JP2022543209A - 凝集を低減するための緩衝剤組成物 - Google Patents

Abstract

膣疾患、例えば、外陰膣カンジダ症、トリコモナス症および／または細菌性腟症の核酸ベースの検出および特定のための組成物、キットおよび方法が開示されている。組成物、キット、および方法は、妨害物質、例えば、臨床膣スワブサンプル中に存在するゲルに対して堅固な診断試験性能を得るために使用し得る。

Description

関連出願への相互参照
本出願は、２０１９年７月２６日に出願された米国仮特許出願第６２／８７９，３１０号に対する優先権を主張し、これは参照によってその全体が本明細書に組み込まれる。
本開示は、膣疾患および／または性感染症のための、組成物、キットおよび方法、例えば緩衝剤組成物、それを含むアッセイキット、その使用およびそれによる診断試験の方法に関する。いくつかの実施形態において、組成物、キットおよび方法は、特に妨害物質の存在下において、生体サンプルからの堅固な高性能の診断試験を達成する。いくつかの実施形態は、外陰膣カンジダ症関連カンジダ種、トリコモナス症を引き起こす膣トリコモナス（ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ ｖａｇｉｎａｌｉｓ）および／または細菌性膣症関連細菌の、膣炎および／または膣症の臨床徴候を示す女性からサンプル採取した臨床膣スワブからの、本明細書に開示する組成物、キットおよび方法を使用した、核酸ベースの検出および特定に関する。いくつかの実施形態において、性感染症、例えばクラミジア感染症、淋病、トリコモナス症は、本明細書に開示する核酸ベースの組成物、キットおよび方法によって診断する。

カンジダは、酵母の属であり、世界中の真菌感染症の最も一般的な原因である。多くのカンジダ種は、無害な片利共生生物であり、宿主の正常な微生物叢の一部であることが見出されており、ヒトを含む宿主の内部共生であり得る。しかしながら、宿主の不安定または免疫低下の場合において、カンジダは侵襲し、疾患を引き起こすことが知られている。いくつかのカンジダ属、例えばＣ．クルセイ（Ｃ．ｋｒｕｓｅｉ）およびＣ．グラブラータ（Ｃ．ｇｌａｂｒａｔａ）は、外陰膣カンジダ症（ＶＶＣ）に関連していることが知られている。膣トリコモナスは、嫌気性の鞭毛虫原生寄生生物であり、これはトリコモナス症の病原体である。細菌性膣症（ＢＶ）は膣における細菌の正常な均衡が変化することによって引き起こされる膣の感染症である。

性感染症（ＳＴＩ）、例えばクラミジア感染症（ＣＴ）、淋病（ＧＣ）およびトリコモナス症（ＴＶ）は、大きな健康保険負担をもたらしており、負担は増大している。これらの感染症の大部分は無症候性であるが、対処されないままの場合、骨盤内炎症性疾患（ＰＩＤ）、子宮外妊娠、不妊症、早期分娩または低出生体重児および男性および女性におけるＳＴＩ伝染または感染（ＨＩＶを含む）のリスクの上昇等の深刻な結果を有する場合がある。

膣疾患および／または性感染症の正確な診断に基づく標的化処置は、患者のクオリティオブライフを改善し、より良好な臨床結果を達成するために必要である。アッセイプラットフォームおよび方法、例えば核酸抽出のための官能化粒子の流体操作は、ＶＶＣ、トリコモナス症、ＢＶ、ＣＴ、ＧＣおよびＴＶの診断試験および治療介入のために開発されている。いくつかのこのようなアッセイは、試験する生体サンプル中に存在する微量の妨害物質にさえも感度を示す。特に、臨床膣スワブサンプルは、ゲル、例えば患者が使用している市販のパーソナルケアクリーム、およびサンプル採取の前の検査手順において導入される臨床用潤滑剤が混入している可能性がある。妨害ゲルの多くは、核酸抽出用のアッセイにおいて配置されている官能化粒子と相互作用することができる、高分子電解質、例えばカルボマー（ポリアクリル酸）を含む。この妨害ゲルは、アッセイカートリッジに移された場合、流体チャネル内において官能化粒子の凝集、流体チャネルの詰まり、および／または標的核酸のポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）の阻害を引き起こし得る。したがって、妨害物質の存在下において、多くの核酸ベースのアッセイでは、報告エラー（偽陽性および偽陰性）が増加するだけでなく、報告不可能な結果（内部対照の失敗による未解決の結果、過剰なノイズによる不確定の結果等）も増加する。例えば、粒子凝集は官能性の喪失につながり、それによってアッセイの感度が低下し、かつ未解決の結果の割合が上昇し得る。チャネルの詰まりは不確定の結果の割合を上昇させ、ＰＣＲ阻害は偽陰性の割合を上昇させ得る。

上述のようなアッセイに使用される標準的な緩衝剤は、典型的には採取後の生体サンプルをその後の診断分析のために保存することを唯一の目的として設計されている。臨床サンプル中に共通して存在する妨害物質に関連する種々の有害事象を考慮すると、臨床効率を維持しながら、オンチップサンプル処理およびそれに伴う膣疾患（例えば、外陰膣カンジダ症、トリコモナス症、細菌性膣症等）の検出についての、より高い干渉堅固性を有する新規の緩衝剤組成物（およびそれを使用する方法）を開発することが切実に必要とされている。前段落で論じたようなマイクロ流体アッセイの場合、粒子凝集、チャネルの詰まり、およびＰＣＲ阻害等の発生を防止する、および／またはその結果を軽減することが特に必要とされている。より迅速な診断、より効果的な処置、およびより良い患者の結果につながる、種々の臨床ワークフローに適合することが可能な新規の緩衝剤組成物がさらに必要とされている。

本開示の実施形態は、膣疾患および／または性感染症の、特に妨害物質を含む膣サンプルからの核酸ベースの検出および特定のための組成物、キットおよび方法に関する。開示されている実施形態のいくつかは、表面官能化粒子、例えば核酸抽出および／または精製のためのマイクロ流体ＰＣＲデバイスにおいて配置されているものの凝集を防止または低減するための緩衝剤組成物、キットおよび方法に関する。いくつかの実施形態は、膣病原性生物からの核酸の増幅および／または検出の効率を向上し得る。本明細書に記載の組成物、キット、および方法の適用は、特定のサンプルまたは特定の膣疾患に限定されるものではないことは、当業者によって理解されるであろう。

緩衝剤組成物が本明細書に記載されている。いくつかの実施形態において、緩衝剤組成物は、酸および塩基の共役対、キレート剤または還元剤、非イオン性界面活性剤、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、およびその組合せからなる群から選択される一価または二価の塩、ならびに任意に、１種または複数のイソチアゾロンを含む殺菌性保存剤を含む。いくつかの実施形態において、共役対は、酢酸およびその塩を含む。いくつかの実施形態において、共役対は、約５０ｍＭ～約１５０ｍＭの酢酸を含む。いくつかの実施形態において、共役対は、約９０ｍＭ～約１１０ｍＭの酢酸を含む。いくつかの実施形態において、共役対は、約３５０ｍＭ～４５０ｍＭの酢酸ナトリウムを含む。いくつかの実施形態において、共役対は、約４００ｍＭ～約６００ｍＭの範囲の濃度で存在し得る。いくつかの実施形態において、共役対は、酢酸および酢酸ナトリウム、またはトリス－ＨＣｌを含む。いくつかの実施形態において、酢酸は、２００ｍＭ以下の濃度で存在し、酢酸ナトリウムは、３００ｍＭ以上の濃度で存在し得る。いくつかの実施形態において、緩衝剤組成物は、約４．０～約６．０または約１．０～約３．０のｐＨであり得る。いくつかの実施形態において、緩衝剤組成物は約５．０のｐＨであり得る。いくつかの実施形態において、緩衝剤組成物は、約２．４のｐＨであり得る。いくつかの実施形態において、キレート剤は、ＥＤＴＡを含み得る。いくつかの実施形態において、還元剤はＴＣＥＰを含む。いくつかの実施形態において、キレート剤または還元剤は、約１ｍＭ～約２０ｍＭの範囲の濃度で存在し得る。いくつかの実施形態において、キレート剤は、約１０ｍＭの濃度のＥＤＴＡである。いくつかの実施形態において、還元剤は、約１５ｍＭの濃度のＴＣＥＰである。いくつかの実施形態において、非イオン性界面活性剤は、エトキシル化非イオン性界面活性剤、プロキシル化非イオン性界面活性剤、コ－エトキシル化－プロポキシル化非イオン性界面活性剤、およびその組合せからなる群から選択し得る。いくつかの実施形態において、非イオン性界面活性剤は、モノ脂肪酸のエトキシル化ソルビタンエステル、エトキシル化オクチルフェノール、エトキシル化二級Ｃ１－Ｃ２０アルコール、コ－エトキシル化－プロポキシル化種子油アルコールおよびその組合せからなる群から選択し得る。いくつかの実施形態において、非イオン性界面活性剤は、界面活性剤あたり平均１～５０のエチレンオキシド単位を含むモノ脂肪酸のエトキシル化ソルビタンエステル、界面活性剤あたり平均１～２０のエチレンオキシド単位を含むエトキシル化オクチルフェノール、界面活性剤あたり平均１～２０のエチレンオキシド単位を含むエトキシル化二級Ｃ１－Ｃ２０アルコール、界面活性剤あたり平均１～２０のプロピレンオキシド単位および１～３０のエチレンオキシド単位を含むコ－エトキシル化－プロポキシル化種子油アルコールおよびその組合せからなる群から選択し得る。いくつかの実施形態において、非イオン性界面活性剤は、１種または複数のモノ脂肪酸のエトキシル化ソルビタンエステルを含み得る。いくつかの実施形態において、１種または複数のモノ脂肪酸のエトキシル化ソルビタンエステルは、平均１～５０のエチレンオキシド単位を含有し得る。いくつかの実施形態において、非イオン性界面活性剤は、１種または複数のエトキシル化二級Ｃ１－Ｃ２０アルコールを含み得る。いくつかの実施形態において、１種または複数のエトキシル化二級Ｃ１－Ｃ２０アルコールは、平均１～２０のエチレンオキシド単位を含み得る。いくつかの実施形態において、非イオン性界面活性剤は、１種または複数のエトキシル化オクチルフェノールを含み得る。いくつかの実施形態において、１種または複数のエトキシル化オクチルフェノールは、平均１～２０のエチレンオキシド単位を含み得る。いくつかの実施形態において、非イオン性界面活性剤は、１種または複数のコ－エトキシル化－プロポキシル化種子油アルコールを含み得る。いくつかの実施形態において、１種または複数のコ－エトキシル化－プロポキシル化種子油アルコールは、平均１～２０のプロピレンオキシド単位および１～３０のエチレンオキシド単位を含み得る。いくつかの実施形態において、非イオン性界面活性剤は、Ｔｅｒｇｉｔｏｌ（商標）またはＴｒｉｔｏｎ（商標）界面活性剤である。いくつかの実施形態において、非イオン性界面活性剤は、Ｔｅｒｇｉｔｏｌ（商標）１５－Ｓ－９またはＴｒｉｔｏｎ（商標）Ｘ－１００である。いくつかの実施形態において、非イオン性界面活性剤は、緩衝剤組成物の約０．５質量％～１．５質量％の範囲の濃度で存在し得る。いくつかの実施形態において、非イオン性界面活性剤は、緩衝剤組成物の約１．０質量％の範囲の濃度で存在する。いくつかの実施形態において、二価の塩はカルシウム塩であり得る。いくつかの実施形態において、二価の塩はＣａＣｌ₂であり得る。いくつかの実施形態において、一価または二価の塩は、約１００ｍＭ～約３００ｍＭの範囲の濃度で存在し得る。いくつかの実施形態において、一価または二価の塩は、約２００ｍＭの濃度で存在し得る。いくつかの実施形態において、殺菌性保存剤は、緩衝剤組成物の約０．０３質量％の範囲の濃度で存在し得る。いくつかの実施形態において、殺菌性保存剤は、約１質量％～約５質量％の１種または複数のイソチアゾロンを含み得る。いくつかの実施形態において、殺菌性保存剤は、約２質量％～約４質量％の１種または複数のイソチアゾロンを含み得る。いくつかの実施形態において、殺菌性保存剤は、約１質量％～約３質量％の１種または複数のイソチアゾロンを含み得る。いくつかの実施形態において、１種または複数のイソチアゾロンは、クロロメチルイソチアゾリノンおよびメチルイソチアゾリノンを含む。いくつかの実施形態において、クロロメチルイソチアゾリノンおよびメチルイソチアゾリノンは、約１：１～約５：１の質量比である。いくつかの実施形態において、１種または複数のイソチアゾロンは、５－クロロ－２－メチル－４－イソチアゾリン－３－オンおよび２－メチル－４－イソチアゾリン－３－オンを約３：１の質量比で含む。いくつかの実施形態において、殺菌性保存剤は、１種または複数の塩非含有の独自のグリコールおよびアルキルカルボキシレート安定化剤を含む。いくつかの実施形態において、緩衝剤組成物は、殺菌性保存剤を含まない。いくつかの実施形態において、緩衝剤組成物は、実施例緩衝剤Ｉまたは実施例緩衝剤ＩＩ、または実施例緩衝剤ＩＩＩである。

本開示はまた、キットを提供する。いくつかの実施形態において、キットは、上述および／または本明細書の他の箇所に記載する緩衝剤組成物を含む。いくつかの実施形態において、キットは、緩衝剤組成物を収容する無菌容器を含む。いくつかの実施形態において、キットは、膣感染症または炎症に関連する症状を診断するためのマニュアルを含む。いくつかの実施形態において、症状は、膣炎もしくは膣症、または性感染症またはその組合せである。いくつかの実施形態において、症状は、外陰膣カンジダ症（ＶＶＣ）、トリコモナス症または細菌性膣症（ＢＶ）またはその組合せである。いくつかの実施形態において、症状は、性感染症、例えば、クラミジア感染症（ＣＴ）、淋病（ＧＣ）、トリコモナス症（ＴＶ）またはその組合せである。

