JP2022541315A - キメラ抗原受容体及びキメラ刺激受容体を発現する細胞並びにその使用 - Google Patents

キメラ抗原受容体及びキメラ刺激受容体を発現する細胞並びにその使用 Download PDF

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シュイ、シャオホア
シオン、コアンヤン
リー、シャン
シュイ、イーシアン
オースティン ヘラー、ブラッドリー
チャン、ホンピン
リウ、ホン
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Abstract

本明細書には、免疫細胞であって、（ｉ）抗体部分を含む細胞外標的結合ドメインと、（ｉｉ）膜貫通ドメインと、（ｉｉｉ）一次シグナル伝達ドメインと、を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）と、（ｉ）標的リガンドに結合又は相互作用することができるリガンド結合モジュールと、（ｉｉ）膜貫通ドメインと、（ｉｉｉ）ＣＤ３０共刺激ドメインと、を含む、キメラ刺激受容体（ＣＳＲ）と、を含み、免疫細胞内のＣＳＲが、機能性一次シグナル伝達ドメインを欠いている、免疫細胞が記載される。また、本明細書には、癌（例えば、血液癌又は固形腫瘍癌）の治療的処置のためのそれ又はその組成物を使用する方法も提供される。

Description

（関連出願の相互参照）
本出願は、２０１９年７月２４日出願の米国特許仮出願第６２／８７８，２７１号、２０１９年７月２９日出願の米国特許仮出願第６２／８７９，６２９号、及び、２０１９年１２月２６日出願の米国特許仮出願第６２／９５３，７５８号に対する優先権を主張するものであり、それらの開示は、全ての目的のために参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
患者自身のＴリンパ球がキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作される養子Ｔ細胞免疫療法は、血液悪性腫瘍を治療することにおいて非常に有望であるが、固形腫瘍ではそうではないことが示されている。更に、ＣＡＲ自体は、一般に、シス又はトランスで発現したとしても、ＣＤ２８又は４－１ＢＢなどの一般的に使用される共刺激断片を有する場合も、特に固形腫瘍の場合有効性が十分ではない。したがって、より効果的で長期間続くＴ細胞免疫療法が必要である。
ＣＤ３０は、受容体タンパク質であるＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバーである。ＴＮＦ受容体ファミリーメンバー間の相同性のほとんどは、細胞外ドメインで発生し、細胞質ドメインにおいては相同性がほとんどない。これは、ＴＮＦ受容体ファミリーの異なるメンバーが異なるシグナル伝達経路を利用し得ることを示唆した。この仮説と一致して、１型ＴＮＦ受容体及びＦａｓは、デスドメインと呼ばれる６５アミノ酸のドメインを介して一連の細胞内シグナル伝達分子と相互作用することが示されているが、２型ＴＮＦ受容体及びＣＤ４０は、シグナル伝達分子の腫瘍壊死因子受容体関連因子（ＴＲＡＦ）ファミリーのメンバーと会合することが見出されている。
ＣＤ３０の膜結合形態は、１８８アミノ酸の細胞質ドメインを有する１２０ｋＤａ、５９５アミノ酸の糖タンパク質である。ＣＤ３０の抗体又はＣＤ３０リガンドとの架橋は、Ｔ細胞受容体のエンゲージメント及びＮＦ－ｋＢ転写因子の誘導後の初代Ｔ細胞の増殖促進など、細胞において様々な効果を生じる。ＣＤ３０は、ホジキンリンパ腫細胞の表面上に発現される抗原として元々同定された。その後、ＣＤ３０は、活性化表現型を有するリンパ球、胚中心の周辺の細胞、及びＣＤ４５ＲＯ１（メモリー）Ｔ細胞によって発現されることが示された。ＣＤ３０はまた、Ｔヘルパー２型細胞の発生において役割を果たし得る。ＴＮＦ受容体ファミリーメンバー４－１ＢＢのＴ細胞活性化特性は、チロシンキナーゼｐ５６ｌｃｋと会合する細胞質ドメインの特定の能力を伴うことが示されている。ＣＤ３０の細胞質ドメインの配列は、これらの受容体のいずれともほとんど配列類似性を示さず、ＣＤ３０は、明らかなデスドメイン又はｐ５６ｌｃｋ結合部位を欠いている。
本発明は、とりわけ、ＣＤ３０由来の共刺激ドメイン（本明細書ではＣＤ３０共刺激ドメインとも称する）を使用する、キメラ刺激受容体（ＣＳＲ）を提供する。本明細書で詳細に記載されるように、ＣＤ３０由来の共刺激ドメインを含有するＣＳＲを有するＴ細胞は、例えば、ＣＤ２８又は４－１ＢＢ由来の共刺激ドメインを含有するＣＳＲを有するＴ細胞よりもはるかに少ない、Ｔ細胞活性化の阻害因子であるＰＤ－１を発現し、同時に、同程度の細胞傷害能を示す。いくつかの実施形態では、ＣＤ３０由来の共刺激ドメインを含有するＣＳＲを有するＴ細胞は、Ｄａｐ１０由来の共刺激ドメインを含有するＣＳＲを有するＴ細胞よりも、はるかに少ないＰＤ－１を発現する。実施例は、ＣＤ３０由来の共刺激ドメインが、アネルギーとも呼ばれるＴ細胞疲弊に繋がる機能的不応答性を改善し、続いて、ＣＤ２８などの一般的に使用される共刺激ドメインと比較して、腫瘍細胞死滅及び腫瘍浸潤増加の優れた持続性を提供することを示唆している。ＣＤ３０はＣＳＲ共刺激に重要であると考えられるｐ５６ｌｃｋ結合部位を欠いているため、予想外である。
一態様では、本開示は、（ａ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であって、（ｉ）抗体部分（ＣＡＲ抗体部分）を含む細胞外標的結合ドメインと、（ｉｉ）膜貫通ドメイン（ＣＡＲ膜貫通ドメイン）と、（ｉｉｉ）一次シグナル伝達ドメインと、を含む、キメラ抗原受容体と、（ｂ）キメラ刺激受容体（ＣＳＲ）であって、（ｉ）標的リガンドに結合又は相互作用することができるリガンド結合モジュールと、（ｉｉ）膜貫通ドメイン（ＣＳＲ膜貫通ドメイン）と、（ｉｉｉ）ＣＤ３０共刺激ドメインと、を含み、ＣＳＲが、機能性一次シグナル伝達ドメインを欠いている、キメラ刺激受容体と、を含む、免疫細胞を特徴とする。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３０共刺激ドメインは、細胞内ＴＲＡＦシグナル伝達タンパク質に結合できる配列を含む。いくつかの実施形態では、細胞内ＴＲＡＦシグナル伝達タンパク質に結合できる配列は、配列番号６５の配列を有する完全長ＣＤ３０の残基５６１～５７３又は５７８～５８６に対応する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３０共刺激ドメインは、配列番号６５の残基５６１～５７３又は５７８～５８６に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一である配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３０共刺激ドメインは、配列番号７５の配列に対して、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％（例えば、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一である配列を含む。
この態様のいくつかの実施形態では、ＣＳＲは、２つ以上のＣＤ３０共刺激ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、ＣＤ３０とは異なる共刺激分子の細胞内配列を含む、少なくとも１つの共刺激ドメインを更に含む。ＣＤ３０とは異なる共刺激分子は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、及びＤａｐ１０からなる群から選択することができる。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、共刺激ドメイン（ＣＡＲ共刺激ドメイン）を更に含む。ＣＡＲ共刺激ドメインは、共刺激受容体の細胞内ドメインに由来し得る。共刺激受容体は、ＣＤ３０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、及びＤａｐ１０からなる群から選択することができる。
いくつかの実施形態では、ＣＳＲのリガンド結合モジュールは、受容体の細胞外ドメインに由来する。いくつかの実施形態では、ＣＳＲのリガンド結合モジュールは、抗体部分（ＣＳＲ抗体部分）を含む。ＣＳＲ抗体部分は、単鎖抗体断片であり得る。ＣＡＲ抗体部分は、単鎖抗体断片であり得る。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分及び／又はＣＳＲ抗体部分は、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、単鎖Ｆａｂ、単鎖Ｆａｂ’、単一ドメイン抗体断片、単一ドメイン多重特異性抗体、細胞内抗体、ナノボディ、又は単鎖イムノカインである。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分及び／又はＣＳＲ抗体部分は、単一ドメイン多重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、単一ドメイン多重特異性抗体は、単一ドメイン二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分及び／又はＣＳＲ抗体部分は、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、タンデムｓｃＦｖである。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分及び／又はＣＳＲ抗体部分は、疾患関連抗原に特異的に結合する。疾患関連抗原は、癌関連抗原である。疾患関連抗原は、ウイルス関連抗原である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分及び／又はＣＳＲ抗体部分は、細胞表面抗原に特異的に結合する。細胞表面抗原は、タンパク質、炭水化物、及び脂質からなる群から選択され得る。細胞表面抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＣＤ１５８ｅ、ＧＰＣ３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＦｃＲＬ５、ＭＵＣ１６、ＭＣＴ４、ＰＳＭＡ、又はそれらの変異型若しくは変異体であり得る。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分及びＣＳＲ抗体部分は、同じ抗原に特異的に結合する。特定の実施形態では、ＣＡＲ抗体部分及びＣＳＲ抗体部分は、同じ抗原上の異なるエピトープに特異的に結合する。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分及び／又はＣＳＲ抗体部分は、ＭＨＣ拘束抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＭＨＣ拘束抗原は、ペプチド及びＭＨＣタンパク質を含む複合体であり、ペプチドは、ＷＴ－１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６－Ｅ７、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ－ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ－１、ＫＲＡＳ、ＦｏｘＰ３、ヒストンＨ３．３、ＰＳＡ、及びその変異型又は変異体からなる群から選択されるタンパク質に由来する。
この態様のいくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分はＣＤ１９に結合し、ＣＳＲのリガンド結合モジュールはＣＤ１９に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分はＣＤ２２に結合し、ＣＳＲのリガンド結合モジュールはＣＤ２２に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分はＣＤ２０に結合し、ＣＳＲのリガンド結合モジュールはＣＤ２０に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分はＣＤ１９に結合し、ＣＳＲのリガンド結合モジュールはＣＤ２２に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分はＣＤ１９に結合し、ＣＳＲのリガンド結合モジュールはＣＤ２０に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分はＣＤ２２に結合し、ＣＳＲのリガンド結合モジュールはＣＤ２０に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分はＣＤ２２に結合し、ＣＳＲのリガンド結合モジュールはＣＤ１９に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分はＣＤ２０に結合し、ＣＳＲのリガンド結合モジュールはＣＤ１９に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分はＣＤ２０に結合し、ＣＳＲのリガンド結合モジュールはＣＤ２２に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分及び／又はＣＳＲのリガンド結合モジュールは、ＣＤ１９及びＣＤ２２の両方に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分及び／又はＣＳＲのリガンド結合モジュールは、ＣＤ１９及びＣＤ２０の両方に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分及び／又はＣＳＲのリガンド結合モジュールは、ＣＤ２０及びＣＤ２２の両方に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分及び／又はＣＳＲのリガンド結合モジュールは、ＣＤ１９、ＣＤ２０、及びＣＤ２２に結合する。
この態様のいくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分は、アルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）ペプチド及びＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＳＲのリガンド結合モジュールは、グリピカン３（ＧＰＣ３）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分は、ＡＦＰペプチド及びＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に結合し、ＣＳＲのリガンド結合モジュールは、ＧＰＣ３に結合する。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分及びＣＳＲのリガンド結合モジュールの両方は、ＧＰＣ３に結合する。特定の実施形態では、ＣＡＲ抗体部分及びＣＳＲのリガンド結合モジュールは、ＧＰＣ３上の異なるエピトープに特異的に結合する。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ膜貫通ドメインは、ＣＤ３０の膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ膜貫通ドメインは、ＣＤ８の膜貫通ドメインである。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ膜貫通ドメイン及び／又はＣＳＲ膜貫通ドメインは、ＴＣＲ共受容体又はＴ細胞共刺激分子の膜貫通ドメインに由来する。ＴＣＲ共受容体又はＴ細胞共刺激分子は、ＣＤ８、４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＯＸ４０、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、及びＤａｐ１０からなる群から選択することができる。特定の実施形態では、ＴＣＲ共受容体又はＴ細胞共刺激分子は、ＣＤ３０又はＣＤ８である。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞共刺激分子は、ＣＤ３０であり得る。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ共受容体は、ＣＤ８である。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ真膜貫通ドメイン及び／又はＣＳＲ膜貫通ドメインは、ＣＤ８、４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＯＸ４０、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、又はＤａｐ１０の膜貫通ドメインである。特定の実施形態では、ＣＡＲ膜貫通ドメイン及び／又はＣＳＲ膜貫通ドメインは、ＣＤ３０又はＣＤ８の膜貫通ドメインである。特定の実施形態では、ＣＡＲ膜貫通ドメイン及び／又はＣＳＲ膜貫通ドメインは、ＣＤ３０の膜貫通ドメインである。特定の実施形態では、ＣＳＲ膜貫通ドメインは、ＣＤ３０の膜貫通ドメインである。特定の実施形態では、ＣＡＲ膜貫通ドメイン及び／又はＣＳＲ膜貫通ドメインは、ＣＤ８の膜貫通ドメインである。特定の実施形態では、ＣＡＲ膜貫通ドメイン及び／又はＣＳＲ膜貫通ドメインは、配列番号６６～７１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
この態様のいくつかの実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、及びＣＤ６６ｄからなる群から選択される分子の細胞内シグナル伝達配列に由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζの細胞内シグナル伝達配列に由来する配列を含む。いくつかの実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζの細胞内シグナル伝達配列を含む。特定の（ｃｅｔａｉｎ）実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、配列番号７７の配列に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一である配列を含む。
この態様のいくつかの実施形態では、免疫細胞内のＣＡＲは、細胞外標的結合ドメインとＣＡＲの膜貫通ドメインとの間にペプチドリンカーを更に含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞内のＣＡＲは、膜貫通ドメインとＣＡＲの共刺激ドメインとの間にペプチドリンカーを更に含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞内のＣＡＲは、共刺激ドメインとＣＡＲの一次シグナル伝達ドメインとの間にペプチドリンカーを更に含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞内のＣＳＲは、リガンド結合モジュールとＣＳＲの膜貫通ドメインとの間にペプチドリンカーを更に含む。いくつかの実施形態では、免疫細胞内のＣＳＲは、膜貫通ドメインとＣＳＲのＣＤ３０共刺激ドメインとの間にペプチドリンカーを更に含む。
この態様のいくつかの実施形態では、ＣＳＲの発現は誘導性である。いくつかの実施形態では、ＣＳＲの発現は、免疫細胞の活性化の際に誘導可能である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
別の態様では、本開示は、本明細書に記載される免疫細胞に含まれるＣＡＲ及びＣＳＲをコードしている１つ以上の核酸を特徴とし、ＣＡＲ及びＣＳＲがそれぞれ、１つ以上の核酸によってコードされる１つ以上のポリペプチド鎖からなる。
別の態様では、本開示は、上記の１つ以上の核酸を含む１つ以上のベクターを特徴とする。
別の態様では、本開示は、（ａ）本明細書に記載の免疫細胞、本明細書に記載の核酸、又は本明細書に記載のベクターと、（ｂ）薬学的に許容される担体又は希釈剤と、を含む、医薬組成物を特徴とする。
別の態様では、本開示は、標的細胞を死滅させる方法であって、免疫細胞が標的細胞の死滅を媒介するのに十分な条件下で十分な時間にわたり、１つ以上の標的細胞を本明細書に記載の免疫細胞と接触させることを含み、標的細胞が、免疫細胞に特異的な抗原を発現し、免疫細胞が、標的細胞の接触時に低い細胞疲弊レベルを呈する、方法を特徴とする。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、低い細胞疲弊レベルの、ＰＤ－１、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、及びＬＡＧ－３からなる群から選択される疲弊マーカーを発現する。特定の実施形態では、免疫細胞はＴ細胞である。特定の実施形態では、免疫細胞は、低い細胞疲弊レベルのＰＤ－１を発現する。いくつかの実施形態では、第１世代ＣＡＲ（例えば、αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ）及びＣＤ３０－ＣＳＲを発現している免疫細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞）由来のＰＤ－１の、第１世代ＣＡＲのみを発現している免疫細胞由来のＰＤ－１に対する比は、０．０５～０．５例えば、０．０５～０．４５、０．０５～０．４、０．０５～０．３５、０．０５～０．３、０．０５～０．２５、０．０５～０．２、０．０５～０．１５、０．０５～０．１、０．１～０．４５、０．１５～０．４５、０．２～０．４５、０．２５～０．４５、０．３～０．４５、０．３５～０．４５、又は０．４～０．４５）である。いくつかの実施形態では、第２世代ＣＡＲ（例えば、αＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ）及びＣＤ３０－ＣＳＲを発現している免疫細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞）由来のＰＤ－１の、第２世代ＣＡＲのみを発現している免疫細胞由来のＰＤ－１に対する比は、０．０５～０．５例えば、０．０５～０．４５、０．０５～０．４、０．０５～０．３５、０．０５～０．３、０．０５～０．２５、０．０５～０．２、０．０５～０．１５、０．０５～０．１、０．１～０．４５、０．１５～０．４５、０．２～０．４５、０．２５～０．４５、０．３～０．４５、０．３５～０．４５、又は０．４～０．４５）である。特定の実施形態では、免疫細胞は、低い細胞疲弊レベルのＴＩＭ－３を発現する。特定の実施形態では、免疫細胞は、低い細胞疲弊レベルのＴＩＧＩＴを発現する。特定の実施形態では、免疫細胞は、低い細胞疲弊レベルのＬＡＧ－３を発現する。いくつかの実施形態では、第２世代ＣＡＲ（例えば、αＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ）及びＣＤ３０－ＣＳＲを発現している免疫細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞）由来のＬＡＧ－３の、第２世代ＣＡＲのみを発現している免疫細胞由来のＬＡＧ－３に対する比は、０．１～０．９例えば、０．１～０．８、０．１～０．７、０．１～０．６、０．１～０．５、０．１～０．４、０．１～０．３、０．１～０．２、０．２～０．９、０．３～０．９、０．４～０．９、０．５～０．９、０．６～０．９、０．７～０．９、又は０．８～０．９）である。
いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＣＤ２８共刺激ドメインを含むＣＳＲを発現している対応する免疫細胞よりも低いレベルのＰＤ－１、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、又はＬＡＧ－３を発現する。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、対応するＣＤ２８ ＣＳＲ免疫細胞よりも低いレベルのＰＤ－１を発現し、免疫細胞の対応するＣＤ２８ ＣＳＲ免疫細胞に対するＰＤ－１発現レベルの比は、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、又はそれ以下である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、対応するＣＤ２８ ＣＳＲ免疫細胞よりも低いレベルのＴＩＭ－３を発現し、免疫細胞の対応するＣＤ２８ ＣＳＲ免疫細胞に対するＴＩＭ－３発現レベルの比は、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、又はそれ以下である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、対応するＣＤ２８ ＣＳＲ免疫細胞よりも低いレベルのＬＡＧ－３を発現し、免疫細胞の対応するＣＤ２８ ＣＳＲ免疫細胞に対するＬＡＧ－３発現レベルの比は、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、又はそれ以下である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、対応するＣＤ２８ ＣＳＲ免疫細胞よりも低いレベルのＴＩＧＩＴを発現し、免疫細胞の対応するＣＤ２８ ＣＳＲ免疫細胞に対するＴＩＧＩＴ発現レベルの比は、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、又はそれ以下である。
いくつかの実施形態では、免疫細胞は、４－１ＢＢ共刺激ドメインを含むＣＳＲを発現している対応する免疫細胞よりも低いレベルのＰＤ－１、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、又はＬＡＧ－３を発現する。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、対応する４－１ＢＢ ＣＳＲ免疫細胞よりも低いレベルのＰＤ－１を発現し、免疫細胞の対応する４－１ＢＢ ＣＳＲ免疫細胞に対するＰＤ－１発現レベルの比は、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、又はそれ以下である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、対応する４－１ＢＢ ＣＳＲ免疫細胞よりも低いレベルのＴＩＭ－３を発現し、免疫細胞の対応する４－１ＢＢ ＣＳＲ免疫細胞に対するＴＩＭ－３発現レベルの比は、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、又はそれ以下である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、対応する４－１ＢＢ ＣＳＲ免疫細胞よりも低いレベルのＬＡＧ－３を発現し、免疫細胞の対応する４－１ＢＢ ＣＳＲ免疫細胞に対するＬＡＧ－３発現レベルの比は、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、又はそれ以下である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、対応する４－１ＢＢ ＣＳＲ免疫細胞よりも低いレベルのＴＩＧＩＴを発現し、免疫細胞の対応する４－１ＢＢ ＣＳＲ免疫細胞に対するＴＩＧＩＴ発現レベルの比は、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、又はそれ以下である。
いくつかの実施形態では、免疫細胞は、Ｄａｐ１０共刺激ドメインを含むＣＳＲを発現している対応する免疫細胞よりも低いレベルのＰＤ－１、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、又はＬＡＧ－３を発現する。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、対応するＤａｐ１０ ＣＳＲ免疫細胞よりも低いレベルのＰＤ－１を発現し、免疫細胞の対応するＤａｐ１０ ＣＳＲ免疫細胞に対するＰＤ－１発現レベルの比は、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、又はそれ以下である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、対応するＤａｐ１０ ＣＳＲ免疫細胞よりも低いレベルのＴＩＭ－３を発現し、免疫細胞の対応するＤａｐ１０ ＣＳＲ免疫細胞に対するＴＩＭ－３発現レベルの比は、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、又はそれ以下である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、対応するＤａｐ１０ ＣＳＲ免疫細胞よりも低いレベルのＬＡＧ－３を発現し、免疫細胞の対応するＤａｐ１０ ＣＳＲ免疫細胞に対するＬＡＧ－３発現レベルの比は、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、又はそれ以下である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、対応するＤａｐ１０ ＣＳＲ免疫細胞よりも低いレベルのＴＩＧＩＴを発現し、免疫細胞の対応するＤａｐ１０ ＣＳＲ免疫細胞に対するＴＩＧＩＴ発現レベルの比は、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、又はそれ以下である。
この態様のいくつかの実施形態では、標的細胞は、癌細胞である。癌細胞は、副腎皮質癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、胆管細胞癌、大腸直腸癌、食道癌、神経膠芽腫、神経膠腫、肝細胞癌、頭頸部癌、腎臓癌、白血病、リンパ腫、肺癌、黒色腫、中皮腫、多発性骨髄腫、膵臓癌、褐色細胞腫、形質細胞腫、神経芽腫、卵巣癌、前立腺癌、肉腫、胃癌、子宮癌、及び甲状腺癌からなる群から選択される、癌由来であり得る。癌細胞は、血液癌細胞であり得る。癌細胞は、固形腫瘍細胞であり得る。
いくつかの実施形態では、標的細胞は、ウイルス感染細胞である。ウイルス感染細胞は、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、伝染性軟属腫ウイルス（ＭＣＶ）、ヒトＴ細胞白血病ウイルス１（ＨＴＬＶ－１）、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス）、及びＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）からなる群から選択されるウイルスによって引き起こされる、ウイルス感染由来であり得る。
別の態様では、本開示は、疾患を治療する方法を特徴とし、この方法は、本明細書に記載の免疫細胞、本明細書に記載の核酸、又は本明細書に記載のベクター、又は本明細書に記載の医薬組成物を対象に投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、疾患は、ウイルス感染である。いくつかの実施形態では、疾患は、癌である。癌は、血液癌であり得る。癌は、固形腫瘍癌であり得る。
いくつかの実施形態では、対象は、対象の身体の残りの部分よりも固形腫瘍癌において本明細書に記載の免疫細胞の密度が高い。
いくつかの実施形態では、癌は、副腎皮質癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、胆管細胞癌、大腸直腸癌、食道癌、神経膠芽腫、神経膠腫、肝細胞癌、頭頸部癌、腎臓癌、白血病、リンパ腫、肺癌、黒色腫、中皮腫、多発性骨髄腫、膵臓癌、褐色細胞腫、形質細胞腫、神経芽腫、卵巣癌、前立腺癌、肉腫、胃癌、子宮癌、及び甲状腺癌からなる群から選択される。
別の態様では、本開示は、対象におけるＴ細胞疲弊を予防及び／又は回復させるための方法であって、本明細書に記載の核酸、本明細書に記載のベクター、又は核酸若しくはベクターを含む本明細書に記載の医薬組成物を、対象に投与することを含む、方法を特徴とする。いくつかの実施形態では、方法は、Ｔ細胞における疲弊マーカーの発現を減少させる。疲弊マーカーは、ＰＤ－１、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、及びＬＡＧ－３からなる群から選択することができる。
別の態様では、本開示は、ＣＡＲ及びＣＤ２８又は４－１ＢＢ共刺激ドメインを含むＣＳＲを発現している免疫細胞によって、同じ種類の固形腫瘍癌の治療と比較して腫瘍浸潤又は免疫細胞増殖の増加を伴う対象における固形腫瘍癌を治療する方法を特徴とし、この方法は、同じＣＡＲ及びＣＤ３０共刺激ドメインを含む対応するＣＳＲを発現している対応する免疫細胞を対象に投与することを含み、対応する免疫細胞は、本明細書に記載の免疫細胞を含む。別の態様では、本開示は、ＣＡＲ及びＤａｐ１０共刺激ドメインを含むＣＳＲを発現している免疫細胞によって、同じ種類の固形腫瘍癌の治療と比較して腫瘍浸潤又は免疫細胞増殖の増加を伴う対象における固形腫瘍癌を治療する方法を特徴とし、この方法は、同じＣＡＲ及びＣＤ３０共刺激ドメインを含む対応するＣＳＲを発現している対応する免疫細胞を対象に投与することを含み、対応する免疫細胞は、本明細書に記載の免疫細胞を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ及びＣＤ３０共刺激ドメインを有するＣＳＲを含む免疫細胞の１つの群、及び、同じＣＡＲ及び非ＣＤ３０共刺激ドメイン、例えば、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、ＣＤ２８共刺激ドメイン、又はＤａｐ１０共刺激ドメインを有する対応するＣＳＲを含む免疫細胞の別の群を使用することによって、固形腫瘍癌の治療における免疫細胞の効果を比較するための実験を、動物例えば、マウスで行うことができる。
本明細書に記載の方法のいくつかの実施形態では、第２世代ＣＡＲ（例えば、αＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ、αＧＰＣ３－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ）及びＣＤ３０－ＣＳＲを発現している免疫細胞によって浸潤された腫瘍細胞の数の、第２世代ＣＡＲのみを発現している免疫細胞によって浸潤された腫瘍細胞の数に対する比は、１～２０（例えば、１～１８、１～１６、１～１４、１～１２、１～１０、１～８、１～６、１～４、１～２、２～２０、４～２０、６～２０、８～２０、１０～２０、１２～２０、１４～２０、１６～２０、又は１８～２０）である。
本明細書に記載の方法のいくつかの実施形態では、第２世代ＣＡＲ（例えば、αＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ、αＧＰＣ３－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ）及びＣＤ３０－ＣＳＲを発現している免疫細胞の血中濃度の、第２世代ＣＡＲのみを発現している免疫細胞の血中濃度に対する比は、１～５例えば、１～４、１～３、１～２、２～５、３～５、又は４～５）である。
別の態様では、本開示は、ＣＡＲ及びＣＤ２８又は４－１ＢＢ共刺激ドメインを含むＣＳＲを発現している免疫細胞によって、同じ種類の固形腫瘍癌の治療と比較して腫瘍縮小の増加を伴う対象における固形腫瘍癌を治療する方法を特徴とし、この方法は、同じＣＡＲ及びＣＤ３０共刺激ドメインを含む対応するＣＳＲを発現している対応する免疫細胞を対象に投与することを含み、対応する免疫細胞は、本明細書に記載の免疫細胞を含む。別の態様では、本開示は、ＣＡＲ及びＤａｐ１０共刺激ドメインを含むＣＳＲを発現している免疫細胞によって、同じ種類の固形腫瘍癌の治療と比較して腫瘍縮小の増加を伴う対象における固形腫瘍癌を治療する方法を特徴とし、この方法は、同じＣＡＲ及びＣＤ３０共刺激ドメインを含む対応するＣＳＲを発現している対応する免疫細胞を対象に投与することを含み、対応する免疫細胞は、本明細書に記載の免疫細胞を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ及びＣＤ３０共刺激ドメインを有するＣＳＲを含む免疫細胞の１つの群、及び、同じＣＡＲ及び非ＣＤ３０共刺激ドメイン、例えば、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、ＣＤ２８共刺激ドメイン、又はＤａｐ１０共刺激ドメインを有する対応するＣＳＲを含む免疫細胞の別の群を使用することによって、腫瘍縮小に対する免疫細胞の効果を比較するための実験を、動物例えば、マウスで行うことができる。
別の態様では、本開示は、対象におけるセントラルメモリーＴ細胞を生成させるための方法であって、本明細書に記載の核酸、本明細書に記載のベクター、又は核酸若しくはベクターを含む本明細書に記載の医薬組成物を、対象に投与することを含む、方法を特徴とする。
いくつかの実施形態では、方法は、対象におけるセントラルメモリーＴ細胞の数及び／又は全Ｔ細胞中のセントラルメモリーＴ細胞の割合を増加させる。
別の態様では、本開示は、インビトロでセントラルメモリーＴ細胞を生成するための方法であって、免疫細胞がセントラルメモリーＴ細胞になるのに十分な条件下で十分な時間にわたり、１つ以上の標的細胞を本明細書に記載の免疫細胞と接触させることを含み、標的細胞が、免疫細胞に特異的な抗原を発現する、方法を提供する。
いくつかの実施形態では、方法は、セントラルメモリーＴ細胞の数及び／又は免疫細胞の子孫である全Ｔ細胞中のセントラルメモリーＴ細胞の割合を増加させる。
いくつかの実施形態では、方法は、ＣＤ２８共刺激ドメインを含むＣＳＲを発現している対応する免疫細胞よりも、高いセントラルメモリーＴ細胞の数及び／又は高いセントラルメモリーＴ細胞の割合をもたらす。
いくつかの実施形態では、方法は、ＣＤ２８共刺激ドメインを含むＣＳＲを発現している対応する免疫細胞よりも、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２００％、３００％、４００％、又は５００％高い、セントラルメモリーＴ細胞の数及び／又はセントラルメモリーＴ細胞の割合をもたらす。
本明細書に記載の方法のいくつかの実施形態では、第１世代ＣＡＲ（例えば、αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ）及びＣＤ３０－ＣＳＲを発現している免疫細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞）は、第１世代ＣＡＲのみを発現している免疫細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞）よりも、多くのセントラルメモリーＴ細胞を生成する。例えば、いくつかの実施形態では、第１世代ＣＡＲ（例えば、αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ）及びＣＤ３０－ＣＳＲを発現している免疫細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞）によって生成されるセントラルメモリーＴ細胞の数の、第１世代ＣＡＲのみを発現している免疫細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞）によって生成されるセントラルメモリーＴ細胞の数に対する比は、５～１０００（例えば、５～９００、５～８００、５～７００、５～６００、５～５００、５～４００、５～３００、５～２００、５～１００、５～５０、５～１０、１０～１０００、５０～１０００、１００～１０００、２００～１０００、３００～１０００、４００～１０００、５００～１０００、６００～１０００、７００～１０００、８００～１０００、又は９００～１０００）である。例えば、いくつかの実施形態では、第１世代ＣＡＲ（例えば、αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ）及びＣＤ３０－ＣＳＲを発現している免疫細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞）によって生成されるセントラルメモリーＴ細胞の数の、第１世代ＣＡＲのみを発現している免疫細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞）によって生成されるセントラルメモリーＴ細胞の数に対する比は、１．５～８０００（例えば、１．５～７０００、１．５～６０００、１．５～５０００、１．５～４０００、１．５～３０００、１．５～２０００、１．５～１０００、１．５～５００、１．５～１００、１０～８０００、５００～８０００、１０００～８０００、２０００～８０００、３０００～８０００、４０００～８０００、５０００～８０００、６０００～８０００、又は７０００～８０００）である。
本明細書に記載の方法のいくつかの実施形態では、第２世代ＣＡＲ（例えば、αＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ）及びＣＤ３０－ＣＳＲを発現している免疫細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞）は、第２世代ＣＡＲのみを発現している免疫細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞）よりも、多くのセントラルメモリーＴ細胞を生成する。例えば、いくつかの実施形態では、第２世代ＣＡＲ（例えば、αＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ）及びＣＤ３０－ＣＳＲを発現している免疫細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞）によって生成されるセントラルメモリーＴ細胞の数の、第２世代ＣＡＲのみを発現している免疫細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞）によって生成されるセントラルメモリーＴ細胞の数に対する比は、０．５～３５００（例えば、０．５～３０００、０．５～２５００、０．５～２０００、０．５～１５００、０．５～１０００、０．５～５００、０．５～１００、０．５～５０、５０～３５００、１００～３５００、５００～３５００、１０００～３５００、１５００～３５００、２０００～３５００、２５００～３５００、又は３０００～３５００）である。例えば、いくつかの実施形態では、第２世代ＣＡＲ（例えば、αＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ）及びＣＤ３０－ＣＳＲを発現している免疫細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞）によって生成されるセントラルメモリーＴ細胞の数の、第２世代ＣＡＲのみを発現している免疫細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞）によって生成されるセントラルメモリーＴ細胞の数に対する比は、１．５～２０，０００（例えば、１．５～１８，０００、１．５～１６，０００、１．５～１４，０００、１．５～１２，０００、１．５～１０，０００、１．５～８，０００、１．５～６，０００、１．５～４，０００、１．５～２，０００、１．５～１，８００、１．５～１，６００、１．５～１，４００、１．５～１，２００、１．５～１，０００、１．５～８００、１．５～６００、１．５～４００、１．５～２００、１．５～１００、１００～２０，０００、２００～２０，０００、４００～２０，０００、６００～２０，０００、８００～２０，０００、１０００～２０，０００、１，２００～２０，０００、１，４００～２０，０００、１，６００～２０，０００、１，８００～２０，０００、２，０００～２０，０００、４，０００～２０，０００、６，０００～２０，０００、８，０００～２０，０００、１０，０００～２０，０００、１２，０００～２０，０００、１４，０００～２０，０００、１６，０００～２０，０００、又は１８，０００～２０，０００）である。
いくつかの実施形態では、セントラルメモリーＴ細胞は、高いレベルのＣＣＲ７及び低いレベルのＣＤ４５ＲＡを発現する。
いくつかの実施形態では、セントラルメモリーＴ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。
定義
本発明の範囲は、本明細書に添付の特許請求の範囲によって定義され、本明細書に記載の特定の実施形態によって限定されない。当業者は、本開示を読むことで、そのような説明された実施形態と同等であり得るか、又は別様に特許請求の範囲の範囲内であり得る様々な修正を認識するであろう。
一般に、本明細書で使用される用語は、別途明確に示されない限り、当該技術分野におけるその理解された意味に従う。特定の用語の明確な定義を以下に提供する。本明細書を通して特定の例におけるこれら及び他の用語の意味は、文脈から当業者には明らかであろう。
本発明がより容易に理解され得るために、特定の用語は、以下に最初に定義される。以下の用語及び他の用語の追加の定義は、本明細書全体を通して記載されている。
投与：本明細書で使用される場合、「投与」という用語は、対象又は系（例えば、細胞、器官、組織、生物、又はこれらの関連する構成要素又は一連の構成要素）への組成物の投与を指す。当業者は、投与経路は、例えば、組成物が投与されている対象又は系、組成物の性質、投与の目的などに応じて変化し得ることを理解するであろう。例えば、特定の実施形態では、動物対象（例えば、ヒト）への投与は、気管支（気管支内注入を含む）、頬側、経腸、真皮、動脈内、皮内、胃内、肝内、髄内、筋肉内、鼻腔内、腹腔内、髄腔内、腫瘍内、静脈内、脳室内、経粘膜、経鼻、経口、直腸内、皮下、舌下、局所、気管（気管内注入を含む）、経皮、経膣、及び／又は硝子体内であり得る。いくつかの実施形態では、投与は、断続的投与を含み得る。いくつかの実施形態では、投与は、少なくとも選択された時間の連続的投与（例えば、灌流）を含み得る。
親和性：当技術分野で知られているように、「親和性」は、特定のリガンドがそのパートナーに結合する堅固さの尺度である。親和性は、異なる方法で測定することができる。いくつかの実施形態では、親和性は定量的アッセイによって測定される。いくつかのそのような実施形態では、結合パートナー濃度は、生理的条件を模倣するため、リガンド濃度を超えて固定され得る。代替的又は追加的に、いくつかの実施形態では、結合パートナー濃度及び／又はリガンド濃度は、変化し得る。いくつかのそのような実施形態では、親和性は、同等の条件（例えば、濃度）下で参照と比較され得る。
親和性成熟（又は親和性成熟した抗体）：本明細書で使用される場合、変化を有さない親抗体と比較して、抗体の抗原に対する親和性の改善をもたらす、１つ以上のＣＤＲ（又はいくつかの実施形態では、フレームワーク領域）における１つ以上の変化を有する抗体を指す。いくつかの実施形態では、親和性成熟した抗体は、標的抗原に対してナノモル濃度又は更にはピコモル濃度の親和性を有するであろう。親和性成熟した抗体は、当該技術分野で既知の様々な手順のいずれかによって作製され得る。Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，１９９２，ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９－７８３は、ＶＨ及びＶＬドメインのシャフリングによる親和性成熟について述べている。ＣＤＲ及び／又はフレームワーク残基のランダム変異誘発は、Ｂａｒｂａｓ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，Ｕ．Ｓ．Ａ．９１：３８０９－３８１３、Ｓｃｈｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｇｅｎｅ １６９：１４７－１５５、Ｙｅｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９５．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４－２００４、Ｊａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０－９、及びＨａｗｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９－８９６で述べられている。改善された結合特性を有するバインダーの選択は、Ｔｈｉｅ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．５２５：３０９－２２で述べられている。
薬剤：本明細書で使用される場合、例えば、ポリペプチド、核酸、糖類、脂質、低分子、金属、又はこれらの組み合わせを含む、化合物又は任意の種類の化学物質を指し得る。いくつかの実施形態では、薬剤は、自然で見つかり、及び／又は自然から得られるという点で天然物であるか、又はそれを含む。いくつかの実施形態では、薬剤は、人の作業を通して設計、操作、及び／又は製造され、かつ／又は自然には見つからないという点で人工的である、１つ以上の物質であるか、又はそれを含む。いくつかの実施形態では、薬剤は、単離された、つまり純粋な形態で利用され得る。いくつかの実施形態では、薬剤は、粗の形態で利用され得る。いくつかの実施形態では、薬剤候補物は、例えば、それらの中で活性剤を特定又は特徴付けるためにスクリーニングされ得る、コレクション又はライブラリとして提供される。本発明に従って利用され得る薬剤のいくつかの特定の実施形態として、低分子、抗体、アプタマー、核酸（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッド、アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム）、ペプチド、ペプチド模倣体などが挙げられる。いくつかの実施形態では、薬剤は、ポリマーであるか、又はポリマーを含む。いくつかの実施形態では、薬剤は、ポリマーではなく、及び／又は任意のポリマーを実質的に含まない。いくつかの実施形態では、薬剤は、少なくとも１つのポリマー部分を含有する。いくつかの実施形態では、薬剤は、いかなるポリマー部分も欠いているか、又は実質的に含まない。
アミノ酸：本明細書で使用される場合、「アミノ酸」という用語は、その最も広い意味で、ポリペプチド鎖に組み込むことができる任意の化合物及び／又は物質を指す。いくつかの実施形態では、アミノ酸は、一般構造Ｈ２Ｎ－Ｃ（Ｈ）（Ｒ）－ＣＯＯＨを有する。いくつかの実施形態では、アミノ酸は、天然に存在するアミノ酸である。いくつかの実施形態では、アミノ酸は、合成アミノ酸であり、いくつかの実施形態では、アミノ酸は、Ｄ－アミノ酸であり、いくつかの実施形態では、アミノ酸は、Ｌ－アミノ酸である。「標準アミノ酸」は、天然に存在するペプチドに一般的に見られる２０個の標準的なＬ－アミノ酸のいずれかを指す。「非標準アミノ酸」は、合成的に調製されるか、又は天然源から得られるかに関係なく、標準アミノ酸以外の任意のアミノ酸を指す。本明細書で使用される場合、「合成アミノ酸」は、塩、アミノ酸誘導体（アミドなど）、及び／又は置換体が挙げられるが、これらに限定されない、化学修飾アミノ酸を包含する。ペプチド中のカルボキシ及び／又はアミノ末端アミノ酸を含むアミノ酸は、メチル化、アミド化、アセチル化、保護基、及び／又はそれらの活性に悪影響を及ぼさずにペプチドの循環半減期を変化させることができる他の化学基で置換することによって修飾され得る。アミノ酸は、ジスルフィド結合に関与し得る。アミノ酸は、１つ以上の化学物質（例えば、メチル基、酢酸基、アセチル基、リン酸基、ホルミル部分、イソプレノイド基、硫酸基、ポリエチレングリコール部分、脂質部分、炭水化物部分、ビオチン部分など）との会合などの、１つ又は翻訳後修飾を含み得る。「アミノ酸」という用語は、「アミノ酸残基」と互換的に使用され、遊離アミノ酸及び／又はペプチドのアミノ酸残基を指し得る。それが遊離アミノ酸又はペプチドの残基を指すかどうかについては、用語が使用される文脈から明らかであろう。
動物：本明細書で使用される場合、動物界の任意のメンバーを指す。いくつかの実施形態では、「動物」は、性別及び年齢を問わないヒトを指す。いくつかの実施形態では、「動物」は、年齢を問わない非ヒト動物を指す。特定の実施形態では、非ヒト動物は、哺乳類（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ブタ、ウシ、シカ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、イヌ、又はサル）である。いくつかの実施形態では、動物として、哺乳類、鳥類、爬虫類、両生類、魚類、昆虫、及び／又は蠕虫類が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、動物は、トランスジェニック動物、遺伝子操作動物、及び／又はクローンであり得る。
抗体部分：本明細書で使用される場合、この用語は、全長抗体及びその抗原結合断片を包含する。完全長抗体は、２本の重鎖及び２本の軽鎖を含む。軽鎖及び重鎖の可変領域は、抗原結合に関与している。両鎖における可変領域は、一般に、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる３つの高度に可変性のループ（ＬＣ－ＣＤＲ１、ＬＣ－ＣＤＲ２、及びＬＣ－ＣＤＲ３を含む軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ、ＨＣ－ＣＤＲ１、ＨＣ－ＣＤＲ２、及びＨＣ－ＣＤＲ３を含む重鎖（ＨＣ）ＣＤＲ）を含有する。本明細書に開示される抗体及び抗原結合断片のＣＤＲの境界は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、又はＡｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ（Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ １９９７、Ｃｈｏｔｈｉａ １９８５、Ｃｈｏｔｈｉａ １９８７、Ｃｈｏｔｈｉａ １９８９、Ｋａｂａｔ １９８７、Ｋａｂａｔ １９９１）の慣例によって定義又は同定することができる。重鎖又は軽鎖の３つのＣＤＲは、ＣＤＲよりも高度に保存され、超可変ループを支持するためのスキャフォールドを形成する、フレームワーク領域（ＦＲ）として知られているフランキング伸長の間に介在する。重鎖及び軽鎖の定常領域は、抗原結合には関与しないが、様々なエフェクター機能を示す。抗体は、その重鎖の定常領域のアミノ酸配列に基づいてクラスに割り当てられる。抗体の５つの主要なクラス又はアイソタイプは、それぞれα、δ、ε、γ、及びμ重鎖の存在を特徴とするＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭである。主な抗体クラスのうちのいくつかは、ｌｇＧ１（γ１重鎖）、ｌｇＧ２（γ２重鎖）、ｌｇＧ３（γ３重鎖）、ｌｇＧ４（γ４重鎖）、ｌｇＡ１（α１重鎖）、又はｌｇＡ２（α２重鎖）などのサブクラスに分類される。
抗原結合断片又は抗原結合タンパク質：用語「抗原結合断片」又は「抗原結合タンパク質」は、本明細書で使用するとき、例えば、ダイアボティ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二重特異性ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボティ（ｄｓダイアボティ）、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖ二量体（二価ダイアボティ）、１つ以上のＣＤＲを含む抗体の一部から形成された多重特異性抗体、ラクダ化単一ドメイン抗体、ナノボディ、ドメイン抗体、二価ドメイン抗体、又は抗原には結合するが完全な抗体構造を構成しない任意の他の抗体断片を含む抗体断片を指す。抗原結合断片は、親抗体又は親抗体断片（例えば、親ｓｃＦｖ）が結合するのと同じ抗原に結合することができる。いくつかの実施形態では、抗原結合断片は、１つ以上の異なるヒト抗体由来のフレームワーク領域に移植された特定のヒト抗体由来の１つ以上のＣＤＲを含み得る。
生物学的活性：本明細書で使用される場合、目的の薬剤又は物質によって達成される観察可能な生物学的効果又は結果を指す。例えば、いくつかの実施形態では、特異的結合相互作用は、生物学的活性である。いくつかの実施形態では、生物学的経路又は事象の調節（例えば、誘導、増強、又は阻害）は、生物学的活性である。いくつかの実施形態では、生物学的活性の存在又は程度は、目的の生物学的経路又は事象によって生成される直接的又は間接的生成物の検出によって評価される。
二重特異性抗体：本明細書で使用される場合、結合部分の少なくとも１つ、典型的には両方が抗体部分であるか又はそれを含む、二重特異性結合剤を指す。様々な異なる二重特異性抗体構造が当該技術分野において既知である。いくつかの実施形態では、抗体部分であるか又はそれを含む二重特異性抗体中の各結合部分は、ＶＨ及び／又はＶＬ領域を含み、いくつかのそのような実施形態では、ＶＨ及び／又はＶＬ領域は、特定のモノクローナル抗体に見られるものである。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体が２つの抗体部分を含む場合、それぞれが、異なるモノクローナル抗体由来のＶＨ及び／又はＶＬ領域を含む。
本明細書で使用される「二重特異性抗体」という用語はまた、各々が別個の標的に結合する、２つの別個の結合部分を有するポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、二重特異性結合抗体は、単一のポリペプチドであり、いくつかの実施形態では、二重特異性結合抗体は、いくつかのそのような実施形態において、例えば架橋によって互いに共有結合し得る複数のペプチドであるか、又はそれを含む。いくつかの実施形態では、二重特異性結合抗体の２つの結合部分は、同じ標的（例えば、抗原）の異なる部位（例えば、エピトープ）を認識し、いくつかの実施形態では、異なる標的を認識する。いくつかの実施形態では、二重特異性結合抗体は、異なる構造の２つの標的に同時に結合することができる。
担体：本明細書で使用される場合、組成物が共に投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤、又はビヒクルを指す。いくつかの例示的な実施形態では、担体として、例えば、水、及び、石油、動物、植物、又は合成物由来のものを含む油、例えば、落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油などの滅菌液体が挙げられ得る。いくつかの実施形態では、担体は、１つ以上の固体成分であるか、又はそれを含む。
ＣＤＲ：本明細書で使用するとき、用語「ＣＤＲ」又は「相補性決定領域」は、重鎖及び軽鎖のポリペプチドの両方の可変領域内に見られる非連続抗原結合部位を意味することを意図する。重鎖及び軽鎖の可変領域の各々に３つのＣＤＲがあり、可変領域の各々についてＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と呼ばれる。「ＣＤＲのセット」又は「ＣＤＲセット」は、抗原に結合することができる単一の可変領域、又は抗原に結合することができる同族重鎖及び軽鎖可変領域のＣＤＲのいずれかで生じる、３つ又は６つのＣＤＲの群を指す。これらの特定の領域は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９－６６１６（１９７７）、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ」（１９９１）、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２７３：９２７－９４８（１９９７）、ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２－７４５（１９９６）、Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４５：３８３２－３８３９（２００８）、Ｌｅｆｒａｎｃ Ｍ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２７：５５－７７（２００３）、及びＨｏｎｅｇｇｅｒ ａｎｄ Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，３０９：６５７－６７０（２００１）に記載されており、定義は、互いに比較したときにアミノ酸残基の重複又はサブセットを含む。それにもかかわらず、抗体若しくはグラフト化抗体又はこれらの変異型のＣＤＲを参照するためのいずれかの定義の適用は、本明細書で定義及び使用される用語の範囲内であることを意図する。上に引用した参照文献のそれぞれによって定義されるＣＤＲを包含するアミノ酸残基を、比較として以下の表１に記載する。ＣＤＲ予測アルゴリズム及びインターフェースは、当該技術分野で公知であり、例えば、Ａｂｈｉｎａｎｄａｎ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，４５：３８３２－３８３９（２００８）、Ｅｈｒｅｎｍａｎｎ Ｆ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，３８：Ｄ３０１－Ｄ３０７（２０１０）、及びＡｄｏｌｆ－Ｂｒｙｆｏｇｌｅ Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，４３：Ｄ４３２－Ｄ４３８（２０１５）を含む。この段落で引用される参考文献の内容は、本発明で使用するため、及び本明細書の１つ以上の特許請求の範囲に包含できるようにするためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
Figure 2022541315000001
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）：本明細書で使用される場合、細胞外標的結合（例えば、抗原結合）ドメインを含有する、人工的に構築されたハイブリッド単鎖タンパク質又は単鎖ポリペプチドを指し、このドメインは膜貫通ドメイン（「ＴＭドメイン」、例えば、共刺激分子の膜貫通ドメイン）に直接的又は間接的に結合し、更には、一次免疫細胞シグナル伝達ドメイン（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞活性化に関与するもの）を含む細胞内シグナル伝達ドメインに直接的又は間接的に結合する。細胞外標的結合ドメインは、抗体に由来する単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）であり得る。ｓｃＦｖに加えて、例えば、タンデムｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体断片（ＶＨＨｓ又はｓｄＡｂ）、単一ドメイン二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）、細胞内抗体、ナノボディ、単鎖形式のイムノカイン、及び単鎖形式のＦａｂ、Ｆａｂ’、又は（Ｆａｂ’）２などの他の単鎖抗原結合ドメインをＣＡＲ中で使用することができる。細胞外標的結合ドメインは、フレキシブルなヒンジ／スペーサー領域を介してＴＭドメインに結合することができる。細胞内シグナル伝達ドメイン（ＩＳＤ）は、一次シグナル伝達配列、又は一次免疫細胞シグナル伝達配列を含み、抗原依存性ＴＣＲ関連Ｔ細胞活性化分子、例えば、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、又はＣＤ６６ｄの細胞内ドメインの一部由来であり得る。ＩＳＤは、共刺激シグナル伝達配列、例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３に特異的に結合するリガンド、Ｄａｐ１０などといった抗原非依存性共刺激分子の細胞内ドメインの一部を更に含むことができる。ＣＡＲの特徴として、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）特異性のリダイレクト能、及び、モノクローナル抗体の抗原結合特性を利用する、ＭＨＣ拘束（ＴＣＲ模倣抗体の場合）又は非ＭＨＣ拘束（細胞表面タンパク質に対する抗体の場合）様式のいずれかで選択された標的に対する反応性が挙げられる。非ＭＨＣ拘束抗原認識は、ＣＡＲを発現している免疫細胞（例えば、Ｔ細胞又はＮＫ細胞）に、抗原プロセシングとは無関係に抗原を認識する能力を与え、したがって、腫瘍エスケープの主要なメカニズムを避ける。
現在、第３世代のＣＡＲがある。「第１世代」ＣＡＲは、典型的には、細胞質／細胞内ドメインに融合した膜貫通ドメインに融合した抗原結合ドメインとしてのｓｃＦｖで構成される単鎖ポリペプチドであり、ＣＤ３ζ由来の細胞内ドメインなどの一次免疫細胞シグナル伝達配列を含み、これは内因性ＴＣＲからのシグナルの主要伝達物質である。「第１世代」ＣＡＲは、デノボ抗原認識をもたらし、ＨＬＡ媒介抗原提示とは無関係に、単一融合分子中のＣＤ３ζ鎖シグナル伝達ドメインを介して、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞両方の活性化を引き起こすことができる。「第２世代」ＣＡＲは、様々な共刺激分子（例えば、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＩＣＯＳ、ＯＸ４０）由来の細胞内ドメインを、ＣＡＲの一次免疫細胞シグナル伝達配列に付加し、Ｔ細胞に追加の信号を提供する。したがって、「第２世代」ＣＡＲは、共刺激（例えば、ＣＤ２８又は４－１ＢＢ）及び活性化（例えば、ＣＤ３ζ）をもたらす断片を含む。前臨床試験では、「第２世代」ＣＡＲがＴ細胞の抗腫瘍活性を改善できることが示されている。例えば、「第２世代」ＣＡＲで修飾されたＴ細胞の安定した有効性が、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）及び急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）患者におけるＣＤ１９分子を標的とする臨床試験で実証された。「第３世代」ＣＡＲは、複数の共刺激（例えば、ＣＤ２８又は４－１ＢＢ）及び活性化（例えば、ＣＤ３ζ）をもたらすものを含む。例えば、抗ＣＤ１９細胞外標的結合ドメイン、ＣＤ８由来の膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ由来の共刺激ドメイン、及びＣＤ３ζ由来の一次シグナル伝達ドメインを有するＣＡＲ ＣＴＬ０１９を記載している、米国特許第１０，２２１，２４５号、並びに、抗ＣＤ１９細胞外標的結合ドメイン、ＣＤ２８由来の共刺激ドメイン、及びＣＤ３ζ由来の一次シグナル伝達ドメインを有するＣＡＲを記載している米国特許第９，８５５，２９８号に、ＣＡＲ Ｔ療法の例が説明されている。
養子細胞療法：養子細胞療法は、典型的には、免疫細胞（例えば、ＮＫ細胞又はＴ細胞）の単離及びエクスビボ増殖及び／又は操作、並びに、例えば癌の治療のための、後続のこれらの細胞の患者への投与を含む、治療手段である。投与された細胞は、自己又は同種異系であり得る。細胞は、全て当該技術分野で既知の技術である、例えば、ＲＮＡ及びＤＮＡトランスフェクション、ウイルス形質導入、エレクトロポレーションを使用することを含む、既知の方法のうちのいずれか１つにおいて操作された受容体（ＣＡＲ及びＣＳＲを含む）を発現するように操作されてもよい。
「養子細胞治療用組成物」という用語は、養子細胞移植に好適な細胞を含む任意の組成物を指す。例示的な実施形態では、養子細胞治療用組成物は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、並びにＣＡＲ及び／又はＣＳＲ修飾リンパ球からなる群から選択される細胞型を含む。別の実施形態では、養子細胞治療用組成物は、Ｔ細胞、ＣＤ８＋細胞、ＣＤ４＋細胞、ＮＫ細胞、デルタ－ガンマＴ細胞、調節性Ｔ細胞、及び末梢血単核細胞からなる群から選択される細胞型を含む。別の実施形態では、ＴＩＬ、Ｔ細胞、ＣＤ８＋細胞、ＣＤ４＋細胞、ＮＫ細胞、デルタ－ガンマＴ細胞、調節性Ｔ細胞、又は末梢血単核細胞が、養子細胞治療用組成物を形成する。一実施形態では、養子細胞治療用組成物は、Ｔ細胞を含む。
いくつかの実施形態では、細胞内で発現されるＣＡＲは、上記のような、第１世代、第２世代、又は第３世代ＣＡＲである。本開示の主題によれば、本明細書で提供される操作された免疫細胞のＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含む。国際公開第２０１９／０３２６９９号は、ＣＡＲ及び誘導性二重特異性抗体を共発現しているＴ細胞について記載している。
同等：本明細書で使用される場合、互いに同一でなくてもよいが、それらの間の比較を可能にするのに十分に類似している２つ以上の薬剤、物質、状況、条件セットなどを指し、それにより、観察される差異又は類似性に基づいて、結論を合理的に引き出すことができる。いくつかの実施形態では、同等の条件セット、状況、個人、又は集団は、複数の実質的に同一の特性と、１つ又は少数の様々な特性を特徴とする。当業者は、文脈において、同等と見なされる２つ以上のそのような薬剤、物質、状況、条件セットなどの任意の所与の状況において、どの程度の同一性が必要とされるかを理解するであろう。例えば、当業者は、異なるセットの状況、個体、又は集団で得られた結果又は観察された現象の違いが、変化している特徴の変動によって引き起こされるか、又はそれを示すという妥当な結論を保証するために、十分な数及びタイプの実質的に同一の特性を特徴とする場合、そのセットの状況、個体、又は集団が互いに同等であると理解するであろう。
対照：本明細書で使用される場合、その結果が比較される標準としての当該技術分野で理解される「対照」の意味を指す。典型的には、対照は、そのような変動に関する結論を下すために、変動を単離することによって実験の完全性を増強するために使用される。いくつかの実施形態では、対照は、試験反応又はアッセイと同時に実行されて、比較基準を提供する反応又はアッセイである。本明細書で使用される場合、「対照」は、「対照抗体」を指し得る。「対照抗体」は、本明細書に記載されるヒト、キメラ、ヒト化、ＣＤＲグラフト化、多重特異性、又は二重特異性抗体、本明細書に記載されるものとは異なる抗体、又は親抗体であり得る。１つの実験では、「試験」（すなわち、試験されている変動）が適用される。第２の実験では、試験されている変数である「対照」は適用されない。いくつかの実施形態では、対照は、歴史的対照（すなわち、以前に実行された試験又はアッセイ、又は以前に知られている量若しくは結果）である。いくつかの実施形態では、対照は、印刷された、ないしは別の方法で保存された記録であるか、又はそれを含む。対照は、陽性対照又は陰性対照であり得る。
対応する：本明細書で使用される場合、目的のポリペプチド中のアミノ酸残基の位置／同一性を示す。当業者であれば、単純にする目的で、ポリペプチド中の残基が、参照関連ポリペプチドに基づいて標準的な番号付けシステムを使用してしばしば指定され、その結果、例えば、位置１９０の残基に「対応する」アミノ酸は、実際には特定のアミノ酸鎖中の１９０番目のアミノ酸である必要はなく、むしろ、参照ポリペプチド中の位置１９０で見られる残基に対応することを理解し、当業者は、「対応する」アミノ酸を特定する方法を容易に理解する。
検出物質／薬剤：本明細書で使用される場合、検出可能な任意の元素、分子、官能基、化合物、断片、又は部分を指す。いくつかの実施形態では、検出物質は、単独で提供されるか、又は利用される。いくつかの実施形態では、検出物質は、別の薬剤と共同して（例えば、結合して）提供されるか、及び／又は、利用される。検出物質の例としては、様々なリガンド、放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、１８Ｆ、１９Ｆ、３２Ｐ、３５Ｓ、１３５Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、６４Ｃｕ、１８７Ｒｅ、１１１Ｉｎ、９０Ｙ、９９ｍＴｃ、１７７Ｌｕ、８９Ｚｒなど）、蛍光色素（特定の例示的な蛍光色素については以下参照）、化学発光剤（例えば、アクリジニウムエステル、安定化ジオキセタンなど）、生物発光剤、スペクトル分解可能な無機蛍光半導体ナノ結晶（すなわち、量子ドット）、金属ナノ粒子（例えば、金、銀、銅、白金など）、ナノクラスター、常磁性金属イオン、酵素（酵素の特定の例については以下参照）、比色標識（例えば、染料、コロイド金など）、ビオチン、ジオキシゲニン、ハプテン、及び抗血清又はモノクローナル抗体が利用可能なタンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。
エフェクター機能：本明細書で使用される場合、抗体Ｆｃ領域とＦｃ受容体又はリガンドとの相互作用から生じる生化学的事象を指す。エフェクター機能としては、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ）、及び補体媒介性細胞傷害（ＣＭＣ）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、エフェクター機能は、抗原の結合後に作動するもの、抗原結合とは無関係に作動するもの、又はその両方である。
エフェクター細胞：本明細書で使用される場合、１つ以上のエフェクター機能を媒介する免疫系の細胞を指す。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞として、単球、マクロファージ、好中球、樹状細胞、好酸球、マスト細胞、血小板、大型顆粒リンパ球、ランゲルハンス細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球のうちの１つ以上が挙げられ得るが、これらに限定しなくてもよく、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、及びサルが挙げられるが、これらに限定されない任意の生物由来であり得る。
操作された：本明細書で使用される場合、一般に、人によって操作されている態様を指す。例えば、いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、自然ではその順序で連結されていない２つ以上の配列が、操作されたポリヌクレオチドにおいて互いに直接連結されるように人によって操作される場合、「操作された」と見なされ得る。いくつかの特定のそのような実施形態では、操作されたポリヌクレオチドは、第１のコード配列と動作可能に関連しているが、第２のコード配列と動作可能に関連せずに自然に見出され、第２のコード配列と動作可能に関連するように人間の手によって連結された、調節配列を含み得る。代替的又は追加的に、いくつかの実施形態では、ポリペプチド要素又はドメインを各々コードする第１及び第２の核酸配列は、自然では互いに結合しておらず、単一の操作されたポリヌクレオチドにおいて互いに連結され得る。同様に、いくつかの実施形態では、細胞又は生物は、その遺伝情報が変更される（例えば、これまで存在しない新しい遺伝物質が導入されているか、又はこれまで存在した遺伝物質が変更又は除去されている）ように操作されている場合、「操作された」と見なされ得る。一般的な慣行であり、当業者によって理解されるように、操作されたポリヌクレオチド又は細胞の子孫は、典型的には、実際の操作が前の物体に対して実施されたとしても、依然として「操作された」と呼ばれる。更に、当業者には理解されるように、本明細書に記載される「操作」が達成され得る様々な方法論が利用可能である。例えば、いくつかの実施形態では、「操作」は、配列、変更点などを分析若しくは比較、ないしは別の方法で分析、推奨、及び／若しくは選択するようにプログラムされたコンピュータシステムの使用による、（例えば、核酸配列、ポリペプチド配列、細胞、組織、及び／又は生物の）選択又は設計を含み得る）。代替的又は追加的に、いくつかの実施形態では、「操作」は、インビトロ化学合成法、及び／又は、組換え核酸法、例えば、核酸増幅（例えば、ポリメラーゼ連鎖反応による）、ハイブリダイゼーション、突然変異、形質転換、トランスフェクションなど、及び／又は、様々な制御された交配法のうちのいずれかを含み得る。当業者には理解されるように、様々な確立されたそのような手法（例えば、組換えＤＮＡにおいては、オリゴヌクレオチド合成、及び組織培養及び形質転換（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクションなど）は、当技術分野で周知であり、本明細書を通して引用及び／又は説明される様々な一般的かつより具体的な参考文献に記載されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２ｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８９）を参照されたい。
エピトープ：本明細書で使用される場合、免疫グロブリン（例えば、抗体又は受容体）結合要素によって特異的に認識される任意の部分を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、抗原上の複数の化学原子又は基からなる。いくつかの実施形態では、抗原が関連する三次元立体構造を取る場合、そのような化学原子又は基は表面に露出している。いくつかの実施形態では、抗原がそのような立体構造を取る場合、そのような化学原子又は基は、空間内で互いに物理的に近接している。いくつかの実施形態では、抗原が別の立体構造を取る（例えば、線形化されている）場合、少なくともいくつかのそのような化学原子及び基は、互いに物理的に分離されている。本明細書に記載の抗体部分は、７～５０個のアミノ酸（例えば、７～５０個の連続的アミノ酸）、例えば、７～４５、７～７～４０、７～３５、７～３０、７～２５、７～２０、７～１５、７～１０、１０～５０、１５～５０、２０～５０、２５～５０、３０～５０、３５～５０、４０～５０、４５～５０、１０～４５、１５～４０、２０～３５、又は２５～３０個のアミノ酸を含む、エピトープに結合し得る。
賦形剤：本明細書で使用される場合、例えば、所望の稠度又は安定化効果を提供又は寄与するために、医薬組成物に含まれ得る非治療薬を指す。好適な薬学的賦形剤としては、例えば、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、白亜、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどが挙げられる。
発現カセット：本明細書で使用される場合、宿主細胞に導入されると、それぞれＲＮＡ又はポリペプチドの転写及び／又は翻訳をもたらす核酸コンストラクトを指す。
異種：本明細書で使用される場合、宿主細胞又は宿主生物で自然に発生しないポリヌクレオチド又はポリペプチドを指す。異種ポリヌクレオチド又はポリペプチドは、周知の組換え法を使用して、例えば、任意にプロモーターに連結された異種ポリヌクレオチドを含む発現カセットを使用して、宿主細胞又は宿主生物に導入され得る。
フレームワーク又はフレームワーク領域：本明細書で使用される場合、可変領域からＣＤＲを引いた配列を指す。ＣＤＲ配列は、異なる系によって決定され得るため、フレームワーク配列も同様に、対応する異なる解釈に供される。６つのＣＤＲは、重鎖及び軽鎖上のフレームワーク領域を、各鎖において４つのサブ領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、及びＦＲ４）に分割し、ＣＤＲ１がＦＲ１とＦＲ２との間、ＣＤＲ２がＦＲ２とＦＲ３との間、ＣＤＲ３がＦＲ３とＦＲ４との間に位置付けられる。ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、又はＦＲ４として特定のサブ領域を特定することなく、他のフレームワーク領域は、他に言及されるように、単一の天然に存在する免疫グロブリン鎖の可変領域内の組み合わされたＦＲｓを表す。本明細書で使用される場合、ＦＲは４つのサブ領域のうちの１つを表し、ＦＲ１は、例えば、ＣＤＲ１に対して可変領域のアミノ末端及び５’に最も近い第１のフレームワーク領域を表し、ＦＲｓは、フレームワーク領域を構成するサブ領域のうちの２つ以上を表す。
宿主細胞：本明細書で使用される場合、外因性ＤＮＡ（組換え又は他のもの）が導入されている細胞を指す。本開示を読んだ当業者は、この用語が特定の対象細胞だけでなく、かかる細胞の子孫も指すことを理解するであろう。突然変異又は環境の影響のいずれかによって後続世代において特定の修飾が起こり得るため、そのような子孫は、実際には親細胞と同一ではなくてもよいが、本明細書で使用される場合、依然として「宿主細胞」という用語の範囲内に含まれる。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、外因性ＤＮＡ（例えば、組換え核酸配列）を発現するのに好適な、生物界のうちのいずれかから選択される原核細胞及び真核細胞を含む。例示的な細胞としては、原核生物及び真核生物のもの（単一細胞又は複数細胞）、細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉの株、Ｂａｃｉｌｌｕｓ種、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ種．など）、マイコバクテリア細胞、真菌細胞、酵母細胞（例えば、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓ．ｐｏｍｂｅ、Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓ、Ｐ．ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａなど）、植物細胞、昆虫細胞（例えば、ＳＦ－９、ＳＦ－２１、バキュロウイルス感染昆虫細胞、イラクサギンウワバなど）、非ヒト動物細胞、ヒト細胞、又は、例えばハイブリドーマ若しくはクアドローマなどの細胞融合体が挙げられる。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、ヒト、サル、類人猿、ハムスター、ラット、又はマウス細胞である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は真核生物であり、次の細胞、すなわち、ＣＨＯ（例えば、ＣＨＯ Ｋｌ、ＤＸＢ－１ １ ＣＨＯ、Ｖｅｇｇｉｅ－ＣＨＯ）、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ－７）、網膜細胞、Ｖｅｒｏ、ＣＶ１、腎臓（例えば、ＨＥＫ２９３、２９３ ＥＢＮＡ、ＭＳＲ ２９３、ＭＤＣＫ、ＨａＫ、ＢＨＫ）、ＨｅＬａ、ＨｅｐＧ２、ＷＩ３８、ＭＲＣ ５、Ｃｏｌｏ２０５、ＨＢ ８０６５、ＨＬ－６０（例えば、ＢＨＫ２１）、Ｊｕｒｋａｔ、Ｄａｕｄｉ、Ａ４３１（表皮）、ＣＶ－１、Ｕ９３７、３Ｔ３、Ｌ細胞、Ｃ１２７細胞、ＳＰ２／０、ＮＳ－０、ＭＭＴ ０６０５６２、セルトリ細胞、ＢＲＬ ３ Ａ細胞、ＨＴ１０８０細胞、骨髄腫細胞、腫瘍細胞、及び前述の細胞に由来する細胞株から選択される。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、１つ以上のウイルス遺伝子、例えば、ウイルス遺伝子（例えば、ＰＥＲ．Ｃ６（商標）細胞）を発現する網膜細胞を含む。
ヒト抗体：本明細書で使用される場合、ヒト免疫グロブリン配列から生成（又は会合）された可変領域及び定常領域を有する抗体を含むことが意図される。いくつかの実施形態では、抗体（又は抗体部分）は、それらのアミノ酸配列が、例えば、１つ以上のＣＤＲ及び特にＣＤＲ３内に、ヒト生殖系免疫グロブリン配列（例えば、インビトロランダム又は部位特異的突然変異誘発によって、又はインビボ体細胞変異によって、例えば、（元々）導入されている場合がある配列変動を含む）によってコードされていない残基又は要素を含む場合であっても、「ヒト」であると見なされ得る。ヒト抗体、ヒト抗体部分、及びそれらの断片は、ヒト免疫細胞から単離され得るか、又は組換え的若しくは半合成などの合成的に生成され得る。
ヒト化：当該技術分野で知られているように、「ヒト化」という用語は、一般に、非ヒト種（例えば、マウス）で産生させた参照抗体由来のアミノ酸配列ＶＨ及びＶＬ領域配列を含むが、より「ヒト様」、すなわち、ヒト生殖系可変配列により類似しているようにすることを意図して、それらの配列中に参照抗体に対する修飾もまた含む、抗体（又は部分）を指すために使用される。いくつかの実施形態では、「ヒト化」抗体（又は抗体部分）は、目的の抗原に免疫特異的に結合し、実質的にヒト抗体のアミノ酸配列を有するフレームワーク（ＦＲ）領域と、実質的に非ヒト抗体のアミノ酸配列を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）とを有するものである。ヒト化抗体は、実質的に全ての少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメイン（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦａｂＣ、Ｆｖ）を含み、全て又は実質的に全てのＣＤＲ領域は、非ヒト免疫グロブリン（すなわち、ドナー免疫グロブリン）のものと一致し、全て又は実質的に全てのフレームワーク領域は、ヒト免疫グロブリンのコンセンサス配列のものである。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体はまた、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域のものである、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部も含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖並びに重鎖の少なくとも可変ドメインの両方を含有する。抗体はまた、重鎖定常領域の、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、及び任意選択でＣＨ４領域を含み得る。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、ヒト化ＶＬ領域のみを含有する。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、ヒト化ＶＨ領域のみを含有する。いくつかの特定の実施形態では、ヒト化抗体は、ヒト化ＶＨ及びＶＬ領域を含有する。
親水性：本明細書で使用される場合、「親水性」及び／又は「極性」という用語は、水と混合するか、又は容易に水に溶解する傾向を指す。
疎水性：本明細書で使用される場合、「疎水性」及び／又は「非極性」という用語は、水と反発するか、水と混合されないか、又は容易に溶解することができない傾向を指す。
改善、増加、若しくは低下又はこれらの文法的等価物：本明細書で使用される場合、ベースライン測定値、例えば、本明細書に記載の治療開始前の同じ個体における測定値、又は本明細書に記載の治療を行わない対照個体（又は複数の対照個体）の測定値に対する値を示す。「対照個体」は、治療される個体と同じ形態の疾患又は損傷に罹患している個体である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫細胞を使用する、癌（例えば、血液癌又は固形腫瘍癌）を治療するための方法は、治療を受ける前の個体又は対照個体と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、又は少なくとも９０％、個体における細胞アポトーシスを増加させ得る（例えば、腫瘍細胞アポトーシスを増加させる）。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の免疫細胞を使用する、癌（例えば、血液癌又は固形腫瘍癌）を治療するための方法は、治療を受ける前の個体又は対照個体と比較して、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、又は少なくとも９０％、個体における腫瘍サイズを減少させ得る（例えば、腫瘍サイズを減少させる）。
インビトロ：本明細書で使用される場合、多細胞生物内ではなく、人工環境、例えば、試験管又は反応容器内、細胞培養などにおいて発生する事象を指す。
インビボ：本明細書で使用される場合、ヒト及び非ヒト動物などの多細胞生物内で発生する事象を指す。細胞系システムの文脈では、この用語は、（例えば、インビトロシステムとは対称的に）生体細胞内で発生する事象を指すために使用され得る。
単離された：本明細書で使用される場合、（１）最初に生成されたとき（自然及び／若しくは実験的設定であるかにかかわらず）、会合された成分のうちの少なくともいくつかから分離され、並びに／又は、（２）人の手によって設計、生成、調製、及び／若しくは製造されている、物質及び／又は物体を指す。単離された物質及び／又は物体は、それらが最初に会合した他の成分の約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約９９％超から分離され得る。いくつかの実施形態では、単離された薬剤は、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約９９％超、純粋である。本明細書で使用される場合、物質は、他の成分を実質的に含まない場合、「純粋」である。いくつかの実施形態では、当業者には理解されるように、物質は、例えば、１つ以上の担体又は賦形剤（例えば、緩衝液、溶媒、水など）といった特定の他の成分と組み合わせた後、依然として「単離された」又は更には「純粋」と見なすことができ、そのような実施形態では、物質の単離パーセント、つまり純度は、そのような担体又は賦形剤を含まずに計算される。一例を提供するために、いくつかの実施形態では、自然に存在するポリペプチド又はポリヌクレオチドなどの生物学的ポリマーは、ａ）そのオリジン又は由来する起源によって、自然における天然状態で関連する成分のいくつか又は全てと会合していないとき、ｂ）自然においてそれを産生する種と同じ種の他のポリペプチド又は核酸を実質的に含まないとき、ｃ）自然においてそれを産生する種ではない細胞又は他の発現系によって発現されるか、ないしは別の方法で由来成分と会合しているとき、「単離された」と見なされる。したがって、例えば、いくつかの実施形態では、化学的に合成されるか、又は自然においてそれを生成するものと異なる細胞系で合成されるポリペプチドは、「単離された」ポリペプチドであると考えられる。あるいは、又は追加的に、いくつかの実施形態では、１つ以上の精製技術に供されたポリペプチドは、ａ）それが自然において会合している、及び／又は、ｂ）最初に産生されたときに会合していた、他の成分から分離されている限りにおいて、「単離された」ポリペプチドであると考えられ得る。
ＫＤ：本明細書で使用される場合、結合剤（例えば、抗体剤又はその結合成分）の、そのパートナー（例えば、抗体剤又はその結合成分が結合するエピトープ）との複合体からの解離定数を指す。
ｋｏｆｆ：本明細書で使用される場合、結合剤（例えば、抗体剤又はその結合成分）の、そのパートナー（例えば、抗体剤又はその結合成分が結合するエピトープ）との複合体からの解離速度定数を指す。
ｋｏｎ：本明細書で使用される場合、結合剤（例えば、抗体剤又はその結合成分）の、そのパートナー（例えば、抗体剤又はその結合成分が結合するエピトープ）との会合速度定数を指す。
