一部の実施形態では、治療用化合物は、抗ＦＣＲＬ抗体分子および抗Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）抗体分子を含む。理論に束縛されることを望まずに述べると、両方の特異性を有する抗体分子を含む治療用化合物は、ＦＣＲＬを、ＢＣＲと近接させ、ＢＣＲシグナル伝達を阻害すると考えられる。
ブチロフィリンおよびブチロフィリン様分子
エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、ブチロフィリンの、アゴニストまたはアンタゴニストを含みうる。一部の実施形態では、エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、アゴニスト性であるか、または機能的な、ＢＴＮ１Ａ１分子、ＢＴＮ２Ａ２分子、ＢＴＮＬ２分子、またはＢＴＮＬ１分子である。
本明細書で使用される用語としての、機能的なＢＴＮＸｉ分子（表記中、Ｘｉ＝１Ａ１、２Ａ２、Ｌ２、またはＬ１である）とは、治療用化合物の一部として、Ｔ細胞を阻害するのに十分なＢＴＮＸｉ配列を有するポリペプチドを指す。一部の実施形態では、ＢＴＮＸｉ分子は、自然発生のブチロフィリンまたはブチロフィリン様分子との、少なくとも６０、７０、８０、９０、９５、９９、もしくは１００％の配列同一性、または実質的な配列同一性を有する。
一部の実施形態では、エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、アンタゴニスト性ＢＴＮＬ８分子である。
本明細書で使用される用語としての、アンタゴニスト性ＢＴＮＬ８分子とは、治療用化合物の一部として、休眠Ｔ細胞の活性化、増殖、またはこれによるサイトカインの分泌を阻害するのに十分なＢＴＮＬ８配列を有するポリペプチドを指す。一部の実施形態では、ＢＴＮＬ８分子は、自然発生のブチロフィリンとの、少なくとも６０、７０、８０、９０、９５、９９、もしくは１００％の配列同一性、または実質的な配列同一性を有する。
ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分：免疫抑制性Ｔ細胞を動員する、エフェクター結合性／モジュレーティング部分
一部の実施形態では、治療用化合物は、標的化部分により媒介される部位において、免疫抑制性細胞、例えば、免疫抑制性Ｔ細胞に結合するか、これを活性化させるか、またはこれを保持し、部位特異的免疫特権をもたらす、エフェクター結合性／モジュレーティング部分、例えば、ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分を含む。ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分、例えば、ｓｃＦｖ結合性ドメインを含む、抗体分子を含む、例えば、ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分は、免疫抑制性細胞型、例えば、Ｔｒｅｇ、例えば、Ｆｏｘｐ３＋ ＣＤ２５＋ Ｔｒｅｇに結合する。臓器、組織、または特異的細胞型のトレランスは、標的臓器の近位にあり、これに浸潤するＴｒｅｇを増大させ；複数の実施形態では、本明細書で記載される方法および化合物は、この生理学的状態を、合成により再創出し、模倣する。Ｔｒｅｇが蓄積されると、目的の臓器を、免疫系から保護するのに用いられる、免疫抑制性微小環境が創出される。
一部の実施形態では、本明細書で提供されるポリペプチドは、Ｔｒｅｇ細胞を活性化するために使用されうる。一部の実施形態では、本明細書で提供されるポリペプチドは、活性化されたＣＤ４およびＣＤ８陽性免疫細胞に結合することができ、このような細胞によって調節される免疫応答を下方制御するために使用することができる。ＩＬ－２ムテインを有するものを含むこのような分子（ポリペプチド）の例、ならびに本明細書で提供されるもののようなＰＤ－１抗体を含むポリペプチド。したがって、一部の実施形態では、対象における免疫応答を調節する方法であって、本明細書で提供されるポリペプチドを対象へと投与する工程を含み、ポリペプチドは、ＣＤ４陽性細胞および／またはＣＤ８陽性細胞に結合し、免疫応答を調節する、方法が提供される。一部の実施形態では、免疫応答は減少される。一部の実施形態では、本方法は、本明細書で提供されるポリペプチドを対象に投与する工程を含み、ポリペプチドは、Ｔｒｅｇ細胞に結合し、免疫応答を調節する。一部の実施形態では、免疫応答は減少される。これは、例えば、本明細書で提供される自己免疫疾患を処置するために行うことができる。一部の実施形態では、ポリペプチドは、ＩＬ－２ムテインに連結された抗ＭＡｄＣＡＭ抗体、またはＰＤ－１抗体に連結された抗ＭＡｄＣＡＭ抗体を含む。抗ＭＡｄＣＡＭ抗体および抗ＰＤ－１抗体を含む種々のポリペプチドが、本明細書で提供され、このセクションに参考により組み入れられる。
Ｔｒｅｇ標的化分子およびＴＧＦＢ標的化分子としてのＧＡＲＰ結合剤
ＧＡＲＰは、活性化Ｔｒｅｇの表面上で発現される、潜在性ＴＧＦ－ベータに対する膜タンパク質受容体である（Ｔｒａｎら、２００９、ＰＮＡＳ、１０６：１３４４５；およびＷａｎｇら、２００９、ＰＮＡＳ、１０６：１３４３９）。一部の実施形態では、治療用化合物は、可溶性ＧＡＲＰおよび活性化ヒトＴｒｅｇのようなＧＡＲＰ発現細胞の一方または両方に結合するＩＩＣ結合性実体と、治療用化合物を、目的の標的組織へと標的化する、標的化部分とを含む。ＧＡＲＰ結合剤を含む、ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分は、例えば、抗ＧＡＲＰ抗体分子、例えば、抗ＧＡＲＰ ｓｃＦｖドメインを含む、ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分を含む。理論に束縛されることを望まずに述べると、ＧＡＲＰ結合剤を含む治療用化合物は、治療用化合物の標的化部分により標的化される部位、例えば、移植部位または臓器損傷部位における、ＧＡＲＰ発現Ｔｒｅｇの蓄積をもたらすと考えられる。再度、理論に束縛されることを望まずに述べると、ＧＡＲＰ結合剤を含む治療用化合物はまた、臓器損傷部位における、可溶性ＧＡＲＰの蓄積も行うことができ、これは、免疫抑制性サイトカインである、ＴＧＦＢ１に結合し、これを、局所的に活性化させるのに役立つと考えられる（Ｆｒｉｄｒｉｃｈら、２０１６、ＰＬｏＳ Ｏｎｅ、１１：ｅ０１５３２９０；ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．０１５３２９０；およびＨａｈｎら、２０１３、Ｂｌｏｏｄ、１５：１１８２）。したがって、ＧＡＲＰ結合剤を含む、エフェクター結合性／モジュレーティング部分はＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分として作用する場合もあり、ＳＭ結合性／モジュレーティング部分として作用する場合もある。
Ｔｒｅｇ標的化分子およびエフェクターＴ細胞サイレンシング分子としてのＣＴＬＡ－４
一部の実施形態では、エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、Ｔｒｅｇの表面上で発現されるＣＴＬＡ－４に結合する、例えば、抗体分子、例えば、ｓｃＦｖドメインを含む。治療用分子は、標的部位において、ＣＴＬＡ－４＋ Ｔｒｅｇを蓄積するか、または保持し、局所的免疫抑制の帰結をもたらす。
Ｔｒｅｇ上で、より高度に発現されるが、ＣＴＬＡ－４はまた、活性化Ｔ細胞上でも発現される。エフェクター結合性／モジュレーティング部分、例えば、抗ＣＴＬＡ－４抗体、または機能的抗ＣＴＬＡ－４抗体を含む治療用化合物は、ＣＴＬＡ－４を発現するＴ細胞を下方調節することができる。したがって、ＣＴＬＡ－４に結合するエフェクター結合性／モジュレーティング部分を含む治療用化合物では、エフェクター部分はまた、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分としても作用する場合がある。
一部の実施形態では、抗ＣＴＬＡ－４結合剤は、単量体フォーマットでは、アンタゴナイズ性でも、アゴナイズ性でもなく、標的に結合して、クラスター化または多量体化された場合に限り、アゴナイズ性となる。
理論に束縛されることを望まずに述べると、治療用化合物の、標的化部分を介する、標的への結合は、治療用化合物の多量体化をもたらすと考えられる。メモリーＴ細胞および活性化Ｔ細胞の場合、治療用化合物のエフェクター結合性／モジュレーティング部分により結合されたＣＴＬＡ－４は、クラスター化され、ＣＴＬＡ－４の係合による阻害シグナルが、メモリーＴ細胞および活性化Ｔ細胞により発現される。
一部の実施形態では、抗ＣＴＬＡ－４結合剤は、単量体フォーマットでは、アンタゴナイズ性でも、アゴナイズ性でもなく、標的に結合して、クラスター化または多量体化された場合に限り、アゴナイズ性となる。
ＩＬ－２ムテイン分子：Ｔｒｅｇを活性化するＩＬ－２受容体結合剤
（細胞傷害性Ｔ細胞に優先して）Ｔｒｅｇ細胞を優先的に拡大または刺激する、ＩＬ－２ムテイン分子は、ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分として使用することができる。
一部の実施形態では、ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分は、ＩＬ－２ムテイン分子を含む。本明細書で使用される通り、「ＩＬ－２ムテイン分子」または「ＩＬ－２ムテイン」という用語は、Ｔｒｅｇ細胞を優先的に活性化させる、ＩＬ－２変異体を指す。一部の実施形態では、単独で、または治療用化合物の構成要素として、ＩＬ－２ムテイン分子は、Ｔｒｅｇを、細胞傷害性Ｔ細胞の、少なくとも２、５、１０、または１００倍活性化させる。Ｔｒｅｇ細胞の優先的な活性化を評価するための適切なアッセイは、米国特許第９，５８０，４８６号の、例えば、実施例２および３、またはＷＯ２０１６０１４４２８の、例えば、実施例３、４、および５に見出すことができ、その各々は参照によりその全体において組み入れられる。成熟ＩＬ－２の配列は、
ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（成熟ＩＬ－２配列）（配列番号６）
である。ＩＬ－２の未成熟配列は、
ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＶＬＮＬＡＱＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＮＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＣＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１５）
によって表される。
一部の実施形態では、ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分は、別のポリペプチド、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏにおける半減期を延長するポリペプチド、例えば、免疫グロブリン定常領域へとカップリングされた、例えば、融合された、ＩＬ－２ムテインもしくはこの活性断片、またはこれらの多量体もしくは二量体を含む。
ＩＬ－２ムテイン分子は、ＩＬ－２の１つまたはそれ以上の残基を突然変異させることにより調製することができる。ＩＬ－２－ムテインの非限定例は、ＷＯ２０１６／１６４９３７、ＵＳ９５８０４８６、ＵＳ７１０５６５３、ＵＳ９６１６１０５、ＵＳ９４２８５６７、ＵＳ２０１７／００５１０２９、ＵＳ２０１４／０２８６８９８Ａ１、ＷＯ２０１４１５３１１１Ａ２、ＷＯ２０１０／０８５４９５、ＷＯ２０１６０１４４２８Ａ２、ＷＯ２０１６０２５３８５Ａ１、およびＵＳ２００６０２６９５１５に見出すことができ、その各々は、参照によりその全体において組み入れられる。
一部の実施形態では、上記配列の１位におけるアラニンは、欠失している。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテイン分子は、成熟ＩＬ－２配列の１２５位におけるシステインを置換するセリンを含む。ＩＬ－２ムテイン分子である突然変異および置換の他の組合せはＵＳ２００６０２６９５１５に記載されており、これは参照によりその全体において組み入れられる。一部の実施形態では、１２５位におけるシステインはまた、バリンまたはアラニンで置換される。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテイン分子は、Ｖ９１Ｋ置換を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテイン分子は、Ｎ８８Ｄ置換を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテイン分子は、Ｎ８８Ｒ置換を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテイン分子は、Ｈ１６Ｅ、Ｄ８４Ｋ、Ｖ９１Ｎ、Ｎ８８Ｄ、Ｖ９１Ｋ、またはＶ９１Ｒ、これらのいずれかの組合せの置換を含む。一部の実施形態では、これらのＩＬ－２ムテイン分子はまた、本明細書で記載される１２５位における置換を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテイン分子は：Ｔ３Ｎ、Ｔ３Ａ、Ｌ１２Ｇ、Ｌ１２Ｋ、Ｌ１２Ｑ、Ｌ１２Ｓ、Ｑ１３Ｇ、Ｅ１５Ａ、Ｅ１５Ｇ、Ｅ１５Ｓ、Ｈ１６Ａ、Ｈ１６Ｄ、Ｈ１６Ｇ、Ｈ１６Ｋ、Ｈ１６Ｍ、Ｈ１６Ｎ、Ｈ１６Ｒ、Ｈ１６Ｓ、Ｈ１６Ｔ、Ｈ１６Ｖ、Ｈ１６Ｙ、Ｌ１９Ａ、Ｌ１９Ｄ、Ｌ１９Ｅ、Ｌ１９Ｇ、Ｌ１９Ｎ、Ｌ１９Ｒ、Ｌ１９Ｓ、Ｌ１９Ｔ、Ｌ１９Ｖ、Ｄ２０Ａ、Ｄ２０Ｅ、Ｄ２０Ｈ、Ｄ２０Ｉ、Ｄ２０Ｙ、Ｄ２０Ｆ、Ｄ２０Ｇ、Ｄ２０Ｔ、Ｄ２０Ｗ、Ｍ２３Ｒ、Ｒ８１Ａ、Ｒ８１Ｇ、Ｒ８１Ｓ、Ｒ８１Ｔ、Ｄ８４Ａ、Ｄ８４Ｅ、Ｄ８４Ｇ、Ｄ８４Ｉ、Ｄ８４Ｍ、Ｄ８４Ｑ、Ｄ８４Ｒ、Ｄ８４Ｓ、Ｄ８４Ｔ、Ｓ８７Ｒ、Ｎ８８Ａ、Ｎ８８Ｄ、Ｎ８８Ｅ、Ｎ８８Ｉ、Ｎ８８Ｆ、Ｎ８８Ｇ、Ｎ８８Ｍ、Ｎ８８Ｒ、Ｎ８８Ｓ、Ｎ８８Ｖ、Ｎ８８Ｗ、Ｖ９１Ｄ、Ｖ９１Ｅ、Ｖ９１Ｇ、Ｖ９１Ｓ、Ｉ９２Ｋ、Ｉ９２Ｒ、Ｅ９５Ｇ、およびＱ１２６からなる群から選択される１つまたはそれ以上の置換を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテイン分子のアミノ酸配列は、成熟ＩＬ－２配列において明示されているアミノ酸配列と異なり、Ｃ１２５ＡまたはＣ１２５Ｓ置換ならびにＴ３Ｎ、Ｔ３Ａ、Ｌ１２Ｇ、Ｌ１２Ｋ、Ｌ１２Ｑ、Ｌ１２Ｓ、Ｑ１３Ｇ、Ｅ１５Ａ、Ｅ１５Ｇ、Ｅ１５Ｓ、Ｈ１６Ａ、Ｈ１６Ｄ、Ｈ１６Ｇ、Ｈ１６Ｋ、Ｈ１６Ｍ、Ｈ１６Ｎ、Ｈ１６Ｒ、Ｈ１６Ｓ、Ｈ１６Ｔ、Ｈ１６Ｖ、Ｈ１６Ｙ、Ｌ１９Ａ、Ｌ１９Ｄ、Ｌ１９Ｅ、Ｌ１９Ｇ、Ｌ１９Ｎ、Ｌ１９Ｒ、Ｌ１９Ｓ、Ｌ１９Ｔ、Ｌ１９Ｖ、Ｄ２０Ａ、Ｄ２０Ｅ、Ｄ２０Ｆ、Ｄ２０Ｇ、Ｄ２０Ｔ、Ｄ２０Ｗ、Ｍ２３Ｒ、Ｒ８１Ａ、Ｒ８１Ｇ、Ｒ８１Ｓ、Ｒ８１Ｔ、Ｄ８４Ａ、Ｄ８４Ｅ、Ｄ８４Ｇ、Ｄ８４Ｉ、Ｄ８４Ｍ、Ｄ８４Ｑ、Ｄ８４Ｒ、Ｄ８４Ｓ、Ｄ８４Ｔ、Ｓ８７Ｒ、Ｎ８８Ａ、Ｎ８８Ｄ、Ｎ８８Ｅ、Ｎ８８Ｆ、Ｎ８８Ｉ、Ｎ８８Ｇ、Ｎ８８Ｍ、Ｎ８８Ｒ、Ｎ８８Ｓ、Ｎ８８Ｖ、Ｎ８８Ｗ、Ｖ９１Ｄ、Ｖ９１Ｅ、Ｖ９１Ｇ、Ｖ９１Ｓ、Ｉ９２Ｋ、Ｉ９２Ｒ、Ｅ９５Ｇ、Ｑ１２６Ｉ、Ｑ１２６Ｌ、およびＱ１２６Ｆから選択される１つの置換を有する。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテイン分子は、成熟ＩＬ－２配列において明示されているアミノ酸配列と異なり、Ｃ１２５ＡまたはＣ１２５Ｓ置換ならびにＤ２０Ｈ、Ｄ２０Ｉ、Ｄ２０Ｙ、Ｄ２０Ｅ、Ｄ２０Ｇ、Ｄ２０Ｗ、Ｄ８４Ａ、Ｄ８４Ｓ、Ｈ１６Ｄ、Ｈ１６Ｇ、Ｈ１６Ｋ、Ｈ１６Ｒ、Ｈ１６Ｔ、Ｈ１６Ｖ、Ｉ９２Ｋ、Ｉ９２Ｒ、Ｌ１２Ｋ、Ｌ１９Ｄ、Ｌ１９Ｎ、Ｌ１９Ｔ、Ｎ８８Ｄ、Ｎ８８Ｒ、Ｎ８８Ｓ、Ｖ９１Ｄ、Ｖ９１Ｇ、Ｖ９１Ｋ、およびＶ９１Ｓから選択される１つの置換を有する。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、Ｎ８８Ｒおよび／またはＤ２０Ｈ突然変異を含む。
一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテイン分子は、アミノ酸３０、アミノ酸３１、アミノ酸３５、アミノ酸６９、およびアミノ酸７４からなる群から選択される位置におけるポリペプチド配列に突然変異を含む。一部の実施形態では、３０位における突然変異は、Ｎ３０Ｓである。一部の実施形態では、３１位における突然変異は、Ｙ３１Ｈである。一部の実施形態では、３５位における突然変異は、Ｋ３５Ｒである。一部の実施形態では、６９位における突然変異は、Ｖ６９Ａである。一部の実施形態では、７４位における突然変異は、Ｑ７４Ｐである。一部の実施形態では、ムテインは、Ｖ６９Ａ突然変異、Ｑ７４Ｐ突然変異、Ｎ８８ＤまたはＮ８８Ｒ突然変異、および１つまたはそれ以上のＬ５３Ｉ、Ｌ５６Ｉ、Ｌ８０Ｉ、またはＬ１１８Ｉ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｖ６９Ａ突然変異、Ｑ７４Ｐ突然変異、Ｎ８８ＤまたはＮ８８Ｒ突然変異、ならびにＬ５３Ｉ、Ｌ５６Ｉ、Ｌ８０Ｉ、およびＬ１１８Ｉ突然変異からなる群から選択されるＬからＩへの突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、Ｖ６９Ａ、Ｑ７４Ｐ、Ｎ８８ＤまたはＮ８８Ｒ突然変異、およびＬ５３Ｉ突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、Ｖ６９Ａ、Ｑ７４Ｐ、Ｎ８８ＤまたはＮ８８Ｒ突然変異、およびＬ５６Ｉ突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、Ｖ６９Ａ、Ｑ７４Ｐ、Ｎ８８ＤまたはＮ８８Ｒ突然変異、およびＬ８０Ｉ突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、Ｖ６９Ａ、Ｑ７４Ｐ、Ｎ８８ＤまたはＮ８８Ｒ突然変異、およびＬ１１８Ｉ突然変異を含む。本明細書に提供される通り、ムテインはまた、Ｃ１２５ＡまたはＣ１２５Ｓ突然変異を含みうる。
一部の実施形態では、ムテインは、Ｔ３Ａ突然変異を含む。本明細書で提供される全長ＩＬ－２ムテインは、本明細書に提供されるＴ３Ａまたは他の突然変異で例示されない可能性があるが、このような突然変異は、本明細書で例示されるいずれかの他の突然変異に関する場合の通り、本明細書で提供されるムテインへと加えられる可能性がある。したがって、一部の実施形態では、ムテインは、Ｔ３Ｎ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｔ３Ａ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｌ１２Ｇ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｌ１２Ｋ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｌ１２Ｑ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｌ１２Ｓ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｑ１３Ｇ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｅ１５Ａ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｅ１５Ｇ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｅ１５Ｓ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｈ１６Ａ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｈ１６Ｄ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｈ１６Ｇ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｈ１６Ｋ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｈ１６Ｍ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｈ１６Ｎ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｈ１６Ｒ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｈ１６Ｓ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｈ１６Ｔ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｈ１６Ｖ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｈ１６Ｙ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｌ１９Ａ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｌ１９Ｄ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｌ１９Ｅ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｌ１９Ｇ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｌ１９Ｎ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｌ１９Ｒ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｌ１９Ｓ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｌ１９Ｔ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｌ１９Ｖ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｄ２０Ａ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｄ２０Ｅ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｄ２０Ｈ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｄ２０Ｉ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｄ２０Ｙ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｄ２０Ｆ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｄ２０Ｇ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｄ２０Ｔ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｄ２０Ｗ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｍ２３Ｒ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｒ８１Ａ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｒ８１Ｇ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｒ８１Ｓ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｒ８１Ｔ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｄ８４Ａ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｄ８４Ｅ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｄ８４Ｇ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｄ８４Ｉ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｄ８４Ｍ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｄ８４Ｑ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｄ８４Ｒ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｄ８４Ｓ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｄ８４Ｔ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｓ８７Ｒ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｎ８８Ａ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｎ８８Ｄ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｎ８８Ｅ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｎ８８Ｉ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｎ８８Ｆ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｎ８８Ｇ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｎ８８Ｍ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｎ８８Ｒ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｎ８８Ｓ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｎ８８Ｖ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｎ８８Ｗ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｖ９１Ｄ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｖ９１Ｅ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｖ９１Ｇ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｖ９１Ｓ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｉ９２Ｋ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｉ９２Ｒ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｅ９５Ｇ突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、Ｑ１２６突然変異を含む。
突然変異はリスト形態で例示されるが、これは単純に簡便さのためであり、ムテインは本明細書で提供される１つまたはそれ以上の置換を有する場合がある。
一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテイン分子は、上に提供される成熟ヒトＩＬ－２配列と比べて、Ｎ８８Ｒ、Ｎ８８Ｉ、Ｎ８８Ｇ、Ｄ２０Ｈ、Ｄ１０９Ｃ、Ｑ１２６Ｌ、Ｑ１２６Ｆ、Ｄ８４Ｇ、またはＤ８４Ｉからなる群から選択される置換を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテイン分子は、Ｄ１０９Ｃの置換ならびにＮ８８Ｒ置換およびＣ１２５Ｓ置換の１つまたは両方を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテイン分子における１０９位でのシステインは、ポリエチレングリコール部分に連結され、ここで、ポリエチレングリコール部分は５から４０ｋＤａの間の分子量を有する。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるいずれかの置換も、１２５位における置換と組み合わされる。置換は、Ｃ１２５Ｓ、Ｃ１２５Ａ、またはＣ１２５Ｖ置換でありうる。
一部の実施形態では、本明細書で記載される置換または突然変異に加えて、ＩＬ－２ムテインは、配列番号１５に対応する、７３、７６、１００、もしくは１３８位のうちの１つもしくはそれ以上、または配列番号６に対応する、５３、５６、８０、もしくは１１８位のうちの１つもしくはそれ以上における、置換／突然変異を有する。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、７３および７６位；７３および１００位；７３および１３８位；７６および１００位；７６および１３８位；１００および１３８位；７３、７６、および１００位；７３、７６、および１３８位；７３、１００、および１３８位；７６、１００および１３８位；または配列番号１５に対応する、７３、７６、１００、および１３８位の各々における突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、５３および５６位；５３および８０位；５３および１１８位；５６および８０位；５６および１１８位；８０および１１８位；５３、５６、および８０位；５３、５６、および１１８位；５３、８０、および１１８位；５６、８０および１１８位；または配列番号６に対応する、５３、５６、８０、および１１８位の各々における突然変異を含む。ＩＬ－２は、本明細書で使用される、他のタンパク質と、融合または係留することができるので（その用語は、配列番号６または１５に対する参照に対応する）、配列が、ＮＣＢＩウェブサイトと共に使用することができるアライメントソフトウェアのようなアライメントソフトウェアのデフォルトの設定で、どのようにアライメントするのかを参照されたい。一部の実施形態では、突然変異は、ロイシンからイソロイシンへの突然変異である。したがって、ＩＬ－２ムテインは、配列番号１５に対応する、７３、７６、１００、もしくは１３８位、または配列番号６に対応する、５３、５６、８０、もしくは１１８位のうちの１つもしくはそれ以上において、１つまたはそれ以上のイソロイシンを含みうる。一部の実施形態では、ムテインは、配列番号６に対応する、Ｌ５３における突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、配列番号６に対応する、Ｌ５６における突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、配列番号６に対応する、Ｌ８０における突然変異を含む。一部の実施形態では、ムテインは、配列番号６に対応する、Ｌ１１８における突然変異を含む。一部の実施形態では、突然変異は、ロイシンからイソロイシンへの突然変異である。一部の実施形態では、ムテインはまた、配列番号６に対応する、これらのムテイン内の、６９、７４、８８、１２５位、またはこれらのいずれかの組合せにおける突然変異も含む。一部の実施形態では、突然変異は、Ｖ６９Ａ突然変異である。一部の実施形態では、突然変異は、Ｑ７４Ｐ突然変異である。一部の実施形態では、突然変異は、Ｎ８８Ｄ突然変異またはＮ８８Ｒ突然変異である。一部の実施形態では、突然変異は、Ｃ１２５Ａ突然変異またはＣ１２５Ｓ突然変異である。
一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号１５に対応する、４９、５１、５５、５７、６８、８９、９１、９４、１０８、および１４５位のうちの１つもしくはそれ以上、または配列番号６に対応する、２９、３１、３５、３７、４８、６９、７１、７４、８８、および１２５位のうちの１つもしくはそれ以上における突然変異を含む。置換は、単独で使用することもでき、互いと組み合わせて使用することもできる。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、２、３、４、５、６、７、８、９における置換、または４９、５１、５５、５７、６８、８９、９１、９４、１０８、および１４５位の各々における置換を含む。このような組合せの非限定例は、４９、５１、５５、５７、６８、８９、９１、９４、１０８、および１４５位；４９、５１、５５、５７、６８、８９、９１、９４、および１０８位；４９、５１、５５、５７、６８、８９、９１、および９４位；４９、５１、５５、５７、６８、８９、および９１位；４９、５１、５５、５７、６８、および８９位；４９、５１、５５、５７、および６８位；４９、５１、５５、および５７位；４９、５１、および５５位；４９および５１位；５１、５５、５７、６８、８９、９１、９４、１０８、および１４５位；５１、５５、５７、６８、８９、９１、９４、および１０８位；５１、５５、５７、６８、８９、９１、および９４位；５１、５５、５７、６８、８９、および９１位；５１、５５、５７、６８、および８９位；５５、５７、および６８位；５５および５７位；５５、５７、６８、８９、９１、９４、１０８、および１４５位；５５、５７、６８、８９、９１、９４、および１０８位；５５、５７、６８、８９、９１、および９４位；５５、５７、６８、８９、９１、および９４位；５５、５７、６８、８９、および９１位；５５、５７、６８、および８９位；５５、５７、および６８位；５５および５７位；５７、６８、８９、９１、９４、１０８、および１４５位；５７、６８、８９、９１、９４、および１０８位；５７、６８、８９、９１、および９４位；５７、６８、８９、および９１位；５７、６８、および８９位；５７および６８位；６８、８９、９１、９４、１０８、および１４５位；６８、８９、９１、９４、および１０８位；６８、８９、９１、および９４位；６８、８９、および９１位；６８および８９位；８９、９１、９４、１０８、および１４５位；８９、９１、９４、および１０８位；８９、９１、および９４位；８９および９１位；９１、９４、１０８、および１４５位；９１、９４、および１０８位；９１、および９４位；または９４および１０８位における突然変異を含むがこれらに限定されない。各突然変異は、互いと組み合わせることができる。配列番号６でも、同じ置換を行うことができるが、番号付けは、本開示から明らかな通り、適切に調整される（配列番号１５のための番号付けより２０小さい番号付けが、配列番号６内の位置に対応する）。
一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号１５に対応する、３５、３６、４２、１０４、１１５、もしくは１４６位のうちの１つもしくはそれ以上、または配列番号６の等価の位置における突然変異（例えば、１５、１６、２２、８４、９５、もしくは１２６位）を含む。これらの突然変異は、本明細書で記載される、ロイシンから、イソロイシンへの、他の突然変異、または配列番号１５に対応する、７３、７６、１００、もしくは１３８位、または配列番号６に対応する、５３、５６、８０、もしくは１１８位のうちの１つもしくはそれ以上における突然変異と組み合わせることができる。一部の実施形態では、突然変異は、Ｅ３５Ｑ、Ｈ３６Ｎ、Ｑ４２Ｅ、Ｄ１０４Ｎ、Ｅ１１５Ｑ、もしくはＱ１４６Ｅ、またはこれらのいずれかの組合せである。一部の実施形態では、これらの置換のうちの、１つまたはそれ以上は、野生型である。一部の実施形態では、ムテインは、配列番号１５に対応する、３５、３６、４２、１０４、１１５、もしくは１４６位のうちの１つもしくはそれ以上、または配列番号６の等価の位置（例えば、１５、１６、２２、８４、９５、および１２６位）において、野生型残基を含む。
これらの位置における突然変異は、本明細書で記載され、上記でも記載した、配列番号１５に対応する、７３、７６、１００、もしくは１３８位、または配列番号６に対応する、５３、５６、８０、もしくは１１８位のうちの１つもしくはそれ以上における置換を含むがこれらに限定されない、本明細書で記載される、他の突然変異のうちのいずれかと組み合わせることができる。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号１５に対応するＮ４９Ｓ突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号１５に対応するＹ５１Ｓ突然変異またはＹ５１Ｈ突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号１５に対応するＫ５５Ｒ突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号１５に対応するＴ５７Ａ突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号１５に対応するＫ６８Ｅ突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号１５に対応するＶ８９Ａ突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号１５に対応するＮ９１Ｒ突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号１５に対応するＱ９４Ｐ突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号１５に対応するＮ１０８Ｄ突然変異またはＮ１０８Ｒ突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号１５に対応するＣ１４５Ａ突然変異またはＣ１４５Ｓ突然変異を含む。これらの置換は、単独で使用することもでき、互いと組み合わせて使用することもできる。一部の実施形態では、ムテインは、これらの置換の各々を含む。一部の実施形態では、ムテインは、これらの突然変異のうちの、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、または８つを含む。一部の実施形態では、ムテインは、配列番号１５に対応する、３５、３６、４２、１０４、１１５、もしくは１４６位のうちの１つもしくはそれ以上、または配列番号６の等価の位置（例えば、１５、１６、２２、８４、９５、および１２６位）において、野生型残基を含む。
一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号６に対応するＮ２９Ｓ突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号６に対応するＹ３１Ｓ突然変異またはＹ３１Ｈ突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号６に対応するＫ３５Ｒ突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号６に対応するＴ３７Ａ突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号６に対応するＫ４８Ｅ突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号６に対応するＶ６９Ａ突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号６に対応するＮ７１Ｒ突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号６に対応するＱ７４Ｐ突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号６に対応するＮ８８Ｄ突然変異またはＮ８８Ｒ突然変異を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号６に対応するＣ１２５Ａ突然変異またはＣ１２５Ｓ突然変異を含む。これらの置換は、単独で使用することもでき、互いと組み合わせて使用することもできる。一部の実施形態では、ムテインは、これらの突然変異のうちの、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、または８つを含む。一部の実施形態では、ムテインは、これらの置換の各々を含む。一部の実施形態では、ムテインは、配列番号１５に対応する、３５、３６、４２、１０４、１１５、もしくは１４６位のうちの１つもしくはそれ以上、または配列番号６の等価の位置（例えば、１５、１６、２２、８４、９５、および１２６位）において、野生型残基を含む。
本明細書で記載されるいずれかのＩＬ－２ムテインについて、一部の実施形態では、配列番号１５に対応する、３５、３６、４２、１０４、１１５、もしくは１４６位のうちの１つもしくはそれ以上、または配列番号６の等価の位置（例えば、１５、１６、２２、８４、９５、もしくは１２６位）は、野生型である（例えば、配列番号６または１５に示される通りである）。一部の実施形態では、配列番号１５に対応する、３５、３６、４２、１０４、１１５、もしくは１４６位のうちの２、３、４、５、６、もしくは各々、または配列番号６の等価の位置（例えば、１５、１６、２２、８４、９５、および１２６位）は、野生型である。
一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは：
ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＳＮＨＫＮＰＲＬＡＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＥＫＡＴＥＩＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＡＬＲＬＡＰＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＤＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＳＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１６）の配列を含む。
一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは：
ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＳＮＨＫＮＰＲＬＡＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＥＫＡＴＥＬＫＨＩＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＡＬＲＬＡＰＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＤＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＳＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１７）の配列を含む。
一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは：
ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＳＮＨＫＮＰＲＬＡＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＥＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＡＬＲＬＡＰＳＫＮＦＨＩＲＰＲＤＬＩＳＤＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＳＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１８）の配列を含む。
一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは：
ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＳＮＨＫＮＰＲＬＡＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＥＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＡＬＲＬＡＰＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＤＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＩＮＲＷＩＴＦＳＱＳＩＩＳＴＬＴ（配列番号１９）の配列を含む。一部の実施形態では、本明細書で記載されるＩＬ－２ムテイン配列は、ＩＬ－２リーダー配列を含まない。ＩＬ－２リーダー配列は、ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号２０）の配列によって表される。したがって、一部の実施形態では、上に例示される配列は、リーダー配列なしのペプチドも包含しうる。配列番号１６～２０は配列番号１５に対応する７３、７６、１００、もしくは１３８位の１つのみまたは配列番号６に対応する５３、５６、８０、もしくは１１８位の１つもしくはそれ以上における位置における突然変異とともに例示されるが、ペプチドはこれらの位置において１つ、２つ、３つまたは４つの突然変異を含む場合もある。一部の実施形態では、各位置における置換は、イソロイシンまたは他の種類の保存的アミノ酸置換である。一部の実施形態では、列挙された位置におけるロイシンは、独立に、イソロイシン、バリン、メチオニン、またはフェニルアラニンで置換される。
一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテイン分子は、本明細書で記載される、Ｆｃ領域、または他のリンカー領域へと融合される。そのような融合タンパク質の例は、ＵＳ９５８０４８６、ＵＳ７１０５６５３、ＵＳ９６１６１０５、ＵＳ９４２８５６７、ＵＳ２０１７／００５１０２９、ＷＯ２０１６／１６４９３７、ＵＳ２０１４／０２８６８９８Ａ１、ＷＯ２０１４１５３１１１Ａ２、ＷＯ２０１０／０８５４９５、ＷＯ２０１６０１４４２８Ａ２、ＷＯ２０１６０２５３８５Ａ１、ＵＳ２０１７／００３７１０２、およびＵＳ２００６／０２６９５１５に見出すことができ、その各々は参照によりその全体において組み入れられる。
一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＬＡＬＡ突然変異として公知の突然変異を含む。Ｆｃ領域のＫａｂａｔによる番号付けを使用するならば、これは、Ｌ２４７Ａ、Ｌ２４８Ａ、およびＧ２５０Ａに対応するであろう。一部の実施形態では、Ｆｃ領域のＥＵ番号付けを使用すると、Ｆｃ領域は、Ｌ２３４Ａ突然変異、Ｌ２３５Ａ突然変異、および／またはＧ２３７Ａ突然変異を含む。使用される番号付けシステムに関わらず、一部の実施形態では、Ｆｃ部分は、これらの残基に対応する突然変異を含みうる。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｎ２９７ＧまたはＮ２９７Ａ（Ｋａｂａｔによる番号付け）突然変異を含む。Ｋａｂａｔによる番号付けは、全長配列に基づくが、Ｆｃ領域については、当業者により使用される、従来のアライメントに基づく断片内で使用されるであろう。
一部の実施形態では、Ｆｃ領域は：
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ．（配列番号２１）
または
ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ．（配列番号２８）の配列を含む。
一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、Ｆｃ領域へと連結される。リンカーの非限定例は、グリシン／セリンリンカーである。例えば、グリシン／セリンリンカーは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２２）またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３０）の配列でありうる。これは単に限定されることのない例であり、リンカーは変動する数のＧＧＧＧＳ（配列番号２３）またはＧＧＧＧＡリピート（配列番号２９）を有する場合がある。一部の実施形態では、リンカーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０のＧＧＧＧＳ（配列番号２３）またはＧＧＧＧＡリピート（配列番号２９）のリピートを含む。一部の実施形態では、リンカーは、１０アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、１５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、２０アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、２５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、３０アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、３５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、５～５０アミノ酸の長さである。
したがって、ＩＬ－２／Ｆｃ融合体はＺＩＬ－２Ｍ－Ｌｇｓ－ＺＦｃの式によって表され、ここで、ＺＩＬ－２Ｍは、本明細書で記載されるＩＬ－２ムテインであり、Ｌｇｓは本明細書で記載されるリンカー配列（例えば、グリシン／セリンリンカー）であり、ＺＦｃは本明細書で記載されるまたは当業者に公知であるＦｃ領域である。一部の実施形態では、式は、逆配置ＺＦｃ－Ｌｇｓ－ＺＩＬ－２Ｍでありうる。
一部の実施形態では、ＩＬ－２／Ｆｃ融合体は
ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＳＮＨＫＮＰＲＬＡＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＥＫＡＴＥＩＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＡＬＲＬＡＰＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＤＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＳＱＳＩＩＳＴＬＴＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２４）
ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＳＮＨＫＮＰＲＬＡＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＥＫＡＴＥＬＫＨＩＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＡＬＲＬＡＰＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＤＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＳＱＳＩＩＳＴＬＴＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２５）
ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＳＮＨＫＮＰＲＬＡＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＥＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＡＬＲＬＡＰＳＫＮＦＨＩＲＰＲＤＬＩＳＤＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＬＮＲＷＩＴＦＳＱＳＩＩＳＴＬＴＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２６）
ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＳＮＨＫＮＰＲＬＡＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＥＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＡＬＲＬＡＰＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＤＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＩＮＲＷＩＴＦＳＱＳＩＩＳＴＬＴＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号２７）の配列を含む。
一部の実施形態では、ＩＬ－２／Ｆｃ融合体は、以下の表、表２から選択される配列を含む：
Figure 2022544990000003
Figure 2022544990000004
一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、以下の表で提供される１つまたはそれ以上の配列を含み、これは、一部の実施形態では、他のタンパク質またはリンカーと融合されたＩＬ－２ムテインを示す。表は、ＩＬ－２が融合することができる様々なＦｃドメインまたは変異体についての配列も提供する：
Figure 2022544990000005
Figure 2022544990000006
Figure 2022544990000007
Figure 2022544990000008
Figure 2022544990000009
一部の実施形態では、表中または全体を通して示される配列は、Ｌ５３、Ｌ５６、Ｌ８０、およびＬ１１８位に対応する１つまたはそれ以上の突然変異を含むか、または含まない。一部の実施形態では、表中または本出願の全体を通して示される配列は、Ｌ５９Ｉ、Ｌ６３Ｉ、Ｉ２４Ｌ、Ｌ９４Ｉ、Ｌ９６ＩもしくはＬ１３２Ｉ位または同じ位置における他の置換に対応する、１つまたはそれ以上の突然変異を含むか、または含まない。一部の実施形態では、突然変異は、ロイシンからイソロイシンへの突然変異である。一部の実施形態では、ムテインは、本明細書で示されるまたは記載される以外の他の突然変異を含まない。一部の実施形態では、ペプチドは、配列番号２１、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、または配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８、配列番号５９、または配列番号６０の配列を含む。
一部の実施形態では、タンパク質は、本明細書に提供されるＩＬ－２ムテインを含む。一部の実施形態では、配列番号５９または配列番号６０を含み、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、およびＸ４のうちの少なくとも１つはＩであり、残りはＬまたはＩである、ポリペプチドが提供される。一部の実施形態では、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３はＬであり、Ｘ４はＩである。一部の実施形態では、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ４はＬであり、Ｘ３はＩである。一部の実施形態では、Ｘ２、Ｘ３、およびＸ４はＬであり、Ｘ１はＩである。一部の実施形態では、Ｘ１、Ｘ３、およびＸ４はＬであり、Ｘ２はＩである。一部の実施形態では、Ｘ１およびＸ２はＬであり、Ｘ３およびＸ４はＩである。一部の実施形態では、Ｘ１およびＸ３はＬであり、Ｘ２およびＸ４はＩである。一部の実施形態では、Ｘ１およびＸ４はＬであり、Ｘ２およびＸ３はＩである。一部の実施形態では、Ｘ２およびＸ３はＬであり、Ｘ１およびＸ４はＩである。一部の実施形態では、Ｘ２およびＸ４はＬであり、Ｘ１およびＸ３はＩである。一部の実施形態では、Ｘ３およびＸ４はＬであり、Ｘ１およびＸ２はＩである。一部の実施形態では、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３はＬであり、Ｘ４はＩである。一部の実施形態では、Ｘ２、Ｘ３、およびＸ４はＬであり、Ｘ１はＩである。一部の実施形態では、Ｘ１、Ｘ３、およびＸ４はＬであり、Ｘ２はＩである。一部の実施形態では、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ４はＬであり、Ｘ３はＩである。
一部の実施形態では、融合体のＦｃ部分は、含まれない。一部の実施形態では、ペプチドは、本明細書に提供されるＩＬ－２ムテインから本質的になる。一部の実施形態では、タンパク質は、Ｆｃ部分を含まない。
例示的な目的だけのために、Ｆｃおよび標的化部分と融合されるＩＬ－２ムテインの実施形態は、図１９に例示される。
一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、ＰＤ－１アゴニストに直接的または間接的に連結される。
配列は、例示的な目的だけのためのものであり、限定されることは意図されていない。一部の実施形態では、化合物は、配列番号５３、５４、５５、または５６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、化合物は、Ｃ１２５ＡまたはＣ１２５Ｓ突然変異を伴うかまたは伴わない配列番号５３、５４、５５、または５６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、１２５位における残基は、Ｃ、Ｓ、またはＡである。一部の実施形態では、化合物は、配列番号５９または配列番号６０のアミノ酸配列を含み、ここで、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、およびＸ４のうちの少なくとも１つはＩであり、残りはＬまたはＩである。一部の実施形態では、タンパク質は、本明細書に提供されるＩＬ－２ムテインを含む。一部の実施形態では、配列番号５９または配列番号６０を含み、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、およびＸ４のうちの少なくとも１つはＩであり、残りはＬまたはＩである、ポリペプチドが提供される。一部の実施形態では、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３はＬであり、Ｘ４はＩである。一部の実施形態では、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ４はＬであり、Ｘ３はＩである。一部の実施形態では、Ｘ２、Ｘ３、およびＸ４はＬであり、Ｘ１はＩである。一部の実施形態では、Ｘ１、Ｘ３、およびＸ４はＬであり、Ｘ２はＩである。一部の実施形態では、Ｘ１およびＸ２はＬであり、Ｘ３およびＸ４はＩである。一部の実施形態では、Ｘ１およびＸ３はＬであり、Ｘ２およびＸ４はＩである。一部の実施形態では、Ｘ１およびＸ４はＬであり、Ｘ２およびＸ３はＩである。一部の実施形態では、Ｘ２およびＸ３はＬであり、Ｘ１およびＸ４はＩである。一部の実施形態では、Ｘ２およびＸ４はＬであり、Ｘ１およびＸ３はＩである。一部の実施形態では、Ｘ３およびＸ４はＬであり、Ｘ１およびＸ２はＩである。一部の実施形態では、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ３はＬであり、Ｘ４はＩである。一部の実施形態では、Ｘ２、Ｘ３、およびＸ４はＬであり、Ｘ１はＩである。一部の実施形態では、Ｘ１、Ｘ３、およびＸ４はＬであり、Ｘ２はＩである。一部の実施形態では、Ｘ１、Ｘ２、およびＸ４はＬであり、Ｘ３はＩである。
タンパク質の各々はまた、本明細書に提供されるＣ１２５ＳおよびＬＡＬＡおよび／またはＧ２３７Ａ突然変異を有すると考えられうる。Ｃ１２５置換はまた、本出願の全体に記載されるＣ１２５Ａでありうる。
ある実施形態では、ＩＬ－２ムテイン分子は、自然発生のヒトＩＬ－２分子、例えば、本明細書で開示される自然発生のＩＬ－２配列または参照により組み入れられるものと少なくとも６０、７０、８０、８５、９０、９５、または９７％の配列同一性または相同性を含む。
本明細書で記載される通り、ＩＬ－２ムテインは、ＩＬ－２ムテインをＭＡｄＣＡＭ発現細胞に標的化するＭＡｄＣＡＭ抗体などの、係留部分を有する二特異性分子の一部でありうる。本明細書で記載される通り、二特異性分子は、２つのポリペプチド鎖から産生されうる。一部の実施形態では、以下を使用することができる：
Figure 2022544990000010
タンパク質は、ＩＬ－２ムテイン中に、Ｃ１２５ＡまたはＣ１２５Ｓ突然変異を伴うかまたは伴わずに産生されうる。含まれうるＩＬ－２ムテインの例は、本明細書で例示され、例えば、配列番号５９または配列番号６０の配列であるが、これらに限定されない。
一部の実施形態では、いずれかの軽鎖中の定常カッパドメインは、定常ラムダドメインで置きかえられうる。
ＧＩＴＲ結合剤
ＧＩＴＲ（ＣＤ３５７）とは、Ｔｒｅｇ上に存在する細胞表面マーカーである。ＧＩＴＲ－ＧＩＴＲＬ間相互作用の遮断は、Ｔｒｅｇ機能を維持する。一部の実施形態では、治療用化合物は、ＧＩＴＲ発現Ｔｒｅｇ細胞に結合する、ＩＩＣ結合性実体と、治療用化合物を、目的の標的組織へと標的化する、標的化部分とを含む。
一部の実施形態では、治療用化合物は、抗ＧＩＴＲ抗体分子、例えば、ＧＩＴＲの、ＧＩＴＲＬへの結合を阻害する抗ＧＩＴＲ抗体分子を含む。
一部の実施形態では、治療用化合物は、抗ＧＩＴＲ抗体分子、例えば、ＧＩＴＲの、ＧＩＴＲＬへの結合を阻害する抗ＧＩＴＲ抗体分子、およびＰＤ－１アゴニスト、ＩＬ－２ムテイン分子、または本明細書で記載される、他のエフェクターを含む。
理論に束縛されることを望まずに述べると、ＧＩＴＲ結合剤を含む治療用化合物は、治療用化合物の標的化部分により標的化される部位、例えば、移植部位または臓器損傷部位において、ＧＩＴＲ発現Ｔｒｅｇの蓄積をもたらすと考えられる。
ブチロフィリン／ブチロフィリン様分子
エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、アゴニスト性ＢＴＮＬ２分子を含みうる。理論に束縛されることを望まずに述べると、アゴニスト性ＢＴＮＬ２分子は、Ｔｒｅｇ細胞を誘導すると考えられる。
本明細書で使用される用語としての、アゴニスト性ＢＴＮＬ２分子とは、治療用化合物の一部として、Ｔｒｅｇ細胞を誘導するのに十分なＢＴＮＬ２配列を有するポリペプチドを指す。一部の実施形態では、ＢＴＮＬ２分子は、自然発生のブチロフィリンとの、少なくとも６０、７０、８０、９０、９５、９９、もしくは１００％の配列同一性、または実質的な配列同一性を有する。
一部の実施形態では、エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、アンタゴニスト性ＢＴＮＬ８分子である。
ＳＭ結合性／モジュレーティング部分：局所的微小環境の操作を含む治療用化合物
治療用化合物は、例えば、標的の近傍において、本明細書では、ＳＭ結合性／モジュレーティング部分と称される、標的の免疫系による攻撃を阻害または最小化する物質を提供することにより、免疫抑制性の局所微小環境を促進する、エフェクター結合性／モジュレーティング部分を含みうる。
一部の実施形態では、ＳＭ結合性／モジュレーティング部分は、標的の免疫系による攻撃を阻害または最小化する分子（本明細書では、ＳＭ結合性／モジュレーティング部分と称される）を含む。一部の実施形態では、治療用化合物は、免疫抑制機能を有する可溶性物質、例えば、内因性物質または外因性物質に結合し、これを蓄積するＳＭ結合性／モジュレーティング部分を含む。一部の実施形態では、治療用化合物は、免疫による攻撃を促進する、可溶性物質、典型的に、内因性可溶性物質、例えば、ＣＤ３９分子もしくはアルカリホスファターゼ分子の場合におけるＡＴＰ、またはＣＤ７３分子の場合におけるＡＭＰに結合するか、これを阻害、封鎖、分解するか、または他の形で中和する、ＳＭ結合性／モジュレーティング部分、例えば、ＣＤ３９分子もしくはＣＤ７３分子、またはアルカリホスファターゼ分子を含む。一部の実施形態では、治療用化合物は、免疫抑制物質、例えば、免疫抑制性であるタンパク質の断片を含む、ＳＭ結合性／モジュレーティング部分を含む。
ＩＣＳＭ結合性／モジュレーティング部分を含む治療用化合物：刺激の阻害、例えば、免疫細胞の共刺激の阻害
治療用化合物は、刺激性結合対、例えば、共刺激性結合対、例えば、ＯＸ４０およびＯＸ４０Ｌを阻害するか、またはアンタゴナイズする、ＩＣＳＭ結合性／モジュレーティング部分を含みうる。ＩＣＳＭ結合性／モジュレーティング部分は、対のいずれかのメンバーに結合し、これをアンタゴナイズすることが可能である。
複数の実施形態では、ＩＣＳＭ結合性／モジュレーティング部分は、刺激性結合対、例えば、共刺激性結合対のいずれかのメンバーに結合し、これをアンタゴナイズする抗体分子を含む。ある実施形態では、ＩＣＳＭ結合性／モジュレーティング部分は、結合対のメンバーのうちの１つの、アンタゴニスト性類似体を含む。このような実施形態では、ＩＣＳＭ結合性／モジュレーティング部分は、メンバーのうちの一方の可溶性断片であって、他方に結合する可溶性断片を含みうる。典型的に、類似体は、対の標的メンバーに結合する、自然発生のメンバーとの、少なくとも５０、６０、７０、８０、９０、９５、または９８％の、相同性または配列同一性を有するであろう。免疫細胞の表面上に存在するメンバーに結合する、ＩＣＳＭ結合性／モジュレーティング部分の場合、ＩＣＳＭ結合性／モジュレーティング部分は、典型的に、内因性カウンターメンバーに結合するが、これを活性化させないか、または内因性カウンターメンバーが結合し、活性化することを可能としない。
したがって、例えば、ＯＸ４０免疫細胞メンバーと、ＯＸ４０Ｌカウンターメンバーとを含む結合対の場合、ＩＣＳＭ結合性／モジュレーティングメンバーは：
ａ）ＯＸ４０免疫細胞メンバーに結合し、例えば、内因性ＯＸ４０Ｌカウンターメンバーの結合を遮断することにより、刺激をアンタゴナイズする抗体分子；
ｂ）ＯＸ４０Ｌカウンターメンバーに結合し、例えば、内因性ＯＸ４０Ｌカウンターメンバーの、ＯＸ４０免疫細胞メンバーへの有効な結合を遮断することにより、刺激をアンタゴナイズする抗体分子；
ｃ）ＯＸ４０免疫細胞メンバーに結合し、刺激をアンタゴナイズする、ＯＸ４０Ｌカウンターメンバーの、可溶性断片または類似体；および
ｄ）ＯＸ４０Ｌカウンターメンバーに結合し、刺激をアンタゴナイズする、ＯＸ４０免疫細胞メンバーの、可溶性断片または類似体
のうちのいずれかを含みうる。
例えば、ＩＣＳＭ結合性／モジュレーティング部分、例えば、抗体分子、またはカウンターメンバーのアンタゴニスト性類似体は、ＣＤ２、ＩＣＯＳ、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ２８、ＬＦＡ１、ＳＬＡＭ、ＴＩＭ１、ＣＤ３０、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）、４１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＣＤ２７、ＨＶＥＭ、ＤＲ３、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡ、ＣＤ３０、またはＣＤ４０に結合することが可能である。別の実施形態では、ＩＣＳＭ結合性／モジュレーティング部分、例えば、抗体分子、またはカウンターメンバーのアンタゴニスト性類似体は、Ｂ７．１、Ｂ７．２、ＩＣＯＳＬ（Ｂ７－Ｈ２、Ｂ７ＲＰ１）、ＬＦＡ３、ＣＤ４８、ＣＤ５８、ＩＣＡＭ１、ＳＬＡＭ、ＴＩＭ４、ＣＤ４０、ＣＤ３０Ｌ、ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、４１ＢＢＬ（ＣＤ１３７Ｌ）、ＣＤ７０、軽、ＴＬ１Ａ、ＧＩＴＲＬ、ＢＡＦＦ、ＡＰＲＩＬ、ＣＤ３０、またはＣＤ４０Ｌに結合することが可能である。