本開示は、表面官能化粒子の凝集を防止または低減する方法であって、サンプルを、上述および／または本明細書の他の箇所に記載する緩衝剤組成物と接触させることを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態において、サンプルは、複数の表面官能化粒子を含み、緩衝剤組成物の存在下における複数の表面官能化粒子の凝集レベルは、緩衝剤組成物の非存在下における凝集レベルと比較して低減する。いくつかの実施形態において、緩衝剤組成物の存在下における複数の表面官能化粒子の凝集レベルは、緩衝剤組成物の非存在下における凝集レベルと比較して少なくとも１％低減し得る。いくつかの実施形態において、緩衝剤組成物の存在下における複数の表面官能化粒子の凝集レベルは、緩衝剤組成物の非存在下における凝集レベルと比較して少なくとも５％低減する。いくつかの実施形態において、緩衝剤組成物の存在下における複数の表面官能化粒子の凝集レベルは、緩衝剤組成物の非存在下における凝集レベルと比較して少なくとも１０％低減する。いくつかの実施形態において、サンプルは臨床サンプルである。いくつかの実施形態において、サンプルは膣サンプルである。いくつかの実施形態において、サンプルは臨床膣スワブである。いくつかの実施形態において、サンプルは膣から採取される。いくつかの実施形態において、サンプルは、膣炎、膣症、性感染症（例えば、クラミジア感染症（ＣＴ）、淋病（ＧＣ）、トリコモナス症（ＴＶ））またはその組合せの臨床徴候を示す対象から採取する。いくつかの実施形態において、サンプルは、膣炎もしくは膣症、または両方の臨床徴候を示す対象から採取する。いくつかの実施形態において、サンプルは、クラミジア感染症（ＣＴ）、淋病（ＧＣ）、トリコモナス症（ＴＶ）またはその組合せの臨床徴候を示す対象から採取する。いくつかの実施形態において、サンプルは、複数の核酸を含み得る。いくつかの実施形態において、複数の核酸は、１種または複数の外陰膣カンジダ症（ＶＶＣ）関連カンジダ種、トリコモナス症を引き起こす膣トリコモナス、１種または複数の細菌性膣症（ＢＶ）関連細菌またはその組合せ由来である。いくつかの実施形態において、１種または複数のＶＶＣ関連カンジダ種は、カンジダ・グラブラータ、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）、カンジダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、Ｃ．デュブリニエンシス（ｄｕｂｌｉｎｉｅｎｓｉｓ）、Ｃ．パラプシローシス（ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ）、カンジダ・クルセイまたはその組合せを含み得る。いくつかの実施形態において、１種または複数のＢＶ関連細菌は、ラクトバチルス・クリスパタス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ）、ラクトバチルス・ジェンセンイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ）、ガルドネラ・ヴァギナリス（Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ ｖａｇｉｎａｌｉｓ）、アトポビウム・ヴァギナエ（Ａｔｏｐｏｂｉｕｍ ｖａｇｉｎａｅ）、メガスファエラ１型（Ｍｅｇａｓｐｈａｅｒａ Ｔｙｐｅ １）、メガスファエラＢＶＡＢ２またはその組合せを含み得る。いくつかの実施形態において、方法は、複数の核酸を増幅および／または検出することをさらに含んでいてもよく、緩衝剤組成物の存在下における複数の核酸の増幅および／または検出の効率は、緩衝剤組成物の非存在下における効率と比較して向上している。いくつかの実施形態において、緩衝剤組成物の存在下における複数の核酸の増幅および／または検出の効率は、緩衝剤組成物の非存在下における効率と比較して少なくとも１％向上している。いくつかの実施形態において、緩衝剤組成物の存在下における複数の核酸の増幅および／または検出の効率は、緩衝剤組成物の非存在下における効率と比較して少なくとも５％向上している。いくつかの実施形態において、表面官能化粒子は、１ｍｍ未満の平均径を含み得る。いくつかの実施形態において、表面官能化粒子は、核酸の抽出、精製、増幅、検出またはその組合せのために構成されている。いくつかの実施形態において、凝集は、サンプル中の妨害物質によって誘導される。いくつかの実施形態において、凝集はマイクロ流体チャネル中で生じ得る。いくつかの実施形態において、妨害物質は、潤滑剤、ゲル、クリームおよびその組合せからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、妨害物質は、１種または複数のカルボマーを含むゲルを含み得る。いくつかの実施形態において、妨害物質は、カルボマーを含まないゲルを含み得る。

本明細書に記載されている代替または追加の実施形態は、上述の記載または本明細書の他の箇所の任意の記載の１つまたは複数の特徴を含む緩衝剤組成物を提供する。
本明細書に記載されている代替または追加の実施形態は、上述の記載または本明細書の他の箇所の任意の記載の１つまたは複数の特徴を含むキットを提供する。
本明細書に記載されている代替または追加の実施形態は、上述の記載または本明細書の他の箇所の任意の記載の１つまたは複数の特徴を含む、表面官能化粒子の凝集を防止または低減する方法を提供する。

実施例２～９で試験した、臨床膣スワブサンプルのドナー２６３人の、地理的な領域による組成の円グラフを示す。 図２～図４は、本明細書に開示される一実施形態の緩衝剤組成物の使用によって達成される、ＢＤ ＭＡＸ（商標）ＰＣＲカートリッジにおける粒子凝集の低減およびマイクロ流体の詰まりの防止の実施形態を示す（以下の表１を参照）。図２Ａ～図２Ｂは、ＢＤ ＭＡＸ（商標）ＰＣＲカートリッジの実施形態の写真を示し、そのそれぞれは、妨害ゲルを含まない臨床膣スワブサンプルの診断試験に利用されている。 図３Ａ～図３Ｂは、ＢＤ ＭＡＸ（商標）ＰＣＲカートリッジの写真の実施形態を示し、そのそれぞれは、１０μＬで存在するカルボマーベースの妨害ゲルＭｃＫｅｓｓｏｎを含む臨床膣スワブサンプルの診断試験に利用されている。 図４Ａ～図４Ｂは、１０μＬで存在する追加の妨害ゲルＥ－Ｚブランド（Ｍｅｄｌｉｎｅ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ， Ｉｎｃ）（図４Ａ～４Ｂ）の試験に利用されたＢＤ ＭＡＸ（商標）ＰＣＲカートリッジの写真の追加の実施形態を示す。 図５～図６は、２つの代表的な妨害ゲルＥ－Ｚ潤滑ゼリー（Ｍｅｄｌｉｎｅ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）（図５Ａ～５Ｆ）および非カルボマーベースのＳｕｒｇｉｌｕｂｅ（登録商標）（図６Ａ～６Ｆ）の存在下における、比較緩衝剤と比較した、実施例緩衝剤ＩＩによって提供される改善されたアッセイ性能の実施形態を示す。細菌性膣症（ＢＶ）を検出するためのアッセイの実施形態は、比較緩衝剤または実施例緩衝剤のいずれかを用いてＢＤ ＭＡＸ（商標）システムにおいて行った。通常のワークフローに従って比較緩衝剤を使用した場合（図５Ａ、５Ｄ、６Ａ、６Ｄ）、最適化されたワークフローに従って比較緩衝剤を使用した場合（図５Ｂ、５Ｅ、６Ｂ、６Ｅ）、および最適化されたワークフローに従って実施例緩衝剤を使用した場合（図５Ｃ、５Ｆ、６Ｃ、６Ｆ）の３セットの散布図を作成した。 図５～図６は、２つの代表的な妨害ゲルＥ－Ｚ潤滑ゼリー（Ｍｅｄｌｉｎｅ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）（図５Ａ～５Ｆ）および非カルボマーベースのＳｕｒｇｉｌｕｂｅ（登録商標）（図６Ａ～６Ｆ）の存在下における、比較緩衝剤と比較した、実施例緩衝剤ＩＩによって提供される改善されたアッセイ性能の実施形態を示す。細菌性膣症（ＢＶ）を検出するためのアッセイの実施形態は、比較緩衝剤または実施例緩衝剤のいずれかを用いてＢＤ ＭＡＸ（商標）システムにおいて行った。通常のワークフローに従って比較緩衝剤を使用した場合（図５Ａ、５Ｄ、６Ａ、６Ｄ）、最適化されたワークフローに従って比較緩衝剤を使用した場合（図５Ｂ、５Ｅ、６Ｂ、６Ｅ）、および最適化されたワークフローに従って実施例緩衝剤を使用した場合（図５Ｃ、５Ｆ、６Ｃ、６Ｆ）の３セットの散布図を作成した。

本明細書において使用されているセクション見出しは、整理を目的としたものであるに過ぎず、記載されている主題をいかなる形においても限定するものと解釈されるべきではない。本出願で引用されている全ての文献および類似資料、例えば非限定的には特許、特許出願、論文、書籍、論説、およびインターネットのウェブページは、そのような文献および類似資料の形式にかかわらず、任意の目的のためにその全体が参照によって明示的に組み込まれる。１つまたは複数の組み込まれた文献および類似資料が、本出願における用語の使用と矛盾するような方法で用語を定義または使用している場合、本出願が優先する。本発明の教示は、種々の実施形態と併せて記載されているが、本発明の教示がそのような実施形態に限定されることは意図されていない。反対に、本発明の教示は、当業者によって理解されるように、種々の代替物、改変物、および等価物を包含する。

本明細書において、膣疾患、例えば、外陰膣カンジダ症（ＶＶＣ）、トリコモナス症および／または細菌性膣症（ＢＶ）の核酸ベースの検出のための緩衝剤組成物、キット、および方法が提供される。例えば、核酸抽出用のマイクロ流体ＰＣＲカートリッジに配置されている表面官能化粒子のアッセイ時の凝集を防止または低減し得る緩衝剤組成物は、妨害物質の存在下において臨床膣スワブサンプルから病原性生物を検出するために提供される。いくつかの実施形態において、緩衝剤組成物は、例えば、ＶＶＣ関連カンジダ種、トリコモナス症を引き起こす膣トリコモナスおよび／またはＢＶ関連細菌についての核酸ベースの検出の効率を向上または維持し得る。

本明細書で使用される「核酸」は、本開示に鑑みて、その明白および通常の意味を有し、ポリヌクレオチドを形成するために、核酸骨格結合（例えば、ホスホジエステル結合）によって連結された、窒素性複素環塩基または塩基アナログを有するヌクレオシドまたはヌクレオシドアナログを含む高分子化合物を指す。核酸の非限定的な例としては、ＲＮＡ、ＤＮＡ、およびそのアナログが挙げられる。核酸骨格は、種々の結合、例えば、糖－ホスホジエステル結合、ペプチド－核酸結合、ホスホロチオエートまたはメチルホスホネート結合の１つまたは複数、または単一のオリゴヌクレオチドにおけるこのような結合の混合物を含み得る。核酸中の糖部分は、リボースもしくはデオキシリボース、または公知の置換を有する類似の化合物である。従来の窒素性塩基（例えば、Ａ、Ｇ、Ｃ、Ｔ、Ｕ）、公知の塩基アナログ（例えば、イノシン）、プリンまたはピリミジン塩基の誘導体および「脱塩基」残基（すなわち、１つまたは複数の骨格位置について窒素性塩基がない）は、核酸という用語に含まれる。すなわち、核酸は、ＲＮＡおよびＤＮＡに見られる従来の糖、塩基および結合のみを含むか、または従来の構成要素および置換の両方（例えば、メトキシ骨格を介して連結された従来の塩基およびアナログ、またはＲＮＡもしくはＤＮＡ骨格を介して連結された従来の塩基および１つまたは複数の塩基アナログ）を含み得る。

本明細書で使用される「共役対」は、本開示に鑑みてその明白および通常の意味を有し、１つのプロトン（Ｈ⁺）において異なる酸（ＨＡ）および塩基（Ａ^-）を指す。例えば、一塩基性リン酸カリウム（ＫＨ₂ＰＯ₄）と二塩基性リン酸カリウム（Ｋ₂ＨＰＯ₄）は共役対である。他の例としては、酢酸および酢酸ナトリウム（ＣＨ₃ＣＯＯＮａ）も共役対である。
本明細書で使用される用語「感度」は、本開示に鑑みてその明白および通常の意味を有し、試験方法の性能に言及する場合、真陽性を真陽性と偽陰性との合計で割ったものである。当業者は、試験方法の性能に言及する場合、用語「リコール」、「ヒット率」、および「真陽性率（ＴＰＲ）」が、「感度」と同じであることを理解するであろう。
本明細書で使用される用語「特異性」は、本開示に鑑みて、その明白および通常の意味を有しており、試験方法の性能に言及する場合には、真陰性を、真陰性と偽陽性との合計で割ったものである。当業者は、試験方法の性能に言及する場合、用語「選択性」および「真陰性率（ＴＰＲ）」が、「特異性」と同じであることを理解するであろう。
本明細書で使用される用語「精度」は、本開示に鑑みて、その明白および通常の意味を有し、試験方法の性能に言及する場合、真陽性と真陰性との合計を、真陽性、偽陽性、真陰性、および偽陰性の合計で割ったものである。
本明細書で使用される、「ａ」および「ｂ」が整数である「Ｃ_a－Ｃ_b」は、化合物中の炭素原子の数を指す。

緩衝剤組成物
本明細書に開示されるいくつかの実施形態は、緩衝剤組成物を提供する。いくつかの実施形態において、緩衝剤組成物は、酸および塩基の共役対、キレート剤、非イオン性界面活性剤、一価または二価の塩、ならびに任意に殺菌性保存剤を含む。いくつかの実施形態において、緩衝剤組成物は、酸および塩基の共役対、キレート剤、非イオン性界面活性剤、一価または二価の塩、ならびに任意に殺菌性保存剤を、以下を含む本明細書に開示されている量または量の範囲のいずれかで含む。