リンカー：本明細書で使用される場合、異なる要素を互いに接続する多要素ポリペプチドの部分を指すために使用される。例えば、当業者は、その構造が２つ以上の機能的又は組織的ドメインを含むポリペプチドが、多くの場合、それらを互いに結合するそのようなドメイン間の連続したアミノ酸を含むことを理解する。いくつかの実施形態では、リンカー要素を含むポリペプチドは、一般形態Ｓ１－Ｌ－Ｓ２の全体構造を有し、Ｓ１及びＳ２は同じであっても異なっていてもよく、リンカーによって互いに関連する２つのドメインを表す。いくつかの実施形態では、リンカーは、長さが少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００個、又はそれ以上のアミノ酸である。いくつかの実施形態では、リンカーは、３～７個のアミノ酸、７～１５個のアミノ酸、又は２０～３０個（例えば、２０～２５個、又は２５～３０個）のアミノ酸を有する。いくつかの実施形態では、リンカーは、剛性三次元構造を取ることはできないが、むしろポリペプチドに可動性を提供することを特徴とする。ポリペプチド（例えば、融合ポリペプチド）を操作するときに適切に使用することができる様々な異なるリンカー要素が当該技術分野で既知である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：６４４４－６４４８、Ｐｏｌｊａｋ，Ｒ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ２：１１２１－１１２３）。
多価結合抗体（又は多重特異性抗体）：本明細書で使用される場合、同じ分子上又は異なる分子上にあり得る２つ以上の抗原に結合することができる抗体を指す。本明細書に記載の多価結合抗体は、いくつかの実施形態では、２つ以上の抗原結合部位を有するように操作され、典型的には天然に存在するタンパク質ではない。本明細書に記載される多価結合抗体は、２つ以上の関連する又は無関係な標的に結合することができる抗体を指す。多価結合抗体は、単一の抗体部分の複数のコピー又は異なる抗体部分の複数のコピーから構成され得る。そのような抗体は、２つ以上の抗原に結合することができ、四価又は多価であり得る。多価結合抗体は、例えば、免疫調節剤、毒素、又はＲＮａｓｅなどの治療薬を更に含み得る。本明細書に記載の多価結合抗体は、いくつかの実施形態では、異なる構造を有する少なくとも２つの標的、例えば、２つの異なる抗原、同じ抗原上の２つの異なるエピトープ、若しくはハプテン、及び／又は、抗原若しくはエピトープに、同時に結合することができる。本発明の多価結合抗体は、単一特異性（１つの抗原に結合することができる）又は多重特異性（２つ以上の抗原に結合することができる）であり得、２つの重鎖ポリペプチド及び２つの軽鎖ポリペプチドから構成され得る。いくつかの実施形態では、各結合部位は、抗原結合部位あたり、抗原結合に関与する合計６個のＣＤＲを有する重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインから構成される。
核酸：本明細書で使用される場合、その最も広い意味で、オリゴヌクレオチド鎖であるか、又はそれに組み込まれ得る任意の化合物及び／又は物質を指す。いくつかの実施形態では、核酸は、オリゴヌクレオチド鎖であるか、又はホスホジエステル結合を介してそれに組み込まれ得る化合物及び／又は物質である。文脈から明らかであるように、いくつかの実施形態では、「核酸」は、個々の核酸残基（例えば、ヌクレオチド及び／又はヌクレオシド）を指し、いくつかの実施形態では、「核酸」は、個々の核酸残基を含むオリゴヌクレオチド鎖を指す。いくつかの実施形態では、「核酸」は、ＲＮＡであるか、又はそれを含み、いくつかの実施形態では、「核酸」は、ＤＮＡであるか、又はそれを含む。いくつかの実施形態では、核酸は、１つ以上の天然核酸残基であるか、それらを含むか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、核酸は、１つ以上の核酸アナログであるか、それらを含むか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、核酸アナログは、ホスホジエステル骨格を利用しないという点で、核酸とは異なる。例えば、いくつかの実施形態では、核酸は、当該技術分野で既知であり、骨格内のホスホジエステル結合の代わりにペプチド結合を有する、１つ以上の「ペプチド核酸」であるか、それらを含むか、又はそれらからなり、本発明の範囲内であると考えられる。代替的又は追加的に、いくつかの実施形態では、核酸は、ホスホジエステル結合ではなく、１つ以上のホスホロチオエート及び／又は５’－Ｎ－ホスホロアミダイト結合を有する。
いくつかの実施形態では、核酸は、１つ以上の天然ヌクレオシド（例えば、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウリジン、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、デオキシグアノシン、及びデオキシシチジン）であるか、それらを含むか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、核酸は、１つ以上のヌクレオシドアナログ（例えば、２－アミノアデノシン、２－チオチミジン、イノシン、ピロロ－ピリミジン、３－メチルアデノシン、５－メチルシチジン、Ｃ－５プロピニル－シチジン、Ｃ－５プロピニル－ウリジン、２－アミノアデノシン、Ｃ５－ブロモウリジン、Ｃ５－フルオロウリジン、Ｃ５－ヨードウリジン、Ｃ５－プロピニル－ウリジン、Ｃ５－プロピニル－シチジン、Ｃ５－メチルシチジン、２－アミノアデノシン、７－デアザアデノシン、７－デアザグアノシン、８－オキソアデノシン、８－オキソグアノシン、０（６）－メチルグアニン、２－チオシチジン、メチル化塩基、挿入塩基、及びこれらの組み合わせ）であるか、それらを含むか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、核酸は、天然核酸と比較して、１つ以上の修飾糖（例えば、２’－フルオロリボース、リボース、２’－デオキシリボース、アラビノース、及びヘキソース）を含む。いくつかの実施形態では、核酸は、ＲＮＡ又はタンパク質などの機能的遺伝子産物をコードするヌクレオチド配列を有する。いくつかの実施形態では、核酸は、１つ以上のイントロンを含む。いくつかの実施形態では、核酸は、天然源から、相補的鋳型に基づく重合による酵素的合成（インビボ又はインビトロ）、組換え細胞又は系での複製、及び化学合成による、１つ以上の単離法によって調製される。いくつかの実施形態では、核酸は、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１ １０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２０、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、５０００、又はそれ以上の残基長である。いくつかの実施形態では、核酸は一本鎖であり、いくつかの実施形態では、核酸は二本鎖である。いくつかの実施形態では、核酸は、ポリペプチドをコードする少なくとも１つの要素を含むヌクレオチド配列を有するか、又はポリペプチドをコードする配列の相補鎖である。いくつかの実施形態では、核酸は、酵素活性を有する。
操作可能に連結された：本明細書で使用される場合、記載される構成要素が、それらが意図された様式で機能することを可能にする関係にある並置を指す。コード配列に「操作可能に連結された」制御配列は、コード配列の発現が制御配列と適合性のある条件下で達成されるように連結される。「操作可能に連結された」配列は、目的の遺伝子と隣接する発現制御配列、及び、目的の遺伝子の制御のためトランスで、つまり距離を取って作用する発現制御配列の両方を含む。本明細書で使用される「発現制御配列」という用語は、それらが連結されるコード配列の発現及びプロセシングをもたらすのに必要なポリヌクレオチド配列を指す。発現制御配列には、適切な転写開始、終結、プロモーター及びエンハンサー配列、スプライシング及びポリアデニル化シグナルなどの効率的なＲＮＡプロセシングシグナル、細胞質ｍＲＮＡを安定化する配列、翻訳効率を高める配列（すなわち、コザックコンセンサス配列）、タンパク質の安定性を高める配列、及び所望の場合、タンパク質分泌を増強する配列が挙げられる。そのような制御配列の性質は、宿主生物によって異なる。例えば、原核生物において、そのような制御配列は、一般に、プロモーター、リボソーム結合部位、及び転写終結配列を含み、真核生物では、典型的には、そのような制御配列は、プロモーター及び転写終結配列を含む。「制御配列」という用語は、その存在が発現及びプロセシングに不可欠である要素を含むことを意図しており、その存在が有利である追加の要素、例えばリーダー配列及び融合パートナー配列も含むことができる。
生理的条件：本明細書で使用される場合、その技術的に理解されている意味を含み、細胞又は生物が生活及び／又は複製される条件を参照する。いくつかの実施形態では、この用語は、生物又は細胞系において自然に発生し得る外部又は内部環境の条件を指す。いくつかの実施形態では、生理的条件は、ヒト又は非ヒト動物の体内に存在する条件、特に手術部位及び／又は手術部位内に存在する条件である。生理的条件は、典型的には、例えば、２０～４０℃の範囲の温度、１気圧、ｐＨ６～８、１～２０ｍＭのグルコース濃度、大気中の酸素濃度レベル、及びそれが地上で遭遇する重力を含む。いくつかの実施形態では、実験室における条件は、生理的条件で操作及び／又は維持される。いくつかの実施形態では、生理的条件は生物で見られる。
ポリペプチド：本明細書で使用される場合、アミノ酸の任意のポリマー鎖を指す。いくつかの実施形態では、アミノ酸は、ペプチド結合又は修飾ペプチド結合によって互いに結合される。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、自然で発生するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、自然で発生しないアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、合成的に設計及び／又は産生されるという点で操作されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、又はその両方を含み得るか、又はそれらからなり得る。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、天然アミノ酸のみ又は非天然アミノ酸のみを含み得るか、又はそれらからなり得る。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、Ｄ－アミノ酸、Ｌ－アミノ酸、又はその両方を含み得る。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、Ｄ－アミノ酸のみを含み得る。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、Ｌ－アミノ酸のみを含み得る。
いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、１つ以上のペンダント基又は他の修飾、例えば、ポリペプチドのＮ末端、ポリペプチドのＣ末端における、１つ以上のアミノ酸側鎖の修飾若しくは付加、又はそれらの任意の組み合わせを含み得る。いくつかの実施形態では、そのようなペンダント基又は修飾は、アセチル化、アミド化、脂質化、メチル化、ペグ化など、及びこれらの組み合わせからなる群から選択され得る。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは環状であってもよく、及び／又は環状部分を含んでもよい。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、環状ではなく、及び／又は任意の環状部分を含まない。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは直鎖状である。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、ステープル留めポリペプチドであり得るか、又はそれを含み得る。いくつかの実施形態では、「ポリペプチド」という用語は、参照ポリペプチド、活性、又は構造の名称に付加され得、そのような場合、本明細書では、関連する活性又は構造を共有するポリペプチドを指すために使用され、したがって、同じクラス又はファミリーのポリペプチドのメンバーであると見なすことができる。そのようなクラス毎に、そのアミノ酸配列及び／又は機能が知られているクラス内の例示的なポリペプチドを、本明細書は提供し、及び／又は当業者は知っているだろうし、いくつかの実施形態では、そのような例示的なポリペプチドは、ポリペプチドクラスの参照ポリペプチドである。
いくつかの実施形態では、ポリペプチドクラス又はファミリーのメンバーは、そのクラスの参照ポリペプチド、いくつかの実施形態では、クラス内の全てのポリペプチド）に対して、顕著な配列相同性又は同一性を示し、共通の配列モチーフ（例えば、特徴的な配列要素）を持ち、かつ／又は、共通の活性（いくつかの実施形態では、同等のレベル又は指定された範囲内で）を持つ。例えば、いくつかの実施形態では、メンバーポリペプチドは、少なくとも約３０～４０％であり、多くの場合約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％以上を超える全体的な程度の参照ポリペプチドとの配列相同性又は同一性を示し、かつ／又は、多くの場合９０％、更には９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％を超える、非常に高い配列同一性を示す、少なくとも１つの保存領域（すなわち、いくつかの実施形態では、特徴的な配列要素であり得るか、又はそれを含み得る、保存領域）を含む。そのような保存領域は通常、少なくとも３～４個、多くの場合最大２０個以上のアミノ酸を包含し、いくつかの実施形態では、保存領域は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５個以上の連続アミノ酸である少なくとも１つの連続部分を包含する。いくつかの実施形態では、有用なポリペプチドは、親ポリペプチドの断片を含み得るか、又はそれらからなり得る。いくつかの実施形態では、有用なポリペプチドは、複数の断片を含み得るか、又はそれらからなり得るが、それらの各々は、対象となるポリペプチドに見られるよりも互いに対して異なる空間配置で同じ親ポリペプチドに見出され（例えば、親に直接連結されている断片は、目的のポリペプチドで空間的に分離され得るか、若しくはその逆であり得、及び／又は、断片は、目的のポリペプチド内で親のポリペプチドとは異なる順序で存在し得る）、その結果、目的のポリペプチドは、その親ポリペプチドの誘導体である。
予防する又は予防：疾患、障害、及び／又は状態の発生に関連して本明細書で使用される場合、疾患、障害、及び／若しくは状態を発症するリスクを低減すること、並びに／又は、疾患、障害、若しくは状態の１つ以上の特徴若しくは症状の発症を遅らせることを指す。疾患、障害、又は状態の発症が所定の期間遅延された場合、予防は完了したと見なされ得る。
組換え：本明細書で使用される場合、組換え手段によって設計、操作、調製、発現、作製、若しくは単離されたポリペプチド（例えば、抗体又は抗体部分）、例えば、宿主細胞にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを使用して発現されるポリペプチド、組換えコンビナトリアルヒトポリペプチドライブラリから単離されたポリペプチド（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ Ｈ．Ｒ．，１９９７，ＴＩＢ Ｔｅｃｈ．１５：６２－７０、Ａｚｚａｚｙ Ｈ．，ａｎｄ Ｈｉｇｈｓｍｉｔｈ Ｗ．Ｅ．，２００２，Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３５：４２５－４５、Ｇａｖｉｌｏｎｄｏ Ｊ．Ｖ．，ａｎｄ Ｌａｒｒｉｃｋ Ｊ．Ｗ．，２００２，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２９：１２８－４５、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ Ｈ．，ａｎｄ Ｃｈａｍｅｓ Ｐ．，２０００，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ ２１：３７１－８）、ヒトイムノグロブリン遺伝子を導入した動物（例えば、マウス）から単離されたポリペプチド（例えば、Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０：６２８７－９５、Ｋｅｌｌｅｒｍａｎｎ Ｓ－Ａ．，ａｎｄ Ｇｒｅｅｎ Ｌ．Ｌ．，２００２，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１３：５９３－７、Ｌｉｔｔｌｅ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ ２１：３６４－７０、Ｍｕｒｐｈｙ，Ａ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１１１（１４）：５１５３－８参照）、又は、互いに対するスプライシングによって選択された配列要素を含む、任意の他の手段によって調製、発現、作製、若しくは単離されたポリペプチドを指すことが意図される。いくつかの実施形態では、そのような選択された配列要素のうちの１つ以上は、自然に見出される。いくつかの実施形態では、そのような選択された配列要素のうちの１つ以上は、インシリコで設計されている。いくつかの実施形態では、１つ以上のそのような選択された配列要素は、既知の配列要素の突然変異誘発（例えば、インビボ又はインビトロ）によって、例えば、天然又は合成源から生じる。例えば、いくつかの実施形態では、組換え抗体は、対象となる供給源生物（例えば、ヒト、マウスなど）の生殖系に見られる配列で構成される。いくつかの実施形態では、組換え抗体は、突然変異誘発（例えば、インビトロ又はインビボ、例えばトランスジェニック動物において）から生じるアミノ酸配列を有し、それにより、組換え抗体のＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列は、生殖系のＶＨ及びＶＬ配列由来であり、関連しているものの、インビボにおいて生殖系の抗体レパートリー内に天然には存在し得ない配列である。
参照：本明細書で使用される場合、本明細書に記載されるように比較が行われる標準、対照、又は他の適切な参照を説明している。例えば、いくつかの実施形態では、参照は、目的の薬剤、動物、個体、集団、試料、配列、一連の工程、一連の条件、又は値が比較される、標準又は対照の薬剤、動物、個体、集団、試料、配列、一連の工程、一連の条件、又は値である。いくつかの実施形態では、参照は、目的の試験又は測定と実質的に同時に試験及び／又は測定される。いくつかの実施形態では、参照は、任意選択で有形媒体で具現化されたヒストリカル参照である。典型的には、当業者によって理解されるように、参照は、目的とする評価で利用されるものに匹敵する条件下で測定又は特徴付けられる。
特異的結合：本明細書で使用される場合、結合が起こる環境においてパートナー候補を区別する結合剤の能力を指す。他の標的候補が存在する場合、ある特定の標的と相互作用する結合剤は、それが相互作用する標的に「特異的に結合する」と言われる。いくつかの実施形態では、特異的結合は、結合剤とそのパートナーとの会合度を検出又は測定することによって評価され、いくつかの実施形態では、特異的結合は、結合剤－パートナー複合体の解離度を検出又は測定することによって評価され、いくつかの実施形態では、特異的結合は、そのパートナーと別の物質との間の代替的な相互作用を競合する結合剤の能力を検出又は測定することによって評価される。いくつかの実施形態では、特異的結合は、ある範囲の濃度においてそのような検出又は測定を実行することによって評価される。いくつかの実施形態では、特異的結合は、同族標的と非同族標的との間の結合親和性の差を決定することによって評価される。例えば、結合剤は、非同族標的に対する結合親和性よりも約３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、又はそれ以上である同族標的に対する結合親和性を有し得る。
特異性：当技術分野で知られているように、「特異性」は、その結合パートナーを他の結合パートナー候補から区別するための特定のリガンドの能力の尺度である。
対象：本明細書で使用される場合、ヒトを含む任意の哺乳類を意味する。本発明の特定の実施形態では、対象は、成体、未成体又は幼体である。いくつかの実施形態では、「個体」又は「患者」という用語が使用され、「対象」と交換可能であることが意図される。また、本発明によって、子宮への医薬組成物の投与及び／又は治療法の実施が企図される。
実質的に：本明細書で使用される場合、「実質的に」という用語は、目的とする特徴又は特性の全体又はほぼ全体の度合い又は程度を示す定性的条件を指す。生物学的技術分野の当業者は、生物学的及び化学的現象が、完了するまで進む、及び／又は、完全に行われる、又は絶対的結果を達成若しくは回避することは、あるとしてもまれであると理解するであろう。したがって、「実質的に」という用語は、多くの生物学的及び化学的現象につきものの完全性の欠如の可能性を捕捉するために本明細書で使用される。
実質的な配列相同性：本明細書で使用される場合、「実質的な相同性」という語句は、アミノ酸配列又は核酸配列間の比較を指す。当業者には理解されるように、２つの配列は、一般に、対応する位置に相同的な残基を含有する場合、「実質的に相同」であると考えられる。相同的な残基は、同一の残基であり得る。あるいは、相同的な残基は、十分に類似した構造的及び／又は機能的特徴を有する非同一の残基であり得る。例えば、当業者によく知られているように、特定のアミノ酸は、典型的には「疎水性」又は「親水性」アミノ酸として、及び／又は「極性」又は「非極性」側鎖を有するものとして分類される。１つのアミノ酸の別の同種のアミノ酸で置換するとき、多くの場合、「相同」置換と見なされ得る。典型的なアミノ酸分類は、以下のように要約される。
Figure 2022541315000002
Figure 2022541315000003
当技術分野で周知であるように、アミノ酸配列又は核酸配列は、ヌクレオチド配列に対するＢＬＡＳＴＮ、及び、アミノ酸配列に対するＢＬＡＳＴＰ、ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴ、及びＰＳＩ－ＢＬＡＳＴなどの商業的コンピュータプログラムで利用可能なものを含む、様々なアルゴリズムのいずれかを使用して比較され得る。例示的なそのようなプログラムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５（３）：４０３－４１０、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２６６：４６０－４８０、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２、Ｂａｘｅｖａｎｉｓ ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ ｔｈｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｗｉｌｅｙ，１９９８、及びＭｉｓｅｎｅｒ，ｅｔ ａｌ，（ｅｄｓ．），Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１３２），Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，１９９９に記載されている。相同配列を特定することに加えて、上記のプログラムは、典型的には、相同性の程度を示す。いくつかの実施形態では、２つの配列は、対応する残基の少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又はそれ以上が残基の関連する連続部分にわたって相同である場合、実質的に相同であると考えられる。いくつかの実施形態では、関連する連続部分は完全な配列である。いくつかの実施形態では、関連する連続部分は、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、少なくとも５５、少なくとも６０、少なくとも６５、少なくとも７０、少なくとも７５、少なくとも８０、少なくとも８５、少なくとも９０、少なくとも９５、少なくとも１００、少なくとも１２５、少なくとも１５０、少なくとも１７５、少なくとも２００、少なくとも２２５、少なくとも２５０、少なくとも２７５、少なくとも３００、少なくとも３２５、少なくとも３５０、少なくとも３７５、少なくとも４００、少なくとも４２５、少なくとも４５０、少なくとも４７５、少なくとも５００、又はそれ以上の残基である。
表面プラズモン共鳴：本明細書で使用される場合、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅシステム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ ＡＢ（Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ及びＰｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．））を使用することによって、例えばバイオセンサマトリックス内のタンパク質濃度の変化の検出を通して、リアルタイムの特異的結合相互作用の解析を可能にする光学現象を指す。更なる説明は、Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｕ．ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ａｎｎ．Ｂｉｏｌ．Ｃｌｉｎ．５１：１９－２６、Ｊｏｎｓｓｏｎ，Ｕ．ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １１：６２０－６２７、Ｊｏｈｎｓｓｏｎ，Ｂ．ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．８：１２５－１３１、及びＪｏｈｎｓｓｏｎ，Ｂ．ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８：２６８－２７７を参照されたい。
治療薬：本明細書で使用される場合、一般に、生物に投与されたときに所望の薬理学的効果を誘発する任意の薬剤を指す。いくつかの実施形態では、薬剤は、適切な集団にわたって統計的に有意な効果を示す場合、治療薬であると考えられる。いくつかの実施形態では、適切な集団は、モデル生物の集団であり得る。いくつかの実施形態では、適切な集団は、特定の年齢群、性別、遺伝的背景、既存の臨床状態などの様々な基準によって定義され得る。いくつかの実施形態では、治療薬は、疾患、障害、及び／又は状態の１つ以上の症状又は特徴を軽減、改善、緩和、阻害、発症の遅延、重篤度の低下、及び／又は発生率の低減に使用することができる物質である。いくつかの実施形態では、「治療薬」は、ヒトへの投与に販売することができる前に政府機関によって承認されているか、又は承認が必要とされる薬剤である。いくつかの実施形態では、「治療薬」は、ヒトへの投与に処方箋が必要である薬剤である。
治療有効量：本明細書で使用される場合、投与されている間所望の効果をもたらす量を意味する。いくつかの実施形態では、この用語は、疾患、障害、及び／又は状態を治療するための治療投与レジメンに従って、疾患、障害、及び／又は状態に罹患しているか又は罹患しやすい集団に投与されるとき、十分である量を指す。いくつかの実施形態では、治療有効量は、疾患、障害、及び／又は状態の１つ以上の症状の発生率及び／又は重症度を低減する、及び／又は発症を遅延するものである。当業者は、「治療有効量」という用語が実際には、特定の個体において治療の成功が達成されることが必須ではないと理解するであろう。むしろ、治療有効量は、そのような治療を必要とする患者に投与されたときに、有意な数の対象において特定の所望の薬理学的応答を提供する量であり得る。いくつかの実施形態において、治療有効量への言及は、１つ以上の特定の組織（例えば、疾患、障害、又は状態によって影響を受けた組織）又は流体（例えば、血液、唾液、血清、汗、涙、尿など）で測定される量に対する言及であり得る。当業者は、いくつかの実施形態では、治療有効量の特定の薬剤又は療法が、単回用量で製剤化及び／又は投与され得ることを理解するであろう。いくつかの実施形態では、治療有効剤は、例えば投与レジメンの一部として、複数回用量で製剤化及び／又は投与され得る。
治療：本明細書で使用される場合、「治療」（更には「治療する」又は「治療している」）という用語は、その最も広い意味で、特定の疾患、障害、及び／又は状態の１つ以上の症状、特徴、及び／又は原因を、部分的又は完全に軽減、改善、緩和、阻害、発症遅延、重篤度低下、及び／又は発生率低減させる、物質（例えば、提供される組成物）の任意の投与を指す。いくつかの実施形態では、そのような治療は、関連する疾患、障害、及び／若しくは状態の兆候を示さない対象、及び／又は、その疾患、障害、及び／若しくは状態の初期の兆候のみを示す対象に投与され得る。代替的又は追加的に、いくつかの実施形態では、治療は、関連する疾患、障害、及び／又は状態の１つ以上の確立された兆候を示す対象に投与され得る。いくつかの実施形態では、治療は、関連する疾患、障害、及び／又は状態に罹患していると診断された対象のものであり得る。いくつかの実施形態では、治療は、関連する疾患、障害、及び／又は状態の発症のリスク増加と統計的に相関する１つ以上の感受性因子を有することが知られている対象のものであり得る。
変異型：本明細書で使用される場合、「変異型」という用語は、参照物質との有意な構造的同一性を示すが、参照物質と比較して、１つ以上の化学部分の存在又はレベルにおいて参照物質とは構造的に異なる物質を指す。多くの実施形態では、変異型はまた、その参照物質と機能的に異なる。一般に、特定の物質が参照物質の「変異型」であると適切に考えられるかどうかは、参照物質との構造的同一性の程度に基づく。当業者には理解されるように、任意の生物学的又は化学的参照物質は、特定の特徴的な構造要素を有する。変異型は、定義によって、１つ以上のそのような特徴的な構造要素を共有する別個の化学物質である。いくつかの例を得るために、ポリペプチドは、線状又は三次元空間において互いに対して指定された位置を有し、及び／又は特定の生物学的機能に寄与する複数のアミノ酸から構成される特徴的な配列要素を有してもよく、核酸は、線状又は三次元空間において互いに指定された位置を有する複数のヌクレオチド残基から構成される特徴的な配列要素を有し得る。例えば、変異型ポリペプチドは、アミノ酸配列の１つ以上の違い、及び／又は、ポリペプチド骨格に共有結合した化学部分（例えば、炭水化物、脂質など）の１つ以上の違いの結果として、参照ポリペプチドとは異なり得る。いくつかの実施形態では、変異型ポリペプチドは、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、又は９９％である参照ポリペプチドとの全体的な配列同一性を示す。代替的又は追加的に、いくつかの実施形態では、変異型ポリペプチドは、参照ポリペプチドの少なくとも１つの特徴的な配列要素が共通ではない。
いくつかの実施形態では、参照ポリペプチドは、１つ以上の生物学的活性を有する。いくつかの実施形態では、変異型ポリペプチドは、参照ポリペプチドの生物学的活性のうち１つ以上が共通である。いくつかの実施形態では、変異型ポリペプチドは、参照ポリペプチドの生物学的活性のうち１つ以上を欠く。いくつかの実施形態では、変異型ポリペプチドは、参照ポリペプチドと比較して、１つ以上の生物学的活性のレベルの低下を示す。多くの実施形態では、目的のポリペプチドは、目的のポリペプチドが親のアミノ酸配列と同一であるが特定の位置で少数の配列変化を有する場合、親又は参照ポリペプチドの「変異型」であると見なされる。典型的には、変異型中の残基の２０％、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％未満が、親と比較して置換されている。いくつかの実施形態では、変異型は、親と比較して、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、又は１個の置換残基を有する。多くの場合、変異型は、極めて少数（例えば、５、４、３、２、又は１未満）の数の置換官能性残基（すなわち、特定の生物学的活性に関与する残基）を有する。更に、変異体は、典型的には、５、４、３、２、又は１個以下の挿入又は欠失を有さず、多くの場合、親と比較して、挿入又は欠失を有さない。更に、任意の付加又は欠失は、典型的には、約２５、約２０、約１９、約１８、約１７、約１６、約１５、約１４、約１３、約１０、約９、約８、約７、約６未満、及び一般には約５、約４、約３、又は約２残基未満である。いくつかの実施形態では、親又は参照ポリペプチドは、自然に見出されるものである。当業者によって理解されるように、目的とする特定のポリペプチドの複数の変異型は、特に目的のポリペプチドが感染病原体ポリペプチドである場合、自然界に一般的に見出され得る。
ベクター：本明細書で使用するとき、連結されている別の核酸を輸送することができる核酸分子を指す。ベクターの１つの種類は「プラスミド」であり、これは、追加のＤＮＡセグメントが連結され得る環状二本鎖ＤＮＡループを指す。別の種類のベクターは、ウイルスベクターであり、追加のＤＮＡセグメントは、ウイルスゲノム内に連結され得る。特定のベクターは、それらが導入される宿主細胞で自律的に複製することができる（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクター及びエピソーム哺乳類ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳類ベクター）は、宿主細胞への導入時に宿主細胞のゲノム内に統合され得、それによって宿主ゲノムと共に複製される。更に、特定のベクターは、それらが機能的に連結される遺伝子の発現を誘導することができる。このようなベクターは、本明細書では「発現ベクター」と称される。
野生型：本明細書で使用される場合、「野生型」という用語は、「正常な」（変異体、変異型、罹患した、変化した、などとは対照的に）状態又は文脈において自然に見出されるような構造及び／又は活性を有する物質を指す、当該技術分野で理解されている意味を有する。当業者は、野生型遺伝子及びポリペプチドが、多くの場合、複数の異なる形態（例えば、対立遺伝子）で存在することを理解するであろう。
（１）抗ＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ、（２）抗ＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲ、（３）抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ、又は（４）抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲを発現しているＴ細胞による、Ｔ細胞媒介性短期標的細胞死滅。 （１）抗ＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ、（２）抗ＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲ、（３）抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ、又は（４）抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲを発現しているＴ細胞は、ＣＳＲを含まない対応するＣＡＲ Ｔ細胞よりもはるかに高いＩＦＮγ（図２Ａ）及びグランザイムＢ（図２Ｂ）（Ｔ細胞活性／死滅能の両方の指標）分泌レベルを有した。 （１）抗ＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ、（２）抗ＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲ、（３）抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ、又は（４）抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲを発現しているＴ細胞は、ＣＳＲを含まない対応するＣＡＲ Ｔ細胞よりもはるかに高いＩＦＮγ（図２Ａ）及びグランザイムＢ（図２Ｂ）（Ｔ細胞活性／死滅能の両方の指標）分泌レベルを有した。 第１世代ＣＡＲコンストラクト：（１）抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ、（２）抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ２８－ＣＳＲ、又は（３）抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲを発現しているＴ細胞によって媒介される、標的ＨｅｐＧ２（Ａ２＋／ＡＦＰ＋／ＧＰＣ３＋）細胞のＴ細胞生存及び死滅の結果。抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ２８－ＣＳＲ又は抗ＡＦＰ－ＣＤ８－ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲを発現しているＴ細胞は、モック形質導入Ｔ細胞及び対応するＣＡＲのみを発現しているＴ細胞よりもはるかに多く残存した（図３Ａ）。更に、抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ２８－ＣＳＲ又は抗ＡＦＰ－ＣＤ８－ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲを発現しているＴ細胞は、対応するＣＡＲのみを発現しているＴ細胞より多くの標的細胞を死滅させた（図３Ｂ）。 第１世代ＣＡＲコンストラクト：（１）抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ、（２）抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ２８－ＣＳＲ、又は（３）抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲを発現しているＴ細胞によって媒介される、標的ＨｅｐＧ２（Ａ２＋／ＡＦＰ＋／ＧＰＣ３＋）細胞のＴ細胞生存及び死滅の結果。抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ２８－ＣＳＲ又は抗ＡＦＰ－ＣＤ８－ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲを発現しているＴ細胞は、モック形質導入Ｔ細胞及び対応するＣＡＲのみを発現しているＴ細胞よりもはるかに多く残存した（図３Ａ）。更に、抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ２８－ＣＳＲ又は抗ＡＦＰ－ＣＤ８－ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲを発現しているＴ細胞は、対応するＣＡＲのみを発現しているＴ細胞より多くの標的細胞を死滅させた（図３Ｂ）。 第２世代ＣＡＲコンストラクト：（１）抗ＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ、（２）抗ＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ２８－ＣＳＲ、又は（３）抗ＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲを発現しているＴ細胞によって媒介される、標的ＨｅｐＧ２（Ａ２＋／ＡＦＰ＋／ＧＰＣ３＋）細胞のＴ細胞生存及び死滅の結果。抗ＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ２８－ＣＳＲ又は抗ＡＦＰ－ＣＤ２８－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲを発現しているＴ細胞は、モック形質導入Ｔ細胞及び対応するＣＡＲのみを発現しているＴ細胞よりもはるかに多く残存した（図３Ｃ）。更に、抗ＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ２８－ＣＳＲ又は抗ＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲを発現しているＴ細胞は、対応するＣＡＲのみを発現しているＴ細胞より多くの標的細胞を死滅させた（図３Ｄ）。 第２世代ＣＡＲコンストラクト：（１）抗ＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ、（２）抗ＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ２８－ＣＳＲ、又は（３）抗ＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲを発現しているＴ細胞によって媒介される、標的ＨｅｐＧ２（Ａ２＋／ＡＦＰ＋／ＧＰＣ３＋）細胞のＴ細胞生存及び死滅の結果。抗ＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ２８－ＣＳＲ又は抗ＡＦＰ－ＣＤ２８－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲを発現しているＴ細胞は、モック形質導入Ｔ細胞及び対応するＣＡＲのみを発現しているＴ細胞よりもはるかに多く残存した（図３Ｃ）。更に、抗ＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ２８－ＣＳＲ又は抗ＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲを発現しているＴ細胞は、対応するＣＡＲのみを発現しているＴ細胞より多くの標的細胞を死滅させた（図３Ｄ）。 （１）モック形質導入Ｔ細胞、（２）αＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲを発現しているＴ細胞、（３）αＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ２８－ＣＳＲを発現しているＴ細胞、又は（４）αＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲを発現しているＴ細胞を投与されたマウスから切り出した腫瘍中のＴ細胞を可視化するため、抗ＣＤ３抗体で染色した腫瘍切片の画像。青色の細胞は、「モック」画像における全細胞を示す腫瘍細胞であり、一方褐色の細胞は、「αＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ」画像における全細胞の５％未満、「αＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ２８－ＣＳＲ」画像における全細胞の約３分の１、及び「αＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲ」画像における全細胞の約半分を示す、Ｔ細胞である。 （１）αＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ、（２）αＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ２８－ＣＳＲ、又は（３）αＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲを発現しているＴ細胞で後に処置された、ＨｅｐＧ移植マウスの複数の腫瘍切片における、ＣＤ３＋細胞（Ｔ細胞）の全細胞（腫瘍細胞及びＣＤ３＋細胞）のうちの割合の定量。 （１）モック形質導入Ｔ細胞、（２）αＧＰＣ３－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲを発現しているＴ細胞、又は（３）αＧＰＣ３－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲを発現しているＴ細胞を投与されたマウスから切り出した腫瘍中のＴ細胞を可視化するため、抗ＣＤ３抗体で染色した腫瘍切片の画像。青色の細胞は、「モック」画像における全細胞を示す腫瘍細胞であり、一方褐色の細胞は、「αＧＰＣ３－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ」画像における全細胞の約４分の１、及び「αＧＰＣ３－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲ」画像における全細胞の約半分を示す、Ｔ細胞である。 （群１）αＧＰＣ３－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ、（群２）αＧＰＣ３－ＣＤ３０Ｔ－ＣＤ２８－ＣＳＲ、又は（群３）αＧＰＣ３－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲを発現しているＴ細胞で後に処置された、ＨｅｐＧ移植マウスの複数の腫瘍切片における、ＣＤ３＋細胞（Ｔ細胞）の全細胞（腫瘍細胞及びＣＤ３＋細胞）のうちの割合の定量。 抗ＣＤ１９－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋抗ＣＤ１９－ＣＤ２８Ｔ－ＣＤ３０－ＣＳＲ又は抗ＣＤ１９－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ＋抗ＣＤ１９－ＣＤ３０－ＣＳＲを発現しているＴ細胞は、抗ＣＤ１９－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋抗ＣＤ１９－ＣＤ２８Ｔ－４１ＢＢ－ＣＳＲ又は抗ＣＤ１９－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ＋抗ＣＤ１９－ＣＤ２８－ＣＳＲを発現している対応するＴ細胞よりも、高いＩＦＮγ（Ｔ細胞活性／死滅能の指標）分泌レベルを有した。 抗ＣＤ１９－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋抗ＣＤ１９－ＣＤ２８Ｔ－ＣＤ３０－ＣＳＲ又は抗ＣＤ１９－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ＋抗ＣＤ１９－ＣＤ３０－ＣＳＲを発現しているＴ細胞は、抗ＣＤ１９－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋抗ＣＤ１９－ＣＤ２８Ｔ－４１ＢＢ－ＣＳＲ又は抗ＣＤ１９－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ＋抗ＣＤ１９－ＣＤ２８－ＣＳＲを発現している対応するＴ細胞よりも、高いＩＦＮγ（Ｔ細胞活性／死滅能の指標）分泌レベルを有した。 抗ＲＯＲ１－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋抗ＲＯＲ１－ＣＤ２８Ｔ－ＣＤ３０－ＣＳＲを発現しているＴ細胞（「ｔＣＤ３０」）は、モック形質導入されたＴ細胞と比較して、６つ全ての試験癌細胞株に対して有意なＲＯＲ１特異的細胞死滅能を有し（ＩＦＮγ放出レベルによって測定）、それらの細胞死滅能は、４－１ＢＢ共刺激ドメインを含むＣＳＲを共発現している対応するＣＡＲ Ｔ細胞（「ｔ４１ＢＢ」）と同等以上である。 それぞれ癌細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、Ａ５４９、Ｈ１９７５、及びＨ１７０３を複数回投与された際の、αＲＯＲ１－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋αＲＯＲ１－ＣＤ２８Ｔ－ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞（「ｔＣＤ３０」）及びαＲＯＲ１－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋αＲＯＲ１－ＣＤ２８Ｔ－４１ＢＢ－ＣＳＲ Ｔ細胞（「ｔ４１ＢＢ」）の生存。示される総細胞＃は、Ｔ細胞数である。 それぞれ癌細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、Ａ５４９、Ｈ１９７５、及びＨ１７０３を複数回投与された際の、αＲＯＲ１－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋αＲＯＲ１－ＣＤ２８Ｔ－ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞（「ｔＣＤ３０」）及びαＲＯＲ１－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋αＲＯＲ１－ＣＤ２８Ｔ－４１ＢＢ－ＣＳＲ Ｔ細胞（「ｔ４１ＢＢ」）の生存。示される総細胞＃は、Ｔ細胞数である。 それぞれ癌細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、Ａ５４９、Ｈ１９７５、及びＨ１７０３を複数回投与された際の、αＲＯＲ１－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋αＲＯＲ１－ＣＤ２８Ｔ－ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞（「ｔＣＤ３０」）及びαＲＯＲ１－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋αＲＯＲ１－ＣＤ２８Ｔ－４１ＢＢ－ＣＳＲ Ｔ細胞（「ｔ４１ＢＢ」）の生存。示される総細胞＃は、Ｔ細胞数である。 それぞれ癌細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、Ａ５４９、Ｈ１９７５、及びＨ１７０３を複数回投与された際の、αＲＯＲ１－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋αＲＯＲ１－ＣＤ２８Ｔ－ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞（「ｔＣＤ３０」）及びαＲＯＲ１－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋αＲＯＲ１－ＣＤ２８Ｔ－４１ＢＢ－ＣＳＲ Ｔ細胞（「ｔ４１ＢＢ」）の生存。示される総細胞＃は、Ｔ細胞数である。
患者自身のＴリンパ球がキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するように操作される養子Ｔ細胞免疫療法は、血液悪性腫瘍を治療することにおいて非常に有望であるが、固形腫瘍ではそうではないことが示されている。更に、ＣＡＲ自体は、一般に、シス又はトランスで発現したとしても、一般的に使用される共刺激断片を有する場合も、特に固形腫瘍の場合有効性が十分ではない。したがって、より効果的で長期間続くＴ細胞免疫療法が必要である。
本明細書において、ＣＡＲとＣＳＲ、特にＣＤ３０共刺激断片を含むＣＳＲの共発現が、低密度抗原を標的とする任意のＣＡＲ Ｔ細胞に利益をもたらすことを開示している。ほとんどのＭＨＣ拘束ペプチド抗原及び固形腫瘍抗原は、低密度である。しかしながら、一部の血液癌関連細胞表面抗原、例えば、ＣＤ２２であっても、低密度である。固形腫瘍を治療するために使用される場合、ＣＡＲ及びＣＤ３０－ＣＳＲを発現しているＴ細胞は、腫瘍浸潤が増加している。
本発明は、ＣＤ３０由来の共刺激ドメイン（本明細書ではＣＤ３０共刺激ドメインとも称する）を使用するＣＳＲと、これらのＣＳＲ及びＣＡＲを発現しているＴ細胞が、例えば、ＣＤ２８又は４－１ＢＢ由来の共刺激ドメインを含有する同じＣＡＲ及びＣＳＲを有するＴ細胞よりも、Ｔ細胞活性化の阻害因子であるＰＤ－１の発現がはるかに低いという発見に関する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３０由来の共刺激ドメインを含有するＣＳＲを有するＴ細胞は、Ｄａｐ１０由来の共刺激ドメインを含有するＣＳＲを有するＴ細胞よりも、はるかに少ないＰＤ－１を発現する。ＣＡＲと、ＣＤ３０共刺激ドメインを含むＣＳＲとを有するＴ細胞は、腫瘍細胞死滅について優れた持続性を提供する。本発明はまた、癌（例えば、血液癌又は固形腫瘍癌）を治療するためのそのようなＴ細胞の使用についても提供する。
Ｉ．キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）
本開示は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）及びキメラ刺激受容体（ＣＳＲ）を含む、免疫細胞を提供する。ＣＡＲは、（ｉ）抗体部分（ＣＡＲ抗体部分）を含む細胞外標的結合ドメインと、（ｉｉ）膜貫通ドメイン（ＣＡＲ膜貫通ドメイン）と、（ｉｉｉ）一次シグナル伝達ドメインと、を含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、共刺激ドメイン（ＣＡＲ共刺激ドメイン）を更に含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ共刺激ドメインは、共刺激受容体、例えば、ＣＤ３０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、及びＤａｐ１０からなる群から選択される共刺激受容体の細胞内ドメイン由来である。本明細書に記載のＣＡＲの例示的な配列、例えば、配列番号１～１２は、略式配列表に見出すことができる。いくつかの実施形態では、ｍｙｃタグを有するＣＡＲは、インビトロ及び前臨床アッセイで使用される。インビボでの使用、すなわち、ヒトにおけるインビボでの使用では、ｍｙｃタグを含まない対応するＣＡＲコンストラクトが使用される。
いくつかの実施形態では、スペーサードメインは、ＣＡＲの細胞外標的結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に存在し得る。いくつかの実施形態では、スペーサードメインは、存在する場合、ＣＡＲの膜貫通ドメインと共刺激ドメインとの間に存在し得る。いくつかの実施形態では、スペーサードメインは、ＣＡＲの共刺激ドメイン（存在する場合）と一次シグナル伝達ドメインとの間に存在し得る。いくつかの実施形態では、スペーサードメインは、ＣＡＲの膜貫通ドメインと一次シグナル伝達ドメインとの間に存在し得る。スペーサードメインは、ＣＡＲの２つの部分を連結するように機能する任意のオリゴ又はポリペプチドであり得る。スペーサードメインは、例えば、約１０～約１００又は約２５～約５０個のアミノ酸を含む、最大約３００個のアミノ酸を含み得る。
ＩＩ．キメラ刺激受容体（ＣＳＲ）
本開示は、我々はキメラシグナル伝達受容体とも呼ぶキメラ刺激受容体（ＣＳＲ）を提供し、これは、（ｉ）標的リガンドに結合又は相互作用することができるリガンド結合モジュールと、（ｉｉ）膜貫通ドメイン（ＣＳＲ膜貫通ドメイン）と、（ｉｉｉ）ＣＤ３０共刺激ドメインと、を含み、ＣＳＲは、機能性一次シグナル伝達ドメインを欠いている。本明細書に記載されるＣＳＲは、標的リガンド（細胞表面抗原又はペプチド／ＭＨＣ複合体など）に特異的に結合し、表面に、標的リガンドを、標的リガンド結合により機能的に発現している免疫細胞を刺激することができる。ＣＳＲは、リガンド結合特異性、膜貫通モジュール、及び免疫細胞の刺激を可能にするＣＤ３０共刺激免疫細胞シグナル伝達モジュールを提供するリガンド結合モジュールを含む。ＣＳＲは、機能的な一次免疫細胞シグナル伝達配列を欠いている。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、任意の一次免疫細胞シグナル伝達配列を欠いている。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、リガンド結合モジュール、膜貫通モジュール、及びＣＤ３０共刺激シグナル伝達モジュールを含む単一のポリペプチド鎖を含む。いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖を含み、当該第１及び第２のポリペプチド鎖は共に、リガンド結合モジュール、膜貫通モジュール、及びＣＤ３０共刺激シグナル伝達モジュールを形成する。いくつかの実施形態では、第１及び第２のポリペプチド鎖は、別個のポリペプチド鎖であり、ＣＳＲは、二量体などの多量体である。いくつかの実施形態では、第１及び第２のポリペプチド鎖は、ペプチド結合によって、又はジスルフィド結合などの別の化学結合によって共有結合的に連結される。いくつかの実施形態では、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖は、少なくとも１つのジスルフィド結合によって連結される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞におけるＣＳＲの発現は、誘導性である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞におけるＣＳＲの発現は、ＣＡＲを介したシグナル伝達の際に誘導可能である。本明細書に記載のＣＳＲの例示的な配列、例えば、配列番号１３～４２は、略式配列表に見出すことができる。いくつかの実施形態では、ｍｙｃタグを有するＣＳＲは、インビトロ及び前臨床アッセイで使用される。インビボでの使用、すなわち、ヒトにおけるインビボでの使用では、ｍｙｃタグを含まない対応するＣＳＲコンストラクトが使用される。
ＣＳＲのＣＤ３０共刺激ドメインは、細胞内ＴＲＡＦシグナル伝達タンパク質に結合できる配列を含み得る。いくつかの実施形態では、細胞内ＴＲＡＦシグナル伝達タンパク質に結合できる配列は、配列番号６５の配列を有する完全長ＣＤ３０の残基５６１～５７３又は５７８～５８６に対応する。特定の実施形態では、ＣＤ３０共刺激ドメインは、配列番号６５の残基５６１～５７３又は５７８～５８６に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一である配列を含む。特定の実施形態では、ＣＤ３０共刺激ドメインは、配列番号７５の配列に対して、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％（例えば、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）同一である配列を含む。本明細書に記載されるように、ＣＡＲと、ＣＤ３０由来の共刺激ドメインを含むＣＳＲとを有する免疫Ｔ細胞は、同じＣＡＲと、ＣＤ３０共刺激ドメインを有さないＣＳＲ、例えば、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、又はＤａｐ１０由来の、例えば、共刺激ドメインとを有するＴ細胞よりも、Ｔ細胞活性化の阻害因子であるＰＤ－１の発現がはるかに低い。ＣＤ３０由来の共刺激ドメインを含有するＣＳＲを有するＴ細胞はまた、細胞傷害能における持続性も示す。ＣＤ３０由来の共刺激ドメインは、Ｔ細胞疲弊、すなわち、アネルギーに至る機能的不応答性を改善し得る。ＣＤ３０が共刺激に重要であると考えられているｐ５６ｌｃｋ結合部位を欠いているため、腫瘍細胞死滅の優れた持続性を有するＴ細胞を提供するＣＤ３０共刺激ドメインの能力は予想外である。
ＣＳＲは、２つ以上のＣＤ３０共刺激ドメインを含み得る。ＣＤ３０共刺激ドメインに加えて、いくつかの実施形態では、ＣＳＲは、ＣＤ３０とは異なる共刺激分子の細胞内配列を含む、少なくとも１つの共刺激ドメインを更に含む。特定の実施形態では、ＣＤ３０とは異なる共刺激分子は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンド、及びＤａｐ１０からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、スペーサードメインは、ＣＳＲのリガンド結合モジュールと膜貫通ドメインとの間に存在し得る。いくつかの実施形態では、スペーサードメインは、ＣＳＲの膜貫通ドメインとＣＤ３０共刺激ドメインとの間に存在し得る。スペーサードメインは、ＣＡＲの２つの部分を連結するように機能する任意のオリゴ又はポリペプチドであり得る。スペーサードメインは、例えば、約１０～約１００又は約２５～約５０個のアミノ酸を含む、最大約３００個のアミノ酸を含み得る。
標的抗原
いくつかの実施形態では、ＣＡＲの細胞外標的結合ドメイン及びＣＳＲのリガンド結合モジュールは、同じ標的抗原を標的とすることができる。他の実施形態では、ＣＡＲの細胞外標的結合ドメイン及びＣＳＲのリガンド結合モジュールは、異なる標的抗原を標的とすることができる。いくつかの実施形態では、ＣＳＲのリガンド結合モジュールは、受容体の細胞外ドメインに由来する。ＣＳＲのリガンド結合モジュールは、抗体部分（ＣＳＲ抗体部分）を含み得る。ＣＳＲ抗体部分及び／又はＣＡＲ抗体部分は、単鎖抗体断片であり得る。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分及び／又はＣＳＲ抗体部分は、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、単鎖Ｆａｂ、単鎖Ｆａｂ’、単一ドメイン抗体断片、単一ドメイン多重特異性抗体、細胞内抗体、ナノボディ、又は単鎖イムノカインである。特定の実施形態では、ＣＡＲ抗体部分及び／又はＣＳＲ抗体部分は、単一ドメイン多重特異性抗体、例えば、単一ドメイン二重特異性抗体である。特定の実施形態では、ＣＡＲ抗体部分及び／又はＣＳＲ抗体部分は、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、例えば、タンデムｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分及び／又はＣＳＲ抗体部分は、疾患関連抗原に特異的に結合する。疾患関連抗原は、癌関連抗原又はウイルス関連抗原であり得る。
ＣＡＲ抗体部分及び／又はＣＳＲ抗体部分は、細胞表面抗原に特異的に結合できる。細胞表面抗原は、タンパク質、炭水化物、及び脂質からなる群から選択され得る。特定の実施形態では、細胞表面抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＣＤ１５８ｅ、ＧＰＣ３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＦｃＲＬ５、ＭＵＣ１６、ＭＣＴ４、ＰＳＭＡ、又はそれらの変異型若しくは変異体である。ＣＡＲ抗体部分及び／又はＣＳＲ抗体部分は、ＭＨＣ拘束抗原に特異的に結合できる。ＭＨＣ拘束抗原は、ペプチド及びＭＨＣタンパク質を含む複合体であり得、ペプチドは、ＷＴ－１、ＡＦＰ、ＨＰＶ１６－Ｅ７、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ－ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ－１、ＫＲＡＳ、ＦｏｘＰ３、ヒストンＨ３．３、ＰＳＡ、及びその変異型又は変異体からなる群から選択されるタンパク質に由来し得る。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分はＣＤ１９に結合し、ＣＳＲのリガンド結合モジュールはＣＤ１９に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分はＣＤ２２に結合し、ＣＳＲのリガンド結合モジュールはＣＤ２２に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分はＣＤ２０に結合し、ＣＳＲのリガンド結合モジュールはＣＤ２０に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分はＣＤ１９に結合し、ＣＳＲのリガンド結合モジュールはＣＤ２２に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分はＣＤ１９に結合し、ＣＳＲのリガンド結合モジュールはＣＤ２０に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分はＣＤ２２に結合し、ＣＳＲのリガンド結合モジュールはＣＤ２０に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分はＣＤ２２に結合し、ＣＳＲのリガンド結合モジュールはＣＤ１９に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分はＣＤ２０に結合し、ＣＳＲのリガンド結合モジュールはＣＤ１９に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分はＣＤ２０に結合し、ＣＳＲのリガンド結合モジュールはＣＤ２２に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分及び／又はＣＳＲのリガンド結合モジュールは、ＣＤ１９及びＣＤ２２の両方に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分及び／又はＣＳＲのリガンド結合モジュールは、ＣＤ１９及びＣＤ２０の両方に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分及び／又はＣＳＲのリガンド結合モジュールは、ＣＤ２０及びＣＤ２２の両方に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分及び／又はＣＳＲのリガンド結合モジュールは、ＣＤ１９、ＣＤ２０、及びＣＤ２２に結合する。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分は、アルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）ペプチド及びＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＳＲのリガンド結合モジュールは、グリピカン３（ＧＰＣ３）に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ抗体部分は、ＡＦＰペプチド及びＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に結合し、ＣＳＲのリガンド結合モジュールは、ＧＰＣ３に結合する。
いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的に結合する抗体部分を含む本明細書に記載のＣＡＲ又はＣＳＲのいずれかによると、抗体部分は、標的抗原に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ１９に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、国際公開第２０１７／０６６１３６（Ａ２）号を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ１９に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、配列番号１０２のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶＨドメイン、及び／又は配列番号１０３のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶＬドメイン、あるいはそれらに含まれるＣＤＲ）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ２０に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、配列番号１０４のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶＨドメイン、及び／又は配列番号１０５のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶＬドメイン、あるいはそれらに含まれるＣＤＲ）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ２２に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、参照によりその全てが本明細書に組み込まれる、２０１８年３月３０日出願の米国特許仮出願第６２／６５０，９５５号、及び２０１９年３月２９日出願の国際出願第ＵＳ２０１９／０２５０３２号を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ２２に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、配列番号９８のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶＨドメイン、及び／又は配列番号９９のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶＬドメイン、あるいはそれらに含まれるＣＤＲ）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ２２に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、配列番号１００のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶＨドメイン、及び／又は配列番号１０１のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶＬドメイン、あるいはそれらに含まれるＣＤＲ）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ４７に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、国際公開第２０１８／２００５８５（Ａ１）号を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＣＤ４７に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、配列番号１０６のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶＨドメイン、及び／又は配列番号１０７のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶＬドメイン、あるいはそれらに含まれるＣＤＲ）。
いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＧＰＣ３に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、参照によりその全てが本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１８／２００５８６（Ａ１）号を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＧＰＣ３に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、配列番号１０８のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶＨドメイン、及び／又は配列番号１０９のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶＬドメイン、あるいはそれらに含まれるＣＤＲ）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＧＰＣ３に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、配列番号１１０のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶＨドメイン、及び／又は配列番号１１１のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、若しくはそれからなるものを含むＶＬドメイン、あるいはそれらに含まれるＣＤＲ）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＲＯＲ１に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、国際公開第２０１６／１８７２２０号及び同第２０１６／１８７２１６号を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＲＯＲ２に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、国際公開第２０１６／１４２７６８号を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＢＣＭＡに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、国際公開第２０１６／０９０３２７号及び同第２０１６／０９０３２０号を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＧＰＲＣ５Ｄに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば，、国際公開第２０１６／０９０３２９号及び同第２０１６／０９０３１２号を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＦＣＲＬ５に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、国際公開第２０１６／０９０３３７号を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＭＵＣ１６に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、参照によりその全てが本明細書に組み込まれる、２０１９年５月８日出願の米国特許仮出願第６２／８４５，０６５号、及び２０１８年１１月１６日出願の米国特許仮出願第６２／７６８，７３０号を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＭＣＴ４に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、参照によりその全てが本明細書に組み込まれる、２０１９年３月２１日出願の国際出願第ＵＳ２０１９／０２３４０２号を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＰＳＭＡに特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、参照によりその全てが本明細書に組み込まれる、２０１９年６月１７日出願の国際出願第ＵＳ２０１９／０３７５３４号を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＷＴ－１ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば，、国際公開第２０１２／１３５８５４号、同第２０１５／０７００７８号及び同第２０１５／０７００６１号を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＡＦＰペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、国際公開第２０１６／１６１３９０号を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＨＰＶ１６－Ｅ７ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、国際公開第２０１６／１８２９５７号を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、国際公開第２０１６／２１０３６５号を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＰＲＡＭＥペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、国際公開第２０１６／１９１２４６号を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＥＢＶ－ＬＭＰ２Ａペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、国際公開第２０１６／２０１１２４号を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＫＲＡＳペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、国際公開第２０１６／１５４０４７号を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＰＳＡペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、国際公開第２０１７／０１５６３４号を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＦｏｘＰ３ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、参照によりその全てが本明細書に組み込まれる、２０１８年２月１４日出願の国際出願第ＵＳ２０１９／０１８１１２号を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ヒストンＨ３．３ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、国際公開第２０１８／１３２５９７号を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＨＩＶ－１ペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的な抗体部分のＣＤＲ又は可変ドメイン（ＶＨ及び／又はＶＬドメイン）を含む（例えば、国際公開第２０１８０５７９６７号を参照されたい）。いくつかの実施形態では、抗体部分は、ＶＨドメイン及びＶＬドメインを含む、ｓｃＦｖ（単鎖可変断片）である。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、ペプチド／ＭＨＣ複合体として知られる、ペプチド及びＭＨＣタンパク質を含む複合体に特異的に結合する、抗原結合モジュールを含む。
表Ａは、断片又はペプチドがＣＡＲ及びＣＳＲによって標的化され得る例示的なタンパク質を列挙する。また、このようなＴ細胞が治療できる可能性がある疾患、具体的には可能性がある癌（例えば、固形腫瘍癌）も列挙されている。
Figure 2022541315000004
細胞外標的結合ドメイン／リガンド結合モジュール
本明細書に記載のＣＡＲの細胞外標的結合ドメイン及び／又はＣＳＲのリガンド結合モジュールは、抗体部分又はその抗原結合断片を含み得る。特定の実施形態では、細胞外標的結合ドメインは、抗体（ｓｃＦｖ）、タンデムｓｃＦｖ、単一ドメイン抗体断片（ＶＨＨｓ又はｓｄＡｂ）、単一ドメイン二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）、細胞内抗体、ナノボディ、単鎖形式のイムノカイン、及び単鎖形式のＦａｂ、Ｆａｂ’、又は（Ｆａｂ’）２に由来する単鎖可変断片であり得る。他の実施形態では、細胞外標的結合ドメインは、共有結合した可変断片の複数鎖を含む抗体部分であり得る。細胞外標的結合ドメインは、フレキシブルなヒンジ／スペーサー領域を介してＴＭドメインに結合することができる。
ｓｃＦｖ及びタンデムｓｃＦｖ
本明細書に記載のＣＡＲの細胞外標的結合ドメイン及び／又はＣＳＲのリガンド結合モジュールは、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体である抗体部分を含み得る。ｓｃＦｖ抗体は、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域を含み得、ここで、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、合成リンカーによって組換え方法を使用して結合され、単一のポリペプチド鎖を作製し得る。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、「（Ｎ末端）軽鎖可変領域－リンカー－重鎖可変領域（Ｃ末端）」の構造を有し得、ここで、重鎖可変領域は、リンカーによって軽鎖可変領域のＣ末端に結合している。他の実施形態では、ｓｃＦｖは、「（Ｎ末端）重鎖可変領域－リンカー－軽鎖可変領域（Ｃ末端）」の構造を有し得、ここで、軽鎖可変領域は、リンカーによって重軽鎖可変領域のＣ末端に結合している。リンカーは、２～２００個（例えば、２、３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、又は２００個）のアミノ酸を含むポリペプチドであってよい。好適なリンカーは、グリシン及びセリンなどの柔軟なアミノ酸残基を含有し得る。
ＣＡＲの細胞外標的結合ドメイン及び／又はＣＳＲのリガンド結合モジュールは、第１のｓｃＦｖ及び第２のｓｃＦｖを含むタンデムｓｃＦｖである抗体部分（本明細書では「タンデムｓｃＦｖ多重特異性抗体」とも称する）を含み得る。いくつかの実施形態では、タンデムｓｃＦｖ多重特異性抗体は、少なくとも１つ（少なくとも約２、３、４、５つ又はそれ以上のいずれかなど）の追加のｓｃＦｖを更に含む。
いくつかの実施形態では、ａ）標的リガンドの細胞外領域に特異的に結合する第１のｓｃＦｖと、ｂ）第２のｓｃＦｖと、を含む、タンデムｓｃＦｖ多重特異性（例えば、二重特異性）抗体が提供される。いくつかの実施形態では、標的リガンドはＣＤ２２であり、第１のｓｃＦｖはＣＤ２２の細胞外領域に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、標的リガンドはＣＤ１９であり、第１のｓｃＦｖはＣＤ１９の細胞外領域に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、標的リガンドはアルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）ペプチドであり、第１のｓｃＦｖはＡＦＰペプチドの細胞外領域に特異的に結合する。
いくつかの実施形態では、第２のｓｃＦｖは、別の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２のｓｃＦｖは、癌細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２のｓｃＦｖは、ＣＤ２２を発現していない細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２のｓｃＦｖは、ＣＤ１９を発現していない細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２のｓｃＦｖは、ＡＦＰペプチドを発現していない細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２のｓｃＦｖは、細胞傷害性細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２のｓｃＦｖは、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、好中球、単球、マクロファージ、又は樹状細胞などのリンパ球の表面上の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２のｓｃＦｖは、細胞傷害性Ｔ細胞などのエフェクターＴ細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２のｓｃＦｖは、例えば、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、ＣＤ１６ａ、ＣＤ５６、ＣＤ６８、ＧＤＳ２Ｄ、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＣＤ４０Ｌ、及びＨＶＥＭを含む、エフェクター細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。
いくつかの実施形態では、第１のｓｃＦｖは、ヒトである、ヒト化されている、又は半合成である。いくつかの実施形態では、第２のｓｃＦｖは、ヒトである、ヒト化されている、又は半合成である。いくつかの実施形態では、第１のｓｃＦｖ及び第２のｓｃＦｖの両方は、ヒトである、ヒト化されている、又は半合成である。いくつかの実施形態では、タンデムｓｃＦｖ多重特異性抗体は、少なくとも１つ（少なくとも約２、３、４、５つ又はそれ以上のいずれかなど）の追加のｓｃＦｖを更に含む。
いくつかの実施形態では、ａ）標的抗原の細胞外領域に特異的に結合する第１のｓｃＦｖと、ｂ）第２のｓｃＦｖと、を含み、タンデムｓｃＦｖ多重特異性抗体が、タンデムジｓｃＦｖ又はタンデムトリｓｃＦｖである、タンデムｓｃＦｖ多重特異性（例えば、二重特異性）抗体が提供される。いくつかの実施形態では、タンデムｓｃＦｖ多重特異性抗体は、タンデムジｓｃＦｖである。いくつかの実施形態では、タンデムｓｃＦｖ多重特異性抗体は、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャである。
いくつかの実施形態では、タンデムジｓｃＦｖ二重特異性抗体は、約０．１ｐＭ～約５００ｎＭ（約０．１ｐＭ、１．０ｐＭ、１０ｐＭ、５０ｐＭ、１００ｐＭ、５００ｐＭ、１ｎＭ、１０ｎＭ、５０ｎＭ、１００ｎＭ、又は５００ｎＭのいずれかなど、これらの値間の任意の範囲を含む）のＫｄで標的抗原の細胞外領域又はその部分に結合する。いくつかの実施形態では、タンデムジｓｃＦｖ二重特異性抗体は、約１ｎＭ～約５００ｎＭ（約１、１０、２５、５０、７５、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、又は５００ｎＭのいずれかなど、これらの値間の任意の範囲を含む）のＫｄで標的抗原の細胞外領域又はその部分に結合する。
多重特異性抗体を設計、構築、及び／又は生産するための様々な技術が当該技術分野において既知である。多重特異性抗体は、完全な免疫グロブリンフレームワーク（例えば、ＩｇＧ）、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又はこれらの組み合わせのいずれかを用いて、構築され得る。二重特異性抗体は、上記のようにタンデムの２つのｓｃＦｖ単位で構成され得る。抗腫瘍免疫療法の場合、タンデムの２つの単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む二重特異性抗体は、腫瘍抗原に結合するｓｃＦｖがＴ細胞とエンゲージメントするｓｃＦｖと連結されるように、すなわち、Ｔ細胞上のＣＤ３を結合することによって、設計され得る。したがって、Ｔ細胞は腫瘍部位に動員され、腫瘍細胞の死滅を媒介する。二重特異性抗体は、例えば、同じ又は異なる抗原の異なるエピトープを認識する重鎖及び／又は軽鎖を組み合わせることによって作製することができる。いくつかの実施形態では、分子機能によって、二重特異性結合剤は、２つの結合アーム（ＶＨ／ＶＬの一対）のうちの１つ上の１つの抗原（又はエピトープ）に結合し、第２のアーム（異なるＶＨ／ＶＬ対）上の異なる抗原（又はエピトープ）に結合する。この定義により、二重特異性結合剤は、２つの異なる抗原結合アーム（特異性及びＣＤＲ配列の両方）を有し、結合する各抗原に対して一価である。特定の実施形態では、本発明による二重特異性結合剤は、第１及び第２のｓｃＦｖを含む。いくつかの特定の実施形態では、第１のｓｃＦｖは、第２のｓｃＦｖのＣ末端に連結される。いくつかの特定の実施形態では、第２のｓｃＦｖは、第１のｓｃＦｖのＣ末端に結合される。いくつかの特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、リンカー（例えば、ＳＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＬＥＭＡ（配列番号７８））を介して互いに連結される。いくつかの特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、リンカーを用いずに互いに連結される。
リンカーは、２～２００個（例えば、２、３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、又は２００個）のアミノ酸を含むポリペプチドであってよい。好適なリンカーは、グリシン及びセリンなどの柔軟なアミノ酸残基を含有し得る。ある特定の実施形態では、リンカーは、モチーフ、例えば、ＧＳ、ＧＧＳ、ＧＧＧＧＳ（配列番号７９）、ＧＧＳＧ（配列番号８０）、又はＳＧＧＧ（配列番号８１）の複数又は繰り返しモチーフを含み得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列ＧＳＧＳ（配列番号８２）、ＧＳＧＳＧＳ（配列番号８３）、ＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８４）、ＧＳＧＳＧＳＧＳＧＳ（配列番号８５）、ＧＧＳＧＧＳ（配列番号８６）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号８７）、ＧＧＳＧＧＳＧＧＳＧＧＳ（配列番号８８）、ＧＧＳＧ（配列番号８９）、ＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号９０）、又はＧＧＳＧＧＧＳＧＧＧＳＧ（配列番号９１）を有し得る。他の実施形態では、リンカーはまた、グリシン及びセリン以外のアミノ酸、例えば、ＳＲＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＬＥＭＡ（配列番号７８）を含有してもよい。
膜貫通ドメイン（ＴＭ）
ＣＡＲ及び／又はＣＳＲの膜貫通ドメインは、天然又は合成起源のいずれに由来していてもよい。起源が天然である場合、ドメインは、任意の膜結合又は膜貫通タンパク質に由来していてよい。本発明における特に有用な膜貫通領域は、Ｔ細胞受容体のα、β、δ、γ、又はζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、又はＣＤ１５４に由来していてよい（すなわち、これらの少なくとも膜貫通領域を含む）。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、例えば、様々な他のタンパク質、又は膜貫通ドメインに結合する又は貫通要素、又は膜貫通ドメインによって誘導されるサイトカインの性質に基づいて選択され得る。例えば、ＣＤ３０に由来する膜貫通ドメインは、ＴＮＦ受容体ファミリーにおける共通モチーフであるｐ５６ｌｃｋキナーゼの結合部位を欠いている。いくつかの実施形態では、本発明における特定の用途の膜貫通領域は、ＣＤ８、例えば、配列番号６６の配列に対し、少なくとも８０％（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）の配列同一性を有する配列を含む膜貫通領域に由来し得る（すなわち、少なくともその膜貫通領域を含む）。いくつかの実施形態では、本発明における特定の用途の膜貫通領域は、ＣＤ３０、例えば、配列番号７０の配列に対し、少なくとも８０％（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）の配列同一性を有する配列を含む膜貫通領域に由来し得る（すなわち、少なくともその膜貫通領域を含む）。
特定の実施形態では、膜貫通ドメインは、標的抗原に基づいて選択され得る。例えば、ＡＦＰペプチド／ＭＨＣ複合体に特異的な抗体部分及びＣＤ８に由来する膜貫通ドメインを含有するＣＡＲは、ＣＤ３０に由来する膜貫通ドメインを含む対応するＣＡＲよりも、良好なインビトロ死滅特性を有するように見えた。この結果は、ＣＤ１９に特異的な抗体部分を含むＣＡＲでは観察されなかった。
いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは合成であってもよく、この場合、膜貫通ドメインは、主にロイシン及びバリンなどの疎水性残基を含み得る。いくつかの実施形態では、フェニルアラニン、トリプトファン、及びバリンのトリプレットは、合成膜貫通ドメインの各末端に見出され得る。いくつかの実施形態では、例えば、約２～約１０（約２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０のいずれかなど）アミノ酸長の長さを有する短いオリゴ又はポリペプチドリンカーが、本明細書に記載のＣＡＲ又はＣＳＲの膜貫通ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとの間に連結を形成し得る。いくつかの実施形態では、リンカーは、グリシン－セリンダブレットである。いくつかの実施形態では、ＣＡＲの細胞外標的結合ドメイン及び／又はＣＳＲのリガンド結合モジュールと膜貫通ドメインとの間のリンカーは、膜貫通ドメインの元の分子と同じ又は異なる分子などの分子の部分的な細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含む。例えば、ＣＤ８若しくはＣＤ３０に由来する又はこれらを含む膜貫通ドメインを連結するリンカーは、それぞれ又は代替的に、ＣＤ８又はＣＤ３０のＥＣＤを含み得る。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ又はＣＳＲの細胞内シグナル伝達ドメイン内の配列のうちの１つと生来関連する膜貫通ドメインが使用される。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、このようなドメインの同じ又は異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインへの結合を回避して、受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小限に抑えるように、選択又はアミノ酸置換によって改変することができる。
細胞内シグナル伝達ドメイン
ＣＡＲ及び／又はＣＳＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲ及びＣＳＲが配置された免疫細胞の正常エフェクター機能のうちの少なくとも１つの活性化に関与している。Ｔ細胞のエフェクター機能は、例えば、サイトカインの分泌を含む細胞溶解活性又はヘルパー活性であってもよい。したがって、用語「細胞内シグナル伝達ドメイン」は、エフェクター機能シグナルを伝達し、細胞に特殊機能を実行させるタンパク質の部分を指す。通常、細胞内シグナル伝達ドメイン全体を使用することができるが、多くの場合、鎖全体を使用する必要はない。細胞内シグナル伝達ドメインの切頭部分が使用される程度まで、それがエフェクター機能シグナルを伝達する限り、インタクトな鎖の代わりにこのような切頭部分を使用してもよい。したがって、用語「細胞内シグナル伝達配列」は、エフェクター機能シグナルを伝達するのに十分な細胞内シグナル伝達ドメインの任意の切頭部分を含むことを意味する。
使用するための細胞内シグナル伝達ドメインの例としては、抗原受容体のエンゲージメント後にシグナル伝達を開始するために協調するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）及び共受容体の細胞質配列、並びにこれらの配列の任意の誘導体又は変異体、並びに同じ機能能力を有する任意の合成配列が挙げられる。
ＴＣＲのみを介して生成されるシグナルは、Ｔ細胞の完全な活性化には不十分であり、二次又は共刺激シグナルも必要とされることが知られている。したがって、Ｔ細胞の活性化は、２つの別個のクラスの細胞内シグナル伝達配列によって媒介されるということができる：ＴＣＲを介した抗原依存性一次活性化を開始するもの（一次シグナル伝達配列）、及び二次又は共刺激シグナルを提供するように抗原非依存的に作用するもの（共刺激シグナル伝達配列）。
一次シグナル伝達配列は、刺激方式又は阻害方式のいずれかで、ＴＣＲ複合体の一次活性化を調節する。刺激方式で作用する一次シグナル伝達配列は、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ又はＩＴＡＭとして知られているシグナル伝達モチーフを含んでいてよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲは、１つ以上のＩＴＡＭを含む。
本発明で特に有用なＩＴＡＭ含有一次シグナル伝達配列の例としては、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、及びＣＤ６６ｄに由来するものが挙げられる。いくつかの実施形態では、一次シグナル伝達配列を含有するＩＴＡＭは、ＣＤ３ζに由来する。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ３ζ由来の一次シグナル伝達配列を含む。例えば、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、単独で又は本発明のＣＡＲの状況において有用な任意の他の所望の細胞内シグナル伝達配列と組み合わせて、ＣＤ３ζ細胞内シグナル伝達配列を含み得る。例えば、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζ一次細胞内シグナル伝達配列及び共刺激シグナル伝達配列を含み得る。
いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫細胞を活性化することができる。いくつかの実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達配列及び共刺激シグナル伝達配列を含む。いくつかの実施形態では、一次シグナル伝達配列は、ＣＤ３ζの細胞内シグナル伝達配列を含む。いくつかの実施形態では、共刺激シグナル伝達配列は、ＣＤ３０の細胞内シグナル伝達配列を含む。
ＩＩＩ．多重特異性抗体
ＣＡＲの細胞外標的結合ドメイン及び／又はＣＳＲのリガンド結合モジュールは、多重特異性抗体である抗体部分を含み得る。多重特異性抗体は、第１の結合部分と、第２の結合部分（第２の抗原結合部分など）と、を含み得る。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる抗原又はエピトープに対する結合特異性を有する（例えば、二重特異性抗体は、２つの抗原又はエピトープに対する結合特異性を有する）抗体である。３つ以上の特異性を有する多重特異性抗体もまた企図される。例えば、三重特異性抗体を調製することができる（例えば、Ｔｕｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）を参照されたい）。当業者は、本明細書に記載の個々の多重特異性抗体の適切な特徴を選択し、互いに組み合わせて、本発明の多重特異性抗体を形成できることを理解されたい。
したがって、例えば、いくつかの実施形態では、ａ）第１の標的抗原の細胞外領域に特異的に結合する第１の結合部分と、ｂ）第２の結合部分（例えば、抗原結合部分）と、を含む、多重特異性（例えば、二重特異性）抗体が提供される。いくつかの実施形態では、第２の結合部分は、異なる標的抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２の結合部分は、細胞、例えば細胞傷害性細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２の結合部分は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、好中球、単球、マクロファージ、又は樹状細胞などのリンパ球の表面上の抗原に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２の結合部分は、細胞傷害性Ｔ細胞（細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）又はＴキラー細胞としても知られている）などのエフェクターＴ細胞に特異的に結合する。
いくつかの実施形態では、第２の結合部分は、腫瘍抗原に特異的に結合する。腫瘍抗原の例として、アルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）、ＣＡ１５－３、ＣＡ２７－２９、ＣＡ１９－９、ＣＡ－１２５、カルレチニン、癌胎児性抗原、ＣＤ３４、ＣＤ９９、ＣＤ１１７、クロモグラニン、サイトケラチン、デスミン、上皮膜タンパク質（ＥＭＡ）、第ＶＩＩＩ因子、ＣＤ３１ ＦＬ１、グリア原線維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）、総嚢胞性疾患流体タンパク質（ＧＣＤＦＰ－１５）、ＨＭＢ－４５、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、インヒビン、ケラチン、ＣＤ４５、リンパ球マーカー、ＭＡＲＴ－１（Ｍｅｌａｎ－Ａ）、Ｍｙｏ Ｄｌ、筋肉特異的アクチン（ＭＳＡ）、神経フィラメント、神経特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）、胎盤性アルカリホスファターゼ（ＰＬＡＰ）、前立腺特異的抗原、Ｓ１００タンパク質、平滑筋アクチン（ＳＭＡ）、シナプトフィジン、チログロブリン、甲状腺転写因子－１、腫瘍Ｍ２－ＰＫ、及びビメンチンが挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、二重特異性抗体における第２の抗原結合部分は、ＣＤ３に結合する。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合部分は、ＣＤ３εに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合部分は、ＣＤ３εのアゴニストエピトープに特異的に結合する。用語「アゴニストエピトープ」は、本明細書で使用するとき、（ａ）多重特異性抗体の結合時、場合により、同じ細胞上におけるいくつかの多重特異性抗体の結合時に、当該多重特異性抗体がＴ細胞受容体（ＴＣＲ）シグナル伝達を活性化し、Ｔ細胞の活性化を誘導することを可能にするエピトープ、及び／又は（ｂ）ＣＤ３のイプシロン鎖のアミノ酸残基のみから構成され、その天然の状況でＴ細胞上に提示された（すなわち、ＴＣＲ、ＣＤ３γ鎖などによって囲まれた）ときに多重特異性抗体による結合にアクセス可能であるエピトープ、及び／又は（ｃ）多重特異性抗体の結合時に、ＣＤ３γに対してＣＤ３εの空間位置を安定化させないエピトープを意味する。
いくつかの実施形態では、第２の抗原結合部分は、例えば、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、ＣＤ１６ａ、ＣＤ５６、ＣＤ６８、ＧＤＳ２Ｄ、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ１３７、ＣＤ２７、ＣＤ４０Ｌ、及びＨＶＥＭを含む、エフェクター細胞の表面上の抗原に特異的に結合する。他の実施形態では、第２の抗原結合部分は、Ｃ１ｑなどの補体系の構成要素に結合する。Ｃ１ｑは、血清補体系を活性化するＣ１酵素複合体のサブユニットである。他の実施形態では、第２の抗原結合部分は、Ｆｃ受容体に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合部分は、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）に特異的に結合する。ＦｃγＲは、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の表面上に存在するＦｃγＲＩＩＩ、又はマクロファージ、単球、好中球、及び／若しくは樹状細胞の表面上に存在するＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢＩ、ＦｃγＲＩＩＢ２、及びＦｃγＲＩＩＩＢのうちの１つであってよい。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合部分は、Ｆｃ領域又はその機能的断片である。「機能的断片」は、この文脈で使用するとき、ＦｃγＲ担持エフェクター細胞、特に、マクロファージ、単球、好中球、及び／又は樹状細胞に、細胞傷害性溶解又は食作用によって標的細胞を殺傷させるのに十分な特異性及び親和性を有する、ＦｃＲ、特にＦｃγＲに依然として結合することができる抗体Ｆｃ領域の断片を指す。機能的Ｆｃ断片は、元の完全長Ｆｃ部分の、活性化ＦｃγＲＩなどのＦｃＲへの結合を競合的に阻害することができる。いくつかの実施形態では、機能的Ｆｃ断片は、活性化ＦｃγＲに対するその親和性の少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は９５％を保持している。いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域又はその機能的断片は、増強されたＦｃ領域又はその機能的断片である。用語「増強されたＦｃ領域」は、本明細書で使用するとき、Ｆｃ受容体が媒介するエフェクター機能、特に抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、及び抗体媒介性食作用を増強するように改変されたＦｃ領域を指す。これは、例えば、活性化受容体（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上で発現したＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６Ａ））に対する親和性を増大させる及び／又は阻害受容体（例えば、ＦｃγＲＩＩＢ１／Ｂ２（ＣＤ３２Ｂ））に対する結合を減少させるようにＦｃ領域を変化させることによって、当該技術分野において既知のとおり達成することができる。
いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、抗原提示標的細胞の死滅を可能にし、かつ／又は標的提示標的細胞を溶解するためにＣＴＬを効率的にリダイレクトすることができる。いくつかの実施形態では、本発明の多重特異性（例えば、二重特異性）抗体は、１０～５００ｎｇ／ｍＬの範囲のインビトロＥＣ５０を示し、約１：１～約５０：１（約１：１～約１５：１又は約２：１～約１０：１など）のＣＴＬの標的細胞に対する比で、ＣＴＬを通じて標的細胞の約５０％のリダイレクトされた溶解を誘導することができる。
いくつかの実施形態では、多重特異性（例えば、二重特異性）抗体は、標的細胞が溶解されるように、刺激された又は刺激されていないＣＴＬ及び標的細胞を架橋することができる。これは、多重特異性抗体が所望の活性を発揮するために、標的特異的Ｔ細胞クローンの生成も樹状細胞による共通抗原提示も必要ないという利点を提供する。いくつかの実施形態では、本発明の多重特異性抗体は、他の活性化シグナルの非存在下で標的細胞を溶解するためにＣＴＬをリダイレクトすることができる。いくつかの実施形態では、第２の抗原結合部分は、ＣＤ３に特異的に結合（例えば、ＣＤ３εに特異的に結合）し、ＣＴＬをリダイレクトして標的細胞を溶解するためにＣＤ２８及び／又はＩＬ－２を介したシグナル伝達は必要ない。
２つの抗原（例えば、２つの異なる細胞上の抗原）に同時に結合する多重特異性抗体の優先度を測定する方法は、当業者の通常の能力の範囲内である。例えば、第２の結合部分が第２の抗原に特異的に結合する場合、多重特異性抗体は、第１の抗原＋／第２の抗原－細胞及び第１の抗原－／第２の抗原＋細胞の混合物と接触され得る。次いで、多重特異性抗体＋の単一細胞の数、及び多重特異性抗体によって架橋された細胞の数を、当該技術分野において既知の顕微鏡観察又は蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）によって評価してよい。
いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、例えば、ダイアボディ（Ｄｂ）、単鎖ダイアボディ（ｓｃＤｂ）、タンデムｓｃＤｂ（Ｔａｎｄａｂ）、線状二量体ｓｃＤｂ（ＬＤ－ｓｃＤｂ）、円形二量体ｓｃＤｂ（ＣＤ－ｓｃＤｂ）、ジ－ダイアボティ、タンデムｓｃＦｖ、タンデムジｓｃＦｖ（例えば、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャ）、タンデムトリｓｃＦｖ、トリ（ａ）ボディ、二重特異性Ｆａｂ２、ジ－ミニ抗体、テトラボディ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ融合物、二重親和性リターゲティング（ＤＡＲＴ）抗体、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）抗体、ＩｇＧ－ｓｃＦａｂ、ｓｃＦａｂ－ｄｓ－ｓｃＦｖ、Ｆｖ２－Ｆｃ、ＩｇＧ－ｓｃＦｖ融合物、ドック・アンド・ロック（ＤＮＬ）抗体、ノブ・インツー・ホール（ＫｉＨ）抗体（ＫｉＨ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙによって調製された二重特異性ＩｇＧ）、ＤｕｏＢｏｄｙ（Ｄｕｏｂｏｄｙ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙによって調製された二重特異性ＩｇＧ）、単一ドメイン抗体断片（ＶＨＨｓ又はｓｄＡｂ）、単一ドメイン二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）、細胞内抗体、ナノボディ、単鎖形式のイムノカイン、ヘテロ多量体抗体、又はヘテロコンジュゲート抗体である。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、単鎖抗体断片である。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、タンデムｓｃＦｖ（例えば、二重特異性Ｔ細胞エンゲージャなどのタンデムジｓｃＦｖ）である。
ＩＶ．抗体－薬物複合体
いくつかの実施形態では、抗体部分と、治療薬とを含む免疫複合体（本明細書では「抗体－薬物複合体」又は「ＡＤＣ」とも称される）が提供される。いくつかの実施形態では、治療薬は、細胞傷害性である、細胞増殖抑制性である、又は別の方法で標的細胞の分裂する能力を阻止若しくは低減する毒素である。細胞傷害性又は細胞増殖抑制性の薬剤、すなわち、癌の治療において腫瘍細胞を死滅又は抑制する薬物の局所送達のためのＡＤＣの使用（Ｓｙｒｉｇｏｓ ａｎｄ Ｅｐｅｎｅｔｏｓ，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １９：６０５－６１４（１９９９）、Ｎｉｃｕｌｅｓｃｕ－Ｄｕｖａｚ ａｎｄ Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ａｄｖ．Ｄｒｇ．Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．２６：１５１－１７２（１９９７）、米国特許第４，９７５，２７８号）により、薬物部分の標的細胞への標的化送達、及び細胞内への蓄積を可能にし、これらの非複合体治療薬の全身投与は、排除が求められる正常細胞並びに標的細胞に対する許容できないレベルの毒性をもたらし得る（Ｂａｌｄｗｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ（Ｍａｒ．１５，１９８６）：６０３－６０５（１９８６）、Ｔｈｏｒｐｅ，（１９８５）「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ」，ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ａ．Ｐｉｎｃｈｅｒａ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．４７５－５０６）。それにより、最小の毒性で最大の有効性が求められている。
免疫複合体（例えば、ＡＤＣ）で使用される治療薬として、例えば、ダウノマイシン、ドキソルビシン、メトトレキサート、及びビンデシンが挙げられる（Ｒｏｗｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２１：１８３－１８７（１９８６））。免疫複合体に使用される毒素として、ジフテリア毒素などの細菌毒素、リシンなどの植物毒素、ゲルダナマイシンなどの低分子毒素（Ｍａｎｄｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎａｔ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．９２（１９）：１５７３－１５８１（２０００）、Ｍａｎｄｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ １０：１０２５－１０２８（２０００）、Ｍａｎｄｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．１３：７８６－７９１（２００２））、マイタンシノイド（欧州特許第１３９１２１３号、Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９３：８６１８－８６２３（１９９６））、及びカリチアマイシン（Ｌｏｄｅ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５８：２９２８（１９９８）、Ｈｉｎｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５３：３３３６－３３４２（１９９３））が挙げられる。毒素は、チューブリン結合、ＤＮＡ結合、又はトポイソメラーゼ阻害を含む機序によって、その細胞傷害及び細胞増殖抑制効果を発揮し得る。いくつかの細胞傷害薬は、大型抗体又はタンパク質受容体リガンドに複合体化した場合、不活性になるか又は活性が低くなる傾向がある。
使用することができる酵素的に活性のある毒素及びその断片としては、例えば、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）由来）、リシンＡ鎖、アビンＡ鎖、モデシンＡ鎖、α－サルシン、シナアブラギリ（Aleurites fordii）タンパク質、ジアンチンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウ（Phytolaca americana）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ－Ｓ）、ニガウリ（momordica charantia）阻害剤、クルシン、クロチン、サボンソウ（sapaonaria officinalis）阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、及びトリコテセンが挙げられる。例えば、１９９３年１０月２８日公開の国際公開第９３／２１２３２号を参照されたい。
抗体部分と、カリチアマイシン、マイタンシノイド、ドラスタチン、オーリスタチン、トリコテシン、及びＣＣ１０６５などの１つ以上の低分子毒素、並びに毒素活性を有するこれらの毒素の誘導体との免疫複合体（例えば、ＡＤＣ）もまた、本明細書において企図される。
いくつかの実施形態では、細胞内活性を有する治療薬を含む免疫複合体（例えば、ＡＤＣ）が提供される。いくつかの実施形態では、免疫複合体は内部移行し、治療薬は、細胞のタンパク質合成をブロックし、これにおいて細胞死をもたらす細胞毒である。いくつかの実施形態では、治療薬は、例えば、ゲロニン、ボウガニン、サポニン、リシン、リシンＡ鎖、ブリヨジン、ジフテリア毒素、レストリクトシン、シュードモナス外毒素Ａ、及びこれらの変異型を含む、リボソーム不活化活性を有するポリペプチドを含む細胞毒素である。いくつかの実施形態では、治療薬がリボソーム不活化活性を有するポリペプチドを含む細胞毒素である場合、免疫複合体は、タンパク質が細胞に対して細胞傷害性になるために、標的細胞への結合時に内部移行しなければならない。
いくつかの実施形態では、ＤＮＡを破壊するよう作用する治療薬を含む免疫複合体（例えば、ＡＤＣ）が提供される。いくつかの実施形態では、ＤＮＡを破壊するよう作用する治療薬は、例えば、エンジイン（例えば、カリチアマイシン及びエスペリミシン）及び非エンジイン低分子剤（例えば、ブレオマイシン、メチジウムプロピル－ＥＤＴＡ－Ｆｅ（ＩＩ））からなる群から選択される。
本発明は更に、抗体部分と、核溶解活性を有する化合物（例えば、リボヌクレアーゼ、又はデオキシリボヌクレアーゼ（ＤＮａｓｅ）などのＤＮＡエンドヌクレアーゼ）との間に形成される免疫複合体（例えば、ＡＤＣ）を想到する。
いくつかの実施形態では、免疫複合体は、チューブリンを破壊するよう作用する剤を含む。このような剤としては、例えば、リゾキシン／マイタンシン、パクリタキセル、ビンクリスチン、及びビンブラスチン、コルヒチン、オーリスタチンドラスタチン１０ ＭＭＡＥ、及びペロルシドＡを挙げることができる。
いくつかの実施形態では、免疫複合体（例えば、ＡＤＣ）は、例えば、Ａｓａｌｅｙ ＮＳＣ１６７７８０、ＡＺＱ ＮＳＣ１８２９８６、ＢＣＮＵ ＮＳＣ４０９９６２、ブスルファンＮＳＣ７５０、カルボキシフタレート白金ＮＳＣ２７１６７４、ＣＢＤＣＡ ＮＳＣ２４１２４０、ＣＣＮＵ ＮＳＣ７９０３７、ＣＨＩＰ ＮＳＣ２５６９２７、クロラムブシルＮＳＣ３０８８、クロロゾトシンＮＳＣ１７８２４８、シスプラチンＮＳＣ１１９８７５、クロメソンＮＳＣ３３８９４７、シアノモルホリノドキソルビシンＮＳＣ３５７７０４、シクロジソンＮＳＣ３４８９４８、ジアンヒドロガラクチトールＮＳＣ１３２３１３、フルオロドーパ（fluorodopan）ＮＳＣ７３７５４、ヘプスルファムＮＳＣ３２９６８０、ヒカントンＮＳＣ１４２９８２、メルファランＮＳＣ８８０６、メチルＣＣＮＵ ＮＳＣ９５４４１、マイトマイシンＣ ＮＳＣ２６９８０、ミトゾラミドＮＳＣ３５３４５１、ナイトロジェンマスタードＮＳＣ７６２、ＰＣＮＵ ＮＳＣ９５４６６、ピペラジンＮＳＣ３４４００７、ピペラジンジオンＮＳＣ１３５７５８、ピポブロマンＮＳＣ２５１５４、ポルフィロマイシンＮＳＣ５６４１０、スピロヒダントインマスタードＮＳＣ１７２１１２、テロキシロンＮＳＣ２９６９３４、テトラプラチンＮＳＣ３６３８１２、チオテパＮＳＣ６３９６、トリエチレンメラミンＮＳＣ９７０６、ウラシルナイトロジェンマスタードＮＳＣ３４４６２、及びＹｏｓｈｉ－８６４ＮＳＣ１０２６２７を含むアルキル化剤を含む。
いくつかの実施形態では、免疫複合体（例えば、ＡＤＣ）は、高い放射活性の原子を含む。放射性複合体化抗体の生成には、様々な放射性同位体が利用可能である。例としては、２１１Ａｔ、１３１Ｉ、１２５Ｉ、９０Ｙ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１５３Ｓｍ、２１２Ｂｉ、３２Ｐ、２１２Ｐｂ、及びＬｕの放射性同位体が挙げられる。
いくつかの実施形態では、抗体部分は、抗体－受容体複合体を患者に投与し、続いて、キレート剤を使用して循環から未結合複合体を除去し、次いで、細胞傷害性剤（例えば、放射性ヌクレオチド）に複合体化している「リガンド」（例えば、アビジン）を投与する、腫瘍プレターゲティングにおいて利用するための「受容体」（ストレプトアビジンなど）に複合体化させることができる。
いくつかの実施形態では、免疫複合体（例えば、ＡＤＣ）は、プロドラッグ活性化酵素に結合した抗体部分を含み得る。いくつかのこのような実施形態では、プロドラッグ活性化酵素は、プロドラッグを抗ウイルス薬などの活性のある薬物に変換する。このような免疫複合体は、いくつかの実施形態では、抗体依存性酵素媒介性プロドラッグ療法（「ＡＤＥＰＴ」）において有用である。抗体に複合体化させることができる酵素としては、リン酸塩含有プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用なアルカリホスファターゼ；硫酸塩含有プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用なアリールスルファターゼ；ペプチド含有プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用な、セラチアプロテアーゼ、サーモリシン、サブチリシン、カルボキシペプチダーゼ、及びカテプシン（カテプシンＢ及びＬなど）などのプロテアーゼ；Ｄ－アミノ酸置換基を含有するプロドラッグを変換するのに有用なＤ－アラニルカルボキシペプチダーゼ；グリコシル化プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用な、β－ガラクトシダーゼ及びノイラミニダーゼなどの炭水化物切断酵素；β－ラクタムで誘導体化された薬物を遊離薬物に変換するのに有用なβ－ラクタマーゼ；並びにそのアミン窒素においてそれぞれフェノキシアセチル又はフェニルアセチル基で誘導体化された薬物を遊離薬物に変換するのに有用なペニシリンＶアミダーゼ及びペニシリンＧアミダーゼなどのペニシリンアミダーゼが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、酵素は、当該技術分野において周知の組換えＤＮＡ技術によって抗体部分に共有結合的に結合させてもよい。例えば、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３１２：６０４－６０８（１９８４）を参照されたい。
いくつかの実施形態では、免疫複合体（例えば、ＡＤＣ）の治療部分は、核酸であってよい。使用することができる核酸としては、チオグアニン及びチオプリンなどの核酸アナログを含む、アンチセンスＲＮＡ、遺伝子、又は他のポリヌクレオチドが挙げられるが、これらに限定されない。
本出願は、エフェクター分子に結合している抗体部分を含む免疫複合体（例えば、ＡＤＣ）であって、当該エフェクター分子が、間接的又は直接的に検出可能なシグナルを生成することができる標識である免疫複合体を更に提供する。これらの免疫複合体は、癌のインビボ検出などの研究又は診断用途に使用することができる。標識は、好ましくは、検出可能なシグナルを直接的又は間接的に生成することができる。例えば、標識は、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉなどの放射線不透過性又は放射性同位体；フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、又はルシフェリンなどの蛍光（フルオロフォア）又は化学発光（発色団）化合物；アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、若しくはセイヨウワサビペルオキシダーゼなどの酵素；造影剤；又は金属イオンであり得る。いくつかの実施形態では、標識は、シンチグラフィ試験用の放射性原子、例えば、９９Ｔｃ若しくは１２３Ｉ、又は核磁気共鳴（ＮＭＲ）映像（磁気共鳴映像法、ＭＲＩとしても知られている）用のスピン標識、例えば、ジルコニウム－８９、ヨウ素－１２３、ヨウ素－１３１、インジウム－１１１、フッ素－１９、炭素－１３、窒素－１５、酸素－１７、ガドリニウム、マンガン、若しくは鉄などである。ジルコニウム－８９は、例えば、ＰＥＴイメージング用に、様々な金属キレート剤に錯化され、抗体に複合体化され得る（国際公開第２０１１／０５６９８３号）。
いくつかの実施形態では、免疫複合体は、間接的に検出可能である。例えば、免疫複合体に特異的であり、検出可能な標識を含有する二次抗体を使用して、免疫複合体を検出することができる。
Ｖ．免疫細胞
本発明は、（ｉ）抗体部分を含む細胞外標的結合ドメインと、（ｉｉ）膜貫通ドメインと、（ｉｉｉ）一次シグナル伝達ドメインと、を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）と、（ｉ）標的リガンドに結合又は相互作用することができるリガンド結合モジュールと、（ｉｉ）膜貫通ドメインと、（ｉｉｉ）ＣＤ３０共刺激ドメインと、を含む、キメラ刺激受容体（ＣＳＲ）と、を含み、免疫細胞内のＣＳＲが、機能性一次シグナル伝達ドメインを欠いている、免疫細胞を提供する。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＣＡＲ及びＣＳＲをコードする１つ以上の核酸を含み、ＣＡＲ及びＣＳＲは、核酸から発現し、免疫細胞表面に局在化する。いくつかの実施形態では、免疫細胞はＴ細胞である。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、免疫細胞の内因性のＴＣＲサブユニットのうちの１つ以上の発現を遮断又は減少させるように改変される。例えば、いくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＴＣＲ α及び／又はβ鎖の発現を遮断又は減少させるように改変されたαβ Ｔ細胞であるか、又は免疫細胞は、ＴＣＲ γ及び／又はδ鎖の発現を遮断又は減少させるように改変されたγδ Ｔ細胞である。遺伝子発現を破壊する細胞の改変としては、例えば、ＲＮＡ干渉（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）、遺伝子編集（例えば、ＣＲＩＳＰＲ又はＴＡＬＥＮ系遺伝子ノックアウト）などを含む、当該技術分野において既知の任意のそのような技術が挙げられる。
例示的な実施形態では、本開示の細胞は、免疫細胞又は免疫系の細胞である。したがって、細胞は、Ｂリンパ球、Ｔリンパ球、胸腺細胞、樹状細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、マクロファージ、顆粒球、好酸球、好塩基球、好中球、骨髄単球細胞、巨核球、末梢血単核細胞、骨髄前駆細胞、又は造血幹細胞であり得る。例示的な態様では、細胞は、Ｔリンパ球である。例示的な態様では、Ｔリンパ球は、ＣＤ８＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋／ＣＤ４＋、又は調節性Ｔ（Ｔ－ｒｅｇ）細胞である。例示的な実施形態では、Ｔリンパ球は、内因性ＴＣＲの発現を抑制するように遺伝子操作される。例示的な態様では、細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。
例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ及びＣＳＲのいずれかによるＣＡＲ及びＣＳＲをコードする１つ以上の核酸を含む、免疫細胞（Ｔ細胞など）が提供され、ＣＡＲ及びＣＳＲは、核酸から発現し、免疫細胞表面に局在化する。いくつかの実施形態では、核酸配列は、ベクターに含まれる。ベクターは、例えば、哺乳類発現ベクター及びウイルスベクター（レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス、ヘルペスウイルス、及びレンチウイルス由来のものなど）からなる群から選択してよい。いくつかの実施形態では、ベクターのうちの１つ以上は、免疫細胞の宿主ゲノムに組み込まれる。いくつかの実施形態では、核酸配列は、プロモーターの制御下にある。いくつかの実施形態では、プロモーターは、誘導可能である。いくつかの実施形態では、プロモーターは、核酸配列の５’末端に操作可能に連結される。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。
したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲ及びＣＳＲを表面上に発現している免疫細胞（Ｔ細胞など）が提供され、免疫細胞は、ＣＡＲのＣＡＲポリペプチド鎖及びＣＳＲのＣＳＲポリペプチド鎖をコードする核酸配列を含み、ＣＡＲポリペプチド鎖及びＣＳＲポリペプチド鎖は、単一のポリペプチド鎖として核酸配列から発現する。次いで、単一のポリペプチド鎖を切断してＣＡＲポリペプチド鎖及びＣＳＲポリペプチド鎖を形成し、ＣＡＲポリペプチド鎖及びＣＳＲポリペプチド鎖を免疫細胞の表面に局在させる。
他の実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲ及びＣＳＲを表面上に発現している免疫細胞（Ｔ細胞など）が提供され、免疫細胞は、ＣＡＲのＣＡＲポリペプチド鎖をコードするＣＡＲ核酸配列と、ＣＳＲのＣＳＲポリペプチド鎖をコードするＣＳＲ核酸配列と、を含み、ＣＡＲポリペプチド鎖はＣＡＲ核酸配列から発現してＣＡＲポリペプチド鎖を形成し、ＣＳＲポリペプチド鎖はＣＳＲ核酸配列から発現してＣＳＲを形成し、ＣＡＲ及びＣＳＲは、免疫細胞の表面に局在する。
ＶＩ．Ｆｃ変異型
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲ及び／又はＣＳＲは、変異型Ｆｃ領域を含み得、変異型Ｆｃ領域は、参照Ｆｃ領域（つまり、親Ｆｃ領域又は野生型Ｆｃ領域）に対して少なくとも１つのアミノ酸修飾を含み得る。アミノ酸修飾は、エフェクター機能を変化させるため、並びに／又は、ＣＡＲ及び／若しくはＣＳＲの血清中安定性を増加させるために、Ｆｃ領域内に行われ得る。変異型Ｆｃ領域を含むＣＡＲ及び／又はＣＳＲは、Ｆｃ受容体（例えば、ＦｃγＲ）に対する親和性の変化を示し得るが、ただし、この変異型Ｆｃ領域は、Ｓｏｎｄｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｎａｔｕｒｅ，４０６：２６７－２７３に開示されるものなど、Ｆｃ－Ｆｃ受容体相互作用についての結晶学的及び構造的分析に基づいて、Ｆｃ受容体と直接接触させる位置においては、置換を有さない。ＦｃγＲなどのＦｃ受容体と直接接触させるＦｃ領域内の位置の例は、アミノ酸２３４～２３９（ヒンジ領域）、アミノ酸２６５～２６９（Ｂ／Ｃループ）、アミノ酸２９７～２９９（Ｃ’／Ｅループ）、及びアミノ酸３２７～３３２（Ｆ／Ｇ）ループである。いくつかの実施形態では、変異型Ｆｃ領域を含むＣＡＲ及び／又はＣＳＲは、構造的及び結晶学的分析に基づいてＦｃγＲと直接接触させる少なくとも１つの残基の修飾を含み得る。
例えば、活性化及び／又は抑制性受容体に対する親和性を変化させ、例えば、抗体依存性細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）などの改善されたエフェクター機能を提供し、Ｃ１ｑの結合親和性を増加させ、ＦｃＲ結合を低減又は排除し、半減期を増加させる、変異型Ｆｃ領域をもたらすためのＦｃ領域におけるアミノ酸修飾は、当該技術分野で既知である（例えば、米国特許第９，０５１，３７３号、同第９，０４０，０４１号、同第８，９３７，１５８号、同第８，８８３，９７３号、同第８，８８３，１４７号、同第８，８５８，９３７号、同第８，８５２，５８６号、同第８，８０９，５０３号、同第８，８０２，８２３号、同第８，８０２，８２０号、同第８，７９５，６６１号、同第８，７５３，６２９号、同第８，７５３，６２８号、同第８，７３５，５４７号、同第８，７３５，５４５号、同第８，７３４，７９１号、同第８，６９７，３９６号、同第８，５４６，５４３号、同第８，４７５，７９２号、同第８，３９９，６１８号、同第８，３９４，９２５号、同第８，３８８，９５５号、同第８，３８３，１０９号、同第８，３６７，８０５号、同第８，３６２，２１０号、同第８，３３８，５７４号、同第８，３２４，３５１号、同第８，３１８，９０７号、同第８，１８８，２３１号、同第８，１２４，７３１号、同第８，１０１，７２０号、同第８，０９３，３５９号、同第８，０９３，３５７号、同第８，０８８，３７６号、同第８，０８４，５８２号、同第８，０３９，５９２号、同第８，０１２，４７６号、同第７，７９９，９００号、同第７，７９０，８５８号、同第７，７８５，７９１号、同第７，７４１，０７２号、同第７，７０４，４９７号、同第７，６６２，９２５号、同第７，４１６，７２７号、同第７，３７１，８２６号、同第７，３６４，７３１号、同第７，３３５，７４２号、同第７，３３２，５８１号、同第７，３１７，０９１号、同第７，２９７，７７５号、同第７，１２２，６３７号、同第７，０８３，７８４号、同第６，７３７，０５６号、同第６，５３８，１２４号、同第６，５２８，６２４号、及び同第６，１９４，５５１号を参照されたい）。
いくつかの実施形態では、変異型Ｆｃ領域は、親Ｆｃ領域と比較して、異なるグリコシル化パターンを有し得る（例えば、非グリコシル化）。いくつかの実施形態では、異なるグリコシル化パターンは、異なる細胞株、例えば、操作された細胞株における発現によって生じ得る。
本明細書に記載のＣＡＲ及び／又はＣＳＲは、１つ以上のＦｃγＲに対してより高い親和性で結合する変異型Ｆｃ領域を含み得る。そのようなＣＡＲ及び／又はＣＳＲは、以下に論じられるように、好ましくは、エフェクター機能をより効率的に媒介する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲ及び／又はＣＳＲは、１つ以上のＦｃγＲに対してより低い親和性で結合する変異型Ｆｃ領域を含み得る。エフェクター機能の低減又は排除は、特定の場合、例えば、それらの作用機序が遮断又は拮抗作用を伴うが、標的抗原を担持する細胞の死滅を伴わないＣＡＲ及び／又はＣＳＲの場合に望ましい場合がある。いくつかの実施形態では、エフェクター機能の増加は、腫瘍細胞及び外来抗原を発現している細胞に向けられ得る。
ＶＩＩ．核酸
本明細書に記載されるＣＡＲ及びＣＳＲをコードする核酸分子も想到される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ及びＣＳＲのいずれかによると、ＣＡＲ及びＣＳＲをコードする核酸（又は核酸のセット）が提供される。
本発明はまた、本発明の核酸が挿入されるベクターも提供する。
簡潔に述べると、ＣＡＲ及び／又はＣＳＲをコードする核酸による本明細書に記載のＣＡＲ及び／又はＣＳＲの発現は、核酸を適切な発現ベクターに挿入し、核酸を、例えばプロモーター（例えば、リンパ球特異的プロモーター）及び３’非翻訳領域（ＵＴＲ）を含む、５’及び３’調節要素に操作可能に連結するようにして達成できる。ベクターは、真核生物宿主細胞における複製及び組み込みに好適であり得る。典型的なクローニング及び発現ベクターは、転写及び翻訳ターミネータ、開始配列、並びに所望の核酸配列の発現の制御に有用なプロモーターを含有する。
本発明の核酸はまた、標準的な遺伝子送達プロトコルを使用して、核酸免疫及び遺伝子治療に使用することもできる。遺伝子送達の方法は、当該技術分野において既知である。例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，３９９，３４６号、同第５，５８０，８５９号、同第５，５８９，４６６号を参照されたい。いくつかの実施形態では、本発明は、遺伝子治療ベクターを提供する。
核酸は、多数の種類のベクターにクローニングすることができる。例えば、核酸は、プラスミド、ファージミド、ファージ誘導体、動物ウイルス、及びコスミドを含むがこれらに限定されないベクターにクローニングすることができる。特に関心のあるベクターとしては、発現ベクター、複製ベクター、プローブ生成ベクター、及びシークエンシングベクターが挙げられる。
更に、発現ベクターは、ウイルスベクターの形態で細胞に提供されてもよい。ウイルスベクター技術は当該技術分野において公知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（２００１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）、及び他の生物学的及び分子生物学的マニュアルに記載されている。ベクターとして有用なウイルスとしては、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス、ヘルペスウイルス、及びレンチウイルスが挙げられるが、これらに限定されない。一般に、適切なベクターは、少なくとも１つの生物で機能する複製起点、プロモーター配列、好都合な制限エンドヌクレアーゼ部位、及び１つ以上の選択可能なマーカーを含む（例えば、国際公開第０１／９６５８４号、同第０１／２９０５８、及び米国特許第６，３２６，１９３号を参照されたい）。
哺乳類細胞への遺伝子導入のために、多数のウイルスベースの系が開発されている。例えば、レトロウイルスは、遺伝子送達系のための便利なプラットフォームを提供する。選択された遺伝子をベクターに挿入し、当該技術分野において既知の技術を使用してレトロウイルス粒子にパッケージすることができる。次いで、組換えウイルスを単離し、インビボ又はエクスビボのいずれかで被験体の細胞に送達することができる。多数のレトロウイルス系が、当該技術分野において既知である。いくつかの実施形態では、アデノウイルスベクターが使用される。多数のアデノウイルスベクターが、当該技術分野において既知である。いくつかの実施形態では、レンチウイルスベクターが使用される。レンチウイルスなどのレトロウイルス由来のベクターは、導入遺伝子の長期の安定した組み込み及び娘細胞におけるその伝播を可能にするので、長期の遺伝子導入を達成するのに好適なツールである。レンチウイルスベクターは、肝細胞などの非増殖細胞を形質導入することができるという点で、マウス白血病ウイルスなどのオンコレトロウイルス由来のベクターよりも優れた更なる利点を有する。これらはまた、免疫原性が低いという更なる利点も有する。
例えば、エンハンサーなどの追加のプロモーター要素は、転写開始の頻度を調節する。典型的には、これらは開始部位の３０～１１０ｂｐ上流の領域に位置しているが、最近、多数のプロモーターが、開始部位の下流にも機能的エレメントを含有することが示されている。プロモーターエレメント間の間隔は、多くの場合、柔軟であるので、エレメントが互いに対して反転又は移動したときでもプロモーター機能が保存される。チミジンキナーゼ（ｔｋ）プロモーター、は、プロモーターエレメント間の間隔は、活性が低下し始める前に５０ｂｐまで増加させることができる。
好適なプロモーターの一例は、最初期サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター配列である。このプロモーター配列は、動作可能に連結された任意のポリヌクレオチド配列の高レベルの発現を駆動することができる強力な構成的プロモーター配列である。適切なプロモーターの別の例は、伸長増殖因子－１α（ＥＦ－１α）である。しかしながら、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、マウス乳癌ウイルス（ＭＭＴＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の長い末端反復配列（ＬＴＲ）プロモーター、ＭｏＭｕＬＶプロモーター、トリ白血病ウイルスプロモーター、エプスタイン・バールウイルス最初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、並びにアクチンプロモーター、ミオシンプロモーター、ヘモグロビンプロモーター、及びクレアチンキナーゼプロモーターなどであるがこれらに限定されないヒト遺伝子プロモーターが挙げられるが、これらに限定されない、他の構成的プロモーター配列を使用してもよい。
更に、本発明は、構成的プロモーターの使用に限定されるべきではない。誘導性プロモーターもまた、本発明の一部として想到される。誘導性プロモーターの使用は、このような発現が望ましいときに動作可能に連結されたポリヌクレオチド配列の発現をオンにするか、又は発現が望ましくないときに発現をオフにすることができる分子スイッチを提供する。真核細胞で使用する例示的な誘導可能プロモーター系としては、ｂｕｔ ａｒｅ ｎｏｔ ｌｉｍｉｔｅｄ ｔｏ，ホルモン調節要素（例えば、Ｍａｄｅｒ，Ｓ．ａｎｄ Ｗｈｉｔｅ，Ｊ．Ｈ．（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５６０３－５６０７を参照されたい）、合成リガンド制御要素（例えば、Ｓｐｅｎｃｅｒ，Ｄ．Ｍ．ｅｔ ａｌ １９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６２：１０１９－１０２４を参照されたい）、及び電離放射線調節要素（例えば、Ｍａｎｏｍｅ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３２：１０６０７－１０６１３、Ｄａｔｔａ，Ｒ．ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０１４－１０１５３を参照されたい）が挙げられるが、これに限定されない。インビトロ又はインビボにおいて哺乳類系で使用するための更なる例示的な誘導性プロモーター系は、Ｇｉｎｇｒｉｃｈ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ ２１：３７７－４０５に概説されている。
本発明で使用するための例示的な誘導性プロモーター系は、Ｔｅｔ系である。このような系は、Ｇｏｓｓｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９９３）らによって記載されているＴｅｔ系に基づく。例示的な実施形態では、対象となるポリヌクレオチドは、１つ以上のＴｅｔオペレータ（ＴｅｔＯ）部位を含むプロモーターの制御下にある。不活性状態では、Ｔｅｔリプレッサ（ＴｅｔＲ）は、ＴｅｔＯ部位に結合し、プロモーターからの転写を抑制する。活性状態では、例えば、テトラサイクリン（Ｔｃ）、無水テトラサイクリン、ドキシサイクリン（Ｄｏｘ）、又はこれらの活性アナログなどの誘導剤の存在下において、誘導剤は、ＴｅｔＯからＴｅｔＲを放出させ、それによって、転写を行わせることができる。ドキシサイクリンは、１－ジメチルアミノ－２，４ａ，５，７，１２－ペンタヒドロキシ－１１－メチル－４，６－ジオキソ－１，４ａ，１１，１１ａ，１２，１２ａ－ヘキサヒドロテトラセン－３－カルボキサミドの化学名を有するテトラサイクリンファミリーの抗生物質のメンバーである。
一実施形態では、ＴｅｔＲは、哺乳類細胞、例えば、マウス又はヒトの細胞における発現に対してコドンが最適化されている。大部分のアミノ酸は、遺伝子コードの縮重に起因して１つより多いコドンによってコードされているので、核酸によってコードされているアミノ酸配列を全く変化させることのない、所与の核酸のヌクレオチド配列の実質的なばらつきを許容する。しかしながら、多くの生物は、「コドンバイアス」（すなわち、所与のアミノ酸に対する特定のコドンの使用についてのバイアス）としても知られているコドン使用頻度の差を示す。コドンバイアスは、多くの場合、特定のコドンについてのｔＲＮＡの優先種の存在と相関しており、これによってｍＲＮＡ翻訳の効率が向上する。したがって、特定の生物（例えば、原核生物）由来のコード配列を、コドンの最適化を介して異なる生物（例えば、真核生物）における発現を改善するために調整することができる。
Ｔｅｔ系の他の具体的な変形例としては、以下の「Ｔｅｔ－Ｏｆｆ」及び「Ｔｅｔ－Ｏｎ」系が挙げられる。Ｔｅｔ－Ｏｆｆ系では、転写は、ＴＣ又はＤｏｘの存在下において不活性である。この系では、単純ヘルペスウイルス由来のＶＰ１６の強力なトランス活性化ドメインに融合しているＴｅｔＲで構成されるテトラサイクリン制御トランス活性化因子タンパク質（ｔＴＡ）が、テトラサイクリン応答性プロモータエレメント（ＴＲＥ）の転写制御下にある標的核酸の発現を調節する。ＴＲＥは、プロモーター（一般に、ヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）最初期プロモーター由来のミニマルプロモーター配列）に融合しているＴｅｔＯ配列コンカテマーで構成される。Ｔｃ又はＤｏｘの非存在下では、ｔＴＡはＴＲＥに結合し、標的遺伝子の転写を活性化する。Ｔｃ又はＤｏｘの存在下では、ｔＴＡはＴＲＥに結合することができず、標的遺伝子からの発現は不活性のままである。
逆に、Ｔｅｔ－Ｏｎ系では、Ｔｃ又はＤｏｘの存在下において転写が活性である。Ｔｅｔ－Ｏｎ系は、逆テトラサイクリン制御トランス活性化因子ｒｔＴＡに基づく。ｔＴＡと同様に、ｒｔＴＡは、ＴｅｔＲリプレッサ及びＶＰ１６トランス活性化ドメインで構成される融合タンパク質である。しかしながら、ＴｅｔＲ ＤＮＡ結合部分における４つのアミノ酸変化は、Ｄｏｘの存在下で標的導入遺伝子のＴＲＥにおけるｔｅｔＯ配列のみを認識できるように、ｒｔＴＡの結合特性を変化させる。したがって、Ｔｅｔ－Ｏｎ系では、ＴＲＥに調節される標的遺伝子の転写は、Ｄｏｘの存在下でのみｒｔＴＡによって刺激される。
別の誘導可能なプロモーター系は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）由来のｌａｃリプレッサ系である。（Ｂｒｏｗｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ４９：６０３－６１２（１９８７）を参照されたい）。ｌａｃリプレッサ系は、ｌａｃオペレータ（ｌａｃＯ）を含むプロモーターに動作可能に連結された、対象となるポリヌクレオチドの転写を調節することによって機能する。ｌａｃリプレッサ（ｌａｃＲ）は、ＬａｃＯに結合して、対象となるポリヌクレオチドの転写を阻止する。対象となるポリヌクレオチドの発現は、好適な誘導剤、例えば、イソプロピル－β－Ｄ－チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）によって誘導される。
本発明で使用するための別の例示的な誘導可能プロモーターシステムは、活性化Ｔ細胞系の核因子（ＮＦＡＴ）である。ＮＦＡＴファミリーの転写因子は、Ｔ細胞活性化の重要な調節因子である。ＮＦＡＴ応答要素は、例えば、ＩＬ－２リプレッサにおいて見出される（例えば、Ｄｕｒａｎｄ，Ｄ．ｅｔ．ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．８，１７１５－１７２４（１９８８）、Ｃｌｉｐｓｔｏｎｅ，ＮＡ，Ｃｒａｂｔｒｅｅ，ＧＲ．Ｎａｔｕｒｅ．１９９２ ３５７（６３８０）：６９５－７、Ｃｈｍｉｅｌｅｗｓｋｉ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ ｒｅｓｅａｒｃｈ ７１．１７（２０１１）：５６９７－５７０６、及びＺｈａｎｇ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｔｈｅｒａｐｙ １９．４（２０１１）：７５１－７５９を参照されたい）。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の誘導可能プロモーターは、１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、又はそれ以上）のＮＦＡＴ応答要素を含む。いくつかの実施形態では、誘導可能プロモーターは、例えば、配列番号１１２のヌクレオチド配列を含む６個のＮＦＡＴ応答要素を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の誘導可能プロモーターは、ミニマルＴＡプロモーターなどのミニマルプロモーターに連結された１つ以上（例えば、２、３、４、５、６、又はそれ以上）のＮＦＡＴ応答要素を含む。いくつかの実施形態では、ミニマルＴＡプロモーターは、配列番号１１３のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、誘導可能なプロモーターは、配列番号１１４のヌクレオチド配列を含む。
ポリペプチド又はその一部の発現を評価するために、ウイルスベクターを介してトランスフェクト又は感染させようとしている細胞の集団からの発現細胞の同定及び選択を促進するために、細胞に導入される発現ベクターは、選択マーカー遺伝子若しくはレポーター遺伝子のいずれか又は両方を含有していてもよい。他の態様では、選択マーカーは、ＤＮＡの別個の部分に担持され、コトランスフェクション手順で使用されてもよい。選択マーカー及びレポーター遺伝子はいずれも、宿主細胞における発現を可能にするために適切な調節配列に隣接していてよい。有用な選択マーカーとしては、例えば、ｎｅｏなどの抗生物質耐性遺伝子が挙げられる。
レポーター遺伝子は、トランスフェクトされた可能性のある細胞を同定するため、及び調節配列の機能性を評価するために使用される。一般に、レポーター遺伝子は、レシピエント生物にも組織にも存在しないか又はそれらによって発現しない遺伝子であり、いくぶん容易に検出可能な特性、例えば、酵素活性によってその発現が顕在化するポリペプチドをコードしている遺伝子である。ＤＮＡがレシピエント細胞に導入された後の好適な時点で、レポーター遺伝子の発現をアッセイする。適切なレポーター遺伝子としては、ルシフェラーゼ、β－ガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、分泌アルカリホスファターゼ、又は緑色蛍光タンパク質遺伝子（例えば、Ｕｉ－Ｔｅｌ ｅｔ ａｌ．，２０００ ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ４７９：７９－８２）をコードする遺伝子を挙げ得る。好適な発現系は周知であり、既知の技術を使用して調製することもでき、又は商業的に入手することもできる。一般に、レポーター遺伝子の最高レベルの発現を示すミニマル５’隣接領域を有する構築物は、プロモーターとして同定される。このようなプロモーター領域は、レポーター遺伝子に連結させ、プロモーターによって駆動される転写を調節する能力について剤を評価するために使用することができる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ及びＣＳＲのいずれかによるＣＡＲ及び／又はＣＳＲをコードする核酸が提供される。いくつかの実施形態では、核酸は、ＣＡＲの全てのポリペプチド鎖をコードする１つ以上の核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、核酸は、ＣＳＲの全てのポリペプチド鎖をコードする１つ以上の核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、核酸は、ＣＡＲ及びＣＳＲの全てのポリペプチド鎖をコードする１つ以上の核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の核酸配列のそれぞれは、別個のベクターに含まれる。いくつかの実施形態では、核酸配列の少なくとも一部が、同じベクターに含まれる。いくつかの実施形態では、核酸配列の全てが、同じベクターに含まれる。ベクターは、例えば、哺乳類発現ベクター及びウイルスベクター（レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス、ヘルペスウイルス、及びレンチウイルス由来のものなど）からなる群から選択してよい。
例えば、いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、単一のＣＡＲポリペプチド鎖を含む単量体であり、ＣＳＲは、単一のＣＳＲポリペプチド鎖を含む単量体であり、核酸は、ＣＡＲポリペプチド鎖をコードする第１の核酸配列、及びＣＳＲポリペプチド鎖をコードする第２の核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の核酸配列は、第１のベクターに含まれ、第２の核酸配列は、第２のベクターに含まれる。いくつかの実施形態では、第１及び第２の核酸配列は、１つのベクターに含まれる。いくつかの実施形態では、第１の核酸配列は、第１のプロモーターの制御下にあり、第２の核酸配列は、第２のプロモーターの制御下にある。いくつかの実施形態では、第１及び第２のプロモーターは同じ配列を有する。いくつかの実施形態では、第１及び第２の核酸配列は、マルチシストロニックベクターにおける単一のプロモーターの制御下で単一の転写物として発現する。例えば、Ｋｉｍ，ＪＨ，ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ６（４）：ｅ１８５５６，２０１１を参照されたい。いくつかの実施形態では、プロモーターのうちの１つ以上は、誘導性である。いくつかの実施形態では、ＣＳＲポリペプチド鎖をコードする核酸配列は、誘導可能なプロモーターに操作可能に連結される。いくつかの実施形態では、誘導可能なプロモーターは、ＮＦＡＴ応答要素などの免疫細胞活性化に応答する１つ以上の要素を含む。
いくつかの実施形態では、第１及び第２の核酸配列は、宿主細胞（Ｔ細胞など）において同様（実質的に又はほぼ同じなど）の発現レベルを有する。いくつかの実施形態では、第１及び第２の核酸配列は、宿主細胞（Ｔ細胞など）において、少なくとも約２倍（少なくとも約２、３、４、５倍、又はそれ以上のいずれかなど）異なる発現レベルを有する。発現は、ｍＲＮＡ又はタンパク質レベルで決定することができる。ｍＲＮＡ発現レベルは、ノーザンブロット、定量的ＲＴ－ＰＣＲ、マイクロアレイ解析などを含む様々な公知の方法を使用して、核酸から転写されたｍＲＮＡの量を測定することによって決定することができる。タンパク質発現レベルは、免疫細胞化学染色、酵素結合免疫吸着検査法（ＥＬＩＳＡ）、ウェスタンブロット分析、発光アッセイ、質量分析、高速液体クロマトグラフィー、高圧液体クロマトグラフィー－タンデム質量分析などを含む既知の方法によって測定することができる。
したがって、いくつかの実施形態では、ａ）本明細書に記載のＣＡＲのいずれかによるＣＡＲポリペプチド鎖と、ｂ）本明細書に記載のＣＳＲのいずれかによるＣＳＲポリペプチド鎖と、をコードする核酸が提供される。いくつかの実施形態では、核酸配列は、ベクター（レンチウイルスベクターなど）に含まれる。いくつかの実施形態では、ＣＡＲポリペプチド鎖をコードする核酸の部分は、第１のプロモーターの制御下にあり、ＣＳＲポリペプチド鎖をコードする核酸の部分は、第２のプロモーターの制御下にある。いくつかの実施形態では、第１のプロモーターは、ＣＡＲ核酸配列の５’末端に操作可能に連結される。いくつかの実施形態では、第２のプロモーターは、ＣＳＲ核酸配列の５’末端に操作可能に連結される。いくつかの実施形態では、１つのプロモーターのみが使用される。いくつかの実施形態では、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、及び、ＣＡＲに特異的なプロモーターが存在する場合、ＣＡＲ核酸配列の３’末端をＣＳＲ核酸配列の５’末端、又はＣＳＲに連結されたプロモーターの５’末端に連結する、自己開裂型２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ、又はＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在する。いくつかの実施形態では、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、及び、ＣＡＲに特異的なプロモーターが存在する場合、ＣＳＲ核酸配列の３’末端をＣＡＲ核酸配列の５’末端、又はＣＡＲに連結されたプロモーターの５’末端に連結する、自己開裂型２Ａペプチド（例えば、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ、又はＦ２Ａ）をコードする核酸からなる群から選択される核酸リンカーが存在する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ核酸配列及びＣＳＲ核酸配列は、１つのプロモーターの制御下で単一のＲＮＡとして転写される。
したがって、いくつかの実施形態では、２つの核酸が提供され、第１の核酸は、本明細書に記載のＣＡＲのいずれかによるＣＡＲポリペプチド鎖をコード死、第２の核酸は、本明細書に記載のＣＳＲのいずれかによるＣＳＲポリペプチド鎖をコードする。いくつかの実施形態では、２つの核酸は、２つのベクター（レンチウイルスベクターなど）に含まれる。
いくつかの実施形態では、第１及び／又は第２のプロモーターは誘導可能である。いくつかの実施形態では、第１及び／又は第２のベクターは、ウイルスベクター（レンチウイルスベクターなど）である。ＣＡＲ核酸配列がＣＳＲ核酸配列と交換される場合など、核酸配列のいずれかが交換される実施形態も想到されることを理解されたい。
ＶＩＩＩ．ＣＡＲ及びＣＳＲ産生
提供されるＣＡＲ及び／若しくはＣＳＲ若しくはそれらの部分、又はそれらをコードする核酸は、任意の利用可能な手段によって産生され得る。産生の方法は、当該技術分野において周知である。抗体（例えば、ｓｃＦｖ抗体、モノクローナル抗体、及び／又はポリクローナル抗体）を生成するための技術は、当該技術分野で利用可能である。広範囲の動物種、例えば、マウス、ラット、ウサギ、ブタ、ウシ、シカ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、イヌ、サル、及びニワトリが、抗血清の産生に使用され得ることが理解されるであろう。動物の選択は、当業者に知られているように、操作の容易さ、コスト、又は所望の血清量によって決定され得る。抗体はまた、対象となる免疫グロブリン重鎖及び軽鎖配列について形質転換された哺乳類又は植物（例えば、ヒト免疫グロブリン重鎖及び軽鎖遺伝子を形質転換したトランスジェニックげっ歯類）を作製することによって、産生され得ることが理解されるであろう。哺乳類におけるトランスジェニック産生に関連して、抗体は、ヤギ、ウシ、又は他の哺乳類の乳汁内で産生され、そこから回収され得る（例えば、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第５，８２７，６９０号、同第５，７５６，６８７号、同第５，７５０，１７２号、及び同第５，７４１，９５７号を参照されたい）。あるいは、抗体は、ＩｇＹ分子を産生するニワトリで作製することができる（Ｓｃｈａｄｅ ｅｔ ａｌ．，１９９６，ＡＬＴＥＸ １３（５）：８０－８５）。
ヒト抗体、すなわち、ヒトＣＤＲ配列を含むヒト重鎖及び軽鎖可変領域配列を有する抗体を含有するＣＡＲ及び／又はＣＳＲを利用する実施形態が、本明細書で広く論じられているが、本発明はまた、非ヒト抗体を含有するＣＡＲ及び／又はＣＳＲも提供する。いくつかの実施形態では、非ヒト抗体は、本明細書に記載の抗体由来のヒトＣＤＲ配列及び非ヒトフレームワーク配列を含む。いくつかの実施形態では、非ヒトフレームワーク配列としては、例えば、マウス、ラット、ウサギ、ブタ、ウシ、シカ、ヒツジ、ヤギ、ニワトリ、ネコ、イヌ、サル、ニワトリなどから作製される配列を含む、本明細書に記載の１つ以上のヒトＣＤＲ配列を使用して合成重鎖及び／又は軽鎖可変領域を生成するために使用することができる、任意の配列が挙げられる。いくつかの実施形態では、提供されるＣＡＲ又はＣＳＲとしては、本明細書に記載の１つ以上のヒトＣＤＲ配列を、非ヒトフレームワーク配列（例えば、マウス又はニワトリのフレームワーク配列）に移植することによって生成される抗体が挙げられる。いくつかの実施形態では、提供されるＣＡＲ又はＣＳＲは、ヒト抗体（例えば、ヒトモノクローナル抗体又はその断片、ヒト抗原結合タンパク質又はポリペプチド、ヒト多重特異性抗体（例えば、ヒト二重特異性抗体）、ヒト免疫グロブリンポリペプチドの１つ以上の構造的構成要素を有するヒトポリペプチド）である。
いくつかの実施形態では、本発明に好適な抗体は、類人猿の霊長類抗体である。例えば、ヒヒにおいて治療上有用な抗体を生じさせるための一般的な手法は、例えば、国際公開第１９９１／１１４６５号及びＬｏｓｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ４６：３１０に見出すことができる。いくつかの実施形態では、抗体（例えば、モノクローナル抗体）は、ハイブリドーマ法を使用して調製できる（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ，１９８３，Ｎａｔｕｒｅ ３０５（５９３４）：５３７－４０）。いくつかの実施形態では、抗体（例えば、モノクローナル抗体）はまた、組換え法によって作製することができる（例えば、米国特許第４，１６６，４５２号を参照されたい）。
Ｂ細胞不死化によって抗体を生成することに関連する問題の多くは、遺伝子操作を行い、ファージディスプレイを使用して、Ｅ．ｃｏｌｉ又は酵母でＣＡＲ又はＣＳＲ構成要素を発現させることによって解決できる。高親和性抗体を確実に回収するため、コンビナトリアル免疫グロブリンライブラリは、典型的には大きなレパートリーサイズを含む必要がある。典型的な戦略では、免疫化マウスのリンパ球又は脾臓細胞から得られたｍＲＮＡを利用して、逆転写酵素を用いてｃＤＮＡを合成する。重鎖及び軽鎖遺伝子は、ＰＣＲによって別々に増幅され、ファージクローニングベクターにライゲーションされる。重鎖遺伝子を含むものが１つ、及び軽鎖遺伝子を含むものが１つある、２つの異なるライブラリが生成され得る。ライブラリは、未処理であり得るか、又は半合成であり得、すなわち、全てのアミノ酸（システインを除く）は、ＣＤＲ内の任意の所与の位置に同じく存在する可能性がある。ファージＤＮＡを各ライブラリから単離し、重鎖及び軽鎖配列を合わせて連結してまとめ、コンビナトリアルライブラリを形成する。各ファージは、ランダムな重鎖及び軽鎖ｃＤＮＡ対を含有し、Ｅ．ｃｏｌｉの感染により、感染細胞内のＣＡＲ又はＣＳＲ中のポリペプチドの発現を指示する。目的の抗原を認識するＣＡＲ又はＣＳＲを特定するために、ファージライブラリをプレーティングし、プラーク中に存在するＣＡＲ又はＣＳＲ分子をフィルターに移す。フィルターを放射標識抗原とインキュベートし、次いで洗浄して過剰な結合していないリガンドを除去する。オートラジオグラム上の放射性スポットは、抗原に結合するＣＡＲ又はＣＳＲを含有するプラークを特定する。あるいは、目的の抗原を認識するＣＡＲ又はＣＳＲの同定は、抗原へのファージの反復結合によって達成され得、ここで抗原は、固体支持体、例えばビーズ、又は哺乳類細胞に結合し、続いて非結合ファージが除去され、特異的に結合したファージが溶出される。そのような実施形態では、抗原は、例えば、ストレプトアビジンをコンジュゲートしたＤｙｎａｂｅａｄｓ Ｍ－２８０に固定化するためにまずビオチン化される。ファージライブラリを細胞、ビーズ又は他の固体支持体とインキュベートし、非結合ファージを洗浄によって除去する。目的の抗原に結合するＣＡＲ又はＣＳＲファージクローンを選択し、更なる特性評価を行う。
選択されると、陽性クローンは、フローサイトメトリーによって生細胞の表面上に発現される目的の抗原への結合について試験され得る。簡潔には、ファージクローンを、抗原を発現する又は発現しないいずれかの細胞（例えば、目的の抗原を発現するように操作されたものか、又はその抗原を自然に発現するもの）とインキュベートすることができる。細胞を洗浄し、次いでマウス抗Ｍ１３コートタンパク質モノクローナル抗体で標識することができる。細胞を再度洗浄し、フローサイトメトリーに先立ち、蛍光コンジュゲートした二次抗体（例えば、ＦＩＴＣ－ヤギ（Ｆａｂ）２抗マウスＩｇＧ）で標識することができる。ヒトグリコールファージライブラリを産生するのに有用なクローニング及び発現ベクターは、例えば、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）から入手することができる。
高親和性ｓｃＦｖクローンを得るために、同様の方法を用いることができる。広いレパートリーを有するライブラリは、全ての既知のＶＨ、Ｖκ及びＶλ遺伝子ファミリーに対応するＰＣＲプライマーを使用して、非免疫化ヒトドナーからＶ遺伝子を単離することによって構築され得る。増幅後、Ｖκ及びＶλプールを組み合わせて、１つのプールを形成することができる。これらの断片は、ファージミドベクターに連結され得る。ｓｃＦｖリンカー（例えば、（Ｇ４Ｓ）ｎ）は、ＶＬ断片の上流（又は、所望されるとき、ＶＨ断片の上流）でファージミド内に連結され得る。ＶＨ及びリンカー－ＶＬ断片（又は、ＶＬ及びリンカー－ＶＨ断片）は、増幅され、ＪＨ領域上に会合され得る。得られるＶＨ－リンカー－ＶＬ（又は、ＶＬ－リンカー－ＶＨ）断片を、ファージミドベクター内に連結することができる。ファージミドライブラリは、上記のように、フィルターを用いて、又は免疫実験用チューブ（Ｎｕｎｃ、Ｍａｘｉｓｏｒｐ）を用いて広げることができる。同様の結果は、免疫化ウサギのリンパ球又は脾臓細胞からコンビナトリアル免疫グロブリンライブラリを構築し、Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓ中でｓｃＦｖを発現させることによって達成し得る（例えば、Ｒｉｄｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１３：２５５－２６０を参照されたい）。更に、適当なｓｃＦｖ抗体の単離に続いて、変異誘発及びｃｈａｉｎシャフリングなどの親和性成熟プロセスによって、より高い結合親和性とより遅い解離速度を得ることができる（例えば、Ｊａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，７８：１８１－１８８）、Ｏｓｂｏｕｒｎ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２：１８１－１９６を参照されたい）。
ヒト抗体は、様々な手法を使用して生成され得、すなわち、ヒトＩｇ遺伝子を、内因性Ｉｇ遺伝子が部分的又は完全に不活性化されたトランスジェニック動物に導入することを利用して、ヒト抗体を合成できる。いくつかの実施形態では、ヒト抗体は、ヒト抗原による抗原負荷に応答してヒト抗体を作製するように操作された非ヒト動物の免疫化によって作製され得る。
提供されるＣＡＲ及びＣＳＲはまた、例えば、ＣＡＲ又はＣＳＲをコードする核酸を発現するように操作された宿主細胞系を利用することによって生成され得る。代替的又は追加的に、提供されるＣＡＲは、化学合成によって部分的又は完全に調製され得る（例えば、自動ペプチドシンセサイザー又はＣＡＲ若しくはＣＳＲをコードする核酸の遺伝子合成を使用する）。本明細書に記載のＣＡＲ及び／又はＣＳＲは、任意の適切なベクター又は発現カセットを使用して発現され得る。様々なベクター（例えば、ウイルスベクター）及び発現カセットは、当該技術分野において既知であり、そのようなベクター又は発現カセットを導入することができる細胞は、当該技術分野で既知であるように培養できる（例えば、連続又は流加培養システムを使用する）。いくつかの実施形態では、細胞を遺伝子操作してもよく、操作されたポリペプチドを発現する細胞を遺伝子操作するための手法は、当該技術分野において周知である（例えば、Ａｕｓａｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９０，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）を参照されたい）。
本明細書に記載のＣＡＲ及び／又はＣＳＲを、精製してもよく、すなわち、濾過、遠心分離、及び／又はＨＰＬＣ又はアフィニティクロマトグラフィーなどの様々なクロマトグラフィー技術を使用してもよい。いくつかの実施形態では、提供されるＣＡＲ及び／又はＣＳＲの断片は、ペプシン若しくはパパインなどの酵素での消化、及び／又は、化学的還元によるジスルフィド結合の切断を含む方法によって得ることができる。
提供されるＣＡＲ及び／又はＣＳＲは、ＣＡＲ及び／又はＣＳＲの特性及び／又は活性を改善するように操作、生成、及び／又は精製され得ることが理解されよう。例えば、改善された特性として、とりわけ、安定性の向上、結合親和性及び／又は結合力の改善、結合特異性の増加、生産性の向上、凝集の低下、非特異的結合の減少が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、提供されるＣＡＲ及び／又はＣＳＲは、タンパク質の安定性、抗原結合、発現レベルを改善するか、又は治療薬、診断薬、又は検出剤を結合するための部位若しくは場所を提供する、１つ以上のアミノ酸置換（例えば、免疫グロブリン又はその断片（例えば、ｓｃＦｖ抗体）中のフレームワーク領域に）を含み得る。
精製タグ
いくつかの実施形態では、精製タグは、本明細書に記載のＣＡＲ及び／又はＣＳＲに結合され得る。精製タグは、ポリペプチドの精製、単離、又は同定に使用することができる任意の長さのペプチドを指す。精製タグは、ポリペプチドに結合（例えば、ポリペプチドのＮ末端又はＣ末端に結合）され、例えば、細胞溶解物混合物からポリペプチドの精製、かつ／又は単離すのに役立ち得る。いくつかの実施形態では、精製タグは、精製タグに対して特異的な親和性を有する別の部分に結合する。いくつかの実施形態では、精製タグに特異的に結合するそのような部分は、マトリックス、樹脂、又はアガロースビーズなどの固体支持体に結合される。ＣＡＲ又はＣＳＲに結合され得る精製タグの例としては、ヘキサヒスチジンペプチド、ヘマグルチニン（ＨＡ）ペプチド、ＦＬＡＧペプチド、及びｍｙｃペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、２つ以上の精製タグ、例えば、ヘキサヒスチジンペプチド及びＨＡペプチドを、ＣＡＲ又はＣＳＲに結合してもよい。ヘキサヒスチジンペプチド（ＨＨＨＨＨＨ（配列番号９３））は、マイクロモル単位の親和性で、ニッケル官能化アガロースアフィニティカラムに結合する。いくつかの実施形態では、ＨＡペプチドは、配列ＹＰＹＤＶＰＤＹＡ（配列番号９４）又はＹＰＹＤＶＰＤＹＡＳ（配列番号９５）を含む。いくつかの実施形態では、ＨＡペプチドは、タンデムに繋がった配列ＹＰＹＤＶＰＤＹＡ（配列番号９４）又はＹＰＹＤＶＰＤＹＡＳ（配列番号９５）の整数倍、例えば、３ｘＹＰＹＤＶＰＤＹＡ又は３ｘＹＰＹＤＶＰＤＹＡＳを含む。いくつかの実施形態では、ＦＬＡＧペプチドは、配列ＤＹＫＤＤＤＤＫ（配列番号９６）を含む。いくつかの実施形態では、ＦＬＡＧペプチドは、タンデムに繋がった配列ＤＹＫＤＤＤＤＫ（配列番号９６）の整数倍、例えば、３ｘＤＹＫＤＤＤＤＫを含む。いくつかの実施形態では、ｍｙｃペプチドは、配列ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬ（配列番号９７）を含む。いくつかの実施形態では、ｍｙｃペプチドは、タンデムに繋がった配列ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬの整数倍、例えば、３ｘＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬを含む。
ＩＸ．治療薬及び検出剤
治療薬又は検出剤は、本明細書に記載のＣＡＲ又はＣＳＲに結合し得る。治療薬は、例えば、タンパク質、炭水化物、脂質、核酸、有機低分子、非生物ポリマー、金属、イオン、放射性同位体などが挙げられるが、これらに限定されない、任意の種類の化学物質であり得る。いくつかの実施形態において、本発明に従って使用するための治療薬は、癌の１つ以上の症状又は原因の治療に関連する生物学的活性を有し得る。いくつかの実施形態では、本発明に従って使用するための治療薬は、免疫系の調節及び／又はＴ細胞媒介性細胞傷害の増強に関連する生物活性を有し得る。いくつかの実施形態では、本発明に従って使用するための治療薬は、１つ以上の他の活性を有する。
検出剤は、例えば、その特定の機能的特性及び／又は化学的特性のために、アッセイを使用して検出され得る任意の部分を含み得る。そのような薬剤の非限定的な例としては、酵素、放射性標識、ハプテン、蛍光標識、燐光分子、化学発光分子、発色団、発光分子、光親和性分子、着色粒子、又はビオチンなどのリガンドが挙げられる。
多くの検出剤は、タンパク質及びペプチドへの結合のためのシステムとして、当該技術分野において既知である（例えば、米国特許第５，０２１，２３６号、同第４，９３８，９４８号、及び同第４，４７２，５０９号を参照されたい）。そのような検出剤の例としては、とりわけ、常磁性イオン、放射性同位体、蛍光色素、ＮＭＲ検出可能物質、Ｘ線用造影剤が挙げられる。例えば、いくつかの実施形態では、常磁性イオンは、クロム（ＩＩＩ）、マンガン（ＩＩ）、鉄（ＩＩＩ）、鉄（ＩＩ）、コバルト（ＩＩ）、ニッケル（ＩＩ）、銅（ＩＩ）、ネオジム（ＩＩＩ）、サマリウム（ＩＩＩ）、イッテルビウム（ＩＩＩ）、ガドリニウム（ＩＩＩ）、バナジウム（ＩＩ）、テルビウム（ＩＩＩ）、ジスプロシウム（ＩＩＩ）、ホルミウム（ＩＩＩ）、エルビウム（ＩＩＩ）、ランタン（ＩＩＩ）、金（ＩＩＩ）、鉛（ＩＩ）、及び／若しくはビスマス（ＩＩＩ）のうちの１つ以上である。
放射性同位体は、アクチニウム－２２５、アスタチン－２１１、ビスマス－２１２、炭素－１４、クロム－５１、塩素－３６、コバルト－５７、コバルト－５８、銅－６７、ユーロピウム－１５２、ガリウム－６７、水素－３、ヨウ素－１２３、ヨウ素－１２４、ヨウ素－１２５、ヨウ素－１３１、インジウム－１１１、鉄－５９、鉛－２１２、ルテチウム－１７７、リン－３２、ラジウム－２２３、ラジウム－２２４、レニウム－１８６、レニウム－１８８、セレン－７５、硫黄－３５、テクネチウム－９９ｍ、トリウム－２２７、イットリウム－９０、及びジルコニウム－８９のうちの１つ以上であってよい。放射標識されたＣＡＲ又はＣＳＲは、当該技術分野における周知の技術に従って生成され得る。
蛍光標識は、とりわけ、Ａｌｅｘａ３５０、Ａｌｅｘａ４３０、ＡＭＣＡ、ＢＯＤＩＰＹ６３０／６５０、ＢＯＤＩＰＹ６５０／６６５、ＢＯＤＩＰＹ－ＦＬ、ＢＯＤＩＰＹ－Ｒ６Ｇ、ＢＯＤＩＰＹ－ＴＭＲ、ＢＯＤＩＰＹ－ＴＲＸ、カスケードブルー、Ｃｙ３、Ｃｙ５、６－ＦＡＭ、フルオレセインイソチオシアネート、ＨＥＸ、６－ＪＯＥ、オレゴングリーン４８８、オレゴングリーン５００、オレゴングリーン５１４、パシフィックブルー、ＲＥＧ、ローダミングリーン、ローダミンレッド、レノグラフィン、ＲＯＸ、ＴＡＭＲＡ、ＴＥＴ、テトラメチルローダミン、及び／又はテキサスレッドのうちの１つ以上であってもよく、又はこれらを含んでもよい。
Ｘ．治療方法
本発明の組成物は、ウイルス感染及び癌（例えば、血液癌又は固形腫瘍癌）などの疾患を治療するため、個体（例えば、ヒトなどの哺乳類）に投与され得る。
本明細書に記載の方法のいずれかを使用して治療することができる癌としては、脈管化されていないか、又はまだ実質的に脈管化されていない腫瘍に加えて、脈管化された腫瘍が挙げられる。癌は、非固形腫瘍（白血病及びリンパ腫などの血液腫瘍など）を含み得るか、又は固形腫瘍を含み得る。治療される癌の種類として、細胞腫、芽細胞腫、肉腫、黒色腫、神経内分泌腫瘍、及び神経膠腫、並びにある種の白血病又はリンパ性腫瘍、良性及び悪性腫瘍、及び悪性病変、例えば、肉腫、細胞腫、黒色腫、及び神経膠腫が挙げられるが、これらに限定されない。成人腫瘍／癌及び小児腫瘍／癌も含まれる。
本明細書に記載の方法のいずれかによる治療のために企図される固形腫瘍として、神経膠腫（例えば、脳幹膠腫及び混合神経膠腫）などのＣＮＳ腫瘍、神経膠芽腫（多形神経膠芽腫としても知られる）、星状細胞腫（高悪性度星状細胞腫）、小児神経膠腫又は神経膠芽腫（小児高悪性度神経膠腫（ＨＧＧ）及びびまん性内在性橋グリオーマ（ＤＩＰＧ）など）、ＣＮＳリンパ腫、胚細胞腫、髄芽芽腫、シュワン細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、神経芽腫、網膜芽細胞腫、及び脳転移が挙げられる。
いくつかの実施形態では、癌は、小児神経膠腫である。いくつかの実施形態では、小児神経膠腫は、低悪性度神経膠腫である。いくつかの実施形態では、小児神経膠腫は、高悪性度神経膠腫（ＨＧＧ）である。いくつかの実施形態では、小児神経膠腫は、多形神経膠芽腫である。いくつかの実施形態では、小児神経膠腫は、びまん性内在性橋グリオーマ（ＤＩＰＧ）である。いくつかの実施形態では、ＤＩＰＧは、グレートＩＩである。いくつかの実施形態では、ＤＩＰＧは、グレートＩＩＩである。いくつかの実施形態では、ＤＩＰＧは、グレートＩＶである。
治療が企図され更なる固形腫瘍として、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫（明細胞軟骨肉腫など）、軟骨芽細胞腫、骨肉腫、及び他の肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、心臓横紋筋肉腫、結腸癌、リンパ系悪性疾患、膵臓癌、乳癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、肝細胞癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、甲状腺髄様癌、乳頭甲状腺癌、褐色細胞腫皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌、肝癌、胆管癌、絨毛癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌（例えば、子宮頸癌及び浸潤前の子宮頸部異形成）、肛門癌、肛門管、又は肛門癌、膣癌、外陰部の癌（例えば、扁平上皮癌、上皮内癌、腺癌、及び線維肉腫）、陰茎癌、中咽頭癌、頭部癌（例えば、扁平上皮癌）、頸部癌（例えば、扁平上皮癌）、精巣癌（例えば、セミノーマ、奇形腫、胎児性癌、奇形癌、絨毛癌、肉腫、ライディッヒ細胞腫瘍、線維腫、線維腺腫、腺腫様腫瘍、及び脂肪腫）、膀胱癌、黒色腫、子宮癌（例えば、子宮内膜癌）、及び尿路上皮癌（例えば、扁平上皮癌、転移細胞癌、腺癌、尿管癌、及び膀胱癌）が挙げられる。
本明細書に記載の方法のいずれかによる治療が企図される血液癌として、急性白血病（急性リンパ性白血病、急性骨髄球性白血病、急性骨髄性白血病及び骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄球性、単球性及び赤血球性白血病など）、慢性白血病（慢性骨髄球性（顆粒球）白血病、慢性骨髄性白血病、及び慢性リンパ性白血病）、多発性血中血症、リンパ腫、ホジキンリンパ疾患、非ホジキンリンパ腫（緩慢性及び高悪性度形態）、多発性骨髄腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、重鎖疾患、骨髄異形成症候群、有毛細胞白血病、及び骨髄異形成症を含む白血病が挙げられる。
他の癌の例として、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞性慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、多発性骨髄腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、前リンパ球性白血病、有毛細胞白血病、一般的な急性リンパ球性白血病、及びヌル細胞型急性リンパ芽球性白血病が挙げられるが、これらに限定されない。
癌治療は、例えば、腫瘍退縮、腫瘍重量又はサイズ収縮、進行時間、生存期間、無増悪生存率、全奏功率、応答期間、生活の質、タンパク質発現及び／又は活性によって評価することができる。例えば、放射線撮像を通した応答の測定を含む、治療の有効性を決定するためのアプローチを使用してよい。
癌（例えば、血液癌又は固形腫瘍癌）を治療するための方法のうちのいずれかのいくつかの実施形態では、個体に投与される前に、ＣＡＲ及びＣＳＲが、細胞（免疫細胞、例えば、Ｔ細胞など）と複合体化される。したがって、例えば、ａ）本明細書に記載されるＣＡＲ及びＣＳＲ又はこれらの抗体部分を、細胞（免疫細胞、例えば、Ｔ細胞など）と複合体化し、ＣＡＲ＋ＣＳＲ／細胞コンジュゲートを形成することと、ｂ）有効量のＣＡＲ＋ＣＳＲ／細胞コンジュゲートを含む組成物を個体に投与することと、を含む、個体における癌、（例えば、血液癌又は固形腫瘍癌）を治療する方法が提供される。いくつかの実施形態では、細胞は、個体に由来する。いくつかの実施形態では、細胞は、個体に由来しない。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ及びＣＳＲは、細胞の表面上の分子への共有結合によって細胞に複合体化される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ及びＣＳＲは、細胞の表面上の分子への非共有結合によって細胞に複合体化される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ及びＣＳＲは、ＣＡＲの一部及びＣＳＲの一部を細胞の外膜に挿入することによって、細胞に複合体化される。
治療は、例えば、腫瘍退縮、腫瘍重量又はサイズ収縮、進行時間、生存期間、無増悪生存率、全奏功率、応答期間、生活の質、タンパク質発現及び／又は活性によって評価することができる。例えば、放射線撮像を通した応答の測定を含む、治療の有効性を決定するためのアプローチを使用してよい。
いくつかの実施形態では、治療の有効性は、式１００－（Ｔ／Ｃ×１００）（式中、Ｔは、治療された腫瘍の平均相対腫瘍体積であり、Ｃは、未治療腫瘍の平均相対腫瘍体積である）を使用して計算され得る、腫瘍成長阻害率（％ＴＧＩ）として測定され得る。いくつかの実施形態では、％ＴＧＩは、約２％、約４％、約６％、約８％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、又は９５％超である。
ＸＩ．ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の調製
一態様では、本発明は、本明細書に記載される実施形態のいずれかによるＣＡＲ及びＣＳＲを発現している免疫細胞（例えば、リンパ球、例えばＴ細胞）を提供する。ＣＡＲ及びＣＳＲ（ＣＡＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞などのＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞）を発現している免疫細胞（Ｔ細胞など）を調製する例示的な方法が、本明細書で提供される。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞（ＣＡＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞など）は、標的抗原（疾患関連抗原など）に特異的に結合するＣＡＲ（本明細書に記載されるＣＡＲのいずれかなど）、及び標的リガンドに特異的に結合するＣＳＲ（本明細書に記載されるＣＳＲのいずれかなど）をコードする１つ以上の核酸（例えば、レンチウイルスベクターを含む）を免疫細胞に導入することによって生成することができる。１つ以上の核酸を免疫細胞に導入することは、核酸について本明細書に記載される技術など、当該技術分野において既知の技術を使用して達成することができる。いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞（ＣＡＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞など）は、インビボで複製することができ、その結果、標的抗原の発現に関連する疾患（癌又はウイルス感染など）の持続的な制御をもたらし得る長期持続性をもたらし得る。
いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載のＣＡＲのいずれかによる標的抗原に特異的に結合するＣＡＲ、及び本明細書に記載のＣＳＲのいずれかによる標的リガンドに特異的に結合するＣＳＲを発現する、遺伝子改変Ｔ細胞を、例えば、リンパ球注入を使用する癌又はウイルス感染を含む、標的抗原の発現と関連する疾患及び／又は障害（本明細書では、「標的抗原陽性」又は「ＴＡ陽性」疾患又は障害とも称される）を有するか、発症するリスクがある患者の治療のために投与することに関連する。いくつかの実施形態では、自己リンパ球注入が、治療に使用される。治療を必要としている患者から自己ＰＢＭＣを回収し、本明細書に記載されており、当該技術分野において既知の方法を使用してＴ細胞を活性化及び増殖させ、次いで、患者に注入し戻す。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲのいずれかによる標的抗原に特異的に結合するＣＡＲ、及び本明細書に記載のＣＳＲのいずれかによる標的リガンドに特異的に結合するＣＳＲを発現する、Ｔ細胞（本明細書では「ＣＡＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞」とも称される）が提供される。本発明のＣＡＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞は、ロバストなインビボＴ細胞増殖を受けることができ、血液及び骨髄中で長期間にわたって高いレベルで持続する標的抗原特異的メモリー細胞を確立することができる。いくつかの実施形態では、患者に注入された本発明のＣＡＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞は、標的抗原関連疾患を有する患者において、インビボで、標的抗原提示細胞、例えば、標的抗原提示癌又はウイルス感染細胞を排除することができる。いくつかの実施形態では、患者に注入された本発明のＣＡＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞は、少なくとも１つの従来の治療に難治性である標的抗原関連疾患を有する患者において、インビボで、標的抗原提示細胞、例えば、標的抗原提示癌又はウイルス感染細胞を排除することができる。