一部の実施形態では、ＩＣＳＭ結合性／モジュレーティング分子は、免疫細胞上に存在する活性化分子もしくは共刺激分子、例えば、共刺激分子に結合し、これをアンタゴナイズするか、またはカウンターメンバーに結合し、カウンターメンバーが、免疫細胞上に存在する共刺激分子を活性化させることを防止する。一部の実施形態では、ＩＣＳＭは、アンタゴニスト性抗体分子、例えば、免疫細胞上の共刺激分子に結合するか、またはＩＣＳＭのカウンターメンバーに結合し、カウンターメンバーが、免疫細胞上の共刺激分子を活性化させることを防止し、共刺激分子の活性の阻害を結果としてもたらす抗体分子を含む。一部の実施形態では、ＩＣＳＭは、アンタゴニスト性カウンターパート分子、例えば、共刺激分子に結合し、共刺激分子活性の阻害を結果としてもたらす分子の断片を含む。
一部の実施形態では、結合対の一方のメンバーが、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはＮＫ細胞もしくは樹状細胞の表面上にあるのに対し、カウンターメンバーは、別の免疫細胞上、もしくは樹状細胞のようなＡＰＣ上、または平滑筋細胞もしくは内皮細胞のような非免疫細胞上にあろう。
以下の表は、共刺激分子と、カウンター構造との対についての非限定例を提供する。
Figure 2022544990000011
ドナー組織
本明細書で記載される治療用化合物および方法は、ドナー組織の、対象への移植と共に使用することができ、ドナー移植組織の拒絶を最小化し、免疫エフェクター細胞媒介性損傷を最小化して、ドナー移植組織の受容を延長するか、またはドナー移植組織の機能的寿命を延長する。組織は、異種移植片の場合もあり、同種移植組織の場合もある。移植された組織は、臓器、例えば、肝臓、腎臓、心臓、膵臓、胸腺、皮膚、または肺の全部または一部を含みうる。
複数の実施形態では、本明細書で記載される治療用化合物は、全身免疫抑制に対する必要を低減するか、または消失させる。本明細書で記載される治療用化合物および方法はまた、ＧＶＨＤを処置するのにも使用することができる。一部の実施形態では、宿主細胞は、エフェクター結合性／モジュレーティング部分として、ＰＤ－Ｌ１分子を含む、治療用化合物でコーティングされる。
表２Ａは、移植適応のための標的分子を提供する。標的分子は、標的化部分が結合する標的である。本明細書の別の箇所で論じられる通り、一部の実施形態では、ドナー組織上に存在し、対象（レシピエント）により発現されないか、または異なるレベル（例えば、低減されたレベル、または実質的に低減されたレベル）で発現される対立遺伝子の産物に結合する標的化部分が選択される。
Figure 2022544990000012
自己免疫障害
本明細書で記載される治療用化合物および方法を使用して、望ましくない自己免疫応答、例えば、１型糖尿病、多発性硬化症、心筋炎、白斑、脱毛症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ、例えば、クローン病もしくは潰瘍性大腸炎）、シェーグレン症候群、巣状分節状糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、強皮症／全身性硬化症（ＳＳｃ）もしくは関節リウマチにおける自己免疫応答を有するか、または有する危険性がある対象を処置することができる。一部の実施形態では、処置は、対象組織の拒絶を最小化するか、免疫エフェクター細胞媒介性損傷を最小化して、自己免疫による攻撃を受ける対象組織の生存を延長するか、または自己免疫による攻撃の危険性を最小化する。表３は、いくつかの自己免疫適応および臓器／細胞型のための標的分子を提供する。標的分子は、標的化部分が結合する標的である。
Figure 2022544990000013
本明細書で提供される化合物またはポリペプチドで処置することのできる、自己免疫障害および自己免疫疾患の他の例は、心筋炎、心筋梗塞後症候群、心膜切開後症候群、亜急性細菌性心内膜炎、抗糸球体基底膜腎炎、間質性膀胱炎、ループス腎炎、膜性糸球体腎症、慢性腎疾患（「ＣＫＤ」）、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、抗合成酵素症候群、円形脱毛症、自己免疫性血管浮腫、自己免疫性プロゲステロン皮膚炎、自己免疫性蕁麻疹、水疱性類天疱瘡、瘢痕性類天疱瘡、疱疹状皮膚炎、円板状エリテマトーデス、後天性表皮水疱症、結節性紅斑、妊娠性類天疱瘡、汗腺膿瘍、扁平苔癬、硬化性苔癬、線状ＩｇＡ病（ｌａｄ）、限局性強皮症、尋常性天疱瘡、急性痘瘡状苔癬状粃糠疹、ムッハ－ハーベルマン病、乾癬、全身性強皮症、白斑、アジソン病、１型自己免疫性多内分泌腺症候群（ＡＰＳ）、２型自己免疫性多内分泌腺症候群（ＡＰＳ）、３型自己免疫性多内分泌腺症候群（ＡＰＳ）、自己免疫性膵炎（ＡＩＰ）、１型糖尿病、自己免疫性甲状腺炎、オード甲状腺炎、グレーブス病、自己免疫性卵巣炎、子宮内膜症、自己免疫性精巣炎、シェーグレン症候群、自己免疫性腸症、セリアック病、クローン病、顕微鏡的大腸炎、潰瘍性大腸炎、血小板減少症、有痛脂肪症、成人発症スティル病、強直性脊椎炎、ＣＲＥＳＴ症候群、薬剤誘導性ループス、腱付着部炎関連関節炎、好酸球性筋膜炎、フェルティー症候群、ＩｇＧ４関連疾患、若年性関節炎、ライム病（慢性）、混合性結合組織疾患（ＭＣＴＤ）、回帰性リウマチ、パリー－ロンベルグ症候群、パーソネージ－ターナー症候群、乾癬性関節炎、反応性関節炎、再発性多発性軟骨炎、後腹膜線維症、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、シュニッツラー症候群、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、未分化型結合組織疾患（ＵＣＴＤ）、皮膚筋炎、線維筋痛症、封入体筋炎、筋炎、重症筋無力症、神経ミオトニー、傍腫瘍性小脳変性症、多発性筋炎、急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、急性運動性軸索神経障害、抗Ｎ－メチル－Ｄ－アスパラギン酸（抗ＮＭＤＡ）受容体脳炎、バロー型同心円硬化症、ビッカースタッフ脳炎、慢性炎症性脱髄性多発神経障害、ギラン－バレー症候群、橋本脳症、特発性炎症性脱髄性疾患、ランバート－イートン筋無力症候群、多発性硬化症、オシュトラン症候群、小児自己免疫性溶連菌関連性精神神経障害（ＰＡＮＤＡＳ）、進行性炎症性神経障害、レストレスレッグス症候群、スティッフパーソン症候群、シデナム舞踏病、横断性脊髄炎、自己免疫性網膜症、自己免疫性ブドウ膜炎、コーガン症候群、グレーブス眼症、中間部ブドウ膜炎、木質結膜炎、モーレン潰瘍、視神経脊髄炎、オプソクローヌス・ミオクローヌス症候群、視神経炎、強膜炎、スザック症候群、交感性眼炎、トロサ－ハント症候群、自己免疫性内耳疾患（ＡＩＥＤ）、メニエール病、ベーチェット病、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症（ＥＧＰＡ）、巨細胞性動脈炎、多発血管炎性肉芽腫症（ＧＰＡ）、ＩｇＡ血管炎（ＩｇＡＶ）、川崎病、白血球破砕性血管炎、ループス血管炎、リウマチ性血管炎、顕微鏡的多発血管炎（ＭＰＡ）、結節性多発動脈炎（ＰＡＮ）、リウマチ性多発筋痛症、血管炎、原発性免疫不全などを含むがこれらに限定されない。
本明細書で記載される化合物で処置することのできる、潜在的な自己免疫障害および自己免疫疾患、ならびに自己免疫性併存疾患の他の例は、慢性疲労症候群、複合性局所疼痛症候群、好酸球性食道炎、胃炎、間質性肺疾患、ＰＯＥＭＳ症候群、レイノー現象、原発性免疫不全症、壊疽性膿皮症、無ガンマグロブリン血症、アミロイドーシス、筋萎縮性側索硬化症、抗尿細管基底膜腎炎、アトピー性アレルギー症、アトピー性皮膚炎、自己免疫性末梢神経障害、ブラウ症候群、キャッスルマン病、シャーガス病、慢性閉塞性肺疾患、慢性再発性多巣性骨髄炎、補体成分２欠損症、接触性皮膚炎、クッシング症候群、皮膚白血球破砕性血管炎、ドゴー病、湿疹、好酸球性胃腸炎、好酸球性肺炎、胎児赤芽球症、進行性骨化性線維異形成症、消化管類天疱瘡、低ガンマグロブリン血症、特発性巨細胞性心筋炎、特発性肺線維症、ＩｇＡ腎症、免疫調節性リポタンパク質、ＩＰＥＸ症候群、木質結膜炎、マジード症候群、ナルコレプシー、ラスムッセン脳炎、統合失調症、血清病、脊椎関節炎、スウィート症候群、高安動脈炎、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー、先天性筋ジストロフィー、筋緊張性ジストロフィー、顔面肩甲上腕型（ＦＨＳＤ）筋ジストロフィー、肢帯型筋ジストロフィー、眼咽頭型筋ジストロフィー（ＯＰＭＤ）、遠位型筋ジストロフィー、エメリー－ドレイフス型筋ジストロフィー、肺動脈性高血圧、喘息、慢性鼻副鼻腔炎、過敏性肺炎、非特異性間質性肺炎、子癇前症、流産、再発性流産、再生不良性貧血、自己免疫性好中球減少症、自己免疫性溶血性貧血、がん免疫療法関連自己免疫疾患などを含むがこれらに限定されない。一部の実施形態では、自己免疫疾患は、ＩｇＧ４疾患である。例えば、肺腺癌におけるＩｇＧ４関連胸膜疾患（全体として参照により本明細書に組み入れられる、Ｔｅｒａｓｈｉｍａ，Ｔ．、Ｉｗａｍｉ，Ｅ．、Ｓｈｉｍａｄａ，Ｔ．ら、ＩｇＧ４－ｒｅｌａｔｅｄ ｐｌｅｕｒａｌ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ａ ｐａｔｉｅｎｔ ｗｉｔｈ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ ｕｎｄｅｒ ｄｕｒｖａｌｕｍａｂ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ：ａ ｃａｓｅ ｒｅｐｏｒｔ．ＢＭＣ Ｐｕｌｍ Ｍｅｄ ２０、１０４（２０２０）を参照されたい）。一部の実施形態では、自己免疫障害は、デュシェンヌ筋ジストロフィー、多発性筋炎、皮膚筋炎、肺動脈高血圧症、ＧＣＡ－巨細胞性動脈炎のような自己免疫性血管炎、高安動脈炎、強皮症血管炎などである。
一部の実施形態では、自己免疫障害は、尋常性天疱瘡である、天疱瘡を含まない。一部の実施形態では、自己免疫障害は落葉状天疱瘡を含まない。一部の実施形態では、自己免疫障害は、水疱性類天疱瘡を含まない。一部の実施形態では、自己免疫障害は、グッドパスチャー病を含まない。一部の実施形態では、自己免疫障害は、乾癬を含まない。一部の実施形態では、自己免疫障害は、皮膚障害を含まない。一部の実施形態では、障害は、新生物性障害、例えば、がんを含まない。
治療用化合物
一部の実施形態では、治療用化合物は、エフェクター結合性／モジュレーティング部分と機能的に関連する、特異的標的化部分を含む。その非限定的な例が本明細書で提供される。一部の実施形態では、治療用化合物は、抗ＰＤ－１抗体を含む。非限定的な例が本明細書で提供される。一部の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、特異的標的化部分に係留も連結もされていない。本開示全体を通じて使用されるように、一部の実施形態では、エフェクター結合性／モジュレーティング部分のようなエフェクター分子は、抗ＰＤ－１抗体である。抗ＰＤ－１抗体の非限定的な例が本明細書で提供される。本開示全体を通じて使用されるように、一部の実施形態では、エフェクター結合性／モジュレーティング部分のようなエフェクター分子は、ＩＬ－２ムテインである。ＩＬ－２ムテインの非限定的な例が本明細書で提供される。
一部の実施形態では、ＰＤ－１抗体は、標的化細胞型に対する別のエフェクターを標的化するための標的化部分として用いることができる。
一部の実施形態では、特異的標的化部分と、エフェクター結合性／モジュレーティング部分とは、共有結合または非共有結合、例えば、一方を、他方へと、直接連結する、共有結合または非共有結合により、互いと連結される。他の実施形態では、特異的標的化部分と、エフェクター結合性／モジュレーティング部分とは、例えば、リンカー部分を介して、共有結合的に、または非共有結合的に連結される。例えば、融合ポリペプチドの場合、特異的標的化部分を含むポリペプチド配列と、エフェクター結合性／モジュレーティング部分を含むポリペプチド配列とは、互いと直接連結される場合もあり、１つまたはそれ以上のリンカー配列を介して連結される場合もある。一部の実施形態では、リンカー部分は、ポリペプチドを含む。しかし、リンカーは、ポリペプチドに限定されない。一部の実施形態では、リンカー部分は、他の骨格、例えば、非ペプチドポリマー、例えば、ＰＥＧポリマーを含む。一部の実施形態では、リンカー部分は、粒子、例えば、ナノ粒子、例えば、ポリマー性ナノ粒子を含みうる。一部の実施形態では、リンカー部分は、分枝状分子またはデンドリマーを含みうる。しかし、エフェクター結合性／モジュレーティング部分が、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分（ＰＤ－１のようなエフェクターに結合する）を含む実施形態では、標的への結合の非存在下で、クラスター化を結果としてもたらす構造は、標的への結合の非存在下で、クラスター化を引き起こす恐れがあるので、回避すべきである。したがって、複数の実施形態では、治療用化合物は、例えば、ＩＣＩＭのコピーが、標的への結合の非存在下におけるクラスター化が、最小化されるか、または実質的に消失されるか、または消失されるか、または実質的な全身免疫抑制が生じない程度に、十分に最小化されるように、十分に限定された構造を有する。
一部の実施形態では、治療用化合物は、エフェクター結合性／モジュレーティング部分へと、共有結合的に、または非共有結合的にコンジュゲートされた、特異的標的化部分を含むポリペプチドを含む。一部の実施形態では、治療用分子は、特異的標的化部分を、例えば、直接、または１つもしくはそれ以上のアミノ酸残基を含む連結部分を介して、エフェクター結合性／モジュレーティング部分へ融合させた融合タンパク質を含む。一部の実施形態では、治療用分子は、非共有結合または共有結合、例えば、ペプチド結合以外の共有結合、例えば、スルフヒドリル結合により、エフェクター結合性／モジュレーティング部分へと連結された、特異的標的化部分を含むポリペプチドを含む。
一部の実施形態では、治療用化合物は：
１．ａ）標的特異的結合性ポリペプチドを含む特異的標的化部分；
１．ｂ）標的リガンド結合性分子を含む特異的標的化部分；
１．ｃ）抗体分子を含む特異的標的化部分；
１．ｄ）単鎖抗体分子、例えば、ｓｃＦｖドメインを含む特異的標的化部分；または
１．ｅ）抗体分子の軽鎖可変領域または重鎖可変領域のうちの、第１の可変領域を含み、他の可変領域は、第１の可変領域と、共有結合的に、または非共有結合的に会合された、特異的標的化部分と；
２．ａ）エフェクター特異的結合性ポリペプチドを含むエフェクター結合性／モジュレーティング部分；
２．ｂ）エフェクターリガンド結合性分子を含むエフェクター結合性／モジュレーティング部分；
２．ｃ）抗体分子を含むエフェクター結合性／モジュレーティング部分；
２．ｄ）単鎖抗体分子、例えば、ｓｃＦｖドメインを含むエフェクター結合性／モジュレーティング部分；または
２．ｅ）抗体分子の軽鎖可変領域または重鎖可変領域のうちの、第１の可変領域を含み、他の可変領域は、第１の可変領域と、共有結合的に、または非共有結合的に会合された、エフェクター結合性／モジュレーティング部分
を含む、ポリペプチド、例えば、融合ポリペプチドを含む。
一部の実施形態では、治療用化合物は、１．ａおよび２．ａを含む。
一部の実施形態では、治療用化合物は、１．ａおよび２．ｂを含む。
一部の実施形態では、治療用化合物は、１．ａおよび２．ｃを含む。
一部の実施形態では、治療用化合物は、１．ａおよび２．ｄを含む。
一部の実施形態では、治療用化合物は、１．ａおよび２．ｅを含む。
一部の実施形態では、治療用化合物は、１．ｂおよび２．ａを含む。
一部の実施形態では、治療用化合物は、１．ｂおよび２．ｂを含む。
一部の実施形態では、治療用化合物は、１．ｂおよび２．ｃを含む。
一部の実施形態では、治療用化合物は、１．ｂおよび２．ｄを含む。
一部の実施形態では、治療用化合物は、１．ｂおよび２．ｅを含む。
一部の実施形態では、治療用化合物は、１．ｃおよび２．ａを含む。
一部の実施形態では、治療用化合物は、１．ｃおよび２．ｂを含む。
一部の実施形態では、治療用化合物は、１．ｃおよび２．ｃを含む。
一部の実施形態では、治療用化合物は、１．ｃおよび２．ｄを含む。
一部の実施形態では、治療用化合物は、１．ｃおよび２．ｅを含む。
一部の実施形態では、治療用化合物は、１．ｄおよび２．ａを含む。
一部の実施形態では、治療用化合物は、１．ｄおよび２．ｂを含む。
一部の実施形態では、治療用化合物は、１．ｄおよび２．ｃを含む。
一部の実施形態では、治療用化合物は、１．ｄおよび２．ｄを含む。
一部の実施形態では、治療用化合物は、１．ｄおよび２．ｅを含む。
一部の実施形態では、治療用化合物は、１．ｅおよび２．ａを含む。
一部の実施形態では、治療用化合物は、１．ｅおよび２．ｂを含む。
一部の実施形態では、治療用化合物は、１．ｅおよび２．ｃを含む。
一部の実施形態では、治療用化合物は、１．ｅおよび２．ｄを含む。
一部の実施形態では、治療用化合物は、１．ｅおよび２．ｅを含む。
本明細書で開示される治療用化合物は、例えば、複数のエフェクター結合性／モジュレーティング部分、および特異的標的化部分を含む場合がある。任意の、適切なリンカーまたはプラットフォームを使用して、複数の部分を提示することができる。リンカーは、典型的に、１つまたはそれ以上のエフェクター結合性／モジュレーティング部分、および標的化部分へと、カップリングされるか、または融合される。
一部の実施形態では、２つ（またはそれ以上）のリンカーは、共有結合的にまたは非共有結合的にのいずれかで会合して、例えば、ヘテロまたはホモ二量体治療用化合物を形成する。例えば、リンカーはＦｃ領域を含むことができ、２つのＦｃ領域は互いに会合することができる。２つのリンカー領域を含む治療用化合物についての、一部の実施形態では、リンカー領域は、例えば、２つの同一なＦｃ領域として、自己会合する場合がある。２つのリンカー領域を含む治療用化合物についての、一部の実施形態では、リンカー領域は、自己会合が可能ではないか、または実質的な自己会合が可能ではなく、例えば、２つのＦｃ領域は、ノブとホールの対のメンバーの場合がある。
治療用化合物の、非限定的な例示的構成は、以下（例えば、Ｎ末端から、Ｃ末端の順に）：
Ｒ１－リンカー領域Ａ－Ｒ２
Ｒ３－リンカー領域Ｂ－Ｒ４、
［式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、各々、独立に、エフェクター結合性／モジュレーティング部分、例えば、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分、ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分、ＩＣＳＭ結合性／モジュレーティング部分、もしくはＳＭ結合性／モジュレーティング部分；特異的標的化部分を含むか；または存在せず；
リンカー領域Ａおよびリンカー領域Ｂは、互いと会合しうる部分を含む、例えば、リンカーＡおよびリンカーＢは、各々、Ｆｃ部分を含み、ただし、エフェクター結合性／モジュレーティング部分、および特異的標的化部分が存在することを条件とする］
を含む。
一部の実施形態では：
Ｒ１は、エフェクター結合性／モジュレーティング部分、例えば、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分、ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分、ＩＣＳＭ結合性／モジュレーティング部分、もしくはＳＭ結合性／モジュレーティング部分を含むか、または存在せず；
Ｒ２は、特異的標的化部分を含むか、または存在せず；
Ｒ３は、エフェクター結合性／モジュレーティング部分、例えば、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分、ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分、ＩＣＳＭ結合性／モジュレーティング部分、もしくはＳＭ結合性／モジュレーティング部分を含むか、または存在せず；
Ｒ４は、特異的標的化部分を含むか、または存在せず；
リンカー領域Ａおよびリンカー領域Ｂは、互いと会合しうる部分を含む、例えば、リンカーＡおよびリンカーＢは、各々、Ｆｃ部分を含み、ただし、Ｒ１またはＲ３のうちの１つが存在し、Ｒ２またはＲ４のうちの１つが存在することを条件とする。
一部の実施形態では：
Ｒ１は、特異的標的化部分を含むか、または存在せず；
Ｒ２は、エフェクター結合性／モジュレーティング部分、例えば、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分、ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分、ＩＣＳＭ結合性／モジュレーティング部分、もしくはＳＭ結合性／モジュレーティング部分を含むか、または存在せず；
Ｒ３は、特異的標的化部分を含むか、または存在せず；
Ｒ４は、エフェクター結合性／モジュレーティング部分、例えば、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分、ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分、ＩＣＳＭ結合性／モジュレーティング部分、もしくはＳＭ結合性／モジュレーティング部分を含むか、または存在せず；
リンカー領域Ａおよびリンカー領域Ｂは、互いと会合しうる部分を含む、例えば、リンカーＡおよびリンカーＢは、各々、Ｆｃ部分を含み、ただし、Ｒ１またはＲ３のうちの１つが存在し、Ｒ２またはＲ４のうちの１つが存在することを条件とする。
非限定例は、以下を含むがこれらに限定されない：
Figure 2022544990000014
Figure 2022544990000015
一部の実施形態では：
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、各々、独立に、免疫細胞上、例えば、Ｔ細胞上もしくはＢ細胞上の阻害性受容体を活性化させるエフェクター結合性／モジュレーティング部分、例えば、ＰＤ－Ｌ１分子または機能的な抗ＰＤ－１抗体分子（ＰＤ－１のアゴニスト）；特異的標的化部分を含むか；または存在せず；
ただし、エフェクター結合性部分および特異的標的化部分が存在することを条件とする。
一部の実施形態では、リンカーＡおよびリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合性Ｆｃ部分）を含む。
一部の実施形態では：
Ｒ１およびＲ３は、独立に、免疫細胞上、例えば、Ｔ細胞上またはＢ細胞上の阻害性受容体を活性化させるエフェクター結合性／モジュレーティング部分、例えば、ＰＤ－Ｌ１分子または機能的な抗ＰＤ－１抗体分子（ＰＤ－１のアゴニスト）を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む。
一部の実施形態では、リンカーＡおよびリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合性Ｆｃ部分）を含む。
一部の実施形態では：
Ｒ１およびＲ３は、独立に、機能的な抗ＰＤ－１抗体分子（ＰＤ－１のアゴニスト）を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む。
一部の実施形態では、リンカーＡおよびリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合性Ｆｃ部分）を含む。
一部の実施形態では：
Ｒ１およびＲ３は、独立に、特異的標的化部分、例えば、抗組織抗原抗体を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、機能的な抗ＰＤ－１抗体分子（ＰＤ－１のアゴニスト）、例えば、ｓｃＦｖ分子を含む。
一部の実施形態では、リンカーＡおよびリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合性Ｆｃ部分）を含む。
一部の実施形態では：
Ｒ１およびＲ３は、独立に、ＰＤ－Ｌ１分子（ＰＤ－１のアゴニスト）を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含み；
一部の実施形態では、リンカーＡおよびリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合性Ｆｃ部分）を含む。
一部の実施形態では：
Ｒ１およびＲ３は、独立に、特異的標的化部分、例えば、抗組織抗原抗体を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、ＰＤ－Ｌ１分子（ＰＤ－１のアゴニスト）を含む。
一部の実施形態では、リンカーＡおよびリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合性Ｆｃ部分）を含む。
一部の実施形態では：
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、各々、独立に、免疫応答をモジュレートする物質、例えば、可溶性分子、例えば、ＡＴＰまたはＡＭＰをモジュレートする、例えば、これらに結合し、これらを阻害、封鎖、分解するか、または他の形で中和する、ＳＭ結合性／モジュレーティング部分、例えば、ＣＤ３９分子またはＣＤ７３分子；特異的標的化部分を含むか；または存在せず；
ただし、ＳＭ結合性／モジュレーティング部分、および特異的標的化部分が存在することを条件とする。
一部の実施形態では、リンカーＡおよびリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合性Ｆｃ部分、または自己対合しないか、もしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
一部の実施形態では：
Ｒ１およびＲ３は、独立に、免疫応答をモジュレートする物質、例えば、可溶性分子、例えば、ＡＴＰまたはＡＭＰをモジュレートする、例えば、これらに結合し、これらを阻害、封鎖、分解するか、または他の形で中和する、ＳＭ結合性／モジュレーティング部分、例えば、ＣＤ３９分子またはＣＤ７３分子を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む。
一部の実施形態では、リンカーＡおよびリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合性Ｆｃ部分、または自己対合しないか、もしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
一部の実施形態では：
Ｒ１およびＲ３は、独立に、ＣＤ３９分子またはＣＤ７３分子を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む。
一部の実施形態では、リンカーＡおよびリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合性Ｆｃ部分、または自己対合しないか、もしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
一部の実施形態では：
Ｒ１およびＲ３は、各々、ＣＤ３９を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含み；
一部の実施形態では、リンカーＡおよびリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合性Ｆｃ部分、または自己対合しないか、もしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
一部の実施形態では：
Ｒ１およびＲ３は、各々、ＣＤ７３分子を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む。
一部の実施形態では、リンカーＡおよびリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合性Ｆｃ部分、または自己対合しないか、もしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
一部の実施形態では：
Ｒ１およびＲ３のうちの一方は、ＣＤ３９分子を含み、他方は、ＣＤ７３分子を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む。
一部の実施形態では、リンカーＡおよびリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合性Ｆｃ部分、または自己対合しないか、もしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
一部の実施形態では：
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、各々、独立に、ＨＬＡ－Ｇ分子；特異的標的化部分を含むか；または存在せず；
ただし、ＨＬＡ－Ｇ分子および特異的標的化部分が存在することを条件とする。
一部の実施形態では、リンカーＡおよびリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合性Ｆｃ部分、または自己対合しないか、もしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
一部の実施形態では：
Ｒ１およびＲ３は、各々、ＨＬＡ－Ｇ分子を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む。
一部の実施形態では、リンカーＡおよびリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合性Ｆｃ部分、または自己対合しないか、もしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
Ｒ１およびＲ３は、各々、アゴニスト性抗ＬＩＬＲＢ１抗体分子を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む。
一部の実施形態では、リンカーＡおよびリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合性Ｆｃ部分、または自己対合しないか、もしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
一部の実施形態では：
Ｒ１およびＲ３は、各々、アゴニスト性抗ＫＩＲ２ＤＬ４抗体分子を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む。
一部の実施形態では、リンカーＡおよびリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合性Ｆｃ部分、または自己対合しないか、もしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
一部の実施形態では：
Ｒ１およびＲ３は、各々、アゴニスト性抗ＬＩＬＲＢ２抗体分子を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む。
一部の実施形態では、リンカーＡおよびリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合性Ｆｃ部分、または自己対合しないか、もしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
一部の実施形態では：
Ｒ１およびＲ３は、各々、アゴニスト性抗ＮＫＧ２Ａ抗体分子を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む。
一部の実施形態では、リンカーＡおよびリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合性Ｆｃ部分、または自己対合しないか、もしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
一部の実施形態では：
Ｒ１およびＲ３のうちの一方は：アンタゴニスト性抗ＬＩＬＲＢ１抗体分子、アゴニスト性抗ＫＲ２ＤＬ４抗体分子、およびアゴニスト性抗ＮＫＧ２Ａ抗体分子から選び出される、第１の部分を含み、他方は、これらから選び出される、異なる部分を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む。
一部の実施形態では、リンカーＡおよびリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合性Ｆｃ部分、または自己対合しないか、もしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
一部の実施形態では：
Ｒ１およびＲ３のうちの一方は、アンタゴニスト性抗ＬＩＬＲＢ１抗体分子を含み、他方は、アゴニスト性抗ＫＲ２ＤＬ４抗体分子を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む。
一部の実施形態では、リンカーＡおよびリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合性Ｆｃ部分、または自己対合しないか、もしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
一部の実施形態では：
Ｒ１およびＲ３のうちの一方は、アンタゴニスト性抗ＬＩＬＲＢ１抗体分子を含み、他方は、アゴニスト性抗ＮＫＧ２Ａ抗体分子を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む。
一部の実施形態では、リンカーＡおよびリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合性Ｆｃ部分、または自己対合しないか、もしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
ある実施形態では：
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、各々、独立に、ＩＬ－２ムテイン分子；特異的標的化部分を含むか；または存在せず；
ただし、ＩＬ－２ムテイン分子および特異的標的化部分が存在することを条件とする。
ある実施形態では、リンカーＡおよびリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合性Ｆｃ部分、または自己対合しないか、もしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４のうちの１つは、ＩＬ－２ムテイン分子を含み、１つは、抗ＧＩＴＲ抗体分子、例えば、ＧＩＴＲＬの、ＧＩＴＲへの結合を阻害する抗ＧＩＴＲ抗体分子を含み、１つは、特異的標的化部分を含む。
ある実施形態では、リンカーＡおよびリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合性Ｆｃ部分、または自己対合しないか、もしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
ある実施形態では：
Ｒ１およびＲ３は、各々、ＩＬ－２ムテイン分子を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む。
一実施形態では、リンカーＡおよびリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合性Ｆｃ部分、または自己対合しないか、もしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
ある実施形態では：
Ｒ１およびＲ３のうちの一方は、ＧＡＲＰ結合性分子、例えば、抗ＧＡＲＰ抗体分子、またはＧＩＴＲ結合性分子、例えば、抗ＧＩＴＲ抗体分子を含み、他方は、ＩＬ－２ムテイン分子を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む。
一実施形態では、リンカーＡおよびリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合性Ｆｃ部分、または自己対合しないか、もしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
ある実施形態では：
Ｒ１およびＲ３のうちの一方は、ＧＡＲＰ結合性分子、例えば、抗ＧＡＲＰ抗体分子を含み、他方は、ＩＬ－２ムテイン分子を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む。
ある実施形態では、リンカーＡおよびリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合性Ｆｃ部分、または自己対合しないか、もしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
ある実施形態では：
Ｒ１およびＲ３のうちの一方は、ＧＩＴＲ結合性分子、例えば、抗ＧＩＴＲ抗体分子を含み、他方は、ＩＬ－２ムテイン分子を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む。
ある実施形態では、リンカーＡおよびリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合性Ｆｃ部分、または自己対合しないか、もしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
一部の実施形態では：
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、各々、独立に、Ｂ細胞上の阻害性受容体を活性化させるエフェクター結合性／モジュレーティング部分、例えば、抗ＦＣＲＬ抗体分子、例えば、アゴニスト性抗ＦＣＲＬ抗体分子；特異的標的化部分を含むか；または存在せず；
ただし、エフェクター結合性部分および特異的標的化部分が存在することを条件とする。
一部の実施形態では、リンカーＡおよびリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合性Ｆｃ部分、または自己対合しないか、もしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
ある実施形態では、抗ＦＣＲＬ分子は：抗ＦＣＲＬ抗体分子、例えば、ＦＣＲＬ１、ＦＣＲＬ２、ＦＣＲＬ３、ＦＣＲＬ４、ＦＣＲＬ５、またはＦＣＲＬ６へと方向付けられた、アゴニスト性抗ＦＣＲＬ抗体分子を含む。
一部の実施形態では：
Ｒ１およびＲ３は、各々、アゴニスト性抗ＦＣＲＬ抗体分子を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む。
一部の実施形態では、リンカーＡおよびリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合性Ｆｃ部分、または自己対合しないか、もしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
ある実施形態では、抗ＦＣＲＬ分子は：ＦＣＲＬ１、ＦＣＲＬ２、ＦＣＲＬ３、ＦＣＲＬ４、ＦＣＲＬ５、またはＦＣＲＬ６へと方向付けられた抗ＦＣＲＬ抗体分子、例えば、アゴニスト性抗ＦＣＲＬ抗体分子を含む。
一部の実施形態では：
Ｒ１およびＲ３は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対する抗体分子を含み；
Ｒ２およびＲ４は、各々、抗ＦＣＲＬ抗体分子、例えば、アゴニスト性抗ＦＣＲＬ抗体分子、例えば、ｓｃＦｖ分子を含む。
一部の実施形態では、リンカーＡおよびリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合性Ｆｃ部分、または自己対合しないか、もしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
ある実施形態では、抗ＦＣＲＬ分子は：ＦＣＲＬ１、ＦＣＲＬ２、ＦＣＲＬ３、ＦＣＲＬ４、ＦＣＲＬ５、またはＦＣＲＬ６へと方向付けられた抗ＦＣＲＬ抗体分子、例えば、アゴニスト性抗ＦＣＲＬ抗体分子を含む。
一部の実施形態では：
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４のうちの１つは、抗ＢＣＲ抗体分子、例えば、アンタゴニスト性抗ＢＣＲ抗体分子を含み、１つは、抗ＦＣＲＬ抗体分子を含み、１つは、特異的標的化部分を含む。
一部の実施形態では、リンカーＡおよびリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合性Ｆｃ部分、または自己対合しないか、もしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
一部の実施形態では、抗ＦＣＲＬ分子は：ＦＣＲＬ１、ＦＣＲＬ２、ＦＣＲＬ３、ＦＣＲＬ４、ＦＣＲＬ５、またはＦＣＲＬ６へと方向付けられた抗ＦＣＲＬ抗体分子、例えば、アゴニスト性抗ＦＣＲＬ抗体分子を含む。
一部の実施形態では：
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４のうちの１つは、抗ＢＣＲ抗体分子、例えば、アンタゴニスト性抗ＢＣＲ抗体分子と、抗ＦＣＲＬ抗体分子とを含む、二特異性抗体分子を含み、１つは、特異的標的化部分を含む。
一部の実施形態では、リンカーＡおよびリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合性Ｆｃ部分、または自己対合しないか、もしくは実質的に自己対合しないＦｃ部分）を含む。
ある実施形態では、抗ＦＣＲＬ分子は：ＦＣＲＬ１、ＦＣＲＬ２、ＦＣＲＬ３、ＦＣＲＬ４、ＦＣＲＬ５、またはＦＣＲＬ６へと方向付けられた抗ＦＣＲＬ抗体分子、例えば、アゴニスト性抗ＦＣＲＬ抗体分子を含む。
一部の実施形態では：
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、各々、独立に、
ｉ）エフェクター結合性／モジュレーティング部分、例えば、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分、ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分、ＩＣＳＭ結合性／モジュレーティング部分、またはＴ細胞の活性、拡大、または機能を最小化または阻害する、ＳＭ結合性／モジュレーティング部分（Ｔ細胞エフェクター結合性／モジュレーティング部分）；
ｉｉ）エフェクター結合性／モジュレーティング部分、例えば、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分、ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分、ＩＣＳＭ結合性／モジュレーティング部分、またはＢ細胞の活性、拡大、または機能を最小化または阻害する、ＳＭ結合性／モジュレーティング部分（Ｂ細胞エフェクター結合性／モジュレーティング部分）；
ｉｉｉ）特異的標的化部分を含むか；または
ｉｖ）存在せず；
ただし、Ｔ細胞エフェクター結合性／モジュレーティング部分、Ｂ細胞エフェクター結合性／モジュレーティング部分、および特異的標的化部分が存在することを条件とする。
一部の実施形態では、リンカーＡおよびリンカーＢは、Ｆｃ部分（例えば、自己対合性Ｆｃ部分）を含む。
一部の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４のうちの１つは、アゴニスト性抗ＰＤ－１抗体を含み、１つは、ＨＬＡ－Ｇ分子を含む。
一部の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４のうちの１つは、ＳＭ結合性／モジュレーティング部分、例えば、ＣＤ３９分子またはＣＤ７３分子を含む。一部の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４のうちの１つは、調節性免疫細胞、例えば、Ｔｒｅｇ細胞、またはＢｒｅｇ細胞に結合するか、これらを活性化させるか、または維持する実体、例えば、ＩＬ－２ムテイン分子を含む。
一部の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４のうちの１つは、アゴニスト性抗ＰＤ－１抗体を含むか、または１つは、ＨＬＡ－Ｇ分子を含み、１つは、ＩＬ－２ムテイン分子を含む。一部の実施形態では、ＰＤ－１抗体は、ＩＬ－２ムテイン分子で置きかえられる。一部の実施形態では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４のうちの１つは、アゴニスト性抗ＰＤ－１抗体を含み、１つは、ＨＬＡ－Ｇ分子を含み、１つは、ＣＤ３９分子またはＣＤ７３分子を含む。一部の実施形態では、ＰＤ－１抗体は、ＩＬ－２ムテイン分子で置きかえられる。
リンカー領域
本明細書の別の箇所で論じられる通り、特異的標的化部分と、エフェクター結合性／モジュレーティング部分とは、リンカー領域により連結することができる。本明細書で記載される、任意のリンカー領域を、リンカーとして使用することができる。例えば、リンカー領域Ａおよびリンカー領域Ｂは、Ｆｃ領域を含みうる。一部の実施形態では、治療用化合物は、自己会合が可能なリンカー領域を含む。一部の実施形態では、治療用化合物は、自己会合を最小化する部分を有するリンカー領域を含み、典型的に、リンカー領域Ａと、リンカー領域Ｂとは、ヘテロ二量体である。リンカーはまた、グリシン／セリンリンカーも含む。一部の実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＧＳ（配列番号２３）の、１回またはそれ以上のリピートを含みうる。一部の実施形態では、リンカーは、配列番号２３の、１、２、３、４、または５回のリピートを含む。一部の実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２２）または、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３０）を含む。これらのリンカーは、本明細書で提供される治療用化合物または組成物のうちのいずれかにおいて使用することができる。リンカー領域はまた、抗体を互いに連結するために、または抗体の部分を互いに異なるようにするために使用することもできる。
一部の実施形態では、リンカー領域は、ヘテロ二量体を生成するように修飾された（例えば、突然変異された）Ｆｃ領域を含むことができる。一部の実施形態では、Ｆｃ領域のＣＨ３ドメインを、突然変異させることができる。このようなＦｃ領域の例は、例えば、参照によりその全体において本明細書に組み入れられる、米国特許第９，５７４，０１０号において見出すことができる。本明細書で規定されるＦｃ領域は、ＣＨ３ドメインまたはこの断片を含み、加えて、ヒンジ、ＣＨ１、またはＣＨ２を含む、１つまたはそれ以上の定常領域ドメインまたはこれらの断片を含む場合がある。Ｆｃアミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔら、１９９１、ＮＩＨ刊行物第９１－３２４２号、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ、Ｖａにおける通りに、ＥＵインデックスによる番号付けであることが理解されるであろう。「Ｋａｂａｔにおいて明示されているＥＵインデックス」とは、ヒトＩｇＧ１ Ｋａｂａｔ抗体に対する、ＥＵインデックスによる番号付けを指す。簡便のために、米国特許第９，５７４，０１０号の表Ｂは、ヒトＩｇＧ１に由来する、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインについて、Ｋａｂａｔにおいて明示されているＥＵインデックスに従い番号付けされたアミノ酸を提供するが、これは、参照により本明細書に組み入れられる。米国特許第９，５７４，０１０号の表１．１は、リンカー領域として使用することができる、変異体のＦｃヘテロ二量体の突然変異を提供する。米国特許第９，５７４，０１０号の表１．１は、参照により本明細書に組み入れられる
一部の実施形態では、リンカー領域Ａは、第１のＣＨ３ドメインポリペプチドを含み、リンカー領域Ｂは、第２のＣＨ３ドメインポリペプチドを含み、第１のＣＨ３ドメインポリペプチドと、第２のＣＨ３ドメインポリペプチドとは、独立に、野生型ＣＨ３ドメインポリペプチドと比較したアミノ酸修飾を含み、この場合、第１のＣＨ３ドメインポリペプチドは、Ｔ３５０、Ｌ３５１、Ｆ４０５０５、およびＹ４０７位におけるアミノ酸修飾を含み、第２のＣＨ３ドメインポリペプチドは、Ｔ３５０、Ｔ３６６、Ｋ３９２、およびＴ３９４位におけるアミノ酸修飾を含み、この場合、Ｔ３５０位におけるアミノ酸修飾は、Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３５０１、Ｔ３５０Ｌ、またはＴ３５０Ｍであり；Ｌ３５１位におけるアミノ酸修飾は、Ｌ３５１Ｙであり；Ｆ４０５位におけるアミノ酸修飾は、Ｆ４０５Ａ、Ｆ４０５Ｖ、Ｆ４０５Ｔ、またはＦ４０５Ｓであり；Ｙ４０７位におけるアミノ酸修飾は、Ｙ４０７Ｖ、Ｙ４０７Ａ、またはＹ４０７Ｉであり；Ｔ３６６位におけるアミノ酸修飾は、Ｔ３６６Ｌ、Ｔ３６６Ｉ、Ｔ３６６Ｖ、またはＴ３６６Ｍであり；Ｋ３９２位におけるアミノ酸修飾は、Ｋ３９２Ｆ、Ｋ３９２Ｌ、またはＫ３９２Ｍであり；Ｔ３９４位におけるアミノ酸修飾は、Ｔ３９４Ｗであり、この場合、アミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔにおいて明示されているＥＵインデックスに従う。
一部の実施形態では、Ｋ３９２位におけるアミノ酸修飾は、Ｋ３９２ＭまたはＫ３９２Ｌである。一部の実施形態では、Ｔ３５０位におけるアミノ酸修飾は、Ｔ３５０Ｖである。一部の実施形態では、第１のＣＨ３ドメインポリペプチドは、Ｑ３４７ＲおよびＳ４００ＲまたはＳ４００Ｅのうちの１つから選択される、１つまたはそれ以上のアミノ酸修飾をさらに含む。一部の実施形態では、第２のＣＨ３ドメインポリペプチドは、Ｌ３５１Ｙ、Ｋ３６０Ｅ、およびＮ３９０Ｒ、Ｎ３９０Ｄ、またはＮ３９０Ｅのうちの１つから選択される、１つまたはそれ以上のアミノ酸修飾をさらに含む。一部の実施形態では、第１のＣＨ３ドメインポリペプチドは、Ｑ３４７ＲおよびＳ４００ＲまたはＳ４００Ｅのうちの１つから選択される、１つまたはそれ以上のアミノ酸修飾をさらに含み、第２のＣＨ３ドメインポリペプチドは、Ｌ３５１Ｙ、Ｋ３６０Ｅ、およびＮ３９０Ｒ、Ｎ３９０Ｄ、またはＮ３９０Ｅのうちの１つから選択される、１つまたはそれ以上のアミノ酸修飾をさらに含む。一部の実施形態では、Ｔ３５０位におけるアミノ酸修飾は、Ｔ３５０Ｖである。一部の実施形態では、Ｆ４０５位におけるアミノ酸修飾は、Ｆ４０５Ａである。一部の実施形態では、Ｙ４０７位におけるアミノ酸修飾は、Ｙ４０７Ｖである。一部の実施形態では、Ｔ３６６位におけるアミノ酸修飾は、Ｔ３６６ＬまたはＴ３６６Ｉである。一部の実施形態では、Ｆ４０５位におけるアミノ酸修飾は、Ｆ４０５Ａであり、Ｙ４０７位におけるアミノ酸修飾は、Ｙ４０７Ｖであり、Ｔ３６６位におけるアミノ酸修飾は、Ｔ３６６ＬまたはＴ３６６Ｉであり、Ｋ３９２位におけるアミノ酸修飾は、Ｋ３９２ＭまたはＫ３９２Ｌである。一部の実施形態では、第１のＣＨ３ドメインポリペプチドは、アミノ酸修飾Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｓ４００Ｅ、Ｆ４０５Ｖ、およびＹ４０７Ｖを含み、第２のＣＨ３ドメインポリペプチドは、アミノ酸修飾Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｎ３９０Ｒ、Ｋ３９２Ｍ、およびＴ３９４Ｗを含む。一部の実施形態では、第１のＣＨ３ドメインポリペプチドは、アミノ酸修飾Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｓ４００Ｅ、Ｆ４０５Ｔ、およびＹ４０７Ｖを含み、第２のＣＨ３ドメインポリペプチドは、アミノ酸修飾Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｎ３９０Ｒ、Ｋ３９２Ｍ、およびＴ３９４Ｗを含む。一部の実施形態では、第１のＣＨ３ドメインポリペプチドは、アミノ酸修飾Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｓ４００Ｅ、Ｆ４０５Ｓ、およびＹ４０７Ｖを含み、第２のＣＨ３ドメインポリペプチドは、アミノ酸修飾Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｎ３９０Ｒ、Ｋ３９２Ｍ、およびＴ３９４Ｗを含む。一部の実施形態では、第１のＣＨ３ドメインポリペプチドは、アミノ酸修飾Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｓ４００Ｅ、Ｆ４０５Ａ、およびＹ４０７Ｖを含み、第２のＣＨ３ドメインポリペプチドは、アミノ酸修飾Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｔ３６６Ｌ、Ｎ３９０Ｒ、Ｋ３９２Ｍ、およびＴ３９４Ｗを含む。一部の実施形態では、第１のＣＨ３ドメインポリペプチドは、アミノ酸修飾Ｑ３４７Ｒ、Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｓ４００Ｅ、Ｆ４０５Ａ、およびＹ４０７Ｖを含み、第２のＣＨ３ドメインポリペプチドは、アミノ酸修飾Ｔ３５０Ｖ、Ｋ３６０Ｅ、Ｔ３６６Ｌ、Ｎ３９０Ｒ、Ｋ３９２Ｍ、およびＴ３９４Ｗを含む。一部の実施形態では、第１のＣＨ３ドメインポリペプチドは、アミノ酸修飾Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｓ４００Ｒ、Ｆ４０５Ａ、およびＹ４０７Ｖを含み、第２のＣＨ３ドメインポリペプチドは、アミノ酸修飾Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｎ３９０Ｄ、Ｋ３９２Ｍ、およびＴ３９４Ｗを含む。一部の実施形態では、第１のＣＨ３ドメインポリペプチドは、アミノ酸修飾Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｓ４００Ｒ、Ｆ４０５Ａ、およびＹ４０７Ｖを含み、第２のＣＨ３ドメインポリペプチドは、アミノ酸修飾Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｎ３９０Ｅ、Ｋ３９２Ｍ、およびＴ３９４Ｗを含む。一部の実施形態では、第１のＣＨ３ドメインポリペプチドは、アミノ酸修飾Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｓ４００Ｅ、Ｆ４０５Ａ、およびＹ４０７Ｖを含み、第２のＣＨ３ドメインポリペプチドは、アミノ酸修飾Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｎ３９０Ｒ、Ｋ３９２Ｌ、およびＴ３９４Ｗを含む。一部の実施形態では、第１のＣＨ３ドメインポリペプチドは、アミノ酸修飾Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｓ４００Ｅ、Ｆ４０５Ａ、およびＹ４０７Ｖを含み、第２のＣＨ３ドメインポリペプチドは、アミノ酸修飾Ｔ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｎ３９０Ｒ、Ｋ３９２Ｆ、およびＴ３９４Ｗを含む。
一部の実施形態では、単離ヘテロ多量体は、第１のＣＨ３ドメインポリペプチドと、第２のＣＨ３ドメインポリペプチドとを含み、第１のＣＨ３ドメインポリペプチドが、Ｆ４０５およびＹ４０７位におけるアミノ酸修飾を含み、第２のＣＨ３ドメインポリペプチドが、Ｔ３６６およびＴ３９４位におけるアミノ酸修飾を含む、ヘテロ二量体のＣＨ３ドメインを含み、この場合、（ｉ）第１のＣＨ３ドメインポリペプチドは、Ｌ３５１位におけるアミノ酸修飾をさらに含み、（ｉｉ）第２のＣＨ３ドメインポリペプチドは、Ｋ３９２位におけるアミノ酸修飾をさらに含み、この場合、Ｆ４０５位におけるアミノ酸修飾は、Ｆ４０５Ａ、Ｆ４０５Ｔ、Ｆ４０５Ｓ、またはＦ４０５Ｖであり；Ｙ４０７位におけるアミノ酸修飾は、Ｙ４０７Ｖ、Ｙ４０７Ａ、Ｙ４０７Ｌ、またはＹ４０７Ｉであり；Ｔ３９４位におけるアミノ酸修飾は、Ｔ３９４Ｗであり；Ｌ３５１位におけるアミノ酸修飾は、Ｌ３５１Ｙであり；Ｋ３９２位におけるアミノ酸修飾は、Ｋ３９２Ｌ、Ｋ３９２Ｍ、Ｋ３９２Ｖ、またはＫ３９２Ｆであり；Ｔ３６６位におけるアミノ酸修飾は、Ｔ３６６Ｉ、Ｔ３６６Ｌ、Ｔ３６６Ｍ、またはＴ３６６Ｖであり；この場合、ヘテロ二量体のＣＨ３ドメインは、約７０℃以上の融点（Ｔｍ）、および約９０％を超える純度を有し、この場合、アミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔにおいて明示されているＥＵインデックスに従う。
一部の実施形態では、リンカー領域Ａは、第１のＣＨ３ドメインポリペプチドを含み、リンカー領域Ｂは、第２のＣＨ３ドメインポリペプチドを含み、この場合、第１のＣＨ３ドメインポリペプチドは、Ｆ４０５およびＹ４０７位におけるアミノ酸修飾を含み、第２のＣＨ３ドメインポリペプチドは、Ｔ３６６およびＴ３９４位におけるアミノ酸修飾を含み、この場合、（ｉ）第１のＣＨ３ドメインポリペプチドは、Ｌ３５１位におけるアミノ酸修飾をさらに含み、（ｉｉ）第２のＣＨ３ドメインポリペプチドは、Ｋ３９２位におけるアミノ酸修飾をさらに含み、この場合、Ｆ４０５位におけるアミノ酸修飾は、Ｆ４０５Ａ、Ｆ４０５Ｔ、Ｆ４０５Ｓ、またはＦ４０５Ｖであり；Ｙ４０７位におけるアミノ酸修飾は、Ｙ４０７Ｖ、Ｙ４０７Ａ、Ｙ４０７Ｌ、またはＹ４０７Ｉであり；Ｔ３９４位におけるアミノ酸修飾は、Ｔ３９４Ｗであり；Ｌ３５１位におけるアミノ酸修飾は、Ｌ３５１Ｙであり；Ｋ３９２位におけるアミノ酸修飾は、Ｋ３９２Ｌ、Ｋ３９２Ｍ、Ｋ３９２Ｖ、またはＫ３９２Ｆであり；Ｔ３６６位におけるアミノ酸修飾は、Ｔ３６６Ｉ、Ｔ３６６Ｌ、Ｔ３６６Ｍ、またはＴ３６６Ｖであり；この場合、ヘテロ二量体のＣＨ３ドメインは、約７０℃以上の融点（Ｔｍ）、および約９０％を超える純度を有し、この場合、アミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔにおいて明示されているＥＵインデックスに従う。一部の実施形態では、Ｆ４０５位におけるアミノ酸修飾は、Ｆ４０５Ａである。一部の実施形態では、Ｔ３６６位におけるアミノ酸修飾は、Ｔ３６６ＩまたはＴ３６６Ｌである。一部の実施形態では、Ｙ４０７位におけるアミノ酸修飾は、Ｙ４０７Ｖである。一部の実施形態では、Ｆ４０５位におけるアミノ酸修飾は、Ｆ４０５Ａであり、Ｙ４０７位におけるアミノ酸修飾は、Ｙ４０７Ｖであり、Ｔ３６６位におけるアミノ酸修飾は、Ｔ３６６ＩまたはＴ３６６Ｌであり、Ｋ３９２位におけるアミノ酸修飾は、Ｋ３９２ＬまたはＫ３９２Ｍである。一部の実施形態では、Ｆ４０５位におけるアミノ酸修飾は、Ｆ４０５Ａであり、Ｙ４０７位におけるアミノ酸修飾は、Ｙ４０７Ｖであり、Ｔ３６６位におけるアミノ酸修飾は、Ｔ３６６Ｌであり、Ｋ３９２位におけるアミノ酸修飾は、Ｋ３９２Ｍである。一部の実施形態では、Ｆ４０５位におけるアミノ酸修飾は、Ｆ４０５Ａであり、Ｙ４０７位におけるアミノ酸修飾は、Ｙ４０７Ｖであり、Ｔ３６６位におけるアミノ酸修飾は、Ｔ３６６Ｌであり、Ｋ３９２位におけるアミノ酸修飾は、Ｋ３９２Ｌである。一部の実施形態では、Ｆ４０５位におけるアミノ酸修飾は、Ｆ４０５Ａであり、Ｙ４０７位におけるアミノ酸修飾は、Ｙ４０７Ｖであり、Ｔ３６６位におけるアミノ酸修飾は、Ｔ３６６Ｉであり、Ｋ３９２位におけるアミノ酸修飾は、Ｋ３９２Ｍである。一部の実施形態では、Ｆ４０５位におけるアミノ酸修飾は、Ｆ４０５Ａであり、Ｙ４０７位におけるアミノ酸修飾は、Ｙ４０７Ｖであり、Ｔ３６６位におけるアミノ酸修飾は、Ｔ３６６Ｉであり、Ｋ３９２位におけるアミノ酸修飾は、Ｋ３９２Ｌである。一部の実施形態では、第１のＣＨ３ドメインポリペプチドは、Ｓ４００ＤおよびＳ４００Ｅから選択される、Ｓ４００位におけるアミノ酸修飾をさらに含み、第２のＣＨ３ドメインポリペプチドは、アミノ酸修飾である、Ｎ３９０Ｒをさらに含む。一部の実施形態では、Ｆ４０５位におけるアミノ酸修飾は、Ｆ４０５Ａであり、Ｙ４０７位におけるアミノ酸修飾は、Ｙ４０５Ｖであり、Ｓ４００位におけるアミノ酸修飾は、Ｓ４００Ｅであり、Ｔ３６６位におけるアミノ酸修飾は、Ｔ３６６Ｌであり、Ｋ３９２位におけるアミノ酸修飾は、Ｋ３９２Ｍである。
一部の実施形態では、改変された、第１のＣＨ３ドメインおよび第２のＣＨ３ドメインは、Ｇ型免疫グロブリン（ＩｇＧ）に基づく、Ｆｃ構築物により含められる。ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４でありうる。
変異体ＣＨ３ドメインを含む、他のリンカー領域Ａおよびリンカー領域Ｂについては、それらの各々が、参照によりその全体において本明細書に組み入れられる、米国特許第９，４９９，６３４号および同第９，５６２，１０９号において記載されている。
リンカー領域Ａと、リンカー領域Ｂとは、ヒト血清アルブミンのようなタンパク質、例えば、自然発生のタンパク質の相補性断片でありうる。複数の実施形態では、リンカー領域Ａおよびリンカー領域Ｂの一方は、タンパク質、例えば、ｈＳＡの、第１の、例えば、Ｎ末端断片を含み、他方は、タンパク質、例えば、ｈＳＡの、第２の、例えば、Ｃ末端断片を含む。ある実施形態では、断片は、Ｎ末端断片およびＣ末端断片を含む。ある実施形態では、断片は、２つの内部断片を含む。典型的に、断片は、重複しない。ある実施形態では、第１の断片と、第２の断片とは、併せて、元のタンパク質、例えば、ｈＳＡの全配列をもたらす。第１の断片は、他の配列、例えば、配列Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、またはＲ４（本明細書で規定される）へと連結する、例えば、融合させるためのＮ末端およびＣ末端をもたらす。
リンカー領域Ａと、リンカー領域Ｂとは、アルブミンポリペプチドに由来することが可能である。一部の実施形態では、アルブミンポリペプチドは、天然ヒト血清アルブミンポリペプチドおよびヒトアロアルブミンポリペプチドから選択される。アルブミンポリペプチドは、リンカー領域Ａと、リンカー領域Ｂとが、互いと相互作用して、ヘテロ二量体を形成するように改変することができる。改変アルブミンポリペプチドの例については、それらの各々が、参照によりその全体において本明細書に組み入れられる、米国特許第９，３８８，２３１号および同第９，４９９，６０５号において記載されている。
したがって、本明細書では、式：Ｒ１－リンカー領域Ａ－Ｒ２およびＲ３－リンカー領域Ｂ－Ｒ４［式中、リンカー領域Ａと、リンカー領域Ｂとは、ヘテロ多量体を形成する］の多機能性ヘテロ多量体タンパク質が提供される。一部の実施形態では、リンカー領域Ａは、第１のポリペプチドを含み、リンカー領域Ｂは、第２のポリペプチドを含み；この場合、前記第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドの各々は、天然ヒト血清アルブミンポリペプチドおよびヒトアロアルブミンポリペプチドから選択される、アルブミンポリペプチドのセグメントを含むアミノ酸配列を含み；前記第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドは、セグメント化部位における、０～３アミノ酸残基の欠失を結果としてもたらすような、セグメント化部位における、前記アルブミンポリペプチドのセグメント化により得られ；前記第１のポリペプチドは、Ａ１９４Ｃ、Ｌ１９８Ｃ、Ｗ２１４Ｃ、Ａ２１７Ｃ、Ｌ３３１Ｃ、およびＡ３３５Ｃから選択される、少なくとも１つの突然変異を含み、前記第２のポリペプチドは、Ｌ３３１Ｃ、Ａ３３５Ｃ、Ｖ３４３Ｃ、Ｌ３４６Ｃ、Ａ３５０Ｃ、Ｖ４５５Ｃ、およびＮ４５８Ｃから選択される、少なくとも１つの突然変異を含み；前記第１のポリペプチドと、第２のポリペプチドとは、自己組織化して、アルブミンポリペプチドの単量体形態の準天然構造を形成する。
一部の実施形態では、セグメント化部位は、溶媒接触可能表面積（ＳＡＳＡ）が大きく、アルブミン構造の残余との接触が限定された、アルブミンポリペプチドのループ上に存在する。一部の実施形態では、セグメント化は、輸送体ポリペプチド間に、相補性界面を結果としてもたらす。これらのセグメント化部位については、参照によりその全体において本明細書に組み入れられる、米国特許第９，３８８，２３１号において記載されている。
一部の実施形態では、第１のポリペプチドは、本明細書で記載される突然変異のうちの、１つまたはそれ以上を伴う、アルブミンポリペプチドの残基１～３３７または残基１～２９３を含む。一部の実施形態では、第２のポリペプチドは、本明細書で記載される突然変異のうちの、１つまたはそれ以上を伴う、アルブミンポリペプチドの３４２～５８５または３０４～５８５の残基を含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチドは、アルブミンタンパク質の残基１～３３９、１～３００、１～３６４、１～４４１、１～８３、１～１７１、１～２８１、１～２９３、１～１１４、１～３３７、または１～３３６を含む。一部の実施形態では、第２のポリペプチドは、アルブミンタンパク質の残基３０１～５８５、３６５～５８５、４４２～５８５、８５～５８５、１７２～５８５、２８２～５８５、または１１５～５８５、３０４～５８５、３４０～５８５、または３４２～５８５を含む。
一部の実施形態では、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドは、下記の表に示される、アルブミンタンパク質の残基を含む。アルブミンタンパク質の配列は、下記に記載される。
Figure 2022544990000016
一部の実施形態では、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドは、互いと、ジスルフィド結合のような共有結合を形成しうるリンカーを含む。リンカーの非限定例は、ペプチドリンカーである。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、ＧＧＧＧＳ（配列番号２３）を含む。リンカーは、第１のポリペプチドのＣ末端および第２のポリペプチドのＮ末端へと融合させることができる。リンカーはまた、リンカーが、ジスルフィド結合を形成する能力を失効化させずに、本明細書で記載される部分を接合させるのにも使用することができる。一部の実施形態では、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドは、共有結合を形成しうるリンカーを含まない。一部の実施形態では、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドは、以下の置換を有する。
Figure 2022544990000017
アルブミンポリペプチドの配列は、Ｎ末端シグナル伝達残基が除去された、タンパク質後形態
（ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳＲＧＶＦＲＲ）
ＤＡＨＫＳＥＶＡＨＲＦＫＤＬＧＥＥＮＦＫＡＬＶＬＩＡＦＡＱＹＬＱＱＣＰＦＥＤＨＶＫＬＶＮＥＶＴＥＦＡＫＴＣＶＡＤＥＳＡＥＮＣＤＫＳＬＨＴＬＦＧＤＫＬＣＴＶＡＴＬＲＥＴＹＧＥＭＡＤＣＣＡＫＱＥＰＥＲＮＥＣＦＬＱＨＫＤＤＮＰＮＬＰＲＬＶＲＰＥＶＤＶＭＣＴＡＦＨＤＮＥＥＴＦＬＫＫＹＬＹＥＩＡＲＲＨＰＹＦＹＡＰＥＬＬＦＦＡＫＲＹＫＡＡＦＴＥＣＣＱＡＡＤＫＡＡＣＬＬＰＫＬＤＥＬＲＤＥＧＫＡＳＳＡＫＱＲＬＫＣＡＳＬＱＫＦＧＥＲＡＦＫＡＷＡＶＡＲＬＳＱＲＦＰＫＡＥＦＡＥＶＳＫＬＶＴＤＬＴＫＶＨＴＥＣＣＨＧＤＬＬＥＣＡＤＤＲＡＤＬＡＫＹＩＣＥＮＱＤＳＩＳＳＫＬＫＥＣＣＥＫＰＬＬＥＫＳＨＣＩＡＥＶＥＮＤＥＭＰＡＤＬＰＳＬＡＡＤＦＶＥＳＫＤＶＣＫＮＹＡＥＡＫＤＶＦＬＧＭＦＬＹＥＹＡＲＲＨＰＤＹＳＶＶＬＬＬＲＬＡＫＴＹＥＴＴＬＥＫＣＣＡＡＡＤＰＨＥＣＹＡＫＶＦＤＥＦＫＰＬＶＥＥＰＱＮＬＩＫＱＮＣＥＬＦＥＱＬＧＥＹＫＦＱＮＡＬＬＶＲＹＴＫＫＶＰＱＶＳＴＰＴＬＶＥＶＳＲＮＬＧＫＶＧＳＫＣＣＫＨＰＥＡＫＲＭＰＣＡＥＤＹＬＳＶＶＬＮＱＬＣＶＬＨＥＫＴＰＶＳＤＲＶＴＫＣＣＴＥＳＬＶＮＲＲＰＣＦＳＡＬＥＶＤＥＴＹＶＰＫＥＦＮＡＥＴＦＴＦＨＡＤＩＣＴＬＳＥＫＥＲＱＩＫＫＱＴＡＬＶＥＬＶＫＨＫＰＫＡＴＫＥＱＬＫＡＶＭＤＤＦＡＡＦＶＥＫＣＣＫＡＤＤＫＥＴＣＦＡＥＥＧＫＫＬＶＡＡＳＱＡＡＬＧＬ（ヒトアルブミン、配列番号４２）