いくつかの実施形態において、共役対の塩基は酸の塩である。いくつかの実施形態において、酸は、酢酸を含む。いくつかの実施形態において、塩基は酢酸の塩を含む。いくつかの実施形態において、共役対は、酢酸およびその塩を含む。いくつかの実施形態において、塩基は酢酸ナトリウムを含む。いくつかの実施形態において、共役対は、酢酸および酢酸ナトリウムを含む。いくつかの実施形態において、緩衝剤はトリス－ＨＣｌを含む。いくつかの実施形態において、酸（例えば酢酸）の濃度は、次の濃度、またはおよそ次の濃度、または次以下の濃度、またはおよそ次以下の濃度、または次以上の濃度、またはおよそ次以上の濃度：５ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭ、５５ｍＭ、６０ｍＭ、６５ｍＭ、７０ｍＭ、７５ｍＭ、８０ｍＭ、８５ｍＭ、９０ｍＭ、９５ｍＭ、１００ｍＭ、１０５ｍＭ、１１０ｍＭ、１１５ｍＭ、１２０ｍＭ、１２５ｍＭ、１３０ｍＭ、１３５ｍＭ、１４０ｍＭ、１４５ｍＭ、１５０ｍＭ、１５５ｍＭ、１６０ｍＭ、１６５ｍＭ、１７０ｍＭ、１７５ｍＭ、１８０ｍＭ、１８５ｍＭ、１９０ｍＭ、１９５ｍＭ、２００ｍＭ、２０５ｍＭ、２１０ｍＭ、２１５ｍＭ、２２０ｍＭ、２２５ｍＭ、２３０ｍＭ、２３５ｍＭ、２４０ｍＭ、２４５ｍＭ、２５０ｍＭ、２５５ｍＭ、２６０ｍＭ、２６５ｍＭ、２７０ｍＭ、２７５ｍＭ、２８０ｍＭ、２８５ｍＭ、２９０ｍＭ、２９５ｍＭ、３００ｍＭ、３０５ｍＭ、３１０ｍＭ、３１５ｍＭ、３２０ｍＭ、３２５ｍＭ、３３０ｍＭ、３３５ｍＭ、３４０ｍＭ、３４５ｍＭ、３５０ｍＭ、３５５ｍＭ、３６０ｍＭ、３６５ｍＭ、３７０ｍＭ、３７５ｍＭ、３８０ｍＭ、３８５ｍＭ、３９０ｍＭ、３９５ｍＭ、４００ｍＭ、４０５ｍＭ、４１０ｍＭ、４１５ｍＭ、４２０ｍＭ、４２５ｍＭ、４３０ｍＭ、４３５ｍＭ、４４０ｍＭ、４４５ｍＭ、４５０ｍＭ、４５５ｍＭ、４６０ｍＭ、４６５ｍＭ、４７０ｍＭ、４７５ｍＭ、４８０ｍＭ、４８５ｍＭ、４９０ｍＭ、４９５ｍＭ、もしくは５００ｍＭまたはこれらの値の任意の２つの間の範囲である。いくつかの実施形態において、酸（例えば酢酸）の濃度は、５ｍＭ～１００ｍＭ、５ｍＭ～２５０ｍＭ、２００～４００ｍＭ、２５０ｍＭ～５００ｍＭ、３００ｍＭ～５００ｍＭ、または４００ｍＭ～５００ｍＭである。いくつかの実施形態において、塩基（例えば酢酸ナトリウム）の濃度は、次の濃度、またはおよそ次の濃度、または次以下の濃度、またはおよそ次以下の濃度、または次以上の濃度、またはおよそ次以上の濃度：５ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭ、５５ｍＭ、６０ｍＭ、６５ｍＭ、７０ｍＭ、７５ｍＭ、８０ｍＭ、８５ｍＭ、９０ｍＭ、９５ｍＭ、１００ｍＭ、１０５ｍＭ、１１０ｍＭ、１１５ｍＭ、１２０ｍＭ、１２５ｍＭ、１３０ｍＭ、１３５ｍＭ、１４０ｍＭ、１４５ｍＭ、１５０ｍＭ、１５５ｍＭ、１６０ｍＭ、１６５ｍＭ、１７０ｍＭ、１７５ｍＭ、１８０ｍＭ、１８５ｍＭ、１９０ｍＭ、１９５ｍＭ、２００ｍＭ、２０５ｍＭ、２１０ｍＭ、２１５ｍＭ、２２０ｍＭ、２２５ｍＭ、２３０ｍＭ、２３５ｍＭ、２４０ｍＭ、２４５ｍＭ、２５０ｍＭ、２５５ｍＭ、２６０ｍＭ、２６５ｍＭ、 ２７０ｍＭ、２７５ｍＭ、２８０ｍＭ、２８５ｍＭ、２９０ｍＭ、２９５ｍＭ、３００ｍＭ、３０５ｍＭ、３１０ｍＭ、３１５ｍＭ、３２０ｍＭ、３２５ｍＭ、３３０ｍＭ、３３５ｍＭ、３４０ｍＭ、３４５ｍＭ、３５０ｍＭ、３５５ｍＭ、３６０ｍＭ、３６５ｍＭ、３７０ｍＭ、３７５ｍＭ、３８０ｍＭ、３８５ｍＭ、３９０ｍＭ、３９５ｍＭ、４００ｍＭ、４０５ｍＭ、４１０ｍＭ、４１５ｍＭ、４２０ｍＭ、４２５ｍＭ、４３０ｍＭ、４３５ｍＭ、４４０ｍＭ、４４５ｍＭ、４５０ｍＭ、４５５ｍＭ、４６０ｍＭ、４６５ｍＭ、４７０ｍＭ、４７５ｍＭ、４８０ｍＭ、４８５ｍＭ、４９０ｍＭ、４９５ｍＭもしくは５００ｍＭ、またはこれらの値の任意の２つの間の範囲である。いくつかの実施形態において、塩基（例えば酢酸ナトリウム）の濃度は、５ｍＭ～１００ｍＭ、５ｍＭ～２５０ｍＭ、２００～４００ｍＭ、２５０ｍＭ～５００ｍＭ、３００ｍＭ～５００ｍＭ、または４００ｍＭ～５００ｍＭである。いくつかの実施形態において、共役対は、約３５０ｍＭ～４５０ｍＭの酢酸ナトリウムを含む。いくつかの実施形態において、共役対は、約５０ｍＭ～約１５０ｍＭの酢酸を含む。いくつかの実施形態において、共役対は、約９０ｍＭ～約１１０ｍＭの酢酸を含む。いくつかの実施形態において、共役対は、次の濃度、またはおよそ次の濃度、または次以下の濃度、またはおよそ次以下の濃度、または次以上の濃度、またはおよそ次以上の濃度：５ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭ、５５ｍＭ、６０ｍＭ、６５ｍＭ、７０ｍＭ、７５ｍＭ、８０ｍＭ、８５ｍＭ、９０ｍＭ、９５ｍＭ、１００ｍＭ、１０５ｍＭ、１１０ｍＭ、１１５ｍＭ、１２０ｍＭ、１２５ｍＭ、１３０ｍＭ、１３５ｍＭ、１４０ｍＭ、１４５ｍＭ、１５０ｍＭ、１５５ｍＭ、１６０ｍＭ、１６５ｍＭ、１７０ｍＭ、１７５ｍＭ、１８０ｍＭ、１８５ｍＭ、１９０ｍＭ、１９５ｍＭ、２００ｍＭ、２０５ｍＭ、２１０ｍＭ、２１５ｍＭ、２２０ｍＭ、２２５ｍＭ、２３０ｍＭ、２３５ｍＭ、２４０ｍＭ、２４５ｍＭ、２５０ｍＭ、２５５ｍＭ、２６０ｍＭ、２６５ｍＭ、 ２７０ｍＭ、２７５ｍＭ、２８０ｍＭ、２８５ｍＭ、２９０ｍＭ、２９５ｍＭ、３００ｍＭ、３０５ｍＭ、３１０ｍＭ、３１５ｍＭ、３２０ｍＭ、３２５ｍＭ、３３０ｍＭ、３３５ｍＭ、３４０ｍＭ、３４５ｍＭ、３５０ｍＭ、３５５ｍＭ、３６０ｍＭ、３６５ｍＭ、３７０ｍＭ、３７５ｍＭ、３８０ｍＭ、３８５ｍＭ、３９０ｍＭ、３９５ｍＭ、４００ｍＭ、４０５ｍＭ、４１０ｍＭ、４１５ｍＭ、４２０ｍＭ、４２５ｍＭ、４３０ｍＭ、４３５ｍＭ、４４０ｍＭ、４４５ｍＭ、４５０ｍＭ、４５５ｍＭ、４６０ｍＭ、４６５ｍＭ、４７０ｍＭ、４７５ｍＭ、４８０ｍＭ、４８５ｍＭ、４９０ｍＭ、４９５ｍＭ、５００ｍＭ、５０５ｍＭ、５１０ｍＭ、５１５ｍＭ、５２０ｍＭ、５２５ｍＭ、５３０ｍＭ、５３５ｍＭ、５４０ｍＭ、５４５ｍＭ、５５０ｍＭ、５５５ｍＭ、５６０ｍＭ、５６５ｍＭ、５７０ｍＭ、５７５ｍＭ、５８０ｍＭ、５８５ｍＭ、５９０ｍＭ、５９５ｍＭ、６００ｍＭ、６０５ｍＭ、６１０ｍＭ、６１５ｍＭ、６２０ｍＭ、６２５ｍＭ、６３０ｍＭ、６３５ｍＭ、６４０ｍＭ、６４５ｍＭ、６５０ｍＭ、６５５ｍＭ、６６０ｍＭ、６６５ｍＭ、６７０ｍＭ、６７５ｍＭ、６８０ｍＭ、６８５ｍＭ、６９０ｍＭ、６９５ｍＭ、７００ｍＭ、７０５ｍＭ、７１０ｍＭ、７１５ｍＭ、７２０ｍＭ、７２５ｍＭ、７３０ｍＭ、７３５ｍＭ、７４０ｍＭ、７４５ｍＭ、７５０ｍＭ、７５５ｍＭ、７６０ｍＭ、７６５ｍＭ、７７０ｍＭ、７７５ｍＭ、７８０ｍＭ、７８５ｍＭ、７９０ｍＭ、７９５ｍＭ、８００ｍＭ、８０５ｍＭ、８１０ｍＭ、８１５ｍＭ、８２０ｍＭ、８２５ｍＭ、８３０ｍＭ、８３５ｍＭ、８４０ｍＭ、８４５ｍＭ、８５０ｍＭ、８５５ｍＭ、８６０ｍＭ、８６５ｍＭ、８７０ｍＭ、８７５ｍＭ、８８０ｍＭ、８８５ｍＭ、８９０ｍＭ、８９５ｍＭもしくは９００ｍＭ、またはこれらの値の任意の２つの間の範囲の濃度で存在する。いくつかの実施形態において、共役対（例えば、酢酸および酢酸ナトリウムまたはトリス－ＨＣＬ）の濃度は、５ｍＭ～１００ｍＭ、５ｍＭ～２５０ｍＭ、２００～４００ｍＭ、２５０ｍＭ～５００ｍＭ、３００ｍＭ～５００ｍＭ、４００ｍＭ～５００ｍＭ、５ｍＭ～１Ｍ、３００ｍＭ～７００ｍＭ、５００ｍＭ～９００ｍＭ、７５０ｍＭ～１Ｍまたは８００ｍＭ～１Ｍである。いくつかの実施形態において、共役対は、約４００ｍＭ～約６００ｍＭの範囲の濃度で存在する。いくつかの実施形態において、共役対は、酢酸および酢酸ナトリウムを含む。いくつかの実施形態において、酢酸は、２００ｍＭ以下の濃度において存在し、酢酸ナトリウムは、３００ｍＭ以上の濃度で存在する。いくつかの実施形態において、共役対は、１０ｍＭの濃度のトリス－ＨＣｌである。

いくつかの実施形態において、緩衝剤組成物のｐＨは、次の値、またはおよそ次の値、または次以下、またはおよそ次以下、または次以上、またはおよそ次以上：１．０、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９もしくは８．０またはこれらの値のいずれかの間の範囲である。いくつかの実施形態において、緩衝剤組成物は、ｐＨが約４．０～約６．０である。いくつかの実施形態において、緩衝剤組成物は、ｐＨが約５．０である。

いくつかの実施形態において、キレート剤としては、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、エチレンジアミン、グルタミン酸、およびヒスチジン等のアミノ酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸等の有機二酸、およびこれらの薬学的に許容される塩が挙げられるが、これらに限定されるものではない。いくつかの実施形態において、キレート剤はＥＤＴＡを含む。いくつかの実施形態において、キレート剤（例えばＥＤＴＡ）の濃度は、次の値、またはおよそ次の値、または次以下、またはおよそ次以下、または次以上、またはおよそ次以上：０．２ｍＭ、０．５ｍＭ、０．８ｍＭ、０．９ｍＭ、１ｍＭ、２ｍＭ、３ｍＭ、４ｍＭ、５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、１１ｍＭ、１２ｍＭ、１３ｍＭ、１４ｍＭ、１５ｍＭ、１６ｍＭ、１７ｍＭ、１８ｍＭ、１９ｍＭもしくは２０ｍＭ、またはこれらの値の任意の２つの間の範囲である。いくつかの実施形態において、キレート剤は、約１ｍＭ～約２０ｍＭ、０．２ｍＭ～２ｍＭ、１ｍＭ～７ｍＭ、１６ｍＭ～２０ｍＭ、１０ｍＭ～２０ｍＭ、または４ｍＭ～８ｍＭの範囲の濃度で存在する。いくつかの実施形態において、キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）の濃度は、約１０ｍＭである。

いくつかの実施形態において、非イオン性界面活性剤は、エトキシル化非イオン性界面活性剤、プロポキシル化非イオン性界面活性剤、コ－エトキシル化－プロポキシル化非イオン性界面活性剤およびその組合せからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、非イオン性界面活性剤は、モノ脂肪酸のエトキシル化ソルビタンエステル、エトキシル化オクチルフェノール、エトキシル化二級Ｃ１－Ｃ２０アルコール、コ－エトキシル化－プロポキシル化種子油アルコール、およびその組合せからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、非イオン性界面活性剤は、界面活性剤あたり平均１～５０のエチレンオキシド単位を含むモノ脂肪酸のエトキシル化ソルビタンエステル、界面活性剤あたり平均１～２０のエチレンオキシド単位を含むエトキシル化オクチルフェノール、界面活性剤あたり平均１～２０のエチレンオキシド単位を含むエトキシル化二級Ｃ１－Ｃ２０アルコール、界面活性剤あたり平均１～２０のプロピレンオキシド単位および１～３０のエチレンオキシド単位を含むコ－エトキシル化－プロポキシル化種子油アルコールおよびその組合せからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、非イオン性界面活性剤は、モノ脂肪酸の１種または複数のエトキシル化ソルビタンエステルを含む。いくつかの実施形態において、１種または複数のモノ脂肪酸のエトキシル化ソルビタンエステルは、平均１～５０のエチレンオキシド単位を含む。いくつかの実施形態において、非イオン性界面活性剤は、Ｔｗｅｅｎ界面活性剤を含む。いくつかの実施形態において、非イオン性界面活性剤は、Ｔｗｅｅｎ ２０界面活性剤、Ｔｗｅｅｎ ４０界面活性剤、Ｔｗｅｅｎ ６０界面活性剤、Ｔｗｅｅｎ ８０界面活性剤またはその組合せを含む。いくつかの実施形態において、界面活性剤は、ＥＣＯＳＵＲＦ（商標）界面活性剤（Ｄｏｗ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．）、例えばＥＣＯＳＵＲＦ（商標）ＳＡ－４、ＳＡ－７、ＳＡ－９またはＳＡ－１５界面活性剤である。いくつかの実施形態において、非イオン性界面活性剤は１種または複数のエトキシル化二級Ｃ１－Ｃ２０アルコールを含む。いくつかの実施形態において、１種または複数のエトキシル化二級Ｃ１－Ｃ２０アルコールは、平均１～２０のエチレンオキシド単位を含む。いくつかの実施形態において、非イオン性界面活性剤は、Ｔｅｒｇｉｔｏｌ（商標）界面活性剤（Ｓｉｇｎｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、例えばＴｅｒｇｉｔｏｌ（商標）１５－Ｓ－９界面活性剤を含む。いくつかの実施形態において、非イオン性界面活性剤は、１種または複数のエトキシル化オクチルフェノールを含む。１種または複数のエトキシル化オクチルフェノールのいくつかは、平均１～２０のエチレンオキシド単位を含む。いくつかの実施形態において、非イオン性界面活性剤は、Ｔｒｉｔｏｎ界面活性剤、例えばＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００界面活性剤を含む。いくつかの実施形態において、非イオン性界面活性剤は、１種または複数のコ－エトキシル化－プロポキシル化種子油アルコールを含む。１種または複数のコ－エトキシル化－プロポキシル化種子油アルコールのいくつかは、平均１～２０のプロピレンオキシド単位および１～３０のエチレンオキシド単位を含む。いくつかの実施形態において、非イオン性界面活性剤は、ＥｃｏＳｕｒｆ（商標）界面活性剤を含む。非イオン性界面活性剤は、緩衝剤組成物中に、次の濃度、またはおよそ次の濃度、または次以下の濃度、またはおよそ次以下の濃度、または次以上の濃度、またはおよそ次以上の濃度：０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１．０％、１．１％、１．２％、１．３％、１．４％、１．５％、１．６％、１．７％、１．８％、１．９％、２．０％、２．１％、２．２％、２．３％、２．４％、２．５％、２．６％、２．７％、２．８％、２．９％もしくは３．０％、またはこれらの値の任意の２つの間の範囲で存在する。いくつかの実施形態において、非イオン性界面活性剤は、緩衝剤組成物の、約０．５質量％～１．５質量％、０．１質量％～３．０質量％、０．８質量％～１．９質量％、１．０質量％～２．０質量％、２．５質量％～３質量％または０．７質量％～２．６質量％の範囲の濃度で存在する。いくつかの実施形態において、非イオン性界面活性剤は、緩衝剤組成物の約１．０質量％の範囲の濃度で存在する。