Ｔ細胞の増殖及び遺伝子改変の前に、被験体からＴ細胞源を得る。Ｔ細胞は、末梢血単核球、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位からの組織、腹水、胸水、脾臓組織、及び腫瘍を含む多数の源から得ることができる。本発明のいくつかの実施形態では、当該技術分野において利用可能な任意の数のＴ細胞株を使用することができる。本発明のいくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ＦＩＣＯＬＬ（商標）分離などの当業者に既知の任意の数の技術を使用して、対象から採取された血液の単位から得ることができる。いくつかの実施形態では、個体の循環血液由来の細胞は、アフェレーシスによって得られる。アフェレーシス生成物は、典型的には、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球、赤血球、及び血小板を含むリンパ球を含有する。いくつかの実施形態では、アフェレーシスによって回収された細胞を洗浄して血漿画分を除去し、後続の処理工程に適した緩衝液又は培地中に細胞を入れてよい。いくつかの実施形態では、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で細胞を洗浄する。いくつかの実施形態では、洗浄溶液はカルシウムを含まず、マグネシウムを含んでいなくてもよく、又は全てではないが多くの二価カチオンを含んでいなくてもよい。洗浄工程は、製造業者の指示に従って半自動化「フロースルー」遠心分離器（例えば、Ｃｏｂｅ ２９９１細胞プロセッサ、Ｂａｘｔｅｒ ＣｙｔｏＭａｔｅ、又はＨａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ Ｃｅｌｌ Ｓａｖｅｒ ５）を使用することによるなど、当該技術分野において既知の方法によって達成され得ることを、当業者であれば容易に理解するであろう。洗浄後、Ｃａ２＋フリー、Ｍｇ２＋フリーＰＢＳ、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａ、又は緩衝剤を有する若しくは有さない他の生理食塩水溶液などの様々な生体適合性緩衝液中に細胞を再懸濁させてもよい。あるいは、アフェレーシスサンプルの望ましくない成分を除去し、細胞を培養培地に直接再懸濁させてもよい。
いくつかの実施形態では、赤血球を溶解し、単球を枯渇させることによって、例えば、ＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配を介した遠心分離によって又は向流遠心溶出によって、末梢血リンパ球からＴ細胞を単離する。ＣＤ３＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、及びＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞などのＴ細胞の特定の亜集団を、正又は負の選択技術によって更に単離することができる。例えば、いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、所望のＴ細胞を陽性選択するのに十分な時間にわたって、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ－４５０ ＣＤ３／ＣＤ２８ Ｔなどの抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８（すなわち、３×２８）コンジュゲートビーズとのインキュベーションによって、単離される。いくつかの実施形態では、当該時間は、約３０分間である。いくつかの実施形態では、期間は、３０分～３６時間又はそれ以上（これらの値間の全ての範囲を含む）の範囲である。いくつかの実施形態では、当該時間は、少なくとも１、２、３、４、５、又は６時間である。いくつかの実施形態では、当該時間は、１０～２４時間である。いくつかの実施形態では、インキュベーション時間は、２４時間である。白血病患者からＴ細胞を単離する場合、２４時間などのより長いインキュベーション時間を使用することによって、細胞収量を増加させることができる。例えば、腫瘍組織又は免疫不全個体から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を単離する際など、他の細胞型と比べてＴ細胞がわずかしか存在しない任意の状況でＴ細胞を単離するために、より長いインキュベーション時間を使用してよい。更に、より長いインキュベーション時間を使用すると、ＣＤ８＋Ｔ細胞の捕捉効率を高めることができる。したがって、Ｔ細胞をＣＤ３／ＣＤ２８ビーズに結合させる時間を単に短縮又は延長することによって、及び／又はビーズのＴ細胞に対する比を増加又は減少させることによって、培養開始時若しくはプロセス中の他の時点で、Ｔ細胞の亜集団を正又は負に（for or against）優先的に選択することができる。更に、ビーズ又は他の表面上の抗ＣＤ３抗体及び／又は抗ＣＤ２８抗体の比を増加又は減少させることによって、培養開始時若しくはプロセス中の他の所望の時点で、Ｔ細胞の亜集団を正又は負に優先的に選択することができる。当業者であれば、本発明の状況において、複数の選択ラウンドを使用してもよいことを認識するであろう。いくつかの実施形態では、選択手順を実施し、活性化及び増殖プロセスにおいて「選択されなかった」細胞を使用することが望ましい場合がある。「選択されなかった」細胞を更なる選択ラウンドに供してもよい。
負の選択によるＴ細胞集団の濃縮は、負に選択された細胞に固有の表面マーカーに対する抗体の組み合わせを用いて達成することができる。１つの方法は、負に選択された細胞上に存在する細胞表面マーカーに対するモノクローナル抗体のカクテルを使用する、陰性磁気免疫付着又はフローサイトメトリーを介した細胞選別及び／又は選択である。例えば、負の選択によってＣＤ４＋細胞を濃縮するために、モノクローナル抗体カクテルは、典型的には、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ－ＤＲ、及びＣＤ８に対する抗体を含む。いくつかの実施形態では、典型的には、ＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＧＩＴＲ＋、及びＦｏｘＰ３＋を発現する調節性Ｔ細胞を濃縮又は正に選択することが望ましい場合がある。あるいは、いくつかの実施形態では、抗ＣＤ２５コンジュゲートビーズ又は他の同様の選択方法によって、調節性Ｔ細胞を枯渇させる。
正又は負の選択によって所望の集団の細胞を単離するために、細胞及び表面（例えば、ビーズなどの粒子）の濃度を変化させてもよい。いくつかの実施形態では、細胞とビーズを確実に最大限接触させるために、ビーズと細胞が一緒に混合される体積を著しく減少させる（すなわち、細胞の濃度を増加させる）ことが望ましい場合がある。例えば、いくつかの実施形態では、約２０億細胞／ｍＬの濃度が使用される。いくつかの実施形態では、約１０億細胞／ｍＬの濃度が使用される。いくつかの実施形態では、約１億細胞／ｍＬ超が使用される。いくつかの実施形態では、約１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、又は５０００万細胞／ｍＬのいずれかの細胞濃度が使用される。いくつかの実施形態では、約７５００、８０００、８５００、９０００、９５００万、又は１億細胞／ｍＬのいずれかの細胞濃度が使用される。いくつかの実施形態では、約１億２５００万又は約１億５０００万細胞／ｍＬの濃度が使用される。高濃度を使用すると、細胞収量、細胞活性化、及び細胞増殖を増加させることができる。更に、高い細胞濃度の使用によって、ＣＤ２８陰性Ｔ細胞などの対象とする標的抗原を弱く発現し得るか、又は多くの腫瘍細胞が存在するサンプル（すなわち、白血病血液、腫瘍組織など）に由来する細胞をより効率的に捕捉することが可能になる。このような細胞集団は、治療的価値を有している場合があり、入手することが望ましい。例えば、高濃度の細胞を使用することにより、通常ＣＤ２８発現の弱いＣＤ８＋Ｔ細胞をより効率的に選択することが可能になる。
本発明のいくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、治療直後に患者から得られる。これに関連して、特定の癌治療後、特に、免疫系に損傷を与える薬物による治療後、患者が通常治療から回復する期間中の治療直後に、得られるＴ細胞の品質が、エクスビボで増殖する能力に関して最適であり得る又は改善され得ることが観察されている。同様に、本明細書に記載の方法を使用したエクスビボ操作後、これらの細胞は、増強された生着及びインビボ増殖にとって好ましい状態であり得る。したがって、この回復期の間にＴ細胞、樹状細胞、又は造血系の他の細胞を含む血液細胞を回収することが、本発明の状況内で想到される。更に、いくつかの実施形態では、可動化（例えば、ＧＭ－ＣＳＦによる可動化）及びコンディショニングレジメンを使用して、特に治療後の規定の時間枠の間に、特定の細胞型の再増殖、再循環、再生、及び／又は増殖に好都合な、被験体における状態を作り出すことができる。例示的な細胞型としては、Ｔ細胞、Ｂ細胞、樹状細胞、及び免疫系の他の細胞が挙げられる。
Ｔ細胞の遺伝子改変の前又は後に、所望のＣＡＲ、ＣＳＲ、及び所望によりＳＳＥを発現するかどうかにかかわらず、Ｔ細胞は、例えば、米国特許第６，３５２，６９４号、同第６，５３４，０５５号、同第６，９０５，６８０号、同第６，６９２，９６４号、同第５，８５８，３５８号、同第６，８８７，４６６号、同第６，９０５，６８１号、同第７，１４４，５７５号、同第７，０６７，３１８号、同第７，１７２，８６９号、同第７，２３２，５６６号、同第７，１７５，８４３号、同第５，８８３，２２３号、同第６，９０５，８７４号、同第６，７９７，５１４号、同第６，８６７，０４１号、及び米国特許出願公開第２００６０１２１００５号に記載されている方法を使用して、全般に活性化及び増殖させることができる。
一般的に、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体関連シグナルを刺激する剤及びＴ細胞の表面上の共刺激分子を刺激するリガンドが結合している表面と接触させることによって、本発明のＴ細胞を増殖させる。具体的には、抗ＣＤ３抗体、若しくはその抗原結合断片、又は表面上に固定化された抗ＣＤ２抗体と接触させることによって、あるいはカルシウムイオノフォアと合わせてタンパク質キナーゼＣ活性化因子（例えば、ブリオスタチン）と接触させることによって、Ｔ細胞集団を刺激することができる。Ｔ細胞の表面上のアクセサリ分子の共刺激については、アクセサリ分子に結合するリガンドが使用される。例えば、Ｔ細胞の増殖を刺激するのに適した条件下で、Ｔ細胞の集団を抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ２８抗体と接触させてよい。ＣＤ４＋Ｔ細胞又はＣＤ８＋Ｔ細胞のいずれかの増殖を刺激するために、抗ＣＤ３抗体、及び抗ＣＤ２８抗体。抗ＣＤ２８抗体の例としては、９．３、Ｂ－Ｔ３、ＸＲ－ＣＤ２８（Ｄｉａｃｌｏｎｅ，Ｂｅｓａｎｃｏｎ，Ｆｒａｎｃｅ）が挙げられ、と当該技術分野において公知の他の方法で使用できるように使用できる（Ｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ Ｐｒｏｃ．３０（８）：３９７５－３９７７，１９９８、Ｈａａｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９０（９）：１３１９１３２８，１９９９、Ｇａｒｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．２２７（１－２）：５３－６３，１９９９）。
ＸＩＩ．遺伝子改変
いくつかの実施形態では、本発明のＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞（ＣＡＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞など）は、本明細書に記載のＣＡＲ及び本明細書に記載のＣＳＲをコードする１つ以上のウイルスベクターを免疫細胞（本明細書に記載の方法によって調製されるＴ細胞など）に形質導入することによって生成される。ウイルスベクター送達系は、ＤＮＡ及びＲＮＡウイルスを含み、それらは、免疫細胞への送達後にエピソームであるか、又はゲノムに組み込まれる。遺伝子治療手順の概説については、Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５６：８０８－８１３（１９９２）、Ｎａｂｅｌ ＆ Ｆｅｉｇｎｅｒ，ＴＩＢＴＥＣＨ １１：２１１－２１７（１９９３）、Ｍｉｔａｎｉ ＆ Ｃａｓｋｅｙ，ＴＩＢＴＥＣＨ １１：１６２－１６６（１９９３）、Ｄｉｌｌｏｎ，ＴＩＢＴＥＣＨ １１：１６７－１７５（１９９３）、Ｍｉｌｌｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ ３５７：４５５－４６０（１９９２）、Ｖａｎ Ｂｒｕｎｔ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ６（１０）：１１４９－１ １５４（１９８８）、Ｖｉｇｎｅ，Ｒｅｓｔｏｒａｔｉｖｅ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ ８：３５－３６（１９９５）、Ｋｒｅｍｅｒ ＆ Ｐｅｒｒｉｃａｕｄｅｔ，Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ５１（ｌ）：３１－４４（１９９５）、及びＹｕ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １：１３－２６（１９９４）を参照されたい。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞ゲノムに組み込まれた１つ以上のベクターを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のウイルスベクターは、レンチウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、そのゲノムに組み込まれたレンチウイルスベクターを含むＣＡＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞である。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、その内因性のＴＣＲ鎖のうちの１つ又は両方の発現を遮断又は減少させるように改変される。例えば、いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、ＴＣＲα及び／又はβ鎖の発現を遮断又は減少させるように改変されたαβＴ細胞であり、又はＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、ＴＣＲγ及び／又はδ鎖の発現を遮断又は減少させるように改変されたγδＴ細胞である。遺伝子発現を破壊する細胞の改変としては、例えば、ＲＮＡ干渉（例えば、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ）、遺伝子編集（例えば、ＣＲＩＳＰＲ又はＴＡＬＥＮ系遺伝子ノックアウト）などを含む、当該技術分野において既知の任意のそのような技術が挙げられる。
いくつかの実施形態では、Ｔ細胞の内因性ＴＣＲ鎖の一方又は両方の発現が減少したＣＡＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞は、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムを使用して生成される。遺伝子編集のＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムの概説については、例えば、Ｊｉａｎ Ｗ＆Ｍａｒｒａｆｆｉｎｉ ＬＡ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６９，２０１５、Ｈｓｕ ＰＤ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ，１５７（６）：１２６２－１２７８，２０１４、及びＯ’Ｃｏｎｎｅｌｌ ＭＲ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ５１６：２６３－２６６，２０１４を参照されたい。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞の内因性ＴＣＲ鎖の一方又は両方の発現が減少したＣＡＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞は、ＴＡＬＥＮ系ゲノム編集を使用して生成される。
ＸＩＩＩ．濃縮
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞のいずれかによるＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の不均質な細胞集団を濃縮する方法が提供される。
標的抗原及び標的リガンドに特異的に結合するＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞（ＣＡＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞など）の特定の亜集団は、陽性選択技術によって濃縮され得る。例えば、いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞（ＣＡＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞など）は、所望のＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞を陽性選択するのに十分な時間にわたって標的抗原コンジュゲートビーズ及び／又は標的リガンドコンジュゲートビーズとのインキュベーションによって濃縮される。いくつかの実施形態では、当該時間は、約３０分間である。いくつかの実施形態では、期間は、３０分～３６時間又はそれ以上（これらの値間の全ての範囲を含む）の範囲である。いくつかの実施形態では、当該時間は、少なくとも１、２、３、４、５、又は６時間である。いくつかの実施形態では、当該時間は、１０～２４時間である。いくつかの実施形態では、インキュベーション時間は、２４時間である。異種細胞集団において低いレベルで存在するＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の単離のために、２４時間などのより長いインキュベーション時間の使用は、細胞収量を増加させることができる。他の細胞型と比較して、少ないＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞が存在する任意の状況において、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞を単離するために、より長いインキュベーション時間を使用することができる。当業者であれば、本発明の状況において、複数の選択ラウンドを使用してもよいことを認識するであろう。
陽性選択によるＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の所望の集団の単離のために、細胞及び表面（例えば、ビーズなどの粒子）の濃度を変更することができる。いくつかの実施形態では、細胞とビーズを確実に最大限接触させるために、ビーズと細胞が一緒に混合される体積を著しく減少させる（すなわち、細胞の濃度を増加させる）ことが望ましい場合がある。例えば、いくつかの実施形態では、約２０億細胞／ｍＬの濃度が使用される。いくつかの実施形態では、約１０億細胞／ｍＬの濃度が使用される。いくつかの実施形態では、約１億細胞／ｍＬ超が使用される。いくつかの実施形態では、約１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、又は５０００万細胞／ｍＬのいずれかの細胞濃度が使用される。いくつかの実施形態では、約７５００、８０００、８５００、９０００、９５００万、又は１億細胞／ｍＬのいずれかの細胞濃度が使用される。いくつかの実施形態では、約１億２５００万又は約１億５０００万細胞／ｍＬの濃度が使用される。高濃度を使用すると、細胞収量、細胞活性化、及び細胞増殖を増加させることができる。更に、高細胞濃度の使用は、ＣＡＲ及び／又はＣＳＲを弱く発現し得るＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞のより効率的な捕捉を可能にする。
本明細書に記載される任意のそのような実施形態のうちのいくつかにおいて、濃縮は、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の疲弊を最小限に抑えるか、又は実質的に全く疲弊させない。例えば、いくつかの実施形態では、濃縮は、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の約５０％未満（約４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、又は５％のいずれか未満など）が疲弊したものになる結果をもたらす。免疫細胞の疲弊は、本明細書に記載される任意の手段を含む、当該技術分野において既知の任意の手段によって判定することができる。
本明細書に記載される任意のそのような実施形態のうちのいくつかにおいて、濃縮は、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の終末分化を最小限に抑えるか、又は実質的に全く終末分化させない。例えば、いくつかの実施形態では、濃縮は、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の約５０％未満（約４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、又は５％のいずれか未満など）が終末分化したものになる結果をもたらす。免疫細胞の終末分化は、本明細書に記載される任意の手段を含む、当該技術分野において既知の任意の手段によって判定することができる。
本明細書に記載される任意のそのような実施形態のうちのいくつかにおいて、濃縮は、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞のＣＡＲ及び／又はＣＳＲの内部移行を最小限に抑えるか、又は実質的に全くＣＡＲ及び／又はＣＳＲを内部移行させない。例えば、いくつかの実施形態では、濃縮は、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞上の約５０％未満（約４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、又は５％のいずれか未満など）のＣＡＲ及び／又はＣＳＲが内部移行したものになる結果をもたらす。ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞上のＣＡＲ及び／又はＣＳＲの内部移行は、本明細書に記載される任意の手段を含む当該技術分野において既知の任意の手段によって判定することができる。
本明細書に記載される任意のそのような実施形態のうちのいくつかにおいて、濃縮は、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の増殖の増加をもたらす。例えば、いくつかの実施形態では、濃縮は、濃縮後のＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の数の少なくとも約１０％（少なくとも約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、１０００％、又はそれ以上のいずれかなど）の増加をもたらす。
したがって、いくつかの実施形態では、標的抗原に特異的に結合するＣＡＲ、及び標的リガンドに特異的に結合するＣＳＲを発現するＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の異種細胞集団を濃縮する方法であって、ａ）異種細胞集団を、標的抗原若しくはその中に含まれる１つ以上のエピトープを含む第１の分子、及び／又は標的リガンド若しくはその中に含まれる１つ以上のエピトープを含む第２の分子と接触させて、第１の分子に結合したＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞及び／又は第２の分子に結合したＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞を含む複合体を形成することと、ｂ）複合体を異種細胞集団から分離することにより、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞について濃縮された細胞集団を生成することと、を含む、方法が提供される。いくつかの実施形態では、第１及び／又は第２の分子は、個々に固体支持体に固定化される。いくつかの実施形態では、固体支持体は粒子状（ビーズなど）である。いくつかの実施形態では、固体支持体は、表面（ウェルの底部など）である。いくつかの実施形態では、第１及び／又は第２の分子は、タグで個別に標識される。いくつかの実施形態では、タグは、蛍光分子、親和性タグ、又は磁気タグである。いくつかの実施形態では、本方法は、第１及び／又は第２の分子からＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞を溶離させることと、溶離液を回収することと、を更に含む。
ＸＩＶ．エフェクター細胞療法
本出願はまた、本明細書に記載の免疫細胞を使用して、エフェクター細胞（初代Ｔ細胞など）の特異性を癌細胞にリダイレクトする方法も提供する。したがって、本発明はまた、哺乳類における癌細胞を含む標的細胞集団又は組織に対するエフェクター細胞媒介性応答（Ｔ細胞媒介性免疫応答など）を刺激する方法であって、本明細書に記載されるＣＡＲ及びＣＳＲを発現するエフェクター細胞（Ｔ細胞など）を当該哺乳類に投与する工程を含む方法も提供する。いくつかの実施形態では、免疫細胞を「刺激する」とは、エフェクター細胞媒介性応答（Ｔ細胞媒介性免疫応答など）を誘発することを指し、免疫細胞の活性化とは異なる。
本明細書に記載されるＣＡＲ及びＣＳＲを発現しているエフェクター細胞（Ｔ細胞など）は、それを必要とするレシピエントに注入することができる。注入された細胞は、レシピエント内の癌細胞を死滅させることができる。いくつかの実施形態では、抗体療法とは異なり、エフェクター細胞（Ｔ細胞など）は、インビボで複製することができ、その結果、持続的な腫瘍管理につながり得る長期存続性が得られる。
いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、ロバストなインビボＴ細胞増殖を受けることができ、長期間にわたって存続することができるＴ細胞である。いくつかの実施形態では、本発明のＴ細胞は、再活性化されて、任意の更なる腫瘍の形成又は成長を阻害することができる特異的メモリーＴ細胞に発達する。
また、本発明のエフェクター細胞（Ｔ細胞など）は、エクスビボ免疫及び／又は哺乳類におけるインビボ療法のための一種のワクチンとしても機能し得る。いくつかの実施形態では、哺乳類は、ヒトである。
エクスビボ免疫に関しては、細胞を哺乳類に投与する前に以下のうちの少なくとも１つをインビトロで行う：ｉ）細胞の増殖、ｉｉ）ＣＡＲ又はＣＳＲをコードしている核酸の細胞への導入、及び／又はｉｉｉ）細胞の冷凍保存。エクスビボの手順は、当該技術分野において周知である。簡潔に述べると、哺乳類（好ましくはヒト）から細胞を単離し、本明細書に開示されるＣＡＲ又はＣＳＲを発現するベクターで遺伝子改変（すなわち、インビトロで形質導入又はトランスフェクト）する。細胞を、哺乳類レシピエントに投与し、治療的利益を提供することができる。哺乳類レシピエントはヒトであってよく、細胞は、レシピエントに対して自己であってよい。あるいは、細胞は、レシピエントに対して同種、同系、又は異種であってもよい。造血幹細胞及び前駆細胞のエクスビボ増殖の手順は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，１９９，９４２号に記載されており、本発明の細胞に適用することができる。他の好適な方法は、当該技術分野において既知である。したがって、本発明は、細胞のエクスビボ増殖の任意の特定の方法には限定されない。簡単には、Ｔ細胞のエクスビボ培養及び増殖は、（１）末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）からＴ細胞を回収することと、（２）そのような細胞をエクスビボで増殖することと、を含む。米国特許第５，１９９，９４２号に記載の細胞成長因子に加えて、ｆｌｔ３－Ｌ、ＩＬ－１、ＩＬ－３、及びｃ－ｋｉｔリガンドなどの他の因子を、細胞の培養及び増殖のために使用することができる。
エクスビボ免疫に関して細胞ベースのワクチンを使用することに加えて、本発明はまた、患者において抗原に対する免疫応答を誘発するためのインビボ免疫のための組成物及び方法も提供する。本発明のエフェクター細胞（Ｔ細胞など）は、単独で、あるいは希釈剤及び／又はＩＬ－２若しくは他のサイトカイン若しくは細胞集団などの他の成分と組み合わせた医薬組成物としてのいずれかで投与してよい。簡潔に述べると、本発明の医薬組成物は、１つ以上の医薬的に又は生理学的に許容できる担体、希釈剤、又は賦形剤と組み合わせて、エフェクター細胞（Ｔ細胞など）を含んでいてもよい。このような組成物は、以下を含んでいてもよい：中性緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水などの緩衝剤；グルコース、マンノース、スクロース、又はデキストランなどの炭水化物、マンニトール；タンパク質；ポリペプチド又はグリシンなどのアミノ酸；酸化防止剤；ＥＤＴＡ又はグルタチオンなどのキレート剤；アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）；及び防腐剤。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞（Ｔ細胞など）組成物は、静脈内、髄腔内、頭蓋内、脳内、又は脳室内経路による投与のために製剤化される。
投与される本発明のエフェクター細胞（Ｔ細胞など）組成物の正確な量は、年齢、体重、腫瘍サイズ、感染又は転移の程度、及び患者（被験体）の状態における個体差を考慮して医師が決定することができる。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞（Ｔ細胞など）を含む医薬組成物は、約１０４～約１０９細胞／ｋｇ（体重）、例えば、約１０４～約１０５、約１０５～約１０６、約１０６～約１０７、約１０７～約１０８、又は約１０８～約１０９細胞／ｋｇ（体重）（これらの範囲内の全ての整数値を含む）のいずれかの投薬量で投与される。エフェクト細胞（Effect cell）（Ｔ細胞など）組成物もまた、これらの投与量で複数回投与され得る。細胞は、免疫療法において一般的に知られている注入技術を使用することによって投与することができる（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｗ Ｅｎｇ．Ｊ．ｏｆ Ｍｅｄ．３１９：１６７６，１９８８を参照されたい）。特定の患者に対する最適な投薬量及び治療レジメンは、疾患の兆候について患者をモニタリングし、それに応じて治療を調整することによって、医療分野の当業者が容易に決定できる。
いくつかの実施形態では、活性化エフェクター細胞（Ｔ細胞など）を被験体に投与し、次いで、再採血し（又はアフェレーシスを実施し）、本発明に従ってそれに由来するＴ細胞を活性化し、これらの活性化及び増殖されたＴ細胞を患者に再注入することが望ましい場合がある。このプロセスを数週間毎に複数回実施してよい。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、１０ｃｃ～４００ｃｃの採血から活性化され得る。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、２０ｃｃ、３０ｃｃ、４０ｃｃ、５０ｃｃ、６０ｃｃ、７０ｃｃ、８０ｃｃ、９０ｃｃ、又は１００ｃｃの採血から活性化される。
エフェクター細胞（Ｔ細胞など）の投与は、注射、摂取、輸血、埋め込み、又は移植を含む、任意の便利な方法で実施され得る。本明細書に記載の組成物は、皮下、皮内、腫瘍内、節内、髄内、筋肉内、髄腔内、頭蓋内、脳内、脳室内、静脈内（ｉ．ｖ．）注射によって、又は腹腔内に患者に投与され得る。いくつかの実施形態では、本発明のエフェクター細胞（Ｔ細胞など）組成物は、皮内又は皮下注射によって患者に投与される。いくつかの実施形態では、本発明のエフェクター細胞（Ｔ細胞など）組成物は、ｉ．ｖ．注射によって投与される。いくつかの実施形態では、本発明のエフェクター細胞（Ｔ細胞など）組成物は、髄腔内注射によって投与される。いくつかの実施形態では、本発明のエフェクター細胞（Ｔ細胞など）組成物は、頭蓋内注射によって投与される。いくつかの実施形態では、本発明のエフェクター細胞（Ｔ細胞など）組成物は、脳内注射によって投与される。いくつかの実施形態では、本発明のエフェクター細胞（Ｔ細胞など）組成物は、脳室内注射によって投与される。エフェクター細胞（Ｔ細胞など）の組成物は、腫瘍、リンパ節、又は感染部位に直接注入され得る。
ＸＶ．ＣＡＲ及びＣＳＲを使用した診断及び撮像方法
標識されたＣＡＲ及びＣＳＲは、癌を検出、診断、又は監視するための診断目的で使用することができる。例えば、本明細書に記載されるＣＡＲ及びＣＳＲは、インサイチュ、インビボ、エクスビボ、及びインビトロの診断アッセイ又は撮像アッセイで使用することができる。
本発明の更なる実施形態は、個体（例えば、ヒトなどの哺乳類）における癌（例えば、血液癌又は固形腫瘍癌）を診断する方法を含む。本方法は、個体における抗原提示細胞を検出することを含む。いくつかの実施形態では、個体（例えば、ヒトなどの哺乳類）における癌（例えば、血液癌又は固形腫瘍癌）を診断する方法であって、（ａ）上記の実施形態のいずれかによる標識された抗体部分の有効量を個体に投与することと、（ｂ）閾値レベルを上回る当該標識のレベルが、当該個体が癌を有することを示すように、個体における標識のレベルを決定することと、を含む方法が提供される。閾値レベルは、例えば、癌を有する個体の第１のセット及び癌を有さない個体の第２のセットにおいて、上記の診断方法に従って標識を検出し、第１のセットと第２のセットとの識別を可能にするレベルに当該閾値を設定することを含む、様々な方法によって決定することができる。いくつかの実施形態では、閾値レベルはゼロであり、方法は、個体における標識の有無を判定することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、標識された抗体部分が、抗原が発現する個体の部位で優先的に濃縮されることを可能にするために、工程（ａ）の投与後に一定期間待つことを更に含む。いくつかの実施形態では、方法は、標識のバックグラウンドレベルを減じることを更に含む。バックグラウンドレベルは、例えば、標識された抗体部分を投与する前に個体における標識を検出すること、又は癌を有さない個体において上記の診断方法に従って標識を検出することを含む、様々な方法によって決定することができる。
本発明の抗体部分を使用して、当業者に既知の方法を用い、生体サンプル中の抗原提示細胞のレベルをアッセイすることができる。好適な抗体標識は、当該技術分野において既知であり、グルコースオキシダーゼなどの酵素標識；ヨウ素（１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１１５ｍＩｎ、１１３ｍＩｎ、１１２Ｉｎ、１１１Ｉｎ）、テクネチウム（９９Ｔｃ、９９ｍＴｃ）、タリウム（２０１Ｔｉ）、ガリウム（６８Ｇａ、６７Ｇａ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、キセノン（１３３Ｘｅ）、フッ素（１８Ｆ）、サマリウム（１５３Ｓｍ）、ルテチウム（１７７Ｌｕ）、ガドリニウム（１５９Ｇｄ）、プロメチウム（１４９Ｐｍ）、ランタン（１４０Ｌａ）、イッテルビウム（１７５Ｙｂ）、ホルミウム（１６６Ｈｏ）、イットリウム（９０Ｙ）、スカンジウム（４７Ｓｃ）、レニウム（１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ）、プラセオジム（１４２Ｐｒ）、ロジウム（１０５Ｒｈ）、及びルテニウム（９７Ｒｕ）などの放射性同位体；ルミノール；フルオレセイン及びローダミンなどの蛍光標識；並びにビオチンが挙げられる。
当該技術分野で既知の技術を、本発明の標識抗体部分に適用され得る。このような技術としては、二官能性複合体化剤の使用が挙げられるが、これらに限定されない（例えば、米国特許第５，７５６，０６５号、同第５，７１４，６３１号、同第５，６９６，２３９号、同第５，６５２，３６１号、同第５，５０５，９３１号、同第５，４８９，４２５号、同第５，４３５，９９０号、同第５，４２８，１３９号、同第５，３４２，６０４号、同第５，２７４，１１９号、同第４，９９４，５６０号、及び同第５，８０８，００３号を参照されたい）。上記アッセイとは別に、様々なインビボ及びエクスビボアッセイが、当業者に利用可能である。例えば、被験体の体内の細胞を、場合により、検出可能な標識、例えば、放射性同位体で標識された抗体部分に曝露してよく、例えば、放射活性を外部走査することによって、又は抗体部分に以前に曝露された被験体に由来するサンプル（例えば、生検又は他の生体サンプル）を分析することによって、当該抗体部分の当該細胞への結合を評価してよい。
ＸＶＩ．医薬組成物
本明細書では、本明細書に記載されるＣＡＲのいずれかによるＣＡＲ、及び本明細書に記載のＣＳＲのいずれかによるＣＳＲを表面に提示する免疫細胞（Ｔ細胞など）を含む、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物（医薬組成物など、本明細書では製剤とも呼ばれる）も提供される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物は、医薬組成物である。
組成物は、同じ細胞型のものであり、同じＣＡＲ及びＣＳＲを発現するＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞を含む均質な細胞集団、又は異なる細胞型のＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞を含み、異なるＣＡＲを発現し、及び／又は異なるＣＳＲを発現する、複数のＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞を含む異種細胞集団を含んでもよい。組成物は、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞ではない細胞を更に含んでもよい。
したがって、いくつかの実施形態では、同じ細胞型のものであり、同じＣＡＲ及びＣＳＲを発現するＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞（ＣＡＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞など）の均質な細胞集団を含む、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物が提供される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物は、医薬組成物である。
いくつかの実施形態では、異なる細胞型のＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞を含み、異なるＣＡＲを発現し、及び／又は異なるＣＳＲを発現する複数のＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞集団を含む異種細胞集団を含むＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物が提供される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、互いに独立して、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される細胞型のものである。いくつかの実施形態では、組成物中のＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の全ては、同じ細胞型のものである（例えば、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の全ては細胞傷害性Ｔ細胞である）。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の少なくとも１つの集団は、他とは異なる細胞型のものである（例えば、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の１つの集団は細胞傷害性Ｔ細胞からなり、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の他の集団は、ナチュラルキラーＴ細胞からなる）。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、同じＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の少なくとも１つの集団は、他とは異なるＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、他とは異なるＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、同じ標的抗原に特異的に結合するＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の少なくとも１つの集団は、他とは異なる標的抗原に特異的に結合するＣＡＲを発現する（例えば、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の１つの集団は、ｐＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の他の集団は、細胞表面受容体に特異的に結合する）。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の少なくとも１つの集団が、異なる標的抗原に特異的に結合するＣＡＲを発現する場合、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、同じ疾患又は障害に関連する標的抗原に特異的に結合するＣＡＲを発現する（例えば、標的抗原のそれぞれは、乳癌などの癌に関連する）。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、同じＣＳＲを発現する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の少なくとも１つの集団は、他とは異なるＣＳＲを発現する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、他とは異なるＣＳＲを発現する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、同じ標的リガンドに特異的に結合するＣＳＲを発現する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の少なくとも１つの集団は、他とは異なる標的リガンドに特異的に結合するＣＳＲを発現する（例えば、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の１つの集団は、ｐＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の他の集団は、細胞表面受容体に特異的に結合する）。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の少なくとも１つの集団が、異なる標的リガンドに特異的に結合するＣＳＲを発現する場合、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、同じ疾患又は障害に関連する標的リガンドに特異的に結合するＣＳＲを発現する（例えば、標的リガンドのそれぞれは、乳癌などの癌に関連する）。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物は、医薬組成物である。
したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載される実施形態のいずれかによる複数のＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞集団を含むＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物が提供され、組成物中のＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の全てが同じ細胞型であり（例えば、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の全てが細胞傷害性Ｔ細胞である）、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、他とは異なるＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、同じ標的抗原に特異的に結合するＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の少なくとも１つの集団は、他とは異なる標的抗原に特異的に結合するＣＡＲを発現する（例えば、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の１つの集団は、ｐＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の他の集団は、細胞表面受容体に特異的に結合する）。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の少なくとも１つの集団が、異なる標的抗原に特異的に結合するＣＡＲを発現する場合、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、同じ疾患又は障害に関連する標的抗原に特異的に結合するＣＡＲを発現する（例えば、標的抗原のそれぞれは、乳癌などの癌に関連する）。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物は、医薬組成物である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される実施形態のいずれかによる複数のＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞集団を含むＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物が提供され、組成物中のＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の全てが同じ細胞型であり（例えば、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の全てが細胞傷害性Ｔ細胞である）、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、他とは異なるＣＳＲを発現する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、同じ標的リガンドに特異的に結合するＣＳＲを発現する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の少なくとも１つの集団は、他とは異なる標的リガンドに特異的に結合するＣＳＲを発現する（例えば、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の１つの集団は、ｐＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の他の集団は、細胞表面受容体に特異的に結合する）。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の少なくとも１つの集団が、異なる標的リガンドに特異的に結合するＣＳＲを発現する場合、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、同じ疾患又は障害に関連する標的リガンドに特異的に結合するＣＳＲを発現する（例えば、標的リガンドのそれぞれは、乳癌などの癌に関連する）。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物は、医薬組成物である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される実施形態のいずれかによる複数のＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞集団を含む組成物が提供され、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の少なくとも１つの集団は、他とは異なる細胞型のものである。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の集団の全ては、異なる細胞型のものである。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、互いに独立して、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される細胞型のものである。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、同じＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の少なくとも１つの集団は、他とは異なるＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、他とは異なるＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、同じ標的抗原に特異的に結合するＣＡＲを発現する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の少なくとも１つの集団は、他とは異なる標的抗原に特異的に結合するＣＡＲを発現する（例えば、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の１つの集団は、ｐＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の他の集団は、細胞表面受容体に特異的に結合する）。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の少なくとも１つの集団が、異なる標的抗原に特異的に結合するＣＡＲを発現する場合、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、同じ疾患又は障害に関連する標的抗原に特異的に結合するＣＡＲを発現する（例えば、標的抗原のそれぞれは、乳癌などの癌に関連する）。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、同じＣＳＲを発現する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の少なくとも１つの集団は、他とは異なるＣＳＲを発現する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、他とは異なるＣＳＲを発現する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、同じ標的リガンドに特異的に結合するＣＳＲを発現する。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の少なくとも１つの集団は、他とは異なる標的リガンドに特異的に結合するＣＳＲを発現する（例えば、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の１つの集団は、ｐＭＨＣ複合体に特異的に結合し、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の他の集団は、細胞表面受容体に特異的に結合する）。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の少なくとも１つの集団が、異なる標的リガンドに特異的に結合するＣＳＲを発現する場合、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞の各集団は、同じ疾患又は障害に関連する標的リガンドに特異的に結合するＣＳＲを発現する（例えば、標的リガンドのそれぞれは、乳癌などの癌に関連する）。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物は、医薬組成物である。
組成物の調製中の様々な時点において、細胞を凍結保存することが必要であるか、又は有益であり得る。用語「凍結される／凍結する」及び「凍結保存される／冷凍保存する」は、互換可能に使用することができる。凍結は凍結乾燥を含む。
当業者には理解されるように、細胞の凍結は破壊的であり得る（Ｍａｚｕｒ，Ｐ．，１９７７，Ｃｒｙｏｂｉｏｌｏｇｙ １４：２５１－２７２を参照されたい）が、そのような損傷を防止するために利用可能な多くの手順が存在する。例えば、損傷は、（ａ）凍結保護剤の使用、（ｂ）凍結速度の制御、及び／又は（ｃ）分解反応を最小限に抑えるために十分な低い温度で保管することによって回避することができる。例示的な凍結保護剤としては、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）（Ｌｏｖｅｌｏｃｋ ａｎｄ Ｂｉｓｈｏｐ，１９５９，Ｎａｔｕｒｅ １８３：１３９４－１３９５、Ａｓｈｗｏｏｄ－Ｓｍｉｔｈ，１９６１，Ｎａｔｕｒｅ １９０：１２０４－１２０５）、グリセロール、ポリビニルピロリドン（Ｒｉｎｆｒｅｔ，１９６０，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８５：５７６）、ポリエチレングリコール（Ｓｌｏｖｉｔｅｒ ａｎｄ Ｒａｖｄｉｎ，１９６２，Ｎａｔｕｒｅ １９６：５４８）、アルブミン、デキストラン、スクロース、エチレングリコール、ｉ－エリスリトール、Ｄ－リビトール、Ｄ－マンニトール（Ｒｏｗｅ ｅｔ ａｌ．，１９６２，Ｆｅｄ．Ｐｒｏｃ．２１：１５７）、Ｄ－ソルビトール、ｉ－イノシトール、Ｄ－ラクトース、塩化コリン（Ｂｅｎｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９６０，Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１５：５２０）、アミノ酸（Ｐｈａｎ Ｔｈｅ Ｔｒａｎ ａｎｄ Ｂｅｎｄｅｒ，１９６０，Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ．２０：６５１）、メタノール、アセトアミド、グリセロールモノアセテート（Ｌｏｖｅｌｏｃｋ，１９５４，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．５６：２６５）、及び無機塩（Ｐｈａｎ Ｔｈｅ Ｔｒａｎ ａｎｄ Ｂｅｎｄｅｒ，１９６０，Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．１０４：３８８；Ｐｈａｎ Ｔｈｅ Ｔｒａｎ ａｎｄ Ｂｅｎｄｅｒ，１９６１，ｉｎ Ｒａｄｉｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｔｈｉｒｄ Ａｕｓｔｒａｌｉａｎ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ ｏｎ Ｒａｄｉｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｉｌｂｅｒｙ ｅｄ．，Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈ，Ｌｏｎｄｏｎ，ｐ．５９）が挙げられる。特定の実施形態では、ＤＭＳＯを使用することができる。血漿の添加（例えば、２０～２５％の濃度まで）は、ＤＭＳＯの保護効果を増強することができる。ＤＭＳＯを添加した後、１％のＤＭＳＯ濃度は４℃を超える温度で毒性であり得るため、凍結まで細胞を０℃で維持することができる。
細胞の冷凍保存において、低速制御冷却速度は重要であり得、異なる凍結保護剤（Ｒａｐａｔｚ ｅｔ ａｌ．，１９６８，Ｃｒｙｏｂｉｏｌｏｇｙ ５（１）：１８－２５）及び異なる細胞型は、異なる最適冷却速度を有する（例えば、Ｒｏｗｅ ａｎｄ Ｒｉｎｆｒｅｔ，１９６２，Ｂｌｏｏｄ ２０：６３６、Ｒｏｗｅ，１９６６，Ｃｒｙｏｂｉｏｌｏｇｙ ３（１）：１２－１８、Ｌｅｗｉｓ，ｅｔ ａｌ．，１９６７，Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ ７（１）：１７－３２、並びに、幹細胞の生存及びそれらの移植可能性に対する冷却速度の影響についてのＭａｚｕｒ，１９７０，Ｓｃｉｅｎｃｅ １６８：９３９－９４９を参照されたい）。水が氷になる融解相の熱は、最小限であるべきである。冷却手順は、例えば、プログラム可能な凍結装置又はメタノール浴手順の使用によって実行することができる。プログラム可能な凍結装置は、最適な冷却速度の決定を可能にし、標準的な再現可能な冷却を促進する。
特定の実施形態では、ＤＭＳＯ処理した細胞を、氷上で予め冷却し、冷却メタノールを収容するトレーに移すことができ、転じて－８０℃の機械的冷凍庫（例えば、Ｈａｒｒｉｓ又はＲｅｖｃｏ）内に定置する。メタノール浴及び試料の熱電対測定値は、１℃～３℃／分の冷却速度を示すことが好ましくあり得る。少なくとも２時間後、試料は－８０℃の温度に到達することができ、液体窒素（－１９６℃）に直接配置することができる。
完全凍結後、細胞は、長期凍結保存容器に迅速に移され得る。好ましい実施形態では、試料は、液体窒素（－１９６℃）又は蒸気（－１℃）に低温保存することができる。このような貯蔵は、高効率の液体窒素冷凍庫の利用可能性によって促進される。
細胞の操作、冷凍保存、及び長期保存のための更なる検討及び手順は、以下の例示的な参考文献：米国特許第４，１９９，０２２号、同第３，７５３，３５７号、及び同第４，５５９，２９８号、Ｇｏｒｉｎ，１９８６，Ｃｌｉｎｉｎ Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ １５（１）：１９－４８、Ｂｏｎｅ－Ｍａｒｒｏｗ Ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ，Ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ａ Ｐａｎｅｌ，Ｍｏｓｃｏｗ，Ｊｕｌｙ ２２－２６，１９６８，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ａｔｏｍｉｃ Ｅｎｅｒｇｙ Ａｇｅｎｃｙ，Ｖｉｅｎｎａ，ｐｐ．１０７－ １８６、Ｌｉｖｅｓｅｙ ａｎｄ Ｌｉｎｎｅｒ，１９８７，Ｎａｔｕｒｅ ３２７：２５５、Ｌｉｎｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．３４（９）：１ １２３－１ １３５、Ｓｉｍｉｏｎｅ，１９９２，Ｊ．Ｐａｒｅｎｔｅｒ．Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．４６（６）：２２６－３２に見出すことができる。
冷凍保存後、凍結した細胞を、当業者に既知の方法に従って使用するために解凍することができる。凍結した細胞は、好ましくは迅速に解凍され、解凍直後に冷却される。特定の実施形態では、凍結した細胞を収容するバイアルを、温水浴中でその頸状部まで浸漬することができ、穏やかな回転により、解凍するときの細胞懸濁液の混合、及び温水から内部氷塊への熱伝達の増加を確実にする。氷が完全に融解するとすぐに、直ちに氷の上にバイアルを載せることができる。
特定の実施形態では、解凍中の細胞凝集を防止する、方法を使用することができる。例示的な方法としては、ＤＮａｓｅ（Ｓｐｉｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８０，Ｃａｎｃｅｒ ４５：３０７５－３０８５）、低分子量デキストラン及びクエン酸、ヒドロキシエチルデンプン（Ｓｔｉｆｆ ｅｔ ａｌ．，１９８３，Ｃｒｙｏｂｉｏｌｏｇｙ ２０：１７－２４）などの凍結前及び／又は凍結後の添加が挙げられる。［０１６２］当業者には理解されるように、ヒトに毒性がある凍結保護剤が使用される場合、治療的使用の前に除去されるべきである。ＤＭＳＯは、深刻な毒性を有さない。
細胞の例示的な担体及び投与方法は、米国特許公開第２０１０／０１８３５６４号の１４～１５ページに記載されている。追加の医薬担体は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｄａｖｉｄ Ｂ．Ｔｒｏｙ，ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００５）に記載されている。
特定の実施形態では、細胞を培養培地から採取し、洗浄し、治療有効量で担体に濃縮することができる。例示的な担体としては、生理食塩水、緩衝生理食塩水、生理食塩水、水、Ｈａｎｋｓ溶液、リンガー溶液、Ｎｏｎｎｏｓｏｌ－Ｒ（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｓ）、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａ（Ｒ）（Ｂａｘｔｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｍｏｒｔｏｎ Ｇｒｏｖｅ，ＩＬ）、グリセロール、エタノール、及びこれらの組み合わせが挙げられる。
特定の実施形態では、担体は、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）又は他のヒト血清成分又はウシ胎児血清を補充することができる。特定の実施形態では、注入のための担体は、５％ＨＡＳ又はデキストロースを有する緩衝化生理食塩水を含む。さらなる等張剤として、三価以上の糖アルコール、例えばグリセリン、エリスリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、又はマンニトールを含む多価糖アルコールが挙げられる。
担体としては、クエン酸緩衝剤、コハク酸塩緩衝剤、酒石酸緩衝剤、フマル酸緩衝剤、グルコン酸緩衝剤、シュウ酸緩衝剤、乳酸緩衝剤、酢酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、ヒスチジン緩衝剤、及び／又はトリメチルアミン塩などの緩衝剤を挙げることができる。
安定剤は、容器壁への細胞の接着を防止するのに役立つ増量剤から添加剤までの範囲で機能することができる、広範囲の賦形剤を指す。典型的な安定剤としては、多価糖アルコール；アルギニン、リジン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アラニン、オルニチン、Ｌ－ロイシン、２－フェニルアラニン、グルタミン酸、及びスレオニンなどのアミノ酸；ラクトース、トレハロース、スタキオース、マンニトール、ソルビトール、キシリトール、リビトール、ミオニシトール、ガラクチトール、グリセロール、などの有機等又は糖アルコール、及びイノシトールなどのシクリトール；ＰＥＧ；アミノ酸ポリマー；尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、α－モノチオグリセロール、及びチオ硫酸ナトリウムなどのイオウ含有還元剤；低分子量ポリペプチド（すなわち、＜１０残基）；ＨＳＡ、ウシ血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；キシロース、マンノース、フルクトース、及びグルコースなどの単糖類；ラクトース、マルトース、及びスクロースなどの二糖類；ラフィノースなどの三糖類、及びデキストランなどの多糖類を挙げることができる。
必要な又は有益な場合、組成物は、注射部位における疼痛を和らげるためにリドカインなどの局所麻酔剤を含むことができる。
例示的な防腐剤としては、フェノール、ベンジルアルコール、メタ－クレゾール、メチルパラベン、プロピルパラベン、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、ベンザルコニウムハライド、ヘキサメトニウムクロリド、メチル又はプロピルパラベンなどのアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、及び３－ペンタノールが挙げられる。
組成物内の治療的に有効な量は、１０２細胞超、１０３細胞超、１０４細胞超、１０５細胞超、１０６細胞超、１０７細胞超、１０８細胞超、１０９細胞超、１０１０細胞超、又は１０１１細胞超であり得る。
本明細書に開示される組成物及び製剤において、細胞は、概して、１リットル以下、５００ｍＬ以下、２５０ｍＬ以下、又は１００ｍＬ以下の容積中にある。したがって、投与される細胞の密度は、典型的には、１０４細胞／ｍＬ、１０７細胞／ｍＬ、又は１０８細胞／ｍＬ超である。
本明細書では、本明細書に記載のＣＡＲ及び／又はＣＳＲ及び／又はＳＳＥをコードする核酸のいずれかを含む核酸組成物（医薬組成物など、本明細書では製剤とも呼ばれる）も提供される。いくつかの実施形態では、核酸組成物は、医薬組成物である。いくつかの実施形態では、核酸組成物は、等張剤、賦形剤、希釈剤、増粘剤、安定剤、緩衝剤、及び／若しくは防腐剤、並びに／又は精製水、水性糖溶液、緩衝液、生理食塩水、水性ポリマー溶液、又はＲＮａｓｅ遊離水などの水性媒体のいずれかを更に含む。そのような添加剤及び添加される水性媒体の量は、核酸組成物の使用形態に従って適切に選択することができる。
本明細書に開示される組成物及び製剤は、例えば、注射、注入、灌流、又は洗浄によって投与するために調製することができる。組成物及び製剤は、骨髄、静脈内、皮内、動脈内、節内、リンパ内、腹腔内、病巣内、前立腺内、膣内、直腸内、局所内、髄腔内、腫瘍内、筋肉内、膀胱内、及び／又は皮下の注射のために更に製剤化することができる。
インビボ投与に使用される製剤は、無菌でなければならない。これは、例えば、滅菌濾過膜に通すた濾過によって容易に達成される。
ＸＶＩＩ．投与量及び投与
個体（ヒトなど）に投与される組成物の用量は、特定の組成、投与様式、及び治療される疾患の種類によって変化し得る。いくつかの実施形態では、組成物の量は、個体において完全奏効をもたらすのに十分である。いくつかの実施形態では、組成物の量は、個体において部分奏効をもたらすのに十分である。いくつかの実施形態では、投与される組成物の量（例えば、単独で投与される場合）は、組成物で治療される個体の集団の中で、約２％、４％、６％、８％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６４％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、又は９０％のいずれかを超える全奏効率を得るのに十分である。本明細書に記載の方法の治療に対する個体の奏功は、例えば、Ｒ腫瘍成長阻害率（％ＴＧＩ）に基づいて判定することができる。
いくつかの実施形態では、組成物の量は、個体の全生存期間を延長するのに十分である。いくつかの実施形態では、組成物の量（例えば、単独（ａｌｏｎｇ）で投与される場合）は、組成物で治療される個体の集団の中で、約２％、４％、６％、８％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、又は７７％のいずれかを超える臨床的有用性を生じさせるのに十分である。
いくつかの実施形態では、組成物の量は、治療を受ける前の同じ被験体における対応する腫瘍サイズ、癌細胞の数、若しくは腫瘍成長速度と比べて、又は治療を受けていない他の被験体における対応する活性と比べて、少なくとも約２％、４％、６％、８％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％又は１００％のいずれかだけ腫瘍のサイズを減少させる、癌細胞の数を減少させる、又は腫瘍の成長速度を減少させるのに十分な量である。精製酵素を使用するインビトロアッセイ、細胞ベースのアッセイ、動物モデル、又はヒト試験などの標準的な方法を使用して、この効果の大きさを測定することができる。
いくつかの実施形態では、組成物の量は、毒性作用（すなわち、臨床的に許容可能なレベルの毒性を超える作用）を誘導するレベル、又は組成物が個体に投与されるときに潜在的な副作用を制御又は許容することができるレベルを下回る。いくつかの実施形態では、組成物の量は、同じ投与レジメンに従った組成物の最大許容用量（ＭＴＤ）に近い。いくつかの実施形態では、組成物の量は、ＭＴＤの約８０％、９０％、９５％、又は９８％のいずれかを上回る。いくつかの実施形態では、組成物の量は、約０．００１μｇ～約１０００μｇの範囲に含まれる。上記の態様のいずれかのいくつかの実施形態では、組成物の有効量は、総体重の約０．１μｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇの範囲内である。
組成物は、例えば、静脈内、動脈内、腹腔内、肺内、経口、経鼻、吸入、静脈内、筋肉内、気管内、皮下、眼内、髄腔内、頭蓋内、脳内、脳室内、経粘膜、及び経皮を含む様々な経路を介して、個体（ヒトなど）に投与することができる。いくつかの実施形態では、組成物の連続徐放性製剤を使用してよい。いくつかの実施形態では、組成物は、静脈内投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、動脈内投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、腹腔内投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、髄腔内投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、頭蓋内投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、脳内投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、脳室内投与される。いくつかの実施形態では、組成物は、経鼻投与される。
ＸＶＩＩＩ．製造
本発明のいくつかの実施形態では、癌（例えば、副腎皮質癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、胆管細胞癌、大腸直腸癌、食道癌、神経膠芽腫、神経膠腫、肝細胞癌、頭頸部癌、腎臓癌、白血病、肺癌、リンパ腫、黒色腫、中皮腫、多発性骨髄腫、膵臓癌、褐色細胞腫、形質細胞腫、神経芽腫、卵巣癌、前立腺癌、肉腫、胃癌、子宮癌、若しくは甲状腺癌）又はウイルス感染（例えば、ＣＭＶ、ＥＢＶ、ＨＢＶ、ＫＳＨＶ、ＨＰＶ、ＭＣＶ、ＨＴＬＶ－１、ＨＩＶ－１、又はＨＣＶによる感染）などの標的抗原陽性疾患の治療に有用な材料を含む製品が提供される。製品は、容器と、この容器上にある又はこの容器に付随したラベル又は添付文書と、を含むことができる。好適な容器としては、例えば、瓶、バイアル、シリンジなどが挙げられる。容器は、ガラス又はプラスチックなどの様々な材料から形成されていてよい。一般に、容器は、本明細書に記載の疾患又は障害を治療するのに有効な組成物を保持するものであり、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有する静脈輸液バッグ又はバイアルであってよい）。組成物中の少なくとも１つの活性剤は、表面上に本発明のＣＡＲ及びＣＳＲを提示する免疫細胞である。ラベル又は添付文書は、特定の病態を治療するために組成物が使用されることを示す。ラベル又は添付文書は、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物を患者に投与するための説明書を更に含む。本明細書に記載の併用療法を含む製品及びキットも想到される。
添付文書は、治療用製品の商品パッケージに習慣的に含まれている、このような治療用製品の使用に関しての指示、使用法、投薬量、投与、禁忌及び／又は警告に関する情報を記載している説明書を参照する。いくつかの実施形態では、添付文書は、組成物が、標的抗原陽性癌（副腎皮質癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、胆管細胞癌、大腸直腸癌、食道癌、神経膠芽腫、神経膠腫、肝細胞癌、頭頸部癌、腎臓癌、白血病、肺癌、リンパ腫、黒色腫、中皮腫、多発性骨髄腫、膵臓癌、褐色細胞腫、形質細胞腫、神経芽腫、卵巣癌、前立腺癌、肉腫、胃癌、子宮癌、又は甲状腺癌など）の治療のために使用されることを示す。他の実施形態では、添付文書は、組成物が標的抗原陽性ウイルス感染（例えば、ＣＭＶ、ＥＢＶ、ＨＢＶ、ＫＳＨＶ、ＨＰＶ、ＭＣＶ、ＨＴＬＶ－１、ＨＩＶ－１、又はＨＣＶによる感染）の治療のために使用されることを示す。
加えて、製品は、静菌注射用水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンガー液及びブドウ糖液など、医薬上許容される緩衝液を含む第２の容器を更に含んでよい。これは、他の緩衝液、希釈液、濾過器、針、及び注射器を含めて、商業上及び利用者の立場からの他の好ましい材料を更に含んでよい。
例えば、本明細書に記載される標的抗原陽性疾患又は障害の治療のために、所望により製品と組み合わせて、様々な目的で有用であるキットも提供される。本発明のキットは、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物（又は単位剤形及び／又は製品）を収容する１つ以上の容器を含み、いくつかの実施形態では、別の薬剤（本明細書に記載の薬剤など）及び／又は本明細書に記載される方法のいずれかに従って使用するための説明書を更に含む。このキットは、処置に適している個体の選択についての説明を更に含んでよい。本発明のキットで提供される説明書は、典型的には、ラベル又は添付文書（例えば、キットに含まれる紙シート）に書かれた説明書であるが、機械で読み取り可能な説明書（例えば、磁気又は光学保存ディスクに保持された説明書）も許容可能である。
例えば、いくつかの実施形態では、キットは、表面上にＣＡＲ及びＣＳＲを提示する免疫細胞を含む組成物を含む。いくつかの実施形態では、キットは、ａ）表面上にＣＡＲ及びＣＳＲを提示する免疫細胞を含む組成物と、ｂ）有効量の少なくとも１種の他の薬剤と、を含み、他の薬剤は、ＭＨＣタンパク質の発現を増加させ、及び／又はＭＨＣタンパク質によるペプチドの表面提示を強化する（例えば、ＩＦＮγ、ＩＦＮβ、ＩＦＮα、又はＨｓｐ９０阻害剤）。いくつかの実施形態では、キットは、ａ）表面上にＣＡＲ及びＣＳＲを提示する免疫細胞を含む組成物と、ｂ）標的抗原陽性疾患（癌又はウイルス感染など）の治療のために、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物を個体に投与するための指示書と、を含む。いくつかの実施形態では、キットは、ａ）表面上にＣＡＲ及びＣＳＲを提示する免疫細胞を含む組成物と、ｂ）有効量の少なくとも１種の他の薬剤であって、ＭＨＣタンパク質の発現を増加させ、及び／又はＭＨＣタンパク質によるペプチドの表面提示を強化する他の薬剤（例えば、ＩＦＮγ、ＩＦＮβ、ＩＦＮα、又はＨｓｐ９０阻害剤）と、ｃ）標的抗原陽性疾患（癌又はウイルス感染など）の治療のために、ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物及び他の薬剤を個体に投与するための指示書と、を含む。ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物及び他の薬剤は、別個の容器又は単一の容器内に存在し得る。例えば、キットは、１つの別個の組成物又は２つ以上の組成物を含んでもよく、１つの組成物はＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞を含み、別の組成物は他の薬剤を含む。
いくつかの実施形態では、キットは、ａ）ＣＡＲ及びＣＳＲを含む１つ以上の組成物と、ｂ）ＣＡＲ及びＣＳＲを、免疫細胞（例えば、個体に由来する免疫細胞、例えばＴ細胞又はナチュラルキラー細胞など）と組み合わせて、ＣＡＲ及びＣＳＲを表面に提示する免疫細胞を含む組成物を形成し、標的抗原陽性疾患（癌又はウイルス感染など）の治療のためにＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物を個体に投与するための指示書と、を含む。いくつかの実施形態では、キットは、ａ）ＣＡＲ及びＣＳＲを含む１つ以上の組成物と、ｂ）免疫細胞（細胞傷害性細胞など）と、を含む。いくつかの実施形態では、キットは、ａ）ＣＡＲ及びＣＳＲを含む１つ以上の組成物と、ｂ）免疫細胞（細胞傷害性細胞など）と、ｃ）ＣＡＲ及びＣＳＲを免疫細胞と組み合わせて、ＣＡＲ及びＣＳＲを表面に提示する免疫細胞を含む組成物を形成し、標的抗原陽性疾患（癌又はウイルス感染など）の治療のためにＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物を個体に投与するための指示書と、を含む。
いくつかの実施形態では、キットは、ＣＡＲ及びＣＳＲをコードする核酸（又は核酸のセット）を含む。いくつかの実施形態では、キットは、ａ）ＣＡＲ及びＣＳＲをコードする核酸（又は核酸のセット）と、ｂ）核酸（又は核酸のセット）を発現するための宿主細胞（免疫細胞など）を含む。いくつかの実施形態では、キットは、ａ）ＣＡＲ及びＣＳＲをコードする核酸（又は核酸のセット）と、ｂ）ｉ）宿主細胞（例えば、Ｔ細胞などの免疫細胞など）中でＣＡＲ及びＣＳＲを発現すること、ｉｉ）ＣＡＲ及びＣＳＲを発現する宿主細胞を含む組成物を調製すること、並びにｉｉｉ）ＣＡＲ及びＣＳＲを発現する宿主細胞を含む組成物を、標的抗原陽性疾患（癌又はウイルス感染など）の治療のために個体に投与することのための指示書と、を含む。いくつかの実施形態では、宿主細胞は個体に由来する。いくつかの実施形態では、キットは、ａ）ＣＡＲ及びＣＳＲをコードする核酸（又は核酸のセット）と、ｂ）核酸（又は核酸のセット）を発現するための宿主細胞（免疫細胞など）と、ｃ）宿主細胞中でＣＡＲ及びＣＳＲを発現すること、ｉｉ）ＣＡＲ及びＣＳＲを発現する宿主細胞を含む組成物を調製すること、並びにｉｉｉ）ＣＡＲ及びＣＳＲを発現する宿主細胞を含む組成物を、標的抗原陽性疾患（癌又はウイルス感染など）の治療のために個体に投与することのための指示書と、を含む。
本発明のキットは、好適なパッケージに入っている。好適なパッケージには、バイアル、ボトル、ジャー、可撓性パッケージ（例えば、密閉Ｍｙｌａｒ又はプラスチック袋）などが挙げられるが、これらに限定されない。キットは、場合により、緩衝材及び解釈的情報など追加構成要素を提供してよい。したがって、本願はまた、バイアル（密閉バイアルなど）、ボトル、ジャー、可撓性パッケージなどを含む製品を提供する。
ＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物の使用に関する説明書は、意図する治療向けの用量、投与スケジュール、及び投与経路に関する情報を概ね含む。容器は、単位用量、大量容器（例えば、複数回用量パッケージ）又は亜単位用量であってよい。例えば、本明細書に開示するように十分な用量のＣＡＲ＋ＣＳＲ免疫細胞組成物を含んで、１週間、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、２週間、３週間、４週間、６週間、８週間、３か月、４か月、５か月、７か月、８か月、９か月、又はそれ以上のうちのいずれかなど長期間にわたって個体の有効な治療を提供するキットを提供し得る。キットはまた、複数のＣＡＲ及びＣＳＲの単位用量と、医薬組成物と、使用説明書と、を含んでよく、例えば、院内薬局及び調剤薬局など薬局での保管及び使用に十分な量でパッケージ化される。
当業者は、本発明の範囲及び趣旨内でいくつかの実施形態が可能であることを理解するであろう。次に、以下の非限定的な実施例を参照して、本発明を更に詳細に説明する。以下の実施例は、本発明を更に説明するが、当然のことながら、決してその範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
材料及び方法
細胞試料、細胞株、及び抗体
細胞株ＨｅｐＧ２（ＡＴＣＣ ＨＢ－８０６５；ＨＬＡ－Ａ２＋、ＡＦＰ＋、ＧＰＣ３＋）、ＳＫ－ＨＥＰ－１（ＡＴＣＣ ＨＴＢ－５２；ＨＬＡ－Ａ２＋、ＡＦＰ－）、Ｒａｊｉ（ＡＴＣＣ ＣＣＬ－８６；ＣＤ１９＋、ＣＤ２２＋）、Ｎａｌｍ６（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５６７；ＣＤ１９＋）、Ｊｕｒｋａｔ細胞（ＡＴＣＣ ＴＩＢ－１５２、ＣＤ２０－、ＣＤ２２－）、ＲＰＭＩ－８２２６（ＡＴＣＣ ＣＲＭ－ＣＣＬ－１５５、ＲＯＲ１＋）、ＬＮＣａＰ（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１７４０；ＰＳＭＡ＋）、及びＩＭ９（ＡＴＣＣ ＣＣＬ－１５９；ＨＬＡ－Ａ２＋、ＮＹ－ＥＳＯ－ｌ＋）を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手した。
ＨｅｐＧ２は、ＡＦＰ及びＧＰＣ３を発現する肝細胞癌細胞株であり、ＳＫ－ＨＥＰ１は、ＡＦＰを発現しない肝腺癌細胞株である。ＳＫ－ＨＥＰｌ－ＡＦＰ ＭＧは、ＳＫ－ＨＥＰ１親細胞株を、ミニ遺伝子カセットを発現しているＡＦＰ１５８ペプチドで形質導入することによって生成され、ＳＫ－ＨＥＰ１におけるＡＦＰ１５８／ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１複合体の高いレベルの細胞表面発現をもたらす。ＳＫ－ＨＥＰｌ－ＡＦＰ ＭＧ－ＧＰＣ３は、ＳＫ－ＨＥＰ１－ＡＦＰ－ＭＧ細胞株をＧＰＣ３発現カセットで更に形質導入することによって生成され、ＳＫ－ＨＥＰ１におけるＡＦＰ１５８／ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１複合体及びＧＰＣ３の高いレベルの細胞表面発現をもたらす。Ｒａｊｉは、ＣＤ１９及びＣＤ２２を発現するバーキットリンパ腫細胞株である。Ｎａｌｍ６は、ＣＤ１９についても発現する白血病細胞株である。Ｊｕｒｋａｔは、ＣＤ２２を発現しない急性Ｔ細胞リンパ腫細胞株である。ＲＰＭＩ－８２２６細胞は、ＲＯＲ１を発現する骨髄腫細胞である。ＬＮＣａＰ前立腺腫瘍細胞株は、ＰＳＭＡを発現する。ＩＭ９は、ＮＹ－ＥＳＯ－１を発現する多発性骨髄腫細胞株である。全ての細胞株を、３７℃／５％ＣＯ２で、１０％ＦＢＳ及び２ｍＭグルタミンを補充したＲＰＭＩ１６４０又はＤＭＥＭ中で培養する。
ヒト又はマウスＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＣＲ７、ＣＤ４５ＲＡ、又はｍｙｃタグに対する抗体は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎから購入し、抗ＣＤ２２及びＣＤ２０抗体は、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄから購入する。
ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１特異的抗体、ＣＤ１９特異的抗体、ＣＤ２０特異的及びＣＤ２２特異的抗体、ＲＯＲ１特異的抗体、ＧＰＣ３特異的抗体、ＰＳＭＡ特異的抗体、及びＮＹ－ＥＳＯ－１抗体は、Ｅｕｒｅｋａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社内で開発し、生成する。フローサイトメトリーデータをＢＤ ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩを使用して収集し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアパッケージを使用して分析する。
全てのペプチドを購入し、Ｅｌｉｍ Ｂｉｏｐｈａｒｍａにより合成する。ペプチドは、＞９０％の純度である。ペプチドを１０ｍｇ／ｍＬでＤＭＳＯに溶解させ、又は生理食塩水で希釈し、－８０℃で凍結する。ビオチン化単鎖ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１及び対照ペプチド／ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１複合体単量体を、組換えＨＬＡ－Ａ＊０２：０１及びβ－２ミクログロブリン（β２Ｍ）を用いてペプチドを再折り畳みすることにより生成する。単量体は、ＢｉｒＡ酵素によるＨＬＡ－Ａ＊０２：０１細胞外ドメイン（ＥＣＤ）のＣ末端に連結されたＢＳＰペプチドを介してビオチン化する。蛍光標識ストレプトアビジンをビオチン化ペプチド／ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１複合体単量体と混合して、蛍光標識されたペプチド／ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１四量体を形成する。
ＣＡＲを含むレンチウイルスは、例えば、ＣＡＲをコードするベクターで２９３Ｔ細胞をトランスフェクションすることによって生成する。初代培養ヒトＴ細胞を、１００Ｕ／ｍＬのインターロイキン－２（ＩＬ－２）の存在下で、ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズ（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）による１日間の刺激後に形質導入に使用する。濃縮レンチウイルスを、レトロネクチン（Ｔａｋａｒａ）コーティングされた６ウェルプレート中のＴ細胞に９６時間適用する。抗ＡＦＰ／ＭＨＣ ＣＡＲ（又は「抗ＡＦＰ ＣＡＲ」若しくは「抗ＡＦＰ－ＣＡＲ」）及び抗ＡＦＰ／ＭＨＣ ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３ ＣＳＲ（又は「抗ＡＦＰ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＳＲ」）コンストラクトの形質導入効率は、フローサイトメトリーによって評価する。抗ＡＦＰ ＣＡＲの場合、ＰＥ結合ストレプトアビジン又は抗ｍｙｃ抗体をそれぞれ有するビオチン化ＡＦＰ１５８／ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１四量体（「ＡＦＰ１５８四量体」）を使用した。抗ＧＰＣ３ ＣＳＲの場合、抗ｍｙｃ抗体を使用した。繰り返しフローサイトメトリー分析を５日目及びその後３～４日おきに行う。抗ＣＤ１９ＣＡＲの場合、アッセイは、ＰＥ結合抗ＣＤ１９抗イディオタイプ抗体を使用して行った。
細胞株は、ＣＡＲ、若しくはＣＡＲ及びＣＳＲの両方をコードするベクター、又は、１つはＣＡＲをコードし、１つはＣＳＲをコードする２つのベクターで、形質導入される。形質導入の５日後、抗ｍｙｃ抗体を用いるウェスタンブロットのため、細胞溶解物を生成する。
腫瘍細胞傷害性を、Ｃｙｔｏｘ ９６非放射性ＬＤＨ細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）によりアッセイする。ＣＤ３＋Ｔ細胞は、ＣＤ１４、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３６、ＣＤ５６、ＣＤ６６ｂ、ＣＤ１２３、グリコホルリンＡ発現細胞を陰性に疲弊させるＥａｓｙＳｅｐヒトＴ細胞単離キット（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、ＰＢＭＣ濃縮全血から調製する。ヒトＴ細胞を活性化し、例えば、製造元のプロトコルに従ってＣＤ３／ＣＤ２８ Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で増殖させる。活性化Ｔ細胞（ＡＴＣ）を、１０％ＦＢＳ＋１００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２を有するＲＰＭＩ１６４０培地で培養して維持し、７～１４日目に使用する。活性化Ｔ細胞（免疫細胞）及び標的細胞を、様々なエフェクター対標的比（例えば、２．５：１又は５：１）で１６時間共培養し、細胞傷害性についてアッセイする。
実施例１Ａ－短期インビトロ癌細胞死滅アッセイ
活性化ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞（ＣＡＲと、ＣＤ３０共刺激ドメインを含むＣＳＲとを含むＴ細胞）及び標的細胞を、αＣＤ１９又はαＡＦＰ抗体と、５：１の比率で１６時間共培養する。培養上清中のＬＤＨ活性を測定することによって、特異的死滅を測定する。腫瘍細胞傷害を、ＬＤＨ細胞傷害アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）によってアッセイする。ＡｌｌＣｅｌｌｓから購入したヒトＴ細胞を活性化し、製造元のプロトコルに従ってＣＤ３／ＣＤ２８ Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で増殖させる。活性化Ｔ細胞（ＡＴＣ）を、１０％ＦＢＳ＋１００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２を有するＲＰＭＩ１６４０培地で培養して維持し、７～１４日目に使用する。Ｔ細胞は、ＦＡＣＳ分析によって＞９９％ＣＤ３＋である。活性化Ｔ細胞（エフェクター細胞）及び標的細胞であるＮａｌｍ６又はＨｅｐＧ２細胞を、それぞれ、異なる濃度のαＣＤ１９又はαＡＦＰ抗体と、５：１の比率で１６時間共培養する。その後、培養上清中のＬＤＨ活性を測定することによって、細胞傷害を測定する。
ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞は、ＣＳＲを含まない対応するＣＡＲ Ｔ細胞よりも高い死滅効果を有し、ＣＡＲ＋ＣＤ２８（又は他の共刺激ドメイン）－ＣＳＲ Ｔ細胞に勝るとも劣らず、ほぼ同じ死滅効果を有する。
実施例１Ｂ－短期インビトロ癌細胞死滅アッセイ
様々なＣＡＲ Ｔ細胞（第１世代及び第２世代ＣＡＲ Ｔ細胞を含む）の短期死滅能を比較するアッセイが実施される。この実施例で使用したエフェクター細胞は、以下を含む。
１）ＣＳＲを含まないＣＡＲ Ｔ細胞、
２）少なくとも細胞内ＣＤ３０共刺激ドメイン（ＣＤ３０ ＩＣドメイン）を含み、ＣＤ３０膜貫通ドメイン（「ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞」と称する）又は異なる共刺激分子の膜貫通（ＴＭ）ドメイン、例えば、ＣＤ２８ ＴＭ（「ＣＡＲ＋ＣＤ２８Ｔ－ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞」と称する）のいずれかを有する、ＣＳＲを有するＣＡＲ Ｔ細胞、
３）少なくとも細胞内ＣＤ２８共刺激ドメインを含み、ＣＤ２８膜貫通ドメイン（「ＣＡＲ＋ＣＤ２８－ＣＳＲ Ｔ細胞」と称する）又は異なる共刺激分子の膜貫通（ＴＭ）ドメイン、例えば、ＣＤ３０ ＴＭ（「ＣＡＲ＋ＣＤ３０Ｔ－ＣＤ２８－ＣＳＲ Ｔ細胞」と称する）のいずれかを有する、ＣＳＲを有するＣＡＲ Ｔ細胞、