に示されるようなヒトアルブミンの配列でありうる。
一部の実施形態では、リンカー領域Ａと、リンカー領域Ｂとは、本明細書で記載される、ヘテロ二量体を形成する。
一部の実施形態では、ポリペプチドは、Ｎ末端において、ＩｇＧ Ｆｃ骨格のＣ末端上のｓｃＦｖと融合された、ＩｇＧ１ Ｆｃ骨格上のＦ（ａｂ’）２から構成される抗体を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ Ｆｃ骨格は、ＩｇＧ１ Ｆｃ骨格である。一部の実施形態では、ＩｇＧ１骨格は、ＩｇＧ４骨格、ＩｇＧ２骨格、または他の同様のＩｇＧ骨格で置きかえられる。本段落で記載されるＩｇＧ骨格は、Ｆｃ領域が、治療用化合物の一部であると称される、本出願を通して使用することができる。したがって、一部の実施形態では、ＩｇＧ１ Ｆｃ骨格上のＦ（ａｂ’）２から構成される抗体は、ＩｇＧ１ Ｆｃ上の抗ＭＡｄＣＡＭ抗体または抗ＰＤ－１抗体の場合もあり、本明細書で提供される、他の任意の標的化部分またはエフェクター結合性／モジュレーティング部分の場合もある。一部の実施形態では、Ｃ末端へと融合されるｓｃＦＶセグメントは、Ｎ末端領域が抗ＭＡｄＣＡＭ抗体である場合は、抗ＰＤ－１抗体でありえ、Ｎ末端領域が、抗ＰＤ－１抗体である場合は、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体でありうる。この非限定例では、Ｎ末端は、本明細書で提供される標的化部分のうちのいずれか１つのような標的化部分でありえ、Ｃ末端は、本明細書で提供されるエフェクター結合性／モジュレーティング部分のうちのいずれかのようなエフェクター結合性／モジュレーティング部分でありうる。代替的に、一部の実施形態では、Ｎ末端は、本明細書で提供されるエフェクター結合性／モジュレーティング部分のうちのいずれか１つのようなエフェクター結合性／モジュレーティング部分でありえ、Ｃ末端は、本明細書で提供される標的化部分のうちのいずれかのような標的化部分でありうる。
一部の実施形態では、Ｎ末端は、本明細書で提供される標的化部分のうちのいずれか１つのような標的化部分でありえ、Ｃ末端は、本明細書で提供されるエフェクター結合性／モジュレーティング部分のうちのいずれかのようなエフェクター結合性／モジュレーティング部分でありうる。
一部の実施形態では、治療用化合物は、ホモ二量体化する、２つのポリペプチドを含む。一部の実施形態では、ポリペプチドのＮ末端は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメイン（例えば、ＣＨ２ドメインおよび／またはＣＨ３ドメイン）へと融合される、エフェクター結合性／モジュレーティング部分を含む。一部の実施形態では、ＦｃドメインのＣ末端は、標的化部分へと融合される、別のリンカーである。したがって、一部の実施形態では、分子は、Ｒ１－リンカーＡ－Ｆｃ領域－リンカーＢ－Ｒ２の式［式中、Ｒ１は、エフェクター結合性／モジュレーティング部分でありえ、Ｒ２は、標的化部分であり、リンカーＡおよびリンカーＢは、独立に、本明細書で提供されるリンカーである］を使用して表すことができよう。一部の実施形態では、リンカー１と、リンカー２とは、異なる。
一部の実施形態では、分子は、Ｒ１－リンカーＡ－Ｆｃ領域－リンカーＢ－Ｒ２の式［式中、Ｒ１は、標的化部分でありえ、Ｒ２は、エフェクター結合性／モジュレーティング部分であり、リンカーＡおよびリンカーＢは、独立に、本明細書で提供されるリンカーである］を使用して表すことができよう。一部の実施形態では、リンカーＡと、リンカーＢとは、異なる。リンカーは、本明細書で提供される、非限定例から選び出すことができる。一部の実施形態では、Ｒ１およびＲ２は、Ｆ（ａｂ’）２およびｓｃＦＶの抗体ドメインから、独立に選択される。一部の実施形態では、Ｒ１とＲ２とは、異なる抗体ドメインである。一部の実施形態では、ｓｃＦＶは、ＶＬドメイン－ＶＨドメインの配置にある。
一部の実施形態では、治療用化合物は、二特異性抗体である。一部の実施形態では、二特異性抗体は、４つのポリペプチド鎖であって、以下：
鎖１：ｎｔ－ＶＨ１－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３－リンカーＡ－ｓｃＦｖ［ＶＬ２－リンカーＢ－ＶＨ２］－ｃｔ
鎖２：ｎｔ－ＶＨ１－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３－リンカーＡ－ｓｃＦｖ［ＶＬ２－リンカーＢ－ＶＨ２］－ｃｔ
鎖３：ｎｔ－ＶＬ１－ＣＬ－ｃｔ
鎖４：ｎｔ－ＶＬ１－ＣＬ－ｃｔ
を含み、
鎖１と、２とが、互いと同一であり、鎖３と、４とが、互いと同一であり、
鎖１は、鎖２と共に、ホモ二量体を形成し；鎖３および４は、鎖１および鎖２と会合する、
４つのポリペプチド鎖から構成される。すなわち、各軽鎖が、各重鎖と会合する場合、ＶＬ１は、ＶＨ１と会合し、ＣＬは、ＣＨ１と会合して、２つの機能的なＦａｂ単位を形成する。いかなる特定の理論にも束縛されずに述べると、各ｓｃＦｖ単位は、ＶＬ２と、ＶＨ２とは、タンデムに、本明細書で提供されるリンカー（例えば、ＧＧＧＧＳ（配列番号２３）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２２）、またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３０と、共有結合的に連結されるので、内因的に機能的である。互いから独立する、リンカーＡの配列と、リンカーＢの配列とは、同じ場合もあり、異なる場合もあり、本出願を通して、他の形で記載される通りである。したがって、一部の実施形態では、リンカーＡは、ＧＧＧＧＳ（配列番号２３）、またはその２回のリピート、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３０）、もしくはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２２）を含む。一部の実施形態では、リンカーＢは、ＧＧＧＧＳ（配列番号２３）、またはその２回のリピート、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３０）、もしくはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２２）を含む。ｓｃＦｖは、ＮＴ－ＶＨ２－ＶＬ２－ＣＴの配置で並べることもでき、ＮＴ－ＶＬ２－ＶＨ２－ＣＴ配置で並べることもできる。ＮＴまたはｎｔは、タンパク質のＮ末端を表し、ＣＴまたはｃｔは、タンパク質のＣ末端を表す。ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３は、ＩｇＧ Ｆｃ領域に由来するドメインであり、ＣＬは、カッパファミリーの軽鎖の場合もあり、ラムダファミリーの軽鎖の場合もある、軽鎖定常領域を表す。他の定義は、当技術分野で通常使用される定義法を表す。
一部の実施形態では、ＶＨ１ドメインおよびＶＬ１ドメインは、エフェクター分子に由来し、ＶＨ２ドメインおよびＶＬ２ドメインは、標的化部分に由来する。一部の実施形態では、ＶＨ１ドメインおよびＶＬ１ドメインは、標的化部分に由来し、ＶＨ２ドメインおよびＶＬ２ドメインは、エフェクター結合性／モジュレーティング部分に由来する。
一部の実施形態では、ＶＨ１ドメインおよびＶＬ１ドメインは、抗ＰＤ－１抗体に由来し、ＶＨ２ドメインおよびＶＬ２ドメインは、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体に由来する。一部の実施形態では、ＶＨ１ドメインおよびＶＬ１ドメインは、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体に由来し、ＶＨ２ドメインおよびＶＬ２ドメインは、抗ＰＤ－１抗体に由来する。
一部の実施形態では、リンカーＡは、１、２、３、４、または５回のＧＧＧＧＳ（配列番号２３）リピートを含む。一部の実施形態では、リンカーＢは、１、２、３、４、または５回のＧＧＧＧＳ（配列番号２３）リピートを含む。誤解を避けるために述べると、本出願を通して使用される、リンカーＡおよびリンカーＢの配列は、互いから独立である。したがって、一部の実施形態では、リンカーＡと、リンカーＢとは、同じ場合もあり、異なる場合もある。一部の実施形態では、リンカーＡは、ＧＧＧＧＳ（配列番号２３）またはその２回のリピート、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３０）、またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２２）を含む。一部の実施形態では、リンカーＢは、ＧＧＧＧＳ（配列番号２３）またはその２回のリピート、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３０）、またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２２）を含む。
一部の実施形態では、治療用化合物は、軽鎖および重鎖を含む。一部の実施形態では、軽鎖および重鎖は、標的化部分のＶＨドメインのＮ末端で始まり、ヒトＩｇＧ１のＣＨ１ドメインがこれに続き、これが、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域（例えば、ＣＨ２－ＣＨ３）へと融合される。一部の実施形態では、Ｆｃ領域のＣ末端は、ＧＧＧＧＳ（配列番号２３）またはその２回もしくは３回のリピート、またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３０）のようであるがこれらに限定されない、本明細書で提供されるリンカーへと融合される。次いで、リンカーは、本明細書で提供されるエフェクター部分のうちのいずれか１つのような、エフェクター結合性／モジュレーティング部分へと融合させることができる。ポリペプチドは、重鎖のホモ二量体化を介するために、ホモ二量体化する場合があり、これは、２つの抗ＰＤ－１抗体のような、２つのエフェクター部分を有する治療用化合物を結果としてもたらす。この配置では、標的化部分は、ＩｇＧフォーマットであり、各々、標的化部分の結合パートナーを認識する、２つのＦａｂアームが存在し、例えば、ＭＡｄＣＡＭは、抗ＭＡｄＣＡＭ標的化部分により結合される。
一部の実施形態では、治療剤またはポリペプチドは、可変重鎖および可変軽鎖をＩｇＧアイソタイプ中に有する抗体（標的化部分）を、例えば、ＩＬ－２ムテインまたはＰＤ－１アゴニスト（例えば、抗ＰＤ抗体）のようなエフェクター分子と共に含む。一部の実施形態では、標的化部分は、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体である。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、可変重鎖のＣ末端に融合される。これは、ＶＬおよびＶＨ－ＩｇＧ定常ドメイン－Ｌ１－Ｅの式で表される［式中、Ｌ１は、リンカー、例えば、本明細書で提供されるグリシン／セリンリンカーであり、Ｅは、エフェクター分子、例えば、ＩＬ－２ムテインであり、ＶＬおよびＶＨは、可変軽鎖および重鎖である］。ＶＬドメインは、カッパドメインでありうる。一部の実施形態では、ＩｇＧ定常ドメインは：
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号４４）の配列を含む。一部の実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＧＳを含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号３１～４１のうちの１つなどの本明細書で提供されるＩＬ－２ムテインを含み、これはＩＬ－２ムテインのＮまたはＣ末端に付加されるＦｃ分子も有する場合がある。Ｆｃドメインは、配列番号２１または４３を含みうる。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号４７～６０のうちの１つを含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号４１または配列番号５６を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号４０または配列番号５５を含む。
一部の実施形態では、標的化部分は、ＭＡｄＣＡＭ抗体である。
一部の実施形態では、ＭＡｄＣＡＭ抗体は、以下の表から選択される
Figure 2022544990000018
Figure 2022544990000019
Figure 2022544990000020
Figure 2022544990000021
Figure 2022544990000022
Figure 2022544990000023
Figure 2022544990000024
Figure 2022544990000025
Figure 2022544990000026
Figure 2022544990000027
Figure 2022544990000028
Figure 2022544990000029
Figure 2022544990000030
一部の実施形態では、抗体は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１またはＭＡｄＣＡＭ抗体の表２において明示されているＣＤＲセットを含む。一部の実施形態では、抗体は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１のクローン番号６、クローン番号５９、またはクローン番号６３のＣＤＲを含む。
抗体はｓｃＦｖフォーマットであってもよく、これはＭＡｄＣＡＭ抗体の表１の非限定的実施形態にも例示される。
一部の実施形態では、ＭＡｄＣＡＭ抗体は、以下の表から選択され、これはＭＡｄＣＡＭ抗体の表２に例示されるＩｇＧフォーマットの場合がある。
Figure 2022544990000031
Figure 2022544990000032
Figure 2022544990000033
Figure 2022544990000034
Figure 2022544990000035
Figure 2022544990000036
Figure 2022544990000037
Figure 2022544990000038
Figure 2022544990000039
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Figure 2022544990000042
Figure 2022544990000043
Figure 2022544990000044
Figure 2022544990000045
Figure 2022544990000046
Figure 2022544990000047
Figure 2022544990000048
Figure 2022544990000049
Figure 2022544990000050
一部の実施形態では、抗体は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２のクローン番号６、クローン番号７５、またはクローン番号７９のＣＤＲを含む。
本明細書で例示されるＩｇＧおよびｓｃＦｖフォーマットは、単に限定されることのない例である。本明細書で提供されるＣＤＲは、異なるＶＨおよびＶＬ／ＶＫフォーマットを含む、異なるフォーマットに配置される場合もあり、ＭＡｄＣＡＭに依然として結合できる。
ＣＤＲは本明細書で提供される表に例示されるが、ＣＤＲをアノテートまたは同定する他の方式が存在する。例えば、一部の実施形態では、ＨＣＤＲ２は、Ｎ末端に追加のアミノ酸を有する場合がある。例えば、クローン６のＨＣＤＲ２について、表は、それがＳＲＩＮＳＹＧＴＳＴＴＹＡ（配列番号９１）の配列を有することを指し示す。しかし、一部の実施形態では、ＨＣＤＲ２はＶＳＲＩＮＳＹＧＴＳＴＴＹＡ（配列番号７９３）の配列を有し、これには追加残基のバリンをＨＣＤＲ２のＮ末端に有することが示されている。バリンは、本明細書で提供される表のＶＨペプチドに明確に例示される。したがって、一部の実施形態では、ＨＣＤＲ２は、表に列挙されたＨＣＤＲ２のＮ末端に対して直前の１つのさらなるアミノ酸を含む。その残基は、表に提供されるＶＨ配列中に見出されるＨＣＤＲ２のＮ末端に対して直前にある残基であろう。この情報を有する当業者は、表に列挙されたＨＣＤＲ２のＮ末端に対して直前にさらなるアミノ酸残基を有するＨＣＤＲ２ペプチド配列を直ちに想定することが可能であろう。
同様に、ＨＣＤＲ３はシステイン残基を排除することができる。表に提供されるＨＣＤＲ３ポリペプチドの各々は、システイン残基から始まる。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ３は、システインを含まず、他のＣＤＲと共に存在する場合、依然として標的抗原に結合することができる。さらに、一部の実施形態では、ＨＣＤＲ３は、本明細書に提供される表に例示される最後のＣ末端残基を有さない。したがって、一部の実施形態では、ＨＣＤＲ３は、表に例示されるシステインおよび／または最後のＣ末端残基を有さない。この情報を有する当業者は、表に例示されるシステインおよび／または最後のＣ末端残基を有さないＨＣＤＲ３ペプチド配列を直ちに想定することが可能であろう。
一部の実施形態では、ＬＣＤＲ２は、Ｎ末端に１つのまたは２つの追加のアミノ酸残基を有する場合がある。これらのさらなる残基は、本明細書に提供されるＶＬ／ＶＫ鎖中に存在するＬＣＤＲ２のＮ末端に対して直前のものであろう。例えば、クローン６のＬＣＤＲ２は、ＧＡＳＳＬＱＳ（配列番号８７）として提供されるが、一部の実施形態では、ＩＹＧＡＳＳＬＱＳ（配列番号７９４）またはＹＧＡＳＳＬＱＳ（配列番号７９５）であることが可能であろう。この情報を有する当業者は、本明細書に提供されるＬＣＤＲ２配列のＮ末端に１つのまたは２つの追加のアミノ酸残基を有するＬＣＤＲ２ペプチド配列を直ちに想定することが可能であろう。これらの実施形態は、十分に記載され、これらの異なるアノテーションの各々を列挙するために応用することが必要とされず、本明細書において提供される指針および説明を有する当業者は、何らかの過度の実験なしで個々にそれらを詳しく記述することが可能であろう。
ＣＤＲをアノテートする代替システムも存在し、その全てを使用することができる。例えば、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔシステム、ＩＭＧＴシステム、またはＣＨＯＴＨＩＡに基づいて選び出すことができる。他のプロプライエタリシステムを使用することもでき、これはタンパク質の予測される３次元構造に基づきうる。したがって、一部の実施形態では、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２のクローン番号６、クローン番号７５、またはクローン番号７９のＣＤＲはまた、下記の表に示されるように特徴づけることができる。これらの代替ＣＤＲは、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２において言及されるこれらのクローン、またはＭＡｄＣＡＭ抗体の表１に番号付けされる等価のクローン、すなわち、クローン６、クローン５９、およびクローン６３で置換することができる。
Figure 2022544990000051
Figure 2022544990000052
一部の実施形態では、抗体は、別の抗体または治療剤へと連結される。一部の実施形態では、ＭＡｄＣＡＭ抗体は、ＰＤ－１抗体または本明細書で提供されるＩＬ－２ムテインまたは参照により組み入れられるものへと連結される。
一部の実施形態では、ＭＡｄＣＡＭ抗体は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１に示される配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１に例示されるｓｃＦＶフォーマットにおける抗体である。一部の実施形態では、抗体は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１のクローン１～６６のうちのいずれか１つからのＣＤＲ１、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１のクローン１～８４のうちのいずれか１つからのＣＤＲ２、およびクローン１～６６のうちのいずれか１つからのＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１のクローン１～６６のうちのいずれか１つからのＬＣＤＲ１、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１のクローン１～６６のうちのいずれか１つからのＬＣＤＲ２、およびＭＡｄＣＡＭ抗体の表１のクローン１～６６のうちのいずれか１つからのＬＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、上に示されるＣＤＲのアミノ酸残基は、突然変異を含有する。一部の実施形態では、ＣＤＲは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０の置換または突然変異を含有する。一部の実施形態では、置換は、保存的置換である。
一部の実施形態では、ＭＡｄＣＡＭ抗体は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２のクローン１～８４のうちのいずれか１つから選択されるＶＨ領域およびＭＡｄＣＡＭ抗体の表２において明示されているクローン１～８４のうちのいずれか１つから選択されるＶＬ領域を有する。一部の実施形態では、抗体は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２のクローン１～８４のうちのいずれか１つからのＣＤＲ１、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２のクローン１～８４のうちのいずれか１つからのＣＤＲ２、およびクローン１～８４のうちのいずれか１つからのＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２のクローン１～８４のうちのいずれか１つからのＬＣＤＲ１、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２のクローン１～８４のうちのいずれか１つからのＬＣＤＲ２、およびＭＡｄＣＡＭ抗体の表２のクローン１～８４のうちのいずれか１つからのＬＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、上に示されるＣＤＲのアミノ酸残基は、突然変異を含有する。一部の実施形態では、ＣＤＲは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０の置換または突然変異を含有する。一部の実施形態では、置換は、保存的置換である。
一部の実施形態では、分子は、ＭＡｄＣＡＭに結合する抗体を含む。一部の実施形態では、抗体は（ｉ）重鎖ＣＤＲｌ、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、ここで、重鎖ＣＤＲ１配列は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１もしくはＭＡｄＣＡＭ抗体の表２において明示されているＣＤＲ１配列セットのうちのいずれかのアミノ酸配列を有し；重鎖ＣＤＲ２は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１もしくはＭＡｄＣＡＭ抗体の表２において明示されているＣＤＲ２配列セットのうちのいずれかのアミノ酸配列を有し；重鎖ＣＤＲ３は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１もしくはＭＡｄＣＡＭ抗体の表２において明示されているＣＤＲ３配列セットのうちのいずれかのアミノ酸配列を有し；または前出のうちのいずれかの変異体；ならびに（ｉｉ）軽鎖ＣＤＲｌ、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、ここで、軽鎖ＣＤＲ１配列は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１もしくはＭＡｄＣＡＭ抗体の表２において明示されているＬＣＤＲ１配列セットのうちのいずれかのアミノ酸配列を有し；軽鎖ＬＣＤＲ２は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１もしくはＭＡｄＣＡＭ抗体の表２において明示されているＬＣＤＲ２配列セットのうちのいずれかのアミノ酸配列を有し；軽鎖ＣＤＲ３は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１もしくはＭＡｄＣＡＭ抗体の表２において明示されているＬＣＤＲ３配列セットのうちのいずれかのアミノ酸配列を有し；または前出のうちのいずれかの変異体を含む。
一部の実施形態では、抗体は、重鎖ＣＤＲｌ、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、ここで、重鎖ＣＤＲｌ、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列は、表１の抗体６もしくは表２の抗体６において明示されているアミノ酸配列を有し；または前出のうちのいずれかの変異体；ならびに（ｉｉ）軽鎖ＣＤＲｌ、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、ここで、軽鎖ＣＤＲｌ、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列は、表１の抗体６もしくは表２の抗体６において明示されているアミノ酸配列を有する、または前出のうちのいずれかの変異体を含む。
一部の実施形態では、抗体は、重鎖ＣＤＲｌ、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、ここで、重鎖ＣＤＲｌ、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列は、表１の抗体５９もしくは表２の抗体７５において明示されているアミノ酸配列を有し；または前出のうちのいずれかの変異体；ならびに（ｉｉ）軽鎖ＣＤＲｌ、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、ここで、軽鎖ＣＤＲｌ、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列は、表１の抗体５９もしくは表２の抗体７５において明示されているアミノ酸配列を有する、または前出のうちのいずれかの変異体を含む。
一部の実施形態では、抗体は、重鎖ＣＤＲｌ、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域、ここで、重鎖ＣＤＲｌ、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列は、表１の抗体６３もしくは表２の抗体７９において明示されているアミノ酸配列を有し；または前出のうちのいずれかの変異体；ならびに（ｉｉ）軽鎖ＣＤＲｌ、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域、ここで、軽鎖ＣＤＲｌ、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列は、表１の抗体６３もしくは表２の抗体７９において明示されているアミノ酸配列を有する、または前出のうちのいずれかの変異体を含む。
これらは、限定されることのない例示的な例であり、抗体は、本明細書で提供される表に記載されるＣＤＲを有することができ、各ＣＤＲセットについて前段落に記載することなく、明示的に言及される。
一部の実施形態では、ＭＡｄＣＡＭ抗体は、本明細書で提供されるＶＨおよびＶＬ（ＶＫ）鎖、例えば、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２に列挙されるものを含む。一部の実施形態では、ＶＨペプチドは、配列番号４１４、５９１、または５９９の配列を含む。一部の実施形態では、ＶＫ鎖は、配列番号４１５、５９２、または６００の配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号４１４のＶＨおよび配列番号４１５のＶＫを含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号５９１のＶＨおよび配列番号５９２のＶＫを含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号５９９のＶＨおよび配列番号６００のＶＫを含む。ＶＨおよびＶＫはまた、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１に例示されるｓｃＦＶフォーマットでありうる。
一部の実施形態では、以下のポリペプチドのうちの１つまたはそれ以上を含む治療剤またはポリペプチドが提供される：
Figure 2022544990000053
一部の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号７９６、７９８、または８００の１つのペプチドおよび配列番号７９７、７９９、または８０１の第２のペプチドを含む。一部の実施形態では、配列番号７９６の第１のペプチドおよび配列番号７９７の配列を含む第２のペプチドを含む、ポリペプチドが提供される。一部の実施形態では、配列番号７９６の第１のペプチドおよび配列番号７９９の配列を含む第２のペプチドを含む、ポリペプチドが提供される。一部の実施形態では、配列番号７９６の第１のペプチドおよび配列番号６２５の配列を含む第２のペプチドを含む、ポリペプチドが提供される。一部の実施形態では、配列番号７９８の第１のペプチドおよび配列番号７９７の配列を含む第２のペプチドを含む、ポリペプチドが提供される。一部の実施形態では、配列番号７９８の第１のペプチドおよび配列番号７９９の配列を含む第２のペプチドを含む、ポリペプチドが提供される。一部の実施形態では、配列番号７９８の第１のペプチドおよび配列番号８０１の配列を含む第２のペプチドを含むポリペプチドが提供される。一部の実施形態では、配列番号８００の第１のペプチドおよび配列番号７９７の配列を含む第２のペプチドを含むポリペプチドが提供される。一部の実施形態では、配列番号８００の第１のペプチドおよび配列番号７９９の配列を含む第２のペプチドを含むポリペプチドが提供される。一部の実施形態では、配列番号８００の第１のペプチドおよび配列番号８０１の配列を含む第２のペプチドを含むポリペプチドが提供される。
一部の実施形態では、ポリペプチドは、抗体または抗原結合タンパク質と称される。
一部の実施形態では、本明細書に提供される通り、ＭＡｄＣＡＭ抗体またはその結合断片は、ＰＤ－１抗体またはその結合断片に直接的または間接的に連結される。
一部の実施形態では、ＰＤ－１抗体は、以下の表から選択される：
Figure 2022544990000054
Figure 2022544990000055
Figure 2022544990000056
Figure 2022544990000057
Figure 2022544990000058
Figure 2022544990000059
Figure 2022544990000060
Figure 2022544990000061
Figure 2022544990000062
Figure 2022544990000063
Figure 2022544990000064
Figure 2022544990000065
Figure 2022544990000066
Figure 2022544990000067
Figure 2022544990000068
Figure 2022544990000069
Figure 2022544990000070
Figure 2022544990000071
一部の実施形態では、抗体は、ＰＤ－１抗体の表４に記載されるＣＤＲセットを含む。一部の実施形態では、抗体は、ＰＤ－１抗体の表４のクローン番号ＰＤ１ＡＢ４、ＰＤ１ＡＢ２５またはＰＤ１ＡＢ３０のＣＤＲを含む。
一部の実施形態では、ＣＤＲを特徴づけるために使用することができる異なるフォーマットに基づく、以下のクローンのＣＤＲが提供される。本開示においてＣＤＲが言及される場合、これらのＣＤＲは、このような開示または添付の特許請求の範囲に記載されたＣＤＲを置換することができ、このようなＣＤＲを置換することができると理解される。例えば、配列番号７１５を含むＣＤＲが記述される場合、配列番号８３４で置換することができる。別の例は、配列番号７１３を含むＣＤＲであるが、これに限定されないが、配列番号８３２、８３６または８３８のＣＤＲで置換することができる。これらは非限定的な例であり、下記の表は、どのＣＤＲが互いに置換されうるかを明らかにする。
Figure 2022544990000072
Figure 2022544990000073
Figure 2022544990000074
したがって、一部の実施形態では、上記の表に提供されるＬＣＤＲセットまたはＨＣＤＲセットを含むＰＤ－１に結合する抗体が提供される。
一部の実施形態では、ＰＤ－１に結合する複数の抗体を含むポリペプチドが提供される。複数の抗体は、同一または異なるＣＤＲ領域を有する１を超える抗体を含む。
一部の実施形態では、抗体は、別の抗体または治療剤に連結される。一部の実施形態では、ＰＤ－１抗体は、本明細書で提供されるか、または参照により組み入れられる、ＭＡｄＣＡＭ抗体またはＩＬ－２ムテインに連結される。
一部の実施形態では、ＰＤ－１抗体は、ＰＤ－１抗体の表４に示される配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、ＰＤ－１抗体の表４に示されるｓｃＦＶフォーマットである。一部の実施形態では、抗体は、ＰＤ－１抗体の表４のクローンのいずれか１つからのＣＤＲ１、ＰＤ－１抗体の表４のクローンのいずれか１つからのＣＤＲ２、およびＰＤ－１抗体の表４のクローンのいずれか１つからのＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、抗体は、ＰＤ－１抗体の表４のクローンのいずれか１つからのＬＣＤＲ１、ＰＤ－１抗体の表４のクローンのいずれか１つからのＬＣＤＲ２、およびＰＤ－１抗体の表４のクローンのいずれか１つからのＬＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、上記で示されるＣＤＲのアミノ酸残基は突然変異を含有する。一部の実施形態では、ＣＤＲは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０の置換または突然変異を含有する。一部の実施形態では、置換は、保存的置換である。
一部の実施形態では、ＰＤ－１抗体は、ＰＤ－１抗体の表４のクローンのいずれか１つから選択されるＶＨ領域、およびＰＤ－１抗体の表４に記載されるクローンのいずれか１つから選択されるＶＬ領域を有する。
一部の実施形態では、本明細書で提供されるように、ＰＤ－１抗体またはその結合断片は、ＭＡｄＣＡＭ抗体またはその結合断片に直接的または間接的に連結される。ＭＡｄＣＡＭ抗体の例は、本明細書で提供されるが、非限定的な例であり、他の抗体にも連結することができる。
一部の実施形態では、分子は、ＰＤ－１に結合する抗体を含む。一部の実施形態では、抗体は、（ｉ）重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域であって、重鎖ＣＤＲ１配列は、ＰＤ－１抗体の表４に記載されるＣＤＲ１配列のいずれかのアミノ酸配列を有し、重鎖ＣＤＲ２配列は、ＰＤ－１抗体の表４に記載されるＣＤＲ２配列のいずれかのアミノ酸配列を有し、重鎖ＣＤＲ３は、ＰＤ－１抗体の表４に記載されるＣＤＲ３配列のいずれかのアミノ酸配列を有する、重鎖可変領域、または前出のいずれかの変異体；ならびに（ｉｉ）軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域であって、軽鎖ＣＤＲ１配列は、ＰＤ－１抗体の表４に記載されるＬＣＤＲ１配列のいずれかのアミノ酸配列を有し、軽鎖ＬＣＤＲ２配列は、ＰＤ－１抗体の表４に記載されるＬＣＤＲ２配列のいずれかのアミノ酸配列を有し、軽鎖ＣＤＲ３は、ＰＤ－１抗体の表４に記載されるＬＣＤＲ３配列のいずれかのアミノ酸配列を有する、軽鎖可変領域、または前出のいずれかの変異体を含む。
一部の実施形態では、抗体は、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域であって、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列は、ＰＤ－１抗体の表４のＰＤ１ＡＢ４に記載されるアミノ酸配列を有する、重鎖可変領域、または前出のいずれかの変異体；ならびに（ｉｉ）軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域であって、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列は、ＰＤ－１抗体の表４のＰＤ１ＡＢ４に記載されるアミノ酸配列を有する、軽鎖可変領域、または前出のいずれかの変異体を含む。
一部の実施形態では、抗体は、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域であって、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列は、ＰＤ－１抗体の表４のＰＤ１ＡＢ２５に記載されるアミノ酸配列を有する、重鎖可変領域、または前出のいずれかの変異体；ならびに（ｉｉ）軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域であって、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列は、ＰＤ－１抗体の表４のＰＤ１ＡＢ２５に記載される配列に記載されるアミノ酸配列を有する、軽鎖可変領域、または前出のいずれかの変異体を含む。
一部の実施形態では、抗体は、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域であって、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列は、ＰＤ－１抗体の表４のＰＤ１ＡＢ３０に記載されるアミノ酸配列を有する、重鎖可変領域、または前出のいずれかの変異体；ならびに（ｉｉ）軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域であって、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列は、ＰＤ－１抗体の表４のＰＤ１ＡＢ３０に記載されるアミノ酸配列を有する、軽鎖可変領域、または前出のいずれかの変異体を含む。
これらは限定されることのない例示的な例であり、抗体は、本明細書で提供される表に記載されるＣＤＲを有することができ、各ＣＤＲセットについて前段落に記載することなく、明示的に言及される。
一部の実施形態では、ＰＤ－１抗体は、ＰＤ－１抗体の表４に列挙されたもののような、本明細書で提供されるＶＨおよびＶＬ（ＶＫ）鎖を含む。一部の実施形態では、ＶＨペプチドは、配列番号６３７または７６９の配列を含む。一部の実施形態では、ＶＫ鎖は、配列番号６３８または７５６の配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号６３７のＶＨおよび配列番号６３８のＶＫを含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号７６９のＶＨおよび配列番号７５９のＶＫを含む。ＶＨおよびＶＫはまた、ｓｃＦＶフォーマットでありうる。
一部の実施形態では、本明細書で提供されるように、ＭＡｄＣＡＭ抗体またはその結合断片は、ＩＬ－２ムテインまたはその結合断片に直接的または間接的に連結される。ＩＬ－２ムテインは、本明細書で提供される任意のムテインでありうるか、または当業者に公知である他のＩＬ－２ムテインでありうる。一部の実施形態では、本明細書で提供されるように、ＭＡｄＣＡＭ抗体またはその結合断片は、本明細書に記載されるもののようなＰＤ－１抗体に直接的または間接的に連結される。
一部の実施形態では、本明細書で提供されるように、ＰＤ－１抗体またはその結合断片は、ＩＬ－２ムテインまたはその結合断片に直接的または間接的に連結される。ＩＬ－２ムテインは、本明細書で提供される任意のムテインでありうるか、または当業者に公知である他のＩＬ－２ムテインでありうる。一部の実施形態では、本明細書で提供されるように、ＰＤ－１抗体またはその結合断片は、本明細書に記載されるもののようなＭＡｄＣＡＭ抗体に直接的または間接的に連結される。
一部の実施形態では、ＰＤ－１抗体は、ＰＤ－１抗体の表４に示される配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、ｓｃＦＶフォーマットである。一部の実施形態では、抗体は、ＰＤ－１抗体の表４のクローンのいずれか１つからのＶＨ配列を含む。一部の実施形態では、抗体は、ＰＤ－１抗体の表４のクローンのいずれか１つからのＶＫ配列を含む。一部の実施形態では、上記で示されるＶＨまたはＶＫのアミノ酸残基は突然変異を含有する。一部の実施形態では、ＶＨまたはＶＫは、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０の置換または突然変異を含有する。一部の実施形態では、置換は、保存的置換である。
ＭＡｄＣＡＭ ＡｂおよびＰＤ－１ Ａｂを含む分子は、本明細書に記載される種々のフォーマットでありうる。例えば、以下のフォーマットでありうる：
ＰＤ－１ ＭＬ－Ｎフォーマット：
重鎖：ＮＴ－［ＶＨ＿ＰＤ－１］－［ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３］－［リンカーＡ］－［ＭＡｄＣＡＭｓｃＦｖ］－ＣＴ
軽鎖：ＮＴ－［ＶＫ＿ＰＤ－１］－［ＣＫ］－ＣＴ
ＰＤ－１ ＭＬ－Ｃフォーマット：
重鎖：ＮＴ－［ＶＨ＿ＭＡｄＣＡＭ］－［ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３］－［リンカーＡ］－［ＰＤ－１ｓｃＦｖ］－ＣＴ
軽鎖：ＮＴ－［ＶＫ＿ＭＡｄＣＡＭ］－［ＣＫ］－ＣＴ
ＰＤ－１ ＩｇＧフォーマット：
重鎖：ＮＴ－［ＶＨ＿ＰＤ－１］－［ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３］
軽鎖：ＮＴ－［ＶＫ＿ＰＤ－１］－［ＣＫ］－ＣＴ
上記で使用される略語は、以下の通りである。
Figure 2022544990000075
ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３の配列は、例えば、次の通りでありうる：
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号４４）
ＣＫの配列は、例えば、次の通りでありうる：
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号４５）
一部の実施形態では、治療用化合物が、Ｆｃ部分を含む場合、Ｆｃドメイン（部分）は、Ｆｃ領域を「エフェクターレス」とする、すなわち、ＦｃＲに結合できなくする突然変異を保有する。Ｆｃ領域をエフェクターレスとする突然変異は、公知である。一部の実施形態では、公知の番号付けシステムに従う、Ｆｃ領域内の突然変異は：Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７、Ｐ３３１Ｓ、またはこれらの任意の組合せからなる群から選択される。一部の実施形態では、Ｆｃ突然変異は、Ｌ２３４および／またはＬ２３５、および／またはＧ２３７における突然変異を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ突然変異は、ＬＡＬＡ突然変異と称することができる、Ｌ２３４Ａおよび／またはＬ２３５Ａ突然変異を含む。一部の実施形態では、Ｆｃ突然変異は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａ突然変異を含む。
本明細書では、リンカー領域のポリペプチド、治療用ペプチド、およびポリペプチド（例えば、治療用化合物）をコードする核酸、核酸配列を含むベクター、および核酸またはベクターを含む細胞が開示される。
治療用化合物は、複数の特異的標的化部分を含みうる。一部の実施形態では、治療用化合物は、複数の特異的標的化部分、複数コピーのドナー特異的標的化部分、または複数の組織特異的標的化部分を含む。一部の実施形態では、治療用化合物は、第１のドナー特異的標的化部分、および第２のドナー特異的標的化部分、例えば、第１のドナー標的に特異的な、第１のドナー特異的標的化部分と、第２のドナー標的に特異的な、第２のドナー特異的標的化部分とを含み、例えば、この場合、第１の標的と、第２の標的とは、同じドナー組織上で見出される。一部の実施形態では、治療用化合物は、例えば、組織特異的標的に対する第１の特異的標的化部分と、第２の標的に対する第２の特異的標的化部分とを含み、例えば、この場合、第１の標的と、第２の標的とは、同じ標的組織上、または異なる標的組織上で見出される。
一部の実施形態では、治療用化合物は、各々が、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分を含む、複数のエフェクター結合性／モジュレーティング部分を含み、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分の数は、例えば、治療用化合物の、標的への結合の非存在下における、免疫細胞の全身性のアゴナイズ化が、回避されるように、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分のリガンドの、免疫細胞上のクラスター化（標的への結合の非存在下における）が最小化される程度に、十分に小さい。
一部の実施形態では、治療用化合物は、Ｎ末端からＣ末端へと式：
Ａ１－－－リンカーＡ－－－Ａ２－－－リンカーＢ－－－Ａ３
Ａ３－－－リンカーＡ－－－Ａ２－－－リンカーＢ－－－Ａ１
［式中、Ａ１およびＡ３は、各々、独立に、エフェクター結合性／モジュレーティング部分、例えば、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分、ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分、ＩＣＳＭ結合性／モジュレーティング部分、もしくはＳＭ結合性／モジュレーティング部分であるか；または特異的標的化部分を含み、
Ａ２はＦｃ領域を含むか；または存在せず；
リンカーＡおよびリンカーＢは、各々、独立した、リンカーである］
を有する。
一部の実施形態では、
Ａ１は、ＩＬ－２ムテイン分子を含み、
Ａ３は、特異的標的化部分、例えば、抗ヒトＭＡｄＣＡＭ Ａｂ、例えば、ｓｃＦｖを含み、
Ａ２はＦｃ領域を含み、
リンカーＡおよびリンカーＢは、各々、独立した、リンカーであり、グリシン／セリンリンカーをさらに含む。
一部の実施形態では、Ａ１またはＡ３は、ＰＤ－１Ａｂである。
一部の実施形態では、ＰＤ－１抗体は、ＰＤ－１抗体の表４に記載されるＰＤ－１抗体である。
一部の実施形態では、Ａ１はＰＤ－１Ａｂであり、Ａ３はＭＡｄＣＡＭ Ａｂである。
一部の実施形態では、Ａ１はＩＬ－２ムテインであり、Ａ３はＰＤ－１Ａｂである。
一部の実施形態では、式
Ａｂ－定常ドメイン－リンカーＡ－ＩＬ２ムテイン－リンカーＢ－Ｆｃ領域［式中、Ａｂは、ＭＡｄＣＡＭに結合する、重鎖可変ドメインであり、定常ドメインは、Ｉｇ定常ドメイン、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４であり、リンカーＡは、リンカー、例えば、本明細書で提供されるものであり、ＩＬ２ムテインは、ＩＬ－２ムテイン、例えば、本明細書に提供されるものである]
のペプチドを含む、ポリペプチドが提供される。一部の実施形態では、重鎖可変ドメインは、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２に例示される重鎖可変ドメインである。一部の実施形態では、重鎖可変ドメインは、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２のクローン番号６、７５、または７９の重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態では、重鎖可変ドメインは、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２の６、７５、または７９の重鎖ドメインのＣＤＲを含む。一部の実施形態では、ＶＨは、配列番号４１４、配列番号５９１、および配列番号５９９の配列を含む。
一部の実施形態では、定常ドメインは、ＩｇＧ１定常ドメイン、例えば、本明細書に提供されるものを含む。一部の実施形態では、定常ドメインは、定常領域を「エフェクターレス」とする、すなわち、ＦｃＲに結合できなくする突然変異を含む。定常領域をエフェクターレスとする突然変異は、公知である。一部の実施形態では、公知の番号付けシステムに従う、定常領域内の突然変異は：Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７、Ｐ３３１Ｓ、またはこれらのいずれかの組合せからなる群から選択される。一部の実施形態では、定常領域突然変異は、Ｌ２３４および／またはＬ２３５、および／またはＧ２３７における突然変異を含む。一部の実施形態では、定常領域突然変異は、ＬＡＬＡ突然変異と称することができる、Ｌ２３４Ａおよび／またはＬ２３５Ａ突然変異を含む。一部の実施形態では、定常領域突然変異は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａ突然変異を含む。一部の実施形態では、定常ドメインは、配列番号４４を含む。
一部の実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号９０の第１のＣＤＲ、配列番号９１の第２のＣＤＲ、配列番号９２の第３のＣＤＲを含む。一部の実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号３５９の第１のＣＤＲ、配列番号１７０の第２のＣＤＲ、および配列番号３６０の第３のＣＤＲを含む。一部の実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号１３５の第１のＣＤＲ、配列番号３８１の第２のＣＤＲ、および配列番号３８２の第３のＣＤＲを含む。これらは例示的なものであるに過ぎず、本明細書および表において明示されているＣＤＲセットも提供される。
一部の実施形態では、リンカーＡは、グリシン／セリンリンカーであり、本明細書に提供されるいずれかのグリシン／セリンリンカーでありうる。一部の実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２２）またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３０）の配列である。これらは限定されることのない例であり、リンカーは変動する数のＧＧＧＧＳ（配列番号２３）もしくはＧＧＧＧＡリピート（配列番号２９）、または２つの混合物を有する場合がある。一部の実施形態では、リンカーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０のＧＧＧＧＳ（配列番号２３）および／またはＧＧＧＧＡリピート（配列番号２９）のリピートを含む。一部の実施形態では、リンカーは、１０アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、１５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、２０アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、２５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、３０アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、３５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、５～５０アミノ酸の長さである。
一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号３１の配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号３２の配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号３３の配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号３４の配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号３５の配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号３６の配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号３７の配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号３８の配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号３９の配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号４０の配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号４１の配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、Ｔ３Ａ置換（突然変異）をさらに含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、配列番号２１の配列を有するペプチドを含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、配列番号２８の配列を有するペプチドを含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域のＣ末端は、可変重鎖またはＩＬ－２ムテインのＮ末端またはＣ末端へと連結される。一部の実施形態では、Ｆｃ領域を、可変重鎖またはＩＬ－２ムテインへと連結するリンカーは、グリシン／セリンまたはグリシン／アラニンリンカーである。一部の実施形態では、Ｆｃ領域を、可変重鎖またはＩＬ－２ムテインのＣ末端またはＮ末端へと連結するリンカーは、グリシン／セリンリンカーであり、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２２）またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３０）の配列でありうる。これらは限定されることのない例であり、リンカーは変動する数のＧＧＧＧＳ（配列番号２３）もしくはＧＧＧＧＡリピート（配列番号２９）、または２つの混合物を有する場合がある。一部の実施形態では、リンカーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０のＧＧＧＧＳ（配列番号２３）および／またはＧＧＧＧＡリピート（配列番号２９）のリピートを含む。一部の実施形態では、リンカーは、１０アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、１５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、２０アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、２５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、３０アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、３５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、５～５０アミノ酸の長さである。
一部の実施形態では、ポリペプチドは、式ＶＬ－軽鎖定常ドメインのポリペプチドをさらに含み、式中、ＶＬは可変軽鎖であり、軽鎖定常ドメインはＩｇＧ軽鎖定常ドメインであり、ここで、ポリペプチドは、Ａｂ－定常ドメイン－リンカーＡ－ＩＬ２ムテイン－リンカーＢ－Ｆｃ領域の式を有するポリペプチドでありうるか、またはそれに関連する。一部の実施形態では、ＶＬは、配列番号４１５、配列番号５９２、または配列番号６００の配列を含む。これらは例示的なものであるに過ぎず、ＶＬドメインは、本明細書、例えば、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２に提供されるＶＬ／ＶＫ配列でありうる。一部の実施形態では、軽鎖可変ドメインは、配列番号９３の第１のＣＤＲ、配列番号８７の第２のＣＤＲ、および配列番号９４の第３のＣＤＲを含む。一部の実施形態では、軽鎖可変ドメインは、配列番号３６１の第１のＣＤＲ、配列番号３６２の第２のＣＤＲ、および配列番号３６３の第３のＣＤＲを含む。一部の実施形態では、重鎖可変ドメインは、配列番号３８３の第１のＣＤＲ、配列番号３８４の第２のＣＤＲ、および配列番号３８５の第３のＣＤＲを含む。これらは例示的なものであるに過ぎず、本明細書および表において明示されているＣＤＲセットも提供される。
一部の実施形態では、定常ドメインは、エフェクター機能、例えば、本明細書に提供されるものを無効化する突然変異も含む。一部の実施形態では、軽鎖定常ドメインは：
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号４５）の配列を含む。
式ＩＬ２ムテイン－リンカーＡ－Ｆｃ領域－リンカーＢ－ＡｂおよびＶＬ－軽鎖定常ドメインの異なるポリペプチドは、互いと交換することができる。一部の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号９０の第１のＣＤＲ、配列番号９１の第２のＣＤＲ、および配列番号９２の第３のＣＤＲを含む可変重鎖ならびに配列番号９３の第１のＣＤＲ、配列番号８７の第２のＣＤＲ、および配列番号９４の第３のＣＤＲを含む可変軽鎖を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号３５９の第１のＣＤＲ、配列番号１７０の第２のＣＤＲ、および配列番号３６０の第３のＣＤＲを含む可変重鎖ならびに配列番号３６１の第１のＣＤＲ、配列番号３６２の第２のＣＤＲ、および配列番号３６３の第３のＣＤＲを含む可変軽鎖を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１３５の第１のＣＤＲ、配列番号３８１の第２のＣＤＲ、および配列番号３８２の第３のＣＤＲを含む可変重鎖ならびに配列番号３８３の第１のＣＤＲ、配列番号３８４の第２のＣＤＲ、および配列番号３８５の第３のＣＤＲを含む可変軽鎖を含む。これらは限定されることのない例であり、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１および２に例示されるＣＤＲの組合せも使用することができ、本明細書に提供される。
一部の実施形態では、Ｎ末端からＣ末端へと以下の式：
ＩＬ２ムテイン－リンカーＡ－Ｆｃ領域－リンカーＢ－Ａｂ［式中、ＩＬ２ムテインは、任意のＩＬ－２ムテインであり、例えば、Ｔｒｅｇを優先的に活性化することができ；リンカーＡおよびリンカーＢは、各々、独立に、本明細書で提供されるリンカーであり、Ｆｃ領域は、例えば、本明細書で提供されるもののうちのいずれか１つである場合があり、Ａｂは、組織標的化部分、例えば、本明細書に提供されるものである］
を含む化合物が提供される。一部の実施形態では、Ａｂは、ＭＡｄＣＡＭ、ＰＤ－１、または本明細書で提供される別の細胞表面標的に結合する抗体である。一部の実施形態では、抗体は、ｓｃＦＶフォーマットにおける抗体である。一部の実施形態では、ｓｃＦＶフォーマットにおける抗体は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１で提供される抗体である。一部の実施形態では、ｓｃＦＶフォーマットにおける抗体は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１またはＭＡｄＣＡＭ抗体の表２において明示されているＣＤＲを含む抗体である。
一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインのＣ末端は、Ｆｃ領域のＮ末端に連結される。一部の実施形態では、連結は、直接であるか、またはリンカー、例えば、本明細書で記載されるものを介する。一部の実施形態では、リンカーは、グリシン／セリンリンカーである。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインを、Ｆｃ領域へと連結するリンカーは、グリシン／セリンリンカーであり、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２２）またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３０）の配列でありうる。これらは限定されることのない例であり、リンカーは変動する数のＧＧＧＧＳ（配列番号２３）もしくはＧＧＧＧＡリピート（配列番号２９）、または２つの混合物を有する場合がある。一部の実施形態では、リンカーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０のＧＧＧＧＳ（配列番号２３）および／またはＧＧＧＧＡリピート（配列番号２９）のリピートを含む。一部の実施形態では、リンカーは、１０アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、１５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、２０アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、２５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、３０アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、３５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、５～５０アミノ酸の長さである。
一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号３１の配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号３２の配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号３３の配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号３４の配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号３５の配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号３６の配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号３７の配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号３８の配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号３９の配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号４０の配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号４１の配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、Ｔ３Ａ置換（突然変異）をさらに含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、配列番号２１の配列を有するペプチドを含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域は、配列番号２８の配列を有するペプチドを含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域のＣ末端は、可変重鎖のＮ末端に連結される。一部の実施形態では、Ｆｃ領域を、可変重鎖へと連結するリンカーは、グリシン／セリンまたはグリシン／アラニンリンカーである。一部の実施形態では、Ｆｃ領域を、可変重鎖のＮ末端へと連結するリンカーは、グリシン／セリンリンカーであり、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２２）またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３０）の配列でありうる。これらは限定されることのない例であり、リンカーは変動する数のＧＧＧＧＳ（配列番号２３）もしくはＧＧＧＧＡリピート（配列番号２９）、または２つの混合物を有する場合がある。一部の実施形態では、リンカーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０のＧＧＧＧＳ（配列番号２３）および／またはＧＧＧＧＡリピート（配列番号２９）のリピートを含む。一部の実施形態では、リンカーは、１０アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、１５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、２０アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、２５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、３０アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、３５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、５～５０アミノ酸の長さである。