いくつかの実施形態において、一価または二価の塩は、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩またはその組合せからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、二価の塩はカルシウム塩である。いくつかの実施形態において、二価の塩はＣａＣｌ₂である。いくつかの実施形態において、一価または二価の塩は、次の濃度、またはおよそ次の濃度、または次以下の濃度、またはおよそ次以下の濃度、または次以上の濃度、またはおよそ次以上の濃度：５ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭ、５５ｍＭ、６０ｍＭ、６５ｍＭ、７０ｍＭ、７５ｍＭ、８０ｍＭ、８５ｍＭ、９０ｍＭ、９５ｍＭ、１００ｍＭ、１０５ｍＭ、１１０ｍＭ、１１５ｍＭ、１２０ｍＭ、１２５ｍＭ、１３０ｍＭ、１３５ｍＭ、１４０ｍＭ、１４５ｍＭ、１５０ｍＭ、１５５ｍＭ、１６０ｍＭ、１６５ｍＭ、１７０ｍＭ、１７５ｍＭ、１８０ｍＭ、１８５ｍＭ、１９０ｍＭ、１９５ｍＭ、２００ｍＭ、２０５ｍＭ、２１０ｍＭ、２１５ｍＭ、２２０ｍＭ、２２５ｍＭ、２３０ｍＭ、２３５ｍＭ、２４０ｍＭ、２４５ｍＭ、２５０ｍＭ、２５５ｍＭ、２６０ｍＭ、２６５ｍＭ、２７０ｍＭ、２７５ｍＭ、２８０ｍＭ、２８５ｍＭ、２９０ｍＭ、２９５ｍＭ、３００ｍＭ、３０５ｍＭ、３１０ｍＭ、３１５ｍＭ、３２０ｍＭ、３２５ｍＭ、３３０ｍＭ、３３５ｍＭ、３４０ｍＭ、３４５ｍＭ、３５０ｍＭ、３５５ｍＭ、３６０ｍＭ、３６５ｍＭ、３７０ｍＭ、３７５ｍＭ、３８０ｍＭ、３８５ｍＭ、３９０ｍＭ、３９５ｍＭ、４００ｍＭ、４０５ｍＭ、４１０ｍＭ、４１５ｍＭ、４２０ｍＭ、４２５ｍＭ、４３０ｍＭ、４３５ｍＭ、４４０ｍＭ、４４５ｍＭ、４５０ｍＭ、４５５ｍＭ、４６０ｍＭ、４６５ｍＭ、４７０ｍＭ、４７５ｍＭ、４８０ｍＭ、４８５ｍＭ、４９０ｍＭ、４９５ｍＭもしくは５００ｍＭ、またはこれらの値の任意の２つの間の範囲の濃度で存在する。いくつかの実施形態において、一価または二価の塩（例えばＣａＣｌ₂）の濃度は、５ｍＭ～１００ｍＭ、５ｍＭ～２５０ｍＭ、２００～４００ｍＭ、２５０ｍＭ～５００ｍＭ、３００ｍＭ～５００ｍＭまたは４００ｍＭ～５００ｍＭである。いくつかの実施形態において、一価または二価の塩は、約１００ｍＭ～約３００ｍＭの範囲の濃度で存在する。いくつかの実施形態において、一価または二価の塩は、約２００ｍＭの濃度で存在する。

いくつかの実施形態において、緩衝剤組成物は、任意に殺菌性保存剤を含む。いくつかの実施形態において、殺菌性保存剤は、１種または複数のイソチアゾロンを含む。いくつかの実施形態において、殺菌性保存剤は、次の濃度、またはおよそ次の濃度、または次以下の濃度、またはおよそ次以下の濃度、または次以上の濃度、またはおよそ次以上の濃度：緩衝剤組成物の０．０１質量％、０．０１５質量％、０．０２質量％、０．０２５質量％、０．０３質量％、０．０３５質量％、０．０４質量％、０．０４５質量％、０．０５質量％、０．０６質量％、０．０７質量％、０．０８質量％、０．０９質量％、または０．１質量％、またはこれらの値の任意の２つの間の範囲の濃度で存在する。いくつかの実施形態において、殺菌性保存剤は、緩衝剤組成物の約０．０１質量％～０．１質量％、０．０１質量％～０．０３質量％、０．０２５質量％～０．０４５質量％、０．０５質量％～０．１質量％、０．０７質量％～０．０１質量％または０．０４質量％～０．０８質量％の濃度で存在する。いくつかの実施形態において、殺菌性保存剤は、緩衝剤組成物の約０．０３質量％の濃度で存在する。いくつかの実施形態において、殺菌性保存剤は、ＰｒｏＣｌｉｎ（商標）３００である。いくつかの実施形態において、殺菌性保存剤 ＰｒｏＣｌｉｎ（商標）３００は、緩衝剤組成物の約０．０３質量％の濃度で存在する。いくつかの実施形態において、殺菌性保存剤は、次、またはおよそ次、または次以下、またはおよそ次以下、または次以上、またはおよそ次以上：０．１質量％、０．２質量％、０．３質量％、０．４質量％、０．５質量％、０．６質量％、０．７質量％、０．８質量％、０．９質量％、１．０質量％、１．１質量％、１．２質量％、１．３質量％、１．４質量％、１．５質量％、１．６質量％、１．７質量％、１．８質量％、１．９質量％、２．０質量％、２．１質量％、２．２質量％、２．３質量％、２．４質量％、２．５質量％、２．６質量％、２．７質量％、２．８質量％、２．９質量％、３．０質量％、３．１質量％、３．２質量％、３．３質量％、３．４質量％、３．５質量％、３．６質量％、３．７質量％、３．８質量％、３．９質量％、４．０質量％、４．１質量％、４．２質量％、４．３質量％、４．４質量％、４．５質量％、４．６質量％、４．７質量％、４．８質量％、４．９質量％、５．０質量％、５．１質量％、５．２質量％、５．３質量％、５．４質量％、５．５質量％、５．６質量％、５．７質量％、５．８質量％、５．９質量％もしくは６．０質量％またはこれらの値の任意の２つの間の範囲の１種または複数のイソチアゾロンを含む。いくつかの実施形態において、殺菌性保存剤は、緩衝剤組成物の約０．１質量％～６．０質量％、０．１質量％～３．０質量％、１．０質量％～４．０質量％、３質量％～６質量％、５質量％～６質量％または２質量％～５質量％の濃度で存在する。いくつかの実施形態において、殺菌性保存剤は、約１質量％～約５質量％の１種または複数のイソチアゾロンを含む。いくつかの実施形態において、殺菌性保存剤は、約２質量％～約４質量％の１種または複数のイソチアゾロンを含む。いくつかの実施形態において、殺菌性保存剤は、約１質量％～約３質量％の１種または複数のイソチアゾロンを含む。いくつかの実施形態において、１種または複数のイソチアゾロンは、クロロメチルイソチアゾリノンおよびメチルイソチアゾリノンを含む。いくつかの実施形態において、クロロメチルイソチアゾリノンおよびメチルイソチアゾリノンは、次の質量比、またはおよそ次の質量比、または次以下の質量比、またはおよそ次以下の質量比、または次以上の質量比、またはおよそ次以上の質量比：１：１、１．５：１、２：１、２．５：１ ３：１、３：５：１、４：１、４．５：１、５：１、５．５：１、６：１、６．５：１、７：１、７．５：１、８：１、８．５：１、９：１、９．５：１もしくは１０：１、またはこれらの値の任意の２つの間の範囲の質量比である。いくつかの実施形態において、クロロメチルイソチアゾリノンおよびメチルイソチアゾリノンは、約１：１～約５：１の質量比である。いくつかの実施形態において、１種または複数のイソチアゾロンは、５－クロロ－２－メチル－４－イソチアゾリン－３－オンおよび２－メチル－４－イソチアゾリン－３－オンを約３：１の質量比で含む。いくつかの実施形態において、殺菌性保存剤は、１種または複数の塩非含有の独自のグリコールおよびアルキルカルボキシレート安定化剤を含む。いくつかの実施形態において、緩衝剤組成物は、試験前にサンプルを保存するために使用される。いくつかの実施形態において、緩衝剤組成物は、殺菌性保存剤を含まない。

いくつかの実施形態において、緩衝剤組成物は、還元剤を含む。いくつかの実施形態において、還元剤は、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、β－メルカプトエタノール、およびＴＣＥＰ（トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン）からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、還元剤はＴＣＥＰ（トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン）である。いくつかの実施形態において、還元剤（例えばＴＣＥＰ）の濃度は、次、またはおよそ次、または次以下、またはおよそ次以下、または次以上、およそ次以上：０．２ｍＭ、０．５ｍＭ、０．８ｍＭ、０．９ｍＭ、１ｍＭ、２ｍＭ、３ｍＭ、４ｍＭ、５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、１１ｍＭ、１２ｍＭ、１３ｍＭ、１４ｍＭ、１５ｍＭ、１６ｍＭ、１７ｍＭ、１８ｍＭ、１９ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、４０ｍＭもしくは５０ｍＭまたはこれらの値の任意の２つの間の範囲の濃度である。いくつかの実施形態において、還元剤は、１ｍＭ～５０ｍＭ、１ｍＭ～３０ｍＭ、１０ｍＭ～２０ｍＭの範囲の濃度で存在する。いくつかの実施形態において、キレート剤（例えばＴＣＥＰ）の濃度は約１５ｍＭである。

例示的な緩衝剤組成物
以下は非限定的な例示的な緩衝剤組成物である。いくつかの実施形態において、緩衝剤組成物は、緩衝剤＃１、＃２または＃３の構成要素を含む：

上記緩衝剤＃１～３のいくつかの実施形態において、酸－塩基対は、酢酸／酢酸ナトリウムおよびトリス－ＨＣｌからなる群から選択され、キレート剤は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、エチレンジアミン、グルタミン酸およびヒスチジン等のアミノ酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸等の有機二酸等からなる群から選択され、界面活性剤は、エトキシル化非イオン性界面活性剤、プロポキシル化非イオン性界面活性剤、コ－エトキシル化－プロポキシル化非イオン性界面活性剤、およびその組合せからなる群から選択される。一価または二価の塩は、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、またはその組合せからなる群から選択され、殺菌性保存剤は、１種または複数のイソチアゾロンを含む。上記緩衝剤＃１～３のいくつかの実施形態において、酸－塩基対は酢酸／酢酸ナトリウムであり、キレート剤はＥＤＴＡであり、界面活性剤はＴｅｒｇｉｔｏｌ（商標）１５－Ｓ－９、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００（商標）界面活性剤またはＥｃｏｓｕｒｆ（商標）界面活性剤であり、二価の塩はＣａＣｌ₂であり、殺菌性保存剤はクロロメチルイソチアゾリノンとメチルイソチアゾリノンとの組合せである。上記緩衝剤＃１～３のいくつかの実施形態において、酸－塩基対は酢酸／酢酸ナトリウムであり、キレート剤はＥＤＴＡであり、界面活性剤はＴｅｒｇｉｔｏｌ（商標）１５－Ｓ－９またはＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００（商標）であり、二価の塩はＣａＣｌ₂であり、殺菌性保存剤はクロロメチルイソチアゾリノンとメチルイソチアゾリノンとの組合せである。上記の緩衝剤＃１～３のいくつかの実施形態において、酸－塩基対は酢酸／酢酸ナトリウムであり、キレート剤はＥＤＴＡであり、界面活性剤はＴｅｒｇｉｔｏｌ（商標）１５－Ｓ－９またはＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００（商標）であり、二価の塩はＣａＣｌ₂であり、殺菌性保存剤はＰｒｏＣｌｉｎ（商標）３００である。上記緩衝剤＃１～３のいくつかの実施形態において、酸－塩基対は酢酸／酢酸ナトリウムであり、キレート剤はＥＤＴＡであり、界面活性剤はＴｅｒｇｉｔｏｌ（商標）１５－Ｓ－９またはＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００（商標）であり、二価の塩はＣａＣｌ₂であり、殺菌性保存剤はＰｒｏＣｌｉｎ（商標）３００である。上記緩衝剤＃１～３のいくつかの実施形態において、酸－塩基対は酢酸／酢酸ナトリウムであり、キレート剤はＥＤＴＡであり、界面活性剤はＴｅｒｇｉｔｏｌ（商標）１５－Ｓ－９であり、二価の塩はＣａＣｌ₂であり、殺菌性保存剤はＰｒｏＣｌｉｎ（商標）３００である。上記緩衝剤＃１～３のいくつかの実施形態において、酸－塩基対は酢酸／酢酸ナトリウムであり、キレート剤はＥＤＴＡであり、界面活性剤はＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００（商標）であり、二価塩はＣａＣｌ₂であり、殺菌性保存剤はＰｒｏＣｌｉｎ（商標）３００である。上記および本明細書のものを含む緩衝剤＃１～３のいくつかの実施形態において、緩衝剤組成物は、殺菌性保存剤を含まない。