４）少なくとも細胞内４－１ＢＢ共刺激ドメインを含み、４－１ＢＢ ＴＭドメイン（「ＣＡＲ＋４１ＢＢ－ＣＳＲ Ｔ細胞」と称する）又は異なる共刺激分子のＴＭドメイン、例えば、ＣＤ２８ ＴＭ（「ＣＡＲ＋ＣＤ２８Ｔ－４１ＢＢ－ＣＳＲ Ｔ細胞」と称する）のいずれかを有する、ＣＳＲを有するＣＡＲ Ｔ細胞、及び
５）少なくとも細胞内ＤＡＰ１０共刺激ドメインを含み、ＤＡＰ１０ ＴＭドメイン（「ＣＡＲ＋ＤＡＰ１０－ＣＳＲ Ｔ細胞」と称する）又は異なる共刺激分子のＴＭドメイン、例えば、ＣＤ２８ ＴＭ（「ＣＡＲ＋ＣＤ２８Ｔ－ＤＡＰ１０－ＣＳＲ Ｔ細胞」と称する）のいずれかを有する、ＣＳＲを有するＣＡＲ Ｔ細胞。
使用され得るその他コンストラクト（contructs）又はコンストラクト（contrusts）／Ｔ細胞の詳細な説明が、本明細書の例えば、実施例９に開示されている。
活性化エフェクター細胞及びそれらの対応する標的細胞を、Ｅ：Ｔ比２：１～５：１で１６～２４時間共培養した。培養上清中のＬＤＨ活性を測定することによって、特異的死滅を測定した。腫瘍細胞傷害を、ＬＤＨ細胞傷害アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用してアッセイした。ＡｌｌＣｅｌｌｓから購入したヒトＴ細胞を活性化し、製造元のプロトコルに従ってＣＤ３／ＣＤ２８ Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で増殖させた。活性化Ｔ細胞（ＡＴＣ）を、１０％ＦＢＳ＋１００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２を有するＲＰＭＩ１６４０培地で培養して維持し、７～１４日目に使用した。Ｔ細胞は、ＦＡＣＳ分析によって＞９９％ＣＤ３＋であった。活性化Ｔ細胞（エフェクター細胞）及び標的細胞例えば、ＨｅｐＧ２細胞を、２：１～５：１の比で１６～２４時間、典型的には１６時間共培養した。その後、培養上清中のＬＤＨ活性を測定することによって、細胞傷害を測定した。
様々なＣＡＲ Ｔ細胞の短期死滅能は、標的細胞とのエンゲージメント時にＴ細胞から放出されるサイトカインの量／レベルを測定することによっても決定した。１６時間の共培養後の上清中のサイトカイン放出のレベルを、ＢｉｏＲａｄ Ｂｉｏ－Ｐｌｅｘキットを使用するＬｕｍｉｎｅｘ Ｍａｇｐｉｘ法、又はＥＬＩＳＡによって定量化した。高い細胞傷害性効力を有するＴ細胞は、ＴＮＦα、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮγ、及びＩＬ－２などのＴ細胞活性に関連した高いレベルのサイトカインを分泌する。
少なくともＣＤＲ３０ ＩＣドメインを含むＣＳＲを有するＣＡＲ Ｔ細胞は、ＣＳＲを含まない対応するＣＡＲ Ｔ細胞よりも高い死滅効果を有し、ＣＤ３０ ＩＣドメインを有さないが、異なる共刺激分子のＩＣドメイン、例えば、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、又はＤＡＰ１０のＩＣドメインを有するＣＳＲを含む対応するＣＡＲ Ｔ細胞とほぼ同等以上の死滅効果を有する。
実施例２－増殖能及び持続性アッセイ
遺伝的に改変されたＴ細胞の増殖及び持続は、癌を治療する際の養子Ｔ細胞移植療法の成功に重要である。Ｔ細胞増殖及び持続性に対するＣＳＲの効果をアッセイするために、本発明者らは、細胞内色素ＣＦＳＥでＴ細胞を標識し、腫瘍細胞で刺激したときにＴ細胞が分裂するときの色素の希釈を観察する。また、示された日に残ったＣＦＳＥ陽性細胞の数を計数することにより、Ｔ細胞の持続性を測定することも可能である。
それぞれのＴ細胞を一晩血清飢餓処理し、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ ＣＦＳＥ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｃ３４５５４）を用いてＣＦＳＥで標識する。５０，０００～１００，０００個のＴ細胞を２：１のエフェクター細胞対標的細胞比（Ｅ：Ｔ比）でインキュベートし、示された日に、フローサイトメトリーを使用してＴ細胞が分裂するときのＣＦＳＥ色素の連続希釈を観察する。Ｔ細胞の総数をＦＡＣｓで計数する。
少なくともＣＤＲ３０ ＩＣドメインを含むＣＳＲを有するＣＡＲ Ｔ細胞は、ＣＳＲを含まない対応するＣＡＲ Ｔ細胞よりも増殖し、ＣＤ３０ ＩＣドメインを有さないが、異なる共刺激分子のＩＣドメイン、例えば、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、又はＤＡＰ１０のＩＣドメインを有するＣＳＲを含む対応するＣＡＲ Ｔ細胞とほぼ同等以上増殖する。
実施例３Ａ－数週間エンゲージメント後のインビトロＴ細胞及び腫瘍細胞数
標的細胞を計数するためのＦＡＣＳ系アッセイを使用して、ＣＡＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞の長期死滅能を比較する。ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞による長期死滅もまた、Ｒａｊｉ細胞との共培養によって測定される。全てのＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞は、標的細胞エンゲージメント後に同等の生存を示す。
ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞は、腫瘍細胞の複数回のエンゲージメントにわたって長期間持続し、ＣＳＲを含まない対応するＣＡＲ Ｔ細胞よりも多く、ＣＡＲ＋ＣＤ２８（又は他の共刺激ドメイン）－ＣＳＲ Ｔ細胞とほぼ同程度の腫瘍細胞を死滅させる。
実施例３Ｂ－数週間エンゲージメント後の長期インビトロＴ細胞及び標的細胞数
Ｔ細胞及び標的細胞を計数するためのＦＡＣＳ系アッセイを使用して、ＣＳＲを含まないか、又は他の共刺激断片を含むＣＳＲを有する、ＣＡＲ Ｔ細胞によるＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞の長期生存及び標的細胞死滅能を比較する。典型的には、５０，０００～１００，０００個のＴ細胞を、２：１のエフェクター細胞対標的細胞比（Ｅ：Ｅ：Ｔ比）でインキュベートする。細胞を、様々な日に、典型的には最初のエンゲージメント後７日毎に標的細胞に再負荷する。残りの標的細胞及び総Ｔ細胞の数を、各標的細胞エンゲージメント後の様々な日において、ＦＡＣＳで定量化する。
少なくともＣＤＲ３０ ＩＣドメインを含むＣＳＲを有するＣＡＲ Ｔ細胞は、ＣＳＲを含まない対応するＣＡＲ Ｔ細胞よりも、複数回のエンゲージメントにわたってより長期間持続／生存し、より多くの腫瘍細胞を死滅させ、ＣＤ３０ ＩＣドメインを有さないが、異なる共刺激分子のＩＣドメイン、例えば、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、又はＤＡＰ１０のＩＣドメインを有するＣＳＲを含む対応するＣＡＲ Ｔ細胞とほぼ同等以上生存し、及び／又は腫瘍細胞を死滅させる。
実施例４－インビボサイトカイン放出
インビボでのサイトカイン放出レベルを決定するために、臨床のサイトカイン放出症候群に関連するものを含む主要なサイトカインを、ＮＡＬＭ－６腫瘍担持マウスにＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞を投与した後、１６、２４、４８、７２時間後に分析する。ＢｉｏＲａｄ Ｂｉｏ－Ｐｌｅｘキットを使用して、Ｌｕｍｉｎｅｘ Ｍａｇｐｉｘ技術によりサイトカインレベルを定量した。
ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞は、ＣＳＲを含まない対応するＣＡＲ Ｔ細胞よりも、高いレベルのＴＮＦα、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮγ、及びＩＬ－２などのＴ細胞活性に関連するサイトカインを分泌する。例えば、ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞は、ＣＡＲ＋ＣＤ２８（又は他の共刺激ドメイン）－ＣＳＲ Ｔ細胞よりも、高いレベルのＴＮＦα、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮγ、及びＩＬ－２などのＴ細胞活性に関連するサイトカインを分泌する。
実施例５Ａ－経時的なＴ細胞サブセットの分化（ＣＣＲ７／ＣＤ４５ＲＡ）
ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞の増殖及び生存は、２つの独立したフローサイトメトリーアッセイにおいて標的細胞エンゲージメントの前後に測定される。ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞のＦＡＣＳ分析は、標的エンゲージメントに先立ち、ＣＡＲ＋ＣＤ２８（又は他の共刺激ドメイン）－ＣＳＲ Ｔ細胞と比較して、Ｔ細胞分化マーカーであるＣＣＲ７及びＣＤ４５ＲＡの発現レベルが高いことを示す。
ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞は、ＣＡＲ＋ＣＤ２８（又は他の共刺激ドメイン）－ＣＳＲ Ｔ細胞と比較して、メモリー及びナイーブＴ細胞の割合が増加している。
実施例５Ｂ－経時的なＴ細胞サブセットの分化（ＣＣＲ７／ＣＤ４５ＲＡ）及びメモリーＴ細胞の定量化
ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞は、標的刺激後に、セントラルメモリー及びエフェクターメモリーＴ細胞を含む、高いメモリーＴ細胞集団に発達し、維持される。ＣＡＲのみ又は、異なる共刺激断片、例えば、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、又はＤＡＰ１０のＩＣドメインを含むＣＳＲと共発現するＣＡＲの発現と比較して、メモリーＴ細胞への発達及び維持するためのＴ細胞の能力に対するＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲの発現の効果を決定するために、メモリーＴ細胞マーカーであるＣＣＲ７及びＣＤ４５ＲＡの細胞表面発現を測定する。本分野で知られているように、高いＣＣＲ７発現レベル及び低いＣＤ４５ＲＡ発現レベルを有するＴ細胞は、セントラルメモリーＴ細胞であり、低ＣＣＲ７及び低ＣＤ４５ＲＡ発現レベルを有するＴ細胞は、エフェクターメモリーＴ細胞であり、低ＣＣＲ７及び高ＣＤ４５ＲＡ発現レベルを有するＴ細胞は、エフェクターＴ細胞であり、一方、高ＣＣＲ７及び高ＣＤ４５ＲＡを有するＴ細胞は、標的／抗原の負荷／認識前のＴ細胞の初期タイプであるナイーブＴ細胞であると見なされる（Ｍａｈｎｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．４３（１１）：２７９７－８０９，２０１３）。抗原との遭遇に応答すると、ナイーブＴ細胞が増殖し、エフェクター細胞に分化し、そのほとんどが標的を破壊する仕事を実行したのち死滅するが、少数の貯蔵されたＴ細胞は最終的には、特定の標的に対するＴ細胞免疫を蓄えることができる、長寿命のメモリーＴ細胞に発達する。メモリーＴ細胞の中で、セントラルメモリーＴ細胞は、エフェクターメモリーＴ細胞よりも長い寿命を有し、エフェクターメモリーＴ細胞を生成することができるが、その逆はないことが分かっている。したがって、メモリーＴ細胞、特にセントラルメモリーＴ細胞に発達し、維持する力は、成功の可能性を秘めたＴ細胞療法の重要かつ所望される特徴である。
ＣＡＲコンストラクトのみを発現しているエフェクター細胞を、標的細胞と共に２：１のＥ：Ｔ比（例えば、９６ウェルプレートの各ウェルに、１００，０００個の受容体＋ Ｔ細胞と５０，０００個の標的細胞）で７日間インキュベートする。その後この細胞に、７日毎にウェル当たり５０，０００～１００，０００個の標的細胞を再負荷する。
ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ及びＣＡＲ＋他のＣＳＲ Ｔ細胞を、標的細胞と共に、１：２のＥ：Ｔ比（例えば、各ウェルに、２５，０００個の受容体＋Ｔ細胞と５０，０００個の標的細胞）で７日間インキュベートする。その後この細胞に、７日毎にウェル当たり５０，０００～１００，０００個の標的細胞を再負荷する。
いくつかの実験では、ＣＡＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞及び標的細胞混合物を、４回目及び５回目の標的細胞エンゲージメント（Ｅ４及びＥ５）の前に１：６に希釈し、著しいＴ細胞増殖に起因するＴ細胞の過密状態を回避し、これまで残った細胞のうちの６分の１個のみが５０，０００～１００，０００個の標的細胞で再負荷される。
各標的細胞エンゲージメント後の選択された日に、各試料由来のウェル内の細胞混合物全体を、ＣＣＲ７及びＣＤ４５ＲＡに対する抗体で染色し、フローサイトメトリーによって分析する。受容体＋Ｔ細胞数を計数し、細胞を、ＣＣＲ７及びＣＤ４５ＲＡの発現レベルに基づいて様々なＴ細胞タイプ、すなわち、セントラルメモリーＴ細胞（ＣＤ４５ＲＡ－ＣＣＲ７＋）、エフェクターメモリーＴ細胞（ＣＤ４５ＲＡ－ＣＣＲ７－）、エフェクターＴ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＣＲ７－）、及びナイーブＴ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＣＲ７＋）に分類する。受容体＋Ｔ細胞の総数のうち様々なタイプのＴ細胞の割合を計算する。いくつかの実験では、細胞を更にＣＤ８又はＣＤ４に対する抗体で染色して、計数されたＴ細胞のＣＤ８－ＣＤ４特性を決定する。
ＣＡＲ又はＣＡＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞の増殖及び生存は、標的細胞エンゲージメントの前後に測定する。少なくともＣＤ３０ ＩＣドメインを含むＣＳＲを有するＣＡＲ Ｔ細胞は、標的細胞とのエンゲージメント時に、ＣＡＲのみを発現している、又は、ＣＡＲと、ＣＤ３０ ＩＣドメインを有さないが、異なる共刺激分子のＩＣドメイン、例えば、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、又はＤＡＰ１０のＩＣドメインを有するＣＳＲとを共発現しているＴ細胞よりも高く、多くの数及び高い割合のセントラルメモリーＴ細胞に発達して維持することができる。
実施例６－標的細胞と共培養後のＴ細胞におけるＴ細胞疲弊マーカーの発現
ＰＤ－１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、及びＴＩＧＩＴなどの分子は、Ｔ細胞が機能を失う際にＴ細胞上に蓄積する抑制性受容体である。この現象のために、これらの分子の発現は、疲弊したＴ細胞のマーカーとして知られる。抗原刺激時にＣＡＲ＋ＣＳＲ形質導入細胞上に発現する疲弊マーカーのレベルを調べるため、ＣＤ３＋Ｔ細胞を、ＥａｓｙＳｅｐヒトＴ細胞単離キット（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してＰＢＭＣ濃縮全血から調製し、上記のＣＤ３／ＣＤ２８Ｄｙｎａｂｅａｄｓで活性化する。活性化して増殖した細胞集団は、フローサイトメトリーによって、＞９９％のＣＤ３＋である。次いで、これらの細胞を、ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲをコードするレンチウイルスベクターによって、他のＣＳＲと共に、又は伴わずに７～９日間形質導入する。形質導入されたＴ細胞（エフェクター細胞）を、１：１～２．５：１の範囲内のエフェクター対標的比で１６時間標的細胞と共培養する。疲弊マーカーＰＤ－１、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、又はＴＩＭ３に対する抗体を使用して、形質導入されたＴ細胞における疲弊マーカーのレベル、例えば、ＭＦＩレベルをフローサイトメトリーによって分析する。いくつかの実験では、細胞をより長時間インキュベートし、７日毎に標的細胞を再負荷し、各標的細胞エンゲージメント後の選択された日に、疲弊マーカーレベルを測定する。
一連の標的細胞エンゲージメントにわたって、ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞は、ＣＳＲを含まない対応するＣＡＲ Ｔ細胞及び他の試験した共刺激ドメイン－ＣＳＲ Ｔ細胞、例えば、ＣＡＲ＋ＣＤ２８（又は他の共刺激ドメイン）－ＣＳＲ Ｔ細胞よりも低いレベルのＴ細胞疲弊マーカーを有する。少なくともＣＤＲ３０ ＩＣドメインを含むＣＳＲを有するＣＡＲ Ｔ細胞は、ＣＳＲを含まない対応するＣＡＲ Ｔ細胞よりも低いレベルのＴ細胞疲弊マーカーを有し、ＣＤ３０ ＩＣドメインを有さないが、異なる共刺激分子のＩＣドメイン、例えば、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、又はＤＡＰ１０のＩＣドメインを有するＣＳＲを含む対応するＣＡＲ Ｔ細胞よりも低いレベルのＴ細胞疲弊を有する。
実施例７－腫瘍細胞死滅
様々なＴ細胞の腫瘍細胞死滅能を比較するアッセイを実施する。活性化Ｔ細胞及び標的細胞を、５：１の比率で１６時間共培養する。培養上清中のＬＤＨ活性を測定することによって、特異的死滅を測定した。腫瘍細胞傷害を、ＬＤＨ細胞傷害アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）によってアッセイする。ＡｌｌＣｅｌｌｓから購入したヒトＴ細胞を活性化し、製造元のプロトコルに従ってＣＤ３／ＣＤ２８ Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で増殖させる。活性化Ｔ細胞（ＡＴＣ）を、１０％ＦＢＳ＋１００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２を有するＲＰＭＩ１６４０培地で培養して維持し、７～１４日目に使用する。Ｔ細胞は、ＦＡＣＳ分析によって＞９９％ＣＤ３＋である。活性化Ｔ細胞（エフェクター細胞）及び標的細胞であるＮａｌｍ６又はＨｅｐＧ２細胞を、５：１の比率で１６時間共培養する。その後、培養上清中のＬＤＨ活性を測定することによって、細胞傷害を測定する。
ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞は、ＣＳＲを含まない対応するＣＡＲ Ｔ細胞及びＣＡＲ＋ＣＤ２８（又は他の共刺激ドメイン）－ＣＳＲ Ｔ細胞よりも、高いインビボ腫瘍細胞死滅効果を有する。
実施例８Ａ－Ｔ細胞によるインビボ腫瘍浸潤／侵入
約１０７個のＨｅｐＧ２腫瘍細胞をＮＳＧマウスに皮下移植し、１５０ｍｍ３の固形腫瘍量を形成させる。５×１０６個のＣＡＲ Ｔ細胞を、腫瘍担持マウスに静脈内注射する。Ｔ細胞投与の３週間後、マウスを屠殺し、腫瘍を除去し、固定し、スライド上の切片を作製する。腫瘍切片をＣＤ３抗体で染色して、固形腫瘍内に存在するＴ細胞を視覚化する。ＣＤ３＋細胞の数の定量化を使用して、Ｔ細胞の腫瘍浸潤能をスコア化することができる（Ｔ細胞／ｍｍ２）。
ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞は、ＣＳＲを含まない対応するＣＡＲ Ｔ細胞又は対応するＣＡＲ＋ＣＤ２８（若しくは他の共刺激ドメイン）－ＣＳＲ Ｔ細胞よりも、高いインビボ腫瘍浸潤／侵入速度／レベル（すなわち、より多くの数のＴ細胞／ｍｍ２）を有する。
実施例８Ｂ－Ｔ細胞によるインビボ腫瘍浸潤
動物モデルに対して約１０７個の腫瘍細胞、例えば、肝癌動物モデルに対してＨｅｐＧ２細胞、ＣＤ１９＋リンパ腫動物モデルに対してＮａｌｍ６又はＲａｊｉ細胞、ＲＯＲ１＋リンパ腫動物モデルに対してＪｅｋｏ１、ＲＯＲ１＋乳癌動物モデルに対してＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞、ＲＯＲ１＋多発性骨髄腫動物モデルに対してＲＰＭＩ８２２６細胞、ＲＯＲ１＋肺癌動物モデルに対してＡ５４９細胞、Ｈ１９７５細胞、又はＨ１７０３細胞を、ＮＳＧマウスに皮下移植し、固形腫瘍、例えば、約１５０～２５０ｍｍ３の量の固形腫瘍をある期間にわたって形成させる。約５ｘ１０６～１ｘ１０７個の様々なＣＡＲ Ｔ細胞（例えば、ＣＡＲのみ、ＣＡＲ＋ＣＤ３０ ＣＳＲ、ＣＡＲ＋ＣＤ２８－ＣＳＲ、ＣＡＲ＋ＤＡＰ１０－ＣＳＲ、ＣＡＲ＋４－１ＢＢ－ＣＳＲ、又はＣＡＲ＋他の共刺激ドメイン－ＣＳＲ Ｔ細胞）を、腫瘍担持マウスに静脈内注射する。Ｔ細胞投与の１０日～３週間後、マウスを屠殺し、腫瘍を除去し、固定し、スライド上の切片を作製する。
Ｔ細胞マーカーであるＣＤ３を染色するため腫瘍切片において免疫組織化学的手法を行い、固形腫瘍が浸潤した全てのＴ細胞を表す（腫瘍に浸入したもの及び浸入したＴ細胞から増加／増殖したものを含む）、固形腫瘍内に存在するＴ細胞を視覚化する。例えば、ＣＤ３＋細胞（Ｔ細胞）である全細胞％、又はＴ細胞の数／ｍｍ２腫瘍切片で表される、Ｔ細胞によって浸潤された腫瘍塊の割合を決定するため、自動免疫組織化学的撮像装置及び／又はＱｕＰａｔｈソフトウェアを使用して、これらの切片中のＣＤ３陽性細胞及びＣＤ３陰性細胞を定量化した。全ての細胞中のより高いＴ細胞％、又はより多くの数のＴ細胞／ｍｍ２は、Ｔ細胞の腫瘍浸入及び細胞増殖能力の組み合わせを反映する、Ｔ細胞によるより高い／増加した腫瘍浸潤率／レベルを示す。
少なくともＣＤＲ３０ ＩＣドメインを含むＣＳＲを有するＣＡＲ Ｔ細胞は、ＣＳＲを含まない対応するＣＡＲ Ｔ細胞、又は、ＣＤ３０ ＩＣドメインを有さないが、異なる共刺激分子のＩＣドメイン、例えば、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、又はＤＡＰ１０のＩＣドメインを有するＣＳＲを含む対応するＣＡＲ Ｔ細胞よりも、高いインビボ腫瘍浸潤速度／レベル／能を有する。
実施例９－コンストラクト
ＨＣＣを含む肝臓癌の場合：
コンストラクト：ＣＤ２８又はＣＤ３０共刺激断片を含む抗ＧＰＣ３ ＣＳＲと共発現する第１世代及び第２世代抗ＡＦＰ ＣＡＲ。
コンストラクト：第１世代αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ：抗ＡＦＰ／ＭＨＣ ＥＣ、ＣＤ８ ＴＭ、及びＣＤ３ζＩＣを含む第１世代ＣＡＲ（共刺激なし）。
コンストラクト：第１世代αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ２８－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ２８ ＴＭ、及びＣＤ２８ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する第１世代抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：第１世代αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する第１世代抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：第１世代αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ８ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する第１世代抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ：抗ＡＦＰ／ＭＨＣ ＥＣ、ＣＤ８ ＴＭ、ＣＤ３０ ＩＣ、及びＣＤ３ζＩＣを含む第２世代ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ２８－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ２８ ＴＭ、及びＣＤ２８ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ８ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ：抗ＡＦＰ／ＭＨＣ ＥＣ、ＣＤ２８ ＴＭ、ＣＤ２８ ＩＣ、及びＣＤ３ζＩＣを含む第２世代ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ２８－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ２８ ＴＭ、及びＣＤ２８ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ８ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ：抗ＡＦＰ／ＭＨＣ ＥＣ、ＣＤ８ ＴＭ、４－１ＢＢ ＩＣ、及びＣＤ３ζＩＣを含む第２世代ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－４１ＢＢ－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、４－１ＢＢ ＴＭ、及び４－１ＢＢ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＯＸ４０－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＯＸ４０ ＴＭ、及びＯＸ４０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ２７－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ２７ ＴＭ、及びＣＤ２７ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ３０Ｔ－ＣＤ２８－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ２８ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ３０Ｔ－４１ＢＢ－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及び４－１ＢＢ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ３０Ｔ－ＯＸ４０－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＯＸ４０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ３０Ｔ－ＣＤ２７－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ２７ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ２８Ｔ－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ２８ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ２８－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ２８ ＴＭ、及びＣＤ２８ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ２８Ｔ－４１ＢＢ－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ２８ ＴＭ、及び４－１ＢＢ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ２８Ｔ－ＯＸ４０－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ２８ ＴＭ、及びＯＸ４０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ２８Ｔ－ＣＤ２７－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ２８ ＴＭ、及びＣＤ２７ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－４１ＢＢＴ－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、４－１ＢＢ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－４１ＢＢ－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、４－１ＢＢ ＴＭ、及び４－１ＢＢ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－４１ＢＢＴ－ＣＤ２８－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、４－１ＢＢ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－４１ＢＢＴ－ＯＸ４０－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、４－１ＢＢ ＴＭ、及び４－１ＢＢ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－４１ＢＢＴ－ＣＤ２７－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、４－１ＢＢ ＴＭ、及びＣＤ２７ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＯＸ４０Ｔ－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＯＸ４０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＯＸ４０－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＯＸ４０ ＴＭ、及びＯＸ４０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＯＸ４０Ｔ－ＣＤ２８－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＯＸ４０ ＴＭ、及びＣＤ２８ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＯＸ４０Ｔ－４１ＢＢ－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＯＸ４０ ＴＭ、及び４－１ＢＢ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＯＸ４０Ｔ－ＣＤ２７－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＯＸ４０ ＴＭ、及びＣＤ２７ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ２７Ｔ－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ２７ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ２７－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ２７ ＴＭ、及びＣＤ２７ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ２７Ｔ－４１ＢＢ－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ２７ ＴＭ、及び４－１ＢＢ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ２７Ｔ－ＯＸ４０－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ２７ ＴＭ、及びＯＸ４０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ２７Ｔ－ＣＤ２８－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ２７ ＴＭ、及びＣＤ２８ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ８ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ２８－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ８ ＴＭ、及びＣＤ２８ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢ－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ８ ＴＭ、及び４－１ＢＢ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ８Ｔ－ＯＸ４０－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ８ ＴＭ、及びＯＸ４０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ２７－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ８ ＴＭ、及びＣＤ２７ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：ＣＤ２８又はＣＤ３０共刺激断片を含む抗ＧＰＣ３ ＣＳＲと共発現する第１世代及び第２世代抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ。
コンストラクト：第１世代αＧＰＣ３－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ８ ＴＭ、及びＣＤ３ζＩＣを含む第１世代ＣＡＲ（共刺激なし）。
コンストラクト：第１世代αＧＰＣ３－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ２８－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ２８ ＴＭ、及びＣＤ２８ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する第１世代抗ＧＰＣ３－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：第１世代αＧＰＣ３－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する第１世代抗ＧＰＣ３－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：第１世代αＧＰＣ３－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ８ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する第１世代抗ＧＰＣ３－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＧＰＣ３－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ：抗ＧＰＣ３／ＭＨＣ ＥＣ、ＣＤ８ ＴＭ、ＣＤ３０ ＩＣ、及びＣＤ３ζＩＣを含む第２世代ＣＡＲ
コンストラクト：αＧＰＣ３－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ２８－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ２８ ＴＭ、及びＣＤ２８ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＧＰＣ３－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＧＰＣ３－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＧＰＣ３－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＧＰＣ３－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ８ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＧＰＣ３－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＧＰＣ３－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ２８ ＴＭ、ＣＤ２８ ＩＣ、及びＣＤ３ζＩＣを含む第２世代ＣＡＲ
コンストラクト：αＧＰＣ３－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ２８－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ２８ ＴＭ、及びＣＤ２８ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＧＰＣ３－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＧＰＣ３－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＧＰＣ３－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＧＰＣ３－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ３０Ｔ－ＣＤ２８－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ２８ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＧＰＣ３－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＧＰＣ３－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＧＰＣ３ ＥＣ、ＣＤ８ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＧＰＣ３－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ
白血病及びリンパ腫を含む血液癌の場合：
コンストラクト：ＣＤ２８又はＣＤ３０共刺激断片を含む抗ＣＤ１９ ＣＳＲと共発現する第１世代及び第２世代抗ＣＤ１９ ＣＡＲ
コンストラクト：第１世代αＣＤ１９－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ：抗ＣＤ１９ ＥＣ、ＣＤ８ ＴＭ、及びＣＤ３ζＩＣを含む第１世代ＣＡＲ（共刺激なし）
コンストラクト：第１世代αＣＤ１９－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ１９－ＣＤ２８－ＣＳＲ：抗ＣＤ１９ ＥＣ、ＣＤ２８ ＴＭ、及びＣＤ２８ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する第１世代抗ＣＤ１９－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：第１世代αＣＤ１９－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ１９－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ１９ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する第１世代抗ＣＤ１９－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：第１世代αＣＤ１９－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ１９－ＣＤ２８Ｔ－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ１９ ＥＣ、ＣＤ２８ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する第１世代抗ＣＤ１９－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ：抗ＣＤ１９ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、ＣＤ３０ ＩＣ、及びＣＤ３ζＩＣを含む第２世代ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ１９－ＣＤ２８－ＣＳＲ：抗ＣＤ１９ ＥＣ、ＣＤ２８ ＴＭ、及びＣＤ２８ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＣＤ１９－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ１９－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ１９ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＣＤ１９－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ：抗ＣＤ１９ ＥＣ、ＣＤ２８ ＴＭ、ＣＤ２８ ＩＣ、及びＣＤ３ζＩＣを含む第２世代ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ１９－ＣＤ２８－ＣＳＲ：抗ＣＤ１９ ＥＣ、ＣＤ２８ ＴＭ、及びＣＤ２８ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＣＤ１９－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ１９－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ１９ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＣＤ１９－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ：抗ＣＤ１９ ＥＣ、ＣＤ８ ＴＭ、４１－ＢＢ ＩＣ、及びＣＤ３ζＩＣを含む第２世代ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ１９－ＣＤ２８－ＣＳＲ：抗ＣＤ１９ ＥＣ、ＣＤ２８ ＴＭ、及びＣＤ２８ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＣＤ１９－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ１９－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ１９ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＣＤ１９－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ１９－ＣＤ２８Ｔ－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ１９ ＥＣ、ＣＤ２８ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＣＤ１９－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ１９－ＣＤ２８Ｔ－４１ＢＢ－ＣＳＲ：抗ＣＤ１９ ＥＣ、ＣＤ２８ ＴＭ、及び４１ＢＢ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＣＤ１９－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：他の共刺激断片を含むＣＳＲと共発現する同じＣＡＲと比較する、抗ＣＤ１９ ＣＤ３０ ＣＳＲと共発現する第２世代抗ＣＤ１９ ＣＤ３０ ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ１９－ＣＤ３０－ＣＳＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ１９－ＣＤ２８－ＣＳＲ：抗ＣＤ１９ ＥＣ、ＣＤ２８ ＴＭ、及びＣＤ２８ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＣＤ１９－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ１９－４１ＢＢ－ＣＳＲ：抗ＣＤ１９ ＥＣ、４－１ＢＢ ＴＭ、及び４－１ＢＢ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＣＤ１９－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ１９－ＯＸ４０－ＣＳＲ：抗ＣＤ１９ ＥＣ、ＯＸ４０ ＴＭ、及びＯＸ４０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＣＤ１９－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ１９－ＣＤ２７－ＣＳＲ：抗ＣＤ１９ ＥＣ、ＣＤ２７ ＴＭ、及びＣＤ２７ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＣＤ１９－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ１９－ＣＤ２８Ｔ－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ１９ ＥＣ、ＣＤ２８ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＣＤ１９－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ１９－４１ＢＢＴ－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ１９ ＥＣ、４－１ＢＢ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＣＤ１９－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ１９－ＯＸ４０Ｔ－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ１９ ＥＣ、ＯＸ４０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＣＤ１９－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ１９－ＣＤ２７Ｔ－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ１９ ＥＣ、ＣＤ２７ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＣＤ１９－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ１９－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ１９ ＥＣ、ＣＤ８ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＣＤ１９－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：ＣＤ２８又はＣＤ３０共刺激断片を含む抗ＣＤ２２ ＣＳＲと共発現する第２世代抗ＣＤ２２ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ：抗ＣＤ２２ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、ＣＤ３０ ＩＣ、及びＣＤ３ζＩＣを含む第２世代ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ２２－ＣＤ２８－ＣＳＲ：抗ＣＤ２２ ＥＣ、ＣＤ２８ ＴＭ、及びＣＤ２８ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ２２－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ２２ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ２２－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ：抗ＣＤ２２ ＥＣ、ＣＤ２８ ＴＭ、ＣＤ２８ ＩＣ、及びＣＤ３ζＩＣを含む第２世代ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ２２－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ２２－ＣＤ２８－ＣＳＲ：抗ＣＤ２２ ＥＣ、ＣＤ２８ ＴＭ、及びＣＤ２８ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＣＤ２２－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ２２－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ２２－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ２２ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＣＤ２２－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ２２－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ：抗ＣＤ２２ ＥＣ、ＣＤ８ ＴＭ、４１－ＢＢ ＩＣ、及びＣＤ３ζＩＣを含む第２世代ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ２２－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ２２－ＣＤ２８－ＣＳＲ：抗ＣＤ２２ ＥＣ、ＣＤ２８ ＴＭ、及びＣＤ２８ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＣＤ２２－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ２２－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ２２－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ２２ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＣＤ２２－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：他の共刺激断片を含むＣＳＲと共発現する同じＣＡＲと比較する、抗ＣＤ２２ ＣＤ３０ ＣＳＲと共発現する第２世代抗ＣＤ２２ ＣＤ３０ ＣＡＲ。
コンストラクト：αＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ２２－ＣＤ３０－ＣＳＲ
コンストラクト：αＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ２２－ＣＤ２８－ＣＳＲ：抗ＣＤ２２ ＥＣ、ＣＤ２８ ＴＭ、及びＣＤ２８ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ２２－４１ＢＢ－ＣＳＲ：抗ＣＤ２２ ＥＣ、４－１ＢＢ ＴＭ、及び４－１ＢＢ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ２２－ＯＸ４０－ＣＳＲ：抗ＣＤ２２ ＥＣ、ＯＸ４０ ＴＭ、及びＯＸ４０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ２２－ＣＤ２７－ＣＳＲ：抗ＣＤ２２ ＥＣ、ＣＤ２７ ＴＭ、及びＣＤ２７ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ２２－ＣＤ２８Ｔ－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ２２ ＥＣ、ＣＤ２８ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ２２－４１ＢＢＴ－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ２２ ＥＣ、４－１ＢＢ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ２２－ＯＸ４０Ｔ－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ２２ ＥＣ、ＯＸ４０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ２２－ＣＤ２７Ｔ－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ２２ ＥＣ、ＣＤ２７ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ２２－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ２２ ＥＣ、ＣＤ８ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含むＣＳＲと共発現する抗ＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：抗ＣＤ１９、抗ＣＤ２２、及び／又は抗ＣＤ２０、ＣＤ３０ ＣＳＲと共発現する二重特異性第２世代抗ＣＤ１９、抗ＣＤ２２、ＣＤ３０ ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－αＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ：抗ＣＤ１９ ＥＣ、抗ＣＤ２２ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、ＣＤ３０ ＩＣ、及びＣＤ３ζＩＣを含む二重特異性第２世代ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ２２－αＣＤ１９－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ：抗ＣＤ２２ ＥＣ、抗ＣＤ１９ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、ＣＤ３０ ＩＣ、及びＣＤ３ζＩＣを含む二重特異性第２世代ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ：抗ＣＤ１９ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、ＣＤ３０ ＩＣ、及びＣＤ３ζＩＣを含む単一特異性第２世代ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ：抗ＣＤ２２ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、ＣＤ３０ ＩＣ、及びＣＤ３ζＩＣを含む単一特異性第２世代ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－αＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ１９－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ１９ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含む単一特異性ＣＳＲと共発現する二重特異性抗ＣＤ１９－抗ＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－αＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ２２－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ２２ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含む単一特異性ＣＳＲと共発現する二重特異性抗ＣＤ１９－抗ＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－αＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ２０－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ２０ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含む単一特異性ＣＳＲと共発現する二重特異性抗ＣＤ１９－抗ＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ２２－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ２２ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含む単一特異性ＣＳＲと共発現する単一特異性抗ＣＤ１９－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ１９－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ１９ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含む単一特異性ＣＳＲと共発現する単一特異性抗ＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ２０－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ２０ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含む単一特異性ＣＳＲと共発現する単一特異性抗ＣＤ１９－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ２０－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ２０ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含む単一特異性ＣＳＲと共発現する単一特異性抗ＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－αＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ２２－αＣＤ１９－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ２２ ＥＣ、抗ＣＤ１９ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含む二重特異性ＣＳＲと共発現する二重特異性抗ＣＤ１９－抗ＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－αＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ２０－αＣＤ１９－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ２０ ＥＣ、抗ＣＤ１９ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含む二重特異性ＣＳＲと共発現する二重特異性抗ＣＤ１９－抗ＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－αＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ２２－αＣＤ２０－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ２２ ＥＣ、抗ＣＤ２０ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含む二重特異性ＣＳＲと共発現する二重特異性抗ＣＤ１９－抗ＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ２２－αＣＤ１９－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ２２ ＥＣ、抗ＣＤ１９ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含む二重特異性ＣＳＲと共発現する単一特異性抗ＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：抗ＣＤ１９、抗ＣＤ２２、及び／又は抗ＣＤ２０、ＣＤ３０ ＣＳＲと共発現する三重特異性第２世代抗ＣＤ１９、抗ＣＤ２２、抗ＣＤ２０、ＣＤ３０ ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－αＣＤ２２－αＣＤ２０－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ：抗ＣＤ１９ ＥＣ、抗ＣＤ２２ ＥＣ、抗ＣＤ２０ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、ＣＤ３０ ＩＣ、及びＣＤ３ζＩＣを含む三重特異性第２世代ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－αＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ：抗ＣＤ１９ ＥＣ、抗ＣＤ２２ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、ＣＤ３０ ＩＣ、及びＣＤ３ζＩＣを含む二重特異性第２世代ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ：抗ＣＤ１９ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、ＣＤ３０ ＩＣ、及びＣＤ３ζＩＣを含む単一特異性第２世代ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ：抗ＣＤ２２ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、ＣＤ３０ ＩＣ、及びＣＤ３ζＩＣを含む単一特異性第２世代ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－αＣＤ２２－αＣＤ２０－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ１９－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ１９ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含む単一特異性ＣＳＲと共発現する三重特異性抗ＣＤ１９－抗ＣＤ２２－抗ＣＤ２０－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－αＣＤ２２－αＣＤ２０－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ２２－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ２２ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含む単一特異性ＣＳＲと共発現する三重特異性抗ＣＤ１９－抗ＣＤ２２－抗ＣＤ２０－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－αＣＤ２２－αＣＤ２０－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ２０－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ２０ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含む単一特異性ＣＳＲと共発現する三重特異性抗ＣＤ１９－抗ＣＤ２２－抗ＣＤ２０－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－αＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ２０－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ２０ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含む単一特異性ＣＳＲと共発現する二重特異性抗ＣＤ１９－抗ＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ２２－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ２２ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含む単一特異性ＣＳＲと共発現する単一特異性抗ＣＤ１９－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ２０－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ２０ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含む単一特異性ＣＳＲと共発現する単一特異性抗ＣＤ１９－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－αＣＤ２２－αＣＤ２０－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ２２－αＣＤ１９－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ２２ ＥＣ、抗ＣＤ１９ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含む二重特異性ＣＳＲと共発現する三重特異性抗ＣＤ１９－抗ＣＤ２２－抗ＣＤ２０－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－αＣＤ２２－αＣＤ２０－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ２０－αＣＤ１９－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ２０ ＥＣ、抗ＣＤ１９ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含む二重特異性ＣＳＲと共発現する三重特異性抗ＣＤ１９－抗ＣＤ２２－抗ＣＤ２０－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－αＣＤ２２－αＣＤ２０－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ２２－αＣＤ２０－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ２２ ＥＣ、抗ＣＤ２０ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含む二重特異性ＣＳＲと共発現する三重特異性抗ＣＤ１９－抗ＣＤ２２－抗ＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－αＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ２０－αＣＤ１９－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ２０ ＥＣ、抗ＣＤ１９ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含む二重特異性ＣＳＲと共発現する二重特異性抗ＣＤ１９－抗ＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－αＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ２２－αＣＤ２０－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ２２ ＥＣ、抗ＣＤ２０ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含む二重特異性ＣＳＲと共発現する二重特異性抗ＣＤ１９－抗ＣＤ２２－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：αＣＤ１９－αＣＤ２２－αＣＤ２０－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ２２－αＣＤ２０－αＣＤ１９－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＣＤ２２ ＥＣ、抗ＣＤ２０ ＥＣ、抗ＣＤ１９ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ、及びＣＤ３０ ＩＣを含む三重特異性ＣＳＲと共発現する三重特異性抗ＣＤ１９－抗ＣＤ２２－抗ＣＤ２０－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ
コンストラクト：抗ＲＯＲ１－ＣＡＲ＋抗ＲＯＲ１－ＣＳＲ
固形腫瘍（神経芽腫）及びＣＬＬ（最も多い白血病）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ、ＮＨＬの５％）の場合：
コンストラクト：αＲＯＲ１－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ：抗ＲＯＲ１ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ及びＣＤ３０ ＩＣ、ＣＤ３ζＩＣ
コンストラクト：αＲＯＲ１－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＲＯＲ１－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＲＯＲ１ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ及びＩＣ並びにＣＤ３ζＩＣ＋抗ＲＯＲ１ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ及びＩＣ
コンストラクト：αＲＯＲ１－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＲＯＲ１－ＣＤ２８－ＣＳＲ：抗ＲＯＲ１ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ及びＩＣ並びにＣＤ３ζＩＣ＋抗ＲＯＲ１ ＥＣ、ＣＤ２８ ＴＭ及びＩＣ
コンストラクト：αＲＯＲ１－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＲＯＲ１－４１ＢＢ－ＣＳＲ：抗ＲＯＲ１ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ及びＩＣ並びにＣＤ３ζＩＣ＋抗ＲＯＲ１ ＥＣ、４－１ＢＢ ＴＭ及びＩＣ。
コンストラクト：αＲＯＲ１－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ：抗ＲＯＲ１ ＥＣ、ＣＤ２８ ＴＭ及びＣＤ２８ ＩＣ、ＣＤ３ζＩＣ
コンストラクト：αＲＯＲ１－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋αＲＯＲ１－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＲＯＲ１ ＥＣ、ＣＤ２８ ＴＭ及びＣＤ２８ ＩＣ、ＣＤ３ζＩＣ＋抗ＲＯＲ１ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ及びＩＣ。
コンストラクト：αＲＯＲ１－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ：抗ＲＯＲ１ ＥＣ、ＣＤ８ ＴＭ、ＣＤ３０ ＩＣ及びＣＤ３ζＩＣ
コンストラクト：αＲＯＲ１－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＲＯＲ１－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＲＯＲ１ ＥＣ、ＣＤ８ ＴＭ、ＣＤ３０ ＩＣ及びＣＤ３ζＩＣ＋抗ＲＯＲ１ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ及びＩＣ
コンストラクト：αＲＯＲ１－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ：抗ＲＯＲ１ ＥＣ、ＣＤ８ ＴＭ、４－１ＢＢ ＩＣ及びＣＤ３ζＩＣ
コンストラクト：αＲＯＲ１－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋αＲＯＲ１－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＲＯＲ１ ＥＣ、ＣＤ８ ＴＭ、４－１ＢＢ ＩＣ及びＣＤ３ζＩＣ＋抗ＲＯＲ１ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ及びＩＣ
コンストラクト：αＲＯＲ１－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋αＲＯＲ１－ＣＤ２８Ｔ－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＲＯＲ１ ＥＣ、ＣＤ８ ＴＭ、４－１ＢＢ ＩＣ及びＣＤ３ζＩＣ＋抗ＲＯＲ１ ＥＣ、ＣＤ２８ ＴＭ及びＣＤ３０ ＩＣ
コンストラクト：αＲＯＲ１－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋αＲＯＲ１－ＣＤ２８Ｔ－４１ＢＢ－ＣＳＲ：抗ＲＯＲ１ ＥＣ、ＣＤ８ ＴＭ、４－１ＢＢ ＩＣ及びＣＤ３ζＩＣ＋抗ＲＯＲ１ ＥＣ、ＣＤ２８ ＴＭ及び４１ＢＢ ＩＣ
コンストラクト：αＲＯＲ１－ＣＤ２８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ：抗ＲＯＲ１ ＥＣ、ＣＤ２８ ＴＭ、４－１ＢＢ ＩＣ及びＣＤ３ζＩＣ
コンストラクト：αＲＯＲ１－ＣＤ２８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋αＲＯＲ１－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＲＯＲ１ ＥＣ、ＣＤ２８ ＴＭ、４－１ＢＢ ＩＣ及びＣＤ３ζＩＣ＋抗ＲＯＲ１ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ及びＩＣ
コンストラクト：抗ＰＳＭＡ－ＣＡＲ＋抗ＰＳＭＡ－ＣＳＲ：ＣＤ３０ ＴＭ及びＩＣを含む抗ＰＭＳＡ－ＣＳＲと共発現する第２世代抗ＰＳＭＡ１ ＣＤ３０又は４－１ＢＢＣＡＲ。
前立腺癌：
コンストラクト：αＰＳＭＡ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ：抗ＰＳＭＡ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ及びＩＣ、ＣＤ３ζＩＣ
コンストラクト：αＰＳＭＡ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＰＳＭＡ－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＰＳＭＡ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ及びＩＣ及びＣＤ３ζＩＣ＋抗ＰＳＭＡ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ及びＩＣ
コンストラクト：αＰＳＭＡ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ：抗ＰＳＭＡ ＥＣ、ＣＤ８ ＴＭ、ＣＤ３０ ＩＣ、ＣＤ３ζＩＣ
コンストラクト：αＰＳＭＡ－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＰＳＭＡ－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＰＳＭＡ ＥＣ、ＣＤ８ ＴＭ、ＣＤ３０ ＩＣ及びＣＤ３ζＩＣ＋抗ＰＳＭＡ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ及びＩＣ
コンストラクト：αＰＳＭＡ－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ：抗ＰＳＭＡ ＥＣ、ＣＤ８ ＴＭ、４－１ＢＢ ＩＣ、ＣＤ３ζＩＣ
コンストラクト：αＰＳＭＡ－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋αＰＳＭＡ－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＰＳＭＡ ＥＣ、ＣＤ８ ＴＭ、４－１ＢＢ ＩＣ及びＣＤ３ζＩＣ＋抗ＰＳＭＡ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ及びＩＣ
コンストラクト：抗ＮＹ－ＥＳＯ－１／ＭＨＣ ＣＡＲ＋抗ＥＧＦＲ－ＣＳＲ：ＣＤ３０又は４－１ＢＢ ＩＣ及びＣＤ３ζＩＣ＋抗ＥＧＦＲ－ＣＤ３０－ＣＳＲを有する第２世代抗ＮＹ－ＥＳＯ－１／ＭＨＣ ＣＡＲ
コンストラクト：αＮＹＥＳＯ１－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ：抗ＮＹ－ＥＳＯ－１／ＭＨＣ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ及びＩＣ、ＣＤ３ζＩＣ
コンストラクト：αＮＹＥＳＯ１－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＥＧＦＲ－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＮＹ－ＥＳＯ－１／ＭＨＣ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ及びＩＣ、ＣＤ３ζＩＣ＋αＥＧＦＲ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ及びＩＣ－ＣＳＲ。
コンストラクト：αＮＹＥＳＯ１－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ：抗ＮＹ－ＥＳＯ－１／ＭＨＣ ＥＣ、ＣＤ８ ＴＭ、ＣＤ３０ ＩＣ、ＣＤ３ζＩＣ
αＮＹＥＳＯ１－ＣＤ８Ｔ－ＣＤ３０ｚ－ＣＡＲ＋αＥＧＦＲ－ＣＤ３０－ＣＳＲ抗ＮＹ－ＥＳＯ－１／ＭＨＣ ＥＣ、ＣＤ８ ＴＭ、ＣＤ３０ ＩＣ、ＣＤ３ζＩＣ＋αＥＧＦＲ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ及びＩＣ ＣＳＲ。
コンストラクト：αＮＹＥＳＯ１－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ：抗ＮＹ－ＥＳＯ－１／ＭＨＣ ＥＣ、ＣＤ８ ＴＭ、４－１ＢＢ ＩＣ、ＣＤ３ζＩＣ
コンストラクト：αＮＹＥＳＯ１－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋αＥＧＦＲ－ＣＤ３０－ＣＳＲ：抗ＮＹ－ＥＳＯ－１／ＭＨＣ ＥＣ、ＣＤ８ ＴＭ、４－１ＢＢ ＩＣ、ＣＤ３ζＩＣ＋αＥＧＦＲ ＥＣ、ＣＤ３０ ＴＭ及びＩＣ ＣＳＲ。
実施例１０－抗ＡＦＰ／ＭＨＣ ＣＡＲ抗ＧＰＣ３－ＣＳＲ Ｔ細胞による標的細胞の短期死滅
この実施例は、ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲを発現しているＴ細胞が、ＣＳＲを含まないＣＡＲ Ｔ細胞よりも高い特異的腫瘍細胞死滅効果を有することを示す。初代Ｔ細胞を、モック形質導入（ＤＮＡ付加なし）又は、（１）抗ＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ（配列番号７）、（２）抗ＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲ（それぞれ、配列番号７＋配列番号１３）、（３）抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ（配列番号１）、又は（４）抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲ（それぞれ、配列番号１＋配列番号１３）をコードしているレンチウイルスベクターでの形質導入を、７～９日間行った。形質導入効率は、ＰＥ標識したＡＦＰ１５８／ＨＬＡ－Ａ＊０２：０１四量体（「ＡＦＰ１５８四量体」）で染色することによって決定した。ＣＡＲ Ｔ細胞を３５％ＣＡＲ＋（つまり「受容体＋」）に補正し、ＦＡＣＳ系アッセイによって癌細胞の死滅能について試験した。活性化Ｔ細胞及び標的細胞ＨｅｐＧ２（ＡＦＰ＋、ＨＬＡ－Ａ２＋、ＧＰＣ３＋）を、２：１のエフェクター対標的比で共培養した。特異的溶解は、Ｃｙｔｏｘ９６非放射性細胞毒性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、１６時間インキュベート後の培養上清中のＬＤＨ活性を測定することによって決定した。図１に示すように、ＣＡＲ（第１世代：抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ又は第２世代：抗ＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ）及びＣＤ３０－ＣＳＲの両方をコードするベクターで形質導入されたＴ細胞は、ＣＳＲを含まない対応するＣＡＲ Ｔ細胞よりも、高いインビトロ腫瘍細胞死滅効果を有した。
実施例１１－抗ＡＦＰ／ＭＨＣ ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＳＲ Ｔ細胞によるサイトカイン産生及び分泌
この実施例は、ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲを発現しているＴ細胞が、ＣＳＲを含まないＣＡＲ Ｔ細胞よりも高い特異的Ｔ細胞活性を有することを示す。ＩＦＮγ及びグランザイムＢは両方とも、Ｔ細胞活性／死滅能の指標である。形質導入後、５０，０００個のＣＡＲ ＋抗ＡＦＰ－ＣＡＲ Ｔ細胞及び抗ＡＦＰ－ＣＡＲ±抗ＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞を、ＨｅｐＧ２標的細胞と、１：１のエフェクター細胞対標的細胞比（Ｅ：Ｔ比）でインキュベートした。細胞を、最初のエンゲージメント後７日毎に１００，０００個のＨｅｐ２Ｇ標的細胞で再負荷する。３回のエンゲージメントの後、培養上清中のＩＦＮγ及びグランザイムＢレベルを、それぞれＢｉｏＬｅｇｅｎｄ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）のＥＬＩＳＡ ＭＡＸ（商標）Ｄｅｌｕｘｅ Ｓｅｔ Ｈｕｍａｎ ＩＦＮγ、及びＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）のＨｕｍａｎ Ｇｒａｎｚｙｍｅ Ｂ ＤｕｏＳｅｔ ＥＬＩＳＡで定量し、結果をそれぞれ、図２Ａ及び図２Ｂに示す。実施例１０において細胞傷害性効力の増加を実証した反応はまた、放出されるサイトカイン（ＩＦＮγ及びグランザイムＢ）の量の増加も示した。具体的には、ＣＡＲ（第１世代：抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ又は第２世代：抗ＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ）及びＣＤ３０－ＣＳＲの両方をコードするベクターで形質導入されたＴ細胞は、ＣＳＲを含まない対応するＣＡＲ Ｔ細胞よりも、高いＩＦＮγ及びグランザイムＢの分泌レベルを有した。
実施例１２－抗ＡＦＰ／ＭＨＣ ＣＡＲ抗ＧＰＣ３－ＣＳＲ Ｔ細胞による標的細胞の長期死滅及びＴ細胞生存率
標的細胞を計数するためのＦＡＣＳ系アッセイを使用して、ＣＡＲ Ｔ細胞の長期死滅能を比較した。使用したエフェクター細胞は、様々なＣＡＲコンストラクトをコードするベクターで形質導入したドナー被験体由来の初代Ｔ細胞とした。エフェクター細胞を、第１世代ＣＡＲコンストラクト（図３Ａ及び３Ｂ）：（１）抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ（配列番号１）、（２）抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ２８－ＣＳＲ（配列番号１＋配列番号１４）、若しくは（３）抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲ（配列番号１＋配列番号１３）、又は第２世代ＣＡＲコンストラクト（図３Ｃ及び３Ｄ）：（１）抗ＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ（配列番号７）、（２）抗ＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ２８－ＣＳＲ（配列番号７＋配列番号１４）、若しくは（３）抗ＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲ（配列番号７＋配列番号１３）をコードするベクターで、７～９日間形質導入した。エフェクター細胞を、ＡＦＰ１５８四量体染色に基づいて３５％受容体＋に補正した。
使用した標的細胞は、ＨｅｐＧ２（Ａ２＋／ＡＦＰ＋／ＧＰＣ３＋）細胞とした。この実験では、エフェクター対標的比（Ｅ：Ｔ比）を１：１とした。具体的には、５０，０００個の受容体＋Ｔ細胞及び５０，０００個のＨｅｐＧ２細胞を、サイトカインを含まないＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ中で各ウェルにおいて共にインキュベートした。細胞に、７日毎にウェル当たり１００，０００個のＨｅｐＧ２細胞を再負荷した。残りの標的細胞及び受容体＋Ｔ細胞の数を、各標的細胞エンゲージメント後の選択した日において定量化した。Ｔ細胞生存率（総Ｔ細胞数、単なる受容体＋細胞ではない）及び長期死滅（モック形質導入Ｔ細胞とともにインキュベートした標的細胞に対する、残りの標的細胞の割合によって表される）の結果を図３Ａ～３Ｄに示しており、第１世代ＣＡＲの結果は図３Ａ及び３Ｂ、第２世代ＣＡＲの結果は図３Ｃ及び３Ｄである。図３Ｂは、抗ＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲ又は抗ＧＰＣ３－ＣＤ２８－ＣＳＲと共発現させた第１世代抗ＡＦＰ－ＣＡＲを発現しているＴ細胞の両方が、ＣＡＲのみを発現しているＴ細胞より多くの標的細胞を死滅させたことを示す。驚くべきことに、ＣＤ３０－ＣＳＲと共発現させた第１世代ＣＡＲを発現しているＴ細胞は、ＣＤ２８－ＣＳＲを有する対応するＴ細胞よりも有意に多くの標的細胞を死滅させた。
図３Ｄは、抗ＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲ又は抗ＧＰＣ３－ＣＤ２８－ＣＳＲと共発現させた第２世代抗ＡＦＰ－ＣＡＲ（抗ＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ）を発現しているＴ細胞の両方が、モック形質導入Ｔ細胞に対して、あらゆる標的細胞をほとんど死滅させない第２世代抗ＡＦＰ－ＣＡＲのみを発現しているＴ細胞とは異なり、最初にエンゲージメントされた標的細胞及び再負荷された標的細胞のほぼ全ての死滅を効果的に媒介したことを示す。驚くべきことに、図３Ａ及び図３Ｃは、抗ＡＦＰ－ＣＤ８－ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲ及び抗ＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲを発現しているＴ細胞がそれぞれ、モック形質導入Ｔ細胞及び対応するＣＡＲのみを発現しているＴ細胞よりもはるかに良好な生存率を示すだけではなく、対応するＣＡＲ＋ＣＤ２８－ＣＳＲを発現しているＴ細胞よりも有意に良好な生存率を示し、更には増殖したことを示す。
実施例１３－標的細胞との共培養後の抗ＡＦＰ／ＭＨＣ ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＳＲ Ｔ細胞Ｔ細胞におけるＴ細胞疲弊マーカーの発現
抗原刺激時にＣＡＲ形質導入細胞上に発現する疲弊マーカーのレベルを調べるため、ＣＤ３＋Ｔ細胞を、ＥａｓｙＳｅｐヒトＴ細胞単離キット（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してＰＢＭＣ濃縮全血から調製し、ＣＤ３／ＣＤ２８Ｄｙｎａｂｅａｄｓで活性化した。活性化して増殖した細胞集団は、フローサイトメトリーによって、＞９９％のＣＤ３＋であった。次いで、これらの細胞を、以下の表２、３、及び４に記載のコンストラクトをコードするレンチウイルスベクターで７～９日間形質導入した。形質導入された細胞（エフェクター細胞）を、ＡＦＰ１５８四量体染色に基づいて３５％受容体＋に補正した。次いで、エフェクター細胞を、ＨｅｐＧ２標的細胞と共に、１：１のＥ：Ｔ比で共培養した。具体的には、５０，０００個の受容体＋Ｔ細胞及び５０，０００個のＨｅｐＧ２細胞を、サイトカインを含まないＲＰＭＩ＋１０％ＦＢＳ中で各ウェルにおいて共にインキュベートした。細胞に、７日毎にウェル当たり１００，０００個のＨｅｐＧ２細胞を再負荷した。受容体＋Ｔ細胞上の疲弊マーカーであるＰＤ－１、ＬＡＧ３、及びＴＩＧＩＴのＭＦＩレベルを、各標的細胞エンゲージメント後の選択した日においてフローサイトメトリーによって分析した。ＰＤ－１、ＬＡＧ３、及びＴＩＧＩＴは、Ｔ細胞が機能を失う際にＴ細胞上に蓄積する抑制性受容体である。この現象のために、これらの分子の発現は、疲弊したＴ細胞のマーカーとして知られる。これらの疲弊マーカーのＭＦＩレベル及び、ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞のいくつかの疲弊マーカーレベルのＣＡＲ＋ＣＤ２８－ＣＳＲ又はＣＡＲのみのＴ細胞に対する比を、表２、３、及び４に示す。驚くべきことに、ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲを発現することにより、ＣＡＲのみ又はＣＡＲ＋ＣＤ２８－ＣＳＲを発現するよりも有意に低い疲弊マーカー蓄積を有するＴ細胞が得られ、著しく機能的でＴ細胞の疲弊がより低いことを示す。また、有意には、ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ発現の結果得られた、より低いＴ細胞疲弊マーカーのレベルは、ＣＤ８＋Ｔ細胞（標的細胞死滅により直接的に関与する細胞傷害性Ｔ細胞）及びＣＤ４＋Ｔ細胞（細胞傷害性Ｔ細胞の活性化及び成長を含む他の免疫細胞の機能を助けるＴヘルパー細胞）の両方に見られた。
Figure 2022541315000005