一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１またはＭＡｄＣＡＭ抗体の表２において明示されているＣＤＲを含む。一部の実施形態では、可変重鎖はＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含み、ここで、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３はＭＡｄＣＡＭ抗体の表１またはＭＡｄＣＡＭ抗体の表２において明示されている。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン１に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン２に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン３に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン４に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン５に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン６に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１のクローン７に関して記載されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１のクローン８に関して記載されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１のクローン９に関して記載されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１のクローン１０に関して記載されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン１１に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン１２に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン１３に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン１４に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン１５に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン１６に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン１７に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン１に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン１８に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン１９に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン２０に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン２１に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン２２に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン２３に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン２４に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン２５に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン２６に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン２７に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン２８に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン２９に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン３０に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン３１に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン３２に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン３３に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン３４に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン３５に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン３６に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン３７に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン３８に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン３９に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン４０に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン４１に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン４２に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン４３に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン４４に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン４５に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン４６に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン４７に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン４８に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン４９に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン５０に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン５１に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン５２に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン５３に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン５４に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン５５に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン５６に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン５７に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン５８に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン５９に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン６０に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン６１に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン６２に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン６３に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン６４に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン６５に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン６６に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。
一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン１に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン２に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン３に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン４に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン５に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン６に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン７に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン８に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２のクローン９に関して記載されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２のクローン１０に関して記載されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２のクローン１１に関して記載されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２のクローン１２に関して記載されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン１３に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン１４に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン１５に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン１６に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン１７に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン１に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン１８に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン１９に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２のクローン２０に関して記載されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２のクローン２１に関して記載されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２のクローン２２に関して記載されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２のクローン２３に関して記載されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン２４に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン２５に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン２６に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン２７に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン２８に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン２９に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン３０に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン３１に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン３２に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン３３に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン３４に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン３５に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン３６に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン３７に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン３８に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン３９に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン４０に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン４１に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン４２に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン４３に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン４４に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン４５に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン４６に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン４７に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン４８に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン４９に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン５０に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン５１に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン５２に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン５３に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン５４に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン５５に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン５６に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン５７に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン５８に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン５９に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン６０に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン６１に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン６２に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン６３に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン６４に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン６５に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン６６に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン６７に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン６８に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン６９に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。
一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン７０に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン７１に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン７２に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン７３に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン７４に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン７５に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン７６に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン７７に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン７８に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン７９に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン８０に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン８１に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン８２に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン８３に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン８４に明示されているＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を有する。
一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン１に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン２に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン３に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１のクローン４に関して記載されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１のクローン５に関して記載されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１のクローン６に関して記載されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１のクローン７に関して記載されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１のクローン８に関して記載されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１のクローン９に関して記載されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１のクローン１０に関して記載されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン１１に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン１２に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン１３に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン１４に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン１５に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン１６に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン１７に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン１に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン１８に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン１９に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン２０に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン２１に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン２２に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン２３に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン２４に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン２５に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン２６に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン２７に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン２８に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン２９に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン３０に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン３１に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン３２に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン３３に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン３４に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン３５に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン３６に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン３７に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン３８に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン３９に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン４０に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン４１に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン４２に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン４３に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン４４に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン４５に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン４６に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン４７に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン４８に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン４９に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン５０に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン５１に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン５２に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン５３に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン５４に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン５５に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン５６に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン５７に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン５８に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン５９に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン６０に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン６１に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン６２に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン６３に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン６４に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン６５に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１においてクローン６６に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。
一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン１に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン２に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン３に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２のクローン４に関して記載されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２のクローン５に関して記載されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２のクローン６に関して記載されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２のクローン７に関して記載されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２のクローン８に関して記載されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２のクローン９に関して記載されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２のクローン１０に関して記載されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン１１に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン１２に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン１３に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン１４に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン１５に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン１６に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン１７に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン１に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン１８に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン１９に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン２０に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン２１に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン２２に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン２３に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン２４に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン２５に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン２６に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン２７に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン２８に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン２９に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン３０に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン３１に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン３２に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン３３に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン３４に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン３５に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン３６に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン３７に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン３８に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン３９に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン４０に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン４１に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン４２に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン４３に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン４４に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン４５に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン４６に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン４７に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン４８に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン４９に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン５０に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン５１に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン５２に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン５３に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン５４に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン５５に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン５６に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン５７に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン５８に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン５９に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン６０に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン６１に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン６２に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン６３に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン６４に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン６５に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。
一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン６６に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン６７に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン６８に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン６９に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン７０に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン７１に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン７２に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン７３に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン７４に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン７５に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン７６に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン７７に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン７８に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン７９に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン８０に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン８１に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン８２に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン８３に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。一部の実施形態では、可変重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２においてクローン８４に明示されているＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を有する。
一部の実施形態では、ＣＤＲＳは互いと交換される。例えば、クローン１のＨＣＤＲ１は、クローン１０のＨＣＤＲ１を置換することができるか、または逆も同様である。このＣＤＲ交換は、本明細書で提供されるクローンのいずれかのＨＣＤＲ（例えば、ＨＣＤＲ１に関してＨＣＤＲ１；ＨＣＤＲ２に関してＨＣＤＲ２；もしくはＨＣＤＲ３に関してＨＣＤＲ３）またはＬＣＤＲ（例えば、ＬＣＤＲ１に関してＬＣＤＲ１；ＬＣＤＲ２に関してＬＣＤＲ２；もしくはＬＣＤＲ３に関してＬＣＤＲ３）に関して行ってもよい。したがって、一部の実施形態では、抗体は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１のクローン１～６６もしくはＭＡｄＣＡＭ抗体の表２のクローン１～８４のうちのいずれかにおいて明示されているＨＣＤＲ１、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１のクローン１～６６もしくはＭＡｄＣＡＭ抗体の表２のクローン１～８４のうちのいずれかにおいて明示されているＨＣＤＲ２、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１のクローン１～６６もしくはＭＡｄＣＡＭ抗体の表２のクローン１～８４のうちのいずれかにおいて明示されているＨＣＤＲ３、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１のクローン１～６６もしくはＭＡｄＣＡＭ抗体の表２のクローン１～８４のうちのいずれかにおいて明示されているＬＣＤＲ１、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１のクローン１～６６もしくはＭＡｄＣＡＭ抗体の表２のクローン１～８４のうちのいずれかにおいて明示されているＬＣＤＲ２、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１のクローン１～６６もしくはＭＡｄＣＡＭ抗体の表２のクローン１～８４のうちのいずれかにおいて明示されているＬＣＤＲ３、または前出のうちのいずれかの変異体を含む。
一部の実施形態では、ＭａｄＣＡＭ抗体は、クローン６、５９、または６３に示されるｓｃＦＶフォーマットである。それらの配列に示されるリンカーは、２０アミノ酸残基の長さであるが、５、１０、または１５アミノ酸残基の長さであることも可能であろう。一部の実施形態では、抗体のＶＨとＶＬ（またはＶＫ）配列を連結するリンカーは、グリシン／セリンリンカーであり、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２２）またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３０）の配列でありうる。これは単に限定されることのない例であり、リンカーは変動する数のＧＧＧＧＳ（配列番号２３）またはＧＧＧＧＡリピート（配列番号２９）を有する場合がある。一部の実施形態では、リンカーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０のＧＧＧＧＳ（配列番号２３）またはＧＧＧＧＡリピート（配列番号２９）のリピートを含む。したがって、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１に示されるリンカーは、限定されることのない例であり、任意の他のリンカー、例えば、本明細書に提供されるもので置換することができる。
一部の実施形態では、ポリペプチドは、式：
ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＡＬＮＬＡＰＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＤＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＩＮＲＷＩＴＦＳＱＳＩＩＳＴＬＴ－リンカー１－ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ－リンカー２－Ａｂ
［式中、リンカー１、リンカー２、およびＡｂは、本明細書で提供される通りである］を含む。一部の実施形態では、リンカー１は、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３０）またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２２）である。一部の実施形態では、リンカー２は、ＧＧＧＧＳ（配列番号２３）である。一部の実施形態では、リンカー２は、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７９２）である。一部の実施形態では、リンカー２は、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３０）である。一部の実施形態では、Ａｂは、ＭＡｄＣＡＭ Ａｂ 表１において明示されているｓｃＦＶである。一部の実施形態では、Ａｂは、配列番号９５の配列を含む。一部の実施形態では、Ａｂは、配列番号３６４の配列を含む。一部の実施形態では、Ａｂは、配列番号３８６の配列を含む。一部の実施形態では、Ａｂは、ＰＤ－１ Ａｂである。一部の実施形態では、ＰＤ－１ Ａｂは、ＰＤ－１抗体の表４に記載されるＰＤ－１ Ａｂである。一部の実施形態では、Ａｂは、ＶＨおよびＶＫまたはＶＬセグメントを含む。一部の実施形態では、ＶＨは、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２において明示されている配列を含む。一部の実施形態では、ＶＫは、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２において明示されている配列を含む。一部の実施形態では、Ａｂは、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２中のクローンについて明示されているＶＨおよびＶＫを含む。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＫは、リンカーによって連結される。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＫは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２２）のペプチドを含むペプチドリンカーによって連結される。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＫは、ＧＧＧＧＳのペプチドを含むペプチドリンカーによって連結される。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＫは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号７９２）のペプチドを含むペプチドリンカーによって連結される。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＫは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３０）のペプチドを含むペプチドリンカーによって連結される。一部の実施形態では、Ａｂは、配列番号４１４のＶＨおよび配列番号４１５のＶＫを含む。一部の実施形態では、Ａｂは、配列番号５９１のＶＨおよび配列番号５９２のＶＫを含む。一部の実施形態では、Ａｂは、配列番号５９９のＶＨおよび配列番号６００のＶＫを含む。
一部の実施形態では、ペプチドは：
ＡＰＴＳＳＳＴＫＫＴＱＬＱＬＥＨＬＬＬＤＬＱＭＩＬＮＧＩＮＮＹＫＮＰＫＬＴＲＭＬＴＦＫＦＹＭＰＫＫＡＴＥＬＫＨＬＱＣＬＥＥＥＬＫＰＬＥＥＡＬＮＬＡＰＳＫＮＦＨＬＲＰＲＤＬＩＳＤＩＮＶＩＶＬＥＬＫＧＳＥＴＴＦＭＣＥＹＡＤＥＴＡＴＩＶＥＦＩＮＲＷＩＴＦＳＱＳＩＩＳＴＬＴ－（ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳまたはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ）－ＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ－（ＧＧＧＧＳまたはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳまたはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ）－Ａｂ
［式中、Ａｂは、本明細書において明示されている］を含む。一部の実施形態では、Ａｂは、配列番号９５の配列を含む。一部の実施形態では、Ａｂは、配列番号３６４の配列を含む。一部の実施形態では、Ａｂは、配列番号３８６の配列を含む。一部の実施形態では、Ａｂは、ＶＨおよびＶＫまたはＶＬセグメントを含む。一部の実施形態では、ＶＨは、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２において明示されている配列を含む。一部の実施形態では、ＶＫは、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２において明示されている配列を含む。一部の実施形態では、Ａｂは、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２中のクローンについて明示されているＶＨおよびＶＫを含む。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＫは、リンカーによって連結される。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＫは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２２）のペプチドを含むペプチドリンカーによって連結される。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＫは、ＧＧＧＧＳ（配列番号２３）のペプチドを含むペプチドリンカーによって連結される。一部の実施形態では、ＶＨおよびＶＫは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７９２）のペプチドを含むペプチドリンカーによって連結される。一部の実施形態では、Ａｂは、配列番号４１４のＶＨおよび配列番号４１５のＶＫを含む。一部の実施形態では、Ａｂは、配列番号５９１のＶＨおよび配列番号５９２のＶＫを含む。一部の実施形態では、Ａｂは、配列番号５９９のＶＨおよび配列番号６００のＶＫを含む。これらの例は限定されることはなく、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２に示されるＶＨおよびＶＫの組合せも提供される。
一部の実施形態では、治療用化合物またはポリペプチドは、抗ＰＤ－１重鎖および軽鎖の式を含み、ここで、ＰＤ－１重鎖は、ＭＡｄＣＡＭ抗体（ｓｃＦＶ）、例えば、本明細書に提供されるものへと、ＰＤ－１ ＩｇＧ重鎖のＣ末端で連結される。ポリペプチドは、Ａ１－Ａ２－リンカー１－Ａ４－リンカー２－Ａ５およびＡ６の式［式中、Ａ１は、ＰＤ－１重鎖であり、Ａ６は、ＰＤ－１軽鎖であり；Ａ２は、ＩｇＧ定常ドメイン（例えば、ＩｇＧ１定常ドメイン）であり、リンカー１は、本明細書で提供される通りであり、例えば、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２２）またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３０）の配列であってもよい、グリシン／セリンリンカーであるが、これらに限定されない、これは単に限定されることのない例であり、リンカーは変動する数のＧＧＧＧＳ（配列番号２３）またはＧＧＧＧＡリピート（配列番号２９）を有する場合があり、一部の実施形態では、リンカーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０のＧＧＧＧＳ（配列番号２３）またはＧＧＧＧＡリピート（配列番号２９）のリピートを含み；Ａ４は、ＶＨドメイン、例えば、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２において明示されているものであり；リンカー２は、本明細書で提供される通りであり、例えば、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２２）またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３０）の配列であってもよい、グリシン／セリンリンカーであるが、これらに限定されない、これは単に限定されることのない例であり、リンカーは変動する数のＧＧＧＧＳ（配列番号２３）またはＧＧＧＧＡリピート（配列番号２９）を有する場合があり、一部の実施形態では、リンカーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０のＧＧＧＧＳ（配列番号２３）またはＧＧＧＧＡリピート（配列番号２９）のリピートを含み；Ａ５は、ＶＫ／ＶＬドメイン、例えば、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２において明示されているものである］を有する場合がある。一部の実施形態では、リンカー２は、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３０）である。一部の実施形態では、Ａ４－リンカー２－Ａ５は、ｓｃＦＶ抗体、例えば、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１において明示されているものである。ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１に示されるリンカーは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３０）のリンカーで置換することができる。一部の実施形態では、Ａ４－リンカー２－Ａ５は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１またはＭＡｄＣＡＭ抗体の表２において明示されているＨＣＤＲセット（例えば、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）セットを含む。誤解を避けるために述べると、ＣＤＲセットは、表に提供される異なる抗体クローンの各々について例示されるＣＤＲを指す。一部の実施形態では、Ａ４は配列番号４１４のペプチドを含み、Ａ５は配列番号４１５のペプチドを含む。一部の実施形態では、Ａ４は配列番号５９１のペプチドを含み、Ａ５は配列番号５９２のペプチドを含む。一部の実施形態では、Ａ４は配列番号５９９のペプチドを含み、Ａ５は配列番号６００のペプチドを含む。これらの例は限定されることはなく、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２に示されるＶＨおよびＶＫの組合せも提供される。
一部の実施形態では、Ａ２は、
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号４４）の配列を含む。
ひとたび発現されると、ＰＤ－１抗体の重鎖および軽鎖は、互いと結合して、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体へと連結される抗ＰＤ－１抗体を含む化合物を形成する。抗ＭＡｄＣＡＭ抗体は、ＭＡｄＣＡＭに結合する任意の抗体、例えば、本明細書に提供されるものでありうる。
一部の実施形態では、式ＰＤ１ＶＨ－定常ドメイン－リンカーＡ－ＭＡｄＣＡＭｓｃＦｖ［式中、ＰＤ１ＶＨは、本明細書で提供されるＰＤ－１抗体の重鎖であり、定常ドメインは、ＩｇＧ１定常ドメインまたは他の定常ドメインであり、リンカーＡは、本明細書で提供されるもののようなＧ／ＳまたはＧ／Ａリンカーであり、ＭＡｄＣＡＭｓｃＦｖは式ＭＡｄＣＡＭＶＨ－リンカーＢ－ＭＡｄＣＡＭＶＫ（式中、ＭＡｄＣＡＭＶＨは、ＭＡｄＣＡＭ Ａｂの重鎖可変ドメインであり、リンカーＢは、本明細書で提供されるもののようなＧ／ＳまたはＧ／Ａリンカーであり、ＭＡｄＣＡＭＶＫは、軽鎖可変ドメインである）を有する］のペプチドを含む、ポリペプチドが提供される。
一部の実施形態では、ＰＤ－１可変重鎖ドメインは、ＰＤ－１抗体の表４に示されるＰＤ－１可変重鎖ドメインである。一部の実施形態では、可変重鎖ドメインは、ＰＤ－１抗体の表４のクローン番号ＰＤ１ＡＢ４、ＰＤ１ＡＢ２５またはＰＤ１ＡＢ３０のＰＤ－１可変重鎖ドメインを含む。一部の実施形態では、ＰＤ－１可変重鎖ドメインは、ＰＤ－１抗体の表４のＰＤ１ＡＢ４、ＰＤ１ＡＢ２５またはＰＤ１ＡＢ３０のＰＤ－１重鎖ドメインのＣＤＲを含む。一部の実施形態では、ＰＤ１ＶＨは、配列番号６３７または７６９の配列を含む。一部の実施形態では、ＰＤ１ＶＨは、配列番号６３７の配列を含む。一部の実施形態では、ＰＤ１ＶＨは、配列番号７６９の配列を含む。
一部の実施形態では、定常ドメインは、本明細書に提供されるもののようなＩｇＧ１定常ドメインを含む。一部の実施形態では、定常ドメインは、定常領域を「エフェクターレス」とする、すなわち、ＦｃＲに結合できなくする突然変異を含む。定常領域をエフェクターレスとする突然変異は、公知である。一部の実施形態では、公知の番号付けシステムに従う、定常領域内の突然変異は、Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｎ２９７、Ｐ３３１Ｓ、またはこれらの任意の組合せからなる群から選択される。一部の実施形態では、定常領域突然変異は、Ｌ２３４および／またはＬ２３５、および／またはＧ２３７における突然変異を含む。一部の実施形態では、定常領域突然変異は、ＬＡＬＡ突然変異と称されうるＬ２３４Ａおよび／またはＬ２３５Ａ突然変異を含む。一部の実施形態では、定常領域突然変異は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａ突然変異を含む。一部の実施形態では、定常ドメインは、配列番号４４を含む。
一部の実施形態では、ＰＤ－１可変重鎖ドメインは、配列番号６３９または７５７の第１のＣＤＲ、配列番号６９または７５８の第２のＣＤＲ、および配列番号６４０または７５９の第３のＣＤＲを含む。一部の実施形態では、ＰＤ－１可変重鎖ドメインは、配列番号６３９の第１のＣＤＲ、配列番号６９の第２のＣＤＲ、および配列番号６４０の第３のＣＤＲを含む。一部の実施形態では、ＰＤ－１可変重鎖ドメインは、配列番号７５７の第１のＣＤＲ、配列番号７５８の第２のＣＤＲ、および配列番号７５９の第３のＣＤＲを含む。これらは例示的なものに過ぎず、本明細書および表に記載されるＣＤＲセットもまた提供される。
一部の実施形態では、リンカーＡは、グリシン／セリンリンカーであり、本明細書で提供される任意のグリシン／セリンリンカーでありうる。一部の実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２２）またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３０）の配列である。これらは非限定的な例であり、リンカーは様々な数のＧＧＧＧＳ（配列番号２３）もしくはＧＧＧＧＡリピート（配列番号２９）、または２つの混合物を有する場合がある。一部の実施形態では、リンカーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０のＧＧＧＧＳ（配列番号２３）および／またはＧＧＧＧＡリピート（配列番号２９）のリピートを含む。一部の実施形態では、リンカーは、１０アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、１５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、２０アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、２５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、３０アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、３５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、５～５０アミノ酸の長さである。
一部の実施形態では、ＭＡｄＣＡＭ可変重鎖ドメインは、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２に示されるＭＡｄＣＡＭ可変重鎖ドメインである。一部の実施形態では、可変重鎖ドメインは、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２のクローン番号６、７５、または７９のＭＡｄＣＡＭ可変重鎖ドメインを含む。一部の実施形態では、ＭＡｄＣＡＭ可変重鎖ドメインは、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２の６、７５、または７９のＭＡｄＣＡＭ重鎖ドメインのＣＤＲを含む。一部の実施形態では、ＭＡｄＣＡＭＶＨは、配列番号４１４、配列番号５９１、および配列番号５９９の配列を含む。
一部の実施形態では、リンカーＢは、グリシン／セリンリンカーであり、本明細書で提供される任意のグリシン／セリンリンカーでありうる。一部の実施形態では、リンカーは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２２）またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３０）の配列である。これらは非限定的な例であり、リンカーは、様々な数のＧＧＧＧＳ（配列番号２３）もしくはＧＧＧＧＡリピート（配列番号２９）、または２つの混合物を有する場合がある。一部の実施形態では、リンカーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０のＧＧＧＧＳ（配列番号２３）および／またはＧＧＧＧＡリピート（配列番号２９）リピートを含む。一部の実施形態では、リンカーは、１０アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、１５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、２０アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、２５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、３０アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、３５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、５～５０アミノ酸の長さである。
一部の実施形態では、ＭＡｄＣＡＭ可変軽鎖ドメインは、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２に示されるＭＡｄＣＡＭ可変軽鎖ドメインである。一部の実施形態では、可変軽鎖ドメインは、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２のクローン番号６、７５、または７９のＭＡｄＣＡＭ可変軽鎖ドメインを含む。一部の実施形態では、ＭＡｄＣＡＭ可変軽鎖ドメインは、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２の６、７５、または７９のＭＡｄＣＡＭ軽鎖ドメインのＣＤＲを含む。一部の実施形態では、ＭＡｄＣＡＭＶＫは、配列番号４１５、配列番号５９２、および配列番号６００の配列を含む。
一部の実施形態では、ポリペプチドは、式ＰＤ１ＶＬ－軽鎖定常ドメイン［式中、ＰＤ１ＶＬは、ＰＤ－１可変軽鎖であり、軽鎖定常ドメインは、ＩｇＧカッパドメインである］のポリペプチドをさらに含み、ポリペプチドは、ＰＤ１ＶＨ－定常ドメイン－リンカーＡ－ＭＡｄＣＡＭｓｃＦｖの式を有するポリペプチドでありうるかまたはそれと関連している。一部の実施形態では、ＰＤ１ＶＬは、配列番号６３８または７５６の配列を含む。一部の実施形態では、ＰＤ１ＶＬは、配列番号６３８の配列を含む。一部の実施形態では、ＰＤ１ＶＬは、配列番号７５６の配列を含む。これらは例示的なものに過ぎず、ＶＬドメインは、ＰＤ－１抗体の表４におけるように、本明細書で提供されるＶＬ／ＶＫ配列でありうる。一部の実施形態では、ＰＤ－１可変軽鎖ドメインは、配列番号６４１または７６０の第１のＣＤＲ、配列番号３６２または３７８の第２のＣＤＲ、および配列番号６４２または７６１の第３のＣＤＲを含む。一部の実施形態では、ＰＤ－１可変軽鎖ドメインは、配列番号６４１の第１のＣＤＲ、配列番号３６２の第２のＣＤＲ、および配列番号６４２の第３のＣＤＲを含む。一部の実施形態では、ＰＤ－１可変軽鎖ドメインは、配列番号７６０の第１のＣＤＲ、配列番号３７８の第２のＣＤＲ、および配列番号７６１の第３のＣＤＲを含む。これらは例示的なものに過ぎず、本明細書および表に記載されるＣＤＲセットもまた提供される。
一部の実施形態では、定常ドメインは、エフェクター機能、例えば、本明細書で提供されるものを無効化する突然変異も含む。一部の実施形態では、軽鎖定常ドメインは：
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号４５）
の配列を含む。
一部の実施形態では、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体および抗ＰＤ－１抗体を含むポリペプチドが提供される。一部の実施形態では、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体重鎖可変領域は、ＰＤ－１抗体鎖（例えば、重可変鎖）を含むポリペプチドのＣ末端に連結される。一部の実施形態では、ポリペプチドは、第１のポリペプチドを含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、第２のポリペプチドを含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、第１および第２のポリペプチドを含む。
一部の実施形態では、第１のポリペプチドは、第２のポリペプチドの可変軽鎖ドメインと共にＰＤ－１に結合する可変重鎖ドメインを含む。一部の実施形態では、可変軽鎖ドメインを含む第２のポリペプチドは、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体に直接的または間接的に連結される。一部の実施形態では、第２のポリペプチドは、第１のポリペプチドの可変重鎖ドメインと共にＰＤ－１に結合する可変軽鎖ドメインを含む。本明細書におよび実施形態のために提供される連結は、任意のタイプのペプチドリンカーでありうる。一部の実施形態では、リンカーは、グリシン／セリンまたはグリシン／アラニンリンカーである。例えば、グリシン／セリンリンカーは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２２）またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３０）の配列でありうる。これは単に非限定的な例であり、リンカーは、様々な数のＧＧＧＧＳ（配列番号２３）またはＧＧＧＧＡリピート（配列番号２９）を有することができる。一部の実施形態では、リンカーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０のＧＧＧＧＳ（配列番号２３）またはＧＧＧＧＡリピート（配列番号２９）のリピートを含む。一部の実施形態では、リンカーは、１０アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、１５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、２０アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、２５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、３０アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、３５アミノ酸の長さである。一部の実施形態では、リンカーは、５～５０アミノ酸の長さである。リンカーはまた、他の形態のペプチドリンカー、例えば、ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号８７７）、ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ（配列番号８７８）、ＧＳＡＧＳＡＡＧＳＧＥＦ（配列番号８７９）、（ＥＡＡＡＫ）ｎ（配列番号８８３）（ｎは１～５である）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）ｎＡ（配列番号８８２）（ｎは１～５である）、（ＸＰ）ｎ（ｎは１～１０であり、Ｘは任意のアミノ酸、例えば、Ａｌａ、Ｌｙｓ、またはＧｌｕである）でありうる。例えば、１つのこのようなリンカーは、ＰＡＰＡＰ（配列番号８８４）でありうる。これらのリンカーは、ある特定の実施形態を参照して作製されるが、リンカーが他のポリペプチドについて本明細書に記載されている場合には、これらのリンカーも置換することができる。一部の実施形態では、リンカーは、ＬＥＡＧＣＫＮＦＦＰＲＳＦＴＳＣＧＳＬＥ（配列番号８８０）またはＣＲＲＲＲＲＲＥＡＥＡＣ（配列番号８８１）のように切断可能でありうる。他のリンカーは、例えば、全体において参照により本明細書に組み入れられる、Ｃｈｅｎ Ｘ、Ｚａｒｏ ＪＬ、Ｓｈｅｎ ＷＣ．Ｆｕｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｉｎｋｅｒｓ：ｐｒｏｐｅｒｔｙ，ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ．Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．２０１３；６５（１０）：１３５７～１３６９に記載される。