いくつかの実施形態において、緩衝剤は、緩衝剤＃４、＃５または＃６の構成要素を含む：

上記緩衝剤＃４～６のいくつかの実施形態において、酸－塩基対は、酢酸／酢酸ナトリウムおよびトリス－ＨＣｌからなる群から選択され、界面活性剤は、エトキシル化非イオン性界面活性剤、プロポキシル化非イオン性界面活性剤、コ－エトキシル化－プロポキシル化非イオン性界面活性剤およびその組合せからなる群から選択され、還元剤は、β－メルカプトエタノールおよびＴＣＥＰ（トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン）から選択され、一価または二価の塩は、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、またはその組合せからなる群から選択される。上記緩衝剤＃４～６のいくつかの実施形態において、酸－塩基対は、酢酸トリス－ＨＣｌであり、界面活性剤はＴｅｒｇｉｔｏｌ（商標）１５－Ｓ－９、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００（商標）、Ｔｗｅｅｎ（商標）界面活性剤またはＥｃｏｓｕｒｆ（商標）界面活性剤であり、還元剤はβ－メルカプトエタノールおよびＴＣＥＰからなる群から選択され、一価または二価の塩はカルシウム塩である。上記緩衝剤＃４～６のいくつかの実施形態において、酸－塩基対はトリス－ＨＣｌであり、界面活性剤はＴｅｒｇｉｔｏｌ（商標）１５－Ｓ－９またはＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００（商標）であり、還元剤はＴＣＥＰ（トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン）であり、一価または二価の塩はＣａＣｌ₂である。上記緩衝剤＃４～６のいくつかの実施形態において、酸－塩基対はトリス－ＨＣｌであり、界面活性剤はＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００（商標）であり、還元剤はＴＣＥＰであり、一価または二価の塩はＣａＣｌ₂である。いくつかの実施形態において、緩衝剤組成物は、１０ｍＭのトリス－ＨＣｌ緩衝剤、ＴＣＥＰ１５ｍＭ、１％のＴｒｉｔｏｎ－Ｘ１００、ＣａＣｌ₂ ５０～１５０ｍＭ、ｐＨ２．４±０．２を含む。上記および本明細書のものを含む緩衝剤＃４～６のいくつかの実施形態において、緩衝剤は本明細書に開示されるような殺菌性保存剤を含む。いくつかの実施形態において、殺菌性保存剤はＰｒｏＣｌｉｎ（商標）３００である。いくつかの実施形態において、殺菌性保存剤は、０．０３％の量のＰｒｏＣｌｉｎ（商標）３００である。上記および本明細書のものを含む緩衝剤＃４－６のいくつかの実施形態において、緩衝剤組成物は、殺菌性保存剤を含まない。

いくつかの実施形態において、緩衝剤は、実施例緩衝剤Ｉまたは実施例緩衝剤ＩＩである：

いくつかの実施形態において、緩衝剤は、実施例緩衝剤ＩＩＩである：

キット
本明細書に開示する実施形態のいくつかは、キットを提供する。いくつかの実施形態において、キットは、上述または本明細書の他の箇所に記載する緩衝剤組成物を含む。いくつかの実施形態において、キットは緩衝剤組成物を収容する無菌容器を含む。いくつかの実施形態において、キットはマイクロ流体カートリッジをさらに含む。いくつかの実施形態において、マイクロ流体カートリッジは、核酸の処理および検出を促進するように構成されている。いくつかの実施形態において、マイクロ流体カートリッジは使い捨てである。いくつかの実施形態において、キットは、膣感染症または炎症に関連する症状を診断するためのマニュアルを含む。いくつかの実施形態において、症状は、膣炎もしくは膣症、またはその組合せである。いくつかの実施形態において、症状は、外陰膣カンジダ症（ＶＶＣ）、トリコモナス症もしくは細菌性膣症（ＢＶ）またはその組合せである。いくつかの実施形態において、症状は、性感染疾患、例えばクラミジア感染症（ＣＴ）、淋病（ＧＣ）、トリコモナス症（ＴＶ）またはその組合せである。

方法
本明細書に開示された実施形態のいくつかは、表面官能化粒子の凝集を防止または低減する方法であって、上述の「緩衝剤組成物」のセクションに記載された、または本明細書の他の箇所に記載された緩衝剤組成物とサンプルを接触させることを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態において、サンプルは複数の表面官能化粒子を含み、緩衝剤組成物の存在下における複数の表面官能化粒子の凝集レベルは、緩衝剤組成物の非存在下における凝集レベルと比較して低減する。

いくつかの実施形態において、緩衝剤組成物の存在下における複数の表面官能化粒子の凝集レベルは、緩衝剤組成物の非存在下における凝集レベルと比較して、次、またはおよそ次、または少なくとも次、または少なくともおよそ次、または最大でも次、または最大でもおよそ次：０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％． ８０％、８５％、９０％、９５％もしくは１００％またはこれらの値の任意の２つの間の範囲で低減する。いくつかの実施形態において、緩衝剤組成物の存在下における複数の表面官能化粒子の凝集レベルは、緩衝剤組成物の非存在下における凝集レベルと比較して少なくとも１％低減する。いくつかの実施形態において、緩衝剤組成物の存在下における複数の表面官能化粒子の凝集レベルは、緩衝剤組成物の非存在下における凝集レベルと比較して少なくとも５％低減する。いくつかの実施形態において、緩衝剤組成物の存在下における複数の表面官能化粒子の凝集レベルは、緩衝剤組成物の非存在下における凝集レベルと比較して少なくとも１０％低減する。いくつかの実施形態において、緩衝剤組成物の存在下における複数の表面官能化粒子の凝集レベルは、緩衝剤組成物の非存在下における凝集レベルと比較して１～５％、１～１０％、１～２０％、１～３０％、１～４０％、１～５０％、１～６０％、１～７０％、１～８０％、１～９０％、５～１０％、５～２０％、５～３０％、５～４０％、５～５０％、５～６０％、５～７０％、５～８０％、５～９０％、１０～２０％、１０～３０％、１０～４０％、１０～５０％、１０～６０％、１０～７０％、１０～８０％または１０～９０％低減する。いくつかの実施形態において、粒子凝集レベルは、デジタル画像処理を使用して測定し、粒子凝集のサイズは、画像上の径または２次元面積を測定することによって決定する。

いくつかの実施形態において、サンプルは臨床サンプルである。いくつかの実施形態において、サンプルは膣サンプルである。いくつかの実施形態において、サンプルは臨床膣スワブである。いくつかの実施形態において、サンプルは膣から採取する。いくつかの実施形態において、サンプルは膣炎もしくは膣症または両方の臨床徴候を示す対象から採取する。いくつかの実施形態において、サンプルは複数の核酸を含む。いくつかの実施形態において、サンプルは、１種または複数の外陰膣カンジダ症（ＶＶＣ）関連カンジダ種、トリコモナス症を引き起こす膣トリコモナス、１種または複数の細菌性膣症（ＢＶ）関連細菌またはその組合せ由来の複数の核酸を含む。いくつかの実施形態において、１種または複数のＶＶＣ関連カンジダ種は、カンジダ・グラブラータ、カンジダ・アルビカンス、カンジダ・トロピカリス、Ｃ．デュブリニエンシス、Ｃ．パラプシローシス、カンジダ・クルセイまたはその組合せを含む。いくつかの実施形態において、１種または複数のＢＶ関連細菌は、ラクトバチルス・クリスパタス、ラクトバチルス・ジュンセンイ、ガルドネラ・ヴァギナリス、アトポビウム・ヴァギナエ、メガスファエラ１型、メガスファエラＢＶＡＢ２またはその組合せを含む。

いくつかの実施形態において、方法は、複数の核酸を増幅および／または検出することをさらに含み、複数の核酸の増幅および／または検出の効率は、緩衝剤組成物の存在下において、緩衝剤組成物の非存在下の効率と比較して向上している。いくつかの実施形態において、複数の核酸の増幅および／または検出の効率は、緩衝剤組成物の非存在下における効率と比較して、次、またはおよそ次、または少なくとも次、または少なくともおよそ次、または最大でも次、または最大でもおよそ次：１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％またはこれらの値の任意の２つの間の範囲で向上する。いくつかの実施形態において、緩衝剤組成物の存在下における複数の核酸の増幅および／または検出の効率は、緩衝剤組成物の非存在下における効率と比較して、少なくとも１％向上している。いくつかの実施形態において、緩衝剤組成物の存在下における複数の核酸の増幅および／または検出の効率は、緩衝剤組成物の非存在下における効率と比較して、少なくとも５％向上している。いくつかの実施形態において、緩衝剤組成物の存在下における複数の核酸の増幅および／または検出の効率は、緩衝剤組成物の非存在下における効率と比較して、１～１０％、１～２０％、１～３０％、１～４０％、１～５０％、１～６０％、１～７０％、１～８０％、または１～９０％、５～１０％、５～２０％、５～３０％、５～４０％、５～５０％、５～６０％、５～７０％、５～８０％、５～９０％、１０～２０％、１０～３０％、１０～４０％、１０～５０％、１０～６０％、１０～７０％、１０～８０％または１０～９０％向上する。
いくつかの実施形態において、表面官能化粒子は、１ｍｍ未満の平均径を含む。いくつかの実施形態において、表面官能化粒子は、核酸の抽出、精製、増幅、検出、またはその組合せのために構成される。いくつかの実施形態において、凝集は、サンプル中の妨害物質によって誘導される。いくつかの実施形態において、凝集はマイクロ流体チャネル内で生じる。
いくつかの実施形態において、妨害物質は、潤滑剤、ゲル、クリーム、およびその組合せからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、妨害物質は、１種または複数のカルボマーを含むゲルを含む。いくつかの実施形態において、妨害物質は、カルボマーを含まないゲルを含む。

また、本明細書において、妨害物質の存在下においてサンプルの診断試験の性能を維持または向上させる方法を開示する。いくつかの実施形態において、方法は、「緩衝剤組成物」のセクションで上述した、または本明細書の他の箇所で記載する緩衝剤組成物にサンプルを移すことを含む。いくつかの実施形態において、方法は、移送ステップに先立って、対象由来のスワブ上のサンプルを採取することをさらに含む。いくつかの実施形態において、方法は、移送ステップに続いて、生体サンプル中の１つまたは複数の核酸を増幅および検出すること、または生体サンプルから抽出された１つまたは複数の核酸を増幅および検出することをさらに含む。

いくつかの実施形態において、性能は、感度、特異性、リコール、精度、迅速性、堅固性またはその組合せを含む。
いくつかの実施形態において、方法は、報告不可能な結果の発生率を、次、または、およそ次、または少なくとも次、または少なくともおよそ次、または最大でも次、または最大でもおよそ次：１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、もしくは９５％、またはこれらの値のいずれか２つの間の範囲で低減する。いくつかの実施形態において、方法は、報告不可能な結果の発生率を、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％低減する。いくつかの実施形態において、報告不可能な結果は、不確定の結果、未解決の結果、不完全な結果またはその組合せを含む。
いくつかの実施形態において、方法は、次、またはおよそ次、または少なくとも次、または少なくともおよそ次、または最大でも次、または最大でもおよそ次：１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％またはこれらの値のいずれか２つの間の範囲の精度率を維持する。いくつかの実施形態において、方法は、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の精度率を維持する。いくつかの実施形態において、精度率は、陽性結果の一致率、陰性結果の一致率、全体の一致率またはその組合せによって測定される。

以下の実施例は、本技術を適用できる特定の状況および設定を示すために提供されるものであり、本発明の範囲および本開示に含まれる特許請求の範囲を制限することを意図するものではない。

（実施例１）
膣サンプルで実施される診断アッセイ
本セクションに記載の試験は、膣疾患、例えば外陰膣カンジダ症（ＶＶＣ）、トリコモナス症および細菌性膣症（ＢＶ）等を、妨害物質を含み得る臨床膣スワブサンプル中で検出するための、本明細書に開示された緩衝剤組成物を使用することによって達成される診断アッセイの堅固な性能を示している。例えば、アッセイは、ＢＤ ＭＡＸ（商標）システムにおいて、カンジダ属（Ｃ．グラブラータ、およびＣ．クルセイ）、膣トリコモナスおよび／またはＢＶ関連細菌を定性的に検出するための全自動インビトロ診断試験を実施した。アッセイは、マイクロ流体ベースのサンプル処理と核酸ベースの検出方法を組み込んでいる。より具体的には、診断アッセイは、流動性に操作される磁性粒子を用いて核酸を抽出し、リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を使用して標的ＤＮＡを増幅し、蛍光発色性ハイブリダイゼーションプローブを使用して標的生物を特定した。
実施例２～９および１１で後述するような診断アッセイは、実施例緩衝剤ＩまたはＩＩのいずれかを用いて行った。また、比較のために、比較緩衝剤を用いて診断アッセイを行った。比較緩衝剤、実施例緩衝剤Ｉ、および実施例緩衝剤ＩＩの組成を以下の表１にまとめる。表１の比較緩衝剤は、生体サンプルの調製、および膣疾患または性感染症の診断検出に使用される、一般的な「ゴールドスタンダード」の緩衝剤組成を表す。

比較緩衝剤中の酸－塩基対としての一塩基性リン酸カリウム（ＫＨ₂ＰＯ₄）／二塩基性リン酸カリウム（Ｋ₂ＨＰＯ₄）の使用は、実施例緩衝剤における酢酸／酢酸ナトリウム（ＣＨ₃ＣＯＯＮａ）の使用と比較して、より粒子の凝集が大きいこと、マイクロ流体の詰まりの頻度が高いことと関連していることが見出された。界面活性剤（例えば、Ｔｅｒｇｉｔｏｌ（商標）１５－Ｓ－９またはＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００）および塩（例えばＣａＣｌ₂）を実施例緩衝剤に含めることによって、妨害ゲルに一般的に存在する高分子電解質（例えばカルボマー）と磁性粒子との相互作用を低減することによって、アッセイ性能の堅固性を向上させることが見出された。３種の緩衝剤組成物全てにおいて、キレート剤としてエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）が存在しすることがサンプルの安定化に不可欠であることが見出された。ＰｒｏＣｌｉｎ（商標）３００保存剤（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、Ｍｏ．）は、サンプル保存の目的で殺菌剤として３種の緩衝剤組成物全てに添加された。

膣炎または／および膣症の臨床徴候を有する合計２６３名の女性から膣スワブを採取し、ＢＤ ＭＡＸ（試験）システムにおいて試験した。図１は、これらのサンプルドナーの構成を地理的な領域によってまとめたものであり、Ｂｉｏｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｏａｋｌａｎｄから９４人（３６％）、ＰＰＧＣ Ｈｏｕｓｔｏｎから６９人（２６％）、Ｂｉｏｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｍｉａｍｉから１００人（３８％）のドナーであった。
本実施例は、診断アッセイの試験的側面を例示しており、その結果は実施例２～９で後述する。特に、本実施例は、本願明細書に開示されている例示的な緩衝剤組成物を示している。

（実施例２）
試験の反復性
表２は、同一サンプル（「同一スワブ」）の２回の試験（「第１のテイク」および「第２のテイク」）において得られたアッセイ結果の一致率をまとめている。表２（ａ）のアッセイには比較緩衝剤を、表２（ｂ）のアッセイには実施例緩衝剤Ｉを使用した。表２（ａ）～２（ｂ）のそれぞれには、カンジダ属、Ｃ．グラブラータ、Ｃ．クルセイ、膣トリコモナス、およびＢＶ（上から下へ）について、陽性結果、陰性結果、および全体（左から右へ）の一致率を記載している。