Figure 2022541315000006
Figure 2022541315000007
Figure 2022541315000008
Figure 2022541315000009

Figure 2022541315000010
実施例１４－抗ＡＦＰ／ＭＨＣ ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＳＲ Ｔ細胞由来のメモリー細胞の発達及び維持
この実施例は、ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞が、標的刺激後に、セントラルメモリー及びエフェクターメモリーＴ細胞を含む、高いメモリーＴ細胞集団に発達し、維持されたことを示す。ＣＡＲのみ又はＣＡＲ＋ＣＤ２８－ＣＳＲの共発現と比較して、メモリーＴ細胞への発達及び維持するためのＴ細胞の能力に対するＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲの発現の効果を決定するために、メモリーＴ細胞マーカーであるＣＣＲ７及びＣＤ４５ＲＡの細胞表面発現を測定した。本分野で知られているように、高いＣＣＲ７発現レベル及び低いＣＤ４５ＲＡ発現レベルを有するＴ細胞は、セントラルメモリーＴ細胞であり、低ＣＣＲ７及び低ＣＤ４５ＲＡ発現レベルを有するＴ細胞は、エフェクターメモリーＴ細胞であり、低ＣＣＲ７及び高ＣＤ４５ＲＡ発現レベルを有するＴ細胞は、エフェクターＴ細胞であり、一方、高ＣＣＲ７及び高ＣＤ４５ＲＡを有するＴ細胞は、標的／抗原の負荷／認識前のＴ細胞の初期タイプであるナイーブＴ細胞であると見なされる（Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１３ Ｎｏｖ；４３（１１）：２７９７－８０９．ｄｏｉ：１０．１００２／ｅｊｉ．２０１３４３７５１．Ｅｐｕｂ ２０１３ Ｏｃｔ ３０．Ｔｈｅ ｗｈｏ’ｓ ｗｈｏ ｏｆ Ｔ－ｃｅｌｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ：ｈｕｍａｎ ｍｅｍｏｒｙ Ｔ－ｃｅｌｌ ｓｕｂｓｅｔｓ．Ｍａｈｎｋｅ ＹＤ１，Ｂｒｏｄｉｅ ＴＭ，Ｓａｌｌｕｓｔｏ Ｆ，Ｒｏｅｄｅｒｅｒ Ｍ，Ｌｕｇｌｉ Ｅ．）。抗原との遭遇に応答すると、ナイーブＴ細胞が増殖し、エフェクター細胞に分化し、そのほとんどが標的を破壊する仕事を実行したのち死滅するが、少数の貯蔵されたＴ細胞は最終的には、特定の標的に対するＴ細胞免疫を蓄えることができる、長寿命のメモリーＴ細胞に発達する。メモリーＴ細胞の中で、セントラルメモリーＴ細胞は、エフェクターメモリーＴ細胞よりも長い寿命を有し、エフェクターメモリーＴ細胞を生成することができるが、その逆はないことが分かっていた。したがって、メモリーＴ細胞、特にセントラルメモリーＴ細胞に発達し、維持する力は、成功の可能性を秘めたＴ細胞療法の重要かつ所望される特徴である。初代Ｔ細胞を、モック形質導入、又は様々なＣＡＲコンストラクトをコードするベクターで形質導入した。エフェクター細胞を、第１世代ＣＡＲコンストラクト：（１）抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ（配列番号１）、（２）抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ２８－ＣＳＲ（配列番号１＋配列番号１４）、若しくは（３）抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲ（配列番号１＋配列番号１３）、又は第２世代ＣＡＲコンストラクト：（１）抗ＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ（配列番号７）、（２）抗ＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ２８－ＣＳＲ（配列番号７＋配列番号１４）、若しくは（３）抗ＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲ（配列番号７＋配列番号１３）をコードするベクターで、７～９日間形質導入した。エフェクター細胞を、ＡＦＰ１５８四量体染色に基づいて３５％受容体＋に補正した。
第１世代又は第２世代ＣＡＲコンストラクトのみを発現しているエフェクター細胞（抗ＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ又は抗ＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ）を、ＨｅｐＧ２標的細胞と共に、２：１のＥ：Ｔ比（９６ウェルプレートの各ウェルに、１００，０００個の受容体＋Ｔ細胞と５０，０００個のＨｅｐＧ２細胞）で７日間インキュベートした。次いで、細胞に、７日毎にウェル当たり１００，０００個のＨｅｐＧ２細胞を再負荷した。
ＣＡＲ＋ＣＳＲコンストラクトを発現しているエフェクター細胞を、ＨｅｐＧ２標的細胞と共に、１：２のＥ：Ｔ比（各ウェルに、２５，０００個の受容体＋Ｔ細胞と５０，０００個のＨｅｐＧ２細胞）で７日間インキュベートした。次いで、細胞に、７日毎にウェル当たり１００，０００個のＨｅｐＧ２細胞を再負荷した。
それぞれの異なるＴ細胞及び標的細胞混合物試料を繰り返し作製し、各選択した日における定量のために少なくとも１つの混合物を利用できるようにした。ＣＡＲ又はＣＡＲ＋ＣＳＲエフェクター及び標的細胞混合物を、４回目及び５回目の標的細胞エンゲージメント（Ｅ４及びＥ５）の前に１：６に希釈し、著しいＴ細胞増殖に起因するＴ細胞の過密状態を回避し、これまで残った細胞のうちの６分の１個のみを１００，０００個のＨｅｐＧ２細胞で再負荷した。
各標的細胞エンゲージメント後の選択された日に、各試料由来のウェル内の細胞混合物全体を、ＣＣＲ７及びＣＤ４５ＲＡに対する抗体で染色し、フローサイトメトリーによって分析した。受容体＋Ｔ細胞数を計数し、細胞を、ＣＣＲ７及びＣＤ４５ＲＡの発現レベルに基づいて様々なＴ細胞タイプ、すなわち、セントラルメモリーＴ細胞（ＣＤ４５ＲＡ－ＣＣＲ７＋）、エフェクターメモリーＴ細胞（ＣＤ４５ＲＡ－ＣＣＲ７－）、エフェクターＴ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＣＲ７－）、及びナイーブＴ細胞（ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＣＲ７＋）に分類した。受容体＋Ｔ細胞の総数のうち様々なタイプのＴ細胞の割合を計算した。いくつかの実験では、細胞を更にＣＤ８又はＣＤ４に対する抗体で染色して、計数されたＴ細胞のＣＤ８－ＣＤ４特性を決定した。
総受容体＋Ｔ細胞（ＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞を含む）のうちセントラルメモリーＴ細胞の計数、並びに、ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞のメモリーＴ細胞数の、ＣＡＲ＋ＣＤ２８－ＣＳＲ又はＣＡＲのみのＴ細胞に対する比を、表５～７に示す。表５及び６は、αＡＦＰ－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲのみを発現している、又は加えてＣＳＲ（αＧＰＣ３－ＣＤ２８－ＣＳＲ又はαＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲ）を発現している第１世代ＣＡＲ＋Ｔ細胞のセントラルメモリーＴ細胞数を示す。表５のＣＡＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞中で共発現するＣＡＲ及びＣＳＲは２つの別個のベクターにコードしたが、表６のＣＡＲ及びＣＳＲは１つのベクターにコードした。表７は、αＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲのみを発現している、又は加えてＣＳＲ（αＧＰＣ３－ＣＤ２８－ＣＳＲ又はαＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲ）を発現している第２世代ＣＡＲ＋Ｔ細胞のセントラルメモリーＴ細胞数を示す。表７のものを含む、この実施例で開示された全ての実験において共発現させた第２世代ＣＡＲ及びＣＳＲは、２つの別個のベクターにコードした。表５～７の結果は、驚くべきことに、ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲの発現が、ほぼ全ての時点、特に標的細胞とのエンゲージメント後長期間（例えば、初回エンゲージメントの７日後かつ２回目のエンゲージメントの開始時）において、ＣＡＲのみ又はＣＡＲ＋ＣＤ２８－ＣＳＲの発現よりも多くのセントラルメモリーＴ細胞をもたらしたことを示す。
Figure 2022541315000011
Figure 2022541315000012
Figure 2022541315000013
Ｔ細胞数に加えて、受容体＋Ｔ細胞の総数におけるセントラルメモリーＴ細胞の割合を計算し、ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞のメモリーＴ細胞割合のＣＡＲ＋ＣＤ２８－ＣＳＲＴ細胞に対する比と共に、表８～１０に示す。割合データがこれらの表に示されているＴ細胞は、細胞数データが表５～７に示されているものと同じＴ細胞であった。
Figure 2022541315000014
Figure 2022541315000015
Figure 2022541315000016
これらの驚くべき結果は、ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲを発現しているＴ細胞が、標的細胞とのエンゲージメント時に、ＣＡＲのみ又はＣＡＲ＋ＣＤ２８－ＣＳＲを発現しているＴ細胞よりも、高い数及び高い割合でセントラルメモリーＴ細胞に発達し、維持され、ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞プラットフォームを成功の可能性を秘めたＴ細胞療法プラットフォームにすることを示す。
総セントラルメモリー受容体＋Ｔ細胞数及び全受容体＋Ｔ細胞におけるそれらの割合の決定に加えて、同じＴ細胞－標的細胞混合物試料で、ＣＤ８に対する抗体での染色も行い、ＣＤ８＋受容体＋セントラルメモリーＴ細胞の数を決定し、ＣＤ８＋受容体＋Ｔ細胞におけるセントラルメモリーＴ細胞の割合を計算した。結果を、メモリーＴ細胞数の比、又はＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞のＣＡＲ＋ＣＤ２８－ＣＳＲ又はＣＡＲのみのＴ細胞の割合と共に、表１１～１６に示す。
Figure 2022541315000017
Figure 2022541315000018