一部の実施形態では、第１のポリペプチドは、式：
ＶＨ－Ｈｃ－リンカー－Ｃ１［式中、ＶＨは、可変軽鎖ドメインと共にＰＤ－１に結合する可変重ドメインであり；Ｈｃは、ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインを含む抗体の重鎖であり；リンカーは、ペプチドリンカーであり；Ｃ１は、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体である］を有する。ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインの一例は、配列番号４４を含むペプチドであるが、これは一例に過ぎず、他の定常ドメインを使用することができる。したがって、一部の実施形態では、定常ドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４定常ドメインである。
一部の実施形態では、第２のポリペプチドは、式：
ＶＬ－Ｌｃ［式中、ＶＬは、可変軽鎖ドメインであり、Ｌｃは、本明細書に提供されるような軽鎖ドメインである］を有する。
リンカーは、本明細書に記載されるもののような任意のリンカーでありうる。これらは、可撓性または剛性のペプチドリンカーでありうる。一部の実施形態では、ペプチドリンカーは、グリシン／セリンまたはグリシン／アラニンリンカーである。一部の実施形態では、グリシン／セリンリンカーは、（ＧＧＧＧＳ）ｎのアミノ酸配列を有し、ｎは、１、２、３もしくは４であるか、または本明細書で提供されるようなものである。
一部の実施形態では、第１のポリペプチドは、ＶＨ－Ｈｃ－リンカー－Ｃ１［式中、ＶＨは、可変軽鎖ドメインと共にＰＤ－１に結合する可変重鎖ドメインであり；Ｈｃは、ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインを含む抗体の重鎖であり；リンカーは、ペプチドリンカーであり；Ｃ１は、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体である］の式を有し、；第２のポリペプチドは、ＶＬ－Ｌｃ［式中、ＶＬは、可変軽鎖ドメインであり；Ｌｃは、軽鎖ドメインである］の式を有する。
本明細書で提供されるように、一部の実施形態では、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体は、ｓｃＦＶ抗体である。一部の実施形態では、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体は、ｓｃＦＶ抗体である。一部の実施形態では、ｓｃＦＶ抗体は、ＶＨＳＣ－ＬＳＣ－ＶＬＳＣ［式中、ＶＨＳＣは、ＶＬＳＣと共にＭＡｄＣＡＭに結合する可変重鎖ドメインを含み；ＬＳＣは、ペプチドリンカーであり；ＶＬＳＣは、ＶＨＳＣと共にＭＡｄＣＡＭに結合する可変軽鎖ドメインを含む］の式を有する。一部の実施形態では、ｓｃＦＶ抗体は、ＶＬＳＣ－ＬＳＣ－ＶＨＳＣ［式中、ＶＨＳＣは、ＶＬＳＣと共にＭＡｄＣＡＭに結合する可変重鎖ドメインを含み；ＬＳＣは、ペプチドリンカーであり；ＶＬＳＣは、ＶＨＳＣと共にＭＡｄＣＡＭに結合する可変軽鎖ドメインを含む］の式を有する。
一部の実施形態では、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１または２に示される配列を含む。一部の実施形態では、ＰＤ－１抗体は、ＰＤ－１抗体の表４またはＰＤ－１抗体の表５に示される配列を含む。ＰＤ－１抗体の表５の配列は、抗体についての代替ＣＤＲ表記である。本明細書で提供されるように、これらは、示されるように互いに置換することができる。一部の実施形態では、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体重鎖可変領域は、ＭＡｄＣＡＭ Ａｂの表２に提供される重鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、重鎖可変領域は、ＭＡｄＣＡＭ Ａｂの表２のクローン番号６、７５、または７９の重鎖可変領域である。一部の実施形態では、重鎖可変部は、ＭＡｄＣＡＭ Ａｂの表２の６、７５、または７９の重鎖ドメインのＣＤＲを含む。一部の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号４１４、配列番号５９１または配列番号５９９の配列を含む。
一部の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号３５９の第１のＣＤＲ、配列番号１７０の第２のＣＤＲ、および配列番号３６０の第３のＣＤＲ；配列番号９０の第１のＣＤＲ、配列番号９１の第２のＣＤＲ、および配列番号９２の第３のＣＤＲ；または配列番号１３５の第１のＣＤＲ、配列番号３８１の第２のＣＤＲ、および配列番号３８２の第３のＣＤＲを含む。
一部の実施形態では、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体軽鎖可変領域は、配列番号４１５、配列番号５９２もしくは配列番号６００の配列、またはＭＡｄＣＡＭ Ａｂの表２に提供されるＶＬ配列を含む。一部の実施形態では、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体軽鎖可変領域は、配列番号３６１の第１のＣＤＲ、配列番号３６２の第２のＣＤＲ、および配列番号３６３の第３のＣＤＲ；配列番号９３の第１のＣＤＲ、配列番号８７の第２のＣＤＲ、および配列番号９４の第３のＣＤＲ；または配列番号３８３の第１のＣＤＲ、配列番号３８４の第２のＣＤＲ、および配列番号３８５の第３のＣＤＲである。
一部の実施形態では、定常ドメインは、配列番号４５の配列を含む。これは、非限定的な例であり、他の定常ドメインを使用することができる。
一部の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体重鎖可変領域は、ＰＤ－１抗体の表４に提供される重鎖可変領域である。一部の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体重鎖可変領域は、ＰＤ－１抗体の表４のクローン番号ＰＤ１ＡＢ４（配列番号６３７）、ＰＤ１ＡＢ３０（配列番号７６９）、ＰＤ１ＡＢ１７（配列番号７０４）、ＰＤ１ＡＢ１８（配列番号７１０）、ＰＤ１ＡＢ２０（配列番号７２４）、ＰＤ１ＡＢ２５（配列番号７５５）の重鎖可変領域である。
一部の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体重鎖可変領域は、ＰＤ－１抗体の表４のＰＤ１ＡＢ４、ＰＤ１ＡＢ３０、ＰＤ１ＡＢ１７、ＰＤ１ＡＢ１８、ＰＤ１ＡＢ２０、またはＰＤ１ＡＢ２５の重鎖ドメインのＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体重鎖可変領域は、配列番号６３９、７５７、７０６、７１２、７２６または７５７の第１のＣＤＲ、配列番号６９、７５８、７０７、７１３、７２７または７５８の第２のＣＤＲ、および配列番号６４０、７５９、７０８、７１４、７２８または７５９の第３のＣＤＲを含む。
一部の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体重鎖可変領域は、配列番号６３９の第１のＣＤＲ、配列番号６９の第２のＣＤＲ、および配列番号６４０の第３のＣＤＲ；配列番号７５７の第１のＣＤＲ、配列番号７５８の第２のＣＤＲ、および配列番号７５９の第３のＣＤＲ；配列番号７０６の第１のＣＤＲ、配列番号７０７の第２のＣＤＲ、および配列番号７０８の第３のＣＤＲ；配列番号７１２の第１のＣＤＲ、配列番号７１３の第２のＣＤＲ、および配列番号７１４の第３のＣＤＲ；または配列番号７２６の第１のＣＤＲ、配列番号７２７の第２のＣＤＲ、および配列番号７２８の第３のＣＤＲを含む。
一部の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体軽鎖可変領域は、ＰＤ－１抗体の表４のクローン番号ＰＤ１ＡＢ４（配列番号６３８）、ＰＤ１ＡＢ３０（配列番号７５６）、ＰＤ１ＡＢ１７（配列番号７０５）、ＰＤ１ＡＢ１８（配列番号７１１）、ＰＤ１ＡＢ２０（配列番号７２５）、ＰＤ１ＡＢ２５（配列番号７５６）の軽鎖可変領域である。一部の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体軽鎖可変領域は、ＰＤ－１抗体の表４のＰＤ１ＡＢ４、ＰＤ１ＡＢ３０、ＰＤ１ＡＢ１７、ＰＤ１ＡＢ１８、ＰＤ１ＡＢ２０、またはＰＤ１ＡＢ２５の軽鎖ドメインのＣＤＲを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体軽鎖可変領域は、配列番号６４１、７０９、７１５、７２９または７６０の第１のＣＤＲ、配列番号３６２、７１６、４２０または３７８の第２のＣＤＲ、および配列番号６４２、４２１、７１７、７３０または７６１の第３のＣＤＲを含む。
一部の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体軽鎖可変領域は、配列番号６４１の第１のＣＤＲ、配列番号３６２の第２のＣＤＲ、および配列番号６４２の第３のＣＤＲ；配列番号７０９の第１のＣＤＲ、配列番号３６２の第２のＣＤＲ、および配列番号４２１の第３のＣＤＲ；配列番号７１５の第１のＣＤＲ、配列番号７１６の第２のＣＤＲ、および配列番号７１７の第３のＣＤＲ；配列番号７２９の第１のＣＤＲ；配列番号４２０の第２のＣＤＲ、および配列番号７３０の第３のＣＤＲ；または配列番号７６０の第１のＣＤＲ；配列番号３７８の第２のＣＤＲ、および配列番号７６１の第３のＣＤＲを含む。
一部の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号６３９の第１のＣＤＲ、配列番号６９の第２のＣＤＲ、および配列番号６４０の第３のＣＤＲを含む重鎖可変領域、ならびに配列番号６４１の第１のＣＤＲ、配列番号３６２の第２のＣＤＲ、および配列番号６４２の第３のＣＤＲを含む軽鎖可変領域；配列番号７５７の第１のＣＤＲ、配列番号７５８の第２のＣＤＲ、および配列番号７５９の第３のＣＤＲを含む重鎖可変領域、ならびに配列番号７６０の第１のＣＤＲ、配列番号３７８の第２のＣＤＲ、および配列番号７６１の第３のＣＤＲを含む軽鎖可変領域；配列番号７０６の第１のＣＤＲ、配列番号７０７の第２のＣＤＲ、および配列番号７０８の第３のＣＤＲを含む重鎖可変領域、ならびに配列番号７０９の第１のＣＤＲ、配列番号３６２の第２のＣＤＲ、および配列番号４２１の第３のＣＤＲを含む軽鎖可変領域；配列番号７１２の第１のＣＤＲ、配列番号７１３の第２のＣＤＲ、および配列番号７１４の第３のＣＤＲを含む重鎖可変領域、ならびに配列番号７１５の第１のＣＤＲ、配列番号７１６の第２のＣＤＲ、および配列番号７１７の第３のＣＤＲを含む軽鎖可変領域；配列番号７２６の第１のＣＤＲ、配列番号７２７の第２のＣＤＲ、および配列番号７２８の第３のＣＤＲを含む重鎖可変領域、ならびに配列番号７２９の第１のＣＤＲ、配列番号４２０の第２のＣＤＲ、および配列番号７３０の第３のＣＤＲを含む軽鎖可変領域；または配列番号７５７の第１のＣＤＲ、配列番号７５８の第２のＣＤＲ、および配列番号７５９の第３のＣＤＲを含む重鎖可変領域、ならびに配列番号７６０の第１のＣＤＲ、配列番号３７８の第２のＣＤＲ、および配列番号７６１の第３のＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含む。
一部の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号６３７、配列番号７６９、配列番号７０４、配列番号７１０、配列番号７２４、または配列番号７５５の配列を含む重鎖、および配列番号６３８、配列番号７５６、配列番号７０５、配列番号７１１、配列番号７２５、または配列番号７５６の配列を含む軽鎖可変領域を含む。
一部の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号６３７の配列を含む重鎖可変領域および配列番号６３８の配列を含む軽鎖可変領域；配列番号７０４の配列を含む重鎖可変領域および配列番号７０５の配列を含む軽鎖可変領域；配列番号７１０の配列を含む重鎖可変領域および配列番号７１１の配列を含む軽鎖可変領域；配列番号７２４の配列を含む重鎖可変領域および配列番号７２５の配列を含む軽鎖可変領域；配列番号７５５の配列を含む重鎖可変領域および配列番号７５６の配列を含む軽鎖可変領域；または配列番号７６９の配列を含む重鎖可変領域および配列番号７５６の配列を含む軽鎖可変領域を含む。
一部の実施形態では、ＰＤ１ＶＨ－定常ドメイン－リンカーＡ－ＭＡｄＣＡＭｓｃＦｖ［式中、ＰＤ１ＶＨは、本明細書で提供されるいずれかのＰＤ－１抗体のＰＤ－１重鎖可変ドメインであり；定常ドメインは、ＩｇＧ１定常ドメイン、またはＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４のような任意の他の定常ドメインであり；リンカーＡは、Ｇ／ＳもしくはＧ／Ａリンカー、または本明細書で提供されるもののような他のリンカーであり、
ＭＡｄＣＡＭｓｃＦｖは、以下の式：ＭＡｄＣＡＭＶＨ－リンカーＢ－ＭＡｄＣＡＭＶＫ（式中、ＭＡｄＣＡＭＶＨは、本明細書で提供されるＭＡｄＣＡＭ重鎖可変ドメインであり；
リンカーＢは、本明細書で提供されるもののようなＧ／ＳまたはＧ／Ａリンカーであり；ＭＡｄＣＡＭＶＫは、本明細書に提供される軽鎖可変ドメインである）
を有する］の式を有するポリペプチドが提供される。
一部の実施形態では、ＰＤ－１重鎖可変ドメインは、ＰＤ－１抗体の表４に提供される重鎖可変領域である。一部の実施形態では、ＰＤ－１重鎖可変ドメインは、ＰＤ－１抗体の表４のクローン番号ＰＤ１ＡＢ４（配列番号６３７）、ＰＤ１ＡＢ３０（配列番号７６９）、ＰＤ１ＡＢ１７（配列番号７０４）、ＰＤ１ＡＢ１８（配列番号７１０）、ＰＤ１ＡＢ２０（配列番号７２４）、ＰＤ１ＡＢ２５（配列番号７５５）の重鎖可変領域である。一部の実施形態では、ＰＤ－１重鎖可変ドメインは、ＰＤ－１抗体の表４のＰＤ１ＡＢ４、ＰＤ１ＡＢ３０、ＰＤ１ＡＢ１７、ＰＤ１ＡＢ１８、ＰＤ１ＡＢ２０、またはＰＤ１ＡＢ２５の重鎖ドメインのＣＤＲを含む。一部の実施形態では、ＰＤ－１重鎖可変ドメインは、配列番号６３７、７６９、７０４、７１０、７２４、または７５５の配列を含む。一部の実施形態では、ＰＤ－１重鎖可変ドメインは、配列番号６３９、７５７、７０６、７１２、７２６または７５７の第１のＣＤＲ、配列番号６９、７５８、７０７、７１３、７２７または７５８の第２のＣＤＲ、および配列番号６４０、７５９、７０８、７１４、７２８または７５９の第３のＣＤＲを含む。
一部の実施形態では、ＰＤ－１重鎖可変ドメインは、配列番号６３９の第１のＣＤＲ、配列番号６９の第２のＣＤＲ、および配列番号６４０の第３のＣＤＲ；配列番号７５７の第１のＣＤＲ、配列番号７５８の第２のＣＤＲ、および配列番号７５９の第３のＣＤＲ；配列番号７０６の第１のＣＤＲ、配列番号７０７の第２のＣＤＲ、および配列番号７０８の第３のＣＤＲ；配列番号７１２の第１のＣＤＲ、配列番号７１３の第２のＣＤＲ、および配列番号７１４の第３のＣＤＲ；または配列番号７２６の第１のＣＤＲ、配列番号７２７の第２のＣＤＲ、および配列番号７２８の第３のＣＤＲを含む。
一部の実施形態では、リンカーＡは、（ＧＧＧＧＳ）ｎもしくは（ＧＧＧＧＡ）ｎの配列、またはその混合物を含み、それぞれのｎは独立して１～１０である。
一部の実施形態では、ＭＡｄＣＡＭ重鎖可変領域は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２に提供されるＭＡｄＣＡＭ重鎖可変領域である。一部の実施形態では、ＭＡｄＣＡＭ重鎖可変領域は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２のクローン番号６、７５、または７９の重鎖可変領域である。一部の実施形態では、ＭＡｄＣＡＭ重鎖可変部は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２のクローン６、７５、または７９の重鎖可変ドメインのＣＤＲを含む。一部の実施形態では、ＭＡｄＣＡＭ重鎖可変領域は、配列番号４１４、配列番号５９１、または配列番号５９９の配列を含む。一部の実施形態では、ＭＡｄＣＡＭ重鎖可変領域は、配列番号９０の第１のＣＤＲ、配列番号９１の第２のＣＤＲ、および配列番号９２の第３のＣＤＲ；配列番号３５９の第１のＣＤＲ、配列番号１７０の第２のＣＤＲ、および配列番号３６０の第３のＣＤＲ；または配列番号１３５の第１のＣＤＲ、配列番号３８１の第２のＣＤＲ、および配列番号３８２の第３のＣＤＲを含む。
一部の実施形態では、リンカーＢは、（ＧＧＧＧＳ）ｎもしくは（ＧＧＧＧＡ）ｎの配列、またはその混合物を含むペプチドリンカーのようなリンカーであり、それぞれのｎは独立して１～１０である。
一部の実施形態では、ＭＡｄＣＡＭ軽鎖可変領域は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２に提供されるＭＡｄＣＡＭ軽鎖可変領域である。一部の実施形態では、ＭＡｄＣＡＭ軽鎖可変領域は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２のクローン番号６、７５、または７９の軽鎖可変領域である。一部の実施形態では、ＭＡｄＣＡＭ軽鎖可変部は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２の６、７５、または７９の軽鎖ドメインのＣＤＲを含む。一部の実施形態では、ＭＡｄＣＡＭ軽鎖可変領域は、配列番号４１５、配列番号５９２、または配列番号６００の配列を含む。
一部の実施形態では、ＭＡｄＣＡＭ軽鎖可変領域は、配列番号９３の第１のＣＤＲ、配列番号８７の第２のＣＤＲ、および配列番号９４の第３のＣＤＲ；配列番号３６１の第１のＣＤＲ、配列番号３６２の第２のＣＤＲ、および配列番号３６３の第３のＣＤＲ；または配列番号３８３の第１のＣＤＲ、配列番号３８４の第２のＣＤＲ、および配列番号３５８の第３のＣＤＲを含む。
一部の実施形態では、ポリペプチドは、ＰＤ１ＶＬ－軽鎖定常ドメイン［式中、ＶＬは、本明細書で提供されるＰＤ－１抗体軽鎖可変ドメインであり、軽鎖定常ドメインは、ＩｇＧ Ｋドメインである］の式を有する第２のポリペプチドを含む。一部の実施形態では、軽鎖定常ドメインは、配列番号４５の配列を含む。定常軽鎖ドメインはまた、本明細書で提供されるか、または当業者に公知であるように、他の定常軽鎖ドメインでありうる。一部の実施形態では、ＰＤ１ＶＬは、配列番号６３８、配列番号７５６、配列番号７０５、配列番号７１１、配列番号７２５、配列番号７５６またはＰＤ－１抗体の表４に提供されるＶＬ（ＶＫ）配列の配列を含む。一部の実施形態では、ＰＤ１ＶＬは、配列番号６４１、７０９、７１５、７２９または７６０の第１のＣＤＲ、配列番号３６２、７１６、４２０または３７８の第２のＣＤＲ、および配列番号６４２、４２１、７１７、７３０または７６１の第３のＣＤＲを含む。一部の実施形態では、ＰＤ１ＶＬは、配列番号６４１の第１のＣＤＲ、配列番号３６２の第２のＣＤＲ、および配列番号６４２の第３のＣＤＲ；配列番号７０９の第１のＣＤＲ、配列番号３６２の第２のＣＤＲ、および配列番号４２１の第３のＣＤＲ；配列番号７１５の第１のＣＤＲ、配列番号７１６の第２のＣＤＲ、および配列番号７１７の第３のＣＤＲ；配列番号７２９の第１のＣＤＲ、配列番号４２０の第２のＣＤＲ、および配列番号７３０の第３のＣＤＲ；または配列番号７６０の第１のＣＤＲ、配列番号３７８の第２のＣＤＲ、および配列番号７６１の第３のＣＤＲを含む。
また、本明細書には、例えば、ＰＤ－１に結合することができ、または抗体として作用することができるポリペプチドが提供される。例えば、一部の実施形態では、ポリペプチドまたは抗体は、ＰＤ－１抗体の表４またはＰＤ－１抗体の表５に提供される配列を含む。一部の実施形態では、ポリペプチド、抗体、またはその抗原結合断は、（ｉ）重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域であって、重鎖ＣＤＲ１配列は、ＰＤ－１抗体の表４もしくはＰＤ－１抗体の表５に記載されるＣＤＲ１配列のいずれかのアミノ酸配列を有し、重鎖ＣＤＲ２配列は、ＰＤ－１抗体の表４もしくはＰＤ－１抗体の表５に記載されるＣＤＲ２配列のいずれかのアミノ酸配列を有し、重鎖ＣＤＲ３配列は、ＰＤ－１抗体の表４もしくはＰＤ－１抗体の表５に記載されるＣＤＲ３配列のいずれかのアミノ酸配列を有する、重鎖可変領域、または前出のいずれかの変異体；ならびに（ｉｉ）軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域であって、軽鎖ＣＤＲ１配列は、ＰＤ－１抗体の表４もしくはＰＤ－１抗体の表５に記載されるＬＣＤＲ１配列のいずれかのアミノ酸配列を有し、軽鎖ＬＣＤＲ２配列は、ＰＤ－１抗体の表４もしくはＰＤ－１抗体の表５に記載されるＬＣＤＲ２配列のいずれかのアミノ酸配列を有し、軽鎖ＣＤＲ３配列は、ＰＤ－１抗体の表４もしくはＰＤ－１抗体の表５に記載されるＬＣＤＲ３配列のいずれかのアミノ酸配列を有する、軽鎖可変領域、または前出のいずれかの変異体を含む、ポリペプチド、抗体、またはその抗原結合断片。
一部の実施形態では、ポリペプチド、抗体、またはその抗原結合断片は、ＰＤ－１抗体の表４に示されるＶＫ配列を含む、ポリペプチド、抗体、またはその抗原結合断片。一部の実施形態では、ポリペプチド、抗体、またはその抗原結合断片は、ＰＤ－１抗体の表４に示されるＶＨ配列を含む、ポリペプチド、抗体、またはその抗原結合断片。一部の実施形態では、ポリペプチド、抗体、またはその抗原結合断片は、ＰＤ－１抗体の表４に示されるＶＫ配列、およびＰＤ－１抗体の表４に示されるＶＨ配列を含む、ポリペプチド、抗体、またはその抗原結合断片。
一部の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ＰＤ－１抗体の表４のクローン番号ＰＤ１ＡＢ４（配列番号６３７）、ＰＤ１ＡＢ３０（配列番号７６９）、ＰＤ１ＡＢ１７（配列番号７０４）、ＰＤ１ＡＢ１８（配列番号７１０）、ＰＤ１ＡＢ２０（配列番号７２４）、ＰＤ１ＡＢ２５（配列番号７５５）の重鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、ＰＤ－１抗体の表４のＰＤ１ＡＢ４、ＰＤ１ＡＢ３０、ＰＤ１ＡＢ１７、ＰＤ１ＡＢ１８、ＰＤ１ＡＢ２０、またはＰＤ１ＡＢ２５の重鎖ドメインのＣＤＲを含む重鎖を含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号６３９、７５７、７０６、７１２、７２６または７５７の第１のＣＤＲ、配列番号６９、７５８、７０７、７１３、７２７または７５８の第２のＣＤＲ、および配列番号６４０、７５９、７０８、７１４、７２８または７５９の第３のＣＤＲを含む重鎖を含む。
一部の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、配列番号６３９の第１のＣＤＲ、配列番号６９の第２のＣＤＲ、および配列番号６４０の第３のＣＤＲ；配列番号７５７の第１のＣＤＲ、配列番号７５８の第２のＣＤＲ、および配列番号７５９の第３のＣＤＲ；配列番号７０６の第１のＣＤＲ、配列番号７０７の第２のＣＤＲ、および配列番号７０８の第３のＣＤＲ；配列番号７１２の第１のＣＤＲ、配列番号７１３の第２のＣＤＲ、および配列番号７１４の第３のＣＤＲ；または配列番号７２６の第１のＣＤＲ、配列番号７２７の第２のＣＤＲ、および配列番号７２８の第３のＣＤＲを含む重鎖を含む。
一部の実施形態では、抗体は、ＰＤ－１抗体の表４のクローン番号ＰＤ１ＡＢ４（配列番号６３８）、ＰＤ１ＡＢ３０（配列番号７５６）、ＰＤ１ＡＢ１７（配列番号７０５）、ＰＤ１ＡＢ１８（配列番号７１１）、ＰＤ１ＡＢ２０（配列番号７２５）、ＰＤ１ＡＢ２５（配列番号７５６）の軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、ＰＤ－１抗体の表４のＰＤ１ＡＢ４、ＰＤ１ＡＢ３０、ＰＤ１ＡＢ１７、ＰＤ１ＡＢ１８、ＰＤ１ＡＢ２０、またはＰＤ１ＡＢ２５の軽鎖ドメインのＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号６４１、７０９、７１５、７２９、または７６０の第１のＣＤＲ、配列番号３６２、７１６、４２０、または３７８の第２のＣＤＲ、および配列番号６４２、４２１、７１７、７３０、または７６１の第３のＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号６４１の第１のＣＤＲ、配列番号３６２の第２のＣＤＲ、および配列番号６４２の第３のＣＤＲ；配列番号７０９の第１のＣＤＲ、配列番号３６２の第２のＣＤＲ、および配列番号４２１の第３のＣＤＲ；配列番号７１５の第１のＣＤＲ、配列番号７１６の第２のＣＤＲ、および配列番号７１７の第３のＣＤＲ；配列番号７２９の第１のＣＤＲ；配列番号４２０の第２のＣＤＲ、および配列番号７３０の第３のＣＤＲ；または配列番号７６０の第１のＣＤＲ；配列番号３７８の第２のＣＤＲ、および配列番号７６１の第３のＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含む。
一部の実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、
配列番号６３９の第１のＣＤＲ、配列番号６９の第２のＣＤＲ、および配列番号６４０の第３のＣＤＲを含む重鎖可変領域、ならびに配列番号６４１の第１のＣＤＲ、配列番号３６２の第２のＣＤＲ、および配列番号６４２の第３のＣＤＲを含む軽鎖可変領域；
配列番号７５７の第１のＣＤＲ、配列番号７５８の第２のＣＤＲ、および配列番号７５９の第３のＣＤＲを含む重鎖可変領域、ならびに配列番号７６０の第１のＣＤＲ、配列番号３７８の第２のＣＤＲ、および配列番号７６１の第３のＣＤＲを含む軽鎖可変領域；
配列番号７０６の第１のＣＤＲ、配列番号７０７の第２のＣＤＲ、および配列番号７０８の第３のＣＤＲを含む重鎖可変領域、ならびに配列番号７０９の第１のＣＤＲ、配列番号３６２の第２のＣＤＲ、および配列番号４２１の第３のＣＤＲを含む軽鎖可変領域；
配列番号７１２の第１のＣＤＲ、配列番号７１３の第２のＣＤＲ、および配列番号７１４の第３のＣＤＲを含む重鎖可変領域、ならびに配列番号７１５の第１のＣＤＲ、配列番号７１６の第２のＣＤＲ、および配列番号７１７の第３のＣＤＲを含む軽鎖可変領域；
配列番号７２６の第１のＣＤＲ、配列番号７２７の第２のＣＤＲ、および配列番号７２８の第３のＣＤＲを含む重鎖可変領域、ならびに配列番号７２９の第１のＣＤＲ、配列番号４２０の第２のＣＤＲ、および配列番号７３０の第３のＣＤＲを含む軽鎖可変領域；または
配列番号７５７の第１のＣＤＲ、配列番号７５８の第２のＣＤＲ、および配列番号７５９の第３のＣＤＲを含む重鎖可変領域、ならびに配列番号７６０の第１のＣＤＲ、配列番号３７８の第２のＣＤＲ、および配列番号７６１の第３のＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含む。
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６３７、配列番号７６９、配列番号７０４、配列番号７１０、配列番号７２４、または配列番号７５５の配列を含む重鎖、および配列番号６３８、配列番号７５６、配列番号７０５、配列番号７１１、配列番号７２５、または配列番号７５６の配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態では、抗体は、配列番号６３７の配列を含む重鎖可変領域および配列番号６３８の配列を含む軽鎖可変領域；配列番号７０４の配列を含む重鎖可変領域および配列番号７０５の配列を含む軽鎖可変領域；配列番号７１０の配列を含む重鎖可変領域および配列番号７１１の配列を含む軽鎖可変領域；配列番号７２４の配列を含む重鎖可変領域および配列番号７２５の配列を含む軽鎖可変領域；配列番号７５５の配列を含む重鎖可変領域および配列番号７５６の配列を含む軽鎖可変領域；または配列番号７６９の配列を含む重鎖可変領域および配列番号７５６の配列を含む軽鎖可変領域を含む。
一部の実施形態では、ＰＤ－１に結合する抗体が提供される。このような抗体の例は、本明細書に提供され、上記および下記に記載される。一部の実施形態では、ＰＤ－１に結合する抗体は、別の部分に直接的または間接的に会合される。それは、例えば、化学的またはペプチドリンカーを介して別の部分に連結されうる。ペプチドリンカーの例は、本明細書に提供され、参照により組み入れられる。一部の実施形態では、別の部分は、治療用分子または標的化部分である。このような標的化部分（分子）の例は、本明細書に提供される。一部の実施形態では、別の部分は、第２の抗体である。一部の実施形態では、第２の抗体は、ＰＤ－１抗体を細胞に標的化する標的化抗体である。一部の実施形態では、標的化抗体は、ＭＡｄＣＡＭに結合する抗体である。一部の実施形態では、標的化抗体は、ＯＡＴ１（ＳＬＣ２２Ａ６）に結合する抗体である。一部の実施形態では、標的化抗体は、ＯＣＴ２（ＳＬＣ２２Ａ２）に結合する抗体である。一部の実施形態では、標的化部分は、ＯＡＴ１（ＳＬＣ２２Ａ６）またはＯＣＴ２（ＳＬＣ２２Ａ２）に結合する抗体である。一部の実施形態では、標的化部分は、ＯＡＴ１（ＳＬＣ２２Ａ６）およびＯＣＴ２（ＳＬＣ２２Ａ２）に結合しない。一部の実施形態では、標的化部分は、膵臓において見出されるタンパク質に特異的に結合する部分である。一部の実施形態では、標的化部分（抗体）は、ＥＮＴＰＤ３に結合する。一部の実施形態では、標的化部分（抗体）は、ＦＸＹＤ２に結合する。一部の実施形態では、標的化部分（抗体）は、ＴＳＰＡＮ７に結合する。一部の実施形態では、標的化部分（抗体）は、ＤＰＰ６に結合する。一部の実施形態では、標的化部分（抗体）は、ＨＥＰＡＣＡＭ２に結合する。一部の実施形態では、標的化部分（抗体）は、ＴＭＥＭ２７に結合する。一部の実施形態では、標的化部分（抗体）は、ＧＰＲ１１９に結合する。一部の実施形態では、標的化部分（抗体）は、ＥＮＴＰＤ３、ＦＸＹＤ２、ＴＳＰＡＮ７、ＤＰＰ６、ＨＥＰＡＣＡＭ２、ＴＭＥＭ２７、またはＧＰＲ１１９に結合しない。一部の実施形態では、標的化部分は、ＥＮＴＰＤ３、ＦＸＹＤ２、ＴＳＰＡＮ７、ＤＰＰ６、ＨＥＰＡＣＡＭ２、ＴＭＥＭ２７、またはＧＰＲ１１９に結合する抗体である。
一部の実施形態では、ＭＡｄＣＡＭに結合する抗体は、本明細書で提供される抗体である。一部の実施形態では、ＭＡｄＣＡＭに結合する抗体は、ｓｃＦＶ抗体である。
一部の実施形態では、別の部分は、ＩＬ－２ムテインである。ＩＬ－２ムテインの非限定的な例は、本明細書に提供される。
一部の実施形態では、ポリペプチドは、下記の表に記載される配列を含む。第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドは、構成要素、例えば、本明細書に提供されるものを含む。表に例示されるリンカーは非限定的であり、他のリンカーもまた使用することができる。
Figure 2022544990000076
Figure 2022544990000077
したがって、一部の実施形態では、配列番号８８５または配列番号８８７を含む第１のポリペプチド、および配列番号８８６または８８８を含む第２のポリペプチドを含むポリペプチドが提供される。一部の実施形態では、配列番号８８５を含む第１のポリペプチド、および配列番号８８６を含む第２のポリペプチドを含むポリペプチドが提供される。一部の実施形態では、配列番号８８７を含む第１のポリペプチド、および配列番号８８８を含む第２のポリペプチドを含むポリペプチドが提供される。
ポリペプチド、重鎖、軽鎖、可変ドメイン、ＣＤＲＳなどは、例として提供され、変異体が含まれる。変異体は、参照配列、例えば、本明細書で提供される配列と、少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する配列でありうる。一部の実施形態では、重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインのＣＤＲは、本明細書で提供される通りであるが、可変ドメインの残りの部分は、本明細書に示されるものとは異なる。一部の実施形態では、ＣＤＲの外側の領域は、ＣＤＲの外側の領域と少なくとももしくは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する。一部の実施形態では、ＣＤＲの外側の領域は、本明細書で提供される配列と比較して保存的置換を含有する。一部の実施形態では、ＣＤＲは、可変鎖の異なるフレームワーク領域に配置され、したがって、本明細書で提供されるＣＤＲ（および本明細書で提供される代替物）のようなＣＤＲは、一定であり、フレームワークは修飾される。配列同一性は、デフォルトパラメータを使用するＢＬＡＳＴＰを用いて実行することができる。一部の実施態様では、配列番号８８５、配列番号８８６、配列番号８８７または配列番号８８８と少なくとももしくは約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一であるポリペプチド鎖を含むポリペプチドが提供される。一部の実施形態では、配列番号８８５、配列番号８８６、配列番号８８７または配列番号８８８に示されるリンカーは、異なるペプチドリンカー、例えば、より短いまたはより長いペプチドリンカーで置換される。一部の実施形態では、リンカーは、グリシン／アラニンリンカーで置換され、非限定的な例が本明細書に提供される。
参照ポリペプチド、例えば、ヒトポリペプチドに由来するポリペプチド
一部の実施形態では、治療用分子の構成要素は、参照分子、例えば、ヒトにおける使用のための治療用分子の場合、自然発生のヒトポリペプチドに由来するか、またはこれに基づく。例えば、一部の実施形態では、ＣＤ３９分子、ＣＤ７３分子、細胞表面分子結合剤、ドナー特異的標的化部分、エフェクターリガンド結合性分子、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分、ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分、阻害性免疫チェックポイント分子のリガンド分子、阻害性分子カウンターリガンド分子、ＳＭ結合性／モジュレーティング部分、特異的標的化部分、標的リガンド結合性分子、または組織特異的標的化部分の全部または一部は、自然発生のヒトポリペプチドに基づくか、またはこれに由来する場合がある。例えば、ＰＤ－Ｌ１分子は、ヒトＰＤ－Ｌ１配列に基づくか、またはこれに由来する場合がある。
一部の実施形態では、治療用化合物の構成要素、例えば、ＰＤ－Ｌ１分子は：
ａ）例えば、ヒトポリペプチドの自然発生形態の活性部分の全部もしくは一部；
ｂ）例えば、データベース、例えば、２０１７年１月１１日現在、ＧｅｎＢａｎｋデータベース内に出現する配列を有するヒトポリペプチドである、疾患状態と関連しない、ヒトポリペプチドの自然発生形態の活性部分の全部もしくは一部；
ｃ）ａ）もしくはｂ）の配列と、１、２、３、４、５、１０、２０、または３０アミノ酸残基以下異なる配列を有する、ヒトポリペプチド；
ｄ）ａ）もしくはｂ）の配列と、１、２、３、４、５、１０、２０、または３０％アミノ酸残基以下異なる配列を有する、ヒトポリペプチド；
ｅ）ａ）もしくはｂ）の配列を有するヒトポリペプチドと、実質的に異ならない配列；または
ｆ）生物学的活性、例えば、免疫応答を増強または阻害する能力において、ａ）もしくはｂ）の配列を有するヒトポリペプチドと、実質的に異ならない、ｃ）、ｄ）、またはｅ）の配列を有する、ヒトポリペプチド
を含む。
一部の実施形態では、治療用化合物は、複数のエフェクター結合性／モジュレーティング部分を含みうる。例えば、治療用化合物は、以下：
（ａ）ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分；（ｂ）ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分；（ｃ）ＳＭ結合性／モジュレーティング部分；または（ｄ）ＩＣＳＭ結合性／モジュレーティング部分
から選択されるエフェクター結合性／モジュレーティング部分のうちの２つ以上を含みうる。一部の実施形態では、例えば、治療用化合物は、複数、例えば、２つの、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分（この場合、ＩＣＩＭは、同じであるか、または異なる）；例を目的として述べると、ＰＤ－１を活性化させるか、またはアゴナイズする、２つの、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分；複数、例えば、２つの、ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分（この場合、ＩＩＣは、同じであるか、または異なる）；複数、例えば、２つの、ＳＭ結合性／モジュレーティング部分（この場合、ＳＭは、同じであるか、または異なる）；または複数、例えば、２つの、ＩＣＳＭ結合性／モジュレーティング部分（この場合、ＩＣＳＭは、同じであるか、または異なる）を含みうる。一部の実施形態では、治療用化合物は、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分およびＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分；ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分およびＳＭ結合性／モジュレーティング部分；ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分およびＳＭ結合性／モジュレーティング部分、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分およびＩＣＳＭ結合性／モジュレーティング部分；ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分およびＩＣＳＭ結合性／モジュレーティング部分；またはＩＣＳＭ結合性／モジュレーティング部分およびＳＭ結合性／モジュレーティング部分を含みうる。一部の実施形態では、治療用化合物は、複数の標的化部分を含む。一部の実施形態では、標的化部分は、同じ場合もあり、異なる場合もある。
医薬組成物およびキット
別の態様では、本実施形態は、組成物、例えば、薬学的に許容される担体と併せて製剤化される、本明細書で記載される治療用化合物を含む、薬学的に許容される組成物を提供する。本明細書で使用される、「薬学的に許容される担体」は、生理学的に適合性であるものなど、任意の溶媒、分散媒、等張剤、および吸収遅延剤、ならびに全ての溶媒、分散媒、等張剤、および吸収遅延剤を含む。
担体は、（例えば、注射または注入による、）静脈内投与に適する場合もあり、筋内投与に適する場合もあり、皮下投与に適する場合もあり、非経口投与に適する場合もあり、直腸内投与に適する場合もあり、局所投与に適する場合もあり、眼内投与に適する場合もあり、局所投与に適する場合もあり、脊髄内投与に適する場合もあり、表皮投与に適する場合もある。本明細書で使用される、「担体」という用語は、それと共に化合物が投与される、希釈剤、アジュバント、または賦形剤を意味する。一部の実施形態では、医薬担体はまた、水、およびラッカセイ油、ダイズ油、鉱物油、ゴマ油などのような、石油由来、動物由来、植物由来、または合成由来の油を含む油のような液体の場合もある。医薬担体はまた、生理食塩液、アカシアガム、ゼラチン、デンプンペースト、滑石、ケラチン、コロイド状シリカ、尿素などの場合もある。加えて、補助剤、安定化剤、増粘剤、滑沢剤、および着色剤も使用することができる。担体は、本明細書で提供される治療用化合物を含む、医薬組成物中で使用することができる。
本明細書で提供される実施形態の組成物および化合物は、様々な形態でありうる。これらは、例えば、溶液（例えば、注射用溶液および注入用溶液）、分散液、または懸濁液、リポソーム、および坐剤のような、液体剤形、半固体剤形、および固体剤形を含む。好ましい形態は、意図される投与方式および治療適用に依存する。典型的な組成物は、注射用溶液または注入用溶液の形態にある。一部の実施形態では、投与方式は、非経口（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、筋内）投与方式である。一部の実施形態では、治療用分子は、静脈内注入または静脈内注射により投与される。別の実施形態では、治療用分子は、筋内注射または皮下注射により投与される。別の実施形態では、治療用分子は、例えば、標的部位への注射または局所塗布により、局所投与される。
本明細書で使用される、「非経口投与」および「非経口投与された」という語句は、通例、注射による、腸内投与および局所投与以外の投与方式を意味し、限定せずに述べると、静脈内注射および静脈内注入、筋内注射および筋内注入、動脈内注射および動脈内注入、髄腔内注射および髄腔内注入、関節包内注射および関節包内注入、眼窩内注射および眼窩内注入、心内注射および心内注入、皮内注射および皮内注入、腹腔内注射および腹腔内注入、経気管注射および経気管注入、皮下注射および皮下注入、表皮下注射および表皮下注入、関節内注射および関節内注入、被膜下注射および被膜下注入、くも膜下注射およびくも膜下注入、脊髄内注射および脊髄内注入、硬膜外注射および硬膜外注入、ならびに胸骨下注射およびならびに胸骨下注入を含む。
治療用組成物は、典型的に、製造条件下および保管条件下で、滅菌かつ安定であるものとする。組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、分散液、リポソーム、または高薬物濃度に適する、他の秩序構造として製剤化することができる。滅菌注射用溶液は、要求に応じて、上記で列挙された成分のうちの１つまたは組合せと共に、適切な溶媒中に、要求量で、活性化合物（すなわち、治療用分子）を組み込むことに続く、濾過滅菌により調製することができる。一般に、分散液は、活性化合物を、基本分散媒と、上記で列挙された成分に由来する、要求される他の成分とを含有する滅菌媒体へと組み込むことにより調製される。滅菌注射用溶液を調製するための滅菌粉剤の場合、調製の好ましい方法は、有効成分に、あらかじめ滅菌濾過されたその溶液に由来する、任意のさらなる所望の成分を加えた粉剤をもたらす、真空乾燥および凍結乾燥である。溶液の適正な流体性は、例えば、レシチンなど、コーティングの使用により維持することができ、分散液の場合は、要求される粒子サイズの維持により維持することができ、界面活性剤の使用により維持することができる。注射用組成物の持続吸収は、組成物中に、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを含めることによりもたらすことができる。
当業者により察知される通り、投与経路および／または投与方式は、所望される結果に応じて変動するであろう。ある特定の実施形態では、活性化合物は、インプラント、経皮パッチ、およびマイクロカプセル化送達系を含む制御放出製剤のように、化合物を、急速な放出に対して保護する担体と共に調製することができる。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸のような、生体分解性ポリマー、生体適合性ポリマーを使用することができる。このような製剤を調製するための多くの方法には、特許権が与えられているか、または、当業者に、一般に公知である。例えば、「Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ」、Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ編、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９７８年を参照されたい。
ある特定の実施形態では、治療用化合物は、例えば、不活性の希釈液または同化可能な可食性担体と共に、経口投与することができる。化合物（および、所望の場合、他の成分）はまた、硬質シェルまたは軟質シェルのゼラチンカプセルへと封入することもでき、錠剤へと圧縮することもでき、対象の食餌へと直接組み込むこともできる。治療的経口投与のために、化合物は、賦形剤と共に組み込み、服用可能な錠剤、口内用錠剤、トローチ、カプセル、エリキシル剤、懸濁液、シロップ、ウェハーなどの形態で使用することができる。化合物を、非経口投与以外で投与するために、化合物を、その不活化を防止する材料でコーティングすることが必要な場合もあり、化合物を、その不活化を防止する材料と共に共投与することが必要な場合もある。治療用組成物はまた、当技術分野で公知の医用デバイスにより投与される場合もある。
投与量レジメンは、所望される最適の応答（例えば、治療応答）をもたらすように調整される。例えば、単回のボーラスを投与することもでき、いくつかに分けた用量を、ある期間にわたり投与することもでき、治療状況の切迫により指し示されるのに応じて、用量を、低減するか、または増大させることもできる。投与の容易さおよび投与量の均一性のために、非経口組成物を、単位剤形で製剤化することが、とりわけ有利である。本明細書で使用される単位剤形とは、処置される対象のための単位投与量として適する、物理的に個別の単位を指し；各単位は、要求される医薬担体と共に、所望の治療効果をもたらすように計算された、所定数量の活性化合物を含有する。単位剤形についての規格は、（ａ）活性化合物の固有の特徴、および、達成される、特定の治療的効果、ならびに（ｂ）個体における感受性の処置のために、このような活性化合物を組み合わせることの、当技術分野における固有の限界により、かつ、これらに直接応じて指示される。
治療用化合物の治療有効量または予防有効量についての、例示的で非限定的な範囲は、０．１～３０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは、１～２５ｍｇ／ｋｇである。治療用化合物の投与量および治療レジメンは、当業者が決定することができる。ある特定の実施形態では、治療用化合物は、約１～４０ｍｇ／ｋｇ、例えば、１～３０ｍｇ／ｋｇ、例えば、約５～２５ｍｇ／ｋｇ、約１０～２０ｍｇ／ｋｇ、約１～５ｍｇ／ｋｇ、１～１０ｍｇ／ｋｇ、５～１５ｍｇ／ｋｇ、１０～２０ｍｇ／ｋｇ、１５～２５ｍｇ／ｋｇ、または約３ｍｇ／ｋｇの用量で、注射（例えば、皮下注射または静脈内注射）により投与される。投与スケジュールは、例えば、毎週１回～２、３、または４週間ごとに１回で変動する場合がある。一実施形態では、治療用化合物は、約１０～２０ｍｇ／ｋｇの用量で、隔週投与される。治療用化合物は、約３５～４４０ｍｇ／ｍ２、典型的に、約７０～３１０ｍｇ／ｍ２であり、より典型的に、約１１０～１３０ｍｇ／ｍ２の用量に達するように、２０ｍｇ／分を超える速度で、例えば、２０～４０ｍｇ／分であり、典型的に、４０ｍｇ／分以上の速度で、静脈内注入により投与することができる。複数の実施形態では、約１１０～１３０ｍｇ／ｍ２の注入速度は、約３ｍｇ／ｋｇのレベルを達成する。他の実施形態では、治療用化合物は、約１～１００ｍｇ／ｍ２、例えば、約５～５０ｍｇ／ｍ２、約７～２５ｍｇ／ｍ２、または約１０ｍｇ／ｍ２の用量に達するように、１０ｍｇ／分未満、例えば、５ｍｇ／分以下の速度における静脈内注入により投与することができる。一部の実施形態では、治療用化合物は、約３０分にわたり注入される。投与量値は、緩和される状態の種類および重症度と共に変動する場合があることに注目すべきである。任意の特定の対象のために、具体的投与量レジメンを、ある期間にわたり、個別の必要、および組成物を投与する担当者、または組成物の投与を監視する担当者の職業的判断に従い調整すべきであり、本明細書で明示される投与量範囲は、例示的なものであるに過ぎず、特許請求される組成物についての範囲または実施を限定することを意図するものではないことをさらに理解されたい。
医薬組成物は、「治療有効量」または「予防有効量」の治療用分子を含みうる。「治療有効量」とは、所望される治療結果を達成するのに必要な投与量で、これに必要な期間にわたり有効な量を指す。治療用分子の治療有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別、および体重、ならびに治療用化合物が、個体において所望される応答を誘発する能力のような因子に従い変動する場合がある。治療有効量はまた、治療用分子の、任意の毒性作用または有害作用が、治療的に有益な効果により凌駕される場合の量でもある。「治療有効投与量」は、好ましくは、測定可能なパラメータ、例えば、免疫による攻撃を、非処置対象と比べて、少なくとも約２０％、より好ましくは、少なくとも約４０％、なおより好ましくは、少なくとも約６０％阻害し、さらにより好ましくは、少なくとも約８０％阻害する。化合物が、測定可能なパラメータ、例えば、免疫による攻撃を阻害する能力は、移植拒絶または自己免疫障害における効能を予測する動物モデル系において査定することができる。代替的に、組成物のこの特性は、例えば、当業者に公知のアッセイを介して、化合物が、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるこのような阻害をもたらす能力について検討することにより査定することもできる。
「予防有効量」とは、所望される予防結果を達成するのに必要な投与量で、これに必要な期間にわたり有効な量を指す。典型的に、予防用量は、対象において、疾患に先だって、またはその早期に使用されるので、予防有効量は、治療有効量未満となるであろう。
また、本明細書で記載される、治療用化合物を含むキットも、実施形態の範囲内にある。キットは、使用のための指示書；他の試薬、例えば、標識、治療剤、もしくはキレート化に有用な薬剤、または治療用分子を、標識もしくは他の治療剤、または放射性組成物へと、他の形でカップリングさせる薬剤；治療用分子を、投与用に調製するためのデバイスまたは他の材料；薬学的に許容される担体；および対象への投与のためのデバイスまたは他の材料を含む、１つまたはそれ以上の他の要素を含みうる。
一部の実施形態では、本明細書で提供される実施形態はまた、以下も含むがこれらに限定されない：
１．治療用化合物であって、
ｉ）特異的標的化部分であって：
ａ）例えば、ドナー標的に優先的に結合する、ドナー特異的標的化部分；または
ｂ）例えば、対象の標的組織に優先的に結合する、組織特異的標的化部分
から選択される、特異的標的化部分と；
ｉｉ）エフェクター結合性／モジュレーティング部分であって、
（ａ）免疫細胞阻害性分子結合性／モジュレーティング部分（ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分）；
（ｂ）免疫抑制性免疫細胞結合性／モジュレーティング部分（ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分）；または
（ｃ）治療用化合物の一部として、例えば、標的の近傍において、標的の免疫系による攻撃を阻害または最小化する物質（ＳＭ結合性／モジュレーティング部分）を提供することにより免疫抑制性の局所微小環境を促進する、エフェクター結合性／モジュレーティング部分
から選択される、エフェクター結合性／モジュレーティング部分と
を含む、治療用化合物。
２．エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、阻害性受容体に直接結合し、これを活性化させる、実施形態１に記載の治療用化合物。
３．エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、阻害性免疫チェックポイント分子である、実施形態２に記載の治療用化合物。
４．エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、免疫細胞により発現される、実施形態１～３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
５．免疫細胞は、望ましくない免疫応答に寄与する、実施形態４に記載の治療用化合物。
６．免疫細胞は、病態を引き起こす、実施形態４または５に記載の治療用化合物。
７．治療用分子が、エフェクター結合性／モジュレーティング部分が結合する分子をアゴナイズする能力は、治療用化合物が、標的に、標的化部分を介して結合される場合に、治療用化合物が、標的に、標的化部分を介して結合されない場合より大きい、例えば、２、５、１０、１００、５００、または１，０００倍大きい、実施形態１に記載の治療用化合物。
８．そのコグネイトリガンド、例えば、阻害性免疫チェックポイント分子に、単量体として結合する場合（または治療用化合物が多量体化されずに、これに結合する場合）、コグネイトリガンドをアゴナイズしないか、または実質的にアゴナイズしない、実施形態１～７のいずれか１項に記載の治療用化合物。
９．治療用化合物の治療有効用量において、エフェクター結合性／モジュレーティング部分が結合する分子の、著明な、全身性アゴナイゼーションが認められる、実施形態１～８のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１０．治療用化合物の治療有効用量において、エフェクター結合性／モジュレーティング部分が結合する分子のアゴナイゼーションは、標的化部分が結合する標的部位だけにおいて、実質的に生じる、実施形態１～９のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１１．治療用化合物の、そのコグネイトリガンド、例えば、阻害性免疫チェックポイント分子への結合は、内因性カウンターリガンドの、コグネイトリガンド、例えば、阻害性免疫チェックポイント分子への結合を阻害しないか、または実質的に阻害しない、実施形態１～９のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１２．エフェクター結合性／モジュレーティング部分の、そのコグネイトリガンドへの結合は、内因性カウンターリガンドの、エフェクター結合性／モジュレーティング部分のコグネイトリガンドへの結合を、６０、５０、４０、３０、２０、１０、または５％未満阻害する、実施形態１～１１のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１４．エフェクター結合性／モジュレーティング部分の、コグネイトリガンドへの結合は実質的に、エフェクター結合性／モジュレーティング分子のコグネイトリガンドに対するアンタゴニズムを結果としてもたらさない、実施形態１～１１のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１５．エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分を含む、実施形態１に記載の治療用化合物。
１６．エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、阻害性免疫チェックポイント分子のリガンド分子を含む、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分を含む、実施形態１５に記載の治療用化合物。
１７．阻害性免疫分子のカウンターリガンド分子は、ＰＤ－Ｌ１分子を含む、実施形態１６に記載の治療用化合物。
１８．阻害性免疫分子のカウンターリガンド分子は、ＰＤ－１、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ、またはＣＴＬＡ－４から選択される、コグネイト阻害性免疫チェックポイント分子を係合する、実施形態１５に記載の治療用化合物。
１９．ＩＣＩＭは、抗体である、実施形態１８に記載の治療用化合物。
２０．ＩＣＩＭは、ＰＤ－１に結合する抗体、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ、またはＣＴＬＡ－４を含む、実施形態１８に記載の治療用化合物。
２１．抗体は、ＰＤ－１に結合する抗体である、実施形態２０に記載の治療用化合物。
２２．抗体は、ＰＤ－１に結合する抗体であり、ＰＤ－１アゴニストである、実施形態２０に記載の治療用化合物。
２３．抗体は、ＰＤ－１に結合する抗体であり、標的部位に係留された場合に、ＰＤ－１アゴニストである、実施形態２０に記載の治療用化合物。
２４．阻害性免疫分子のカウンターリガンド分子は、ＨＬＡ－Ｇ分子を含む、実施形態１６に記載の治療用化合物。
２５．阻害性免疫分子のカウンターリガンド分子は、ＰＤ－１、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ、またはＣＴＬＡ－４から選択される、コグネイト阻害性免疫チェックポイント分子を係合する、実施形態１５に記載の治療用化合物。
２６．阻害性免疫分子のカウンターリガンド分子は、表１から選択される、コグネイト阻害性免疫チェックポイント分子を係合する、実施形態１５に記載の治療用化合物。
２７．そのコグネイト阻害性免疫チェックポイント分子に、単量体として結合する場合、阻害性免疫チェックポイント分子をアゴナイズしないか、または実質的にアゴナイズしない、実施形態１５に記載の治療用化合物。
２８．阻害性免疫分子のカウンターリガンドは、自然発生の阻害性免疫チェックポイント分子のリガンドとの、少なくとも６０、７０、８０、９０、９５、９９、または１００％の相同性を有する、実施形態１５に記載の治療用化合物。
２９．エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、細胞表面阻害性分子に対する機能的抗体分子を含む、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分を含む、実施形態１に記載の治療用化合物。
３０．細胞表面阻害性分子は、阻害性免疫チェックポイント分子である、実施形態１に記載の治療用化合物。
３１．阻害性免疫チェックポイント分子は、ＰＤ－１、ＫＩＲ２ＤＬ４、ＬＩＬＲＢ１、ＬＩＬＲＢ２、ＣＴＬＡ－４から選択されるか、または表１から選択される、実施形態３０に記載の化合物。
３２．例えば治療用化合物の治療有効用量における、全身免疫抑制のレベルは、全身性の免疫抑制剤（関与性の場合）を伴う標準療法によりもたらされる全身免疫抑制のレベル未満であるか、または等モル量の遊離（治療用化合物の構成要素としてでない）エフェクター結合性／モジュレーティング分子によりもたらされる全身免疫抑制のレベル未満である、実施形態１～３１のいずれか１項に記載の治療用化合物。
３３．例えば治療用化合物の治療有効用量における、全身性免疫活性化のレベルは、等モル量の遊離（治療用化合物の構成要素としてでない）エフェクター結合性／モジュレーティング分子によりもたらされる全身性免疫活性化のレベル未満である、実施形態１～３２のいずれか１項に記載の治療用化合物。
３４．第２のエフェクター結合性／モジュレーティング部分をさらに含む、実施形態１～３３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
３５．第２のエフェクター結合性／モジュレーティング部分は、エフェクター結合性／モジュレーティング部分と異なる標的に結合する、実施形態３４に記載の治療用化合物。
３６．第２のエフェクター結合性／モジュレーティング部分は、ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分を含む、実施形態３４または３５に記載の治療用化合物。
３６Ａ．第２のエフェクター結合性／モジュレーティング部分は、ＳＭ結合性／モジュレーティング部分を含む、実施形態３４または３５に記載の治療用化合物。
３７．エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分を含む、実施形態１に記載の治療用化合物。
３８．エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、免疫抑制性免疫細胞を、標的部位において増大させるか、標的部位に動員するか、または標的部位に蓄積する、ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分を含む、実施形態１に記載の治療用化合物。
３９．エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、免疫抑制性免疫細胞上の細胞表面分子に結合するか、または特異的に結合する、細胞表面分子結合剤を含む、実施形態１に記載の治療用化合物。
４０．エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、免疫抑制性免疫細胞上の細胞表面分子に結合するか、または特異的に結合する、細胞表面分子のリガンド分子を含む、実施形態１に記載の治療用化合物。
４１．エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、免疫抑制性免疫細胞上の細胞表面分子に結合する抗体分子を含む、実施形態１に記載の治療用化合物。
４２．免疫抑制性免疫細胞は、Ｆｏｘｐ３＋ ＣＤ２５＋調節性Ｔ細胞のような調節性Ｔ細胞を含む、実施形態３８～４１のいずれか１項に記載の治療用化合物。
４３．エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、ＧＡＲＰに結合し、例えば、ＧＡＲＰを発現する免疫抑制性細胞、例えば、Ｔｒｅｇ上のＧＡＲＰに結合する抗体分子を含む、実施形態１～４２のいずれか１項に記載の治療用化合物。
４４．エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、ＳＭ結合性／モジュレーティング部分を含む、実施形態１に記載の治療用化合物。
４５．ＳＭ結合性／モジュレーティング部分は、免疫抑制性の局所微小環境を促進する、実施形態４４に記載の治療用化合物。
４６．エフェクター分子結合性部分は、例えば、免疫細胞機能を阻害する物質、例えば、免疫細胞の活性化、または活性化免疫細胞の機能を阻害する物質の局所濃度もしくは局所量を増大させることにより、アベイラビリティーを増大させる、実施形態４４または４５に記載の治療用化合物。
４７．エフェクター分子結合性部分は、免疫抑制機能を有する可溶性物質、例えば、内因性物質または外因性物質に結合し、これらを蓄積する、実施形態４４～４６のいずれか１項に記載の治療用化合物。
４８．エフェクター分子結合性部分は、例えば、免疫細胞機能を促進する物質、例えば、免疫細胞の活性化、または活性化免疫細胞の機能を促進する物質の局所濃度もしくは局所量を減少させるか、またはこれを封鎖することにより、アベイラビリティーを減少させる、実施形態４４～４７のいずれか１項に記載の治療用化合物。
４９．ＳＭ結合性／モジュレーティング部分は、例えば、標的の近傍において、標的の免疫系による攻撃を阻害または最小化する物質を提供することにより、免疫抑制性の局所微小環境を促進する、実施形態４４～４８のいずれか１項に記載の治療用化合物。
５０．ＳＭ結合性／モジュレーティング部分は、標的の免疫系による攻撃を阻害または最小化する分子を含む、実施形態４４～４９のいずれか１項に記載の治療用化合物。
５１．ＳＭ結合性／モジュレーティング部分は、免疫抑制機能を有する可溶性物質、例えば、内因性物質または外因性物質に結合し、かつ／またはこれらを蓄積する、実施形態４４～５０のいずれか１項に記載の治療用化合物。
５２．ＳＭ結合性／モジュレーティング部分は、免疫による攻撃を促進する物質、例えば、可溶性物質、典型的に、内因性可溶性物質に結合し、かつ／またはこれらを阻害、封鎖、分解するか、もしくは他の形で中和する、実施形態４４～５１のいずれか１項に記載の治療用化合物。
５３．エフェクター分子結合性部分は、ＡＴＰまたはＡＭＰのアベイラビリティーを減少させる実施形態４４～５２のいずれか１項に記載の治療用化合物。
５４．ＳＭ結合性／モジュレーティング部分は、免疫エフェクター細胞機能を促進する成分、例えば、ＡＴＰまたはＡＭＰを枯渇させる物質、例えば、ＣＤ３９またはＣＤ７３に結合するか、またはこれらを含む、実施形態４４～５３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
５５．ＳＭ結合性／モジュレーティング部分は、ＣＤ３９分子を含む、実施形態４４～５４のいずれか１項に記載の治療用化合物。
５６．ＳＭ結合性／モジュレーティング部分は、ＣＤ７３分子を含む、実施形態４４～５４のいずれか１項に記載の治療用化合物。
５７．ＳＭ結合性／モジュレーティング部分は、抗ＣＤ３９分子を含む、実施形態４４～５４のいずれか１項に記載の治療用化合物。
５８．ＳＭ結合性／モジュレーティング部分は、抗ＣＤ７３抗体分子を含む、実施形態４４～５４のいずれか１項に記載の治療用化合物。
５９．エフェクター分子結合性部分は、免疫抑制性物質、例えば、免疫抑制性タンパク質の断片を含む、実施形態４４～５４のいずれか１項に記載の治療用化合物。
６０．ＳＭ結合性／モジュレーティング部分は、アルカリホスファターゼ分子を含む、実施形態４４～５４のいずれか１項に記載の治療用化合物。
６１．Ｎ末端から、Ｃ末端へと、式：
Ｒ１－リンカー領域Ａ－Ｒ２またはＲ３－リンカー領域Ｂ－Ｒ４
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、各々、独立に、エフェクター結合性／モジュレーティング部分、例えば、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分、ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分、もしくはＳＭ結合性／モジュレーティング部分；特異的標的化部分を含むか；または存在せず；ただし、エフェクター結合性／モジュレーティング部分および特異的標的化部分が存在することを条件とする］
を有する、実施形態１に記載の治療用化合物。
６２．リンカー領域Ａおよびリンカー領域Ｂの各々は、Ｆｃ領域を含む、実施形態６１に記載の治療用化合物。
６３．Ｒ１およびＲ２のうちの１つは、抗ＰＤ－１抗体であり、Ｒ１およびＲ２のうちの１つは、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体である、実施形態６１に記載の治療用化合物。
６４．Ｒ１は、抗ＰＤ－１抗体であり、Ｒ２は、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体である、実施形態６１に記載の治療用化合物。
６５．Ｒ１は、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体であり、Ｒ２は、抗ＰＤ－１抗体である、実施形態６１に記載の治療用化合物。
６６．Ｒ３およびＲ４のうちの１つは、抗ＰＤ－１抗体であり、Ｒ３およびＲ４のうちの１つは、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体である、実施形態６１に記載の治療用化合物。