比較緩衝剤および実施例緩衝剤Ｉは両方、種々の病原性マーカーの診断検出を行った場合、「同一スワブ」の２つの異なる試験（「第１のテイク」および「第２のテイク」）の間で、少なくとも９０．０％の一致を達成した。
したがって、本実施例は、診断アッセイおよび関連する方法の反復性についての代表的なベースラインを提供する。

（実施例３）
試験の再現性
表３は、同一の対象（またはサンプルドナー）から採取した２つのサンプル（「スワブ１」および「スワブ２」）のうちの１つの試験（「第１のテイク」）において、それぞれ得られたアッセイ結果の一致率をまとめている。表３（ａ）のアッセイにおいては比較緩衝剤を、表３（ｂ）のアッセイにおいては実施例緩衝剤Ｉを使用した。表３（ａ）～３（ｂ）のそれぞれには、カンジダ属、Ｃ．グラブラータ、Ｃ．クルセイ、膣トリコモナス、およびＢＶ（上から下へ）について、陽性結果、陰性結果、および全体（左から右へ）の一致率をそれぞれ記載している。
比較緩衝剤および実施例緩衝剤Ｉは両方、種々の病原性マーカーについて試験した際に、同一の対象から得られた２つの異なるサンプル（「スワブ１」と「スワブ２」）の間で、少なくとも９０．０％の一致を達成した。

したがって、本実施例は、診断アッセイおよび関連する方法の再現性に関する代表的なベースラインを示す。

（実施例４）
報告可能な結果に対する緩衝剤のベースライン効果
表４は、代表的なバイオマーカーの５つのセット、カンジダ属（表４（ａ））、Ｃ．グラブラータ（表４（ｂ））、Ｃ．クルセイ（表４（ｃ））、膣トリコモナス（表４（ｄ））、および細菌性膣症（ＢＶ）（表４（ｅ））についての報告されたアッセイ結果における緩衝剤依存性の分散を示している。

例えば、表４（ａ）に示すように、実施例緩衝剤をアッセイに使用した場合、ＰＣＲ分析ではカンジダ属の陽性結果が４５件、陰性結果が１７８件報告され、一方、比較例緩衝剤を使用した場合、ＰＣＲ分析ではカンジダ属について４６の陽性結果、および１７７の陰性結果が報告された。表４（ａ）において報告された２２３の結果のうち、比較緩衝剤では陰性と報告された３つのサンプル（右上）が、実施例緩衝剤では病原性陽性と特定され、比較緩衝剤で陽性と報告された４つのサンプル（左下）が、実施例緩衝剤では病原性陰性と特定された。

一例として、表４（ｂ）に示すように、実施例緩衝剤をアッセイに使用した場合、ＰＣＲ分析によって、Ｃ．グラブラータについて１１の陽性結果、および２１２の陰性結果が報告された一方で、比較例緩衝剤を使用した場合、ＰＣＲ分析では、Ｃ．グラブラータについて１３の陽性結果、および２１０の陰性結果が報告された。表４（ｂ）に報告された２２３の結果のうち、比較緩衝剤では陽性と報告された２つのサンプル（左下）が、実施例緩衝剤では病原性陰性と特定された。

一例として、表４（ｃ）に示すように、実施例緩衝剤をアッセイに使用した場合、ＰＣＲ分析では、Ｃ．クルセイについて０の陽性結果、および２２３の陰性結果が報告された一方で、比較緩衝剤を使用した場合、ＰＣＲ分析では、Ｃ．クルセイについて０の陽性結果、および２２３の陰性結果が報告された。
一例として、表４（ｄ）に示すように、実施例緩衝剤をアッセイに使用した場合、ＰＣＲ分析では、膣トリコモナスについて３６の陽性結果、および１８７の陰性結果が報告された一方で、比較緩衝剤を使用した場合、ＰＣＲ分析では、膣トリコモナスについて３６の陽性結果、および１８７の陰性結果が報告された。表４（ｄ）に報告された２２３の結果のうち、比較緩衝剤で陰性と報告された１つのサンプル（右上）が、実施例緩衝剤では病原性陽性と特定され、比較緩衝剤で陽性と報告された１つのサンプル（左下）が、実施例緩衝剤では病原性陰性と特定された。
一例として、表４（ｅ）に示すように、実施例緩衝剤をアッセイに使用した場合、ＰＣＲ分析では、ＢＶについて１２９の陽性結果、および１０４の陰性結果が報告された一方で、比較例緩衝剤を使用した場合、ＰＣＲ分析ではＣ．グラブラータについて１２９の陽性結果、および１０４の陰性結果が報告された。表４（ｅ）に報告可能な２３３の結果のうち、比較緩衝剤で陰性と報告された７つのサンプル（右上）が、実施例緩衝剤では病原性陽性と特定され、比較緩衝剤で陽性と報告された７つのサンプル（左下）が、実施例緩衝剤では病原性陰性と特定された。

表５は、表４に示したアッセイ結果の、実施例緩衝剤と比較例緩衝剤の間の一致率（概して８４％超）をまとめたものである。特に、陽性結果、陰性結果、全体（左から右へ）の一致率を、カンジダ属、Ｃ．グラブラータ、Ｃ．クルセイ、膣トリコモナスおよびＢＶ（上から下へ）について試験した。
本実施例は、診断アッセイおよび関連方法の報告可能な結果に対するアッセイ緩衝剤の効果を評価するための代表的なベースラインを表している。

（実施例５）
報告不可能な結果に対する緩衝剤のベースライン効果
表６～７は、膣疾患のアッセイ試験において、比較緩衝剤（表６（ａ）～６（ｄ）、７（ａ）～７（ｆ））および実施例緩衝剤Ｉ（表６（ｅ）～６（ｈ）、７（ｇ）～７（ｌ））をそれぞれ使用した場合の報告不可能率を示す。表６で試験したサンプルは、妨害ゲルを含まなかったが、表７で試験したサンプルは、種々の妨害ゲル、例えばＭｃＫｅｓｓｏｎ潤滑ゼリー（表７（ａ）、７（ｇ））、Ｅ－Ｚ潤滑ゼリー（表７（ｂ）、７（ｈ））、Ｓｕｒｇｉｌｕｂｅ（登録商標）潤滑剤（表７（ｃ）、７（ｉ））、Ｃａｎｅｓｔｅｎ（登録商標）（クロトリマゾール抗真菌クリーム）（表７（ｄ）、７（ｊ））、Ｖａｇｉｓｉｌ（登録商標）（ベンゾカイン／レゾルシノール痒み止めクリーム）（表７（ｅ）、７（ｋ））を含んでいた。表６～７で試験した各スワブサンプルは、膣炎および膣症の両方についてアッセイされ、表６～７に記載された報告不可能率は、さらに未解決の結果率および不確定の結果率に分けられた。

妨害ゲルを含まないスワブサンプルのアッセイ試験に関して、表６（ａ）および表６（ｅ）は、それぞれ比較緩衝剤および実施例緩衝剤Ｉを用いて実施したサンプルの最初の試験（「スワブ１、テイク１」）を比較しており、表６（ｂ）および６（ｆ）は、２つの緩衝剤を用いて実施したサンプルの第２の試験（「スワブ１、テイク２」）を比較しており、表６（ｃ）および６（ｇ）は、第２のサンプルの第１の試験（「スワブ２、テイク１」）を比較しており、表６（ｄ）および６（ｈ）は、表６（ａ）～６（ｃ）および６（ｅ）～６（ｇ）の試験から得られた全体の結果をそれぞれ比較している。

表６に示すように、実施例緩衝剤Ｉおよび比較例緩衝剤は、アッセイがゲルに妨害されていない場合、同等の報告不可能率をもたらした。
したがって、実施例緩衝剤Ｉの使用は、妨害ゲルを含まないサンプルについて、報告可能な結果のレベルを維持することが実証された。

表７に示すように、実施例緩衝剤Ｉは、スワブサンプルが妨害物質を含んでいた場合、報告不可能率を有意に低下させた。例えば、ＭｃＫｅｓｓｏｎ潤滑ゼリーが混入したスワブサンプルについて、実施例緩衝剤Ｉを使用することによって、サンプルあたりの未解決、不確定、および合計の報告不可能率が、３４．８％、３４．８％、および６９．６％（表７（ａ））から、８．７％、０．０％、および８．７％（表７（ｇ））に低下した。他の例として、Ｅ－Ｚ潤滑ゼリーが混入されたスワブサンプルについて、実施例緩衝剤Ｉを使用することによって、サンプルあたりの未解決、不確定、および合計の報告不可能率が、２３．１％、５３．８％、および７６．９％（表７（ｂ））から、０．０％、０．０％、０．０％（表７（ｈ））に低下した。
全体として、サンプルあたりの未解決、不確定、合計の報告不可能率は、４７．１％、２１．８％、および６８．９％（表７（ｆ））から１２．６％、０．０％、および１２．６％（表７（ｌ））に低下した。
したがって、本実施例では、実施例緩衝剤を使用することによって、種々の妨害物質の存在に対する試験の堅固性を向上させることで、報告可能率を妨害物質の非存在レベルに維持しながら、アッセイ性能を大幅に改善させることができることを示している。

（実施例６）
妨害に対する比較緩衝剤の堅固性
比較緩衝剤を用いて、１１９の臨床スワブサンプルについて診断アッセイを実施した。この１１９サンプルのうち、報告可能な結果が得られたのは３７サンプル（約３１．１％）のみであった。これら１１９サンプルのそれぞれについて、妨害ゲルが非存在下で試験（「テイク１」）を実施し、妨害ゲルの存在下で他の試験（「テイク２」）を実施した。

表８は、カンジダ属（表８（ａ））、Ｃ．グラブラータ（表８（ｂ））、Ｃ．クルセイ（表８（ｃ））、膣トリコモナス（表８（ｄ））、および細菌性膣症（ＢＶ）（表８（ｅ））を検出するための報告可能なアッセイ結果に対する妨害ゲルの存在の影響を示している。
例えば、表８（ｅ）に示すように、妨害ゲルの存在下において、診断アッセイでは、ＢＶについて３４の陽性結果および３７の陰性結果が報告された一方、妨害ゲルの非存在下においては、診断アッセイではＢＶについて３８の陽性結果および３３の陰性結果が報告された。表８（ｄ）で報告された結果のうち、妨害ゲルの存在下で陽性と報告された２つのサンプル（右上）は、妨害ゲルの非存在下では陰性と同定され、妨害ゲルの存在下で陰性と報告された６つのサンプル（左下）は、妨害ゲルの非存在下では陽性と特定された。

表９は、表８に示したアッセイ結果の、妨害ゲルの存在下および非存在下の試験間の一致率（概して８４％超）をまとめたものである。特に、陽性結果、陰性結果、および全体（左から右へ）の一致率を、カンジダ属、Ｃ．グラブラータ、Ｃ．クルセイ、膣トリコモナス、およびＢＶ（上から下へ）について試験した。

本実施例では、比較緩衝剤を使用した場合の限定的なアッセイ性能、特に低い報告可能率が示されている。

（実施例７）
妨害に対する実施例緩衝剤の堅固性
実施例緩衝剤Ｉを使用して１１９の臨床スワブサンプルについての診断アッセイを実施した。これら１１９サンプルのうち、実施例６では約３１．１％であったのに対し、１０４（約８７．４％）の報告可能な結果が得られた。したがって、実施例６における比較緩衝剤の使用と比較して、実施例緩衝剤Ｉを使用することによって、診断アッセイの報告可能率が大幅に上昇した。これら１１９のサンプルのそれぞれについて、妨害ゲルの非存在下で試験（「テイク１」）を実行し、妨害ゲルの存在下において他の試験（「テイク２」）を実行した。

実施例６の表８と同様に、表１０は、実施例緩衝剤Ｉを利用した場合のカンジダ属（表１０（ａ））、Ｃ．グラブラータ（表１０（ｂ））、Ｃ．クルセイ（表１０（ｃ））、膣トリコモナス（表１０（ｄ））、および細菌性膣症（ＢＶ）（表１０（ｅ））を検出するための報告可能なアッセイ結果に対する妨害ゲルの存在の影響を示す。
例えば、表１０（ｄ）に示すように、妨害ゲルの存在下では、診断アッセイはＢＶについて５４の陽性結果および５０の陰性結果を報告した一方で、妨害ゲルの非存在下において、診断アッセイでは、ＢＶについて５５の陽性結果および４９の陰性結果が報告された。表１０（ｄ）で報告されたこれらの結果のうち、妨害ゲルの存在下で陽性と報告された１つのサンプル（右上）は、妨害ゲルの非存在下では陰性と特定され、妨害ゲルの存在下で陰性と報告された２つのサンプル（左下）は、妨害ゲルの非存在下では陽性と特定された。

表１１は、表１０に示したようなアッセイ結果の、妨害ゲルの存在下および非存在下の試験間の一致率（概ね８７％超）をまとめたものである。特に、陽性結果、陰性結果、および全体（左から右へ）の一致率を、カンジダ属、Ｃ．グラブラータ、Ｃ．クルセイ、膣トリコモナス、およびＢＶ（上から下へ）について試験した。
表１１に示すような一致率は、少なくとも表９に示すものと同等である。したがって、実施例緩衝剤Ｉ（表１０～１１）の使用は、比較緩衝剤（表８～９）の使用と同じ精度レベルを維持することが示された。
したがって、本実施例は、実施例緩衝剤の使用が、ノイズ条件下において診断アッセイの再現性に影響を与えることなく、報告可能率を上昇させることを示している。