Figure 2022541315000019
Figure 2022541315000020

Figure 2022541315000021
Figure 2022541315000022
これらの驚くべき結果は、ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲを発現しているＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞が、ＣＡＲのみ又はＣＡＲ＋ＣＤ２８－ＣＳＲを発現しているＣＤ８＋Ｔ細胞よりも、高い数及び高い割合でセントラルメモリーＴ細胞に発達し、かつ維持されることができ、ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞プラットフォームを、特に標的細胞（癌細胞を含む）死滅及び癌治療のための優れたＴ細胞療法プラットフォームにすることを示す。
この実験から、少なくとも第１世代ＣＡＲにおいて、ＣＤ３０－ＣＳＲの共発現により、ＣＡＲのみの発現又はＣＤ２８－ＣＳＲの共発現よりも、（多くのセントラルメモリーＴ細胞に加えて）多くのエフェクターメモリーＴ細胞もまたもたらし（データは示さず）、これもＴ細胞療法に役立つ。
実施例１５－抗ＡＦＰ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＳＲ Ｔ細胞によるインビボ腫瘍浸潤
約１０７個のＨｅｐＧ２腫瘍細胞をＮＳＧマウスに皮下移植し、１５０ｍｍ３の固形腫瘍量を形成させた。１つの実験では、５×１０６個のモック形質導入Ｔ細胞又は、（１）αＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ（配列番号７）、（２）αＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ２８－ＣＳＲ（配列番号７＋配列番号１４）、若しくは（３）αＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲ（配列番号７＋配列番号１３）を発現しているＣＡＲ＋Ｔ細胞を、各試料群に３例の腫瘍担持マウスに静脈内注射した。Ｔ細胞投与の３週間後、マウスを屠殺し、腫瘍を除去し、固定し、スライド上の切片を作製した。腫瘍切片をＣＤ３抗体で染色して、固形腫瘍内に存在するＴ細胞を視覚化した。各試料の腫瘍切片の代表的な画像を図４に示す。各マウスの腫瘍の４つの代表的な切片において、ＣＤ３＋細胞（Ｔ細胞）数並びに全ての細胞数の定量化を行い、各ＣＡＲ Ｔ試料群について、平均Ｔ細胞％（ＣＤ３＋細胞であった全細胞の％）を、ＣＡＲ Ｔ細胞の腫瘍浸潤能の指標として計算し、図５及び表１７に示す。図４及び図５並びに表１７は、驚くべきことに、αＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞が、ＣＳＲを含まない対応するＣＡＲ Ｔ細胞又は対応するＣＡＲ＋ＣＤ２８－ＣＳＲ Ｔ細胞よりも、有意に高いインビボ腫瘍浸潤／侵入速度／レベル／能力（すなわち、全細胞中のより高いＣＤ３＋細胞％）を有したことを示す。表１７は、腫瘍試料中の全細胞におけるＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞（ＣＤ３＋）の％の、全細胞におけるＣＡＲ＋ＣＤ２８－ＣＳＲ又はＣＡＲのみのＴ細胞の％に対する比を更に示す。
Figure 2022541315000023
実施例１６－抗ＧＰＣ３－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＳＲ Ｔ細胞によるインビボ腫瘍浸潤
ＮＳＧマウスへの移植にＨｅｐＧ２腫瘍細胞を使用することを含む、実施例１５に記載されるものと同様のプロトコルに従って、αＧＰＣ３－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ及びαＧＰＣ３－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞の腫瘍浸潤能についても、インビボで試験した。このようなＣＡＲ Ｔ細胞は、αＧＰＣ３－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ又はαＧＰＣ３－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲをコードするレンチウイルスベクターを用いて、初代Ｔ細胞を形質導入することによって生成した。αＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲは、前の実施例で開示されたαＡＦＰ－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲと共発現するαＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲと同一である。これらのＴ細胞のＣＡＲ及びＣＳＲ中のαＧＰＣ３抗体部分は、略式配列表に開示されるように、異なるＧＰＣ３結合配列を含む。１０７個のＨｅｐＧ２腫瘍細胞をＮＳＧマウスに皮下移植し、約２５０ｍｍ３の量の固形腫瘍を形成させた。１×１０７個のＣＡＲ Ｔ細胞（５０％ＣＡＲ受容体陽性）又は５×１０６個のモックＴ細胞を、腫瘍担持マウスに静脈内注射した。Ｔ細胞投与の２週間後、マウスを屠殺し、腫瘍を除去し、固定し、スライド上の切片を作製した。腫瘍切片をＣＤ３抗体で染色して、固形腫瘍内に存在するＴ細胞を視覚化した。ＣＤ３＋細胞（Ｔ細胞）及び全細胞の数の定量化を、ＱｕＰａｔｈソフトウェアを使用して行い、Ｔ細胞の腫瘍浸潤能（腫瘍侵入及び侵入後のＴ細胞増殖能の組み合わせ）をスコア化した。各試料の腫瘍切片の代表的な画像を図６に示す。各マウスの腫瘍の４つの代表的な切片において、Ｔ細胞及び全細胞の数の定量化を行い、各ＣＡＲ Ｔ試料群について、平均Ｔ細胞％（ＣＤ３＋細胞であった全細胞の％）を計算し、表１８に示す。表１８は、腫瘍試料中の全細胞におけるＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞の％の、全細胞におけるＣＡＲのみのＴ細胞の％に対する比を更に示す。図６並びに表１８は、αＧＰＣ３－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞が、ＣＳＲを含まない対応するＣＡＲ Ｔ細胞よりも、有意に高いインビボ腫瘍能力（すなわち、全細胞中のより高いＣＤ３＋細胞％）を有したことを示す。
Figure 2022541315000024
実施例１７－抗ＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲ対抗ＧＰＣ３－ＣＤ３０Ｔ－ＣＤ２８－ＣＳＲを発現している抗ＧＰＣ３－ＣＡＲ Ｔ細胞の追加のインビトロ及びインビボアッセイ
インビトロ腫瘍細胞死滅アッセイ
様々な抗ＧＰＣ３－ＣＡＲ Ｔ細胞の短期死滅能を比較するＬＤＨ系アッセイを、実施例１Ａ及び１Ｂに記載の方法を使用して実施した。この実施例で使用したエフェクター細胞群は、以下を含む。これらのＣＡＲ Ｔ細胞は、以下のＣＡＲ又はＣＡＲ＋ＣＳＲをコードするレンチウイルスベクターを用いて、初代Ｔ細胞（実施例１６で使用した初代Ｔ細胞源とは異なるドナー由来）を形質導入することによって生成した。
群１）ＣＳＲを含まないＣＡＲ Ｔ細胞：抗ＧＰＣ３－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ、
群２）ＣＤ３０膜貫通ドメイン及びＣＤ２８細胞内ドメインを含むＣＳＲを有するＣＡＲ Ｔ細胞：抗ＧＰＣ３－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ３０Ｔ－ＣＤ２８－ＣＳＲ
群３）ＣＤ３０膜貫通ドメイン及び細胞内ＣＤ３０共刺激ドメイン（ＣＤ３０ ＩＣドメイン）を含むＣＳＲを有するＣＡＲ Ｔ細胞：抗ＧＰＣ３－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲ。
活性化エフェクター細胞（抗ＧＰＣ３－ＣＡＲ受容体陽性Ｔ細胞）及び標的細胞（ＧＰＣ３＋のＨｅｐＧ２細胞＋）を、陰性対照としてＳＫＨｅｐ１（ＧＰＣ３－）細胞を含めて、２：１のＥ：Ｔ比で１６時間共培養した。培養上清中のＬＤＨ活性を測定することによって、特異的死滅を測定した。腫瘍細胞傷害を、ＬＤＨ細胞傷害アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用してアッセイした。結果は、３つの抗ＧＰＣ３ ＣＡＲ Ｔ細胞群全てが有意かつ同等のＧＰＣ３特異的死滅効果を示した（約６０％の特異的溶解全て）。
インビボ腫瘍浸潤アッセイ
更に、実施例８Ａ、８Ｂ、１５、及び１６に記載されているものと同様のプロトコルに従って、上記実施例１７（Ａ）の３つの異なるＣＡＲ Ｔエフェクター細胞群を、インビボ腫瘍浸潤能について試験した。５×１０６個のＨｅｐＧ２腫瘍細胞を各ＮＳＧマウスに皮下移植し、約１５０ｍｍ３の量の固形腫瘍を形成させた。腫瘍が適切なサイズに達したとき、動物を、群当たり３例のマウスで実験群に割り当てた。１×１０７個の総Ｔ細胞（ＣＡＲ Ｔ細胞群については５０％ＣＡＲ受容体陽性）を、腫瘍担持マウスに静脈内注射した。Ｔ細胞投与の１０日後、腫瘍成長がプラトーになたたときに動物を屠殺した。マウスを屠殺したときに、腫瘍を除去し、固定し、スライド上の切片を作製した。腫瘍切片において免疫組織化学的手法を用いて、ＣＤ３を染色した。これらの切片中のＣＤ３陽性細胞及びＣＤ３陰性細胞を、自動免疫組織化学的撮像装置で定量化し、Ｔ細胞によって浸潤された腫瘍塊の割合を決定した。各マウスの腫瘍の代表的な切片において、ＣＤ３＋細胞（Ｔ細胞）の数並びに全細胞の数の定量化を行ったところ、切片当たり５５，０００個超～ほぼ７００，０００個の範囲の全細胞数であった。各ＣＡＲ Ｔ試料群について平均Ｔ細胞％（ＣＤ３＋であった全細胞の％）を計算し、図７及び表１９に示した。図７並びに表１９は、αＧＰＣ３－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞（「群３」）が、ＣＳＲを含まない（「群１」）又はαＧＰＣ３－ＣＤ３０Ｔ－ＣＤ２８－ＣＳＲを含む（「群２」）対応するＣＡＲ Ｔ細胞よりも、有意に高いインビボ腫瘍能力（すなわち、全細胞中のより高いＣＤ３＋細胞％）を有したことを示す。
Figure 2022541315000025
結果は、インビボ腫瘍浸潤能（腫瘍侵入及び侵入後のＴ細胞増殖能の組み合わせ）が、αＣＤ３０ ＴＭ及びＣＤ３０ ＩＣドメインを有するＧＰＣ３－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞で最も高く、驚くべきことに、細胞内領域のＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞のみが異なるαＧＰＣ３－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ３０Ｔ－ＣＤ２８－ＣＳＲ Ｔ細胞よりもはるかに高かったことを示し、ＣＤ３０ ＩＣ共刺激ドメインが、ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞の高インビボ腫瘍浸潤能において、重要な役割を果たすことを示唆している。
末梢血試料におけるインビボＴ細胞増殖／増加
αＧＰＣ３－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ３０Ｔ－ＣＤ２８－ＣＳＲ Ｔ細胞のインビボ細胞増殖／増加能の試験のため、実施例１７（Ｂ）に開示されているインビボ腫瘍浸潤アッセイで使用したマウスから、マウスの屠殺時に、末梢血試料を回収した。ＣＡＲ受容体＋ＣＤ３＋細胞及び総ＣＤ３＋細胞の濃度（血液１ｍＬ当たりの細胞数）を決定し、結果を表２０に示す。表２０は、ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞（ＣＤ３＋）の末梢血濃度のＣＡＲ＋ＣＤ２８－ＣＳＲ又はＣＡＲのみのＴ細胞の濃度に対する比を更に示す。
Figure 2022541315000026
結果は、インビボ細胞増殖／増加能が、αＣＤ３０ ＴＭ及びＣＤ３０ ＩＣドメインを有するＧＰＣ３－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞で最も高く、驚くべきことに、細胞内領域のＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞のみが異なるαＧＰＣ３－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ３０Ｔ－ＣＤ２８－ＣＳＲ Ｔ細胞よりもはるかに高かったことを示し、ＣＤ３０ ＩＣ共刺激ドメインが、ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞の高インビボ細胞増殖／増加能において、重要な役割を果たすことを示唆している。
末梢血試料のインビボメモリーＴ細胞数
αＧＰＣ３－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ３０Ｔ－ＣＤ２８－ＣＳＲ Ｔ細胞のインビボメモリーＴ細胞生成能の試験のため、実施例１７（Ｂ）に開示されているインビボ腫瘍浸潤アッセイで使用したマウスから、マウスの屠殺時に、末梢血試料を回収した。末梢血において、セントラルメモリーＴ細胞（ＣＤ４５ＲＡ－ＣＣＲ７＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋又はＣＤ４＋）の数を、上記実施例に記載されるように決定し、全Ｔ細胞におけるセントラルメモリーＴ細胞の割合を算出し、表２１に示した。表２１は、ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞のセントラルメモリーＴ細胞割合のＣＡＲ＋ＣＤ２８－ＣＳＲ又はＣＡＲのみのＴ細胞の割合に対する比を更に示す。
Figure 2022541315000027
インビボ末梢血の結果は、ＣＤ８＋及びＣＤ４＋両方のセントラルメモリーＴ細胞割合もまた、抗ＧＰＣ３－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋抗ＧＰＣ３－ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞でも最も高く、これも驚くべきことに、細胞内領域のＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞のみが異なるαＧＰＣ３－ＣＤ２８ｚ－ＣＡＲ＋αＧＰＣ３－ＣＤ３０Ｔ－ＣＤ２８－ＣＳＲ Ｔ細胞よりもはるかに高かったことを示し、ＣＤ３０ ＩＣ共刺激ドメインが、ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞の高インビボセントラルメモリーＴ細胞生成能において、重要な役割を果たすことを示唆している。
実施例１８－抗ＣＤ１９－ＣＤ３０－ＣＳＲ対抗ＣＤ１９－ＣＤ２８－ＣＳＲ又は４１ＢＢ－ＣＳＲを発現している抗ＣＤ１９－ＣＡＲ Ｔ細胞の多角的インビトロアッセイ
短期死滅及びＩＦＮγ産生
様々なＴ細胞の短期死滅能を比較するアッセイを、以下のコンストラクトを使用して実施例１Ａと同様に実施した。
使用した第１世代コンストラクト：
αＣＤ１９－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ１９－ＣＤ２８－ＣＳＲ、及び
αＣＤ１９－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ１９－ＣＤ３０－ＣＳＲ。
使用した第２世代コンストラクト：
αＣＤ１９－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ１９－ＣＤ２８Ｔ－４１ＢＢ－ＣＳＲ、及び
αＣＤ１９－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ１９－ＣＤ２８Ｔ－ＣＤ３０－ＣＳＲ。
初代Ｔ細胞を、各コンストラクトをコードするベクターで形質導入した。形質導入効率を決定し、モック形質導入Ｔ細胞と混合することによって、Ｔ細胞を４０パーセント受容体陽性にした。Ｎａｌｍ６又はＲａｊｉ細胞を、１：１のエフェクター対標的比で使用した。培地へのＩＦＮγの放出を７２時間後に測定した。培養培地中のＩＦＮγレベルは、Ｍａｇｐｉｘ ｍｕｌｔｉｐｌｅｘシステム（Ｌｕｍｉｎｅｘ）をＢｉｏ－ｐｌｅｘ Ｐｒｏ Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ８－ｐｌｅｘ Ａｓｓａｙ（ＢｉｏＲａｄ）と共に使用して測定した。Ｎａｌｍ６又はＲａｊｉ標的反応物からのアッセイ上清を、４倍に希釈した。サイトカイン濃度を、ＢｉｏＲａｄ Ｂｉｏ－ｐｌｅｘキットで提供される標準曲線を用いて決定した。
ＣＡＲ＋４１ＢＢ－ＣＳＲと比較して、ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲを使用すると、インビトロ死滅及びその後のサイトカインレベルの増加は特に高く、又は同等であり、最も劇的な増加は、Ｎａｌｍ６及びＲａｊｉ細胞の両方を使用する第１世代ＣＡＲ発現エフェクターＴ細胞で観察された（図８Ａ及び８Ｂ）。Ｎａｌｍ６又はＲａｊｉを死滅させるときにＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲで見られるＩＦＮγ放出の顕著な増加は、ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲが抗ＣＤ１９モデルにおいて、増加した細胞毒性シグナル伝達能を保持していたことを示した。
第１世代ＣＡＲ＋ＣＳＲエフェクター及びＮａｌｍ６標的細胞を使用した長期死滅アッセイ及びセントラルメモリーＴ細胞測定
第１世代ＣＡＲ＋ＣＳＲ発現エフェクター細胞を用いて、様々なＴ細胞の長期死滅能を比較するアッセイを行った（例えば、試料実験プロトコルについて実施例３Ａ、３Ｂ、及び１２を参照されたい）。
使用した第１世代ＣＡＲ：
αＣＤ１９－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ１９－ＣＤ２８－ＣＳＲ、
αＣＤ１９－ＣＤ８Ｔ－ｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ１９－ＣＤ３０－ＣＳＲ。
セントラルメモリーＴ細胞（Ｔｃｍ）の割合は、全受容体＋Ｔ細胞（ＣＤ８＋Ｔ細胞及びＣＤ４＋Ｔ細胞）の集団における％Ｔｃｍを表す。セントラルメモリーＴ細胞の％を、数週間のアッセイの過程で測定し、ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ発現細胞のメモリーＴ細胞％を、ＣＡＲ＋ＣＤ２８－ＣＳＲ発現エフェクター細胞のＴｃｍ％で割ったものを使用して計算した。表２２は、ＣＡＲ－ＣＤ３０－ＣＳＲ発現が、ＣＡＲ＋ＣＤ２８－ＣＳＲ細胞よりも、かなり多くのセントラルメモリーＴ細胞を誘導し、一貫して良好に、アッセイの過程にわたって維持されて増殖したことを示す。標的細胞はＮａｌｍ６とした。代表的なデータを示す。
Figure 2022541315000028
標的としてＲａｊｉ細胞を使用するアッセイも、ＣＡＲ＋ＣＤ２８－ＣＳＲ集団よりもＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ集団において、受容体＋Ｔ細胞（ＣＤ８＋ＣＤ４＋）の割合として表される、より多くのＴｃｍ細胞が存在したことを示した。ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ発現エフェクター細胞を用いたアッセイにおけるセントラルメモリーＴ細胞％は、ＣＡＲ＋ＣＤ２８－ＣＳＲを発現しているエフェクター細胞よりもアッセイ期間全体にわたって明らかかつ一貫して高かった（データは示さず）。
第２世代ＣＡＲ＋ＣＳＲエフェクター細胞及びＮａｌｍ６標的細胞を使用した長期死滅アッセイ及びセントラルメモリーＴ細胞測定
この実施例で使用したコンストラクトは、以下の第２世代ＣＡＲを含む。
αＣＤ１９－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ１９－ＣＤ２８Ｔ－４１ＢＢ－ＣＳＲ、
αＣＤ１９－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ１９－ＣＤ２８Ｔ－ＣＤ３０－ＣＳＲ。
Ｎａｌｍ６標的細胞エンゲージメント後の、総Ｔ細胞（ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞）のうちの標的抗原特異的メモリーＴ細胞成分の増殖を、ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ及びＣＡＲ＋４１ＢＢ－ＣＳＲを発現している第２世代するＣＡＲエフェクター細胞を使用して長期アッセイにおいて評価した。ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲのセントラルメモリーＴ細胞割合のＣＡＲ＋４１ＢＢ－ＣＳＲと比較した比は、長期アッセイの全過程で依存的に高かった。ＣＤ８＋セントラルメモリーＴ細胞の割合の比は、同様に、同じ期間中、ＣＡＲ＋４１ＢＢ－ＣＳＲ発現細胞と比較して、ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ発現エフェクター細胞において一貫して高い。全てのＣＡＲ＋ＣＳＲアッセイは、堅牢な標的細胞死滅を示した（図示せず）。代表的なデータを示され、表２３Ａ及び表２３Ｂを参照されたい。
Figure 2022541315000029
Figure 2022541315000030
Ｒａｊｉ細胞のデータは、アッセイの過程中、ＣＡＲ＋４１ＢＢ－ＣＳＲとＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ集団との間で同等のセントラルメモリーＴ細胞割合を示した。
第２世代ＣＡＲ＋ＣＳＲエフェクター細胞及び標的細胞としてＮａｌｍ６を使用した、長期死滅アッセイ及び総Ｔ細胞及び受容体＋Ｔ細胞の測定
この実施例で使用したコンストラクトは、以下を含む。
使用した第２世代ＣＡＲ：
αＣＤ１９－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ１９－ＣＤ２８Ｔ－４１ＢＢ－ＣＳＲ、
αＣＤ１９－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ１９－ＣＤ２８Ｔ－ＣＤ３０－ＣＳＲ。
総Ｔ細胞集団、受容体＋＋成分及びＴ細胞の標的成分を、４１ＢＢ－ＣＳＲ又はＣＤ３０－ＣＳＲを発現している第２世代ＣＡＲ Ｔ細胞をＮａｌｍ６標的細胞集団と共に使用する長期死滅アッセイの過程中で測定した。総Ｔ細胞、受容体＋Ｔ細胞及び標的細胞数を比較すると、ＣＡＲ＋４１ＢＢ－ＣＳＲを発現している集団よりもＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲを発現している集団において一貫してより多数の総Ｔ細胞を示した。これらのＴ細胞の受容体＋成分は、アッセイの最終週（Ｅ３Ｄ５～Ｅ４Ｄ７）中のＣＡＲ＋４１ＢＢ－ＣＳＲ発現細胞よりもＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ発現エフェクター集団においてより高いが、当初は、このレベルは、ＣＤ３０－ＣＳＲ及び４１ＢＢ－ＣＳＲエフェクター細胞の両方において培養中で同等であった。アッセイの期間中に、少数の標的細胞が両方の集団に見られた。ＣＤ３０－ＣＳＲを４１ＢＢ－ＣＳＲ細胞数と比較する、総Ｔ細胞数と受容体＋Ｔ細胞数の比は、ＣＤ３０－ＣＳＲ発現エフェクター細胞培養物中に存在するＴ細胞及びＲ＋Ｔ細胞の数が、一貫して高いことを示した。代表的なデータを示す。表２４Ａ及び表２４Ｂを参照されたい。
Figure 2022541315000031

Figure 2022541315000032
Ｒａｊｉ標的エンゲージメントのデータは、各アッセイ時点中、同様のＴ細胞及び受容体＋Ｔ細胞数を示し、並びに、アッセイの過程中、低い標的細胞数を示した（図示せず）。
第１又は第２世代ＣＡＲ＋ＣＳＲエフェクター細胞を使用した長期死滅アッセイにおける疲弊マーカー発現
この実施例で使用したコンストラクトは、ＰＤ１発現レベル及び総Ｔ細胞（ＣＤ４＋ＣＤ８＋）を測定するアッセイにおいて、以下の第２世代ＣＡＲを含む。
αＣＤ１９－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ１９－ＣＤ２８Ｔ－４１ＢＢ－ＣＳＲ、
αＣＤ１９－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋αＣＤ１９－ＣＤ２８Ｔ－ＣＤ３０－ＣＳＲ。
ＰＤ１疲弊マーカーの発現は、標的としてＮａｌｍ６及びＲａｊｉ細胞の両方を使用して、ＣＡＲ＋ＣＳＲ発現エフェクター細胞の長期培養において分析した。標的エンゲージメント後の総Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＰＤ１疲弊マーカーの発現は、標的としてＮａｌｍ６及びＲａｊｉ細胞を使用したアッセイの過程中（Ｅ１Ｄ３～Ｅ４Ｄ７）、４１ＢＢ－ＣＳＲ発現集団と比較してＣＤ３０－ＣＳＲ発現集団において低かった。Ｔ細胞におけるＰＤ１発現を、フローサイトメトリーによって測定し、ＰＤ１の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を計算した。長期アッセイ培養におけるＣＡＲ＋４１ＢＢ－ＣＳＲ発現と比較するとき、Ｔ細胞におけるＰＤ１の発現の低下は、ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ発現がＴ細胞機能の低下を弱めることを示す。表２５Ａ、２５Ｂ、２６Ａ、及び２６Ｂを参照されたい。

Figure 2022541315000033
Figure 2022541315000034
実施例１９－抗ＲＯＲ１－ＣＤ２８Ｔ－ＣＤ３０－ＣＳＲ対抗ＲＯＲ１－ＣＤ２８Ｔ－４１ＢＢ－ＣＳＲを発現している抗ＲＯＲ１－ＣＡＲ Ｔ細胞の多角的インビトロアッセイ
この実施例は、細胞疲弊マーカーレベル及びセントラルメモリーＴ細胞測定アッセイにおいて、ＣＤ３０共刺激ドメインを含むＲＯＲ１標的ＣＳＲを共発現しているＲＯＲ１標的化ＣＡＲ Ｔ細胞が、効果的に癌細胞を死滅させ、４－１ＢＢ共刺激ドメインを含むＣＳＲを共発現している対応するＣＡＲ Ｔ細胞より優れていたことを示す。
この実施例で使用した２つのエフェクター細胞群は、以下の通りである。
モック形質導入Ｔ細胞、
αＲＯＲ１－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋αＲＯＲ１－ＣＤ２８Ｔ－ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞（「ｔＣＤ３０」）、及び
αＲＯＲ１－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋αＲＯＲ１－ＣＤ２８Ｔ－４１ＢＢ－ＣＳＲ Ｔ細胞（「ｔ４１ＢＢ」）。
これらのＣＡＲ及びＣＳＲの抗ＲＯＲ１抗原結合ドメイン（抗体部分）は、同じｓｃＦｖ配列（配列番号５０）を含む。これらのＣＡＲ Ｔ細胞は、単一のベクター上にコードされたＣＡＲ及びＣＳＲを有するレンチウイルス（lentivial）ベクターを用いて、初代Ｔ細胞を形質導入することによって生成した。
この実施例で使用した標的細胞株は、全てＲＯＲ１を発現している（ＲＯＲ１＋）以下のものである。
Ｊｅｋｏ１（リンパ腫細胞株）、
ＲＰＭＩ８２２６（多発性骨髄腫細胞株）、
ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（乳癌細胞株）、及び
Ａ５４９、Ｈ１９７５、及びＨ１７０３（３つの異なる肺癌細胞株）。
Ａ．抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞による短期死滅及び癌細胞死滅に関連するサイトカイン産生
２種類の抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞群の短期インビトロ標的細胞死滅能は、実施例１Ｂに記載されるように、様々な標的細胞とのエンゲージメント時にＴ細胞から放出されるサイトカインの量／レベルを測定することによって決定した。２×１０５個のＣＡＲ＋Ｔ細胞を、１：１のＥＴ比で約１６時間、標的細胞と共培養した。共培養後の上清中のＩＦＮγ放出のレベルを定量した。結果を図９に示したが、この図は、抗ＲＯＲ１－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋抗ＲＯＲ１－ＣＤ２８Ｔ－ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞（「ｔＣＤ３０」）が、モック形質導入されたＴ細胞と比較して、６つ全ての試験癌細胞株に対して有意なＲＯＲ１特異的細胞死滅能を有し（ＩＦＮγ放出レベルによって測定）、それらの細胞死滅能は、４－１ＢＢ共刺激ドメインを含むＣＳＲを共発現している対応するＣＡＲ Ｔ細胞（「ｔ４１ＢＢ」）と同等かやや良好であることを示す。
Ｂ．数週間エンゲージメント後の長期抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞及び標的細胞数
この実施例は、長期死滅アッセイにおいて、抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞が、対応するＣＡＲ＋４１ＢＢ－ＣＳＲ Ｔ細胞よりも、多くの標的細胞を死滅させ、ほとんどが生存したことを示す。
この実施例に記載される２つの抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ＋ＣＳＲ細胞群の１０５個のＣＡＲ＋（受容体＋）Ｔ細胞を、２つ組を複数回、まず１：１のＥＴ比で様々な標的細胞と共培養／エンゲージメントさせた。この実施例（実施例１９Ｂ）で使用される標的細胞は、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（乳癌細胞株）、Ａ５４９、Ｈ１９７５、及びＨ１７０３（肺癌細胞株）であり、全て固形腫瘍細胞及び接着細胞であった。初回エンゲージメント後７日毎に、１試料群当たり、１試料のＴ細胞標的細胞混合物のうち残っている生標的細胞（プレートに接着している）を溶解し、クリスタルバイオレットで染色して総標的細胞数／質量定量を行い、一方、培養懸濁液中のＴ細胞及び接着標的細胞を含む各群の溶解していない試料は、７日毎に１０５個の新しい標的細胞を再負荷した。
表２６は、様々な癌細胞株（Ｈ１９７５、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、Ｈ１７０３、及びＡ５４９）を用いた、αＲＯＲ１－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋αＲＯＲ１－ＣＤ２８Ｔ－ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞（「ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ」）の負荷対αＲＯＲ１－ＣＤ８Ｔ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋αＲＯＲ１－ＣＤ２８Ｔ－４１ＢＢ－ＣＳＲ Ｔ細胞（「ＣＡＲ＋４１ＢＢ－ＣＳＲ」）負荷後の残った標的細胞数／質量の比を示す。各試料群（培養懸濁液中）に残っている生Ｔ細胞を、ＦＡＣＳを使用した各標的細胞エンゲージメント後に様々な日に定量し、結果を図１０Ａ～図１０Ｄに示す。
Figure 2022541315000035
表２６に見られるように、長期死滅アッセイにおいて、抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞は、驚くべきことに、４つの標的細胞株の各々の負荷において、ＣＡＲ＋４１ＢＢ－ＣＳＲ Ｔ細胞よりも多くの標的細胞を死滅させた。図１０Ａ～１０Ｄは、長期死滅アッセイにおいて、抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞が、多くの場合、ＣＡＲ＋４１ＢＢ－ＣＳＲ Ｔ細胞よりも高い細胞生存率を有し、ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞がより良好なＴ細胞持続性を有したことを示した。更に、２つのＣＡＲ＋ＣＳＲコンストラクト間の唯一の違いがＣＳＲの細胞内ドメインであるため、ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞の長期標的細胞殺滅及びＴ細胞生存能は、主にＣＤ３０の細胞内ドメイン、つまり共刺激ドメインに起因する。
Ｃ．標的細胞と共培養後の抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞におけるＴ細胞疲弊マーカーの発現
２つの抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞群のＴ細胞疲弊マーカーであるＰＤ１の発現レベルを、実施例６及び１３に記載の方法に従って、上記開示したＲＯＲ１＋癌細胞株のを一部を使用して測定した。この実施例に記載される２つの抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ＋ＣＳＲ細胞群の１０５個のＣＡＲ＋（受容体＋）Ｔ細胞を、９６ウェルプレートの２つ組を複数回、まず１：１のＥＴ比で様々な標的細胞と共培養／エンゲージメントさせた。この実施例（実施例１９Ｃ）で使用した標的細胞は、Ａ５４９、Ｈ１９７５、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、及び多発性骨髄腫細胞株のＲＰＭＩ８２２６である。１試料群当たり少なくとも１つの試料のＴ細胞のＰＤ１発現レベルを、標的細胞エンゲージメント後の選択した日に測定した。初回エンゲージメント後７日毎に、各群の未使用の２つ組の細胞混合物試料に、１０５個の新しい標的細胞を再負荷した。ＰＤ１発現レベル測定（ＭＦＩ値）及びＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ対ＣＡＲ＋４１ＢＢ－ＣＳＲ Ｔ細胞のＭＦＩ値の計算した比率の代表的な結果を、以下の表２６Ａ～２９Ｂに示す。
Figure 2022541315000036

Figure 2022541315000037
Figure 2022541315000038
Figure 2022541315000039
Figure 2022541315000040

Figure 2022541315000041
Figure 2022541315000042
Figure 2022541315000043
結果は、驚くべきことに、ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲを発現することにより、ＣＡＲ＋４１ＢＢ－ＣＳＲを発現するよりも有意に低い疲弊マーカーＰＤ１の蓄積を有するＴ細胞が得られ、著しく機能的でＴ細胞の疲弊がより低いことを示す。更に、２つのＣＡＲ＋ＣＳＲコンストラクト間の唯一の違いがＣＳＲの細胞内ドメインであるため、細胞疲弊能の低下は、主にＣＤ３０の細胞内ドメイン、つまり共刺激ドメインに起因する。更に、ＣＡＲ＋４１ＢＢ－ＣＳＲと比較して、ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ発現に由来するＴ細胞疲弊マーカーのレベルの顕著な低下はまた、ＣＤ８＋Ｔ細胞（細胞傷害性Ｔ細胞）及びＣＤ４＋Ｔ細胞（Ｔヘルパー細胞）の両方に見られた。
抗ＲＯＲ１－ｃｄ８ＴＭ－４１ＢＢｚ－ＣＡＲ＋抗ＲＯＲ１－ｃｄ２８ＴＭ－ＣＤ３０ＩＣ－ＣＳＲ Ｔ細胞もまた、より低いＰＤ－１発現を示し、セントラルメモリーＴサブセットのより高い割合及び総細胞数を示し、より良好な持続性を示している。
Ｄ．標的細胞と共培養後の抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ＋ＣＳＲ Ｔ細胞からのセントラルメモリーＴ細胞の発達及び維持
この実施例は、抗ＲＯＲ１－ＣＡＲ＋抗ＲＯＲ１－ＣＤ３０－ＣＳＲ Ｔ細胞が、標的刺激後に、総ＣＤ３＋セントラルメモリーＴ細胞及びＣＤ８＋サブセットセントラルメモリーＴ細胞を含む、高いセントラルメモリーＴ細胞集団に発達し、維持されたことを示す。ＲＯＲ１＋癌細胞株の６つ全てを使用する、実施例５Ａ、５Ｂ、及び１４に記載の方法に従うメモリーＴ細胞マーカーＣＣＲ７及びＣＤ４５ＲＡの細胞表面発現は、上で開示した。この実施例に記載される２つの抗ＲＯＲ１ ＣＡＲ＋ＣＳＲ細胞群の１０５個のＣＡＲ＋（受容体＋）Ｔ細胞を、９６ウェルプレートの２つ組を複数回、まず１：１のＥＴ比で様々な標的細胞と共培養／エンゲージメントさせた。１試料群当たり少なくとも１つの試料のセントラルメモリーＴ細胞の数（Ｔｃｍ細胞数）を、標的細胞エンゲージメントの選択した日に定量化し、ＣＤ３（総Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞及びＣＤ４＋Ｔ細胞を含む）又はＣＤ８（ＣＤ８＋Ｔ細胞）についても標識した。初回エンゲージメント後７日毎に、各群の未使用の２つ組の細胞混合物試料に、１０５個の新しい標的細胞を再負荷した。ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲ及びＣＡＲ＋４１ＢＢ－ＣＳＲ Ｔ細胞のセントラルメモリーＴ細胞数及びＴｃｍ割合の代表的な結果を、表３０～４４に示す。全Ｔ細胞中のセントラルメモリーＴ細胞の割合は、総Ｔ細胞（ＣＤ３＋細胞）の集団中の％Ｔｃｍである。ＣＤ８＋細胞中のＴｃｍの割合は、ＣＤ８＋Ｔ細胞の集団中の％Ｔｃｍである。Ｔｃｍ細胞数及びＴｃｍ割合の比を、ＣＡＲ＋４１ＢＢ－ＣＳＲ Ｔ細胞に対するＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲについて計算した。
Figure 2022541315000044