６７．Ｒ３は、抗ＰＤ－１抗体であり、Ｒ４は、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体である、実施形態６１に記載の治療用化合物。
６８．Ｒ３は、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体であり、Ｒ４は、抗ＰＤ－１抗体である、実施形態６１に記載の治療用化合物。
６９．リンカーは、存在しない、実施形態６１～６８のいずれか１項に記載の治療用化合物。
７０．リンカーは、Ｆｃ領域である、実施形態６１～６８のいずれか１項に記載の治療用化合物。
７１．リンカーは、ＧＧＧＧＳ（配列番号２３）の、１、２、３、４、または５回のリピートのような、グリシン／セリンリンカーである、実施形態６１～６８のいずれか１項に記載の治療用化合物。
７２．リンカーは、Ｆｃ領域と、ＧＧＧＧＳ（配列番号２３）の、１、２、３、４、または５回のリピートのような、グリシン／セリンリンカーとを含む、実施形態６１～６８のいずれか１項に記載の治療用化合物。
７３．ＰＤ－１抗体は、ＰＤ－１アゴニストである、実施形態６１～７２のいずれか１項に記載の治療用化合物。
７４．Ｒ１およびＲ３は、独立に、機能的な抗ＰＤ－１抗体分子（ＰＤ－１のアゴニスト）を含み；Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む、
実施形態６１に記載の治療用化合物。
７５．Ｒ１およびＲ３は、独立に、特異的標的化部分、例えば、抗組織抗原抗体を含み；Ｒ２およびＲ４は、独立に、機能的な抗ＰＤ－１抗体分子（ＰＤ－１のアゴニスト）を含む、
実施形態７３または７４に記載の治療用化合物。
７６．Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、各々、独立に、免疫応答をモジュレートする物質、例えば、可溶性分子、例えば、ＡＴＰまたはＡＭＰをモジュレートする、例えば、これらに結合し、これらを阻害、封鎖、分解するか、または他の形で中和する、ＳＭ結合性／モジュレーティング部分、例えば、ＣＤ３９分子またはＣＤ７３分子；特異的標的化部分を含むか；または存在せず；
ただし、ＳＭ結合性／モジュレーティング部分および特異的標的化部分が存在することを条件とする、
実施形態７３または７４に記載の治療用化合物。
７７．Ｒ１およびＲ３は、独立に、ＣＤ３９分子またはＣＤ７３分子を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む、
実施形態６１に記載の治療用化合物。
７８．Ｒ１およびＲ３は、各々、ＣＤ３９を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む、
実施形態７７に記載の治療用化合物。
７９．Ｒ１およびＲ３は、各々、ＣＤ７３を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む、
実施形態６１または７７に記載の治療用化合物。
８０．Ｒ１およびＲ３のうちの一方は、ＣＤ３９分子を含み、他方は、ＣＤ７３分子を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む、
実施形態６１に記載の治療用化合物。
８１．Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、各々、独立に、ＨＬＡ－Ｇ分子；特異的標的化部分を含むか；または存在せず；
ただし、ＨＬＡ－Ｇ分子および特異的標的化部分が存在することを条件とする、
実施形態６１に記載の治療用化合物。
８２．Ｒ１およびＲ３は、各々、ＨＬＡ－Ｇ分子を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む、
実施形態６１または８１に記載の治療用化合物。
８３．Ｒ１およびＲ３は、各々、アゴニスト性抗ＬＩＬＲＢ１抗体分子を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む、
実施形態８１または８２に記載の治療用化合物。
８４．Ｒ１およびＲ３は、各々、アゴニスト性抗ＫＩＲ２ＤＬ４抗体分子を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む、
実施形態８１または８２に記載の治療用化合物。
８５．Ｒ１およびＲ３は、各々、アゴニスト性抗ＬＩＬＲＢ２抗体分子を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む、
実施形態８１～８４のいずれか１項に記載の治療用化合物。
８６．Ｒ１およびＲ３は、各々、アゴニスト性抗ＮＫＧ２Ａ抗体分子を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む、
実施形態８１～８４のいずれか１項に記載の治療用化合物。
８７．Ｒ１およびＲ３のうちの一方は：アンタゴニスト性抗ＬＩＬＲＢ１抗体分子、アゴニスト性抗ＫＲ２ＤＬ４抗体分子、およびアゴニスト性抗ＮＫＧ２Ａ抗体分子から選び出される、第１の部分を含み、他方は、これらから選び出される、異なる部分を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む、
実施形態８１～８４のいずれか１項に記載の治療用化合物。
８８．Ｒ１およびＲ３のうちの一方は、アンタゴニスト性抗ＬＩＬＲＢ１抗体分子を含み、他方は、アゴニスト性抗ＫＲ２ＤＬ４抗体分子を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む、
実施形態８１～８４のいずれか１項に記載の治療用化合物。
８９．Ｒ１およびＲ３のうちの一方は、アンタゴニスト性抗ＬＩＬＲＢ１抗体分子を含み、他方は、アゴニスト性抗ＮＫＧ２Ａ抗体分子を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む、
実施形態８１～８４のいずれか１項に記載の治療用化合物。
９０．Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、各々、独立に、ＩＬ－２ムテイン分子；特異的標的化部分を含むか；または存在せず；
ただし、ＩＬ－２ムテイン分子および特異的標的化部分が存在することを条件とする、
実施形態８１～８４のいずれか１項に記載の治療用化合物。
９１．Ｒ１およびＲ３は、各々、ＩＬ－２ムテイン分子を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む、
実施形態９０に記載の治療用化合物。
９２．Ｒ１およびＲ３のうちの一方は、ＭＡｄＣＡＭ結合性分子、例えば、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体分子、またはＧＩＴＲ結合性分子、例えば、抗ＧＩＴＲ抗体分子を含み、他方は、ＩＬ－２ムテイン分子を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む、
実施形態９０または９１に記載の治療用化合物。
９３．Ｒ１およびＲ３のうちの一方は、ＧＡＲＰ結合性分子、例えば、抗ＧＡＲＰ抗体分子を含み、他方は、ＩＬ－２ムテイン分子を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む、
実施形態９０または９１に記載の治療用化合物。
９４．Ｒ１およびＲ３のうちの一方は、ＧＡＲＰ結合性分子、例えば、抗ＧＡＲＰ抗体分子、またはＧＩＴＲ結合性分子、例えば、抗ＧＩＴＲ抗体分子を含み、他方は、ＩＬ－２ムテイン分子を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む、
実施形態９０または９１に記載の治療用化合物。
９５．Ｒ１およびＲ３のうちの一方は、ＧＡＲＰ結合性分子、例えば、抗ＧＡＲＰ抗体分子を含み、他方は、ＩＬ－２ムテイン分子を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む、
実施形態９０または９１に記載の治療用化合物。
９６．Ｒ１およびＲ３のうちの一方は、ＧＩＴＲ結合性分子、例えば、抗ＧＩＴＲ抗体分子を含み、他方は、ＩＬ－２ムテイン分子を含み；
Ｒ２およびＲ４は、独立に、特異的標的化部分、例えば、組織抗原に対するｓｃＦｖ分子を含む、
実施形態９０または９１に記載の治療用化合物。
９７．ポリペプチドまたはタンパク質であり、ポリペプチドまたはタンパク質は、標的細胞に結合する標的化部分と、エフェクター結合性／モジュレーティング部分とを含み、エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、ＩＬ－２突然変異体ポリペプチド（ＩＬ－２ムテイン）である、実施形態１に記載の治療用化合物。
９８．標的化部分は、標的細胞の表面上の標的タンパク質に結合する抗体を含む、実施形態９７に記載の治療用化合物。
９９．抗体は、ＭＡｄＣＡＭ、ＯＡＴ１（ＳＬＣ２２Ａ６）、ＯＣＴ２（ＳＬＣ２２Ａ２）、ＦＸＹＤ２、ＴＳＰＡＮ７、ＤＰＰ６、ＨＥＰＡＣＡＭ２、ＴＭＥＭ２７、ＥＮＴＰＤ３、またはＧＰＲ１１９に結合する抗体である、実施形態９８に記載の治療用化合物。
１００．ＩＬ－２ムテインは、免疫細胞により発現される受容体に結合する、実施形態９８に記載の治療用化合物。
１０１．免疫細胞は、望ましくない免疫応答に寄与する、実施形態９８に記載の治療用化合物。
１０２．免疫細胞は、病態を引き起こす、実施形態９７～１０１のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１０３．標的化部分は、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体を含む、実施形態９７～１０２のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１０４．Ｎ末端から、Ｃ末端へと、式：
Ｒ１－リンカー領域Ａ－Ｒ２またはＲ３－リンカー領域Ｂ－Ｒ４、
［式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、各々、独立に、エフェクター結合性／モジュレーティング部分、標的化部分を含むか、または存在しない］
を有する、実施形態９７に記載の治療用化合物。
１０５．リンカー領域Ａおよびリンカー領域Ｂの各々は、Ｆｃ領域を含む、実施形態１０４に記載の治療用化合物。
１０６．Ｒ１およびＲ２のうちの１つは、ＩＬ－２ムテインであり、Ｒ１およびＲ２のうちの１つは、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体である、実施形態１０４または１０５に記載の治療用化合物。
１０７．Ｒ１は、ＩＬ－２ムテインであり、Ｒ２は、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体である、実施形態１０４、１０５、または１０６のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１０８．Ｒ１は、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体であり、Ｒ２は、抗ＰＤ－１抗体である、実施形態１０４、１０５、または１０６のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１０９．Ｒ３およびＲ４のうちの１つは、ＩＬ－２ムテインであり、Ｒ３およびＲ４のうちの１つは、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体である、実施形態１０４、１０５、または１０６のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１１０．Ｒ３は、ＩＬ－２ムテインであり、Ｒ４は、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体である、実施形態１０４、１０５、または１０６のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１１１．Ｒ３は、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体であり、Ｒ４は、ＩＬ－２ムテインである、実施形態１０４、１０５、または１０６のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１１２．リンカーは存在しない、実施形態１０４～１１１のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１１３．リンカーは、Ｆｃ領域であるか、またはこれを含む、実施形態１０４～１１１のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１１４．リンカーは、グリシン／セリンリンカーを含む、実施形態１０４～１１１のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１１５．リンカーは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３０）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７９２）、またはＧＧＧＧＳ（配列番号２３）の配列を含む、実施形態１０４～１１１のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１１６．ＩＬ－２ムテインは、配列番号６のＩＬ－２配列を含み、ペプチドは、配列番号６の、５３、５６、８０、または１１８位に対応する位置における突然変異を含む、実施形態９７に記載の治療用化合物。
１１７．ＩＬ－２ムテインは配列番号６のＩＬ－２配列を含み、ペプチドは、配列番号６の、５３、５６、８０、または１１８位に対応する位置における突然変異を含む、実施形態９７～１１６のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１１８．突然変異は、５３、５６、８０、または１１８位における、ＬからＩへの突然変異である、実施形態１１６に記載の治療用化合物。
１１９．突然変異は、５３、５６、８０、または１１８位における、ＬからＩへの突然変異である、実施形態１１７に記載の治療用化合物。
１２０．ＩＬ－２ムテインは、配列番号６内のこれらの位置に対応する、２９、３１、３５、３７、４８、６９、７１、７４、８８、および１２５の、１つまたはそれ以上の位置における突然変異をさらに含む、実施形態９７～１１９のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１２１．ＩＬ－２ムテインは、位置Ｅ１５、Ｈ１６、Ｑ２２、Ｄ８４、Ｅ９５、もしくはＱ１２６のうちの、１つまたはそれ以上において、突然変異をさらに含むか、または位置Ｅ１５、Ｈ１６、Ｑ２２、Ｄ８４、Ｅ９５、もしくはＱ１２６のうちの、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、もしくは各々は、野生型である、実施形態９７～１２０のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１２２．ムテイン内の突然変異は、Ｅ１５Ｑ、Ｈ１６Ｎ、Ｑ２２Ｅ、Ｄ８４Ｎ、Ｅ９５Ｑ、またはＱ１２６Ｅのうちの、１つまたはそれ以上である、実施形態９７～１２１のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１２３．ムテインは、配列番号６内の、Ｎ２９Ｓ突然変異を含む、実施形態９７～１２２のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１２４．ムテインは、Ｙ３１Ｓ突然変異またはＹ５１Ｈ突然変異を含む、実施形態９７～１２３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１２５．ムテインは、Ｋ３５Ｒ突然変異を含む、実施形態９７～１２４のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１２６．ムテインは、Ｔ３７Ａ突然変異を含む、実施形態９７～１２５のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１２７．ムテインは、Ｋ４８Ｅ突然変異を含む、実施形態９７～１２６のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１２８．ムテインは、Ｖ６９Ａ突然変異を含む、実施形態９７～１２７のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１２９．ムテインは、Ｎ７１Ｒ突然変異を含む、実施形態９７～１２８のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１３０．ムテインは、Ｑ７４Ｐ突然変異を含む、実施形態９７～１２９のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１３１．ムテインは、Ｎ８８Ｄ突然変異またはＮ８８Ｒ突然変異を含む、実施形態９７～１３０のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１３２．ムテインは、Ｃ１２５Ａ突然変異またはＣ１２５Ｓ突然変異を含む、実施形態９７～１３１のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１３３．ＩＬ－２ムテインは、Ｆｃペプチドへと、融合されるか、または連結される、実施形態９７～１３２のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１３４．Ｆｃペプチドは、Ｌ２３４、Ｌ２４７、Ｌ２３５、Ｌ２４８、Ｇ２３７、およびＧ２５０の位置のうちの、１つまたはそれ以上における突然変異を含む、実施形態１３３に記載の治療用化合物。
１３５．突然変異は、ＬからＡへの突然変異、またはＧからＡへの突然変異である、実施形態１３４に記載の治療用化合物。
１３６．Ｆｃペプチドは、Ｌ２４７Ａ、Ｌ２４８Ａ、および／またはＧ２５０Ａの突然変異（Ｋａｂａｔによる番号付け）を含む、実施形態１３４に記載の治療用化合物。
１３７．Ｆｃペプチドは、Ｌ２３４Ａ突然変異、Ｌ２３５Ａ突然変異、および／またはＧ２３７Ａ突然変異（ＥＵによる番号付け）を含む、実施形態１３４に記載の治療用化合物。
１３８．ポリペプチドを形成する、第１の鎖および第２の鎖を含み、
第１の鎖は：
ＶＨ－Ｈｃ－リンカー－Ｃ１であって、ＶＨは、第２の鎖のＶＬドメインと共に、標的細胞に結合する、重鎖可変ドメインであり；Ｈｃは、ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインを含む、抗体の重鎖であり、リンカーは、グリシン／セリンリンカーであり、Ｃ１は、Ｎ末端またはＣ末端に配置されて、Ｆｃタンパク質へと、融合されるか、または連結されるＩＬ－２ムテインである、ＶＨ－Ｈｃ－リンカー－Ｃ１
を含み；
第２の鎖は：
ＶＬ－Ｌｃであって、ＶＬは、第１の鎖のＶＨドメインと共に、標的細胞に結合する、軽鎖可変ドメインであり、Ｌｃドメインは、軽鎖ＣＫドメインである、ＶＬ－Ｌｃ
を含む、
ポリペプチドを含む、実施形態９７に記載の治療用化合物。
１３９．ＶＨドメインおよびＶＬドメインは、細胞上で発現される、ＭＡｄＣＡＭに結合する、抗ＭＡｄＣＡＭ可変ドメインである、実施形態１３８に記載の治療用化合物。
１４０．ＩＬ－２ムテインは、配列番号６の、５３、５６、８０、または１１８位に対応する位置における突然変異を含む、実施形態１３８または１３９に記載の治療用化合物。
１４１．突然変異は、５３、５６、８０、または１１８位における、ＬからＩへの突然変異である、実施形態１４０に記載の治療用化合物。
１４２．ムテインは、６９、７５、８８、および／もしくは１２５位、またはこれらの任意の組合せに対応する位置における突然変異をさらに含む、実施形態１４０または１４１に記載の治療用化合物。
１４３．ＩＬ－２ムテインは：Ｌ５３Ｉ、Ｌ５６Ｉ、Ｌ８０Ｉ、およびＬ１１８Ｉのうちの１つ、ならびにＶ６９Ａ、Ｑ７４Ｐ、Ｎ８８Ｄ、またはＮ８８Ｒの突然変異からなる群から選択される突然変異を含み、場合により、Ｃ１２５ＡまたはＣ１２５Ｓを含む、実施形態１４０または１４１に記載の治療用化合物。
１４４．ＩＬ－２ムテインは、Ｌ５３Ｉ突然変異を含む、実施形態１４３に記載の治療用化合物。
１４５．ＩＬ－２ムテインは、Ｌ５６Ｉ突然変異を含む、実施形態１４３に記載の治療用化合物。
１４６．ＩＬ－２ムテインは、Ｌ８０Ｉ突然変異を含む、実施形態１４３に記載の治療用化合物。
１４７．ＩＬ－２ムテインは、Ｌ１１８Ｉ突然変異を含む、実施形態１４３に記載の治療用化合物。
１４８．ＩＬ－２ムテインは、他の突然変異を含まない、実施形態１４３に記載の治療用化合物。
１４９．Ｆｃタンパク質は、ＫＡＢＡＴによる番号付けに従う、Ｌ２４７Ａ、Ｌ２４８Ａ、およびＧ２５０Ａの突然変異、またはＬ２３４Ａ突然変異、Ｌ２３５Ａ突然変異、および／もしくはＧ２３７Ａ突然変異を含む、実施形態１３８～１４８のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１５０．リンカーは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３０）、またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２２）の配列を含む、実施形態１３８～１４９のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１５１．ポリペプチドは、本明細書で記載される配列を含むＦｃペプチドを含む、実施形態１３８～１４９のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１５２．Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４のうちの１つは、抗ＢＣＲ抗体分子、例えば、アンタゴニスト性抗ＢＣＲ抗体分子を含み、１つは、抗ＦＣＲＬ抗体分子を含み、１つは、特異的標的化部分を含む、
実施形態８１～８４のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１５３．抗ＦＣＲＬ分子は：ＦＣＲＬ１、ＦＣＲＬ２、ＦＣＲＬ３、ＦＣＲＬ４、ＦＣＲＬ５、またはＦＣＲＬ６へと方向付けられた抗ＦＣＲＬ抗体分子、例えば、アゴニスト性抗ＦＣＲＬ抗体分子を含む、
実施形態１５２に記載の治療用化合物。
１５４．Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、各々、独立に、
ｉ）エフェクター結合性／モジュレーティング部分、例えば、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分、ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分、またはＴ細胞の活性、拡大、または機能を最小化または阻害する、ＳＭ結合性／モジュレーティング部分（Ｔ細胞エフェクター結合性／モジュレーティング部分）；
ｉｉ）エフェクター結合性／モジュレーティング部分、例えば、ＩＣＩＭ結合性／モジュレーティング部分、ＩＩＣ結合性／モジュレーティング部分、またはＢ細胞の活性、拡大、または機能を最小化または阻害する、ＳＭ結合性／モジュレーティング部分（Ｂ細胞エフェクター結合性／モジュレーティング部分）；
ｉｉｉ）特異的標的化部分を含むか；または
ｉｖ）存在せず；ただし、Ｔ細胞エフェクター結合性／モジュレーティング部分、Ｂ細胞エフェクター結合性／モジュレーティング部分、および特異的標的化部分が存在することを条件とする、
実施形態８１～８４のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１５５．Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４のうちの１つは、アゴニスト性抗ＰＤ－１抗体を含み、１つは、ＨＬＡ－Ｇ分子を含む、
実施形態１５４に記載の治療用化合物。
１５６．Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４のうちの１つは、ＳＭ結合性／モジュレーティング部分、例えば、ＣＤ３９分子またはＣＤ７３分子を含む、
実施形態１５４～１５５のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１５７．Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４のうちの１つは、調節性免疫細胞、例えば、Ｔｒｅｇ細胞、またはＢｒｅｇ細胞に結合するか、これらを活性化させるか、または維持する実体を含む、
実施形態１５４～１５６のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１５８．Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４のうちの１つは、アゴニスト性抗ＰＤ－１抗体を含むか、または１つは、ＨＬＡ－Ｇ分子を含む、
実施形態１５４～１５７のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１５９．Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４のうちの１つは、アゴニスト性抗ＰＤ－１抗体を含み、１つは、ＨＬＡ－Ｇ分子を含み、１つは、ＣＤ３９分子またはＣＤ７３分子を含む、
実施形態１５８に記載の治療用化合物。
１６０．エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、ポリペプチドを含む、実施形態１～１５９のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１６１．エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、少なくとも５、１０、２０、３０、４０、５０、１５０、２００、または３５０アミノ酸残基を有するポリペプチドを含む、実施形態１～１６０のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１６２．エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、５、１０、１５、２０、または４０Ｋｄの分子量を有する、実施形態１～１６１のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１６３．エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、アポリポタンパク質ＣＩＩＩ、タンパク質キナーゼＡ、Ｓｒｃキナーゼ、またはベータ１インテグリンの発現の阻害剤を含まない、実施形態１～１６２のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１６４．エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、アポリポタンパク質ＣＩＩＩ、タンパク質キナーゼＡ、Ｓｒｃキナーゼ、またはベータ１インテグリンの活性の阻害剤を含まない、実施形態１～１６２のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１６５．肺、皮膚、膵臓、網膜、前立腺、卵巣、リンパ節、副腎、肝臓、または腸の組織から選択される組織を、特異的に標的化しない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１６６．尿細管細胞、例えば、近位尿細管上皮細胞を、特異的に標的化しない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１６７．ＴＩＥ－２、ＡＰＮ、ＴＥＭ４、ＴＥＭ６、ＩＣＡＭ－１、ヌクレオリンＰ２Ｚ受容体、Ｔｒｋ－Ａ、ＦＬＪ１０８４９、ＨＳＰＡ１２Ｂ、ＡＰＰ、またはＯＸ－４５を、特異的に標的化しない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１６８．管腔内発現タンパク質を、特異的に標的化しない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１６９．ドナー標的は、心臓特異的標的を含まない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１７０．肺組織を、特異的に標的化しない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１７１．腎臓組織を、特異的に標的化しない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１７２．膵臓組織を、特異的に標的化しない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１７３．腸組織を、特異的に標的化しない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１７４．前立腺組織を、特異的に標的化しない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１７５．脳組織を、特異的に標的化しない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１７６．ＣＤ７１を、特異的に標的化しない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１７７．ＣＤ９０を、特異的に標的化しない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１７８．ＭＡｄＣＡＭを、特異的に標的化しない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１７９．アルブミンを、特異的に標的化しない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１８０．炭酸脱水酵素ＩＶを、特異的に標的化しない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１８１．ＺＧ１６－ｐを、特異的に標的化しない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１８２．ジペプチジルペプチダーゼＩＶを、特異的に標的化しない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１８３．血管内皮細胞膜の管腔表面を、特異的に標的化しない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１８４．心臓組織を、特異的に標的化しない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１８５．腫瘍、充実性腫瘍、または充実性腫瘍の血管を、特異的に標的化しない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１８６．皮膚組織を、特異的に標的化しない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１８７．表皮組織を、特異的に標的化しない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１８８．基底膜を、特異的に標的化しない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１８９．Ｄｓｇポリペプチドを、特異的に標的化しない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１９０．Ｄｓｇ１を、特異的に標的化しない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１９１．Ｄｓｇ３を、特異的に標的化しない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１９２．ＢＰ１８０を、特異的に標的化しない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１９３．デスモグレインを、特異的に標的化しない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１９４．補体モジュレーター、例えば、参照によりその全体において本明細書に組み入れられる、米国特許第８，４５４，９６３号において記載されている補体阻害剤のようであるがこれらに限定されない補体阻害剤を含まない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１９５．イメージング剤を含まない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１９６．参照によりその全体において本明細書に組み入れられる、米国特許第８，８１５，２３５号において記載されているイメージング剤のようであるがこれらに限定されない、以下の群：放射性薬剤、放射性同位元素、放射性医薬、造影剤、ナノ粒子；酵素、補欠分子族、蛍光材料、発光材料、および生物発光材料から選択されるイメージング剤を含まない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１９７．参照によりその全体において本明細書に組み入れられる、米国特許第６，２３２，２８７号において記載されている放射性核種のようであるがこれらに限定されない放射性核種を含まない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１９８．それが結合するドナー細胞により内部移行されない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
１９９．特異的標的化部分により標的化される細胞に侵入しない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２００．特異的標的化部分により標的化される細胞を死滅させない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２０１．エフェクター結合性／モジュレーティング部分が結合する細胞に侵入しない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２０２．エフェクター結合性／モジュレーティング部分が結合する細胞を死滅させない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２０３．自己抗原性のペプチドまたはポリペプチドを含まない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２０４．自己抗原性ペプチドまたはポリペプチドを含まない、例えば、対象がそれらに対する自己抗体を有するペプチドまたはポリペプチドを含まない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２０５．自己免疫障害を有する哺乳動物、例えば、ヒトに由来する抗体分子を含まない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２０６．急性粘膜皮膚性ＰＶを有する哺乳動物、例えば、ヒトに由来する抗体分子を含まない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２０７．グッドパスチャー病を有する哺乳動物、例えば、ヒトに由来する抗体分子を含まない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２０８．尋常性天疱瘡を有する哺乳動物、例えば、ヒトに由来する抗体分子を含まない、実施形態１～１６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２０９．ドナー特異的標的化部分を含む、実施形態１～２０８のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２１０．レシピエントの組織と対比して、植え込まれたドナー組織に優先的に局在化する、実施形態２０９に記載の治療用化合物。
２１１．ドナー特異的標的化部分は、移植組織、例えば、ドナーに由来する臓器に対する部位特異的免疫特権をもたらす、実施形態２０９～２１０のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２１２．ドナー特異的標的化部分は、その対立遺伝子が、レシピエントの遺伝子座に存在しない、ドナーの遺伝子座に存在する対立遺伝子の産物、例えば、ポリペプチドに結合する、実施形態２０９～２１１のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２１３．ドナー特異的標的化部分は、ドナー組織、例えば、移植組織、例えば、臓器上で発現される遺伝子の対立遺伝子に、対象組織上で発現される遺伝子の対立遺伝子と比較して、優先的に結合する、実施形態２０９～２１２のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２１４．ドナー特異的標的化部分は、ドナー組織、例えば、移植組織、例えば、臓器上で発現される遺伝子の対立遺伝子に対して、対象組織上で発現される遺伝子の対立遺伝子に対する結合アフィニティーの、少なくとも２、４、５、１０、５０、１００、５００、１，０００、５，０００、または１０，０００倍である、結合アフィニティーを有する、実施形態２０９～２１３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２１５．ドナー特異的標的化部分は、その対立遺伝子が、レシピエントの遺伝子座に存在しない、ドナーの遺伝子座に存在する対立遺伝子の産物、例えば、ポリペプチドに結合する、実施形態２０９～２１４のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２１６．結合は、例えば、治療用化合物の臨床有効用量で、望ましくない全身免疫抑制、実質的な全身免疫抑制、または臨床的に許容されない全身免疫抑制が生じない程度に、十分に特異的である、実施形態２０９～２１５のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２１７．標的部位において蓄積する、例えば、ドナー特異的標的化部分の結合は、標的部位における、治療用化合物の蓄積を結果としてもたらす、実施形態２０９～２１６のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２１８．ドナー特異的標的化部分は、その対立遺伝子が、ドナーのＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－ＤＰ、ＨＬＡ－ＤＱ、またはＨＬＡ－ＤＲの遺伝子座に存在するが、レシピエントのＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－ＤＰ、ＨＬＡ－ＤＱ、またはＨＬＡ－ＤＲの遺伝子座に存在しない、表２から選択される遺伝子座、例えば、ＨＬＡ遺伝子座、例えば、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－ＤＰ、ＨＬＡ－ＤＱ、またはＨＬＡ－ＤＲ遺伝子座の対立遺伝子の産物に結合する、実施形態２０９～２１７のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２１９．ドナー特異的標的化部分は、ＨＬＡ－Ａの対立遺伝子、ＨＬＡ－Ｂの対立遺伝子、ＨＬＡ－Ｃの対立遺伝子、ＨＬＡ－ＤＰの対立遺伝子、ＨＬＡ－ＤＱの対立遺伝子、またはＨＬＡ－ＤＲの対立遺伝子に結合する、実施形態２０９～２１８のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２２０．移植をしているか、移植をするか、または移植を必要とする対象を処置するのに適する、実施形態２０９～２１９のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２２１．移植は、臓器、例えば、肝臓、腎臓、心臓、膵臓、胸腺、皮膚、または肺の全部または一部を含む、実施形態２２０に記載の治療用化合物。
２２２．ドナー特異的標的化部分は、抗体分子を含む、実施形態２０９～２２１のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２２３．ドナー特異的標的化部分は、標的特異的結合性ポリペプチドまたは標的リガンド結合性分子を含む、実施形態２０９～２２１のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２２４．組織特異的標的化部分を含む、実施形態１～２２３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２２５．組織特異的標的化部分は、ＭＡｄＣＡＭに特異的に結合する分子である、実施形態２２４に記載の治療用化合物。
２２６．組織特異的標的化部分は、ＭＡｄＣＡＭに特異的に結合する抗体である、実施形態２２４に記載の治療用化合物。
２２７．自己免疫障害、例えば、本明細書で記載される自己免疫障害を有するか、またはこれを有する危険性があるかもしくは上昇している対象を処置するのに適する、実施形態２２４～２２６のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２２８．標的部位において蓄積する、例えば、組織特異的標的化部分の結合は、標的部位における、治療用化合物の蓄積を結果としてもたらす、実施形態２２４～２２７のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２２９．対象の標的組織に、対象の他の組織と対比して、優先的に局在化する、実施形態２２４～２２８のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２３０．対象の標的組織、例えば、例えば、自己免疫障害における、免疫による、望ましくない攻撃を受けるか、またはこれを有する危険性があるかもしくは上昇している標的組織に対する部位特異的免疫特権をもたらす、実施形態２２４～２２９のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２３１．治療用化合物の構成要素としての、組織特異的標的化部分は、例えば、自己免疫障害における、免疫による、望ましくない攻撃を受ける、対象の標的組織に優先的に結合する、実施形態２２４～２２９のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２３２．組織特異的標的化部分は、標的組織の外部に存在しないか、または治療用分子の治療濃度では、許容されないレベルの免疫抑制が存在しないか、または実質的に存在しない程度に、十分に低レベルで存在する産物、例えば、ポリペプチドに結合する、実施形態２２４～２３１のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２３３．組織特異的標的化部分は、非標的組織内において、標的組織内より存在度が大きい、産物または産物上の部位に結合する、実施形態２２４～２３２のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２３４．標的組織上に存在するか、または標的組織上で、実質的にもっぱら発現される、産物または産物上の部位に結合する、実施形態２２４～２３３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２３５．特異的標的化部分が結合する産物または産物上の部位は、治療用化合物の治療有効レベルでは、対象が、許容されないレベル、例えば、臨床的に著明なレベルの全身免疫抑制を被らない程度に十分に、標的組織に限定される、実施形態２２４～２３４のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２３６．標的組織または標的組織抗原に優先的に結合する、例えば、標的組織または標的抗原に対して、標的組織の外部に存在する、非標的組織または非標的抗原に対する結合アフィニティーの、例えば、少なくとも２、４、５、１０、５０、１００、５００、１，０００、５，０００、または１０，０００倍である、結合アフィニティーを有する、実施形態２２４～２３５のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２３７．組織特異的標的化部分は、産物、例えば、ポリペプチド産物、またはあらかじめ選択された部位、例えば、自己免疫障害における、望ましくない免疫応答の部位に存在する、産物上の部位に結合する、実施形態２２４～２３６のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２３８．１型糖尿病を有するか、またはこれを有する危険性があるかもしくは上昇している対象の処置に適する、実施形態２２４～２３７のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２３９．標的組織は、膵臓組織、例えば、膵島細胞もしくは膵臓ベータ細胞、腸組織（例えば、腸内皮細胞）、腎臓組織（例えば、腎臓上皮細胞）、または肝臓組織（例えば、肝臓上皮細胞）を含む、実施形態２２４～２３８のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２４０．エフェクター結合性／モジュレーティング部分、または標的化部分は、表３に列挙されたポリペプチド、例えば、ＳＥＺ６Ｌ２、ＬＲＰ１１、ＤＩＳＰ２、ＳＬＣ３０Ａ８、ＦＸＹＤ２、ＴＳＰＡＮ７、ＥＮＴＰＤ３、またはＴＭＥＭ２７のような、本明細書で記載されるポリペプチドから選択されるポリペプチドに結合する、実施形態２２４～２３９のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２４１．多発性硬化症を有するか、またはこれを有する危険性があるかもしくは上昇している対象の処置に適する、実施形態２２４～２３６のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２４２．標的組織は、ＣＮＳ組織、髄鞘、または希突起膠細胞の髄鞘を含む、実施形態２４１に記載の治療用化合物。
２４３．エフェクター結合性／モジュレーティング部分、または標的化部分は、本明細書で記載されるポリペプチドから選択され、表３、例えば、ＭＯＧ、ＰＬＰ、またはＭＢＰを含むがこれらに限定されないポリペプチドに結合する、実施形態２４１～２４２のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２４４．心筋炎を有するか、またはこれを有する危険性があるかもしくは上昇している対象の処置に適する、実施形態２２４～２３６のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２４５．標的組織は、心筋細胞、単球、マクロファージ、または骨髄細胞を含む、実施形態２４４に記載の治療用化合物。
２４６．エフェクター結合性／モジュレーティング部分、または標的化部分は、表３から選択されるポリペプチド、例えば、ＳＩＲＰＡ（ＣＤ１７２ａ）を含むがこれらに限定されない、本明細書で記載されるポリペプチドに結合する、実施形態２４４～２４５のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２４７．炎症性腸疾患、自己免疫性肝炎（ＡＩＨ）；原発性硬化性胆管炎（ｐｒｉｍａｒｙ ｓｃｌｅｒｏｓｉｎｇ ｃｈｏｌａｎｇｉｔｉｓ；ＰＳＣ）；原発性硬化性胆管炎（ｐｒｉｍａｒｙ ｂｉｌｉａｒｙ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ；ＰＢＣ）；または移植を有するか、またはこれを有する危険性があるかもしくは上昇している対象の処置に適する、実施形態２２４～２３６のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２４８．対象は、クローン病または潰瘍性大腸炎を有するか、またはこれを有する危険性があるかもしくは上昇している、実施形態２２４～２３６のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２４９．標的組織は、腸上皮細胞のような腸細胞、または肝臓上皮細胞のような肝臓細胞を含む、実施形態２４７または２４８に記載の治療用化合物。
２５０．エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、表３から選択されるポリペプチド、例えば、ＰＤ－１を含むがこれらに限定されない、本明細書で記載されるポリペプチドに結合する、実施形態２４７～２４９のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２５１．標的化部分は、ＭＡｄＣＡＭを含むがこれらに限定されない、本明細書で記載されるポリペプチドに結合する、実施形態２４７～２４９のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２５２．関節リウマチを有するか、またはこれを有する危険性があるかもしくは上昇している対象の処置に適する、実施形態２２４～２３６のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２５３．標的組織は、心筋細胞、単球、マクロファージ、または骨髄細胞を含む、実施形態２５２に記載の治療用化合物。
２５４．エフェクター結合性／モジュレーティング部分、または標的化部分は、表３、例えば、ＳＩＲＰＡ（ＣＤ１７２ａ）から選択されるポリペプチドに結合する、実施形態２５２または２５３に記載の治療用化合物。
２５５．組織特異的標的化部分は、抗体分子を含む、実施形態２２４～２５４のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２５６．組織特異的標的化部分は、標的特異的結合性ポリペプチドまたは標的リガンド結合性分子を含む、実施形態２２４～２５４のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２５７．組織特異的標的化部分は、標的特異的結合性ポリペプチドを含み、ＭＡｄＣＡＭに結合する、実施形態２２４～２５４のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２５８．免疫促進性応答を伝える、免疫エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、または他の免疫細胞の細胞表面分子に結合する、実施形態１～２５７のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２５９．免疫エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、または他の免疫細胞が、免疫促進性応答を伝える能力を低減する、実施形態１～２５８のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２６０．特異的標的化部分は、哺乳動物標的、例えば、哺乳動物ポリペプチドを標的化し、エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、哺乳動物免疫構成要素、例えば、哺乳動物免疫細胞、例えば、哺乳動物Ｂ細胞、哺乳動物Ｔ細胞、または哺乳動物マクロファージに結合する／これをモジュレートする、実施形態１～２５９のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２６１．特異的標的化部分は、ヒト標的、例えば、ヒトポリペプチドを標的化し、エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、ヒト免疫構成要素、例えば、ヒト免疫細胞、例えば、ヒトＢ細胞、ヒトＴ細胞、またはヒトマクロファージに結合する／これをモジュレートする、実施形態１～２６０のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２６２．ヒトにおける使用のために構成される、実施形態１～２６１のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２６３．非ヒト哺乳動物における使用のために構成される、実施形態１～２６０のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２６４．例えば、エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、ＰＤ－１アゴニストを含む、実施形態１～２６３のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２６５．治療用化合物は、配列番号１５のＩＬ－２ムテインを含み、ムテインは７３、７６、１００、または１３８位に突然変異を含む、実施形態１～２６４のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２６６．突然変異は、７３、７６、１００、または１３８位における、ＬからＩへの突然変異である、実施形態２６５に記載の治療用化合物。
２６７．ＩＬ－２ムテインは、４９、５１、５５、５７、６８、８９、９１、９４、１０８、および１４５の、１つまたはそれ以上の位置における突然変異をさらに含む、実施形態２６５または２６６に記載の治療用化合物。
２６８．ムテインは、位置Ｅ３５、Ｈ３６、Ｑ４２、Ｄ１０４、Ｅ１１５、もしくはＱ１４６のうちの、１つまたはそれ以上において、突然変異をさらに含むか、またはＥ３５、Ｈ３６、Ｑ４２、Ｄ１０４、Ｅ１１５、もしくはＱ１４６のうちの、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、もしくは各々は、野生型である、実施形態２６５～２６７のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２６９．突然変異は、Ｅ３５Ｑ、Ｈ３６Ｎ、Ｑ４２Ｅ、Ｄ１０４Ｎ、Ｅ１１５Ｑ、またはＱ１４６Ｅのうちの、１つまたはそれ以上である、実施形態２６８に記載の治療用化合物。
２７０．ＩＬ－２ムテインは、Ｎ４９Ｓ突然変異を含む、実施形態２６５～２６９のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２７１．ＩＬ－２ムテインは、Ｙ５１ＳまたはＹ５１Ｈ突然変異を含む、実施形態２６５～２７０のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２７２．ＩＬ－２ムテインは、Ｋ５５Ｒ突然変異を含む、実施形態２６５～２７１のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２７３．ＩＬ－２ムテインは、Ｔ５７Ａ突然変異を含む、実施形態２６５～２７２のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２７４．ＩＬ－２ムテインは、Ｋ６８Ｅ突然変異、Ｖ８９Ａ（Ｖ６９Ａ）突然変異、Ｎ９１Ｒ（Ｎ７１Ｒ）突然変異、Ｑ９４ＰまたはＱ７４Ｐ突然変異、（Ｎ８８Ｄ）またはＮ１０８Ｒ（Ｎ８８Ｒ）突然変異、Ｃ１４５Ａ（Ｃ１２５Ａ）またはＣ１４５Ｓ（Ｃ１２５Ｓ）突然変異を含む、実施形態２６５～２７２のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２７５．治療用化合物は、配列番号６のＩＬ－２ムテインを含み、ムテインは５３、５６、８０、または１１８位の突然変異、および実施形態２６５～２７４に列挙された突然変異のうちの、１つまたはそれ以上を含む、実施形態２６５～２７４のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２７６．ＩＬ－２ムテインは、Ｆｃペプチドへと、融合されるか、または連結される、実施形態２６５～２７５のいずれか１項に記載の治療用化合物。
２７７．Ｆｃペプチドは、Ｌ２３４、Ｌ２４７、Ｌ２３５、Ｌ２４８、Ｇ２３７、およびＧ２５０の位置のうちの、１つまたはそれ以上における突然変異を含む、実施形態２７６に記載の治療用化合物（ＥＵによる番号付け）。
２７８．炎症性腸疾患を有する対象を処置する方法であって、実施形態１～２７７のいずれか１項に記載の治療用化合物を、対象へと投与して、炎症性腸疾患を処置する工程を含む方法。
２７９．炎症性腸疾患を有する対象は、クローン病を有する、実施形態２７８に記載の方法。
２８０．炎症性腸疾患を有する対象は、潰瘍性大腸炎を有する、実施形態２７８に記載の方法。
２８１．自己免疫性肝炎を有する対象を処置する方法であって、実施形態１～２７７のいずれか１項に記載の治療用化合物を、対象へと投与して、自己免疫性肝炎を処置する工程を含む方法。
２８２．原発性硬化性胆管炎を処置する方法であって、実施形態１～２７７のいずれか１項に記載の治療用化合物を、対象へと投与して、原発性硬化性胆管炎を処置する工程を含む方法。
２８３．１型糖尿病を処置する方法であって、実施形態１～２７７のいずれか１項に記載の治療用化合物を投与し、これにより、１型糖尿病を処置するように、対象を処置する工程を含む方法。
２８４．移植対象を処置する方法であって、治療有効量の、実施形態１～２７７のいずれか１項に記載の治療用化合物を、対象へと投与し、これにより、移植（レシピエント）対象を処置する工程を含む方法。
２８５．ドナー組織を移植した対象におけるＧＶＨＤを処置する方法であって、治療有効量の、実施形態１～２７７のいずれか１項に記載の治療用化合物を、対象へと投与する工程を含む方法。
２８６．治療用化合物は、対象へと：移植を受ける前に；ＧＶＨＤの症状を発症する前に；移植を受けた後で、もしくはこれと同時に；またはＧＶＨＤの症状を発症した後で、もしくはこれと同時に投与される、実施形態２８５に記載の方法。
２８７．自己免疫障害を有するか、またはこれを有する危険性があるかもしくは上昇している対象を処置する方法であって、治療有効量の、実施形態１～２７７のいずれか１項に記載の治療用化合物を投与し、これにより、対象を処置する工程を含む方法。
２８８．対象は、同種移植ドナー組織を施されているか、施されるか、またはこれを必要とする、実施形態２８７に記載の方法。
２８９．ドナー組織は、固形臓器、例えば、肝臓、腎臓、心臓、膵臓、胸腺、または肺を含む、実施形態２８７～２８８のいずれか１項に記載の方法。
２９０．ドナー組織は、臓器、例えば、肝臓、腎臓、心臓、膵臓、胸腺、または肺の全部または一部を含む、実施形態２８７～２８８のいずれか１項に記載の方法。
２９１．ドナー組織は、皮膚を含む、実施形態２８７～２８８のいずれか１項に記載の方法。
２９２．ドナー組織は、皮膚を含まない、実施形態２８７～２８８のいずれか１項に記載の方法。
２９３．ドナー組織は、対象において存在しないか、または発現されない遺伝子座の対立遺伝子の産物を提示するか、またはこれを発現する、実施形態２８７～２９２のいずれか１項に記載の方法。
２９４．ドナー組織は、対象において存在しないか、または発現されない、表２から選択される遺伝子座、例えば、ＨＬＡ遺伝子座、例えば、ＨＬＡ－Ａ、ＨＬＡ－Ｂ、ＨＬＡ－Ｃ、ＨＬＡ－ＤＰ、ＨＬＡ－ＤＱ、またはＨＬＡ－ＤＲ遺伝子座の対立遺伝子の産物を提示するか、またはこれを発現する、実施形態２８７～２９２のいずれか１項に記載の方法。
２９５．移植組織を、対象へと導入する工程を含む、実施形態２８７～２９４のいずれか１項に記載の方法。
２９６．対象を、例えば、末梢循環内またはリンパ系内の標的部位から遠位の部位における、免疫細胞の不活化についてモニタリングする工程（例えば、免疫阻害性チェックポイント分子の、望ましくないアゴナイゼーションをモニタリングするように）を含む、実施形態２７８～２９５のいずれか１項に記載の方法。
２９７．対象を、例えば、末梢循環内またはリンパ系内の標的部位から遠位の部位における、免疫細胞の活性化についてモニタリングする工程（例えば、免疫阻害性チェックポイント分子の、望ましくないアンタゴナイゼーションをモニタリングするように）を含む、実施形態２７８～２９６のいずれか１項に記載の方法。
２９８．モニタリングする工程の結果に応じて、対象のための処置のコースを選択する、例えば、治療用化合物の用量を増大させ、治療用化合物の用量を減少させ、用量を変化させずに、治療用化合物による処置を継続する、実施形態２７８～２９７のいずれか１項に記載の方法。
２９９．実施形態１～２７７のいずれか１項に記載の化合物を、レシピエントへと投与する工程を含む、実施形態２７８～２９８のいずれか１項に記載の方法。
３００．投与する工程は、例えば、末梢循環系への全身投与を含む、実施形態２７８～２９８のいずれか１項に記載の方法。
３０１．投与する工程は、例えば、標的組織、ドナー組織、または標的組織もしくはドナー組織が位置しているか、もしくは位置する部位への局所投与を含む、実施形態２７８～２９８のいずれか１項に記載の方法。
３０２．ドナー組織の、レシピエントへの導入の前に、治療用化合物を、レシピエントへと投与する工程を含む、実施形態３０１に記載の方法。
３０３．ドナー組織の、レシピエントへの導入の後で、治療用化合物を、レシピエントへと投与する工程を含む、実施形態３０１に記載の方法。
３０４．ドナー組織の、レシピエントへの導入と同時に、治療用化合物を、レシピエントへと投与する工程を含む、実施形態２９５に記載の方法。
３０５．ドナー組織の、レシピエントへの導入の前に、治療用化合物を、ドナー組織と接触させる工程を含む、実施形態２９５に記載の方法。
３０６．治療用化合物を、対象へと施す工程を含み、移植組織は、対象への導入の前に、治療用化合物と接触している、実施形態２９５に記載の方法。
３０７．ドナー組織の、レシピエントへの導入の後で、例えば、ドナー組織への局所投与により、治療用化合物を、ドナー組織と接触させる工程を含む、実施形態２９５に記載の方法。
３０８．治療レベルが、少なくとも１、５、１０、１４、または２８日間、例えば、これらの連続する日数またはのべ日数にわたり存在するように、本明細書で提供される治療用化合物を投与する工程を含む、実施形態２７８～３０７のいずれか１項に記載の方法。
３０９．対象は、標的化されていない免疫抑制剤を施されない、実施形態２７８～３０８のいずれか１項に記載の方法。
３１０．対象は、治療用化合物の初回投与の前に、少なくとも１、１５、３０、６０、または９０日間にわたり、標的化されていない免疫抑制剤を施されていない、実施形態２７８～３０８のいずれか１項に記載の方法。
３１１．対象は、移植組織の導入の前に、少なくとも１、１５、３０、６０、または９０日間にわたり、標的化されていない免疫抑制剤を施されていない、実施形態２９５に記載の方法。
３１２．対象は、治療用化合物の初回投与の後で、少なくとも１、１５、３０、６０、９０、または１８０日間にわたり、標的化されていない免疫抑制剤を施されない、実施形態２７８～３１１のいずれか１項に記載の方法。
３１３．対象は、移植組織の導入の後で、少なくとも１、１５、３０、６０、９０、または１８０日間にわたり、標的化されていない免疫抑制剤を施されない、実施形態２７８～３１１のいずれか１項に記載の方法。
３１４．標的化されていない免疫抑制剤を、対象へと投与する工程を含む、実施形態２７８～３１３のいずれか１項に記載の方法。
３１５．対象は、治療用化合物の初回投与の前に、少なくとも１、１５、３０、６０、または９０日間にわたり、標的化されていない免疫抑制剤を施される、実施形態２７８～３１４のいずれか１項に記載の方法。
３１６．対象は、移植組織の導入の前に、少なくとも１、１５、３０、６０、または９０日間にわたり、標的化されていない免疫抑制剤を施される、実施形態３９５に記載の方法。
３１７．対象は、治療用化合物の初回投与の後で、少なくとも１、１５、３０、６０、９０、または１８０日間にわたり、標的化されていない免疫抑制剤を施される、実施形態３１６に記載の方法。
３１８．対象は、移植組織の導入の後で、少なくとも１、１５、３０、６０、９０、または１８０日間にわたり、標的化されていない免疫抑制剤を施される、実施形態２７８～３１７のいずれか１項に記載の方法。
３１９．対象は、治療用化合物の初回投与の前に、標的化されていない免疫抑制剤を施されるが、１、１５、３０、６０、９０、または１８０日間以下にわたり施される、実施形態２７８～３１７のいずれか１項に記載の方法。
３２０．対象は、移植組織の導入の前に、標的化されていない免疫抑制剤を施されるが、１、１５、３０、６０、９０、または１８０日間以下にわたり施される、実施形態２９５に記載の方法。
３２１．対象は、治療用化合物の初回投与の後で、標的化されていない免疫抑制剤を施されるが、１、１５、３０、６０、９０、または１８０日間以下にわたり施される、実施形態２７８～３２０のいずれか１項に記載の方法。
３２２．対象は、移植組織の導入の後で、標的化されていない免疫抑制剤を施されるが、１、１５、３０、６０、９０、または１８０日間以下にわたり施される、実施形態２９５に記載の方法。
３２３．対象は、移植組織の拒絶についてモニタリングされる、実施形態２９５に記載の方法。
３２４．標的化されていない免疫抑制剤の投与量は選択されるか、またはモニタリングする工程に応じて、標的化されていない免疫抑制剤の投与量は選択される、実施形態２７８～３２３のいずれか１項に記載の方法。
３２５．投与量は投与される、実施形態３２４に記載の方法。
３２６．選択される投与量は、ゼロである、すなわち、標的化されていない免疫抑制剤は投与されない、実施形態３２５に記載の方法。
３２７．選択される投与量は、ゼロではない、すなわち、標的化されていない免疫抑制剤は投与される、実施形態３２５に記載の方法。
３２８．投与量は、治療用化合物の投与の非存在下で投与される投与量未満である、実施形態３２５に記載の方法。
３２９．対象は、哺乳動物、例えば、非ヒト哺乳動物である、実施形態２７８～３２８のいずれか１項に記載の方法。
３３０．対象は、ヒトである、実施形態２７８～３２８のいずれか１項に記載の方法。
３３１．ドナーと対象とは、ＨＬＡ遺伝子座、例えば、主座または副座において、ミスマッチである、実施形態２９５に記載の方法。
３３２．対象は、哺乳動物、例えば、非ヒト哺乳動物である、実施形態３３１に記載の方法。
３３３．対象は、ヒトである、実施形態３３１に記載の方法。
３３４．自己免疫障害を有するか、またはこれを有する危険性があるかもしくは上昇している対象を処置する方法であって、治療有効量の、実施形態１～２７７のいずれか１項に記載の治療用化合物を投与し、これにより、対象を処置する工程を含む方法。
３３５．治療用化合物の施薬は、自己免疫障害の症状の発生の前に、または自己免疫障害の症状の発生の同定の前に開始される、実施形態３３４に記載の方法。
３３６．治療用化合物の施薬は、自己免疫障害の症状の発生の後で、または自己免疫障害の症状の発生の同定の後で開始される、実施形態３３４～３３５のいずれか１項に記載の方法。
３３７．自己免疫障害は、１型糖尿病を含む、実施形態３３４～３３６のいずれか１項に記載の方法。
３３８．標的組織は、膵島細胞または膵臓ベータ細胞、腸組織（例えば、腸内皮細胞）、腎臓組織（例えば、腎臓上皮細胞）、または肝臓組織（例えば、肝臓上皮細胞）を含む、実施形態３３４～３３７のいずれか１項に記載の方法。
３３９．エフェクター結合性／モジュレーティング部分、または標的化部分は、表３のポリペプチド、例えば、ＭＡｄＣＡＭ、ＯＡＴ１、ＯＣＴ、ＤＰＰ６、ＳＥＺ６Ｌ２、ＬＲＰ１１、ＤＩＳＰ２、ＳＬＣ３０Ａ８、ＦＸＹＤ２、ＴＳＰＡＮ７、ＥＮＴＰＤ３、またはＴＭＥＭ２７のポリペプチドから選択されるポリペプチドに結合する、実施形態３３４～３３８のいずれか１項に記載の方法。
３４０．治療用化合物の施薬は、１型糖尿病の症状の発生の前に、または１型糖尿病の症状の発生の同定の前に開始される、実施形態３３４～３３９のいずれか１項に記載の方法。
３４１．治療用化合物の施薬は、あらかじめ選択された特徴または症状の前に、またはこれを有する対象の同定の前に開始される、実施形態３３４～３４０のいずれか１項に記載の方法。