（実施例８）
実施例緩衝剤は、マイクロ流体の詰まりを防止／減少させる
図２Ａ～２Ｂは、ＢＤ ＭＡＸ（商標）ＰＣＲカートリッジの写真を示しており、それぞれは、妨害ゲルを含まない臨床膣スワブサンプルの診断試験に利用された。実施例緩衝剤Ｉは、図２Ａの試験に利用され、比較緩衝剤が図２Ｂの試験において利用された。図２Ａに赤矢印で示すように、比較緩衝剤を用いて診断アッセイを実施した場合、核酸抽出用カートリッジに配置された磁性粒子が凝集体を形成した。この粒子凝集により、図２Ａに示すようなマイクロ流体の詰まりが生じた。図２Ａの粒子凝集およびマイクロ流体の詰まりの例示的な領域は、「Ａ_i」、「Ａ_ii」、および「Ａ_iii」としてマークされ、下部で拡大されている。比較として、図２Ｂでは、そのような粒子凝集またはマイクロ流体の詰まりは観察されず、図２Ｂの例示的な領域は、「Ｂ_i」、「Ｂ_ii」、および「Ｂ_iii」としてマークされ、下部で拡大されている。
図３Ａ～３Ｂは、ＢＤ ＭＡＸ（商標）ＰＣＲカートリッジの写真を示しており、それぞれが、カルボマーベースの妨害ゲルＭｃＫｅｓｓｏｎを含む臨床膣スワブサンプルの診断試験に利用されている。図４Ａ～４Ｂは、１０μＬで存在する追加の妨害ゲルＥ－Ｚブランド（Ｍｅｄｌｉｎｅ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ）（図４Ａ～４Ｂ）の試験に利用されたＢＤ ＭＡＸ（商標）ＰＣＲカートリッジの写真の追加の実施形態を示す。
図３Ａおよび図４Ａに赤矢印で示すように、核酸抽出用カートリッジに配置された磁性粒子は、比較緩衝剤を用いて診断アッセイを行った場合に凝集体を形成した。粒子凝集によって、次いで、図３Ａおよび図４Ａに示すようにマイクロ流体の詰まりが生じた。図３Ａの粒子凝集およびマイクロ流体の詰まりの例示的な領域は、「Ａ_i」、「Ａ_ii」、および「Ａ_iii」としてマークされ、下部で拡大されている。図４Ａの粒子凝集およびマイクロ流体の詰まりの例示的な領域は、「Ａ_i」、「Ａ_ii」、および「Ａ_iii」としてマークされ、下部で拡大されている。比較として、図３Ｂ、例えば「Ｂ_i」、「Ｂ_ii」、「Ｂ_iii」としてマークされ、下部で拡大された領域では、そのような粒子凝集またはマイクロ流体の詰まりは観察されなかった。図４Ｂ、例えば、「Ｂ_i」、「Ｂ_ii」としてマークされ、下部で拡大された領域において、粒子凝集もマイクロ流体の詰まりも観察されなかった。
したがって、本実施例は、本願明細書に開示される緩衝剤組成物の使用が、診断アッセイ中のＢＤ ＭＡＸ（商標）ＰＣＲカートリッジにおける粒子凝集およびマイクロ流体の詰まりを防止または低減することを示している。

（実施例９）
実施例緩衝剤は診断精度を改善／維持する
妨害ゲルを含むサンプルの代表的な膣症状を検出および診断するためのアッセイを、実施例緩衝剤ＩＩおよび比較緩衝剤を用いてＢＤ ＭＡＸ（商標）システムで実施した。図５の膣症試験結果は、妨害Ｅ－Ｚ潤滑ゼリー（Ｍｅｄｌｉｎｅ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ， Ｉｎｃ）を含む膣スワブサンプルから得られたものであり、図６の膣炎試験結果は、カルボマーを含まないゲルである、妨害Ｓｕｒｇｉｌｕｂｅ（登録商標）潤滑剤を含む膣スワブサンプルから得られたものである。
通常のワークフローに従って比較緩衝剤を用いた場合（図５Ａ、５Ｄ、６Ａ、および６Ｄ）、最適化されたワークフローに従って比較緩衝剤を用いた場合（図５Ｂ、５Ｅ、６Ｂ、および６Ｅ）、および最適化されたワークフローに従って実施例緩衝剤を用いた場合（図５Ｃ、５Ｆ、６Ｃ、および６Ｆ）に、それぞれ得られたＰＣＲデータから散布図を作成した。図５～６のｙ軸（「Ｃｙ５．５ ＥＰ」）は終点蛍光を表し、これは、ＰＣＲ増幅曲線の終点におけるＣｙａｎｉｎｅ Ｄｙｅ ５．５（Ｃｙ５．５）の蛍光強度を測定したものである。図５Ａ～５Ｃおよび６Ａ～６Ｃのｘ軸（「Ｃｙ５．５ Ｃｔスコア」）は、シグナルドリフトを補正した後、増幅産物が確信を持って検出できるようになったＰＣＲサイクル数の閾値を表している。図５Ｄ～５Ｆおよび図６Ｄ～６Ｆのｘ軸（「Ｃｙ５．５ ＳＤＰＡ」）は、アッセイの再現性を評価するための基準として使用された「二次導関数ピーク横軸」を表す。図５および図６の両方に示すように、実施例緩衝剤ＩＩは、比較緩衝剤よりも、ＣｔスコアおよびＳＤＰＡの両方において、試験結果の分布が狭くなっていた。
したがって、本実施例は、実施例緩衝剤を使用することで、特に妨害ゲルの存在下のサンプルに対して、ノイズ条件下での診断試験の再現性を少なくとも改善させることによって、アッセイ性能を大幅に改善できることを示している。

（実施例１０）
実施例緩衝剤ＩＩＩは、サンプルが妨害物質（潤滑剤）を含む場合に報告不可能率を低下させる
実施例２～９について上述した試験と同様に、第３の実施例緩衝剤を用いて追加の試験を行った。実施例緩衝剤ＩＩＩは、以下を含む：

実施例緩衝剤ＩおよびＩＩについて報告されたように、実施例緩衝剤ＩＩＩを使用すると、妨害物質（Ｅ－Ｚゼリー、Ｍｅｄｌｉｎｅ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ， Ｉｎｃ．）の存在下において、従来の緩衝剤と比較して、不確定および未解決の試験の数が減少した。

（実施例１１）
実施例緩衝剤Ｉと比較緩衝剤の比較
ＢＤ ＭＡＸ（商標）膣パネルおよびＢＤ ＭＡＸ（商標）ＣＴ／ＧＣ／ＴＶ
以下の実施例は、ＢＤ ＭＡＸ（商標）膣パネルアッセイおよびＢＤ ＭＡＸ（商標）ＣＴ／ＧＣ／ＴＶアッセイにおける報告不可能率（ＮＲＲ）、一致および検出パーセントに対する緩衝剤Ｉの影響を検討した試験の結果を記載している。緩衝剤Ｉは、実施例１、表１に記載の比較緩衝剤と比較した。
実験室および臨床手順：サンプルはドナー対象から採取した。各ドナーについて、４つの採取方法を用いた：
１）潤滑剤を使用しない自己膣採取、
２）潤滑剤を使用しない臨床医による膣採取
３）膣鏡＋潤滑剤（３つの異なるブランド）を使用した臨床医による膣採取
４）鏡筒＋潤滑剤（３種類の異なるブランド）を使用した臨床医による子宮頸管内採取。
潤滑剤は、臨床医が適切と判断した量で膣鏡上に使用し、３つの異なるブランドの潤滑剤、Ｓｕｒｇｉｌｕｂｅ（登録商標）外科用潤滑剤、無菌静菌性（ＨＲ（登録商標）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ．， Ｙｏｒｋ ＰＡ）、ＭｃＫｅｓｓｏｎ潤滑ゼリー（ＭｃＫｅｓｓｏｎ Ｍｅｄｉｃａｌ－Ｓｕｒｇｉｃａｌ Ｉｎｃ．， Ｒｉｃｈｍｏｎｄ ＶＡ）、Ａｐｌｉｃａｒｅ潤滑ゼリー（Ａｐｌｉｃａｒｅ， Ｉｎｃ．， Ｍｅｒｉｄｅｎ ＣＴ）を使用した。サンプルは、メーカーの仕様書に従って、ＢＤ ＭＡＸ（商標）膣パネルアッセイおよびＢＤ ＭＡＸ（商標）ＣＴ／ＧＣ／ＴＶアッセイにおいて実行した。試験の結果を以下に示す。

表１２は、実施例緩衝剤Ｉが、ＢＤ ＭＡＸ（商標）膣パネルで実行した際に、潤滑剤を含む膣サンプルのＮＲＲ（未解決（ＵＮＲ）および不確定（ＩＮＤ）結果）を低下させる上で非常に効率的であった（－７．９）が、潤滑剤を使用せずに臨床医が採取した膣サンプルでは、実施例Ｉ緩衝剤によってＮＲＲのわずかな上昇（５．５）が観察されたことを示している。自己採取した膣サンプルまたは、臨床医が潤滑剤を使用して採取した子宮頸部サンプルでは、ＮＲＲに大きな変化は観察されなかった。

ＢＤ ＭＡＸ（商標）膣パネルと同様に、実施例Ｉ緩衝剤は、ＢＤ ＭＡＸ（商標）ＣＴ／ＧＣ／ＴＶアッセイにおいて実行した際に、潤滑剤を含む膣サンプルのＮＲＲを効率的に低下させた（－１３．１）が、ＢＤ ＭＡＸ（商標）膣パネルについては異なっており、潤滑剤を使用せずに臨床医が採取した膣サンプルにおいてＵＮＲの上昇は観察されなかった（表１３）。自己採取した膣サンプルまたは潤滑剤を使用して臨床医が採取した子宮頸部内サンプルでは、ＮＲＲに大きな変化は観察されなかった。

ＢＤ ＭＡＸ（商標）膣パネルアッセイにおいて、実施例Ｉ緩衝剤は、全ての標的について比較緩衝剤を用いた試験結果と良好な一致をもたらした。Ｃ．グラブラータについては、観察された陽性一致はわずかに低かったが、これは、陽性結果の数が非常に少なかったためである（表１４）。

ＢＤ ＭＡＸ（商標）ＣＴ／ＧＣ／ＴＶアッセイにおいて、実施例Ｉ緩衝剤は、比較緩衝剤を用いた試験結果と良好な一致をもたらした（表１５）。

ＰＣＲ測定値（ＥｎｄＰｏｉｎｔ、ＳＤＰＡ、Ｃｔスコア）の分析によると、実施例緩衝剤Ｉは、ＢＤ ＭＡＸ（商標）膣パネルアッセイにおけるいくつかの標的の増幅にわずかに陰性の影響を与える傾向があり、一方で、ＢＤ ＭＡＸ（商標）ＣＴ／ＧＣ／ＴＶアッセイにおけるＴＶの増幅をわずかに改善する傾向があった。

本明細書では種々の局面および実施形態が開示されているが、他の局面および実施形態も当業者には明らかであろう。本明細書に開示された種々の局面および実施形態は、例示を目的としたものであり、限定することを意図したものではなく、真の範囲および精神は以下の特許請求の範囲によって示される。

当業者は、本明細書に開示されたこのプロセスおよび方法ならびに他のプロセスおよび方法について、プロセスおよび方法で実施される機能を異なる順序で実施することができることを理解するであろう。さらに、概説されたステップおよび操作は例として示されているに過ぎず、ステップおよび操作のいくつかは、任意選択的であり、開示された実施形態の本質を損なうことなく、より少ないステップおよび操作に組み合わせるか、または追加のステップおよび操作に拡張することができる。

本明細書における実質的に任意の複数形および／または単数形の用語の使用に関して、当業者は、文脈および／または用途に応じて、複数形から単数形および／または単数形から複数形へと翻訳することができる。種々の単数形／複数形の順列は、明確にするために本明細書で明示的に示すことができる。

一般的に、本明細書、特に添付の特許請求の範囲（例えば、添付の請求項本体）で使用される用語は、一般的に「開いた」用語として意図されていることが、当業者には理解されるであろう（例えば、「含む」という用語は、「含むが、これに限定されない」と解釈されるべきであり、「有する」という用語は、「少なくとも有する」と解釈されるべきであり、「含む」という用語は、「含むが、これに限定されない」と解釈されるべきである等）。導入された特許請求の範囲の記載の特定の数が意図されている場合、そのような意図は特許請求の範囲に明示的に記載され、そのような記載がない場合にはそのような意図は存在しないことが、当業者にはさらに理解されるであろう。例えば、理解を助けるために、以下の添付の特許請求の範囲には、特許請求の記載を導入するための「少なくとも１つ」および「１つまたは複数」という導入句の使用が含まれてよい。しかし、このような句の使用は、同一請求項が導入句「１つまたは複数」または「少なくとも１つ」および「１つ（ａ）」または「１つ（ａｎ）」等の不定冠詞を含む（例えば「１つ（ａ）」および／または「１つ（ａｎ）」が、「少なくとも１つ」または「１つまたは」を意味すると解釈されるべきである）場合であっても、不定冠詞「１つ（ａ）」または「１つ（ａｎ）」による請求項の記載の導入が、そのような導入された請求項の記載を含む特定の請求項を、そのような再述を１つだけ含む実施形態に限定することを意味するように解釈されるべきではなく、これは、請求項の記載を導入するために使用される定冠詞の使用についても同様である。また、導入された請求項の記載の具体的な数が明示的に記載されている場合でも、当業者であれば、そのような記載は少なくとも記載された数を意味すると解釈すべきであると認識するであろう（例えば、他の修飾語を伴わない「２回の再現」というのみの記載は、少なくとも２回の再現、または２回以上の再現を意味する）。さらに、「Ａ、Ｂ、およびＣ等の少なくとも１つ」に類する慣例が使用されている場合、一般的にそのような構成は、当業者が慣例を理解するような意味で意図されている（例えば、「Ａ、Ｂ、およびＣの少なくとも１つを有するシステム」は、Ａ単独、Ｂ単独、Ｃ単独、ＡおよびＢを共に、ＡおよびＣを共に、ＢおよびＣを共に、および／またはＡ、Ｂ、およびＣを共に有するシステムを含むが、これらに限定されない）。「Ａ、Ｂ、またはＣ等の少なくとも１つ」に類する慣例が使用されている場合、一般的に、そのような構成は、当業者が慣例を理解する意味で意図されている（例えば、「Ａ、Ｂ、またはＣのうち少なくとも１つを有するシステム」は、Ａ単独、Ｂ単独、Ｃ単独、ＡとＢを共に、ＡとＣを共に、ＢとＣを共に、および／またはＡ、Ｂ、およびＣを共に有する等のシステムを含むが、これらに限定されない）。当業者であれば、明細書、特許請求の範囲、図面において、２つ以上の代替用語を提示する実質的に任意の分離語および／または句は、用語のいずれか１つ、用語のいずれか、または両方の用語を含む可能性を企図していると理解するであろう。例えば、「ＡまたはＢ」という句は、「Ａ」または「Ｂ」、または「ＡおよびＢ」の可能性を含むと理解されるであろう。

さらに、本開示の特徴または局面がマーカッシュ群の用語で記載される場合、当業者は、本開示がそれによってマーカッシュ群の任意の個々のメンバーまたはメンバーのサブグループの点においても記載されていることを認識するであろう。

当業者に理解されるように、任意のおよび全ての目的について、例えば書面による説明を提供する点において、本明細書に開示されている全ての範囲は、可能なサブ範囲およびサブ範囲の組合せも全て包含する。記載されている任意の範囲は、同一の範囲が少なくとも等分の半分、３分の１、４分の１、５分の１、１０分の１等に分解されることを十分に説明し、可能にするものとして容易に認識することができる。非限定的な例として、本明細書に記載されている各範囲は、下位３分の１、中間３分の１、上位３分の１等に容易に分解することができる。また、当業者であれば理解できるように、「まで」、「少なくとも」等の全ての言葉は、記載された数を含み、上述のように後にサブ範囲に分解できる範囲を指す。