Figure 2022541315000045
Figure 2022541315000046

Figure 2022541315000047
Figure 2022541315000048

Figure 2022541315000049
Figure 2022541315000050

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結果は、驚くべきことに、ＣＡＲ＋ＣＤ３０－ＣＳＲの発現は、ＣＡＲ＋４１ＢＢ－ＣＳＲの発現よりも、特異的標的に対する長期Ｔ細胞免疫機能のより高い「貯蔵」能を示す、有意に高いセントラルメモリーＴ細胞を有するＴ細胞をもたらした。更に、２つのＣＡＲ＋ＣＳＲコンストラクト間の唯一の違いがＣＳＲの細胞内ドメインであるため、多くの数のセントラルメモリーＴ細胞を発達させ、維持する能力は、主にＣＤ３０の細胞内ドメイン、つまり共刺激ドメインに起因する。
例示的な実施形態
本開示の主題に従って提供される例示的な実施形態には、特許請求の範囲及び以下の実施形態が含まれるが、これらに限定されない。
１．免疫細胞であって、
（ａ）
（ｉ）抗体部分（ＣＡＲ抗体部分）を含む細胞外標的結合ドメインと、
（ｉｉ）膜貫通ドメイン（ＣＡＲ膜貫通ドメイン）と、
（ｉｉｉ）一次シグナル伝達ドメインと、を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）と、
（ｂ）
（ｉ）標的リガンドに結合又は相互作用することができるリガンド結合モジュールと、
（ｉｉ）膜貫通ドメイン（ＣＳＲ膜貫通ドメイン）と、
（ｉｉｉ）ＣＤ３０共刺激ドメインと、を含む、キメラ刺激受容体（ＣＳＲ）と、を含み、
ＣＳＲは、機能性一次シグナル伝達ドメインを欠いている、免疫細胞。
２．ＣＤ３０共刺激ドメインが、細胞内ＴＲＡＦシグナル伝達タンパク質に結合できる配列を含む、実施形態１に記載の免疫細胞。
３．細胞内ＴＲＡＦシグナル伝達タンパク質に結合できる配列が、配列番号６５の配列を有する完全長ＣＤ３０の残基５６１～５７３又は５７８～５８６に対応する、実施形態２に記載の免疫細胞。
４．ＣＤ３０共刺激ドメインが、配列番号６５の残基５６１～５７３又は５７８～５８６に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％同一である配列を含む、実施形態１～３のいずれか１つに記載の免疫細胞。
５．ＣＤ３０共刺激ドメインが、配列番号７５の配列に対して、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％同一である配列を含む、実施形態１～４のいずれか１つに記載の免疫細胞。
６．ＣＳＲが、２つ以上のＣＤ３０共刺激ドメインを含む、実施形態１～５のいずれか１つに記載の免疫細胞。
７．ＣＳＲが、ＣＤ３０とは異なる共刺激分子の細胞内配列を含む、少なくとも１つの共刺激ドメインを更に含む、実施形態１～６のいずれか１つに記載の免疫細胞。
８．ＣＤ３０とは異なる共刺激分子が、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンドからなる群から選択される、実施形態７に記載の免疫細胞。
９．ＣＡＲが、共刺激ドメイン（ＣＡＲ共刺激ドメイン）を更に含む、実施形態１～８のいずれか１つに記載の免疫細胞。
１０．ＣＡＲ共刺激ドメインが、共刺激受容体の細胞内ドメインに由来する、実施形態９に記載の免疫細胞。
１１．共刺激受容体が、ＣＤ３０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンドからなる群から選択される、実施形態１０に記載の免疫細胞。
１２．ＣＳＲのリガンド結合モジュールが、受容体の細胞外ドメインに由来する、実施形態１～１１のいずれか１つに記載の免疫細胞。
１３．ＣＳＲのリガンド結合モジュールが、抗体部分（ＣＳＲ抗体部分）を含む、実施形態１～１１のいずれか１つに記載の免疫細胞。
１４．ＣＳＲ抗体部分が、単鎖抗体断片である、実施形態１３に記載の免疫細胞。
１５．ＣＡＲ抗体部分が、単鎖抗体断片である、実施形態１～１４のいずれか１つに記載の免疫細胞。
１６．ＣＡＲ抗体部分及び／又はＣＳＲ抗体部分が、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、単鎖Ｆａｂ、単鎖Ｆａｂ’、単一ドメイン抗体断片、単一ドメイン多重特異性抗体、細胞内抗体、ナノボディ、又は単鎖イムノカインである、実施形態１～１５のいずれか１つに記載の免疫細胞。
１７．ＣＡＲ抗体部分及び／又はＣＳＲ抗体部分が、単一ドメイン多重特異性抗体である、実施形態１６に記載の免疫細胞。
１８．単一ドメイン多重特異性抗体が、単一ドメイン二重特異性抗体である、実施形態１７に記載の免疫細胞。
１９．ＣＡＲ抗体部分及び／又はＣＳＲ抗体部分が、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）である、実施形態１～１８のいずれか１つに記載の免疫細胞。
２０．ｓｃＦｖがタンデムｓｃＦｖである、実施形態１９に記載の免疫細胞。
２１．ＣＡＲ抗体部分及び／又はＣＳＲ抗体部分が、疾患関連抗原に特異的に結合する、実施形態１～２０のいずれか１つに記載の免疫細胞。
２２．疾患関連抗原が、癌関連抗原である、実施形態２１に記載の免疫細胞。
２３．疾患関連抗原が、ウイルス関連抗原である、実施形態２１に記載の免疫細胞。
２４．ＣＡＲ抗体部分及び／又はＣＳＲ抗体部分が、細胞表面抗原に特異的に結合する、実施形態１～２３のいずれか１つに記載の免疫細胞。
２５．細胞表面抗原が、タンパク質、炭水化物、及び脂質からなる群から選択される、実施形態２４に記載の免疫細胞。
２６．細胞表面抗原が、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＣＤ１５８ｅ、ＧＰＣ３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＦｃＲＬ５、ＭＵＣ１６、ＭＣＴ４、ＰＳＭＡ、又はそれらの変異型若しくは変異体である、実施形態２４又は２５に記載の免疫細胞。
２７．ＣＡＲ抗体部分及びＣＳＲ抗体部分が、同じ抗原に特異的に結合する、実施形態１～２６のいずれか１つに記載の免疫細胞。
２８．ＣＡＲ抗体部分及びＣＳＲ抗体部分が、同じ抗原上の異なるエピトープに特異的に結合する、実施形態２７に記載の免疫細胞。
２９．ＣＡＲ抗体部分及び／又はＣＳＲ抗体部分が、ＭＨＣ拘束抗原に特異的に結合する、実施形態１～２６のいずれか１つに記載の免疫細胞。
３０．ＭＨＣ拘束抗原が、ペプチド及びＭＨＣタンパク質を含む複合体であり、ペプチドが、ＷＴ－１、ＡＦＰ、ＧＰＣ３、ＨＰＶ１６－Ｅ７、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ－ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ－１、ＫＲＡＳ、ＦｏｘＰ３、ヒストンＨ３．３、ＰＳＡ、ＲＯＲ１、及びその変異型又は変異体からなる群から選択されるタンパク質に由来する、実施形態２９に記載の免疫細胞。
３１．ＣＡＲ抗体部分はＣＤ１９に結合し、ＣＳＲのリガンド結合モジュールはＣＤ１９に結合する、実施形態１～２８のいずれか１つに記載の免疫細胞。
３２．ＣＡＲ抗体部分はＣＤ２２に結合し、ＣＳＲのリガンド結合モジュールはＣＤ２２に結合する、実施形態１～２８のいずれか１つに記載の免疫細胞。
３３．ＣＡＲ抗体部分はＣＤ２０に結合し、ＣＳＲのリガンド結合モジュールはＣＤ２０に結合する、実施形態１～２８のいずれか１つに記載の免疫細胞。
３４．ＣＡＲ抗体部分はＣＤ１９に結合し、ＣＳＲのリガンド結合モジュールはＣＤ２２に結合する、実施形態１～２６のいずれか１つに記載の免疫細胞。
３５．ＣＡＲ抗体部分はＣＤ１９に結合し、ＣＳＲのリガンド結合モジュールはＣＤ２０に結合する、実施形態１～２６のいずれか１つに記載の免疫細胞。
３６．ＣＡＲ抗体部分はＣＤ２２に結合し、ＣＳＲのリガンド結合モジュールはＣＤ２０に結合する、実施形態１～２６のいずれか１つに記載の免疫細胞。
３７．ＣＡＲ抗体部分はＣＤ２２に結合し、ＣＳＲのリガンド結合モジュールはＣＤ１９に結合する、実施形態１～２６のいずれか１つに記載の免疫細胞。
３８．ＣＡＲ抗体部分はＣＤ２０に結合し、ＣＳＲのリガンド結合モジュールはＣＤ１９に結合する、実施形態１～２６のいずれか１つに記載の免疫細胞。
３９．ＣＡＲ抗体部分はＣＤ２０に結合し、ＣＳＲのリガンド結合モジュールはＣＤ２２に結合する、実施形態１～２６のいずれか１つに記載の免疫細胞。
４０．ＣＡＲ抗体部分及び／又はＣＳＲのリガンド結合モジュールが、ＣＤ１９及びＣＤ２２の両方に結合する、実施形態１～２６のいずれか１つに記載の免疫細胞。
４１．ＣＡＲ抗体部分及び／又はＣＳＲのリガンド結合モジュールが、ＣＤ１９及びＣＤ２０の両方に結合する、実施形態１～２６のいずれか１つに記載の免疫細胞。
４２．ＣＡＲ抗体部分及び／又はＣＳＲのリガンド結合モジュールが、ＣＤ２０及びＣＤ２２の両方に結合する、実施形態１～２６のいずれか１つに記載の免疫細胞。
４３．ＣＡＲ抗体部分及び／又はＣＳＲのリガンド結合モジュールが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、及びＣＤ２２に結合する、実施形態１～２６のいずれか１つに記載の免疫細胞。
４４．ＣＡＲ抗体部分が、アルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）ペプチド及びＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する、実施形態１～３０のいずれか１つに記載の免疫細胞。
４５．ＡＦＰペプチドが、配列番号１５７～１６７のいずれか１つの配列を含む、実施形態４４に記載の免疫細胞。
４６．抗体部分が、
（ａ）それぞれ配列番号１６８～１７０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号１７１の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号１７２～１７４の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号１７５の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｂ）それぞれ配列番号１７６～１７８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号１７９の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号１８０～１８２の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号１８３の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｃ）それぞれ配列番号１８４～１８６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号１８７の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号１８８～１９０の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号１９１の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｄ）それぞれ配列番号１９２～１９４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号１９５の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号１９６～１９８の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号１９９の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｅ）それぞれ配列番号２００～２０２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号２０３の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号２０４～２０６の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号２０７の配列を有する軽鎖可変領域、を含む、実施形態４４又は４５に記載の免疫細胞。
４７．ＣＡＲ抗体部分が、グリピカン３（ＧＰＣ３）に特異的に結合する、実施形態１～３０のいずれか１つに記載の免疫細胞。
４８．ＣＳＲのリガンド結合モジュールが、ＧＰＣ３に特異的に結合する、実施形態１～３０及び４７のいずれか１つに記載の免疫細胞。
４９．ＣＡＲ抗体部分蛾、ＡＦＰペプチド及びＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に結合し、ＣＳＲのリガンド結合モジュールが、ＧＰＣ３に結合する、実施形態１～３０のいずれか１つに記載の免疫細胞。
５０．ＣＡＲ抗体部分及びＣＳＲのリガンド結合モジュールが、ＧＰＣ３に結合する、実施形態１～３０のいずれか１つに記載の免疫細胞。
５１．ＣＡＲ抗体部分及びＣＳＲのリガンド結合モジュールが、ＧＰＣ３上の異なるエピトープに特異的に結合する、実施形態４７、４８、及び５０のいずれか１つに記載の免疫細胞。
５２．ＣＡＲ抗体部分及び／又はＣＳＲのリガンド結合モジュールが、
（ａ）それぞれ配列番号２０８～２１０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号２１１の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号２１２～２１４の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号２１５の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｂ）それぞれ配列番号２１６～２１８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号２１９の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号２２０～２２２の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号２２３の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｃ）それぞれ配列番号２２４～２２６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号２２７の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号２２８～２３０の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号２３１の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｄ）それぞれ配列番号２３２～２３４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号２３５の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号２３６～２３８の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号２３９の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｅ）それぞれ配列番号２４０～２４２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号２４３の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号２４４～２４６の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号２４７の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｆ）それぞれ配列番号２４８～２５０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号２５１の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号２５２～２５４の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号２５５の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｇ）それぞれ配列番号２５６～２５８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号２５９の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号２６０～２６２の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号２６３の配列を有する軽鎖可変領域、を含む、実施形態４７、４８、５０、及び５１のいずれか１つに記載の免疫細胞。
５３．ＣＡＲ抗体部分が、ＫＲＡＳペプチド及びＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する、実施形態１～３０のいずれか１つに記載の免疫細胞。
５４．ＫＲＡＳペプチドが、配列番号２６４～２７２のいずれか１つの配列を含む、実施形態５３に記載の免疫細胞。
５５．抗体部分が、
（ａ）それぞれ配列番号２７３～２７５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号２７６の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号２７７～２７９の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号２８０の配列を有する軽鎖可変領域、並びに任意選択で配列番号２８１の配列を有するｓｃＦｖ、又は
（ｂ）それぞれ配列番号２８２～２８４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号２８５の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号２８６～２８８の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号２８９の配列を有する軽鎖可変領域、並びに任意選択で配列番号２９０の配列を有するｓｃＦｖ、又は
（ｃ）それぞれ配列番号２９１～２９３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号２９４の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号２９５～２９７の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号２９８の配列を有する軽鎖可変領域、並びに任意選択で配列番号２９９の配列を有するｓｃＦｖ、又は
（ｄ）それぞれ配列番号３００～３０２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号３０３の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号３０４～３０６の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号３０７の配列を有する軽鎖可変領域、並びに任意選択で配列番号３０８の配列を有するｓｃＦｖ、又は
（ｅ）それぞれ配列番号３０９～３１１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号３１２の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号３１３～３１５の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号３１６の配列を有する軽鎖可変領域、並びに任意選択で配列番号３１７の配列を有するｓｃＦｖ、又は
（ｆ）それぞれ配列番号３１８～３２０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号３２１の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号３２２～３２４の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号３２５の配列を有する軽鎖可変領域、並びに任意選択で配列番号３２６の配列を有するｓｃＦｖ、又は
（ｇ）それぞれ配列番号３２７～３２９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号３３０の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号３３１～３３３の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号３３４の配列を有する軽鎖可変領域、並びに任意選択で配列番号３３５の配列を有するｓｃＦｖ、又は
（ｈ）それぞれ配列番号３３６～３３８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号３３９の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号３４０～３４２の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号３４３の配列を有する軽鎖可変領域、並びに任意選択で配列番号３４４の配列を有するｓｃＦｖ、を含む、実施形態５３又は５４に記載の免疫細胞。
５６．ＣＡＲ抗体部分が、ＰＳＡペプチド及びＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する、実施形態１～３０のいずれか１つに記載の免疫細胞。
５７．ＰＳＡペプチドが、配列番号３４５～３５５のいずれか１つの配列を含む、実施形態５６に記載の免疫細胞。
５８．抗体部分が、
（ａ）配列番号３５６～３７０のいずれか１つの配列を有するＨＣＤＲ１、配列番号３７１～３８４のいずれか１つの配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号３８５～４０２のいずれか１つの配列を有するＨＣＤＲ３、及び任意選択で配列番号４０３～４２０のいずれか１つの配列を有する重鎖可変領域、並びに／又は
（ｂ）配列番号４２１～４３７のいずれか１つの配列を有するＬＣＤＲ１、配列番号４３８～４５０のいずれか１つの配列を有するＬＣＤＲ２、配列番号４５１～４６８のいずれか１つの配列を有するＬＣＤＲ３、及び任意選択で配列番号４６９～４８６のいずれか１つの配列を有する軽鎖可変領域、を含む、実施形態５６又は５７に記載の免疫細胞。
５９．ＣＡＲ抗体部分が、ＰＳＭＡペプチド及びＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する、実施形態１～３０のいずれか１つに記載の免疫細胞。
６０．抗体部分が、配列番号４８７～４８８の配列を有するｓｃＦｖを含む、実施形態５９に記載の免疫細胞。
６１．ＣＡＲ抗体部分及び／又はＣＳＲのリガンド結合モジュールが、ＲＯＲ１に結合する、実施形態１～３０のいずれか１つに記載の免疫細胞。
６２．ＣＡＲ抗体部分及び／又はＣＳＲのリガンド結合モジュールが、配列番号４８９～４９２のいずれか１つの配列を有するＲＯＲ１ペプチドに結合する、実施形態６１に記載の免疫細胞。
６３．ＣＡＲ抗体部分及び／又はＣＳＲのリガンド結合モジュールが、
（ａ）それぞれ配列番号４９３～４９５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号４９６の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号４９７～４９９の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号５００の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｂ）それぞれ配列番号５０１～５０３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号５０４の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号５０５～５０７の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号５０８の配列を有する軽鎖可変領域、を含む、実施形態６１又は６２に記載の免疫細胞。
６４．ＣＡＲ抗体部分が、ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチド及びＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する、実施形態１～３０のいずれか１つに記載の免疫細胞。
６５．ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチドが、配列番号５０９～５１９のいずれか１つの配列を含む、実施形態６４に記載の免疫細胞。
６６．抗体部分が、
（ａ）それぞれ配列番号５２０～５２２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号５２３の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号５２４～５２６の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号５２７の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｂ）それぞれ配列番号５２８～５３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号５３１の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号５３２～５３４の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号５３５の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｃ）それぞれ配列番号５３６～５３８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号５３９の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号５４０～５４２の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号５４３の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｄ）それぞれ配列番号５４４～５４６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号５４７の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号５４８～５５０の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号５５１の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｅ）それぞれ配列番号５５２～５５４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号５５５の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号５５６～５５８の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号５５９の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｆ）それぞれ配列番号５６０～５６２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号５６３の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号５６４～５６６の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号５６７の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｇ）それぞれ配列番号５６８～５７０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号５７１の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号５７２～５７４の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号５７５の配列を有する軽鎖可変領域、を含む、実施形態６４又は６５に記載の免疫細胞。
６７．ＣＡＲ抗体部分が、ＰＲＡＭＥペプチド及びＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する、実施形態１～３０のいずれか１つに記載の免疫細胞。
６８．ＰＲＡＭＥペプチドが、配列番号５７６～５８０のいずれか１つの配列を含む、実施形態６７に記載の免疫細胞。
６９．抗体部分が、
（ａ）それぞれ配列番号５８１～５８３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号５８４の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号５８５～５８７の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号５８８の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｂ）それぞれ配列番号５８９～５９１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号５９２の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号５９３～５９５の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号５９６の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｃ）それぞれ配列番号５９７～５９９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号６００の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号６０１～６０３の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号６０４の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｄ）それぞれ配列番号６０５～６０７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号６０８の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号６０９～６１１の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号６１２の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｅ）それぞれ配列番号６１３～６１５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号６１６の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号６１７～６１９の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号６２０の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ａ）それぞれ配列番号６２１～６２３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号６２４の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号６２５～６２７の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号６２８の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ａ）それぞれ配列番号６２９～６３１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号６３２の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号６３３～６３５の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号６３６の配列を有する軽鎖可変領域、を含む、実施形態６７又は６８に記載の免疫細胞。
７０．ＣＡＲ抗体部分が、ＷＴ１ペプチド及びＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する、実施形態１～３０のいずれか１つに記載の免疫細胞。
７１．ＷＴ１ペプチドが、配列番号６３７の配列を含む、実施形態７０に記載の免疫細胞。
７２．抗体部分が、
（ａ）それぞれ配列番号６３８～６４０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号６４１の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号６４２～６４４の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号６４５の配列を有する軽鎖可変領域、並びに任意選択で配列番号６４６の配列を有するｓｃＦｖ、又は
（ｂ）それぞれ配列番号６４７～６４９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号６５０の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号６５１～６５３の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号６５４の配列を有する軽鎖可変領域、並びに任意選択で配列番号６５５の配列を有するｓｃＦｖ、又は
（ｃ）それぞれ配列番号６５６～６５８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号６５９の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号６６０～６６２の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号６６３の配列を有する軽鎖可変領域、並びに任意選択で配列番号６６４の配列を有するｓｃＦｖ、又は
（ｄ）それぞれ配列番号６６５～６６７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号６６８の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号６６９～６７１の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号６７２の配列を有する軽鎖可変領域、並びに任意選択で配列番号６７３の配列を有するｓｃＦｖ、又は
（ｅ）それぞれ配列番号６７４～６７６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号６７７の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号６７８～６８０の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号６８１の配列を有する軽鎖可変領域、並びに任意選択で配列番号６８２の配列を有するｓｃＦｖ、又は
（ｆ）それぞれ配列番号６８３～６８５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号６８６の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号６８７～６８９の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号６９０の配列を有する軽鎖可変領域、並びに任意選択で配列番号６９１の配列を有するｓｃＦｖ、を含む、実施形態７０又は７１に記載の免疫細胞。
７３．ＣＡＲ抗体部分が、ヒストンＨ３．３ペプチド及びＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する、実施形態１～３０のいずれか１つに記載の免疫細胞。
７４．ヒストンＨ３．３ペプチドが、配列番号６９２～７１１のいずれか１つの配列を含む、実施形態７３に記載の免疫細胞。
７５．抗体部分が、
（ａ）それぞれ配列番号７１２～７１４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号７１５の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号７１６～７１８の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号７１９の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｂ）それぞれ配列番号７２０～７２２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号７２３の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号７２４～７２６の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号７２７の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｃ）それぞれ配列番号７２８～７３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号７３１の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号７３２～７３４の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号７３５の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｄ）それぞれ配列番号７３６～７３８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号７３９の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号７４０～７４２の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号７４３の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｅ）それぞれ配列番号７４４～７４６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号７４７の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号７４８～７５０の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号７５１の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｆ）それぞれ配列番号７５２～７５４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号７５５の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号７５６～７５８の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号７５９の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｇ）それぞれ配列番号７６０～７６２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号７６３の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号７６４～７６６の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号７６７の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｈ）それぞれ配列番号７６８～７７０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号７７１の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号７７２～７７４の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号７７５の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｉ）それぞれ配列番号７７６～７７８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号７７９の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号７８０～７８２の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号７８３の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｊ）それぞれ配列番号７８４～７８６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号７８７の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号７８８～７９０の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号７９１の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｋ）それぞれ配列番号７９２～７９４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号７９５の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号７９６～７９８の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号７９９の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｌ）それぞれ配列番号８００～８０２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号８０３の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号８０４～８０６の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号８０７の配列を有する軽鎖可変領域、を含む、実施形態７３又は７４に記載の免疫細胞。
７６．ＣＳＲのリガンド結合モジュールが、ＭＳＬＮペプチドに結合する、実施形態１～３０のいずれか１つに記載の免疫細胞。
７７．ＣＳＲのリガンド結合モジュールが、それぞれ配列番号８０８～８１０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号８１１の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号８１２～８１４の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号８１５の配列を有する軽鎖可変領域、を含む、実施形態７６に記載の免疫細胞。
７８．ＣＳＲのリガンド結合モジュールが、ＲＯＲ２ペプチドに結合する、実施形態１～３０のいずれか１つに記載の免疫細胞。
７９．ＲＯＲ２ペプチドが、配列番号８１６の配列を含む、実施形態７８に記載の免疫細胞。
８０．ＣＳＲのリガンド結合モジュールが、
（ａ）それぞれ配列番号８１７～８１９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号８２０の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号８２１～８２３の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号８２４の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｂ）それぞれ配列番号８２５～８２７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号８２８の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号８２９～８３１の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号８３２の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｃ）それぞれ配列番号８３３～８３５のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号８３６の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号８３７～８３９の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号８４０の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｄ）それぞれ配列番号８４１～８４３のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号８４４の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号８４５～８４７の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号８４８の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｅ）それぞれ配列番号８４９～８５１のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号８５２の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号８５３～８５５の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号８５６の配列を有する軽鎖可変領域、を含む、実施形態７８又は７９に記載の免疫細胞。
８１．ＣＳＲのリガンド結合モジュールが、ＨＥＲ２ペプチドに結合する、実施形態１～３０のいずれか１つに記載の免疫細胞。
８２．ＣＳＲのリガンド結合モジュールが、それぞれ配列番号８５７～８５９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号８６０の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号８６１～８６３の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号８６４の配列を有する軽鎖可変領域、並びに任意選択で配列番号８６５の配列を有するｓｃＦｖ、を含む、実施形態８１に記載の免疫細胞。
８３．ＣＳＲのリガンド結合モジュールが、ＥｐＣＡＭペプチドに結合する、実施形態１～３０のいずれか１つに記載の免疫細胞。
８４．ＣＳＲのリガンド結合モジュールが、それぞれ配列番号８６６～８６８のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号８６９の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号８７０～８７２の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号８７３の配列を有する軽鎖可変領域、を含む、実施形態８３に記載の免疫細胞。
８５．ＣＳＲのリガンド結合モジュールが、ＭＵＣ１ペプチドに結合する、実施形態１～３０のいずれか１つに記載の免疫細胞。
８６．ＣＳＲのリガンド結合モジュールが、それぞれ配列番号８７４～８７６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号８７７の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号８７８～８８０の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号８８１の配列を有する軽鎖可変領域、を含む、実施形態８５に記載の免疫細胞。
８７．ＣＳＲのリガンド結合モジュールが、ＭＵＣ１６ペプチドに結合する、実施形態１～３０のいずれか１つに記載の免疫細胞。
８８．ＣＳＲのリガンド結合モジュールが、
（ａ）それぞれ配列番号８８２～８８４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号８８５の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号８８６～８８８の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号８８９の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｂ）それぞれ配列番号８９０～８９２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号８９３の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号８９４～８９６の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号８９７の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｃ）それぞれ配列番号８９８～９００のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号９０１若しくは９０２の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号９０３～９０５の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号９０６若しくは９０７の配列を有する軽鎖可変領域、又は
（ｄ）それぞれ配列番号９０８～９１０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号９１１若しくは９１２の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号９１３～９１５の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号９１６若しくは９１７の配列を有する軽鎖可変領域、を含む、実施形態８７に記載の免疫細胞。
８９．ＣＳＲのリガンド結合モジュールが、ＦＲαペプチドに結合する、実施形態１～３０のいずれか１つに記載の免疫細胞。
９０．ＣＳＲのリガンド結合モジュールが、
（ａ）それぞれ配列番号９１８～９２０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号９２１の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号９２３～９２５の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号９２６の配列を有する軽鎖可変領域、を含む、実施形態８９に記載の免疫細胞。
９１．ＣＳＲのリガンド結合モジュールが、ＥＧＦＲペプチドに結合する、実施形態１～３０のいずれか１つに記載の免疫細胞。
９２．ＣＳＲのリガンド結合モジュールが、それぞれ配列番号９２８～９３０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号９３１の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号９３２～９３４の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号９３５の配列を有する軽鎖可変領域、並びに任意選択で配列番号９３６の配列を有するｓｃＦｖ、を含む、実施形態９１に記載の免疫細胞。
９３．ＣＳＲのリガンド結合モジュールが、ＥＧＦＲＶＩＩＩペプチドに結合する、実施形態１～３０のいずれか１つに記載の免疫細胞。
９４．ＣＳＲのリガンド結合モジュールが、それぞれ配列番号９３７～９３９のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号９４０の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号９４１～９４３の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号９４４の配列を有する軽鎖可変領域、を含む、実施形態９３に記載の免疫細胞。
９５．ＣＳＲのリガンド結合モジュールが、ＨＥＲ３ペプチドに結合する、実施形態１～３０のいずれか１つに記載の免疫細胞。
９６．ＣＳＲのリガンド結合モジュールが、それぞれ配列番号９４５～９４７のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号９４８の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号９４９～９５１の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号９５２の配列を有する軽鎖可変領域、並びに任意選択で配列番号９５３の配列を有するｓｃＦｖ、を含む、実施形態９５に記載の免疫細胞。
９７．ＣＳＲのリガンド結合モジュールが、ＤＬＬ３ペプチドに結合する、実施形態１～３０のいずれか１つに記載の免疫細胞。
９８．ＣＳＲのリガンド結合モジュールが、それぞれ配列番号９５４～９５６のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号９５７の配列を有する重鎖、並びにそれぞれ配列番号９５８～９６０の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号９６１の配列を有する軽鎖、を含む、実施形態９７に記載の免疫細胞。
９９．ＣＳＲのリガンド結合モジュールが、ｃ－Ｍｅｔペプチドに結合する、実施形態１～３０のいずれか１つに記載の免疫細胞。
１００．ＣＳＲのリガンド結合モジュールが、それぞれ配列番号９６２～９６４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号９６５の配列を有する重鎖、並びにそれぞれ配列番号９６６～９６８の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号９６９の配列を有する軽鎖、を含む、実施形態９９に記載の免疫細胞。
１０１．ＣＳＲのリガンド結合モジュールが、ＣＤ７０ペプチドに結合する、実施形態１～３０のいずれか１つに記載の免疫細胞。
１０２．ＣＳＲのリガンド結合モジュールが、それぞれ配列番号９７０～９７２のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３の配列、並びに任意選択で配列番号９７３の配列を有する重鎖可変領域、並びにそれぞれ配列番号９７４～９７６の配列ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３、並びに任意選択で配列番号９７７の配列を有する軽鎖、を含む、実施形態１０１に記載の免疫細胞。
１０３．ＣＡＲ膜貫通ドメインが、ＣＤ３０の膜貫通ドメインである、実施形態１～１０２のいずれか１つに記載の免疫細胞。
１０４．ＣＡＲ膜貫通ドメインが、ＣＤ８の膜貫通ドメインである、実施形態１～１０２のいずれか１つに記載の免疫細胞。
１０５．ＣＡＲ膜貫通ドメイン及び／又はＣＳＲ膜貫通ドメインが、ＴＣＲ共受容体又はＴ細胞共刺激分子の膜貫通ドメインに由来する、実施形態１～１０４のいずれか１つに記載の免疫細胞。
１０６．ＴＣＲ共受容体又はＴ細胞共刺激分子が、ＣＤ８、４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＯＸ４０、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、及びＣＤ１５４からなる群から選択される、実施形態１０５に記載の免疫細胞。
１０７．ＴＣＲ共受容体又はＴ細胞共刺激分子が、ＣＤ３０又はＣＤ８である、実施形態１０５又は１０６に記載の免疫細胞。
１０８．Ｔ細胞共刺激分子が、ＣＤ３０である、実施形態１０７に記載の免疫細胞。
１０９．ＴＣＲ共受容体が、ＣＤ８である、実施形態１０７に記載の免疫細胞。
１１０．ＣＡＲ膜貫通ドメイン及び／又はＣＳＲ膜貫通ドメインが、ＣＤ８、４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＯＸ４０、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、又はＣＤ１５４の膜貫通ドメインである、実施形態１～１０４のいずれか１つに記載の免疫細胞。
１１１．ＣＡＲ膜貫通ドメイン及び／又はＣＳＲ膜貫通ドメインが、ＣＤ３０又はＣＤ８の膜貫通ドメインである、実施形態１１０に記載の免疫細胞。
１１２．ＣＡＲ膜貫通ドメイン及び／又はＣＳＲ膜貫通ドメインが、ＣＤ３０の膜貫通ドメインである、実施形態１１１に記載の免疫細胞。
１１３．ＣＳＲ膜貫通ドメインが、ＣＤ３０の膜貫通ドメインである、実施形態１１２に記載の免疫細胞。
１１４．ＣＡＲ膜貫通ドメイン及び／又はＣＳＲ膜貫通ドメインが、ＣＤ８の膜貫通ドメインである、実施形態１１２に記載の免疫細胞。
１１５．ＣＡＲ膜貫通ドメイン及び／又はＣＳＲ膜貫通ドメインが、配列番号６６～７１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、実施形態１～１１４のいずれか１つに記載の免疫細胞。
１１６．一次シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζ、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、及びＣＤ６６ｄからなる群から選択される分子の細胞内シグナル伝達配列に由来する配列を含む、実施形態１～１１５のいずれか１つに記載の免疫細胞。
１１７．一次シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζの細胞内シグナル伝達配列に由来する配列を含む、実施形態１１６に記載の免疫細胞。
１１８．一次シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζの細胞内シグナル伝達配列を含む、実施形態１１６に記載の免疫細胞。
１１９．一次シグナル伝達ドメインが、配列番号７７の配列に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％同一である配列を含む、実施形態１～１１８のいずれか１つに記載の免疫細胞。
１２０．細胞外標的結合ドメインとＣＡＲの膜貫通ドメインとの間にペプチドリンカーを更に含む、実施形態１～１１９のいずれか１つに記載の免疫細胞。
１２１．膜貫通ドメインとＣＡＲの共刺激ドメインとの間にペプチドリンカーを更に含む、実施形態１～１２０のいずれか１つに記載の免疫細胞。
１２２．共刺激ドメインとＣＡＲの一次シグナル伝達ドメインとの間にペプチドリンカーを更に含む、実施形態１～１２１のいずれか１つに記載の免疫細胞。
１２３．リガンド結合モジュールとＣＳＲの膜貫通ドメインとの間にペプチドリンカーを更に含む、実施形態１～１２２のいずれか１つに記載の免疫細胞。
１２４．膜貫通ドメインとＣＳＲのＣＤ３０共刺激ドメインとの間にペプチドリンカーを更に含む、実施形態１～１２３のいずれか１つに記載の免疫細胞。
１２５．ＣＳＲの発現が誘導可能である、実施形態１～１２４のいずれか１つに記載の免疫細胞。
１２６．ＣＳＲの発現が、免疫細胞の活性化の際に誘導可能である、実施形態１２５に記載の免疫細胞。
１２７．免疫細胞が、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される、実施形態１～１２６のいずれか１つに記載の免疫細胞。
１２８．実施形態１～１２７のいずれか１つに記載の免疫細胞に含まれるＣＡＲ及びＣＳＲをコードしている１つ以上の核酸であって、ＣＡＲ及びＣＳＲがそれぞれ、１つ以上の核酸によってコードされる１つ以上のポリペプチド鎖からなる、１つ以上の核酸。
１２９．実施形態１２８に記載の１つ以上の核酸を含む、１つ以上のベクター。
１３０．（ａ）実施形態１～１２７のいずれか１つに記載の免疫細胞、実施形態１２８に記載の核酸、又は実施形態１２９に記載のベクターと、（ｂ）薬学的に許容される担体又は希釈剤と、を含む、医薬組成物。
１３１．標的細胞を死滅させる方法であって、
１つ以上の標的細胞を、実施形態１～１２７のいずれか１つに記載の免疫細胞と、免疫細胞が標的細胞の死滅を媒介するのに十分な条件下で十分な時間接触させることを含み、
標的細胞は、免疫細胞に特異的な抗原を発現し、
免疫細胞は、標的細胞と接触すると低い細胞疲弊レベルを呈する、方法。
１３２．免疫細胞が、低い細胞疲弊レベルの、ＰＤ－１、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、及びＬＡＧ－３からなる群から選択される疲弊マーカーを発現する、実施形態１３１に記載の方法。
１３３．免疫細胞がＴ細胞である、実施形態１３１又は１３２に記載の方法。
１３４．免疫細胞が、低い細胞疲弊レベルのＰＤ－１を発現する、実施形態１３１～１３３のいずれか１つに記載の方法。
１３５．免疫細胞が、低い細胞疲弊レベルのＴＩＭ－３を発現する、実施形態１３１～１３３のいずれか１つに記載の方法。
１３６．免疫細胞が、低い細胞疲弊レベルのＬＡＧ－３を発現する、実施形態１３１～１３３のいずれか１つに記載の方法。
１３７．免疫細胞が、低い細胞疲弊レベルのＴＩＧＩＴを発現する、実施形態１３１～１３３のいずれか１つに記載の方法。
１３８．免疫細胞が、ＣＤ２８共刺激ドメインを含むＣＳＲを発現している対応する免疫細胞よりも低いレベルのＰＤ－１、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、又はＬＡＧ－３を発現する、実施形態１３１～１３７のいずれか１つに記載の方法。
１３９．免疫細胞が、対応するＣＤ２８ ＣＳＲ免疫細胞よりも低いレベルのＰＤ－１を発現し、免疫細胞の対応するＣＤ２８ ＣＳＲ免疫細胞に対するＰＤ－１発現レベルの比は、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、又はそれ以下である、実施形態１３８に記載の方法。
１４０．免疫細胞が、対応するＣＤ２８ ＣＳＲ免疫細胞よりも低いレベルのＴＩＭ－３を発現し、免疫細胞の対応するＣＤ２８ ＣＳＲ免疫細胞に対するＴＩＭ－３発現レベルの比は、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、又はそれ以下である、実施形態１３８に記載の方法。
１４１．免疫細胞が、対応するＣＤ２８ ＣＳＲ免疫細胞よりも低いレベルのＬＡＧ－３を発現し、免疫細胞の対応するＣＤ２８ ＣＳＲ免疫細胞に対するＬＡＧ－３発現レベルの比は、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、又はそれ以下である、実施形態１３８に記載の方法。
１４２．免疫細胞が、対応するＣＤ２８ ＣＳＲ免疫細胞よりも低いレベルのＴＩＧＩＴを発現し、免疫細胞の対応するＣＤ２８ ＣＳＲ免疫細胞に対するＴＩＧＩＴ発現レベルの比は、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、又はそれ以下である、実施形態１３８に記載の方法。
１４３．免疫細胞が、４－１ＢＢ共刺激ドメインを含むＣＳＲを発現している対応する免疫細胞よりも低いレベルのＰＤ－１、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、又はＬＡＧ－３を発現する、実施形態１３１～１３７のいずれか１つに記載の方法。
１４４．免疫細胞が、対応する４－１ＢＢ ＣＳＲ免疫細胞よりも低いレベルのＰＤ－１を発現し、免疫細胞の対応する４－１ＢＢ ＣＳＲ免疫細胞に対するＰＤ－１発現レベルの比は、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、又はそれ以下である、実施形態１４３に記載の方法。
１４５．免疫細胞が、対応する４－１ＢＢ ＣＳＲ免疫細胞よりも低いレベルのＴＩＭ－３を発現し、免疫細胞の対応する４－１ＢＢ ＣＳＲ免疫細胞に対するＴＩＭ－３発現レベルの比は、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、又はそれ以下である、実施形態１４３に記載の方法。
１４６．免疫細胞が、対応する４－１ＢＢ ＣＳＲ免疫細胞よりも低いレベルのＬＡＧ－３を発現し、免疫細胞の対応する４－１ＢＢ ＣＳＲ免疫細胞に対するＬＡＧ－３発現レベルの比は、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、又はそれ以下である、実施形態１４３に記載の方法。
１４７．免疫細胞が、対応する４－１ＢＢ ＣＳＲ免疫細胞よりも低いレベルのＴＩＧＩＴを発現し、免疫細胞の対応する４－１ＢＢ ＣＳＲ免疫細胞に対するＴＩＧＩＴ発現レベルの比は、０．９、０．８、０．７、０．６、０．５、０．４、０．３、０．２、０．１、又はそれ以下である、実施形態１４３に記載の方法。
１４８．標的細胞が癌細胞である、実施形態１３１～１４７のいずれか１つに記載の方法。
１４９．癌細胞が、副腎皮質癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、胆管細胞癌、大腸直腸癌、食道癌、神経膠芽腫、神経膠腫、肝細胞癌、頭頸部癌、腎臓癌、白血病、リンパ腫、肺癌、黒色腫、中皮腫、多発性骨髄腫、膵臓癌、褐色細胞腫、形質細胞腫、神経芽腫、卵巣癌、前立腺癌、肉腫、胃癌、子宮癌、及び甲状腺癌からなる群から選択される、癌由来である、実施形態１４８に記載の方法。
１５０．癌細胞が、血液癌細胞である、実施形態１４７又は１４８に記載の方法。
１５１．癌細胞が、固形腫瘍細胞である、実施形態１４７又は１４８に記載の方法。
１５２．標的細胞が、ウイルス感染細胞である、実施形態１３１～１４７のいずれか１つに記載の方法。
１５３．ウイルス感染細胞が、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、伝染性軟属腫ウイルス（ＭＣＶ）、ヒトＴ細胞白血病ウイルス１（ＨＴＬＶ－１）、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス）、及びＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）からなる群から選択されるウイルスによって引き起こされる、ウイルス感染由来である、実施形態１５２に記載の方法。
１５４．疾患を治療する方法であって、対象に、実施形態１～１２７のいずれか１つに記載の免疫細胞、実施形態１２８に記載の核酸、又は実施形態１２９に記載のベクター、又は実施形態１３０に記載の医薬組成物を、対象に投与する工程を含む、方法。
１５５．疾患がウイルス感染である、実施形態１５４に記載の方法。
１５６．疾患が癌である、実施形態１５４に記載の方法。
１５７．癌が血液癌である、実施形態１５６に記載の方法。
１５８．癌が固形腫瘍癌である、実施形態１５６に記載の方法。
１５９．対象は、対象の身体の残りの部分よりも固形腫瘍癌において、より高密度の実施形態１～１２７のいずれか１つに記載の免疫細胞を有する、実施形態１５８に記載の方法。
１６０．対象が、同じＣＡＲ及びＣＤ２８又は４－１ＢＢ共刺激ドメインを含む対応するＣＳＲを発現している同じ数の免疫細胞による、同じ種類の疾患の治療と比較して、対象の末梢血中により高い密度の実施形態１～１２７のいずれか１つに記載の免疫細胞を有する、実施形態１５４～１５９のいずれか１つに記載の方法。
１６１．癌が、副腎皮質癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、胆管細胞癌、大腸直腸癌、食道癌、神経膠芽腫、神経膠腫、肝細胞癌、頭頸部癌、腎臓癌、白血病、リンパ腫、肺癌、黒色腫、中皮腫、多発性骨髄腫、膵臓癌、褐色細胞腫、形質細胞腫、神経芽腫、卵巣癌、前立腺癌、肉腫、胃癌、子宮癌、及び甲状腺癌からなる群から選択される、実施形態１５４～１５９のいずれか１つに記載の方法。
１６２．対象におけるＴ細胞疲弊を予防及び／又は回復させるための方法であって、対象に、実施形態１２８に記載の核酸、実施形態１２９に記載のベクター、又は核酸若しくはベクターを含む実施形態１３０に記載の医薬組成物を、対象に投与することを含む、方法。
１６３．方法が、Ｔ細胞における疲弊マーカーの発現を減少させる、実施形態１６２に記載の方法。
１６４．疲弊マーカーが、ＰＤ－１、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、及びＬＡＧ－３からなる群から選択される、実施形態１６２又は１６３に記載の方法。
１６５．ＣＡＲ及びＣＤ２８又は４－１ＢＢ共刺激ドメインを含むＣＳＲを発現している免疫細胞による、同じ種類の固形腫瘍癌の治療と比較して、腫瘍浸潤の増加を伴う対象における固形腫瘍癌を治療する方法であって、同じＣＡＲ及びＣＤ３０共刺激ドメインを含む対応するＣＳＲを発現している対応する免疫細胞を対象に投与することを含み、対応する免疫細胞は、実施形態１～１２７のいずれか１つに記載の免疫細胞を含む、方法。
１６６．ＣＡＲ及びＣＤ２８又は４－１ＢＢ共刺激ドメインを含むＣＳＲを発現している免疫細胞による、同じ種類の固形腫瘍癌の治療と比較して、腫瘍縮小の増加を伴う対象における固形腫瘍癌を治療する方法であって、同じＣＡＲ及びＣＤ３０共刺激ドメインを含む対応するＣＳＲを発現している対応する免疫細胞を対象に投与することを含み、対応する免疫細胞は、実施形態１～１２７のいずれか１つに記載の免疫細胞を含む、方法。
１６７．対象においてセントラルメモリーＴ細胞を産生させるための方法であって、対象に、実施形態１２８に記載の核酸、実施形態１２９に記載のベクター、又は核酸若しくはベクターを含む実施形態１３０に記載の医薬組成物を、対象に投与することを含む、方法。
１６８．方法が、対象におけるセントラルメモリーＴ細胞の数及び／又は全Ｔ細胞中のセントラルメモリーＴ細胞の割合を増加させる、実施形態１６７に記載の方法。
１６９．インビトロでセントラルメモリーＴ細胞を産生させるための方法であって、
１つ以上の標的細胞を、実施形態１～１２７のいずれか１つに記載の免疫細胞と、免疫細胞がセントラルメモリーＴ細胞に発達するのに十分な条件下で十分な時間接触させることを含み、標的細胞は、免疫細胞に特異的な抗原を発現する、方法。
１７０．方法が、セントラルメモリーＴ細胞の数及び／又は免疫細胞の子孫である全Ｔ細胞中のセントラルメモリーＴ細胞の割合を増加させる、実施形態１６９に記載の方法。
１７１．方法が、ＣＤ２８共刺激ドメインを含むＣＳＲを発現している対応する免疫細胞よりも、多くのセントラルメモリーＴ細胞の数及び／又は高いセントラルメモリーＴ細胞の割合をもたらす、実施形態１６９又は１７０に記載の方法。
１７２．方法が、ＣＤ２８共刺激ドメインを含むＣＳＲを発現している対応する免疫細胞よりも、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２００％、３００％、４００％、又は５００％高い、セントラルメモリーＴ細胞の数及び／又はセントラルメモリーＴ細胞の割合をもたらす、実施形態１７１に記載の方法。
１７３．セントラルメモリーＴ細胞が、高いレベルのＣＣＲ７及び低いレベルのＣＤ４５ＲＡを発現する、実施形態１６９～１７２のいずれか１つに記載の方法。
１７４．セントラルメモリーＴ細胞が、ＣＤ８＋Ｔ細胞である、実施形態１６９～１７３のいずれか１つに記載の方法。
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本明細書に記載の任意の実施形態の又は図中の１つ以上の特徴は、本開示の範囲から逸脱することなく、図中の本明細書に記載の任意の他の実施形態の１つ以上の特徴と組み合わせることができる。
本明細書で引用された全ての刊行物、特許、及び特許出願は、各個々の刊行物又は特許出願が参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示されたかのように、参照により本明細書に組み込まれる。前述の開示は、理解を明確にするために例示及び例としていくつか詳細に説明されてきたが、本開示の教示に照らして、添付の特許請求の範囲の趣旨又は範囲から逸脱することなく、特定の変更及び修正が行われ得ることが当業者には容易に明らかであろう。

Claims (35)

  1. 免疫細胞であって、
    （ａ）
    （ｉ）抗体部分（ＣＡＲ抗体部分）を含む細胞外標的結合ドメインと、
    （ｉｉ）膜貫通ドメイン（ＣＡＲ膜貫通ドメイン）と、
    （ｉｉｉ）一次シグナル伝達ドメインと、を含む、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）と、
    （ｂ）
    （ｉ）標的リガンドに結合又は相互作用することができるリガンド結合モジュールと、
    （ｉｉ）膜貫通ドメイン（ＣＳＲ膜貫通ドメイン）と、
    （ｉｉｉ）ＣＤ３０共刺激ドメインと、を含む、キメラ刺激受容体（ＣＳＲ）と、を含み、
    前記ＣＳＲは、機能性一次シグナル伝達ドメインを欠いている、免疫細胞。
  2. 前記ＣＤ３０共刺激ドメインが、細胞内ＴＲＡＦシグナル伝達タンパク質に結合できる配列を含み、任意に、前記細胞内ＴＲＡＦシグナル伝達タンパク質に結合できる配列は、配列番号６５の配列を有する完全長ＣＤ３０の残基５６１～５７３又は５７８～５８６に対応する、請求項１に記載の免疫細胞。
  3. 前記ＣＤ３０共刺激ドメインが、配列番号６５の残基５６１～５７３又は５７８～５８６に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％同一である配列を含む、又は、前記ＣＤ３０共刺激ドメインが、配列番号７５の配列に対して、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％同一である配列を含む、請求項１又は２に記載の免疫細胞。
  4. 前記ＣＳＲが、２つ以上のＣＤ３０共刺激ドメインを含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の免疫細胞。
  5. 前記ＣＳＲが、ＣＤ３０とは異なる共刺激分子の細胞内配列を含む、少なくとも１つの共刺激ドメインを更に含み、任意に、前記ＣＤ３０とは異なる共刺激分子は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、及び、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドからなる群から選択される、請求項１～４のいずれか一項に記載の免疫細胞。
  6. 前記ＣＡＲが、共刺激ドメイン（ＣＡＲ共刺激ドメイン）を更に含み、任意に、前記ＣＡＲ共刺激ドメインは、共刺激受容体の細胞内ドメインに由来し、更に任意に、前記共刺激受容体は、ＣＤ３０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、及び、ＣＤ８３と特異的に結合するリガンドからなる群から選択される、請求項１～５のいずれか一項に記載の免疫細胞。
  7. （ａ）前記ＣＳＲの前記リガンド結合モジュールが、受容体の細胞外ドメインに由来する、又は、（ｂ）前記ＣＳＲの前記リガンド結合モジュールが、抗体部分（ＣＳＲ抗体部分）を含み、任意に、前記ＣＳＲ抗体部分は、単鎖抗体断片である、請求項１～６のいずれか一項に記載の免疫細胞。
  8. 前記ＣＡＲ抗体部分が、単鎖抗体断片である、並びに／又は、前記ＣＡＲ抗体部分及び／若しくは前記ＣＳＲ抗体部分が、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、単鎖Ｆａｂ、単鎖Ｆａｂ’、単一ドメイン抗体断片、単一ドメイン多重特異性抗体、細胞内抗体、ナノボディ、又は単鎖イムノカインである、請求項１～７のいずれか一項に記載の免疫細胞。
  9. 前記ＣＡＲ抗体部分及び／又は前記ＣＳＲ抗体部分が、疾患関連抗原に特異的に結合し、任意に、前記疾患関連抗原は、癌関連抗原又はウイルス関連抗原である、請求項１～８のいずれか一項に記載の免疫細胞。
  10. 前記ＣＡＲ抗体部分及び／又は前記ＣＳＲ抗体部分が、細胞表面抗原に特異的に結合し、任意に、前記細胞表面抗原は、タンパク質、炭水化物、及び脂質からなる群から選択される、及び／又は、任意に、前記細胞表面抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４７、ＣＤ１５８ｅ、ＧＰＣ３、ＲＯＲ１、ＲＯＲ２、ＢＣＭＡ、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＦｃＲＬ５、ＭＵＣ１６、ＭＣＴ４、ＰＳＭＡ、又はそれらの変異型若しくは変異体である、請求項１～９のいずれか一項に記載の免疫細胞。
  11. （ａ）前記ＣＡＲ抗体部分及び前記ＣＳＲ抗体部分が、同じ抗原に特異的に結合する、又は、（ｂ）前記ＣＡＲ抗体部分及び／若しくは前記ＣＳＲ抗体部分が、ＭＨＣ拘束抗原に特異的に結合し、任意に、前記ＭＨＣ拘束抗原は、ペプチド及びＭＨＣタンパク質を含む複合体であり、前記ペプチドが、ＷＴ－１、ＡＦＰ、ＧＰＣ３、ＨＰＶ１６－Ｅ７、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＰＲＡＭＥ、ＥＢＶ－ＬＭＰ２Ａ、ＨＩＶ－１、ＫＲＡＳ、ＦｏｘＰ３、ヒストンＨ３．３、ＰＳＡ、ＲＯＲ１、及びその変異型又は変異体からなる群から選択されるタンパク質に由来する、請求項１～１０のいずれか一項に記載の免疫細胞。
  12. （ａ）前記ＣＡＲ抗体部分がＣＤ１９に結合し、前記ＣＳＲの前記リガンド結合モジュールがＣＤ１９に結合する、又は
    （ｂ）前記ＣＡＲ抗体部分がＣＤ２２に結合し、前記ＣＳＲの前記リガンド結合モジュールがＣＤ２２に結合する、又は
    （ｃ）前記ＣＡＲ抗体部分がＣＤ２０に結合し、前記ＣＳＲの前記リガンド結合モジュールがＣＤ２０に結合する、又は
    （ｄ）前記ＣＡＲ抗体部分がＣＤ１９に結合し、前記ＣＳＲの前記リガンド結合モジュールがＣＤ２２に結合する、又は
    （ｅ）前記ＣＡＲ抗体部分がＣＤ１９に結合し、前記ＣＳＲの前記リガンド結合モジュールがＣＤ２０に結合する、又は
    （ｆ）前記ＣＡＲ抗体部分がＣＤ２２に結合し、前記ＣＳＲの前記リガンド結合モジュールがＣＤ２０に結合する、
    （ｇ）前記ＣＡＲ抗体部分がＣＤ２２に結合し、前記ＣＳＲの前記リガンド結合モジュールがＣＤ１９に結合する、又は
    （ｈ）前記ＣＡＲ抗体部分がＣＤ２０に結合し、前記ＣＳＲの前記リガンド結合モジュールがＣＤ１９に結合する、又は
    （ｉ）前記ＣＡＲ抗体部分がＣＤ２０に結合し、前記ＣＳＲの前記リガンド結合モジュールがＣＤ２２に結合する、又は
    （ｊ）前記ＣＡＲ抗体部分及び／又は前記ＣＳＲの前記リガンド結合モジュールが、ＣＤ１９及びＣＤ２２の両方に結合する、又は
    （ｋ）前記ＣＡＲ抗体部分及び／又は前記ＣＳＲの前記リガンド結合モジュールが、ＣＤ１９及びＣＤ２０の両方に結合する、又は
    （ｌ）前記ＣＡＲ抗体部分及び／又は前記ＣＳＲの前記リガンド結合モジュールが、ＣＤ２０及びＣＤ２２の両方に結合する、又は
    （ｍ）前記ＣＡＲ抗体部分及び／又は前記ＣＳＲの前記リガンド結合モジュールが、ＣＤ１９、ＣＤ２０及びＣＤ２２に結合する、請求項１～１１のいずれか一項に記載の免疫細胞。
  13. （ａ）前記ＣＡＲ抗体部分が、アルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）ペプチド及びＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する、又は
    （ｂ）前記ＣＡＲ抗体部分が、グリピカン３（ＧＰＣ３）に特異的に結合する、又は
    （ｃ）前記ＣＳＲの前記リガンド結合モジュールが、ＧＰＣ３に特異的に結合する、又は
    （ｄ）前記ＣＡＲ抗体部分が、ＡＦＰペプチド及びＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に結合し、前記ＣＳＲの前記リガンド結合モジュールが、ＧＰＣ３に結合する、又は
    （ｅ）前記ＣＡＲ抗体部分及び前記ＣＳＲの前記リガンド結合モジュールの両方が、ＧＰＣ３に結合する、又は
    （ｆ）前記ＣＡＲ抗体部分及び前記ＣＳＲの前記リガンド結合モジュールが、ＧＰＣ３上の異なるエピトープに特異的に結合する、又は
    （ｇ）前記ＣＡＲ抗体部分が、ＫＲＡＳペプチド及びＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する、又は
    （ｈ）前記ＣＡＲ抗体部分が、ＰＳＡペプチド及びＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する、又は
    （ｉ）前記ＣＡＲ抗体部分が、ＰＳＭＡペプチド及びＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する、又は
    （ｊ）前記ＣＡＲ抗体部分及び／若しくは前記ＣＳＲの前記リガンド結合モジュールが、ＲＯＲ１に結合する、又は
    （ｋ）前記ＣＡＲ抗体部分が、ＮＹ－ＥＳＯ－１ペプチド及びＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する、又は
    （ｌ）前記ＣＡＲ抗体部分が、ＰＲＡＭＥペプチド及びＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する、又は
    （ｍ）前記ＣＡＲ抗体部分が、ＷＴ１ペプチド及びＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する、又は
    （ｎ）前記ＣＡＲ抗体部分が、ヒストンＨ３．３ペプチド及びＭＨＣクラスＩタンパク質を含む複合体に特異的に結合する、又は
    （ｏ）前記ＣＳＲの前記リガンド結合モジュールが、ＭＳＬＮペプチドに結合する、又は
    （ｐ）前記ＣＳＲの前記リガンド結合モジュールが、ＲＯＲ２ペプチドに結合する、又は
    （ｑ）前記ＣＳＲの前記リガンド結合モジュールが、ＨＥＲ２ペプチドに結合する、又は
    （ｒ）前記ＣＳＲの前記リガンド結合モジュールが、ＥｐＣＡＭペプチドに結合する、又は
    （ｓ）前記ＣＳＲの前記リガンド結合モジュールが、ＭＵＣ１ペプチドに結合する、又は
    （ｔ）前記ＣＳＲの前記リガンド結合モジュールが、ＭＵＣ１６ペプチドに結合する、又は
    （ｕ）前記ＣＳＲの前記リガンド結合モジュールが、ＦＲαペプチドに結合する、又は
    （ｖ）前記ＣＳＲの前記リガンド結合モジュールが、ＥＧＦＲＶＩＩＩペプチドに結合する、又は
    （ｗ）前記ＣＳＲの前記リガンド結合モジュールが、ＨＥＲ３ペプチドに結合する、又は
    （ｘ）前記ＣＳＲの前記リガンド結合モジュールが、ＤＬＬ３ペプチドに結合する、又は
    （ｙ）前記ＣＳＲの前記リガンド結合モジュールが、ｃ－Ｍｅｔペプチドに結合する、又は
    （ｚ）前記ＣＳＲの前記リガンド結合モジュールが、ＣＤ７０ペプチドに結合する、請求項１～１２のいずれか一項に記載の免疫細胞。
  14. （ａ）前記ＣＡＲ膜貫通ドメインが、ＣＤ３０の膜貫通ドメインである、又は
    （ｂ）前記ＣＡＲ膜貫通ドメインが、ＣＤ８の膜貫通ドメインである、並びに／又は
    （ｃ）前記ＣＳＲ膜貫通ドメインが、ＴＣＲ共受容体若しくはＴ細胞共刺激分子の膜貫通ドメインに由来し、任意に、前記ＴＣＲ共受容体若しくはＴ細胞共刺激分子は、ＣＤ８、４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＯＸ４０、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、及びＣＤ１５４からなる群から選択される、又は
    （ｄ）前記ＣＡＲ膜貫通ドメイン及び／若しくは前記ＣＳＲ膜貫通ドメインが、ＣＤ８、４－１ＢＢ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＯＸ４０、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、若しくはＣＤ１５４の膜貫通ドメインである、並びに／又は、
    （ｅ）前記ＣＡＲ膜貫通ドメイン及び／若しくは前記ＣＳＲ膜貫通ドメインが、配列番号６６～７１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の免疫細胞。
  15. （ａ）前記一次シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζ、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、及びＣＤ６６ｄからなる群から選択される分子の細胞内シグナル伝達配列に由来する配列を含む、並びに／又は、
    （ｂ）前記一次シグナル伝達ドメインが、配列番号７７の配列に対して、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、若しくは１００％同一である配列を含む、請求項１～１４のいずれか一項に記載の免疫細胞。
  16. 前記細胞外標的結合ドメインと前記ＣＡＲの前記膜貫通ドメインとの間にペプチドリンカーを更に含む、及び／又は、前記膜貫通ドメインと前記ＣＡＲの前記共刺激ドメインとの間にペプチドリンカーを更に含む、及び／又は、前記共刺激ドメインと前記ＣＡＲの前記一次シグナル伝達ドメインとの間にペプチドリンカーを更に含む、及び／又は、前記リガンド結合モジュールと前記ＣＳＲの前記膜貫通ドメインとの間にペプチドリンカーを更に含む、及び／又は、前記膜貫通ドメインと前記ＣＳＲの前記ＣＤ３０共刺激ドメインとの間にペプチドリンカーを更に含む、請求項１～１５のいずれか一項に記載の免疫細胞。
  17. 前記ＣＳＲの発現が誘導可能であり、任意に、前記ＣＳＲの前記発現が、前記免疫細胞の活性化の際に誘導可能である、請求項１～１６のいずれか一項に記載の免疫細胞。
  18. 前記免疫細胞が、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、及びサプレッサーＴ細胞からなる群から選択される、請求項１～１７のいずれか一項に記載の免疫細胞。
  19. 請求項１～１８のいずれか一項に記載の免疫細胞に含まれる前記ＣＡＲ及びＣＳＲをコードしている１つ以上の核酸であって、前記ＣＡＲ及びＣＳＲがそれぞれ、１つ以上の核酸によってコードされる１つ以上のポリペプチド鎖からなる、１つ以上の核酸。
  20. 請求項１９に記載の１つ以上の核酸を含む、１つ以上のベクター。
  21. （ａ）請求項１～１８のいずれか一項に記載の免疫細胞、請求項１９に記載の核酸、又は請求項２０に記載のベクターと、（ｂ）薬学的に許容される担体又は希釈剤と、を含む、医薬組成物。
  22. 標的細胞を死滅させる方法であって、
    １つ以上の標的細胞を、請求項１～１８のいずれか一項に記載の免疫細胞と、前記免疫細胞が前記標的細胞の死滅を媒介するのに十分な条件下で十分な時間接触させることを含み、
    前記標的細胞は、前記免疫細胞に特異的な抗原を発現し、
    前記免疫細胞は、前記標的細胞と接触すると低い細胞疲弊レベルを呈し、
    任意に、前記免疫細胞はＴ細胞である、及び／又は、
    任意に、前記標的細胞は癌細胞である、方法。
  23. （ａ）前記免疫細胞が、低い細胞疲弊レベルの、ＰＤ－１、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、及びＬＡＧ－３からなる群から選択される疲弊マーカーを発現する、並びに／又は、
    （ｂ）前記免疫細胞が、ＣＤ２８共刺激ドメインを含むＣＳＲを発現している対応する免疫細胞よりも低いレベルのＰＤ－１、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、若しくはＬＡＧ－３を発現する、並びに／又は、
    （ｃ）前記免疫細胞が、４－１ＢＢ共刺激ドメインを含むＣＳＲを発現している対応する免疫細胞よりも低いレベルのＰＤ－１、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、若しくはＬＡＧ－３を発現する、請求項２２に記載の方法。
  24. （ａ）前記癌細胞が、副腎皮質癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、胆管細胞癌、大腸直腸癌、食道癌、神経膠芽腫、神経膠腫、肝細胞癌、頭頸部癌、腎臓癌、白血病、リンパ腫、肺癌、黒色腫、中皮腫、多発性骨髄腫、膵臓癌、褐色細胞腫、形質細胞腫、神経芽腫、卵巣癌、前立腺癌、肉腫、胃癌、子宮癌、及び甲状腺癌からなる群から選択される、癌由来である、並びに／又は、
    （ｂ）前記癌細胞が、血液癌細胞である、又は
    （ｃ）前記癌細胞が、固形腫瘍細胞である、請求項２２又は２３に記載の方法。
  25. 前記標的細胞が、ウイルス感染細胞であり、任意に、前記ウイルス感染細胞は、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、伝染性軟属腫ウイルス（ＭＣＶ）、ヒトＴ細胞白血病ウイルス１（ＨＴＬＶ－１）、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス）、及びＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）からなる群から選択されるウイルスによって引き起こされる、ウイルス感染由来である、請求項２２～２４のいずれか一項に記載の方法。
  26. 疾患を治療する方法であって、対象に、請求項１～１８のいずれか一項に記載の免疫細胞、請求項１９に記載の核酸、又は請求項２０に記載のベクター、又は請求項２１に記載の医薬組成物を、前記対象に投与する工程を含む、方法。
  27. 前記疾患が、ウイルス感染若しくは癌であり、任意に、前記癌は、血液癌若しくは固形腫瘍癌である、並びに／又は、任意に、前記癌は、副腎皮質癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、胆管細胞癌、大腸直腸癌、食道癌、神経膠芽腫、神経膠腫、肝細胞癌、頭頸部癌、腎臓癌、白血病、リンパ腫、肺癌、黒色腫、中皮腫、多発性骨髄腫、膵臓癌、褐色細胞腫、形質細胞腫、神経芽腫、卵巣癌、前立腺癌、肉腫、胃癌、子宮癌、及び甲状腺癌からなる群から選択される、請求項２６に記載の方法。
  28. （ａ）前記対象が、前記対象の身体の残りの部分よりも固形腫瘍癌において、より高密度の請求項１～１８のいずれか一項に記載の免疫細胞を有する、並びに／又は、
    （ｂ）前記対象が、同じＣＡＲ及びＣＤ２８若しくは４－１ＢＢ共刺激ドメインを含む対応するＣＳＲを発現している同じ数の免疫細胞による、同じ種類の疾患の治療と比較して、前記対象の末梢血中により高い密度の請求項１～１８のいずれか一項に記載の免疫細胞を有する、請求項２６又は２７に記載の方法。
  29. 対象におけるＴ細胞疲弊を予防及び／又は回復させるための方法であって、前記対象に、請求項１９に記載の核酸、又は請求項２０に記載のベクター、又は前記核酸若しくは前記ベクターを含む請求項２１に記載の医薬組成物を、前記対象に投与することを含み、任意に、前記方法は、Ｔ細胞における疲弊マーカーの発現を減少させ、更に任意に、前記疲弊マーカーは、ＰＤ－１、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、及びＬＡＧ－３からなる群から選択される、方法。
  30. ＣＡＲ及びＣＤ２８又は４－１ＢＢ共刺激ドメインを含むＣＳＲを発現している免疫細胞による、同じ種類の固形腫瘍癌の治療と比較して、腫瘍浸潤の増加を伴う対象における固形腫瘍癌を治療する方法であって、同じＣＡＲ及びＣＤ３０共刺激ドメインを含む対応するＣＳＲを発現している対応する免疫細胞を前記対象に投与することを含み、前記対応する免疫細胞は、請求項１～１８のいずれか一項に記載の免疫細胞を含む、方法。
  31. ＣＡＲ及びＣＤ２８又は４－１ＢＢ共刺激ドメインを含むＣＳＲを発現している免疫細胞による、同じ種類の固形腫瘍癌の治療と比較して、腫瘍縮小の増加を伴う対象における固形腫瘍癌を治療する方法であって、同じＣＡＲ及びＣＤ３０共刺激ドメインを含む対応するＣＳＲを発現している対応する免疫細胞を前記対象に投与することを含み、前記対応する免疫細胞は、請求項１～１８のいずれか一項に記載の免疫細胞を含む、方法。
  32. 対象におけるセントラルメモリーＴ細胞を産生させるための方法であって、前記対象に、請求項１９に記載の核酸、又は請求項２０に記載のベクター、又は前記核酸若しくは前記ベクターを含む請求項２１に記載の医薬組成物を、前記対象に投与することを含み、任意に、前記方法は、前記対象におけるセントラルメモリーＴ細胞の数及び／又は全Ｔ細胞中のセントラルメモリーＴ細胞の割合を増加させる、方法。
  33. インビトロでセントラルメモリーＴ細胞を産生させるための方法であって、
    １つ以上の標的細胞を、請求項１～１８のいずれか一項に記載の免疫細胞と、前記免疫細胞がセントラルメモリーＴ細胞に発達するのに十分な条件下で十分な時間接触させることを含み、前記標的細胞は、前記免疫細胞に特異的な抗原を発現する、方法。
  34. （ａ）前記方法が、セントラルメモリーＴ細胞の数及び／若しくは前記免疫細胞の子孫である全Ｔ細胞中のセントラルメモリーＴ細胞の割合を増加させる、並びに／又は、
    （ｂ）前記方法が、ＣＤ２８共刺激ドメインを含むＣＳＲを発現している対応する免疫細胞よりも、多くのセントラルメモリーＴ細胞の数及び／若しくは高いセントラルメモリーＴ細胞の割合をもたらし、任意に、前記方法は、ＣＤ２８共刺激ドメインを含むＣＳＲを発現している対応する免疫細胞よりも、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２００％、３００％、４００％、若しくは５００％高い、セントラルメモリーＴ細胞の数及び／若しくはセントラルメモリーＴ細胞の割合をもたらす、請求項３３に記載の方法。
  35. 前記セントラルメモリーＴ細胞が、高いレベルのＣＣＲ７及び低いレベルのＣＤ４５ＲＡを発現し、並びに／又は、前記セントラルメモリーＴ細胞が、ＣＤ８＋Ｔ細胞である、請求項３３又は３４のいずれか一項に記載の方法。
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