３４２．治療用化合物の施薬は、１型糖尿病の症状の発生の後で、または１型糖尿病の症状の発生の同定の後で開始される、実施形態３３４～３４１のいずれか１項に記載の方法。
３４３．治療用化合物の施薬は、あらかじめ選択された特徴または症状の後で、またはこれを有する対象の同定の後で開始される、実施形態３３４～３４２のいずれか１項に記載の方法。
３４４．治療用化合物は、実施形態１～２７７のいずれか１項に記載の治療用化合物である、実施形態３３４～３４３のいずれか１項に記載の方法。
３４５．治療用化合物は、多発性硬化症を有するか、またはこれを有する危険性があるかもしくは上昇している対象の処置に適する、実施形態３３４～３３９のいずれか１項に記載の方法。
３４６．標的組織は、ＣＮＳ組織、髄鞘、または希突起膠細胞の髄鞘を含む、実施形態３４５に記載の方法。
３４７．エフェクター結合性／モジュレーティング部分、または標的化部分は、表３、例えば、ＭＯＧ、ＰＬＰ、またはＭＢＰのポリペプチドから選択されるポリペプチドに結合する、実施形態３４５または３４６に記載の方法。
３４８．治療用化合物の施薬は、多発性硬化症の症状の発生の前に、または多発性硬化症の症状の発生の同定の前に開始される、実施形態３４５～３４７のいずれか１項に記載の方法。
３４９．治療用化合物の施薬は、あらかじめ選択された特徴または症状の前に、またはこれを有する対象の同定の前に開始される、実施形態３４５～３４７のいずれか１項に記載の方法。
３５０．治療用化合物の施薬は、多発性硬化症の症状の発生の後で、または多発性硬化症の症状の発生の同定の後で開始される、実施形態３４５～３４７のいずれか１項に記載の方法。
３５１．治療用化合物の施薬は、あらかじめ選択された特徴または症状の後で、またはこれを有する対象の同定の後で開始される、実施形態３４５～３４７のいずれか１項に記載の方法。
３５２．治療用化合物は、実施形態１～２７７のいずれか１項に記載の治療用化合物である、実施形態３４５～３５１のいずれか１項に記載の方法。
３５３．治療用化合物は、心筋炎を有するか、またはこれを有する危険性があるかもしくは上昇している対象の処置に適する、実施形態３３４～３３９のいずれか１項に記載の方法。
３５４．標的組織は、心筋細胞、単球、マクロファージ、または骨髄細胞を含む、実施形態３５３に記載の方法。
３５５．エフェクター結合性／モジュレーティング部分、または標的化部分は、表３のポリペプチド、例えば、ＳＩＲＰＡ（ＣＤ１７２ａ）のポリペプチドから選択されるポリペプチドに結合する、実施形態３５３または３５４に記載の方法。
３５６．治療用化合物の施薬は、心筋炎の症状の発生の前に、または心筋炎の症状の発生の同定の前に開始される、実施形態３５３～３５５のいずれか１項に記載の方法。
３５７．治療用化合物の施薬は、あらかじめ選択された特徴または症状の前に、またはこれを有する対象の同定の前に開始される、実施形態３５３～３５５のいずれか１項に記載の方法。
３５８．治療用化合物の施薬は、心筋炎の症状の発生の後で、または心筋炎の症状の発生の同定の後で開始される、実施形態３５３～３５５のいずれか１項に記載の方法。
３５９．治療用化合物の施薬は、あらかじめ選択された特徴または症状の後で、またはこれを有する対象の同定の後で開始される、実施形態３５３～３５５のいずれか１項に記載の方法。
３６０．治療用化合物は、実施形態１～２７７のいずれか１項に記載の治療用化合物である、実施形態３５３～３５９のいずれか１項に記載の方法。
３６１．治療用化合物は、関節リウマチを有するか、またはこれを有する危険性があるかもしくは上昇している対象の処置に適する、実施形態３３４～３３９のいずれか１項に記載の方法。
３６２．標的組織は、心筋細胞、単球、マクロファージ、または骨髄細胞を含む、実施形態３６１に記載の方法。
３６３．エフェクター結合性／モジュレーティング部分、または標的化部分は、表３のポリペプチド、例えば、ＳＩＲＰＡ（ＣＤ１７２ａ）のポリペプチドから選択されるポリペプチドに結合する、実施形態３６１または３６２に記載の方法。
３６４．治療用化合物の施薬は、関節リウマチの症状の発生の前に、または関節リウマチの症状の発生の同定の前に開始される、実施形態３６１～３６３のいずれか１項に記載の方法。
３６５．治療用化合物の施薬は、あらかじめ選択された特徴または症状の前に、またはこれを有する対象の同定の前に開始される、実施形態３６１～３６３のいずれか１項に記載の方法。
３６６．治療用化合物の施薬は、関節リウマチの症状の発生の後で、または関節リウマチの症状の発生の同定の後で開始される、実施形態３６１～３６３のいずれか１項に記載の方法。
３６７．治療用化合物の施薬は、あらかじめ選択された特徴または症状の後で、またはこれを有する対象の同定の後で開始される、実施形態３６１～３６３のいずれか１項に記載の方法。
３６８．治療用化合物は、実施形態１～２７７のいずれか１項に記載の治療用化合物である、実施形態３６１～３６７のいずれか１項に記載の方法。
３６９．対象を、例えば、末梢循環内またはリンパ系内の標的部位から遠位の部位における、免疫細胞の不活化についてモニタリングする工程（例えば、免疫阻害性チェックポイント分子の、望ましくないアゴナイゼーションをモニタリングするように）を含む、実施形態２７８～３６８のいずれか１項に記載の方法。
３７０．対象を、例えば、末梢循環内またはリンパ系内の標的部位から遠位の部位における、免疫細胞の活性化についてモニタリングする工程（例えば、免疫阻害性チェックポイント分子の、望ましくないアンタゴナイゼーションをモニタリングするように）を含む、実施形態２７８～３６９のいずれか１項に記載の方法。
３７１．モニタリングする工程の結果に応じて、対象のための処置のコースを選択する、例えば、治療用化合物の用量を増大させ、治療用化合物の用量を減少させ、用量を変化させずに、治療用化合物による処置を継続する、実施形態２７８～３７０のいずれか１項に記載の方法。
３７２．対象は、自己免疫による、標的組織の攻撃についてモニタリングされる、実施形態２７８～３７１のいずれか１項に記載の方法。
３７３．モニタリングする工程に応じて、治療用化合物の投与量は選択される、実施形態３７２に記載の方法。
３７４．投与量は投与される、実施形態３７３に記載の方法。
３７５．選択される投与量は、ゼロである、すなわち、治療用化合物の投与は、中止される、実施形態３７２に記載の方法。
３７６．選択される投与量は、ゼロではない、実施形態３７２に記載の方法。
３７７．選択される投与量は、増大された投与量である、実施形態３７２に記載の方法。
３７８．選択される投与量は、低減された投与量である、実施形態３７２に記載の方法。
３７９．投与する工程は、例えば、末梢循環系への全身投与を含む、実施形態２７８～３７８のいずれか１項に記載の方法。
３８０．投与する工程は、例えば、標的組織への局所投与を含む、実施形態２７８～３７９のいずれか１項に記載の方法。
３８１．治療レベルが、少なくとも１、５、１０、１４、または２８日間、例えば、これらの連続する日数またはのべ日数にわたり存在するように、本明細書で提供される治療用化合物を投与する工程を含む、実施形態２７８～３８０のいずれか１項に記載の方法。
３８２．対象は、哺乳動物、例えば、非ヒト哺乳動物である、実施形態２７８～３８１のいずれか１項に記載の方法。
３８３．対象は、ヒトである、実施形態２７８～３８１のいずれか１項に記載の方法。
３８４．実施形態１～２７７のいずれか１項に記載の治療用化合物をコードする、１つまたは複数の核酸分子。
３８５．実施形態３８４に記載の核酸分子を含む、１つまたは複数のベクター。
３８６．実施形態３８４に記載の核酸分子、または実施形態３８５に記載のベクターを含む細胞。
３８７．治療用化合物を作製する方法であって、実施形態３８６に記載の細胞を培養して、治療用化合物を作製する工程を含む方法。
３８８．実施形態１～２７７のいずれか１項に記載の治療用化合物をコードする核酸配列を作製する方法であって、
ａ）標的化部分をコードする配列を含むベクターを用意し、ベクターを、エフェクター結合性／モジュレーティング部分をコードする配列へと挿入して、治療用化合物をコードする配列を形成する工程；または
ｂ）エフェクター結合性／モジュレーティング部分をコードする配列を含むベクターを用意し、ベクターを、標的化部分をコードする配列へと挿入して、治療用化合物をコードする配列を形成する工程
を含み、
これにより、治療用化合物をコードする配列を作製する、方法。
３０７．標的化部分は、対象の必要に応じて選択される、実施形態３０６に記載の方法。
３８９．標的化部分は、対象の必要に応じて選択される、実施形態３８８に記載の方法。
３９０．エフェクター結合性／モジュレーティング部分は、対象の必要に応じて選択される、実施形態３８８または３８９に記載の方法。
３９１．治療用化合物をコードする配列を発現させて、治療用化合物を産生する工程をさらに含む、実施形態３８８または３８９に記載の方法。
３９２．配列、または配列から作製されたポリペプチドを、別の実体、例えば、治療用化合物を、対象へと投与する、医療提供者へと移送する工程をさらに含む、実施形態３８８～３９１のいずれか１項に記載の方法。
３９３．対象を処置する方法であって：
別の実体から、本明細書で提供されるが、実施形態３８８～３９２に限定されない方法により作製される、治療用化合物、または治療用化合物をコードする核酸を入手する工程、例えば、これらを受け取る工程と；
治療用化合物、または治療用化合物をコードする核酸を、対象へと投与し、
これにより、対象を処置する工程と
を含む方法。
３９４．治療用化合物、または治療用化合物をコードする核酸を、別の実体、例えば、治療用化合物、または治療用化合物をコードする核酸を作製する実体へと移送する工程をさらに含む、実施形態３９３に記載の方法。
３９５．治療用化合物、または治療用化合物をコードする核酸を、別の実体、例えば、治療用化合物、または治療用化合物をコードする核酸を作製した実体から請求する工程をさらに含む、実施形態３９３または３９４に記載の方法。
３９６．対象は、自己免疫障害を有し、治療用化合物は、自己免疫障害に特徴的な、自己抗原性ペプチドまたはポリペプチドを含まない、例えば、対象がそれらに対する自己抗体を有するペプチドまたはポリペプチドを含まない、実施形態３９３～３９５のいずれか１項に記載の方法。
３９７．Ｎ末端から、Ｃ末端へと、式：
Ａ１－－－リンカーＡ－－－Ａ２－－－リンカーＢ－－－Ａ３またはＡ３－－－リンカーＡ－－－Ａ２－－－リンカーＢ－－－Ａ１、
［式中、
Ａ１、およびＡ３は、各々、独立に、エフェクター結合性／モジュレーティング部分、または標的化部分を含み、
Ａ２は、Ｆｃ領域を含み、
リンカーＡおよびリンカーＢは、各々が独立したリンカーである］
を有する、実施形態９７に記載の治療用化合物。
３９８．リンカーＡおよびリンカーＢの各々は、独立したリンカーを含む、実施形態３９７に記載の治療用化合物。
３９９．Ａ１は、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体であり、Ａ３は、ＩＬ２ムテイン抗体である、実施形態３９７に記載の治療用化合物。
４００．Ａ１またはＡ３はＰＤ－１抗体である、実施形態３９７に記載の治療用化合物。
４０１．Ａ２はＦｃ領域を含む、実施形態３９７に記載の治療用化合物。
４０２．リンカーＡおよびリンカーＢはそれぞれ独立してグリシン／セリンリンカーである、実施形態３９７～４０１に記載の治療用化合物。
４０３．リンカーＡおよびリンカーＢはそれぞれ独立してＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２２）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３０）、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７９２）、またはＧＧＧＧＳ（配列番号２３）を含む、実施形態３９７～４０２に記載の治療用化合物。
以下の実施例は、本明細書で記載される、化合物、組成物、および方法についての、例示的なものであり、限定的なものではない。当業者に公知である、他の適切な改変および適合も、以下の実施形態の範囲内にある。
実施例１
ＨＬＡ標的化ＰＤ－１アゴナイズ化治療用化合物
ＨＬＡ標的化ＰＤ－１アゴナイズ化治療用化合物の操作
ＨＬＡ－Ａ２に特異的な結合性ドメインは、Ｉｇ重鎖およびＩｇ軽鎖の可変領域を、ＢＢ７．２のハイブリドーマ（ＡＴＣＣ）からクローニングし、単鎖Ａｂ（ｓｃＦｖ）へと転換することにより得られる。ｓｃＦｖの活性および特異性は、ＢＢ７．２の、ＨＬＡ－Ａ２発現細胞への結合を、他のＨＬＡ－Ａ対立遺伝子を発現する細胞と比較して評価することにより確認することができる。ＰＤ－１結合活性に要求される、最小限のＰＤ－Ｌ１残基は、アミノ酸６８～１１４に対応するＰＤ－Ｌ１ ＩｇＶドメインの、３’側および５’側のアミノ酸についての要件を体系的に査定することにより同定する。発現構築物をデザインし、タンパク質を合成および精製し、ＰＤ－１への結合活性は、Ｂｉａｃｏｒｅが調べる。ＰＤ－Ｌ１ ＩｇＶドメインによるＰＤ－１への結合に要求される、最小限の不可欠のアミノ酸を、ＰＤ－Ｌ１－ＩｇＶと称する。ＢＢ７．２ ｓｃＦｖおよびＰＤ－Ｌ１－ＩｇＶに対する二特異性分子を作出するために、ドメイン配置を、ＶＬＢＢ７．２－ＶＨＢＢ７．２－ＰＤ－Ｌ１－ＩｇＶ－ＩｇＧ４Ｆｃとする、二特異性単鎖抗体である、ＢＢ７．２×ＰＤ－Ｌ１－ＩｇＶをコードするＤＮＡ断片を合成し、ＤＨＦＲ選択カセットを含有する発現ベクターへとクローニングする。
２９３Ｔ細胞に、発現ベクターである、プラスミドＤＮＡを、一過性にトランスフェクトし、プロテインＡ／Ｇカラムを使用して、ＢＢ７．２×ＰＤ－Ｌ１－ＩｇＶ二特異性抗体を、上清から精製する。ＢＢ７．２×ＰＤ－Ｌ１－ＩｇＶ二特異性抗体の完全性は、ポリアクリルアミドゲルにより評価する。ＢＢ７．２ ｓｃＦｖドメインの、ＨＬＡ－Ａ２への結合、およびＰＤ－Ｌ１－ＩｇＶドメインの、ＰＤ－１への結合は、ＥＬＩＳＡおよび細胞ベースのＦＡＣＳアッセイにより評価する。
ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける、ＢＢ７．２×ＰＤ－Ｌ１－ＩｇＶ二特異性抗体の機能は、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイを使用して評価する。９６ウェルプレートフォーマットでは、ＨＬＡ－Ａ２＋ドナーに由来する、１００，０００個の照射ヒトＰＢＭＣを、ウェルごとにアリコート分割し、活性化因子として使用する。次いで、ＨＬＡ－Ａ１－レスポンダーＴ細胞を、量を増大させる、ＢＢ７．２×ＰＤ－Ｌ１－ＩｇＶ二特異性抗体と併せて添加する。レスポンダーＴ細胞が、７２時間にわたり増殖する能力を、ＢｒｄＵの取込みにより評価し、加えて、ＩＦＮｇおよびＩＬ２のサイトカイン産生を、ＥＬＩＳＡにより評価される通り、共培養物上清中で査定する。ＢＢ７．２×ＰＤ－Ｌ１－ＩｇＶ二特異性抗体は、ＨＬＡ－Ａ２－レスポンダーＴ細胞の増殖およびサイトカイン産生を阻害することにより裏付けられる通り、ＭＬＲ反応を抑制することが見出される。
ｉｎ ｖｉｖｏにおける、ＢＢ７．２×ＰＤ－Ｌ１－ＩｇＶ二特異性抗体の機能は、皮膚同種移植トレランスのマウスモデルを使用して評価する。マウスのＣ５７ＢＬ／６－Ｔｇ（ＨＬＡ－Ａ２．１）１Ｅｎｇｅ／Ｊ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ、Ｍａｉｎｅ）株を、Ｂａｌｂ／ｃＪと交配させると、Ｆ１後代は、ＨＬＡ－Ａ２．１トランス遺伝子を発現し、同種移植ドナーとして用いられる。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスを剃毛し、これに、安楽死させたＣ５７ＢＬ／６－Ｔｇ（ＨＬＡ－Ａ２．１）１Ｅｎｇｅ／Ｊ×Ｂａｌｂ／ｃＪＦ１マウスから採取された皮膚を生着させた。同時に、宿主マウスへの、マウスＩｇＧ１ Ｆｃ、またはＢＢ７．２だけの対照、もしくはＰＤ－Ｌ１－ＩｇＶだけの対照を含有するように操作された、ＢＢ７．２×ＰＤ－Ｌ１－ＩｇＶ二特異性抗体の腹腔内注射を開始する。皮膚における同種移植片の拒絶または受容を、３０日間にわたりモニタリングし、ここで、宿主を安楽死させ、リンパ節および同種移植片在留リンパ球を定量する
実施例２
目的の細胞型または組織の周囲に、プリン作動性ハローを創出するエフェクタードメインとしての、ＣＤ３９および／またはＣＤ７３
ＣＤ３９および／またはＣＤ７３の触媒活性断片を、標的化ドメインへと融合させる。標的部位に結合し、蓄積されると、ＣＤ３９は、ＡＴＰを、ＡＭＰへとリン酸加水分解する。標的部位に結合し、蓄積されると、ＣＤ７３は、細胞外ＡＭＰを、アデノシンへと脱リン酸化させる。本明細書における使用に適する、ＣＤ３９の、可溶性の触媒活性形態は、ヒトおよびマウスの血液中で循環することが見出されている。例えば、Ｙｅｇｕｔｋｉｎら、ＦＡＳＥＢ Ｊ．、２０１２年９月；２６（９）：３８７５～８３を参照されたい。可溶性の組換えＣＤ３９断片もまた、組換え可溶性細胞外ＡＤＰアーゼ／ＣＤ３９による、血小板機能の阻害において記載されている。Ｇａｙｌｅら、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．、１９９８年５月１日；１０１（９）：１８５１～１８５９。適切なＣＤ７３分子は、ＧＰＩアンカーの、タンパク質分解性切断または加水分解、およびせん断応力により、内皮細胞の膜から脱落する可能性がある、ＣＤ７３の可溶性形態を含む。例えば、参考文献：Ｙｅｇｕｔｋｉｎ Ｇ、Ｂｏｄｉｎ Ｐ、Ｂｕｒｎｓｔｏｃｋ Ｇ．、「Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｓｈｅａｒ ｓｔｒｅｓｓ ｏｎ ｔｈｅ ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ ｓｏｌｕｂｌｅ ｅｃｔｏ－ｅｎｚｙｍｅｓ ＡＴＰａｓｅ ａｎｄ ５’－ｎｕｃｌｅｏｔｉｄａｓｅ ａｌｏｎｇ ｗｉｔｈ ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ＡＴＰ ｆｒｏｍ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ」、Ｂｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、２０００；１２９：９２１～６を参照されたい。
ＡＴＰからＡＭＰへの局所触媒反応、またはＡＭＰからアデノシンへの局所触媒反応は、劇症性エフェクターＴ細胞機能に要求される、局所エネルギー貯蔵を枯渇させる。Ｔｒｅｇ機能は、エネルギー的必要のための酸化的リン酸化（ＡＴＰの要求が少ない）への依拠のために、ＡＴＰ枯渇の影響を受けないはずであるが、メモリーＴ細胞、および他のエフェクター細胞は、劇症性機能のための解糖反応（高度のＡＴＰ使用を要求する）への依拠のために、影響を受けるはずである。
実施例３
抗体誘導性ＰＤ－１シグナル伝達の測定
２つの構築物である、１）「酵素ドナー」と称することができる、ベータ－ガラクトシダーゼへと融合されたヒトＰＤ－１ポリペプチドと、２）「酵素アクセプター」と称することができる、ベータ－ガラクトシダーゼへと融合されたＳＨＰ－２ポリペプチドとを、安定的に発現する、Ｊｕｒｋａｔ細胞を構築する。ＰＤ－１抗体を、細胞と接触させ、ＰＤ－１を係合すると、ＳＨＰ－２が、ＰＤ－１へと動員される。酵素アクセプターと、酵素ドナーとは、完全に活性のベータ－ガラクトシダーゼ酵素を形成し、これをアッセイすることができる。このアッセイを使用して、ＰＤ－１シグナル伝達の活性化を示すことができる。
実施例４
ＰＤ－１アゴニズムの測定：ＰＤ－１アゴニストは、Ｔ細胞の活性化を阻害する
いかなる特定の理論にも束縛されずに述べると、ＰＤ－１アゴニズムは、抗ＣＤ３に誘導される、Ｔ細胞の活性化を阻害する。ＰＤ－１を発現するように、ヒト細胞またはマウス細胞を、ＰＨＡ（ヒトＴ細胞のための）またはＣｏｎＡ（マウスＴ細胞のための）であらかじめ活性化させる。次いで、ＰＤ－１アゴニズムアッセイのために、Ｔ細胞を、抗ＰＤ－１（またはＰＤ－Ｌ１）の存在下で、抗ＣＤ３により「再活性化」させる。抗ＣＤ３の存在下で、ＰＤ－１アゴニストシグナルを施されるＴ細胞は、抗ＣＤ３による刺激単独と比べて、活性化の減殺を示す。活性化は、増殖またはサイトカイン産生（ＩＬ－２、ＩＦＮｇ、ＩＬ－１７）により読み取ることができ、おそらく、ＣＤ６９活性化マーカーのような他のマーカーにより読み取ることもできる。
実施例５
抗ＭＡｄＣＡＭ／マウスＰＤ－Ｌ１融合タンパク質の発現および機能は、分子的立体構造の影響を受けない
抗マウスＭＡｄＣＡＭ Ａｂ／マウスＰＤ－Ｌ１分子を含む二特異性融合分子を、２つの配置で発現させた。第１の配置は、マウスＰＤ－Ｌ１を、その重鎖のＣ末端において融合させた、抗マウスＭＡｄＣＡＭ ＩｇＧからなった。第２の配置は、Ｃ末端において、抗マウスＭＡｄＣＡＭ ｓｃＦｖを融合させた、Ｉｇ ＦｃドメインのＮ末端において融合させた、マウスＰＤ－Ｌ１からなった。いずれの分子も、哺乳動物発現系において、良好に発現されることが見出された。また、分子は、両方の配置における、それらのそれぞれの結合パートナーである、ＭＡｄＣＡＭまたはＰＤ－１に、同時に結合することが可能であることも見出された。これらの結果は、ＰＤ－Ｌ１が、Ｎ末端またはＣ末端において、Ｆｃへと融合された構成において、ＰＤ－Ｌ１へと融合された、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体からなる分子を発現させることができ、これが、適正な機能的結合活性を保持することを裏付ける。
略述すると、ＨＥＫ２９３ Ｅｘｐｉ細胞に、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインの単一のポリペプチドであって、Ｎ末端において、マウスＰＤ－Ｌ１を融合させ、Ｃ末端において、抗ＭＡｄＣＡＭ ｓｃＦｖである、ＭＥＣＡ８９を融合させたポリペプチドをコードする、単一の遺伝子を含有するｐＴＴ５ベクターをトランスフェクトした。代替的に、２つのプラスミドを、等モル比で共トランスフェクトした。第１のプラスミドは、ＭＥＣＡ８９の軽鎖をコードし、第２のプラスミドは、Ｃ末端において、マウスＰＤ－Ｌ１を融合させた、ＭＥＣＡ８９の、全長ＩｇＧ１重鎖をコードした。５～７日後、分子を発現する細胞培養物上清を採取し、遠心分離および０．２２μｍの濾過デバイスを介する濾過により清明化させた。二特異性分子は、ｐｒｏＡ樹脂上で捕捉した。樹脂を、ＰＢＳ ｐＨ ７．４で洗浄し、１００ｍＭのグリシンｐＨ ２．５を使用して、捕捉された分子を溶出させ、１０分の１容量の１ＭトリスｐＨ ８．５を使用して、中和させた。タンパク質を、ＰＢＳ ｐＨ ７．４へと緩衝液交換し、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ ３．２／３００上のサイズ除外クロマトグラフィーにより解析した。精製材料１μｇについての、４～１２％のビス－トリスゲル上の還元型ＳＤＳ－ＰＡＧＥおよび非還元型ＳＤＳ－ＰＡＧＥによる解析を行った。
いずれのタンパク質も、配置に関わらず、１０ｍｇ／Ｌで発現され、精製後に、サイズ除外クロマトグラフィーおよび還元型／非還元型ＳＤＳ－ＰＡＧＥにより示される通り、９５％を超えて単分散性であった。したがって、これは、ＦｃドメインのＮ末端およびＣ末端において、異なる免疫モジュレーターおよび組織標的化部分を伴う、二重機能性二特異性分子の、産生および活性を裏付ける。これはまた、ＰＤ－１アゴニストおよび結合パートナーを、Ｉｇ Ｆｃドメインの、Ｎ末端またはＣ末端において発現させることができることも、具体的に示す。
実施例６
ＭＡｄＣＡＭに係留されたＰＤ－１アゴニストの試作品を含む二特異性分子は、ＭＡｄＣＡＭおよびＰＤ－１に、同時に結合することが可能である
略述すると、免疫測定プレートを、ウェル１つ当たりのＰＢＳ ｐＨ ７．４ ７５μＬ中に１μｇ／ｍＬの濃度の、マウスＰＤ－１でコーティングし、４℃で、一晩にわたりインキュベートした。ウェルを、０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０（洗浄緩衝液）を含有するＰＢＳ ｐＨ ７．４で、３回にわたり洗浄し、次いで、ウェル１つ当たりのＰＢＳ ｐＨ ７．４（ブロッキング緩衝液）中に１％のＢＳＡ ２００μｌにより、室温で、２時間にわたりブロッキングした。洗浄緩衝液による、３回にわたる洗浄の後、ＰＤ－１アゴニストの試作品を、Ｎ末端またはＣ末端において含む、２つの二特異性分子を、１％のＢＳＡおよび０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０を含有するＰＢＳ（アッセイ緩衝液）中に、１ｎＭ、１０ｎＭ、および１００ｎＭへと希釈した。希釈された材料を、マウスＰＤ－１でコーティングしたプレートへと、ウェル１つ当たり７５μＬ、室温で、１時間にわたり添加した。洗浄緩衝液による、３回にわたる洗浄の後、マウスＭＡｄＣＡＭを、プレートへと、ウェル１つ当たり７５μＬ、アッセイ緩衝液中に１０ｎＭの濃度、室温で、１時間にわたり添加した。洗浄緩衝液による、３回にわたる洗浄の後、アッセイ緩衝液中に０．５μｇ／ｍＬへと希釈した、ヤギビオチニル化抗マウスＭＡｄＣＡＭポリクローナル抗体を、プレートへと、ウェル１つ当たり７５μＬ、室温で、１時間にわたり添加した。洗浄緩衝液による、３回にわたる洗浄の後、アッセイ緩衝液中に１：５０００で希釈した、高感度ストレプトアビジンＨＲＰを、プレートへと、ウェル１つ当たり７５μｌ、室温で、１５分間にわたり添加した。洗浄緩衝液による、３回にわたる洗浄、および洗浄緩衝液（Ｔｗｅｅｎ－２０を伴わない）による、１回の洗浄の後、アッセイを、ＴＭＢで発色させ、１ＮのＨＣｌで停止させた。４５０ｎｍにおけるＯＤを測定した。実験は、プレートへの非特異的結合／マウスＰＤ－１の非存在下におけるブロッキングに適切な対照のほか、ＭＡｄＣＡＭを伴わない対照、およびマウスＰＤ－１と、マウスＭＡｄＣＡＭとの間で架橋を形成することができない、単一特異性対照を含めた。
結果は、１ｎＭ、１０ｎＭ、および１００ｎＭの濃度で、いずれの二特異性分子も、マウスＭＡｄＣＡＭおよびマウスＰＤ－Ｌ１と、同時に相互作用することが可能であるのに対し、単一特異性対照は、架橋シグナルを創出しないことを裏付けた。加えて、マウスＰＤ－１が、プレート表面上に存在しない場合、いずれの被験濃度の、いずれの化合物の、ＭＡｄＣＡＭへの結合も見られなかったことは、いずれの被験化合物も、プレート表面と、非特異的に相互作用しなかったことを指し示す。したがって、これらの結果は、ＭＡｄＣＡＭおよびＰＤ－１の両方への結合を標的化する二特異性分子が、いずれの分子への結合にも成功することが可能であることを裏付ける。実験は、ＰＤ－１抗体の代替物としてのＰＤ－Ｌ１で実施したが、ＰＤ－１抗体も、同様に機能することが予測される。
実施例７
二特異性ＰＤ－Ｌ１試作品分子は、ＰＤ－１アゴニストアッセイにおいて、Ｔ細胞を阻害する
ＰＤ－１アゴニスト抗体を模倣する二特異性分子を調べて、ＰＤ－１アゴニズムが、Ｔ細胞を阻害することが可能であることを裏付けた。略述すると、７週齢の雌Ｃ５７ＬＢ／６マウスを屠殺し、それらの脾臓細胞を摘出した。脾臓細胞を、ＣｏｎＡへと、３日間にわたり曝露し、次いで、本実施例では、抗ヒトＩｇＧを使用して、プレートへと係留された、ＰＤ－Ｌ１二特異性分子である、ＰＤ－１型分子の存在下または非存在下で、抗ＣＤ３へと曝露した。次いで、Ｔ細胞を、ＰＤ－Ｌ１二特異性分子へと導入した。ＰＤ－１抗体を模倣するＰＤ－Ｌ１は、Ｔ細胞アゴニストであり、Ｔ細胞の活性化を阻害することが見出された。ＭＡｄＣＡＭコーティングプレートとの相互作用により、プレートへと係留された、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体と融合させた、ＰＤ－Ｌ１二特異性分子を使用して、同じ実験を繰り返した。ＰＤ－１アゴニスト模倣体である、ＰＤ－Ｌ１／抗ＭＡｄＣＡＭ抗体は、Ｔ細胞活性の有効なアゴニストであることが見出された。これらの結果は、分子が、分子の末端において、ＭＡｄＣＡＭ抗体構成要素を介して捕捉されると、ＰＤ－１抗体／ＭＡｄＣＡＭＡ抗体融合タンパク質を模倣する二特異性分子が、初代マウスＴ細胞ブラストへと、機能的な阻害性シグナル伝達をもたらすことが可能であることを裏付ける。
実施例８
組織係留が異なる、二特異性ＰＤ－１試作品分子は、ＰＤ－１アゴニストアッセイにおいて、Ｔ細胞を阻害することが可能である
ＰＤ－Ｌ１の融合分子を、ＰＤ－１抗体の代替物として使用し、クラスＩ Ｈ－２Ｋｋ抗体へと連結した。ＭＨＣクラスＩ Ｈ－２Ｋｋへと係留されたＰＤ－Ｌ１分子は、実施例６および７で記載したデータと同様の機能的結合を示した。略述すると、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスに由来する脾臓細胞を、Ｃｏｎｃａｎａｖａｌｉｎ Ａ（ＣｏｎＡ）およびＩＬ－２で、３日間にわたり刺激した。プレートを、抗ＣＤ３（２Ｃ１１）により、４℃で、一晩にわたりコーティングし、洗浄した。プレートを、抗ヒトＩｇＧにより、３７℃で、３時間にわたりコーティングし、洗浄した。単一特異性抗Ｈ－２Ｋｋ（１６－３－２２）、または二特異性抗Ｈ－２Ｋｋ：ｍＰＤ－Ｌ１を添加し、３７℃で、３時間にわたりインキュベートし、洗浄した。全ての被験物質は、ヒトＩｇＧ１－Ｆｃ部分を含有した。ＰＢＳ（Ｔｘなし）を添加して、アッセイバックグラウンドを決定した。ＣｏｎＡブラストを、２回にわたり洗浄し、プレートへと添加し、３７℃でインキュベートした。２４時間後に、上清を除去した。ＩＦＮｇレベルは、ＭＳＤにより決定した。４８時間後に、細胞の生存率／代謝を、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ－ｇｌｏにより解析した。マウスＰＤ－１アゴニズムアッセイにおいて、ＩｇＧ Ｆｃドメインを介して捕捉されると、ＭＨＣクラスＩにより係留された、ＰＤ－Ｌ１二特異性分子は、Ｔ細胞の活性化を弱めることができる。したがって、本実施例は、（分子が、異なる組織係留（この場合、マウス抗体の、ＭＨＣクラスＩ Ｈ－２Ｋｋへの係留）を介して捕捉されると、）異なる二特異性試作品分子が、初代マウスＴ細胞ブラストへと、機能的な阻害性シグナル伝達をもたらすことが可能であることを裏付ける。したがって、このデータは、係留は、ＭＡｄＣＡＭに特異的ではなく、本明細書で提供される標的化部分として作用することの可能な、他の分子に対しても可能であることを裏付ける。
実施例９
ＰＤ－１アゴニストは、Ｊｕｒｋａｔ細胞内のシグナル伝達を誘導することが可能である
ベータ－ガラクトシダーゼ酵素ドナーへと融合させた、ヒトＰＤ－１、およびベータ－ガラクトシダーゼ酵素アクセプターへと融合させた、ＳＨＰ－２の両方を発現する、Ｊｕｒｋａｔ細胞を、プレート内の被験条件へと添加し、２時間にわたりインキュベートした。アゴニストである、ＰＤ－１抗体は、シグナル伝達およびＳＨＰ－２の動員、酵素補完および活性ベータ－ガラクトシダーゼ酵素の形成を誘導する。ベータ－ガラクトシダーゼ基質を添加し、標準的な発光プレートリーダー上で、化学発光を測定することができる。アゴニズムは、化学発光により測定し、この場合、測定される化学発光が多いほど、大きなアゴニズムを指し示す。
このアッセイでは、ＰＤ－１／ＭＡｄＣＡＭ二特異性分子のアゴニズムを測定した。Ｃｌ１０（ＵＣＢ）およびＣＣ－９０００６（Ｃｅｌｇｅｎｅ／Ａｎａｐｔｙｓ）を、ＰＤ－１アゴニスト抗体として使用した。いずれも、活性であり、Ｉｇ捕捉アッセイフォーマットの、機能的アッセイにおいて、ＰＤ－１アゴニズムを呈する。略述すると、プレートを、抗ヒトＩｇＧにより、４℃で、一晩にわたりコーティングし、洗浄した。抗破傷風毒素（ＴＴ）、または基準となるアゴニストの抗ＰＤ－１モノクローナル抗体である、Ｃｌ１０またはＣＣ－９０００６を添加し、３７℃で、１時間にわたりインキュベートし、洗浄した。全ての被験物質は、ヒトＩｇＧ１－Ｆｃを含有した。培地（Ｔｘなし）を添加して、アッセイバックグラウンドを決定した。プレートを、３回にわたり洗浄した。ベータ－ガラクトシダーゼ酵素ドナーへと融合させた、ヒトＰＤ－１、およびベータ－ガラクトシダーゼ酵素アクセプターへと融合させた、ＳＨＰ－２の両方を発現する、Ｊｕｒｋａｔ細胞を添加し、２時間にわたりインキュベートした。アゴニストである、ＰＤ－１抗体は、シグナル伝達およびＳＨＰ－２の動員、酵素補完および活性ベータ－ガラクトシダーゼ酵素の形成を誘導する。ベータ－ガラクトシダーゼ基質を添加し、標準的な発光プレートリーダー上で、化学発光を測定した。２つのヒトＰＤ－１アゴニスト抗体（Ｃｌ１０およびＣＣ－９０００６）は結合し、改変Ｊｕｒｋａｔレポーターアッセイにおいて、シグナル伝達（アゴニズムについてのサロゲート）を誘導する。したがって、このアッセイは、機能的ＰＤ－１アゴニズムアッセイである。Ｃｌ１０：ＭＥＣＡ８９（ＭＥＣＡ８９は、公知のＭＡｄＣＡＭ抗体である）は、ＭＡｄＣＡＭ抗体である、ＭＥＣＡ８９［ｓｃＦｖ］を、Ｃｌ１０の重鎖のＣ末端へと融合させることにより創出される、新規の二特異性分子である。この融合タンパク質は、活性であり、機能的アッセイにおいて、ＩｇＧ Ｆｃドメインを介して捕捉されると、Ｃｌ１０だけのタンパク質の場合と同様に、ＰＤ－１アゴニズムを呈することが見出された。しかし、ＭＡｄＣＡＭタンパク質を、捕捉剤として使用する、機能的アッセイフォーマットでは、Ｃｌ１０：ＭＥＣＡ８９だけが活性である（単一特異性の構成要素は、シグナル伝達しない）。
略述すると、プレートを、抗ヒトＩｇＧまたは組換えｍＭＡｄＣＡＭ－１により、４℃で、一晩にわたりコーティングし、洗浄した。単一特異性抗破傷風毒素（ＴＴ）、抗ＭＡｄＣＡＭ－１（ＭＥＣＡ８９）、もしくはアゴニストである、抗ＰＤ－１（Ｃｌ１０）、または二特異性Ｃｌ１０：ＭＥＣＡ８９を添加し、３７℃で、１時間にわたりインキュベートし、洗浄した。全ての被験物質は、ヒトＩｇＧ１－Ｆｃ部分を含有した。ＰＢＳ（Ｔｘなし）を添加して、アッセイバックグラウンドを決定した。プレートを、２回にわたり洗浄した。ベータ－ガラクトシダーゼ酵素ドナーへと融合させた、ヒトＰＤ－１、およびベータ－ガラクトシダーゼ酵素アクセプターへと融合させた、ＳＨＰ－２の両方を発現する、Ｊｕｒｋａｔ細胞を添加し、２時間にわたりインキュベートした。アゴニストである、ＰＤ－１抗体は、シグナル伝達およびＳＨＰ－２の動員、酵素補完および活性ベータ－ガラクトシダーゼ酵素の形成を誘導する。ベータ－ガラクトシダーゼ基質を添加し、標準的な発光プレートリーダー上で、化学発光を測定した。結果：Ｊｕｒｋａｔレポーターアッセイにおいて、プレートを、抗ＩｇＧ Ｆｃ捕捉剤でコーティングした場合は、Ｃｌ１０、およびＭＡｄＣＡＭにより係留されたＣｌ１０二特異性分子のいずれもが、ＰＤ－１シグナル伝達を誘導することが可能であるが、レポーターアッセイにおいて、プレートを、組換えＭＡｄＣＡＭタンパク質でコーティングした場合は、ＭＡｄＣＡＭにより係留された二特異性分子だけが、ＰＤ－１シグナル伝達を誘導することが可能である。これらの結果は、ＭＡｄＣＡＭにより係留され、ＰＤ－１アゴニスト抗体を含有する分子は、機能的であり、これは、ＰＤ－１アゴニストのサロゲートとしてのＰＤ－Ｌ１により示される結果と同様であることを裏付ける。
実施例１０
ＰＤ－１アゴニスト抗体の作出
ＰＤ－１欠損マウスを、ＰＤ－１に対する免疫応答を発生させる条件下で、マウスＰＤ－１により免疫化した。５４例のハイブリドーマを作出し、マウスＰＤ－１に結合するハイブリドーマを同定した。異なるハイブリドーマにより産生される抗体を、実施例４および６において記載される方法に従い、Ｔ細胞アゴニズムについて解析した。５４例のハイブリドーマのうち、少なくとも６例を、ＰＤ－１アゴニストとして同定した。抗体はまた、ＰＤ－１への結合についても調べ、ＰＤ－Ｌ１結合性部位と同じ部位において結合することが見出された。
略述すると、ＰＤ－Ｌ１結合性部位への結合は、以下のアッセイを使用して決定した。免疫測定プレートを、１倍濃度のＰＢＳ ｐＨ ７．４中の、組換えマウスＰＤ－Ｌ１－Ｆｃ ７５μＬ（２μｇ／ｍＬ）で、一晩にわたりコーティングした。次いで、プレートを、１倍濃度のＰＢＳで、３回にわたり洗浄し、１％のＢＳＡを補充した、１倍濃度のＰＢＳにより、室温で、２時間にわたりブロッキングした。組換えマウスＰＤ－１－Ｆｃ（１ｎＭ）を、１％のＢＳＡおよび０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０を補充した、１倍濃度のＰＢＳ（アッセイ緩衝液）中に１００ｎＭの、表示の抗マウスＰＤ－１抗体と共に、室温で、振とうしながら、１時間にわたりインキュベートした。ブロッキングの後、プレートを、０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０を補充した、１倍濃度のＰＢＳである、ＰＢＳＴで、３回にわたり洗浄し、抗体－ＰＤ－１コンジュゲートを、プレートに結合させたマウスＰＤ－Ｌ１と共にインキュベートした。結合しなかったＰＤ－１を、ＰＢＳＴで洗い流した後、プレートを、アッセイ緩衝液中の、ビオチニル化抗ＰＤ－１ポリクローナル抗体７５μＬ（０．５μｇ／ｍＬ）と共にインキュベートするのに続き、これもまた、アッセイ緩衝液中で希釈された、１：５０００のストレプトアビジンＨＲＰによる増幅を行った。プレートを、ＰＢＳＴで、３回にわたり洗浄するのに続き、１倍濃度のＰＢＳによる、３回にわたる洗浄を行ってから、ＴＭＢ １００μＬの添加に続き、１ＭのＨＣｌ １００μＬの添加を行って、発色を停止させた。吸光度を、４５０ｎｍで読み取り、抗体の非存在下における、ＰＤ－１の、ＰＤ－Ｌ１への結合に照らして正規化した。結果は、活性の抗体が、ＰＤ－Ｌ１結合性部位に結合することを示した。不活性の抗体は、ＰＤ－Ｌ１結合性部位に結合しなかった。したがって、本実施例は、既に同定された、本明細書で記載されるＰＤ－１アゴニスト抗体に加えて、アゴニストである、抗ＰＤ－１抗体を産生する能力を裏付ける。
実施例１１
係留された抗ＰＤ－１抗体は、ＰＤ－１アゴニストとして作用する。
ヒト抗体ｓｃＦｖファージライブラリーを、反復的な選択ラウンドにわたり、組換えヒトＰＤ－１タンパク質、組換えマウスＰＤ－１タンパク質、および組換えカニクイザルＰＤ－１タンパク質に対してパニングして、前述の３つの種の、ＰＤ－１オーソログ全てを認識する抗体クローンをエンリッチした。ｓｃＦｖクローンを、Ｎ末端－ＶＨ－リンカー－ＶＬ－Ｃ末端のフォーマットで構成し、ｐＩＩＩコートタンパク質を介して、Ｍ１３ファージ表面へと融合させた。選択の後、ｓｃＦｖクローンを、ＣＨＯ細胞の細胞表面上で発現される、ヒトＰＤ－１、マウスＰＤ－１、およびカニクイザルＰＤ－１への結合についてスクリーニングした。標準的な分子生物学法を使用して、３つの種の細胞表面発現型ＰＤ－１オーソログ全てに対して交差反応性であることが見出されたクローンを、各分子が、合計４つのポリペプチド鎖（２つの重鎖および２つの軽鎖）内に含まれる、ヒトＩｇＧ１フォーマットへと転換した。規定の通り、２つの軽鎖は、互いと同一とし、２つの重鎖は、互いと同一とした。
２つの同一な重鎖は、ホモ二量体化し、２つの同一な軽鎖は、各重鎖と対合して、無傷ヒトＩｇＧ１を形成する。Ｆｃドメインは、ＦｃγＲとの相互作用を失効化させる、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａ突然変異を含有する。ＨＥＫ２９３ Ｅｘｐｉ細胞に、転換されたヒトＩｇＧ１抗ＰＤ－１抗体をトランスフェクトし、ここで発現させ、プロテインＡクロマトグラフィーにより精製した。タンパク質濃度は、ナノドロップ分光光度計を、抗体特異的減衰係数と共に使用して決定した。抗体は、ＰＢＳ ｐＨ ７．４中で製剤化した。
次に、抗ＰＤ－１抗体を、本明細書で記載される、Ｊｕｒｋａｔアッセイにおいて、アゴニスト活性について調べた。略述すると、組織培養プレートを、抗ＩｇＧでコーティングするか、またはコーティングせずに放置した。捕捉型フォーマットでは、被験物質または対照を、抗ＩｇＧでコーティングされたウェルへと、１００ｎＭ、２５ｎＭ、または１２．５ｎＭで添加し、３７℃で、３時間にわたりインキュベートし、プレートを、洗浄し、Ｊｕｒｋａｔ ＰＤ－１細胞を添加した。可溶型フォーマットでは、可溶性の被験物質または対照を、Ｊｕｒｋａｔ ＰＤ１細胞を、既に含有するウェルへと、１００ｎＭ、２５ｎＭ、または１２．５ｎＭで添加した。プレートリーダーにより、発光を測定した。結果は、ヒト／マウス交差反応性ＰＤ－１抗体１２例中９例が、Ｊｕｒｋａｔアッセイにおいて、抗ＩｇＧを介して、抗ＰＤ－１抗体を捕捉した場合、用量依存的活性を示すが、可溶性フォーマットでは、これを示さないことを裏付けた。このデータは、抗ＰＤ－１抗体が、標的化部分により、その標的へと係留された場合に、アゴニストとして作用することが可能であることを裏付ける。
結論として、いかなる特定の理論にも束縛されずに述べると、本明細書で提示されたデータは、ＰＤ－１アゴニスト／ＭＡｄＣＡＭ二特異性分子が、ＭＡｄＣＡＭおよびＰＤ－１のいずれにも結合することが可能であり、ＰＤ－１アゴニズムを介してエフェクターＴ細胞活性を阻害することが可能であることを裏付ける。したがって、分子を使用して、本明細書で提供される、多様な状態を処置し、Ｔ細胞応答に対する、局在化され、かつ／または組織特異的な、免疫モジュレーションおよび下方調節をもたらすことができる。
実施例１２
ＩＬ－２ムテインの作出
ヒトＩｇＧ１ ＦｃドメインにＮ末端（配列番号５７）またはＣ末端（配列番号５８）で融合したヒトＩＬ－２ムテインポリペプチドをコードする単一遺伝子を含むｐＴＴ５ベクターをＨＥＫ２９３ Ｅｘｐｉ細胞にトランスフェクトした。５～７日後、ＩＬ－２ムテインを発現する細胞培養物上清を採取し、遠心分離および０．２２μｍの濾過デバイスを介する濾過により清明化させた。ＩＬ－２ムテインは、ｐｒｏＡ樹脂上で捕捉した。樹脂を、ＰＢＳ ｐＨ７．４で洗浄し、０．２５％の酢酸ｐＨ３．５を使用して、捕捉されたタンパク質を溶出させ、１０分の１容量の１ＭトリスｐＨ８．０を使用して、中和させた。タンパク質を、３０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７へと緩衝液交換し、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ ３．２／３００カラム上のサイズ除外クロマトグラフィーにより解析した。精製材料５ｕｇについての、４～１２％のビス－トリスゲル上の還元型ＳＤＳ－ＰＡＧＥおよび非還元型ＳＤＳ－ＰＡＧＥによる解析を行った。ＩＬ－２ムテインは、１０ｍｇ／Ｌより多く発現され、精製後に、サイズ除外クロマトグラフィーおよび還元型／非還元型ＳＤＳ－ＰＡＧＥにより示される通り、９５％を超えて単分散性であった。
実施例１３
ＩＬ－２ムテイン分子はＣＤ２５に結合することができる
免疫測定プレートを、ウェル１つ当たりのＰＢＳ ｐＨ７．４ ７５μｌ中に０．５ｕｇ／ｍＬの濃度の、ＣＤ２５でコーティングし、４℃で、一晩にわたりインキュベートした。ウェルを、０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０（洗浄緩衝液）を含有するＰＢＳ ｐＨ７．４で、３回にわたり洗浄し、次いで、ウェル１つ当たりのＰＢＳ ｐＨ７．４（ブロッキング緩衝液）中に１％のＢＳＡ ２００μｌにより、室温で、２時間にわたりブロッキングした。洗浄緩衝液による、３回にわたる洗浄の後、実施例１２のＩＬ－２ムテイン分子を、１％のＢＳＡおよび０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０を含有するＰＢＳ（アッセイ緩衝液）中に、２ｎＭが最高濃度となるように、１１～２倍の段階希釈を行った。希釈された材料を、ＣＤ２５でコーティングしたプレートへと、ウェル１つ当たり７５μＬ、室温で、１時間にわたり添加した。洗浄緩衝液による、３回にわたる洗浄の後、アッセイ緩衝液中に０．０５ｕｇ／ｍＬへと希釈した、ヤギビオチニル化抗ＩＬ－２ポリクローナル抗体を、プレートへと、ウェル１つ当たり７５μＬ、室温で、１時間にわたり添加した。洗浄緩衝液による、３回にわたる洗浄の後、アッセイ緩衝液中に１：５０００で希釈した、高感度ストレプトアビジンＨＲＰを、プレートへと、ウェル１つ当たり７５μＬ、室温で、１５分間にわたり添加した。洗浄緩衝液による、３回にわたる洗浄、および洗浄緩衝液（Ｔｗｅｅｎ－２０を伴わない）による、１回の洗浄の後、アッセイを、ＴＭＢで発色させ、１ＮのＨＣｌで停止させた。４５０ｎｍにおけるＯＤを測定した。実験は、ＩＬ－２ムテイン分子のプレートへの非特異的結合／ＣＤ２５の非存在下におけるブロッキングに適切な対照、ＣＤ２５に結合することができない陰性対照分子を含めた。
結果は、２ｎＭ～１．９ｐＭの濃度で、ＩＬ－２ムテイン分子がナノモル以下のＥＣ５０でＣＤ２５と結合できることを示す。加えて、ＣＤ２５が、プレート表面上に存在しない場合、いずれの被験濃度の、いずれの化合物の、検出も見られなかったことは、いずれの被験化合物も、プレート表面と、非特異的に相互作用しなかったことを指し示す（データは、示さない）。
実施例１４
ＩＬ－２ムテイン分子の効力と選択性を決定するためのｉｎ ｖｉｔｒｏ ｐ－ＳＴＡＴ５アッセイ
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、新たに単離されたヘパリン処理したヒト全血からＦＩＣＯＬＬ－ＰＡＱＵＥ ＰｒｅｍｉｕｍおよびＳｅｐｍａｔｅチューブを用いて調製した。ＰＢＭＣを１０％牛胎児血清ＲＰＭＩ培地で、野生型ＩＬ－２または実施例１２のＩＬ－２ムテインの存在下で２０分間培養した後、ＢＤ Ｃｙｔｏｆｉｘで１０分間固定した。
固定した細胞をＢＤ Ｐｅｒｍ ＩＩＩ、次にＢｉｏＬｅｇｅｎｄ ＦＯＸＰ３透過処理用緩衝液で順次透過性にした。ヒト血清で１０分間ブロッキングした後、細胞をホスホ－ＳＴＡＴ５ ＦＩＴＣ、ＣＤ２５ ＰＥ、ＦＯＸＰ３ ＡＦ６４７およびＣＤ４ ＰｅｒＣＰ Ｃｙ５．５の抗体で３０分間染色し、次いでプレートリーダーを備えたＡｔｔｕｎｅ ＮＸＴで取得した。実施例１２のＩＬ－２ムテインは、ＴｒｅｇにおいてＳＴＡＴ５のリン酸化を強力かつ選択的に誘導するが、Ｔｅｆｆにおいては誘導しない。
実施例１５
二特異性ＭＡｄＣＡＭを係留したＩＬ－２ムテイン分子の作出方法
ＨＥＫ２９３ Ｅｘｐｉ細胞に、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３０）リンカーで、本明細書で提供されるＬＡＬＡの突然変異を有するＦｃタンパク質と融合させたＮ８８Ｄ、Ｖ６９Ａ、およびＱ７４Ｐの突然変異を有するＩＬ－２ムテインを含む単一のＢ０００１ポリペプチドと、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号２２）リンカーＢ０００２を有し、ヒトＩｇＧ１ ＦｃドメインのＮ末端にヒトＩＬ－２ムテインを融合させ、Ｃ末端に抗ｍＭＡｄＣＡＭ ｓｃＦｖ ＭＥＣＡ８９を融合させたＭＡｄＣＡＭまたは類似の分子に結合するｓｃＦＶ抗体とをコードする単一の遺伝子を含有するｐＴＴ５ベクターをトランスフェクトした。Ｂ０００３については、２つのプラスミドを、等モル比で共トランスフェクトした。第１のプラスミドは、ＭＥＣＡ８９の軽鎖をコードし、第２のプラスミドは、Ｃ末端において、ヒトＩＬ－２ムテインを融合させた、ＭＥＣＡ８９の、全長ＩｇＧ１重鎖をコードした。５～７日後、Ｂ０００１、Ｂ０００２、およびＢ０００３を発現する細胞培養物上清を採取し、遠心分離および０．２２μｍの濾過デバイスを介する濾過により清明化させた。Ｂ０００１、Ｂ０００２、およびＢ０００３は、ｐｒｏＡ樹脂上で捕捉した。樹脂を、ＰＢＳ ｐＨ７．４で洗浄し、０．２５％の酢酸ｐＨ３．５を使用して、捕捉されたタンパク質を溶出させ、１０分の１容量の１ＭトリスｐＨ８．０を使用して、中和させた。タンパク質を、３０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７へと緩衝液交換し、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ ３．２／３００上のサイズ除外クロマトグラフィーにより解析した。精製材料１ｕｇについての、４～１２％のビス－トリスゲル上の還元型ＳＤＳ－ＰＡＧＥおよび非還元型ＳＤＳ－ＰＡＧＥによる解析を行った。
Ｂ０００１、Ｂ０００２、およびＢ０００３は、８ｍｇ／Ｌより多く発現され、精製後に、サイズ除外クロマトグラフィーおよび還元型／非還元型ＳＤＳ－ＰＡＧＥにより示される通り、９５％を超えて単分散性であった。本実験は、Ｎ末端またはＣ末端のいずれかに免疫モジュレーターを伴う二重機能性二特異性分子が産生できることを示しており、ＩＬ－２ムテインタンパク質の位置（Ｎ末端またはＣ末端のいずれか）によって発現が大きく変化することはなく、したがって、どちらのフォーマットでも使用できることを示している。
実施例１６
二特異性のＭＡｄＣＡＭを係留したＩＬ－２ムテイン分子はＭＡｄＣＡＭとＣＤ２５を同時に結合することができる
免疫測定プレートを、ウェル１つ当たりのＰＢＳ ｐＨ７．４ ７５μＬ中に１ｕｇ／ｍＬの濃度の、組換えマウスＭＡｄＣＡＭ－１でコーティングし、４℃で、一晩にわたりインキュベートした。ウェルを、０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０（洗浄緩衝液）を含有するＰＢＳ ｐＨ７．４で、３回にわたり洗浄し、次いで、ウェル１つ当たりのＰＢＳ ｐＨ７．４（ブロッキング緩衝液）中に１％のＢＳＡ ２００μＬにより、室温で、２時間にわたりブロッキングした。洗浄緩衝液による３回にわたる洗浄の後、Ｂ０００１、Ｂ０００２、Ｂ０００３を、１％のＢＳＡおよび０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０を含有するＰＢＳ（アッセイ緩衝液）中に、１ｎＭ、１０ｎＭ、および１００ｎＭへと希釈した。希釈された材料を、マウスＭＡｄＣＡＭ－１でコーティングしたプレートへと、ウェル１つ当たり７５μＬ、室温で、１時間にわたり添加した。洗浄緩衝液による、３回にわたる洗浄の後、ヒトＣＤ２５を、プレートへと、ウェル１つ当たり７５μＬ、アッセイ緩衝液中に１０ｎＭの濃度、室温で、１時間にわたり添加した。洗浄緩衝液による、３回にわたる洗浄の後、アッセイ緩衝液中に０．４ｕｇ／ｍＬへと希釈した、ヤギビオチニル化抗ヒトＣＤ２５ポリクローナル抗体を、プレートへと、ウェル１つ当たり７５μＬ、室温で、１時間にわたり添加した。洗浄緩衝液による、３回にわたる洗浄の後、アッセイ緩衝液中に１：５０００で希釈した、高感度ストレプトアビジンＨＲＰを、プレートへと、ウェル１つ当たり７５μＬ、室温で、１５分間にわたり添加した。洗浄緩衝液による、３回にわたる洗浄、および洗浄緩衝液（Ｔｗｅｅｎ－２０を伴わない）による、１回の洗浄の後、アッセイを、ＴＭＢで発色させ、１ＮのＨＣｌで停止させた。４５０ｎｍにおけるＯＤを測定した。実験は、実施例１５のタンパク質のプレートへの非特異的結合／マウスＭＡｄＣＡＭ－１の非存在下におけるブロッキングに適切な対照のほか、ＣＤ２５を伴わない対照、およびヒトＣＤ２５と、マウスＭＡｄＣＡＭとの間で架橋を形成することができない、単一特異性対照を含めた。
１ｎＭ、１０ｎＭ、および１００ｎＭの濃度で、実施例１５の二特異性分子は、マウスＭＡｄＣＡＭおよびヒトＣＤ２５と、同時に相互作用することが可能であるのに対し、単一特異性対照は、架橋シグナルを創出しないことが見出された。加えて、マウスＭＡｄＣＡＭ－１が、プレート表面上に存在しない場合、いずれの被験濃度の、いずれの化合物の、ＣＤ２５への結合も見られなかったことは、いずれの被験化合物も、プレート表面と、非特異的に相互作用しなかったことを指し示す。これらの結果は、ＥＬＩＳＡのような機能的結合アッセイにおいて、二特異性分子がＭＡｄＣＡＭとＣＤ２５の両方に同時に結合することが可能であることを裏付ける。
実施例１７
溶液中または係留した場合の二特異性ＭＡｄＣＡＭ係留ＩＬ－２ムテインの活性と選択性を実証するＩｎ ｖｉｔｒｏ ｐ－ＳＴＡＴ５アッセイ
９６ウェル高結合プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）のウェルに組換えマウスＭＡｄＣＡＭを一晩にわたりコーティングした。ＰＢＳで２回にわたり洗浄した後、プレートを１０％ＦＢＳ ＲＰＭＩ培地で１時間にわたりブロッキングした。実施例１５の二特異性ＭＡｄＣＡＭ係留ＩＬ－２ムテイン、または非係留ＩＬ－２ムテイン対照（実施例１２で調製したものなど）を１時間にわたり捕捉した。ＰＢＳで２回にわたり洗浄した後、新たに単離されたヒトＰＢＭＣを、溶液中で捕捉されたＩＬ－２ムテインまたは比較用ＩＬ－２ムテインで６０分間刺激した。次いで、細胞をＢＤ Ｃｙｔｏｆｉｘで１０分間固定し、ＢＤ Ｐｅｒｍ ＩＩＩとＢｉｏＬｅｇｅｎｄ ＦＯＸＰ３透過処理用緩衝液で順次透過性にし、ヒト血清でブロッキングし、ホスホ－ＳＴＡＴ５ ＦＩＴＣ（ＣＳＴ）、ＣＤ２５ ＰＥ、ＦＯＸＰ３ ＡＦ６４７、およびＣＤ４ ＰｅｒＣＰ Ｃｙ５．５（ＢＤ）に対する抗体で３０分間染色し、プレートリーダーを備えたＡｔｔｕｎｅ ＮＸＴで取得した。溶液中では、どちらの分子もＴｅｆｆに対してＴｒｅｇに同等の活性と選択性を有する。マウスＭＡｄＣＡＭでコーティングしたプレートは、実施例１５の二特異性分子を捕捉することができ、捕捉された／固定化された二特異性分子は、Ｔｅｆｆに対してＴｒｅｇをなお選択的に活性化することができた。この例は、ＭＡｄＣＡＭ係留ＩＬ－２ムテイン分子が、溶液中や捕捉／固定化された場合でも生物学的活性と選択性を維持できることを裏付ける。
実施例１８
ＩＬ－２ムテインの免疫原性
ＩＬ－２ムテインの配列は、ｗｗｗ「ドット」ｃｂｓ「ドット」ｄｔｕ「ドット」ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ＮｅｔＭＨＣＩＩｐａｎ／に掲載されているＮｅｔＭＨＣＩＩＰａｎ３．２ソフトウェアを用いて解析した。人工ニューラルネットワークを用いて，ＭＨＣクラスＩＩ対立遺伝子に対するペプチドの親和性を決定した。この解析では、ＭＨＣクラスＩＩ分子と直接相互作用する可能性のある９残基のペプチドを結合コアとして認識した。また、結合コアに隣接し、間接的に結合に影響を与える可能性のある残基をマスキング残基として検討した。結合コアとマスキング残基の両方を含むペプチドは，ＭＨＣクラスＩＩ分子との予測ＫＤが５０ｎＭ未満の場合、強力な結合剤としてマークされた。強力な結合剤は、Ｔ細胞の免疫原性を導入する可能性が高い。
ｉｎ ｓｉｌｉｃｏ解析では、北米と欧州で多く見られる合計９つのＭＨＣＩＩ対立遺伝子を含めた。試験したＩＬ－２ムテイン分子のパネルには、Ｌ５３Ｉ、Ｌ５６Ｉ、Ｌ８０Ｉ、またはＬ１１８Ｉの突然変異を持つＩＬ－２ムテインを含めた。ＭＨＣＩＩ対立遺伝子ＤＲＢ１＿１１０１、ＤＲＢ１＿１５０１、ＤＲＢ１＿０７０１、およびＤＲＢ１＿０１０１のみが、評価したいずれの分子ともヒットした。ＤＲＢ＿１５０１のペプチドヒットは、Ｃ１２５Ｓ突然変異のある野生型ＩＬ－２を含め、試験した全てのコンストラクトで同一であった。Ｌ８０Ｉの添加により、ＤＲＢ１－０１０１の１つのＴ細胞エピトープ［ＡＬＮＬＡＰＳＫＮＦＨＬＲＰＲ（配列番号６２６）］が除去され、他の２つのＴ細胞エピトープ［ＥＥＡＬＮＬＡＰＳＫＮＦＨＬＲ（配列番号６２７）およびＥＡＬＮＬＡＰＳＫＮＦＨＬＲＰ（配列番号６２８）］の親和性がわずかに低下した。ＭＨＣＩＩ対立遺伝子ＤＲＢ１－０７０１については、Ｌ８０Ｉは１つのＴ細胞エピトープ［ＥＥＡＬＮＬＡＰＳＫＮＦＨＬＲ（配列番号６２７）］を除去している。したがって、このデータは、Ｌ８０Ｉ突然変異を含むＩＬ－２ムテインは、免疫原性が低いはずであることを裏付け、これは、ｉｎ ｓｉｌｉｃｏ解析から得られた意外な、予想外の結果である。
実施例１９
追加のＩＬ－２ムテインの作出
ＨＥＫ２９３ Ｅｘｐｉ細胞に、ヒトＩｇＧ１ ＦｃドメインのＮ末端において、ヒトＩＬ－２ムテインを融合させた、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６（およびＩＬ－２ムテイン対照；配列番号５０）ポリペプチドの単一ＩＬ－２ムテインをコードする、単一の遺伝子を含有するｐＴＴ５ベクターをトランスフェクトした。５～７日後、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６（およびＩＬ－２ムテイン対照；配列番号５０）を発現する細胞培養物上清を採取し、遠心分離および０．２２μｍの濾過デバイスを介する濾過により清明化させた。配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６（およびＩＬ－２ムテイン対照；配列番号５０）は、ｐｒｏＡ樹脂上で捕捉した。樹脂を、ＰＢＳ ｐＨ７．４で洗浄し、０．２５％の酢酸ｐＨ３．５を使用して、捕捉されたタンパク質を溶出させ、１０分の１容量の１ＭトリスｐＨ８．０を使用して、中和させた。タンパク質を、３０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７へと緩衝液交換し、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ ３．２／３００カラム上のサイズ除外クロマトグラフィーにより解析した。精製材料５μｇについての、４～１２％のビス－トリスゲル上の還元型ＳＤＳ－ＰＡＧＥおよび非還元型ＳＤＳ－ＰＡＧＥによる解析を行った。
ＩＬ－２ムテインの、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６（およびＩＬ－２ムテイン対照；配列番号５０）は、４５ｍｇ／Ｌより多く発現され、精製後に、サイズ除外クロマトグラフィーおよび還元型／非還元型ＳＤＳ－ＰＡＧＥにより示される通り、９５％を超えて単分散性であった。
実施例２０
実施例１９のＩＬ－２ムテインは、ＣＤ２５と結合することができる
免疫測定プレートを、ウェル１つ当たりのＰＢＳ ｐＨ７．４ ７５μＬ中に０．５ｕｇ／ｍＬの濃度の、ＣＤ２５でコーティングし、４℃で、一晩にわたりインキュベートした。ウェルを、０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０（洗浄緩衝液）を含有するＰＢＳ ｐＨ７．４で、３回にわたり洗浄し、次いで、ウェル１つ当たりのＰＢＳ ｐＨ７．４（ブロッキング緩衝液）中に１％のＢＳＡ ２００μＬにより、室温で、２時間にわたりブロッキングした。洗浄緩衝液による３回にわたる洗浄の後、ＩＬ－２ムテインの、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６を、１％のＢＳＡおよび０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０を含有するＰＢＳ（アッセイ緩衝液）中に、２ｎＭが最高濃度となるように、１１～２倍の段階希釈を行った。希釈された材料を、ＣＤ２５でコーティングしたプレートへと、ウェル１つ当たり７５μＬ、室温で、１時間にわたり添加した。洗浄緩衝液による、３回にわたる洗浄の後、アッセイ緩衝液中に０．０５ｕｇ／ｍＬへと希釈した、ヤギビオチニル化抗ＩＬ－２ポリクローナル抗体を、プレートへと、ウェル１つ当たり７５μＬ、室温で、１時間にわたり添加した。洗浄緩衝液による、３回にわたる洗浄の後、アッセイ緩衝液中に１：５０００で希釈した、高感度ストレプトアビジンＨＲＰを、プレートへと、ウェル１つ当たり７５μＬ、室温で、１５分間にわたり添加した。洗浄緩衝液による、３回にわたる洗浄、および洗浄緩衝液（Ｔｗｅｅｎ－２０を伴わない）による、１回の洗浄の後、アッセイを、ＴＭＢで発色させ、１ＮのＨＣｌで停止させた。４５０ｎｍにおけるＯＤを測定した。実験は、分子のプレートへの非特異的結合／ＣＤ２５の非存在下におけるブロッキングに適切な対照を含めた。結果は、２ｎＭ～１．９ｐＭの濃度で、実施例１９のムテインがナノモル以下のＥＣ５０でＣＤ２５と結合できることを示す。加えて、ＣＤ２５が、プレート表面上に存在しない場合、いずれの被験濃度の、いずれの化合物の、検出も見られなかったことは、いずれの被験化合物も、プレート表面と、非特異的に相互作用しなかったことを指し示す。したがって、実施例１９のムテインは、ＣＤ２５と結合することができる。
実施例２１
実施例１９のＩＬ－２ムテインは強力かつ選択的である
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、新たに単離されたヘパリン処理したヒト全血からＦＩＣＯＬＬ－ＰＡＱＵＥ ＰｒｅｍｉｕｍおよびＳｅｐｍａｔｅチューブを用いて調製した。ＰＢＭＣを１０％牛胎児血清ＲＰＭＩ培地で、野生型ＩＬ－２または実施例１９のムテインの存在下で２０分間培養した後、ＢＤ Ｃｙｔｏｆｉｘで１０分間固定した。固定した細胞をＢＤ Ｐｅｒｍ ＩＩＩ、次いでＢｉｏＬｅｇｅｎｄ ＦＯＸＰ３透過処理用緩衝液で順次透過性にした。ヒト血清で１０分間ブロッキングした後、細胞をホスホ－ＳＴＡＴ５ ＦＩＴＣ（ＣＳＴ）、ＣＤ２５ ＰＥ、ＦＯＸＰ３ ＡＦ６４７およびＣＤ４ ＰｅｒＣＰ Ｃｙ５．５（全ＢＤ）の抗体で３０分間染色し、次いでプレートリーダーを備えたＡｔｔｕｎｅ ＮＸＴで取得した。実施例１９のＩＬ－２ムテインはＴｅｆｆに対するＴｒｅｇに強力かつ選択的であることが見出された。Ｌ１１８Ｉ突然変異を含むムテインは、他のムテインと比較して、活性および選択性が増加していることが見出された。
実施例２２
ＩＬ－２ムテインはヒト化マウスにおいてＴｒｅｇを拡大する
ヒトＣＤ３４＋造血幹細胞でヒト化したＮＳＧマウスをＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓから購入した。０日目および７日目に、マウスに１μｇのＩＬ－２ムテイン（配列番号５０）または他のＩＬ－２ムテイン、配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、または配列番号５６を皮下に投与した。７日目に、マウスを安楽死させ、全血および脾臓を採取した。全血を９６ウェルの深底ウェルプレートにアリコート分割し、ＢＤ Ｆｉｘ Ｌｙｓｅを用いて１０分間固定した。７０μｍフィルター（ＢＤ）を用いて脾臓細胞を単離し、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄのＲＢＣ溶解緩衝液を用いて赤血球を溶解した。２％ウシ胎児血清ＰＢＳで洗浄した後、脾臓細胞を近赤外ライブデッド染色（ｎｅａｒ ｉｎｆｒａｒｅｄ ｌｉｖｅ ｄｅａｄ ｓｔａｉｎ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で２０分間標識し、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄの固定緩衝液を用いて２０分間固定した。次いで、全血球と脾臓細胞の両方を、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ ＦＯＸＰ３透過処理用緩衝液を用いて透過性にし、ヒト血清でブロッキングし、ヒトＣＤ８ａ ＦＩＴＣ（ＢＬ）、ヒトＣＤ２５ ＰＥ（ＢＤ）、ヒトＦＯＸＰ３ ＡＦ６４７（ＢＤ）、ＣＤ４ ＰｅｒＣＰ Ｃｙ５．５（ＢＤ）、ヒトＳｉｇｌｅｃ－８ ＰＥ Ｃｙ７（ＢＬ）、ヒトＣＤ３ ＢＶ４２１（ＢＬ）、ヒトＣＤ４５ ＢＶ６０５（ＢＬ）、ヒトＣＤ５６ ＢＶ７８５（ＢＬ）、およびマウスＣＤ４５（ＢＶ７１１）に対する抗体で３０分間染色し、プレートリーダーを備えたＡｔｔｕｎｅ ＮＸＴで取得した。
媒体対照と比較して、ＩＬ－２ムテインの配列番号５４および配列番号５６は、マウスの脾臓および全血においてＴｒｅｇを選択的に誘導した（Ｄｕｎｎの多重比較検定を用いたＡＮＯＶＡにより、ｐ＜０．０００５）。他のＩＬ－２ムテインもＴｒｅｇの頻度を増加させたが、媒体群と比較してこれらの変化は統計的に有意ではなかった。配列番号５４および配列番号５６を投与したマウスでは、ＣＤ５６＋のＮＫ細胞、ＣＤ３＋のＴ細胞、ＣＤ８＋の細胞傷害性Ｔリンパ球、ＣＤ４＋のヘルパーＴ細胞またはＣＤ２５ｌｏ／ＦＯＸＰ３－のＴエフェクターの頻度に有意な変化は見られなかった。これらの結果は、ＩＬ－２ムテインが調節性Ｔ細胞の頻度を増加させることを裏付ける。
実施例２３
二特異性ｍＭＡｄＣＡＭを係留したＩＬ－２ムテイン分子の作出
ＭＥＣＡ８９の重鎖と軽鎖の抗体を用いて、二特異性ＭＡｄＣＡＭ－ＩＬ－２ムテインを産生した。これは、重鎖と軽鎖の両方をコードする２つのプラスミドを等モル比で共トランスフェクトして産生した。第１のプラスミドは、ＭＥＣＡ８９の軽鎖をコードし、第２のプラスミドは、Ｃ末端において、Ｌ１１８Ｉ突然変異を含むヒトＩＬ－２ムテインを融合させた、ＭＥＣＡ８９の、全長ＩｇＧ１重鎖をコードした。３～５日後、二特異性を発現する細胞培養物上清を採取し、遠心分離および０．２２μｍの濾過デバイスを介する濾過により清明化させた。二特異性分子は、ｐｒｏＡ樹脂上で捕捉した。樹脂を、ＰＢＳ ｐＨ７．４で洗浄し、０．２５％の酢酸ｐＨ３．５を使用して、捕捉されたタンパク質を溶出させ、１０分の１容量の１ＭトリスｐＨ８．０を使用して、中和させた。タンパク質を、３０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７へと緩衝液交換し、ＡｄｖａｎｃｅＢｉｏ ＳＥＣカラム上のサイズ除外クロマトグラフィーにより解析した。精製材料１μｇについての、４～１２％のビス－トリスゲル上の還元型ＳＤＳ－ＰＡＧＥおよび非還元型ＳＤＳ－ＰＡＧＥによる解析を行った。
二特異性分子は、１７ｍｇ／Ｌで発現され、精製後に、サイズ除外クロマトグラフィーおよび還元型／非還元型ＳＤＳ－ＰＡＧＥにより示される通り、９５％を超えて単分散性であった。これらの結果は、Ｃ末端に免疫モジュレーターを伴う二重機能性二特異性分子を産生できることを裏付ける。
実施例２４
ＭＡｄＣＡＭ抗体の作出
ヒト抗体ｓｃＦｖファージライブラリーを、反復的な選択ラウンドにわたり、組換えヒトＭＡｄＣＡＭタンパク質、組換えマウスＭＡｄＣＡＭタンパク質、および組換えカニクイザルＭＡｄＣＡＭタンパク質に対してパニングして、前述の３つの種の、ＭＡｄＣＡＭオーソログ全てを認識する抗体クローンをエンリッチした。ｓｃＦｖクローンを、Ｎ末端－ＶＨ－リンカー－ＶＬ－Ｃ末端のフォーマットで構成し、ｐＩＩＩコートタンパク質を介して、Ｍ１３ファージ表面へと融合させた。選択の後、ｓｃＦｖクローンを、ＣＨＯ細胞の細胞表面上で発現される、ヒトＭＡｄＣＡＭ、マウスＭＡｄＣＡＭ、およびカニクイザルＭＡｄＣＡＭへの結合についてＥＬＩＳＡでスクリーニングした。標準的な分子生物学法または遺伝子合成を使用して、３つの種の細胞表面発現型ＭＡｄＣＡＭオーソログ全てに対して交差反応性であることが見出されたクローンを、各分子が、合計４つのポリペプチド鎖（２つの重鎖および２つの軽鎖）内に含まれる、ヒトＩｇＧ１フォーマットへと転換した。２つの軽鎖は、互いと同一とし、２つの重鎖は、互いと同一とした。２つの同一な重鎖（１および２）は、ホモ二量体化し、２つの同一な軽鎖（３および４）は、各重鎖と対合して、無傷ヒトＩｇＧ１を形成する。Ｆｃドメインは、ＦｃγＲとの相互作用を失効化させる、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａ突然変異を含有する。フォーマットは以下のように例示することができる。
鎖１：ｎｔ－ＶＨ１－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３－ｃｔ
鎖２：ｎｔ－ＶＨ１－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３－ｃｔ
鎖３：ｎｔ－ＶＫ１－ＣＫ－ｃｔ
鎖４：ｎｔ－ＶＫ１－ＣＫ－ｃｔ
加えて、標準的な分子生物学的法（ギブソンクローニング法など）や遺伝子合成を使用して、ＭＡｄＣＡＭｓｃＦｖｓを、以下のようにＩＬ－２ムテインがＭＡｄＣＡＭ抗体のＩｇＧ重鎖のｃ末端に位置するような、二特異性フォーマットに変換した。
鎖１：ｎｔ－ＶＨ１－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３－ｃｔ－リンカー－ＩＬ－２ムテイン
鎖２：ｎｔ－ＶＨ１－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３－ｃｔ－リンカー－ＩＬ－２ムテイン
鎖３：ｎｔ－ＶＫ１－ＣＫ－ｃｔ
鎖４：ｎｔ－ＶＫ１－ＣＫ－ｃｔ
ＥＬＩＳＡ法を用いて、抗ＭＡｄＣＡＭｓｃＦｖｓと、捕捉された、あるいはプレートに結合したヒト、カニクイザル、およびマウスのＭＡｄＣＡＭとの結合を解析した。ビオチン化したヒトとカニクイザルのＭＡｄＣＡＭをストレプトアビジンでコーティングしたプレートに捕捉し、マウスＭＡｄＣＡＭ－Ｆｃを免疫測定プレートに直接コーティングした。ブロッキングステップ後、プレートを洗浄し、粗ペリプラズムライセート中のｓｃＦｖをプレート表面に塗布した。ｓｃＦｖの結合は、抗Ｖ５ＨＲＰコンジュゲートを用いて検出した。アッセイはＴＭＢ基質で発色させ、酸で停止させた。４５０ｎｍの吸光度を測定した。ＥＬＩＳＡの各ステップの間に適切な洗浄ステップを適用した。ヒト対カニクイザル、ヒト対マウスの評価を行った。また、表面プラズモン共鳴技術を用いてｓｃＦｖの解析を行った。Ｖ５タグを介してバイオセンサーの表面に捕捉された後、可溶性単量体ヒトＭＡｄＣＡＭを滴定し、結合と解離の両方を測定し、１：１の結合モデルにフィットさせることで、オンおよびオフ速度を導き出すことができた。