本明細書で値の範囲が提供される場合はいずれの場合も、特に明記されない限り、その範囲は、開始値、終了値、各個別の値、またはその間の値の範囲を含むことを意味する。例えば、「０．２～０．５」とは、０．２、０．３、０．４、０．５、０．２～０．３、０．３～０．４、０．２～０．４等のその間の範囲、０．２５、０．３５、０．２２５、０．３３５、０．４９等のその間の増分、０．２６～０．３９等のその間の増分範囲等を意味する。他の例として、１～３個のセルを有する群は、１、２、または３つのセルを有する群を指す。同様に、１～５個のセルを有する群は、１、２、３、４、または５個のセルを有する群等を意味する。

以上のことから、本開示の種々の実施形態は、説明のために本明細書に記載されており、本開示の範囲および精神から逸脱することなく種々の改変を加えることができることは理解されるであろう。したがって、本明細書に開示される種々の実施形態は、限定することを意図したものではなく、真の範囲および精神は、以下の特許請求の範囲によって示される。

Claims (72)

1. 酸と塩基の共役対、
   キレート剤または還元剤、
   非イオン性界面活性剤、
   ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、およびその組合せからなる群から選択される、一価または二価の塩、ならびに
   任意に、１種または複数のイソチアゾロンを含む、殺菌性保存剤
   を含む、緩衝剤組成物。
2. 共役対が、酢酸およびその塩を含む、請求項１に記載の緩衝剤組成物。
3. 共役対が、約５０ｍＭ～約１５０ｍＭの酢酸を含む、請求項１または２に記載の緩衝剤組成物。
4. 共役対が、約９０ｍＭ～約１１０ｍＭの酢酸を含む、請求項１または２に記載の緩衝剤組成物。
5. 共役対が、約３５０ｍＭ～約４５０ｍＭの酢酸ナトリウムを含む、請求項１～４のいずれか１項に記載の緩衝剤組成物。
6. 共役対が、約４００ｍＭ～約６００ｍＭの範囲の濃度で存在する、請求項１または２に記載の緩衝剤組成物。
7. 共役対が、酢酸および酢酸ナトリウムまたはトリス－ＨＣｌを含む、請求項１または２に記載の緩衝剤組成物。
8. 酢酸が２００ｍＭ以下の濃度で存在し、酢酸ナトリウムが３００ｍＭ以上の濃度で存在する、請求項７に記載の緩衝剤組成物。
9. ｐＨが、約４．０～約６．０、または約１．０～約３．０である、請求項１～５のいずれか１項に記載の緩衝剤組成物。
10. ｐＨが約５．０である、請求項１～９のいずれか１項に記載の緩衝剤組成物。
11. ｐＨが約２．４である、請求項１～９のいずれか１項に記載の緩衝剤組成物。
12. キレート剤がＥＤＴＡを含むか、または還元剤がＴＣＥＰを含む、請求項１～１０のいずれか１項に記載の緩衝剤組成物。
13. キレート剤または還元剤が、約１ｍＭ～約２０ｍＭの範囲の濃度で存在する、請求項１～１２のいずれか１項に記載の緩衝剤組成物。
14. キレート剤が約１０ｍＭの濃度のＥＤＴＡである、請求項１～１２のいずれか１項に記載の緩衝剤組成物。
15. 還元剤が、約１５ｍＭの濃度のＴＣＥＰである、請求項１～１２のいずれか１項に記載の緩衝剤組成物。
16. 非イオン性界面活性剤が、エトキシル化非イオン性界面活性剤、プロポキシル化非イオン性界面活性剤、コ－エトキシル化－プロポキシル化非イオン性界面活性剤、およびその組合せからなる群から選択される、請求項１～１５のいずれか１項に記載の緩衝剤組成物。
17. 非イオン性界面活性剤が、ＴｅｒｇｉｔｏｌまたはＴｒｉｔｏｎ界面活性剤である、請求項１～１５のいずれか１項に記載の緩衝剤組成物。
18. 非イオン性界面活性剤が、Ｔｅｒｇｉｔｏｌ １５－Ｓ－９またはＴｒｉｔｏｎＸ－１００である、請求項１７に記載の緩衝剤組成物。
19. 非イオン性界面活性剤が、モノ脂肪酸のエトキシル化ソルビタンエステル、エトキシル化オクチルフェノール、エトキシル化二級Ｃ１－Ｃ２０アルコール、コ－エトキシル化－プロポキシル化種子油アルコール、およびその組合せからなる群から選択される、請求項１～１６のいずれか１項に記載の緩衝剤組成物。
20. 非イオン性界面活性剤が、界面活性剤あたり平均１～５０のエチレンオキシド単位を含むモノ脂肪酸のエトキシル化ソルビタンエステル、界面活性剤あたり平均１～２０のエチレンオキシド単位を含むエトキシル化オクチルフェノール、界面活性剤あたり平均１～２０のエチレンオキシド単位を含むエトキシル化二級Ｃ１－Ｃ２０アルコール、界面活性剤あたり平均１～２０のプロピレンオキシド単位および１～３０のエチレンオキシド単位を含むコ－エトキシル化－プロポキシル化種子油アルコール、およびその組合せからなる群から選択される、請求項１９に記載の緩衝剤組成物。
21. 非イオン性界面活性剤が、１種または複数の、モノ脂肪酸のエトキシル化ソルビタンエステルを含む、請求項１～１９のいずれか１項に記載の緩衝剤組成物。
22. １種または複数の、モノ脂肪酸のエトキシル化ソルビタンエステルの各々が、平均１～５０のエチレンオキシド単位を含む、請求項２１に記載の緩衝剤組成物。
23. 非イオン性界面活性剤が、１種または複数のエトキシル化二級Ｃ１－Ｃ２０アルコールを含む、請求項１～１９のいずれか１項に記載の緩衝剤組成物。
24. １種または複数のエトキシル化二級Ｃ１－Ｃ２０アルコールの各々が、平均１～２０のエチレンオキシド単位を含む、請求項２３に記載の緩衝剤組成物。
25. 非イオン性界面活性剤が、１種または複数のエトキシル化オクチルフェノールを含む、請求項１～１９のいずれか１項に記載の緩衝剤組成物。
26. １種または複数のエトキシル化オクチルフェノールの各々が、平均１～２０のエチレンオキシド単位を含む、請求項２５に記載の緩衝剤組成物。
27. 非イオン性界面活性剤が、１種または複数のコ－エトキシル化－プロポキシル化種子油アルコールを含む、請求項１～１９のいずれか１項に記載の緩衝剤組成物。
28. １種または複数のコ－エトキシル化－プロポキシル化種子油アルコールの各々が、平均１～２０のプロピレンオキシド単位および１～３０のエチレンオキシド単位を含む、請求項２７に記載の緩衝剤組成物。
29. 非イオン性界面活性剤が、緩衝剤組成物の約０．５質量％～１．５質量％の範囲の濃度で存在する、請求項１～２８のいずれか１項に記載の緩衝剤組成物。
30. 非イオン性界面活性剤が、緩衝剤組成物の約１．０質量％の範囲の濃度で存在する、請求項１～２９のいずれか１項に記載の緩衝剤組成物。
31. 二価の塩がＣａＣｌ₂である、請求項１～３０のいずれか１項に記載の緩衝剤組成物。
32. 一価または二価の塩が、約１００ｍＭ～約３００ｍＭの範囲の濃度で存在する、請求項１～３１のいずれか１項に記載の緩衝剤組成物。
33. 一価または二価の塩が、約２００ｍＭの濃度で存在する、請求項１～３２のいずれか１項に記載の緩衝剤組成物。
34. 殺菌性保存剤が緩衝剤組成物の約０．０３質量％の濃度で存在する、請求項１～３３のいずれか１項に記載の緩衝剤組成物。
35. 殺菌性保存剤が、約１質量％～約５質量％の１種または複数のイソチアゾロンを含む、請求項１～３４のいずれか１項に記載の緩衝剤組成物。
36. 殺菌性保存剤が、約２質量％～約４質量％の１種または複数のイソチアゾロンを含む、請求項１～３４のいずれか１項に記載の緩衝剤組成物。
37. 殺菌性保存剤が、約１質量％～約３質量％の１種または複数のイソチアゾロンを含む、請求項１～３４のいずれか１項に記載の緩衝剤組成物。
38. １種または複数のイソチアゾロンが、クロロメチルイソチアゾリノンおよびメチルイソチアゾリノンを含む、請求項１～３７のいずれか１項に記載の緩衝剤組成物。
39. クロロメチルイソチアゾリノンとメチルイソチアゾリノンが、約１：１～約５：１の質量比である、請求項３８に記載の緩衝剤組成物。
40. １種または複数のイソチアゾロンが、５－クロロ－２－メチル－４－イソチアゾリン－３－オンおよび２－メチル－４－イソチアゾリン－３－オンを約３：１の質量比で含む、請求項３８または３９に記載の緩衝剤組成物。
41. 殺菌性保存剤が、塩非含有の独自のグリコールおよびアルキルカルボキシレート安定化剤の１つまたは複数を含む、請求項１～４０のいずれか１項に記載の緩衝剤組成物。
42. 緩衝剤が、実施例緩衝剤Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩからなる群から選択される、請求項１～４１のいずれか１項に記載の緩衝剤組成物。
43. 請求項１～４１のいずれか１項に記載の緩衝剤組成物を含む、キット。
44. 緩衝剤組成物を収容する無菌容器を含む、請求項４３に記載のキット。
45. 膣感染症または炎症に関連する症状を診断するためのマニュアルを含む、請求項４３または４４に記載のキット。
46. 症状が、膣炎もしくは膣症、またはその組合せである、請求項４５に記載のキット。
47. 症状が、外陰膣カンジダ症（ＶＶＣ）、トリコモナス症、もしくは細菌性膣症（ＢＶ）またはその組合せである、請求項４５に記載のキット。
48. 表面官能化粒子の凝集を防止または低減する方法であって、サンプルを請求項１～４１のいずれか１項に記載の緩衝剤組成物と接触させることを含み、サンプルが、複数の表面官能化粒子を含み、緩衝剤組成物の存在下における複数の表面官能化粒子の凝集レベルが、緩衝剤組成物の非存在下における凝集レベルと比較して低減される、方法。
49. 緩衝剤組成物の存在下における複数の表面官能化粒子の凝集レベルが、緩衝剤組成物の非存在下における凝集レベルと比較して、少なくとも１％低減される、請求項４８に記載の方法。
50. 緩衝剤組成物の存在下における複数の表面官能化粒子の凝集レベルが、緩衝剤組成物の非存在下における凝集レベルと比較して、少なくとも５％低減される、請求項４８または４９に記載の方法。
51. 緩衝剤組成物の存在下における複数の表面官能化粒子の凝集レベルが、緩衝剤組成物の非存在下における凝集レベルと比較して、少なくとも１０％低減される、請求項４８～５０のいずれか１項に記載の方法。
52. サンプルが臨床サンプルである、請求項４８～５１のいずれか１項に記載の方法。
53. サンプルが膣サンプルである、請求項４８～５２のいずれか１項に記載の方法。
54. サンプルが臨床膣スワブである、請求項４８～５３のいずれか１項に記載の方法。
55. サンプルが膣から採取される、請求項４８～５４のいずれか１項に記載の方法。
56. サンプルが、膣炎、膣症、またはその両方の臨床徴候を示す対象から採取される、請求項４８～５５のいずれか１項に記載の方法。
57. サンプルが複数の核酸を含む、請求項４８～５６のいずれか１項に記載の方法。
58. 複数の核酸が、１種または複数の、外陰膣カンジダ症（ＶＶＣ）関連カンジダ種、トリコモナス症を引き起こす膣トリコモナス（ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ ｖａｇｉｎａｌｉｓ）、１種または複数の細菌性膣症（ＢＶ）関連細菌、またはその組合せに由来する、請求項５７に記載の方法。
59. １種または複数のＶＶＣ関連カンジダ種が、カンジダ・グラブラータ（Ｃａｎｄｉｄａ ｇｌａｂｒａｔａ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）、カンジダ・トロピリカス（Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、Ｃ．デュブリニエンシス（Ｃ． ｄｕｂｌｉｎｉｅｎｓｉｓ）、Ｃ．パラプシローシス（Ｃ． ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ）、カンジダ・クルセイ（Ｃａｎｄｉｄａ ｋｒｕｓｅｉ）またはその組合せを含む、請求項５８に記載の方法。
60. １種または複数のＢＶ関連細菌が、ラクトバチルス・クリスパタス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｒｉｓｐａｔｕｓ）、ラクトバチルス・ジュンセンイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｅｎｓｅｎｉｉ）、ガルドネラ・ヴァギナリス（Ｇａｒｄｎｅｒｅｌｌａ ｖａｇｉｎａｌｉｓ）、アトポビウム・ヴァギナエ（Ａｔｏｐｏｂｉｕｍ ｖａｇｉｎａｅ）、メガスファエラ１型（Ｍｅｇａｓｐｈａｅｒａ Ｔｙｐｅ １）、メガスファエラＢＶＡＢ２またはその組合せを含む、請求項５８または５９に記載の方法。
61. 複数の核酸を増幅することおよび／または検出することをさらに含み、複数の核酸の増幅および／または検出の効率が、緩衝剤組成物の存在下において、緩衝剤組成物の非存在下における効率と比較して向上する、請求項５７～６０のいずれか１項に記載の方法。
62. 複数の核酸の増幅および／または検出の効率が、緩衝剤組成物の存在下において、緩衝剤組成物の非存在下における効率と比較して少なくとも１％向上する、請求項６１に記載の方法。
63. 複数の核酸の増幅および／または検出の効率が、緩衝剤組成物の存在下において、緩衝剤組成物の非存在下における効率と比較して少なくとも５％向上する、請求項６１または６２に記載の方法。
64. 表面官能化粒子が、１ｍｍ未満の平均径を含む、請求項４８～６３のいずれか１項に記載の方法。
65. 表面官能化粒子が、核酸の抽出、精製、増幅、検出、またはその組合せのために構成されている、請求項４８～６４のいずれか１項に記載の方法。
66. 凝集が、サンプル中の妨害物質によって誘導される、請求項４８～６５のいずれか１項に記載の方法。
67. 妨害物質が、潤滑剤、ゲル、クリーム、およびその組合せからなる群から選択される、請求項６６に記載の方法。
68. 妨害物質が、１種または複数のカルボマーを含むゲルを含む、請求項６７に記載の方法。
69. 妨害物質が、カルボマーを含まないゲルを含む、請求項６７に記載の方法。
70. 凝集がマイクロ流体チャネル中で生じる、請求項４８～６９のいずれか１項に記載の方法。
71. 緩衝剤組成物が殺菌性保存剤を含まない、請求項１～７０のいずれか１項に記載の組成物、キットまたは方法。
72. 緩衝剤組成物が殺菌性保存剤を含む、請求項１～７１のいずれか１項に記載の組成物、キット、または方法。

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