測定された結果は、試験したクローンの大部分はヒトＭＡｄＣＡＭとカニクイザルＭＡｄＣＡＭとの結合交差反応性を持ち、少数のパネルはさらにマウスＭＡｄＣＡＭとの交差反応性を持つことを示す。バイオセンサーの実験は、クローンはヒトＭＡｄＣＡＭに対して、１０３ １／Ｍｓから１０７ １／Ｍｓの範囲のｋａ値と、１０－１から１０－４ １／ｓの範囲のｋｄ値で、さまざまな結合オン／オフ速度を示すことを裏付けた。あるクローンはオフ速度が２×１０ｅ２ １／ｓよりも遅い。このように、ＭａｄＣＡＭ抗体が作出され、二特異性フォーマットで使用することができる。
実施例２５
実施例１９の二特異性ヒトＭＡｄＣＡＭ係留ＩＬ－２ムテインの作出
２つのプラスミドの各々を、等モル比で共トランスフェクトした。それぞれの場合、第１のプラスミドはＨｕ．ＭＡｄＣＡＭの軽鎖をコードし、第２のプラスミドは、Ｃ末端において、本明細書で提供されるＭＡｄＣＡＭ－ＩＬ－２ムテイン二特異性化合物の表に例示されているように、Ｌ１１８Ｉ突然変異を含むヒトＩＬ－２ムテインを融合させた、Ｈｕ．ＭＡｄＣＡＭの全長ＩｇＧ１重鎖をコードした。３～５日後、Ｈｕ．ＭＡｄＣＡＭ－ＩＬ－２ムテイン二特異性分子を発現する細胞培養物上清を採取し、遠心分離および０．２２μｍの濾過デバイスを介する濾過により清明化させた。Ｈｕ．ＭＡｄＣＡＭ－ＩＬ－２ムテイン二特異性分子は、ｐｒｏＡ樹脂上で捕捉した。樹脂を、ＰＢＳ ｐＨ７．４で洗浄し、０．２５％の酢酸ｐＨ３．５を使用して、捕捉されたタンパク質を溶出させ、１０分の１容量の１ＭトリスｐＨ８．０を使用して、中和させた。タンパク質を、３０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７へと緩衝液交換し、ＡｄｖａｎｃｅＢｉｏ ＳＥＣカラム上のサイズ除外クロマトグラフィーにより解析した。精製材料１ｕｇについての、４～１２％のビス－トリスゲル上の還元型ＳＤＳ－ＰＡＧＥおよび非還元型ＳＤＳ－ＰＡＧＥによる解析を行った。Ｈｕ．ＭＡｄＣＡＭ－ＩＬ－２ムテイン二特異性分子は、１０ｍｇ／Ｌより多く発現され、精製後に、サイズ除外クロマトグラフィーおよび還元型／非還元型ＳＤＳ－ＰＡＧＥにより示される通り、９５％を超えて単分散性であった。これらの結果は、Ｃ末端に免疫モジュレーターを伴う完全なヒト型二重機能性二特異性分子を産生できることを裏付ける。
実施例２６
ＩＬ－２のムテインによって誘導されるシグナル伝達の耐久性
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、新たに単離されたヘパリン処理したヒト全血からＦＩＣＯＬＬ－ＰＡＱＵＥ ＰｒｅｍｉｕｍおよびＳｅｐｍａｔｅチューブを用いて調製した。ＰＢＭＣを１０％牛胎児血清ＲＰＭＩ培地で、ＩＬ－２ムテインの存在下で６０分間培養した。次いで、細胞を３回洗浄し、さらに３時間培養した。次いで、細胞をＢＤ Ｃｙｔｏｆｉｘで１０分間固定した。固定した細胞をＢＤ Ｐｅｒｍ ＩＩＩ、次にＢｉｏＬｅｇｅｎｄ ＦＯＸＰ３透過処理用緩衝液で順次透過性にした。ヒト血清で１０分間ブロッキングした後、細胞をホスホ－ＳＴＡＴ５ ＦＩＴＣ、ＣＤ２５ ＰＥ、ＦＯＸＰ３ ＡＦ６４７およびＣＤ４ ＰｅｒＣＰ Ｃｙ５．５の抗体で３０分間染色し、次いでプレートリーダーを備えたＡｔｔｕｎｅ ＮＸＴで取得した。実施例１９の４つのＩＬ－２ムテインは全て、対照と比較して、Ｔｒｅｇでは耐久性のあるシグナル伝達を誘導したが、Ｔｅｆｆでは誘導しなかった。配列番号５６のＩＬ－２ムテインは、配列番号５５、配列番号５４または配列番号５３のＩＬ－２ムテインよりも優れている。これらの結果は、ＩＬ－２がＴｒｅｇにおける持続的かつ選択的なシグナル伝達を誘導することができることを裏付けており、このことはｉｎ ｖｉｖｏでより大きなＴｒｅｇの拡大をもたらし、Ｔｒｅｇの拡大を達成するためのより少ない頻度の投与を可能にするはずである。
実施例２７
溶液中または係留した場合の二特異性Ｈｕ．ＭＡｄＣＡＭ係留ＩＬ－２ムテインの活性と選択性を実証するＩｎ ｖｉｔｒｏ ｐ－ＳＴＡＴ５アッセイ
９６ウェル高結合プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）のウェルに組換えヒトＭＡｄＣＡＭを一晩にわたりコーティングした。ＰＢＳで２回にわたり洗浄した後、プレートを１０％ＦＢＳ ＲＰＭＩ培地で１時間にわたりブロッキングした。ＭＡｄＣＡＭ係留ＩＬ－２ムテイン二特異性分子または非係留ＩＬ－２ムテイン対照を、１時間にわたり捕捉した。ＰＢＳで２回にわたり洗浄した後、新たに単離されたヒトＰＢＭＣを、溶液中で捕捉されたＩＬ－２ムテインまたは比較用ＩＬ－２ムテインで６０分間刺激した。次いで、細胞をＢＤ Ｃｙｔｏｆｉｘで１０分間固定し、ＢＤ Ｐｅｒｍ ＩＩＩとＢｉｏＬｅｇｅｎｄ ＦＯＸＰ３透過処理用緩衝液で順次透過性にし、ヒト血清でブロッキングし、ホスホ－ＳＴＡＴ５ ＦＩＴＣ（ＣＳＴ）、ＣＤ２５ ＰＥ、ＦＯＸＰ３ ＡＦ６４７、およびＣＤ４ ＰｅｒＣＰ Ｃｙ５．５（ＢＤ）に対する抗体で３０分間染色し、プレートリーダーを備えたＡｔｔｕｎｅ ＮＸＴで取得した。
溶液中では、ヒトＭＡｄＣＡＭに係留されたＩＬ－２ムテイン二特異性分子および対照は、Ｔｒｅｇ対Ｔｅｆｆに対して同等の活性および選択性を有する。ＭＡｄＣＡＭでコーティングされたプレートは、二特異性分子を捕捉することができ、捕捉された／固定化された二特異性分子は、Ｔｅｆｆと比較してＴｒｅｇを選択的に活性化することができた。この実施例は、ヒトＭＡｄＣＡＭを標的化するＩＬ－２ムテイン二特異性分子が、溶液中でまたは捕捉された／固定化された場合に、生物学的活性および選択性を保持しうることを示す。
実施例２８
ＩＬ－２ムテインはヒトＴｒｅｇのｐＳＴＡＴ５を誘導する。
６人の健康なドナーのヘパリン処理した全血から精製したＰＢＭＣを、Ｘ３がＩでＸ１、Ｘ２、Ｘ４がＬである配列番号５９の配列を含むＩＬ－２ムテインタンパク質、またはＸ４がＩでＸ１、Ｘ２、Ｘ３がＬである配列番号５９の配列を含むＩＬ－２ムテインタンパク質の連続希釈液で、３７℃で３０分間にわたり処理した。細胞を固定し、洗浄し、透過性にし、洗浄した。表面マーカーと細胞内／核内マーカー（ｐＳＴＡＴ５およびＦＯＸＰ３）の両方を検出する抗体で細胞を染色した。データはＡｔｔｕｎｅ ＮＸＴサイトメータで収集した。Ｔｒｅｇは、単核、一重項、ＣＤ３ｐｏｓ、ＣＤ４ｐｏｓ、ＣＤ２５ｈｉ、ＦｏｘＰ３ｐｏｓとしてゲートされた。リン酸化されたＳＴＡＴ５を発現するゲートされたＴｒｅｇの割合を測定した。ｐＳＴＡＴ５の用量反応にベストフィット曲線を当てはめ、ＥＣ５０値を決定した。６人のドナー全員の平均ＥＣ５０値を、Ｘ３がＩであり、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ４がＬである配列番号５９のＩＬ－２について（３７．２６±７．３０；ｎ＝１６）、およびＸ４がＩであり、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３がＬである配列番号５９のＩＬ－２について（２３．１１±５．３５；ｎ＝１５）と決定した。このデータは、ＩＬ－２のムテインがヒトＴｒｅｇにおいてｐＳＴＡＴ５を誘導できることを裏付ける。Ｘ４がＩであり、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３がＬである配列番号５９の配列を含むＩＬ－２は、配列番号３９を含むＩＬ－２の配列よりも強力であるが、両者とも細胞の複数の集団にわたって活性である。
実施例２９
ＩＬ－２ムテインはｉｎ ｖｉｔｒｏでサルＰＢＭＣのｐＳＴＡＴ５を誘導する
３匹の健康なサルのヘパリン処理した全血から精製したＰＢＭＣを、Ｘ３がＩでＸ１、Ｘ２、Ｘ４がＬである配列番号５９の配列を含むＩＬ－２ムテインタンパク質、またはＸ４がＩでＸ１、Ｘ２、Ｘ３がＬである配列番号５９の配列を含むＩＬ－２ムテインタンパク質の連続希釈液で、３７℃で６０分間にわたり処理した。ＩＬ－２ムテイン処理の最後の３０分間に、蛍光標識抗ＣＤ２５および抗ＣＤ４を添加した。細胞を固定し、洗浄し、透過性にし、洗浄した。表面マーカーと細胞内／核内マーカー（ｐＳＴＡＴ５およびＦＯＸＰ３）の両方を検出する残りの抗体で細胞を染色した。データはＡｔｔｕｎｅ ＮＸＴサイトメータで収集した。Ｔｒｅｇは、単核、一重項、ＣＤ４ｐｏｓ、ＣＤ２５ｈｉ、ＦｏｘＰ３ｐｏｓとしてゲートされた。リン酸化されたＳＴＡＴ５を発現するゲートされたＴｒｅｇの割合を測定した。ＩＬ－２のムテインは、サルにおいてｐＳＴＡＴ５を誘導することが見出された。
実施例３０
ｉｎ ｖｉｖｏでＩＬ－２ムテインはＴｒｅｇ細胞の拡大およびＴｒｅｇの増殖を誘導する。
Ｘ３がＩでＸ１、Ｘ２、Ｘ４がＬである配列番号５９のＩＬ－２ムテイン、またはＸ４がＩでＸ１、Ｘ２、Ｘ３がＬである配列番号５９の配列を投与する前（２回のタイムポイント／カニクイザル、カニクイザル５匹）、およびＸ３がＩでＸ１、Ｘ２、Ｘ４がＬである配列番号５９（５回のタイムポイント／カニクイザル、カニクイザル２匹）、またはＸ４がＩでＸ１、Ｘ２、Ｘ３がＬである配列番号５９（５回のタイムポイント／カニクイザル、カニクイザル３匹）を投与した後、サル（カニクイザル）からＫ２ＥＤＴＡチューブで静脈全血を採取した。サンプルを２つに分け、２つのＦＡＣＳパネルを別々に染色した。一つは「Ｔｒｅｇパネル」、もう一つは一般的な免疫表現型検査パネルであった。ＲＢＣを溶解し、細胞を固定および透過処理後、表面および細胞内のマーカーを染色した。ＦＡＣＳ解析については、ＡＤＶＩＡにより総細胞数／μｌを測定した。次いで、所与の亜集団の細胞数／μｌを、総数／ｕｌと総数に対する％で算出した。各々のサルについて、投与前の２回の出血の所与の細胞タイプの平均数／μｌを平均し、投与後の出血を正規化するために使用して、「投与前からの倍数変化」を求めた。血清中のサイトカインおよびケモカインを分析するため、Ｋ２ＥＤＴＡ全血の血漿を試験終了まで凍結した。ケモカインおよびサイトカインの量は、標準対照の連続希釈液を用いたマルチプレックスＭＳＤアッセイにより定量化した。ＭＣＰ－１とＩＰ－１０の平均値と範囲は、投与前の出血で決定した。両ムテインは、サルにおいてＴｒｅｇを拡大し、Ｔｒｅｇの増殖を誘導することが見出された。これらの結果は、ＩＬ－２ムテインが、ヒトと同様のｉｎ ｖｉｖｏ動物モデルにおいて機能することを裏付ける。また、サル（非ヒト霊長類）において、いずれの分子もＴｃｏｎｖ細胞、ＣＤ４細胞（ｎａｉｖｅ Ｔ）、ＣＤ８細胞（細胞傷害性Ｔ）、ＮＫ細胞を有意に拡大しないことが見出された。また、いずれの分子も血清ケモカインを有意に誘導しないことも見出された。このデータは、ＩＬ－２ムテインが、他の経路の不要な拡大や活性化を伴うことなく、Ｔｒｅｇ細胞を拡大し、Ｔｒｅｇ細胞の増殖を誘導できることを裏付ける。このように、ＩＬ－２ムテインは、Ｔｒｅｇの拡大と増殖に驚くほど強力で効果的、かつ選択的である。
要約すると、本明細書に提供された実施形態および実施例は、特定の組織に標的化できるＩＬ－２ムテインが意図した通りに機能し、本明細書に記載された疾患および状態を治療するために使用できることを裏付けている。さらに、本明細書に提供される実施例は、ＭＡｄＣＡＭ抗体およびＩＬ－２ムテインを含む二機能性分子が、ＴｅｆｆよりもＴｒｅｇを選択的かつ強力に活性化するように機能することができるという驚くべき予想外の結果を示しており、このことは、本明細書に記載された状態を治療または改善するために分子を使用することができることを裏付けている。また、本実施例は、ＩＬ－２ムテインが、本明細書で提供されているように単独で（またはＦｃタンパク質に連結して）使用された場合に、ＴｒｅｇをＴｅｆｆｓよりも選択的かつ強力に活性化するように機能しうることを裏付けている。
実施例３１
抗体はＭＡｄＣＡＭに結合する。
本明細書で提供される特定の抗体は、ＭＡｄＣＡＭに結合する能力について試験された。以下の表は、様々な標的に対する結合情報およびその他の活性を提供する。ｓｃＦｖまたはＩｇＧフォーマットの抗体について、ＭａｄＣＡＭを発現するヒトまたはマウスの細胞に結合する能力、およびカニクイザルＭａｄＣＡＭタンパク質に結合する能力について試験した。結果は、有意な結合がない場合は「－」、異なるレベルで結合する場合は「＋」、「＋＋」、「＋＋＋」のように表示される。
Figure 2022544990000078
Figure 2022544990000079
Figure 2022544990000080
Figure 2022544990000081
実施例３２
ＭＡｄＣＡＭ抗体とＩＬ－２ムテインを含む二特異性分子は、マウスに皮下投与すると腸内の高内皮細静脈（ＨＥＶ）に特異的に局在する。
マウスに係留なしのＩＬ－２ムテインまたはＭＡｄＣＡＭ係留ありのＩＬ－２ムテインを皮下投与した。４日後に腸組織を採取し、ヒトＩｇＧ１（係留していない分子と係留した分子の被験物質Ｉｇ骨格を検出するため）、またはＭＥＣＡ３６７（ＭＡｄＣＡＭを発現するＨＥＶを検出するため）を染色した。ＭＡｄＣＡＭ係留ＩＬ－２ムテイン分子のみがＨＥＶに特異的に局在するのに対し、係留していないＩＬ－２ムテインは同じ組織では検出できないか、または有意な局在を示さないことが見出された。
実施例３３
二特異性ＭａｄＣＡＭ－ＩＬ２ムテインは、ＭＡＤＣＡＭ：α４／β７の相互作用を遮断しないため、細胞輸送に影響を与えない。
ＭＡｄＣＡＭ係留ＩＬ－２ムテイン分子が、α４／β７インテグリンのＭＡｄＣＡＭへの結合を遮断するかどうかを試験した。アッセイは遮断しないことを裏付けた。また、二特異性分子は、細胞輸送に影響を与えないことも見出された。結合活性は、ＥＬＩＳＡまたは細胞相互作用アッセイによって行われた。
実施例３４
ＭＡｄＣＡＭ抗体に係留されたＩＬ－２ムテインは機能的である。
ＣＨＯ細胞をヒトまたはマウスのＭＡｄＣＡＭでトランスフェクトし、ＭＡｄＣＡＭを発現するＣＨＯ細胞を作出し、次いでそれをプレート上で培養した。被験物質を加えて結合させた後、付着していない被験物質を洗い流した。ヒトＰＢＭＣを加え、３０分後にＦＡＣＳでＳＴＡＴ５のリン酸化を評価したところ、ＴｒｅｇはｐＳＴＡＴ５＋となり、ＩＬ－２ムテインによる活性化が確認され、Ｔｃｏｎｖ細胞は、細胞表面の二特異性の局在濃度が高いと思われるにもかかわらず、不活性化なままであった。
実施例３５
ＭＡｄＣＡＭ－係留－ＩＬ２ムテインは、低用量ＩＬ－２と同様に、ヒト化マウスのＴＮＢＳ誘導大腸炎の体重減少を改善する。
マウスをＴＮＢＳ Ｄ－７で感作し、ＴＮＢＳ Ｄ０で刺激した。Ｄ－７からＤ３まで、低用量のＩＬ－２（陽性対照）または媒体（陰性対照）をマウスに毎日投与した。マウスにＭＡｄＣＡＭ－係留－ＩＬ２ムテインをＤ－７とＤ０に投与した。ＭＡｄＣＡＭ－係留－ＩＬ２ムテインによる体重減少の減衰は、ＬＤ ＩＬ－２による体重減少の減衰と同様であることが見出された。したがって、これらの結果は、これまでの実施例で示したようにＨＥＶに特異的に局在するものであっても、係留の手法が機能的であることを裏付ける。
実施例２２～２４に記載のＭＡｄＣＡＭ－係留－ＩＬ２ムテインのフォーマットは、ＭＡｄＣＡＭ構成要素が、ＩＬ－２ムテイン部分を重鎖のＣ末端において融合させた、ＩｇＧであった。しかし、ＩＬ－２ムテインは、本明細書に記載のように、配列番号５６のようなＮ末端にＦｃ部分を有していた。二特異性のフォーマットは、以下のフォーマットで表すことができる多鎖ポリペプチドである：重鎖：ＮＴ－［ＶＨ＿ＭＡｄＣＡＭ］－［ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３］－［Ｌｉｎｋｅｒ＿Ｂ］－［ＩＬ－２＿Ｍｕｔｅｉｎ］－ＣＴ、
［式中、
ＮＴは、Ｎ末端であり、
［ＶＨ＿ＭＡｄＣＡＭ］は、本明細書で提供されるいずれかのＶＨドメイン、またはＭＡｄＣＡＭ抗体の表１もしくはＭＡｄＣＡＭ抗体の表２に記載のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３を含むＶＨドメインであり；
［ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３］は、ヒトＩｇＧ１定常重鎖１ドメイン（ＣＨ１）、定常重鎖２ドメイン（ＣＨ２）、および定常重鎖３（ＣＨ３）ドメインであり、以下の配列：ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧ（配列番号４４）
を有していてもよく；
［Ｌｉｎｋｅｒ＿Ｂ］は、ＧＧＧＧＳ（配列番号２３）であり、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号３０）であってもよく；
［ＩＬ－２＿Ｍｕｔｅｉｎ］は、配列番号５６を含むがこれに限定されない、本明細書で提供されるいずれかのＩＬ２ムテインであり；
ＣＴは、Ｃ末端である］。
また、この分子は、軽鎖のフォーマットを有していてもよい：
軽鎖：ＮＴ－［ＶＫ＿ＭＡｄＣＡＭ］－［ＣＫ］－ＣＴ、
［式中、
ＮＴは、Ｎ末端であり；
［ＶＫ＿ＭＡｄＣＡＭ］は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１またはＭＡｄＣＡＭ抗体の表２に示される通りであり；
［ＣＫ］は、ヒト定常カッパドメインであり、以下の配列：
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号４５）
を有していてもよく；
ＣＴは、Ｃ末端である］。
実施例３６
様々なＭＡｄＣＡＭ抗体を、異なる種のＭＡｄＣＡＭに結合する能力について試験した。
表１の抗体６、抗体５９、抗体６３のＣＤＲを含む抗体である。抗体は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１に示されているようにｓｃＦＶフォーマットで試験されたが、ＭＡｄＣＡＭ抗体は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２に示されるように従来のＶＨ／ＶＬフォーマットでもありうる。抗体は、ヒトおよびカニクイザルＭＡｄＣＡＭの両方に結合することができ、抗体クローン６を除いて、マウスＭＡｄＣＡＭにも結合することができることが見出された。抗体は、ナノモルからマイクロモルの範囲のＫＤでＭＡｄＣＡＭと結合することができる。
実施例３７
抗体のエピトープマッピング
ヒトまたはマウスのＭＡｄＣＡＭ－ａｖｉｔａｇ／ポリヒスチジンタグを０．５ｕｇ／ｍＬで１８０秒間ペンタ－ｈｉｓバイオセンサーに固定化した。ベースラインステップはアッセイ緩衝液（１×ＰＢＳ中に０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０を加えた１％のＢＳＡ）で１２０秒間行った。会合の第１のステップは、表１の抗体６、抗体５９、抗体６３の抗体ＣＤＲと、ＰＦ－００５４７６５９（インテグリン遮断抗体、（Ｐｆｉｚｅｒ；Ｐｕｌｌｅｎら、ＢｒＪＰｈａｒｍａｃｏｌ．、２００９年５月、１５７（２）：２８１～９３）、ＭＥＣＡ８９（非インテグリンブロッカー）、ＭＥＣＡ３６７（インテグリンブロッカー）由来のその他のＭＡｄＣＡＭ抗体を含む４０ｎＭの分子をウェルに入れて行った。
表１の抗体５９は、抗体６とヒトＭＡｄＣＡＭの結合で競合することが見出された。表１の抗体６３は、表１の抗体５９または抗体６とヒトＭＡｄＣＡＭの結合について競合しなかった。抗体６３はＰｆｉｚｅｒのベンチマーク抗体と競合し、他の抗体はＰｆｉｚｅｒのベンチマーク抗体と競合しなかった。また、結果は、マウスのＭＡｄＣＡＭの結合では、抗体５９は抗体６３と競合しなかったことを示した。抗体６３は、ＭＥＣＡ３６７と競合したが、ＭＥＣＡ８９とは競合しなかった。抗体５９は、ＭＥＣＡ８９と競合したが、ＭＥＣＡ３６７とは競合しなかった。このデータは、抗体が異なるエピトープに結合することを示している。
実施例３８
ＰＤ－１アゴニストとして機能することができるＡｂの同定
ＰＤ－１構成要素抗体を３つのフォーマットでスクリーニングした。主なフォーマットはＰＤ－１ ＭＬ－Ｎであり、それにより、ＰＤ－１アゴニスト構成要素は、重鎖のＣ末端に融合した抗ＭＡｄＣＡＭ部分プレースホルダを有するＰＤ－１ ＩｇＧであった。ＭＡｄＣＡＭ ｓｃＦｖは、ラット抗マウスＭＡｄＣＡＭ抗体であるＭＥＣＡ８９と呼ばれる「プレースホルダ」ｓｃＦｖであった。しかしながら、プレースホルダＡｂは、本明細書に記載される別のＭＡｄＣＡＭ抗体で置換することができた。以下の表は、本明細書に記載される異なる抗体クローンに関するデータを提供する。
Figure 2022544990000082
Figure 2022544990000083
実施例３９
ＭＡｄＣＡＭ－ＰＤ１アゴニストの二特異性分子は自己会合しない。
金ナノ粒子を抗ヒトＩｇＧ Ｆｃとポリクローナルヤギ非特異抗体の混合物でコーティングした。次に、目的の抗体を粒子と共に２時間インキュベートし、全波長における吸光度を測定した。自己相互作用対照抗体は、波長シフトを示した。対照緩衝液（１×ＰＢＳ）または対照抗体と同様に、ＭＡｄＣＡＭ－ＰＤ１アゴニスト二特異性抗体は、波長シフトを示さなかった。このデータは、二特異性抗体が自己会合しないことを示す。
実施例４５
ＭＡｄＣＡＭ－ＰＤ１アゴニストの二特異性分子は、ヒトタンパク質アレイ（Ｒｅｔｒｏｇｅｎｉｘ）によるＭＡｄＣＡＭおよびＰＤ－１への結合に特異的である。
ＺｓＧｒｅｅｎ１と完全長のヒト細胞膜タンパク質、または細胞表面に係留したヒト分泌タンパク質の両方をコードする５５２８の発現ベクターを、１６のマイクロアレイスライドにわたって２連に配列した。逆トランスフェクション／発現には、ヒトＨＥＫ２９３細胞を用いた。細胞を固定した後、各スライドに試験抗体を加えた。結合の検出は、プレスクリーンで使用したものと同じ蛍光２次抗体を用いて行った。蛍光画像はＩｍａｇｅＱｕａｎｔソフトウェアを用いて解析し、定量化した（トランスフェクションの場合）。タンパク質の「ヒット」は、バックグラウンドレベルと比較してシグナルが上昇した重複スポットと定義される。これは、ＩｍａｇｅＱｕａｎｔソフトウェア上でグリッド化された画像を用いた目視検査によって達成される。ヒットは、重複したスポットの強度に応じて、「強い、中程度、弱い、非常に弱い」に分類された。ＭＡｄＣＡＭ抗体５９およびＰＤ－１抗体ＰＤ１ＡＢ３０を含む試験分子は、その２つの主要標的のみ－ＰＤＣＤ１（中／強）およびＭＡＤＣＡＭ１（強）のみと特異的に相互作用することが見出された。他の有意な相互作用は検出されなかった。これらの結果は、二特異性分子がそのそれぞれの標的に結合することができることを示す。
実施例４６
ＭＡｄＣＡＭ－ＰＤ１アゴニストの二特異性分子は、ｘＧＶＨＤマウスモデルにおいて生存を延長する。
ＮＯＤ酸ガンマ（ＮＳＧ）マウスをヒトＰＢＭＣで移植し、ＭＡｄＣＡＭ－ＰＤ１アゴニスト二重特異性抗体の媒体で週１回処理した。体重減少が開始体重の２０％を超えた場合、マウスを安楽死させた。ＭＡｄＣＡＭ－ＰＤ１二重特異性抗体による処理は、媒体と比較して生存の延長をもたらした。
実施例４７
ＭＡｄＣＡＭ－ＰＤ１アゴニストの二特異性分子はＰＤ－１アゴニスト活性を示す。
親またはＭＡｄＣＡＭ（ヒトまたはマウス）を発現するＣＨＯ細胞を、被験物質と共に予めインキュベートし、次に洗浄した。ＰＤ－１レポーターであるＪｕｒｋａｔ細胞を添加し、ＳＨＰ－２動員を２時間後に評価した。ＰＤ－１アゴニストであるＣＣ－９０００６（Ｃｅｌｇｅｎｅ／Ａｎａｐｔｙｓ）と同様に、ＭＡｄＣＡＭ－ＰＤ１アゴニストの二特異性分子は、ＰＤ－１抗体クローンＰＤ１ＡＢ４またはＰＤ１ＡＢ３０およびＭＡｄＣＡＭ抗体クローン７５からなり、親ＣＨＯ細胞ではなく、ヒトおよびマウスＣＨＯ細胞において増加した化学黄体形成を示し、ＴＴ２ＩｇＧと比較した。
実施例４８
ＭＡｄＣＡＭ－ＰＤ１アゴニストの二特異性分子は、異種移植片対宿主病マウス由来の結腸組織におけるＴＮＦ－αレベルを低減する。
免疫不全のＮＳＧマウスに、治療の２４日前にヒトＰＢＭＣを移植した。マウスをＭＡＤＣＡＭ－ＰＤ１アゴニスト二特異性分子（０．３ｍｇ／ｋｇ）で１週間処理し、屠殺した。結腸組織をホモジナイズし、結腸ライセート中のＴＮＦ－α濃度をＥＬＩＳＡで測定した。組織のアリコート分割サイズの違いを考慮して、値を全タンパク質濃度で正規化した。媒体および係留されていないＰＤ－１抗体は、結腸溶解物中のＴＮＦ－アルファレベルがそれぞれ０．６７９±０．１８６および０．８４３±０．１７２（ｐｇ／ｍｇ）±Ｓ．Ｅ．Ｍであったのに対して、ＰＤ－１抗体ＰＤ１ＡＢ４に連結したＭＡｄＣＡＭ抗体７５からなる二特異性ＭＡｄＣＡＭ－ＰＤ１抗体は、より少ない（０．３８６±０．１５７（ｐｇ／ｍｇ）±Ｓ．Ｅ．Ｍ）ＴＮＦ－アルファのレベルを認めた。したがって、二特異性を有し、ＭＡｄＣＡＭを発現する結腸を標的化することは、部位特異的にＴＮＦ－アルファの産生を低減することができる。標的組織におけるこの炎症誘発性サイトカインのレベルの低減は、ＭＡＤＣＡＭ－ＰＤ－１の治療効果および誘導免疫寛容を意味する。
実施例４９
二特異性ＰＮＤ９００およびＰＮＤ９０１は、ヒトＰＤ－１上の異なるエピトープに結合する。ＰＮＤ９００は、ＭＡｄＣＡＭ ｓｃＦＶ（ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１のクローン５９）を含むＰＤ１ＡＢ４のＰＤ－１抗体が、ＰＤ－１ ＩｇＧ重鎖のｃ末端で融合した二特異性分子である。ＰＮＤ９０１は、ＰＤ－１抗体が、ＰＤ－１ ＩｇＧ重鎖のｃ末端で融合したＭＡｄＣＡＭ ｓｃＦＶ（ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１のクローン５９）を含むＰＤ１ＡＢ３０である二特異性である。これらの分子を試験して、これらがヒトＰＤ－１上の異なるエピトープに結合するかどうかを決定した。抗体は、別のものと競合しないことが見出され、これらが異なるエピトープに結合することを示す。簡単に説明すると、抗ペンタ－ＨＩＳバイオセンサーをアッセイ緩衝液中で１０分間平衡化した。ＨＩＳタグを有するヒトまたはマウスＰＤ－１をアッセイ緩衝液中で０．１２５μｇ／ｍＬに希釈した。被験物質をアッセイ緩衝液中で５０ｎＭに希釈した。ＰＤ－１を１２０秒間チップ上に捕捉した。第１の抗体を捕捉されたＰＤ－１上に３００秒間装填し、続いて第２の抗体と３００秒間会合させた。
実施例５０
二特異性ＰＮＤ９００およびＰＮＤ９０１は、ヒトＰＤ－１上の異なるエピトープに結合し、優れた特性を有し、自己会合しない。
金ナノ粒子を、抗ヒトヤギＩｇＧ Ｆｃおよびポリクローナルヤギ非特異抗体の混合物でコーティングした。次に、目的の抗体を粒子と共に２時間インキュベートし、全ての波長における吸光度を測定した。自己相互作用するクローンは、より高い波長シフトを示す。対照抗体と比較して、ＰＮＤ９００およびＰＮＤ９０１の波長シフトは認められなかった。金粒子のいずれかのバッチによる波長のシフトは、緩衝液対照と同様である。
実施例５１
二特異性ＰＮＤ９０１は、非特異的タンパク質に有意に結合しなかった。
簡単に説明すると、ＭＡｄＣＡＭに結合する抗体およびＰＤ－１に結合する抗体を含む二特異性抗体は、５５２８個のヒト細胞膜関連タンパク質を発現するように一過性にトランスフェクトされたＨＥＫ細胞上のオフターゲット結合についてスクリーニングされた。オフターゲット結合は観察されなかった（データは、示さない）。
実施例５２
ＰＮＤ９００およびＰＮＤ９０１は、製造に適した特性を有する。
抗体のｐＩを決定した。簡単に説明すると、試料は、メチルセルロース、４Ｍ尿素、３～１０ファーマライト（４％）、５ｍＭアルギニン、およびｐＩマーカーのマトリックスに希釈された。混合物をｉＣＥ３ ＩＥＦ Ａｎａｌｙｚｅｒ（ＰｒｏｔｅｉｎＳｉｍｐｌｅ）で測定し、１，５００Ｖで予め集束させた後、３，０００Ｖで集束させた。各ピークの等電点をｐＩマーカーに基づいて計算した。いくつかの電荷不均一性が観察されたが、それはｐＩ８をはるかに上回っていた。８を上回るｐＩは、中性ｐＨでの製造プロセスおよび製剤に望ましい。したがって、抗体は、生理学的ｐＨでの製造および製剤に対して良好な特性を有する。
実施例５３
ＰＮＤ９００およびＰＮＤ９０１は安定である。
両方の組成物の試料は、２５～９５℃の温度勾配１℃／分で分析するために、ナノＤＳＣシステム（ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）に提出された。ブランク緩衝液のサーモグラムは、ナノＤＳＣソフトウェアを用いた分析に先立って減算された。いずれの分子も６５℃を上回るＴｍを有することが見出され、分子が安定であり、長期間貯蔵できることを示す。
実施例５４
ＰＤ１ＡＢ３０またはＰＤ１ＡＢ４を含む二特異性分子は、細胞表面ＰＤ－１に結合する。
抗ＭＡｄＣＡＭ抗体に連結されたＰＤ１ＡＢ３０またはＰＤ１ＡＢ４を含む二特異性分子は、ＰＤ－１を発現するＪｕｒｋａｔ細胞に結合することができることが見出された。ヒトＰＤ－１またはヒトＰＢＭＣを発現するＪｕｒｋａｔ細胞を、抗ＣＤ３＋抗ＣＤ２８＋ＩＬ－２で２日間刺激し、上記で言及した被験物質および濃度で染色し、フルオロフォアをコンジュゲートした抗ヒトＩｇＧ二次抗体で検出した。データはフローサイトメトリーにより回収された。＋ｃｔｌは、直接的にコンジュゲートした抗ＰＤ－１抗体によるＰＤ－１染色を示す。抗体は、ＰＢＭＣ試料由来の活性化ＣＤ８＋および活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞に加えて、ヒトＰＤ－１を発現するＪｕｒｋａｔ細胞に結合することが見出された。
実施例５５
抗ＭＡｄＣＡＭ抗体（クローン５９ ｓｃＦＶフォーマット）およびＰＤ－１抗体（ＰＤ１ＡＢ３０またはＰＤ１ＡＢ４のいずれか）を含む二特異性分子は、係留されたＰＤ－１アゴニスト活性を有する。
プレートを抗ヒトＩｇＧでコーティングし、遮断し、ＰＤ１ＡＢ３０またはＰＤ１ＡＢ４のいずれかを種々の濃度で１時間添加した。プレートを洗浄し、ＰＤ－１レポーターであるＪｕｒｋａｔ細胞を添加した。２時間後にＳＨＰ－２動員を評価し、ＰＤ－１アゴニズムを決定した。両分子は用量反応性アゴニストのリードアウトを示した。ＰＤ－１のアゴニズムはまた、分子をヒトおよびマウスＭＡｄＣＡＭを発現するＣＨＯ細胞に係留した場合に検証され、一方、ＭＡｄＣＡＭを発現しない親ＣＨＯ細胞を用いる場合にはアゴニズムを示さなかった。
実施例５６
抗ＭＡｄＣＡＭ抗体（クローン５９ ｓｃＦＶフォーマット）およびＰＤ－１抗体（ＰＤ１ＡＢ３０またはＰＤ１ＡＢ４のいずれか）を含む二特異性分子は、係留されたＰＤ－１アゴニスト活性を有する。
ＰＤ１ＡＢ３０およびＰＤ１ＡＢ４はまた、ＰＤ－１アンタゴニズムについて試験された。ＰＤ－１レポーターであるＪｕｒｋａｔ細胞を、指示された濃度の被験物質と共に１時間インキュベートした。次に、ＰＤ－Ｌ１を発現する細胞を添加し、ＳＨＰ－２動員を２時間後に評価した。ペンブロリズマブを用いたコントロールアッセイを用いて結果を検証した。ペンブロリズマブのＩＣ５０は０．０４ｎＭであった。１００ｎＭまでの濃度では、いずれの被験物質に対しても有意なアンタゴニズムは認められなかった。
実施例５７
ＭＡｄＣＡＭ係留ＰＤ－１アゴニストは、異種移植片対宿主病モデルにおいて生存を延長する。ＮＳＧマウスにヒトＰＢＭＣを移植し、媒体、対照、または二特異性抗体（ＰＮＤ９００もしくはＰＮＤ９０１）で週１回処理した。体重減少が開始体重の２０％を超えた場合、マウスを安楽死させた。データを図２０に示し、被験物質と比較した媒体を示す。陰性対照は、媒体と同様の挙動を示した（データは、示さない）。したがって、本明細書で提供される分子は、ＧＶＨＤにおいて生存を延長する驚くべき効果を示す。
実施例５８
ＭＡＤＣＡＭ－ＰＤ１アゴニストの二特異性は異種移植片対宿主病マウス由来の結腸組織におけるＴＮＦ－αレベルを低減する。
標的組織における炎症誘発性サイトカインの低減は、二特異性の特異的な治療効果を示す。簡単に説明すると、免疫不全ＮＳＧマウスを処理の２４日前にヒトＰＢＭＣで移植した。マウスをＭＡＤＣＡＭ－ＰＤ１二特異性（０．３ｍｇ／ｋｇ）で１週間処理し、屠殺した。結腸組織をホモジナイズし、結腸溶解物中のＴＮＦ－α濃度をＥＬＩＳＡにより測定した。組織アリコートサイズの違いを考慮するために、値を総タンパク質濃度に標準化した。ＰＮＤ９００は、対照と比較してＴＮＦ－α濃度の減少を示した（データは、示さない）。実施した実験において、ＴＮＦ－αの対照レベル（０．６７９±０．１８６）と比較して、試験媒体（０．３８６±０．１５７）でＴＮＦ－α濃度の平均差は低減した。被験物質はＰＮＤ９０１を含む。
これらのデータは、ＰＤ－１抗体がアゴニストとして作用することができ、ＭＡｄＣＡＭ Ａｂのような標的化部分に結合した場合、ＰＤ－１活性をアゴナイズすることもできることを示す。抗体はまた、本明細書で提供されるＩＬ－２ムテインまたは他の部分に連結されうる。
本明細書で提供される実施例は、本明細書で提供される分子が、ＰＤ－１アゴニストとして、および本明細書に記載されるもののような他の治療用分子として、治療剤を特異的に局在化するために使用しうることを示す。
本明細書で引用される、各特許、各特許出願、および各刊行物、ならびに全ての特許、特許出願、および刊行物の開示は、参照によりこれらの全体において本明細書に組み入れられる。具体的な態様に言及しながら、多様な実施形態が開示されたが、実施形態の真の精神および範囲から逸脱しない限りにおいて、他の当業者が、これらの実施形態の、他の態様および変化形を考案することが可能であることは明らかである。付属の特許請求の範囲は、全てのこのような態様、および同等な変化形を含むとみなされることが意図される。

Claims (104)

  1. 抗ＭＡｄＣＡＭ抗体および抗ＰＤ－１抗体を含むポリペプチドであって、該ポリペプチドは、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチドを含み、
    第１のポリペプチドは、抗ＭＡｄＣＡＭ抗体に直接的または間接的に連結された第２のポリペプチドの可変軽鎖ドメインと共にＰＤ－１に結合する可変重鎖ドメインを含み；
    第２のポリペプチドは、第１のポリペプチドの可変重鎖ドメインと共にＰＤ－１に結合する可変軽鎖ドメインを含む、前記ポリペプチド。
  2. 第１のポリペプチドは、式：
    ＶＨ－Ｈｃ－リンカー－Ｃ１（式中、
    ＶＨは、可変軽鎖ドメインと共にＰＤ－１に結合する可変重鎖ドメインであり、
    Ｈｃは、ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインを含む抗体の重鎖であり、
    リンカーは、ペプチドリンカーであり、
    Ｃ１は抗ＭＡｄＣＡＭ抗体である）
    を有する、請求項１に記載のポリペプチド。
  3. 第２のポリペプチドは、式：
    ＶＬ－Ｌｃ（式中、
    ＶＬは可変軽鎖ドメインであり；
    Ｌｃは軽鎖ドメインである）
    を有する、請求項１または２に記載のポリペプチド。
  4. ペプチドリンカーはグリシン／セリンリンカーである、請求項１～３のいずれか１項に記載のポリペプチド
  5. グリシン／セリンリンカーは、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（式中、ｎは１、２、３または４である）のアミノ酸配列を有する、請求項４に記載のポリペプチド。
  6. 抗ＭＡｄＣＡＭ抗体はｓｃＦＶ抗体である、請求項１～５のいずれか１項に記載のポリペプチド。
  7. ｓｃＦＶ抗体は、式：
    ＶＨＳＣ－ＬＳＣ－ＶＬＳＣ（式中、
    ＶＨＳＣはＶＬＳＣと共にＭＡｄＣＡＭに結合する可変重鎖ドメインを含み、
    ＬＳＣはペプチドリンカーであり、
    ＶＬＳＣは、ＶＨＳＣと共にＭＡｄＣＡＭに結合する可変軽鎖ドメインを含む）
    を有する、請求項６に記載のポリペプチド。
  8. 第１のポリペプチドは、式：
    ＶＨ－Ｈｃ－リンカー－Ｃ１（式中、
    ＶＨは、可変軽鎖ドメインと共にＰＤ－１に結合する可変重鎖ドメインであり、
    Ｈｃは、ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３ドメインを含む抗体の重鎖であり、
    リンカーは、ペプチドリンカーであり、
    Ｃ１は抗ＭＡｄＣＡＭ抗体である）
    を有し、ならびに
    第２のポリペプチドは、式：
    ＶＬ－Ｌｃ（式中、
    ＶＬは可変軽鎖ドメインであり、
    Ｌｃは軽鎖ドメインである）
    を有する、請求項１に記載のポリペプチド。
  9. 抗ＭＡｄＣＡＭ抗体はｓｃＦＶ抗体である、請求項８に記載のポリペプチド。
  10. ｓｃＦＶ抗体は、式：
    ＶＬＳＣ－ＬＳＣ－ＶＨＳＣ（式中、
    ＶＨＳＣはＶＬＳＣと共にＭＡｄＣＡＭに結合する可変重鎖ドメインを含み、
    ＬＳＣはペプチドリンカーであり、
    ＶＬＳＣはＶＨＳＣと共にＭＡｄＣＡＭに結合する可変軽鎖ドメインを含む）
    を有する、請求項９に記載のポリペプチド。
  11. 抗ＭＡｄＣＡＭ抗体は細胞上に発現したＭＡｄＣＡＭに結合する、請求項１～１０のいずれか１項に記載のポリペプチド。
  12. 抗ＰＤ－１抗体は、ＰＤ－１に結合した場合、ＰＤ－１アゴニストである、請求項１～１１のいずれか１項に記載のポリペプチド。
  13. アゴニストは、ＰＤ－１アンタゴニズムアッセイにおいてＰＤ－１に対して有意なアンタゴニズム活性をまったく有さない、請求項１２に記載のポリペプチド。
  14. 抗ＭＡｄＣＡＭ抗体は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表１または２に示される配列を含む、請求項１～１３のいずれか１項に記載のポリペプチド。
  15. ＰＤ－１抗体は、ＰＤ－１抗体の表４またはＰＤ－１抗体の表５に示される配列を含む、請求項１～１４のいずれか１項に記載のポリペプチド。
  16. 定常ドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４定常ドメインである、請求項２に記載のポリペプチド。
  17. 抗ＭＡｄＣＡＭ抗体重鎖可変領域は、ＭＡｄＣＡＭ Ａｂの表２に提供される重鎖可変領域を含む、請求項１～１６のいずれか１項に記載のポリペプチド。
  18. 重鎖可変領域は、ＭＡｄＣＡＭ Ａｂの表２のクローン番号６、７５または７９の重鎖可変領域である、請求項１７に記載のポリペプチド。
  19. 重鎖可変部は、ＭＡｄＣＡＭ Ａｂの表２の６、７５または７９の重鎖ドメインのＣＤＲを含む、請求項１７に記載のポリペプチド。
  20. 重鎖可変領域は、配列番号４１４、配列番号５９１または配列番号５９９の配列を含む、請求項１７に記載のポリペプチド。
  21. 重鎖可変領域は、
    配列番号３５９の第１のＣＤＲ、配列番号１７０の第２のＣＤＲおよび配列番号３６０の第３のＣＤＲ；
    配列番号９０の第１のＣＤＲ、配列番号９１の第２のＣＤＲおよび配列番号９２の第３のＣＤＲ；または
    配列番号１３５の第１のＣＤＲ、配列番号３８１の第２のＣＤＲおよび配列番号３８２の第３のＣＤＲ
    を含む、請求項１７に記載のポリペプチド。
  22. 抗ＭＡｄＣＡＭ抗体重鎖可変領域はＰＤ－１抗体鎖のＣ末端に連結されている、請求項１～２１のいずれか１項に記載のポリペプチド。
  23. 抗ＭＡｄＣＡＭ抗体は、配列番号４１５、配列番号５９２もしくは配列番号６００の配列、またはＭＡｄＣＡＭ Ａｂの表２に提供されるＶＬ配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１に記載のポリペプチド。
  24. 抗ＭＡｄＣＡＭ抗体軽鎖可変領域は：
    配列番号３６１の第１のＣＤＲ、配列番号３６２の第２のＣＤＲおよび配列番号３６３の第３のＣＤＲ；
    配列番号９３の第１のＣＤＲ、配列番号８７の第２のＣＤＲおよび配列番号９４の第３のＣＤＲ；または
    配列番号３８３の第１のＣＤＲ、配列番号３８４の第２のＣＤＲおよび配列番号３８５の第３のＣＤＲ
    である、請求項２２に記載のポリペプチド。
  25. 定常ドメインは配列番号４５の配列を含む、請求項１６に記載のポリペプチド。
  26. 抗ＰＤ－１抗体重鎖可変領域は、ＰＤ－１抗体の表４に提供される重鎖可変領域である、請求項１～２５のいずれか１項に記載のポリペプチド。
  27. 抗ＰＤ－１抗体重鎖可変領域は、ＰＤ－１抗体の表４のクローン番号ＰＤ１ＡＢ４（配列番号６３７）、ＰＤ１ＡＢ３０（配列番号７６９）、ＰＤ１ＡＢ１７（配列番号７０４）、ＰＤ１ＡＢ１８（配列番号７１０）、ＰＤ１ＡＢ２０（配列番号７２４）、ＰＤ１ＡＢ２５（配列番号７５５）の重鎖可変領域である、請求項１～２５のいずれか１項に記載のポリペプチド。
  28. 抗ＰＤ－１抗体重鎖可変領域は、ＰＤ－１抗体の表４のＰＤ１ＡＢ４、ＰＤ１ＡＢ３０、ＰＤ１ＡＢ１７、ＰＤ１ＡＢ１８、ＰＤ１ＡＢ２０、またはＰＤ１ＡＢ２５の重鎖ドメインのＣＤＲを含む、請求項１～２５のいずれか１項に記載のポリペプチド。
  29. 抗ＰＤ－１抗体重鎖可変領域は、配列番号６３９、７５７、７０６、７１２、７２６または７５７の第１のＣＤＲ、配列番号６９、７５８、７０７、７１３、７２７または７５８の第２のＣＤＲ、および配列番号６４０、７５９、７０８、７１４、７２８または７５９の第３のＣＤＲを含む、請求項１～２５のいずれか１項に記載のポリペプチド。
  30. 抗ＰＤ－１抗体重鎖可変領域は、
    配列番号６３９の第１のＣＤＲ、配列番号６９の第２のＣＤＲおよび配列番号６４０の第３のＣＤＲ；
    配列番号７５７の第１のＣＤＲ、配列番号７５８の第２のＣＤＲおよび配列番号７５９の第３のＣＤＲ；
    配列番号７０６の第１のＣＤＲ、配列番号７０７の第２のＣＤＲおよび配列番号７０８の第３のＣＤＲ；
    配列番号７１２の第１のＣＤＲ、配列番号７１３の第２のＣＤＲおよび配列番号７１４の第３のＣＤＲ；または
    配列番号７２６の第１のＣＤＲ、配列番号７２７の第２のＣＤＲおよび配列番号７２８の第３のＣＤＲ
    を含む、請求項１～２５のいずれか１項に記載のポリペプチド。
  31. 抗ＰＤ－１抗体軽鎖可変領域は、ＰＤ－１抗体の表４のクローン番号ＰＤ１ＡＢ４（配列番号６３８）、ＰＤ１ＡＢ３０（配列番号７５６）、ＰＤ１ＡＢ１７（配列番号７０５）、ＰＤ１ＡＢ１８（配列番号７１１）、ＰＤ１ＡＢ２０（配列番号７２５）、ＰＤ１ＡＢ２５（配列番号７５６）の軽鎖可変領域である、請求項１～３０のいずれか１項に記載のポリペプチド。
  32. 抗ＰＤ－１抗体軽鎖可変領域は、ＰＤ－１抗体の表４のＰＤ１ＡＢ４、ＰＤ１ＡＢ３０、ＰＤ１ＡＢ１７、ＰＤ１ＡＢ１８、ＰＤ１ＡＢ２０またはＰＤ１ＡＢ２５の軽鎖ドメインのＣＤＲを含む、請求項１～３０のいずれか１項に記載のポリペプチド。
  33. 抗ＰＤ－１抗体軽鎖可変領域は、配列番号６４１、７０９、７１５、７２９または７６０の第１のＣＤＲ、配列番号３６２、７１６、４２０または３７８の第２のＣＤＲ、および配列番号６４２、４２１、７１７、７３０または７６１の第３のＣＤＲを含む、請求項１～３０のいずれか１項に記載のポリペプチド。
  34. 抗ＰＤ－１抗体軽鎖可変領域は、
    配列番号６４１の第１のＣＤＲ、配列番号３６２の第２のＣＤＲおよび配列番号６４２の第３のＣＤＲ；
    配列番号７０９の第１のＣＤＲ、配列番号３６２の第２のＣＤＲおよび配列番号４２１の第３のＣＤＲ；
    配列番号７１５の第１のＣＤＲ、配列番号７１６の第２のＣＤＲおよび配列番号７１７の第３のＣＤＲ；
    配列番号７２９の第１のＣＤＲ、配列番号４２０の第２のＣＤＲおよび配列番号７３０の第３のＣＤＲ；または
    配列番号７６０の第１のＣＤＲ、配列番号３７８の第２のＣＤＲおよび配列番号７６１の第３のＣＤＲ
    を含む、請求項１～３０のいずれか１項に記載のポリペプチド。
  35. 抗ＰＤ－１抗体は、
    配列番号６３９の第１のＣＤＲ、配列番号６９の第２のＣＤＲおよび配列番号６４０の第３のＣＤＲを含む重鎖可変領域、ならびに配列番号６４１の第１のＣＤＲ、配列番号３６２の第２のＣＤＲおよび配列番号６４２の第３のＣＤＲを含む軽鎖可変領域；
    配列番号７５７の第１のＣＤＲ、配列番号７５８の第２のＣＤＲおよび配列番号７５９の第３のＣＤＲを含む重鎖可変領域、ならびに配列番号７６０の第１のＣＤＲ、配列番号３７８の第２のＣＤＲおよび配列番号７６１の第３のＣＤＲを含む軽鎖可変領域；
    配列番号７０６の第１のＣＤＲ、配列番号７０７の第２のＣＤＲおよび配列番号７０８の第３のＣＤＲを含む重鎖可変領域、ならびに配列番号７０９の第１のＣＤＲ、配列番号３６２の第２のＣＤＲおよび配列番号４２１の第３のＣＤＲを含む軽鎖可変領域；
    配列番号７１２の第１のＣＤＲ、配列番号７１３の第２のＣＤＲおよび配列番号７１４の第３のＣＤＲを含む重鎖可変領域、ならびに配列番号７１５の第１のＣＤＲ、配列番号７１６の第２のＣＤＲ、および配列番号７１７の第３のＣＤＲを含む軽鎖可変領域；
    配列番号７２６の第１のＣＤＲ、配列番号７２７の第２のＣＤＲおよび配列番号７２８の第３のＣＤＲを含む重鎖可変領域、ならびに配列番号７２９の第１のＣＤＲ、配列番号４２０の第２のＣＤＲおよび配列番号７３０の第３のＣＤＲを含む軽鎖可変領域；または
    配列番号７５７の第１のＣＤＲ、配列番号７５８の第２のＣＤＲおよび配列番号７５９の第３のＣＤＲを含む重鎖可変領域、ならびに配列番号７６０の第１のＣＤＲ、配列番号３７８の第２のＣＤＲおよび配列番号７６１の第３のＣＤＲを含む軽鎖可変領域
    を含む、請求項１～３０のいずれか１項に記載のポリペプチド。
  36. 抗ＰＤ－１抗体は、配列番号６３７、配列番号７６９、配列番号７０４、配列番号７１０、配列番号７２４または配列番号７５５の配列を含む重鎖、および配列番号６３８、配列番号７５６、配列番号７０５、配列番号７１１、配列番号７２５または配列番号７５６の配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１～３０のいずれか１項に記載のポリペプチド。
  37. 抗ＰＤ－１抗体は、
    配列番号６３７の配列を含む重鎖可変領域および配列番号６３８の配列を含む軽鎖可変領域；
    配列番号７０４の配列を含む重鎖可変領域および配列番号７０５の配列を含む軽鎖可変領域；
    配列番号７１０の配列を含む重鎖可変領域および配列番号７１１の配列を含む軽鎖可変領域；
    配列番号７２４の配列を含む重鎖可変領域および配列番号７２５の配列を含む軽鎖可変領域；
    配列番号７５５の配列を含む重鎖可変領域および配列番号７５６の配列を含む軽鎖可変領域；または
    配列番号７６９の配列を含む重鎖可変領域および配列番号７５６の配列を含む軽鎖可変領域
    を含む、請求項１～３０のいずれか１項に記載のポリペプチド。
  38. ＰＤ１ＶＨ－定常ドメイン－リンカーＡ－ＭＡｄＣＡＭｓｃＦｖ
    ［式中、ＰＤ１ＶＨは、本明細書で提供される任意のＰＤ－１抗体のＰＤ－１重鎖可変ドメインであり；
    定常ドメインは、ＩｇＧ１定常ドメイン、またはＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくＩｇＧ４のような任意の他の定常ドメインであり；
    リンカーＡは、本明細書で提供されるもののようなＧ／ＳまたはＧ／Ａリンカーであり；
    ＭＡｄＣＡＭｓｃＦｖは、以下の式：
    ＭＡｄＣＡＭＶＨ－リンカーＢ－ＭＡｄＣＡＭＶＫ
    （式中、ＭＡｄＣＡＭＶＨは、本明細書で提供されるＭＡｄＣＡＭ重鎖可変ドメインであり、
    リンカーＢは、本明細書で提供されるもののようなＧ／ＳまたはＧ／Ａリンカーであり、
    ＭＡｄＣＡＭＶＫは、本明細書で提供されるような軽鎖可変ドメインである）
    を有する］
    の式を有するポリペプチド。
  39. ＰＤ－１重鎖可変ドメインは、ＰＤ－１抗体の表４に提供されるような重鎖可変領域である、請求項３８に記載のポリペプチド。
  40. ＰＤ－１重鎖可変ドメインは、ＰＤ－１抗体の表４のクローン番号ＰＤ１ＡＢ４（配列番号６３７）、ＰＤ１ＡＢ３０（配列番号７６９）、ＰＤ１ＡＢ１７（配列番号７０４）、ＰＤ１ＡＢ１８（配列番号７１０）、ＰＤ１ＡＢ２０（配列番号７２４）、ＰＤ１ＡＢ２５（配列番号７５５）の重鎖可変領域である、請求項３８に記載のポリペプチド。
  41. ＰＤ－１重鎖可変ドメインは、ＰＤ－１抗体の表４のＰＤ１ＡＢ４、ＰＤ１ＡＢ３０、ＰＤ１ＡＢ１７、ＰＤ１ＡＢ１８、ＰＤ１ＡＢ２０またはＰＤ１ＡＢ２５の重鎖ドメインのＣＤＲを含む、請求項３８に記載のポリペプチド。
  42. ＰＤ－１重鎖可変ドメインは、配列番号６３７、７６９、７０４、７１０、７２４または７５５の配列を含む、請求項３８に記載のポリペプチド。
  43. ＰＤ－１重鎖可変ドメインは、配列番号６３９、７５７、７０６、７１２、７２６または７５７の第１のＣＤＲ、配列番号６９、７５８、７０７、７１３、７２７または７５８の第２のＣＤＲ、および配列番号６４０、７５９、７０８、７１４、７２８または７５９の第３のＣＤＲを含む、請求項３８に記載のポリペプチド。
  44. ＰＤ－１重鎖可変ドメインは、
    配列番号６３９の第１のＣＤＲ、配列番号６９の第２のＣＤＲおよび配列番号６４０の第３のＣＤＲ；
    配列番号７５７の第１のＣＤＲ、配列番号７５８の第２のＣＤＲおよび配列番号７５９の第３のＣＤＲ；
    配列番号７０６の第１のＣＤＲ、配列番号７０７の第２のＣＤＲおよび配列番号７０８の第３のＣＤＲ；
    配列番号７１２の第１のＣＤＲ、配列番号７１３の第２のＣＤＲおよび配列番号７１４の第３のＣＤＲ；または
    配列番号７２６の第１のＣＤＲ、配列番号７２７の第２のＣＤＲおよび配列番号７２８の第３のＣＤＲ
    を含む、請求項３８に記載のポリペプチド。
  45. リンカーＡは、（ＧＧＧＧＳ）ｎもしくは（ＧＧＧＧＡ）ｎの配列、またはその混合物を含み、それぞれのｎは独立して１～１０である、請求項３８～４４のいずれか１項に記載のポリペプチド。
  46. ＭＡｄＣＡＭ重鎖可変領域は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２に提供されるＭＡｄＣＡＭ重鎖可変領域である、請求項３８～４５のいずれか１項に記載のポリペプチド。
  47. ＭＡｄＣＡＭ重鎖可変領域は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２のクローン番号６、７５または７９の重鎖可変領域である、請求項３８～４６のいずれか１項に記載のポリペプチド。
  48. ＭＡｄＣＡＭ重鎖可変部は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２のクローン６、７５または７９の重鎖可変ドメインのＣＤＲを含む、請求項３８～４５のいずれか１項に記載のポリペプチド。
  49. ＭＡｄＣＡＭ重鎖可変領域は、配列番号４１４、配列番号５９１または配列番号５９９の配列を含む、請求項３８～４５のいずれか１項に記載のポリペプチド。
  50. ＭＡｄＣＡＭ重鎖可変領域は、
    配列番号９０の第１のＣＤＲ、配列番号９１の第２のＣＤＲおよび配列番号９２の第３のＣＤＲ；
    配列番号３５９の第１のＣＤＲ、配列番号１７０の第２のＣＤＲおよび配列番号３６０の第３のＣＤＲ；または
    配列番号１３５の第１のＣＤＲ、配列番号３８１の第２のＣＤＲおよび配列番号３８２の第３のＣＤＲ
    を含む、請求項３８～４５のいずれか１項に記載のポリペプチド。
  51. リンカーＢは、（ＧＧＧＧＳ）ｎもしくは（ＧＧＧＧＡ）ｎの配列、またはその混合物を含むペプチドリンカーのようなリンカーであり、それぞれのｎは独立して１～１０である、請求項３８～５０のいずれか１項に記載のポリペプチド。
  52. ＭＡｄＣＡＭ軽鎖可変領域は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２に提供されるＭＡｄＣＡＭ軽鎖可変領域である、請求項３８～５１のいずれか１項に記載のポリペプチド。
  53. ＭＡｄＣＡＭ軽鎖可変領域は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２のクローン番号６、７５または７９の軽鎖可変領域である、請求項３８～５２のいずれか１項に記載のポリペプチド。
  54. ＭＡｄＣＡＭ軽鎖可変部は、ＭＡｄＣＡＭ抗体の表２の６、７５または７９の軽鎖ドメインのＣＤＲを含む、請求項３８～５１のいずれか１項に記載のポリペプチド
  55. ＭＡｄＣＡＭ軽鎖可変領域は、配列番号４１５、配列番号５９２または配列番号６００の配列を含む、請求項３８～５１のいずれか１項に記載のポリペプチド。
  56. ＭＡｄＣＡＭ軽鎖可変領域は、
    配列番号９３の第１のＣＤＲ、配列番号８７の第２のＣＤＲおよび配列番号９４の第３のＣＤＲ；
    配列番号３６１の第１のＣＤＲ、配列番号３６２の第２のＣＤＲおよび配列番号３６３の第３のＣＤＲ；または
    配列番号３８３の第１のＣＤＲ、配列番号３８４の第２のＣＤＲおよび配列番号３５８の第３のＣＤＲ
    を含む、請求項３８～５１のいずれか１項に記載のポリペプチド。
  57. ポリペプチドは、ＰＤ１ＶＬ－定常ドメイン軽鎖の式を有する第２のポリペプチドを含み、ＶＬは、本明細書に提供されるようなＰＤ－１抗体軽鎖可変ドメインであり、定常ドメイン軽鎖はＩｇＧ Ｋドメインである、請求項１１２～１３０のいずれか１項に記載のポリペプチド。
  58. ＰＤ１ＶＬは、配列番号６３８、配列番号７５６、配列番号７０５、配列番号７１１、配列番号７２５、配列番号７５６の配列、またはＰＤ－１抗体の表４に提供されるＶＬ（ＶＫ）配列を含む、請求項５７に記載のポリペプチド。
  59. ＰＤ１ＶＬは、配列番号６４１、７０９、７１５、７２９または７６０の第１のＣＤＲ、配列番号３６２、７１６、４２０または３７８の第２のＣＤＲ、および配列番号６４２、４２１、７１７、７３０または７６１の第３のＣＤＲを含む、請求項５７に記載のポリペプチド。
  60. ＰＤ１ＶＬは、
    配列番号６４１の第１のＣＤＲ、配列番号３６２の第２のＣＤＲおよび配列番号６４２の第３のＣＤＲ；
    配列番号７０９の第１のＣＤＲ、配列番号３６２の第２のＣＤＲおよび配列番号４２１の第３のＣＤＲ；
    配列番号７１５の第１のＣＤＲ、配列番号７１６の第２のＣＤＲおよび配列番号７１７の第３のＣＤＲ；
    配列番号７２９の第１のＣＤＲ、配列番号４２０の第２のＣＤＲおよび配列番号７３０の第３のＣＤＲ；または
    配列番号７６０の第１のＣＤＲ、配列番号３７８の第２のＣＤＲおよび配列番号７６１の第３のＣＤＲ
    を含む、請求項５７に記載のポリペプチド
  61. 定常ドメイン軽鎖は配列番号４５の配列を含む、請求項５７～６０のいずれか１項に記載のポリペプチド。
  62. ＰＤ－１に結合する抗体であって、ＰＤ－１抗体の表４またはＰＤ－１抗体の表５に提供される配列を含む、前記抗体。
  63. 抗体またはその抗原結合断片は、
    （ｉ）重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変領域であって、該重鎖ＣＤＲ１配列は、ＰＤ－１抗体の表４もしくはＰＤ－１抗体の表５に記載されるＣＤＲ１配列のいずれかのアミノ酸配列を有し、該重鎖ＣＤＲ２は、ＰＤ－１抗体の表４もしくはＰＤ－１抗体の表５に記載されるＣＤＲ２配列のいずれかのアミノ酸配列を有し、該重鎖ＣＤＲ３は、ＰＤ－１抗体の表４もしくはＰＤ－１抗体の表５に記載されるＣＤＲ３配列のいずれかのアミノ酸配列を有する、重鎖可変領域、または前出のいずれかの変異体；ならびに
    （ｉｉ）軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変領域であって、該軽鎖ＣＤＲ１配列は、ＰＤ－１抗体の表４もしくはＰＤ－１抗体の表５に記載されるＬＣＤＲ１配列のいずれかのアミノ酸配列を有し、該軽鎖ＬＣＤＲ２は、ＰＤ－１抗体の表４もしくはＰＤ－１抗体の表５に記載されるＬＣＤＲ２配列のいずれかのアミノ酸配列を有し、該軽鎖ＣＤＲ３は、ＰＤ－１抗体の表４もしくはＰＤ－１抗体の表５に記載されるＬＣＤＲ３配列のいずれかのアミノ酸配列を有する、軽鎖可変領域、または前出のいずれかの変異体
    を含む、請求項６２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
  64. 抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ－１抗体の表４に示されるＶＫ配列を含む、請求項６２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
  65. 抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ－１抗体の表４に示されるＶＨ配列を含む、請求項６２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
  66. 抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ－１抗体の表４に示されるＶＫ配列およびＰＤ－１抗体の表４に示されるＶＨ配列を含む、請求項６２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
  67. 抗ＰＤ－１抗体は、ＰＤ－１抗体の表４のクローン番号ＰＤ１ＡＢ４（配列番号６３７）、ＰＤ１ＡＢ３０（配列番号７６９）、ＰＤ１ＡＢ１７（配列番号７０４）、ＰＤ１ＡＢ１８（配列番号７１０）、ＰＤ１ＡＢ２０（配列番号７２４）、ＰＤ１ＡＢ２５（配列番号７５５）の重鎖可変領域を含む、請求項６２に記載の抗体。
  68. 抗ＰＤ－１抗体は、ＰＤ－１抗体の表４のＰＤ１ＡＢ４、ＰＤ１ＡＢ３０、ＰＤ１ＡＢ１７、ＰＤ１ＡＢ１８、ＰＤ１ＡＢ２０またはＰＤ１ＡＢ２５の重鎖ドメインのＣＤＲを含む重鎖を含む、請求項６２に記載の抗体。
  69. 抗ＰＤ－１抗体は、配列番号６３９、７５７、７０６、７１２、７２６または７５７の第１のＣＤＲ；配列番号６９、７５８、７０７、７１３、７２７または７５８の第２のＣＤＲ；および配列番号６４０、７５９、７０８、７１４、７２８または７５９の第３のＣＤＲを含む重鎖を含む、請求項６２に記載の抗体。
  70. 抗ＰＤ－１抗体は、
    配列番号６３９の第１のＣＤＲ、配列番号６９の第２のＣＤＲおよび配列番号６４０の第３のＣＤＲ；
    配列番号７５７の第１のＣＤＲ、配列番号７５８の第２のＣＤＲおよび配列番号７５９の第３のＣＤＲ；
    配列番号７０６の第１のＣＤＲ、配列番号７０７の第２のＣＤＲおよび配列番号７０８の第３のＣＤＲ；
    配列番号７１２の第１のＣＤＲ、配列番号７１３の第２のＣＤＲおよび配列番号７１４の第３のＣＤＲ；または
    配列番号７２６の第１のＣＤＲ、配列番号７２７の第２のＣＤＲおよび配列番号７２８の第３のＣＤＲ
    を含む重鎖を含む、請求項６２に記載の抗体。
  71. 抗体は、ＰＤ－１抗体の表４のクローン番号ＰＤ１ＡＢ４（配列番号６３８）、ＰＤ１ＡＢ３０（配列番号７５６）、ＰＤ１ＡＢ１７（配列番号７０５）、ＰＤ１ＡＢ１８（配列番号７１１）、ＰＤ１ＡＢ２０（配列番号７２５）、ＰＤ１ＡＢ２５（配列番号７５６）の軽鎖可変領域を含む、請求項６２および６７～７０のいずれか１項に記載の抗体。
  72. 抗体は、ＰＤ－１抗体の表４のＰＤ１ＡＢ４、ＰＤ１ＡＢ３０、ＰＤ１ＡＢ１７、ＰＤ１ＡＢ１８、ＰＤ１ＡＢ２０またはＰＤ１ＡＢ２５の軽鎖ドメインのＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含む、請求項６２および６７～７０のいずれか１項に記載の抗体。
  73. 抗体は、配列番号６４１、７０９、７１５、７２９または７６０の第１のＣＤＲ、配列番号３６２、７１６、４２０または３７８の第２のＣＤＲ、および配列番号６４２、４２１、７１７、７３０または７６１の第３のＣＤＲを含む軽鎖可変領域を含む、請求項６２および６７～７０のいずれか１項に記載の抗体。
  74. 抗体は、
    配列番号６４１の第１のＣＤＲ、配列番号３６２の第２のＣＤＲおよび配列番号６４２の第３のＣＤＲ；
    配列番号７０９の第１のＣＤＲ、配列番号３６２の第２のＣＤＲおよび配列番号４２１の第３のＣＤＲ；
    配列番号７１５の第１のＣＤＲ、配列番号７１６の第２のＣＤＲおよび配列番号７１７の第３のＣＤＲ；
    配列番号７２９の第１のＣＤＲ、配列番号４２０の第２のＣＤＲおよび配列番号７３０の第３のＣＤＲ；または
    配列番号７６０の第１のＣＤＲ、配列番号３７８の第２のＣＤＲおよび配列番号７６１の第３のＣＤＲ
    を含む軽鎖可変領域を含む、請求項６２および６７～７０のいずれか１項に記載の抗体。
  75. 抗ＰＤ－１抗体は、
    配列番号６３９の第１のＣＤＲ、配列番号６９の第２のＣＤＲおよび配列番号６４０の第３のＣＤＲを含む重鎖可変領域、ならびに配列番号６４１の第１のＣＤＲ、配列番号３６２の第２のＣＤＲおよび配列番号６４２の第３のＣＤＲを含む軽鎖可変領域；
    配列番号７５７の第１のＣＤＲ、配列番号７５８の第２のＣＤＲおよび配列番号７５９の第３のＣＤＲを含む重鎖可変領域、ならびに配列番号７６０の第１のＣＤＲ、配列番号３７８の第２のＣＤＲおよび配列番号７６１の第３のＣＤＲを含む軽鎖可変領域；
    配列番号７０６の第１のＣＤＲ、配列番号７０７の第２のＣＤＲおよび配列番号７０８の第３のＣＤＲを含む重鎖可変領域、ならびに配列番号７０９の第１のＣＤＲ、配列番号３６２の第２のＣＤＲおよび配列番号４２１の第３のＣＤＲを含む軽鎖可変領域；
    配列番号７１２の第１のＣＤＲ、配列番号７１３の第２のＣＤＲおよび配列番号７１４の第３のＣＤＲを含む重鎖可変領域、ならびに配列番号７１５の第１のＣＤＲ、配列番号７１６の第２のＣＤＲおよび配列番号７１７の第３のＣＤＲを含む軽鎖可変領域；
    配列番号７２６の第１のＣＤＲ、配列番号７２７の第２のＣＤＲおよび配列番号７２８の第３のＣＤＲを含む重鎖可変領域、ならびに配列番号７２９の第１のＣＤＲ、配列番号４２０の第２のＣＤＲ、および配列番号７３０の第３のＣＤＲを含む軽鎖可変領域；または
    配列番号７５７の第１のＣＤＲ、配列番号７５８の第２のＣＤＲおよび配列番号７５９の第３のＣＤＲを含む重鎖可変領域、ならびに配列番号７６０の第１のＣＤＲ、配列番号３７８の第２のＣＤＲ、および配列番号７６１の第３のＣＤＲを含む軽鎖可変領域
    を含む、請求項６２～７４のいずれか１項に記載の抗体。
  76. 抗体は、配列番号６３７、配列番号７６９、配列番号７０４、配列番号７１０、配列番号７２４または配列番号７５５の配列を含む重鎖、および配列番号６３８、配列番号７５６、配列番号７０５、配列番号７１１、配列番号７２５または配列番号７５６の配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項６２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
  77. 抗体は、
    配列番号６３７の配列を含む重鎖可変領域および配列番号６３８の配列を含む軽鎖可変領域；
    配列番号７０４の配列を含む重鎖可変領域および配列番号７０５の配列を含む軽鎖可変領域；
    配列番号７１０の配列を含む重鎖可変領域および配列番号７１１の配列を含む軽鎖可変領域；
    配列番号７２４の配列を含む重鎖可変領域および配列番号７２５の配列を含む軽鎖可変領域；
    配列番号７５５の配列を含む重鎖可変領域および配列番号７５６の配列を含む軽鎖可変領域；または
    配列番号７６９の配列を含む重鎖可変領域および配列番号７５６の配列を含む軽鎖可変領域
    を含む、請求項６２または７６に記載の抗体。
  78. ＰＤ－１に結合する抗体は、直接的または間接的に別の部分に結合している、請求項６２～７７のいずれか１項に記載の抗体。
  79. 別の部分は二次抗体である、請求項７８に記載の抗体。
  80. 二次抗体は、ＰＤ－１抗体を細胞に標的化する標的化抗体である、請求項７８に記載の抗体。
  81. 標的化抗体はＭＡｄＣＡＭに結合する抗体である、請求項８０に記載の抗体。
  82. ＭＡｄＣＡＭに結合する抗体は本明細書に提供される抗体である、請求項８１に記載の抗体。
  83. ＭＡｄＣＡＭに結合する抗体はｓｃＦＶ抗体である、請求項８１に記載の抗体。
  84. 別の部分はＩＬ－２ムテインである、請求項７８に記載の抗体。
  85. 別の部分はペプチドリンカーを介してＰＤ－１に結合する抗体に連結されている、請求項７８～８４のいずれか１項に記載の抗体。
  86. 請求項１～８５のいずれか１項に記載のポリペプチド、タンパク質または抗体を含む医薬組成物。
  87. 炎症性腸疾患を有する対象を処置する方法であって、請求項１～８５のいずれか１項に記載のポリペプチド、タンパク質もしくは抗体、または請求項８６に記載の医薬組成物を、該対象へと投与して、該炎症性腸疾患を処置する工程を含む、前記方法。
  88. 炎症性腸疾患を有する対象は、クローン病を有する、請求項８７に記載の方法。
  89. 炎症性腸疾患を有する対象は、潰瘍性大腸炎を有する、請求項８７に記載の方法。
  90. 自己免疫性肝炎を有する対象を処置する方法であって、請求項１～８５のいずれか１項に記載のポリペプチド、タンパク質もしくは抗体、または請求項８６に記載の医薬組成物を、該対象へと投与して、該自己免疫性肝炎を処置する工程を含む、前記方法。
  91. 原発性硬化性胆管炎を処置する方法であって、請求項１～８５のいずれか１項に記載のポリペプチド、タンパク質もしくは抗体、または請求項８６に記載の医薬組成物を、対象へと投与して、該原発性硬化性胆管炎を処置する工程を含む、前記方法。
  92. １型糖尿病を処置する方法であって、請求項１～８５のいずれか１項に記載のポリペプチド、タンパク質もしくは抗体、または請求項８６に記載の医薬組成物を、対象へと投与して、該１型糖尿病を処置する工程を含む、前記方法。
  93. 移植対象を処置する方法であって、治療有効量の、請求項１～８５のいずれか１項に記載のポリペプチド、タンパク質もしくは抗体、または請求項８６に記載の医薬組成物を、該対象へと投与し、これにより、移植（レシピエント）対象を処置する工程を含む、前記方法。
  94. ドナー組織を移植した対象におけるＧＶＨＤを処置する方法であって、治療有効量の、請求項１～８５のいずれか１項に記載のポリペプチド、タンパク質もしくは抗体、または請求項８６に記載の医薬組成物を、該対象へと投与する工程を含む、前記方法。
  95. 自己免疫疾患を有するか、またはこれを有する危険性があるかもしくは上昇している対象を処置する方法であって、治療有効量の、請求項１～８５のいずれか１項に記載のポリペプチド、タンパク質もしくは抗体、または請求項８６に記載の医薬組成物を投与し、これにより、該対象を処置する工程を含む、前記方法。
  96. 対象における免疫応答を調節する方法であって、治療有効量の、請求項１～８５のいずれか１項に記載のポリペプチド、タンパク質もしくは抗体、または請求項８６に記載の医薬組成物を、該対象へと投与する工程を含み、該ポリペプチドは、Ｔｒｅｇ細胞、ＣＤ４陽性免疫細胞、および／またはＣＤ８陽性免疫細胞に結合して、該免疫応答を調節する、前記方法。
  97. ＣＤ４陽性および／またはＣＤ８陽性免疫細胞は、活性化されたＣＤ４陽性および／またはＣＤ８陽性免疫細胞である、請求項９６に記載の方法。
  98. 免疫応答は、対象において減少する、請求項９６または９７に記載の方法。
  99. 免疫応答は、ＭＡｄＣＡＭを発現する組織において減少する、請求項９６～９８のいずれか１項に記載の方法。
  100. 請求項１～８５のいずれか１項に記載のポリペプチド、タンパク質または抗体をコードする核酸。
  101. 請求項１００に記載の核酸を含むベクター。
  102. 請求項１００に記載の核酸または請求項１０１に記載のベクターを含む細胞。
  103. 請求項１～８５のいずれか１項に記載のポリペプチド、タンパク質または抗体を作製するために、請求項１０２に記載の細胞を培養する工程を含む、請求項１～８５のいずれか１項に記載のポリペプチド、タンパク質または抗体を作製する方法。
  104. 請求項１～８５のいずれか１項に記載のポリペプチド、タンパク質または抗体をコードする核酸配列を作製する方法であって、
    ａ）標的化部分をコードする配列を含むベクターを提供し、エフェクター結合性／モジュレーティング部分をコードするベクター配列に挿入して、治療用化合物をコードする配列を形成する工程；または
    ｂ）エフェクター結合性／モジュレーティング部分をコードする配列を含むベクターを提供し、標的化部分をコードするベクター配列に挿入して、治療用化合物をコードする配列を形成する工程
    を含み、これにより、請求項１～８５のいずれか１項に記載のポリペプチド、タンパク質または抗体をコードする配列を作製する、前記方法。
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